TW202146653A - 適體及其用途 - Google Patents

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琴 楊
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Abstract

本公開提供了抗VEGF適體、包含抗VEGF適體的劑或組成物及其用途。

Description

適體及其用途
本發明係關於抗VEGF適體、抗Ang2適體、雙特異性適體和包含抗VEGF適體和/或抗Ang2適體的組成物及其用途。
新生血管形成(NV)和血管滲漏是多種新生血管性視網膜疾病諸如糖尿病性黃斑水腫(DME)、濕性年齡相關性黃斑變性(AMD)和糖尿病性視網膜病(DR)的標誌。
VEGF在調節血管生成和血管通透性方面起著關鍵作用，血管生成是眼部血管新生(ocular NV)的主要機制，血管通透性決定了滲漏的程度，因此是多種疾病的有效靶點。
大量研究證明，Ang2/Tie2途徑是VEGF的重要補充作用者，作為治療多種疾病(諸如視網膜疾病)的新型靶點具有巨大潛力。據報導，Tie2是血管生成素-1(Ang1)和血管生成素-2(Ang2)的酪胺酸激酶受體，位於血管內皮細胞表面。Ang2僅在病理條件下表達。其藉由促進血管通透性和刺激促血管生成細胞因子的分泌來補充VEGF的功能，該促血管生成細胞因子是VEGF誘導的眼部NV和血管滲漏所必需的。
目前的抗VEGF藥物儘管取得了成功，但效力和持續時間仍然有限。增加抗VEGF劑的劑量可以提高藥物的效力和持續時間。核酸適體具有高溶解度和小分子量(~15kDa)，因此可以獲得高得多的莫耳劑量。
然而，以前的抗VEGF適體，例如Macugen®不能實現這一潛力。Macugen®不能識別所有VEGFA同種型，因此效力較低。因此，迫切需要開發比現有技術更有效的適體
目前需要開發靶向VEGF和/或Ang2的適體，其具有更高的特異性、親和力和/或更有效。
本公開提供了抗VEGF適體、抗Ang2適體、雙特異性適體和包含抗VEGF適體和/或抗Ang2適體的組成物及其用途。
本公開中提供的抗VEGF適體能夠實現以下方面中的至少一個方面：1)結合所有VEGF同種型(例如VEGF-121、VEGF-165和VEGF-189)，其中KD值為約20奈莫耳(nM)或更小；2)形成特定的二級結構，其從5’至3’方向包含第一莖、第一環、第二莖和第二環；3)以高達200mg/ml或更高的濃度配製；4)具有核酸酶抗性；5)與不同物種的VEGF同種型，諸如人VEGF、小鼠VEGF、大鼠VEGF、兔VEGF和猴VEGF結合；6)抑制VEGF與VEGF受體之間的相互作用；以及7)預防、治療和/或改善新生血管疾病、紊亂或病況。
本公開中提供的抗Ang2適體能夠實現以下方面中的至少一個方面：1)與Ang2結合，其中KD約為500皮莫耳(pM)或更小；2)基本上不與人Ang1結合；3)形成特定的二級結構，其從5’至3’方向包含第一莖、第一凸出、第二 莖、第二凸出、第三莖、第三凸出、第四莖和第一環；4)與人Ang2和小鼠Ang2結合；5)具有核酸酶抗性；6)抑制Ang2與Tie2之間的相互作用；以及7)預防、治療和/或改善新生血管疾病、紊亂或病況。
本公開中提供的雙特異性適體和/或組成物能夠具有以下方面中的至少一個方面：1)結合所有的VEGFA同種型(例如VEGF-121、VEGF-165和VEGF-189)，其KD值為約20奈莫耳(nM)或更小；2)與Ang2結合，其中KD值約為500皮莫耳(pM)或更小；3)具有核酸酶抗性；4)抑制Ang2與Tie2之間的相互作用；5)抑制VEGF和VEGF受體之間的相互作用；以及6)預防、治療和/或改善新生血管疾病、紊亂或病況。
抗VEGF適體
一方面，本公開提供了抗VEGF適體，其與VEGF-121結合，其中KD值約為20奈莫耳(nM)或更小，並與VEGF-165結合，其中KD值約為20奈莫耳(nM)或更小。
在一些實施方案中，抗VEGF適體與VEGF-121結合，其中KD值約為2奈莫耳(nM)或更小。在一些實施方案中，抗VEGF適體與VEGF-165結合，其中KD值約為2奈莫耳(nM)或更小。
在一些實施方案中，VEGF-121是人VEGF-121、小鼠VEGF-120、猴VEGF-121、兔VEGF-121和/或大鼠VEGF-120。在一些實施方案中，VEGF-165是人VEGF-165、小鼠VEGF-164、猴VEGF-165、兔VEGF-165和/或大鼠VEGF-164。在一些實施方案中，抗VEGF適體與VEGF-189，諸如兔VEGF-189結合。
在一些實施方案中，抗VEGF適體特異性結合VEGF-121或其片段的VEGF受體結合結構域和VEGF-165或其片段的VEGF受體結合結構域。
在一些實施方案中，VEGF-121的VEGF受體結合結構域包含如SEQ ID NO：30-34、40、41和45中的任一個所示的胺基酸序列。在一些實施方案中，VEGF-165的VEGF受體結合結構域包含如SEQ ID NO：30-34、40和41中任一個所示的胺基酸序列。
在一些實施方案中，抗VEGF適體抑制該VEGF-121與VEGF-R1之間的相互作用。在一些實施方案中，抗VEGF適體抑制該VEGF-121與VEGF-R2之間的相互作用。
在一些實施方案中，抗VEGF適體抑制該VEGF-165與VEGF-R1之間的相互作用。在一些實施方案中，抗VEGF適體抑制該VEGF-165與VEGF-R2之間的相互作用。
在一些實施方案中，抗VEGF適體能夠減少和/或改善鐳射誘導脈絡膜新血管形成(CNV)大鼠模型中的損傷和/或滲漏。
在一些實施方案中，抗VEGF適體能夠減少和/或改善非人靈長類動物(NHP)鐳射誘導CNV模型中的損傷和/或滲漏。
在一些實施方案中，抗VEGF適體是高度可溶的。
在一些實施方案中，抗VEGF適體是RNA適體、DNA適體或其組合。在一些實施方案中，抗VEGF適體包含一個或多個經修飾的核苷酸。在一些實施方案中，抗VEGF適體具有核酸酶抗性。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有核苷酸都是經修飾的核苷酸。在一些實施方案中，這種經修飾的核苷酸在一個或多個獨立選自核糖位置、去氧核糖位置、磷酸位置和鹼基位置的位置包 含化學取代或修飾。在一些實施方案中，該經修飾的核苷酸包括一個或多個修飾，該修飾獨立地選自2’-位糖修飾、2’-胺基(2’-NH2)修飾、2’-氟(2’-F)修飾、2’-O-甲基(2’-OMe)修飾、2’-O-(2-甲氧基乙基)(2’-O-MOE)修飾、5-位修飾的嘧啶、胞嘧啶外環胺處的修飾、5’-溴尿嘧啶取代、5’-溴去氧尿苷取代、5’-溴去氧胞苷取代、骨架修飾、鎖核酸(LNA)、甲基化、3’帽和5’帽。在一些實施方案中，5-位修飾的嘧啶選自5-羧基-2’-去氧尿苷、5-胺基烯丙基-2’-去氧尿苷、5-[(3-吲哚基)丙醯胺-N-烯丙基]-2’-去氧尿苷、5-羧基-2’-去氧胞苷、5-胺基烯丙基-2’-去氧胞苷、生物素-16-胺基烯丙基-2’-去氧胞苷、5-(N-苄基羧醯胺)-2’-去氧尿苷、5-(N-異丁基羧醯胺)-2’-去氧尿苷、5-(N-萘基甲基羧醯胺)-2’-去氧尿苷和5-(N-色胺羧醯胺基)-2’-去氧尿苷。
在一些實施方案中，抗VEGF適體包含至少一個2’-修飾的核苷酸。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有核苷酸均為2’-修飾的核苷酸。在一些實施方案中，2’-修飾的核苷酸選自2’-胺基修飾的核苷酸、2’-氟修飾的核苷酸、2’-O-甲基修飾的核苷酸和2’-O-(2-甲氧基乙基)修飾的核苷酸。在一些實施方案中，適體包含至少一個2’-氟修飾的核苷酸、至少一個2’-O-甲基修飾的核苷酸和/或至少一個LNA。
在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有胞苷都是2’-修飾的胞苷。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有胞苷是2’-氟修飾的胞苷和/或2’-O-甲基修飾的胞苷。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有胞苷都是2’-去氧-2’-氟胞苷。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有尿苷都是2’-修飾的尿苷。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有尿苷是2’-氟修飾的尿苷和/或2’-O-甲基修飾的尿苷。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有尿苷都是2’-去氧-2’- 氟尿苷。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有腺苷都是2’-修飾的腺苷。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有腺苷都是2’-氟修飾的腺苷和/或2’-O-甲基修飾的腺苷。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有腺苷都是2’-去氧-2’-氟腺苷。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有鳥苷都是2’-修飾的鳥苷。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有鳥苷都是2’-氟修飾的鳥苷和/或2’-O-甲基修飾的鳥苷。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有鳥苷都是2’-去氧-2’-氟鳥苷。
在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有核苷酸都是2’-氟修飾的核苷酸和/或2’-O-甲基修飾的核苷酸。
在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有核苷酸都是2’-氟修飾的核苷酸。
在一些實施方案中，抗VEGF適體不包含任何天然核苷酸。
在一些實施方案中，抗VEGF適體包含約10個至約150個核苷酸。
在一些實施方案中，抗VEGF適體與抗VEGF參考適體競爭與VEGF-165和/或VEGF-121的結合，其中抗VEGF參考適體包含二級結構，該二級結構包含(例如，從5’至3’方向)第一莖、第一環、第二莖和第二環。
在一些實施方案中，抗VEGF參考適體包含由(例如，從5’至3’方向)第一莖、第一環、第二莖和第二環組成的二級結構。
在一些實施方案中，抗VEGF參考適體包含第一共有序列，該第一共有序列包含如SEQ ID NO：136-137中的任一個所示的核苷酸序列。在一些 實施方案中，抗VEGF參考適體包含第二共有序列，該第二共有序列包含如SEQ ID NO：138-139中的任一個所示的核苷酸序列。
在一些實施方案中，第一共有序列包含形成抗VEGF參考適體的第一莖和第一環的核苷酸序列。在一些實施方案中，第一共有序列不包含在形成抗VEGF參考適體的第二莖或第二環的核苷酸序列中。在一些實施方案中，第二共有序列包含形成抗VEGF參考適體的第二莖和第二環的核苷酸序列。在一些實施方案中，第二共有序列不包含在形成抗VEGF參考適體的第一莖或第一環的核苷酸序列中。
在一些實施方案中，抗VEGF參考適體包含如SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列或其變體或截短形式。在一些實施方案中，變體包含與SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列具有至少50%同一性的核苷酸序列。在一些實施方案中，變體包含具有一個或多個核苷酸添加、缺失和/或取代的如SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列。在一些實施方案中，抗VEGF參考適體包含約10個至約150個核苷酸。
在一些實施方案中，抗VEGF參考適體包含第一共有序列和第二共有序列，並且該第一共有序列位於該第二共有序列的5’。
在實施方案中，抗VEGF參考適體包含第一共有序列和第二共有序列，並且該第二共有序列位於該第一共有序列的5’。
在一些實施方案中，抗VEGF適體包含二級結構，該二級結構包含(例如，從5’至3’方向)第一莖、第一環、第二莖和第二環。在一些實施方案中， 抗VEGF適體包含(例如，從5’至3’方向)由第一莖、第一環、第二莖和第二環組成的二級結構。
在一些實施方案中，該抗VEGF適體包含第一共有序列，該第一共有序列包含如SEQ ID NO：136-137中的任一個所示的核苷酸序列。在一些實施方案中，抗VEGF適體包含第二共有序列，該第二共有序列包含如SEQ ID NO：138-139中的任一個所示的核苷酸序列。
在一些實施方案中，第一共有序列包含形成抗VEGF適體的第一莖和第一環的核苷酸序列。在一些實施方案中，第一共有序列不包含在形成抗VEGF適體的第二莖或第二環的核苷酸序列中。在一些實施方案中，第二共有序列包含形成抗VEGF適體的第二莖和第二環的核苷酸序列。在一些實施方案中，第二共有序列不包含在形成抗VEGF適體的第一莖或第一環的核苷酸序列中。
在一些實施方案中，抗VEGF適體包含如SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列，或其變體或截短形式。在一些實施方案中，變體包含與SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列具有至少50%同一性的核苷酸序列。在一些實施方案中，變體包含具有一個或多個核苷酸添加、缺失和/或取代的如SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列。
在一些實施方案中，抗VEGF適體包含第一共有序列和第二共有序列，並且該第一共有序列位於該第二共有序列的5’。在一些實施方案中，抗VEGF適體包含第一共有序列和第二共有序列，並且該第二共有序列位於該第一共有序列的5’。
在一些實施方案中，抗VEGF適體用於調節VEGF或VEGF受體的生物活性。
在一些實施方案中，抗VEGF適體用於預防、治療和/或改善VEGF相關的疾病、紊亂或病況。在一些實施方案中，VEGF相關疾病、紊亂或病況是新生血管疾病、紊亂或病況。在一些實施方案中，VEGF相關疾病、紊亂或病況是眼部新生血管疾病、紊亂或病況。在一些實施方案中，VEGF相關疾病、紊亂或病況選自年齡相關性黃斑變性、脈絡膜新生血管形成、糖尿病性黃斑水腫、視網膜靜脈阻塞和糖尿病性視網膜病。在一些實施方案中，VEGF相關疾病、紊亂或病況選自濕性年齡相關性黃斑變性、近視性脈絡膜新生血管形成和增生性糖尿病性視網膜病。
一方面，本公開提供了包含本公開的抗VEGF適體的抗VEGF劑。在一些實施方案中，抗VEGF劑還步包含聚乙二醇(PEG)部分。在一些實施方案中，PEG部分綴合於適體的5’末端。
一方面，本公開提供了組成物，其包含本公開的抗VEGF適體或抗VEGF劑。
在一些實施方案中，組成物是醫藥組成物。在一些實施方案中，組成物包含藥學上可接受的賦形劑或載體。在一些實施方案中，組成物包含治療有效量的抗VEGF適體或抗VEGF劑。
一方面，本公開提供了用於調節VEGF和/或VEGF受體的生物活性的方法，其包括向有此需要的受試者施用有效量的本公開的抗VEGF適體或抗VEGF劑。
一方面，本公開提供了用於預防、治療和/或改善VEGF相關疾病、紊亂或病況的方法，其包括向有此需要的受試者施用有效量的本公開的抗VEGF適體或抗VEGF劑。在一些實施方案中，VEGF相關疾病、紊亂或病況是新生血管疾病、紊亂或病況。在一些實施方案中，VEGF相關疾病、紊亂或病況是眼部新生血管疾病、紊亂或病況。在一些實施方案中，VEGF相關疾病、紊亂或病況選自年齡相關性黃斑變性、脈絡膜新生血管形成、糖尿病性黃斑水腫、視網膜靜脈阻塞和糖尿病性視網膜病。在一些實施方案中，VEGF相關疾病、紊亂或病況選自濕性年齡相關性黃斑變性、近視性脈絡膜新生血管形成和增生性糖尿病性視網膜病。
一方面，本公開提供了本公開的抗VEGF適體或抗VEGF劑在製備用於調節VEGF或VEGF受體的生物活性的劑方面的用途。
一方面，本公開提供了本公開的抗VEGF適體或抗VEGF劑在製備用於預防、治療和/或改善VEGF相關疾病、紊亂或病況的藥物方面的用途。在一些實施方案中，VEGF相關疾病、紊亂或病況是新生血管疾病、紊亂或病況。在一些實施方案中，VEGF相關疾病、紊亂或病況是眼部新生血管疾病、紊亂或病況。在一些實施方案中，VEGF相關疾病、紊亂或病況選自年齡相關性黃斑變性、脈絡膜新生血管形成、糖尿病性黃斑水腫、視網膜靜脈阻塞和糖尿病性視網膜病。在一些實施方案中，VEGF相關疾病、紊亂或病況選自濕性年齡相關性黃斑變性、近視性脈絡膜新生血管形成和增生性糖尿病性視網膜病。
抗Ang2適體
一方面，本公開提供了與Ang2特異性結合的抗Ang2適體，其中KD值約為500皮莫耳(pM)或更小。
在一些實施方案中，抗Ang2適體與Ang2結合，其中KD值約為100皮莫耳(pM)或更小。
在一些實施方案中，Ang2是人Ang2、小鼠Ang2、猴Ang2、兔Ang2和/或大鼠Ang2。
在一些實施方案中，抗Ang2適體基本上不與人Ang1結合。
在一些實施方案中，抗Ang2適體抑制Ang2與Tie2之間的相互作用。
在一些實施方案中，抗Ang2適體能夠在小鼠氧誘導的缺血性視網膜病(OIR)模型中減少新生血管形成並且/或者減少血管通透性。
在一些實施方案中，抗Ang2適體是高度可溶的。
在一些實施方案中，抗Ang2適體是RNA適體、DNA適體或其組合。在一些實施方案中，抗Ang2適體包含一個或多個經修飾的核苷酸。在一些實施方案中，抗Ang2適體具有核酸酶抗性。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有核苷酸都是經修飾的核苷酸。在一些實施方案中，經修飾的核苷酸包括在一個或多個獨立地選自核糖位置、去氧核糖位置、磷酸位置和鹼基位置的位置處的化學取代或修飾。在一些實施方案中，該經修飾的核苷酸包括一個或多個修飾，該修飾獨立地選自2’-位糖修飾、2’-胺基(2’-NH2)修飾、2’-氟(2’-F)修飾、2’-O-甲基(2’-OMe)修飾、2’-O-(2-甲氧基乙基)(2’-O-MOE)修飾、5-位修飾的嘧啶、胞嘧啶外環胺處的修飾、5’-溴尿嘧啶取代、5’-溴去氧尿苷取代、5’-溴去氧胞苷取代、骨架修飾、鎖核酸(LNA)、甲基化、3’帽和5’帽。在一些實施方案中，5-位置修飾的嘧啶選自5-羧基-2’-去氧尿苷、5-胺基烯丙基-2’-去氧尿苷、5-[(3-吲哚基)丙醯胺-N-烯丙基]-2’-去氧尿苷、5-羧基-2’-去氧胞苷、5-胺基烯丙基-2’-去 氧胞苷、生物素-16-胺基烯丙基-2’-去氧胞苷、5-(N-苄基羧醯胺)-2’-去氧尿苷、5-(N-異丁基羧醯胺)-2’-去氧尿苷、5-(N-萘基甲基羧醯胺)-2’-去氧尿苷和5-(N-色胺羧醯胺)-2’-去氧尿苷。
在一些實施方案中，抗Ang2適體包含至少一個2’-修飾的核苷酸。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有核苷酸都是2’-修飾的核苷酸。在一些實施方案中，2’-修飾的核苷酸選自2’-胺基修飾的核苷酸、2’-氟修飾的核苷酸、2’-O-甲基修飾的核苷酸和2’-O-甲氧基修飾的核苷酸。
在一些實施方案中，抗Ang2適體包含至少一個2’-氟修飾的核苷酸、至少一個2’-O-甲基修飾的核苷酸和/或至少一個LNA。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有胞苷都是2’-修飾的胞苷。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有胞苷都是2’-氟修飾的胞苷和/或2’-O-甲基修飾的胞苷。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有胞苷都是2’-去氧-2’-氟胞苷。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有尿苷都是2’-修飾的尿苷。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有尿苷都是2’-氟修飾的尿苷和/或2’-O-甲基修飾的尿苷。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有尿苷都是2’-去氧-2’-氟尿苷。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有腺苷都是2’-修飾的腺苷。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有腺苷都是2’-氟修飾的腺苷和/或2’-O-甲基修飾的腺苷。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有腺苷都是2’-去氧-2’-氟腺苷。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有鳥苷都是2’-修飾的鳥苷。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有鳥苷都是2’-氟修飾的鳥苷和/或2’-O-甲基修飾的鳥苷。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有鳥苷都是2’-去氧-2’-氟鳥苷。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所 有核苷酸是2’-氟修飾的核苷酸和/或2’-O-甲基修飾的核苷酸。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有核苷酸都是2’-氟修飾的核苷酸。
在一些實施方案中，抗Ang2適體不包含任何天然核苷酸。在一些實施方案中，抗Ang2適體包含約10個至約150個核苷酸。
在一些實施方案中，抗Ang2適體與抗Ang2參考適體競爭與Ang2的結合，其中抗Ang2參考適體包含二級結構，該二級結構從5’至3’方向包含第一莖、第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出、第四莖和第一環。
在一些實施方案中，抗Ang2參考適體包含二級結構，該二級結構從5’至3’方向由第一莖、第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出、第四莖和第一環組成。
在一些實施方案中，抗Ang2參考適體包含第一共有序列，該第一共有序列包含如SEQ ID NO：13-20中的任一個所示的核苷酸序列。在一些實施方案中，抗Ang2參考適體包含第二共有序列，該第二共有序列包含如SEQ ID NO：21-28中的任一個所示的核苷酸序列。
在一些實施方案中，第一共有序列包含在形成抗Ang2參考適體的第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出和/或第四莖的核苷酸序列中。在一些實施方案中，第一共有序列不包含在形成抗Ang2參考適體的第一環的核苷酸序列中。
在一些實施方案中，第二共有序列包含在形成抗Ang2參考適體的第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出和/或第四莖的核苷酸序列中。在一些實施方案中，第二共有序列不包含在形成抗Ang2參考適體的第一環的核苷酸序列中。
在一些實施方案中，抗Ang2參考適體包含如SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列，或其變體或截短形式。在一些實施方案中，變體包含與SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列具有50%同一性的核苷酸序列。在一些實施方案中，變體包含具有一個或多個核苷酸添加、缺失和/或取代的如SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列。在一些實施方案中，抗Ang2參考適體包含約10個至約150個核苷酸。
在一些實施方案中，抗Ang2參考適體包含第一共有序列和第二共有序列，並且該第一共有序列位於該第二共有序列的5’。
在一些實施方案中，抗Ang2適體包含二級結構，該二級結構從5’至3’方向包含第一莖、第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出、第四莖和第一環。在一些實施方案中，抗Ang2適體包含二級結構，該二級結構從5’至3’方向由第一莖、第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出、第四莖和第一環組成。
在一些實施方案中，抗Ang2適體包含第一共有序列，該第一共有序列包含如SEQ ID NO：13-20中的任一個所示的核苷酸序列。在一些實施方案中，抗Ang2適體包含第二共有序列，該第二共有序列包含如SEQ ID NO：21-28中的任一個所示的核苷酸序列。
在一些實施方案中，第一共有序列包含在形成抗Ang2適體的第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出和/或第四莖的核苷酸序列中。在一些實施方案中，第一共有序列不包含在形成抗Ang2適體的第一環的核苷酸序列中。在一些實施方案中，第二共有序列包含在形成抗Ang2適體的第一凸出、 第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出和/或第四莖的核苷酸序列中。在一些實施方案中，第二共有序列不包含在形成抗Ang2適體的第一環的核苷酸序列中。
本公開的抗Ang2參考適體或抗Ang2適體的第一環可以包含2-30個核苷酸。
在一些實施方案中，抗Ang2適體包含如SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列，或其變體或截短形式。在一些實施方案中，變體包含與SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列具有至少50%同一性的核苷酸序列。在一些實施方案中，變體包含具有一個或多個核苷酸添加、缺失和/或取代的如SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列。
在一些實施方案中，抗Ang2適體包含第一共有序列和第二共有序列，並且該第一共有序列位於該第二共有序列的5’。
在一些實施方案中，抗Ang2適體包含第一共有序列和第二共有序列，並且該第二共有序列位於該第一共有序列的5’。
在一些實施方案中，抗Ang2適體用於調節Ang2或Tie2的生物活性。
在一些實施方案中，抗Ang2適體用於預防、治療和/或改善Ang2相關疾病、紊亂或病況。在一些實施方案中，Ang2相關疾病、紊亂或病況是新生血管疾病、紊亂或病況。在一些實施方案中，Ang2相關疾病、紊亂或病況是眼部新生血管疾病、紊亂或病況。在一些實施方案中，Ang2相關疾病、紊亂或病況選自年齡相關性黃斑變性、脈絡膜新生血管形成、糖尿病性黃斑水腫、視網膜靜脈阻塞和糖尿病性視網膜病。在一些實施方案中，Ang2相關疾病、紊亂或 病況選自年齡相關性黃斑變性、脈絡膜新生血管形成、糖尿病性黃斑水腫、視網膜靜脈阻塞和糖尿病性視網膜病。
一方面，本公開提供了抗Ang2劑，其包含本公開的抗Ang2適體。在一些實施方案中，抗Ang2劑還包含聚乙二醇(PEG)部分。在一些實施方案中，PEG部分綴合於抗Ang2適體的3’末端。
一方面，本公開提供了包含本公開的抗Ang2適體或抗Ang2劑的組成物。
在一些實施方案中，組成物是醫藥組成物。在一些實施方案中，組成物包含藥學上可接受的賦形劑或載體。在一些實施方案中，組成物包含有效量的抗Ang2適體或抗Ang2劑。
在一些實施方案中，組成物還包含抗VEGF劑。在一些實施方案中，抗VEGF劑包含阿柏西普。
一方面，本公開提供了用於調節Ang2或Tie2的生物活性的方法，其包括向有此需要的受試者施用有效量的本公開的抗Ang2適體或抗Ang2劑。
一方面，本公開提供了用於預防、治療和/或改善Ang2相關疾病、紊亂或病況的方法，其包括向有此需要的受試者施用有效量的本公開的抗Ang2適體或抗Ang2劑。
在一些實施方案中，Ang2相關疾病、紊亂或病況是新生血管疾病、紊亂或病況。在一些實施方案中，Ang2相關疾病、紊亂或病況選自年齡相關性黃斑變性、脈絡膜新生血管形成、糖尿病性黃斑水腫、視網膜靜脈阻塞和糖尿病性視網膜病。在一些實施方案中，Ang2相關疾病、紊亂或病況選自濕性年齡相關性黃斑變性、近視性脈絡膜新生血管形成和增生性糖尿病性視網膜病。在 一些實施方案中，該方法還包括向受試者施用抗VEGF劑。在一些實施方案中，抗VEGF劑包含阿柏西普。
一方面，本公開提供了本公開的抗Ang2適體或抗Ang2劑在製備用於調節Ang2或Tie2的生物活性的劑方面的用途。
一方面，本公開提供了本公開的抗Ang2適體或抗Ang2劑在製備用於預防、治療和/或改善Ang2相關疾病、紊亂或病況的醫藥方面的用途。
在一些實施方案中，Ang2相關疾病、紊亂或病況是新生血管疾病、紊亂或病況。在一些實施方案中，Ang2相關疾病、紊亂或病況是眼部新生血管疾病、紊亂或病況。在一些實施方案中，Ang2相關疾病、紊亂或病況選自年齡相關性黃斑變性、脈絡膜新生血管形成、糖尿病性黃斑水腫、視網膜靜脈阻塞和糖尿病性視網膜病。在一些實施方案中，Ang2相關疾病、紊亂或病況選自濕性年齡相關性黃斑變性、近視性脈絡膜新生血管形成和增生性糖尿病性視網膜病。
在一個方面，本公開提供了1)本公開的Ang2適體或抗Ang2劑與2)抗VEGF劑的組合在製備用於預防、治療和/或改善新生血管疾病、紊亂或病況的醫藥方面的用途。在一些實施方案中，抗VEGF劑包含阿柏西普。在一些實施方案中，新生血管疾病或紊亂是眼部新生血管疾病、紊亂或病況。在一些實施方案中，新生血管疾病、紊亂或病況選自年齡相關性黃斑變性、脈絡膜新血管形成、糖尿病性黃斑水腫、視網膜靜脈阻塞和糖尿病性視網膜病。在一些實施方案中，新生血管疾病、紊亂或病況選自濕性年齡相關性黃斑變性、近視性脈絡膜新血管形成和增生性糖尿病性視網膜病。
雙特異性適體
另一方面，本公開提供了包含抗Ang2適體和抗VEGF適體的雙特異性適體。雙特異性適體可包含在本公開的組成物中。
在一些實施方案中，抗VEGF適體結合與VEGF-121結合，其中KD值約為20奈莫耳(nM)或更小，以及與VEGF-165結合，其中KD值約為20奈莫耳(nM)或更小。
在一些實施方案中，抗Ang2適體與Ang2特異性結合，其中KD值約為500皮莫耳(pM)或更小。
在一些實施方案中，抗VEGF適體與VEGF-121結合，其中KD值約為2奈莫耳(nM)或更小。在一些實施方案中，抗VEGF適體與VEGF-165結合，其中KD值約為2奈莫耳(nM)或更小。
在一些實施方案中，VEGF-121是人VEGF-121、小鼠VEGF-120、猴VEGF-121、兔VEGF-121和/或大鼠VEGF-120。在一些實施方案中，VEGF-165是人VEGF-165、小鼠VEGF-164、猴VEGF-165、兔VEGF-165或大鼠VEGF-164。
在一些實施方案中，抗VEGF適體與VEGF-121的VEGF受體結合結構域和VEGF-165的VEGF受體結合結構域特異性結合。
在一些實施方案中，VEGF-121的VEGF受體結合結構域包含如SEQ ID NO：30-34、40、41和45中的任一個所示的胺基酸序列。在一些實施方案中，VEGF-165的VEGF受體結合結構域包含如SEQ ID NO：30-34、40和41中的任一個所示的胺基酸序列。
在一些實施方案中，抗VEGF適體抑制VEGF-121與VEGF-R1之間的相互作用。在一些實施方案中，抗VEGF適體抑制VEGF-121與VEGF- R2之間的相互作用。在一些實施方案中，抗VEGF適體抑制VEGF-165與VEGF-R1之間的相互作用。在一些實施方案中，抗VEGF適體抑制VEGF-165與VEGF-R2之間的相互作用。
在一些實施方案中，抗VEGF適體能夠減少和/或改善鐳射誘導脈絡膜新血管形成(CNV)大鼠模型中的損傷和/或滲漏。
在一些實施方案中，抗VEGF適體能夠減少和/或改善非人靈長類動物(NHP)鐳射誘導CNV模型中的損傷和/或滲漏。
在一些實施方案中，抗VEGF適體是高度可溶的。
在一些實施方案中，抗VEGF適體是RNA適體、DNA適體或其組合。在一些實施方案中，抗VEGF適體具有核酸酶抗性。在一些實施方案中，抗VEGF適體包含一個或多個經修飾的核苷酸。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有核苷酸都是經修飾的核苷酸。在一些實施方案中，經修飾的核苷酸包括在一個或多個獨立地選自核糖位置、去氧核糖位置、磷酸位置和鹼基位置的位置處的化學取代或修飾。在一些實施方案中，該經修飾的核苷酸包括一個或多個修飾，該修飾獨立地選自2’-位置糖修飾、2’-胺基(2’-NH2)修飾、2’-氟(2’-F)修飾、2’-O-甲基(2’-OMe)修飾、2’-O-(2-甲氧基乙基)(2’-O-MOE)修飾、5-位修飾的嘧啶、胞嘧啶外環胺處的修飾、5’-溴尿嘧啶取代、5’-溴去氧尿苷取代、5’-溴去氧胞苷取代、骨架修飾、鎖核酸(LNA)、甲基化、3’帽和5’帽。在一些實施方案中，5-位修飾的嘧啶選自5-羧基-2’-去氧尿苷、5-胺基烯丙基-2’-去氧尿苷、5-[(3-吲哚基)丙醯胺-N-烯丙基]-2’-去氧尿苷、5-羧基-2’-去氧胞苷、5-胺基烯丙基-2’-去氧胞苷、生物素-16-胺基烯丙基-2’-去氧胞苷、5-(N-苄基羧醯胺)-2’-去氧尿苷、5-(N- 異丁基羧醯胺)-2’-去氧尿苷、5-(N-萘基甲基羧醯胺)-2’-去氧尿苷和5-(N-色胺羧醯胺)-2’-去氧尿苷。
在一些實施方案中，抗VEGF適體包含至少一個2’-修飾的核苷酸。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有核苷酸均為2’-修飾的核苷酸。在一些實施方案中，2’-修飾的核苷酸選自2’-胺基修飾的核苷酸、2’-氟修飾的核苷酸以及2’-O-甲基修飾的核苷酸和2’-O-(2-甲氧基乙基)修飾的核苷酸。在一些實施方案中，抗VEGF適體包含至少一個2’-氟修飾的核苷酸。在一些實施方案中，抗VEGF適體包含至少一個2’-氟修飾的核苷酸、至少一個2’-O-甲基修飾的核苷酸和/或至少一個LNA。
在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有胞苷都是2’-修飾的胞苷。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有胞苷都是2’-氟修飾的胞苷和/或2’-O-甲基修飾的胞苷。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有胞苷都是2’-去氧-2’-氟胞苷。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有尿苷都是2’-修飾的尿苷。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有尿苷是2’-氟修飾的尿苷和/或2’-O-甲基修飾的尿苷。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有尿苷都是2’-去氧-2’-氟尿苷。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有腺苷都是2’-修飾的腺苷。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有腺苷都是2’-氟修飾的腺苷和/或2’-O-甲基修飾的腺苷。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有腺苷都是2’-去氧-2’-氟腺苷。在一些實施方案中，所有的鳥苷都是2’-修飾的鳥苷。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有鳥苷都是2’-氟修飾的鳥苷和/或2’-O-甲基修飾的鳥苷。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有鳥苷都是2’-去氧-2’-氟鳥苷。
