JP2023537958A - Ｂｃｍａと結合する単一可変ドメイン及び抗原結合分子 - Google Patents

Ｂｃｍａと結合する単一可変ドメイン及び抗原結合分子 Download PDF

Info

Publication number
JP2023537958A
JP2023537958A JP2023509554A JP2023509554A JP2023537958A JP 2023537958 A JP2023537958 A JP 2023537958A JP 2023509554 A JP2023509554 A JP 2023509554A JP 2023509554 A JP2023509554 A JP 2023509554A JP 2023537958 A JP2023537958 A JP 2023537958A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
amino acid
seq
single variable
variable domain
acid sequence
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2023509554A
Other languages
English (en)
Inventor
子 朋 甄
美 娟 謝
秀 貞 杜
毅 敏 馬
兵 張
同 杰 徐
喜 全 張
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co Ltd
Original Assignee
Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co Ltd filed Critical Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co Ltd
Publication of JP2023537958A publication Critical patent/JP2023537958A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/22—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from camelids, e.g. camel, llama or dromedary
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/72—Increased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Abstract

本発明は、ＢＣＭＡに結合する免疫グロブリンの単一可変ドメイン及び抗原結合分子を提供する。具体的には、免疫グロブリン単一可変ドメイン及び抗原結合分子、それらをコードする核酸、該核酸を含むベクター、該ベクターを含む細胞、それらを含む医薬組成物、及びそれらの治療的使用が含まれる。

