JP2023531872A - 急性呼吸窮迫症候群、喘息、又はアレルギー性鼻炎を治療するための製剤及び方法 - Google Patents

急性呼吸窮迫症候群、喘息、又はアレルギー性鼻炎を治療するための製剤及び方法 Download PDF

Info

Publication number
JP2023531872A
JP2023531872A JP2022573664A JP2022573664A JP2023531872A JP 2023531872 A JP2023531872 A JP 2023531872A JP 2022573664 A JP2022573664 A JP 2022573664A JP 2022573664 A JP2022573664 A JP 2022573664A JP 2023531872 A JP2023531872 A JP 2023531872A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
amino acids
free amino
pharmaceutical formulation
present
arginine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2022573664A
Other languages
English (en)
Other versions
JPWO2021243183A5 (ja
Inventor
ヴィディヤサガル，サダシヴァン
グロッシェ，アストリッド
シュー，シャオドン
アンゴリ，ダミアーノ
ガット，スティーブン，ジェー．
Original Assignee
ユニバーシティ オブ フロリダ リサーチ ファウンデーション，インコーポレイティド
エントリンジック，エルエルシー．
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ユニバーシティ オブ フロリダ リサーチ ファウンデーション，インコーポレイティド, エントリンジック，エルエルシー． filed Critical ユニバーシティ オブ フロリダ リサーチ ファウンデーション，インコーポレイティド
Publication of JP2023531872A publication Critical patent/JP2023531872A/ja
Publication of JPWO2021243183A5 publication Critical patent/JPWO2021243183A5/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A61K31/198—Alpha-amino acids, e.g. alanine or edetic acid [EDTA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A61K31/405—Indole-alkanecarboxylic acids; Derivatives thereof, e.g. tryptophan, indomethacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0043—Nose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/007—Pulmonary tract; Aromatherapy
    • A61K9/0073—Sprays or powders for inhalation; Aerolised or nebulised preparations generated by other means than thermal energy

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

ＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎の治療に有用な遊離アミノ酸の組み合わせを含む製剤を本明細書に記載する。ＡＲＤＳ、喘息、若しくはアレルギー性鼻炎の治療を必要とする対象におけるＡＲＤＳ、喘息、若しくはアレルギー性鼻炎を治療するためのそのようなアミノ酸製剤の使用、ＡＲＤＳ、喘息、若しくはアレルギー性鼻炎の治療を必要とする対象におけるこれらの治療のための方法における、及び／又はＡＲＤＳ、喘息、若しくはアレルギー性鼻炎の治療のための医薬品の調製におけるそのようなアミノ酸製剤の使用が、本明細書に包含される。【選択図】図１

