JP2023541637A - 抗体－エクサテカンコンジュゲート - Google Patents

抗体－エクサテカンコンジュゲート Download PDF

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シャイク， アーノルドゥス ヤコブス ファン
ソラヤ ポパル，
ビーバー， ローリーン デ
マリア アントニア ヴァイデベン，
ゲール， レモン ファン
インゲ カタリーナ ジョゼフィーナ ハークマンズ，
デ サンデ， ピーター ファン
バーケル， サンダー セバスティアーン ファン
デルフト， フロリス ルイス ファン
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シンアフィックス ビー．ブイ．
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Abstract

本発明は、構造（１）を有する抗体－薬物コンジュゲートに関するTIFF2023541637000112.tif64149［構造中、ＡＢは抗体であり、Ｌ１及びＬ２はリンカーであり、ｗは、０又は１であり、Ｚは、無金属クリック反応又はチオールライゲーションによって得られた接続基であり、Ｒ１７はそれぞれ個別にアミノ酸側鎖であり、ｎは、１～５の範囲の整数であり、Ａは、５員又は６員の芳香族又はヘテロ芳香族環であり、ｘは、１～８の範囲の整数であり、Ｒ２１は、Ｈ、Ｒ２２、Ｃ（Ｏ）ＯＨ及びＣ（Ｏ）Ｒ２２から選択され、Ｒ２２は、Ｃ１～Ｃ２４（ヘテロ）アルキル基、Ｃ３～Ｃ１０（ヘテロ）シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ１０（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ１０アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３～Ｃ１０（ヘテロ）アリールアルキル基であり、それらは、任意選択で置換されており、Ｏ、Ｓ及びＮＲ２３から選択される１個又は複数のヘテロ原子で任意選択で中断されており、Ｒ２３は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキル基からなる群から独立的に選択される］。【選択図】 なし

Description

[0001]本発明は、抗体－薬物コンジュゲートの分野、特にがんの処置に適している、エクサテカン細胞傷害性ペイロードを含む抗体－薬物コンジュゲートに関する。
[0002]治療における特効薬と考えられる抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、薬剤に結合している抗体からなる。抗体（リガンドとも呼ばれる）は、小タンパク質フォーマット（ｓｃＦｖ、Ｆａｂフラグメント、ＤＡＲＰｉｎ、アフィボディなど）とすることができるが、一般に所与の抗原に対する高選択性及び親和性、長い循環半減期、並びにほとんどない～全くない免疫原性に基づいて選択されたモノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。したがって、慎重に選択された生物学的受容体のタンパク質リガンドとしてのｍＡｂは、医薬品の選択的標的化にとって理想的な送達プラットホームを提供する。例えば、特異的がん関連抗原と選択的に結合することが知られているモノクローナル抗体は、化学的にコンジュゲートされた細胞傷害性物質の腫瘍への送達のために結合、内部移行、細胞内プロセシング、最後に活性カタボライトの遊離を介して使用されうる。細胞傷害性物質は、低分子毒素、タンパク質毒素又はオリゴヌクレオチドのような他のフォーマットとすることができる。その結果、抗体によって標的にされなかった正常細胞を温存しながら、腫瘍細胞が選択的に根絶されうる。同様に、抗細菌薬（抗生物質）の抗体への化学的コンジュゲーションを細菌感染症の処置に適用することができるが、抗炎症薬のコンジュゲートが、自己免疫疾患の処置について研究中であり、例えばオリゴヌクレオチドの抗体への付着は、神経筋疾患の処置のための潜在的な有望手法である。したがって、活性医薬品の選択された特定細胞部位への標的化送達の概念は、同じ薬物の全身送達に優る多くの有利な面をもつ、広範囲の疾患の処置のための強力な手法である。
[0003]モノクローナル抗体を採用して、特定タンパク質物質を標的化送達するための代替戦略は、軽鎖又は重鎖（又は両方）のＮ末端又はＣ末端でありうる抗体の末端の１つ（又は複数）への後者のタンパク質の遺伝子融合によるものである。この場合、興味の対象となる生物活性タンパク質、例えばシュードモナス外毒素Ａ（ＰＥ３８）のようなタンパク質毒素又は抗ＣＤ３単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）は、必ずしもそうではないがおそらくペプチドスペーサーを介して抗体への融合物として遺伝子にコードされ、抗体が融合タンパク質として発現される。ペプチドスペーサーは、プロテアーゼ感受性切断部位を含むこともあれば、含まないこともある。
[0004]ＡＤＣの分野において、化学的リンカーが、典型的に医薬品を抗体に付着させるために採用される。このリンカーは、長期間の薬物投与後に血漿が安定である必要性を含めて、いくつかの重要な属性を有する必要がある。安定なリンカーは、身体の計画された部位又は細胞へのＡＤＣの局在化を可能にし、循環におけるペイロードの早期遊離を予防する。その早期放出は、あらゆる種類の望ましくない生物学的応答を無差別に誘導し、それによってＡＤＣの治療指数が下がる。内部移行すると、ＡＤＣは、ペイロードが効果的に遊離されるようにプロセシングされるべきであり、したがってその標的に結合することができる。
[0005]リンカーには、切断不可能なリンカーと切断可能なリンカーの２つのファミリーがある。切断不可能なリンカーは、抗体とペイロードの間の原子の鎖からなり、抗体薬物コンジュゲートが存在する器官又は生体コンパートメントにかかわりなく、生理的条件下で十分に安定である。結果として、切断不可能なリンカーを含むＡＤＣからのペイロードの遊離は、ＡＤＣの細胞への内部移行後における抗体の完全な（リソソーム）分解に依存する。この分解の結果として、ペイロード（リンカーを依然として有する）、並びにペプチドフラグメント及び／又はアミノ酸は、リンカーが元々付着していた抗体から遊離される。切断可能なリンカーは、細胞又は細胞コンパートメントの固有の特性をＡＤＣからのペイロードの選択的遊離のために利用し、これによって、一般に代謝プロセシング後に微量のリンカーも残らない。切断可能なリンカーには、１）特定酵素に対する感受性、２）ｐＨ感受性、及び３）細胞の酸化還元状態（又はその微小環境）に対する感受性という３つのよく使用される機構がある。切断可能なリンカーは、例えばパラ－アミノベンジルアルコール基及びその誘導体をベースにした自己破壊性ユニットも含んでもよい。リンカーは、抗体との反応のための反応性基とリンカーを接続するための、スペーサー又はストレッチャーユニットと呼ばれることが多い追加の非機能的要素も含んでもよい。
[0006]ＡＤＣは、臨床及び前臨床活性を明らかにしてきたが、標的にされた腫瘍細胞での抗原発現に加えてどの因子がそのような効力を決定するか不明であった。例えば、薬物：抗体比（ＤＡＲ）、ＡＤＣ結合親和性、ペイロードの効力、受容体発現レベル、内部移行率、輸送、多剤耐性（ＭＤＲ）状態、及び他の因子はすべてインビトロでのＡＤＣ処置の転帰に影響するように関与した。抗原陽性腫瘍細胞の直接死滅に加えて、ＡＤＣは、参照により組み込まれるＳａｈｉｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、１９９０、５０、６９４４～６９４８によって報告され、例えば参照により組み込まれるＬｉら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、２０１６、７６、２７１０～２７１９によって研究されたように、隣接している抗原陰性腫瘍細胞を死滅させる能力、いわゆる「バイスタンダー死滅」効果も有する。概して、中性である細胞傷害性ペイロードは、バイスタンダー死滅を示すが、イオン性（荷電）ペイロードは、イオン種が受動拡散では細胞性膜を容易に透過しないという事実の結果としてバイスタンダー死滅を示さない。確立されたバイスタンダー効果を有するペイロードは、例えばＭＭＡＥ及びＤＸｄである。バイスタンダー死滅を示さないペイロードの例には、ＭＭＡＦ又はカドサイラ（Ｋａｄｃｙｌａ）の活性カタボライト（リシン－ＭＣＣ－ＤＭ１）がある。
[0007]ＡＤＣは、バイオコンジュゲーションと呼ばれるプロセスである、リンカー－薬物とタンパク質のコンジュゲーションによって調製される。参照により組み込まれるＧ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、第３版、２０１３に要約されているように、バイオコンジュゲーションについては多くの技術が公知である。リシン側鎖のアシル化に基づく又はシステイン側鎖のアルキル化に基づく、主要な２つの技術をランダムコンジュゲーションによるＡＤＣの調製に関して認めることができる。リシン側鎖におけるε－アミノ基のアシル化は、典型的にはタンパク質を、活性化エステル又は活性化カーボネート誘導体をベースにした試薬にさらすことによって達成され、例えばＳＭＣＣが、カドサイラ（Ｋａｄｃｙｌａ）（登録商標）の製造に適用されている。システイン側鎖におけるチオール基のアルキル化のための主要な化学は、例えばアドセトリス（Ａｄｃｅｔｒｉｓ）（登録商標）の製造において適用されるようにマレイミド試薬の使用に基づいている。標準のマレイミド誘導体の他に、例えば共に参照により組み込まれるＪａｍｅｓ Ｃｈｒｉｓｔｉｅら、Ｊ．Ｃｏｎｔｒ．Ｒｅｌ．、２０１５、２２０、６６０～６７０及びＬｙｏｎら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２０１４、３２、１０５９～１０６２によって明らかなように、さまざまなマレイミドバリアントもより安定なシステインコンジュゲーションに適用される。システインアルキル化のための他の手法は、例えば、ハロアセトアミド（典型的にブロモアセトアミド又はヨードアセトアミド）の求核置換（例えば参照により組み込まれるＡｌｌｅｙら、Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．、２００８、１９、７５９～７６５を参照のこと）、若しくはアクリレート試薬との反応など不飽和結合に対する求核付加に基づくさまざまな手法（例えば共に参照により組み込まれるＢｅｒｎａｒｄｉｍら、Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．、２０１６、７、ＤＯＩ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ１３１２８及びＡｒｉｙａｓｕら、Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．、２０１７、２８、８９７～９０２を参照のこと）、ホスホンアミデートとの反応（例えば参照により組み込まれるＫａｓｐｅｒら、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．、２０１９、５８、１１６２５～１１６３０を参照のこと）、アレンアミドとの反応（例えば参照により組み込まれるＡｂｂａｓら、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．、２０１４、５３、７４９１～７４９４を参照のこと）、シアノエチニル試薬との反応（例えば参照により組み込まれるＫｏｌｏｄｙｃｈら、Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．、２０１５、２６、１９７～２００を参照のこと）、ビニルスルホンとの反応（例えば参照により組み込まれるＧｉｌ ｄｅ Ｍｏｎｔｅｓら、Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．、２０１９、１０、４５１５～４５２２を参照のこと）、又はビニルピリジンとの反応（例えばｈｔｔｐｓ：／／ｉｋｓｕｄａ．ｃｏｍ／ｓｃｉｅｎｃｅ／ｐｅｒｍａｌｉｎｋ／（２０２０年１月７日にアクセス）を参照のこと）を含む。抗体のリエンジニアリングを含まない抗体コンジュゲーションへの代替手法は、鎖間ジスルフィド架橋の低減、及びそれに続く、ビス－スルホン試薬（例えば共に参照により組み込まれるＢａｌａｎら、Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．、２００７、１８、６１～７６及びＢｒｙａｎｔら、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ、２０１５、１２、１８７２～１８７９を参照のこと）、モノ－若しくはビス－ブロモマレイミド（例えば共に参照により組み込まれるＳｍｉｔｈら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、２０１０、１３２、１９６０～１９６５及びＳｃｈｕｍａｃｈｅｒら、Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２０１４、３７、７２６１～７２６９を参照のこと）、ビス－マレイミド試薬（例えば国際公開第２０１４１１４２０７号を参照のこと）、ビス（フェニルチオ）マレイミド（例えば共に参照により組み込まれるＳｃｈｕｍａｃｈｅｒら、Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２０１４、３７、７２６１～７２６９及びＡｕｂｒｅｙら、Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．、２０１８、２９、３５１６～３５２１を参照のこと）、ビス－ブロモピリダジンジオン（例えば参照により組み込まれるＲｏｂｉｎｓｏｎら、ＲＳＣ Ａｄｖａｎｃｅｓ、２０１７、７、９０７３～９０７７）、ビス（ハロメチル）ベンゼン（例えば参照により組み込まれるＲａｍｏｓ－Ｔｏｍｉｌｌｅｒｏら、Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．、２０１８、２９、１１９９～１２０８を参照のこと）、又は他のビス（ハロメチル）芳香族化合物（例えば国際公開第２０１３１７３３９１号を参照のこと）などのシステイン架橋試薬に付着しているペイロードの付加を伴う。典型的に、システインの架橋によって調製されるＡＤＣは、約４の薬物抗体負荷（ＤＡＲ４）を有する。システイン側鎖へのコンジュゲーションに有用な別の技術は、タンパク質毒素、化学療法薬、及びプローブを担体分子に可逆的に接続するために利用されてきたバイオ活性化可能な接続であるジスルフィド結合による技術である（例えば参照により組み込まれるＰｉｌｌｏｗら、Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．、２０１７、８、３６６～３７０を参照のこと）。
[0008]リシン又はシステインへのコンジュゲーションの他に、さまざまな他のコンジュゲーション技術がこの１０年間探索されてきた。ある方法は、例えば参照により組み込まれるＡｘｕｐら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、２０１２、１０９、１６１０１～１６１０６によって明らかなように、非天然アミノ酸、例えばオキシムライゲーションに適したｐ－アセトフェニルアラニン、又はクリックケミストリーコンジュゲーションに適したｐ－アジドメチルフェニルアラニン若しくはｐ－アジドフェニルアラニンの遺伝子コード化に基づく。同様に、参照により組み込まれるＺｉｍｍｅｒｍａｎら、Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．、２０１４、２５、３５１～３６１は、無細胞タンパク質合成方法を採用して、無金属クリックケミストリーによるＡＤＣへの変換のためにアジドメチルフェニルアラニン（ＡｚＰｈｅ）をモノクローナル抗体に導入した。また、参照により組み込まれるＮａｉｒｎら、Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．、２０１２、２３、２０８７～２０９７によって、アジドホモアラニン（Ａｈａ）のようなメチオニン類似体を、栄養素要求性細菌によってタンパク質に導入することができ、さらに（銅触媒）クリックケミストリーによってタンパク質コンジュゲートに変換できることも示された。最後に、ピロリシル－ｔＲＮＡシンテターゼ／ｔＲＮＡＣＵＡ対を使用する組換えタンパク質における脂肪族アジドの遺伝子コード化が、参照により組み込まれるＮｇｕｙｅｎら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、２００９、１３１、８７２０～８７２１によって示され、標識が、クリックケミストリーによって確保された。
[0009]別の方法は、非天然官能性の酵素的導入に基づく。例えば、参照により組み込まれるＬｈｏｓｐｉｃｅら、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．、２０１５、１２、１８６３～１８７１は、アジド部分の抗体への導入のために細菌酵素トランスグルタミナーゼ（ＢＴＧ又はＴＧａｓｅ）を採用する。Ｃ末端ＴＧａｓｅ媒介アジド導入に続いて、無金属クリックケミストリーを用いたＡＤＣにおける変換に基づく遺伝学的方法が、参照により組み込まれるＣｈｅｎｇら、Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐ．、２０１８、１７、２６６５～２６７５によって報告された。
[0010]すべて参照により組み込まれる国際公開第２０１４０６５６６１号において、ｖａｎ Ｇｅｅｌら、Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．、２０１５、２６、２２３３～２２４２及びＶｅｒｋａｄｅら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、２０１８、７、１２によって、自然抗体グリカンのＮ２９７における酵素的リモデリングは、クリックケミストリーを使用する細胞傷害性ペイロードの付着に適したアジド修飾糖の導入を可能にすることが示された（図５Ａを参照のこと）。代替として、修飾糖が、ジスルフィド結合を有するかたちで酵素的に組み込まれ、続いて還元後に、遊離されて、アルキル化によるコンジュゲーションのための遊離チオール基を与える（図５Ｂを参照のこと）。例えばＹａｍａｄａ及びＩｔｏ、ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ．、２０１９、２０、２７２９～２７３７によって強調されているように、事前の遺伝子改変を行わない、抗体の部位特異的修飾のための化学的手法も開発された。
[0011]よく行われるリンカー－薬物のアジド修飾タンパク質へのバイオコンジュゲーション方法は、歪み促進型アルキン－アジド環化付加（ＳＰＡＡＣ）である。ＳＰＡＡＣ反応において、リンカー－薬物は環式アルキンで官能化され、アジド修飾抗体との環化付加は、環歪みの解放によって駆動される。反対に、リンカー－薬物はアジドで官能化され、抗体は環式アルキンで官能化される。無金属クリックケミストリーに適したさまざまな歪んだアルキンを図１Ａに示す。
[0012]その上、歪んだアルキンの場合、リンカー－薬物の抗体（及びグリカン、核酸などの他の生体分子）へのバイオコンジュゲーションは、さまざまな他の無金属クリックケミストリーによって達成することができる。例えば、参照により組み込まれるＮｇｕｙｅｎ及びＰｒｅｓｃｈｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ ｒｅｖ． ２０２０， ｄｏｉ： １０．１０３８／ｓ４１５７０－０２０－０２０５－０を参照のこと。例えば、タンパク質における特定チロシンの酸化によって、オルトキノンを得ることができ、それは、歪んだアルケン（例えば、ＴＣＯ）又は歪んだアルキンと容易に環化付加を起こす。例えば、参照により組み込まれるＢｒｕｉｎｓら、Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．、２０１７、２４、４７４９～４７５６を参照のこと。シクロオクチンの他に、いくつかのシクロヘプチンも、参照により組み込まれるＷｅｔｅｒｉｎｇら、Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．、２０２０、ｄｏｉ： １０．１０３９／ｄ０ｓｃ０３４７７ｋによって報告されたように無金属クリックケミストリーに適している。テトラジン部分は、さまざまな手段、例えば遺伝子コード化又は化学的アシル化によってタンパク質又はグリカンに導入することもでき、環式アルケン及びアルキンと環化付加を起こすこともある。無金属クリックケミストリーのための官能基ＦとＱの対の一覧を図２に記載する。
[0013]上記に基づいて、図３におけるモノクローナル抗体に対して例証されているタンパク質コンジュゲートを調製する一般的方法は、ｘ個の反応性部分Ｆを含むタンパク質と単一分子Ｑを含むリンカー－薬物構築物との反応を必要とする。反応性分子Ｆを如何にモノクローナル抗体に導入することができるかを示す概略図を図４に記載する。
[0014]上記の方法のうちのいずれかによる細胞傷害性ペイロードの抗体へのコンジュゲーションは、ペイロードの疎水性、場合によってはリンカーと組み合わせたペイロードの疎水性が、水性又は緩衝系（抗体にとって好ましい媒体）に対する溶解度を妨げるため、難題であることが多い。結果として、細胞傷害性ペイロードのコンジュゲーションは、典型的に水／緩衝液に加えて有機共溶媒からなる媒体中で行われる。コンジュゲーションのために典型的な共溶媒は、ＤＭＳＯ、プロピレングリコール（ＰＧ）、エタノール、ＤＭＦ、ＤＭＡ及びＮＭＰであり、リンカー－薬物の可溶化を促進するが、水ともよく混合することができる。共溶媒の典型的な量は、水性媒体に対して１０～２５％であるが、共溶媒は、場合によっては５０％まで添加されてもよい。高量の共溶媒を添加することは、ペイロードが著しく疎水性（親油性）であるコンジュゲーションプロセスにとって、大過剰のリンカー－薬物が所望の生成物への十分な変換を達成するために必要とされるプロセスにおいて特に有利である。
[0015]明らかな利益の他に、相当量の有機共溶媒を添加することの不利な面は、抗体が、溶媒混合物において安定でない可能性があり、結果としてコンジュゲーションプロセスの間に凝集する可能性があることである。典型的に、凝集レベルは共溶媒の量と相互関係があるが、これは抗体依存性でもある。特に不安定な抗体では、凝集レベルは著しいことがあり、１０％か、さらにはそれ以上のレベルに達し、その結果プロセス収率を損なう。さらに、凝集塊のこれらのレベルは、凝集塊を許容されるレベルに除去するのに追加のプロセシングステップ（例えば、ＳＥＣ又はＣＨＴ）を必要とする。コンジュゲーション時において共溶媒レベルが高いことの追加の不利な点は、サイズ排除精製（ＳＥＣ）を行うことができるようになるには、その前に、例えば透析、スピン濾過又はＴＦＦによって過剰の共溶媒を除去するための追加のプロセスステップを導入する必要があることである。
[0016]現在、細胞傷害性ペイロードとしては、例えば微小管破壊剤［例えば、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）やモノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）などのアウリスタチン、ＤＭ１やＤＭ４などのメイタンシノイド、ツブリシン］、ＤＮＡ損傷剤［例えば、カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）二量体、インドリノベンゾジアゼピン(indolinobenzodiapine)二量体、デュオカルマイシン、アントラサイクリン］、トポイソメラーゼ阻害剤［例えば、ＤＸｄ、ＳＮ－３８］又はＲＮＡポリメラーゼＩＩ阻害剤［例えば、アマニチン］が挙げられる。市販承認に到達したＡＤＣは、例えばペイロードＭＭＡＥ、ＭＭＡＦ、ＤＭ１、カリケアマイシン、ＳＮ－３８及びＤＸｄを含んでおり、さまざまな主試験が、デュオカルマイシン、ＤＭ４及びＰＢＤ二量体をベースにしたＡＤＣに対して実行されている。より多岐にわたるペイロード、例えばエリブリン、インドリノベンゾジアゼピン二量体、ＰＮＵ－１５９，６８２、ヘミアステルリン、ドキソルビシン、ビンカアルカロイドなどが、やはり臨床評価の段階であり、又はこれまでに臨床試験が行われている。最後に、後期前臨床ステージのさまざまなＡＤＣが、新規ペイロード、例えばアマニチン、ＫＳＰ阻害剤、ＭＭＡＤなどにコンジュゲートされている。
[0017]サシツズマブゴビテカン（sacituzumabgovetican）（トロデルヴィ（Ｔｒｏｄｅｌｖｙ）（登録商標））を除いて、臨床及び市販ＡＤＣのすべてが、独立型薬として適していない細胞傷害性薬を含む。トロデルヴィ（登録商標）は、細胞傷害性ペイロードとしてイリノテカンの活性カタボライト（ＳＮ－３８プロドラッグ）でもあるＳＮ－３８を特徴とするので例外である。臨床ＡＤＣにおいて今や使用されるいくつかの他のペイロードは、最初に遊離薬物、例えばカリケアマイシン、ＰＢＤ二量体及びエリブリンとして化学療法について評価されたが、パクリタキセルやドキソルビシンなど標準化学療法薬の典型的に低いマイクロモル濃度の効力に比べた、細胞毒の極度に高い効力（ピコモル濃度～低ナノモル濃度ＩＣ５０値）が理由で失敗に終わった。
[0018]現在、市販のＡＤＣが１種及びさまざまな臨床ステージのＡＤＣが５種あり、すべてエクサテカンの合成誘導体であるペイロードＤＸｄ（図６に示す構造）をベースにし、リンカー－薬物デルクステカン（図８）をベースにしたＡＤＣである。ＤＸｄ及びエクサテカンは、両方ともカンプトテシンのファミリーメンバーである（トポイソメラーゼ１阻害剤）。これまでに、エクサテカンは、前臨床試験が、ＣＰＴ－１１耐性腫瘍を含めてさまざまな腫瘍異種移植片モデルに対してＳＮ－３８ベースのイリノテカン（ＣＰＴ－１１）より強力であることを示したので、独立型化学療法薬（エクサテカンメシレート、ＤＸ－８９５１ｆ）として臨床的に評価された。さらに、エクサテカンは、多剤耐性を与えるＰｇｐトランスポーターの基質ではないことがわかったが、ＳＮ－３８はＰｇｐの弱い基質である。しかし、臨床研究において、エクサテカンメシレートのさまざまながんタイプに対するわずかな効果のみ観察され、参照により組み込まれるＶｅｎｄｉｔｔｏ及びＳｉｍａｎｅｋ、Ｍｏｌ． Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．、２０１０、７、３０７～３４９にまとめられており、最もよく見られた薬物関連毒性は好中球減少であった。エクサテカンとゲムシタビンを比較する第ＩＩＩ相試験は、ゲムシタビン単独療法に対して生存期間の延長を示さなかった。結果として、遊離薬物としてのエクサテカンメシレートの開発は中止された。
[0019]その後のエクサテカンベースの研究は、ＤＸ－８９５１ｆがＧｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ（ＧＧＦＧ）テトラペプチドスペーサーを介してカルボキシメチルデキストランポリアルコール（ＣＭ－Ｄｅｘ－ＰＡ）に共有結合している高分子担体系であるＤＥ－３１０の開発に焦点を絞った。ＤＥ－３１０のＧＧＦＧペプチドスペーサーは、腫瘍微小環境において実際に前臨床試験でアップレギュレートされる特異的システインプロテアーゼによって切断されるように設計され、実際にマウスにおいてＤＥ－３１０の１１．４ｍｇ／ｋｇの単回投与が、ＤＸ－８９５１ｆ単独の反復投与（１日１０ｍｇ／ｋｇ、５日間）より強い抗腫瘍活性を示すことが明らかになっていた。しかし、透過性貯蔵性の亢進（ＥＰＲ）によって起こりうる徐放の利点は、参照により組み込まれるＷｅｎｔｅら、Ｉｎｖｅｓｔ Ｎｅｗ Ｄｒｕｇｓ．、２００５、２３、３３９によって報告されたように、ヒトがんの処置の第Ｉ相試験において確認されなかった。
[0020]ごく最近、エクサテカンは、例えば、参照により組み込まれるＮａｋａｄａら、Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ．、２０１６、２６、１５４２～１５４５によって報告されたように、抗体－薬物コンジュゲートのペイロードとして検討され、さまざまなリンカーフォーマットがスクリーニングされた。しかし、エクサテカンベースのＡＤＣは最大で２６％という甚だしい凝集を示すことが観察された。さらに、ＧＧＦＧリンカーのエクサテカンアミノ基への直接付着によって、ＧＧＦＧペプチドスペーサーのタンパク質分解除去が不完全になり、遊離ＤＸ－８９５１とＧ－ＤＸ－８９５１、すなわちＮ－グリシル－エクサテカンの両方の混合物を遊離することが見出された（図６を参照のこと）。実際、参照により組み込まれるＷｅｎｔｅら、Ｉｎｖｅｓｔ Ｎｅｗ Ｄｒｕｇｓ．、２００５、２３、３３９によって報告されたように、ＤＥ－３１０の以前の臨床試験から、腫瘍組織中のＧ－ＤＸ－８９５１濃度は、ＤＸ－８９５１自体の約１０倍であることが明らかになり、Ｇ－ＤＸ－８９５１が、ＤＥ－３１０の細胞傷害活性を引き起こす要因の一端を担っている可能性があることを示唆された。同時に、前臨床データは、参照により組み込まれるＳｈｉｏｓｅら、Ｂｉｏｌ． Ｐｈａｒｍ． Ｂｕｌｌ．、２００７、３０、２３６５～２３７０によって報告されたように、ＤＸ－８９５１及びＧ－ＤＸ－８９５１のトポイソメラーゼ－Ｉ活性に対する阻害活性は同程度であるが、ＤＸ－８９５１のインビトロ細胞傷害性は、Ｇ－ＤＸ－８９５１の約２０～１９０倍強いことを示していた。最後に、さまざまなＮ－アミノアシル化誘導体は、エクサテカン／ＤＸ－８９５１自体と比べて有意に低減した膜透過性を示すことがＰＡＭＰＡアッセイにより決定してわかった。
[0021]ＤＸ－８９５１に比べたＧ－ＤＸ－８９５１の効力の低減、アミノアシル化エクサテカン誘導体全般の不十分な細胞膜透過性及びエクサテカンベースのＡＤＣの著しい凝集可能性の結果として、ＧＧＦＧ－アミナールベースのリンカーと組み合わせたＮ－ヒドロキシアシル化ＤＸ－８９５１誘導体（ＤＸｄ）をベースにしたデルクステカン（図８に示す）と呼ばれる、新しいエクサテカンベースのリンカー技術がＤａｉｉｃｈｉ－Ｓａｎｋｙｏによって開発された。リンカー－ペイロードは、鎖間ジスルフィド結合が還元剤で還元された後、システイン残基を介して抗体とコンジュゲートされ、それによってＤＡＲ４又はＤＡＲ８のＡＤＣ（それぞれ図１０Ａに示すＡＤＣ４ａ又はＡＤＣ４ｂ）が還元剤の化学量論に応じて産生される。代替として、システインエンジニアリング抗体を使用して、ＤＡＲ２のＡＤＣを産生することができる（図１０Ｂに示すＡＤＣ５）。テトラペプチドは、腫瘍細胞において高発現されるカテプシンＢ及びＬなどのリソソーム酵素によって分解されるので、次にＤＸｄが（ホルムアルデヒドの遊離を伴って）遊離アミナール部分の自壊を介して遊離されると思われる。予想通りに、ＤＸｄは、参照により組み込まれるＯｇｉｔａｎｉら、Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ．、２０１６、１０７、１０３９～１０４６によって報告されたように、高細胞透過性であることがわかり、結果として著しいバイスタンダー効果を示した。したがって、デルクステカンをベースにしたＡＤＣは、標的不均一性で腫瘍を処置する際に有益でありうる。さらに、デルクステカンとのシステインコンジュゲーションによって誘導されたＡＤＣは、３つのＡＤＣプログラム、すなわちＤＳ－８２０１ａ（ＨＥＲ２を標的にするＡＤＣ、現在Ｅｎｈｅｒｔｕとして市販）、Ｕ３－１４０２ａ（ＨＥＲ３を標的にするＡＤＣ）及びＤＳ－６１５７ａ（ＧＲＰ２０を標的にするＡＤＣ）において適用されたように、高安定性を示し、最大でＤＡＲ８の高薬物負荷を可能にすることが見出された。さらに、２種のデルクステカンベースのＤＡＲ４のＡＤＣ、すなわちＤＳ－１０６２ａ（ＴＲＯＰ－２を標的にするＡＤＣ）及びＤＳ－７３００ａ（Ｂ７－Ｈ３を標的にするＡＤＣ）が、臨床開発のさまざまなステージにある。
[0022]デルクステカンベースのプログラムの他に、カンプトテシンペイロードを有する他の３種のＡＤＣが臨床に到達し、これらのうちの２種がＳＮ－３８をベースにしたＡＤＣ、すなわち両方ともＳＮ－３８をベースにした（ＴＲＯＰ－２を標的にする）サシツズマブゴビテカン（sacetizumab govetican）と（ＣＥＡＣＡＭ５を標的にする）ラベツズマブゴビテカン（labetuzumab govetican）である。実際、参照により組み込まれるＷａｌｋｅｒら、Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ．、２００２、１２、２１７～２１９によるカンプトテシンペイロードをベースにしたＡＤＣに関する第一報は、（抗ＢＲ９６標的化抗体にコンジュゲートされた）ＳＮ－３８を含むものであった。参照により組み込まれるＳｈａｒｋｅｙら、Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、２０１５、２１、５１３１～５１３８によって記載されたサシツズマブゴビテカン（sacetizumab govetican）は、トリプルネガティブ乳がんの処置のためのトロデルヴィ（登録商標）として承認された。最近臨床に入った、カンプトテシンペイロード（ベロテカン）を有する第３のＡＤＣは、ＳＫＢ２６４である。
[0023]ＡＤＣの文脈の中でカンプトテシン型ペイロードの他のバリアントを用いたいくつかの前臨床試験も、最近開示された。例えば、参照により組み込まれるＢｕｒｋｅら、Ｂｉｏｃｏｎｊ． Ｃｈｅｍ．、２００９、２０、１２４２～１２５０には、カンプトテシン自体の１０～１０００倍強力な新規カンプトテシン類似体を有する抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の調製が記載されている。強力なカンプトテシン類似体の７－ブチル－９－アミノ－１０，１１－メチレンジオキシ－カンプトテシンを有するＡＤＣは、インビトロでがん細胞株の一団に対して高度に強力で、免疫学的に特異的であり、腎細胞癌異種移植モデルにおいて忍容性が良好な用量で効果的である。しかし、これらのＡＤＣは、それ以上開発されなかった。最後に、２０１９年にＬｉら、ＡＣＳ Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ．、２０１９、１０、１３８６～１３９２によって、エクサテカンによって喚起されたがペイロードの（図６を参照のこと、カンプトテシン環番号付けの）Ｆ環を欠いているカンプトテシンを有するＡＤＣに関する報告が発表された。Ｆ環のキラル中心がその合成及び誘導体化を複雑にすると推論されたので、ペイロードにおいてＦ環を欠くものの、それでもインビトロ及びインビボでＤＸｄを有するコンジュゲートと同様に挙動する新しいカンプトテシンが合成された。特に、ペプチドリンカー切断に続いてヒドロキシル又はチオールを有する代謝物を遊離する能力を有する、バイスタンダー死滅がさまざまな程度のＡＤＣは、デルクステカンベースのＡＤＣに対してベンチマークテストされ、共培養中の標的陽性細胞に対して少なくとも同じ効力及び標的陰性細胞に対する増強した効力（バイスタンダー死滅）を有することが見出された。しかし、エクサテカン自体をベースにしたＡＤＣは、スクリーニングされなかった。
[0024]多種多様なカンプトテシンベースのＡＤＣが記載され、これらのうち複数は、ＤＸｄ、ＳＮ－３８又はベロテカンをベースにしたすべてが臨床評価中であるか、又は市販承認に到達した。しかし、現在まで、活性カタボライトとしてエクサテカンを遊離するように設計されたリンカーフォーマットをベースにしたＡＤＣは、もしかすると参照により組み込まれるＮａｋａｄａら、Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ．、２０１６、２６、１５４２～１５４５によって報告された高凝集傾向が理由で、報告されていない。解決策として、ＤＸｄの著しいバイスタンダー効果がデルクステカンリンカー技術の価値に実質的に寄与する、ＤＸｄが開発された。
[0025]本発明者らは驚いたことに、切断可能なペプチド－ＰＡＢＣ系を有するリンカーが、凝集傾向を全く示さないか、又は無視できるほどの凝集傾向を示す抗体－エクサテカンコンジュゲートを生じる、エクサテカンの抗体への無金属クリック又はチオールコンジュゲーションに大いに適していることを見出した。得られたＡＤＣは、著しいインビボ有効性効能を示すことがわかった。したがって、本発明者らは初めて、凝集を全く示すことなく、現在までに知られている最も効果的な抗体－カンプトテシンコンジュゲートと同じ大きさの有効性を示す、エクサテカンペイロードを有するＡＤＣを調製することができた。
[0026]本発明は、まず第一に構造（１）を有する抗体－薬物コンジュゲートに関する
Figure 2023541637000002
［構造中、
ＡＢは抗体であり、
Ｌ１及びＬ２はリンカーであり、
ｗは、０又は１であり、
Ｚは、無金属クリック反応又はチオールライゲーションによって得られた接続基であり、
Ｒ１７はそれぞれ個別にアミノ酸側鎖であり、
ｎは、１～５の範囲の整数であり、
Ａは、５員又は６員の芳香族又はヘテロ芳香族環であり、
ｘは、１～８の範囲の整数であり、
Ｒ２１は、Ｈ、Ｒ２２、Ｃ（Ｏ）ＯＨ及びＣ（Ｏ）Ｒ２２から選択され、Ｒ２２は、Ｃ１～Ｃ２４（ヘテロ）アルキル基、Ｃ３～Ｃ１０（ヘテロ）シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ１０（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ１０アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３～Ｃ１０（ヘテロ）アリールアルキル基であり、それらは、任意選択で置換されており、Ｏ、Ｓ及びＮＲ２３から選択される１個又は複数のヘテロ原子で任意選択で中断されており、Ｒ２３は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキル基からなる群から独立的に選択される］。
[0027]本発明はさらに、本発明に係る抗体薬物コンジュゲートの合成方法、本発明に係る方法において使用されることが適したリンカー－薬物構築物、本発明に係る抗体薬物コンジュゲートの医学的使用及び本発明に係る抗体薬物コンジュゲートを含む医薬組成物に関する。
無金属クリックケミストリーに適した環式アルキン、及び反応性部分Ｑの好ましい実施形態を示す図である。この一覧は包括的なものではなく、例えばアルキンは、フッ素化、芳香族環の置換又は芳香族環におけるヘテロ原子の導入によってさらに活性化されうる。 システイン側鎖との反応に適したさまざまな試薬を示す図である。試薬は、モノアルキル化型（Ａ）とすることができるか、又は２個のシステイン側鎖との反応のための架橋剤（Ｂ）とすることができる。 相補的反応性基Ｑとの無金属クリック反応後に、接続基Ｚを生じる、エンジニアリング、化学修飾、又は酵素的手段によって抗体に導入することができる官能基（Ｆ）の代表的（ではあるが包括的でない）一群を示す図である。官能基Ｆは、抗体に選択されたいずれの位置でも人工的に導入（エンジニアリング）されうる。いくつかの官能基Ｆ（例えば、ニトリルオキシド、キノン）は、歪んだアルキンの他に、歪んだアルケンとも反応することができ、例として、トリアジン又はテトラジンが描かれる（最下行）。ピリジン又はピリダジン接続基は、それぞれトリアジン又はテトラジンとアルキン（アルケンではない）の反応後にＮ２を失って形成される、テトラアザビシクロ［２．２．２］オクタン接続基の転位生成物である。接続基Ｚは、本発明において使用されるのに好ましい接続基である。 ｘ個の官能基Ｆを含むモノクローナル抗体（たいていの場合、対称的二量体）の反応による抗体薬物コンジュゲート調製の一般スキームを示す図である。抗体－（Ｆ）ｘと過剰のリンカー－薬物構築物（Ｑ－スペーサー－リンカー－ペイロード）のインキュベーションにより、ＦとＱが反応し、結合Ｚを形成することによってコンジュゲートが得られる。 クリックコンジュゲーション又はチオールライゲーションのためのプローブ（Ｆ）を含む抗体へのモノクローナル抗体の非遺伝子変換の一般プロセスを示す図である。クリックプローブは、採用される技術に応じて、抗体のさまざまな位置に存在することができる。例えば、抗体は、クリックコンジュゲーションのための、２つのクリックプローブ（左側の構造）又は４つのクリックプローブ（下側の構造）又は８つのプローブ（右側の構造）を含む抗体に変換されうる。 全長ＩｇＧのグリカンリモデリングに続いて、アジド－シクロオクチンクリックケミストリーに基づく、ペイロードの部位特異的コンジュゲーションの具体例を示す図である。最初に、ＩｇＧは、異なるすべてのグリコフォームのエンドグリコシダーゼ媒介トリミングに続いて、エンドグリコシダーゼによって遊離されたコアＧｌｃＮＡｃへのアジド－糖のグリコシルトランスフェラーゼ媒介移動によって、酵素的にリモデリングされる。次のステップで、アジド－リモデリングＩｇＧを免疫細胞エンゲージングポリペプチドにさらし、無金属クリックケミストリーのために単一のシクロオクチンで修飾され（ＳＰＡＡＣ）、２：２の分子フォーマットの二重特異性抗体を生じる。シクロオクチン－ポリペプチド構築物が、シクロオクチンとポリペプチドの間にＩｇＧ－ポリペプチドの距離の調整を可能にする特定のスペーサーを有するか、又は得られた二重特異性抗体に他の特性を付与することも示されている。 全長ＩｇＧのグリカンリモデリングとそれに続くチオールアルキル化ケミストリーに基づく、ペイロードの部位特異的コンジュゲーションの具体例を示す図である。最初に、ＩｇＧは、異なるすべてのグリコフォームのエンドグリコシダーゼ媒介トリミングとそれに続くエンドグリコシダーゼによって遊離されたコアＧｌｃＮＡｃへのチオール修飾（及びジスルフィド保護）糖誘導体のグリコシルトランスフェラーゼ媒介転移によって、酵素的にリモデリングされる。次のステップで、リモデリングＩｇＧの還元（ジスルフィドのチオールへの変換）と、もしかするとそれに続く酸化、次いで好適なチオール反応性試薬で修飾されたペイロードとの反応を行う。 トポイソメラーゼ阻害剤ＤＸｄ及びエクサテカン、並びにＮ－グリシル－エクサテカン（Ｇ－ＤＸ－８９５１）の構造を示す図である。エクサテカンについて、環番号付けを示す。 アジド修飾抗体へのコンジュゲーションによるＡＤＣにおける適用に適したＢＣＮ－リンカー－薬物１～３の構造を示す図である。構造１～３は、ペプチド－ＰＡＢＣ切断可能なリンカーを含み、Ｖａｌ－Ａｌａ（１ａ及び２ａ）又はＶａｌ－Ｃｉｔ（１ｂ又は２ｂ）のペプチドが存在する。構造１及び２は、ペイロードの直接遊離に合わせて設計され、構造３については、追加部分（Ｎ，Ｎ’－ジメチルエチレンジアミノカルボニル）が、環化を通したペイロードの遊離のために含まれている。構造１及び２は、細胞傷害性ペイロードエクサテカンを含み、構造３は、細胞傷害性ペイロードＳＮ－３８を含む。 遊離システイン側鎖へのコンジュゲーションによるＡＤＣにおける適用に適したＤＸｄベースのマレイミド－リンカー－薬物４（デルクステカンとも呼ばれる）の構造を示す図である。 （アジド－糖の導入のための）Ｎ－グリカンの酵素リモデリングとそれに続くリンカー－薬物１又は２との無金属クリックコンジュゲーションによって得られたＡＤＣの構造を示す図である。リモデリング及びネイティブのＮ２９７グリカンのみにおける１又は２とのコンジュゲーションが、それぞれＤＡＲ４のＡＤＣ１ａ又はＤＡＲ４のＡＤＣ２をもたらす。リモデリング及びネイティブのＮ２９７グリカン＋追加のエンジニアリングＮ－グリコシル化部位（例えば、ＨＣ－Ｌ２０１Ｎ）における１とのコンジュゲーションが、ＤＡＲ８のＡＤＣ１ｂをもたらす。 ネイティブのジスルフィド結合の還元とそれに続くデルクステカン４とのコンジュゲーションを行い、採用された具体的な条件（還元剤、例えばＴＣＥＰ又はＤＴＴの化学量論、及びデルクステカン）に応じてＡＤＣ４ａ（平均ＤＡＲ４）又はＡＤＣ４ｂ（平均ＤＡＲ８）をもたらすことによって得られたＡＤＣの構造を示す図である。 天然アミノ酸の変異体、システイン挿入又は抗体のＮ末端若しくはＣ末端に縮合しているペプチドにおけるシステインとすることがあるエンジニアリングシステイン、及びそれに続く、ＡＤＣ５（平均ＤＡＲ２）をもたらすデルクステカン４とのコンジュゲーションを有する抗体から得られたＡＤＣの構造を示す図である。 アジド基又はチオール基が次に起こる抗体コンジュゲートへの変換の出発物質として利用できるさまざまな抗体バリアントを示す図である。 アジド－トラスツズマブ（酵素リモデリング後）、ＡＤＣ１ａ（ＤＡＲ４）及びＡＤＣ４ａ（ＤＡＲ４）のＨＩＣプロファイルを示す図である。アジド－トラスツズマブは、保持時間９．２分を示し、本発明に係るＡＤＣ１ａは、保持時間９．８分の単一ピークを示し、したがって相対保持時間は１．０６である。対照的に、対照のＡＤＣ ＡＤＣ４ａは、ＨＩＣカラムから溶離する多数のピーク（１０．２分から＞１２．３分まで）を示し、アジド－トラスツズマブに対する相対保持時間は、１．１１から＞１．３３までである。 トラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ）２の２５ａとのコンジュゲーションのＲＰ－ＨＰＬＣトレースを示す図である。 トラスツズマブＳ２３９Ｃ変異体ｔｒａｓｔ－ｖ３のマレイミド－エクサテカンバリアント５４ａ、５７ｂ、５９ａ又は６０ａとのコンジュゲーションの還元条件下におけるＲＰ－ＵＰＬＣトレースを示す図である。 トラスツズマブＧａｌＰｒｏＳＨ ｔｒａｓｔ－ｖ２のマレイミド－エクサテカンバリアント５７ｂ又は６０ａとのコンジュゲーションの還元条件下におけるＲＰ－ＵＰＬＣトレースを示す図である。 一般手順Ａに従ったトラスツズマブｔｒａｓｔ－ｖ４のマレイミド－エクサテカンバリアント６０ａ又は５７ｂとのコンジュゲーションの還元条件下におけるＲＰ－ＵＰＬＣトレースを示す図である。 一般手順Ａに従ったリツキシマブｒｉｔ－ｖ４のマレイミド－エクサテカンバリアント６０ａ又は５７ｂとのコンジュゲーションの還元条件下におけるＲＰ－ＵＰＬＣトレースを示す図である。 一般手順Ｂに従ったトラスツズマブｔｒａｓｔ－ｖ４のマレイミド－エクサテカンバリアント６０ａ又は５７ｂとのコンジュゲーションの還元条件下におけるＲＰ－ＵＰＬＣトレースを示す図である。 ＢＴ－４７４細胞株を移植し、ビヒクル、カドサイラ（Ｋａｄｃｙｌａ）（Ｔ－ＤＭ１）並びにエクサテカン（ＡＤＣ１ａ）及びＳＮ－３８（ＡＤＣ３）をベースにしたＤＡＲ４ ＡＤＣを投与（すべて単回投与）したマウスにおける腫瘍容積のインビボ有効性研究モニタリングの結果を示す図である。本発明に係るＡＤＣ１ａは、１回１２ｍｇ／ｋｇで完全な腫瘍消失を示し、対照ＡＤＣ３と比べて有意な改善である。 ＢＴ－４７４細胞株を移植し、ビヒクル並びにエクサテカン（ＡＤＣ１ａ）及びＤＸｄ（ＡＤＣ４ａ）をベースにしたＤＡＲ４ ＡＤＣを投与（すべて単回投与）したマウスにおける腫瘍容積のインビボ有効性研究モニタリングの結果を示す図である。 図２０Ａのズームを示す図である。本発明に係るＡＤＣ１ａ及び対照ＡＤＣ４ａは、有効性における有意差を示さず、４ｍｇ／ｋｇで部分応答を、両ＡＤＣについて１回１２ｍｇ／ｋｇで完全な腫瘍退縮を示す。 ＢＴ－４７４細胞株を移植し、ビヒクル、並びにエクサテカン（ＡＤＣ１ａ（ＤＡＲ４）及びＡＤＣ１ｂ（ＤＡＲ８））及びＤＸｄ（ＡＤＣ４ａ（ＤＡＲ４）及びＡＤＣ４ｂ（ＤＡＲ４））をベースにしたＤＡＲ４＋ＤＡＲ８ ＡＤＣを投与（すべて単回投与）したマウスにおける腫瘍容積のインビボ有効性研究モニタリングの結果を示す図である。 ＢＴ－４７４細胞株を移植し、ビヒクル、及び短いスペーサー（ＡＤＣ１ａ（ＤＡＲ４））又は長いスペーサー（ＡＤＣ２（ＤＡＲ４））を有するエクサテカンをベースにしたＤＡＲ４ ＡＤＣを投与したマウスにおける腫瘍容積のインビボ有効性研究モニタリングの結果を示す図である。本発明に係るＡＤＣ１ａ及びＡＤＣ２は、有効性における有意差を示さない。
定義
[0052]本明細書及び特許請求の範囲において使用される「含むこと（to comprise）」という動詞及びその活用形は、その単語に続く事項を含むが、具体的に述べられていない事項を除外しないことを意味するためにその非限定的な意味で使用される。さらに、不定冠詞「ａ」又は「ａｎ」による「要素」への言及は、文脈上から要素は唯一つ存在していることが明確に求められていない限り、１つより多くの要素が存在する可能性を排除しない、したがって、不定冠詞「ａ」又は「ａｎ」は、通常「少なくとも１つ」を意味する。
[0053]本明細書及び特許請求の範囲に開示された化合物は、１個又は複数の不斉中心を含むことができ、化合物のさまざまなジアステレオマー及び／又はエナンチオマーが存在する可能性がある。本明細書及び特許請求の範囲におけるいずれの化合物の説明も、別段の記載がない限り、すべてのジアステレオマー及びその混合物を含むことになっている。さらに、本明細書及び特許請求の範囲におけるいずれの化合物の説明も、別段の記載がない限り、個々のエナンチオマーも、エナンチオマーのいずれの混合物、ラセミかそうでないものも含むことになっている。化合物の構造が特定のエナンチオマーとして示されているとき、本出願の発明はその特定のエナンチオマーに限定されないことを理解すべきである。
[0054]化合物は、さまざまな互変異性形で出現する可能性がある。本発明に係る化合物は、別段の記載がない限り、すべての互変異性形を含むことになっている。化合物の構造が特定の互変異性体として示されているとき、本出願の発明は、その特定の互変異性体に限定されないことを理解すべきである。
[0055]本明細書及び特許請求の範囲に開示された化合物は、Ｒ及びＳの立体異性体としてさらに存在する可能性がある。別段の記載がない限り、本明細書及び特許請求の範囲におけるいずれの化合物の説明も、化合物の個々のＲと個々のＳの立体異性体の両方、並びにそれらの混合物を含むことになっている。化合物の構造が特定のＳ又はＲの立体異性体として示されているとき、本出願の発明は、その特定のＳ又はＲの立体異性体に限定されないことを理解すべきである。
[0056]本明細書及び特許請求の範囲に開示された化合物は、Ｒ及びＳの立体異性体としてさらに存在する可能性がある。別段の記載がない限り、本明細書及び特許請求の範囲におけるいずれの化合物の説明も、化合物の個々のＲと個々のＳの立体異性体の両方、並びにそれらの混合物を含むことになっている。化合物の構造が特定のＳ又はＲの立体異性体として示されているとき、本出願の発明は、その特定のＳ又はＲの立体異性体に限定されないことを理解すべきである。
[0057]本明細書及び特許請求の範囲に開示された化合物は、エキソ及びエンドジアステレオマーとしてさらに存在する可能性がある。別段の記載がない限り、本明細書及び特許請求の範囲におけるいずれの化合物の説明も、化合物の個々のエキソジアステレオマーと個々のエンドジアステレオマーの両方、並びにそれらの混合物を含むことになっている。化合物の構造がエンド又はエキソジアステレオマーとして示されているとき、本出願の発明はその特定のエンド又はエキソジアステレオマーに限定されないことを理解すべきである。
[0058]本発明に係る化合物は、本発明によってやはり包含される塩の形で存在する可能性がある。塩は、典型的に薬学的に許容されるアニオンを含む薬学的に許容される塩である。用語「その塩」は、酸性プロトン、典型的に酸のプロトンが金属カチオン又は有機カチオンなどカチオンによって置き換えられるとき形成された化合物を意味する。適用可能な場合、塩は、薬学的に許容される塩であるが、これは、患者への投与が意図されていない塩には必要でない。例えば、化合物の塩では、化合物は、無機酸又は有機酸によってプロトン化されて、カチオンを形成することができ、無機酸又は有機酸の共役塩基が塩のアニオン成分である。
[0059]用語「薬学的に許容される」塩は、哺乳類など患者への投与のために許容される塩（所与の投与計画に対して許容される哺乳類の安全性を有する対イオンを含む塩）を意味する。そのような塩は、薬学的に許容される無機塩基又は有機塩基及び薬学的に許容される無機酸又は有機酸から誘導することができる。「薬学的に許容される塩」は、化合物の薬学的に許容される塩を指す。その塩は、当技術分野において公知であるさまざまな有機及び無機の対イオンから誘導されるものであり、例えばナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩、テトラアルキルアンモニウム塩など、分子が塩基性官能基を含むとき、塩酸塩、臭化水素酸塩、ギ酸塩、酒石酸塩、ベシル酸塩、メシル酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩などの有機酸又は無機酸の塩が含まれる。
[0060]本明細書では用語「タンパク質」は、その通常の科学的意味で使用される。本明細書では、約１０個以上のアミノ酸を含むポリペプチドは、タンパク質と考えられる。タンパク質は、天然アミノ酸を含むことができるが、非天然アミノ酸も含むことができる。
[0061]本明細書では用語「抗体」は、その通常の科学的意味で使用される。抗体は、免疫系によって産生されたタンパク質であり、特異的抗原を認識し、それに結合することができる。抗体は、糖タンパク質の例である。本明細書では抗体という用語は、その最も広義の意味で使用され、具体的にはモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、二量体、多量体、多特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、抗体フラグメント、並びに二重鎖及び単鎖抗体が含まれる。本明細書では用語「抗体」は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体及びがん抗原を特異的に結合する抗体も含むように意図されている。用語「抗体」は、全免疫グロブリンを含むが、抗体の抗原結合性フラグメントも含むように意図されている。さらに、用語は、遺伝子エンジニアリング抗体及び抗体の誘導体を含む。抗体、抗体のフラグメント及び遺伝子エンジニアリング抗体は、当技術分野において公知である方法によって得ることができる。
[0062]本明細書では「抗体フラグメント」は、その抗原結合性又は可変領域を含むインタクト抗体の一部分と定義される。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント、ダイアボディ、ミニボディ、トリアボディ、テトラボディ、線状抗体、単鎖抗体分子、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、抗体フラグメント（複数可）から形成された多重特異性抗体フラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生されたフラグメント（複数可）、又は標的抗原（例えば、がん細胞抗原、ウイルス抗原又は微生物抗原）に免疫特異的に結合する上記のいずれかのエピトープ結合性フラグメントが挙げられる。
[0063]本明細書では「抗原」は、抗体が特異的に結合する単位と定義される。
[0064]本明細書では用語「特異的結合」及び「特異的に結合する」は、抗体又は抗体がその対応する標的抗原エピトープと結合し、多数の他の抗原とは結合しない高度に選択的な様式と定義される。典型的に、抗体又は抗体誘導体は、少なくとも約１×１０－７Ｍ、好ましくは１０－８Ｍ～１０－９Ｍ、１０－１０Ｍ、１０－１１Ｍ、又は１０－１２Ｍの親和性で結合し、所定の抗原に、所定の抗原又は密接に関連した抗原以外の非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）に結合するためのその親和性より少なくとも２倍高い親和性で結合する。
[0065]本明細書では用語「実質的な」又は「実質的に」は、混合物又は試料の集団の大多数、すなわち＞５０％、好ましくは集団の５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％超と定義される。
[0066]本明細書では「リンカー」は、化合物の２個以上の元素を接続する部分と定義される。例えば、抗体コンジュゲートにおいて、抗体及びペイロードは互いにリンカーを介して共有結合される。リンカーは、１つ又は複数のリンカー及びさまざまな部分をリンカー内で接続するスペーサー部分を含むことができる。
[0067]本明細書では「スペーサー」又はスペーサー部分は、リンカーの２つ（以上）のパートに一定の間隔を置き（それらのパートの間に距離を与え）、それらのパートを共有結合する部分と定義される。リンカーは、以下に定義されるように、例えばリンカー－構築物の一部分、リンカーコンジュゲート又はバイオコンジュゲートとすることができる。
[0068]本明細書では「自己破壊性基」は、リガンドユニットによって標的にされる部位において遊離薬物を条件付きで遊離する機能を有する抗体薬物コンジュゲートにおけるリンカーの一部分と定義される。活性化可能な自己破壊性部分は、活性化可能な基（ＡＧ）及び自己破壊性スペーサーユニットを含む。活性化可能な基を例えばアミド基のアミノ基への酵素的変換又はジスルフィドの遊離チオール基への還元によって活性化すると、任意選択で二酸化炭素の遊離を伴う、ｐ－アミノベンジル基のｐ－キノンメチドへの（一時的）１，６－脱離反応、及び／又はその後に続く第２の環化遊離機構を含むことができるさまざまな機構のうちの１つ又は複数によって、自己破壊性反応順序が開始され、遊離薬物の遊離を引き起こす。自己破壊性アセンブリユニットは、抗体とペイロードを（官能基を介して）接続する化学的スペーサーの一部分とすることができる。代替として、自己破壊性基は、化学的スペーサーの固有の一部分ではなく、抗体とペイロードを接続する化学的スペーサーから分岐する。
[0069]本明細書では「コンジュゲート」は、抗体がリンカーを介してペイロードに共有結合される化合物と定義される。コンジュゲートは、１個若しくは複数の抗体及び／又は１個若しくは複数のペイロードを含む。
[0070]用語「ペイロード」は、抗体などのターゲティング部分に共有結合しているが、タンパク質コンジュゲートの取り込み及び／又はリンカーの切断後にコンジュゲートから遊離される分子にも共有結合している部分を指す。したがって、ペイロードは、リンカーを介してターゲティング部分に共有結合している１つの開放端部を有する１価の部分、及びそれから遊離される分子も指す。本発明の文脈において、ペイロードはエクサテカンである。
本発明
[0071]本発明者らは、凝集傾向を全く示さないか、又は無視できるほどの凝集傾向を示す、細胞傷害性ペイロードとしてエクサテカン及び切断可能なペプチド－ＰＡＢＣ系を含む抗体－薬物コンジュゲートを開発した。得られたＡＤＣは、著しいインビボ有効性を示すことがわかった。
[0072]本発明は、まず第一に抗体－薬物コンジュゲートに関する。第２の態様において、本発明は、本発明に係る抗体－薬物コンジュゲートの合成方法に関する。第３の態様において、本発明は、本発明に係る方法において使用されるのに適したリンカー－薬物構築物に関する。第４の態様において、本発明は、本発明に係る抗体－薬物コンジュゲートの医学的使用、及び本発明に係る抗体－薬物コンジュゲートを含む医薬組成物に関する。当業者は、すべての態様が関連づけられていること、並びに本発明に係る抗体－薬物コンジュゲートについて述べられているあらゆることが、本発明に係る方法、本発明に係るリンカー－薬物構築物、本発明に係る使用、及び本発明に係る組成物に同様に適用され、逆も同様であることを理解する。
[0073]本発明は、以下の好ましい実施形態の一覧に従って定義されうる。
１． 構造（１）を有する抗体－薬物コンジュゲート
Figure 2023541637000003
［構造中、
ＡＢは抗体であり、
Ｌ１及びＬ２はリンカーであり、
ｗは、０又は１であり、
Ｚは、無金属クリック反応又はチオールライゲーションによって得られた接続基であり、
Ｒ１７はそれぞれ個別にアミノ酸側鎖であり、
ｎは、１～５の範囲の整数であり、
Ａは、５員又は６員の芳香族又はヘテロ芳香族環であり、
ｘは、１～８の範囲の整数であり、
Ｒ２１は、Ｈ、Ｒ２２、Ｃ（Ｏ）ＯＨ及びＣ（Ｏ）Ｒ２２から選択され、Ｒ２２は、Ｃ１～Ｃ２４（ヘテロ）アルキル基、Ｃ３～Ｃ１０（ヘテロ）シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ１０（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ１０アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３～Ｃ１０（ヘテロ）アリールアルキル基であり、それらは、任意選択で置換されており、Ｏ、Ｓ及びＮＲ２３から選択される１個又は複数のヘテロ原子で任意選択で中断されており、Ｒ２３は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキル基からなる群から独立的に選択される］。
２． Ｌ２が、構造（２）を有する
Figure 2023541637000004
［構造中、
＊で標識された波形の結合は、Ｚに接続されており、＊＊で標識された波形の結合は、ＮＨに接続されており、
Ｓｐ１及びＳｐ２はそれぞれ個別にスペーサー部分であり、
ｎ、Ａ、Ｒ１７及びＲ２１は、実施形態１に記載の通りである］、
実施形態１に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
３． 出現する各Ｓｐ２が同じであり、出現する各（ＮＨ－ＣＲ１７－ＣＯ）ｎが同じであり、出現する各Ａが同じであり、出現する各Ｒ２１が同じである、実施形態２に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
４． Ｌ２、好ましくはＳｐ１が、構造（３）で表されるスルファミド基を含む
Figure 2023541637000005
［構造中、
ａ＝０又は１であり、
Ｒ１３は、水素、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ３～Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ３～Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換されており、Ｏ、Ｓ及びＮＲ１４［ここで、Ｒ１４は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキル基からなる群から独立的に選択される］から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子で任意選択で中断されているか、又はＲ１３は、スペーサー部分を介してＮに接続されているＣ（Ｏ）Ｘの第２の出現である］、
実施形態１～３のいずれか一形態に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
５． Ｌ２、好ましくはＳｐ１が、式（３）の基を２個含む、実施形態４に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
６． 出現する各ｎが２である、実施形態１～５のいずれか一形態に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
７． 出現する各（ＮＨ－ＣＲ１７－ＣＯ）ｎが、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ａｒｇ、ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ－Ｃｉｔ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ、Ａｌａ－Ａｓｎ及びＬｙｓ、好ましくはＶａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎから、最も好ましくはＶａｌ－Ｃｉｔ又はＶａｌ－Ａｌａから選択される、実施形態１～６のいずれか一形態に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
８． Ｚが、（Ｚ１）～（Ｚ８）及び（Ｚ１１）～（Ｚ２３）から選択される構造を有する

