JP2023516392A

JP2023516392A - アプタマーおよびその使用

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Publication number: JP2023516392A
Application number: JP2022552859A
Authority: JP
Inventors: ワン、ジンペン; ゴン、チャン; カン、フイ; ヤン、チン; スコットファーガソン、ブライアン
Original assignee: アプティテュードメディカルシステムズ、インコーポレイテッド
Priority date: 2020-03-03
Filing date: 2021-02-25
Publication date: 2023-04-19
Also published as: US20230095004A1; CA3168939A1; AU2021229390A1; KR20220148188A; WO2021178209A1; EP4114412A1; CN115151263A; TW202146653A

Abstract

本開示は、抗VEGFアプタマー、上記の抗VEGFアプタマーを含む薬剤または組成物、およびそれらの使用を提供する。【選択図】図8JPEG2023516392000030.jpg135163

Description

新生血管形成（NV）および血管漏出は、糖尿病黄斑浮腫（DME）、湿性加齢黄斑変性（AMD）、および糖尿病網膜症（DR）などの複数の新生血管網膜疾患の特徴である。

VEGFは、眼球NVの主要なメカニズムである血管新生や、漏出の程度を決定する血管透過性の制御に重要な役割を担っており、様々な疾患の有力なターゲットである。

Ang2/Tie2経路は、VEGFの重要な補完であることが広範な研究によって明らかにされており、網膜疾患などの様々な疾患の治療のための新規ターゲットとして大きな可能性を秘めている。Tie2は、アンジオポエチン-1（Ang1）とアンジオポエチン-2（Ang2）の両方のチロシンキナーゼ受容体として、血管内皮細胞の表面に存在することが報告されている。Ang2は、病的状態でのみ発現する。これは、血管透過性を促進し、VEGF誘発眼球NVや血管漏出に必要な血管新生促進サイトカインの分泌を刺激することにより、VEGFの機能を補完する。

現在の抗VEGF薬、その成功にもかかわらず、依然として限られた効力と持続時間に悩まされている。抗VEGF剤の用量を増加させることにより、薬効と持続時間の両方を改善することができる。核酸アプタマーは溶解度が高く、分子量が小さい（15 kDa）ため、より高いモル量を達成できる可能性がある。

しかし、Macugen（登録商標）などの従来の抗VEGFアプタマーは、この可能性を実現することができない。Macugen（登録商標）はすべてのVEGFAアイソフォームを認識できないため、効力が劣る。そのため、当技術分野のものよりも有効なアプタマーの開発が急務となっている。

VEGFおよび/またはAng2を標的とするアプタマーは、より特異的で、より親和性が高く、および/または効果的なものを開発することが求められている。

本開示は、抗VEGFアプタマー、抗Ang2アプタマー、二重特異的アプタマー、および上記の抗VEGFアプタマーおよび/または上記の抗Ang2アプタマーを含む組成物、およびその使用を提供する。

本開示による抗VEGFアプタマーは、以下の1）すべてのVEGFアイソフォーム（例えば、VEGF-121、VEGF-165およびVEGF-189）に約20ナノモル（nM）以下のKD値で結合すること；2）5’から3’方向に第1ステム、第1ループ、第2ステムおよび第2ループを含む特定の二次構造を形成すること；3）200 mg/ml以上の高濃度で配合されること；4）ヌクレアーゼに対して耐性であること；5）ヒトVEGF、マウスVEGF、ラットVEGF、ウサギVEGF、およびサルVEGFなどの様々な種からのVEGFアイソフォームに結合すること；6）VEGFとVEGF受容体間の相互作用を阻害すること；および7）血管新生疾患、障害または病状を予防、治療、および/または改善することのうちの少なくとも1つが可能である。

本開示による抗Ang2アプタマーは、以下の1）Ang2に約500ピコモル（pM）以下のKD値で結合すること；2）ヒトAng1に実質的に結合しないこと；3）5’から3’方向に第1ステム、第1バルジ、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジ、第4ステム、および第1ループを含む特定の二次構造を形成すること；4）ヒトAng2とマウスAng2の両方に結合すること；5）ヌクレアーゼに対して耐性であること；6）Ang2とTie2間の相互作用を阻害すること；および7）血管新生疾患、障害または病状を予防、治療、および/または改善することのうちの少なくとも1つが可能である。

本開示による二重特異的アプタマーおよび/または組成物は、以下の1）すべてのVEGFアイソフォーム（例えば、VEGF-121、VEGF-165およびVEGF189）に約20ナノモル（nM）以下のKD値で結合すること；2）Ang2に約500ピコモル（pM）以下のKD値で結合すること；3）ヌクレアーゼに対して耐性であること；4）Ang2とTie2間の相互作用を阻害すること；5）VEGFとVEGF受容体間の相互作用を阻害すること；および6）血管新生疾患、障害または病状を予防、治療、および/または改善することのうちの少なくとも1つが可能である。

抗VEGFアプタマー

一態様において、本開示は、VEGF-121に約20ナノモル（nM）以下のKD値で結合し、VEGF-165に約20ナノモル（nM）以下のKD値で結合する抗VEGFアプタマーを提供する。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、VEGF-121に約2ナノモル（nM）以下のKD値で結合する。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、VEGF-165に約2ナノモル（nM）以下のKD値で結合する。

いくつかの実施形態において、VEGF-121は、ヒトVEGF-121、マウスVEGF-120、サルVEGF-121、ウサギVEGF-121および/またはラットVEGF-120である。いくつかの実施形態において、VEGF-165は、ヒトVEGF-165、マウスVEGF-164、サルVEGF-165、ウサギVEGF-165および/またはラットVEGF-164である。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、ウサギVEGF-189などのVEGF-189に結合する。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、VEGF-121のVEGF受容体結合ドメインまたはその断片と、VEGF-165のVEGF受容体結合ドメインまたはその断片の両方に特異的に結合する。

いくつかの実施形態において、VEGF-121のVEGF受容体結合ドメインは、SEQ ID NO: 30～34、40、41および45のいずれか1つで表されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、VEGF-165のVEGF受容体結合ドメインは、SEQ ID NO: 30～34、40および41のいずれか1つで表されるアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、上記のVEGF-121とVEGF-R1間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、上記のVEGF-121とVEGF-R2間の相互作用を阻害する。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、上記のVEGF-165とVEGF-R1間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、上記のVEGF-165とVEGF-R2間の相互作用を阻害する。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、レーザー誘発性脈絡膜血管新生（CNV）ラットモデルにおいて、病変および/または漏出を軽減および/または改善することが可能である。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、非ヒト霊長類（NHP）レーザー誘発CNVモデルにおいて、病変および/または漏出を軽減および/または改善することが可能である。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、高度に可溶である。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、RNAアプタマー、DNAアプタマー、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、1つ以上の修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーはヌクレアーゼに対して耐性である。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、このような修飾ヌクレオチドは、リボース位置、デオキシリボース位置、リン酸位置、および塩基位置から独立して選ばれる1つ以上の位置における化学的置換または修飾を含む。いくつかの実施形態において、修飾ヌクレオチドは、2’位糖修飾、2’-アミノ（2’-NH₂）修飾、2’-フルオロ（2’-F）修飾、2’-O-メチル（2’-OMe）修飾、2’-O-（2-メトキシエチル）（2’-O-MOE）修飾、5位修飾ピリミジン、シトシン環外アミンにおける修飾、5’-ブロモウラシルによる置換、5’-ブロモデオキシウリジンによる置換、5’-ブロモデオキシシチジンによる置換、骨格修飾、ロック核酸（LNA）、メチル化、3’キャップ、および5’キャップから独立して選ばれる1つ以上の修飾を含む。いくつかの実施形態において、5位修飾ピリミジンは、5-カルボキシ-2’-デオキシウリジン、5-アミノアリル-2’-デオキシウリジン、5-[（3-インドリル）プロピオンアミド-N-アリル]-2’-デオキシウリジン、5-カルボキシ-2’-デオキシシチジン、5-アミノアリル-2’-デオキシシチジン、ビオチン-16-アミノアリル-2’-デオキシシチジン、5-（N-ベンジルカルボキシアミド）-2’-デオキシウリジン、5-（N-イソブチルカルボキシアミド）-2’-デオキシウリジン、5-（N-ナフチルメチルカルボキシアミド）-2’-デオキシウリジン、および5-（N-トリプタミノカルボキサミド）-2’-デオキシウリジンから選択される。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、少なくとも1つの2’修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのヌクレオチドは、2’修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、2’修飾ヌクレオチドは、2’-アミノ修飾ヌクレオチド、2’-フルオロ修飾ヌクレオチド、2’-O-メチル修飾ヌクレオチド、および2’-O-（2-メトキシエチル）修飾ヌクレオチドから選択される。いくつかの実施形態において、アプタマーは、少なくとも1つの2’-フルオロ修飾ヌクレオチド、少なくとも1つの2’-O-メチル修飾ヌクレオチド、および/または少なくとも1つのLNAを含む。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのシチジンは、2’修飾シチジンである。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのシチジンは、2’-フルオロ修飾シチジンおよび/または2’-O-メチル修飾シチジンである。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのシチジンは、2’-デオキシ-2’-フルオロシチジンである。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのウリジンは、2’修飾ウリジンである。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのウリジンは、2’-フルオロ修飾ウリジンおよび/または2’-O-メチル修飾ウリジンである。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのウリジンは、2’-デオキシ-2’-フルオロウリジンである。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのアデノシンは、2’修飾アデノシンである。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのアデノシンは、2’-フルオロ修飾アデノシンおよび/または2’-O-メチル修飾アデノシンである。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのアデノシンは、2’-デオキシ-2’-フルオロアデノシンである。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのグアノシンは、2’修飾グアノシンである。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのグアノシンは、2’-フルオロ修飾グアノシンおよび/または2’-O-メチル修飾グアノシンである。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのグアノシンは、2’-デオキシ-2’-フルオログアノシンである。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのヌクレオチドは、2’-フルオロ修飾ヌクレオチドおよび/または2’-O-メチル修飾ヌクレオチドである。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのヌクレオチドは、2’-フルオロ修飾ヌクレオチドである。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、いかなる天然ヌクレオチドを含まない。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、約10～約150個のヌクレオチドを含む。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、VEGF-165および/またはVEGF-121への結合を、（例えば、5’から3’方向に）第1ステム、第1ループ、第2ステムおよび第2ループを含む二次構造を含む抗VEGF参照アプタマーと競合する。

いくつかの実施形態において、抗VEGF参照アプタマーは、（例えば、5’から3’方向に）第1ステム、第1ループ、第2ステムおよび第2ループを含む二次構造を含む。

いくつかの実施形態において、抗VEGF参照アプタマーは、SEQ ID NO: 136～137のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する第1の共通配列を有する。いくつかの実施形態において、抗VEGF参照アプタマーは、SEQ ID NO: 138～139のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する第2の共通配列を有する。

いくつかの実施形態において、第1の共通配列は、抗VEGF参照アプタマーにおける第1ステムおよび第1ループを形成するヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態において、第1の共通配列は、抗VEGF参照アプタマーにおける第2ステムまたは第2ループを形成するヌクレオチド配列に含まれない。いくつかの実施形態において、第2の共通配列は、抗VEGF参照アプタマーにおける第2ステムおよび第2ループを形成するヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態において、第2の共通配列は、抗VEGF参照アプタマーにおける第1ステムまたは第1ループを形成するヌクレオチド配列に含まれない。

いくつかの実施形態において、抗VEGF参照アプタマーは、SEQ ID NO: 46～135、SEQ ID NO: 200～201のいずれかで表されるヌクレオチド配列またはその変異体もしくはトランケートを含む。いくつかの実施形態において、変異体は、SEQ ID NO: 46～135、SEQ ID NO: 200～201のいずれかで表されるヌクレオチド配列と少なくとも50%同一のヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態において、変異体は、1つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、および/または置換を含む、SEQ ID NO: 46～135、SEQ ID NO: 200～201のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態において、抗VEGF参照アプタマーは、約10～約150個のヌクレオチドを含む。

いくつかの実施形態において、抗VEGF参照アプタマーは、第1の共通配列および第2の共通配列を有し、第1の共通配列は、第2の共通配列に対して5’に位置する。

実施形態において、抗VEGF参照アプタマーは、第1の共通配列および第2の共通配列を有し、第2の共通配列は、第1の共通配列に対して5’に位置する。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、（例えば、5’から3’方向に）第1ステム、第1ループ、第2ステムおよび第2ループを含む二次構造を含む。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、（例えば、5’から3’方向に）第1ステム、第1ループ、第2ステムおよび第2ループを含む二次構造を含む。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、SEQ ID NO: 136～137のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する第1の共通配列を有する。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、SEQ ID NO: 138～139のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する第2の共通配列を有する。

いくつかの実施形態において、第1の共通配列は、抗VEGFアプタマーにおける第1ステムおよび第1ループを形成するヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態において、第1の共通配列は、抗VEGFアプタマーにおける第2ステムまたは第2ループを形成するヌクレオチド配列に含まれない。いくつかの実施形態において、第2の共通配列は、抗VEGFアプタマーにおける第2ステムおよび第2ループを形成するヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態において、第2の共通配列は、抗VEGFアプタマーにおける第1ステムまたは第1ループを形成するヌクレオチド配列に含まれない。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、SEQ ID NO: 46～135、SEQ ID NO: 200～201のいずれかで表されるヌクレオチド配列またはその変異体もしくはトランケートを含む。いくつかの実施形態において、変異体は、SEQ ID NO: 46～135、SEQ ID NO: 200～201のいずれかで表されるヌクレオチド配列と少なくとも50%同一のヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態において、変異体は、1つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、および/または置換を含む、SEQ ID NO: 46～135、SEQ ID NO: 200～201のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、第1の共通配列および第2の共通配列を有し、第1の共通配列は、第2の共通配列に対して5’に位置する。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、を含む第1の共通配列および第2の共通配列、第2の共通配列は、第1の共通配列に対して5’に位置する。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、VEGFまたはVEGF受容体の生物学的活性を調節するために用いられる。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、VEGF関連疾患、障害または病状を予防、治療、および/または改善するために用いられる。いくつかの実施形態において、VEGF関連疾患、障害または病状は、血管新生疾患、障害または病状である。いくつかの実施形態において、VEGF関連疾患、障害または病状は、眼内血管新生疾患、障害または病状である。いくつかの実施形態において、VEGF関連疾患、障害または病状は、加齢黄斑変性、脈絡膜血管新生、糖尿病黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、および糖尿病網膜症から選択される。いくつかの実施形態において、VEGF関連疾患、障害または病状は、湿性加齢黄斑変性、近視性脈絡膜血管新生、および増殖性糖尿病網膜症から選択される。

一態様において、本開示は、本開示の抗VEGFアプタマーを含む抗VEGF剤を提供する。いくつかの実施形態において、抗VEGF剤は、ポリエチレングリコール（PEG）部分をさらに含む。いくつかの実施形態において、PEG部分は、アプタマーの5’末端に抱合される。

一態様において、本開示は、本開示の抗VEGFアプタマーまたは抗VEGF剤を含む組成物を提供する。

いくつかの実施形態において、組成物は、医薬組成物である。いくつかの実施形態において、組成物は、薬学的に許容される賦形剤または担体を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、治療有効量の抗VEGFアプタマーまたは抗VEGF剤を含む。

一態様において、本開示は、本開示の有効量の抗VEGFアプタマーまたは抗VEGF剤をそれを必要とする被験者に投与することを含むVEGFおよび/またはVEGF受容体の生物学的活性を調節するための方法を提供する。

一態様において、本開示は、本開示の有効量の抗VEGFアプタマーまたは抗VEGF剤をそれを必要とする被験者に投与することを含む、VEGF関連疾患、障害または病状を予防、治療、および/または改善するための方法を提供する。いくつかの実施形態において、VEGF関連疾患、障害または病状は、血管新生疾患、障害または病状である。いくつかの実施形態において、VEGF関連疾患、障害または病状は、眼内血管新生疾患、障害または病状である。いくつかの実施形態において、VEGF関連疾患、障害または病状は、加齢黄斑変性、脈絡膜血管新生、糖尿病黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、および糖尿病網膜症から選択される。いくつかの実施形態において、VEGF関連疾患、障害または病状は、湿性加齢黄斑変性、近視性脈絡膜血管新生、および増殖性糖尿病網膜症から選択される。

一態様において、本開示は、VEGFまたはVEGF受容体の生物学的活性を調節するための薬剤の製造における本開示の抗VEGFアプタマーまたは抗VEGF剤の使用を提供する。

一態様において、本開示は、VEGF関連疾患、障害または病状を予防、治療、および/または改善するための医薬品の製造における、本開示の抗VEGFアプタマーまたは抗VEGF剤の使用を提供する。いくつかの実施形態において、VEGF関連疾患、障害または病状は、血管新生疾患、障害または病状である。いくつかの実施形態において、VEGF関連疾患、障害または病状は、眼内血管新生疾患、障害または病状である。いくつかの実施形態において、VEGF関連疾患、障害または病状は、加齢黄斑変性、脈絡膜血管新生、糖尿病黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、および糖尿病網膜症から選択される。いくつかの実施形態において、VEGF関連疾患、障害または病状は、湿性加齢黄斑変性、近視性脈絡膜血管新生、および増殖性糖尿病網膜症から選択される。

抗Ang2アプタマー

一態様において、本開示は、Ang2に約500ピコモル（pM）以下のKD値で特異的に結合する抗Ang2アプタマーを提供する。

いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、Ang2に約100ピコモル（pM）以下のKD値で結合する。

いくつかの実施形態において、Ang2は、ヒトAng2、マウスAng2、サルAng2、ウサギAng2、および/またはラットAng2である。

いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、ヒトAng1に実質的に結合しない。

いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、Ang2とTie2間の相互作用を阻害する。

いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、マウス酸素誘発性虚血性網膜症（OIR）モデルにおいて、新生血管形成の減少および/または血管透過性の低下を可能にする。

いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、高度に可溶である。

いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、RNAアプタマー、DNAアプタマー、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、1つ以上の修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーはヌクレアーゼに対して耐性である。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、修飾ヌクレオチドは、リボース位置、デオキシリボース位置、リン酸位置、および塩基位置から独立して選ばれる1つ以上の位置における化学的置換または修飾を含む。いくつかの実施形態において、修飾ヌクレオチドは、2’位糖修飾、2’-アミノ（2’-NH₂）修飾、2’-フルオロ（2’-F）修飾、2’-O-メチル（2’-OMe）修飾、2’-O-（2-メトキシエチル）（2’-O-MOE）修飾、5位修飾ピリミジン、シトシン環外アミンにおける修飾、5’-ブロモウラシルによる置換、5’-ブロモデオキシウリジンによる置換、5’-ブロモデオキシシチジンによる置換、骨格修飾、ロック核酸（LNA）、メチル化、3’キャップ、および5’キャップから独立して選ばれる1つ以上の修飾を含む。いくつかの実施形態において、5位修飾ピリミジンは、5-カルボキシ-2’-デオキシウリジン、5-アミノアリル-2’-デオキシウリジン、5-[（3-インドリル）プロピオンアミド-N-アリル]-2’-デオキシウリジン、5-カルボキシ-2’-デオキシシチジン、5-アミノアリル-2’-デオキシシチジン、ビオチン-16-アミノアリル-2’-デオキシシチジン、5-（N-ベンジルカルボキシアミド）-2’-デオキシウリジン、5-（N-イソブチルカルボキシアミド）-2’-デオキシウリジン、5-（N-ナフチルメチルカルボキシアミド）-2’-デオキシウリジン、および5-（N-トリプタミノカルボキサミド）-2’-デオキシウリジンから選択される。

いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、少なくとも1つの2’修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのヌクレオチドは、2’修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、2’修飾ヌクレオチドは、2’-アミノ修飾ヌクレオチド、2’-フルオロ修飾ヌクレオチド、2’-O-メチル修飾ヌクレオチドおよび2’-O-メトキシ修飾ヌクレオチドから選択される。

いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、少なくとも1つの2’-フルオロ修飾ヌクレオチド、少なくとも1つの2’-O-メチル修飾ヌクレオチド、および/または少なくとも1つのLNAを含む。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのシチジンは、2’修飾シチジンである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのシチジンは、2’-フルオロ修飾シチジンおよび/または2’-O-メチル修飾シチジンである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのシチジンは、2’-デオキシ-2’-フルオロシチジンである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのウリジンは、2’修飾ウリジンである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのウリジンは、2’-フルオロ修飾ウリジンおよび/または2’-O-メチル修飾ウリジンである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのウリジンは、2’-デオキシ-2’-フルオロウリジンである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのアデノシンは、2’修飾アデノシンである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのアデノシンは、2’-フルオロ修飾アデノシンおよび/または2’-O-メチル修飾アデノシンである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのアデノシンは、2’-デオキシ-2’-フルオロアデノシンである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのグアノシンは、2’修飾グアノシンである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのグアノシンは、2’-フルオロ修飾グアノシンおよび/または2’-O-メチル修飾グアノシンである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのグアノシンは、2’-デオキシ-2’-フルオログアノシンである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのヌクレオチドは、2’-フルオロ修飾ヌクレオチドおよび/または2’-O-メチル修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのヌクレオチドは、2’-フルオロ修飾ヌクレオチドである。

いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、いかなる天然ヌクレオチドを含まない。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、約10～約150個のヌクレオチドを含む。

いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、Ang2への結合を、5’から3’方向に第1ステム、第1バルジ、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジ、第4ステム、および第1ループを含む二次構造を含む抗Ang2参照アプタマーと競合する。

いくつかの実施形態において、抗Ang2参照アプタマーは、5’から3’方向に第1ステム、第1バルジ、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジ、第4ステム、および第1ループを含む二次構造を含む。

いくつかの実施形態において、抗Ang2参照アプタマーは、SEQ ID NO: 13～20のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する第1の共通配列を有する。いくつかの実施形態において、抗Ang2参照アプタマーは、SEQ ID NO: 21～28のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する第2の共通配列を有する。

いくつかの実施形態において、第1の共通配列は、抗Ang2参照アプタマーにおける第1バルジ、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジおよび/または第4ステムを形成するヌクレオチド配列に含まれる。いくつかの実施形態において、第1の共通配列は、抗Ang2参照アプタマーにおける第1ループを形成するヌクレオチド配列に含まれない。

いくつかの実施形態において、第2の共通配列は、抗Ang2参照アプタマーにおける第1バルジ、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジおよび/または第4ステムを形成するヌクレオチド配列に含まれる。いくつかの実施形態において、第2の共通配列は、抗Ang2参照アプタマーにおける第1ループを形成するヌクレオチド配列に含まれない。

いくつかの実施形態において、抗Ang2参照アプタマーは、SEQ ID NO: 1～12のいずれかで表されるヌクレオチド配列またはその変異体もしくはトランケートを含む。いくつかの実施形態において、変異体は、SEQ ID NO: 1～12のいずれかで表されるヌクレオチド配列と少なくとも50%同一のヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態において、変異体は、1つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、および/または置換を含む、SEQ ID NO: 1～12のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態において、抗Ang2参照アプタマーは、約10～約150個のヌクレオチドを含む。

いくつかの実施形態において、抗Ang2参照アプタマーは、第1の共通配列および第2の共通配列を有し、第1の共通配列は、第2の共通配列に対して5’に位置する。

いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、5’から3’方向に第1ステム、第1バルジ、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジ、第4ステム、および第1ループを含む二次構造を含む。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、5’から3’方向に第1ステム、第1バルジ、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジ、第4ステム、および第1ループを含む二次構造を含む。

いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、SEQ ID NO: 13～20のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する第1の共通配列を有する。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、SEQ ID NO: 21～28のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する第2の共通配列を有する。

いくつかの実施形態において、第1の共通配列は、抗Ang2アプタマーにおける第1バルジ、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジおよび/または第4ステムを形成するヌクレオチド配列に含まれる。いくつかの実施形態において、第1の共通配列は、抗Ang2アプタマーにおける第1ループを形成するヌクレオチド配列に含まれない。いくつかの実施形態において、第2の共通配列は、抗Ang2アプタマーにおける第1バルジ、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジおよび/または第4ステムを形成するヌクレオチド配列に含まれる。いくつかの実施形態において、第2の共通配列は、抗Ang2アプタマーにおける第1ループを形成するヌクレオチド配列に含まれない。

本開示の抗Ang2参照アプタマーまたは抗Ang2アプタマーの第1ループは、2～30個のヌクレオチドを含み得る。

いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、SEQ ID NO: 1～12のいずれかで表されるヌクレオチド配列またはその変異体もしくはトランケートを含む。いくつかの実施形態において、変異体は、SEQ ID NO: 1～12のいずれかで表されるヌクレオチド配列と少なくとも50%同一のヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態において、変異体は、1つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、および/または置換を含む、SEQ ID NO: 1～12のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する。

いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、第1の共通配列および第2の共通配列を有し、第1の共通配列は、第2の共通配列に対して5’に位置する。

いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、第1の共通配列および第2の共通配列を有し、第2の共通配列は、第1の共通配列に対して5’に位置する。

いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、Ang2またはTie2の生物学的活性を調節するために用いられる。

いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、Ang2関連疾患、障害または病状を予防、治療、および/または改善するために用いられる。いくつかの実施形態において、Ang2関連疾患、障害または病状は、血管新生疾患、障害または病状である。いくつかの実施形態において、Ang2関連疾患、障害または病状は、眼内血管新生疾患、障害または病状である。いくつかの実施形態において、Ang2関連疾患、障害または病状は、加齢黄斑変性、脈絡膜血管新生、糖尿病黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、および糖尿病網膜症から選択される。いくつかの実施形態において、Ang2関連疾患、障害または病状は、加齢黄斑変性、脈絡膜血管新生、糖尿病黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、および糖尿病網膜症から選択される。

一態様において、本開示は、本開示の抗Ang2アプタマーを含む抗Ang2剤を提供する。いくつかの実施形態において、抗Ang2剤は、ポリエチレングリコール（PEG）部分をさらに含む。いくつかの実施形態において、PEG部分は、抗Ang2アプタマーの3’末端に抱合される。

一態様において、本開示は、本開示の抗Ang2アプタマーまたは抗Ang2剤を含む組成物を提供する。

いくつかの実施形態において、組成物は、医薬組成物である。いくつかの実施形態において、組成物は、薬学的に許容される賦形剤または担体を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、有効量の抗Ang2アプタマーまたは抗Ang2剤を含む。

いくつかの実施形態において、組成物は、抗VEGF剤をさらに含む。いくつかの実施形態において、抗VEGF剤は、アフリベルセプトを含む。

一態様において、本開示は、本開示の有効量の抗Ang2アプタマーまたは抗Ang2剤を、それを必要とする被験者に投与することを含む、Ang2またはTie2の生物学的活性を調節するための方法を提供する。

一態様において、本開示は、本開示の有効量の抗Ang2アプタマーまたは抗Ang2剤を、それを必要とする被験者に投与することを含む、Ang2関連疾患、障害または病状を予防、治療、および/または改善するための方法を提供する。