Description

関連出願
本出願は、２０２０年５月２９日出願の米国仮特許出願第６３／０３２，１８５号、２０２０年９月１８日出願の米国仮特許出願第６３／０８０，４７０号、２０２０年１０月７日出願の米国仮特許出願第６３／０８８，８１３号、及び２０２１年１月１２日出願の米国仮特許出願第６３／１３６，４０４号の優先権を主張するものであり、その全体が参照により全ての目的で本明細書に組み込まれる。
本明細書に記載されるアミノ酸製剤、組成物、薬剤、及び方法は、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、喘息、又はアレルギー性鼻炎の治療を必要とする対象において、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、喘息、又はアレルギー性鼻炎を治療するために有用である。治療を必要とする対象は、過剰な肺胞液に関連する症状を含む、呼吸窮迫の徴候を呈することがある。アミノ酸製剤及びその組成物及び薬剤は、上皮ナトリウムチャネル（ＥＮａＣ）活性の増加をもたらし、それによってこれらの疾患の少なくとも１つの症状を低減させる。ＡＲＤＳは、コロナウイルス感染症２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）を含む様々な疾患に関連する症候群である。ＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎の治療を必要とする対象における、及びＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎の治療のための医薬品の調製における、ＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎を治療するための本明細書に記載のアミノ酸製剤の使用、並びにＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎を治療するための方法が、本明細書に包含される。
コロナウイルス感染症２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）を引き起こすＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、主に気道及び肺胞上皮細胞、血管内皮細胞、及びマクロファージに感染する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症は、致命的な炎症反応及び急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）を頻繁に引き起こし、これはＣＯＶＩＤ－１９患者の高死亡率と関連している。ＡＲＤＳは、ＣＯＶＩＤ－１９肺炎を呈する患者の４２％で発症し、その６１～８１％が集中治療室（ＩＣＵ）に入院している。ＣＯＶＩＤ－１９患者の約２０％では、疾患は重度であり、そのような患者は酸素療法又は機械的換気を必要とする。ＣＯＶＩＤ－１９ ＡＲＤＳ患者は、症状の発病後、中央値で８．５日換気装置を使用しており、典型的には、このような患者は、このような支持療法後、予後不良である。ＡＲＤＳは、肺にびまん性肺胞障害を引き起こす。興味深いことに、ＣＯＶＩＤ－１９のＡＲＤＳ患者は、他の原因により、ＡＲＤＳ患者よりも転帰が悪い。治療プロトコルの進歩にもかかわらず、ＡＲＤＳ患者は高い死亡率を継続して経験する。
対象となる実施形態は、この概要ではなく特許請求の範囲によって定義される。この概要は、様々な側面の大まかな概要であり、以下の詳細説明の項で更に説明するいくつかの概念を紹介する。この概要は、請求された主題の重要な特徴又は必須の特徴を識別することを意図するものではなく、請求された主題の範囲を決定するために単独で使用することも意図するものでもない。主題は、明細書全体、一部又は全ての図面、及び各請求項の適切な部分を参照することによって理解されるべきである。
ＥＮａＣ及びバリア機能は、肺胞液クリアランスにおいて重要な役割を果たし、ＣＯＶＩＤ－１９に見られるように、その破壊がＡＲＤＳの一因となる。先天性免疫機構によるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の認識不良は、Ｔｈ１及びＴｈ２応答の早期活性化及びＴｒｅｇ細胞応答の抑制を引き起こす。この免疫反応の変化は、古典的サイトカインストームをもたらし、最終的にＥＮａＣ活性及びバリア機能の破壊につながる。今回の結果が出る前には、ＥＮａＣ活性及びバリア機能の破壊に関与するサイトカインのタイムライン及び量についてはほとんど知られていなかった。この理解の欠如が、ＡＲＤＳに対処する治療の選択肢の少なさの一因となっている。
本明細書に提示される電気生理学的及び免疫蛍光法に基づいて、本発明者らは、ＥＮａＣ活性が、バリア破壊よりも早期に減少し、Ｔｈ２サイトカイン（ＩＬ－４及びＩＬ－１３）が、先天的（ＩＦＮ－γ）、Ｔｈ１（ＴＮＦ－α）及びＴｒｅｇ（ＴＧＦ－β）免疫応答由来のサイトカインよりも、これらの阻害効果に大きく寄与したことを示している。
本明細書に記載されるように、初代正常ヒト気管支上皮細胞（ＨＢＥＣ）を、用量及び時間依存性評価においてＣＯＶＩＤ－１９中に放出される、代表的なサイトカイン、及びその組み合わせに曝露した。少なくとも部分的にはＥＮａＣ機能の増加させることによって、アミノ酸製剤がＡＲＤＳを治療するために使用できる可能性を探索するために、本発明者らは、ＣＯＶＩＤ－１９免疫応答に特徴的な選択されたサイトカインに曝露された初代ＨＢＥＣのモデル系において、ＥＮａＣ活性を調節する能力について、ＡＡ－ＥＣ０１と指定されたものを含む複数のアミノ酸製剤を評価した。本明細書に記載されるように、ＡＡ－ＥＣ０１は、最大ＥＮａＣ阻害を示した用量及びインキュベーション時間でＩＬ－１３に曝露されたときに、ＨＢＥＣにおいてＥＮａＣ機能を改善し、ＭＵＣ５ＡＣ発現を減少させる例示的なアミノ酸製剤である。ＡＡ－ＥＣ０１はまた、サイトカインカクテルとともにインキュベートしたＨＢＥＣの線毛周囲（ｐｅｒｉｃｉｌｉａｒｙ）膜内のＥＮａＣ発現を増加させ、ＩＬ－６分泌を減少させた。したがって、本明細書に提示される結果は、ＡＲＤＳ関連炎症反応のインビトロモデル系におけるＥＮａＣ機能に対するＡＡ－ＥＣ０１の有益な効果を示す。ＥＮａＣ活性を回復する能力により、ＡＡ－ＥＣ０１は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２又は他の肺ウイルス感染後のＡＲＤＳ患者の転帰を改善するように設計された最初の治療製剤となる可能性がある。ＡＡ－ＥＣ０１は、スタンドアロン治療剤として使用することができるか、又はＡＲＤＳ患者を治療するために現在使用されている他の治療剤との組み合わせ治療アプローチで使用することもできる。
ＡＡ－ＥＣ０１はまた、喘息を治療するための治療薬として提供されている。喘息を治療するために、ＡＡ－ＥＣ０１は、スタンドアロン治療剤として使用することができるが、又は喘息患者を治療するために現在使用されている他の治療剤との組み合わせ治療アプローチで使用することもできる。
ＡＡ－ＥＣ０１はまた、アレルギー性鼻炎を治療するための治療薬としても提示される。アレルギー性鼻炎を治療するため、ＡＡ－ＥＣ０１は、スタンドアロン治療剤として使用することができるが、又はアレルギー性鼻炎患者を治療するために現在使用されている他の治療剤との組み合わせ治療アプローチで使用することもできる。
いくつかの実施形態では、ＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎の治療を必要とする対象におけるＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎の治療に使用するための医薬製剤が提示され、製剤が、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせであって、治療有効量のアルギニン及びリジンの遊離アミノ酸、並びに治療有効量のグルタミン、トリプトファン、チロシン、システイン、アスパラギン、若しくはトレオニンの遊離アミノ酸、又はそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つ、から本質的になるか、あるいはそれらからなり、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせが、ＡＲＤＳ若しくは喘息を治療するための肺への送達のために製剤化されており、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせが、対象の肺内の流体貯留を低減させるのに十分であるか、又は、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせがアレルギー性鼻炎を治療するための鼻腔への送達のために製剤化されており、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせが、対象の鼻腔内の流体貯留を低減させるのに十分である、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせと、任意選択的に、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体、緩衝液、電解質、アジュバント、賦形剤、又は水又はそれらの任意の組み合わせと、を含む。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、遊離アミノ酸は、治療有効量のアルギニン及びリジンの遊離アミノ酸、並びに治療有効量のグルタミン、トリプトファン、チロシン、システイン、若しくはアスパラギンの遊離アミノ酸、又はそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つ、から本質的になるか、あるいはそれらからなる。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、遊離アミノ酸は、治療有効量のアルギニン、リジンの遊離アミノ酸、及びグルタミン、並びに治療有効量のトリプトファン、チロシン、システイン、アスパラギン、若しくはトレオニンの遊離アミノ酸、又はそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つ、から本質的になるか、あるいはそれらからなる。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、遊離アミノ酸は、治療有効量のアルギニン、リジン、及びグルタミンの遊離アミノ酸、並びに治療有効量のトリプトファン、チロシン、システイン、若しくはアスパラギンの遊離アミノ酸、又はそれらの任意の組み合わせの少なくとも１つ、から本質的になるか、あるいはそれらからなる。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、医薬製剤は、無菌である。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、医薬製剤中に存在する遊離アミノ酸の各々の濃度は、０．１ｍＭ～３０ｍＭ又は０．５ｍＭ～３０ｍＭの範囲である。いくつかの実施形態では、医薬製剤中に存在する遊離アミノ酸の各々の濃度は、０．１ｍＭ～１５ｍＭ又は０．５ｍＭ～１５ｍＭの範囲である。いくつかの実施形態では、医薬製剤中に存在する遊離アミノ酸の各々の濃度は、０．１ｍＭ～１０ｍＭ又は０．５ｍＭ～１０ｍＭの範囲である。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、医薬製剤のｐＨは、２．５～８．０、３．０～８．０、３．５～８．０、４．０～８．０、４．５～８．０、４．５～６．５、５．５～６．５、５．０～８．０、５．５～８．０、６．０～８．０、６．５～８．０、７．０～８．０、又は７．５～８．０の範囲である。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、アルギニンの濃度が４ｍＭ～１０ｍＭの範囲であるか、アルギニンの濃度が６ｍＭ～１０ｍＭの範囲であるか、アルギニンの濃度が７ｍＭ～９ｍＭの範囲であるか、アルギニンの濃度が７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲であるか、若しくはアルギニンの濃度が８ｍＭであり；リジンの濃度が４ｍＭ～１０ｍＭの範囲であるか、リジンの濃度が６ｍＭ～１０ｍＭの範囲であるか、リジンの濃度が７ｍＭ～９ｍＭの範囲であるか、リジンの濃度が７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲であるか、若しくはリジンの濃度が８ｍＭであり；グルタミンの濃度が４ｍＭ～１０ｍＭの範囲であるか、グルタミンの濃度が６ｍＭ～１０ｍＭの範囲であるか、グルタミンの濃度が７ｍＭ～９ｍＭの範囲であるか、グルタミンの濃度が７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲であるか、若しくはリジンの濃度が８ｍＭであり；トリプトファンの濃度が４ｍＭ～１０ｍＭの範囲であるか、トリプトファンの濃度が６ｍＭ～１０ｍＭの範囲であるか、トリプトファンの濃度が７ｍＭ～９ｍＭの範囲であるか、トリプトファンの濃度が７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲であるか、若しくはトリプトファンの濃度が８ｍＭであり；チロシンの濃度の範囲が０．１ｍＭ～１．２ｍＭであるか、チロシンの濃度の範囲が０．４ｍＭ～１．２ｍＭであるか、チロシンの濃度の範囲が０．６ｍＭ～１．２ｍＭであるか、チロシンの濃度の範囲が０．８ｍＭ～１．２ｍＭであるか、若しくはチロシンの濃度が１．２ｍＭであり；システインの濃度が４ｍＭ～１０ｍＭの範囲であるか、システインの濃度が６ｍＭ～１０ｍＭの範囲であるか、システインの濃度が７ｍＭ～９ｍＭの範囲であるか、システインの濃度の範囲が７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲であるか、若しくはシステインの濃度が８ｍＭであり；アスパラギンの濃度が４ｍＭ～１０ｍＭの範囲であるか、アスパラギンの濃度が６ｍＭ～１０ｍＭの範囲であるか、アスパラギンの濃度が７ｍＭ～９ｍＭの範囲であるか、アスパラギンの濃度が７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲であるか、若しくはアスパラギンの濃度が８ｍＭであり；トレオニンの濃度が４ｍＭ～１０ｍＭの範囲であるか、トレオニンの濃度が６ｍＭ～１０ｍＭの範囲であるか、トレオニンの濃度が７ｍＭ～９ｍＭの範囲であるか、トレオニンの濃度が７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲であるか、若しくはトレオニンの濃度が８ｍＭであり、又はそれらの任意の組み合わせである。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせは、治療有効量のアルギニン、リジン、トリプトファン、チロシン、及びグルタミン、並びに任意選択的にアスパラギンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる。医薬製剤のいくつかの実施形態では、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせは、治療有効量のアルギニン、リジン、トリプトファン、チロシン、及びグルタミンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる。医薬製剤のいくつかの実施形態では、アルギニンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、リジンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、トリプトファンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、チロシンは、０．１ｍＭ～１．２ｍＭの範囲の濃度で存在し、グルタミンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在する。医薬製剤のいくつかの実施形態では、アルギニンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、リジンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、トリプトファンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、チロシンは、０．８ｍＭ～１．２ｍＭの範囲の濃度で存在し、グルタミンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在する。医薬製剤のいくつかの実施形態では、アルギニンは８ｍＭの濃度で存在し、リジンは８ｍＭの濃度で存在し、トリプトファンは８ｍＭの濃度で存在し、チロシンは１．２ｍＭの濃度で存在し、グルタミンは８ｍＭの濃度で存在する。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせは、治療有効量のアルギニン、リジン、トリプトファン、チロシン、及びグルタミン、並びに任意選択的にアスパラギンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる。医薬製剤のいくつかの実施形態では、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせは、治療有効量のアルギニン、リジン、トリプトファン、及びグルタミンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる。医薬製剤のいくつかの実施形態では、アルギニンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、リジンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、トリプトファンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、グルタミンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在する。医薬製剤のいくつかの実施形態では、アルギニンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、リジンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、トリプトファンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、グルタミンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在する。医薬製剤のいくつかの実施形態では、アルギニンは、８ｍＭの濃度で存在し、リジンは、８ｍＭの濃度で存在し、トリプトファンは、８ｍＭの濃度で存在し、グルタミンは、８ｍＭの濃度で存在する。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせは、治療有効量のアルギニン、リジン、チロシン、及びグルタミン、並びに任意選択的にアスパラギンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる。医薬製剤のいくつかの実施形態では、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせは、治療有効量のアルギニン、リジン、チロシン、及びグルタミンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる。医薬製剤のいくつかの実施形態では、アルギニンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、リジンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、チロシンは、０．１ｍＭ～１．２ｍＭの範囲の濃度で存在し、グルタミンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在する。医薬製剤のいくつかの実施形態では、アルギニンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、リジンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、チロシンは、０．８ｍＭ～１．２ｍＭの範囲の濃度で存在し、グルタミンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在する。医薬製剤のいくつかの実施形態では、アルギニンは、８ｍＭの濃度で存在し、リジンは、８ｍＭの濃度で存在し、チロシンは、１．２ｍＭの濃度で存在し、グルタミンは、８ｍＭの濃度で存在する。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、遊離アミノ酸の治療有効組み合わせは、治療有効量のアルギニン、リジン、グルタミン、システイン、及びアスパラギンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる。医薬製剤のいくつかの実施形態では、アルギニンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、リジンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、グルタミンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、システインは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、アスパラギンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在する。医薬製剤のいくつかの実施形態では、アルギニンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、リジンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、グルタミンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、システインは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、アスパラギンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在する。医薬製剤のいくつかの実施形態では、アルギニンは８ｍＭの濃度で存在し、リジンは８ｍＭの濃度で存在し、グルタミンは８ｍＭの濃度で存在し、システインは８ｍＭの濃度で存在し、アスパラギンは８ｍＭの濃度で存在する。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせは、治療有効量のアルギニン、リジン、及びトリプトファン、並びに任意選択的にアスパラギンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる。医薬製剤のいくつかの実施形態では、遊離アミノ酸の治療上有効な組み合わせは、治療有効量のアルギニン、リジン、及びトリプトファンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる。医薬製剤のいくつかの実施形態では、アルギニンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、リジンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、トリプトファンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在する。医薬製剤のいくつかの実施形態では、アルギニンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、リジンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、トリプトファンは、７．２ｍＭ～８．８の範囲の濃度で存在する。医薬製剤のいくつかの実施形態では、アルギニンは、８ｍＭの濃度で存在し、リジンは、８ｍＭの濃度で存在し、トリプトファンは、８ｍＭの濃度で存在する。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせは、治療有効量のアルギニン、リジン、トリプトファン、トレオニン、及びチロシン、並びに任意選択的にアスパラギンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる。医薬製剤のいくつかの実施形態では、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせは、治療有効量のアルギニン、リジン、トリプトファン、トレオニン、及びチロシンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる。医薬製剤のいくつかの実施形態では、アルギニンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、リジンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、トリプトファンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、トレオニンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、チロシンは、０．１ｍＭ～１．２ｍＭの範囲の濃度で存在する。医薬製剤のいくつかの実施形態では、アルギニンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、リジンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、トリプトファンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、トレオニンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、チロシンは、０．８ｍＭ～１．２ｍＭの範囲の濃度で存在する。医薬製剤のいくつかの実施形態では、アルギニンは、８ｍＭの濃度で存在し、リジンは、８ｍＭの濃度で存在し、トリプトファンは、８ｍＭの濃度で存在し、トレオニンは、８ｍＭの濃度で存在し、チロシンは、１．２ｍＭの濃度で存在する。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせは、治療有効量のアルギニン、リジン、トリプトファン、トレオニン、及びグルタミン、並びに任意選択的にアスパラギンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる。医薬製剤のいくつかの実施形態では、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせは、治療有効量のアルギニン、リジン、トリプトファン、トレオニン、及びグルタミンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる。医薬製剤のいくつかの実施形態では、アルギニンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、リジンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、トリプトファンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、トレオニンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、グルタミンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在する。医薬製剤のいくつかの実施形態では、アルギニンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、リジンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、トリプトファンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、トレオニンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、グルタミンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在する。医薬製剤のいくつかの実施形態では、アルギニンは、８ｍＭの濃度で存在し、リジンは、８ｍＭの濃度で存在し、トリプトファンは、８ｍＭの濃度で存在し、トレオニンは、８ｍＭの濃度で存在し、グルタミンは、８ｍＭの濃度で存在する。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、遊離アミノ酸の治療有効組み合わせは、アルギニン、リジン、トリプトファン、チロシン、グルタミン、及びトレオニン、並びに任意でアスパラギンの治療有効量の遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる。医薬製剤のいくつかの実施形態では、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせは、治療有効量のアルギニン、リジン、トリプトファン、チロシン、グルタミン、及びトレオニンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる。医薬製剤のいくつかの実施形態では、アルギニンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、リジンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、トリプトファンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、チロシンは、０．１ｍＭ～１．２ｍＭの範囲の濃度で存在し、グルタミンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、トレオニンは、６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在する。医薬製剤のいくつかの実施形態では、アルギニンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、リジンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、トリプトファンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、チロシンは、０．８ｍＭ～１．２ｍＭの範囲の濃度で存在し、グルタミンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、トレオニンは、７．２ｍＭ～８．８ｍＭの濃度で存在する。医薬製剤のいくつかの実施形態では、アルギニンは８ｍＭの濃度で存在し、リジンは８ｍＭの濃度で存在し、トリプトファンは８ｍＭの濃度で存在し、チロシンは１．２ｍＭの濃度で存在し、グルタミンは８ｍＭの濃度で存在し、トレオニンは８ｍＭの濃度で存在する。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、医薬製剤は、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体、緩衝剤、電解質、アジュバント、賦形剤、若しくは水、又はそれらの任意の組み合わせを更に含む。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、遊離アミノ酸の少なくとも１つ、又は遊離アミノ酸の各々は、Ｌ－アミノ酸を含む。医薬製剤のいくつかの実施形態では、アミノ酸の全ては、Ｌ－アミノ酸である。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、医薬製剤は、経肺経路、吸入経路、又は鼻腔内経路による投与のために製剤化される。医薬製剤のいくつかの実施形態では、医薬製剤は、吸入又は鼻腔投与を介した投与のために製剤化される。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、対象は哺乳動物である。医薬製剤のいくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒト、ネコ、イヌ、ブタ、ウマ、ウシ、ヒツジ、又はヤギである。医薬製剤のいくつかの実施形態では、哺乳動物はヒトである。医薬製剤のいくつかの実施形態では、ヒトは、乳幼児である。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、対象は、コロナウイルス感染症２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）に罹患している。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、医薬製剤は、ＡＲＤＳ又は喘息に罹患した対象の肺内の過剰な流体貯留を低減させ、それによって、ＡＲＤＳ又は喘息に関連する少なくとも１つの症状を低減させる。医薬製剤のいくつかの実施形態では、医薬製剤は、アレルギー性鼻炎に罹患した対象の鼻腔内の過剰な流体貯留を低減させ、それによって、アレルギー性鼻炎に関連する少なくとも１つの症状を低減させる。過剰な流体貯留の低減は、部分的には、ＥＮａＣ活性の増加によるものである。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、医薬製剤は、ＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎の治療に使用するためのものである。そのいくつかの実施形態では、医薬製剤は、肺内経路、吸入経路、又は鼻腔内経路のうちの少なくとも１つを介して投与可能である。そのいくつかの実施形態では、医薬製剤は、吸入又は鼻腔投与を介して投与可能である。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、医薬製剤は、ＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎を治療するための医薬品の製造における使用のためのものである。そのいくつかの実施形態では、医薬品は、肺、吸入、又は鼻腔内経路のうちの少なくとも１つを介して投与可能である。一部の実施形態では、薬剤は、吸入又は鼻腔投与を介して投与可能である。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、医薬製剤が、ＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎、それを必要とする対象におけるＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎を治療するための方法において使用され、方法が、治療を必要とする前記対象に、本明細書に記載される医薬製剤のうちの少なくとも１つを投与することを含み、投与が、肺内の流体貯留を低減させ、それによって、対象におけるＡＲＤＳ又は喘息に関連する少なくとも１つの症状を低減させ、又は投与が、対象の鼻腔内の流体の蓄積を低減させ、それによって、対象におけるアレルギー性鼻炎に関連する少なくとも１つの症状を低減させる。
方法のいくつかの実施形態では、医薬製剤は、肺内経路、吸入経路、又は鼻腔内経路を介して投与される。方法のいくつかの実施形態では、医薬製剤は、吸入又は鼻腔投与を介して投与される。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、遊離アミノ酸の組み合わせを含む医薬製剤が提示される：治療有効量のアルギニン及びリジンの遊離アミノ酸、並びに治療有効量のグルタミン、トリプトファン、チロシン、システイン、アスパラギン、若しくはトレオニンの遊離アミノ酸、又はそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つ、から本質的になるか、あるいはそれらからなる、遊離アミノ酸、並びに任意選択的に、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体、緩衝液、電解質、アジュバント、賦形剤、若しくは水、又はそれらの任意の組み合わせ、である。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせを含む医薬製剤が提示される：治療有効量のアルギニン及びリジンの遊離アミノ酸、並びに治療有効量のグルタミン、トリプトファン、チロシン、システイン、若しくはアスパラギンの遊離アミノ酸、又はそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つ、から本質的になるか、又はそれらからなる、遊離アミノ酸、である。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、遊離アミノ酸の組み合わせを含む医薬製剤が提示される：治療有効量のアルギニン、リジン、及びグルタミンの遊離アミノ酸、並びに治療有効量のトリプトファン、チロシン、システイン、アスパラギン、若しくはトレオニンの遊離アミノ酸、又はそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つ、から本質的になるか、又はそれらからなる、遊離アミノ酸、である。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせは、治療有効量のアルギニン、リジン、トリプトファン、チロシン、及びグルタミンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせは、治療有効量のアルギニン、リジン、グルタミン、システイン、及びアスパラギンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせは、治療有効量のアルギニン、リジン、トリプトファン、及びグルタミンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせは、治療有効量のアルギニン、リジン、チロシン、及びグルタミンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる。
医薬製剤のいくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬製剤、又は本明細書に記載の医薬製剤を含む医薬品を含むデバイスが提示され、デバイスは、肺又は鼻腔への医薬製剤又は医薬品の送達を必要とする対象において医薬製剤又は医薬品を送達するように構成されている。例示的なこうした装置としては、吸入器、ネブライザー、鼻腔用スプレー容器、及び点鼻用容器が挙げられる。
別に記載される実施形態の全ての組み合わせが想定されている。
本開示のいくつかの実施形態は、添付図面を参照して、例としてのみ、本明細書に記載する。ここで図面を詳細に特に参照すると、示される実施形態は、例示として、及び本開示の実施形態の例示的な考察の目的としていることが強調される。これに関して、図面を用いてなされた説明は、本開示の実施形態がどのように実施され得るかを、当業者に明らかにする。
