JP2023546766A - 多重特異性キメラ抗原受容体及びその使用 - Google Patents

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Abstract

本開示は、ＣＤ２０、ＣＤ１９、及び／またはＣＤ２２を標的とするキメラ抗原受容体を提供する。さらに、キメラ抗原受容体を含む操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）が提供される。疾患または障害を処置する医薬組成物、キット、及び方法も提供される。【選択図】なし

Description

相互参照
本出願は、２０２０年７月１６日に出願された国際特許出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０２０／１０２４７０号の優先権の恩典を主張し、その内容は、全体が参照により本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、２０２１年７月１４日に作成された１４６５１－０２８－２２８＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴＩＮＧ．ｔｘｔという名称の、サイズが５３６，００２バイトであるテキストファイルとして、本出願と共に提出された配列表を参照により組み込む。
１．分野
本開示は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、及び／またはＣＤ２２を標的とするキメラ抗原受容体、それを含む操作された免疫エフェクター細胞、及びその使用方法に関する。本開示は、さらに、治療的使用のための細胞の活性化及び増大、特に、キメラ抗原受容体ベースのＴ細胞免疫療法に関する。
２．背景
ＣＤ２０は、Ｂ細胞分化の特定の段階で発現する表面抗原である。治療用モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を用いてＣＤ２０陽性Ｂ細胞を標的とすることは、血液悪性腫瘍、例えば、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、の処置において効果的な方策となっている。リツキシマブ（ＲＴＸ）の初期の成功により、より効果的なＣＤ２０ベースの治療法の作成及び開発が促進されている。しかし、従来のｍＡｂによる処置は、難治性／再発性疾患などの障害を克服するのに十分ではなかった（Ｓｈａｎｅｈｂａｎｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ，１７（５）：４２３－４４４（２００７）（非特許文献１））。
ＣＤ１９は、正常なＢ細胞上において、ならびに、ほとんどのＢ細胞悪性腫瘍を含む様々な疾患及び状態の細胞及び組織により、発現される。ＣＤ１９は、Ｂ細胞受容体依存性及び非依存性シグナル伝達の両方を調節することにより、固有のＢ細胞シグナル伝達閾値の確立に大きく関与している。ＣＤ１９は、成熟Ｂ細胞の表面にある多分子複合体の主要なシグナル伝達コンポーネントとして機能し、体液性抗原誘導応答及び寛容誘導間のバランスを維持する上で重要な役割を果たす。以下を参照：Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｅｘｐ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ．１：３６（２０１２）（非特許文献２））。
ＢＬ－ＣＡＭ、Ｂ３、Ｌｅｕ－１４、Ｌｙｂ－８、及びＳｉｇｌｅｃ－２としても既知のＣＤ２２は、シアロアドヘシンファミリーの細胞表面Ｉ型糖タンパク質である。ＣＤ２２は、Ｂリンパ球により特異的に発現されることが示されており、Ｂリンパ球活性化の負の調節因子として機能的に重要である（Ｎｉｔｓｃｈｋｅ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７：２９０－２９７（２００５）（非特許文献３））。ＣＤ２２は、ＢＣＲシグナル伝達を下方調節し、Ｂ細胞の過剰刺激を遮断する抑制性共受容体であり、辺縁帯でのＢ細胞集団の維持、最適なＢ細胞抗原受容体誘導性増殖及びＢ細胞ターンオーバーなどに重要な役割を果たす。Ｂ細胞悪性腫瘍の大部分はＣＤ２２を発現し、がんの処置の有望な標的となっている。加えて、ＣＤ２２を標的とすることによるＢ細胞活性の選択的調節は、自己免疫疾患を処置するために提案されている（例えば、以下を参照：Ｓｔｅｉｎｆｅｌｄ ａｎｄ Ｙｏｕｉｎｏｕ，Ｅｘｐｅｒｔ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．，６：９４３－９４９（２００６）（非特許文献４））。
キメラ抗原受容体Ｔ（ＣＡＲ－Ｔ）細胞療法は、特に、血液悪性腫瘍における、新興の効果的ながん免疫療法である。しかし、ＣＡＲ－Ｔ細胞の適用は、サイトカイン放出症候群及びオンターゲットオフ腫瘍毒性などの副作用により阻まれる（Ｙｕ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ １８（１）：１２５（２０１９）（非特許文献５））。
改善された結合分子及び操作された細胞が必要である。例えば、より効果的または効率的なＣＡＲ－Ｔ療法に使用される、安定で治療効果のあるＣＤ２０、ＣＤ１９、及び／またはＣＤ２２結合分子を開発する必要がある。
Ｓｈａｎｅｈｂａｎｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ，１７（５）：４２３－４４４（２００７） Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｅｘｐ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ．１：３６（２０１２） Ｎｉｔｓｃｈｋｅ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７：２９０－２９７（２００５） Ｓｔｅｉｎｆｅｌｄ ａｎｄ Ｙｏｕｉｎｏｕ，Ｅｘｐｅｒｔ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．，６：９４３－９４９（２００６） Ｙｕ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ １８（１）：１２５（２０１９）
３．概要
一態様では、（ａ）抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂを含む、細胞外抗原結合ドメイン；（ｂ）膜貫通ドメイン；ならびに、（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン、を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が本明細書で提供され、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂが、膜貫通ドメインに対する抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂまたは抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂよりも、膜貫通ドメインに近い。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂのＮ末端にある。他の実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂのＣ末端にある。
別の態様では、（ａ）抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂを含む、細胞外抗原結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、ならびに、（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン、を含むＣＡＲが本明細書で提供され、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂが、膜貫通ドメインに対する抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂまたは抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂよりも、膜貫通ドメインに近い。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂのＮ末端にある。他の実施形態では、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂのＣ末端にある。
さらに別の態様では、（ａ）抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂを含む、細胞外抗原結合ドメイン；（ｂ）膜貫通ドメイン；ならびに、（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン、を含むＣＡＲが本明細書で提供され、抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂが、膜貫通ドメインに対する抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂまたは抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂよりも、膜貫通ドメインに近い。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂのＮ末端にある。他の実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂのＣ末端にある。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、直接または１つ以上のペプチドリンカー（複数可）を介して互いに融合され；１つ以上のペプチドリンカー（複数可）は、２０個以下、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、または５個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペプチドリンカー（複数可）は、（ＧＧＧＧＳ）ｎであり、ｎは、１、２、３、または４である。
さらに別の態様では、（ａ）抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂを含む、細胞外抗原結合ドメイン；（ｂ）膜貫通ドメイン；ならびに、（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン、を含むＣＡＲが本明細書で提供され、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂが、直接または１つ以上のペプチドリンカー（複数可）を介して互いに融合され、１つ以上のペプチドリンカー（複数可）が、２０個以下、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、または５個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のペプチドリンカー（複数可）は、（ＧＧＧＧＳ）ｎであり、ｎは、１、２、３、または４である。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、（ｉ）配列番号１もしくは３１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｉｉｉ）配列番号１もしくは３１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｖ）配列番号１１もしくは３１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｖｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｖｉｉ）配列番号１４もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｖｉｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｉｘ）配列番号２０もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｉ）配列番号２４もしくは３１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｉｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｉｉｉ）配列番号１４もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｉｖ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｖ）配列番号１もしくは３１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｖｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｖｉｉ）配列番号２０もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｖｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｉｘ）配列番号２０もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｘ）配列番号２０もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または（ｘｘｉ）配列番号２０もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｘｉｉ）配列番号２８３もしくは３１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｘｉｉｉ）配列番号２８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｘｉｖ）配列番号２８９もしくは３１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｘｖ）配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｘｉｖ）配列番号２９５もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または（ｘｘｖｉｉ）配列番号２９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含み、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、（ｉ）配列番号７３もしくは３１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｉｉ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｉｉｉ）配列番号７９もしくは３１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｖ）配列番号７３もしくは３１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または（ｖｉ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含み、抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、（ｉ）配列番号９３もしくは３１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｉｉｉ）配列番号９９もしくは３１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｖ）配列番号１０５もしくは３２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｖｉ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｖｉｉ）配列番号１１１もしくは３２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｖｉｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｉｘ）配列番号１１７もしくは３２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｉ）配列番号１２３もしくは３２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または（ｘｉｉ）配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。
さらに別の態様では、（ａ）抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂのうちの少なくとも２つを含む、細胞外抗原結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、ならびに、（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲが本明細書で提供され、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、（ｉ）配列番号１もしくは３１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｉｉｉ）配列番号１もしくは３１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｖ）配列番号１１もしくは３１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｖｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｖｉｉ）配列番号１４もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｖｉｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｉｘ）配列番号２０もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｉ）配列番号２４もしくは３１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｉｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｉｉｉ）配列番号１４もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｉｖ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｖ）配列番号１もしくは３１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｖｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｖｉｉ）配列番号２０もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｖｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｉｘ）配列番号２０もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｘ）配列番号２０もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｘｉ）配列番号２０もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｘｉｉ）配列番号２８３もしくは３１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｘｉｉｉ）配列番号２８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｘｉｖ）配列番号２８９もしくは３１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｘｖ）配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｘｖｉ）配列番号２９５もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または（ｘｘｖｉｉ）配列番号２９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含み、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、（ｉ）配列番号７３もしくは３１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｉｉ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｉｉｉ）配列番号７９もしくは３１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または（ｉｖ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または（ｖ）配列番号７３もしくは３１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含み、抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、（ｉ）配列番号９３もしくは３１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｉｉｉ）配列番号９９もしくは３１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｖ）配列番号１０５もしくは３２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｖｉ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｖｉｉ）配列番号１１１もしくは３２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｖｉｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｉｘ）配列番号１１７もしくは３２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、（ｘｉ）配列番号１２３もしくは３２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または（ｘｉｉ）配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。
さらに別の態様では、（ａ）抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂのうちの少なくとも２つを含む、細胞外抗原結合ドメイン、（ｂ）膜貫通ドメイン、ならびに、（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン、を含むＣＡＲが本明細書で提供され、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、（ｉ）配列番号３９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、（ｉｉ）配列番号４０に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、（ｉｉｉ）配列番号４１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号４２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、（ｖ）配列番号４３に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、（ｖｉ）配列番号４４に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、（ｖｉｉ）配列番号４５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、（ｖｉｉｉ）配列番号４６に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、（ｉｘ）配列番号４７に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、（ｘ）配列番号４８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、（ｘｉ）配列番号４９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、（ｘｉｉ）配列番号５０に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、（ｘｉｉｉ）配列番号５１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、（ｘｉｖ）配列番号５２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、（ｘｖ）配列番号５３に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、（ｘｖｉ）配列番号５４に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、（ｘｖｉｉ）配列番号５５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、（ｘｖｉｉｉ）配列番号３０１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、（ｘｉｘ）配列番号３０２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、または（ｘｘ）配列番号３０３に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、を含み、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、（ｉ）配列番号８５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、（ｉｉ）配列番号８６に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、（ｉｉｉ）配列番号８７に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、または（ｉｖ）配列番号８８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、または（ｖ）配列番号３０８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、を含み、抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、（ｉ）配列番号１２９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、（ｉｉ）配列番号１３０に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、（ｉｉｉ）配列番号１３１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号１３２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、（ｖ）配列番号１３３に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、（ｖｉ）配列番号１３４に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、または、（ｖｉｉ）配列番号１３５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３は、Ｋａｂａｔナンバリングスキーム、ＩＭＧＴナンバリングスキーム、ＡｂＭナンバリングスキーム、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングスキーム、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングスキーム、またはそれらの組み合わせに従って決定される。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、（１）抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ及び抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、（２）抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂ；（３）抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂ；または、（４）抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂ、を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、それぞれ、独立して、ラクダ科ｓｄＡｂまたはヒト化ｓｄＡｂである。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号３０１、配列番号３０２、または配列番号３０３のアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、または配列番号３０８のアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、または配列番号１３５のアミノ酸配列を含む。
他の実施形態では、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号３０１、配列番号３０２、または配列番号３０３の配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、または配列番号３０８の配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、または配列番号１３５と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８α、ＣＤ４、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１５２、及びＰＤ１からなる群より選択される分子に由来する。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８αに由来する。
いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫エフェクター細胞の一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζに由来する。
いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、さらに、共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３、ＬＦＡ－１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３のリガンド及びその組み合わせからなる群より選択される共刺激分子に由来する。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ１３７に由来する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲは、さらに、細胞外抗原結合ドメインのＣ末端と膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８αに由来する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲは、さらに、ポリペプチドのＮ末端に位置するシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＣＤ８αに由来する。
別の態様では、（ｉ）配列番号１７４～２２６からなる群より選択されるアミノ酸配列、または、（ｉｉ）配列番号１７４～２２６からなる群より選択される配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＡＲが本明細書で提供される。
さらに別の態様では、本明細書で提供されるＣＡＲをコードする核酸配列を含む単離核酸が本明細書で提供される。別の態様では、本明細書で提供されるＣＡＲをコードする核酸を含むベクターが本明細書で提供される。
さらに別の態様では、本明細書で提供されるＣＡＲ、単離核酸、またはベクターを含む、操作された免疫エフェクター細胞が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、操作された免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞またはＢ細胞である。
別の態様では、本明細書で提供される操作された免疫エフェクター細胞またはベクターと、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物が、本明細書で提供される。
さらに別の態様では、対象の疾患または障害を処置する方法が本明細書で提供され、この方法は、有効量の本明細書で提供される操作された免疫エフェクター細胞または医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、Ｂ細胞関連疾患もしくは障害、ＣＤ１９関連疾患もしくは障害、ＣＤ２０関連疾患もしくは障害及び／またはＣＤ２２関連疾患もしくは障害である。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、がんである。他の実施形態では、疾患または障害は、Ｂ細胞悪性腫瘍である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍は、Ｂ細胞白血病またはＢ細胞リンパ腫である。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、辺縁帯リンパ腫（例えば、脾辺縁帯リンパ腫）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病（Ｂ－ＰＬＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、バーキットリンパ腫、原発性眼内リンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、前駆Ｂリンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫（ＨＧＢＬ）、及び多発性骨髄腫（ＭＭ）からなる群より選択される。他の実施形態では、疾患または障害は、自己免疫及び／または炎症性疾患である。いくつかの実施形態では、自己免疫及び／または炎症性疾患は、不適切なまたは増加したＢ細胞数及び／または活性化と関連する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、さらに、有効量の操作された免疫エフェクター細胞を対象に投与する前に、対象から得られたがん細胞上で発現しているＣＤ１９、ＣＤ２０、及び／またはＣＤ２２のレベルを検出及び／または測定することを含む。いくつかの実施形態では、対象から得られたがん細胞上で発現しているＣＤ１９、ＣＤ２０、及び／またはＣＤ２２のレベルにより、がんを処置するのに適したＣＡＲを発現する操作された免疫エフェクター細胞の選択が決定される。
４．図面の簡単な説明
例示的な単一特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞（図１Ａ）の形質導入効率を示す。ＵｎＴは、ＣＡＲで形質導入されていないＴ細胞を指す。 例示的な三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞（図１Ｂ）の形質導入効率を示す。ＵｎＴは、ＣＡＲで形質導入されていないＴ細胞を指す。 細胞株Ｒａｊｉ．Ｌｕｃ（図２Ａ、２Ｇ、及び２Ｊ）、Ｎａｌｍ．６．Ｌｕｃ（図２Ｂ、２Ｉ、及び２Ｋ）、Ｋ５６２－ＣＤ１９．Ｌｕｃ（図２Ｃ）、Ｋ５６２－ＣＤ２０．Ｌｕｃ（図２Ｄ）、Ｋ５６２－ＣＤ２２．Ｌｕｃ（図２Ｅ）、Ｋ５６２．Ｌｕｃ（図２Ｆ）、及びＤａｕｄｉ．Ｌｕｃ（図２Ｈ）に対する単一特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞または単一特異性ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較した、三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 細胞株Ｒａｊｉ．Ｌｕｃ（図２Ａ、２Ｇ、及び２Ｊ）、Ｎａｌｍ．６．Ｌｕｃ（図２Ｂ、２Ｉ、及び２Ｋ）、Ｋ５６２－ＣＤ１９．Ｌｕｃ（図２Ｃ）、Ｋ５６２－ＣＤ２０．Ｌｕｃ（図２Ｄ）、Ｋ５６２－ＣＤ２２．Ｌｕｃ（図２Ｅ）、Ｋ５６２．Ｌｕｃ（図２Ｆ）、及びＤａｕｄｉ．Ｌｕｃ（図２Ｈ）に対する単一特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞または単一特異性ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較した、三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 細胞株Ｒａｊｉ．Ｌｕｃ（図２Ａ、２Ｇ、及び２Ｊ）、Ｎａｌｍ．６．Ｌｕｃ（図２Ｂ、２Ｉ、及び２Ｋ）、Ｋ５６２－ＣＤ１９．Ｌｕｃ（図２Ｃ）、Ｋ５６２－ＣＤ２０．Ｌｕｃ（図２Ｄ）、Ｋ５６２－ＣＤ２２．Ｌｕｃ（図２Ｅ）、Ｋ５６２．Ｌｕｃ（図２Ｆ）、及びＤａｕｄｉ．Ｌｕｃ（図２Ｈ）に対する単一特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞または単一特異性ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較した、三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 細胞株Ｒａｊｉ．Ｌｕｃ（図２Ａ、２Ｇ、及び２Ｊ）、Ｎａｌｍ．６．Ｌｕｃ（図２Ｂ、２Ｉ、及び２Ｋ）、Ｋ５６２－ＣＤ１９．Ｌｕｃ（図２Ｃ）、Ｋ５６２－ＣＤ２０．Ｌｕｃ（図２Ｄ）、Ｋ５６２－ＣＤ２２．Ｌｕｃ（図２Ｅ）、Ｋ５６２．Ｌｕｃ（図２Ｆ）、及びＤａｕｄｉ．Ｌｕｃ（図２Ｈ）に対する単一特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞または単一特異性ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較した、三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 細胞株Ｒａｊｉ．Ｌｕｃ（図２Ａ、２Ｇ、及び２Ｊ）、Ｎａｌｍ．６．Ｌｕｃ（図２Ｂ、２Ｉ、及び２Ｋ）、Ｋ５６２－ＣＤ１９．Ｌｕｃ（図２Ｃ）、Ｋ５６２－ＣＤ２０．Ｌｕｃ（図２Ｄ）、Ｋ５６２－ＣＤ２２．Ｌｕｃ（図２Ｅ）、Ｋ５６２．Ｌｕｃ（図２Ｆ）、及びＤａｕｄｉ．Ｌｕｃ（図２Ｈ）に対する単一特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞または単一特異性ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較した、三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 細胞株Ｒａｊｉ．Ｌｕｃ（図２Ａ、２Ｇ、及び２Ｊ）、Ｎａｌｍ．６．Ｌｕｃ（図２Ｂ、２Ｉ、及び２Ｋ）、Ｋ５６２－ＣＤ１９．Ｌｕｃ（図２Ｃ）、Ｋ５６２－ＣＤ２０．Ｌｕｃ（図２Ｄ）、Ｋ５６２－ＣＤ２２．Ｌｕｃ（図２Ｅ）、Ｋ５６２．Ｌｕｃ（図２Ｆ）、及びＤａｕｄｉ．Ｌｕｃ（図２Ｈ）に対する単一特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞または単一特異性ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較した、三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 細胞株Ｒａｊｉ．Ｌｕｃ（図２Ａ、２Ｇ、及び２Ｊ）、Ｎａｌｍ．６．Ｌｕｃ（図２Ｂ、２Ｉ、及び２Ｋ）、Ｋ５６２－ＣＤ１９．Ｌｕｃ（図２Ｃ）、Ｋ５６２－ＣＤ２０．Ｌｕｃ（図２Ｄ）、Ｋ５６２－ＣＤ２２．Ｌｕｃ（図２Ｅ）、Ｋ５６２．Ｌｕｃ（図２Ｆ）、及びＤａｕｄｉ．Ｌｕｃ（図２Ｈ）に対する単一特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞または単一特異性ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較した、三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 細胞株Ｒａｊｉ．Ｌｕｃ（図２Ａ、２Ｇ、及び２Ｊ）、Ｎａｌｍ．６．Ｌｕｃ（図２Ｂ、２Ｉ、及び２Ｋ）、Ｋ５６２－ＣＤ１９．Ｌｕｃ（図２Ｃ）、Ｋ５６２－ＣＤ２０．Ｌｕｃ（図２Ｄ）、Ｋ５６２－ＣＤ２２．Ｌｕｃ（図２Ｅ）、Ｋ５６２．Ｌｕｃ（図２Ｆ）、及びＤａｕｄｉ．Ｌｕｃ（図２Ｈ）に対する単一特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞または単一特異性ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較した、三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 細胞株Ｒａｊｉ．Ｌｕｃ（図２Ａ、２Ｇ、及び２Ｊ）、Ｎａｌｍ．６．Ｌｕｃ（図２Ｂ、２Ｉ、及び２Ｋ）、Ｋ５６２－ＣＤ１９．Ｌｕｃ（図２Ｃ）、Ｋ５６２－ＣＤ２０．Ｌｕｃ（図２Ｄ）、Ｋ５６２－ＣＤ２２．Ｌｕｃ（図２Ｅ）、Ｋ５６２．Ｌｕｃ（図２Ｆ）、及びＤａｕｄｉ．Ｌｕｃ（図２Ｈ）に対する単一特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞または単一特異性ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較した、三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 細胞株Ｒａｊｉ．Ｌｕｃ（図２Ａ、２Ｇ、及び２Ｊ）、Ｎａｌｍ．６．Ｌｕｃ（図２Ｂ、２Ｉ、及び２Ｋ）、Ｋ５６２－ＣＤ１９．Ｌｕｃ（図２Ｃ）、Ｋ５６２－ＣＤ２０．Ｌｕｃ（図２Ｄ）、Ｋ５６２－ＣＤ２２．Ｌｕｃ（図２Ｅ）、Ｋ５６２．Ｌｕｃ（図２Ｆ）、及びＤａｕｄｉ．Ｌｕｃ（図２Ｈ）に対する単一特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞または単一特異性ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較した、三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 細胞株Ｒａｊｉ．Ｌｕｃ（図２Ａ、２Ｇ、及び２Ｊ）、Ｎａｌｍ．６．Ｌｕｃ（図２Ｂ、２Ｉ、及び２Ｋ）、Ｋ５６２－ＣＤ１９．Ｌｕｃ（図２Ｃ）、Ｋ５６２－ＣＤ２０．Ｌｕｃ（図２Ｄ）、Ｋ５６２－ＣＤ２２．Ｌｕｃ（図２Ｅ）、Ｋ５６２．Ｌｕｃ（図２Ｆ）、及びＤａｕｄｉ．Ｌｕｃ（図２Ｈ）に対する単一特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞または単一特異性ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較した、三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 ２４時間の異なるＥ：Ｔ比でＲａｊｉ．ＬｕｃまたはＫ５６２．Ｌｕｃ細胞と共培養した後の単一特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較した、三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のＩＦＮ－γ放出レベル及び細胞傷害性を示す。Ｐ値は、Ｔ検定を使用して分析された。 ２４時間の異なるＥ：Ｔ比でＲａｊｉ．ＬｕｃまたはＫ５６２．Ｌｕｃ細胞と共培養した後の単一特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較した、三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のＩＦＮ－γ放出レベル及び細胞傷害性を示す。Ｐ値は、Ｔ検定を使用して分析された。 Ｒａｊｉ異種移植ＮＣＧマウスモデルにおける三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍有効性を示す。異なる用量の三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞で処置されたマウスを定期的に評価して、生物発光イメージング（図４Ａ～４Ｆ）及び体重（図４Ｇ）で腫瘍成長を監視した。 Ｒａｊｉ異種移植ＮＣＧマウスモデルにおける三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍有効性を示す。異なる用量の三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞で処置されたマウスを定期的に評価して、生物発光イメージング（図４Ａ～４Ｆ）及び体重（図４Ｇ）で腫瘍成長を監視した。 Ｒａｊｉ異種移植ＮＣＧマウスモデルにおける三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍有効性を示す。異なる用量の三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞で処置されたマウスを定期的に評価して、生物発光イメージング（図４Ａ～４Ｆ）及び体重（図４Ｇ）で腫瘍成長を監視した。 Ｒａｊｉ異種移植ＮＣＧマウスモデルにおける三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍有効性を示す。異なる用量の三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞で処置されたマウスを定期的に評価して、生物発光イメージング（図４Ａ～４Ｆ）及び体重（図４Ｇ）で腫瘍成長を監視した。 Ｒａｊｉ異種移植ＮＣＧマウスモデルにおける三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍有効性を示す。異なる用量の三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞で処置されたマウスを定期的に評価して、生物発光イメージング（図４Ａ～４Ｆ）及び体重（図４Ｇ）で腫瘍成長を監視した。 Ｒａｊｉ異種移植ＮＣＧマウスモデルにおける三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍有効性を示す。異なる用量の三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞で処置されたマウスを定期的に評価して、生物発光イメージング（図４Ａ～４Ｆ）及び体重（図４Ｇ）で腫瘍成長を監視した。 Ｒａｊｉ異種移植ＮＣＧマウスモデルにおける三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍有効性を示す。異なる用量の三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞で処置されたマウスを定期的に評価して、生物発光イメージング（図４Ａ～４Ｆ）及び体重（図４Ｇ）で腫瘍成長を監視した。 例示的な単一特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞（図５Ａ）の形質導入効率を示す。ＵｎＴは、ＣＡＲで形質導入されていないＴ細胞を指す。 例示的な三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞（図５Ｂ）の形質導入効率を示す。ＵｎＴは、ＣＡＲで形質導入されていないＴ細胞を指す。 リンパ腫細胞株－Ｒａｊｉ．Ｌｕｃ（図６Ａ、図６Ｃ、及び図６Ｅ）を発現する三重陽性抗原ならびに白血病細胞株－Ｎａｌｍ．６．Ｌｕｃ（図６Ｂ、図６Ｄ、及び図６Ｆ）を発現する二重陽性抗原に対する三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 リンパ腫細胞株－Ｒａｊｉ．Ｌｕｃ（図６Ａ、図６Ｃ、及び図６Ｅ）を発現する三重陽性抗原ならびに白血病細胞株－Ｎａｌｍ．６．Ｌｕｃ（図６Ｂ、図６Ｄ、及び図６Ｆ）を発現する二重陽性抗原に対する三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 リンパ腫細胞株－Ｒａｊｉ．Ｌｕｃ（図６Ａ、図６Ｃ、及び図６Ｅ）を発現する三重陽性抗原ならびに白血病細胞株－Ｎａｌｍ．６．Ｌｕｃ（図６Ｂ、図６Ｄ、及び図６Ｆ）を発現する二重陽性抗原に対する三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 リンパ腫細胞株－Ｒａｊｉ．Ｌｕｃ（図６Ａ、図６Ｃ、及び図６Ｅ）を発現する三重陽性抗原ならびに白血病細胞株－Ｎａｌｍ．６．Ｌｕｃ（図６Ｂ、図６Ｄ、及び図６Ｆ）を発現する二重陽性抗原に対する三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 リンパ腫細胞株－Ｒａｊｉ．Ｌｕｃ（図６Ａ、図６Ｃ、及び図６Ｅ）を発現する三重陽性抗原ならびに白血病細胞株－Ｎａｌｍ．６．Ｌｕｃ（図６Ｂ、図６Ｄ、及び図６Ｆ）を発現する二重陽性抗原に対する三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 リンパ腫細胞株－Ｒａｊｉ．Ｌｕｃ（図６Ａ、図６Ｃ、及び図６Ｅ）を発現する三重陽性抗原ならびに白血病細胞株－Ｎａｌｍ．６．Ｌｕｃ（図６Ｂ、図６Ｄ、及び図６Ｆ）を発現する二重陽性抗原に対する三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 単一抗原発現細胞株－Ｋ５６２－ＣＤ１９．Ｌｕｃ（図７Ａ及び図７Ｄ）、Ｋ５６２－ＣＤ２０．Ｌｕｃ（図７Ｂ及び図７Ｅ）、ならびにＫ５６２－ＣＤ２２．Ｌｕｃ（図７Ｃ及び図７Ｆ）に対する三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 単一抗原発現細胞株－Ｋ５６２－ＣＤ１９．Ｌｕｃ（図７Ａ及び図７Ｄ）、Ｋ５６２－ＣＤ２０．Ｌｕｃ（図７Ｂ及び図７Ｅ）、ならびにＫ５６２－ＣＤ２２．Ｌｕｃ（図７Ｃ及び図７Ｆ）に対する三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 単一抗原発現細胞株－Ｋ５６２－ＣＤ１９．Ｌｕｃ（図７Ａ及び図７Ｄ）、Ｋ５６２－ＣＤ２０．Ｌｕｃ（図７Ｂ及び図７Ｅ）、ならびにＫ５６２－ＣＤ２２．Ｌｕｃ（図７Ｃ及び図７Ｆ）に対する三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 単一抗原発現細胞株－Ｋ５６２－ＣＤ１９．Ｌｕｃ（図７Ａ及び図７Ｄ）、Ｋ５６２－ＣＤ２０．Ｌｕｃ（図７Ｂ及び図７Ｅ）、ならびにＫ５６２－ＣＤ２２．Ｌｕｃ（図７Ｃ及び図７Ｆ）に対する三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 単一抗原発現細胞株－Ｋ５６２－ＣＤ１９．Ｌｕｃ（図７Ａ及び図７Ｄ）、Ｋ５６２－ＣＤ２０．Ｌｕｃ（図７Ｂ及び図７Ｅ）、ならびにＫ５６２－ＣＤ２２．Ｌｕｃ（図７Ｃ及び図７Ｆ）に対する三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 単一抗原発現細胞株－Ｋ５６２－ＣＤ１９．Ｌｕｃ（図７Ａ及び図７Ｄ）、Ｋ５６２－ＣＤ２０．Ｌｕｃ（図７Ｂ及び図７Ｅ）、ならびにＫ５６２－ＣＤ２２．Ｌｕｃ（図７Ｃ及び図７Ｆ）に対する三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 異なるＥ：Ｔ比で、Ｒａｊｉ．ＬｕｃまたはＫ５６２．Ｌｕｃ細胞と共に２４時間共培養した後の、単一特異性ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞比較した、三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のＩＦＮ－γ放出レベルを示す。 Ｒａｊｉ．Ｌｕｃ、単球、または標的細胞及び単球の両方と共に２４時間共培養した後の、三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のＩＬ－６放出レベルを示す。 ＣＤ１９遺伝子ノックアウトを有するＲａｊｉ細胞に対する三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 ＣＤ１９遺伝子ノックアウトを有するＲａｊｉ細胞に対する三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 ＣＤ１９遺伝子ノックアウトを有するＲａｊｉ細胞に対する三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 ＣＤ１９遺伝子ノックアウトを有するＲａｊｉ細胞に対する三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 ＣＤ１９遺伝子ノックアウトを有するＲａｊｉ細胞に対する三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 ＣＤ１９遺伝子ノックアウトを有するＲａｊｉ細胞に対する三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を示す。 Ｒａｊｉ異種移植ＮＣＧマウスモデルにおける三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍有効性を示す。生物発光イメージング（図１１Ａ及び図１１Ｂ）、体重（図１１Ｃ）、及び生存（図１１Ｄ）により腫瘍成長を監視するために、マウスを定期的に評価した。 Ｒａｊｉ異種移植ＮＣＧマウスモデルにおける三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍有効性を示す。生物発光イメージング（図１１Ａ及び図１１Ｂ）、体重（図１１Ｃ）、及び生存（図１１Ｄ）により腫瘍成長を監視するために、マウスを定期的に評価した。 Ｒａｊｉ異種移植ＮＣＧマウスモデルにおける三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍有効性を示す。生物発光イメージング（図１１Ａ及び図１１Ｂ）、体重（図１１Ｃ）、及び生存（図１１Ｄ）により腫瘍成長を監視するために、マウスを定期的に評価した。 Ｒａｊｉ異種移植ＮＣＧマウスモデルにおける三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍有効性を示す。生物発光イメージング（図１１Ａ及び図１１Ｂ）、体重（図１１Ｃ）、及び生存（図１１Ｄ）により腫瘍成長を監視するために、マウスを定期的に評価した。 ＡＩＯ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ ｍＡｂまたはｈｕＡＩＯ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ ｍＡｂの結合親和性を評価する研究からの結果を示す。ＭＦＩ＝平均蛍光強度。 ＡＩＯ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ ｍＡｂまたはｈｕＡＩＯ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ ｍＡｂの結合親和性を評価する研究からの結果を示す。ＭＦＩ＝平均蛍光強度。 ＡＩＯ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ ｍＡｂまたはｈｕＡＩＯ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ ｍＡｂの結合親和性を評価する研究からの結果を示す。ＭＦＩ＝平均蛍光強度。
５．詳細な説明
本開示は、部分的には、ＣＤ２０、ＣＤ１９、及び／またはＣＤ２２に結合する新規の多重特異性キメラ抗原受容体、またはそれを含む操作された細胞、及びその改善された脂質に基づく。
いくつかの重大な疾患は、Ｂリンパ球を含む。例えば、Ｂ細胞の悪性形質転換は、限定されないが、リンパ腫、例えば、多発性骨髄腫及び非ホジキンリンパ腫を含むがんをもたらす。様々な形態の処置に対するＢ細胞性悪性腫瘍の応答が混ざり合う。化学療法及び放射線療法を含む、Ｂ細胞性悪性腫瘍を処置する従来の方法は、有毒な副作用のために有用性が限られている。抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２０、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ２３、及び抗ＣＤ８０治療用抗体を用いる免疫療法は、薬物動態プロファイルが乏しいこと、血清プロテアーゼによる抗体の急速な除去、及び糸球体での濾過のために、限られた達成しかもたらされず、腫瘍部位への浸透及びがん細胞上の標的抗原の発現レベルが制限される。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する遺伝子改変細胞を使用する試みも、ＣＡＲ Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏでの増大が不十分であること、注入後の細胞の急速な消失、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）、腫瘍抗原回避などのために、達成の制限がもたらされている。
ヒトＣＤ１９抗原は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する９５ｋＤａの膜貫通型糖タンパク質である。ＣＤ２０は、４つの膜貫通領域ならびに細胞内アミノ及びカルボキシル末端を有する３３ｋＤａ～３７ｋＤａの非グリコシル化リン酸化タンパク質である。ＣＤ１９及びＣＤ２０は両方とも、初期のプレＢ段階から成熟Ｂ細胞段階までのＢ細胞発達で広く発現するが、形質細胞への分化で失われる。ＣＤ２２は、また、Ｂ細胞系統であり、１３０～１５０ｋＤａの制限された細胞表面ホスホ糖タンパク質である。細胞質ＣＤ２２は、ＣＤ１９と共にＢ細胞分化の初期段階で発現し、ＣＤ２０の発現前に存在する。ＣＤ１９、ＣＤ２０、及びＣＤ２２は、全てのＢ細胞悪性腫瘍で発現している。
Ｂ細胞表面抗原を標的とすることは魅力的な処置方策であったが、腫瘍学の分野における長年の課題は、標的抗原の喪失または下方調節を伴う腫瘍の出現である。抗原の喪失または低抗原回避は、標的抗原発現の不均一性が大きいので、固形腫瘍の成功に対するさらに大きな障壁として現れる可能性がある。
ＣＡＲ－Ｔ細胞は、がん細胞上の十分な量の腫瘍関連表面抗原（ＴＡＡ）に遭遇する場合、強力である。腫瘍細胞は、「抗原回避」（ＣＡＲにより認識される細胞外エピトープを欠くＴＡＡの代替形態を発現する）または「抗原の下方調節」（ＣＡＲ－Ｔ細胞活性化の引き金となる閾値未満にＴＡＡ発現レベルを減少させる）により、ＣＡＲ－Ｔによる殺傷を回避し得る。例えば、おそらく、ＣＤ１９抗原の回避または下方調節により、ＣＤ１９ ＣＡＲ処置後の３０～６０％のＡＬＬまたはＢＣＬ患者が再発したことが報告された。同様に、ブリナツモマブ（ＣＤ１９ｘＣＤ３二重特異性抗体）またはＣＤ１９もしくはＣＤ２２を標的とするＣＡＲ－Ｔ細胞のいずれかを用いた、ＡＬＬで報告された寛解率は、ＣＤ１９発現及びＣＤ２２下方調節の喪失による可能性が高い、４０％～９４％で変動した。
本開示は、ＴＡＡのより低い発現レベルに応答し、抗原回避及び抗原下方調節の両方に対抗し、ＣＡＲ－Ｔ細胞のさらなる活性化、増殖、細胞傷害性、及びサイトカインの放出に効果的であるような多重特異性を有する操作されたＣＡＲ及びＣＡＲ－Ｔ細胞で、既存の療法の上記の問題を解決することを、部分的に目的とする。
しかし、多くの研究が示しているように、効果的な多重特異性ＣＡＲの生成も困難である。例えば、現在利用可能なＣＡＲ－Ｔ療法は、ｓｃＦｖに基づいているが、タンデムＣＡＲアプローチが、２つ以上のｓｃＦｖに使用される可能性はほとんどない。３つ以上のｓｃＦｖを有するタンデムＣＡＲは、非常に大きな分子であり、ｓｃＦｖは、互いに折りたたまれることがあり、これにより、抗原結合部位が不明瞭になり、ＶＨ－ＶＬドメインのミスマッチ及び機能不全につながり得る。加えて、膜貫通ドメインから２つ以上のｓｃＦｖで隔てられている最も遠位のｓｃＦｖによる腫瘍抗原特異的結合は、Ｔ細胞の活性化及び増大を誘発することができないであろう。
本ＣＡＲは、これらの問題に対処し、免疫細胞の表面に効果的な３つ以上のタンデムＣＡＲ特異性を生成するという満たされていないニーズを満たすだけでなく、「抗原回避抗原」及び／または「抗原下方調節」の腫瘍治療の課題に効果的な解決策も提供する。
一態様では、本開示は、複数のＢ細胞特異的マーカーを同時に標的とする単一のＣＡＲ（三重特異性ＣＡＲまたはオールインワン（ＡｌＯ）ＣＡＲ）を生成するべく、タンデムの３つのＶＨＨ（ＣＤ１９に特異的なもの、ＣＤ２０に特異的なもの、及びＣＤ２２に特異的なもの）を含む新規ＣＡＲを開発した。ＡＩＯ ＣＡＲの細胞外ドメインは、単一の膜貫通部分に連結されるタンデムの３つの抗原結合特異性（例えば、ＶＨＨ）を含み、１つのＶＨＨが膜に、１つのＶＨＨが中央に、残りの１つのＶＨＨが遠位位置に並置され、必要に応じてＧｌｙ－Ｓｅｒリンカー（複数可）で連結される。
以下のセクション６に記載されるように、本明細書で提供されるＡＩＯ ＣＡＲは、Ｂ細胞上のＣＤ１９、ＣＤ２０、及びＣＤ２２抗原に対する明確なＴ細胞反応性を誘導することが示された。ＶＨＨの順序配置は、ＣＤ１９（２０～２９１ａａ）、ＣＤ２０（７９～８４ａａ及び１４２～１８８ａａ）、ならびにＣＤ２２（２０～６８７ａａ）の細胞外ドメインのそれぞれの長さに基づいて、選択することができ、特定の空間配置に役立つ。空間的な柔軟性を高めるために、種々の長さのＧｌｙ－Ｓｅｒリンカー（複数可）を設計し、スクリーニングした。近接、中間、及び遠位の位置のＶＨＨの接近困難なまたは遮断効果も調査されている。
示されるように、再発性または難治性Ｂ細胞リンパ腫及び白血病の満たされていない医療ニーズは、本多重特異性ＣＡＲ－Ｔにより解決され得る。本開示は、驚くべきことに、ＣＡＲの細胞外ドメインにタンデムに配置された３つのＶＨＨドメインが、互いに構造的に干渉することなく優れた効果を生み出すことを見出した。
５．１．定義
本明細書に記載または参照される手法及び手順は、例えば、当業者らによる通常の方法論、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（３ｄ ｅｄ．２００１）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，２００３）；Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｆｒｏｍ Ｂｅｎｃｈ ｔｏ Ｃｌｉｎｉｃ（Ａｎ ｅｄ．２００９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ａｌｂｉｔａｒ ｅｄ．２０１０）；及びＡｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｖｏｌｓ １ ａｎｄ ２（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ ｅｄｓ．，２ｄ ｅｄ．２０１０）に記載の幅広く利用された方法論などを使用して、一般に十分に理解及び／または一般に用いられるものを含む。本明細書で別途定義されない限り、本明細書で使用される技術用語及び科学用語は、当業者らにより一般に理解される意味を有する。本明細書を解釈する目的で、以下の用語の説明が適用され、適切な場合はいつでも、単数形で使用される用語は、複数形も含み、その逆も同様である。記載の用語のいずれかの説明が、参照により本明細書に組み込まれるいずれかの文書と矛盾する場合は、以下に記載の用語の説明が優先されるものとする。
「抗体」、「免疫グロブリン」、または「Ｉｇ」という用語は、本明細書では互換的に使用され、最も広い意味で使用され、具体的には、例えば、モノクローナル抗体（アゴニスト、アンタゴニスト、中和抗体、全長またはインタクトモノクローナル抗体を含む）、ポリエピトープまたはモノエピトープ特異性を有する抗体組成物、ポリクローナルまたは一価抗体、多価抗体、多重特異性抗体（例えば、所望の生物学的活性を示す限り、二重特異性抗体）を網羅し、以下に記載されるように、少なくとも２つのインタクト抗体、単鎖抗体、及びそのフラグメント（例えば、ドメイン抗体）から形成される。抗体は、ヒト、ヒト化、キメラ、及び／または親和性成熟、ならびに他の種、例えば、マウス、ウサギ、ラマなどに由来する抗体であり得る。「抗体」という用語は、特定の分子抗原に結合することができ、ポリペプチド鎖の２つの同一のペアから構成されるポリペプチドの免疫グロブリンクラス内のＢ細胞のポリペプチド産物を含むことが意図され、各ペアが、１つの重鎖（約５０～７０ｋＤａ）及び１つの軽鎖（約２５ｋＤａ）であり、各鎖の各アミノ末端部分が、約１００～約１３０またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含み、各鎖の各カルボキシ末端部分が、定常領域を含む。例えば、以下を参照：Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ ｅｄ．，２ｄ ｅｄ．１９９５）；及びＫｕｂｙ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（３ｄ ｅｄ．１９９７）。抗体は、合成抗体、組み換え産生抗体、ラクダ科種（例えば、ラマもしくはアルパカ）またはそれらのヒト化バリアントを含む単一ドメイン抗体、イントラボディ、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、及び上のいずれかの機能的フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）も含むが、これらに限定されず、これは、フラグメントが由来する抗体の結合活性の一部または全部を保持する抗体の重鎖または軽鎖ポリペプチドの一部を指す。機能的フラグメント（例えば、抗原結合フラグメント）の非限定例としては、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）（例えば、単一特異性、二重特異性などを含む）、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、Ｆ（ａｂ）２フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｄｓＦｖ）、Ｆｄフラグメント、Ｆｖフラグメント、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、及びミニボディが挙げられる。特に、本明細書で提供される抗体は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、例えば、抗原結合ドメインまたは抗原に結合する抗原結合部位を含む分子（例えば、抗体の１つ以上のＣＤＲ）を含有する。そのような抗体フラグメントは、例えば、以下に見出すことができる：Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（１９８９）；Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（Ｍｙｅｒｓ ｅｄ．，１９９５）；Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ ２２：１８９－２２４；Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ａｎｄ Ｓｋｅｒｒａ，１９８９，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１７８：４９７－５１５；及びＤａｙ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２ｄ ｅｄ．１９９０）。本明細書で提供される抗体は、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）のものであり得る。抗体は、アゴニスト抗体またはアンタゴニスト抗体であってよい。抗体は、アゴニストでもアンタゴニストでもないことがある。
「抗原」は、抗体が選択的に結合できる構造である。標的抗原は、ポリペプチド、炭水化物、核酸、脂質、ハプテン、または他の天然に存在するまたは合成化合物であってよい。いくつかの実施形態では、標的抗原は、ポリペプチドである。特定の実施形態では、抗原は、細胞と会合し、例えば、細胞上または細胞内に存在する。
「インタクト」抗体は、抗原結合部位ならびにＣＬ及び少なくとも重鎖定常領域、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含むものである。定常領域は、ヒト定常領域またはそのアミノ酸配列バリアントを含んでもよい。特定の実施形態では、インタクト抗体は、１つ以上のエフェクター機能を有する。
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略される「単鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖に連結されたＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体フラグメントである。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドは、さらに、ＶＨドメイン及びＶＬドメイン間にポリペプチドリンカーを含み、これにより、ｓＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することが可能になる。ｓＦｖのレビューについては、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照のこと。
「重鎖のみの抗体」または「ＨＣＡｂ」という用語は、重鎖を含むが、４鎖抗体に通常見られる軽鎖を欠く機能的抗体を指す。ラクダ科動物（例えば、ラクダ、ラマ、またはアルパカ）は、ＨＣＡｂを生成することが知られる。