在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有核苷酸都是2’-氟修飾的核苷酸和/或2’-O-甲基修飾的核苷酸。
在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有核苷酸都是2’-氟修飾的核苷酸。
在一些實施方案中，抗VEGF適體不包含任何天然核苷酸。
在一些實施方案中，抗VEGF適體包含約10個至約150個核苷酸。
在一些實施方案中，抗VEGF適體與抗VEGF參考適體競爭與VEGF-165和/或VEGF-121的結合，並且抗VEGF參考適體包含二級結構，該二級結構從5’到3’方向包含第一莖、第一環、第二莖和第二環。
在一些實施方案中，抗VEGF參考適體包含二級結構，該二級結構從5’至3’方向由第一莖、第一環、第二莖和第二環組成。
在一些實施方案中，抗VEGF參考適體包含第一共有序列，該第一共有序列包含如SEQ ID NO：136-137中的任一個所示的核苷酸序列。在一些實施方案中，抗VEGF參考適體包含第二共有序列，該第二共有序列包含如SEQ ID NO：138-139中的任一個所示的核苷酸序列。
在一些實施方案中，第一共有序列包含形成抗VEGF參考適體的第一莖和第一環的核苷酸序列。在一些實施方案中，第一共有序列不包含在形成抗VEGF參考適體的第二莖或第二環的核苷酸序列中。在一些實施方案中，第二共有序列包含形成抗VEGF參考適體的第二莖和第二環的核苷酸序列。在一些實施方案中，第二共有序列不包含在形成抗VEGF參考適體的第一莖或第一環的核苷酸序列中。
在一些實施方案中，抗VEGF參考適體包含如SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列，或其變體或截短形式。在一些實施方案中，變體包含與SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列具有至少50%同一性的核苷酸序列。在一些實施方案中，變體包含具有一個或多個核苷酸添加、缺失和/或取代的如SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列。在一些實施方案中，抗VEGF參考適體包含約10個至約150個核苷酸。
在一些實施方案中，抗VEGF參考適體包含第一共有序列和第二共有序列，並且該第一共有序列位於該第二共有序列的5’。
在一些實施方案中，抗VEGF參考適體包含第一共有序列和第二共有序列，其中該第二共有序列位於該第一共有序列的5’。
在一些實施方案中，抗VEGF適體包含二級結構，該二級結構從5’至3’方向包含第一莖、第一環、第二莖和第二環。在一些實施方案中，抗VEGF適體包含二級結構，該二級結構從5’至3’方向由第一莖、第一環、第二莖和第二環組成。
在一些實施方案中，該抗VEGF適體包含第一共有序列，該第一共有序列包含如SEQ ID NO：136-137中的任一個所示的核苷酸序列。在一些實施方案中，抗VEGF適體包含第二共有序列，該第二共有序列包含如SEQ ID NO：138-139中的任一個所示的核苷酸序列。
在一些實施方案中，第一共有序列包含形成抗VEGF適體的第一莖和第一環的核苷酸序列。在一些實施方案中，第一共有序列不包含在形成抗VEGF適體的第二莖或第二環的核苷酸序列中。在一些實施方案中，第二共有序 列包含形成抗VEGF適體的第二莖和第二環的核苷酸序列。在一些實施方案中，第二共有序列不包含在形成抗VEGF適體的第一莖或第一環的核苷酸序列中。
在一些實施方案中，抗VEGF適體包含如SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列，或其變體或截短形式。在一些實施方案中，變體包含與SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列具有至少50%同一性的核苷酸序列。在一些實施方案中，變體包含具有一個或多個核苷酸添加、缺失和/或取代的如SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列。
在一些實施方案中，抗VEGF適體包含第一共有序列和第二共有序列，並且該第一共有序列位於該第二共有序列的5’。
在一些實施方案中，抗VEGF適體包含第一共有序列和第二共有序列，並且該第二共有序列位於該共有序列的5’。
在一些實施方案中，抗Ang2適體與Ang2結合，其中KD值約為100皮莫耳(pM)或更小。
在一些實施方案中，Ang2是人Ang2、小鼠Ang2、猴子Ang2、兔Ang2和/或大鼠Ang2。
在一些實施方案中，抗Ang2適體基本上不與人Ang1結合。
在一些實施方案中，抗Ang2適體抑制Ang2與Tie2之間的相互作用。
在一些實施方案中，抗Ang2適體能夠在小鼠氧誘導的缺血性視網膜病(OIR)模型中減少新生血管形成並且/或者減少血管通透性。
在一些實施方案中，抗Ang2適體是高度可溶的。
在一些實施方案中，抗Ang2適體是RNA適體、DNA適體或其組合。在一些實施方案中，抗Ang2適體包含一個或多個經修飾的核苷酸。在一些實施方案中，抗Ang2適體具有核酸酶抗性。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有核苷酸都是經修飾的核苷酸。在一些實施方案中，經修飾的核苷酸在一個或多個獨立地選自核糖位置、去氧核糖位置、磷酸位置和鹼基位置的位置處包含化學取代或修飾。在一些實施方案中，該經修飾的核苷酸包括一個或多個修飾，該修飾獨立地選自2’-位置糖修飾、2’-胺基(2’-NH2)修飾、2’-氟(2’-F)修飾、2’-O-甲基(2’-OMe)修飾、2’-O-(2-甲氧基乙基)(2’-O-MOE)修飾、5-位修飾的嘧啶、胞嘧啶外環胺處的修飾、5’-溴尿嘧啶取代、5’-溴去氧尿苷取代、5’-溴去氧胞苷取代、骨架修飾、鎖核酸(LNA)、甲基化、3’帽和5’帽。在一些實施方案中，5-位修飾的嘧啶選自5-羧基-2’-去氧尿苷、5-胺基烯丙基-2’-去氧尿苷、5-[(3-吲哚基)丙醯胺-N-烯丙基]-2’-去氧尿苷、5-羧基-2’-去氧胞苷、5-胺基烯丙基-2’-去氧胞苷、生物素-16-胺基烯丙基-2’-去氧胞苷、5-(N-苄基羧醯胺)-2’-去氧尿苷、5-(N-異丁基羧醯胺)-2’-去氧尿苷、5-(N-萘基甲基羧醯胺)-2’-去氧尿苷和5-(N-色胺羧醯胺)-2’-去氧尿苷。
在一些實施方案中，抗Ang2適體包含至少一個2’-修飾的核苷酸。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有核苷酸都是2’-修飾的核苷酸。在一些實施方案中，2’-修飾的核苷酸選自2’-胺基修飾的核苷酸、2’-氟修飾的核苷酸、2’-O-甲基修飾的核苷酸和2’-O-(2-甲氧基乙基)-修飾的核苷酸。在一些實施方案中，抗Ang2適體包含至少一個2’-氟修飾的核苷酸、至少一個2’-O-甲基修飾的核苷酸和/或至少一個LNA。
在一些實施方案中，抗Ang2適體包含至少一個2’-氟修飾的核苷酸。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有胞苷都是2’-修飾的胞苷。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有胞苷都是2’-氟修飾的胞苷和/或2’-O-甲基修飾的胞苷。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有胞苷都是2’-去氧-2’-氟胞苷。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有尿苷都是2’-修飾的尿苷。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有尿苷都是2’-氟修飾的尿苷和/或2’-O-甲基修飾的尿苷。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有尿苷都是2’-去氧-2’-氟尿苷。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有腺苷都是2’-修飾的腺苷。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有腺苷都是2’-氟修飾的腺苷和/或2’-O-甲基修飾的腺苷。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有腺苷都是2’-去氧-2’-氟腺苷。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有鳥苷都是2’-修飾的鳥苷。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有鳥苷都是2’-氟修飾的鳥苷和/或2’-O-甲基修飾的鳥苷。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有鳥苷都是2’-去氧-2’-氟鳥苷。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有核苷酸都是2’-氟修飾的核苷酸。在一些實施方案中，抗Ang2適體的所有核苷酸是2’-氟修飾的核苷酸和/或2’-O-甲基修飾的核苷酸。
在一些實施方案中，抗Ang2適體不包含任何天然核苷酸。在一些實施方案中，抗Ang2適體包含約10個至約150個核苷酸。
在一些實施方案中，抗Ang2適體與抗Ang2參考適體競爭與Ang2的結合，其中抗Ang2參考適體包含二級結構，該二級結構從5’至3’方向包含第一莖、第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出、第四莖和第一環。
在一些實施方案中，抗Ang2參考適體包含二級結構，該二級結構從5’至3’方向由第一莖、第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出、第四莖和第一環組成。
在一些實施方案中，抗Ang2參考適體包含第一共有序列，該第一共有序列包含如SEQ ID NO：13-20中的任一個所示的核苷酸序列。在一些實施方案中，抗Ang2參考適體包含第二共有序列，該第二共有序列包含如SEQ ID NO：21-28中的任一個所示的核苷酸序列。
在一些實施方案中，第一共有序列包含在形成抗Ang2參考適體的第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出和/或第四莖的核苷酸序列中。在一些實施方案中，第一共有序列不包含在形成抗Ang2參考適體的第一環的核苷酸序列中。
在一些實施方案中，第二共有序列包含在形成抗Ang2參考適體的第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出和/或第四莖的核苷酸序列中。在一些實施方案中，第二共有序列不包含在形成抗Ang2參考適體的第一環的核苷酸序列中。
在一些實施方案中，抗Ang2參考適體包含如SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列，或其變體或截短形式。在一些實施方案中，變體包含與SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列具有至少50%同一性的核苷酸序列。在一些實施方案中，變體包含具有一個或多個核苷酸添加、缺失和/或取代的如SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列。在一些實施方案中，抗Ang2參考適體包含約10個至約150個核苷酸。
在一些實施方案中，抗Ang2參考適體包含第一共有序列和第二共有序列，並且該第一共有序列位於該第二共有序列的5’。
在一些實施方案中，抗Ang2參考適體包含第一共有序列和第二共有序列，並且該第二共有序列位於該第一共有序列的5’。
在一些實施方案中，抗Ang2適體包含二級結構，該二級結構從5’至3’方向包含第一莖、第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出、第四莖和第一環。在一些實施方案中，適體包含二級結構，該二級結構從5’到3’方向由第一莖、第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出、第四莖和第一環組成。
在一些實施方案中，抗Ang2適體包含第一共有序列，該第一共有序列包含如SEQ ID NO：13-20中的任一個所示的核苷酸序列。在一些實施方案中，抗Ang2適體包含第二共有序列，該第二共有序列包含如SEQ ID NO：21-28中的任一個所示的核苷酸序列。
在一些實施方案中，第一共有序列包含在形成抗Ang2適體的第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出和/或第四莖的核苷酸序列中。在一些實施方案中，第一共有序列不包含在形成抗Ang2適體的第一環的核苷酸序列中。在一些實施方案中，第二共有序列包含在形成抗Ang2適體的第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出和/或第四莖的核苷酸序列中。在一些實施方案中，第二共有序列不包含在形成抗Ang2適體的第一環的核苷酸序列中。
在一些實施方案中，抗Ang2適體包含如SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列，或其變體或截短形式。在一些實施方案中，變體包含與SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列具有至少50%同一性的核苷酸序 列。在一些實施方案中，變體包含具有一個或多個核苷酸添加、缺失和/或取代的如SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列。
在一些實施方案中，抗Ang2適體包含第一共有序列和第二共有序列，並且該第一共有序列位於該第二共有序列的5’。
在一些實施方案中，抗Ang2適體包含第一共有序列和第二共有序列，並且該第二共有序列位於該第一共有序列的5’。
在一些實施方案中，抗VEGF適體與聚乙二醇(PEG)部分綴合。在一些實施方案中，PEG部分與抗VEGF適體的5’末端綴合。在一些實施方案中，PEG部分與抗VEGF適體的3’末端綴合。在一些實施方案中，抗Ang2適體與聚乙二醇(PEG)部分綴合。在一些實施方案中，PEG部分與抗Ang2適體的5’末端綴合。在一些實施方案中，PEG部分與抗Ang2適體的3’末端綴合。
在一些實施方案中，雙特異性適體具有式A1-(L)n-A2，其中A1是抗VEGF適體，並且A2是抗Ang2適體，或者A1是抗Ang2適體，A2是抗VEGF適體；L是接頭；n為至少為0的數。在一些實施方案中，n為0至20。在一些實施方案中，n是0至10。
在一些實施方案中，雙特異性適體能夠與VEGF和Ang2特異性結合。
在一些實施方案中，雙特異性適體與VEGF-121結合，其中KD值約為500pM或更小，以及與Ang2結合，其中KID值約為500pM或更小。
在一些實施方案中，雙特異性適體與VEGF-121結合，其中KD值約為200pM或更小，以及與Ang2結合，其中KD值約為200pM或更小。
在一些實施方案中，雙特異性適體與VEGF-121結合，其中KD值約為100pM或更小，以及與Ang2結合，其中KD值約為100pM或更小。
在雙特異性適體的一些實施方案中，L選自天然存在的核苷酸接頭、經修飾的核苷酸接頭、烴接頭、聚乙二醇接頭及其組合。在一些實施方案中，至少一個L是聚乙二醇接頭。在一些實施方案中，至少一個L是六乙二醇(H或PEG6)接頭。在一些實施方案中，L是六乙二醇接頭，n為0至10。
在雙特異性適體的一些實施方案中，A1是抗VEGF適體，其包含如SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列，或其變體或截短形式；A2是抗Ang2適體，其包含如SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列，或其變體或截短形式。
在雙特異性適體的一些實施方案中，A1是抗Ang2適體，其包含如SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列，或其變體或截短形式；並且A2是抗VEGF適體，其包含如SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列，或其變體或截短形式。
在雙特異性適體的一些實施方案中，A1是抗VEGF適體，其包含如SEQ ID NO：83所示的核苷酸序列或其截短形式，A2是抗Ang2適體，其包含如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列或其截短形式，L是六乙二醇接頭，n為0至10。
在雙特異性適體的一些實施方案中，A1是抗VEGF適體，其包含如SEQ ID NO：128所示的核苷酸序列或其截短形式，A2是抗Ang2適體，其包含如SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列或其截短形式，L是六乙二醇接頭，n為0至10。
在雙特異性適體的一些實施方案中，A1是抗Ang2適體，其包含如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列或其截短形式，A2是抗VEGF適體，其包含如SEQ ID NO：83所示的核苷酸序列或其截短形式，L是六乙二醇接頭，n為0至10。
在雙特異性適體的一些實施方案中，A1是抗Ang2適體，其包含如SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列或其截短形式，A2是抗VEGF適體，其包含如SEQ ID NO：128所示的核苷酸序列或其截短形式，L是六乙二醇接頭，n為0至10。
在一些實施方案中，雙特異性適體選自r-AMSB107.0、r-AMSB108.0、r-AMSB107.1、r-AMSB107.2、r-AMSB107、r-AMSB107.4、r-AMSB107.5、r-AMSB107.6、r-AMSB107.7、r-AMSB107.8、r-AMSB107.9、r-AMSB107.10、r-AMSB107.11、r-AMSB107.12、r-AMSB107.13、r-AMSB107.14、r-AMSB107.15、r-AMSB107.16、r-AMSB107.17、r-AMSB107.18、r-AMSB107.19、r-AMSB107.22、r-AMSB107.23、r-AMSB107.24、r-AMSB107.25、r-AMSB107.26、r-AMSB107.27、AMSB107.0、AMSB108.0、AMSB107.1、AMSB107.2、AMSB107、AMSB107.4、AMSB107.5、AMSB107.6、AMSB107.7、AMSB107.8、AMSB107.9、AMSB107.10、AMSB107.11、AMSB107.12、AMSB107.13、AMSB107.14、AMSB107.15、AMSB107.16、AMSB107.17、AMSB107.18、AMSB107.19、AMSB107.20、AMSB107.21、AMSB107.22、AMSB107.23、AMSB107.24、AMSB107.25、AMSB107.26、AMSB107.P6、AMSB107.P40K、AMSB107P和AMSB107.27。
在一些實施方案中，雙特異性適體包含如SEQ ID NO：140-195、SEQ ID NO：202-204中的任一個所示的核苷酸序列。
組成物
一方面，本公開提供了組成物，其包含本公開的抗Ang2適體、本公開的抗VEGF適體和/或本公開的雙特異性適體。
在一些實施方案中，組成物是醫藥組成物。
在一些實施方案中，組成物包含藥學上可接受的賦形劑或載體。
在一些實施方案中，該組成物用於預防、治療和/或改善新生血管疾病、紊亂或病況。新生血管疾病、紊亂或病況可以是眼部新生血管疾病、紊亂或病況。在一些實施方案中，新生血管疾病、紊亂或病況選自年齡相關性黃斑變性、脈絡膜新血管形成、糖尿病性黃斑水腫、視網膜靜脈阻塞和糖尿病性視網膜病。在一些實施方案中，新生血管疾病、紊亂或病況選自濕性年齡相關性黃斑變性、近視性脈絡膜新血管形成和增生性糖尿病性視網膜病。
醫療用途和方法
另一方面，本公開提供了用於預防、治療和/或改善新生血管疾病、紊亂或病況的方法，其包括向有此需要的受試者施用有效量的本公開的抗Ang2適體、有效量的本公開的抗VEGF適體、有效量的本公開的雙特異性適體和/或有效量的本公開的組成物。
在一些實施方案中，新生血管疾病、紊亂或病況是眼部新生血管疾病、紊亂或病況。在一些實施方案中，新生血管疾病、紊亂或病況選自年齡相關性黃斑變性、脈絡膜新血管形成、糖尿病性黃斑水腫、視網膜靜脈阻塞和糖尿 病性視網膜病。在一些實施方案中，新生血管疾病、紊亂或病況選自濕性年齡相關性黃斑變性、近視性脈絡膜新血管形成和增生性糖尿病性視網膜病。
另一方面，本公開提供了本公開的抗Ang2適體、本公開的抗VEGF適體、本公開的雙特異性適體和/或本公開的組成物在製備用於預防、治療和/或改善新生血管疾病、紊亂/病況的藥物方面的用途。
在一些實施方案中，新生血管疾病、紊亂或病況是眼部新生血管疾病、紊亂或病況。在一些實施方案中，新生血管疾病、紊亂或病況選自年齡相關性黃斑變性、脈絡膜新血管形成、糖尿病性黃斑水腫、視網膜靜脈阻塞和糖尿病性視網膜病。在一些實施方案中，新生血管疾病、紊亂或病況選自濕性年齡相關性黃斑變性、近視性脈絡膜新血管形成和增生性糖尿病性視網膜病。
從以下詳細描述中，本公開的其他方面和有利方面對於所屬技術領域具有通常知識者將變得顯而易見，其中僅顯示和描述了本公開的說明性實施方案。如將認識到的，本公開能夠具有其他不同的實施方案，並且其幾個細節能夠在各種明顯的方面進行修改，所有這些都不脫離本公開。因此，圖式和描述在本質上被認為是說明性的，而不是限制性的。
藉由引用併入
本說明書中提及的所有出版物、專利和專利申請均藉由引用併入本文，其程度如同每個單獨出版物、專利或專利申請具體地和單獨地表示為藉由引用併入。
在所附請求項中具體闡述了本公開的新穎特徵。藉由參考以下詳細描述以及圖式(本文中也是“圖(figure)”和“圖(FIG)”)，將獲得對本公開的特徵和 有利方面的更好理解，該詳細描述闡述了使用本公開的原理的說明性實施方案，其中：
圖1A及圖1B示出了本公開的抗VEGF適體的結合親和力。
圖2示出本公開的抗VEGF適體的體外VEGF受體競爭測定。
圖3A示出了本公開的抗Ang2適體的結合親和力；圖3B示出了本公開的抗Ang2適體對人Ang2與Tie2的結合的抑制。
圖4A及圖4B示出了本公開的雙特異性適體對VEGF和Ang2的結合親和力。圖4C-圖4D示出了本公開的雙特異性適體的體外VEGF和Ang2受體競爭測定。
圖5A至圖5C示出了本公開的抗VEGF適體、抗Ang2適體和雙特異性適體的二級結構。
圖6A至圖6C示出了本公開的抗Ang2適體對新生血管形成和血管通透性的影響。
圖7A及圖7B示出了本公開的抗VEGF適體在非人靈長類動物(NHP)鐳射誘導的CNV模型的體內功效測試中的結果。
圖8示出了本公開的抗VEGF適體的兔DL-AAA研究結果的代表性無紅成像照片。
圖9示出了本公開的抗VEGF適體的兔抗VEGF適體研究結果的代表性FA照片。
雖然本文已經顯示和描述了本公開的各種實施方案，但對於所屬技術領域具有通常知識者來說，顯然此類實施方案僅僅是作為實例提供的。在不脫離本公開的情況下，所屬技術領域具有通常知識者可以想到許多變化、改變和替代。應當理解，可以採用本文所述的本公開實施方案的各種替代方案。
如本文中所用，術語“適體”通常指對靶分子具有所需作用的非天然存在的核酸。理想的作用可以包括但不限於對靶標的結合、催化改變靶標、以修飾或改變靶標或靶標的功能活性的方式與靶標反應、共價附接至靶標(如在自殺抑制劑中)，以及促進靶標與另一分子之間的反應。在一些實施方案中，作用可以是對靶分子的特異性結合親和力，這種靶分子是三維化學結構，而不是藉由獨立於沃爾森/克裏克鹼基配對或三螺旋形成的機制與核酸配體結合的多核苷酸，其中適體不是具有被靶分子結合的已知生理功能的核酸。給定靶標的適體包括可藉由包括以下步驟的方法從候選核酸混合物中鑑定的核酸，其中適體可以是靶杯的配體：(a)使候選混合物與靶標接觸，其中可將相對於候選混合物中的其他核酸，對靶標具有增強的親和力的核酸從候選混合物的剩餘部分中分離出來；(b)從剩餘的候選混合物中分離親和力增強的核酸；以及(c)擴增親和力增強的核酸以產生富含配體的核酸混合物，由此鑑定靶分子的適體。應認識到，親和相互作用是一個程度問題；然而，在本說明書中，適體對其靶標的“特異性結合親和力”意味著適體通常可以以比其與混合物或樣品中其他非靶標組分結合程度高得多的親和力與其靶標結合。“適體”或“核酸配體”是具有特定核苷酸序列的一種類型或種類的核酸分子的一組拷貝。適體可包括任何合適數量的核苷酸。適體可以是DNA和/或RNA(或DNA和RNA的組合)，可以是單鏈、雙鏈或者包含雙鏈或三鏈區域。在一些情況下，適體還可包含一個或多個(例如，1-20個、 1-19個、1-18個、1-17個、1-16個、1-15個、1-14個、1-13個、1-12個、1-11個、1-10個、1-9個、1-8個、1-7個、1-6個、1-5個、1-4個、1-3個或1-2個)非核苷酸取代。例如，適體的一個或多個核苷酸可以被聚乙二醇部分或包含多個(例如，1-10個、1-9個、1-8個、1-7個、1-6個、1-5個、1-4個、1-3個或1-2個)聚乙二醇部分的接頭取代。在一些情況下，接頭可以是六乙二醇(H或PEG6)接頭。這種取代可以發生在適體的任何核苷酸上，只要其基本上不影響適體的活性(例如，結合活性或抑制活性)和/或功能。在一些情況下，取代基本上不影響適體的二級結構，例如，取代可發生在包含在適體二級結構的凸出或環區域中的核苷酸上。在一些情況下，取代不會發生在適體二級結構的莖區中包含的任何核苷酸上。
如本文中所用，術語“抗VEGF適體”通常指對VEGF具有特異性結合親和力的核酸分子。在一些情況下，抗VEGF適體可以包含一個或多個(例如，1-20個、1-19個、1-18個、1-17個、1-16個、1-15個、1-14個、1-13個、1-12個、1-11個、1-10個、1-9個、1-8個、1-7個、1-6個、1-5個、1-4個、1-3個或1-2個)如本文所定義的非核苷酸取代。例如，抗VEGF適體的一個或多個核苷酸可被聚乙二醇部分或包含多個(例如，1-10個、1-9個、1-8個、1-7個、1-6個、1-5個、1-4個、1-3個或1-2個)聚乙二醇部分的接頭取代。在一些情況下，接頭可以是六乙二醇(H或PEG6)接頭。這種取代可以發生在抗VEGF適體的任何核苷酸上，只要其基本上不影響抗VEGF適體的活性(例如，結合活性或抑制活性)和/或功能。在一些情況下，取代基本上不影響抗VEGF適體的二級結構，例如，取代可發生在包含在抗VEGF適體二級結構的凸出或環區中的核苷酸上。 在一些情況下，取代不會發生在包含在抗VEGF適體二級結構的莖區中的任何核苷酸上。
如本文中所用，術語“VEGF”通常指血管內皮生長因子A(VEGFA或VEGF-A)及其剪接變體和同種型。VEGF可被發現為稱為VEGF121(或VEGF-121)、VEGF165(或VEGF-165)、VEGF189(或VEGF-189)和VEGF206(或VEGF-206；數字是指多肽中胺基酸的數目)的四種不同的剪接變體。所有四種同種型都以二硫鍵連接的同二聚體形式存在。儘管VEGF-165是觀察到的最常見的同種型，但不同細胞類型的同種型分泌模式不同。同種型以高親和力與兩種受體Flt-1和Flk-1/KDR結合，但它們對肝素和細胞外基質的結合親和力不同。NCBI資料庫中人類VEGF的編號可以是NP_001273973.1、NP_001028928.1、NP_001020540.2、NP_001020539.2、NP_001020538.2、NP_003367.4或NP_001020537.2。
如本文所用，術語“KD值”通常是指解離常數，藉由適合適體和靶標對的技術來測量，例如藉由使用利用放射性或螢光測量的配體結合測定法、表面電漿共振(SPR)、生物層干涉測量法(BLI，例如Octet®系統)、SRU生物系統BIND®、等溫滴定量熱法(ITC)或微尺度熱泳法(MicroscaleThermophoresis)(MST)。在一些實施方案中，使用標準的基於螢光的配體結合測定和飽和度分析來測定KD值。在一個實例中，將各種濃度的螢光標記的靶分子與本公開的顆粒在室溫下於溫和旋轉下孵育至少3小時。然後洗滌每個樣品，藉由使用流式細胞儀測量每個顆粒的螢光來定量剩餘的結合靶標。然後，例如藉由使用平衡結合模型(例如，根據品質作用定律)，將扣除背景的螢光值與飽和結合曲線進行擬合。
術語“特異性結合”或“與......特異性結合”或“特異於”在本文中可互換使用，通常是指劑(例如，核酸劑，諸如適體)與靶分子(例如，蛋白質或其部分)的結合，並且該結合與非特異性相互作用(例如，非特異性相互作用可以與參考分子或隨機分子結合)是可測量地和/或統計上不同的。特異性結合可以例如藉由與類似於靶標的對照分子(例如過量的未標記靶標)競爭來測量，在這種情況下，如果過量的未標記靶競爭性抑制了標記靶標與候選劑的結合，則表明特異性結合。特異性結合可以例如藉由對靶標具有至少約1nM、至少約900pM、至少約800pM、至少約700pM、至少約600pM、至少約500pM、至少約400pM、至少約300pM、至少約200pM、至少約100pM、至少約90pM、至少約80pM、至少約70pM、至少約60pM、至少約50pM、至少約40pM、至少約30pM、至少約20pM、至少約10pM、至少約5pM、至少約1pM或更大的KD的分子來顯示。
如本文中所用，術語“VEGF受體結合結構域”通常是指與相應的VEGF受體結合或被其識別的VEGF的結構域。
如本文中所用，術語“VEGF-R”或“VEGF受體”通常指結合VEGF或VEGF家族成員(包括它們的剪接變體和同種型)的受體。VEGF受體可包括：(1)Flt-1(鰭狀酪胺酸激酶)，也稱為VEGF-R1(Shibuya等人，Oncogene(1990),5：519-524；De Vries等人，Science(1992),255：989-991)；(ii)Flk-1(胎兒肝激酶)、小鼠RTK(Quinn等人，Proc Natl Acad Sci USA(1993),90：7533-7537；Millauer等人，Cell(1993),72：835-846)及其人同源物，KDR(含激酶插入結構域的受體，也稱為VEGF-R2；Terman等人，Biochem Biophys Res Comm(1992),187：1579-1586)； 和(iii)Flt-4，其在淋巴內皮上表達，但在血管內皮上不表達(Pajusola等人，Cancer Res(1992),52：5738-43)。
如本文中所用，術語“RNA適體”通常指包含核糖核苷酸單元的適體。“核酸適體”也意味著涵蓋如本文所定義的RNA類似物。
如本文中所用，術語“DNA適體”通常指包含去氧核糖核苷酸單元的適體。“DNA適體”也意味著涵蓋如本文所定義的DNA類似物。
如本文中所用，術語“高度可溶的”通常是指劑以相對高的程度(例如，總重量的80%或更多、總重量的85%或更多、總重量的90%或更多、總重量的95%或更多、總重量的99%或更多)溶於溶劑(例如，水或適當的緩衝液)的特徵。
如本文中所用，術語“核酸酶抗性”通常是指抗核酸酶切割的劑的特徵。在一些情況下，核酸分子可被作用於核酸的5’或3’末端的外切核酸酶破壞。另外，內切核酸酶可以在單個核苷酸之間的內部磷酸二酯鍵聯處切割DNA或RNA。然而，當分子(例如，DNA或RNA)具有核酸酶抗性時(例如，在經過一定的修飾後)，外切核酸酶或內切核酸酶可能不再能夠破壞或消化其。
如本文中所用，術語“經修飾的核苷酸”通常是指非天然存在的，但為天然存在的核苷酸的類似物或酯的核苷酸。當在寡核苷酸或核酸分子(諸如適體)的上下文中使用時，通常意味著寡核苷酸的四個組成核苷酸(即，A、G、T/U和C)中的至少一種是天然存在的核苷酸的類似物或酯。在一些實施方案中，經修飾的核苷酸可以賦予寡核苷酸核酸酶抗性。在一些實施方案中，經修飾的核苷酸可以導致適體與其蛋白質靶標的主要疏水相互作用，從而導致高結合效率和穩定的共晶體複合物。在C-5位有取代的嘧啶是經修飾的核苷酸的一個實例。修 飾可包括主鏈修飾、甲基化、罕見的鹼基配對組合，諸如異鹼基(isobase)異胞苷和異胍等。修飾還可包括3’和5’修飾，諸如封端。其他修飾可以包括類似物對一個或多個天然核苷酸的取代、核苷酸間修飾例如具有不帶電荷的鍵聯(例如，甲基膦酸酯、磷酸三酯、磷酸醯胺酯、胺基甲酸酯等)的那些和具有帶電荷的鍵聯(例如，硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)的那些、具有嵌入劑(例如，吖啶、補骨脂素等)的那些、包含螯合劑(例如，金屬、放射性金屬、硼、氧化性金屬等)的那些、包含烷化劑的那些，以及具有經修飾的鍵聯(例如，α異頭核酸等)的那些。另外，核苷酸的糖上通常存在的任何羥基可以被膦酸酯基團或磷酸酯基團取代；由標準保護基團保護；或者被活化以製備與另外的核苷酸或固體載體的另外的鍵聯。5’和3’末端OH基可以被胺、約1至約20個碳原子的有機封端基團部分、聚乙二醇(PEG)聚合物(在一些實施方案中為約10kDa至約80kDa)、PEG聚合物(在一些實施方案中為約20kDa至約60kDa)或其他親水或疏水生物或合成聚合物磷酸化或取代。在一些實施方案中，修飾可以是對嘧啶的C-5位修飾。這些修飾可以藉由直接在C-5位處的醯胺鍵聯或其他類型的鍵聯來產生。
如本文中所用，術語“2’-修飾的核苷酸”通常指具有2’碳原子修飾的核苷酸。例如，胞苷、尿苷、腺苷、鳥苷可具有2’碳原子的修飾。
如本文中所用，術語“2’-氟修飾的核苷酸”通常指具有2’-氟取代基的核苷酸。2’-去氧-2’-氟修飾的寡核苷酸可藉由美國專利第6,531,584號中描述的方法來製備。
如本文中所用，術語“胞苷”通常是指當胞嘧啶藉由β-N1糖苷鍵連接至核糖環(也稱為呋喃核糖)時形成的核苷分子。胞苷可具有以下結構：
Figure 110110012-A0202-12-0040-309
如本文中所用，術語“2’-修飾的胞苷”通常指具有2’碳原子修飾的胞苷。
如本文中所用，術語“2’-去氧-2’-氟胞苷”通常指具有如下結構的 化學品：
Figure 110110012-A0202-12-0040-310
。
如本文中所用，術語“2’-修飾的尿苷”通常指具有2’碳原子的修飾的尿苷。尿苷是糖基化嘧啶類似物，其含有藉由β-N1糖苷鍵連接至核糖環(或更 具體地說，呋喃核糖)的尿嘧啶。尿苷可具有如下結構：
Figure 110110012-A0202-12-0040-312
。
如本文中所用，術語“2’-去氧-2’-氟尿苷”通常指具有如下結構的 化學品：
Figure 110110012-A0202-12-0040-311
。
如本文中所用，術語“2’-修飾的腺苷”通常指具有2’碳原子修飾的腺苷。腺苷是由藉由β-N9糖苷鍵連接到核糖糖分子(呋喃核糖)部分的腺嘌呤分 子組成的嘌呤核苷。腺苷可具有如下結構：