いくつかの実施形態において、Ang2関連疾患、障害または病状は、血管新生疾患、障害または病状である。いくつかの実施形態において、Ang2関連疾患、障害または病状は、加齢黄斑変性、脈絡膜血管新生、糖尿病黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、および糖尿病網膜症から選択される。いくつかの実施形態において、Ang2関連疾患、障害または病状は、湿性加齢黄斑変性、近視性脈絡膜血管新生、および増殖性糖尿病網膜症から選択される。いくつかの実施形態において、方法は、抗VEGF剤を被験者に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態において、抗VEGF剤は、アフリベルセプトを含む。

一態様において、本開示は、Ang2またはTie2の生物学的活性を調節するための薬剤の製造における本開示の抗Ang2アプタマーまたは抗Ang2剤の使用を提供する。

一態様において、本開示は、Ang2関連疾患、障害または病状を予防、治療、および/または改善するための医薬品の製造における本開示の抗Ang2アプタマーまたは抗Ang2剤の使用を提供する。

いくつかの実施形態において、Ang2関連疾患、障害または病状は、血管新生疾患、障害または病状である。いくつかの実施形態において、Ang2関連疾患、障害または病状は、眼内血管新生疾患、障害または病状である。いくつかの実施形態において、Ang2関連疾患、障害または病状は、加齢黄斑変性、脈絡膜血管新生、糖尿病黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、および糖尿病網膜症から選択される。いくつかの実施形態において、Ang2関連疾患、障害または病状は、湿性加齢黄斑変性、近視性脈絡膜血管新生、および増殖性糖尿病網膜症から選択される。

一態様において、本開示は、血管新生疾患、障害または病状を予防、治療、および/または改善するための医薬品の製造における1）本開示の抗Ang2アプタマーまたは抗Ang2剤と2）抗VEGF剤との組み合わせの使用を提供する。いくつかの実施形態において、抗VEGF剤は、アフリベルセプトを含む。いくつかの実施形態において、血管新生疾患または障害は、眼内血管新生疾患、障害または病状である。いくつかの実施形態において、血管新生疾患、障害または病状は、加齢黄斑変性、脈絡膜血管新生、糖尿病黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、および糖尿病網膜症から選択される。いくつかの実施形態において、血管新生疾患、障害または病状は、湿性加齢黄斑変性、近視性脈絡膜血管新生、および増殖性糖尿病網膜症から選択される。

二重特異的アプタマー

別の態様において、本開示は、抗Ang2アプタマーおよび抗VEGFアプタマーを含む二重特異的アプタマーを提供する。上記の二重特異的アプタマーは、本開示の組成物に含まれ得る。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、VEGF-121に約20ナノモル（nM）以下のKD値で結合し、VEGF-165に約20ナノモル（nM）以下のKD値で結合する。

いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーはAng2に約500ピコモル（pM）以下のKD値で特異的に結合する。

いくつかの実施形態において、VEGF-121は、ヒトVEGF-121、マウスVEGF-120、サルVEGF-121、ウサギVEGF-121、および/またはラットVEGF-120である。いくつかの実施形態において、VEGF-165は、ヒトVEGF-165、マウスVEGF-164、サルVEGF-165、ウサギVEGF-165、またはラットVEGF-164である。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、VEGF-121のVEGF受容体結合ドメインとVEGF-165のVEGF受容体結合ドメインの両方に特異的に結合する。

いくつかの実施形態において、VEGF-121のVEGF受容体結合ドメインは、SEQ ID NO: 30～34、40、41、および45のいずれか1つで表されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、VEGF-165のVEGF受容体結合ドメインは、SEQ ID NO: 30～34、40、および41のいずれか1つで表されるアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、VEGF-121とVEGF-R1間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、VEGF-121とVEGF-R2間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、VEGF-165とVEGF-R1間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、VEGF-165とVEGF-R2間の相互作用を阻害する。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、RNAアプタマー、DNAアプタマー、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーはヌクレアーゼに対して耐性である。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、1つ以上の修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、修飾ヌクレオチドは、リボース位置、デオキシリボース位置、リン酸位置、および塩基位置から独立して選ばれる1つ以上の位置における化学的置換または修飾を含む。いくつかの実施形態において、修飾ヌクレオチドは、2’位糖修飾、2’-アミノ（2’-NH₂）修飾、2’-フルオロ（2’-F）修飾、2’-O-メチル（2’-OMe）修飾、2’-O-（2-メトキシエチル）（2’-O-MOE）修飾、5位修飾ピリミジン、シトシン環外アミンにおける修飾、5’-ブロモウラシルによる置換、5’-ブロモデオキシウリジンによる置換、5’-ブロモデオキシシチジンによる置換、骨格修飾、ロック核酸（LNA）、メチル化、3’キャップ、および5’キャップから独立して選ばれる1つ以上の修飾を含む。いくつかの実施形態において、5位修飾ピリミジンは、5-カルボキシ-2’-デオキシウリジン、5-アミノアリル-2’-デオキシウリジン、5-[（3-インドリル）プロピオンアミド-N-アリル]-2’-デオキシウリジン、5-カルボキシ-2’-デオキシシチジン、5-アミノアリル-2’-デオキシシチジン、ビオチン-16-アミノアリル-2’-デオキシシチジン、5-（N-ベンジルカルボキシアミド）-2’-デオキシウリジン、5-（N-イソブチルカルボキシアミド）-2’-デオキシウリジン、5-（N-ナフチルメチルカルボキシアミド）-2’-デオキシウリジン、および5-（N-トリプタミノカルボキサミド）-2’-デオキシウリジンから選択される。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、少なくとも1つの2’修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのヌクレオチドは、2’修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、2’修飾ヌクレオチドは、2’-アミノ修飾ヌクレオチド、2’-フルオロ修飾ヌクレオチド、2’-O-メチル修飾ヌクレオチドおよび2’-O-（2-メトキシエチル）修飾ヌクレオチドから選択される。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、少なくとも1つの2’-フルオロ修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、少なくとも1つの2’-フルオロ修飾ヌクレオチド、少なくとも1つの2’-O-メチル修飾ヌクレオチド、および/または少なくとも1つのLNAを含む。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのシチジンは、2’修飾シチジンである。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのシチジンは、2’-フルオロ修飾シチジンおよび/または2’-O-メチル修飾シチジンである。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのシチジンは、2’-デオキシ-2’-フルオロシチジンである。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのウリジンは、2’修飾ウリジンである。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのウリジンは、2’-フルオロ修飾ウリジンおよび/または2’-O-メチル修飾ウリジンである。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのウリジンは、2’-デオキシ-2’-フルオロウリジンである。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのアデノシンは、2’修飾アデノシンである。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのアデノシンは、2’-フルオロ修飾アデノシンおよび/または2’-O-メチル修飾アデノシンである。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのアデノシンは、2’-デオキシ-2’-フルオロアデノシンである。いくつかの実施形態において、すべてのグアノシンは、2’修飾グアノシンである。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのグアノシンは、2’-フルオロ修飾グアノシンおよび/または2’-O-メチル修飾グアノシンである。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのグアノシンは、2’-デオキシ-2’-フルオログアノシンである。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、VEGF-165および/またはVEGF-121への結合を、5’から3’方向に第1ステム、第1ループ、第2ステムおよび第2ループを含む二次構造を含む抗VEGF参照アプタマーと競合する。

いくつかの実施形態において、抗VEGF参照アプタマーは、5’から3’方向に第1ステム、第1ループ、第2ステムおよび第2ループを含む二次構造を含む。

いくつかの実施形態において、抗VEGF参照アプタマーは、第1の共通配列および第2の共通配列を有し、第2の共通配列は、第1の共通配列に対して5’に位置する。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、5’から3’方向に第1ステム、第1ループ、第2ステムおよび第2ループを含む二次構造を含む。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、5’から3’方向に第1ステム、第1ループ、第2ステムおよび第2ループを含む二次構造を含む。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、第1の共通配列および第2の共通配列を有し、第1の共通配列は、第2の共通配列に対して5’に位置する。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、第1の共通配列および第2の共通配列を有し、第2の共通配列は、第1の共通配列に対して5’に位置する。

いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、Ang2とTie2と間の相互作用を阻害する。

いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、RNAアプタマー、DNAアプタマー、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、1つ以上の修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーはヌクレアーゼに対して耐性である。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、上記の修飾ヌクレオチドは、リボース位置、デオキシリボース位置、リン酸位置、および塩基位置から独立して選ばれる1つ以上の位置における化学的置換または修飾を含む。いくつかの実施形態において、修飾ヌクレオチドは、2’位糖修飾、2’-アミノ（2’-NH₂）修飾、2’-フルオロ（2’-F）修飾、2’-O-メチル（2’-OMe）修飾、2’-O-（2-メトキシエチル）（2’-O-MOE）修飾、5位修飾ピリミジン、シトシン環外アミンにおける修飾、5’-ブロモウラシルによる置換、5’-ブロモデオキシウリジンによる置換、5’-ブロモデオキシシチジンによる置換、骨格修飾、ロック核酸（LNA）、メチル化、3’キャップ、および5’キャップから独立して選ばれる1つ以上の修飾を含む。いくつかの実施形態において、5位修飾ピリミジンは、5-カルボキシ-2’-デオキシウリジン、5-アミノアリル-2’-デオキシウリジン、5-[（3-インドリル）プロピオンアミド-N-アリル]-2’-デオキシウリジン、5-カルボキシ-2’-デオキシシチジン、5-アミノアリル-2’-デオキシシチジン、ビオチン-16-アミノアリル-2’-デオキシシチジン、5-（N-ベンジルカルボキシアミド）-2’-デオキシウリジン、5-（N-イソブチルカルボキシアミド）-2’-デオキシウリジン、5-（N-ナフチルメチルカルボキシアミド）-2’-デオキシウリジン、および5-（N-トリプタミノカルボキサミド）-2’-デオキシウリジンから選択される。

いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、少なくとも1つの2’修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのヌクレオチドは、2’修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、2’修飾ヌクレオチドは、2’-アミノ修飾ヌクレオチド、2’-フルオロ修飾ヌクレオチド、2’-O-メチル修飾ヌクレオチド、および2’-O-（2-メトキシエチル）修飾ヌクレオチドから選択される。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、少なくとも1つの2’-フルオロ修飾ヌクレオチド、少なくとも1つの2’-O-メチル修飾ヌクレオチド、および/または少なくとも1つのLNAを含む。

いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、少なくとも1つの2’-フルオロ修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのシチジンは、2’修飾シチジンである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのシチジンは、2’-フルオロ修飾シチジンおよび/または2’-O-メチル修飾シチジンである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのシチジンは、2’-デオキシ-2’-フルオロシチジンである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのウリジンは、2’修飾ウリジンである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのウリジンは、2’-フルオロ修飾ウリジンおよび/または2’-O-メチル修飾ウリジンである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのウリジンは、2’-デオキシ-2’-フルオロウリジンである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのアデノシンは、2’修飾アデノシンである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのアデノシンは、2’-フルオロ修飾アデノシンおよび/または2’-O-メチル修飾アデノシンである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのアデノシンは、2’-デオキシ-2’-フルオロアデノシンである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのグアノシンは、2’修飾グアノシンである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのグアノシンは、2’-フルオロ修飾グアノシンおよび/または2’-O-メチル修飾グアノシンである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのグアノシンは、2’-デオキシ-2’-フルオログアノシンである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのヌクレオチドは、2’-フルオロ修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーのすべてのヌクレオチドは、2’-フルオロ修飾ヌクレオチドおよび/または2’-O-メチル修飾ヌクレオチドである。

いくつかの実施形態において、抗Ang2参照アプタマーは、第1の共通配列および第2の共通配列を有し、第2の共通配列は、第1の共通配列に対して5’に位置する。

いくつかの実施形態において、第1の共通配列は、抗Ang2アプタマーの第1バルジ、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジおよび/または第4ステムを形成するヌクレオチド配列に含まれる。いくつかの実施形態において、第1の共通配列は、抗Ang2アプタマーにおける第1ループを形成するヌクレオチド配列に含まれない。いくつかの実施形態において、第2の共通配列は、抗Ang2アプタマーにおける第1バルジ、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジおよび/または第4ステムを形成するヌクレオチド配列に含まれる。いくつかの実施形態において、第2の共通配列は、抗Ang2アプタマーにおける第1ループを形成するヌクレオチド配列に含まれない。

いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーは、ポリエチレングリコール（PEG）部分に抱合される。いくつかの実施形態において、PEG部分は、抗VEGFアプタマーの5’末端に抱合される。いくつかの実施形態において、PEG部分は、抗VEGFアプタマーの3’末端に抱合される。いくつかの実施形態において、抗Ang2アプタマーは、ポリエチレングリコール（PEG）部分に抱合される。いくつかの実施形態において、PEG部分は、抗Ang2アプタマーの5’末端に抱合される。いくつかの実施形態において、PEG部分は、抗Ang2アプタマーの3’末端に抱合される。

いくつかの実施形態において、二重特異的アプタマーは、式A1-（L）n-A2を有し、ここで、A1が抗VEGFアプタマー、A2が抗Ang2アプタマーであるか、またはA1が抗Ang2アプタマー、A2が抗VEGFアプタマーであり、Lがリンカー、nは少なくとも0の数である。いくつかの実施形態において、nは、0～20である。いくつかの実施形態において、nは、0～10である。

いくつかの実施形態において、二重特異的アプタマーは、VEGFとAng2の両方に特異的に結合することが可能である。

いくつかの実施形態において、二重特異的アプタマーは、VEGF-121に約500 pM以下のKD値で結合し、Ang2に約500 pM以下のKD値で結合する。

いくつかの実施形態において、二重特異的アプタマーは、VEGF-121に約200 pM以下のKD値で結合し、Ang2に約200 pM以下のKD値で結合する。

いくつかの実施形態において、二重特異的アプタマーは、VEGF-121に約100 pM以下のKD値で結合し、Ang2に約100 pM以下のKD値で結合する。

二重特異的アプタマーのいくつかの実施形態において、Lは、天然に存在するヌクレオチドリンカー、修飾ヌクレオチドリンカー、炭化水素リンカー、ポリエチレングリコールリンカーおよびそれらの組み合わせから選択される。いくつかの実施形態において、Lの少なくとも1つは、ポリエチレングリコールリンカーである。いくつかの実施形態において、Lの少なくとも1つは、ヘキサエチレングリコール（HまたはPEG6）リンカーである。いくつかの実施形態において、Lはヘキサエチレングリコールリンカー、nは0～10である。

二重特異的アプタマーのいくつかの実施形態において、A1は、SEQ ID NO: 46～135、SEQ ID NO: 200～201のいずれかで表されるヌクレオチド配列またはその変異体もしくはトランケートを有する抗VEGFアプタマーであり、A2は、SEQ ID NO: 1～12のいずれかで表されるヌクレオチド配列またはその変異体もしくはトランケートを有する抗Ang2アプタマーである。

二重特異的アプタマーのいくつかの実施形態において、A1は、SEQ ID NO: 1～12のいずれかで表されるヌクレオチド配列またはその変異体もしくはトランケートを有する抗Ang2アプタマーであり、A2は、SEQ ID NO: 46～135、SEQ ID NO: 200～201のいずれかで表されるヌクレオチド配列またはその変異体もしくはトランケートを有する抗VEGFアプタマーである。

二重特異的アプタマーのいくつかの実施形態において、A1は、SEQ ID NO: 83で表されるヌクレオチド配列またはそのトランケートを有する抗VEGFアプタマーであり、A2は、SEQ ID NO: 2で表されるヌクレオチド配列またはそのトランケートを有する抗Ang2アプタマーであり、Lは、ヘキサエチレングリコールリンカーであり、nは、0～10である。

二重特異的アプタマーのいくつかの実施形態において、A1は、SEQ ID NO: 128で表されるヌクレオチド配列またはそのトランケートを有する抗VEGFアプタマーであり、A2は、SEQ ID NO: 6で表されるヌクレオチド配列またはそのトランケートを有する抗Ang2アプタマーであり、Lは、ヘキサエチレングリコールリンカーであり、nは、0～10である。

二重特異的アプタマーのいくつかの実施形態において、A1は、SEQ ID NO: 2で表されるヌクレオチド配列またはそのトランケートを有する抗Ang2アプタマーであり、A2は、SEQ ID NO: 83で表されるヌクレオチド配列またはそのトランケートを有する抗VEGFアプタマーであり、Lは、ヘキサエチレングリコールリンカーであり、nは、0～10である。

二重特異的アプタマーのいくつかの実施形態において、A1は、SEQ ID NO: 6で表されるヌクレオチド配列またはそのトランケートを有する抗Ang2アプタマーであり、A2は、SEQ ID NO: 128で表されるヌクレオチド配列またはそのトランケートを有する抗VEGFアプタマーであり、Lは、ヘキサエチレングリコールリンカーであり、nは、0～10である。

いくつかの実施形態において、二重特異的アプタマーは、r-AMSB107.0、r-AMSB108.0、r-AMSB107.1、r-AMSB107.2、r-AMSB107、r-AMSB107.4、r-AMSB107.5、r-AMSB107.6、r-AMSB107.7、r-AMSB107.8、r-AMSB107.9、r-AMSB107.10、r-AMSB107.11、r-AMSB107.12、r-AMSB107.13、r-AMSB107.14、r-AMSB107.15、r-AMSB107.16、r-AMSB107.17、r-AMSB107.18、r-AMSB107.19、r-AMSB107.22、r-AMSB107.23、r-AMSB107.24、r-AMSB107.25、r-AMSB107.26、r-AMSB107.27、AMSB107.0、AMSB108.0、AMSB107.1、AMSB107.2、AMSB107、AMSB107.4、AMSB107.5、AMSB107.6、AMSB107.7、AMSB107.8、AMSB107.9、AMSB107.10、AMSB107.11、AMSB107.12、AMSB107.13、AMSB107.14、AMSB107.15、AMSB107.16、AMSB107.17、AMSB107.18、AMSB107.19、AMSB107.20、AMSB107.21、AMSB107.22、AMSB107.23、AMSB107.24、AMSB107.25、AMSB107.26、AMSB107.P6、AMSB107.P40K、AMSB107PおよびAMSB107.27から選択される。

いくつかの実施形態において、二重特異的アプタマーは、SEQ ID NO: 140～195、SEQ ID NO: 202～204のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する。

組成物

一態様において、本開示は、本開示の抗Ang2アプタマー、本開示の抗VEGFアプタマー、および/または本開示の二重特異的アプタマーを含む組成物を提供する。

いくつかの実施形態において、組成物は、医薬組成物である。

いくつかの実施形態において、組成物は、薬学的に許容される賦形剤または担体を含む。

いくつかの実施形態において、組成物は、血管新生疾患、障害または病状の予防、治療および/または改善に用いられる。血管新生疾患、障害または病状は、眼内血管新生疾患、障害または病状であり得る。いくつかの実施形態において、血管新生疾患、障害または病状は、加齢黄斑変性、脈絡膜血管新生、糖尿病黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、および糖尿病網膜症から選択される。いくつかの実施形態において、血管新生疾患、障害または病状は、湿性加齢黄斑変性、近視性脈絡膜血管新生、および増殖性糖尿病網膜症から選択される。

医学的使用および方法

別の態様において、本開示は、本開示の抗Ang2アプタマーの有効量、本開示の抗VEGFアプタマーの有効量、本開示の二重特異的アプタマーの有効量、および/または本開示の組成物の有効量を、それを必要とする被験者に投与することを含む、血管新生疾患、障害または病状を予防、治療および/または改善するための方法を提供する。

いくつかの実施形態において、血管新生疾患、障害または病状は、眼内血管新生疾患、障害または病状である。いくつかの実施形態において、血管新生疾患、障害または病状は、加齢黄斑変性、脈絡膜血管新生、糖尿病黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、および糖尿病網膜症から選択される。いくつかの実施形態において、血管新生疾患、障害または病状は、湿性加齢黄斑変性、近視性脈絡膜血管新生、および増殖性糖尿病網膜症から選択される。

別の態様において、本開示は、血管新生疾患、障害または病状を予防、治療および/または改善するための医薬品の製造における本開示の抗Ang2アプタマー、本開示の抗VEGFアプタマー、本開示の二重特異的アプタマー、および/または本開示の組成物の使用を提供する。

本開示の追加の態様および利点は、本開示の例示的な実施形態のみが示され説明される以下の詳細な説明から、当業者には容易に明らかとなるであろう。理解されるように、本開示は、他の異なる実施形態が可能であり、そのいくつかの詳細は、全て本開示から逸脱することなく、様々な明白な点で、修正が可能である。従って、図面および説明は、本質的に例示的なものとみなされ、限定的なものとはみなされない。

参照による組み込み
本明細書で言及されているすべての刊行物、特許および特許出願は、個々の刊行物、特許または特許出願が参照により組み込まれるものとして、具体的かつ個別に示されている場合と同程度に、参照により本明細書に組み込まれるものとする。

本発明の新規の特徴は、添付の特許請求の範囲に具体的に記載されている。本発明の特徴および利点は、本発明の原理を採用した例示的な実施形態を示す以下の詳細な説明および添付の図面（本明細書では「図」および「図面」ともいう）を参照することにより、よりよく理解されるであろう。添付の図面は、以下の通りである。

図１A～１Bは、本開示の抗VEGFアプタマーの結合親和性を示す図である。

図2は、本開示の抗VEGFアプタマーについてのインビトロVEGF受容体競合アッセイを示す図である。

図3Aは、本開示の抗Ang2アプタマーの結合親和性、図3Bは、本開示の抗Ang2アプタマーによるヒトAng2とTie2の結合の阻害をそれぞれ示す図である。

図4A～4Bは、本開示の二重特異的アプタマーに対するVEGFおよびAng2への結合親和性を示す図である。図4C～4Dは、本開示の二重特異的アプタマーについてのインビトロVEGFおよびAng2受容体競合アッセイを示す図である。

図5A～5Cは、本開示の抗VEGFアプタマー、抗Ang2アプタマー、および二重特異的アプタマーの二次構造を示す図である。

図6A～6Cは、新生血管形成および血管透過性に対する本開示の抗Ang2アプタマーの効果を示す図である。

図7A～7Bは、非ヒト霊長類（NHP）レーザー誘発CNVモデルにおけるインビボ有効性試験で本開示の抗VEGFアプタマーの結果を示す図である。

図8は、本開示の抗VEGFアプタマーのウサギのDL-AAA研究結果の代表的なレッドフリー撮影写真を示す図である。

図9は、本開示の抗VEGFアプタマーのウサギのDL-AAA研究結果の代表的なFA写真を示す図である。

本発明の様々な実施形態が本明細書で示され、説明されてきたが、そのような実施形態は例としてのみ提供されていることは当業者には明らかであろう。当業者であれば、本発明から逸脱することなく、多数の変形、変更、および置換を行うことができる。本明細書に記載の本発明の実施形態に対する様々な代替案が採用され得ることが理解されるべきである。

本明細書で使用される「アプタマー」という用語は、一般に、標的分子に対して所望の作用を有する非天然に存在する核酸を指す。所望の作用としては、標的との結合、標的の触媒的変化、標的または標的の機能的活性を改変または変更させるような形での標的との反応、標的（例えば、自殺型阻害剤の中で）への共有結合、標的と他の分子との反応の促進を含み得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、その作用は、ワトソン/クリック塩基対（Watson/Crick base pairing）または三重らせん形成とは無関係のメカニズムによって核酸リガンドに結合するポリヌクレオチド以外の三次元化学構造である標的分子に対する特異的結合親和性であってよく、ここで、アプタマーは、標的分子によって結合されるという既知の生理学的機能を有する核酸でない。所定の標的に対するアプタマーは、核酸の候補混合物から、（a）候補混合物を標的と接触させ、ここで、候補混合物中の他の核酸と比較して標的に対する親和性が増加した核酸を候補混合物の残りの核酸から分離することができ、（b）親和性が増加した核酸を候補混合物の残りの核酸から分離し、および（c）その親和性が増加した核酸を増幅してリガンドに富む核酸の混合物を生成し、それによって標的分子のアプタマーを同定することを含む方法によって同定された核酸を含み、ここで、アプタマーが標的のリガンドであり得る。親和性の相互作用は程度の問題であることが認識されたいが、この場合は、アプタマーの標的に対する「特異的結合親和性」とは、アプタマーが混合物またはサンプル中の他の非標的成分に結合するよりもはるかに高い親和性で一般にその標的に結合し得ることを意味する。「アプタマー」または「核酸リガンド」とは、特定のヌクレオチド配列を持つ核酸分子の1つのタイプまたは種のコピーのセットである。アプタマーは、任意の適切な数のヌクレオチドを含んでもよい。アプタマーは、DNAおよび/またはRNA（あるいはDNAとRNAの組み合わせ）であってよく、一本鎖、二本鎖であってよく、または二本鎖あるいは三本鎖領域を含んでよい。いくつかの場合において、アプタマーは、１つ以上（例えば、1～20、1～19、1～18、1～17、1～16、1～15、1～14、1～13、1～12、1～11、1～10、1～9、1～8、1～7、1～6、1～5、1～4、1～3、または1～2）の非ヌクレオチド置換を含み得る。例えば、アプタマーの1つ以上のヌクレオチドは、ポリエチレングリコール部分または複数（例えば、1～10、1～9、1～8、1～7、1～6、1～5、1～4、1～3、または1～2）のポリエチレングリコール部分を含むリンカーによって置換されてもよい。いくつかの場合において、リンカーはヘキサエチレングリコール（HまたはPEG6）リンカーであり得る。このような置換は、アプタマーの活性（例えば、結合活性や阻害活性）および/または機能に実質的に影響を与えない限り、アプタマーの任意のヌクレオチドで起こり得る。いくつかの場合において、上記の置換は、アプタマーの二次構造に実質的に影響を与えなく、例えば、アプタマーの二次構造のバルジまたはループ領域に含まれるヌクレオチドで起こり得る。いくつかの場合において、上記の置換は、アプタマーの二次構造のステム領域に含まれる任意のヌクレオチドで起こさない。

本明細書で使用される「抗VEGFアプタマー」という用語は、一般に、VEGFに対して特異的結合親和性を持つ核酸分子を指す。いくつかの場合において、本明細書で定義したように、抗VEGFアプタマーは、1つ以上（例えば、1～20、1～19、1～18、1～17、1～16、1～15、1～14、1～13、1～12、1～11、1～10、1～9、1～8、1～7、1～6、1～5、1～4、1～3、または1～2）の非ヌクレオチド置換を含み得る。例えば、抗VEGFアプタマーの1つ以上のヌクレオチドは、ポリエチレングリコール部分または複数（例えば、1～10、1～9、1～8、1～7、1～6、1～5、1～4、1～3、または1～2）のポリエチレングリコール部分を含むリンカーによって置換されてもよい。いくつかの場合において、リンカーは、ヘキサエチレングリコール（HまたはPEG6）リンカーであり得る。このような置換は、抗VEGFアプタマーの活性（例えば、結合活性、または阻害活性）および/または機能に実質的に影響を与えない限り、抗VEGFアプタマーの任意のヌクレオチドで起こり得る。いくつかの場合において、上記の置換は、抗VEGFアプタマーの二次構造に実質的に影響を与えなく、例えば、抗VEGFアプタマーの二次構造のバルジまたはループ領域に含まれるヌクレオチドで起こり得る。いくつかの場合において、上記の置換は、抗VEGFアプタマーの二次構造のステム領域に含まれる任意のヌクレオチドで起こさない。