本明細書で使用される「単一ドメイン抗体」または「ｓｄＡｂ」は、単一の単量体可変抗体ドメインを指し、抗原結合が可能である（例えば、ＣＤ２０、ＣＤ１９、またはＣＤ２２に結合する単一ドメイン抗体）。単一ドメイン抗体は、本明細書に記載のＶＨＨドメインを含む。単一ドメイン抗体の例としては、ラクダ科種（例えば、ラマ）由来のものなどの軽鎖を天然に欠く抗体、従来の４鎖抗体に由来する単一ドメイン抗体、操作された抗体、及び抗体由来のもの以外の単一ドメイン骨格が挙げられるが、これらに限定されない。単一ドメイン抗体は、限定されないが、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、ヤギ、ウサギ、及びウシを含む任意の種に由来し得る。例えば、単一ドメイン抗体は、本明細書に記載されるように、例えば、ラクダ、ラマ、ヒトコブラクダ、アルパカ、及びグアナコなどのラクダ科種で生じた抗体に由来することができる。ラクダ科以外の他の種は、軽鎖を天然に欠く重鎖抗体を産生し得、そのような他の種に由来するＶＨＨは、本開示の範囲内である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）は、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４の構造を有する。単一ドメイン抗体は、本明細書に記載の別の分子（例えば、薬剤）に遺伝的に融合または化学的に結合させてもよい。単一ドメイン抗体は、より大きな結合分子（例えば、多重特異性抗体またはキメラ抗原受容体）の一部であってよい。
「結合」または「結合」という用語は、例えば、複合体を形成することを含む、分子間の相互作用を指す。相互作用は、例えば、水素結合、イオン結合、疎水性相互作用、及び／またはファンデルワールス相互作用を含む非共有相互作用であり得る。複合体は、共有もしくは非共有結合、相互作用、または力により一緒に保持された２つ以上の分子の結合も含み得る。抗体上の単一の抗原結合部位と、抗原などの標的分子の単一エピトープとの間の全非共有相互作用の強度は、そのエピトープに対する抗体または機能的フラグメントの親和性である。結合分子（例えば、抗体）対一価抗原の、解離速度（ｋｏｆｆ）対結合速度（ｋｏｎ）の比（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）は、解離定数ＫＤであり、これは、親和性に反比例する。ＫＤ値が低いほど、抗体の親和性が高くなる。ＫＤの値は、抗体及び抗原の複合体により異なり、ｋｏｎ及びｋｏｆｆの両方に依存する。本明細書で提供される抗体の解離定数ＫＤは、本明細書で提供される任意の方法または当業者らに周知の任意の他の方法を使用して決定することができる。１つの結合部位での親和性は、抗体及び抗原間の相互作用の真の強さを常に反映しない。多価抗原などの複数の繰り返し抗原決定基を含有する複合抗原が、複数の結合部位を含有する抗体と接触する場合、１つの部位での抗体と抗原の相互作用により、２番目の部位での反応の可能性が増加するであろう。そのような多価抗体及び抗原間の複数の相互作用の強さは結合力と呼ばれる。
本明細書に記載の結合分子に関連して、「に結合する」、「に特異的に結合する」などの用語、及び類似の用語も本明細書では互換的に使用され、抗原、例えば、ポリペプチド、に特異的に結合する抗原結合ドメインの結合分子を指す。抗原に結合するか、または特異的に結合する結合分子または抗原結合ドメインは、例えば、イムノアッセイ、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）、または当業者らに既知の他の手法により同定することができる。いくつかの実施形態では、結合分子または抗原結合ドメインは、任意の交差反応性抗原よりも高い親和性（ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）及び酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）などの実験手法を使用して測定）で抗原に結合する場合、抗原に結合または特異的に結合する。通常、特異的または選択的な反応は、バックグラウンドのシグナルまたはノイズの少なくとも２倍であり、バックグラウンドの１０倍を超える場合もある。結合特異性に関する考察については、例えば、以下を参照：Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ３３２－３６（Ｐａｕｌ ｅｄ．，２ｄｅｄ．１９８９）。特定の実施形態では、結合分子または抗原結合ドメインの「非標的」タンパク質への結合の程度は、例えば、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析またはＲＩＡで決定される場合、結合分子または抗原結合ドメインの、その特定の標的抗原への結合の約１０％未満である。抗原に結合する結合分子または抗原結合ドメインは、結合分子が、例えば、抗原を標的とする治療薬及び／または診断薬として有用であるように、十分な親和性で抗原に結合可能なものを含む。特定の実施形態では、抗原に結合する結合分子または抗原結合ドメインは、１μＭ、８００ｎＭ、６００ｎＭ、５５０ｎＭ、５００ｎＭ、３００ｎＭ、２５０ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭ以下の解離定数（ＫＤ）を有する。特定の実施形態では、結合分子または抗原結合ドメインは、異なる種由来の抗原間で保存されている抗原のエピトープに結合する。
特定の実施形態では、結合分子または抗原結合ドメインは、重鎖及び／または軽鎖の一部が、特定の種に由来するか、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同である「キメラ」配列を含み得るが、所望の生物学的活性を示す限り、鎖（複数可）の残りの部分は、別の種に由来するか、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体、ならびにそのような抗体のフラグメントの対応する配列と同一または相同である（例えば、以下を参照：米国特許第４，８１６，５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１－５５）。キメラ配列は、ヒト化配列を含んでもよい。
特定の実施形態では、結合分子または抗原結合ドメインは、ヒト免疫グロブリン（例えば、レシピエント抗体）由来の配列を含む非ヒト（例えば、ラクダ科動物、マウス、非ヒト霊長類）抗体の「ヒト化」形態の部分を含み得、天然のＣＤＲ残基は、非ヒト種（例えば、ドナー抗体）、例えば、ラクダ科動物、マウス、ラット、ウサギ、または所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト哺乳類動物の対応するＣＤＲ由来の残基で置換される。いくつかの場合では、ヒト免疫グロブリン配列の１つ以上のＦＲ領域残基が、対応する非ヒト残基で置換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含み得る。これらの修飾は、さらに、抗体の性能を向上させるために行われる。ヒト化抗体の重鎖または軽鎖は、少なくとも１つ以上の可変領域の実質的に全てを含み得、ＣＤＲの全てまたは実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てが、ヒト免疫グロブリン配列のものである。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、通常、ヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部を含むであろう。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－２９（１９８８）；Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－９６（１９９２）；Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：４２８５－８９（１９９２）；米国特許第６，８００，７３８号；同第６，７１９，９７１号；同第６，６３９，０５５号；同第６，４０７，２１３号；及び同第６，０５４，２９７号を参照のこと。
特定の実施形態では、結合分子または抗原結合ドメインは、「完全ヒト抗体」または「ヒト抗体」の一部を含み得、用語は、本明細書では互換的に使用され、ヒト可変領域、例えば、ヒト定常領域を含む抗体を指す。結合分子は、単一ドメイン抗体配列を含んでもよい。特定の実施形態では、用語は、ヒト起源の可変領域及び定常領域を含む抗体を指す。特定の実施形態では、「完全ヒト」抗体は、ポリペプチドに結合し、ヒト生殖系列免疫グロブリン核酸配列の天然に存在する体細胞バリアントである核酸配列にコードされる抗体も包含し得る。「完全ヒト抗体」という用語は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．に記載されるヒト生殖系列免疫グロブリンに対応する可変及び定常領域を有する抗体を含む（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２を参照）。「ヒト抗体」は、ヒトにより産生される抗体のアミノ酸配列に対応するものを有し、及び／またはヒト抗体を作製するための手法のいずれかを使用して作製されているものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリー（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１（１９９１））及び酵母ディスプレイライブラリー（Ｃｈａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ １：７５５－６８（２００６））を含む、当該技術分野で既知の様々な手法を使用して産生することができる。さらに、Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ７７（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（１）：８６－９５（１９９１）；及びｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４（２００１）に記載の方法が、ヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能である。ヒト抗体は、抗原投与に応答して、そのような抗体を産生するように改変されているが、その内因性遺伝子座が無効化されているトランスジェニック動物、例えば、マウス、に抗原を投与することにより調製することができる（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６（５）：５６１－６６（１９９５）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ａｎｄ Ｔａｕｓｓｉｎｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８（４）：４５５－５８（１９９７）；ならびに、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術に関しては、米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号）。例えば、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体に関しては、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０３：３５５７－６２（２００６）も参照のこと。
特定の実施形態では、結合分子または抗原結合ドメインは、「組み換えヒト抗体」の一部を含み得、この表現は、組み換え手段により調製、発現、作成、または単離されるヒト抗体、例えば、宿主細胞にトランスフェクトされた組み換え発現ベクターを使用して発現される抗体、組み換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子のトランスジェニック及び／またはトランス染色体である動物（例えば、マウスもしくはウシ）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：６２８７－６２９５（１９９２）を参照）、または、他のＤＮＡ配列へのヒト免疫グロブリン遺伝子配列のスプライシングを含む任意の他の手段で調製、発現、作製、もしくは単離された抗体、を含む。そのような組み換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変及び定常領域を有し得る（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２を参照）。しかし、特定の実施形態では、そのような組み換えヒト抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ変異導入（または、ヒトＩｇ配列についてトランスジェニックな動物が使用される場合、ｉｎ ｖｉｖｏ体細胞変異導入）を実施され、従って、組み換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨ及びＶＬ配列に由来及び関連しているが、ｉｎ ｖｉｖｏでヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然には存在しないことがある配列である。
特定の実施形態では、結合分子または抗原結合ドメインは、「モノクローナル抗体」の一部を含み得、本明細書で使用される用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、例えば、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る可能な天然に存在する変異、または周知の翻訳後修飾、例えば、アミノ酸イオメリゼーションまたは脱アミド化、メチオニン酸化またはアスパラギンもしくはグルタミン脱アミド化を除いて同一であり、各モノクローナル抗体は、通常、抗原上の単一のエピトープを認識するであろう。特定の実施形態では、本明細書で使用される「モノクローナル抗体」は、単一のハイブリドーマまたは他の細胞により産生される抗体である。「モノクローナル」という用語は、抗体を作製する特定の方法に限定されない。例えば、本開示において有用なモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５（１９７５）に最初に記載されたハイブリドーマ方法論で調製されても、細菌または真核動物または植物細胞における組み換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照）を使用して作製されてもよい。「モノクローナル抗体」は、また、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－２８（１９９１）及びＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－９７（１９９１）に記載の手法を使用してファージ抗体ライブラリーから単離されてもよい。クローン細胞株及びそれにより発現されるモノクローナル抗体を調製するための他の方法は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，５ｔｈ ｅｄ．２００２）を参照のこと。
典型的な４鎖抗体ユニットは、２つの同一の軽（Ｌ）鎖及び２つの同一の重（Ｈ）鎖で構成されるヘテロ四量体糖タンパク質である。ＩｇＧの場合、４鎖ユニットは、一般に、約１５０，０００ダルトンである。各Ｌ鎖は、１つの共有ジスルフィド結合でＨ鎖に連結されているが、２つのＨ鎖は、Ｈ鎖アイソタイプに応じて１つ以上のジスルフィド結合で互いに連結されている。各Ｈ鎖及びＬ鎖は、規則的な間隔で配置された鎖内ジスルフィド架橋も有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端に、可変ドメイン（ＶＨ）、続いて、α鎖及びγ鎖のそれぞれの場合、３つの定常ドメイン（ＣＨ）、ならびに、μ及びεアイソタイプの場合、４つのＣＨドメイン、を有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端に、可変ドメイン（ＶＬ）、続いて、他端に、定常ドメイン（ＣＬ）を有する。ＶＬは、ＶＨとアラインされ、ＣＬは、重鎖の最初の定常ドメイン（ＣＨ１）とアラインされる。特定のアミノ酸残基は、軽鎖及び重鎖の可変ドメイン間に界面を形成すると考えられる。ＶＨ及びＶＬのペアリングにより、単一の抗原結合部位が形成される。種々のクラスの抗体の構造及び特性については、例えば、以下を参照：Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ７１（Ｓｔｉｔｅｓ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，８ｔｈ ｅｄ．１９９４）；及びＩｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，５ｔｈ ｅｄ．２００１）。
「Ｆａｂ」または「Ｆａｂ領域」という用語は、抗原に結合する抗体領域を指す。通常、従来のＩｇＧは、２つのＦａｂ領域を含み、それぞれが、Ｙ字型のＩｇＧ構造の２つのアームの１つに存在する。各Ｆａｂ領域は、通常、重鎖及び軽鎖のそれぞれの１つの可変領域及び１つの定常領域から構成される。より具体的には、Ｆａｂ領域における重鎖の可変領域及び定常領域は、ＶＨ及びＣＨ１領域であり、Ｆａｂ領域における軽鎖の可変領域及び定常領域は、ＶＬ及びＣＬ領域である。Ｆａｂ領域内のＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、及びＣＬは、本開示による抗原結合能力を付与するために、様々な方法で配置することができる。例えば、従来のＩｇＧのＦａｂ領域と同様に、ＶＨ及びＣＨ１領域は、１つのポリペプチド上にあり得、ＶＬ及びＣＬ領域は、別のポリペプチド上にあり得る。あるいは、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、及びＣＬ領域は全て、以下のセクションでより詳細に説明するように、全て同じポリペプチド上にあり、異なる順序で配向することができる。
「可変領域」、「可変ドメイン」、「Ｖ領域」、または「Ｖドメイン」という用語は、抗体の軽鎖または重鎖のアミノ末端に一般に位置し、重鎖に約１２０～１３０アミノ酸、軽鎖に約１００～１１０アミノ酸の長さを有し、特定の抗原に対する各特定の抗体の結合及び特異性に使用される抗体の軽鎖または重鎖の一部を指す。重鎖の可変領域は、「ＶＨ」と呼ばれることがある。軽鎖の可変領域は、「ＶＬ」と呼ばれることがある。「可変」という用語は、可変領域の特定のセグメントが、抗体間で配列が大きく異なるという事実を指す。Ｖ領域は、抗原結合を媒介し、特定の抗原に対する特定の抗体の特異性を定義する。しかし、可変性は、可変領域の１１０アミノ酸スパン全体に均等に分散されていない。その代わりに、Ｖ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる約１５～３０アミノ酸の可変性の少ない（例えば、比較的不変の）ストレッチからなり、これは、それぞれが約９～１２アミノ酸長である「超可変領域」と呼ばれるより大きい可変性（例えば、極端な変動性）のより短い領域に隔てられている。重鎖及び軽鎖の可変領域は、それぞれ、４つのＦＲを含み、それは、主に、βシート構造を採用し、３つの超可変領域で連結され、一部の場合では、βシート構造を連結するループを形成し、いくつかの場合では、βシート構造の一部を形成する。各鎖の超可変領域は、ＦＲにより近接して一緒に保持され、他の鎖由来の超可変領域と共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（例えば、以下を参照：Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（５ｔｈ ｅｄ．１９９１））。定常領域は、抗体の抗原への結合において直接関与しないが、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）への抗体の関与などの様々なエフェクター機能を示す。可変領域は、異なる抗体間で配列が大きく異なる。特定の実施形態では、可変領域は、ヒト可変領域である。
「Ｋａｂａｔによる可変領域残基ナンバリング」または「Ｋａｂａｔによるアミノ酸位置ナンバリング」という用語、及びそれらの変形形態は、上掲のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．における抗体の編集物の重鎖可変領域または軽鎖可変領域に使用されるナンバリングシステムを指す。このナンバリングシステムを使用して、実際の線形アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＣＤＲの短縮または挿入に対応するより少ないまたは追加のアミノ酸を含有してもよい。例えば、重鎖可変ドメインは、残基５２の後に単一のアミノ酸挿入物（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）及び残基８２の後に３つの挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃなど）を含んでもよい。残基のＫａｂａｔナンバリングは、「標準」Ｋａｂａｔナンバリング配列を有する抗体の配列の相同領域におけるアラインメントにより、所与の抗体について決定されてもよい。Ｋａｂａｔナンバリングシステムは、可変ドメイン中の残基（およそ、軽鎖の残基１～１０７及び重鎖の残基１～１１３）（例えば、上掲のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．）を指す場合に、一般に使用される。「ＥＵナンバリングシステム」または「ＥＵインデックス」は、免疫グロブリン重鎖定常領域中の残基を指す場合に、一般に使用される（例えば、上掲のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．で報告されたＥＵインデックス）。「ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基ナンバリングを指す。他のナンバリングシステムは、例えば、ＡｂＭ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴ、及びＡＨｏｎにより記述されている。
抗体に関して使用される場合、「重鎖」という用語は、アミノ末端部分が約１２０～１３０個以上のアミノ酸の可変領域を含み、カルボキシ末端部分が定常領域を含む、約５０～７０ｋＤａのポリペプチド鎖を指す。定常領域は、重鎖定常領域のアミノ酸配列に基づいて、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、及びミュー（μ）と呼ばれる５つの異なるタイプ（例えば、アイソタイプ）のうちの１つであり得る。異なる重鎖は、サイズが異なる：α、δ、及びγは、約４５０個のアミノ酸を含有するが、μ及びεは、約５５０のアミノ酸を含有する。軽鎖と組み合わせる場合、これらの異なるタイプの重鎖は、ＩｇＧの４つのサブクラス、すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む、抗体の５つの周知のクラス（例えば、アイソタイプ）である、それぞれ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭを生じさせる。
抗体に関して使用される場合、「軽鎖」という用語は、アミノ末端部分が約１００～約１１０個以上のアミノ酸の可変領域を含み、カルボキシ末端部分が定常領域を含む、約２５ｋＤａのポリペプチド鎖を指す。軽鎖のおおよその長さは、２１１～２１７アミノ酸である。定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）またはラムダ（λ）と呼ばれる２つの異なるタイプがある。
本明細書で使用される場合、「超可変領域」、「ＨＶＲ」、「相補性決定領域」、及び「ＣＤＲ」という用語は、互換的に使用される。「ＣＤＲ」は、免疫グロブリン（Ｉｇまたは抗体）ＶＨβシートフレームワークの非フレームワーク領域内の３つの超可変領域（Ｈ１、Ｈ２、もしくはＨ３）のうちの１つ、または抗体ＶＬ βシートフレームワークの非フレームワーク領域内の３つの超可変領域（Ｌ１、Ｌ２、もしくはＬ３）の１つを指す。従って、ＣＤＲは、フレームワーク領域配列内に散在する可変領域配列である。
ＣＤＲ領域は、当業者らに周知であり、周知のナンバリングシステムで定義されている。例えば、Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）は、配列可変性に基づいており、最も一般に使用される（例えば、上掲のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．を参照）。Ｃｈｏｔｈｉａは、むしろ、構造ループの位置を指す（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－１７（１９８７）を参照）。Ｋａｂａｔナンバリング規則を使用してナンバリングされた場合の、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループの終わりは、ループの長さに応じてＨ３２及びＨ３４間で変動する（これは、Ｋａｂａｔナンバリングスキームが、Ｈ３５ＡとＨ３５Ｂに挿入物を配置するためであり；３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、ループは３２で終了し；３５Ａしか存在しない場合、ループは３３で終了し；ループは３５Ａ及び３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終了する）。ＡｂＭ超可変領域は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ及びＣｈｏｔｈｉａ構造ループの間の中間物を表し、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアにより使用される（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｖｏｌ．２（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ ｅｄｓ．，２ｄ ｅｄ．２０１０）を参照）。「接触」超可変領域は、利用可能な複雑な結晶構造の分析に基づいている。開発され広く採用されている別の普遍的なナンバリングシステムは、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）情報システム（登録商標）（Ｌａｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７（１）：５５－７７（２００３））である。ＩＭＧＴは、免疫グロブリン（ＩＧ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、ならびにヒト及び他の脊椎動物の主要組織適合複合体（ＭＨＣ）に特化した統合情報システムである。本明細書において、ＣＤＲは、アミノ酸配列及び軽鎖または重鎖内の位置の両方に関して言及される。免疫グロブリン可変ドメインの構造内のＣＤＲの「位置」が、種間で保存され、ループと呼ばれる構造に存在するので、構造的特徴に従って可変ドメイン配列をアラインさせるナンバリングシステムを使用することにより、ＣＤＲ及びフレームワーク残基は、容易に同定される。１つの種の免疫グロブリン由来のＣＤＲ残基を、通常は、ヒト抗体由来のアクセプターフレームワークに移植及び置換する際に、この情報を使用することができる。追加のナンバリングシステム（ＡＨｏｎ）が、Ｈｏｎｅｇｇｅｒ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３０９：６５７－７０（２００１）により開発されている。例えば、Ｋａｂａｔナンバリング及びＩＭＧＴ固有のナンバリングシステムを含むナンバリングシステム間の対応は、当業者に周知である（例えば、上掲のＫａｂａ；上掲のＣｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ；上掲のＭａｒｔｉｎ；上掲のＬｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．を参照）。これらの超可変領域またはＣＤＲのそれぞれに由来する残基が、以下の表１に例示される。
（表１）様々なナンバリングシステムによる例示的なＣＤＲ
Figure 2023546766000001
特定のＣＤＲの境界は、識別に使用されるスキームに応じて変動し得る。従って、別途明記のない限り、所与の抗体またはその領域、例えば、可変領域、の「ＣＤＲ」及び「相補性決定領域」という用語、ならびに抗体またはその領域の個々のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２）は、上の本明細書に記載の既知のスキームのいずれかで定義される相補性決定領域を包含すると理解されるべきである。いくつかの場合では、ＩＭＧＴ、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＣｏｎｔａｃｔ法により定義されるＣＤＲなどの、特定のＣＤＲまたは複数のＣＤＲを同定するためのスキームが指定される。いくつかの場合では、Ｋａｂａｔナンバリングによる１つ以上の位置が、実際の配列で占められていないことがあるか、または、実際の配列が、Ｋａｂａｔナンバリングで許可される数よりも多くのアミノ酸残基を含有してもよい。例えば、以下を参照：Ｄｅｓｃｈａｃｈｔ ｅｔ ａｌ．，２０１０．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８４：５６９６－７０４（例えば、ＫａｂａｔによるＶＨＨドメインの例示的なナンバリングについて）。他の場合では、ＣＤＲの特定のアミノ酸配列が与えられる。ＣＤＲ領域は、また、様々なナンバリングシステムの組み合わせ、例えば、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａナンバリングシステムの組み合わせ、またはＫａｂａｔ及びＩＭＧＴナンバリングシステムの組み合わせで定義され得ることに留意すべきである。従って、「特定のＶＨまたはＶＨＨに記載のＣＤＲ」などの用語は、上記の例示的なＣＤＲナンバリングシステムで定義される任意のＣＤＲ１を含むが、それにより限定されない。可変領域（例えば、ＶＨＨ、ＶＨ、またはＶＬ）が与えられると、領域内のＣＤＲが異なるナンバリングシステムまたはそれらの組み合わせにより定義することができると、当業者らは理解するであろう。
超可変領域は、以下のような「拡張された超可変領域」を含んでもよい：ＶＬ中の２４～３６または２４～３４（Ｌ１）、４６～５６または５０～５６（Ｌ２）、及び８９～９７または８９～９６（Ｌ３）、及びＶＨ中の２６～３５または２６～３５Ａ（Ｈ１）、５０～６５または４９～６５（Ｈ２）、及び９３～１０２、９４～１０２、または９５～１０２（Ｈ３）。
「定常領域」または「定常ドメイン」という用語は、抗原への抗体の結合に直接関与しないが、様々なエフェクター機能、例えば、Ｆｃ受容体との相互作用を示す軽鎖及び重鎖のカルボキシ末端部分を指す。この用語は、抗原結合部位を含有する免疫グロブリンの他の部分である可変領域と比較して、より保存されたアミノ酸配列を有する免疫グロブリン分子の部分を指す。定常領域は、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３領域、ならびに軽鎖のＣＬ領域を含有してもよい。
「フレームワーク」または「ＦＲ」という用語は、ＣＤＲに隣接する可変領域残基を指す。ＦＲ残基は、例えば、キメラ、ヒト化、ヒト、ドメイン抗体（例えば、単一ドメイン抗体）、ダイアボディ、線状抗体、及び二重特異性抗体に存在する。ＦＲ残基は、超可変領域残基またはＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用され、例えば、天然配列Ｆｃ領域、組み換えＦｃ領域、及びバリアントＦｃ領域を含む。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は異なり得ることがあるが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、多くの場合、位置Ｃｙｓ２２６のアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端まで伸びると定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵナンバリングシステムによる残基４４７）は、例えば、抗体の産生もしくは精製中に、または抗体の重鎖をコードする核酸を組み換え操作することにより、除去され得る。従って、インタクト抗体の組成物は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、及びＫ４４７残基の有り無しの両方で抗体の混合物を有する抗体集団を含んでもよい。「機能的Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の「エフェクター機能」を有する。例示的な「エフェクター機能」は、Ｃ１ｑ結合；ＣＤＣ；Ｆｃ受容体結合；ＡＤＣＣ；食作用；細胞表面受容体の下方調節（例えば、Ｂ細胞受容体）などが挙げられる。そのようなエフェクター機能は、一般に、Ｆｃ領域が結合領域または結合ドメイン（例えば、抗体可変領域またはドメイン）と組み合わされることを必要とし、当業者らに既知の様々なアッセイを使用して評価することができる。「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾（例えば、置換、付加、または欠失）により天然配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列とは異なるものを含む。特定の実施形態では、バリアントＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域における、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、約１～約１０個のアミノ酸置換、または約１～約５個のアミノ酸置換を有する。本明細書におけるバリアントＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域及び／または親ポリペプチドのＦｃ領域と、少なくとも約８０％の相同性、またはそれと少なくとも約９０％の相同性、例えば、それと少なくとも約９５％の相同性を有し得る。
本明細書で使用される場合、「エピトープ」は、当該技術分野の用語であり、結合分子（例えば、単一ドメイン抗体配列を含む抗体）が特異的に結合し得る抗原の局在領域を指す。エピトープは、線状エピトープもしくは立体配座の、非線状、または不連続エピトープであり得る。ポリペプチド抗原の場合、例えば、エピトープは、ポリペプチドの連続したアミノ酸（「線状」エピトープ）であり得るか、またはエピトープは、ポリペプチドの２つ以上の非連続領域からのアミノ酸を含み得る（「立体配座」、「非線形」、もしくは「不連続」エピトープ）。一般に、線状エピトープは、２次、３次、または４次構造に依存しても、依存しないこともあると、当業者は理解するであろう。例えば、いくつかの実施形態では、結合分子は、アミノ酸基が天然の３次元タンパク質構造に折りたたまれるかどうかに関わらず、アミノ酸基に結合する。他の実施形態では、結合分子は、エピトープを認識して結合するために、エピトープを構成するアミノ酸残基が特定の立体配座（例えば、曲がり、ねじれ、回転、または折りたたみ）を示すことを必要とする。
「遮断」抗体または「アンタゴニスト」抗体は、それが結合する抗原の生物学的活性を阻害または低減させるものである。いくつかの実施形態では、遮断抗体またはアンタゴニスト抗体は、抗原の生物学的活性を実質的にまたは完全に阻害する。
「アゴニスト」または活性化抗体は、それが結合する抗原によるシグナル伝達を増強または開始するものである。いくつかの実施形態では、アゴニスト抗体は、天然リガンドの存在なしでシグナル伝達を引き起こすか、または活性化する。
ペプチド、ポリペプチド、または抗体配列に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」及び「相同性」は、配列をアラインし、必要に応じて、最大パーセントの配列同一性を達成するためにギャップを導入した後の、配列同一性の一部としていかなる保存的置換も考慮しない特定のペプチドまたはポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定するためのアラインメントは、例えば、公的に入手可能なコンピューターソフトウェア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、またはＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用して、当業者の範囲内である様々な方法で達成することができる。当業者らは、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメーターを決定し得る。
「特異性」という用語は、抗原の特定のエピトープに対する抗原結合タンパク質（例えば、ＣＡＲまたはｓｄＡｂ）の選択的認識を指す。例えば、天然の抗体は、単一特異性である。本明細書で使用される「多重特異性」という用語は、抗原結合タンパク質（例えば、ＣＡＲまたはｓｄＡｂ）が、少なくとも２つが異なる抗原に結合する２つ以上の抗原結合部位を有することを意味する。本明細書で使用される「二重特異性」は、抗原結合タンパク質（例えば、ＣＡＲまたはｓｄＡｂ）が２つの異なる抗原結合特異性を有することを意味する。本明細書で使用される「単一特異性」ＣＡＲという用語は、１つ以上の結合部位を有する抗原結合タンパク質（例えば、ＣＡＲまたはｓｄＡｂ）を意味し、これらのそれぞれが、同じ抗原に結合する。
本明細書で使用される「価」という用語は、抗原結合タンパク質（例えば、ＣＡＲまたはｓｄＡｂ）における特定数の結合部位の存在を意味する。例えば、天然抗体または全長抗体は、２つの結合部位を有し、二価である。このように、「三価」、「四価」、「五価」、及び「六価」という用語は、抗原結合タンパク質（例えば、ＣＡＲまたはｓｄＡｂ）における、それぞれ、２つの結合部位、３つの結合部位、４つの結合部位、５つの結合部位、及び６つの結合部位の存在を意味する。
本明細書で使用される「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」は、Ｔ細胞などの免疫エフェクター細胞に１つ以上の抗原特異性を移植するために使用できる遺伝子操作された受容体を指す。いくつかのＣＡＲは、「人工Ｔ細胞受容体」、「キメラＴ細胞受容体」、または「キメラ免疫受容体」としても既知である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、１つ以上の抗原（例えば、腫瘍抗原）に特異的な細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびにＴ細胞及び／または他の受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。「ＣＡＲ－Ｔ細胞」は、ＣＡＲを発現するＴ細胞を指す。
「ポリペプチド」及び「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は、本明細書では互換的に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは、直鎖状または分枝状であってもよく、それは、改変アミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸により中断されてもよい。この用語は、自然にまたは介入、例えば、ジスルフィド結合の形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または任意の他の操作もしくは改変により改変されているアミノ酸ポリマーも包含する。例えば、限定されないが、非天然アミノ酸を含むアミノ酸の１つ以上のアナログを含有するポリペプチド、ならびに当該技術分野で既知の他の改変も定義内に含まれる。本開示のポリペプチドは、抗体または免疫グロブリンスーパーファミリーの他のメンバーに基づいてもよく、特定の実施形態では、「ポリペプチド」は、単鎖として、または２つ以上の関連鎖として生じ得ることが理解される。
本明細書で互換的に使用される「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、改変ヌクレオチドもしくは塩基、及び／またはそれらのアナログ、またはＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼまたは合成反応によりポリマーに組み込むことができる任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、改変ヌクレオチド、例えば、メチル化ヌクレオチド及びそれらのアナログを含んでもよい。本明細書で使用される「オリゴヌクレオチド」は、必ずしも必要ではないが、一般に長さが約２００ヌクレオチド未満である、短い、一般に一本鎖の合成ポリヌクレオチドを指す。「オリゴヌクレオチド」及び「ポリヌクレオチド」という用語は、相互に排他的ではない。ポリヌクレオチドに関する上記の説明は、オリゴヌクレオチドにも等しく完全に適用可能である。本開示の結合分子を産生する細胞は、親ハイブリドーマ細胞、ならびに抗体をコードする核酸が導入されている細菌及び真核宿主細胞を含んでもよい。別途明記のない限り、本明細書に開示の任意の一本鎖ポリヌクレオチド配列の左側末端は、５’末端であり、二本鎖ポリヌクレオチド配列の左側方向は、５’方向と呼ばれる。新生ＲＮＡ転写産物の５’から３’への付加の方向は、転写方向と呼ばれ；ＲＮＡ転写物の５’側から５’末端にある、ＲＮＡ転写物と同じ配列を有するＤＮＡ鎖上の配列領域は、「上流配列」と呼ばれ；ＲＮＡ転写物の３’側から３’末端にある、ＲＮＡ転写物と同じ配列を有するＤＮＡ鎖上の配列領域は、「下流配列」と呼ばれる。
「単離核酸」は、他のゲノムＤＮＡ配列、ならびにタンパク質または複合体、例えば、リボソーム及びポリメラーゼから実質的に分離される核酸、例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡ、または混合核酸であり、これは、天然配列を天然に伴う。「単離」核酸分子は、核酸分子の天然供給源に存在する他の核酸分子から分離されるものである。さらに、ｃＤＮＡ分子などの「単離」核酸分子は、組み換え手法で産生される場合に、他の細胞材料、もしくは培地を実質的に含まない可能性があるか、または、化学的に合成された場合、化学前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まない可能性がある。特定の実施形態では、単一ドメイン抗体または本明細書に記載の抗体をコードする１つ以上の核酸分子が単離または精製される。この用語は、天然に存在する環境から除去されている核酸配列を包含し、組み換えまたはクローン化されたＤＮＡ単離物及び化学的に合成されたアナログまたは異種系により生物学的に合成されたアナログを含む。実質的に純粋な分子は、分子の単離形態を含んでもよい。具体的には、本明細書に記載のＣＡＲまたはｓｄＡｂをコードする「単離」核酸分子は、それが産生された環境で通常会合している少なくとも１つの混入核酸分子から同定及び分離される核酸分子である。
「制御配列」という用語は、特定の宿主生物において作動可能に連結されたコード配列の発現に必要なＤＮＡ配列を指す。原核生物に適した制御配列は、例えば、プロモーター、任意に、オペレーター配列、及びリボソーム結合部位を含む。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、及びエンハンサーを利用することが知られている。
本明細書で使用される場合、「作動可能に連結された」という用語及び類似の語句（例えば、遺伝子融合された）は、核酸またはアミノ酸に関して使用される場合、それぞれ、互いに機能的な関係で配置される核酸配列またはアミノ酸配列の作動可能結合を指す。例えば、作動可能に連結されたプロモーター、エンハンサーエレメント、オープンリーディングフレーム、５’及び３’ＵＴＲ、ならびにターミネーター配列は、核酸分子（例えば、ＲＮＡ）の正確な産生をもたらす。いくつかの実施形態では、作動可能に連結された核酸エレメントは、オープンリーディングフレームの転写をもたらし、最終的にポリペプチドの産生（すなわち、オープンリーディングフレームの発現）をもたらす。別の例として、作動可能に連結されたペプチドは、機能ドメインが互いに適切な距離を置いて配置されて、各ドメインの意図された機能を付与するものである。
「ベクター」という用語は、宿主細胞に核酸配列を導入するために、例えば、本明細書に記載の結合分子（例えば、抗体）をコードする核酸配列を含む核酸配列を保有または包含するために使用される物質を指す。使用に適用可能なベクターは、例えば、発現ベクター、プラスミド、ファージベクター、ウイルスベクター、エピソーム、及び人工染色体を含み、これは、宿主細胞の染色体への安定な組み込みのために実施可能な選択配列またはマーカーを含み得る。さらに、ベクターは、１つ以上の選択マーカー遺伝子及び適切な発現制御配列を含み得る。含み得る選択可能なマーカー遺伝子は、例えば、抗生物質または毒素に対する耐性を提供し、栄養要求性欠乏を補完し、または培地にない重要な栄養素を供給する。発現制御配列は、構成的及び誘導可能なプロモーター、転写エンハンサー、転写ターミネーターなどを含み得、これらは、当該技術分野で周知である。２つ以上の核酸分子が共発現される場合（例えば、抗体重鎖及び軽鎖の両方、または抗体ＶＨ及びＶＬ）、両方の核酸分子を、例えば、単一発現ベクターに挿入するか、または別々の発現ベクターに挿入することができる。単一ベクター発現の場合、コード核酸は、１つの共通の発現制御配列に作動可能に連結するか、または１つの誘導性プロモーター及び１つの構成的プロモーターなどの異なる発現制御配列に連結することができる。宿主細胞への核酸分子の導入は、当該技術分野で周知の方法を使用して確認することができる。そのような方法には、核酸分析、例えば、ノーザンブロットまたはｍＲＮＡのポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅、遺伝子産物の発現のためのイムノブロッティング、または導入された核酸配列もしくはその対応する遺伝子産物の発現を試験するための他の好適な分析方法、を含む。核酸分子が所望の産物を産生するのに十分な量で発現されることは、当業者らに理解され、発現レベルは、当該技術分野で周知の方法を使用して十分な発現を得るために最適化することができることがさらに理解される。
本明細書で使用される「宿主」という用語は、動物、例えば、哺乳動物（例えば、ヒト）を指す。
本明細書で使用される「宿主細胞」という用語は、核酸分子でトランスフェクトされ得る特定の対象細胞、及びそのような細胞の子孫または潜在的な子孫を指す。そのような細胞の子孫は、変異または続く宿主ゲノムへの核酸分子の生成もしくは組み込みにおいて生じ得る環境の影響により、核酸分子でトランスフェクトされた親細胞と同一ではないことがある。
本明細書で使用される場合、「自己由来」と用語は、後で個体に再導入される同じ個体に由来する任意の物質を指すことを意味する。
「同種異系」は、同じ種の異なる個体に由来する移植片を指す。
本明細書で使用される「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」という用語は、外因性核酸が宿主細胞に移入または導入されるプロセスを指す。「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」細胞は、外因性核酸でトランスフェクト、形質転換、または形質導入されているものである。細胞は、初代対象細胞及びその子孫を含む。
本明細書で使用される「薬学的に許容される」という用語は、連邦政府もしくは州政府の規制機関により承認されていること、または、動物、特に、ヒトでの使用が米国薬局方、欧州薬局方、または他の一般に認められている薬局方に記載されることを意味する。
「賦形剤」は、液体もしくは固体の充填剤、希釈剤、溶媒、または封入材料などの薬学的に許容される材料、組成物、またはビヒクルを意味する。賦形剤は、例えば、封入材料または添加剤、例えば、吸収促進剤、酸化防止剤、結合剤、緩衝剤、担体、コーティング剤、着色剤、希釈剤、崩壊剤、乳化剤、増量剤、充填剤、香味剤、湿潤剤、潤滑剤、香料、防腐剤、噴射剤、放出剤、殺菌剤、甘味料、可溶化剤、湿潤剤、及びそれらの混合物を含む。「賦形剤」という用語は、希釈剤、アジュバント（例えば、フロイントのアジュバント（完全もしくは不完全））またはビヒクルも指し得る。
いくつかの実施形態では、賦形剤は、薬学的に許容される賦形剤である。薬学的に許容される賦形剤の例としては、緩衝剤、例えば、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸；アスコルビン酸を含む酸化防止剤；低分子量（例えば、約１０アミノ酸残基未満）のポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、またはリジン；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、またはデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖アルコール、例えば、マンニトールまたはソルビトール；塩形成カウンターイオン、例えば、ナトリウム；及び／または非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）が挙げられる。薬学的に許容される賦形剤の他の例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１８ｔｈｅｄ．１９９０）に記載されている。
一実施形態では、各構成成分は、医薬製剤の他の成分と適合するという意味で「薬学的に許容される」ものであり、合理的な利益／リスク比に見合った過度の毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性、または他の問題もしくは合併症がなく、ヒト及び動物の組織または臓器と接触して使用するのに適する。例えば、以下を参照：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，２００５；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，６ｔｈ ｅｄ．；Ｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．；Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ：２００９；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ，３ｒｄ ｅｄ．；Ａｓｈ ａｎｄ Ａｓｈ Ｅｄｓ．；Ｇｏｗｅｒ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ：２００７；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ，２ｎｄ ｅｄ．；Ｇｉｂｓｏｎ Ｅｄ．；ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ ＬＬＣ：Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ，２００９。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、用いられる投薬量及び濃度で曝露される細胞または哺乳動物に対して無毒である。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、ｐＨ緩衝水溶液である。
いくつかの実施形態では、賦形剤は、滅菌液体、水及び例えば、石油、動物、植物、または合成起源、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油などを含む油である。水は、組成物（例えば、医薬組成物）が静脈内投与される場合の例示的な賦形剤である。食塩水ならびに水性デキストロース及びグリセロール水溶液も液体賦形剤として、特に、注射用溶液として用いることができる。賦形剤は、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、白亜、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアラート、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなども含み得る。組成物は、必要に応じて、少量の湿潤剤または乳化剤、またはｐＨ緩衝剤も含有し得る。組成物は、溶液、懸濁液、エマルション、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、持続放出製剤などの形態をとり得る。製剤を含む経口組成物は、標準的な賦形剤、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどを含み得る。
薬学的化合物を含む組成物は、例えば、適量の賦形剤と共に、単離または精製された形態で、結合分子（例えば、抗体）を含有してもよい。
本明細書で使用される「有効量」または「治療有効量」という用語は、所望の結果をもたらすのに十分な、本明細書で提供される薬剤及び単一ドメイン抗体または医薬組成物を含む単一ドメイン抗体または治療用分子の量を指す。
「対象」及び「患者」という用語は、交換可能に使用されてもよい。本明細書で使用される場合、特定の実施形態では、対象は、哺乳動物、例えば、非霊長類または霊長類（例えば、ヒト）である。特定の実施形態では、対象は、ヒトである。一実施形態では、対象は、疾患または障害と診断された、哺乳動物、例えば、ヒトである。別の実施形態では、対象は、疾患または障害を発症するリスクのある、哺乳動物、例えば、ヒト、である。
「投与する」または「投与」は、体外に存在する物質を患者に注射するか、または別の方法で物理的に送達する行為、例えば、粘膜、皮内、静脈内、筋肉内送達、及び／または本明細書に記載もしくは当該技術分野で既知の物理的送達の任意の他の方法、を指す。
本明細書で使用される場合、「処置する」、「処置」、及び「処置すること」という用語は、１つ以上の療法の投与に起因する疾患または状態の進行、重症度、及び／または期間の軽減または改善を指す。処置は、患者が依然として基礎疾患に罹患していることがあるにもかかわらず、改善が患者に観察されるように、基礎疾患と関連する１つ以上の症状の減少、緩和、及び／または軽減があったかどうかを評価することにより決定されてもよい。「処置すること」という用語は、疾患の管理及び改善の両方を含む。「管理する」、「管理すること」、及び「管理」という用語は、必ずしも疾患の治癒をもたらすとは限らない療法から対象が受ける有益な効果を指す。
「予防する」、「予防すること」、及び「予防」という用語は、疾患、障害、状態、または関連症状（複数可）（例えば、糖尿病またはがん）の発症（または再発）の可能性を低減させることを指す。
本明細書で使用される場合、がんの発症を「遅延させること」は、疾患の発症を遅延、妨害、減速、阻止、安定化、及び／または延期することを意味する。この遅延は、疾患の病歴及び／または処置される個体に応じて、様々な時間のものとなり得る。当業者には明らかであるように、十分なまたは有意な遅延は、個体が疾患を発症しないという点で、事実上、予防を包含し得る。がんの発症を「遅延させる」方法は、その方法を使用しない場合と比較して、所与の時間枠での疾患の発症の可能性を低減する方法、及び／または所与の時間枠での疾患の程度を低減する方法である。そのような比較は、通常、統計的に有意な個体数を使用した臨床研究に基づく。限定されないが、コンピューター断層撮影法（ＣＡＴスキャン）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、腹部超音波検査、凝固検査、動脈造影、または生検を含む標準的な方法を使用して、がんの発症を検出することができる。発症は、最初は検出できないことがあるがんの進行を指すこともあり、発生、再発、及び発症を含む。
本明細書で使用される「Ｂ細胞関連疾患または障害」は、Ｂ細胞により媒介されるか、または異常なＢ細胞機能（例えば、Ｂ細胞機能の調節不全）により付与される疾患または障害を指す。本明細書で使用される「Ｂ細胞関連疾患または障害」は、Ｂ細胞悪性腫瘍、例えば、Ｂ細胞白血病またはＢ細胞リンパ腫を含むが、これらに限定されない。それは、辺縁帯リンパ腫（例えば、脾辺縁帯リンパ腫）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病（Ｂ－ＰＬＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、バーキットリンパ腫、原発性眼内リンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、前駆Ｂリンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫（ＨＧＢＬ）、及び多発性骨髄腫（ＭＭ）も含む。「Ｂ細胞関連疾患または障害」は、不適切なまたは増加したＢ細胞数及び／または活性化と関連するような、特定の自己免疫及び／または炎症性疾患も含む。
本明細書で使用される「ＣＤ２０関連疾患または障害」は、ＣＤ２０が発現されている細胞または組織を含む疾患または障害を指す。いくつかの実施形態では、ＣＤ２０関連疾患または障害は、ＣＤ２０が異常に発現されている細胞を含む。他の実施形態では、ＣＤ２０関連疾患または障害は、内側または上にＣＤ２０が欠損している細胞を含む。
本明細書で使用される「ＣＤ１９関連疾患または障害」は、ＣＤ１９が発現されている細胞または組織を含む疾患または障害を指す。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９関連疾患または障害は、ＣＤ１９が異常に発現されている、例えば、正常細胞よりも高く発現をしている、細胞を含む。他の実施形態では、ＣＤ１９関連疾患または障害は、内側または上にＣＤ１９が欠損している細胞を含む。
本明細書で使用される「ＣＤ２２関連疾患または障害」は、ＣＤ２２が発現されている細胞または組織を含む疾患または障害を指す。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２関連疾患または障害は、ＣＤ２２が異常に発現されている細胞を含む。他の実施形態では、ＣＤ２２関連疾患または障害は、内側または上にＣＤ２２が欠損している細胞を含む。
「約」及び「およそ」という用語は、２０％以内、１５％以内、１０％以内、９％以内、８％以内、７％以内、６％以内、５％以内、４％以内、３％以内、２％以内、１％以内、またはそれ以下の特定の値または範囲を意味する。
本開示及び特許請求の範囲で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈に別途明示のない限り、複数形を含む。
実施形態が「含む」という用語を用いて本明細書に記載される場合、「からなる」及び／または「から本質的になる」に関して記載される別の点で類似の実施形態も提供されることが理解される。実施形態が「から本質的になる」という表現を用いて本明細書に記載される場合、「からなる」に関して記載される別の点で類似の実施形態も提供されることも理解される。
「Ａ及びＢ間」または「ＡＢ間」などの表現で使用される「間」という用語は、Ａ及びＢの両方を含む範囲を指す。
本明細書の「Ａ及び／またはＢ」などの表現で使用される「及び／または」という用語は、Ａ及びＢの両方；ＡまたはＢ；Ａ（単独）；及びＢ（単独）を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」などの表現で使用される「及び／または」という用語は、以下の実施形態のそれぞれを包含することが意図される：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）。
５．２．キメラ抗原受容体
一態様では、ポリペプチドを含む多重特異性キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が本明細書で提供され、ポリペプチドが、（ａ）本明細書で提供される抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂのうちの２つまたは３つを含む、細胞外抗原結合ドメイン；（ｂ）膜貫通ドメイン；ならびに、（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメインを含む。以下のセクション６で示されるように、現在の多重特異性ＣＡＲは、既存のＣＡＲ構築物よりも優れた利点を提供する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲは、ＣＤ２０及びＣＤ１９に結合する二重特異性ＣＡＲである。他の実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲは、ＣＤ２０及びＣＤ２２に結合する二重特異性ＣＡＲである。他の実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲは、ＣＤ１９及びＣＤ２２に結合する二重特異性ＣＡＲである。さらに他の実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲは、ＣＤ２０、ＣＤ１９、及びＣＤ２２の全てに結合する三重特異性ＣＡＲである。
各コンポーネント及び追加の領域は、以下により詳細に記載される。
５．２．１．細胞外抗原結合ドメイン
本明細書に記載のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、２つ、３つ、またはそれ以上の単一ドメイン抗体を含む。ペプチド結合を介して直接、またはペプチドリンカーを介して、単一ドメイン抗体を互いに融合させることができる。
５．２．１．１．単一ドメイン抗体
本開示のＣＡＲは、複数の単一ドメイン抗体を含む細胞外抗原結合ドメインを含む。ｓｄＡｂは、同じまたは異なる起源のもの、及び、同じまたは異なるサイズのものであってよい。例示的なｓｄＡｂとしては、重鎖のみの抗体由来の重鎖可変ドメイン（例えば、ＶＨＨまたはＶＮＡＲ）、軽鎖を天然に欠く結合分子、ヒト重鎖セグメントを発現するトランスジェニックマウスまたはラットにより産生された従来の４鎖抗体、ヒト化重鎖のみの抗体、ヒト単一ドメイン抗体に由来する単一ドメイン（例えば、ＶＨまたはＶＬ）、ならびに抗体に由来するもの以外の操作されたドメイン及び単一ドメイン足場が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載のＣＡＲを構築するために、本開示の上記の単一ドメイン抗体を含む、当該技術分野で既知の、または本開示により開発された任意のｓｄＡｂが、使用されてもよい。ｓｄＡｂは、限定されないが、マウス、ラット、ヒト、ラクダ、ラマ、ヤツメウナギ、魚、サメ、ヤギ、ウサギ、及びウシを含む任意の種に由来し得る。本明細書で企図される単一ドメイン抗体は、ラクダ科及びサメ以外の種に由来する天然に存在する単一ドメイン抗体分子も含む。
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、軽鎖を欠く重鎖抗体（本明細書では「重鎖のみの抗体」とも呼ばれる）として既知の天然に存在する単一ドメイン抗原結合分子に由来する。そのような単一ドメイン分子は、例えば、ＷＯ９４／０４６７８及びＨａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６３：４４６－４４８（１９９３）に開示される。明確にするために、軽鎖を天然に欠く重鎖分子に由来する可変ドメインは、４鎖免疫グロブリンの従来のＶＨと区別するために、本明細書ではＶＨＨとして既知である。そのようなＶＨＨ分子は、ラクダ科種、例えば、ラクダ、ラマ、ビキューナ、ヒトコブラクダ、アルパカ、及びグアナコで生じた抗体に由来し得る。ラクダ科以外の他の種は、軽鎖を天然に欠く重鎖分子を産生し得、そのようなＶＨＨは、本開示の範囲内である。加えて、ＶＨＨのヒト化バージョンならびに他の改変及びバリアントも企図され、本開示の範囲内である。
ラクダ科由来のＶＨＨ分子は、ＩｇＧ分子の約１０分の１である。それらは、単一のポリペプチドであり、非常に安定する可能性があり、これは、極端なｐＨ及び温度条件に耐性がある。さらに、それらは、従来の４鎖抗体用の問題ではないプロテアーゼの作用に耐性があり得る。さらに、ＶＨＨのｉｎ ｖｉｔｒｏ発現により、高収率の、適切に折りたたまれた機能的なＶＨＨが生成される。加えて、ラクダ科で生成された抗体は、抗体ライブラリーの使用によりｉｎ ｖｉｔｒｏで、またはラクダ科以外の哺乳動物の免疫により、生成された抗体により認識されるエピトープ以外のエピトープを認識し得る（例えば、ＷＯ９７４９８０５を参照）。従って、１つ以上のＶＨＨドメインを含む多重特異性または多価ＣＡＲは、従来の４鎖抗体に由来する抗原結合フラグメントを含む多重特異性または多価ＣＡＲよりも効率的に標的と相互作用し得る。ＶＨＨは、「珍しい」エピトープ、例えば、空洞または溝に結合することが既知であるため、そのようなＶＨＨを含むＣＡＲの親和性は、従来の多重特異性ポリペプチドよりも治療的処置に、より適することがある。
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、軟骨魚に見られる免疫グロブリンの可変領域に由来する。例えば、ｓｄＡｂは、サメの血清に見られる新規抗原受容体（ＮＡＲ）として既知の免疫グロブリンアイソタイプに由来し得る。ＮＡＲの可変領域に由来する単一ドメイン分子（「ＩｇＮＡＲ」）を生成する方法は、ＷＯ０３／０１４１６１及びＳｔｒｅｌｔｓｏｖ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．１４：２９０１－２９０９（２００５）に記載される。
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、組み換え、ＣＤＲ移植、ヒト化、ラクダ化、脱免疫化、及び／またはｉｎ ｖｉｔｒｏ生成（例えば、ファージディスプレイにより選択）である。いくつかの実施形態では、フレームワーク領域のアミノ酸配列は、フレームワーク領域内の特定のアミノ酸残基の「ラクダ化」により改変されてもよい。ラクダ化は、重鎖抗体のＶＨＨドメインに、対応する位置（複数可）に存在するアミノ酸残基のうちの１つ以上による、従来の４鎖抗体由来の（天然に存在する）ＶＨドメインのアミノ酸配列における１つ以上のアミノ酸残基の置き換えまたは置換を指す。当業者には明らかである当分野で既知の方法で、これを実施することができる。そのような「ラクダ化」置換は、好ましくは、本明細書で定義されるように、ＶＨ－ＶＬ境界面に、及び／またはいわゆるラクダ科のホールマーク残基に形成及び／または存在するアミノ酸位置に挿入される（例えば、ＷＯ９４／０４６７８、Ｄａｖｉｅｓ ａｎｄ Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ３３９：２８５－２９０（１９９４）；Ｄａｖｉｅｓ ａｎｄ Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ９（６）：５３１－５３７（１９９６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２５９：９５７－９６９（１９９６）；及びＲｉｅｃｈｍａｎｎ ａｎｄ Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２３１：２５－３８（１９９９）を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、ヒト重鎖セグメントを発現するトランスジェニックマウスまたはラットにより産生されるヒト単一ドメイン抗体である。例えば、ＵＳ２００９０３０７７８７、米国特許第８，７５４，２８７号、ＵＳ２０１５０２８９４８９、ＵＳ２０１００１２２３５８、及びＷＯ２００４０４９７９４を参照のこと。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、親和性成熟している。
いくつかの実施形態では、特定の抗原または標的に対する天然に存在するＶＨＨドメインは、ラクダ科ＶＨＨ配列の（ナイーブまたは免疫）ライブラリーから得ることができる。そのような方法は、当該分野で既知の１つ以上のスクリーニング手法を使用して、該抗原もしくは標的、またはその少なくとも一部、フラグメント、抗原決定基、またはエピトープを使用して、そのようなライブラリーをスクリーニングすることを含んでも含まなくてもよい。そのようなライブラリー及び手法は、例えば、ＷＯ９９／３７６８１、ＷＯ０１／９０１９０、ＷＯ０３／０２５０２０、及びＷＯ０３／０３５６９４に記載される。あるいは、（ナイーブまたは免疫）ＶＨＨに由来する改良された合成または半合成ライブラリー、例えば、ランダム変異導入及び／またはＣＤＲシャッフリングなどの手法で、（ナイーブまたは免疫）ＶＨＨライブラリーから得られたＶＨＨライブラリーは、例えば、ＷＯ００／４３５０７に記載されるように、使用されてもよい。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、従来の四本鎖抗体から生成される。例えば、ＥＰ０３６８６８４；Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４１（６２４２）：５４４－６（１９８９）；Ｈｏｌｔ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２１（１１）：４８４－４９０（２００３）；ＷＯ０６／０３０２２０；及びＷＯ０６／００３３８８を参照のこと。
本明細書で提供されるＣＡＲにおける例示的な単一ドメイン抗体が表２に列挙される。
（表２）例示的な単一ドメイン抗体
Figure 2023546766000002
Figure 2023546766000003
Figure 2023546766000004
ＣＤ２０に結合する単一ドメイン抗体