Description

技術分野
本発明は、抗原結合分子に関し、特にＢＣＭＡと結合する単一可変ドメイン及び抗原結合分子に関する。
背景技術
Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１７（ＴＮＦＲＳ１７）とも言われ、人体のＴＮＦＲＳＦ１７遺伝子によってコードされるタンパク質である。
ＢＡＦＦ、ＡＰＲＩＬは、ＢＣＭＡのリガンドであり、その中のＢＡＦＦ（ＢＬｙＳ、ＴＡＬＬ－１、ＴＨＡＮＫ、ｚＴＮＦ４、ＴＮＦＳＦ２０、Ｄ８Ｅｒｔｄ３８７ｅとも言われる）は、ＢＣＭＡの高親和性リガンドであり、ＡＰＲＩＬ（増殖誘発リガンド、ＴＮＦＳＦ１３、ＴＡＬＬ－２、ＴＲＤＬ－１とも言われる）は、ＢＣＭＡの低親和性リガンドである。そして、ＢＡＦＦ、ＡＰＲＩＬは、さらに腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーメンバーＢ細胞活性化因子受容体（Ｂ－ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ＢＡＦＦ－Ｒ）、膜貫通活性化剤及びカルシウム調整シクロパンリガンド相互作用分子（ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ａｎｄ ｃａｌｃｉｕｍ ｍｏｄｕｌａｔｏｒ ａｎｄ ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ ｌｉｇａｎｄ ｉｎｔｅｒａｃｔｏｒ；ＴＡＣＩ）のリガンドである。ＢＣＭＡは、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＴＡＣＩと一緒にＢ細胞の増殖、生存、成熟、及び分化を調節する。
多発性骨髄腫は、悪性乳管細胞疾患であり、多発性骨髄腫細胞において、ＢＣＭＡの発現レベルが大幅に増加している。ＢＣＭＡは多発性骨髄腫に対する免疫療法剤のための適切な腫瘍抗原標的であり得る。ＢＣＭＡに結合する抗体などの免疫治療薬は、ＢＣＭＡとその天然リガンドであるＢＡＦＦ又は／及びＡＰＲＩＬとの結合を阻害することができる。潜在的な治療標的として、ＢＣＭＡを標的とするいくつかの抗体が開発されたが、それらはまだ限られており、より多くの選択肢が必要である。
ラクダ科動物の体内のＩｇＧ抗体は、従来の軽鎖と重鎖を含む４鎖構造抗体ＩｇＧ１に加え、さらに軽鎖を含まず重鎖のみの抗体（ＨｃＡｂ）ＩｇＧ２とＩｇＧ３が天然に存在している。重鎖のみの抗体中の単一の可変領域ドメイン（ＶＨＨ又は単一可変ドメイン）が、抗原に特異的な結合の特性を有し、且つ抗原に対して高い親和性を有し、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）と言われる。その独自性に基づいて、従来のｓｃＦｖ、Ｆａｂのような抗体フラグメントよりも、ＶＨＨドメインを単独で、又はより大きな抗原結合分子の一部として使用することは、いくつかの顕著な利点を有し、例えば、単一ドメインだけで高親和性で抗原を特異的に結合し、容易に多価及び多重特異性形式に改造することができ、ＶＨＨドメインは高度に可溶かつ凝集傾向がなく、分子が小さくて高い組織透過性を示し、単一ドメイン抗体は軽鎖とペアリングする必要がない、重鎖ミスマッチの問題は、二重特異性抗体又は多重特異性抗体を構成する際には存在しないなどがある。
発明の概要
本発明は、ＢＣＭＡと結合する単一可変ドメイン及び抗原結合分子を提供する。本発明は、係る単一可変ドメイン及び抗原結合分子をコードする、関係なヌクレオチド、ベクター、細胞、組成物、構築方法及び使用をさらに提供する。
一面において、本発明は、ＢＣＭＡと結合する、分離された単一可変ドメインを提供する。前記単一可変ドメインには、以下から選択されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、１０及び１３から選択されるアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するＣＤＲ１；
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８、１１及び１４から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するＣＤＲ２；及び
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９、１２及び１５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するＣＤＲ３。
いくつかの実施形態では、前記単一可変ドメインには、以下のいずれか１つのグループから選択されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む
（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；
（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；或いは
（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３。
いくつかの実施形態では、前記単一可変ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、１８又は２０の配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のいずれか１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一面において、本発明は、分離された単一可変ドメインを提供する。前記単一可変ドメインには、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、１８又は２０のアミノ酸配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
一面において、本発明は、分離された単一可変ドメインを提供する。前記単一可変ドメインには、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、１８又は２０のアミノ酸配列を含む。
一面において、ＢＣＭＡ細胞外領域に結合し、結合部位が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６で示されるアミノ酸配列を有するＢＣＭＡ細胞外領域のＳｅｒ９～Ｐｒｏ２３の位置の１つ以上のアミノ酸にある、分離された単一可変ドメインを提供する。ここに記載された位置は、ＢＣＭＡ細胞外領域の最初のアミノ酸（位置１）から順に番号付けされている。
一面において、本発明は、本明細書のいずれかの実施形態で説明された単一可変ドメインに対して同じエピトープを結合する、分離された単一可変ドメインを提供する。
一面において、本発明は、ＢＣＭＡとの結合に対して、本明細書のいずれかの実施形態に記載された単一可変ドメインと競合する、分離された単一可変ドメインを提供する。
いくつかの実施形態では、本明細書の上記単一可変ドメインは、ラクダ科動物のもの又はヒト化したものである。いくつかの実施形態では、本明細書の上記単一可変ドメインは、ＶＨＨであり、好ましくは、ラクダ科動物のＶＨＨ又はヒト化したＶＨＨである。
一面において、本発明は、本明細書に記載した単一可変ドメインの使用を提供する。前記の使用には、抗体を好ましい例とする抗原結合分子、単一特異性抗体、多重特異的抗体又は免疫コンジュゲートを構築するための使用が含まれる。
一面において、本発明は、分離された抗原結合分子を提供する。それがＢＣＭＡに結合し、且つ少なくとも１つの本明細書に記載した単一可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、前記抗原結合分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２、２４又は２６で示されるアミノ酸配列を含む。
一面において、本発明は、活性成分及び薬学的に許容されるベクターを含む、組成物を提供する。その有効成分は、本明細書に記載した単一可変ドメイン又は本明細書に記載した抗原結合分子である。
一面において、本発明は、本明細書に記載の単一可変ドメインまたは抗原結合分子をコードする単離された核酸を提供する。
一面において、本発明は、本明細書に記載の単離された核酸を含むベクターを提供する。
一面において、本発明は、本明細書に記載のベクターを含む宿主細胞を提供する。
一面において、試料中のＢＣＭＡを検出または測定する方法であって、試料を、本明細書に記載の単一可変ドメインまたは抗原結合分子と接触させ、結合複合体を検出または測定することを含む方法を提供する。
一面において、本発明は、前記宿主細胞を培養し、発現された単一可変ドメインを単離することを含み、ここで、ベクターは発現ベクターであり、前記宿主細胞は前記単一可変ドメインをコードする核酸を含む、本明細書に記載の単一可変ドメインを調製する方法を提供する。
一面において、本発明は、前記宿主細胞を培養し、発現された抗原結合分子を単離することを含み、ここで、ベクターは発現ベクターであり、前記宿主細胞が前記抗原結合分子をコードする核酸を含む、前記抗原結合分子を調製する方法を提供する。
別の態様では、本発明は、ＢＣＭＡを発現する腫瘍に罹患している被験体を処置する方法であって、該被験体に、治療上有効量の前記単一可変ドメイン、前記抗原結合分子、または前記組成物を投与することを含む方法を提供する。
別の態様では、細胞内のＢＣＭＡシグナル伝達を阻害、低減またはブロックする方法であって、有効量の前記単一可変ドメイン、前記抗原結合分子または前記組成物を細胞に投与することを含む方法。
別の態様では、本発明は、ＢＣＭＡを発現する腫瘍細胞を殺傷する、または増殖を阻害する方法であって、腫瘍細胞を、前記単一可変ドメイン、前記抗原結合分子または前記組成物と接触させることを含む、方法を提供する。
別の態様では、本発明は、自己免疫疾患に罹患している被験体を治療する方法であって、治療上有効量の本明細書に記載の単一可変ドメイン、本明細書に記載の抗原結合分子、または本明細書に記載の組成物を被験体に投与することを含む方法を提供する。
図１は、ＥＬＩＳＡ測定による抗ヒトＢＣＭＡ ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体と抗原との結合曲線である。 図２Ａは、フローサイトメトリー測定による抗ヒトＢＣＭＡ ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体とＣＨＯ－ｈＢＣＭＡ細胞の結合曲線である。 図２Ｂは、フローサイトメトリー測定による抗ヒトＢＣＭＡ ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体とＵ２６６細胞の結合曲線である。 図２Ｃは、フローサイトメトリー測定による抗ヒトＢＣＭＡ ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体とＲＰＭＩ８２２６細胞の結合曲線である。 図２Ｄは、フローサイトメトリー測定による抗ヒトＢＣＭＡ ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体とＨＵＶＥＣ細胞の結合曲線である。 図３は、ヒトＢＣＭＡ ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体とリガンドＡＰＲＩＬの競合的ＥＬＩＳＡ測定結果である。 図４Ａは、ヒトＢＣＭＡの細胞外領域のアミノ酸配列である。 図４Ｂは、ヒトＢＣＭＡの細胞外領域の結晶構造である。 図４Ｃは、１Ａ５、１Ｂ５及び１Ｂ１１のエピトープ関係である。
発明を実施するための形態
用語
「抗原結合分子」という用語は、最も広い意味で抗原決定基と特異的に結合する分子を指す。抗原結合分子のいくつかの代表例は、抗体、融合タンパク質、抗体コンジュゲートである。
「免疫グロブリン」という用語は、天然抗体構造を持つタンパク質を指す。例えば、ヒトＩｇＧ類の免疫グロブリンが約１５０，０００のダルトンのエイリアンバスクリンタンパク質であり、ジスルフィド結合で接続された２つの軽鎖と２つの重鎖で構成されている。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖には、重鎖可変領域（ＶＨ）があり、その後、ヒンジ領域（ＨＲ）と３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）は、重鎖定常領域とも言われる。ＩｇＥ免疫グロブリンの場合、重鎖にはさらにＣＨ４ドメインを有する。従って、免疫グロブリン重鎖は、Ｎ末端からＣ末端の方向まで以下で構成されるポリペプチドである：ＶＨ－ＣＨ１～ＨＲ－ＣＨ２－ＣＨ３～（ＣＨ４）。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖には、軽鎖可変領域（ＶＨ）があり、その後、定常軽鎖ドメインは、軽鎖定常領域（ＣＬ）とも言われる。従って、免疫グロブリン軽鎖は、Ｎ末端からＣ末端の方向まで以下で構成されるポリペプチドである：ＶＬ－ＣＬ。ヒト免疫グロブリンは、基本的に免疫グロブリンヒンジ領域で接続された２つのＦａｂ及びＦｃドメインで構成されている。
「抗体」という用語は、最も広範な意味で使用され、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異的抗体（例えば二重特異性抗体、三重特異性抗体）、及び抗体断片の様々な抗体構造を含むが、希望の抗原結合活性を示す限り、これらに限定されない。
「可変ドメイン」又は「可変領域」という用語は、当該抗体と抗原との結合に関与する抗体のドメインを指す。天然抗体の各可変ドメインは、基本的に４つの「フレーム領域」と３つの相補性決定領域で構成されている。４つの「フレーム領域」は、本分野及び下文において、それぞれが「フレーム領域１」又は「ＦＲ１」、「フレーム領域２」又は「ＦＲ２」、「フレーム領域３」又は「ＦＲ３」、及び「フレーム領域４」又は「ＦＲ４」と呼ばれる；前記フレーム領域は、本分野及び下文において、それぞれが「相補性決定領域１」又は「ＣＤＲ１」、「相補性決定領域２」又は「ＣＤＲ２」、及び「相補性決定領域３」又は「ＣＤＲ３」と呼ばれる３つの「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」で分離されている。従って、可変ドメインの一般的な構造又は配列は、次のように表現できる：ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４。可変ドメインでは、抗原結合部位により抗原に対する抗体の特異性を与える。
「単一可変ドメイン」という用語は、他の可変ドメインとペアリングせずに抗原エピトープを特異的に結合できる可変ドメインを指す。単一可変ドメインの抗原結合部位は、３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）によって形成され、単一のドメインに存在する。ある場合には、単一の抗原結合ユニット（つまり、基本的に単一可変ドメインで構成される機能的抗原結合ユニットで、このように、単一抗原結合ドメインは、機能性抗原結合ユニットを形成するために別の可変ドメインと相互作用する必要はない）を形成できる限り、単一可変ドメインは重鎖可変ドメイン（例えばＶＨ）又はその適切なフラグメントであり得る。単一可変ドメインの別の代表例は、ラクダ科の「ＶＨＨドメイン」である（又は「ＶＨＨ」又は「ＶＨＨ」と簡単に言う）。
「ＶＨＨドメイン」は、ＶＨＨ、ＶＨＨ、ＶＨＨドメイン又は単一ドメイン抗体とも言われ、最初は「重鎖抗体のみ」（つまり、「軽鎖欠如抗体」）の抗原と結合する可変ドメインとして説明されていた。「ＶＨＨドメイン」という用語を使用して、これらの可変ドメインを、従来の４鎖抗体に存在する重鎖可変ドメイン（本明細書では、「ＶＨドメイン」又は「ＶＨ」と呼ばれる） と区別するため、及び従来の４鎖抗体に存在する軽鎖可変ドメインと区別するため（本明細書では、と呼ばれる「ＶＬドメイン」又は「ＶＬ」）である。ＶＨＨドメインは他の抗原結合ドメインなしで特異的にエピトープに結合する（これは、従来の４鎖抗体のＶＨ又はＶＬドメインとは異なる。４鎖抗体では、ＶＬドメインとＶＨドメインともにエピトープを識別する。）。ＶＨＨドメインは、単一のドメインによって形成される小さな安定化、効率的な抗原認識ユニットである。
「ＣＤＲ」（相補性決定領域）は、「超可変領域（ＨＶＲ）」とも言われ、通常、配列上に高度に可変及び／又は構造化された環を形成する個々抗体可変領域を指す。天然の４鎖抗体には通常、６つのＣＤＲが含まれ、３つは重鎖可変領域にあり（重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２及び重鎖ＣＤＲ３）、３つは軽鎖可変領域にある（軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２及び軽鎖ＣＤＲ３）。重鎖抗体又は単一可変ドメインのみが通常３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１（又はＨＶＲ１）、ＣＤＲ２（又はＨＶＲ２）、及びＣＤＲ３（又はＨＶＲ３））を有する。ＣＤＲ３は、３つのＣＤＲの中で最も多様なものであり、抗体に優れた特異性を与える上でユニークな役割を果たすと考えられている。
現在、ＣＤＲを定義する方法はいくつかある。中では、Ｋａｂａｔの定義は、配列の可変性に基づいてＣＤＲを分割し、最も一般的に使用されている（Ｅｌｖｉｎ Ａ．Ｋａｂａｔ、ｅｔ ａｌ、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１））；一方、Ｃｈｏｔｈｉａの定義は構造リングの位置に基づいている（Ｃｙｒｕｓ Ｃｈｏｔｈｉａ、ｅｔ ａｌ、Ｃａｎｏｎｉｃａｌ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ Ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１～９１７（１９８７））。ＡｂＭ定義は、Ｋａｂａｔの定義とＣｈｏｔｈｉａの定義の間のトレードオフであり、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアで使用されている。「接触（ｃｏｎｔａｃｔ）」では、利用可能な複雑な結晶構造の分析に基づいて、ＣＤＲを定義しているものである。これらのＣＤＲの各残基は、以下の表Ｓ１に記載されている。
表Ｓ１ ＣＤＲの分割
Figure 2023537958000001