本明細書で使用される「VEGF」という用語は、一般に、血管内皮増殖因子A（VEGFAまたはVEGF-A）およびそのスプライス変異体ならびにアイソフォームを指す。VEGFは、VEGF121（またはVEGF-121）、VEGF165（またはVEGF-165）、VEGF189（またはVEGF-189）およびVEGF206（またはVEGF-206、数字はポリペプチド中のアミノ酸数を指す）として知られる4つの異なるスプライス変異体として見出され得る。4つのアイソフォームは、すべてジスルフィド結合したホモ二量体として存在する。VEGF-165は、最も一般的なアイソフォームであることが観察されたが、様々な細胞タイプでアイソフォームの分泌パターンが異なっている。これらのアイソフォームは、Flt-1とFlt-1/KDRの2つの受容体に高い親和性で結合するが、ヘパリンおよび細胞外マトリックスへの結合親和性には違いがある。NCBIデータベースにおけるヒトVEGFの番号は、NP_001273973.1、NP_001028928.1、NP_001020540.2、NP_001020539.2、NP_001020538.2、NP_003367.4、またはNP_001020537.2であり得る。

本明細書で使用される「KD値」という用語は、一般に、アプタマーおよび標的対に適した技術、例えば、放射性または蛍光測定によるリガンド結合アッセイ、表面プラズモン共鳴（SPR）、生体層干渉法（BLI、例えばOctet（登録商標）システム）、SRU biosystems BIND（登録商標）、等温滴定カロリー（ITC）、またはマイクロスケール熱泳動（MST）を使用して測定する解離定数を指す。いくつかの実施形態において、KD値は、標準的に蛍光に基づくリガンド結合アッセイおよび飽和分析を用いて決定される。一例では、様々な濃度の蛍光標識された標的分子を、室温で穏やかに回転させながら少なくとも3時間、本開示の粒子とインキュベートした。次に、各サンプルを洗浄し、フローサイトメーターを用いて各粒子の蛍光を測定することにより、残りの結合した標的を定量化した。次に、バックグラウンドを引いた蛍光値を、例えば平衡結合モデル（例えば、質量作用の法則に従う）を用いて、飽和結合曲線に当てはめる。

「特異的結合」または「に特異的に結合する」または「に特異的」」という用語は、本明細書において互換的に用いられ、一般に、薬剤（例えば、アプタマーなどの核酸製剤）が標的分子（例えば、タンパク質またはその一部）に結合し、その結合が非特異的相互作用（例えば、非特異的相互作用は、参照分子またはランダム分子との結合であり得る）と測定的および/または統計的に異なっていることを意味する。特異的結合は、例えば、過剰な非標識標的などの標的と同様の対照分子との競合によって測定することができ、この場合、標識された標的と候補薬剤の結合が過剰な非標識標的によって競合的に阻害されれば、特異的結合を示すことになる。特異的結合は、例えば、標的に対するKDが少なくとも約1 nM、少なくとも約900 pM、少なくとも約800 pM、少なくとも約700 pM、少なくとも約600 pM、少なくとも約500 pM、少なくとも約400 pM、少なくとも約300 pM、少なくとも約200 pM、少なくとも約100 pM、少なくとも約90 pM、少なくとも約80 pM、少なくとも約70 pM、少なくとも約60 pM、少なくとも約50 pM、少なくとも約40 pM、少なくとも約30 pM、少なくとも約20 pM、少なくとも約10 pM、少なくとも約5 pM、少なくとも約1 pM、またはそれ以上である分子によって示され得る。

本明細書で使用される「VEGF受容体結合ドメイン」という用語は、一般に、対応するVEGF受容体に結合するかまたはそれによって認識されるVEGFのドメインを指す。

本明細書で使用される「VEGF-R」または「VEGF受容体」という用語は、一般に、それぞれのスプライス変異体およびアイソフォームを含むVEGFまたはVEGFファミリーメンバーに結合する受容体を指す。VEGFRは、（i）VEGF-R1とも呼ばれるFlt-1（フィン様チロシンキナーゼ）（Shibuyaら, Oncogene (1990), 5:519-524；De Vries等人, Science (1992), 255:989-991）; （ii）Flk-1（胎児肝臓キナーゼ）、マウスRTK（Quinnら, Proc Natl Acad Sci USA (1993), 90:7533-7537；Millauerら, Cell (1993), 72:835-846）およびそのヒトホモログ,KDR（VEGF-R2とも呼ばれるキナーゼ挿入ドメイン含有受容体；Termanら, Biochem Biophys Res Comm (1992), 187:1579-1586；および（iii）血管内皮ではなくリンパ管内皮に発現するFlt-4（Pajusolaら, , Cancer Res (1992), 52:5738-43）を含み得る。

本明細書で使用される「RNAアプタマー」という用語は、一般に、リボヌクレオチドユニットを含むアプタマーを指す。「RNAアプタマー」は、さらに、本明細書で定義されるRNAアナログを包含することを意味する。

本明細書で使用される「DNAアプタマー」という用語は、一般に、デオキシリボヌクレオチドユニットを含むアプタマーを指す。「DNAアプタマー」は、さらに、本明細書で定義されるDNAアナログを包含することを意味する。

本明細書で使用される「高度に可溶」という用語は、一般に、薬剤が比較的高い程度（例えば、全重量の80%以上、全重量の85%以上、全重量の90%以上、全重量の95%以上、全重量の99%以上）で溶媒（例えば、水や適当な緩衝液）に可溶である特徴を指す。

本明細書で使用される「ヌクレアーゼに対して耐性」という用語は、一般に、ヌクレアーゼ切断に対して耐性がある薬剤の特徴を指す。いくつかの場合において、核酸分子は、核酸の5’末端または3’末端のいずれかに作用するエキソヌクレアーゼによって破壊されることがある。さらに、エンドヌクレアーゼは、DNAまたはRNAを個々のヌクレオチド間の内部ホスホジエステル結合で切断することができる。しかし、分子（例えば、DNAやRNA）は、ヌクレアーゼに対して耐性である場合（例えば、特定の修飾後）、エキソヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼはもはやそれを破壊または消化できなくなる可能性がある。

本明細書で使用される「修飾ヌクレオチド」という用語は、一般に、天然には存在しないものであるが、天然に存在するヌクレオチドのアナログまたはエステルであるヌクレオチドを指す。オリゴヌクレオチドまたは核酸分子（アプタマーなど）の状況で用いられる場合、一般に、オリゴヌクレオチドの4つの構成ヌクレオチド（すなわち、A、G、T/U、およびC）の少なくとも1つが、天然に存在するヌクレオチドのアナログまたはエステルであることを意味する。いくつかの実施形態において、修飾ヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドをヌクレアーゼに対して耐性にすることができる。いくつかの実施形態において、修飾ヌクレオチドは、主にアプタマーとそのタンパク質標的との疎水性相互作用を引き起こし、高い結合効率および安定した共結晶複合体をもたらす。C-5位が置換されたピリミジンは、修飾ヌクレオチドの一例である。修飾には、骨格修飾、メチル化、アイソベースのイソシチジンおよびイソグアニジンのような希少な塩基対の組み合わせなどを含み得る。また、修飾には、キャッピングなどの3’および5’の修飾も含まれる。他の修飾としては、アナログで置換された1つ以上の天然ヌクレオチド、例えば、非荷電結合を有するもの（例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カルバメートなど）および荷電結合を有するもの（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）などのヌクレオチド間修飾、インターカレーター（例えば、アクリジン、プソラレンなど）を用いた修飾、キレート剤（例えば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化金属など）を含む修飾、アルキル化剤を含む修飾、および修飾結合（例えば、αアノマー核酸など）を含むものを有してよい。さらに、ヌクレオチドの糖上に通常存在するヒドロキシル基のいずれかを、ホスホン酸基またはリン酸基で置換し、標準的な保護基で保護したり、活性化して追加のヌクレオチドまたは固体担体への結合を調製することも可能である。5’および3’末端のOH基は、リン酸化され得るか、またはアミン、約1～約20個の炭素原子を有する有機キャッピング基部分、いくつかの実施形態における約10～約80 kDaの範囲のポリエチレングリコール（PEG）ポリマー、いくつかの実施形態における約20～約60 kDaの範囲のPEGポリマー、または他の親水性もしくは疎水性の生物学的または合成的ポリマーで置換することができる。いくつかの実施形態において、修飾はピリミジンのC-5位であり得る。これらの修飾は、C-5位で直接アミド結合を介して、または他のタイプの結合によって生成され得る。

本明細書で使用される「2’修飾ヌクレオチド」という用語は、一般に、2’炭素原子の修飾を有するヌクレオチドを指す。例えば、シチジン、ウリジン、アデノシン、グアノシンは、2’炭素原子の修飾を有し得る。

本明細書で使用される「2’-フルオロ修飾ヌクレオチド」という用語は、一般に、2’-フルオロ置換基を有するヌクレオチドを指す。2’-デオキシ-2’-フルオロ修飾オリゴヌクレオチドは、米国特許第6,531,584に記載の方法によって調製することができる。

本明細書で使用される「シチジン」という用語は、一般に、シトシンがβ-N1-グリコシド結合を介してリボース環（リボフラノースとも呼ばれる）に結合したときに形成されるヌクレオシド分子を指す。シチジンは次の構造：

を含み得る。

本明細書で使用される「2’修飾シチジン」という用語は、一般に、2’炭素原子の修飾を有するシチジンを指す。

本明細書で使用される「2’-デオキシ-2’-フルオロシチジン」という用語は、一般に、以下のような構造:

を有する化学物質を指す。

本明細書で使用される「2’修飾ウリジン」という用語は、一般に、2’炭素原子の修飾を有するウリジンを指す。ウリジンは、β-N1-グリコシド結合を介してリボース環（より具体的にはリボフラノース）に結合したウラシルを含むグリコシル化ピリミジンアナログである。ウリジンは、以下のような構造:

を有し得る。

本明細書で使用される「2’-デオキシ-2’-フルオロウリジン」という用語は、一般に、以下のような構造:

を有する化学物質を指す。

本明細書で使用される「2’修飾アデノシン」という用語は、一般に、2’炭素原子の修飾を有するアデノシンを指す。アデノシンは、β-N9-グリコシド結合を介してリボース糖分子（リボフラノース）部分に結合したアデニン分子より構成されるプリンヌクレオシドである。アデノシンは、以下のような構造:

を有し得る。

本明細書で使用される「2’-デオキシ-2’-フルオロアデノシン」という用語は、一般に、以下のような構造:

を有する化学物質を指す。

本明細書で使用される「2’修飾グアノシン」という用語は、一般に、2’炭素原子の修飾を有するグアノシンを指す。グアノシンは、β-N9-グリコシド結合を介してリボース（リボフラノース）環に結合したグアニンを含むプリンヌクレオシドである。グアノシンは以下のような構造:

を有し得る。

本明細書で使用される「2’-デオキシ-2’-フルオログアノシン」という用語は、一般に、以下のような構造:

を有する化学物質を指す。

本明細書で使用される「ヌクレオチド」という用語は、一般に、核酸ポリマーのデオキシリボ核酸（DNA）や、リボ核酸（RNA）を形成するためのモノマー単位として用いられる有機分子を指す。ヌクレオチドは、窒素塩基、炭素数5の糖（リボースまたはデオキシリボース）、および少なくとも1つのリン酸基の3つのサブユニット分子で構成される。ヌクレオシドは、窒素塩基と炭素数5の糖から構成されている。したがって、ヌクレオシドにリン酸基を付加して、ヌクレオチドを生成する。

本明細書で使用される「天然ヌクレオチド」という用語は、一般に、自然界に存在するヌクレオチドを指す。例えば、天然ヌクレオチドは、シチジン、アデノシン、グアノシン、ウリジンを含み得る。いくつかの実施形態において、「天然核酸」はまた、増幅および/またはシーケンシングを妨げない合成または修飾されたヌクレオチドも含む。

本明細書で使用される「参照アプタマー」という用語は、一般に、本開示のアプタマーと競合的に標的に結合するアプタマーを指す。いくつかの実施形態において、参照アプタマーは、本開示のアプタマーと同じ標的に結合することができる。

本明細書で使用される「競合」という用語は、一般に、ある化学物質が結合またはボンディングを他の化学物質と競合させることによってその化学物質の作用を阻害することを指す。例えば、参照アプタマーは、本開示のアプタマーと競合的に標的に結合することができる。別の例として、本開示のアプタマーは、標的の受容体またはリガンドと競合的に標的に結合することができる。

本明細書で使用される「二次構造」という用語は、一般に、核酸分子の高次構造を指す。二次構造は、単一の核酸ポリマー内または2つのポリマー間の塩基対の相互作用によって形成され得る。これは、核酸分子内で対になっている一連の塩基として表すことができる。二次構造は、一般に、ヘリックス（隣接する塩基対）とさまざまな種類のループ（ヘリックスに囲まれた対になっていないヌクレオチド）に分けることができる。多くの場合、それらの要素またはそれらの組み合わせは、ステム、バルジ、ループ、およびヘリックスを含む追加のカテゴリにさらに分類され得る。本開示において、二次構造は、NUPACKソフトウェアスイート使用することによって決定され得る。

本明細書で使用される「5’-3’」という用語は、一般に、DNAまたはRNA鎖の5’-末端から 3’-末端までの順序を指す。5’-末端は、デオキシリボースまたはリボースの糖環の5番目の炭素を末端に有するDNAまたはRNA鎖の末端を指すことがある。5’-末端に結合したリン酸基は、2つのヌクレオチドの連結、すなわち、5’-リン酸と他のヌクレオチドの3’-ヒドロキシ基の共有結合を可能にし、リン酸ジエステル結合を形成する。3’-末端は、糖環の3番目の炭素のヒドロキシ基での末端を指し、テールエンドとも呼ばれることもある。3’-ヒドロキシは、別のヌクレオチドの5’-リン酸に連結（結合）し、ヌクレオチドが連結した鎖の形成を可能にするため、新しい核酸分子の合成にしばしば必要とされる。

本明細書で使用される「ステム」という用語は、一般に、核酸二次構造における領域を指し、また、ステムは、塩基対ヘリックスを含む。

本明細書で使用される「バルジ」という用語は、一般に、核酸二次構造において、ヘリックスの1つの鎖に核酸分子の二次構造における反対側の鎖に対応物がない「余分な」挿入塩基を持つ領域を指す。

本明細書で使用される「ループ」という用語は、一般に、核酸二次構造において、ヘリックスの1つの鎖における1つ以上の塩基に核酸分子二次構造の反対側の鎖に相補的な対応物を持たない領域を指す。

本明細書で使用される「共通配列」という用語は、一般に、必ずしも隣接していない、オリゴヌクレオチドの特定の位置が指定されていることを意味する。「指定」とは、その位置の組成が完全にランダムではなくてもよいことを意味する。混合物中のすべてのオリゴヌクレオチドがその位置に同じヌクレオチドを持つとは限らない。例えば、共通配列は、特定のヌクレオチドの既知の比率を含み得る。

本明細書で使用される「トランケート」という用語は、一般に、ヌクレオチドの欠失によって切断されたが、依然として所望の、あるいは改善された結合特性を有するアプタマーを指す。トランケートは、長さが出発アプタマーの長さに応じて変化してもよく、また本明細書で「アプタマー」の用語について定義されるように変化する場合がある。トランケートにおける切断は、出発アプタマーの固定領域もしくは可変領域、または固定領域と可変領域の両方で起こってもよい。

本明細書で使用される「生物学的活性の調節」という用語は、一般に、標的分子（例えば、受容体やリガンドなどのタンパク）生物学的活性を調節（例えば、増加または減少）することを指す。例えば、本開示の抗VEGFアプタマーは、VEGFおよび/またはVEGF受容体の生物学的活性を調節し得る。

本明細書で使用される「血管新生疾患または障害」という用語は、一般に、新生血管形成関連疾患または障害を指す。血管新生疾患または障害としては、眼内血管新生疾患（例えば、網膜および脈絡膜血管新生疾患）、ルベオティック緑内障、翼状片、固形腫瘍がん、変形性関節症、関節リウマチ、血管異常および奇形（例えば、血管腫、リンパ管腫など）、並びに乾癬を含み得る。

本明細書で使用される「眼内血管新生疾患」という用語は、一般に、眼球新生血管形成、すなわち被験者の眼球における血管の異常発達によって特徴づけられる疾患を指す。

本明細書で使用される「VEGF関連疾患、障害または病状」という用語は、一般に、VEGFの異常な活性または活性の喪失に関連する疾患、障害または病状を指す。例えば、VEGF関連疾患、障害または病状は、異常な血管新生を含み得る。例えば、VEGF関連疾患、障害または病状としては、癌、関節リウマチ、水疱性疾患（水疱性類天疱瘡、疱疹状皮膚炎、および多形紅斑を含む）、および乾癬を含み得る。

本明細書で使用される「加齢黄斑変性」、または「AMD」という用語は、一般に、加齢に伴う黄斑変性症を指す。黄斑変性症は、黄斑と呼ばれる網膜の中心領域を侵し、20/200以下のレベルまで徐々にまたは急速に視力を低下させることがある。また、AMDは読書やテレビ視聴の時の中心視力にも影響を与え、周辺視力が比較的保たれたまま中心視力が低下していく。

本明細書で使用される「糖尿病網膜症」または「DR」という用語は、一般に、糖尿病、例えば、II型糖尿病の後期微小血管合併症を指す。糖尿病性網膜症は、重症度が高くなり、視力の予後が悪化する段階のカスケードとして現れることがある網膜微小血管疾患である。DRは、非増殖性糖尿病網膜症（NPDR）と増殖性糖尿病網膜症（PDR）2つの臨床病期に大別され、ここで、増殖性という用語は網膜新生血管の存在を指す。

本明細書で使用される「糖尿病黄斑浮腫」という用語は、一般に、中心視力の著しい低下を引き起こす糖尿病性網膜症の任意の段階で付随する症状を指す。

本明細書で使用される「網膜静脈閉塞症」という用語は、一般に、網膜組織を通る血液の流れを制限する完全または部分的に閉塞した網膜血管を指す。閉塞の部位は、典型的には静脈側に生じ、分岐血管（網膜静脈分枝閉塞-BRVO）または網膜中心静脈（網膜中心静脈閉塞-CRVO）のいずれかで発生する可能性がある。

本明細書で使用される「近視性脈絡膜血管新生」という用語は、一般に、病的近視の人において視覚障害を引き起こす疾患を指す。新生血管が黄斑領域に生成されると、しばしば視界の中心部に暗点をもたらす色素性線維性瘢痕が形成される。近視性脈絡膜血管新生は、脈絡膜血管新生に属する。

本明細書で使用される「抗VEGF剤」という用語は、一般に、血管内皮増殖因子（「VEGF」）の活性または産生を阻害する化合物を指す。

本明細書で使用される「組成」という用語は、一般に、混合物を構成する個々の物質の分布を意味する。個々の物質は、成分として命名することができる。

本明細書で使用される「医薬組成物」という用語は、医薬投与に適した形態で調製された製剤を指す。医薬組成物は、典型的には、意図した投与経路に適合するように配合され得る。投与経路の例としては、静脈内、皮内、皮下、吸入、局所、経皮、経粘膜、および直腸投与などの経口および非経口が含まれるが、これらに限定されるものではない。

本明細書で使用される「薬学的に許容される賦形剤または担体」という用語は、一般に、連邦政府または州政府の規制機関によって承認された、または米国薬局方若しくは他の一般に認められた薬局方に記載された、動物およびより詳細にはヒトにおける使用に適した賦形剤または担体を意味する。用語「担体」は、治療薬とともに投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、または媒体を指す場合があり、水や油などの無菌液体が含まれるが、これらに限定されるものではない。

本明細書で使用される「有効量」という用語は、一般に、本明細書に記載されるように予防、低減、または治療されるべき障害または病状の少なくとも1つの症状を改善するために必要な量を指す。本開示の抗VEGFアプタマー、抗Ang2アプタマー、または二重特異的アプタマー、組成物または薬剤に関連する「治療上有効な量」という表現は、アプタマーの量が、かかる治療を必要としているかなりの数の個体に投与された後に所望の特定の薬学的応答をもたらすものであることを意味する。特定の場合に特定の個体に投与されるアプタマーの治療有効量は、そのような投用量が当業者によって治療有効量であるとみなされるとしても、本明細書に記載される病状/疾患の治療において常に有効であるとは限らないことが強調される。

本明細書で使用される「Ang2」という用語は、一般に、E2Fファミリーに属する血管新生因子であるアンジオポエチン-2を意味する。Ang2は、Tie2に対して天然に存在するアンタゴニストであると考えられている。ヒトのAng2だけでなく、様々な種のAng2も、明示的に別段の定めがない限り、本用語に包含されるものとする。また、「Ang2」という用語は、全長Ang2の機能的断片およびコンポーネントも包含する。ヒトAng2は、Ensembl:ENSG00000091879、またはMIM:601922としても知られている。

本明細書で使用される「上記のAng2とTie2間の相互作用」という用語は、一般に、Tie2に結合するAng2の活性を指す。Tie2は、胚の血管発生と病的な血管新生の両方に関与する内皮受容体型チロシンキナーゼ（RTK）である。

本明細書で使用される「実質的に結合しない」という用語は、一般に、特定の物質にほとんど結合しないことを意味する。例えば、本開示のアプタマーは、そのターゲットにごくわずかまたはほとんど結合しない（例えば、10％未満、9％未満、8％未満、7％未満、6％未満、5％未満、4％未満、3％未満、2％未満、1％未満、0.5％未満、0.1％未満または0.01％未満）ことがある。

本明細書で使用される「抗Ang2アプタマー」という用語は、一般に、Ang2に対する特異的結合親和性を有する核酸分子を指す。いくつかの場合において、抗Ang2アプタマーは、本明細書で定義するように、1つ以上（例えば、1～20、1～19、1～18、1～17、1～16、1～15、1～14、1～13、1～12、1～11、1～10、1～9、1～8、1～7、1～6、1～5、1～4、1～3、または1～2）の非ヌクレオチド置換を含み得る。例えば、抗Ang2アプタマーの1つ以上のヌクレオチドは、ポリエチレングリコール部分または複数（例えば、1～10、1～9、1～8、1～7、1～6、1～5、1～4、1～3、または1～2）のポリエチレングリコール部分を含むリンカーによって置換されてもよい。いくつかの場合において、リンカーは、ヘキサエチレングリコール（HまたはPEG6）リンカーであり得る。このような置換は、抗Ang2アプタマーの活性（例えば、結合活性、または阻害活性）および/または機能に実質的に影響を与えない限り、抗VEGFアプタマーの任意のヌクレオチドで起こり得る。いくつかの場合において、上記の置換は抗Ang2アプタマーの二次構造に実質的に影響しない。例えば、上記の置換は抗Ang2アプタマー二次構造のバルジ領域またはループ領域に含まれるヌクレオチドに生じ得る。いくつかの場合において、上記の置換は、抗Ang2アプタマー二次構造のステム領域に含まれる任意のヌクレオチドに生じない。

本明細書で使用される「抗Ang2剤」という用語は、一般に、Ang2の活性または産生を阻害する薬剤を指す。

本明細書で使用される「アフリベルセプト」という用語は、一般に、ヒトIgG1免疫グロブリンのFc部分に融合した、ヒトVEGF受容体1および2の細胞外ドメイン由来の血管内皮増殖因子（VEGF）結合部分からなる組換え融合タンパク質を指す。

本明細書で使用される「リンカー」という用語は、一般に、2つの部分を連結したものへの機能的接続を促進するように設計された薬剤を意味する。例えば、リンカーは、所望の生物学的活性を達成するために一本鎖を作るために使用されてもよい。例えば、リンカーを一本鎖にすることによって、連結されたヌクレオチドを生成するのに必要な安定性を付与することができる。

本明細書で使用される「ヌクレオチドリンカー」という用語は、一般に、ヌクレオチドから作られるリンカーを指す。隣接するヌクレオチドをつなぐヌクレオチドリンカーの長さは、様々であってもよい。

本明細書で使用される「修飾ヌクレオチドリンカー」という用語は、一般に、1つ以上の修飾を含むヌクレオチドリンカーを指す。

本明細書で使用される「炭化水素リンカー」という用語は、一般に、炭化水素から作られるリンカーを指す。炭化水素は、水素と炭素のみからなる有機化合物である。炭化水素の例としては、例えば、メタン、エタン、プロパン、ブタン、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、ノナン、デカン、ウンデカン、およびドデカンが含まれるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される「ポリエチレングリコールリンカー」という用語は、一般に、1つ以上のポリエチレングリコール（PEG）サブユニットから作られるリンカーを指す。

本明細書で使用される「その断片」という用語は、一般に、インタクトな親分子（例えば、本開示のアプタマー）から得られる部分領域を指す。断片は、それが由来する親分子の特性を依然として保持することができる。場合によっては、断片は、製造および/または医療用途において、無傷の親分子に勝る多くの利点を提供することができる。

本明細書で使用される「変異体」という用語は、一般に、親分子（例えば、アプタマー）と少なくとも1つのヌクレオチド酸によって異なるアプタマー分子を指す。変異体は、分子自体、分子を含む組成物を指す場合がある。そのような分子がDNAまたはRNAである場合、分子のヌクレオチド酸配列を指すこともある。いくつかの場合において、変異体は、1～50、1～40、1～30、1～20、1～15、1～14、1～13、1～12、1～11、1～10、1～9、1～8、1～7、1～6、1～5、1～4、1～3、または1～2などの1つ以上のヌクレオチド酸の付加、削除または置換によってその親分子（例えば、アプタマー）と異なるようにされる。いくつかの場合において、変異体は、その親分子のヌクレオチド酸配列と少なくとも約80%（例えば、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%またはより高い）の配列相同性/同一性を有することができる。

本明細書で使用される「血管新生の低減」という用語は、一般に、新生血管形成の程度を低減することを意味する。新生血管形成は、通常、機能的な微小血管網の形態で、赤血球による灌流が可能であり、局所的な灌流不良または虚血に応答して側副血行として機能するように形成される、新しい血管の自然な形成である。本開示では、「血管新生」と互換的に使用される場合がある。

本明細書で使用される「血管透過性の低下」という用語は、一般に、組織における血管透過性の程度が低下することを意味する。血管透過性の変化は、正常および病的な生理学的プロセスの両方において役割を果たすと考えられている（Cullinan-Boveら, 1993, Endocrinology 133: 829-837；Sengerら, 1993, Cancer and Metastasis Reviews, 12: 303-324）。そして、血管新生および/または血管透過性の上昇に関連する疾患病状は、癌、糖尿病、乾癬、関節リウマチ、カポジ肉腫、血管腫、急性および慢性腎症、アテローム、動脈再狭窄、自己免疫疾患、急性炎症、過剰な瘢痕形成および癒着、子宮内膜症、機能性月経障害および網膜血管増殖を伴う眼疾患であり得る。

本明細書で使用される「マウス酸素誘発性虚血性網膜症（OIR）モデル」という用語は、一般に、マウスで再現可能かつ定量可能な増殖性網膜新生血管を伴う酸素誘発性網膜症を発症する動物モデルを意味する。このモデルは、未熟児網膜症（ROP）やその他の血管病変における網膜血管新生の病因や治療的介入を検討するのに適している。このモデルの作製方法は、例えば、Smith L Eら, Oxygen-induced retinopathy in the mouse. Invest. Opthalmol. Vis. Sci. 1994; 35:101-111に記載されている。

