JP2023538085A - アデノウイルスベクター及びアデノウイルスベクターの使用方法 - Google Patents

アデノウイルスベクター及びアデノウイルスベクターの使用方法 Download PDF

Info

Publication number
JP2023538085A
JP2023538085A JP2023511995A JP2023511995A JP2023538085A JP 2023538085 A JP2023538085 A JP 2023538085A JP 2023511995 A JP2023511995 A JP 2023511995A JP 2023511995 A JP2023511995 A JP 2023511995A JP 2023538085 A JP2023538085 A JP 2023538085A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
polypeptide
acid sequence
nucleic acid
seq
coronavirus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2023511995A
Other languages
English (en)
Inventor
エー． バリー，マイケル
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Mayo Foundation for Medical Education and Research
Original Assignee
Mayo Foundation for Medical Education and Research
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Mayo Foundation for Medical Education and Research filed Critical Mayo Foundation for Medical Education and Research
Publication of JP2023538085A publication Critical patent/JP2023538085A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A61K9/006—Oral mucosa, e.g. mucoadhesive forms, sublingual droplets; Buccal patches or films; Buccal sprays
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/485—Exopeptidases (3.4.11-3.4.19)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/17—Metallocarboxypeptidases (3.4.17)
    • C12Y304/17023—Angiotensin-converting enzyme 2 (3.4.17.23)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A61K2039/541—Mucosal route
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A61K2039/541—Mucosal route
    • A61K2039/543—Mucosal route intranasal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/575—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 humoral response
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/08—Clostridium, e.g. Clostridium tetani
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
    • C12N2710/10322—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
    • C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/20011—Coronaviridae
    • C12N2770/20022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/20011—Coronaviridae
    • C12N2770/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本文書は、アデノウイルスベクター、並びにアデノウイルスベクターの使用に関する方法及び材料を提供する。例えば、哺乳動物が免疫原に対して有効な免疫応答を生じるように、哺乳動物内の細胞に１つ以上の免疫原（例えば、感染を引き起こす病原体に関連する１つ以上の免疫原）をコードする核酸を送達するためのアデノウイルスが提供される。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年８月１７日に提出された米国仮特許出願第６３／０６６，７４０号の利益を主張する、２０２０年８月１８日に提出された米国特許出願第１６／９９６，７４０号に対する優先権を主張する。先行出願の開示は、本出願の開示の一部とみなされる（そして参照により援用される）。
配列表
この文書は、ＡＳＣＩＩテキストファイルとして電子出願システムを介して米国特許商標庁に提出された配列リストを含む。参照により本明細書に援用される配列表は、「07039-1964WO1_ST25.txt」というタイトルであり、２０２１年８月６日に作成され、サイズは８９２キロバイトである。
技術分野
本文書は、アデノウイルスベクター、並びにアデノウイルスベクターの使用に関する方法及び材料に関する。例えば、アデノウイルスベクターを使用して、哺乳動物が免疫原に対して有効な免疫応答を生じるように、哺乳動物内の細胞に１つ以上の免疫原（例えば、感染を引き起こす病原体に関連する１つ以上の免疫原）を送達することができる。
背景情報
ＣＯＶＩＤ－１９として知られるコロナウイルスによって引き起こされる感染症は、２０１９年１２月３１日に中国の世界保健機関（ＷＨＯ）の国別事務所に最初に報告された。２０２０年６月３日の時点で、３７９，９４１件の死亡を含む、約６，２８７，７７１件のＣＯＶＩＤ－１９の確定症例がＷＨＯに報告されている（covid19.who.int/）。
概要
本文書は、アデノウイルスベクター、並びにアデノウイルスベクターの使用に関する方法及び材料に関する。例えば、本文書は、アデノウイルスベクター、アデノウイルスベクターをコードする核酸分子、アデノウイルスベクターを含有する細胞株、及びインビトロ又はインビボで細胞に核酸を送達するためにアデノウイルスベクターを使用する方法を提供する。この文書はまた、哺乳動物（例えば、ヒト）内で免疫応答を誘導するためにアデノウイルスベクターを使用するための方法及び材料をも供する。一部の場合において、アデノウイルスベクター（例えば、シングルサイクルアデノウイルス（ＳＣ－Ａｄ）ベクター）を使用して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個又はそれを超える数）の、哺乳動物（例えば、ヒト）内で免疫応答を誘発する免疫原を送達することができる。
本明細書で示されるように、ＳＣ－Ａｄは、免疫原に対する有効な免疫応答を誘導できる融合及び分泌ポリペプチドとして、１つ以上の免疫原を発現するように操作することができる。例えば、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ＴｃｄＡ／Ｂ融合ポリペプチドを発現するＳＣ－Ａｄの投与により、マウス及びシリアンハムスターは、単回免疫後、長期間（例えば、３６週間以上）にわたって致死的毒素チャレンジから保護された。
哺乳動物（例えば、ヒト）のウイルス性及び／又は細菌性病原体（例えば、コロナウイルス）に対して有効に免疫応答を産生する能力を有することで、生存率を改善し、感染の影響を最小限に抑えることができる。１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクターを使用して、感染性病原体（例えば、コロナウイルス）に対する持続的で長期的な免疫を哺乳動物に提供できる。例えば、ＣＯＶＩＤ－１９に関連する１つ以上の免疫原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２由来の１つ以上の免疫原）をコードするアデノウイルスベクターは、初感染及び再発の両方に対し液性免疫を生成するための、ＣＯＶＩＤ－１９パンデミックにおける強力なワクチンとして使用できる。
一般に、本文書の一態様は、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを有し、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドを含み、ＳＣ－Ａｄが、コロナウイルス免疫原をコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄを特徴とする。アデノウイルスポリペプチドは、ファイバーポリペプチド、Ｖポリペプチド、ヘキソンポリペプチド、ペントンベースポリペプチド、又はｐＩＩＩａポリペプチドであり得る。コロナウイルス免疫原は、コロナウイルススパイクポリペプチド又はその免疫原性断片を含み得る。コロナウイルス免疫原は、配列番号１～４のいずれか１つに示されるアミノ酸配列からなり得るか、又はそれから本質的になり得る。ＳＣ－Ａｄはまた、アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列を含み得る。アジュバントポリペプチドは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）ポリペプチド、インターロイキン４（ＩＬ－４）ポリペプチド、インターロイキン２１（ＩＬ－２１）ポリペプチド、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）ポリペプチド、４－１ＢＢリガンド（４－１ＢＢＬ）ポリペプチド、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦ－β）ポリペプチド、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）ＴｃｄＡポリペプチド、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ＴｃｄＢポリペプチド、又はそれらの生物学的に活性な断片であり得る。コロナウイルススパイクポリペプチドは、アジュバントポリペプチドに融合することができる。アジュバントポリペプチドに融合したコロナウイルススパイクポリペプチドは、配列番号５に示されるアミノ酸配列から本質的になり得るか、又はそれからなり得る。ＳＣ－Ａｄはまた、チャフ（chaff）ポリペプチドをコードする核酸配列も含み得る。チャフポリペプチドは、ＡＣＥ２ポリペプチドの断片であり得る。ＡＣＥ２ポリペプチドの断片は、ＡＣＥ２ポリペプチドの細胞外領域を含み得、膜貫通ドメインを欠き得る。チャフポリペプチドは、配列番号８又は配列番号９に示されるアミノ酸配列から本質的になり得るか、又はそれからなり得る。コロナウイルススパイクポリペプチドは、チャフポリペプチドに融合することができる。
別の態様において、本文書は、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを有し、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドを含み、ＳＣ－Ａｄが、コロナウイルス免疫原をコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄを含む組成物を特徴とする。
別の態様において、本文書は、哺乳動物においてコロナウイルスに対する免疫応答を誘導するための方法を特徴とする。この方法は、ＳＣ－Ａｄが哺乳動物の細胞に感染し、細胞における免疫原の発現が免疫応答の誘導をもたらす条件下で、ｉ）ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを有し、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドを含み、ＳＣ－Ａｄが、コロナウイルス免疫原をコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄ；又はｉｉ）ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを有し、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドを含み、ＳＣ－Ａｄが、コロナウイルス免疫原をコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄを含む組成物を、哺乳動物に投与することを含み得るか、又はそれから本質的になり得る。哺乳動物は、ヒトであり得る。コロナウイルスは、ベータコロナウイルスであり得る。ベータコロナウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２であり得る。投与は、ＳＣ－Ａｄの粘膜送達を含み得る。
別の態様において、本文書は、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを有し、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドを含み、ＳＣ－Ａｄが、（ａ）免疫原をコードする核酸配列、及び（ｂ）アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄを特徴とする。アデノウイルスポリペプチドは、ファイバーポリペプチド、Ｖポリペプチド、ヘキソンポリペプチド、ペントンベースポリペプチド、又はｐＩＩＩａポリペプチドであり得る。免疫原は、コロナウイルス免疫原であり得る。コロナウイルス免疫原は、コロナウイルススパイクポリペプチド又はその免疫原性断片を含み得る。コロナウイルス免疫原は、配列番号１～４のいずれか１つに示されるアミノ酸配列からなり得るか、又はそれから本質的になり得る。アジュバントポリペプチドは、ＧＭ－ＣＳＦポリペプチド、ＩＬ－４ポリペプチド、ＩＬ－２１ポリペプチド、ＣＤ４０Ｌポリペプチド、４－１ＢＢＬポリペプチド、ＴＧＦ－βポリペプチド、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）ＴｃｄＡポリペプチド、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ＴｃｄＢポリペプチド、又はそれらの生物学的に活性な断片であり得る。コロナウイルススパイクポリペプチドは、アジュバントポリペプチドに融合することができる。アジュバントポリペプチドに融合したコロナウイルススパイクポリペプチドは、配列番号５に示されるアミノ酸配列から本質的になり得るか、又はそれからなり得る。ＳＣ－Ａｄはまた、チャフポリペプチドをコードする核酸配列も含み得る。チャフポリペプチドは、ＡＣＥ２ポリペプチドの断片であり得る。ＡＣＥ２ポリペプチドの断片は、ＡＣＥ２ポリペプチドの細胞外領域を含み得、膜貫通ドメインを欠き得る。チャフポリペプチドは、配列番号８又は配列番号９に示されるアミノ酸配列から本質的になり得るか、又はそれからなり得る。
別の態様において、本文書は、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを有し、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドを含み、ＳＣ－Ａｄが、（ａ）免疫原をコードする核酸配列、及び（ｂ）アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄを含む組成物を特徴とする。
別の態様において、本文書は、哺乳動物においてウイルスに対する免疫応答を誘導するための方法を特徴とする。この方法は、ＳＣ－Ａｄが哺乳動物の細胞に感染し、細胞における免疫原の発現が免疫応答の誘導をもたらす条件下で、ｉ）ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを有し、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドを含み、ＳＣ－Ａｄが、（ａ）免疫原をコードする核酸配列、及び（ｂ）アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄ；又はｉｉ）ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを有し、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドを含み、ＳＣ－Ａｄが、（ａ）免疫原をコードする核酸配列、及び（ｂ）アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄを含む組成物を、哺乳動物に投与することを含み得るか、又はそれから本質的になり得る。哺乳動物は、ヒトであり得る。ウイルスはコロナウイルスであり得、免疫原はコロナウイルスに関連し得る。コロナウイルスは、ベータコロナウイルスであり得る。ベータコロナウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２であり得る。投与は、ＳＣ－Ａｄの粘膜送達を含み得る。
別の態様において、本文書は、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを有し、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドを含み、ＳＣ－Ａｄが、（ａ）免疫原をコードする核酸配列、及び（ｂ）チャフポリペプチドをコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄを特徴とする。アデノウイルスポリペプチドは、ファイバーポリペプチド、Ｖポリペプチド、ヘキソンポリペプチド、ペントンベースポリペプチド、又はｐＩＩＩａポリペプチドであり得る。免疫原は、コロナウイルス免疫原であり得る。コロナウイルス免疫原は、コロナウイルススパイクポリペプチド又はその免疫原性断片を含み得る。コロナウイルス免疫原は、配列番号１～４のいずれか１つに示されるアミノ酸配列からなり得るか、又はそれから本質的になり得る。チャフポリペプチドは、ＡＣＥ２ポリペプチドの断片であり得る。ＡＣＥ２ポリペプチドの断片は、ＡＣＥ２ポリペプチドの細胞外領域を含み得、膜貫通ドメインを欠き得る。チャフポリペプチドは、配列番号８又は配列番号９に示されるアミノ酸配列から本質的になり得るか、又はそれからなり得る。コロナウイルススパイクポリペプチドは、チャフポリペプチドに融合することができる。ＳＣ－Ａｄはまた、アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列を含み得る。アジュバントポリペプチドは、ＧＭ－ＣＳＦポリペプチド、ＩＬ－４ポリペプチド、ＩＬ－２１ポリペプチド、ＣＤ４０Ｌポリペプチド、４－１ＢＢＬポリペプチド、ＴＧＦ－βポリペプチド、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）ＴｃｄＡポリペプチド、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ＴｃｄＢポリペプチド、又はそれらの生物学的に活性な断片であり得る。
別の態様において、本文書は、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを有し、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドを含み、ＳＣ－Ａｄが、（ａ）免疫原をコードする核酸配列、及び（ｂ）チャフポリペプチドをコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄを含む組成物を特徴とする。
別の態様において、本文書は、哺乳動物においてウイルスに対する免疫応答を誘導するための方法を特徴とする。この方法は、ＳＣ－Ａｄが哺乳動物の細胞に感染し、細胞における免疫原の発現が免疫応答の誘導をもたらす条件下で、ｉ）ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを有し、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドを含み、ＳＣ－Ａｄが、（ａ）免疫原をコードする核酸配列、及び（ｂ）チャフポリペプチドをコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄ；又はｉｉ）ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを有し、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドを含み、ＳＣ－Ａｄが、（ａ）免疫原をコードする核酸配列、及び（ｂ）チャフポリペプチドをコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄを含む組成物を、哺乳動物に投与することを含み得るか、又はそれから本質的になり得る。哺乳動物は、ヒトであり得る。ウイルスはコロナウイルスであり得、免疫原はコロナウイルスに関連し得る。コロナウイルスは、ベータコロナウイルスであり得る。ベータコロナウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２であり得る。投与は、ＳＣ－Ａｄの粘膜送達を含み得る。
別の態様において、本文書は、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを有し、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドを含み、ＳＣ－Ａｄが、（ａ）免疫原をコードする核酸配列、（ｂ）アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列、及び（ｃ）チャフポリペプチドをコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄを特徴とする。アデノウイルスポリペプチドは、ファイバーポリペプチド、Ｖポリペプチド、ヘキソンポリペプチド、ペントンベースポリペプチド、又はｐＩＩＩａポリペプチドであり得る。免疫原は、コロナウイルス免疫原であり得る。コロナウイルス免疫原は、コロナウイルススパイクポリペプチド又はその免疫原性断片を含み得る。コロナウイルス免疫原は、配列番号１～４のいずれか１つに示されるアミノ酸配列からなり得るか、又はそれから本質的になり得る。アジュバントポリペプチドは、ＧＭ－ＣＳＦポリペプチド、ＩＬ－４ポリペプチド、ＩＬ－２１ポリペプチド、ＣＤ４０Ｌポリペプチド、４－１ＢＢＬポリペプチド、ＴＧＦ－βポリペプチド、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）ＴｃｄＡポリペプチド、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ＴｃｄＢポリペプチド、又はそれらの生物学的に活性な断片であり得る。チャフポリペプチドは、ＡＣＥ２ポリペプチドの断片であり得る。ＡＣＥ２ポリペプチドの断片は、ＡＣＥ２ポリペプチドの細胞外領域を含み得、膜貫通ドメインを欠き得る。チャフポリペプチドは、配列番号８又は配列番号９に示されるアミノ酸配列から本質的になり得るか、又はそれからなり得る。
別の態様において、本文書は、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを有し、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドを含み、ＳＣ－Ａｄが、（ａ）免疫原をコードする核酸配列、（ｂ）アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列、及び（ｃ）チャフポリペプチドをコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄを含む組成物を特徴とする。
別の態様において、本文書は、哺乳動物においてウイルスに対する免疫応答を誘導するための方法を特徴とする。この方法は、ＳＣ－Ａｄが哺乳動物の細胞に感染し、細胞における免疫原の発現が免疫応答の誘導をもたらす条件下で、ｉ）ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを有し、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドを含み、ＳＣ－Ａｄが、（ａ）免疫原をコードする核酸配列、（ｂ）アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列、及び（ｃ）チャフポリペプチドをコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄ、又はｉｉ）ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを有し、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドを含み、ＳＣ－Ａｄが、（ａ）免疫原をコードする核酸配列、（ｂ）アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列、及び（ｃ）チャフポリペプチドをコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄを含む組成物を、哺乳動物に投与することを含み得るか、又はそれから本質的になり得る。哺乳動物は、ヒトであり得る。ウイルスはコロナウイルスであり得、免疫原はコロナウイルスに関連し得る。コロナウイルスは、ベータコロナウイルスであり得る。ベータコロナウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２であり得る。投与は、ＳＣ－Ａｄの粘膜送達を含み得る。
別の態様において、本文書は、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを有し、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドを含み、ＳＣ－Ａｄが、アレルゲンによって発現又はシェディングされる免疫原をコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄを特徴とする。アデノウイルスポリペプチドは、ファイバーポリペプチド、Ｖポリペプチド、ヘキソンポリペプチド、ペントンベースポリペプチド、又はｐＩＩＩａポリペプチドであり得る。ＳＣ－Ａｄはまた、アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列を含み得る。アジュバントポリペプチドは、ＧＭ－ＣＳＦポリペプチド、ＩＬ－４ポリペプチド、ＩＬ－２１ポリペプチド、ＣＤ４０Ｌポリペプチド、４－１ＢＢＬポリペプチド、ＴＧＦ－βポリペプチド、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）ＴｃｄＡポリペプチド、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ＴｃｄＢポリペプチド、又はそれらの生物学的に活性な断片であり得る。ＳＣ－Ａｄはまた、チャフポリペプチドをコードする核酸配列も含み得る。チャフポリペプチドは、ＡＣＥ２ポリペプチドの断片であり得る。ＡＣＥ２ポリペプチドの断片は、ＡＣＥ２ポリペプチドの細胞外領域を含み得、膜貫通ドメインを欠き得る。チャフポリペプチドは、配列番号８又は配列番号９に示されるアミノ酸配列から本質的になり得るか、又はそれからなり得る。
別の態様において、本文書は、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを有し、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドを含み、ＳＣ－Ａｄが、アレルゲンによって発現又はシェディングされる免疫原をコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄを含む組成物を特徴とする。
別の態様において、本文書は、哺乳動物においてアレルゲンに対する免疫応答を誘導するための方法を特徴とする。この方法は、ＳＣ－Ａｄが哺乳動物の細胞に感染し、細胞における免疫原の発現が免疫応答の誘導をもたらす条件下で、ｉ）ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを有し、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドを含み、ＳＣ－Ａｄが、アレルゲンによって発現又はシェディングされる免疫原をコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄ、又はｉｉ）ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを有し、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドを含み、ＳＣ－Ａｄが、アレルゲンによって発現又はシェディングされる免疫原をコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄを含む組成物を、哺乳動物に投与することを含み得るか、又はそれから本質的になり得る。哺乳動物は、ヒトであり得る。