本明細書の特定のコンテキストの下で、「相補性決定領域」、「ＣＤＲ」、又は「ＨＶＲ」は、Ｋａｂａｔによって定義されたＣＤＲのことを指す（Ｅｌｖｉｎ Ａ．Ｋａｂａｔ、ｅｔ ａｌ、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１））。当業者は、抗体のアミノ酸配列の可変領域に基づいて任意に定義されたＣＤＲに含まれるアミノ酸残基を通常的に決定でき、他の定義された（例えばＣｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭによる定義など）ＣＤＲについても、本発明の範囲にある。
単一可変ドメイン（例えばＶＨＨ）のアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔら（Ｅｌｖｉｎ Ａ．Ｋａｂａｔ、ｅｔ ａｌ、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１））によって与えられたＶＨユニバーサル番号付けシステムによる行われる。例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎなどによる論文（Ｌ Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ、ｅｔ ａｌ、Ｓｉｎｇｌｅ ｄｏｍａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｃａｍｅｌ ＶＨ ａｎｄ ｃａｍｅｌｉｓｅｄ ｈｕｍａｎ ＶＨ ｄｏｍａｉｎｓ、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．（１９９９））でラクダ科動物のＶＨＨドメインに適用されていた。この番号付けにしたがって、ＶＨＨのＦＲ１には、位置１～３０のアミノ酸残基が含まれ、ＶＨＨのＣＤＲ１には、位置３１～３５のアミノ酸残基が含まれ、ＶＨＨのＦＲ２には、位置３６～４９のアミノ酸が含まれ、ＶＨＨのＣＤＲ２には、位置５０－６５のアミノ酸残基が含まれ、ＶＨＨのＦＲ３には、位置６６～９４のアミノ酸残基が含まれ、ＶＨＨのＣＤＲ３には、位置９５～１０２のアミノ酸残基が含まれ、ＶＨＨのＦＲ４には、位置１０３～１１３のアミノ酸残基が含まれる。この点で、注意すべきことは、本分野でよく知られているＶＨ及びＶＨＨのように、各ＣＤＲでアミノ酸残基の総数を変更でき、そしてＫａｂａｔ番号に示されているアミノ酸残基の総数に対応できない場合がある（つまり、実際の配列において、Ｋａｂａｔ番号に基づく１つ以上の位置が占有されていなくてもよい、又は実際の配列がＫａｂａｔ番号によって許容される数よりも多くのアミノ酸残基を含んでいてもよい）。
「Ｋａｂａｔの可変ドメイン残基番号」又は「Ｋａｂａｔのアミノ酸の位置番号」及びその変化とは、Ｋａｂａｔらによる抗体の重鎖可変ドメイン又は軽鎖可変ドメインを番号付けするシステムを意味する（Ｅｌｖｉｎ Ａ．Ｋａｂａｔ、ｅｔ ａｌ、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１））。この番号付けシステムを使用して、実際の線形アミノ酸配列には、可変ドメインのＦＲ又はＣＤＲの短縮又は挿入に対応する、より少ない又は追加のアミノ酸を含むことができる。例えば、重鎖可変ドメインには、ＣＤＲ２アミノ酸残基５２番目の後の単一のアミノ酸インサート（Ｋａｂａｔによるアミノ酸残基５２ａ）及び重鎖ＦＲアミノ酸残基８２番目の後の単一の挿入されたアミノ酸残基（例えばＫａｂａｔによるアミノ酸残基８２ａ、８２ｂ及び８２ｃなど）が含まれる。規定の抗体のアミノ酸残基のＫａｂａｔ番号は、抗体配列を「標準的な」Ｋａｂａｔ番号の相同領域配列と照合することにより決定することができる。
用語「フレーム領域」又は「ＦＲ」残基は、本明細書で定義されるＣＤＲ残基以外の可変ドメインのアミノ酸残基である。
「ヒト共通フレームワーク領域」または「受容体ヒトフレームワーク」という用語は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク領域の配列の中で最もよく出現するアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループから得られる。一般に、配列のサブグループはＫａｂａｔらによるＳｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１）におけるサブグループである。例として、ＶＬについては、サブグループはＫａｂａｔら（出典は同じ）が述べたサブグループκＩ、κＩＩ、κＩＩＩまたはκＩＶであってもよい。また、ＶＨについては、サブグループは、Ｋａｂａｔらが述べたサブグループＩ、サブグループＩＩまたはサブグループＩＩＩであってもよい。或いは、ヒト共通フレーム領域が上文の特定的残基から誘導され、例えば、ドナーフレーム領域配列を様々なヒトフレーム領域配列の集合と照合することにより、ヒトフレーム領域残基とドナーフレーム領域との相同性に基づいてヒトフレーム領域残基を選択する場合、ヒト共通フレーム領域から「誘導された」受容体ヒトフレームは、同じアミノ酸配列を含んでいてもよい、又はアミノ酸配列の既存の変化を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、既存のアミノ酸変化の数は１０以下であり、９ 以下であり、８以下であり、７以下であり、６以下であり、５以下であり、４以下であり、３以下であり又は２以下である。
「Ｆｃドメイン」又は「Ｆｃ」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用され、少なくともいくつかの定常領域を含む。この用語には、天然の配列Ｆｃ及び変異体Ｆｃが含まれる。ＦｃのＣ末端リシン（ＥＵ番号付けシステムに従うＬｙｓ４４７）は存在するか、存在しない可能性がある。
「ＥＣ５０」という用語は、有効濃度であり、最大応答の５０％における抗原結合分子の濃度を意味する。「ＩＣ５０」という用語は、抗原結合分子の５０％の最大応答を抑制する濃度を意味する。ＥＣ５０とＩＣ５０の両方は、ＥＬＩＳＡ又はＦＡＣＳ分析、又は当技術分野で知られている他の方法によって測定することができる。
「ＫＤ」という用語は、本明細書で使用される場合、平衡解離定数を指し、モル濃度（Ｍ）で表される。抗原結合分子のＫＤ値は、当業者に公知の方法を用いて測定することができる。抗原結合分子ＫＤを測定する方法は、例えばＢｉａｃｏｒｅのようなバイオセンサシステムを用いるなど、表面プラズモン共鳴（ｓｕｒｆａｃｅ ｐｌａｓｍｏｎ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ）を用いる。
「治療」という用語は、統計学的に有意的に疾患（例えば、疾病）、疾患の症状を治療、治癒、軽減、緩和、変化、修復、救済、改善、改良、又は影響を与えるため、又は症状、合併症、生化学的指標の発作を予防又は遅らせるため、又はその他の方法で疾患、病気、又は病状のさらなる進行を阻止又は抑制するために、処置を使用することを意味する。
用語「治療上有効量」は、治療的及び／又は予防的利益を被験体に提供するために必要な抗原結合性分子又は組成物又は他の投与物の量である。
「被験者」という用語は、任意のヒト又は非ヒト動物を含む。「非ヒト動物」という用語には、すべての脊椎動物、例えば非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、馬、牛、ニワトリ、両生類、爬虫類など哺乳類や非哺乳類動物を含む。好ましくは、本発明の被験者はヒトである。「患者」又は「被験者」という用語は、明示されていない限り、交換して使用されてもよい。
「特異的な結合」又は「特異的結合」という用語は、結合が抗原に対して選択的であり、不必要又は非特異的な相互作用から区別できることを意味する。特定の抗原決定基に結合する抗原結合分子又は単一可変ドメインの能力は、酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）又は表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術（Ｂｉａｃｏｒｅ装置上での分析）のような当業者によく知られた他の技術によって測定することができる。
「分離された」という用語は、自然環境から分離された標的化合物（例えば、ＶＨＨ、抗原結合分子、抗体、又は核酸）を指す。
「エピトープ」又は交換可能に使用される用語「抗原決定基」という用語は、抗体の相補部位が結合した抗原上の任意の抗原決定基を指す。抗原決定基は、一般に、アミノ酸又は糖側鎖のような分子の化学的に活性な表面基を含み、一般に、特定の三次元構造的特徴及び特定の電荷的特徴を有する。例えば、エピトープは、一般に、「線形」エピトープ又は「コンホメーション」エピトープとすることができる、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個の連続又は非連続のアミノ酸を特徴とする。線状エピトープでは、タンパク質と相互作用分子（例えば、抗体）との間の相互作用のすべての点が、タンパク質の１次アミノ酸配列に沿って線状に存在する。コンホメーションエピトープでは、相互作用の点が互いに離れたタンパク質アミノ酸残基にまたがって存在する。
配列「同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）」という用語は、一致性とも呼ばれる。２つのシーケンス間のパーセンテージ同一性は、シーケンスに共通する同一位置の数の関数である（すなわち、％同一性＝同一位置の数／位置の総数×１００）。ここでは、２つのシーケンスを生成する最適な比較するためいに、導入すべきノッチの数と各ノッチの長さを考慮する必要がある。以下の非限定的な実施形態に示されるように、シーケンスの比較及び２つのシーケンス間のパーセント同一性の決定は、数学的アルゴリズムを使用して行うことができる。Ｅ．Ｍｅｙｅｒｓ及びＷ．Ｍｉｌｌｅｒのアルゴリズムを用いて（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．、４：１１～１７（１９８８））２つのアミノ酸配列間の的パーセント同一性を測定することができ、このアルゴリズムは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれており、ＰＡＭ１２０残基の重み表を使用して、ノッチ長のペナルティが１２、ノッチペナルティが４であることが示されている。さらに、両アミノ酸配列のパーセント同一性は、ＧＣＧパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈのアルゴリズム（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８４－４５３（１９７０））を使用して決定することができ、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２マトリックス又はＰＡＭ２５０マトリックスを使用し、１６、１４、１２、１０、８、６又は４のノッチ重み、１、２、３、４、５又は６の長さ重みを有する。
本明細書で使用されるように、「約」は、特定の値がどのように検査又は測定されるか、すなわち測定システムの制限に部分的に依存して、当業者が特定の値に対して許容できると判断した誤差の範囲内であることを意味する。例えば、「約」は、当業者の慣行に従った標準偏差の１倍以内又はそれを超える１倍以内を表すことができる。代替的に、「約」は、例えば、与えられた特定の数値範囲±２％の範囲、±１％の範囲、又は±０．５％の範囲内で変動するような、多くて５％（すなわち±５％）の範囲を表すことができる。さらに、特に生物学的システム又は方法に関しては、この用語は、１桁以上、又はある値の５倍以上を表すことができる。本出願又は特許請求の範囲に特定の値が記載されている場合は、別段の記載がない限り、「約」の意味は、特定の値の許容可能な誤差の範囲内にあるものとみなされる。
本明細書では、別段の記載がない限り、用語「含む」又はその同等物（例えば、含有、含むなど）は、明示された要素、ステップ又は構成要素を含むがこれに限定されるものではなく、明示されていない要素、ステップ又は構成要素に対してオープンであることを意味するオープン用語である。
本明細書では、別段の記載がない限り、単数の用語は複数の参照をカバーし、その逆も同様である。
すべての特許、特許出願及び他の特定された出版物は、説明及び開示の目的のために、ここにおいて明示的に本明細書に引用によって組み込まれる。これらの出版物は、その公開が出願の出願日より前であることのみを理由として提供される。書類の日付又は書類の内容に関するすべての表示は、出願人が入手可能な情報に基づくものであり、書類の日付又は書類の内容の正当性に関するいかなる承認も構成しないものとする。さらに、いずれの国においても、本明細書におけるこれらの出版物へのいかなる引用も、その出版物がその分野の公知の常識の一部であるという認識を構成するものではない。本発明の様々な態様について、以下のセクションでさらに詳細に説明する。
単一可変ドメイン
本発明の一態様は、ＢＣＭＡ（例えばヒトＢＣＭＡ）に結合された分離された単一変動ドメインを提供する。単一可変ドメインは、ＢＣＭＡ標的薬の開発又は薬物構造の構築のためのより利用可能な選択を提供する。単一可変ドメインは、ヒトＢＣＭＡに対して良好な親和性を有し、増殖誘導リガンドＡＰＲＩＬのＢＣＭＡへの結合をブロックすることができるなど、多くの望ましい治療特性を有する。特別に、いくつかの実施形態では、単一可変ドメインはヒトＴＡＣＩ及びＢＡＦＦＲタンパク質と結合せず、特異性を示す。
いくつかの実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６で示される単一可変ドメインの１つ、２つ、又は３つのＣＤＲのすべてを含むＢＣＭＡと結合する単一可変ドメインを提供する。ある特定の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６で示される単一可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含むＢＣＭＡと結合する単一可変ドメインを提供する。いくつかの実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８で示される単一可変ドメインの１つ、２つ、又は３つのＣＤＲのすべてを含むＢＣＭＡと結合する単一可変ドメインを提供する。ある特定の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８で示される単一可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含むＢＣＭＡと結合する単一可変ドメインを提供する。いくつかの実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０で示される単一可変ドメインの１つ、２つ、又は３つのＣＤＲのすべてを含むＢＣＭＡと結合する単一可変ドメインを提供する。ある特定の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０で示される単一可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含むＢＣＭＡと結合する単一可変ドメインを提供する。いくつかの実施形態では、単一可変ドメインはラクダ科動物のものである。いくつかの実施形態では、単一可変ドメインはヒト化されている。いくつかの実施形態では、単一可変ドメインは受容体ヒトフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、以下の少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は全ての３つのＣＤＲから選択されるＣＤＲを含み、ＢＣＭＡと結合する単一可変ドメインが提供される：（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ７、１０、及び１３から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ８、１１、及び１４から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ９、１２、及び１５から選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３。いくつかの実施形態では、単一可変ドメインはラクダ科動物のものである。いくつかの実施形態では、単一可変ドメインはヒト化されている。いくつかの実施形態では、単一可変ドメインは受容体ヒトフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含むＢＣＭＡと結合する単一可変ドメインを提供する。前記ＣＤＲには、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、１０及び１３から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％のいずれか１つの配列同一性を有するＣＤＲ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８、１１及び１４から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％のいずれか１つの配列同一性を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９、１２及び１５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％のいずれか１つの配列同一性を有するＣＤＲ３。いくつかの具体的な実施形態では、３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含むＢＣＭＡと結合する単一可変ドメインを提供する。前記ＣＤＲには、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列と少なくとも約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％のいずれか１つの配列同一性を有するＣＤＲ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８のアミノ酸配列と少なくとも約 ８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％のいずれか１つの配列同一性を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のアミノ酸配列と少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％のいずれか１つの配列同一性を有するＣＤＲ３。いくつかの具体的な実施形態では、３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含むＢＣＭＡと結合する単一可変ドメインを提供する。