本明細書で使用される「Ang2関連疾患、障害または病状」という用語は、一般に、Ang2の異常な活性または活性の喪失に関連する疾患、障害または病状を意味する。例えば、Ang2関連疾患、障害または病状は、血管新生に影響を及ぼすと言われている。そのような疾患、障害または病状についての例は、癌または癌性疾患、加齢黄斑変性症および糖尿病性網膜症等の眼疾患および/または糖尿病性腎症、腎後性腎不全、前腎性貧血および内在性腎不全等の慢性腎疾患であってもよい。

本明細書で使用されるように、単数形「1つ」、「と」、および「上記」は、文脈上明確に指定されない限り、複数の指示語を含む。したがって、例えば、「粒子」への言及は、複数のそのような粒子を含み、「上記の配列」への言及は、1つ以上の上記の配列および当業者に知られているそれらの等価物への言及を含む、などである。

本明細書で使用される「約」という用語は、一般に、当業者の通常の技術に基づいて合理的に推測される所定の値に対する近似値を指し、かかる所定の値に対する実験および/または測定条件による等価物および近似値を含む。例えば、この用語によって修正される値の上下に最大10％以下である値を指すことがある。

本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、別段の定義がない限り、本発明が属する技術分野における通常の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されたものと類似または同等の任意の方法および材料も本発明の実施または試験に使用することができるが、好ましい方法および材料について次に説明される。本明細書で言及された全ての刊行物は、その刊行物が引用されていることに関連する方法および/または材料を開示し、説明するために、参照により本明細書に組み込まれる。

本開示を読めば当業者には明らかなように、本明細書に記載され図示された個々の実施形態の各々は、本発明の範囲または精神から逸脱せずに他のいくつかの実施形態のいずれかの特徴から容易に分離またはそれと組み合わせることができる個別の構成要素と特徴を有している。任意の記載された方法は、記載された事象の順序で、または論理的に可能な他の順序で実施することができる。これは、すべてのそのような組み合わせに対するサポートを提供することを意図している。

抗VEGFアプタマー

例えば、抗VEGFアプタマーは、VEGF-121に約20ナノモル（nM）以下、18ナノモル（nM）以下、16ナノモル（nM）以下、14ナノモル（nM）以下、12ナノモル（nM）以下、10ナノモル（nM）以下、8ナノモル（nM）以下、6ナノモル（nM）以下、4ナノモル（nM）以下、2ナノモル（nM）以下、1ナノモル（nM）以下、0.5ナノモル（nM）以下、0.4ナノモル（nM）以下、0.2ナノモル（nM）以下、0.1ナノモル（nM）以下、0.09ナノモル（nM）以下、0.08ナノモル（nM）以下、0.07ナノモル（nM）以下、0.06ナノモル（nM）以下、0.05ナノモル（nM）以下、0.04ナノモル（nM）以下、または0.03ナノモル（nM）以下のKD値で結合することができる。

例えば、抗VEGFアプタマーは、VEGF-165に約20ナノモル（nM）以下、18ナノモル（nM）以下、16ナノモル（nM）以下、14ナノモル（nM）以下、12ナノモル（nM）以下、10ナノモル（nM）以下、8ナノモル（nM）以下、6ナノモル（nM）以下、4ナノモル（nM）以下、2ナノモル（nM）以下、1ナノモル（nM）以下、0.5ナノモル（nM）以下、0.4ナノモル（nM）以下、0.2ナノモル（nM）以下、0.18ナノモル（nM）以下、0.15ナノモル（nM）以下、0.12ナノモル（nM）以下、0.1ナノモル（nM）以下、0.09ナノモル（nM）以下、0.08ナノモル（nM）以下、0.07ナノモル（nM）以下、0.06ナノモル（nM）以下、0.05ナノモル（nM）以下、0.04ナノモル（nM）以下、または0.03ナノモル（nM）以下のKD値で結合することができる。

VEGF-121は、ヒトVEGF-121、マウスVEGF-120、サルVEGF-121、ウサギVEGF-121、および/またはラットVEGF-120であり得る。VEGF-165は、ヒトVEGF-165、マウスVEGF-164、サルVEGF-165、ウサギVEGF-165、および/またはラットVEGF-164であり得る。

ヒトVEGF-121（NCBI No. P15692-9）は、SEQ ID NO: 29で表されるアミノ酸配列を有し得る。マウスVEGF-120（NCBI No.Q00731～3）は、SEQ ID NO: 44で表されるアミノ酸配列を有し得る。ラットVEGF-120（NCBI No.P16612-4）は、SEQ ID NO: 42で表されるアミノ酸配列を有し得る。

ヒトVEGF-165（NCBI No.P15692-4）は、SEQ ID NO: 35で表されるアミノ酸配列を有し得る。マウスVEGF-164（NCBI No.Q00731～2）は、SEQ ID NO: 43で表されるアミノ酸配列を有し得る。サルVEGF-165（NCBI No.H9EQI6）は、SEQ ID NO: 35で表されるアミノ酸配列を有し得る。ラットVEGF-164（NCBI No.P16612-2）は、SEQ ID NO: 39で表されるアミノ酸配列を有し得る。

ウサギVEGF-189（NCBI No.G1T1L9）は、SEQ ID NO: 36で表されるアミノ酸配列を有し得る。

抗VEGFアプタマーは、1）VEGF-121のVEGF受容体結合ドメインまたはその断片；および2）VEGF-165のVEGF受容体結合ドメインまたはその断片の両方に特異的に結合し得る。

VEGF-121のVEGF受容体結合ドメインは、SEQ ID NO: 30～34、40、41、および45のいずれか1つで表されるアミノ酸配列を有し得る。VEGF-165のVEGF受容体結合ドメインは、SEQ ID NO: 30～34、40、および41のいずれか1つで表されるアミノ酸配列を有し得る。

ヒトVEGF-121の受容体結合ドメイン1は、SEQ ID NO: 30で表されるアミノ酸配列を有し得る。ヒトVEGF-121の受容体結合ドメイン2は、SEQ ID NO: 31で表されるアミノ酸配列を有し得る。ヒトVEGF-121の受容体結合ドメイン3は、SEQ ID NO: 32で表されるアミノ酸配列を有し得る。ヒトVEGF-121の受容体結合ドメイン4は、SEQ ID NO: 33で表されるアミノ酸配列を有し得る。ヒトVEGF-121の受容体結合ドメイン5は、SEQ ID NO: 34で表されるアミノ酸配列を有し得る。

ヒトVEGF-165の受容体結合ドメイン1は、SEQ ID NO: 30で表されるアミノ酸配列を有し得る。ヒトVEGF-165受容体結合ドメイン2は、SEQ ID NO: 31で表されるアミノ酸配列を有し得る。ヒトVEGF-165の受容体結合ドメイン3は、SEQ ID NO: 32で表されるアミノ酸配列を有し得る。ヒトVEGF-165の受容体結合ドメイン4は、SEQ ID NO: 33で表されるアミノ酸配列を有し得る。ヒトVEGF-165の受容体結合ドメイン5は、SEQ ID NO: 34で表されるアミノ酸配列を有し得る。

サルVEGF-165の受容体結合ドメイン1は、SEQ ID NO:30で表されるアミノ酸配列を有し得る。サルVEGF-165の受容体結合ドメイン2は、SEQ ID NO:31で表されるアミノ酸配列を有し得る。サルVEGF-165の受容体結合ドメイン3は、SEQ ID NO: 32で表されるアミノ酸配列を有し得る。サルVEGF-165の受容体結合ドメイン4は、SEQ ID NO: 33で表されるアミノ酸配列を有し得る。サルVEGF-165の受容体結合ドメイン5は、SEQ ID NO: 34で表されるアミノ酸配列を有し得る。

ウサギVEGF-189の受容体結合ドメイン1は、SEQ ID NO:37で表されるアミノ酸配列を有し得る。ウサギVEGF-189の受容体結合ドメイン2は、SEQ ID NO: 31で表されるアミノ酸配列を有し得る。ウサギVEGF-189の受容体結合ドメイン3は、SEQ ID NO: 38で表されるアミノ酸配列を有し得る。ウサギVEGF-189の受容体結合ドメイン4は、SEQ ID NO: 33で表されるアミノ酸配列を有し得る。ウサギVEGF-189の受容体結合ドメイン5は、SEQ ID NO: 34で表されるアミノ酸配列を有し得る。

ラットVEGF-164の受容体結合ドメイン1は、SEQ ID NO: 30で表されるアミノ酸配列を有し得る。ラットVEGF-164の受容体結合ドメイン2は、SEQ ID NO: 31で表されるアミノ酸配列を有し得る。ラットVEGF-164の受容体結合ドメイン3は、SEQ ID NO: 40で表されるアミノ酸配列を有し得る。ラットVEGF-164の受容体結合ドメイン4は、SEQ ID NO: 33で表されるアミノ酸配列を有し得る。ラットVEGF-164の受容体結合ドメイン5は、SEQ ID NO:41で表されるアミノ酸配列を有し得る。

ラットVEGF-120の受容体結合ドメイン1は、SEQ ID NO: 30で表されるアミノ酸配列を有し得る。ラットVEGF-120の受容体結合ドメイン2は、SEQ ID NO: 31で表されるアミノ酸配列を有し得る。ラットVEGF-120の受容体結合ドメイン3は、SEQ ID NO: 40で表されるアミノ酸配列を有し得る。ラットVEGF-120の受容体結合ドメイン4は、SEQ ID NO: 33で表されるアミノ酸配列を有し得る。ラットVEGF-120の受容体結合ドメイン5は、SEQ ID NO: 41で表されるアミノ酸配列を有し得る。

マウスVEGF-164の受容体結合ドメイン1は、SEQ ID NO: 30で表されるアミノ酸配列を有し得る。マウスVEGF-164の受容体結合ドメイン2は、SEQ ID NO: 31で表されるアミノ酸配列を有し得る。マウスVEGF-164の受容体結合ドメイン3は、SEQ ID NO: 40で表されるアミノ酸配列を有し得る。マウスVEGF-164の受容体結合ドメイン4は、SEQ ID NO:33で表されるアミノ酸配列を有し得る。マウスVEGF-164の受容体結合ドメイン5は、SEQ ID NO: 41で表されるアミノ酸配列を有し得る。

マウスVEGF-120の受容体結合ドメイン1は、SEQ ID NO:30で表されるアミノ酸配列を有し得る。マウスVEGF-120の受容体結合ドメイン2は、SEQ ID NO: 31で表されるアミノ酸配列を有し得る。マウスVEGF-120の受容体結合ドメイン3は、SEQ ID NO: 40で表されるアミノ酸配列を有し得る。マウスVEGF-120の受容体結合ドメイン4は、SEQ ID NO: 45で表されるアミノ酸配列を有し得る。マウスVEGF-120の受容体結合ドメイン5は、SEQ ID NO: 41で表されるアミノ酸配列を有し得る。

抗VEGFアプタマーは、VEGF-121とVEGF-R1間の相互作用を阻害し得る。抗VEGFアプタマーは、VEGF-121とVEGF-R2間の相互作用を阻害し得る。抗VEGFアプタマーは、VEGF-165とVEGF-R1間の相互作用を阻害し得る。抗VEGFアプタマーは、VEGF-165とVEGF-R2間の相互作用を同時にあるいは加えて阻害し得る。

本開示の抗VEGFアプタマーは、眼球動物モデルなどの動物モデルにおいて新生血管形成および/または漏出を軽減および/または改善することが可能である。

動物モデルは、脊椎動物モデルであってもよく、場合によっては、哺乳動物モデルであってもよい。動物は、ラット、マウス、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、非ヒト霊長類、または他の任意の適切な動物であってもよい。

いくつかの実施形態において、本開示の抗VEGFアプタマーは、レーザー誘発性脈絡膜血管新生（CNV）モデル（例えば、ラットモデルまたは非ヒト霊長類（NHP）モデルなど）において、病変および/または漏出を軽減および/または改善することが可能である。

本開示の抗VEGFアプタマーは、高度に可溶である。例えば、抗VEGFアプタマーは、比較的高い程度で（例えば、全重量の80%以上、全重量の85%以上、全重量の90%以上、全重量の95%以上、全重量の99%以上）溶媒に溶解することができる。例えば、抗VEGFアプタマーは、100 mg/ml以上、または150 mg/ml以上、例えば200 mg/ml以上の濃度で配合され得る。

抗VEGFアプタマーは、RNAアプタマー、DNAアプタマー、またはそれらの組み合わせであり得る。例えば、抗VEGFアプタマーは、主にRNAを含んでいてもよいし、主にDNAを含んでいてもよいし、またはRNAとDNAの両方を含んでいてもよい。

抗VEGFアプタマーは、1つ以上（例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15またはそれ以上）の修飾ヌクレオチドを含み得る。いくつかの場合において、抗VEGFアプタマーのすべてのヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドであってもよい。例えば、抗VEGFアプタマーは、すべてが修飾ヌクレオチドであり得る20個のヌクレオチドを有してよい。

いくつかの場合において、本開示の抗VEGFアプタマーは、ヌクレアーゼに対して耐性であってもよい。

修飾ヌクレオチドは、リボース位置、デオキシリボース位置、リン酸位置、および塩基位置から独立して選ばれる1つ以上の位置における化学的置換または修飾を含み得る。修飾ヌクレオチドは、2’位糖修飾、2’-アミノ（2’-NH₂）修飾、2’-フルオロ（2’-F）修飾、2’-O-メチル（2’-OMe）修飾、2’-O-（2-メトキシエチル）（2’-O-MOE）修飾、5位修飾ピリミジン、シトシン環外アミンにおける修飾、5’-ブロモウラシルによる置換、5’-ブロモデオキシウリジンによる置換、5’-ブロモデオキシシチジンによる置換、骨格修飾、ロック核酸（LNA）、メチル化、3’キャップ、および5’キャップから独立して選ばれる1つ以上の修飾を含み得る。5位修飾ピリミジンは、5-カルボキシ-2’-デオキシウリジン、5-アミノアリル-2’-デオキシウリジン、5-[（3-インドリル）プロピオンアミド-N-アリル]-2’-デオキシウリジン、5-カルボキシ-2’-デオキシシチジン、5-アミノアリル-2’-デオキシシチジン、ビオチン-16-アミノアリル-2’-デオキシシチジン、5-（N-ベンジルカルボキシアミド）-2’-デオキシウリジン、5-（N-イソブチルカルボキシアミド）-2’-デオキシウリジン、5-（N-ナフチルメチルカルボキシアミド）-2’-デオキシウリジン、および5-（N-トリプタミノカルボキサミド）-2’-デオキシウリジンから選択される。

抗VEGFアプタマーは、少なくとも1つ（例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15またはそれ以上）の2’修飾ヌクレオチドを含み得る。いくつかの実施形態において、すべてのヌクレオチドは、2’修飾ヌクレオチドであり得る。2’修飾ヌクレオチドは、2’-アミノ修飾ヌクレオチド、2’-フルオロ修飾ヌクレオチド、2’-O-メチル修飾ヌクレオチド、および2’-O-（2-メトキシエチル）修飾ヌクレオチドから選ばれてよい。

いくつかの場合において、すべてのシチジンは、2’修飾シチジンであり得る。いくつかの場合において、すべてのシチジンは、2’-フルオロ修飾シチジンおよび/または2’-O-メチル修飾シチジンであり得る。いくつかの場合において、すべてのシチジンは、2’-デオキシ-2’-フルオロシチジンであり得る。いくつかの場合において、すべてのウリジンは、2’修飾ウリジンであり得る。いくつかの場合において、すべてのウリジンは、2’-フルオロ修飾ウリジンおよび/または2’-O-メチル修飾ウリジンであり得る。いくつかの場合において、すべてのウリジンは、2’-デオキシ-2’-フルオロウリジンであり得る。いくつかの場合において、すべてのアデノシンは、2’修飾アデノシンであり得る。いくつかの場合において、すべてのアデノシンは、2’-フルオロ修飾アデノシンおよび/または2’-O-メチル修飾アデノシンであり得る。いくつかの場合において、すべてのアデノシンは、2’-デオキシ-2’-フルオロアデノシンであり得る。いくつかの場合において、すべてのグアノシンは、2’修飾グアノシンであり得る。いくつかの場合において、すべてのグアノシンは、2’-フルオロ修飾グアノシンおよび/または2’-O-メチル修飾グアノシンであり得る。いくつかの場合において、すべてのグアノシンは、2’-デオキシ-2’-フルオログアノシンであり得る。

例えば、抗VEGFアプタマーは、少なくとも1つの2’修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのヌクレオチドは、2’修飾ヌクレオチドであり得る。いくつかの実施形態において、抗VEGFアプタマーのすべてのヌクレオチドは、2’-フルオロ修飾ヌクレオチドおよび/または2’-O-メチル修飾ヌクレオチドであり得る。例えば、2’-フルオロ修飾ヌクレオチドは、2’-フルオロ（2’-F）修飾ヌクレオチドまたは2’-フルオロ-2’-デオキシ修飾ヌクレオチドであり得る。例えば、2’-フルオロ修飾ヌクレオチドは、次の構造、すなわち

を含み得る。

いくつかの場合において、抗VEGFアプタマーは、いかなる天然ヌクレオチド（例えば、未修飾のA、C、T、UまたはG）を含まない。

抗VEGFアプタマーは、約10～約150個のヌクレオチドを含み得る。例えば、抗VEGFアプタマーは、約10～約150個のヌクレオチド、約10～約140個のヌクレオチド、約10～約130個のヌクレオチド、約10～約120個のヌクレオチド、約10～約110個のヌクレオチド、約10～約100個のヌクレオチド、約10～約90個のヌクレオチド、約10～約80個のヌクレオチド、約10～約70個のヌクレオチド、約10～約60個のヌクレオチド、約10～約50個のヌクレオチド、約10～約40個のヌクレオチド、約10～約30個のヌクレオチド、約10～約20個のヌクレオチドを含み得る。

抗VEGFアプタマーは、VEGF-165および/またはVEGF-121への結合を、抗VEGF参照アプタマーと競合し得る。

本開示の抗VEGF参照アプタマーまたは抗VEGFアプタマーは、修飾を伴うまたは伴わないヌクレオチド配列を含み得る。例えば、アプタマーは、天然および/または修飾ヌクレオチドを含み得る。アプタマーは、特定のSEQ ID NOで表されるヌクレオチド配列を含むか、そのヌクレオチド配列より構成されるものと定義される場合、該配列内のヌクレオチドはさらに修飾されていてもよい。

本開示によれば、抗VEGFアプタマーr-AMS0431.0は、SEQ ID NO: 46で表される天然ヌクレオチドを含み、抗VEGFアプタマーAMS0431.0は、SEQ ID NO: 91で表される対応する2’-フルオロ修飾ヌクレオチドを含む。したがって、SEQ ID NO: 46で表されるヌクレオチド配列を有するアプタマーは、r-AMS0431.0およびAMS0431.0の両方を包含し得るが、SEQ ID NO: 91で表されるヌクレオチド配列を有するアプタマーは、r-AMS0431.0を包含し得ない。

同様に、本開示において、一般に、「r-AMSxxxx」（例えば、r-AMS0433）で命名されたアプタマー（例えば、本開示のアプタマー）は、天然ヌクレオチド（ただし、リンカー、例えば、本明細書に記載のHリンカーを含んでもよい）を有しており、対応する2’-フルオロ修飾ヌクレオチドを含むアプタマーは、「AMSxxxx」（例えば、AMS0433）として命名されている。

本開示の抗VEGF参照アプタマーまたは抗VEGFアプタマーは、（例えば、5’から3’方向に）第1ステム、第1ループ、第2ステムおよび第2ループを含む二次構造を含み得る。抗VEGFアプタマーは、（例えば、5’から3’方向に）第1ステム、第1ループ、第2ステムおよび第2ループを含む二次構造を含み得る。

本開示の抗VEGF参照アプタマーまたは抗VEGFアプタマーは、SEQ ID NO: 136～137のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する第1の共通配列を有し得る。

代替的にまたは追加的に、本開示の抗VEGF参照アプタマーまたは抗VEGFアプタマーは、SEQ ID NO: 138～139のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する第2の共通配列を有し得る。

例えば、本開示の抗VEGF参照アプタマーまたは抗VEGFアプタマーは、SEQ ID NO: 136で表されるヌクレオチド配列を有する第1の共通配列と、SEQ ID NO: 138で表されるヌクレオチド配列を有する第2の共通配列とを有し、本開示の抗VEGF参照アプタマーまたは抗VEGFアプタマーは、SEQ ID NO: 137で表されるヌクレオチド配列を有する第1の共通配列と、SEQ ID NO: 139で表されるヌクレオチド配列を有する第2の共通配列とを有している。

第1の共通配列は、本開示の抗VEGF参照アプタマーまたは抗VEGFアプタマーにおける第1ステムおよび第1ループを形成するヌクレオチド配列を有し得る。いくつかの場合において、第1の共通配列は、本開示の抗VEGF参照アプタマーまたは抗VEGFアプタマーにおける第2ステムまたは第2ループを形成するヌクレオチド配列に含まれない。

第2の共通配列は、本開示の抗VEGF参照アプタマーまたは抗VEGFアプタマーにおける第2ステムおよび第2ループを形成するヌクレオチド配列を有し得る。いくつかの場合において、第2の共通配列は、本開示の抗VEGF参照アプタマーまたは抗VEGFアプタマーにおける第1ステムまたは第1ループを形成するヌクレオチド配列に含まれない。

本開示の抗VEGF参照アプタマーまたは抗VEGFアプタマーは、第1の共通配列および第2の共通配列を有し、上記の第1の共通配列は、第2の共通配列に対して5’に位置する。

いくつかの場合において、本開示の抗VEGF参照アプタマーまたは抗VEGFアプタマーは、第1の共通配列および第2の共通配列を有し、上記第2の共通配列は、第1の共通配列に対して5’に位置する。

本開示の抗VEGF参照アプタマーまたは抗VEGFアプタマーは、SEQ ID NO: 46～135、SEQ ID NO: 200～201のいずれかで表されるヌクレオチド配列またはその変異体もしくはトランケートを含み得る。変異体は、SEQ ID NO: 46～135、SEQ ID NO: 200～201のいずれかで表されるヌクレオチド配列と少なくとも50%同一のヌクレオチド配列を有し得る。変異体は、1つ以上（例えば、1～2、1～3、1～4、1～5、1～6、1～7、1～8、1～9、1～10、1～11、1～12、1～13、1～14、1～15、1～16、1～17、1～18、1～19、1～20またはそれ以上）のヌクレオチドの付加、欠失、および/または置換を含む、SEQ ID NO: 46～135、SEQ ID NO: 200～201のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有し得る。

抗VEGF参照アプタマーは、約10～約150個のヌクレオチドを有し得る。例えば、抗VEGF参照アプタマーは、約10～約150個のヌクレオチド、約10～約140個のヌクレオチド、約10～約130個のヌクレオチド、約10～約120個のヌクレオチド、約10～約110個のヌクレオチド、約10～約100個のヌクレオチド、約10～約90個のヌクレオチド、約10～約80個のヌクレオチド、約10～約70個のヌクレオチド、約10～約60個のヌクレオチド、約10～約50個のヌクレオチド、約10～約40個のヌクレオチド、または約10～約30個のヌクレオチド、約10～約20個のヌクレオチドを有し得る。

抗VEGFアプタマーは、VEGFまたはVEGF受容体の生物学的活性を調節するために用いられるものである。

抗VEGFアプタマーは、VEGF関連疾患、障害または病状を予防、治療、および/または改善するために用いられる。例えば、VEGF関連疾患、障害または病状は、血管新生疾患、障害または病状であり得る。例えば、VEGF関連疾患、障害または病状は、眼内血管新生疾患、障害または病状であり得る。例えば、VEGF関連疾患、障害または病状は、加齢黄斑変性、脈絡膜血管新生、糖尿病黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、および糖尿病網膜症から選ばれてよい。例えば、VEGF関連疾患、障害または病状は、湿性加齢黄斑変性、近視性脈絡膜血管新生、および増殖性糖尿病網膜症から選ばれてよい。

一態様において、本開示は、本開示のアプタマーを含む抗VEGF剤を提供する。抗VEGF剤は、ポリエチレングリコール（PEG）部分をさらに含み得る。例えば、PEG部分は、抗VEGFアプタマーの5’末端および/または3’末端に抱合される。

別の態様において、本開示は、本開示の抗VEGFアプタマー、および/または抗VEGF剤を含む組成物を提供する。

いくつかの場合において、組成物は、医薬組成物であり得る。例えば、組成物は、薬学的に許容される賦形剤または担体を含み得る。

いくつかの場合において、組成物は、それぞれが所定量の活性成分を含む離散的な剤形で提示されることができ、上記の活性成分は、粉末の形態、または粒子、水性または非水性液体中の溶液もしくは懸濁液の形態である。このような剤形は、当業者に知られている任意の方法によって調製することができ、例えば、活性成分を、1つまたは複数の他の成分を構成する担体と会合させるステップを含むことができる。一般に、組成物は、活性成分を液体担体または微粉砕した固体担体またはその両方と均一かつ密接に混合し、次いで、必要に応じて、製品を所望の外観に形成することによって調製される。

組成物は、治療有効量の活性組成物（例えば、本開示の抗VEGFアプタマーまたは抗VEGF剤）を含み得る。治療有効量は、新生血管疾患もしくは障害を患っているか、または上記の疾患もしくは障害を発症するリスクを有する被験者において、上記の疾患もしくは障害および/またはそれらの任意の合併症を予防および/または治癒（少なくとも部分的に）することができる対象組成物の量であってよい。含まれる活性剤の具体的な量/濃度は、投与方法および患者のニーズによって異なり、例えば、患者の体積、粘度および/または体重等に基づいて決定することができる。例えば、適切な用量は、約0.1 mgまたは1 mg/kg/日～約50 mg/kg/日であってもよく、時には、用量はさらに高くてもよい。これらの特定の用量は、特定の患者、製剤、および/または疾患の状態に基づいて、当業者（例えば、医師または薬剤師）によって都合よく調整され得ることが理解されるものとする。

組成物は、追加の治療活性成分、例えば、新生血管疾患または障害を予防、治療および/または改善するための追加の治療活性成分の有効量を更に含んでいてもよい。活性成分の各々は、医薬組成物中に薬学的に有効な量で存在し得る。本願の抗VEGFアプタマーは、追加の活性成分と関連していてもよいし、そうでなくてもよい。

非限定的な例示的組成物およびそのような組成物を調製するための方法を以下に記載する。組成物は、例えば、錠剤、カプセル、丸薬、粉末、徐放性製剤、溶液、懸濁液などの経口投与に適した形態；無菌溶液、懸濁液、乳剤などの非経口注入に適した形態；軟膏やクリームなどの局所投与に適した形態；坐剤などの直腸投与に適した形態であってもよい。組成物は、正確な用量の単回投与に適した単位剤形であってよい。いくつかの実施形態では、組成物は、液体医薬組成物であってよい。

組成物において、抗VEGFアプタマーは、従来の医薬配合技術に従って、医薬担体と組み合わせて密接した混和物にすることができる。担体は、投与に望まれる製剤の形態に応じて、様々な形態をとることができる。