肺胞及び周囲の微小毛細血管床を介したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の病態形成の概略図であり、このプロセスにおいてナトリウムチャネルＥＮａＣを阻害する。 ＩＬ－１３の異なる濃度の存在下でのヒト気管支上皮細胞におけるＥＮａＣ電流。Ｎ＝６組織。 ＩＬ－１２がＥＮａＣ電流Ｎ＝６組織の最大低下をもたらすのに必要な時間。 ＩＬ－１３がＥＮａＣ電流を最大低下をもたらすのに必要な時間。Ｎ＝６組織 ＨＢＥＣ細胞は、透過性インサート上で増殖し、ＩＬ－１３で４日間及び１４日間処理された。図５Ａ．ＨＢＥＣは、リンゲル溶液と比較した場合、製剤ＡＡＦ０１（本明細書ではＡＡ－ＥＣ０１とも呼ぶ）の存在下でのＥＮａＣ電流の増加を示す。図５Ｂ．リンゲル溶液中のＨＢＥＣと比較した場合、ＡＡＦ０１の存在下でブメタニド感受性アニオン電流は減少した。Ｎ＝６組織。 ＡＡＦ０１は、ＩＬ－１３で処置されたＨＢＥＣにおいて、塩化物分泌を減少させた。図６Ａ．Ｊｎｅｔ基底ＷＴ５４及びＷＴ５９、図６Ｂ．Ｊｎｅｔブメタニド後ＷＴ５４及びＷＴ５９。ＡＡＦ０１は、ＩＬ－１３誘導Ｃｌ分泌を減少させて正常値に戻す（０日目）。 ２０ｎｇのＩＬ－１３で４日間及び１４日間処理した完全分化した初代ＨＢＥＣにおける、ベンザミル感受性電流（ＥＮａＣ活性）及びブメタニド感受性電流（アニオン電流）に対する選択アミノ酸製剤の効果。平均±ＳＥＭ、リンゲル対照と比較した場合、＊Ｐ＜０．０５でのＡＮＯＶＡ（ｎ＝３）。 ２０ｎｇのＩＬ－１３で４日間及び１４日間処理した場合の初代ＨＢＥＣ中のベンザミル感受性電流（ＥＮａＣ活性）及びブメタニド感受性電流（アニオン電流）に対する選択アミノ酸製剤の効果。平均±ＳＥＭ、Ｐ＜０．０５でのＡＮＯＶＡ（ｎ＝３）。 漸増濃度のＴＮＦ－αに７日間曝露後のヒト気管支上皮細胞におけるＥＮａＣ活性。ヒト気管支上皮細胞（ＨＢＥＣ）を、異なる濃度のＴＮＦ－α（０．００００５、０．０００５、０．００５、０．０５、０．５、５、５０又は５００ｎｇ／ｍＬ培地）で７日間処理した。 漸増濃度のＩＦＮ－γに７日間曝露後のヒト気管支上皮細胞におけるＥＮａＣ活性。ＨＢＥＣをＩＦＮ－γ（０．００００５、０．０００５、０．００５、０．０５、０．５、５、５０又は５００ｎｇ／ｍＬ培地）で７日間処理した。 漸増濃度のＴＧＦ－β１に７日間曝露後のヒト気管支上皮細胞におけるＥＮａＣ活性。ＨＢＥＣをＴＧＦ－β１（０．００００５、０．０００５、０．００５、０．０５、０．５、５、５０又は５００ｎｇ／ｍＬ培地）で７日間処理した。 ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、及びＴＧＦ－β１に７日間曝露後のヒト気管支上皮細胞におけるＥＮａＣ活性に対する選択アミノ酸製剤の効果。ＨＢＥＣを、ＴＮＦ－α（１．２ｎｇ／ｍＬ培地）、ＩＦＮ－γ（０．８７５ｎｇ／ｍＬ培地）、及びＴＧＦ－β１（２．６ｎｇ／ｍＬ）で７日間処理した。ナイーブ細胞：同年齢の正常で健康な細胞。選択された“５つのＡＡ製剤”（８ ｍＭアルギニン、８ ｍＭリジン、８ ｍＭシステイン、８ ｍＭアスパラギン、８ ｍＭグルタミン）、ＮＣ（８ ｍＭアスパラギン酸、８ ｍＭトレオニン、８ ｍＭロイシン） ＨＢＥＣにおけるベンザミル感受性Ｉｓｃ及びＴＥＥＲに対するＩＦＮ－γの用量依存的及び時間依存的効果。（１３Ａ）ベンザミル感受性Ｉｓｃに対するＩＦＮ－γの用量依存的効果を、漸増濃度のＩＦＮ－γ（５×１０－５～５００ｎｇ／ｍＬ）との７日間のＨＢＥＣのインキュベーション後に解析した。デルタＩｓｃは、Ｕｓｓｉｎｇチャンバ中のリンゲル溶液に６μＭのベンザミルを頂端から添加する前及び１５分後のＩｓｃから計算した。（１３Ｂ）ＴＥＥＲに対するＩＦＮ－γの用量依存的効果を、漸増濃度のＩＦＮ－γ（５×１０－５～５００ｎｇ／ｍＬ）との７日間のＨＢＥＣのインキュベ－ション後に解析した。ＴＥＥＲをＵｓｓｉｎｇチャンバ中のリンゲル液に浸しながら、３０分後に記録した。（１３Ｃ）ベンザミル感受性Ｉｓｃに対するＩＦＮ－γの時間依存的効果を、１ｎｇ／ｍＬのＩＦＮ－γとの１６日間のＨＢＥＣのインキュベ－ション後に解析し、データは２、４、６、８、１０、１２、１４、及び１６日目に解析した。デルタＩｓｃは、Ｕｓｓｉｎｇチャンバ中のリンゲル溶液に６μＭのベンザミルを頂端から添加する前及び１５分後のＩｓｃから計算した。（１３Ｄ）ＴＥＥＲに対するＩＦＮ－γの時間依存的効果を、１ｎｇ／ｍＬのＩＦＮ－γとの１６日間のＨＢＥＣのインキュベ－ション後に解析し、データは２、４、６、８、１０、１２、１４、及び１６日目に解析した。ＴＥＥＲをＵｓｓｉｎｇチャンバ中のリンゲル液に浸しながら、３０分後に記録した。全ての値を対照（０ｎｇ／ｍＬサイトカイン／０日目）に対して正規化し、データを平均±ＳＥＭとして提示する（群当たりＮ＝２の独立した実験でのｎ＝２ドナー）。統計的有意性を、対照との対比較についてマン・ホイットニー検定で検定した（＊ Ｐ＜０．０５）。 ＨＢＥＣにおけるベンザミル感受性Ｉｓｃ及びＴＥＥＲに対するＴＮＦ－αの用量依存的及び時間依存的の効果。（１４Ａ）ベンザミル感受性Ｉｓｃに対するＴＮＦ－αの用量依存的効果を、漸増濃度のＴＦＮ－α（５×１０－５～５００ｎｇ／ｍＬ）との７日間のＨＢＥＣのインキュベ－ション後に解析した。デルタＩｓｃは、Ｕｓｓｉｎｇチャンバ中のリンゲル溶液に６μＭのベンザミルを頂端から添加する前及び１５分後のＩｓｃから計算した。（１４Ｂ）ＴＥＥＲに対するＴＮＦ－αの用量依存的効果を、漸増濃度のＴＦＮ－α（５×１０－５～５００ｎｇ／ｍＬ）との７日間のＨＢＥＣのインキュベ－ション後に解析した。ＴＥＥＲをＵｓｓｉｎｇチャンバ中のリンゲル液に浸しながら、３０分後に記録した。（１４Ｃ）ベンザミル感受性Ｉｓｃに対するＴＮＦ－αの時間依存的効果を、１ｎｇ／ｍＬのＴＮＦ－αとの１６日間のＨＢＥＣのインキュベ－ション後に解析し、データは２、４、６、８、１０、１２、１４、及び１６日目に解析した。デルタＩｓｃは、Ｕｓｓｉｎｇチャンバ中のリンゲル溶液に６μＭのベンザミルを頂端から添加する前及び１５分後のＩｓｃから計算した。（１４Ｄ）ＴＥＥＲに対するＴＮＦ－αの時間依存的効果を、１ｎｇ／ｍＬのＴＮＦ－αとの１６日間のＨＢＥＣのインキュベ－ション後に解析し、データは２、４、６、８、１０、１２、１４、及び１６日目に解析した。ＴＥＥＲをＵｓｓｉｎｇチャンバ中のリンゲル液に浸しながら、３０分後に記録した。全ての値を対照（０ｎｇ／ｍＬサイトカイン／０日目）に対して正規化し、データを平均±ＳＥＭとして提示する（群当たりＮ＝２の独立した実験でのｎ＝２ドナー）。統計的有意性を、対照との対比較についてマン・ホイットニー検定で検定した（＊ Ｐ＜０．０５）。 ＨＢＥＣにおけるベンザミル感受性Ｉｓｃ及びＴＥＥＲに対するＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αカクテルの用量効果並びにＩＬ－４の時間依存的効果。（１５Ａ）ベンザミル感受性Ｉｓｃに対するＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αカクテルの用量依存的効果を、それぞれ０．０５、０．５、２．５、５又は１０ｎｇ／ｍＬのＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αとの７日間のＨＢＥＣのインキュベーション後に解析した。デルタＩｓｃは、Ｕｓｓｉｎｇチャンバ中のリンゲル溶液に６μＭのベンザミルを頂端から添加する前及び１５分後のＩｓｃから計算した。（１５Ｂ）ＴＥＥＲに対するＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αカクテルの用量依存的効果を、それぞれ０．０５、０．５、２．５、５又は１０ｎｇ／ｍＬのＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αとの７日間のＨＢＥＣのインキュベーション後に解析した。ＴＥＥＲをＵｓｓｉｎｇチャンバ中のリンゲル液に浸しながら、３０分後に記録した。（１５Ｃ）ベンザミル感受性Ｉｓｃに対するＩＬ－４の時間依存的効果を、２ｎｇ／ｍＬのＩＬ－４との１４日間のＨＢＥＣのインキュベーション後に解析し、データは２、４、６、８、１０、１２、及び１４日目に解析した。デルタＩｓｃは、Ｕｓｓｉｎｇチャンバ中のリンゲル溶液に６μＭのベンザミルを頂端から添加する前及び１５分後のＩｓｃから計算した。（１５Ｄ）ＴＥＥＲに対するＩＬ－４の時間依存的効果を、２ｎｇ／ｍＬのＩＬ－４との１４日間のＨＢＥＣのインキュベーション後に解析し、データは２、４、６、８、１０、１２、及び１４日目に解析した。ＴＥＥＲをＵｓｓｉｎｇチャンバ中のリンゲル液に浸しながら、３０分後に記録した。全ての値を対照（０ｎｇ／ｍＬサイトカイン／０日目）に対して正規化し、データを平均±ＳＥＭとして提示する（群当たりＮ＝２の独立した実験でのｎ＝２ドナー）。統計的有意性を、対照との対比較についてマン・ホイットニー検定で検定した（＊ Ｐ＜０．０５）。 ＨＢＥＣにおけるベンザミル感受性Ｉｓｃ及びＴＥＥＲに対するＩＬ－１３の用量依存的及び時間依存的効果。（１６Ａ）ベンザミル感受性Ｉｓｃに対するＩＬ－１３の用量依存的効果を、漸増濃度のＩＬ－１３（０．１～６４ｎｇ／ｍＬ）との１４日間のＨＢＥＣのインキュベ－ション後に解析した。デルタＩｓｃは、Ｕｓｓｉｎｇチャンバ中のリンゲル溶液に６μＭのベンザミルを頂端から添加する前及び１５分後のＩｓｃから計算した。（１６Ｂ）ＴＥＥＲに対するＩＬ－１３の用量依存的効果を、漸増濃度のＩＬ－１３（０．１～６４ ｎｇ／ｍＬ）との１４日間のＨＢＥＣのインキュベ－ション後に解析した。ＴＥＥＲをＵｓｓｉｎｇチャンバ中のリンゲル液に浸しながら、３０分後に記録した。（１６Ｃ）ベンザミル感受性Ｉｓｃに対するＩＬ－１３の時間依存的効果を、２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１３との１６日間のＨＢＥＣのインキュベーション後に解析し、データを２、４、６、８、１０、１２、１４、及び１６日目に解析した。デルタＩｓｃは、Ｕｓｓｉｎｇチャンバ中のリンゲル溶液に６μＭのベンザミルを頂端から添加する前及び１５分後のＩｓｃから計算した。（１６Ｄ）ＴＥＥＲに対するＩＬ－１３の時間依存的効果を、２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１３との１６日間のＨＢＥＣのインキュベーション後に解析し、データは２、４、６、８、１０、１２、１４、及び１６日目に解析した。ＴＥＥＲをＵｓｓｉｎｇチャンバ中のリンゲル液に浸しながら、３０分後に記録した。全ての値を対照（０ｎｇ／ｍＬサイトカイン／０日目）に対して正規化し、データを平均±ＳＥＭとして提示する（群当たりＮ＝２の独立した実験でのｎ＝２ドナー）。統計的有意性を、対照との対比較についてマン・ホイットニー検定で検定した（＊ Ｐ＜０．０５）。 ＨＢＥＣにおけるベンザミル感受性Ｉｓｃ及びＴＥＥＲに対するＴＧＦ－β１の用量依存的及び時間依存的効果。（１７Ａ）ベンザミル感受性Ｉｓｃに対するＴＧＦ－β１の用量依存的効果を、漸増濃度のＴＧＦ－β１（５×１０－５～５０ｎｇ／ｍＬ）との７日間のＨＢＥＣのインキュベ－ション後に解析した。デルタＩｓｃは、Ｕｓｓｉｎｇチャンバ中のリンゲル溶液に６μＭのベンザミルを頂端から添加する前及び１５分後のＩｓｃから計算した。（１７Ｂ）ＴＥＥＲに対するＴＧＦ－β１の用量依存的効果を、漸増濃度のＴＧＦ－β１（５×１０－５～５０ｎｇ／ｍＬ）との７日間のＨＢＥＣのインキュベ－ション後に解析した。ＴＥＥＲをＵｓｓｉｎｇチャンバ中のリンゲル液に浸しながら、３０分後に記録した。（１７Ｃ）ベンザミル感受性Ｉｓｃに対するＴＧＦ－β１の時間依存的効果を、１ｎｇ／ｍＬのＴＧＦ－β１との１６日間のＨＢＥＣのインキュベーション後に解析し、データは２、４、６、８、１０、１２、１４、及び１６日目に解析した。デルタＩｓｃは、Ｕｓｓｉｎｇチャンバ中のリンゲル溶液に６μＭのベンザミルを頂端から添加する前及び１５分後のＩｓｃから計算した。（１７Ｄ）ＴＥＥＲに対するＴＧＦ－β１の時間依存的効果を、１ｎｇ／ｍＬのＴＧＦ－β１との１６日間のＨＢＥＣのインキュベーション後に解析し、データは２、４、６、８、１０、１２、１４、及び１６日目に解析した。ＴＥＥＲをＵｓｓｉｎｇチャンバ中のリンゲル液に浸しながら、３０分後に記録した。全ての値を対照（０ｎｇ／ｍＬサイトカイン／０日目）に対して正規化し、データを平均±ＳＥＭとして提示する（群当たりＮ＝２の独立した実験でのｎ＝２ドナー）。統計的有意性を、対照との対比較についてマン・ホイットニー検定で検定した（＊ Ｐ＜０．０５）。 ＨＢＥＣにおけるベンザミル感受性Ｉｓｃ及びＴＥＥＲに対するＡＡ－ＥＣ０１の効果、並びにＣＯＶＩＤ－１９関連ＡＲＤＳにおけるＥＮａＣ及び免疫応答に影響を及ぼすＡＡ－ＥＣ０１の概略図。（１８Ａ）ベンザミル感受性Ｉｓｃ対するＡＡ－ＥＣ０１の効果を、２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１３との１４日間のＨＢＥＣのインキュベーション後に解析した。デルタＩｓｃは、Ｕｓｓｉｎｇチャンバ中のリンゲル溶液、ＡＡ－ＥＣ０１又はＡＡＮＣ（陰性対照）に６μＭのベンザミルを頂端から添加する前及び１５分後のＩｓｃから計算した。（１８Ｂ）ＴＥＥＲに対するＡＡ－ＥＣ０１の効果を、２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１３との１４日間のＨＢＥＣのインキュベーション後に解析した。ＴＥＥＲをＵｓｓｉｎｇチャンバ中のリンゲル溶液、ＡＡ－ＥＣ０１、又はＡＡＮＣ（陰性対照）に浸しながら、３０分後に記録した。全ての値を対照（０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－１３）に対して正規化し、データを平均±ＳＥＭとして提示する（群当たりＮ＝２の独立した実験でのｎ＝２ドナー）。クラスカル・ワリスを用いて群間で有意性が確認された後、マン・ホイットニー検定を対比較に使用した（＊ Ｐ＜０．０５）。
開示された利益及び改善のうち、本開示の他の目的及び利点は、添付の図と併せて解釈される以下の説明から明らかになるであろう。本開示の詳細な実施形態が、本明細書に開示され、しかしながら、開示される実施形態は、様々な形態で具体化され得る本開示の単なる例示であることが理解されるべきである。更に、本開示の様々な実施形態に関して提供される各実施例は、例示を意図しており、限定を意図するものではない。
ＡＲＤＳは、ＣＯＶＩＤ－１９において高い死亡率と関連している。ＡＲＤＳは、肺胞液クリアランス（ＡＬＣ）の障害、肺胞－毛細血管の透過性亢進、血管及び上皮の漏出を伴うサイトカインストーム特徴とし、肺毛細血管から間質及び肺胞腔へのタンパク質が豊富な流体の漏出をもたらし、肺水腫を引き起こす。通常の条件下では、気道は、肺胞内腔及び肺胞間中核に埋め込まれた毛細血管網にわたってガス交換を促進する。ＥＮａＣは、起電性ナトリウム吸収し、続いて受動的吸水を媒介し、粘液線毛クリアランスのための最適な水分含量を維持する。しかしながら、ＥＮａＣは、ＣＯＶＩＤ－１９の病態形成の複数の段階で阻害され、これは肺胞内の流体蓄積につながる。酸素補給及び換気補助は、炎症を増強し、スーパーオキシド、ペルオキシ亜硝酸の形成及び一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）の脱共役を誘発し、ＥＮａＣを含むバリア及び輸送タンパク質を損傷する。
上記事象のカスケードを図１に概略的に示す。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によるＥＮａＣ活性の阻害は、以下の段階で起こる：１）膜貫通型プロテアーゼセリンＳ１メンバー２（ＴＭＰＲＳＳ２）、ウイルスのタンパク質分解活性化に必須の宿主細胞因子、結果として、ＣＯＶＩＤ－１９の拡散及び病態形成；２）アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）及びレニンアンジオテンシン系（ＲＡＳ）をアップレギュレーションするアンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）；３）ＡＣＥ及びＲＡＳ活性化に続発するサイトカインストームにより、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＩＰ－１０、ＩＬ－１３、ＭＣＰ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＧＣＳＦ ＩＰ－１０及びＭＩＰ－１Ａレベルの上昇を引き起こす；４）上皮と内皮のバリアの崩壊により、肺胞に流体漏れを引き起こし、それによって、ガス交換を低減する、５）肺胞内の炎症と局所的酸素増加に続発するＮＯＳの脱共役。
ＡＲＤＳに対する唯一の利用可能な治療は、酸素補給及び換気装置の使用であり、これは、浮腫液で満たされた肺胞腔を通してより多くの酸素を溶解し、血液－空気関門で利用可能な酸素を増加させるのに役立つ。しかしながら、酸素補給及び換気補助は、炎症を増強し、ｅＮＯＳの脱共役、スーパーオキシド形成、ペルオキシ亜硝酸（ＯＮＯＯ－）の増加、及び上皮及び周辺の脈管構造におけるＥＮａＣなどの膜関連タンパク質を含む様々な細胞タンパク質のシステイン残基の不可逆的なニトロ化を促進する。例えば輸送、細胞内及び細胞間の構造の完全性など、必須の細胞機能に寄与するＥＮａＣ及び他の細胞タンパク質への損傷は、肺組織の完全性に悪影響を及ぼす更なる損傷を引き起こす。
酸素補充療法及び機械的換気を受けているＣＯＶＩＤ－１９患者の高い死亡率は、上記のような傷害のカスケードと関連している可能性がある。実際に、これらの患者の死亡率は６５％～９４％の範囲であり、統計データは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２患者に換気装置を使用するメリットについて議論を引き起こしている。更に、ＣＯＶＩＤ－１９媒介性ＡＲＤＳに罹患している対象が、他の原因によりＡＲＤＳに罹っている対象よりもはるかに不良な転帰を有することも注目すべきである。
本発明者らは、ＡＲＤＳに対処するための潜在的な治療レジメンを調査するためのアッセイを開発し、ＡＲＤＳ、特にＣＯＶＩＤ－１９患者／対象におけるＡＲＤＳを治療する課題に対処するためのモデルシステムを開発した。したがって、本明細書に記載されるモデルシステムは、ＣＯＶＩＤ－１９に関連するか、又はＣＯＶＩＤ－１９とは無関係かにかかわらず、ＡＲＤＳに関連する重大な臨床問題に対処し、本明細書に記載されるようなアミノ酸製剤を提供することによって、そのような臨床問題に対する解決策を提示するように設計された。これらの臨床問題に対処するために使用されたインビトロモデルシステムに最初に目を向けて、本発明者らは、様々な炎症性促進剤に曝露された分化初代ヒト気管支上皮細胞（ＨＢＥＣ）を使用して、ＡＲＤＳの特徴を再現した。
モデルシステムのいくつかの実施形態では、本発明者らは、分化したＨＢＥＣのＩＬ－１３への曝露が、ＥＮａＣの阻害及びバリア機能の損傷につながることを示した。したがって、本発明者らは、この所見に基づく実験システムであって、ＡＲＤＳのこれらの特徴が、罹患した対象／患者の肺で観察されたものと同程度に再現された実験システムを開発した。
本明細書に記載されるＩＬ－１３に曝露された分化ＨＢＥＣを含む開発される実験システムは、ＥＮａＣ活性の増加及びバリア機能の改善に対する様々なアミノ酸製剤の効果を評価するためのモデルシステムとして使用された。このモデルシステムを使用して、複数のアミノ酸製剤を、ＥＮａＣ電流を増加させ、バリア機能を改善するそれらの能力によって測定される、ＥＮａＣ輸送タンパク質活性を増加させるそれらの能力に基づいて特定し、特徴解析した。以下の表１及び２を参照されたい。例示的なこのような製剤は、５アミノ酸製剤（ＡＡＦ０１）である。本明細書で示されるように、ＡＡＦ０１は、ＩＬ－１３で１４日間処理されたＨＢＥＣにおいて、ＥＮａＣ電流を増加させ、アニオン電流を減少させ、バリア機能を改善した。ＡＡＦ０１は、少なくとも部分的には、塩化物分泌を低減させ、バリア機能を改善する能力があるため選択された。
これらの所見は、ＡＡＦ０１及び本明細書に記載される他の例示的なアミノ酸製剤が、ＣＯＶＩＤ－１９に罹患した対象、特に、ＡＲＤＳの少なくとも１つの症状を呈する対象を治療するために使用できるという証拠を提供する。ＡＡＦ０１及び本明細書に記載される他の例示的なアミノ酸製剤は、Ｔｈ２サイトカイン（例えば、ＩＬ－４及びＩＬ－１３）が重要な役割を果たしている状態である、喘息又はアレルギー性鼻炎に罹患した対象を治療するためにも使用することができる。本明細書に提示される結果に基づいて、ＡＡＦ０１及び本明細書に記述される他の例示的なアミノ酸製剤は、ＥＮａＣ活性を増加させ、肺胞液クリアランスを改善するそれらの能力を介して少なくとも部分的に作用し得る。
本明細書に提示される結果は、ＡＡＦ０１が、
●アミロリド／ベンザミル感受性ＥＮａＣ電流を増加させる
●ＥＮａＣタンパク質レベルを増加させる
●ＮＨＥ３タンパク質レベルを増加させる（ＥＮａＣ非依存的ナトリウム吸収）
●タイトジャンクションタンパク質レベル及び機能を増加させる
●ＡＡＦ０１が、ＣＯＶＩＤ及びその他の形態の肺炎、並びに喘息及びアレルギー性鼻炎に関連するＡＲＤＳの治療に使用できる。
●ＡＡＦ０１が、限定されるものではないが、ネブライザー、吸入器、又は鼻腔アトマイザによって送達されるものなどエアロゾル化された形態を含む、様々な手段を介して送達できる。
●ＡＡＦ０１が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、喘息、及び／又はアレルギー性鼻炎の治療に使用される他の薬剤と組み合わせて使用される、ことを示している。
本明細書に提示される結果に基づいて、ＡＡＦ０１、ＡＡＦ０３、及びＡＡＦ０７を、ＡＲＤＳを治療するための例示的な製剤として選択したが、その理由は、少なくとも部分的には、製剤のそれぞれが、呼吸窮迫の特徴を再現する本明細書に記載のモデルシステムにおいてＥＮａＣ活性の増加をもたらすためである。ＡＡＦ０１、ＡＡＦ０３、及びＡＡＦ０７のそれぞれは、ＡＲＤＳ又は喘息で観察されるものなど、過剰な肺胞液貯留を含む呼吸窮迫の特徴を再現する本明細書に記載のモデルシステムで、塩化物分泌を低減する、及び／又はバリア透過性を低減するそれらの能力のために、例示的な製剤として選択された。塩化物分泌を低減する、及び／又はバリア透過性を低減する能力はまた、ＡＡＦ０１、 ＡＡＦ０３、及びＡＡＦ０７の各々に、それを必要とする対象の鼻腔における過剰な流体貯留を低減することによって、アレルギー性鼻炎を治療するための治療剤として役立つ能力も付与した。
Figure 2023531872000002
Figure 2023531872000003
本明細書に記載される例示的なアミノ酸製剤〔例えば、ＡＡＦ０１、ＡＡＦ０３、ＡＡＦ０７、及び選択された５ＡＡ製剤（アルギニン、リジン、システイン、アスパラギン、及びグルタミン）は、ＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎の治療を必要とする対象におけるＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎の治療に有用である。ＡＲＤＳ又は喘息は、肺胞液貯留と関連している可能性があるため、肺胞液のクリアランスを改善することによって症状緩和をもたらすことができる。本明細書に記載の例示的なアミノ酸製剤は、増加したナトリウム及び液体吸収によって反映されるように、ＥＮａＣ機能をアップレギュレーションすることによって、少なくとも部分的に肺胞液クリアランスを改善する。したがって、本明細書に記載のアミノ酸製剤は、肺胞液クリアランスの改善が望まれる、ＡＲＤＳ又は喘息の治療における使用のために提示される。ＡＲＤＳ又は喘息の治療に使用するための本明細書に記載のアミノ酸製剤は、単独で、又はこれらの障害の各々を治療するために使用される少なくとも１つの他の医薬品有効成分（ＡＰＩ）と組み合わせて使用され得る。肺胞液クリアランスを改善することができるという特性はまた、ＡＲＤＳ又は喘息を治療するための医薬品の調製における本明細書に記載の例示的なアミノ酸製剤の有用性を際立たせ、このような薬剤は、肺胞液クリアランスを改善し、したがって、これらの障害に罹患した対象に症状緩和をもたらす。本明細書に記載のアミノ酸製剤は、医薬品中の唯一のＡＰＩであってもよく、又はＡＲＤＳ又は喘息を治療するために使用される少なくとも１つの他のＡＰＩとの組み合わせで存在してもよい。本明細書に記載の例示的なアミノ酸製剤は、肺胞液貯留に関連する、ＡＲＤＳ又は喘息を有する、治療を必要とする対象を治療するための方法にも使用され得る。ＡＲＤＳ又は喘息を治療する方法は、本明細書に記載のアミノ酸製剤を単独で、又はＡＲＤＳ又は喘息を治療するために使用される少なくとも１つの他のＡＰＩと組み合わせて投与することを必要とし得る。
本明細書に記載される例示的なアミノ酸製剤（例えば、ＡＡＦ０１、ＡＡＦ０３、ＡＡＦ０７、及び選択された５ＡＡ製剤）は、アレルギー性鼻炎の治療を必要とする対象におけるアレルギー性鼻炎の治療に有用である。アレルギー性鼻炎は、鼻腔内の過剰な液体と関連しており、したがって、鼻腔からの液体クリアランスを改善することによって症状緩和をもたらすことができる。本明細書に記載の例示的なアミノ酸製剤は、増加したナトリウム及び液体吸収によって反映されるように、ＥＮａＣ機能をアップレギュレーションすることによって、少なくとも部分的に副鼻腔及び／又は鼻腔からの液体クリアランスを改善する。したがって、本明細書に記載のアミノ酸製剤は、アレルギー性鼻炎の治療における使用のために提示される。アレルギー性鼻炎の治療に使用するための本明細書に記載のアミノ酸製剤は、単独で、又はアレルギー性鼻炎の治療に使用される少なくとも１つの他のＡＰＩと組み合わせて使用することができる。鼻腔からの液体クリアランスを改善することができるという特性はまた、過剰な鼻分泌物の低減が望まれるアレルギー性鼻炎を治療するための医薬品の調製における、本明細書に記載の例示的なアミノ酸製剤の有用性も強調する。本明細書に記載のアミノ酸製剤は、医薬品中の唯一のＡＰＩであってもよく、又はアレルギー性鼻炎を治療するために使用される少なくとも１つの他のＡＰＩと組み合わせて存在してもよい。本明細書に記載の例示的なアミノ酸製剤は、アレルギー性鼻炎を有する治療を必要とする対象を治療するための方法にも使用され得る。アレルギー性鼻炎を治療する方法は、本明細書に記載されるアミノ酸製剤を単独で、又はアレルギー性鼻炎を治療するために使用される少なくとも１つの他のＡＰＩと組み合わせて投与することを必要とし得る。
いくつかの実施形態では、製剤中に存在する遊離アミノ酸の各々の濃度は、０．１ｍＭ～３０ｍＭ又は０．５ｍＭ～３０ｍＭの範囲である。いくつかの実施形態では、製剤中に存在する遊離アミノ酸の各々の濃度は、０．１ｍＭ～１５ｍＭ又は０．５ｍＭ～１５ｍＭの範囲である。いくつかの実施形態では、製剤中に存在する遊離アミノ酸の各々の濃度は、０．１ｍＭ～１０ｍＭ又は０．５ｍＭ～１０ｍＭの範囲である。いくつかの実施形態では、製剤中に存在する遊離アミノ酸の各々の濃度は、０．１～１．２ｍＭ、０．５～１．２ｍＭ、０．６～１．２ｍＭ、又は０．８～１．２ｍＭ（例えば、約１．２ｍＭ）の範囲のチロシンを除いて、４ｍＭ～１２ｍＭ、５ｍＭ～１２ｍＭ、６ｍＭ～１２ｍＭ、４ｍＭ～１０ｍＭ、５ｍＭ～１０ｍＭ、６ｍＭ～１０ｍＭ、４ｍＭ～９ｍＭ、５ｍＭ～９ｍＭ、又は６ｍＭ～９ｍＭの範囲である。いくつかの実施形態では、製剤中に存在する遊離アミノ酸の各々の濃度は、０．８～１．２ｍＭ（例えば、約１．２ｍＭ）の範囲のチロシンを除いて、７ｍＭ～９ｍＭ（例えば、約８ｍＭ）の範囲である。いくつかの実施形態では、製剤は、次のようなＡＡＦ０１（本明細書ではＡＡ－ＥＣ０１とも呼ぶ）であり、８ｍＭのリジン、８ｍＭのトリプトファン、８ｍＭのアルギニン、８ｍＭのグルタミン、及び１．２ｍＭのチロシンである。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の製剤のｐＨは、２．５～８．０、３．０～８．０、３．５～８．０、４．０～８．０、４．５～８．０、４．５～６．５、５．５～６．５、５．０～８．０、５．５～８．０、６．０～８．０、６．５～８．０、７．０～８．０、又は７．５～８．０の範囲である。
製剤がネブライザー（吸入又は溶液懸濁液）を介して送達されるいくつかの実施形態では、製剤のｐＨは、対象が投与に応答してくしゃみをする傾向を低減する４．５～６．５のｐＨの範囲であってもよい。
製剤が、鼻腔スプレー又は鼻腔アトマイザを介して送達されるいくつかの実施形態では、製剤のｐＨは、４．５～６．５のｐＨの範囲であり得る。いくつかの実施形態では、製剤のｐＨは、５．５～６．５のｐＨの範囲であり得る。市販の鼻腔スプレー製品は、典型的には３．５～７．０の範囲のｐＨを有する。鼻上皮のｐＨは、典型的には５．５～６．５の範囲である。ヒト鼻の平均ベースラインのｐＨは、約６．３である。
いくつかの実施形態では、噴霧パフ１回当たりの用量（左及び右鼻孔）：効力＜５ｍｇ／用量；最大体積１００μＬ／噴霧パフ：溶解度＞５０ｍｇ／ｍｌ；溶液中の薬剤：ｐＨ約５．５、重量オスモル濃度２９０～５００ｍｏｓｍ／ｋｇ。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の製剤は、例えば、適切な生理食塩水中で、鼻洗浄を介して送達される。適切な生理食塩水溶液は、市販であるか、又は代替的に、自宅で作製することができる。適切な生理食塩水溶液は、小さじ１／４～１／２の非ヨウ素化塩及び１つまみの重曹が溶解された１～２カップの温水（例えば、蒸留、滅菌、又は煮沸）から構成される。
適用デバイス：経鼻投与を意図した製剤（例えば、洗浄液、液滴、噴出（ｓｑｕｉｒｔ）システム、スプレー）の意図した用途及び薬学的形態は、使用され得る適用デバイスを決定する。用量（パフ当たりの容量は通常わずか１００μｌ）、投与オプション（単回対複数回）、対象（消費者、医療従事者、患者、子供、高齢者）、及び対象の健康状態もまた、適用デバイスの選択に影響を与える。経粘膜鼻腔送達及び吸収は、胃腸破壊及び肝臓の初回通過代謝の回避から利益を得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の製剤は、病原体（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対する免疫応答の段階に対処するために順次使用される。したがって、疾患が初期段階から後期段階に進行するにつれて、初期段階疾患の治療に好適なアミノ酸製剤は、後期段階疾患の治療に好適なアミノ酸製剤に置き換えられる。いくつかの実施形態では、先天的免疫（例えば、ＩＦＮ－γ）及び／又はＴｈ１細胞応答（例えば、ＴＮＦ－α）に特徴的なサイトカインの病理学的帰結に対抗する製剤が、病原体又は状態（例えば、慢性又は急性）に対する免疫応答の初期段階で投与される。先天的免疫及び／又はＴｈ１細胞応答に特徴的なサイトカインの病理学的帰結に対抗するための例示的な製剤としては、第１の製剤を含み、このような第１の製剤は、治療有効量のアルギニン及びリジン、並びに治療有効量のシステイン、アスパラギン、若しくはグルタミンの遊離アミノ酸、又はそれら任意の組み合わせのうちの少なくとも１つ、から本質的になる治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせを含む。このような免疫応答は、病原体などの病原体によって引き起こされる、例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に応答して開始される、呼吸状態に対する初期免疫反応で観察される。例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する免疫応答が時間とともに進行すると、サイトカイン発現パネルは、Ｔｈ２細胞応答（例えば、ＩＬ－４及びＩＬ－１３）の特徴に変化し得る。免疫応答がＴｈ２細胞応答に進行し始めると、例えば、ＡＡＦ０１、ＡＡＦ０３又はＡＡＦ０７などの例示的なアミノ酸製剤を含む第２の製剤を使用して、第１の製剤を置き換えることができる。本明細書に提示される証拠は、例えば、ＡＡＦ０１（本明細書ではＡＡ－ＥＣ０１とも呼ぶ）が、ＥＮａＣ活性を少なくとも部分的に回復させることによって、Ｔｈ２型サイトカインの病理学的帰結に対処するのに治療的に適していることを示す。
本明細書に提示される結果に基づいて、治療レジメンは、少なくとも部分的にはＥＮａＣ活性を回復させることによって、先天免疫及び／又はＴｈ１細胞に特徴的なサイトカインの病理学的作用を弱める第１のアミノ酸製剤、続いて、少なくとも部分的にはＥＮａＣ活性を回復させることによって、Ｔｈ２細胞に特徴的なサイトカインの病理学的作用を弱める第２のアミノ酸製剤を含んでもよい。第１のアミノ酸製剤及び第２のアミノ酸製剤は、投与可能であるか、又は逐次的に別々に投与され得るか、若しくは第２のアミノ酸製剤のみが投与されるまで、第２のアミノ酸製剤の量が増加するにつれて、第１のアミノ酸製剤の量を徐々に減らしながら、重複投与で逐次的に投与され得る。第１及び第２のアミノ酸製剤の投与のタイミングは、臨床徴候及び症状の提示に基づいて、担当医によって決定され得る。
いくつかの実施形態では、対象が、優勢な免疫応答が先天的免疫及び／若しくはＴｈ１細胞に特徴的なサイトカインの産生、又はＴｈ２細胞に特徴的なサイトカインの産生を含む免疫応答を示すか、あるいは、初期免疫反応が先天免疫及び／又はＴｈ１細胞に特徴的なサイトカインの産生を含み、その後にＴｈ２細胞に特徴的なサイトカインの産生を含む免疫反応を呈するかどうかを決定するために評価することができる。このような評価は、対象の遺伝学、状態、環境、及びライフスタイルに合わせてアミノ酸製剤を適合させるために使用でき、それによって精密医療を促進し得る。
上記に加えて、ＥＮａＣ活性及びバリア機能に対するサイトカイン誘導性炎症の効果を、本明細書に提示する実施例及び図面に詳述されるように調査した。本明細書に記載されるように、ＥＮａＣは、上皮流体層の維持に重要である。高濃度でのＴＮＦ－α、ＴＧＦ－β、ＩＦＮ－γ、及びＩＬ－６などの一部のサイトカインは、肺損傷及びＡＲＤＳと強く関連しており、本明細書に示されるように、ＥＮａＣ活性及び機能を減少させ、したがってＣＯＶＩＤ－１９患者における気道からの液体クリアランスを防止する。疾患の病因及び進行におけるこれらのサイトカインの効果を調査するために、本発明者らは、正常なヒト気管支上皮細胞を３つのサイトカイン（ＴＮＦ－α、ＴＧＦ－β１、ＩＦＮ－γ）のカクテルに７日間曝露し、ＥＮａＣ活性に対するそれらの効果を分析し、その後、ＥＮａＣ機能に対するサイトカインレベルの増加の有害作用を逆転させるアミノ酸製剤を選択した。図９～１２を参照されたい。図９は、例えば、ＥＮａＣ電流が、ＴＮＦ－αの濃度が増加するにつれて減少することを示す。図１０は、例えば、細胞がより低い濃度のＩＦＮ－γ（０．００００５～０．０５ｎｇ／ｍＬの培地）で処理された場合、ＥＮａＣ電流が増加したことを示す。ＥＮａＣ電流は、より高いレベルのＩＦＮ－γに曝露された場合、ベースライン（未処理）レベルに戻ったが、その後、より高濃度のＩＦＮ－γ（＞０．０５ｎｇ／ｍＬ培地）で細胞を処理した場合、ベースラインと比較して減少した。図１１は、例えば、ＥＮａＣ電流が、ＴＧＦ－β１の濃度の増加とともに減少したことを示す。
図１２は、例えば、７日間のＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、及びＴＧＦ－β１（サイトカインカクテル）へのＨＢＥＣの曝露が、サイトカインカクテルに曝露されていないＨＢＥＣ（ナイーブ）と比較して、ＥＮａＣ活性（ビヒクル）を有意に減少させたことを示す。図１２で使用される用語「ビヒクル」は、５ＡＡ製剤及びＮＣ製剤を生成するためにＡＡが導入された溶液を指し、したがってＡＡ製剤の陰性対照として機能する。図１２に示すように、選択された５ＡＡ製剤（ＡＡ；アルギニン、リジン、システイン、アスパラギン、及びグルタミン）は、ナイーブ細胞と比較して、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、及びＴＧＦ－β１に曝露されたＨＢＥＣにおけるＥＮａＣ活性の有意な回復をもたらした。いくつかの実施形態では、選択された５ＡＡ製剤は、８ｍＭのアルギニン、８ｍＭのリジン、８ｍＭのシステイン、８ｍＭのアスパラギン、及び８ｍＭのグルタミンを含み、ナイーブ細胞と比較して、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、及びＴＧＦ－β１に曝露されたＨＢＥＣにおけるＥＮａＣ活性の有意な回復をもたらした。ＮＣ製剤（アスパラギン酸、トレオニン、及びロイシン）は、サイトカイン誘導性ＥＮａＣ活性の低減を改善しなかった。実際に、ＮＣ製剤は、サイトカインカクテル及びビヒクルに曝露されたＨＢＥＣと比較して、サイトカインカクテルに曝露されたＨＢＥＣで更にＥＮａＣ活性を減少させた。
本明細書で上記に詳述したように、ＡＲＤＳは、コロナウイルス感染症１９（ＣＯＶＩＤ－１９）及び他のウイルス性肺感染症の一般的な呼吸症状である。ＡＲＤＳは、肺水腫、換気不良、及び酸素飽和度の低下を引き起こす、肺胞液クリアランス（ＡＦＣ）の障害から生じる。正常な状況下では、気道表面液（ＡＳＬ）は、線毛周囲液（約７μｍ）と粘液の薄層で構成される、約７５ｍ２の表面積にわたる６００ｍＬの流体に寄与し、また、気道から塵及び他の外来粒子を除去するための粘膜毛様機能を促進する。頂端（ａｐｉｃａｌ）アニオンチャネル活性とＥＮａＣによる再吸収の複雑な相互作用により、受動的な水移動のための浸透圧勾配を生成し、ＡＦＣを維持する。例えばインフルエンザウイルス感染症に見られるように、ＥＮａＣ機能の低下は、活性ウイルス複製を超えて持続するＡＦＣの減少を引き起こす。バリア破壊は、肺微小血管毛細血管から肺胞内にタンパク質が豊富な流体の滲出を引き起こし、非心原性肺水腫及びＡＦＣを重度に障害するヒアリン膜形成をもたらす。
ＥＮａＣ及びバリア機能は、ＣＯＶＩＤ－１９の病態形成の複数の段階で影響を受ける。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２がアンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）を結合し、宿主細胞に入る能力に寄与するＩＩ型膜貫通型セリンプロテアーゼ（ＴＭＰＲＳＳ２）、ジスインテグリン及びメタロペプチダーゼドメイン１７（ＡＤＡＭ１７）も、ＥＮａＣ機能を阻害する。図１を参照されたい。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＡＣＥ２への結合はＡＣＥ２レベルの減少をもたらし、アンジオテンシンＩＩ（Ａｎｇ ＩＩ）及びキニンの上昇を伴う、レニン－アンジオテンシン－アルドステロン系（ＲＡＡＳ）と組織カリクレイン－キニン系（ＫＫＳ）との間の不均衡を引き起こす。Ａｎｇ ＩＩ及びキニンは、ＥＮａＣ機能を直接的に、及びＴＮＦ－α及びＩＬ－６を含む炎症誘発性サイトカインの放出を通して、阻害する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染では、ウイルス関連分子パターンは、パターン認識受容体（ＰＲＲ）によって認識されにくく、その結果、Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ）産生及びウイルスクリアランスの減少をもたらす。マクロファージ機能及びＩＦＮ－γ活性化に対するＩ型ＩＦＮの抑制効果が減衰され、早期かつ持続的な低レベルのＩＦＮ－γ放出をもたらす。この変化したＩＦＮ－γ応答は、早期のＭ１分極化を促進し、Ｍ２活性化に対する抑制因子効果を明らかにし、Ｔｈ１及びＴｈ２型免疫反応の高度かつ持続的な刺激を開始させる。患者における臨床的合併症は、ＣＯＶＩＤ－１９の特徴的なサイトカインストームを引き起こす、時間とともに増幅する持続的な先天的及び適応免疫応答から生じる。
ＨＢＥＣにおけるベンザミル感受性電流及びＴＥＥＲの個人差が大きい。Ｕｓｓｉｎｇチャンバに基づく実験計画では、気液界面においてスナップウェル上で２８～３５日間成長させた２人の肺ドナーからの分化ＨＢＥＣにおいて、基底短絡電流（Ｉｓｃ）及び経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）を記録した。強力なＥＮａＣブロッカーであるベンザミルを使用して、細胞の頂端側に６μＭのベンザミルを添加した１５分後に起こるＩｓｃの変化から、ベンザミル感受性Ｉｓｃを計算することによってＥＮａＣ活性を決定した。年齢が一致するＨＢＥＣのベンザミル感受性Ｉｓｃ（３８±２．６μＡ．ｃｍ－２、２５．７±２．２μＡ．ｃｍ－２、Ｐ＜０．０１、ｎ＝１０）及び基底ＴＥＥＲ（１３０．５±６．８ Ｏｈｍ．ｃｍ２、１７７．７±１６ Ｏｈｍ．ｃｍ２、Ｐ＜０．０３、ｎ＝１０）は、２つのドナー間で有意に異なっていた。したがって、正規化されたデータは、図１３～１８に関連する統計解析のために、後続する全ての実験に使用された。
ＩＦＮ－γは、用量依存的及び時間依存的な様式でＥＮａＣ活性及び上皮バリアを変化させた。ＩＦＮは先天的免疫反応の最中に中心的役割を果たし、ウイルス感染に対する防御の最前線である。ＩＩ型ＩＦＮファミリーのメンバーとして、ＩＦＮ－γは強力な抗ウイルス活性を有し、ＥＮａＣ活性及びバリア機能に対するその効果を決定するために使用された。ベンザミル感受性Ｉｓｃ及びＴＥＥＲに対するＩＦＮ－γの用量依存的効果は、ＨＢＥＣを様々な濃度のＩＦＮ－γとともに７日間インキュベートすることによって測定された。興味深いことに、ＩＦＮ－γへの曝露は、ベンザミル感受性Ｉｓｃを、非常に低い濃度（５×１０－４ｎｇ／ｍＬ）でベースライン値の１６１．６２±９．７％（Ｐ＜０．０４）に増加させたが、ＩＦＮ－γ＞２０ｎｇ／ｍＬは、ベンザミル感受性Ｉｓｃにマイナスの効果を及ぼした（図１３Ａ）。ＩＦＮ－γは、より低い濃度ではＴＥＥＲに影響を与えなかったが、≧０．５ｎｇ／ｍＬの濃度では上皮抵抗が有意に増加した（図１３Ｂ）。これらの研究は、先天的免疫反応の初期段階で、ＡＳＬ及び粘膜免疫の適切な恒常性を維持するために、ＥＮａＣ活性及びバリア機能がＩＦＮ－γによって促進されることを示唆している。０．５ｎｇ／ｍＬのＴＥＥＲに対するＩＦＮ－γの効果（疾患状態中に観察された血漿レベルと類似した濃度）に基づいて、適切なＩＦＮ－γ応答を確保するために、全ての後続の実験を１ｎｇ／ｍＬで実施した。
ＥＮａＣ活性及びバリア機能に対するＩＦＮ－γの時間依存的効果を、１ｎｇ／ｍＬのＩＦＮ－γで１６日間にわたって試験した。ベンザミル感受性Ｉｓｃは、曝露の最初の１２日以内に変化しなかったが、１４日目に減少し始め、１６日目に最も低いＥＮａＣ活性（４３．７±７．０％、Ｐ＜０．０４、図１３Ｃ）を示した。対照的に、ＩＦＮ－γは初期に上皮抵抗性を改善し、試験期間全体を通して時間の経過とともにＴＥＥＲを徐々に増加させた（１６日目：１４２．５±１２．３％、Ｐ＜０．０４、図１３Ｄ）。これらの結果は、ＩＦＮ－γが、ＡＲＤＳの初期段階においてＥＮａＣ活性及び上皮バリアを保護し支持するが、時間の経過とともに有害になる可能性があることを示唆する。
低濃度でのＴＮＦ－αは、ＥＮａＣ機能を破壊した。ＴＮＦ－αは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中に放出される初期の強力な炎症促進性サイトカインの１つであり、ＣＯＶＩＤ－１９関連ＡＲＤＳの重症度と相関する。本明細書に提示される結果は、≧０．０５ｎｇ／ｍＬの濃度で、ＴＮＦ－αがベンザミル感受性Ｉｓｃを減少させたことを示し（図１４Ａ）、これはＣＯＶＩＤ－１９患者に見られる血漿レベルと同様である。ベンザミル感受性Ｉｓｃの低下は、約１０ｎｇ／ｍＬでプラトーとなった（１７．４±３．６％、Ｐ＜０．０１）。ＴＮＦ－α濃度の増加に伴うバリア機能の減少が、５×１０－５～５×１０－３ｎｇ／ｍＬのＴＮＦ－αで観察された（図１４Ｂ）。驚くべきことに、１０～４０ｎｇ／ｍＬのＴＮＦ－αは、上皮抵抗性の有意な増加を引き起こした。濃度＞０．５ｎｇ／ｍＬのベンザミル感受性Ｉｓｃの顕著な減少のため、完全な阻害を確実にするために、全ての後続実験でＴＮＦ－αを１ｎｇ／ｍＬで使用した。ＨＢＥＣを１ｎｇ／ｍＬのＴＮＦ－αとともに１６日間インキュベートした場合、ベンザミル感受性Ｉｓｃは、時間とともに漸進的に減少し、４日目（８１．２±５．４％、Ｐ＜０．０４）から始まって１６日目（３９．２±２．４％、Ｐ＜０．０４、図１４Ｃ）で最大減少を引き起こした。ＴＥＥＲの有意な変化は、ＴＮＦ－αへの曝露から最初の８日以内に観察されなかったが、上皮抵抗性は時間とともに増加し、１６日目にピーク変化が測定された（１３２．６±９．０％、Ｐ＜０．０４）（図１４Ｄ）。これらの研究は、ＴＮＦ－αが疾患状態に関連する濃度でのＥＮａＣ活性及びバリア機能の破壊に大きく寄与することを示し、ＡＲＤＳの病態形成におけるＴＮＦ－αの重要な役割を示唆している。
高濃度のＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αの組み合わせは、ＥＮａＣ及びバリア機能を減少させた。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の初期段階を模倣するよう設計された実験条件である７日間増加する濃度の組み合わせに曝露されたＨＢＥＣは、対照細胞と比較して、各サイトカインについて１０ｎｇ／ｍＬでベンザミル感受性Ｉｓｃの有意な減少をもたらした（４８．０±３．７％、Ｐ＜０．０１）。ＴＥＥＲは、５及び１０ｎｇ／ｍＬで、組み合わせの存在下で減少した（図１５Ａ、Ｂ）。これらの結果は、ＥＮａＣ機能に対するＴＮＦ－αの阻害効果が、より低濃度でＩＦＮ－γの保護特性によって補償されたことを示唆している。しかしながら、ＩＦＮ－γの代償効果は、より高濃度で潜在的に減少し、ＥＮａＣ及びバリア機能障害の増加をもたらし、それは主にＴＮＦ－αによって駆動された。
ＩＬ－４及びＩＬ－１３は、ＥＮａＣ及びバリア機能を強固に低下させた。ＩＬ－４及びＩＬ－１３は機能的に関連するサイトカインであり、Ｔｈ１／Ｔｈ１７応答を抑制しながらＴｈ２免疫応答を開始する。本明細書に示されるように、Ｔｈ２サイトカインは、ＥＮａＣ機能及びＡＦＣの障害と関連していた。２ｎｇ／ｍＬのＩＬ－４と１４日間インキュベートされたＨＢＥＣは、早くも４日目に、ベンザミル感受性Ｉｓｃを有意に減少させた（５９．９±９．４％、Ｐ＜０．０４）。ベンザミル感受性Ｉｓｃの最大の低下は、１０日目に見られ（８．６±５％、Ｐ＜０．０４）、残りの試験期間にわたって抑制されたままであった（図１５Ｃ）。同様に、バリア機能は、２日目には早くも減少し、１０日目に最大阻害が発生した（３７．５±２％、Ｐ＜０．０４）（図１５Ｄ）。ＨＢＥＣにおけるＥＮａＣ及び上皮バリア機能に対する早期かつ強力な阻害効果は、ＩＬ－４がＡＲＤＳの病態生理学的進化において重要な役割を果たしていることを明らかにした。
ＩＬ－４は正のフィードバック機構によって調節され、ＩＬ－４及び他のＴｈ２サイトカイン（ＩＬ－１３など）の更なる放出を刺激する。したがって、ＩＬ－１３（このような特性を欠く）を使用して、疾患の発症に対するその寄与を研究した。ＩＬ－１３を用量依存的に培養培地に添加すると、ベンザミル感受性Ｉｓｃは０．１ｎｇ／ｍＬ（５０．９±９．６％、Ｐ＜０．０３）で開始して漸進的に減少し、ベンザミル感受性Ｉｓｃは８ｎｇ／ｍＬで完全に消失した（図１６Ａ）。ＴＥＥＲは、２ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１３で５９．９±７．６％（Ｐ＜０．０３）に低減され、バリア機能の最大減少は、４ｎｇ／ｍＬ（４１．３±６．９％、Ｐ＜０．０３、図１６Ｂ）で観察された。ＨＢＥＣを２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１３と１６日間インキュベートすると、ベンザミル感受性Ｉｓｃが２日目にそのベースライン値の１／４まで減少し（２５．０±５％、Ｐ＜０．０３）、ベンザミル感受性Ｉｓｃは８日目まで完全に抑制された（図１６Ｃ）。上皮抵抗性は時間の経過とともに徐々に減少し、ＴＥＥＲの最大減少は１０日目に観察された（４８．７±３．６％、Ｐ＜０．０３）（図１６Ｄ）。まとめると、これらの研究は、ＥＮａＣ及びバリア機能に対するＴｈ２型サイトカインの早期かつ強力な阻害効果を示唆しており、これは、ＡＳＬクリアランスの早期かつ進行性の調節不全の原因となる可能性がある。ＣＯＶＩＤ－１９－関連ＡＲＤＳ患者では、両方のサイトカイン（ＩＬ－４及びＩＬ－１３）が高濃度で検出されているため、ＡＦＣの進行性障害は肺水腫及びＡＲＤＳの発症につながる可能性がある。
ＴＧＦ－β１は、ＥＮａＣ活性を減少させたが、バリア機能を免れた。一般的に成長、増殖、及び分化に関与する多機能サイトカインＴＧＦ－β１は、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、及びインターロイキンなどの炎症促進性サイトカインの分泌及び活性化を阻害する抗炎症性Ｔｒｅｇ免疫反応の一部でもある。その免疫抑制性の性質にもかかわらず、ＴＧＦ－β１はまた、化学誘引物質として作用し、炎症を引き起こすことがある。本明細書で示されるように、ＴＧＦ－β１は、ＥＮａＣ輸送を調節不全にし、ＣＯＶＩＤ－１９－関連ＡＲＤＳの病態形成に関与する炎症促進性サイトカインと同期して動作した。
ＨＢＥＣを７日間、ＴＧＦ－β１の濃度を増加させながらインキュベーションすると、ＴＧＦ－β１は、０．５ｎｇ／ｍＬで、ベンザミル感受性Ｉｓｃを７０．４±２．５％（Ｐ＜０．０４）、及び５０ｎｇ／ｍＬでは１．５±０．３％（Ｐ＜０．０４）に低減させることが示された（図１７Ａ）。対照的に、ＴＥＥＲは、低濃度のＴＧＦ－β１では影響を受けなかったが、５ｎｇ／ｍＬのＴＧＦ－β１で徐々に増加した（図１７Ｂ）。ベンザミル感受性Ｉｓｃの阻害を確実にするために、ＴＧＦ－β１を１ｎｇ／ｍＬで使用して、その後の時間依存的実験を最大１６日間行った。ＴＧＦ－β１は、ベンザミル感受性Ｉｓｃを４日目から開始して減少させ（６４．４±８．３％、Ｐ＜０．０４）、ベンザミル感受性Ｉｓｃは、１６日目までに対照値の２０．３±５．８％に低下させた（図１７Ｃ）。ＴＥＥＲは、試験期間中、影響を受けなかった（図１７Ｄ）。これらの結果は、ＴＧＦ－β１がＥＮａＣ活性に用量依存的効果を有したが、上皮バリア機能に効果を有しなかったことを示唆している。したがって、ＴＧＦ－β１は、ＡＦＣ及びＡＲＤＳへの進行に影響を及ぼすサイトカインとして特定された。
ＡＡ－ＥＣ０１は、高濃度のＩＬ－１３によって消失したＥＮａＣ活性を改善した。本明細書に記載されるように、本発明者らは、ベンザミル感受性Ｉｓｃを増加させる５つのアミノ酸を含む製剤（ＡＡ－ＥＣ０１）を開発し、２０ｎｇ／ｍＬでＩＬ－１３と１４日間インキュベートしたＨＢＥＣにおけるＥＮａＣ発現及び機能を改善する製剤の能力、ＥＮａＣ機能を完全に消失する濃度及び曝露時間を検証した。Ｕｓｓｉｎｇチャンバにおける、ＩＬ－１３チャレンジＨＢＥＣのＡＡ－ＥＣ０１への曝露は、リンゲル溶液に浸したＩＬ－１３－チャレンジＨＢＥＣの４．０±１．７％と比較した場合、ベンザミル感受性Ｉｓｃが３３．９±３．６％（Ｐ＜０．０２）に増加した（図１８Ａ）。ＩＬ－１３－チャレンジ細胞を、ベンザミル感受性Ｉｓｃに対する阻害効果に基づいて選択された（陰性対照；ＡＡＮＣ）アミノ酸のセットに曝露したとき、ＥＮａＣ活性は低いままであった（３．４±２．５％、Ｐ＝ＮＳ；図１８Ａ）。ＥＮａＣ機能はＡＡ－ＥＣ０１との接触後３０分以内に改善したが、試験期間中は完全には回復しなかった。対照的に、ＩＬ－１３誘導バリア破壊はＡＡ－ＥＣ０１によっては変化しないままであった（図１８Ｂ）。
ＡＡ－ＥＣ０１は、ＩＬ－１３の存在下で頂端のＥＮａＣ発現を回復させた。本明細書に提示される結果は、Ｔｈ２サイトカインＩＬ－４及びＩＬ－１３が、ＨＢＥＣにおけるＥＮａＣ活性の調節不全に関与する主要なサイトカインであり、ＡＡ－ＥＣ０１が、サイトカインインキュベーション後にＥＮａＣ機能を改善することを実証した（図１８Ａ）。ＨＢＥＣの免疫蛍光イメージングは、線毛周囲及び頂端膜に沿ってＥＮａＣ－αサブユニットの発現を示した。ＩＬ－１３に１４日間曝露されたＨＢＥＣは、線毛周囲及び頂端膜から、線毛細胞及び非線毛細胞の亜頂端コンパートメント及び細胞質へのＥＮａＣタンパク質の完全な転位を示した。ＡＡ－ＥＣ０１による１時間の処理により、頂端及び線毛周囲膜に沿ったＥＮａＣ－αの免疫蛍光が増加した。これらの観察結果は、ＡＡ－ＥＣ０１が、頂端及び線毛周囲膜でのＥＮａＣの発現を少なくとも回復させることによって、ＥＮａＣ機能を改善することを示す。