［構造中、
＊で標識された波形の結合は、Ｌ１を任意選択で介してＡＢに接続されており、他の波形の結合は、Ｌ２に接続されており、
（Ｚ３）、（Ｚ７）及び（Ｚ８）における官能基Ｒは、水素、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ２～Ｃ２４アシル基、Ｃ３～Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基及びＣ１～Ｃ２４スルホニル基から選択され、これらのそれぞれが、任意選択で置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３２［ここで、Ｒ３２は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキル基からなる群から独立的に選択される］から選択される１個又は複数のヘテロ原子で任意選択で中断されていてもよく、
Ｒ２４は、Ｈ又はＣ１～１２アルキル、好ましくはＨ又はＣ１～６アルキルであり、
Ｒ２９は、Ｃ１～１２アルキル、好ましくはＣ１～４アルキル、最も好ましくはエチルである］、
実施形態１～７のいずれか一形態に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
９． 構造（１ａ）を有する

［構造中、
ＡＢ、Ｌ１、ｗ、Ｚ、Ａ、Ｒ２１及びｘは、実施形態１に記載の通りであり、
Ｒ１７は、ＣＨ３又はＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
ｍは、１～１０の範囲の整数であり、
ｑは、０～１０の範囲の整数であり、
ｐは、０又は１である］、
実施形態１～８のいずれか一形態に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
１０． ｗ＝０であり、コンジュゲーション部位が、システイン残基であり、好ましくはシステイン残基が、任意選択でジスルフィド結合の還元後に、抗体中に天然に存在するか、或いはシステイン残基が、エンジニアリングされ、好ましくはアミノ酸のシステインによる置換、システイン挿入或いは単一システイン残基又はＮ末端若しくはＣ末端にシステイン残基を含むペプチドフラグメントの導入によってエンジニアリングされている、実施形態１～９のいずれか一形態に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
１１． 構造（１ｂ）を有する