前記ＣＤＲには、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のアミノ酸配列と少なくとも約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％のいずれか１つの配列同一性を有するＣＤＲ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のアミノ酸配列と少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％のいずれか１つの配列同一性を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸配列と少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％のいずれか１つの配列同一性を有するＣＤＲ３。いくつかの具体的な実施形態では、３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含むＢＣＭＡと結合する単一可変ドメインを提供する。前記ＣＤＲには、（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列と少なくとも約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％のいずれか１つの配列同一性を有するＣＤＲ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列と少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％のいずれか１つの配列同一性を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸配列と少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％のいずれか１つの配列同一性を有するＣＤＲ３。いくつかの実施形態では、少なくとも約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％のいずれか１つの配列同一性を有するＣＤＲは、参照配列に対して置換（例えば、保守的置換）、挿入、又は欠失を含むが、この配列を含む単一可変ドメインは、ＢＣＭＡに結合する能力を保持する。いくつかの実施形態では、３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含む単一可変ドメインを提供し、前記ＣＤＲは、下記の（ａ）～（ｃ）を含む；（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、１０及び１３から選択されるアミノ酸配列と比較して、約１つまたは約２つのいずれか１つのアミノ酸置換（例えば、保守的な交換）、挿入、又は欠失を有するＣＤＲ１；（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８、１１及び１４から選択されるアミノ酸配列と比較して、約１つ、約２つまたは約３つのいずれか１つのアミノ酸置換（例えば、保守的な交換）、挿入又は欠失を有するＣＤＲ２；及び（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９、１２及び１５から選択されるアミノ酸配列と比較して、約１つ、約２つまたは約３つのいずれか１つのアミノ酸置換（例えば、保守的な交換）、挿入又は欠失を有するＣＤＲ３。いくつかの実施形態では、単一可変ドメインは、成熟した親和性である。いくつかの実施形態では、単一可変ドメインはラクダ科動物のものである。いくつかの実施形態では、単一可変ドメインはヒト化されている。いくつかの実施形態では、単一可変ドメインは受容体ヒトフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含むＢＣＭＡと結合する単一可変ドメインを提供する。前記ＣＤＲには、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含むＢＣＭＡと結合する単一可変ドメインを提供する。前記ＣＤＲには、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含むＢＣＭＡと結合する単一可変ドメインを提供する。前記ＣＤＲには、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、単一可変ドメインはラクダ科動物のものである。いくつかの実施形態では、単一可変ドメインはヒト化されている。いくつかの実施形態では、単一可変ドメインは受容体ヒトフレームワークを含む。
いくつかの実施形態では、単一可変ドメイン（上記の実施形態のいずれかを含み、例えば上記特定のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３を含む単一可変ドメイン）は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、１８及び２０から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％のいずれか１つの配列同一性を有するＶＨＨを含む。いくつかの具体的な実施形態では、単一可変ドメイン（上記の実施形態のいずれかを含み、例えば上記特定のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３を含む単一可変ドメイン）は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のアミノ酸配列と少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％のいずれか１つの配列同一性を有するＶＨＨを含む。いくつかの具体的な実施形態では、単一可変ドメイン（上記の実施形態のいずれかを含み、例えば上記特定のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３を含む単一可変ドメイン）は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８のアミノ酸配列と少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％のいずれか１つの配列同一性を有するＶＨＨを含む。いくつかの具体的な実施形態では、単一可変ドメイン（上記の実施形態のいずれかを含み、例えば上記特定のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３を含む単一可変ドメイン）は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０のアミノ酸配列と少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％のいずれか１つの配列同一性を有するＶＨＨドメインを含む。いくつかのより具体的な実施形態では、単一可変ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のアミノ酸配列と少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％のいずれか１つの配列同一性を有するＶＨＨを含み、そして、ＶＨＨは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかのより具体的な実施形態では、単一可変ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８のアミノ酸配列と少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％のいずれか１つの配列同一性を有するＶＨＨを含み、そして、ＶＨＨは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかのより具体的な実施形態では、単一可変ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０のアミノ酸配列と少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約１００％のいずれか１つの配列同一性を有するＶＨＨを含み、そして、ＶＨＨは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％または約９９％のいずれか１つの配列同一性を有する的ＶＨＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば、保守的置換）、挿入、又は欠失を含むが、この配列を含む単一可変ドメインは、ＢＣＭＡに結合する能力を保持する。いくつかの実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、２１、２３及び２５からなる群から選択されるアミノ酸配列において、合計１～１８、１～１６、１～１４、１～１２、１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３又は１～２のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失される。いくつかの実施形態では、置換、挿入又は欠失は、ＣＤＲ以外の区域で（即ち、ＦＲで）発生する。いくつかの実施形態では、置換、挿入又は欠失は、ＣＤＲ領域で発生し、例えばＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３のうちの１つ、２つ又は３つで発生する。いくつかの実施形態では、置換、挿入又は欠失は、ＣＤＲ領域及び非ＣＤＲ領域で発生する。任意的に、単一可変ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１９、２１、２３及び２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、この配列の翻訳後修飾を含む。
いくつかの実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、１８又は２０のアミノ酸配列を有するＶＨＨを含む分離された単一可変ドメインを提供する。
いくつかの実施形態では、前記単一可変ドメイン（上記の実施形態のいずれかを含み、例えば上記特定のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３を含む単一可変ドメイン）はＶＨＨである。基本的に、ＶＨＨは、Ｎ－末端からＣ－末端まで以下の構造：ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４を有し、その中で、ＦＲ１～ＦＲ４はそれぞれフレーム領域１～４を指し、ＣＤＲ１～ＣＤＲ３は相補性決定領域１～３を指す。
いくつかの実施形態では、前記単一可変ドメイン（上記の実施形態のいずれかを含み、例えば上記特定のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３を含む単一可変ドメイン）はヒト化したＶＨＨである。非ヒト由来の単一可変ドメインは、ヒトの従来の４本鎖抗体のＶＨドメインの対応する位置に存在する１つ以上のアミノ酸残基で、元の単一可変ドメイン配列のアミノ酸配列中の１つ以上のアミノ酸残基を置換することによって「ヒト化」され得る。ヒト化により免疫原性を低下することが期待できる。
いくつかの実施形態では、上記のいずれかの実施形態による単一の可変ドメインは、以下の特性特徴のうちの１つ又は複数を個別に又は組み合わせて含むことができる
（ｉ）ヒトＢＣＭＡに結合すること；
（ｉｉ）ＡＰＲＩＬとＢＣＭＡとの結合をブロックすること；或いは
（ｉｉｉ）ヒトＴＡＣＩ又は／及びＢＡＦＦＲタンパク質に結合しないこと。
いくつかの実施形態では、前記の単一可変ドメインはヒトＢＣＭＡに結合する。
いくつかの実施形態では、前記の単一可変ドメインは、ＡＰＲＩＬとＢＣＭＡとの結合をブロックする。
いくつかの実施形態では、前記の単一可変ドメインは、ヒトＴＡＣＩ又は／及びＢＡＦＦＲタンパク質に結合せず、良好な特異性を示す。
いくつかの実施形態では、前記の単一可変ドメインは、上記性質特徴（ｉ）－（ｉｉ）の組み合わせを有する。いくつかの実施形態では、前記の単一可変ドメインは、上記の性質特徴（ｉ）－（ｉｉｉ）の組み合わせを有する。
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載した単一可変ドメインのいずれか１つに対して同じエピトープに結合する単一可変ドメインを提供する。いくつかの具体的な実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、１８又は２０のアミノ酸配列を含む単一可変ドメインに対して同じエピトープに結合する単一可変ドメインを提供する。いくつかの実施形態では、前記同じエピトープに結合する単一可変ドメインは、ラクダ科動物のものであるか、又はヒト化されたものである。
当業者に知られている従来技術を用いて、単一の可変ドメインを、同じエピトープとの結合に関して競合的にスクリーニングすることができる。例えば、競合及び交差競合研究は、抗原との結合上、互いに競合するか又は交差競合する単一の可変ドメインを得るために行われ得る。従って、いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載した単一可変ドメインのいずれか１つと競合してＢＣＭＡに結合する単一可変ドメインを提供する。いくつかの具体的な実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、１８又は２０のアミノ酸配列を含む単一可変ドメインと競合的にＢＣＭＡに結合する単一可変ドメインを提供する。ＢＣＭＡとの結合は、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイ、又は当技術分野で知られている他の任意の方法によって測定することができる。いくつかの実施形態では、前記ＢＣＭＡに競合的に結合する単一可変ドメインは、ラクダ科動物のものであるか、又はヒト化されたものである。
本発明は、ＢＣＭＡに結合されたいくつかの例示的な単一可変ドメインを提供する。本明細書で提供される例示的な単一可変ドメインのＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）のアミノ酸配列は、以下の表Ｓ２に示されている。例示的な単一可変ドメインの全長アミノ酸配列は、以下の表Ｓ３に示されている。
表Ｓ２：単一可変ドメインのＣＤＲ配列
Figure 2023537958000002
表Ｓ３：単一可変ドメイン全長配列
Figure 2023537958000003
抗原結合分子
本発明の単一可変ドメインは、任意の所望の抗原結合分子を構築するために使用され、それによって抗原結合分子にＢＣＭＡに標的結合する特性又は他の単一可変ドメインの特性を与えることができる。従って、本発明は、少なくとも１つ（１つ以上）の本発明の単一可変ドメインを含む単離された抗原結合分子を提供する。
いくつかの実施形態では、前記抗原結合分子は、以下のいずれか１つのグループから選択されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む少なくとも１つの単一可変ドメインを含む
（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示されるＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に示されるＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９に示されるＣＤＲ３；
（ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０に示されるＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１に示されるＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２に示されるＣＤＲ３；或いは
（ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３に示されるＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４に示されるＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５に示されるＣＤＲ３。
いくつかの実施形態では、前記単一可変ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、１８又は２０で示されるアミノ酸配列を含む。いくつかのより具体的な実施形態では、前記単一可変ドメインのアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、１８又は２０のとおりである。
抗原結合分子が含む単一可変ドメインは２つ以上である場合に、同一又は異なる単一可変ドメインを選択することができる。
前記した抗原結合分子は、抗体、単一特異性抗体、多重特異的抗体又は免疫コンジュゲートが含まれる。１つの実施形態では、前記した抗原結合分子は、抗体である。１つの具体的な例では、抗体は、単一特異性抗体であり、もう１つの具体的な例では、抗体は、二重特異性抗体である。１つの実施形態では、前記抗体又は免疫コンジュゲートは、免疫グロブリン定常領域を含む。１つより具体的な実施形態では、前記した抗体又は免疫コンジュゲートは、ヒト免疫グロブリンＦｃを含む。好ましくは、前記Ｆｃは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のＦｃである。
いくつかの実施形態では、前記抗原結合分子は、ラクダ科動物のもの、キメラのもの又はヒト化されたものである。
いくつかの実施形態では、上記の実施形態のいずれか１つの抗原結合分子は、独自又は組み合わせで以下の性質特徴の１つ以上を含む
（ｉ）ヒトＢＣＭＡに結合すること；
（ｉｉ）ＡＰＲＩＬとＢＣＭＡとの結合をブロックすること；或いは
（ｉｉｉ）ヒトＴＡＣＩ又は／及びＢＡＦＦＲタンパク質に結合しないこと。