組成物は、1つ以上の薬学的に許容される添加剤および賦形剤をさらに含んでもよい。そのような添加剤および賦形剤としては、粘着防止剤、消泡組成物、緩衝組成物、ポリマー、酸化防止剤、保存料、キレート組成物、粘度調整剤、等張化剤、香味料、着色剤、着臭剤、乳白剤、懸濁組成物、バインダー、フィラー、可塑剤、潤滑剤、および/またはこれらの混合物などが挙げられるが、これらに限定されない。

別の態様において、本開示は、本開示の有効量の抗VEGFアプタマーまたは抗VEGF剤を、それを必要とする被験者に投与することを含む、VEGFまたはVEGF受容体の生物学的活性を調節するための方法を提供する。

別の態様において、本開示は、本開示の有効量の抗VEGFアプタマーまたは抗VEGF剤を、それを必要とする被験者に投与することを含む、VEGF関連疾患、障害または病状を予防、治療、および/または改善するための方法を提供する。

例えば、VEGF関連疾患、障害または病状は、血管新生疾患、障害または病状であり得る。例えば、VEGF関連疾患、障害または病状は、眼内血管新生疾患、障害または病状であり得る。例えば、VEGF関連疾患、障害または病状は、加齢黄斑変性、脈絡膜血管新生、糖尿病黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、および糖尿病網膜症から選ばれてよい。例えば、VEGF関連疾患、障害または病状は、湿性加齢黄斑変性、近視性脈絡膜血管新生、および増殖性糖尿病網膜症から選ばれてよい。

一態様において、本開示は、VEGF関連疾患、障害または病状を予防、治療、および/または改善するための医薬品の製造における本開示のアプタマーまたは本開示の抗VEGF剤の使用を提供する。

VEGF関連疾患、障害または病状は、血管新生疾患、障害または病状であり得る。例えば、VEGF関連疾患、障害または病状は、眼内血管新生疾患、障害または病状であり得る。例えば、VEGF関連疾患、障害または病状は、加齢黄斑変性、脈絡膜血管新生、糖尿病黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、および糖尿病網膜症から選ばれてよい。例えば、VEGF関連疾患、障害または病状は、湿性加齢黄斑変性、近視性脈絡膜血管新生、および増殖性糖尿病網膜症から選ばれてよい。

抗Ang2アプタマー

一態様において、本開示は、Ang2に約500ピコモル（pM）以下のKD値で特異的に結合するアプタマーを提供する。例えば、抗Ang2アプタマーは、Ang2に約500ピコモル（pM）以下、約400ピコモル（pM）以下、約300ピコモル（pM）以下、約200ピコモル（pM）以下、約100ピコモル（pM）以下、約90ピコモル（pM）以下、約80ピコモル（pM）以下、約70ピコモル（pM）以下、約60ピコモル（pM）以下、約50ピコモル（pM）以下、約40ピコモル（pM）以下、約30ピコモル（pM）以下、または約20ピコモル（pM）以下のKD値で結合し得る。

Ang2は、ヒトAng2、マウスAng2、サルAng2、ウサギAng2、および/またはラットAng2であり得る。

抗Ang2アプタマーは、ヒトAng1に実質的に結合しない。例えば、抗Ang2アプタマーは、Ang2に対する親和性よりも著しく低い（例えば、少なくとも1倍、少なくとも2倍、少なくとも3倍、少なくとも4倍以上低い）親和性でAng1に結合し得る。いくつかの場合において、抗Ang2アプタマーは、放射性または蛍光測定、表面プラズモン共鳴（SPR）、生体層干渉法（BLI、例えばOctet（登録商標）システム）、SRU Biosystems BIND（登録商標）、等温滴定カロリー（ITC）、またはマイクロスケール熱泳動（MST）によるリガンド結合アッセイを使用して測定不能なKD値でAng1に結合し得る。

抗Ang2アプタマーは、Ang2とTie2間の相互作用を阻害し得る。

本開示の抗Ang2アプタマーは、眼球動物モデルなどの動物モデルにおいて、新生血管形成および/または血管透過性を軽減および/または改善することが可能である。例えば、眼球動物モデルは、酸素誘発性虚血性網膜症（OIR）モデルであり得る。動物モデルは、脊椎動物モデルであってもよく、場合によっては、哺乳類モデルであってよい。動物は、ラット、マウス、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、非ヒト霊長類、またはいかなる他の適切な動物であり得る。

本開示の抗Ang2アプタマーは、マウス酸素誘発性虚血性網膜症（OIR）モデルにおいて、新生血管形成の減少および/または血管透過性の低下を可能にすることが可能である。

本開示の抗Ang2アプタマーは、高度に可溶である。例えば、抗Ang2アプタマーは、比較的高い程度（例えば、全重量の80%以上、全重量の85%以上、全重量の90%以上、全重量の95%以上、全重量の99%以上）で溶媒に溶解することができる。例えば、抗Ang2アプタマーは、100 mg/ml以上、または150 mg/ml以上、例えば少なくとも200 mg/mlの濃度で配合され得る。

抗Ang2アプタマーは、RNAアプタマー、DNAアプタマー、またはそれらの組み合わせであり得る。例えば、抗VEGFアプタマーは、主にRNAを含んでいてもよいし、主にDNAを含んでいてもよいし、またはRNAとDNAの両方を含んでいてもよい。

抗Ang2アプタマーは、1つ以上の修飾ヌクレオチドを含み得る。いくつかの場合において、抗Ang2アプタマーのすべてのヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドであってもよい。

例えば、修飾ヌクレオチドは、リボース位置、デオキシリボース位置、リン酸位置、および塩基位置から独立して選ばれる1つ以上の位置における化学的置換または修飾を含み得る。修飾ヌクレオチドは、2’位糖修飾、2’-アミノ（2’-NH₂）修飾、2’-フルオロ（2’-F）修飾、2’-O-メチル（2’-OMe）修飾、2’-O-（2-メトキシエチル）（2’-O-MOE）修飾、5位修飾ピリミジン、シトシン環外アミンにおける修飾、5’-ブロモウラシルによる置換、5’-ブロモデオキシウリジンによる置換、5’-ブロモデオキシシチジンによる置換、骨格修飾、ロック核酸（LNA）、メチル化、3’キャップ、および5’キャップから独立して選ばれる1つ以上の修飾を含み得る。5位修飾ピリミジンは、5-カルボキシ-2’-デオキシウリジン、5-アミノアリル-2’-デオキシウリジン、5-[（3-インドリル）プロピオンアミド-N-アリル]-2’-デオキシウリジン、5-カルボキシ-2’-デオキシシチジン、5-アミノアリル-2’-デオキシシチジン、ビオチン-16-アミノアリル-2’-デオキシシチジン、5-（N-ベンジルカルボキシアミド）-2’-デオキシウリジン、5-（N-イソブチルカルボキシアミド）-2’-デオキシウリジン、5-（N-ナフチルメチルカルボキシアミド）-2’-デオキシウリジン、および5-（N-トリプタミノカルボキサミド）-2’-デオキシウリジンから選ばれてよい。

抗Ang2アプタマーは、少なくとも1つ（例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15以上）の2’修飾ヌクレオチドを含み得る。いくつかの場合において、抗Ang2アプタマーのすべてのヌクレオチドは、2’修飾ヌクレオチドであり得る。2’修飾ヌクレオチドは、2’-アミノ修飾ヌクレオチド、2’-フルオロ修飾ヌクレオチド、2’-O-メチル修飾ヌクレオチド、および2’-O-（2-メトキシエチル）修飾ヌクレオチドから選ばれてよい。例えば、2’-フルオロ修飾ヌクレオチドは、2’-フルオロ（2’-F）修飾ヌクレオチドまたは2’-フルオロ-2’-デオキシ修飾ヌクレオチドであり得る。例えば、2’-フルオロ修飾ヌクレオチドは、次の構造、すなわち

を含み得る。

抗Ang2アプタマーは、少なくとも1つの2’-フルオロ修飾ヌクレオチド、少なくとも1つの2’-O-メチル修飾ヌクレオチド、および/または少なくとも1つのLNAを含み得る。

いくつかの場合において、抗Ang2アプタマーのすべてのシチジンは、2’修飾シチジンであり得る。いくつかの場合において、すべてのシチジンは、2’-フルオロ修飾シチジンおよび/または2’-O-メチル修飾シチジンであり得る。いくつかの場合において、すべてのシチジンは、2’-デオキシ-2’-フルオロシチジンであり得る。いくつかの場合において、すべてのウリジンは、2’修飾ウリジンであり得る。いくつかの場合において、すべてのウリジンは、2’-フルオロ修飾ウリジンおよび/または2’-O-メチル修飾ウリジンであり得る。いくつかの場合において、すべてのウリジンは、2’-デオキシ-2’-フルオロウリジンであり得る。いくつかの場合において、すべてのアデノシンは、2’修飾アデノシンであり得る。いくつかの場合において、すべてのアデノシンは、2’-フルオロ修飾アデノシンおよび/または2’-O-メチル修飾アデノシンであり得る。いくつかの場合において、すべてのアデノシンは、2’-デオキシ-2’-フルオロアデノシンであり得る。いくつかの場合において、すべてのグアノシンは、2’修飾グアノシンであり得る。いくつかの場合において、すべてのグアノシンは、2’-フルオロ修飾グアノシンおよび/または2’-O-メチル修飾グアノシンであり得る。いくつかの場合において、すべてのグアノシンは、2’-デオキシ-2’-フルオログアノシンであり得る。いくつかの場合において、すべてのヌクレオチドは、2’-フルオロ修飾ヌクレオチドおよび/または2’-O-メチル修飾ヌクレオチドであり得る。いくつかの場合において、すべてのヌクレオチドは、2’-フルオロ修飾ヌクレオチドであり得る。

いくつかの場合において、抗Ang2アプタマーは、いかなる天然ヌクレオチド（例えば、未修飾のA、C、T、UまたはG）を含まない。

抗Ang2アプタマーは、約10～約150個のヌクレオチドを含み得る。例えば、抗Ang2アプタマーは、約10～約150個のヌクレオチド、約10～約140個のヌクレオチド、約10～約130個のヌクレオチド、約10～約120個のヌクレオチド、約10～約110個のヌクレオチド、約10～約100個のヌクレオチド、約10～約90個のヌクレオチド、約10～約80個のヌクレオチド、約10～約70個のヌクレオチド、約10～約60個のヌクレオチド、約10～約50個のヌクレオチド、約10～約40個のヌクレオチド、約10～約30個のヌクレオチド、または約10～約20個のヌクレオチドを含み得る。

抗Ang2アプタマーは、Ang2への結合を、抗Ang2参照アプタマーと競合し得る。

抗Ang2参照アプタマーまたは本開示の抗Ang2アプタマーは、修飾を伴うまたは伴わないヌクレオチド配列を含み得る。例えば、アプタマーは、天然および/または修飾ヌクレオチドを含み得る。アプタマーは、特定のSEQ ID NOで表されるヌクレオチド配列を含むか、そのヌクレオチド配列より構成されるものと定義される場合、該配列内のヌクレオチドはさらに修飾されていてもよい。

本開示によれば、抗Ang2アプタマーr-AMS0526は、配列がSEQ ID NO: 2で表される天然ヌクレオチドを含み、抗Ang2アプタマーAMS0526は、配列がSEQ ID NO: 6で表される対応する2’-フルオロ修飾ヌクレオチドを含む。したがって、SEQ ID NO: 2で表されるヌクレオチド配列を有するアプタマーは、r-AMS0526とAMS0526の両方を包含し得るが、SEQ ID NO: 6で表されるヌクレオチド配列を有するアプタマーは、r-AMS0526を包含し得ない。

同様に、抗Ang2アプタマーr-AMS0525は、配列がSEQ ID NO: 1で表される天然ヌクレオチドを含み、抗Ang2アプタマーAMS0525は、配列がSEQ ID NO: 5で表される対応する2’-フルオロ修飾ヌクレオチドを含む。抗Ang2アプタマーr-AMS0525.3は、配列がSEQ ID NO: 3で表される天然ヌクレオチドを含み、抗Ang2アプタマーAMS0525.3は、配列がSEQ ID NO: 7で表される対応する2’-フルオロ修飾ヌクレオチドを含む。抗Ang2アプタマーr-AMS0525.4は、配列がSEQ ID NO: 4で表される天然ヌクレオチドを含み、抗Ang2アプタマーAMS0525.4は、配列がSEQ ID NO: 8で表される対応する2’-フルオロ修飾ヌクレオチドを含む。抗Ang2アプタマーr-AMS0525は、配列がSEQ ID NO: 1で表される天然ヌクレオチドを含み、抗Ang2アプタマーAMS0525.5、AMS0525.6、AMS0525.7、またはAMS0525.8は、配列がSEQ ID NO: 9～12で表され様々な修飾を有する対応するヌクレオチドを含む。

本開示の抗Ang2参照アプタマーまたは抗Ang2アプタマーは、5’から3’方向に第1ステム、第1バルジ、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジ、第4ステム、および第1ループを含む二次構造を含み得る。抗Ang2アプタマーは、5’から3’方向に第1ステム、第1バルジ、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジ、第4ステム、および第1ループより構成される二次構造を含み得る。

抗Ang2参照アプタマーまたは本開示の抗Ang2アプタマーは、SEQ ID NO: 13～20のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する第1の共通配列を有し得る。

代替的にまたは追加的に、抗Ang2参照アプタマーまたは本開示の抗Ang2アプタマーは、SEQ ID NO: 21～28のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する第2の共通配列を有し得る。

例えば、抗Ang2参照アプタマーまたは本開示の抗Ang2アプタマーは、SEQ ID NO: 13で表されるヌクレオチド配列を有する第1の共通配列と、SEQ ID NO: 21で表されるヌクレオチド配列を有する第2の共通配列とを有し、抗Ang2参照アプタマーまたは本開示の抗Ang2アプタマーは、SEQ ID NO:14で表されるヌクレオチド配列を有する第1の共通配列と、SEQ ID NO: 22で表されるヌクレオチド配列を有する第2の共通配列とを有し、抗Ang2参照アプタマーまたは本開示の抗Ang2アプタマーは、SEQ ID NO: 15で表されるヌクレオチド配列を有する第1の共通配列と、SEQ ID NO: 23で表されるヌクレオチド配列を有する第2の共通配列とを有し、抗Ang2参照アプタマーまたは本開示の抗Ang2アプタマーは、SEQ ID NO: 16で表されるヌクレオチド配列を有する第1の共通配列と、SEQ ID NO: 24で表されるヌクレオチド配列を有する第2の共通配列とを有し、抗Ang2参照アプタマーまたは本開示の抗Ang2アプタマーは、SEQ ID NO: 17で表されるヌクレオチド配列を有する第1の共通配列と、SEQ ID NO: 25で表されるヌクレオチド配列を有する第2の共通配列とを有し、抗Ang2参照アプタマーまたは本開示の抗Ang2アプタマーは、SEQ ID NO: 18で表されるヌクレオチド配列を有する第1の共通配列と、SEQ ID NO: 26で表されるヌクレオチド配列を有する第2の共通配列とを有し、抗Ang2参照アプタマーまたは本開示の抗Ang2アプタマーは、SEQ ID NO: 19で表されるヌクレオチド配列を有する第1の共通配列と、SEQ ID NO: 27で表されるヌクレオチド配列を有する第2の共通配列とを有し、抗Ang2参照アプタマーまたは本開示の抗Ang2アプタマーは、SEQ ID NO: 20で表されるヌクレオチド配列を有する第1の共通配列と、SEQ ID NO: 28で表されるヌクレオチド配列を有する第2の共通配列とを有する。

第1の共通配列は、本開示の抗Ang2アプタマーの抗Ang2参照アプタマーにおける第1ステム、第1バルジ、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジおよび/または第4ステムを形成するヌクレオチド配列に含まれ得る。いくつかの場合において、第1の共通配列は、抗Ang2参照アプタマーまたは本開示の抗Ang2アプタマーにおける第1ループを形成するヌクレオチド配列に含まれ得ない。例えば、第1の共通配列は、第1ループを形成する領域を除いて、アプタマー内のどこに存在してもよい。

いくつかの場合において、第1の共通配列は、第1ステム、第1バルジおよび第2ステムに含まれ得る。いくつかの場合において、第1の共通配列は、第1ステム、第1バルジ、第2ステム、および第2バルジに含まれ得る。いくつかの場合において、第1の共通配列は、第1ステム、第1バルジ、第2ステム、第2バルジおよび第3ステムに含まれ得る。いくつかの場合において、第1の共通配列は、第1ステム、第1バルジ、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、および第3バルジに含まれ得る。いくつかの場合において、第1の共通配列は、第1ステム、第1バルジ、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジ、および第4ステムに含まれ得る。いくつかの場合において、第1の共通配列は、第2ステム、第2バルジおよび第3ステムに含まれ得る。いくつかの場合において、第1の共通配列は、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、および第3バルジに含まれ得る。いくつかの場合において、第1の共通配列は、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジおよび第4ステムに含まれ得る。いくつかの場合において、第1の共通配列は、第3ステム、第3バルジおよび第4ステムに含まれ得る。

第2の共通配列は、抗Ang2参照アプタマーまたは本開示の抗Ang2アプタマーにおける第1ステム、第1バルジ、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジおよび/または第4ステムを形成するヌクレオチド配列に含まれ得る。いくつかの場合において、第2の共通配列は、抗Ang2参照アプタマーまたは本開示の抗Ang2アプタマーにおける第1ループを形成するヌクレオチド配列に含まれ得ない。例えば、第2の共通配列は、第1ループを形成する領域を除いて、アプタマー内のどこに存在してもよい。

いくつかの場合において、第2の共通配列は、第1ステム、第1バルジおよび第2ステムに含まれ得る。いくつかの場合において、第2の共通配列は、第1ステム、第1バルジ、第2ステム、および第2バルジに含まれ得る。いくつかの場合において、第2の共通配列は、第1ステム、第1バルジ、第2ステム、第2バルジおよび第3ステムに含まれ得る。いくつかの場合において、第2の共通配列は、第1ステム、第1バルジ、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、および第3バルジに含まれ得る。いくつかの場合において、第2の共通配列は、第1ステム、第1バルジ、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジ、および第4ステムに含まれ得る。いくつかの場合において、第2の共通配列は、第2ステム、第2バルジおよび第3ステムに含まれ得る。いくつかの場合において、第2の共通配列は、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、および第3バルジに含まれ得る。いくつかの場合において、第2の共通配列は、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジおよび第4ステムに含まれ得る。いくつかの場合において、第2の共通配列は、第3ステム、第3バルジおよび第4ステムに含まれ得る。

第1の共通配列と第2の共通配列は、アプタマーの二次構造を適切に形成するように、対にすることができる。例えば、第1の共通配列を選択した場合、当業者は、アプタマーの二次構造を適切に形成できる限り、第2の共通配列のヌクレオチド配列を調整することができる。

抗Ang2参照アプタマーまたは本開示の抗Ang2アプタマーは、第1の共通配列と第2の共通配列を有し、上記の第1の共通配列は、第2の共通配列に対して5’に位置し得る。

いくつかの場合において、抗Ang2参照アプタマーまたは本開示の抗Ang2アプタマーは、第1の共通配列と第2の共通配列を有し、上記の第2の共通配列は、第1の共通配列に対して5’に位置し得る。

例えば、1）第1の共通配列は、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジおよび第4ステムに含まれ得、第2の共通配列は、第4ステム、第3バルジ、第3ステム、第2バルジおよび第2ステムに含まれ得、2）第1の共通配列は、第1バルジ、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジおよび第4ステムに含まれ、第2の共通配列は、第4ステム、第3バルジ、第3ステム、第2バルジ、第2ステムおよび第1バルジに含まれ得、または、3）第1の共通配列は、第1ステム、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジおよび第4ステムを形成するヌクレオチド配列に含まれ得、第2の共通配列は、第4ステム、第3バルジ、第3ステム、第2バルジおよび第2ステム、第1バルジおよび第1ステムに含まれ得る。

例えば、1）第2の共通配列は、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジおよび第4ステムに含まれ得、第1の共通配列は、第4ステム、第3バルジ、第3ステム、第2バルジおよび第2ステムに含まれ得、2）第2の共通配列は、第1バルジ、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジおよび第4ステムに含まれ得、第1の共通配列は、第4ステム、第3バルジ、第3ステム、第2バルジ、第2ステムおよび第1バルジに含まれ得、または、3）第2の共通配列は、第1ステム、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジおよび第4ステムを形成するヌクレオチド配列に含まれ得、第1の共通配列は、第4ステム、第3バルジ、第3ステム、第2バルジおよび第2ステム、第1バルジおよび第1ステムに含まれ得る。

抗Ang2参照アプタマーまたは本開示の抗Ang2アプタマーの第1ループは、2～30個のヌクレオチド（例えば、少なくとも2、少なくとも3、少なくとも4、少なくとも5、少なくとも6、少なくとも7、少なくとも8、少なくとも9、少なくとも10、少なくとも11、少なくとも12、少なくとも13、少なくとも14、少なくとも15、少なくとも16、少なくとも17、少なくとも18、少なくとも19、少なくとも20、少なくとも21、少なくとも22、少なくとも23、少なくとも24、少なくとも25、少なくとも26、少なくとも27、少なくとも28、少なくとも29、または少なくとも30個のヌクレオチド）を含み得る。

抗Ang2参照アプタマーまたは本開示の抗Ang2アプタマーは、SEQ ID NO: 1～12のいずれかで表されるヌクレオチド配列またはその変異体もしくはトランケートを含み得る。変異体は、SEQ ID NO: 1～12のいずれかで表されるヌクレオチド配列と少なくとも50%同一のヌクレオチド配列を含み得る。変異体は、1つ以上（例えば、1～2、1～3、1～4、1～5、1～6、1～7、1～8、1～9、1～10、1～11、1～12、1～13、1～14、1～15、1～16、1～17、1～18、1～19、1～20、またはそれ以上）のヌクレオチドの付加、欠失、および/または置換を含む、SEQ ID NO: 1～12のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有し得る。

抗Ang2参照アプタマーは、約10～約150個のヌクレオチドを含み得る。例えば、抗Ang2参照アプタマーは、約10～約150個のヌクレオチド、約10～約140個のヌクレオチド、約10～約130個のヌクレオチド、約10～約120個のヌクレオチド、約10～約110個のヌクレオチド、約10～約100個のヌクレオチド、約10～約90個のヌクレオチド、約10～約80個のヌクレオチド、約10～約70個のヌクレオチド、約10～約60個のヌクレオチド、約10～約50個のヌクレオチド、約10～約40個のヌクレオチド、約10～約30個のヌクレオチド、または約10～約20個のヌクレオチドを含み得る。

抗Ang2アプタマーは、Ang2とTie2の生物学的活性を調節するために用いられる。

抗Ang2アプタマーは、Ang2関連疾患、障害または病状を予防、治療、および/または改善するために用いられる。例えば、Ang2関連疾患、障害または病状は、血管新生疾患、障害または病状であり得る。例えば、Ang2関連疾患、障害または病状は、眼内血管新生疾患、障害または病状であり得る。例えば、Ang2関連疾患、障害または病状は、加齢黄斑変性、脈絡膜血管新生、糖尿病黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、および糖尿病網膜症から選ばれてよい。例えば、Ang2関連疾患、障害または病状は、湿性加齢黄斑変性、近視性脈絡膜血管新生、および増殖性糖尿病網膜症から選ばれてよい。

一態様において、本開示は、本開示のアプタマーを含む抗Ang2剤を提供する。抗Ang2剤は、ポリエチレングリコール（PEG）部分をさらに含み得る。例えば、PEG部分は、抗Ang2アプタマーの5’末端および/または3’末端に抱合される。

別の態様において、本開示は、本開示の抗Ang2アプタマーおよび/または抗Ang2剤を含む組成物を提供する。

組成物は、治療有効量の活性組成物（例えば、本開示の抗Ang2アプタマーまたは抗Ang2剤）を含み得る。治療有効量は、新生血管疾患もしくは障害を患っているか、または上記の疾患もしくは障害を発症するリスクを有する被験者において、上記の疾患もしくは障害および/またはそれらの任意の合併症を予防および/または治癒（少なくとも部分的に）することができる対象組成物の量であってよい。含まれる活性剤の具体的な量/濃度は、投与方法および患者のニーズによって異なり、例えば、患者の体積、粘度および/または体重等に基づいて決定することができる。例えば、適切な用量は、約0.1 mgまたは1 mg/kg/日～約50 mg/kg/日であってもよく、時には、用量はさらに高くてもよい。これらの特定の用量は、特定の患者、製剤、および/または疾患の状態に基づいて、当業者（例えば、医師または薬剤師）によって都合よく調整され得ることが理解されるものとする。

組成物は、追加の治療活性成分、例えば、新生血管疾患または障害を予防、治療および/または改善するための追加の治療活性成分の有効量を更に含んでいてもよい。活性成分の各々は、医薬組成物中に薬学的に有効な量で存在し得る。本願の抗Ang2アプタマーは、追加の活性成分と関連していてもよいし、そうでなくてもよい

いくつかの場合において、追加の治療活性成分は、抗VEGF剤であり得る。抗VEGF剤は、アフリベルセプトを含み得る。抗VEGF剤は、本開示の抗VEGFアプタマーをさらに含み得る。

組成物において、抗Ang2アプタマーは、従来の医薬配合技術に従って、医薬担体と組み合わせて密接した混合物にすることができる。担体は、投与に望まれる製剤の形態に応じて、様々な形態をとることができる。

一態様において、本開示は、本開示の有効量の抗Ang2アプタマーまたは抗Ang2剤をそれを必要とす被験者に投与することを含む、Ang2関連疾患、障害または病状を予防、治療、および/または改善するための方法を提供する。

例えば、Ang2関連疾患、障害または病状は、血管新生疾患、障害または病状であり得る。Ang2関連疾患、障害または病状は、眼内血管新生疾患、障害または病状であり得る。Ang2関連疾患、障害または病状は、加齢黄斑変性、脈絡膜血管新生、糖尿病黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、および糖尿病網膜症から選ばれてよい。Ang2関連疾患、障害または病状は、湿性加齢黄斑変性、近視性脈絡膜血管新生、および増殖性糖尿病網膜症から選ばれてよい。

方法は、抗VEGF剤を被験者に投与することをさらに含み得る。抗VEGF剤は、アフリベルセプトおよび/または本開示の抗VEGFアプタマーを含み得る。

別の態様において、本開示は、Ang2またはTie2の生物学的活性を調節するための薬剤の製造における本開示の抗Ang2アプタマーまたは抗Ang2剤の使用を提供する、。

一態様において、本開示は、Ang2関連疾患、障害または病状を予防、治療、および/または改善するための医薬品の製造における本開示のアプタマーまたは本開示の抗Ang2剤の使用を提供する。

一態様において、本開示は、血管新生疾患、障害または病状を予防、治療、および/または改善するための医薬品の製造における1）本開示の抗Ang2アプタマーまたは抗Ang2剤と2）抗VEGF剤（例えば、アフリベルセプトおよび/または本開示の抗VEGFアプタマー）の組み合わせの使用を提供する。