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲ内の抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）は、ヒトＣＤ２０に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、１つ以上のＣＤ２０活性を調節する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アンタゴニスト抗体である。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）で、ＣＤ２０（例えば、ヒトＣＤ２０）に結合する。結合親和性を測定する様々な方法が当該技術分野で既知であり、それらのいずれかを本開示の目的のために使用することができ、これは、例えば、目的の抗体のＦａｂバージョン及びその抗原を用いて実施されるＲＩＡ（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９３：８６５－８１）によるもの、；バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）もしくは例えば、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ９６システムを使用したＯｃｔｅｔ（登録商標）による表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイによるもの、または、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－２０００もしくはＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－３０００を使用したＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）によるものを含む。「オンレート」または「会合の速度」または「会合速度」または「ｋｏｎ」は、また、例えば、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ９６、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－２０００、またはＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）ＴＭ－３０００システムを使用した上記のバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）または表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）手法で決定されてもよい。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲ内の抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ＶＨＨドメインである。本明細書で提供される例示的なＶＨＨドメインは、以下のセクション６に記載されるように生成され、これらのＶＨＨドメインは、上記の表２にも示されるＶＨＨ－２７３、ＶＨＨ－２８３、ＶＨＨ－３１３、ＶＨＨ－４４０、ＶＨＨ－４６６、ＶＨＨ－４９６、ＶＨＨ－６５３、ＶＨＨ－６２３、ＶＨＨ－６４０、ＶＨＨ－６５７、ｈｕＶＨＨ－２５３、ｈｕＶＨＨ－２５６、ｈｕＶＨＨ－２６０、ｈｕＶＨＨ－７４６、ｈｕＶＨＨ－７５０、ｈｕＶＨＨ－７５３、ｈｕＶＨＨ－８３６、ｈｕＶＨＨ－８４０、ｈｕＶＨＨ－８４３、及びｈｕＶＨＨ－８４６と呼ばれる。
従って、いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、ＶＨＨ－２７３、ＶＨＨ－２８３、ＶＨＨ－３１３、ＶＨＨ－４４０、ＶＨＨ－４６６、ＶＨＨ－４９６、ＶＨＨ－６５３、ＶＨＨ－６２３、ＶＨＨ－６４０、ＶＨＨ－６５７、ｈｕＶＨＨ－２５３、ｈｕＶＨＨ－２５６、ｈｕＶＨＨ－２６０、ｈｕＶＨＨ－７４６、ｈｕＶＨＨ－７５０、ｈｕＶＨＨ－７５３、ｈｕＶＨＨ－８３６、ｈｕＶＨＨ－８４０、ｈｕＶＨＨ－８４３、及び／またはｈｕＶＨＨ－８４６のうちのいずれか１つの１つ以上のＣＤＲ配列を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４の構造を含み、ＣＤＲ配列は、ＶＨＨ－２７３、ＶＨＨ－２８３、ＶＨＨ－３１３、ＶＨＨ－４４０、ＶＨＨ－４６６、ＶＨＨ－４９６、ＶＨＨ－６５３、ＶＨＨ－６２３、ＶＨＨ－６４０、ＶＨＨ－６５７、ｈｕＶＨＨ－２５３、ｈｕＶＨＨ－２５６、ｈｕＶＨＨ－２６０、ｈｕＶＨＨ－７４６、ｈｕＶＨＨ－７５０、ｈｕＶＨＨ－７５３、ｈｕＶＨＨ－８３６、ｈｕＶＨＨ－８４０、ｈｕＶＨＨ－８４３、及びｈｕＶＨＨ－８４６のものから選択される。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３９のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４０のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４１のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４２のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４３のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４４のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４５のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４６のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４７のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４８のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４９のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号５０のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号５１のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号５２のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号５３のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号５４のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号５５のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３０１のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３０２のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３０３のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３９に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３９に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３９に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３９に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３９に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３９に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４０に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４０に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４０に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４０に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４０に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４０に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４０に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４１に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４１に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４１に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４１に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４１に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４１に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４２に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４２に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４２に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４２に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４２に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４２に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４３に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４３に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４３に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４３に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４３に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４３に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４３に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４４に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４４に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４４に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４４に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４４に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４４に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４４に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４５に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４５に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４５に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４５に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４５に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４５に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４６に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４６に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４６に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４６に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４６に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４６に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４６に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４７に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４７に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４７に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４７に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４７に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４７に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４７に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４８に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４８に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４８に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４８に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４８に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４８に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４９に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４９に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４９に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４９に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４９に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４９に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５０に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５０に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５０に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５０に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５０に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５０に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５０に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５１に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５１に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５１に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５１に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５１に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５１に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５２に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５２に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５２に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５２に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５２に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５２に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５３に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５３に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５３に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５３に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５３に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５３に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５３に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５４に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５４に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５４に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５４に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５４に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５４に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５４に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５５に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５５に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５５に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５５に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５５に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５５に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０１に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０１に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０１に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０１に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０１に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０１に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０２に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０２に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０２に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０２に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０２に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０２に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０３に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０３に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０３に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０３に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０３に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０３に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０３に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４の構造を含み、（ｉ）ＣＤＲ１は、配列番号１もしくは３１０、配列番号４、配列番号１１もしくは３１１、配列番号１３、配列番号１４もしくは３１２、配列番号１７、配列番号２０もしくは３１２、配列番号２２、配列番号２４もしくは３１３、配列番号２７、配列番号２８３もしくは３１４、配列番号２８６、配列番号２８９もしくは３１５、配列番号２９２、配列番号２９５もしくは３１２、配列番号２９８のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＣＤＲ２は、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１８、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号２８４、配列番号２８７、配列番号２９０、配列番号２９３、配列番号２９６、もしくは配列番号２９９のアミノ酸配列を含み、及び／または、（ｉｉｉ）ＣＤＲ３は、配列番号３、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２６、配列番号２９、配列番号２８５、配列番号２８８、配列番号２９１、配列番号２９４、配列番号２９７、もしくは配列番号３００のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
他の実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４の構造を含み、（ｉ）ＣＤＲ１は、配列番号１もしくは３１０、配列番号４、配列番号１１もしくは３１１、配列番号１３、配列番号１４もしくは３１２、配列番号１７、配列番号２０もしくは３１２、配列番号２２、配列番号２４もしくは３１３、配列番号２７、配列番号２８３もしくは３１４、配列番号２８６、配列番号２８９もしくは３１５、配列番号２９２、配列番号２９５もしくは３１２、配列番号２９８と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＣＤＲ２は、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１８、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号２８４、配列番号２８７、配列番号２９０、配列番号２９３、配列番号２９６、もしくは配列番号２９９と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び／または、（ｉｉｉ）ＣＤＲ３は、配列番号３、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２６、配列番号２９、配列番号２８５、配列番号２８８、配列番号２９１、配列番号２９４、配列番号２９７、もしくは配列番号３００と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号１または３１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号１または３１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号１１または３１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号１４または３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号２０または３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号２４または３１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号１４または３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号１または３１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号２０または３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号２０または３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号２０または３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号２０または３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号２８３または３１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号２８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号２８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号２８９または３１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号２９５または３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号２９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号２９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、さらに、ＶＨＨ－２７３、ＶＨＨ－２８３、ＶＨＨ－３１３、ＶＨＨ－４４０、ＶＨＨ－４６６、ＶＨＨ－４９６、ＶＨＨ－６５３、ＶＨＨ－６２３、ＶＨＨ－６４０、ＶＨＨ－６５７、ｈｕＶＨＨ－２５３、ｈｕＶＨＨ－２５６、ｈｕＶＨＨ－２６０、ｈｕＶＨＨ－７４６、ｈｕＶＨＨ－７５０、ｈｕＶＨＨ－７５３、ｈｕＶＨＨ－８３６、ｈｕＶＨＨ－８４０、ｈｕＶＨＨ－８４３、及び／またはｈｕＶＨＨ－８４６の１つ以上のフレームワーク領域（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３９の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４０の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４１の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４２の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４３の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４４の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４５の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４６の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４７の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４８の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号４９の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５０の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５１の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５２の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５３の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５４の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号５５の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０１の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０２の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０３の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体は、ヒト化単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、ヒト化単一ドメイン抗体は、以下のセクション６で例示される方法または以下のセクションに記載の方法を使用して生成することができる。
本明細書に記載のフレームワーク領域は、ＣＤＲナンバリングシステムの境界に基づいて決定される。換言すれば、ＣＤＲが、例えば、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、またはＣｈｏｔｈｉａで決定される場合、フレームワーク領域は、Ｎ末端からＣ末端までの形式の可変領域内のＣＤＲを取り囲むアミノ酸残基である：ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４。例えば、ＦＲ１は、例えば、Ｋａｂａｔナンバリングシステム、ＩＭＧＴナンバリングシステム、またはＣｈｏｔｈｉａナンバリングシステムで定義されるＣＤＲ１アミノ酸残基のＮ末端側のアミノ酸残基として定義され、ＦＲ２は、例えば、Ｋａｂａｔナンバリングシステム、ＩＭＧＴナンバリングシステム、またはＣｈｏｔｈｉａナンバリングシステムで定義されるＣＤＲ１及びＣＤＲ２アミノ酸残基の間のアミノ酸残基として定義され、ＦＲ３は、例えば、Ｋａｂａｔナンバリングシステム、ＩＭＧＴナンバリングシステム、またはＣｈｏｔｈｉａナンバリングシステムで定義されるＣＤＲ２及びＣＤＲ３アミノ酸残基間のアミノ酸残基として定義され、ＦＲ４は、例えば、Ｋａｂａｔナンバリングシステム、ＩＭＧＴナンバリングシステム、またはＣｈｏｔｈｉａナンバリングシステムで定義されるＣＤＲ３アミノ酸残基のＣ末端側のアミノ酸残基として定義される。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４０のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４１のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４２のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４３のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４４のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４５のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４６のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４７のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４８のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４９のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号５０のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号５１のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号５３のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号５４のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号５５のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３０１のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３０２のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３０３のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。
特定の実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、抗体ＶＨＨ－２７３、ＶＨＨ－２８３、ＶＨＨ－３１３、ＶＨＨ－４４０、ＶＨＨ－４６６、ＶＨＨ－４９６、ＶＨＨ－６５３、ＶＨＨ－６２３、ＶＨＨ－６４０、ＶＨＨ－６５７、ｈｕＶＨＨ－２５３、ｈｕＶＨＨ－２５６、ｈｕＶＨＨ－２６０、ｈｕＶＨＨ－７４６、ｈｕＶＨＨ－７５０、ｈｕＶＨＨ－７５３、ｈｕＶＨＨ－８３６、ｈｕＶＨＨ－８４０、ｈｕＶＨＨ－８４３、及びｈｕＶＨＨ－８４６のいずれか１つと比較して、特定のパーセント同一性を有するアミノ酸配列を含む。
２つの配列（例えば、アミノ酸配列または核酸配列）間のパーセント同一性の決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。２つの配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの非限定例は、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７：２２６４ ２２６８（１９９０）のアルゴリズムであり、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：５８７３ ５８７７（１９９３）のように修正される。そのようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３（１９９０）のＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれる。本明細書に記載の核酸分子に相同なヌクレオチド配列を得るために、ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を、例えば、スコア＝１００、ワード長＝１２に設定されたＮＢＬＡＳＴヌクレオチドプログラムパラメーターで実施することができる。本明細書に記載のタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を得るために、ＢＬＡＳＴタンパク質検索を、例えば、スコア５０、ワード長＝３に設定されたＸＢＬＡＳＴプログラムパラメーターで実施することができる。比較目的のギャップアラインメントを得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９ ３４０２（１９９７）に記載のギャップＢＬＡＳＴを利用することができる。あるいは、分子間の遠い関係を検出する反復検索を実施するために、ＰＳＩ ＢＬＡＳＴを使用することができる（同上）。ＢＬＡＳＴ、ギャップＢＬＡＳＴ、及びＰＳＩ Ｂｌａｓｔプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメーターを使用することができる（例えば、ワールドワイドウェブｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖの国立バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）を参照）。配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの別の非限定例は、Ｍｙｅｒｓ ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒ，ＣＡＢＩＯＳ ４：１１－１７（１９９８）のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれる。アミノ酸配列を比較するためにＡＬＩＧＮプログラムを利用する場合、ＰＡＭ１２０重量残基表、１２のギャップ長ペナルティ、及び４のギャップペナルティを使用することができる。ギャップを許容してまたは許容せずに、上記のものと同様の手法を使用して、２つの配列間のパーセント同一性を決定することができる。パーセント同一性の計算では、通常、完全一致のみがカウントされる。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３９～５５及び３０１～３０３から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のいずれか１つを有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性のいずれか１つを有するＶＨＨ配列は、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、ＣＤ２０に結合する能力を保持する。いくつかの実施形態では、配列番号３９～５５及び３０１～３０３から選択されるアミノ酸配列において、合計１～１０のアミノ酸が置換、挿入及び／または欠失している。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体は、配列番号３９～５５及び３０１～３０３から選択されるアミノ酸配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。
特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２０に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号４０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２０に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２０に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号４２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２０に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２０に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号４４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２０に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２０に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号４６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２０に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号４７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２０に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２０に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２０に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号５０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２０に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２０に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号５２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２０に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２０に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号５４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２０に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号５５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２０に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号３０１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２０に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号３０２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２０に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号３０３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２０に結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体との相互作用に必要なＣＤ２０タンパク質中のアミノ酸を同定するために、機能的エピトープを、例えば、コンビナトリアルアラニンスキャニングでマッピングすることができる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２０に結合している抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体の立体構造及び結晶構造は、エピトープを同定するために用いられてもよい。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、本明細書で提供される抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体のいずれかと同じエピトープに特異的に結合する。例えば、いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３９のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４１のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４２のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４３のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４５のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４６のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４７のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４８のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号５０のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号５１のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号５２のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号５４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号５５のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３０１のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３０２のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３０３のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、本明細書に記載の抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体のいずれか１つと競合的にＣＤ２０に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、競合的結合は、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して決定されてもよい。例えば、いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３９のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と競合的にＣＤ２０に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と競合してＣＤ２０に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４１のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と競合してＣＤ２０に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４２のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と競合してＣＤ２０に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４３のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と競合してＣＤ２０に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と競合してＣＤ２０に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４５のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と競合してＣＤ２０に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４６のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と競合的にＣＤ２０に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４７のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と競合してＣＤ２０に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４８のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と競合してＣＤ２０に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号４９のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と競合してＣＤ２０に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号５０のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と競合してＣＤ２０に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号５１のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と競合してＣＤ２０に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号５２のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と競合してＣＤ２０に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と競合してＣＤ２０に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号５４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と競合してＣＤ２０に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号５５のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と競合してＣＤ２０に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３０１のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と競合してＣＤ２０に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３０２のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と競合してＣＤ２０に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、配列番号３０３のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体と競合してＣＤ２０に特異的に結合する。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、以下のセクション５．２．１．２から５．２．１．４に記載される、特徴のいずれかを単独でまたは組み合わせて組み込んでもよい。
ＣＤ１９に結合する単一ドメイン抗体
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲ内の抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）は、ヒトＣＤ１９に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、１つ以上のＣＤ１９活性を調節する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、アンタゴニスト抗体である。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）で、ＣＤ１９（例えば、ヒトＣＤ１９）に結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲ内の抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ＶＨＨドメインである。本明細書で提供される例示的なＶＨＨドメインは、セクション６で後述されるように生成され、これらのＶＨＨドメインは、上記の表２にも示されるＶＨＨ－０８３、ＶＨＨ－１１１、ＶＨＨ－１３１、ｈｕＶＨＨ－７７３、及びｈｕＶＨＨ－７７６と呼ばれる。
従って、いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、ＶＨＨ－０８３、ＶＨＨ－１１１、ＶＨＨ－１３１、ｈｕＶＨＨ－７７３、及び／またはｈｕＶＨＨ－７７６のうちのいずれか１つの１つ以上のＣＤＲ配列を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４の構造を含み、ＣＤＲ配列は、ＶＨＨ－０８３、ＶＨＨ－１１１、ＶＨＨ－１３１、ｈｕＶＨＨ－７７３、及びｈｕＶＨＨ－７７６内のものから選択される。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号８５のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号８６のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号８７のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号８８のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号３０８のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８５に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８５に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８５に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８５に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８５に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８５に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８６に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８６に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８６に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８６に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８６に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８６に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８６に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８７に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８７に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８７に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８７に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８７に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８７に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８７に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８８に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８８に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８８に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８８に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８８に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８８に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０８に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０８に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０８に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０８に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０８に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０８に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４の構造を含み、（ｉ）ＣＤＲ１は、配列番号７３もしくは３１６、配列番号７６、配列番号７９もしくは３１７、または配列番号８２のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＣＤＲ２は、配列番号７４、配列番号７７、配列番号８０、配列番号８３、または配列番号３０７のアミノ酸配列を含み、及び／または、（ｉｉｉ）ＣＤＲ３は、配列番号７５、配列番号７８、配列番号８１、または配列番号８４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４の構造を含み、（ｉ）ＣＤＲ１は、配列番号７３もしくは３１６、配列番号７６、配列番号７９もしくは３１７、または配列番号８２と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＣＤＲ２は、配列番号７４、配列番号７７、配列番号８０、配列番号８３、または配列番号３０７と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び／または、（ｉｉｉ）ＣＤＲ３は、配列番号７５、配列番号７８、配列番号８１、または配列番号８４と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号７３または３１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号３１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号７９または３１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号３１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号７３または３１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号７３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号３１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、さらに、ＶＨＨ－０８３、ＶＨＨ－１３１、ＶＨＨ－１１１、ｈｕＶＨＨ－７７３、及び／またはｈｕＶＨＨ－７７６の１つ以上のフレームワーク領域（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８５の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８６の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８７の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号８８の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号３０８の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体は、ヒト化単一ドメイン抗体である。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号８５のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号８６のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号８７のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号８８のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号３０８のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。
特定の実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、抗体ＶＨＨ－０８３、ＶＨＨ－１１１、ＶＨＨ－１３１、ｈｕＶＨＨ－７７３、及び／またはｈｕＶＨＨ－７７６のうちのいずれか１つと比較して、特定のパーセント同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号８５～８８及び３０８から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちのいずれか１つを有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性のうちのいずれか１つを有するＶＨＨ配列は、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、ＣＤ１９に結合する能力を保持する。いくつかの実施形態では、配列番号８５～８８及び３０８から選択されるアミノ酸配列において、合計１～１０のアミノ酸が置換、挿入及び／または欠失している。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体は、配列番号８５～８８及び３０８から選択されるアミノ酸配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。
特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号８５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ１９に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号８６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ１９に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ１９に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号８８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ１９に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号３０８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ１９に結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体との相互作用に必要なＣＤ１９タンパク質中のアミノ酸を同定するために、機能的エピトープを、例えば、コンビナトリアルアラニンスキャニングでマッピングすることができる。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９に結合している抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体の立体構造及び結晶構造は、エピトープを同定するために用いられてもよい。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、本明細書で提供される抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体のいずれかと同じエピトープに特異的に結合する。例えば、いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号８５のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号８６のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号８７のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号８８のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号３０８のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、本明細書に記載の抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体のいずれか１つと競合的にＣＤ１９に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、競合的結合は、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して決定されてもよい。例えば、いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号８５のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体と競合的にＣＤ１９に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号８６のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体と競合的にＣＤ１９に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号８７のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体と競合的にＣＤ１９に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号８８のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体と競合的にＣＤ１９に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、配列番号３０８のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ１９単一ドメイン抗体と競合的にＣＤ１９に特異的に結合する。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、以下のセクション５．２．１．２から５．２．１．４に記載される、特徴のいずれかを単独でまたは組み合わせて組み込んでもよい。
ＣＤ２２に結合する単一ドメイン抗体
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲ内の抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）は、ヒトＣＤ２２に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、１つ以上のＣＤ２２活性を調節する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、アンタゴニスト抗体である。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）で、ＣＤ２２（例えば、ヒトＣＤ２２）に結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲ内の抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ＶＨＨドメインである。本明細書で提供される例示的なＶＨＨドメインは、以下のセクション６に記載されるように生成され、これらのＶＨＨドメインは、上記の表２にも示されるＶＨＨ－１８、ＶＨＨ－６６、ＶＨＨ－８７、ＶＨＨ－９０、ＶＨＨ－１０２、ＶＨＨ－１０５、及びｈｕＶＨＨ－０７７と呼ばれる。