いくつかの実施形態では、前記した抗原結合分子はヒトＢＣＭＡに結合する。いくつかの実施形態では、前記した抗原結合分子は、ヒトＢＣＭＡに対して以下の結合親和性（ＫＤ）を有する：約１Ｅ－１２Ｍから約１Ｅ－０８Ｍ、約１Ｅ－１１Ｍから約１Ｅ－０９Ｍ、または約９．４３Ｅ－１１Ｍから約１．２１Ｅ－１０Ｍの範囲内である。いくつかの実施形態では、前記抗原結合分子は、ヒトＢＣＭＡに対して以下の結合親和性（ＫＤ）を有する：約１Ｅ－０８Ｍ以下であり、約１Ｅ－０９Ｍ以下であり、約４．９６Ｅ－１０Ｍ以下であり、約１．２１Ｅ－１０Ｍ以下であり、又は約９．４３Ｅ－１１Ｍ以下である。いくつかの実施形態では、Ｂｉａｃｏｒｅにより本明細書で提供された抗原結合分子の結合親和性ＫＤを測定する。
いくつかの実施形態では、前記した抗原結合分子は、ＡＰＲＩＬとＢＣＭＡとの結合をブロックする。
いくつかの実施形態では、前記した抗原結合分子は、ヒトＴＡＣＩ又は／及びＢＡＦＦＲタンパク質に結合しなく、良好な特異性を示す。
いくつかの実施形態では、前記した抗原結合分子は、上記性質特徴（ｉ）－（ｉｉ）の組み合わせを有する。いくつかの実施形態では、前記した抗原結合分子は、上記の性質特徴（ｉ）－（ｉｉｉ）の組み合わせを有する。
本発明は、例えば単一特異性抗体（包括１Ａ５－Ｆｃ、１Ｂ５－Ｆｃ及び１Ｂ１１－Ｆｃ抗体）などの例示的抗原結合分子を提供する。単一可変ドメインをヒトＩｇＧ１のＦｃと融合させ、Ｆｃによってホモダイマーを形成する。例示的な単一特異性抗体のアミノ酸配列は、次の表Ｓ４に示される。
表Ｓ４：例示的抗原結合分子の全長配列
Figure 2023537958000004
組成物
本発明は、有効成分と薬学的に受容可能な担体とを含む薬学的組成物であって、有効成分が、本明細書に記載の単一可変ドメイン又は本明細書に記載の抗原結合分子である、薬学的組成物を提供する。いくつかの実施形態では、１Ａ５－Ｆｃ、１Ｂ５－Ｆｃ及び１Ｂ１１－Ｆｃ抗体のいずれか１つ又は複数と、薬学的に許容される担体とを医薬組成物とする。薬学的に受容可能な担体は、例えば、賦形剤、希釈剤、封入剤、充填剤、緩衝剤、又は他の試薬を含む。
分離された核酸
本発明は、本明細書に記載の単一可変ドメインまたは抗原結合分子をコードする単離された核酸を提供する。いくつかの実施形態では、前記核酸は、単一可変ドメイン、例えば１Ａ５－Ｆｃ、１Ｂ５－Ｆｃ及び１Ｂ１１－Ｆｃの単一可変ドメインなどをコードする。いくつかの実施形態では、前記核酸は、抗原結合分子、例えば１Ａ５－Ｆｃ、１Ｂ５－Ｆｃ及び１Ｂ１１－Ｆｃなどをコードする。配列表に、いくつかの単一可変ドメイン、抗原結合分子の核酸配列が例示的に挙げられた。
ベクター
本発明は、前記した分離された核酸を含むベクターを提供する。いくつかの実施形態では、前記したベクターは、クローニングベクターである。さらにいくつかの実施形態では、前記したベクターは、発現ベクターである。前記発現ベクターは、本明細書に記載の単一可変ドメイン又は抗原結合分子を発現することができる任意の発現ベクターであり、１つの具体例では、発現ベクターはｐｃＤＮＡ３．１である。
宿主細胞
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載したベクターを含む宿主細胞を提供する。宿主細胞は、単一可変ドメイン又は抗原結合分子をクローニング又は発現するための適切な宿主細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、原核細胞である。さらにいくつかの実施形態では、宿主細胞は、真核細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、イースト細胞、哺乳細胞又は抗原結合分子の調製に適切なその他の細胞から選択される。哺乳細胞は、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＣＨＯ－Ｓ細胞である。
単一可変ドメイン又は抗原結合分子を調製する方法
いくつかの実施形態では、本発明は、単一可変ドメインを調製する方法を提供する。前記方法には、本明細書に記載した単一可変ドメインをコードする核酸を含む宿主細胞を培養し、前記宿主細胞又は宿主細胞の培地から前記単一可変ドメインを回収することを含む。いくつかの実施形態では、本発明は、抗原結合分子を調製する方法を提供する。前記方法は、本明細書に記載した抗原結合分子をコードする核酸を含む宿主細胞を培養し、前記宿主細胞又は宿主細胞培地から前記抗原結合分子を回収することを含む。
前記の単一可変ドメイン又は抗原結合分子を生成するために、前記単一可変ドメイン又は抗原結合分子をコードする核酸をベクターに挿入して、さらに宿主細胞でクローニング又は／及び発現させる。前記核酸は、遺伝子の連結、化学的合成などの様々な本分野でよく知っている方法で取得することができる。
使用
本発明は、単一可変ドメイン又は抗原結合分子の使用を提供する。
本発明は、ＢＣＭＡ発現腫瘍がかかっている被験者を治療する方法を提供する。その方法は、前記被験者に治療上有効量の本明細書に記載した単一可変ドメイン、本明細書に記載した抗原結合分子又は本明細書に記載した組成物を投与することを含む。治療を受ける必要がある被験者には、すでに病気や症状にかかっている被験者、及び病気や状態に苦しむ可能性のある被験者や、そして疾患又は病態の予防、遅延又は緩和を目的とする被験者が含まれる。本発明は、さらに、ＢＣＭＡを発現する腫瘍にかかっている被験者を治療する薬物の調製における本明細書に記載した単一可変ドメイン、本明細書に記載した抗原結合分子又は本明細書に記載した組成物の使用を提供する。
本発明は、細胞におけるＢＣＭＡシグナル伝達を抑制、低減又はブロッキングする方法を提供する。その方法には、前記細胞に有効量の本明細書に記載した単一可変ドメイン、本明細書に記載した抗原結合分子又は本明細書に記載した組成物を投与することがふくまれる。さらに細胞におけるＢＣＭＡシグナル伝達を抑制、低減又はブロッキングするための薬物の調製における単一可変ドメイン又は抗原結合分子の使用を提供する。いくつかの実施形態では、細胞は腫瘍細胞である。
本発明は、ＢＣＭＡを発現する腫瘍細胞を殺傷する又はＢＣＭＡを発現する腫瘍細胞の成長を抑制する方法を提供する。その方法は、前記腫瘍細胞を本明細書に記載した単一可変ドメイン、本明細書に記載した抗原結合分子又は本明細書に記載した組成物に接触させることを含む。本発明は、さらにＢＣＭＡを発現する腫瘍細胞を殺傷する又はＢＣＭＡを発現する腫瘍細胞の成長を抑制する薬物の調製における前記の単一可変ドメイン、抗原結合分子又は本明細書に記載した組成物の使用を提供する。
上記腫瘍は、Ｂ細胞悪性腫瘍であり、具体的には、リンパ腫、骨髄腫、多発性骨髄腫又は白血病が挙げられる。
本発明は、自己免疫疾患に罹患している被験体を治療する方法であって、本明細書に記載の単一可変ドメイン、本明細書に記載の抗原結合分子、または本明細書に記載の組成物の治療上有効量を被験体に投与することを含む方法を提供する。本発明は、さらに自己免疫疾患にかかっている被験者を治療する薬物の調製における、本明細書に記載した単一可変ドメイン、本明細書に記載した抗原結合分子又は本明細書に記載した組成物の使用を提供する。前記自己免疫疾患は、全身性エリテマトーデスであって良い。
いくつかの実施形態では、サンプルにおけるＢＣＭＡを検査又は測定する方法を提供する。その方法には、前記サンプルを本明細書に記載した単一可変ドメイン又は抗原結合分子と接触させ、結合複合体を検査又は測定することを含む。
明確に理解する目的で、前述の発明は例示及び実施形態によってかなり詳細に説明されてきたが、本発明の教示から、本発明が、添付の請求項の精神及び範囲から逸脱することなく、さらにいくつかの変更及び修正を加えてもよいことは、当業者には明白であろう。以下の実施形態は、例示的に提供されるだけであって、限定的なものではない。当業者は、実質的に同様の結果をもたらすように変更又は修正され得る複数の非重要性パラメータを容易に識別するであろう。
発明を実施するための形態
実施例１ 抗ＢＣＭＡ単一ドメイン抗体ファージディズプレイ・ライブラリーの構築
１．１ 動物免疫
組み換えヒトＢＣＭＡ－Ｆｃ融合タンパク質（ＡＣＲＯ、製品カタログＮｏ．ＢＣ７－Ｈ５２５４）と完全フロイントを体積比１：１で混合乳化し、フタコブラクダに初めて皮下多点注射免疫を行った。その後、２週間ごとに組換えヒトＢＣＭＡ－Ｆｃ融合蛋白質と不完全フルードアジュバントを体積比１：１で混合乳化して免疫強化を行った。４回目又は５回目の免疫後に血清を採取して抗ヒトＢＣＭＡ抗体の力価を検出する。多回免疫後にフタコブラクダの末梢血を採取し、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を分離した。
１．２ ＲＮＡ抽出
ＴＲＩｚｏｌＴＭ薬剤を用いてＰＢＭＣ（１．１由来）から全ＲＮＡを抽出した。抽出された全ＲＮＡを１％アガロースゲル電気泳動より品質を評価して、２６０ｎｍと２８０ｎｍでの吸光度を測定して定量し、ＯＤ゜２６０ｎｍ／ＯＤ゜２８０ｎｍの比値は１．８～２．０の範囲である。
１．３ ＶＨＨ増幅
ｃＤＮＡ合成キットＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭＩＩ １ｓｔ Ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ（ＴＡＫＡＲＡ、製品カタログＮｏ．６２１０Ａ）を用いて、指示にしたがって、全ＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写した。ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ法を用いて、ラクダ抗体の可変領域（ＶＨＨ）配列を以下の方法で増幅した。ｃＤＮＡをテンプレートとして、プライマーＣａｌｌ００１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）及びＣａｌｌ００２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）を用いて第１回ＰＣＲ増幅を行い、増幅により得られたＤＮＡ産物の短片部分をガム回収キット（ＱＩＡＧＥＮ、製品カタログＮｏ．２８７０６）により精製した。第１回ＰＣＲ産物を鋳型として、プライマーＶ－Ｂａｃｋ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）及びＶ－Ｆｗｄ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）を用いて第２回ＰＣＲ増幅を行い、増幅により得られたＤＮＡ産物であるＶＨＨコーディングセグメントをゲル回収キット（ＱＩＡＧＥＮ、製品カタログＮｏ．２８７０６）を用いて精製した。
Ｃａｌｌ００１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）：ＧＴＣＣＴＧＧＣＴＧＣＴＣＴＴＣＴＡＣＡＡＧＧ
Ｃａｌｌ００２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）：ＧＧＴＡＣＧＴＧＣＴＧＴＴＧＡＡＣＴＧＴＴＣＣ
Ｖ－Ｂａｃｋ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）：ＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＴＣＴＧＧＲＧＧＡＧＧ
Ｖ－Ｆｗｄ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）：ＣＴＡＧＴＧＣＧＧＣＣＧＣＴＧＡＧＧＡＧＡＣＧＧＴＧＡＣＣＴＧＧＧＴ
第１回及第２回ＰＣＲ反応プログラムは、９４℃で６ｍｉｎ前変性し、その後９４℃で３０ｓ変性し、５５℃で３０ｓアニーリングして、７２℃で３０ｓ伸長し、計３０回サイクルして、最後に７２℃で１０ｍｉｎ伸長した。
１．４ ＶＨＨファージライブラリーの構築
ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ増幅により得られたＶＨＨコーディングセグメントをＰｓｔＩ／ＮｏｔＩエンドヌクレアーゼで消化した後、ファージミドベクターｐＭＥＣＳ（ＮＴＣＣプラスミドベクター菌種細胞遺伝子寄託センター、製品カタログＮｏ．ｐＭＥＣＳ）に挿入して、組み換えベクターに構築し、大腸菌ＴＧ１（Ｌｕｃｉｇｅｎ、製品カタログＮｏ．６０５０２－１）へ電気法にて導入した。形質転換後の菌液の一部を取り出し、希釈した後、１００μｇ／ｍｌアンピシリンを含む選択性プレートに塗布し、コロニーカウンタ法によりライブラリーの容量を算出し、無作為に１００個のクローンを選択し、配列決定して、ライブラリー品質を評価した。残りの菌液１００μｇ／ｍｌアンピシリンを含む選択性プレートに塗布し、プレートからコロニーをかきとり、グリセリンを補充した後－８０℃でライブラリー原種として保存した。ＶＨＨライブラリー原種を対数増殖期までに増幅した、Ｍ１３ＫＯ７介助ファージ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、製品カタログＮｏ．Ｎ０３１５Ｓ）を入れてライブラリー増幅を行い、２８℃、２００ｒｐｍ／分を一晩振って培養した。菌液を遠心して上清を取り、上清体積１／４のＰＥＧ６０００／ＮａＣｌ溶液（２０％ＰＥＧ６０００（ｗ／ｖ）、２．５Ｍ ＮａＣｌ）を入れて、氷上で１～２時間インキュベーションして、ファージを沈降し、遠心してファージ沈殿を回収し、ＰＢＳで再懸濁後、２０％グリセリンを入れて単一ドメイン抗体ファージディズプレイ・ライブラリーとして－８０℃で保存した。
実施例２ 抗ヒトＢＣＭＡ単一ドメイン抗体スクリーニング
２．１ スクリーニング
固相スクリーニングによって単一ドメイン抗体ファージディズプレイ・ライブラリーに対してスクリーニングした。組み換えＢＣＭＡ－ＡｖｉｔａｇｅＴＭ（ＡＣＲＯ、製品カタログＮｏ．ＢＣＡ－Ｈ８２Ｅ４）をマイクロプレートリーダー用高吸着プレートに固定し、ブロッキング後、１．４で得られたファージをマイクロプレートに入れ、３７℃で１～２時間インキュベーションした。リン酸塩／ＴＷＥＥＮ（登録商標）緩衝液（ＰＢＳＴ）で１０回洗浄して、非特異的結合したファージを除去し、ＰＢＳで洗浄した後、ｔｒｙｐｓｉｎ酵素で結合したファージを溶出させ、４－（２－アミノエチル）ベンゼンスルホニルフルオリド塩酸塩（ＡＥＢＳＦ）で中和した後、大腸菌ＴＧ１に感染して増幅した後、次のライブラリースクリーニングを行った。２～３回スクリーニングした後、収集したファージを対数増殖期大腸菌ＴＧ１に感染させ、２０％（ｗ／ｖ）ブドウ糖及び１００μｇ／ｍｌアンピシリンを含む選択性プレートにコーティングした。単一のクローンを選んで培養し、イソプロピル－β－Ｄ－チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）にて発現を誘導して上清を調製した。
２．２ 陽性クローンの同定
選抜されたクローンは、ヒトＢＣＭＡ－Ｈｉｓ（ＡＣＲＯ、製品カタログＮｏ．ＢＣＡ－Ｈ５２２ｙ）を対象とした間接ＥＬＩＳＡ法により陽性判定された。ヒトＢＣＭＡ－Ｈｉｓ又は対照蛋白質ヒトＦｃ蛋白（ＡＣＲＯ、製品カタログＮｏ．ＦＣＣ－Ｈ５２１４）をマイクロプレートリーダー用高吸着プレートにコーティングした後、ブロッキング液でブロッキングし、２．１で調製した上清を加えて３７℃で１時間インキュベートし、洗浄後にＨＲＰ結合抗ＨＡタグ二次抗体（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ、製品カタログＮｏ．Ａ０１２９６）を加え、３７℃で０．５時間インキュベーションし、５回洗浄し、発色基質を加えて発色し、波長４５０ｎｍ及び基準波長６５０ｎｍにおける光吸収シグナル値を検出した。ヒトＢＣＭＡ－Ｈｉｓのみに結合且つシグナル値が比較的高い陽性クローンを選んで保存と配列決定を行った。スクリーニングにより陽性クローン１Ａ５、１Ｂ５と１Ｂ１１を獲得した。配列解析の結果、１Ａ５のＶＨＨのヌクレオチド配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７であり、アミノ酸配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６であり、１Ｂ５のＶＨＨのヌクレオチド配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９であり、アミノ酸配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８であり、１Ｂ１１のＶＨＨのヌクレオチド配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１であり、アミノ酸配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０である。
実施例３ 抗ヒトＢＣＭＡ ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体の調製
３．１ ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体の調製
スクリーニングされた陽性クローンのＶＨＨ配列とヒトＦｃ領域に連結し、ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体を構築した。具体的に、２．２で配列決定によって得られたＶＨＨ配列をヒトＩｇＧ１定常領域（アミノ酸配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）を含有するｐＣＤＮＡ３．１真核発現ベクターに挿入し、Ｅｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＴＭＣＨＯ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ一過性発現システム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．、製品カタログＮｏ．Ａ２９１２９）でこれらのＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体を発現した。プロティンＡアフィニティーカラムを用いて精製した後、ヒトＢＣＭＡ－Ｈｉｓタンパク質に対する間接ＥＬＩＳＡ法（方法は３．２を参照）によってＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体とヒトＢＣＭＡタンパク質との結合活性を測定し、表面プラズモン共鳴技術により抗体とヒトＴＡＣＩ、ＢＡＦＦＲタンパク質の結合状況（方法は３．３を参照）を測定した。測定により、１Ａ５－Ｆｃ、１Ｂ５と１Ｂ１１－Ｆｃはいずれも特異的にヒトＢＣＭＡ－Ｈｉｓ蛋白に結合するが、ヒトＴＡＣＩ、ＢＡＦＦＲ蛋白には結合しない。１Ａ５－Ｆｃの全長アミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のとおりであり、ヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３のとおりであり、１Ｂ５－Ｆｃの全長アミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４のとおりであり、ヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のとおりであり、１Ｂ１１－Ｆｃの全長アミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のとおりであり、ヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のとおりである。