Figure 110110012-A0202-12-0041-313
。
如本文中所用，術語“2’-去氧-2’-氟腺苷”通常是指具有如下結構 的化學品：
Figure 110110012-A0202-12-0041-314
。
如本文中所用，術語“2’-修飾的鳥苷”通常指具有2’碳原子修飾的鳥苷。鳥苷是嘌呤核苷，其包含藉由β-N9糖苷鍵連接至核糖(呋喃核糖)環的鳥 嘌呤。鳥苷可具有如下結構：
Figure 110110012-A0202-12-0041-315
。
如本文中所用，術語“2’-去氧-2’-氟鳥苷”通常是指具有如下結構 的化學品：
Figure 110110012-A0202-12-0041-316
。
如本文中所用，術語“核苷酸”通常指有機分子，其用作用於形成核酸聚合物去氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)的單體單元。核苷酸由三個亞 單位分子組成：含氮鹼基、五碳糖(核糖或去氧核糖)和至少一個磷酸基團。核苷由含氮鹼基和5碳糖組成。因此，帶有磷酸基團的核苷產生核苷酸。
如本文中所用，術語“天然核苷酸”通常指自然界中存在的核苷酸。例如，天然核苷酸可包括胞苷、腺苷、鳥苷、尿苷。在一些實施方案中，“天然核酸”還包含不妨礙擴增和/或測序的合成或修飾的核苷酸。
如本文中所用，術語“參考適體”通常是指與本公開的適體競爭與靶標的結合的適體。在一些實施方案中，參考適體可以結合至與本公開的適體的靶標相同的靶標。
如本文中所用，術語“競爭”通常是指一種化學物質藉由與另一種物質競爭結合或鍵合來抑制該另一種物質的作用。例如，參考適體可以與本公開的適體競爭與靶標的結合。作為另一個實例，本公開的適體可以與靶標的受體或配體競爭與該靶標的結合。
如本文中所用，術語“二級結構”通常指核酸分子的高級結構。二級結構可以藉由單個核酸聚合物內部或兩個聚合物之間的鹼基配對相互作用形成。其可以表示為核酸分子中配對的鹼基列表。二級結構通常可分為螺旋(毗連的鹼基對)和各種環(由螺旋包圍的未配對核苷酸)。通常，這些元件或它們的組合可被進一步分為其他類別，包括莖、凸出、環和螺旋。在本公開中，二級結構可藉由使用NUPACK軟體套件來確定。
如本文中所用，術語“5’-3’”，通常是指從DNA或RNA鏈的5’-末端到3’-末端的順序。5’-末端可以指去氧核糖或核糖的糖環在其末端具有第五個碳的DNA或RNA鏈的末端。連接至5’末端的磷酸基團允許兩個核苷酸的連接，即5’-磷酸與另一個核苷酸的3’-羥基共價結合，以形成磷酸二酯鍵。3’-末端 可以指糖環中第三個碳的羥基處的末端，也稱為尾末端。在新核酸分子的合成中，3’-羥基通常是必需的，因為其連接(聯接)至單獨核苷酸的5’-磷酸，從而形成連接的核苷酸鏈。
如本文中所用，術語“莖”通常指核酸二級結構的區域，莖包含鹼基配對的螺旋。
如本文中所用，術語“凸出”通常指核酸二級結構的區域，在該區域中一條螺旋鏈具有“額外”插入的鹼基，而在核酸分子二級結構中的相對鏈中沒有對應的鹼基。
如本文中所用，術語“環”通常指核酸二級結構的區域，在該區域中螺旋的一條鏈具有一個或多個鹼基，而在核酸分子二級結構中的相對鏈中沒有互補的對應部分。
如本文中所用，術語“共有序列”通常指指定的寡核苷酸的某些位置，不一定是連續的。“指定的”是指位置的組成可以不是完全隨機的。並非混合物中的所有寡核苷酸在該位置具有相同的核苷酸；例如，共有序列可以包含已知比例的特定核苷酸。
如本文中所用，術語“截短”通常是指因核苷酸的缺失而被截短但仍具有所需的或甚至提高的結合特徵的適體。截短物的長度可根據起始適體的長度以及如本文對術語“適體”的定義而變化。截短物中的截短可以發生在起始適體的固定區或可變區域中，或者發生在固定區和可變區兩者中。
如本文中所用，術語“調節生物活性”通常指調節(例如，增加或減少)靶分子(例如，蛋白質，諸如受體或配體)的生物活性。例如，本公開的抗VEGF適體可以調節VEGF和/或VEGF受體的生物活性。
如本文中所用，術語“新生血管疾病或紊亂”通常指與新生血管形成相關的疾病或紊亂。新生血管疾病或紊亂可包括眼部新生血管疾病(例如，視網膜和脈絡膜新生血管疾病)、發紅性青光眼、翼狀胬肉、實體瘤癌症、骨關節炎、類風濕性關節炎、血管異常和畸形(例如，血管瘤、淋巴管瘤等)和銀屑病。
如本文中所用，術語“眼部新生血管疾病”通常是指以眼部新生血管形成(即受試者眼睛中異常血管的發展)為特徵的疾病。
如本文中所用，術語“VEGF相關疾病、紊亂或病況”通常指與VEGF的異常活性或活性喪失相關的疾病、紊亂或病況。例如，VEGF相關的疾病、紊亂或病況可包括異常血管生成。例如，VEGF相關疾病、紊亂或病況可包括癌症、類風濕性關節炎、大皰性疾病(包括大皰性類天皰瘡、皰疹樣皮炎和多形性紅斑)和銀屑病。
如本文中所用，術語“年齡相關性黃斑變性”或“AMD”通常是指與衰老相關的黃斑變性。黃斑變性可影響稱為黃斑的視網膜的中心區域，並且其可導致視力逐漸或快速喪失至20/200或更低的水準。AMD可能會影響諸如用於閱讀和看電視的中央視力，從而導致視力喪失，而外圍視力仍保持相對完好無損。
如本文中所用，術語“糖尿病性視網膜病變”或“DR”通常指糖尿病例如II型糖尿病的晚期微血管併發症。糖尿病性視網膜病是視網膜微血管疾病，可表現為嚴重程度水準遞增和視力預後惡化的一系列階段。DR可大致分為2個主要臨床階段：非增殖性糖尿病性視網膜病變(NPDR)和增殖性糖尿病性視網膜病變(PDR)，其中術語“增殖性”是指視網膜新生血管形成的存在。
如本文中所用，術語“糖尿病性黃斑水腫”通常是指在糖尿病性視網膜病的任何階段附帶的引起中心視覺敏銳度顯著下降的症狀。
如本文中所用，術語“視網膜靜脈阻塞”通常是指完全或部分阻塞的視網膜血管，其限制血液藉由視網膜組織的流動。阻塞部位通常發生在靜脈側，可能發生在分支血管(視網膜分支靜脈阻塞-BRVO)或視網膜中央靜脈(視網膜中央靜脈阻塞-CRVO)中。
如本文中所用，術語“近視性脈絡膜新生血管形成”通常是指在具有病理性近視的人中引起視力障礙的疾病。當黃斑區新生血管時，通常會形成色素性纖維疤痕，導致視覺中心暗點。近視性脈絡膜新生血管形成屬於脈絡膜新生血管形成。
如本文中所用，術語“抗VEGF劑”通常指抑制血管內皮生長因子(“VEGF”)的活性或產生的化合物。
如本文中所用，術語“組成”通常指構成混合物的單獨物質的分佈。單獨物質可以命名為組分。
如本文中所用，術語“醫藥組成物”通常是指以適於藥物施用的形式製備的製劑。醫藥組成物通常可被配製成與其預期的施用途徑相容。施用途徑的實例可以包括但不限於口服和腸胃外施用，例如靜脈內、皮內、皮下、吸入、局部、經皮膚、經黏膜和直腸施用。
如本文中所用，術語“藥學上可接受的賦形劑或載體”通常是指由聯邦或州政府的監管機構批准的或在美國藥典或其他公認的藥典中列出的用於動物，更具體地，用於人的任何賦形劑或載體。術語“載體”可以指與治療劑一起施用的稀釋劑、佐劑、賦形劑或媒介物，並且包括但不限於諸如水和油的無菌液體。
如本文中所用，術語“有效量”通常是指如本文該改善待預防、減輕或治療的紊亂或病況的至少一種症狀所需的量。當涉及本公開的抗VEGF適體、抗Ang2適體或雙特異性適體、組成物或劑時，短語“治療有效量”意指在大量需要這種治療的個體中施用後，適體的量應提供所需的特定藥理反應。需要強調的是，在特定情況下向特定個體施用的治療有效量的適體並不總是能有效治療本文所述的病況/疾病，即使所屬技術領域具有通常知識者認為這種劑量是治療有效量。
如本文中所用，術語“Ang2”通常指血管生成素-2，其是屬於E2F家族的血管生成因子。Ang2被認為是Tie2的天然存在的拮抗劑。除非另有明確說明，否則不僅人Ang2，而且來自各種物種的Ang2也應被視為被該術語所涵蓋。術語“Ang2”還包括全長Ang2的功能片段和組分。人Ang2也稱為Ensembl：ENSG00000091879或MIM：601922。
如本文中所用，術語“該Ang2與該Tie2之間的相互作用”通常指Ang2與Tie2結合的活性。Tie2是內皮受體酪胺酸激酶(RTK)，其參與胚胎血管發育和病理性血管生成。
如本文中所用，術語“基本上不結合”通常是指很少與或幾乎不與特定物質結合。例如，非常少或幾乎沒有(例如，少於10%、少於9%、少於8%、少於7%、少於6%、少於5%、少於4%、少於3%、少於2%、少於1%、少於0.5%、少於0.1%或少於0.01%)本公開的適體可以與其靶標結合。
如本文中所用，術語“抗Ang2適體”通常指對Ang2具有特異性結合親和力的核酸分子。在一些情況下，抗Ang2適體可包含一個或多個(例如，1-20個、1-19個、1-18個、1-17個、1-16個、1-15個、1-14個、1-13個、1-12個、 1-11個、1-10個、1-9個、1-8個、1-7個、1-6個、1-5個、1-4個、1-3個或1-2個)非核苷酸取代，如本文所定義的。例如，抗Ang2適體的一個或多個核苷酸可被聚乙二醇部分或包含多個(例如，1-10個、1-9個、1-8個、1-7個、1-6個、1-5個、1-4個、1-3個或1-2個)聚乙二醇部分的接頭取代。在一些情況下，接頭可以是六乙二醇(H或PEG6)接頭。這種取代可以發生在抗VEGF適體的任何核苷酸上，只要其基本上不影響抗Ang2適體的活性(例如，結合活性或抑制活性)和/或功能。在一些情況下，取代基本上不影響抗Ang2適體的二級結構，例如，取代可能發生在包含在抗Ang2適體二級結構的凸出或環區中的核苷酸上。在某些情況下，取代不會發生在包含在抗Ang2適體二級結構的莖區中的任何核苷酸上。
如本文中所用，術語“抗Ang2劑”通常指抑制Ang2活性或產生的劑。
如本文中所用，術語“阿柏西普”通常指由來自人VEGF受體1和2的胞外結構域的血管內皮生長因子(VEGF)結合部分組成的重組融合蛋白，該血管內皮生長因子結合部分與人IgG1免疫球蛋白的Fc部分融合。
如本文中所用，術語“接頭”通常是指被設計成促進兩個部分功能性連接至連接的部分的劑。例如，接頭可用於形成單鏈，以獲得所需的生物活性。例如，接頭可用於製造單鏈，以賦予所得連接核苷酸所需的穩定性程度。
如本文中所用，術語“核苷酸接頭”通常指由核苷酸製成的接頭。連接相鄰核苷酸的核苷酸接頭的長度可以變化。
如本文中所用，術語“經修飾的核苷酸接頭”通常指具有一個或多個修飾的核苷酸接頭。
如本文中所用，術語“烴接頭”通常指由烴製成的接頭。烴是完全由氫和碳組成的有機化合物。烴的實例包括但不限於，例如甲烷、乙烷、丙烷、丁烷、戊烷、己烷、庚烷、辛烷、壬烷、癸烷、十一烷和十二烷。
如本文中所用，術語“聚乙二醇接頭”通常是指由一個或多個聚乙二醇(PEG)亞單元製成的接頭。
如本文中所用，術語“其片段”通常指可從完整的母體分子(例如，本公開的適體)獲得的部分區域。片段可以仍然保留其所源自的母體分子的性質。在一些情況下，對於製造和/或醫療用途，片段可以提供優於完整母體分子的許多有利方面。
如本文中所用，術語“變體”通常指與母體分子(例如，適體)相異在於至少一個核苷酸的適體分子。變體可以指分子本身，包含該分子的組成物。當這種分子是DNA或RNA時，其也可以指分子的核苷酸序列。在一些情況下，變體與其母體分子(例如，適體)相異在於一個或多個核苷酸(諸如1-50個、1-40個、1-30個、1-20個、1-15個、1-14個、1-13個、1-12個、1-11個、1-10個、1-9個、1-8個、1-7個、1-6個、1-5個、1-4個、1-3個或1-2個核苷酸)的添加、缺失或取代。在一些情況下，變體可以與其母體分子的核苷酸序列具有至少約80%(例如，至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或更高)的序列同源性/同一性。
如本文中所用，術語“減少新生血管形成”通常是指新生血管形成的程度降低。新生血管形成是新血管的自然形成，通常以功能性微血管網路的形 式存在，可以能夠被紅細胞灌注，該形式可作為對局部不良灌注或局部缺血的反應的側支迴圈。在本公開中，其可以與“血管生成”互換使用。
如本文中所用，術語“降低血管通透性”通常指組織中血管通透性的程度降低。血管通透性的改變被認為在正常和病理生理過程中都起作用(Cullinan-Bove等人，1993,Endocrinology 133：829-837；Senger等人，1993,Cancer and Metastasis Reviews,12：303-324)。與血管生成和/或血管通透性增加相關的疾病狀態可以是癌症、糖尿病、銀屑病、類風濕性關節炎、卡波西氏肉瘤、血管瘤、急性和慢性腎病、動脈粥樣硬化、動脈再狹窄、自身免疫性疾病、急性炎症、過度瘢痕形成和黏連、子宮內膜異位症、功能失調性子宮出血和伴有視網膜血管增生的眼病。
如本文中所用，術語“小鼠缺血性視網膜病(OIR)模型”通常是指在小鼠中發生氧誘導視網膜病的動物模型，其具有可再現且可定量的增殖性視網膜新生血管形成。該模型可適用於檢測早產兒視網膜病(ROP)和其他血管病變中視網膜新生血管形成的發病機制和治療干預。該模型的製備方法描述於例如Smith L E等人Oxygen-induced retinopathy in the mouse.Invest.Opthalmol.Vis.Sci.1994；35：101-111中。
如本文中所用，術語“Ang2相關疾病、紊亂或病況”通常指與Ang2的異常活性或活性喪失相關的疾病、紊亂或病況。例如，Ang2相關疾病、紊亂或病況可對血管生成有影響。這種疾病、紊亂或病況的實例可以是癌症或癌性疾病、眼病諸如年齡相關性黃斑變性和糖尿病性視網膜病，和/或慢性腎臟疾病諸如糖尿病性腎病、腎後性衰竭、腎前性氮質血症和固有腎衰竭。
如本文中所用，除非上下文另有明確規定，否則單數形式“一個/種(a)”、“和(and)”以及“該(the)”包括複數指代物。因此，例如，提及“一顆(a)顆粒”包括多個這樣的顆粒，提及“該(the)序列”包括提及一個或多個該序列及其所屬技術領域具有通常知識者已知的等同物，等等。
如本文中所用，術語“約”通常是指基於所屬技術領域具有通常知識者合理推斷的給定值的近似值，包括由於該給定值的實驗和/或測量條件而產生的等同值和近似值。例如，其可以指比該術語所修飾的值高或低不超過10%的值。
除非另有定義，否則本文使用的所有技術和科學術語具有與本公開所屬技術領域具有通常知識者通常理解的含義相同的含義。儘管在本公開的實踐或測試中也可以使用類似於或等同於本文所述的方法和材料的任何方法和材料，但現在描述較佳的方法和材料。本文提及的所有出版物均藉由引用併入本文，以公開和描述與其結合引用該出版物的方法和/或材料。
對於所屬技術領域具有通常知識者來說，在閱讀本公開內容後，顯而易見的是，本文描述和示出的每個單獨實施方案都具有分立的組件和特徵，該組件和特徵可以容易地與另外的幾個實施方案中的任一個的特徵分離或結合，而不脫離本公開的範圍或精神。任何引述的方法均可按照引述的事件的順序或者邏輯上可能的任何其他順序來執行。這旨在為所有此類組合提供支持。
抗VEGF適體
一方面，本公開提供了抗VEGF適體，其與VEGF-121結合，其中KD值約為20奈莫耳(nM)或更小，並與VEGF-165結合，其中KD值約為20奈莫耳(nM)或更小。
例如，抗VEGF適體可與VEGF-121結合，其中KD值為約20奈莫耳(nM)或更小、18奈莫耳(nM)或更小、16奈莫耳(nM)或更小、14奈莫耳(nM)或更小、12奈莫耳(nM)或更小、10奈莫耳(nM)或更小、8奈莫耳(nM)或更小、6奈莫耳(nM)或更小、4奈莫耳(nM)或更小、2奈莫耳(nM)或更小、1奈莫耳(nM)或更小、0.5奈莫耳(nM)或更小、0.4奈莫耳(nM)或更小、0.2奈莫耳(nM)或更小、0.1奈莫耳(nM)或更小、0.09奈莫耳(nM)或更小、0.08奈莫耳(nM)或更小、0.07奈莫耳(nM)或更小、0.06奈莫耳(nM)或更小、0.05奈莫耳(nM)或更小、0.04奈莫耳(nM)或更小或0.03奈莫耳(nM)或更小。
例如，抗VEGF適體可與VEGF-165結合，其中KD值為約20奈莫耳(nM)或更小、18奈莫耳(nM)或更小、16奈莫耳(nM)或更小、14奈莫耳(nM)或更小、12奈莫耳(nM)或更小、10奈莫耳(nM)或更小、8奈莫耳(nM)或更小、6奈莫耳(nM)或更小、4奈莫耳(nM)或更小、2奈莫耳(nM)或更小、1奈莫耳(nM)或更小、0.5奈莫耳(nM)或更小、0.4奈莫耳(nM)或更小、0.2奈莫耳(nM)或更小、0.18奈莫耳(nM)或更小、0.15奈莫耳(nM)或更小、0.12奈莫耳(nM)或更小、0.1奈莫耳(nM)或更小、0.09奈莫耳(nM)或更小、0.08奈莫耳(nM)或更小、0.07奈莫耳(nM)或更小、0.06奈莫耳(nM)或更小、0.05奈莫耳(nM)或更小、0.04奈莫耳(nM)或更小或0.03奈莫耳(nM)或更小。
VEGF-121可以是人VEGF-121、小鼠VEGF-120、猴VEGF-121、兔VEGF-121和/或大鼠VEGF-120。VEGF-165可以是人VEGF-165、小鼠VEGF-164、猴VEGF-165、兔VEGF-165和/或大鼠VEGF-164。
人VEGF-121(NCBI編號P15692-9)可包含如SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列。小鼠VEGF-120(NCBI編號Q00731-3)可包含如SEQ ID NO：44 所示的胺基酸序列。大鼠VEGF-120(NCBI編號P16612-4)可包含如SEQ ID NO：42所示的胺基酸序列。
人VEGF-165(NCBI編號P15692-4)可包含如SEQ ID NO：35所示的胺基酸序列。小鼠VEGF-164(NCBI編號Q00731-2)可包含如SEQ ID NO：43所示的胺基酸序列。猴VEGF-165(NCBI編號H9EQI6)可包含如SEQ ID NO：35所示的胺基酸序列。大鼠VEGF-164(NCBI編號P16612-2)可包含如SEQ ID NO：39所示的胺基酸序列。
兔VEGF-189(NCBI編號G1T1L9)可包含如SEQ ID NO：36所示的胺基酸序列。
抗VEGF適體可與以下兩者特異性結合：1)VEGF-121的VEGF受體結合結構域或其片段；和2)VEGF-165的VEGF受體結合結構域或其片段。
VEGF-121的VEGF受體結合結構域可包含如SEQ ID NO：30-34、40、41和45中的任一個所示的胺基酸序列。VEGF-165的VEGF受體結合結構域可包含如SEQ ID NO：30-34、40和41中的任一個所示的胺基酸序列。
人VEGF-121的受體結合結構域1可包含如SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列。人VEGF-121的受體結合結構域2可包含如SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列。人VEGF-121的受體結合結構域3可包含如SEQ ID NO：32所示的胺基酸序列。人VEGF-121的受體結合結構域4可包含如SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列。人VEGF-121的受體結合結構域5可包含如SEQ ID NO：34所示的胺基酸序列。
人VEGF-165的受體結合結構域1可包含SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列。人VEGF-165的受體結合結構域2可包含SEQ ID NO：31所示的胺 基酸序列。人VEGF-165的受體結合結構域3可包含SEQ ID NO：32所示的胺基酸序列。人VEGF-165的受體結合結構域4可包含SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列。人VEGF-165的受體結合結構域5可包含SEQ ID NO：34所示的胺基酸序列。
猴VEGF-165的受體結合結構域1可包含如SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列。猴VEGF-165的受體結合結構域2可包含如SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列。猴VEGF-165的受體結合結構域3可包含如SEQ ID NO：32所示的胺基酸序列。猴VEGF-165的受體結合結構域4可包含如SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列。猴VEGF-165的受體結合結構域5可包含如SEQ ID NO：34所示的胺基酸序列。
兔VEGF-189的受體結合結構域1可包含如SEQ ID NO：37所示的胺基酸序列。兔VEGF-189的受體結合域2可包含SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列。兔VEGF-189的受體結合域3可包含SEQ ID NO：38所示的胺基酸序列。兔VEGF-189的受體結合結構域4可包含如SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列。兔VEGF-189的受體結合結構域5可包含如SEQ ID NO：34所示的胺基酸序列。
大鼠VEGF-164的受體結合結構域1可包含SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列。大鼠VEGF-164的受體結合結構域2可包含SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列。大鼠VEGF-164的受體結合結構域3可包含SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列。大鼠VEGF-164的受體結合結構域4可包含SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列。大鼠VEGF-164的受體結合結構域5可包含SEQ ID NO：41中所述的胺基酸序列。
大鼠VEGF-120的受體結合結構域1可包含SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列。大鼠VEGF-120的受體結合結構域2可包含SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列。大鼠VEGF-120的受體結合結構域3可包含SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列。大鼠VEGF-120的受體結合結構域4可包含SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列。大鼠VEGF-120的受體結合結構域5可包含SEQ ID NO：41所示的胺基酸序列。
小鼠VEGF-164的受體結合結構域1可包含SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列。小鼠VEGF-164的受體結合結構域2可包含SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列。小鼠VEGF-164的受體結合結構域3可包含SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列。小鼠VEGF-164的受體結合結構域4可包含如SEQ ID NO：33所示的胺基酸序列。小鼠VEGF-164的受體結合結構域5可包含SEQ ID NO：41所示的胺基酸序列。
小鼠VEGF-120的受體結合結構域1可包含如SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列。小鼠VEGF-120的受體結合結構域2可包含如SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列。小鼠VEGF-120的受體結合結構域3可包含如SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列。小鼠VEGF-120的受體結合結構域4可包含如SEQ ID NO：45所示的胺基酸序列。小鼠VEGF-120的受體結合結構域5可包含如SEQ ID NO：41所示的胺基酸序列。
抗VEGF適體可以抑制VEGF-121與VEGF-R1之間的相互作用。抗VEGF適體可以抑制VEGF-121與VEGF-R2之間的相互作用。抗VEGF適體可以抑制VEGF-165與VEGF-R1之間的相互作用。抗VEGF適體還可以或另外抑制VEGF-165與VEGF-R2之間的相互作用。
本公開的抗VEGF適體能夠減少和/或改善動物模型諸如眼用動物模型中的新生血管形成和/或滲漏。
動物模型可以是脊椎動物模型，在一些情況下，動物模型可以是哺乳動物模型。動物可以是大鼠、小鼠、兔子、山羊、綿羊、非人靈長類動物或任何其他合適的動物。
在一些實施方案中，本公開的抗VEGF適體能夠減少和/或改善鐳射誘導脈絡膜新生血管形成(CNV)模型(諸如大鼠模型或非人類靈長類動物(NHP)模型)中的損傷和/或滲漏。
本公開的抗VEGF適體可以是高度可溶的。例如，抗VEGF適體可以以相對高的程度(例如，總重量的80%或更多、總重量的85%或更多、總重量的90%或更多、總重量的95%或更多、總重量的99%或更多)溶解在溶劑中。例如，抗VEGF適體可以以100mg/ml或更高的濃度，或者以150mg/ml或更高的濃度，諸如以200mg/ml或更高的濃度配製。
抗VEGF適體可以是RNA適體、DNA適體或其組合。例如，抗VEGF適體可以主要包含RNA，可以主要包含DNA，或者其可同時包含RNA和DNA。
抗VEGF適體可以包含一個或多個(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15個或更多個)經修飾的核苷酸。在一些情況下，抗VEGF適體的所有核苷酸都可以是經修飾的核苷酸。例如，抗VEGF適體可具有20個核苷酸，並且所有這20個核苷酸都可以是經修飾的核苷酸。
在一些情況下，本公開的抗VEGF適體可具有核酸酶抗性。
經修飾的核苷酸可在一個或多個獨立選自核糖位置、去氧核糖位置、磷酸位置和鹼基位置的位置上包含化學取代或修飾。經修飾的核苷酸可以包括一種或多種獨立地選自以下的修飾：2’-位糖修飾、2’-胺基(2’-NH2)修飾、2’-氟(2’-F)修飾、2’-O-甲基(2’-OMe)修飾、2’-O-(2-甲氧基乙基)(2’-OMe)修飾、5-位修飾的嘧啶、胞嘧啶外環胺上的修飾、5’-溴尿嘧啶取代、5’-溴去氧尿嘧啶取代、5’-溴去氧胞苷取代、主鏈修飾、鎖核酸(LNA)、甲基化、3’帽和5’帽。5-位修飾的嘧啶選自5-羧基-2’-去氧尿苷、5-胺基烯丙基-2’-去氧尿苷、5-[(3-吲哚基)丙醯胺-N-烯丙基]-2’-去氧尿苷、5-羧基-2’-去氧胞苷、5-胺基烯丙基-2’-去氧胞苷、生物素-16-胺基烯丙基-2’-去氧胞苷、5-(N-苄基羧醯胺)-2’-去氧尿苷、5-(N-異丁基羧醯胺)-2’-去氧尿苷、5-(N-萘基甲基羧醯胺)-2’-去氧尿苷和5-(N-色胺羧醯胺)-2’-去氧尿苷。
抗VEGF適體可包含至少一個(例如1、個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個、15個或更多個)2’-修飾的核苷酸。在一些實施方案中，所有的核苷酸都可以是2’-修飾的核苷酸。2’-修飾的核苷酸可選自2’-胺基修飾的核苷酸、2’-氟修飾的核苷酸、2’-O-甲基修飾的核苷酸和2’-O-(2-甲氧基乙基)修飾的核苷酸。
在一些情況下，所有胞苷都可以是2’-修飾的胞苷。在一些情況下，所有的胞苷都可以是2’-氟修飾的胞苷和/或2’-O-甲基修飾的胞苷。在一些情況下，所有的胞苷都可以是2’-去氧-2’-氟胞苷。在一些情況下，所有的尿苷都可以是2’-修飾的尿苷。在一些情況下，所有的尿苷都可以是2’-氟修飾的尿苷和/或2’-O-甲基修飾的尿苷。在一些情況下，所有的尿苷都可以是2’-去氧-2’-氟尿苷。在一些情況下，所有的腺苷都可以是2’-修飾的腺苷。在一些情況下，所有 的腺苷都可以是2’-氟修飾的腺苷和/或2’-O-甲基修飾的腺苷。在一些情況下，所有的腺苷都可以是2’-去氧-2’-氟腺苷。在一些情況下，所有的鳥苷都可以是2’-修飾的鳥苷。在一些情況下，所有的鳥苷可以是2’-氟修飾的鳥苷和/或2’-O-甲基修飾的鳥苷。在一些情況下，所有的鳥苷可以是2’-去氧-2’-氟鳥苷。
例如，抗VEGF適體包含至少一個2’-修飾的核苷酸。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有核苷酸都可以是2’-修飾的核苷酸。在一些實施方案中，抗VEGF適體的所有核苷酸都可以是2’-氟修飾的核苷酸和/或2’-O-甲基修飾的核苷酸。例如，2’-氟修飾的核苷酸可以是2’-氟(2’-F)修飾的核苷酸或2’- 氟-2’-去氧修飾的核苷酸。例如，2’-氟修飾的核苷酸可包含以下結構：
Figure 110110012-A0202-12-0057-317
。
在一些情況下，抗VEGF適體不包含任何天然核苷酸(例如，未修飾的A、C、T、U或G)。
抗VEGF適體可包含約10個至約150個核苷酸。例如，抗VEGF適體可包含約10個至約150個核苷酸、約10個至約140個核苷酸、約10個至約130個核苷酸、約10個至約120個核苷酸、約10個至約110個核苷酸、約10個至約100個核苷酸、約10個至約90個核苷酸、約10個至約80個核苷酸、約10個至約70個核苷酸、約10個至約60個核苷酸、約10個至約50個核苷酸、約10個至約40個核苷酸、約10個至約30個核苷酸、約10個至約20個核苷酸。
抗VEGF適體可以與抗VEGF參考適體競爭與VEGF-165和/或與VEGF-121的結合。
本公開的抗VEGF參考適體或抗VEGF適體可包含具有或不具有修飾的核苷酸序列。例如，適體可以包含天然和/或經修飾的核苷酸。當適體被定義為包含特定SEQ ID NO所示的核苷酸序列或由該核苷酸序列組成時，該序列中的核苷酸可被進一步修飾。
根據本公開，抗VEGF適體r-AMS0431.0具有天然核苷酸，其核苷酸序列是如SEQ ID NO：46所示的；抗VEGF適體AMS0431.0具有相應的2’-氟修飾的核苷酸，其核苷酸序列是如SEQ ID NO：91所示的。因此，包含如SEQ ID NO：46所示的胺基酸序列的適體可涵蓋r-AMS0431.0和AMS0431.0，但包含如SEQ ID NO：91所示的核苷酸序列的適體可以不涵蓋r-AMS0431.0。
類似地，在本公開中，通常，以“r-AMSxxxx”(例如，r-AMS0433)命名的適體(例如，本公開的適體)具有天然核苷酸(但可以包含接頭，例如，本文所述的H接頭)，並且包含相應的2’-氟修飾的核苷酸的適體被命名為“AMSxxxx”(例如，AMS0433)。
本公開的抗VEGF參考適體或抗VEGF適體可包含二級結構，該二級結構(例如，從5’至’方向)包含第一莖、第一環、第二莖和第二環。抗VEGF適體可以包含由(例如，從5’至3’方向)第一莖、第一環、第二莖和第二環組成的二級結構。
本公開的抗VEGF參考適體或抗VEGF適體可包含第一共有序列，該第一共有序列包含如SEQ ID NO：136-137中的任一個所示的核苷酸序列。
可選地，或另外地，本公開的抗VEGF參考適體或抗VEGF適體可包含第二共有序列，該第二共有序列包含如SEQ ID NO：138-139中的任一個所示的核苷酸序列。
例如，本公開的抗VEGF參考適體或抗VEGF適體可包含第一共有序列以及第二共有序列，該第一共有序列包含如SEQ ID NO：136所示的核苷酸序列，該第二共有序列包含如SEQ ID NO：138所示的核苷酸序列；本公開的抗VEGF參考適體或抗VEGF適體可包含第一共有序列以及第二共有序列，該第一共有序列包含如SEQ ID NO：137所示的核苷酸序列，該第二共有序列包含如SEQ ID NO：139所示的核苷酸序列。
第一共有序列可包含形成本公開的抗VEGF參考適體或抗VEGF適體的第一莖和第一環的核苷酸序列。在一些情況下，第一共有序列可以不包含在形成本公開的抗VEGF參考適體或抗VEGF適體的第二莖或第二環的核苷酸序列中。
第二共有序列可包含形成本公開的抗VEGF參考適體或抗VEGF適體的第二莖和第二環的核苷酸序列。在一些情況下，第二共有序列可以不包含在形成本公開的抗VEGF參考適體或抗VEGF適體的第一莖或第一環的核苷酸序列中。
本公開的抗VEGF參考適體或抗VEGF適體可包含第一共有序列和第二共有序列，其中該第一共有序列可位於該第二共有序列的5’。
在一些情況下，本公開的抗VEGF參考適體或抗VEGF適體可包含第一共有序列和第二共有序列，其中該第二共有序列可位於第一共有序列的5’。
本公開的抗VEGF參考適體或抗VEGF適體可包含如SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列，或其變體或截短形式。變體可包含與SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示 的核苷酸序列具有至少50%同一性的核苷酸序列。變體可包含具有一個或多個(例如，1-2個、1-3個、1-4個、1-5個、1-6個、1-7個、1-8個、1-9個、1-10個、1-11個、1-12個、1-13個、1-14個、1-15個、1-16個、1-17個、1-18個、1-19個、1-20個或更多個)核苷酸添加、缺失和/或取代的如SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列。
抗VEGF參考適體可包含約10個至約150個核苷酸。例如，抗VEGF參考適體可包含約10個至約150個核苷酸、約10個至約140個核苷酸、約10個至約130個核苷酸、約10個至約120個核苷酸、約10個至約110個核苷酸、約10個至約100個核苷酸、約10個至約90個核苷酸、約10個至約80個核苷酸、約10個至約70個核苷酸、約10個至約60個核苷酸、約10個至約50個核苷酸、約10個至約40個核苷酸、約10個至約30個核苷酸、約10個至約20個核苷酸。
抗VEGF適體可用於調節VEGF或VEGF受體的生物活性。
抗VEGF適體可用於預防、治療和/或改善VEGF相關疾病、紊亂或病況。例如，VEGF相關疾病、紊亂或病況可以是新生血管疾病、紊亂或病況。例如，VEGF相關疾病、紊亂或病況可以是眼部新生血管疾病、紊亂或病況。例如，VEGF相關疾病、紊亂或病況可選自年齡相關性黃斑變性、脈絡膜新生血管形成、糖尿病性黃斑水腫、視網膜靜脈阻塞和糖尿病性視網膜病。例如，VEGF相關疾病、紊亂或病況可選自濕性年齡相關性黃斑變性、近視性脈絡膜新生血管和增生性糖尿病視網膜病變。
一方面，本公開提供了抗VEGF劑，其包含本公開的適體。抗VEGF劑還可包含聚乙二醇(PEG)部分。例如，PEG部分可以綴合於抗VEGF適體的5’末端和/或3’末端。
另一方面，本公開提供了包含本申請的抗VEGF適體和/或抗VEGF劑的組成物。
在一些情況下，組成物可以是醫藥組成物。例如，組成物可包含藥學上可接受的賦形劑或載體。
在一些情況下，組成物可以以離散的劑型存在，其中每個劑型含有預定量的呈粉末或顆粒、溶液或者水性或非水性液體中的懸浮液的形式的活性成分。此類劑型可以藉由技術人員已知的任何方法製備，例如，其可包括將活性成分與載體締合的步驟，該載體構成一種或多種其他成分。通常，藉由將活性成分與液體載體或細粉狀固體載體或兩者均勻而緊密地混合，然後，如果需要，將產品塑形為所需的外觀來製備組成物。
該組成物可包含治療有效量的活性組成物(例如，本公開的抗VEGF適體或抗VEGF劑)。治療有效量可以是能夠預防和/或治癒(至少部分)患有病況或紊亂或有發展該病況或紊亂的風險的受試者的新生血管疾病或紊亂和/或其任何併發症的本公開組成物的量。所包含的活性劑的具體量/濃度可以根據施用方法和患者的需要而變化，並且可以基於例如體積、黏度和/或患者的體重等來確定。例如，合適的劑量可以是約0.1mg或1mg/kg/日至約50mg/kg/日；有時，劑量可以甚至更高。應當理解，所屬技術領域具有通常知識者(例如醫生或藥劑師)可以基於特定患者、製劑和/或疾病的狀況方便地調整這些特定劑量。
