JP2023525778A - 抗ｂｃｍａ抗体およびキメラ抗原受容体 - Google Patents

抗ｂｃｍａ抗体およびキメラ抗原受容体 Download PDF

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Abstract

抗ＢＣＭＡ抗体およびキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が提供される。抗ＢＣＭＡ ＣＡＲを発現する免疫細胞を使用して癌を治療することができる。抗ＢＣＭＡ抗体およびＣＡＲは、ヒトＢＣＭＡの細胞外ドメインを認識することができる。抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ陽性の標的細胞に対して特異的な細胞傷害性を示す。【選択図】図１A

Description

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、この配列表は、参照によりその全体が本明細書に援用される。２０２１年５月７日に作成された上記ＡＳＣＩＩコピーは、１１２９９－００９９３８－ＷＯ０＿ＳＴ２５．ｔｘｔという名称で、サイズは９１ＫＢである。
本発明は、抗ＢＣＭＡ抗体およびキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、ならびにそれらの調製および利用に関する。
多発性骨髄腫（ＭＭ）は、非ホジキンリンパ腫に次いで２番目に多い血液系悪性腫瘍である。近年、化学療法、プロテアソーム阻害剤、免疫調節剤（サリドマイド誘導体）、およびＣＤ３８標的化抗体に大きな進展が見られているが、ほとんどすべての患者は結局再発することになる。したがって、新しい治療レジメンが緊急に必要とされている。
腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１７としても知られるＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）は、成熟Ｂ細胞上に広く発現される膜タンパク質である。ＢＣＭＡの重要な特徴は、ＢＣＭＡがすべてのＭＭ細胞で高度に発現され、他の正常な組織（形質細胞を除く）では発現されないことである。したがって、ＢＣＭＡは、多くの製薬会社および研究機関にとっての再発性または難治性の多発性骨髄腫（Ｒ／Ｒ ＭＭ患者）を治療するための一般的な標的となっている。
現在、ＢＣＭＡ標的に対して開発された免疫療法は主に、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）療法、二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）、および抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の３つのカテゴリーに分類される。セルジーン（Ｃｅｌｇｅｎｅ）社およびブルーバード・バイオ（Ｂｌｕｅｂｉｒｄ Ｂｉｏ）社によって共同開発されたＣＡＲ－Ｔ（ｂｂ２１２１）は、第３相臨床段階に入った。ＢＣＭＡを標的とする現在の二重特異性抗体は、ＢＣＭＡに結合する一方の末端と、Ｔ細胞の表面上のＣＤ３ Ｔ細胞受容体に結合するもう一方の末端とを有するため、Ｔ細胞を腫瘍細胞に動員し、その後、腫瘍細胞を殺傷することができる。最適用量のＡＭＧ－４２０（アムジェン（Ａｍｇｅｎ）社）は、Ｒ／Ｒ ＭＭ患者を治療する場合に、７０％のＯＲＲに達し得ることが報告されている。ＡＤＣの側面では、グラクソ・スミスクライン（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）（ＧＳＫ）社製のＧＳＫ－２８５７９１６が多数の臨床試験において使用され、さまざまな種類のＭＭ患者が治療されている。なかでも、Ｒ／Ｒ ＭＭ患者を第３／第４ライン療法として治療する主要な臨床試験が中間結果を得ている。ブラッド・キャンサー・ジャーナル（Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ）において最近発表された結果によれば、ＧＳＫ－２８５７９１６で治療された患者のＯＲＲが６０％であり、完全奏効率（ＣＲＲ）が１５％に達し、無増悪生存期間（ＰＦＳ）が１２ヶ月に達することが示された。
それにもかかわらず、Ｒ／Ｒ ＭＭ患者の治療に利用可能な療法はまだ限定的であり、この分野において依然としてＲ／Ｒ ＭＭ患者の治療用の新しい薬物および方法を開発することが必要である。
本開示は、軽鎖可変領域（ＶＬ）および重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合部分を提供する。
本開示は、軽鎖可変領域（ＶＬ）および重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗ＢＣＭＡ抗原結合領域を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
軽鎖可変領域は、（ｉ）それぞれ配列番号７６、配列番号７７、および配列番号７８、（ｉｉ）それぞれ配列番号８２、配列番号８３、および配列番号８４、（ｉｉｉ）それぞれ配列番号８８、配列番号８９、および配列番号９０、（ｉｖ）それぞれ配列番号９４、配列番号９５、および配列番号９６、（ｖ）それぞれ配列番号１００、配列番号１０１、および配列番号１０２、（ｖｉ）それぞれ配列番号１０６、配列番号１０７、および配列番号１０８、（ｖｉｉ）それぞれ配列番号１１２、配列番号１１３、および配列番号１１４、（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号１１８、配列番号１１９、および配列番号１２０、または（ｉｘ）それぞれ配列番号１２４、配列番号１２５、および配列番号１２６に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み得る。
重鎖可変領域は、（ｉ）それぞれ配列番号７９、配列番号８０、および配列番号８１、（ｉｉ）それぞれ配列番号８５、配列番号８６、および配列番号８７、（ｉｉｉ）それぞれ配列番号９１、配列番号９２、および配列番号９３、（ｉｖ）それぞれ配列番号９７、配列番号９８、および配列番号９９、（ｖ）それぞれ配列番号１０３、配列番号１０４、および配列番号１０５、（ｖｉ）それぞれ配列番号１０９、配列番号１１０、および配列番号１１１、（ｖｉｉ）それぞれ配列番号１１５、配列番号１１６、および配列番号１１７、（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号１２１、配列番号１２２、および配列番号１２３、または（ｉｘ）それぞれ配列番号１２７、配列番号１２８、および配列番号１２９に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み得る。
ＶＬおよびＶＨは、以下のとおりであり得る：（ｉ）ＶＬは、それぞれ配列番号７６、配列番号７７、および配列番号７８に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み得て、ＶＨは、それぞれ配列番号７９、配列番号８０、および配列番号８１に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み得るか、（ｉｉ）ＶＬは、それぞれ配列番号８２、配列番号８３、および配列番号８４に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み得て、ＶＨは、それぞれ配列番号８５、配列番号８６、および配列番号８７に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み得るか、（ｉｉｉ）ＶＬは、それぞれ配列番号８８、配列番号８９、および配列番号９０に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み得て、ＶＨは、それぞれ配列番号９１、配列番号９２、および配列番号９３に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み得るか、（ｉｖ）ＶＬは、それぞれ配列番号９４、配列番号９５、および配列番号９６に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み得て、ＶＨは、それぞれ配列番号９７、配列番号９８、および配列番号９９に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み得るか、（ｖ）ＶＬは、それぞれ配列番号１００、配列番号１０１、および配列番号１０２に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み得て、ＶＨは、それぞれ配列番号１０３、配列番号１０４、および配列番号１０５に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み得るか、（ｖｉ）ＶＬは、それぞれ配列番号１０６、配列番号１０７、および配列番号１０８に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み得て、ＶＨは、それぞれ配列番号１０９、配列番号１１０、および配列番号１１１に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み得るか、（ｖｉｉ）ＶＬは、それぞれ配列番号１１２、配列番号１１３、および配列番号１１４に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み得て、ＶＨは、それぞれ配列番号１１５、配列番号１１６、および配列番号１１７に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み得るか、（ｖｉｉ）ＶＬは、それぞれ配列番号１１８、配列番号１１９、および配列番号１２０に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み得て、ＶＨは、それぞれ配列番号１２１、配列番号１２２、および配列番号１２３に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み得るか、または（ｘｉ）ＶＬは、それぞれ配列番号１２４、配列番号１２５、および配列番号１２６に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み得て、ＶＨは、それぞれ配列番号１２７、配列番号１２８、および配列番号１２９に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み得る。
ＶＬおよびＶＨは、（ｉ）それぞれ配列番号５３および配列番号５４、（ｉｉ）それぞれ配列番号５５および配列番号５６、（ｉｉｉ）それぞれ配列番号５７および配列番号５８、（ｖｉ）それぞれ配列番号５９および配列番号６０、（ｖ）それぞれ配列番号６１および配列番号６２、（ｖｉ）それぞれ配列番号６３および配列番号６４、（ｖｉｉ）それぞれ配列番号６５および配列番号６６、（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号６７および配列番号６８、または（ｉｘ）それぞれ配列番号６９および配列番号７０に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有し得る。
ＶＬは、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６７、および配列番号６９に示されるアミノ酸配列のいずれか１つと約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。ＶＨは、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６８、および配列番号７０に示されるアミノ酸配列のいずれか１つと約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を含み得る。
抗体またはその抗原結合部分は、（ａ）全免疫グロブリン分子、（ｂ）ｓｃＦｖ、（ｃ）Ｆａｂフラグメント、（ｄ）Ｆ（ａｂ’）２、または（ｅ）ジスルフィド結合されたＦｖであり得る。
本抗体またはその抗原結合部分は、（ａ）ＩｇＧ定常ドメイン、および（ｂ）ＩｇＡ定常ドメインから選択される少なくとも１つの定常ドメインを含み得る。
本抗体またはその抗原結合部分は、少なくとも１つのヒト定常ドメインを含み得る。
本開示は、コンジュゲート部分と連結された本抗体またはその抗原結合部分を含む抗体コンジュゲートを提供する。コンジュゲート部分は、検出可能なマーカー、薬物、毒素、サイトカイン、放射性核種、酵素、標的化部分、およびそれらの組合せであり得る。一実施形態においては、抗体コンジュゲートは、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。
本抗体またはその抗原結合部分と、薬学的に許容可能な担体とを含む組成物も本開示に含まれる。
本開示は、本ＣＡＲまたは免疫細胞と、薬学的に許容可能な担体とを含む組成物を提供する。
本開示は、本抗体またはその抗原結合部分をコードする（またはＣＡＲをコードする）核酸、本核酸を含むベクター、および本ベクターを含む細胞を提供する。
ＣＡＲにおいて、抗ＢＣＭＡ抗原結合領域は、ＢＣＭＡに特異的に結合する単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）であり得る。
ＣＡＲは、以下の：
（ａ）シグナルペプチド、
（ｂ）ヒンジ領域、
（ｃ）膜貫通ドメイン、
（ｄ）共刺激領域、および、
（ｅ）細胞質シグナル伝達ドメイン、
うちの１つ以上をさらに含み得る。
ＣＡＲの共刺激領域は、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ１３４、ＰＤ１、Ｄａｐ１０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＮＫＧ２Ｄ、ＧＩＴＲ、ＴＬＲ２の共刺激領域、またはそれらの組合せを含み得る。
ＣＡＲの細胞質シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメインを含み得る。
ＣＡＲのヒンジ領域は、Ｉｇ４、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ１３７のヒンジ領域、またはそれらの組合せを含み得る。
ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４の膜貫通ドメイン、またはそれらの組合せを含み得る。
本開示は、ＣＡＲを発現する免疫細胞を提供する。免疫細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、リンパ系前駆細胞、造血幹細胞、幹細胞、マクロファージ、または樹状細胞であり得る。
本開示は、癌を治療する方法を提供する。この方法は、本免疫細胞または組成物をそれを必要とする被験体に投与することを含み得る。
癌は血液癌であり得る。癌は形質細胞悪性腫瘍であり得る。癌はＢＣＭＡ陽性悪性腫瘍であり得る。癌は多発性骨髄腫（ＭＭ）または形質細胞白血病であり得る。
免疫細胞は、注入、注射、輸液、植え込み、および／または移植によって投与され得る。免疫細胞は、静脈内、皮下、皮内、リンパ節内、腫瘍内、髄内、筋肉内、または腹腔内で投与され得る。一実施形態においては、免疫細胞は静脈内注入を介して投与される。
免疫細胞は、被験体にとって同種他家由来または自己由来であり得る。
被験体はヒトまたは哺乳動物であり得る。本抗体、その抗原結合部分、ＣＡＲ、組成物、および方法は、すべての脊椎動物、例えば、ヒト、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、サル、類人猿、ゴリラ、チンパンジー、ウサギ、アヒル、ガチョウ、ニワトリ、両生類、爬虫類、およびその他の動物を含む哺乳動物および非哺乳動物において使用され得る。
本開示の目的は、ＢＣＭＡ抗体、ならびにその調製および利用を提供することである。
本開示の第１の態様においては、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、および配列番号３７に示されるヌクレオチド配列によってコードされる重鎖可変（ＶＨ）領域と、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１３、配列番号１８、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、および配列番号３８に示されるヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖可変（ＶＬ）領域とを含む、ＢＣＭＡ抗体が提供される。
一方で、抗体は、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４７、および配列番号４９に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、および配列番号５１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む。
一方で、抗体は、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６８、および配列番号７０に示されるアミノ酸配列を有するＶＨ領域と、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６７、および配列番号６９に示されるアミノ酸配列を有するＶＬ領域とを含む。
上述のアミノ酸配列のいずれも、任意に少なくとも１つのアミノ酸を付加、欠失、修飾、および／または置換し、ＢＣＭＡの結合親和性を保持することができる誘導体配列を含み得る。
特定の実施形態においては、抗体は、以下に示されるヌクレオチド配列によってコードされるＶＨ領域およびＶＬ領域を含む：
Figure 2023525778000002
特定の実施形態においては、抗体はマウス抗体である。
特定の実施形態においては、抗体は、以下に示されるアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖を含む：
Figure 2023525778000003
特定の実施形態においては、抗体はキメラ抗体である。
特定の実施形態においては、抗体は、以下に示されるアミノ酸配列を有するＶＨ領域およびＶＬ領域を含む：
Figure 2023525778000004
特定の実施形態においては、抗体は一本鎖抗体である。
特定の実施形態においては、抗体は、ヒトＢＣＭＡタンパク質および／またはカニクイザルＢＣＭＡタンパク質に結合する。
特定の実施形態においては、抗体は、ＢＣＭＡタンパク質の細胞外ドメインに結合する。
特定の実施形態においては、抗体は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー１３Ｂに結合しない。
特定の実施形態においては、抗体は、重鎖定常領域および／または軽鎖定常領域をさらに含む。
特定の実施形態においては、重鎖定常領域は、ヒト由来またはマウス由来である。
特定の実施形態においては、重鎖定常領域は、ヒト抗体の重鎖ＩｇＧ１定常領域である。
特定の実施形態においては、軽鎖定常領域は、ヒト由来またはマウス由来である。
特定の実施形態においては、軽鎖定常領域は、ヒト抗体の軽鎖κ定常領域である。
特定の実施形態においては、付加、欠失、修飾、および／または置換されたアミノ酸の数は、１個～５個（例えば、１個～３個、１個～２個、または１個）である。
特定の実施形態においては、少なくとも１つのアミノ酸を付加、欠失、修飾、および／または置換し、ＢＣＭＡの結合親和性を保持することができる誘導体配列は、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の相同性または配列類似性を有するアミノ酸配列である。
特定の実施形態においては、抗体は、動物由来抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、またはそれらの組合せから選択される。
特定の実施形態においては、ヒトにおけるキメラ抗体の免疫原性Ｚ１対ヒトにおける非キメラ抗体（マウス抗体など）の免疫原性Ｚ０の比（Ｚ１／Ｚ０）は、０～０．５、０～０．２、または０～０．０５（例えば、０．００１～０．０５）である。
特定の実施形態においては、抗体は、部分的もしくは完全にヒト化されたモノクローナル抗体、または完全ヒトモノクローナル抗体である。
特定の実施形態においては、抗体は二本鎖抗体または一本鎖抗体である。
特定の実施形態においては、抗体は、抗体全長タンパク質または抗原結合フラグメントである。
特定の実施形態においては、抗体は二重特異性抗体または多重特異性抗体である。
特定の実施形態においては、抗体はモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体である。
本開示の第２の態様においては、
（ｉ）本開示の第１の態様に記載される抗体と、
（ｉｉ）発現および／または精製を補助する任意のタグ配列と、
を含む、組換えタンパク質が提供される。
特定の実施形態においては、タグ配列としては、６ｘＨｉｓタグが挙げられる。
特定の実施形態においては、組換えタンパク質（またはポリペプチド）は、融合タンパク質を含む。
特定の実施形態においては、組換えタンパク質は、単量体、二量体、または多量体である。
本開示の第３の態様においては、Ｎ末端からＣ末端に向かって、
（ｉ）ＢＣＭＡを標的とするｓｃＦｖと、
（ｉｉ）膜貫通ドメインと、
（ｉｉｉ）少なくとも１つの共刺激ドメインと、
（ｉｖ）活性化ドメインと、
を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）融合タンパク質が提供される。
ｓｃＦｖ標的化ＢＣＭＡは、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６８、および配列番号７０に示されるアミノ酸配列を有するＶＨ領域と、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６７、および配列番号６９に示されるアミノ酸配列を有するＶＬ領域とを含む。
特定の実施形態においては、ｓｃＦｖは、以下に示されるアミノ酸配列を有するＶＨ領域およびＶＬ領域を含む：
Figure 2023525778000005
特定の実施形態においては、ＣＡＲ融合タンパク質は、以下の式Ｉ：
Ｌ－ｓｃＦｖ－Ｈ－ＴＭ－Ｃ－ＣＤ３ζ （Ｉ）
（式中、
各「－」は、独立して、連結ペプチドまたはペプチド結合であり、
Ｌは、任意のシグナルペプチド配列であり、
ｓｃＦｖは、ＢＣＭＡを標的とするｓｃＦｖであり、
Ｈは、任意のヒンジ領域であり、
ＴＭは、膜貫通ドメインであり、
Ｃは、共刺激シグナル分子であり、かつ、
ＣＤ３ζは、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達配列である）に示される構造を有する。
特定の実施形態においては、Ｌは、ＣＤ８、ＧＭ－ＣＳＦ、ＣＤ４、ＣＤ１３７からなる群から選択されるタンパク質のシグナルペプチド、またはそれらの組合せである。
特定の実施形態においては、Ｌは、ＣＤ８に由来するシグナルペプチドである。
特定の実施形態においては、シグナルペプチドのアミノ酸配列は、配列番号５２に示されている。
特定の実施形態においては、ｓｃＦｖは、以下の式ＩＩまたは式ＩＩＩ：
ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ （ＩＩ）
ＶＨ－Ｌ２－ＶＬ （ＩＩＩ）
（式中、
ＶＬは、軽鎖可変領域であり、
ＶＨは、重鎖可変領域であり、
Ｌ１およびＬ２は、それぞれ独立して連結ペプチドである）に示される構造を有する。
特定の実施形態においては、連結ペプチドのアミノ酸配列は、配列番号７１に示されるとおりである。
特定の実施形態においては、Ｈは、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ１３７からなる群から選択されるタンパク質のヒンジ領域、またはそれらの組合せである。特定の実施形態においては、Ｈは、ＣＤ８に由来するヒンジ領域である。特定の実施形態においては、ヒンジ領域のアミノ酸配列は、配列番号７２に示されるとおりである。
特定の実施形態においては、ＴＭは、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４からなる群から選択されるタンパク質の膜貫通領域、またはそれらの組合せである。
特定の実施形態においては、ＴＭとしては、ＣＤ８に由来する膜貫通領域が挙げられる。特定の実施形態においては、膜貫通領域のアミノ酸配列は、配列番号７３に示されるとおりである。
特定の実施形態においては、Ｃは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ１３４、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＰＤ１、Ｄａｐ１０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＮＫＧ２Ｄ、ＧＩＴＲ、ＴＬＲ２からなる群から選択されるタンパク質の共刺激シグナル分子、またはそれらの組合せである。特定の実施形態においては、Ｃとしては、４－１ＢＢに由来する共刺激シグナル分子が挙げられる。特定の実施形態においては、共刺激シグナル分子のアミノ酸配列は、配列番号７４に示されるとおりである。
特定の実施形態においては、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達配列は、配列番号７５に示されるとおりである。
本開示の第４の態様においては、
（１）本開示の第１の態様に記載される抗体、
（２）本開示の第２の態様に記載される組換えタンパク質、および、
（３）本開示の第３の態様に記載されるＣＡＲ融合タンパク質、
などのポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチドが提供される。
特定の実施形態においては、抗体のＶＨ領域をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号３４、および配列番号３７に示されるとおりであり、および／または抗体のＶＬ領域をコードするポリヌクレオチドは、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１３、配列番号１８、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３６、および配列番号３８に示されるとおりである。
特定の実施形態においては、ＶＨ領域をコードするポリヌクレオチドおよびＶＬ領域をコードするポリヌクレオチドを以下に示す：
Figure 2023525778000006
本開示の第５の態様においては、本開示の第４の態様におけるポリヌクレオチドのいずれかを含む、ベクターが提供される。
特定の実施形態においては、ベクターとしては、細菌プラスミド、バクテリオファージ、酵母プラスミド、植物細胞ウイルス、アデノウイルス、もしくはレトロウイルスなどの哺乳動物細胞ウイルス、またはあらゆる他のベクターが挙げられる。
特定の実施形態においては、ベクターとしては、レンチウイルスベクターが挙げられる。
本開示の第６の態様においては、本開示の第５の態様に記載されるベクターを含むか、または本開示の第４の態様に記載される外因性ポリヌクレオチドとともにゲノムに組み込まれているか、または本開示の第１の態様に記載される抗体、本開示の第２の態様に記載される組換えタンパク質、もしくは本開示の第３の態様におけるＣＡＲ融合タンパク質を発現する、遺伝子操作された宿主細胞が提供される。
特定の実施形態においては、細胞は、分離された細胞、および／または遺伝子操作された細胞である。
特定の実施形態においては、免疫細胞は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物（マウスなど）に由来する。
特定の実施形態においては、細胞としては、Ｔ細胞およびＮＫ細胞が挙げられる。
特定の実施形態においては、宿主細胞は、操作された免疫細胞である。
特定の実施形態においては、操作された免疫細胞としては、Ｔ細胞またはＮＫ細胞、例えば（ｉ）キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）、または（ｉｉ）キメラ抗原受容体ＮＫ細胞（ＣＡＲ－ＮＫ細胞）が挙げられる。
本開示の第７の態様においては、
（ａ）本発明の第１の態様に記載される抗体からなる群から選択される抗体部分と、
（ｂ）検出可能なマーカー、薬物、毒素、サイトカイン、放射性核種、酵素、またはそれらの組合せからなる群から選択される、抗体部分にコンジュゲートされたコンジュゲート部分と、
を含む、抗体コンジュゲートが提供される。
特定の実施形態においては、抗体部分は、化学結合またはリンカーを介してコンジュゲート部分にコンジュゲートされる。
特定の実施形態においては、抗体コンジュゲートは、抗体薬物コンジュゲートである。
本開示の第８の態様においては、操作された細胞を調製する方法が提供される。操作された細胞は、本開示の第１の態様に記載される抗体、本開示の第２の態様に記載される組換えタンパク質、または本開示の第３の態様に記載されるＣＡＲ融合タンパク質を発現する。以下の工程：本開示の第４の態様に記載されるポリヌクレオチドまたは本開示の第５の態様に記載されるベクターを宿主細胞へと形質導入し、それにより操作された細胞を得る工程が含まれる。
特定の実施形態においては、上記方法は、得られた操作された細胞の機能および有効性を検出する工程をさらに含む。
本開示の第９の態様においては、本開示の第１の態様に記載される抗体、本開示の第２の態様に記載される組換えタンパク質、本開示の第３の態様に記載されるＣＡＲ融合タンパク質、本開示の第５の態様に記載されるベクター、本開示の第６の態様に記載される宿主細胞、または本開示の第７の態様に記載される抗体コンジュゲートと、薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤とを含む、医薬組成物が提供される。
