JP2023531672A - H2L2とHCAb構造を有する結合タンパク質 - Google Patents
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Abstract
Description
好ましく、前記タンパク質機能領域Bの数は1つである場合、前記結合タンパク質は二価結合タンパク質であり、下記の構造を含み:前記タンパク質機能領域Aは(d)従来のFab構造、または(e)Fab(cross VH/VL)構造、または(f)Fab(cross Fd/LC)構造であり;前記タンパク質機能領域Bの数は2つである場合、前記結合タンパク質は三価結合タンパク質であり、下記の構造を含み:左アームの前記タンパク質機能領域Aは前記(d)または(e)または(f)であり、2つ目のタンパク質機能領域Bが左アームの前記タンパク質機能領域AのN末端またはC末端、または右アームの1つ目のタンパク質機能領域BのN末端、または前記FcのC末端に接続され、好ましく2つ目のタンパク質機能領域Bが右アームの1つ目のタンパク質機能領域BのN末端に接続され;前記タンパク質機能領域Bの数は3つである場合、前記結合タンパク質は四価結合タンパク質であり、具体に下記の構造を含み:左アームの前記タンパク質機能領域Aは前記(d)または(e)または(f)構造であり、3つ目のタンパク質機能領域Bはさらに左アームの前記タンパク質機能領域AのN末端またはC末端、または左アームの2つ目のタンパク質機能領域BのN末端またはC末端、または右アームの1つ目または2つ目のタンパク質機能領域BのN末端、または前記FcのC末端に接続され、好ましく2つ目のタンパク質機能領域Bが右アームの1つ目のタンパク質機能領域BのN末端に接続され、且つ3つ目のタンパク質機能領域Bが前記2つ目のタンパク質機能領域BのN末端に接続される。
より一層好ましく、前記結合タンパク質はさらにタンパク質機能領域Dを含み、前記結合タンパク質は四価または多価の多特異性結合タンパク質であり、具体に:前記タンパク質機能領域Dと前記タンパク質機能領域A、タンパク質機能領域B、タンパク質機能領域Cが異なる抗原または抗原エピトープを標的とし、前記タンパク質機能領域Dが前記結合タンパク質のN末端またはC末端に接続され;好ましく前記タンパク質機能領域Dが前記(d)、(e)、(f)または(g)に記載の結合タンパク質のタンパク質機能領域BのN末端に接続される。
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 167、188及び211に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、62及び122に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 17、65及び125に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 171、190及び215に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 19、67及び127に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 17、65及び125に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 176、196及び220に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 23、74及び132に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 17、65及び125に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 167、188及び211に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、69及び122に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 28、80及び138に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 167、188及び211に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、69及び122に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 27、79及び137に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 167、188及び211に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、69及び122に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 29、82及び138に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 180、191及び225に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 32、87及び143に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 28、80及び138に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 180、191及び225に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 32、87及び143に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 27、79及び137に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 180、191及び225に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 32、87及び143に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 28、89及び145に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 177、191及び226に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 33、88及び144に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 28、80及び138に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 177、191及び226に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 33、88及び144に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 28、81及び139に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 177、191及び226に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 33、88及び144に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、83及び140に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 20、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 24、76及び134に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 20、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 26、78及び136に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 20、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、75及び133に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、75及び133に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 26、78及び136に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 26、90及び136に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 36、90及び146に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、76及び147に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 34、78及び148に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、76及び136に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、90及び146に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 34、76及び136に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、76及び146に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 34、76及び146に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、90及び148に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、90及び136に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 34、78及び146に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、78及び147に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、90及び147に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 177、191及び221に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、84及び141に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 26、78及び136に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 178、197及び222に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 31、85及び142に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 26、78及び136に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 177、191及び223に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 31、86及び141に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 26、78及び136に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 179、198及び224に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 31、85及び142に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 26、78及び136に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 25、77及び135に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Cが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 26、78及び136に示すアミノ酸配列である。挙げられたCDRのアミノ酸配列は、Chothia定義規則に従って示されている。
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 282に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 233に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 236に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 286に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 238に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 236に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 293に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 247に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 236に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 282に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 240に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 253に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 282に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 240に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 252に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 282に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 240に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 255に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 298に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 261に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 253に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 298に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 261に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 252に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 298に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 261に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 264に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 299に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 262に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 253に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 299に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 262に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 254に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 299に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 262に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 256に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 245に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 249に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 245に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 251に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 245に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 248に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 257に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 248に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 257に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 251に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 281に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 251に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 251に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 265に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 269に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 270に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 271に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 272に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 273に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 274に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 275に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 276に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 277に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 278に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 279に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 280に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 266に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 267に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 268に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 244に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 249に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 244に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 251に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 294に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 258に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 251に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 295に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 259に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 251に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 296に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 260に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 251に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 297に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 259に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 251に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 257に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 250に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Cが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 251に示すアミノ酸配列を含む。
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 371に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 373に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 353に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 362に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 363に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 364に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 365に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 364に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 353に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 366に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 353に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 369に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 353に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 370に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 353に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 394に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 353に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 395に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 363に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 310に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 363に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 396に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 363に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 362に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 363に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 394に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 363に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 395に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 368に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 378に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 379に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 380に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 381に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 382に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 383に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 385に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 388に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 389に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 374に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 375に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 386に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 387に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 401に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 402に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 305に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 403に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 402に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 409に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 359に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 404に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 405に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 315に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 359に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 406に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 376に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 377に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 397に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 398に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 399に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 400に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 402に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 401に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 402に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 403に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 405に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 404に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 405に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 406に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 371に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 486に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 353に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 460に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 353に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 461に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 353に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 462に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 487に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 488に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 360に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 455に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 360に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 456に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 360に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 457に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 360に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 458に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 360に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 459に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 419に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 412に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 419に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 414に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 440に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 428に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 441に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 428に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 442に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 428に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 443に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 428に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 487に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 520に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 353に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 521に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 371に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 522に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 360に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 523に示すアミノ酸配列を含む。