［構造中、
Ｚ、Ｌ２、Ｒ１７、Ａ、Ｒ２１、ｎ及びｘは、実施形態１に記載の通りであり、
ｅは、０～２０の範囲の整数であり、
Ｓｕは単糖であり、
Ｇは単糖部分であり、
ＧｌｃＮＡｃは、Ｎ－アセチルグルコサミン部分であり、
Ｆｕｃは、フコース部分であり、
ｄは、０又は１である］、
実施形態１～９のいずれか一形態に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
１２． 抗体ＡＢが、ＨＥＲ２を標的にする、実施形態１～１１のいずれか一形態に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
１３． 実施形態１～１２のいずれか一形態に記載の抗体－薬物コンジュゲートの合成方法であって、
（ｉ） 構造ＡＢ－（（Ｌ１）ｗ－Ｆ）ｘの修飾抗体［構造中、
ＡＢは抗体であり、
Ｌ１はリンカーであり、
ｗは、０又は１であり、
Ｆは、無金属クリック反応においてＱと反応することができるクリックプローブ、又はチオール若しくはその前駆体であり、
ｘは、１～８の範囲の整数である］を
（ｉｉ） 構造（５）で表されるリンカー－薬物構築物
Figure 2023541637000009
［構造中、
Ｌ２はリンカーであり、
Ｑは、無金属クリック反応を行うことができるクリックプローブ又はチオール反応性プローブであり、
Ｒ１７はそれぞれ個別にアミノ酸側鎖であり、
ｎは、１～５の範囲の整数であり、
Ａは、５員又は６員の芳香族又はヘテロ芳香族環であり、
ｘは、１～８の範囲の整数であり、
Ｒ２１は、Ｈ、Ｒ２２、Ｃ（Ｏ）ＯＨ及びＣ（Ｏ）Ｒ２２から選択され、Ｒ２２は、Ｃ１～Ｃ２４（ヘテロ）アルキル基、Ｃ３～Ｃ１０（ヘテロ）シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ１０（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ１０アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３～Ｃ１０（ヘテロ）アリールアルキル基であり、それらは、任意選択で置換されており、Ｏ、Ｓ及びＮＲ２３から選択される１個又は複数のヘテロ原子で任意選択で中断されており、Ｒ２３は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキル基からなる群から独立的に選択される］と
反応させて、ＱとＦの間の無金属クリック反応又はＱとＦの間のチオールライゲーションによって形成された接続基Ｚを介して薬物が抗体に共有結合している抗体－薬物コンジュゲートを形成するステップを含む方法。
１４． クリックプローブＱが、環式アルキン部分若しくは環式アルケン部分を含み、又はチオール反応性プローブＱが、マレイミド部分を含む、実施形態１３に記載の方法。
１５． クリックプローブＱが、（Ｑ２２）～（Ｑ３６）からなる群から選択されるか
Figure 2023541637000010
［構造中、Ｂ（－）はアニオンである］、
又は（ヘテロ）シクロアルキニル部分Ｑが、構造（Ｑ３７）に一致し、
Figure 2023541637000011
［構造中、
Ｒ１５は、水素、ハロゲン、－ＯＲ１６、－ＮＯ２、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１６、－Ｓ（Ｏ）３ （－）、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換されており、２個の置換基Ｒ１５は連結されて、任意選択で置換されている縮合環化シクロアルキル又は任意選択で置換されている縮合環化（ヘテロ）アレーン置換基を形成することがあり、Ｒ１６は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、
Ｙ２は、Ｃ（Ｒ３１）２、Ｏ、Ｓ又はＮＲ３１であり、Ｒ３１はそれぞれ個別に、Ｒ１５又はスペーサー部分を介して接続されているエクサテカンペイロードの第２の出現であり、
ｕは、０、１、２、３、４又は５であり、
ｕ’は、０、１、２、３、４又は５であり、ｕ＋ｕ’＝４、５、６、７又は８であり、
ｖ＝８～１６の範囲の整数である］、
好ましくはシクロオクチニル部分Ｑが、構造（Ｑ３８）で表されるか
Figure 2023541637000012
［構造中、
Ｒ１５は、水素、ハロゲン、－ＯＲ１６、－ＮＯ２、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１６、－Ｓ（Ｏ）３ （－）、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ５～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換されており、２個の置換基Ｒ１５は連結されて、任意選択で置換されている縮合環化シクロアルキル又は任意選択で置換されている縮合環化（ヘテロ）アレーン置換基を形成することがあり、Ｒ１６は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、
Ｒ１８は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、
Ｒ１９は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、アルキル基は、Ｏ、Ｎ及びＳからなる群から選択される１個若しくは複数（one of more）のヘテロ原子で任意選択で中断されており、アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、独立的に任意選択で置換されており、又はＲ１９は、スペーサー部分を介して接続されているエクサテカンペイロードの第２の出現であり、
ｌは、０～１０の範囲の整数である］、
又は（ヘテロ）シクロオクチニル部分Ｑが、構造（Ｑ３９）で表されるか
Figure 2023541637000013
［構造中、
Ｒ１５は、水素、ハロゲン、－ＯＲ１６、－ＮＯ２、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１６、－Ｓ（Ｏ）３ （－）、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ５～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換されており、２個の置換基Ｒ１５は連結されて、任意選択で置換されている縮合環化シクロアルキル又は任意選択で置換されている縮合環化（ヘテロ）アレーン置換基を形成することがあり、Ｒ１６は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、
Ｙは、Ｎ又はＣＲ１５である］、
又はヘテロシクロヘプチニル部分Ｑが、構造（Ｑ３６ａ）で表される、
Figure 2023541637000014
実施形態１４に記載の方法。
１７． クリックプローブＱが、任意選択で置換されている（ヘテロ）シクロプロペニル基、（ヘテロ）シクロブテニル基、トランス－（ヘテロ）シクロヘプテニル基、トランス－（ヘテロ）シクロオクテニル基、トランス－（ヘテロ）シクロノネニル基又はトランス－（ヘテロ）シクロデシニル基からなる群から選択され、好ましくはクリックプローブＱが、（Ｑ４０）～（Ｑ５０）からなる群から選択され、
Figure 2023541637000015
（Ｑ４４）及び（Ｑ４５）においてＳｉのＲ基（複数可）が、アルキル又はアリールである、実施形態１４に記載の方法。
１８． チオール反応性プローブＱが、（Ｑ５１）～（Ｑ６５）からなる群から選択され
Figure 2023541637000016
［構造中、
Ｘ６は、Ｈ、ハロゲン、ＰｈＳ、ＭｅＳであり、
Ｘ７は、ハロゲン、ＰｈＳ、ＭｅＳであり、
Ｒ２４は、Ｈ又はＣ１～１２アルキル、好ましくはＨ又はＣ１～６アルキルであり、
Ｒ２５は、Ｈ、Ｃ１～１２アルキル、Ｃ１～１２アリール、Ｃ１～１２アルカリール又はＣ１～１２アラルキル、好ましくはＨ又はパラ－メチルフェニルであり、
（Ｑ５５）及び（Ｑ５７）の芳香族環が、任意選択でフェニル又はピリジン環などヘテロ芳香族環とすることができる］、
実施形態１３又は１４に記載の方法。
１９． クリックプローブＦが、アジド、テトラジン、トリアジン、ニトロン、ニトリルオキシド、ニトリルイミン、ジアゾ化合物、オルト－キノン、ジオキソチオフェン及びシドノンからなる群から選択され、好ましくはクリックプローブＦが、アジド部分である、実施形態１３～１８のいずれか一形態に記載の方法。
２０． クリック反応が、１，３双極付加環化又は（４＋２）環化付加である、実施形態１３～１９のいずれか一形態に記載の方法。
２１． Ｆが、チオールである、実施形態１３～１８のいずれか一形態に記載の方法。
２２． チオールライゲーションが、求核性反応、好ましくはマイケル付加又は求核置換である、実施形態１３～１８又は２１のいずれか一形態に記載の方法。
２３． ｗ＝０であり、コンジュゲーション部位が、システイン残基であり、好ましくはシステイン残基が、任意選択でジスルフィド結合の還元後に、抗体中に天然に存在するか、或いはシステイン残基が、エンジニアリングされ、好ましくはアミノ酸のシステインによる置換、システイン挿入又は単一システイン残基又はＮ末端若しくはＣ末端にシステイン残基を含むペプチドフラグメントの導入によってエンジニアリングされている、実施形態１３～１８又は２１若しくは２２のいずれか一形態に記載の方法。
２４． ｗ＝１であり、ＡＢ－（（Ｌ１）ｗ－Ｆ）ｘが、構造（６）で表される
Figure 2023541637000017
［構造中、
ｅは、０～１０の範囲の整数であり、
Ｓｕは単糖であり、
Ｇは単糖部分であり、
ＧｌｃＮＡｃは、Ｎ－アセチルグルコサミン部分であり、
Ｆｕｃは、フコース部分であり、
ｄは、０又は１である］、
実施形態１３～２３のいずれか一形態に記載の方法。
２５． 構造（５）で表されるリンカー－薬物構築物
Figure 2023541637000018
［構造中、
Ｌ２はリンカーであり、
Ｑは、無金属クリック反応を行うことができるクリックプローブ又はチオール反応性プローブであり、
Ｒ１７はそれぞれ個別にアミノ酸側鎖であり、
ｎは、１～５の範囲の整数であり、
Ａは、５員又は６員の芳香族又はヘテロ芳香族環であり、
ｘは、１～８の範囲の整数であり、
Ｒ２１は、Ｈ、Ｒ２２、Ｃ（Ｏ）ＯＨ及びＣ（Ｏ）Ｒ２２から選択され、Ｒ２２は、Ｃ１～Ｃ２４（ヘテロ）アルキル基、Ｃ３～Ｃ１０（ヘテロ）シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ１０（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ１０アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３～Ｃ１０（ヘテロ）アリールアルキル基であり、それらは、任意選択で置換されており、Ｏ、Ｓ及びＮＲ２３から選択される１個又は複数のヘテロ原子で任意選択で中断されており、Ｒ２３は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキル基からなる群から独立的に選択される］。
２６． クリックプローブＱが、環式アルキン部分若しくは環式アルケン部分を含み、又はチオール反応性プローブＱが、マレイミド部分を含む、実施形態２５に記載のリンカー－薬物構築物。
２７． クリックプローブＱが、（Ｑ２２）～（Ｑ３６）からなる群から選択されるか