３．２ 間接ＥＬＩＳＡ法による抗体とヒトＢＣＭＡ－Ｈｉｓタンパク質との結合測定
２μｇ／ｍｌヒトＢＣＭＡ－Ｈｉｓタンパク質（ＡＣＲＯ、製品カタログＮｏ．ＢＣＡ－Ｈ５２２ｙ）をマイクロプレートリーダー用高吸着プレートにコーティングした後、３％（ｗ／ｖ）ＢＳＡブロッキング液でブロッキングし、１００μｌ／ｗｅｌｌで勾配希釈（初期濃度１２６ｎＭ、５倍勾配希釈、７つの濃度）した抗ヒトＢＣＭＡ ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体を加え、３７℃で１時間インキュベーションし、洗浄後ＨＲＰ結合抗ヒトＩｇＧ Ｆｃタグ二次抗体（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、製品カタログＮｏ．ＮＥＦ８０２００１ＥＡ）を加え、３７℃で０．５時間インキュベーションし、５回洗浄し、１００μｌ／ｗｅｌｌでＴＭＢ基質溶液（ＴＩＡＮＧＥＮ、製品カタログＮｏ．ＰＡ１０７）を加えて発色させ、４５０ｎｍ波長及び６５０ｎｍ基準波長での光吸收シグナル値を測定し、カーブフィッティング（図１）してＥＣ５０値を算出した（表１）。
表１ ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体とヒトＢＣＭＡ－Ｈｉｓタンパク質との親和性
Figure 2023537958000005
３．３ 表面プラズモン共鳴技術による抗体とヒトＴＡＣＩ、ＢＡＦＦＲタンパク質の結合測定
生体分子相互作用分析システム（ＧＥ、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００）を用いて抗ヒトＢＣＭＡ ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体の特異性を測定した。アミノ結合によりＡｎｔｉ－ｈＩｇＧ（Ｆｃ）Ａｎｔｉｂｏｄｙ（ＧＥ、製品カタログＮｏ．ＢＲ－１００８－３９）をＣＭ５センサーチップに結合させ、ランニングバッファ（１３７ｍＭ Ｎａｃｌ、２．７ｍＭ ＫＣｌ、１０ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２Ｏ、１．８ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、０．０５％ｓｕｒｆａｃｔａｎｔＰ－２０（ｗ／ｖ）、ｐＨ ７．４）を用いて抗ヒトＢＣＭＡ ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体を２μｇ／ｍｌまで希釈し、３０μｌ／ｍｉｎの流速で実験通路を通過して９０ｓ捕集した。ランニングバッファを用いてヒトＴＡＣＩ又はＢＡＦＦＲタンパク質を１００ｎＭに希釈し、５０μｌ／ｍｉｎ流速で結合させ、結合シグナル曲線を観察した。１Ａ５－Ｆｃ、１Ｂ５－Ｆｃ、１Ｂ１１－Ｆｃは、いずれも結合曲線が観察されず、ＴＡＣＩとＢＡＦＦＲタンパク質のいずれもに結合しなかった。
実施例４ 抗ヒトＢＣＭＡ ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体とヒトＢＣＭＡとの親和性
４．１ 表面プラズモン共鳴技術による抗体とヒトＢＣＭＡとの親和性測定
生体分子相互作用分析システム（ＧＥ、ＢｉａｃｏｒｅＴ２００）を使用して抗ヒトＢＣＭＡ ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体の親和性を測定した。アミノ結合によりＡｎｔｉ－ｈＩｇＧ（Ｆｃ）Ａｎｔｉｂｏｄｙ（ＧＥ、製品カタログＮｏ．ＢＲ－１００８－３９）をＣＭ５センサーチップに結合させ、ランニングバッファ（１３７ｍＭ Ｎａｃｌ、２．７ｍＭ ＫＣｌ、１０ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２Ｏ、１．８ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、０．０５％ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ Ｐ－２０（ｗ／ｖ）、ｐＨ ７．４）を用いて抗ヒトＢＣＭＡ ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体に１μｇ／ｍｌ希釈し、３０μｌ／ｍｉｎの流速で実験通路を通過して捕集した。ランニングバッファを用いてヒトＢＣＭＡ－Ｈｉｓ（ＡＣＲＯ、製品カタログＮｏ．ＢＣＡ－Ｈ５２２ｙ）に１００ｎＭ、５０ｎＭ、２５ｎＭ、１２．５ｎｍｏｌ／Ｌ、６．２５ｎＭ、３．１２５ｎＭに希釈し、５０μｌ／ｍｉｎの流速で結合し、結合時間は２００ｓに設定し、その後アプライを停止して解離し、解離時間は８００ｓに設定した。ソフトウエアＢｉａＣｏｎｔｒｏｌ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ２．０でデータシグナルをアルタイムで採集し、ソフトウエアＢｉａＥｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ２．０でデータ分析を行い、Ｌａｎｇｍｕｉｒ １：１でフィッティングし、結合速度定数Ｋａ（１／Ｍｓ）、解離速度定数Ｋｄ（１／ｓ）、平衡常数ＫＤ（Ｍ）値を算出した。測定結果を表２に示すように、１Ａ５－Ｆｃ、１Ｂ５－Ｆｃ及び１Ｂ１１－Ｆｃは、ヒトＢＣＭＡタンパク質と高い親和性を有している。測定によれば、キメラ対照抗体ＢＭ－Ｆｃ（ＶＨＨ対照抗体（ＢＭ）配列はＣＮ１０９１５３７３１ＡにおけるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２５と同様）のＫＤが約３Ｅ－１０Ｍであった。
表２ ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体とヒトＢＣＭＡの親和性
Figure 2023537958000006
４．２ フローサイトメトリーにより抗体と細胞との結合を測定する
フローサイトメトリーを用いて、抗ヒトＢＣＭＡ ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体とＢＣＭＡの発現レベルの異なる標的細胞との結合を測定し、ここで、ＣＨＯ－ｈＢＣＭＡ細胞（ｉＣａｒＴａｂ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｃｏ．ｌｔｄ（蘇州）、製品カタログＮｏ．ＡＫＤ００１Ａ）は、ＢＣＭＡ高発現安定化細胞株であり、Ｕ２６６細胞（中国医学科学院基礎医学研究所基礎医学細胞センター、製品カタログＮｏ．３１１１Ｃ０００１ＣＣＣ０００６８４）は、中程度のＢＣＭＡ発現レベルを有する天然ヒト骨髄腫細胞株、ＰＲＭＩ８２２６細胞（中国医学科学院基礎医学研究所基礎医学細胞センター、製品カタログＮｏ．３１１１Ｃ０００１ＣＣＣ００００８３）は、ＢＣＭＡの発現量が低い天然ヒト骨髄腫細胞株であり、ＨＵＶＥＣ細胞（ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、製品カタログＮｏ．ＡＫＤ００１Ａ ８０００）は、ＢＣＭＡを発現しないヒト臍帯静脈内皮細胞株である。勾配希釈（初始濃度１２６ｎＭ、５倍勾配希釈、６つの濃度）した抗ヒトＢＣＭＡ ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体を２×１０５標的細胞とともにインキュベーションし、氷上で１時間インキュベーションした後細胞を洗浄し、ＰＥ標識抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ抗体（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、製品カタログＮｏ．１０９－１１６～１７０）を入れ、氷上０．５時間インキュベーションし、細胞を洗浄後、フローサイトメトリー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．、Ａｔｔｕｎｅ ＮＸＴ）により測定した。
図２Ａ～２Ｃ、表３に示すように、１Ａ５－Ｆｃ、１Ｂ５－Ｆｃ及び１Ｂ１１－ＦｃはいずれもＢＣＭＡ高発現のＣＨＯ－ｈＢＣＭＡ細胞及びＢＣＭＡ中程度発現のＵ２６６細胞に対して効果的に標的化・結合することができ、ＢＣＭＡ発現レベルが比較的に低いＲＰＭＩ８２２６細胞とも明らかな結合があった。図２Ｄに示すように、１Ａ５－Ｆｃ、１Ｂ５－Ｆｃと１Ｂ１１－ＦｃはＢＣＭＡを発現しないＨＵＶＥＣ細胞と明らかな結合がなかった。キメラコントロール抗体ＢＭ－Ｆｃ（ＶＨＨコントロール抗体（ＢＭ）配列はＣＮ１０９１５３７３１ＡのＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２５と同じ）は、ＣＨＯ－ｈＢＣＭＡ細胞に結合するＥＣ５０が約４ｎＭ、Ｕ２６６細胞に結合するＥＣ５０が約６ｎＭであることを示した。
表３抗ヒトＢＣＭＡ ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体と標的細胞との親和性
Figure 2023537958000007
実施例５ 抗ヒトＢＣＭＡ ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体によるＡＰＲＩＬとＢＣＭＡとの結合に対するブロック
勾配希釈（初始濃度２５２ｎＭ、５倍勾配希釈、７つの濃度）の抗ヒトＢＣＭＡ ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体１Ａ５－Ｆｃ、１Ｂ５－Ｆｃ及び１Ｂ１１－Ｆｃのそれぞれは１００ｎｇ／ｍｌビオチン結合組み換えＢＣＭＡ－Ｈｉｓタンパク質（ＡＣＲＯ、製品カタログＮｏ．ＢＣＡ－Ｈ５２２ｙ）を１：１の体積比で混合し、室温で１時間インキュベーションした後、組換えＡＰＲＩＬタンパク質（ＡＣＲＯ、製品カタログＮｏ．ＡＰＬ－Ｈ５２４４）を固定化したマイクロプレートリーダー用高吸着プレートに加え、同時に対照群に５０ｎｇ／ｍｌのビオチン結合組換えＢＣＭＡ－Ｈｉｓ蛋白のみを加えた。３７℃で１時間インキュベーションし、結合していないビオチン結合ＢＣＭＡ－Ｈｉｓタンパク質を洗浄し、ＨＲＰ結合ストレプトアビジン（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、製品カタログＮｏ．１８－４１００－５１）を加え、５回洗浄後発色させた。４５０ｎｍ波長及び６５０ｎｍ基準波長での光吸收シグナル値を測定した。式：結合量＝サンプル信号値／対照群信号値×１００％に従って、各抗体の各濃度サンプルに対するＢＣＭＡとＡＰＲＩＬ結合量を計算し、そしてカーブフィッティングを行った。結果は図３と表４に示すように、１Ａ５－Ｆｃ、１Ｂ５－Ｆｃと１Ｂ１１－ＦｃはいずれもＡＰＲＩＬとＢＣＭＡの結合を有効にブロックした。
図４ＡはヒトＢＣＭＡの細胞外領域のアミノ酸配列であり、図４ＢはＰＤＢデータベースにおけるヒトＢＣＭＡの細胞外領域構造（ＰＤＢ番号：２ｋｎ１）である。図４Ａ、４Ｂに示すように、ヒトＢＣＭＡの細胞外領域は３対のジスルフィド結合を含み、それぞれＣｙｓ８－Ｃｙｓ２１、Ｃｙｓ２４－Ｃｙｓ３７とＣｙｓ２８－Ｃｙｓ４１である、ヒトＢＣＭＡとＡＰＲＩＬは主にβ－ヘアピン構造に結合した（Ｂｏｓｓｅｎ、Ｃ．ｅｔ ａｌ．Ｓｅｍｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００６、１８（５）：２６３～２７５）。このことから、クローン１Ａ５－Ｆｃ、１Ｂ５－Ｆｃ及び１Ｂ１１－ＦｃのエピトープはＳｅｒ９～Ｐｒｏ２３に位置していると推測される。
表４ 抗ヒトＢＣＭＡ ＶＨＨ－Ｆｃによる、ＡＰＲＩＬとＢＣＭＡとの結合をブロックする
Figure 2023537958000008
実施例６ 抗ヒトＢＣＭＡ ＶＨＨクローン同士のエピトープ差異分析
６．１ ＥＬＩＳＡ（チェッカーボード法）測定による抗ヒトＢＣＭＡ ＶＨＨ同士の競合関係の検出
ヒトＢＣＭＡ ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体を２μｇ／ｍｌに希釈し、マイクロプレートリーダー用高吸着プレートにコーティングし、洗浄した後、ブロッキングした。２０μｇ／ｍｌのヒトＢＣＭＡ ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体とビオチン結合ＢＣＭＡ－Ｈｉｓタンパク質（ＡＣＲＯ、製品カタログＮｏ．ＢＣＡ－Ｈ５２２ｙ）を室温で０．５時間インキュベーションし、抗原抗体混合物を得た。チェッカーボードの配置方法により、インキュベートした抗体抗原混合物又はビオチン結合ＢＣＭＡ－Ｈｉｓタンパク質のみ（対照群）を順に１００μｌ／孔でマイクロプレートに加え３７℃で１時間インキュベートし、結合していないビオチン結合ＢＣＭＡ－Ｈｉｓタンパク質を洗し、ＨＲＰ結合ストレプトアビジン（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、製品カタログＮｏ．１８－４１００－５１）を加え、５回洗浄して発色させた。４５０ｎｍ波長及び６５０ｎｍ基準波長での光吸收シグナル値を測定した。式：ブロッキング率＝（対照群シグナル値－サンプル組シグナル値）／対照群シグナル値×１００％により、１つの抗体の、もう１つの抗体とＢＣＭＡ－Ｂｉｏとの結合シグナルに対するブロッキング率を算出した。結果は、表５に示すように、チェッカーボードにおいて、「＼」対角線位置（灰色マーク）は抗体自己競合の陽性対照群であり、ブロッキング率はいずれも９５％以上に達していた。１Ｂ１１－ＦｃのヒトＢＣＭＡへの結合に対する１Ｂ５－Ｆｃのブロック率（１２．６％）は５０％未満であり、１Ｂ５－ＦｃのヒトＢＣＭＡへの結合に対する１Ｂ１１－Ｆｃのブロック率（１４．５％）も５０％未満であり、１Ｂ５－Ｆｃと１Ｂ１１－Ｆｃの間に明らかな競合関係が存在せず、１Ｂ５－Ｆｃと１Ｂ１１－Ｆｃは同時にＢＣＭＡタンパクの異なるエピトープに結合できることを表明した。１Ａ５－Ｆｃと１Ｂ１１－Ｆｃ、１Ａ５－Ｆｃと１Ｂ５－Ｆｃの間のブロッキング率は８５％を超えたことを示す。
表５ ＥＬＩＳＡ（チェッカーボード法）によるエピトープ競合
Figure 2023537958000009
６．２ 表面プラズモン共鳴技術によるエピトープ差異分析
生体分子相互作用分析システム（ＧＥ、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００）を用いてエピトープ競合関係の分析を行った。アミノ結合によりＡｎｔｉ－Ｈｉｓ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（ＧＥ、製品カタログＮｏ．２８９９５０５６）をＣＭ５センサーチップに結合させ、ＢＣＭＡ－Ｈｉｓタンパク質（ＡＣＲＯ、製品カタログＮｏ．ＢＣＡ－Ｈ５２２ｙ）をランニングバッファーを用いて１μｇ／ｍｌ程度に希釈し、３０μｌ／ｍｉｎの流速で実験流路で捕集し、結合時間を調整することにより、キャプチャシグナルを１７０ＲＵ～１８０ＲＵに制御した。ランニングバッファを用いて抗ヒトＢＣＭＡ ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体ＶＨＨ－Ｆｃ１を１０μｇ／ｍｌ（飽和濃度、濃度が増加した後、結合されたシグナル値が変化しない）に希釈して、シグナルをプラットフォームに到達したまで、サンプルを注入する。サンプル注入終了後、直ちに別の抗ヒトＢＣＭＡ ＶＨＨ－Ｆｃキメラ抗体ＶＨＨ－Ｆｃ２を注入した。抗体結合曲線を観察し、２つの抗体の結合シグナル値をそれぞれ記録した。シグナル値の変化は表６に示すように、１Ｂ５－Ｆｃ抗体がＢＣＭＡと結合して飽和に達したシグナル値は６１３．３ＲＵであった。このときさらに１Ｂ１１－Ｆｃを注入したが、飽和シグナル値は４２６．３ＲＵであり、１Ｂ１１－Ｆｃを単独で注入した場合の飽和シグナル値４９１．０ＲＵと同等であった。逆も同様である。こんな２種類のサンプル注入順序では、累積シグナル値は同等であり、１Ｂ５－Ｆｃ及び１Ｂ１１－Ｆｃは同時にＢＣＭＡ蛋白上の異なるエピトープと結合できることを説明した。
表６ ＶＨＨ－Ｆｃ抗体ＳＰＲシグナル値の変化と分析
Figure 2023537958000010
６．３ フローサイトメトリーによるエピトープ差異分析
細胞膜上に発現しているＢＣＭＡ蛋白質と遊離蛋白質はエピトープの有効な露出に差がある可能性があるため、フローサイトメトリーを用いて１Ｂ５、１Ｂ１１の二つのクローンが同様に細胞膜上のＢＣＭＡ蛋白質に結合できるかどうかをさらに確認した。標的細胞はＵ２６６細胞である。２０μｇ／ｍｌ又は１０μｇ／ｍｌの１Ｂ５－Ｆｃ、Ｂ１１－Ｆｃ抗体単独で２×１０５標的細胞とともにインキュベーションし、又は２０μｇ／ｍｌの１Ｂ５－Ｆｃ抗体と２０μｇ／ｍｌの１Ｂ１１－Ｆｃ抗体を１：１体積比で混合した後、２×１０５の標的細胞とともにインキュベーションし、氷上で１時間インキュベーションした後、細胞を洗浄し、ＰＥ標識抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、製品カタログＮｏ．１０９－１１６－１７０）を入れて、氷上０．５時間インキュベーションし、細胞を洗浄後、フローサイトメトリー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．、Ａｔｔｕｎｅ ＮＸＴ）により測定した。結果は、表７に示すように、１０μｇ／ｍｌの同じ抗体が増加した場合、１Ｂ５－Ｆｃサンプルの蛍光平均値増加率は８２１．５／７６５．５－１＝７．３％で、１Ｂ１１－Ｆｃサンプルの蛍光平均値増加率は９７５．０／９４７．０１＝２．９％であり、２つの抗体は１０μｇ／ｍｌとも飽和濃度に近いことを示した。これに異なる抗体を１０μｇ／ｍｌ加える、すなわち１０μｇ／ｍｌの１Ｂ５－Ｆｃに１０μｇ／ｍｌの１Ａ１１－Ｆｃを加え、蛍光平均値増加率は１５０５．０／７６５．５－１＝９６．６％である。１０μｇ／ｍｌの１Ｂ１１－Ｆｃに１０μｇ／ｍｌの１Ｂ５－Ｆｃを加え、蛍光平均値増加率は１５０５．０／９４７．０－１＝５８．９％であり、従って、１Ｂ５－Ｆｃ、１Ｂ１１－Ｆｃは同時に細胞膜上のＢＣＭＡ蛋白の異なるエピトープに結合できることが示唆された。
１Ｂ５、１Ｂ１１と１Ｂ５のエピトープ関係は図４Ｃに示すように推測される：１Ｂ５と１Ｂ１１はそれぞれヒトＢＣＭＡの異なるエピトープに結合し、１Ａ５のヒトＢＣＭＡに結合したエピトープと１Ｂ５、１Ｂ１１の結合エピトープは部分的に重複している。
表７抗ヒトＢＣＭＡ ＶＨＨキメラ抗体とＵ２６６細胞との結合
Figure 2023537958000011