該組成物還可包含有效量的附加治療活性組分，例如，用於預防、治療和/或改善新生血管疾病或紊亂的附加治療活性組分。該活性組分中的每一種可以以藥物有效量存在於醫藥組成物中。本申請的抗VEGF適體可以與或可以不與附加活性組分相關聯。
下麵描述了非限制性示例性組成物和製備這種組成物的方法。例如，組成物可呈適於口服施用的形式如片劑、膠囊劑、丸劑、粉劑、緩釋製劑、溶液、混懸劑，呈適於腸胃外注射的形式如無菌溶液、混懸劑或乳劑，呈適於局部施用的形式如軟膏或乳膏，或呈適於直腸施用的形式如栓劑。組成物可呈適於精確劑量的單次施用的單位劑型。在一些實施方案中，組成物可以是液體醫藥組成物。
在組成物中，抗VEGF適體可以根據常規藥物配製技術與藥物載體緊密混合。根據施用所需的製劑形式，載體可採取多種形式。
組成物還可包含一種或多種藥學上可接受的添加劑和賦形劑。此類添加劑和賦形劑包括但不限於防黏劑、抗泡沫組成物、緩衝組成物、聚合物、抗氧化劑、防腐劑、螯合組成物、黏度調節劑、增生劑(tonicifiers)、調味劑、著色劑、加臭劑(odorants)、遮光劑、懸浮組成物、黏合劑、填充劑、增塑劑、潤滑劑和/或其混合物。
另一方面，本公開提供了用於調節VEGF或VEGF受體的生物活性的方法，其包括向有此需要的受試者施用有效量的本公開的抗VEGF適體或抗VEGF劑。
另一方面，本公開提供了用於預防、治療和/或改善VEGF相關疾病、紊亂或病況的方法，其包括向有此需要的受試者施用有效量的本公開的抗VEGF適體或抗VEGF劑。
例如，VEGF相關疾病、紊亂或病況可以是新生血管疾病、紊亂或病況。例如，VEGF相關疾病、紊亂或病況可以是眼部新生血管疾病、紊亂或病況。例如，VEGF相關疾病、紊亂或病況可選自年齡相關性黃斑變性、脈絡膜新生血管形成、糖尿病性黃斑水腫、視網膜靜脈阻塞和糖尿病性視網膜病。例如，VEGF相關疾病、紊亂或病況可選自濕性年齡相關性黃斑變性、近視性脈絡膜新生血管和增生性糖尿病視網膜病變。
一方面，本公開提供了本公開的抗VEGF適體或抗VEGF劑在製備用於調節VEGF或VEGF受體的生物活性的劑方面的用途。
一方面，本公開提供了本公開的適體或本公開的抗VEGF劑在製備用於預防、治療和/或改善VEGF相關疾病、紊亂或病況的藥物方面的用途。
VEGF相關疾病、紊亂或病況可以是新生血管疾病、紊亂或病況。例如，VEGF相關疾病、紊亂或病況可以是眼部新生血管疾病、紊亂或病況。例如，VEGF相關疾病、紊亂或病況可選自年齡相關性黃斑變性、脈絡膜新生血管形成、糖尿病性黃斑水腫、視網膜靜脈阻塞和糖尿病性視網膜病。例如，VEGF相關疾病、紊亂或病況可選自濕性年齡相關性黃斑變性、近視性脈絡膜新生血管和增生性糖尿病視網膜病變。
抗Ang2適體
一方面，本公開提供了與Ang2特異性結合的適體，其中KD值約為500皮莫耳(pM)或更小。例如，抗Ang2適體可與Ang2結合，其中KD值約為500皮 莫耳(pM)或更小、約400皮莫耳(pM)或更小、約300皮莫耳(pM)或更小、約200皮莫耳(pM)或更小、約100皮莫耳(pM)或更小、約90皮莫耳(pM)或更小、約80皮莫耳(pM)或更小、約70皮莫耳(pM)或更小、約60皮莫耳(pM)或更小、約50皮莫耳(pM)或更小、約40皮莫耳(pM)或更小、約30皮莫耳(pM)或更小或約20皮莫耳(pM)或更小。
Ang2可以是人Ang2、小鼠Ang2、猴Ang2、兔Ang2和/或大鼠Ang2。
抗Ang2適體可以基本上不與人Ang1結合。例如，抗Ang2適體可與Ang1結合，其親和力顯著低於其對Ang2的親和力(例如，低至少1倍，低至少2倍，低至少3倍，低至少4倍或更多倍)。在一些情況下，抗Ang2適體可與Ang1結合，其中使用利用放射性或螢光測量的配體結合測定法、表面電漿共振(SPR)、生物層干涉測量法(BLI，例如Octet®系統)、SRU生物系統BIND®、等溫滴定量熱法(ITC)或微尺度熱泳法(MST)不能測得KD值。
抗Ang2適體可以抑制Ang2與Tie2之間的相互作用。
本公開的抗Ang2適體能夠減少和/或改善動物模型中(諸如在眼用動物模型中)的新生血管形成和/或血管通透性。例如，眼用動物模型可以是氧誘導缺血性視網膜病(OIR)模型。動物模型可以是脊椎動物模型，在一些情況下，動物模型可以是哺乳動物模型。動物可以是大鼠、小鼠、兔子、山羊、綿羊、非人靈長類動物或任何其他合適的動物。
本公開的抗Ang2適體可以能夠在小鼠氧誘導缺血性視網膜病(OIR)模型中減少新生血管形成和/或減少血管通透性。
本公開的抗Ang2適體可以是高度可溶的。例如，抗Ang2適體可以以相對高的程度(例如，總重量的80%或更多、總重量的85%或更多、總重量的90%或更多、總重量的95%或更多、總重量的99%或更多)溶於溶劑中。例如，可以以100mg/ml或更高的濃度，150mg/ml或更高的濃度，諸如以至少200mg/ml的濃度配製抗Ang2適體。
抗Ang2適體可以是RNA適體、DNA適體或其組合。例如，抗VEGF適體可以主要包含RNA，可以主要包含DNA，或者其可同時包含RNA和DNA。
抗Ang2適體可包含一個或多個經修飾的核苷酸。在一些情況下，抗Ang2適體的所有核苷酸可以是經修飾的核苷酸。
例如，經修飾的核苷酸可在一個或多個獨立選自核糖位置、去氧核糖位置、磷酸位置和鹼基位置的位置上包含化學取代或修飾。經修飾的核苷酸可以包括一種或多種獨立地選自以下的修飾：2’-位糖修飾、2’-胺基(2’-NH2)修飾、2’-氟(2’-F)修飾、2’-O-甲基(2’-OMe)修飾、2’-O-(2-甲氧基乙基)(2’-OMe)修飾、5-位修飾的嘧啶、胞嘧啶外環胺上的修飾、5’-溴尿嘧啶取代、5’-溴去氧尿嘧啶取代、5’-溴去氧胞苷取代、主鏈修飾、鎖核酸(LNA)、甲基化、3’帽和5’帽。5-位修飾的嘧啶可選自5-羧基-2’-去氧尿苷、5-胺基烯丙基-2’-去氧尿苷、5-[(3-吲哚基)丙醯胺-N-烯丙基]-2’-去氧尿苷、5-羧基-2’-去氧胞苷、5-胺基烯丙基-2’-去氧胞苷、生物素-16-胺基烯丙基-2’-去氧胞苷、5-(N-苄基羧醯胺)-2’-去氧尿苷、5-(N-異丁基羧醯胺)-2’-去氧尿苷、5-(N-萘基甲基羧醯胺)-2’-去氧尿苷和5-(N-色胺羧醯胺)-2’-去氧尿苷。
抗Ang2適體可包含至少一個(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15個或更多個)2’-修飾的核苷酸。在一些情況下，抗Ang2適體的所有核苷酸都可以是2’-修飾的核苷酸。2’-修飾的核苷酸可選自2’-胺基修飾的核苷酸、2’-氟修飾的核苷酸、2’-O-甲基修飾的核苷酸和2’-O-(2-甲氧基乙基)修飾的核苷酸。例如，2’-氟修飾的核苷酸可以是2’-氟(2’-F)修飾的核苷酸或2’-氟-2’-去氧修飾的核苷酸。例如，2’-氟修飾的核苷酸可包含以下結構：
Figure 110110012-A0202-12-0066-318
抗Ang2適體可包含至少一個2’-氟修飾的核苷酸、至少一個2’-O-甲基修飾的核苷酸和/或至少一個LNA。
在一些情況下，抗Ang2適體的所有胞苷都可以是2’-修飾的胞苷。在一些情況下，所有的胞苷都可以是2’-氟修飾的胞苷和/或2’-O-甲基修飾的胞苷。在一些情況下，所有的胞苷都可以是2’-去氧-2’-氟胞苷。在一些情況下，所有的尿苷都可以是2’-修飾的尿苷。在一些情況下，所有的尿苷都可以是2’-氟修飾的尿苷和/或2’-O-甲基修飾的尿苷。在一些情況下，所有的尿苷都可以是2’-去氧-2’-氟尿苷。在一些情況下，所有的腺苷都可以是2’-修飾的腺苷。在一些情況下，所有的腺苷都可以是2’-氟修飾的腺苷和/或2’-O-甲基修飾的腺苷。在一些情況下，所有的腺苷都可以是2’-去氧-2’-氟腺苷。在一些情況下，所有的鳥苷都可以是2’-修飾的鳥苷。在一些情況下，所有的鳥苷可以是2’-氟修飾的鳥苷和/或2’-O-甲基修飾的鳥苷。在一些情況下，所有的鳥苷可以是2’-去氧-2’-氟鳥苷。在一些情況下，所有的核苷酸都可以是2’-氟修飾的核苷酸和/或2’-O-甲基修飾的核苷酸。在一些情況下，所有的核苷酸可以是2’-氟修飾的核苷酸。
在一些情況下，抗Ang2適體不包含任何天然核苷酸(例如，未修飾的A、C、T、U或G)。
抗Ang2適體可包含約10個至約150個核苷酸。例如，抗Ang2適體可包含約10個至約150個核苷酸、約10個至約140個核苷酸、約10個至約130個核苷酸、約10個至約120個核苷酸、約10個至約110個核苷酸、約10個至約100個核苷酸、約10個至約90個核苷酸、約10個至約80個核苷酸、約10個至約70個核苷酸、約10個至約60個核苷酸、約10個至約50個核苷酸、約10個至約40個核苷酸、約10個至約30個核苷酸、約10個至約20個核苷酸。
抗Ang2適體可以與抗Ang2參考適體競爭與Ang2的結合。
本公開的抗Ang2參考適體或抗Ang2適體可包含具有或不具有修飾的核苷酸序列。例如，適體可以包含天然和/或經修飾的核苷酸。當適體被定義為包含特定SEQ ID NO所示的核苷酸序列或由該核苷酸序列組成時，該序列中的核苷酸可被進一步修飾。
根據本公開，抗Ang2適體r-AMS0526具有天然核苷酸，並且核苷酸序列是如SEQ ID NO：2所示的；抗Ang2適體AMS0526具有相應的2’-氟修飾的核苷酸，並且核苷酸序列是如SEQ ID NO：6所示的。因此，包含如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列的適體可涵蓋r-AMS0526和AMS0526，但包含如SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列的適體可以不涵蓋r-AMS0526。
類似地，抗Ang2適體r-AMS0525具有天然核苷酸，並且核苷酸序列是如SEQ ID NO：1所示的；抗Ang2適體AMS0525具有相應的2’-氟修飾的核苷酸，並且核苷酸序列是如SEQ ID NO：5所示的。抗Ang2適體r-AMS0525.3 具有天然核苷酸，並且核苷酸序列是如SEQ ID NO：3所示的；抗Ang2適體AMS0525.3具有相應的2’-氟修飾的核苷酸，並且核苷酸序列是如SEQ ID NO：7所示的。抗Ang2適體r-AMS0525.4具有天然核苷酸，並且核苷酸序列是如SEQ ID NO：4所示的；抗Ang2適體AMS0525.4具有相應的2’-氟修飾的核苷酸，並且核苷酸序列是如SEQ ID NO：8所示的。抗Ang2適體r-AMS0525具有天然核苷酸，並且核苷酸序列是如SEQ ID NO：1所示的；抗Ang2適體AMS0525.5、AMS0525.6、AMS0525.7或AMS0525.8具有經各種修飾的相應核苷酸，並且其核苷酸序列是如SEQ ID NO：9-12所示的。
本公開的抗Ang2參考適體或抗Ang2適體可包含二級結構，該二級結構從5’至3’方向包含第一莖、第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出、第四莖和第一環。抗Ang2適體可包含二級結構，該二級結構從5’至3’方向由第一莖、第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出、第四莖和第一環組成。
本公開的抗Ang2參考適體或抗Ang2適體可包含第一共有序列，該第一共有序列包含如SEQ ID NO：13-20中的任一個所示的核苷酸序列。
可選地，或另外地，本公開的抗Ang2參考適體或抗Ang2適體可包含第二共有序列，該第二共有序列包含如SEQ ID NO：21-28中的任一個所示的核苷酸序列。
例如，本公開的抗Ang2參考適體或抗Ang2適體可包含第一共有序列以及第二共有序列，該第一共有序列包含如SEQ ID NO：13的核苷酸序列，該第二共有序列包含如SEQ ID NO：21所示的核苷酸序列；本公開的抗Ang2參考適體或抗Ang2適體可包含第一共有序列以及第二共有序列，該第一共有序列 包含如SEQ ID NO：14所示的核苷酸序列，該第二共有序列包含如SEQ ID NO：22所示的核苷酸序列；本公開的抗Ang2參考適體或抗Ang2適體可包含第一共有序列以及第二共有序列，該第一共有序列包含如SEQ ID NO：15所示的核苷酸序列，該第二共有序列包含如SEQ ID NO：23所示的核苷酸序列；本公開的抗Ang2參考適體或抗Ang2適體可包含第一共有序列以及第二共有序列，該第一共有序列包含如SEQ ID NO：16所示的核苷酸序列，該第二共有序列包含如SEQ ID NO：24所示的核苷酸序列；本公開的抗Ang2參考適體或抗Ang2適體可包含第一共有序列以及第二共有序列，該第一共有序列包含如SEQ ID NO：17所示的核苷酸序列，該第二共有序列包含如SEQ ID NO：25所示的核苷酸序列；本公開的抗Ang2參考適體或抗Ang2適體可包含第一共有序列以及第二共有序列，該第一共有序列包含如SEQ ID NO：18所示的核苷酸序列，該第二共有序列包含如SEQ ID NO：26所示的核苷酸序列；本公開的抗Ang2參考適體或抗Ang2適體可包含第一共有序列以及第二共有序列，該第一共有序列包含如SEQ ID NO：19所示的核苷酸序列，該第二共有序列包含如SEQ ID NO：27所示的核苷酸序列；本公開的抗Ang2參考適體或抗Ang2適體可包含第一共有序列以及第二共有序列，該第一共有序列包含如SEQ ID NO：的抗Ang2參考適體的20所示的核苷酸序列，該第二共有序列包含如SEQ ID NO：28所示的核苷酸序列。
第一共有序列可以包含在形成本公開的抗Ang2參考適體或抗Ang2適體的第一莖、第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出和/或第四莖的核苷酸序列中。在一些情況下，第一共有序列可以不包含在形成本公開的抗Ang2參考適體或抗Ang2適體的第一環的核苷酸序列中。例如，第一共有序列可存在於適體中的任何地方，除形成第一環的區域中外。
在一些情況下，第一共有序列可包含在第一莖幹、第一凸出和第二莖中。在一些情況下，第一共有序列可包含在第一莖、第一凸出、第二莖和第二凸出中。在一些情況下，第一共有序列可包含在第一莖幹、第一凸出、第二莖幹、第二凸出和第三莖中。在一些情況下，第一共有序列可包含在第一莖、第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖和第三凸出中。在一些情況下，第一共有序列可包含在第一莖、第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出和第四莖中。在一些情況下，第一共有序列可包含在第二莖、第二凸出和第三莖中。在一些情況下，第一共有序列可包含在第二莖、第二凸出、第三莖和第三凸出中。在一些情況下，第一共有序列可包含在第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出和第四莖中。在一些情況下，第一共有序列可包含在第三莖、第三凸出和第四莖中。
第二共有序列可包含在形成本公開的抗Ang2參考適體或抗Ang2適體的第一莖、第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出和/或第四莖的核苷酸序列中。在一些情況下，第二共有序列可以不包含在形成本公開的抗Ang2參考適體或抗Ang2適體的第一環的核苷酸序列中。例如，第二共有序列可存在於適體中的任何地方，除形成第一環的區域中外。
在一些情況下，第二共有序列可包含在第一莖幹、第一凸出和第二莖中。在一些情況下，第二共有序列可包含在第一莖、第一凸出、第二莖和第二凸出中。在一些情況下，第二共有序列可包含在第一莖幹、第一凸出、第二莖、第二凸出和第三莖中。在一些情況下，第二共有序列可包含在第一莖、第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖和第三凸出中。在一些情況下，第二共有序列可包含在第一莖、第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出和第四莖中。在一些情況下，第二共有序列可包含在第二莖、第二凸出和第三莖中。在一些情況下， 第二共有序列可包含在第二莖、第二凸出、第三莖和第三凸出中。在一些情況下，第二共有序列可包含在第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出和第四莖中。在一些情況下，第二共有序列可包含在第三莖、第三凸出和第四莖中。
第一共有序列和第二共有序列可以配對，以確保適體的二級結構正確形成。例如，當選擇第一共有序列時，所屬技術領域具有通常知識者能夠調整第二共有序列的核苷酸序列，只要適體的二級結構能夠正確形成即可。
本公開的抗Ang2參考適體或抗Ang2適體可包含第一共有序列和第二共有序列，其中該第一共有序列可位於該第二共有序列的5’。
在一些情況下，本公開的抗Ang2參考適體或抗Ang2適體可包含第一共有序列和第二共有序列，其中該第二共有序列可位於該第一共有序列的5’。
例如，1)第一共有序列可包含在第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出和第四莖中；而第二共有序列可包含在第四莖、第三凸出、第三莖、第二凸出和第二莖中；2)第一共有序列可存在於第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出和第四莖中；而第二共有序列可包含在第四莖、第三凸出、第三莖、第二凸出、第二莖和第一凸出中；或者，3)第一共有序列可包含在形成第一莖、第二莖、第二凸出、第三莖、第三突出和第四莖的核苷酸序列中；而第二共有序列可包含在第四莖、第三凸出、第三莖、第二凸出和第二莖、第一凸出和第一莖中。
例如，1)第二共有序列可以包含在第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出和第四莖中；而第一共有序列可以包含在第四莖、第三凸出、第三莖、第二凸出和第二莖中；2)第二共有序列可存在於第一凸出、第二杆、第二凸出、 第三莖、第三凸出和第四莖中；而第一共有序列可包含在第四莖、第三凸出、第三莖、第二凸出、第二莖和第一凸出中；或者，3)第二共有序列可包含在形成第一莖、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出和第四莖的核苷酸序列中；而第一共有序列可包括在第四莖、第三凸出、第三莖、第二凸出和第二莖、第一凸出和第一莖中。
本公開的抗Ang2參考適體或抗Ang2適體的第一環可包含2-30個核苷酸(例如，至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、至少19個、至少20個、至少21個、至少22個、至少23個、至少24個、至少25個、至少26個、至少27個、至少28個、至少29個或至少30個核苷酸)。
本公開的抗Ang2參考適體或抗Ang2適體可包含如SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列，或其變體或截短形式。變體可包含與SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列具有至少50%同一性的核苷酸序列。變體可包含具有一個或多個(例如，1-2個、1-3個、1-4個、1-5個、1-6個、1-7個、1-8個、1-9個、1-10個、1-11個、1-12個、1-13個、1-14個、1-15個、1-16個、1-17個、1-18個、1-19個、1-20個或更多)核苷酸添加、缺失和/或取代的如SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列。
抗Ang2參考適體可包含約10個至約150個核苷酸。例如，抗Ang2參考適體可包含約10個至約150個核苷酸、約10個至約140個核苷酸、約10個至約130個核苷酸、約10個至約120個核苷酸、約10個至約110個核苷酸、約10個至約100個核苷酸、約10個至約90個核苷酸、約10個至約80 個核苷酸、約10個至約70個核苷酸、約10個至約60個核苷酸、約10個至約50個核苷酸、約10個至約40個核苷酸、約10個至約30個核苷酸、約10個至約20個核苷酸.
抗Ang2適體可用於調節Ang2或Tie2的生物活性。
抗Ang2適體可用於預防、治療和/或改善Ang2相關疾病、紊亂或病況。例如，Ang2相關疾病、紊亂或病況可以是新生血管疾病、紊亂或病況。例如，Ang2相關疾病、紊亂或病況可以是眼部新生血管疾病、紊亂或病況。例如，Ang2相關疾病、紊亂或病況可選自年齡相關性黃斑變性、脈絡膜新生血管形成、糖尿病性黃斑水腫、視網膜靜脈阻塞和糖尿病性視網膜病。例如，Ang2相關疾病、紊亂或病況可選自濕性年齡相關性黃斑變性、近視性脈絡膜新生血管形成和增生性糖尿病視網膜病變。
一方面，本公開提供了抗Ang2劑，其包含本公開的適體。抗Ang2劑還可包含聚乙二醇(PEG)部分。例如，PEG部分可以綴合於抗Ang2適體的5’末端和/或3’末端。
另一方面，本公開提供了包含本申請的抗Ang2適體和/或抗Ang2劑的組成物。
在一些情況下，組成物可以是醫藥組成物。例如，組成物可包含藥學上可接受的賦形劑或載體。
在一些情況下，組成物可以以離散的劑型存在，其中每個劑型含有預定量的呈粉末或顆粒、溶液或者水性或非水性液體中的懸浮液的形式的活性成分。此類劑型可以藉由技術人員已知的任何方法製備，例如，其可包括將活性成分與載體締合的步驟，該載體構成一種或多種其他成分。通常，藉由將活性 成分與液體載體或細粉狀固體載體或兩者均勻而緊密地混合，然後，如果需要，將產品塑形為所需的外觀來製備組成物。
該組成物可包含治療有效量的活性組成(例如，本公開的抗Ang2適體或抗Ang2劑)。治療有效量可以是能夠預防和/或治癒(至少部分)患有病況或紊亂或有發展該病況或紊亂的風險的受試者的新生血管疾病或紊亂和/或其任何併發症的本公開組成物的量。所包含的活性劑的具體量/濃度可以根據施用方法和患者的需要而變化，並且可以基於例如體積、黏度和/或患者的體重等來確定。例如，合適的劑量可以是約0.1mg或1mg/kg/日至約50mg/kg/日；有時，劑量可以甚至更高。應當理解，所屬技術領域具有通常知識者(例如醫生或藥劑師)可以基於特定患者、製劑和/或疾病的狀況方便地調整這些特定劑量。
該組成物還可包含有效量的附加治療活性組分，例如，用於預防、治療和/或改善新生血管疾病或紊亂的附加治療活性組分。該活性組分中的每一種可以以藥物有效量存在於醫藥組成物中。本申請的抗Ang2適體可以與或可以不與附加活性組分締合。
在一些情況下，附加治療活性組分可以是抗VEGF劑。抗VEGF劑可包含阿柏西普。抗VEGF劑還可包含本公開的抗VEGF適體。
下麵描述了非限制性示例性組成物和製備這種組成物的方法。例如，組成物可呈適於口服施用的形式如片劑、膠囊劑、丸劑、粉劑、緩釋製劑、溶液、混懸劑，呈適於腸胃外注射的形式如無菌溶液、混懸劑或乳劑，呈適於局部施用的形式如軟膏或乳膏，或呈適於直腸施用的形式如栓劑。組成物可呈適於精確劑量的單次施用的單位劑型。在一些實施方案中，組成物可以是液體醫藥組成物。
在該組成物中，可按照常規藥物配製技術將抗Ang2適體與藥物載體緊密混合。根據施用所需的製劑形式，載體可採取多種形式。
組成物還可包含一種或多種藥學上可接受的添加劑和賦形劑。此類添加劑和賦形劑包括但不限於防黏劑、消泡組成物、緩衝組成物、聚合物、抗氧化劑、防腐劑、螯合組成物、黏度調節劑、增生劑、調味劑、著色劑、加臭劑、遮光劑、懸浮組成物、黏合劑、填充劑、增塑劑、潤滑劑和/或其混合物。
一方面，本公開提供了用於調節Ang2或Tie2的生物活性的方法，其包括向有此需要的受試者施用有效量的本公開的抗Ang2適體或抗Ang2劑。
一方面，本公開提供了用於預防、治療和/或改善Ang2相關疾病、紊亂或病況的方法，其包括向有此需要的受試者施用有效量的本公開的抗Ang2適體或抗Ang2劑。
例如，Ang2相關疾病、紊亂或病況可以是新生血管疾病、紊亂或病況，可以是新生血管疾病、紊亂或病況。Ang2相關疾病、紊亂或病況可以是眼部新生血管疾病、紊亂或病況。Ang2相關疾病、紊亂或病況可選自年齡相關性黃斑變性、脈絡膜新生血管形成、糖尿病性黃斑水腫、視網膜靜脈阻塞和糖尿病性視網膜病。Ang2相關疾病、紊亂或病況可選自濕性年齡相關性黃斑變性、近視性脈絡膜新生血管和增殖性糖尿病性視網膜病。
該方法還可包括向受試者施用抗VEGF劑。抗VEGF劑可包含阿柏西普和/或本公開的抗VEGF適體。
另一方面，本公開提供了本公開的抗Ang2適體或抗Ang2劑在製備用於調節Ang2或Tie2的生物活性的劑方面的用途。
一方面，本公開提供了本公開的適體或本公開的抗Ang2劑在製備用於預防、治療和/或改善Ang2相關疾病、紊亂或病況的藥物方面的用途。
例如，Ang2相關疾病、紊亂或病況可以是新生血管疾病、紊亂或病況，可以是新生血管疾病、紊亂或病況。Ang2相關疾病、紊亂或病況可以是眼部新生血管疾病、紊亂或病況。Ang2相關疾病、紊亂或病況可選自年齡相關性黃斑變性、脈絡膜新生血管形成、糖尿病性黃斑水腫、視網膜靜脈阻塞和糖尿病性視網膜病。Ang2相關疾病、紊亂或病況可選自濕性年齡相關性黃斑變性、近視性脈絡膜新生血管和增殖性糖尿病性視網膜病。
一方面，本公開提供了1)本公開的抗Ang2適體或抗Ang2劑與2)抗VEGF劑(例如，阿柏西普和/或本公開的抗VEGF適體)的組合在製備用於預防、治療和/或改善新血管生成疾病、紊亂或病況的藥物方面的用途。
可將本公開的抗Ang2適體或抗Ang2劑與抗VEGF劑同時或依次施用。
新生血管疾病、紊亂或病況可以是眼部新生血管疾病、紊亂或病況。新生血管疾病、紊亂或病況可選自年齡相關性黃斑變性、脈絡膜新血管形成、糖尿病性黃斑水腫、視網膜靜脈阻塞和糖尿病性視網膜病。新生血管疾病、紊亂或病況可選自濕性年齡相關性黃斑變性、近視性脈絡膜新血管形成和增生性糖尿病性視網膜病。
雙特異性適體
一方面，本公開提供了包含本公開的抗Ang2適體和本公開的抗VEGF適體的雙特異性適體。雙特異性適體可包含在本公開的組成物中。
雙特異性適體可具有式A1-(L)n-A2，其中：A1是本公開的抗VEGF適體，A2是本公開的抗Ang2適體；或者A1是本公開的抗Ang2適體，A2是本公開的抗VEGF適體；L是接頭；n為至少為0的數。例如，n可以是0至到20，諸如0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
雙特異性適體可以能夠與VEGF和Ang2特異性結合。
例如，雙特異性適體可與VEGF-121結合，其中KD值約為500pM或更小(例如，雙特異性適體可與VEGF-121結合，其中KD值約為500皮莫耳(pM)或更小、約400皮莫耳(pM)或更小、約300皮莫耳(pM)或更小、約200皮莫耳(pM)或更小、約100皮莫耳(pM)或更小、約90皮莫耳(pM)或更小、約80皮莫耳(pM)或更小、約70皮莫耳(pM)或更小、約60皮莫耳(pM)或更小、約50皮莫耳(pM)或更小、約40皮莫耳(pM)或更小、約30皮莫耳(pM)或更小或約20皮莫耳(pM)或更小)，並且雙特異性適體可與Ang2結合，其中KD值約為500pM或更小(例如，雙特異性適體可與Ang2結合，其中KD值約為500皮莫耳(pM)或更小、約400皮莫耳(pM)或更小、約300皮莫耳(pM)或更小、約200皮莫耳(pM)或更小、約100皮莫耳(pM)或更小、約90皮莫耳(pM)或更小、約80皮莫耳(pM)或更小、約70皮莫耳(pM)或更小、約60皮莫耳(pM)或更小、約50皮莫耳(pM)或更小、約40皮莫耳(pM)或更小、約30皮莫耳(pM)或更小或約20皮莫耳(pM)或更小)。
L可選自天然存在的核苷酸接頭、經修飾的核苷酸接頭、烴接頭、聚乙二醇接頭及其組合。
在一些情況下，至少一個L可以是聚乙二醇接頭。在一些情況下，至少一個L可以是六乙二醇(也稱為H或PEG6)接頭。例如，L可以是六乙二醇接頭，n可為0至10(例如，n為0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)。
例如，A1可以是抗VEGF適體，其包含如SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列，或其變體或截短形式；以及A2可以是抗Ang2適體，其包含如SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列，或其變體或截短形式。
作為另一個實例，A1可以是抗Ang2適體，其包含如SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列，或其變體或截短形式；以及A2可以是抗VEGF適體，其包含如SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列，或其變體或截短形式。
在雙特異性適體的一些情況下，A1是抗VEGF適體，其包含如SEQ ID NO：83所示的核苷酸序列或其截短形式，A2是抗Ang2適體，其包含如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列或其截短形式，L是六乙二醇接頭，n為0至10。
在雙特異性適體的一些情況下，A1是抗VEGF適體，其包含如SEQ ID NO：128所示的核苷酸序列或其截短形式，A2是抗Ang2適體，其包含如SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列或其截短形式，L是六乙二醇接頭，n為0至10。
在雙特異性適體的一些情況下，A1是抗Ang2適體，其包含如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列或其截短形式，A2是抗VEGF適體，其包含如SEQ ID NO：83所示的核苷酸序列或其截短形式，L是六乙二醇接頭，n為0至10。
在雙特異性適體的一些情況下，A1是抗Ang2適體，其包含如SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列或其截短形式，A2是抗VEGF適體，其包含如SEQ ID NO：128所示的核苷酸序列或其截短形式，L是六乙二醇接頭，n為0至10。
在一些情況下，雙特異性適體可包含如SEQ ID NO：140-195、SEQ ID NO：202-204中的任一個所示的核苷酸序列。
雙特異性適體可選自r-AMSB107.0、r-AMSB108.0、r-AMSB107.1、r-AMSB107.2、r-AMSB107、r-AMSB107.4、r-AMSB107.5、r-AMSB107.6、r-AMSB107.7、r-AMSB107.8、r-AMSB107.9、r-AMSB107.10、r-AMSB107.11、r-AMSB107.12、r-AMSB107.13、r-AMSB107.14、r-AMSB107.15、r-AMSB107.16、r-AMSB107.17、r-AMSB107.18、r-AMSB107.19、r-AMSB107.22、r-AMSB107.23、r-AMSB107.24、r-AMSB107.25、r-AMSB107.26、r-AMSB107.27、AMSB107.0、AMSB108.0、AMSB107.1、AMSB107.2、AMSB107、AMSB107.4、AMSB107.5、AMSB107.6、AMSB107.7、AMSB107.8、AMSB107.9、AMSB107.10、AMSB107.11、AMSB107.12、AMSB107.13、AMSB107.14、AMSB107.15、AMSB107.16、AMSB107.17、AMSB107.18、AMSB107.19、AMSB107.20、AMSB107.21、AMSB107.22、AMSB107.23、AMSB107.24、AMSB107.25、AMSB107.26、AMSB107.P6、AMSB107.P40K、AMSB107P和AMSB107.27。
雙特異性適體r-AMSB107.22、r-AMSB107.23、r-AMSB107.24、r-AMSB107.25、AMSB107.22、AMSB107.23、AMSB107.24和AMSB107.25各自包含一個或多個六乙二醇(也稱為PEG6)作為接頭(L)或修飾。
組成物
一方面，本公開提供了組成物，其包含本公開的抗Ang2適體、本公開的抗VEGF適體和/或本公開的雙特異性適體。在一些情況下，該組成物包含有效量的本公開的抗Ang2適體和有效量的本公開的抗VEGF適體。在一些情況下，組成物包含有效量的本公開的雙特異性適體。
該組成物可以是醫藥組成物。該組成物可包含藥學上可接受的賦形劑或載體。
該組成物可用於預防、治療和/或改善新生血管疾病、紊亂或病況。新生血管疾病、紊亂或病況可以是眼部新生血管疾病、紊亂或病況。在一些實施方案中，新生血管疾病、紊亂或病況選自年齡相關性黃斑變性、脈絡膜新血管形成、糖尿病性黃斑水腫、視網膜靜脈阻塞和糖尿病性視網膜病。在一些實施方案中，新生血管疾病、紊亂或病況選自濕性年齡相關性黃斑變性、近視性脈絡膜新血管形成和增生性糖尿病性視網膜病。
例如，組成物可呈適於口服施用的形式如片劑、膠囊劑、丸劑、粉劑、緩釋製劑、溶液、混懸劑，呈適於腸胃外注射的形式如無菌溶液、混懸劑或乳劑，呈適於局部施用的形式如軟膏或乳膏，或呈適於直腸施用的形式如栓劑。組成物可呈適於精確劑量的單次施用的單位劑型。在一些情況下，組成物可以是液體醫藥組成物。
藥學上可接受的賦形劑或載體可包括但不限於防黏劑、消泡劑、緩衝劑、聚合物、抗氧化劑、防腐劑、螯合劑、黏度調節劑、增生劑、調味劑、著色劑、加臭劑、遮光劑、懸浮劑、黏合劑、填充劑、增塑劑、潤滑劑和/或其混合物。
在一些情況下，組成物可以以離散的劑型存在，其中每個劑型含有預定量的呈粉末或顆粒、溶液或者水性或非水性液體中的懸浮液的形式的活性成分。此類劑型可以藉由技術人員已知的任何方法製備，例如，其可包括將活性成分與載體締合的步驟，該載體構成一種或多種其他成分。通常，藉由將活性成分與液體載體或細粉狀固體載體或兩者均勻而緊密地混合，然後，如果需要，將產品塑形為所需的外觀來製備組成物。
該組成物可包含治療有效量的活性劑(例如，本公開的劑)。治療有效量可以是能夠預防和/或治癒(至少部分)患有病況或紊亂或有發展該病況或紊亂的風險的受試者的新生血管疾病或紊亂和/或其任何併發症的本公開組成物的量。所包含的活性劑的具體量/濃度可以根據施用方法和患者的需要而變化，並且可基於例如體積、黏度和/或患者的體重等來確定。例如，合適的劑量可以是約0.1mg或1mg/kg/日至約50mg/kg/日；有時，劑量可以甚至更高。應當理解，所屬技術領域具有通常知識者(例如醫生或藥劑師)可以基於特定患者、製劑和/或疾病的狀況方便地調整這些特定劑量。
醫療用途和方法
另一方面，本公開提供了用於預防、治療和/或改善新生血管疾病、紊亂或病況的方法，其包括向有此需要的受試者施用有效量的本公開的抗Ang2適體、有效量的本公開的抗VEGF適體、有效量的本公開的雙特異性適體和/或有效量的本公開的組成物。
另一方面，本公開提供了本公開的抗Ang2適體、本公開的抗VEGF適體、本公開的雙特異性適體和/或本公開的組成物在製備用於預防、治療和/或改善新生血管疾病、紊亂/病況的藥物方面的用途。
新生血管疾病、紊亂或病況可以是眼部新生血管疾病、紊亂或病況。在一些實施方案中，新生血管疾病、紊亂或病況選自年齡相關性黃斑變性、脈絡膜新血管形成、糖尿病性黃斑水腫、視網膜靜脈阻塞和糖尿病性視網膜病。在一些實施方案中，新生血管疾病、紊亂或病況選自濕性年齡相關性黃斑變性、近視性脈絡膜新血管形成和增生性糖尿病性視網膜病。
其他實施方案
本公開還提供了以下實施方案：
AMSB107.25、AMSB107.26、AMSB107.P6、AMSB107.P40K、AMSB107P
本公開還涉及以下序列：