従って、いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、ＶＨＨ－１８、ＶＨＨ－６６、ＶＨＨ－８７、ＶＨＨ－９０、ＶＨＨ－１０２、ＶＨＨ－１０５、及び／またはｈｕＶＨＨ－０７７のうちのいずれか１つの１つ以上のＣＤＲ配列を含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４の構造を含み、ＣＤＲ配列は、ＶＨＨ－１８、ＶＨＨ－６６、ＶＨＨ－８７、ＶＨＨ－９０、ＶＨＨ－１０２、ＶＨＨ－１０５、及びｈｕＶＨＨ－０７７のものから選択される。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１２９のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１３０のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１３１のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１３２のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１３３のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１３４のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１３５のアミノ酸配列の１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１２９に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１２９に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１２９に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１２９に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１２９に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１２９に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１２９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３０に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３０に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３０に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３０に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３０に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３０に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３０に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３１に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３１に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３１に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３１に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３１に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３１に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３２に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３２に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３２に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３２に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３２に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３２に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３３に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３３に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３３に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３３に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３３に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３３に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３３に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３４に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３４に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３４に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３４に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３４に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３４に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３４に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３５に記載のＣＤＲ１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３５に記載のＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２を有する。他の実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３５に記載のＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３５に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ２を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３５に記載のＣＤＲ１及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３５に記載のＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有する。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を有する。ＣＤＲ配列は、周知のナンバリングシステムに従って決定することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングに従う。他の実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングに従う。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４の構造を含み、（ｉ）ＣＤＲ１は、配列番号９３もしくは３１８、配列番号９６、配列番号９９もしくは３１９、配列番号１０２、配列番号１０５もしくは３２０、配列番号１０８、配列番号１１１もしくは３２１、配列番号１１４、配列番号１１７もしくは３２２、配列番号１２０、配列番号１２３もしくは３２３、または配列番号１２６のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＣＤＲ２は、配列番号９４、配列番号９７、配列番号１００、配列番号１０３、配列番号１０６、配列番号１０９、配列番号１１２、配列番号１１５、配列番号１１８、配列番号１２１、配列番号１２４、または配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、及び／または、（ｉｉｉ）ＣＤＲ３は、配列番号９５、配列番号９８、配列番号１０１、配列番号１０４、配列番号１０７、配列番号１１０、配列番号１１３、配列番号１１６、配列番号１１９、配列番号１２２、配列番号１２５、または配列番号１２８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４の構造を含み、（ｉ）ＣＤＲ１は、配列番号９３もしくは３１８、配列番号９６、配列番号９９もしくは３１９、配列番号１０２、配列番号１０５もしくは３２０、配列番号１０８、配列番号１１１もしくは３２１、配列番号１１４、配列番号１１７もしくは３２２、配列番号１２０、配列番号１２３もしくは３２３、または配列番号１２６と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＣＤＲ２は、配列番号９４、配列番号９７、配列番号１００、配列番号１０３、配列番号１０６、配列番号１０９、配列番号１１２、配列番号１１５、配列番号１１８、配列番号１２１、配列番号１２４、または配列番号１２７と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び／または、（ｉｉｉ）ＣＤＲ３は、配列番号９５、配列番号９８、配列番号１０１、配列番号１０４、配列番号１０７、配列番号１１０、配列番号１１３、配列番号１１６、配列番号１１９、配列番号１２２、配列番号１２５、または配列番号１２８と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号９３または３１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号３１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号９９または３１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号３１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１０５または３２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号３２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１１１または３２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号３２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１１７または３２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号３２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１２３または３２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号３２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ラクダ科動物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ヒト化されている。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、さらに、ＶＨＨ－１８、ＶＨＨ－６６、ＶＨＨ－８７、ＶＨＨ－９０、ＶＨＨ－１０２、ＶＨＨ－１０５、及び／またはｈｕＶＨＨ－０７７の１つ以上のフレームワーク領域（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１２９の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３０の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３１の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３２の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３３の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３４の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、配列番号１３５の配列を含むＶＨＨドメインに由来する１つ以上のフレームワーク（複数可）を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体は、ヒト化単一ドメイン抗体である。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１２９のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１３０のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１３１のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１３２のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１３３のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１３４のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１３５のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。
特定の実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、抗体ＶＨＨ－１８、ＶＨＨ－６６、ＶＨＨ－８７、ＶＨＨ－９０、ＶＨＨ－１０２、ＶＨＨ－１０５、及びｈｕＶＨＨ－０７７のうちのいずれか１つと比較して、特定のパーセント同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１２９～１３５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性のうちのいずれか１つを有するＶＨＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性のうちのいずれか１つを有するＶＨＨ配列は、参照配列に対する置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、ＣＤ２２に結合する能力を保持する。いくつかの実施形態では、配列番号１２９～１３５から選択されるアミノ酸配列において、合計１～１０のアミノ酸が置換、挿入、及び／または欠失している。いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）で生じる。任意に、抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体は、配列番号１２９～１３５から選択されるアミノ酸配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。
特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号１２９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２２に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号１３０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２２に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号１３１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２２に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号１３２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２２に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号１３３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２２に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号１３４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２２に結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、配列番号１３５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨＨドメインを含み、単一ドメイン抗体が、ＣＤ２２に結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体との相互作用に必要なＣＤ２２タンパク質中のアミノ酸を同定するために、機能的エピトープを、例えば、コンビナトリアルアラニンスキャニングでマッピングすることができる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２２に結合した抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体の立体構造及び結晶構造を使用して、エピトープを同定することができる。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、本明細書で提供される抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体のいずれかと同じエピトープに特異的に結合する。例えば、いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１３１のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１３２のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１３３のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１３４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１３５のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体と同じエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、本明細書に記載の抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体のいずれか１つと競合的にＣＤ２２に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、競合的結合は、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して決定されてもよい。例えば、いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体と競合的にＣＤ２２に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体と競合してＣＤ２２に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１３１のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体と競合してＣＤ２２に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１３２のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体と競合してＣＤ２２に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１３３のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体と競合してＣＤ２２に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１３４のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体と競合してＣＤ２２に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、配列番号１３５のアミノ酸配列を含む抗ＣＤ２２単一ドメイン抗体と競合してＣＤ２２に特異的に結合する。
いくつかの実施形態では、本ＣＡＲ内の抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、以下のセクション５．２．１．２から５．２．１．４に記載される、特徴のいずれかを単独でまたは組み合わせて組み込んでもよい。
配列番号５６～７２、８９～９２、１３６～１４２、及び３０４～３０６、ならびに３０９を含む上記のｓｄＡｂ（ＶＨＨ）をコードする核酸配列が本開示に含まれる。
５．２．１．２．ヒト化単一ドメイン抗体
本明細書に記載の単一ドメイン抗体は、ヒト化単一ドメイン抗体を含む。ラクダ科種由来の単一ドメイン抗体をヒト化するための一般的な方策が記載されており（例えば、Ｖｉｎｃｋｅｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８４（５）：３２７３－３２８４（２００９）を参照）、本明細書に開示のヒト化ＶＨＨドメインの産生に有用であってよい。ラクダ科種由来のヒト化単一ドメイン抗体の設計は、残基１１、３７、４４、４５、及び４７（Ｋａｂａｔによる残基ナンバリング）などのＶＨＨの特徴的な残基を含んでもよい（Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈ ７４：２７７－３０２（２００１））。
限定されないが、以下を含む当該技術分野で既知の種々の手法を使用して、本明細書に開示のヒト化単一ドメイン抗体などのヒト化抗体を作製することもできる：ＣＤＲ移植（欧州特許第ＥＰ２３９，４００号；国際公開第ＷＯ９１／０９９６７号；ならびに米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５３０，１０１号、及び同第５，５８５，０８９号）、ベニアリングまたは再表面化（欧州特許第ＥＰ５９２，１０６号及び同第ＥＰ５１９，５９６号；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９－４９８（１９９１）；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７（６）：８０５－８１４（１９９４）；及びＲｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ９１：９６９－９７３（１９９４））、鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）、ならびに、例えば、米国特許第６，４０７，２１３号、米国特許第５，７６６，８８６号、ＷＯ９３１７１０５、Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９ ２５（２００２）、Ｃａｌｄａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１３（５）：３５３－６０（２０００）、Ｍｏｒｅａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０（３）：２６７ ７９（２０００）、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１６）：１０６７８－８４（１９９７）、Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．９（１０）：８９５ ９０４（１９９６）、Ｃｏｕｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５（２３ Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ－５９７７ｓ（１９９５）、Ｃｏｕｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５（８）：１７１７－２２（１９９５），Ｓａｎｄｈｕ ＪＳ，Ｇｅｎｅ １５０（２）：４０９－１０（１９９４）、及びＰｅｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３５（３）：９５９－７３（１９９４）に開示の手法。米国特許公開第２００５／００４２６６４Ａ１号（２００５年２月２４日）（これらのそれぞれは、全体が参照により本明細書に組み込まれる）も参照のこと。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体は、ＣＤ２０、ＣＤ１９、またはＣＤ２２に結合するヒト化単一ドメイン抗体であり得る。例えば、本開示のヒト化単鎖抗体は、配列番号３９～５５、８５～８８、１２９～１３５、３０１～３０３、及び３０８に示される１つ以上のＣＤＲを含んでもよい。非ヒト抗体をヒト化するための様々な方法が当該技術分野で既知である。例えば、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源から導入された１つ以上のアミノ酸残基を有し得る。これらの非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合、「移入」残基と呼ばれ、これは、通常は「移入」可変ドメインから取得される。ヒト化は、例えば、超可変領域配列をヒト抗体の対応する配列に置換することによる、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－２７（１９８８）；及びＶｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－３６（１９８８）の方法に従って実施されてもよい。特定の実施形態では、本明細書で提供される単一ドメイン抗体のヒト化は、以下のセクション６に記載されるように実施される。
いくつかの場合では、ヒト化抗体は、ＣＤＲ移植で構築され、親非ヒト抗体のＣＤＲのアミノ酸配列がヒト抗体フレームワークに移植される。例えば、Ｐａｄｌａｎ ｅｔ ａｌ．により、ＣＤＲ中の残基の約３分の１のみが、実際に抗原と接触することが決定され、これらを「特異性決定残基」またはＳＤＲと呼ぶ（Ｐａｄｌａｎ ｅｔ ａｌ．，ＦＡＳＥＢ Ｊ．９：１３３－３９（１９９５））。ＳＤＲ移植の手法では、ＳＤＲ残基のみが、ヒト抗体フレームワークに移植される（例えば、Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５－３４（２００５）を参照）。
ヒト化抗体の作製に使用されるヒト可変ドメインの選択は、抗原性を低減させるために重要であり得る。例えば、いわゆる「ベストフィット」法に従って、非ヒト抗体の可変ドメインの配列が、既知のヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対してスクリーニングされる。非ヒト抗体のヒト配列に最も近いものが、ヒト化抗体のヒトフレームワークとして選択されてもよい（Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６－３０８（１９９３）；及びＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－１７（１９８７））。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループの全てのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークが、いくつかの異なるヒト化抗体に使用されてもよい（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：４２８５－８９（１９９２）；及びＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３－３２（１９９３））。いくつかの場合では、フレームワークは、最も豊富なヒトサブクラスＶＬ６サブグループＩ（ＶＬ６Ｉ）、及びＶＨサブグループＩＩＩ（ＶＨＩＩＩ）のコンセンサス配列に由来する。別の方法では、ヒト生殖系列遺伝子は、フレームワーク領域の供給源として使用される。
超ヒト化と呼ばれるＣＤＲの比較に基づく別のパラダイムでは、ＦＲの相同性は、無関係である。方法は、非ヒト配列と機能的なヒト生殖系列遺伝子レパートリーとの比較からなる。次に、マウス配列と同じまたは密接に関連するカノニカル構造をコードする遺伝子が選択される。次に、非ヒト抗体と、カノニカル構造を共有する遺伝子中で、ＣＤＲ内で相同性が最も高い遺伝子がＦＲドナーとして選択される。最後に、非ヒトＣＤＲをこれらのＦＲに移植する（例えば、以下を参照：Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９－２５（２００２））。
さらに一般には、抗原に対する親和性及び他の好ましい生物学的特性を保持して、抗体がヒト化されることが望ましい。この目標を達成するために、ある方法によれば、親及びヒト化配列の３次元モデルを使用した、親配列及び様々な概念的ヒト化産物の分析プロセスにより、ヒト化抗体を調製する。３次元免疫グロブリンモデルは、一般に、入手可能であり、当業者らによく知られる。選択された候補免疫グロブリン配列の予想される３次元立体配座構造を図示及び表示するコンピュータープログラムが利用可能である。これらは、例えば、ＷＡＭ（Ｗｈｉｔｅｌｅｇｇ ａｎｄ Ｒｅｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１３：８１９－２４（２００２））、Ｍｏｄｅｌｌｅｒ（Ｓａｌｉ ａｎｄ Ｂｌｕｎｄｅｌｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３４：７７９－８１５（１９９３））、及びＳｗｉｓｓ ＰＤＢ Ｖｉｅｗｅｒ（Ｇｕｅｘ ａｎｄ Ｐｅｉｔｓｃｈ，Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ １８：２７１４－２３（１９９７））を含む。これらの表示を調査することにより、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能性がある役割の分析、例えば、候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を与える残基の分析、が可能になる。このようにして、標的抗原（複数可）に対する親和性の増加などの所望の抗体特性が達成されるように、ＦＲ残基をレシピエント及び移入配列から選択して組み合わせることができる。一般に、超可変領域残基は、抗原結合への影響に直接且つ最も実質的に関与する。
抗体をヒト化する別の方法は、ヒト鎖含量（Ｈｕｍａｎ Ｓｔｒｉｎｇ Ｃｏｎｔｅｎｔ）（ＨＳＣ）と呼ばれる抗体のヒト性の測定基準に基づいている。この方法は、マウス配列をヒト生殖系列遺伝子のレパートリーと比較し、その違いがＨＳＣとして点数化される。次に、標的配列は、複数の多様なヒト化バリアントを生成するためにグローバル同一性尺度を使用する代わりに、ＨＳＣを最大化することにより、ヒト化される（Ｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４４：１９８６－９８（２００７））。
上記の方法に加えて、実験的方法は、ヒト化抗体を生成及び選択するために使用されてもよい。これらの方法は、ヒト化バリアントの大規模ライブラリーの生成及び濃縮技術またはハイスループットスクリーニング手法を使用した最良のクローンの選択に基づくものを含む。抗体バリアントは、ファージ、リボソーム、及び酵母ディスプレイライブラリーから、ならびに細菌コロニースクリーニングにより単離され得る（例えば、以下を参照：Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１１０５－１６（２００５）；Ｄｕｆｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２４：５２３－２９（２００６）；Ｆｅｌｄｈａｕｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：１６３－７０（２００３）；及びＳｃｈｌａｐｓｃｈｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．１７：８４７－６０（２００４））。
ＦＲライブラリーアプローチでは、残基バリアントのコレクションがＦＲの特定の位置に導入され、続いて、移植されたＣＤＲを最もよくサポートするＦＲを選択するために、ライブラリーをスクリーニングする。置換されるべき残基は、ＣＤＲ構造に潜在的に寄与すると確認された「Ｖｅｒｎｉｅｒ」残基の一部または全部（例えば、以下を参照：Ｆｏｏｔｅ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７－９９（１９９２））、またはＢａｃａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－８４（１９９７）により同定された標的残基のより制限されたセット由来のものを含み得る。
ＦＲシャッフリングでは、選択された残基バリアントのコンビナトリアルライブラリーを作成する代わりに、ＦＲ全体が非ヒトＣＤＲと組み合わされる（例えば、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３－６０（２００５）を参照）。１ステップＦＲシャッフルプロセスが、使用されてもよい。得られた抗体は、発現の増強、親和性の増加、及び熱安定性を含む改善された生化学的及び物理化学的特性を示したので、そのようなプロセスは、効率的であることが示されている（例えば、Ｄａｍｓｃｈｒｏｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４４：３０４９－６０（２００７）を参照）。
「ヒューマニアリング」法は、必須最小特異性決定因子（ＭＳＤ）の実験的同定に基づいており、非ヒトフラグメントをヒトＦＲのライブラリーに順次置換し、結合を評価することに基づいている。この方法論は、通常、異なるヒトＶセグメントＣＤＲを有する複数のサブクラスからの抗体のエピトープ保持及び同定をもたらす。
「ヒト工学」法は、ヒトの免疫原性を低減させた（それにもかかわらず、元の非ヒト抗体のその望ましい結合特性を保持する）改変抗体を産生するために、抗体のアミノ酸配列に特定の変更を加えることにより、非ヒト抗体または抗体フラグメントを変更することを含む。一般に、この手法は、非ヒト抗体のアミノ酸残基を、「低リスク」、「中リスク」、または「高リスク」残基として分類することを含む。置換が結果として生じる抗体の折りたたみに影響を与えるリスクに対して、特定の置換（例えば、ヒトの免疫原性）を行うことの予測される利益を評価する全体的なリスク／リワード計算を使用して、分類が行われる。非ヒト抗体の可変領域由来のアミノ酸配列を、特定のまたはコンセンサスヒト抗体配列の対応する領域とアラインすることにより、非ヒト抗体配列の所与の位置（例えば、低リスクまたは中リスク）で置換されるべき特定のヒトアミノ酸残基を選択することができる。アラインメントに従って、非ヒト配列の低リスクまたは中リスク位置のアミノ酸残基を、ヒト抗体配列の対応する残基と置換することができる。ヒト操作されたタンパク質の作製手法は、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７：８０５－１４（１９９４）；米国特許第５，７６６，８８６号；同第５，７７０，１９６号；同第５，８２１，１２３号；及び同第５，８６９，６１９号；ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ９３／１１７９４号に詳細に記載される。
例えば、Ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（商標）技術（Ａｎｔｉｔｏｐｅ Ｌｔｄ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）を使用して、複合ヒト抗体を生成することができる。複合ヒト抗体を生成するために、可変領域配列は、Ｔ細胞エピトープを回避する方法で複数のヒト抗体可変領域配列のフラグメントから設計され、それにより、得られる抗体の免疫原性が最小限に抑えられる。
脱免疫化抗体は、Ｔ細胞エピトープが除去されている抗体である。脱免疫化抗体を作製する方法が記載されている。例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．５２５：４０５－２３（２００９），ｘｉｖ，及びＤｅ Ｇｒｏｏｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４４：１４８－１５３（２００６）を参照のこと。脱免疫化抗体は、Ｔ細胞エピトープ枯渇可変領域及びヒト定常領域を含む。要約すると、抗体の可変領域がクローン化され、その後、Ｔ細胞エピトープが、Ｔ細胞増殖アッセイで抗体の可変領域に由来する重複ペプチドを試験することにより同定される。Ｔ細胞エピトープは、ヒトＭＨＣクラスＩＩに結合するペプチドを同定するｉｎ ｓｉｌｉｃｏ法により同定される。ヒトＭＨＣクラスＩＩへの結合を無効にするために、変異が可変領域に導入される。次に、変異可変領域は、脱免疫化抗体を生成するために利用される。
５．２．１．３．単一ドメイン抗体バリアント
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ内の単一ドメイン抗体のアミノ酸配列改変（複数可）が企図される。例えば、限定されないが、特異性、熱安定性、発現レベル、エフェクター機能、グリコシル化、免疫原性の低減、または溶解性を含む、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を最適化することが望ましいことがある。従って、本明細書に記載の単一ドメイン抗体に加えて、本明細書に記載の単一ドメイン抗体のバリアントを調製することができることが企図される。例えば、適切なヌクレオチド変化をコードＤＮＡに導入することにより、及び／または所望の抗体もしくはポリペプチドの合成により、単一ドメイン抗体バリアントを調製することができる。当業者らは、アミノ酸変化が単一ドメイン抗体の翻訳後プロセスを変化させ得ることを認識する。
変化は、元の抗体またはポリペプチドと比較してアミノ酸配列の変化をもたらす、単一ドメイン抗体またはポリペプチドをコードする１つ以上のコドンの置換、欠失、または挿入であってよい。置換変異導入の目的の部位は、ＣＤＲ及びＦＲを含む。
アミノ酸置換は、あるアミノ酸を、類似の構造的及び／または化学的性質を有する別のアミノ酸で置換すること、例えば、ロイシンをセリンで置換すること、例えば、保存的アミノ酸置換、の結果であり得る。本明細書で提供される分子をコードするヌクレオチド配列に変異を導入するために、例えば、アミノ酸置換をもたらす部位特異的変異導入及びＰＣＲ媒介変異導入を含む当業者らに既知の標準的手法を使用することができる。挿入または欠失は、任意に、約１～５個のアミノ酸の範囲であり得る。特定の実施形態では、置換、欠失、または挿入は、元の分子と比較して、２５未満のアミノ酸置換、２０未満のアミノ酸置換、１５未満のアミノ酸置換、１０未満のアミノ酸置換、５未満のアミノ酸置換、４未満のアミノ酸置換、３未満のアミノ酸置換、または２未満のアミノ酸置換を含む。特定の実施形態では、置換は、１つ以上の予測される非必須アミノ酸残基で行われる保存的アミノ酸置換である。配列中のアミノ酸の挿入、欠失、または置換を体系的に行い、得られたバリアントを親抗体により示される活性について試験することにより、許容された変化が決定されてもよい。
アミノ酸配列の挿入は、１残基から、複数の残基を含むポリペプチドまでの長さのアミノ末端及び／またはカルボキシル末端の融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。
保存的アミノ酸置換で生成された単一ドメイン抗体は、本開示に含まれる。保存的アミノ酸置換では、アミノ酸残基は、同様の電荷を有する側鎖を有するアミノ酸残基で置換される。上記のように、同様の電荷を有する側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが当該技術分野で定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。あるいは、例えば、飽和変異導入などにより、コード配列の全部または一部に沿ってランダムに、変異を導入することができ、活性を保持する変異体を同定するために、生物活性についてスクリーニングすることができる。変異導入後、コードされたタンパク質を発現させることができ、タンパク質の活性を決定することができる。特性を維持するか、または有意に変化させないように、保存的（例えば、類似の特性及び／または側鎖を有するアミノ酸群内で）置換が行われてもよい。例示的置換が以下の表３に示される。
（表３）アミノ酸置換
Figure 2023546766000005
アミノ酸は、それらの側鎖の特性の類似性に従ってグループ化されてもよい（例えば、Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ７３－７５（２ｄ ｅｄ．１９７５）を参照）：（１）非極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）；（２）非荷電極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）；（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）；及び、（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）。あるいは、天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づいて、以下の群に分けられてもよい：（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖の配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；及び、（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。例えば、単一ドメイン抗体の適切な立体配座の維持に関与していない任意のシステイン残基は、また、分子の酸化安定性を改善し且つ異常な架橋を防ぐために、別のアミノ酸、例えば、アラニンまたはセリン、で置換されてもよい。非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを、別のクラスに交換する必要がある。
置換バリアントの１つのタイプは、親抗体（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを含む。一般に、さらなる研究のために選択された得られたバリアント（複数可）は、親抗体と比較して、特定の生物学的特性（例えば、親和性の増加、免疫原性の減少）において改変（例えば、改善）を有し、及び／または、親抗体の特定の生物学的特性を実質的に保持することになる。例示的な置換バリアントは、親和性成熟抗体であり、これは、例えば、本明細書に記載されるようなファージディスプレイベースの親和性成熟手法を使用して、簡便に生成されてもよい。要約すると、１つ以上のＣＤＲ残基が、変異し、バリアント抗体が、ファージ上に提示され、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
例えば、抗体親和性を改善するために、ＣＤＲにおいて、改変（例えば、置換）が行われてもよい。そのような改変は、ＣＤＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で変異を受けるコドンにコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９－１９６（２００８）を参照）、及び／またはＳＤＲ（α－ＣＤＲ）において行われてもよく、得られたバリアント抗体またはそのフラグメントは、結合親和性について試験される。２次ライブラリーの構築及び再選択による親和性成熟は、例えば、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））のＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施形態では、様々な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、またはオリゴヌクレオチド特異的変異導入）のいずれかにより、成熟について選択された可変遺伝子に多様性が導入される。次に、２次ライブラリーが作成される。次に、ライブラリーは、所望の親和性を有する任意の抗体バリアントを同定するためにスクリーニングされる。多様性を導入する別の方法は、いくつかのＣＤＲ残基（例えば、一度に４～６残基）がランダム化されるＣＤＲ特異的アプローチを含む。抗原結合に関与するＣＤＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異導入またはモデリングを使用して、特異的に同定されてもよい。親和性成熟に関するより詳細な説明は、以下のセクションで提供される。
いくつかの実施形態では、抗体が抗原に結合する能力を、そのような改変が実質的に低減させない限り、置換、挿入、または欠失は、１つ以上のＣＤＲ内で生じ得る。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的改変（例えば、本明細書で提供される保存的置換）がＣＤＲで行われてもよい。本明細書で提供されるバリアントＶＨＨ配列のいくつかの実施形態では、各ＣＤＲは、変更されていないか、または１つ、２つもしくは３つ以下のアミノ酸置換を含有する。
変異導入の標的となり得る抗体の残基または領域の同定に有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１－１０８５（１９８９）に記載される「アラニンスキャニング変異導入」と呼ばれる。この方法では、標的残基の残基または群（例えば、荷電残基、例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、及びＧｌｕ）が同定され、抗原の抗体との相互作用が影響を受けるかどうかを判定するために、中性または負荷電アミノ酸（例えば、アラニンもしくはポリアラニン）で置換される。最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸位置にさらなる置換が導入されてもよい。代替的または追加的に、抗体及び抗原間の接触点を同定するための抗原－抗体複合体の結晶構造。そのような接触残基及び隣接残基は、置換の候補として標的とされてもまたは排除されてもよい。バリアントは、それらが所望の特性を含有するかどうかを決定するためにスクリーニングされてもよい。
アミノ酸配列の挿入には、１残基から、１００残基以上を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端及び／またはカルボキシル末端の融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントには、抗体のＮ末端またはＣ末端に酵素（例えば、ＡＤＥＰＴの場合）または抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドを融合することを含む。
オリゴヌクレオチド媒介（部位特異的）変異導入、アラニンスキャニング、及びＰＣＲ変異導入などの当該技術分野で既知の方法を使用して、変化をもたらすことができる。単一ドメイン抗体バリアントＤＮＡを生成するために、部位特異的変異導入（例えば、Ｃａｒｔｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２３７：１－７（１９８６）；及びＺｏｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１０：６４８７－５００（１９８２）を参照）、カセット変異導入（例えば、Ｗｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ ３４：３１５－２３（１９８５）を参照）、または他の既知の手法を、クローン化ＤＮＡに実施することができる。
５．２．１．４．ｉｎ ｖｉｔｒｏ親和性成熟
いくつかの実施形態では、親抗体と比較して、親和性、安定性、または発現レベルなどの特性が改善された抗体バリアントが、ｉｎ ｖｉｔｒｏ親和性成熟により調製されてもよい。自然のプロトタイプと同様に、ｉｎ ｖｉｔｒｏ親和性成熟は、変異及び選択の原則に基づく。抗体のライブラリーは、生物（例えば、ファージ、細菌、酵母、もしくは哺乳動物細胞）の表面上に、またはそれらのコードｍＲＮＡまたはＤＮＡと（例えば、共有結合的または非共有結合的に）会合して提示される。表示された抗体の親和性選択により、抗体をコードする遺伝情報を運ぶ生物または複合体の分離が可能になる。ファージディスプレイなどのディスプレイ法を使用した２回または３回の変異及び選択により、通常、低ナノモル範囲の親和性を有する抗体フラグメントがもたらされる。親和性成熟抗体は、標的抗原に対してナノモルまたはさらにピコモルの親和性を有し得る。
ファージディスプレイは、抗体のディスプレイ及び選択のための広範な方法である。抗体は、バクテリオファージコートタンパク質への融合物としてＦｄまたはＭ１３バクテリオファージの表面に表示される。選択は、ファージに提示された抗体の標的への結合を可能にする抗原への曝露（「パニング」と呼ばれるプロセス）を含む。さらなる選択ラウンドのためのファージを生成するために、抗原に結合したファージが回収されて、使用される。概説については、例えば、以下を参照のこと：Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１７８：１－３７（２００２）；及びＢｒａｄｂｕｒｙ ａｎｄ Ｍａｒｋｓ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２９０：２９－４９（２００４）。
酵母ディスプレイシステム（例えば、Ｂｏｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５：５５３－５７（１９９７）；及びＣｈａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ １：７５５－６８（２００６）を参照）では、抗体は、酵母凝集素タンパク質Ａｇａ２ｐの接着サブユニットに融合されてもよく、これは、Ａｇａ１ｐへのジスルフィド結合を介して酵母細胞壁に結合する。Ａｇａ２ｐを介したタンパク質のディスプレイは、タンパク質を細胞表面から突出し、酵母細胞壁上の他の分子との潜在的な相互作用を最小限に抑える。磁気分離及びフローサイトメトリーは、ライブラリーをスクリーニングし、親和性または安定性が向上した抗体を選択するために使用される。目的の可溶性抗原への結合は、ビオチン化抗原及び蛍光体にコンジュゲートされた２次試薬、例えば、ストレプトアビジンで、酵母を標識することにより決定される。抗体の表面発現の変化は、単鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）に隣接するヘマグルチニンまたはｃ－Ｍｙｃエピトープタグのいずれかの免疫蛍光標識で測定することができる。発現は、提示されたタンパク質の安定性と相関することが示されており、それにより、安定性及び親和性を改善するために、抗体を選択することができる（例えば、Ｓｈｕｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９２：９４９－５６（１９９９）を参照）。酵母ディスプレイの追加の利点は、小胞体シャペロン及び品質管理機序を利用して、提示されたタンパク質が真核酵母細胞の小胞体で折りたたまれることである。成熟が完了すると、酵母の表面に提示される間、抗体親和性を簡便に「滴定」することができ、これにより、各クローンの発現及び精製の必要がなくなる。酵母の表面提示の理論的な制限は、機能ライブラリーサイズが他の提示方法のサイズよりも小さい可能性があるが、最近のアプローチは、酵母細胞の配偶システムを使用して、サイズが１０１４であると推定されるコンビナトリアル多様性が生じる（例えば、米国特許公開第２００３／０１８６３７４号；及びＢｌａｉｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ ３４２：２１１－１８（２００４）を参照）。
リボソームディスプレイでは、無細胞系での選択のために抗体－リボソーム－ｍＲＮＡ（ＡＲＭ）複合体が生成される。抗体の特定のライブラリーをコードするＤＮＡライブラリーは、終止コドンを欠くスペーサー配列に遺伝的に融合される。このスペーサー配列は、翻訳された場合、依然として、ペプチジルｔＲＮＡに結合しており、リボソームトンネルを占有し、それにより、目的のタンパク質がリボソームから突き出て、折りたたまれることが可能になる。得られたｍＲＮＡ、リボソーム、及びタンパク質の複合体は、表面に結合したリガンドに結合し得、これにより、リガンドを用いるアフィニティーキャプチャーにより、抗体及びそのコードｍＲＮＡを同時に単離することが可能である。次に、リボソーム結合ｍＲＮＡは、逆転写されてｃＤＮＡに戻り、次に、変異導入を受け、次の選択ラウンドで使用することができる（例えば、Ｆｕｋｕｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３４：ｅ１２７（２００６）を参照）。ｍＲＮＡディスプレイでは、ピューロマイシンをアダプター分子として使用して、抗体及びｍＲＮＡ間の共有結合が確立される（Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９８：３７５０－５５（２００１））。
これらの方法は、完全にｉｎ ｖｉｔｒｏで実施されるので、他の選択技術に優る２つの主な利点がある。まず、ライブラリーの多様性は、細菌細胞の形質転換効率により制限されるのではなく、試験管内に存在するリボソーム及び異なるｍＲＮＡ分子の数によってのみ制限される。次に、任意の多様化ステップの後にライブラリーを変換する必要がないため、例えば、非校正ポリメラーゼにより、各選択ラウンドの後にランダムな変異を簡単に導入することができる。
いくつかの実施形態では、哺乳動物のディスプレイシステムが使用されてもよい。
多様性は、また、標的指向性の方法で、またはランダムな導入を介して、抗体ライブラリーのＣＤＲに導入され得る。前者のアプローチは、高レベルまたは低レベルの変異導入を介して抗体の全てのＣＤＲを連続的に標的にすること、あるいは体細胞超変異の単離されたホットスポット（例えば、Ｈｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８０：６０７－１７（２００５））または実験的根拠もしくは構造上の理由で親和性に影響を与えると疑われる残基を連続して標的にすることを含む。多様性は、また、ＤＮＡシャッフリングまたは同様の手法を介して自然に多様である領域の置換により導入され得る（例えば、Ｌｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：４３４９６－５０７（２００３）；米国特許第５，５６５，３３２号及び同第６，９８９，２５０号を参照）。代替手法は、フレームワーク領域残基に伸びる超可変ループを標的とし（例えば、Ｂｏｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４８：６９９－７０９（２００５）を参照）、ＣＤＲ内のループ欠失及び挿入を用いるか、または、ハイブリダイゼーションベースの多様性を使用する（例えば、米国特許公開第２００４／０００５７０９号を参照）。ＣＤＲにおいて多様性を生成する追加の方法は、例えば、米国特許第７，９８５，８４０号に開示される。抗体ライブラリー及び／または抗体親和性成熟を生成するために使用することができるさらなる方法は、例えば、米国特許第８，６８５，８９７号及び同第８，６０３，９３０号、ならびに米国公開第２０１４／０１７０７０５号、同第２０１４／００９４３９２号、同第２０１２／００２８３０１号、同第２０１１／０１８３８５５号、及び同第２００９／００７５３７８号に開示され、これらのそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる。
ライブラリーのスクリーニングは、当該技術分野で既知の様々な技術により達成することができる。例えば、単一ドメイン抗体を、固体支持体、カラム、ピン、もしくはセルロース／ポリ（フッ化ビニリデン）膜／他のフィルターに固定するか、吸着プレートに固定された宿主細胞上で発現させるか、または細胞選別に使用するか、または、ストレプトアビジンでコーティングされたビーズを用いた捕捉のためにビオチンにコンジュゲートするか、またはディスプレイライブラリーをパニングするための任意の他の方法で使用することができる。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ親和性成熟方法の概説については、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３：１１０５－１６（２００５）；Ｑｕｉｒｏｚ ａｎｄ Ｓｉｎｃｌａｉｒ，Ｒｅｖｉｓｔａ Ｉｎｇｅｎｅｒｉａ Ｂｉｏｍｅｄｉａ ４：３９－５１（２０１０）；及びそれらの中の参考文献を参照のこと。
５．２．２．ＣＤ２０×ＣＤ１９二重特異性ＣＡＲ
別の態様では、細胞外抗原結合ドメイン内に、本明細書で提供される抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ（例えば、セクション５．２．１に記載）及び本明細書で提供される抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ（例えば、セクション５．２．１に記載）を含むＣＤ２０及びＣＤ１９を標的とする二重特異性ＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ（例えば、抗ＣＤ２０ ＶＨＨ）は、膜貫通ドメインに対する抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ（例えば、抗ＣＤ１９ ＶＨＨ）よりも、膜貫通ドメインに近い。他の実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ（例えば、抗ＣＤ１９ ＶＨＨ）は、膜貫通ドメインに対する抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ（例えば、抗ＣＤ２０ ＶＨＨ）よりも、膜貫通ドメインに近い。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される二重特異性ＣＡＲは、（ａ）抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ及び抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂを含む、細胞外抗原結合ドメイン；（ｂ）膜貫通ドメイン；ならびに、（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン、を含み、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂが、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号３０１、配列番号３０２、または配列番号３０３の配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂが、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、または配列番号３０８の配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
特定の具体的なの実施形態では、本明細書で提供される二重特異性ＣＡＲは、以下の表４に例示される抗ＣＤ２０ ＶＨＨ及び抗ＣＤ１９ ＶＨＨのペアを含む。他の特定の実施形態では、本明細書で提供される二重特異性ＣＡＲは、以下の表４に例示される抗ＣＤ２０ ＶＨＨ及び抗ＣＤ１９ ＶＨＨのペアの抗ＣＤ２０ ＶＨＨのＣＤＲ及び抗ＣＤ１９ ＶＨＨのＣＤＲを含む。
（表４）例示的なＣＤ２０×ＣＤ１９二重特異性ＣＡＲ
Figure 2023546766000006
Figure 2023546766000007
５．２．３．ＣＤ２０×ＣＤ２２二重特異性ＣＡＲ
さらに別の態様では、細胞外抗原結合ドメイン内の、本明細書で提供される抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ（例えば、セクション５．２．１に記載）及び本明細書で提供される抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂ（例えば、セクション５．２．１に記載）を含む、ＣＤ２０及びＣＤ２２を標的とする二重特異性ＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ（例えば、抗ＣＤ２０ ＶＨＨ）は、膜貫通ドメインに対する抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂ（例えば、抗ＣＤ２２ ＶＨＨ）よりも、膜貫通ドメインに近い。他の実施形態では、抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂ（例えば、抗ＣＤ２２ ＶＨＨ）は、膜貫通ドメインに対する抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ（例えば、抗ＣＤ２０ ＶＨＨ）よりも、膜貫通ドメインに近い。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される二重特異性ＣＡＲは、（ａ）抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂを含む、細胞外抗原結合ドメイン；（ｂ）膜貫通ドメイン；ならびに、（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン、を含み、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂが、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号３０１、配列番号３０２、または配列番号３０３の配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂが、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、または配列番号１３５の配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
特定の具体的なの実施形態では、本明細書で提供される二重特異性ＣＡＲは、以下の表５に例示される抗ＣＤ２０ ＶＨＨ及び抗ＣＤ２２ ＶＨＨのペアを含む。他の特定の実施形態では、本明細書で提供される二重特異性ＣＡＲは、以下の表５に例示される抗ＣＤ２０ ＶＨＨ及び抗ＣＤ２２ ＶＨＨのペアの抗ＣＤ２０ ＶＨＨのＣＤＲ及び抗ＣＤ１９ ＶＨＨのＣＤＲを含む。
（表５）例示的なＣＤ２０×ＣＤ２２二重特異性ＣＡＲ
Figure 2023546766000008
Figure 2023546766000009
５．２．４．ＣＤ１９×ＣＤ２２二重特異性ＣＡＲ
さらに別の態様では、ＣＤ１９及びＣＤ２２を標的とする二重特異性ＣＡＲが本明細書で提供され、これは、細胞外抗原結合ドメイン内に、本明細書で提供される抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ（例えば、セクション５．２．１に記載）及び本明細書で提供される抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂ（例えば、セクション５．２．１に記載）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ（例えば、抗ＣＤ１９ ＶＨＨ）は、膜貫通ドメインに対する抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂ（例えば、抗ＣＤ２２ ＶＨＨ）よりも、膜貫通ドメインに近い。他の実施形態では、抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂ（例えば、抗ＣＤ２２ ＶＨＨ）は、膜貫通ドメインに対する抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ（例えば、抗ＣＤ１９ ＶＨＨ）よりも、膜貫通ドメインに近い。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される二重特異性ＣＡＲは、（ａ）抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂを含む、細胞外抗原結合ドメイン；（ｂ）膜貫通ドメイン；ならびに、（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン、を含み、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂが、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、または配列番号３０８の配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂが、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、または配列番号１３５の配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
特定の具体的なの実施形態では、本明細書で提供される二重特異性ＣＡＲは、以下の表６に例示される抗ＣＤ１９ ＶＨＨ及び抗ＣＤ２２ ＶＨＨのペアを含む。他の特定の実施形態では、本明細書で提供される二重特異性ＣＡＲは、以下の表６に例示される抗ＣＤ１９ ＶＨＨ及び抗ＣＤ２２ ＶＨＨのペアの抗ＣＤ１９ ＶＨＨのＣＤＲ及び抗ＣＤ２２ ＶＨＨのＣＤＲを含む。
（表６）例示的なＣＤ１９×ＣＤ２２二重特異性ＣＡＲ
Figure 2023546766000010
５．２．５．ＣＤ２０×ＣＤ１９×ＣＤ２２三重特異性ＣＡＲ
さらに別の態様では、ＣＤ２０、ＣＤ１９、及びＣＤ２２を標的とする三重特異性ＣＡＲが本明細書で提供され、これは、細胞外抗原結合ドメイン内に、本明細書で提供される抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ（例えば、セクション５．２．１に記載）、本明細書で提供される抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ（例えば、セクション５．２．１に記載）、及び本明細書で提供される抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂ（例えば、セクション５．２．１に記載）を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、膜貫通ドメインに対する抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂまたは抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂよりも、膜貫通ドメインに近い。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂのＮ末端にある。他の実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂのＣ末端にある。いくつかの実施形態では、Ｎ末端からＣ末端までの本明細書で提供されるＣＡＲ内の３つのｓｄＡｂの順序は、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂである。他の実施形態では、Ｎ末端からＣ末端までのＣＡＲ内の３つのｓｄＡｂの順序は、抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂ、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂである。
他の実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、膜貫通ドメインに対する抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂまたは抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂよりも、膜貫通ドメインに近い。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂのＮ末端にある。他の実施形態では、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂのＣ末端にある。いくつかの実施形態では、Ｎ末端からＣ末端までのＣＡＲ内の３つのｓｄＡｂの順序は、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ、抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂである。他の実施形態では、Ｎ末端からＣ末端までのＣＡＲ内の３つのｓｄＡｂの順序は、抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂ、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂである。
さらに他の実施形態では、抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、膜貫通ドメインに対する抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂまたは抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂよりも、膜貫通ドメインに近い。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂのＮ末端にある。他の実施形態では、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂのＣ末端にある。いくつかの実施形態では、Ｎ末端からＣ末端までのＣＡＲ内の３つのｓｄＡｂの順序は、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂである。他の実施形態では、Ｎ末端からＣ末端までのＣＡＲ内の３つのｓｄＡｂの順序は、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂである。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される三重特異性ＣＡＲは、（ａ）抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂを含む、細胞外抗原結合ドメイン；（ｂ）膜貫通ドメイン；ならびに、（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン、を含み、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂが、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号３０１、配列番号３０２、または配列番号３０３の配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂが、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、または配列番号３０８の配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂが、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、または配列番号１３５の配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