［構造中、Ｂ（－）はアニオンである］、
又は（ヘテロ）シクロアルキニル部分Ｑが、構造（Ｑ３７）に一致し
Figure 2023541637000020
［構造中、
Ｒ１５は、水素、ハロゲン、－ＯＲ１６、－ＮＯ２、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１６、－Ｓ（Ｏ）３ （－）、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換されており、２個の置換基Ｒ１５は連結されて、任意選択で置換されている縮合環化シクロアルキル又は任意選択で置換されている縮合環化（ヘテロ）アレーン置換基を形成することがあり、Ｒ１６は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、
Ｙ２は、Ｃ（Ｒ３１）２、Ｏ、Ｓ又はＮＲ３１であり、Ｒ３１はそれぞれ個別に、Ｒ１５又はスペーサー部分を介して接続されているエクサテカンペイロードの第２の出現であり、
ｕは、０、１、２、３、４又は５であり、
ｕ’は、０、１、２、３、４又は５であり、ｕ＋ｕ’＝４、５、６、７又は８であり、
ｖ＝８～１６の範囲の整数である］、
好ましくはシクロオクチニル部分Ｑが、構造（Ｑ３８）で表されるか
Figure 2023541637000021
［構造中、
Ｒ１５は、水素、ハロゲン、－ＯＲ１６、－ＮＯ２、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１６、－Ｓ（Ｏ）３ （－）、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ５～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換されており、２個の置換基Ｒ１５は連結されて、任意選択で置換されている縮合環化シクロアルキル又は任意選択で置換されている縮合環化（ヘテロ）アレーン置換基を形成することがあり、Ｒ１６は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、
Ｒ１８は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、
Ｒ１９は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、アルキル基は、Ｏ、Ｎ及びＳからなる群から選択される１個若しくは複数（one of more）のヘテロ原子で任意選択で中断されており、アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、独立的に任意選択で置換されており、又はＲ１９は、スペーサー部分を介して接続されているエクサテカンペイロードの第２の出現であり、
ｌは、０～１０の範囲の整数である］、
又は（ヘテロ）シクロオクチニル部分Ｑが、構造（Ｑ３９）で表されるか
Figure 2023541637000022
［構造中、
Ｒ１５は、水素、ハロゲン、－ＯＲ１６、－ＮＯ２、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１６、－Ｓ（Ｏ）３ （－）、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ５～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換されており、２個の置換基Ｒ１５は連結されて、任意選択で置換されている縮合環化シクロアルキル又は任意選択で置換されている縮合環化（ヘテロ）アレーン置換基を形成することがあり、Ｒ１６は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、
Ｙは、Ｎ又はＣＲ１５である］、
又はヘテロシクロヘプチニル部分Ｑが、構造（Ｑ３６ａ）で表される、
Figure 2023541637000023
実施形態２５に記載のリンカー－薬物構築物。
２８． クリックプローブＱが、任意選択で置換されている（ヘテロ）シクロプロペニル基、（ヘテロ）シクロブテニル基、トランス－（ヘテロ）シクロヘプテニル基、トランス－（ヘテロ）シクロオクテニル基、トランス－（ヘテロ）シクロノネニル基又はトランス－（ヘテロ）シクロデシニル基からなる群から選択され、好ましくはクリックプローブＱが、（Ｑ４０）～（Ｑ５０）からなる群から選択され、
Figure 2023541637000024
（Ｑ４４）及び（Ｑ４５）においてＳｉのＲ基（複数可）が、アルキル又はアリールである、
実施形態２６に記載のリンカー－薬物構築物。
２９． チオール反応性プローブＱが、（Ｑ５１）～（Ｑ６５）からなる群から選択される
Figure 2023541637000025
［構造中、
Ｘ６は、Ｈ、ハロゲン、ＰｈＳ、ＭｅＳであり、
Ｘ７は、ハロゲン、ＰｈＳ、ＭｅＳであり、
Ｒ２４は、Ｈ又はＣ１～１２アルキル、好ましくはＨ又はＣ１～６アルキルであり、
Ｒ２５は、Ｈ、Ｃ１～１２アルキル、Ｃ１～１２アリール、Ｃ１～１２アルカリール又はＣ１～１２アラルキル、好ましくはＨ又はパラ－メチルフェニルであり、
Ｒ２９は、Ｃ１～１２アルキル、好ましくはＣ１～４アルキル、最も好ましくはエチルであり、
（Ｑ５５）及び（Ｑ５７）の芳香族環は、任意選択でフェニル又はピリジン環などヘテロ芳香族環とすることができる］、
実施形態２５又は２６に記載のリンカー－薬物構築物。
３０． 実施形態１～１２のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲートと薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
３１． 治療を必要とする対象の治療における使用のための、実施形態１～１２のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
３２． がんの処置における使用のための、実施形態１～１２のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
３３． がんが、ＨＥＲ２陽性がん、好ましくは乳がん、胃がん、結腸がん、肺がん、膵がん、尿路上皮がん、脳がん又は卵巣がんである、実施形態３２に記載の使用のための抗体－薬物コンジュゲート。
抗体－薬物コンジュゲート
[0074]本発明に係る抗体－薬物コンジュゲートは、構造（１）を有する
Figure 2023541637000026
［構造中、
ＡＢは抗体であり、
Ｌ１及びＬ２はリンカーであり、
ｗは、０又は１であり、
Ｚは、無金属クリック反応又はチオールライゲーションによって得られた接続基であり、
Ｒ１７はそれぞれ個別にアミノ酸側鎖であり、
ｎは、１～５の範囲の整数であり、
Ａは、６員の芳香族環又はヘテロ芳香族環であり、
ｘは、１～８の範囲の整数であり、
Ｒ２１は、Ｈ、Ｒ２２、Ｃ（Ｏ）ＯＨ及びＣ（Ｏ）Ｒ２２から選択され、Ｒ２２は、Ｃ１～Ｃ２４（ヘテロ）アルキル基、Ｃ３～Ｃ１０（ヘテロ）シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ１０（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ１０アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３～Ｃ１０（ヘテロ）アリールアルキル基であり、それらは、任意選択で置換されており、Ｏ、Ｓ及びＮＲ２３から選択される１個又は複数のヘテロ原子で任意選択で中断されており、Ｒ２３は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキル基からなる群から独立的に選択される］。
[0075]本発明に係るコンジュゲートは、ペプチドスペーサー及びパラ－アミノベンシルオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）部分又はその誘導体を含む自己破壊性基又は切断可能なリンカーを含む。
[0076]ペプチドスペーサーは、（ＮＨ－ＣＲ１７－ＣＯ）ｎによって定義され、ここで、Ｒ１７は、当技術分野において公知のアミノ酸側鎖を表す。本明細書では、アミノ酸は、天然アミノ酸でも、合成アミノ酸でもよい。好ましくは、アミノ酸（複数可）はすべて、そのＬ型配置である。ｎは、１～５の範囲の整数、好ましくは２～５の範囲である。したがって、ペプチドスペーサーは、１～５個のアミノ酸を含む。好ましくは、ペプチドは、ジペプチド（ｎ＝２）又はトリペプチド（ｎ＝３）であり、最も好ましくはペプチドスペーサーはジペプチドである。いずれのペプチドスペーサーも使用することができるが、好ましくはペプチドスペーサーは、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ａｒｇ、ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ－Ｃｉｔ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ、Ａｌａ－Ａｓｎ及びＬｙｓ、より好ましくはＶａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ、より好ましくはＶａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ、最も好ましくはＶａｌ－Ｃｉｔ又はＶａｌ－Ａｌａから選択される。一実施形態において、ペプチドスペーサーは、Ｖａｌ－Ｃｉｔである。一実施形態において、ペプチドスペーサーは、Ｖａｌ－Ａｌａである。
[0077]Ｒ１７は、アミノ酸側鎖を表し、好ましくはアラニン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リシン、アセチルリシン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、ピロリシン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、トレオニン、セレノシステイン、バリン、トリプトファン、チロシン及びシトルリンの側鎖から選択される。好ましいアミノ酸側鎖は、Ｖａｌ、Ｃｉｔ、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、ＡｃＬｙｓ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｒｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ及びＡｓｎの側鎖であり、より好ましくはＶａｌ、Ｃｉｔ、Ａｌａ、ＧＬｕ及びＬｙｓの側鎖に由来する。言葉を換えれば、Ｒ１７は、好ましくはＣＨ３（Ａｌａ）、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２（Ｌｅｕ）、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２（Ｃｉｔ）、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２（Ｌｙｓ）、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３（ＡｃＬｙｓ）、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２（Ａｒｇ）、ＣＨ２Ｐｈ（Ｐｈｅ）、ＣＨ（ＣＨ３）２（Ｖａｌ）、ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３（Ｉｌｅ）、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２（Ａｓｎ）、ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＨ（Ｇｌｕ）、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＨ（Ａｓｐ）及びＣＨ２（１Ｈ－インドール－３－イル）（Ｔｒｐ）から選択される。Ｒ１７の特に好ましい実施形態は、ＣＨ３（Ａｌａ）、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２（Ｃｉｔ）、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２（Ｌｙｓ）、ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＨ（Ｇｌｕ）及びＣＨ（ＣＨ３）２（Ｖａｌ）である。最も好ましくは、Ｒ１７は、ＣＨ３（Ａｌａ）、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２（Ｃｉｔ）、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２（Ｌｙｓ）、又はＣＨ（ＣＨ３）２（Ｖａｌ）である。
[0078]特に好ましい実施形態において、ペプチドスペーサーは、一般構造（Ｌ３）によって表すことができる。
Figure 2023541637000027
[0079]本明細書では、Ｒ１７は以上に記載の通りであり、好ましくはＲ１７は、ＣＨ３（Ｖａｌ）又はＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２（Ｃｉｔ）である。
[0080]パラ－アミノベンシルオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）誘導体は、一般構造（Ｌ４）によって表すことができる。
Figure 2023541637000028
[0081]Ａは、５員又は６員芳香族又はヘテロ芳香族環、好ましくは６員の芳香族又はヘテロ芳香族環である。好適な５員環は、オキサゾール、チアゾール及びフランである。好適な６員環は、フェニル及びピリジルである。好ましい実施形態において、Ａは、１，４－フェニル、２，５－ピリジル又は３，６－ピリジルである。最も好ましくは、Ａは、１，４－フェニルである。
[0082]Ｒ２１は、Ｈ、Ｒ２２、Ｃ（Ｏ）ＯＨ及びＣ（Ｏ）Ｒ２２から選択され、Ｒ２２は、Ｃ１～Ｃ２４（ヘテロ）アルキル基、Ｃ３～Ｃ１０（ヘテロ）シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ１０（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ１０アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３～Ｃ１０（ヘテロ）アリールアルキル基であり、それらは、任意選択で置換されており、Ｏ、Ｓ及びＮＲ２３から選択される１個又は複数のヘテロ原子で任意選択で中断されており、Ｒ２３は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキル基からなる群から独立的に選択される。好ましくは、Ｒ２２は、Ｃ３～Ｃ１０（ヘテロ）シクロアルキル又はポリアルキレングリコールである。ポリアルキレングリコールは、好ましくはポリエチレングリコール又はポリプロピレングリコール、より好ましくは－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓＨ又は－（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓＨである。ポリアルキレングリコールは、最も好ましくはポリエチレングリコール、好ましくは－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓＨであり、ｓは、１～１０、好ましくは１～５の範囲の整数であり、最も好ましくはｓ＝１、２、３又は４である。より好ましくは、Ｒ２１は、Ｈ又はＣ（Ｏ）Ｒ２２であり、Ｒ２２＝４－メチル－ピペラジン又はモルホリンである。最も好ましくは、Ｒ２１はＨである。
リンカー（Ｌ１、Ｌ２及びＬ５）
[0083]リンキングユニットとも呼ばれるリンカーは、当技術分野において周知であり、いずれの好適なリンカーも使用することができる。本発明の文脈において、エクサテカンペイロードは、リンカーＬ２を介して無金属クリック反応又はチオールライゲーションによって得られた接続基Ｚに化学的に接続され、接続基Ｚは、リンカーＬ１を介して抗体に化学的に接続される。接続基Ｚは、リンカーＬ５を介して（Ｏ）ａに化学的に接続される。リンカー、特にリンカーＬ２は、複数のペイロードが単一の接続基に付着するための１個又は複数の分枝点を含むことができる。リンカーＬ１は、存在しても（ｗ＝１）、存在しなくても（ｗ＝０）よい。リンカーＬ１が存在する場合、Ｆは、抗体に直接付着する。好ましくは、コンジュゲーションの場合ｗ＝０は、チオールライゲーションを介している。好ましくは、コンジュゲーションの場合ｗ＝１は、クリック反応を介している。リンカーＬ５は、存在しても（ｒ＝１）、存在しなくても（ｒ＝０）よい。
[0084]リンカーは、例えば直鎖状又は分枝状Ｃ１～Ｃ２００アルキレン基、Ｃ２～Ｃ２００アルケニレン基、Ｃ２～Ｃ２００アルキニレン基、Ｃ３～Ｃ２００シクロアルキレン基、Ｃ５～Ｃ２００シクロアルケニレン基、Ｃ８～Ｃ２００シクロアルキニレン基、Ｃ７～Ｃ２００アルキルアリーレーン基、Ｃ７～Ｃ２００アリールアルキレン基、Ｃ８～Ｃ２００アリールアルケニレン基、Ｃ９～Ｃ２００アリールアルキニレン基からなる群から選択することができる。任意選択でアルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレーン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基は置換されていてもよく、任意選択で前記基は、１個又は複数のヘテロ原子、好ましくは１～１００個のヘテロ原子で中断されていてもよく、前記ヘテロ原子は、好ましくはＯ、Ｓ（Ｏ）ｙ及びＮＲ１２からなる群から選択され、ｙは、０、１又は２であり、好ましくはｙ＝２であり、Ｒ１２は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択される。リンカーは、（ポリ）エチレングリコールジアミン（例えば、１，８－ジアミノ－３，６－ジオキサオクタン又はより長いエチレングリコール鎖を含む等価物）、（ポリ）エチレングリコール又は（ポリ）エチレンオキシド鎖、（ポリ）プロピレングリコール又は（ポリ）プロピレンオキシド鎖及び１，ｚ－ジアミノアルカンを含むことができ、ｚは、アルカンにおける炭素原子の数であり、例えば２～２５の範囲とすることができる。
[0085]好ましい実施形態において、リンカーＬ２（特にＳｐ１が存在する場合それ）は、極性基を含む。そのような極性基は、－（Ｏ）ａ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－Ｓ（Ｏ）２－ＮＲ１３－（以下にさらに定義される）、－Ｃ（Ｓ（Ｏ）３ （－））－、－Ｃ（Ｃ（Ｏ）２ （－））－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｐ（Ｏ）２ （－）－、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｔ－、－ＮＲ３０（ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ３０）ｔ－、及び以下の２つの構造から選択することができる。
Figure 2023541637000029
極性基は、アミノ酸、好ましくはＡｒｇ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｓｅｒ及びＴｈｒから選択されるアミノ酸を含むこともできる。本明細書では、ａ及びＲ１３は、以下に構造（３）でさらに定義される。ｔは、０～１５、好ましくは１～１０、より好ましくは２～５の範囲の整数であり、最も好ましくはｔ＝２又は４である。Ｒ３０はそれぞれ個別にＨ、Ｃ１～１２アルキル、Ｃ１～１２アリール、Ｃ１～１２アルカリール又はＣ１～１２アラルキルである。リンカーＬ２は、少なくとも２個の極性基など１個より多いそのような極性基を含むことができる。極性基は、他で定義された分枝部分から分枝するリンカーＬ２（特にＳｐ１が存在する場合それ）の分枝中に存在することもできる。好ましくは、窒素又は炭素原子は、分枝部分として使用される。分枝中に存在する－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｔ－極性基を有することが特に好ましい。
[0086]好ましい実施形態において、リンカーＬ２は、スルファミド基、好ましくは構造（３）で表されるスルファミド基を含む。
Figure 2023541637000030
[0087]波線は、コンジュゲートの残部、典型的にＺ及び（ＮＨ－ＣＲ１７－ＣＯ）ｎへの、スペーサーを任意選択で介した接続を表す。好ましくは、（Ｏ）ａＣ（Ｏ）部分はＺに接続され、ＮＲ１３部分は（ＮＨ－ＣＲ１７－ＣＯ）ｎに接続される。リンカーＬ２がスペーサー部分Ｓｐ１を含む場合、構造（３）で表されるスルファミド基がスペーサー部分Ｓｐ１に含まれることが好ましい。
[0088]構造（３）では、ａ＝０又は１、好ましくはａ＝１であり、Ｒ１３は、水素、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ３～Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ３～Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換されており、Ｏ、Ｓ及びＮＲ１４［ここで、Ｒ１４は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキル基からなる群から独立的に選択される］から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子で任意選択で中断されているか、又はＲ１３は、スペーサー部分を介してＮに接続されているエクサテカンペイロードの第２の出現である（すなわち、窒素原子が分枝部分でありうる）。
[0089]好ましい実施形態において、Ｒ１３は、水素、Ｃ１～Ｃ２０アルキル基であるか、又はＲ１３は、スペーサー部分を介してＮに接続されているエクサテカンペイロードの第２の出現である。より好ましくは、Ｒ１３は、水素、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、又はスペーサー部分を介してＮに接続されているエクサテカンペイロードの第２の出現である。本明細書では、アルキル基は、任意選択で置換されており、Ｏ、Ｓ及びＮＲ１４［ここで、Ｒ１４は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキル基からなる群から独立的に選択される］から選択される１個又は複数のヘテロ原子、好ましくはＯによって任意選択で中断されている。好ましい実施形態において、Ｒ１３は水素である。別の好ましい実施形態において、Ｒ１３は、Ｃ１～Ｃ２０アルキル基、より好ましくはＣ１～Ｃ１６アルキル基、さらにより好ましくはＣ１～Ｃ１０アルキル基であり、アルキル基は、１個又は複数のＯ原子で任意選択で中断されており、アルキル基は、－ＯＨ基、好ましくは末端－ＯＨ基で任意選択で置換されている。この実施形態において、Ｒ１３は、末端－ＯＨ基を含む（ポリ）エチレングリコール鎖であることがさらに好ましい。別の好ましい実施形態において、Ｒ１３は、スペーサー部分を介してＮに接続されているエクサテカンペイロードの第２の出現である。別の好ましい実施形態において、Ｒ１３は、水素、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉ－プロピル、ｎ－ブチル、ｓ－ブチル及びｔ－ブチルからなる群から、より好ましくは水素、メチル、エチル、ｎ－プロピル及びｉ－プロピルからなる群から、さらにより好ましくは水素、メチル及びエチルからなる群から選択される。さらにより好ましくは、Ｒ１３は、水素、又はスペーサー部分を介してＮに接続されているエクサテカンペイロードの第２の出現であり、最も好ましくはＲ１３は水素である。
[0090]本発明に係る抗体－薬物コンジュゲートは、式（３）の基を２個含むことがあり、好ましくは両方ともＬ２、より好ましくは両方ともＳｐ１に含まれている。典型的に、本明細書に定義されるリンカーなど、出現する両方の式（３）の基を接続するスペーサーが存在する。好ましくは、これは、（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍと定義されるＰＥＧスペーサーであり、ここで、ｍは、１～１０の範囲、好ましくは２～６の範囲の整数であり、最も好ましくはｍは、２又は４である。
[0091]一実施形態において、リンカーＬ２、好ましくはスペーサーＳｐ１は、構造（Ｌ３）を含む。
(O)aC(O)NHS(O)2NH－(CH2CH2O)m－C(O)－(NHS(O)2)pN*
(L3)
[0092]本明細書では、ａ及びｍは以上に記載の通りであり、ｐは、０又は１である。Ｎ＊は、ペプチドスペーサーの窒素原子、又は分枝部分を表すことができる。
分枝部分
[0093]好ましい実施形態において、本発明に係るコンジュゲートのリンカーは、分枝部分を含む。本発明の文脈において「分枝部分」は、３つの部分を接続するリンカーに埋め込まれた部分を指す。言い換えれば、分枝部分は、他の部分への結合を少なくとも３つ含み、典型的に１つはＺに接続する抗体ＡＢへの結合、１つはエクサテカンペイロードへの結合、及び１つは第２のエクサテカンペイロードへの結合である。分枝部分は、好ましくはリンカーＬ２に埋め込まれている。他の部分への結合を少なくとも３つ含むいずれの部分も、本発明の文脈における分枝部分として適している。好ましい実施形態において、分枝部分ＢＭは、炭素原子、窒素原子、リン原子、（ヘテロ）芳香族環、（ヘテロ）環又は多環式部分から選択される。最も好ましくは、分枝部分は窒素原子である。
[0094]したがって、リンカーＬ２は、２個のエクサテカンペイロードが単一部分Ｚに接続されるように、分枝部分を好ましくは窒素原子を介して含むことが好ましい。特に好ましい実施形態において、Ｌ２は、構造（２）を有する。
Figure 2023541637000031
[0095]本明細書では、＊で標識された波形の結合は、Ｚに接続されており、＊＊で標識された波形の結合は、ＮＨに接続されている。Ｓｐ１及びＳｐ２はそれぞれ個別にスペーサー部分である。可変要素ｎ、Ａ、Ｒ１７及びＲ２１は、他で定義されており、この実施形態に同様に適用される。分枝窒素原子に接続されている２個のリンカー－エクサテカン部分は、同じでも異なってもよい。好ましくは、それらは同じであり、すなわち出現する各Ｓｐ２は同じであり、出現する各（ＮＨ－ＣＲ１７－ＣＯ）ｎは同じであり、出現する各Ａは同じであり、出現する各Ｒ２１は同じである。
接続基Ｚ
[0096]Ｚは接続基である。用語「接続基」は、コンジュゲートのある部分と同じバイオコンジュゲートの別の部分を接続する構造要素を指す。（１）では、Ｚは、リンカーを介して抗体ＡＢをエクサテカンペイロードと接続する。接続基Ｚは、無金属クリック反応又はチオールライゲーションによって得られうる部分である。当業者が理解するように、Ｚの正確な性質は、Ｆ及びＱの性質に依存する。Ｑ及びＦについて好ましい実施形態は、以下にさらに定義される。
[0097]第１の好ましい実施形態において、接続基Ｚは、無金属クリック反応によって得られうる。本明細書では、接続基Ｚは、好ましくはトリアゾール部分、イソオキサゾール部分、ジヒドロイソオキサゾール部分、ビシクロ［２．２．２］オクタ－５，７－ジエン－２，３－ジオン部分、ビシクロ［２．２．２］オクタ－５－エン－２，３－ジオン部分、７－チアビシクロ［２．２．１］ヘプタ－２，５－ジエン－７，７－ジオキシド部分、７－チアビシクロ［２．２．１］ヘプタ－２－エン－７，７－ジオキシド部分、ピラゾール部分、ピリジン部分、ジヒドロピリジン部分、ピリダジン部分又はジヒドロピリダジン部分を含むことができる。接続基Ｚについて好ましい構造は、ここで以下に示す部分（Ｚ１）～（Ｚ８）である。
Figure 2023541637000032
[0098]本明細書では、（Ｚ３）、（Ｚ７）及び（Ｚ８）における官能基Ｒは、水素、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ２～Ｃ２４アシル基、Ｃ３～Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基及びＣ１～Ｃ２４スルホニル基から選択することができ、これらのそれぞれ（水素を除く）が、任意選択で置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３２［ここで、Ｒ３２は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキル基からなる群から独立的に選択される］から選択される１個又は複数のヘテロ原子で任意選択で中断されていてもよい。＊で標識された波形の結合は、Ｌ１に接続されており、他の波形の結合は、Ｌ２に接続されている。当業者は、どのＲ基を接続基Ｚのそれぞれに適用することができるかを理解する。例えば、（Ｚ３）の窒素原子に接続されているＲ基は、以上に定義されたアルキル又はアリールから選択することができ、（Ｚ３）の炭素原子に接続されているＲ基は、以上に定義された水素、アルキル、アリール、アシル及びスルホニルから選択することができる。
[0099]特に好ましい実施形態において、Ｑは、環式アルキン部分を含み、Ｆはアジドであり、Ｚは、アルキン部分とアジド部分の１，３－双極付加環化によって形成されたトリアゾール部分を含む。別の特に好ましい実施形態において、Ｚは、ここで以下に定義された構造（Ｚ３６）～（Ｚ４０）［構造中、＊で標識された波形の結合は、Ｌ１に接続されており、他の波形の結合は、Ｌ２に接続されている］のいずれか１つで表される。
[0100]特に好ましい実施形態において、接続基Ｚは、構造（Ｚ３７）で表される。
Figure 2023541637000033
本明細書では、
Ｒ１５は、水素、ハロゲン、－ＯＲ１６、－ＮＯ２、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１６、－Ｓ（Ｏ）３ （－）、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換されており、２個の置換基Ｒ１５は連結されて、任意選択で置換されている縮合環化シクロアルキル又は任意選択で置換されている縮合環化（ヘテロ）アレーン置換基を形成することがあり、Ｒ１６は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、
Ｙ２は、Ｃ（Ｒ３１）２、Ｏ、Ｓ又はＮＲ３１であり、Ｒ３１はそれぞれ個別に、Ｒ１５又はスペーサー部分を介して接続されているエクサテカンペイロードの第２の出現であり、
ｕは、０、１、２、３、４又は５であり、
ｕ’は、０、１、２、３、４又は５であり、ｕ＋ｕ’＝４、５、６、７又は８であり、
ｖ＝８～１６の範囲の整数である。
[0101]好ましい実施形態において、ｕ＋ｕ’＝４、５又は６であり、より好ましくはｕ＋ｕ’＝５である。典型的に、ｖ＝（ｕ＋ｕ’）×２又は［（ｕ＋ｕ’）×２］－１である。好ましい実施形態において、ｖ＝８、９又は１０であり、より好ましくはｖ＝９又は１０であり、最も好ましくはｖ＝１０である。
[0102]特に好ましい実施形態において、接続基Ｚは、構造（Ｚ３８）で表される。
Figure 2023541637000034
本明細書では、
Ｒ１５は、水素、ハロゲン、－ＯＲ１６、－ＮＯ２、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１６、－Ｓ（Ｏ）３ （－），Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ５～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換されており、２個の置換基Ｒ１５は連結されて、任意選択で置換されている縮合環化シクロアルキル又は任意選択で置換されている縮合環化（ヘテロ）アレーン置換基を形成することがあり、Ｒ１６は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、
Ｒ１８は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、
Ｒ１９は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、アルキル基は、Ｏ、Ｎ及びＳからなる群から選択される１個若しくは複数（one of more）のヘテロ原子で任意選択で中断されており、アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、独立的に任意選択で置換されており、又はＲ１９は、スペーサー部分を介して接続されているエクサテカンペイロードの第２の出現であり、
ｌは、０～１０の範囲の整数である。
[0103]構造（Ｚ３８）で表される反応性基の好ましい実施形態において、Ｒ１５は、水素、ハロゲン、－ＯＲ１６［ここで、Ｒ１６は、水素又はＣ１～Ｃ６アルキルである］、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ５～Ｃ６（ヘテロ）アリール基からなる群から独立的に選択され、より好ましくはＲ１５は、水素及びＣ１～Ｃ６アルキルからなる群から独立的に選択され、最も好ましくはＲ１５はすべてＨである。構造（Ｚ３８）で表される反応性基の好ましい実施形態において、Ｒ１８は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基からなる群から独立的に選択され、最も好ましくはＲ１８は両方ともＨである。構造（Ｚ３８）で表される反応性基の好ましい実施形態において、Ｒ１９はＨである。構造（Ｚ３８）で表される反応性基の好ましい実施形態において、ｌは、０又は１であり、より好ましくはｌは１である。
[0104]特に好ましい実施形態において、接続基Ｚは、構造（Ｚ３９）で表される。
Figure 2023541637000035
本明細書では、
Ｒ１５は、水素、ハロゲン、－ＯＲ１６、－ＮＯ２、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１６、－Ｓ（Ｏ）３ （－）、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ５～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換されており、２個の置換基Ｒ１５は連結されて、任意選択で置換されている縮合環化シクロアルキル又は任意選択で置換されている縮合環化（ヘテロ）アレーン置換基を形成することがあり、Ｒ１６は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、
Ｙは、Ｎ又はＣＲ１５である。
[0105]構造（Ｚ３９）で表される反応性基の好ましい実施形態において、Ｒ１５は、水素、ハロゲン、－ＯＲ１６［ここで、Ｒ１６は、水素又はＣ１～Ｃ６アルキルである］、－Ｓ（Ｏ）３ （－）、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ５～Ｃ６（ヘテロ）アリール基からなる群から独立的に選択され、より好ましくはＲ１５は、水素及び－Ｓ（Ｏ）３ （－）からなる群から独立的に選択される。構造（Ｚ３９）で表される反応性基の好ましい実施形態において、Ｙは、Ｎ又はＣＨであり、より好ましくはＹ＝Ｎである。
[0106]特に好ましい実施形態において、接続基Ｚは、構造（Ｚ３６）で表される。
Figure 2023541637000036
[0107]最も好ましくは、接続基Ｚは、構造（Ｚ３８）［構造中、Ｒ１５、Ｒ１８及びＲ１９はすべてＨであり、ｌは１である］で表される。
[0108]第２の好ましい実施形態において、接続基Ｚは、チオールライゲーションによって得られうる。本明細書では、接続基Ｚは、多分Ｌ１を介した、Ｌ２への接続を１つ及びＡＢへの接続を少なくとも１つ有する。１個の接続基Ｚは、架橋チオール反応性プローブＱが使用される場合、ＡＢへの接続を２つ有することもできる（図１Ｂを参照のこと）。好ましくは、Ｌ１は存在せず（ｗ＝０）、Ｚは、ＡＢに直接接続されている。好ましい実施形態において、接続基Ｚは、スクシンイミジル環又はその開環コハク酸アミド誘導体を含む。ＡＢへの接続を１つ含む、接続基Ｚの好ましい選択肢は、ここで以下に示す（Ｚ１０）～（Ｚ２０）から選択される部分を含む。ＡＢへの接続を２つ含む、接続基Ｚの好ましい選択肢は、ここで以下に示す（Ｚ１１）～（Ｚ２３）から選択される部分を含む。
[0109]本明細書では、＊で標識された波形の結合（複数可）は、Ｌ１を任意選択で介してＡＢに接続されており、他の波形の結合は、Ｌ２に接続されている。さらに、以下のことが適用される。
Ｒ２４は、Ｈ又はＣ１～１２アルキル、好ましくはＨ又はＣ１～６アルキルであり、
Ｒ２９は、Ｃ１～１２アルキル、好ましくはＣ１～４アルキル、最も好ましくはエチルである。
コンジュゲーションの様式
[0110]本発明に係るコンジュゲートは、コンジュゲーションのいずれの様式でも調製することができる。コンジュゲーション反応は、チオールライゲーション又は無金属クリック反応である。修飾抗体ＡＢ－（（Ｌ１）ｗ－Ｆ）ｘの性質、特にＬ１、ｗ及びｘの性質は、採用されたコンジュゲーションの様式に依存する。ｘは、抗体上における（Ｌ１）ｗの付着点（コンジュゲーション部位）の数を指し、１～８の範囲の整数である。（コンジュゲートにおける）Ｚ又は（修飾抗体における）Ｆが抗体に直接付着している場合、Ｌ１は存在せず、ｗ＝０である。この実施形態において、修飾抗体は、ＡＢ－（Ｆ）ｘと呼ばれることもある。
[0111]ｘは、リンカーＬ１を任意選択で介して抗体上に存在するプローブＦの量を表し、１～８の範囲の整数である。好ましくは、ｘは、１～６の範囲の整数であり、より好ましくはｘ＝１、２、３又は４であり、さらにより好ましくはｘ＝１又は２であり、最も好ましくはｘ＝２である。典型的に、ｘは、抗体に接続されている部分Ｚの平均数を指す。好ましい実施形態において、特にコンジュゲーションがクリック反応によって行われる場合、本発明に係るコンジュゲートは、普通同じ量の、抗体に接続されている部分Ｚを有するが、コンジュゲーション反応は、時には若干不完全なことがある。注目すべきことに、リンカーＬ２はそれぞれ、リンカーＬ２ごとに１個又は２個のペイロード分子など１個より多いエクサテカンペイロードを含むことができる。
[0113]好ましい実施形態において、ｗ＝１であり、コンジュゲーションの様式には、抗体のグリカンを介した、好ましくはＮ－グリコシル化部位を介したコンジュゲーションが関わっている。好ましくは、修飾抗体は、構造－ＧｌｃＮＡｃ（Ｆｕｃ）ｄ－（Ｇ）ｅ－Ｓｕ－Ｆ［構造中、ｅは、０～２０の範囲の整数であり、Ｓｕは単糖であり、Ｇは単糖部分であり、ＧｌｃＮＡｃは、Ｎ－アセチルグルコサミン部分であり、Ｆｕｃは、フコース部分であり、ｄは、０又は１である］を有する１種又は複数のグリカンを含む。言い換えれば、Ｌ１は、好ましくは－ＧｌｃＮＡｃ（Ｆｕｃ）ｄ－（Ｇ）ｅ－Ｓｕ－［ここで、ＧｌｃＮＡｃ（Ｆｕｃ）ｄ－は、抗体のペプチド部分に付着しており、Ｓｕは、Ｚ又はＦに付着している］によって表される。本明細書では、ＧｌｃＮＡｃは、典型的に抗体のグリカン構造中に存在するコアＮ－アセチルグルコサミン部分である。本明細書では、コアＮ－アセチルグルコサミン部分は、抗体のペプチド鎖に直接付着しているＮ－アセチルグルコサミン部分を指す。このコアＮ－アセチルグルコサミン部分は、任意選択でフコシル化されており（ｄは、０又は１である）、それは、抗体のよく見られる特徴である。
[0114]（Ｇ）ｅは、抗体のグリコフォームを表す。本発明は、いずれのグリコフォームの抗体にも適用されうる。グリカン中に存在し、それらのうちからＧが選択されうる典型的な単糖としては、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、Ｎ－アセチルグルコサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、Ｎ－アセチルノイラミン酸及びキシロースが挙げられる。したがって、（Ｇ）ｅは、ｅ単糖部分を含む直鎖状又は分枝状オリゴ糖とすることができる。典型的なグリカンは、４～１６、好ましくは６～１０の範囲のｅを有する。好ましい実施形態において、抗体は刈り込まれ、ｅ＝０である。そのような刈り込みは、ＥｎｄｏＳなどのエンドグリコシダーゼ酵素によって行うことができる。グリカンを介したコンジュゲーションは、好ましくはＮ－グリコシル化部位、より好ましくは抗体のアスパラギンアミノ酸、最も好ましくは抗体のアミノ酸Ｎ２９７における保存グリコシル化部位に接続されているＮ－グリコシル化部位を採用する。
[0115]Ｓｕは、Ｆを含む単糖である。Ｓｕは、好ましくはガラクトース（Ｇａｌ）、マンノース（Ｍａｎ）、グルコース（Ｇｌｃ）、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、Ｎ－アセチルノイラミン酸又はシアル酸（Ｓｉａｌ）及びフコース（Ｆｕｃ）からなる群から選択される。Ｓｕは、好ましくはグルコース又はガラクトース誘導体、より好ましくはガラクトース誘導体、最も好ましくはＮ－アセチルガラクトサミンである。
[0116]代替の好ましい実施形態において、ｗ＝０であり、抗体におけるコンジュゲーション部位は、システイン残基であり、好ましくはシステイン残基は、当技術分野において公知のように、任意選択でジスルフィド結合の還元後に、抗体中に天然に存在するか、或いはシステイン残基は、エンジニアリングされ、好ましくはアミノ酸のシステインによる置換、システイン挿入又は単一システイン残基又はＮ末端若しくはＣ末端にシステイン残基を含むペプチドフラグメントの導入によってエンジニアリングされている。
[0117]ＡＢは、抗体を表す。当業者は、本発明がいずれの抗体にも適用されうることを理解する。好ましくは、抗体はＨＥＲ２を標的にする。
好ましいコンジュゲート
[0118]本発明に係る好ましいコンジュゲートは、構造（１ｆ）を有する。
Figure 2023541637000038
[0119]本明細書では、Ｌ２の正確な性質がさらに明記され、分枝部分Ｎを含む。ＡＢ、Ｌ１、Ｚ、Ａ、ａ、Ｒ１３、Ｒ２１、ｘ、ｎ、Ｒ１７、ｍ及びｐは、本明細書において他で定義され、Ｌ５はリンカーであり、ｒは、０又は１であり、ｑは、０～１０の範囲の整数である。好ましくは、リンカーＬ５は存在しないか、又はＣＨ２である。好ましくは、ｍは、１～１０の範囲の整数であり、ｑは、１～４の範囲の整数であり、ｐは１である。好ましくは、ｎは、１、２又は３である。さらにより好ましくは、
ＡＢは抗体であり、
Ｌ１はリンカーであり、
Ｚは、構造（Ｚ３８）で表される接続基であり、好ましくは構造中、Ｒ１５、Ｒ１８及びＲ１９はすべてＨであり、ｌは１であり、
ａ＝１であり、
Ｒ１３は水素であり、
ｒ＝０であり、Ｌ５は存在せず、
（ＮＨ－ＣＨ（Ｒ１７）－Ｃ（Ｏ））ｎはそれぞれ、Ｖａｌ－Ａｌａ又はＶａｌ－Ｃｉｔであり、
ｍは、２又は４であり、好ましくはｍ＝２であり、
ｐは、０又は１であり、好ましくはｐ＝１であり、
ｑはそれぞれ、２又は４であり、好ましくはそれぞれｑ＝２であり、
Ａはそれぞれ、１，４－フェニルであり、
ｘは、２～４の範囲の整数であり、好ましくはｘ＝２であり、
Ｒ２１はそれぞれＨである。
[0120]本発明に係る好ましいコンジュゲートは、構造（１ａ）を有する。
Figure 2023541637000039
[0121]本明細書では、Ｌ２の正確な性質がさらに明記され、分枝部分Ｎを含む。ＡＢ、Ｌ１、Ｚ、Ａ、Ｒ２１、ｘ、Ｒ１７、ｍ及びｐは、本明細書において他で定義され、ｑは、０～１０の範囲の整数である。好ましくは、Ｒ１７は、ＣＨ３又はＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、ｍは、１～１０の範囲の整数であり、ｑは、１～４の範囲の整数であり、ｐは１である。さらにより好ましくは、
ＡＢは抗体であり、
Ｌ１はリンカーであり、
Ｚは、構造（Ｚ３８）で表される接続基であり、好ましくは構造中、Ｒ１５、Ｒ１８及びＲ１９はすべてＨであり、ｌは１であり、
Ｒ１７はそれぞれ個別にＣＨ３又はＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、好ましくはＲ１７はそれぞれＣＨ３であり、
ｍは、２又は４であり、好ましくはｍ＝２であり、
ｐは、０又は１であり、好ましくはｐ＝１であり、
ｑはそれぞれ、２又は４であり、好ましくはそれぞれｑ＝２であり、
Ａはそれぞれ、１，４－フェニルであり、
ｘは、２～４の範囲の整数であり、好ましくはｘ＝２であり、
Ｒ２１はそれぞれＨである。
[0122]本発明に係る好ましいコンジュゲートは、構造（１ｂ）を有する。
[0123]本明細書では、Ｌ２の正確な性質がさらに明記され、分枝部分Ｎを含む。ＡＢ、Ｌ１、ｗ、Ｚ、Ａ、Ｒ２１、ｘ、Ｒ１７、ｍ及びｐは、本明細書において他で定義され、ｑは、０～１０の範囲の整数である。好ましくは、Ｒ１７は、ＣＨ３又はＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、ｍは、１～１０の範囲の整数であり、ｑは、１～４の範囲の整数であり、ｐは１である。さらにより好ましくは、
ＡＢは抗体であり、
Ｌ１はリンカーであり、
ｗは、０又は１であり、
Ｚは、構造（Ｚ１）で表される接続基であり、
Ｒ１７はそれぞれ個別にＣＨ３又はＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、好ましくはＲ１７はそれぞれＣＨ３であり、
ｍは、２又は４であり、好ましくはｍ＝２であり、
ｐは、０又は１であり、好ましくはｐ＝１であり、
ｑは、２又は４であり、好ましくはｑ＝２であり、
Ａはそれぞれ、１，４－フェニルであり、
ｘは、２～４の範囲の整数であり、好ましくはｘ＝２であり、
Ｒ２１はそれぞれＨである。
[0124]本発明に係る別の好ましいコンジュゲートは、構造（１ｃ）を有する。
Figure 2023541637000041
[0125]本明細書では、Ｌ１の正確な性質及び抗体へのコンジュゲーションの様式がさらに明記される。Ｚ、Ｌ２、Ａ、Ｒ２１、ｘ及びＲ１７は、本明細書において他で定義される。追加的に、ｅは、０～２０の範囲の整数であり、Ｓｕは単糖であり、Ｇは単糖部分であり、ＧｌｃＮＡｃは、Ｎ－アセチルグルコサミン部分であり、Ｆｕｃは、フコース部分であり、ｄは、０又は１である。
[0126]本発明に係る特に好ましいコンジュゲートは、コンジュゲーションの様式及び構造（１ｃ）のＬ１定義と構造（１ｆ）のＬ２の定義を組み合わせ、したがって構造（１ｇ）を有する。
[0127]本明細書では、ｅ、Ｓｕ、Ｇ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｆｕｃ、ｄ、Ｚ、Ｌ５、ｒ、ｍ、ｐ、ｑ、Ａ、ａ、Ｒ１３、Ｒ２１、ｎ、Ｒ１７、及びｘのすべては、それらの好ましい実施形態を含めて、以上に記載の通りである。
[0128]特に好ましい実施形態において、本発明に係るコンジュゲートは、構造（１ｄ）を有する［構造中、
ｄは、０又は１であり、
ｅは０であり、Ｇは存在せず、
ＳｕはＧａｌＮＡｃであり、
Ｚは、構造（Ｚ３８）で表される接続基であり、好ましくは構造中、Ｒ１５、Ｒ１８及びＲ１９はすべてＨであり、ｌは１であり、
ａ＝１であり、
Ｒ１３は水素であり、
ｒ＝０であり、Ｌ５は存在せず、
（ＮＨ－ＣＨ（Ｒ１７）－Ｃ（Ｏ））ｎはそれぞれ、Ｖａｌ－Ａｌａ又はＶａｌ－Ｃｉｔであり、
ｍは、２又は４であり、好ましくはｍ＝２であり、
ｐは、０又は１であり、好ましくはｐ＝１であり、
ｑはそれぞれ、２又は４であり、好ましくはそれぞれｑ＝２であり、
Ａはそれぞれ、１，４－フェニルであり、
ｘは、２～４の範囲の整数であり、好ましくはｘ＝２であり、
Ｒ２１はそれぞれＨである］。
[0129]本発明に係る特に好ましいコンジュゲートは、コンジュゲーションの様式及び構造（１ｃ）のＬ１定義と構造（１ａ）のＬ２の定義を組み合わせ、したがって構造（１ｄ）を有する。
[0130]本明細書では、ｅ、Ｓｕ、Ｇ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｆｕｃ、ｄ、Ｚ、ｍ、ｐ、ｑ、Ｒ１７、Ａ、Ｒ２１及びｘのすべては、それらの好ましい実施形態を含めて、以上に記載の通りである。
[0131]特に好ましい実施形態において、本発明に係るコンジュゲートは、構造（１ｄ）を有する［構造中、
ｄは、０又は１であり、
ｅは０であり、Ｇは存在せず、
ＳｕはＧａｌＮＡｃであり、
Ｚは、構造（Ｚ３８）で表される接続基であり、好ましくは構造中、Ｒ１５、Ｒ１８及びＲ１９はすべてＨであり、ｌは１であり、
Ｒ１７はそれぞれ個別にＣＨ３又はＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、好ましくはＲ１７はそれぞれＣＨ３であり、
ｍは、２又は４であり、好ましくはｍ＝２であり、
ｐは、０又は１であり、好ましくはｐ＝１であり、
ｑはそれぞれ、２又は４であり、好ましくはそれぞれｑ＝２であり、
Ａはそれぞれ、１，４－フェニルであり；
ｘは、２～４の範囲の整数であり、好ましくはｘ＝２であり、
Ｒ２１はそれぞれＨである］。
[0132]本発明に係る特に好ましいコンジュゲートは、コンジュゲーションの様式及び構造（１ｃ）のＬ１定義と構造（１ｂ）のＬ２の定義を組み合わせ、したがって構造（１ｅ）を有する。
Figure 2023541637000044
[0133]本明細書では、ｅ、Ｓｕ、Ｇ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｆｕｃ、ｄ、Ｚ、ｍ、ｐ、ｑ、Ｒ１７、Ａ、Ｒ２１及びｘのすべては、それらの好ましい実施形態を含めて、以上に記載の通りである。
[0134]特に好ましい実施形態において、本発明に係るコンジュゲートは、構造（１ｅ）を有する［構造中、
ｄは、０又は１であり、
ｅは０であり、Ｇは存在せず、
ＳｕはＧａｌＮＡｃであり、
Ｚは、構造（Ｚ１）で表される接続基であり、
Ｒ１７はそれぞれ個別にＣＨ３又はＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、好ましくはＲ１７はそれぞれＣＨ３であり、
ｍは、２又は４であり、好ましくはｍ＝２であり、
ｐは、０又は１であり、好ましくはｐ＝１であり、
ｑは、２又は４であり、好ましくはｑ＝２であり、
Ａはそれぞれ、１，４－フェニルであり、
ｘは、２～４の範囲の整数であり、好ましくはｘ＝２であり、
Ｒ２１はそれぞれＨである］。
[0135]特に好ましい実施形態において、本発明に係るコンジュゲートは、構造（１ｈ）を有する。
[0136]本明細書では、ｅ、Ｓｕ、Ｇ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｆｕｃ及びｄは、それらの好ましい実施形態を含めて、以上に記載の通りであり、ｎ＝０又は１である。構造（１ｈ）は、実施例においてｎ＝０の化合物（３１ａ）及びｎ＝１の化合物（３２ａ）のコンジュゲートに相当する。最も好ましくは、ｅ＝０であり、Ｓｕは、Ｎ－アセチルガラクトサミンである。
抗体－薬物コンジュゲートの合成方法
[0137]第２の態様において、本発明は、本発明に係る抗体－薬物コンジュゲートを調製する方法に関する。本発明に係る方法は、（ｉ）構造ＡＢ－（（Ｌ１）ｗ－Ｆ）ｘの修飾抗体を（ｉｉ）構造（５）で表されるリンカー－薬物構築物と反応させるステップを含む。反応は、エクサテカンペイロードと抗体の間に共有結合を形成するコンジュゲーション反応である。反応は、無金属クリック反応又はチオールライゲーションであり、ＱとＦの間の無金属クリック反応又はＱとＦの間のチオールライゲーションによって形成された接続基Ｚを介して薬物が抗体に共有結合している抗体－薬物コンジュゲートを形成する。
[0138]本発明に係る方法では、構造ＡＢ－（（Ｌ１）ｗ－Ｆ）ｘの修飾抗体［構造中、ＡＢは抗体であり、Ｌ１はリンカーであり、ｗは、０又は１であり、Ｆは、無金属クリック反応においてＱと反応することができるクリックプローブ又はチオールライゲーションにおいてＱと反応することができるチオール若しくはその前駆体であり、ｘは、１～８の範囲の整数である］。無金属クリック反応又はチオールライゲーションを介して、Ｆを構造（５）で表されるリンカー－薬物構築物のＱと反応させると、接続基Ｚが形成される。一実施形態において、修飾抗体は、ＡＢ－（Ｆ）ｘと呼ばれることもある。修飾抗体を調製する方法は、参照により本明細書に組み込まれる、例えば国際公開第２０１４／０６５６６１号、同第２０１６／１７０１８６号及び同第２０１６／０５３１０７号から当技術分野において公知である。同じ文献から、修飾糖タンパク質と細胞毒及びクリックプローブを含むリンカー－薬物構築物との間のコンジュゲーション反応は、当業者に公知である。
[0139]本発明に係る方法では、リンカー－薬物構築物は、構造（５）を有する
Figure 2023541637000046
［構造中、
Ｌ２はリンカーであり、
Ｑは、無金属クリック反応を行うことができるクリックプローブ又はチオール反応性プローブであり、
Ｒ１７はそれぞれ個別にアミノ酸側鎖であり、
ｎは、１～５の範囲の整数であり、
Ａは、５員又は６員の芳香族又はヘテロ芳香族環であり、
ｘは、１～８の範囲の整数であり、
Ｒ２１は、Ｈ、Ｒ２２、Ｃ（Ｏ）ＯＨ及びＣ（Ｏ）Ｒ２２から選択され、Ｒ２２は、Ｃ１～Ｃ２４（ヘテロ）アルキル基、Ｃ３～Ｃ１０（ヘテロ）シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ１０（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ１０アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３～Ｃ１０（ヘテロ）アリールアルキル基であり、それらは、任意選択で置換されており、Ｏ、Ｓ及びＮＲ２３から選択される１個又は複数のヘテロ原子で任意選択で中断されており、Ｒ２３は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキル基からなる群から独立的に選択される］。
無金属クリック反応
[0140]無金属クリック反応は、当技術分野において周知であり（例えば、共に参照により組み込まれる国際公開第２０１４／０６５６６１号、並びにＮｇｕｙｅｎ及びＰｒｅｓｃｈｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ ｒｅｖ．、２０２０、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１５７０－０２０－０２０５－０を参照のこと）、典型的に１，３双極付加環化又は（４＋２）環化付加の形をとることができる。アルキン－アジド環化付加は、歪み促進型（例えば、歪み促進型アルキン－アジド環化付加、ＳＰＡＡＣ）とすることができる。好ましい実施形態において、バイオコンジュゲーション反応は、無金属歪み促進型環化付加、最も好ましくは無金属歪み促進型アルキン－アジド環化付加である。好ましい実施形態において、コンジュゲーションは、（４＋２）環化付加又は１，３双極付加環化、好ましくは１，３双極付加環化など環化付加を介して達成される。
[0141]典型的な（４＋２）環化付加は、ディールス－アルダー反応であり、ここで、Ｑは、ジエン又はジエノフィルである。当業者によって理解されるように、ディールス－アルダー反応の文脈の中で用語「ジエン」は、１，３－（ヘテロ）ジエンを指し、共役ジエン（Ｒ２Ｃ＝ＣＲ－ＣＲ＝ＣＲ２）、イミン（例えば、Ｒ２Ｃ＝ＣＲ－Ｎ＝ＣＲ２又はＲ２Ｃ＝ＣＲ－ＣＲ＝ＮＲ、Ｒ２Ｃ＝Ｎ－Ｎ＝ＣＲ２）及びカルボニル（例えば、Ｒ２Ｃ＝ＣＲ－ＣＲ＝Ｏ又はＯ＝ＣＲ－ＣＲ＝Ｏ）を包含する。Ｎ含有及びＯ含有ジエンとのヘテロ－ディールス－アルダー反応は、当技術分野において公知である。当技術分野において（４＋２）環化付加に適していると公知であるいずれのジエンも、反応性基Ｑとして使用することができる。好ましいジエンとしては、テトラジン、１，２－キノン及びトリアジンが挙げられる。当技術分野において（４＋２）環化付加に適していると公知であるいずれのジエノフィルも、反応性基Ｑとして使用することができるが、ジエノフィルは、好ましくは上記のアルケン基又はアルキン基、最も好ましくはアルキン基である。（４＋２）環化付加を介したコンジュゲーションでは、Ｑはジエノフィルである（Ｆはジエンである）ことが好ましく、より好ましくはＱはアルキニル基であるか、又はアルキニル基を含む。
[0142]１，３双極付加環化では、Ｑは、１，３－双極子又は親双極子である。当技術分野において１，３双極付加環化に適していると公知であるいずれの１，３－双極子も、反応性基Ｑとして使用することができる。好ましい１，３－双極子としては、アジド基、ニトロン基、ニトリルオキシド基、ニトリルイミン基及びジアゾ基が挙げられる。当技術分野において１，３双極付加環化に適していると公知であるいずれの親双極子も、反応性基Ｑとして使用することができるが、親双極子は、好ましくはアルケン基又はアルキン基、最も好ましくはアルキン基である。１，３双極付加環化を介したコンジュゲーションでは、Ｑは親双極子である（Ｆは１，３－双極子である）ことが好ましく、より好ましくはＱはアルキニル基であるか、又はアルキニル基を含む。
[0143]したがって、好ましい実施形態において、Ｑは、親双極子及びジエノフィルから選択される。
クリックプローブＱ
[0144]クリックプローブＱは、コンジュゲーション反応において使用されて、リンカー－薬物構築物を構造ＡＢ－（Ｆ）ｘの抗体に接続する。Ｑは、無金属クリック反応においてクリックプローブＦに対して反応性を示す。そのようなクリックプローブは、当技術分野において公知であり、環式アルケン、環式アルキン、アジド、テトラジン、トリアジン、ニトロン、ニトリルオキシド、ニトリルイミン、ジアゾ化合物、オルト－キノン、ジオキソチオフェン及びシドノンが挙げられる。好ましくは、Ｑは、環式アルケン又は環式アルキン部分であり、最も好ましくは、Ｑは環式アルキン部分である。
[0145]特に好ましい実施形態において、クリックプローブＱは、環式アルキン部分を含む。アルキニル基は、（ヘテロ）シクロアルキニル基、すなわちヘテロシクロアルキニル基又はシクロアルキニル基とも呼ばれることがあり、（ヘテロ）シクロアルキニル基は任意選択で置換されている。好ましくは、（ヘテロ）シクロアルキニル基は、（ヘテロ）シクロヘプチニル基、（ヘテロ）シクロオクチニル基、（ヘテロ）シクロノニニル基又は（ヘテロ）シクロデシニル基である。本明細書では、（ヘテロ）シクロアルキンは、任意選択で置換されていてもよい。好ましくは、（ヘテロ）シクロアルキニル基は、任意選択で置換されている（ヘテロ）シクロヘプチニル基又は任意選択で置換されている（ヘテロ）シクロオクチニル基である。最も好ましくは、（ヘテロ）シクロアルキニル基は、（ヘテロ）シクロオクチニル基であり、（ヘテロ）シクロオクチニル基は任意選択で置換されている。好ましくは、Ｑは、以下の構造（Ｑ１）で表される（ヘテロ）シクロオクチン部分を含む。別の好ましい実施形態において、（ヘテロ）シクロオクチニル基は、以下にさらに定義される構造（Ｑ３７）、（Ｑ３８）又は（Ｑ３９）で表される。（ヘテロ）シクロオクチニル基の好ましい例としては、ＤＩＢＯ基とも呼ばれる構造（Ｑ２）、ＤＩＢＡＣ基とも呼ばれる構造（Ｑ３）、又はＢＡＲＡＣ基とも呼ばれる構造（Ｑ４）、ＣＯＭＢＯ基とも呼ばれる構造（Ｑ５）、及びＢＣＮ基とも呼ばれる構造（Ｑ６）が挙げられ、すべて以下に示され、構造中、Ｙ１は、Ｏ又はＮＲ１１であり、Ｒ１１は、水素、直鎖状若しくは分枝状Ｃ１～Ｃ１２アルキル基又はＣ４～Ｃ１２（ヘテロ）アリール基からなる群から独立的に選択される。（Ｑ２）における芳香族環は、１個又は複数の位置で任意選択でＯ－スルホニル化されており、（Ｑ３）及び（Ｑ４）の環は、１個又は複数の位置でハロゲン化されていてもよい。特に好ましいシクロアルキニル基は、任意選択で置換されているビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イル］基（ＢＣＮ基）である。好ましくは、ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イル］基は、以下に示す式（Ｑ６）［式中、Ｖは（ＣＨ２）ｌであり、ｌは、０～１０の範囲、好ましくは０～６の範囲の整数である］で表される。より好ましくは、ｌは、０、１、２、３又は４であり、より好ましくはｌは、０、１又は２であり、最も好ましくはｌは、０又は１である。（Ｑ６）基の文脈の中で、ｌは、最も好ましくは１である。
Figure 2023541637000047
[0146]別の好ましい実施形態において、クリックプローブＱは、ここで以下に示す（Ｑ７）～（Ｑ２１）からなる群から選択される。
Figure 2023541637000048
[0147]本明細書では、波形の結合で示されたＬ２への接続は、Ｑのいずれか利用可能な炭素又は窒素原子への接続とすることができる。Ｂ（－）はアニオンであり、好ましくはＯＴｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩから選択され、最も好ましくはＢ（－）は、（－）ＯＴｆである。コンジュゲーション反応において、Ｂ（－）は、反応混合物中に存在するアニオンといずれにしても交換できるので、薬学的に許容されるアニオンである必要はない。（Ｑ２１ｂ）がＱとして使用される場合、負電荷対イオンは、好ましいことに、本発明に係るコンジュゲートが医薬品として容易に使用可能であるように、コンジュゲートの単離時に薬学的に許容されるものである。
[0148]別の好ましい実施形態において、クリックプローブＱは、ここで以下に示す（Ｑ２２）～（Ｑ３６）からなる群から選択される。
Figure 2023541637000049
[0149]構造（Ｑ３６ｂ）では、Ｂ（－）はアニオンであり、好ましくはＯＴｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩから選択され、最も好ましくはＢはＯＴｆである。
[0150]特に好ましい実施形態において、クリックプローブＱは、（ヘテロ）シクロアルキニル基を含み、構造（Ｑ３７）で表される。
Figure 2023541637000050
本明細書では、
Ｒ１５は、水素、ハロゲン、－ＯＲ１６、－ＮＯ２、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１６、－Ｓ（Ｏ）３ （－）、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換されており、２つの置換基Ｒ１５は連結されて、任意選択で置換されている縮合環化シクロアルキル又は任意選択で置換されている縮合環化（ヘテロ）アレーン置換基を形成することがあり、Ｒ１６は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、
Ｙ２は、Ｃ（Ｒ３１）２、Ｏ、Ｓ又はＮＲ３１であり、Ｒ３１はそれぞれ個別に、Ｒ１５又はスペーサー部分を介して接続されているエクサテカンペイロードの第２の出現であり、
ｕは、０、１、２、３、４又は５であり、
ｕ’は、０、１、２、３、４又は５であり、ｕ＋ｕ’＝４、５、６、７又は８であり、
ｖ＝８～１６の範囲の整数である。
[0151]好ましい実施形態において、ｕ＋ｕ’＝４、５又は６であり、より好ましくはｕ＋ｕ’＝５である。典型的に、ｖ＝（ｕ＋ｕ’）×２又は［（ｕ＋ｕ’）×２］－１である。好ましい実施形態において、ｖ＝８、９又は１０であり、より好ましくはｖ＝９又は１０であり、最も好ましくはｖ＝１０である。
[0152]特に好ましい実施形態において、クリックプローブＱは、シクロオクチニル基を含み、構造（Ｑ３８）で表される。
Figure 2023541637000051
本明細書では、
Ｒ１５は、水素、ハロゲン、－ＯＲ１６、－ＮＯ２、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１６、－Ｓ（Ｏ）３ （－），Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ５～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換されており、２つの置換基Ｒ１５は連結されて、任意選択で置換されている縮合環化シクロアルキル又は任意選択で置換されている縮合環化（ヘテロ）アレーン置換基を形成することがあり、Ｒ１６は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、
Ｒ１８は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、
Ｒ１９は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、アルキル基は、Ｏ、Ｎ及びＳからなる群から選択される１個若しくは複数（one of more）のヘテロ原子で任意選択で中断されており、アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、独立的に任意選択で置換されており、又はＲ１９は、スペーサー部分を介して接続されているエクサテカンペイロードの第２の出現であり、
ｌは、０～１０の範囲の整数である。
[0153]構造（Ｑ３８）で表される反応性基の好ましい実施形態において、Ｒ１５は、水素、ハロゲン、－ＯＲ１６、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ５～Ｃ６（ヘテロ）アリール基からなる群から独立的に選択され、Ｒ１６は、水素又はＣ１～Ｃ６アルキルであり、より好ましくはＲ１５は、水素及びＣ１～Ｃ６アルキルからなる群から独立的に選択され、最も好ましくはＲ１５はすべてＨである。構造（Ｑ３８）で表される反応性基の好ましい実施形態において、Ｒ１８は、水素、Ｃ１～Ｃ６アルキル基からなる群から独立的に選択され、最も好ましくはＲ１８は両方ともＨである。構造（Ｑ３８）で表される反応性基の好ましい実施形態において、Ｒ１９はＨである。構造（Ｑ３８）で表される反応性基の好ましい実施形態において、ｌは、０又は１であり、より好ましくはｌは１である。構造（Ｑ３８）で表される反応性基の特に好ましい実施形態は、構造（Ｑ３０）で表される反応性基である。
[0154]特に好ましい実施形態において、クリックプローブＱは、シクロオクチニル基を含み、構造（Ｑ３９）で表される。
Figure 2023541637000052
本明細書では、
Ｒ１５は、水素、ハロゲン、－ＯＲ１６、－ＮＯ２、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１６、－Ｓ（Ｏ）３ （－）、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ５～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換されており、２つの置換基Ｒ１５は連結されて、任意選択で置換されている縮合環化シクロアルキル又は任意選択で置換されている縮合環化（ヘテロ）アレーン置換基を形成することがあり、Ｒ１６は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、
Ｙは、Ｎ又はＣＲ１５である。
[0155]構造（Ｑ３９）で表される反応性基の好ましい実施形態において、Ｒ１５は、水素、ハロゲン、－ＯＲ１６、－Ｓ（Ｏ）３ （－）、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ５～Ｃ６（ヘテロ）アリール基からなる群から独立的に選択され、Ｒ１６は、水素又はＣ１～Ｃ６アルキルであり、より好ましくはＲ１５は、水素及び－Ｓ（Ｏ）３ （－）からなる群から独立的に選択される。構造（Ｑ３９）で表される反応性基の好ましい実施形態において、Ｙは、Ｎ又はＣＨであり、より好ましくはＹ＝Ｎである。
[0156]特に好ましい実施形態において、クリックプローブＱは、ヘテロシクロヘプチニル基を含み、構造（Ｑ３６ａ）で表される。
Figure 2023541637000053
[0157]代替の好ましい実施形態において、クリックプローブＱは、環式アルケン部分を含む。アルケニル基Ｑは、（ヘテロ）シクロアルケニル基、すなわちヘテロシクロアルケニル基又はシクロアルケニル基、好ましくはシクロアルケニル基とも呼ばれることがあり、（ヘテロ）シクロアルケニル基は、任意選択で置換されている。好ましくは、（ヘテロ）シクロアルケニル基は、（ヘテロ）シクロプロペニル基、（ヘテロ）シクロブテニル基、トランス－（ヘテロ）シクロヘプテニル基、トランス－（ヘテロ）シクロオクテニル基、トランス－（ヘテロ）シクロノネニル基又はトランス－（ヘテロ）シクロデシニル基であり、それらはすべて任意選択で置換されていてもよい。特に好ましいのは、（ヘテロ）シクロプロペニル基、トランス－（ヘテロ）シクロヘプテニル基又はトランス－（ヘテロ）シクロオクテニル基であり、（ヘテロ）シクロプロペニル基、トランス－（ヘテロ）シクロヘプテニル基又はトランス－（ヘテロ）シクロオクチニル基は、任意選択で置換されている。好ましくは、Ｑは、構造（Ｑ４０）で表されるシクロプロペニル部分、構造（Ｑ４１）で表されるトランス－（ヘテロ）シクロヘプテニル部分又は構造（Ｑ４２）で表されるトランス－（ヘテロ）シクロオクテニル部分を含む。別の好ましい実施形態において、シクロプロペニル基は、構造（Ｑ４３）で表される。別の好ましい実施形態において、トランス－（ヘテロ）シクロヘプテン基は、構造（Ｑ４４）又は（Ｑ４５）で表される。別の好ましい実施形態において、トランス－（ヘテロ）シクロオクテン基は、構造（Ｑ４６）、（Ｑ４７）、（Ｑ４８）、（Ｑ４９）又は（Ｑ５０）で表される。
Figure 2023541637000054
[0158]本明細書では、（Ｑ４４）及び（Ｑ４５）におけるＳｉのＲ基（複数可）は、典型的にアルキル又はアリール、好ましくはＣ１～Ｃ６アルキルである。
チオールライゲーション
[0159]抗体－薬物コンジュゲート調製のためのチオールライゲーションは、当技術分野において周知であり、チオール基のアルキル化と呼ばれることもある。それは、典型的に求核置換又はマイケル反応など求核性反応の形をとる。好ましいマイケル反応は、マレイミド－チオール反応であり、バイオコンジュゲーションにおいて広く用いられている。したがって、好ましい実施形態において、Ｑは、求核性反応、好ましくは求核置換又はマイケル反応において反応性を示す。本明細書では、Ｑは、マレイミド部分、ハロアセトアミド部分、アレンアミド部分、ホスホンアミダイト部分、シアノエチニル部分、ビニルスルホン、ビニルピリジン部分又はメチルスルホニルフェニルオキサジアゾール部分、最も好ましくはマレイミド部分を含むことが好ましい。Ｑの特に好ましい選択肢を図１Ｂに示す。
チオール反応性プローブＱ
[0160]チオール反応性プローブＱは、コンジュゲーション反応において使用されて、リンカー－薬物構築物を構造ＡＢ－（（Ｌ１）ｗ－Ｆ）ｘの抗体に接続する。Ｑは、チオールライゲーションにおいてチオール又はその前駆体Ｆに対して反応性を示す。そのようなプローブは、当技術分野において公知であり、マレイミド部分、ハロアセトアミド部分、アレンアミド部分、ホスホンアミダイト部分、シアノエチニル部分、ビニルスルホン、ビニルピリジン部分又はメチルスルホニルフェニルオキサジアゾール部分からなる群から選択することができる。最も好ましくは、Ｑは、マレイミド部分を含むか、又はマレイミド部分である。
[0161]別の好ましい実施形態において、プローブＱは、ここで以下に示す（Ｑ５１）～（Ｑ６５）からなる群から選択される
Figure 2023541637000055
［構造中、
Ｘ６は、Ｈ、ハロゲン、ＰｈＳ、ＭｅＳ、好ましくはＣｌ、Ｂｒ、Ｉなどハロゲンであり、
Ｘ７は、ハロゲン、ＰｈＳ、ＭｅＳ、好ましくはＣｌ、Ｂｒ、Ｉなどハロゲンであり、
Ｒ２４は、Ｈ又はＣ１～１２アルキル、好ましくはＨ又はＣ１～６アルキルであり、
Ｒ２５は、Ｈ、Ｃ１～１２アルキル、Ｃ１～１２アリール、Ｃ１～１２アルカリール又はＣ１～１２アラルキル、好ましくはＨ又はパラ－メチルフェニルであり、
（Ｑ５５）及び（Ｑ５７）の芳香族環は、任意選択でフェニル又はピリジン環などヘテロ芳香族環とすることができる］。
[0162]チオール反応性プローブ（Ｑ５１）の好ましい実施形態において、プローブＱは、ここで以下に示す（Ｑ６６）～（Ｑ６８）からなる群から選択される
Figure 2023541637000056
［構造中、
Ｒ２７は、Ｃ１～１２アルキル、Ｃ１～１２アリール、Ｃ１～１２アルカリール又はＣ１～１２アラルキルであり、
ｔは、０～１５、好ましくは１～１０の範囲の整数である］。
好ましいリンカー－薬物構築物
[0163]特に好ましい実施形態において、本発明に係るリンカー－薬物構築物は、構造（５ｃ）を有する
Figure 2023541637000057
［構造中、Ｑ、ｍ、ｐ、ｑ、Ｒ１７、Ａ及びＲ２１のそれぞれは、以上に記載の通りである］。
[0164]最も好ましくは、本発明に係るリンカー－薬物構築物は、構造（５ａ）を有する［構造中、
Ｑは、構造（Ｑ３８）で表される接続基であり、好ましくは構造中、Ｒ１５、Ｒ１８及びＲ１９はすべてＨであり、ｌは１であり、
Ｒ１７はそれぞれ個別にＣＨ３又はＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、好ましくはＲ１７はそれぞれＣＨ３であり、
ｍは、２又は４であり、好ましくはｍ＝２であり、
ｐは、０又は１であり、好ましくはｐ＝１であり、
ｑはそれぞれ、２又は４であり、好ましくはそれぞれｑ＝２であり、
Ａはそれぞれ、１，４－フェニルであり、
Ｒ２１はそれぞれＨである］。
[0165]特に好ましい実施形態において、本発明に係るリンカー－薬物構築物は、構造（５ａ）を有する
Figure 2023541637000058
［構造中、Ｑ、ｍ、ｐ、ｑ、Ｒ１７、Ａ及びＲ２１のそれぞれは、以上に記載の通りである］。
[0166]最も好ましくは、本発明に係るリンカー－薬物構築物は、構造（５ａ）を有する［構造中、
Ｑは、構造（Ｑ３８）で表される接続基であり、好ましくは構造中、Ｒ１５、Ｒ１８及びＲ１９はすべてＨであり、ｌは１であり、
Ｒ１７はそれぞれ個別にＣＨ３又はＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、好ましくはＲ１７はそれぞれＣＨ３であり、
ｍは、２又は４であり、好ましくはｍ＝２であり、
ｐは、０又は１であり、好ましくはｐ＝１であり、
ｑはそれぞれ、２又は４であり、好ましくはそれぞれｑ＝２であり、
Ａはそれぞれ、１，４－フェニルであり、
Ｒ２１はそれぞれＨである］。
[0167]特に好ましい実施形態において、本発明に係るリンカー－薬物構築物は、構造（５ｂ）を有する