Figure 110110012-A0202-12-0082-319
Figure 110110012-A0202-12-0083-320
Figure 110110012-A0202-12-0084-321
Figure 110110012-A0202-12-0085-322
Figure 110110012-A0202-12-0086-323
Figure 110110012-A0202-12-0087-324
Figure 110110012-A0202-12-0088-325
Figure 110110012-A0202-12-0089-326
Figure 110110012-A0202-12-0090-327
Figure 110110012-A0202-12-0091-328
Figure 110110012-A0202-12-0092-329
Figure 110110012-A0202-12-0093-330
Figure 110110012-A0202-12-0094-331
Figure 110110012-A0202-12-0095-332
Figure 110110012-A0202-12-0096-333
Figure 110110012-A0202-12-0097-334
Figure 110110012-A0202-12-0098-335
Figure 110110012-A0202-12-0099-336
Figure 110110012-A0202-12-0100-337
Figure 110110012-A0202-12-0101-338
Figure 110110012-A0202-12-0102-339
Figure 110110012-A0202-12-0103-340
Figure 110110012-A0202-12-0104-341
[實施例]
闡述以下實施例是為了向所屬技術領域具有通常知識者提供如何製造和使用本公開的完整公開內容和描述，並且不旨在限制本發明人認為是他們的發明的範圍，也不旨在表示下麵的實驗是所有或唯一進行的實驗。已努力確保所用數字(例如數量、溫度等)的準確性，但應該考慮一定的實驗誤差和偏差。 除非另有說明，否則份數是重量份，分子量是重均分子量，溫度以攝氏度為單位， 壓力等於或接近大氣壓。可以使用標準縮寫，例如，bp，鹼基對；kb，千鹼基；pl，皮升；s或sec，秒；min，分鐘；h或hr，小時；aa，胺基酸；nt，核苷酸；i.m.，肌內(地)；i.p.，腹膜內(地)；s.c.，皮下(地)；等等。
實施例1抗VEGF適體的選擇
使用化學增強顆粒展示(CAPD)，一種所述的平臺(請參考Wang等人WO 2018064086A1；Wang等人WO2018102115A1；Wang等人PCT/US2013/071318)來鑑定本公開的抗VEGF適體。詳細的方法和步驟是如例如WO 2018064086A1(其藉由引用以其整體併入本文)中所描述的。
簡言之，來自不同供應商的重組人VEGF-121和VEGF-165蛋白(列於表1)被用作適體發現的靶蛋白。典型的初始選擇文庫包含40-50個核苷酸的隨機區域，其中所有核苷酸都包含2’-氟(2’-F)修飾。例如，針對人VEGF-121(R&D系統，4644-vs-CF)的選擇，所用的正向引子為5’-CGCCCTCGTCCCATCTC-3’(SEQ ID NO：196)並且所用的反向引子為5’-CGTTCTCGGTTGGTGTTC-3’(SEQ ID NO：197)。
表1用於適體選擇的重組VEGF蛋白
Figure 110110012-A0202-12-0106-342
選擇開始於合成單選殖修飾的適體顆粒(MAP)文庫，每個顆粒在其表面顯示多個拷貝的完全2’-氟修飾的適體候選序列。然後將乳液打碎，反向鏈去雜交，在顆粒上留下單鏈2’-氟修飾的適體(約90%)和天然DNA範本序列(約10%)，完成MAP的形成，該MAP現在已準備好用於篩選。像範本顆粒一樣，MAP是單選殖的，其中每個顆粒展約105個拷貝的單個修飾的適體序列和約104個拷貝的可擴增的天然DNA序列。
然後在37℃下，將該MAP與來自表1的一種或多種選擇VEGF靶標一起孵育。隨後使用螢光標記的(Alexa Fluor 488或647)抗VEGF抗體(針對 未加標籤的VEGF)、抗His抗體(針對加His標籤的VEGF)或鏈黴抗生物素蛋白(針對生物素化的VEGF)標記該MAP。每個MAP的螢光強度反映了2’-氟修飾的核酸適體對VEGF靶標的相對親和力，這允許藉由螢光啟動細胞分選儀(FACS)定量分離對靶標具有高親和力的核酸適體。為了進行迭代輪次的CAPD以將庫集中在最佳結合劑上，使用PCR藉由高保真聚合酶擴增富集的MAPS上的天然DNA編碼鏈，並進行隨後輪的篩選或測序。藉由在連續輪中縮短孵育時間、降低VEGF濃度和增加洗滌時間，可以優先選擇具有更高親和力的抗VEGF適體。為了避免產生主要藉由不太特異的極性相互作用與VEGF結合的抗VEGF適體，在連續輪中引入了濃度遞增的聚陰離子競爭劑，諸如鮭魚精子DNA(Thermo Fisher Scientific,15632011)、鯡魚精子DNA(Sigma-Aldrich,D3159)和硫酸葡聚糖(Sigma-Aldrich,31404)。
為了確保對選擇靶標VEGF的結合特異性，可在選擇中引入遞增濃度的非靶蛋白諸如牛血清白蛋白(BSA)或酪蛋白或非靶蛋白混合物諸如稀釋的人血清(0%、0.1%、1%和10%)，以確保所得的抗VEGF適體即使在過量(與VEGF相比濃度高達109倍)干擾蛋白存在的情況下也能以極大的親和力特異性識別VEGF。
在一些選擇中，還引入了富集解離速率慢的抗VEGF適體的方法。為此，用飽和濃度的生物素化VEGF(ACROBiosystems,VE1-H82E7或VE5-H82Q0)靶標孵育富集的高親和力MAP，隨後用過量的未標記的VEGF(ACROBiosystems，VE1-H5246或VE5-H5248)洗滌，在連續輪中增加持續時間(從1分鐘至24小時)。未標記的VEGF可以替代從MAP解離的生物素化VEGF，並且在用螢光鏈黴抗生物素蛋白標記MAP後不會顯示任何螢光信號。 顯示較慢解離速率的抗VEGF適體的MAP可在洗滌過程後保留更多生物素化的VEGF靶標，並顯示較高的螢光強度，這使得可以藉由螢光啟動細胞分選儀(FACS)定量分離具有較慢解離速率的針對VEGF的抗VEGF適體。
對於針對VEGF-165的一些選擇，在選擇中引入過量的肝素(Sigma-Aldrich H3393)作為競爭劑，以確保優先選擇對VEGF-165的受體結合結構域具有更高親和力的抗VEGF適體，並避免產生靶向VEGF-165的肝素結合結構域的抗VEGF適體。這樣，產生的抗VEGF適體可能識別VEGF-165和VEGF-121兩者。
為了產生能夠以相似的高親和力識別VEGF-121和VEGF-165兩者的抗VEGF適體，在交替輪的選擇期間，藉由在人VEGF-121與人VEGF-165之間切換蛋白質靶標來進行一些選擇。“切換”選擇過程產生了抗VEGF適體家族，所有適體都以高親和力結合VEGF-121和VEGF-165兩者。物種交叉反應性促進了在動物模型中進行潛在治療性抗VEGF適體的臨床前評估。為了產生同時結合人VEGF和大鼠/小鼠VEGF兩者的適體，藉由在交替輪選擇期間在人VEGF-121與小鼠VEGF-120(Shenandoah Biotechnology,200-52)或大鼠VEGF 164(R&D Systems,564-RV/CF)之間切換蛋白質靶標來進行一些選擇。
為了確保選定的抗VEGF適體能夠抑制VEGF與其受體之間的相互作用，藉由利用識別VEGF抗原的受體結合結構域的現有VEGF結合劑諸如重組人VEGF受體2(VEGFR2，R&D Systems,357-KD-050)、重組人VEGF受體1(VEGFR1，321-FL-050)、雷珠單抗(Lucentis®)或阿柏西普(Eyla®)進行了一些選擇。將現有的VEGF結合劑在顆粒展示篩選期間用作競爭劑。
使用llumina MiSeqTM系統，利用下一代測序技術對選定的適體庫進行測序，並進行生物資訊學分析。因為這些適體是使用如上所述的先進選擇方法(諸如包括聚陰離子和/或蛋白質競爭劑、提高解離速率、在VEGF-121與VEGF-165之間切換)產生的，因此所得適體可以以高親和力識別VEGF-121和VEGF-165兩者。
實施例2抗VEGF適體的鑑定和截短
本公開的抗VEGF適體的截短的和經修飾的變體由LGC Biosearch Technologies(Novato,CA)製備，並檢測了它們與相應靶的結合親和力。簡言之，使用磁珠分配法測量富集的文庫的平衡結合常數。生物素化的抗VEGF適體綴合於1μm鏈黴抗生物素蛋白包被的MyOne鏈黴抗生物素蛋白C1磁珠(Thermo Fisher Scientific,65002)。結合測定是藉由在37℃下將固定濃度的抗VEGF適體(0.01nM)和濃度為10-12至10-8M的於PBSMCT緩衝液(DPBS,pH 7.2，含2.5mM MgCl2、1mM CaCl2和0.01% TWEEN-20)中的靶蛋白一起孵育90分鐘來進行的。結合的靶蛋白藉由磁性分離進行分配，隨後藉由螢光抗VEGF或抗His標籤抗體進行標記。藉由流式細胞術(BD Accuri C6 Plus)定量抗VEGF適體結合的分數。針對靶蛋白與空磁珠的非特異性背景結合對原始結合數據進行了校正。將結合的抗VEGF適體的分數作為蛋白質濃度的函數作圖，並使用非線性曲線擬合算法(Langmuir單位點結合模型)從數據中提取平衡結合常數(KD值)(圖1A-圖1B)。
表2顯示了本公開的代表性抗VEGF適體序列的截短變體，其中顯示了它們對VEGF-121和VEGF-165的KD值。
表2抗VEGF適體AMS0433.0的突變和截短
Figure 110110012-A0202-12-0110-343
Figure 110110012-A0202-12-0111-41
與FDA批准的唯一一種僅與VEGF-165結合的基於適體的抗VEGF治療劑(Macugen®)相比，本公開的抗VEGF適體與人VEGF-121和人VEGF-165結合的親和力相當且優於約50pM於(圖1A-圖1B)。與FDA批准的以相似親和力結合VEGF-121和VEGF-165的基於蛋白質的抗VEGF治療劑(Lucentis®)相比，本公開的抗VEGF適體顯示結合親和力提高至超過10倍。
實施例3抗VEGF適體體外VEGF-R競爭測定和二級結構預測
為了證明本公開的抗VEGF適體是血管內皮生長因子-A(VEGF)信號傳導的強效抑制劑，進行了體外VEGF受體競爭ELISA測定，以驗證抗VEGF適體能夠強效地阻斷VEGF-A與VEGF受體之間的相互作用，並比較了它們與FDA批准的基於蛋白質的藥物雷珠單抗(Lucentis®)的性能。簡言之，將濃度為10-12至10-8M的於PBSMCT緩衝液(DPBS,pH 7.2，含2.5mM MgCl2,1mM CaCl2和0.01% TWEEN-20)中的AMS0433(作為本公開的抗VEGF適體的實例)或Lucentis與50pM的人VEGF-165(R&D Systems,293-VE-050)混合，並轉移到固定有人VEGFR2受體(R&D Systems,357-KD-050)的平板上，並在37℃下孵育1小時。洗滌後，藉由1μg/ml抗VEGF抗體(R&D Systems,AF-293-NA)和綴合有辣根過氧化物酶(HRP)的抗山羊IgG，然後藉由TMB受質檢測VEGFR2捕獲的VEGF-165。使用Biotek Synergy H1混合多模式讀數器，藉由在405nm處測量光密度(OD)來定量VEGFR2結合的VEGF。將原始數據相對樣品的吸光度信號作歸一化，該樣品中含有50pM的VEGF-165，但無適體競爭(0nM適體)。將結合 VEGFR2的VEGF繪製為適體濃度的函數，並使用非線性曲線擬合算法(劑量-反應抑制)從數據中提取IC50值(圖2)。
可以看出，本公開的抗VEGF適體可以以約50pM的IC50值強效地抑制VEGF-A與VEGFR2之間的相互作用(圖2)，表明抗VEGF適體結合並阻斷了VEGF上的受體結合結構域，並且顯示與FDA批准的基於蛋白質的抗VEGF治療劑(Lucentis®)相比，效力提高至約10倍。藉由VEGF受體2阻斷測定測量的本公開的抗VEGF適體的示例性效力列於表3中。
表3抗VEGF適體的體外效力
Figure 110110012-A0202-12-0113-44
Figure 110110012-A0202-12-0114-45
另外，使用NUPACK軟體套件對選定的抗VEGF適體進行二維結構分析。AMS0433的結果如圖5A所示。
另外，證明了將幾個2’-F核苷酸替換為2’-Ome核苷酸不會損害性能。本申請的適體的一個關鍵有利方面是它們對各種化學取代或修飾的靈活性。此類修飾在化學合成過程中很容易實現。例如，VEGF適體AMS0433(具有如SEQ ID No.128所示的核苷酸序列)和另外2種變體(AMS0433.m4和AMS0433.m6，分別具有如SEQ ID No.200或SEQ ID No.201所示的核苷酸序列)，其每一種包含多個2’-Ome修飾的核苷酸來代替先前的2’-氟修飾的核苷酸。在體外VEGF-R競爭測定中，這兩種變體均顯示出與AMS0433相似的效力(表3)，並且與AMS0433相比可具有額外的益處，諸如更好的可製造性。
實施例4在非人靈長類動物(NHP)鐳射誘導CNV模型中進行的抗VEGF適體體內功效測試
這項研究在很大程度上是遵循了以前建立的程式來進行。將成年食蟹猴(2-4kg)用於研究。用鹽酸氯胺酮(10mg/kg，肌內注射)和戊巴比妥鈉(12mg/kg，靜脈內注射)麻醉猴子，瞳孔擴張，藉由鐳射破壞黃斑周圍的布魯赫膜來在猴子中誘導CNV(每隻眼6-8次燒傷。鐳射設置：532nm的波長，400-500mW，50μm的直徑，100ms持續時間)。只有在沒有出血的情況下形成氣泡的鐳射點被認為是有效的CNV損傷，並被納入研究。鐳射處理後兩週，進行螢光素血管造影術(FA) 以使CNV病變可視化：以10mg/kg體重注射100mg/ml螢光素鈉；注射後，在第一分鐘(早期圖像)和5分鐘後(晚期圖像)拍攝快速的一系列圖像。藉由將晚期圖像與早期圖像進行比較來使每個病變的滲漏可視化，並且根據等級1至IV對滲漏嚴重程度進行評分：I級-無高螢光；II級-超螢光無滲漏；III級-早期或中期圖像中的高螢光和晚期滲漏；IV級-在運輸過程中出現明亮的超螢光，在治療區域外出現晚期滲漏。IV級病變被認為具有臨床意義。還進行了光學相干斷層掃描(OCT)來測量鐳射燒傷處視網膜下高反射材料(SHRM)的高度，這類似於人病理CNV。然後在同一天藉由玻璃體內注射施用以下劑：組1：AMS0433的50μl；組2：50μl陰性對照適體。按照上述程式，在測試品注射後1週和2週再次測量CNV損傷，並藉由比較注射前後IV級損傷的滲漏面積來測量適體的效果。此外，還進行了OCT，並比較了注射前後SHRM的高度。
結果如圖7所示。陰性對照適體對SHRM厚度和洩漏面積的影響與預期的一樣小。相比之下，注射本公開的抗VEGF適體(例如，AMS0433)導致SHRM厚度和滲漏面積的顯著減少，以及IV級損傷的完全消退，證實了其在抑制NHP中的CNV的強效功效。
有趣的是，也在這個模型中了測試Macugen®，但據報導對其在抑制CNV方面沒有作用，這可能是因為其不抑制某些VEGF同種型，諸如VEGF-121(請參考R.T.Tzekov等人，Evaluation of intravitreal application of Pegaptanib Sodium on Laser-induced CNV in Cynomolgus Monkeys,ARVO年會摘要，2006年5月)。然而，本公開的適體在該模型中表現出強效的功效。
實施例5抗Ang2適體的選擇
選擇方法類似於實施例1的選擇方法。
簡言之，將重組人血管生成素-2蛋白(R&D Systems,623-AN)用作發現抗Ang2適體的靶蛋白。典型的初始選擇文庫包含40個核苷酸的隨機區域，其中所有的核苷酸都含有2’-氟(2’-F)修飾。正向引子是5’-ATCCAGAGTGACG-CTCTTCAGCA-3’(SEQID NO：198)，反向引子為5’-TGAAGAGCGTCACTCTGGAT-3’(SEQ ID NO：199)。以下實施例描述了特異性結合重組人Ang2的適體的選擇和產生過程。
每次選擇均為藉由合成單選殖修飾的適體顆粒(MAP)文庫開始的，每個顆粒在其表面展示多個拷貝的完全2’-氟修飾的適體候選序列。然後，在37℃下，將MAP與Ang2靶一起孵育。隨後，使用螢光標記的(Alexa Fluor 488或647)抗Ang2抗體或抗His抗體(針對His標籤Ang2)或鏈黴抗生物素蛋白(針對生物素化的Ang2)標記MAP。每個MAP的螢光強度反映了2’-氟修飾的核酸適體對Ang2靶標的相對親和力，這允許藉由螢光啟動細胞分選儀(FACS)定量分離對靶標具有高親和力的核酸適體。為了進行疊代輪的CAPD以將庫集中在最佳結合劑上，進行了PCR以藉由高保真聚合酶擴增富集的MAP上的天然DNA編碼鏈，並進行隨後輪的篩選或測序。藉由在連續輪中縮短孵育時間、降低Ang2濃度和增加洗滌時間，可以優先選擇具有更高親和力的抗Ang2適體。為了避免產生主要藉由不太特異的極性相互作用與Ang2結合的抗Ang2適體，在連續輪中引入了濃度遞增的聚陰離子競爭劑，諸如鮭魚精子DNA(Thermo Fisher Sciental,15632011)、鯡魚精子DNA(Sigma-Aldrich,D3159)和硫酸葡聚糖(Sigma-Aldrich,31404)。
在一些選擇過程中，採用了先進的技術來確保抗Ang2適體的精細結合特異性要求-理想的抗Ang2適體不應與其同源物Ang1結合，該Ang1與 Ang2起相反的作用。例如，可以在選擇中引入遞增濃度的非靶蛋白諸如牛血清白蛋白(BSA)或酪蛋白或Ang1(R&D Systems,923-AN)或非靶蛋白混合物諸如稀釋的人血清(0%、0.1%、1%和10%)，以確保即使存在過量的干擾蛋白(與Ang2相比濃度高達109倍)，所得的抗Ang2適體也能以高親和力特異性識別Ang2。
在一些選擇中，還引入了富集解離速率慢的抗Ang2適體的方法。為此，用飽和濃度的生物素化Ang2靶標孵育富集的高親和力MAP，隨後用過量的未標記的Ang2洗滌，在連續輪中增加持續時間(從1分鐘到24小時)。未標記的Ang2可以替代從MAP解離的生物素化Ang2，並且在用螢光鏈黴抗生物素蛋白標記MAP後不會顯示任何螢光信號。顯示較慢失活速率的適體的MAP可在洗滌過程後保留更多生物素化的Ang2靶標，並顯示較高的螢光強度，這使得我們能夠藉由螢光啟動細胞分選儀(FACS)定量分離具有較慢解離速率的Ang2的抗Ang2適體。
物種交叉反應性促進了在動物模型中進行潛在治療性抗Ang2適體的臨床前評估。為了產生同時結合人Ang2和小鼠Ang2兩者的抗Ang2適體，還藉由在交替輪選擇期間在人Ang2與小鼠Ang2(R&D Systems,7186-AN)之間切換蛋白質靶標來進行一些選擇。切換選擇過程產生了抗Ang2適體家族，所有該適體都以高親和力結合人和小鼠Ang2。
實施例6抗Ang2適體的鑑定和截短以及結合親和力測定
獲得了代表性抗Ang2適體(AMS0525)的各種突變和截短變體，並使用磁珠分配法測量了它們與Ang2的結合親和力。生物素化的抗Ang2適體綴合於1μm鏈黴抗生物素蛋白包被的MyOne鏈黴抗生物素蛋白C1磁珠(Thermo Fisher Scientific,65002)。藉由在37℃下，將固定濃度的適體(0.01nM)與濃度為10-12 至10-8M的於PBSMCT緩衝液(DPBS，pH 7.2，含有2.5mM MgCl2,1mM CaCl2和0.01% TWEEN-20)中的Ang2蛋白一起孵育90分鐘來進行結合測定。結合的靶蛋白藉由磁性分離進行分配，隨後藉由螢光抗His標籤抗體進行標記。藉由流式細胞術(BD Accuri C6 Plus)定量抗Ang2適體結合的分數。針對靶蛋白與空磁珠的非特異性背景結合對原始結合數據進行了校正。將結合的抗Ang2適體的分數作為蛋白質濃度的函數作圖，並使用非線性曲線擬合算法(Langmuir單位點結合模型)從數據中提取平衡結合常數(KD值)(圖3A)。
表4顯示了獲得的Ang2的KD值。在一系列突變和缺失實驗中，AMS0525被截短為48聚體(AMS0526)。與先前報導的以3.1nM的KD與人Ang2結合的部分修飾的抗Ang2適體相比，AMS0526是完全修飾的適體，其以更高的親和力(KD<100pM)與人和小鼠Ang2結合，並且不識別人Ang1(圖3A)。
表4抗Ang2適體AMS0525的變體
Figure 110110012-A0202-12-0118-46
有趣的是，注意到將2’F修飾的核苷酸替換為用2’OMe或LNA修飾的相應核苷酸不會顯著影響所得抗Ang2適體與靶Ang2的結合(如藉由AMS0525.5和AMS0525.6的KD值所證明的)。
另外，使用NUPACK軟體套件對抗Ang2適體AMS0526進行二維結構分析，預測的結構如圖5B所示。
實施例7抗Ang2適體體外Tie2受體競爭測定
為了證明本公開的抗Ang2適體是Ang2信號傳導的強效抑制劑，進行了體外競爭測定以驗證選定的抗Ang2適體能夠阻斷Ang2與Tie-2之間的相互作用。為了測定受體競爭IC50，將0.01nM的帶有His標籤的Ang2綴合於Dynabeads His標籤分離和下拉珠(Thermfisher Science,10104D)，然後在37℃下與1nM的Tie2(R&D Systems,313-TI)和濃度為10-12至10-8M的於PBSMCT緩衝液(DPBS，pH 7.2，含2.5mM MgCl2,1mM CaCl2和0.01%TWEEN-20)中的抗Ang2適體一起孵育90分鐘。結合Ang2的Tie2和抗Ang2適體藉由磁性分離進行分配，結合Ang2的Tie2隨後藉由螢光抗人抗體進行標記。藉由流式細胞術(BD Accuri C6 Plus)定量結合Ang2的受體的分數。針對非特異性背景結合對原始結合數據進行了校正，並將其相對具有1nM Tie2但無抗Ang2適體競爭的樣品的螢光強度作歸一化。將結合的受體的分數作為抗Ang2適體濃度的函數繪圖，並使用非線性曲線擬合算法(劑量-反應抑制)從數據中提取IC50值(圖3B)。可以看出，AMS0526可以強效地抑制Ang2與Tie2之間的相互作用，其中IC50為83.9pM，比先前報導的抗Ang2適體好30倍(圖3B)。
實施例8氧誘導視網膜病(OIR)模型中的抗Ang2適體的體內功效測試
這項研究在很大程度上是遵循了以前建立的測試對血管生成和血管通透性兩者的影響的程式而進行的。藉由在出生後第7天(P7)將C57BL/6小鼠的同窩生幼崽置於75% O2中來誘導OIR。在P12，將小鼠返回室內空氣。為了測試對血管生成的影響，小鼠在同一天接受了以下劑的玻璃體內注射：組1(G1)：PBS(陰性對照)；G2：20μg阿柏西普；G3：20μg AMS0525；G4：20μg阿柏西普+20μg AMS0525；在P17，將小鼠處死，在22℃下於10%磷酸鹽緩衝福馬林中固定4小時，解剖小鼠的眼睛並製備視網膜鋪片。然後用FITC標記的單葉加奈籽(Griffonia simplicifolia)凝集素(Vector Laboratories)對視網膜染色45分鐘，以使NV可視。數碼照片是用蔡司螢光顯微鏡在5X放大倍數下獲得的，使用Photoshop Cs5.4的照片合併(photomerge)選項將圖像合併成一幅圖像以顯示整個視網膜。視網膜NV的面積是由對樣品身份不知情的獨立研究人員藉由Image-Pro Plus(Media Cybernetics)測量的。為了測試對血管通透性的影響，藉由與上述程式相同的程式誘導OIR，但小鼠在P16接受注射-此時新血管形成(NV)已經形成時。這樣隻測試了醫藥對血管通透性的影響，而未測試對NV生長的影響。在P17，從小鼠獲得玻璃體樣品，並藉由ELISA測量從血管中滲漏的白蛋白量。
結果如圖6所示。雖然單獨抑制Ang2具有非常溫和的效果(與先前的研究一致)，但將本公開的抗Ang2適體與阿柏西普組合幾乎完全消除NV，導致比單獨的阿柏西普顯著更好的功效(圖6)。如圖66所示，儘管已經建立了NV，但本公開的抗Ang2適體和阿柏西普的組合比單獨使用阿柏西普更好地減少了滲漏。
實施例9獲得雙特異性適體
為了開發能夠同時識別VEGF和Ang2的雙特異性適體，製備並測試了多種包含與抗Ang2適體AMS0526(如表4所示)連接的抗VEGF適體(AMS0433或其來自表2的衍生物)的適體構建體。藉由在兩個方向上(要麼抗VEGF適體處於5’末端(AMSB107.0)，要麼抗Ang2適體處於5’末端(AMSB108.0))上直接連接(無任何接頭)從頭到尾合成雙特異性適體構建體。結果概述於表5中。
表5雙特異性適體的結合親和力
Figure 110110012-A0202-12-0121-47
基於對VEGF和Ang2的結合親和力，雙特異性適體AMSB107.0似乎給出了最好的結果，並被選擇用於進一步的截短和突變實驗。VEGF/Ang2雙特異性適體AMSB107顯示了等於或優於其前體適體的結合親和力的針對VEGF和Ang2的KD和IC50(表6)。根據功能性受體抑制測定結果，AMSB107抑制VEGF/VEGF受體2和Ang2/Tie2的相互作用，其中IC50值約為100pM(圖4)。
表6雙特異性適體的結合親和力和體外功能
Figure 110110012-A0202-12-0122-49
Figure 110110012-A0202-12-0123-50
抗VEGF適體AMS0433、抗Ang2適體AMS0526和抗VEGF/抗Ang2雙特異性適體AMSB107的預測的二級結構如圖5所示。當設計AMSB107時，抗VEGF適體AMS0433和抗Ang2適體AMS0526的3’底部莖區域被仔細地選擇和共用，以最小化兩個單獨適體之間的錯誤折疊和干擾的機會(圖5)。結果，抗VEGF適體AMS0433和抗Ang2適體AMS0526的結構均很好地保留在雙特異性構建體AMSB107中。
表7雙特異性適體的結合親和力和體外功能
Figure 110110012-A0202-12-0123-51
此外，證明了添加接頭或PEG聚合物不會損害性能。本申請的適體的另一個關鍵有利方面是它們的模組性-在不同結合基序之間的化學合成過程中，可以添加諸如六乙二醇接頭(H或PEG6)等的接頭，並且諸如高分子量聚乙二醇(PEG)的大的聚合物可以綴合於適體的末端，而不影響適體的性能。例如，VEGF適體AMSB107(具有如SEQ ID No.171所示的核苷酸序列)和另外2種變 體(AMSB107.P6和AMSB107.P40K，分別具有如SEQ ID No.202或SEQ ID No.203所示的核苷酸序列)在體外受體競爭測定中對VEGF和Ang2兩者均展示出相似的效力。與AMSB107相比，此類變體可具有額外的益處，諸如可調間距、較低的製造成本和更好的體內醫藥代謝動力學。AMSB107.P6使用H接頭來取代AMSB107中的幾個核苷酸-H鍵接頭可以在適體的化學合成過程中使公知的程式來引入。藉由使用公知的基於胺基的化學綴合化學，AMSB107.P40K使用40kDa PEG與AMSB107的5’-末端綴合。
聚乙二醇化和純化程式：
具有5’-胺基修飾的C6接頭(Glen-research,10-1906-02M)的適體使用Trityl-on工藝來合成，並藉由Glen-pak純化盒(Glen-research,60-5100-96)純化，以脫去三苯甲基並除去短時失敗的合成產物。然後使用旋轉濃縮器(Millipore,UFC901024)濃縮脫鹽的適體。將1mM 5’-胺基修飾的適體與1.5mM至2mM 40kDa的Y形NHS酯修飾的PEG(JenKem Technology USA Inc,Y-NHS-40K)混合，在pH8.2下用50% DMSO以及50mM Teorell和Stenhagen緩衝液處理。將反應混合物充分混合，並在37℃孵育1小時。在Agilent 1260 HPLC系統上使用DNAPac PA100分析管柱(Thermofisher,043010)分析反應混合物。聚乙二醇化適體的形成藉由出現不同於非聚乙二醇化適體的相應洗脫峰來證實。隨後在AKTA Explorer FPLC系統上使用TSKgel SuperQ-5PW陰離子交換樹脂(Tosoh Bioscience，0043383)對聚乙二醇化適體進行純化。然後使用超濾對聚乙二醇化適體進行脫鹽，凍幹並於-20℃下儲存。
使用與測量本申請的適體對VEGF的結合親和力的方法相似的方法，測量本申請的適體與Tie2的結合親和力。
實施例10聚乙二醇化雙特異性適體在兔DL-α-胺基二酸(DL-AAA)誘導的視網膜NV模型中獲得了比阿柏西普更高的效力和更長的作用持續時間
構建了AMSB107P(具有如SEQ ID No.204中所示的核苷酸核酸序列)，其為包含2’-氟修飾的核苷酸和2’-Ome修飾的核苷酸的經完全修飾的雙特異性適體，並且如針對AMSB107.P40K所描述的，使用胺基-NHS綴合化學將其在5’-末端與40kDa的PEG綴合。假設聚乙二醇化適體將擁有比生物製品更長的半衰期；此外，VEGF/Ang2雙重靶向機制也可以在體內實現更好的療效和更長的持續時間。並且在兔DL-a-胺基二酸(DL-AAA)誘導的視網膜NV模型中測試了這一假設。
本研究藉由採用先前建立的程式(參見J.Cao,T.C.MacPherson,B.V.Iglesias,Y.Liu,N.Tirko,G.D.Yancopoulos,S.J.Wiegand,C.Romano,Aflibercept Action in a Rabbit Model of Chronic Retinal Neovascularization：：Reversible Inhibition of Pathologic Leakage With Dose-Dependent Duration,Investig.Opthalmology Vis.Sci.59,1033(2018))來進行。本研究使用2-4月齡(~6 lbs)的新西蘭白兔(NZW)。使兔子在到達設施後1週適應環境。為了誘導視網膜NV和滲漏，藉由肌內注射用8mg/kg ZoletilTM 50和1.6mg/kg賽拉嗪麻醉兔子，並在兩隻眼睛中接受玻璃體內注射80μl新鮮製備的80mM DL-a-胺基二酸溶液(DL-AAA)以誘導視網膜血管滲漏。注射後用棉簽塗抹器用抗生素軟膏處理注射部位。然後將兔子保持至少10週，以使NV和滲漏穩定。
接下來，滲漏穩定的兔子接受以下試驗品的玻璃體內注射：組1：50μl的10mg/ml阿柏西普；組2：50Lrμl的10mg/ml AMSB107P。使用Spectralis HRA+OCT系統(Heidelberg)測量洩漏抑制和NV消退的功效。為了測量滲漏抑制的作用，在兔子的耳緣靜脈中注射10%螢光素鈉(10mg/kg)用於螢光素血管造影(FA)成像；無紅成像用於可視化視網膜靜脈。注射前一天(作為基線)以及還有注射後一週進行FA和無紅成像。
藉由每週一次的裂隙燈生物顯微鏡檢查來評估測試品的安全性。
發現AMSB107P耐受性良好，並且在整個研究過程中沒有報告與測試品相關的毒性。
藉由無紅成像測量對病理性NV的影響(圖8)。在注射測試品之前，NV在所有眼睛中均為明顯的(由箭頭標記的)。在注射後1週，在阿柏西普臂中觀察到視網膜NV消退，但殘餘NV仍然明顯(由箭頭標記的)。相比之下，AMSB107P導致視網膜NV接近完全消退(箭頭被放置在NV先前出現的相同位置以進行定向)。
注射後8週，NV已生長回阿柏西普治療的眼中的基線水準。再生長遵循注射前觀察到的相同血管模式。相比之下，AMSB107P仍保持其對視網膜NV(由箭頭標記的)的抑制作用。
注射後15週，在用AMSB107P治療的眼中觀察到NV再生長(由箭頭標記的)。與注射前觀察到的NV相比，新的NV遵循不同的模式，這表明適體引起了血管重塑。在以前的報告中也報導了血管重構的類似效果(參考Bibiana,T.MacPherson,J.Cao,C.Romano,Aflibercept in combination with nesvacumab(anti-Ang2)induces vascular remodeling in a rabbit model of pathological neovascularization.,Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.59,1447-1447(2018))，其中阿柏西 普和Ang2抗體(尼伐單抗(nesvacumab))的組合引起血管重塑，而阿伯西普本身沒有表現出這種作用。
藉由FA測量對血管滲漏的影響(圖9)。在注射測試品之前，所有眼睛中都有明顯的滲漏(由白色箭頭標記的)。注射後1週，阿柏西普和AMSB107P均可完全抑制滲漏。注射後7週，阿柏西普治療的眼睛開始再次滲漏；注射後8週滲漏惡化，恢復到基線水準。相比之下，在注射後7週和8週，在適體治療的眼中沒有觀察到滲漏。注射後14週開始觀察到輕微滲漏；第14週和第15週的滲漏程度都顯著低於基線水準。
雖然本文已顯示和描述了本公開的較佳實施方案，但是對於所屬技術領域具有通常知識者來說，顯然這些實施方案僅僅是作為示例提供的。本公開無意限於本說明書中提供的具體實例。雖然已經參考前述說明書描述了本公開，但本文中的實施方案的描述和說明不意味著以限制的意義來解釋。在不脫離本公開的情況下，所屬技術領域具有通常知識者現在將會想到許多變化、改變和替換。此外，應當理解，本公開的所有方面不限於本文闡述的取決於各種條件和變數的具體描述、配置或相對比例。應當理解，在實踐本公開時，可以採用本文描述的本公開實施方案的各種替代方案。因此，預期本公開也將覆蓋任何這樣的替代、修改、變化或等同物。下麵的請求項旨在限定本公開的範圍，並且這些請求項及其等同物範圍內的方法和結構由此被覆蓋。
<110> 美商愛普濟德生物技術有限公司(Aptitude Medical Systems,Inc)
<120> 適體及其用途(APTAMERS AND USE THEREOF)
<130> 0014-PA-014
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<170> PatentIn version 3.5
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<211> 61
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-Ang2適體
<400> 1
Figure 110110012-A0202-12-0128-73
<210> 2
<211> 48
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-Ang2適體
<400> 2
Figure 110110012-A0202-12-0128-74
<210> 3
<211> 48
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-Ang2適體
<400> 3
Figure 110110012-A0202-12-0128-75
<210> 4
<211> 40
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-Ang2適體
<400> 4
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<210> 5
<211> 61
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-Ang2適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(61)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 5