特定の具体的なの実施形態では、本明細書で提供される三重特異性ＣＡＲは、以下の表７に例示される抗ＣＤ２０ ＶＨＨ、抗ＣＤ１９ ＶＨＨ及び抗ＣＤ２２ ＶＨＨの組み合わせを含む。他の特定の実施形態では、本明細書で提供される三重特異性ＣＡＲは、以下の表７に例示される抗ＣＤ２０ ＶＨＨ、抗ＣＤ１９ ＶＨＨ、及び抗ＣＤ２２ ＶＨＨの組み合わせの抗ＣＤ２０ ＶＨＨのＣＤＲ、抗ＣＤ１９ ＶＨＨのＣＤＲ、及び抗ＣＤ２２ ＶＨＨのＣＤＲを含む。
（表７）例示的なＣＤ２０×ＣＤ１９×ＣＤ２２三重特異性ＣＡＲ
Figure 2023546766000011
Figure 2023546766000012
Figure 2023546766000013
Figure 2023546766000014
Figure 2023546766000015
Figure 2023546766000016
Figure 2023546766000017
Figure 2023546766000018
いくつかの特定の実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲは、表９及び表１２のＶＨＨドメインの組み合わせを含む。具体的には、いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲは、ＶＨＨ－４９６、ＶＨＨ－６６、及びＶＨＨ－０８３を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲは、ＶＨＨ－２７３、ＶＨＨ－６６、及びＶＨＨ－０８３を含む。
他の実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲは、ｈｕＶＨＨ－７４６、ｈｕＶＨＨ－７７３、及びｈｕＶＨＨ－０７７を含む。他の実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲは、ｈｕＶＨＨ－７５０、ｈｕＶＨＨ－７７３、及びｈｕＶＨＨ－０７７を含む。他の実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲは、ｈｕＶＨＨ－７５３、ｈｕＶＨＨ－７７３、及びｈｕＶＨＨ－０７７を含む。他の実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲは、ｈｕＶＨＨ－２５３、ｈｕＶＨＨ－７７３、及びｈｕＶＨＨ－０７７を含む。他の実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲは、ｈｕＶＨＨ－２５６、ｈｕＶＨＨ－７７３、及びｈｕＶＨＨ－０７７を含む。他の実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲは、ｈｕＶＨＨ－２５３、ｈｕＶＨＨ－７７６、及びｈｕＶＨＨ－０７７を含む。他の実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲは、ｈｕＶＨＨ－２５６、ｈｕＶＨＨ－７７６、及びｈｕＶＨＨ－０７７を含む。他の実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲは、ｈｕＶＨＨ－７４６、ｈｕＶＨＨ－７７６、及びｈｕＶＨＨ－０７７を含む。他の実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲは、ｈｕＶＨＨ－７５０、ｈｕＶＨＨ－７７６、及びｈｕＶＨＨ－０７７を含む。他の実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲは、ｈｕＶＨＨ－７５３、ｈｕＶＨＨ－７７６、及びｈｕＶＨＨ－０７７を含む。
５．２．６．他の多重特異性ＣＡＲ
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される多重特異性ＣＡＲは、１つ以上の追加の抗原に結合する１つ以上の追加の結合ドメイン（例えば、ｓｄＡｂ）をさらに含む。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲにより標的とされる追加の抗原（複数可）は、細胞表面分子である。単一ドメイン抗体は、特定の疾患状態と関連する標的細胞上の細胞表面マーカーとして作用する抗原を認識するように選択されてもよい。いくつかの実施形態では、抗原は、腫瘍抗原である。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、Ｂ細胞悪性腫瘍と関連する。腫瘍は、免疫応答、特に、Ｔ細胞媒介性免疫応答の標的抗原として機能し得る多数のタンパク質を発現する。ＣＡＲにより標的とされる抗原は、単一の疾患細胞上の抗原、またはそれぞれが疾患に寄与する異なる細胞上で発現される抗原であってよい。ＣＡＲにより標的とされる抗原は、疾患に直接的または間接的に関与することがある。
腫瘍抗原は、免疫応答、特に、Ｔ細胞媒介性免疫応答を誘発し得る腫瘍細胞により産生されるタンパク質である。本開示の追加の標的抗原の選択は、処置されるべき特定のタイプのがんに依存するであろう。例示的な腫瘍抗原としては、神経膠腫関連抗原、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、β－ヒト絨毛性ゴナドトロピン、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、チログロブリン、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、Ｍ－ＣＳＦ、プロスターゼ、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ｐ５３、プロステイン、ＰＳＭＡ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、サバイビン及びテロメラーゼ、前立腺がん腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１）、ＭＡＧＥ、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、エフリンＢ２、インスリン成長因子（ＩＧＦ）－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦ－Ｉ受容体及びメソテリンが挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、悪性腫瘍と関連する１つ以上の抗原性がんエピトープを含む。悪性腫瘍は、免疫攻撃の標的抗原として機能し得る多数のタンパク質を発現する。これらの分子は、組織特異的抗原、例えば、黒色腫のＭＡＲＴ－１、チロシナーゼ、及びｇｐ１００、ならびに、前立腺がんの前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）及び前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）を含むが、これらに限定されない。他の標的分子は、がん遺伝子ＨＥＲ２／Ｎｅｕ／ＥｒｂＢ－２などの形質転換関連分子の群に属する。標的抗原のさらに別の群は、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）などのがん胎児性抗原である。Ｂ細胞リンパ腫では、腫瘍特異的イディオタイプ免疫グロブリンが、個々の腫瘍に固有の真の腫瘍特異的免疫グロブリン抗原を構成する。ＣＤ２０に加えて、Ｂ細胞分化抗原、例えば、ＣＤ２２及びＣＤ３７は、Ｂ細胞リンパ腫の標的抗原の他の候補である。
いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、腫瘍特異抗原（ＴＳＡ）または腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である。ＴＳＡは、腫瘍細胞に固有のものであり、体内の他の細胞には発生しない。ＴＡＡ関連抗原は、腫瘍細胞に固有のものではなく、代わりに、抗原に対する免疫寛容の状態を誘導できない条件下で正常細胞にも発現される。腫瘍上での抗原の発現は、免疫系が抗原に応答することを可能にする条件下で起こり得る。ＴＡＡは、免疫系が未熟で応答できない場合、胎児の発育中に正常細胞に発現する抗原であっても、通常は正常細胞に非常に低いレベルで存在する抗原であってもよいが、これは、腫瘍細胞にはるかに高いレベルで発現される。
ＴＳＡまたはＴＡＡ抗原の非限定例としては、分化抗原、例えば、ＭＡＲＴ－１／ＭｅｌａｎＡ（ＭＡＲＴ－１）、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ １７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、及び腫瘍特異的多系統抗原、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ｐｌ５；過剰発現胚性抗原、例えば、ＣＥＡ；過剰発現がん遺伝子及び変異がん抑制遺伝子、例えば、ｐ５３、Ｒａｓ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ；染色体転座に起因する固有の腫瘍抗原、例えば、ＢＣＲ－ＡＢＬ、Ｅ２Ａ－ＰＲＬ、Ｈ４－ＲＥＴ、ＩＧＨ－ＩＧＫ、ＭＹＬ－ＲＡＲ；ならびに、ウイルス抗原、例えば、エプスタインバーウイルス抗原ＥＢＶＡ及びヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６及びＥ７が挙げられる。
他の大きなタンパク質ベースの抗原としては、ＴＳＰ－１８０、ＭＡＧＥ－４、ＭＡＧＥ－５、ＭＡＧＥ－６、ＲＡＧＥ、ＮＹ－ＥＳＯ、ｐｌ８５ｅｒｂＢ２、ｐｌ８０ｅｒｂＢ－３、ｃ－ｍｅｔ、ｎｍ－２３ＨＩ、ＰＳＡ、ＴＡＧ－７２、ＣＡ １９－９、ＣＡ ７２－４、ＣＡＭ １７．１、ＮｕＭａ、Ｋ－ｒａｓ、ベータ－カテニン、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ－１、ｐ１５、ｐ１６、４３－９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、アルファ－フェトプロテイン、ベータ－ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ １２５、ＣＡ １５－３＼ＣＡ ２７．２９＼ＢＣＡＡ、ＣＡ １９５、ＣＡ ２４２、ＣＡ－５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８＼Ｐ１、ＣＯ－０２９、ＦＧＦ－５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３＼ＥｐＣＡＭ、ＨＴｇｐ－１７５、Ｍ３４４、ＭＡ－５０、ＭＧ７－Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ－ＣＯ－１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ－９０＼Ｍａｃ－２結合タンパク質＼シクロフィリンＣ関連タンパク質、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、及びＴＰＳが挙げられる。
いくつかのより具体的な実施形態では、１つ以上の追加の抗原（複数可）は、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＢＣＭＡ、ＣＳ１、ＲＯＲ１、ＧＰＣ３、ＣＤ１２３、ＩＬ－１３Ｒ、ＣＤ１３８、ｃ－Ｍｅｔ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ－２、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ Ａ３、及び糖脂質Ｆ７７からなる群から選択される。
本明細書で提供される結合ドメイン（複数可）に加えて、本明細書で提供されるＣＡＲは、さらに、以下のうちの１つ以上を含んでもよい：リンカー（例えば、ペプチドリンカー）、膜貫通ドメイン、ヒンジ領域、シグナルペプチド、細胞内シグナル伝達ドメイン、共刺激シグナル伝達ドメインであり、これらのそれぞれは、以下により詳細に記載される。
例えば、いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）の一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζに由来する。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３、ＬＦＡ－１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３のリガンド及びその組み合わせからなる群より選択される共刺激分子に由来する。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ１３７に由来する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、さらに、細胞外抗原結合ドメインのＣ末端及び膜貫通ドメインのＮ末端間に位置するヒンジドメイン（例えば、ＣＤ８αヒンジドメイン）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、さらに、ポリペプチドのＮ末端に位置するシグナルペプチド（例えば、ＣＤ８αシグナルペプチド）を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、ＣＤ８αシグナルペプチド、細胞外抗原結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７に由来する共刺激シグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ζに由来する一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
５．２．７．ペプチドリンカー
本明細書に記載の多重特異性ＣＡＲにおける様々な単一ドメイン抗体は、ペプチドリンカーを介して互いに融合されてもよい。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体は、任意のペプチドリンカーなしで互いに直接融合される。異なる単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）を連結するペプチドリンカーは、同じであっても異なっていてもよい。ＣＡＲの異なるドメインは、また、ペプチドリンカーを介して互いに融合されてもよい。
ＣＡＲ内の各ペプチドリンカーは、単一ドメイン抗体及び／または様々なドメインの構造的及び／または機能的特徴に応じて、同じまたは異なる長さ及び／または配列を有してもよい。各ペプチドリンカーは、独立して、選択及び最適化されてもよい。ＣＡＲで使用されるペプチドリンカー（複数可）の長さ、柔軟性の程度、及び／または他の特性は、限定されないが、１つ以上の特定の抗原またはエピトープに対する親和性、特異性、または結合力を含む特性に何らかの影響を与え得る。例えば、より長いペプチドリンカーは、隣接する２つのドメインが互いに立体的に干渉しないようにするために選択されてもよい。いくつかの実施形態では、短いペプチドリンカーは、ＣＡＲの膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメイン間に配置されてもよい。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、隣接するドメインが互いに自由に移動できるように、柔軟な残基（例えば、グリシン及びセリン）を含む。例えば、グリシン－セリンダブレットは、好適なペプチドリンカーであり得る。
以下のセクション６で示されるように、ｓｄＡｂ間のペプチドリンカーの長さは、ＣＡＲ－Ｔ細胞の効果に影響を与え、短いリンカーは、長いリンカーよりも優れた効果を生じる。従って、いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、約１００、７５、５０、４０、３５、３０、２５、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、またはそれ以下のアミノ酸長のうちのいずれかである。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーの長さは、約１アミノ酸～約１０アミノ酸、約１アミノ酸～約２０アミノ酸、約１アミノ酸～約３０アミノ酸、約５アミノ酸～約１５アミノ酸、約１０アミノ酸～約２５アミノ酸、約５アミノ酸～約３０アミノ酸、約１０アミノ酸～約３０アミノ酸、約３０アミノ酸～約５０アミノ酸のうちのいずれかである。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、３０アミノ酸長以下である。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、２５アミノ酸長以下である。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、２０アミノ酸長以下、例えば、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５またはそれ以下のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、１５アミノ酸長以下である。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、１０アミノ酸長以下である。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、５アミノ酸長以下である。
ペプチドリンカーは、天然に存在する配列、または非天然に存在する配列を有してもよい。例えば、重鎖のみの抗体のヒンジ領域に由来する配列は、リンカーとして使用されてもよい。例えば、ＷＯ１９９６／３４１０３を参照。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、柔軟なリンカーである。例示的な柔軟なリンカーとしては、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ、グリシン－セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＳ）ｎ、及び（ＧＧＧＧＳ）ｎを含み、ｎは、少なくとも１の整数である）、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー、及び当該技術分野で既知の他の柔軟なリンカーが挙げられるが、これらに限定されない。例示的なペプチドリンカーは、以下の表に列挙される。特定の実施形態では、本明細書で提供される２つ以上の抗ＣＤ２０ ＶＨＨドメインを連結するペプチドリンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１４７）であり、ｎは、任意に１、２、３、４、５、または６である。
（表８）例示的なペプチドリンカー
Figure 2023546766000019
例えば、ＷＯ２０１６０１４７８９、ＷＯ２０１５１５８６７１、ＷＯ２０１６１０２９６５、ＵＳ２０１５０２９９３１７、ＷＯ２０１８０６７９９２、ＵＳ７７４１４６５、Ｃｏｌｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８２：１１９１－１１９７（１９９０）、及びＢｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６（１９８８）に記載の当該技術分野で既知の他のリンカーは、また、本明細書で提供されるＣＡＲに含まれ得、これらのそのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
５．２．８．膜貫通ドメイン
本開示のＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインに直接的または間接的に融合することができる膜貫通ドメインを含む。膜貫通ドメインは、天然または合成の供給源のいずれかに由来し得る。本明細書で使用される場合、「膜貫通ドメイン」は、細胞膜、好ましくは、真核細胞膜において熱力学的に安定している任意のタンパク質構造を指す。本明細書に記載のＣＡＲでの使用に適合する膜貫通ドメインは、天然に存在するタンパク質から得られてもよい。あるいは、それは、合成の非天然タンパク質セグメント、例えば、細胞膜中で熱力学的に安定している疎水性タンパク質セグメント、であり得る。
膜貫通ドメインは、膜貫通ドメインの３次元構造に基づいて分類される。例えば、膜貫通ドメインは、アルファへリックス、複数のアルファへリックスの複合体、ベータ－バレル、または細胞のリン脂質二重層にまたがることが可能な任意の他の安定構造を形成し得る。さらに、膜貫通ドメインは、膜貫通ドメインが膜を横切る通過回数及びタンパク質の配向を含む膜貫通ドメイントポロジーに基づいて分類されてもよい。例えば、シングルパス膜タンパク質は、細胞膜を１回横切り、マルチパス膜タンパク質は、細胞膜を少なくとも２回（例えば、２、３、４、５、６、７回またはそれ以上）横切る。膜タンパク質は、細胞の内側及び外側に対するそれらの末端及び膜通過セグメント（複数可）のトポロジーに応じて、Ｉ型、ＩＩ型、またはＩＩＩ型として定義されてもよい。Ｉ型膜タンパク質は、単一の膜貫通領域を有し、タンパク質のＮ末端が、細胞の脂質二重層の細胞外側に存在し、タンパク質のＣ末端が、細胞質側に存在するように配向されている。ＩＩ型膜タンパク質は、単一の膜貫通領域も有するが、タンパク質のＣ末端が、細胞の脂質二重層の細胞外側に存在し、タンパク質のＮ末端が、細胞質側に存在するように配向されている。ＩＩＩ型膜タンパク質は、複数の膜貫通セグメントを有し、さらに、膜貫通セグメントの数ならびにＮ末端及びＣ末端の位置に基づいて細分類されてもよい。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲの膜貫通ドメインは、Ｉ型シングルパス膜タンパク質に由来する。いくつかの実施形態では、マルチパス膜タンパク質由来の膜貫通ドメインは、また、本明細書に記載のＣＡＲでの使用に適合し得る。マルチパス膜タンパク質は、複合（少なくとも２、３、４、５、６、７またはそれ以上）アルファヘリックスまたはベータシート構造を含んでもよい。いくつかの実施形態では、マルチパス膜タンパク質のＮ末端及びＣ末端は、脂質二重層の反対側に存在し、例えば、タンパク質のＮ末端は、脂質二重層の細胞質側に存在し、タンパク質のＣ末端は、細胞外側に存在する。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータまたはゼータ鎖の膜貫通ドメイン、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ－２Ｒベータ、ＩＬ－２Ｒガンマ、ＩＬ－７Ｒａ、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（触覚）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤＩＯＯ（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、及び／またはＮＫＧ２Ｃから選択される膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８α、ＣＤ４、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１５２、及びＰＤ１からなる群より選択される分子に由来する。
いくつかの特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８αに由来する。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＣＤ８αの膜貫通ドメインである。
本明細書に記載のＣＡＲに使用される膜貫通ドメインは、合成の非天然タンパク質セグメントの少なくとも一部も含み得る。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、合成の非天然アルファヘリックスまたはベータシートである。いくつかの実施形態では、タンパク質セグメントは、少なくとも約２０アミノ酸、例えば、少なくとも１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、またはそれ以上のアミノ酸である。合成膜貫通ドメインの例は、例えば、米国特許第７，０５２，９０６号及びＰＣＴ公開第ＷＯ２０００／０３２７７６号において、当該技術分野で既知であり、これらの関連開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書で提供される膜貫通ドメインは、膜貫通領域及び膜貫通ドメインのＣ末端側に位置する細胞質領域を含み得る。膜貫通ドメインの細胞質領域は、３つ以上のアミノ酸を含んでもよく、いくつかの実施形態では、脂質二重層において膜貫通ドメインを配向させるのに役立つ。いくつかの実施形態では、１つ以上のシステイン残基は、膜貫通ドメインの膜貫通領域に存在する。いくつかの実施形態では、１つ以上のシステイン残基は、膜貫通ドメインの細胞質領域に存在する。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインの細胞質領域は、正荷電アミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインの細胞質領域は、アミノ酸のアルギニン、セリン、及びリジンを含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインの膜貫通領域は、疎水性アミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲの膜貫通ドメインは、人工疎水性配列を含む。例えば、フェニルアラニン、トリプトファン、及びバリンのトリプレットは、膜貫通ドメインのＣ末端に存在してもよい。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、ほとんどが疎水性のアミノ酸残基、例えば、アラニン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、またはバリンを含む。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、疎水性である。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、ポリロイシンアラニン配列を含む。タンパク質またはタンパク質セグメントのハイドロパシーまたは疎水性もしくは親水性の特性は、当該技術分野で既知ある任意の方法、例えば、カイト及びドゥーリトルのハイドロパシー分析で評価することができる。
５．２．９．細胞内シグナル伝達ドメイン
本開示のＣＡＲは、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞の正常なエフェクター機能の少なくとも１つの活性化に関与する。「エフェクター機能」という用語は、細胞の特殊な機能を指す。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、サイトカインの分泌を含む細胞溶解活性またはヘルパー活性であり得る。従って、「細胞質シグナル伝達ドメイン」という用語は、エフェクター機能シグナルを伝達し、細胞に特定の機能を実行するように指示するタンパク質の部分を指す。通常、細胞質シグナル伝達ドメイン全体を用いることができるが、多くの場合、鎖全体を使用する必要はない。細胞質シグナル伝達ドメインの切断部分が使用される限りにおいて、そのような切断部分は、エフェクター機能シグナルを伝達する限り、インタクト鎖の代わりに使用されてもよい。従って、細胞質シグナル伝達ドメインという用語は、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な細胞質シグナル伝達ドメインの任意の切断部分を含むことを意味する。
いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫エフェクター細胞の一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、免疫エフェクター細胞の一次細胞内シグナル伝達ドメインから本質的になる細胞内シグナル伝達ドメインを含む。「一次細胞内シグナル伝達ドメイン」は、免疫エフェクター機能を誘導するように、刺激的に作用する細胞質シグナル伝達配列を指す。いくつかの実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ、またはＩＴＡＭとして既知のシグナル伝達モチーフを含有する。本明細書で使用される「ＩＴＡＭ」は、多くの免疫細胞で発現されるシグナル伝達分子のテール部分に一般に存在する、保存されたタンパク質モチーフである。モチーフは、６～８個のアミノ酸により分離されたアミノ酸配列ＹｘｘＬ／Ｉの２つのリピートを含んでもよく、各ｘは、独立して、任意のアミノ酸であり、これは、保存されたモチーフＹｘｘＬ／Ｉｘ（６～８）ＹｘｘＬ／Ｉを生成する。シグナル伝達分子内のＩＴＡＭは、細胞内のシグナル伝達にとって重要であり、これは、ＩＴＡＭのチロシン残基のリン酸化、続いて、シグナル伝達分子の活性化により少なくとも部分的に媒介される。ＩＴＡＭは、シグナル伝達経路に関与する他のタンパク質のドッキング部位としても機能し得る。例示的なＩＴＡＭ含有１次細胞質シグナル伝達配列は、ＣＤ３ζ、ＦｃＲガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃＲベータ（Ｆｃイプシロンリブ）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄに由来するものを含む。
いくつかの実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζに由来する。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメインからなる。いくつかの実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、野生型ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ζの一次細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１６５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、野生型ＣＤ３ζの一次細胞内シグナル伝達ドメイン。いくつかの実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｑ６５Ｋなどの１つ以上の変異を含むＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメインの機能的変異体である。
５．２．１０．共刺激シグナル伝達ドメイン
多くの免疫エフェクター細胞は、抗原特異的シグナルの刺激に加えて、細胞増殖、分化、及び生存を促進し、細胞のエフェクター機能を活性化するために共刺激を必要とする。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインを含む。本明細書で使用される「共刺激シグナル伝達ドメイン」という用語は、エフェクター機能などの免疫応答を誘導するために細胞内でシグナル伝達を媒介するタンパク質の少なくとも一部を指す。本明細書に記載のキメラ受容体の共刺激シグナル伝達ドメインは、共刺激タンパク質由来の細胞質シグナル伝達ドメインであり得、これは、シグナルを伝達し、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、好中球、または好酸球を媒介した応答を調節する。「共刺激シグナル伝達ドメイン」は、共刺激分子の細胞質部分であり得る。「共刺激分子」という用語は、共刺激リガンドと特異的に結合し、それにより、限定されないが、増殖及び生存を含む免疫細胞で共刺激応答を媒介する免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）上に同族結合パートナーを指す。
いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、単一の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、２つ以上（例えば、約２、３、４、またはそれ以上のうちのいずれか）の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、同じ共刺激シグナル伝達ドメインの２つ以上を含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、本明細書に記載の任意の２つ以上の共刺激タンパク質などの、異なる共刺激タンパク質からの２つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメイン）及び１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメイン及び一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメイン）は、任意のペプチドリンカーを介して互いに融合される。一次細胞内シグナル伝達ドメイン、及び１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインは、任意の好適な順序で配置されてもよい。いくつかの実施形態では、１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインは、膜貫通ドメイン及び一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメイン）間に位置する。複数の共刺激シグナル伝達ドメインは、相加的または相乗的な刺激効果を提供し得る。
宿主細胞（例えば、免疫細胞）における共刺激シグナル伝達ドメインの活性化は、サイトカインの産生及び分泌、食作用特性、増殖、分化、生存、及び／または細胞傷害性を増加または減少させるように細胞を誘導し得る。任意の共刺激分子の共刺激シグナル伝達ドメインは、本明細書に記載のＣＡＲでの使用に適合し得る。共刺激シグナル伝達ドメインのタイプ（複数可）は、エフェクター分子が発現される免疫エフェクター細胞のタイプ（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、好中球、または好酸球）、ならびに、所望の免疫エフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣ効果）などの要因に基づいて選択される。ＣＡＲに使用される共刺激シグナル伝達ドメインの例としては、限定されないが、Ｂ７／ＣＤ２８ファミリーのメンバー（例えば、Ｂ７－１／ＣＤ８０、Ｂ７－２／ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ１／ＰＤ－Ｌ１、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ６、Ｂ７－Ｈ７、ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、Ｇｉ２４／ＶＩＳＴＡ／Ｂ７－Ｈ５、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ２／Ｂ７－ＤＣ、及びＰＤＣＤ６）；ＴＮＦスーパーファミリーのメンバー（例えば、４－１ＢＢ／ＴＮＦＳＦ９／ＣＤ１３７、４－１ＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＡＦＦ Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２７リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３０リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４０／ＴＮＦＳＦ５、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＧＩＴＲリガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、リンホトキシン－アルファ／ＴＮＦ－ベータ、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦ－アルファ、及びＴＮＦＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ）；ＳＬＡＭファミリーのメンバー（例えば、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＣＤ２、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ５８／ＬＦＡ－３、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、及びＳＬＡＭ／ＣＤ１５０）；ならびに、任意の他の共刺激分子、例えば、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ５３、Ｄ８２／Ｋａｉ－１、ＣＤ９０／Ｔｈｙ１、ＣＤ９６、ＣＤ１６０、ＣＤ２００、ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１、ＨＬＡクラスＩ、ＨＬＡ－ＤＲ、Ｉｋａｒｏｓ、インテグリンアルファ４／ＣＤ４９ｄ、インテグリンアルファ４ベータ１、インテグリンアルファ４ベータ７／ＬＰＡＭ－１、ＬＡＧ－３、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＣＲＴＡＭ、ＤＡＰ１２、デクチン－１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、ＥｐｈＢ６、ＴＩＭ－１／ＫＩＭ－１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ－４、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰ Ｒ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、及びＮＫＧ２Ｃを含む、共刺激タンパク質の細胞質シグナル伝達ドメインであり得る。
いくつかの実施形態では、１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、及びＣＤ８３に特異的に結合するリガンドからなる群より選択される。
いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲにおける細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ１３７（すなわち、４－１ＢＢ）に由来する共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメイン及びＣＤ１３７の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＣＤ１３７の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。
共刺激シグナル伝達ドメインが免疫細胞の免疫応答を調節可能であるように、本明細書に記載の共刺激シグナル伝達ドメインのいずれかのバリアントも本開示の範囲内である。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、野生型対応物と比較して、最大１０（例えば、１、２、３、４、５、または８つ）のアミノ酸残基の変化を含む。１つ以上のアミノ酸の変化を含むそのような共刺激シグナル伝達ドメインは、バリアントと呼ばれることがある。共刺激シグナル伝達ドメインのアミノ酸残基の変異は、変異を含まない共刺激シグナル伝達ドメインと比較して、シグナル伝達の増加及び免疫応答の刺激の増強をもたらし得る。共刺激シグナル伝達ドメインのアミノ酸残基の変異は、変異を含まない共刺激シグナル伝達ドメインと比較して、シグナル伝達の減少及び免疫応答の刺激の低減をもたらし得る。
５．２．１１．ヒンジ領域
本開示のＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン及び膜貫通ドメイン間に位置するヒンジドメインを含んでもよい。ヒンジドメインは、一般に、タンパク質の２つのドメイン間に見られるアミノ酸セグメントであり、タンパク質の柔軟性と、互いに対する、ドメインの一方または両方の移動を可能にすることがある。エフェクター分子の膜貫通ドメインに対する、細胞外抗原結合ドメインのそのような柔軟性及び移動を提供する任意のアミノ酸配列を使用することができる。
ヒンジドメインは、約１０～１００個のアミノ酸、例えば、約１５～７５個のアミノ酸、２０～５０個のアミノ酸、または３０～６０個のアミノ酸のうちのいずれか１つを含有してもよい。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、少なくとも約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、または７５アミノ酸長のうちのいずれか１つであってよい。
いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、天然に存在するタンパク質のヒンジドメインである。ヒンジドメインを含むことが当該技術分野で知られている任意のタンパク質のヒンジドメインは、本明細書に記載のキメラ受容体での使用に適合性がある。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、天然に存在するタンパク質のヒンジドメインの少なくとも一部であり、キメラ受容体に柔軟性を付与する。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８αに由来する。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８αのヒンジドメインの一部、例えば、ＣＤ８αのヒンジドメインの少なくとも１５個（例えば、２０、２５、３０、３５、または４０個）の連続するアミノ酸を含有するフラグメントである。いくつかの実施形態では、ＣＤ８αのヒンジドメインは、配列番号１６２のアミノ酸配列を含む。
ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、またはＩｇＤ抗体などの抗体のヒンジドメインも、本明細書に記載のｐＨ依存性キメラ受容体システムでの使用に適合する。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、抗体の定常ドメインＣＨ１及びＣＨ２を連結するヒンジドメインである。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、抗体のものであり、抗体のヒンジドメイン及び抗体の１つ以上の定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、抗体のヒンジドメイン及び抗体のＣＨ３定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、抗体のヒンジドメイン、ならびに、抗体のＣＨ２及びＣＨ３定常領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、またはＩｇＤ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４抗体である。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＩｇＧ１抗体のヒンジ領域ならびにＣＨ２及びＣＨ３定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＩｇＧ１抗体のヒンジ領域及びＣＨ３定常領域を含む。
非天然ペプチドは、本明細書に記載のキメラ受容体のヒンジドメインとしても使用されてもよい。いくつかの実施形態では、Ｆｃ受容体の細胞外リガンド結合ドメインのＣ末端と、膜貫通ドメインのＮ末端との間のヒンジドメインは、（ＧｘＳ）ｎリンカーなどのペプチドリンカーであり、ｘ及びｎは、独立して、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、またはそれ以上を含む、３～１２の整数であり得る。
５．２．１２．シグナルペプチド
本開示のＣＡＲは、ポリペプチドのＮ末端にシグナルペプチド（シグナル配列としても既知）を含んでもよい。一般に、シグナルペプチドは、ポリペプチドを細胞内の所望の部位に向けるペプチド配列である。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、エフェクター分子を細胞の分泌経路に標的指向させ、脂質二重層へのエフェクター分子の組み込み及び固定を可能にする。天然に存在するタンパク質のシグナル配列または合成の非天然シグナル配列を含むシグナルペプチド（本明細書に記載のＣＡＲでの使用に適合）は、当業者には明らかであろう。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＣＤ８α、ＧＭ－ＣＳＦ受容体α、及びＩｇＧ１重鎖からなる群より選択される分子に由来する。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＣＤ８αに由来する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８αのシグナルペプチドは、配列番号１６１のアミノ酸配列を含む。
５．２．１３．例示的なＣＡＲ
例示的な多重特異性ＣＡＲは、以下のセクション６に示されるように生成される（表９及び表１２を参照）。
いくつかの実施形態では、配列番号１７４のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１７５のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１７６のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１７７のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１７９のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１８０のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１８１のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１８２のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１８３のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１８４のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１８５のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１８６のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１８７のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１８８のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１８９のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１９０のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１９１のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１９２のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１９３のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１９４のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１９５のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１９６のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１９７のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１９８のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１９９のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２００のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２０１のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２０２のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２０３のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２０４のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２０５のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２０６のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２０７のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２０８のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２０９のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２１０のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２１１のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２１２のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２１３のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２１４のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２１５のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２１６のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２１７のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２１８のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２１９のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２２０のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２２１のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２２２のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２２３のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２２４のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２２５のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２２６のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。
特定の実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲは、以下のセクション６に例示されるＣＡＲのいずれか１つと比較して、特定のパーセントの同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、配列番号１７４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１７５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１７６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１７７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１７８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１７９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１８０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１８１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１８２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１８３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１８４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１８５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１８６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１８７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１８８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１８９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１９０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１９１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１９２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１９３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１９４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１９５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１９６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１９７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１９８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１９９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２００のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２０１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２０２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２０３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２０４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２０５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２０６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２０７のアミ
ノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２０８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２０９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２１０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２１１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２１２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２１３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２１４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２１５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２１６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２１７のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２１８のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２１９のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２２０のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２２１のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２２２のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２２３のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２２４のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２２５のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号２２６のアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むか、またはそれからなるＣＡＲが本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲのいずれかをコードする単離核酸が本明細書で提供される。核酸配列及びベクターに関する、より詳細な説明が以下に提供される。
５．３．操作された免疫エフェクター細胞
さらに別の態様では、本明細書に記載の多重特異性ＣＡＲのいずれか１つを含む宿主細胞（例えば、免疫エフェクター細胞）が本明細書で提供される。
従って、いくつかの実施形態では、ポリペプチドを含む、多重特異性ＣＡＲを含む操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）が本明細書で提供され、このポリペプチドは、（ａ）抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂのうちの少なくとも２つを含む、細胞外抗原結合ドメイン；（ｂ）膜貫通ドメイン；ならびに、（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン、を含み、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、それぞれ、例えば、表２のＶＨＨドメインを含む、上記のセクション５．２．１に記載されるもの、及び、表２のそれらのＶＨＨドメインのいずれかに、１つ、２つ、または３つ全てのＣＤＲを有するものである。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、ラクダ科動物、キメラ、ヒト、またはヒト化のものである。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８α、ＣＤ４、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１５２、及びＰＤ１からなる群より選択される。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）の一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζに由来する。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３、ＬＦＡ－１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３のリガンド及びその組み合わせからなる群より選択される共刺激分子に由来する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、さらに、細胞外抗原結合ドメインのＣ末端及び膜貫通ドメインのＮ末端間に位置するヒンジドメイン（例えば、ＣＤ８αヒンジドメイン）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、さらに、ポリペプチドのＮ末端に位置するシグナルペプチド（例えば、ＣＤ８αシグナルペプチド）を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、ＣＤ８αシグナルペプチド、細胞外抗原結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７に由来する共刺激シグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ζに由来する一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、例えば、表４～７、９、及び１２に記載の多重特異性ＣＡＲを含む、上記セクション５．２に記載のＣＡＲ、及び、配列番号１７４～２２６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＣＡＲを含む、操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、配列番号１７４～２２６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するポリペプチドを含むＣＡＲを含む、操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、操作された免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、造血幹細胞、多能性幹細胞、または胚性幹細胞である。いくつかの実施形態では、操作された免疫エフェクター細胞は、自己由来である。いくつかの実施形態では、操作された免疫エフェクター細胞は、同種異系である。
２つ以上の異なるＣＡＲを含む（または発現する）操作された免疫エフェクター細胞も提供される。本明細書に記載のＣＡＲの任意の２つ以上を組み合わせて発現させてもよい。ＣＡＲは、異なる抗原を標的とし、それにより、相乗効果または相加効果を提供し得る。２つ以上のＣＡＲは、同じベクターまたは異なるベクター上でコードされてもよい。
操作された免疫エフェクター細胞は、さらに、１つ以上の治療用タンパク質及び／または免疫チェックポイント阻害薬などの免疫調節薬を発現し得る。例えば、全体が参照により本明細書に組み込まれる国際特許出願公開第ＰＣＴ／ＣＮ２０１６／０７３４８９号及び同第ＰＣＴ／ＣＮ２０１６／０８７８５５号を参照のこと。
５．３．１．ベクター
本開示は、本明細書に記載のＣＡＲのいずれか１つをクローニング及び発現するためのベクターを提供する。いくつかの実施形態では、ベクターは、哺乳動物細胞などの真核細胞における複製及び組み込みに適する。いくつかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。ウイルスベクターの例としては、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ワクシニアベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、及びそれらの誘導体が含まれるが、これらに限定されない。ウイルスベクター技術は、当該技術分野で周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、ならびに、他のウイルス学及び分子生物学のマニュアルに記載される。
多数のウイルスベースのシステムは、哺乳動物細胞への遺伝子導入のために開発されている。例えば、レトロウイルスは、遺伝子送達システムの便利なプラットフォームを提供する。当該技術分野で既知の技術を使用して、異種核酸をベクターに挿入し、レトロウイルス粒子にパッケージングすることができる。次に、組み換えウイルスを単離し、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで、操作された哺乳動物細胞に送達することができる。多くのレトロウイルス系が、当該技術分野で既知である。いくつかの実施形態では、アデノウイルスベクターが使用される。多くのアデノウイルスベクターが、当該技術分野で既知である。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターが使用される。いくつかの実施形態では、自己不活化レンチウイルスベクターが使用される。例えば、免疫調節因子（例えば、免疫チェックポイント阻害薬）コード配列を担持する自己不活化レンチウイルスベクター及び／またはキメラ抗原受容体を担持する自己不活化レンチウイルスベクターは、当該技術分野で既知のプロトコールでパッケージングすることができる。得られたレンチウイルスベクターは、当該技術分野で既知の方法を使用して哺乳動物細胞（例えば、初代ヒトＴ細胞）に形質導入するために使用することができる。レンチウイルスなどのレトロウイルスに由来するベクターは、導入遺伝子の長期的で安定した統合及び子孫細胞での増殖を可能にするので、長期的な遺伝子導入を達成するのに好適なツールである。レンチウイルスベクターも免疫原性が低く、非増殖細胞に形質導入し得る。
いくつかの実施形態では、ベクターは、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸のいずれか１つを含む。例えば、制限エンドヌクレアーゼ部位及び１つ以上の選択マーカーを使用することを含む、当該技術分野で既知の任意の分子クローニング法を使用して、核酸をベクターにクローニングすることができる。いくつかの実施形態では、核酸は、プロモーターに作動可能に連結される。哺乳動物細胞における遺伝子発現のために様々なプロモーターが調査されており、当該技術分野で既知のプロモーターのいずれかが本開示で使用されてもよい。プロモーターは、構成的プロモーターまたは調節プロモーター、例えば、誘導性プロモーターとして大まかに分類されてもよい。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸は、構成的プロモーターに作動可能に連結される。構成的プロモーターは、異種遺伝子（導入遺伝子とも呼ばれる）が宿主細胞内で構成的に発現されることを可能にする。本明細書で企図される例示的な構成的プロモーターとしては、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ヒト伸長因子－１アルファ（ｈＥＦ１α）、ユビキチンＣプロモーター（ＵｂｉＣ）、ホスホグリセロキナーゼプロモーター（ＰＧＫ）、シミアンウイルス４０初期プロモーター（ＳＶ４０）、及びＣＭＶ初期エンハンサー（ＣＡＧＧ）と結合したニワトリβ－アクチンプロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。導入遺伝子発現を引き起こす、そのような構成的プロモーターの効率は、膨大な数の研究で広く比較されている。例えば、Ｍｉｃｈａｅｌ Ｃ．Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌは、初代ヒトＴ細胞のキメラ抗原受容体の発現を促進するＣＭＶ、ｈＥＦ１α、ＵｂｉＣ、及びＰＧＫの効率を比較し、ｈＥＦ１αプロモーターは、最高レベルの導入遺伝子発現を誘導しただけでなく、ＣＤ４及びＣＤ８ヒトＴ細胞で最適に維持された（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，１７（８）：１４５３－１４６４（２００９））。いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸は、ｈＥＦ１αプロモーターに作動可能に連結される。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードする核酸は、誘導性プロモーターに作動可能に連結される。誘導性プロモーターは、調節プロモーターのカテゴリーに属する。１つ以上の条件、例えば、物理的状態、操作された免疫エフェクター細胞の微小環境、または操作された免疫エフェクター細胞の生理学的状態、誘導因子（すなわち、誘導作用物質）、またはその組み合わせにより、誘導性プロモーターを誘導することができる。
いくつかの実施形態では、この誘導条件は、操作された哺乳動物細胞において、及び／または医薬組成物を投与される対象において、内因性遺伝子の発現を誘導しない。いくつかの実施形態では、この誘導条件は、誘導因子、照射（例えば、電離放射線、光）、温度（例えば、熱）、レドックス状態、腫瘍環境、及び操作された哺乳動物細胞の活性化状態からなる群より選択される。