別の態様において、本文書は、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを有し、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドを含み、ＳＣ－Ａｄが、癌細胞によって発現される免疫原をコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄを特徴とする。アデノウイルスポリペプチドは、ファイバーポリペプチド、Ｖポリペプチド、ヘキソンポリペプチド、ペントンベースポリペプチド、又はｐＩＩＩａポリペプチドであり得る。ＳＣ－Ａｄはまた、アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列を含み得る。アジュバントポリペプチドは、ＧＭ－ＣＳＦポリペプチド、ＩＬ－４ポリペプチド、ＩＬ－２１ポリペプチド、ＣＤ４０Ｌポリペプチド、４－１ＢＢＬポリペプチド、ＴＧＦ－βポリペプチド、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）ＴｃｄＡポリペプチド、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ＴｃｄＢポリペプチド、又はそれらの生物学的に活性な断片であり得る。ＳＣ－Ａｄはまた、チャフポリペプチドをコードする核酸配列も含み得る。チャフポリペプチドは、ＡＣＥ２ポリペプチドの断片であり得る。ＡＣＥ２ポリペプチドの断片は、ＡＣＥ２ポリペプチドの細胞外領域を含み得、膜貫通ドメインを欠き得る。チャフポリペプチドは、配列番号８又は配列番号９に示されるアミノ酸配列から本質的になり得るか、又はそれからなり得る。
別の態様において、本文書は、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを有し、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドを含み、ＳＣ－Ａｄが、癌細胞によって発現される免疫原をコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄを含む組成物を特徴とする。
別の態様において、本文書は、哺乳動物において癌細胞に対する免疫応答を誘導するための方法を特徴とする。この方法は、ＳＣ－Ａｄが哺乳動物の細胞に感染し、細胞における免疫原の発現が免疫応答の誘導をもたらす条件下で、ｉ）ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを有し、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドを含み、ＳＣ－Ａｄが、癌細胞によって発現される免疫原をコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄ、又はｉｉ）ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを有し、ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドを含み、ＳＣ－Ａｄが、癌細胞によって発現される免疫原をコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄを含む組成物を、哺乳動物に投与することを含み得るか、又はそれから本質的になり得る。哺乳動物は、ヒトであり得る。
別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術的及び科学的用語は、本発明に関する当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと同様又は同等の方法及び材料を使用して本発明を実施することができるが、適切な方法及び材料を以下に記載する。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、及びその他の参考文献は、参照によりその全体が援用される。矛盾する場合は、定義を含み、本明細書が優先される。さらに、材料、方法、及び実施例は、例示のみを目的とし、限定することを意図したものではない。
本発明の１つ以上の実施形態の詳細は、添付の図面及び以下の説明に示される。本発明のその他の特徴、目的、及び利点は、説明及び図面から、並びに特許請求の範囲から明らかになるであろう。
図面の説明
いくつかの実施形態による、例示的なＴｃｄＡ／Ｂ融合タンパク質及び融合タンパク質を発現する例示的なＳＣ－Ａｄ６プラスミドの概略図。ＴｃｄＡ／Ｂ融合タンパク質は、ヒトα１－アンチトリプシン（ＡＡＴ）分泌リーダー配列、及び２つのフューリン切断部位で分離されたＴｃｄＡ及びＴｃｄＢのＲＢＤを含む。 いくつかの実施形態による、例示的なＴｃｄＡ／Ｂ融合タンパク質及び融合タンパク質を発現する例示的なＳＣ－Ａｄ６プラスミドの概略図。ＣＭＶプロモーターを使用してＴｃｄＡ／Ｂ融合を発現するＳＣ－Ａｄ６プラスミド。 Ｃ．ディフィシル（C. difficile）トキシンＡ及びＢ融合タンパク質のシングルサイクルアデノウイルス発現。未感染細胞、Ａｄ対照（ＳＣ－Ａｄ６－ＧＦＰ－ルシフェラーゼ（ＧＬ））に感染した細胞、及びＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂに感染した細胞から採取した細胞溶解物及び培地中のＴｃｄＡ断片の発現を検出するウエスタンブロット。 Ｃ．ディフィシル（C. difficile）トキシンＡ及びＢ融合タンパク質のシングルサイクルアデノウイルス発現。未感染細胞、Ａｄ対照（ＳＣ－Ａｄ６－ＧＦＰ－ルシフェラーゼ（ＧＬ））に感染した細胞、及びＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂに感染した細胞から採取した細胞溶解物及び培地中のＴｃｄＢ断片の発現を検出するウエスタンブロット。 免疫したＣＤ１マウス及びトキシンＡチャレンジにおける血清抗体反応。雄及び雌のＣＤ１マウス（ｎ＝１０）に、ＳＣ－Ａｄ６－ＰＥＢ１、ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂ、又はＰＢＳの１ｘ１０１０個のウイルス粒子により、筋肉内（ｉ．ｍ．）でワクチン接種した。６週目に採取した血清をＥＬＩＳＡ及び中和アッセイによりアッセイした。６週目の血清エンドポイント力価は、雄よりもＳＣ－Ａｄ－ＴｃｄＡ／Ｂで免疫した雌マウスで有意に高かった（ｐ＝０．００６６）（幾何平均、９５％ＣＩ）。 免疫したＣＤ１マウス及びトキシンＡチャレンジにおける血清抗体反応。雄及び雌のＣＤ１マウス（ｎ＝１０）に、ＳＣ－Ａｄ６－ＰＥＢ１、ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂ、又はＰＢＳの１ｘ１０１０個のウイルス粒子により、筋肉内（ｉ．ｍ．）でワクチン接種した。６週目に採取した血清をＥＬＩＳＡ及び中和アッセイによりアッセイした。トキシンＡの中和力価は、性別が一致する対照と比較して、雌及び雄の群で有意に高かった（雌及び雄につき調整されたDunnによるｐ＝０．０００１及び０．０２３８）。 免疫したＣＤ１マウス及びトキシンＡチャレンジにおける血清抗体反応。雄及び雌のＣＤ１マウス（ｎ＝１０）に、ＳＣ－Ａｄ６－ＰＥＢ１、ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂ、又はＰＢＳの１ｘ１０１０個のウイルス粒子により、筋肉内（ｉ．ｍ．）でワクチン接種した。６週目に採取した血清をＥＬＩＳＡ及び中和アッセイによりアッセイした。雄及び雌のトキシンＡ生存曲線を合わせると、ＰＢＳ又はＰＥＢ１対照動物と比較した有意な生存率が示される（ｐ＜０．０００１）。 ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂは、単回免疫の後、長期間、致死的チャレンジに対する保護を提供する。雌のＣＤ１マウス（ｎ＝５）に、ＳＣ－Ａｄ６－ＰＥＢ１、ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂ、又はＰＢＳの１ｘ１０１０個のウイルス粒子により、ｉ．ｍ．でワクチン接種した。３、６、１４、２６、及び３６週目に採取した血清を滴定して、トキシンＡの結合エンドポイント力価を決定し、標準偏差とともに幾何平均として表した。 ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂは、単回免疫の後、長期間、致死的チャレンジに対する保護を提供する。雌のＣＤ１マウス（ｎ＝５）に、ＳＣ－Ａｄ６－ＰＥＢ１、ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂ、又はＰＢＳの１ｘ１０１０個のウイルス粒子により、ｉ．ｍ．でワクチン接種した。３、６、１４、２６、及び３６週目に採取した血清を滴定して、トキシンＢの結合エンドポイント力価を決定し、標準偏差とともに幾何平均として表した。 ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂは、単回免疫の後、長期間、致死的チャレンジに対する保護を提供する。雌のＣＤ１マウス（ｎ＝５）に、ＳＣ－Ａｄ６－ＰＥＢ１、ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂ、又はＰＢＳの１ｘ１０１０個のウイルス粒子により、ｉ．ｍ．でワクチン接種した。トキシンＢの平均中和力価は、ＳＣ－Ａｄ－ＰＥＢ１免疫動物よりもＳＣ－Ａｄ－ＴｃｄＡ／Ｂで有意に高かった（マン・ホイットニーによるｐ＞０．００７９）。 ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂは、単回免疫の後、長期間、致死的チャレンジに対する保護を提供する。雌のＣＤ１マウス（ｎ＝５）に、ＳＣ－Ａｄ６－ＰＥＢ１、ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂ、又はＰＢＳの１ｘ１０１０個のウイルス粒子により、ｉ．ｍ．でワクチン接種した。トキシンＡでチャレンジしたＳＣ－Ａｄ－ＴｃｄＡ／Ｂワクチン接種マウスの生存曲線は、ＰＢＳ又はＰＥＢ１対照動物と比較して有意な保護を示す（それぞれｐ＝０．００１９及び０．００２１）。 免疫されたシリアンハムスターにおける血清中和抗体応答及び致死的芽胞チャレンジからの保護。雌のシリアンハムスター（ｎ＝１０）に、ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂの１×１０１１個のウイルス粒子により、鼻腔内（ｉ．ｎ．）又はｉ．ｍ．で、又はＰＢＳにより、ｉ．ｎ．でワクチン接種した。免疫化後６、１２、及び１８週間で採取した血清をアッセイして、トキシンＡの平均中和力価を決定した（＊対照に対する調整ｐ＜０．０５、＊＊対照及びｉ．ｎ．経路に対する調整ｐ＜０．０５）。 免疫されたシリアンハムスターにおける血清中和抗体応答及び致死的芽胞チャレンジからの保護。雌のシリアンハムスター（ｎ＝１０）に、ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂの１×１０１１個のウイルス粒子により、鼻腔内（ｉ．ｎ．）又はｉ．ｍ．で、又はＰＢＳにより、ｉ．ｎ．でワクチン接種した。免疫化後６、１２、及び１８週間で採取した血清をアッセイして、トキシンＢの平均中和力価を決定した（＊対照に対する調整ｐ＜０．０５、＊＊対照及びｉ．ｎ．経路に対する調整ｐ＜０．０５）。 免疫されたシリアンハムスターにおける血清中和抗体応答及び致死的芽胞チャレンジからの保護。雌のシリアンハムスター（ｎ＝１０）に、ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂの１×１０１１個のウイルス粒子により、鼻腔内（ｉ．ｎ．）又はｉ．ｍ．で、又はＰＢＳにより、ｉ．ｎ．でワクチン接種した。ＵＫ１芽胞でチャレンジしたＳＣ－Ａｄ－ＴｃｄＡ／Ｂワクチン接種動物の生存曲線は、ＰＢＳ対照動物と比較して有意な保護を示す（ｐ＜０．０００１）。 ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂは、単回免疫の４５週間後に致死的芽胞チャレンジに対する保護を提供する。雌のシリアンハムスター（ｎ＝１０）に、ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂの１×１０１１個のウイルス粒子により、ｉ．ｎ．又はｉ．ｍ．で、又はＰＢＳにより、ｉ．ｎ．でワクチン接種した。免疫化後６、１２、１８、２５、及び３６週間で採取した血清をアッセイして、トキシンＡの平均中和力価を決定した（＊対照に対する調整ｐ＜０．０５、＊＊対照及びｉ．ｎ．経路に対する調整ｐ＜０．０５）。Ｘ軸の切れ目は、低用量チャレンジ研究の終了を表す。各群の残りの動物から３６週目に血清を採取した（ｎ＝５）。 ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂは、単回免疫の４５週間後に致死的芽胞チャレンジに対する保護を提供する。雌のシリアンハムスター（ｎ＝１０）に、ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂの１×１０１１個のウイルス粒子により、ｉ．ｎ．又はｉ．ｍ．で、又はＰＢＳにより、ｉ．ｎ．でワクチン接種した。免疫化後６、１２、１８、２５、及び３６週間で採取した血清をアッセイして、トキシンＢの平均中和力価を決定した（＊対照に対する調整ｐ＜０．０５、＊＊対照及びｉ．ｎ．経路に対する調整ｐ＜０．０５）。Ｘ軸の切れ目は、低用量チャレンジ研究の終了を表す。各群の残りの動物から３６週目に血清を採取した（ｎ＝５）。 ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂは、単回免疫の４５週間後に致死的芽胞チャレンジに対する保護を提供する。雌のシリアンハムスター（ｎ＝１０）に、ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂの１×１０１１個のウイルス粒子により、ｉ．ｎ．又はｉ．ｍ．で、又はＰＢＳにより、ｉ．ｎ．でワクチン接種した。単回免疫の４５週間後にＵＫ１芽胞でチャレンジしたｉ．ｎ．（ｎ＝５）及びｉ．ｍ．（ｎ＝４）ＳＣ－Ａｄ－ＴｃｄＡ／Ｂワクチン接種動物の生存曲線は、ＰＢＳ対照動物（ｎ＝４）と比較して有意な保護を示す（それぞれｐ＝０．００２７対ｐ＝０．００６７）。 ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂは、単回免疫の４５週間後に致死的芽胞チャレンジに対する保護を提供する。雌のシリアンハムスター（ｎ＝１０）に、ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂの１×１０１１個のウイルス粒子により、ｉ．ｎ．又はｉ．ｍ．で、又はＰＢＳにより、ｉ．ｎ．でワクチン接種した。非生存者と比較した、チャレンジで生存したｉ．ｎ．免疫動物の３６週目の中和トキシンＡ及びトキシンＢ中和力価。 ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂワクチン接種動物の血液化学。１０匹のシリアンハムスター群を、ｉ．ｎ．又はｉ．ｍ．経路で、１０１１個のＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂのウイルス粒子を用いて単回免疫した。対照動物は、ｉ．ｎ．ＰＢＳを投与された。血液は、臨床化学のために免疫化の３日後に採取された。 ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂワクチン接種動物の血液化学及びＣＢＣ。１０匹のシリアンハムスター群を、ｉ．ｎ．又はｉ．ｍ．経路で、１０１１個のＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂのウイルス粒子を用いて単回免疫した。対照動物は、ｉ．ｎ．ＰＢＳを投与された。コホートの１／２（群あたりｎ＝５）を、臨床化学のために免疫化の３日後に採血した。 ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂワクチン接種動物の血液化学及びＣＢＣ。１０匹のシリアンハムスター群を、ｉ．ｎ．又はｉ．ｍ．経路で、１０１１個のＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂのウイルス粒子を用いて単回免疫した。対照動物は、ｉ．ｎ．ＰＢＳを投与された。コホートの他方の１／２（群あたりｎ＝５）を、臨床化学のために免疫化の４日後に採血した。 ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂワクチン接種動物の血液化学及びＣＢＣ。１０匹のシリアンハムスター群を、ｉ．ｎ．又はｉ．ｍ．経路で、１０１１個のＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂのウイルス粒子を用いて単回免疫した。対照動物は、ｉ．ｎ．ＰＢＳを投与された。ＣＢＣのためにハムスターの１／２（群あたりｎ＝５）から４日目に血液を採取した。 ベロ細胞上の毒素の滴定。 チャレンジから２６週間後のトキシンＢ中和抗体（ｎＡｂｓ）の力価。 トキシンＡチャレンジの８週間後の生存曲線。 いくつかの実施形態による、１つ以上の免疫原をコードする核酸を送達するために使用できる例示的なＳＣ－Ａｄベクターの概略図。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクバリアント免疫原と、任意選択により１つ以上のアジュバント及び／又は１つ以上のチャフポリペプチドとをコードする、例示的なＳＣ－Ａｄベクターの概略図。 いくつかの実施形態による、１つ以上の免疫原をコードする核酸を送達するために使用できる例示的なＳＣ－Ａｄベクターの概略図。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクバリアント免疫原と、任意選択により１つ以上のアジュバント及び／又は１つ以上のチャフポリペプチドとをコードする、例示的なＳＣ－Ａｄベクターの概略図。通常は５２Ｋとペントンの間に位置するｐＩＩＩＡのポリペプチドコード配列が欠失している。 制限部位を有する、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク遺伝子及びＲＢＤ－Ｓｂサブドメイン遺伝子。 ＳＣ－Ａｄベクターによって発現されたスパイクポリペプチドのウエスタンブロット。１°＝アンチスパイクポリクローナル（１：１０００）；２°＝プロテインＡ／Ｇ－ＨＲＰ（１：１０，０００）；基質＝Pico。 ＳＣ－Ａｄ－スパイクはＡＣＥ２＋細胞に感染し、細胞融合イベントを形成する。 ＳＣ－Ａｄ－スパイクはＡＣＥ２＋細胞に感染し、細胞融合イベントを形成し、アデノウイルスＤＮＡ及びアデノウイルスタンパク質アジュバントを発現する。 ２９３－ＩＩＩＡ－ＡＣＥ２細胞におけるＡＣＥ２発現のウエスタンブロット。１°＝抗ＡＣＥ２（１：１０００）；２°＝プロテインＡ／Ｇ－ＨＲＰ（１：１０，０００）。 様々なプラスミド発現ベクターによって発現されたスパイクポリペプチドのウエスタンブロット。 スパイクポリペプチドを発現するプラスミドベクター又は陰性対照のＧＦＰ－ルシフェラーゼ（ＧＬ）ベクターを投与してから２週間後のマウスにおける抗体反応。 スパイクポリペプチドを発現するＳＣ－Ａｄ又はジカタンパク質を発現する陰性対照ＳＣ－Ａｄ又は緩衝液（ＰＢＳ）の、鼻腔内（ＩＮ）又は筋肉内（ＩＭ）投与後２週間のマウスにおけるＩｇＡ及びＩｇＧ抗体応答。 スパイクポリペプチドを発現するＳＣ－Ａｄ又はジカタンパク質を発現する陰性対照ＳＣ－Ａｄ又は緩衝液（ＰＢＳ）の、鼻腔内（ＩＮ）又は筋肉内（ＩＭ）投与後６週間のマウスにおけるＩｇＡ及びＩｇＧ抗体応答。 スパイクポリペプチドを発現するＳＣ－Ａｄ又はジカタンパク質を発現する陰性対照ＳＣ－Ａｄ又は緩衝液（ＰＢＳ）の、鼻腔内（ＩＮ）又は筋肉内（ＩＭ）投与後２週間のマウスにおけるＩｇＡ及びＩｇＧ抗体応答。 スパイクポリペプチドを発現するＳＣ－Ａｄ又はジカタンパク質を発現する陰性対照ＳＣ－Ａｄ又は緩衝液（ＰＢＳ）の、鼻腔内（ＩＮ）又は筋肉内（ＩＭ）投与後２週間のマウスにおけるＩｇＡ及びＩｇＧ抗体応答。 ＩＦＮγも測定した。 ＣＤ８ Ｔ細胞数も測定した。 ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクを発現する複製欠損アデノウイルス（ＲＤ－Ａｄ）及びＳＣ－Ａｄによるスパイクポリペプチド発現のウエスタンブロット。 集中型インフルエンザＨＡ遺伝子Ｈ１－ＣＯＮを有する、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク又はＲＢＤを持つＳＣ－Ａｄの例。 Ｈ１ヘマグルチニン配列をカバーする集中型インフルエンザＨＡ遺伝子Ｈ１－ＣＯＮ及びＨ１－Ｈ５ヘマグルチニン配列をカバーするＨ１－５ＣＯＮを持つ、例示的なＳＣ－Ａｄ。 プラスミドワクチンによって生成される血清抗体は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）アジュバントプラスミドとの共免疫化によって増加する。 遺伝的アジュバントを発現するＳＣ－Ａｄと組み合わせたＳＣ－Ａｄ ＨＩＶ Ｅｎｖの単回ｉ．ｎ．投与の６週間後の血清抗体。 遺伝的アジュバントを発現するＳＣ－Ａｄと組み合わせたＳＣ－Ａｄ ＨＩＶ Ｅｎｖの単回ｉ．ｎ．投与の６週間後の膣抗体。 遺伝的アジュバントを発現するＳＣ－Ａｄと組み合わせたＳＣ－Ａｄ ＨＩＶ Ｅｎｖの単回ｉ．ｍ．投与、及びその後のｉ．ｍ．又はｉ．ｎ． ＨＩＶ－１エンベロープＳＯＳＩＰポリペプチドの投与後の膣抗体。 いくつかの実施形態による、ガンマミンクスパイクポリペプチドバリアント免疫原をコードする核酸を送達するために使用できる例示的なＡｄベクターの概略図。 いくつかの実施形態による、Ｂ．１．６１７．２デルタスパイクポリペプチドバリアント免疫原をコードする核酸を送達するために使用できる例示的なＡｄベクターの概略図。 いくつかの実施形態による、Ｂ．１．６１７．２デルタプラススパイクポリペプチドバリアント免疫原をコードする核酸を送達するために使用できる例示的なＡｄベクターの概略図。 いくつかの実施形態による、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｍ／Ｎ融合ポリペプチド免疫原をコードする核酸を送達するために使用できる例示的なＡｄベクターの概略図。 元のスパイクポリペプチド又はガンマミンクスパイクポリペプチドを発現するシングルサイクルのＡｄ６及びＡｄ６５７ベクターによって生成される抗体応答。血清の１／１０００希釈物を、ポリペプチドに結合するＩｇＧ抗体について、スパイクＳ１ポリペプチドに対するＥＬＩＳＡによって分析した。 いくつかの実施形態による、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ｔｃｄＢ／Ｂ（ｔｃｄＢｘ２）融合ポリペプチド免疫原をコードする核酸を送達するために使用できる例示的なＡｄベクターの概略図。 いくつかの実施形態による、ラムダスパイクポリペプチドバリアント免疫原をコードする核酸を送達するために使用できる例示的なＡｄベクターの概略図。 いくつかの実施形態による、イプシロンスパイクポリペプチドバリアント免疫原をコードする核酸を送達するために使用できる例示的なＡｄベクターの概略図。
詳細な説明
本文書は、アデノウイルスベクター、並びにアデノウイルスベクターの使用のための方法及び材料を提供する。一部の場合において、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、又はそれを超える数）の免疫原をコードするアデノウイルスベクターを使用して、哺乳動物が有効な免疫応答（例えば、それらの免疫原に対する免疫応答）を産生するように、免疫原を哺乳動物（例えば、ヒト）に送達することができる。例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクターを使用して、哺乳動物がそれらの免疫原に関連する病原体、アレルゲン、及び／又は癌細胞に対する抗体を産生するように、免疫原を哺乳動物（例えば、ヒト）に送達することができる。一部の場合において、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子を使用して、哺乳動物が有効な免疫応答（例えば、それらの免疫原に対する免疫応答）を産生するように、免疫原を哺乳動物（例えばヒト）に送達することができる。例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子を使用して、哺乳動物がそれらの免疫原に関連する病原体、アレルゲン、及び／又は癌細胞に対する抗体を産生するように、免疫原を哺乳動物（例えば、ヒト）に送達することができる。
本文書はまた、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、又はそれを超える数）の免疫原（例えば、１つ以上の免疫原をコードするＳＣ－Ａｄ）をコードするアデノウイルスベクター、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクターをコードする核酸分子、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクターを含有する細胞株、インビトロ又はインビボで免疫原を細胞に送達するために１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクターを使用する方法、及び哺乳動物（例えば、ヒト）内で免疫応答を誘導するために１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクターを使用する方法も提供する。
本明細書で提供されるアデノウイルスベクター（例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）は、任意のアデノウイルスに由来し得る。本明細書で提供されるアデノウイルスベクターを作製するために使用されるアデノウイルスは、任意の適切な血清型（例えば、Ａｄ１～Ａｄ５７）であり得る。一部の場合において、アデノウイルスは、複製可能アデノウイルスであり得る。一部の場合において、アデノウイルスは複製欠損アデノウイルスである可能性がある。一部の場合において、アデノウイルスは、ヒト細胞に感染することができる（例えば、ヒトアデノウイルスであり得る）。一部の場合において、アデノウイルスは、チンパンジー細胞などの非ヒト細胞に感染することができる（例えば、非ヒトアデノウイルスであり得る）。本明細書で提供されるアデノウイルスベクターを作製するために使用できるアデノウイルスの例としは、限定されないが、Ａｄ５アデノウイルス、Ａｄ６アデノウイルス、ＣｈＡｄＯｘ１、及びＣｈＡｄＯｘ２が挙げられる。
一部の場合において、本明細書で提供されるアデノウイルスベクター（例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）は、ＳＣ－Ａｄであり得る。ＳＣ－Ａｄは、以下のアデノウイルス核酸配列の少なくとも１つの全部又は一部を欠くゲノムを有し得る：ファイバータンパク質コード配列、Ｖタンパク質コード配列、ヘキソンコード配列、ペントン塩基コード配列（ｐＩＩＩコード配列とも呼ばれる）、ＶＡ ＲＮＡコード配列、ｐＩＩＩａタンパク質コード配列（マイナーキャプシドタンパク質コード配列とも呼ばれる）、又は他の初期若しくは後期遺伝子産物コード配列。アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の例としては、限定されないが、ＧｅｎＢａｎｋ ｇｉ番号２０９８４２、５８４７８、又は２９３５２１０に示されるもの、及び／又はＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｍ７３２６０、Ｘ１７０１６、又はＡＦ０３０１５４で注釈が付けられているものが挙げられる。一部の場合において、アデノウイルスベクターがその全長アデノウイルスポリペプチド又はそのアデノウイルスポリペプチドの完全に機能的なバージョンをコードしないように、以下のポリペプチドの１つ以上をコードする核酸の全部又は一部の欠失を操作して、アデノウイルスをコードする核酸にすることができる：ファイバータンパク質コード配列、Ｖタンパク質コード配列、ヘキソンコード配列、ペントン塩基コード配列、ＶＡ ＲＮＡコード配列、ｐＩＩＩａタンパク質コード配列、又は他の初期若しくは後期遺伝子産物コード配列。そのような欠失は、１つ以上のコードされたアミノ酸の欠失、及びそのポリペプチドの正常な機能の低下又は排除をもたらす任意の長さであり得る。例えば、除去部分以外をコードされたポリペプチドが５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、又はそれを超えるアミノ酸残基を欠き、その通常の活性を欠くように、アデノウイルスの核酸配列の一部が除去される。欠失される部分は、配列の長さに沿った任意の位置から欠失させることができる。例えば、アデノウイルス核酸配列の一部は、アデノウイルス核酸の５’末端、３’末端、又はファイバータンパク質コード配列、Ｖタンパク質コード配列、ヘキソンコード配列、ペントン塩基コード配列、ＶＡ ＲＮＡコード配列、ｐＩＩＩａタンパク質コード配列、若しくは他の初期若しくは後期遺伝子産物コード配列などの内部領域で除去され得る。一部の場合において、ＳＣ－Ａｄは他で説明されているとおりであり得る（例えば、Matchett et al., J. of Virol., 2019 93(10):e02016-18 (2019)；及び国際公開第２００９／１１１７３８号を参照）。