本開示の抗Ang2アプタマーまたは抗Ang2剤は、抗VEGF剤を同時または順次に投与することができる。

血管新生疾患、障害または病状は、眼内血管新生疾患、障害または病状であり得る。血管新生疾患、障害または病状は加齢黄斑変性、脈絡膜血管新生、糖尿病黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、および糖尿病網膜症、から選ばれてよい。血管新生疾患、障害または病状は、湿性加齢黄斑変性、近視性脈絡膜血管新生、および増殖性糖尿病網膜症から選ばれてよい。

二重特異的アプタマー

一態様において、本開示は、本開示の抗Ang2アプタマーおよび本開示の抗VEGFアプタマーを含む二重特異的アプタマーを提供する。二重特異的アプタマーは、本開示の組成物に含まれ得る。

二重特異的アプタマーは、式A1-（L）n-A2を有し、ここで、A1が本開示の抗VEGFアプタマー、A2が本開示の抗Ang2アプタマーであるか、またはA1が本開示の抗Ang2アプタマー、A2が本開示の抗VEGFアプタマーであり、Lがリンカーであり、nが少なくとも0の数である。例えば、nは、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、または20のような0～20であり得る。

二重特異的アプタマーは、VEGFとAng2の両方に特異的に結合することが可能である。

例えば、二重特異的アプタマーは、VEGF-121に約500 pM以下のKD値で（例えば、二重特異的アプタマーは、VEGF-121に約500ピコモル（pM）以下、約400ピコモル（pM）以下、約300ピコモル（pM）以下、約200ピコモル（pM）以下、約100ピコモル（pM）以下、約90ピコモル（pM）以下、約80ピコモル（pM）以下、約70ピコモル（pM）以下、約60ピコモル（pM）以下、約50ピコモル（pM）以下、約40ピコモル（pM）以下、約30ピコモル（pM）以下、または約20ピコモル（pM）以下のKD値で結合し得る）結合し得、また、二重特異的アプタマーは、Ang2に約500 pM以下のKD値で（例えば、二重特異的アプタマーは、Ang2に約500ピコモル（pM）以下、約400ピコモル（pM）以下、約300ピコモル（pM）以下、約200ピコモル（pM）以下、約100ピコモル（pM）以下、約90ピコモル（pM）以下、約80ピコモル（pM）以下、約70ピコモル（pM）以下、約60ピコモル（pM）以下、約50ピコモル（pM）以下、約40ピコモル（pM）以下、約30ピコモル（pM）以下、または約20ピコモル（pM）以下のKD値で結合し得る）結合し得る。

Lは、天然に存在するヌクレオチドリンカー、修飾ヌクレオチドリンカー、炭化水素リンカー、ポリエチレングリコールリンカーおよびそれらの組み合わせから選ばれてよい。

いくつかの場合において、Lの少なくとも1つは、ポリエチレングリコールリンカーであり得る。いくつかの場合において、Lの少なくとも1つは、ヘキサエチレングリコール（HまたはPEG6とも示される）リンカーであり得る。例えば、Lはヘキサエチレングリコールリンカー、nは0～10（例えば、nが0、1、2、3、4、5、6、7、8、9または10である）であり得る。

例えば、A1は、SEQ ID NO: 46～135、SEQ ID NO: 200～201のいずれかで表されるヌクレオチド配列またはその変異体もしくはトランケートを有する抗VEGFアプタマーであり得、A2は、SEQ ID NO: 1～12のいずれかで表されるヌクレオチド配列またはその変異体もしくはトランケートを有する抗Ang2アプタマーであり得る。

別の例として、A1は、SEQ ID NO: 1～12のいずれかで表されるヌクレオチド配列またはその変異体もしくはトランケートを有する抗Ang2アプタマーであり得、A2は、SEQ ID NO: 46～135、SEQ ID NO: 200～201のいずれかで表されるヌクレオチド配列またはその変異体もしくはトランケートを有する抗VEGFアプタマーであり得る。

二重特異的アプタマーのいくつかの場合において、A1は、SEQ ID NO: 83で表されるヌクレオチド配列またはそのトランケートを有する抗VEGFアプタマーであり、A2は、SEQ ID NO: 2で表されるヌクレオチド配列またはそのトランケートを有する抗Ang2アプタマーであり、Lは、ヘキサエチレングリコールリンカーであり、nは、0～10である。

二重特異的アプタマーのいくつかの場合において、A1は、SEQ ID NO: 128で表されるヌクレオチド配列またはそのトランケートを有する抗VEGFアプタマーであり、A2は、SEQ ID NO: 6で表されるヌクレオチド配列またはそのトランケートを有する抗Ang2アプタマーであり、Lは、ヘキサエチレングリコールリンカーであり、nは、0～10である。

二重特異的アプタマーのいくつかの場合において、A1は、SEQ ID NO: 2で表されるヌクレオチド配列またはそのトランケートを有する抗Ang2アプタマーであり、A2は、SEQ ID NO: 83で表されるヌクレオチド配列またはそのトランケートを有する抗VEGFアプタマーであり、Lは、ヘキサエチレングリコールリンカーであり、nは、0～10である。

二重特異的アプタマーのいくつかの場合において、A1は、SEQ ID NO: 6で表されるヌクレオチド配列またはそのトランケートを有する抗Ang2アプタマーであり、A2は、SEQ ID NO: 128で表されるヌクレオチド配列またはそのトランケートを有する抗VEGFアプタマーであり、Lは、ヘキサエチレングリコールリンカーであり、nは、0～10である。

いくつかの場合において、二重特異的アプタマーは、SEQ ID NO: 140～195、SEQ ID NO: 202～204のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有し得る。

二重特異的アプタマーは、r-AMSB107.0、r-AMSB108.0、r-AMSB107.1、r-AMSB107.2、r-AMSB107、r-AMSB107.4、r-AMSB107.5、r-AMSB107.6、r-AMSB107.7、r-AMSB107.8、r-AMSB107.9、r-AMSB107.10、r-AMSB107.11、r-AMSB107.12、r-AMSB107.13、r-AMSB107.14、r-AMSB107.15、r-AMSB107.16、r-AMSB107.17、r-AMSB107.18、r-AMSB107.19、r-AMSB107.22、r-AMSB107.23、r-AMSB107.24、r-AMSB107.25、r-AMSB107.26、r-AMSB107.27、AMSB107.0、AMSB108.0、AMSB107.1、AMSB107.2、AMSB107、AMSB107.4、AMSB107.5、AMSB107.6、AMSB107.7、AMSB107.8、AMSB107.9、AMSB107.10、AMSB107.11、AMSB107.12、AMSB107.13、AMSB107.14、AMSB107.15、AMSB107.16、AMSB107.17、AMSB107.18、AMSB107.19、AMSB107.20、AMSB107.21、AMSB107.22、AMSB107.23、AMSB107.24、AMSB107.25、AMSB107.26、AMSB107.P6、AMSB107.P40K、AMSB107PおよびAMSB107.27から選ばれてよい。

二重特異的アプタマーr-AMSB107.22、r-AMSB107.23、r-AMSB107.24、r-AMSB107.25、AMSB107.22、AMSB107.23、AMSB107.24、およびAMSB107.25のそれぞれは、リンカー（L）または修飾として1つ以上のヘキサエチレングリコール（PEG₆とも呼ばれる）を含む。

組成物

一態様において、本開示は、本開示の抗Ang2アプタマー、本開示の抗VEGFアプタマー、および/または本開示の二重特異的アプタマーを含む組成物を提供する。いくつかの場合において、組成物は、本開示の有効量の抗Ang2アプタマーおよび本開示の有効量の抗VEGFアプタマーを含む。いくつかの場合において、組成物は、本開示の有効量の二重特異的アプタマーを含む。

組成物は、医薬組成物であり得る。組成物は、薬学的に許容される賦形剤または担体を含み得る。

組成物は、血管新生疾患、障害または病状の予防、治療および/または改善に用いられる。血管新生疾患、障害または病状は、眼内血管新生疾患、障害または病状であり得る。いくつかの実施形態において、血管新生疾患、障害または病状は、加齢黄斑変性、脈絡膜血管新生、糖尿病黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、および糖尿病網膜症から選択される。いくつかの実施形態において、血管新生疾患、障害または病状は、湿性加齢黄斑変性、近視性脈絡膜血管新生、および増殖性糖尿病網膜症から選択される。

組成物は、例えば、錠剤、カプセル、丸薬、粉末、徐放性製剤、溶液、懸濁液などの経口投与に適した形態；無菌溶液、懸濁液、乳剤などの非経口注入に適した形態；軟膏やクリームなどの局所投与に適した形態；坐剤などの直腸投与に適した形態であってもよい。組成物は、正確な用量の単回投与に適した単位剤形であってよい。いくつかの場合では、組成物は、液体医薬組成物であってよい。

薬学的に許容される賦形剤または担体としては、粘着防止剤、消泡剤、緩衝剤、ポリマー、酸化防止剤、保存料、キレート剤、粘度調整剤、等張化剤、香味料、着色剤、着臭剤、乳白剤、懸濁剤、バインダー、フィラー、可塑剤、潤滑剤、および/またはこれらの混合物などが挙げられるが、これらに限定されない。

組成物は、治療有効量の活性剤（例えば、本開示の医薬品）を含み得る。治療有効量は、新生血管疾患もしくは障害を患っているか、または上記の疾患もしくは障害を発症するリスクを有する被験者において、上記の疾患もしくは障害および/またはそれらの任意の合併症を予防および/または治癒（少なくとも部分的に）することができる対象組成物の量であってよい。含まれる活性剤の具体的な量/濃度は、投与方法および患者のニーズによって異なり、例えば、患者の体積、粘度および/または体重等に基づいて決定することができる。例えば、適切な用量は、約0.1 mgまたは1 mg/kg/日～約50 mg/kg/日であってもよく、時には、用量はさらに高くてもよい。これらの特定の用量は、特定の患者、製剤、および/または疾患の状態に基づいて、当業者（例えば、医師または薬剤師）によって都合よく調整され得ることが理解されるものとする。

医学的使用および方法

別の態様において、本開示は、本開示の有効量の抗Ang2アプタマー、本開示の有効量の抗VEGFアプタマー、本開示の有効量の二重特異的アプタマーおよび/または本開示の有効量の組成物を、それを必要とする被験者に投与するを含む、血管新生疾患、障害または病状を予防、治療および/または改善するための方法を提供する。

別の態様において、本開示は、血管新生疾患、障害または病状を予防、治療および/または改善するための医薬品の製造における本開示の抗Ang2アプタマー、本開示の抗VEGFアプタマー、本開示の二重特異的アプタマーおよび/または本開示の組成物の使用を提供する。

血管新生疾患、障害または病状は、眼内血管新生疾患、障害または病状であり得。いくつかの実施形態において、血管新生疾患、障害または病状は、加齢黄斑変性、脈絡膜血管新生、糖尿病黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、および糖尿病網膜症から選択される。いくつかの実施形態において、血管新生疾患、障害または病状は、湿性加齢黄斑変性、近視性脈絡膜血管新生、および増殖性糖尿病網膜症から選択される。

さらなる実施形態

本開示は、以下の実施形態、すなわち、

AMSB107.25、AMSB107.26、AMSB107.P6、AMSB107.P40K、AMSB107Pをさらに提供する。

本開示は、以下の配列に関するものである。

実施例
以下の実施例は、当業者に本発明をどのように実施し、使用するかについての完全な開示および説明を提供するように記載されており、本発明者らが発明とみなす範囲を制限することを意図しておらず、以下の実験がすべてまたは唯一の実験であることを表すことを意図していない。使用される数値（例えば、量、温度など）に関して正確さを確保するための努力がなされているが、いくつかの実験誤差および偏差は考慮する必要がある。特に断りのない限り、部は重量部、分子量は重量平均分子量、温度は摂氏、圧力は大気圧または大気圧近傍であることを示す。例えば、bpは塩基対、kbはキロベース、plはピコリットル、sまたはsecは秒、minは分、hまたはhrは時間、aaはアミノ酸、ntはヌクレオチド、i.m.は筋肉内、i.p.は腹膜内、s.c.は皮下であるような標準的な略語を用いてもよい。

実施例1 抗VEGFアプタマーの選択

本開示の抗VEGFアプタマーは、後述のプラットフォームである化学増強粒子ディスプレイ（CAPD）を用いて同定された（Wangら,WO 2018064086A1；Wangら,WO2018102115A1；Wangら,PCT/US2013/071318を参照されたい）。詳細な方法およびステップは、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるWO2018064086A1に記載されているとおりであった。

簡単に言えば、様々なベンダー（表1に記載）からの組換えヒトVEGF-121およびVEGF-165タンパク質は、アプタマー探索のための標的タンパク質として用いられた。典型的な初期選択ライブラリには、すべてが2’-フルオロ（2’-F）修飾を含む40～50個のヌクレオチドのランダム領域が含まれている。例えば、ヒトVEGF-121（R&Dシステム、4644-vs-CF）への選択、フォワードプライマーとして5’-CGCCCTCGTCCCATCTC-3’（SEQ ID NO: 196）が用いられ、リバースプライマーとして5’-CGTTCTCGGTTGGTGTTC-3’（SEQ ID NO: 197）が用いられた。

表面に完全な2’-フルオロ修飾アプタマー候補配列の複数のコピーを表示しているモノクローナル修飾アプタマー粒子（MAP）のライブラリを合成することによって、選択を開始した。その後、エマルジョンが破され、逆鎖が脱ハイブリダイズされ、粒子上に1本鎖の2’-フルオロ修飾アプタマー（約90%）および天然DNAテンプレートシーケンス（約10%）を残し、MAPの形成を完了し、スクリーニングの準備が整った。MAPは、テンプレート粒子と同様に、モノクローナルであり、各粒子が単一の修飾アプタマー配列の~10⁵コピーと増幅可能な天然DNA配列の~10⁴コピーを表示した。

次に、MAPを表1からの1つ以上の選択VEGF標的と共に37℃でインキュベートした。その後、MAPを、蛍光標識（Alexa Fluor 488または647）抗VEGF抗体（タグなしVEGF用）、抗His抗体（Hisタグ付きVEGF用）、またはストレプトアビジン（ビオチン標識VEGF用）を使用して標識した。各MAPの蛍光強度は、2’-フルオロ修飾アプタマーのVEGF標的に対する相対的な親和性を反映しており、蛍光活性化細胞選別装置（FACS）を介して、標的に対して高い親和性を持つアプタマーを定量的に単離することが可能である。CAPDの反復ラウンドを行い、プールを最適なバインダーに収束させるために、PCRを使用して、高忠実度ポリメラーゼを介して、濃縮したMAPS上の天然DNAエンコード鎖を増幅し、その後のラウンドのスクリーニングまたはシーケンシングが実施された。親和性の高い抗VEGFアプタマーの優先的選択は、連続的なラウンドにおいて、インキュベーション時間を短くし、VEGF濃度を下げ、洗浄時間を長くすることによって達成された。主に特異性の低い極性相互作用を介してVEGFに結合する抗VEGFアプタマーを産生しないように、連続的なラウンドにおいて、サケ精子DNA（Thermo Fisher Scientific、15632011）、ニシン精子DNA（Sigma-Aldrich、D3159）、およびデキストラン硫酸（Sigma-Aldrich、31404）などの濃度が増大しているポリアニオンコンペティターを次々と導入していった。

選択標的であるVEGFに対する結合特異性を確保するために、得られる抗VEGFアプタマーは過剰な（VEGFに比べて最大10⁹倍濃度）干渉タンパク質が存在しても、大きな親和性を持ってVEGFを特異的に認識するように、ウシ血清アルブミン（BSA）やカゼインなどの非標的タンパク質、または希釈ヒト血清（0%、0.1%、1%および10%）などの非標的タンパク質混合物をその濃度を増加させて選択に導入することができる。

解離速度の遅い抗VEGFアプタマーを濃縮する方法も、いくつかの選択において組み入れられた。そのために、濃縮された高親和性のMAPを、飽和濃度のビオチン標識VEGF（ACROBiosystems、VE1-H82E7またはVE5-H82Q0）標的とインキュベートし、続いて過剰の非標識VEGF（ACROBiosystems、VE1-H5246またはVE5-H5248）で洗浄して、連続的なラウンドにおいて、持続時間を増加させた（1分間から24時間）。非標識VEGFは、MAPから解離したビオチン標識VEGFを置き換えることができ、そして、MAPが蛍光ストレプトアビジンで標識された後は、何の蛍光シグナルも示さない。洗浄手順の後、解離速度の遅い抗VEGFアプタマーを表示するMAPは、より多くのビオチン標識VEGF標的を保持し、より高い蛍光強度を示すため、蛍光活性化細胞選別装置（FACS）を介してVEGFに対して解離速度の遅い抗VEGFアプタマーを定量的に分離することができる。

VEGF-165に対するいくつかの選択について、VEGF-165の受容体結合ドメインに対するより高い親和性を有する抗VEGFアプタマーを優先的に選択し、VEGF-165のヘパリン結合ドメインを標的とする抗VEGFアプタマーをもたらすことを避けるために、過剰量のヘパリン（Sigma-Aldrich H3393）が選択におけるコンペティターとして導入された。このようにして、結果として得られる抗VEGFアプタマーはVEGF-165とVEGF-121の両方を認識する可能性が高い。

VEGF-121とVEGF-165の両方を同様に高い親和性で認識することができる抗VEGFアプタマーを産生するために、いくつかの選択は、ヒトVEGF-121とヒトVEGF-165間でタンパク質標的を選択の交互ラウンド中に切り替えることによって行われた。「切り替え」選択プロセスにより、すべてがVEGF-121とVEGF-165の両方に高い親和性で結合する抗VEGFアプタマーファミリーが得られた。種間交差反応性は、動物モデルにおける潜在的に治療的な抗VEGFアプタマーの前臨床評価に寄与する。ヒトVEGFとラット/マウスVEGFの両方に結合するアプタマーを産生するために、いくつかの選択も、ヒトVEGF-121とマウスVEGF-120（Shenandoah Biotechnology、200-52）またはラットVEGF164（R&D Systems、564-RV/CF）間でタンパク質標的を選択の交互ラウンド中に切り替えることによって行われた。

選択された抗VEGFアプタマーがVEGFとその受容体間の相互作用を阻害できるようにするために、いくつかの選択は、組換えヒトVEGF受容体2（VEGFR2、R&D Systems、357-KD-050）、組換えヒトVEGF受容体1（VEGFR1、R&D Systems、321-FL-050）、ラニビズマブ（ranibizumab、Lucentis（登録商標））またはアフリベルセプト（Eylea（登録商標））などのVEGF抗原の受容体結合ドメインを認識する既存のVEGFバインダーを利用することによって行われた。既存のVEGFバインダーは、粒子ディスプレイスクリーンでコンペティターとして使用された。

選択されたアプタマープールは、Illumina MiSeq（商標）システムを用いた次世代シーケンサーで配列決定され、生物情報学的に分析された。これらのアプタマーは、ポリアニオンおよび/またはタンパク質コンペティターを含むこと、解離速度を改善すること、VEGF-121とVEGF-165を切り替えることなどの高度な選択方法で産生するされたため、結果として得られるアプタマーは、VEGF-121とVEGF-165の両方を高い親和性で認識する。

実施例2 抗VEGFアプタマーの同定とトランケーション

本開示の抗VEGFアプタマーのトランケートおよび修飾変異体は、LGC Biosearch Technologies（Novato,CA）によって調製され、対応する標的への結合親和性について調べた。簡単に言えば、濃縮ライブラリーの平衡結合定数を磁気ビーズ分配法を用いて測定した。ビオチン標識抗VEGFアプタマーは、1 μmのストレプトアビジン被覆MyOneストレプトアビジンC1磁気ビーズに抱合している（Thermo Fisher Scientific, 65002）。結合アッセイは、一定濃度の抗VEGFアプタマー（0.01 nM）を、PBSMCT緩衝液（DPBS、pH7.2で、2.5 mMの MgCl₂、1 mMのCaCl₂および0.01%のTWEEN-20を含む）中の10^-12～10^-8 Mの範囲の濃度の標的タンパク質と、37℃、90分間でインキュベートすることによって実施された。結合した標的タンパク質は磁気分離により分割され、その後、蛍光抗VEGFや抗Hisタグ抗体により標識された。結合した抗VEGFアプタマーの割合は、フローサイトメトリー（BD Accuri C6 Plus）で定量化した。生結合データは、空の磁気ビーズへの標的タンパク質の非特異的バックグラウンド結合を基準に補正された。結合した抗VEGFアプタマーの割合を、タンパク質濃度の関数としてプロットし、非線形曲線フィッティングアルゴリズム（Langmuir one-site binding model）を用いて、データから平衡結合定数（KD値）を抽出した（図1A～1B）。

本開示の代表的な抗VEGFアプタマー配列のトランケート変異体を表2に示し、VEGF-121とVEGF-165に対するそれらのKD値を示している。

本開示の抗VEGFアプタマーは、VEGF-165のみに結合するFDA承認のアプタマーを用いた抗VEGF治療薬（Macugen（登録商標））と比較して、ヒトVEGF-121およびヒトVEGF-165の両方に約50 pMの同等かつ優れた親和性で結合する（図1A～1B）。本開示の抗VEGFアプタマーは、VEGF-121とVEGF-165の両方に同様の親和性で結合するFDA承認のタンパク質を用いた抗VEGF治療薬（Lucentis（登録商標））と比較して、結合親和性が10倍以上向上していることが示された。

実施例3 抗VEGFアプタマーのインビトロでのVEGF-R競合アッセイと二次構造予測

本開示の抗VEGFアプタマーが血管内皮増殖因子A（VEGF）シグナル伝達の強力な阻害剤であることを示すために、抗VEGFアプタマーがVEGF-AとVEGF受容体間の相互作用を有効に遮断できることを確認するようにインビトロVEGF受容体競合ELISAアッセイが行われ、FDA承認のタンパク質を用いた薬剤ラニビズマブ（Lucentis（登録商標））との性能比較がされた。簡単に言えば、PBSMCT緩衝液（DPBS、pH7.2で、2.5 mM MgCl₂、1 mM CaCl₂および0.01%TWEEN-20を含む）中の10^-12～10^-8 Mの範囲の濃度のAMS0433（本開示の抗VEGFアプタマーの例として）またはLucentisを、50 pMのヒトVEGF-165（R&D Systems、293-VE-050）と共に混合し、ヒトVEGFR2受容体（R&D Systems、357-KD-050）固定化プレートに移して、37℃、1時間インキュベーした。洗浄後、VEGFR2を捕捉したVEGF-165は、1 μg/mlの抗VEGF抗体（R&D Systems、AF-293-NA）およびホースラディッシュペルオキシダーゼ（HRP）結合抗ヤギIgG、そしてTMB基質により検出された。VEGFR2に結合したVEGFは、Biotek Synergy H1 Hybrid Multi-Mode Readerを用いて405 nmで光学密度（OD）を測定することにより定量化した。生データは、50 pM VEGF-165を含むがアプタマー競合（0 nMのアプタマー）のないサンプルからの吸光度シグナルに対して正規化された。VEGFR2結合VEGFを、アプタマー濃度の関数としてプロットし、非線形曲線フィッティングアルゴリズム（用量反応阻害）を用いてデータからIC₅₀値を抽出した（図2）。

本開示の抗VEGFアプタマーは、VEGF-AとVEGFR2間の相互作用を約50 pMのIC₅₀値で効果的に阻害できることがわかり（図2）、これは、抗VEGFアプタマーがVEGF上の受容体結合ドメインに結合して遮断し、FDA承認のタンパク質を用いた抗VEGF治療薬（Lucentis（登録商標））に比べて約10倍の有効性を示していることを実証した。VEGFR2受容体遮断アッセイによって測定された、本開示の抗VEGFアプタマーの例示的な有効性を、表3に記載する。

さらに、選択された抗VEGFアプタマーの2次元構造解析を、NUPACKソフトウェアスイートを用いて行った。AMS0433の結果は、図5Aに示されている。

さらに、いくつかの2’-Fヌクレオチドを2’-Omeヌクレオチドに置換しても、性能が低下しないことも実証された。本開示のアプタマーは、様々な化学的置換や修飾プロセスに対して柔軟であることが重要な利点の1つである。このような修飾は、化学合成の過程で容易に実現することができる。例えば、VEGFアプタマーAMS0433（SEQ ID No.128で表されるヌクレオチド酸配列を有する）および2つの追加の変異体（それぞれがSEQ ID No.200またはSEQ ID No.201で表されるヌクレオチド酸配列を有するAMS0433.m4およびAMS0433.m6）は、それぞれが従来の2’-フルオロ修飾ヌクレオチドの代わりに複数の2’-Ome修飾ヌクレオチドを含む。両変異体は、インビトロVEGF-R競合アッセイにおいて、AMS0433と同様の効力を示し（表3）、AMS0433と比較して、製造性が良いなどの利点があると考えられる。

実施例4 非ヒト霊長類（NHP）レーザー誘発CNVモデルにおける抗VEGFアプタマーのインビボ有効性試験

本試験は、従来から確立されている手順にほぼ従って実施した。成熟したカニクイザル（2～4 kg）を試験に使用した。サルに塩酸ケタミン（10 mg/kg、筋肉内）およびペントバルビタールナトリウム（12 mg/kg、静脈内）で麻酔をかけ、瞳孔を拡張し、黄斑周囲のブルッフ膜（Bruch's membrane）をレーザーで破裂させてCNVを誘発した（片眼6～8回熱傷。レーザー設定:波長532nm、400～500 mW、直径50 μm、持続時間100 ms）。出血を伴わない気泡が形成されたレーザースポットのみを有効なCNV病変とみなし、研究の対象とした。レーザー治療から2週間後、CNV病変を視覚化するためにフルオレセイン血管造影（FA）が行われ、100 mg/mlフルオレセインナトリウムを10 mg/kgの体重で注入後，最初の1分間（早期画像）および5分間後（後期画像）に一連の画像を高速で撮影した。各病変の漏出は、後期画像を初期画像と比較することにより視覚化し、漏出の重症度をグレードIからIVのスケールに従ってスコア化し、グレードI-過蛍光なし；グレードII-漏出なしの過蛍光；グレードIII-初期または中期画像での過蛍光と後期漏出；グレードIV-トランジットでの明るい過蛍光と治療部位を越えた後期漏出であった。グレードIVの病変は、臨床的に重要な病変とみなされる。光干渉断層計（OCT）を用いて、ヒトの病的CNVと同様のレーザー火傷における網膜下高反射物質（SHRM）高さを測定した。その後、同日に以下の薬剤、すなわち、グループ1：50 μlAMS0433；グループ2：50 μlの陰性コントロールのアプタマーを硝子体内注入で投与した。試験品注入後1週間および2週間後に再度上記の手順でCNV病変を測定し、注入前後のグレードIV病変の漏出面積を比較することによりアプタマー効果を測定した。さらに、OCTも実施し、注入前後のSHRMの高さを比較した。

その結果を図7に示す。陰性コントロールアプタマーは、予想通り、SHRMの厚みと漏出面積の両方に対してほとんど効果を示さなかった。一方、本開示の抗VEGFアプタマー（例えば、AMS0433）の注入は、SHRMの厚さおよび漏出領域の両方の劇的な減少、ならびにグレードIV病変の完全な退縮をもたらし、NHPにおけるCNVを阻害するその強力な効力を確認することができる。