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 353に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 408に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 392に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 391に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 390に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 393に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 392に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 391に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 434に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 391に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 435に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 393に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 436に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 393に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 437に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 438に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 434に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 438に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 435に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 439に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 436に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 439に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 437に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 361に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 481に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 482に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 361に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 481に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 483に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 361に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 481に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 484に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 361に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 481に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 485に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 411に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 412に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 411に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 414に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 415に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 416に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 410に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 415に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 416に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 412に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 415に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 416に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 414に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 417に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 418に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 412に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 417に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 418に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 414に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 423に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 426に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 423に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 427に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 423に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 428に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 423に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 429に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 444に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 449に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 450に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 449に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 444に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 445に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 444に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 446に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 450に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 445に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 450に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 446に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 444に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 447に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 444に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 448に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 450に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 447に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 450に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 448に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 445に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 446に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 463に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 464に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 465に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 466に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 467に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 468に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 469に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 470に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 471に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 472に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 473に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 474に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 475に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 476に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 477に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 478に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 479に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 480に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 423に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 430に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 423に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 431に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 423に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 432に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 423に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 433に示すアミノ酸配列を含む。
前記CD3抗体が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 177、191及び221に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、84及び141に示すアミノ酸配列であり;または、その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 178、197及び222に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 31、85及び142に示すアミノ酸配列であり;または、その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 177、191及び223に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 31、86及び141に示すアミノ酸配列であり;または、その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 179、198及び224に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 31、85及び142に示すアミノ酸配列である。挙げられたCDRのアミノ酸配列は、Chothia定義規則に従って示されている。好ましく、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 294に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 258に示すアミノ酸配列を含み;または、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 295に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 259に示すアミノ酸配列を含み;または、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 296に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 260に示すアミノ酸配列を含み;または、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 297に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 259に示すアミノ酸配列を含む。
または、前記CD3抗体が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 20、68及び128に示すアミノ酸配列であり;または、その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列である。挙げられたCDRのアミノ酸配列は、Chothia定義規則に従って示されている。好ましく、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 245に示すアミノ酸配列を含み;または、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 257に示すアミノ酸配列を含み;または、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;または、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 281に示すアミノ酸配列を含み;または、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 244に示すアミノ酸配列を含む。
または、前記BCMA抗体が重鎖可変領域を含み、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 26、90及び136に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 34、78及び146に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、78及び147に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、90及び147に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 36、90及び146に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、76及び147に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 34、78及び148に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、76及び136に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、90及び146に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 34、76及び136に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、76及び146に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 34、76及び146に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、90及び148に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、90及び136に示すアミノ酸配列である。挙げられたCDRのアミノ酸配列は、Chothia定義規則に従って示されている。
いくつかの具体的な実施例において、前記BCMA抗体が1つのポリペプチド鎖を含み、前記ポリペプチド鎖は、SEQ ID NO: 330に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 331に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 332に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 333に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 334に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 335に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 336に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 337に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 338に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 339に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 340に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 341に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 342に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 343に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 344に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 345に示すアミノ酸配列を含む。
本発明は、全ヒト由来重鎖抗体及びその由来の単一ドメイン抗体を用いて構築された二価~多価の二重特異性又は多特異性結合タンパク質及びそのような結合タンパク質の作製及び使用方法を提供する。これは、従来のIgG抗体を用いて構築された二価~多価の二重特異性または多特異性結合タンパク質より多くの利点があり、特異性と結合価数の調整においてより便利であり;分子量が小さく、ポリペプチド鎖が少なく、構造がより簡単な多特異性結合タンパク質を構築することができる;また、異なる構造を利用して異なる生物学的機能を実現することができる。
図2. PD-L1×CTLA4二重抗体分子のhCTLA4-Hisタンパク質と結合する結合活性。
図3. PD-L1×CTLA4二重抗体分子のCHO-K1/hCTLA4細胞と結合する結合活性。
図4. PD-L1×CTLA4二重抗体分子のHEK293/hCTLA4細胞と結合する結合活性。
図5. PD-L1×CTLA4二重抗体分子がヒトCTLA4タンパク質とそのリガンドタンパク質B7-1との結合を遮断する活性。
図6. PD-L1×CTLA4二重抗体分子がCHO-K1/hCTLA4細胞とそのリガンドタンパク質B7-1との結合を遮断する活性。
図7. PD-L1×CTLA4二重抗体分子のhPDL1-Hisタンパク質と結合する結合活性。
図8. PD-L1×CTLA4二重抗体分子のCHO-K1/hPDL1細胞と結合する結合活性。
図9. PD-L1×CTLA4二重抗体分子のヒトPD-L1を高発現するMDA-MB-231細胞と結合する結合活性。
図10. PD-L1×CTLA4二重抗体分子がCHO-K1/hPDL1細胞とそのリガンドタンパク質 PD-1との結合を遮断する活性。
図11. PD-L1×CTLA4二重抗体分子はADCC効果によってCTLA4+標的細胞を殺傷する能力。
図12. IgG-VH構造のPD-L1×CTLA4二重抗体がSEB刺激実験においてT細胞を活性化する能力。
図13. Fab-HCAb構造のPD-L1×CTLA4二重抗体がSEB刺激実験においてT細胞を活性化する能力。
図14. SEB刺激実験において、VHがIgG HCまたはLCのN端にある場合、PD-L1×CTLA4二重抗体は対応モノクローナル抗体の1:1用量の組み合わせと相当ひいてはより強いT細胞を活性化する能力を有する。
図15. SEB刺激実験において、CTLA4端の活性は、IgG_HC-VH(VHがIgG HCのC端)及びFab-HCAb構造中では、IgGまたはHCAb双価構造中と比べて弱まり、それによってその用量に係る毒性を小さくすることができる。
図16. 混合リンパ球反応実験において、VHがIgG HCまたはLCのN端にある場合、PD-L1×CTLA4二重抗体は対応モノクローナル抗体の1:1用量の組み合わせより強いT細胞を活性化する能力を有する。
図17. 混合リンパ球反応実験において、VHがIgG HCまたはLCのC端にある場合、PD-L1×CTLA4二重抗体はPD-L1モノクローナル抗体より強いT細胞を活性化する能力を有する。
図18. HER2×CTLA4二重抗体分子のCHO-K1/hCTLA4細胞と結合する結合活性。
図19. HER2×CTLA4二重抗体分子がヒトCTLA4タンパク質とそのリガンドタンパク質B7-1との結合を遮断する活性。
図20. HER2×CTLA4二重抗体分子がCHO-K1/hCTLA4細胞とそのリガンドタンパク質B7-1との結合を遮断する活性。
図21. HER2×CTLA4二重抗体分子のSK-BR-3細胞と結合する結合活性。
図22. HER2×CTLA4二重抗体分子はADCC効果によってHER2+標的細胞を殺傷する能力。
図23. HER2×CTLA4二重抗体分子がHER2+標的細胞SK-BR-3増殖を抑制する能力。
図24. HER2×CTLA4二重抗体分子が同時にCTLA4+細胞及びHER2+細胞と結合する能力。
図25. HER2×CTLA4二重抗体分子がSEB刺激実験においてT細胞を活性化する能力。
図26. HER2×CTLA4二重抗体分子のマウス体内の薬物動態学。
図27. PD-L1×4-1BB二重抗体分子のCHO-K1/hPDL1細胞と結合する結合活性。
図28. 4-1BB抗体またはPD-L1×4-1BB二重抗体分子のCHO-K1/hu4-1BB細胞と結合する結合活性。
図29. PD-L1×4-1BB二重抗体分子のCHO-K1/cyno 4-1BB細胞と結合する結合活性。
図30. PD-L1×4-1BB二重抗体分子はCHO-K1/hPDL1細胞によってT細胞特異性活性化を媒介する。
図31. PD-L1×4-1BB二重抗体分子はMDA-MB-231細胞によってT細胞特異性活性化を媒介する。
図32. 混合リンパ球反応実験において、IgG-VH構造のPD-L1×4-1BB二重抗体分子はFIT-Ig構造の二重抗体分子より強いT細胞を活性化する能力を有する。
図33. 混合リンパ球反応実験において、IgG-VH構造及びFab-HCAb構造のPD-L1×4-1BB二重抗体分子はFIT-Ig構造の二重抗体分子より強いT細胞を活性化する能力を有する。
図34. PD-L1×4-1BB二重抗体分子のマウス体内の薬物動態学。
図35. B7H4×4-1BB二重抗体分子がSK-BR-3細胞と結合する結合活性。
図36. B7H4×4-1BB二重抗体分子のCHO-K1/hu4-1BB細胞と結合する結合活性。
図37. B7H4×4-1BB二重抗体分子はSK-BR-3T細胞によって特異性活性化を媒介する(INFγ放出)。
図38. B7H4×4-1BB二重抗体分子はSK-BR-3T細胞によって特異性活性化を媒介する(IL-2放出)。
図39. B7H4×4-1BB二重抗体分子のT細胞に対する活性化は特異的にB7H4の発現を依存する。
図40. B7H4×4-1BB二重抗体分子PR003334の血清安定性。
図41. B7H4×4-1BB二重抗体分子PR003335の血清安定性。
図42. B7H4×4-1BB二重抗体分子のマウス体内の薬物動態学。
図43. B7H4×4-1BB二重抗体分子のマウス腫瘍模型における抗腫瘍効果。
図44. BCMA HCAb抗体がHEK293T/hBCMA細胞と結合する結合活性。
図45. BCMA HCAb抗体がHEK293T/cynoBCMA細胞と結合する結合活性。
図46. BCMA HCAb抗体がNCI-H929細胞と結合する結合活性。
図47. BCMA HCAb抗体のHEK293T/hBCMA細胞に対する内在化能力。
図48. BCMA HCAb抗体がヒトBCMAと結合する親和性(BLI方法)。
図49. BCMA HCAb抗体PR001046由来の変異体分子がNCI-H929細胞と結合する結合活性。
図50. BCMA×CD3二重抗体分子のHEK293T/hBCMA細胞と結合する結合活性。
図51. BCMA×CD3二重抗体分子のHEK293T/cynoBCMA細胞と結合する結合活性。
図52. BCMA×CD3二重抗体分子のNCI-H929細胞と結合する結合活性。
図53. BCMA×CD3二重抗体分子がヒトT細胞と結合する結合活性。
図54. BCMA×CD3二重抗体分子がカニクイザルT細胞と結合する結合活性。
図55. scFv-Fc-VH(2)非対称構造のBCMA×CD3二重抗体分子のNCI-H929細胞を殺傷する能力。
図56. scFv-Fc-VH(1)非対称構造のBCMA×CD3二重抗体分子のNCI-H929細胞を殺傷する能力。
図57. Fab-Fc-VH(1)非対称構造のBCMA×CD3二重抗体分子のNCI-H929細胞を殺傷する能力。
図58. Fab-Fc-VH(2)非対称構造のBCMA×CD3二重抗体分子のNCI-H929細胞を殺傷する能力。
図59. BCMA×CD3二重抗体分子(PR001990, PR002309)はエフェクター細胞のNCI-H929細胞に対する特異性殺傷及びサイトカイン放出検出を媒介する。
図60. BCMA×CD3二重抗体分子(PR002895, PR002953, PR003178)はエフェクター細胞のNCI-H929細胞に対する特異性殺傷及びサイトカイン放出検出を媒介する。
図61. 可溶性APRILまたはBAFFのBCMA×CD3二重抗体分子が標的細胞を殺傷する効果に対する影響。
図62. 可溶性BCMAのBCMA×CD3二重抗体分子が標的細胞を殺傷する効果に対する影響。
図63. BCMA×CD3二重抗体分子のマウスまたはラット体内の薬物動態学。
図64. BCMA×CD3二重抗体分子のマウス腫瘍模型における抗腫瘍効果。
図65. 二重抗体分子が瞬時トランスフェクション発現及び一段階親和精製を経て得られたタンパク質サンプルのSDS-PAGE及びSEC-HPLCの分析結果。
図66. CD3抗体がヒトT細胞と結合する結合活性。
図67. PD-L1×CTLA4二重抗体分子のマウス腫瘍模型における抗腫瘍効果。
以下、実施例の形態により本発明をさらに説明するが、本発明を当該実施例の範囲に限定するものではない。実施例は、ベクター及びプラスミドを構築するための方法、タンパク質をコードする遺伝子をベクター及びプラスミドに挿入する方法、又はプラスミドを宿主細胞に導入する方法など、従来の方法の詳細な説明を含まない。このような方法は、当業者にとって周知であり、多くの出版物に記載されている。以下の実施例に具体的な条件が明記されていない実験方法は、従来の方法と条件に従って、または商品説明書に従って選択する。
本実施例は、全ヒト由来重鎖抗体(HCAb)及びその由来の単一ドメイン抗体(sdAb)を用いて構築され、Fcを含有し、対称又は非対称であり、多価及び多特異性結合タンパク質の構造をいくつか挙げた。いくつかの構造では、ドメインとドメインとの間に接続ペプチドを用いて結合する。いくつかの構造では、重鎖Fc領域には、Fc受容体との結合を調整し、さらに関連する効果機能または他の性能を調整するためにアミノ酸突然変異が導入される。いくつかの構造では、2つの重鎖のFc領域はそれぞれ異なるアミノ酸突然変異を導入して、重鎖ホモ二量化の形成を減少させる。
本発明は、2種類の親モノクローナル抗体を用いて二重特異性結合タンパク質を構築する方法を提供する:第1抗原を結合する従来の抗体Aと第2抗原を結合する重鎖抗体B。
構造(1)の結合タンパク質は両本の異なるポリペプチド鎖を含み:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、短鎖とも呼ばれ、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_A-CH1を含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、長鎖とも呼ばれ、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VL_A-CL-L1-VH_B-L2-CH2-CH3を含む。構造(1)において、抗体AのVL_A及び重鎖抗体BのVH_Bが同じ一つのポリペプチド鎖に融合し、それによってVL_A及びVH_Bの会合で発生するミスマッチ副生成物を回避することができる。
構造(2)の結合タンパク質は両本の異なるポリペプチド鎖を含み:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、短鎖とも呼ばれ、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VL_A-CLを含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、長鎖とも呼ばれ、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_A-CH1-L1-VH_B-L2-CH2-CH3を含む。
本発明は、2種類の親モノクローナル抗体を用いて二重特異性結合タンパク質を構築する方法を提供する:第1抗原を結合する従来の抗体Aと第2抗原を結合する重鎖抗体B。
構造(3)の結合タンパク質は両本の異なるポリペプチド鎖を含み:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、短鎖とも呼ばれ、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VL_A-CLを含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、長鎖とも呼ばれ、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_B-L-VH_A-CH1-h-CH2-CH3を含む。
構造(4)の結合タンパク質は両本の異なるポリペプチド鎖を含み:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、短鎖とも呼ばれ、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_B-L-VL_A-CLを含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、長鎖とも呼ばれ、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_A-CH1-h-CH2-CH3を含む。
構造(5)の結合タンパク質は両本の異なるポリペプチド鎖を含み:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、短鎖とも呼ばれ、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VL_A-CLを含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、長鎖とも呼ばれ、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_A-CH1-h-CH2-CH3-L-VH_Bを含む。
構造(6)の結合タンパク質は両本の異なるポリペプチド鎖を含み:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、短鎖とも呼ばれ、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VL_A-CL-L-VH_Bを含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、長鎖とも呼ばれ、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_A-CH1-h-CH2-CH3を含む。
本発明は、2種類の親モノクローナル抗体を用いて二重特異性結合タンパク質を構築する方法を提供する:第1抗原を結合する従来の抗体Aと第2抗原を結合する重鎖抗体B。
構造(7)は、両本の異なるポリペプチド鎖を含む二重特異性結合タンパク質を示し:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、短鎖とも呼ばれ、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VL_A-CLを含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、長鎖とも呼ばれ、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_A-CH1-h-CH2-CH3-L1-VH_B-L2-VH_Bを含む。