いくつかの実施形態では、ベクターは、レンチウイルスベクターを介してトランスフェクトされた宿主細胞の集団からＣＡＲを発現する細胞を選択するための選択マーカー遺伝子またはレポーター遺伝子も含有する。宿主細胞での発現を可能にするために、選択マーカー及びレポーター遺伝子の両方は、適切な調節配列に隣接していてもよい。例えば、ベクターは、核酸配列の発現の調節に有用な転写及び翻訳ターミネーター、開始配列、及びプロモーターを含有してもよい。
いくつかの実施形態では、ベクターは、ＣＡＲをコードする２つ以上の核酸を含む。いくつかの実施形態では、ベクターは、第１のＣＡＲをコードする第１の核酸配列及び第２のＣＡＲをコードする第２の核酸配列を含む核酸を含み、第１の核酸は、自己切断ペプチドをコードする第３の核酸配列を介して第２の核酸に作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、自己切断ペプチドは、Ｔ２Ａ、Ｐ２Ａ、及びＦ２Ａからなる群より選択される。
５．３．２．免疫エフェクター細胞
「免疫エフェクター細胞」は、免疫エフェクター機能を実施することができる免疫細胞である。いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞は、少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、ＡＤＣＣエフェクター機能を実施する。ＡＤＣＣを媒介する免疫エフェクター細胞の例としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞傷害性Ｔ細胞、好中球、及び好酸球が挙げられる。
いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋／ＣＤ８－、ＣＤ４－／ＣＤ８＋、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋、ＣＤ４－／ＣＤ８－、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＡＲを発現時及び標的細胞、例えば、ＣＤ２０＋、ＣＤ１９＋、及び／またはＣＤ２２＋腫瘍細胞、への結合時に、ＩＬ－２、ＴＦＮ、及び／またはＴＮＦを産生する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＣＡＲの発現時及び標的細胞への結合時に、抗原特異的標的細胞を溶解させる。
いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞は、ＮＫ細胞である。他の実施形態では、免疫エフェクター細胞は、確立された細胞株、例えば、ＮＫ－９２細胞であり得る。
いくつかの実施形態では、免疫エフェクター細胞は、幹細胞、例えば、造血幹細胞、多能性幹細胞、ｉＰＳ、または胚性幹細胞から分化する。
操作された免疫エフェクター細胞は、免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞にＣＡＲを導入することにより調製される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、上記の単離核酸のいずれか１つまたはベクターのいずれか１つをトランスフェクトすることにより、免疫エフェクター細胞に導入される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＥＬＬ ＳＱＵＥＥＺＥ（登録商標）などのマイクロ流体システムを細胞に通過させながら、タンパク質を細胞膜に挿入することにより、免疫エフェクター細胞に導入される（例えば、米国特許出願公開第２０１４０２８７５０９号を参照）。
ベクターまたは単離核酸を哺乳動物細胞に導入する方法は、当該技術分野で既知である。記載のベクターを、物理的、化学的、または生物学的方法で免疫エフェクター細胞に移すことができる。
ベクターを免疫エフェクター細胞に導入するための物理的方法は、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、粒子衝撃、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションなどを含む。ベクター及び／または外因性核酸を含む細胞を作製する方法は、当該技術分野で周知である。例えば、以下を参照のこと：Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ。いくつかの実施形態では、ベクターは、エレクトロポレーションにより細胞に導入される。
ベクターを免疫エフェクター細胞に導入するための生物学的方法は、ＤＮＡ及びＲＮＡベクターの使用を含む。ウイルスベクターは、遺伝子を哺乳動物、例えば、ヒト細胞、に挿入するための最も広く使用される方法になっている。
ベクターを免疫エフェクター細胞に導入するための化学的手段は、コロイド分散システム、例えば、巨大分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、ならびに、水中油エマルション、ミセル、混合ミセル、及びリポソームを含む脂質ベースのシステムを含む。ｉｎ ｖｉｔｒｏで送達ビヒクルとして使用するための例示的なコロイド系は、リポソーム（例えば、人工膜小胞）である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲのいずれかをコードするＲＮＡ分子は、従来の方法（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写）で調製され、次に、ｍＲＮＡエレクトロポレーションなどの既知の方法により免疫エフェクター細胞に導入されてもよい。例えば、Ｒａｂｉｎｏｖｉｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １７：１０２７－１０３５（２００６）を参照のこと。
いくつかの実施形態では、形質導入またはトランスフェクトされた免疫エフェクター細胞は、ベクターまたは単離核酸の導入後に、ｅｘ ｖｉｖｏで増殖される。いくつかの実施形態では、形質導入またはトランスフェクトされた免疫エフェクター細胞は、増殖するために、少なくとも約１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１０日、１２日、または１４日間のうちのいずれかで培養される。いくつかの実施形態では、形質導入またはトランスフェクトされた免疫エフェクター細胞は、さらに、操作された哺乳動物細胞を選択するために評価またはスクリーニングされる。
レポーター遺伝子は、潜在的にトランスフェクトされた細胞を特定するため、及び調節配列の機能を評価するために使用されてもよい。一般に、レポーター遺伝子は、レシピエント生物または組織に存在しないか、または発現しない、且つ、いくつかの容易に検出可能な特性、例えば、酵素活性により発現が明示されるポリペプチドをコードする遺伝子である。レポーター遺伝子の発現は、ＤＮＡがレシピエント細胞に導入されている後の好適な時点でアッセイされる。好適なレポーター遺伝子としては、ルシフェラーゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌型アルカリホスファターゼ、または緑色蛍光タンパク質遺伝子をコードする遺伝子が挙げられる（例えば、Ｕｉ－Ｔｅｉ ｅｔ ａｌ．ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ４７９：７９－８２（２０００））。好適な発現系は、周知であり、既知の手法を使用して調製されても、商業的に入手されてもよい。操作された免疫エフェクター細胞におけるＣＡＲをコードする核酸の存在を確認するための他の方法は、例えば、当業者らに周知の分子生物学的アッセイ、例えば、サザンブロッティング及びノーザンブロッティング、ＲＴ－ＰＣＲ及びＰＣＲ；生化学的アッセイ、例えば、免疫学的方法（例えば、ＥＬＩＳＡ及びウェスタンブロット）による、例えば、特定のペプチドの有無の検出、を含む。
５．３．３．Ｔ細胞の供給源
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の増大及び遺伝子改変の前に、Ｔ細胞の供給源が対象から得られる。末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、及び腫瘍を含む多くの供給源から、Ｔ細胞を得ることができる。いくつかの実施形態では、当該技術分野で利用可能な任意数のＴ細胞株が使用されてもよい。いくつかの実施形態では、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離などの当業者に既知の任意数の手法を使用して、対象から収集された血液の単位から、Ｔ細胞を得ることができる。いくつかの実施形態では、個体の循環血液からの細胞は、アフェレーシスにより得られる。アフェレーシス製品は、通常、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球、及び血小板を含むリンパ球を含有する。いくつかの実施形態では、アフェレーシスにより収集された細胞は、血漿画分を除去し、その後の処理ステップのために細胞を適切な緩衝液または培地に入れるために、洗浄されてもよい。いくつかの実施形態では、細胞は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄される。いくつかの実施形態では、洗浄溶液は、カルシウムを欠いており、マグネシウムを欠き得るか、または全てではないが、多くの二価カチオンを欠き得る。カルシウムの不存在下での最初の活性化ステップは、活性化の拡大につながり得る。当業者らが容易に理解するように、洗浄ステップは、例えば、半自動「フロースルー」遠心分離機（例えば、Ｃｏｂｅ２９９１セルプロセッサ、Ｂａｘｔｅｒ ＣｙｔｏＭａｔｅ、またはＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｅｌｌ Ｓａｖｅｒ５）を製造者の使用説明書に従って使用することにより、当業者らに既知の方法で達成されてもよい。洗浄後、細胞は、様々な生体適合性緩衝液、例えば、Ｃａ２＋不含、Ｍｇ２＋不含ＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ、または、緩衝剤を含むかもしくは含まない他の生理食塩水、に再懸濁させてもよい。あるいは、アフェレーシスサンプルの望ましくない構成成分を除去し、細胞を培地に直接再懸濁させてもよい。
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配による遠心分離または向流遠心エルトリエーションで、赤血球を溶解させ、単球を枯渇させることにより、末梢血リンパ球から単離される。ＣＤ３＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、及びＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞などのＴ細胞の特定の亜集団を、さらに、正または負の選択手法で分離することができる。例えば、いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、所望のＴ細胞の正の選択に十分な時間に、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（すなわち、３×２８）コンジュゲートビーズ、例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ－４５０ ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｔとインキュベーションすることにより単離される。いくつかの実施形態では、期間は、約３０分である。さらなる実施形態では、期間は、３０分～３６時間以上、及びその間の全ての整数値の範囲である。さらなる実施形態では、期間は、少なくとも１、２、３、４、５、または６時間である。いくつかの実施形態では、期間は、１０～２４時間である。いくつかの実施形態では、インキュベーション期間は、２４時間である。白血病患者由来のＴ細胞の単離では、２４時間などの長いインキュベーション時間を使用すると、細胞収量が増加し得る。より長いインキュベーション時間は、例えば、腫瘍組織または免疫不全の個体から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を単離することにおいて、他の細胞型と比較してＴ細胞がほとんどない任意の状況で、Ｔ細胞を単離するために使用されてもよい。さらに、より長いインキュベーション時間を使用すると、ＣＤ８＋Ｔ細胞の捕捉効率を増加し得る。従って、いくつかの実施形態では、Ｔ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズに結合させる時間を単純に短縮または延長することにより、及び／またはビーズ対Ｔ細胞の比を増加または減少させることにより、培養の開始時またはプロセス中の他の時点で、Ｔ細胞の亜集団を優先的に選択することができる。さらに、ビーズまたは他の表面上の抗ＣＤ３及び／または抗ＣＤ２８抗体の比を増加または減少させることにより、培養開始時または他の所望の時点で、Ｔ細胞の亜集団を、優先的に選択することができる。複数ラウンドの選択も使用することができることを、当業者は認識するであろう。いくつかの実施形態では、選択手順を実行し、「選択されていない」細胞を活性化及び増大プロセスで使用することが望ましい場合がある。「選択されていない」細胞も、さらなる選択ラウンドに供することができる。
負の選択された細胞に固有の表面マーカーに向けられた抗体の組み合わせを用いて、負の選択によるＴ細胞集団の濃縮を実施することができる。１つの方法は、負の選択された細胞上に存在する細胞表面マーカーに向けられたモノクローナル抗体のカクテルを使用するネガティブ磁気免疫接着またはフローサイトメトリーによる細胞選別及び／または選択である。例えば、負の選択によりＣＤ４＋細胞を濃縮するために、モノクローナル抗体カクテルは、通常、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ－ＤＲ、及びＣＤ８に対する抗体を含む。特定の実施形態では、通常、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋、及びＦｏｘＰ３＋を発現する制御性Ｔ細胞を濃縮または正の選択することが望ましいことがある。あるいは、特定の実施形態では、制御性Ｔ細胞は、抗Ｃ２５コンジュゲートビーズまたは他の同様の選択方法により枯渇される。
正または負の選択による所望の細胞集団の単離のために、細胞及び表面（例えば、ビーズなどの粒子）の濃度を変動させることができる。特定の実施形態では、細胞及びビーズの最大の接触を確保するために、ビーズ及び細胞が、一緒に混合される体積を大幅に減少させる（すなわち、細胞の濃度を増加させる）ことが望ましいことがある。例えば、一実施形態では、２０億細胞／ｍｌの濃度が使用される。一実施形態では、１０億細胞／ｍｌの濃度が使用される。さらなる実施形態では、１億細胞／ｍｌ超が使用される。さらなる実施形態では、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、または５千万細胞／ｍｌの細胞濃度が使用される。さらに別の実施形態では、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０千万細胞／ｍｌの細胞濃度が使用される。さらなる実施形態では、１億２５００万または１億５０００万細胞／ｍｌの濃度を使用することができる。高濃度を使用すると、細胞収量、細胞活性化、及び細胞増大が増加することがある。さらに、高濃度細胞の使用は、目的の標的抗原、例えば、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞を弱く発現し得る細胞、または、多くの腫瘍細胞が存在するサンプル（すなわち、白血病の血液、腫瘍組織など）由来の細胞を、より効率的に捕捉可能であり得る。そのような細胞集団は、治療効果を有し得、取得することが望ましいだろう。いくつかの実施形態では、高濃度の細胞を使用することにより、通常、より弱いＣＤ２８発現を有するＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択が可能になる。
いくつかの実施形態では、より低い濃度の細胞を使用することが望ましいことがある。Ｔ細胞及び表面の混合物（例えば、ビーズなどの粒子）を大幅に希釈することにより、粒子及び細胞間の相互作用が最小限に抑えられる。これにより、粒子に結合されるべき所望の抗原を大量に発現する細胞が選択される。例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、高レベルのＣＤ２８を発現し、希釈濃度のＣＤ８＋Ｔ細胞よりも効率的に捕捉される。いくつかの実施形態では、使用される細胞の濃度は、５×１０６／ｍｌである。いくつかの実施形態では、使用される濃度は、約１×１０５／ｍｌ～１×１０６／ｍｌ、及びその間の任意の整数値であり得る。
いくつかの実施形態では、細胞は、２～１０℃または室温のいずれかで、様々な速度で、様々な時間、回転装置上でインキュベートされてもよい。
刺激用のＴ細胞を、洗浄ステップ後に凍結することもできる。理論に束縛されるものではないが、凍結及びその後の解凍ステップは、細胞集団中の顆粒球及びある程度までの単球を除去することにより、より均一な生成物を提供し得る。血漿及び血小板を除去する洗浄ステップの後、細胞が凍結溶液に懸濁されてもよい。多くの凍結溶液及びパラメーターが当該技術分野で既知であり、この文脈で有用となるが、１つの方法は、２０％のＤＭＳＯ及び８％のヒト血清アルブミンを含有するＰＢＳ、または１０％のデキストラン４０及び５％のデキストロース、２０％のヒト血清アルブミン及び７．５％のＤＭＳＯ、または３１．２５％のプラズマライトＡ、３１．２５％のデキストロース５％、０．４５％のＮａＣｌ、１０％のデキストラン４０及び５％のデキストロース、２０％のヒト血清アルブミン、及び７．５％のＤＭＳＯ、または例えば、Ｈｅｓｐａｎ及びＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａを含有する他の好適な細胞凍結培地を使用することを含む。次に、細胞は、毎分１度の速度で－８０℃まで凍結され、液体窒素貯蔵タンクの蒸気相で貯蔵される。制御された凍結の他の方法が使用されてもよく、－２０℃で、または液体窒素中で直に制御されていない凍結が使用されてもよい。
いくつかの実施形態では、凍結保存された細胞は、本明細書に記載されるように解凍及び洗浄され、活性化前に室温で１時間静置させる。
本明細書に記載の増大細胞が必要となり得る前の期間の対象由来の血液サンプルまたはアフェレーシス製品の収集も本開示で企図される。そのようなものであるから、増大されるべき細胞の供給源は、必要な任意の時点で収集し、Ｔ細胞などの所望の細胞を、本明細書に記載されるようなＴ細胞療法から恩恵を受ける任意数の疾患または状態に対するＴ細胞療法において後で使用するために単離して凍結することができる。一実施形態では、血液サンプルまたはアフェレーシスは、一般に、正常対象から採取される。特定の実施形態では、血液サンプルまたはアフェレーシスは、一般に、疾患を発症するリスクがあるが、まだ疾患を発症していない正常対象から採取され、目的の細胞が単離され、後で使用するために凍結される。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、後で、増大、凍結、及び使用され得る。特定の実施形態では、サンプルは、本明細書に記載の特定の疾患の診断直後で、任意の処置の前に、患者から収集される。さらなる実施形態では、細胞は、任意数の関連する治療モダリティ前に対象由来の血液サンプルまたはアフェレーシスから単離され、これは、薬剤、例えば、ナタリズマブ、エファリズマブ、抗ウイルス薬、化学療法、放射線、免疫抑制薬、例えば、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノラート、及びＦＫ５０６、抗体、または他の免疫除去薬、例えば、ＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体、サイトキサン、フルダラビン、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８、及び照射を用いる処置を含むが、これらに限定されない。これらの薬剤は、カルシウム依存性ホスファターゼカルシニューリン（シクロスポリン及びＦＫ５０６）を阻害するか、または、成長因子誘導シグナル伝達に重要なｐ７０Ｓ６キナーゼ（ラパマイシン）を阻害する（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ６６：８０７－８１５（１９９１）；Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎ ７３：３１６－３２１（１９９１）；Ｂｉｅｒｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎ．５：７６３－７７３（１９９３））。さらなる実施形態では、細胞は、患者のために単離され、骨髄もしくは幹細胞移植、いずれかの化学療法薬、例えば、フルダラビンの、外部ビーム放射線療法（ＸＲＴ）、シクロホスファミド、または、抗体、例えば、ＯＫＴ３もしくはＣＡＭＰＡＴＨのいずれかを使用するＴ細胞除去療法と共に（例えば、この前に、これと同時に、またはこの後に）、後の併用のために凍結される。別の実施形態では、細胞は、ＣＤ２０と反応する薬剤、例えば、リツキサンなどのＢ細胞除去療法の前に単離され、それの後に、後の処置用の使用ために凍結することができる。
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、処置直後の患者から得られる。この点に関して、以下の特定のがん処置、特に、免疫系に損傷を与える薬物による処置は、患者が通常処置から回復する期間中の処置直後に、得られたＴ細胞の品質が、最適であり得るか、またはｅｘ ｖｉｖｏで増大する能力が改善され得ることが観察されている。同様に、本明細書に記載の方法を使用するｅｘ ｖｉｖｏ操作の後に、これらの細胞は、生着の促進及びｉｎ ｖｉｖｏでの増大にとって好ましい状態になり得る。従って、本開示の文脈内で、この回復期中にＴ細胞、樹状細胞、または造血系統の他の細胞を含む血球を収集することが企図される。さらに、特定の実施形態では、動員（例えば、ＧＭ－ＣＳＦによる動員）及びコンディショニングレジメンを、対象に状態を生じさせるために使用することができ、特に、処置後の規定された期間中の特定の細胞型の再増殖、再循環、再生、及び／または増大が好まれる。例示的な細胞型としては、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、及び免疫系の他の細胞が挙げられる。
５．３．４．Ｔ細胞の活性化及び増大
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲを用いるＴ細胞の遺伝子改変の前または後に、例えば、一般に、米国特許第６，３５２，６９４号；同第６，５３４，０５５号；同第６，９０５，６８０号；同第６，６９２，９６４号；同第５，８５８，３５８号；同第６，８８７，４６６号；同第６，９０５，６８１号；同第７，１４４，５７５号；同第７，０６７，３１８号；同第７，１７２，８６９号；同第７，２３２，５６６号；同第７，１７５，８４３号；同第５，８８３，２２３号；同第６，９０５，８７４号；同第６，７９７，５１４号；同第６，８６７，０４１号；及び米国特許出願公開第２００６０１２１００５号に記載の方法を使用して、Ｔ細胞を活性化及び増大することができる。
一般に、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する薬剤及びＴ細胞の表面上の共刺激分子を刺激するリガンドを、それが結合している表面で接触させることにより、Ｔ細胞を増大させることができる。特に、Ｔ細胞集団は、本明細書に記載されるように、例えば、抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または表面に固定化された抗ＣＤ２抗体と接触させることにより、あるいは、カルシウムイオノフォアと組み合わせたプロテインキナーゼＣアクチベーター（例えば、ブリオスタチン）と接触させることにより刺激され得る。Ｔ細胞表面のアクセサリー分子の共刺激には、アクセサリー分子に結合するリガンドが使用される。例えば、Ｔ細胞の増殖を刺激するのに適切な条件下で、Ｔ細胞の集団を、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体と接触させることができる。ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を刺激するための、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体。抗ＣＤ３抗体の例としては、ＵＣＨＴ１、ＯＫＴ３、ＨＩＴ３ａ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、米国サンディエゴ）が挙げられ、当該技術分野で一般に既知の他の方法と同様に使用することができる（Ｇｒａｖｅｓ Ｊ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：２１０２（１９９１）；Ｌｉ Ｂ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １１６：４８７（２００５）；Ｒｉｖｏｌｌｉｅｒ Ａ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０４：４０２９（２００４））。抗ＣＤ２８抗体の例としては、９．３、Ｂ－Ｔ３、ＸＲ－ＣＤ２８（Ｄｉａｃｌｏｎｅ、Ｂｅｓａｎｃｏｎ、Ｆｒａｎｃｅ）が挙げられ、当該技術分野で一般に既知の他の方法と同様に使用することができる（Ｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｐｒｏｃ．３０（８）：３９７５－３９７７（１９９８）；Ｈａａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９０（９）：１３１９１３２８（１９９９）；Ｇａｒｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈ．２２７（１－２）：５３－６３（１９９９））。
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞に対する１次刺激シグナル及び共刺激シグナルは、異なるプロトコールで提供され得る。例えば、各シグナルを提供する作用物質は、溶液中にあっても、表面に結合していてもよい。表面に結合する場合、作用物質は、同じ表面に（すなわち、「シス」形成で）結合していても、別の表面に（すなわち、「トランス」形成で）結合していてもよい。あるいは、一方の薬剤を表面に結合しており、他方の薬剤を溶液中に存在し得る。一実施形態では、共刺激シグナルを提供する薬剤は、細胞表面に結合しており、１次活性化シグナルを提供する薬剤は、溶液中に存在するか、または表面に結合している。特定の実施形態では、両方の薬剤は、溶液中にあり得る。別の実施形態では、物質、例えば、Ｆｃ受容体もしくは抗体を発現する細胞、または物質に結合することになる他の結合物質は、可溶型であり、次に、表面に架橋され得る。この点に関しては、例えば、本開示の特定の実施形態では、Ｔ細胞を活性化及び増大する際の使用が企図される人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）については、米国特許出願公開第２００４０１０１５１９号及び同第２００６００３４８１０号を参照のこと。
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、薬剤コーティングされたビーズと結合され、ビーズ及び細胞が、その後、分離され、次に、細胞が培養される。別の実施形態では、培養前に、薬剤でコーティングされたビーズ及び細胞は、分離されないが、一緒に培養される。さらなる実施形態では、ビーズ及び細胞は、磁力などの力の適用により最初に濃縮され、その結果、細胞表面マーカーのライゲーションが増加し、それにより、細胞刺激が誘導される。
例として、細胞表面タンパク質は、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８が結合している常磁性ビーズ（３×２８ビーズ）をＴ細胞と接触させることによりライゲーションされてもよい。一実施形態では、細胞（例えば、１０４～４×１０８のＴ細胞）及びビーズ（例えば、１：１００の推奨力価の抗ＣＤ３／ＣＤ２８ ＭＡＣＳｉＢｅａｄ粒子）を緩衝液中、好ましくは、ＰＢＳ（カルシウム及びマグネシウムなどの二価陽イオンを含まず）中で組み合わせる。任意の細胞濃度が使用されてもよいことを、当業者らは容易に理解し得る。例えば、標的細胞が、サンプル中で非常にまれであり、サンプルの０．０１％のみを含んでも、サンプル全体（すなわち、１００％）が、目的の標的細胞を含んでもよい。従って、任意の細胞数が、本開示の文脈内にある。特定の実施形態では、細胞及び粒子の最大の接触を確保するために、細胞及び粒子が、一緒に混合される体積を大幅に減少させる（すなわち、細胞の濃度を増加させる）ことが望ましいことがある。例えば、一実施形態では、約２０億細胞／ｍＬの濃度が使用される。別の実施形態では、１億細胞／ｍＬ超が使用される。さらなる実施形態では、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、または５千万細胞／ｍＬの細胞濃度が使用される。さらに別の実施形態では、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０千万細胞／ｍＬの細胞濃度が使用される。さらなる実施形態では、１億２５００万または１億５０００万細胞／ｍＬの濃度を使用することができる。高濃度を使用すると、細胞収量、細胞活性化、及び細胞増大が増加することがある。さらに、高細胞濃度を使用すると、目的の標的抗原、例えば、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞、をわずかに発現し得る細胞をより効率的に捕捉できることがある。そのような細胞集団は、治療効果を有し得、特定の実施形態では、取得することが望ましいであろう。例えば、高濃度の細胞を使用することにより、通常、より弱いＣＤ２８発現を有するＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択が可能になる。
いくつかの実施形態では、混合物は、数時間（約３時間）～約１４日間、またはその間の任意の整数値の時間単位で培養され得る。別の実施形態では、混合物が、２１日間培養されてもよい。一実施形態では、ビーズ及びＴ細胞は、一緒に約８日間培養される。別の実施形態では、ビーズ及びＴ細胞は、一緒に２～３日間培養される。Ｔ細胞の培養時間が６０日以上になり得るように、数サイクルの刺激が望ましいこともある。Ｔ細胞培養に適切な条件としては、増殖及び生存率に必要とされる要因を含有し得る適切な培地（例えば、最小必須培地もしくはＲＰＭＩ培地１６４０、またはＸ－ｖｉｖｏ １５、（Ｌｏｎｚａ））が挙げられ、これらは、血清（例えば、ウシ胎児またはヒト胎児血清）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インスリン、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＴＧＦβ及びＴＮＦ－α、または当業者に既知の細胞の成長のための任意の他の添加剤を含む。細胞の成長のための他の添加剤としては、界面活性剤、プラズマネート、及び還元剤、例えば、Ｎ－アセチル－システイン及び２－メルカプトエタノール、が挙げられるが、これらに限定されない。培地は、無血清か、あるいは、適切な量の血清（もしくは血漿）または規定の一連のホルモン、及び／またはＴ細胞の成長及び増大に十分な量のサイトカイン（複数可）が補充された、添加されたアミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、及びビタミンを含むＲＰＭＩ １６４０、ＡＩＭ－Ｖ、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、α－ＭＥＭ、Ｆ－１２、Ｘ－Ｖｉｖｏ １５、及びＸ－Ｖｉｖｏ ２０、オプティマイザーを含み得る。抗生物質、例えば、ペニシリン及びストレプトマイシンは、対象に注入されるべき細胞の培養物ではなく、実験培養物にのみ含まれる。標的細胞は、成長を支持するのに必要な条件下、例えば、適切な温度（例えば、３７℃）及び雰囲気（例えば、空気及び５％のＣＯ２）で維持される。様々な刺激時間にさらされているＴ細胞は、異なる特性を示し得る。例えば、代表的な血液またはアフェレーシスされた末梢血単核細胞製品は、細胞傷害性またはサプレッサーＴ細胞集団（ＴＣ、ＣＤ８）よりも多いヘルパーＴ細胞集団（ＴＨ、ＣＤ４＋）を有する。ＣＤ３及びＣＤ２８受容体を刺激することによるＴ細胞のｅｘ ｖｉｖｏ増大は、約８～９日前には、主にＴＨ細胞からなるＴ細胞の集団を生じるが、約８～９日後には、Ｔ細胞の集団は、ますます多くのＴＣ細胞の集団を含む。従って、処置の目的に応じて、主に、ＴＨ細胞を含むＴ細胞集団を対象に注入することが、有利であり得る。同様に、ＴＣ細胞の抗原特異的サブセットは、単離されている場合、このサブセットを、より大きい程度までに増大することが有益であることがある。
さらに、ＣＤ４及びＣＤ８マーカーに加えて、他の表現型マーカーは、大幅に変動するが、大部分では、細胞増大プロセスの過程で再現可能である。従って、そのような再現性により、特定の目的のために活性化Ｔ細胞産物を調整する能力が可能になる。
５．４．ポリヌクレオチド
特定の実施形態では、本開示は、本明細書で提供される多重特異性ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを提供する。本開示のポリヌクレオチドは、ＲＮＡの形態またはＤＮＡの形態をとり得る。ＤＮＡは、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成ＤＮＡを含み；二本鎖または一本鎖であり得、一本鎖である場合、コード鎖または非コード（アンチセンス）鎖であり得る。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ｃＤＮＡの形態をとる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、合成ポリヌクレオチドである。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１７４の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１７５の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１７６の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１７７の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１７８の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１７９の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１８０の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１８１の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１８２の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１８３の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１８４の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１８５の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１８６の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１８７の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１８８の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１８９の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１９０の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１９１の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１９２の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１９３の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１９４の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１９５の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１９６の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１９７の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１９８の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号１９９の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２００の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２０１の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２０２の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２０３の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２０４の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２０５の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２０６の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２０７の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２０８の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２０９の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２１０の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２１１の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２１２の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２１３の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２１４の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２１５の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２１６の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２１７の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２１８の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２１９の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２２０の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２２１の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２２２の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２２３の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２２４の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２２５の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書で提供される核酸分子は、配列番号２２６の配列を有するＣＡＲをコードする配列を含む。
特定の実施形態では、配列番号２２７～２７９からなる群より選択される配列を有する核酸が本明細書で提供される。
本開示は、さらに、本明細書に記載のポリヌクレオチドのバリアントに関し、このバリアントは、例えば、本開示の単一ドメイン抗体またはＣＡＲのフラグメント、アナログ、及び／または誘導体をコードする。特定の実施形態では、本開示は、本開示の単一ドメイン抗体またはＣＡＲをコードするポリヌクレオチドと、少なくとも約７５％同一、少なくとも約８０％同一、少なくとも約８５％同一、少なくとも約９０％同一、少なくとも約９５％同一、及び、いくつかの実施形態では、少なくとも約９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを提供する。本明細書で使用される時、「参照ヌクレオチド配列」と少なくとも、例えば、９５％「同一である」ヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド」という語句は、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が参照配列と同一であることを意味するものである。但し、ポリヌクレオチド配列が、参照ヌクレオチド配列の各１００ヌクレオチド当たり最大５つの点変異を含み得る。換言すれば、参照ヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを得るために、参照配列中のヌクレオチドの最大５％を欠失させるか、もしくは別のヌクレオチドで置換することができ、または参照配列中の総ヌクレオチドの最大５％の多数のヌクレオチドは、参照配列に挿入することができる。参照配列のこれらの変異は、参照ヌクレオチド配列の５’もしくは３’末端位置に、またはそれらの末端位置の間の至るところ生じ得、参照配列内のヌクレオチド間に個別に、または参照配列内の１つ以上の隣接基内に点在する。
ポリヌクレオチドバリアントは、コード領域、非コード領域、またはその両方に変更を含有し得る。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドバリアントは、サイレント置換、付加、または欠失をもたらす変化を含有するが、コードされたポリペプチドの特性または活性を変化させない。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドバリアントは、（遺伝コードの縮重による）ポリペプチドのアミノ酸配列に変化をもたらさないサイレント置換を含む。ポリヌクレオチドバリアントは、様々な理由で、例えば、特定の宿主のコドン発現を最適化する（すなわち、ヒトｍＲＮＡのコドンを大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）などの細菌宿主が好むコドンに変更する）ように生成することができる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドバリアントは、配列の非コード領域またはコード領域に少なくとも１つのサイレント変異を含む。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドバリアントは、コードされたポリペプチドの発現（または発現レベル）を調節または変更するように生成される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドバリアントは、コードされたポリペプチドの発現を増加させるように生成される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドバリアントは、コードされたポリペプチドの発現を減少させるように生成される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドバリアントは、親ポリヌクレオチド配列と比較して、コードされたポリペプチドの発現が増加している。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドバリアントは、親ポリヌクレオチド配列と比較して、コードされたポリペプチドの発現が減少している。
本明細書に記載の核酸分子を含むベクターも提供される。一実施形態では、核酸分子を組み換え発現ベクターに組み込むことができる。本開示は、本開示の核酸のいずれかを含む組み換え発現ベクターを提供する。本明細書で使用される場合、構築物が、ｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、細胞内で発現する、ｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドを有するのに十分な条件下で、ベクターを細胞と接触させる場合の、「組み換え発現ベクター」という用語は、宿主によりｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドの発現を可能にする遺伝子改変されたオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチド構築物を意味する。本明細書に記載のベクターは、全体として天然に存在するものではないが、ベクターの一部は、自然に存在し得る。記載された組み換え発現ベクターは、限定されないが、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む任意のタイプのヌクレオチドを含み得、これらは、一本鎖または二本鎖であり、天然の供給源から部分的に合成または取得することができ、これは、天然の、非天然、または改変されたヌクレオチドを含有し得る。組み換え発現ベクターは、天然に存在するまたは非天然ヌクレオチド間結合、または両方のタイプの結合を含み得る。非天然または改変ヌクレオチドまたはヌクレオチド間結合は、ベクターの転写または複製を妨げない。
一実施形態では、本開示の組み換え発現ベクターは、任意の好適な組み換え発現ベクターであり得、任意の好適な宿主に形質転換またはトランスフェクトするために使用することができる。好適なベクターとしては、増殖及び増大のために、または発現もしくはその両方のために設計されるもの、例えば、プラスミド及びウイルス、が挙げられる。ｐＵＣシリーズ（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｇｌｅｎ Ｂｕｒｎｉｅ， Ｍｄ．）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔシリーズ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、ＬａＪｏｌｌａ， Ｃａｌｉｆ．）、ｐＥＴシリーズ（Ｎｏｖａｇｅｎ、Ｍａｄｉｓｏｎ， Ｗｉｓ．）、ｐＧＥＸシリーズ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｕｐｐｓａｌａ， Ｓｗｅｄｅｎ）、及びｐＥＸシリーズ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ， Ｃａｌｉｆ．）からなる群より、ベクターを選択することができる。バクテリオファージベクター、例えば、λＧＴ１０、λＧＴ１１、λＥＭＢＬ４、及びλＮＭ１１４９、λＺａｐＩＩ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を使用することができる。植物発現ベクターの例としては、ｐＢＩ０１、ｐＢＩ０１．２、ｐＢＩ１２１、ｐＢＩ１０１．３、及びｐＢＩＮ１９（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が挙げられる。動物発現ベクターの例としては、ｐＥＵＫ－Ｃ１、ｐＭＡＭ、及びｐＭＡＭｎｅｏ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が挙げられる。組み換え発現ベクターは、ウイルスベクター、例えば、レトロウイルスベクター、例えば、ガンマレトロウイルスベクターであってよい。
一実施形態では、組み換え発現ベクターは、例えば、上掲のＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．及び上掲のＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．に記載の標準的な組み換えＤＮＡ技術を使用して調製される。環状または線状である発現ベクターの構築物は、原核または真核宿主細胞で機能する複製系を含有するように調製することができる。例えば、ＣｏｌＥ１、ＳＶ４０、２μのプラスミド、λ、ウシパピローマウイルスなどから、複製系を誘導することができる。
組み換え発現ベクターは、調節配列、例えば、転写及び翻訳の開始コドン及び終結コドンを含んでもよく、これは、宿主のタイプ（例えば、細菌、植物、菌類、または動物）に特異的であり、この中に、適宜、ベクターが導入され、これは、ベクターがＤＮＡベースであるか、ＲＮＡベースであるかを考慮に入れる。
組み換え発現ベクターは、形質転換またはトランスフェクトされた宿主の選択を可能にする１つ以上のマーカー遺伝子を含み得る。マーカー遺伝子は、殺生物剤耐性、例えば、抗生物質、重金属などに対する耐性、原栄養体を提供するための栄養要求性宿主における相補性などを含む。記載された発現ベクターに好適なマーカー遺伝子としては、例えば、ネオマイシン／Ｇ４１８耐性遺伝子、ヒスチジノールｘ耐性遺伝子、ヒスチジノール耐性遺伝子、テトラサイクリン耐性遺伝子、及びアンピシリン耐性遺伝子が挙げられる。
組み換え発現ベクターは、本開示のヌクレオチド配列に作動可能に連結された天然または標準プロモーターを含み得る。例えば、強い、弱い、組織特異的、誘導可能及び発生特異的な、プロモーターの選択は、当業者の通常の技術の範囲内である。同様に、ヌクレオチド配列とプロモーターとの組み合わせも当業者の技術範囲内である。プロモーターは、非ウイルスプロモーターまたはウイルスプロモーター、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＲＳＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、またはマウス幹細胞ウイルスの長末端反復に見られるプロモーターであり得る。
組み換え発現ベクターは、一過性発現、安定発現、またはその両方のために設計することができる。また、組み換え発現ベクターは、構成的発現または誘導的発現のために作製することができる。
さらに、組み換え発現ベクターは、自殺遺伝子を含むように作製することができる。本明細書で使用される場合、「自殺遺伝子」という用語は、自殺遺伝子を発現する細胞を死滅させる遺伝子を指す。自殺遺伝子は、遺伝子が発現される細胞に、薬剤、例えば、薬物に対する感受性を与え、細胞が薬剤と接触または曝露される時、細胞を死滅させる遺伝子であり得る。自殺遺伝子は、当該技術分野で知られており、例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）チミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子、シトシンデアミナーゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、及びニトロレダクターゼを含む。
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドが、単離される。特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、実質的に純粋である。
本明細書に記載の核酸分子を含む宿主細胞もまた提供される。宿主細胞は、異種核酸を含有する任意の細胞であってよい。異種核酸は、ベクター（例えば、発現ベクター）であり得る。例えば、宿主細胞は、細胞による物質の産生用、例えば、遺伝子、ＤＮＡもしくはＲＮＡ配列、タンパク質、または酵素の細胞による発現用の、任意の方法で選択、改変、形質転換、成長、使用、または操作される任意の生物由来の細胞であり得る。適切な宿主が決定されてもよい。例えば、宿主細胞は、ベクターバックボーン及び所望の結果に基づいて選択されてもよい。例として、プラスミドまたはコスミドは、いくつかのタイプのベクターの複製のために原核宿主細胞に導入することができる。限定されないが、ＤＨ５α、ＪＭ１０９、及びＫＣＢ、ＳＵＲＥ（登録商標）形質転換受容性細胞、及びＳＯＬＯＰＡＣＫ Ｇｏｌｄ細胞などの細菌細胞を、ベクター複製及び／または発現用の宿主細胞として使用することができる。さらに、大腸菌ＬＥ３９２などの細菌細胞は、ファージウイルスの宿主細胞として使用することができた。宿主細胞として使用することができる真核細胞は、酵母（例えば、ＹＰＨ４９９、ＹＰＨ５００、及びＹＰＨ５０１）、昆虫、ならびに哺乳動物を含むが、これらに限定されない。ベクターの複製及び／または発現用の哺乳動物真核宿主細胞の例としては、ＨｅＬａ、ＮＩＨ３Ｔ３、Ｊｕｒｋａｔ、２９３、ＣＯＳ、Ｓａｏｓ、ＰＣ１２、ＳＰ２／０（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、Ｍａｎａｓｓａｓ， ＶＡ、ＣＲＬ－１５８１）、ＮＳ０（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）、Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ， Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ， ＵＫ、ＥＣＡＣＣ番号８５１１０５０３）、ＦＯ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６４６）及びＡｇ６５３（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８０）マウス細胞株が挙げられるが、これらに限定されない。例示的なヒト骨髄腫細胞株は、Ｕ２６６（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－ＴＩＢ－１９６）である。他の有用な細胞株としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞に由来するもの、例えば、ＣＨＯ－Ｋ１ＳＶ（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ、Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ， ＭＤ）、ＣＨＯ－Ｋ１（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－６１）、またはＤＧ４４、が挙げられる。
５．５．医薬組成物
一態様では、本開示は、さらに、本開示の操作された免疫エフェクター細胞を含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、治療有効量の本開示の操作された免疫エフェクター細胞と薬学的に許容される賦形剤とを含む。
いくつかの実施形態では、治療有効量の本明細書で提供されるＣＡＲを含む治療用分子と薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物が、本明細書で提供される。
他の実施形態では、例えば、ベクター中の、治療有効量の本明細書で提供される核酸と、例えば、遺伝子療法に適した、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物が、本明細書で提供される。
特定の実施形態では、「賦形剤」という用語は、希釈剤、アジュバント（例えば、フロイントのアジュバント（完全または不完全））、担体またはビヒクル）も指し得る。医薬賦形剤は、滅菌液体、例えば、水及び、石油、動物、植物または合成起源のもの、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油などを含む油であり得る。生理食塩水ならびに水性デキストロース及びグリセロール溶液も液体賦形剤として用いることができる。好適な医薬品賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアラート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。組成物は、必要に応じて、少量の湿潤剤または乳化剤、またはｐＨ緩衝剤も含有し得る。これらの組成物は、液剤、懸濁剤、エマルション剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、持続放出製剤などの形態をとり得る。好適な医薬品賦形剤の例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．（Ｅａｓｔｏｎ， ＰＡ．）に記載される。そのような組成物は、患者への適切な投与のための形態を提供するために、好適な量の賦形剤と共に、例えば、精製形態で、予防的または治療的に有効な量の本明細書で提供される活性成分を含有するであろう。製剤は、投与方法に適合する必要がある。
いくつかの実施形態では、賦形剤の選択は、部分的には、特定の細胞、結合分子、及び／または抗体により、及び／または投与方法により決定される。従って、様々な好適な製剤が存在する。
通常、許容される担体、賦形剤、または安定剤は、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、緩衝液、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ、メタ重亜硫酸ナトリウムなどの抗酸化剤；防腐剤、等張化剤、安定剤、金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；ＥＤＴＡなどのキレート剤、及び／または非イオン性界面活性剤を含む。
緩衝液は、特に、安定性がｐＨに依存する場合、治療効果を最適化する範囲にｐＨを制御するために使用されてもよい。本開示で使用される好適な緩衝剤としては、有機酸及び無機酸の両方、ならびにそれらの塩が挙げられる。例えば、シトラート、ホスファート、スクシナート、タータラート、フマラート、グルコナート、オキサラート、ラクタート、アセタート。さらに、緩衝液は、ヒスチジン及びトリメチルアミン塩、例えば、トリスを含んでもよい。
防腐剤は、微生物の成長を遅らせるために添加されてもよい。本開示で使用される好適な防腐剤としては、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、塩化ヘキサメトニウム；ハロゲン化ベンザルコニウム（例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物）、塩化ベンゼトニウム；チメロサール、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール、３－ペンタノール、及びｍ－クレゾールが挙げられる。
多くの場合「安定剤」として既知の等張化剤は、組成物中の液体の張性を調整または維持するために存在し得る。大きな荷電生体分子、例えば、タンパク質及び抗体と共に使用される場合、それらは、アミノ酸側鎖の荷電基と相互作用し、それにより、分子間及び分子内相互作用の可能性を減らすことができるので、多くの場合、「安定剤」と呼ばれる。例示的な等張化剤としては、多価糖アルコール、三価以上の糖アルコール、例えば、グリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、及びマンニトールが挙げられる。
さらなる例示的な賦形剤としては、（１）増量剤、（２）溶解促進剤、（３）安定剤、及び（４）変性または容器壁への付着を防止する薬剤、が挙げられる。そのような賦形剤にとしては、以下が挙げられる：多価糖アルコール（上に列挙）；アミノ酸、例えば、アラニン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リジン、オルニチン、ロイシン、２－フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニンなど；有機糖または糖アルコール、例えば、スクロース、ラクトース、ラクチトール、トレハロース、スタキオース、マンノース、ソルボース、キシロース、リボース、リビトール、ミオイニシトース、ミオイニシトール、ガラクトース、ガラクチトール、グリセロール、シクリトール（例えば、イノシトール）、ポリエチレングリコール；硫黄含有還元剤、例えば、尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α－モノチオグリセロール、及びチオ硫酸ナトリウム；低分子量タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチンまたは他の免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；単糖類、例えば、キシロース、マンノース、フルクトース、グルコース；二糖類（例えば、ラクトース、マルトース、スクロース）；三糖類、例えば、ラフィノース；ならびに多糖類、例えば、デキストリンまたはデキストラン。
非イオン性界面活性剤または界面活性剤（「湿潤剤」としても既知）は、治療薬の可溶化を助けるために、及び撹拌による凝集から治療用タンパク質を保護するために、存在することがあり、これにより、活性な治療用タンパク質または抗体の変性を引き起こすことなく、製剤をせん断表面応力にさらすこともできる。好適な非イオン性界面活性剤としては、例えば、ポリソルベート（２０、４０、６０、６５、８０など）、ポリオキサマー（１８４、１８８など）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）ポリオール、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）、ポリオキシエチレンソルビタンモノエーテル（ＴＷＥＥＮ（登録商標）－２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）－８０など）、ラウロマクロゴール４００、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油１０、５０、及び６０、グリセロールモノステアラート、スクロース脂肪酸エステル、メチルセルロース、ならびにカルボキシメチルセルロースが挙げられる。使用することができるアニオン性界面活性剤としては、ラウリル硫酸ナトリウム、スルホコハク酸ジオクチルナトリウム、及びスルホン酸ジオクチルナトリウムが挙げられる。カチオン性界面活性剤は、塩化ベンザルコニウムまたは塩化ベンゼトニウムを含む。
医薬組成物がｉｎ ｖｉｖｏ投与に使用されるために、それらは、無菌であることが好ましい。医薬組成物は、無菌濾過膜による濾過により無菌にされ得る。本明細書の医薬組成物は、一般に、無菌のアクセスポートを有する容器、例えば、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針が穿刺可能な栓を有するバイアルに入れることができる。
投与経路は、既知で許容されている方法、例えば、好適な方法、例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、病巣内、または関節内経路による注射もしくは注入、局所投与、吸入で、長期間にわたる単回または複数回のボーラスまたは注入または持続放出、または拡張された放出手段に従うものである。
別の実施形態では、医薬組成物を、制御放出または持続放出システムとして提供することができる。一実施形態では、ポンプは、制御または持続放出を達成するために使用されてもよい（例えば、以下を参照：Ｓｅｆｔｏｎ，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１－４０（１９８７）；Ｂｕｃｈｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８：５０７－１６（１９８０）；及びＳａｕｄｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５６９－７４（１９８９））。別の実施形態では、予防薬もしくは治療薬（例えば、本明細書に記載の融合タンパク質）または本明細書で提供される組成物、の制御放出または持続放出を達成するために、ポリマー材料を使用することができる（例えば、以下を参照：Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ（Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ ｅｄｓ．，１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ（Ｓｍｏｌｅｎ ａｎｄ Ｂａｌｌ ｅｄｓ．，１９８４）；Ｒａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｐｅｐｐａｓ，Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１－１２６（１９８３）；Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１９０－９２（１９８５）；Ｄｕｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１－５６（１９８９）；Ｈｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５－１２（１９８９）；米国特許第５，６７９，３７７号；同第５，９１６，５９７号；同第５，９１２，０１５号；同第５，９８９，４６３号；ならびに同第５，１２８，３２６号；ＰＣＴ公開第ＷＯ９９／１５１５４号及び同第ＷＯ９９／２０２５３号）。持続放出製剤に使用されるポリマーの例としては、ポリ（２－ヒドロキシエチルメタクリラート）、ポリ（メチルメタクリラート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン－コ－ビニルアセタート）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）、及びポリオルトエステルが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、持続放出製剤に使用されるポリマーは、不活性で、浸出性不純物がなく、貯蔵安定性、無菌、及び生分解性である。さらに別の実施形態では、制御放出または持続放出システムを、特定の標的組織、例えば、鼻腔または肺の近くに配置することができ、それにより、全身用量のほんの一部しか必要とされない（例えば、以下に参照：Ｇｏｏｄｓｏｎ，Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｖｏｌ．２，１１５－３８（１９８４））。制御放出システムは、例えば、Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－３３（１９９０）により議論される。本明細書に記載の１つ以上の薬剤を含む持続放出製剤を製造するために、当業者に既知の任意の手法を使用することができる（例えば、以下を参照：米国特許第４，５２６，９３８号、ＰＣＴ公開第ＷＯ９１／０５５４８号及び同第ＷＯ９６／２０６９８号、Ｎｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ ＆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ３９：１７９－８９（１９９６）；Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，ＰＤＡ Ｊ．ｏｆ Ｐｈａｒｍａ．Ｓｃｉ．＆ Ｔｅｃｈ．５０：３７２－９７（１９９５）；Ｃｌｅｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：８５３－５４（１９９７）；ならびに、Ｌａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：７５９－６０（１９９７））。
本明細書に記載の医薬組成物は、処置される特定の適応症に必要な場合、複数の活性化合物または薬剤も含んでもよい。代わりに、または加えて、組成物は、細胞傷害薬、化学療法薬、サイトカイン、免疫抑制薬、または成長阻害薬を含んでもよい。そのような分子は、意図される目的に有効な量で組み合わせて適切に存在する。
活性成分は、また、コロイド薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子、及びナノカプセル）中、またはマクロエマルション中で、例えば、コアセルベーション手法により、または、界面重合により、それぞれ、例えば、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン－マイクロカプセル及びポリ－（メチルメタクリラート）マイクロカプセルにより、調製されたマイクロカプセル中に封入されてもよい。そのような手法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １８ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎに開示される。
様々な組成物及び送達系が既知であり、本明細書で提供される治療薬と共に使用することができ、これらは、リポソーム、マイクロ粒子、マイクロカプセルへのカプセル化、本明細書で提供される単一ドメイン抗体または治療用分子を発現することが可能な組み換え細胞、レトロウイルスまたは他のベクターの一部としての核酸の構築などを含むが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、疾患または障害を処置または予防するのに有効な量、例えば、治療有効量または予防有効量で結合分子及び／または細胞を含有する。いくつかの実施形態における治療効果または予防効果は、処置対象の定期的な評価により監視される。状態に応じて、数日以上にわたって反復投与する場合、所望の疾患症状の抑制が起こるまで、処置を繰り返す。しかし、他の投薬計画が有用であり、決定することができる。
５．６．方法及び使用
別の態様では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及び／または組み換え受容体を発現する操作された細胞を使用するための方法及びその使用が本明細書で提供される。