ＡＡ－ＥＣ０１は、ＣＯＶＩＤ－１９サイトカインの組み合わせによって引き起こされるＩＬ－６分泌を低減させた。ＩＬ－６は、感染及び組織損傷に応答して、上皮細胞、組織マクロファージ及び単球を含む様々な細胞タイプによって産生される多面的な炎症促進性サイトカインである。まず、ＩＬ－６は、好中球及び他の炎症細胞を炎症部位に引き付ける急性期タンパク質のための重要な刺激因子である。その後、ＩＬ－６は、Ｔｈ２細胞分化を促進し、ＩＬ－４の発現をもたらすだけでなく、慢性炎症及び自己免疫の前提条件であるＴｈ１７／Ｔｒｅｇバランスを破壊しながら、Ｔｈ１７型応答を活性化する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中、ＩＬ－６は、ＩＬ－１β及びＴＮＦ－αなどの他の炎症促進性サイトカインとともに、Ａｎｇ ＩＩの上昇に応答して気管支上皮細胞によって産生される。免疫蛍光顕微鏡を使用して、本発明者らは、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、及びＴＧＦ－β１からなるサイトカインの組み合わせに７日間曝露した後、ＨＢＥＣの線毛周囲膜に沿ってＩＬ－６発現が増加することを実証した。サイトカインでインキュベートした細胞をＡＡ－ＥＣ０１で１時間処理した場合、ＩＬ－６関連免疫蛍光シグナルは、頂端膜で大幅に減少した。これらの研究に基づき、ＡＡ－ＥＣ０１の有益な効果は、ＥＮａＣ機能の強化に限定されないが、むしろ、ＣＯＶＩＤ－１９感染症の進化において重要な役割を果たすサイトカインに対する免疫調節特性も含まれていた。
ＡＡ－ＥＣ０１は、ＩＬ－１３によって誘導されたＭＵＣ５ＡＣ分泌を低減させた。ＭＵＣ５ＡＣは、ゲル形成性の粘性ムチンであり、上皮表面で杯細胞によって一般的に産生される。ＭＵＣ５ＡＣの発現は、肺の損傷及び炎症の間に実質的に増加し、進行性気道閉塞、粘膜防御の障害、及び肺機能の低下をもたらす。ＭＵＣ５ＡＣは、喘息及び嚢胞性線維症の病態形成における重要な寄与体であり、また炎症に関連する多数の病原体及び内因性因子によってアップレギュレーションされる。呼吸器ウイルス感染の間、ＭＵＣ５ＡＣの過剰発現は、特にＴＮＦ－α及びＴｈ２型サイトカインの産生の増加によって引き起こされる。本発明者らは、免疫蛍光イメージングを使用して、ＩＬ－１３インキュベーション後の杯細胞過形成、並びにＭＵＣ５ＡＣの発現及び分泌の増加を明らかにした。ＡＡ－ＥＣ０１による１時間の処理は、罹患細胞における細胞内及び細胞外ＭＵＣ５ＡＣが低減させ、ＡＡ－ＥＣ０１が気管支上皮細胞における粘液産生を調節する可能性を示唆した。ＣＯＶＩＤ－１９の重症患者は、喀痰中の高レベルのＭＵＣ５ＡＣと相関した気道閉塞を呈するため、ＭＵＣ５ＡＣはＡＡ－ＥＣ０１の標的としても機能する可能性がある。
要約すると、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２関連分子パターンがＰＲＲによって認識される方法における極端な不一致は、先天的及び適応免疫応答の予測不可能で非常に可変的な活性化、並びに関連するサイトカイン（ＩＦＮ、Ｔｈ１、Ｔｈ２、Ｔｈ１７及びＴｒｅｇ）の放出を引き起こす。免疫反応の増大の場合、患者は、サイトカインストーム症候群の徴候である肺水腫又は、ＡＲＤＳを呈している（図１）。本明細書に提示される結果は、これらのサイトカインが、気道上皮のＥＮａＣ及びバリア機能を障害することを示す。ＥＮａＣ機能は、ＡＳＬの調節に不可欠であり、肺胞上皮表面における薄い液層を正確に維持することは、効率的なガス交換に重要である。バリア欠損は、肺胞－毛細血管の透過性亢進及び肺毛細血管から間質及び肺胞腔へのタンパク質豊富な液体の漏出をもたらし、酸素飽和度の減少を引き起こす。現在、ＡＲＤＳの治療は大部分が支持的であり、酸素補給と換気補助からなる。換気装置で送達された酸素は、肺胞内の過剰な液体の酸素化によって部分的に枯渇し、それによって、血液空気関門を横切って交換するために利用可能な酸素を減少させ、またスーパーオキシド及びペルオキシ亜硝酸の形成に関連する、内皮一酸化窒素合成酵素（ｅＮＯＳ）を脱共役する。ペルオキシ亜硝酸は、ＥＮａＣ及びバリアタンパク質を含む様々な細胞タンパク質においてチロシン残基の不可逆的なニトロ化を引き起こし、状態の進行に伴いコラーゲン沈着、線維症及び組織リモデリングをもたらす。機械的換気は、肺実質への更なる損傷を引き起こし、その結果、換気装置誘発性肺損傷が生じ、罹患した患者における高い死亡率（６５～８８％）が説明され得る。更に、挿管を生き延びた患者は、重大な瘢痕を伴う肺機能の低下を呈した。そのため、支持療法は肺損傷を悪化させ、換気装置補助から患者を切り離すことは時間の経過とともに次第に困難になる。肺胞液貯留は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２及び他の感染症に関連するＡＲＤＳにおける罹患率及び死亡率の顕著な原因であるが、ＥＮａＣ及びバリア機能を効果的に標的とする治療薬に関して利用可能な選択肢はほとんどない。
本明細書で示されるように、ＡＡ－ＥＣ０１は、ＨＢＥＣにおいてＥＮａＣ機能を強化し、したがって、ＡＦＣを改善し、肺水腫及びＡＲＤＳを治療するための臨床介入に使用するための有望な治療製剤である。ＡＡ－ＥＣ０１は、ＥＮａＣ機能を消失するのに十分な期間、サイトカインストーム症候群に特徴的な病理学的に高濃度のサイトカインに曝露されたＨＢＥＣにおいて、ＥＮａＣ機能を増加させることが示された。更に、ＡＡ－ＥＣ０１は、ＩＬ－６及びＭＵＣ５ＡＣの産生及び分泌を減少させた。
ＴＮＦ－αは、強力な炎症促進性サイトカインであり、複数の恒常性及び病理学的機序を伴う多面的効果を有し、そのレベルは、ＡＲＤＳ中に上昇する。ＴＮＦ－αは、肺胞上皮細胞において、α－、β－、γ－ＥＮａＣ ｍＲＮＡ、タンパク質レベル及びアミロリド感受性Ｉｓｃを減少させた。ＴＮＦ－αは、タイトジャンクションタンパク質の発現をダウンレギュレーションする一方で、肺胞透過性を増加させる。本研究では、低濃度でのＴＮＦ－αは、ベンザミル感受性Ｉｓｃに影響を与えなかったが、より高濃度ではＥＮａＣ活性に大幅な減少をもたらした。対照的に、より低濃度ではＴＥＥＲの低下が見られ、一方でより高濃度では、上皮抵抗性を増加させた。
ＥＮａＣはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の切断部位と類似した切断部位を有するため、ＥＮａＣ機能の調節不全は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を切断して活性化するＴＭＰＲＳＳ２により始まる。ＥＮａＣ機能は、上昇したＡｎｇ ＩＩ及びキニンによって更に低下する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染中に放出された様々なサイトカインによるＥＮａＣ及びバリア機能の阻害は、ＡＲＤＳの主な原因であり、ウイルスがその複製を停止した後も長く持続する。本研究では、より低濃度のＩＦＮ－γとのＨＢＥＣの長時間のインキュベーションにより、ＥＮａＣ機能が阻害された。ＩＦＮ－γで≧１４日インキュベートした場合のＨＢＥＣにおけるベンザミル感受性Ｉｓｃが徐々に減少することは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２で観察される疾患進行の説明に役立つ可能性がある。重症のＣＯＶＩＤ－１９患者では、軽症の疾患患者と比較した場合、血漿ＩＦＮ－γ及びＩＬ－６レベルの上昇が報告されている。ＩＦＮ－γは単独で作用することはまれであり、ＴＮＦ－αとともに、マクロファージにおける誘導性一酸化窒素シンターゼ（ｉＮＯＳ）をアップレギュレーションすることが示されている。これは、ｅＮＯＳの脱共役がスーパーオキシド及びペルオキシ亜硝酸の形成を誘発し、これがタンパク質を損傷し、ＥＮａＣ及びバリア機能の減少をもたらすため、特に重要である。これらの影響は、スーパーオキシド形成が増加する、酸素補給及び換気補助によって悪化する。
本発明者らは、ＨＢＥＣに対するＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αの組み合わせを、ベンザミル感受性Ｉｓｃ及びＴＥＥＲに対するそれらの効果について研究した。本明細書に提示される結果は、１０ｎｇ／ｍＬでの両方のサイトカインの組み合わせが相乗的に作用したことを実証する。ＴＮＦ－αは、単独ではＥＮａＣ活性を低下させたが、ＩＦＮ－γと組み合わせた場合、ＴＮＦ－α及びＩＦＮ－γの組み合わせもバリア機能に影響を与えた。これらの研究は、ＴＮＦ－αが、ＣＯＶＩＤ－１９の初期段階で、特にＩＦＮ－γの存在下で、ＥＮａＣ及びバリア機能に著しい損傷を引き起こすことを示した。
Ｔｒｅｇ細胞は、ＴＧＦ－β及びＩＬ－１０の放出を活性化し、炎症状態中にＣＤ８＋、ＣＤ４＋Ｔ細胞、単球、ＮＫ細胞、及びＢ細胞を抑制することによって免疫学的恒常性を維持し、自己免疫の予防において重要な役割を果たしている。Ｔｒｅｇ細胞の阻害効果は、ＣＯＶＩＤ－１９の間に減少する。ＴＧＦ－β１は、アミロリド感受性のＥＮａＣ活性、ＥＮａＣ ｍＲＮＡ、及びα－サブユニットのタンパク質の発現を低下させることが知られている。しかしながら、ＴＧＦ－β１は多面的効果を有し、その機能は関連サイトカイン及び炎症状態に依存する。ＣＯＶＩＤ－１９の病態形成中は、サイトカインの複雑な組み合わせにより、ＥＮａＣ及びバリア機能に対するＴＧＦ－β１の特定の効果を判断することがより困難になる。本研究では、他のサイトカインとは独立して試験されたＴＧＦ－β１は、早くも４日目に≧０．５ｎｇ／ｍＬの濃度でベンザミル感受性Ｉｓｃの減少をもたらし、ＴＥＥＲに対する阻害効果はなかった。これらの効果は、ＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αに応答して観察されたものと類似していた。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染は、Ｔｈ２応答に対するサプレッサー効果の減少と相まって、Ｔｈ１型活性化によって特徴付けられる先天的免疫応答の障害を引き起こす可能性があり、その結果、Ｔｈ２応答が優性になるＴｈ１／Ｔｈ２の不均衡が生じる。ＩＦＮ－γ産生の減少に起因する初期のＴｈ２活性化は、Ｍ２マクロファージを活性化し、Ｔｈ２サイトカインを放出し、アルギナーゼ活性を増加させる。アルギナーゼ経路の活性化は、ＮＯＳに対するアルギニンの可用性を減少させることによってＮＯ媒介性細胞傷害を減少させ、コラーゲン合成、増殖、線維症及び組織リモデリングを強化する。ＩＬ－４は、正のフィードバック応答を有する主要なＴｈ２サイトカインであり、ＩＬ－４応答、及び他のＴｈ２サイトカイン（ＩＬ－５及びＩＬ－１３）の応答を更に増強する。ＩＬ－４は、アレルギー反応の一部として好塩基球からのＩｇＥの分泌を開始し、ＩＬ－５はマスト細胞及び好酸球を動員し、ＩＬ－１３はＭＵＣ５ＡＣを活性化することによって主に上皮細胞からの粘液産生を増加させる。ＩＬ－４はまた、ＥＮａＣのβ－及びγサブユニットの発現を低減させ、ＩＬ－４及びＩＬ－１３は、アミロリド感受性Ｉｓｃを阻害する。本明細書に提示される結果は、研究された全てのサイトカインのうち、ＣＯＶＩＤ－１９疾患進行の初期段階において、Ｔｈ２サイトカインが、ベンザミル感受性Ｉｓｃ及びＴＥＥＲに対して特に顕著なマイナス効果を与えたのに対し、ＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αはＴＥＥＲに対して影響を与えなかったことを示す。したがって、ＣＯＶＩＤ－１９病態形成中に、一部の個体におけるＴｈ２免疫応答への早期移行は、ＡＲＤＳを含むより重度の肺事象の原因となる可能性がある。
本明細書に提示される結果は、ＩＬ－１３がＥＮａＣ及びバリア機能を阻害する一方でＡＡ－ＥＣ０１がＥＮａＣの活性及び発現を増加させ、それによってＩＬ－１３媒介性の有害作用に対抗することを示す。本研究では更に、ＡＡ－ＥＣ０１が細胞質から頂端膜へのＥＮａＣの転位を促進し、そこでそれが機能的に活性であることを示した。本明細書に記載の免疫組織化学研究は、ＡＡ－ＥＣ０１が、増加したＥＮａＣ転写及び／又はＥＮａＣタンパク質合成を介して、ＥＮａＣ活性も増加させ得ることを明らかにした。
Ｔｈ２型サイトカイン、特にＩＬ－１３の活性化は、ムチンの産生と分泌の増加の主要なトリガーであり、ＭＵＣ５ＡＣは、重度のＣＯＶＩＤ－１９を有する患者で観察される閉塞性呼吸器症状の病態形成において重要な役割を果たしている。ＩＬ－１３曝露後のＨＢＥＣにおける細胞内ＭＵＣ５ＡＣ発現及び分泌に対するＡＡ－ＥＣ０１の阻害効果は、粘液産生に対するＡＡ－ＥＣ０１の調節効果を示唆した。
肺内の常在細胞によって分泌される炎症促進性サイトカインである、ＩＬ－６は、サイトカインストーム中に中心的な役割を果たし、ＣＯＶＩＤ－１９を有する患者における予後指標を表す。ＨＢＥＣにおけるサイトカイン誘導性ＩＬ－６分泌を減少させるＡＡ－ＥＣ０１の能力は、この製剤が、ＥＮａＣ活性の増強を超えるより広範な特性を有することを示唆した。
過剰な肺胞液貯留を低減できる承認された医薬品が利用できないため、ＡＡ－ＥＣ０１は満たされていない緊急の臨床ニーズに対する解決策を提供する。本明細書に提示される結果は、ＡＲＤＳを治療するための、及び／又はＡＲＤＳに関連する肺合併症の可能性及び／又は重症度を低減するための治療剤としてのＡＡ－ＥＣ０１の使用を支持する。ＡＡ－ＥＣ０１は、治療特性を有するアミノ酸の機能的組み合わせで構成されているため、製剤は、スタンドアロンＡＰＩとして、又は他の治療オプションと組み合わせて使用するための相補的ＡＰＩとして使用することができる。ＡＡ－ＥＣ０１は、その中に含有されるアミノ酸の各々が「一般に安全と認められる」（ＧＲＡＳ）ため、優れた安全性プロファイルを有し、いかなる副作用も、又は他のＡＰＩに関して禁忌となることないと予想される。したがって、ＡＡ－ＥＣ０１は、標準治療ＡＰＩと組み合わせることで、標準治療療法の効果を最大化し、それによって酸素補給及び換気補助の期間を短縮し、長期肺合併症を最小限に抑え、罹患患者の生存を高めることができる。同じ推論は、少なくとも部分的にＥＮａＣ活性を増加させることによって、過剰な肺胞液貯留を低減させる、本明細書に記載される他の関連するアミノ酸製剤［ＡＡＦ０３、ＡＡＦ０７、及び選択された５ＡＡ製剤（アルギニン、リジン、システイン、アスパラギン、及びグルタミン）］に適用される。
ＡＲＤＳの治療に使用されるＡＰＩには、以下が含まれる。肺保護換気（低一回換気量：６ｍｌ／ｋｇ；ＡＲＤＳネットワークガイダンスによる中程度の吸気終末陽圧；３０ｃｍ水未満のプラトー圧）；腹臥位；高頻度振動換気；保存的流体戦略（ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ ｆｌｕｉｄ ｓｔｒａｔｅｇｙ）；ＡＲＤＳの早期段階における低用量コルチコステロイド；体外式膜型人工肺；外因性界面活性剤（小児集団において特に有益であることが示され、４つのタイプ：非イオン性、アニオン性、カチオン性、両性）；免疫調節物質（例えば、インターロイキン－１受容体拮抗薬、インターフェロンガンマ及びＴＮＦ－アルファ阻害剤）；ファビピラビル（広域スペクトルＲＮＡポリメラーゼ阻害剤）；ロピナビル／リトナビル（ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤）；ウミフェノビル（アルビドール（ａｒｂｉｄｏｌ）；ウイルスの相互作用及びＡＣＥ２を介した宿主細胞との結合を阻害する）；クロロキン／ヒドロキシクロロキン（抗マラリア薬）；神経筋作用薬（ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒ ａｇｅｎｔ）（ＮＭＡ）は、患者と換気装置の同期を改善し、重度の低酸素血症を有する患者の機械的換気を支援するために使用できる；吸入一酸化窒素（ＮＯ；内因性血管拡張剤）；プロスタノイド：プロスタサイクリン（肺血管拡張を引き起こすアラキドン酸誘導体）を含む；好中球エラスターゼ阻害剤（例えば、Ｄｅｐｅｌｅｓｔａｔ）；抗酸化物質（例えば、グルタチオン及びその前駆体Ｎ－アセチルシステイン）；β２作動薬；エアロゾル化アルブテロール；抗凝固剤（噴霧ヘパリン又は静注ヘパリン）；間葉系間質細胞を用いた細胞ベースの治療；スタチン；インスリン；及びインターフェロンβ。組み合わせ治療用途、方法、及び医薬品では、本明細書に記載のアミノ酸製剤を、ＡＲＤＳに罹患した対象を治療するために現在使用されている、上記に列挙された治療的介入の少なくとも１つと組み合わせて使用してもよい。
気管支喘息は、気管支気道の発作性狭窄から生じる、息切れ、胸部圧迫感、及び喘鳴という発作である。喘息は、気道の炎症、閉塞、及び応答性亢進を特徴とする。気管支喘息の病理学的特徴には、気管支収縮及び炎症が含まれる。喘息の治療に使用されるＡＰＩは、それゆえ、気管支収縮の防止又は逆転、及び／又は気道炎症の減少を標的とする。
喘息の治療に使用されるＡＰＩを、以下に詳述する。気管支樹の平滑筋は、主にβ２受容体を含有し、その刺激は気管支拡張を引き起こす。交感神経作用薬（β２アドレナリン受容体の刺激を引き起こす）であるＡＰＩは、気管支喘息の治療、特に、主に、β２受容体に作用するものが有用である。このようなＡＰＩには、エピネフリン、エフェドリン、イソプロテレノール、アルブテロール、レバルブテロール、ビトルテロール、メタプロテレノール、テルブタリン、リトドリン、プロカテロール、イソエタリン、ホルモテロール、ピルブテロール、及びサルメテロールが含まれる。アドレナリンは、注射又は吸入器を介して投与され得る。アドレナリン（０．３～０．５ｍＬの１：１０００溶液）は、喘息のために皮下投与されてもよく、この投与は、１５～２０分後に繰り返すことができる。高齢の対象及び虚血性心疾患、心不整脈、又は高血圧に罹患している対象には禁忌である。アルブテロールは、経口的に、注射によって、又は吸入によって投与することができる。経口投与すると、消化管から十分に吸収され、気管支拡張は約１時間で起こり、６～８時間持続する。吸入により投与すると、約１５分で作用し、３～４時間効果が持続する。皮下注射により、その効果は５分で現れ、３～４時間持続する。メチルキサンチン薬剤には、テオフィリン、アミノフィリン、テオブロミン、カフェイン、オクストリフィリン、ジフィリン、ペントキシフィリン、及びアセフィリンが含まれる。アミノフィリンは、パラドキシカルな（ｐａｒａｄｏｘｉｃａｌ）腹部及び横隔膜疲労を発症する患者に処方される。アミノフィリン注入は、横隔膜の収縮性の改善に効果的である。マスト細胞安定剤には、クロモグリク酸ナトリウム、ネドクロミルＮａ、及びケトチフェンが含まれる。このような抗炎症薬は、炎症性細胞、特にマスト細胞、好酸球、及び上皮細胞の活性化を防ぐが、直接的な気管支拡張活性は有さない。軽度の持続性喘息に効果的であり、特に運動が誘発因子である場合に有効である。クロモグリク酸ナトリウムは、ケリンと呼ばれるエジプトの植物に由来する。マスト細胞からの化学物質の放出を阻害するため、喘息発作の全段階を防止する。１日に３～４回投与されてもよい。粉末形態の薬剤は吸入することができ、１％のＩｎｔｅｌ溶液として開発されており、これは噴霧デバイスで使用され、現在はＩｎｔｅｌポケット吸入器で利用可能である。コルチコステロイドには、トリアムシノロン、プレドニゾン、モメタゾン、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、フルチカゾン、フルニソリド、デキサメタゾン、ブデソニド、及びベクロメタゾンが含まれる。コルチコステロイドは効果的な抗炎症薬である。コルチコステロイドは、炎症を減少させ、喘息症状の制御及び喘息の増悪の予防をもたらす。コルチゾン吸入器は、最小限の副作用で喘息の局所的緩和をもたらす。コルチゾンは、喘息及び持続性の異常呼吸に効果的である。５－リポキシゲナーゼ阻害剤（例えば、ジロートン（ｚｉｌｅｕｔｏｎ））及びロイコトリエンＤ４（ＬＴＤ４）受容体拮抗薬（例えば、ザフィルルカスト及びモンテルカスト）も、喘息の治療に日常的に使用される。ロイコトリエンは、平滑筋細胞を収縮させ、炎症細胞を引き付け、粘液分泌及び血管透過性を増強することによって、喘息の症状及び気道閉塞を誘発する。組み合わせ治療用途、方法、及び医薬品では、本明細書に記載のアミノ酸製剤は、喘息に罹患した対象を治療するために現在使用されている、上記に列挙された治療的介入のうちの少なくとも１つと組み合わせて使用することができる。
アレルギー性鼻炎に特徴的な症状には、鼻閉、鼻の痒み、鼻漏（鼻からの過剰な粘液流出）、及びくしゃみが含まれる。第二世代の経口抗ヒスタミン薬及び鼻腔内コルチコステロイドが、治療の主力である。一般的に、アレルギー性鼻炎の治療選択肢は、症状の軽減を目標とする。かかる治療選択肢には、回避手段（症状がアレルゲンへの曝露に関連する場合のアレルゲンの回避；経口抗ヒスタミン薬、鼻腔内コルチコステロイド、うっ血除去薬、ロイコトリエン受容体拮抗薬、及び鼻腔内クロモン（ｃｒｏｍｏｎｅ）などのＡＰＩ；及びアレルゲン免疫療法が含まれる。対象の一部に有用であり得る他の治療には、うっ血除去薬及び経口コルチコステロイドが含まれる。時折の全身性コルチコステロイド及びうっ血除去薬（経口及び局所用）も使用される。市販の鼻腔生理食塩水スプレー又は自家製塩水溶液を使用して、鼻腔から刺激物を洗浄し、粘液を薄くし、鼻腔膜を落ち着かせることもできる。組み合わせ治療用途、方法、及び薬剤では、本明細書に記載のアミノ酸製剤は、アレルギー性鼻炎に罹患した対象を治療するために現在使用されている、上記に列挙された治療的介入のうちの少なくとも１つと組み合わせて使用され得る。
粘液溶解薬は、粘液を薄くするＡＰＩであり、これにより粘液を身体から排出し易くする。粘液溶解薬は、過剰な又は濃厚な粘液を特徴とする呼吸状態又は鼻腔状態を治療するために使用される。粘膜溶解剤は、錠剤若しくはシロップ製剤中で経口投与されてもよく、又はネブライザーを通して吸入されてもよい。より一般的な種類の粘液溶解薬には、以下が含まれる。ムシネックス（Ｍｕｃｉｎｅｘ）（グアイフェネシン）、カルボシステイン、プルモザイム（ドルナーゼアルファ）、エルドステイン、メチステイン（Ｍｅｃｙｓｔｅｉｎｅ）、ブロムヘキシン高浸透圧生理食塩水、及びマンニトール粉末。組み合わせ治療用途、方法、及び医薬品では、本明細書に記載のアミノ酸製剤は、上記に列挙されるものなど、少なくとも１つの粘液溶解薬と組み合わせて使用され得る。
本明細書で使用される場合、「ＥＮａＣ活性の増加」という語句は、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、２００％、３００％、４００％、又は５００％のＥＮａＣ活性の増加を指すために使用され得る。
本明細書で使用される場合、「ＥＮａＣ活性の増加」という語句は、１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、又は５０倍のＥＮａＣ活性の増加を指すために使用され得る。
本明細書で使用される場合、「ＥＮａＣ活性の増加」という語句は、ＥＮａＣ活性が正常なＥＮａＣ活性の５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％まで回復するように、ＥＮａＣ活性が特定の細胞又は組織において正常レベルに少なくとも部分的に回復するＥＮａＣ活性の増加を指すために使用され得る。
本明細書に記載されるように、ＥＮａＣ活性の増加又は減少は、例えば、Ｕｓｓｉｎｇチャンバにおけるベンザミル／アミロリド感受性電流を測定することによって決定され得る。本明細書に提示される結果に基づいて、ＡＡＦ０１、ＡＡＦ０３、ＡＡＦ０７、選択された５ＡＡ製剤（アルギニン、リジン、システイン、アスパラギン、及びグルタミン）が、呼吸窮迫の特徴を再現する本明細書に記述されたモデルシステムにおいて、陰性対照溶液（ＥＮａＣ活性に効果を持たないことが確認されている）と比較して、ＥＮａＣ活性を増加させる例示的製剤として、選択された。
本明細書及び特許請求の範囲全体を通して、以下の用語は、文脈が別途明確に指示しない限り、本明細書に明示的に関連する意味を取る。本明細書で使用されるとき、語句「一実施形態では（ｉｎ ｏｎｅ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」、「一実施形態では（ｉｎ ａｎ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」、及び「いくつかの実施形態では」は、同じ実施形態に言及している場合もあるが、必ずしも同じ実施形態に言及しているとは限らない。更に、本明細書で使用される場合、語句「別の実施形態では」及び「いくつかの他の実施形態では」は、異なる実施形態に言及している場合もあるが、必ずしも異なる実施形態に言及しているとは限らない。本開示の全ての実施形態は、本開示の範囲又は精神から逸脱することなく組み合わせ可能であることが意図される。
本明細書で使用される場合、文脈が別途明確に指示しない限り、用語「～に基づく」は排他的ではなく、記述されていない追加の要因に基づくことを可能にする。更に、本明細書全体を通して、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」の意味は、複数の参照を含む。「～において（ｉｎ）」の意味は、「～の中で（ｉｎ）」及び「～の上で（ｏｎ）」を含む。
薬剤（又はそのような薬剤を含有する組成物）の「有効量」又は「有効用量」は、例えば、選択された投与形態、経路、及び／又はスケジュールに従って細胞又は生物に送達された場合に、所望の生物学的及び／又は薬理学的効果を達成するのに十分な量を指す。語句「有効量」及び「治療有効量」は、互換的に使用される。当業者によって理解されるものとなるように、有効な特定の薬剤又は組成物の絶対量は、所望の生物学的又は薬理学的なエンドポイント、送達される薬剤、標的組織などの因子に応じて、変化し得る。当業者は、様々な実施形態で、「有効量」が、単回用量で若しくは複数回用量の使用を介して、細胞と接触し得るか、又は対象に投与され得ることを、更に理解するであろう。いくつかの実施形態では、有効量は、少なくとも１つの細胞においてＥＮａＣ活性を増加させることによって、少なくとも部分的に、過剰な流体貯留を減少させる量である。いくつかの実施形態では、有効量は、それを必要とする対象におけるＥＮａＣ活性を少なくとも部分的に増加させることによって、それを必要とする対象における過剰な流体貯留を減少させる量である。そのいくつかの実施形態では、有効量は、肺又は鼻腔内の過剰な流体貯留の減少を必要とする対象の肺又は鼻腔内の過剰な流体貯留を減少させる量である。いくつかの実施形態では、有効量は、ＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎の少なくとも１つの症状を軽減させる量である。
対象を治療する文脈において本明細書で使用される場合、「治療」、「治療すること」、及び類似の用語は、対象の医学的及び／又は外科的管理を提供することを指す。治療には、薬剤又は製剤（例えば、医薬製剤）を対象に投与することを含み得るが、これらに限定されない。「治療」という用語又はその任意の文法的変形（例えば、治療する、治療すること、及び治療等）は、本明細書で使用される場合、疾患又は状態の症状を緩和すること、及び／又は疾患又は病態の進行、重症度、及び／又は範囲を低減、抑制、阻害、減少、又は影響を与えることを含むがこれに限定されない。
治療の効果はまた、疾患の発生又は再発の可能性、又は疾患の少なくとも１つの症状又は症状の減少を含み得る。治療剤又はその製剤は、疾患を有するか、又は一般集団のメンバーと比較して疾患を発症するリスクが高い対象に投与されてもよい。いくつかの実施形態では、治療剤又はその製剤は、疾患の少なくとも１つの症状を低減又は除去するための維持目的で対象に投与される。いくつかの実施形態では、治療剤又はその製剤は、疾患を有していたが、もはや疾患の証拠を示さなくなった対象に投与されてもよい。薬剤又はその製剤は、例えば、疾患の再発の可能性を低減するために投与されてもよい。治療剤又はその製剤は、予防的に、すなわち、疾患の任意の症状又は徴候の発症前に投与されてもよい。
「予防的治療」とは、疾患を発症していない、又は疾患の証拠を示していない対象に、例えば疾患が発生する可能性を低減するために、又は発生した場合に疾患の重症度を低減するために、対象に医学的及び／又は外科的管理を提供することを指す。対象は、疾患を発症するリスクがある（例えば、一般集団と比較してリスクが高い、又は疾患を発症する可能性を高めるリスク因子を有する）と特定されている可能性がある。
「寛解」という用語又はその文法的変化（例えば、寛解する、寛解すること、及び寛解等）は、本明細書で使用される場合、疾患又は病態の発症を遅らせること、又は重症度を減少させることを含むがこれに限定されない。寛解は、本明細書で使用される場合、症状の完全になくなることを必要としない。
用語「状態」、「疾患」、「障害」は、互換的に使用される。
「対象」は、様々な実施形態で任意の脊椎生物であってもよい。対象は、例えば、実験、診断、及び／又は治療目的のために薬剤が投与される個体であってもよく、又は試料が取得されるか、又は処置が実施される個体であってもよい。いくつかの実施形態では、対象は、哺乳動物、例えば、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、類人類、チンパンジー、オランウータン、サル）、又はイヌ、ネコ、ウサギ、畜牛、ウシ、ウマ（例えば、仔馬を含む）、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラマ、マウス、及びラットなどの家畜化動物である。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。ヒト又は他の哺乳動物は、性別のいずれかであってもよく、発達の任意の段階であってもよい。いくつかの実施形態では、ヒト又は他の哺乳動物は、乳幼児（早産児を含む）である。いくつの実施形態では、対象は、ＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎と診断されている。
上記に加えて、ＥＮａＣは、出産中に重要な役割を果たしている。胎児の流体で満たされた肺胞は、ＥＮａＣの発現及び機能の巨大な急増によって、出産時に空気満たされた肺胞に変換される。したがって、本明細書に記載の例示的な製剤は、早産児（その期日前に未熟に生まれた乳児）又は呼吸器系における発達障害を特徴とする疾患又は障害で生まれた乳児において、即時の利益をもたらす。同じ推論は、早産の動物幼体、及び呼吸器系における発達障害を特徴とする疾患又は障害を有して生まれた動物幼体に適用される。
本明細書で使用される場合、用語「乳児」は、出生から１歳までの年齢に及ぶヒトの子供を指す。本明細書で使用される場合、用語「乳幼児」は、出生から４歳までの年齢の範囲のヒトの子供を指し、ゆえに新生児、乳児、及び幼児を包含する。
「無視できる量」とは、存在するアミノ酸が肺又は鼻腔内の液体貯留を減少させないことを意味する。又はいくつかの実施形態では、アミノ酸が製剤中に存在する場合であっても、それを必要とする対象において肺又は鼻腔内の液体貯留に影響を及ぼす量では存在しない。いくつかの実施形態では、無視できる量とは、アミノ酸の総濃度が１００ｍｇ／ｌ、５０ｍｇ／ｌ、１０ｍｇ／ｌ、５ｍｇ／ｌ、１ｍｇ／ｌ、０．５ｍｇ／ｌ、０．１ｍｇ／ｌ、又は０．０１ｍｇ／ｌ未満である量である。いくつかの実施形態では、無視できる量とは、アミノ酸の総濃度が１００ｍｇ／ｌ未満である量である。いくつかの実施形態では、無視できる量とは、アミノ酸の総濃度が５０ｍｇ／ｌ未満である量である。いくつかの実施形態では、無視できる量とは、アミノ酸の総濃度が１０ｍｇ／ｌ未満である量である。いくつかの実施形態では、無視できる量とは、アミノ酸の総濃度が５ｍｇ／ｌ未満である量である。いくつかの実施形態では、無視できる量とは、アミノ酸の総濃度が１ｍｇ／ｌ未満である量である。いくつかの実施形態では、無視できる量とは、アミノ酸の総濃度が０．５ｍｇ／ｌ未満である量である。いくつかの実施形態では、無視できる量とは、アミノ酸の総濃度が０．１ｍｇ／ｌ未満である量である。いくつかの実施形態では、無視できる量とは、アミノ酸の総濃度が０．０１ｍｇ／ｌ未満である量である。
「アミノ酸」という用語は、アミン（－ＮＨ２）官能基と、カルボキシ（－ＣＯＯＨ）官能基と、各アミノ酸に特異的な側鎖（「Ｒ」）基とを含む全ての既知のアミノ酸を包含する。「アミノ酸」は、ヒトゲノムによってコードされる２１種のアミノ酸（すなわちタンパク質を構成するアミノ酸）、細菌又は単細胞生物によってコード又は産生されるアミノ酸、及び天然由来のアミノ酸である。本開示の目的では、塩基性側鎖（アルギニン、リジン、及びヒスチジン）を有するアミノ酸の共役酸形態、又は酸性側鎖（アスパラギン酸及びグルタミン酸）を有するアミノ酸の共役塩基形態は、別段の記載がない限り、本質的に同一である。「アミノ酸」はまた、例えば、Ｕｓｓｉｎｇチャンバアッセイにおいて、ＥＮａＣ活性の増加に関して実質的に同じ活性を保持する誘導体及びその類似体を包含する。誘導体及び類似体は、例えば、エナンチオマーであってよく、アミノ酸のＤ型及びＬ型の両方を含み得る。誘導体及び類似体は、「天然」又は「非天然」のアミノ酸（例えば、β－アミノ酸、ホモアミノ酸、プロリン誘導体、ピルビン酸誘導体、３－置換アラニン誘導体、グリシン誘導体、環置換システイン誘導体、環置換フェニルアラニン誘導体、直鎖コアアミノ酸、及びＮ－メチルアミノ酸）の誘導体、例えば、セレノシステイン、ピロリシン、ヨードシステイン、ノルロイシン、又はノルバリンであり得る。誘導体及び類似体は、保護基（α－アミノ基、α－カルボン酸基、又は好適なＲ基、式中、ＲはＮＨ２、ＯＨ、ＳＨ、ＣＯＯＨ又は他の反応性官能基を含有する）を含んでもよい。他のアミノ酸誘導体としては、以下に限定されないが、アミノ酸の例えばアシル化、メチル化、グリコシル化、及び／又はハロゲン化によって合成されるものが挙げられる。これらには、例えば、β－メチルアミノ酸、Ｃ－メチルアミノ酸、及びＮ－メチルアミノ酸を含む。本明細書に記載されるアミノ酸は、遊離アミノ酸として存在し得る。用語「遊離アミノ酸」は、ペプチド又はポリペプチドの一部ではない（例えば、ペプチド結合を介して別のアミノ酸に接続されていない）アミノ酸を指す。遊離アミノ酸は、溶液中に遊離しているが（例えばジペプチド結合を介して少なくとも１つの他のアミノ酸に連結されているとは対照的である）、溶液中の塩又は他の成分と会合している場合がある。
本明細書に使用される際に、用語「塩」は、任意の及び全ての塩を指し、薬学的に許容可能な塩を包含する。
用語「担体」は、本明細書に記載の製剤とともに投与される任意の希釈剤、アジュバント、賦形剤、又はビヒクルを指すことができる。適切な医薬担体の例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｓ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，２１ ｓｔ ｅｄ．，Ｅｄ．Ｆｅｌｔｏｎ，２０１２に記載されており、参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書に記載される製剤に含めるための例示的な塩としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、又はクエン酸三ナトリウム、重炭酸ナトリウム、リン酸一、二、若しくは三ナトリウム、又はそれらの任意の組み合わせを使用したグルコン酸ナトリウムリン酸緩衝剤が挙げられる。
例示的な希釈剤としては、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、セルロース、微結晶セルロース、カオリン、塩化ナトリウム、及びこれらの混合物が挙げられる。
本明細書に記載の医薬組成物の製造に使用される薬学的に許容可能な賦形剤としては、不活性希釈剤、分散剤及び／若しくは造粒剤、表面活性剤及び／若しくは乳化剤、崩壊剤、結合剤、防腐剤、緩衝剤、滑沢剤、並びに／又は油が挙げられる。ココアバター及び座薬ワックス、着色剤、コーティング剤、及び芳香剤などの賦形剤も、組成物中に存在し得る。
有効量を達成するために必要なアミノ酸製剤又は組成物の正確な量は、例えば、対象の種、年齢、及び全身状態、投与様式などに応じて、対象ごとに異なるものとなる。有効量は、単回用量（例えば単回経口用量）又は複数回用量（例えば複数回経口用量）に含まれ得る。いくつかの実施形態では、複数回用量が対象に投与されるか又は組織若しくは細胞に適用される場合、複数回用量のうち任意の２回用量は、異なるか又は実質的に同じ量の本明細書に記載のアミノ酸組成物を含む。いくつかの実施形態では、複数回用量が対象に投与されるか又は組織若しくは細胞に適用される場合、複数回用量を対象に投与するか又は複数回用量を組織若しくは細胞に適用する頻度は、必要に応じて、１日３回用量、１日２回用量、１日１回用量、隔日１回用量、３日に１回用量、毎週１回用量、２週間に１回用量、３週間に１回用量、又は４週間に１回用量である。いくつかの実施形態では、複数回用量を対象に投与するか又は複数回用量を組織若しくは細胞に適用する頻度は、１日１回用量である。いくつかの実施形態では、複数回用量を対象に投与するか又は複数回用量を組織若しくは細胞に適用する頻度は、１日２回用量である。いくつかの実施形態では、複数回用量を対象に投与するか又は複数回用量を組織若しくは細胞に適用する頻度は、１日３回である。いくつかの実施形態では、複数回用量が対象に投与されるか又は組織若しくは細胞に適用される場合、複数回用量投与のうち第１回の用量投与と最終回の用量投与の間の持続期間は、１／３日、半日、１日、２日、４日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、７年間、１０年間、１５年間、２０年間、又は対象、組織、若しくは細胞の寿命期間である。いくつかの実施形態では、複数回用量投与のうち第１回の用量投与と最終回の用量投与との間の持続期間は、３ヶ月、６ヶ月、又は１年である。いくつかの実施形態では、複数回用量投与のうち第１回の用量投与と最終回の用量投与との間の持続時間は、対象、組織、又は細胞の寿命期間である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される用量（例えば、単回用量、又は複数回用量のうちの任意の用量）は、本明細書に記載のアミノ酸製剤を、独立して０．１μｇ～１μｇの間、０．００１ｍｇ～０．０１ｍｇの間、０．０１ｍｇ～０．１ｍｇの間、０．１ｍｇ～１ｍｇの間、１ｍｇ～３ｍｇの間、３ｍｇ～１０ｍｇの間、１０ｍｇ～３０ｍｇの間、３０ｍｇ～１００ｍｇの間、１００ｍｇ～３００ｍｇの間、３００ｍｇ～１，０００ｍｇの間、１ｇ～１０ｇの間、１ｇ～１５ｇの間、又は１ｇ～２０ｇの間で（両端を含めて）含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される用量は、本明細書に記載のアミノ酸製剤を、独立して１ｍｇ～３ｍｇの間で（両端を含めて）含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記述される用量は、本明細書に記載のアミノ酸製剤を、独立して３ｍｇ～１０ｍｇの間で（両端を含めて）独立して含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される用量は、本明細書に記載のアミノ酸製剤を、独立して１０ｍｇ～３０ｍｇの間で（両端を含めて）含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記述される用量は、本明細書に記載のアミノ酸製剤を、独立して３０ｍｇ～１００ｍｇの間で（両端を含めて）含む。
本明細書に記載される用量範囲は、提供される医薬組成物又は組成物の成人への投与に関するガイダンスを提供する。投与される量、例えば、乳幼児、子供又は青年に投与される量は、医療実践者又は当業者によって決定することができ、成人に投与されるものよりも低いか又はそれと同じとすることができる。
本明細書に参照される全ての従前の特許、刊行物、及び試験方法は、参照によりその全体が組み込まれる。
いくつかの実施形態の詳細な説明
本明細書に記載されるアミノ酸製剤（例えば、医薬製剤）の各々は、ＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎を治療するための方法、ＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎を治療するための使用、及び／又はＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎を治療するための医薬品を調製するために利用さすることができる。ＡＲＤは、肺の機能を妨げる過剰な肺胞液貯留を特徴とする。喘息はまた、肺の機能を妨げる過剰な流体貯留の特徴を示す場合もある。アレルギー性鼻炎は、鼻腔に過剰な液体が貯留することを特徴とする。本明細書に記載のアミノ酸製剤の各々を使用して、これらの状態における流体貯留を低減することができ、その能力は肺又は鼻腔におけるＥＮａＣ活性を増加させる能力によって少なくとも部分的に与えられる。
そのいくつかの実施形態では、本明細書に記載のアミノ酸製剤（例えば、医薬製剤）のそれぞれに関して、アミノ酸製剤は、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、セリン（Ｓ）、又はＮ－アセチルシステインの遊離アミノ酸を含まない。そのいくつかの実施形態では、アミノ酸製剤は、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、セリン（Ｓ）、若しくはＮ－アセチルシステイン、又はそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つの遊離アミノ酸を含まない。
いくつかの実施形態では、製剤は、遊離アミノ酸を含むか、又はそれらから本質的になるか、若しくはそれらからなり、遊離アミノ酸が、リジン（Ｋ）及びアルギニン（Ｒ）、並びに、グルタミン（Ｑ）、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）、システイン（Ｃ）、若しくはアスパラギン（Ｎ）、又はそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つの遊離アミノ酸、から本質的になるか、あるいはそれらからなる。その例示的な遊離アミノ酸製剤としては、ＡＡＦ０１［リジン（Ｋ）、トリプトファン（Ｗ）、アルギニン（Ｒ）、チロシン（Ｙ）、及びグルタミン（Ｑ）］、ＡＡＦ０７［Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｙ］、ＡＡＦ０３［Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｗ］、ＡＡＦ０２［Ｋ、Ｒ、Ｗ］、及び選択した５ＡＡ製剤［Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｃ、Ｎ］が挙げられる。いくつかの実施形態では、そのこのような遊離アミノ酸製剤は、ＡＡＦ０１［リジン（Ｋ）、トリプトファン（Ｗ）、アルギニン（Ｒ）、チロシン（Ｙ）、及びグルタミン（Ｑ）］、ＡＡＦ０７［Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｙ］、ＡＡＦ０３［Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｗ］、及び選択した５ＡＡ製剤［Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｃ、Ｎ］を含む。そのいくつかの実施形態では、アミノ酸製剤は、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、セリン（Ｓ）、又はＮ－アセチルシステインの遊離アミノ酸を含まない。そのいくつかの実施形態では、アミノ酸製剤は、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、セリン（Ｓ）、若しくはＮ－アセチルシステイン、又はそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つの遊離アミノ酸を含まない。
いくつかの実施形態では、製剤は、遊離アミノ酸を含むか、又はそれらから本質的になるか、若しくはそれらからなり、遊離アミノ酸は、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、及びグルタミン（Ｑ）、並びにトリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）、システイン（Ｃ）、又はアスパラギン（Ｎ）、又はそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つの遊離アミノ酸、から本質的になるか、あるいはそれらからなる。その例示的な遊離アミノ酸製剤としては、ＡＡＦ０１［リジン（Ｋ）、トリプトファン（Ｗ）、アルギニン（Ｒ）、チロシン（Ｙ）、及びグルタミン（Ｑ）］、ＡＡＦ０７［Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｙ］、ＡＡＦ０３［Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｗ］、ＡＡＦ０２［Ｋ、Ｒ、Ｗ］、及び選択した５ＡＡ製剤［Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｃ、Ｎ］が挙げられる。いくつかの実施形態では、このような遊離アミノ酸製剤は、ＡＡＦ０１［リジン（Ｋ）、トリプトファン（Ｗ）、アルギニン（Ｒ）、チロシン（Ｙ）、及びグルタミン（Ｑ）］、ＡＡＦ０７［Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｙ］、ＡＡＦ０３［Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｗ］、及び選択した５ＡＡ製剤［Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｃ、Ｎ］を含む。そのいくつかの実施形態では、アミノ酸製剤は、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、セリン（Ｓ）、又はＮ－アセチルシステインの遊離アミノ酸を含まない。そのいくつかの実施形態では、アミノ酸製剤は、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、セリン（Ｓ）、若しくはＮ－アセチルシステイン、又はそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つの遊離アミノ酸を含まない。