構造(8)は、両本の異なるポリペプチド鎖を含む三重特異性結合タンパク質を示し:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、短鎖とも呼ばれ、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VL_A-CLを含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、長鎖とも呼ばれ、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_A-CH1-h-CH2-CH3-L1-VH_B-L2-VH_Cを含む。
本発明は、2種類の親モノクローナル抗体を用いて二重特異性結合タンパク質を構築する方法を提供する:第1抗原を結合する従来の抗体Aと第2抗原を結合する重鎖抗体B。
構造(9)は、両本の異なるポリペプチド鎖を含む二重特異性結合タンパク質を示し:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、短鎖とも呼ばれ、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_B-L1-VL_A-CLを含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、長鎖とも呼ばれ、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_B-L2-VH_A-CH1-h-CH2-CH3を含む。
構造(10)は、両本の異なるポリペプチド鎖を含む三重特異性結合タンパク質を示し:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、短鎖とも呼ばれ、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_B-L1-VL_A-CLを含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、長鎖とも呼ばれ、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_C-L2-VH_A-CH1-h-CH2-CH3を含む。
本発明は、2種類の親モノクローナル抗体を用いて二重特異性結合タンパク質を構築する方法を提供する:第1抗原を結合する従来の抗体Aと第2抗原を結合する重鎖抗体B。
構造(11)の結合タンパク質は三本の異なるポリペプチド鎖を含み:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VL_A-CLを含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_A-CH1-h-CH2-CH3を含み;ポリペプチド鎖3は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_B-h-CH2-CH3を含む。
構造(12)の結合タンパク質は三本の異なるポリペプチド鎖を含み:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_A-CLを含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VL_A-CH1-h-CH2-CH3を含み;ポリペプチド鎖3は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_B-h-CH2-CH3を含む。
構造(13)の結合タンパク質は三本の異なるポリペプチド鎖を含み:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_A-CH1を含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VL_A-CL-h-CH2-CH3を含み;ポリペプチド鎖3または第三ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_B-h-CH2-CH3を含む。
本発明は、2種類の親モノクローナル抗体を用いて二重特異性結合タンパク質を構築する方法を提供する:第1抗原を結合する従来の抗体Aと第2抗原を結合する重鎖抗体B。
構造(14)は、三本の異なるポリペプチド鎖を含む二重特異性結合タンパク質を示し:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VL_A-CLを含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_A-CH1-h-CH2-CH3を含み;ポリペプチド鎖3または第三ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_B-L-VH_B-h-CH2-CH3を含む。
構造(15)は、三本の異なるポリペプチド鎖を含む三重特異性結合タンパク質を示し:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VL_A-CLを含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_A-CH1-h-CH2-CH3を含み;ポリペプチド鎖3または第三ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_C-L-VH_B-h-CH2-CH3を含む。
構造(16)は、三本の異なるポリペプチド鎖を含む二重特異性結合タンパク質を示し:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_A-CLを含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VL_A-CH1-h-CH2-CH3を含み;ポリペプチド鎖3または第三ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_B-L-VH_B-h-CH2-CH3を含む。
構造(17)は、三本の異なるポリペプチド鎖を含む三重特異性結合タンパク質を示し:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_A-CLを含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VL_A-CH1-h-CH2-CH3を含み;ポリペプチド鎖3または第三ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_C-L-VH_B-h-CH2-CH3を含む。
構造(18)は、三本の異なるポリペプチド鎖を含む二重特異性結合タンパク質を示し:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_A-CH1を含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VL_A-CL-h-CH2-CH3を含み;ポリペプチド鎖3または第三ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_B-L-VH_B-h-CH2-CH3を含む。
構造(19)は、三本の異なるポリペプチド鎖を含む三重特異性結合タンパク質を示し:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_A-CH1を含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VL_A-CL-h-CH2-CH3を含み;ポリペプチド鎖3または第三ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_C-L-VH_B-h-CH2-CH3を含む。
本発明は、2種類の親モノクローナル抗体を用いて二重特異性結合タンパク質を構築する方法を提供する:第1抗原を結合する従来の抗体Aと第2抗原を結合する重鎖抗体B。
構造(20)の結合タンパク質は両本の異なるポリペプチド鎖を含み:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VL_A-L-VH_A-h-CH2-CH3を含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_B-h-CH2-CH3を含む。
構造(21)の結合タンパク質は両本の異なるポリペプチド鎖を含み:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_A-L-VL_A-h-CH2-CH3を含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_B-h-CH2-CH3を含む。
本発明は、2種類の親モノクローナル抗体を用いて二重特異性結合タンパク質を構築する方法を提供する:第1抗原を結合する従来の抗体Aと第2抗原を結合する重鎖抗体B。
構造(22)は、両本の異なるポリペプチド鎖を含む二重特異性結合タンパク質を示し:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VL_A-L1-VH_A-h-CH2-CH3を含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_B-L2-VH_B-h-CH2-CH3を含む。
構造(23)は、両本の異なるポリペプチド鎖を含む二重特異性結合タンパク質を示し:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_A-L1-VL_A-h-CH2-CH3を含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_B-L2-VH_B-h-CH2-CH3を含む。
構造(24)は、両本の異なるポリペプチド鎖を含む三重特異性結合タンパク質を示し:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VL_A-L1-VH_A-h-CH2-CH3を含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_C-L2-VH_B-h-CH2-CH3を含む。
構造(25)は、両本の異なるポリペプチド鎖を含む三重特異性結合タンパク質を示し:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_A-L1-VL_A-h-CH2-CH3を含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_C-L2-VH_B-h-CH2-CH3を含む。
本発明は、2種類の親モノクローナル抗体を用いて二重特異性結合タンパク質を構築する方法を提供する:第1抗原を結合する従来の抗体Aと第2抗原を結合する重鎖抗体B。
構造(26)は、三本の異なるポリペプチド鎖を含む二重特異性結合タンパク質を示し:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VL_A-CLを含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_A-CH1-h-CH2-CH3を含み;ポリペプチド鎖3または第三ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_B-L1-VH_B-L2-VH_B-h-CH2-CH3を含む。
構造(27)は、三本の異なるポリペプチド鎖を含む四重特異性結合タンパク質を示し:ポリペプチド鎖1または第一ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VL_A-CLを含み;ポリペプチド鎖2または第二ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_A-CH1-h-CH2-CH3を含み;ポリペプチド鎖3または第三ポリペプチド鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、VH_D-L1-VH_C-L2-VH_B-h-CH2-CH3を含む。
実施例2.1.抗体の配列分析及び最適化
抗体の重鎖可変ドメイン配列は、染色体上の重鎖遺伝子群の胚系遺伝子V、D、J遺伝子フラグメントの遺伝子組み換えと体細胞の高周波突然変異などの事象に由来する;軽鎖可変ドメイン配列は、軽鎖遺伝子群の胚系遺伝子V、J遺伝子フラグメントの遺伝子組み換え、体細胞の高周波突然変異などの事象に由来する。遺伝子組み換えと体細胞の高周波突然変異は、抗体の多様性を増加させる主要な要素である。同じ胚系V遺伝子フラグメントに由来する抗体も異なる配列を産生する可能性があるが、全体的に類似性が高い。IMGT/DomainGapAlign(http://imgt.org/3Dstructure-DB/cgi/DomainGapAlign.cgi)またはNCBI/IgBLAST(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/)などの計算方法により、抗体の可変ドメイン配列から遺伝子組み換えが発生した場合に可能な胚系遺伝子フラグメントを推定することができる。
本実施例は、哺乳動物宿主細胞(例えば、ヒト胚腎細胞HEK293またはチャイニーズハムスター卵巣細胞CHO及びその誘導細胞)、瞬時トランスフェクション発現及びアフィニティー捕獲分離などの技術を用いて抗体を作製する一般的な方法を紹介した。本方法は、Fc領域を含む標的抗体に適用する;標的抗体は、1つ以上のタンパク質ポリペプチド鎖から構成することができ;1つ以上の発現プラスミドに由来することができる。
本実施例は、分析型分子サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)を用いてタンパク質サンプルの純度及び多量体形態を分析した。分析型カラムTSKgel G3000SWxl(Tosoh Bioscience,##08541,5μm,7.8mm×30cm)を高圧液体クロマトグラフィーHPLC(Agilent Technologies,Agilent 1260 Infinity II)に接続し、PBS緩衝液を用いて室温で少なくとも1時間平衡させる。適量のタンパク質サンプル(少なくとも10μg)を0.22μm濾過膜で濾過してシステムに注入し、HPLCプログラムを設定する:PBS緩衝液でサンプルを1.0ml/分の流速でカラムを流し、最長時間は25分である。HPLCは、分析報告書を生成し、サンプル内の異なる分子サイズ成分の滞留時間を報告する。
示差走査蛍光法(Differential Scanning Fluorimetry、DSF)は、タンパク質の熱安定性を測定するための一般的な高フラックス法である。当該方法は、リアルタイム蛍光定量PCR装置を用いて、折り畳みが解除されたタンパク質分子と結合した染料の蛍光強度の変化を監視することにより、タンパク質の変性の過程を反映し、さらにタンパク質分子の熱安定性を反映する。本実施例は、DSF法を用いてタンパク質分子の熱変性温度(Tm)を測定した。10μgタンパク質を96-ウェルPCRプレート(Thermo,#AB-0700/W)に添加し、続いて2μLの100×希釈された染料SYPROTM(Invitrogen,#2008138)を添加し、最終体積がウェルあたり40μlになるように緩衝液を添加した。PCRプレートを密封し、リアルタイム蛍光定量PCR装置(Bio-Rad CFX 96 PCR System)に置き、25℃で5分間インキュベートした後、0.2℃/0.2分の勾配で25℃から95℃に徐々に昇温し、試験終了時に温度を25℃に下げた。FRETスキャンモードを使用し、Bio-Rad CFX Maestroソフトウェアを使用してデータ分析を行い、サンプルのTmを算出した。
Uncle(Unchained Labs)は、全蛍光、静止光散乱(SLS)、及び動的光分散(DLS)検出法によりタンパク質の安定性を特徴付ける多機能ワンストップタンパク質安定性解析プラットフォームである。同じ群のサンプルは、同時に溶解温度(Tm)、凝集温度(Tagg)と粒径(diameter)などのパラメータを得ることができる。本実施例では、Uncleの「Tm&Tagg with optional DLS」アプリケーションを選択して操作し、9μLサンプルをUniチューブに加え、0.3℃/分の勾配で25℃から95℃に徐々に昇温するように設定した。初期及び最終DLS測定を5秒ずつ4回採取した。実験実行終了後、Uncle分析ソフトウェアは重心平均値(BCM)公式を用いて各サンプルのTm値を計算し;Tagg値は、266nmまたは473nmの波長におけるSLSの蛍光強度の曲線(凝集曲線)によって計算され;サンプルの粒径と分散度はDLSに関する関数で計算した。
実施例3.1.背景
プログラム死受容体1(programmed death 1、PD-1)は、主にT細胞などの免疫細胞に発現し、2つのリガンド、すなわちプログラム死リガンド-1(programmed death ligand 1、PD-L1)とPD-L2を有する。PD‐L1は、主に抗原提示細胞及び複数の腫瘍細胞に発現される。PD‐L1とPD‐1の相互作用は、T細胞の活性を低下させ、サイトカインの分泌を弱め、免疫抑制作用を果たす。多くのヒト腫瘍組織においてPD‐L1タンパク質の発現が検出され、腫瘍部位のミクロ環境は腫瘍細胞上のPD‐L1の発現を誘導でき、発現されたPD‐L1は腫瘍の発生と成長に有利であり、抗腫瘍T細胞のアポトーシスを誘導し、さらに腫瘍細胞を保護して免疫攻撃から逃れる。PD-1/PD-L1経路阻害剤は、PD-1とPD-L1の結合を遮断し、負方向制御信号を遮断し、T細胞を活性化させ、腫瘍細胞を殺傷する作用を発揮し、さらに腫瘍の成長を抑制することができるため、PD-1/PD-L1を標的とする免疫調節は腫瘍抑制に重要な意義がある。
実施例3.2.1.抗PD-L1の全ヒト由来IgG抗体の獲得
Harbour H2L2マウス(Harbour Antibodies BV)は、ヒト免疫グロブリン免疫ライブラリを持つトランスジェニックマウスであり、その産生抗体は完全なヒト抗体可変ドメインとラット定常ドメインを有する。
Harbour HCAbマウス(Harbour Antibodies BV、WO2010/109165A2)は、ヒト免疫グロブリン免疫ライブラリを持つトランスジェニックマウスであり、従来のIgG抗体の半分の大きさしかない重鎖のみからなる抗体を産生することができる。その産生抗体は、ヒトの抗体重鎖可変ドメインとマウスFc定常ドメインのみを有する。
本実施例は、抗PD‐L1のIgG抗体PR000070またはPR000265の抗原結合ドメインFabと、抗CTLA4のHCAb抗体PR000184の抗原結合ドメインVHを用いて、多種類の構造の抗PD‐L1×CTLA4二重特異性抗体分子を構築した。
抗PD‐L1のIgG抗体と抗CTLA4の重鎖抗体を用いて、実施例1.1に記載の構造に従ってFab‐HCAb対称構造のPD‐L1×CTLA4二重抗体分子を設計し、表3‐1にまとめた。そして、実施例2に記載の方法に従って、抗体分子サンプルを作製し、分析を行い、表3‐2にまとめた。
抗PD‐L1のIgG抗体と抗CTLA4の重鎖抗体を用いて、実施例1.2に記載の構造に従ってIgG‐VH四価対称構造のPD‐L1×CTLA4二重抗体分子を設計し、表33にまとめた。そして、実施例2に記載の方法に従って抗体分子サンプルを作製し、分析を行い、表34にまとめた。
抗PD‐L1のIgG抗体と抗CTLA4の重鎖抗体を用いて、実施例1.4に記載の構造に従って2xVH‐IgG六価対称構造のPD‐L1×CTLA4二重抗体分子を設計し、表35にまとめた。そして、実施例2に記載の方法に従って抗体分子サンプルを作製し、分析を行い、表36にまとめた。
抗PD‐L1のIgG抗体と抗CTLA4の重鎖抗体を用いて、実施例1.4に記載の構造に従ってFab‐FC‐VH二価非対称構造のPD‐L1×CTLA4二重抗体分子を設計し、表37にまとめた。そして、実施例2に記載の方法に従って抗体分子サンプルを作製し、分析を行い、表38にまとめた。
表3‐9、表3‐10及び表3‐11は、本実施例によって構築されたPD‐L1×CTLA4二重抗体分子及び対応するPD‐L1モノクローナル抗体、CTLA4モノクローナル抗体などの親モノクローナル抗体分子及び対照分子の配列に対応する配列番号を示す。表3‐11中の構造番号は、表1‐1及び図1に対応する。表3‐12は、二重特異性抗体分子の第1及び第2抗原結合ドメインに対応するCDR配列の配列番号を示す。
本実施例は、PD‐L1×CTLA4二重抗体分子がCTLA4と結合する活性を研究するためである。
抗体分子がヒトCTLA4組換えタンパク質に結合する能力を、酵素結合免疫吸着反応ELISAを用いて試験した。具体的には、まず2μg/mLのヒトCTLA4-Hisタンパク質(ACRO Biosystems,#CT 4-H5229)を96ウェルプレートに100μL/ウェルで包み、4℃で一晩過ごした。その後、PBST緩衝液(0.05%Tween-20を含むPBS緩衝液)で3回すすぎ、次いで閉鎖液(5%脱脂粉乳を含むPBS緩衝液)を加えて37℃で1時間インキュベートした。次にPBST緩衝液で3回すすぐ。その後、最高最終濃度30nMの5倍の濃度勾配で希釈した抗体分子を100μL/ウェルで加え、合計8つの濃度があり、均一に混合し、37℃で1時間インキュベートした;hIgG1 iso(CrownBio,#C0001)を同型対照とした。次にPBST緩衝液で3回すすぐ。その後、HRP標識ヤギ抗ヒトIgG Fc二次抗体(Sigma,#A0170,1:5000希釈)を100μL/ウェルで加え、37℃で0.5時間インキュベートした。次にPBST緩衝液で3回すすぐ。その後、TMB発色液を100μL/ウェルで加えて15分間反応させた。最後に終止液を加えて反応を中止した。Enspire(登録商標)マルチファンクションリーダ(Perkin Elmer,Inc.)で450nMで光吸収値(OD値)を読み取る。アプリケーションソフトウェアGraphPad Prism 8でデータ処理と作図分析を行い、4パラメータ非線形フィッティングにより結合曲線やEC50値などのパラメータを得る。
抗体分子の、ヒトCTLA4を高発現するCHO-K1細胞株CHO-K1/hCTLA4(KYINNO、KC-1406)またはヒトCTLA4を高発現するHEK293T細胞株HEK293/hCTLA4(KYINNO、KC-0209)などの細胞と結合する能力について、フローサイトメトリーFACSを用いて試験した。具体的には、CHO-K1/hCTLA4とHEK293/hCTLA4細胞を消化し、それぞれF12K培地とDMEM培地で再懸濁する;細胞密度を1×106細胞/mLに調整した。次いで細胞を96ウェルVプレート(Corning,#3894)に100μL/ウェルで播種し、4℃で5分間遠心分離し、上清を廃棄した。その後、勾配希釈された抗体分子を100μL/ウェルで96ウェルプレートに添加し、均一に混合し、抗体分子が最高最終濃度300nMから5倍濃度勾配で希釈された合計8つの濃度、または最高最終濃度100nMから4倍濃度勾配で希釈された合計8つの濃度に希釈し;hIgG1 iso(CrownBio,#C0001)を同型対照とした。細胞を4℃に置き、遮光して1時間インキュベートした。その後、100μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液(0.5%BSA含有PBS緩衝液)を加えて細胞を2回すすぎ、4℃で500gで5分間遠心分離し、上清を廃棄した。次に、さらに100μL/ウェルで蛍光二次抗体(Alexa Fluor 488 anti-human IgGFc、Biolegend、#409322、1:1000希釈)を加え、4℃に放置し、1時間遮光して培養した。その後、200μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液を加えて細胞を2回すすぎ、その後4℃で500gで5分間遠心分離し、上清を廃棄した。最後に、200μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液を添加し、細胞を再懸濁した。BD FACS CANTOIIフローサイトメータまたはACEA NovoCyteフローサイトメータを用いて蛍光発光信号値を読み取り、ソフトウェアFlowJov 10(FlowJo,LLC)を用いてデータを処理し分析した。ソフトウェアGraphPad Prism 8を用いてデータ処理と作図分析を行い、4パラメータの非線形フィッティングにより、抗体の標的細胞に対する結合曲線及びEC50値などのパラメータを得た。
本実施例は、PD‐L1×CTLA4二重抗体分子がCTLA4とそのリガンドB7‐1/CD80との結合を抑制する活性を研究するためである。
抗体分子がヒトCTLA4タンパク質とそのリガンドB7‐1/CD80との結合を抑制する活性を酵素結合免疫吸着反応ELISAを用いて測定した。具体的には、まず2μg/mLのタンパク質ヒトB7‐1‐Fc(ACRO Biosystems,#B71‐H5259)を96ウェルプレートに100μL/ウェルで包み、4℃で一晩過ごした。その後、PBST緩衝液(0.05%Tween-20を含むPBS緩衝液)で3回すすぎ、次いで閉鎖液(5%脱脂粉乳を含むPBS緩衝液)を加えて37℃で1時間インキュベートした。その後、最高最終濃度180nMの4倍の濃度勾配で希釈した抗体分子を90μL/ウェルで加え、合計7つの濃度があり、均一に混合し、37℃で20分間インキュベートした;hIgG1 iso(CrownBio,#C0001)を同型対照とした。その後、ビオチン化ヒトCTLA4-Fcタンパク質(ACRO Biosystems、#CT4-H82F3)を10μL/ウェルで添加し、その最終濃度を0.25μg/mlとし、37℃で1時間インキュベートした。次にPBST緩衝液で3回すすぐ。次に100μL/ウェルで標識Precision Protein(登録商標) StrepTactin-HRP Conjugate(Bio-RAD、#1610380、1:4000希釈)を追加し、37℃で0.5時間インキュベートした。次にPBST緩衝液で3回すすぐ。その後、TMB発色液を100μL/ウェルで加えて15分間反応させた。最後に終止液を加えて反応を中止した。Enspire(登録商標) マルチファンクションリーダ(Perkin Elmer,Inc.)で490nMで光吸収値(OD値)を読み取る。アプリケーションソフトウェアGraphPad Prism 8でデータ処理と作図分析を行い、OD値を抑制率に変換し、4パラメータの非線形フィッティングにより、抑制曲線、IC50値と最大抑制率などのパラメータを得る。
抗体分子がCTLA4を発現する細胞とそのリガンドB7‐1/CD80との結合を抑制する活性を、フローサイトメトリーFACSを用いて測定した。具体的には、ヒトCTLA4を高発現するCHO‐K1細胞株CHO‐K1/hCTLA4(KYINNO、KC‐1406)を消化し、F12K培地で再懸濁した。細胞密度を1×106細胞/mLに調整し、FACS緩衝液(2%FBS含有PBS緩衝液)中に37℃で15分間放置した。FACS緩衝液を200μL/ウェルで96ウェルプレートに加えて閉鎖し、37℃で1時間インキュベートした後、ウェル内の閉鎖液を廃棄した。次いで、CHO‐K1/hCTLA4細胞を96ウェルプレート(2×105細胞/ウェル)に200μL/ウェルで播種し、500gの回転速度で4℃で5分間遠心分離し、上清を廃棄した。その後、勾配希釈された抗体分子を100μL/ウェルで96ウェルプレートに添加し、均一に混合し、抗体分子は最高最終濃度200nMから3倍濃度勾配で希釈された合計8つの濃度、または最高最終濃度400nMから5倍濃度勾配で希釈された合計8つの濃度に希釈し;hIgG1 iso(CrownBio,#C0001)を同型対照とした。次に、1μg/mLのビオチン化リガンドタンパク質ヒトB7-1-Fc(ACRO Biosystems、#B71-H82F2)を100μL/ウェルで96ウェルプレートに加え、均一に混合した。96ウェルプレートを4℃に置き、遮光して1.5時間インキュベートした。その後、200μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液を加えて細胞を2回すすぎ、4℃で500gで5分間遠心分離し、上清を廃棄した。次に100μL/ウェルで蛍光標識(Streptavidin,Alexa Fluor(登録商標) 488 conjugate,Thermo,#S11223,1:500希釈)を添加し、4℃に放置し、遮光して1時間インキュベートした。その後、200μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液を加えて細胞を3回すすぎ、4℃で500gで5分間遠心分離し、上清を廃棄した。最後に、200μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液を添加して、細胞を再懸濁した。BD FACS CANTOIIフローサイトメータまたはACEA NovoCyteフローサイトメータを用いて蛍光発光信号値を読み取り、ソフトウェアFlowJov 10(FlowJo,LLC)を用いてデータを処理し分析した。ソフトウェアGraphPad Prism 8を用いてデータ処理と作図分析を行い、蛍光信号値MFIを抑制率に変換し、4パラメータの非線形フィッティングにより、抑制曲線、IC50値と最大抑制率などのパラメータを得た。
本実施例は、ヒトCTLA4を高発現する細胞293F‐hCTLA4(CHEMPARTNER)に対するPD‐L1×CTLA4二重抗体分子の抗体依存性の細胞媒介の細胞毒性(ADCC)を調べることである。第一段階に、標的細胞をDELFIA BATDA(Perkin Elmer,#C136‐100)で標識する。具体的な標識方法は以下の通りである:1×106標的細胞を2μL DELFIA BATDA試薬で標識した;37℃で、CO2培養箱中で20分間インキュベートした;PBSで4回洗浄し、1000rpmで5分間遠心分離した。最後の洗浄後、沈殿物を完全培地に再懸濁し、細胞密度を1×105/mlに調整した。第二段階に、標識された標的細胞を96ウェルプレート(Corning,#3599)に100μL/ウェルで播種し、その後、最高最終濃度0.8nMの5倍濃度勾配で希釈した抗体分子を50μL/ウェルで加え、合計7つの濃度があり、均一に混合した;hIgG1 iso(CrownBio,#C0001)を同型対照とし、37℃、5%CO2培養箱中で10分間インキュベートした。第三段階に、NK-92 MI/CD16a細胞(CHEMPARTNER)をエフェクター細胞として収集し、NK-92 MI/CD16a細胞密度を6×105/mlに調整する。次いで、50μL/ウェルで96ウェルプレートに添加し、エフェクター細胞:標的細胞=3:1である。次いで、37℃、5%CO2培養箱中で2時間インキュベートした。第四段階に、500gで5分間遠心分離し、各ウェルから25μL上清を取って新しい96ウェル検出プレートに加えた。続いて200μL/ウェルでDELFIA(登録商標) Europium溶液(Perkin Elmer,#C135‐100)を添加し、室温でプレートを250rpmで15分間揺動した。最後に、EnVision(登録商標)2015マルチファンクションリーダ(Perkin Elmer,Inc.)で蛍光値を測定した。
殺傷率(%)=(ER-ETSR)/(TMR-ETSR)*100%
ここで、次の操作を行う。
ER=実験ウェル(抗体+エフェクター細胞+標的細胞)、ETSR=標的細胞とエフェクター細胞を混合した自発放出ウェル(エフェクター細胞+標的細胞)、TMR=標的細胞最大放出ウェル(標的細胞+溶解液)
ソフトウェアGraphPad Prism 8を用いてデータ処理と作図分析を行い、4パラメータの非線形フィッティングにより、抗体の標的細胞に対する殺傷率曲線とEC50及び最大殺傷率などのパラメータを得た。
本実施例は、PD‐L1×CTLA4二重抗体分子がPD‐L1を結合する活性を研究するためである。
抗体分子がヒトPD‐L1組換えタンパク質に結合する能力を、酵素結合免疫吸着反応ELISAを用いて試験した。具体的には、まず2μg/mLのヒトPD‐L1‐Hisタンパク質(ACRO Biosystems,#PD1‐H5229)を96ウェルプレート(Corning,#9018)に100μL/ウェルで包み、4℃で一晩過ごした。その後、PBST緩衝液(0.05%Tween‐20を含むPBS緩衝液)で3回すすぎ、次いで2%BSAを含む閉鎖液を加え、37℃で1時間インキュベートした。閉鎖液を捨て、PBST緩衝液で3回すすぐ。その後、最高最終濃度30nMの5倍の濃度勾配で希釈した抗体分子を100μL/ウェルで加え、8つの濃度があり、均一に混合し、37℃で1時間インキュベートした;hIgG1 iso(CrownBio,#C0001)を同型対照とした。次にPBST緩衝液で3回すすぐ。その後、HRP標識ヤギ抗ヒトIgG Fc二次抗体(Sigma,#A0170,1:5000希釈)を100μL/ウェルで加え、37℃で0.5時間インキュベートした。次にPBST緩衝液で3回すすぐ。その後、TMB発色液を100μL/ウェルで加えて15分間反応させた。最後に終止液を加えて反応を中止した。Enspire(登録商標) マルチファンクションリーダ(PerkinElmer,Inc.)で450nMで光吸収値(OD値)を読み取る。
抗体分子の、ヒトPD‐L1を高発現するCHO‐K1細胞株CHO‐K1/hPDL1(GENSCRIPT、M00543)またはヒトPD‐L1を高発現する腫瘍細胞系MDA‐MB‐231(ATCC、HTB‐26)などの細胞との結合能力について、フローサイトメトリー細胞法FACSを用いて試験した。具体的には、細胞を消化し、完全培地で再懸濁する;細胞密度を1×106細胞/mLに調整した。次いで細胞を96ウェルVプレート(Corning,#3894)に100μL/ウェルで播種し、4℃で5分間遠心分離し、上清を廃棄した。その後、勾配希釈された抗体分子を100μL/ウェルで96ウェルプレートに添加し、均一に混合し、抗体分子は最高最終濃度60nMから5倍濃度勾配で希釈された合計8つの濃度、または最高最終濃度300nMから5倍濃度勾配で希釈された合計8つの濃度、または最高最終濃度100nMから4倍濃度勾配で希釈された合計8つの濃度に希釈し;hIgG1 iso(CrownBio,#C0001)を同型対照とした。細胞を4℃に置き、遮光して1時間インキュベートした。その後、100μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液(0.5%BSA含有PBS緩衝液)を加えて細胞を2回すすぎ、4℃で500gで5分間遠心分離し、上清を廃棄した。次に、さらに100μL/ウェルで蛍光二次抗体(Goat human lgG(H+L)Alexa Fluor 488 conjunction,Thermo,#A11013,1:1000希釈)を加え、4℃に放置し、遮光して1時間インキュベートした。その後、200μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液を加えて細胞を2回すすぎ、その後4℃で500gで5分間遠心分離し、上清を廃棄した。最後に、200μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液を添加して、細胞を再懸濁した。BD FACS CANTOIIフローサイトメータまたはACEA NovoCyteフローサイトメータを用いて蛍光発光信号値を読み取り、ソフトウェアFlowJov 10(FlowJo,LLC)を用いてデータを処理し分析した。ソフトウェアGraphPad Prism 8を用いてデータ処理と作図分析を行い、4パラメータの非線形フィッティングにより、抗体の標的細胞に対する結合曲線及びEC50値などのパラメータを得た。
本実施例は、PD‐L1×CTLA4二重抗体分子がPD‐L1とそのリガンドPD‐1との結合を抑制する活性を研究するためである。
抗体分子がPD‐L1を発現する細胞とそのリガンドPD‐1との結合を抑制する活性を、フローサイトメトリーFACSを用いて測定した。具体的には、ヒトPD‐L1を高発現するCHO‐K1細胞株CHO‐K1/hPDL1(GENSCRIPT、M00543)を消化し、F12K培地で再懸濁し、細胞密度を2×106細胞/mLに調整し、37℃で15分間FACS緩衝液(1%BSAを含むPBS緩衝液)中に置いた。閉鎖緩衝液を200μL/ウェルで96ウェルプレートに添加し、37℃で1時間インキュベートした後、ウェル内の閉鎖液を廃棄した。次いで、CHO‐K1/hPDL1細胞を96ウェルプレート(1×105細胞/ウェル)に50μL/ウェルで播種した。その後、勾配希釈された抗体分子を100μL/ウェルで96ウェルプレートに添加し、均一に混合し、抗体分子は最高最終濃度100nMから5倍濃度勾配で希釈された合計8つの濃度で希釈することができ、hIgG1 iso(CrownBio,#C0001)を同型対照とした。4℃に放置し、遮光して0.5時間インキュベートした。その後、PBS緩衝液を100μL/ウェルで添加し、500gの回転速度で4℃で5分間遠心分離し、上清を廃棄した。次に、1μg/mL濃度のビオチン化リガンドタンパク質ヒトPD-1タンパク(ACRO Biosystems、#PD 1-H82F2)を50μL/ウェルで96ウェルプレートに加え、均一に混合した。96ウェルプレートを4℃に置き、遮光して0.5時間インキュベートした。その後、100μL/ウェルで予冷のPBS緩衝液を加えて細胞を2回すすぎ、その後4℃で500gで5分間遠心分離し、上清を廃棄した。次に100μL/ウェルで蛍光二次抗体(PE Streptavidin,BD Biosciences,#554061,1:200希釈)を加え、4℃に放置し、遮光して0.5時間インキュベートした。その後、200μL/ウェルで予冷のPBS緩衝液を加えて細胞を2回すすぎ、その後4℃で500gで5分間遠心分離し、上清を廃棄した。最後に、200μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液を添加して、細胞を再懸濁した。BD FACS CANTOIIフローサイトメータまたはACEA NovoCyteフローサイトメータを用いて蛍光発光信号値を読み取り、ソフトウェアFlowJov 10(FlowJo,LLC)を用いてデータを処理し分析した。ソフトウェアGraphPad Prism 8を用いてデータ処理と作図分析を行い、蛍光信号値MFIを抑制率に変換し、4パラメータの非線形フィッティングにより、抑制曲線、IC50値と最大抑制率などのパラメータを得た。