［構造中、Ｑ、ｍ、ｐ、ｑ、Ｒ１７、Ａ及びＲ２１のそれぞれは、以上に記載の通りである］。
[0168]最も好ましくは、本発明に係るリンカー－薬物構築物は、構造（５ａ）を有する［構造中、
Ｑは、構造（Ｑ１）で表される接続基であり、
Ｒ１７はそれぞれ個別にＣＨ３又はＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、好ましくはＲ１７はそれぞれＣＨ３であり、
ｍは、２又は４であり、好ましくはｍ＝２であり、
ｐは、０又は１であり、好ましくはｐ＝１であり、
ｑはそれぞれ、２又は４であり、好ましくはそれぞれｑ＝２であり、
Ａはそれぞれ、１，４－フェニルであり、
Ｒ２１はそれぞれＨである］。
[0169]特に好ましい実施形態において、本発明に係るリンカー－薬物構築物は、構造（５ｄ）を有する
Figure 2023541637000060
［構造中、ｎ＝０又は１である］。
[0170]構造（５ｄ）は、実施例においてｎ＝０の化合物（３１ａ）及びｎ＝１の化合物（３２ａ）に相当する。
反応性基Ｆ
[0171]反応性基Ｆは、クリックプローブ又はチオール若しくはその前駆体である。したがって、第１の好ましい実施形態において、Ｆは、クリックプローブである。クリックプローブＦは、コンジュゲーション反応において使用されて、リンカー－薬物構築物を修飾抗体に接続する。Ｆは、無金属クリック反応においてクリックプローブＱに対して反応性を示す。そのようなクリックプローブは、当技術分野において公知であり、環式アルケン、環式アルキン、アジド、テトラジン、トリアジン、ニトロン、ニトリルオキシド、ニトリルイミン、ジアゾ化合物、オルト－キノン、ジオキソチオフェン及びシドノンが挙げられる。
[0172]好ましくは、Ｆは、環式アルケン、環式アルキンに対して反応性を示し、典型的にアジド、テトラジン、トリアジン、ニトロン、ニトリルオキシド、ニトリルイミン、ジアゾ化合物、オルト－キノン、ジオキソチオフェン及びシドノンからなる群から選択される。反応性基について好ましい構造は、ここで以下に示す構造（Ｆ１）～（Ｆ１０）である。
Figure 2023541637000061
[0173]本明細書では、波形の結合は、抗体への接続を表す。（Ｆ３）、（Ｆ４）、（Ｆ８）及び（Ｆ９）については、抗体を波形の結合のうちのいずれか１つに接続させることができる。次いで、他の波形の結合を、水素、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ２～Ｃ２４アシル基、Ｃ３～Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基及びＣ１～Ｃ２４スルホニル基から選択されるＲ基に接続させることができ、これらのそれぞれ（水素を除く）が、任意選択で置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３２［ここで、Ｒ３２は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキル基からなる群から独立的に選択される］から選択される１個又は複数のヘテロ原子で任意選択で中断されていてもよい。当業者は、どのＲ基をクリックプローブＦのそれぞれに適用することができるかを理解する。例えば、（Ｆ３）の窒素原子に接続されているＲ基は、アルキル及びアリールから選択することができ、（Ｆ３）の炭素原子に接続されているＲ基は、水素、アルキル、アリール、アシル及びスルホニルから選択することができる。好ましくは、クリックプローブＦは、アジド又はテトラジンから選択される。最も好ましくは、クリックプローブＦはアジドである。
[0174]第２の好ましい実施形態において、Ｆは、チオール又はその前駆体である。チオール又はその前駆体Ｆは、コンジュゲーション反応において使用されて、リンカー－薬物構築物を修飾抗体に接続する。Ｆは、チオールライゲーションにおいてチオール反応性プローブＱに対して反応性を示す。バイオコンジュゲーションの文脈の中でチオール前駆体は、当技術分野において公知であり、ジスルフィドが挙げられる。それは、抗体中に存在する天然の架橋ジスルフィドでも、合成で導入されたジスルフィドでもよく、当技術分野において公知のように還元される。好ましくは、Ｆはチオール基である。
リンカー－薬物構築物
[0175]第３の態様において、本発明は、構造（５）で表されるリンカー－薬物構築物に関する
Figure 2023541637000062
［構造中、
Ｌ２はリンカーであり、
Ｑは、無金属クリック反応を行うことができるクリックプローブ又はチオール反応性プローブであり、
Ｒ１７はそれぞれ個別にアミノ酸側鎖であり、
ｎは、１～５の範囲の整数であり、
Ａは、５員又は６員の芳香族又はヘテロ芳香族環であり、
ｘは、１～８の範囲の整数であり、
Ｒ２１は、Ｈ、Ｒ２２、Ｃ（Ｏ）ＯＨ及びＣ（Ｏ）Ｒ２２から選択され、Ｒ２２は、Ｃ１～Ｃ２４（ヘテロ）アルキル基、Ｃ３～Ｃ１０（ヘテロ）シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ１０（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ１０アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３～Ｃ１０（ヘテロ）アリールアルキル基であり、それらは、任意選択で置換されており、Ｏ、Ｓ及びＮＲ２３から選択される１個又は複数のヘテロ原子で任意選択で中断されており、Ｒ２３は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキル基からなる群から独立的に選択される］。
[0176]本発明の第１及び第２の態様の文脈の中で記載されているリンカー－薬物構築物の定義及び好ましい実施形態並びにＬ２、Ｑ、Ｒ１７、ｎ、Ａ、ｘ及びＲ２１は、本発明の第３の態様に同様に適用される。この態様によるリンカー－薬物構築物は、本発明に係る抗体－薬物コンジュゲートの調製における中間体として理想的に適している。したがって、本発明は、構造ＡＢ－（（Ｌ１）ｗ－Ｆ）ｘの修飾抗体との無金属クリックコンジュゲーション反応又はチオールライゲーションコンジュゲーション反応における本発明に係るリンカー－薬物構築物の使用にも関する。
応用
[0177]本発明に係るコンジュゲートは、がんの治療において特に適している。したがって、本発明はさらに、医薬における本発明に係るコンジュゲートの使用に関する。別の態様において、本発明は、それを必要とする対象を治療する方法であって、本発明に係るコンジュゲートを対象に投与するステップを含む方法にも関する。この態様による方法は、治療における使用のため、特にそれを必要とする対象の治療における使用のための本発明に係るコンジュゲートと称することもできる。この態様による方法は、医薬品の製造のための、本発明に係るコンジュゲートの使用と称することもできる。本明細書では、投与は、典型的に治療有効量の本発明に係るコンジュゲートを用いて行われる。
[0178]本発明はさらに、それを必要とする対象における特定の疾患の治療方法であって、以上に定義した本発明に係るコンジュゲートの投与を含む方法に関する。特定の疾患は、がん及び自己免疫疾患から選択することができ、好ましくは疾患はがんである。それを必要とする対象は、典型的にがん患者である。抗体－薬物コンジュゲートの使用は、そのような治療、特にがん治療の分野において周知であり、本発明に係るコンジュゲートは、この点に関して特に適している。この態様による方法では、コンジュゲートは、典型的に治療有効量で投与される。本発明のこの態様は、それを必要とする対象における特定の疾患の治療における使用のため、好ましくはがんの治療のための本発明に係るコンジュゲートと称することもできる。言い換えれば、この態様は、それを必要とする対象における特定の疾患の治療における使用のため、好ましくはがんの治療における使用のための医薬品又は医薬組成物の調製のための、本発明に係るコンジュゲートの使用に関する。一実施形態において、がんは、ＨＥＲ２陽性乳がん、ＨＥＲ２陽性胃がん、ＨＥＲ２陽性結腸がん、ＨＥＲ２陽性肺がん、ＨＥＲ２陽性膵がん、ＨＥＲ２陽性尿路上皮がん、ＨＥＲ２陽性脳がん、ＨＥＲ２陽性卵巣がんなどＨＥＲ２陽性がんである。したがって、一実施形態において、患者は、ＨＥＲ２陽性である。
[0179]本発明の文脈における投与は、全身投与を指す。したがって、一実施形態において、本明細書において定義された方法は、コンジュゲートの全身投与のための方法である。コンジュゲートの特異性を考えると、それらは、全身投与することができるが、それでも、それらの活性を目的の組織（例えば、腫瘍）又はその付近において発揮する。全身投与は、薬物が、画像処理技法で検出不可能な腫瘍転移に到達することもでき、血液腫瘍に適用可能でありうるので、局所投与に対して大きな利点を有する。
[0180]本発明はさらに、本発明に係る抗体－ペイロードコンジュゲートと薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物に関する。
[0181]本発明を、以下の実施例によって説明する。
分析用ＲＰ－ＨＰＬＣの一般手順（ＤＴＴ還元）
[0182]ＲＰ－ＨＰＬＣ分析の前に、ＩｇＧ（１０μＬ、ＰＢＳ中１ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ ７．４）を１２．５ｍＭ ＤＴＴ、１００ｍＭ ＴｒｉｓＨＣｌ ｐＨ ８．０（４０μＬ）に添加し、３７℃で１５分間インキュベートした。４９％アセトニトリル、４９％水、２％ギ酸（５０μＬ）を添加することによって、反応をクエンチした。ＲＰ－ＨＰＬＣ分析を、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズ（Ｈｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ社）で行った。試料（１０μＬ）を０．５ｍＬ／分で、カラム温度７０℃のＢｉｏｒｅｓｏｌｖｅ ＲＰ ｍＡｂ ２．１×１５０ｍｍ ２．７μｍ（Ｗａｔｅｒｓ社）に注入した。１６．８分で０．１％ＴＦＡ及び水中アセトニトリル３０→５４％の直線グラジエントを適用した。
分析用ＲＰ－ＵＰＬＣの一般手順
[0183]ＲＰ－ＵＰＬＣ分析の前に、ＩｇＧ（１０μＬ、ＰＢＳ ｐＨ ７．４中の１ｍｇ／ｍＬ）を、１２．５ｍＭ ＤＴＴ、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ ｐＨ ８．０（４０μＬ）に添加し、３７℃で１５分間インキュベートした。４９％アセトニトリル、４９％水、２％ギ酸（５０μＬ）を添加することによって、反応をクエンチした。Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ－ＳＱＤで、ＲＰ－ＵＰＬＣ分析を行った。試料（５μＬ）を０．４ｍＬ／分で、カラム温度７０℃のＢｉｏｒｅｓｏｌｖｅ ＲＰ ｍＡｂ ２．１×１５０ｍｍ ２．７μｍ（Ｗａｔｅｒｓ社）に注入した。９分で０．１％ＴＦＡ及び水中アセトニトリル３０→５４％の直線グラジエントを適用した。
分析ＳＥＣの一般手順
[0184]ＨＰＬＣ－ＳＥＣ分析は、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズ（Ｈｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ社）でＸｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ２００Ａ（３．５μＭ、７．８×３００ｍＭ、ＰＮ １８６００７６４０ Ｗａｔｅｒｓ社）カラムを使用して行った。試料をＰＢＳ中１ｍｇ／ｍＬに希釈し、０．８６ｍＬ／分のアイソクラティック法（１０％イソプロパノールを含有する０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液 ｐＨ ６．９（ＮａＨＰＯ４／Ｎａ２ＰＯ４））で１６分間測定した。
分析ＨＰＬＣ－ＭＳの一般手順（ＩｄｅＳ消化）
[0185]質量スペクトル分析の前に、ＩｇＧをＩｄｅＳで処理した。それによって、Ｆｃ／２フラグメントの分析が可能になる。Ｆｃ／２フラグメントの分析では、２０μｇの（修飾）ＩｇＧの溶液を、総容積１０μＬでＰＢＳ中ＩｄｅＳ／Ｆａｂｒｉｃａｔｏｒ（商標）（１．２５Ｕ／μＬ） ｐＨ ６．６と共に３７℃で１時間インキュベートした。試料を８０μＬに希釈し、次にＪＥＯＬ ＡｃｃｕＴＯＦでエレクトロスプレーイオン化飛行時間（ＥＳＩ－ＴＯＦ）型分析を行った。Ｍａｇｔｒａｎソフトウェアを使用して、デコンボリューション後のスペクトルが得られた。
[0186]化合物３（図７を参照のこと）を国際公開第２０２０／０９４６７０号に従って（リンカー－薬物化合物４２）調製した。化合物４（デルクステカン、図８を参照のこと）をＭｅｄＣｈｅｍＥｘｐｒｅｓｓ社から得た。無金属クリックコンジュゲーション（ｖ１及びｖ５）又はチオールライゲーション（ｖ２、ｖ３、ｖ４）のためのさまざまな抗体フォーマットの構造を図１１に示す。
実施例１． 化合物６の調製
Figure 2023541637000063
[0187]ＢＣＮ－ＯＨ（５、１．５ｇ、１０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１５０ｍＬ）溶液に、Ｎ２雰囲気下、ＣＳＩ（０．８７ｍＬ、１．４ｇ、１０ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（２．８ｍＬ、２．０ｇ、２０ｍｍｏｌ）及び２－（２－アミノエトキシ）エタノール（１．２ｍＬ、１．２６ｇ、１２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１０分間撹拌し、ＮＨ４Ｃｌ水溶液（飽和、１５０ｍＬ）の添加によりクエンチした。分離後、水性層をＤＣＭ（１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーで精製した。生成物６が若干黄色の濃厚な油（２．０６ｇ、５．７２ｍｍｏｌ、５７％）として得られた。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ (ppm)6.0 (bs, 1H), 4.28 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 3.78-3.73 (m, 2H), 3.66-3.61 (m, 2H),3.61-3.55 (m, 2H), 3.34 (t, J = 4.9 Hz, 2H), 2.37-2.15 (m, 6H), 1.64-1.48 (m,2H), 1.40 (五重線, J = 8.7 Hz, 1H), 1.05-0.92 (m, 2H).
実施例２． 化合物７の調製
Figure 2023541637000064
[0188]撹拌した６（４７ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液に、ＣＳＩ（１１μＬ、１８ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を添加した。３０分後、Ｅｔ３Ｎ（９１μＬ、６６ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）、及びジエタノールアミン（１６ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．５ｍＬ）溶液を添加した。３０分後、クロロギ酸ｐ－ニトロフェニル（５２ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（５４μＬ、３９ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を添加した。さらに４．５時間後、反応混合物を濃縮し、残渣をグラジエントカラムクロマトグラフィー（３３→６６％ ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１％ＡｃＯＨ））によって精製して、７を無色油（８８ｍｇ、０．０９８ｍｍｏｌ、７５％）として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ (ppm) 8.28-8.23 (m, 4H), 7.42-7.35 (m, 4H), 4.52 (t, J = 5.4 Hz,4H), 4.30 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 4.27-4.22 (m, 2H), 3.86 (t, J = 5.3 Hz, 4H),3.69-3.65 (m, 2H), 3.64-3.59 (m, 2H), 3.30-3.22 (m, 2H), 2.34-2.14 (m, 6H),1.62-1.46 (m, 2H), 1.38 (五重線, J = 8.7 Hz, 1H), 1.04-0.92(m, 2H).
実施例３． 化合物９ａ及び９ｂの調製
Figure 2023541637000065
[0189]化合物８ａ（１６３ｍｇ、２４０μｍｏｌ）を、乾燥ＤＭＦ（０．９ｍＬ）中エクサテカンメシレート（１２５ｍｇ、２３５μｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（６１ｍｇ、８２μＬ、０．４７ｍｍｏｌ）の混合物に添加した。２０時間後、反応混合物を９ｍＬのＤＣＭに希釈し、グラジエントカラムクロマトグラフィー（０→４０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、９ａ（１５５ｍｇ、１５９μｍｏｌ、６８％）を得た。LCMS (ESI+) C55H54FN6O10 +(M+H)+の計算値977.39, 実測値977.72. ９ａ以外に、エクサテカン（８２．４ｍｇ、１８９μｍｏｌ、２０％）の遊離塩基を回収した。LCMS (ESI+) C24H23FN3O4 +(M+H)+の計算値436.46, 実測値436.54.
[0190]化合物８ｂ（２９．１ｍｇ、３８μｍｏｌ）を、乾燥ＤＭＦ（１５０μＬ）中エクサテカンメシレート（１９．８ｍｇ、３７．２μｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（９．６ｍｇ、１３μＬ、７４．５μｍｏｌ）の混合物に添加した。５時間後、反応混合物を３ｍＬのＤＣＭに希釈し、自動グラジエントシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０→１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、９ｂ（２８．２ｍｇ、２６．５μｍｏｌ、７４％）を淡黄色固体として得た。LCMS (ESI+) C58H60FN8O11 +(M+H)+の計算値1063.44, 実測値1063.72.
実施例４． 化合物１ａ及び１ｂの調製（構造について、図７を参照のこと）
[0191]化合物９ａ（１５５ｍｇ、１５９μｍｏｌ）のＤＭＦ（１．６ｍＬ）溶液に、Ｅｔ３Ｎ（７３ｍｇ、１０１μＬ、０．７２ｍｍｏｌ）、及び化合物７（６５ｍｇ、７２μｍｏｌ）のＤＭＦ（１．４ｍＬ）溶液を添加した。反応混合物を１８時間撹拌し、ＤＣＭ（２０ｍＬ）で希釈し、グラジエントカラムクロマトグラフィー（０→４０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、１ａを淡黄色固体（９４ｍｇ、４４μｍｏｌ、２８％）として得た。LCMS (ESI+) C102H118F2N16O29S2 2+(M/2+H)+の計算値1066.88, 実測値1067.12.
[0192]化合物７（３．５ｍｇ、３．９μｍｏｌ）のＤＭＦ（７８μＬ）溶液に、化合物９ｂ（８．２ｍｇ、９．７μｍｏｌ）のＤＭＦ（９７μＬ）溶液及びＥｔ３Ｎ（２．４ｍｇ、３．３μＬ、２３．４μｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２０時間放置した。反応混合物をＤＣＭ（２ｍＬ）で希釈し、自動グラジエントシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０→３０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製した。得られた材料の一部を分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（ＸＢｒｉｄｇｅ ｐｒｅｐ Ｃ１８ ５μｍ ＯＢＤ、３０×１００ｍｍ、３０→９０％ ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ＋１％ＡｃＯＨ）によって再精製して、１ｂを白色固体（１．０ｍｇ、０．４３μｍｏｌ、１１％）として得た。LCMS (ESI+) C108H130F2N20O31S2 2+(M/2+H)+の計算値1152.93, 実測値1152.58.
実施例５． 化合物１０ａ及び１０ｂの調製
Figure 2023541637000066
[0193]化合物９ａ（３２ｍｇ、３３μｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解し、ピペリジン（２８ｍｇ、３３μＬ、０．３３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を５．５時間撹拌し、濃縮し、ＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解し、グラジエントカラムクロマトグラフィー（０→３０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１％ＡｃＯＨ））によって精製して、１０ａ（１４．８ｍｇ、１９．６μｍｏｌ、５９％）を得た。LCMS (ESI+) C40H44FN6O8 +(M+H)+の計算値755.32, 実測値755.46.
[0194]化合物９ｂ（２８．２ｍｇ、２６．５μｍｏｌ）のＤＭＦ（２００μＬ）溶液に、ピペリジン（２２．６ｍｇ、２６．２μＬ、２６５μｍｏｌ）を添加した。反応混合物を５．５時間放置した。反応混合物をＤＣＭ（２ｍＬ）で希釈し、グラジエントカラムクロマトグラフィー（０→３０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、１０ｂを淡黄色固体（１６．３ｍｇ、１９．４μｍｏｌ、７３％）として得た。LCMS (ESI+) C43H50FN8O9 +(M+H)+の計算値841.37, 実測値841.53.
実施例６． 化合物２ａの調製
Figure 2023541637000067
[0195]撹拌した６（１７２ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液に、ＣＳＩ（４２μＬ、６７ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を添加した。２０分後、Ｅｔ３Ｎ（３３１μＬ、２４０ｍｇ、２．３８ｍｍｏｌ）、及び１１（２５０ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液を添加した。６０分後、クロロギ酸ｐ－ニトロフェニル（２４２ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（６４３μＬ、４６７ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ）を添加した。１６時間後、追加のクロロギ酸ｐ－ニトロフェニル（５０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を４時間続けた。反応混合物を濃縮し、残渣をグラジエントカラムクロマトグラフィー（２０→１００％ ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１％ＡｃＯＨ））によって精製して、１２を無色油（３１８ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ、５３％）として得た。LCMS (ESI+) C50H73N6O27S2 +(M+H+)の計算値1253.40, 実測値1253.49.
[0196]化合物１２（１０．０ｍｇ、８．０μｍｏｌ）のＤＭＦ（２００μＬ）溶液に、化合物１０（１４．８ｍｇ、１９．６μｍｏｌ）のＤＭＦ（２００μＬ）溶液及びＥｔ３Ｎ（４．０ｍｇ、５．６μＬ、４０μｍｏｌ）を添加した。反応混合物を６４時間放置した。反応混合物を、分取ＨＰＬＣ（ＸＢｒｉｄｇｅ ｐｒｅｐ Ｃ１８ ５μｍ ＯＢＤ、３０×１００ｍｍ、３０→１００％ ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ（１％ＡｃＯＨ含有））によって精製して、２ａを淡黄色フィルム（４．３ｍｇ、１．７３μｍｏｌ、２２％）として得た。LCMS (ESI+) C118H150F2N16O37S2 2+(M/2+H)+の計算値1242.99, 実測値1243.13.
実施例７． 化合物１４の調製
Figure 2023541637000068
[0197]１３の調製：６（３．６２ｇ、１０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２００ｍＬ）溶液に、クロロギ酸４－ニトロフェニル（２．０２ｇ、１０ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（４．２ｍＬ、３．０４ｇ、３０ｍｍｏｌ）を添加した。周囲温度で１．５時間撹拌した後、反応混合物を濃縮し、自動グラジエントシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０％→７０％ ＥｔＯＡｃ／ヘプタン＋１％ＡｃＯＨ）によって精製して、１３を白色フォーム（４．０７ｇ、１１．７ｍｍｏｌ、７７％）として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ (ppm) 8.32 - 8.27 (m, 2H), 7.46 - 7.40 (m, 2H), 5.56 (t, J = 5.4Hz, 1H), 4.49 - 4.42 (m, 2H), 4.28 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 3.80 - 3.76 (m, 2H),3.70 - 3.65 (m, 2H), 3.39-3.30 (m, 2H), 2.36 - 2.16 (m, 6H), 1.62-1.46 (m, 2H),1.38 (五重線, J = 8.7 Hz, 1H), 1.05-0.92 (m, 2H).
[0198]１４の調製：ＤＣＭ（８０．０ｍＬ）中１３（２．６１ｇ、１Ｈ－ＮＭＲによる純度８６．８％、４．６２ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、クロロギ酸４－ニトロフェニル（２．１４ｇ、１０．６ｍｍｏｌ、２．３０当量）を添加した後、続いてＥｔ３Ｎ（３．７０ｍＬ、２．６８ｇ、２６．５ｍｍｏｌ、５．７５当量）を添加した。反応混合物を室温で４．５時間撹拌し、次いで真空中で濃縮し、黄色油を得た。残渣をグラジエントカラムクロマトグラフィー（５０→１００％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン＋１％ＡｃＯＨ）によって精製した後、続いて第２のグラジエントカラムクロマトグラフィー（５０→１００％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン＋１％ＡｃＯＨ）によって精製して、１４を白色固体（２．１ｇ、１Ｈ－ＮＭＲによる純度８８％、２．２５μｍｏｌ、４９％）として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm) 8.33-8.20 (m, 4H), 7.40 (d, J = 8.4 Hz, 4H), 5.74 (t, J = 5.8Hz, 1H), 4.56-4.42 (m, 4H), 4.40-4.31 (m, 2H), 4.26 (d, J = 8.3 Hz, 2H),3.83-3.72 (m, 4H), 3.71-3.64 (m, 2H), 3.60 (t, J = 4.9 Hz, 2H), 3.34-3.23 (m,2H), 2.36-2.14 (m. 6H), 1.82-1.44 (m, 4H), 1.44-1.31 (m, 1H), 0.98-0.92 (m,2H).
実施例８：化合物１７ｂの調製
Figure 2023541637000069
[0199]１６ｂの調製：撹拌した１４（６２ｍｇ、７５μｍｏｌ）のＤＭＦ（５００μＬ）溶液に、１５ｂ（６０ｍｇ、１５８μｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（６３μＬ、４６ｍｇ、４５０μｍｏｌ）を添加した。３．５時間後、ビス（４－ニトロフェニル）カーボネート（１３７ｍｇ、４５０μｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（６３μＬ、４６ｍｇ、４５０μｍｏｌ）を添加した。反応混合物をＤＭＦ（５００μＬ）で希釈し、撹拌を１．５時間続けた。反応混合物を濃縮し、残渣を自動グラジエントシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０→１５％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、１６ｂを白色固体（８６ｍｇ、５２．７μｍｏｌ、７０％）として得た。LCMS (ESI+) C72H94N15O27S+(M+H)+の計算値1632.62, 実測値1632.70.
[0200]１７ｂの調製：ＤＭＦ（４０μＬ）中エクサテカンメシレート（２．０ｍｇ、３．７μｍｏｌ）の混合物に、Ｅｔ３Ｎ（０．９ｍｇ、１．２μＬ、８．９μｍｏｌ）、及び化合物１６ｂ（２．９ｍｇ、１．７８μｍｏｌ）のＤＭＦ（２５μＬ）溶液を添加した。反応混合物を１９時間放置した。反応混合物をＤＭＦ（１００μＬ）で希釈し、分取ＨＰＬＣ（ＸＢｒｉｄｇｅ ｐｒｅｐ Ｃ１８ ５μｍ ＯＢＤ、３０×１００ｍｍ、３０→１００％ ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ（１％ＡｃＯＨ含有））によって精製して、１７ｂを白色固体（２．５ｍｇ、１．１μｍｏｌ、６２％）として得た。LCMS (ESI+) C108H129F2N19O29S2 2+(M/2+H)+の計算値1113.45, 実測値1113.80.
実施例９：化合物２１ｂの調製
[0201]１９の調製：Ｎ２雰囲気下で、ＢＣＮ－ＯＨ（５、１．０ｇ、６．７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）冷却溶液（０℃）に、ＣＳＩ（５９７μＬ、０．９４ｇ、６．７ｍｍｏｌ）を添加した。７分後、撹拌を周囲温度で続け、追加のＣＳＩ（５８μＬ、０．１ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）を添加した。６分撹拌した後、Ｅｔ３Ｎ（１．８６ｍＬ、１．３５ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）を添加し、続いて３分撹拌した後、２－［２－（１－ピペラジニル）エトキシ］エタノール（１８、１．４２ｍＬ、１．５１ｇ、８．６５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１７時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、残渣を自動グラジエントシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０→１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、１９を明黄色フォーム（２．０５ｇ、３．９１ｍｍｏｌ、５８％）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ (ppm) 4.21 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 3.72-3.63 (m, 4H), 3.62-3.56 (m,2H), 3.47-3.36 (m, 4H), 2.70-2.55 (m, 6H), 2.37-2.15 (m, 6H), 1.66-1.48 (m,2H), 1.39 (五重線, J = 8.7 Hz, 1H), 1.03-0.89 (m, 2H).LCMS (ESI+) C19H32N8O6S+(M+H+)の計算値430.20, 実測値430.43.
[0202]２０の調製：撹拌した１９（７５０ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１８ｍＬ）冷却懸濁液（０℃）に、ＣＳＩ（１６７μＬ、２７２ｍｇ、１．９２ｍｍｏｌ）を添加した。０℃で２分撹拌した後、撹拌を周囲温度で２８分間続けた。次いで、Ｅｔ３Ｎ（１．２２ｍＬ、８８６ｍｇ、８．７５ｍｍｏｌ）を添加し、３分撹拌した後、ジエタノールアミン（２２９ｍｇ、２０９μＬ、２．１８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．５ｍＬ）溶液を添加した。４０分後、ビス（４－ニトロフェニル）カーボネート（１．３３ｇ、４．３８ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（７２５μＬ、５２６ｍｇ、５．２０ｍｍｏｌ）を添加した。１８時間後、追加のビス（４－ニトロフェニル）カーボネート（２６６ｍｇ）を添加し、撹拌を２５時間続けた。反応混合物を濃縮し、残渣を自動グラジエントシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０→２０％ ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ、続いて５０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製した。生成物を含む画分の貯蔵及び濃縮を行った後、残渣を分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（ＸＢｒｉｄｇｅ ｐｒｅｐ Ｃ１８ ５μｍ ＯＢＤ、３０×１００ｍｍ、３０→９０％ ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ＋１％ＡｃＯＨ）によって２回再精製して、２０をフィルム（１０．５ｍｇ、１０．８μｍｏｌ、０．６％）として得た。LCMS (ESI+) C38H48N7O19S2 +(M+H+)の計算値970.24, 実測値970.39.
[0203]２１ｂの調製：化合物２０（１０．５ｍｇ、１０．８μｍｏｌ）のＤＭＦ（２７０μＬ）溶液に、化合物１０ｂ（２０．４ｍｇ、２７．１μｍｏｌ）のＤＭＦ（１７５μＬ）溶液及びＥｔ３Ｎ（６．６ｍｇ、９．１μＬ、６５μｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１７．５時間放置した。反応混合物をＤＣＭ（２ｍＬ）で希釈し、自動グラジエントシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０→２０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、２１ｂを淡黄色固体（１３．５ｍｇ、６．１３μｍｏｌ、５７％）として得た。LCMS (ESI+) C106H125F2N7O19S2 2+(M/2+2H)+の計算値1101.41, 実測値1101.61.
実施例１０：化合物２５ａの調製
Figure 2023541637000071
[0204]２３ａの調製：乾燥ＤＭＦ中の１０ａ（２１．７ｍｇ、２８．７μｍｏｌ、１．０当量）及びＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－ＯＨ（１２．６ｍｇ、３６．６μｍｏｌ、１．２４当量）の溶液に、ＨＢＴＵ（１８．５ｍｇ、４８．９μｍｏｌ、１．７当量）を添加した後、続いてＤｉＰＥＡ（１２．３ｍｇ、１６．５μＬ、９４．９μｍｏｌ、３．３当量）を添加した。得られた混合物を混合し、室温で１１０分間放置し、次いでＤＣＭで希釈し、得られた混合物をグラジエントカラムクロマトグラフィー（０→１２％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、２３ａを明黄色固体（３６ｍｇ、ＨＰＬＣ純度４８％、１６μｍｏｌ、５５，０％）として得た。LCMS (ESI+) C59H60FN8O12 +(M+H+)の計算値1091.43, 実測値1091.61.
[0205]２４ａの調製：化合物２３ａ（３６ｍｇ、４８重量％、１６μｍｏｌ、１．０当量）を、ＤＭＦ（２５０μＬ）とＨ２Ｏ（１．２５μＬ）の混合物に溶解した。得られた混合物に、Ｅｔ３Ｎ（８．０ｍｇ、１１μＬ、７９μｍｏｌ、５．０当量）を添加し、得られた溶液を室温で約５時間放置した。次に、追加のＥｔ３Ｎ（８．０ｍｇ、１１μＬ、７９μｍｏｌ、５．０当量）を反応混合物に添加し、混合物を室温で１８時間放置し、次いで冷凍庫にもう１日貯蔵した。反応混合物を冷凍庫から取り出し、真空中で濃縮した後、続いて乾燥ＤＭＦと（３回）共蒸発させて、２４ａを褐色油として得た。それをさらに精製することなく使用した。LCMS (ESI+) C44H50FN8O10 +(M+H+)の計算値869.36, 実測値869.53.
[0206]２５ａの調製：２４ａ（１４ｍｇ、１６μｍｏｌ、３．２当量）が入っているバイアルに、１００ｍＭ 化合物７（４．５ｍｇ、５０μＬ、５．０μｍｏｌ、１．０当量）のＤＭＦ溶液を添加し、続いてＥｔ３Ｎ（２．５ｍｇ、３．５μＬ、２５μｍｏｌ、５．０当量）を添加した。得られた混合物に、追加の乾燥ＤＭＦ（５０μＬ）を添加し、次いで反応混合物を室温で４．５時間放置した。次に、反応混合物を乾燥ＤＭＦで希釈し、次いでＲＰ－ＨＰＬＣ（Ｃ１８、３０％→９０％ ＭｅＣＮ（１％ＡｃＯＨ含有）／水（１％ＡｃＯＨ含有））によって精製して、２５ａ（３．６ｍｇ、１．５μｍｏｌ、収率３１％）を得た。LCMS (ESI+) C110H130F2N20O33S2+(M+2H+)の計算値1180.93. 実測値1180.94.
実施例１１：化合物２６ａの調製
Figure 2023541637000072
[0207]１０ａ（１８．９ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（５００μＬ）溶液に、１３（１６ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（１１μＬ、０．０７５ｍｍｏｌ）を添加した。周囲温度で２３時間撹拌した後、反応混合物をＤＭＦで総容積が７００μＬに到達するまで希釈し、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（Ｃｏｌｕｍｎ Ｘｂｒｉｄｇｅ ｐｒｅｐ Ｃ１８ ５μｍ ＯＢＤ、３０×１００ｍｍ、３０％→１００％ ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ＋１％ＡｃＯＨ）によって精製した。生成物２６ａが灰白色固体（５．３ｍｇ、４．６μｍｏｌ、１８．６％）として得られた。LCMS (ESI+) C56H66FN8O15S+(M+H)+の計算値1142.23, 実測値1142.54.
実施例１２：化合物３１ａ及び３２ａの調製
Figure 2023541637000073
[0208]２７ａの調製：Ｂｏｃ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－ＯＨ（１１．１ｍｇ、３６．６μｍｏｌ、１．３２当量）が入っているバイアルに、１４８．４ｍＭ １０ａ（２１．０ｍｇ、１８７．５μＬ、２７．８３μｍｏｌ、１．０当量）の乾燥ＤＭＦ溶液を添加した後、続いてＨＢＴＵ（１８．６ｍｇ、４９．０μｍｏｌ、１．７６当量）及び追加の乾燥ＤＭＦ（７５μＬ）を添加した。最後に、ＤｉＰＥＡ（１２．２ｍｇ、１６．５μＬ、９４．７μｍｏｌ、３．４０当量）を添加し、反応混合物を、褐色溶液が得られるまで混合した。反応混合物を室温で約３５分間放置し、次いでＤＣＭ（２．８ｍＬ）で希釈し、次いで得られた溶液をグラジエントカラムクロマトグラフィー（０→１２％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、２７ａを白色残渣（３０．８ｍｇ、２９．６μｍｏｌ、定量的収率）として得た。LCMS (ESI+) C54H67FN7O13 +(M+H+)の計算値1040.48, 実測値1040.70.
[0209]２８ａの調製：１０ａ（６１９．９ｍｇ、１当量、８２１．３μｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（２．５ｍｌ）溶液が入っている１０ｍＬの容器に、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯＦｍ）－ＯＨ（４１８．３ｍｇ、０．９３当量、７６３．８μｍｏｌ）を添加した。得られた白色懸濁液に、追加の乾燥ＤＭＦ（１．０ｍＬ）を添加した後、続いてＤＩＰＥＡ（３１８．５ｍｇ、４２９μＬ、３当量、２．４６４ｍｍｏｌ）を添加した。この懸濁液に、ＨＢＴＵ（２８９．７ｍｇ、０．９３当量、７６３．８μｍｏｌ）を追加の乾燥ＤＭＦ（０．５ｍＬ）と一緒に添加した。反応混合物を５分間混合し、溶液を生成し、それを室温でもう４０分間放置した。反応混合物をＤＣＭ（４０ｍＬ）で希釈し、得られた混合物をグラジエントカラムクロマトグラフィー（０→１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、２８ａを白色固体（６１７．５ｍｇ、４８１μｍｏｌ、６３，０％）として得た。LCMS (ESI+) C74H71FN7O13 +(M+H+)の計算値1284.51, 実測値1284.91.
[0210]２９ａの調製：２８ａ（６１７．５ｍｇ、４８１μｍｏｌ、１．０当量）が入っているバイアルに、ＤＭＦ（７．５ｍＬ）及びＥｔ３Ｎ（６７０μＬ、４８６．５ｍｇ、４．８１ｍｍｏｌ、１０当量）を添加した。得られた混合物を水浴中で４０℃に５分間加熱し、褐色溶液を生成し、それを室温で１８時間放置した。次いで、反応混合物を冷凍庫中で３日間維持した。次に、反応混合物を冷凍庫から取り出し、真空中で濃縮し、２９ａを褐色油として得た。それをさらに精製することなく使用した。LCMS (ESI+) C45H51FN7O11 +(M+H+)の計算値884.36, 実測値884.70.
[0211]３０ａの調製：２７ａ（１０．８ｍｇ、１０．４μｍｏｌ、１．０当量）が入っているバイアルを氷浴に入れた後、続いて氷冷ＴＦＡ（１．０４ｇ、７００μＬ、９．１５ｍｍｏｌ、８８１当量）を添加した。得られた溶液を混合し、次いで氷浴に７０分間放置した。次いで、反応混合物を真空中で濃縮し（３４℃の水浴）、残渣をＭｅＣＮとＤＭＳＯの１：１混合物に溶解し、次いでＲＰ－ＨＰＬＣ（Ｃ１８、５％→９０％ ＭｅＣＮ（＋１％ＡｃＯＨ）／水（＋１％ＡｃＯＨ））によって精製して、３０ａを酢酸アンモニウム塩（４．５ｍｇ、５．１μｍｏｌ、収率４９％）として得た。LCMS (ESI+) C45H51FN7O11 +(M+H+)の計算値884.36, 実測値884.55.
[0212]３１ａの調製：粗製２９ａ（３８６ｍｇ、４３７μｍｏｌ、３．８６当量）を乾燥ＤＭＦ（３００μＬ）に溶解した後、１４（１０５．６ｍｇ、１Ｈ－ｑＮＭＲによって８８重量％、１１３．１μｍｏｌ、１．０当量）、追加の乾燥ＤＭＦ（２００μＬ）及びＥｔ３Ｎ（７８．８μＬ、５７．２ｍｇ、５６５μｍｏｌ、５．０当量）を添加した。得られた混合物を混合し、褐色溶液を生成した。それを室温で８５分間放置した。次に、反応混合物を冷凍庫に１８．５時間貯蔵し、次いで冷凍庫から取り出し、室温で追加の６時間放置した後、反応混合物を冷凍庫にもう１８時間貯蔵した。最後に、反応混合物を冷凍庫から取り出し、ＲＰ－ＨＰＬＣ（Ｃ１８、５０％→１００％ ＭｅＣＮ（１％ＡｃＯＨ）／水（１％ＡｃＯＨ））によって精製した。純粋な画分を、乾燥ＤＭＦ（５３μＬ）中で２９ａ（３８．９ｍｇ、４４．０μｍｏｌ、３．８８当量）、１４（１０．６ｍｇ、１Ｈ－ｑＮＭＲによって８８重量％、１１．４μｍｏｌ、１．０当量）及びＥｔ３Ｎ（７．９１μＬ、５．７４ｍｇ、５６．８μｍｏｌ、５．０当量）を利用した、室温で反応時間５時間のより小スケール反応から得られた純粋な画分と組み合わせた。純粋な画分を真空中で濃縮し、３１ａを灰白色残渣（８６．６ｍｇ、３７．５μｍｏｌ、３３．１％）として得た。LCMS (ESI+) C112H131F2N17O33S2+(M+2H+)の計算値1156.44, 実測値1157.03.
[0213]３２ａの調製：３０ａ（４．５０ｍｇ、５．０９μｍｏｌ、３．２８当量）が入っているバイアルに、１００ｍＭ 化合物７の乾燥ＤＭＡ溶液（１．４０ｍｇ、１５．５μＬ、１．５５μｍｏｌ、１．０当量）を添加した後、続いてＥｔ３Ｎ（１．２６ｍｇ、１．７３μＬ、１２．４μｍｏｌ、８．００当量）を添加した。得られた混合物をボルテックスし、４３℃に約１０分間加熱して、橙色溶液を得た。次いで、反応混合物を暗所に室温で２時間４５分放置し、次いで冷蔵庫に１６時間貯蔵した。次に、反応混合物を冷凍庫から取り出し、室温で４０分間放置した後、反応混合物をＤＭＦで希釈した。得られた溶液をＲＰ－ＨＰＬＣ（Ｃ１８、３０％→９０％ ＭｅＣＮ（＋１％ＡｃＯＨ）／水（＋１％ＡｃＯＨ））によって精製して、３２ａを白色固体（１．０ｍｇ、０．４２μｍｏｌ、２７％）として得た。LCMS (ESI+) C112H132F2N18O35S2 +(M+2H+)の計算値1195.93, 実測値1196.33.
実施例１３：化合物３５ａの調製
Figure 2023541637000074
[0214]３３の調製：化合物５（１０１ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（８００μＬ）に溶解し、クロロスルホニルイソシアネート（ＣＳＩ、６４．０μＬ、０．７４ｍｍｏｌ）を添加すると、褐色溶液が生じた。周囲温度で１７分間撹拌した後、Ｅｔ３Ｎ（１８７．０μＬ、１．３４ｍｍｏｌ）を添加した（混合物が黄色に変色）後、続いてＮ，Ｎ，－（２－ヒドロキシエチル）エチレンジアミン（１１０．９ｍｇ、０．７４８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１．０ｍＬ）に溶解した。周囲温度でさらに１８時間撹拌した後、粗製混合物を真空中で濃縮し、自動グラジエントシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→３０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、３３を白色蝋様固体（３３．５ｍｇ、０．０８３ｍｍｏｌ、１２％）として得た。LCMS (ESI+) C17H30N3O6S+(M+H)+の計算値404.50, 実測値404.42.
[0215]３４の調製：３３（１６．５ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（９００μＬ）溶液に、ビス（４－ニトロフェニル）カーボネート（２９．９ｍｇ、０．０９８ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（１７．０μＬ、０．０１２ｍｍｏｌ）を添加した。周囲温度で９６時間撹拌した後、粗製混合物を真空中で濃縮し、自動グラジエントシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１０％→１００％ ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）によって精製して、３４を透明な油（２．５ｍｇ、０．００３ｍｍｏｌ、８％）として得た。LCMS (ESI+) C31H36N5O14S+(M+H)+の計算値734.71, 実測値734.48.
[0216]３５ａの調製：３４（２．５ｍｇ、０．００３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１１０μＬ）溶液に、２００ｍＭ １０ａ（４１．０μＬ、６．２ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ）のストック及びＥｔ３Ｎ（３．０μＬ、０．０２ｍｍｏｌ）を添加した。周囲温度で４．５時間後に、反応混合物を分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（Ｃｏｌｕｍｎ Ｘｂｒｉｄｇｅ ｐｒｅｐ Ｃ１８ ５μｍ ＯＢＤ、３０×１００ｍｍ、５％→９０％ ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ＋１％ＡｃＯＨ）によって精製した。生成物３５ａが無色フィルム（１．０ｍｇ、０．５μｍｏｌ、１０％）として得られた。LCMS (ESI+) C99H112F2N15O24S+(M+H)+の計算値1966.10, 実測値1966.85.
実施例１４：化合物３９ａの調製
Figure 2023541637000075
[0217]３７ａの調製：ＤＢＣＯ－ＰＥＧ４－ＯＳｕ（３６、６３．０ｍｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．０ｍＬ）溶液に、Ｖａｌ－Ａｌａ－ＰＡＢ（１５ａ、２６．０ｍｇ、０．１０８ｍｍｏｌ）を添加した後、続いてＥｔ３Ｎ（４１．０μＬ、０．２８ｍｍｏｌ）を添加した。周囲温度で２時間撹拌した後、ＤＭＦ（１５０μＬ）に溶解したＶａｌ－Ａｌａ－ＰＡＢ（１５ａ、７．８ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）をさらに添加した。さらに４５分後、反応混合物を０．５ｍＬの容積に濃縮し、自動グラジエントシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→１５％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、３７ａを透明な油（９４ｍｇ、０．１１３ｍｍｏｌ）として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ (ppm) 7.72 - 7.61 (m, 3H), 7.44 - 7.21 (m, 9H), 5.12 (d, J = 14.0Hz, 1H), 4.74 - 4.56 (m, 3H), 4.24 - 4.14 (m, 1H), 3.83 - 3.73 (m, 1H), 3.70(dd, J = 14.0 Hz; J = 1.8 Hz, 1H), 3.66 - 3.36 (m, 16H), 3.35 - 3.14 (m, 2H),2.70 - 1.80 (m, 6H), 1.49 - 1.36 (m, 3H), 1.05 - 0.90 (m, 6H).
[0218]３８ａの調製：３７ａ（９４．０ｍｇ、０．１１３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．５ｍＬ）溶液に、ビス（４－ニトロフェニル）カーボネート（３８．０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（４６．０μＬ、０．３３ｍｍｏｌ）を添加した。２時間撹拌した後、余分のビス（４－ニトロフェニル）カーボネート（１０．０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を添加した。さらに１時間後、反応混合物を、１ｍＬの溶媒が残るまで濃縮し、自動グラジエントシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１００％ ＤＣＭ、続いて０％→１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、３８ａを透明な油（７９ｍｇ、０．０９５ｍｍｏｌ）として得た。LCMS (ESI+) C52H60N6O14 +(M+H)+の計算値994.07, 実測値994.74.
[0219]３９ａの調製：エクサテカン遊離塩基（７．２８ｍｇ、０．０１６７ｍｍｏｌ、９ａの調製において回収、実施例３を参照のこと）のＤＭＦ（２１４μＬ）溶液に、３８ａ（１５．１ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（６．０μＬ、０．０４ｍｍｏｌ）を添加した。周囲温度で１６．５時間後、反応混合物をＤＭＦで６００μＬになるまで希釈し、分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（Ｃｏｌｕｍｎ Ｘｂｒｉｄｇｅ ｐｒｅｐ Ｃ１８ ５μｍ ＯＢＤ、３０×１００ｍｍ、３０％→１００％ ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ＋１％ＡｃＯＨ）によって精製した。生成物３９ａが無色フィルム（８．３ｍｇ、１５．２μｍｏｌ、４２％）として得られた。LCMS (ESI+) C70H78FN8O15 +(M+H)+の計算値1290.41, 実測値1290.02.
実施例１５：化合物４３ａの調製
Figure 2023541637000076
[0220]４１の調製：ＤＩＢＯ（４０、２２０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（１５ｍＬ）溶液に、クロロスルホニルイソシアネート（ＣＳＩ、８８．１μＬ、１．０ｍｍｏｌ）を添加すると、白色懸濁液が形成された。周囲温度で２０分間撹拌した後、Ｅｔ３Ｎ（２８２μＬ、２．０ｍｍｏｌ）を添加した後、続いて２－アミノ－エトキシエタノール（１１７ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）を添加した。さらに２０分間撹拌した後、反応混合物をＮＨ４Ｃｌ水溶液（飽和、３０ｍＬ）添加によりクエンチした。分離後、水性層をＤＣＭ（２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。残渣を自動グラジエントシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→７％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、４１を明黄色油（４９８ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ (ppm) 7.52 - 7.42 (m, 1H), 7.35 - 7.29 (m, 2H), 7.28 - 7.19 (m,5H), 5.42 - 5.39 (bs, 1H), 3.48 - 3.43 (m, 4H), 3.36 - 3.32 (m, 2H), 3.23 -3.18 (m, 2H), 3.17 - 3.12 (m, 2H).
[0221]４２の調製：４１（１９２ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３０ｍＬ）溶液に、Ｎ２雰囲気下、クロロスルホニルイソシアネート（ＣＳＩ、３８．８μＬ、０．４４ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。周囲温度で２０分間撹拌した後、Ｅｔ３Ｎ（３１１μＬ、２．２３ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を１０分間撹拌した。その後、ジエタノールアミン（５１．６μＬ、０．５３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．５ｍＬ）溶液を添加した。反応を１時間撹拌した後、続いてクロロギ酸４－ニトロフェニル（１８０ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（１８７μＬ、１．３４ｍｍｏｌ）を添加した。周囲温度で１８時間撹拌した後、反応混合物を自動グラジエントシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→６％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、４２を白色固体（１８７ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）として得た。LCMS (ESI+) C40H39N6O19S2 +(M+H)+の計算値971.90, 実測値971.26.
[0222]４３ａの調製：１０ａ（１５ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１１０μＬ）溶液に、４２（７．９ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（５．０μＬ、０．０４ｍｍｏｌ）を添加した。周囲温度で６時間後、反応混合物を自動グラジエントシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％→１５％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、４３ａを灰白色固体（１０．１ｍｇ、０．００４６ｍｍｏｌ、５５％）として得た。LCMS (ESI+) C108H115F2N16O29S2 +(M/2+H)+の計算値1101.64, 実測値1101.97.
実施例１６：化合物４９ａの調製
[0223]４５の調製：（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（５－ヒドロキシペンチル）カルバメート（３９７ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＣＭ（５５ｍＬ）溶液に、ＣＳＩ（１０６μＬ、１．２２ｍｍｏｌ、１．０当量）を室温で滴下して加えた。反応混合物を室温で２０分間撹拌した後、続いてＥｔ３Ｎ（８５０μＬ、６．１０ｍｍｏｌ、５．０当量）を添加した。得られた混合物を室温で１０分間撹拌し、次いでジエタノールアミン（１４４ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ、１．１１当量）のＤＭＦ（１．７ｍＬ）溶液を添加した。反応混合物を２時間撹拌し、次いでクロロギ酸４－ニトロフェニル（４９２ｍｇ、２．４４ｍｍｏｌ、２．０当量）を追加のＥｔ３Ｎ（３４０μＬ、２．４４ｍｍｏｌ、２．０当量）と一緒に添加した。反応混合物を１８時間撹拌し、次いで真空中で濃縮し、得られた残渣をＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶解し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（５０ｍＬ）で洗浄した。水層をＤＣＭ（５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、真空中で濃縮した。次いで、残渣をグラジエントカラムクロマトグラフィー（０→５％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製した後、続いて第２のカラムクロマトグラフィー（６５％ ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）によって精製して、４５を白色粉末（３４２ｍｇ、３９５μｍｏｌ、収率３２．３％）として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ (ppm) 8.24 (d, J = 9.2 Hz, 4H), 7.76 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.59 (d,J = 7.5 Hz, 2H), 7.42-7.33 (m, 6H), 7.33-7.27 (m, 2H), 4.86 (t, J = 5.5 Hz,1H), 4.51 (t, J = 5.4 Hz, 4H), 4.43 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 4.21 (t, J = 6.8 Hz,1H), 4.17-4.09 (m, 2H), 3.84 (t, J = 4.4 Hz, 4H), 3.24-3.14 (m, 2H), 1.72-1.62(m, 2H), 1.62-1.48 (m, 3H), 1.48-1.36 (m, 2H).