或る特定の実施形態においては、医薬組成物は、液体調剤である。
或る特定の実施形態においては、医薬組成物は、注射剤である。
特定の実施形態においては、医薬組成物は、二次抗体または化学療法剤などの抗腫瘍の第２の有効成分をさらに含む。
特定の実施形態においては、化学療法剤は、ドセタキセル、カルボプラチン、またはそれらの組合せである。
本開示の第１０の態様においては、有効成分の使用が提供される。有効成分は、本開示の第１の態様に記載される抗体、本開示の第２の態様に記載される組換えタンパク質、本開示の第３の態様に記載されるＣＡＲ融合タンパク質、本開示の第５の態様に記載されるベクター、本開示の第６の態様に記載される宿主細胞、または本開示の第７の態様に記載される抗体コンジュゲートからなる群から選択され、（ａ）診断試薬またはキットを調製するために、および／または（ｂ）癌または腫瘍の予防用および／または治療用の薬物または調剤を調製するために使用される。
特定の実施形態においては、腫瘍はＢＣＭＡ陽性腫瘍である。
特定の実施形態においては、腫瘍は、血液系腫瘍、固形腫瘍、またはそれらの組合せである。
特定の実施形態においては、血液系腫瘍は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、またはそれらの組合せである。
特定の実施形態においては、固形腫瘍は、胃癌、胃癌の腹膜転移、肝臓癌、腎臓腫瘍、肺癌、小腸の癌腫、骨癌、前立腺癌、結腸直腸癌、乳癌、結腸癌、子宮頸癌、卵巣癌、リンパ腫癌、鼻咽頭癌、副腎腫瘍、膀胱腫瘍、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、脳神経膠腫、子宮内膜癌、精巣癌、結腸直腸癌、尿路腫瘍、甲状腺癌、またはそれらの組合せである。
特定の実施形態においては、腫瘍は多発性骨髄腫である。
特定の実施形態においては、診断試薬は試験片または試験プレートである。
特定の実施形態においては、診断試薬またはキットは、（１）試料中のＢＣＭＡタンパク質を検出するために、（２）腫瘍細胞における内因性ＢＣＭＡタンパク質を検出するために、および／または（３）ＢＣＭＡタンパク質を発現する腫瘍細胞を検出するために使用される。
本開示の第１１の態様においては、（１）ｉｎ ｖｉｔｒｏで、試料を、本開示の第１の態様に記載される抗体、本開示の第２の態様に記載される組換えタンパク質、または本開示の第７の態様に記載される抗体コンジュゲートと接触させる工程と、（２）抗原－抗体複合体が形成されているかどうかを検出する工程（形成されていれば、試料中にＢＣＭＡタンパク質が存在することを意味する）とを含む、試料中のＢＣＭＡタンパク質をｉｎ ｖｉｔｒｏで検出する方法（診断的または非診断的を含む）が提供される。
本開示の第１２の態様においては、基材（支持プレート）および試験ストリップを含む、試験プレートが提供される。試験ストリップは、本開示の第１の態様に記載される抗体、本開示の第２の態様に記載される組換えタンパク質、もしくは本開示の第７の態様に記載される抗体コンジュゲート、またはそれらの組合せを含む。
本開示の第１３の態様においては、（１）第１の態様に記載される抗体を含む第１の容器、および／または（２）本開示の第１の態様に記載される抗体に対する二次抗体を含む第２の容器を含み得る、キットが提供される。
キットは、本開示の第１２の態様に記載される試験プレートを含み得る。
本開示の第１４の態様においては、（ａ）本開示の第６の態様に記載される宿主細胞を発現に適した条件下で培養する工程、（ｂ）培養物から組換えポリペプチドを単離する工程を含み、ここで、組換えポリペプチドが、本開示の第１の態様に記載される抗体、または本開示の第２の態様に記載される組換えタンパク質である、組換えポリペプチドを調製する方法が提供される。
本開示の第１５の態様においては、疾患を治療する方法が提供される。この方法は、それを必要とする被験体に、有効用量の本開示の第１の態様に記載される抗体、本開示の第２の態様に記載される組換えタンパク質、本開示の第７の態様に記載される抗体コンジュゲート、本開示の第６の態様における宿主細胞、もしくは本開示の第９の態様に記載される医薬組成物、またはそれらの組合せを投与することを含み得る。
特定の実施形態においては、疾患はＢＣＭＡ陽性癌／腫瘍である。
１回目の追加免疫後のマウス血清のｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃへの結合力価に関するＥＬＩＳＡ分析を示す図である。 １回目の追加免疫後のマウス血清のｃｙｎｏＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃへの結合力価に関するＥＬＩＳＡ分析を示す図である。 １回目の追加免疫後のマウス血清のＫ５６２－ＢＣＭＡ＋およびＫ５６２細胞への結合力価に関するフローサイトメトリー分析を示す図である。 ２回目の追加免疫後のマウス血清のｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃへの結合力価に関するＥＬＩＳＡ分析を示す図である。 ２回目の追加免疫後のマウス血清のｃｙｎｏＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃへの結合力価に関するＥＬＩＳＡ分析を示す図である。 ２回目の追加免疫後のマウス血清のＫ５６２－ＢＣＭＡ＋およびＫ５６２細胞への結合力価に関するフローサイトメトリー分析を示す図である。 ３回目の追加免疫後のマウス血清のｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃへの結合力価に関するＥＬＩＳＡ分析を示す図である。 ３回目の追加免疫後のマウス血清のｃｙｎｏＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃへの結合力価に関するＥＬＩＳＡ分析を示す図である。 ３回目の追加免疫の前および後のマウス血清のＬ－ＢＣＭＡ＋およびＬ細胞への結合力価に関するフローサイトメトリー分析を示す図である。 ハイブリドーマ細胞のスクリーニングプロセス（選択されたすべてのクローンはＮＣ－Ｆｃに結合しない）を示す図である。 ハイブリドーマ細胞のスクリーニングプロセス（選択されたすべてのクローンはＮＣ－Ｆｃに結合しない）を示す図である。 ハイブリドーマ細胞のスクリーニングプロセス（選択されたすべてのクローンはＮＣ－Ｆｃに結合しない）を示す図である。 ハイブリドーマ細胞のスクリーニングプロセス（選択されたすべてのクローンはＮＣ－Ｆｃに結合しない）を示す図である。 小バッチの抗体の産生および精製に関するＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を示す図である。 ハイブリドーマ抗体のｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃへの結合能に関するＥＬＩＳＡ分析を示す図である。 ハイブリドーマ抗体のｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃへの結合能に関するＥＬＩＳＡ分析を示す図である。 ハイブリドーマ抗体のｃｙｎｏＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃへの結合能に関するＥＬＩＳＡ分析を示す図である。 ハイブリドーマ抗体のｃｙｎｏＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃへの結合能に関するＥＬＩＳＡ分析を示す図である。 ハイブリドーマ抗体のｈＴＡＣＩ－ＥＣＤ－Ｆｃへの結合能に関するＥＬＩＳＡ分析を示す図である。 ハイブリドーマ抗体のｈＴＡＣＩ－ＥＣＤ－Ｆｃへの結合能に関するＥＬＩＳＡ分析を示す図である。 ハイブリドーマ抗体のＬ－ＢＣＭＡ＋細胞への結合能に関するフローサイトメトリー分析を示す図である。 ハイブリドーマ抗体のＬ－ＢＣＭＡ＋細胞への結合能に関するフローサイトメトリー分析を示す図である。 ハイブリドーマ抗体のＬ細胞への結合能に関するフローサイトメトリー分析を示す図である。 ハイブリドーマ抗体のＬ細胞への結合能に関するフローサイトメトリー分析を示す図である。 可溶性ＢＣＭＡのｍＡｂ００１への競合的結合に関するフローサイトメトリー分析を示す図である。 可溶性ＢＣＭＡのｍＡｂ００１への競合的結合に関するフローサイトメトリー分析を示す図である。 可溶性ＢＣＭＡのｍＡｂ００１への競合的結合に関するフローサイトメトリー分析を示す図である。 可溶性ＢＣＭＡのｍＡｂ００１への競合的結合に関するフローサイトメトリー分析を示す図である。 可溶性ＢＣＭＡのｍＡｂ００１への競合的結合に関するフローサイトメトリー分析を示す図である。 可溶性ＢＣＭＡのｍＡｂ００１への競合的結合に関するフローサイトメトリー分析を示す図である。 キメラ抗体のｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃへの結合活性に関するＥＬＩＳＡ分析を示す図である。 キメラ抗体のｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃへの結合活性に関するＥＬＩＳＡ分析を示す図である。 キメラ抗体のＬ－ＢＣＭＡ＋およびＬ細胞への結合活性に関するフローサイトメトリー分析を示す図である。 キメラ抗体のＬ－ＢＣＭＡ＋およびＬ細胞への結合活性に関するフローサイトメトリー分析を示す図である。 ヒトＢＣＭＡキメラ抗原受容体を標的とする操作されＴ細胞のトランスフェクション効率の検出を示す図である。組換えヒトＢＣＭＡタンパク質Ｆｃフラグメントの染色方法は、７日間培養したＣＡＲＴ－ＢＣＭＡ細胞における細胞膜表面上のＣＡＲ遺伝子にコードされるタンパク質の発現レベルを特定する。 ヒトＢＣＭＡキメラ抗原受容体を標的とする操作されＴ細胞のトランスフェクション効率の検出を示す図である。組換えヒトＢＣＭＡタンパク質Ｆｃフラグメントの染色方法は、７日間培養したＣＡＲＴ－ＢＣＭＡ細胞における細胞膜表面上のＣＡＲ遺伝子にコードされるタンパク質の発現レベルを特定する。 フローサイトメトリーによって検出されたＴ細胞膜表面上のＣＤ１３７の発現レベルを示す図である。 フローサイトメトリーによって検出されたＴ細胞膜表面上のＣＤ１３７の発現レベルを示す図である。 フローサイトメトリーによって検出されたＴ細胞膜表面上のＣＤ１３７の発現レベルを示す図である。 フローサイトメトリーによって検出されたＴ細胞膜表面上のＣＤ１３７の発現レベルを示す図である。 フローサイトメトリーによって検出されたＴ細胞膜表面上のＣＤ１３７の発現レベルを示す図である。 フローサイトメトリーによって検出されたＴ細胞膜表面上のＣＤ１３７の発現レベルを示す図である。 フローサイトメトリーによって検出されたＴ細胞膜表面上のＣＤ１３７の発現レベルを示す図である。 フローサイトメトリーによって検出されたＴ細胞膜表面上のＣＤ１３７の発現レベルを示す図である。 ＥＬＩＳＡ法によって検出された培養上清中のＩＦＮγの分泌レベルを示す図である。 ＥＬＩＳＡ法によって検出された培養上清中のＩＦＮγの分泌レベルを示す図である。 標的細胞に対するＣＡＲＴ－ＢＣＭＡの殺傷効果を検出するＲＴＣＡリアルタイム無標識細胞分析を示す図である。ヒトＢＣＭＡ陽性Ａ５４９－ＢＣＭＡ－１Ｄ６腫瘍細胞系統、サルＢＣＭＡ陽性Ａ５４９－ＢＣＭＡ－Ｍ腫瘍細胞系統、およびＢＣＭＡ陰性Ａ５４９腫瘍細胞系統を２００μｌのＣＢＭＧ－ＲＣ－０９ａ中でさまざまなエフェクター／標的比にしたがって８時間共培養した後に、殺傷率を計算した。 標的細胞に対するＣＡＲＴ－ＢＣＭＡの殺傷効果を検出するＲＴＣＡリアルタイム無標識細胞分析を示す図である。ヒトＢＣＭＡ陽性Ａ５４９－ＢＣＭＡ－１Ｄ６腫瘍細胞系統、サルＢＣＭＡ陽性Ａ５４９－ＢＣＭＡ－Ｍ腫瘍細胞系統、およびＢＣＭＡ陰性Ａ５４９腫瘍細胞系統を２００μｌのＣＢＭＧ－ＲＣ－０９ａ中でさまざまなエフェクター／標的比にしたがって８時間共培養した後に、殺傷率を計算した。 標的細胞に対するＣＡＲＴ－ＢＣＭＡの殺傷効果を検出するＲＴＣＡリアルタイム無標識細胞分析を示す図である。ヒトＢＣＭＡ陽性Ａ５４９－ＢＣＭＡ－１Ｄ６腫瘍細胞系統、サルＢＣＭＡ陽性Ａ５４９－ＢＣＭＡ－Ｍ腫瘍細胞系統、およびＢＣＭＡ陰性Ａ５４９腫瘍細胞系統を２００μｌのＣＢＭＧ－ＲＣ－０９ａ中でさまざまなエフェクター／標的比にしたがって８時間共培養した後に、殺傷率を計算した。 標的細胞に対するＣＡＲＴ－ＢＣＭＡの殺傷効果を検出するＲＴＣＡリアルタイム無標識細胞分析を示す図である。ヒトＢＣＭＡ陽性Ａ５４９－ＢＣＭＡ－１Ｄ６腫瘍細胞系統、サルＢＣＭＡ陽性Ａ５４９－ＢＣＭＡ－Ｍ腫瘍細胞系統、およびＢＣＭＡ陰性Ａ５４９腫瘍細胞系統を２００μｌのＣＢＭＧ－ＲＣ－０９ａ中でさまざまなエフェクター／標的比にしたがって８時間共培養した後に、殺傷率を計算した。 標的細胞に対するＣＡＲＴ－ＢＣＭＡの殺傷効果を検出するＲＴＣＡリアルタイム無標識細胞分析を示す図である。ヒトＢＣＭＡ陽性Ａ５４９－ＢＣＭＡ－１Ｄ６腫瘍細胞系統、サルＢＣＭＡ陽性Ａ５４９－ＢＣＭＡ－Ｍ腫瘍細胞系統、およびＢＣＭＡ陰性Ａ５４９腫瘍細胞系統を２００μｌのＣＢＭＧ－ＲＣ－０９ａ中でさまざまなエフェクター／標的比にしたがって８時間共培養した後に、殺傷率を計算した。 標的細胞に対するＣＡＲＴ－ＢＣＭＡの殺傷効果を検出するＲＴＣＡリアルタイム無標識細胞分析を示す図である。ヒトＢＣＭＡ陽性Ａ５４９－ＢＣＭＡ－１Ｄ６腫瘍細胞系統、サルＢＣＭＡ陽性Ａ５４９－ＢＣＭＡ－Ｍ腫瘍細胞系統、およびＢＣＭＡ陰性Ａ５４９腫瘍細胞系統を２００μｌのＣＢＭＧ－ＲＣ－０９ａ中でさまざまなエフェクター／標的比にしたがって８時間共培養した後に、殺傷率を計算した。
本開示は、さまざまな治療方法、予防方法、診断方法、および他の方法において使用され得る抗ＢＣＭＡ抗体、抗体フラグメント（例えば、抗体の抗原結合部分）、ならびにキメラ抗原受容体に関する。
抗体、またはその抗原結合部分としては、限定されるものではないが、ヒト化抗体、ヒト抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ポリクローナル抗体、組換え発現された抗体、および上記の抗原結合部分が挙げられる。抗体の抗原結合部分としては、ＢＣＭＡに特異的に結合する抗体の部分を挙げることができる。
本開示は、本抗体もしくはその抗原結合部分、または本キメラ抗原受容体を含む免疫細胞を有効量で被験体に投与することによって、被験体における癌などの疾患を治療する方法を提供する。
また、本抗体もしくはその抗原結合部分、または本キメラ抗原受容体を含む免疫細胞を含む組成物を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物におけるＢＣＭＡの機能を遮断する方法も本開示に包含される。
本開示の別の方法は、細胞を本抗体もしくは抗原結合フラグメント、または本キメラ抗原受容体を含む免疫細胞と接触させることを含む、ＢＣＭＡを発現する細胞の成長および／または分化を阻害することに関連する。
広範かつ徹底的な調査およびマススクリーニングの末に、多くの抗ＢＣＭＡモノクローナル抗体が得られた。本開示は、ＢＣＭＡを標的とするキメラ抗原受容体の構築、ならびにＢＣＭＡを標的とするキメラ抗原受容体を発現するＴ細胞の調製方法および活性特定をさらに提供する。具体的には、本発明者らは、９株のハイブリドーマ細胞（６Ｇ１０－１Ｄ７、９９Ｂ３Ｇ３、１０５Ｃ１０Ｆ１、１１３Ｂ３Ｆ１２、１０９Ｃ５Ｆ３Ｃ１、１４３Ｄ６Ｆ４、１５１Ａ９Ａ４、１０７Ｂ１１Ｅ１Ｄ７、および１０７Ａ９Ａ４Ｄ２）のスクリーニングに成功し、それらが分泌した抗体は、（例えば、細胞膜表面上の）ヒトＢＣＭＡの可溶性細胞外ドメインを認識する。６Ｇ１０－１Ｄ７、９９Ｂ３Ｇ３、１０９Ｃ５Ｆ３Ｃ１、１４３Ｄ６Ｆ４、１５１Ａ９Ａ４、１０７Ｂ１１Ｅ１Ｄ７、および１０７Ａ９Ａ４Ｄ２によって分泌される抗体はまた、カニクイザルＢＣＭＡ分子の可溶性細胞外ドメインを交差認識し得る。抗ＢＣＭＡキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）も構築した。これらのＣＡＲは、ＢＣＭＡ陽性標的細胞に対してさまざまな反応性を有し、標的細胞に対して所望の特異的な細胞傷害性を有する。
ヒトＢＣＭＡ細胞外ドメイン（Ｍｅｔ１－Ａｌａ５４）およびヒトＩｇＧ１ Ｆｃフラグメント（Ｐｒｏ１００－Ｌｙｓ３３０）の融合タンパク質（ｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ）を使用して、マウスを免疫化した。ハイブリドーマ技術を使用して、ヒトＢＣＭＡに対するモノクローナル抗体をスクリーニングした。抗体は、カニクイザルＢＣＭＡ（ｃｙｎｏＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ）を交差認識することができなければならず、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１３Ｂ（ＢＣＭＡと共通のリガンドを共有するＴＡＣＩ）を認識してはならない。
本開示は、軽鎖可変領域（ＶＬ）および重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合部分を提供する。
本開示は、軽鎖可変領域（ＶＬ）および重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗ＢＣＭＡ抗原結合領域を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
特定の実施形態においては、抗ＢＣＭＡ抗原結合領域（または抗ＢＣＭＡ抗体もしくはその抗原結合部分）としては、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６７、および配列番号６９に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％、少なくとももしくは約７０％、少なくとももしくは約７５％、少なくとももしくは約８０％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９９％、少なくとももしくは約８１％、少なくとももしくは約８２％、少なくとももしくは約８３％、少なくとももしくは約８４％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約８６％、少なくとももしくは約８７％、少なくとももしくは約８８％、少なくとももしくは約８９％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９１％、少なくとももしくは約９２％、少なくとももしくは約９３％、少なくとももしくは約９４％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９６％、少なくとももしくは約９７％、少なくとももしくは約９８％、少なくとももしくは約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域が挙げられる。
特定の実施形態においては、抗ＢＣＭＡ抗原結合領域（または抗ＢＣＭＡ抗体もしくはその抗原結合部分）としては、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６８、および配列番号７０に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％、少なくとももしくは約７０％、少なくとももしくは約７５％、少なくとももしくは約８０％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９９％、少なくとももしくは約８１％、少なくとももしくは約８２％、少なくとももしくは約８３％、少なくとももしくは約８４％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約８６％、少なくとももしくは約８７％、少なくとももしくは約８８％、少なくとももしくは約８９％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９１％、少なくとももしくは約９２％、少なくとももしくは約９３％、少なくとももしくは約９４％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９６％、少なくとももしくは約９７％、少なくとももしくは約９８％、少なくとももしくは約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域が挙げられる。
特定の実施形態においては、抗ＢＣＭＡ抗原結合領域（または抗ＢＣＭＡ抗体もしくはその抗原結合部分）としては、軽鎖可変領域（ＶＬ）および重鎖可変領域（ＶＨ）が挙げられ、ここで、ＶＬおよびＶＨは、（ｉ）それぞれ配列番号５３および配列番号５４、（ｉｉ）それぞれ配列番号５５および配列番号５６、（ｉｉｉ）それぞれ配列番号５７および配列番号５８、（ｖｉ）それぞれ配列番号５９および配列番号６０、（ｖ）それぞれ配列番号６１および配列番号６２、（ｖｉ）それぞれ配列番号６３および配列番号６４、（ｖｉｉ）それぞれ配列番号６５および配列番号６６、（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号６７および配列番号６８、または（ｉｘ）それぞれ配列番号６９および配列番号７０に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％、少なくとももしくは約７０％、少なくとももしくは約７５％、少なくとももしくは約８０％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９９％、少なくとももしくは約８１％、少なくとももしくは約８２％、少なくとももしくは約８３％、少なくとももしくは約８４％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約８６％、少なくとももしくは約８７％、少なくとももしくは約８８％、少なくとももしくは約８９％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９１％、少なくとももしくは約９２％、少なくとももしくは約９３％、少なくとももしくは約９４％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９６％、少なくとももしくは約９７％、少なくとももしくは約９８％、少なくとももしくは約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む／有する。
抗ＢＣＭＡ抗原結合領域（または抗ＢＣＭＡ抗体もしくはその抗原結合部分）の軽鎖可変領域は、（ｉ）それぞれ配列番号７６、配列番号７７、および配列番号７８、（ｉｉ）それぞれ配列番号８２、配列番号８３、および配列番号８４、（ｉｉｉ）それぞれ配列番号８８、配列番号８９、および配列番号９０、（ｉｖ）それぞれ配列番号９４、配列番号９５、および配列番号９６、（ｖ）それぞれ配列番号１００、配列番号１０１、および配列番号１０２、（ｖｉ）それぞれ配列番号１０６、配列番号１０７、および配列番号１０８、（ｖｉｉ）それぞれ配列番号１１２、配列番号１１３、および配列番号１１４、（ｖｉｉｉ）配列番号１１８、配列番号１１９、および配列番号１２０、または（ｉｘ）それぞれ配列番号１２４、配列番号１２５、および配列番号１２６に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％、少なくとももしくは約７０％、少なくとももしくは約７５％、少なくとももしくは約８０％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９９％、少なくとももしくは約８１％、少なくとももしくは約８２％、少なくとももしくは約８３％、少なくとももしくは約８４％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約８６％、少なくとももしくは約８７％、少なくとももしくは約８８％、少なくとももしくは約８９％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９１％、少なくとももしくは約９２％、少なくとももしくは約９３％、少なくとももしくは約９４％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９６％、少なくとももしくは約９７％、少なくとももしくは約９８％、少なくとももしくは約９９％、または約１００％同一である１つ、２つ、または３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み得る。
抗ＢＣＭＡ抗原結合領域（または抗ＢＣＭＡ抗体もしくはその抗原結合部分）の重鎖可変領域は、（ｉ）それぞれ配列番号７９、配列番号８０、および配列番号８１、（ｉｉ）それぞれ配列番号８５、配列番号８６、および配列番号８７、（ｉｉｉ）それぞれ配列番号９１、配列番号９２、および配列番号９３、（ｉｖ）それぞれ配列番号９７、配列番号９８、および配列番号９９、（ｖ）それぞれ配列番号１０３、配列番号１０４、および配列番号１０５、（ｖｉ）それぞれ配列番号１０９、配列番号１１０、および配列番号１１１、（ｖｉｉ）それぞれ配列番号１１５、配列番号１１６、および配列番号１１７、（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号１２１、配列番号１２２、および配列番号１２３、または（ｉｘ）それぞれ配列番号１２７、配列番号１２８、および配列番号１２９に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％、少なくとももしくは約７０％、少なくとももしくは約７５％、少なくとももしくは約８０％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９９％、少なくとももしくは約８１％、少なくとももしくは約８２％、少なくとももしくは約８３％、少なくとももしくは約８４％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約８６％、少なくとももしくは約８７％、少なくとももしくは約８８％、少なくとももしくは約８９％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９１％、少なくとももしくは約９２％、少なくとももしくは約９３％、少なくとももしくは約９４％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９６％、少なくとももしくは約９７％、少なくとももしくは約９８％、少なくとももしくは約９９％、または約１００％同一である１つ、２つ、または３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み得る。
特定の実施形態においては、抗ＢＣＭＡ抗原結合領域（または抗ＢＣＭＡ抗体もしくはその抗原結合部分）の軽鎖可変領域は、（ｉ）それぞれ配列番号７６、配列番号７７、および配列番号７８、（ｉｉ）それぞれ配列番号８２、配列番号８３、および配列番号８４、（ｉｉｉ）それぞれ配列番号８８、配列番号８９、および配列番号９０、（ｉｖ）それぞれ配列番号９４、配列番号９５、および配列番号９６、（ｖ）それぞれ配列番号１００、配列番号１０１、および配列番号１０２、（ｖｉ）それぞれ配列番号１０６、配列番号１０７、および配列番号１０８、（ｖｉｉ）それぞれ配列番号１１２、配列番号１１３、および配列番号１１４、（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号１１８、配列番号１１９、および配列番号１２０、または（ｉｘ）それぞれ配列番号１２４、配列番号１２５、および配列番号１２６に示されるアミノ酸配列と同一である３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含み、かつ抗ＢＣＭＡ抗原結合領域（または抗ＢＣＭＡ抗体もしくはその抗原結合部分）の重鎖可変領域としては、（ｉ）それぞれ配列番号７９、配列番号８０、および配列番号８１、（ｉｉ）それぞれ配列番号８５、配列番号８６、および配列番号８７、（ｉｉｉ）それぞれ配列番号９１、配列番号９２、および配列番号９３、（ｉｖ）それぞれ配列番号９７、配列番号９８、および配列番号９９、（ｖ）それぞれ配列番号１０３、配列番号１０４、および配列番号１０５、（ｖｉ）それぞれ配列番号１０９、配列番号１１０、および配列番号１１１、（ｖｉｉ）それぞれ配列番号１１５、配列番号１１６、および配列番号１１７、（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号１２１、配列番号１２２、および配列番号１２３、または（ｉｘ）それぞれ配列番号１２７、配列番号１２８、および配列番号１２９に示されるアミノ酸配列と同一である３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）が挙げられる。
特定の実施形態においては、抗ＢＣＭＡ抗原結合領域（または抗ＢＣＭＡ抗体もしくはその抗原結合部分）は、軽鎖可変領域（ＶＬ）および重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、ここで、