本実施例は、PD‐L1×CTLA4二重抗体分子の外周血単一核細胞PBMCに対する活性化作用を研究するためである。第一段階に、分離されたヒトPBMC(MT‐BIO)細胞を100μL/ウェル(1×105細胞/ウェル)で96ウェルプレート(Corning,#3799)に添加し、その後、100μL/ウェルで異なる濃度の抗体分子を添加し、抗体の最終濃度は(100nM、10nM、1nM、0.1nM、0.01nM)であってもよく、または2つの抗体を特定の割合で混合し、2つの複合ウェルに添加してもよい。hIgG1 iso(CrownBio,#C0001)を同型対照とした。37℃で30分間インキュベートした。次に超抗原Staphylococcal enterotoxin B(SEB)を50μL/ウェルで加え、最終濃度を100ng/mLまたは10ng/mLとした。37℃に置き、5%CO2培養箱中で96時間または120時間インキュベート後に上清を回収した。第二段階に、上清を収集してIL-2 ELISAキット(Biolegend,#431805)を用いて上清中のIL-2濃度を検出し、操作方法はキットの説明書を参照してください。アプリケーションソフトウェアGraphPad Prism 8で、データ処理と作図分析を行う。
本実施例は、混合リンパ球反応(MLR)を用いてPD‐L1×CTLA4二重抗体分子のT細胞に対する活性化作用を研究する。第一段階に、第一ドナーPBMC細胞(MT-BIO)に組換えヒト由来インターロイキン4(IL-4、R&D Systems、#204-GMP)と組換えヒト由来GM-CSF(R&D Systems、#215-GM)を添加し、6日間誘導した後、未成熟ヒトCD14+樹状細胞(iDC細胞)を得た。続いて、1μg/mlのリポ多糖Lipopololysaccharide(LPS、Sigma、#L2630)を添加し、24時間誘導した後、成熟樹状細胞(mDC細胞)を得た。第二段階に、T細胞分離キット(StemCell,#17951)を用いて第2ドナーPBMC細胞(MT-BIO)からTリンパ細胞を分離した。第三段階に、得られたT細胞とmDC細胞を96ウェルプレートに10:1の割合で播種した(1×105/ウェルのT細胞と1×104/ウェルのmDC細胞)。その後、100μL/ウェルで異なる濃度の抗体分子を添加し、抗体の最終濃度は(100nM、10nM、1nM、0.1nM、0nM)であってもよく、または2つの抗体を特定の割合で混合し、2つの複合ウェルに添加してもよい。hIgG1 iso(CrownBio,#C0001)を同型対照とした。37℃、5%CO2培養箱で5日間インキュベートした。第四段階に、それぞれ3日目と5日目の上清を収集し、IL-2 ELISAキット(Thermo,#88-7025-88)で3日目の上清中のIL-2濃度を検出し、IFN-γ ELISAキット(Thermo,#88-7316-88)で5日目の上清中のIFN-γ濃度を検出した。
本研究は、PD-L1×CTLA4抗体の体内抗腫瘍薬効を評価するために、6-8週齢雌性B6-PD1/CTLA4トランスジェニックマウスを用い、MC38-hPDL1細胞(MC38細胞上でヒトPD-L1を過発現する)を皮下接種し、腫瘍平均値が約100mm3に達すると、腫瘍マウスを腫瘍体積でグループ化し、そして特定濃度のPBSで希釈された抗体薬物を特定の用量と頻度で腹腔注射(i.p.)方式で投与した。本実施例で用いた投与スキーム:週2回、合計8回(BIWx4weeks)投与した。試験はPBSを空白対照群とし、二重抗体投与群は3mg/kgのPR001573であり、併用投与群は3mg/kgのipilimummabに3mg/kgのatezolizumabを加えた。腫瘍接種後6、9、12、15、19、22、26、29、33日目に腫瘍体積とマウス体重を測定した。
本実施例は、抗PD‐L1のIgG抗体の抗原結合ドメインFabと抗CTLA4のHCAb抗体の抗原結合ドメインVHを用いて、多種類の構造の抗PD‐L1×CTLA4二重特異性抗体分子を構築した。HCAbに基づいて二重特異性抗体分子構造を構築するフレキシビリティを示し、異なる構造タイプ、相対位置、結合価数などのパラメータを通じてPD-L1端とCTLA4端の機能活性を調節し、さらに異なる活性組み合わせを設計し、異なる臨床併用用量の組み合わせの需要を満たす。
実施例4.1. 背景
細胞毒性Tリンパ球関連抗原4(CTLA4)はT細胞上で発現する負の調節因子であり、抗原提示細胞上のCD80またはCD86と結合した後、CD28の共刺激信号を遮断すると同時に、T細胞の活性を低下させ、免疫抑制作用を果たす。CTLA4媒介の抑制機序はしばしば腫瘍細胞が免疫系から逃れる原因の一つとなる。CTLA4とそのリガンドとの相互作用を遮断することでT細胞の活性を回復し、抗腫瘍能力を増強することができる。Ipilimumabモノクローナル抗体(商品名Yervoy(登録商標))は初めて市販された抗CTLA4モノクローナル抗体薬であり、腫瘍免疫治療時代を切り開く最初の製品でもある。Ipilimumabは末期メラノーマの治療に比較的に良い治療効果を示したが、Ipilimumabが比較的に高い免疫関連副反応をもたらし、その関連する3-5級副作用の発生率は50%にも達し、これはその臨床応用に深刻な影響を与えた。Ipilimumabが示す毒副作用の大部分はCTLA4標的に関連しており、現在のPD-1/PD-L1抑制剤とCTLA4抑制剤の併用投与スキームでは、CTLA4抑制剤はIpilimumabまたはTremelimummabにかかわらず通常より低用量を選択している。
本実施例は、対応するアミノ酸配列がIMGTデータベースに由来する抗HER2のIgG抗体trastuzumab及びpertuzumabを使用し、表4‐11に示す。
本実施例は、抗HER2のIgG抗体PR000210(trastuzumamab類似体)またはPR000672(pertuzumamab類似体)の抗原結合ドメインFabと、抗CTLA4のHCAb抗体PR000184の抗原結合ドメインVHを用いて、多様な構造の抗HER2×CTLA4二重特異性抗体分子を構築する。
抗HER2のIgG抗体と抗CTLA4の重鎖抗体を用いて、実施例1.1に記載の構造に従ってFab-HCAb対称構造のHER2×CTLA4二重抗体分子を設計し、表4‐1にまとめた。そして、実施例2に記載の方法に従って抗体分子サンプルを作製し、分析を行い、表4‐2にまとめた。
抗HER2のIgG抗体と抗CTLA4の重鎖抗体を用いて、実施例1.2に記載の構造に従ってIgG-VH四価対称構造のHER2×CTLA4二重抗体分子を設計し、表4‐3にまとめた。そして、実施例2に記載の方法に従って抗体分子サンプルを作製し、分析を行い、表44にまとめた。
抗HER2のIgG抗体と抗CTLA4の重鎖抗体を用いて、実施例1.3に記載の構造に従ってIgG-VH(2)六価対称構造のHER2×CTLA4二重抗体分子を設計し、表4‐5にまとめた。そして、実施例2に記載の方法に従って抗体分子サンプルを作製し、分析を行い、表4‐6にまとめた。
抗HER2のIgG抗体と抗CTLA4の重鎖抗体を用いて、実施例1.4に記載の構造に従って2xVH‐IgG六価対称構造のHER2×CTLA4二重抗体分子を設計し、表47にまとめた。そして、実施例2に記載の方法に従って抗体分子サンプルを作製し、分析を行い、表48にまとめた。
抗HER2のIgG抗体と抗CTLA4の重鎖抗体を用いて、実施例1.5と実施例1.6に記載の構造に従ってFab‐Fc‐VH(n,n={1,2})非対称構造のHER2×CTLA4二重抗体分子を設計し、表49にまとめた。そして、実施例2に記載の方法に従って抗体分子サンプルを作製し、分析を行い、表4‐10にまとめた。
表4‐11、表4‐12及び表4‐13は、本実施例によって構築されたHER2×CTLA4二重抗体分子及び対応するHER2モノクローナル抗体、CTLA4モノクローナル抗体等の親モノクローナル抗体分子及び対照分子の配列に対応する配列番号を示す。表4‐13中の構造番号は、表1‐1及び図1に対応する。表4‐14は、二重特異性抗体分子の第1及び第2抗原結合ドメインに対応するCDR配列の配列番号を示す。
本実施例は、HER2×CTLA4二重抗体分子がCTLA4と結合する活性を研究するためである。
抗体分子の、ヒトCTLA4を高発現するCHO-K1細胞株CHO-K1/hCTLA4(CHEMPARTNER)などの細胞との結合能力について、フローサイトメトリーFACSを用いて試験した。具体的には、CHO‐K1/hCTLA4細胞を消化し、F12K培地を用いて再懸濁する;細胞密度を2×106細胞/mLに調整した。次に、CHO-K1/hCTLA4細胞を96ウェルVプレート(Corning,#3894)に100μL/ウェルで播種し、4℃で5分間遠心分離し、上清を廃棄した。その後、勾配希釈された抗体分子を100μL/ウェルで96ウェルプレートに添加し、均一に混合し、抗体分子は最高最終濃度300nMから5倍濃度勾配で希釈された合計8つの濃度、または最高最終濃度300nMから4倍濃度勾配で希釈された合計12濃度に希釈し;hIgG1 iso(CrownBio,#C0001)を同型対照とした。細胞を4℃に置き、遮光して1時間インキュベートした。その後、100μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液(0.5%BSAを含むPBS緩衝液)を加えて細胞を2回すすぎ、4℃で500gで5分間遠心分離し、上清を廃棄した。次に、さらに100μL/ウェルで蛍光二次抗体(Goat human lgG(H+L)Alexa Fluor 488 conjunction,Thermo,#A11013,1:1000希釈)を加え、4℃に放置し、遮光して1時間インキュベートした。その後、200μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液を加えて細胞を2回すすぎ、その後4℃で500gで5分間遠心分離し、上清を廃棄した。最後に、200μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液を添加して、細胞を再懸濁した。BD FACS CANTOIIフローサイトメータまたはACEA NovoCyteフローサイトメータを用いて蛍光発光信号値を読み取り、ソフトウェアFlowJov 10(FlowJo,LLC)を用いてデータを処理し分析した。ソフトウェアGraphPad Prism 8を用いてデータ処理と作図分析を行い、4パラメータの非線形フィッティングにより、抗体の標的細胞に対する結合曲線及びEC50値などのパラメータを得た。
図18(B‐D)に示すように、IgG‐VH四価対称構造の二重抗体分子がCTLA4と結合する能力は、その具体的な分子構造によってわずかに異なる。抗HER2のIgGに対する抗CTLA4のVH端の二重抗体構造中の相対位置に基づいて、このような構造の二重抗体分子をさらに3つに分類する:VHはIgGの重鎖C端にある(PR000539、PR000540、PR000714、PR000715);VHはIgGの重鎖N端にある(PR001583、PR001586、PR001588、PR001591);VHはIgGの軽鎖N端にある(PR001584、PR001589)。VHがIgGの重鎖C端にある場合、これらの二重抗体分子がCTLA4と結合するEC50値は、親モノクローナル抗体PR000184の値と似ているが、FACS上のMFI最大値は親モノクローナル抗体PR000184よりやや低い。VHがIgGの重鎖または軽鎖を問わないN端にある場合、これらの二重抗体分子がCTLA4と結合するEC50値は親モノクローナル抗体PR000184のものよりやや弱いが、FACS上のMFI最大値は親モノクローナル抗体PR000184よりも強い。これは、IgG上のVHの相対位置を調整することにより、VHが標的分子と結合する数と結合効果を調整することができることを示している。
本実施例は、HER2×CTLA4二重抗体分子がCTLA4とそのリガンドB7‐1/CD80との結合を抑制する活性を研究するためである。
抗体分子のヒトCTLA4タンパク質とそのリガンドB7‐1/CD80タンパク質との結合を抑制する活性を酵素結合免疫吸着反応ELISAを用いて測定した。具体的には、まず2μg/mLのタンパク質ヒトB7‐1‐Fc(ACRO Biosystems,#B71‐H5259)を96ウェルプレートに100μL/ウェルで包み、4℃で一晩過ごした。その後、PBST緩衝液(0.05%Tween-20を含むPBS緩衝液)で3回すすぎ、次いで閉鎖液(5%脱脂粉乳を含むPBS緩衝液)を加えて37℃で1時間インキュベートした。その後、最高最終濃度が200nMの3倍の濃度勾配で希釈した抗体分子を90μL/ウェルで加え、7つの濃度があり、均一に混合し、37℃で20分間インキュベートした;hIgG1 iso(CrownBio,#C0001)を同型対照とした。その後、ビオチン化ヒトCTLA4-Fcタンパク質(ACRO Biosystems、#CT4-H82F3)を10μL/ウェルで添加し、その最終濃度を0.25μg/mlとし、37℃で1時間インキュベートした。次にPBST緩衝液で3回すすぐ。次に100μL/ウェルで標識Precision Protein(登録商標) StrepTactin-HRP Conjugate(Bio-RAD、#1610380、1:4000希釈)を追加し、37℃で0.5時間インキュベートした。次にPBST緩衝液で3回すすぐ。その後、TMB発色液を100μL/ウェルで加えて15分間反応させた。最後に終止液を加えて反応を中止した。Enspire(登録商標) マルチファンクションリーダ(Perkin Elmer,Inc.)で490nMで光吸収値(OD値)を読み取る。アプリケーションソフトウェアGraphPad Prism 8を用いてデータ処理と作図分析を行い、4パラメータの非線形フィッティングにより、抑制曲線及びIC50値などのパラメータを得た。
抗体分子がCTLA4を発現する細胞とそのリガンドB7‐1/CD80との結合を抑制する活性を、フローサイトメトリーFACSを用いて測定した。具体的には、ヒトCTLA4を高発現するCHO-K1細胞株CHO-K1/hCTLA4(CHEMPARTNER)を消化し、FACS緩衝液(2%FBSを含むPBS緩衝液)に再懸濁し、細胞密度を3×106細胞/mLに調整した。CHO-K1/hCTLA4細胞を96ウェルプレート(3×105細胞/ウェル)に100μL/ウェルで播種し、500gの回転速度で4℃で5分間遠心分離し、上清を廃棄した。その後、勾配希釈された抗体分子を100μL/ウェルで96ウェルプレートに添加し、均一に混合し、抗体分子は最高最終濃度200nMから3倍濃度勾配で希釈された合計8つの濃度で希釈することができ、hIgG1 iso(CrownBio,#C0001)を同型対照とした。次に、3μg/mLのビオチン化リガンドタンパク質ヒトB7-1-Fc-biotin(ACRO Biosystems,#B71-H82F2)を100μL/ウェルで96ウェルプレートに加え、均一に混合した。96ウェルプレートを4℃に置き、遮光して1時間インキュベートした。その後、200μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液を加えて細胞を2回すすぎ、4℃で500gで5分間遠心分離し、上清を廃棄した。次に100μL/ウェルで蛍光標識(Streptavidin,Alexa Fluor(登録商標) 488 conjugate,Thermo,#S32354,1:1000希釈)を添加し、4℃に放置し、遮光して1時間インキュベートした。その後、200μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液を加えて細胞を3回すすぎ、4℃で500gで5分間遠心分離し、上清を廃棄した。最後に、200μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液を添加して、細胞を再懸濁した。BD FACS CANTOIIフローサイトメータまたはACEA NovoCyteフローサイトメータを用いて蛍光発光信号値を読み取り、ソフトウェアFlowJov 10(FlowJo,LLC)を用いてデータを処理し分析した。ソフトウェアGraphPad Prism 8を用いてデータ処理と作図分析を行い、蛍光信号値MFIを抑制率に変換し、4パラメータの非線形フィッティングにより、抑制曲線、IC50値と最大抑制率などのパラメータを得た。
本実施例は、HER2×CTLA4二重抗体分子がHER2と結合する活性を研究するためである。
ヒトHER2を高発現する腫瘍細胞系SK‐BR‐3(ATCC、HTB‐30)に対する抗体の結合能力をフローサイトメトリーFACSを用いて試験した。具体的には、SK‐BR‐3細胞を消化し、DMEM完全培地で再懸濁し、細胞密度を1×106細胞/mLに調整する;次いで、96ウェルVプレート(Corning,#3894)に100μL細胞/ウェルで接種し、4℃で5分間遠心分離し、上清を廃棄した。その後、最高最終濃度100nMの5倍濃度勾配で希釈した抗体分子を100μL/ウェルで加え、8つの濃度を均一に混合した;hIgG1 iso(CrownBio,#C0001)を同型対照とした。細胞を4℃に置き、遮光して1時間インキュベートした。その後、4℃で5分間遠心分離し、上清を廃棄した;その後、200μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液(0.5%BSAを含むPBS緩衝液)を加えて細胞を2回すすぎ、その後500g、4℃で5分間遠心分離し、上清を廃棄した。その後、蛍光二次抗体(Goat human lgG(H+L)Alexa Fluor 488 conjunction,Thermo,#A11013,1:1000希釈)を100μL/ウェルで添加し、4℃に放置し、遮光して1時間インキュベートした。その後、200μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液を加えて細胞を2回すすぎ、その後4℃で500gで5分間遠心分離し、上清を廃棄した。最後に、200μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液を添加して、細胞を再懸濁した。BD FACS CANTOIIフローサイトメータまたはACEA NovoCyteフローサイトメータを用いて蛍光発光信号値を読み取り、ソフトウェアFlowJov 10(FlowJo,LLC)を用いてデータを処理し分析した。ソフトウェアGraphPad Prism 8を用いてデータ処理と作図分析を行い、4パラメータの非線形フィッティングにより、抗体の標的細胞に対する結合曲線及びEC50値などのパラメータを得た。
本実施例は、HER2×CTLA4二重抗体分子の外周血単一核細胞PBMCに対する活性化作用を研究するためである。第一段階に、分離したヒトPBMC(MT‐BIO )を5×106細胞/mLに調整する。次に、PBMCを50μL/ウェルで96ウェルプレート(Corning,#3799)に追加する。その後、100μL/ウェルで異なる濃度の抗体分子を添加し、抗体最終濃度勾配は(150nM、30nM、1nM)または(80nM、8nM、0.8nM、0.08nM)であり、2つの複合ウェルに添加することができる。hIgG1 iso(CrownBio,#C0001)を同型対照とした。37℃で30分間インキュベートした。次いで、50μL/ウェルで400ng/mLの超抗原Staphylococcal enterotoxin B(SEB)を添加し、その最終濃度は100ng/mLであった。37℃に置き、5%CO2培養箱中で72時間または96時間インキュベート後に上清を回収した。第二段階に、上清を収集し、IL‐2検出キット(Thermo,#88‐7025‐77)を用いて上清中のIL‐2濃度を検出する。アプリケーションソフトウェアGraphPad Prism 8で、データ処理と作図分析を行う。
本実施例は、HER2×CTLA4二重抗体分子がヒトHER2を高発現する腫瘍細胞系SK‐BR‐3(ATCC、HTB‐30)の増殖を抑制することを研究するためである。具体的には、SK‐BR‐3細胞を消化し、DMEM完全培地で再懸濁する。2000細胞/50μLで96ウェルプレート(Perkin Elmer,#6005225)に接種した;その後、37℃、5%CO2培養箱中で一晩インキュベートした。翌日、最高最終濃度100nMの5倍の濃度勾配で希釈した抗体分子を50μL/ウェルで加え、合計6つの濃度があり、均一に混合した;hIgG1 iso(CrownBio,#C0001)を同型対照とし、37℃、5%CO2培養箱中で7日間インキュベートした。その後、各ウェルに100μL CellTiter‐Glo(Promega,#G7573)を添加し、水平振動ロッカ上で10分間混合して細胞分解を誘導した。最後に、Enspire(登録商標) マルチファンクションリーダ(PerkinElmer,Inc.)で化学発光値を測定した。ソフトウェアGraphPad Prism 8を用いてデータ処理と作図分析を行い、4パラメータの非線形フィッティングにより、抗体の標的細胞に対する抑制率などのパラメータを得た。
本実施例は、ヒトHER2を高発現する腫瘍細胞系BT‐474(ATCC、HTB‐20)に対するHER2×CTLA4二重抗体分子の抗体依存性の細胞媒介の細胞毒性(ADCC)を研究するためである。第一段階に、標的細胞をDELFIA BATDA(Perkin Elmer,#C136‐100)で標識する。具体的な標識方法は以下の通りである:1×106標的細胞を2μL DELFIA BATDA試薬で標識する;37℃で、CO2培養箱中で20分間インキュベートした;PBSで4回洗浄し、1000rpmで5分間遠心分離した。最後の洗浄後、沈殿物を20%FBS含有RPMI‐1640培地(Thermo,#A10491)に再懸濁し、細胞密度を1×105/mlに調整した。第二段階に、標識された標的細胞を96ウェルプレート(Corning,#3599)に100μL/ウェルで播種し、その後、最高最終濃度100nMの5倍濃度勾配で希釈した抗体分子を50μL/ウェルで加え、合計10濃度があり、均一に混合した;hIgG1 iso(CrownBio,#C0001)を同型対照とし、37℃、5%CO2培養箱中で10分間インキュベートした。第三段階に、NK-92 MI/CD16a細胞(CHEMPARTNER)をエフェクター細胞として収集し、NK-92 MI/CD16a細胞密度を1.2×106/mlに調整する;次いで、50μL/ウェルで96ウェルプレートに添加し、エフェクター細胞:標的細胞=6:1。次いで、37℃、5%CO2培養箱中で4時間インキュベートした。第四段階に、500gで5分間遠心分離し、各ウェルから25μL上清を取って新しい96ウェル検出プレートに加えた。続いてDELFIA(登録商標) Europium溶液(Perkin Elmer,#C135‐100)を200μL/ウェルで添加し、室温でプレートを250rpmで15分間揺動した。最後に、EnVision(登録商標)2015マルチファンクションリーダ(Perkin Elmer,Inc.)で蛍光値を測定した。
殺傷率(%)=(ER-ETSR)/(TMR-ETSR)*100%
ここで:
本実施例は、HER2×CTLA4二重抗体分子がヒトHER2を発現する細胞SK‐BR‐3(ATCC、HTB‐30)及びヒトCTLA4を発現する細胞CHO‐K1/hCTLA4(CHEMPARTNER)と同時に結合する能力を有するかどうかを研究するためである。第一段階に、CHO‐K1/hCTLA4細胞とSK‐BR‐3細胞をそれぞれCFSE(Thermo,#C34554)とFar red(Thermo,#C34564)染料で蛍光標識した。具体的な手順は以下の通り:CHO-K1/hCTLA4細胞とSK-BR-3細胞をそれぞれPBSに再懸濁し、2×106/mlに調整する;CHO-K1/hCTLA4細胞とSK-BR-3細胞に5μM CFSEと1μM Far redをそれぞれ添加し、37℃で10分間インキュベートし、時々揺動した;5倍量の完全培地を添加して染色を中止した。その後、4℃で5分間遠心分離し、上清を捨て、その後PBSを加えて2回洗浄した。標識後のCHO-K1/hCTLA4細胞とSK-BR-3細胞の密度をそれぞれ4×106/mlと2×106/mlに調整した。第二段階に、標識されたCHO-K1/hCTLA4細胞とSK-BR-3細胞をそれぞれ25μl採取し、50μlの4倍濃度勾配で希釈した抗体分子と均一に混合し、96ウェルプレートに添加し、そのうち抗体分子の最高最終濃度は31.25nMで、合計6つの濃度があり、hIgG1 iso(CrownBio,#C0001)を同型対照とした。遮光して4℃で1時間インキュベートした。その後、ウェル当たり100μlの4%ポリホルムアルデヒドPFA固定細胞を添加して10分間固定した。最後に、BD FACS CANTOIIフローサイトメータを用いて蛍光信号値を読み取り、ソフトウェアFlowJov 10(FlowJo、LLC)を用いてデータを処理し分析した。異なる蛍光標識に基づいて異なる象限内の細胞数をそれぞれ統計する:Q1はFar-red標識のSK-BR-3細胞(SK-BR-3+)であり;Q3はCFSEによって標識されたCHO‐K1/hCTLA4細胞(CTLA4+)であり;Q2は二重抗体分子が二種類の細胞と同時に結合することによって形成された二種類の標識を持つ細胞群(CTLA4+&SK-BR-3+)を含む。二重標識陽性細胞群(Q2)の、すべての標識されたSK‐BR‐3細胞(Q1+Q2)に対する占有率は、以下の式に基づいて計算され、二重抗体分子が2つの細胞と同時に結合する能力を反映した。
ソフトウェアGraphPad Prism 8を用いてデータ処理と作図分析を行い、4パラメータの非線形フィッティングにより、抗体が同時に2種類の標的細胞に結合する曲線を得た。
本実施例は、マウス体内における抗体分子の薬物動態学特性を研究した。本実施例では、抗HER2のモノクローナル抗体PR000210(trastuzumab類似体)、IgG‐VH四価対称構造を有するHER2×CTLA4二重抗体分子PR000540、IgG‐VH‐VH六価対称構造を有するHER2×CTLA4二重抗体分子PR000541について測定した。
本実施例は、抗HER2のIgG抗体の抗原結合ドメインFabと抗CTLA4のHCAb抗体の抗原結合ドメインVHを用いて、多種類の構造の抗HER2×CTLA4二重特異性抗体分子を構築した。HCAbに基づいて二重特異性抗体分子構造を構築するフレキシビリティを示し、異なる構造タイプ、相対位置、結合価数などのパラメータを通じてHER2端とCTLA4端の機能活性を調節し、さらに異なる活性組み合わせを設計し、異なる作用機序の需要を実現する。現在、抗HER2のモノクローナル抗体trastuzumabの乳癌治療における推奨初期用量は4mg/kgであり、胃癌治療における推奨初期用量は8mg/kgであり、メラノーマの治療における抗CTLA4のモノクローナル抗体Ipilimumabの推奨用量としての3mg/kgよりわずかに高い。
実施例5.1. 背景
プログラム死受容体1(programmed death 1、PD-1)は主にT細胞などの免疫細胞に発現し、それは2つのリガンド、すなわちプログラム死リガンド-1(programmed death ligand 1、PD-L1)とPD-L2を有する。PD‐L1は主に抗原提示細胞及び複数の腫瘍細胞に発現される。PD‐L1とPD‐1の相互作用はT細胞の活性を低下させ、サイトカインの分泌を弱め、免疫抑制作用を果たす。多くのヒト腫瘍組織においてPD‐L1タンパク質の発現が検出され、腫瘍部位のミクロ環境は腫瘍細胞上のPD‐L1の発現を誘導でき、発現されたPD‐L1は腫瘍の発生と成長に有利であり、抗腫瘍T細胞のアポトーシスを誘導し、さらに腫瘍細胞を保護して免疫攻撃から逃れる。
実施例5.2.1. 抗PD-L1の全ヒト由来IgG抗体の獲得
本実施例で用いた抗PD‐L1の全ヒト由来IgG抗体PR000265(表5‐8)は、実施例3.2.1に記載されているように、Harbour H2L2マウスに由来している。
Harbour H2L2マウス(Harbour Antibodies BV)はヒト免疫グロブリン免疫ライブラリを持つトランスジェニックマウスであり、その産生抗体は完全なヒト抗体可変ドメインとラット定常ドメインを有する。
Harbour HCAbマウス(Harbour Antibodies BV、WO2010/109165A2)はヒト免疫グロブリン免疫ライブラリを持つトランスジェニックマウスで、従来のIgG抗体の半分の大きさしかなく、重鎖のみからなる抗体を産生することができる。その産生抗体は、ヒトの抗体重鎖可変ドメインとマウスFc定常ドメインのみを有する。
本実施例は、抗PD‐L1のIgG抗体PR000265またはPR000151(atezolizumab類似体)の抗原結合ドメインFabと、抗4‐1BBのIgG抗体PR000197またはPR000448の抗原結合ドメインFabを用いて、FIT‐Ig構造を有する抗PD‐L1×4‐1BBの二重特異性抗体分子を構築する。FIT‐Ig構造の設計は特許WO2015/103072A1を参照することができ、構造は図1(28)に示すように参照することができる;構築した分子を表5‐1にまとめた。そして、実施例2に記載の方法に従って抗体分子サンプルを作製し、分析を行い、表52にまとめた。表53は、FIT‐Ig構造の二重抗体分子のポリペプチド鎖配列に対応する配列番号を示す。
本実施例は、抗PD‐L1のIgG抗体PR000265の抗原結合ドメインFabと、抗4‐1BBのHCAb抗体PR001758、PR001760またはPR001836の抗原結合ドメインVHを用いて、多種類の構造の抗PD‐L1×4‐1BBの二重特異性抗体分子を構築する。
抗PD‐L1のIgG抗体と抗4‐1BBの重鎖抗体を用いて、実施例1.1に記載の構造に従ってFab‐HCAb対称構造のPD‐L1×4‐1BB二重抗体分子を設計し、表54にまとめた。そして、実施例2に記載の方法に従って抗体分子サンプルを作製し、分析を行い、表55にまとめた。
抗PD‐L1のIgG抗体と抗4‐1BBの重鎖抗体を用いて、実施例1.2に記載の構造に従ってIgG‐VH四価対称構造のPD‐L1×4‐1BB二重抗体分子を設計し、表56にまとめた。そして、実施例2に記載の方法に従って抗体分子サンプルを作製し、分析を行い、表57にまとめた。
表5‐8、表5‐9及び表5‐10は、本実施例によって構築されたPD‐L1×4‐1BB二重抗体分子及び対応するPD‐L1モノクローナル抗体、4‐1BBモノクローナル抗体などの親モノクローナル抗体分子及び対照分子の配列に対応する配列番号を示す。表5‐10の構造番号は、表1‐1及び図1に対応する。表5‐11は、二重特異性抗体分子の第1及び第2抗原結合ドメインに対応するCDR配列の配列番号を示す。
本実施例はPD‐L1×4‐1BB二重抗体分子がPD‐L1を結合する活性を研究するためである。
抗体分子の、ヒトPD‐L1を高発現するCHO‐K1細胞株CHO‐K1/hPDL1(GENSCRIPT、M00543)との結合能力を、フローサイトメトリー細胞法FACSを用いて試験した。具体的には、CHO‐K1/hPDL1細胞を消化し、完全培地で再懸濁する;細胞密度を1×106細胞/mLに調整した。次いで細胞を96ウェルVプレート(Corning,#3894)に100μL/ウェルで播種し、4℃で5分間遠心分離し、上清を廃棄した。その後、勾配希釈された抗体分子を100μL/ウェルで96ウェルプレートに添加し、均一に混合し、抗体分子は最高最終濃度200nMから3倍濃度勾配で希釈された合計12濃度であり、hIgG1 iso(CrownBio,#C0001)を同型対照とした。細胞を4℃に置き、遮光して1時間インキュベートした。その後、100μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液(0.5%BSA含有PBS緩衝液)を加えて細胞を2回すすぎ、4℃で500gで5分間遠心分離し、上清を廃棄した。次に、さらに100μL/ウェルで蛍光二次抗体(Goat human lgG(H+L)Alexa Fluor 488 conjunction,Thermo,#A11013,1:1000希釈)を加え、4℃に放置し、遮光して1時間インキュベートした。その後、200μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液を加えて細胞を2回すすぎ、その後4℃で500gで5分間遠心分離し、上清を廃棄した。最後に、200μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液を添加して、細胞を再懸濁した。BD FACS CANTOIIフローサイトメータまたはACEA NovoCyteフローサイトメータを用いて蛍光発光信号値を読み取り、ソフトウェアFlowJov 10(FlowJo,LLC)を用いてデータを処理し分析した。ソフトウェアGraphPad Prism 8を用いてデータ処理と作図分析を行い、4パラメータの非線形フィッティングにより、抗体の標的細胞に対する結合曲線及びEC50値などのパラメータを得た。
本実施例は、PD‐L1×4‐1BB二重抗体分子が4‐1BBと結合する活性を研究するためである。
抗体分子の、ヒト4‐1BBを高発現するCHO‐K1細胞株CHO‐K1/hu4‐1BB(GENSCRIPT、M00538)とカニクイザル4‐1BBを高発現するCHO‐K1細胞株CHO‐K1/cyno 4‐1BB(GENSCRIPT、M00569)などと結合する能力を、フローサイトメトリーFACSを用いて試験した。具体的には、細胞を消化し、完全培地で再懸濁する;細胞密度を2×106細胞/mLに調整した。次いで、細胞を96ウェルVプレート(Corning,#3894)に100μL/ウェル(2×105細胞/ウェル)で播種し、4℃で5分間遠心分離し、上清を廃棄した。その後、勾配希釈された抗体分子を100μL/ウェルで96ウェルプレートに添加し、均一に混合し、抗体分子は最高最終濃度200nMから3倍濃度勾配で希釈された合計12濃度であり、hIgG1 iso(CrownBio,#C0001)を同型対照とした。細胞を4℃に置き、遮光して1時間インキュベートした。その後、100μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液(0.5%BSA含有PBS緩衝液)を加えて細胞を2回すすぎ、4℃で500gで5分間遠心分離し、上清を廃棄した。次に、さらに100μL/ウェルで蛍光二次抗体(Goat human lgG(H+L)Alexa Fluor 488 conjunction,Thermo,#A11013,1:1000希釈)を加え、4℃に放置し、遮光して1時間インキュベートした。その後、200μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液を加えて細胞を2回すすぎ、その後4℃で500gで5分間遠心分離し、上清を廃棄した。最後に、200μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液を添加して、細胞を再懸濁した。BD FACS CANTOIIフローサイトメータまたはACEA NovoCyteフローサイトメータを用いて蛍光発光信号値を読み取り、ソフトウェアFlowJov 10(FlowJo,LLC)を用いてデータを処理し分析した。ソフトウェアGraphPad Prism 8を用いてデータ処理と作図分析を行い、4パラメータの非線形フィッティングにより、抗体の標的細胞に対する結合曲線及びEC50値などのパラメータを得た。
その結果を図28及び表5‐13に示す。
図29及び表5‐14に示すように、本実施例の二重抗体分子はカニクイザル4‐1BBと結合することができ、Urelumabはできない。二重抗体分子がカニクイザル4‐1BB(図29、A‐B)と結合する能力は、ヒト4‐1BB(図28、G‐H)と結合する能力に匹敵し、類似の結合EC50を有する。
本実施例は、標的細胞におけるPD‐L1×4‐1BB二重抗体分子の存在は4‐1BBを結合することによりT細胞の活性を活性化することを研究するためである。標的細胞は、ヒトPD‐L1を高発現するCHO‐K1/hPDL1(GENSCRIPT、M00543)、またはヒトPD‐L1を高発現するMDA‐MB‐231(ATCC、HTB‐26)などの、PD‐L1を異なる程度に発現する細胞であってもよい。エフェクター細胞は、単離されたヒトPBMCまたはT細胞であってもよい。
本実施例において、陽性対照分子は抗4‐1BBのモノクローナル抗体Urelumabである。
図30に示すように、標的細胞CHO-K1/hPDL1とT細胞を混合するシステムにおいて、架橋に依存しない抗4-1BBモノクローナル抗体Urelumabは、T細胞のIFN-γ放出を活性化することができ、一方、架橋に依存する抗4-1BBモノクローナル抗体(PR000448、PR001758、PR001760、PR001836)はT細胞をほとんど活性化できない。FIT‐Ig構造の二重抗体分子(PR003052、PR000701)とIgG‐VH四価対称構造の二重抗体分子(PR003549、PR003550、PR003551)とFab‐HCAb構造の二重抗体分子(PR004270)はいずれもT細胞を活性化させ、サイトカインを放出することができる。これは、二重抗体分子のT細胞に対する活性化が標的細胞の特異的活性化に依存することを示している。また、IgG-VH四価対称構造の二重抗体分子(PR003549、PR003550)とFab-HCAb構造の二重抗体分子(PR004270)はFIT-Ig構造の二重抗体分子(PR003052、PR000701)よりも高いサイトカイン放出レベルを引き起こすことができ、より強いT細胞活性化能力を示し、Urelumabより優れている。また、PR003549及びPR004270は、対照二重抗体分子(PR001289)と比較してかなり強いT細胞活性化能力を有する。