Figure 110110012-A0202-12-0129-79
<210> 6
<211> 48
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-Ang2適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(48)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 6
Figure 110110012-A0202-12-0129-80
<210> 7
<211> 48
<212> RNA
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<220>
<223> 經修飾抗-Ang2適體
<220>
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<222> (1)..(48)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 7
Figure 110110012-A0202-12-0130-81
<210> 8
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<212> RNA
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<220>
<223> 經修飾抗-Ang2適體
<220>
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<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 8
Figure 110110012-A0202-12-0130-82
<210> 9
<211> 48
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-Ang2適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(4)
<223> a表示2’-O-甲基A,u表示2’-O-甲基U,c表示2’-O-甲基C,g表示2’-O-甲基G
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(44)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (45)..(48)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示 2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 9
Figure 110110012-A0202-12-0131-83
<210> 10
<211> 48
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> 經修飾抗-Ang2適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(4)
<223> a表示鎖核酸(LNA)A,u表示鎖核酸(LNA)U,c表示鎖核酸(LNA)C,g表示鎖核酸(LNA)G
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(44)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (45)..(48)
<223> a表示鎖核酸(LNA)A,u表示鎖核酸(LNA)U,c表示鎖核酸(LNA)C,g表示鎖核酸(LNA)G
<400> 10
Figure 110110012-A0202-12-0131-84
<210> 11
<211> 43
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-Ang2適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(20)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (21)..(21)
<223> n指示六乙二醇(Heg)接頭
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(43)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 11
Figure 110110012-A0202-12-0132-85
<210> 12
<211> 45
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-Ang2適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (22)..(22)
<223> h指示六乙二醇(Heg)接頭
<220>
<221> misc_feature
<222> (23)..(45)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 12
Figure 110110012-A0202-12-0132-86
<210> 13
<211> 13
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-Ang2適體第一共有序列
<220>
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<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 13
Figure 110110012-A0202-12-0133-87
<210> 14
<211> 14
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<220>
<223> 經修飾抗-Ang2適體第一共有序列
<220>
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<222> (1)..(14)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 14
Figure 110110012-A0202-12-0133-88
<210> 15
<211> 15
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-Ang2適體第一共有序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(15)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 15
Figure 110110012-A0202-12-0133-89
<210> 16
<211> 15
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-Ang2適體第一共有序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(15)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 16
Figure 110110012-A0202-12-0134-90
<210> 17
<211> 13
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-Ang2適體第一共有序列
<400> 17
Figure 110110012-A0202-12-0134-91
<210> 18
<211> 14
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-Ang2適體第一共有序列
<400> 18
Figure 110110012-A0202-12-0134-92
<210> 19
<211> 15
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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Figure 110110012-A0202-12-0134-93
<210> 20
<211> 15
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-Ang2適體第一共有序列
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Figure 110110012-A0202-12-0135-94
<210> 21
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-Ang2適體第二共有序列
<220>
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<222> (1)..(12)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 21
Figure 110110012-A0202-12-0135-95
<210> 22
<211> 13
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-Ang2適體第二共有序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(13)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 22
Figure 110110012-A0202-12-0135-97
<210> 23
<211> 14
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-Ang2適體第二共有序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(14)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 23
Figure 110110012-A0202-12-0136-99
<210> 24
<211> 14
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-Ang2適體第二共有序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(14)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 24
Figure 110110012-A0202-12-0136-101
<210> 25
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-Ang2適體第二共有序列
<400> 25
Figure 110110012-A0202-12-0136-102
<210> 26
<211> 13
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-Ang2適體第二共有序列
<400> 26
Figure 110110012-A0202-12-0136-103
<210> 27
<211> 14
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-Ang2適體第二共有序列
<400> 27
Figure 110110012-A0202-12-0137-104
<210> 28
<211> 14
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-Ang2適體第二共有序列
<400> 28
Figure 110110012-A0202-12-0137-105
<210> 29
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人VEGF121
<400> 29
Figure 110110012-A0202-12-0137-106
<210> 30
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人VEGF121受體結合結構域1，人VEGF165受體結合結構域1，猴VEGF 165受體結合結構域1，大鼠VEGF 164受體結合結構域1，大鼠VEGF 120受體結合結構域1，小鼠VEGF 164受體結合結構域1，小鼠VEGF 120
<400> 30
Figure 110110012-A0202-12-0138-107
<210> 31
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人VEGF121受體結合結構域2，人VEGF165受體結合結構域2，兔VEGF 189受體結合結構域2，猴VEGF 165受體結合結構域2，大鼠VEGF 164受體結合結構域2，大鼠VEGF 120受體結合結構域2，小鼠VEGF 164
<400> 31
Figure 110110012-A0202-12-0138-108
<210> 32
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人VEGF121受體結合結構域3，人VEGF165受體結合結構域3，猴VEGF 165受體結合結構域3
<400> 32
Figure 110110012-A0202-12-0138-109
<210> 33
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人VEGF121受體結合結構域4，人VEGF165受體結合結構域4，猴VEGF 165受體結合結構域4，兔VEGF 189受體結合結構域4，大鼠VEGF 164受體結合結構域4，大鼠VEGF 120受體結合結構域4，小鼠VEGF 164
<400> 33
Figure 110110012-A0202-12-0139-110
<210> 34
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人VEGF121受體結合結構域5，人VEGF165受體結合結構域5,Moneky VEGF 165受體結合結構域5，兔VEGF 189受體結合結構域5
<400> 34
Figure 110110012-A0202-12-0139-111
<210> 35
<211> 165
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人VEGF165，猴VEGF 165
<400> 35
Figure 110110012-A0202-12-0139-112
Figure 110110012-A0202-12-0140-113
<210> 36
<211> 189
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 兔VEGF 189
<400> 36
Figure 110110012-A0202-12-0140-114
Figure 110110012-A0202-12-0141-115
<210> 37
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 兔VEGF 189受體結合結構域1
<400> 37
Figure 110110012-A0202-12-0141-116
<210> 38
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 兔VEGF 189受體結合結構域3
<400> 38
Figure 110110012-A0202-12-0141-117
<210> 39
<211> 164
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 大鼠VEGF 164
<400> 39
Figure 110110012-A0202-12-0142-118
<210> 40
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 大鼠VEGF 164受體結合結構域3，大鼠VEGF 120受體結合結構域3，小鼠VEGF 164受體結合結構域3，小鼠VEGF 120受體結合結構域3
<400> 40
Figure 110110012-A0202-12-0143-119
<210> 41
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<400> 41
Figure 110110012-A0202-12-0143-120
<210> 42
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 大鼠VEGF 120
<400> 42
Figure 110110012-A0202-12-0143-121
Figure 110110012-A0202-12-0144-122
<210> 43
<211> 164
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 小鼠VEGF 164
<400> 43
Figure 110110012-A0202-12-0144-123
Figure 110110012-A0202-12-0145-124
<210> 44
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 小鼠VEGF 120
<400> 44
Figure 110110012-A0202-12-0145-125
<210> 45
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 小鼠VEGF 120受體結合結構域4
<400> 45
Figure 110110012-A0202-12-0146-126
<210> 46
<211> 40
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 46
Figure 110110012-A0202-12-0146-127
<210> 47
<211> 40
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 47
Figure 110110012-A0202-12-0146-128
<210> 48
<211> 40
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 48
Figure 110110012-A0202-12-0146-129
<210> 49
<211> 38
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 49
Figure 110110012-A0202-12-0146-130
<210> 50
<211> 38
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 50
Figure 110110012-A0202-12-0147-131
<210> 51
<211> 38
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 51
Figure 110110012-A0202-12-0147-132
<210> 52
<211> 40
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 52
Figure 110110012-A0202-12-0147-134
<210> 53
<211> 43
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 53
Figure 110110012-A0202-12-0147-133
<210> 54
<211> 40
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 54
Figure 110110012-A0202-12-0148-135
<210> 55
<211> 40
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 55
Figure 110110012-A0202-12-0148-137
<210> 56
<211> 40
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 56
Figure 110110012-A0202-12-0148-138
<210> 57
<211> 40
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 57
Figure 110110012-A0202-12-0148-140
<210> 58
<211> 40
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 58
Figure 110110012-A0202-12-0148-139
<210> 59
<211> 36
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 59
Figure 110110012-A0202-12-0149-141
<210> 60
<211> 40
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 60
Figure 110110012-A0202-12-0149-142
<210> 61
<211> 32
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 61
Figure 110110012-A0202-12-0149-143
<210> 62
<211> 31
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 62
Figure 110110012-A0202-12-0149-144
<210> 63
<211> 32
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 63
Figure 110110012-A0202-12-0149-145
<210> 64
<211> 42
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 64
Figure 110110012-A0202-12-0150-146
<210> 65
<211> 42
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 65
Figure 110110012-A0202-12-0150-147
<210> 66
<211> 41
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 66
Figure 110110012-A0202-12-0150-150
<210> 67
<211> 42
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 67
Figure 110110012-A0202-12-0150-149
<210> 68
<211> 42
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 68
Figure 110110012-A0202-12-0150-151
<210> 69
<211> 42
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 69
Figure 110110012-A0202-12-0151-152
<210> 70
<211> 52
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 70
Figure 110110012-A0202-12-0151-153
<210> 71
<211> 43
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 71
Figure 110110012-A0202-12-0151-154
<210> 72
<211> 52
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 72
Figure 110110012-A0202-12-0151-155
<210> 73
<211> 52
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 73
Figure 110110012-A0202-12-0151-156
<210> 74
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 74
Figure 110110012-A0202-12-0152-157
<210> 75
<211> 50
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 75
Figure 110110012-A0202-12-0152-158
<210> 76
<211> 45
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 76
Figure 110110012-A0202-12-0152-159
<210> 77
<211> 41
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 77
Figure 110110012-A0202-12-0152-160
<210> 78
<211> 25
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 78
Figure 110110012-A0202-12-0153-161
<210> 79
<211> 33
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 79
Figure 110110012-A0202-12-0153-166
<210> 80
<211> 55
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 80
Figure 110110012-A0202-12-0153-163
<210> 81
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 81
Figure 110110012-A0202-12-0153-164
<210> 82
<211> 52
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 82
Figure 110110012-A0202-12-0153-165
<210> 83
<211> 42
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 83
Figure 110110012-A0202-12-0154-167
<210> 84
<211> 48
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 84
Figure 110110012-A0202-12-0154-168
<210> 85
<211> 30
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 85
Figure 110110012-A0202-12-0154-169
<210> 86
<211> 43
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 86
Figure 110110012-A0202-12-0154-170
<210> 87
<211> 44
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 87
Figure 110110012-A0202-12-0154-171
<210> 88
<211> 42
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 88
Figure 110110012-A0202-12-0155-172
<210> 89
<211> 45
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 89
Figure 110110012-A0202-12-0155-173
<210> 90
<211> 44
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體
<400> 90
Figure 110110012-A0202-12-0155-174
<210> 91
<211> 40
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<220>
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<400> 91
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<210> 92
<211> 40
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(40)
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<400> 92
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<210> 93
<211> 40
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(40)
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<400> 93
Figure 110110012-A0202-12-0156-177
<210> 94
<211> 38
<212> RNA
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<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
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<400> 94
Figure 110110012-A0202-12-0156-178
<210> 95
<211> 38
<212> RNA
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<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(38)
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<400> 95
Figure 110110012-A0202-12-0157-179
<210> 96
<211> 38
<212> RNA
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<220>
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<220>
<221> misc_feature
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Figure 110110012-A0202-12-0157-180
<210> 97
<211> 40
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<220>
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<220>
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<210> 98
<211> 43
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<220>
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<220>
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<400> 98
Figure 110110012-A0202-12-0158-182
<210> 99
<211> 40
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<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
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<400> 99
Figure 110110012-A0202-12-0158-183
<210> 100
<211> 40
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(40)
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<400> 100
Figure 110110012-A0202-12-0159-184
<210> 101
<211> 40
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(40)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 101
Figure 110110012-A0202-12-0159-185
<210> 102
<211> 40
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(40)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 102
Figure 110110012-A0202-12-0159-186
<210> 103
<211> 40
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(40)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 103
Figure 110110012-A0202-12-0160-187
<210> 104