[0224]４６ａの調製：Ｅｔ３Ｎ（３７．７μＬ、２７．３ｍｇ、２７０μｍｏｌ、１０当量）を含む２５ｍＭ 粗製２９ａの乾燥ＤＭＦ溶液（２５ｍｇ、１．１ｍＬ、２８μｍｏｌ、４．０当量）を真空中で濃縮した。得られた残渣に、４５（６．１ｍｇ、７．１μｍｏｌ、１．０当量）の乾燥ＤＭＦ（１５０μＬ）溶液を添加した後、続いてＥｔ３Ｎ（６．０μＬ、４．２ｍｇ、４２μｍｏｌ、６．０当量）を添加した。得られた混合物を４５℃に５分間加熱し、次いで室温で２．５時間放置し、次いで冷蔵庫に１７時間貯蔵した。次に、反応混合物を冷凍庫から取り出し、乾燥ＤＭＦで希釈し、メンブランフィルターで濾過し、次いでＲＰ－ＨＰＬＣ（Ｃ１８、５０％→１００％ ＭｅＣＮ（＋１％ＡｃＯＨ）／水（＋１％ＡｃＯＨ））によって精製して、４６ａを（７．４ｍｇ、３．１μｍｏｌ、収率４４％）として得た。LCMS (ESI+) C117H131F2N17O32S2+(M+2H+)の計算値1178.44, 実測値1178.79.
[0225]４９ａの調製：４６ａ（７．４ｍｇ、３．１μｍｏｌ、１．０当量）が入っているバイアルに、ＤＭＦ（２００μＬ）を添加した後、続いてＥｔ３Ｎ（４．４μＬ、３．２ｍｇ、３１．６μｍｏｌ、１０当量）を添加した。得られた混合物を室温で２時間放置した後、続いて追加のＥｔ３Ｎ（１０μＬ、７．３ｍｇ、７１．７μｍｏｌ、２３当量）を添加した。反応混合物を混合し、室温で２１時間放置した。次に、ＤＭＦ（５μＬ）中のＤＢＣＯ－ＮＨＳエステル４８（２．１ｍｇ、５．２μｍｏｌ、１．７当量）を添加した。得られた褐色溶液を室温で１時間放置し、次いで冷蔵庫に１８時間貯蔵した。翌日、反応混合物を冷凍庫から取り出し、次いでＲＰ－ＨＰＬＣ（Ｃ１８、５０％→１００％ＭｅＣＮ（＋１％ＡｃＯＨ）／水（＋１％ＡｃＯＨ）によって精製して、不純な生成物を得た。それをさらにグラジエントカラムクロマトグラフィー（０→３０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、４９ａを白色固体（２．５ｍｇ、１．０μｍｏｌ、収率３３％）として得た。LCMS (ESI+) C121H134F2N18O32S2+(M+2H+)の計算値1210.96, 実測値1211.20.
実施例１７：化合物５２ａの調製
Figure 2023541637000078
[0226]５０ａの調製：化合物１０ａ（８７．３μｍｏｌ、１．７１当量）が入っているバイアルに、４５（１６．２ｍｇ、１８．７μｍｏｌ、１．０当量）を添加した後、続いて乾燥ＤＭＦ（２００μＬ）及びＥｔ３Ｎ（９．５ｍｇ、１３μＬ、９４μｍｏｌ、５．０当量）を添加した。得られた褐色溶液を室温で５０分間放置し、次いで追加の中間体１０ａ（５５．３μｍｏｌ、３．０当量）が入っているバイアルに移した。得られた反応混合物を室温で４０分間放置した後、続いて追加の乾燥ＤＭＦ（１５０μＬ）を添加した。反応混合物を室温で２０時間放置し、次いで冷蔵庫に３日間貯蔵した。次に、反応混合物を冷凍庫から取り出し、２，２’－（エタン－１，２－ジイルビス（オキシ））ビス（エタン－１－アミン）（５．０μＬ）を添加した。反応混合物を室温で２０分間放置し、次いで乾燥ＤＭＦで希釈し、０．２μｍのナイロンシリンジフィルターで濾過し、次いでＲＰ－ＨＰＬＣ（Ｃ１８、５０％→１００％ ＭｅＣＮ（＋１％ＡｃＯＨ）／水（＋１％ＡｃＯＨ））によって精製して、不純な生成物を得た。それをさらにグラジエントカラムクロマトグラフィー（０→３０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、５０ａを白色残渣（６．５ｍｇ、３．０６μｍｏｌ、収率１６％）として得た。LCMS (ESI+) C107H117F2N15O26S2+(M+2H+)の計算値1049.40, 実測値1049.28.
[0227]５２ａの調製：５０ａ（１．６ｍｇ、０．７６μｍｏｌ、１．０当量）が入っているバイアルに、ＤＭＦ（１５０μＬ）を添加した後、続いてＥｔ３Ｎ（１．５ｍｇ、２．１μＬ、１５μｍｏｌ、２０当量）を添加した。得られた淡褐色溶液を室温で５０分間放置した後、続いて追加のＥｔ３Ｎ（３．５μＬ）を添加した。反応混合物を室温でもう１８時間放置し、次いで真空中で濃縮した。この粗製残渣に、（（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イル）メチル（４－ニトロフェニル）カーボネート（ＢＣＮ－ＯＰＮＰ、１．２ｍｇ、３．８μｍｏｌ、５．０当量）の乾燥ＤＭＦ（１０μＬ）溶液を添加した後、続いてＥｔ３Ｎ（０．３５ｍｇ、０．４８μＬ、３．４μｍｏｌ、４．５当量）を添加した。得られた褐色溶液をボルテックスし、室温で１４０分間放置した。次いで、反応混合物をＤＣＭで希釈し、得られた混合物をグラジエントカラムクロマトグラフィー（０→１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、５２ａを白色固体（１．７ｍｇ、ＨＰＬＣによる純度８６％、０．７１μｍｏｌ、９４％）として得た。LCMS (ESI+) C103H119F2N15O26S2+(M+2H+)の計算値1026.41, 実測値1026.11.
実施例１８：化合物５４ａの調製
[0228]１０ａ（１５ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１５０μＬ）溶液に、２，５－ジオキシピロリジン－１－イル６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノエート（５３、５．５ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１０μＬ、０．０６０ｍｍｏｌ）を添加した。周囲温度で３５分後、反応混合物を分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（Ｃｏｌｕｍｎ Ｘｂｒｉｄｇｅ ｐｒｅｐ Ｃ１８ ５μｍ ＯＢＤ、３０×１００ｍｍ、３０％→１００％ ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ＋１％ＡｃＯＨ）によって精製した。生成物５４ａが透明な油（２．４ｍｇ、２．１μｍｏｌ、１１％）として得られた。LCMS (ESI+) C50H55FN7O11 +(M+H)+の計算値949.01, 実測値949.82.
実施例１９：化合物５７ｂの調製
Figure 2023541637000080
[0229]５５ｂの調製：乾燥ＤＭＦ（２ｍＬ）中の化合物５３（６８４μｍｏｌ）が入っているバイアルに、Ｈ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＯＨ（１５ｂ、２５９ｍｇ、６８４μｍｏｌ、１．０当量）を添加し、得られた溶液を室温で１７時間撹拌した。次に、反応混合物を追加のＤＭＦ（２．０ｍＬ）で希釈し、次いでＥｔ２Ｏ（８０ｍＬ）に注ぎ、濾過した。濾過した固体をＥｔ２Ｏ（２５ｍＬ、２回）で洗浄し、次いで真空中で濃縮して、５５ｂを白色固体（３７８ｍｇ、１Ｈ－ＮＭＲ純度９５．３％、６２９μｍｏｌ、収率９１．９％）として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm) 9.91 (s, 1H), 8.08 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 8.4 Hz,1H), 7.56 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.24 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.02 (s, 2H),6.06-5.90 (m, 1H), 5.42 (s, 2H), 5.11 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.52-4.33 (m, 3H),4.20 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.09-2.93 (m, 2H), 2.26-2.06 (m, 2H), 2.05-1.91 (m,1H), 1.77-1.65 (m, 1H), 1.65-1.56 (m, 1H), 1.56-1.30 (m, 6H), 1.28-1.15 (m,2H), 0.93-0.76 (m, 6H).
[0230]５６ｂの調製：ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中の５５ｂ（２１４ｍｇ、１Ｈ－ＮＭＲ純度９５．３％、０．３５７ｍｍｏｌ）及びビス（４－ニトロフェニル）カーボネート（２１７ｍｇ、０．７１４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（８８μＬ、０．５３５ｍｍｏｌ）を添加した。周囲温度で２時間撹拌した後、反応混合物をジエチルエーテル（８０ｍＬ）に注ぎ、濾過した。残渣をジエチルエーテル（２回×５０ｍＬ）に懸濁し、再び濾過した。真空中で濃縮した後、５６ｂが明黄色固体（２５１．０ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ、９５％）として得られた。LCMS (ESI+) C35H44N7O11 +(M+H)+の計算値738.76, 実測値738.25. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm) 10.08 (s, 1H), 8.40-8.28 (m, 2H), 8.12 (d, J = 7.6 Hz, 1H),7.82 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.67 (d, J = 8.5, 2H), 7.62-7.53 (m, 2H), 7.42 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.02 (s, 2H), 5.99 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 5.43 (s, 2H), 5.26 (s,2H), 4.46-4.34 (m, 1H), 4.21 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 3.12-2.88 (m, 2H), 2.26-2.04(m, 2H), 2.04-1.89 (m, 1H), 1.77-1.67 (m, 1H), 1.67-1.56 (m, 1H), 1.56 (m, 6H),1.27-1.14 (m, 2H), 0.94-0.78 (m, 6H).
[0231]５７ｂの調製：エクサテカンメシル酸塩（２０ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（２２０μＬ）溶液に、ＤＩＰＥＡ（３３．０μＬ、０．１９ｍｍｏｌ）及び５６ｂ（２５ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ）を添加した。周囲温度で２時間後、粗製反応混合物を分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（Ｃｏｌｕｍｎ Ｘｂｒｉｄｇｅ ｐｒｅｐ Ｃ１８ ５μｍ ＯＢＤ、３０×１００ｍｍ、３０％→９０％ ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ＋１％ＡｃＯＨ）によって直接精製した。生成物５７ｂが透明な油（８．１ｍｇ、７．８μｍｏｌ、２１％）として得られた。LCMS (ESI+) C53H61FN9O12 +(M+H)+の計算値1035.10, 実測値1035.82.
実施例２０：化合物５９ｂの調製
[0232]１０ａ（１５ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１５０μＬ）溶液に、マレイミド－ＰＥＧ１－ＯＰＮＰ（５８、７．７ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１０μＬ、０．０６０ｍｍｏｌ）を添加した。周囲温度で２．５時間後、粗製反応混合物を分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（Ｃｏｌｕｍｎ Ｘｂｒｉｄｇｅ ｐｒｅｐ Ｃ１８ ５μｍ ＯＢＤ、３０×１００ｍｍ、３０％→１００％ ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ＋１％ＡｃＯＨ）によって直接精製した。生成物５９ａが透明な油（３．６ｍｇ、３．４μｍｏｌ、１７％）として得られた。LCMS (ESI+) C49H53FN7O13 +(M+H)+の計算値966.98, 実測値966.77.
実施例２１：化合物６０ａの調製
Figure 2023541637000082
[0233]マレイミドカプロン酸ＮＨＳエステル（５３、５．２ｍｇ、１７μｍｏｌ、１．０当量）が入っているバイアルに、Ｅｔ３Ｎ（２３．３μＬ、１６．９ｍｇ、１６７μｍｏｌ、１０当量）を含有する２５ｍＭ 粗製２９ａの乾燥ＤＭＦ溶液（１５ｍｇ、０．６８ｍＬ、１７μｍｏｌ、１．０当量）を添加した。得られた褐色溶液を室温で４０分間放置し、次いでＤＭＦ（２０μＬ）中の追加のマレイミドカプロン酸ＮＨＳエステル（２．１ｍｇ、６．８μｍｏｌ、０．４当量）を添加した。ＲＭを室温でもう２４分間放置し、次いでＲＰ－ＨＰＬＣ（Ｃ１８、４０％→１００％ ＭｅＣＮ（１％ＡｃＯＨ）／水（１％ＡｃＯＨ））によって精製して、６０ａを白色残渣（３．３ｍｇ、２．５μｍｏｌ、ＨＰＬＣ純度８０％、収率１４％）として得た。LCMS (ESI+) C55H62FN8O14 +(M+H+)の計算値1077.44, 実測値1077.78.
実施例２２． ＡＤＣ１ａ－ＤＡＲ４の調製（構造について、図９を参照のこと）
[0234]リンカーコンジュゲートである化合物１ａの生体分子であるアジド修飾トラスツズマブへのコンジュゲーションによって、本発明に係るバイオコンジュゲートを調製した。したがって、国際公開第２０１６１７０１８６号に従って調製されたトラスツズマブ－（６－Ｎ３－ＧａｌＮＡｃ）２（６０４μＬ、２０．６ｍｇ、ＰＢＳ ｐＨ ７．４中の３４．１ｍｇ／ｍｌ、ｔｒａｓｔ－ｖ１）の溶液に、ＰＢＳ ｐＨ ７．４（６３μＬ）、１，２－プロピレングリコール（５８７μＬ）及び化合物１ａ（８０μＬ、ＤＭＦ中の１０ｍＭ溶液）を添加した。反応を室温で終夜インキュベートした後、続いてＰＢＳ ｐＨ ７．４に透析した。残留遊離ペイロードを、チャコール（ＡＤＣ １ｍｇ当たりチャコール１．２ｍｇ）の添加後、続いて室温で終夜回転させることによって除去した。チャコールを遠心及び濾過によって除去し、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ ＧＬ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）カラムを用いてＡＫＴＡ Ｐｕｒｉｆｉｅｒ－１０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）でＡＤＣを精製した。ＩｄｅＳ消化試料の質量スペクトル分析は、コンジュゲートされたＦｃ／２フラグメント（ペイロードの２つの閉環ラクトン形）に対応する１つの主生成物（観測質量２６４９４Ｄａ、全Ｆｃ／２フラグメントの約６０％、計算質量２６４９５Ｄａ）、及びコンジュゲートされたＦｃ／２フラグメント（ペイロードの１つの閉環ラクトン形及び１つの開環カルボキシレート形）に対応する１つの少量生成物（観測質量２６５１０Ｄａ、全Ｆｃ／２フラグメントの約３０％、計算質量２６５１３Ｄａ）を示した。
[0235]ＡＤＣ１ａ－ＤＡＲ８（構造について、図９を参照のこと）を、化合物１ａのトラスツズマブ－（ＨＣ－Ｌ１９６Ｎ変異体）－（６－Ｎ３－ＧａｌＮＡｃ）４（ｔｒａｓｔ－ｖ５）へのコンジュゲーションによって同様に調製した。
実施例２３． ＡＤＣ２（ＤＡＲ４）の調製
[0236]リンカーコンジュゲートである化合物２の生体分子であるアジド修飾トラスツズマブへのコンジュゲーションによって、本発明に係るバイオコンジュゲートを調製した。したがって、国際公開第２０１６１７０１８６号に従って調製されたトラスツズマブ－（６－Ｎ３－ＧａｌＮＡｃ）２（３６３μＬ、１２．０ｍｇ、ＰＢＳ ｐＨ ７．４中の３３．１ｍｇ／ｍｌ、ｔｒａｓｔ－ｖ１）の溶液に、ＰＢＳ ｐＨ ７．４（３７μＬ）、１，２－プロピレングリコール（３３６μＬ）及び化合物２（６４μＬ、ＤＭＦ中の１０ｍＭ溶液）を添加した。反応を室温で終夜インキュベートした後、続いて追加の２（１６μＬ、ＤＭＦ中の１０ｍＭ溶液）を添加し、室温で終夜インキュベートした。反応をＰＢＳ ｐＨ ７．４に透析し、残留遊離ペイロードを、チャコール（ＡＤＣ １ｍｇ当たりチャコール４．８ｍｇ）の添加後、続いて室温で４時間回転させることによって除去した。チャコールを遠心及び濾過によって除去し、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ ＧＬ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）カラムを用いてＡＫＴＡ Ｐｕｒｉｆｉｅｒ－１０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）でＡＤＣを精製した。ＩｄｅＳ消化試料の質量スペクトル分析は、コンジュゲートされたＦｃ／２フラグメント（ペイロードの２つの閉環ラクトン形）に対応する１つの主生成物（観測質量２６８４７Ｄａ、全Ｆｃ／２フラグメントの約６０％、計算質量２６８４７Ｄａ）、及びコンジュゲートされたＦｃ／２フラグメント（ペイロードの１つの閉環ラクトン形及び１つの開環カルボキシレート形）に対応する１つの少量生成物（観測質量２６８６５Ｄａ、全Ｆｃ／２フラグメントの約３０％、計算質量２６８６５Ｄａ）を示した。
実施例２４． ＡＤＣ３（ＤＡＲ４）の調製
[0237]トラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ）２（３３３μＬ、１１ｍｇ、ＰＢＳ ｐＨ ７．４中の３３ｍｇ／ｍＬ、ｔｒａｓｔ－ｖ１）の溶液に、３（３５０μＬ、ＰＧ中の２ｍＭ溶液、ＩｇＧと比べて１０当量）を添加した。反応を室温で１８時間インキュベートした後、続いてＳｕｐｅｒｄｅｘ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ ＧＬ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）カラムを用いてＡＫＴＡ Ｐｕｒｉｆｉｅｒ－１０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）で精製した。ＩｄｅＳ消化試料の質量スペクトル分析は、コンジュゲートされたＡＤＣ ｔｒａｓｔ－ｖ１－３（ＡＤＣ－３）に対応する１つの主生成物（計算質量２６７３２Ｄａ、観測質量２６７３３Ｄａ）を示した。
実施例２５． ＡＤＣ４ａ及びＡＤＣ４ｂ（ＤＡＲ４及びＤＡＲ８）の調製
[0238]トラスツズマブ（２９０ｍｇ、製剤緩衝液＋２５ｍＭ ＥＤＴＡ＋２５ｍＭ トリス ｐＨ ８．５中の１８ｍｇ／ｍＬ、ｔｒａｓｔ－ｖ４）をＴＣＥＰ（３８６μＬ、２．０５当量μＬ、ＭＱ中の１０ｍＭ）と共に９０分間インキュベートした。反応に、デルクステカン（４、１．６ｍＬ、６当量、ＤＭＡ中の７．１ｍＭ）を添加した後、続いて室温で９０分間インキュベートした。続いて、反応を過剰量のＮ－アセチルシステインでクエンチし、ＴＦＦで精製した。ＲＰ－ＨＰＬＣによる分析は、３．９４の平均ＤＡＲを有する生成物ｔｒａｓｔ－ｖ４－４ａ（ＡＤＣ４ａ）の形成を示した。
[0239]ｔｒａｓｔ－ｖ４を５～６当量のＴＣＥＰで還元した後、化合物４のコンジュゲーションによって、ＡＤＣ４ｂを同様に調製した。ＲＰ－ＨＰＬＣによる分析は、７．０の平均ＤＡＲを有する生成物ｔｒａｓｔ－ｖ４－４ｂ（ＡＤＣ４ｂ）の形成を示した。
実施例２６． トラスツズマブ－（ＨＣ－Ｌ１９６Ｎ変異体）－（６－Ｎ ３ －ＧａｌＮＡｃ） ４ ｔｒａｓｔ－ｖ５の１７ｂへのコンジュゲーション
[0240]トラスツズマブ－（ＨＣ－Ｌ１９６Ｎ変異体）－（６－Ｎ３－ＧａｌＮＡｃ）４（６．８μＬ、１５１μｇ、ＰＢＳ ｐＨ ７．４中の２２．２ｍｇ／ｍｌ、ｔｒａｓｔ－ｖ５）の溶液に、ＰＢＳ ｐＨ ７．４（０．７μＬ）及び１７ｂ（２．５μＬ、ＤＭＦ中の８ｍＭ溶液、ＩｇＧと比べて２０当量）を添加した。反応を室温で１８時間インキュベートした。還元試料の質量スペクトル分析は、非コンジュゲート重鎖（観測質量５０３１７Ｄａ、全重鎖生成物の約７０％）、単一コンジュゲート重鎖（観測質量５２５４４Ｄａ、全重鎖生成物の約２５％）、及び二重コンジュゲート重鎖（観測質量５４７６８Ｄａ、全重鎖生成物の約５％）に対応する３つの重鎖生成物を示した。
実施例２７． １ａとのトラスツズマブ－（６－ａｚｉｄｏＧａｌＮＡｃ） ２ ｔｒａｓｔ－ｖ１コンジュゲーション
[0241]トラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ）２（１６７μＬ、５ｍｇ、ＰＢＳ ｐＨ ７．４中の３０ｍｇ／ｍＬ、ｔｒａｓｔ－ｖ１）の溶液に、１ａ（１６７μＬ、ＰＧ中の１．２ｍＭ溶液、ＩｇＧと比べて６当量）を添加した。反応を室温で１８時間インキュベートした後、続いてＳｕｐｅｒｄｅｘ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ ＧＬ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）カラムを用いてＡＫＴＡ Ｐｕｒｉｆｉｅｒ－１０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）で精製した。ＩｄｅＳ消化試料の質量スペクトル分析は、コンジュゲートされたＡＤＣ ｔｒａｓｔ－ｖ１－１ａに対応する１つの主生成物（計算質量２６４９６Ｄａ、観測質量２６４９８Ｄａ）を示した。
実施例２８． ２ａとのトラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ） ２ ｔｒａｓｔ－ｖ１コンジュゲーション
[0242]トラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ）２（４００μＬ、１２ｍｇ、ＰＢＳ ｐＨ ７．４中の３０ｍｇ／ｍＬ、ｔｒａｓｔ－ｖ１）の溶液に、２ａ（４００μＬ、ＰＧ中の１．６ｍＭ溶液、ＩｇＧと比べて８当量）を添加した。反応を室温で１８時間インキュベートした後、続いてＳｕｐｅｒｄｅｘ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ ＧＬ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）カラムを用いてＡＫＴＡ Ｐｕｒｉｆｉｅｒ－１０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）で精製した。ＩｄｅＳ消化試料の質量スペクトル分析は、コンジュゲートされたＡＤＣ ｔｒａｓｔ－ｖ１－２ａに対応する１つの主生成物（計算質量２６８４７Ｄａ、観測質量２６８４７Ｄａ）を示した。
実施例２９． ２１ｂとのトラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ） ２ ｔｒａｓｔ－ｖ１コンジュゲーション
[0243]トラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ）２（１６７μＬ、５ｍｇ、ＰＢＳ ｐＨ ７．４中の３０ｍｇ／ｍＬ）の溶液に、２１ｂ（１６７μＬ、ＰＧ中の１．２ｍＭ溶液、ＩｇＧと比べて６当量）を添加した。反応を室温で１８時間インキュベートした後、続いてＳｕｐｅｒｄｅｘ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ ＧＬ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）カラムを用いてＡＫＴＡ Ｐｕｒｉｆｉｅｒ－１０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）で精製した。ＩｄｅＳ消化試料の質量スペクトル分析は、コンジュゲートされたＡＤＣ ｔｒａｓｔ－ｖ１－２１ｂに対応する１つの主生成物（計算質量２６５６５Ｄａ、観測質量２６５６７Ｄａ）を示した。
実施例３０． １ｂとのトラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ） ２ ｔｒａｓｔ－ｖ１コンジュゲーション
[0244]トラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ）２（１６７μＬ、５ｍｇ、ＰＢＳ ｐＨ ７．４中の３０ｍｇ／ｍＬ、ｔｒａｓｔ－ｖ１）の溶液に、１ｂ（１６７μＬ、ＰＧ中の１．２ｍＭ溶液、ＩｇＧと比べて６当量）を添加した。反応を室温で１８時間インキュベートした後、続いてＳｕｐｅｒｄｅｘ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ ＧＬ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）カラムを用いてＡＫＴＡ Ｐｕｒｉｆｉｅｒ－１０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）で精製した。ＩｄｅＳ消化試料の質量スペクトル分析は、コンジュゲートされたＡＤＣ ｔｒａｓｔ－ｖ１－１ｂに対応する１つの主生成物（計算質量２６６６８Ｄａ、観測質量２６６７１Ｄａ）を示した。
実施例３１． ２５ａとのトラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ） ２ ｔｒａｓｔ－ｖ１コンジュゲーション
[0245]トラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ）２（３００μＬ、５ｍｇ、ＰＢＳ ｐＨ ７．４中の１６．７ｍｇ／ｍＬ、ｔｒａｓｔ－ｖ１）の溶液に、５０μＬのデオキシコール酸ナトリウム（ＭＱ中の１１０ｍＭ）及び２５ａ（１５０μＬ、ＰＧ中の１．３３ｍＭ溶液、ＩｇＧと比べて６当量）を添加した。反応を室温で１８時間インキュベートした後、続いてＳｕｐｅｒｄｅｘ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ ＧＬ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）カラムを用いてＡＫＴＡ Ｐｕｒｉｆｉｅｒ－１０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）で精製した。ＤＴＴ還元試料のＲＰ－ＨＰＬＣ分析（図１３を参照のこと）は、コンジュゲーション後にＨＣのはっきりとしたシフト（ＲＴＨＣ－０＝８．７分、ＲＴＨＣ－２５ａ＝１０．５分）を示した。これは、３．６６の平均薬物抗体比（ＤＡＲ）に対応し、ｔｒａｓｔ－ｖ１－２５ａの形成を示唆する。
実施例３２． ２６ａとのトラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ） ２ ｔｒａｓｔ－ｖ１コンジュゲーション
[0246]トラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ）２（２０．９μＬ、０．５ｍｇ、ＰＢＳ ｐＨ ７．４中の２３．９２ｍｇ／ｍＬ、ｔｒａｓｔ－ｖ１）の溶液に、ＰＢＳ ｐＨ ７．４（９．１μＬ）、デオキシコール酸ナトリウム（５μＬ、１１０ｍＭ）及び化合物２６ａ（１５μＬ、ＰＧ中の１．３ｍＭ溶液、ＩｇＧと比べて６当量）を添加した。反応を室温で１８時間インキュベートした後、続いて遠心濾過器（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ ０．５ｍｌ ＭＷＣＯ １０ｋＤａ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用してＰＢＳ ｐＨ ７．４に緩衝液交換を行った。ＩｄｅＳ消化試料の質量スペクトル分析は、コンジュゲートされたＡＤＣ ｔｒａｓｔ－ｖ１－２６ａに対応する１つの主生成物（計算質量２５５０４Ｄａ、観測質量２５５０５Ｄａ）を示した。
実施例３３． ３２ａとのトラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ） ２ ｔｒａｓｔ－ｖ１コンジュゲーション
[0247]トラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ）２（１２．５４μＬ、０．３ｍｇ、ＰＢＳ ｐＨ ７．４中の２３．９２ｍｇ／ｍＬ、ｔｒａｓｔ－ｖ１）の溶液に、ＰＢＳ ｐＨ ７．４（５．４６μＬ）、デオキシコール酸ナトリウム（３μＬ、１１０ｍＭ）及び化合物３２ａ（９μＬ、ＰＧ中の０．８ｍＭ溶液、ＩｇＧと比べて７当量）を添加した。反応を室温で１８時間インキュベートした後、続いて遠心濾過器（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ ０．５ｍｌ ＭＷＣＯ １０ｋＤａ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用してＰＢＳ ｐＨ ７．４に緩衝液交換を行った。ＩｄｅＳ消化試料の質量スペクトル分析は、コンジュゲートされたＡＤＣ ｔｒａｓｔ－ｖ１－３２ａに対応する１つの主生成物（計算質量２６７５３Ｄａ、観測質量２６７５２Ｄａ）を示した。
実施例３４． ３５ａとのトラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ） ２ ｔｒａｓｔ－ｖ１コンジュゲーション
[0248]トラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ）２（１２．５４μＬ、０．３ｍｇ、ＰＢＳ ｐＨ ７．４中の２３．９２ｍｇ／ｍＬ、ｔｒａｓｔ－ｖ１）の溶液に、デオキシコール酸ナトリウム（３μＬ、１１０ｍＭ）及び化合物３５ａ（１５μＬ、ＰＧ中の１．２ｍＭ溶液、ＩｇＧと比べて９当量）を添加した。反応を室温で１８時間インキュベートした後、続いて遠心濾過器（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ ０．５ｍｌ ＭＷＣＯ １０ｋＤａ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用してＰＢＳ ｐＨ ７．４に緩衝液交換を行った。ＩｄｅＳ消化試料の質量スペクトル分析は、コンジュゲートされたＡＤＣ ｔｒａｓｔ－ｖ１－３５ａに対応する１つの主生成物（計算質量２６３２８Ｄａ、観測質量２６３２９Ｄａ）を示した。
実施例３５． ３１ａとのトラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ） ２ ｔｒａｓｔ－ｖ１コンジュゲーション
[0249]トラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ）２（１５ｍＬ、２５０ｍｇ、ＴＢＳ ｐＨ ７．４中の１６．６７ｍｇ／ｍＬ、ｔｒａｓｔ－ｖ１）の溶液に、２．５ｍＬのデオキシコール酸ナトリウム（ＭＱ中の１１０ｍＭ）及び化合物３１ａ（７．５ｍＬ、ＰＧ中の０．８８ｍＭ溶液、ＩｇＧと比べて４当量）を添加した。反応を室温で１８時間インキュベートした後、続いてＳｕｐｅｒｄｅｘ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ ＧＬ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）カラムを用いてＡＫＴＡ Ｐｕｒｉｆｉｅｒ－１０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）で精製した。ＩｄｅＳ消化試料の質量スペクトル分析は、コンジュゲートされたＡＤＣ ｔｒａｓｔ－ｖ１－３１ａに対応する１つの主生成物（計算質量２６６７５Ｄａ、観測質量２６６７２Ｄａ）を示した。
実施例３６． ３９ａとのリツキシマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ） ２ ｒｉｔ－ｖ１コンジュゲーション
[0250]リツキシマブのリツキシマブ－（６－Ｎ３－ＧａｌＮＡｃ）２への酵素リモデリングを、リツキシマブ（１５ｍｇ／ｍＬ）と国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０５２７９２号に記載されたＥｎｄｏＳＨ（１重量／重量％）、国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１６／０５９１９４号（５重量／重量％）に記載されたＨｉｓ－ＴｎＧａｌＮＡｃＴ、及び国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１６／０５９１９４号に従って調製されたＵＤＰ ６－Ｎ３－ＧａｌＮＡｃ（ＩｇＧと比べて２５当量）を、１０ｍＭ ＭｎＣｌ２を含有するＴＢＳ中、３０℃で１６時間インキュベートすることによって行った。次に、官能化ＩｇＧを、ＨｉＴｒａｐ ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ ５ｍＬカラムを使用して精製した。反応混合物を負荷した後、カラムをＴＢＳ＋０．２％Ｔｒｉｔｏｎ及びＴＢＳで洗浄した。ＩｇＧを０．１Ｍ グリシン－ＨＣｌ ｐＨ ２．７で溶離し、１Ｍ トリス－ＨＣｌ ｐＨ ８．８で中和した。ＰＢＳに３回透析した後、Ｖｉｖａｓｐｉｎ Ｔｕｒｂｏ １５限外濾過ユニット（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社）を使用して、ＩｇＧを１５～２０ｍｇ／ｍＬに濃縮した。
[0251]コンジュゲーション：化合物３９ａ（１５μｌ；ＰＧ中の０．５３ｍＭ溶液、ＩｇＧと比べて４当量）を、リツキシマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ）２（１５μｌ；ＰＢＳ ｐＨ ７．４中の２０ｍｇ／ｍｌ、ｒｉｔ－ｖ１）の溶液に添加した。反応を室温で終夜インキュベートした後、続いて遠心濾過器（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ ０．５ｍｌ ＭＷＣＯ １０ｋＤａ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用してＰＢＳ ｐＨ ７．４に緩衝液交換を行った。ＩｄｅＳ消化試料の質量分析は、コンジュゲートされたＡＤＣ ｒｉｔ－ｖ１－３９ａに対応する１つの主生成物（計算質量２５６１９．６Ｄａ、観測質量２５６１８．１Ｄａ）を示した。
実施例３７． ３９ａとのトラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ） ２ ｔｒａｓｔ－ｖ１コンジュゲーション
[0252]化合物３９ａ（１５μｌ；ＰＧ中の０．５３ｍＭ溶液、ＩｇＧと比べて４当量）を、トラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ）２（１５μｌ；ＴＢＳ ｐＨ ７．４中の２０ｍｇ／ｍｌ、ｔｒａｓｔ－ｖ１）の溶液に添加した。反応を室温で終夜インキュベートした後、続いて遠心濾過器（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ ０．５ｍｌ ＭＷＣＯ １０ｋＤａ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用してＰＢＳ ｐＨ ７．４に緩衝液交換を行った。ＩｄｅＳ消化試料の質量分析は、コンジュゲートされたＡＤＣ ｒｉｔ－ｖ１－３９ａに対応する１つの主生成物（計算質量２５６１９．６Ｄａ、観測質量２５６１８．１Ｄａ）を示した。
実施例３８． ４３ａとのリツキシマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ） ２ ｒｉｔ－ｖ１コンジュゲーション
[0253]化合物４３ａ（１５μｌ；ＰＧ中の０．５３ｍＭ溶液、ＩｇＧと比べて４当量）を、リツキシマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ）２（１５μｌ；ＰＢＳ ｐＨ ７．４中の２０ｍｇ／ｍｌ、ｒｉｔ－ｖ１）の溶液に添加した。反応を室温で終夜インキュベートした後、続いて遠心濾過器（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ ０．５ｍｌ ＭＷＣＯ １０ｋＤａ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用してＰＢＳ ｐＨ ７．４に緩衝液交換を行った。ＩｄｅＳ消化試料の質量分析は、コンジュゲートされたＡＤＣ ｒｉｔ－ｖ１－４３ａに対応する１つの主生成物（計算質量２６５３２．５Ｄａ、観測質量２６５３１．０Ｄａ）を示した。
実施例３９． ４３ａとのトラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ） ２ ｔｒａｓｔ－ｖ１コンジュゲーション
[0254]化合物４３ａ（１５μｌ；ＰＧ中の０．５３ｍＭ溶液、ＩｇＧと比べて４当量）を、トラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ）２（１５μｌ；ＴＢＳ ｐＨ ７．４中の２０ｍｇ／ｍｌ、ｔｒａｓｔ－ｖ１）の溶液に添加した。反応を室温で終夜インキュベートした後、続いて遠心濾過器（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ ０．５ｍｌ ＭＷＣＯ １０ｋＤａ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用してＰＢＳ ｐＨ ７．４に緩衝液交換を行った。ＩｄｅＳ消化試料の質量分析は、コンジュゲートされたＡＤＣ ｔｒａｓｔ－ｖ１－４３ａに対応する１つの主生成物（計算質量２６５６６．７Ｄａ、観測質量２６５６４．５Ｄａ）を示した。
実施例４０． ４９ａとのリツキシマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ） ２ ｒｉｔ－ｖ１コンジュゲーション
[0255]化合物４９ａ（１５μｌ；ＰＧ中の０．５３ｍＭ溶液、ＩｇＧと比べて４当量）を、リツキシマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ）２（１５μｌ；ＰＢＳ ｐＨ ７．４中の２０ｍｇ／ｍｌ、ｒｉｔ－ｖ１）の溶液に添加した。反応を室温で終夜インキュベートした後、続いて遠心濾過器（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ ０．５ｍｌ ＭＷＣＯ １０ｋＤａ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用してＰＢＳ ｐＨ ７．４に緩衝液交換を行った。ＩｄｅＳ消化試料の質量分析は、コンジュゲートされたＡＤＣ ｒｉｔ－ｖ１－４９ａに対応する１つの主生成物（計算質量２６７５０．７Ｄａ、観測質量２６７５１．１Ｄａ）を示した。
実施例４１． ４９ａとのトラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ） ２ ｔｒａｓｔ－ｖ１コンジュゲーション
[0256]化合物４９ａ（１５μｌ；ＰＧ中の０．５３ｍＭ溶液、ＩｇＧと比べて４当量）を、トラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ）２（１５μｌ；ＴＢＳ ｐＨ ７．４中の２０ｍｇ／ｍｌ、ｔｒａｓｔ－ｖ１）の溶液に添加した。反応を室温で終夜インキュベートした後、続いて遠心濾過器（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ ０．５ｍｌ ＭＷＣＯ １０ｋＤａ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用してＰＢＳ ｐＨ ７．４に緩衝液交換を行った。ＩｄｅＳ消化試料の質量分析は、コンジュゲートされたＡＤＣ ｔｒａｓｔ－ｖ１－４９ａに対応する１つの主生成物（計算質量２６７８４．９Ｄａ、観測質量２６７８３．８Ｄａ）を示した。
実施例４２． ５２ａとのリツキシマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ） ２ ｒｉｔ－ｖ１コンジュゲーション
[0257]化合物５２ａ（１５μｌ；ＰＧ中の０．５３ｍＭ溶液、ＩｇＧと比べて４当量）を、リツキシマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ）２（１５μｌ；ＰＢＳ ｐＨ ７．４中の２０ｍｇ／ｍｌ、ｒｉｔ－ｖ１）の溶液に添加した。反応を室温で終夜インキュベートした後、続いて遠心濾過器（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ ０．５ｍｌ ＭＷＣＯ １０ｋＤａ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用してＰＢＳ ｐＨ ７．４に緩衝液交換を行った。ＩｄｅＳ消化試料の質量分析は、コンジュゲートされたＡＤＣ ｒｉｔ－ｖ１－５２ａに対応する１つの主生成物（計算質量２６３８１．４Ｄａ、観測質量２６３８１．９Ｄａ）を示した。
実施例４３． ５２ａとのトラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ） ２ ｔｒａｓｔ－ｖ１コンジュゲーション
[0258]化合物５２ａ（１５μｌ；ＰＧ中の０．５３ｍＭ溶液、ＩｇＧと比べて４当量）を、トラスツズマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ）２（１５μｌ；ＴＢＳ ｐＨ ７．４中の２０ｍｇ／ｍｌ、ｔｒａｓｔ－ｖ１）の溶液に添加した。反応を室温で終夜インキュベートした後、続いて遠心濾過器（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ ０．５ｍｌ ＭＷＣＯ １０ｋＤａ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用してＰＢＳ ｐＨ ７．４に緩衝液交換を行った。ＩｄｅＳ消化試料の質量分析は、コンジュゲートされたＡＤＣ ｔｒａｓｔ－ｖ１－５２ａに対応する１つの主生成物（計算質量２６４１５．６、観測質量２６４１４．２Ｄａ）を示した。
実施例４４． １ａとのリツキシマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ） ２ ｒｉｔ－ｖ１コンジュゲーション
[0259]リツキシマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ）２（１２．２４μＬ、０．３ｍｇ、ＰＢＳ ｐＨ ７．４中の２４．５ｍｇ／ｍｌ、ｒｉｔ－ｖ１）の溶液に、デオキシコール酸ナトリウム（３μＬ、１１０ｍＭ）及び化合物１ａ（９μｌ、ＰＧ中の１．３３ｍＭ溶液、ＩｇＧと比べて６当量）を添加した。反応を室温で１８時間インキュベートした後、続いて遠心濾過器（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ ０．５ｍｌ ＭＷＣＯ １０ｋＤａ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用してＰＢＳ ｐＨ ７．４に緩衝液交換を行った。ＩｄｅＳ消化試料の質量スペクトル分析は、コンジュゲートされたＡＤＣ ｒｉｔ－ｖ１－１ａに対応する生成物（計算質量２６４６３Ｄａ、観測質量２６４６１Ｄａ）の形成を示した。
実施例４５． ３２ａとのリツキシマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ） ２ ｒｉｔ－ｖ１コンジュゲーション
[0260]リツキシマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ）２（１２．２４μＬ、０．３ｍｇ、ＰＢＳ ｐＨ ７．４中の２４．５ｍｇ／ｍｌ、ｒｉｔ－ｖ１）の溶液に、デオキシコール酸ナトリウム（３μＬ、１１０ｍＭ）及び化合物３２ａ（９μｌ、ＰＧ中の０．８９ｍＭ溶液、ＩｇＧと比べて４当量）を添加した。反応を室温で１８時間インキュベートした後、続いて遠心濾過器（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ ０．５ｍｌ ＭＷＣＯ １０ｋＤａ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用してＰＢＳ ｐＨ ７．４に緩衝液交換を行った。ＩｄｅＳ消化試料の質量スペクトル分析は、コンジュゲートされたＡＤＣ ｒｉｔ－ｖ１－３２ａに対応する生成物（計算質量２６７２１Ｄａ、観測質量２６７２０Ｄａ）の形成を示した。
実施例４６． ３１ａとのリツキシマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ） ２ ｒｉｔ－ｖ１コンジュゲーション
[0261]リツキシマブ－（６－アジドＧａｌＮＡｃ）２（１２．２４μＬ、０．３ｍｇ、ＰＢＳ ｐＨ ７．４中の２４．５ｍｇ／ｍｌ、ｒｉｔ－ｖ１）の溶液に、デオキシコール酸ナトリウム（３μＬ、１１０ｍＭ）及び化合物３１ａ（９μＬ、ＰＧ中の０．８９ｍＭ溶液、ＩｇＧと比べて４当量）を添加した。反応を室温で１８時間インキュベートした後、続いて遠心濾過器（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ ０．５ｍｌ ＭＷＣＯ １０ｋＤａ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用してＰＢＳ ｐＨ ７．４に緩衝液交換を行った。ＩｄｅＳ消化試料の質量スペクトル分析は、コンジュゲートされたＡＤＣ ｒｉｔ－ｖ１－３１ａに対応する生成物（計算質量２６６４２Ｄａ、観測質量２６６４０Ｄａ）の形成を示した。
実施例４７． トラスツズマブのトラスツズマブ－（ＧａｌＮＰｒｏＳＳＭｅ） ２ （ｔｒａｓｔ－ｖ２ｂ）への酵素リモデリング
[0262]トラスツズマブ（５ｍｇ、２２．７ｍｇ／ｍｌ）を、国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０５２７９２号に記載されたＥｎｄｏＳＨ（１重量／重量％）と共に１時間インキュベートした後、続いてＴｎＧａｌＮＡｃＴ（ＣＨＯにおいて発現）（１０重量／重量％）及びＵＤＰ－ＧａｌＮＰｒｏＳＳＭｅ（ＩｇＧと比べて４０当量）を添加し、１０ｍＭ ＭｎＣｌ２及びＴＢＳ中、３０℃で１６時間おいた。成分を添加した後、トラスツズマブの最終濃度は１２．５ｍｇ／ｍｌである。官能化ＩｇＧを、ｐｒｏｔＡカラム（５ｍＬ、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ、Ｃｙｔｉｖａ社）を使用して精製した。反応混合物を負荷した後、カラムをＴＢＳで洗浄した。ＩｇＧを０．１Ｍ ＮａＯＡｃ ｐＨ ３．５で溶離し、２．５Ｍ トリス－ＨＣｌ ｐＨ ７．２で中和した。ＰＢＳに３回透析した後、Ｖｉｖａｓｐｉｎ Ｔｕｒｂｏ ４限外濾過ユニット（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社）を使用して、官能化トラスツズマブを１７．４ｍｇ／ｍｌに濃縮した。ＩｄｅＳ処理後の試料の質量スペクトル分析は、予想生成物（ｔｒａｓｔ－ｖ２ｂ）に対応する１つの主Ｆｃ／２生成物（観測質量２４４３０Ｄａ）を示した。
実施例４８． トラスツズマブＳ２３９Ｃ変異体ｔｒａｓｔ－ｖ３とマレイミド－エクサテカンバリアント５４ａ、５７ｂ、５９ａ又は６０ａとのコンジュゲーション
[0263]トラスツズマブＳ２３９Ｃ変異体（ＥｖｉｔｒｉａによりＣＨＯにおいて一過性発現、重鎖変異Ｓ２３９Ｃ）（１ｍｇ、ＰＢＳ＋１０ｍＭ ＥＤＴＡ中の１０ｍｇ／ｍｌ、ｔｒａｓｔ－ｖ３）を、ＴＣＥＰ（６．５μＬ、ＭＱ中の１０ｍＭ）と共に３７℃で２時間インキュベートした。遠心濾過器（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－０．５ｍＬ ＭＷＣＯ １０ｋＤａ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用して、還元抗体をＰＢＳ＋１０ｍＭ ＥＤＴＡとスピン濾過し、続いて１００μＬに希釈した。続いて、ＤＨＡ（６．５μＬ、ＭＱ中の１０ｍＭ）を添加し、反応を室温で３時間インキュベートした。反応を４つの部分（それぞれ２０μＬ、０．２ｍｇの抗体）に分け、各部分にマレイミド－エクサテカンバリアント（５４ａ、５７ｂ、５９ａ又は６０ａ）（２．３μＬ、ＤＭＦ中の５ｍＭ）を添加した後、続いて室温で１時間インキュベートした。遠心濾過器（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－０．５ｍＬ ＭＷＣＯ １０ｋＤａ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用して、コンジュゲートをＰＢＳにスピン濾過し、続いてＲＰ－ＵＰＬＣにより分析した（図１４を参照のこと）。
Figure 2023541637000083
実施例４９． トラスツズマブＧａｌＰｒｏＳＨ ｔｒａｓｔ－ｖ２とマレイミド－エクサテカンバリアント６０ａとのコンジュゲーション
[0264]トラスツズマブＧａｌＰｒｏＳＳＭｅ（０．５ｍｇ、ＰＢＳ＋１０ｍＭ ＥＤＴＡ中の１０ｍｇ／ｍｌ、ｔｒａｓｔ－ｖ２ｂ）を、ＴＣＥＰ（３．３μＬ、ＭＱ中の１０ｍＭ）と共に３７℃で２時間インキュベートした。遠心濾過器（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－０．５ｍＬ ＭＷＣＯ １０ｋＤａ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用して、還元抗体をＰＢＳ＋１０ｍＭ ＥＤＴＡとスピン濾過した。続いて、デヒドロアスコルビン酸（ＤＨＡ ３．３μＬ、ＭＱ中の１０ｍＭ）を添加し、反応を室温で３時間インキュベートした。反応の一部分（１０μＬ、０．１ｍｇの抗体）に、マレイミド－エクサテカン６０ａ（１．３μＬ、ＤＭＦ中の５ｍＭ）を添加した後、続いて室温で１時間インキュベートした。遠心濾過器（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－０．５ｍＬ ＭＷＣＯ １０ｋＤａ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用して、コンジュゲートをＰＢＳにスピン濾過し、続いてＲＰ－ＵＰＬＣで分析した。ＤＴＴ処理コンジュゲートのＲＰ－ＵＰＬＣ分析は、１．１５のＤＡＲを有するコンジュゲートｔｒａｓｔ－ｖ２－６０ａへの変換を示した（図１５を参照のこと）。
実施例５０． トラスツズマブＧａｌＰｒｏＳＨ ｔｒａｓｔ－ｖ２とマレイミド－エクサテカンバリアント５７ｂとのコンジュゲーション
[0265]トラスツズマブＧａｌＰｒｏＳＳＭｅ（０．５ｍｇ、ＰＢＳ＋１０ｍＭ ＥＤＴＡ中の１０ｍｇ／ｍｌ、ｔｒａｓｔ－ｖ２ｂ）を、ＴＣＥＰ（３．３μＬ、ＭＱ中の１０ｍＭ）と共に３７℃で２時間インキュベートした。遠心濾過器（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－０．５ｍＬ ＭＷＣＯ １０ｋＤａ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用して、還元抗体をＰＢＳ＋１０ｍＭ ＥＤＴＡとスピン濾過した。続いて、ＤＨＡ（３．３μＬ、ＭＱ中の１０ｍＭ）を添加し、反応を室温で３時間インキュベートした。反応の一部分（１０μＬ、０．１ｍｇの抗体）に、マレイミド－エクサテカン５７ｂ（１．３μＬ、ＤＭＦ中の５ｍＭ）を添加した後、続いて室温で１時間インキュベートした。遠心濾過器（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－０．５ｍＬ ＭＷＣＯ １０ｋＤａ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用して、コンジュゲートをＰＢＳにスピン濾過し、続いてＲＰ－ＵＰＬＣにより分析した。ＤＴＴ処理コンジュゲートのＲＰ－ＵＰＬＣ分析は、１．３７のＤＡＲを有するコンジュゲートｔｒａｓｔ－ｖ２－５７ｂへの変換を示した（図１５を参照のこと）。
一般実験：ＴＣＥＰ還元ステップ後の鎖間マレイミドコンジュゲーション
[0266]一般実験Ａ－３．５当量ＴＣＥＰを用いたコンジュゲーション：ｍＡｂ－ｖ４（ＰＢＳ＋１０ｍＭ ＥＤＴＡ中の１０ｍｇ／ｍｌ）をＴＣＥＰ（３．５当量、ＭＱ中の１０ｍＭ）と共に３７℃で１時間インキュベートした。反応の一部分（２０μＬ、０．２ｍｇの抗体）に、マレイミド－エクサテカン（２．３μＬ、ＤＭＦ中の５ｍＭ）を添加した後、続いて室温で１時間インキュベートした。遠心濾過器（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－０．５ｍＬ ＭＷＣＯ １０ｋＤａ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用して、コンジュゲートをＰＢＳにスピン濾過し、続いてＲＰ－ＵＰＬＣで分析した。ＤＡＲは、以下の式に従って計算した。
[0267]一般実験Ｂ－７当量のＴＣＥＰを用いたコンジュゲーション：ｍＡｂ－ｖ４（ＰＢＳ＋１０ｍＭ ＥＤＴＡ中の１０ｍｇ／ｍｌ）をＴＣＥＰ（７当量、ＭＱ中の１０ｍＭ）と共に３７℃で１時間インキュベートした。反応の一部分（２０μＬ、０．２ｍｇの抗体）に、マレイミド－エクサテカン（ＤＭＦ中１０～３５当量）を添加した後、続いて室温で１時間インキュベートした。遠心濾過器（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－０．５ｍＬ ＭＷＣＯ １０ｋＤａ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）を使用して、コンジュゲートをＰＢＳにスピン濾過し、続いてＲＰ－ＵＰＬＣで分析した。ＤＡＲは、以下の式に従って計算した。
[0268]平均ＤＡＲ計算式：
Figure 2023541637000084
実施例５１． トラスツズマブｔｒａｓｔ－ｖ４とマレイミド－エクサテカン６０ａとのコンジュゲーション
[0269]一般実験Ａに従って、トラスツズマブをマレイミド－エクサテカン６０ａにコンジュゲートした。ＤＴＴ処理コンジュゲートのＲＰ－ＵＰＬＣ分析は、４．６のＤＡＲを有するコンジュゲートｔｒａｓｔ－ｖ４－６０ａへの変換を示した（図１６を参照のこと）。
実施例５２． トラスツズマブｔｒａｓｔ－ｖ４とマレイミド－エクサテカン５７ｂとのコンジュゲーション
[0270]一般実験Ａに従って、トラスツズマブをマレイミド－エクサテカン５７ｂにコンジュゲートした。ＤＴＴ処理コンジュゲートのＲＰ－ＵＰＬＣ分析は、５．６のＤＡＲを有するコンジュゲートｔｒａｓｔ－ｖ４－５７ｂへの変換を示した（図１６を参照のこと）。
実施例５３． リツキシマブｒｉｔ－ｖ４とマレイミド－エクサテカン６０ａとのコンジュゲーション
[0271]一般実験Ａに従って、リツキシマブをマレイミド－エクサテカン６０ａにコンジュゲートした。ＤＴＴ処理コンジュゲートのＲＰ－ＵＰＬＣ分析は、２．５のＤＡＲを有するコンジュゲートｒｉｔ－ｖ４－６０ａへの変換を示した（図１７を参照のこと）。
実施例５４． リツキシマブｒｉｔ－ｖ４とマレイミド－エクサテカン５７ｂとのコンジュゲーション
[0272]一般実験Ａに従って、リツキシマブをマレイミド－エクサテカン５７ｂにコンジュゲートした。ＤＴＴ処理コンジュゲートのＲＰ－ＵＰＬＣ分析は、３．４のＤＡＲを有するコンジュゲートｒｉｔ－ｖ４－５７ｂへの変換を示した（図１７を参照のこと）。
実施例５５． トラスツズマブｔｒａｓｔ－ｖ４とマレイミド－エクサテカン５９ａとのコンジュゲーション
[0273]一般実験Ａに従って、トラスツズマブをマレイミド－エクサテカン５９ａにコンジュゲートした。ＤＴＴ処理コンジュゲートのＲＰ－ＵＰＬＣ分析は、２．２のＤＡＲを有するコンジュゲートｔｒａｓｔ－ｖ４－５９ａへの変換を示した。
実施例５６． リツキシマブｒｉｔ－ｖ４とマレイミド－エクサテカン５９ａとのコンジュゲーション
[0274]一般実験Ａに従って、リツキシマブをマレイミド－エクサテカン５９ａにコンジュゲートした。ＤＴＴ処理コンジュゲートのＲＰ－ＵＰＬＣ分析は、３．６のＤＡＲを有するコンジュゲートｒｉｔ－ｖ４－５９ａへの変換を示した。
実施例５７． トラスツズマブｔｒａｓｔ－ｖ４とマレイミド－エクサテカン６０ａとのコンジュゲーション
[0275]一般実験Ｂに従って、トラスツズマブをマレイミド－エクサテカン６０ａにコンジュゲートした。ＤＴＴ処理コンジュゲートのＲＰ－ＵＰＬＣ分析は、５．７のＤＡＲを有するコンジュゲートｔｒａｓｔ－ｖ４－６０ａへの変換を示した（図１８を参照のこと）。
実施例５８． トラスツズマブｔｒａｓｔ－ｖ４とマレイミド－エクサテカン５７ｂとのコンジュゲーション
[0276]一般実験Ｂに従って、トラスツズマブをマレイミド－エクサテカン５７ｂにコンジュゲートした。ＤＴＴ処理コンジュゲートのＲＰ－ＵＰＬＣ分析は、６．２のＤＡＲを有するコンジュゲートｔｒａｓｔ－ｖ４－５７ｂへの変換を示した（図１８を参照のこと）。
実施例５９． リツキシマブｒｉｔ－ｖ４とマレイミド－エクサテカン６０ａとのコンジュゲーション
[0277]一般実験Ｂに従って、リツキシマブをマレイミド－エクサテカン６０ａにコンジュゲートした。ＤＴＴ処理コンジュゲートのＲＰ－ＵＰＬＣ分析は、５．８のＤＡＲを有するコンジュゲートｒｉｔ－ｖ４－６０ａへの変換を示した。
実施例６０． トラスツズマブｔｒａｓｔ－ｖ４とマレイミド－エクサテカン５９ａとのコンジュゲーション
[0278]一般実験Ｂに従って、トラスツズマブをマレイミド－エクサテカン５９ａにコンジュゲートした。ＤＴＴ処理コンジュゲートのＲＰ－ＵＰＬＣ分析は、２．６のＤＡＲを有するコンジュゲートｔｒａｓｔ－ｖ４－５９ａへの変換を示した。
実施例６１． リツキシマブｒｉｔ－ｖ４とマレイミド－エクサテカン５９ａとのコンジュゲーション
[0279]一般実験Ｂに従って、リツキシマブをマレイミド－エクサテカン５９ａにコンジュゲートした。ＤＴＴ処理コンジュゲートのＲＰ－ＵＰＬＣ分析は、４．４のＤＡＲを有するコンジュゲートｒｉｔ－ｖ４－５９ａへの変換を示した。
実施例６２． 凝集研究
[0280]ＡＤＣ（ＰＢＳ ｐＨ ７．４中の１ｍｇ／ｍＬ）を３７℃でインキュベートした。Ａｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズＨＰＬＣ（Ｈｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ社）を使用して、凝集レベルを０、１、４、７、１４及び２１日後に測定した。試料（３μＬ、１ｍｇ／ｍＬ）を０．８６ｍＬ／分で、Ｘｂｒｉｄｇｅ ＢＥＨ２００Åカラム（３．５μＭ、７．８×３００ｍｍ、Ｗａｔｅｒｓ社）に注入した。０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ ６．９（ＮａＨ２ＰＯ４／Ｎａ２ＨＰＯ４）を使用する定組成溶離を１６分間行った。凝集レベルに表１に示す。