図31(A)に示すように、標的細胞MDA‐MB‐231とT細胞を混合するシステムにおいて、IgG‐VH四価対称構造の二重抗体分子(PR003549)とFab‐HCAb構造の二重抗体分子(PR004270)は類似のT細胞活性化能力を有し、FIT‐Ig構造の二重抗体分子(PR003052、PR000701)と対照の二重抗体分子(PR001289)より優れた。
本実施例は、混合リンパ球反応(MLR)を用いてT細胞に対するPD‐L1×4‐1BB二重抗体分子の活性化作用を研究する。
第一段階に、CD14ビーズ(Meltenyi,#130‐050‐201)を用いて第一ドナーPBMC細胞(MT‐BIO)から単核細胞(monocytes)を単離する;具体的な操作は、関連キットの説明書を参照する。その後、50ng/mL組換えヒト由来IL-4(PeproTech,#200-02-A)と100ng/mL組換えヒト由来GM-CSF(PeproTech,#300-03-A)を加え、37℃で7日間誘導した後、未成熟樹状細胞(iDC細胞)を得た。続いて、1μg/mlのリポ多糖Lipopololysaccharide(LPS、Sigma、#L 6529)を添加し、24時間誘導した後、成熟樹状細胞(mDC細胞)を得た。第二段階に、T細胞分離キット(Meltenyi,#130‐096‐535)を用いて第二ドナーPBMC細胞(MT-BIO)からTリンパ細胞を分離する。第三段階に、得られたT細胞とmDC細胞を96ウェルプレートに5:1の割合で播種した(1×105/ウェルのT細胞と2×104/ウェルのmDC細胞)。その後、50μL/ウェルで異なる濃度の抗体分子を添加し、抗体最終濃度は(10nM、1nM)、または最高最終濃度50nMから3倍濃度勾配で希釈した計8つの濃度であってもよく、2つの複合ウェルに添加し;hIgG1 iso(CrownBio,#C0001)または空白ウェルを対照とした。37℃、5%CO2培養箱で5日間インキュベートした。第四段階に、それぞれ3日目と5日目の上清を収集し、IL-2 ELISAキット(Thermo,#88-7025-88)で3日目の上清中のIL-2濃度を検出し、IFN-γ ELISAキット(Thermo,#88-7316-77)を用いて5日目の上清中のIFN-γ濃度を検出した。ELISA検出方法は関連キットの操作説明を参照する。
本実施例は、マウス体内におけるFab‐HCAb対称構造を有するPD‐L1×4‐1BB二重抗体分子PR004270の薬物動態学特性を研究した。
実施方法:各試験抗体分子に対して、体重18~22グラムの雌性BALB/cマウス6匹を選択し、5mg/kgの用量で静脈注射により二重特異性抗体を投与した。1群3匹は投与前及び投与後15分、24時間(1日)、4日目、及び10日目に全血を採取し、別の1群3匹は投与前及び投与後5時間、2日目、7日目、及び14日目に全血を採取した。全血を30分間静置して凝固させ、その後遠心分離し、分離した血清サンプルを分析するまで‐80℃で凍結保存した。本実施例は2種類のELISA方法を用いてマウス血清中の薬物濃度を定量的に測定した。ELISA方法1、つまりFc端検出(全体検出)方法であり、96ウェルプレートに包接されたヤギ抗ヒトFcポリクローナル抗体によりマウス血清中のヒトFc含有抗体を捕獲し、HRP標識ヤギ抗ヒトFc第2抗体を加えて検出する;ELISA方法2、すなわちPD‐L1端検出(機能ドメイン検出)方法であり、96ウェルプレートに包接されたヒトPD‐L1タンパク質によりマウス血清中のPD‐L1を特異的に識別する抗体を捕獲し、その後HRP標識されたヤギ抗ヒトFc第2抗体を加えて検出する。Phoenix WinNonlinソフトウェアバージョン8.2を使用して、非房室モデル(NCA)を選択して薬物動態学パラメータを分析した。
本実施例は、抗PD‐L1のIgG抗体の抗原結合ドメインFabと抗4‐1BBのHCAb抗体の抗原結合ドメインVHを用いて、多種類の構造の抗PD‐L1×4‐1BBの二重特異性抗体分子を構築した。HCAbに基づいて二重特異性抗体分子構造を構築するフレキシビリティを示し、異なる構造タイプ、相対位置、結合価数などのパラメータによってT細胞を活性化する機能活性を調節した。
以上より、本実施例は安全性が良く、機能活性が突出し、分子安定性が良いPD-L1×4-1BB二重特異性抗体分子を構築した。
実施例6.1. 背景
B7-H4(VTCN1、B7h.5、B7S1、B7x)は、B7/CD28スーパーファミリーに属する膜貫通タンパク質である。B7‐H4タンパク質は単核細胞や樹状細胞などの免疫細胞に発現し、T細胞の負の制御免疫応答に関与する可能性がある。また、B7H4は乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、非小細胞肺癌、腎癌などの腫瘍細胞の表面でも高発現しているが、ほとんどの正常組織では発現していないか、極めて低い発現をしている。B7‐H4はこれらの腫瘍の新たな標的として近年注目されている。抗B7-H4の抗体は様々な機構を通じて腫瘍細胞に作用することができるが、その開発方向は主にモノクローナル抗体に集中しており、現在では二重特異性抗体療法はない。
実施例6.2.1. 抗B7H4の全ヒト由来H2L2抗体の獲得
Harbour H2L2マウス(Harbour Antibodies BV)はヒト免疫グロブリン免疫ライブラリを持つトランスジェニックマウスであり、その産生抗体は完全なヒト抗体可変ドメインとラット定常ドメインを有する。
本実施例で用いた抗4‐1BBの全ヒト由来HCAb抗体PR001758、PR001760、PR001771、PR001840、及びPR004469(表6‐9)は、実施例5.2.3に記載されているように、Harbour HCAbマウス由来である。
本実施例では、抗B7H4のIgG抗体PR002408またはPR002410の抗原結合ドメインFabと、抗4-1BBのHCAb抗体PR001758、PR001760、PR001771、PR001840またはPR004469の抗原結合ドメインVHを用いて、多種類の構造の抗B7H4×4-1BBの二重特異性抗体分子を構築した。
抗B7H4のIgG抗体と抗4-1BBの重鎖抗体を用いて、実施例1.1に記載の構造に従ってFab-HCAb対称構造のB7H4×4-1BB二重抗体分子を設計し、表6‐1にまとめた;そして、実施例2に記載の方法に従って抗体分子サンプルを作製し、分析を行い、表62にまとめた。
抗B7H4のIgG抗体と抗4-1BBの重鎖抗体を用いて、実施例1.2に記載の構造に従ってIgG-VH四価対称構造のB7H4×4-1BB二重抗体分子を設計し、表6‐3にまとめた。そして、実施例2に記載の方法に従って抗体分子サンプルを作製し、分析を行い、表64にまとめた。
抗B7H4のIgG抗体と抗4-1BBの重鎖抗体を用いて、実施例1.3の構造に従ってIgG-VH(2)六価対称構造のB7H4×4-1BB二重抗体分子を設計し、表65にまとめた。そして、実施例2に記載の方法に従って抗体分子サンプルを作製し、分析を行い、表66にまとめた。
抗B7H4のIgG抗体と抗4-1BBの重鎖抗体を用いて、実施例1.6と実施例1.9に記載の構造に従ってFab-Fc-VH(n,n={2,3})非対称構造のB7H4×4-1BB二重抗体分子を設計し、表67にまとめた。そして、実施例2に記載の方法に従って抗体分子サンプルを作製し、分析を行い、表6‐8にまとめた。分子のFc領域は、「knob‐into‐hole」構造の突然変異を使用し、L234AとL235Aの二重突然変異を導入する。
表6‐9、表6‐10及び表6‐11は、本実施例によって構築されたB7H4×4‐1BB二重抗体分子及び対応するB7H4モノクローナル抗体、4‐1BBモノクローナル抗体などの親モノクローナル抗体分子及び対照分子の配列に対応する配列番号を示す。表6‐11中の構造番号は、表1‐1及び図1に対応する。表6‐12は、二重特異性抗体分子の第1及び第2抗原結合ドメインに対応するCDR配列の配列番号を示す。
本実施例はB7H4×4‐1BB二重抗体分子がB7H4と結合する活性を研究するためである。
抗体のヒトB7H4を高発現する腫瘍細胞系SK‐BR‐3(ATCC、HTB‐30)に対する結合能力をフローサイトメトリーFACSを用いて試験した。具体的には、SK‐BR‐3細胞を消化し、完全培地で再懸濁し、細胞密度を2×106細胞/mLに調整する;次いで、96ウェルVプレート(Corning,#3894)に50μL細胞/ウェルで播種した。その後、50μL/ウェルで5倍濃度勾配で希釈した抗体分子の合計8つの濃度を加え、均一に混合した;hIgG1 iso(CrownBio,#C0001)を同型対照とした。細胞を4℃に置き、遮光して2時間インキュベートした。その後、100μL/ウェルで予冷のPBS緩衝液を加えて細胞を2回すすぎ、その後4℃で500gで5分間遠心分離し、上清を廃棄した。その後、蛍光二次抗体(Alexa Fluor 647-conjugated AffiniPure Goat Anti-Human IgG,Fcγ Fragment Specific,Jackson ImmunoResearch,#109-605-098,1:1000希釈)を4℃に置いて1時間遮光してインキュベートした。その後、100μL/ウェルで予冷のPBS緩衝液を加えて細胞を2回すすぎ、その後4℃で500gで5分間遠心分離し、上清を廃棄した。最後に、200μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液(0.5%BSA含有PBS緩衝液)を添加して細胞を再懸濁した。BD FACS CANTOIIフローサイトメータまたはACEA NovoCyteフローサイトメータ(ACEA Biosciences Inc.)を用いて蛍光発光信号値を読み取り、ソフトウェアFlowJov 10(FlowJo,LLC)を用いてデータを処理し分析した。ソフトウェアGraphPad Prism 8を用いてデータ処理と作図分析を行い、4パラメータの非線形フィッティングにより、抗体の標的細胞に対する結合曲線及びEC50値などのパラメータを得た。
図35及び表6‐13に示すように、二重抗体分子はいずれもSK‐BR‐3細胞に結合することができる。図35(A‐C)に示すように、対称構造の二重抗体分子(PR003334、PR003335、PR003338、PR003487、PR003488、PR004279)は同じ二価のB7H4結合ドメイン(抗B7H4モノクローナル抗体PR002408に由来)を有し、それらのB7H4を結合するEC50に非常に近い。IgG‐VH‐VH六価対称構造の二重抗体分子PR003487とPR003488は、IgG‐VH四価対称構造の二重抗体分子PR003335と比べて、B7H4を結合する能力がほぼ同じである。Fab‐HCAb対称構造の二重抗体分子PR004279がB7H4と結合する活性は、IgG‐VH構造のPR003335よりやや強い。図35(D‐E)に示すように、非対称構造の二重抗体分子(PR004160、PR004161、PR004181、PR004182)は1つのB7H4結合ドメインしかないため、B7H4を結合する能力は対称構造の二重抗体分子より弱いが、PR004182は対称構造の二重抗体分子に近似した結合EC50を体現している。図35(F)に示すように、Fab‐HCAb対称構造の二重抗体分子は、構造(1)の分子(PR005189)であれ構造(2)の分子(PR007165)であれ、ほとんど同じ結合活性を有し、FabのCLをVH_Bが位置する重鎖に融合することがFab端の結合活性に影響しないと示している。
本実施例は、B7H4×4‐1BB二重抗体分子が4‐1BBと結合する活性を研究するためである。
抗体分子のヒト4‐1BBを高発現するCHO‐K1細胞株CHO‐K1/hu4‐1BB(GENSCRIPT、M00538)との結合能力をフローサイトメトリーFACSを用いて試験した。具体的には、細胞を消化し、完全培地で再懸濁する;細胞密度を2×106細胞/mLに調整した。次いで、細胞を96ウェルVプレート(Corning,#3894)に100μL/ウェル(2×105細胞/ウェル)で播種し、4℃で5分間遠心分離し、上清を廃棄した。その後、勾配希釈された抗体分子を100μL/ウェルで96ウェルプレートに添加し、均一に混合し、抗体分子を5倍濃度勾配で希釈した合計8つの濃度に希釈し;hIgG1 iso(CrownBio,#C0001)を同型対照とした。細胞を4℃に置き、遮光して1時間インキュベートした。その後、100μL/ウェルで予冷のPBS緩衝液を加えて細胞を2回すすぎ、4℃で500gで5分間遠心分離し、上清を廃棄した。次に、さらに100μL/ウェルで蛍光二次抗体(Alexa Fluor(登録商標) 488, Goat Anti-Human IgG, Fcγ fragment specific、Jackson ImmunoResearch、#109-545-098、1:1000希釈)を添加し、4℃に放置し、遮光して1時間インキュベートした。その後、200μL/ウェルで予冷のPBS緩衝液を加えて細胞を2回すすぎ、その後4℃で500gで5分間遠心分離し、上清を廃棄した。最後に、200μL/ウェルで予冷のFACS緩衝液(0.5%BSA含有PBS緩衝液)を添加して細胞を再懸濁した。BD FACS CANTOIIフローサイトメータまたはACEA NovoCyteフローサイトメータを用いて蛍光発光信号値を読み取り、ソフトウェアFlowJov 10(FlowJo,LLC)を用いてデータを処理し分析した。ソフトウェアGraphPad Prism 8を用いてデータ処理と作図分析を行い、4パラメータの非線形フィッティングにより、抗体の標的細胞に対する結合曲線及びEC50値などのパラメータを得た。
本実施例は、標的細胞の存在時にB7H4×4‐1BB二重抗体分子が4‐1BBを結合することによりT細胞の活性を活性化することを研究するためである。標的細胞は、B7H4を高発現するSK‐BR‐3(ATCC、HTB‐30)のようなB7H4を異なる程度で発現する細胞であってもよく、またはB7H4を発現しないJIMT‐1(DSMZ、ACC 589)であってもよい。エフェクター細胞は、単離されたヒトPBMCまたはT細胞であってもよい。
本実施例において、陽性対照分子は抗4‐1BBのモノクローナル抗体Urelumabである。
図37及び図38に示すように、B7‐H4を高発現するSK‐BR‐3細胞が存在する場合、B7‐H4×4‐1BB二重抗体分子がT細胞を活性化する能力は陽性対照分子より優れ、この系で産生されたサイトカインIFN‐γ(図37)またはIL‐2(図38)の放出は陽性対照分子より高かった。
図39に示すように、B7H4×4-1BB二重抗体のT細胞に対する活性化は、特異的にB7H4の発現に依存する。(A)B7H4を高発現する細胞SK‐BR‐3が存在する場合、二重抗体PR003334はT細胞のIL‐2放出を特異的に活性化することができ、(B)B7H4を発現しない細胞JIMT‐1が存在する場合、PR003334はT細胞を活性化できない。Urelumabは標的特異性がなく、B7H4の発現がなくてもT細胞を活性化することができる。
本実施例は、高濃度ヒト血清中のIgG‐VH対称構造を有するB7H4×4‐1BB二重抗体分子(PR003334、PR003335)の安定性を研究した。具体的には、二重抗体分子は90%ヒト血清で勾配希釈を行い、初期濃度は100nMで、3倍勾配で8つの濃度点に希釈した。各濃度で6つのサンプルに分け、それぞれ37℃で0日、1日、2日、4日、7日、14日インキュベートし、液体窒素を急速凍結した後、‐40℃に放置して保存した。次に、血清中で異なる時間インキュベートした後のサンプルを収集し、実施例6.4.1及び実施例6.5.1に記載の方法に従って二重抗体分子とSK‐BR‐3細胞及びCHOK1/hu4‐1BB細胞との結合活性をそれぞれ試験し、血清中に異なる時間放置した後の結合活性の変化を調べた。
本実施例は、マウス体内におけるIgG‐VH対称構造を有するB7H4×4‐1BB二重抗体分子(PR003334、PR003335)の薬物動態学特性を研究した。
本実施例は、BALB/c-hCD137/CT26-hB7H4マウス腫瘍モデルにおけるB7H4×4-1BB二重抗体分子PR003334の抗腫瘍薬効を研究した。
本実施例は、実施例2.5に記載された方法を用いて、IgG‐VH対称構造を有するB7H4×4‐1BB二重抗体分子(PR003334、PR003335、PR003338)の分子安定性等の物理的特性評価を試験した。表6‐18に示すように、これらの二重抗体分子は良好な安定性を有する。
本実施例は、抗B7H4のIgG抗体の抗原結合ドメインFabと抗4-1BBのHCAb抗体の抗原結合ドメインVHを用いて、多種類の構造の抗B7H4×4-1BBの二重特異性抗体分子を構築した。HCAbに基づいて二重特異性抗体分子構造を構築するフレキシビリティを示し、異なる構造タイプ、相対位置、結合価数などのパラメータによってT細胞を活性化する機能活性を調節した。
以上より、本実施例は安全性が良く、機能活性が突出し、分子安定性が良いB7H4×4-1BB二重特異性抗体分子を構築した。
実施例7.1. 背景
BCMA(B‐細胞成熟抗原、TNFRSF 17、CD269)は、B細胞の成熟、成長、生存に関与するTNF受容体超ファミリーに属する膜貫通タンパク質である。BCMAには主に高親和性リガンドAPRIL(増殖誘導リガンド)と低親和性リガンドBAFF(B細胞活性化因子)の2種類のリガンドがある。BCMAは高度に分化した形質細胞選択性タンパク質であり、その発現はB細胞系統に限定され、主に形質細胞と形質母細胞上に存在し、記憶B細胞上にある程度存在するが、末梢B細胞上には存在しない。BCMAは多発性骨髄腫(MM)患者の悪性形質細胞中で発現し、多発性骨髄腫細胞の成長と生存を支持する。多発性骨髄腫は非ホチキンリンパ腫に次ぐ血液系第2位の悪性腫瘍であり、血液系悪性腫瘍の約13%を占めている。多発性骨髄腫の新たな標的として、BCMA抗体はMM細胞に様々な機構によって作用することができる。
BCMA抗原を用いて実験動物を免疫化してBCMAに特異的に結合する抗体分子を得ることができ、この実験動物はマウス、ラット、ウサギ、羊、ラクダなどであることができる。通常、得られる抗体分子は非ヒト由来である。非ヒト由来の抗体を獲得した後、これらの分子に対して抗体工学技術を利用してヒト由来化改造を行い、免疫原性を低下させ、薬剤性を高める必要がある。しかし、抗体のヒト由来化過程には技術的複雑性があり、ヒト由来化改造を経た分子は抗原への親和性を低下させることが多い。一方、遺伝子組み換え技術の進歩により、ヒト免疫グロブリン免疫ライブラリを持ち、内因性のマウスの免疫ライブラリを欠損させた遺伝子工学化マウスを育成することができる。この遺伝子組み換えマウスが産生した抗体は全ヒト由来の配列を持っているので、これ以上ヒト由来化改造をする必要はなく、治療性抗体開発の効率を大幅に高めた。Harbour HCAbマウス(Harbour Antibodies BV、WO2010/109165A2)はヒト免疫グロブリン免疫ライブラリを持つトランスジェニックマウスで、従来のIgG抗体の半分の大きさしかなく、全く新しい「重鎖」のみからなる抗体を産生することができる。その産生抗体はヒトの抗体「重鎖」可変ドメインとマウスFc定常ドメインのみを有する。軽鎖を含まないという特徴のため、この抗体は軽鎖ミスマッチと異種二量化の問題をほとんど解決し、この技術プラットフォームは従来の抗体プラットフォームでは実現しにくい製品を開発することができる。
Harbour HCAbマウスに対して、可溶性組換えヒトBCMA‐ECD‐Fc融合タンパク質を用いて多ラウンド免疫を行った。抗原タンパク質を免疫アジュバントと混合して免疫原試薬とし、その後皮下による鼠径部注射または腹腔内注射を行った。各免疫ラウンドにおいて、各マウスが受けた総注射量は100マイクロリットルであった。1ラウンド目の免疫において、各マウスは50マイクログラムの抗原タンパク質(組換えヒトBCMA‐ECD‐Fc,ACRO Biosystems、#BC7‐H82F0)と完全Freundアジュバント(Sigma、#F 5881)を体積比1:1で混合して作製した免疫原試薬により免疫を受けた。下記の免疫増強の各ラウンドにおいて、各マウスは、25マイクログラムの抗原タンパク質とSigma Adjuvant Systemアジュバント(Sigma,#S6322)とを混合して作製された免疫原試薬により免疫を受けた。1ラウンド当たりの免疫増強間隔は少なくとも2週間であり、通常は5ラウンドを超えない。免疫時間は0、14、28、42、56、70日目であり;そして49、77日目にマウス血清抗体滴下を測定した。HCAbマウス脾臓B細胞分離を行う5日前に、各マウス25マイクログラムの抗原タンパク質の用量で最後の免疫増強を行った。
マウス血清中のBCMA特異性抗体価が特定のレベルに達したことを検出した後、マウスの脾臓細胞を取り出してB細胞を分離し、BD FACSARia(登録商標) III細胞選別器でCD138陽性の形質細胞とBCMA抗原陽性のB細胞群を選別する。RNAを抽出し、cDNAを逆転写した後、ヒトVH遺伝子をPCR増幅した。増幅されたVH遺伝子フラグメントをヒトIgG1抗体重鎖Fcドメイン配列をコードする哺乳動物細胞発現プラスミドpCAGベクターに構築し、プラスミドで哺乳動物宿主細胞(例えばヒト胚腎細胞HEK293)をトランスフェクションし発現し、発現されたHCAbの抗体上清と組換えヒトBCMA-Fc,Avitag組換えタンパク質(ACRO Biosystems、#BC7-H82F0)をMirrorball(SPT Labtech、mirrorball(登録商標) fluorescence cytometer)スクリーニングし、得られた陽性モノクローナル抗体上清をフローサイトメトリーFACSでさらに同定した。抗体上清とヒトBCMAを高発現するHEK293T細胞株HEK293T/hBCMA(KYINNO、KC-0233)、カニクイザルBCMAを高発現するHEK293T細胞株HEK293T/cynoBCMA(KYINNO、KC-0979)、ヒトBCMAを高発現する細胞系NCI-H929(ATCC,CRL-9068)などの細胞との結合能力をFACSを用いて試験した。複数ラウンドのスクリーニングにより、4つの陽性モノクローナルが得られた。抗体分子の可変ドメインをコードするヌクレオチド配列及び対応するアミノ酸配列を、従来の配列決定手段を用いて得る。本実施例では、免疫のHarbour HCAbマウスから得られた抗BCMAモノクローナル抗体分子の可変ドメインの配列はヒト由来抗体配列である。
実施例2.2に記載の方法に従って、HCAb抗体をコードするプラスミドを用いて、従来の組換えタンパク質発現と精製技術を用いて、精製された抗BCMA組換え重鎖抗体を作製した。
本実施例は、抗BCMAのHCAb抗体がヒト及びカニクイザルBCMAと結合する活性を研究するためである。抗BCMAの組換え抗体と、ヒトBCMAを高発現するHEK293T細胞株HEK293T/hBCMA(KYINNO、KC-0233)、カニクイザルBCMAを高発現するHEK293T細胞株HEK293T/cynoBCMA(KYINNO、KC-0979)、ヒトBCMAを高発現する細胞系NCI-H929(ATCC,CRL-9068)などの細胞との結合能力を、フローサイトメトリー細胞法FACSを用いて試験した。具体的には、HEK293T/hBCMA細胞とHEK293T/cynoBCMA細胞を消化し、DMEM完全培地で再懸濁する;また、NCI-H929細胞懸濁液を収集した。3種類の細胞の密度をそれぞれ1×106細胞/mLに調整した。96ウェルVプレート(Corning,#3894)に100μL細胞/ウェルで接種した後、最終濃度の2倍の3倍濃度勾配で希釈した測定対象抗体を100μL/ウェルで加えた。細胞を4℃に置き、遮光して1時間インキュベートした。その後、100μL/ウェルで予冷のPBSリンス細胞を2回加え、500gで4℃で5分間遠心分離し、上清を廃棄した。さらに100μL/ウェルで蛍光二次抗体(Alexa Fluor 488-conjugated AffiniPure Goat Anti-Human IgG,Fcγ Fragment Specific、Jackson、#109-545-06、1:500希釈)を添加し、4℃で遮光して30分間インキュベートした。細胞を100μL/ウェルで予冷のPBSで2回洗浄し、500g、4℃で5分間遠心分離し、上清を廃棄した。最後に、200μL/ウェルで予冷のPBSで細胞を再懸濁し、BD FACS CANToIIフローサイトメータまたはACEA NovoCyteフローサイトメータを用いて蛍光発光信号値を読み取り、ソフトウェアFlowJov 10(FlowJo、LLC)を用いてデータを処理し分析した。ソフトウェアGraphPad Prism 8を用いてデータ処理と作図分析を行い、4パラメータの非線形フィッティングにより、抗体の標的細胞に対する結合曲線及びEC50値などのパラメータを得た。
本実施例において、陽性対照1分子は抗BCMAのモノクローナル抗体PR000274である。
図44及び表7‐3に示すように、抗ヒトBCMAのHCAbモノクローナル抗体PR000943、PR001035及びPR001046はHEK293T/hBCMAと結合することができ、結合曲線のEC50はいずれも陽性対照1より優れている。
図46及び表74に示すように、抗ヒトBCMAのHCAbモノクローナル抗体PR000940、PR000943、PR001035及びPR001046はNCI‐H929と結合することができ、結合曲線のEC50はいずれも陽性対照1より優れている。
図45及び表75に示すように、抗ヒトBCMAのHCAbモノクローナル抗体PR000943及びPR001046はHEK293T/cynoBCMAと結合することができ、結合曲線のEC50はいずれも陽性対照1より優れている。PR001035はカニクイザルBCMAを結合する能力が弱い。
本実施例は、ヒトBCMAを発現する細胞に対する抗ヒトBCMAのHCAb抗体内在化媒介による殺傷を研究するためである。具体的には、ヒトBCMAを高発現するHEK293T細胞株HEK293T/hBCMA(KYINNO、KC-0233)を消化し、DMEM完全培地を用いて細胞を再懸濁し、5000または10000個/ウェルで96ウェル黒壁透明底のプレート(Perkin Elmer,#6005225)を計数し接種した。組換え抗体を9つの異なる濃度に連続的に希釈して添加し、最終濃度は100nMからである。a-hFc-MMAF(Moradec,#AH-102-AF)を加えて最終濃度を1μg/mlとした。プレートを37℃、5%CO2条件下で72時間インキュベートした後、CTGキット(Promega,#G7573)で分解し、Enspire(登録商標)多機能ボードリーダー(PerkinElmer,Inc.)で発光を検出する。ソフトウェアGraphPad Prism 8を用いてデータ処理と作図分析を行い、4パラメータの非線形フィッティングにより、抗体の標的細胞に対する結合曲線及びEC50値と最大殺傷率などのパラメータを得た。
本実施例では、バイオフィルム干渉(BLI)技術を用いて、Octet Red96e分子相互作用分析器(ForteBio、Octet Red 96 e)を用いて、抗BCMAの抗体とBCMA抗原タンパク質との結合動力学を分析した。本実施例では、BCMAタンパク質はビオチン化されたヒトBCMA‐Fc,Avitag組換えタンパク質(ACRO Biosystems,#BC7‐H82F0)であり、試験緩衝液は1x動力学緩衝液(10x動力学緩衝液(ForteBio,#18‐1105)から希釈)である。
本実施例は、HCAb抗体PR001046がBCMAと結合する親和性を高めるために抗体工学的方法を用いた。
HCAb抗体PR001046の可変領域VHのCDR領域を二ラウンド定点突然変異することにより、BCMAと結合する親和性が向上した変異体を得る。
実施例7.5に記載の方法を用いてBLI技術でPR001046 VHから誘導された単一ドメイン構造変異体分子とBCMAとの結合能力を測定した。本実施例は、PR001046 VH誘導体変異体分子を含む上清を直接用い、Octet Red96e分子相互作用分析器を用いて変異体分子とビオチン化したヒトBCMA‐Fc,Avitag組換えタンパク質との結合動力学を分析した。結合動力学における解離速度によって変異体分子をランキングし、解離速度がより遅い(より強い親和性)変異体分子を選択した。本実施例では、各変異体分子とBCMAとの結合動力学の解離速度のみを分析し、初期分子(PR001046 VH)との相対値(Kdis Fold)を計算する;「Kdis倍数」が1未満であることは、変異体分子が初期分子よりも遅い解離速度を有することを意味する。
表79に示すように、16個のPR001046 VHから誘導される変異体分子は、初期分子よりも遅い解離速度(すなわちBCMAに対してより強い親和性)を有する。
実施例7.3に記載の方法を用いて、PR001046 VHから誘導された単一ドメイン構造変異体分子とヒトBCMAを高発現する細胞NCI‐H929との結合を決定した。特に、その組換え変異体分子はFlagタグを持つVH単一ドメイン抗体分子であり、FACS実験ではこのタグに対する蛍光二次抗体を用いる必要があることを指摘した。
抗CD3抗体は、T細胞結合二重特異性抗体(T‐Cell Engager Bispecific Antibody)を構築するための重要な構成要素である。本実施例は異なる方法で抗CD3の抗体を発見し、作製することを紹介した。
Harbour H2L2マウス(Harbour Antibodies BV)は、ヒト免疫グロブリン免疫ライブラリを持つトランスジェニックマウスであり、その産生抗体は完全なヒト抗体可変ドメインとラット定常ドメインを有する。CD3抗原を用いてHarbour H2L2マウスに対して多ラウンド免疫を行い;前記抗原は、組換えヒトCD3融合タンパク質、またはヒトCD3EのN末端の前の27個アミノ酸残基を含む短いペプチド、またはヒトT細胞であり得る。マウス血清中のCD3特異性抗体価が特定のレベルに達したことを検出した後、マウスの脾臓細胞を取り出し、そこからB細胞を分離した;その後、RNAを抽出し、RT‐PCRを用いてcDNAを作製した。cDNAをテンプレートとし、PCRによりVHとVκフラグメントを増幅し、その後繰り返しPCRを行ってscFvフラグメントを作製し、予め線形化された担体pHBM‐scFv‐STに接続した。前記で得られた結合生成物をMC1061F'電気転移受容体細胞(Lucigen,#60512‐1)に転換し、次いでファージライブラリを作製した。ビオチン化抗原タンパク質を用いて、多ラウンドのバイオスクリーニングを行い、ヒトCD3/TCR複合体を高発現するCHO-K1細胞CHO-K1/hCD3(HARBOURBIOMED)を用いてスクリーニングし、陽性クローンを同定し、配列を測定した。表7‐11は、ファージディスプレイ技術によってスクリーニングして得られたCD3と結合する単鎖可変領域融合タンパク質(scFv‐Fc構造)を示す。
SP34は、マウス由来の抗ヒトCD3抗体であり、T細胞を活性化する機能を持つ。SP34は、多種の霊長類CD3(例えばヒト及びカニクイザルCD3)を結合することができるごく少数の抗体である(Salmeron,A.etal,J ImmunoL147(1991)3047‐3052;Conrad M.L., et. al, CytometryA71(2007)925-933を参照)。その可変領域配列VH及びVLはWO2016071004A1に由来する。
CD3抗体がヒトのT細胞と結合する結合能力を、フローサイトメトリーFACS及び実施例7.10に記載の方法を用いて試験した。図66に示すように、CD3抗体はすべてヒトT細胞と結合することができ、特に、全ヒト由来CD3抗体(PR002161、PR002163)がT細胞に結合する能力は、SP34キメラ抗体(PR000260)と類似している(図66(F)));PR000510とPR000511はSP34由来のヒト由来化抗体であり、そのT細胞と結合する能力はPR000260に近い(図66(A‐B)) ;PR001848、PR003886、及びPR004616はSP34由来のヒト由来化抗体であり、そのT細胞と結合する能力を配列最適化により異なる程度で弱めることにより(図66(C‐E))、下記の二重抗体設計においてT細胞活性化機能を選択的に調節する。
本実施例は、抗CD3のIgG抗体の抗原結合ドメインFabと、抗BCMAのHCAb抗体の抗原結合ドメインVHとを用いて、多種類の構造の抗BCMA×CD3の二重特異性抗体分子を構築する。抗CD3の抗原結合ドメインFabの配列は、表7‐11及び表7‐13に記載の配列に由来し;抗BCMAの抗原結合ドメインVHの配列は、表7‐1及び表7‐8に記載の配列に由来する。
抗CD3のIgG抗体と抗BCMAの重鎖抗体を用いて、実施例1.5と実施例1.6に記載の構造に従ってFab‐FC‐VH(n,n={1,2})非対称構造のBCMA×CD3二重抗体分子を設計し、表7‐14にまとめた。そして、実施例1.6.2に記載の構造に従って2つの異なる抗BCMAのVHドメイン配列を含む3価非対称構造分子を設計し、表7‐15にまとめた;そして、実施例2に記載の方法に従って抗体分子サンプルを作製し、分析を行い、表7‐16にまとめた。
抗CD3のIgG抗体と抗BCMAの重鎖抗体を用いて、実施例1.7と実施例1.8に記載の構造に従ってscFv‐FC‐VH(n,n={1,2})非対称構造のBCMA×CD3二重抗体分子を設計し、表7‐17にまとめた。そして、実施例2に記載の方法に従って抗体分子サンプルを作製し、分析を行い、表7‐18にまとめた。
表7‐20及び表7‐19は、本実施例によって構築されたBCMA×CD3二重抗体分子及び対照分子の配列に対応する配列番号を示す。二重抗体分子において、抗CD3の抗原結合ドメインFabの配列は、表7‐11及び表7‐13に記載の配列に由来し;抗BCMAの抗原結合ドメインVHの配列は、表7‐1及び表7‐8に記載の配列に由来する。表7‐20の構造番号は、表1‐1及び図1に対応する。表7‐21は、BCMA×CD3二重特異性または多特異性抗体分子の異なる抗原結合ドメインに対応するCDR配列の配列番号を示す。
本実施例は、BCMA×CD3二重特異性抗体がBCMAに結合する能力を研究するためである。
図50及び表7‐22に示すように、二重抗体分子はいずれもヒトBCMAを結合することができ、しかも2つの直列に形成されたBCMA結合ドメインを含むFab‐Fc‐VH(2)非対称構造の二重抗体分子は、1つのBCMA結合ドメインのみを有するFab‐Fc‐VH非対称構造の二重抗体分子よりも、強いBCMAと結合する能力を有する。
図52及び表7‐23に示すように、二重抗体分子はいずれもヒトBCMAと結合することができる。全体的に言えば、一つのBCMA結合ドメインのみを有する二重抗体分子(例えば、Fab‐Fc‐VH構造とscFv‐Fc‐VH構造で)がBCMAと結合する能力は、2価BCMA結合ドメインを有する分子(例えば、IgGモノクローナル抗体、またはFab‐Fc‐VH(2)非対称構造の二重抗体分子)より弱い。図52(E)に示すように、PR001046から誘導された親和性が向上したHCAb変異体に基づいて一連のFab‐Fc‐VH構造の二重抗体分子(PR003867,...、PR003882)が構築されており、これらの二重抗体分子は、PR002929(PR001046 HCAbで構築されたFab‐Fc‐VH構造)に対してBCMAを結合する能力がより強い。Fab‐Fc‐VH(2)非対称構造の二重抗体分子がBCMAに結合する能力は、陽性対照1及び3より優れている。
図51及び表7‐24に示すように、二重抗体分子はいずれもカニクイザルBCMAと結合することができるが、陽性対照2二重抗体分子はカニクイザルBCMAと結合することができない。また、2つのPR001046のVH直列ドメインを含むFab‐FC‐VH(2)は、カニクイザルBCMAを結合する能力がより強い。
本実施例は、BCMA×CD3二重特異性抗体がT細胞に結合する能力を研究するためのものである。
抗体分子のヒトまたはカニクイザルT細胞に対する結合能力を、フローサイトメトリーFACSを用いて試験した。具体的には、T細胞分離キット(Meltenyi,#130‐096‐535)を用いてヒトまたはカニクイザルのPBMC細胞からT細胞を分離した。T細胞密度をそれぞれ1×106細胞/mLに調整した。96ウェルプレート(Corning,#3894)に100μL細胞/ウェルで接種し、次いで最終濃度の2倍の3倍濃度勾配で希釈された測定対象抗体を100μL/ウェルで添加した。細胞を4℃に置き、遮光して1時間インキュベートした。その後、予冷のPBSリンス細胞を100μL/ウェルで2回添加し、4℃で500gで5分間遠心分離し、上清を廃棄した。さらに100μL/ウェルで蛍光二次抗体(Alexa Fluor 488-conjugated AffiniPure Goat Anti-Human IgG,Fcγ Fragment Specific,Jackson,#109-545-06,1:500希釈)を添加し、4℃で30分間遮光して培養した。細胞を100μL/ウェルで予冷のPBSで2回洗浄し、4℃で500gで5分間遠心分離し、上清を廃棄した。最後に、200μL/ウェルで予冷のPBSで細胞を再懸濁し、BD FACS CANToIIフローサイトメータまたはACEA NovoCyteフローサイトメータを用いて蛍光発光信号値を読み取り、ソフトウェアFlowJov 10(FlowJo、LLC)を用いてデータを処理し分析した。ソフトウェアGraphPad Prism 8を用いてデータ処理と作図分析を行い、4パラメータの非線形フィッティングにより、抗体の標的細胞に対する結合曲線及びEC50値などのパラメータを得た。
図53及び表7‐25に示すように、二重抗体分子はいずれもヒトのT細胞に結合することができる。陽性対照分子SP34は二価のIgG構造であり、T細胞を結合する能力が非常に強い。陽性対照2二重抗体分子がT細胞と結合する能力は弱い。二重抗体分子のCD3末端における構造は一価のFabであり、そのFab配列は抗CD3のモノクローナル抗体SP34に由来する変異体配列であり、配列設計と突然変異によって、これらの変異体配列のT細胞と結合する能力が異なる程度で低下し、これは、CD3末端のT細胞活性化能力を低下させ、サイトカインの過剰放出による副作用を減少させるためである。異なる二重抗体分子のCD3端部には、異なる構造または変異体配列があり、T細胞を結合する能力も異なる。臨床的には活性と安全性とのバランスに対する異なる需要があり、T細胞に対する結合能力についての要求も異なる。