いくつかの実施形態では、製剤は、遊離アミノ酸を含むか、又はそれらから本質的になるか、若しくはそれらからなり、遊離アミノ酸は、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、及びグルタミン（Ｑ）、並びにトリプトファン（Ｗ）、若しくはチロシン（Ｙ）、又はそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの遊離アミノ酸、あるいはシステイン（Ｃ）若しくはアスパラギン（Ｎ）、又はそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの遊離アミノ酸から本質的になるか、あるいはそれらからなる。その例示的な遊離アミノ酸製剤としては、ＡＡＦ０１［リジン（Ｋ）、トリプトファン（Ｗ）、アルギニン（Ｒ）、チロシン（Ｙ）、及びグルタミン（Ｑ）］、ＡＡＦ０７［Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｙ］、ＡＡＦ０３［Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｗ］、ＡＡＦ０２［Ｋ、Ｒ、Ｗ］、及び選択した５ＡＡ製剤［Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｃ、Ｎ］が挙げられる。いくつかの実施形態では、そのこのような遊離アミノ酸製剤は、ＡＡＦ０１［リジン（Ｋ）、トリプトファン（Ｗ）、アルギニン（Ｒ）、チロシン（Ｙ）、及びグルタミン（Ｑ）］、ＡＡＦ０７［Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｙ］、ＡＡＦ０３［Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｗ］、及び選択した５ＡＡ製剤［Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｃ、Ｎが挙げられる。そのいくつかの実施形態では、アミノ酸製剤は、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、セリン（Ｓ）、又はＮ－アセチルシステインの遊離アミノ酸を含まない。そのいくつかの実施形態では、アミノ酸製剤は、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、セリン（Ｓ）、若しくはＮ－アセチルシステイン、又はそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つの遊離アミノ酸を含まない。
いくつかの実施形態では、製剤は、遊離アミノ酸を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなり、遊離アミノ酸は、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、及びグルタミン（Ｑ）、並びにトリプトファン（Ｗ）若しくはチロシン（Ｙ）、又はそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの遊離アミノ酸から本質的になるか、あるいはそれらからなる。その例示的な遊離アミノ酸製剤としては、ＡＡＦ０１［リジン（Ｋ）、トリプトファン（Ｗ）、アルギニン（Ｒ）、チロシン（Ｙ）、及びグルタミン（Ｑ）］、ＡＡＦ０７［Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｙ］、及びＡＡＦ０３［Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｗ］が挙げられる。そのいくつかの実施形態では、アミノ製剤は、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、又はセリン（Ｓ）の遊離アミノ酸を含まない。そのいくつかの実施形態では、アミノ製剤は、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、若しくはセリン（Ｓ）、又はそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つを含まない。そのいくつかの実施形態では、アミノ酸製剤は、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、セリン（Ｓ）、又はＮ－アセチルシステインの遊離アミノ酸を含まない。そのいくつかの実施形態では、アミノ酸製剤は、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、セリン（Ｓ）、若しくはＮ－アセチルシステイン、又はそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つの遊離アミノ酸を含まない。
いくつかの実施形態では、製剤は、遊離アミノ酸を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなり、遊離アミノ酸は、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、及びグルタミン（Ｑ）、並びにシステイン（Ｃ）若しくはアスパラギン（Ｎ）、又はそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つの遊離アミノ酸から本質的になるか、あるいはそれらからなる。その例示的な遊離アミノ酸製剤は、選択された５ＡＡ製剤［Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｃ、Ｎ］を含む。そのいくつかの実施形態では、アミノ酸製剤は、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、セリン（Ｓ）、又はＮ－アセチルシステインの遊離アミノ酸を含まない。そのいくつかの実施形態では、アミノ酸製剤は、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、セリン（Ｓ）、若しくはＮ－アセチルシステイン、又はそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つの遊離アミノ酸を含まない。
ＡＡＦ０１は、本明細書に記載される例示的なアミノ酸製剤である。これにより包含される異なる組み合わせの数を決定するための式は、２ｎ－１であり、ここで、ｎは、アミノ酸の選択したリスト中の異なるアミノ酸の数（例えば、５アミノ酸）に等しい。したがって、リジン、トリプトファン、アルギニン、チロシン、及びグルタミン（ＡＡＦ０１の遊離アミノ酸）の異なる組み合わせの総数は、３１の異なる組み合わせ（２５－ １）になる。簡略化のため、選択したアミノ酸の各々は、次のようにアミノ酸についての標準的な単一大文字で表される：リジン（Ｋ）、トリプトファン（Ｗ）、アルギニン（Ｒ）、チロシン（Ｙ）、及びグルタミン（Ｑ）。異なる組み合わせを、以下のようにリスト２に示す。５ＡＡセット：Ｋ、Ｗ、Ｒ、Ｙ、Ｑ（ＡＡＦ０１）。４ＡＡサブセット：Ｋ、Ｗ、Ｒ、Ｙ；Ｋ、Ｗ、Ｒ、Ｑ（ＡＡＦ０３）；Ｋ、Ｗ、Ｙ、Ｑ；Ｋ、Ｒ、Ｙ、Ｑ（ＡＡＦ０７）；及びＷ、Ｒ、Ｙ、Ｑ。３つのＡＡサブセット：Ｋ、Ｗ、Ｒ（ＡＡＦ０２）；Ｋ、Ｗ、Ｙ；Ｋ、Ｗ、Ｑ；Ｋ、Ｒ、Ｙ；Ｋ、Ｒ、Ｑ；Ｋ、Ｙ、Ｑ；Ｗ、Ｒ、Ｙ；Ｗ、Ｒ、Ｑ；Ｗ、Ｙ、Ｑ；及びＲ、Ｙ、Ｑ。２ＡＡサブセット：Ｋ、Ｗ；Ｋ、Ｒ；Ｋ、Ｙ；Ｋ、Ｑ；Ｗ、Ｒ；Ｗ、Ｙ；Ｗ、Ｑ；Ｒ、Ｙ；Ｒ、Ｑ；及びＹ、Ｑ。
製剤は、ＡＡＦ０１中の選択された５アミノ酸（Ｋ Ｗ Ｒ Ｙ Ｑ）及び選択された５アミノ酸の２、３、又は４アミノ酸サブセットを含むそのサブセットを含む製剤（例えば、医薬製剤）に適用され、ＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎の治療を必要とする対象におけるＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎を治療するため、及び／又はＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎を治療するための医薬品を調製するためのそれらの使用を含む。
上述の製剤及び推論は、本明細書に記載される選択された５アミノ酸（Ｋ Ｗ Ｒ Ｙ Ｑ）のうちの２、３、又は４アミノ酸サブセットの任意の組み合わせに等しく適用される。
いくつかの実施形態では、製剤は、リジン（Ｋ）、トリプトファン（Ｗ）、アルギニン（Ｒ）、チロシン（Ｙ）、及びグルタミン（Ｑ）うちの任意の２つの遊離アミノ酸を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。ＡＡＦ０１［リジン（Ｋ）、トリプトファン（Ｗ）、アルギニン（Ｒ）、チロシン（Ｙ）、及びグルタミン（Ｑ）］の５アミノ酸製剤の例示的な２つの遊離アミノ酸サブセットは、以下の通りである。Ｋ、Ｗ；Ｋ、Ｒ；Ｋ、Ｙ；Ｋ、Ｑ；Ｗ、Ｒ；Ｗ、Ｙ；Ｗ、Ｑ；Ｒ、Ｙ；Ｒ、Ｑ；及びＹ、Ｑ。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ及びＷを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ及びＲを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ及びＹを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｗ及びＲを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｗ及びＹを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｗ及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｒ及びＹを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｒ及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｙ及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。
いくつかの実施形態では、製剤は、リジン（Ｋ）、トリプトファン（Ｗ）、アルギニン（Ｒ）、チロシン（Ｙ）、及びグルタミン（Ｑ）のうちの任意の３つの遊離アミノ酸を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。ＡＡＦ０１［リジン（Ｋ）、トリプトファン（Ｗ）、アルギニン（Ｒ）、チロシン（Ｙ）、及びグルタミン（Ｑ）］の５アミノ酸製剤の例示的な３つの遊離アミノ酸サブセットは、以下の通りである。Ｋ、Ｗ、Ｒ；Ｋ、Ｗ、Ｙ；Ｋ、Ｗ、Ｑ；Ｋ、Ｒ、Ｙ；Ｋ、Ｒ、Ｑ；Ｋ、Ｙ、Ｑ；Ｗ、Ｒ、Ｙ；Ｗ、Ｒ、Ｑ；Ｗ、Ｙ、Ｑ；及びＲ、Ｙ、Ｑ。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ、Ｗ、及びＲを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ、Ｗ、及びＹを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ、Ｗ、及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ、Ｒ、及びＹを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ、Ｒ、及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ、Ｙ、及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｗ、Ｒ、及びＹを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｗ、Ｒ、及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｗ、Ｙ、及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｒ、Ｙ、及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。
いくつかの実施形態では、製剤は、リジン（Ｋ）、トリプトファン（Ｗ）、アルギニン（Ｒ）、チロシン（Ｙ）、及びグルタミン（Ｑ）のうちの任意の４つの遊離アミノ酸を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。ＡＡＦ０１［リジン（Ｋ）、トリプトファン（Ｗ）、アルギニン（Ｒ）、チロシン（Ｙ）、及びグルタミン（Ｑ）］の５アミノ酸製剤の例示的な４つの遊離アミノ酸サブセットは、以下の通りである。Ｋ、Ｗ、Ｒ、Ｙ；Ｋ、Ｗ、Ｒ、Ｑ；Ｋ、Ｗ、Ｙ、Ｑ；Ｋ、Ｒ、Ｙ、Ｑ；及びＷ、Ｒ、Ｙ、Ｑ。いくつかの実施形態では、いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ、Ｗ、Ｒ、及びＹを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ、Ｗ、Ｒ、及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ、Ｗ、Ｙ、及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ、Ｒ、Ｙ、及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｗ、Ｒ、Ｙ、及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。
いくつかの実施形態では、組成物は、リジン（Ｋ）、トリプトファン（Ｗ）、アルギニン（Ｒ）、チロシン（Ｙ）、及びグルタミン（Ｑ）の遊離アミノ酸を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。
選択した５ＡＡ製剤［Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｃ、Ｎ］は、本明細書に記載の例示的なアミノ酸製剤である。これにより包含される異なる組み合わせの数を決定するための式は、２ｎ－１であり、ここで、ｎは、アミノ酸の選択したリスト中の異なるアミノ酸の数（例えば、５アミノ酸）に等しい。したがって、リジン、アスパラギン、アルギニン、システイン、及びグルタミンの異なる組み合わせの総数は、３１の異なる組み合わせ（２５－１）である。簡略化のため、選択したアミノ酸の各々は、次のようにアミノ酸についての標準的な単一大文字で表される：リジン（Ｋ）、アスパラギン（Ｎ）、アルギニン（Ｒ）、システイン（Ｃ）、及びグルタミン（Ｑ）。異なる組み合わせを、以下のようにリスト１に示す。５ＡＡセット：Ｋ、Ｎ、Ｒ、Ｃ、Ｑ。そのいくつかの実施形態では、トレオニン（Ｔ）は、Ｋ、Ｎ、Ｒ、Ｃ、Ｑの５ＡＡセットに任意で追加されてもよい。そのいくつかの実施形態では、アルギニン（Ｒ）は、シトルリン、又はＫ、Ｎ、Ｒ、Ｃ、Ｑの５ＡＡセットのアルギニンとシトルリンの組み合わせによって置換されてもよい。４ＡＡサブセット：Ｋ、Ｎ、Ｒ、Ｃ；Ｋ、Ｎ、Ｒ、Ｑ；Ｋ、Ｎ、Ｃ、Ｑ；Ｋ、Ｒ、Ｃ、Ｑ；及びＮ、Ｒ、Ｃ、Ｑ。そのいくつかの実施形態では、トレオニン（Ｔ）が、任意選択的に、４ＡＡサブセットの任意の１つに添加されてもよい。そのいくつかの実施形態では、存在する場合、アルギニン（Ｒ）は、４ＡＡサブセットのいずれか１つにおいて、シトルリン、又はアルギニンとシトルリンの組み合わせによって置換されてもよい。
３ＡＡサブセット：Ｋ、Ｎ、Ｒ；Ｋ、Ｎ、Ｃ；Ｋ、Ｎ、Ｑ；Ｋ、Ｒ、Ｃ；Ｋ、Ｒ、Ｑ；Ｋ、Ｃ、Ｑ；Ｎ、Ｒ、Ｃ；Ｎ、Ｒ、Ｑ；Ｎ、Ｃ、Ｑ；及びＲ、Ｃ、Ｑ。そのいくつかの実施形態では、トレオニン（Ｔ）が、任意選択的に、３ＡＡサブセットのうちの任意の１つに添加されてもよい。そのいくつかの実施形態では、存在する場合、アルギニン（Ｒ）は、３ＡＡサブセットのいずれか１つにおいて、シトルリン、又はアルギニンとシトルリンの組み合わせによって置換されてもよい。２ＡＡサブセット：Ｃ、Ｎ；Ｋ、Ｒ；Ｋ、Ｃ；Ｋ、Ｑ；Ｎ、Ｒ；Ｎ、Ｃ；Ｎ、Ｑ；Ｒ、Ｑ；及びＣ、Ｑ。そのいくつかの実施形態では、トレオニン（Ｔ）は、任意選択的に、２ＡＡサブセットの任意の１つに添加されてもよい。そのいくつかの実施形態では、存在する場合、アルギニン（Ｒ）は、２ＡＡサブセットのいずれか１つにおいて、シトルリン、又はアルギニンとシトルリンの組み合わせによって置換されてもよい。
製剤は、選択された５つのアミノ酸（Ｋ Ｎ Ｒ Ｃ Ｑ）及び選択された５つのアミノ酸の２、３、又は４アミノ酸サブセットを含むそのサブセットを含む製剤（例えば、医薬製剤）に適用され、ＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎を治療するため、並びにＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎を治療するための医薬品を調製するために使用される。選択される５アミノ酸（Ｋ Ｎ Ｒ Ｃ Ｑ）及び選択された５アミノ酸の２、３、又は４アミノ酸サブセットを含むそのサブセットを含むこのような製剤（例えば、医薬製剤）は、存在する場合、アルギニン（Ｒ）が、シトルリン、又はアルギニンとシトルリンの組み合わせによって置換され得る実施形態を含む。
上述の製剤及び推論は、本明細書に記載される選択された５アミノ酸（Ｋ Ｎ Ｒ Ｃ Ｑ）うちの２、３、又は４アミノ酸サブセットのいずれかに等しく適用される。
いくつかの実施形態では、製剤は、リジン（Ｋ）、アスパラギン（Ｎ）、アルギニン（Ｒ）、システイン（Ｃ）、及びグルタミン（Ｑ）のうちの任意の２つの遊離アミノ酸を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。リジン（Ｋ）、アスパラギン（Ｎ）、アルギニン（Ｒ）、システイン（Ｃ）、及びグルタミン（Ｑ）の５アミノ酸製剤の例示的な２つの遊離アミノ酸サブセットは、以下の通りである。Ｋ、Ｎ；Ｋ、Ｒ；Ｋ、Ｃ；Ｋ、Ｑ；Ｎ、Ｒ；Ｎ、Ｃ；Ｎ、Ｑ；Ｒ、Ｑ；及びＣ、Ｑ。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ及びＮを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ及びＲを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ及びＣを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｎ及びＲを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｎ及びＣを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｎ及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｒ及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｃ及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。
いくつかの実施形態では、製剤は、リジン（Ｋ）、アスパラギン（Ｎ）、アルギニン（Ｒ）、システイン（Ｃ）、及びグルタミン（Ｑ）うちの任意の３つの遊離アミノ酸を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。リジン（Ｋ）、アスパラギン（Ｎ）、アルギニン（Ｒ）、システイン（Ｃ）、及びグルタミン（Ｑ）の５アミノ酸製剤の３つの遊離アミノ酸サブセットの例は、以下の通りである。Ｋ、Ｎ、Ｒ；Ｋ、Ｎ、Ｃ；Ｋ、Ｎ、Ｑ；Ｋ、Ｒ、Ｃ；Ｋ、Ｒ、Ｑ；Ｋ、Ｃ、Ｑ；Ｎ、Ｒ、Ｃ；Ｎ、Ｒ、Ｑ；Ｎ、Ｃ、Ｑ；及びＲ、Ｃ、Ｑ。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ、Ｎ、及びＲを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ、Ｎ、及びＣを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ、Ｎ、及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ、Ｒ、及びＣを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ、Ｒ、及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ、Ｃ、及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｎ、Ｒ、及びＣを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｎ、Ｒ、及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｎ、Ｃ、及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｒ、Ｃ、及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。
いくつかの実施形態では、製剤は、リジン（Ｋ）、アスパラギン（Ｎ）、アルギニン（Ｒ）、システイン（Ｃ）、及びグルタミン（Ｑ）うちの任意の４つの遊離アミノ酸を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。リジン（Ｋ）、アスパラギン（Ｎ）、アルギニン（Ｒ）、システイン（Ｃ）、及びグルタミン（Ｑ）の５アミノ酸製剤の４つの遊離アミノ酸サブセットの例は、以下の通りである。Ｋ、Ｎ、Ｒ、Ｃ；Ｋ、Ｎ、Ｒ、Ｑ；Ｋ、Ｎ、Ｃ、Ｑ；Ｋ、Ｒ、Ｃ、Ｑ；及びＮ、Ｒ、Ｃ、Ｑ。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ、Ｎ、Ｒ、及びＣを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ、Ｎ、Ｒ、及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ、Ｎ、Ｃ、及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｋ、Ｒ、Ｃ、及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、製剤が、Ｎ、Ｒ、Ｃ、及びＱを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。
いくつかの実施形態では、製剤は、リジン（Ｋ）、アスパラギン（Ｎ）、アルギニン（Ｒ）、システイン（Ｃ）、及びグルタミン（Ｑ）の遊離アミノ酸を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。
いくつかの実施形態では、製剤は、アルギニン（Ｒ）及びリジン（Ｋ）の遊離アミノ酸と、トリプトファン（Ｗ）、チロシン（Ｙ）、グルタミン（Ｑ）、トレオニン（Ｔ）、又はアスパラギン（Ｎ）のうちの少なくとも１つの遊離アミノ酸とを含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。この実施形態の異なる組み合わせを、以下のようにリスト３に示す。７ＡＡセット：Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｙ、Ｑ、Ｔ、Ｎ。その実施形態では、製剤は、Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｙ、Ｑ、Ｔ、及びＮの遊離アミノ酸を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。６ＡＡサブセット：Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｙ、Ｑ、Ｔ［ＡＡＦ０６］；Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｙ、Ｑ、Ｎ；Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｙ、Ｔ、Ｎ；及びＲ、Ｋ、Ｗ、Ｑ、Ｔ、Ｎ；及びＲ、Ｋ、Ｙ、Ｑ、Ｔ、Ｎ。その実施形態では、製剤は、Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｙ、Ｑ、及びＴ［ＡＡＦ０６］；Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｙ、Ｑ及びＮ；Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｙ、Ｔ、及びＮ；Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｑ、Ｔ，及びＮ；又はＲ、Ｋ、Ｙ、Ｑ、Ｔ，及びＮの遊離アミノ酸を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。５ＡＡセット：Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｙ、Ｑ；Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｙ、Ｔ［ＡＡＦ０４］；Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｙ、Ｎ；Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｑ、Ｔ［ＡＡＦ０５］；Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｑ、Ｎ；Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｔ、Ｎ；Ｒ、Ｋ、Ｙ、Ｑ、Ｔ；Ｒ、Ｋ、Ｙ、Ｑ、Ｎ；Ｒ、Ｋ、Ｙ、Ｔ、Ｎ；及びＲ、Ｋ、Ｑ、Ｔ、Ｎ。その実施形態では、製剤は、Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｙ、及びＱ；Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｙ、及びＴ［ＡＡＦ０４］；Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｙ、及びＮ；Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｑ、及びＴ［ＡＡＦ０５］；Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｑ、及びＮ；Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｔ、及びＮ；Ｒ、Ｋ、Ｙ、Ｑ、及びＴ；Ｒ、Ｋ、Ｙ、Ｑ、及びＮ；Ｒ、Ｋ、Ｙ、Ｔ、及びＮ；又はＲ、Ｋ、Ｑ、Ｔ、及びＮの遊離アミノ酸を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。４ＡＡサブセット：Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｙ；Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｑ［ＡＡＦ０３］；Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｔ；Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｎ；Ｒ、Ｋ、Ｙ、Ｑ［ＡＡＦ０７］；Ｒ、Ｋ、Ｙ、Ｔ；Ｒ、Ｋ、Ｙ、Ｎ；Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｔ；Ｒ、Ｋ、Ｑ、Ｎ；及びＲ、Ｋ、Ｔ、Ｎ。その実施形態では、製剤は、Ｒ、Ｋ、Ｗ、及びＹ；Ｒ、Ｋ、Ｗ、及びＱ［ＡＡＦ０３］；Ｒ、Ｋ、Ｗ、及びＴ；Ｒ、Ｋ、Ｗ、及びＮ；Ｒ、Ｋ、Ｙ、及びＱ［ＡＡＦ０７］；Ｒ、Ｋ、Ｙ、及びＴ；Ｒ、Ｋ、Ｙ、及びＮ；Ｒ、Ｋ、Ｑ、及びＴ；Ｒ、Ｋ、Ｑ、及びＮ；又はＲ、Ｋ、Ｔ、及びＮの遊離アミノ酸を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。３ＡＡサブセット：Ｒ、Ｋ、Ｗ［ＡＡＦ０２］；Ｒ、Ｋ、Ｙ；Ｒ、Ｋ、Ｑ；Ｒ、Ｋ、Ｔ；及びＲ、Ｋ、Ｎ。その実施形態では、製剤は、Ｒ、Ｋ、及びＷ［ＡＡＦ０２］；Ｒ、Ｋ、及びＹ；Ｒ、Ｋ、及びＱ、Ｒ、Ｋ、及びＴ；又はＲ、Ｋ、及びＮの遊離アミノ酸を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。
したがって、選択された７アミノ酸（Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｙ、Ｑ、Ｔ、Ｎ）並びに選択された７アミノ酸の２（Ｒ、Ｋ）、３、４、５、及び６アミノ酸サブセットを含むそのサブセットを含む製剤（例えば、医薬製剤）並びにＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎の治療を必要とする対象におけるＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎を治療するためのそれらの使用するため、並びにＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎を治療するための医薬品を調製するためのそれらの使用が、本明細書に包含される。上記の推論は、本明細書に記載される選択された７アミノ酸（Ｒ、Ｋ、Ｗ、Ｙ、Ｑ、Ｔ、Ｎ）のうちの２（Ｒ、Ｋ）、３、４、５、又は６アミノ酸サブセットの任意の組み合わせに等しく適用される。
いくつかの実施形態では、ＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎の治療を必要とする対象における、ＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎の治療に使用するための製剤が提示され、製剤が、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせであって、治療有効量のアルギニン及びリジン、並びに治療有効量のシステイン、アスパラギン、若しくはグルタミンの遊離アミノ酸、又はそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つ、から本質的になるか、あるいはそれらからなり、ここで治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせが、対象においてＡＲＤＳ若しくは喘息に関連する肺内の流体貯留を低減させるのに十分であるか、又はアレルギー性鼻炎に関連する鼻腔内の流体貯留を低減させるのに十分である、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせと、任意選択的に、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体と、を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。
いくつかの実施形態では、ＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎の治療を必要とする対象における、ＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎の治療に使用するための製剤が提示され、製剤が、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせであって、治療有効量のアルギニン、リジン及びグルタミン、並びに治療有効量のシステイン若しくはアスパラギンの遊離アミノ酸、又はそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つ、から本質的になるか、あるいはそれらからなり、ここで治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせが、ＡＲＤＳ若しくは喘息に関連する肺内の流体貯留を低減させるのに十分であるか、又はアレルギー性鼻炎に関連する鼻腔内の流体貯留を低減させるのに十分である、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせと、任意選択的に、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体と、を含むか、それらから本質的になるか、又はそれらからなる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の製剤は、単糖類グルコース、少なくとも１つのグルコース含有二糖、又はそれらの任意の組み合わせを任意に含んでもよく、単糖類グルコース、少なくとも１つのグルコース含有二糖、又はそれらの任意の組み合わせの総濃度は、９０ｍＭ以下である。その実施形態では、単糖類グルコース、少なくとも１つのグルコース含有二糖類、若しくはそれらの任意の組み合わせが８５ｍＭ以下であり；単糖類グルコース、少なくとも１つのグルコース含有二糖類、若しくはその任意の組み合わせが８０ｍＭ以下であり；単糖類グルコース、少なくとも１つのグルコース含有二糖類、若しくはその任意の組み合わせが７５ｍＭ以下であり；単糖類グルコース、少なくとも１つのグルコース含有二糖類、若しくはその任意の組み合わせが７０ｍＭ以下であり；単糖類グルコース、少なくとも１つのグルコース含有二糖類、若しくはその任意の組み合わせが６５ｍＭ以下であり；単糖類グルコース、少なくとも１つのグルコース含有二糖類、若しくはその任意の組み合わせが６０ｍＭ以下であり；単糖類グルコース、少なくとも１つのグルコース含有二糖類、若しくはその任意の組み合わせが５５ｍＭ以下であり；単糖類グルコース、少なくとも１つのグルコース含有二糖類、若しくはその任意の組み合わせが５０ｍＭ以下であり；単糖類グルコース、少なくとも１つのグルコース含有二糖類、若しくはその任意の組み合わせが４５ｍＭ以下であり；単糖類グルコース、少なくとも１つのグルコース含有二糖類、若しくはその任意の組み合わせが４０ｍＭ以下であり；単糖類グルコース、少なくとも１つのグルコース含有二糖類、若しくはその任意の組み合わせが３５ｍＭ以下であり；単糖類グルコース、少なくとも１つのグルコース含有二糖類、若しくはその任意の組み合わせが３０ｍＭ以下であり；単糖類グルコース、少なくとも１つのグルコース含有二糖類、若しくはその任意の組み合わせが２５ｍＭ以下であり；単糖類グルコース、少なくとも１つのグルコース含有二糖類、若しくはその任意の組み合わせが２０ｍＭ以下であり；単糖類グルコース、少なくとも１つのグルコース含有二糖類、若しくはその任意の組み合わせが１５ｍＭ以下であり；単糖類グルコース、少なくとも１つのグルコース含有二糖類、若しくはその任意の組み合わせが１０ｍＭ以下であり；又は単糖類グルコース、少なくとも１つのグルコース含有二糖類、若しくはその任意の組み合わせが５ｍＭ以下である。
その実施形態では、単糖類グルコース、少なくとも１つのグルコース含有二糖類、若しくはその任意の組み合わせが１０～９０ｍＭの範囲であり、１０～８５ｍＭの範囲であり、１０～８０ｍＭの範囲、１０～７５ｍＭの範囲であり、１０～７０ｍＭの範囲であり、１０～６５ｍＭの範囲であり、１０～６０ｍＭの範囲であり、１０～５５ｍＭの範囲であり、１０～５０ｍＭの範囲であり、１０～４５ｍＭの範囲であり、１０～４０ｍＭの範囲であり、１０～３５ｍＭの範囲であり、１０～３０ｍＭの範囲であり、１０～２５ｍＭの範囲であり、１０～２０ｍＭの範囲であり、５～９０ｍＭの範囲であり、５～８５ｍＭの範囲であり、５～８０ｍＭの範囲であり、５～７５ｍＭの範囲であり、５～７０ｍＭの範囲であり、５～６５ｍＭの範囲であり、５～６０ｍＭの範囲であり、５～５５ｍＭの範囲であり、５～５０ｍＭの範囲であり、５～４５ｍＭの範囲であり、５～４０ｍＭの範囲であり、５～３５ｍＭの範囲であり、５～３０ｍＭの範囲であり、５～２５ｍＭの範囲であり、５～２０ｍＭの範囲であり、１～９０ｍＭの範囲であり、１～８５ｍＭの範囲であり、１～８０ｍＭの範囲であり、１～７５ｍＭの範囲であり、１～７０ｍＭの範囲であり、１～６５ｍＭの範囲であり、１～６０ｍＭの範囲であり、１～５５ｍＭの範囲であり、１～５０ｍＭの範囲であり、１～４５ｍＭの範囲であり、１～４０ｍＭの範囲であり、１～３５ｍＭの範囲であり、１～３０ｍＭの範囲であり、１～２５ｍＭの範囲であり、又は１～２０ｍＭの範囲である。
いくつかの実施形態では、治療用組成物は、単糖類、二糖類、オリゴ糖類、多糖類、及び炭水化物を含むいかなる糖類も含有しない。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、グルコース、並びに／又は加水分解されてグルコースになり得る任意の二糖類、オリゴ糖類、多糖類、及び炭水化物を含有しない。いくつかの実施形態では、組成物はラクトースを含有しない。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、フルクトース及び／又はガラクトース、並びに／又は加水分解されてフルクトース及び／又はガラクトースになり得る任意の二糖類、オリゴ糖類、多糖類、及び炭水化物を含有しない。
本明細書で使用される場合、「から本質的になる」という用語は、成分及び工程の範囲を、特定の材料又は工程、並びに本発明の基本的及び新規の特徴、例えば、ＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎の治療のための製剤及びその使用、並びにＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎を治療するための方法に実質的に影響を及ぼさないものに限定される。例えば、「から本質的になる」を使用することにより、治療製剤には、これらには限定されないが、ＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎の治療に治療効果を有する、遊離アミノ酸、ジ－、オリゴ、又はポリペプチド若しくはタンパク質、並びに単糖類、二糖類、オリゴ糖類、多糖類、炭水化物が含まれ、特許請求の範囲に明示的に列挙されていない任意の成分を含有しない。「から本質的になる」という文脈において、治療有効量は、Ｕｓｓｉｎｇチャンバアッセイで試験された分化したＨＢＥＣにおけるベンザミル感受性電流を測定することによって評価されるＥＮａＣ活性の変化に基づいて決定されてもよく、ここで、最大１％、２％、３％、４％、又は５％の増減をもたらす成分は、「から本質的になる」という用語の範囲内に含まれ得る。
本明細書に記載の製剤は、薬理学の技術分野で公知の任意の方法によって調製することができる。一般に、このような調製方法は、本明細書に記載の製剤の化合物を準備することを含む（すなわち、遊離アミノ酸を担体若しくは賦形剤、及び／又は１つ以上の他の副成分と会合させ、その後、必要及び／又は望ましい場合、所望の単回用量単位又は複数回用量単位に製品を成形及び／又はパッケージングすることを含む。
本明細書に記載の医薬製剤中の有効成分／複数の有効成分、薬学的に許容可能な賦形剤、及び／又は任意の追加成分の相対量は、治療される対象の同一性、サイズ、及び／又は状態に応じて、並びに製剤が投与される経路によって更に変化する。製剤は、０．１％～１００％（ｗ／ｗ）の有効成分を含み得る。
経口投与のための固体剤形には、カプセル、錠剤、丸剤、散剤、及び顆粒剤が含まれる。このような固体剤形では、有効成分が、少なくとも１つの不活性で薬学的に許容可能な賦形剤又は担体、例えばクエン酸ナトリウム又はリン酸二カルシウム、及び／又は充填剤又は増量剤、例えばデンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及びケイ酸；結合剤、例えばカルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロース、及びアカシア；保湿剤、例えばグリセロール；崩壊剤、例えば寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモ又はタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、及び炭酸ナトリウム；溶液遅延剤（ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｒｅｔａｒｄｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、例えばパラフィン；吸収促進剤、例えば第四級アンモニウム化合物；湿潤剤、例えばセチルアルコール及びグリセロールモノステアレートなど；吸収剤、例えばカオリン及びベントナイト粘土；並びに滑沢剤、例えばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、及びこれらの混合物と混合される。カプセル、錠剤、及び丸剤の場合、剤形は、緩衝剤を含み得る。
特定の実施形態では、本明細書に記載のアミノ酸を含む製剤は、粉末形態で提供され、対象への投与のために再構成されてもよい。本明細書に記載される医薬製剤は、頬側口腔を介した肺投与に好適な製剤で調製、包装、及び／又は販売することができる。こうした製剤は、有効成分を含み、約０．５～約７ナノメートル、又は約１～約６ナノメートルの範囲の直径を有する乾燥粒子を含んでもよい。このような製剤は、粉末を分散させるように、噴射剤の流れを向けることができる、乾燥粉末リザーバーを含むデバイスを使用して、及び／又は密封容器内の低沸点噴射剤に溶解及び／又は懸濁された有効成分を含むデバイスなどの自己促進性（ｓｅｌｆ－ｐｒｏｐｅｌｌｉｎｇ）溶媒／粉末分注容器を使用して、投与するための乾燥粉末の形態であることが好都合である。このような粉末は、重量による粒子の少なくとも９８％が、０．５ナノメートル超の直径を有し、数で少なくとも９５％の粒子が７ナノメートル未満の直径を有する粒子を含む。あるいは、重量による粒子の少なくとも９５％が、１ナノメートルを超える直径を有し、数で粒子の少なくとも９０％は、６ナノメートル未満の直径を有する。乾燥粉末製剤は、糖などの固体微粉末希釈剤を含んでもよく、単位用量形態で便利に提供される。
経口投与及び非経口投与のための液体剤形には、薬学的に許容可能なエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ、及びエリキシルが含まれる。有効成分に加えて、液体剤形は、例えば、水又は他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１、３－ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（例えば、綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール及びソルビタンの脂肪酸エステル及びこれらの混合物などの当技術分野で一般的に使用される不活性希釈剤を含むことができる。不活性希釈剤に加えて、経口製剤は、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、甘味剤、香味剤、及び芳香剤などのアジュバントを含み得る。非経口投与のための特定の実施形態では、本明細書に記載のコンジュゲートは、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）アルコール、油、変性油、グリコール、ポリソルベート、シクロデキストリン、ポリマー、及びそれらの混合物などの可溶化剤と混合される。
肺送達のために製剤化された本明細書に記載の医薬製剤は、有効成分を溶液及び／又は懸濁液の液滴の形態で提供することができる。こうした製剤は、任意に滅菌され、有効成分を含む水溶液及び／又は希釈アルコール溶液及び／又は懸濁液として調製、包装、及び／又は販売することができ、任意の噴霧化及び／又は霧化デバイスを使用して便利に投与することができる。このような製剤は、サッカリンナトリウムなどの香味剤、揮発性油、緩衝剤、表面活性剤、及び／又はヒドロキシ安息香酸メチルなどの防腐剤を含むが、これらに限定されない、１つ以上の追加の成分を更に含み得る。この投与経路によって提供される液滴は、約０．１～約２００ナノメートルの範囲の平均直径を有し得る。吸入に一般的に利用可能なデバイスには、加圧式定量噴霧吸入器（ｐＭＤＩ）、ネブライザー（例えば、圧縮空気／ジェット及び超音波ネブライザー）、及び乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）が含まれる。ジェットネブライザーは、超音波ネブライザーと比較して、より小さな粒子サイズを送達し、長い処理時間を必要とする。吸入を介して投与される薬剤は、対象が気道内に吸入するエアロゾルスプレー、ミスト、又は粉末を介して分散される。
肺送達に有用なものとして本明細書に記載される製剤は、本明細書に記載される医薬製剤の鼻腔内送達にも使用され得る。鼻腔内投与に適した別の製剤は、有効成分を含み、約０．２～５００マイクロメートルの平均粒子を有する粗粉末である。このような製剤は、鼻孔の近くに保持された粉末の容器からの鼻腔を介して急速な吸入によって投与される。