実施例６３：分析ＨＩＣ
ＨＩＣ分析をＡｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズＨＰＬＣ（Ｈｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ社）で行った。試料（３μＬ、ＰＢＳ中の１ｍｇ／ｍｌ）を、０．８ｍＬ／分でＴＳＫｇｅｌ（登録商標）ブチル－ＮＰＲ ＨＰＬＣカラム（３．５ｃｍ×４．６ｍｍ、２．５μｍ、Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）に注入した。１３分で２Ｍ硫酸アンモニウム／５０ｍＭリン酸カリウムｐＨ ６．０から２０％イソプロパノール／５０ｍＭリン酸カリウム ｐＨ ６．０への直線グラジエントを適用した。ＨＩＣ分析の結果を図１２に示す。
実施例６４：ＢＴ－４７４有効性研究
[0281]実験段階の初めに８週齢～１２週齢のＣＲ雌性ＣＢ．１７ ＳＣＩＤマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、ＵＳＡから得られた）に、５０％ Ｍａｔｒｉｇｅｌ中１×１０７個のＢＴ－４７４腫瘍細胞を側腹部皮下に注射した（ＢＴ－４７４細胞異種移植モデル）。腫瘍容積が１００～１５０ｍｍ３の範囲であるとき、マウス７匹／群に、１日目に単一用量を静脈内注射した。試験品目及び用量レベルを以下に示す。腫瘍を１週間に２回、４３日間測定した。腫瘍容積（平均）の結果を図１９～２２に示す。
Figure 2023541637000086