図54及び表7‐26に示すように、本実施例の二重抗体分子のCD3末端Fab配列は、抗CD3のモノクローナル抗体SP34に由来する変異体配列であるため、カニクイザルのT細胞を結合することができ、一方、陽性対照2二重抗体分子はカニクイザルのT細胞を結合することができない。
本実施例は、実施例7.5に記載の方法に従ってOctet Red96e分子相互作用分析器(ForteBio、Octet Red96e)を用いてBCMA×CD3二重抗体分子とBCMA抗原タンパク質との結合動力学を分析した。
本実施例の二重抗体分子はいずれもヒト及びカニクイザルのBCMA(表7‐27及び表7‐28)に結合することができるが、陽性対照2二重抗体分子はカニクイザルのBCMAに結合することができなかった。また、本実施例の二重抗体分子がヒトBCMA(ACRO Biosystems,#BC7‐H82F0)及びカニクイザルBCMA(ACRO Biosystems,#BCA‐C82F4)と結合する親和性(KD)の比(表7‐29)は5倍以内(0.5~5)であり、良好な関連性があることを示している。
本実施例は、BCMA×CD3二重抗体分子媒介のT細胞活性化と特異的な標的細胞殺傷能力を研究した。
本実施例は、BCMAを高発現する腫瘍細胞NCI-H929(ATCC,CRL-9068)が存在する時、二重抗体分子がT細胞を活性化し、サイトカインを放出し、腫瘍細胞を殺傷する能力を研究した。エフェクター細胞は、ヒト末梢血単一核細胞PBMCであってもよいし、PBMCから単離されたT細胞であってもよい。
具体的には、培地(5%FBSを含むRPMI1640培地)を用いてエフェクター細胞(PBMCまたはT細胞)の密度を1.1×106細胞/mLに調整し、NCI-H929の密度を0.11×106細胞/mLに調整し、2種類の細胞懸濁液をそれぞれ90μL細胞/ウェルで96ウェルプレート(Corning,#3799)に接種した。その後、20μL/ウェルで異なる濃度の測定対象抗体(最終濃度の10倍の勾配希釈)を添加し、抗体濃度は最終濃度が30nM、または最高最終濃度が1nMから20倍濃度勾配で希釈された合計3濃度、または最高最終濃度が30nMから4倍濃度勾配で希釈された合計10濃度に希釈し;hIgG1 iso(CrownBio,#C0001)を同型対照とした。最終的な効果標的比は10:1で、2つの複合ウェル添加を設定する。測定対象抗体を添加したウェルをER(測定対象抗体サンプルとエフェクター細胞及び標的細胞を含む、実験ウェル)と呼び;同時に、プレート内に以下の式中のパラメータ組成に従って異なる対照群を設置する:ESR(エフェクター細胞自然放出ウェル、エフェクター細胞と培地のみ);TSR(標的細胞自然放出ウェル、標的細胞と培地のみ);CMB(培地参照ウェル、培地のみ);TMR(標的細胞の最大放出ウェル、標的細胞と培地のみ);VCC(体積参照ウェル、培地のみ)。96ウェルプレートを37℃の二酸化炭素培養箱に24時間インキュベートした。その後、TMRウェルとVCCウェルに10μL分解液を加え、30分間インキュベートを続けた。インキュベーション完了後、50μL/ウェルの上清液を採取し、96ウェルプレート(Corning,#:3599)に添加し、そして50μL/ウェルで細胞毒性検出試薬(CytoTox96(登録商標)非放射性細胞毒性検出キット、Promega,#G1780)を添加する。室温で30分間インキュベートした後、50μLの反応停止液を加えて反応を停止した。最後にEnspire(登録商標) マルチファンクションリーダ(Perkin Elmer,Inc.)で490nMで光吸収値を読み取り、次の計算式に従って標的細胞殺傷率を計算した。
ここで、次の操作を行う。
ER=実験ウェル、サンプル+エフェクター細胞+標的細胞
ESR=エフェクター細胞自然放出ウェル、エフェクター細胞+培地
TSR=標的細胞自然放出ウェル、標的細胞+培地
TMR=標的細胞最大放出ウェル、標的細胞+培地+分解液
VCC=体積参照ウェル、培地+溶解液
CMB=培地参照ウェル、培地
本実施例は、実施例7.12.1に記載の方法に基づいて、二重抗体分子の標的細胞殺傷効果に対するBCMAリガンド(APRILとBAFF)の影響をさらに研究し、多発性骨髄腫患者の血漿中のAPRILとBAFFの濃度が約100ng/ml(Blood 2004、103:3148-3157)である。具体的には、実施例7.12.1に記載の方法において、異なる濃度の測定対象抗体を添加する際にも、可溶性リガンドタンパク質の最終濃度が100ng/mlと10ng/mlとなるようにBCMAリガンドタンパク質を20μL/ウェルで添加した。可溶性APRILタンパク質(sAPRIL)は、組換えヒト由来APRILタンパク質(Novoprotein,#CU89)である;可溶性BAFFタンパク質(sBAFF)は、組換えヒト由来BAFFタンパク質(ACRO Biosystems,#BAF‐H5248)である。エフェクター細胞は、ヒトPBMCまたはT細胞であり、標的細胞はNCI‐H929である。実施例7.12.1に記載の方法を用いて標的細胞殺傷率を計算した。
BCMAは、膜貫通タンパク質であるが、その細胞外領域には細胞膜から脱落して可溶性BCMA(sBCMA)を形成できるものがあり、多発性骨髄腫患者の血漿中でsBCMAのレベルの異なる程度の上昇が観察され、中央値濃度は176.0ng/ml(Leuk Res.2019 Jun;81:62-66)であった。
本実施例は、マウスまたはラット内のFab‐Fc‐VH非対称構造を有するBCMA×CD3二重抗体分子(PR002929)とFab‐Fc‐VH(2)非対称構造を有するBCMA×CD3二重抗体分子(PR003178)の単用量の薬物動態学特性を研究した。
BCMA×CD3双特異性抗体のインビボ抗腫瘍薬効を評価するために、6~8週間雌性NCGマウス用い、腫瘍細胞接種3日前、すべてのマウスに3×106人のPBMCを腹腔内注射(i.p.)し、次いで腫瘍細胞接種当日に各実験マウスに5×106NCI-H929細胞を皮下接種し、細胞をPBSとMatrigel(1:1)混合液(0.1ml/匹)に再懸濁した。腫瘍体積が90mm3に達したとき、マウスをランダムにグループ化し、各グループ6匹のマウスを用いた。グループ化後、特定濃度のPBSで希釈された抗体薬を特定の用量と頻度で静脈内注射(i.v.)で投与した。本実施例は多種の投与方案を採用した:1)10μg/マウスの用量群、単回投与;2)10μg/マウスと3μg/マウスの用量群、週1回合計2回(QW*2)で投与した。各試験はPBSを空白対照群とした。腫瘍体積及びマウス体重は、初回投与後3日目、7日目、10日目及び14日目に測定した。腫瘍サイズ計算式:腫瘍体積(mm3)=0.5×(腫瘍長径×腫瘍短径2)。
図64(A‐B)に示すように、PR001990、PR002309、PR002313及び陽性対照2などの二重抗体分子の10μg/マウスの単回投与量群は、いずれも腫瘍の成長を抑制する薬効を示し、PR001990及びPR002309の薬効は同等用量の陽性対照2分子より顕著に優れている。各群のマウスの体重変化はいずれも正常範囲内であった。
図64(C‐D)に示すように、すべての二重抗体分子の異なる投与量群は、異なる程度の腫瘍成長抑制の薬効を示している。全体的に言えば、10μg/マウス群の薬効は3μg/マウス群の薬効より優れている;また、10μg/マウスのQW*2の投与量では、PR003177とPR003178の薬効は同用量の陽性対照2分子より優れていた;PR002895の3μg/マウス用量群の薬効は、陽性対照2分子の10μg/マウス用量群よりもやや優れていた。各群のマウスの体重変化はいずれも正常範囲内であった。
本実施例は、抗CD3のIgG抗体の抗原結合ドメインFab(またはscFv形式)と抗BCMAのHCAb抗体の抗原結合ドメインVHを用いて、多種の非対称構造の抗BCMA×CD3の二重特異性抗体分子を構築した。HCAbに基づく二重特異性抗体分子構造の構築のフレキシビリティを示した。本実施例の二重抗体分子は、ヒトのBCMA及びヒトのT細胞と同時に結合することができ、またカニクイザルのBCMAとカニクイザルのT細胞を結合することができるので、カニクイザルを非霊長類毒理評価に利用することができ、この点は臨床開発にとって非常に重要である。一方、陽性対照2二重抗体分子は、このようなカニクイザルの標的と結合する性能はなかった。
本実施例は、一連のBCMA×CD3二重抗体分子を構築し、CD3結合ドメインの配列及び微細構造を調節することによってそのT細胞と結合する能力を変え、BCMA結合ドメインの配列とドメイン数を調節することによって、BCMAを発現する標的細胞と結合する能力を変え、さらに二重抗体分子のT細胞活性化と特異的な標的細胞殺傷能力を調節する。インビトロ標的細胞殺傷実験において、Fab‐FC‐VH(2)非対称構造を有する二重抗体分子PR002309、PR002895、PR002953及びPR003178の標的細胞殺傷EC50は、陽性対照2より優れている;また、PR002895、PR002953及びPR003178による複数種類のサイトカイン放出レベルは、陽性対照3よりも低かった。マウス体内の抗腫瘍薬効モデルにおいて、PR002309とPR003178の薬効は同等用量の陽性対照2分子より顕著に優れ;PR002895の低用量群の薬効は、陽性対照2分子の高用量群よりもやや優れていた。
特に、PR003178の標的細胞殺傷能力は陽性対照2より明らかに優れ、陽性対照3と同等である;しかし、PR003178は陽性対照3よりも低いサイトカイン放出レベルを有する。これは、PR003178は有効な腫瘍殺傷効率を維持しながら、サイトカイン放出レベルを制御してサイトカイン放出症候群のリスクを低減し、臨床的に有効性と安全性をよりよくバランスさせ、より良い薬物治療ウィンドウをもたらせる可能性があることを示している。
Claims (19)
- 少なくとも2つのタンパク質機能領域を含有する結合タンパク質であって、
前記結合タンパク質がタンパク質機能領域A及びタンパク質機能領域Bを含み;前記タンパク質機能領域A及び前記タンパク質機能領域Bが異なる抗原または抗原エピトープを標的とし、そのなかで前記タンパク質機能領域AはFabまたはscFv構造であり、前記タンパク質機能領域BはVH構造であり、前記タンパク質機能領域A及びタンパク質機能領域Bの数はそれぞれ1つまたは複数であり;好ましく、前記結合タンパク質は対称構造または非対称構造であり、及び/または、前記結合タンパク質はさらにFcを含み、前記Fcの数は2つであり、それによって形成されたFc二量体は好ましくホモ二量体またはヘテロ二量体である、結合タンパク質。 - 請求項1に記載の結合タンパク質であって、
(I)前記結合タンパク質は対称構造であり、前記対称構造は左右対称のIgG類似構造であり、そのなかで前記タンパク質機能領域Aの数は2つであり、前記タンパク質機能領域Bの数は2つまたは4つであり;
好ましく、前記タンパク質機能領域Bの数は2つである場合、前記結合タンパク質は四価結合タンパク質であり、下記の構造を含み:(a)前記結合タンパク質はN末端からC末端まで順にタンパク質機能領域A、タンパク質機能領域B及びFcであり、そのなかで前記タンパク質機能領域Aと前記タンパク質機能領域Bは第一接続ペプチド(L1)によって接続され、前記タンパク質機能領域Bと前記Fcは第二接続ペプチド(L2)によって接続され;または、(b)前記結合タンパク質はN末端からC末端まで順にタンパク質機能領域B、タンパク質機能領域A及びFcであり、そのなかで前記タンパク質機能領域Bと前記タンパク質機能領域Aは接続ペプチドによって接続され、前記タンパク質機能領域Aと前記Fcはヒンジ領域によって接続され;または、(c)前記結合タンパク質はN末端からC末端まで順にタンパク質機能領域A、Fc及びタンパク質機能領域Bであり、そのなかで前記タンパク質機能領域AとFcはヒンジ領域によって接続され、前記Fcと前記タンパク質機能領域Bは接続ペプチドによって接続され;
前記タンパク質機能領域Bの数は4つである場合、前記結合タンパク質は六価結合タンパク質であり、下記の構造を含み:追加の2つのタンパク質機能領域Bはさらに前記(a)または(b)または(c)に記載の結合タンパク質のN末端またはC末端に接続され;好ましく前記(c)に記載の結合タンパク質のFcのC末端または元のタンパク質機能領域BのC末端に接続され、または前記(b)に記載の結合タンパク質の元のタンパク質機能領域Bとともにタンパク質機能領域AのN末端に接続され;
好ましく、前記結合タンパク質はさらにタンパク質機能領域Cを含み、前記タンパク質機能領域Cと前記タンパク質機能領域A、タンパク質機能領域Bが異なる抗原または抗原エピトープを標的とし、前記結合タンパク質は六価または八価の三重特異性結合タンパク質であり、下記の構造を含み:前記タンパク質機能領域Cが前記結合タンパク質のN末端またはC末端に接続され;好ましく前記タンパク質機能領域Cの数は2つであり、前記タンパク質機能領域Cが前記(c)に記載の結合タンパク質のC末端に接続され、または、前記(b)に記載の結合タンパク質のタンパク質機能領域Bと同じ、前記タンパク質機能領域AのN末端に接続され;または、
(II)前記結合タンパク質は非対称構造であり、前記非対称構造が左右非対称のIgG類似構造を呈し、そのなかで左アームはFabまたはscFv構造のタンパク質機能領域Aであり、右アームはVH構造のタンパク質機能領域Bであり、前記タンパク質機能領域A及び前記タンパク質機能領域Bがそれぞれ1つのFcと接続され;好ましく前記タンパク質機能領域Aの数は1つであり、前記タンパク質機能領域Bの数は1つまたは2つまたは3つであり;
好ましく、前記タンパク質機能領域Bの数は1つである場合、前記結合タンパク質は二価結合タンパク質であり、下記の構造を含み:前記タンパク質機能領域Aは(d)従来のFab構造、または(e)Fab(cross VH/VL)構造、または(f)Fab(cross Fd/LC)構造であり;前記タンパク質機能領域Bの数は2つである場合、前記結合タンパク質は三価結合タンパク質であり、下記の構造を含み:左アームの前記タンパク質機能領域Aは前記(d)または(e)または(f)であり、2つ目のタンパク質機能領域Bが左アームの前記タンパク質機能領域AのN末端またはC末端、または右アームの1つ目のタンパク質機能領域BのN末端、または前記FcのC末端に接続され、好ましく2つ目のタンパク質機能領域Bが右アームの1つ目のタンパク質機能領域BのN末端に接続され;前記タンパク質機能領域Bの数は3つである場合、前記結合タンパク質は四価結合タンパク質であり、具体に下記の構造を含み:左アームの前記タンパク質機能領域Aは前記(d)または(e)または(f)構造であり、3つ目のタンパク質機能領域Bはさらに左アームの前記タンパク質機能領域AのN末端またはC末端、または左アームの2つ目のタンパク質機能領域BのN末端またはC末端、または右アームの1つ目または2つ目のタンパク質機能領域BのN末端、または前記FcのC末端に接続され、好ましく2つ目のタンパク質機能領域Bが右アームの1つ目のタンパク質機能領域BのN末端に接続され、且つ3つ目のタンパク質機能領域Bが前記2つ目のタンパク質機能領域BのN末端に接続され;または、
前記タンパク質機能領域Bの数は1つである場合、前記結合タンパク質は二価結合タンパク質であり、下記の構造を含み:左アームの前記タンパク質機能領域Aは(g)scFv構造であり、前記scFvはVHの末端またはVLの末端によってFcと接続され;前記タンパク質機能領域Bの数は2つである場合、前記結合タンパク質は三価結合タンパク質であり、具体に下記の構造を含み:左アームの前記タンパク質機能領域Aは(g)であり、2つ目のタンパク質機能領域Bが左アームの前記タンパク質機能領域AのN末端、または右アームの1つ目のタンパク質機能領域BのN末端、または前記FcのC末端に接続され、好ましく2つ目のタンパク質機能領域Bが右アームの1つ目のタンパク質機能領域BのN末端に接続され;前記タンパク質機能領域Bの数は3つである場合、前記結合タンパク質は四価結合タンパク質であり、具体に下記の構造を含み:左アームの前記タンパク質機能領域Aは(g)であり、3つ目のタンパク質機能領域Bはさらに左アームの前記タンパク質機能領域AのN末端、または2つ目のタンパク質機能領域BのN末端またはC末端、または前記FcのC末端に接続され、好ましく2つ目のタンパク質機能領域Bが右アームの1つ目のタンパク質機能領域BのN末端に接続され、且つ3つ目のタンパク質機能領域Bが前記2つ目のタンパク質機能領域BのN末端に接続され;
好ましく、前記結合タンパク質はさらにタンパク質機能領域Cを含み、前記結合タンパク質は三価または多価の多特異性結合タンパク質であり、そのなかで、前記タンパク質機能領域Cと前記タンパク質機能領域A、タンパク質機能領域Bが異なる抗原または抗原エピトープを標的とし、前記タンパク質機能領域Cが前記結合タンパク質のN末端またはC末端に接続され;好ましく前記タンパク質機能領域Cが前記(d)、(e)、(f)または(g)に記載の結合タンパク質のタンパク質機能領域BのN末端に接続され;
より一層好ましく、前記結合タンパク質はさらにタンパク質機能領域Dを含み、前記結合タンパク質は四価または多価の多特異性結合タンパク質であり、具体に:前記タンパク質機能領域Dと前記タンパク質機能領域A、タンパク質機能領域B、タンパク質機能領域Cが異なる抗原または抗原エピトープを標的とし、前記タンパク質機能領域Dが前記結合タンパク質のN末端またはC末端に接続され;好ましく前記タンパク質機能領域Dが前記(d)、(e)、(f)または(g)に記載の結合タンパク質のタンパク質機能領域BのN末端に接続される、結合タンパク質。 - 請求項1または2に記載の結合タンパク質であって、
(A)前記結合タンパク質が四本のポリペプチド鎖を有し、そのなかで両本は同じの短鎖であり、他の両本は同じの長鎖であり、そのなかで、(1)前記短鎖はN末端からC末端まで順にVH_A-CH1を含み、前記長鎖はN末端からC末端まで順にVL_A-CL-L1-VH_B-L2-CH2-CH3を含み;または(2)前記短鎖はN末端からC末端まで順にVL_A-CLを含み、前記長鎖はN末端からC末端まで順にVH_A-CH1-L1-VH_B-L2-CH2-CH3を含み;または(3)前記短鎖はN末端からC末端まで順にVL_A-CLを含み、前記長鎖はN末端からC末端まで順にVH_B-L-VH_A-CH1-h-CH2-CH3を含み;または(4)前記短鎖はN末端からC末端まで順にVH_B-L-VL_A-CLを含み、前記長鎖はN末端からC末端まで順にVH_A-CH1-h-CH2-CH3を含み;または(5)前記短鎖はN末端からC末端まで順にVL_A-CLを含み、前記長鎖はN末端からC末端まで順にVH_A-CH1-h-CH2-CH3-L-VH_Bを含み;または(6)前記短鎖はN末端からC末端まで順にVL_A-CL-L-VH_Bを含み、前記長鎖はN末端からC末端まで順にVH_A-CH1-h-CH2-CH3を含み;または(7)前記短鎖はN末端からC末端まで順にVL_A-CLを含み、前記長鎖はN末端からC末端まで順にVH_A-CH1-h-CH2-CH3-L1-VH_B-L2-VH_Bを含み;または(8)前記短鎖はN末端からC末端まで順にVL_A-CLを含み、前記長鎖はN末端からC末端まで順にVH_A-CH1-h-CH2-CH3-L1-VH_B-L2-VH_Cを含み;または(9)前記短鎖はN末端からC末端まで順にVH_B-L1-VL_A-CLを含み、前記長鎖はN末端からC末端まで順にVH_B-L2-VH_A-CH1-h-CH2-CH3を含み;または(10)前記短鎖はN末端からC末端まで順にVH_B-L1-VL_A-CLを含み、前記長鎖はN末端からC末端まで順にVH_C-L2-VH_A-CH1-h-CH2-CH3を含み;そのなかで、前記L、L1及びL2は接続ペプチドであり、前記hはヒンジ領域または接続ペプチドであり、前記ヒンジ領域または接続ペプチドは例えば「-」、GSまたはSEQ ID NO: 495-519のアミノ酸配列に示し;または、
(B)前記結合タンパク質がポリペプチド鎖1、ポリペプチド鎖2及びポリペプチド鎖3の三種ポリペプチド鎖を有し、各種のポリペプチド鎖は一本であり、そのなかで、(11)前記ポリペプチド鎖1はN末端からC末端まで順にVL_A-CLを含み、前記ポリペプチド鎖2はN末端からC末端まで順にVH_A-CH1-h-CH2-CH3を含み、前記ポリペプチド鎖3はN末端からC末端まで順にVH_B-h-CH2-CH3を含み;または(12)前記ポリペプチド鎖1はN末端からC末端まで順にVH_A-CLを含み、前記ポリペプチド鎖2はN末端からC末端まで順にVL_A-CH1-h-CH2-CH3を含み、前記ポリペプチド鎖3はN末端からC末端まで順にVH_B-h-CH2-CH3を含み;または(13)前記ポリペプチド鎖1はN末端からC末端まで順にVH_A-CH1を含み、前記ポリペプチド鎖2はN末端からC末端まで順にVL_A-CL-h-CH2-CH3を含み、前記ポリペプチド鎖3はN末端からC末端まで順にVH_B-h-CH2-CH3を含み;または(14)前記ポリペプチド鎖1はN末端からC末端まで順にVL_A-CLを含み、前記ポリペプチド鎖2はN末端からC末端まで順にVH_A-CH1-h-CH2-CH3を含み、前記ポリペプチド鎖3はN末端からC末端まで順にVH_B-L-VH_B-h-CH2-CH3を含み;または(15)前記ポリペプチド鎖1はN末端からC末端まで順にVL_A-CLを含み、前記ポリペプチド鎖2はN末端からC末端まで順にVH_A-CH1-h-CH2-CH3を含み、前記ポリペプチド鎖3はN末端からC末端まで順にVH_C-L-VH_B-h-CH2-CH3を含み;または(16)前記ポリペプチド鎖1はN末端からC末端まで順にVH_A-CLを含み、前記ポリペプチド鎖2はN末端からC末端まで順にVL_A-CH1-h-CH2-CH3を含み、前記ポリペプチド鎖3はN末端からC末端まで順にVH_B-L-VH_B-h-CH2-CH3を含み;または(17)前記ポリペプチド鎖1はN末端からC末端まで順にVH_A-CLを含み、前記ポリペプチド鎖2はN末端からC末端まで順にVL_A-CH1-h-CH2-CH3を含み、前記ポリペプチド鎖3はN末端からC末端まで順にVH_C-L-VH_B-h-CH2-CH3を含み;または(18)前記ポリペプチド鎖1はN末端からC末端まで順にVH_A-CH1を含み、前記ポリペプチド鎖2はN末端からC末端まで順にVL_A-CL-h-CH2-CH3を含み、前記ポリペプチド鎖3はN末端からC末端まで順にVH_B-L-VH_B-h-CH2-CH3を含み;または(19)前記ポリペプチド鎖1はN末端からC末端まで順にVH_A-CH1を含み、前記ポリペプチド鎖2はN末端からC末端まで順にVL_A-CL-h-CH2-CH3を含み、前記ポリペプチド鎖3はN末端からC末端まで順にVH_C-L-VH_B-h-CH2-CH3を含み;または(26)前記ポリペプチド鎖1はN末端からC末端まで順にVL_A-CLを含み、前記ポリペプチド鎖2はN末端からC末端まで順にVH_A-CH1-h-CH2-CH3を含み、前記ポリペプチド鎖3はN末端からC末端まで順にVH_B-L1-VH_B-L2-VH_B-h-CH2-CH3を含み;または(27)前記ポリペプチド鎖1はN末端からC末端まで順にVL_A-CLを含み、前記ポリペプチド鎖2はN末端からC末端まで順にVH_A-CH1-h-CH2-CH3を含み、前記ポリペプチド鎖3はN末端からC末端まで順にVH_D-L1-VH_C-L2-VH_B-h-CH2-CH3を含み;そのなかで、前記L、L1及びL2は接続ペプチドであり、前記hはヒンジ領域または接続ペプチドであり、前記ヒンジ領域または接続ペプチドは例えば「-」、GSまたはSEQ ID NO: 495-519のアミノ酸配列に示し;または、
(C)前記結合タンパク質がポリペプチド鎖1及びポリペプチド鎖2の両種のポリペプチド鎖を有し、各種のポリペプチド鎖は一本であり、そのなかで、(20)前記ポリペプチド鎖1はN末端からC末端まで順にVL_A-L-VH_A-h-CH2-CH3を含み、前記ポリペプチド鎖2はN末端からC末端まで順にVH_B-h-CH2-CH3を含み;または(21)前記ポリペプチド鎖1はN末端からC末端まで順にVH_A-L-VL_A-h-CH2-CH3を含み、前記ポリペプチド鎖2はN末端からC末端まで順にVH_B-h-CH2-CH3を含み;または(22)前記ポリペプチド鎖1はN末端からC末端まで順にVL_A-L1-VH_A-h-CH2-CH3を含み、前記ポリペプチド鎖2はN末端からC末端まで順にVH_B-L2-VH_B-h-CH2-CH3を含み;または(23)前記ポリペプチド鎖1はN末端からC末端まで順にVH_A-L1-VL_A-h-CH2-CH3を含み、前記ポリペプチド鎖2はN末端からC末端まで順にVH_B-L2-VH_B-h-CH2-CH3を含み;または(24)前記ポリペプチド鎖1はN末端からC末端まで順にVL_A-L1-VH_A-h-CH2-CH3を含み、前記ポリペプチド鎖2はN末端からC末端まで順にVH_C-L2-VH_B-CH2-CH3を含み;または(25)前記ポリペプチド鎖1はN末端からC末端まで順にVH_A-L1-VL_A-h-CH2-CH3を含み、前記ポリペプチド鎖2はN末端からC末端まで順にVH_C-L2-VH_B-h-CH2-CH3を含み;そのなかで、前記L、L1及びL2は接続ペプチドであり、前記hはヒンジ領域または接続ペプチドであり、前記ヒンジ領域または接続ペプチドは例えば「-」、GSまたはSEQ ID NO: 495-519のアミノ酸配列に示す、結合タンパク質。 - 請求項1-3のいずれの一項に記載の結合タンパク質であって、
前記タンパク質機能領域Aまたは前記タンパク質機能領域BがPD-L1抗体、HER2抗体、B7H4抗体、CD3抗体、CTLA4抗体、4-1BB抗体またはBCMA抗体から選択される一種であり;好ましく、前記タンパク質機能領域AはPD-L1抗体、HER2抗体、B7H4抗体またはCD3抗体であり、前記タンパク質機能領域BはCTLA4抗体、4-1BB抗体またはBCMA抗体であり;
好ましく、前記タンパク質機能領域AはPD-L1抗体であり、前記タンパク質機能領域BはCTLA4抗体であり;または、前記タンパク質機能領域AはPD-L1抗体であり、前記タンパク質機能領域Bは4-1BB抗体であり;または、前記タンパク質機能領域AはHER2抗体であり、前記タンパク質機能領域BはCTLA4抗体であり;または、前記タンパク質機能領域AはB7H4抗体であり、前記タンパク質機能領域Bは4-1BB抗体であり;または、前記タンパク質機能領域AはCD3抗体であり、前記タンパク質機能領域BはBCMA抗体である、結合タンパク質。 - 請求項4に記載の結合タンパク質であって、
前記PD-L1抗体が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 167、188及び211に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、62及び122に示すアミノ酸配列であり;または、その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 167、188及び211に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、69及び122に示すアミノ酸配列であり;好ましく、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 282に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 233に示すアミノ酸配列を含み;または、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 282に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 240に示すアミノ酸配列を含み;及び、
前記PD-L1抗体が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 169、190及び213に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 16、64及び124に示すアミノ酸配列であり;好ましく、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 284に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 235に示すアミノ酸配列を含み;及び、
前記HER2抗体が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 171、190及び215に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 19、67及び127に示すアミノ酸配列であり;または、その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 176、196及び220に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 23、74及び132に示すアミノ酸配列であり;好ましく、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 286に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 238に示すアミノ酸配列を含み;または、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 293に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 247に示すアミノ酸配列を含み;及び、
前記B7H4抗体が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 180、191及び225に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 32、87及び143に示すアミノ酸配列であり;または、その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 177、191及び226に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 33、88及び144に示すアミノ酸配列であり;好ましく、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 298に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 261に示すアミノ酸配列を含み;または、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 299に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 262に示すアミノ酸配列を含み;及び、
前記CTLA4抗体が重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 17、65及び125に示すアミノ酸配列であり;好ましく、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 236に示すアミノ酸配列を含み;及び、
前記4-1BB抗体が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 170、191及び214に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 18、66及び126に示すアミノ酸配列であり;または、その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 170、191及び214に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 18、71及び126に示すアミノ酸配列であり;好ましく、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 285に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 237に示すアミノ酸配列を含み;または、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 289に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 242に示すアミノ酸配列を含み;及び、
前記4-1BB抗体が重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 27、79及び137に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 28、80及び138に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 29、82及び138に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 28、89及び145に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 28、81及び139に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、83及び140に示すアミノ酸配列であり;好ましく、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 252に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 253に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 255に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 264に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 254に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 256に示すアミノ酸配列を含み;及び、
前記CD3抗体が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 177、191及び221に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、84及び141に示すアミノ酸配列であり;または、その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 178、197及び222に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 31、85及び142に示すアミノ酸配列であり;または、その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 177、191及び223に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 31、86及び141に示すアミノ酸配列であり;または、その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 179、198及び224に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 31、85及び142に示すアミノ酸配列であり;好ましく、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 294に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 258に示すアミノ酸配列を含み;または、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 295に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 259に示すアミノ酸配列を含み;または、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 296に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 260に示すアミノ酸配列を含み;または、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 297に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 259に示すアミノ酸配列を含み;及び、
前記CD3抗体が軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 20、68及び128に示すアミノ酸配列であり;または、その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;好ましく、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 245に示すアミノ酸配列を含み;または、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 257に示すアミノ酸配列を含み;または、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;または、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 281に示すアミノ酸配列を含み;または、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 244に示すアミノ酸配列を含み;及び、