経鼻投与のための製剤は、例えば、約０．１％（ｗ／ｗ）程度の少量から１００％（ｗ／ｗ）程度の有効成分を含有してもよく、本明細書に記載される追加成分のうちの１つ以上を含んでもよい。このような製剤は、例えば、従来の方法を用いて作製された錠剤及び／又はトローチ剤の形態であってもよく、例えば、０．１～２０％（ｗ／ｗ）の有効成分を含み、残りは経口溶解性及び／又は分解性組成物を含み、任意選択的に本明細書に記載される１つ以上の追加成分を含有してもよい。あるいは、頬側投与のための製剤は、有効成分を含む粉末及び／又はエアロゾル化及び／又は霧化された溶液及び／又は懸濁液を含んでもよい。このような粉末、エアロゾル化、及び／又はエアロゾル化製剤は、分散されると、約０．１～約２００ナノメートルの範囲の平均粒子及び／又は液滴サイズを有することができ、本明細書に記載される追加の成分のうちの１つ以上を更に含み得る。
上述の本開示の実施形態に対する変形、改変、及び変更は、当業者にとって自明であろう。こうした全ての変形、改変、変更などは、添付の特許請求の範囲のみによって限定される、本開示の精神及び範囲内に入ることが意図される。
本開示のいくつかの実施形態を記載してきたが、これらの実施形態は例示にすぎず、限定的ではなく、当業者にとって多くの修正が明らかとなり得ることが理解される。例えば、本明細書で論じる全ての寸法は、例示としてのみ提供され、例示を目的としており、限定するものではないことが意図される。
本明細書において明確に識別される任意の特徴又は要素はまた、特許請求の範囲に定義されるような本発明の実施形態の特徴又は要素として、具体的に除外されることもある。
本明細書に記載された開示は、本明細書に具体的に開示されていない任意の要素又は複数の要素、制限又は複数の制限が存在しない場合でも実施することができる。用いられた用語及び表現は、限定ではなく、説明の用語として使用されており、そのような用語及び表現の使用において、示され、記載されている特徴、又はその一部の任意の均等物を除外する意図はないが、本開示の範囲内で様々な修正が可能であることが認識される。
実施例１ ＡＲＤＳ：ＩＬ－１３介在性肺組織炎症を再現する肺病理モデルシステム
材料及び方法
ＩＬ－１３：ａｂｃａｍ（＃ａｂ９５７７）、原液：１０μｇ／ｍＬ水、２０ｎｇ＝２μＬ原液／ｍＬ培地
隔日でＩＬ－１３を使用した培地交換
実験計画：２０ｎｇ／ｍＬ培地による４日間及び１４日間のＩＬ－１３処理。塩基性リンゲルにおけるＵｓｓｉｎｇチャンバ実験（基底外側に５ｍＭのグルコース）。
いくつかの実施形態では、実験研究は、以下を決定するよう要請した。
●ベースライン値（３０分）
●６μＭベンザミル（頂端側）の有無（１５分）
●２０μＭ ＣＦＴＲｉｎｈ １７２（頂端側及び基底外側）の有無（１５分）
●１０μＭ ＣａＣＣｉｎｈ ＡＯ１頂端側及び基底外側）の有無（１０分）
●２０μＭブメタニド（基底外側）の有無（１５分）
０日目の解析：
●ＩＬ－１３処理：０ｎｇ／ｍＬ培地
●塩基性リンゲル又はアミノ酸（ＡＡ）製剤におけるＵｓｓｉｎｇチャンバ実験。
●更に、Ｓ側は５ｍＭのグルコースを添加した
４日間又は１４日間の解析のための処理：
●ＩＬ－１３処理：２０ｎｇ／ｍＬ培地
●塩基性リンゲル又はＡＡ製剤におけるＵｓｓｉｎｇチャンバ実験。
●更に、Ｓ側は５ｍＭのグルコースを添加した
いくつかの実施形態において、４日目及び１４日目の実験研究は、以下を決定するよう要請した。
●ベースライン値（３０分）
●６μＭのベンザミル（粘膜側）の有無（１５分）
●２０μＭブメタニド（漿膜側）の有無（１５分）
●２０μＭ ＣＦＴＲｉｎｈ １７２（粘膜側及び漿膜側）の有無（１５分）
結果
炎症中のＥＮａＣの重要性を調査し、その活性がＡＲＤＳの進化中にどのように調節されるかを探索するために、本発明者らは、正常なヒト肺から採取されたヒト気管支上皮細胞（ＨＢＥＣ）の初代培養物を使用し、細胞は、空気培地相間で（頂端側の空気と基底外側の培地）でインビトロで３０日間分化された。分化ＨＢＥＣを電気生理学的実験に使用して、これらの細胞に対するＩＬ－１３の効果を評価した。これらの実験からの結果は、ＥＮａＣ電流のＩＬ－１３用量依存的の低減を明らかにした（図２）。結果はまた、ＩＬ－１３曝露の８日目にＥＮａＣ電流の最大低下が発生したことも示した（図３）。同様に、ＩＬ－１３（２０ｎｇ／ｍＬ）は、曝露８日目にバリア機能の最大の低下を引き起こした。これらの研究は、ＩＬ－１３曝露が、ＨＢＥＣの分化におけるＥＮａＣ活性及びバリア機能の減少をもたらすことを実証した。上記は、ＩＬ－１３に曝露されたＨＢＥＣが、呼吸窮迫の条件下で肺組織に特徴的な特色を呈することを立証し、したがって、ＡＲＤＳ及び喘息を治療するための製剤の有効性を評価するインビトロモデルシステムを提供した。
実施例２ 肺組織炎症におけるＩＬ－１３介在性との関連において、ＡＲＤＳを再現する肺病理のモデルシステムを使用するアミノ酸製剤の試験
４日間又は１４日間、ＩＬ－１３（２０ｎｇ／ｍＬ）に曝露した分化したＨＢＥＣにおける、バリア機能を改善し、ＥＮａＣを介した起電性ナトリウム吸収（図４）を増加させる能力、及び嚢胞性線維症経膜コンダクタンス調節因子（ＣＦＴＲ）及びアノクタミン１（ａｎｏｃｔａｍｉｎ １）（ＡＮＯ１）チャネルを介したアニオン分泌を減少させる能力に基づいて、アミノ酸の選択的な組み合わせを含む様々な製剤をスクリーニングし、ランク付けした。これらの定量的アッセイに基づいて、例示的な５アミノ酸製剤が同定される（ＡＡＦ０１）。ＡＡＦ０１によって与えられた正味のナトリウム吸収機能は、ナトリウム同位体（２２Ｎａ）フラックス研究を使用して検証される。ＡＡＦ０１はまた、ナトリウム－水素交換体アイソフォーム３（ＮＨＥ３）を介した電気中性ナトリウム吸収も増加させた。ウェスタンブロット分析では、対照溶液の存在下でインキュベーションした分化したＨＢＥＣと比較して、分化したＨＢＥＣでは、ＡＡＦ０１の存在下で、ＥＮａＣ及びＮＨＥ３のタンパク質レベルの増加、ＣＦＴＲの減少、ＡＮＯ１（カルシウム活性化塩素チャネル）の減少、並びにタイトジャンクションタンパク質クローディン１及びＥ－カドヘリンのレベルの増加を示した。
ＩＬ－１３に４日間又は１４日間曝露した分化したＨＢＥＣに対するＡＡＦ０１の効果（図５Ａ及び５Ｂ）を、リンゲル溶液（陰性対照製剤／溶液）の効果と比較した。ＨＢＥＣは、４日目又は１４日目のリンゲル液と比較して、ＡＡＦ０１製剤の存在下でＥＮａＣ電流の増加を示した。図５Ａを参照されたい。ＥＮａＣ電流のＡＡＦ０１介在性の増加は、ＩＬ－１３曝露の１４日目でより顕著であり、モデルシステムのその後の一時的な状態が、関与する生化学的、シグナル伝達経路、組織及び／又は細胞の完全性、並びに構造タンパク質及び細胞表面輸送及びチャネルタンパク質の状態を含む病態形成に関して、ＡＲＤＳの後期段階と相関している。
追加の実験を実施して、ＮＫＣＣ１の強力な阻害剤である、ブメタニドの存在下でＡＡＦ０１の効果を評価した。ブメタニドは、頂端出口に利用可能になる前に細胞への塩化物侵入を防止する。
図６Ａは、３６Ｃｌを使用する同位体フラックス研究の結果を提示し、指定されたインキュベーション日におけるリンゲル溶液（ＩＬ－１３なし）、リンゲル溶液（ＩＬ－１３あり）、又はＡＡＦ０１（ＩＬ－１３あり）の存在下での正味の塩化物分泌を示す。ＡＡＦ０１は、ＩＬ－１３の存在下であっても、塩化物分泌を減少させた。図６Ｂは、ブメタニドの添加後の正味の塩化物分泌を示す、３６Ｃｌを使用した同位体フラックス研究の結果を提示する。ＩＬ－１３は正味の塩化物分泌を増加させた。ブメタニド感受性アニオン電流は、ＡＡＦ０１の存在下で減少する。この減少は、リンゲル溶液の存在下では観察されない。したがって、ＡＡＦ０１は、これらの研究で使用される陰性対照製剤／溶液と比較して、塩化物分泌を減少させる。ブメタニドの添加は、正味の塩化物分泌を完全には逆転させなかった。しかしながら、ＡＡＦ０１の存在は、正味の塩化物吸収をもたらした。これらの研究は、ＥＮａＣ活性の強化及び塩化物分泌の減少を介して、液取り込みを増加させるＡＡＦ０１の有効性を実証した。これは、ＡＲＤＳ又は喘息で観察された肺胞液の除去を助け、アレルギー性鼻炎で観察された過剰な鼻分泌物を除去するのに役立つ効果である。
リンゲル溶液の存在下でインキュベーションした分化したＨＢＥＣと比較して、分化したＨＢＥＣ中のＡＡＦ０１の存在下でのタイトジャンクションタンパク質クローディン１及びＥ－カドヘリンのレベルの増加を示す結果は、ＡＡＦ０１がバリア機能も改善したことを明らかにする。
図７Ａ～７Ｄは、ＥＮａＣ活性におけるＩＬ－１３－誘導性の減少が示されたアミノ酸製剤の存在下で有意に改善されることを示す結果を提示し、ＩＬ－１３処理後４日目にＡＡＦ０３に、１４日目にＡＡＦ０１に曝露した細胞で最大値が見られた。アニオン電流のＩＬ－１３誘導性増加は、示される例示的なアミノ酸製剤の存在下で有意に減少し、ＩＬ－１３処理後４日目にＡＡＦ０４に浸した細胞で、及び１４日目にＡＡＦ０３に浸した細胞で最低値が観察された。
図８Ａ及び図８Ｂは、ＩＬ－１３処理後４日目にＡＡＦ０１又はＡＡＦ０７の存在下で、及び１４日目にＡＡＦ０１、ＡＡＦ０３、又はＡＡＦ０７の存在下でＩＬ－１３誘導性ＥＮａＣ活性の減少が有意に改善されることを示す結果を提示する。指示された例示的なアミノ酸製剤に曝露されたＨＢＥＣではＩＬ－１３－誘導性増加が有意に減少し、ＩＬ－１３処理の４日後及び１４日後にＡＡＦ０７に浸した細胞で最低値が観察された。
実施例３ ＡＲＤＳを再現する肺病理のモデルシステム：ヒト気管支上皮モデルシステムを用いたＴＮＦ－α介在性肺組織炎症
アプローチ：ＴＮＦ－αはサイトカインストームに関与する主要な炎症促進性メディエーターの１つとして特定されているため、本発明者らは、分化ＨＢＥＣモデルシステムを使用して、ＡＲＤＳ肺病理の特徴を再現する炎症状態の誘導物質として、ＴＮＦ－αへの曝露との関連でアミノ酸製剤の効果を探索した。上記実施例１～２に記載されるように、アミノ酸製剤は、様々な濃度で様々な期間にわたって、ＴＮＦ－αの存在下でインキュベーションされた分化ＨＢＥＣにおけるＥＮａＣ活性、アニオンチャネル活性、及びバリア機能に対するそれらの効果について評価できる。
方法及び材料
Ｕｓｓｉｎｇチャンバ試験を使用して、以下を決定することができる：
●ベンザミル感受性電流（ＥＮａＣ介在性起電性ナトリウム電流）
●２２Ｎａを使用して正味Ｎａ吸収を決定するＵｓｓｉｎｇチャンバフラックス試験
●バリア透過性（オーム）の尺度としてのＴＥＥＲ
●ＦＩＴＣデキストランを使用した透過性アッセイ
●ｑＲＴ－ＰＣＲによる、ＥＮａＣ（α、β、及びγ）、クローディン１、２、５、７、及び８、オクルジン及びＥ－カドヘリン、酸感受性イオンチャネル（ＡＳＩＣ１ａ）、並びにアクアポリン１及び５のｍＲＮＡ発現
タンパク質レベル及びＥＮａＣ（α、β、及びγ）、タイトジャンクションタンパク質（クローディン１、２、５、７、及び８、オクルジン及びＥ－カドヘリン）、酸感受性イオンチャネル（ＡＳＩＣ１ａ）並びにアクアポリン１及び５の発現を決定するためのウェスタンブロット分析及び免疫組織化学的検査
●ＩＬ－６，ＩＬ－１、及び／又はＩＬ１３を検出するためにＥＬＩＳＡを使用して、培養培地におけるサイトカイン発現を決定する。
ＥＮａＣ活性及びバリア機能の最大減少に必要な最小量のＴＮＦ－αを、例えば、０．０５、０．１、０．２、０．５、１、２、５、１０、２０又は４０ｎｇ／Ｌでの異なる濃度のＴＮＦ－αを培養培地に添加することによって決定した。
ＴＮＦ－αがＥＮａＣ活性及びバリア機能を減少させるのに必要な時間を、例えば、０、１、３、７又は１４日でのその添加後に、毎日評価し、決定された。
いくつかの実施形態では、ＨＢＥＣは、０．００００５ｎｇ／ｍＬ～５００ｎｇ／ｍＬのＴＮＦ－α（例えば、培地中では０．００００５、０．０００５、０．００５、０．０５、０．５、５、５０又は５００ｎｇ／ｍＬのＴＮＦ－α）を範囲とする異なる濃度のＴＮＦ－αで７日間処置された。図９を参照されたい。これは、ＴＮＦ－αの濃度の増加とともにＥＮａＣ電流が減少したことを示す。
ＥＮａＣ活性及びバリア機能の最大増加を誘発するために必要なＡＡＦ０１の用量及び時間を評価し、決定した。ＡＡＦ０１は、ＴＮＦ－α処理の前、処理と一緒に、及び処理後に使用された。ＡＡＦ０１の投与及びタイミングは、本明細書に記載されるＴＮＦ－α媒介性肺組織炎症モデルシステムに関して、上記で決定されたＴＮＦ－αの量及びＴＮＦ－α曝露の持続時間と併せて評価された。
目的：ＡＡＦ０１がＴＮＦ－α処理された分化したＨＢＥＣにおいてＥＮａＣ活性及びバリア機能の最大増加を誘導するために必要な最小濃度及び曝露時間を定義すること。これを達成するために、０．４μｍのサイズの細孔を有するＣｏｓｔａｒの透過性スナップウェルインサート上でＨＢＥＣを成長させ、３０日間、空気培地相間で分化させた。ＥＮａＣ活性の減少、ＣＦＴＲ及びＡＮＯ１活性の増加、並びにバリア機能の減少におけるＴＮＦ－αの効果を、以下に概説するように評価することができる。
ＥＮａＣ活性の減少、ＣＦＴＲ及びＡＮＯ１活性の増加、並びにバリア機能の減少によって示されるように、炎症効果を誘発するために必要なＴＮＦ－αの最小量を決定する。これを達成するため、例えば、０．０５、０．１、０．２、０．５、１、２、５、１０、２０、又は４０ｎｇ／Ｌなど、異なる濃度のＴＮＦ－αを培養培地に添加することができる。ＥＮａＣ電流の最大の減少をもたらすＴＮＦ－αの濃度をその後の試験で使用した。これらの実験を、上記実施例１及び２に関して記載したように行った。
ＥＮａＣ活性の減少、ＣＦＴＲ及びＡＮＯ１活性の増加、並びにバリア機能の減少によって証明されるように、ＴＮＦ－αがその効果を発揮するのに必要とされる時間を決定する。これを達成するために、ＴＮＦ－αを培地に加え、添加後０、１、３、７、又は１４日目に試験した。これらの研究は、ＴＮＦ－αに対する早期及び後期の応答を特定するのに役立ち、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染及びＡＲＤＳ発生後の肺組織に対する生理学的変化の進行をより明確にするのに役立つ。
本明細書に記載のアミノ酸（例えば、ＡＡＦ０１）などのアミノ酸を含む様々な製剤を評価し、顕著な治療活性を有するものの特徴解析を行う。ＴＮＦ－αがその最大効果を発揮するのに必要な用量及び時間は、上述のように決定された。異なる製剤を、ＡＲＤの進行で観察される肺病理の異なる段階に相関する炎症の異なるＴＮＦ－α媒介状態の下で並行して評価した。
アミノ酸製剤を、インターフェロン－ガンマ（ＩＦＮ－γ）単独の存在下でインキュベートされた、又は様々な濃度で異なる期間にわたってＴＮＦ－α及びＩＦＮ－γの組み合わせの存在下でインキュベートされた、分化したＨＢＥＣにおけるＥＮａＣ活性、アニオンチャネル活性、及びバリア機能に対するそれらの効果について評価した。図１０は、例えば、細胞がより低い濃度のＩＦＮ－γ（０．００００５～０．０５ｎｇ／ｍＬの培地）で処理された場合、ＥＮａＣ電流が増加することを示す。ＥＮａＣ電流は、より高いレベルのＩＦＮ－γに曝露された場合、ベースライン（未処理）レベルに戻ったが、その後、より高濃度のＩＦＮ－γ（＞０．０５ｎｇ／ｍＬ培地）で細胞を処理した場合、ベースラインと比較して減少した。これらの研究は、ＴＮＦ－α単独、ＩＦＮ－γ単独、又はＴＮＦ－αとＩＦＮ－γの組み合わせに対する早期及び後期の応答を特定するのに役立ち、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染及びＡＲＤＳの発生後の肺組織に対する生理学的変化の進行をより明確に定義するのに役立つ。異なる製剤は、異なるＴＮＦ－α媒介性炎症状態、ＩＦＮ－γ媒介性炎症状態、及びＴＮＦ－α／ＩＦＮ－γ媒介性炎症状態を、ＡＲＤの進行で観察される肺病理の異なる段階と相関させて、並列に評価され得る。
分化したＨＢＥＣにおけるＥＮａＣ活性に対するＴＧＦ－βの効果も本明細書で調査した。図１１は、例えば、ＥＮａＣ電流が、ＴＧＦ－β１の濃度の増加とともに減少したことを示す。
要約すると、本明細書に提示された結果に基づき、ＴＮＦ－αの濃度を増加させることにより、ＥＮａＣ活性が濃度依存的に減少することが明らかになった。図９を参照されたい。ＩＦＮ－γの濃度を増加させると、より低い濃度のＩＦＮ－γでの活性の増加、及びより高い濃度（＞ ５ｎｇ）でのＥＮａＣ活性の有意な減少が明らかになった。図１０を参照されたい。ＴＧＦ－β１濃度を増加させると、ＥＮａＣ活性が濃度依存的に減少することが明らかになった。図１１を参照されたい。
本発明者らはまた、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、及びＴＧＦ－β１のサイトカインカクテルの存在下で７日間インキュベートされた分化したＨＢＥＣにおけるＥＮａＣ活性を評価した。図１２を参照されたい。ＥＮａＣ電流は、サイトカインカクテルを有さない培地中でインキュベートされた未処理のＨＢＥＣ（ナイーブ）と比較して、サイトカインカクテルに７日間曝露されたＨＢＥＣ（ビヒクル）において有意に減少した。図１２で使用される用語「ビヒクル」は、５ＡＡ製剤及びＮＣ製剤を生成するためにＡＡが導入された溶液を指し、したがってＡＡ製剤の陰性対照として機能する。選択された５ＡＡ製剤（ＡＡ；アルギニン、リジン、システイン、アスパラギン、及びグルタミン）は、ナイーブＨＢＥＣと比較して、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、及びＴＧＦ－β１に曝露されたＨＢＥＣにおけるＥＮａＣ活性の有意な回復をもたらした。対照的に、ＮＣ製剤（アスパラギン酸、トレオニン、及びロイシン）は、サイトカイン誘導性ＥＮａＣ活性の低減を改善しなかった。実際に、ＮＣ製剤は、サイトカインカクテル及びビヒクルに曝露されたＨＢＥＣと比較して、サイトカインカクテルに曝露されたＨＢＥＣで更にＥＮａＣ活性を減少させた。したがって、いくつかの実施形態では、アミノ酸製剤を、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、及びＴＧＦ－β１を含むサイトカインカクテルの存在下で７日間インキュベートされた分化したＨＢＥＣで観察されたような、障害されたＥＮａＣ活性との関連でＥＮａＣ活性を改善する能力について評価した。図１２に提示される結果は、本明細書に記載される例示的な製剤である「５ＡＡ製剤」の治療特性を実証する。
追加の材料及び方法
ＥＮａＣ、ＩＬ－６、及びＭＵＣ５ＡＣ発現パターンは、代表的なサイトカインに曝露されたＨＢＥＣ中のＡＡ－ＥＣ０１とのインキュベーション後に免疫蛍光法によって可視化された。ＥＮａＣ発現を２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１３に１４日間曝露し、リンゲル溶液又はＡＡ－ＥＣ０１のいずれかで１時間処理された、ナイーブ対照及び同年齢のＨＢＥＣで評価した。ＩＬ－６発現を、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、及びＴＧＦ－β１のサイトカインカクテルに７日間曝露したナイーブ対照及び同年齢のＨＢＥＣで（各１ｎｇ／ｍＬ）評価し、リンゲル溶液又はＡＡ－ＥＣ０１のいずれかで１時間処置した。ＭＵＣ５ＡＣ発現を、２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１３に１４日間曝露しこれをリンゲル溶液又はＡＡ－ＥＣ０１のいずれかで１時間処理したナイーブ対照及び同年齢のＨＢＥＣで評価した。全ての実験を、Ｎ＝２の異なるセクションで、ｎ＝２ドナーで行った。本明細書に詳述するように、ＡＡ－ＥＣ０１は、ＩＬ－１３の存在下で頂端のＥＮａＣ発現を回復させ、ＣＯＶＩＤ－１９サイトカインの組み合わせ（ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α及びＴＧＦ－β１）によって誘発されたＩＬ－６分泌を減少させ、ＩＬ－１３によって誘発されたＭＵＣ５ＡＣ分泌を減少させた。
実施例４ ＡＲＤＳを再現する肺病理のモデルシステム：ヒト肺胞内皮細胞モデルシステムを使用したＴＮＦ－α介在性肺組織炎症
アプローチ：ヒト肺胞内皮細胞に対するＴＮＦ－αの効果を探索するために、本発明者らはまた、ヒト肺胞内皮細胞モデルシステムを使用して、ＡＲＤＳ肺病理の特徴を再現する炎症状態の誘導物質としてのＴＮＦ－αへの曝露との関連でアミノ酸製剤の効果を探索する。上記実施例１～３に記載されるように、アミノ酸製剤は、様々な濃度で異なる期間にわたって、ＴＮＦ－αの存在下でインキュベートされたヒト肺胞内皮細胞におけるＥＮａＣ活性、アニオンチャネル活性、及びバリア機能に対するその効果について評価することができる。
方法及び材料
Ｕｓｓｉｎｇチャンバ試験を使用して、以下を決定する：
●ベンザミル感受性電流（ＥＮａＣ介在性起電性ナトリウム電流）
●２２Ｎａを使用して正味Ｎａ吸収を決定するＵｓｓｉｎｇチャンバフラックス試験
●バリア透過性（オーム）の尺度としてのＴＥＥＲ
●ＦＩＴＣデキストランを使用した透過性アッセイ
●ｑＲＴ－ＰＣＲによる、ＥＮａＣ（α、β、及びγ）、クローディン１、２、５、７、及び８、オクルジン及びＥ－カドヘリン、酸感受性イオンチャネル（ＡＳＩＣ１ａ）、並びにアクアポリン１及び５のｍＲＮＡ発現
●タンパク質レベル及びＥＮａＣ（α、β、及びγ）、タイトジャンクションタンパク質（クローディン１、２、５、７、及び８、オクルジン及びＥ－カドヘリン）、酸感受性イオンチャネル（ＡＳＩＣ１ａ）並びにアクアポリン１及び５の発現を決定するためのウェスタンブロット分析及び免疫組織化学的検査
●ＥＬＩＳＡを使用して培養液中のサイトカイン発現を決定し、例えば、ＩＬ－６，ＩＬ－１β、及び／又はＩＬ１３を検出する。
ＥＮａＣ活性及びバリア機能を最大限に減少させるために必要なＴＮＦ－αの最低量を決定する。０．０５、０．１、０．２、０．５、１、２、５、１０、２０、又は４０ｎｇ／Ｌの異なる濃度のＴＮＦ－αを培地に加える。ＴＮＦ－αがＥＮａＣ活性及びバリア機能を減少させるのに必要な時間を評価し、決定する。ＴＮＦ－αの効果は、例えば、０、１、３、７、又は１４日目にその添加後、毎日試験される。
ＥＮａＣ活性及びバリア機能の最大増加を誘発するために必要なＡＡＦ０１の用量及び時間を評価し、決定する。ＡＡＦ０１は、ＴＮＦ－α処理の前、処理中一緒に、及び処理後に使用される。ＡＡＦ０１の用量及び投与のタイミングは、本明細書に記載されるＴＮＦ－α介在性肺組織炎症モデルシステムに関して、上記で決定されたＴＮＦ－αの量及びＴＮＦ－α曝露の持続時間と併せて評価される。
目的：ＡＡＦ０１がＴＮＦ－α処理ヒト肺胞内皮細胞においてＥＮａＣ活性及びバリア機能の最大増加を誘導するために必要な最小濃度及び曝露時間を定義すること。これを達成するために、ヒト肺微小血管内皮（ＨＰＭＶＥ）細胞は、０．４μｍのサイズの細孔を有するＣｏｓｔａｒの透過性スナップウェルインサート上で成長させ、７日間の間、培地（頂端側及び基底側の両方の培地を用いて）で分化させることができる。ＥＮａＣ活性の減少、ＣＦＴＲ及びＡＮＯ１活性の増加、並びにバリア機能の減少におけるＴＮＦ－αの効果を、以下に概説するように評価することができる。
ＥＮａＣ活性の減少、ＣＦＴＲ及びＡＮＯ１活性の増加、並びにバリア機能の減少によって証明されるように、炎症効果を誘発するために必要なＴＮＦ－αの最小量を決定する。これを達成するため、例えば、０．０５、０．１、０．２、０．５、１、２、５、１０、２０、又は４０ｎｇ／Ｌなど、異なる濃度のＴＮＦ－αを培養培地に添加することができる。ＥＮａＣ電流の最大の減少をもたらすＴＮＦ－αの濃度をその後の試験で使用する。これらの実験は、上記実施例１及び２に関して記載されるように実施される。
ＥＮａＣ活性の減少、ＣＦＴＲ及びＡＮＯ１活性の増加、並びにバリア機能の減少によって証明されるように、ＴＮＦ－αがその効果を発揮するのに必要とされる時間を決定する。これを達成するために、ＴＮＦ－αを培地に加え、添加後０、１、３、７、又は１４日目に試験する。これらの研究は、ＴＮＦ－αに対する早期及び後期の応答の特定し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染及びＡＲＤＳの発生後の肺組織に対する生理学的変化の進行をより明確に定義するのに役立つ。
本明細書に記載のアミノ酸（例えば、ＡＡＦ０１）などのアミノ酸を含む様々な製剤を評価し、顕著な治療活性を有するものの特徴解析を行う。ＴＮＦ－αがその最大効果を発揮するのに必要な用量及び時間は、上述のように決定される。異なる製剤を、ＡＲＤの進行で観察される肺病理の異なる段階に相関する異なるＴＮＦ－α媒介炎症状態の下で並行して評価できる。
また、アミノ酸製剤は、インターフェロン－ガンマ（ＩＦＮ－γ）単独の存在下でインキュベートされた、又は様々な濃度で異なる期間にわたってＴＮＦ－α及びＩＦＮ－γの組み合わせの存在下でインキュベートされた、ヒト肺胞内皮細胞におけるＥＮａＣ活性、アニオンチャネル活性、及びバリア機能に対するそれらの効果について評価される。これらの研究は、ＴＮＦ－α単独、ＩＦＮ－γ単独、又はＴＮＦ－αとＩＦＮ－γの組み合わせに対する早期及び後期の応答を特定し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染及びＡＲＤＳの発生後の肺組織に対する生理学的変化の進行をより明確に定義するのに役立つ。異なる製剤は、異なるＴＮＦ－α媒介性炎症状態、ＩＦＮ－γ媒介性炎症状態、及びＴＮＦ－α／ＩＦＮ－γ媒介性炎症状態を、ＡＲＤの進行で観察される肺病理の異なる段階と相関させて、並列に評価され得る。
ヒト肺胞内皮細胞はまた、例えば、実施例１及び２によるＥＮａＣ活性に対するＩＬ－１３の効果を評価するために試験される。例示的なアミノ酸製剤は、ＨＢＥＣに関して上述したように、ヒト肺胞内皮細胞に関する治療活性について評価される。
実施例５ 実施例１～４で使用された例示的な方法：
電気生理学的手法：ａ）ベンザミル感受性電流（ＥＮａＣによって媒介される起電性ナトリウム電流）、ブメタニド感受性電流及びＵｓｓｉｎｇチャンバにおける経上皮抵抗の測定、ｂ）２２Ｎａを使用して正味Ｎａ吸収を決定し、及び塩化物分泌のための３６Ｃｌを使用したＵｓｓｉｎｇチャンバフラックス試験、並びにｃ）フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）－デキストラン（４ＫＤ）を使用した透過性アッセイ。
Ｕｓｓｉｎｇチャンバ－ナトリウムフラックス（一般）
８週齢のオスのＳｗｉｓｓマウスからの小腸粘膜組織（回腸及び空腸）を、９５％ Ｏ２及び５％ ＣＯ２でバブリングし、実験全体を通して３７℃で維持した等張リンゲル溶液を含有するＵｓｓｉｎｇチャンバに取り付けた。組織を安定化させた後、コンダクタンス（Ｇ；ｍＳ／ｃｍ２として表される）を記録し、同様のコンダクタンスに基づいて腸組織を対にした。ナトリウム放射性同位元素（２２Ｎａ）を、各組織対の基底側又は頂端側（ホット）のいずれかに加えた。リンゲル試料を反対側（コールド）から１５分ごとに採取した。試料の２２Ｎａ活性をガンマカウンターを使用して分析し、一方向性正味ナトリウムフラックス（Ｊｎｅｔ；μｅｑ・ｃｍ２・ｈ－１）を計算した。
Figure 2023531872000004
［ＣＰＭ＝カウント毎分、ＣＰＭ１＝前の試料、ＣＰＭ２＝次の試料、ブランク＝２２Ｎａ添加なし、９／１０＝各サンプルに対する希釈係数（０．５ｍＬ～５ｍＬ）、５＝チャンバ体積（５ｍＬ）、４＝時間係数（１５分～６０分）、１４０＝ナトリウム濃度、ホットＣＰＭ＝「ホット」試料活性、コールドＣＰＭ＝「コールド」試料活性、１０＝ホット試料に対する体積係数（０．１ｍＬ～１ｍＬ）、０．３＝腸表面積（ｃｍ２）］
分子生物学技術：ｑＲＴ－ＰＣＲによる、ＥＮａＣ（α、β、及びγ）ｍＲＮＡ発現、クローディン１、２、５、７、及び８、オクルジン及びＥ－カドヘリン）、酸感受性イオンチャネル（ＡＳＩＣ１ａ）、及びアクアポリン１及び５。
ウェスタンブロット分析及び免疫組織化学的検査：タンパク質レベル及びＥＮａＣ（α、β、及びγ）、タイトジャンクションタンパク質（クローディン１、２、５、７及び８、オクルジン及びＥ－カドヘリン）、酸感受性イオンチャネル（ＡＳＩＣ１ａ）並びにアクアポリン１及び５の発現を決定するためのウェスタンブロット分析及び／又は免疫組織化学的検査。
実施例６ ＡＡＦ０１を使用した急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）のマウスモデルにおける肺機能と放射線クリアランスの改善
本明細書に記載される例示的な製剤（例えば、ＡＡＦ０１）の異なる濃度は、例えば、噴霧によって送達されてもよく、治療効果について評価されてもよい。
ＡＲＤＳ誘導 ＡＲＤＳモデル
ＴＮＦ－αが、ＥＮａＣ活性及びバリアを減少させるために必要な時間を決定する。
●０、１、３、７、又は１４日後、ＴＮＦ－αの効果を試験することができる
ＡＲＤＳ誘導性肺炎球菌ＡＲＤＳモデル
ＡＲＤＳの動物モデルは当該技術分野で公知であり、例えば、Ａｅｆｆｎｅｒ ｅｔ ａｌ．（Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，４３：１０７４－１０９２，２０１５）、Ｇｏｔｔｓ ｅｔ ａｌ．（Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ ３１７：Ｌ７１７－Ｌ７３６，２０１９）；及びＨｏｎｇ ｅｔ ａｌ．［Ｓｉｇｎａｌ Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｔｈｅｒａｐｙ （２０２１）６：１］、に記載されており、その各々の内容が、その全体が本明細書に組み込まれる。ＥＮａＣ活性及びバリア機能の最大増加を誘導するために必要なＡＡＦ０１の用量及び時間を決定する。ＡＡＦ０１は、ＴＮＦ－α処理の前、処理中一緒に、及び処理後に使用される。ＴＮＦ－αの最適な用量及び時間が、エンドトキシンバリア機能アッセイ及び上述のＡＲＤＳ誘導ＡＲＤＳモデルで取得された情報に基づいて特定された。
方法
●身体測定
体重、日活動量（ｄａｉｌｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ）、呼吸数、酸素飽和度、肺湿／乾重量比
●生理学的測定
肺機能検査、ＦＩＴＣデキストランを使用した透過性アッセイ（４ＫＤ及び１０ＫＤ ＦＩＴＣデキストラン透過試験）
●分子生物学
●ｑＲＴ－ＰＣＲによる、ＥＮａＣ（α、β、及びγ）、クローディン１、２、５、７、及び８、オクルジン及びＥ－カドヘリン、酸感受性イオンチャネル（ＡＳＩＣ１ａ）、並びにアクアポリン１及び５のｍＲＮＡ発現
●タンパク質レベル及びＥＮａＣ（α、β、及びγ）、タイトジャンクションタンパク質（クローディン１、２、５、７、及び８、オクルジン及びＥ－カドヘリン）、酸感受性イオンチャネル（ＡＳＩＣ１ａ）並びにアクアポリン１及び５の発現を決定するためのウェスタンブロット及び免疫組織化学的分析
●ＥＬＩＳＡにより、例えばＩＬ－６，ＩＬ－１β及び／又はＩＬ１３のサイトカインレベルを決定する。
実施例７ 図１３～１８に関して使用される例示的方法
材料及び方法
試験デザイン。ＣＯＶＩＤ－１９免疫応答の様々な段階（先天的、Ｔｈ１，Ｔｈ２及びＴｒｅｇ）からの個々のサイトカイン及びその組み合わせが、ＨＢＥＣにおけるＥＮａＣ及びバリア機能に及ぼす影響を分析し、ＡＦＣにおけるそれぞれの役割を決定した。ＣＯＶＩＤ－１９中に見られるように、ＡＦＣの減少が肺水腫又はＡＲＤＳの主要なトリガーであるという仮説が立てられた。２つの別々の肺ドナーからの正常な初代ＨＢＥＣ（Ｐ２）を使用し、全ての実験は、ヘルシンキ宣言及びヒト研究倫理に関するＨｕｒｉｅｔ－Ｓｅｒｕｓｃｌａｔ及びＪａｒｄｅｔ法に記載されるガイドライン及び規制に従って行われ、ＨＢＥＣを取得、培養、保存及び研究するためのプロトコルは、フロリダ大学の機関審査委員会によって承認された。同年齢の分化したＨＢＥＣを、個々のサイトカイン及びサイトカインの組み合わせを用いた用量依存的及び時間依存的インキュベーション実験のために群に無作為に分けられ、試験を重複又は三重で繰り返した。ＡＡ－ＥＣ０１で細胞を処理した場合、同様の無作為化を使用した。全ての試料を、統計解析のためにプールした。データの外れ値は除外されなかった。
ＨＢＥＣ培養。ＨＢＥＣは、ＭＴＡを介して、アラバマ大学及びマイアミ大学から取得された。細胞は、前述のようにドナーの肺から単離された（Ｍ．Ｌ．Ｆｕｌｃｈｅｒ，Ｓ．Ｈ．Ｒａｎｄｅｌｌ，ｉｎ Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓ．Ｈ．Ｒａｎｄｅｌｌ，Ｍ．Ｌ．Ｆｕｌｃｈｅｒ，Ｅｄｓ．（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２０１３），ｐｐ．１０９－１２１）。細胞（Ｐ０及びＰ１）を、１０ｃｍ、ラットテールコラーゲンＩ－コーティング細胞培養ディッシュ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）上に１×１０６細胞の濃度で播種し、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン／ストレプトマイシン、及び０．２５ｕｇ／ｍＬのアンホテリシンＢ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を含有するＰｎｅｕｍａＣｕｌｔ Ｅｘ Ｐｌｕｓ培地（ＳｔｅｍＣｅｌｌ）中で、上述のように、３７℃及び５％ ＣＯ２／９５％ Ｏ２で４～８日間増殖させた（７１）。培養培地は、細胞が８０～９０％のコンフルエントになるまで、２日ごとに交換された。
継代のために、培養培地を除去し、細胞をＰＢＳで洗浄し、ＴｒｙｐＬＥ Ｓｅｌｅｃｔ酵素（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）でトリプシン処理し、更に増殖させるためにコラーゲンＩコート細胞培養ディッシュ（Ｐ１）、又はコラーゲンＩＶコート（Ｓｉｇｍａ）透過性スナップウェルインサート（０．４μＭ細孔ポリカーボネート膜、Ｃｏｒｎｉｎｇ）のいずれかに、８０，０００細胞／ｃｍ２（Ｐ２）の濃度で播種した。ペニシリン／ストレプトマイシンを含有するＰｎｅｕｍａＣｕｌｔ Ｅｘ Ｐｌｕｓ中のスナップウェルで９０％コンフルエンスまで増殖させた後（細胞は培養培地に浸漬された）、空気－液体界面においてペニシリン／ストレプトマイシンを含有するＰｎｅｕｍａＣｕｌｔ ＡＬＩ培地（ＳｔｅｍＣｅｌｌ）中で細胞を分化させた。ＡＬＩ培地は、細胞が完全に分化するまで２日ごとに交換された（１４～２１日）。分化したＨＢＥＣは、線毛の運動性によって特徴付けられる。
ＡＬＩ培地に希釈されたサイトカイン［ＩＬ－１３（Ａｂｃａｍ）、ＩＬ－４（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ）、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、及びＴＧＦ－β１（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）］を用いた基本処理は、分化後１４日目に早くも開始された。個々のサイトカイン又はサイトカインカクテルを、所望の濃度で培養培地に添加し、細胞をサイトカインとともに最大１６日間インキュベートした。サイトカインを含有するＡＬＩ培地を２日ごとに交換した。同年齢のＨＢＥＣを以下の処理群に割り当てた：
Ｉ 用量依存性試験：７日間の処理については、ＩＦＮ－γ又はＴＮＦ－αを５ｘ１０－５、５ｘ１０－４、５ｘ１０－３、５ｘ１０－２、０．５、５、１０、２０、４０、５０及び５００ｎｇ／ｍＬで使用し、一方でＴＧＦ－β１を５ｘ１０－５、５ｘ１０－４、５ｘ１０－３、５ｘ１０－２、０．５、５及び５０ｎｇ／ｍＬで使用した。１４日間の処理については、ＩＬ－１３を０．１、０．２、０．５、１、２、４、８、１６、２０、６４ｎｇ／ｍＬで使用した。
ＩＩ 時間依存性試験：これらの試験は、ベンザミル感受性Ｉｓｃ及びＴＥＥＲの最大阻害を確実にする濃度を使用して行われた。ＨＢＥＣは、２、４、６、８、１０、１２、１４、又は１６日間、それぞれのサイトカインで処理された。１ｎｇ／ｍＬのＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、又はＴＧＦ－β１、２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１３、及び２ｎｇ／ｍＬのＩＬ－４を使用した。
ＩＩＩ サイトカインカクテル：０．０５、０．５、２．５、５及び１０ｎｇ／ｍＬでＩＦＮ－γ及びＴＮＦ－αを使用して調製されたが、各サイトカインについて１ｎｇ／ｍＬでＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ及びＴＧＦ－β１を培養培地に７日間添加した。
ＩＶ免疫蛍光のためのアミノ酸による処理：ＡＡ－ＥＣ０１、ＡＡＮＣ（陰性対照）、又はリンゲルの等張溶液を、それぞれ２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１３、又は１ｎｇ／ｍＬのＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、及びＴＧＦ－β１のいずれかで１４日間又は７日間、前もってインキュベートされた細胞培養物の頂端側に添加した（２００μＬ）。細胞培養物を、免疫蛍光イメージングのために処理する前に、アミノ酸又はリンゲル溶液で１時間、３７℃及び５％ ＣＯ２／９５％ Ｏ２で処理した。
Ｕｓｓｉｎｇチャンバ実験：サイトカインとインキュベートされた分化したＨＢＥＣを有するスナップウェル、又はサイトカイン曝露なしに同年齢のＨＢＥＣを、Ｕｓｓｉｎｇチャンバ（Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）に取り付け、１１３．８ｍＭ Ｎａ＋、９３．６ｍＭ Ｃｌ－、２５ｍＭ ＨＣＯ３ －、５．２ｍＭ Ｋ＋、２．４ｍＭ ＨＰＯ４ －、０．４ｍＭ Ｈ２ＰＯ４ －、１．２ ｍＭ Ｍｇ２＋、１．２ ｍＭ Ｃａ２＋、及び７５ｍＭマンニトールを含む等張リンゲル溶液、又はＡＡ－ＥＣ０１のいずれかに細胞を浸漬した。グルコース（５ｍＭ）を基底側に添加し、チャンバを３７℃で９５％Ｏ２及び５％ＣＯ２でバブリングした。ＡＡ－ＥＣ０１は、８ｍＭのリジン、８ｍＭのトリプトファン、８ｍＭのアルギニン、８ｍＭのグルタミン、及び１．２ｍＭのチロシンを含有し、並びにＡＡＮＣは、８ｍＭのロイシン、８ｍＭのシステイン、８ｍＭのイソロイシン、８ｍＭのアスパラギン酸、及び８ｍＭのグルタミン酸（Ａｊｉｎｏｍｏｔｏ）を含有し、両方とも、１１３．８ｍＭ Ｎａ＋、９３．６ｍＭ Ｃｌ－、２５ｍＭ ＨＣＯ３ －、５．２ｍＭ Ｋ＋、２．４ｍＭ ＨＰＯ４ －、０．４ｍＭ Ｈ２ＰＯ４ －、１．２ｍＭ Ｍｇ２＋、１．２ｍＭ Ｃａ２＋及び４０ｍＭマンニトール、ｐＨ７．４及び３００ｍＯｓｍの電解質溶液で希釈された。細胞培養物を、０ｍＶに連続的に電圧クランプしながら、Ｕｓｓｉｎｇチャンバ内で３０分間平衡化させた。基底短絡電流（Ｉｓｃ）及び経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）を３０秒間隔で記録し、ベンザミル感受性Ｉｓｃを、３０分後に記録した基底Ｉｓｃと、６μＭのベンザミル（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を頂端側に添加し、１５分後に測定したＩｓｃとの差から計算した。
免疫蛍光イメージング：ＡＡ－ＥＣ０１又はリンゲル溶液で処理した後、細胞を４％のパラホルムアルデヒドで固定し、パラフィン中に包埋した。断面（４μｍ）を、標準プロトコルに従って、シラン被覆ガラススライド（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に載せ、脱パラフィン、再水和し、及びｐＨ６．０（Ｂｉｏｃａｒｅ Ｍｅｄｉｃａｌ）の回収緩衝液中で熱前処理した。１％のＢＳＡ及び１０％の正常なヤギ血清でブロッキングした後、切片を、ブロッキング緩衝液（１：１００）中で希釈したマウス抗ヒトＩＬ－６モノクローナル抗体（Ａｂｃａｍ）、ウサギ抗ヒトＥＮａＣ－αポリクローナル抗体（Ａｂｃｅｐｔａ）、又はマウス抗ヒトＭＵＣ５ＡＣモノクローナル抗体（Ａｂｃａｍ）と４℃で一晩インキュベートした。ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）とコンジュゲートされたヤギ抗マウススーパークローナル組換え二次抗体をＩＬ－６及びＭＵＣ５ＡＣ検出／ビジュアライゼーションに使用し、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）とコンジュゲートされたヤギ抗ウサギスーパークローナル組換え二次抗体をＥＮａＣ－ａ検出／ビジュアライゼーションに使用して、１μｇ／ｍＬの濃度で１時間インキュベートした。核をＤＡＰＩで１０分間染色し、細胞を水性封入剤（Ａｂｃａｍ）中に装填後、分析した。シグナルは、レーザー走査型Ｏｌｙｍｐｕｓ Ｆｌｕｏｖｉｅｗ ＦＶ１０００共焦点顕微鏡を使用して４００Ｘ倍率で分析した。
統計解析：結果は、平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として示される。解析は、ＯｒｉｇｉｎＰｒｏ ２０１８ソフトウェアパッケージを用いて実施した。各処理群について、値は、Ｓｈａｐｉｒｏ－Ｗｉｌｋ正規性検定を使用して、正規分布について検定した。ドナー肺の利用可能性が限定的であり、サンプルサイズが小さく、ドナー間のばらつきが大きいため、データは正規分布しておらず、ノンパラメトリック検定を使用して正規化された値について統計解析が実施された。値は、群内の対照に対して正規化され、群間の比較のためにデータがプールされた。クラスカル－ワリス検定は、ベンザミル感受性Ｉｓｃ及びＴＥＥＲに対するリンゲル、ＡＡ－ＥＣ０１及びＡＡＮＣの全体的な効果を比較するために使用され、マン・ホイットニーＵ検定は、群内のペアワイズ比較、及び各サイトカインの０ｎｇ／ｍＬ又は０日目の各濃度及び調査された期間での基底値の比較に使用された。Ｐ＜０．０５は有意とみなされ、ＮＳは有意ではないことを示す。
図１３～１８に関する結果
図１３は、低濃度のＩＦＮ－γとのＨＢＥＣの長時間のインキュベーションが、ＥＮａＣ機能を阻害したことを示す。ＥＮａＣ阻害は、ＩＦＮ－γで１４日以上インキュベートした場合、ＨＢＥＣにおけるベンザミル感受性Ｉｓｃの段階的な減少に反映された。
図１４は、ＴＮＦ－αがＥＮａＣ活性を阻害したが、ＴＥＥＲによって反映されるようにバリア機能を損なわなかったことを示す。対照的に、図１７Ａ及び１７Ｂは、ＩＦＮ－γとＴＮＦ－αの組み合わせ（それぞれ１０ｎｇ／ｍＬ）が、相乗的に作用して、ＨＢＥＣのＥＮａＣ活性を低下させ、バリア機能を損なったことを示す。
図１５Ｃ及び１５Ｄは、２ｎｇ／ｍＬのＩＬ－４で１４日間インキュベートしたＨＢＥＣが、４日目に早くも、ベンザミル感受性Ｉｓｃの有意な減少を示したことを示す。ベンザミル感受性Ｉｓｃの最大の低下は、１０日目に見られ、残りの試験期間にわたってベンザミル感受性Ｉｓｃは抑制されたままであった（図１５Ｃ）。同様に、バリア機能は、２日目に早くも減少し、１０日目に最大阻害が生じた（図１５Ｄ）。
図１６は、培養培地へのＩＬ－１３を添加が、ベンザミル感受性Ｉｓｃを用量依存的に減少させたことを示す。ベンザミル感受性Ｉｓｃは、０．１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１３から開始して徐々に減少し、８ｎｇ／ｍＬで完全に消失した（図１６Ａ）。ＴＥＥＲは、２ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１３で劇的に低下し、４ｎｇ／ｍＬでバリア機能の最大の低下が観察された（図１６Ｂ）。ＨＢＥＣを２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１３と１６日間インキュベートすると、ベンザミル感受性Ｉｓｃが２日目にそのベースライン値の１／４まで減少し、ベンザミル感受性Ｉｓｃは８日目まで完全に抑制された（図１６Ｃ）。上皮抵抗は時間の経過とともに徐々に減少し、ＴＥＥＲの最大減少は１０日目に観察された（図１６Ｄ）。
図１７に示されるように、他のサイトカインとは独立して試験されたＴＧＦ－β１は、早くも４日目に≧０．５ｎｇ／ｍＬの濃度でベンザミル感受性Ｉｓｃの減少をもたらし、ＴＥＥＲに対する阻害効果はなかった。
図１８は、ＩＬ－１３がＥＮａＣ及びバリア機能を阻害する一方でＡＡ－ＥＣ０１がＥＮａＣの活性及び発現を増加させ、それによって肺胞液蓄積などのＩＬ－１３媒介性の有害作用に対抗することを示す。本研究はまた、ＡＡ－ＥＣ０１が細胞質から頂端膜へのＥＮａＣの転位を促進し、そこでそれが機能的に活性であることを示した。本明細書に記載の免疫組織化学研究は、ＡＡ－ＥＣ０１が、増加したＥＮａＣ転写及び／又はＥＮａＣタンパク質合成を介して、ＥＮａＣ活性も増加させ得ることを明らかにした。
免疫組織化学研究によって示されるように、ＡＡ－ＥＣ０１はまた、ＩＬ－１３曝露後のＨＢＥＣにおける細胞内ＭＵＣ５ＡＣ発現及び分泌を有意な程度に低下させたことから、ＡＡ－ＥＣ０１は粘液産生を低下させるために使用され得ることが示唆される。ＡＡ－ＥＣ０１が、ＨＢＥＣにおけるサイトカイン誘導性ＩＬ－６分泌を減少させる能力（ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、及びＴＧＦ－β１結合からなるサイトカインの組み合わせへの曝露による）は、ＡＡ－ＥＣ０１が、ＡＲＤＳに関連する肺合併症に対処する複数の治療特性を有することを更に強調する。ＡＡ－ＥＣ０１は、ＩＬ－１３曝露後のＨＢＥＣにおけるＥＮａＣ活性を増加させ、ＩＬ－１３曝露後のＨＢＥＣにおけるＭＵＣ５ＡＣの発現及び分泌を有意に低下させ、サイトカインとインキュベートした細胞の頂端膜におけるＩＬ－６－関連免疫蛍光シグナルを有意に低減した。
肺胞液貯留を低減できる承認された医薬品が利用できないため、ＡＡ－ＥＣ０１は満たされていない緊急の臨床ニーズに対する解決策を提供する。本明細書に提示される結果は、ＡＲＤＳを治療するための、及び／又はＡＲＤＳに関連する肺合併症の可能性及び／又は重症度を低減するための治療剤としてのＡＡ－ＥＣ０１の使用を支持する。ＡＡ－ＥＣ０１は、治療特性を有する機能性アミノ酸からなるため、製剤は、スタンドアロンＡＰＩとして、又は他の治療選択肢と組み合わせて使用するための相補的ＡＰＩとして使用することができる。ＡＡ－ＥＣ０１は、その中に含有されるアミノ酸の各々が「一般に安全と認められる」（ＧＲＡＳ）ため、優れた安全性プロファイルを有し、他のＡＰＩとの副作用を呈することはないと予想される。したがって、ＡＡ－ＥＣ０１は、標準治療ＡＰＩと組み合わせることで、標準治療療法の効果を最大化し、それによって酸素補給及び換気補助の期間を短縮し、長期肺合併症を最小限に抑え、罹患患者の生存を高めることができる。