Claims (18)

  1. 構造（１）を有する抗体－薬物コンジュゲート
    Figure 2023541637000087
    ［構造中、
    ＡＢは抗体であり、
    Ｌ１及びＬ２はリンカーであり、
    ｗは、０又は１であり、
    Ｚは、無金属クリック反応又はチオールライゲーションによって得られた接続基であり
    Ｒ１７はそれぞれ個別にアミノ酸側鎖であり、
    ｎは、１～５の範囲の整数であり、
    Ａは、５員又は６員の芳香族又はヘテロ芳香族環であり、
    ｘは、１～８の範囲の整数であり、
    Ｒ２１は、Ｈ、Ｒ２２、Ｃ（Ｏ）ＯＨ及びＣ（Ｏ）Ｒ２２から選択され、Ｒ２２は、Ｃ１～Ｃ２４（ヘテロ）アルキル基、Ｃ３～Ｃ１０（ヘテロ）シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ１０（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ１０アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３～Ｃ１０（ヘテロ）アリールアルキル基であり、それらは、任意選択で置換されており、Ｏ、Ｓ及びＮＲ２３から選択される１個又は複数のヘテロ原子で任意選択で中断されており、Ｒ２３は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキル基からなる群から独立的に選択される］。
  2. Ｌ２が、構造（２）を有し
    Figure 2023541637000088
    ［構造中、
    ＊で標識された波形の結合は、Ｚに接続されており、＊＊で標識された波形の結合は、ＮＨに接続されており、
    Ｓｐ１及びＳｐ２はそれぞれ個別にスペーサー部分であり、
    ｎ、Ａ、Ｒ１７及びＲ２１は、請求項１に記載の通りである］、
    好ましくはＬ２、好ましくは出現する各Ｓｐ２が同じであり、出現する各（ＮＨ－ＣＲ１７－ＣＯ）ｎが同じであり、出現する各Ａが同じであり、出現する各Ｒ２１が同じである、請求項１に記載の抗体薬物コンジュゲート。
  3. Ｌ２、好ましくはＳｐ１が、構造（３）で表されるスルファミド基を含み、
    Figure 2023541637000089
    ［構造中、
    ａ＝０又は１であり、
    Ｒ１３は、水素、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ３～Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、前記Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ３～Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換されており、Ｏ、Ｓ及びＮＲ１４［ここで、Ｒ１４は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキル基からなる群から独立的に選択される］から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子で任意選択で中断されているか、又はＲ１３は、スペーサー部分を介してＮに接続されているＣ（Ｏ）Ｘの第２の出現である］、
    好ましくはＬ２、好ましくはＳｐ１が、式（３）の基を２個含む、請求項１に記載の抗体薬物コンジュゲート。
  4. 出現する各ペプチド（ＮＨ－ＣＲ１７－ＣＯ）ｎが、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ａｒｇ、ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、ＡｃＬｙｓ－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ－Ｃｉｔ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ、Ａｌａ－Ａｓｎ及びＬｙｓから、好ましくはＶａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｇｌｕ－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎから、最も好ましくはＶａｌ－Ｃｉｔ又はＶａｌ－Ａｌａから選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
  5. Ｚが、（Ｚ１）～（Ｚ８）及び（Ｚ１１）～（Ｚ２３）から選択される構造を有する
    Figure 2023541637000090
    ［構造中、
    ＊で標識された波形の結合は、Ｌ１を任意選択で介してＡＢに接続されており、他の波形の結合は、Ｌ２に接続されており、
    （Ｚ３）、（Ｚ７）及び（Ｚ８）における官能基Ｒは、水素、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ２～Ｃ２４アシル基、Ｃ３～Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基及びＣ１～Ｃ２４スルホニル基から選択され、これらのそれぞれが、任意選択で置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３２［ここで、Ｒ３２は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキル基からなる群から独立的に選択される］から選択される１個又は複数のヘテロ原子で任意選択で中断されていてもよく、
    Ｒ２４は、Ｈ又はＣ１～１２アルキル、好ましくはＨ又はＣ１～６アルキルであり、
    Ｒ２９は、Ｃ１～１２アルキル、好ましくはＣ１－４アルキル、最も好ましくはエチルである］
    請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
  6. 構造（１ｆ）又は（１ｂ）を有し
    Figure 2023541637000091
    ［構造中、
    ＡＢ、Ｌ１、Ｚ、Ａ、Ｒ２１、ｎ、Ｒ１７及びｘは、請求項１に記載の通りであり、
    ａ及びＲ１３は、請求項３に記載の通りであり、
    Ｌ５はリンカーであり、
    ｒは、０又は１であり、
    ｍは、１～１０の範囲の整数であり、
    ｑは、０～１０の範囲の整数であり、
    ｐは、０又は１である］、

    ［構造中、
    Ｚ、Ｌ２、Ｒ１７、Ａ、Ｒ２１、ｎ及びｘは、請求項１に記載の通りであり、
    ｅは、０～２０の範囲の整数であり、
    Ｓｕは単糖であり、
    Ｇは単糖部分であり、
    ＧｌｃＮＡｃは、Ｎ－アセチルグルコサミン部分であり、
    Ｆｕｃは、フコース部分であり、
    ｄは、０又は１である］、
    好ましくは構造（１ｈ）を有する

    ［構造中、
    ｅ、Ｓｕ、Ｇ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｆｕｃ及びｄは以上に記載の通りであり、
    ｎは、０又は１である］、
    請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
  7. 請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲートの合成方法であって、
    （ｉ） 構造ＡＢ－（（Ｌ１）ｗ－Ｆ）ｘの修飾抗体［構造中、
    ＡＢは抗体であり、
    Ｌ１はリンカーであり、
    ｗは、０又は１であり、
    Ｆは、無金属クリック反応においてＱと反応することができるクリックプローブ、又はチオール若しくはその前駆体であり、
    ｘは、１～８の範囲の整数である］を
    （ｉｉ） 構造（５）で表されるリンカー－薬物構築物
    Figure 2023541637000094
    ［構造中、
    Ｌ２はリンカーであり、
    Ｑは、無金属クリック反応を行うことができるクリックプローブ又はチオール反応性プローブであり、
    Ｒ１７はそれぞれ個別にアミノ酸側鎖であり、
    ｎは、１～５の範囲の整数であり、
    Ａは、５員又は６員の芳香族又はヘテロ芳香族環であり、
    ｘは、１～８の範囲の整数であり、
    Ｒ２１は、Ｈ、Ｒ２２、Ｃ（Ｏ）ＯＨ及びＣ（Ｏ）Ｒ２２から選択され、Ｒ２２は、Ｃ１～Ｃ２４（ヘテロ）アルキル基、Ｃ３～Ｃ１０（ヘテロ）シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ１０（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ１０アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３～Ｃ１０（ヘテロ）アリールアルキル基であり、それらは、任意選択で置換されており、Ｏ、Ｓ及びＮＲ２３から選択される１個又は複数のヘテロ原子で任意選択で中断されており、Ｒ２３は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキル基からなる群から独立的に選択される］と反応させて、
    ＱとＦの間の無金属クリック反応又はＱとＦの間のチオールライゲーションによって形成された接続基Ｚを介して薬物が前記抗体に共有結合している抗体薬物コンジュゲートを形成するステップを含む方法。
  8. クリックプローブＱが、環式アルキン部分又は環式アルケン部分を含み、好ましくは
    （ａ）前記クリックプローブＱが、（Ｑ２２）～（Ｑ３６）からなる群から選択されるか

    ［構造中、Ｂは、薬学的に許容されるアニオンである］、
    又は（ヘテロ）シクロアルキニル部分Ｑが、構造（Ｑ３７）で表されるか
    Figure 2023541637000096
    ［構造中、
    Ｒ１５は、水素、ハロゲン、－ＯＲ１６、－ＮＯ２、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１６、－Ｓ（Ｏ）３ （－）、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、前記アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換されており、２個の置換基Ｒ１５は連結されて、任意選択で置換されている縮合環化シクロアルキル又は任意選択で置換されている縮合環化（ヘテロ）アレーン置換基を形成することがあり、Ｒ１６は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、
    Ｙ２は、Ｃ（Ｒ３１）２、Ｏ、Ｓ又はＮＲ３１であり、Ｒ３１はそれぞれ個別に、Ｒ１５又はスペーサー部分を介して接続されているエクサテカンペイロードの第２の出現であり、
    ｕは、０、１、２、３、４又は５であり、
    ｕ’は、０、１、２、３、４又は５であり、ｕ＋ｕ’＝４、５、６、７又は８であり、
    ｖ＝８～１６の範囲の整数である］、
    好ましくは、シクロオクチニル部分Ｑが、構造（Ｑ３８）で表されるか
    Figure 2023541637000097
    ［構造中、
    Ｒ１５は、水素、ハロゲン、－ＯＲ１６、－ＮＯ２、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１６、－Ｓ（Ｏ）３ （－）、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ５～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、前記アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換されており、２個の置換基Ｒ１５は連結されて、任意選択で置換されている縮合環化シクロアルキル又は任意選択で置換されている縮合環化（ヘテロ）アレーン置換基を形成することがあり、Ｒ１６は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、
    Ｒ１８は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、
    Ｒ１９は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、前記アルキル基は、Ｏ、Ｎ及びＳからなる群から選択される１個若しくは複数（one of more）のヘテロ原子で任意選択で中断されており、前記アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、独立的に任意選択で置換されており、又はＲ１９は、スペーサー部分を介して接続されている前記エクサテカンペイロードの第２の出現であり、
    ｌは、０～１０の範囲の整数である］、
    又は（ヘテロ）シクロオクチニル部分Ｑが、構造（Ｑ３９）で表されるか
    Figure 2023541637000098
    ［構造中、
    Ｒ１５は、水素、ハロゲン、－ＯＲ１６、－ＮＯ２、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１６、－Ｓ（Ｏ）３ （－）、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ５～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、前記アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換されており、２個の置換基Ｒ１５は連結されて、任意選択で置換されている縮合環化シクロアルキル又は任意選択で置換されている縮合環化（ヘテロ）アレーン置換基を形成することがあり、Ｒ１６は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、
    Ｙは、Ｎ又はＣＲ１５である］、
    又はヘテロシクロヘプチニル部分Ｑが、構造（Ｑ３６ａ）で表されるか、
    Figure 2023541637000099
    或いは（ｂ）前記クリックプローブＱが、任意選択で置換されている（ヘテロ）シクロプロペニル基、（ヘテロ）シクロブテニル基、トランス－（ヘテロ）シクロヘプテニル基、トランス－（ヘテロ）シクロオクテニル基、トランス－（ヘテロ）シクロノネニル基又はトランス－（ヘテロ）シクロデシニル基からなる群から選択され、好ましくはクリックプローブＱが、（Ｑ４０）～（Ｑ５０）からなる群から選択され、
    Figure 2023541637000100
    （Ｑ４４）及び（Ｑ４５）においてＳｉのＲ基（複数可）が、アルキル又はアリールである、請求項７に記載の方法。
  9. チオール反応性プローブＱが、（Ｑ５１）～（Ｑ６５）からなる群から選択される
    Figure 2023541637000101
    ［構造中、
    Ｘ６は、Ｈ、ハロゲン、ＰｈＳ、ＭｅＳであり、
    Ｘ７は、ハロゲン、ＰｈＳ、ＭｅＳであり、
    Ｒ２４は、Ｈ又はＣ１～１２アルキル、好ましくはＨ又はＣ１～６アルキルであり、
    Ｒ２５は、Ｈ、Ｃ１～１２アルキル、Ｃ１～１２アリール、Ｃ１～１２アルカリール又はＣ１～１２アラルキル、好ましくはＨ又はパラ－メチルフェニルであり、
    （Ｑ５５）及び（Ｑ５７）の芳香族環は、任意選択でフェニル又はピリジン環などヘテロ芳香族環とすることができる］、請求項７に記載の方法。
  10. クリックプローブＦが、アジド、テトラジン、トリアジン、ニトロン、ニトリルオキシド、ニトリルイミン、ジアゾ化合物、オルト－キノン、ジオキソチオフェン及びシドノンからなる群から選択され、好ましくはクリックプローブＦが、アジド部分であり、並びに／又はクリック反応が、１，３双極付加環化若しくは（４＋２）環化付加であるか、或いは
    Ｆがチオールであり、並びに／又はチオールライゲーションが、マイケル付加若しくは求核置換である、
    請求項７～９のいずれか一項に記載の方法。
  11. ＡＢ－（（Ｌ１）ｗ－Ｆ）ｘが、構造（６）で表される
    Figure 2023541637000102
    ［構造中、
    ｅは、０～１０の範囲の整数であり、
    Ｓｕは単糖であり、
    Ｇは単糖部分であり、
    ＧｌｃＮＡｃは、Ｎ－アセチルグルコサミン部分であり、
    Ｆｕｃは、フコース部分であり、
    ｄは、０又は１である］、
    請求項７～１０のいずれか一項に記載の方法。
  12. 構造（５）で表されるリンカー－薬物構築物
    Figure 2023541637000103
    ［構造中、
    Ｌ２はリンカーであり、
    Ｑは、無金属クリック反応を行うことができるクリックプローブ又はチオール反応性プローブであり、
    Ｒ１７はそれぞれ個別にアミノ酸側鎖であり、
    ｎは、１～５の範囲の整数であり、
    Ａは、５員又は６員の芳香族又はヘテロ芳香族環であり、
    ｘは、１～８の範囲の整数であり、
    Ｒ２１は、Ｈ、Ｒ２２、Ｃ（Ｏ）ＯＨ及びＣ（Ｏ）Ｒ２２から選択され、Ｒ２２は、Ｃ１～Ｃ２４（ヘテロ）アルキル基、Ｃ３～Ｃ１０（ヘテロ）シクロアルキル基、Ｃ２～Ｃ１０（ヘテロ）アリール基、Ｃ３～Ｃ１０アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３～Ｃ１０（ヘテロ）アリールアルキル基であり、それらは、任意選択で置換されており、Ｏ、Ｓ及びＮＲ２３から選択される１個又は複数のヘテロ原子で任意選択で中断されており、Ｒ２３は、水素及びＣ１～Ｃ４アルキル基からなる群から独立的に選択される］。
  13. クリックプローブＱが、環式アルキン部分又は環式アルケン部分を含み、好ましくは
    （ａ）前記クリックプローブＱが、（Ｑ２２）～（Ｑ３６）からなる群から選択されるか

    ［構造中、Ｂは、薬学的に許容されるアニオンである］、
    又は（ヘテロ）シクロアルキニル部分Ｑが、構造（Ｑ３７）で表されるか
    Figure 2023541637000105
    ［構造中、
    Ｒ１５は、水素、ハロゲン、－ＯＲ１６、－ＮＯ２、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１６、－Ｓ（Ｏ）３ （－）、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、前記アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換されており、２個の置換基Ｒ１５は連結されて、任意選択で置換されている縮合環化シクロアルキル又は任意選択で置換されている縮合環化（ヘテロ）アレーン置換基を形成することがあり、Ｒ１６は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、
    Ｙ２は、Ｃ（Ｒ３１）２、Ｏ、Ｓ又はＮＲ３１であり、Ｒ３１はそれぞれ個別に、Ｒ１５又はスペーサー部分を介して接続されているエクサテカンペイロードの第２の出現であり、
    ｕは、０、１、２、３、４又は５であり、
    ｕ’は、０、１、２、３、４又は５であり、ｕ＋ｕ’＝４、５、６、７又は８であり、
    ｖ＝８～１６の範囲の整数である］、
    好ましくはシクロオクチニル部分Ｑが、構造（Ｑ３８）で表されるか
    Figure 2023541637000106
    ［構造中、
    Ｒ１５は、水素、ハロゲン、－ＯＲ１６、－ＮＯ２、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１６、－Ｓ（Ｏ）３ （－）、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ５～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、前記アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換されており、２個の置換基Ｒ１５は連結されて、任意選択で置換されている縮合環化シクロアルキル又は任意選択で置換されている縮合環化（ヘテロ）アレーン置換基を形成することがあり、Ｒ１６は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、
    Ｒ１８は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、
    Ｒ１９は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、前記アルキル基は、Ｏ、Ｎ及びＳからなる群から選択される１個若しくは複数（one of more）のヘテロ原子で任意選択で中断されており、前記アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、独立的に任意選択で置換されており、又はＲ１９は、スペーサー部分を介して接続されているエクサテカンペイロードの第２の出現であり、
    ｌは、０～１０の範囲の整数である］、
    又は（ヘテロ）シクロオクチニル部分Ｑが、構造（Ｑ３９）で表されるか
    Figure 2023541637000107
    ［構造中、
    Ｒ１５は、水素、ハロゲン、－ＯＲ１６、－ＮＯ２、－ＣＮ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ１６、－Ｓ（Ｏ）３ （－）、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ５～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、前記アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換されており、２個の置換基Ｒ１５は連結されて、任意選択で置換されている縮合環化シクロアルキル又は任意選択で置換されている縮合環化（ヘテロ）アレーン置換基を形成することがあり、Ｒ１６は、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ２４アルキル基、Ｃ６～Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７～Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７～Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立的に選択され、
    Ｙは、Ｎ又はＣＲ１５である］、
    又はヘテロシクロヘプチニル部分Ｑが、構造（Ｑ３６ａ）で表されるか、
    Figure 2023541637000108
    或いは（ｂ）前記クリックプローブＱが、任意選択で置換されている（ヘテロ）シクロプロペニル基、（ヘテロ）シクロブテニル基、トランス－（ヘテロ）シクロヘプテニル基、トランス－（ヘテロ）シクロオクテニル基、トランス－（ヘテロ）シクロノネニル基又はトランス－（ヘテロ）シクロデシニル基からなる群から選択され、好ましくはクリックプローブＱが、（Ｑ４０）～（Ｑ５０）からなる群から選択され、
    Figure 2023541637000109
    （Ｑ４４）及び（Ｑ４５）においてＳｉのＲ基（複数可）が、アルキル又はアリールである、請求項１２に記載のリンカー－薬物構築物。
  14. チオール反応性プローブＱが、（Ｑ５１）～（Ｑ６５）からなる群から選択される
    Figure 2023541637000110
    ［構造中、
    Ｘ６は、Ｈ、ハロゲン、ＰｈＳ、ＭｅＳであり、
    Ｘ７は、ハロゲン、ＰｈＳ、ＭｅＳであり、
    Ｒ２４は、Ｈ又はＣ１～１２アルキル、好ましくはＨ又はＣ１～６アルキルであり、
    Ｒ２５は、Ｈ、Ｃ１～１２アルキル、Ｃ１～１２アリール、Ｃ１～１２アルカリール又はＣ１～１２アラルキル、好ましくはＨ又はパラ－メチルフェニルであり、
    （Ｑ５５）及び（Ｑ５７）の芳香族環は、任意選択でフェニル又はピリジン環などヘテロ芳香族環とすることができる］、
    請求項１２に記載のリンカー－薬物構築物。
  15. 構造（５ｄ）を有する

    ［構造中、ｎ＝０又は１である］、
    請求項１２に記載のリンカー－薬物構築物。
  16. 請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲートと薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
  17. 治療を必要とする対象の治療における使用のための、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
  18. がん、好ましくはＨＥＲ２陽性がんの処置における使用のための、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
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