<211> 36
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(36)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 104
Figure 110110012-A0202-12-0160-188
<210> 105
<211> 40
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(40)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 105
Figure 110110012-A0202-12-0160-189
<210> 106
<211> 32
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(32)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 106
Figure 110110012-A0202-12-0161-190
<210> 107
<211> 31
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(31)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 107
Figure 110110012-A0202-12-0161-191
<210> 108
<211> 32
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(32)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 108
Figure 110110012-A0202-12-0161-192
<210> 109
<211> 42
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(42)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 109
Figure 110110012-A0202-12-0162-193
<210> 110
<211> 42
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(42)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 110
Figure 110110012-A0202-12-0162-194
<210> 111
<211> 41
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(41)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 111
Figure 110110012-A0202-12-0162-195
<210> 112
<211> 42
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(42)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 112
Figure 110110012-A0202-12-0163-196
<210> 113
<211> 42
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(42)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 113
Figure 110110012-A0202-12-0163-197
<210> 114
<211> 42
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(42)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 114
Figure 110110012-A0202-12-0163-198
<210> 115
<211> 52
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(52)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 115
Figure 110110012-A0202-12-0164-199
<210> 116
<211> 43
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(43)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 116
Figure 110110012-A0202-12-0164-200
<210> 117
<211> 52
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(52)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 117
Figure 110110012-A0202-12-0165-201
<210> 118
<211> 52
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(52)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 118
Figure 110110012-A0202-12-0165-203
<210> 119
<211> 51
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(51)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 119
Figure 110110012-A0202-12-0165-204
<210> 120
<211> 50
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(50)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 120
Figure 110110012-A0202-12-0166-206
<210> 121
<211> 45
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(45)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 121
Figure 110110012-A0202-12-0166-207
<210> 122
<211> 41
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(41)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 122
Figure 110110012-A0202-12-0166-208
<210> 123
<211> 25
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(25)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 123
Figure 110110012-A0202-12-0167-209
<210> 124
<211> 33
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(33)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 124
Figure 110110012-A0202-12-0167-210
<210> 125
<211> 55
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(55)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 125
Figure 110110012-A0202-12-0167-212
<210> 126
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(27)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 126
Figure 110110012-A0202-12-0168-213
<210> 127
<211> 52
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(52)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 127
Figure 110110012-A0202-12-0168-214
<210> 128
<211> 42
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(42)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 128
Figure 110110012-A0202-12-0168-215
<210> 129
<211> 48
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(48)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 129
Figure 110110012-A0202-12-0169-216
<210> 130
<211> 30
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(30)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 130
Figure 110110012-A0202-12-0169-217
<210> 131
<211> 43
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(43)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 131
Figure 110110012-A0202-12-0169-218
<210> 132
<211> 44
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(44)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 132
Figure 110110012-A0202-12-0170-219
<210> 133
<211> 42
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(42)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 133
Figure 110110012-A0202-12-0170-220
<210> 134
<211> 45
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(45)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 134
Figure 110110012-A0202-12-0170-222
<210> 135
<211> 44
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(45)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 135
Figure 110110012-A0202-12-0171-223
<210> 136
<211> 17
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體第一共有序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(17)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 136
Figure 110110012-A0202-12-0171-224
<210> 137
<211> 17
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體第一共有序列
<400> 137
Figure 110110012-A0202-12-0171-225
<210> 138
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾抗-VEGF適體第二共有序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(12)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 138
Figure 110110012-A0202-12-0172-226
<210> 139
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然抗-VEGF適體第二共有序列
<400> 139
Figure 110110012-A0202-12-0172-227
<210> 140
<211> 88
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<400> 140
Figure 110110012-A0202-12-0172-229
<210> 141
<211> 81
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<400> 141
Figure 110110012-A0202-12-0172-230
<210> 142
<211> 67
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<400> 142
Figure 110110012-A0202-12-0173-232
<210> 143
<211> 69
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<400> 143
Figure 110110012-A0202-12-0173-233
<210> 144
<211> 78
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<400> 144
Figure 110110012-A0202-12-0173-235
<210> 145
<211> 76
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<400> 145
Figure 110110012-A0202-12-0173-236
<210> 146
<211> 80
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<400> 146
Figure 110110012-A0202-12-0174-237
<210> 147
<211> 74
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<400> 147
Figure 110110012-A0202-12-0174-238
<210> 148
<211> 72
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<400> 148
Figure 110110012-A0202-12-0174-239
<210> 149
<211> 81
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<400> 149
Figure 110110012-A0202-12-0174-240
<210> 150
<211> 76
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<400> 150
Figure 110110012-A0202-12-0175-241
<210> 151
<211> 80
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<400> 151
Figure 110110012-A0202-12-0175-242
<210> 152
<211> 77
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<400> 152
Figure 110110012-A0202-12-0175-243
<210> 153
<211> 78
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<400> 153
Figure 110110012-A0202-12-0175-244
<210> 154
<211> 80
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<400> 154
Figure 110110012-A0202-12-0176-245
<210> 155
<211> 79
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<400> 155
Figure 110110012-A0202-12-0176-246
<210> 156
<211> 80
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<400> 156
Figure 110110012-A0202-12-0176-247
<210> 157
<211> 81
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<400> 157
Figure 110110012-A0202-12-0176-248
<210> 158
<211> 80
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<400> 158
Figure 110110012-A0202-12-0177-249
<210> 159
<211> 78
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<400> 159
Figure 110110012-A0202-12-0177-250
<210> 160
<211> 78
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<400> 160
Figure 110110012-A0202-12-0177-251
<210> 161
<211> 74
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> n指示六-乙二醇(Heg)接頭
<400> 161
Figure 110110012-A0202-12-0177-252
<210> 162
<211> 79
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> n指示六-乙二醇(Heg)接頭
<400> 162
Figure 110110012-A0202-12-0178-253
<210> 163
<211> 73
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (51)..(51)
<223> n指示六-乙二醇(Heg)接頭
<400> 163
Figure 110110012-A0202-12-0178-255
<210> 164
<211> 75
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (52)..(52)
<223> n指示六-乙二醇(Heg)接頭
<400> 164
Figure 110110012-A0202-12-0178-256
Figure 110110012-A0202-12-0179-257
<210> 165
<211> 75
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(10)
<223> n指示三碳接頭
<400> 165
Figure 110110012-A0202-12-0179-259
<210> 166
<211> 77
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 天然雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(12)
<223> n指示三碳接頭
<400> 166
Figure 110110012-A0202-12-0179-264
<210> 167
<211> 88
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
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<400> 167
Figure 110110012-A0202-12-0180-262
<210> 168
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<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(81)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 168
Figure 110110012-A0202-12-0180-263
<210> 169
<211> 67
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
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<400> 169
Figure 110110012-A0202-12-0180-265
<210> 170
<211> 69
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
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<400> 170
Figure 110110012-A0202-12-0181-266
<210> 171
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<212> RNA
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<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
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Figure 110110012-A0202-12-0181-268
<210> 172
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<212> RNA
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<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
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<400> 172
Figure 110110012-A0202-12-0181-269
Figure 110110012-A0202-12-0182-270
<210> 173
<211> 80
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(80)
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<400> 173
Figure 110110012-A0202-12-0182-271
<210> 174
<211> 74
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
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<400> 174
Figure 110110012-A0202-12-0182-273
<210> 175
<211> 72
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
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Figure 110110012-A0202-12-0183-274
<210> 176
<211> 81
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(81)
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<400> 176
Figure 110110012-A0202-12-0183-275
<210> 177
<211> 76
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(76)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 177
Figure 110110012-A0202-12-0183-276
<210> 178
<211> 80
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
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<400> 178
Figure 110110012-A0202-12-0184-278
<210> 179
<211> 77
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(77)
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<400> 179
Figure 110110012-A0202-12-0184-279
<210> 180
<211> 78
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(78)
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<400> 180
Figure 110110012-A0202-12-0185-281
<210> 181
<211> 80
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(80)
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<400> 181
Figure 110110012-A0202-12-0185-282
<210> 182
<211> 79
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(79)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 182
Figure 110110012-A0202-12-0185-283
<210> 183
<211> 80
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(80)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 183
Figure 110110012-A0202-12-0186-284
<210> 184
<211> 81
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(81)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 184
Figure 110110012-A0202-12-0186-285
<210> 185
<211> 80
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(80)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 185
Figure 110110012-A0202-12-0187-287
<210> 186
<211> 78
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(18)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<220>
<221> misc_feature
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<220>
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<220>
<221> misc_feature
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<220>
<221> misc_feature
<222> (30)..(78)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 186
Figure 110110012-A0202-12-0187-288
<210> 187
<211> 78
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(15)
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<220>
<221> misc_feature
<222> (16)..(18)
<223> a表示鎖核酸(LNA)A,u表示鎖核酸(LNA)U,c表示鎖核酸(LNA)C,g表示鎖核酸(LNA)G
<220>
<221> misc_feature
<222> (19)..(78)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 187
Figure 110110012-A0202-12-0188-289
<210> 188
<211> 78
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(8)
<223> a表示鎖核酸(LNA)A,u表示鎖核酸(LNA)U,c表示鎖核酸(LNA)C,g表示鎖核酸(LNA)G
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(30)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (31)..(34)
<223> a表示鎖核酸(LNA)A,u表示鎖核酸(LNA)U,c表示鎖核酸(LNA)C,g表示鎖核酸(LNA)G
<220>
<221> misc_feature
<222> (35)..(74)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (75)..(78)
<223> a表示鎖核酸(LNA)A,u表示鎖核酸(LNA)U,c表示鎖核酸(LNA)C,g表示鎖核酸(LNA)G
<400> 188
Figure 110110012-A0202-12-0189-290
<210> 189
<211> 78
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(8)
<223> a表示2’-O-甲基A,u表示2’-O-甲基U,c表示2’-O-甲基C,g表示2’-O-甲基G
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(30)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (31)..(34)
<223> a表示2’-O-甲基A,u表示2’-O-甲基U,c表示2’-O-甲基C,g表示2’-O-甲基G
<220>
<221> misc_feature
<222> (35)..(74)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (75)..(78)
<223> a表示2’-O-甲基A,u表示2’-O-甲基U,c表示2’-O-甲基C,g表示2’-O-甲基G
<400> 189
Figure 110110012-A0202-12-0190-291
<210> 190
<211> 74
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(8)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> n指示六-乙二醇(Heg)接頭
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(74)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 190
Figure 110110012-A0202-12-0190-292
<210> 191
<211> 79
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> n指示六-乙二醇(Heg)接頭
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(79)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 191
Figure 110110012-A0202-12-0191-293
<210> 192
<211> 73
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(50)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (51)..(51)
<223> n指示六-乙二醇(Heg)接頭
<220>