Claims (48)

  1. 急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、喘息、又はアレルギー性鼻炎の治療を必要とする対象における前記急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、喘息、又はアレルギー性鼻炎の治療に使用するための医薬製剤であって、前記製剤が、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせであって、
    前記遊離アミノ酸が、治療有効量のアルギニン及びリジンの遊離アミノ酸、並びに
    治療有効量のグルタミン、トリプトファン、チロシン、システイン、アスパラギン、若しくはトレオニンの遊離アミノ酸、又はそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つ、から本質的になるか、あるいはそれらからなり、
    前記治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせが、ＡＲＤＳ若しくは喘息を治療するための肺への送達のために製剤化されており、前記治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせが、前記対象の肺内の流体貯留を低減させるのに十分であるか、又は
    前記治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせが、アレルギー性鼻炎を治療するための鼻腔への送達のために製剤化されており、前記治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせが、前記対象の鼻腔内の流体貯留を低減させるのに十分である、治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせと、
    任意選択的に、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体、緩衝剤、電解質、アジュバント、賦形剤、若しくは水、又はそれらの任意の組み合わせと、を含む、医薬製剤。
  2. 前記遊離アミノ酸が、治療有効量のアルギニン及びリジンの遊離アミノ酸、並びに
    治療有効量のグルタミン、トリプトファン、チロシン、システイン、若しくはアスパラギンの遊離アミノ酸、又はそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つ、から本質的になるか、あるいはそれらからなる、請求項１に記載の医薬製剤。
  3. 前記遊離アミノ酸が、治療有効量のアルギニン、リジン、及びグルタミンの遊離アミノ酸、並びに
    治療有効量のトリプトファン、チロシン、システイン、アスパラギン、若しくはトレオニンの遊離アミノ酸、又はそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つ、から本質的になるか、あるいはそれらからなる、請求項１に記載の医薬製剤。
  4. 前記遊離アミノ酸が、治療有効量のアルギニン、リジン、及びグルタミンの遊離アミノ酸、並びに
    治療有効量のトリプトファン、チロシン、システイン、若しくはアスパラギンの遊離アミノ酸、又はそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つ、から本質的になるか、あるいはそれらからなる、請求項２に記載の医薬製剤。
  5. アルギニンの濃度が４ｍＭ～１０ｍＭの範囲であるか、アルギニンの濃度が６ｍＭ～１０ｍＭの範囲であるか、アルギニンの濃度が７ｍＭ～９ｍＭの範囲であるか、アルギニンの濃度が７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲であるか、又はアルギニンの濃度が８ｍＭである、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  6. 前記治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせが、治療有効量のアルギニン、リジン、トリプトファン、チロシン、及びグルタミンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  7. アルギニンが６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、リジンが６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、トリプトファンが６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、チロシンが０．１ｍＭ～１．２ｍＭの範囲の濃度で存在し、グルタミンが６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在する、請求項６に記載の医薬製剤。
  8. アルギニンが７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、リジンが７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、トリプトファンが７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、チロシンが０．８ｍＭ～１．２ｍＭの範囲の濃度で存在し、グルタミンが７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在する、請求項６に記載の医薬製剤。
  9. アルギニンが８ｍＭの濃度で存在し、リジンが８ｍＭの濃度で存在し、トリプトファンが８ｍＭの濃度で存在し、チロシンが１．２ｍＭの濃度で存在し、グルタミンが８ｍＭの濃度で存在する、請求項６に記載の医薬製剤。
  10. 前記治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせが、治療有効量のアルギニン、リジン、トリプトファン、及びグルタミンの遊離アミノ酸からなる、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  11. アルギニンが６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、リジンが６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、トリプトファンが６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、グルタミンが６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在する、請求項１０に記載の医薬製剤。
  12. アルギニンが７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、リジンが７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、トリプトファンが７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、グルタミンが７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在する、請求項１０に記載の医薬製剤。
  13. アルギニンが８ｍＭの濃度で存在し、リジンが８ｍＭの濃度で存在し、トリプトファンが８ｍＭの濃度で存在し、グルタミンが８ｍＭの濃度で存在する、請求項１０に記載の医薬製剤。
  14. 前記治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせが、治療有効量のアルギニン、リジン、チロシン、及びグルタミンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  15. アルギニンが６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、リジンが６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、チロシンが０．１ｍＭ～１．２ｍＭの範囲の濃度で存在し、グルタミンが６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在する、請求項１４に記載の医薬製剤。
  16. アルギニンが７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、リジンが７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、チロシンが０．８ｍＭ～１．２ｍＭの範囲の濃度で存在し、グルタミンが７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在する、請求項１４に記載の医薬製剤。
  17. アルギニンが８ｍＭの濃度で存在し、リジンが８ｍＭの濃度で存在し、チロシンが１．２ｍＭの濃度で存在し、グルタミンが８ｍＭの濃度で存在する、請求項１４に記載の医薬製剤。
  18. 前記治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせが、治療有効量のアルギニン、リジン、グルタミン、システイン、及びアスパラギンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  19. アルギニンが６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、リジンが６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、グルタミンが６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、システインが６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在し、アスパラギンが６ｍＭ～１０ｍＭの範囲の濃度で存在する、請求項１８に記載の医薬製剤。
  20. アルギニンが７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、リジンが７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、グルタミンが７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、システインが７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在し、アスパラギンが７．２ｍＭ～８．８ｍＭの範囲の濃度で存在する、請求項１８に記載の医薬製剤。
  21. アルギニンが８ｍＭの濃度で存在し、リジンが８ｍＭの濃度で存在し、グルタミンが８ｍＭの濃度で存在し、システインが８ｍＭの濃度で存在し、アスパラギンが８ｍＭの濃度で存在する、請求項１８に記載の医薬製剤。
  22. 前記治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせが、治療有効量のアルギニン、リジン、及びトリプトファンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  23. 前記遊離アミノ酸の組み合わせが、治療有効量のアルギニン、リジン、トリプトファン、トレオニン、及びチロシンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる、請求項１、３、又は５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  24. 前記遊離アミノ酸の組み合わせが、治療有効量のアルギニン、リジン、トリプトファン、トレオニン、及びグルタミンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる、請求項１、３、又は５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  25. 前記治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせが、治療有効量のアルギニン、リジン、トリプトファン、チロシン、グルタミン、及びトレオニンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる、請求項１、３、又は５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  26. 少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体、緩衝剤、電解質、アジュバント、賦形剤、若しくは水、又はそれらの任意の組み合わせを更に含む、請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  27. 前記遊離アミノ酸のうちの少なくとも１つ又は前記遊離アミノ酸の各々が、Ｌ－アミノ酸を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  28. 前記医薬製剤が、経肺経路、吸入経路、又は鼻腔内経路による投与のために製剤化される、請求項１～２７のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  29. 前記医薬製剤が、吸入又は鼻腔投与を介した投与のために製剤化される、請求項１～２８のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  30. 前記対象が、哺乳動物である、請求項１～２９のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  31. 前記哺乳動物が、ヒト、ネコ、イヌ、ブタ、ウマ、ウシ、ヒツジ、又はヤギである、請求項１～３０のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  32. 前記哺乳動物が、ヒトである、請求項１～３１のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  33. 前記ヒトが、乳幼児である、請求項３２に記載の医薬製剤。
  34. 前記対象が、コロナウイルス感染症２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）に罹患している、請求項１～３３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  35. 肺内の流体貯留を低減することが、ＡＲＤＳ又は喘息に関連する少なくとも１つの症状を低減し、鼻腔内の流体貯留を低減することが、アレルギー性鼻炎に関連する少なくとも１つの症状を低減する、請求項１～３４のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  36. ＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎の治療に使用するための、請求項１～３５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  37. ＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎を治療するための医薬品の製造のための、請求項１～３５のいずれか一項に記載の医薬製剤の使用。
  38. ＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎の治療を必要とする対象における前記ＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎を治療するための方法であって、
    前記ＡＲＤＳ、喘息、又はアレルギー性鼻炎の治療を必要とする前記対象に、請求項１～３５のいずれか一項に記載の医薬製剤を投与することを含み、
    前記投与が、肺内の流体貯留を低減し、それによって、前記対象におけるＡＲＤＳ若しくは喘息に関連する少なくとも１つの症状を低減するか、又は
    前記投与が、前記対象の鼻腔内の流体貯留を低減し、それによって、前記対象におけるアレルギー性鼻炎に関連する少なくとも１つの症状を低減する、方法。
  39. 前記医薬製剤又は前記医薬品が、肺内経路、吸入経路、若しくは鼻腔内経路、又はそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つを介して投与可能である、請求項３６に記載の使用、請求項３７に記載の医薬品、又は請求項３８に記載の方法。
  40. 前記医薬製剤又は前記医薬品が、吸入又は鼻腔投与を介して投与可能である、請求項３６に記載の使用、請求項３７に記載の医薬品、又は請求項３８に記載の方法。
  41. 治療上有効な遊離アミノ酸の組み合わせを含む、医薬製剤であって、前記医薬製剤が、肺内投与又は鼻腔内投与のために、
    前記遊離アミノ酸であって、治療有効量のアルギニン及びリジンの遊離アミノ酸、並びに
    治療有効量のグルタミン、トリプトファン、チロシン、システイン、アスパラギン、若しくはトレオニンの遊離アミノ酸、又はそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つ、から本質的になるか、あるいはそれらからなる、前記遊離アミノ酸と、
    任意選択的に、少なくとも１つの担体、緩衝剤、電解質、アジュバント、賦形剤、若しくは水、又はそれらの任意の組み合わせと、が製剤化される、医薬製剤。
  42. 前記遊離アミノ酸が、治療有効量のアルギニン及びリジンの遊離アミノ酸、並びに
    治療有効量のグルタミン、トリプトファン、チロシン、システイン、若しくはアスパラギンの遊離アミノ酸、又はそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つ、から本質的になるか、あるいはそれらからなる、請求項４１に記載の医薬製剤。
  43. 前記遊離アミノ酸が、治療有効量のアルギニン、リジン、及びグルタミンの遊離アミノ酸、並びに
    治療有効量のトリプトファン、チロシン、システイン、アスパラギン、若しくはトレオニンの遊離アミノ酸、又はそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つ、から本質的になるか、あるいはそれらからなる、請求項４１に記載の医薬製剤。
  44. 前記遊離アミノ酸の組み合わせが、治療有効量のアルギニン、リジン、トリプトファン、チロシン、及びグルタミンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる、請求項４１～４３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  45. 前記遊離アミノ酸の組み合わせが、治療有効量のアルギニン、リジン、グルタミン、システイン、及びアスパラギンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる、請求項４１～４３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
  46. 前記遊離アミノ酸の組み合わせが、治療有効量のアルギニン、リジン、トリプトファン、及びグルタミンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる、請求項４１～４３に記載の医薬製剤。
  47. 前記遊離アミノ酸の組み合わせが、治療有効量のアルギニン、リジン、チロシン、及びグルタミンの遊離アミノ酸から本質的になるか、又はそれらからなる、請求項４１～４３に記載の医薬製剤。
  48. 請求項１～３５若しくは４１～４７のいずれか一項に記載の医薬製剤、又は請求項３７に記載の医薬品を含む、デバイスであって、前記デバイスが、肺又は鼻腔への前記医薬製剤又は前記医薬品の送達を必要とする対象において前記医薬製剤又は前記医薬品を送達するように構成されている、デバイス。