本明細書で提供されるアデノウイルスベクター（例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）は、任意の適切な免疫原をコードする核酸配列（例えば、任意の適切な免疫原の発現を駆動する核酸）を含み得る。一部の場合において、免疫原は抗原であり得る。免疫原は、全長免疫原性ポリペプチド又はその一部であり得る（例えば、免疫原性ポリペプチドに由来し得る）。
免疫原性ポリペプチドが病原体由来である場合、免疫原性ポリペプチドは、任意のタイプの病原体（例えば、ウイルス、細菌、原生動物、プリオン、ウイロイド、又は真菌）由来であり得る。一部の場合において、免疫原性ポリペプチドは、ウイルスによって発現されるポリペプチド（例えば、ウイルスポリペプチド）であり得る。例えば、免疫原性ポリペプチドは、コロナウイルス（例えば、ベータコロナウイルス）によって発現されるポリペプチドであり得る。免疫原性ポリペプチドを発現できるウイルスの例としては、限定されないが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＨＣｏＶ ＮＬ６３、ＨＫＵ１、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、ＨＩＶ－１、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、インフルエンザ、エボラウイルス、チニングニア（Chiningunya）ウイルス、ジカウイルス、サイトメガロウイルス、西ナイルウイルス、及び“Learning from SARS:Preparing for the Next Disease Outbreak:Workshop Summary.” Institute of Medicine (US) Forum on Microbial Threats; Knobler S, Mahmoud A, Lemon S, et al., editors.Washington (DC):National Academies Press (US); 2004の表３－１に記載のものが挙げられる。一部の場合において、免疫原は、細菌によって発現されるポリペプチド（例えば、細菌ポリペプチド）に由来し得る。免疫原が由来し得るポリペプチドを発現する細菌の例としては、限定されないが、クロストリジウム（Clostridium）（例えば、Ｃ．ディフィシル（C. difficile））、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）（例えば、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（S. aureus））、カンピロバクター（例えば、カンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter jejuni））、マイコバクテリア（Mycobacteria）（例えば、結核菌（M. tuberculosis））、及びボレリア（Borrelia）（ライム病ボレリア（B. burgdorferi））が挙げられる。病原体によって発現され得る免疫原性ポリペプチドの例としては、限定されないが、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）トキシンＡ（ＴｃｄＡ）ポリペプチド、Ｃ．ディフィシルトキシンＢ（ＴｃｄＢ）ポリペプチド、コロナウイルススパイクポリペプチド、配列番号１で示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）、コロナウイルス核タンパク質、コロナウイルス膜タンパク質、コロナウイルスエンベロープタンパク質、及びコロナウイルス非構造タンパク質（例えば、コロナウイルス非構造タンパク質１～１６）が挙げられる。例えば、病原体に関連する免疫原性ポリペプチドは、例えば、国立バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）受入番号：ＭＮ９３８３８４及びＡＹ７７２０６２に示される配列を有し得るか、又はそれらによってコードされ得る。
免疫原性ポリペプチドがアレルゲンに由来する場合、免疫原性ポリペプチドは、任意のタイプのアレルゲン（例えば、アレルギー反応を生じる免疫応答を誘発することができる物質）に由来し得る。免疫原性ポリペプチドを発現及び／又はシェディングできるアレルゲンの例としては、限定されないが、Ｆｅｌ ｄ ７、Ｃａｎ ｆ１、ベータラクトグロブリン、プロラミン、パルブアルブミン、グリアジン、Ｆｅｌ ｄ１、キチナーゼ、グルテニン、クピン（cupin）、プロラミン、プロフィリン、ポルカルシン、ｂｅｔ ｖ－１関連タンパク質、２Ｓアルブミン、ビシリン、レグミン、ｎｓＬＴＰ、及びＡｅｄ ａ ２が挙げられる。例えば、本明細書に記載の１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクターを使用して、哺乳動物がそれらの免疫原に関連するアレルゲンに対する抗体を産生するように、免疫原を哺乳動物（例えば、ヒト）に送達することができる。例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子を使用して、哺乳動物がそれらの免疫原に関連するアレルゲンに対する抗体を産生するように、免疫原を哺乳動物（例えば、ヒト）に送達することができる。例えば、アレルゲンに関連する免疫原性ポリペプチドは、例えば、ＮＣＢＩ受入番号：ＮＰ＿００１３６３１３４．１、ＡＡＤ５６７１９、ＮＰ＿００１３６３１３６．１、ＮＰ＿００１３６３１３９．１、Ｐ２７７６２．１、Ｐ１０４１４．２、Ｐ１５４９４．２、Ｐ４３１７６．２、ＮＰ＿００１１９１７０６．１、ＮＰ＿００１００３１９０．１、ＸＰ＿０３００９９００３．１、又はＸＰ＿００１６５７７７９．１に示される配列を有し得るか、又はそれらによってコードされ得る。
免疫原性ポリペプチドが癌細胞（例えば、癌を有する哺乳動物内の癌細胞）に由来する場合、免疫原性ポリペプチドは、任意の癌細胞によって発現され得る。例えば、癌細胞によって発現される免疫原性ポリペプチドは、腫瘍抗原であり得る。一部の場合において、癌細胞によって発現される免疫原性ポリペプチドは、細胞表面腫瘍抗原であり得る。一部の場合において、癌細胞によって発現される免疫原性ポリペプチドは、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ；例えば、腫瘍細胞上に存在する、異常タンパク質などの抗原）であり得る。一部の場合において、免疫原性ポリペプチドは、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ；例えば、腫瘍細胞のみに存在する抗原）であり得る。癌細胞によって発現され、本明細書に記載されるように使用され得る免疫原性ポリペプチドの例としては、限定されないが、葉酸受容体α、ムチン１（ＭＵＣ－１）、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ－２）、エストロゲン受容体（ＥＲ）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、葉酸受容体アルファ、メソテリン、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＡ－１２５、上皮腫瘍抗原（ＥＴＡ）、メラノーマ関連抗原（ＭＡＧＥ）、エプスタイン・バーウイルスによって産生される抗原、及びヒトパピローマウイルスによって産生される抗原が挙げられる。例えば、本明細書に記載されるような１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクターを使用して、哺乳動物がそれらの免疫原に関連する癌細胞に対する抗体を産生するように、免疫原を哺乳動物（例えば、ヒト）に送達することができる。例えば、本明細書に記載されるような１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子を使用して、哺乳動物がそれらの免疫原に関連する癌細胞に対する抗体を産生するように、免疫原を哺乳動物（例えば、ヒト）に送達することができる。例えば、癌細胞に関連する免疫原性ポリペプチドは、例えば、ＮＣＢＩ受入番号：ＸＰ＿００２７５４８８３．１、ＡＡＡ０３２２９．１、Ｑ０２４９６．２、ＡＡＤ３３２５３．１、ＣＥＱ３２４０９．１、ＹＰ＿４０１６３１．１、ＹＰ＿４０１６３２．１、又はＱＡＲ１５０５１．１に示される配列を有し得るか、又はそれらによってコードされ得る。
免疫原性ポリペプチドが癌細胞（例えば、癌を有する哺乳動物内の癌細胞）に由来する場合、免疫原性ポリペプチドは、任意のタイプの癌細胞によって発現され得る。そのような癌の例としては、限定されないが、肺癌、乳癌、前立腺癌、肝臓癌、腎臓癌、脳癌、Ｂ細胞癌、Ｔ細胞癌、卵巣癌、及び皮膚癌が挙げられる。
免疫原は、全長免疫原性ポリペプチド又はその一部であり得る（例えば、免疫原性ポリペプチドに由来し得る）。例えば、免疫原性ポリペプチドをコードする核酸配列を改変して、コードされたポリペプチドが任意の数のアミノ酸（例えば、免疫原性ポリペプチドの５、１０、１５、２０、３０アミノ酸、又は全てのアミノ酸）を欠くように、核酸の一部を除去することができる。一部の場合において、免疫原性ポリペプチドをコードする核酸配列の一部を、配列の長さに沿ってどこからでも除去することができる。例えば、核酸配列の一部は、標的核酸の５’末端、３’末端、又は内部領域で除去され得る。一部の場合において、免疫原をコードするアデノウイルスベクターに感染した細胞から分泌されるように免疫原を設計することができる。例えば、ＥＲ保持配列をコードする核酸配列は、（例えば、コードされた免疫原がＥＲ保持配列を欠くように）免疫原をコードする核酸配列から除去することができる。一部の場合において、免疫原は、免疫原をコードするアデノウイルスベクターに感染した細胞から細胞外空間に広がるように設計することができる。例えば、免疫原は、免疫原性ポリペプチドの外部ドメインを含み得る。一部の場合において、免疫原は、ウイルス受容体（例えば、ＡＣＥ２ポリペプチド）に結合することができる（例えば、結合するように設計することができる）。例えば、免疫原は、免疫原性ポリペプチドの受容体結合ドメインを含み得る。
一部の場合において、免疫原は、本明細書に記載の２つ以上の免疫原性ポリペプチドを含み得る（例えば、それらの融合ポリペプチドであり得る）。例えば、免疫原は、第１の免疫原性ポリペプチド及び第２の免疫原性ポリペプチドを含み得る。一部の場合において、第１の免疫原性ポリペプチドと第２の免疫原性ポリペプチドは異なるポリペプチドであり得る。例えば、免疫原は、ｔｃｄＡポリペプチド及びｔｃｄＢポリペプチド（例えば、ｔｃｄＡ／Ｂ融合ポリペプチド）を含み得る。一部の場合において、第１の免疫原性ポリペプチドと第２の免疫原性ポリペプチドは同じポリペプチドであり得る。例えば、免疫原は、ｔｃｄＢポリペプチド及びｔｃｄＢポリペプチド（例えば、ｔｃｄＢ／Ｂ融合ポリペプチド）を含み得る。免疫原が第１の免疫原性ポリペプチド及び第２の免疫原性ポリペプチドを含む場合、第１の免疫原性ポリペプチドは、第１の病原体に由来し得、第２の免疫原性ポリペプチドは、第２の病原体に由来し得る。第１の病原体及び第２の病原体は、同じ病原体又は異なる病原体であり得る。第１の病原体及び第２の病原体が同じ病原体である場合、第１の免疫原性ポリペプチド及び第２の免疫原性ポリペプチドは、その病原体の異なる株に由来し得る。例えば、第１の免疫原性ポリペプチド及び第２の免疫原性ポリペプチドは、同じ細菌（例えば、Ｃ．ディフィシル（C. difficile））の異なる株に由来し得る。
本明細書に記載されるように使用することができる免疫原性ポリペプチドに由来する免疫原の例としては、限定されないが、配列番号２に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）、配列番号３に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）、配列番号４に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）、配列番号１１に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）、配列番号１２に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）、配列番号１３に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）、配列番号１４に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）、配列番号１５に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）、配列番号１６に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）、配列番号１７に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）、配列番号１８に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）、配列番号１９に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）、配列番号４２に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）、配列番号４３に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）、配列番号４４に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）、配列番号４５に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）、配列番号４６に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）、配列番号４７に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）、及び配列番号４８に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）が挙げられる。
一部の場合において、本明細書に記載の免疫原は、野生型免疫原のバリアントであり得る。例えば、コロナウイルススパイクポリペプチド（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクポリペプチド）のバリアントは、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、又はそれを超える数）のアミノ酸の欠失、付加、置換、又はそれらの組み合わせを有する、配列番号１～４のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含み得るか、又はそれから本質的になり得る。コロナウイルススパイクポリペプチドのバリアントに存在し得るアミノ酸欠失の例（例えば、配列番号１～４のいずれか１つで番号付けされている）としては、限定されないが、残基６９～７０の欠失、残基１４４の欠失、残基１５６～１５７の欠失、残基２４１～２４３の欠失、及び残基２４６～２５２の欠失が挙げられる。コロナウイルススパイクポリペプチドのバリアントに存在し得るアミノ酸置換の例（例えば、配列番号１～４のいずれか１つで番号付けされている）としては、限定されないが、Ｌ５Ｆアミノ酸置換、Ｓ１３Ｉアミノ酸置換、Ｌ１８Ｆアミノ酸置換、Ｔ１９Ｒアミノ酸置換、Ｔ２０Ｎアミノ酸置換、Ｐ２６Ｓアミノ酸置換、Ｇ７５Ｉアミノ酸置換、Ａ６７Ｖアミノ酸置換、Ｖ７０Ｆアミノ酸置換、Ｔ７６Ｉアミノ酸置換、Ｄ８０Ａアミノ酸置換、Ｄ８０Ｇアミノ酸置換、Ｔ９５Ｉアミノ酸置換、Ｄ１３８Ｙアミノ酸置換、Ｇ１４２Ｄアミノ酸置換、Ｗ１５２Ｃアミノ酸置換、Ｅ１５４Ｋアミノ酸置換、Ｆ１５７Ｓアミノ酸置換、Ｒ１５８Ｇアミノ酸置換、Ｒ１９０Ｓアミノ酸置換、Ｄ２１５Ｇアミノ酸置換、Ａ２２２Ｖアミノ酸置換、Ｄ２５３Ｇアミノ酸置換、Ｗ２５８Ｌアミノ酸置換、Ｋ４１７Ｎアミノ酸置換、Ｋ４１７Ｔアミノ酸置換、Ｌ４５２Ｒアミノ酸置換、Ｌ４５２Ｑアミノ酸置換、Ｙ４５３Ｆアミノ酸置換、Ｓ４７７Ｎアミノ酸置換、Ｔ４７８Ｋアミノ酸置換、Ｅ４８４Ｑアミノ酸置換、Ｅ４８４Ｋアミノ酸置換、Ｆ４９０Ｓアミノ酸置換、Ｅ４８４Ｋアミノ酸置換、Ｓ４９４Ｐアミノ酸置換、Ｎ５０１Ｙアミノ酸置換、Ａ５７０Ｄアミノ酸置換、Ｄ６１４Ｇアミノ酸置換、Ｈ６５５Ｙアミノ酸置換、Ｑ６７７Ｈアミノ酸置換、Ｐ６８１Ｈアミノ酸置換、Ｐ６８１Ｒアミノ酸置換、Ａ７０１Ｖアミノ酸置換、Ｔ７１６Ｉアミノ酸置換、Ｔ８５９Ｎアミノ酸置換、Ｆ８８８Ｌアミノ置換、Ｄ９５０Ｎアミノ酸置換、Ｑ９５７Ｒアミノ酸置換、Ｓ９８２Ａアミノ酸置換、Ｋ９８６Ｐアミノ酸置換、Ｖ９８７Ｐアミノ酸置換、Ｔ１０２７Ｉアミノ酸置換、Ｑ１０７１Ｈアミノ酸置換、Ｄ１１１８Ｈアミノ酸置換、及びＫ１１９１Ｎアミノ酸置換が挙げられる。例えば、コロナウイルススパイクポリペプチドのバリアントは、Ｋ９８６Ｐアミノ酸置換及びＶ９８７Ｐアミノ酸置換（例えば、ＰＰ置換）を含み得る。一部の場合において、コロナウイルススパイクポリペプチドのバリアントは、コロナウイルススパイクポリペプチドのガンマミンクバリアントであり得る。一部の場合において、コロナウイルススパイクポリペプチドのバリアントは、コロナウイルススパイクポリペプチドのデルタバリアントであり得る。一部の場合において、コロナウイルススパイクポリペプチドのバリアントは、コロナウイルススパイクポリペプチドのラムダバリアントであり得る。一部の場合において、コロナウイルススパイクポリペプチドのバリアントは、コロナウイルススパイクポリペプチドのイプシロンバリアントであり得る。一部の場合において、コロナウイルススパイクポリペプチドのバリアントは、コロナウイルススパイクポリペプチドのデルタプラスバリアントであり得る。
一部の場合において、本明細書に記載の免疫原は、配列番号１～４のいずれか１つに示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８８％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９３％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性、又は少なくとも９９％配列同一性）を有するアミノ酸配列を有し得る。
特定のアミノ酸配列と特定の配列識別番号によって参照される配列との間のパーセント配列同一性は、以下のように決定される。最初に、ＢＬＡＳＴＮバージョン２．０．１４及びＢＬＡＳＴＰバージョン２．０．１４を含むＢＬＡＳＴＺのスタンドアロンバージョンからBLAST 2 Sequences（Ｂｌ２ｓｅｑ）プログラムを使用して、特定の配列識別番号で示される配列とアミノ酸配列を比較する。ＢＬＡＳＴＺのこのスタンドアロンバージョンは、オンラインでfr.com/blast又はncbi.nlm.nih.gov.から入手できる。Ｂｌ２ｓｅｑプログラムの使用方法を説明する説明書は、ＢＬＡＳＴＺに付属のreadmeファイルに見出すことができる。Ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮ又はＢＬＡＳＴＰアルゴリズムを使用して、２つの配列間の比較を実施する。ＢＬＡＳＴＮは核酸配列の比較に使用され、ＢＬＡＳＴＰはアミノ酸配列の比較に使用される。２つの核酸配列を比較するには、オプションを次のように設定する：－ｉは、比較する第１の核酸配列を含むファイルに設定し（例えば、C:＼seq1.txt）；－ｊは、比較する第２の核酸配列を含むファイルに設定し（例えば、C:＼seq2.txt）：－ｐは、blastnに設定し；－ｏは、任意の所望のファイル名に設定し（例えば、C:＼output.txt）；－ｑは、－１に設定し；－ｒは、２に設定し；他の全てのオプションはデフォルト設定のままとする。例えば、次のコマンドを使用して、２つの配列間の比較を含む出力ファイルを生成できる：C:＼Bl2seq -i c:＼seq1.txt -j c:＼seq2.txt -p blastn -o c:＼output.txt -q -1 -r 2。２つのアミノ酸配列を比較するには、Ｂｌ２ｓｅｑのオプションを次のように設定する：－ｉは、比較する第１のアミノ酸配列を含むファイルに設定し（例えば、C:＼seq1.txt）；－ｊは、比較する第２のアミノ酸配列を含むファイルに設定し（例えば、C:＼seq2.txt）：－ｐは、blastpに設定し；－ｏは、任意の所望のファイル名に設定し（例えば、C:＼output.txt）；他の全てのオプションはデフォルト設定のままとする。例えば、次のコマンドを使用して、２つのアミノ酸配列間の比較を含む出力ファイルを生成できる：C:＼Bl2seq -i c:＼seq1.txt -j c:＼seq2.txt -p blastp -o c:＼output.txt。比較された２つの配列が相同性を共有している場合、指定された出力ファイルは、これらの相同性領域をアラインされた配列として提示する。比較された２つの配列が相同性を共有しない場合、指定された出力ファイルはアラインされた配列を提示しない。アラインされると、同一のヌクレオチド又はアミノ酸残基が両方の配列に存在する位置の数をカウントすることにより、マッチの数を決定する。マッチした位置は、アラインされた配列の同じ位置に同一のアミノ酸が存在する位置を指す。パーセント配列同一性は、同定された配列（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号３、又は配列番号４）に示される配列の長さでマッチ数を割った後、得られた値に１００を掛けることによって決定される。例えば、配列番号２に示される配列でアラインした場合に２２０個のマッチを有するアミノ酸配列は、配列番号２に示される配列と９３．２パーセント同一である（すなわち、２２０÷２３６×１００＝９３．２）。パーセント配列同一性値は小数第２位で四捨五入されることに留意されたい。例えば、７５．１、７５．２、７５．３、及び７５．４は、７５に切り捨てられ、７５．５、７５．６、７５．７、７５．８、及び７５．９は、７６に切り上げられる。また、長さの値は常に整数になることにも留意されたい。
一部の場合において、コロナウイルススパイクポリペプチドバリアントは、コロナウイルススパイクポリペプチドバリアントが、哺乳動物（例えば、ヒト）内でコロナウイルスに対する免疫応答を誘導する能力を有するという条件で、アミノ酸配列が１～１０（例えば、１～９、２～９、１～８、２～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、２、又は１）個のアミノ酸の付加、欠失、置換、又はそれらの組み合わせを含有することを除き、配列番号１～４のいずれか１つに示されるアミノ酸配列全体を含有し得る。一部の場合において、コロナウイルススパイクポリペプチドバリアントは、コロナウイルススパイクポリペプチドが、哺乳動物（例えば、ヒト）内でコロナウイルスに対する免疫応答を誘導する能力を有するという条件で、アミノ酸配列が配列識別子（例えば、配列番号１）の連結された配列の前に１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つのアミノ酸残基を含有し、及び／又は配列識別子（例えば、配列番号１）の連結された配列の後に１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つのアミノ酸残基を有することを除き、配列番号１～４のいずれか１つに示されるアミノ酸配列から本質的になり得る。
一部の場合において、本明細書で提供されるアデノウイルスベクター（例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）は、２つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個又はそれを超える数）の、異なる免疫原性ポリペプチドからの免疫原をコードする核酸配列を含み得る。例えば、本明細書で提供されるアデノウイルスベクターは、第１の病原体に由来する免疫原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によって発現される免疫原性ポリペプチドに由来する免疫原）をコードする核酸配列を含み得、第２の病原体に由来する免疫原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２以外の病原体によって発現される免疫原性ポリペプチドに由来する免疫原）をコードする核酸配列を含み得る。一部の場合において、異なる病原体によって発現される免疫原性ポリペプチドに由来する２つ以上の免疫原をコードする核酸配列を含む、本明細書で提供されるアデノウイルスベクターは、配列番号１～４のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になるポリペプチドをコードする核酸配列を含み得、配列番号２０～２１のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になるポリペプチドをコードする核酸配列を含み得る。本明細書で提供されるアデノウイルスベクターが、異なる病原体によって発現される免疫原性ポリペプチドからの２つ以上の免疫原をコードする核酸配列を含む場合、アデノウイルスベクターを使用して、２つ以上の病原体に対する免疫応答を誘導することができる。
一部の場合において、本明細書で提供されるアデノウイルスベクター（例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）は、２つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個又はそれを超える数）の、同じ免疫原性ポリペプチド及び／又は同じ病原体からの免疫原をコードする核酸配列を含み得る。例えば、本明細書で提供されるアデノウイルスベクターは、同じ病原体に由来する２つ以上の免疫原をコードする核酸配列を含み得る。一部の場合において、インフルエンザによって発現される免疫原性ポリペプチドに由来する２つ以上の免疫原をコードする核酸配列を含む、本明細書で提供されるアデノウイルスベクターは、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になるポリペプチドをコードする核酸配列を含み得（例えば、実施例５を参照）、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になるポリペプチドをコードする核酸配列を含み得る（例えば、実施例５を参照）。
一部の場合において、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個又はそれを超える数）の、疫原をコードする核酸配列を含む、本明細書で提供されるアデノウイルスベクター（例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）はまた、免疫原の転写を駆動するために、１つ以上の調節配列（例えば、構成性、誘導性、及び／又は組織特異的プロモーター配列などのエンハンサー又はプロモーター配列）も含み得る。本明細書で提供されるアデノウイルスの１つ以上の免疫原をコードする核酸配列の発現を駆動するために使用できるエンハンサー及びプロモーターの例としては、限定されないが、ＣＭＶエンハンサー配列、ＣＭＶプロモーター配列、ＣＡＧエンハンサー配列、ＣＡＧプロモーター配列、ＲＳＶエンハンサー配列、ＲＳＶプロモーター配列、Ｅｆ１アルファエンハンサー配列、Ｅｆ１アルファプロモーター配列、ユビキチンエンハンサー配列、ユビキチンプロモーター配列、アデノウイルスエンハンサー配列、及びアデノウイルスプロモーター配列が挙げられる。アデノウイルスベクターに感染した細胞から免疫原の発現を検出するために、任意の適切な方法を使用することができる。例えば、免疫原を認識する抗体を使用して、免疫原の存在又は非存在を検出することができる。