興味深いことに、Macugen（登録商標）もこのモデルでテストされたが、VEGF-121など一部のVEGFアイソフォームを阻害しないためか、CNV抑制効果がないことが報告されている（R.T.Tzekovら, Evaluation of intravitreal application of Pegaptanib Sodium on Laser-induced CNV in Cynomolgus Monkeys, ARVO Annual Meeting Abstract, 2006年5月を参照されたい）。しかし、本開示のアプタマーは、このモデルにおいて強力な有効性を示している。

実施例5 抗Ang2アプタマーの選択

選択方法は、実施例1と同様である。

簡単に言えば、組換えヒトアンジオポエチン-2タンパク質（R&D Systems、623-AN）を、抗Ang2アプタマー発見のための標的タンパク質として使用した。典型的な初期選択ライブラリには、すべてが2’-フルオロ（2’-F）修飾を含む40個のヌクレオチドのランダム領域が含まれている。フォワードプライマーは5’-ATCCAGAGTGACG-CTCTTCAGCA-3’（SEQ ID NO: 198）、リバースプライマーは5’-TGAAGAGCGTCACTCTGGAT-3’（SEQ ID NO: 199）であった。次の実施例は、組換えヒトAng2に特異的に結合するアプタマーの選択および産生プロセスについて説明する。

表面に2’-フルオロ修飾アプタマー候補配列の複数のコピーを表示しているモノクローナル修飾アプタマー粒子（MAP）のライブラリを合成することによって、選択を開始した。その後、MAPを、Ang2標的と37℃でインキュベートした。次に、MAPを蛍光標識（Alexa Fluor 488または647）抗Ang2抗体または抗His抗体（Hisタグ付きAng2用）、またはストレプトアビジン（ビオチン標識Ang2用）を使用して標識した。各MAPの蛍光強度は、Ang2標的に対する2’-フルオロ修飾アプタマーの相対的な親和性を反映しており、蛍光活性化細胞選別装置（FACS）を介して標的に対する親和性の高いアプタマーを定量的に単離することが可能である。CAPDの反復ラウンドを行い、プールを最適なバインダーに収束させるために、PCRを使用して、高忠実度ポリメラーゼを介して、濃縮したMAPS上の天然DNAエンコード鎖を増幅し、その後のラウンドのスクリーニングまたはシーケンシングが実施された。親和性の高い抗Ang2アプタマーの優先的選択は、連続的なラウンドにおいて、インキュベーション時間を短くし、Ang2濃度を下げ、洗浄時間を長くすることによって達成された。主に特異性の低い極性相互作用を介してAng2に結合する抗Ang2アプタマーを産生しないように、連続的なラウンドにおいてサケ精子DNA（Thermo Fisher Scientific、15632011）、ニシン精子DNA（Sigma-Aldrich、D3159）、およびデキストラン硫酸（Sigma-Aldrich、31404）などの濃度が増大しているポリアニオンコンペティターを次々と導入していった。

いくつかの選択の間、抗Ang2アプタマーに対する絶妙な結合特異性要件-理想的な抗Ang2アプタマーは、Ang2と反対の役割を果たすそのホモログAng1には結合すべきではないことを確実にするために、高度な技術が採用された。例えば、得られる抗Ang2アプタマーは過剰な（Ang2に比べて最大10⁹倍濃度）干渉タンパク質が存在しても、大きな親和性を持ってAng2を特異的に認識するように、ウシ血清アルブミン（BSA）やカゼインもしくはAng1（R & D Systems、923-AN）などの非標的タンパク質、または希釈ヒト血清（0%、0.1%、1%および10%）などの非標的タンパク質混合物をその濃度を増加させて選択に導入することができる。

解離速度の遅い抗Ang2アプタマーを濃縮する方法も、いくつかの選択において組み入れられた。そのために、濃縮された高親和性のMAPを、飽和濃度のビオチン標識Ang2標的とインキュベートし、続いて過剰の非標識Ang2で洗浄し、連続的なラウンドにおいて、持続時間を増加させた（1分から24時間）。非標識Ang2は、MAPから解離したビオチン標識Ang2を置き換えることができ、そして、MAPが蛍光ストレプトアビジンで標識された後は、何の蛍光シグナルも示さない。洗浄手順の後、解離速度の遅い抗Ang2アプタマーを表示するMAPは、より多くのビオチン標識Ang2標的を保持し、より高い蛍光強度を示すため、蛍光活性化細胞選別装置（FACS）を介して、Ang2に対して解離速度の遅い抗VEGFアプタマーを定量的に分離することができる。

種間交差反応性は、動物モデルにおける潜在的に治療的な抗Ang2アプタマーの前臨床評価に寄与する。ヒトAng2とマウスAng2の両方に結合する抗Ang2アプタマーを産生するために、いくつかの選択も、ヒト抗Ang2とマウス抗Ang2（R & D Systems、7186-AN）間でタンパク質標的を選択の交互ラウンド中に切り替えることによって行われた。切り替え選択プロセスにより、すべてヒトおよびマウスのAng2に高親和性で結合する抗Ang2アプタマーファミリーが得られた。

実施例6 抗Ang2アプタマーの同定およびトランケーション、ならびに結合親和性アッセイ

代表的な抗Ang2アプタマー（AMS0525）の様々な突然変異およびトランケート変異体が得られ、Ang2への結合親和性を磁気ビーズ分配法を用いて測定する。ビオチン標識抗Ang2アプタマーは、1 μmのストレプトアビジン被覆MyOneストレプトアビジンC1磁気ビーズに抱合している（Thermo Fisher Scientific、65002）。結合アッセイは、一定濃度のアプタマー（0.01 nM）を、PBSMCT緩衝液（DPBS、pH7.2で、2.5 mMのMgCl₂、1 mMのCaCl₂および0.01%のTWEEN-20を含む）中の10^-12～10^-8Mの範囲の濃度のAng2タンパク質と、37℃、90分間でインキュベートすることによって実施された。結合した標的タンパク質は磁気分離により分割され、その後、蛍光抗Hisタグ抗体により標識された。結合した抗Ang2アプタマーの割合は、フローサイトメトリー（BD Accuri C6 Plus）で定量化した。生結合データは、空の磁気ビーズへの標的タンパク質の非特異的バックグラウンド結合を基準に補正された。結合した抗Ang2アプタマーの割合を、タンパク質濃度の関数としてプロットし、非線形曲線フィッティングアルゴリズム（Langmuir one-site binding model）を用いて、データから平衡結合定数（KD値）を抽出した（図3A）。

得られたAng2のKD値を表4に示す。AMS0525は、一連の突然変異および欠失実験において48量体に切断された（AMS0526）。AMS0526は、これまでに報告されているヒトAng2に3.1 nMのKDで結合する部分修飾抗Ang2アプタマーと比較して、ヒトおよびマウスAng2の両方に優れた親和性（KD < 100 pM）で結合し、ヒトAng1を認識しない完全修飾型アプタマーである（図3A）。

興味深いことに、2'F修飾ヌクレオチドを、2’OMeまたはLNAで修飾した対応するヌクレオチドに置き換えても、得られた抗Ang2アプタマーの標的Ang2への結合には有意な影響がなかったことがわかった（AMS0525.5およびAMS0525.6のKD値によって示されるように）。

さらに、抗Ang2アプタマーAMS0526の2次元構造分析を、NUPACKソフトウェアスイートを用いて実施し、予測された構造を図5Bに示す。

実施例7 抗Ang2アプタマーのインビトロでのTie2受容体競合アッセイ

本開示の抗Ang2アプタマーがAng2シグナル伝達の強力な阻害剤であることを示すために、選択された抗Ang2アプタマーがAng2とTie-2間の相互作用を遮断することが可能であることを確認するように、インビトロ競合アッセイが行われた。受容体競合IC₅₀を決定するために、0.01 nMのHisタグ付きAng2をDynabeads His-Tag Isolation ＆ Pulldownビーズ（Thermo Fisher Scientific、10104D）に抱合し、1 nM Tie2（R&D Systems、313-TI）およびPBSMCT緩衝液（DPBS、pH7.2で、2.5 mM MgCl₂、1 mM CaCl₂および0.01%TWEEN-20を含む）中の10^-12～10^-8 Mの範囲の濃度の抗Ang2アプタマーと37℃、90分間インキュベートした。Ang2結合Tie2と抗Ang2アプタマーを磁気分離により分割、そして、Ang2結合Tie2を蛍光抗ヒト抗体を介して標識した。Ang2の結合した受容体の割合は、フローサイトメトリー（BD Accuri C6 Plus）で定量化した。生結合データは、非特異的バックグラウンド結合を基準に補正され、1 nM Tie2を有するが抗Ang2アプタマー競合のないサンプルからの蛍光強度に対して正規化された。結合した受容体の割合を抗Ang2アプタマー濃度の関数としてプロットし、非線形曲線フィッティングアルゴリズム（用量反応阻害）を用いてデータからIC₅₀値を抽出した（図3B）。AMS0526は、IC₅₀が83.9 pMと、以前に報告された抗Ang2アプタマーよりも30倍も高い値で、Ang2とTie2 間の相互作用を効果的に阻害することがわかった（図3B）。

実施例8 抗Ang2アプタマーの酸素誘発性網膜症（OIR）モデルにおけるインビボ有効性試験

試験は、血管新生と血管透過性への効果を試験するために、基本的に以前に確立された手順に従って行われた。OIRは、C57BL/6マウスの産仔を生後7日目（P7）に75%O₂中に置くことで誘発された。P12に、マウスを室内気に戻した。血管新生に対する効果を試験するために、マウスは同じ日に次の薬剤：群1（G1）：PBS（陰性コントロール）；G2：20 μgのアフリベルセプト；G3：20 μg AMS0525； G4：20 μgのアフリベルセプト+ 20 μg AMS0525の硝子体内注入を受けた。P17に、マウスを犠牲にし、10%リン酸緩衝ホルマリンで22℃、4時間固定し、マウスの眼を解剖し、網膜フラットマウントを調製した。次に、網膜をFITC標識グリフォニアシンプリシフォリア（Griffonia simplicifolia、GSA）レクチン（Vector Laboratories）で45分間染色し、NVを視覚化した。デジタル写真はZeiss蛍光顕微鏡で5倍の倍率で取得し、網膜全体を示すためにPhotoshop CS5.4の光合成オプションを使って1枚の画像に合成した。網膜NVの面積は、Image-Pro Plus（Media Cybernetics）を用いて、被験者の身元に関して盲検化された別の研究者により測定された。血管透過性への影響を調べるため、上記と同様の手順でOIRを誘発したが、P16に、マウスは血管新生（NV）が既に生じた時点で注入を受けた。このようにして、NVの成長ではなく、血管透過性に対する薬剤の効果のみが検証された。P17に、マウスから硝子体サンプルを採取し、血管から漏出したアルブミンの量をELISA法で測定した。

その結果を図6に示している。Ang2単独阻害すではほとんど効果がなかったが（従来の研究と同様）、本開示の抗Ang2アプタマーをアフリベルセプトと組み合わせることにより、アフリベルセプト単独よりも有意に高い効果でNVをほぼ完全に排除することができた（図6）。図6に示すように、NVが確立されたにもかかわらず、本開示の抗Ang2アプタマーとアフリベルセプトとの組み合わせは、アフリベルセプト単独よりも優れた程度に漏出を減少させることができた。

実施例9二重特異的アプタマーの取得

VEGFとAng2の両方を同時に認識することが可能な二重特異的アプタマーを開発するために、抗Ang2アプタマーAMS0526（表4）に連結された抗VEGFアプタマー（表2からのAMS0433またはその誘導体）を含む様々なアプタマー構築物を調製して試験した。二重特異的アプタマー構築物は、5'末端に抗VEGFアプタマー（AMSB107.0）または5'末端に抗Ang2アプタマー（AMSB108.0）の両方の方向で、リンカーなしで直接接合されたヘッド-テールで合成された。結果は表5にまとめられている。

VEGFとAng2に対する結合親和性に基づいて、二重特異的アプタマーAMSB107.0は最適な結果を与えるように見え、さらなるトランケーションと突然変異の実験に選択された。VEGF/Ang2二重特異的アプタマーAMSB107は、VEGFおよびAng2に対するKDおよびIC₅₀が前駆体のアプタマーと同等以上の結合親和性を示す（表6）。、AMSB107は、機能的受容体阻害アッセイの結果から、VEGF/VEGFR2およびAng2/Tie2の相互作用を約100 pMのIC₅₀値で阻害した（図4）。

抗VEGFアプタマーAMS0433、抗Ang2アプタマーAMS0526および抗VEGF/抗Ang2二重特異的アプタマーAMSB107の予測二次構造を図5に示した。AMSB107を設計する際、抗VEGFアプタマーAMS0433と抗Ang2アプタマーAMS0526の両方の3'ボトムステム領域を慎重に選択して共有することで、2つの個々のアプタマー間のミスフォールディングと干渉の可能性を最小限に抑えました（図5）。その結果、抗VEGFアプタマーAMS0433と抗Ang2アプタマーAMS0526の両方の構造は、二重特異的構築物AMSB107でよく保存されている。

さらに、リンカーまたはPEGポリマーを添加しても、性能を損なわないことが確認された。本開示のアプタマーのもう一つの重要な利点は、化学合成時に異なる結合モチーフの間にヘキサエチレングリコールリンカー（HまたはPEG6）のようなリンカーを加えることができ、アプタマーの性能に影響を与えずに高分子量ポリエチレングリコール（PEG）などの大きなポリマーをアプタマーの末端に抱合させるなどそのモジュール性である。例えば、VEGFアプタマーAMSB107（SEQ ID No.171で表されるヌクレオチド酸配列を有する）および2つの追加の変異体（AMSB107.P6およびAMSB107.P40K、それぞれSEQ ID No.202またはSEQ ID No.203で表されるヌクレオチド酸配列を有する）は、VEGFとAng2両方のインビトロ受容体競合アッセイで同様の効力が示された。このような変異体は、間隔を調整できる、製造コストが低い、インビトロでの薬物動態が優れているなど、AMSB107よりもさらに多くの利点を持つことができる。AMSB107.P6は、AMSB107におけるいくつかのヌクレオチドをHリンカーで置換しており、アプタマーを化学合成する際に、既知の手順でHリンカーに組み入れることができる。AMSB107.P40Kは、既知のチオールによる化学的抱合化学を利用して、40 kDaのPEGを用いてAMSB107の5’末端に抱合した。

本開示のアプタマーのVEGFに対する結合親和性の測定方法と同様の方法を用いて、本開示のアプタマーのTier2に対する結合親和性を測定した。

ペグ化および精製手順：

5’-アミノ修飾C6リンカーを有するアプタマー（Glen-research、10-1906-02Mを、トリチルオンプロセスを使用して合成し、Glen-pak精製カートリッジ（Glen-research、60-5100-96）で精製して、脱トリチルおよびショートフェイル合成生成物の除去を行った。次に、脱塩したアプタマーをスピン濃縮器Millipore、UFC901024）を用いて濃縮した。1mM 5’-アミノ修飾アプタマーを、1.5 mMから2mMの40 kDa Y型NHS エステル修飾PEG（JenKem Technology USA Inc、Y-NHS-40K ）と50%DMSOおよび50mM TeorellならびにStenhagen緩衝液でpH8.2で混合した。反応混合物を十分に混合し、37℃で1時間インキュベートした。反応混合物をAgilent 1260 HPLCシステムでDNAPac PA100分析カラム（Thermofisher、043010）を使用して分析した。ペグ化アプタマーの生成は、非ペグ化アプタマーとは異なる対応する溶出ピークの出現によって確認された。次に、ペグ化アプタマーを、AKTA Explorer FPLCシステムでTSKgel SuperQ-5PWアニオ交換樹脂（東ソー・バイオサイエンス、0043383）を用いて精製した。次に、ペグ化アプタマーを限外ろ過で脱塩し、凍結乾燥して-20℃で保存した。

実施例10 ウサギDL-α-アミノアジピン酸（DL-AAA）誘発網膜NVモデルにおけるペグ化二重特異的アプタマーのアフリベルセプトよりも高い効力および長い効果持続時間の達成

2’-フルオロ修飾ヌクレオチドと2’-Ome修飾ヌクレオチドの両方を含む完全修飾二重特異的アプタマーであるAMSB107P（SEQ ID No.204で表されるヌクレオチド酸配列を有する）を構築し、チオールリンカーを介して5’末端で40 kDa PEGに抱合される。ペグ化アプタマーは、生物製剤よりも半減期が長く、さらに、VEGF/Ang2デュアルターゲティングメカニズムにより、より効果的でインビボでより長く持続するという仮説が立てられた。そして、この仮説は、ウサギDL-α-アミノアジピン酸（DL-AAA）誘発網膜NVモデルでテストされた。

研究は、既に確立された手順を適合させることによって実施された（J. Cao, T. C. MacPherson, B. V. Iglesias, Y. Liu, N. Tirko, G. D. Yancopoulos, S. J. Wiegand, C. Romano, Aflibercept Action in a Rabbit Model of Chronic Retinal Neovascularization: Reversible Inhibition of Pathologic Leakage With Dose-Dependent Duration, Investig. Opthalmology Vis. Sci. 59, 1033 （2018）を参照されたい）。この研究では、生後2～4ヶ月（約6ポンド）のニュージーランド・ホワイト（NZW）ウサギを使用した。ウサギは、施設に到着してから1週間、新しい環境に順応させる。網膜NVと漏出を誘発するために、ウサギを8 mg/kgのゾレチル（商標） 50と1.6 mg/kgのキシラジンで筋肉内注入で麻酔し、網膜血管漏出を誘発するために、新しく調製された80 mM DL-α-アミノアジピン酸（DL-AAA）の溶液80 μlを両眼に眼窩内注入した。注入後、注入部位は清潔な綿棒を使って抗生物質軟膏で処置された。その後、NVと漏出が安定するように、ウサギを少なくとも10週間飼育した。

次に、安定した漏出が確認されたウサギに、次の試験品、すなわち群1：50 μlの10 mg/ml アフリベルセプト；群2：50 μlの10 mg/ml AMSB107Pの硝子体内注入を行った。Spectralis HRA+OCTシステム（Heidelberg社製）を用いて、漏出抑制およびNV退縮の有効性を測定した。漏出抑制効果を測定するために、ウサギに10%のフルオレセインナトリウム（10 mg/kg）を耳の辺縁静脈から注入して、蛍光血管造影（FA）撮影を行い、レッドフリー撮影により網膜NVを視覚化した。注入の1日前（ベースラインとして）に、FAおよびレッドフリー撮影を実施し、さらに注入後1週間にも実施した。

試験品の安全性は、週1回のスリットランプ生体顕微鏡検査で評価した。

AMSB107Pは、忍容性が高く、試験を通して試験品に関連する毒性は報告されていないことがわかった。

病理学的NVに対する効果は、レッドフリー撮影によって測定された（図8）。試験品を注入する前に、すべての眼でNVが見られた（矢印で示す）。注入後1週間で、アフリベルセプト群では網膜NVの退縮が認められたが、残存のNVはまだ明らかであった（矢印で示す）。これに対して、AMSB107Pは、網膜NVをほぼ完全に退縮させた（矢印は、方向性を示すために以前NVが出現したのと同じ位置にある）。

注入後8週目には、NVはすでにアフリベルセプト処置眼においてベースラインレベルに戻った。再成長は、注入前に観察されたのと同じ血管パターンに従っていた。これに対して、AMSB107Pは依然として網膜NVに対する抑制効果を維持していた（矢印で示す）。

注入後15週目には、NV再成長（矢印で示す）がAMSB107P処置眼で観察された。新しいNVは、注入前に観察されたNVとは異なるパターンに従っており、これはアプタマーによる血管のリモデリングを示唆している。また、同様の血管リモデリングの効果は、これまでの報告でも報告されており（Bibiana, T. MacPherson, J. Cao, C. Romano, Aflibercept in combination with nesvacumab (anti-Ang2) induces vascular remodeling in a rabbit model of pathological neovascularization., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 59, 1447-1447 (2018)を参照）、アフリベルセプトとAng2抗体（ネスヴァクマブ（Nesvacumab））の併用により血管のリモデリングを引き起こしたが、アフリベルセプト単独ではそのような効果は見られなかった。

血管漏出に対する効果をFAにより測定した（図9）。試験品を注入する前に、すべての眼で漏れが確認された（白矢印で示す）。注入後1週間では、アフリベルセプトとAMSB107Pの両方が漏出を完全に抑制した。注入後7週間では、アフリベルセプト処置眼は再び漏出し始め、注入後8週間では、漏出が悪化し、ベースラインレベルに戻った。これに対して、アフリベルセプト処置眼では、注入後7週間、8週間に漏出は観察されなかった。注入後14週目から少量の漏出が観察されたが、その程度は14週目、15週目ともにベースラインより有意に低いものであった。

本発明の好ましい実施形態が本明細書に示され、説明されてきたが、当業者には、そのような実施形態が単なる例として提供されていることが明らかであろう。本発明は、明細書内で提供される特定の実施形態によって限定されることを意図していない。本発明は、前述の明細書を参照して説明されてきたが、本明細書における実施形態の説明および例示は、限定的な意味で解釈されることを意図されていない。現在、当業者は、本発明から逸脱することなく、多数の変形、変更、および置換を思い付くであろう。さらに、本発明のすべての態様は、さまざまな条件および変数に依存する、本明細書に記載の特定の描写、構成、または相対的比率に限定されないことを理解されたい。本明細書に記載された本発明の実施形態に対する様々な代替物が、本発明を実施する際に採用され得ることが理解されるべきである。したがって、本発明は、そのような代替物、修正物、変形物、または均等物も包含するものと考えられる。以下の特許請求の範囲が本発明の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲内の方法および構造、ならびにそれらの等価物がそれによってカバーされることが意図されている。