Claims (15)

  1. ＢＣＭＡに結合する単離された単一可変ドメインであって、前記単一可変ドメインには、以下からなる群から選択されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む：
    （ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、１０及び１３から選択されるアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するＣＤＲ１；
    （ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８、１１及び１４から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するＣＤＲ２；及び
    （ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９、１２及び１５から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するＣＤＲ３。
  2. 請求項１に記載の分離された単一可変ドメインであって、前記単一可変ドメインには、以下のいずれか１つのグループから選択されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む：
    （ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８のアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するＣＤＲ３；
    （ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するＣＤＲ３；或いは
    （ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するＣＤＲ２、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するＣＤＲ３。
  3. 請求項２に記載の分離された単一可変ドメインであって、前記単一可変ドメインには、以下のいずれか１つのグループから選択されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む：
    （ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；
    （ｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；或いは
    （ｉｉｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３。
  4. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、１８又は２０のアミノ酸配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む、分離された単一可変ドメイン。
  5. 請求項１～４のいずれかに記載の分離された単一可変ドメインであって、前記単一可変ドメインには、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、１８又は２０の配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む；或いは、前記単一可変ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、１８又は２０のアミノ酸配列を含む。
  6. 請求項１～５のいずれかに記載の分離された単一可変ドメインであって、前記の単一可変ドメインは、ラクダ科動物のもの又はヒト化したものである；任意に、前記の単一可変ドメインは、ＶＨＨである。
  7. 請求項１～６のいずれかに記載の分離された単一可変ドメインであって、前記単一可変ドメインは、以下の性質のうちの１つ又は複数の組み合わせを示す：
    （ｉ）ヒトＢＣＭＡに結合すること；
    （ｉｉ）ＡＰＲＩＬとＢＣＭＡとの結合をブロックすること；或いは
    （ｉｉｉ）ヒトＴＡＣＩ又は／及びＢＡＦＦＲタンパク質に結合しないこと。
  8. ＢＣＭＡに結合し、且つ少なくとも１つの請求項１～７のいずれかに記載の単一可変ドメインを含む、分離された抗原結合分子。
  9. 請求項８に記載の分離された抗原結合分子であって、前記抗原結合分子は、抗体、単一特異性抗体、多重特異的抗体又は免疫コンジュゲートである；任意に、前記抗体又は免疫コンジュゲートは、免疫グロブリン定常領域を含む；任意に、前記免疫グロブリン定常領域には、ヒト免疫グロブリンＦｃ、好ましくはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のＦｃを含む；任意に、前記抗原結合分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２、２４又は２６で示されるアミノ酸配列を含む。
  10. 請求項８又は９に記載の分離された抗原結合分子であって、以下の性質のうちの１つ又は複数の組み合わせを示す：
    （ｉ）ヒトＢＣＭＡに結合すること；
    （ｉｉ）ＡＰＲＩＬとＢＣＭＡとの結合をブロックすること；及び、
    （ｉｉｉ）ヒトＴＡＣＩ又は／及びＢＡＦＦＲタンパク質に結合しないこと。
  11. 活性成分及び薬学的に許容されるベクターを含み、活性成分は、請求項１～７のいずれかに記載の単一可変ドメイン又は請求項８～９のいずれかに記載の抗原結合分子である、組成物。
  12. 請求項１～７のいずれかに記載の単一可変ドメイン又は請求項８～１０のいずれかに記載の抗原結合分子をコードする、分離された核酸。
  13. ＢＣＭＡを発現する腫瘍にかかっている被験者を治療する方法であって、治療上有効量の請求項１～７のいずれかに記載の単一可変ドメイン、請求項８～１０のいずれかに記載の抗原結合分子又は請求項１１前記した組成物を前記被験者に投与させることが含まれる；任意に、前記した腫瘍は、Ｂ細胞悪性腫瘍であり、任意に、前記Ｂ細胞悪性腫瘍は、リンパ腫、骨髄腫、多発性骨髄腫又は白血病である、前記方法。
  14. ＢＣＭＡを発現する腫瘍細胞を殺傷する又はＢＣＭＡを発現する腫瘍細胞の成長を抑制する方法であって、前記腫瘍細胞を請求項１～７のいずれかに記載の単一可変ドメイン、請求項８～１０のいずれかに記載の抗原結合分子又は請求項１１に記載の組成物と接触させることを含む；任意に、前記細胞は、Ｂ細胞悪性腫瘍細胞である；任意に、前記Ｂ細胞悪性腫瘍は、リンパ腫、骨髄腫、多発性骨髄腫又は白血病である、前記方法。
  15. 自己免疫疾患にかかっている被験者を治療する方法であって、治療上有効量の請求項１～７のいずれかに記載の単一可変ドメイン、請求項８～１０のいずれかに記載の抗原結合分子又は請求項１１に記載の組成物を前記被験者に投与することを含み、前記自己免疫疾患は、全身性エリテマトーデスである、前記方法。
JP2023509554A 2020-08-20 2021-08-16 Ｂｃｍａと結合する単一可変ドメイン及び抗原結合分子 Pending JP2023537958A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010842370 2020-08-20
CN202010842370.5 2020-08-20
PCT/CN2021/112756 WO2022037527A1 (zh) 2020-08-20 2021-08-16 结合bcma的单可变结构域及抗原结合分子