一部の場合において、本明細書で提供されるアデノウイルスベクター（例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）は、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、又はそれを超える数）のアジュバントポリペプチド（例えば、１つ以上のアジュバントポリペプチドの発現を駆動する核酸）を含み得る。例えば、アデノウイルスベクターは、哺乳動物内の免疫応答を増強することができる１つ以上のポリペプチドをコードする核酸配列を含み得る。一部の場合において、アジュバントポリペプチドはサイトカインであり得る。一部の場合において、アジュバントポリペプチドは、免疫刺激剤であり得る。一部の場合において、アジュバントポリペプチドは毒素であり得る。一部の場合において、アジュバントポリペプチドは、哺乳動物内に存在する病原体に対する全身性Ｔ細胞応答を促進することができる。一部の場合において、アジュバントポリペプチドは、病原体が哺乳類の体に侵入できる部位で、病原体に対する抗体の濃度を上昇させることができる。例えば、アジュバントポリペプチドは、ウイルスが哺乳動物の体に侵入できる粘膜部位で、ウイルス（例えば、コロナウイルス）に対する抗体の濃度を上昇させることができる。本明細書に記載の１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクターによってコードされ得るアジュバントポリペプチドの例としては、限定されないが、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）ポリペプチド、インターロイキン４（ＩＬ－４）ポリペプチド、インターロイキン２１（ＩＬ－２１）ポリペプチド、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）ポリペプチド、４－１ＢＢリガンド（４－１ＢＢＬ）ポリペプチド、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦ－β）ポリペプチド、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）毒素ポリペプチド（例えば、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ＴｃｄＡポリペプチド（例えば、配列番号２２を参照）、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ＴｃｄＢポリペプチド（例えば、配列番号２３を参照）、及び／又は配列番号１０に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照））、及びインフルエンザポリペプチド（例えば、Ｎポリペプチド、Ｈポリペプチド、Ｍポリペプチド、配列番号２０に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）、及び／又は配列番号２１に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照））が挙げられる。一部の場合において、アジュバントポリペプチド（例えば、配列番号２２）の前に、ＡＡＴ分泌配列（例えば、ＭＰＳＳＶＳＷＧＩＬＬＬＡＧＬＣＣＬＶＰＶＳＬＡＥＤＰ；配列番号２８）が先行し得る。一部の場合において、アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列（例えば、配列番号２３）の前に、合成フューリン切断部位（例えば、ＲＧＲＲＳＲＧＲＲＳ；配列番号２９）などの切断部位が先行し得る。本明細書に記載のアジュバントポリペプチドをコードすることができる核酸配列の例としては、限定されないが、配列番号２４に示される核酸配列（例えば、実施例５を参照）及び配列番号２５に示される核酸配列（例えば、実施例５を参照）が挙げられる。一部の場合において、アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列（例えば、配列番号２４）は、ＡＡＴ分泌配列（例えば、ＡＴＧＣＣＴＴＣＡＴＣＣＧＴＧＴＣＡＴＧＧＧＧＡＡＴＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＴＧＧＡＣＴＧＴＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＣＣＴＧＴＣＴＣＡＣＴＧＧＣＣＧＡＧＧＡＣＣＣＴ；配列番号４０）によって先行され得る。一部の場合において、アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列（例えば、配列番号２５）の前に、合成フューリン切断部位（例えば、ＡＧＡＧＧＡＣＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＧＣＧＣＡＧＣ；配列番号４１）などの切断部位が先行し得る。アジュバントポリペプチドは、全長ポリペプチド、又は本明細書に記載のアジュバントポリペプチドの断片であり得るが、ただし、この断片は、免疫応答を増強する能力を有する（例えば、生物学的に活性な断片）。一部の場合において、アジュバントポリペプチドは、他で説明されている通りであり得る（例えば、Matchett et al., Vaccines, 8(1):64 (2020)を参照）。
一部の場合において、本明細書で提供されるアデノウイルスベクター（例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）は、アジュバントポリペプチドに融合した免疫原を含むポリペプチドをコードすることができる（例えば、コードするように設計することができる）。例えば、免疫原をコードする核酸配列は、（例えば、コードされた免疫原が、コードされたアジュバントポリペプチドに融合するように）アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列に融合することができる。本明細書に記載の１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクターによってコードされ得るアジュバントポリペプチドに融合される免疫原の例としては、限定されないが、配列番号５に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）が挙げられる。
一部の場合において、本明細書で提供されるアデノウイルスベクター（例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）は、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、又はそれを超える数）のチャフポリペプチド（例えば、１つ以上のチャフポリペプチドの発現を駆動する核酸）を含み得る。チャフポリペプチドは、哺乳動物内の細胞への病原体の侵入速度を低下させるか、又は侵入を阻害するという条件で、全長ポリペプチド又はその断片であり得る。一部の場合において、チャフポリペプチドは、可溶性ポリペプチドであり得る。例えば、可溶性チャフポリペプチドは、全長チャフポリペプチド、又は膜貫通ドメインを欠くチャフポリペプチドの断片であり得る。例えば、可溶性チャフポリペプチドは、チャフポリペプチドの外部ドメインを含み得る。一部の場合において、チャフポリペプチドは、特定の病原体（例えば、コロナウイルスなどのウイルス）を標的として（例えば、標的とし結合して）、哺乳動物内の細胞への病原体の侵入速度を低下させるか、又は侵入を阻害することができる。一部の場合において、チャフポリペプチドは、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、又はそれを超える数の異なる病原体を標的とする（例えば、標的とし結合する）ことができる。一部の場合において、チャフポリペプチドは、１つ以上の変異（例えば、不活性化変異）を含み得る。本明細書に記載の１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクターによってコードされ得るチャフポリペプチドの例としては、限定されないが、全長ＡＣＥ２ポリペプチド及びその断片、全長ＣＤ１３ポリペプチド及びその断片、全長ＣＥＡＣＡＭ１ポリペプチド及びその断片、全長シアリル化ポリペプチド及びその断片、全長ＣＤ４６ポリペプチド及びその断片、全長ネスチンポリペプチド及びその断片、配列番号８に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）、及び配列番号９に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）が挙げられる。
一部の場合において、本明細書で提供されるアデノウイルスベクター（例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）は、チャフポリペプチドに融合した免疫原を含むポリペプチドをコードすることができる（例えば、コードするように設計することができる）。例えば、免疫原をコードする核酸配列は、（例えば、コードされた免疫原が、コードされたチャフポリペプチドに融合するように）チャフポリペプチドをコードする核酸配列を含み得る。
一部の場合において、本明細書で提供されるアデノウイルスベクター（例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）は、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、又はそれを超える数）のマーカーポリペプチド（例えば、１つ以上のマーカーポリペプチドの発現を駆動する核酸）を含み得る。本明細書に記載の１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクターによってコードされ得るマーカーポリペプチドの例としては、限定されないが、蛍光ポリペプチド（例えば、ＧＦＰ、ＲＦＰ、ＣＦＰ、及びＹＦＰ）、ストレプトアビジンポリペプチド、Ｃｒｅリコンビナーゼポリペプチド、Ｃａｓポリペプチド、ルシフェラーゼポリペプチド、ベータガラクトシダーゼポリペプチド、及びヨウ化ナトリウム共輸送体ポリペプチドが挙げられる。
一部の場合において、本明細書で提供されるアデノウイルスベクター（例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）は、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、又はそれを超える数）の多量体を形成することができるポリペプチド（例えば、１つ以上の多量体を形成することができるポリペプチドの発現を駆動する核酸）を含み得る。本明細書に記載の１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクターによってコードされ得る多量体を形成し得るポリペプチドの例としては、限定されないが、免疫グロブリン定常領域ポリペプチド（例えば、Ｉｇポリペプチド）、ストレプトアビジンポリペプチド、及びシグマコイルポリペプチドが挙げられる。
一部の場合において、本明細書で提供されるアデノウイルスベクター（例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）は、多量体を形成することができるポリペプチドに融合した免疫原を含むポリペプチドをコードすることができる（例えば、コードするように設計することができる）。例えば、免疫原をコードする核酸配列は、（例えば、コードされた免疫原が、多量体を形成できるコードされたポリペプチドに融合するように）多量体を形成できるポリペプチドをコードする核酸配列を含み得る。本明細書に記載の１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクターによってコードされ得る多量体を形成し得るポリペプチドに融合した免疫原の例としては、限定されないが、配列番号５に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）、配列番号６に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）及び配列番号７に示されるアミノ酸配列（例えば、実施例５を参照）が挙げられる。
一部の場合において、本明細書で提供されるアデノウイルスベクター（例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）は、配列番号２８～３９のいずれか１つに示される配列と少なくとも８５％同一（例えば、少なくとも８８％配列同一、少なくとも９０％配列同一、少なくとも９３％配列同一、少なくとも９５％配列同一、少なくとも９７％配列同一、少なくとも９８％配列同一、又は少なくとも９９％配列同一）であるゲノムを有し得る。例えば、本明細書で提供されるアデノウイルスベクターは、配列番号２８に示される核酸配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になるゲノムを有し得る（例えば、実施例５を参照）。例えば、本明細書で提供されるアデノウイルスベクターは、配列番号２９に示される核酸配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になるゲノムを有し得る（例えば、実施例５を参照）。例えば、本明細書で提供されるアデノウイルスベクターは、配列番号３０に示される核酸配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になるゲノムを有し得る（例えば、実施例５を参照）。例えば、本明細書で提供されるアデノウイルスベクターは、配列番号３１に示される核酸配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になるゲノムを有し得る（例えば、実施例５を参照）。例えば、本明細書で提供されるアデノウイルスベクターは、配列番号３２に示される核酸配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になるゲノムを有し得る（例えば、実施例５を参照）。例えば、本明細書で提供されるアデノウイルスベクターは、配列番号３３に示される核酸配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になるゲノムを有し得る（例えば、実施例５を参照）。例えば、本明細書で提供されるアデノウイルスベクターは、配列番号３４に示される核酸配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になるゲノムを有し得る（例えば、実施例５を参照）。例えば、本明細書で提供されるアデノウイルスベクターは、配列番号３５に示される核酸配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になるゲノムを有し得る（例えば、実施例５を参照）。例えば、本明細書で提供されるアデノウイルスベクターは、配列番号３６に示される核酸配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になるゲノムを有し得る（例えば、実施例５を参照）。例えば、本明細書で提供されるアデノウイルスベクターは、配列番号３７に示される核酸配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になるゲノムを有し得る（例えば、実施例５を参照）。例えば、本明細書で提供されるアデノウイルスベクターは、配列番号３８に示される核酸配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になるゲノムを有し得る（例えば、実施例５を参照）。例えば、本明細書で提供されるアデノウイルスベクターは、配列番号３９に示される核酸配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になるゲノムを有し得る（例えば、実施例５を参照）。
一部の場合において、本明細書で提供されるアデノウイルスベクター（例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）は、配列番号２８～３９のいずれか１つに示されるコード領域の１つ以上を含むゲノムを有し得る。例えば、ＳＣ－Ａｄは、ＳＣ－Ａｄの全てのコードされたポリペプチドが、配列番号２８～３９のいずれか１つに示される核酸によってコードされるポリペプチドと同じアミノ酸配列を有するゲノムを有するように設計することができる。
本文書は、本明細書で提供されるアデノウイルスベクター（例えば、本明細書に記載のＳＣ－Ａｄなどの１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）をコードすることができる核酸分子も提供する。本明細書で使用される場合、「核酸」という用語は、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成（例えば、化学合成）ＤＮＡを含む、ＲＮＡ及びＤＮＡの両方を包含する。核酸は、二本鎖又は一本鎖であり得る。一本鎖核酸は、センス鎖又はアンチセンス鎖であり得る。さらに、核酸は、環状又は直鎖状であり得る。
本文書はまた、本明細書に記載のアデノウイルスベクター（例えば、本明細書に記載のＳＣ－Ａｄなどの１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）を含有する細胞（例えば、細胞株）も提供する。アデノウイルスベクターが少なくとも１つのアデノウイルス配列の全部又は一部を欠く場合、アデノウイルスベクターを含有する細胞は、欠けているアデノウイルスポリペプチドを提供することができる。例えば、アデノウイルスがアデノウイルスファイバーポリペプチドをコードする核酸を欠くように設計されている場合、アデノウイルスファイバーポリペプチド発現細胞株を使用して、アデノウイルスが、ファイバーポリペプチド（例えば、野生型ファイバーポリペプチド）を含有するが、ファイバーポリペプチド（例えば、野生型ファイバーポリペプチド）をコードする核酸を欠くように、アデノウイルスを生成することができる。例えば、アデノウイルスがＶポリペプチドをコードする核酸を欠くように設計されている場合、アデノウイルスＶポリペプチド発現細胞株を使用して、アデノウイルスが、Ｖポリペプチド（例えば、野生型Ｖポリペプチド）を含有するが、Ｖポリペプチド（例えば、野生型Ｖポリペプチド）をコードする核酸を欠くように、アデノウイルスを生成することができる。例えば、アデノウイルスがｐＩＩＩａポリペプチドをコードする核酸を欠くように設計されている場合、アデノウイルスｐＩＩＩａポリペプチド発現細胞株を使用して、アデノウイルスが、ｐＩＩＩａポリペプチド（例えば、野生型ｐＩＩＩａポリペプチド）を含有するが、ｐＩＩＩａポリペプチド（例えば、野生型ｐＩＩＩａポリペプチド）をコードする核酸を欠くように、アデノウイルスを生成することができる。一部の場合において、本明細書に記載のアデノウイルスベクターを含む細胞は、そのウイルスの入手可能なコピー数を少なくとも１００倍（例えば、１００倍～１５，０００倍、５００倍～１０，０００倍、５，０００倍～１０，０００倍、又は５，０００～１５，０００倍）増加させることができる。ウイルスは、標準的な細胞培養培地（例えば、５％ＣＯ２中３７℃の５～１０％のウシ胎児血清を添加したＤＭＥＭ又はＲＰＭＩ－１６４０）中で、所望の濃度が得られるまで拡大培養することができる。ウイルス力価は、典型的には、培養物中の細胞（例えば、Ａ５４９又は２９３細胞）に接種することによって、又は光学密度又はリアルタイムＰＣＲによってウイルスゲノムを定量化することによってアッセイされる。一部の場合において、本明細書で提供されるアデノウイルスベクターを含有する細胞を使用して、アデノウイルスベクターを増殖させる（例えば、アデノウイルスベクターのストックを確立する）ことができる。例えば、アデノウイルスベクターのストックは、哺乳動物細胞での増殖によって産生することができる。一部の場合において、アデノウイルスベクターのストックを分注して凍結し、－７０℃～－８０℃で保存できる（例えば、治療有効用量よりも高い濃度で）。一部の場合において、アデノウイルスベクターのストックを安定化溶液中に保存することができる。安定化溶液の例としては、限定されないが、糖（例えば、トレハロース、デキストロース、及びグルコース）、アミノ酸、グリセロール、ゼラチン、グルタミン酸一ナトリウム、Ｃａ２＋、及びＭｇ２＋が挙げられる。
一部の場合において、１つ以上の免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクター（及び／又は１つ以上の免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子）は、哺乳動物への投与のための組成物（例えば、ワクチン組成物などの医薬組成物）に製剤化することができる。例えば、１つ以上の免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクター（及び／又は１つ以上のウイルス免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子）を含む組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体（添加剤）、賦形剤、及び／又は希釈剤とともに製剤化することができる。本明細書に記載の組成物に使用できる薬学的に許容される担体、賦形剤、及び希釈剤の例としては、限定されないが、スクロース、ラクトース、デンプン（例えば、グリコール酸デンプン）、セルロース、セルロース誘導体（例えば、微結晶性セルロースなどの変性セルロース、並びにヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）及びセルロースエーテルヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）などのセルロースエーテル）、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、ゼラチン、ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、架橋ポリビニルピロリドン（クロスポビドン）、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレン－ポリオキシプロピレン－ブロックポリマー、及び架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム（クロスカルメロースナトリウム））、酸化チタン、アゾ染料、シリカゲル、ヒュームドシリカ、タルク、炭酸マグネシウム、植物性ステアリン、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸、抗酸化剤（例えば、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、パルミチン酸レチニル、及びセレン）、クエン酸、クエン酸ナトリウム、ワセリン（例えば、メチルパラベン及びプロピルパラベン）、ペトロラタム、ジメチルスルホキシド、鉱油、血清タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミンなど）、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、水、塩又は電解質（例えば、生理食塩水、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、及び亜鉛塩）、コロイダルシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリアクリレート、ワックス、羊毛脂、レシチン、及びコーン油が挙げられる。適切な医薬製剤は、用途及び投与経路に部分的に依存する。そのような形態は、組成物又は製剤が標的細胞に到達すること、又はその効果を発揮することを妨げてはならない。例えば、血流に注入される薬理組成物は可溶性でなければならない。
一部の場合において、１つ以上の免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクター（及び／又は１つ以上の免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子）を含む組成物は、１つ以上の免疫原（及び／又は１つ以上の免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子）を含むように設計された、複数の同一のアデノウイルスベクターを含み得る。
一部の場合において、１つ以上の免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクター（及び／又は１つ以上の免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子）を含む組成物は、２つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれを超える数）の異なるアデノウイルスベクターの集団を含み得る。例えば、組成物は、アデノウイルスベクターの２つの集団を含むように設計することができ、第１の集団は、１つ以上のコロナウイルス免疫原（例えば、配列番号１～４、４２～４４、４７、及び４８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列）を含有し、第２の集団は、１つ以上のアジュバントポリペプチド（例えば、ＧＭ－ＣＳＦポリペプチド、ＩＬ－４ポリペプチド、ＩＬ－２１ポリペプチド、ＣＤ４０Ｌポリペプチド、４－１ＢＢＬポリペプチド、ＴＧＦ－βポリペプチド、Ｃディフィシル（C difficile）ＴｃｄＡポリペプチド、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ＴｃｄＢポリペプチド、及び／又はそれらの生物学的に活性な断片）を含有する。例えば、組成物は、アデノウイルスベクターの２つの集団を含むように設計することができ、第１の集団は、１つ以上のコロナウイルス免疫原（例えば、配列番号１～４、４２～４４、４７、及び４８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列）を含有し、第２の集団は、チャフポリペプチド（例えば、ＡＣＥ２ポリペプチドの断片）を含有する。
一部の場合において、１つ以上の免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクター（及び／又は１つ以上の免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子）を含む組成物は、組成物のアデノウイルスベクターの各集団が単一の免疫原（及び／又は単一の免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子）を含有する、異なるアデノウイルスベクターの集団を含むように設計できる。例えば、アデノウイルスベクターの組成物は、第１のコロナウイルス免疫原（例えば、配列番号１～４、４２～４４、４７、及び４８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列）を有するアデノウイルスベクターの第１の集団、及び第２のコロナウイルス免疫原（例えば、配列番号１～４、４２～４４、４７、及び４８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列）を有するアデノウイルスベクターの第２の集団を含むように設計することができる。例えば、アデノウイルスベクターの組成物は、第１のコロナウイルス免疫原（例えば、配列番号１～４、４２～４４、４７、及び４８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列）を有するアデノウイルスベクターの第１の集団、第２のコロナウイルス免疫原（例えば、配列番号１～４、４２～４４、４７、及び４８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列）、及び第３のコロナウイルス免疫原（例えば、配列番号１～４、４２～４４、４７、及び４８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列）を有するアデノウイルスベクターの第３の集団を有するアデノウイルスベクターの第２の集団を含むように設計することができる。別の例において、アデノウイルスベクターの組成物は、第１のコロナウイルス免疫原（例えば、配列番号１～４、４２～４４、４７、及び４８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列）を有するアデノウイルスベクターの第１の集団、第２のコロナウイルス免疫原（例えば、配列番号１～４、４２～４４、４７、及び４８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列）を有するアデノウイルスベクターの第２の集団、及びアジュバントポリペプチド（例えば、ＧＭ－ＣＳＦポリペプチド、ＩＬ－４ポリペプチド、ＩＬ－２１ポリペプチド、ＣＤ４０Ｌポリペプチド、４－１ＢＢＬポリペプチド、ＴＧＦ－βポリペプチド、Ｃディフィシル（C difficile）ＴｃｄＡポリペプチド、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ＴｃｄＢポリペプチド、及び／又はそれらの生物学的に活性な断片）のアデノウイルスベクターの第３の集団を含むように設計することができる。第１のコロナウイルス免疫原（例えば、配列番号１～４、４２～４４、４７、及び４８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列）を有するアデノウイルスベクターの第１の集団、第２のコロナウイルス免疫原（例えば、配列番号１～４、４２～４４、４７、及び４８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列）を有するアデノウイルスベクターの第２の集団、及びチャフポリペプチド（例えば、ＡＣＥ２ポリペプチドの断片）を有するアデノウイルスベクターの第３の集団。
本文書はまた、本明細書に記載のアデノウイルスベクター（例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）及び／又は本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子を使用する方法も提供する。一部の場合において、本明細書に記載のアデノウイルスベクター及び／又は本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子を哺乳動物（例えば、ヒト）に投与して、病原体（例えば、アデノウイルスベクターによってコードされる免疫原に関連する細菌又はウイルス病原体）に対する免疫応答を増加（例えば、抗体応答の増加及び／又はＴ細胞応答の増加）させることができる。例えば、１つ以上の免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクター（及び／又は１つ以上の免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子）を含む組成物を哺乳動物に投与して、アデノウイルスベクターによってコードされる免疫原に関連する病原体によって引き起こされる感染の重症度を軽減するのに有効な免疫応答を哺乳動物に提供することができる。一部の場合において、１つ以上の免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクター（及び／又は１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子）を含む組成物を、本明細書に記載されるように哺乳動物に投与して、アデノウイルスベクターによってコードされる免疫原に関連する病原体によって引き起こされる感染の症状を哺乳動物が示すことを防止するのに有効な免疫応答を哺乳動物に提供することができる。一部の場合において、本明細書に記載のアデノウイルスベクター及び／又は本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子は、哺乳動物（例えば、ヒト）に投与して、哺乳動物内のＢ細胞応答を増加させることができる。例えば、１つ以上の免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクター（及び／又は１つ以上の免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子）は、本明細書に記載されるように哺乳動物に投与して、哺乳動物内の活性化Ｂ細胞（例えば、形質芽細胞、形質細胞、及びメモリーＢ細胞）の数を、例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又はそれを超えて増加させることができる。