（ｉ）ＶＬは、それぞれ配列番号７６、配列番号７７、および配列番号７８に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％、少なくとももしくは約７０％、少なくとももしくは約７５％、少なくとももしくは約８０％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９９％、少なくとももしくは約８１％、少なくとももしくは約８２％、少なくとももしくは約８３％、少なくとももしくは約８４％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約８６％、少なくとももしくは約８７％、少なくとももしくは約８８％、少なくとももしくは約８９％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９１％、少なくとももしくは約９２％、少なくとももしくは約９３％、少なくとももしくは約９４％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９６％、少なくとももしくは約９７％、少なくとももしくは約９８％、少なくとももしくは約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、ＶＨは、それぞれ配列番号７９、配列番号８０、および配列番号８１に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％、少なくとももしくは約７０％、少なくとももしくは約７５％、少なくとももしくは約８０％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９９％、少なくとももしくは約８１％、少なくとももしくは約８２％、少なくとももしくは約８３％、少なくとももしくは約８４％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約８６％、少なくとももしくは約８７％、少なくとももしくは約８８％、少なくとももしくは約８９％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９１％、少なくとももしくは約９２％、少なくとももしくは約９３％、少なくとももしくは約９４％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９６％、少なくとももしくは約９７％、少なくとももしくは約９８％、少なくとももしくは約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、
（ｉｉ）ＶＬは、それぞれ配列番号８２、配列番号８３、および配列番号８４に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％、少なくとももしくは約７０％、少なくとももしくは約７５％、少なくとももしくは約８０％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９９％、少なくとももしくは約８１％、少なくとももしくは約８２％、少なくとももしくは約８３％、少なくとももしくは約８４％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約８６％、少なくとももしくは約８７％、少なくとももしくは約８８％、少なくとももしくは約８９％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９１％、少なくとももしくは約９２％、少なくとももしくは約９３％、少なくとももしくは約９４％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９６％、少なくとももしくは約９７％、少なくとももしくは約９８％、少なくとももしくは約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、ＶＨは、それぞれ配列番号８５、配列番号８６、および配列番号８７に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％、少なくとももしくは約７０％、少なくとももしくは約７５％、少なくとももしくは約８０％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９９％、少なくとももしくは約８１％、少なくとももしくは約８２％、少なくとももしくは約８３％、少なくとももしくは約８４％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約８６％、少なくとももしくは約８７％、少なくとももしくは約８８％、少なくとももしくは約８９％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９１％、少なくとももしくは約９２％、少なくとももしくは約９３％、少なくとももしくは約９４％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９６％、少なくとももしくは約９７％、少なくとももしくは約９８％、少なくとももしくは約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、
（ｉｉｉ）ＶＬは、それぞれ配列番号８８、配列番号８９、および配列番号９０に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％、少なくとももしくは約７０％、少なくとももしくは約７５％、少なくとももしくは約８０％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９９％、少なくとももしくは約８１％、少なくとももしくは約８２％、少なくとももしくは約８３％、少なくとももしくは約８４％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約８６％、少なくとももしくは約８７％、少なくとももしくは約８８％、少なくとももしくは約８９％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９１％、少なくとももしくは約９２％、少なくとももしくは約９３％、少なくとももしくは約９４％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９６％、少なくとももしくは約９７％、少なくとももしくは約９８％、少なくとももしくは約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、ＶＨは、それぞれ配列番号９１、配列番号９２、および配列番号９３に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％、少なくとももしくは約７０％、少なくとももしくは約７５％、少なくとももしくは約８０％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９９％、少なくとももしくは約８１％、少なくとももしくは約８２％、少なくとももしくは約８３％、少なくとももしくは約８４％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約８６％、少なくとももしくは約８７％、少なくとももしくは約８８％、少なくとももしくは約８９％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９１％、少なくとももしくは約９２％、少なくとももしくは約９３％、少なくとももしくは約９４％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９６％、少なくとももしくは約９７％、少なくとももしくは約９８％、少なくとももしくは約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、
（ｉｖ）ＶＬは、それぞれ配列番号９４、配列番号９５、および配列番号９６に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％、少なくとももしくは約７０％、少なくとももしくは約７５％、少なくとももしくは約８０％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９９％、少なくとももしくは約８１％、少なくとももしくは約８２％、少なくとももしくは約８３％、少なくとももしくは約８４％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約８６％、少なくとももしくは約８７％、少なくとももしくは約８８％、少なくとももしくは約８９％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９１％、少なくとももしくは約９２％、少なくとももしくは約９３％、少なくとももしくは約９４％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９６％、少なくとももしくは約９７％、少なくとももしくは約９８％、少なくとももしくは約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、ＶＨは、それぞれ配列番号９７、配列番号９８、および配列番号９９に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％、少なくとももしくは約７０％、少なくとももしくは約７５％、少なくとももしくは約８０％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９９％、少なくとももしくは約８１％、少なくとももしくは約８２％、少なくとももしくは約８３％、少なくとももしくは約８４％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約８６％、少なくとももしくは約８７％、少なくとももしくは約８８％、少なくとももしくは約８９％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９１％、少なくとももしくは約９２％、少なくとももしくは約９３％、少なくとももしくは約９４％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９６％、少なくとももしくは約９７％、少なくとももしくは約９８％、少なくとももしくは約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、
（ｖ）ＶＬは、それぞれ配列番号１００、配列番号１０１、および配列番号１０２に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％、少なくとももしくは約７０％、少なくとももしくは約７５％、少なくとももしくは約８０％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９９％、少なくとももしくは約８１％、少なくとももしくは約８２％、少なくとももしくは約８３％、少なくとももしくは約８４％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約８６％、少なくとももしくは約８７％、少なくとももしくは約８８％、少なくとももしくは約８９％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９１％、少なくとももしくは約９２％、少なくとももしくは約９３％、少なくとももしくは約９４％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９６％、少なくとももしくは約９７％、少なくとももしくは約９８％、少なくとももしくは約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、ＶＨは、それぞれ配列番号１０３、配列番号１０４、および配列番号１０５に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％、少なくとももしくは約７０％、少なくとももしくは約７５％、少なくとももしくは約８０％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９９％、少なくとももしくは約８１％、少なくとももしくは約８２％、少なくとももしくは約８３％、少なくとももしくは約８４％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約８６％、少なくとももしくは約８７％、少なくとももしくは約８８％、少なくとももしくは約８９％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９１％、少なくとももしくは約９２％、少なくとももしくは約９３％、少なくとももしくは約９４％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９６％、少なくとももしくは約９７％、少なくとももしくは約９８％、少なくとももしくは約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、
（ｖｉ）ＶＬは、それぞれ配列番号１０６、配列番号１０７、および配列番号１０８に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％、少なくとももしくは約７０％、少なくとももしくは約７５％、少なくとももしくは約８０％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９９％、少なくとももしくは約８１％、少なくとももしくは約８２％、少なくとももしくは約８３％、少なくとももしくは約８４％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約８６％、少なくとももしくは約８７％、少なくとももしくは約８８％、少なくとももしくは約８９％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９１％、少なくとももしくは約９２％、少なくとももしくは約９３％、少なくとももしくは約９４％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９６％、少なくとももしくは約９７％、少なくとももしくは約９８％、少なくとももしくは約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、ＶＨは、それぞれ配列番号１０９、配列番号１１０、および配列番号１１１に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％、少なくとももしくは約７０％、少なくとももしくは約７５％、少なくとももしくは約８０％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９９％、少なくとももしくは約８１％、少なくとももしくは約８２％、少なくとももしくは約８３％、少なくとももしくは約８４％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約８６％、少なくとももしくは約８７％、少なくとももしくは約８８％、少なくとももしくは約８９％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９１％、少なくとももしくは約９２％、少なくとももしくは約９３％、少なくとももしくは約９４％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９６％、少なくとももしくは約９７％、少なくとももしくは約９８％、少なくとももしくは約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、
（ｖｉｉ）ＶＬは、それぞれ配列番号１１２、配列番号１１３、および配列番号１１４に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％、少なくとももしくは約７０％、少なくとももしくは約７５％、少なくとももしくは約８０％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９９％、少なくとももしくは約８１％、少なくとももしくは約８２％、少なくとももしくは約８３％、少なくとももしくは約８４％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約８６％、少なくとももしくは約８７％、少なくとももしくは約８８％、少なくとももしくは約８９％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９１％、少なくとももしくは約９２％、少なくとももしくは約９３％、少なくとももしくは約９４％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９６％、少なくとももしくは約９７％、少なくとももしくは約９８％、少なくとももしくは約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、ＶＨは、それぞれ配列番号１１５、配列番号１１６、および配列番号１１７に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％、少なくとももしくは約７０％、少なくとももしくは約７５％、少なくとももしくは約８０％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９９％、少なくとももしくは約８１％、少なくとももしくは約８２％、少なくとももしくは約８３％、少なくとももしくは約８４％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約８６％、少なくとももしくは約８７％、少なくとももしくは約８８％、少なくとももしくは約８９％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９１％、少なくとももしくは約９２％、少なくとももしくは約９３％、少なくとももしくは約９４％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９６％、少なくとももしくは約９７％、少なくとももしくは約９８％、少なくとももしくは約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、
（ｖｉｉｉ）ＶＬは、それぞれ配列番号１１８、配列番号１１９、および配列番号１２０に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％、少なくとももしくは約７０％、少なくとももしくは約７５％、少なくとももしくは約８０％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９９％、少なくとももしくは約８１％、少なくとももしくは約８２％、少なくとももしくは約８３％、少なくとももしくは約８４％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約８６％、少なくとももしくは約８７％、少なくとももしくは約８８％、少なくとももしくは約８９％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９１％、少なくとももしくは約９２％、少なくとももしくは約９３％、少なくとももしくは約９４％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９６％、少なくとももしくは約９７％、少なくとももしくは約９８％、少なくとももしくは約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、ＶＨは、それぞれ配列番号１２１、配列番号１２２、および配列番号１２３に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％、少なくとももしくは約７０％、少なくとももしくは約７５％、少なくとももしくは約８０％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９９％、少なくとももしくは約８１％、少なくとももしくは約８２％、少なくとももしくは約８３％、少なくとももしくは約８４％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約８６％、少なくとももしくは約８７％、少なくとももしくは約８８％、少なくとももしくは約８９％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９１％、少なくとももしくは約９２％、少なくとももしくは約９３％、少なくとももしくは約９４％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９６％、少なくとももしくは約９７％、少なくとももしくは約９８％、少なくとももしくは約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、または、
（ｉｘ）ＶＬは、それぞれ配列番号１２４、配列番号１２５、および配列番号１２６に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％、少なくとももしくは約７０％、少なくとももしくは約７５％、少なくとももしくは約８０％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９９％、少なくとももしくは約８１％、少なくとももしくは約８２％、少なくとももしくは約８３％、少なくとももしくは約８４％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約８６％、少なくとももしくは約８７％、少なくとももしくは約８８％、少なくとももしくは約８９％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９１％、少なくとももしくは約９２％、少なくとももしくは約９３％、少なくとももしくは約９４％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９６％、少なくとももしくは約９７％、少なくとももしくは約９８％、少なくとももしくは約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、ＶＨは、それぞれ配列番号１２７、配列番号１２８、および配列番号１２９に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％、少なくとももしくは約７０％、少なくとももしくは約７５％、少なくとももしくは約８０％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９９％、少なくとももしくは約８１％、少なくとももしくは約８２％、少なくとももしくは約８３％、少なくとももしくは約８４％、少なくとももしくは約８５％、少なくとももしくは約８６％、少なくとももしくは約８７％、少なくとももしくは約８８％、少なくとももしくは約８９％、少なくとももしくは約９０％、少なくとももしくは約９１％、少なくとももしくは約９２％、少なくとももしくは約９３％、少なくとももしくは約９４％、少なくとももしくは約９５％、少なくとももしくは約９６％、少なくとももしくは約９７％、少なくとももしくは約９８％、少なくとももしくは約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。
特定の実施形態においては、ＣＤＲ、ＶＨ、および／またはＶＬは配列変異を有する。例えば、全残基のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、もしくは８つの残基、または２０％未満、３０％未満、もしくは約４０％未満が置換または欠失されているＣＤＲ、ＶＨ、またはＶＬは、ＢＣＭＡに結合する抗体（またはその抗原結合部分）またはＣＡＲにおいて存在し得る。
また、特定のアミノ酸が置換、欠失、または付加されている抗体もしくはその抗原結合部分、またはＣＡＲも本開示の範囲内である。これらの変化は、結合活性などのペプチドの生物学的特性に対して実質的な影響を与えない。例えば、抗体もしくはその抗原結合部分、またはＣＡＲは、抗原への結合を改善するような、フレームワーク領域におけるアミノ酸置換を有し得る。別の例においては、選択された少数のアクセプターフレームワーク残基を、対応するドナーアミノ酸により置き換えることができる。ドナーフレームワークは、成熟または生殖細胞系列のヒト抗体フレームワーク配列またはコンセンサス配列であり得る。表現型的にサイレントなアミノ酸置換を設ける方法に関する指導は、ボウイら（Ｂｏｗｉｅ ｅｔ ａｌ．）著のサイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ），第２４７巻：第１３０６頁～第１３１０頁（１９９０年）、カニンガムら（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ｅｔ ａｌ．）著のサイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ），第２４４巻：第１０８１頁～第１０８５頁（１９８９年）、オースベル（編集）のカレント・プロトコール・イン・モレキュラー・バイオロジー（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ），ジョン・ワイリー・アンド・サンズ，インコーポレーテッド（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．）社（１９９４年）、Ｔ．マニアティス（Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ），Ｅ．Ｆ．フリッチュ（Ｅ．Ｆ．Ｆｒｉｔｓｃｈ）、およびＪ．サンブルック（Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ）著のモレキュラークローニング：ア・ラボラトリー・マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ），コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）（ニューヨーク州コールド・スプリング・ハーバー）（１９８９年）、ピアソン（Ｐｅａｒｓｏｎ）著のメソッズ・イン・モレキュラー・バイオロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．）第２４３巻：第３０７頁～第３３１頁（１９９４年）、ゴネットら（Ｇｏｎｎｅｔ ｅｔ ａｌ．）著のサイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）第２５６巻：第１４４３頁～第１４４５頁（１９９２年）において提供される。
本ペプチドは、例えば、約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満のアミノ酸残基が置換または欠失されているが、限定されるものではないが、ＢＣＭＡへの結合を含む同じ免疫学的特性を本質的に維持する、本明細書において開示される抗体もしくはその抗原結合部分、またはＣＡＲの機能的に活性な変異体であり得る。
抗体もしくはその抗原結合部分、またはＣＡＲとしては、生物学的活性、例えばＢＣＭＡの結合を示すペプチドの変異体、類似体、オルソログ、相同体、および誘導体を挙げることもできる。ペプチドは、アミノ酸（例えば、天然に存在しないアミノ酸、無関係の生物系においてのみ天然に存在するアミノ酸、哺乳動物系由来の修飾アミノ酸などを含む）の１つ以上の類似体、置換された連結および当該技術分野において知られる他の修飾を含むペプチドを含み得る。
抗体またはその抗原結合部分を、誘導体化することも、または別の機能的分子に連結することもできる。例えば、抗体またはその抗原結合部分を、１つ以上の他の分子実体、例えば、別の抗体、検出可能な作用物質、免疫抑制薬、細胞傷害剤、医薬品、別の分子との会合を媒介し得るタンパク質もしくはペプチド（ストレプトアビジンコア領域またはポリヒスチジンタグなど）、アミノ酸リンカー、シグナル配列、免疫原性担体、またはタンパク質精製に有用なリガンド、例えば、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ、ヒスチジンタグ、およびブドウ球菌プロテインＡに（化学的カップリング、遺伝的融合、非共有結合的相互作用などによって）機能的に連結させることができる。細胞傷害剤としては、放射性同位体、化学療法剤、および細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素的に活性な毒素、およびそれらの断片などの毒素を挙げることができる。このような細胞傷害剤は、標準的な手順を使用して本開示の抗体またはその抗原結合部分にカップリングさせ、それを使用して、例えば、抗体による療法に適応される患者を治療することができる。
２つ以上の（同じ種類または異なる種類の）タンパク質を架橋させることによって、１つの種類の誘導体化されたタンパク質が生成される。適切な架橋剤としては、適切なスペーサーによって隔離された２つの別個の反応性基を有するヘテロ二官能性の架橋剤（例えば、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）、またはホモ二官能性の架橋剤（例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル）が挙げられる。タンパク質を誘導体化（または標識）することができる有用な検出可能な作用物質としては、蛍光性作用物質、さまざまな酵素、補欠分子族、発光性物質、生物発光性物質、および放射性物質が挙げられる。非限定的な例示的な蛍光性の検出可能な作用物質としては、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、およびフィコエリトリンが挙げられる。タンパク質または抗体を、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、グルコースオキシダーゼなどの検出可能な酵素で誘導体化することもできる。タンパク質を、補欠分子族（例えば、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチン）で誘導体化することもできる。