JP2022573664A 2020-05-29 2021-05-28 急性呼吸窮迫症候群、喘息、又はアレルギー性鼻炎を治療するための製剤及び方法 Pending JP2023531872A (ja)

Applications Claiming Priority (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063032185P 2020-05-29 2020-05-29
US63/032,185 2020-05-29
US202063080470P 2020-09-18 2020-09-18
US63/080,470 2020-09-18
US202063088813P 2020-10-07 2020-10-07
US63/088,813 2020-10-07
US202163136404P 2021-01-12 2021-01-12
US63/136,404 2021-01-12
PCT/US2021/034807 WO2021243183A1 (en) 2020-05-29 2021-05-28 Formulations and methods for treating acute respiratory distress syndrome, asthma, or allergic rhinitis

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2023531872A true JP2023531872A (ja) 2023-07-26
JPWO2021243183A5 JPWO2021243183A5 (ja) 2024-06-04

Family

ID=78722883

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022573664A Pending JP2023531872A (ja) 2020-05-29 2021-05-28 急性呼吸窮迫症候群、喘息、又はアレルギー性鼻炎を治療するための製剤及び方法

Country Status (10)

Country Link
US (1) US20230201151A1 (ja)
EP (1) EP4157218A1 (ja)
JP (1) JP2023531872A (ja)
KR (1) KR20230018474A (ja)
CN (1) CN115697301A (ja)
AU (1) AU2021280328A1 (ja)
BR (1) BR112022024033A2 (ja)
CA (1) CA3177780A1 (ja)
MX (1) MX2022015044A (ja)
WO (1) WO2021243183A1 (ja)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116036277B (zh) * 2022-07-19 2023-10-31 广州国家实验室 氯离子在预防、治疗冠状病毒所致疾病中的应用
US11878073B1 (en) 2022-09-20 2024-01-23 Entrinsic, LLC Generation of hydration-targeted formulations and methods of use therein

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3078335A1 (en) * 2017-10-02 2019-04-11 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Materials and methods for inhibiting tumor growth
CN113164425A (zh) * 2018-10-30 2021-07-23 佛罗里达大学研究基金会公司 用于治疗囊性纤维化的氨基酸组合物和方法

Also Published As

Publication number Publication date
US20230201151A1 (en) 2023-06-29
CA3177780A1 (en) 2021-12-02
MX2022015044A (es) 2023-01-04
CN115697301A (zh) 2023-02-03
WO2021243183A8 (en) 2022-01-13
WO2021243183A1 (en) 2021-12-02
KR20230018474A (ko) 2023-02-07
BR112022024033A2 (pt) 2022-12-20
EP4157218A1 (en) 2023-04-05
AU2021280328A1 (en) 2022-11-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8993581B2 (en) Methods for treating viral disorders
RU2524304C2 (ru) Применение соли ацетилсалициловой кислоты для лечения вирусных инфекций
US9913819B2 (en) Methods of treating or preventing fibrotic lung diseases
JP2023531872A (ja) 急性呼吸窮迫症候群、喘息、又はアレルギー性鼻炎を治療するための製剤及び方法
US20220193010A1 (en) Methods of using dipivefrin
JP7359519B2 (ja) ライノウイルス感染症の予防又は治療のための薬物
JP2023520323A (ja) ２型アンギオテンシンｉｉ受容体アゴニストの新規使用
US20230233514A1 (en) Antiviral compounds and methods of using the same
JP2023524693A (ja) ラクトフェリンの投与によるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス侵入の阻害およびその使用
EP1437134A1 (en) Anti-influenza drugs
US20230058134A1 (en) Aldose reductase inhibitors for the treatment of acute respiratory distress syndrome, acute lung inflammation/injury, cardiac injury and anti-viral therapy
US20230158103A1 (en) Pld for use in combination in the treatment of coronavirus
JP2015534943A (ja) Ｃｂｐ／カテニン阻害剤を用いるウイルス性及び感染性疾病の治療
WO2021209620A1 (en) Cysteine protease inhibitors for use in the prevention and/or treatment of coronavirus
CA3182274A1 (en) Inhaled statins for treatment of viral respiratory diseases
US11197912B2 (en) Prevention and treatment of viral infection and viral infection-induced organ failure
US20220016160A1 (en) Method for preventing or treating infection of respiratory virus utilizing gold nanoparticles
WO2022146399A1 (en) Dual inhibition of sars-cov-2 virus of leukotriene ltd4 receptor antagonist montelukast
JP2003155230A (ja) 抗インフルエンザ薬
CN115443126A (zh) 用于预防或治疗SARS-CoV-2感染的相容性溶质
WO2021252378A1 (en) Prevention or treatment of covid-19
CN116744934A (zh) 用于治疗病毒性呼吸疾病的吸入性他汀类药物

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20221209

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20240527

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20240527