一部の場合において、本明細書に記載のアデノウイルスベクター及び／又は本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子は、哺乳動物（例えば、ヒト）に投与して、哺乳動物内の抗体（例えば、アデノウイルスベクターによってコードされる免疫原に関連する細菌又はウイルス病原体などの病原体に対する抗体）の数を増加させることができる。例えば、１つ以上の免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクター（及び／又は１つ以上の免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子）は、本明細書に記載されるように哺乳動物に投与して、哺乳動物内の抗体の数を、例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又はそれを超えて増加させることができる。一部の場合において、本明細書に記載のアデノウイルスベクター及び／又は本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子を、本明細書に記載されるように哺乳動物に投与して、哺乳動物内の免疫原に対する抗体を、例えば、約１週間（例えば、約１日間～約７日間、約１日間～約６日間、約１日間～約５日間、約１日間～約４日間、約１日間～約３日間、約２日間～約７日間、約３日間～約７日間、約４日間～約７日間、約５日間～約７日間、約２日間～約６日間、約３日間～約５日間、約２日間～約４日間、約３日間～約５日間、又は約４日間～約６日間）産生させることができる。
一部の場合において、本明細書に記載のアデノウイルスベクター及び／又は本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子は、哺乳動物（例えば、ヒト）に投与して、哺乳動物内のＴ細胞応答を増加させることができる。例えば、１つ以上の免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクター（及び／又は１つ以上の免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子）は、本明細書に記載されるように哺乳動物に投与して、哺乳動物内の活性化Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞及びマクロファージ）の数を、例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又はそれを超えて増加させることができる。
本明細書に記載のアデノウイルスベクター（例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）及び／又は本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子は、（例えば、その哺乳動物内のアデノウイルスベクターによってコードされる免疫原に関連する細菌又はウイルス病原体などの病原体に対する免疫応答を増加させるために）任意の適切な哺乳動物に投与することができる。一部の場合において、哺乳動物は、本明細書で提供されるアデノウイルスベクターによってコードされる免疫原に関連する病原体に以前に感染したことがない哺乳動物であり得る。一部の場合において、哺乳動物は、本明細書で提供されるアデノウイルスベクターによってコードされる免疫原に関連する病原体に密接に関連する（例えば、遺伝的に関連する）病原体による以前の感染を有する哺乳動物であり得る。一部の場合において、哺乳動物は、本明細書で提供されるアデノウイルスベクターによってコードされる免疫原に関連する病原体による感染（例えば、進行中の感染）を有する哺乳動物であり得る。１つ以上の免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクター（及び／又は１つ以上の免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子）を投与することができる哺乳動物の例としては、限定されないが、ヒト、サルなどの非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター、コウモリ、アライグマ、フェレットが挙げられる。一部の場合において、本明細書に記載の方法及び材料は、哺乳動物の代わりに鳥類の種に適用することができる。例えば、哺乳動物を処置するための本明細書に記載の方法及び材料は、ニワトリ及びシチメンチョウに適用することができる。一部の場合において、本明細書に記載の方法及び材料は、哺乳動物の代わりに爬虫類の種に適用することができる。一部の場合において、本明細書に記載の方法及び材料は、哺乳動物の代わりに両生類の種に適用することができる。一部の場合において、本明細書に記載の方法及び材料は、哺乳動物の代わりに魚の種に適用することができる。一部の場合において、１つ以上の本明細書に記載のアデノウイルスベクター及び／又は本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子をヒトに投与して、病原体（例えば、アデノウイルスベクターによってコードされる免疫原に関連する細菌又はウイルス病原体）に対する免疫応答を増加させることができる。
本明細書に記載のアデノウイルスベクター（例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）及び／又は本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子（例えば、本明細書に記載のアデノウイルスベクター及び／又は本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子を含む、ワクチン組成物などの組成物）を投与する場合、任意の適切な投与経路を使用することができる。例えば、本明細書で提供される組成物（例えば、ワクチン組成物）は、経口（例えば、舌下）又は非経口（限定されないが、鼻腔内、皮下、筋肉内、静脈内、皮内、脳内、髄腔内、又は腹腔内を含む）で哺乳動物（例えば、ヒト）に投与することができる。一部の場合において、本明細書で提供される組成物（例えば、ワクチン組成物）の投与経路及び／又は投与様式は、処置される哺乳動物に合わせて調整することができる。一部の場合において、本明細書に記載のアデノウイルスベクター及び／又は本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子は、粘膜送達を介して哺乳動物に投与することができる。一部の場合において、本明細書に記載のアデノウイルスベクター及び／又は本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子は、他で説明されているように哺乳動物に投与することができる（例えば、Weaver et al.PLOS ONE, 8(7):e67574 (2013)を参照）。
本明細書に記載のアデノウイルスベクター（例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）及び／又は本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子（例えば、本明細書で提供されるアデノウイルスベクター及び／又は本明細書で提供されるアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子を含む、ワクチン組成物などの組成物）は、任意の適切な量（例えば、任意の適切な用量）で哺乳動物（例えば、ヒト）に投与することができる。有効量は、投与経路、対象の年齢及び一般的な健康状態、賦形剤の使用、他の薬剤の使用などの他の治療的処置との併用の可能性、及び処置する医師の判断によって異なる。１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター（及び／又は１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子）を含有する組成物の有効量は、哺乳動物に重大な毒性を生じることなく、本明細書に記載されるように哺乳動物において免疫応答を誘導することができる任意の量であり得る。例えば、１つ以上の免疫原をコードする有効量のアデノウイルスベクターは、例えば、約１０８ウイルス粒子（ｖｐ）～約１０１４ｖｐ（例えば、約１０８ｖｐ～約１０１３ｖｐ、約１０８ｖｐ～約１０１２ｖｐ、約１０８ｖｐ～約１０１１ｖｐ、約１０８ｖｐ～約１０１０ｖｐ、約１０８ｖｐ～約１０９ｖｐ、約１０９ｖｐ～約１０１４ｖｐ、約１０１０ｖｐ～約１０１４ｖｐ、約１０１１ｖｐ～約１０１４ｖｐ、約１０１２ｖｐ～約１０１４ｖｐ、約１０１３ｖｐ～約１０１４ｖｐ、約１０９ｖｐ～約１０１３ｖｐ、約１０１０ｖｐ～約１０１２ｖｐ、約１０９ｖｐ～約１０１１ｖｐ、約１０１０ｖｐ～約１０１２ｖｐ、又は約１０１ｖｐ～約１０１３ｖｐ）であり得る。有効量は、一定のままであってもよく、処置に対する哺乳類の応答に応じて、スライド制又は可変用量として調整することもできる。様々な要因が、特定の用途に使用される実際の有効量に影響を与え得る。例えば、投与頻度、処置期間、複数の処置剤の使用、及び／又は投与経路は、投与される実際の有効量の増加又は減少を要し得る。
本明細書で提供されるアデノウイルスベクター（例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）及び／又は本明細書で提供されるアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子（例えば、本明細書で提供されるアデノウイルスベクター及び／又は本明細書で提供されるアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子を含む、ワクチン組成物などの組成物）は、任意の適切な頻度で哺乳動物（例えば、ヒト）に投与することができる。投与頻度は、哺乳動物に重大な毒性を生じることなく、哺乳動物において免疫応答を誘導することができる任意の頻度であり得る。一部の場合において、本明細書で提供されるアデノウイルスベクター及び／又は本明細書で提供されるアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子は、哺乳動物に１回（例えば、単回投与で）投与することができる。一部の場合において、本明細書で提供されるアデノウイルスベクター及び／又は本明細書で提供されるアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子は、哺乳動物に数回（例えば、数回投与として）投与することができる。例えば、投与頻度は、約１日１回～約３日ごと、約１日１回～約１週間に１回、約１週間に１回～約３週間ごと、又は約１週間に１回～約６週間ごとであり得る。投与頻度は、一定のままであってもよく、処置期間中に変更可能であってもよい。有効量と同様に、様々な要因が、特定の用途に使用される実際の投与頻度に影響を与え得る。例えば、有効量、処置期間、複数の処置剤の使用、及び／又は投与経路は、投与頻度の増加又は減少を要し得る。
本明細書で提供されるアデノウイルスベクター（例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）及び／又は本明細書で提供されるアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子（例えば、本明細書で提供されるアデノウイルスベクター及び／又は本明細書で提供されるアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子を含む、ワクチン組成物などの組成物）は、任意の適切な期間にわたって哺乳動物（例えば、ヒト）に投与することができる。１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター（及び／又は１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子）を含有する組成物を投与又は使用する期間は、哺乳動物に重大な毒性を生じることなく、哺乳動物において免疫応答を誘導することができる任意の期間であり得る。例えば、有効期間は、２、３日（a couple of days）から１週間まで、数日（several days）から数週間まで、又は数日（a few days）から１ヶ月まで変動し得る。複数の要因が、特定の処置に使用される実際の有効期間に影響を与え得る。例えば、有効期間は、投与頻度、有効量、複数の処置剤の使用、及び／又は投与経路によって変動し得る。
一部の場合において、本明細書で提供されるアデノウイルスベクター（例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）及び／又は本明細書で提供されるアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子（例えば、本明細書で提供されるアデノウイルスベクター及び／又は本明細書で提供されるアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子を含む、ワクチン組成物などの組成物）は、１回以上投与される場合は各投与間１～４週間で、１、２、又は３回、有効量で哺乳動物（例えば、ヒト）に投与することができる。
一部の場合において、１つ以上の本明細書で提供されるアデノウイルスベクター（例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）及び／又は本明細書で提供されるアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子（例えば、本明細書で提供されるアデノウイルスベクター及び／又は本明細書で提供されるアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子を含む、ワクチン組成物などの組成物）は、病原体（例えば、アデノウイルスベクターによってコードされる免疫原に関連する細菌又はウイルス病原体）に対する免疫応答を増加（例えば、抗体応答の増加及び／又はＴ細胞応答の増加）させる単独の有効成分として哺乳動物（例えば、ヒト）に投与することができる。例えば、１つ以上のコロナウイルス免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクター（及び／又は１つ以上のコロナウイルス免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子）を含有する組成物は、コロナウイルスに対する免疫応答を増加（例えば、抗体応答の増加及び／又はＴ細胞応答の増加）させる単独の有効成分として哺乳動物（例えば、ヒト）に投与することができる。
一部の場合において、１つ以上の本明細書で提供されるアデノウイルスベクター（例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）及び／又は本明細書で提供されるアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子（例えば、本明細書で提供されるアデノウイルスベクター及び／又は本明細書で提供されるアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子を含む、ワクチン組成物などの組成物）は、病原体（例えば、アデノウイルスベクターによってコードされる免疫原に関連する細菌又はウイルス病原体）に対する免疫応答を増加（例えば、抗体応答の増加及び／又はＴ細胞応答の増加）させるために使用される１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれを超える数）の追加の薬剤／療法とともに哺乳動物（例えば、ヒト）に投与することができる。例えば、１つ以上のコロナウイルス免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクター（及び／又は１つ以上のコロナウイルス免疫原をコードする本明細書に記載のアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子）を含有する組成物は、コロナウイルスに対する免疫応答を増加（例えば、抗体応答の増加及び／又はＴ細胞応答の増加）させるために使用される１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれを超える数）の追加の薬剤／療法とともに哺乳動物（例えば、ヒト）に投与することができる。１種以上の本明細書で提供されるアデノウイルスベクター（例えば、１つ以上の免疫原をコードするアデノウイルスベクター）及び／又は本明細書で提供されるアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子（例えば、本明細書で提供されるアデノウイルスベクター及び／又は本明細書で提供されるアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子を含む、ワクチン組成物などの組成物）が、免疫応答を増加（例えば、抗体応答の増加及び／又はＴ細胞応答の増加）させるために使用される１つ以上の追加の薬剤／療法と組み合わせて使用される場合、本明細書で提供される１つ以上のアデノウイルスベクター（及び／又は本明細書で提供されるアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子）及び１つ以上の追加の薬剤／療法は、同時に（例えば、単一組成物で）又は独立して投与することができる。例えば、本明細書で提供される１つ以上のアデノウイルスベクター（及び／又は本明細書で提供されるアデノウイルスベクターをコードすることができる核酸分子）を最初に投与し、次に１つ以上の追加の薬剤／療法を投与することができ、又はその逆も可能である。
本発明は、以下の実施例でさらに説明されるが、これらは特許請求の範囲に記載される本発明の範囲を限定するものではない。
実施例
実施例１：クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）に対する複製シングルサイクルアデノウイルスワクチン
クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）は、米国で毎年約５００，０００件の感染、及び約３０，０００件の死亡を引き起こし、年間最大４８億ドルの費用がかかる。Ｃ．ディフィシル（C. difficile）感染症（ＣＤＩ）は、細菌が大腸にコロニーを形成し、その２つの毒素、トキシンＡ（ＴｃｄＡ）及びトキシンＢ（ＴｃｄＢ）を放出することによって発生する。この実施例では、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）に対するＳＣ－Ａｄ遺伝子ベースのワクチンについて説明する。
結果
Ｃ．ディフィシル（C. difficile）トキシンＡ及びＢ融合タンパク質を発現するシングルサイクルアデノウイルス。
ＳＣ－Ａｄ－ＴｃｄＡ／Ｂベクターは、アデノウイルス６型（Ａｄ６）を使用して生成された（図１）。このベクターは、分泌リーダーと、２つのフューリン切断部位で区切られたＴｃｄＡ及びＢのＲＢＤとからなる融合タンパク質を発現する哺乳動物コドン最適化ｃＤＮＡを持つ。毒素ＲＢＤは、ＶＰＩ １０４６３株（トキシノタイプ０）に由来し、推定ｎ結合型グリコシル化部位のアスパラギン置換がグルタミンで置換されている。これにより、ＴｃｄＡ ＲＢＤに合計８つの置換が生じ、ＴｃｄＢ ＲＢＤ配列内に３つの改変が生じた。ヒト肺Ａ５４９細胞にＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂを感染させ、細胞上清及び溶解物を、ＴｃｄＡ及びＴｃｄＢに特異的な抗体を使用してウエスタンブロットで分析した。融合タンパク質は１６０ｋＤａであると予測され、ＴｃｄＡ及びＴｃｄＢのＲＢＤはそれぞれ１００及び６０ｋＤａであると予測された。これらの条件下で、ＲＢＤ及び融合タンパク質の両方が細胞及び濃縮細胞上清で観察された（図２）。
ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂによる単回筋肉内ワクチン接種は、マウスの免疫応答を誘導する。
１０匹の雄及び雌の非近交系ＣＤ－１マウスの群を、ＰＢＳ、又はＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂの１０１０ウイルス粒子、又は別の細菌カンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter jejuni）からのミスマッチタンパク質を発現する陰性対照ベクターＳＣ－Ａｄ６－ＰＥＢ１により、ｉ．ｍ．で単回免疫した。免疫化の６週間後に血清を回収し、抗毒素抗体応答をＥＬＩＳＡ及びインビトロ毒素中和アッセイによって評価した。単回免疫により、ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂワクチン接種動物の大部分でトキシンＡに対する有意な抗体が生成された（図３Ａ及び３Ｂ）。逆数力価は、ＰＢＳ対照マウスのレベルよりも有意に高いものとして定義された。したがって、ＰＢＳ群の抗体レベルは示されていない。動物は両性別とも、対照マウスよりも有意に高い抗体応答を生成した。雌マウスの幾何平均逆数トキシンＡ結合力価は１，４６７，３２９であり、雄マウスの力価は３９７，９６４であった（図３Ａ）。雌の結合力価は、雄の力価よりも有意に高かった（マン・ホイットニーによるｐ＜０．００６６）。同様のパターンが２つの性別からのＴｃｄＡ中和（ｎＡｂ）力価で観察され、平均力価は雌で１６８２、雄で３７９であった（図３Ｂ）。しかし、これらの差は有意ではなかった（Dunnによるｐ＝０．８００４）。これらをＳＣ－Ａｄ６－ＰＥＢ１で免疫した動物と比較すると、ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂを投与された動物のｎＡｂ力価は、性別が一致する対照よりも有意に高かった。
ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂによる単回筋肉内ワクチン接種は、毒素チャレンジに対する保護を提供する。
単回免疫の８週間後、List Labsの精製ＴｃｄＡ３００ｎｇ（６×ＬＤ５０）でマウスをチャレンジした。組換え毒素は、ＳＣ－ＡｄワクチンのＶＰＩ １０４６３抗原に類似したリボタイプ０８７及びトキシノタイプ０株に由来する。ＰＢＳ及びＰＥＢ１マウスの１０匹中８匹が、チャレンジから２４時間以内に毒素で死亡した（図３Ｃ）。追加の１匹のＰＢＳマウスは、３日後に屠殺基準を満たした。ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂワクチンを接種した２０匹のマウスのうち１７匹がチャレンジで生存した。カプラン・マイヤー生存曲線のログランク比較により、ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂワクチン接種動物が、ＰＢＳ又はＰＥＢ１対照動物よりも有意に良好に生存したことが示された。生存しなかった３匹のＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂワクチン接種マウスは、ＴｃｄＡ結合力価が低下し、ｎＡｂが完全に不存在であった（図３Ａ及び３Ｂ）。
ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂは、単回免疫の３８週間後に毒素チャレンジに対する保護を提供する。
雌のＣＤ１マウスの第２のセットは、ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂ、ＳＣ－Ａｄ６－ＰＥＢ１、又はＰＢＳ（群あたりｎ＝５）の１０１０ウイルス粒子により、ｉ．ｍ．で単回免疫された。このＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂの単回ワクチン接種は、２６週間にわたって１００，０００を超えて上昇したＴｃｄＡ及びＴｃｄＢの逆数エンドポイント結合力価を有する強力な抗体応答を生成した（図４Ａ及び４Ｂ）。２６週目に、ＳＣ－Ａｄ－ＴｃｄＡ／Ｂ群の平均逆数ＴｃｄＢ ｎＡｂ力価は１７４に達した（図４Ｃ）。３８週目に、マウスを３００ｎｇ（６×ＬＤ５０）のＴｃｄＡでチャレンジした。全てのＰＢＳ及び対照ＳＣ－Ａｄ－ＰＥＢ１ワクチン接種動物は、４８時間以内に毒素で死亡した（図４Ｄ）。対照的に、ＳＣ－Ａｄ Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ワクチン群の全ての動物が生存した。
ハムスターにおけるパイロット毒性学及び有効性試験。
１０匹のシリアンハムスター群を、ｉ．ｎ．又はｉ．ｍ．経路で、１０１１個のＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂのウイルス粒子を用いて単回免疫した。対照動物は、ｉ．ｎ．ＰＢＳを投与された。血液は、臨床化学のために免疫化の３日後に採取された。これらは、血液化学に有意差がないことを明らかにした（図７）。
ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂによる単回の鼻腔内又は筋肉内ワクチン接種は、ハムスターの免疫応答を誘導する。
血清は、免疫化から６、１２、及び１８週間後にハムスターから採取され、抗毒素抗体応答が評価された。ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂによる単回免疫は、経路にかかわらず、トキシンＡに対して有意な血清ｎＡｂを生成した。これらの抗体レベルは、研究の過程にわたって増加した（図５Ａ）。ｉ．ｍ．免疫化は、トキシンＡに対し、ｉ．ｎ．群よりも高い平均ｎＡｂを産生したが、これらは１８週目まで有意には異ならなかった（Dunnによるｐ＝０．０３３６）。トキシンＢ抗体は、６週目にＥＬＩＳＡで検出可能であった。しかし、トキシンＢに対する有意なレベルのｎＡｂは、発現により時間がかかった（図５Ｂ）。全てのｉ．ｍ．免疫動物及び６／１０のｉ．ｎ．免疫動物は、１２週目までに有意なトキシンＢ ｎＡｂレベルを有していた。１８週目に、全てのｉ．ｍ．及びｉ．ｎ．免疫動物は、それぞれ平均逆数力価が２０８４及び２２９の有意なトキシンＢ ｎＡｂを有していた。
ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂによる単回筋肉内ワクチン接種は、ハムスターにおけるＣ．ディフィシル（C. difficile）芽胞チャレンジに対する保護を提供する。
シリアンハムスターをクリンダマイシンで感作すると、ＣＤＩが誘発され得る。このモデルは、ＣＤＩ患者で観察されるものと同様の症状を引き起こす、精製されたＣ．ディフィシル（C. difficile）芽胞を経口胃で送達することにより、糞口感染経路を模倣する。Ｃ．ディフィシル（C. difficile）の臨床分離株内で、様々な毒素アイソフォームが同定されている。最近の研究では、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）のＢＩ／ＮＡＰ１／０２７株が北米におけるＣＤＩの最も一般的な原因であることが報告されている。その臨床的関連性及び異種毒素アイソフォームの発現を考慮して、ＵＫ１（ＢＩ／ＮＡＰ１／０２７）株からの芽胞を使用してワクチンの有効性を試験した。ハムスターは、単回免疫の後、２０～２１週間後に１０，０００個の芽胞を投与される２４時間前に、クリンダマイシンを投与された。ＰＢＳで免疫した動物は全て、芽胞チャレンジで死亡した（図５Ｃ）。驚くべきことに、ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂワクチンを接種したハムスターは全て、ワクチン投与経路にかかわらず、研究の終わりまで生存した。カプラン・マイヤー生存曲線のログランク比較により、ｉ．ｎ．及びｉ．ｍ．両方のＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂワクチン接種動物が、ＰＢＳ対照動物よりも有意に良好に生存したことが示された。実験の過程にわたって全ての動物で体重減少が観察されたが、ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂ動物の体重減少は７日目までに安定するか、又は逆転し始めた。
ＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂは、単回免疫の４５週間後に致死的芽胞チャレンジに対する保護を提供する。