抗体は、完全長であり得るか、または限定されるものではないが、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）’、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、二価ｓｃＦｖ（ｂｉ－ｓｃＦｖ）、三価ｓｃＦｖ（ｔｒｉ－ｓｃＦｖ）、Ｆｄ、ｄＡｂフラグメント（例えば、ワードら（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．）著のネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ），第３４１巻：第５４４頁～第５４６頁（１９８９年））、単離されたＣＤＲ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、線状抗体（ｌｉｎｅａｒ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、一本鎖抗体分子を含む抗原結合部分を有する抗体のフラグメント（または複数のフラグメント）、および抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体を含み得る。組換え法または合成リンカーを使用して抗体フラグメントを繋ぎ合わせることによって生成される一本鎖抗体も、本開示に包含される。バードら（Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．）著のサイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ），１９８８年，第２４２巻：第４２３頁～第４２６頁，ヒューストンら（Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．）著の米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ），１９８８年，第８５巻：第５８７９頁～第５８８３頁。
本抗体またはその抗原結合部分は、少なくとも１つの定常ドメイン、例えば、（ａ）ＩｇＧ定常ドメイン、（ｂ）ＩｇＡ定常ドメインなどを含み得る。
ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ（ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）、ＩｇＤ、またはＩｇＥを含むあらゆる抗体アイソタイプが本開示に包含される。抗体またはその抗原結合部分は、哺乳動物（例えば、マウス、ヒト）抗体またはその抗原結合部分であり得る。抗体の軽鎖は、カッパ型またはラムダ型であり得る。
本開示の抗体またはその抗原結合部分は、単一特異性、二重特異性、または多重特異性であり得る。多重特異性もしくは二重特異性抗体またはそれらの断片は、１つの標的ポリペプチド（例えば、ＢＣＭＡ）の異なるエピトープに特異的であり得るか、または２つ以上の標的ポリペプチドに特異的な抗原結合ドメイン（例えば、ＢＣＭＡおよび別の抗原に特異的な抗原結合ドメイン）を含み得る。一実施形態においては、多重特異性抗体またはその抗原結合部分は、少なくとも２つの異なる可変ドメインを含み、ここで、各可変ドメインは、別個の抗原または同じ抗原上の異なるエピトープに特異的に結合することができる。トゥットら（Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．）（１９９１年）著のジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．）第１４７巻：第６０頁～第６９頁、クファーら（Ｋｕｆｅｒ ｅｔ ａｌ．）（２００４年）著のトレンズ・イン・バイオテクノロジー（Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．）第２２巻：第２３８頁～第２４４頁。本抗体を、別の機能的分子、例えば別のペプチドまたはタンパク質と連結させることができ、またはそれらと同時発現させることができる。例えば、抗体またはその断片を、１つ以上の他の分子実体、例えば、別の抗体または抗体フラグメントに（例えば、化学的カップリング、遺伝的融合、非共有結合的会合、または他の方法によって）機能的に連結させて、第２の結合特異性を有する二重特異性または多重特異性の抗体を生成することができる。例えば、本開示は、免疫グロブリンの一方のアームがＢＣＭＡに特異的であり、かつ免疫グロブリンの他方のアームが第２の治療標的に特異的であるか、または本明細書に記載される治療部分にコンジュゲートされている二重特異性抗体を含む。
本明細書に記載される抗体またはその抗原結合部分は、アフィニティー精製剤として有用である。この方法においては、当該技術分野において周知の方法を使用して、抗体またはその断片をプロテインＡ樹脂などの固相に固定化する。
本抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合部分は、ＢＣＭＡタンパク質を検出および／または定量化する、例えば、特定の細胞、組織、または血清におけるＢＣＭＡ発現を検出する診断アッセイにおいても有用である。
本明細書に記載される抗体またはその抗原結合部分は、競合結合アッセイ、直接的および間接的なサンドイッチアッセイ、ならびに免疫沈降アッセイなどのあらゆる既知のアッセイ方法において使用され得る。例えば、ゾラ（Ｚｏｌａ）著のモノクローナル・アンチボディーズ：ア・マニュアル・オブ・テクニクス（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）、第１４７頁～第１５８頁（ＣＲＣ出版社１９８７年）を参照のこと。
抗体
「抗体」または「免疫グロブリン」という用語は、２つの同一の軽鎖（Ｌ）および２つの同一の重鎖（Ｈ）を含む、同じ構造的特徴を有する約１５００００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質を意味し得る。各軽鎖はジスルフィド共有結合によって重鎖に連結されており、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間のジスルフィド結合の数は異なる。各重鎖および軽鎖は、規則的な間隔で配置された鎖内ジスルフィド結合も有する。各重鎖は、一端に可変領域（ＶＨ）を有し、続いて複数の定常領域を有する。各軽鎖は、一方の末端に可変領域（ＶＬ）を有し、他方の末端に定常領域を有し、軽鎖の定常領域は重鎖の第１の定常領域の反対側にあり、軽鎖の可変領域は重鎖の可変領域の反対側にある。特定のアミノ酸残基は、軽鎖と重鎖との可変領域間に界面を形成する。
「可変」という用語は、抗体の可変領域の特定の部分の配列が様々であり、それにより、その特異抗原に対するさまざまな特異抗体の結合および特異性が形成されることを意味し得る。それにもかかわらず、可変性は抗体全体の可変領域に均一に分布しておらず、軽鎖および重鎖の可変領域における相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域の３つの断片に集中している。可変領域のより保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖および軽鎖の可変領域はそれぞれ４つのＦＲを含み、これらはおおむねβ折り畳み構造にあり、３つのＣＤＲによって連結され、これらはアダプターリングを形成する。場合によっては、部分的なβ折り畳み構造が形成される場合もある。各鎖中のＣＤＲは、ＦＲによって互いに密接に繋ぎ合わされ、別の鎖のＣＤＲと一緒に抗体の抗原結合部位を形成する（カバットら（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．）著のＮＩＨ刊行物番号（ＮＩＨ Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．）９１－３２４２、第Ｉ巻、第６４７頁～第６６９頁（１９９１年）を参照）。定常領域は、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、これらは、抗体の抗体依存性細胞傷害性に関与するなど、さまざまなエフェクター機能を示す。
脊椎動物の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、それらの定常領域のアミノ酸配列に基づいて、２つの異なるカテゴリー（κおよびλと呼ばれる）の１つに分類され得る。免疫グロブリンの重鎖定常領域のアミノ酸配列にしたがって、免疫グロブリンを異なるタイプに分類することができる。主に５つのタイプの免疫グロブリン：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが存在し、その一部は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、およびＩｇＡ２などのサブクラス（アイソタイプ）にさらに分けられる場合がある。異なるタイプの免疫グロブリンに対応する重鎖定常領域は、それぞれα、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。異なるタイプの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元配置は、当業者に周知である。
一般に、抗体の抗原結合特性は、このフラグメントに間隔を挟んで４つのフレームワーク領域（ＦＲ）にする、可変領域（ＣＤＲ）と呼ばれる重鎖および軽鎖の可変領域に位置する３つの特定の領域によって説明され得る。４つのＦＲのアミノ酸配列は比較的保存的であり、結合反応には直接関与しない。これらのＣＤＲは環状構造を形成し、ＣＤＲ間のＦＲが形成するβフォールドによって空間構造が互いに近接している。重鎖上のＣＤＲおよび軽鎖上の対応するＣＤＲは、抗体の抗原結合部位を構成する。同じタイプの抗体のアミノ酸配列を比較して、ＦＲまたはＣＤＲを構成するアミノ酸を決定することができる。
本開示は、完全な抗体を含むだけでなく、免疫学的に活性な抗体フラグメントまたは抗体および他の配列によって形成される融合タンパク質も含む。したがって、本開示は、抗体の断片、誘導体、および類似体も含む。
本開示において、抗体としては、当業者に周知の技術によって調製されたマウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、または完全ヒト抗体が挙げられる。キメラモノクローナル抗体およびヒト化モノクローナル抗体などの組換え抗体は、ヒト部分および非ヒト部分を含み、標準的なＤＮＡ組換え技術によって得ることができ、すべて有用な抗体である。キメラ抗体は、マウス由来モノクローナル抗体の可変領域およびヒト由来免疫グロブリンの定常領域を有するキメラ抗体などの、異なる部分が異なる動物種に由来する分子である（例えば、参照によりその全体が本明細書に援用される米国特許第４，８１６，５６７号明細書および米国特許第４，８１６，３９７号明細書を参照）。ヒト化抗体は、非ヒト種に由来する１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）およびヒト免疫グロブリン分子に由来するフレームワーク領域を含む、非ヒト種に由来する抗体分子を指し得る（参照によりその全体が本明細書に援用される米国特許第５，５８５，０８９号明細書を参照）。これらのキメラモノクローナル抗体およびヒト化モノクローナル抗体は、当該技術分野において周知のＤＮＡ組換え技術を使用して調製され得る。
本開示において、抗体は、単一特異性、二重特異性、三重特異性、または多重特異性であり得る。
本開示においては、抗体はその保存的変異体も含み、これは、本開示によって提供される抗体のアミノ酸配列と比較して、最大で１０個、最大で８個、最大で５個、または最大で３個のアミノ酸が、類似の特性を有するアミノ酸によって置換されて、ポリペプチドを形成することを意味する。例えば、保存的変異体ポリペプチドは、表Ａによるアミノ酸置換によって生成され得る。
Figure 2023525778000007
抗ＢＣＭＡ抗体
本開示は、重鎖および軽鎖を含み、重鎖がＶＨ領域のアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖がＶＬ領域のアミノ酸配列を含む、高い特異性および高い親和性を有するＢＣＭＡに対する抗体を提供する。
特定の実施形態においては、抗体は、以下に示されるヌクレオチド配列によってコードされるＶＨ領域およびＶＬ領域を含む：
Figure 2023525778000008
特定の実施形態においては、抗体はマウス抗体である。
特定の実施形態においては、抗体は、以下に示されるアミノ酸配列を有する重鎖および軽鎖を含む：
Figure 2023525778000009
特定の実施形態においては、抗体はキメラ抗体である。
特定の実施形態においては、抗体は、以下に示されるアミノ酸配列を有するＶＨ領域およびＶＬ領域を含む：
Figure 2023525778000010
抗体ＣＰ０１～ＣＰ０９のＣＤＲ配列を以下に示す。
Figure 2023525778000011
Figure 2023525778000012
Figure 2023525778000013
特定の実施形態においては、抗体は一本鎖抗体である。
特定の実施形態においては、上述のアミノ酸配列のいずれも、任意に少なくとも１つのアミノ酸を付加、欠失、修飾、および／または置換し、ＢＣＭＡの結合親和性を保持することができる誘導体配列を含む。
特定の実施形態においては、少なくとも１つのアミノ酸配列の付加、欠失、修飾、および／または置換によって形成される配列は、アミノ酸配列の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の相同性を有し得る。付加、欠失、修飾、および／または置換されたアミノ酸残基の数は、１個～７個、１個～５個、１個～３個、または１個～２個であり得る。
本開示によって提供される抗体は、二本鎖または一本鎖抗体であり得て、動物由来抗体、キメラ抗体およびヒト化抗体、ヒト－動物キメラ抗体、または完全ヒト化抗体から選択され得る。
本開示によって提供される抗体誘導体は、一本鎖抗体および／または抗体フラグメント、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、または当該技術分野において既知の他の抗体誘導体、およびＩｇＡ抗体、ＩｇＤ抗体、ＩｇＥ抗体、ＩｇＧ抗体、およびＩｇＭ抗体または他のサブタイプの抗体のいずれか１つ以上であり得る。
なかでも、動物は、マウスなどの哺乳動物であり得る。
本開示によって提供される抗体は、ヒトＢＣＭＡを標的とするキメラ抗体、ヒト化抗体、またはＣＤＲグラフト化および／またはＣＤＲ改変抗体であり得る。
具体的には、本出願の実施形態においては、４回のハイブリドーマ細胞融合を行った。小バッチでの抗体の産生および精製のために、合計１４個のハイブリドーマ細胞（６Ｇ１０－１Ｄ７、９９Ｂ３Ｇ３、１０２Ａ１２Ｈ６、１０７Ａ１１Ｆ１、１０７Ａ９Ａ４、１０７Ｂ１１Ｅ１、１００Ｈ２Ｄ１２Ｃ６、１０５Ｃ１０Ｆ１、１１３Ｂ３Ｆ１２、１０９Ｃ５Ｆ３Ｃ１、９７Ｂ８Ｇ８Ｄ１２、１４３Ｄ６Ｆ４、１５１Ａ９Ａ４、および１５２Ｄ８Ｅ８）を選択した。それらの中で、１４個のクローンのうち１３個のクローン（９７Ｂ８Ｇ８Ｄ１２を除く）のすべてにおいて、対応する抗体の生成に成功した。１５２Ｄ８Ｅ８（ＣＰ０９）を除いて、残りの１２個のハイブリドーマ抗体はすべて、ヒトＢＣＭＡ分子の可溶性細胞外ドメインに結合することができた。１０５Ｃ１０Ｆ１（ＣＰ０３）、１５２Ｄ８Ｅ８（ＣＰ０９）、および１１３Ｂ３Ｆ１２を除いて、残りの１０個のハイブリドーマ抗体はすべて、カニクイザルＢＣＭＡ分子の可溶性細胞外ドメインを交差認識することができた。１０２Ａ１２Ｈ６および１５２Ｄ８Ｅ８（ＣＰ０９）を除いて、残りの１１個のハイブリドーマ抗体はすべて、細胞表面上のヒトＢＣＭＡ分子の細胞外ドメインを認識することができた。
合計１７株のハイブリドーマ細胞の抗体可変領域をシーケンシングした。１２株のハイブリドーマ細胞は、シーケンシングによればモノクローナルであった：６Ｇ１０－１Ｄ７、９９Ｂ３Ｇ３、１０２Ａ１２Ｈ６、１００Ｈ２Ｄ１２Ｃ６、１０５Ｃ１０Ｆ１、１１３Ｂ３Ｆ１２、１０９Ｃ５Ｆ３Ｃ１、９７Ｂ８Ｇ８Ｄ１２、１４３Ｄ６Ｆ４、１５１Ａ９Ａ４、１５２Ｄ８Ｅ８、および１０７Ｂ１１Ｅ１Ｄ７、そのうち、９９Ｂ３Ｇ３、１００Ｈ２Ｄ１２Ｃ６、および９７Ｂ８Ｇ８Ｄ１２は、抗体可変領域中に同じ配列を有していた。５株のハイブリドーマ細胞は、配列決定によればポリクローナルであった：０７Ａ１１Ｆ１、１０７Ａ９Ａ４、１０７Ｂ１１Ｅ１、１０７Ａ９Ａ４Ｄ２、および１０７Ａ１１Ｆ１Ｂ７、そのうち１０７Ａ１１Ｆ１、１０７Ａ９Ａ４、および１０７Ｂ１１Ｅ１はそれぞれ、４つの重鎖および１つの軽鎖を有しており、１０７Ａ９Ａ４Ｄ２および１０７Ａ１１Ｆ１Ｂ７はそれぞれ、１つの重鎖および２つの軽鎖を有し、同じ配列を有していた。５株のモノクローナルのハイブリドーマ細胞（６Ｇ１０－１Ｄ７、９９Ｂ３Ｇ３、１０５Ｃ１０Ｆ１、１１３Ｂ３Ｆ１２、および１０７Ｂ１１Ｅ１Ｄ７）および１株のポリクローナルのハイブリドーマ細胞（１０７Ａ９Ａ４Ｄ２）を選択して、キメラ抗体を発現させた。そのうち、１０７Ａ９Ａ４Ｄ２ＶＨを、それぞれ１０７Ａ９Ａ４Ｄ２ＶＬ－１および１０７Ａ９Ａ４Ｄ２ＶＬ－２とペアにして発現させた。ＥＬＩＳＡおよびフローサイトメトリーの検出結果により、ハイブリドーマ６Ｇ１０－１Ｄ７、９９Ｂ３Ｇ３、１０５Ｃ１０Ｆ１、および１０７Ｂ１１Ｅ１Ｄ７のキメラ抗体がすべて、細胞表面上のヒトＢＣＭＡ分子の可溶性細胞外ドメインに結合することが分かった。ハイブリドーマ１０７Ａ９Ａ４Ｄ２の重鎖１０７Ａ９Ａ４Ｄ２ＶＨおよび軽鎖１０７Ａ９Ａ４Ｄ２ＶＬ－２をペアにすることによって形成されたキメラ抗体はすべて、細胞表面上のヒトＢＣＭＡ分子の可溶性細胞外ドメインに結合した。１０７Ａ９Ａ４Ｄ２ＶＨおよび１０７Ａ９Ａ４Ｄ２ＶＬ－１をペアにすることによって形成されたキメラ抗体は、細胞表面上のヒトＢＣＭＡ分子の可溶性細胞外ドメインに結合しなかった。
抗体の調製
本開示によって提供される抗体またはそのフラグメントのＤＮＡ分子の配列を、ＰＣＲ増幅またはゲノムライブラリースクリーニングなどの従来の技術によって得ることができる。さらに、軽鎖および重鎖のコーディング配列を互いに融合させて一本鎖抗体を形成することもできる。
関連する配列が得られたら、関連する配列を組換えによって大バッチで得ることができる。一般に、関連する配列は、関連する配列をベクターにクローニングし、次に関連する配列を細胞に導入し、次に増殖させた宿主細胞から従来の方法により関連する配列を単離することによって得られる。
さらに、特に断片の長さが短い場合に、人工合成法を使用して、関連する配列を合成することができる。一般に、長い配列を有する断片は、最初に小さな断片を複数合成した後に、小さな断片同士を連結することによって得ることができる。
現在、本開示によって提供される抗体（またはそのフラグメントもしくは誘導体）をコードするＤＮＡ配列は、完全に化学合成によって得ることができる。次に、ＤＮＡ配列を、当該技術分野で知られるさまざまな既存のＤＮＡ分子（またはベクターなど）および細胞に導入することができる。さらに、化学合成によって本開示のタンパク質配列に突然変異を導入することができる。
本開示はまた、上述の適切なＤＮＡ配列および適切なプロモーターまたは制御配列を含むベクターに関する。これらのベクターを使用して、タンパク質を発現することができるように適切な宿主細胞を形質転換することができる。
宿主細胞は、細菌細胞などの原核細胞、または酵母細胞などの下等真核細胞、または哺乳動物細胞などの高等真核細胞であり得る。動物細胞としては、（限定されるものではないが）ＣＨＯ－Ｓ細胞およびＨＥＫ－２９３細胞を挙げることができる。
通常、得られた宿主細胞は、本開示によって提供される抗体の発現に適した条件下で培養および形質転換される。次に、プロテインＡ－セファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、イオン化交換クロマトグラフィー（ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、疎水性クロマトグラフィー、モレキュラーシーブクロマトグラフィー、またはアフィニティークロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製工程、ならびに当業者に周知の他の従来の単離方法および精製方法を精製に使用して、本開示によって提供される抗体を得る。
得られたモノクローナル抗体を、従来の手段によって特定することができる。例えば、モノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降またはｉｎ ｖｉｔｒｏでの結合試験（ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）など）によって決定され得る。例えば、モノクローナル抗体の結合親和性は、マンソンら（Ｍｕｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．），アナリティカル・バイオケミストリー（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．），第１０７巻：第２２０頁（１９８０年）のスキャッチャード分析によって決定され得る。
本開示によって提供される抗体は、細胞内もしくは細胞膜上で発現され得るか、または細胞外に分泌され得る。必要に応じて、組換えタンパク質の物理的特性、化学的特性、およびその他の特性を使用することによって、さまざまな単離方法により組換えタンパク質を単離および精製することができる。これらの方法は当業者に周知である。これらの方法の例としては、限定されるものではないが、従来の復元処理、タンパク質沈殿剤による処理（塩析法）、遠心分離、浸透圧静菌、超音波処理、超遠心分離、モレキュラーシーブクロマトグラフィー（ゲル濾過）、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、およびその他のさまざまな液体クロマトグラフィー技術、ならびにこれらの方法の組合せが挙げられる。
抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）
本開示はさらに、本開示によって提供される抗体に基づく抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を提供する。
典型的には、ＡＤＣは、抗体およびエフェクター分子を含み、抗体は、エフェクター分子にコンジュゲート、例えば化学的にコンジュゲートされる。エフェクター分子は、治療活性を有する薬物であり得る。さらに、エフェクター分子は、毒性タンパク質、化学療法薬、小分子薬、または放射性核種のうちの１つ以上であり得る。
本開示によって提供される抗体およびエフェクター分子は、カップリング剤によってコンジュゲートされ得る。カップリング剤の例としては、非選択的カップリング剤、カルボキシル基を使用するカップリング剤、ペプチド鎖、およびジスルフィド結合を使用するカップリング剤のうちの１つ以上が挙げられる。非選択的カップリング剤とは、エフェクター分子および抗体に共有結合を形成させる化合物、例えばグルタルアルデヒドを指す。カルボキシル基を使用するカップリング剤は、シス－アコニット酸無水物カップリング剤（例えば、シス－アコニット酸無水物）およびアシルヒドラゾンカップリング剤（カップリング部位がアシルヒドラゾンである）のいずれか１つ以上であり得る。
抗体上の一部の残基（例えば、ＣｙｓまたはＬｙｓ）を使用して、イメージング試薬（例えば、発色基および蛍光基）、診断試薬（例えば、ＭＲＩ造影剤および放射性同位元素）、安定剤（例えば、グリコールポリマー）、および治療剤を含む多岐にわたる官能基を連結することができる。抗体を機能的作用物質にコンジュゲートさせて、抗体－機能的作用物質コンジュゲートを形成することができる。機能的作用物質（例えば、薬物、検出試薬、および安定剤）を、抗体にコンジュゲート（共有結合により連結）させることができる。機能的作用物質を、リンカーによって直接的または間接的に抗体に連結させることができる。
抗体を薬物にコンジュゲートさせて、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を形成することができる。通常、ＡＤＣは、薬物と抗体との間に位置するリンカーを含む。リンカーは、分解性または非分解性のリンカーであり得る。分解性のリンカーは、典型的には、細胞内環境において容易に分解され、例えば、リンカーは標的部位で分解され、こうして薬物が抗体から放出される。適切な分解性のリンカーとしては、例えば、細胞内プロテアーゼ（例えば、リソソームプロテアーゼまたはエンドソームプロテアーゼ）によって分解され得るペプチジル含有リンカーを含む酵素分解されるリンカー、または糖リンカー、例えば、グルコシダーゼにより分解され得るグルクロニド含有リンカーが挙げられる。ペプチジルリンカーとしては、例えば、バリン－シトルリン、フェニルアラニン－リジン、またはバリン－アラニンなどのジペプチドを挙げることができる。他の適切な分解性のリンカーとしては、例えば、ｐＨ感受性リンカー（例えば、ヒドラゾンリンカーなどの、ｐＨが５．５未満であるときに加水分解されるリンカー）および還元条件下で分解されるリンカー（例えば、ジスルフィド結合リンカー）が挙げられる。非分解性のリンカーは、典型的には、抗体がプロテアーゼによって加水分解される条件下で薬物を放出する。
抗体を連結する前に、リンカーは、いくつかのアミノ酸残基と反応し得る活性反応性基を有する場合があり、ここで、連結は活性反応性基を介して達成される。スルフヒドリル特異的活性反応性基としては、例えば、マレイミド化合物、ハロゲン化アミド（例えば、ヨウ素化、臭素化、または塩素化）、ハロゲン化エステル（例えば、ヨウ素化、臭素化、または塩素化）、ハロゲン化メチルケトン（例えば、ヨウ素化、臭素化、または塩素化）、ハロゲン化ベンジル（例えば、ヨウ素化、臭素化、または塩素化）、ビニルスルホン、およびピリジルジスルフィド、対イオンが酢酸イオン、塩化物イオン、または硝酸イオンである３，６－ジ－（水銀メチル）ジオキサンなどの水銀誘導体、ならびにポリ（メチレンジメチルスルフィドエーテル）チオスルホネートが挙げられる。リンカーとして、例えば、チオスクシンイミドによって抗体に連結されたマレイミドを挙げることができる。
薬物は、細胞傷害性であるか、細胞成長を阻害するか、または免疫抑制性であるあらゆる薬物であり得る。一実装形態の様式では、リンカーは、抗体および薬物を連結し、薬物はリンカーと結合を形成することができる官能基を有する。例えば、薬物は、リンカーと結合を形成することができるアミノ基、カルボキシル基、スルフヒドリル基、ヒドロキシル基、またはケト基を有し得る。薬物がリンカーに直接連結される場合に、薬物は、抗体に連結される前に反応性活性基を有する。
有用な薬物カテゴリーとしては、例えば、抗チューブリン薬、ＤＮＡマイナーグルーブバインダー、ＤＮＡ複製阻害剤、アルキル化試薬、抗生物質、葉酸拮抗薬、代謝拮抗剤、化学療法増感剤、トポイソメラーゼ阻害剤、およびビンカアルカロイドが挙げられる。特に有用な細胞傷害性薬物の例としては、例えば、ＤＮＡマイナーグルーブバインダー、ＤＮＡアルキル化試薬、およびチューブリン阻害剤が挙げられる。典型的な細胞傷害性薬物としては、例えば、アウリスタチン、カンプトテシン、デュオカルマイシン、エトポシド、メイタンシン、およびメイタンシノイド化合物（例えば、ＤＭ１およびＤＭ４）、タキサン、ベンゾジアゼピンまたはベンゾジアゼピン含有薬物（例えば、ピロリジン［１，４］ベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、インドリノベンゾジアゼピン、およびオキサゾリジノベンゾジアゼピン）、およびビンカアルカロイドが挙げられる。
薬物－リンカーを使用して、簡単な工程でＡＤＣを形成することができる。他の実装形態の様式では、二官能性リンカー化合物を使用して、二工程プロセスまたは多工程プロセスでＡＤＣを形成することができる。例えば、最初の工程でシステイン残基がリンカーの反応性部分と反応し、次の工程でリンカー上の官能基が薬物と反応し、それによってＡＤＣが形成される。
一般に、リンカー上の官能基は、薬物部分上の適切な反応性基との特異的反応を促進するように選択される。非限定的な例として、アジドベースの部分を使用して、薬物部分上の反応性アルキニル基と特異的に反応させることができる。薬物は、アジド基とアルキニル基との間で１，３－双極性環状付加を介してリンカーに共有結合される。他の有用な官能基としては、例えば、ケトンおよびアルデヒド（ヒドラジドおよびアルコキシアミンとの反応に適している）、ホスフィン（アジドとの反応に適している）、イソシアネートおよびイソチオシアネート（アミンおよびアルコールとの反応に適している）、ならびにＮ－ヒドロキシスクシンイミドエステルなどの活性化エステル（アミンおよびアルコールとの反応に適している）が挙げられる。これらの連結戦略、および「バイオコンジュゲート・テクニクス（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）」，第２版（エルゼビア（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ））に記載される他の連結戦略は、当業者に周知である。当業者は、薬物部分とリンカーとの間の選択的反応について、相補的ペアにおける反応性官能基が選択される場合に、相補的ペアの各要素がリンカーおよび薬物の両方で使用され得ることを理解することができる。
本開示はさらに、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を形成するのに十分な条件下で、抗体を薬物－リンカー化合物に結合させることをさらに含み得る、ＡＤＣを調製する方法を提供する。
いくつかの実装形態の様式では、本開示によって提供される方法は、抗体－リンカーコンジュゲートを形成するのに十分な条件下で、抗体を二官能性リンカー化合物に結合させることを含む。これらの実装形態の様式では、本開示によって提供される方法は、リンカーによって薬物部分を抗体に共有結合により連結させるのに十分な条件下で、抗体リンカーコンジュゲートを薬物部分に結合させることをさらに含む。
いくつかの実装形態の様式では、抗体－薬物コンジュゲートＡＤＣは、以下の分子式：
Figure 2023525778000014
 （式中、Ａｂは抗体であり、ＬＵはリンカーであり、Ｄは薬物であり、下付き文字ｐは１～８から選択される値である）において示されるとおりである。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