そのような方法及び使用は、例えば、ＣＤ２０、ＣＤ１９、及び／またはＣＤ２２の発現を発現する、もしくはそれに関連する、及び／または細胞もしくは組織がＣＤ２０、ＣＤ１９及び／またはＣＤ２２を発現する疾患、状態、または障害を有する対象に、それを含有する分子、細胞、または組成物を投与することを含む、治療方法及び使用を含む。いくつかの実施形態では、分子、細胞、及び／または組成物は、疾患または障害の処置を行うのに有効な量で投与される。使用は、そのような方法及び処置における、ならびにそのような治療方法を実施するための薬品の調製における、ＣＡＲ及び細胞の使用を含む。いくつかの実施形態では、方法は、疾患または状態を有するか、または有すると疑われる対象に、ＣＡＲもしくは細胞、またはそれらを含む組成物を投与することにより実施される。いくつかの実施形態では、それにより、方法は、対象の疾患または障害を処置する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される処置は、疾患もしくは障害、または症状、有害作用もしくは転帰、またはそれに関連する表現型の完全または部分的な改善または低減を引き起こす。処置の望ましい効果は、疾患の発生または再発の防止、症状の軽減、疾患の直接的または間接的な病理学的結果の減少、転移の防止、疾患の進行速度の減少、病状の改善または緩和、及び予後の寛解または改善が含まれるが、これらに限定されない。これらの用語は、疾患の完全治癒、または、全ての症状もしくは転帰における任意の症状もしくは効果（複数可）の完全な排除を含むが、それらを意味しない。
本明細書で使用される場合、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される処置は、疾患または障害の発症を遅らせ、例えば、疾患（例えば、がん）の発症を遅延、妨害、減速、阻止、安定化、抑制、及び／または延期する。この遅延は、疾患の病歴及び／または処置される個体に応じて、様々な時間のものとなり得る。当業者には明らかであるように、十分なまたは有意な遅延は、個体が疾患または障害を発症しないという点で、事実上、予防を包含し得る。例えば、転移の発症などの末期がんは、遅延され得る。他の実施形態では、本明細書で提供される方法または使用は、疾患または障害を予防する。
いくつかの実施形態では、疾患または障害は、ＣＤ２０関連の疾患または障害である。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、ＣＤ１９関連の疾患または障害である。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、ＣＤ２２関連の疾患または障害である。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、Ｂ細胞関連の疾患または障害である。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、Ｂ細胞悪性腫瘍である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍は、Ｂ細胞白血病またはＢ細胞リンパ腫である。特定の実施形態では、疾患または障害は、辺縁帯リンパ腫（例えば、脾辺縁帯リンパ腫）である。特定の実施形態では、疾患または障害は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＬ）である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、Ｂ細胞前リンパ球性白血病（Ｂ－ＰＬＬ）である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、バーキットリンパ腫である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、原発性眼内リンパ腫である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、前駆Ｂリンパ芽球性白血病である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫（ＨＧＢＬ）である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、多発性骨髄腫（ＭＭ）である。他の実施形態では、疾患または障害は、再発性または難治性Ｂ細胞悪性腫瘍、例えば、再発性または難治性ＡＬＬ（Ｒ／Ｒ ＡＬＬ）である。
他の実施形態では、疾患または障害は、例えば、不適切なまたは増加したＢ細胞数及び／または活性化と関連するものを含む、自己免疫疾患及び炎症性疾患である。
いくつかの実施形態では、方法は、養子細胞療法を含み、それにより、提供された多重特異性ＣＡＲを発現する遺伝子操作された細胞が対象に投与される。そのような投与は、疾患または障害の細胞が破壊の標的となるように、ＣＤ２０、ＣＤ１９、及び／またはＣＤ２２が標的指向性となる方法で、細胞の活性化（例えば、Ｔ細胞活性化）を促進し得る。
いくつかの実施形態では、方法は、対象、組織、または細胞、例えば、疾患または障害を有するか、これらのリスクがあるか、またはこれらを有すると疑われるものへの、細胞または細胞を含有する組成物の投与を含む。いくつかの実施形態では、細胞、集団、及び組成物は、例えば、養子細胞療法、例えば、養子Ｔ細胞療法を介して、処置されるべき特定の疾患または障害を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、細胞または組成物は、対象、例えば、疾患または障害を有するか、またはそれらのリスクがある対象、に投与される。いくつかの実施形態では、それにより、方法は、例えば、ＣＤ２０、ＣＤ１９、及び／またはＣＤ２２を発現するがんの腫瘍量を低減させることにより、疾患または障害の１つ以上の症状を処置、例えば、改善する。
例えば、米国特許出願公開第２００３／０１７０２３８号；米国特許第４，６９０，９１５号；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．８（１０）：５７７－８５（２０１１）；Ｔｈｅｍｅｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３１（１０）：９２８－９３３（２０１３）；Ｔｓｕｋａｈａｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ４３８（１）：８４－９（２０１３）；及びＤａｖｉｌａ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ ＯＮＥ ８（４）：ｅ６１３３８（２０１３）に記載される養子細胞療法のための細胞の投与方法が既知である。これらの方法は、本明細書で提供される方法及び組成物と関連して使用されてもよい。
いくつかの実施形態では、細胞療法（例えば、養子Ｔ細胞療法）は、自己移植で実施され、細胞が、細胞治療を受けるべき対象から、またはそのような対象に由来するサンプルから、単離及び／または別の方法で調製される。従って、いくつかの態様では、細胞は、処置を必要とする対象に由来し、細胞は、単離及び処理後に、同じ対象に投与される。他の実施形態では、細胞療法（例えば、養子Ｔ細胞療法）は、同種異系移植で実施され、細胞は、細胞療法を受けるべき、または最終的に受ける対象以外の対象、例えば、第１の対象、から単離及び／または別の方法で調製される。そのような実施形態では、次に、細胞は、同じ種の異なる対象、例えば、第２の対象、に投与される。いくつかの実施形態では、第１及び第２の対象は、遺伝的に同一である。いくつかの実施形態では、第１及び第２の対象は、遺伝的に類似している。いくつかの実施形態では、第２の対象は、第１の対象と同じＨＬＡクラスまたはスーパータイプを発現する。
いくつかの実施形態では、細胞、細胞集団、または組成物が投与される対象は、霊長類、例えば、ヒトである。対象は、男性または女性であり得、幼児、少年、青年、成人、及び高齢者対象を含む任意の好適な年齢であり得る。いくつかの例では、対象は、疾患、養子細胞療法、及び／または毒作用の評価について検証された動物モデルである。
本明細書で提供される組成物を、任意の好適な手段、例えば、注射、例えば、静脈内または皮下注射、眼内注射、眼周囲注射、網膜下注射、硝子体内注射、経中隔注射、強膜下注射、脈絡膜内注射、前房内注射、ｓｕｂｃｏｎｊｅｃｔｖａｌ注射、結膜下注射、テノン嚢下注射、眼球後注射、眼球周囲注射、または後部強膜傍送達により投与することができる。いくつかの実施形態では、それらは、非経口、肺内、及び鼻腔内、局所処置に望ましい場合、病巣内投与で投与される。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与を含む。
疾患または状態の予防及び／または処置に有効となる本明細書で提供される予防薬または治療薬の量は、標準的な臨床手法で決定することができる。有効用量は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたは動物モデル試験系から導出された用量反応曲線から外挿されてもよい。疾患の予防または処置のために、結合分子または細胞の適切な投薬量は、処置されるべき疾患または障害のタイプ、結合分子のタイプ、疾患または障害の重症度及び経過、治療薬が予防または治療目的のために投与されるかどうか、以前の治療、患者の病歴及び薬剤に対する応答、ならびに主治医の判断に依存し得る。組成物、分子、及び細胞は、いくつかの実施形態では、一度にまたは一連の処置にわたって患者に適切に投与される。断続的に複数回用量が投与されてもよい。最初に高負荷用量、続いて、１つ以上の低用量が投与されてもよい。
結合分子を含有する遺伝子操作された細胞との関連で、いくつかの実施形態では、対象は、約１００万～約１０００億個の範囲の細胞及び／または体重１キログラム当たりの細胞の量を投与されてもよい。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載の操作された免疫細胞のいずれか１つを含み、医薬組成物は、少なくとも約１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、または１０９細胞／個体体重ｋｇのうちのいずれかの投薬量で投与される。投薬量は、疾患もしくは障害及び／または患者及び／または他の処置に特有の属性に応じて変動し得る。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１回投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、複数回（例えば、２、３、４、５、６回、またはそれ以上のうちのいずれか）投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、投与サイクル中に１回または複数回投与される。投与サイクルは、例えば、１、２、３、４、５週間もしくはそれ以上、または１、２、３、４、５ヶ月もしくはそれ以上であり得る。特定の患者に対する最適な投与量及び処置計画は、疾患の徴候について患者を監視し、それに応じて処置を調整することにより、医療の当業者により決定することができる。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物は、併用処置の一部として、例えば、別の治療的介入、例えば、別の抗体または操作された細胞または受容体または薬剤、例えば、細胞傷害性もしくは治療薬と同時に、または任意の順序で、逐次的に投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物は、１つ以上の追加の治療薬と同時に、または別の治療的介入と関連して、同時にもしくは任意の順序で逐次的に投与される。いくつかの状況では、細胞集団が１つ以上の追加の治療薬の効果を高めるか、またはその逆も同様に、細胞は、十分に近い時間に別の療法と同時投与される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物は、１つ以上の追加の治療薬の前に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物は、１つ以上の追加の治療薬の後に投与される。
特定の実施形態では、細胞が哺乳動物（例えば、ヒト）に投与されると、操作された細胞集団及び／または結合分子の生物学的活性が、多数の既知の方法のいずれかで測定される。評価するパラメーターは、ｉｎ ｖｉｖｏでの、例えば、イメージングにより、例えば、ｅｘ ｖｉｖｏでの、例えば、ＥＬＩＳＡまたはフローサイトメトリーにより、操作されたまたは天然のＴ細胞または他の免疫細胞の抗原への特異的結合を含む。特定の実施形態では、例えば、Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，３２（７）：６８９－７０２（２００９），及びＨｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２８５（１）：２５－４０（２００４）に記載の細胞傷害性アッセイなどの当該技術分野で既知の任意の好適な方法を使用して、操作された細胞が標的細胞を破壊する能力を測定することができる。特定の実施形態では、特定のサイトカイン、例えば、ＣＤ１０７ａ、ＩＦＮγ、ＩＬ－２、及びＴＮＦ、の発現及び／または分泌をアッセイすることにより、細胞の生物学的活性を測定することもできる。いくつかの態様では、生物学的活性は、臨床転帰、例えば、腫瘍量または負荷の低減、を評価することにより測定される。
特定の具体的な実施形態では、疾患または障害を処置するための方法が本明細書で提供され、この方法は、例えば、セクション５．２で提供されるＣＡＲを含む細胞を含む、セクション５．３で提供される操作された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、対象に投与される操作された免疫細胞は、（ａ）抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂのうちの少なくとも２つ（例えば、３つ全て）を含む、細胞外抗原結合ドメイン；（ｂ）膜貫通ドメイン；ならびに、（ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン、を含むポリペプチドを含むＣＡＲを含み、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂが、例えば、表２のＣＤＲを有するものを含む、上記のセクション５．２．１に記載される通りである。いくつかの実施形態では、対象に投与される操作された免疫細胞は、表４～７、９、及び１２に列挙されるＣＡＲを含む。他の実施形態では、対象に投与される操作された免疫細胞は、表４～７、９、及び１２に列挙されるＣＡＲのＣＤＲを有するＣＡＲを含む。他の実施形態では、対象に投与される操作された免疫細胞は、配列番号１７４～２２６から選択されるアミノ酸配列、または配列番号１７４～２２６から選択されるアミノ酸配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列、を含むＣＡＲを含む。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、ＣＤ２０関連の疾患または障害である。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、ＣＤ１９関連の疾患または障害である。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、ＣＤ２２関連の疾患または障害である。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、Ｂ細胞関連の疾患または障害である。いくつかの実施形態では、疾患または障害は、Ｂ細胞悪性腫瘍である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍は、Ｂ細胞白血病またはＢ細胞リンパ腫である。特定の実施形態では、疾患または障害は、辺縁帯リンパ腫（例えば、脾辺縁帯リンパ腫）である。特定の実施形態では、疾患または障害は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＬ）である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、Ｂ細胞前リンパ球性白血病（Ｂ－ＰＬＬ）である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、バーキットリンパ腫である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、原発性眼内リンパ腫である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、前駆Ｂリンパ芽球性白血病である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫（ＨＧＢＬ）である。別の特定の実施形態では、疾患または障害は、多発性骨髄腫（ＭＭ）である。他の実施形態では、疾患または障害は、再発性または難治性Ｂ細胞悪性腫瘍、例えば、再発性または難治性ＡＬＬ（Ｒ／Ｒ ＡＬＬ）である。他の実施形態では、疾患または障害は、例えば、不適切なまたは増加したＢ細胞数及び／または活性化と関連するものを含む、自己免疫疾患及び炎症性疾患である。
いくつかの実施形態では、疾患または障害を処置するための方法が本明細書で提供され、この方法は、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂを含むＣＡＲを発現する操作された免疫エフェクター細胞を対象に投与することを含み、これのそれぞれは、上記のセクション５．２．１に記載のそれぞれのｓｄＡｂから選択され、３つのｓｄＡｂの中で、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂは、ＣＡＲの膜貫通ドメインに最も近く、疾患または障害は、ＣＤ１９またはＣＤ２２よりも高いレベルのＣＤ２０を発現する細胞（例えば、がん細胞）を含む。
他の実施形態では、疾患または障害を処置するための方法が本明細書で提供され、この方法は、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂを含むＣＡＲを発現する操作された免疫エフェクター細胞を対象に投与することを含み、これのそれぞれは、上記のセクション５．２．１に記載のそれぞれのｓｄＡｂから選択され、３つのｓｄＡｂの中で、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂは、ＣＡＲの膜貫通ドメインに最も近く、疾患または障害は、ＣＤ２０またはＣＤ２２よりも高いレベルのＣＤ１９を発現する細胞（例えば、がん細胞）を含む。
さらに他の実施形態では、疾患または障害を処置するための方法が本明細書で提供され、この方法は、抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂを含むＣＡＲを発現する操作された免疫エフェクター細胞を対象に投与することを含み、これのそれぞれは、上記のセクション５．２．１に記載のそれぞれのｓｄＡｂから選択され、３つのｓｄＡｂの中で、抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂは、ＣＡＲの膜貫通ドメインに最も近く、疾患または障害は、ＣＤ２０またはＣＤ１９よりも高いレベルのＣＤ２２を発現する細胞（例えば、がん細胞）を含む。
特定の実施形態では、本明細書で提供される方法は、例えば、細胞表面抗原の発現レベルにより導かれるように、本明細書で提供される２つ以上のＣＡＲ－Ｔ細胞を同時または順次投与することを含む。
別の態様では、特定の対象に最も適した順序で配置されたＣＤ１９、ＣＤ２０、及びＣＤ２２結合ＶＨＨドメインを有するカスタマイズされたＣＡＲ－Ｔを利用する、個別化ＣＡＲ－Ｔ療法が本明細書で提供される。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、対象からがんサンプルを得るステップ、ならびに、ＣＤ１９、ＣＤ２０、及びＣＤ２２のレベルを決定するステップを含み、これに基づいて、特定の順序で配置されたＣＤ１９、ＣＤ２０、及びＣＤ２２結合ＶＨＨドメインを有するＣＡＲを発現するＣＡＲ－Ｔが、対象に投与される。この方法は、処置を通してこれらの抗原の発現レベルを継続的に監視すること、及び、それに応じて処置を調整すること、も含んでもよい。
５．７．キット及び製造物品
さらに、本明細書に記載のキメラ抗原受容体または操作された免疫エフェクター細胞のいずれかを含むキット、単位投薬量、及び製造物品が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物のいずれか１つを含有し、且つ、好ましくは、その使用説明書を提供するキットが提供される。
本願のキットは、好適なパッケージ中にある。好適なパッケージングとしては、バイアル、ボトル、ジャー、フレキシブル包装（例えば、密閉マイラーまたはビニール袋）などが挙げられるが、これらに限定されない。キットは、任意に、緩衝液及び説明情報などの追加の構成要素を提供してもよい。従って、本出願は、製造物品も提供し、これは、バイアル（例えば、密閉バイアル）、ボトル、ジャー、フレキシブルパッケージなどを含む。
製造物品は、容器、及び、容器上または容器に付属するラベルまたは添付文書を含み得る。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、注射器などが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成されてもよい。一般に、容器は、本明細書に記載の疾患または障害（例えば、がん）を処置するのに有効な組成物を保持し、無菌のアクセスポートを有していてもよい（例えば、容器は、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針により穿刺可能な栓を有するバイアルであってよい）。ラベルまたは添付文書は、組成物が個体の特定の状態を処置するために使用されることを示す。ラベルまたは添付文書は、さらに、個体に組成物を投与するための説明書を含むであろう。ラベルは、再構成及び／または使用のための注意書きを示し得る。医薬組成物を保持する容器は、再構成された製剤の反復投与（例えば、２～６回の投与）を可能にする多目的バイアルであってもよい。添付文書は、治療用製品の市販パッケージに通常含まれる使用説明書を指し、これは、そのような治療用製品の使用に関する適応症、使用法、投薬量、投与、禁忌、及び／または警告に関する情報を含有する。さらに、製造物品は、さらに、薬学的に許容される緩衝液、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液、及びデキストロース溶液、を含む第２の容器を含んでもよい。それは、さらに、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、及び注射器を含む、商業的及び使用者の観点から望ましい他の材料を含んでもよい。
キットまたは製造物品は、複数の単位用量の医薬組成物及び使用説明書を含み、薬局、例えば、病院薬局及び調剤薬局、で保管及び使用するのに十分な量でパッケージングされてもよい。
簡潔にするために、特定の略語が、本明細書で使用される。一例は、アミノ酸残基を表す１文字の略語である。アミノ酸及びそれに対応する３文字及び１文字の略語は以下の通りである。
Figure 2023546766000020
本開示は、多数の実施形態を記載するために肯定的な言葉を使用して、一般に、本明細書に開示される。本開示は、また、具体的には、特定の対象が、完全にまたは部分的に除外される実施形態、例えば、物質もしくは材料、方法のステップ及び条件、プロトコール、手順、アッセイ、または分析を含む。従って、本開示は、一般に、本開示が含まないものに関して、本明細書で表現されていないが、それにもかかわらず、本開示に明示的に含まれていない態様は、本明細書に開示される。
本開示のいくつかの実施形態が説明されている。それでもなお、本開示の趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な修正がなされてもよいことを理解されるであろう。従って、以下の実施例は、特許請求の範囲に記載された開示の範囲を説明するが、限定しないことが意図される。
６．実施例
以下は、研究で使用される様々な方法及び材料の説明であり、本開示の作成方法及び使用方法の完全な開示及び説明を当業者らに提供するために記載され、本発明者らが本開示としてみなすものの範囲に制限することが意図されないか、以下の実験が実施され、実施され得る実験の全てであることを表すことが意図されない。現在時制で書かれた例示的な説明は、必ずしも実行されたわけではなく、むしろ、この説明は、本開示の教示に関連するデータなどを生成するために実施することができることを理解すべきである。使用される数値（例えば、量、パーセンテージなど）に関して正確性を確保するための取り組みがなされているが、いくつかの実験誤差及び偏差は、考慮されるべきである。
６．１．実施例１－抗ＣＤ２０、抗ＣＤ１９、及び抗ＣＤ２２ ＶＨＨの調製
ＣＤ１９、ＣＤ２０、及びＣＤ２２抗原に対して高い結合親和性を有するＶＨＨを開発するために、ラクダ科動物を、それぞれ、ヒトＣＤ１９、ＣＤ２０、もしくはＣＤ２２タンパク質、またはＣＤ１９、ＣＤ２０、またはＣＤ２２単一抗原発現細胞株で免疫した。次に、ＶＨＨリードを同定するために、ファージディスプレイライブラリーを構築した。異なるクローンを結合時に選択し、ＶＨＨ相補性決定領域（ＣＤＲ）、特に、抗原認識レパートリー及び結合を拡大するＣＤＲ３に従って分類した。
抗ＣＤ２２ ＶＨＨを生成するプロセスは、各抗原に対するＶＨＨを生成するための例として以下に記載される。以下に記載するのと同様のプロセスで、抗ＣＤ１９ ＶＨＨ及び抗ＣＤ２０ ＶＨＨの生成を実施した。単一ドメイン抗体を調製するための他のプロトコールが記載されている。例えば、Ｅｌｓ Ｐａｒｄｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ，９（３）：６７４（２０１４）を参照のこと。
６．１．１．細胞株の構築
Ｋ５６２．ｈｕＣＤ２２．Ｌｕｃ細胞株は、以下に簡単に記載される方法に従って社内で開発された。ヒトＣＤ２２コード配列（ＮＭ＿００１７７１．３）を合成し、ＥｃｏＲＩ及びＢａｍＨＩ制限部位の間にｐＬＶＸ－ｐｕｒｏ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、カタログ番号６３２１６４）をサブクローニングして、プラスミドｐＬＶＸ－ｈｕＣＤ２２．Ｌｕｃ．Ｐｕｒｏを得た。ｐｓＰＡＸ２、ｐＭＤ．２Ｇ及びｐＬＶＸ－ｈｕＣＤ２２．Ｌｕｃ．Ｐｕｒｏを含有するプラスミドの混合物を用いて、Ｌｅｎｔｉ－Ｘ２９３Ｔ宿主細胞を一過性トランスフェクションすることにより、レンチウイルスをパッケージングした。１００μＬのＬＶ－ｈｕＣＤ２２．Ｌｕｃ．ＰｕｒｏＲレンチウイルスで感染させることにより、０．５×１０６個のＫ５６２細胞（ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ－２４３）を形質導入した。細胞培養物にピューロマイシン選択培地（ＲＰＭＩ１６４０、１０％のＦＢＳ及び５μｇ／ｍＬのピューロマイシン）を２～３日毎に補充することにより、形質導入された細胞を選択した。３回の選択の後、遠心分離により、細胞プールを採取した。採取された細胞を分注し、凍結保存し、さらなる使用の準備をした。
ＰＥコンジュゲート抗ヒトＣＤ２２抗体（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、カタログ番号１３０－１０５－０８６）を使用したフローサイトメトリーにより、Ｋ５６２．ｈｕＣＤ２２．Ｌｕｃ細胞株でのヒトＣＤ２２の発現レベルを検証した。要約すると、２×１０５個のＫ５６２．ｈｕＣＤ２２．Ｌｕｃ細胞またはＫ５６２細胞をＰＥコンジュゲート抗ヒトＣＤ２２抗体と共に４℃で３０分間インキュベートし、続いて、３回洗浄し、Ａｔｔｕｎｅ ＮＸＴフローサイトメトリー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）でのＦＡＣＳ分析用に、０．５％のＦＢＳを含むＤＰＢＳ ２００μＬに再懸濁させて、ヒトＣＤ２２抗原の発現レベルを検出する。Ｋ５６２．ｈｕＣＤ２２．Ｌｕｃの平均蛍光強度（ＭＦＩ）は、Ｋ５６２細胞（陰性対照）よりも６４１．５９倍高かった。
６．１．２．動物の免疫及び免疫応答試験
ヒトＣＤ２２タンパク質（ＡＣＲＯ、カタログ番号ＣＤ２－Ｈ５２Ｈ８）を用いて、１頭の成体雄ラクダ（Ｃａｍｅｌｕｓ ｂａｃｔｒｉａｎ）を２週間間隔で５回皮下免疫した。免疫前日（Ｐｒｅ）及び最終免疫日（ＴＢ）に、血液を採取した。ラクダの免疫応答をＥＬＩＳＡで評価し、血清サンプル及び固定化抗原間の結合を試験した。動物へのＣＤ２２抗原の注射時に、強い免疫応答が誘導され、血清力価は、＞１：７２９ｋに達した。データは、抗体力価がＣＤ２２抗原免疫により有意に増加したことを示唆した。
最後の免疫から３～５日後に、産生血として頸静脈から、１００ｍＬの血液を採取した。リンホプレップの手順に従って、血液から末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を分離した。
６．１．３．抗体ファージライブラリーの構築
製造者の使用説明書に従い、ＴＲＩＺＯＬ（登録商標）試薬（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号１５５９６０２６）を使用して、単離されたリンパ球から総ＲＮＡを抽出し、製造者のプロトコールに従い、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（商標）第１鎖ｃＤＮＡ合成キット（Ｔａｋａｒａ、カタログ番号６１１０Ａ）を使用して、オリゴ（ｄＴ）２０プライマーを含むｃＤＮＡに逆転写した。２つのＳｆｉＩ制限部位が導入されたＶＨＨフラグメントを増幅するように、フォワード及びリバース特異的変性プライマー（中国特許第ＣＮ１０５５５５３１０Ｂ号を参照）を設計した。２ステップポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使用して、ＶＨＨフラグメントを増幅し、第２のＰＣＲ産物をＳｆｉＩで消化し、ゲル精製し、次に、ファージミドベクター－ｐＦＬ２４９に挿入し、これを、大腸菌細胞に電気的に導入して、ファージディスプレイＶＨＨ免疫ライブラリーを得た。
形質転換された細胞のごく一部を希釈し、１００μｇ／ｍＬのアンピシリンが補充された２ｘＹＴプレートに塗り広げた。コロニーを計数して、ライブラリーサイズを算出した。ライブラリーの品質を評価するために、陽性クローンをランダムに選択し、シーケンシングした。１００μｇ／ｍＬのアンピシリン及び２％のグルコースが補充された２４５ｍｍ平方の２×ＹＴ寒天皿に、残りの形質転換された細胞を塗り広げた。コロニーの菌叢を、皿からこすり落とした。細胞の少量のアリコートを、ライブラリープラスミド分離に使用した。残りに、グリセロールを補充し、ストックとして－８０℃で保存した。
６．１．４．ファージディスプレイパニング
ヘルパーファージによる感染後、表面にＶＨＨドメインを遺伝子ＩＩＩ融合タンパク質として提示する組み換えファージ粒子が産生された。ファージ粒子を標準的な方法に従って調製し、フィルター滅菌後に、さらなる研究のために４℃で保存した。
ファージライブラリーを、種々のパニング方策に使用した。１回目及び２回目のパニングでは、ビオチン化ヒトＣＤ２２抗原（Ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ－ＬＣ－ビオチンキットで標識されたビオチン）をファージライブラリーと共にインキュベートし、続いて、Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｉｎｖｉｔｏｇｅｎ）で捕捉した。多数回洗浄した後、結合したファージをトリエチルアミンで溶出させた。２回のパニング後に、ファージの濃縮が観察された。
６．１．５．ＥＬＩＳＡスクリーニング
個々のライブラリークローンをインキュベートし、９６ウェルディープウェルプレートで発現を誘導した。ヒトＣＤ２２抗原を特異的に認識するＶＨＨクローンをスクリーニングするために、ＥＬＩＳＡスクリーニングを実施した。
単一の抗原特異的細胞株に結合するＶＨＨクローンを同定するために、Ｋ５６２．ｈｕＣＤ２２．Ｌｕｃ及びＫ５６２．Ｌｕｃ細胞を３％のＢＳＡ緩衝液で、室温で１時間ブロックした。出力ライブラリーから単一のクローンをランダムに選択し、９６ウェルディープウェルプレートで培養した。細菌培養のＯＤ６００が０．６～０．８に達した時、発現を一晩誘導するために、ＩＰＴＧを添加した。遠心分離により細菌を採取し、マイクロウェルプレートに播種した。本開示の例示的な抗ＣＤ２２ ＶＨＨドメインを選択し、配列決定した。
上記の方法を使用して、抗ＣＤ１９及び抗ＣＤ２０ ＶＨＨを得た。例示的なＶＨＨのＶＨＨ配列は、表２及び本明細書で提供される配列表にまとめられる。
６．２．実施例２－ＣＡＲの構築及び免疫細胞におけるその発現
６．２．１．ＣＡＲの構築
Ｎ末端からＣ末端にかけて、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７細胞質ドメイン、及びＣＤ３ζ細胞質ドメインを含む、ＣＡＲバックボーンポリペプチドをコードする核酸配列を、化学的に合成し、下流でｈＥＦ１αプロモーターに作動可能に連結されている事前改変されたレンチウイルスベクターにクローニングした。ベクター内のマルチクローニング部位（ＭＣＳ）は、ＶＨＨドメイン（複数可）のＮ末端に融合されたＣＤ８αシグナルペプチドをコードする核酸配列に作動可能に連結されたＫｏｚａｋ配列（ＧＣＣＧＣＣＡＣＣ（配列番号１６６））を含む核酸配列の挿入を可能にし、上流をＣＡＲバックボーン配列に作動可能に連結した。
ＣＡＲバックボーンベクターを使用して多重特異性ＶＨＨ ＣＡＲを構築するために、ペプチドリンカー（複数可）を介して互いに融合した複数の異なるＶＨＨドメインをコードする核酸配列を、ＣＤ８αシグナルペプチドをコードする核酸配列の３’に作動可能に連結した。ＣＤ１９ ＶＨＨドメインのうちの１つ、ＣＤ２０ ＶＨＨドメインのうちの１つ、またはＣＤ２２ ＶＨＨドメインのうちの１つのいずれかに由来の２つのＶＨＨドメイン（様々なＶＨＨ順序及び組み合わせを含む）を、一連のグリシン－セリンペプチドリンカー（（Ｇ４Ｓ）ｎ）で融合させることにより、二重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ構築物を調製することができる。抗ＣＤ１９ ＶＨＨドメインのうちの１つ、抗ＣＤ２０ ＶＨＨドメインのうちの１つ、及び抗ＣＤ２２ ＶＨＨドメインのうちの１つに由来する３つのＶＨＨドメイン（様々なＶＨＨ順序及び組み合わせを含む）を、一連のグリシン－セリンペプチドリンカー（（Ｇ４Ｓ）ｎ）で融合させることにより、三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ（ＡＩＯ ＣＡＲ）構築物を調製した。Ｋｏｚａｋ－ＣＤ８αシグナルペプチド核酸配列と組み合わせた融合核酸配列を化学的に合成し、当該技術分野で既知の分子クローニング手法で、ＥｃｏＲＩ（５’－ＧＡＡＴＴＣ－３’（配列番号１６７））及びＳｐｅＩ（５’－ＡＣＴＡＧＴ－３’（配列番号１６８））制限部位を介してＣＡＲバックボーンにクローニングした。ＣＡＲバックボーンを使用して、表２に示されるＶＨＨを有する単一特異性ＣＡＲも構築した。加えて、陽性対照として機能するために、抗ＣＤ１９ｓｃＦｖ（ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ（配列番号２８０））、抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ（Ｌｅｕ１６ ｓｃＦｖ（配列番号２８１））及び抗ＣＤ２２ ｓｃＦｖ（ｍ９７１ ｓｃＦｖ（配列番号２８２））も、それぞれＣＡＲバックボーンにクローニングした。
例示的な二重特異性ラクダ科ＣＤ１９×ＣＤ２０ ＶＨＨ ＣＡＲ、ＣＤ１９×ＣＤ２２ ＶＨＨ ＣＡＲ、ＣＤ２０×ＣＤ２２ ＶＨＨ ＣＡＲ構築物（様々なＶＨＨ順序を含む）及び三重特異性ラクダ科ＣＤ１９×ＣＤ２０×ＣＤ２２ ＶＨＨ ＣＡＲ（ＡＩＯ ＣＡＲ）構築物（様々なＶＨＨ順序を含む）が、表４－７及び９に記載される。
（表９）例示的な多重特異性ラクダ科ＶＨＨ ＣＡＲ
Figure 2023546766000021
Figure 2023546766000022
Figure 2023546766000023
上記の多重特異性ＶＨＨ ＣＡＲの核酸配列は、配列表の配列番号２２７～２５９に示される。これらの例示的なＣＡＲ構築物では、ＣＤ８αシグナルペプチド、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７細胞質ドメイン、及びＣＤ３ζ細胞質ドメインの配列は、それぞれ、配列番号１６１、配列番号１６２、配列番号１６３、配列番号１６４、及び配列番号１６５に示される。
６．２．２．レンチウイルスベクターのパッケージング
ポリエーテルイミド（ＰＥＩ）と事前に最適化された比で、ＣＡＲ構築物を発現するベクターと、ｐＭＤＬｇ．ｐＲＲＥ（Ａｄｄｇｅｎｅ、カタログ番号１２２５１）、ｐＲＳＶ－ＲＥＶ（Ａｄｄｇｅｎｅ、カタログ番号１２２５３）、及びｐＭＤ２．Ｇ（Ａｄｄｇｅｎｅ、カタログ番号１２２５９）を含有するレンチウイルスパッケージングプラスミド混合物を事前に混合した。トランスフェクション混合物を、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に滴加し、穏やかに混合し、続いて、６～８時間後に培地を交換した。ウイルス含有上清を４８時間及び７２時間後に収集し、次に、４℃、３０００ｇで１０分間遠心分離した。レンチウイルス濃縮後、上清を注意深く捨て、ウイルスペレットをＤ１０培地（ＤＭＥＭ、１０％のＦＢＳ、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、及び２ｍＭのＬ－グルタミン）で再懸濁させた。採取されたウイルスを分注し、直ちに、－８０℃で保存した。ＣＨＯ哺乳動物細胞の形質導入効率により、ウイルス力価を評価及び決定した。ＶＨＨ ＣＡＲのＬＶ力価は、０．８×１０８～４×１０８の範囲内に達した。
６．２．３．Ｔ細胞の分離及び活性化
ヒトＰＢＭＣを、健康なドナーから収集した。以下に記載される製造者プロトコールに従い、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｐａｎ Ｔ細胞単離キット（カタログ番号１３０－０９６－５３５）を使用して、ＰＢＭＣからヒトＴ細胞を精製した。細胞数を計数し、細胞懸濁液を４℃、３００ｇで１０分間遠心分離した。次に、上清を吸引除去し、細胞ペレットを総細胞１０７個当たり４０μＬの緩衝液に再懸濁させた。総細胞１０７個当たり１０μＬのＰａｎ Ｔ細胞ビオチン抗体カクテルを添加し、十分に混合し、４℃で５分間インキュベートした。次に、全細胞１０７個当たり３０μＬの緩衝液を添加した。細胞１０７個当たり２０μＬのＰａｎ Ｔ細胞ＭｉｃｒｏＢｅａｄカクテルを添加した。細胞懸濁液混合物を完全に混合し、４℃でさらに１０分間インキュベートした。磁気分離には、５００μＬの最小量（体積）が必要であった。磁気分離では、ＬＳカラムを好適なＭＡＣＳセパレーターの磁場に配置した。ＬＳカラムを３ｍＬの緩衝液ですすいだ。細胞懸濁液をカラムに適用し、非標識細胞を含有するフロースルーを収集し、これは、濃縮されたＴ細胞画分を表す。カラムを３ｍＬの緩衝液で洗浄し、通過した非標識細胞を採取することにより、追加のＴ細胞を収集した。これらの非標識細胞は、濃縮されたＴ細胞を再び表し、前のステップからのフロースルーと組み合わせた。次に、プールされた濃縮Ｔ細胞を遠心分離し、Ｔ細胞培地（ＲＰＭＩ１６４０、１０％の熱不活化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）及び３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２）で再懸濁させた。製造者プロトコールに従って、Ｔ細胞培地に抗ＣＤ３／ＣＤ２８ ＭＡＣＳｉＢｅａｄ粒子（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、カタログ番号１３０－１１１－１６０）を添加することにより、新たに単離されたＴ細胞を活性化した。
６．２．４．三重特異性ラクダ科ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞の生成
ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏ研究の両方ならびに抗ＣＤ１９ ＶＨＨ－ｈｕＩｇＧ１ＦｃｍＡｂ、抗ＣＤ２０ ＶＨＨ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ ｍＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ＶＨＨ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ ｍＡｂのモノクローナル抗体の特性評価による、数百の新規ラクダ科ＣＤ１９ ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＤ２０ ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞、及びＣＤ２２ ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞の広範なスクリーニング及び検証に基づいて、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏ研究の両方による有効性及び安全性評価のためのヒト初代Ｔ細胞へのレンチウイルス形質導入による多重特異性ラクダ科ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞を生成するために、ＣＤ１９、ＣＤ２０、またはＣＤ２２抗原に対するトップラクダ科ＶＨＨリードを選択し、設計し、様々なＶＨＨオーダー／組み合わせで構築した。例示的な多重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ（ＡＩＯ ＣＡＲを含む）構築物が表９に示される。ラクダ科動物の単一特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＤ１９ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＤ２０ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞、及びＣＤ２２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞も対照として生成した。
２４ウェルプレートのウェル当たり０．５ｍＬの培地中、０．５×１０６細胞で、活性化Ｔ細胞を培養した。２４時間後、Ｔ細胞が破裂している時に、０．５ｍＬの非濃縮ウイルス上清または少量の濃縮ウイルス上清を添加し；１２００ｇ、３２℃で１．５時間遠心分離することにより、感染多重度（ＭＯＩ）１０または１５で、Ｔ細胞を形質導入した。次に、形質導入されたＴ細胞を、好適な条件下で、導入遺伝子発現のために細胞培養インキュベーターに移した。Ｔ細胞は、対数成長パターンで分割し始め、細胞数（生細胞／ｍＬ）及び生存率（％）を測定することにより、これを監視した。Ｔ細胞培養物を、２日毎に新鮮な培地で補充した。Ｔ細胞は、約７～９日後に休止し始めたので、後で分析するために採取して凍結保存するために、それらを準備した。
凍結保存前に、（Ｔ細胞表面にＶＨＨドメイン（複数可）またはｓｃＦｖドメインを発現する）形質導入された細胞のパーセンテージをフローサイトメトリー分析で決定した。Ｔ細胞を、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（商標）フレキシブル死細胞染色キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ｌ３４９７６）を用いて、ＶＨＨベースのＣＡＲ－Ｔ細胞を、ヤギ抗ラマＩｇＧ ＦＩＴＣコンジュゲート（Ｂｅｔｈｙｌ、カタログ番号Ａ１６０－１００Ｆ）を用いて、ｓｃＦｖベースのＣＡＲ－Ｔ細胞（陽性対照）を、ＦＩＴＣ標識組み換えプロテインＬ（Ａｃｒｏ、カタログ番号ＲＰＬ－ＰＦ１４１）を用いて、４℃で３０分間染色し、その後、３回洗浄し、ＮｏｖｏＣｙｔｅフローサイトメーター（ＡＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でのＦＡＣＳ分析のために、０．５％のＦＢＳを含むＤＰＢＳ ２００μＬに懸濁させた。Ｎｏｖｏｅｘｐｒｅｓｓソフトウェアで、ＦＡＣＳデータを分析した。
例示的な単一特異性ラクダ科ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞の生存率は、約９２％～９６％であり、ＣＡＲ＋％は、約３７％～４２％であり、細胞増殖倍数は、８日間の培養で７５～８３倍以内であった。例示的な三重特異性ラクダ科ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞の生存率は、約９２％～９６％であり、ＣＡＲ＋％は、約７％～３２％であり、細胞増殖倍数は、８日間の培養で７５～９２倍以内であった（図１Ａ～１Ｂ）。表１０に示されるように、形質導入されていないＴ細胞（ＵｎＴ）と比較した場合、Ｔ細胞の増殖及び増大する能力に対して、単一特異性ＶＨＨ ＣＡＲと比較して、三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲの検出可能な負の効果がなかったことを、データは示す。
形質導入されたＴ細胞は、異なるＣＡＲ発現レベル（％）を示し、三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ陽性率（ＣＡＲ＋％）は、一般に、単一特異性ＶＨＨ ＣＡＲ＋％及び単一特異性ｓｃＦｖ ＣＡＲ＋％よりも低く、これは、形質導入効率（形質導入された細胞のパーセント）がＣＡＲの構造及び長さと相関し得ることを示した。
（表１０）例示的なＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＡＲ発現レベル及び細胞増殖倍数
Figure 2023546766000024
６．３．実施例３－ｉｎ ｖｉｔｒｏでＣＡＲを発現する免疫細胞の特性評価
６．３．１．標的細胞表面でのＣＤ１９、ＣＤ２０、及び／またはＣＤ２２抗原（複数可）の発現
評価された標的細胞表面上のＣＤ１９、ＣＤ２０、及びＣＤ２２の発現レベルを評価するために、１ウェル当たり５×１０５個の細胞を、それぞれ、ＰＥ標識抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２０、または抗ＣＤ２２ ｍＡｂ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号３０２２０８、番号３０２３０６、または番号３０２５０６）、及びＱＵＡＮＴＩ－ＢＲＩＴＥ ＰＥビーズ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号３４０４９５）を用いたフローサイトメトリーで評価した。製造者の使用説明書に従って、アッセイ及びデータ分析を実施した。「細胞毎の受容体数」は、示された細胞株のそれぞれにおける細胞当たりの受容体のおおよその絶対数を示す（表１１）。
（表１１）標的細胞毎のＣＤ１９、ＣＤ２０、及びＣＤ２２受容体数
Figure 2023546766000025
６．３．２．三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞の有効性評価
腫瘍細胞に対する三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞（またはＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞）の細胞傷害性を評価するために、上記のように生成された細胞を、計数し、抗原（複数可）特異的がん細胞と共培養して、殺傷能を読み取った。親の単一特異性ラクダ科ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＤ１９ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＤ２０ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞、及び／またはＣＤ２２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞を陽性対照として使用した。非形質導入Ｔ細胞（ＵｎＴ）を、非標的指向性Ｔ細胞対照として使用した。ＣＤ１９＋ＣＤ２０＋ＣＤ２２＋三重陽性抗原を発現するＢリンパ腫細胞株－Ｒａｊｉ（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ－８６）及びＤａｕｄｉ（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ－２１３）、ＣＤ１９＋ＣＤ２０－ＣＤ２２ｌｏｗ二重陽性抗原を発現するＢ白血病細胞株－Ｎａｌｍ．６（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ－３２７３）、単一抗原を発現する細胞株－Ｋ５６２－ＣＤ１９、Ｋ５６２－ＣＤ２０、またはＫ５６２－ＣＤ２２、及び陰性細胞株－Ｋ５６２（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ－２４３）に対して、三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞殺傷を実施した。全ての細胞株を社内で設計して、細胞の生存率／死滅のレポーターとしてホタルルシフェラーゼを発現した。形質導入された細胞をピューロマイシンで選択し、選択培地（１０％のＦＢＳ及び２μｇ／ｍＬのピューロマイシンが補充されたイーグル最小必須培地）で２～３日毎にリフレッシュした。３回の選択後、選択された細胞クローンを採取し、さらなる使用のために保存した。２４時間、２０：１、１５：１、１０：１、５：１、２．５：１、１．２５：１、０．６２５：１、または０．３１２５：１のエフェクター細胞 対 標的細胞の比（Ｅ：Ｔ）で、三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞傷害性を測定した。それぞれの数のＴ細胞を一定数の標的細胞と混合することにより、アッセイを開始した。ＯＮＥ－Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｅ６１１０）により、ウェル当たりの残りのルシフェラーゼ活性を評価して、１ウェル当たりの残りの生存可能な標的細胞を定量化した。抗ＣＤ１９ ＶＨＨ、抗ＣＤ２０ ＶＨＨ、及び抗ＣＤ２２ ＶＨＨのトップリードを、（Ｇ４Ｓ）ｎリンカー（ｎ＝１～４）の様々な順序／組み合わせを、三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲで作成し、三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞を生成し、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞傷害性アッセイでスクリーニングした。
例示的な三重特異性ＶＨＨ ＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞のデータを図２Ａ～２Ｋに示す。１つのＣＡＲオープンリーディングフレームをコードするレンチウイルスベクターで、ＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞を操作し、タンデムＣＤ１９、ＣＤ２０、及びＣＤ２２標的指向性結合薬で構成した。抗ＣＤ１９ ＶＨＨ、抗ＣＤ２０ ＶＨＨ、及び抗ＣＤ２２ ＶＨＨドメインの複数の組み合わせが評価され、リンパ腫及び白血病の腫瘍細胞を強力に殺傷する最適なＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏで同定した。３つのタンデムＶＨＨドメインの共効果に関して、データは、ＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞のいくつかが、陽性対照（モノＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞またはモノｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞）より、ＣＤ１９＋ＣＤ２０＋ＣＤ２２＋リンパ腫細胞株－Ｒａｊｉ．Ｌｕｃ及びＤａｕｄｉ．Ｌｕｃに対する相乗効果及び優れた抗腫瘍効力を示し、用量依存的な殺傷能を示したことを示した（図２Ａ、図２Ｇ、図２Ｈ、及び図２Ｊ）。ＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞のいくつかは、ＣＤ１９＋ＣＤ２０－ＣＤ２２ｌｏｗ白血病細胞株－Ｎａｌｍ．６．Ｌｕｃに対してより高い細胞傷害性を示した（図２Ｂ、図２Ｉ、及び図２Ｋ）。単一抗原発現細胞－Ｋ５６２－ＣＤ１９．Ｌｕｃ、Ｋ５６２－ＣＤ２０．Ｌｕｃ、またはＫ５６２－ＣＤ２２．Ｌｕｃを標的とする場合、ＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞のいくつかは、効力を増強または維持し、腫瘍細胞溶解を誘発する単一標的抗原の十分性を確認した（図２Ｃ～２Ｅ）。三重陽性または二重陽性抗原発現細胞に対する相乗効果及び単一抗原発現細胞に対する維持された効力に基づいて、それは、タンデムＶＨＨドメインのそれぞれを、異なるエピトープに結合したＴ細胞表面に折りたたまれて発現し、互いにブロックせず、立体障害効果は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、及びＣＤ２２抗原への結合を妨げないことを示した。図２Ａ及び２Ｂの例示的なデータは、各ＶＨＨを連結する（Ｇ４Ｓ）リンカーの長さが短いほど、オンターゲット腫瘍細胞の殺傷では、ＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞の効力がより高いことを示した。この観察結果は、リンカーの長さが、Ｔ細胞エフェクター機能に有益な影響を与えたことを示唆した。図２Ｇ及び２Ｉの例示的なデータは、同じリンカー長の下で、三重特異性ＶＨＨドメインの異なる組み合わせが、リンパ腫及び白血病細胞－Ｒａｊｉ．Ｌｕｃ、Ｄａｕｄｉ．Ｌｕｃ、またはＮａｌｍ．６．Ｌｕｃ細胞株に対して異なる殺傷能を示したことを示した。リンカーの長さ及び三重－ＶＨＨの組み合わせの結果に基づいて、いかなる理論にも拘束されないが、殺傷能の違いは、シナプス形成の間隔ならびにＣＡＲ－Ｔ細胞及び腫瘍細胞間の距離と相関していることがある。免疫学的シナプス（ＩＳ）は、リンパ球（例えば、エフェクターＴ細胞）が細胞間相互作用を介してＡＰＣまたは腫瘍細胞と通信するための中心的な作用機序である。腫瘍標的の関与により、ＣＤ８＋Ｔ細胞が一定期間にわたって分化及び活性化され、サイトカイン、グランザイム、及びパーフォリンで満たされた顆粒が負荷された抗原特異的キラーＴ細胞になる。予想通り、三重特異性ＶＨＨ ＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞及び単一特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、Ｋ５６２．Ｌｕｃ細胞の表面上の標的指向可能な抗原の欠如により、ＵｎＴ対照（図２Ｆ）と比較して、陰性細胞株－Ｋ５６２．Ｌｕｃに対する殺傷能を欠いていた。
上記の観察結果は、三重特異性なＶＨＨ ＣＡＲが、標的細胞上のＣＤ１９、ＣＤ２０、及び／またはＣＤ２２抗原（複数可）を特異的に認識することによりＴ細胞の活性化を誘導し、Ｔ細胞の内因性シグナル伝達経路を活性化し、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の活性化を誘導し、相乗的抗腫瘍応答を高めることを示す。
６．３．３．三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のＩＦＮ－γ放出評価
ＣＤ１９、ＣＤ２０、及びＣＤ２２抗原発現細胞に応答した三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のサイトカイン産生を測定するために、ＣＡＲ－Ｔ細胞を、ＣＤ１９＋ＣＤ２０＋ＣＤ２２＋三重陽性抗原発現Ｂリンパ腫細胞株－Ｒａｊｉ（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ－８６）及び陰性細胞株－Ｋ５６２（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ－２４３）を、５：１または２．５：１のＥ：Ｔ比で２４時間培養した後、ヒトＩＦＮ－γキット（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＨＩＦＮＧＰＥＧ）を使用して、サイトカイン放出の定量化及び分析のために培地を採取し、各ウェルの吸光度（試験項目毎に３回ずつ）をマルチモードマイクロプレートリーダー（Ｔｅｃａｎ Ｓｐａｒｋ）で読み取った。
図３Ａの例示的なデータは、三重特異性ＶＨＨドメインの同じ組み合わせ、各ＶＨＨを連結する（Ｇ４Ｓ）リンカーの長さ、より多くのＩＦＮ－γが、ＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞で放出したことを示した。図３Ａ及び３Ｂの例示的なデータは、ＩＦＮ－γ放出のレベルが、ＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞の殺傷能力と一致することを示した。
対照的に、非形質導入Ｔ細胞（ＵｎＴ）対照または標的陰性細胞株－Ｋ５６２．Ｌｕｃとの共培養では、ＩＦＮ－γ放出は検出されないか、または極めて低かった（図３Ａ）。ＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞のＩＦＮ－γ放出の欠如は、Ｋ５６２．Ｌｕｃの殺傷がないことと一致した（図３Ｂ）。これは、特異的抗原（複数可）刺激ＣＡＲ－Ｔ細胞活性化が、三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のオンターゲット殺傷及びサイトカイン（複数可）分泌に必要とされたことを示す。データは、同じＶＨＨ順序で、（Ｇ４Ｓ）リンカーが短いほど、より多くのＩＦＮ－γが、ＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞により放出されたことを示した。ＩＦＮ－γ放出の傾向は、異なる（Ｇ４Ｓ）リンカーでＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞傷害性と一致していた。例えば、同じＶＨＨ順序で、１つの（Ｇ４Ｓ）ユニットリンカー（ｎ＝１）を有するＡＩＯ－８Ｃ１ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、３つの（Ｇ４Ｓ）ユニットリンカー（ｎ＝３）を有するＡＩＯ－８Ｃ３ ＣＡＲ－Ｔ細胞よりも多くのＩＦＮ－γを放出し、ＡＩＯ－８Ｃ３ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、４つの（Ｇ４Ｓ）ユニットリンカー（ｎ＝４）を有するＡＩＯ－８Ｃ４ ＣＡＲ－Ｔよりも多くのＩＦＮ－γを放出した（図３）。一方、同じ（Ｇ４Ｓ）ｎリンカー（複数可）を用いて、ＶＨＨ順序が異なるＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、有意に異なるレベルのＩＦＮ－γを放出し、例示的なデータは、Ｔ細胞膜に近い抗ＣＤ２０ ＶＨＨドメインを有するＡＩＯ－８Ｃ１ ＣＡＲ－Ｔ細胞が、ＩＦＮ－γと比較して、Ｔ細胞膜の遠位に抗ＣＤ２０ ＶＨＨドメインを有するＡＩＯ－７Ｃ１ ＣＡＲ－Ｔ細胞により放出されるほぼ２倍量のＩＦＮ－γを放出した（図３）。対照的に、形質導入されていないＴ細胞（ＵｎＴ）または陰性対照細胞株－Ｋ５６２．Ｌｕｃのいずれかを含有する共培養では、ＩＦＮ－γ放出は、検出されないか、または非常に低かった。これは、ＡＩＯ ＣＡＲ Ｔ細胞の抗原（複数可）特異的な認識及び刺激が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、及び／またはＣＤ２２発現細胞に対する反応性に必要であったことを示す（図３）。
６．４．実施例４－腫瘍異種移植マウスにおける三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ有効性
三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞の抗腫瘍活性を、Ｒａｊｉ異種移植ＮＣＧマウスモデルにおいてｉｎ ｖｉｖｏで評価し、ＣＤ１９ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞及び非形質導入Ｔ細胞（ＵｎＴ）を対照として評価した。
細胞株：Ｒａｊｉ（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ－８６）は、１１歳の男性のバーキットリンパ腫から１９６３年にＰｕｌｖｅｒｔａｆｔにより確立されたリンパ芽球様細胞株である。１０％のウシ胎児血清を含有するＲＭＰＩ培地で、Ｒａｊｉ細胞を成長させた。この細胞株は、組織培養フラスコの懸濁液中で成長する。この細胞株は、静脈内に移植された場合、マウスにおいて持続及び増大する。Ｒａｊｉ細胞は、ルシフェラーゼを発現するように改変されており、従って、マウスをイメージングすることにより、腫瘍細胞の成長も監視することができた。Ｒａｊｉモデルは、内因的に、高レベルのＣＤ１９、ＣＤ２０、及びＣＤ２２を発現するので、ＣＤ１９、ＣＤ２０、及び／またはＣＤ２２向けの操作されたＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏでの有効性を試験するために使用することができる。
マウス：同等の体重（約２０ｇ）の５～６週齢のＮＣＧ（ＮＯＤ－Ｐｒｋｄｃｅｍ２６Ｃｄ５２Ｉｌ２ｒｇｅｍ２６Ｃｄ２２／Ｎｊｕ）雌マウスは、Ｍｏｄｅｌ Ａｎｉｍａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｎａｎｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙから受領した。動物を、実験前の７日間、動物施設で順応させた。動物を、ＡＣＵＣの規制及びガイドラインに従って処理した。
６．４．１．三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞の有効性に関するｉｎ ｖｉｖｏ試験及び結果
腫瘍異種移植片を作成するために、ＮＣＧマウスに、Ｒａｊｉ．Ｌｕｃを静脈内注射した。Ｒａｊｉ．Ｌｕｃ腫瘍細胞移植の４日後に、マウスをＴ細胞で処置した。マウスの尾静脈から４００μＬのＴ細胞を静脈内注射した。１群当たり５匹のマウスを、それぞれマウス１匹当たり１Ｍ、マウス１匹当たり０．５Ｍ、またはマウス１匹当たり０．２５ＭのＣＡＲ－Ｔ細胞用量のＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞またはＣＤ１９ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞（陽性対照）のいずれか、４００μＬのＨＢＳＳ単独、及び対照としての非形質導入Ｔ細胞（ＵｎＴ）で処置した。全てのＴ細胞を、同じドナーから並行して調製した。
体重測定を含む動物の健康状態を、週に２回監視した。動物がエンドポイントに達するまで、腫瘍の成長を、生物発光イメージング（ＢＬＩ）により毎週監視した。全ての処置群の平均生物発光が、図４Ａ～４Ｆにプロットされる。いずれのＴ細胞も投与されなかったＨＢＳＳ処置群（ビヒクル）は、静脈内注射されたＮＣＧマウスにおいてベースラインＲａｊｉ腫瘍成長動態を示した。ＵｎＴ処置群は、操作されたＴ細胞の陰性対照として非形質導入Ｔ細胞を投与された。ＨＢＳＳ及びＵｎＴ処置群の両方は、この研究を通じて連続的な侵襲性の腫瘍の進行を示し、１７日目に安楽死させた（図４Ａ～４Ｇ）。平均の生物発光及び生物発光の画像から示されるように、マウス１匹当たり１ＭのＣＡＲ－Ｔ細胞用量で、ＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＣＤ１９ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞の有効性は、同等であり、全てのＣＡＲ－Ｔ細胞が、ＵｎＴ処置と比較した場合、腫瘍成長を有意に阻害し、全てが、２８日間のｉｎ ｖｉｖｏ有効性試験中に、完全な腫瘍阻害を示した（図４Ａ及び図４Ｂ）；マウス１匹当たり０．５ＭのＣＡＲ－Ｔ細胞用量で、ＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、腫瘍抑制において、ＣＤ１９ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞よりも有効であった（図４Ｃ及び図４Ｄ）；マウス１匹当たり０．２５ＭのＣＡＲ－Ｔ細胞用量で、ＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、腫瘍抑制において、ＣＤ１９ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞よりも有意に有効であり；ＣＤ１９ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞で処理されたマウスは、侵襲性の腫瘍成長により、１９日目に安楽死させた（図４Ｅ及び図４Ｆ）。ＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、リンパ腫細胞株－Ｒａｊｉに対して用量依存的な殺傷能を示した（図４Ａ～４Ｆ）。加えて、隔週で監視されたマウスの健康状態は、正常であり、体重は、２８日間のｉｎ ｖｉｖｏ研究を通じて、ＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞処置群（マウス１匹当たり１Ｍ及び０．５ＭのＣＡＲ－Ｔ細胞）で安定していた（図４Ｇ）。
６．５．実施例５－三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲの生成及び特性評価
三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞（またはヒト化ＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞）を生成するために、配列分析、ヒトアクセプター選択、ｉｎ ｓｉｌｉｃｏのＣＤＲ移植、相同性構造モデリング、配列アラインメント、及び構造ベースの復帰変異設計を適用することにより、ラクダ科ＶＨＨドメインをヒト化した。ヒト初代Ｔ細胞へのレンチウイルス形質導入により、ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞を生成し、ｉｎ ｖｉｔｒｏ有効性研究により評価した。ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲのトップリードを、選択し、様々なＶＨＨ順序／組み合わせで設計及び構築し、次に、三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞を、有効性評価のために、ヒト初代Ｔ細胞でのレンチウイルス形質導入により生成した。
６．５．１ ＶＨＨのヒト化
ヒトにおける免疫原性を低減させるために、ラクダ科ＶＨＨ抗体をヒト化した。これは、免疫応答の多くが非ヒト抗体定常領域に対して生じるからである。異なるフレームワーク領域をラクダ科ＣＤＲと組み合わせると、同じ抗原に特異的なヒトとラクダ科動物のキメラ抗体が、異なるエフェクター機能を誘発し得、これにより、治療上の利点が拡大する。配列ベースのアプローチと、最も相同なヒト生殖系列配列または関連足場へのフレームワークシャッフリングを使用して、ラクダ科ＶＨＨをヒト化した。非ネイティブなヒトフレームワーク足場によりサポートされているラクダ科ＣＤＲの非互換性及び重要な立体配座残基の除去は、ｉｎ ｓｉｌｉｃｏのＣＤＲ移植、相同構造モデリング（３次立体配座及び折りたたみ）、配列アラインメント、構造ベースの復帰変異設計及び重要な配座残基の再導入により解決された。抗体のヒト化プロセスは、立体的な衝突を排除するだけでなく、抗原への結合親和性に関する機能を回復させることがある。
Ｃｅｃｉｌｅ Ｖｉｎｃｋｅらにより設計されたユニバーサルヒト化ＶＨＨフレームワークｈ－ＮｂＢｃＩＩ１０ＦＧＬＡ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋ、ＰＤＢコード：３ＥＡＫ、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｒｃｓｂ．ｏｒｇ／ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ／３ＥＡＫ）は、配列相同性に基づくヒト化設計に採用された。モデリングソフトウェアＭＯＤＥＬＬＥＲを使用して、ラクダ科ＶＨＨの相同モデリングを実施した。ヒト生殖系列遺伝子とのアラインメントに従って、抗ＣＤ１９ ＶＨＨ、抗ＣＤ２０ ＶＨＨ及び抗ＣＤ２２ ＶＨＨのうちの１つのヒトアクセプターとしてＩＧＨＶ３－６４＊０４を選択した。アミノ酸の相対的な溶媒接近可能性を、タンパク質の３次元構造に従って算出した。ＶＨＨのアミノ酸の１つは、溶媒に曝露された場合、元のアミノ酸に置き換えられるであろう。本明細書で生成される例示的なヒト化ＶＨＨドメインが表２に示され、対応する配列は、本明細書で提供する配列表で提供される。
６．５．２．ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲの調製
実施例２に記載の方法を使用して、単一特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ（ＣＤ１９、ＣＤ２０、またはＣＤ２２抗原を標的とする）及び多重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ（様々なＶＨＨ順序を含む）を生成した。多重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲの構築物が表１２に示される。
（表１２）例示的な多重特異性ヒト化ＣＡＲ
Figure 2023546766000026
Figure 2023546766000027
上記の多重特異性ＶＨＨ ＣＡＲの核酸配列は、配列表の配列番号２６０～２７９に示される。これらの例示的なＣＡＲ構築物では、ＣＤ８αシグナルペプチド、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７細胞質ドメイン、及びＣＤ３ζ細胞質ドメインの配列は、それぞれ、配列番号１６１、配列番号１６２、配列番号１６３、配列番号１６４、及び配列番号１６５に示される。
各ＣＡＲ構築物のそれぞれを搭載したレンチウイルスベクターは、実施例２に記載されるように、プロトコールでパッケージング及び滴定される。Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｐａｎ Ｔ細胞分離キットを使用して、初代ヒトＴ細胞をさらに単離するために、実施例２で記載のプロトコールを使用して、健康なドナー由来の末梢血サンプルからヒトＰＢＭＣを調製した。実施例２に記載されるように、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ抗ＣＤ３／ＣＤ２８マイクロビーズを使用して、精製されたＴ細胞を事前に活性化及び増大した。
次に、３２℃で１．５時間、１２００ｇで遠心分離することにより、前活性化Ｔ細胞にレンチウイルスストックを形質導入した。次に、形質導入された細胞を、好適な条件下で、導入遺伝子発現のために細胞培養インキュベーターに移した。Ｔ細胞は、対数成長パターンで分割し始め、細胞数（生細胞／ｍＬ）及び生存率（％）を測定することにより、これを監視した。Ｔ細胞培養物を、２日毎に新鮮な培地で補充した。Ｔ細胞は、約７～９日後に休止し始めたので、後で分析するために採取して凍結保存するために、それらを準備した。