１０匹の雌のシリアンハムスターの第２の群は、ｉ．ｎ．若しくはｉ．ｍ．で１０１１個のＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂウイルス粒子により、又はＰＢＳにより、単回免疫された。免疫化の３日又は４日後に血液を採取し、前と同じ分析物パネルを使用して試験した。同様に、３日目又は４日目には、ワクチン接種者と非接種者の間で有意差は観察されなかった（図８Ａ及び８Ｂ）。４日目に、半数の動物でＣＢＣを測定した。対照と比較して、ワクチンを投与された動物では、好中球のパーセンテージが有意に増加し、それに対応してリンパ球のパーセンテージが減少した。しかし、好中球及びリンパ球の数を比較すると、違いは見られなかった（図８Ｃ）。ｉ．ｍ．免疫された動物では、血小板及び血小板クリットの増加が見られたが、これらはまだ正常範囲内であった。
６、１２、及び１８週目に採取した血清は、第１のワクチン接種研究と同様に、トキシンＡ及びＢ ｎＡｂの増加を示した（図６Ａ及び６Ｂ）。２４週目に、各群のハムスターの半数を経口胃投与のクリンダマイシン（３０ｍｇ／ｋｇ）で感作し、５日後に２００芽胞のＣ．ディフィシル（C. difficile）でチャレンジした。この低用量チャレンジは、驚くべきことに、ＰＢＳ対照を含むどのハムスターにもＣ．ディフィシル（C. difficile）感染の症状又は徴候を誘発しなかった。このチャレンジの終了時に採取された血清抗体では、コホート内のチャレンジされていない動物と比較して、病原体チャレンジによるトキシンＡ又はＢ抗体の増加がないことが明らかになった。チャレンジを受けていない動物は、さらに２０週間追跡された。この期間中、１匹のＰＢＳ及び１匹のｉ．ｍ．免疫した動物が瀕死になり、それぞれ４２週目及び４４週目に安楽死させなければならなかった。
残りの動物は、４５週目に高用量１０，０００芽胞チャレンジを用いてチャレンジした。全てのＰＢＳ免疫動物はエンドポイント基準を満たし、安楽死させられた（図６Ｃ）。鼻腔内免疫された２匹の動物も、チャレンジで死亡した。ｉ．ｍ．ワクチン群の全ての動物が芽胞チャレンジで生存した。これらの生存曲線のログランク比較は、ＰＢＳと比較したｉ．ｎ．及びｉ．ｍ．両方のＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂワクチン接種動物の生存率で有意差を示した。チャレンジ前（３６週目）の毒素ｎＡｂレベルは、群の生存率と相関していた（図６Ｄ）。芽胞チャレンジで生存したｉ．ｎ．群の動物は、チャレンジ前に高い毒素ｎＡｂを有していた。対照的に、生存しなかったこの群の動物は、チャレンジを受ける前の毒素ｎＡｂが低かった。Ｃ．ディフィシル（C. difficile）チャレンジに対する保護は、ＳＣ－Ａｄワクチンによる単回免疫のみから１０ヶ月後に観察された。
材料及び方法
細胞培養
Ａ５４９細胞及びベロ細胞は、American Type Culture Collectionから購入した。２９３－ＩＩＩＡ細胞は、他で説明されているように生成した（Crosby et al., Virology 462-463:158-165 (2014)）。全ての細胞は、１０％熱不活化ウシ胎児血清（HI-FBS；HyClone）及び１００Ｕ／ｍＬのペニシリン／ストレプトマイシン（Invitrogen）を添加したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で３７℃に維持した。
Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ＴｃｄＡ／Ｂ融合を発現するシングルサイクルアデノウイルス
Ｃ．ディフィシル（C. difficile）トキシンＡ及びＢの受容体結合ドメインの新規融合をコードするコドン最適化ｃＤＮＡは、Genscriptによって合成された。このｃＤＮＡは、α－１アンチトリプシン（ＡＡＴ）からの分泌リーダー配列を含有し、融合タンパク質の分泌を促進する。受容体結合ドメインは、哺乳動物細胞からの分泌中に、２つのＴｃｄを互いから遊離させるために、２つのフューリン切断部位によって分離されている。このｃＤＮＡをシャトルプラスミドｐＡｄ６－ＮｄｅＰｆｌに挿入し、他で記載されているようにＳＣ－Ａｄ６に組換えて（Crosby et al., Virology 462-463:158-165 (2014)、Crosby et al., J. Virol.91(2):e00720-16 (2017)；及びCrosby et al., J. Virol.89:669-675 (2015)）、SC-Ad6-C. diff.を生成した。ＧＦＰ－ルシフェラーゼ又はカンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter jejuni）ＰＥＢ１を発現する対照ＳＣ－Ａｄ６ウイルスも使用した。ウイルスは、他の場所で説明されているようにレスキュー、増幅、及び精製した（Crosby et al., Virology 462-463:158-165 (2014)、Crosby et al., J. Virol. 91(2):e00720-16 (2017)；及びCrosby et al., J. Virol. 89:669-675 (2015))。ウイルス比較は、ウイルス粒子に基づいていた。
ウエスタンブロット法
Ａ５４９細胞に、ＧＦＰ－ルシフェラーゼを発現するＳＣ－Ａｄ６－ＴｃｄＡ／Ｂ又はＳＣ－Ａｄ－ＧＬを、細胞あたり１０４個のウイルス粒子で感染させた。感染の２４時間後に、培地を無血清ＤＭＥＭに交換した。２４時間後、この培地を回収し、Amicon Ultra-15 30k（Millipore）を用いて濃縮した。細胞は、Complete（商標）Protease Inhibitor Cocktail（Roche）を添加したTriton-X溶解緩衝液を使用して回収した。培地濃縮物及び細胞溶解物を、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）トキシンＡ又はＢに対する抗体（１：１０００；List Biological Labs, Inc.）、続いてヤギ抗ニワトリ西洋ワサビペルオキシダーゼ二次抗体（１：１０００；Invitrogen）を使用したウエスタンブロットで分析した。SuperSignal West Dura（ThermoScientific）を加え、ブロットをIn Vivo F Station（KODAK）で画像化した。
動物
雄及び雌の非近交系ＣＤ－１マウス（Charles River Laboratories）及び雌のゴールデンシリアンハムスター（Envigo）は、Mayo Clinic Animal Facilityに収容された。全ての動物の取り扱い及び実験は、動物福祉法（Animal Welfare Act）の規定、PHS動物福祉方針（Animal Welfare Policy）、実験動物の管理及び使用に関するNIHガイド（NIH Guide for the Care and Use of Laboratory Animals）の原則、及びMayo Clinicの施設内動物管理及び使用委員会（Institutional Animal Care and Use Committee）の方針と及び順に従って実施された。
免疫化及びサンプル採取
マウスをイソフルランで麻酔し、指示されたワクチン１０１０ｖｐによって、筋肉内（ｉ．ｍ．）経路で免疫した。ハムスターをイソフルランで麻酔し、１０１１ｖｐのワクチンによって、筋肉内（ｉ．ｍ．）又は鼻腔内（ｉ．ｎ．）経路で免疫した。マウスでは、指定された時点で顔面静脈から血清を採取した。様々な時点で、ハムスターを麻酔し、頸静脈から血液を採取した。
酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）
Immulon 4 HBXプレート（Thermo）を、１×リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の１００ｎｇ／ウェルのＣ．ディフィシル（C. difficile）Ａ又はＢトキソイド（List Biological Labs, Inc）のいずれかで一晩コーティングした。ウェルを洗浄し、０．１％Tween 20（TBST）を含むＴｒｉｓ緩衝生理食塩水中の５％ミルクで、室温（ＲＴ）で２時間ブロッキングした。ＴＢＳＴで洗浄した後、各血清サンプルの１／２対数希釈物を３つプレーティングし、ＲＴで３時間インキュベートした。ウェルを洗浄し、１：１０，０００ヤギ抗マウスＩｇＧ－西洋ワサビペルオキシダーゼ（Thermo Fisher Scientific Inc.）１００μＬを各ウェルに加えた。プレートをＲＴで２時間インキュベートした。ウェルを洗浄し、５０μＬの1 step Ultra TMB ELISA（Thermo Fisher Scientific Inc.）を各ウェルに加えた。発色すると、５０μＬの２Ｍ Ｈ２ＳＯ４を加えた。ＯＤ４５０は、BioTek Synergy H1 Hybrid Multi-Mode Readerで測定した。逆数力価は、９５％信頼区間に基づいて統計的に定義された。
細胞毒性及び中和アッセイ
Ｃ．ディフィシル（C. difficile）トキシンＡ及びトキシンＢの細胞毒性は、他で説明されている方法（Donald et al., Microbiology 159:1254-1266 (2013)）を用いてベロ細胞で決定された。ベロ細胞は、ＩＭＲ－９０細胞と比較してトキシンＢに対して同様の感受性を有するが、トキシンＡに対する感受性が高いため、ＩＭＲ－９０の代わりに使用された。ベロ細胞を９６ウェルプレートにウェルあたり１０４細胞で播種した。Ｃ．ディフィシル（C. difficile）トキシンＡ又はトキシンＢ（List Biological Laboratories, Inc）を、１０％HI-FBSを添加したＤＭＥＭで段階希釈し、プレーティングの２４時間後に細胞に加えた。３日後、生物発光CellTiter-Glo試薬（Promega）を使用して細胞生存率を測定した。ＥＣ５０は、データを４パラメーター式でフィッティングすることにより、発光の５０％減少を引き起こす毒素の量に等しいものとして決定された。毒素中和は、マウス又はハムスター血清の段階希釈物を、細胞毒性アッセイで決定されたＥＣ５０値の８倍と混合して使用して決定された。混合物を９６ウェルプレート上のベロ細胞に加える前に、加湿インキュベーター（５％ＣＯ２）中、３７℃で９０分間インキュベートした。３日後、Celltiter-Gloで細胞生存率を測定した。４パラメーター回帰応答は、血清希釈物から得られたルシフェラーゼ相対発光量（ＲＬＵ）値にフィッティングした。中和抗体（ｎＡｂ）力価は、細胞毒性の５０％減少を示す、派生サンプル希釈として表された。血清滴定が、試験した濃度範囲内で５０％阻害を生成できなかった場合、試験した最高血清濃度の１／２の力価がそれに起因するとした。
マウスにおける組換えＣ．ディフィシル（C. difficile）トキシンＡによるチャレンジ
免疫したマウスを、３００ｎｇのＣ．ディフィシル（C. difficile）トキシンＡ（List Biological Laboratories, Inc）により腹腔内（ｉ．ｐ．）でチャレンジした。毒素チャレンジ後、最初の３０時間は３時間ごとにマウスをモニターし、その後７２時間は６時間間隔でモニターし、その後３日目から７日目まで（１６８時間）は１２時間ごとにモニターした。臨床徴候についてマウスをモニターした。簡潔には、動物の症状は、正常、嗜眠、異常、又は瀕死として記録された。瀕死の動物は直ちに安楽死させ、記録した。各処置群の生存率を決定した。
ハムスターにおける血液学及び臨床化学
血液は、臨床化学分析（ヘパリンリチウムチューブ中２００μＬ；Greiner Bio-One）及び完全血球算定（ＣＢＣ、Ｋ２ＥＤＴＡチューブに１００μＬ；Greiner Bio-One）のために採取された。血液化学は、Piccolo Xpress Analyzer（Abaxis）で分析し、ＣＢＣは、VetScan ＨＭ５血液学分析器（Abaxis）で決定した。２つの試験の分析物パラメーターを表１と表２に示す。
Figure 2023538085000002
Figure 2023538085000003
ハムスターにおけるＣ．ディフィシル（C. difficile）芽胞によるチャレンジ
チャレンジの前に、ハムスターは換気されたケージに個別に収容された。低用量チャレンジでは、給餌針を介して経口胃で送達されるリン酸クリンダマイシン（Sigma-Aldrich）抗生物質溶液（３０ｍｇ／ｋｇ体重）を使用して、ハムスターを感染に対して感作した。５日後、ハムスターは、Ｃ．ディフィクル（C.difficle）株ＵＫ１からの２００個の芽胞により経口胃でチャレンジした。低用量の芽胞チャレンジでは、本発明者らのハムスターに症状が誘発されなかったため、修正クリンダマイシン投与による高用量チャレンジが使用された。このチャレンジでは、ハムスターは、経口胃経路ではなく腹腔内経路によってリン酸クリンダマイシン抗生物質溶液（体重１０ｍｇ／ｋｇ）で感作された。ハムスターは、２４時間後に１０４個のＵＫ１芽胞により経口胃でチャレンジされた。高用量チャレンジ及び低用量チャレンジの両方で、感染後、ハムスターを１日４回、微生物学的安全キャビネット内で、ウェットテイル、軟便、下痢、体重減少、活動レベル、ぼさぼさの（starey）被毛、目の窪み、円背及び刺激への反応の存在及び重症度を含むいくつかのパラメーターについて個別に評価することにより、モニターした。動物の状態を定量化するために、観察された変化の重症度に基づくスコアリングシステム（各パラメーターにつき０～３の範囲）を使用した。スコアが１５に達したか、瀕死であるか、又は２０％を超える体重減少があった場合、動物は安楽死させられ、疾患で死亡したと見なされた。
統計分析
全ての統計分析にはPrism 8 Graphicalソフトウェアを使用した。
実施例２：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ポリペプチドを発現するシングルサイクルアデノウイルスベクター
全長コドン最適化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクｃＤＮＡ（図１３）又はＲＢＤ－Ｓｂサブドメインを、遺伝的アジュバント又はチャフ遺伝子（図１２）を伴い及び伴わず、ｐＡｄ６－ΔＩＩＩ－ΔＥ３に挿入し、２９３－ＩＩＩＡ細胞でレスキューした。ＣｓＣｌ精製ＳＣ－Ａｄ６－スパイクは、抗スパイク抗体によるウエスタンブロットにより示されるように、Ａ５４９ヒト肺細胞の感染後、Ｓ２ドメインを切断するだけでなく、スパイクの単量体、二量体、及び三量体を生成した（図１４）。ＳＣ－Ａｄ６－スパイクは、その受容体ＡＣＥ２を発現するように操作された細胞において、細胞間融合及び合胞体を誘導した（図１５）。これらの合胞体を調べたところ、AdenoX Rapid Titer試薬を用いたアデノウイルスヘキソンの免疫組織化学染色によって示される、大量のアデノウイルスタンパク質を含んでいた（図１６）。ＳＣ－Ａｄ６－スパイクを使用して、ＢＡＬＢ／ｃマウスを鼻腔内（ｉ．ｎ．）又は筋肉内（ｉ．ｍ．）経路で免疫すると、マウス血清の１／１０００希釈物を使用したＥＬＩＳＡによって示されるように、ウイルスは２週間以内に強いスパイク抗体を誘導した（図２０Ａ）。これらはクラススイッチＩｇＧ抗体であり、ＰＢＳ緩衝液又はジカＥを発現するＳＣ－Ａｄで免疫した陰性対照マウスよりも有意に高かった（一元配置分散分析によるｐ＜０．０００１）。免疫化後６週間で、血清中のＩｇＧ抗体は上昇したままであった。特に、鼻腔内免疫化は、粘膜バリアでの応答を示すＩｇＡ抗体も生成した（図２０Ｂ）。ＢＡＬＢ／ｃマウスにおける用量設定研究により、有意なＩｇＧ抗体応答は、１０８ウイルス粒子のＳＣ－Ａｄ－スパイクによる単回ｉ．ｎ．又はｉ．ｍ．免疫化の２週間後に生成されることが示された（ＡＮＯＶＡによる＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、図２０Ｃ）。
Ｅ１欠失を有する複製欠損Ａｄ６（ＲＤ－Ａｄ６）は、同じスパイク発現カセットで構築された。ＲＤ－Ａｄ６－スパイク及びＳＣ－Ａｄ－スパイクを使用して、異なる細胞あたりのウイルス粒子数（ｖｐ）でＡ５４９ヒト肺細胞を感染させた。細胞溶解物を２４時間後にスパイクタンパク質につきウエスタンブロットで調べたところ、１０２又は１０４ｖｐのウイルスの場合にＳＣ－Ａｄが高レベルのスパイクタンパク質を発現したことが明らかになった（図２１）。対照的に、ＲＤ－Ａｄ－スパイクは、ウイルスの１０２粒子では検出可能なスパイクタンパク質を生成せず、ウイルスの１０４ｖｐでは低レベルのスパイクタンパク質しか生成しない。
コロナウイルススパイク又はＲＢＤタンパク質を発現するＳＣ－Ａｄは、インフルエンザ遺伝子の付加により修飾して、コロナウイルスとインフルエンザウイルスの混合ワクチンを生成できる。例えば、スパイク及び集中型Ｈ１コンセンサスインフルエンザヘマグルチニン（Ｈ１－ＣＯＮ）遺伝子を含有するＳＣ－Ａｄ６、又はスパイクＲＢＤドメイン及び集中型Ｈ１コンセンサスインフルエンザヘマグルチニン（Ｈ１－ＣＯＮ）遺伝子を含有するＳＣ－Ａｄ６（図２２）。或いは、スパイク又はＲＢＤを発現するＳＣ－Ａｄは、２つのインフルエンザコンセンサス免疫原を発現するＳＣ－Ａｄと同時免疫され得る。例えば、集中型Ｈ１コンセンサスインフルエンザＨ１－ＣＯＮ及びＨ１－５集中型ＨＡ遺伝子Ｈ１－５－ＣＯＮを含むＳＣ－Ａｄ６（図２３）。
実施例３：遺伝子アジュバントを発現するシングルサイクルアデノウイルスベクター
ＳＨＩＶ－１１５７ｉｐｄ３Ｎ４からのクレードＣ ｇｐ１４０を発現するＳＣ－Ａｄ６の１０９ウイルス粒子（ｖｐ）を使用して、４－１ＢＢＬ、ＧＭＣＳＦ、Ｃ．ｄｉｆｆ毒素断片ＴｃｄＡ／Ｂを発現する１０９ＳＣ－Ａｄ、又はＧＦＰ－ルシフェラーゼを発現する非特異的アデノウイルス対照と組み合わせて、ｉ．ｎ．経路でＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫した。単回免疫の６週間後に採取した血清を使用したＥＬＩＳＡは、ＧＭＣＳＦ及びＴｃｄＡ／Ｂによる抗体アイソタイプの有意な増加を示した（全てのＩｇＧでｐ＜０．０５以下）（図２５）。膣洗浄液を同じ時点でＩｇＡについてアッセイすると、ＴｃｄＡ／Ｂアジュバントのｉ．ｎ．共送達によって媒介される最高の粘膜ＩｇＡと同様の傾向が明らかになった。（図２６）。
ＳＣ－Ａｄ－ＧＭＣＳＦ及びＴｃｄＡ／Ｂは、１０倍多いＳＣ－Ａｄでｉ．ｍ．経路によって再度試験された。Ｔｆｈ及び他のＴ細胞を刺激する能力のために、ＳＣ－Ａｄ－ＩＬ－２１アジュバントも加えた。この場合、ｉ．ｍ．注射は、膣のサンプル部位に近い大腿四頭筋に投与された。この単回高用量のｉ．ｍ．免疫化の６週間後、血清の１／２０００希釈でのＥＬＩＳＡにより、ＳＣ－Ａｄ－ＧＭＣＳＦ、ＴｃｄＡ／Ｂ、及びＩＬ－２１によるエンベロープＩｇＧレベルの増加が示された（ｐ＜０．０５対ＰＢＳ）。ＳＣ－Ａｄ－ＩＬ－２１は、ＧＭＣＳＦ又はＴｃｄＡ／Ｂよりもさらに高い抗体レベルを提供した（ＰＢＳに対してｐ＜０．０００１）。膣洗浄サンプルをＩｇＧにつき試験すると、全てのＳＣ－Ａｄ－１１５７動物で増加が見られたが、有意性に達したのはＳＣ－Ａｄ－ＩＬ－２１アジュバントのみであった（ｐ＜０．０５対ＰＢＳ）。膣洗浄液を同じ時点でＩｇＡについてアッセイすると、ＧＭＣＳＦ、ＴｃｄＡ／Ｂ、及びＩＬ－２１群のほとんどの動物で粘膜ＩｇＡが高いという同様の傾向が明らかになり、ＩＬ－２１群のみがｐ＜０．０５に達した。可溶性ＨＩＶ ＳＯＳＩＰエンベロープタンパク質を使用して、ＳＣ－Ａｄによって生成された応答をブーストした。それぞれのｉ．ｍ．ＳＣ－Ａｄ－１１５７＋ＳＣ－Ａｄアジュバント免疫マウスを、ＮＫＴ細胞アジュバントアルファＧａｌＣｅｒと混合した５μｇのクレードＣ ＣＺＡ９７ ＳＯＳＩＰ．ｖ４．２－Ｍ６．ＩＴでブーストした。マウスの半分は、ｉ．ｍ．経路でブーストされ、もう半分は、ｉ．ｎ．経路でブーストされた。２週間後、膣洗浄液を回収し、クレードＣエンベロープに対するＩｇＡ又はＩｇＧ抗体についてアッセイした（図２７）。
これらのデータは、ＳＯＳＩＰタンパク質ブーストの送達経路に基づいて抗体応答に強いバイアスを示した。ｉ．ｍ．ＳＯＳＩＰは、ｉ．ｍ．ＳＣ－Ａｄ－１１５７及びＳＣ－ＡｄＧＦＰ－Ｌｕｃ又はＧＭＣＳＦによって生成される膣ＩｇＧレベルがｉ．ｎ．タンパク質よりも増加した。対照的に、ｉ．ｎ．ＳＯＳＩＰプロテインブーストは、ＳＣ－Ａｄ－１１５７により、ｉ．ｍ．経路でプライミングされたマウスの膣ＩｇＡレベルを強力に増幅し、最も強力なＳＣ－Ａｄアジュバントは、ＧＭＣＳＦ、ＴｃｄＡ／Ｂ、及びＩＬ－２１であった。ＳＣ－Ａｄ－１１５７＋ＳＣ－Ａｄ－ＧＦＰ－Ｌｕｃ群は、筋肉内でプライミング及びブーストした場合に強力なＩｇＧ応答を示したが、ＳＯＳＩＰをｉ．ｎ．で投与した場合は強力なＩｇＧ応答を生成できなかった。さらに、これらの組み合わせはいずれも、ＩｇＡ応答を生成できなかった。これは、ＳＣ－Ａｄ－ＧＦＰ－Ｌｕｃの代わりに投与された遺伝的アジュバントが動物をプライミングして、動物がｉ．ｎ．でブーストされた場合に観察されるＩｇＡ応答を駆動することを示唆しており、粘膜表面でのプライミングも示す。プライミングされていない動物に投与されたタンパク質は、膣洗浄剤でわずかにＩｇＧ又はＩｇＡ応答を生成した。
実施例４：スパイクバリアントポリペプチドを発現するＳＣ－Ａｄベクターによって生成される抗体応答
５匹のハムスターの群を、スパイクポリペプチド又はガンマミンクスパイクバリアントポリペプチドを発現する指定されたＳＣ－Ａｄ Ａｄ６又はＡｄ６５７ベクターの指定された数のウイルス粒子により、筋肉内経路で免疫した。ＤＥ３ＡＤＰは、元のWuhanスパイクを発現する別のＥ３欠失を有するＳＣ－Ａｄを示す。２週間後に血清を採取した。投与された群は、投与者に知らされていなかった。
ベクターによって生成された抗体応答を測定した。血清の１／１０００希釈物を、タンパク質に結合するＩｇＧ抗体について、スパイクＳ１タンパク質に対するＥＬＩＳＡによって分析した。データは、各サンプルにつきＥＬＩＳＡのＯＤ４５０として示される。
全ての免疫化は、ガンマミンクスパイクバリアントポリペプチド及びスパイクポリペプチドの両方を認識することができる同様の免疫応答を誘発した（図３２）。
実施例５：例示的な実施形態
実施形態１．シングルサイクルアデノウイルス（ＳＣ－Ａｄ）であって、前記ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを含み、前記ＳＣ－Ａｄが、前記アデノウイルスポリペプチドを含み、前記ＳＣ－Ａｄが、コロナウイルス免疫原をコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄ。
実施形態２．前記アデノウイルスポリペプチドが、ファイバーポリペプチド、Ｖポリペプチド、ヘキソンポリペプチド、ペントンベースポリペプチド、及びｐＩＩＩａポリペプチドからなる群から選択される、実施形態１に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態３．前記コロナウイルス免疫原が、コロナウイルススパイクポリペプチド又はその免疫原性断片を含む、実施形態１～２のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態４．前記コロナウイルス免疫原が、配列番号１～４のいずれか１つに示されるアミノ酸配列からなるか、又はそれから本質的になる、実施形態３に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態５．前記ＳＣ－Ａｄが、アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列をさらに含む、実施形態１～４のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態６．前記アジュバントポリペプチドが、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）ポリペプチド、インターロイキン４（ＩＬ－４）ポリペプチド、インターロイキン２１（ＩＬ－２１）ポリペプチド、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）ポリペプチド、４－１ＢＢリガンド（４－１ＢＢＬ）ポリペプチド、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦ－β）ポリペプチド、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）ＴｃｄＡポリペプチド、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ＴｃｄＢポリペプチド、及びそれらの生物学的に活性な断片からなる群から選択される、実施形態５に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態７．前記コロナウイルススパイクポリペプチドが、前記アジュバントポリペプチドに融合されている、実施形態５又は実施形態６に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態８．前記アジュバントポリペプチドに融合した前記コロナウイルススパイクポリペプチドが、配列番号５に示されるアミノ酸配列から本質的になるか、又はそれからなる、実施形態７に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態９．前記ＳＣ－Ａｄが、チャフポリペプチドをコードする核酸配列をさらに含む、実施形態１～４のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態１０．前記チャフポリペプチドが、ＡＣＥ２ポリペプチドの断片である、実施形態９に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態１１．ＡＣＥ２ポリペプチドの前記断片が、ＡＣＥ２ポリペプチドの細胞外領域を含み、膜貫通ドメインを欠く、実施形態１０に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態１２．前記チャフポリペプチドが、配列番号８又は配列番号９に示されるアミノ酸配列から本質的になるか、又はそれからなる、実施形態１１に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態１３．前記コロナウイルススパイクポリペプチドが、前記チャフポリペプチドに融合されている、実施形態９～１２のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態１４．実施形態１～１３のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄを含む組成物。
実施形態１５．哺乳動物においてコロナウイルスに対する免疫応答を誘導する方法であって、前記方法が、実施形態１～１３のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄ又は実施形態１４に記載の組成物を、前記ＳＣ－Ａｄが前記哺乳動物の細胞に感染する条件下で前記哺乳動物に投与することを含み、前記細胞における前記免疫原の発現が、前記免疫応答の誘導をもたらす、方法。
実施形態１６．前記哺乳動物がヒトである、実施形態１５に記載の方法。
実施形態１７．前記コロナウイルスが、ベータコロナウイルスである、実施形態１５～１６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１８．前記ベータコロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、実施形態１７に記載の方法。
実施形態１９．前記投与が、前記ＳＣ－Ａｄの粘膜送達を含む、実施形態１５～１８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２０．ＳＣ－Ａｄであって、前記ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを含み、前記ＳＣ－Ａｄが、前記アデノウイルスポリペプチドを含み、前記ＳＣ－Ａｄが、（ａ）免疫原をコードする核酸配列、及び（ｂ）アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄ。
実施形態２１．前記アデノウイルスポリペプチドが、ファイバーポリペプチド、Ｖポリペプチド、ヘキソンポリペプチド、ペントンベースポリペプチド、及びｐＩＩＩａポリペプチドからなる群から選択される、実施形態２０に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態２２．前記免疫原が、コロナウイルス免疫原である、実施形態２０～２１のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態２３．前記コロナウイルス免疫原が、コロナウイルススパイクポリペプチド又はその免疫原性断片を含む、実施形態２２に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態２４．前記コロナウイルス免疫原が、配列番号１～４のいずれか１つに示されるアミノ酸配列からなるか、又はそれから本質的になる、実施形態２３に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態２５．前記アジュバントポリペプチドが、ＧＭ－ＣＳＦポリペプチド、ＩＬ－４ポリペプチド、ＩＬ－２１ポリペプチド、ＣＤ４０Ｌポリペプチド、４－１ＢＢＬポリペプチド、ＴＧＦ－βポリペプチド、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）ＴｃｄＡポリペプチド、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ＴｃｄＢポリペプチド、及びそれらの生物学的に活性な断片からなる群から選択される、実施形態２０～２４のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態２６．前記コロナウイルススパイクポリペプチドが、前記アジュバントポリペプチドに融合されている、実施形態２５に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態２７．前記アジュバントポリペプチドに融合した前記コロナウイルススパイクポリペプチドが、配列番号５に示されるアミノ酸配列から本質的になるか、又はそれからなる、実施形態２６に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態２８．前記ＳＣ－Ａｄが、チャフポリペプチドをコードする核酸配列をさらに含む、実施形態２０～２７のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態２９．前記チャフポリペプチドが、ＡＣＥ２ポリペプチドの断片である、実施形態２８に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態３０．ＡＣＥ２ポリペプチドの前記断片が、ＡＣＥ２ポリペプチドの細胞外領域を含み、膜貫通ドメインを欠く、実施形態２９に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態３１．前記チャフポリペプチドが、配列番号８又は配列番号９に示されるアミノ酸配列から本質的になるか、又はそれからなる、実施形態３０に記載のＳＤ－Ａｃ。