本開示によって提供されるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインを含み得る。細胞外ドメインは、標的特異的結合エレメント（抗原結合ドメインとしても知られる）を含み得る。細胞内ドメインは、共刺激シグナル伝達領域およびζ鎖部分を含み得る。共刺激シグナル伝達領域は、共刺激分子を含む細胞内ドメインの一部を指し得る。共刺激分子は、抗原受容体またはそのリガンドではなく、抗原に対するリンパ球の有効な応答に必要とされる細胞表面分子である。
リンカーは、ＣＡＲの細胞外ドメインと膜貫通ドメインとの間、またはＣＡＲの細胞質ドメインと膜貫通ドメインとの間に組み込まれ得る。「リンカー」という用語は、膜貫通ドメインをポリペプチド鎖の細胞外ドメインまたは細胞質ドメインに連結するように機能するあらゆるオリゴペプチドまたはポリペプチドを指し得る。リンカーは、０個～３００個のアミノ酸、２個～１００個のアミノ酸、または３個～５０個のアミノ酸を含み得る。
特定の実施形態においては、ＣＡＲの細胞外ドメインは、ＢＣＭＡを標的とする抗原結合ドメインを含む。ＣＡＲがＴ細胞において発現されると、抗原結合特異性に基づいて抗原認識が行われ得る。Ｔ細胞がそれに関連する抗原に結合すると、Ｔ細胞は、腫瘍細胞を成長させないように、または腫瘍細胞死をもたらすように、腫瘍細胞に影響を与えることになり、それにより患者の腫瘍負荷が軽減または排除され得る。
抗原結合ドメインは、共刺激分子およびζ鎖からの１つ以上の細胞内ドメインと融合され得る。一実施形態においては、抗原結合ドメインは、４－１ＢＢシグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ζシグナルドメインの組合せによって形成される細胞内ドメインと融合される。
「抗原結合ドメイン」および「単鎖抗体フラグメント」という用語は、抗原結合活性を有するＦａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、または単一Ｆｖフラグメントを指し得る。Ｆｖ抗体は、抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域を含み、定常領域を含まず、すべての抗原結合部位の最小の抗体フラグメントを有する。一般に、Ｆｖ抗体は、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、抗原結合に必要とされる構造を形成することができる。抗原結合ドメインは一般に、ｓｃＦｖ（単鎖可変フラグメント）である。ｓｃＦｖのサイズは一般に、完全な抗体の１／６である。一本鎖抗体は、ヌクレオチド鎖によってコードされるアミノ酸鎖配列であり得る。特定の実施形態においては、ｓｃＦｖは、ＢＣＭＡを特異的に認識する。
ヒンジ領域および膜貫通領域（膜貫通ドメイン）については、ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞外ドメインに融合された膜貫通ドメインを含むように設計され得る。一実装形態の様式では、ＣＡＲ内のドメインのうち１つと自然に会合される膜貫通ドメインが使用される。いくつかの例においては、修飾は、膜貫通ドメインを選択するか、またはアミノ酸を置換して、そのようなドメインが同じまたは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインに結合することを回避し、それによって受容体複合体の他の要素との相互作用を最小限に抑えることによって行われ得る。
ＣＡＲの細胞内ドメインとしては、４－１ＢＢシグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを挙げることができる。
本開示におけるスクリーニングを通じて得られた９個の抗体の軽鎖および重鎖に基づいて、１８個のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を構築した。これらのＣＡＲは、ＢＣＭＡ陽性標的細胞に対して様々な反応性を有し、標的細胞に対して望ましい特異的な殺傷能力を有する。具体的には、上述の９個の抗体は、以下に示されるアミノ酸配列を有するＶＨ領域およびＶＬ領域を含む：
Figure 2023525778000015
特定の実施形態においては、ＣＡＲの遺伝子構造は、リーダー配列（シグナルペプチド）、抗原認識配列、リンカー領域、膜貫通領域、共刺激因子シグナル領域、およびＣＤ３ζシグナル伝達領域を含み得て、連結配列は、以下のとおりである：
［ＣＤ８ ＬＳ］－［ＶＬ－リンカー－ＶＨ］－［ヒンジ－ＣＤ８ＴＭ］－［４－１ＢＢ］－［ＣＤ３ζ］、または、
［ＣＤ８ ＬＳ］－［ＶＨ－リンカー－ＶＬ］－［ヒンジ－ＣＤ８ＴＭ］－［４－１ＢＢ］－［ＣＤ３ζ］
本開示は、ウイルス感染後の細胞膜表面上での異なるＣＡＲ構造の発現時間と発現強度との間の相関関係を特定し、異なるＣＡＲ構造タンパク質の発現し易さの違いを特定した。この知見は、膜表面上でのＣＡＲタンパク質の発現レベルと、異なるＣＡＲ構造の同じ感染条件下でのＣＡＲＴのｉｎ ｖｉｖｏでの活性の持続性との間の違いを指摘している。
ベクター
所望の分子をコードする核酸配列は、例えば、遺伝子を発現する細胞からライブラリーをスクリーニングすることによるか、遺伝子を含むことが知られているベクターから遺伝子を得ることによるか、または遺伝子を含む細胞および組織から遺伝子を直接単離する標準的な技術を使用することによるなどの、当該技術分野において知られる組換え法を使用して得ることができる。任意に、対象となる遺伝子を合成し、生成することができる。
本開示はまた、本開示によって提供される発現カセットが挿入されているベクターを提供する。レンチウイルスなどのレトロウイルスに由来するベクターは、これらが導入遺伝子の長期的で安定した組み込みおよび娘細胞における導入遺伝子の伝達を可能にするため、長期の遺伝子導入を達成するのに適した担体である。レンチウイルスベクターは、これらが肝細胞などの非増殖細胞に形質導入することができるため、マウス白血病ウイルスなどの発癌性レトロウイルスに由来するベクターよりも有利である。これらはまた、低い免疫原性という利点も有する。
本開示における発現カセットまたは核酸配列は、プロモーターに作動可能に連結され、概して発現ベクターへと組み込まれ得る。これらのベクターは、真核細胞の複製および組み込みに適している。典型的なクローニングベクターは、転写および翻訳の終結因子、初期配列、ならびに予想される核酸配列の発現を調節するのに使用することができるプロモーターを含む。
発現コンストラクトはまた、核酸免疫化および遺伝子療法のための標準的な遺伝子送達プロトコルを使用し得る。遺伝子送達の方法は、当該技術分野において知られている。例えば、米国特許第５，３９９，３４６号明細書、米国特許第５，５８０，８５９号明細書、および米国特許第５，５８９，４６６号明細書を参照のこと。特定の実施形態において、本開示は、遺伝子療法ベクターを提供する。
核酸を、多くの種類のベクターにクローニングすることができる。例えば、核酸を、限定されるものではないが、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルス、およびコスミドを含むそのようなベクターにクローニングすることができる。対象となる特定のベクターとしては、発現ベクター、複製ベクター、プローブ生成ベクター、およびシーケンシングベクターが挙げられる。
さらに、発現ベクターは、ウイルスベクターの形で細胞に提供され得る。ウイルスベクター技術は、当該技術分野において周知であり、例えば、サンブルックら（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．）著の（２００１年，モレキュラークローニング：ア・ラボラトリー・マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ），コールド・スプリング・ハーバー研究所（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ），ニューヨーク）、ならびにその他のウイルス学および分子生物学のマニュアルに記載されている。ベクターとして使用することができるウイルスとしては、限定されるものではないが、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、およびレンチウイルスが挙げられる。一般に、適切なベクターは、少なくとも１つの生物において機能する複製起点、プロモーター配列、適切な制限酵素部位、および１つ以上の選択可能なマーカーを含む（例えば、国際公開第０１／９６５８４号パンフレット、国際公開第０１／２９０５８号パンフレット、および米国特許第６，３２６，１９３号明細書）。
哺乳動物細胞に遺伝子を導入するために、多くのウイルスベースの系が開発されている。例えば、レトロウイルスは、遺伝子送達系に適切なプラットフォームを提供する。当該技術分野で既知の技術を使用して、選択された遺伝子をベクターに挿入し、選択された遺伝子をレトロウイルス粒子にパッケージングすることができる。次に、組換えウイルスを単離し、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで標的細胞に送達することができる。多くのレトロウイルス系は、当該技術分野において知られている。いくつかの実装形態の様式では、アデノウイルスベクターが使用される。多くのアデノウイルスベクターは、当該技術分野において知られている。一実装形態の様式では、レトロウイルスベクターが使用される。
エンハンサーなどの追加のプロモーターエレメントは、転写開始の頻度を調節することができる。一般に、これらは開始部位の３０ｂｐ～１１０ｂｐ上流の領域に位置しているが、多くのプロモーターは開始部位の下流にも機能的エレメントを含むことが最近示されている。プロモーターエレメント間の間隔は、これらのエレメントが互いに反転または移動してもプロモーター機能が維持されるように、しばしば柔軟である。チミジンキナーゼ（ｔｋ）プロモーターにおいては、活性が減少し始める前に、プロモーターエレメント間の間隔を５０ｂｐだけ増やすことができる。プロモーターに応じて、個々のエレメントが協調的または独立して作用して転写を開始し得るように思われる。
適切なプロモーターの一例は、前初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列である。このプロモーター配列は、プロモーター配列に作動可能に連結された任意のポリヌクレオチド配列の高レベル発現を駆動することができる強力な構成的プロモーター配列である。適切なプロモーターの別の例は、伸長成長因子－１α（ＥＦ－１α）である。それにもかかわらず、限定されるものではないが、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）長末端反復（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタインバーウイルス前初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ならびに限定されるものではないが、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、ヘムプロモーター、およびクレアチンキナーゼプロモーターなどのヒト遺伝子プロモーターを含む、他の構成的プロモーター配列を使用することもできる。誘導性プロモーターも本開示の部分と見なされる。誘導性プロモーターの使用は、誘導性プロモーターに作動可能に連結されたポリヌクレオチド配列の発現が予想される場合にそのような発現をオンにするか、または上記発現が予想されない場合にそのような発現をオフにすることができる分子スイッチを提供する。誘導性プロモーターの例としては、限定されるものではないが、メタロチオネインプロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター、およびテトラサイクリンプロモーターが挙げられる。
ＣＡＲポリペプチドまたはその部分の発現を評価するには、細胞に導入される発現ベクターは、ウイルスベクターによってトランスフェクションまたは感染された調査される細胞集団から発現細胞を特定し選択するために、選択可能なマーカー遺伝子またはレポーター遺伝子のいずれかまたは両方を含み得る。他の態様においては、選択可能なマーカーは、ＤＮＡの単一の断片上に担持され、同時トランスフェクション手順において使用され得る。選択可能なマーカーおよびレポーター遺伝子の両側部は、宿主細胞において発現されるように適切な調節配列を有し得る。有用な選択可能なマーカーとしては、例えば、ｎｅｏなどのような抗生物質耐性遺伝子が挙げられる。
レポーター遺伝子を使用して、トランスフェクションされた可能性のある細胞を特定し、調節配列の機能性を評価することができる。一般に、レポーター遺伝子は、以下の遺伝子である。これらはレシピエント生物もしくは組織中に存在せず、またはレシピエント生物もしくは組織によって発現され、酵素活性などのいくつかの容易に検出可能な特性によって発現が明確に示されるポリペプチドをコードする。ＤＮＡがレシピエント細胞に導入された後に、適切な時点でレポーター遺伝子の発現が決定される。適切なレポーター遺伝子としては、ルシフェラーゼ、β－ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌型アルカリホスファターゼ、または緑色蛍光タンパク質をコードする遺伝子を挙げることができる（例えば、ウイ－テイら（Ｕｉ－Ｔｅｉ ｅｔ ａｌ．）（２０００年）著のＦＥＢＳレターズ（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ），第４７９巻：第７９頁～第８２頁）。適切な発現系は周知であり、既知の技術を使用して調製することができ、または商業的に入手することができる。一般に、最高レベルのレポーター遺伝子発現を示す最低５つの隣接領域を有するコンストラクトが、プロモーターとして特定される。このようなプロモーター領域をレポーター遺伝子に連結し、試薬がプロモーター駆動転写を調節する能力を評価するために使用することができる。
遺伝子を細胞に導入し、遺伝子を細胞に発現させる方法は、当該技術分野において知られている。発現ベクターの文脈においては、ベクターを、当該技術分野におけるあらゆる方法によって宿主細胞、例えば、哺乳動物、細菌、酵母、または昆虫細胞に容易に導入することができる。例えば、発現ベクターを、物理的手段、化学的手段、または生物学的手段によって宿主細胞に導入することができる。
ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入する物理的方法としては、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、粒子衝撃、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションなどが挙げられる。ベクターおよび／または外因性核酸を含む細胞を生成する方法は、当該技術分野で周知である。例えば、サンブルックら（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．）著の（２００１年，モレキュラークローニング：ア・ラボラトリー・マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ），コールド・スプリング・ハーバー研究所（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ），ニューヨーク）を参照のこと。ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入する方法は、リン酸カルシウムトランスフェクションである。
対象となるポリヌクレオチドを宿主細胞に導入する生物学的方法としては、ＤＮＡベクターおよびＲＮＡベクターの使用が挙げられる。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、ヒト細胞などの哺乳動物細胞に遺伝子を挿入するのに最も広く使用されている方法となっている。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ型、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルスなどに由来し得る。例えば、米国特許第５，３５０，６７４号明細書および米国特許第５，５８５，３６２号明細書を参照のこと。
ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入する化学的手段としては、高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、およびビーズなどのコロイド分散系、ならびに水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセル、およびリポソームなどの脂質ベースの系が挙げられる。ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏで送達担体として使用される例示的なコロイド系は、リポソーム（例えば、人工膜小胞）である。
非ウイルス性送達系を使用する場合に、例示的な送達ツールはリポソームである。宿主細胞へと核酸を（ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、またはｉｎ ｖｉｖｏで）導入するのに、脂質調製物の使用が考えられる。一方で、核酸を脂質と会合させることができる。脂質に会合された核酸は、リポソームの水性内部に封入され、リポソームの脂質二重層内に分散され、リポソームおよびオリゴヌクレオチドの両方と会合された連結分子を介してリポソームに取り付けられ、リポソーム内に捕捉され、リポソームと複合体が形成され、脂質を含む溶液中に分散され、脂質と混合され、脂質と合わされ、脂質中で懸濁液として含まれ、ミセル内に収容され、もしくはミセルと複合体が形成され、または他の方法により脂質と会合され得る。組成物と会合される脂質、脂質／ＤＮＡ、または脂質／発現ベクターは、溶液中の特定の構造に一切限定されない。例えば、これらは二重層構造でミセルとして存在するか、または「崩壊した」構造を有することができる。これらは溶液中に単に分散されている場合もあり、不均一なサイズまたは形状の凝集体を形成する可能性がある。脂質は脂肪物質であり、天然に存在するか、または合成され得る。例えば、脂質としては、細胞質中、ならびに脂肪酸、アルコール、アミン、アミノアルコール、およびアルデヒドなどの長鎖脂肪族炭化水素およびそれらの誘導体を含む化合物中に天然に存在する脂肪滴が挙げられる。
特定の実施形態においては、ベクターは、レンチウイルスベクターである。
ＣＡＲ Ｔの治療的利用
本開示は、本開示の発現カセットをコードするレンチウイルスベクター（ＬＶ）で形質導入された細胞（例えば、Ｔ細胞）を使用する治療的利用を含む。形質導入されたＴ細胞は、腫瘍細胞のマーカーであるＢＣＭＡを標的とし、Ｔ細胞を相乗的に活性化し、Ｔ細胞の免疫応答を引き起こし、それによって腫瘍細胞に対するＴ細胞の殺傷効率を大幅に向上させることができる。
したがって、本開示はさらに、本開示のＣＡＲ－Ｔ細胞を哺乳動物に投与する工程を含む、哺乳動物の標的細胞集団または組織に対するＴ細胞媒介性免疫応答を刺激する方法を提供する。
一実装形態の様式では、本開示は、患者の自己Ｔ細胞（または異種ドナー）を分離し、それらを活性化および遺伝子改変させて、ＣＡＲ－Ｔ細胞を生成した後に、これらを同じ患者に注射する細胞療法を含む。こうして、移植片対宿主疾患に罹患する可能性は極めて低く、抗原は非ＭＨＣ拘束性の様式でＴ細胞によって認識される。さらに、１つのＣＡＲ－Ｔにより、その抗原を発現するあらゆる癌が治療され得る。抗体療法とは異なり、ＣＡＲ－Ｔ細胞はｉｎ ｖｉｖｏで複製され得ることから、持続的な腫瘍制御につながり得る長期持続性をもたらす。
一実装形態の様式では、本開示によって提供されるＣＡＲ－Ｔ細胞は、連続的に延長可能な期間にわたって、ｉｎ ｖｉｖｏでＴ細胞の安定した増殖を経ることができる。さらに、ＣＡＲ媒介性免疫応答は、ＣＡＲ改変Ｔ細胞がＣＡＲ中の抗原結合ドメインに特異的な免疫応答を誘導する養子免疫療法工程の部分であり得る。例えば、ＢＣＭＡに対するＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを発現する細胞に対して特異的な免疫応答を引き起こす。
本明細書に開示されるデータは、抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖ、ヒンジ、膜貫通領域、ならびに４－１ＢＢおよびＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含むレンチウイルスベクターを具体的に開示するが、本開示は、コンストラクトの構成要素のそれぞれにおいて任意の数の変化を含むと解釈されるべきである。
治療可能な癌としては、血管新生されていない、または実質的に血管新生されていない腫瘍、ならびに血管新生された腫瘍が挙げられる。癌としては、非固形腫瘍（白血病およびリンパ腫などの血液系腫瘍など）を挙げることができ、または固形腫瘍を挙げることができる。本開示によって提供されるＣＡＲ、抗体、またはそれらの抗原結合部分で治療される癌の種類としては、限定されるものではないが、癌腫、芽細胞腫、および肉腫、ならびにいくつかの白血病またはリンパ性悪性腫瘍、肉腫、癌腫、および黒色腫などの良性および悪性の腫瘍が挙げられ、成人の腫瘍／癌および小児の腫瘍／癌も挙げられる。
血液系癌は、血液または骨髄の癌である。血液系（または造血系）癌の例としては、急性白血病（急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性骨髄性白血病、および骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性赤血球性白血病など）、慢性白血病（慢性骨髄芽球性（顆粒球性）白血病、慢性骨髄性白血病、および慢性リンパ性白血病）を含む白血病、真性多血症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（無痛型および高悪性度型）、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、重鎖疾患、骨髄異形成症候群、有毛細胞白血病、および骨髄異形成が挙げられる。
用語「固形腫瘍」は、一般的に嚢胞または液体領域を含まない異常な組織塊を指す。固形腫瘍は、良性または悪性であり得る。さまざまな種類の固形腫瘍は、固形腫瘍を形成する細胞の種類（肉腫、癌腫、リンパ腫など）にちなんで名付けられている。肉腫および癌腫などの固形腫瘍の例としては、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、中皮腫、リンパ性悪性腫瘍、膵臓癌、および卵巣癌が挙げられる。
ＣＡＲ改変Ｔ細胞はまた、哺乳動物のｅｘ－ｖｉｖｏ免疫化および／またはｉｎ ｖｉｖｏ療法のためのワクチンの一種としても使用され得る。好ましくは、哺乳動物はヒトである。
ｅｘ ｖｉｖｏ免疫化の場合に、以下の項目：ｉ）細胞の増幅、ｉｉ）ＣＡＲをコードする核酸の細胞への導入、および／またはｉｉｉ）細胞の凍結保存の少なくとも１つをｉｎ ｖｉｔｒｏで行った後に、細胞を哺乳動物に投与する。
ｅｘ ｖｉｖｏの手順は、当該技術分野で周知であり、以下でより完全に論じることにする。簡潔には、細胞を哺乳動物（好ましくはヒト）から分離し、本明細書に開示されるＣＡＲを発現するベクターで遺伝子改変（すなわち、ｉｎ ｖｉｔｒｏで形質導入またはトランスフェクション）する。ＣＡＲ改変細胞を哺乳動物レシピエントに投与して、治療効果を得ることができる。哺乳動物レシピエントはヒトであり得て、ＣＡＲ改変細胞はレシピエントに対して自己由来であり得る。任意に、細胞は、レシピエントに対して同種他家由来、同系由来、または異種由来であり得る。
ｅｘ ｖｉｖｏ免疫化のための細胞ベースのワクチンの使用に加えて、本開示はまた、患者において抗原に対する免疫応答を引き起こすｉｎ ｖｉｖｏ免疫化のための組成物および方法を提供する。
本開示は、腫瘍を治療する方法であって、それを必要とする被験体に、治療的有効用量の本開示によって提供されるＣＡＲ改変Ｔ細胞を投与することを含む、方法を提供する。
本開示によって提供されるＣＡＲ改変Ｔ細胞は、単独で投与され得るか、または希釈剤および／またはＩＬ－２、ＩＬ－１７もしくは他のサイトカインなどの他の成分または細胞集団と組み合わせて医薬組成物として投与され得る。簡潔には、本開示によって提供される医薬組成物は、本明細書に記載される標的細胞集団を１つ以上の薬学的または生理学的に許容可能なベクター、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて含み得る。このような組成物は、中性緩衝生理食塩水および硫酸緩衝液などの緩衝溶液、グルコース、マンノース、スクロース、デキストラン、およびマンニトールなどの炭水化物、タンパク質、ポリペプチドまたはグリシンなどのアミノ酸、酸化防止剤、ＥＤＴＡまたはグルタチオンなどのキレート剤、アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）、ならびに保存剤を含み得る。組成物は、静脈内投与に適切であり得る。
本開示によって提供される医薬組成物は、治療（または予防）される疾患に適した様式で投与され得る。投与の回数および頻度は、患者の状態、ならびに患者の疾患の種類および重症度などの要因によって決定されることになるが、適切な用量は臨床試験によって決定され得る。
「免疫学的有効用量」、「抗腫瘍有効用量」、「腫瘍抑制有効用量」、または「治療用量」が示される場合に、投与される組成物の正確な用量は、年齢、体重、腫瘍サイズ、感染または転移の程度、および患者（被験体）における疾患の個人差を考慮して医師によって決定され得る。本明細書に記載されるＴ細胞を含む医薬組成物は、体重１ｋｇあたり１０４個～１０９個の細胞の用量、または体重１ｋｇあたり１０５個～１０６個の細胞の用量（これらの範囲内のすべての整数を含む）で投与され得ることが一般的に示され得る。Ｔ細胞組成物を、これらの用量で複数回投与することもできる。細胞を、免疫療法における周知の注射技術を使用することによって投与することができる（例えば、ローゼンベルクら（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．）著のニューイングランド・ジャーナル・オブ・メディシン（Ｎｅｗ Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ Ｍｅｄ．）第３１９巻：第１６７６頁，１９８８年を参照）。特定の患者に対する最適な用量および治療レジメンは、医療分野における当業者によって、患者の疾患の徴候を監視し、こうして治療を調整することによって容易に決定され得る。
被験体による組成物の投与は、噴霧、注射、嚥下、注入、植え込み、または移植を含むあらゆる適切な様式で実施され得る。本明細書に記載される組成物は、皮下、皮内、腫瘍内、リンパ節内、脊髄内、もしくは筋肉内で、または静脈内注射（ｉ．ｖ．）によって、もしくは腹腔内で患者に投与され得る。一実装形態の様式では、本開示によって提供されるＴ細胞組成物は、皮内注射または皮下注射によって患者に投与される。特定の実施形態においては、Ｔ細胞組成物は、静脈内注射（ｉ．ｖ．）によって投与される。Ｔ細胞組成物は、腫瘍、リンパ節、または感染部位に直接注射され得る。
特定の実施形態においては、Ｔ細胞を治療レベルまで増殖させる本明細書に記載される方法または当該技術分野で既知の他の方法を使用して活性化および増殖された細胞は、任意の数の関連する治療形態と組み合わせて（例えば、前に、同時に、または後に）患者に投与される。治療形態としては、限定されるものではないが、以下の試薬による治療が挙げられる。試薬としては、例えば、抗ウイルス療法薬、シドフォビルおよびインターロイキン－２、シタラビン（ＡＲＡ－Ｃとしても知られる）もしくはＭＳ患者用のナタリズマブ、または乾癬患者用のエルファズマブモノクローナル治療薬、またはＰＭＬ患者用の他の治療薬が挙げられる。さらなる実装形態の様式では、本開示によって提供されるＴ細胞は、以下の、化学療法、放射線、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸エステルおよびＦＫ５０６などの免疫抑制薬、抗体、または他の免疫療法薬と組み合わせて使用され得る。特定の実施形態においては、本開示によって提供される細胞組成物は、骨髄移植、フルダラビンなどの化学療法剤、外部ビーム放射線療法（ＸＲＴ）、シクロホスファミドと組み合わせて（例えば、前に、同時に、または後に）患者に投与される。例えば、被験体は、高用量化学療法とその後の末梢血幹細胞移植の標準治療を受けることができる。特定の実施形態においては、移植後に、被験体は、本開示に従って増殖された免疫細胞の注射を受ける。特定の実施形態においては、増殖された細胞は、手術の前または後に投与される。
患者に投与される上述の治療用量は、治療される状態の正確な性質および治療を受ける者によって多岐にわたることになる。ヒトへの投与の投与量比は、当該技術分野において受け入れられている慣行に従って実現され得る。一般に、１×１０６個～１×１０１０個の改変Ｔ細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ２０細胞）を、治療または治療過程ごとに静脈再輸液によって患者に投与することができる。
ＣＡＲＴ調剤
本開示は、ＣＡＲ－Ｔ細胞、および薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤を提供する。一実装形態の様式では、調剤は液体調剤である。一実施形態においては、調剤は注射剤である。一実施形態においては、調剤中のＣＡＲ－Ｔ細胞の濃度は、１×１０３個～１×１０８個の細胞／ｍｌ、または１×１０４個～１×１０７個の細胞／ｍｌである。
特定の実施形態においては、調剤は、中性緩衝生理食塩水および硫酸緩衝生理食塩水などの緩衝溶液、グルコース、マンノース、スクロース、デキストラン、およびマンニトールなどの炭水化物、タンパク質、ポリペプチドまたはグリシンなどのアミノ酸、酸化防止剤、ＥＤＴＡまたはグルタチオンなどのキレート剤、アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）、ならびに保存剤を含み得る。調剤は、静脈内投与に適切であり得る。