前記BCMA抗体が重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、75及び133に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 24、76及び134に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 25、77及び135に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 26、78及び136に示すアミノ酸配列であり;好ましく、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 248に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 249に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 250に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 251に示すアミノ酸配列を含み;及び、
前記BCMA抗体が重鎖可変領域を含み、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 26、90及び136に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 34、78及び146に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、78及び147に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、90及び147に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 36、90及び146に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、76及び147に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 34、78及び148に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、76及び136に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、90及び146に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 34、76及び136に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、76及び146に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 34、76及び146に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、90及び148に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、90及び136に示すアミノ酸配列であり;好ましく、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 265に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 266に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 267に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 268に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 269に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 270に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 271に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 272に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 273に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 274に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 275に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 276に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 277に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 278に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 279に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 280に示すアミノ酸配列を含む、結合タンパク質。 - 請求項1-4のいずれの一項に記載の結合タンパク質であって、
(A)前記結合タンパク質がタンパク質機能領域A及びタンパク質機能領域Bを含有し:
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 167、188及び211に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、69及び122に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 17、65及び125に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 167、188及び211に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、62及び122に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 17、65及び125に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 171、190及び215に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 19、67及び127に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 17、65及び125に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 176、196及び220に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 23、74及び132に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 17、65及び125に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 167、188及び211に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、69及び122に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 28、80及び138に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 167、188及び211に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、69及び122に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 27、79及び137に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 167、188及び211に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、69及び122に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 29、82及び138に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 180、191及び225に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 32、87及び143に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 28、80及び138に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 180、191及び225に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 32、87及び143に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 27、79及び137に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 180、191及び225に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 32、87及び143に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 28、89及び145に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 177、191及び226に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 33、88及び144に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 28、80及び138に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 177、191及び226に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 33、88及び144に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 28、81及び139に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 177、191及び226に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 33、88及び144に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、83及び140に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 20、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 24、76及び134に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 20、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 26、78及び136に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 20、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、75及び133に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、75及び133に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 26、78及び136に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 26、90及び136に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 36、90及び146に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、76及び147に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 34、78及び148に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、76及び136に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、90及び146に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 34、76及び136に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、76及び146に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 34、76及び146に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、90及び148に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、90及び136に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 34、78及び146に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、78及び147に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、90及び147に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 177、191及び221に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、84及び141に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 26、78及び136に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 178、197及び222に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 31、85及び142に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 26、78及び136に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 177、191及び223に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 31、86及び141に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 26、78及び136に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 179、198及び224に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 31、85及び142に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 26、78及び136に示すアミノ酸配列であり;または、
(B)前記結合タンパク質がタンパク質機能領域A、タンパク質機能領域B及びタンパク質機能領域Cを含有し:
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、75及び133に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Cが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 24、76及び134に示すアミノ酸配列であり;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 25、77及び135に示すアミノ酸配列であり;前記タンパク質機能領域Cが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 26、78及び136に示すアミノ酸配列である、結合タンパク質。 - 請求項1-6のいずれの一項に記載の結合タンパク質であって、
(A)前記結合タンパク質がタンパク質機能領域A及びタンパク質機能領域Bを含み:
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 282に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 240に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 236に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 282に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 233に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 236に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 286に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 238に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 236に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 293に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 247に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 236に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 282に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 240に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 253に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 282に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 240に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 252に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 282に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 240に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 255に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 298に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 261に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 253に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 298に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 261に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 252に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 298に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 261に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 264に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 299に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 262に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 253に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 299に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 262に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 254に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 299に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 262に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 256に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 245に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 249に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 245に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 251に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 245に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 248に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 257に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 248に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 257に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 251に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 281に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 251に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 251に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 265に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 269に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 270に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 271に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 272に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 273に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 274に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 275に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 276に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 277に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 278に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 279に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 280に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 266に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 267に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 268に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 244に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 249に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 244に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 251に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 294に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 258に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 251に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 295に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 259に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 251に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 296に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 260に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 251に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 297に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 259に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 251に示すアミノ酸配列を含み;または、
(B)前記結合タンパク質がタンパク質機能領域A、タンパク質機能領域B及びタンパク質機能領域Cを含有し:
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 257に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 248に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Cが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 249に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記タンパク質機能領域Aが軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み;その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 257に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Bが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 250に示すアミノ酸配列を含み;前記タンパク質機能領域Cが重鎖可変領域を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 251に示すアミノ酸配列を含む、結合タンパク質。 - 請求項1-7のいずれの一項に記載の結合タンパク質であって、
(1)前記結合タンパク質が両種のポリペプチド鎖を含み、そのなかで、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 371に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 372に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 371に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 373に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 353に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 362に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 363に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 364に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 365に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 364に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 353に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 366に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 353に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 369に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 353に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 370に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 353に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 394に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 353に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 395に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 363に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 310に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 363に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 396に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 363に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 362に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 363に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 394に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 363に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 395に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 368に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 378に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 379に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 380に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 381に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 382に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 383に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 385に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 388に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 389に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 374に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 375に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 386に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 387に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 401に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 402に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 305に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 403に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 402に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 409に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 359に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 404に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 405に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 315に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 359に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 406に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 376に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 377に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 397に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 398に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 399に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 