実施形態３２．実施形態２０～３１のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄを含む組成物。
実施形態３３．哺乳動物においてウイルスに対する免疫応答を誘導する方法であって、前記方法が、実施形態２０～３１のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄ又は実施形態３２に記載の組成物を、前記ＳＣ－Ａｄが前記哺乳動物の細胞に感染する条件下で前記哺乳動物に投与することを含み、前記細胞における前記免疫原の発現が、前記免疫応答の誘導をもたらす、方法。
実施形態３４．前記哺乳動物がヒトである、実施形態３３に記載の方法。
実施形態３５．前記ウイルスが、コロナウイルスであり、前記免疫原が、前記コロナウイルスに関連している、実施形態３３～３４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３６．前記コロナウイルスが、ベータコロナウイルスである、実施形態３３～３５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３７．前記ベータコロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、実施形態３６に記載の方法。
実施形態３８．前記投与が、前記ＳＣ－Ａｄの粘膜送達を含む、実施形態３３～３７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３９．ＳＣ－Ａｄであって、前記ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを含み、前記ＳＣ－Ａｄが、前記アデノウイルスポリペプチドを含み、前記ＳＣ－Ａｄが、（ａ）免疫原をコードする核酸配列、及び（ｂ）チャフポリペプチドをコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄ。
実施形態４０．前記アデノウイルスポリペプチドが、ファイバーポリペプチド、Ｖポリペプチド、ヘキソンポリペプチド、ペントンベースポリペプチド、及びｐＩＩＩａポリペプチドからなる群から選択される、実施形態３９に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態４１．前記免疫原が、コロナウイルス免疫原である、実施形態３９～４０のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態４２．前記コロナウイルス免疫原が、コロナウイルススパイクポリペプチド又はその免疫原性断片を含む、実施形態４１に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態４３．前記コロナウイルス免疫原が、配列番号１～４のいずれか１つに示されるアミノ酸配列からなるか、又はそれから本質的になる、実施形態４２に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態４４．前記チャフポリペプチドが、ＡＣＥ２ポリペプチドの断片である、実施形態４３に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態４５．ＡＣＥ２ポリペプチドの前記断片が、ＡＣＥ２ポリペプチドの細胞外領域を含み、膜貫通ドメインを欠く、実施形態４４に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態４６．前記チャフポリペプチドが、配列番号８又は配列番号９に示されるアミノ酸配列から本質的になるか、又はそれからなる、実施形態４５に記載のＳＤ－Ａｃ。
実施形態４７．前記コロナウイルススパイクポリペプチドが、前記チャフポリペプチドに融合されている、実施形態３９～４６のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態４８．前記ＳＣ－Ａｄが、アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列をさらに含む、実施形態３９～４７のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態４９．前記アジュバントポリペプチドが、ＧＭ－ＣＳＦポリペプチド、ＩＬ－４ポリペプチド、ＩＬ－２１ポリペプチド、ＣＤ４０Ｌポリペプチド、４－１ＢＢＬポリペプチド、ＴＧＦ－βポリペプチド、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）ＴｃｄＡポリペプチド、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ＴｃｄＢポリペプチド、及びそれらの生物学的に活性な断片からなる群から選択される、実施形態４８に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態５０．実施形態３９～４９のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄを含む組成物。
実施形態５１．哺乳動物においてウイルスに対する免疫応答を誘導する方法であって、前記方法が、請求項３９～４９のいずれか一項に記載のＳＣ－Ａｄ又は請求項５０に記載の組成物を、前記ＳＣ－Ａｄが前記哺乳動物の細胞に感染する条件下で前記哺乳動物に投与することを含み、前記細胞における前記免疫原の発現が、前記免疫応答の誘導をもたらす、方法。
実施形態５２．前記哺乳動物がヒトである、実施形態５１に記載の方法。
実施形態５３．前記ウイルスが、コロナウイルスであり、前記免疫原が、前記コロナウイルスに関連している、実施形態５１～５２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５４．前記コロナウイルスが、ベータコロナウイルスである、実施形態５３に記載の方法。
実施形態５５．前記ベータコロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、実施形態５４に記載の方法。
実施形態５６．前記投与が、前記ＳＣ－Ａｄの粘膜送達を含む、実施形態５１～５５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５７．ＳＣ－Ａｄであって、前記ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを含み、前記ＳＣ－Ａｄが、前記アデノウイルスポリペプチドを含み、前記ＳＣ－Ａｄが、（ａ）免疫原をコードする核酸配列、（ｂ）アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列、及び（ｃ）チャフポリペプチドをコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄ。
実施形態５８．前記アデノウイルスポリペプチドが、ファイバーポリペプチド、Ｖポリペプチド、ヘキソンポリペプチド、ペントンベースポリペプチド、及びｐＩＩＩａポリペプチドからなる群から選択される、実施形態５７に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態５９．前記免疫原が、コロナウイルス免疫原である、実施形態５７～５８のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態６０．前記コロナウイルス免疫原が、コロナウイルススパイクポリペプチド又はその免疫原性断片を含む、実施形態５９に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態６１．前記コロナウイルス免疫原が、配列番号１～４のいずれか１つに示されるアミノ酸配列からなるか、又はそれから本質的になる、実施形態６０に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態６２．前記アジュバントポリペプチドが、ＧＭ－ＣＳＦポリペプチド、ＩＬ－４ポリペプチド、ＩＬ－２１ポリペプチド、ＣＤ４０Ｌポリペプチド、４－１ＢＢＬポリペプチド、ＴＧＦ－βポリペプチド、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）ＴｃｄＡポリペプチド、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ＴｃｄＢポリペプチド、及びそれらの生物学的に活性な断片からなる群から選択される、実施形態５７～６１のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態６３．前記チャフポリペプチドが、ＡＣＥ２ポリペプチドの断片である、実施形態５７～６１のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態６４．ＡＣＥ２ポリペプチドの前記断片が、ＡＣＥ２ポリペプチドの細胞外領域を含み、膜貫通ドメインを欠く、実施形態６３に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態６５．前記チャフポリペプチドが、配列番号８又は配列番号９に示されるアミノ酸配列から本質的になるか、又はそれからなる、実施形態６４に記載のＳＤ－Ａｃ。
実施形態６６．実施形態５７～６５のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄを含む組成物。
実施形態６７．哺乳動物においてウイルスに対する免疫応答を誘導する方法であって、前記方法が、実施形態５７～６５のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄ又は実施形態６６に記載の組成物を、前記ＳＣ－Ａｄが前記哺乳動物の細胞に感染する条件下で前記哺乳動物に投与することを含み、前記細胞における前記免疫原の発現が、前記免疫応答の誘導をもたらす、方法。
実施形態６８．前記哺乳動物がヒトである、実施形態６７に記載の方法。
実施形態６９．前記ウイルスが、コロナウイルスであり、前記免疫原が、前記コロナウイルスに関連している、実施形態６７～６８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７０．前記コロナウイルスが、ベータコロナウイルスである、実施形態６９に記載の方法。
実施形態７１．前記ベータコロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、実施形態７０に記載の方法。
実施形態７２．前記投与が、前記ＳＣ－Ａｄの粘膜送達を含む、実施形態５１～５５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７３．ＳＣ－Ａｄであって、前記ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを含み、前記ＳＣ－Ａｄが、前記アデノウイルスポリペプチドを含み、前記ＳＣ－Ａｄが、アレルゲンによって発現又はシェディングされる免疫原をコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄ。
実施形態７４．前記アデノウイルスポリペプチドが、ファイバーポリペプチド、Ｖポリペプチド、ヘキソンポリペプチド、ペントンベースポリペプチド、及びｐＩＩＩａポリペプチドからなる群から選択される、実施形態７３に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態７５．前記ＳＣ－Ａｄが、アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列をさらに含む、実施形態７３～７４のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態７６．前記アジュバントポリペプチドが、ＧＭ－ＣＳＦポリペプチド、ＩＬ－４ポリペプチド、ＩＬ－２１ポリペプチド、ＣＤ４０Ｌポリペプチド、４－１ＢＢＬポリペプチド、ＴＧＦ－βポリペプチド、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）ＴｃｄＡポリペプチド、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ＴｃｄＢポリペプチド、及びそれらの生物学的に活性な断片からなる群から選択される、実施形態７５に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態７７．前記ＳＣ－Ａｄが、チャフポリペプチドをコードする核酸配列をさらに含む、実施形態７３～７６のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態７８．前記チャフポリペプチドが、ＡＣＥ２ポリペプチドの断片である、実施形態７７に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態７９．ＡＣＥ２ポリペプチドの前記断片が、ＡＣＥ２ポリペプチドの細胞外領域を含み、膜貫通ドメインを欠く、実施形態７８に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態８０．前記チャフポリペプチドが、配列番号８又は配列番号９に示されるアミノ酸配列から本質的になるか、又はそれからなる、実施形態７９に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態８１．実施形態７３～８０のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄを含む組成物。
実施形態８２．哺乳動物においてアレルゲンに対する免疫応答を誘導する方法であって、前記方法が、実施形態７３～８０のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄ又は実施形態８１に記載の組成物を、前記ＳＣ－Ａｄが前記哺乳動物の細胞に感染する条件下で前記哺乳動物に投与することを含み、前記細胞における前記免疫原の発現が、前記免疫応答の誘導をもたらす、方法。
実施形態８３．前記哺乳動物がヒトである、実施形態１５に記載の方法。
実施形態８４．ＳＣ－Ａｄであって、前記ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを含み、前記ＳＣ－Ａｄが、前記アデノウイルスポリペプチドを含み、前記ＳＣ－Ａｄが、癌細胞によって発現される免疫原をコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄ。
実施形態８５．前記アデノウイルスポリペプチドが、ファイバーポリペプチド、Ｖポリペプチド、ヘキソンポリペプチド、ペントンベースポリペプチド、及びｐＩＩＩａポリペプチドからなる群から選択される、実施形態８４に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態８６．前記ＳＣ－Ａｄが、アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列をさらに含む、実施形態８４～８５のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態８７．前記アジュバントポリペプチドが、ＧＭ－ＣＳＦポリペプチド、ＩＬ－４ポリペプチド、ＩＬ－２１ポリペプチド、ＣＤ４０Ｌポリペプチド、４－１ＢＢＬポリペプチド、ＴＧＦ－βポリペプチド、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）ＴｃｄＡポリペプチド、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ＴｃｄＢポリペプチド、及びそれらの生物学的に活性な断片からなる群から選択される、実施形態８６に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態８８．前記ＳＣ－Ａｄが、チャフポリペプチドをコードする核酸配列をさらに含む、実施形態８４～８７のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態８９．前記チャフポリペプチドが、ＡＣＥ２ポリペプチドの断片である、実施形態８８に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態９０．ＡＣＥ２ポリペプチドの前記断片が、ＡＣＥ２ポリペプチドの細胞外領域を含み、膜貫通ドメインを欠く、実施形態８９に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態９１．前記チャフポリペプチドが、配列番号８又は配列番号９に示されるアミノ酸配列から本質的になるか、又はそれからなる、実施形態９０に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態９２．実施形態８４～９１のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄを含む組成物。
実施形態９３．哺乳動物において癌細胞に対する免疫応答を誘導する方法であって、前記方法が、実施形態８４～９１のいずれか１つに記載のＳＣ－Ａｄ又は実施形態９２に記載の組成物を、前記ＳＣ－Ａｄが前記哺乳動物の細胞に感染する条件下で前記哺乳動物に投与することを含み、前記細胞における前記免疫原の発現が、前記免疫応答の誘導をもたらす、方法。
実施形態９４．前記哺乳動物がヒトである、実施形態９３に記載の方法。
実施形態９５．ＳＣ－Ａｄであって、前記ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを含み、前記ＳＣ－Ａｄが、前記アデノウイルスポリペプチドを含み、前記ＳＣ－Ａｄが、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ポリペプチドをコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄ。
実施形態９６．前記Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ポリペプチドが、ＴｃｄＡ／Ｂ融合ポリペプチドである、実施形態９５に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態９７．前記Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ポリペプチドが、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含むか、又は配列番号２２に示される配列と少なくとも８５パーセント同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態９５に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態９８．Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ポリペプチドが、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む、実施形態９７に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態９９．前記Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ポリペプチドが、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むか、又は配列番号２３に示される配列と少なくとも８５パーセント同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態９５に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態１００．Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ポリペプチドが、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含む、実施形態９７に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態１０１．前記Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ポリペプチドが、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含むか、又は配列番号１０に示される配列と少なくとも８５パーセント同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態９５に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態１０２．Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ポリペプチドが、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含む、実施形態１０１に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態１０３．配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、及び配列番号３１からなる群から選択される核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄ。
実施形態１０４．前記コロナウイルス免疫原が、配列番号４２～４４、４７、及び４８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列からなるか、又はそれから本質的になる、実施形態３に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態１０５．前記コロナウイルス免疫原が、配列番号４２～４４、４７、及び４８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列からなるか、又はそれから本質的になる、実施形態２３に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態１０６．前記コロナウイルス免疫原が、配列番号４２～４４、４７、及び４８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列からなるか、又はそれから本質的になる、実施形態４２に記載のＳＣ－Ａｄ。
実施形態１０７．ＳＣ－Ａｄの２つ以上の集団を含む組成物であって、ＳＣ－Ａｄの各集団が、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを含み、前記ＳＣ－Ａｄの各集団が、前記アデノウイルスポリペプチドを含み、前記ＳＣ－Ａｄの各集団が、独立して、コロナウイルス免疫原をコードする核酸配列を含む、組成物。
実施形態１０８．前記アデノウイルスポリペプチドが、ファイバーポリペプチド、Ｖポリペプチド、ヘキソンポリペプチド、ペントンベースポリペプチド、及びｐＩＩＩａポリペプチドからなる群から選択される、実施形態１０７に記載の組成物。
実施形態１０９．前記コロナウイルス免疫原が、コロナウイルススパイクポリペプチド又はその免疫原性断片を含む、実施形態１０７～１０８のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態１１０．前記コロナウイルス免疫原が、配列番号１～４、４２～４４、４７、及び４８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列からなるか、又はそれから本質的になる、実施形態１０７～１０９のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態１１１．前記ＳＣ－Ａｄの２つ以上の集団の前記ＳＣ－Ａｄが、アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列をさらに含む、実施形態１０７～１１０のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態１１２．前記アジュバントポリペプチドが、ＧＭ－ＣＳＦポリペプチド、ＩＬ－４ポリペプチド、ＩＬ－２１ポリペプチド、ＣＤ４０Ｌポリペプチド、４－１ＢＢＬポリペプチド、ＴＧＦ－βポリペプチド、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ＴｃｄＡポリペプチド、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ＴｃｄＢポリペプチド、及びそれらの生物学的に活性な断片からなる群から選択される、実施形態１１１に記載の組成物。
実施形態１１３．前記コロナウイルススパイクポリペプチドが、前記アジュバントポリペプチドに融合されている、実施形態１１１又は実施形態１１２に記載の組成物。
実施形態１１４．前記アジュバントポリペプチドに融合した前記コロナウイルススパイクポリペプチドが、配列番号５に示されるアミノ酸配列から本質的になるか、又はそれからなる、実施形態１１３に記載の組成物。
実施形態１１５．前記ＳＣ－Ａｄの２つ以上の集団の前記ＳＣ－Ａｄが、チャフポリペプチドをコードする核酸配列をさらに含む、実施形態１０７～１１０のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態１１６．前記チャフポリペプチドが、ＡＣＥ２ポリペプチドの断片である、実施形態１１５に記載の組成物。
実施形態１１７．ＡＣＥ２ポリペプチドの前記断片が、ＡＣＥ２ポリペプチドの細胞外領域を含み、膜貫通ドメインを欠く、実施形態１１６に記載の組成物。
実施形態１１８．前記チャフポリペプチドが、配列番号８又は配列番号９に示されるアミノ酸配列から本質的になるか、又はそれからなる、実施形態１１７に記載の組成物。
実施形態１１９．前記コロナウイルススパイクポリペプチドが、前記チャフポリペプチドに融合されている、実施形態１１５～１１８のいずれか１つに記載の組成物。
配列表フリーテキスト
配列番号１
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号２
ＥＲ保持配列を欠くＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号３
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクポリペプチドの外部ドメインのアミノ酸配列
配列番号４
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクポリペプチドの受容体結合ドメインのアミノ酸配列
配列番号５
Ｉｇポリペプチドに融合したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクポリペプチドの受容体結合ドメインのアミノ酸配列
配列番号６
ストレプトアビジンポリペプチドに融合したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクポリペプチドの受容体結合ドメインのアミノ酸配列
配列番号７
シグマコイルポリペプチドに融合したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクポリペプチドの受容体結合ドメインのアミノ酸配列
配列番号８
ＡＣＥ２チャフポリペプチドの外部ドメインのアミノ酸配列
配列番号９
ＡＣＥ２チャフポリペプチドの不活性化外部ドメインのアミノ酸配列
配列番号１０
ＴｃｄＡ／Ｂ融合ポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号１１
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ１ａｂポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号１２
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号１３
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ３ポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号１４
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｅポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号１５