医薬組成物
さらに、本開示は、組成物を提供する。特定の実施形態においては、組成物は、上述の抗体またはその活性フラグメント、その融合タンパク質、そのＡＤＣ、または対応するＣＡＲ－Ｔ細胞と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物である。一般に、これらの物質は、約５～８、または約６～８のｐＨを有する非毒性で不活性の薬学的に許容可能な水性担体媒体中で調製され得るが、ｐＨ値は調製される物質の性質および治療される疾患により多岐にわたり得る。調製された医薬組成物は、（限定されるものではないが）腫瘍内投与、腹腔内投与、静脈内投与、または局所投与を含む従来の経路によって投与され得る。
本開示に記載される抗体は、ヌクレオチド配列の細胞内発現のための細胞療法においても使用され得る。例えば、抗体は、キメラ抗原受容体Ｔ細胞免疫療法（ＣＡＲ－Ｔ）において使用される。
本開示によって提供される医薬組成物を、ＴＦタンパク質分子への結合に直接使用することができ、したがって、腫瘍および他の疾患の予防および治療に使用することができる。さらに、他の治療剤を同時に使用することもできる。
本開示によって提供される医薬組成物は、安全かつ有効な用量（例えば、０．００１重量％～９９重量％、０．０１重量％～９０重量％、または０．１重量％～８０重量％）の本開示によって提供される上述のモノクローナル抗体（またはそのコンジュゲート）と、薬学的に許容可能な担体または賦形剤とを含む。そのような担体としては、（限定されるものではないが）生理食塩水、緩衝溶液、グルコース、水、グリセロール、エタノール、およびそれらの組合せが挙げられる。医薬調剤は、投与方式に適合させるべきである。本開示によって提供される医薬組成物は、例えば、生理食塩水またはグルコースおよび他のアジュバントを含む水溶液から、従来の方法によって、注射剤の形で調製され得る。注射剤または液剤などの医薬組成物は、滅菌条件下で製造されるべきである。有効成分の投与量は、治療的有効用量、例えば、１日につき体重１ｋｇあたり約１ｍｇ～体重１ｋｇあたり約５ｍｇである。さらに、本開示によって提供されるポリペプチドはまた、他の治療剤と一緒に使用され得る。
医薬組成物の使用は、安全かつ有効な用量の免疫コンジュゲートを哺乳動物に投与することであり、ここで、安全かつ有効な用量は一般に、体重１ｋｇあたり少なくとも約１０ｍｇであり、ほとんどの場合に、体重１ｋｇあたり約５０ｍｇを超えない。例えば、用量は、体重１ｋｇあたり約１０ｍｇから体重１ｋｇあたり約２０ｍｇまでである。当然ながら、特定の用量は、投与経路および患者の健康状態などの要因も考慮すべきであり、これらはすべて熟練した医師の技能の範囲内である。
検出目的およびキット
本開示によって提供される抗体またはそのコンジュゲートは、検出用途で使用され、例えば、試料を検出し、それによって診断情報を提供するために使用され得る。
標本（試料）としては、細胞、組織試料、および生検標本が挙げられる。「生検」という用語は、当業者に知られるあらゆる種類の生検を含み得る。したがって、生検としては、例えば、腫瘍切除試料、および内視鏡法または臓器の穿刺生検もしくは針生検によって調製された組織試料を挙げることができる。
試料としては、固定または保存された細胞試料または組織試料を挙げることができる。
さらに、本開示は、本開示の抗体（またはそのフラグメント）またはＣＡＲを含むキットを提供する。一実施形態においては、キットは、容器、操作マニュアル、緩衝剤などをさらに含む。一実施形態においては、抗体を試験プレートに取り付けることができる。
さらに、本開示は、抗体の使用を提供する。例えば、抗体は、ＢＣＭＡ陽性の癌／腫瘍を予防および／または治療するための診断用調製物または薬物を調製するために使用される。
本開示によって提供される抗体は、細胞膜表面上のヒトＢＣＭＡ分子の可溶性細胞外ドメインを認識し得る。一部の抗体はまた、カニクイザルＢＣＭＡ分子の可溶性細胞外ドメインを交差認識し得る。
本開示によって提供されるＣＡＲ－Ｔ細胞は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１３Ｂを認識しない。
本開示によって提供されるＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ陽性標的細胞に対して望ましい特異的細胞傷害性を有する。
本開示を実施する特定の態様の以下の例は、例示のみを目的として提供され、本開示の範囲を決して限定することを意図するものではない。
一般的な材料および方法
実施例において使用される材料および方法は、以下のとおりである：
１ 細胞およびマウスの供給元
Ｋ５６２－ＢＣＭＡ＋：Ｋ５６２－ＢＣＭＡ－Ｂ２２Ｄ８（セルラー・バイオメディシン・グループ（Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｇｒｏｕｐ）社によって供給される）
Ｋ５６２（ＡＴＣＣ、セルラー・バイオメディシン・グループ社によって供給される）
Ｌ－ＢＣＭＡ＋：Ｌ－ＢＣＭＡ－１Ｅ６－Ａ４（セルラー・バイオメディシン・グループ社によって供給される）
Ｌ細胞（マウス線維芽細胞、ＡＴＣＣ：カタログ番号ＣＲＬ－２６４８（商標）、ロット６３９０３６８７、セルラー・バイオメディシン・グループ社によって供給される）
Ｓｐ２／０－Ａｇ１４細胞（ＡＴＣＣ、ケムパートナー（ＣｈｅｍＰａｒｔｎｅｒ）社によって供給される）
Ｂａｌｂ／ｃマウス（シャンハイ・スラック（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｓｌａｃ）社）
ＳＪＬマウス（シャンハイ・スラック社）
２ 主要な試薬
Figure 2023525778000016
３ 主要な実験機器
Figure 2023525778000017
４ 実験設計
４．１ マウスの免疫化および血清力価の検出
５匹のＢａｌｂ／ｃマウスおよび５匹のＳＪＬマウスを２つの群に分け、表３に従ってｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃで免疫化した。表４に示されるように、１回目の免疫化後に、少なくとも２回追加免疫を行うべきである（３回目の追加免疫ではＫ５６２－ＢＣＭＡ＋細胞が使用される）。免疫化後に、ＥＬＩＳＡおよびＦＡＣＳを使用して、マウス血清の力価を検出した。血清力価が要件を満たした後に（ＥＬＩＳＡは１：１００００希釈に達するか、またはＦＡＣＳは１：１０００希釈に達する）、ハイブリドーマ細胞融合スクリーニングを実施した。
Figure 2023525778000018
Figure 2023525778000019
４．２ ハイブリドーマ細胞株のスクリーニング
４．２．１ ハイブリドーマ細胞の融合
ＦＡＣＳ検出によって、最高の血清力価を有するマウス（Ｂａｌｂ／ｃおよびＳＪＬのそれぞれ１匹）を決定し、脾臓およびリンパ節のリンパ球およびＳｐ２／０－Ａｇ１４細胞を電気細胞融合法により融合させて、ハイブリドーマ細胞を得た。
４．２．２ ハイブリドーマ細胞のモノクローナルスクリーニング
赤血球溶解後に、各マウスの融合細胞を９６ウェルプレート上で１プレートあたり２．５×１０６個の細胞で合計２０枚のプレートに塗抹した。１０日後に一次スクリーニングを行い、培地上清のｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃタンパク質への結合能をＥＬＩＳＡによって検出し、陽性の試験結果を有するクローンを２４ウェルプレートに移して増殖培養した。
増殖培養後の細胞について、ＥＬＩＳＡを使用して、培地上清のｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－ＦｃおよびｃｙｎｏＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃへの結合能を検出し、ＦＡＣＳを使用して、培地上清のＬ－ＢＣＭＡ＋細胞への結合能を検出した（二次スクリーニング）。最終的に、Ｌ－ＢＣＭＡ＋細胞に強い結合を有するクローンを選択して、サブクローナルスクリーニングを実施した。
４．２．３ ハイブリドーマ細胞のサブクローナルスクリーニング
４．２．２で得られたモノクローナル細胞を２枚の９６ウェルプレート上に塗抹し、４．２．２におけるＥＬＩＳＡおよびＦＡＣＳのスクリーニングプロセスを繰り返し、最終的にサブクローナル細胞株を得た。標的クローンを増殖培養用の培養瓶に移し、シードバンクを樹立し、各株で４単位～６単位の細胞を凍結保存した（０．５～１×１０７個の細胞／単位）。
４．３ ハイブリドーマ抗体の産生および精製
ヒトＢＣＭＡおよびカニクイザルＢＣＭＡの両方に結合するモノクローナル細胞を選択して、小バッチの試験産生を行った。細胞を２５０ｍｌ～５００ｍｌの細胞培養振とうフラスコ中で培養し、産生された抗体をプロテインＡアフィニティーカラムにより精製し、エンドトキシン除去で順次処理し、３ｍｇ～５ｍｇの抗体を得て、特性分析を行った。
４．４ 精製されたハイブリドーマ抗体の特定
抗体の特定には、以下の３つの点が含まれる：
ａ）ｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ、ｃｙｎｏＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ、およびｈＴＡＣＩ－ＥＣＤ－Ｆｃへの結合特異性の分析（ＥＬＩＳＡ）
ｂ）Ｌ細胞およびＬ－ＢＣＭＡ＋細胞への結合能の分析（ＦＡＣＳ）
ｃ）可溶性ＢＣＭＡへの競合的結合の分析（ＦＡＣＳ）。
４．５ 抗体可変領域のシーケンシング
標的クローンのハイブリドーマ細胞のＲＮＡを抽出し、ＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写し、ＰＣＲにより抗体ＶＨ／ＶＬ遺伝子断片を増幅し、シーケンシングして標的クローンの抗体可変領域の遺伝子配列を取得する。
４．６ キメラ抗体の発現特定
シーケンシングから得られた抗体のＶＨ領域をＩｇＧ１，κ組換え抗体重鎖発現ベクターにクローニングし、ＶＬ領域をＩｇＧ１，κ組換え抗体軽鎖発現ベクターにクローニングして、キメラ抗体の発現プラスミドを構築し、一方で２つのプラスミドを使用してＨＥＫ２９３Ｔ細胞をトランスフェクションさせる。３日間培養した後に、培養上清を収集する。ｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ（ＥＬＩＳＡ）およびＬ－ＢＣＭＡ＋細胞（ＦＡＣＳ）への上清の結合能を決定する。
実施例１ マウスの免疫化および血清力価の検出
マウスの免疫化を行った。３回の追加免疫および４回の融合を行った。表５に示されるように、最初の２回の追加免疫は、マウスの免疫化にｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃを使用し、次にＦ０１０９およびＦ０２２７を融合させた。３回目の追加免疫は、マウスの免疫化にＫ５６２－ＢＣＭＡ＋細胞を使用し、次にＦ０５０８およびＦ０６１４を融合させた。
Figure 2023525778000020
１回目の追加免疫後のマウス血清力価のＥＬＩＳＡ分析の結果を図１Ａ～１Ｂに示す。ｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃを使用した１回目の追加免疫の後に、ＥＬＩＳＡにより、１：１０ｋの希釈での１０匹のマウスの血清がすべてｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－ＦｃおよびｃｙｎｏＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃへの結合能を有し、そのうちＳＪＬ番号５０６６の力価は比較的低く、残りの９匹のマウスは同様の力価をすることが検出された。
ＦＡＣＳの検出結果は、図２に示されるとおりである。ＪＬ番号５０６６を除いて、１：１０００の希釈での残りのマウスの血清はすべて、Ｋ５６２－ＢＣＭＡ＋への強い結合能を有していた。
２回目の追加免疫後のマウス血清力価のＥＬＩＳＡ分析の結果を図３Ａ～３Ｂに示す。ｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃを使用した２回目の追加免疫の後に、ＥＬＩＳＡにより、１：１０ｋの希釈での１０匹のマウスの血清がすべてｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－ＦｃおよびｃｙｎｏＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃへの望ましい結合能を有し、同様の力価を有することが検出された。
ＦＡＣＳの検出結果は、図４に示されるとおりである。１：１０００の希釈での１０匹のマウスの血清はすべて、Ｋ５６２－ＢＣＭＡ＋に結合した。マウスの２つの群では、Ｂａｌｂ／ｃ番号５０６２およびＳＪＬ番号５０６７が最も高い力価を示した。
マウスＢａｌｂ／ｃ番号５０６２は融合前かつ免疫化後に死亡したため、マウスＢａｌｂ／ｃ番号５０６５およびＳＪＬ番号５０６７を選択して、１回目の融合Ｆ０１０９を実施した。マウスＳＪＬ番号５０７０は融合前かつ免疫化後に死亡したため、マウスＢａｌｂ／ｃ番号５０６３およびＳＪＬ番号５０６８を選択して、２回目の融合Ｆ０２２７を実施した（この融合によりスクリーニングに際して陽性クローンは得られなかった）。
Ｆ０１０９では１個のクローンしか生成されず、Ｆ０２２７では陽性クローンは生成されなかったため、Ｋ５６２－ＢＣＭＡ＋細胞を使用して３回目の追加免疫を実施した。マウス血清（ＴＢ２－２）を免疫化前に採取し、マウス血清（ＴＢ３）を免疫化の１週間後に採取した。
３回目の追加免疫後のマウス力価のＥＬＩＳＡの分析結果は、図５Ａ～５Ｂに示されるとおりである。１：１０ｋの希釈での４匹のマウスの血清はすべて、免疫化の前および後にｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－ＦｃおよびｃｙｎｏＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃへの望ましい結合能を有し、同様の力価を有した。
ＦＡＣＳの検出結果は、図６に示されるとおりである。１：１０００の希釈での４匹のマウスの血清はすべて、Ｌ－ＢＣＭＡ＋細胞に結合した。２つのマウスの群では、Ｂａｌｂ／ｃ番号５０６４およびＳＪＬ番号５０６９が最も高い力価を示した。
３回目の追加免疫の後に、Ｂａｌｂ／ｃ番号５０６４およびＳＪＬ番号５０６９を選択して、３回目の融合Ｆ０５０８を実施し、Ｂａｌｂ／ｃ番号５０６１およびＳＪＬ番号５０６６を選択して、４回目の融合Ｆ０６１４を実施した。
実施例２ ハイブリドーマ細胞株のスクリーニング
２．１ 融合Ｆ０１０９のハイブリドーマ細胞のスクリーニング
電気細胞融合後の細胞を４０枚の９６ウェルプレート上に塗抹した。このうち、Ｂａｌｂ／ｃ番号５０６５をプレート番号１～番号２０上に塗抹し、ＳＪＬ番号５０６７をプレート番号２１～番号４０上に塗抹した。一次スクリーニング：ＥＬＩＳＡにより、培地上清のｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃへの結合能が検出され、ネガティブコントロール群はＮＣ－Ｆｃであり、設定された閾値はＤ値＞０．８であり、一方で、ＯＤ４５０（ｈＢＣＭＡ ＥＣＤ－Ｆｃ）－ＯＤ４５０（ｈＦｃ）＞０．５であり、合計６８個のクローンが得られた。増殖培養後に、二次スクリーニングを実施したところ、Ｂａｌｂ／ｃ番号５０６５の６Ｇ１０は、ｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ、ｃｙｎｏＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ、およびＫ５６２－ＢＣＭＡ＋細胞に対して強い結合親和性を示し、ＳＪＬ番号５０６７の３４Ｄ１は、Ｋ５６２－ＢＣＭＡ＋細胞に対して良好な結合親和性を示した。これら２個のクローンを親クローンとして選択して、サブクローナルスクリーニングを行った。
Ｂａｌｂ／ｃ番号５０６５に由来し、サブクローナルスクリーニングから得られたモノクローナル６Ｇ１０－１Ｄ７および６Ｇ１０－１Ｈ２ならびにハイブリッドクローン６Ｇ１０－１Ｂ１１および６Ｇ１０－１Ｄ３は、ｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ、ｃｙｎｏＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ、およびＫ５６２－ＢＣＭＡ＋に対して強い結合親和性を有し、ＳＪＬ番号５０６７に由来するサブクローナル３４Ｄ１－２Ｈ２は、ｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－ＦｃおよびＫ５６２－ＢＣＭＡ＋に対して強い結合親和性を有した。５個のクローンを選択し、凍結保存した。クローン６Ｇ１０－１Ｄ７を選択して、小バッチで抗体の産生を行った。
２．２ 融合Ｆ０２２７のハイブリドーマ細胞のスクリーニング
融合Ｆ０２２７のサブクローナルスクリーニングから、ｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－ＦｃおよびＬ－ＢＣＭＡ＋細胞に結合し得る陽性クローンは得られなかった。
２．３ 融合Ｆ０５０８のハイブリドーマ細胞のスクリーニング
電気細胞融合後の細胞を４０枚の９６ウェルプレート上に塗抹した。このうち、Ｂａｌｂ／ｃ番号５０６４をプレート番号８１～番号１００上に塗抹し、ＳＪＬ番号５０６９をプレート番号１０１～番号１２０上に塗抹した。一次スクリーニング：ＥＬＩＳＡにより、培地上清のｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃへの結合親和性が検出され、ネガティブコントロール群はＮＣ－Ｆｃであり、設定された閾値はＤ値≧２であり、合計７９個のクローンが得られた。増殖培養後に、二次スクリーニングを実施したところ、得られた１９個のクローン（１０９Ｃ５、１０７Ａ１１、１０７Ｂ１１、１１６Ｈ６、１０２Ｇ２、１０２Ａ１２、１１１Ｆ１１、１０７Ａ９、１１１Ｄ５、１０５Ｆ９、１１４Ｃ６、９７Ｂ８、９７Ｃ４、１０４Ｈ４、１１５Ｇ７、１１６Ａ９、１００Ｈ２、９９Ｂ３、および１１０Ａ１１）はすべて、ｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ、ｃｙｎｏＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ、およびＬ－ＢＣＭＡ＋細胞に対して強い結合親和性を示し、得られた４個のクローン（１２０Ｄ６、１２０Ａ１０、１０５Ｃ１０、および１１３Ｂ３）はすべて、ｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－ＦｃおよびＬ－ＢＣＭＡ＋細胞に対して強い結合親和性を示し、これらの２３個のクローンを親クローンとして使用して、図７Ａ～７Ｄに示されるようにサブクローナルスクリーニングを行った。
それぞれの親クローンを９６ウェルプレート上に塗抹して、サブクローナルスクリーニングを行った。一次スクリーニングにおいては、６個のクローン１０５Ｆ９、１１１Ｆ１１、１２０Ｄ６、１０４Ｈ４、１１５Ｇ７、および１１０Ａ１１のサブクローナルはすべて陰性であり、１２０Ａ１０は、ＥＬＩＳＡにおいて陰性であるサブクローナルを有したが、他のクローンはすべて陰性であった。１２０Ａ１０をサブクローニング前にスクリーニングしたところ、これは、カニクイザルＢＣＭＡと交差反応性を示さなかったため、このクローンは二次スクリーニングにかけなかった。上述のクローンを塗抹した９６ウェルプレートをさらに２日間培養した。その後、ＥＬＩＳＡスクリーニングを再度行ったところ、スクリーニング結果は依然として陰性であった。したがって、これら７個の親クローンのサブクローナルスクリーニングを中止した。
残りの１６個の親クローンを、二次スクリーニングにかけた。スクリーニングから得られた５個のサブクローン９９Ｂ３Ｇ３、１０２Ａ１２Ｈ６、１０７Ａ１１Ｆ１、１０７Ａ９Ａ４、および１０７Ｂ１１Ｅ１はすべて、ｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ、ｃｙｎｏＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ、およびＬ－ＢＣＭＡ＋細胞に対して強い結合親和性を有し、ＮＣ－Ｆｃには結合しなかった。２個のサブクローン１０５Ｃ１０Ｆ１および１１３Ｂ３Ｆ１２は両方とも、ｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－ＦｃおよびＬ－ＢＣＭＡ＋に対して強い結合親和性を有し、ｃｙｎｏＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ、ＮＣ－Ｆｃには結合しなかった。上述の７個のサブクローンを選択して、小バッチで抗体を産生した。
さらに、４個のクローン９７Ｂ８Ｇ８、１００Ｈ２Ｄ１２、１０９Ｃ５Ｆ３、および１１４Ｃ６Ｃ８は、顕微鏡検査によればモノクローナルではなく、２回目のサブクローニングにかけた。２回目の一次サブクローナルスクリーニングの結果は以下のとおりである。１１４Ｃ６Ｃ８は陽性のサブクローンを生成しなかったため、このクローンをもはや保持しなかった。クローン９７Ｂ８Ｇ８Ｄ１２、９７Ｂ８Ｇ８Ｅ６、９７Ｂ８Ｇ８Ｆ７、９７Ｂ８Ｇ８Ｇ２、１００Ｈ２Ｄ１２Ｂ１０、１００Ｈ２Ｄ１２Ｃ６、１００Ｈ２Ｄ１２Ｄ５、１００Ｈ２Ｄ１２Ｈ３、１０９Ｃ５Ｆ３Ｃ１、１０９Ｃ５Ｆ３Ｄ２、１０９Ｃ５Ｆ３Ｄ４、および１０９Ｃ５Ｆ３Ｈ３を選択して、二次スクリーニングにかけた。この結果は、２個の得られたクローン１００Ｈ２Ｄ１２Ｃ６および１０９Ｃ５Ｆ３Ｃ１が両方とも、ｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ、ｃｙｎｏＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ、およびＬ－ＢＣＭＡ＋細胞に対して強い結合親和性を有し、ＮＣ－Ｆｃには結合しなかったことを示している。生成されたクローン９７Ｂ８Ｇ８Ｄ１２は、ｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－ＦｃおよびｃｙｎｏＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃに対して強い結合親和性を有し、Ｌ－ＢＣＭＡ＋細胞に対して弱い結合親和性を有した。上述の３個のクローンを選択して、小バッチで抗体産生を行った。
クローン１１６Ａ９、１１１Ｄ５、および１１６Ｈ６に由来するサブクローンのほとんどはＮＣ－ｈＦｃに対して強い結合親和性を有していたため、ＦＡＣＳを使用して、上述の３個のクローンからのすべてのサブクローンをスクリーニングした。１１６Ａ９からのサブクローンはすべて陰性クローンであった。１１６Ｈ６Ｃ１０からのサブクローンは陽性クローンであったが、ＮＣ－ｈＦｃに対して強い結合親和性を有していた。１１１Ｄ５から１０個のサブクローンを選択して、二次スクリーニングを行ったところ、すべてのサブクローンがＮＣ－ｈＦｃに対して強い結合親和性を有していた。したがって、クローン１１６Ａ９、１１１Ｄ５、および１１６Ｈ６、ならびにそれらのサブクローンをもはや保持しなかった。
クローン９７Ｃ４Ｆ２、１０２Ｇ２Ｂ５、１０２Ｇ２Ｄ１、および１０２Ｇ２Ｆ３はＬ－ＢＣＭＡ＋細胞に結合しなかったため、これらももはや保持しなかった。
シーケンシング結果は、１０７Ａ１１Ｆ１、１０７Ｂ１１Ｅ１、および１０７Ａ９Ａ４がそれぞれ４つの重鎖および１つの軽鎖を有したことを示しており、これら３個のクローンを２回目のサブクローナルスクリーニングにかけた。この結果は、１０７Ａ１１Ｆ１のサブクローン１０７Ａ９Ａ４Ｄ２、１０７Ａ１１Ｆ１Ｂ７、および１０７Ｂ１１Ｅ１Ｄ７が、ｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ、ｃｙｎｏＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ、およびＬ－ＢＣＭＡ＋細胞に対して強い結合親和性を有したことを示している。これらの３個のクローンを選択してシーケンシングを行い、サブクローン１０７Ａ９Ａ４Ｂ２、１０７Ａ９Ａ４Ｄ８、１０７Ａ９Ａ４Ｅ９、１０７Ａ１１Ｆ１Ｃ５、１０７Ａ１１Ｆ１Ｅ６、１０７Ａ１１Ｆ１Ｅ７、１０７Ｂ１１Ｅ１Ａ８、１０７Ｂ１１Ｅ１Ｂ１０、および１０７Ｂ１１Ｅ１Ｃ１１を凍結保存した。
２．４ 融合Ｆ０６１４のハイブリドーマ細胞のスクリーニング
電気細胞融合後の細胞を４０枚の９６ウェルプレート上に塗抹した。このうち、Ｂａｌｂ／ｃ番号５０６１をプレート番号１２１～番号１４０上に塗抹し、ＳＪＬ番号５０６６をプレート番号１４１～番号１６０上に塗抹した。ＥＬＩＳＡを一次スクリーニングにおいて使用して、培地上清のｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃへの結合親和性を検出した。ここで、設定された閾値はＤ値≧０．８である。合計３３個のクローンが得られた。増殖培養後に、二次スクリーニングを行った。５個の得られたクローン（１５１Ａ９、１５６Ｅ１１、１４９Ｈ４、１４３Ｄ６、および１５４Ｂ８）はすべて、ｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ、ｃｙｎｏＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ、およびＬ－ＢＣＭＡ＋に対して結合親和性を有し、ＮＣ－Ｆｃには結合しなかった。１個の得られたクローン（１５２Ｄ８）は、ｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－ＦｃおよびＬ－ＢＣＭＡ＋に対して強い結合親和性を有し、ＮＣ－Ｆｃには結合しなかった。これら６個のクローンを親クローンとして選択して、サブクローナルスクリーニングを行った。
それぞれの親クローンを９６ウェルプレート上に塗抹して、サブクローナルスクリーニングを行った。３個のクローン１５６Ｅ１１、１４９Ｈ４、および１５４Ｂ８のサブクローンはすべて陰性であったため、これら３個の親クローンのサブクローニングを二次スクリーニングにかけなかった。
残りの３個の親クローンからサブクローンを選択して、二次スクリーニングを行った。この結果は、３個のサブクローン１４３Ｄ６Ｆ４、１５１Ａ９Ａ４、および１５２Ｄ８Ｅ８がすべて、ｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ、ｃｙｎｏＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ、およびＬ－ＢＣＭＡ＋に対して強い結合親和性を有し、ＮＣ－Ｆｃには結合しなかったことを示している。これらの３個のサブクローンを選択して、小バッチで抗体産生を行った。１４３Ｄ６Ｄ８および１５１Ａ９Ｆ１を凍結保存した。
２．５ ハイブリドーマ細胞スクリーニング結果のまとめ
図７Ａ～７Ｄに示されるように、４回のハイブリドーマ細胞融合を行った。サブクローナルスクリーニングの後に、１４株のハイブリドーマ細胞（６Ｇ１０－１Ｄ７、９９Ｂ３Ｇ３、１０２Ａ１２Ｈ６、１０７Ａ１１Ｆ１、１０７Ａ９Ａ４、１０７Ｂ１１Ｅ１、１００Ｈ２Ｄ１２Ｃ６、１０５Ｃ１０Ｆ１、１１３Ｂ３Ｆ１２、１０９Ｃ５Ｆ３Ｃ１、９７Ｂ８Ｇ８Ｄ１２、１４３Ｄ６Ｆ４、１５１Ａ９Ａ４、および１５２Ｄ８Ｅ８）を選択して、小バッチのハイブリドーマ抗体の産生および精製、ならびに抗体可変領域のシーケンシングを行った。
シーケンシング結果は、１００Ｈ２Ｄ１２Ｃ６および９７Ｂ８Ｇ８Ｄ１２の抗体可変領域の配列が９９Ｂ３Ｇ３のものと同じであることを示している。１０７Ａ１１Ｆ１、１０７Ａ９Ａ４、および１０７Ｂ１１Ｅ１はモノクローナルではなかった。これら３個のハイブリドーマ細胞を２回目のサブクローニングにかけた。１０７Ａ９Ａ４Ｄ２、１０７Ａ１１Ｆ１Ｂ７、および１０７Ｂ１１Ｅ１Ｄ７を選択して、抗体可変領域のシーケンシングを行った。１０７Ａ９Ａ４Ｄ２および１０７Ａ１１Ｆ１Ｂ７の抗体可変領域は同じ配列を有し、それぞれ１つの重鎖および２つの軽鎖を有していた。上述のハイブリドーマ上清のスクリーニングデータは表６に示されるとおりである。
Figure 2023525778000021
実施例３ ハイブリドーマ抗体の産生および精製
合計１４個のハイブリドーマ細胞を選択して、小バッチで抗体産生を行った。そのうち、９７Ｂ８Ｇ８Ｄ１２は抗体を産生しなかった。残りの１３個のクローンはすべて、表７に示されるように、対応する抗体の生成に成功した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥの結果は、図８に示されるように、純粋な抗体が精製から得られたことを示している。
Figure 2023525778000022
実施例４ 精製されたハイブリドーマ抗体の特定
１．０μｇ／ｍｌのｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ、ｃｙｎｏＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ、およびｈＴＡＣＩ－ＥＣＤ－Ｆｃをプレート上に塗抹して、ＥＬＩＳＡによってハイブリドーマ抗体の特異性を検出した。
ＥＬＩＳＡ分析結果を図９Ａ～図１１Ｂに示す。精製されたハイブリドーマ抗体ｍＡｂ００１（６Ｇ１０－１Ｄ７）は、ヒトＢＣＭＡの細胞外ドメインに結合することができたが、カニクイザルＢＣＭＡの細胞外ドメインに対する弱い結合親和性を有した。ｍＡｂ００１（６Ｇ１０－１Ｄ７）は、高濃度でのみカニクイザルＢＣＭＡ分子の細胞外ドメインに結合した。ｍＡｂ０１３（１５２Ｄ８Ｅ）は、ヒトＢＣＭＡおよびカニクイザルＢＣＭＡの細胞外ドメインに結合しなかった。ｍＡｂ００４（１０５Ｃ１０Ｆ１）およびｍＡｂ００８（１３Ｂ３Ｆ１２）は、ヒトＢＣＭＡの細胞外ドメインに結合することができたが、カニクイザルＢＣＭＡの細胞外ドメインを認識することができなかった。他のすべての精製されたハイブリドーマ抗体は、ヒトＢＣＭＡおよびカニクイザルＢＣＭＡの細胞外ドメインに結合することができた。どのハイブリドーマ抗体も、ｈＴＡＣＩ－ＥＣＤ－Ｆｃを認識しなかった。各抗体のｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ、ｃｙｎｏＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃ、およびｈＴＡＣＩ－ＥＣＤ－Ｆｃへの結合についてのＥＣ５０を表８に示す。