400に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 402に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 401に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 402に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 403に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 405に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 404に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 405に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 406に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 371に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 486に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 353に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 460に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 353に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 461に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 353に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 462に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 487に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 488に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 360に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 455に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 360に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 456に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 360に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 457に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 360に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 458に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 360に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 459に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 419に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 412に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 419に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 414に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 440に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 428に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 441に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 428に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 442に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 428に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 443に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 428に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 487に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 520に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 353に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 521に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 371に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 522に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 360に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 523に示すアミノ酸配列を含み;または、
(2)前記結合タンパク質が3つのポリペプチド鎖を含み、そのなかで、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 353に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 407に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 390に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 353に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 408に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 392に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 391に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 390に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 393に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 392に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 391に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 434に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 391に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 435に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 393に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 436に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 351に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 393に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 437に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 438に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 434に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 438に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 435に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 439に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 436に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 367に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 439に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 437に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 361に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 481に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 482に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 361に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 481に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 483に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 361に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 481に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 484に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 361に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 481に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 485に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 411に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 412に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 411に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 414に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 415に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 416に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 410に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 415に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 416に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 412に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 415に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 416に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 414に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 417に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 418に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 412に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 417に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 418に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 414に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 423に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 426に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 423に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 427に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 423に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 428に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 423に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 429に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 444に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 449に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 450に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 449に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 444に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 445に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 444に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 446に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 450に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 445に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 450に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 446に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 444に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 447に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 444に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 448に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 450に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 447に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 450に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 448に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 445に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 446に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 463に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 464に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 465に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 466に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 467に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 468に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 469に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 470に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 471に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 472に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 473に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 474に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 475に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 476に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 477に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 478に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 479に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 454に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 480に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 423に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 430に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 423に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 431に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 423に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 432に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み;第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 423に示すアミノ酸配列を含み;第三ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 433に示すアミノ酸配列を含む、結合タンパク質。 - 請求項1-8のいずれの一項に記載の結合タンパク質であって、
さらに軽鎖定常領域を含み、前記軽鎖定常領域は好ましくヒト軽鎖定常領域であり、より好ましくはヒト軽鎖定常領域CκまたはCλであり;前記の結合タンパク質はさらに重鎖定常領域のCH1、CH2及び/またはCH3を含み、前記重鎖定常領域は好ましくヒト重鎖定常領域であり、より好ましくはヒトIgG1、IgG2、IgG3、IgG4重鎖定常領域であり;前記IgG1重鎖定常領域のFcにはさらにC220S、N297A、L234A、L235A、P329G、S239D、I332E、S354C、T366W 、Y349C、T366S、L368A、Y407V、M252Y、S254T、T256Eなどの突然変異における一種または多種を有し、前記突然変異部位についてはEU番号規則を使用する、結合タンパク質。 - 請求項1-9のいずれの一項に記載の結合タンパク質をコードする、単離の核酸。
- 請求項10に記載の単離の核酸を含む、発現ベクター。
- 請求項11に記載の発現ベクターを含み、
原核細胞または真核細胞である、ホスト細胞。 - 請求項1-9のいずれの一項に記載の結合タンパク質の作製方法であって、
前記作製方法が下記の段階を含み:前記のようなホスト細胞を培養し、培養物から前記結合タンパク質を獲得する、結合タンパク質の作製方法。 - 請求項1-9のいずれの一項に記載の結合タンパク質を含む、薬物組成物。
- 薬カセット一及び薬カセット二を含み、前記薬カセット一が請求項1-9のいずれの一項に記載の結合タンパク質または請求項14に記載の薬物組成物を含み、前記薬カセット二が癌を治療する他の抗体または薬物組成物を含む、薬キット。
- 請求項1-9のいずれの一項に記載の結合タンパク質または請求項14に記載の薬物組成物の癌を治療及び/または予防する薬物の作製における用途であって、
好ましく、前記癌は好ましく乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、腎癌、メラノーマ、肺癌、胃癌、肝臓癌、食道癌、子宮頸癌、頭頸部腫瘍、胆管癌、胆嚢癌、膀胱癌、肉腫、結腸直腸癌、リンパ腫または多発性骨髄腫などである、用途。 - 必要な被験者に請求項1-9のいずれの一項に記載の結合タンパク質、または請求項14に記載の薬物組成物、または請求項15に記載の薬キットに投与し;
好ましく、癌を治療する他の抗体、例えば免疫チェックポイント抗体及び/または化学療法薬物を投与することをさらに含む、癌を治療する方法。 - 軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み、
その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 177、191及び221に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、84及び141に示すアミノ酸配列であり;または、
その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 178、197及び222に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 31、85及び142に示すアミノ酸配列であり;または、
その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 177、191及び223に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 31、86及び141に示すアミノ酸配列であり;または、
その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 179、198及び224に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 31、85及び142に示すアミノ酸配列であり;または、
その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 20、68及び128に示すアミノ酸配列であり;または、
その軽鎖可変領域VLがLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 172、192及び216に示すアミノ酸配列であり;その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 30、68及び128に示すアミノ酸配列であり;
好ましく、その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 294に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 258に示すアミノ酸配列を含み;または、
その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 295に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 259に示すアミノ酸配列を含み;または、
その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 296に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 260に示すアミノ酸配列を含み;または、
その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 297に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 259に示すアミノ酸配列を含み;または、
その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 245に示すアミノ酸配列を含み;または、
その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 257に示すアミノ酸配列を含み;または、
その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 263に示すアミノ酸配列を含み;または、
その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 281に示すアミノ酸配列を含み;または、
その軽鎖可変領域VLがSEQ ID NO: 291に示すアミノ酸配列を含み;その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 244に示すアミノ酸配列を含み;
より好ましく、前記CD3抗体が両種のポリペプチド鎖を含み;そのなかで、第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み、第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 313に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み、第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 325に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み、第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 328に示すアミノ酸配列を含み;または、
第一ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 357に示すアミノ酸配列を含み、第二ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 346に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記CD3抗体が1つのポリペプチド鎖を含み、前記ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 489に示すアミノ酸配列、SEQ ID NO: 490に示すアミノ酸配列、SEQ ID NO: 491に示すアミノ酸配列、SEQ ID NO: 492に示すアミノ酸配列、または、SEQ ID NO: 493に示すアミノ酸配列を含む、CD3抗体。 - 重鎖可変領域を含み、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 15、75及び133に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 24、76及び134に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 25、77及び135に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 26、78及び136に示すアミノ酸配列であり;または、
重鎖可変領域を含み、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 26、90及び136に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 34、78及び146に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、78及び147に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、90及び147に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 36、90及び146に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、76及び147に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 34、78及び148に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、76及び136に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、90及び146に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 34、76及び136に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、76及び146に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 34、76及び146に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、90及び148に示すアミノ酸配列であり;または、その重鎖可変領域VHがHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、それぞれSEQ ID NO: 35、90及び136に示すアミノ酸配列であり;
好ましく、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 248に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 249に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 250に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 251に示すアミノ酸配列を含み;または、
その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 265に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 266に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 267に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 268に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 269に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 270に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 271に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 272に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 273に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 274に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 275に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 276に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 277に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 278に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 279に示すアミノ酸配列を含み;または、その重鎖可変領域VHがSEQ ID NO: 280に示すアミノ酸配列を含み;
より好ましく、前記BCMA抗体が1つのポリペプチド鎖を含み、前記ポリペプチド鎖がSEQ ID NO: 316に示すアミノ酸配列、SEQ ID NO: 317に示すアミノ酸配列、SEQ ID NO: 318に示すアミノ酸配列、または、SEQ ID NO: 319に示すアミノ酸配列を含み;または、
前記BCMA抗体が1つのポリペプチド鎖を含み、前記ポリペプチド鎖は、SEQ ID NO: 330に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 331に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 332に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 333に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 334に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 335に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 336に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 337に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 338に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 339に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 340に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 341に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 342に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 343に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 344に示すアミノ酸配列;または、SEQ ID NO: 345に示すアミノ酸配列を含む、BCMA抗体。
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