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｍポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号１６
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ３ポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号１７
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ７ポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号１８
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＯＲＦ８ポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号１９
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｎポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号２０
集中型Ｈ１インフルエンザヘマグルチニンポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号２１
集中型Ｈ１－５インフルエンザヘマグルチニンポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号２２
ＴｃｄＡポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号２３
ＴｃｄＢポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号２４
Ｃ．ディフィシル（C. difficile）毒素由来のＴｃｄＡポリペプチドをコードできる核酸配列
配列番号２５
Ｃ．ディフィシル（C. difficile）毒素由来のＴｃｄＢポリペプチドをコードできる核酸配列
配列番号２６
ＳＣ－Ａｄ－スパイクウイルスをコードできる核酸配列
配列番号２７
ＳＣ－Ａｄ－ＴｃｄＡ／Ｂウイルスをコードできる核酸配列
配列番号２８
ＳＣ－Ａｄ６－ΔＩＩＩ－ΔＥ３－ＣＭＶ－スパイク－３Ｘ－ＬＺＬ核酸
配列番号２９
ＳＣ－Ａｄ６－ΔＩＩＩ－ΔＥ３－ＣＭＶ－スパイク－ＰＰ－３Ｘ－ＬＺＬ核酸
配列番号３０
ＳＣ－Ａｄ６－ΔＩＩＩ－ΔＥ３ＡＤＰ－Ｉ－ＣＭＶ－スパイク－３Ｘ－Ｌ核酸
配列番号３１
ＳＣ－Ａｄ６－ΔＩＩＩ－ΔＥ３ＡＤＰ－Ｉ－ＣＭＶ－スパイク－ＰＰ－３Ｘ－Ｌ核酸
配列番号３２
ＳＣ－Ａｄ－ＦＺＦ－６５７－ΔＩＩＩＦ－ΔＥ３－スパイク－３Ｘ－Ｌ核酸
配列番号３３
ＳＣ－Ａｄ－ＦＺＦ－６５７－ΔＩＩＩＦ－ΔＥ３－スパイクＰＰ－３Ｘ－Ｌ核酸
配列番号３４
ＳＣ－Ａｄ－ＦＺＦ－Ｃ６８－ΔＩＩＩＦ－ΔＥ３－スパイク－３Ｘ－Ｌ核酸
配列番号３５
ＳＣ－Ａｄ－ＦＺＦ－Ｃ６８－ΔＩＩＩＦ－ΔＥ３－スパイクＰＰ－３Ｘ－Ｌ核酸
配列番号３６
ＳＣ－Ａｄ－Ｆ－６５７－ΔＩＩＩＦ－ΔＥ３－スパイク－３Ｘ－Ｌ核酸
配列番号３７
ＳＣ－Ａｄ－Ｆ－６５７－ΔＩＩＩＦ－ΔＥ３－スパイクＰＰ－３Ｘ－Ｌ核酸
配列番号３８
ＳＣ－Ａｄ－Ｆ－Ｃ６８－ΔＩＩＩＦ－ΔＥ３－スパイク－３Ｘ－Ｌ核酸
配列番号３９
ＳＣ－Ａｄ－Ｆ－Ｃ６８－ΔＩＩＩＦ－ΔＥ３－スパイクＰＰ－３Ｘ－Ｌ核酸
配列番号４０
ＡＡＴ分泌配列をコードする核酸配列
配列番号４１
合成フューリン切断部位をコードする核酸配列
配列番号４２
Ｋ４１７Ｔ、Ｙ４５３Ｆ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ｄ６１４Ｇ、Ｋ９８６Ｐ、及びＶ９８７Ｐ変異を有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ガンマミンクスパイクバリアントポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号４３
Ｔ１９Ｒ、Ｇ１４２Ｄ、Ｒ１５８Ｇ、１５６－１５７ｄｅｌ、Ｌ４５２Ｒ、Ｔ４７８Ｋ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１Ｒ、Ｄ９５０Ｎ、Ｋ９８６Ｐ、及びＶ９８７Ｐ変異を有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｂ．１．６１７．２（デルタ）スパイクバリアントポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号４４
Ｔ１９Ｒ、Ｇ１４２Ｄ、Ｒ１５８Ｇ、１５６－１５７ｄｅｌ、Ｋ４１７Ｔ、Ｌ４５２Ｒ、Ｔ４７８Ｋ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１Ｒ、Ｄ９５０Ｎ、Ｋ９８６Ｐ、及びＶ９８７Ｐ変異を有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｂ．１．６１７．２．１（デルタプラス）スパイクポリペプチドバリアントのアミノ酸配列
配列番号４５
Ｍ／Ｎ融合ポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号４６
Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ＴｃｄＢ／Ｂ（ＴｃｄＢ×２）融合ポリペプチドのアミノ酸配列
配列番号４７
Ｇ７５Ｉ、Ｔ７６Ｉ、ｄｅｌ２４６－２５２、Ｌ４５２Ｑ、Ｆ４９０Ｓ、Ｄ６１４Ｇ、Ｔ８５９Ｎ、Ｋ９８６Ｐ、及びＶ９８７Ｐ変異を有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ラムダスパイクポリペプチドバリアントのアミノ酸配列
配列番号４８
Ｓ１３Ｉ、Ｗ１５２Ｃ、Ｌ４５２Ｒ、Ｄ６１４Ｇ、Ｋ９８６Ｐ、及びＶ９８７Ｐ変異を有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｅｐｓｉｌｏｎスパイクポリペプチドバリアントのアミノ酸配列
他の実施形態
本発明をその詳細な説明と併せて説明してきたが、前述の説明は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を例示することを意図したものであり、限定するものではないことを理解されたい。他の態様、利点、及び変更は、以下の特許請求の範囲内である。

Claims (56)

  1. シングルサイクルアデノウイルス（ＳＣ－Ａｄ）であって、前記ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを含み、前記ＳＣ－Ａｄが、前記アデノウイルスポリペプチドを含み、前記ＳＣ－Ａｄが、コロナウイルス免疫原をコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄ。
  2. 前記アデノウイルスポリペプチドが、ファイバーポリペプチド、Ｖポリペプチド、ヘキソンポリペプチド、ペントンベースポリペプチド、及びｐＩＩＩａポリペプチドからなる群から選択される、請求項１に記載のＳＣ－Ａｄ。
  3. 前記コロナウイルス免疫原が、コロナウイルススパイクポリペプチド又はその免疫原性断片を含む、請求項１又は２に記載のＳＣ－Ａｄ。
  4. 前記コロナウイルス免疫原が、配列番号１～４のいずれか１つに示されるアミノ酸配列からなるか、又は配列番号１～４のいずれか１つに示されるアミノ酸配列から本質的になる、請求項３に記載のＳＣ－Ａｄ。
  5. 前記ＳＣ－Ａｄが、アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列をさらに含む、請求項１～４のいずれか一項に記載のＳＣ－Ａｄ。
  6. 前記アジュバントポリペプチドが、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）ポリペプチド、インターロイキン４（ＩＬ－４）ポリペプチド、インターロイキン２１（ＩＬ－２１）ポリペプチド、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）ポリペプチド、４－１ＢＢリガンド（４－１ＢＢＬ）ポリペプチド、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦ－β）ポリペプチド、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）ＴｃｄＡポリペプチド、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ＴｃｄＢポリペプチド、及びそれらの生物学的に活性な断片からなる群から選択される、請求項５に記載のＳＣ－Ａｄ。
  7. 前記コロナウイルススパイクポリペプチドが、前記アジュバントポリペプチドに融合されている、請求項５又は６に記載のＳＣ－Ａｄ。
  8. 前記アジュバントポリペプチドに融合した前記コロナウイルススパイクポリペプチドが、配列番号５に示されるアミノ酸配列から本質的になるか、又は配列番号５に示されるアミノ酸配列からなる、請求項７に記載のＳＣ－Ａｄ。
  9. 前記ＳＣ－Ａｄが、チャフポリペプチドをコードする核酸配列をさらに含む、請求項１～４のいずれか一項に記載のＳＣ－Ａｄ。
  10. 前記チャフポリペプチドが、ＡＣＥ２ポリペプチドの断片である、請求項９に記載のＳＣ－Ａｄ。
  11. ＡＣＥ２ポリペプチドの前記断片が、ＡＣＥ２ポリペプチドの細胞外領域を含み、膜貫通ドメインを欠く、請求項１０に記載のＳＣ－Ａｄ。
  12. 前記チャフポリペプチドが、配列番号８又は配列番号９に示されるアミノ酸配列から本質的になるか、又は配列番号８又は配列番号９に示されるアミノ酸配列からなる、請求項１１に記載のＳＣ－Ａｄ。
  13. 前記コロナウイルススパイクポリペプチドが、前記チャフポリペプチドに融合されている、請求項９～１２のいずれか一項に記載のＳＣ－Ａｄ。
  14. 請求項１～１３のいずれか一項に記載のＳＣ－Ａｄを含む組成物。
  15. 哺乳動物においてコロナウイルスに対する免疫応答を誘導する方法であって、前記方法が、請求項１～１３のいずれか一項に記載のＳＣ－Ａｄ又は請求項１４に記載の組成物を、前記ＳＣ－Ａｄが前記哺乳動物の細胞に感染する条件下で前記哺乳動物に投与することを含み、前記細胞における前記免疫原の発現が、前記免疫応答の誘導をもたらす、方法。
  16. 前記哺乳動物がヒトである、請求項１５に記載の方法。
  17. 前記コロナウイルスが、ベータコロナウイルスである、請求項１５又は１６に記載の方法。
  18. 前記ベータコロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、請求項１７に記載の方法。
  19. 前記投与が、前記ＳＣ－Ａｄの粘膜送達を含む、請求項１５～１８のいずれか一項に記載の方法。
  20. ＳＣ－Ａｄであって、前記ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを含み、前記ＳＣ－Ａｄが、前記アデノウイルスポリペプチドを含み、前記ＳＣ－Ａｄが、（ａ）免疫原をコードする核酸配列、及び（ｂ）アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄ。
  21. 前記アデノウイルスポリペプチドが、ファイバーポリペプチド、Ｖポリペプチド、ヘキソンポリペプチド、ペントンベースポリペプチド、及びｐＩＩＩａポリペプチドからなる群から選択される、請求項２０に記載のＳＣ－Ａｄ。
  22. 前記免疫原が、コロナウイルス免疫原である、請求項２０又は２１に記載のＳＣ－Ａｄ。
  23. 前記コロナウイルス免疫原が、コロナウイルススパイクポリペプチド又はその免疫原性断片を含む、請求項２２に記載のＳＣ－Ａｄ。
  24. 前記コロナウイルス免疫原が、配列番号１～４のいずれか１つに示されるアミノ酸配列からなるか、又は配列番号１～４のいずれか１つに示されるアミノ酸配列から本質的になる、請求項２３に記載のＳＣ－Ａｄ。
  25. 前記アジュバントポリペプチドが、ＧＭ－ＣＳＦポリペプチド、ＩＬ－４ポリペプチド、ＩＬ－２１ポリペプチド、ＣＤ４０Ｌポリペプチド、４－１ＢＢＬポリペプチド、ＴＧＦ－βポリペプチド、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）ＴｃｄＡポリペプチド、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ＴｃｄＢポリペプチド、及びそれらの生物学的に活性な断片からなる群から選択される、請求項２０～２４のいずれか一項に記載のＳＣ－Ａｄ。
  26. 前記コロナウイルススパイクポリペプチドが、前記アジュバントポリペプチドに融合されている、請求項２５に記載のＳＣ－Ａｄ。
  27. 前記アジュバントポリペプチドに融合した前記コロナウイルススパイクポリペプチドが、配列番号５に示されるアミノ酸配列から本質的になるか、又は配列番号５に示されるアミノ酸配列からなる、請求項２６に記載のＳＣ－Ａｄ。
  28. 前記ＳＣ－Ａｄが、チャフポリペプチドをコードする核酸配列をさらに含む、請求項２０～２７のいずれか一項に記載のＳＣ－Ａｄ。
  29. 前記チャフポリペプチドが、ＡＣＥ２ポリペプチドの断片である、請求項２８に記載のＳＣ－Ａｄ。
  30. ＡＣＥ２ポリペプチドの前記断片が、ＡＣＥ２ポリペプチドの細胞外領域を含み、膜貫通ドメインを欠く、請求項２９に記載のＳＣ－Ａｄ。
  31. 前記チャフポリペプチドが、配列番号８又は配列番号９に示されるアミノ酸配列から本質的になるか、又は配列番号８又は配列番号９に示されるアミノ酸配列からなる、請求項３０に記載のＳＤ－Ａｃ。
  32. 請求項２０～３１のいずれか一項に記載のＳＣ－Ａｄを含む組成物。
  33. 哺乳動物においてウイルスに対する免疫応答を誘導する方法であって、前記方法が、請求項２０～３１のいずれか一項に記載のＳＣ－Ａｄ又は請求項３２に記載の組成物を、前記ＳＣ－Ａｄが前記哺乳動物の細胞に感染する条件下で前記哺乳動物に投与することを含み、前記細胞における前記免疫原の発現が、前記免疫応答の誘導をもたらす、方法。
  34. 前記哺乳動物がヒトである、請求項３３に記載の方法。
  35. 前記ウイルスが、コロナウイルスであり、前記免疫原が、前記コロナウイルスに関連している、請求項３３又は３４に記載の方法。
  36. 前記コロナウイルスが、ベータコロナウイルスである、請求項３３～３５のいずれか一項に記載の方法。
  37. 前記ベータコロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、請求項３６に記載の方法。
  38. 前記投与が、前記ＳＣ－Ａｄの粘膜送達を含む、請求項３３～３７のいずれか一項に記載の方法。
  39. ＳＣ－Ａｄであって、前記ＳＣ－Ａｄが、アデノウイルスポリペプチドをコードする核酸配列の少なくとも一部を欠くゲノムを含み、前記ＳＣ－Ａｄが、前記アデノウイルスポリペプチドを含み、前記ＳＣ－Ａｄが、（ａ）免疫原をコードする核酸配列、及び（ｂ）チャフポリペプチドをコードする核酸配列を含む、ＳＣ－Ａｄ。
  40. 前記アデノウイルスポリペプチドが、ファイバーポリペプチド、Ｖポリペプチド、ヘキソンポリペプチド、ペントンベースポリペプチド、及びｐＩＩＩａポリペプチドからなる群から選択される、請求項３９に記載のＳＣ－Ａｄ。
  41. 前記免疫原が、コロナウイルス免疫原である、請求項３９又は４０に記載のＳＣ－Ａｄ。
  42. 前記コロナウイルス免疫原が、コロナウイルススパイクポリペプチド又はその免疫原性断片を含む、請求項４１に記載のＳＣ－Ａｄ。
  43. 前記コロナウイルス免疫原が、配列番号１～４のいずれか１つに示されるアミノ酸配列からなるか、又は配列番号１～４のいずれか１つに示されるアミノ酸配列から本質的になる、請求項４２に記載のＳＣ－Ａｄ。
  44. 前記チャフポリペプチドが、ＡＣＥ２ポリペプチドの断片である、請求項４３に記載のＳＣ－Ａｄ。
  45. ＡＣＥ２ポリペプチドの前記断片が、ＡＣＥ２ポリペプチドの細胞外領域を含み、膜貫通ドメインを欠く、請求項４４に記載のＳＣ－Ａｄ。
  46. 前記チャフポリペプチドが、配列番号８又は配列番号９に示されるアミノ酸配列から本質的になるか、又は配列番号８又は配列番号９に示されるアミノ酸配列からなる、請求項４５に記載のＳＤ－Ａｃ。
  47. 前記コロナウイルススパイクポリペプチドが、前記チャフポリペプチドに融合されている、請求項３９～４６のいずれか一項に記載のＳＣ－Ａｄ。
  48. 前記ＳＣ－Ａｄが、アジュバントポリペプチドをコードする核酸配列をさらに含む、請求項３９～４７のいずれか一項に記載のＳＣ－Ａｄ。
  49. 前記アジュバントポリペプチドが、ＧＭ－ＣＳＦポリペプチド、ＩＬ－４ポリペプチド、ＩＬ－２１ポリペプチド、ＣＤ４０Ｌポリペプチド、４－１ＢＢＬポリペプチド、ＴＧＦ－βポリペプチド、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium difficile）ＴｃｄＡポリペプチド、Ｃ．ディフィシル（C. difficile）ＴｃｄＢポリペプチド、及びそれらの生物学的に活性な断片からなる群から選択される、請求項４８に記載のＳＣ－Ａｄ。
  50. 請求項３９～４９のいずれか一項に記載のＳＣ－Ａｄを含む組成物。
  51. 哺乳動物においてウイルスに対する免疫応答を誘導する方法であって、前記方法が、請求項３９～４９のいずれか一項に記載のＳＣ－Ａｄ又は請求項５０に記載の組成物を、前記ＳＣ－Ａｄが前記哺乳動物の細胞に感染する条件下で前記哺乳動物に投与することを含み、前記細胞における前記免疫原の発現が、前記免疫応答の誘導をもたらす、方法。
  52. 前記哺乳動物がヒトである、請求項５１に記載の方法。
  53. 前記ウイルスが、コロナウイルスであり、前記免疫原が、前記コロナウイルスに関連している、請求項５１又は５２に記載の方法。
  54. 前記コロナウイルスが、ベータコロナウイルスである、請求項５３に記載の方法。
  55. 前記ベータコロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、請求項５４に記載の方法。
  56. 前記投与が、前記ＳＣ－Ａｄの粘膜送達を含む、請求項５１～５５のいずれか一項に記載の方法。
JP2023511995A 2020-08-17 2021-08-17 アデノウイルスベクター及びアデノウイルスベクターの使用方法 Pending JP2023538085A (ja)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063066740P 2020-08-17 2020-08-17
US63/066,740 2020-08-17
US16/996,740 US11149286B1 (en) 2020-08-17 2020-08-18 Adenovirus vectors and methods for using adenovirus vectors
US16/996,740 2020-08-18
PCT/US2021/046333 WO2022040204A1 (en) 2020-08-17 2021-08-17 Adenovirus vectors and methods for using adenovirus vectors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2023538085A true JP2023538085A (ja) 2023-09-06

Family

ID=78083221

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2023511995A Pending JP2023538085A (ja) 2020-08-17 2021-08-17 アデノウイルスベクター及びアデノウイルスベクターの使用方法

Country Status (11)

Country Link
US (3) US11149286B1 (ja)
EP (1) EP4196092A1 (ja)
JP (1) JP2023538085A (ja)
KR (1) KR20230079359A (ja)
CN (1) CN116887820A (ja)
AU (1) AU2021329309A1 (ja)
BR (1) BR112023002932A2 (ja)
CA (1) CA3189832A1 (ja)
MX (1) MX2023002008A (ja)
WO (1) WO2022040204A1 (ja)
ZA (1) ZA202303601B (ja)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10131921B2 (en) 2008-03-06 2018-11-20 Mayo Foundation For Medical Education And Research Single cycle replicating adenovirus vectors
US10953089B1 (en) 2020-01-27 2021-03-23 Novavax, Inc. Coronavirus vaccine formulations
US11149286B1 (en) * 2020-08-17 2021-10-19 Mayo Foundation For Medical Education And Research Adenovirus vectors and methods for using adenovirus vectors
WO2022216895A1 (en) * 2021-04-09 2022-10-13 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Methods, kits, and approaches for viral vaccines
WO2024064140A1 (en) * 2022-09-19 2024-03-28 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods and materials for using adenovirus vectors to immunize mammals

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2761689B1 (fr) 1997-04-02 1999-06-25 Transgene Sa Fibre adenovirale modifiee et adenovirus cibles
US20060062764A1 (en) 2004-08-25 2006-03-23 Seshidar-Reddy Police Fiber-modified adenoviral vectors for enhanced transduction of tumor cells
US10131921B2 (en) 2008-03-06 2018-11-20 Mayo Foundation For Medical Education And Research Single cycle replicating adenovirus vectors
CN104203271B (zh) * 2012-02-14 2017-08-25 梅里亚股份有限公司 表达狂犬病病毒和ox40蛋白的重组痘病毒载体及从其制造的疫苗
CN111088283B (zh) * 2020-03-20 2020-06-23 苏州奥特铭医药科技有限公司 mVSV病毒载体及其病毒载体疫苗、一种基于mVSV介导的新冠肺炎疫苗
CN111529685A (zh) * 2020-04-21 2020-08-14 厦门诺康得生物科技有限公司 抗呼吸道病毒感染的鼻腔喷雾制剂
CN111560076B (zh) * 2020-05-15 2021-05-07 广州百暨基因科技有限公司 一种嵌合抗原受体免疫细胞及其制备方法和应用
US11149286B1 (en) * 2020-08-17 2021-10-19 Mayo Foundation For Medical Education And Research Adenovirus vectors and methods for using adenovirus vectors

Also Published As

Publication number Publication date
CN116887820A (zh) 2023-10-13
US20220049271A1 (en) 2022-02-17
MX2023002008A (es) 2023-06-20
EP4196092A1 (en) 2023-06-21
BR112023002932A2 (pt) 2023-04-25
AU2021329309A1 (en) 2023-04-27
US20230279428A1 (en) 2023-09-07
US11149286B1 (en) 2021-10-19
ZA202303601B (en) 2023-10-25
WO2022040204A1 (en) 2022-02-24
CA3189832A1 (en) 2022-02-24
KR20230079359A (ko) 2023-06-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2023538085A (ja) アデノウイルスベクター及びアデノウイルスベクターの使用方法
US20220305111A1 (en) Immunobiological agent for inducing specific immunity against severe acute respiratory syndrome virus sars-cov-2
JP6898024B2 (ja) ヘンドラ及びニパウイルスｇ糖タンパク質免疫原性組成物
KR100898648B1 (ko) 보조제로서 콜레라 홀로톡신의 돌연변이체 형태
US20240123053A1 (en) Coronavirus vaccine through nasal immunization
Rice et al. A next generation bivalent human Ad5 COVID-19 vaccine delivering both spike and nucleocapsid antigens elicits Th1 dominant CD4+, CD8+ T-cell and neutralizing antibody responses
TW202146427A (zh) 用於預防冠狀病毒疾病的疫苗組合物
WO2023023940A1 (zh) 一种诱导广谱抗冠状病毒的t细胞疫苗免疫原及其应用
KR20150058435A (ko) 염색체 재조합공학에 기반한 다기능 경구 백신
JP4653934B2 (ja) バクテリオファージによって仲介される免疫化方法
EP4196158A1 (en) Salmonella vaccine for the treatment of coronavirus
TW202206598A (zh) 對抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２之疫苗及其製品
US20100322957A1 (en) Secretion-related bacterial proteins for nlrc4 stimulation
TW201718001A (zh) 豬物種中增強之免疫反應
US20230310585A1 (en) Vaccine for viral pathogens
CN115698295A (zh) 一种疫苗试剂和接种方法
Wang et al. Antigen engineering can play a critical role in the protective immunity elicited by Yersinia pestis DNA vaccines
JP2015515486A (ja) 抗原および抗原の組み合わせ
RU2709659C1 (ru) Иммунобиологическое средство и способ его использования для индукции специфического иммунитета к вирусу ближневосточного респираторного синдрома (варианты)
CA3184406A1 (en) A dna plasmid sars-coronavirus-2/covid-19 vaccine
Summers et al. Jaagsiekte sheep retrovirus-specific immune responses induced by vaccination: a comparison of immunisation strategies
Dong et al. Construction and evaluation of novel plasmid DNA encoding somatostatin fused to a tissue plasminogen activator (tPA) in mice
JP2021506833A (ja) 豚をアクチノバシラス・プルロニューモニエに対して防御するためのワクチン
Zhao et al. A DNA vaccine (EG95-PT1/2/3-IL2) encoding multi-epitope antigen and IL-2 provokes efficient and long-term immunity to echinococcosis
US20240016916A1 (en) Bacterial outer membrane vesicles carrying coronavirus polypeptides, method of preparation, compositions and use thereof