Figure 2023525778000023
フローサイトメトリーの検出結果は、図１２Ａ～図１３Ｂに示されるとおりである。ｍＡｂ００３およびｍＡｂ０１３を除いて、残りの１１個のハイブリドーマ抗体はすべて、Ｌ－ＢＣＭＡ＋細胞に対して望ましい結合親和性を有し、Ｌ細胞への非特異的な結合を有しなかった。
可溶性ＢＣＭＡへのハイブリドーマ抗体の競合的結合の分析結果は、図１４Ａ～１４Ｆに示されるとおりである。ｈＢＣＭＡ－ＥＣＤ－Ｆｃの濃度が２４０ｎｇ／ｍｌを超える場合に、Ｋ５６２－ＢＣＭＡ＋細胞のｍＡｂ００１への結合（最終濃度ＥＣ８０：１μｇ／ｍｌ）を競合的に阻害することができ、ここで、ＩＣ５０は７３１ｎｇ／ｍｌであり、対応するモル比は１．７：１であった。Ｋ５６２－ＢＣＭＡ＋培地上清のＢＣＭＡ濃度が１２０ｎｇ／ｍｌを超える場合に、Ｋ５６２－ＢＣＭＡ＋細胞のｍＡｂ００１への結合（最終濃度ＥＣ８０：１μｇ／ｍｌ）を競合的に阻害することができ、ここで、ＩＣ５０は４６６ｎｇ／ｍｌであり、対応するモル比は１０．４：１であった。
実施例５ 抗体可変領域のシーケンシング
合計１７株のハイブリドーマ細胞を抗体可変領域のシーケンシングにかけた。シーケンシング結果は、１２株のハイブリドーマ細胞：６Ｇ１０－１Ｄ７（ＣＰ０１）、９９Ｂ３Ｇ３（ＣＰ０２）、１０２Ａ１２Ｈ６、１００Ｈ２Ｄ１２Ｃ６、１０５Ｃ１０Ｆ１（ＣＰ０３）、１１３Ｂ３Ｆ１２、１０９Ｃ５Ｆ３Ｃ１（ＣＰ０６）、９７Ｂ８Ｇ８Ｄ１２、１４３Ｄ６Ｆ４（ＣＰ０７）、１５１Ａ９Ａ４（ＣＰ０８）、１５２Ｄ８Ｅ８（ＣＰ０９）、および１０７Ｂ１１Ｅ１Ｄ７（ＣＰ０５）がモノクローナルであったことを示している。９９Ｂ３Ｇ３（ＣＰ０２）、１００Ｈ２Ｄ１２Ｃ６、および９７Ｂ８Ｇ８Ｄ１２は、同じ配列の抗体可変領域を有していた。５株のハイブリドーマ細胞：１０７Ａ１１Ｆ１、１０７Ａ９Ａ４、１０７Ｂ１１Ｅ１、１０７Ａ９Ａ４Ｄ２および１０７Ａ１１Ｆ１Ｂ７（ＣＰ０４）はポリクローナルであった。１０７Ａ１１Ｆ１、１０７Ａ９Ａ４、および１０７Ｂ１１Ｅ１はそれぞれ、４つの重鎖および１つの軽鎖を有していた。１０７Ａ９Ａ４Ｄ２および１０７Ａ１１Ｆ１Ｂ７（ＣＰ０４）はそれぞれ、１つの重鎖および同じ配列を有する２つの軽鎖を有していた。
表９は、抗体可変領域の配列を示している。
Figure 2023525778000024
実施例６ キメラ抗体の発現および特定
シーケンシングから得られた抗体のＶＨ領域をＩｇＧ１，κ組換え抗体重鎖発現ベクターにクローニングし、ＶＬ領域をＩｇＧ１，κ組換え抗体軽鎖発現ベクターにクローニングして、キメラ抗体の発現プラスミドを構築した。５株のモノクローナルのハイブリドーマ細胞（６Ｇ１０－１Ｄ７、９９Ｂ３Ｇ３、１０５Ｃ１０Ｆ１、１１３Ｂ３Ｆ１２、および１０７Ｂ１１Ｅ１Ｄ７）および１株のポリクローナルのハイブリドーマ細胞（１０７Ａ９Ａ４Ｄ２）を選択して、キメラ抗体を発現させた。そのうち、１０７Ａ９Ａ４Ｄ２ＶＨを、それぞれ１０７Ａ９Ａ４Ｄ２ＶＬ－１および１０７Ａ９Ａ４Ｄ２ＶＬ－２とペアにして発現させた。組換え発現されたキメラ抗体の重鎖および軽鎖の配列は以下のとおりである（下線部分は抗体の可変領域配列である）：
１．ハイブリドーマ６Ｇ１０－１Ｄ７
＞６Ｇ１０－１Ｄ７ＶＨ重鎖（配列番号３９、ＶＨに下線が引かれている）：
ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＭＫＩＳＣＫＡＳＤＹＳＦＴＤＹＩＭＴＷＶＫＱＳＨＧＫＮＬＥＷＩＧＬＩＮＰＹＮＧＧＴＴＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＦＴＶＤＫＳＳＴＴＡＹＭＤＬＬＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＲＧＩＴＴＤＹＹＴＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
＞６Ｇ１０－１Ｄ７ＶＬ軽鎖（配列番号４０）：
ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＦＰＧＳＲＣＤＩＶＭＴＱＳＱＲＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＳＶＧＴＡＶＡＷＹＱＱＴＰＧＱＦＰＫＬＬＩＹＳＴＳＮＲＹＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＮＭＱＳＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱＹＳＴＹＰＬＴＦＧＳＧＴＫＬＥＬＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
２．ハイブリドーマ９９Ｂ３Ｇ３
＞９９Ｂ３Ｇ３ＶＨ重鎖（配列番号４１、ＶＨに下線が引かれている）：
ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＥＶＱＬＱＱＳＧＰＶＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＬＹＭＮＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＶＩＮＰＹＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＡＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＩＴＡＹＭＥＬＮＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＤＳＩＹＶＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
＞９９Ｂ３Ｇ３ＶＬ軽鎖（配列番号４２、ＶＬに下線が引かれている）：
ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＦＰＧＳＲＣＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＭＳＶＧＱＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＳＩＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＶＹＦＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＩＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱＨＹＳＳＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
３．ハイブリドーマ１０５Ｃ１０Ｆ１
＞１０５Ｃ１０Ｆ１ＶＨ重鎖（配列番号４３、ＶＨに下線が引かれている）：
ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＥＶＫＬＬＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＩＤＦＳＲＹＷＭＳＷＶＲＲＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＡＰＳＬＫＤＫＦＩＩＳＲＤＡＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＫＶＲＳＥＤＴＡＬＹＹＣＡＴＬＹＹＤＹＤＧＤＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
＞１０５Ｃ１０Ｆ１ＶＬ軽鎖（配列番号４４、ＶＬに下線が引かれている）：
ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＦＰＧＳＲＣＤＩＶＭＴＰＳＱＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＶＴＣＫＡＳＱＮＶＧＴＮＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＡＬＩＹＳＡＳＹＲＹＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＮＶＱＳＥＤＬＡＥＹＦＣＱＨＹＮＳＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
４．ハイブリドーマ１１３Ｂ３Ｆ１２
＞１１３Ｂ３Ｆ１２ＶＨ重鎖（配列番号４５、ＶＨに下線が引かれている）：
ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＥＶＱＬＱＱＳＧＰＶＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＶＩＮＰＹＮＧＧＴＤＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＮＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＲＲＥＳＹＧＴＳＹＱＧＡＹＦＤＳＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
＞１１３Ｂ３Ｆ１２ＶＬ軽鎖（配列番号４６、ＶＬに下線が引かれている）：
ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＦＰＧＳＲＣＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＳＩＳＤＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＶＩＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
５．ハイブリドーマ１０７Ｂ１１Ｅ１Ｄ７
＞１０７Ｂ１１Ｅ１Ｄ７ＶＨ重鎖（配列番号４７、ＶＨに下線が引かれている）：
ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＥＶＱＬＱＱＳＧＰＶＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＬＹＭＮＷＬＫＱＳＨＧＫＲＬＥＷＩＧＶＩＮＰＹＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＤＬＮＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＤＳＩＹＶＭＤＹＷＧＱＧＴＳＦＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
＞１０７Ｂ１１Ｅ１Ｄ７ＶＬ軽鎖（配列番号４８、ＶＬに下線が引かれている）：
ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＦＰＧＳＲＣＥＮＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＳＳＴＳＰＫＬＷＩＹＤＴＳＫＬＳＳＧＶＰＧＲＦＳＧＳＧＳＧＫＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＶＡＴＹＹＣＦＱＧＳＧＹＰＬＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
６．ハイブリドーマ１０７Ａ９Ａ４Ｄ２
＞１０７Ａ９Ａ４Ｄ２ＶＨ重鎖（配列番号４９、ＶＨに下線が引かれている）：
ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＥＶＱＬＱＱＳＧＰＶＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＬＹＭＮＷＬＫＱＳＨＧＫＲＬＥＷＩＧＶＩＮＰＹＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＤＬＮＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＤＳＩＹＶＭＤＹＷＧＱＧＴＳＦＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
＞１０７Ａ９Ａ４Ｄ２ＶＬ－１軽鎖（配列番号５０、ＶＬに下線が引かれている）：
ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＦＰＧＳＲＣＥＮＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＳＳＴＳＰＫＬＷＩＹＤＴＳＫＬＳＳＧＶＰＧＲＦＳＧＳＧＳＧＫＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＶＡＴＹＹＣＦＱＧＳＧＹＰＬＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
＞１０７Ａ９Ａ４Ｄ２ＶＬ－２軽鎖（配列番号５１、ＶＬに下線が引かれている）：
ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＦＰＧＳＲＣＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＭＳＶＧＱＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＳＩＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＦＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＩＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱＨＹＳＴＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
実施例７ キメラ抗体の発現特定
キメラ抗体の発現特定に関するＥＬＩＳＡ分析の結果を図１５Ａ～１５Ｂに示す。フローサイトメトリー検出の結果を図１６Ａ～１６Ｂに示す。ハイブリドーマ６Ｇ１０－１Ｄ７、９９Ｂ３Ｇ３、１０５Ｃ１０Ｆ１、および１０７Ｂ１１Ｅ１Ｄ７のキメラ抗体は、細胞表面上のヒトＢＣＭＡ分子の可溶性細胞外ドメインに結合した。ハイブリドーマ１０７Ａ９Ａ４Ｄ２の重鎖１０７Ａ９Ａ４Ｄ２ＶＨおよび軽鎖１０７Ａ９Ａ４Ｄ２ＶＬ－２をペアにすることによって形成されたキメラ抗体はすべて、細胞表面上のヒトＢＣＭＡ分子の可溶性細胞外ドメインに結合した。１０７Ａ９Ａ４Ｄ２ＶＨおよび１０７Ａ９Ａ４Ｄ２ＶＬ－１をペアにすることによって形成されたキメラ抗体は、細胞表面上のヒトＢＣＭＡ分子の可溶性細胞外ドメインに結合しなかった。詳細なデータについては表１０を参照のこと。
Figure 2023525778000025
実施例８ ＣＡＲ構造を含むレンチウイルス発現ベクターの構築
表１１に示される上述のスクリーニングから得られた９個の抗体の軽鎖および重鎖を使用して、１８個のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を構築した。ＣＡＲの構造は、シグナルペプチド（リーダー配列）と、抗原結合領域と、リンカー領域と、膜貫通ドメインと、共刺激領域と、細胞質シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメイン）とを含み、ヒンジ領域は次のとおりである：
［ＣＤ８ ＬＳ］－［ＶＬ－リンカー－ＶＨ］－［ヒンジ－ＣＤ８ＴＭ］－［４－１ＢＢ］－［ＣＤ３ζ］、または、
［ＣＤ８ ＬＳ］－［ＶＨ－リンカー－ＶＬ］－［ヒンジ－ＣＤ８ＴＭ］－［４－１ＢＢ］－［ＣＤ３ζ］
Figure 2023525778000026
上記で構築されたＣＡＲの配列に基づいて、全長ＤＮＡ合成およびクローニングにより発現ベクターを構築した。選択された発現ベクターはｐＷＰＴレンチウイルスベクターであり、クローニングサイトはＢａｍＨＩおよびＳａｌＩの部位であった。各ＣＡＲの具体的な配列は以下のとおりである：
（１）リーダー配列（シグナルペプチド）は、ＣＤ８抗原のリーダー配列であった：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ（配列番号５２）
（２）ＢＣＭＡ－ＣＰ０１抗体由来の単鎖可変領域軽鎖（ＶＬ）配列：
ＤＩＶＭＴＱＳＱＲＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＳＶＧＴＡＶＡＷＹＱＱＴＰＧＱＦＰＫＬＬＩＹＳＴＳＮＲＹＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＮＭＱＳＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱＹＳＴＹＰＬＴＦＧＳＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号５３）
（３）ＢＣＭＡ－ＣＰ０１抗体由来の単鎖可変領域重鎖（ＶＨ）配列：
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＭＫＩＳＣＫＡＳＤＹＳＦＴＤＹＩＭＴＷＶＫＱＳＨＧＫＮＬＥＷＩＧＬＩＮＰＹＮＧＧＴＴＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＦＴＶＤＫＳＳＴＴＡＹＭＤＬＬＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＲＧＩＴＴＤＹＹＴＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号５４）
（４）ＢＣＭＡ－ＣＰ０２抗体由来の単鎖可変領域軽鎖（ＶＬ）配列：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＭＳＶＧＱＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＳＩＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＶＹＦＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＩＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱＨＹＳＳＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号５５）
（５）ＢＣＭＡ－ＣＰ０２抗体由来の単鎖可変領域重鎖（ＶＨ）配列：
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＶＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＬＹＭＮＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＶＩＮＰＹＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＡＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＩＴＡＹＭＥＬＮＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＤＳＩＹＶＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号５６）
（６）ＢＣＭＡ－ＣＰ０３抗体由来の単鎖可変領域軽鎖（ＶＬ）配列：
ＤＩＶＭＴＰＳＱＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＶＴＣＫＡＳＱＮＶＧＴＮＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＡＬＩＹＳＡＳＹＲＹＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＮＶＱＳＥＤＬＡＥＹＦＣＱＨＹＮＳＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号５７）
（７）ＢＣＭＡ－ＣＰ０３抗体由来の単鎖可変領域重鎖（ＶＨ）配列：
ＥＶＫＬＬＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＩＤＦＳＲＹＷＭＳＷＶＲＲＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＰＤＳＳＴＩＮＹＡＰＳＬＫＤＫＦＩＩＳＲＤＡＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＫＶＲＳＥＤＴＡＬＹＹＣＡＴＬＹＹＤＹＤＧＤＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号５８）
（８）ＢＣＭＡ－ＣＰ０４抗体由来の単鎖可変領域軽鎖（ＶＬ）配列：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＭＳＶＧＱＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＳＩＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＦＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＩＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱＨＹＳＴＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号５９）
（９）ＢＣＭＡ－ＣＰ０４抗体由来の単鎖可変領域重鎖（ＶＨ）配列：
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＶＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＬＹＭＮＷＬＫＱＳＨＧＫＲＬＥＷＩＧＶＩＮＰＹＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＤＬＮＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＤＳＩＹＶＭＤＹＷＧＱＧＴＳＦＴＶＳＳ（配列番号６０）
（１０）ＢＣＭＡ－ＣＰ０５抗体由来の単鎖可変領域軽鎖（ＶＬ）配列：
ＥＮＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＳＳＴＳＰＫＬＷＩＹＤＴＳＫＬＳＳＧＶＰＧＲＦＳＧＳＧＳＧＫＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＶＡＴＹＹＣＦＱＧＳＧＹＰＬＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号６１）
（１１）ＢＣＭＡ－ＣＰ０５抗体由来の単鎖可変領域重鎖（ＶＨ）配列：
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＶＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＬＹＭＮＷＬＫＱＳＨＧＫＲＬＥＷＩＧＶＩＮＰＹＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＤＬＮＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＤＳＩＹＶＭＤＹＷＧＱＧＴＳＦＴＶＳＳ（配列番号６２）
（１２）ＢＣＭＡ－ＣＰ０６抗体由来の単鎖可変領域軽鎖（ＶＬ）配列：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＬＳＶＧＱＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＤＮＳＮＱＫＨＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＶＹＦＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＩＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱＨＹＴＡＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＡＬＫ（配列番号６３）
（１３）ＢＣＭＡ－ＣＰ０６抗体由来の単鎖可変領域重鎖（ＶＨ）配列：
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＶＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＶＳＧＹＴＦＴＤＹＹＭＮＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＶＩＴＰＹＮＧＡＮＲＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＶＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＤＳＩＹＶＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＩＶＳＳ（配列番号６４）
（１４）ＢＣＭＡ－ＣＰ０７抗体由来の単鎖可変領域軽鎖（ＶＬ）配列：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＭＳＶＧＱＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＳＩＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＶＹＦＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＩＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱＨＹＳＴＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号６５）
（１５）ＢＣＭＡ－ＣＰ０７抗体由来の単鎖可変領域重鎖（ＶＨ）配列：
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＶＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＳＬＮＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＶＶＮＰＹＮＧＧＴＳＨＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＮＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＰＤＳＩＹＶＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号６６）
（１６）ＢＣＭＡ－ＣＰ０８抗体由来の単鎖可変領域軽鎖（ＶＬ）配列：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＡＭＳＶＧＱＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＮＩＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＶＹＦＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＩＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱＨＹＳＴＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号６７）
（１７）ＢＣＭＡ－ＣＰ０８抗体由来の単鎖可変領域重鎖（ＶＨ）配列：
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＶＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＳＬＮＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＶＶＮＰＹＮＧＧＴＴＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＮＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＰＤＳＩＹＶＭＤＳＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号６８）
（１８）ＢＣＭＡ－ＣＰ０９抗体由来の単鎖可変領域軽鎖（ＶＬ）配列：
ＤＩＫＭＴＱＳＰＳＳＭＹＶＳＬＧＥＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＲＮＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＳＰＫＴＬＩＹＲＡＮＲＬＶＤＧＶＰＬＲＦＳＧＳＧＳＧＱＤＹＳＬＴＩＳＳＬＥＹＥＤＭＧＩＹＹＣＬＱＹＤＥＦＰＲＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号６９）
（１９）ＢＣＭＡ－ＣＰ０９抗体由来の単鎖可変領域重鎖（ＶＨ）配列：
ＱＶＴＬＫＥＳＧＰＧＩＬＱＳＳＱＴＬＳＬＴＣＳＦＳＧＦＳＬＮＴＳＧＭＧＶＮＷＩＲＱＳＳＧＫＤＬＥＷＬＡＨＩＹＷＮＤＤＫＲＹＮＰＳＬＫＳＲＬＴＩＳＫＤＴＳＲＮＱＶＦＬＲＩＴＳＶＤＡＴＤＴＡＴＹＦＣＣＲＳＲＬＳＦＤＹＷＧＨＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号７０）
（２０）ＢＣＭＡ－ＣＰ０１／Ｒ、ＢＣＭＡ－ＣＰ０２／Ｒ、ＢＣＭＡ－ＣＰ０３／Ｒ、ＢＣＭＡ－ＣＰ０４／Ｒ、ＢＣＭＡ－ＣＰ０５／Ｒ、ＢＣＭＡ－ＣＰ０６／Ｒ、ＢＣＭＡ－ＣＰ０７／Ｒ、ＢＣＭＡ－ＣＰ０８／Ｒ、およびＢＣＭＡ－ＣＰ０９／Ｒの単鎖可変領域における重鎖と軽鎖との間のリンカー配列は以下のとおりである：