Claims

約500ピコモル（pM）以下のKD値でAng2に特異的に結合する、
抗Ang2アプタマー。
約100ピコモル（pM）以下のKD値でAng2に特異的に結合する、
請求項1に記載の抗Ang2アプタマー。
前記Ang2は、ヒトAng2、マウスAng2、サルAng2、ウサギAng2、および/またはラットAng2である、
請求項1～2のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
ヒトAng1に実質的に結合しない、
請求項1～3のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記Ang2とTie2間の相互作用を阻害する、
請求項1～4のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
マウス酸素誘発性虚血性網膜症（OIR）モデルにおいて、新生血管形成の減少および/または血管透過性の低下を可能にする、
請求項1～5のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
高度に可溶である、
請求項1～6のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
RNAアプタマー、DNAアプタマー、またはそれらの組み合わせである、
請求項1～7のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
1つ以上の修飾ヌクレオチドを含む、
請求項1～8のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
ヌクレアーゼに対して耐性である、
請求項1～9のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーの全てのヌクレオチドは、修飾ヌクレオチド、および/または1つ以上の置換（1つ以上のPEGによる置換など）であり、例えば、前記抗Ang2アプタマーの１つまたは複数（例えば、1～20、1～19、1～18、1～17、1～16、1～15、1～14、1～13、1～12、1～11、1～10、1～9、1～8、1～7、1～6、1～5、1～4、1～3、または1～2）のヌクレオチドは、ポリエチレングリコール部分または複数（例えば、1～10、1～9、1～8、1～7、1～6、1～5、1～4、1～3、または1～2）のポリエチレングリコール部分を含むリンカーで置換されてよく、ある場合には、リンカーは、ヘキサエチレングリコール（HまたはPEG6）リンカーであってもよく、このような置換は、前記抗Ang2アプタマーの活性（例えば、結合活性または阻害活性）および/または機能に実質的に影響を与えない限り、前記抗Ang2アプタマーの任意のヌクレオチドで起こり得、ある場合には、前記置換は、前記抗Ang2アプタマーの二次構造に実質的に影響を与えなく、例えば、前記置換は、前記抗Ang2アプタマーの二次構造のバルジまたはループ領域に含まれるヌクレオチドで起こり得、ある場合には、前記置換は、前記抗Ang2アプタマーの二次構造のステム領域に含まれる任意のヌクレオチドで起こさない、
請求項1～10のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記修飾ヌクレオチドは、リボース位置、デオキシリボース位置、リン酸位置、および塩基位置から独立して選択される1つ以上の位置における化学的置換または修飾を含む、
請求項9～11のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記修飾ヌクレオチドは、2’位糖修飾、2’-アミノ（2’-NH₂）修飾、2’-フルオロ（2’-F）修飾、2’-O-メチル（2’-OMe）修飾、2’-O-（2-メトキシエチル）（2’-O-MOE）修飾、5位修飾ピリミジン、シトシン環外アミンにおける修飾、5’-ブロモウラシルによる置換、5’-ブロモデオキシウリジンによる置換、5’-ブロモデオキシシチジンによる置換、骨格修飾、ロック核酸（LNA）、メチル化、3’キャップ、および5’キャップから独立して選ばれる1つ以上の修飾を含む、
請求項9～12のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記5位修飾ピリミジンは、5-カルボキシ-2’-デオキシウリジン、5-アミノアリル-2’-デオキシウリジン、5-[（3-インドリル）プロピオンアミド-N-アリル]-2’-デオキシウリジン、5-カルボキシ-2’-デオキシシチジン、5-アミノアリル-2’-デオキシシチジン、ビオチン-16-アミノアリル-2’-デオキシシチジン、5-（N-ベンジルカルボキシアミド）-2’-デオキシウリジン、5-（N-イソブチルカルボキシアミド）-2’-デオキシウリジン、5-（N-ナフチルメチルカルボキシアミド）-2’-デオキシウリジン、および5-（N-トリプタミノカルボキサミド）-2’-デオキシウリジンから選択される、
請求項13に記載の抗Ang2アプタマー。
1つ以上の2’修飾ヌクレオチドを含む、
請求項1～14のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーのすべてのヌクレオチドは、2’修飾ヌクレオチドである、
請求項1～15のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記2’修飾ヌクレオチドは、2’-アミノ修飾ヌクレオチド、2’-フルオロ修飾ヌクレオチド、2’-O-メチル修飾ヌクレオチド、および2’-O-（2-メトキシエチル）修飾ヌクレオチドから選択される、
請求項15～16のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
少なくとも1つの2’-フルオロ修飾ヌクレオチド、少なくとも1つの2’-O-メチル修飾ヌクレオチド、および/または少なくとも1つのLNAを含む、
請求項1～17のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーのすべてのシチジンは、2’修飾シチジンである、
請求項1～18のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーのすべてのシチジンは、2’-フルオロ修飾シチジンおよび/または2’-O-メチル修飾シチジンである、
請求項1～19のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーのすべてのシチジンは、2’-デオキシ-2’-フルオロシチジンである、
請求項1～20のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーのすべてのウリジンは、2’修飾ウリジンである、
請求項1～21のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーのすべてのウリジンは、2’-フルオロ修飾ウリジンおよび/または2’-O-メチル修飾ウリジンである、
請求項1～22のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーのすべてのウリジンは、2’-デオキシ-2’-フルオロウリジンである、
請求項1～23のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーのすべてのアデノシンは、2’修飾アデノシンである、
請求項1～24のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーのすべてのアデノシンは、2’-フルオロ修飾アデノシンおよび/または2’-O-メチル修飾アデノシンである、
請求項1～25のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーのすべてのアデノシンは、2’-デオキシ-2’-フルオロアデノシンである、
請求項1～26のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーのすべてのグアノシンは、2’修飾グアノシンである、
請求項1～27のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーのすべてのグアノシンは、2’-フルオロ修飾グアノシンおよび/または2’-O-メチル修飾グアノシンである、
請求項1～28のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーのすべてのグアノシンは、2’-デオキシ-2’-フルオログアノシンである、
請求項1～29のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーのすべてのヌクレオチドは、2’修飾ヌクレオチドである、
請求項1～30のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーのすべてのヌクレオチドは、2’-フルオロ修飾ヌクレオチドおよび/または2’-O-メチル修飾ヌクレオチドである、
請求項1～31のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーのすべてのヌクレオチドは、2’-フルオロ修飾ヌクレオチドである、
請求項1～32のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
いかなる天然ヌクレオチドを含まない、
請求項1～33のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
約10～約150個のヌクレオチドを含む、
請求項1～34のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記Ang2への結合を、5’から3’方向に第1ステム、第1バルジ、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジ、第4ステム、および第1ループを含む二次構造を含む抗Ang2参照アプタマーと競合する、
請求項1～35のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2参照アプタマーは、5’から3’方向に第1ステム、第1バルジ、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジ、第4ステム、および第1ループより構成される二次構造を含む、
請求項36に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2参照アプタマーは、SEQ ID NO: 13～20のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する第1の共通配列を有する、
請求項36～37のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2参照アプタマーは、SEQ ID NO: 21～28のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する第2の共通配列を有する、
請求項36～38のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記第1の共通配列は、前記抗Ang2参照アプタマーにおける前記第1バルジ、前記第2ステム、前記第2バルジ、前記第3ステム、前記第3バルジおよび/または前記第4ステムを形成するヌクレオチド配列に含まれる、
請求項38～39のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記第1の共通配列は、前記抗Ang2参照アプタマーにおける前記第1ループを形成するヌクレオチド配列に含まれない、
請求項38～40のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記第2の共通配列は、前記抗Ang2参照アプタマーにおける前記第1バルジ、前記第2ステム、前記第2バルジ、前記第3ステム、前記第3バルジおよび/または前記第4ステムを形成するヌクレオチド配列に含まれる、
請求項39～41のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記第2の共通配列は、前記抗Ang2参照アプタマーにおける前記第1ループを形成するヌクレオチド配列に含まれない、
請求項39～42のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2参照アプタマーの前記第1ループは、2～30個のヌクレオチドを含む、
請求項36～43のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2参照アプタマーの前記第1ループは、3～10個のヌクレオチドを含む、
請求項36～44のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2参照アプタマーは、SEQ ID NO: 1～12のいずれかで表されるヌクレオチド配列またはその変異体もしくはトランケートを含む、
請求項36～45のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記変異体は、SEQ ID NO: 1～12のいずれかで表されるヌクレオチド配列と少なくとも50%同一のヌクレオチド配列を有する、
請求項46に記載の抗Ang2アプタマー。
前記変異体は、1つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、および/または置換を含む、SEQ ID NO: 1～12のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する、
請求項46～47のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2参照アプタマーは、約10～約150個のヌクレオチドを含む、
請求項36～48のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2参照アプタマーは、前記第1の共通配列および前記第2の共通配列を有し、前記第1の共通配列は、前記第2の共通配列に対して5’に位置する、
請求項38～49のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2参照アプタマーは、前記第1の共通配列および前記第2の共通配列を有し、前記第2の共通配列は、前記第1の共通配列に対して5’に位置する、
請求項38～49のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーは、5’から3’方向に第1ステム、第1バルジ、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジ、第4ステム、および第1ループを含む二次構造を含む、
請求項1～51のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーは、5’から3’方向に第1ステム、第1バルジ、第2ステム、第2バルジ、第3ステム、第3バルジ、第4ステム、および第1ループからなる二次構造を含む、
請求項1～52のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーは、SEQ ID NO: 13～20のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する第1の共通配列を有する、
請求項1～53のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーは、SEQ ID NO: 21～28のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する第2の共通配列を有する、
請求項1～54のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記第1の共通配列は、前記抗Ang2アプタマーにおける前記第1バルジ、前記第2ステム、前記第2バルジ、前記第3ステム、前記第3バルジおよび/または前記第4ステムを形成するヌクレオチド配列に含まれる、
請求項54～55のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記第1の共通配列は、前記抗Ang2アプタマーにおける前記第1ループを形成するヌクレオチド配列に含まれない、
請求項54～56のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記第2の共通配列は、前記抗Ang2アプタマーにおける前記第1バルジ、前記第2ステム、前記第2バルジ、前記第3ステム、前記第3バルジおよび/または前記第4ステムを形成するヌクレオチド配列に含まれる、
請求項55～57のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記第2の共通配列は、前記抗Ang2アプタマーおける前記第1ループを形成するヌクレオチド配列に含まれない、
請求項55～58のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーの前記第1ループは、2～30個のヌクレオチドを含む、
請求項52～59のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーの前記第1ループは、3～10個のヌクレオチドを含む、
請求項52～60のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーは、SEQ ID NO: 1～12のいずれかで表されるヌクレオチド配列またはその変異体もしくはトランケートを含む、
請求項1～61のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記変異体は、SEQ ID NO: 1～12のいずれかで表されるヌクレオチド配列と少なくとも50%同一のヌクレオチド配列を有する、
請求項62に記載の抗Ang2アプタマー。
前記変異体は、1つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、および/または置換を含む、SEQ ID NO: 1～12のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する、
請求項62～63のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーは、前記第1の共通配列および前記第2の共通配列を有し、前記第1の共通配列は、前記第2の共通配列に対して5’に位置する、
請求項54～64のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
前記抗Ang2アプタマーは、前記第1の共通配列および前記第2の共通配列を有し、前記第2の共通配列は、前記第1の共通配列に対して5’に位置する、
請求項54～64のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー。
請求項1～66のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマーを含むものであって、前記抗Ang2アプタマーは、ポリエチレングリコール（PEG）部分に抱合されている、
薬剤。
少なくとも1つのPEG部分は、前記抗Ang2アプタマーの5’末端に抱合されている、
請求項67に記載の薬剤。
少なくとも1つのPEG部分は、前記抗Ang2アプタマーの3’末端に抱合されている、
請求項67～68のいずれか一項に記載の薬剤。
VEGF-121に約20ナノモル（nM）以下のKD値で結合しVEGF-165に約20ナノモル（nM）以下のKD値で結合する、
抗VEGFアプタマー。
VEGF-121に約2ナノモル（nM）以下のKD値で結合する、
請求項70に記載の抗VEGFアプタマー。
VEGF-165に約2ナノモル（nM）以下のKD値で結合する、
請求項70～71のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記VEGF-121は、ヒトVEGF-121、マウスVEGF-120、サルVEGF-121、ウサギVEGF-121、および/またはラットVEGF-120である、
請求項70～72のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記VEGF-165は、ヒトVEGF-165、マウスVEGF-164、サルVEGF-165、ウサギVEGF-165、および/またはラットVEGF-164である、
請求項70～73のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
VEGF-121のVEGF受容体結合ドメインおよびVEGF-165のVEGF受容体結合ドメインの両方に特異的に結合する、
請求項70～74のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記VEGF-121のVEGF受容体結合ドメインは、SEQ ID NO: 30～34、40、41、および45のいずれか1つで表されるアミノ酸配列を有する、
請求項75に記載の抗VEGFアプタマー。
前記VEGF-165のVEGF受容体結合ドメインは、SEQ ID NO: 30～34、40、および41のいずれか1つで表されるアミノ酸配列を有する、
請求項75～76のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記VEGF-121とVEGF-R1間の相互作用を阻害する、
請求項70～77のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記VEGF-121とVEGF-R2間の相互作用を阻害する、
請求項70～78のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記VEGF-165とVEGF-R1間の相互作用を阻害する、
請求項70～79のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記VEGF-165とVEGF-R2間の相互作用を阻害する、
請求項70～80のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
レーザー誘発性脈絡膜血管新生（CNV）ラットモデルにおいて、病変および/または漏出を軽減および/または改善することが可能である、
請求項70～81のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
高度に可溶である、
請求項70～82のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
RNAアプタマー、DNAアプタマー、またはそれらの組み合わせである、
請求項70～83のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
ヌクレアーゼに対して耐性である、
請求項70～84のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
1つ以上の修飾ヌクレオチド、および/または1つ以上の置換（1つ以上のPEGによる置換など）を含み、例えば、前記抗VEGFアプタマーの1つ以上の（例えば、1～20、1～19、1～18、1～17、1～16、1～15、1～14、1～13、1～12、1～11、1～10、1～9、1～8、1～7、1～6、1～5、1～4、1～3、または1～2）ヌクレオチドは、ポリエチレングリコール部分または複数（例えば、1～10、1～9、1～8、1～7、1～6、1～5、1～4、1～3、または1～2）のポリエチレングリコール部分を含むリンカーで置換されてよく、ある場合には、リンカーは、ヘキサエチレングリコール（HまたはPEG6）リンカーであってもよく、このような置換は、前記抗VEGFアプタマーの活性（例えば、結合活性または阻害活性）および/または機能に実質的に影響を与えない限り、前記抗VEGFアプタマーの任意のヌクレオチドで起こり得、ある場合には、前記置換は、前記抗VEGFアプタマーの二次構造に実質的に影響を与えなく、例えば、前記置換は、前記抗VEGFアプタマーの二次構造のバルジまたはループ領域に含まれるヌクレオチドで起こり得、ある場合には、前記置換は、前記抗VEGFアプタマーの二次構造のステム領域に含まれる任意のヌクレオチドで起こさない、
請求項70～85のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーのすべてのヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドである、
請求項86に記載の抗VEGFアプタマー。
前記修飾ヌクレオチドは、リボース位置、デオキシリボース位置、リン酸位置、および塩基位置から独立して選ばれる1つ以上の位置における化学的置換または修飾を含む、
請求項86～87のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記修飾ヌクレオチドは、2’位糖修飾、2’-アミノ（2’-NH₂）修飾、2’-フルオロ（2’-F）修飾、2’-O-メチル（2’-OMe）修飾、2’-O-（2-メトキシエチル）（2’-O-MOE）修飾、5位修飾ピリミジン、シトシン環外アミンにおける修飾、5’-ブロモウラシルによる置換、5’-ブロモデオキシウリジンによる置換、5’-ブロモデオキシシチジンによる置換、骨格修飾、ロック核酸（LNA）、メチル化、3’キャップ、および5’キャップから独立して選ばれる1つ以上の修飾を含む、
請求項86～88のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記5位修飾ピリミジンは、5-カルボキシ-2’-デオキシウリジン、5-アミノアリル-2’-デオキシウリジン、5-[（3-インドリル）プロピオンアミド-N-アリル]-2’-デオキシウリジン、5-カルボキシ-2’-デオキシシチジン、5-アミノアリル-2’-デオキシシチジン、ビオチン-16-アミノアリル-2’-デオキシシチジン、5-（N-ベンジルカルボキシアミド）-2’-デオキシウリジン、5-（N-イソブチルカルボキシアミド）-2’-デオキシウリジン、5-（N-ナフチルメチルカルボキシアミド）-2’-デオキシウリジン、および5-（N-トリプタミノカルボキサミド）-2’-デオキシウリジンから選択される、
請求項89に記載の抗VEGFアプタマー。
少なくとも1つの2’修飾ヌクレオチドを含む、
請求項70～90のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーのすべてのヌクレオチドは、2’修飾ヌクレオチドである、
請求項91に記載の抗VEGFアプタマー。
前記2’修飾ヌクレオチドは、2’-アミノ修飾ヌクレオチド、2’-フルオロ修飾ヌクレオチド、2’-O-メチル修飾ヌクレオチド、および2’-O-（2-メトキシエチル）修飾ヌクレオチドから選択される、
請求項91～92のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
少なくとも1つの2’-フルオロ修飾ヌクレオチド、少なくとも1つの2’-O-メチル修飾ヌクレオチド、および/または少なくとも1つのLNAを含む、
請求項70～93のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーのすべてのシチジンは、2’修飾シチジンである、
請求項70～94のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーのすべてのシチジンは、2’-フルオロ修飾シチジンおよび/または2’-O-メチル修飾シチジンである、
請求項70～95のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーのすべてのシチジンは、2’-デオキシ-2’-フルオロシチジンである、
請求項70～96のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーのすべてのウリジンは、2’修飾ウリジンである、
請求項70～97のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーのすべてのウリジンは、2’-フルオロ修飾ウリジンおよび/または2’-O-メチル修飾ウリジンである、
請求項70～98のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーのすべてのウリジンは、2’-デオキシ-2’-フルオロウリジンである、
請求項70～99のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーのすべてのアデノシンは、2’修飾アデノシンである、
請求項70～100のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーのすべてのアデノシンは、2’-フルオロ修飾アデノシンおよび/または2’-O-メチル修飾アデノシンである、
請求項70～101のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーのすべてのアデノシンは、2’-デオキシ-2’-フルオロアデノシンである、
請求項70～102のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーのすべてのグアノシンは、2’修飾グアノシンである、
請求項70～103のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーのすべてのグアノシンは、2’-フルオロ修飾グアノシンおよび/または2’-O-メチル修飾グアノシンである、
請求項70～104のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーのすべてのグアノシンは、2’-デオキシ-2’-フルオログアノシンである、
請求項70～105のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーのすべてのヌクレオチドは、2’修飾ヌクレオチドである、
請求項70～106のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーのすべてのヌクレオチドは、2’-フルオロ修飾ヌクレオチドおよび/または2’-O-メチル修飾ヌクレオチドである、
請求項70～107のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーのすべてのヌクレオチドは、2’-フルオロ修飾ヌクレオチドである、
請求項70～108のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーは、いかなる天然ヌクレオチドを含まない、
請求項70～109のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
約10～約150個のヌクレオチドを含む、
請求項70～110のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーは、前記VEGF-165および前記VEGF-121への結合を、5’から3’方向に第1ステム、第1ループ、第2ステムおよび第2ループを含む二次構造を含む抗VEGF参照アプタマーと競合する、
請求項70～111のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGF参照アプタマーは、5’から3’方向に第1ステム、第1ループ、第2ステムおよび第2ループより構成される二次構造を含む、
請求項112に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGF参照アプタマーは、SEQ ID NO: 136～137のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する第1の共通配列を有する、
請求項112～113のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGF参照アプタマーは、SEQ ID NO: 138～139のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する第2の共通配列を有する、
請求項112～114のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記第1の共通配列は、前記抗VEGF参照アプタマーにおける前記第1ステムおよび/または前記第1ループを形成するヌクレオチド配列を有する、
請求項114～115のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記第1の共通配列は、前記抗VEGF参照アプタマーにおける前記第2ステムまたは前記第2ループを形成するヌクレオチド配列に含まれない、
請求項114～116のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記第2の共通配列は、前記抗VEGF参照アプタマーにおける前記第2ステムおよび前記第2ループを形成するヌクレオチド配列を有する、
請求項115～117のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記第2の共通配列は、前記抗VEGF参照アプタマーにおける前記第1ステムまたは前記第1ループを形成するヌクレオチド配列に含まれない、
請求項115～118のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGF参照アプタマーは、SEQ ID NO: 46～135、SEQ ID NO: 200～201のいずれかで表されるヌクレオチド配列またはその変異体もしくはトランケートを含む、
請求項112～119のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記変異体は、SEQ ID NO: 46～135、SEQ ID NO: 200～201のいずれかで表されるヌクレオチド配列と少なくとも50%同一のヌクレオチド配列を有する、
請求項120に記載の抗VEGFアプタマー。
前記変異体は、1つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、および/または置換を含む、SEQ ID NO: 46～135、SEQ ID NO: 200～201のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する、
請求項120～121のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGF参照アプタマーは、約10～約150個のヌクレオチドを含む、
請求項112～122のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGF参照アプタマーは、前記第1の共通配列および前記第2の共通配列を有し、前記第1の共通配列は、前記第2の共通配列に対して5’に位置する、
請求項114～123のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGF参照アプタマーは、前記第1の共通配列および前記第2の共通配列を有し、前記第2の共通配列は、前記第1の共通配列に対して5’に位置する、
請求項114～123のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーは、5’から3’方向に第1ステム、第1ループ、第2ステムおよび第2ループを含む二次構造を含む、
請求項70～125のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーは、5’から3’方向に第1ステム、第1ループ、第2ステムおよび第2ループからなる二次構造を含む、
請求項70～126のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーは、SEQ ID NO: 136～137のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する第1の共通配列を有する、
請求項70～127のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーは、SEQ ID NO: 138～139のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する第2の共通配列を有する、
請求項70～128のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記第1の共通配列は、前記抗VEGFアプタマーにおける前記第1ステムおよび前記第1ループを形成するヌクレオチド配列を有する、
請求項128～129のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記第1の共通配列は、前記抗VEGFアプタマーにおける前記第2ステムまたは前記第2ループを形成するヌクレオチド配列に含まれない、
請求項128～130のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記第2の共通配列は、前記抗VEGFアプタマーにおける前記第2ステムおよび前記第2ループを形成するヌクレオチド配列を有する、
請求項129～131のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記第2の共通配列は、前記抗VEGFアプタマーにおける前記第1ステムまたは前記第1ループを形成するヌクレオチド配列に含まれない、
請求項129～132のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーは、SEQ ID NO: 46～135、SEQ ID NO: 200～201のいずれかで表されるヌクレオチド配列またはその変異体もしくはトランケートを含む、
請求項70～133のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記変異体は、SEQ ID NO: 46～135、SEQ ID NO: 200～201のいずれかで表されるヌクレオチド配列と少なくとも50%同一のヌクレオチド配列を有する、
請求項134に記載の抗VEGFアプタマー。
前記変異体は、1つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、および/または置換を含む、SEQ ID NO:46～135、SEQ ID NO: 200～201のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する、
請求項134～135のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーは、前記第1の共通配列および前記第2の共通配列を有し、前記第1の共通配列は、前記第2の共通配列に対して5’に位置する、
請求項128～136のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
前記抗VEGFアプタマーは、前記第1の共通配列および前記第2の共通配列を有し、前記第2の共通配列は、前記第1の共通配列に対して5’に位置する、
請求項128～136のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー。
請求項70～138のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマーを含むものであって、前記抗VEGFアプタマーは、ポリエチレングリコール（PEG）部分に抱合される、
薬剤。
少なくとも1つのPEG部分は、前記抗VEGFアプタマーの5’末端に抱合される、
請求項139に記載の薬剤。
少なくとも1つのPEG部分は、前記抗VEGFアプタマーの3’末端に抱合される、
請求項139～140のいずれか一項に記載の薬剤。
請求項1～69のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー、および請求項70～141のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマーを含む、
二重特異的アプタマー。
式A1-（L）n-A2を有するものであって、ここで、
A1が前記抗VEGFアプタマー、A2が前記抗Ang2アプタマーであるか、またはA1が前記抗Ang2アプタマー、A2が前記抗VEGFアプタマーであり、
Lがリンカーであり、そして
nが少なくとも0の数である、
請求項142に記載の二重特異的アプタマー。
VEGFとAng2の両方に特異的に結合することができる、
請求項142～143のいずれか一項に記載の二重特異的アプタマー。
VEGF-121に約500 pM以下のKD値で特異的に結合し、Ang2に約500 pM以下のKD値で結合する、
請求項142～144のいずれか一項に記載の二重特異的アプタマー。
VEGF-121に約200 pM以下のKD値で結合し、Ang2に約200 pM以下のKD値で結合する、
請求項142～145のいずれか一項に記載の二重特異的アプタマー。
VEGF-121に約100 pM以下のKD値で結合し、Ang2に約100 pM以下のKD値で結合する、
請求項142～146のいずれか一項に記載の二重特異的アプタマー。
nは、0～20である、
請求項143～147のいずれか一項に記載の二重特異的アプタマー。
nは、0～10である、
請求項143～148のいずれか一項に記載の二重特異的アプタマー。
Lは、天然に存在するヌクレオチドリンカー、修飾ヌクレオチドリンカー、炭化水素リンカー、ポリエチレングリコールリンカーおよびそれらの組み合わせから選択される、
請求項143～149のいずれか一項に記載の二重特異的アプタマー。
Lの少なくとも1つは、ポリエチレングリコールリンカーである、
請求項143～150のいずれか一項に記載の二重特異的アプタマー。
Lの少なくとも1つは、ヘキサエチレングリコールリンカーである、
請求項143～151のいずれか一項に記載の二重特異的アプタマー。
Lはヘキサエチレングリコールリンカー、nは0～10である、
請求項143～152のいずれか一項に記載の二重特異的アプタマー。
A1は、SEQ ID NO: 46～135、SEQ ID NO: 200～201のいずれかで表されるヌクレオチド配列またはその変異体もしくはトランケートを有する抗VEGFアプタマーであり、A2は、SEQ ID NO: 1～12のいずれかで表されるヌクレオチド配列またはその変異体もしくはトランケートを有する抗Ang2アプタマーである、
請求項143～153のいずれか一項に記載の二重特異的アプタマー。
A1は、SEQ ID NO: 1～12のいずれかで表されるヌクレオチド配列またはその変異体もしくはトランケートを有する抗Ang2アプタマーであり、A2は、SEQ ID NO: 46～135、SEQ ID NO: 200～201のいずれかで表されるヌクレオチド配列またはその変異体もしくはトランケートを有する抗VEGFアプタマーである、
請求項143～154のいずれか一項に記載の二重特異的アプタマー。
1）A1は、SEQ ID NO: 83で表されるヌクレオチド配列またはそのトランケートを有する抗VEGFアプタマーであり、A2は、SEQ ID NO: 2で表されるヌクレオチド配列またはそのトランケートを有する抗Ang2アプタマーであり、Lはヘキサエチレングリコールリンカーであり、nは0～10であり；
2）A1は、SEQ ID NO: 128で表されるヌクレオチド配列またはそのトランケートを有する抗VEGFアプタマーであり、A2は、SEQ ID NO: 6で表されるヌクレオチド配列またはそのトランケートを有する抗Ang2アプタマーであり、Lはヘキサエチレングリコールリンカーであり、nは0～10であり；
3）A1は、SEQ ID NO: 2で表されるヌクレオチド配列またはそのトランケートを有する抗Ang2アプタマーであり、A2は、SEQ ID NO: 83で表されるヌクレオチド配列またはそのトランケートを有する抗VEGFアプタマーであり、Lはヘキサエチレングリコールリンカーであり、nは0～10であり；または
4）A1は、SEQ ID NO: 6で表されるヌクレオチド配列またはそのトランケートを有する抗Ang2アプタマーであり、A2は、SEQ ID NO: 128で表されるヌクレオチド配列またはそのトランケートを有する抗VEGFアプタマーであり、Lはヘキサエチレングリコールリンカーであり、nは0～10である、
請求項143～155のいずれか一項に記載の二重特異的アプタマー。
r-AMSB107.0、r-AMSB108.0、r-AMSB107.1、r-AMSB107.2、r-AMSB107、r-AMSB107.4、r-AMSB107.5、r-AMSB107.6、r-AMSB107.7、r-AMSB107.8、r-AMSB107.9、r-AMSB107.10、r-AMSB107.11、r-AMSB107.12、r-AMSB107.13、r-AMSB107.14、r-AMSB107.15、r-AMSB107.16、r-AMSB107.17、r-AMSB107.18、r-AMSB107.19、r-AMSB107.22、r-AMSB107.23、r-AMSB107.24、r-AMSB107.25、r-AMSB107.26、r-AMSB107.27、AMSB107.0、AMSB108.0、AMSB107.1、AMSB107.2、AMSB107、AMSB107.4、AMSB107.5、AMSB107.6、AMSB107.7、AMSB107.8、AMSB107.9、AMSB107.10、AMSB107.11、AMSB107.12、AMSB107.13、AMSB107.14、AMSB107.15、AMSB107.16、AMSB107.17、AMSB107.18、AMSB107.19、AMSB107.20、AMSB107.21、AMSB107.22、AMSB107.23、AMSB107.24、AMSB107.25、AMSB107.26、AMSB107.P6、AMSB107.P40K、AMSB107PおよびAMSB107.27から選択される、
請求項142～156のいずれか一項に記載の二重特異的アプタマー。
SEQ ID NO: 140～195、SEQ ID NO: 202～204のいずれかで表されるヌクレオチド配列を有する、
請求項142～157のいずれか一項に記載の二重特異的アプタマー。
請求項1～69のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー、請求項70～141のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー、および/または請求項142～158のいずれか一項に記載の二重特異的アプタマーを含む、
組成物。
医薬組成物である、
請求項159に記載の組成物。
薬学的に許容される賦形剤または担体を含む、
請求項159～160のいずれか一項に記載の組成物。
血管新生疾患、障害または病状の治療に使用される、
請求項159～161のいずれか一項に記載の組成物。
前記血管新生疾患、障害または病状は、眼内血管新生疾患、障害または病状である、
請求項162に記載の組成物。
前記血管新生疾患、障害または病状は、加齢黄斑変性、脈絡膜血管新生、糖尿病黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、および糖尿病網膜症から選択される、
請求項162～163のいずれか一項に記載の組成物。
前記血管新生疾患、障害または病状は、湿性加齢黄斑変性、近視性脈絡膜血管新生、および増殖性糖尿病網膜症から選択される、
請求項162～164のいずれか一項に記載の組成物。
請求項1～69のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマーの有効量、請求項70～141のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマーの有効量、請求項142～158のいずれか一項に記載の二重特異的アプタマーの有効量、および/または請求項159～165のいずれか一項に記載の組成物の有効量を、それを必要とする被験者に投与することを含む、
血管新生疾患、障害または病状を治療するための方法。
前記血管新生疾患、障害または病状は、眼内血管新生疾患、障害または病状である、
請求項166に記載の方法。
前記血管新生疾患、障害または病状は、加齢黄斑変性、脈絡膜血管新生、糖尿病黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、および糖尿病網膜症から選択される、
請求項166～167のいずれか一項に記載の方法。
前記血管新生疾患、障害または病状は、湿性加齢黄斑変性、近視性脈絡膜血管新生、および増殖性糖尿病網膜症から選択される、
請求項166～168のいずれか一項に記載の方法。
血管新生疾患、障害または病状を治療するための医薬品の製造における請求項1～69のいずれか一項に記載の抗Ang2アプタマー、請求項70～141のいずれか一項に記載の抗VEGFアプタマー、請求項142～158のいずれか一項に記載の二重特異的アプタマー、および/または請求項159～165のいずれか一項に記載の組成物の使用。
前記血管新生疾患、障害または病状は、眼内血管新生疾患、障害または病状である、
請求項170に記載の使用。
前記血管新生疾患、障害または病状は、加齢黄斑変性、脈絡膜血管新生、糖尿病黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症、および糖尿病網膜症から選択される、
請求項170～171のいずれか一項に記載の使用。
前記血管新生疾患、障害または病状は、湿性加齢黄斑変性、近視性脈絡膜血管新生、および増殖性糖尿病網膜症から選択される、
請求項170～172のいずれか一項に記載の使用。