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2023537958A true JP2023537958A (ja) 2023-09-06

Family

ID=80323410

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2023509554A Pending JP2023537958A (ja) 2020-08-20 2021-08-16 Ｂｃｍａと結合する単一可変ドメイン及び抗原結合分子

Country Status (6)

Country Link
US (1) US20230193292A1 (ja)
EP (1) EP4202047A1 (ja)
JP (1) JP2023537958A (ja)
KR (1) KR20230045066A (ja)
CN (1) CN115715325A (ja)
WO (1) WO2022037527A1 (ja)

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105384825B (zh) 2015-08-11 2018-06-01 南京传奇生物科技有限公司 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用
EP3689908A4 (en) * 2017-09-29 2021-09-29 Mogam Institute for Biomedical Research ANTI-BCMA ANTIBODIES WITH HIGH AFFINITY FOR BCMA AND PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR THE TREATMENT OF CANCER, INCLUDING THIS
PE20210320A1 (es) * 2018-06-01 2021-02-16 Novartis Ag Moleculas de union contra bcma y usos de las mismas
WO2020038147A1 (zh) * 2018-08-24 2020-02-27 深圳普瑞金生物药业有限公司 抗bcma的单域抗体及其应用
CN109942708B (zh) * 2019-03-28 2021-01-05 上海科棋药业科技有限公司 一种抗bcma的单域抗体及其应用
CN109942709B (zh) * 2019-04-22 2019-12-27 广州百暨基因科技有限公司 一种抗bcma的单域抗体及其应用
CN111333729B (zh) * 2020-03-17 2022-12-06 深圳市南科生物工程有限公司 抗b细胞成熟抗原的纳米抗体及应用

Also Published As

Publication number Publication date
KR20230045066A (ko) 2023-04-04
US20230193292A1 (en) 2023-06-22
EP4202047A1 (en) 2023-06-28
CN115715325A (zh) 2023-02-24
WO2022037527A1 (zh) 2022-02-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7317272B2 (ja) Ｔｉｇｉｔ抗体、その抗原結合断片及びその医療用途 本願は、２０１９年９月２９日に出願された出願番号ｃｎ２０１７１０９０８５６５．３に基づいたものであり、その優先権を主張する。その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
KR20200119846A (ko) 항 비7 에이치4 항체, 그의 항원 결합 단편 및 그의 약학적 용도
KR20220110177A (ko) 항인간 클라우딘 18.2 항체 및 그의 적용
CN112243443B (zh) 抗trop-2抗体、其抗原结合片段及其医药用途
EP3744734A1 (en) Anti-4-1bb antibody, antigen-binding fragment thereof and medical use thereof
CN113227148B (zh) 抗gpc3抗体、其抗原结合片段及其医药用途
WO2021197401A1 (zh) 结合cd47的抗原结合多肽及用途
CN115298216A (zh) 抗体或其抗原结合片段、其制备方法及医药用途
JP2020532279A (ja) 抗ｇｉｔｒ抗体、その抗原結合性断片、およびその医薬用途
WO2022037528A1 (zh) 结合bcma的单可变结构域及抗原结合分子
CN110343181B (zh) 针对凝血因子ix(fix)的单域抗体
JP2023537958A (ja) Ｂｃｍａと結合する単一可変ドメイン及び抗原結合分子
KR20230035079A (ko) 응고인자 xi(fxi) 결합 단백질
WO2024012434A1 (en) Antibody, antigen-binding fragment thereof, and pharmaceutical use thereof
WO2024088386A1 (en) Antibody, antigen-binding fragment thereof, and pharmaceutical use thereof
WO2022171109A1 (zh) 抗vegf抗体及其用途
TWI836070B (zh) 抗trop-2抗體、其抗原結合片段及其醫藥用途
KR102662387B1 (ko) B7-h3 항체, 이의 항원-결합 단편 및 이의 의학적 용도
WO2022078424A1 (zh) 抗trop-2抗体、其抗原结合片段或其突变体、及其医药用途
TW202413422A (zh) 抗體、其抗原結合片段及其藥物用途
CN116478288A (zh) 红细胞弱结合型人源化cd47抗体及其应用
CN117843776A (zh) 抗体分子、核酸、制药用途及炎性疾病治疗方法
CN116744971A (zh) 一种抗erbb3受体的抗体或其抗原结合片段及其医药用途
KR20190134614A (ko) B7-h3 항체, 이의 항원-결합 단편 및 이의 의학적 용도
Lu et al. Llama-Derived Single-Chain Antibody for Targeting CD20 in B-Cell Lymphoma

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230302