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７１）
（２１）ヒンジ領域（およびリンカー領域）の配列：
ＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ（配列番号７２）
（２２）ＣＤ８（ＣＤ８ＴＭ）膜貫通ドメインである膜貫通ドメインの配列：
ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣ（配列番号７３）
（２３）共刺激領域における４－１ＢＢからの細胞内シグナル伝達モチーフの配列：
ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ（配列番号７４）
（２４）ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達領域におけるＴＣＲ複合体からの免疫受容体チロシン依存性活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）の配列：
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＱＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号７５）
実施例９ ＣＡＲ－Ｔ細胞の調製
（１）健康なヒトの静脈血を採取し、密度勾配遠心分離による分離を行って、単核細胞（ＰＢＭＣ）を得た。
（２）０日目に、事前にＣＤ３モノクローナル抗体（ＯＫＴ３）を５μｇ／ｍＬの最終濃度でコーティングし、かつレトロネクチン（タカラバイオ（ＴＡＫＡＲＡ）社から購入）を１０μｇ／ｍＬの最終濃度でコーティングした細胞培養フラスコにＰＢＭＣを接種した。培地は、１％のヒトアルブミンを含むＣＢＭＧ－ＲＣ－０９ａ細胞培地であった。１０００Ｕ／ｍＬの最終濃度の組換えヒトインターロイキン２（ＣＢＭＧ－ＲＣ－０５ｂ）を加えた。３７℃および５％の飽和湿度のＣＯ２インキュベーターにおいて培地を培養した。
（３）１日目に、培養したＰＢＭＣの上清をゆっくりと取り除き、１％のヒトアルブミンを含む新たなＣＢＭＧ－ＲＣ－０９ａ細胞培地を加えた。組換えヒトインターロイキン２（ＣＢＭＧ－ＲＣ－０５ｂ）を、１０００Ｕ／ｍＬの最終濃度まで培地に加えた。３７℃および５％の飽和湿度のＣＯ２インキュベーターにおいて細胞を培養し続けた。
（４）３日目に、新たな培養培地、濃縮および精製されたＣＡＲ－ＢＣＭＡレンチウイルス、硫酸プロタミン（１２μｇ／ｍｌ）、ならびに１０００Ｕ／ｍＬの最終濃度のＣＢＭＧ－ＲＣ－０５ｂを加えた。３７℃、５％のＣＯ２インキュベーターにおいて１２時間形質導入した後に、培養液を廃棄し、新しい培地を加え、３７℃、５％のＣＯ２インキュベーターにおいて培養を続けた。
（５）６日目から、ＣＡＲＴ－ＢＣＭＡ細胞を所望の活性試験に使用した。
実施例１０ ＣＡＲ遺伝子のＴ細胞ゲノムへの組込み率およびＣＡＲ遺伝子によってコードされるタンパク質の膜表面上での発現レベルの検出
実施例９において７日間培養された０．５×１０６個のＣＡＲＴ－ＢＣＭＡ細胞を使用して、組換えヒトＢＣＭＡタンパク質のＦｃフラグメントを染色した後に、Ｔ細胞膜表面上のＣＡＲ－ＢＣＭＡタンパク質の発現レベルをフローサイトメーターにおいて分析した。
結果を図１７Ａ～１７Ｂに示す。ＢＣＭＡ－ＣＰ０１、ＢＣＭＡ－ＣＰ０９、およびＢＣＭＡ－ＣＰ０９Ｒの３つのＣＡＲ－Ｔレンチウイルスがトランスフェクション率を有しなかったことを除いて、他の１５個のＢＣＭＡ－ＣＰ ＣＡＲ－Ｔ細胞はすべて、７日間の形質導入後にＣＡＲの比較的高いＴ細胞表面発現を有していた。６Ｃおよび８Ｃはポジティブコントロールであった。
実施例１１ ＣＡＲＴ－ＢＣＭＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ活性化能の検出
実施例９において７日間培養されたＣＡＲＴ－ＢＣＭＡ細胞を使用して、細胞活性化レベルの指標であるタンパク質ＣＤ１３７およびＩＦＮγを検出した。７日間培養された１×１０５個のＣＡＲＴ－ＢＣＭＡ細胞を、それぞれヒトＢＣＭＡ陽性Ａ５４９－ＢＣＭＡ－１Ｄ６、ＭＭ．１Ｓ、ＲＰＭＩ８２２６腫瘍細胞系統、サルＢＣＭＡ陽性Ａ５４９－ＢＣＭＡ－Ｍ、ＢＣＭＡ陰性Ａ５４９腫瘍細胞系統、または無添加の腫瘍細胞とともに、２００μｌのＣＢＭＧ－ＲＣ－０９ａ培地中で１：１の比率にて１８時間培養した。次に、Ｔ細胞膜表面上のＣＤ１３７の発現レベルをフローサイトメトリーにより検出し、培養上清中のＩＦＮγの分泌レベルをＥＬＩＳＡにより検出した。
結果は図１８Ａ～１８Ｈおよび図１９Ａ～１９Ｂに示されるとおりである。ＢＣＭＡ－ＣＰ０１Ｒ、ＢＣＭＡ－ＣＰ０３、およびＢＣＭＡ－ＣＰ０３Ｒは、Ａ５４９－ＢＣＭＡ－１Ｄ６細胞に対してのみ、高特異性ＩＦＮ－γ放出能およびＣＤ１３７活性化特異的アップレギュレーション発現を示した。ＢＣＭＡ－ＣＰ０２／Ｒ、ＢＣＭＡ－ＣＰ０４／Ｒ、およびＢＣＭＡ－ＣＰ０５／Ｒは、Ａ５４９－ＢＣＭＡ－１Ｄ６細胞およびＡ５４９－ＢＣＭＡ－Ｍ細胞の両方に対して、高特異性ＩＦＮ－γ放出能およびＣＤ１３７活性化特異的アップレギュレーション発現を示した。
実施例１２ 標的細胞に対するＣＡＲＴ－ＢＣＭＡ細胞の細胞傷害性の検出
ＲＴＣＡ（リアルタイム細胞解析）を実施して、実施例９において１４日間培養されたＣＡＲＴ細胞（ＢＣＭＡ－ＣＰ０１／Ｒ～ＢＣＭＡ－ＣＰ０５／Ｒ）および１２日間培養されたＣＡＲＴ細胞（ＢＣＭＡ－ＣＰ０６／Ｒ～ＢＣＭＡ－ＣＰ０９／Ｒ）の細胞傷害性を検出した。これらを、それぞれ２００μｌのＣＢＭＧ－ＲＣ－０９ａ培地中で、ＢＣＭＡ陰性細胞（Ａ５４９）、ヒトＢＣＭＡ陽性自己構築細胞Ａ５４９－ＢＣＭＡ－１Ｄ６、またはサルＢＣＭＡ陽性自己構築細胞Ａ５４９－ＢＣＭＡ－Ｍとともに、図４に示される比率で８時間共培養した後に、各標的細胞に対するＣＡＲＴ細胞の細胞傷害性を分析した。
結果を図２０Ａ～２０Ｆに示す。ＢＣＭＡ－ＣＰ０１Ｒ、ＢＣＭＡ－ＣＰ０３、およびＢＣＭＡ－ＣＰ０３Ｒは、Ａ５４９－ＢＣＭＡ－１Ｄ６に対して強い細胞傷害性を有していた。ＢＣＭＡ－ＣＰ０２／Ｒ、ＢＣＭＡ－ＣＰ０４／Ｒ、およびＢＣＭＡ－ＣＰ０５／Ｒは、Ａ５４９－ＢＣＭＡ－１Ｄ６およびＡ５４９－ＢＣＭＡ－Ｍ細胞に対して強い細胞傷害性を有し、陰性の標的細胞Ａ５４９に対して有意な殺傷効果を有しなかった。形質導入されていないコントロール群（ＮＴ）も、標的細胞に対して有意な殺傷効果を有しなかった。
本発明の範囲は、上記で具体的に示され説明されたものによって限定されない。当業者は、材料、構成、構造、および寸法の記述された例に対する適切な選択肢があることを認識するであろう。特許および様々な刊行物を含む多数の参考文献が、本発明の詳細な説明において引用され、論じられている。このような参考文献の引用および考察は、本発明の詳細な説明を明確にするために提供されているにすぎず、どの参考文献も本明細書に記載される発明に対する先行技術であることを認めるものではない。本明細書において引用され、論じられたすべての参考文献は、参照によりその全体が本明細書に援用される。当業者であれば、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、本明細書に記載されているものの変形、変更、および他の実装を想起するであろう。本発明の特定の実施形態を示し、記載してきたが、当業者には、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、変化および変更を加えることができることは明らかであろう。上述の詳細な説明および添付の図面に示された事項は、例示として提示されたものであって、限定として提示されたものではない。

Claims (34)

  1. 軽鎖可変領域（ＶＬ）および重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、
    前記軽鎖可変領域は、（ｉ）それぞれ配列番号７６、配列番号７７、および配列番号７８、（ｉｉ）それぞれ配列番号８２、配列番号８３、および配列番号８４、（ｉｉｉ）それぞれ配列番号８８、配列番号８９、および配列番号９０、（ｉｖ）それぞれ配列番号９４、配列番号９５、および配列番号９６、（ｖ）それぞれ配列番号１００、配列番号１０１、および配列番号１０２、（ｖｉ）それぞれ配列番号１０６、配列番号１０７、および配列番号１０８、（ｖｉｉ）それぞれ配列番号１１２、配列番号１１３、および配列番号１１４、（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号１１８、配列番号１１９、および配列番号１２０、または（ｉｘ）それぞれ配列番号１２４、配列番号１２５、および配列番号１２６に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、かつ、
    前記重鎖可変領域は、（ｉ）それぞれ配列番号７９、配列番号８０、および配列番号８１、（ｉｉ）それぞれ配列番号８５、配列番号８６、および配列番号８７、（ｉｉｉ）それぞれ配列番号９１、配列番号９２、および配列番号９３、（ｉｖ）それぞれ配列番号９７、配列番号９８、および配列番号９９、（ｖ）それぞれ配列番号１０３、配列番号１０４、および配列番号１０５、（ｖｉ）それぞれ配列番号１０９、配列番号１１０、および配列番号１１１、（ｖｉｉ）それぞれ配列番号１１５、配列番号１１６、および配列番号１１７、（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号１２１、配列番号１２２、および配列番号１２３、または（ｉｘ）それぞれ配列番号１２７、配列番号１２８、および配列番号１２９に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合部分。
  2. 軽鎖可変領域（ＶＬ）および重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、
    （ｉ）前記ＶＬは、それぞれ配列番号７６、配列番号７７、および配列番号７８に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、前記ＶＨは、それぞれ配列番号７９、配列番号８０、および配列番号８１に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むか、
    （ｉｉ）前記ＶＬは、それぞれ配列番号８２、配列番号８３、および配列番号８４に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、前記ＶＨは、それぞれ配列番号８５、配列番号８６、および配列番号８７に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むか、
    （ｉｉｉ）前記ＶＬは、それぞれ配列番号８８、配列番号８９、および配列番号９０に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、前記ＶＨは、それぞれ配列番号９１、配列番号９２、および配列番号９３に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むか、
    （ｉｖ）前記ＶＬは、それぞれ配列番号９４、配列番号９５、および配列番号９６に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、前記ＶＨは、それぞれ配列番号９７、配列番号９８、および配列番号９９に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むか、
    （ｖ）前記ＶＬは、それぞれ配列番号１００、配列番号１０１、および配列番号１０２に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、前記ＶＨは、それぞれ配列番号１０３、配列番号１０４、および配列番号１０５に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むか、
    （ｖｉ）前記ＶＬは、それぞれ配列番号１０６、配列番号１０７、および配列番号１０８に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、前記ＶＨは、それぞれ配列番号１０９、配列番号１１０、および配列番号１１１に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むか、
    （ｖｉｉ）前記ＶＬは、それぞれ配列番号１１２、配列番号１１３、および配列番号１１４に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、前記ＶＨは、それぞれ配列番号１１５、配列番号１１６、および配列番号１１７に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むか、
    （ｖｉｉｉ）前記ＶＬは、それぞれ配列番号１１８、配列番号１１９、および配列番号１２０に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、前記ＶＨは、それぞれ配列番号１２１、配列番号１２２、および配列番号１２３に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むか、または、
    （ｉｘ）前記ＶＬは、それぞれ配列番号１２４、配列番号１２５、および配列番号１２６に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、前記ＶＨは、それぞれ配列番号１２７、配列番号１２８、および配列番号１２９に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合部分。
  3. 前記ＶＬおよびＶＨは、（ｉ）それぞれ配列番号５３および配列番号５４、（ｉｉ）それぞれ配列番号５５および配列番号５６、（ｉｉｉ）それぞれ配列番号５７および配列番号５８、（ｖｉ）それぞれ配列番号５９および配列番号６０、（ｖ）それぞれ配列番号６１および配列番号６２、（ｖｉ）それぞれ配列番号６３および配列番号６４、（ｖｉｉ）それぞれ配列番号６５および配列番号６６、（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号６７および配列番号６８、または（ｉｘ）それぞれ配列番号６９および配列番号７０に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  4. 前記ＶＬは、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６７、および配列番号６９に示されるアミノ酸配列のいずれか１つと約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を含み、かつ前記ＶＨは、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号６８、および配列番号７０に示されるアミノ酸配列のいずれか１つと約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  5. 前記抗体またはその抗原結合部分は、（ａ）全免疫グロブリン分子、（ｂ）ｓｃＦｖ、（ｃ）Ｆａｂフラグメント、（ｄ）Ｆ（ａｂ’）２、および（ｅ）ジスルフィド結合されたＦｖからなる群から選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
  6. 検出可能なマーカー、薬物、毒素、サイトカイン、放射性核種、酵素、標的化部分、およびそれらの組合せからなる群から選択されるコンジュゲート部分と連結された、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分を含む、抗体コンジュゲート。
  7. 抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である、請求項６に記載の抗体コンジュゲート。
  8. 請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分と、薬学的に許容可能な担体とを含む組成物。
  9. 請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分をコードする核酸。
  10. 請求項９に記載の核酸を含むベクター。
  11. 請求項１０に記載のベクターを含む細胞。
  12. 軽鎖可変領域（ＶＬ）および重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗ＢＣＭＡ抗原結合領域を含み、
    前記軽鎖可変領域は、（ｉ）それぞれ配列番号７６、配列番号７７、および配列番号７８、（ｉｉ）それぞれ配列番号８２、配列番号８３、および配列番号８４、（ｉｉｉ）それぞれ配列番号８８、配列番号８９、および配列番号９０、（ｉｖ）それぞれ配列番号９４、配列番号９５、および配列番号９６、（ｖ）それぞれ配列番号１００、配列番号１０１、および配列番号１０２、（ｖｉ）それぞれ配列番号１０６、配列番号１０７、および配列番号１０８、（ｖｉｉ）それぞれ配列番号１１２、配列番号１１３、および配列番号１１４、（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号１１８、配列番号１１９、および配列番号１２０、または（ｉｘ）それぞれ配列番号１２４、配列番号１２５、および配列番号１２６に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、かつ、
    前記重鎖可変領域は、（ｉ）それぞれ配列番号７９、配列番号８０、および配列番号８１、（ｉｉ）それぞれ配列番号８５、配列番号８６、および配列番号８７、（ｉｉｉ）それぞれ配列番号９１、配列番号９２、および配列番号９３、（ｉｖ）それぞれ配列番号９７、配列番号９８、および配列番号９９、（ｖ）それぞれ配列番号１０３、配列番号１０４、および配列番号１０５、（ｖｉ）それぞれ配列番号１０９、配列番号１１０、および配列番号１１１、（ｖｉｉ）それぞれ配列番号１１５、配列番号１１６、および配列番号１１７、（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号１２１、配列番号１２２、および配列番号１２３、または（ｉｘ）それぞれ配列番号１２７、配列番号１２８、および配列番号１２９に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
  13. 軽鎖可変領域（ＶＬ）および重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗ＢＣＭＡ抗原結合領域を含み、
    （ｉ）前記ＶＬは、それぞれ配列番号７６、配列番号７７、および配列番号７８に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、前記ＶＨは、それぞれ配列番号７９、配列番号８０、および配列番号８１に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むか、
    （ｉｉ）前記ＶＬは、それぞれ配列番号８２、配列番号８３、および配列番号８４に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、前記ＶＨは、それぞれ配列番号８５、配列番号８６、および配列番号８７に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むか、
    （ｉｉｉ）前記ＶＬは、それぞれ配列番号８８、配列番号８９、および配列番号９０に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、前記ＶＨは、それぞれ配列番号９１、配列番号９２、および配列番号９３に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むか、
    （ｉｖ）前記ＶＬは、それぞれ配列番号９４、配列番号９５、および配列番号９６に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、前記ＶＨは、それぞれ配列番号９７、配列番号９８、および配列番号９９に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むか、
    （ｖ）前記ＶＬは、それぞれ配列番号１００、配列番号１０１、および配列番号１０２に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、前記ＶＨは、それぞれ配列番号１０３、配列番号１０４、および配列番号１０５に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むか、
    （ｖｉ）前記ＶＬは、それぞれ配列番号１０６、配列番号１０７、および配列番号１０８に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、前記ＶＨは、それぞれ配列番号１０９、配列番号１１０、および配列番号１１１に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むか、
    （ｖｉｉ）前記ＶＬは、それぞれ配列番号１１２、配列番号１１３、および配列番号１１４に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、前記ＶＨは、それぞれ配列番号１１５、配列番号１１６、および配列番号１１７に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むか、
    （ｖｉｉｉ）前記ＶＬは、それぞれ配列番号１１８、配列番号１１９、および配列番号１２０に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、前記ＶＨは、それぞれ配列番号１２１、配列番号１２２、および配列番号１２３に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むか、または、
    （ｉｘ）前記ＶＬは、それぞれ配列番号１２４、配列番号１２５、および配列番号１２６に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つのＣＤＲ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含み、前記ＶＨは、それぞれ配列番号１２７、配列番号１２８、および配列番号１２９に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
  14. 前記ＶＬおよびＶＨは、（ｉ）それぞれ配列番号５３および配列番号５４、（ｉｉ）それぞれ配列番号５５および配列番号５６、（ｉｉｉ）それぞれ配列番号５７および配列番号５８、（ｖｉ）それぞれ配列番号５９および配列番号６０、（ｖ）それぞれ配列番号６１および配列番号６２、（ｖｉ）それぞれ配列番号６３および配列番号６４、（ｖｉｉ）それぞれ配列番号６５および配列番号６６、（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号６７および配列番号６８、または（ｉｘ）それぞれ配列番号６９および配列番号７０に示されるアミノ酸配列と約８０％～約１００％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１２または１３に記載のＣＡＲ。
  15. 前記抗ＢＣＭＡ抗原結合領域は、ＢＣＭＡに特異的に結合する単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である、請求項１２～１４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  16. 前記ＣＡＲは、以下の：
    （ａ）シグナルペプチド、
    （ｂ）ヒンジ領域、
    （ｃ）膜貫通ドメイン、
    （ｄ）共刺激領域、および、
    （ｅ）細胞質シグナル伝達ドメイン、
    うちの１つ以上をさらに含む、請求項１２～１５のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  17. 前記共刺激領域は、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ１３４、ＰＤ１、Ｄａｐ１０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＮＫＧ２Ｄ、ＧＩＴＲ、ＴＬＲ２、またはそれらの組合せの共刺激領域を含む、請求項１６に記載のＣＡＲ。
  18. 前記細胞質シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメインを含む、請求項１６に記載のＣＡＲ。
  19. 前記ヒンジ領域は、Ｉｇ４、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ１３７のヒンジ領域、またはそれらの組合せを含む、請求項１６に記載のＣＡＲ。
  20. 前記膜貫通ドメインは、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４の膜貫通ドメイン、またはそれらの組合せを含む、請求項１６に記載のＣＡＲ。
  21. 請求項１２～１５のいずれか一項に記載のＣＡＲを発現する免疫細胞。
  22. 前記免疫細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、リンパ系前駆細胞、造血幹細胞、幹細胞、マクロファージ、または樹状細胞である、請求項２１に記載の免疫細胞。
  23. 請求項１２～１５のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードする核酸。
  24. 請求項２３に記載の核酸を含むベクター。
  25. 癌を治療する方法であって、請求項２１に記載の免疫細胞をそれを必要とする被験体に投与することを含む、方法。
  26. 前記癌は、血液癌である、請求項２５に記載の方法。
  27. 前記癌は、形質細胞悪性腫瘍である、請求項２５に記載の方法。
  28. 前記癌は、ＢＣＭＡ陽性悪性腫瘍である、請求項２５に記載の方法。
  29. 前記癌は、多発性骨髄腫（ＭＭ）または形質細胞白血病である、請求項２５に記載の方法。
  30. 前記免疫細胞を、注入、注射、輸液、植え込み、および／または移植によって投与する、請求項２５に記載の方法。
  31. 前記免疫細胞を、静脈内、皮下、皮内、リンパ節内、腫瘍内、髄内、筋肉内、または腹腔内で投与する、請求項２５に記載の方法。
  32. 前記免疫細胞を、静脈内注入を介して投与する、請求項２５に記載の方法。
  33. 前記免疫細胞は、同種他家由来または自己由来である、請求項２５に記載の方法。
  34. 前記被験体は、ヒトである、請求項２５に記載の方法。
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Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2236604B1 (en) * 2007-12-05 2016-07-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-nr10 antibody and use thereof
CN102272158B (zh) * 2008-11-12 2014-05-07 乔治·K·刘易斯 源自记忆b细胞的人单克隆抗体的快速表达克隆
CN105873949A (zh) * 2014-01-31 2016-08-17 勃林格殷格翰国际有限公司 新的抗baff抗体
SG11201608415QA (en) * 2014-04-30 2016-11-29 Max Delbrück Ct Für Molekulare Medizin In Der Helmholtz Gemeinschaft Humanized antibodies against cd269 (bcma)
WO2016150899A2 (en) * 2015-03-23 2016-09-29 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Anti-ceacam6 antibodies and uses thereof
EP3313887A2 (en) * 2015-06-26 2018-05-02 MAB Discovery GmbH Monoclonal anti-il-1racp antibodies
EP3337824B1 (en) * 2015-08-17 2020-06-03 Janssen Pharmaceutica NV Anti-bcma antibodies, bispecific antigen binding molecules that bind bcma and cd3, and uses thereof
CN105777911B (zh) * 2016-04-12 2019-07-02 上海优卡迪生物医药科技有限公司 抗bcma嵌合抗原受体、编码基因、重组表达载体及其构建方法和应用
WO2017181098A2 (en) * 2016-04-15 2017-10-19 Visterra, Inc. Antibody molecules to zika virus and uses thereof
WO2017189959A1 (en) * 2016-04-29 2017-11-02 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions for the treatment of disease
SG11202000499RA (en) * 2017-08-01 2020-02-27 Medimmune Llc Bcma monoclonal antibody-drug conjugate

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