凍結保存前に、（Ｔ細胞表面にＶＨＨドメイン（複数可）またはｓｃＦｖドメインを発現する）形質導入された細胞のパーセンテージをフローサイトメトリー分析で決定した。Ｔ細胞をＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（商標）フレキシブル死細胞染色キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ｌ３４９７６）で染色し、ＶＨＨベースのＣＡＲ－Ｔ細胞をヤギ抗ラマＩｇＧ ＦＩＴＣコンジュゲート（Ｂｅｔｈｙｌ、カタログ番号Ａ１６０－１００Ｆ）で染色し、ｓｃＦｖベースのＣＡＲ－Ｔ細胞（陽性対照）をＦＩＴＣ標識組み換えプロテインＬ（Ａｃｒｏ、カタログ番号ＲＰＬ－ＰＦ１４１）で、４℃で３０分間染色し、その後、３回洗浄し、ＮｏｖｏＣｙｔｅフローサイトメーター（ＡＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でのＦＡＣＳ分析のために、０．５％のＦＢＳを含むＤＰＢＳ ２００μＬに再懸濁させた。Ｎｏｖｏｅｘｐｒｅｓｓソフトウェアで、ＦＡＣＳデータを分析した。
例示的な単一特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞の生存率は、約９２％～９６％であり、ＣＡＲ＋％は、約１０％～４３％であり、増殖倍数は、７日間の培養で６０～８０以内であった。例示的な三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞の生存率は、約９０％～９８％であり、ＣＡＲ＋％は、約５％～２１％であり、増殖倍数は、７日間の培養で３６～８６以内であった（図５Ａ～５Ｂ）。データは、形質導入されていないＴ細胞（ＵｎＴ）と比較した場合、Ｔ細胞の増殖及び増大する能力に対する単一／三重特異性ＶＨＨ（複数可）ＣＡＲのヒト化の検出可能な負の効果がなかったことを示す。
６．６．実施例６－三重特異性ヒト化ＣＡＲをｉｎ ｖｉｔｒｏで発現する免疫細胞の特性評価
６．６．１．三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞傷害性評価
例示的な三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ｈｕＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞）のデータが、図６Ａ～６Ｆ及び図７Ａ～７Ｆに示される。１つのＣＡＲオープンリーディングフレームをコードするレンチウイルスベクターを用いて、ｈｕＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞を操作し、スクリーニング及び最適化されたヒト化抗ＣＤ１９ ＶＨＨ、抗ＣＤ２０ ＶＨＨ、及び抗ＣＤ２２ ＶＨＨドメインで構成していた。ヒト化抗ＣＤ１９ ＶＨＨ、抗ＣＤ２０ ＶＨＨ、及び抗ＣＤ２２ ＶＨＨドメインの複数の組み合わせを評価し、リンパ腫及び白血病腫瘍細胞を強力に殺傷する最適なヒト化ＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ｈｕＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞）を、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性評価で同定した。ｈｕＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞のいくつかが、リンパ腫細胞を発現するＣＤ１９＋ＣＤ２０＋ＣＤ２２＋抗原－Ｒａｊｉ．Ｌｕｃ及び白血病細胞を発現するＣＤ１９＋ＣＤ２０－ＣＤ２２ｌｏｗ抗原－Ｎａｌｍ．６．Ｌｕｃに対して陽性対照（単一特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞または単一特異性ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞）よりも相乗効果及び優れた抗腫瘍効力を示し、用量依存的な殺傷能を示したことを、データは示した（図６Ａ～６Ｆ）。さらに、ｈｕＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞のいくつかは、単一抗原発現細胞株－Ｋ５６２－ＣＤ１９．Ｌｕｃ、Ｋ５６２－ＣＤ２０．Ｌｕｃ、またはＫ５６２－ＣＤ２２．Ｌｕｃに対する効力を増強または維持し、単一の標的抗原が腫瘍細胞溶解を誘発するのに十分であることを確認した（図７Ａ～７Ｆ）。三重陽性または二重陽性抗原発現細胞に対する相乗効果及び単一抗原発現細胞に対する維持された効力に基づいて、それは、タンデムヒト化ＶＨＨドメインのそれぞれを、異なるエピトープに結合したＴ細胞表面に折りたたまれて発現し、互いにブロックせず、立体障害効果は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、及びＣＤ２２抗原への結合を妨げないことを示した。
上記の観察結果は、ｈｕＡＩＯ ＣＡＲが、標的細胞上のＣＤ１９、ＣＤ２０、及び／またはＣＤ２２抗原（複数可）を特異的に認識することによりＴ細胞の活性化を誘導し、Ｔ細胞の内因性シグナル伝達経路を活性化し、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の活性化を誘導し、相乗的抗腫瘍応答を高めることを示す。
６．６．２．三重特異性ヒト化ＣＡＲ－Ｔ細胞のＩＦＮ－γ放出評価
ＣＤ１９、ＣＤ２０、及びＣＤ２２抗原発現細胞に応答した三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞によるサイトカイン産生を測定するために、ＣＡＲ－Ｔ細胞を、ＣＤ１９＋ＣＤ２０＋ＣＤ２２＋三重陽性抗原発現Ｂリンパ腫細胞株－Ｒａｊｉ（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ－８６）及び陰性細胞株－Ｋ５６２（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ－２４３）を、５：１または２．５：１のＥ：Ｔ比で２４時間同時培養した後、ヒトＩＦＮ－γキット（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＨＩＦＮＧＰＥＧ）を使用して、サイトカイン放出の定量化及び分析のために培地を採取し、各ウェルの吸光度（試験項目毎に３回ずつ）をマルチモードマイクロプレートリーダー（Ｔｅｃａｎ Ｓｐａｒｋ）で読み取った。
データは、例示的なｈｕＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞が、Ｒａｊｉ細胞との共培養物中の陽性対照－ＣＤ１９ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＤ２０ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞、またはＣＤ２２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞よりも多くのＩＦＮ－γを放出したことを示した。ＶＨＨのヒト化は、三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞の機能性に悪影響を及ぼさなかった（図８）。対照的に、ＩＦＮ－γ放出は、ＵｎＴ対照または陰性対照細胞株－Ｋ５６２との共培養では非常に低く、これは、ｈｕＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞のＣＤ１９、ＣＤ２０、及び／またはＣＤ２２抗原特異性が抗原発現標的細胞の反応性に必要であったことを示した（図８）。ＩＦＮ－γは、Ｔ細胞のエフェクター機能で主要な役割を果たし、マクロファージの重要な活性化因子であり、抗原提示細胞（ＡＰＣ）でのＭＨＣ－ＩＩ分子発現の誘導因子である。
６．６．３．三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のＩＬ－６放出評価
ＣＲＳ（サイトカイン放出症候群）は、ＩＦＮ－γ、場合によりは、追加のサイトカインを分泌するＣＡＲ－Ｔ細胞に応答して、主にマクロファージ／単球から炎症性サイトカインが大量に分泌されるために発生する。単球は、ＩＬ－６を放出することによりＣＲＳを媒介する主要な細胞であることが判明したので、単球共培養によるＩＬ－６放出を評価した。単球を、製造者のプロトコールに従って、ＣＡＲ－Ｔ細胞産生のために同じ健康なドナーのＰＢＭＣからＣＤ１４ ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、カタログ番号１３０－０５０－２０１）で分離した。ｈｕＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞単独を、対照として播種し、ｈｕＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞を、１０：１のＥ：Ｔ比でＲａｊｉ細胞と共培養するか、または、２：３のＥ：Ｍ比で単球と共培養するか、または１０：１：１５のＥ：Ｔ：Ｍ比でＲａｊｉ細胞及び単球と２４時間共培養し（試験項目毎に３回ずつ）、その後、サイトカインの定量化及びヒトＩＬ－６キットを使用した分析のために培地を採取した（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＨＩＬ０６ＰＥＧ）。
ＣＡＲ－Ｔ細胞、Ｒａｊｉ細胞、及び単球の共培養において、ｈｕＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、陽性対照ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞よりもわずかに多くのＩＬ－６放出を誘導した。ＩＬ－６の放出は、ｈｕＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞及び単球の共培養では極めて低かった。これは、抗原特異的な刺激がなければ、ｈｕＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞単独は、単球からのＩＬ－６の放出を誘導しなかったことが示す（図９）。
６．６．４．ＣＤ１９遺伝子ノックアウト（Ｒａｊｉ１９ＫＯ）を有するＲａｊｉ細胞に対するｉｎ ｖｉｔｒｏでの三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞傷害性
ＣＡＲ－Ｔ療法の失敗及び５０％超のＲ／Ｒ ＮＨＬ及びＡＬＬの再発は、抗原の下方調節、変異、アイソフォームスイッチ、及びトロゴサイトーシスを含む標的Ｂ細胞抗原の回避によるものであることを、臨床研究は実証した。三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、異種抗原の発現を伴う腫瘍を強力に阻害し、単一の標的抗原の発現で十分な腫瘍溶解を誘発し得る。三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞が抗原回避に対抗し得るかどうかを試験するために、ＣＤ１９ノックアウト（ＫＯ）Ｒａｊｉリンパ腫クローン（Ｒａｊｉ１９ＫＯ）に対する三重特異性ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞傷害性をｉｎ ｖｉｔｒｏで評価した。クラスタ化された規則的に間隔をあけた短い回文反復（ＣＲＩＳＰＲ）－Ｃａｓ９遺伝子編集を介して、親Ｒａｊｉ．Ｌｕｃ（Ｒａｊｉ－ルシフェラーゼ）細胞株から、ＣＤ１９の発現を欠くＲａｊｉ１９ＫＯ細胞クローンを生成した。Ｒａｊｉ及びＲａｊｉ１９ＫＯ細胞を、ＣＤ１９、ＣＤ２０、及びＣＤ２２に結合する抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ＰＥ抗ヒトＣＤ１９、カタログ番号３０２２０８、ＰＥ抗ヒトＣＤ２０、カタログ番号３０２３０６、及びＰＥ抗ヒトＣＤ２２、カタログ番号３０２５０６）で染色して、ＦＡＣＳで標的発現を検証した（図１０Ａ）。
試験モデルは、抗原回避により出現し得る抗原陰性腫瘍細胞増殖をシミュレートする。ＣＡＲ－Ｔ細胞を、ヒト初代Ｔ細胞へのレンチウイルス形質導入により生成し、１０：１、５：１、または２．５：１のＥ：Ｔ比でＲａｊｉまたはＲａｊｉ１９ＫＯ細胞と共に２４時間共培養した。ＯＮＥ－Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｅ６１１０）を使用した生物発光により、特異的腫瘍溶解を測定した。Ｒａｊｉ及びＲａｊｉ１９ＫＯに対する例示的な三重特異性ＶＨＨ ＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞のデータが、図１０Ｂ及び１０Ｃに示される。ＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＣＤ１９－ＣＤ２０＋ＣＤ２２＋Ｒａｊｉ１９ＫＯ細胞と共に共培養した場合、高い割合の腫瘍細胞溶解を示し、これは、親ＣＤ１９＋ＣＤ２０＋ＣＤ２２＋Ｒａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ－８６）の溶解の規模において同等であった。対照的に、Ｒａｊｉ１９ＫＯ細胞と共に共培養した場合、ＣＤ１９ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞について、相当の腫瘍細胞溶解は観察されなかった（図１０Ｃ）。加えて、全てのＣＤ１９ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＤ２０ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞、及びＣＤ２２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、親ＣＤ１９＋ＣＤ２０＋ＣＤ２２＋Ｒａｊｉ細胞を強力に殺傷し、ＣＤ２０ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びＣＤ２２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＣＤ１９－ＣＤ２０＋ＣＤ２２＋Ｒａｊｉ１９ＫＯ細胞も強力に殺傷した（図１０Ｂ及び１０Ｃ）。
抗原発現標的細胞に応答したＣＡＲ－Ｔ細胞のサイトカイン産生を特性評価するために、上記のＲａｊｉまたはＲａｊｉ１９ＫＯと２４時間共培養したものから上清を採取し、分泌されたＩＦＮ－γキットをヒトＩＦＮ－γキット（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＨＩＦＮＧＰＥＧ）で測定した。予想通り、ＵｎＴ細胞によりＩＦＮ－γがまったく産生されないか、または極めて少量しか産生されなかった。これは、ＣＡＲ依存性サイトカイン分泌を示す。三重特異性ＶＨＨ ＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＵｎＴ対照と比較してＲａｊｉまたはＲａｊｉ１９ＫＯのいずれかに応答して、ＩＦＮ－γを有意に誘導し、オンターゲット活性化において、ＣＤ１９ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＤ２０ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ、またはＣＤ２２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較して、最高レベルのＩＦＮ－γを維持した（図１０Ｄ及び１０Ｅ）。これは、抗原回避時に、ＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞が、異種抗原発現を伴う腫瘍をさらに強力に阻害し、抗原回避に対抗し、抗原陰性の腫瘍細胞増殖を可能にすることを示唆する。対照的に、ＣＤ１９ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞をＲａｊｉ１９ＫＯと共培養することにおいて、ＣＤ１９抗原発現がなく、ＣＡＲ依存性オンターゲット活性化が欠如しているので、ＩＦＮ－γが産生されないか、または極めて少量しか産生されなかった（図１０Ｅ）。Ｒａｊｉ１９ＫＯ細胞と共培養されたＣＤ１９ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞傷害性及びサイトカイン産生の両方は、モノＣＡＲ－Ｔ細胞は、腫瘍細胞の表面に標的指向可能な抗原がないので、腫瘍回避を可能にすることを示した。
ＣＤ２５は、三量体ＩＬ－２受容体のアルファ鎖であり、これは、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体の刺激から２４時間以内に上方制御され、数日間上昇したままであった。１：１のＥ：Ｔ比で、ＲａｊｉまたはＲａｊｉ１９ＫＯと４日間連続して共培養したＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞活性化レベルを評価するために、後期活性化マーカー（ＣＤ２５）ＣＡＲ－Ｔ細胞を、マウスＡＰＣ抗ヒトＣＤ２５で染色し（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３０２６１０）、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（商標）フレキシブル死細胞染色キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ｌ３４９７６）及びヤギＦＩＴＣ抗アルパカＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、カタログ番号１２８－０９５－２３０）で、４℃で３０分間同時染色し、続いて、３回洗浄し、ＮｏｖｏＣｙｔｅフローサイトメトリー（ＡＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でのＦＡＣＳ分析のために、０．５％のＦＢＳを含む２００μＬのＤＰＢＳに再懸濁させた。Ｎｏｖｏｅｘｐｒｅｓｓソフトウェアで、ＦＡＣＳデータを分析した。例示的な三重特異性ＶＨＨ ＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞のデータは、ＲａｊｉまたはＲａｊｉ１９ＫＯのいずれかと共培養される場合、Ｂ細胞表面抗原を認識することにより、ＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞を強力に活性化し、Ｔ細胞のＣＤ２５＋／ＣＡＲ＋％が増加し、４日間でプラトー（約９９％）に達した。一方、Ｒａｊｉ細胞と共培養されたＣＤ１９ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞も強力に活性化し、Ｔ細胞のＣＤ２５＋／ＣＡＲ＋％が増加し、４日間でプラトー（約９９％）に達した。対照的に、ＣＤ１９抗原認識がなく、ＣＤ１９ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞をＲａｊｉ１９ＫＯ細胞と共培養すると、Ｔ細胞のＣＤ２５＋／ＣＡＲ＋％は、２４時間で減少し、２日目から４日目まで、６０～７０％に維持され、これは、場合により、Ｔ細胞のＴＣＲ及びＲａｊｉ１９ＫＯ細胞の細胞表面ＭＨＣ－ＩＩ分子の認識により単独で媒介された（図１０Ｆ）。
６．７．実施例７－腫瘍異種移植マウスにおける三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ有効性
三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞の抗腫瘍活性を、Ｒａｊｉ異種移植ＮＣＧマウスモデルにおいてｉｎ ｖｉｖｏで評価し、ＣＤ１９ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＤ２０ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＤ２２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞、及び非形質導入Ｔ細胞（ＵｎＴ）を対照として評価した。
細胞株：Ｒａｊｉ（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ－８６）は、１１歳男性のバーキットリンパ腫から１９６３年にＰｕｌｖｅｒｔａｆｔにより確立されたリンパ芽球様細胞株である。１０％のウシ胎児血清を含有するＲＭＰＩ培地で、Ｒａｊｉ細胞を成長させた。この細胞株は、組織培養フラスコの懸濁液中で成長する。この細胞株は、静脈内に移植された場合、マウスにおいて持続及び増大する。Ｒａｊｉ細胞は、ルシフェラーゼを発現するように改変しており、従って、マウスをイメージングすることにより、腫瘍細胞の成長も監視することができた。Ｒａｊｉモデルは、内因的に、高レベルのＣＤ１９、ＣＤ２０、及びＣＤ２２を発現するので、ＣＤ１９、ＣＤ２０、及び／またはＣＤ２２向けの操作されたＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏでの有効性を試験するために使用することができる。
マウス：体重が同じ（約２０ｇ）５～６週齢のＮＣＧ（ＮＯＤ－Ｐｒｋｄｃｅｍ２６Ｃｄ５２Ｉｌ２ｒｇｅｍ２６Ｃｄ２２／Ｎｊｕ）雌マウスを、Ｍｏｄｅｌ Ａｎｉｍａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｎａｎｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙから受け取った。動物を、実験前の７日間、動物施設で順応させた。動物を、ＡＣＵＣの規制及びガイドラインに従って扱った。
６．７．１．三重特異性ヒト化ＶＨＨ ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ有効性試験及び結果
腫瘍異種移植片を作成するために、ＮＣＧマウスに、Ｒａｊｉ．Ｌｕｃを静脈内注射した。Ｒａｊｉ．Ｌｕｃ腫瘍細胞移植の４日後に、マウスをＴ細胞で処置した。マウスの尾静脈から４００μＬのＴ細胞を静脈内注射した。１群当たり６匹のマウスを、ｈｕＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞または陽性対照－ＣＤ１９ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＤ２０ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞、及びＣＤ２２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞で、マウス１匹当たり０．３Ｍの用量のＣＡＲ－Ｔ細胞で処置し、４００μＬのＨＢＳＳ単独（ビヒクル）及びＵｎＴ群を、非標的指向性Ｔ細胞対照として使用した。
体重測定を含む動物の健康状態を、週に２回監視した。動物が図１１Ａのエンドポイントに達するまで、生物発光イメージング（ＢＬＩ）により腫瘍成長を毎週監視した。全ての処置群の平均生物発光が、図１１Ｂにプロットされる。いずれのＴ細胞も投与されなかったＨＢＳＳ処置群（ビヒクル）は、静脈内移植されたＮＣＧマウスにおいてベースラインＲａｊｉ腫瘍成長動態を示した。非形質導入Ｔ細胞を受けたＵｎＴ処置群は、ｈｕＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞の陰性対照として使用された。ＨＢＳＳ及びＵｎＴ処置群の両方が、この研究を通して持続的な浸潤性腫瘍進行を示し、１４日目に安楽死させた（図１１Ａ～１１Ｂ）。平均生物発光及び生物発光の画像から示されるように、マウス１匹当たり０．３ＭのＣＡＲ－Ｔ細胞の用量で、例示的なｈｕＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ｈｕＡＩＯ－１３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ｈｕＡＩＯ－４６７ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ｈｕＡＩＯ－１８０ ＣＡＲ－Ｔ細胞、及びｈｕＡＩＯ－２２７ ＣＡＲ－Ｔ細胞）は、ＣＤ２２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞よりも腫瘍抑制において有意により効果的であり；ｈｕＡＩＯ－１３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びｈｕＡＩＯ－１８０ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＣＤ１９ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞よりも腫瘍抑制において有意により効果的であり；ｈｕＡＩＯ－１８０ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＣＤ２０ ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞よりも腫瘍抑制において有意により効果的であった。ｈｕＡＩＯ－１８０ ＣＡＲ－Ｔ細胞処置群のマウスの１匹は、腹腔への腫瘍移動を示し、エンドポイントで安楽死させた（図１１Ａ～１１Ｂ）。加えて、ｈｕＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞で処置された無腫瘍マウスでは、ほとんどの健康状態は、正常であり、体重は、安定していた（図１１Ｃ）。ｈｕＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞及び陰性／陽性対照処置マウスの生存曲線が図１１Ｄに示される。要約すれば、三重特異性ＶＨＨ ｈｕＡＩＯ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、単一特異性ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較して、大幅に強化された疾患制御を示し、長期の健康な生存に直接変換された。
６．８．実施例８－ｉｎ ｖｉｔｒｏでの三重特異性ラクダ科ＶＨＨ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ ｍＡｂ（ＡＩＯ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ ｍＡｂ）及び三重特異性ヒト化ＶＨＨ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ ｍＡｂ（ｈｕＡＩＯ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ ｍＡｂ）の細胞表面結合の特性評価
６．８．１．ＡＩＯ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ ｍＡｂ及びｈｕＡＩＯ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ ｍＡｂのＲａｊｉ細胞へのオンターゲット結合及びＥＣ５０
三重特異性ラクダ科ＶＨＨ及び三重特異性ヒト化ＶＨＨ構築物は、表９及び表１２に示すように、対応するＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインである。三重特異性ラクダ科ＶＨＨ配列またはヒトＩｇＧ１Ｆｃフラグメント配列（配列番号１６９）を含む三重特異性ヒト化ＶＨＨ配列を、哺乳動物発現ベクター（ｐｃＤＮＡ３．４）にクローニングして、組み換えタンパク質発現を促進した。哺乳動物宿主細胞（Ｅｘｐｉ２９３Ｆ）における最適な発現のために、ＤＮＡコドンをさらに最適化した。抗体を、細胞培養上清から採取し、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ ＬＸで１ステップ精製し、０．２μｍのフィルターで滅菌した。精製された抗体濃度を、Ａ２８０で決定し、８０％～９５％の純度で０．２３～１．８８ｍｇ／ｍＬに達した。抗ＣＤ２０Ｆａｂ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ ｍＡｂのうちの２つ（リツキシマブＦａｂ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ ｍＡｂ及びＬｅｕ１６Ｆａｂ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ ｍＡｂ（配列番号１７０～１７３を参照））を陽性対照として使用し、細胞表面結合アッセイのために、ｈｕＩｇＧ１Ｆｃアイソタイプ対照ｍＡｂ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、カタログ番号Ｃ２８６７ＤＬ２８０－２）を陰性対照として使用した。ＣＤ１９＋ＣＤ２０＋ＣＤ２２＋三重陽性抗原発現Ｂリンパ腫細胞－Ｒａｊｉ（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ－８６）を完全培地に再懸濁させ、細胞濃度を１×１０６細胞／ｍＬに希釈し、染色を１ウェル当たり２×１０５細胞で実施した。ｍＡｂを最大濃度から段階的に希釈し（３分の１に低減）、実験計画及びプロトコールに従って細胞に添加した。ｍＡｂ及びＲａｊｉ細胞を、４℃で１時間共インキュベートし、次に、細胞を０．５％のＦＢＳを含む２００μＬのＤＰＢＳで２回洗浄し、４℃で５分間、３００ｇで遠心した。細胞を、検出抗体（ＰＥ結合マウス抗ヒトＩｇＧ１Ｆｃ）（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号４０９３０４、１：１００）で、４℃で４０分間染色した。次に、細胞を２回洗浄し、ＮｏｖｏＣｙｔｅフローサイトメーター（ＡＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でのフローサイトメトリー分析のために、０．５％のＦＢＳを含む２００μＬのＤＰＢＳで再懸濁させた。ＦＡＣＳデータをＮｏｖｏｅｘｐｒｅｓｓソフトウェアで分析し、ＭＦＩ（蛍光強度の中央値）をＧｒａｐｈＰａｄ ＰＲＩＳＭバージョン６．０により分析した。細胞表面結合データは、例示的な三重特異性ラクダ科ＶＨＨ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ ｍＡｂ（ＡＩＯ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ ｍＡｂ）及び三重特異性ヒト化ＶＨＨ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ ｍＡｂ（ｈｕＡＩＯ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ ｍＡｂ）が用量依存的にＲａｊｉ細胞に特異的に結合したことを示し、結合のＥＣ５０を記載した（図１２Ａ～１２Ｃ）。
６．８．２．ｈｕＡＩＯ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ ｍＡｂオフターゲット結合評価
オフターゲット結合を検証するために、ｈｕＡＩＯ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ ｍＡｂを様々なヒト細胞株で評価した。例示的な試験細胞株が表１３に列挙される。ｍＡｂを１ウェル当たり１×１０５細胞で、４℃で１時間インキュベートした。次に、細胞を２００μＬのＤＰＢＳ及び０．５％のＦＢＳで洗浄し、４℃で５分間、３００ｇで遠心した。細胞を、検出抗体－ＰＥ結合マウス抗ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号４０９３０４、１：１００）で、４℃で３０分間染色した。次に、細胞を再度洗浄し、ＮｏｖｏＣｙｔｅフローサイトメーター（ＡＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でのフローサイトメトリー分析のために２００μＬのＤＰＢＳ＋０．５％のＦＢＳで再懸濁させ、ＦＡＣＳヒストグラムデータをＮｏｖｏｅｘｐｒｅｓｓソフトウェアで分析した。例示的なｈｕＡＩＯ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ ｍＡｂについては、Ｒａｊｉ細胞へのＥＣ５０結合をもたらす濃度では、オフターゲット細胞への非特異的結合は観察されなかった（表１３）。
（表１３）オン／オフターゲット細胞株へのｈｕＡＩＯ－ｈｕＩｇＧ１Ｆｃ ｍＡｂの結合
Figure 2023546766000028
本明細書に引用された全ての特許、公開された出願、及び参考文献の教示は、全体が参照により組み込まれる。例示的な実施形態が特に示され、説明されているが、添付の特許請求の範囲に包含される実施形態の範囲から逸脱することなく、形態及び詳細に様々な変更が行われ得ることは、当業者らには理解されるであろう。
上記から、例示の目的で特定の実施形態が本明細書に記載されているが、本明細書で提供されるものの趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な修正を行うことができることが理解されるであろう。上で言及された全ての参考文献は、全体が参照により本明細書に組み込まれる。

Claims (48)

  1. キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
    （ａ）抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂを含む、細胞外抗原結合ドメイン、
    （ｂ）膜貫通ドメイン、ならびに
    （ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン
    を含み、
    前記抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂが、前記膜貫通ドメインに対する前記抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂまたは前記抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂよりも、前記膜貫通ドメインに近い、
    前記キメラ抗原受容体。
  2. 前記抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂが、前記抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂのＮ末端にある、請求項１に記載のＣＡＲ。
  3. 前記抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂが、前記抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂのＣ末端にある、請求項１に記載のＣＡＲ。
  4. キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
    （ａ）抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂを含む、細胞外抗原結合ドメイン、
    （ｂ）膜貫通ドメイン、ならびに
    （ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン
    を含み、
    前記抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂが、前記膜貫通ドメインに対する前記抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂまたは前記抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂよりも、前記膜貫通ドメインに近い、
    前記キメラ抗原受容体。
  5. 前記抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂが、前記抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂのＮ末端にある、請求項４に記載のＣＡＲ。
  6. 前記抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂが、前記抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂのＣ末端にある、請求項４に記載のＣＡＲ。
  7. キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
    （ａ）抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂを含む、細胞外抗原結合ドメイン、
    （ｂ）膜貫通ドメイン、ならびに
    （ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン
    を含み、
    前記抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂが、前記膜貫通ドメインに対する前記抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂまたは前記抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂよりも、前記膜貫通ドメインに近い、
    前記キメラ抗原受容体。
  8. 前記抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂが、前記抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂのＮ末端にある、請求項７に記載のＣＡＲ。
  9. 前記抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂが、前記抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂのＣ末端にある、請求項７に記載のＣＡＲ。
  10. 前記抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ、前記抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び前記抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂが、直接または１つ以上のペプチドリンカー（複数可）を介して互いに融合され、前記１つ以上のペプチドリンカー（複数可）が、２０個以下、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、または５個のアミノ酸を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載のＣＡＲ。
  11. 前記１つ以上のペプチドリンカー（複数可）が、（ＧＧＧＧＳ）ｎであり、ｎが、１、２、３、または４である、請求項１０に記載のＣＡＲ。
  12. キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
    （ａ）抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂを含む、細胞外抗原結合ドメイン、
    （ｂ）膜貫通ドメイン、ならびに
    （ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン
    を含み、
    前記抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ、前記抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び前記抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂが、直接または１つ以上のペプチドリンカー（複数可）を介して互いに融合され、
    前記１つ以上のペプチドリンカー（複数可）が、２０個以下、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、または５個のアミノ酸を含む、
    前記キメラ抗原受容体。
  13. 前記１つ以上のペプチドリンカー（複数可）が、（ＧＧＧＧＳ）ｎであり、ｎが、１、２、３、または４である、請求項１２に記載のＣＡＲ。
  14. （Ｉ）抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂが、
    （ｉ）配列番号１もしくは３１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｉｉｉ）配列番号１もしくは３１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｖ）配列番号１１もしくは３１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｖｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｖｉｉ）配列番号１４もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｖｉｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｉｘ）配列番号２０もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｉ）配列番号２４もしくは３１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｉｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｉｉｉ）配列番号１４もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｉｖ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｖ）配列番号１もしくは３１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｖｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｖｉｉ）配列番号２０もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｖｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｉｘ）配列番号２０もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｘ）配列番号２０もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または
    （ｘｘｉ）配列番号２０もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｘｉｉ）配列番号２８３もしくは３１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｘ）配列番号２８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｘｉ）配列番号２８９もしくは３１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｘｉｉ）配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｘｉｉｉ）配列番号２９５もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または
    （ｘｘｉｖ）配列番号２９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３
    を含み、
    （ＩＩ）前記抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂが、
    （ｉ）配列番号７３もしくは３１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｉｉ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｉｉｉ）配列番号７９もしくは３１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｉｖ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｖ）配列番号７３もしくは３１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または
    （ｖｉ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３
    を含み、
    （ＩＩＩ）前記抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂが、
    （ｉ）配列番号９３もしくは３１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｉｉｉ）配列番号９９もしくは３１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｉｖ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｖ）配列番号１０５もしくは３２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｖｉ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｖｉｉ）配列番号１１１もしくは３２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｖｉｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｉｘ）配列番号１１７もしくは３２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｉ）配列番号１２３もしくは３２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または
    （ｘｉｉ）配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３
    を含む、
    請求項１～１３のいずれか１項に記載のＣＡＲ。
  15. キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
    （ａ）抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂのうちの少なくとも２つを含む、細胞外抗原結合ドメイン、
    （ｂ）膜貫通ドメイン、ならびに
    （ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン
    を含み、
    （Ｉ）抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂが、
    （ｉ）配列番号１もしくは３１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｉｉｉ）配列番号１もしくは３１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｖ）配列番号１１もしくは３１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｖｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｖｉｉ）配列番号１４もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｖｉｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｉｘ）配列番号２０もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｉ）配列番号２４もしくは３１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｉｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｉｉｉ）配列番号１４もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｉｖ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｖ）配列番号１もしくは３１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｖｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｖｉｉ）配列番号２０もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｖｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｉｘ）配列番号２０もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｘ）配列番号２０もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｘｉ）配列番号２０もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または
    （ｘｘｉｉ）配列番号２８３もしくは３１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２８５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｘ）配列番号２８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２８７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２８８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｘｉ）配列番号２８９もしくは３１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｘｉｉ）配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｘｉｉｉ）配列番号２９５もしくは３１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または
    （ｘｘｉｖ）配列番号２９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２９９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３
    を含み、
    （ＩＩ）前記抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂが、
    （ｉ）配列番号７３もしくは３１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｉｉ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｉｉｉ）配列番号７９もしくは３１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｉｖ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｖ）配列番号７３もしくは３１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または
    （ｖｉ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３
    を含み、
    （ＩＩＩ）前記抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂが、
    （ｉ）配列番号９３もしくは３１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｉｉｉ）配列番号９９もしくは３１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｉｖ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｖ）配列番号１０５もしくは３２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｖｉ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｖｉｉ）配列番号１１１もしくは３２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｖｉｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｉｘ）配列番号１１７もしくは３２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、
    （ｘｉ）配列番号１２３もしくは３２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または
    （ｘｉｉ）配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３
    を含む、
    前記キメラ抗原受容体。
  16. キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
    （ａ）抗ＣＤ２０単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂのうちの少なくとも２つを含む、細胞外抗原結合ドメイン、
    （ｂ）膜貫通ドメイン、ならびに
    （ｃ）細胞内シグナル伝達ドメイン
    を含み、
    （Ｉ）抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂが、
    （ｉ）配列番号３９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｉｉ）配列番号４０に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｉｉｉ）配列番号４１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｉｖ）配列番号４２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｖ）配列番号４３に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｖｉ）配列番号４４に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｖｉｉ）配列番号４５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｖｉｉｉ）配列番号４６に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｉｘ）配列番号４７に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｘ）配列番号４８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｘｉ）配列番号４９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｘｉｉ）配列番号５０に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｘｉｉｉ）配列番号５１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｘｉｖ）配列番号５２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｘｖ）配列番号５３に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｘｖｉ）配列番号５４に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｘｖｉｉ）配列番号５５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｘｖｉｉｉ）配列番号３０１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｘｉｘ）配列番号３０２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、または
    （ｘｘ）配列番号３０３に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３
    を含み、
    （ＩＩ）抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂが、
    （ｉ）配列番号８５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｉｉ）配列番号８６に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｉｉｉ）配列番号８７に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｉｖ）配列番号８８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、または
    （ｖ）配列番号３０８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３
    を含み、
    （ＩＩＩ）抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂが、
    （ｉ）配列番号１２９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｉｉ）配列番号１３０に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｉｉｉ）配列番号１３１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｉｖ）配列番号１３２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｖ）配列番号１３３に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、
    （ｖｉ）配列番号１３４に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、または
    （ｖｉｉ）配列番号１３５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ有するＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３
    を含む、
    前記キメラ抗原受容体。
  17. 前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３が、Ｋａｂａｔナンバリングスキーム、ＩＭＧＴナンバリングスキーム、ＡｂＭナンバリングスキーム、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングスキーム、Ｃｏｎｔａｃｔナンバリングスキーム、またはそれらの組み合わせに従って決定される、請求項１６に記載のＣＡＲ。
  18. （１）前記抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ及び前記抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、
    （２）前記抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ及び前記抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂ、
    （３）前記抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ及び前記抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂ、または
    （４）前記抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ、前記抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び前記抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂ
    を含む、請求項１５～１７のいずれか１項に記載のＣＡＲ。
  19. 前記抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂ、前記抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂ、及び前記抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂが、それぞれ、独立して、ラクダ科ｓｄＡｂまたはヒト化ｓｄＡｂである、請求項１～１８のいずれか１項に記載のＣＡＲ。
  20. （Ｉ）前記抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂが、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号３０１、配列番号３０２、または配列番号３０３のアミノ酸配列を含み、
    （ＩＩ）前記抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂが、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、または配列番号３０８のアミノ酸配列を含み、
    （ＩＩＩ）前記抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂが、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、または配列番号１３５のアミノ酸配列を含む、
    請求項１～１９のいずれか１項に記載のＣＡＲ。
  21. （Ｉ）前記抗ＣＤ２０ ｓｄＡｂが、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号３０１、配列番号３０２、または配列番号３０３の配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
    （ＩＩ）前記抗ＣＤ１９ ｓｄＡｂが、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８、または配列番号３０８の配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
    （ＩＩＩ）前記抗ＣＤ２２ ｓｄＡｂが、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、または配列番号１３５の配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
    請求項１～１９のいずれか１項に記載のＣＡＲ。
  22. 前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８α、ＣＤ４、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１５２、及びＰＤ１からなる群より選択される分子に由来する、請求項１～２１のいずれか１項に記載のＣＡＲ。
  23. 前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８αに由来する、請求項２２に記載のＣＡＲ。
  24. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、免疫エフェクター細胞の一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項１～２３のいずれか１項に記載のＣＡＲ。
  25. 前記一次細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζに由来する、請求項２４に記載のＣＡＲ。
  26. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項２４または請求項２５に記載のＣＡＲ。
  27. 前記共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３、ＬＦＡ－１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３のリガンド、及びその組み合わせからなる群より選択される共刺激分子に由来する、請求項２６に記載のＣＡＲ。
  28. 前記共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ１３７に由来する、請求項２７に記載のＣＡＲ。
  29. 前記細胞外抗原結合ドメインのＣ末端と前記膜貫通ドメインのＮ末端との間に位置するヒンジドメインをさらに含む、請求項１～２８のいずれか１項に記載のＣＡＲ。
  30. 前記ヒンジドメインが、ＣＤ８αに由来する、請求項２９に記載のＣＡＲ。
  31. 前記ポリペプチドのＮ末端に位置するシグナルペプチドをさらに含む、請求項１～３０のいずれか１項に記載のＣＡＲ。
  32. 前記シグナルペプチドが、ＣＤ８αに由来する、請求項３１に記載のＣＡＲ。
  33. （ｉ）配列番号１７４～２２６からなる群より選択されるアミノ酸配列、または
    （ｉｉ）配列番号１７４～２２６からなる群より選択される配列と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸配列
    を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
  34. 請求項１～３３のいずれか１項に記載のＣＡＲをコードする核酸配列を含む、単離核酸。
  35. 請求項３４に記載の単離核酸を含む、ベクター。
  36. 請求項１～３３のいずれか１項に記載のＣＡＲ、請求項３４に記載の単離核酸、または請求項３５に記載のベクターを含む、操作された免疫エフェクター細胞。
  37. Ｔ細胞またはＢ細胞である、請求項３６に記載の操作された免疫エフェクター細胞。
  38. 請求項３６もしくは請求項３７に記載の操作された免疫エフェクター細胞、または請求項３５に記載のベクターと、薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
  39. 対象の疾患または障害を処置する方法であって、有効量の、請求項３６もしくは請求項３７に記載の操作された免疫エフェクター細胞、または請求項３８に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  40. 前記疾患または障害が、Ｂ細胞関連疾患もしくは障害、ＣＤ１９関連疾患もしくは障害、ＣＤ２０関連疾患もしくは障害、及び／またはＣＤ２２関連疾患もしくは障害である、請求項３９記載の方法。
  41. 前記疾患または障害が、がんである、請求項４０に記載の方法。
  42. 前記疾患または障害が、Ｂ細胞悪性腫瘍である、請求項４１に記載の方法。
  43. 前記Ｂ細胞悪性腫瘍が、Ｂ細胞白血病またはＢ細胞リンパ腫である、請求項４２記載の方法。
  44. 前記疾患または障害が、辺縁帯リンパ腫（例えば、脾辺縁帯リンパ腫）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病（Ｂ－ＰＬＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、バーキットリンパ腫、原発性眼内リンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、前駆Ｂリンパ芽球性白血病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫（ＨＧＢＬ）、及び多発性骨髄腫（ＭＭ）からなる群より選択される、請求項３９に記載の方法。
  45. 前記疾患または障害が、自己免疫及び／または炎症性疾患である、請求項３９に記載の方法。
  46. 前記自己免疫及び／または炎症性疾患が、不適切なまたは増加したＢ細胞数及び／または活性化と関連する、請求項４５に記載の方法。
  47. 有効量の前記操作された免疫エフェクター細胞を前記対象に投与する前に、前記対象から得られたがん細胞上で発現しているＣＤ１９、ＣＤ２０、及び／またはＣＤ２２のレベルを検出及び／または測定することをさらに含む、請求項３９～４６のいずれか１項に記載の方法。
  48. 前記対象から得られた前記がん細胞上で発現しているＣＤ１９、ＣＤ２０、及び／またはＣＤ２２のレベルにより、前記がんを処置するのに適したＣＡＲを発現する操作された免疫エフェクター細胞の選択が決定される、請求項４７に記載の方法。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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JP2015524255A (ja) * 2012-07-13 2015-08-24 ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニア 二重特異性抗体を共導入することによってｃａｒｔ細胞の活性を強化する方法
CN105384825B (zh) * 2015-08-11 2018-06-01 南京传奇生物科技有限公司 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用
EP3426278B1 (en) * 2016-03-07 2024-01-03 Vib Vzw Cd20 binding single domain antibodies
WO2020087116A1 (en) * 2018-10-30 2020-05-07 Peter Maccallum Cancer Institute Bispecific polypeptides for engagement of car expressing immune cells with antigen presenting cells and uses thereof
CN111217908B (zh) * 2019-11-29 2021-07-06 深圳普瑞金生物药业有限公司 Cd22单域抗体、核苷酸序列、试剂盒、car-t病毒载体及car-t细胞
CN110922482B (zh) * 2019-12-25 2021-08-31 源道隆（苏州）医学科技有限公司 可结合cd19的多肽及其应用

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