<221> misc_feature
<222> (52)..(73)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 192
Figure 110110012-A0202-12-0191-294
<210> 193
<211> 75
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(51)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (52)..(52)
<223> n指示六-乙二醇(Heg)接頭
<220>
<221> misc_feature
<222> (53)..(75)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 193
Figure 110110012-A0202-12-0192-295
<210> 194
<211> 75
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(8)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(10)
<223> n指示三碳接頭
<220>
<221> misc_feature
<222> (11)..(75)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 194
Figure 110110012-A0202-12-0193-297
<210> 195
<211> 77
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 經修飾雙特異性適體
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(8)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示
2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g
表示2’-氟鳥苷酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(12)
<223> n指示三碳接頭
<220>
<221> misc_feature
<222> (13)..(77)
<223> a表示2’-氟腺苷酸，u表示2’-氟尿苷酸，c表示2’-氟胞苷酸，g表示2’-氟鳥苷酸
<400> 195
Figure 110110012-A0202-12-0193-298
<210> 196
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> VEGF正向引子
<400> 196
Figure 110110012-A0202-12-0193-300
<210> 197
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> VEGF反向引子
<400> 197
Figure 110110012-A0202-12-0194-301
<210> 198
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> Ang2正向引子
<400> 198
Figure 110110012-A0202-12-0194-303
<210> 199
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> Ang2反向引子
<400> 199
Figure 110110012-A0202-12-0194-304
<210> 200
<211> 42
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> AMS0433.m4
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(8)
<223> 2’-F修飾
<220>
<221> misc_RNA
<222> (9)..(14)
<223> 2’-Ome修飾
<220>
<221> misc_RNA
<222> (15)..(22)
<223> 2’-F修飾
<220>
<221> misc_RNA
<222> (23)..(23)
<223> 2’-Ome修飾
<220>
<221> misc_RNA
<222> (24)..(26)
<223> 2’-F修飾
<220>
<221> misc_RNA
<222> (27)..(27)
<223> 2’-Ome修飾
<220>
<221> misc_RNA
<222> (28)..(30)
<223> 2’-F修飾
<220>
<221> misc_RNA
<222> (31)..(42)
<223> 2’-Ome修飾
<400> 200
Figure 110110012-A0202-12-0195-305
<210> 201
<211> 42
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> AMS0433.m6
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(14)
<223> 2’-Ome修飾
<220>
<221> misc_RNA
<222> (15)..(22)
<223> 2’-F修飾
<220>
<221> misc_RNA
<222> (23)..(23)
<223> 2’-Ome修飾
<220>
<221> misc_RNA
<222> (24)..(26)
<223> 2’-F修飾
<220>
<221> misc_RNA
<222> (27)..(27)
<223> 2’-Ome修飾
<220>
<221> misc_RNA
<222> (28)..(42)
<223> 2’-F修飾
<400> 201
Figure 110110012-A0202-12-0196-306
<210> 202
<211> 74
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> AMSB107.P6
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(74)
<223> 2’-F修飾
<220>
<221> misc_RNA
<222> (9)..(9)
<223> H為A,U為C
<400> 202
Figure 110110012-A0202-12-0196-307
<210> 203
<211> 74
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> AMSB107.P40K
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(74)
<223> 2’-F修飾
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(74)
<223> 具有40kDa PEG接合於5’-末端
<220>
<221> misc_RNA
<222> (9)..(9)
<223> H為A,U或C
<400> 203
Figure 110110012-A0202-12-0197-308
<210> 204
<211> 78
<212> RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> AMSB107P
<220>
<221> misc_RNA
<222> (1)..(8)
<223> 2’-F修飾
<220>
<221> misc_RNA
<222> (9)..(14)
<223> 2’-Ome修飾
<220>
<221> misc_RNA
<222> (15)..(22)
<223> 2’-F修飾
<220>
<221> misc_RNA
<222> (23)..(23)
<223> 2’-Ome修飾
<220>
<221> misc_RNA
<222> (24)..(26)
<223> 2’-F修飾
<220>
<221> misc_RNA
<222> (27)..(27)
<223> 2’-Ome修飾
<220>
<221> misc_RNA
<222> (28)..(34)
<223> 2’-F修飾
<220>
<221> misc_RNA
<222> (35)..(36)
<223> 2’-Ome修飾
<220>
<221> misc_RNA
<222> (37)..(50)
<223> 2’-F修飾
<220>
<221> misc_RNA
<222> (51)..(56)
<223> 2’-Ome修飾
<220>
<221> misc_RNA
<222> (57)..(74)
<223> 2’-F修飾
<220>
<221> misc_RNA
<222> (75)..(78)
<223> 2’-Ome修飾
<400> 204
Figure 110110012-A0202-12-0198-52

Claims (173)

  1. 一種抗Ang2適體，其與Ang2特異性結合，其中KD值約為500皮莫耳(pM)或更小。
  2. 如請求項1所述的抗Ang2適體，其與Ang2特異性結合，其中KD值約為100皮莫耳(pM)或更小。
  3. 如請求項1至2中任一項所述的抗Ang2適體，其中該Ang2是人Ang2、小鼠Ang2、猴Ang2、兔Ang2和/或大鼠Ang2。
  4. 如請求項1至3中任一項所述的抗Ang2適體，其基本上不與人Ang1結合。
  5. 如請求項1至4中任一項所述的抗Ang2適體，其抑制該Ang2與該Tie2之間的相互作用。
  6. 如請求項1至5中任一項所述的抗Ang2適體，其能夠在小鼠氧誘導缺血性視網膜病(OIR)模型中減少新生血管形成並且/或者減少血管通透性。
  7. 如請求項1至6中任一項所述的抗Ang2適體，其是高度可溶的。
  8. 如請求項1至7中任一項所述的抗Ang2適體，其為RNA適體、DNA適體或其組合。
  9. 如請求項1至8中任一項所述的抗Ang2適體，其包含一個或多個經修飾的核苷酸。
  10. 如請求項1至9中任一項所述的抗Ang2適體，其具有核酸酶抗性。
  11. 如請求項1至10中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體的所有核苷酸均為經修飾的核苷酸，和/或一個或多個取代(諸如利用一個或多個PEG的取代)。例如，抗Ang2適體的一個或多個(例如，1-20個、1-19個、1-18個、1-17個、1-16個、1-15個、1-14個、1-13個、1-12個、1-11個、1-10個、1-9個、1-8個、1-7個、1-6個、1-5個、1-4個、1-3個或1-2個)核苷酸可被聚乙二醇部分或包含多個(例如，1-10個、1-9個、1-8個、1-7個、1-6個、1-5個、1-4個、1-3個或1-2個)聚乙二醇部分的接頭取代。在一些情況下，該接頭可以是六乙二醇(H或PEG6)接頭。這種取代可以發生在該抗Ang2適體的任何核苷酸上，只要其基本上不影響抗該Ang2適體的活性(例如，結合活性或抑制活性)和/或功能。在一些情況下，該取代基本上不影響該抗Ang2適體的二級結構，例如，該取代可以發生在包含在該抗Ang2適體二級結構的凸出或環區中的核苷酸上。在一些情況下，該取代不會發生在包含在該抗Ang2適體二級結構的莖區中的任何核苷酸上。
  12. 如請求項9至11中任一項所述的抗Ang2適體，其中該經修飾的核苷酸在一個或多個獨立選自核糖位置、去氧核糖位置、磷酸位置和鹼基位置的位置上包含化學取代或修飾。
  13. 如請求項9至12中任一項所述的抗Ang2適體，其中該經修飾的核苷酸包含一種或多種修飾，該修飾獨立地選自2’-位糖修飾、2’-胺基(2’-NH2)修飾、2’-氟(2’-F)修飾、2’-O-甲基(2’-OMe)修飾、2’-O-(2-甲氧基乙基)(2’-O-MOE)修飾、5-位修飾的嘧啶、胞嘧啶外環胺處的修飾、5’-溴尿嘧啶取代、5’-溴去氧尿苷取代、5’-溴去氧胞苷取代、主鏈修飾、鎖核酸(LNA)、甲基化、3’帽和5’帽。
  14. 如請求項13所述的抗Ang2適體，其中該5-位修飾的嘧啶選自5-羧基-2’-去氧尿苷、5-胺基烯丙基-2’-去氧尿苷、5-[(3-吲哚基)丙醯胺-N-烯丙基]-2’-去氧尿苷、5-羧基-2’-去氧胞苷、5-胺基烯丙基-2’-去氧胞苷、生物素-16-胺基烯丙基-2’-去氧胞苷、5-(N-苄基羧醯胺)-2’-去氧尿苷、5-(N-異丁基羧醯胺)-2’-去氧尿苷、5-(N-萘基甲基羧醯胺)-2’-去氧尿苷和5-(N-色胺羧醯胺)-2’-去氧尿苷。
  15. 如請求項1至14中任一項所述的抗Ang2適體，其包含一個或多個2’-修飾的核苷酸。
  16. 如請求項1至15中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體的所有核苷酸均為2’-修飾的核苷酸。
  17. 如請求項15或16所述的抗Ang2適體，其中該2’-修飾的核苷酸選自2’-胺基修飾的核苷酸、2’-氟修飾的核苷酸、2’-O-甲基修飾的核苷酸和2’-O-(2-甲氧基乙基)修飾的核苷酸。
  18. 如請求項1至17中任一項所述的抗Ang2適體，其包含至少一個2’-氟修飾的核苷酸、至少一個2’-O-甲基修飾的核苷酸和/或至少一個LNA。
  19. 如請求項1至18中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體的所有胞苷均為2’-修飾的胞苷。
  20. 如請求項1至19中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體的所有胞苷均為2’-氟修飾的胞苷和/或2’-O-甲基修飾的胞苷。
  21. 如請求項1至20中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體的所有胞苷均為2’-去氧-2’-氟胞苷。
  22. 如請求項1至21中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體的所有尿苷均為2’-修飾的尿苷。
  23. 如請求項1至22中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體的所有尿苷均為2’-氟修飾的尿苷和/或2’-O-甲基修飾的尿苷。
  24. 如請求項1至23中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體的所有尿苷均為2’-去氧-2’-氟尿苷。
  25. 如請求項1至24中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體的所有腺苷均為2’-修飾的腺苷。
  26. 如請求項1至25中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體的所有腺苷均為2’-氟修飾的腺苷和/或2’-O-甲基修飾的腺苷。
  27. 如請求項1至26中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體的所有腺苷均為2’-去氧-2’-氟腺苷。
  28. 如請求項1至27中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體的所有鳥苷均為2’-修飾的鳥苷。
  29. 如請求項1至28中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體的所有鳥苷均為2’-氟修飾的鳥苷和/或2’-O-甲基修飾的鳥苷。
  30. 如請求項1至29中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體的所有鳥苷均為2’-去氧-2’-氟鳥苷。
  31. 如請求項1至30中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體的所有核苷酸均為2’-修飾的核苷酸。
  32. 如請求項1至31中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體的所有核苷酸均為2’-氟修飾的核苷酸和/或2’-O-甲基修飾的核苷酸。
  33. 如請求項1至32中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體的所有核苷酸均為2’-氟修飾的核苷酸。
  34. 如請求項1至33中任一項所述的抗Ang2適體，其不包含任何天然核苷酸。
  35. 如請求項1至34中任一項所述的抗Ang2適體，其包含約10個至約150個核苷酸。
  36. 如請求項1至35中任一項所述的抗Ang2適體，其與抗Ang2參考適體競爭與該Ang2的結合，其中該抗Ang2參考適體包含二級結構，該二級結構從5’至3’方向包含第一莖、第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出、第四莖和第一環。
  37. 如請求項36所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2參考適體包含二級結構，該二級結構從5’至3’方向由第一莖、第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出、第四莖和第一環組成。
  38. 如請求項36或37所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2參考適體包含第一共有序列，該第一共有序列包含如SEQ ID NO：13-20中的任一個所示的核苷酸序列。
  39. 如請求項36至38中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2參考適體包含第二共有序列，該第二共有序列包含如SEQ ID NO：21-28中的任一個所示的核苷酸序列。
  40. 如請求項38或39所述的抗Ang2適體，其中該第一共有序列包含在形成該抗Ang2參考適體的第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出和/或第四莖的核苷酸序列中。
  41. 如請求項38至40中任一項所述的抗Ang2適體，其中該第一共有序列不包含在形成該抗Ang2參考適體的第一環的核苷酸序列中。
  42. 如請求項39至41中任一項所述的抗Ang2適體，其中該第二共有序列包含在形成抗Ang2參考適體的第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出和/或第四莖的核苷酸序列中。
  43. 如請求項39至42中任一項所述的抗Ang2適體，其中該第二共有序列不包含在形成抗Ang2參考適體的第一環的核苷酸序列中。
  44. 如請求項36至43中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2參考適體的該第一環包含2-30個核苷酸。
  45. 如請求項36至44中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2參考適體的該第一環包含3-10個核苷酸。
  46. 如請求項36至45中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2參考適體包含如SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列，或其變體或截短形式。
  47. 如請求項46所述的抗Ang2適體，其中該變體包含與SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列具有至少50%同一性的核苷酸序列。
  48. 如請求項46或47所述的抗Ang2適體，其中該變體包含具有一個或多個核苷酸添加、缺失和/或取代的如SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列。
  49. 如請求項36至48中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2參考適體包含約10個至約150個核苷酸。
  50. 如請求項38至49中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2參考適體包含該第一共有序列和該第二共有序列，並且其中該第一共有序列位於該第二共有序列的5’。
  51. 如請求項38至49中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2參考適體包含該第一共有序列和該第二共有序列，並且其中該第二共有序列位於該第一共有序列的5’。
  52. 如請求項1至51中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體包含二級結構，該二級結構從5’至3’方向包含第一莖、第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出、第四莖和第一環。
  53. 如請求項1至52中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體包含二級結構，該二級結構從5’至3’方向由第一莖、第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出、第四莖和第一環組成。
  54. 如請求項1至53中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體包含第一共有序列，該第一共有序列包含如SEQ ID NO：13-20中的任一個所示的核苷酸序列。
  55. 如請求項1至54中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體包含第二共有序列，該第二共有序列包含如SEQ ID NO：21-28中的任一個所示的核苷酸序列。
  56. 如請求項54或55所述的抗Ang2適體，其中該第一共有序列包含在形成該抗Ang2適體的第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出和/或第四莖的核苷酸序列中。
  57. 如請求項54至56中任一項所述的抗Ang2適體，其中該第一共有序列不包含在形成該抗Ang2適體的第一環的核苷酸序列中。
  58. 如請求項55至57中任一項所述的抗Ang2適體，其中該第二共有序列包含在形成該抗Ang2適體的第一凸出、第二莖、第二凸出、第三莖、第三凸出和/或第四莖的核苷酸序列中。
  59. 如請求項55至58中任一項所述的抗Ang2適體，其中該第二共有序列不包含在形成該抗Ang2適體的第一環的核苷酸序列中。
  60. 如請求項52至59中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體的該第一環包含2-30個核苷酸。
  61. 如請求項52至60中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體的該第一環包含3-10個核苷酸。
  62. 如請求項1至61中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體包含如SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列，或其變體或截短形式。
  63. 如請求項62所述的抗Ang2適體，其中該變體包含與SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列具有至少50%同一性的核苷酸序列。
  64. 如請求項62或63所述的抗Ang2適體，其中該變體包含具有一個或多個核苷酸添加、缺失和/或取代的如SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列。
  65. 如請求項54至64中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體包含該第一共有序列和該第二共有序列，並且其中該第一共有序列位於該第二共有序列的5’。
  66. 如請求項54至64中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體包含該第一共有序列和該第二共有序列，其中該第二共有序列位於該第一共有序列的5’。
  67. 一種劑，其包含如請求項1至66中任一項所述的抗Ang2適體，其中該抗Ang2適體綴合於聚乙二醇(PEG)部分。
  68. 如請求項67所述的劑，其中至少一個PEG部分綴合於該抗Ang2適體的5’末端。
  69. 如請求項67或68所述的劑，其中至少一個PEG部分綴合該抗Ang2適體的3’末端。
  70. 一種抗VEGF適體，其與VEGF-121結合，其中KD值約為20奈莫耳(nM)或更小，並與VEGF-165結合，其中KD值約為20奈莫耳(nM)或更小。
  71. 如請求項70所述的抗VEGF適體，其以與VEGF-121結合，其中KD值約為2奈莫耳(nM)或更小。
  72. 如請求項70或71所述的抗VEGF適體，其與VEGF-165結合，其中KD值約為2奈莫耳(nM)或更小。
  73. 如請求項70至72中任一項所述的抗VEGF適體，其中該VEGF-121是人VEGF-121、小鼠VEGF-120、猴VEGF-121、兔VEGF-121和/或大鼠VEGF-120。
  74. 如請求項70至73中任一項所述的抗VEGF適體，其中該VEGF-165是人VEGF-165、小鼠VEGF-164、猴VEGF-165、兔VEGF-165和/或大鼠VEGF-164。
  75. 如請求項70至74中任一項所述的抗VEGF適體，其與VEGF-121的VEGF受體結合結構域和VEGF-165的VEGF受體結合結構域兩者特異性結合。
  76. 如請求項75所述的抗VEGF適體，其中該VEGF-121的該VEGF受體結合結構域包含如SEQ ID NO：30-34、40、41和45中的任一個所示的胺基酸序列。
  77. 如請求項75或76所述的抗VEGF適體，其中該VEGF-165的該VEGF受體結合結構域包含如SEQ ID NO：30-34、40和41中的任一個所示的胺基酸序列。
  78. 如請求項70至77中任一項所述的抗VEGF適體，其抑制該VEGF-121與該VEGF-R1之間的相互作用。
  79. 如請求項70至78中任一項所述的抗VEGF適體，其抑制該VEGF-121與該VEGF-R2之間的相互作用。
  80. 如請求項70至79中任一項所述的抗VEGF適體，其抑制該VEGF-165與該VEGF-R1之間的相互作用。
  81. 如請求項70至80中任一項所述的抗VEGF適體，其抑制該VEGF-165與該VEGF-R2之間的相互作用。
  82. 如請求項70至81中任一項所述的抗VEGF適體，其能夠在鐳射誘導脈絡膜新生血管形成(CNV)大鼠模型中減少和/或改善損傷和/或滲漏。
  83. 如請求項70至82中任一項所述的抗VEGF適體，其是高度可溶的。
  84. 如請求項70至83中任一項所述的抗VEGF適體，其為RNA適體、DNA適體或其組合。
  85. 如請求項70至84中任一項所述的抗VEGF適體，其具有核酸酶抗性。
  86. 如請求項70至85中任一項所述的抗VEGF適體，其包含一個或多個經修飾的核苷酸，和/或一個或多個取代(例如利用一個或多個PEG進行的取代)。例如，該抗VEGF適體的一個或多個(例如，1-20個、1-19個、1-18個、1-17個、1-16個、1-15個、1-14個、1-13個、1-12個、1-11個、1-10個、1-9個、1-8個、1-7個、1-6個、1-5個、1-4個、1-3個或1-2個)核苷酸可被聚乙二醇部分或包含多個(例如，1-10個、1-9個、1-8個、1-7個、1-6個、1-5個、1-4個、1-3個或1-2個)聚乙二醇部分。在一些情況下，該接頭可以是六乙二醇(H或PEG6)接頭。這種取代可以發生在抗VEGF適體的任何核苷酸上，只要其基本上不影響該抗VEGF適體的活性(例如，結合活性或抑制活性)和/或功能。在一些情況下，該取代基本上不影響該抗VEGF適體的二級結構，例如，該取代可發生在包含在該抗VEGF適體二級結構的凸出或環區中的核苷酸上。在一些情況下，該取代不會發生在包含在該抗VEGF適體二級結構的莖區中的任何核苷酸上。
  87. 如請求項86所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體的所有核苷酸均為經修飾的核苷酸。
  88. 如請求項86或87所述的抗VEGF適體，其中該經修飾的核苷酸在一個或多個獨立選自核糖位置、去氧核糖位置、磷酸位置和鹼基位置的位置上包含化學取代或修飾。
  89. 如請求項86至88中任一項所述的抗VEGF適體，其中該經修飾的核苷酸包含一種或多種修飾，該修飾獨立地選自2’-位糖修飾、2’-胺基(2’-NH2)修飾、2’-氟(2’-F)修飾、2’-O-甲基(2’-OMe)修飾、2’-O-(2-甲氧基乙基)(2’-O-MOE)修飾、5-位修飾的嘧啶、胞嘧啶外環胺處的修飾、5’-溴尿嘧啶取代、5’-溴去氧尿苷取代、5’-溴去氧胞苷取代、主鏈修飾、鎖核酸(LNA)、甲基化、3’帽和5’帽。
  90. 如請求項89所述的抗VEGF適體，其中該5-位修飾的嘧啶選自5-位修飾的嘧啶選自5-羧基-2’-去氧尿苷、5-胺基烯丙基-2’-去氧尿苷、5-[(3-吲哚基)丙醯胺-N-烯丙基]-2’-去氧尿苷、5-羧基-2’-去氧胞苷、5-胺基烯丙基-2’-去氧胞苷、生物素-16-胺基烯丙基-2’-去氧胞苷、5-(N-苄基羧醯胺)-2’-去氧尿苷、5-(N-異丁基羧醯胺)-2’-去氧尿苷、5-(N-萘基甲基羧醯胺)-2’-去氧尿苷和5-(N-色胺羧醯胺)-2’-去氧尿苷。
  91. 如請求項70至90中任一項所述的抗VEGF適體，其包含至少一個2’-修飾的核苷酸。
  92. 如請求項91所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體的所有核苷酸均為2’-修飾的核苷酸。
  93. 如請求項91或92所述的抗VEGF適體，其中該2’-修飾核苷酸選自2’-胺基修飾的核苷酸、2’-氟修飾的核苷酸、2’-O-甲基修飾的核苷酸和2’-O-(2-甲氧基乙基)修飾的核苷酸。
  94. 如請求項70至93中任一項所述的抗VEGF適體，其包含至少一個2’-氟修飾的核苷酸、至少一個2’-O-甲基修飾的核苷酸和/或至少一個LNA。
  95. 如請求項70至94中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體的所有胞苷均為2’-修飾的胞苷。
  96. 如請求項70至95中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體的所有胞苷均為2’-氟修飾的胞苷和/或2’-O-甲基修飾的胞苷。
  97. 如請求項70至96中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體的所有胞苷均為2’-去氧-2’-氟胞苷。
  98. 如請求項70至97中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體的所有尿苷均為2’-修飾的尿苷。
  99. 如請求項70至98中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體的所有尿苷是2’-氟修飾的尿苷和/或2’-O-甲基修飾的尿苷。
  100. 如請求項70至99中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體的所有尿苷是2’-去氧-2’-氟尿苷。
  101. 如請求項70至100中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體的所有腺苷均為2’-修飾的腺苷。
  102. 如請求項70至101中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體的所有腺苷是2’-氟修飾的腺苷和/或2’-O-甲基修飾的腺苷。
  103. 如請求項70至102中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體的所有腺苷均為2’-去氧-2’-氟腺苷。
  104. 如請求項70至103中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體的所有鳥苷均為2’-修飾的鳥苷。
  105. 如請求項70至104中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體的所有鳥苷均為2’-氟修飾的鳥苷和/或2’-O-甲基修飾的鳥苷。
  106. 如請求項70至105中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體的所有鳥苷均為2’-去氧-2’-氟鳥苷。
  107. 如請求項70至106中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體的所有核苷酸均為2’-修飾的核苷酸。
  108. 如請求項70至107中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體的所有核苷酸均為2’-氟修飾的核苷酸和/或2’-O-甲基修飾的核苷酸。
  109. 如請求項70至108中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體的所有核苷酸是2’-氟修飾的核苷酸。
  110. 如請求項70至109中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體不包含任何天然核苷酸。
  111. 如請求項70至110中任一項所述的抗VEGF適體，其包含約10個至約150個核苷酸。
  112. 如請求項70至111中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體與抗VEGF參考適體競爭與該VEGF-165和該VEGF-121的結合，其中該抗VEGF參考適體包含二級結構，該二級結構從5’至3’方向包含第一莖、第一環、第二莖和第二環。
  113. 如請求項112所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF參考適體包含二級結構，該二級結構從5’至3’方向由第一莖、第一環、第二莖和第二環組成。
  114. 如請求項112或113所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF參考適體包含第一共有序列，該第一共有序列包含如SEQ ID NO：136-137中的任一個所示的核苷酸序列。
  115. 如請求項112至114中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF參考適體包含第二共有序列，該第二共有序列包含如SEQ ID NO：138-139中的任一個所示的核苷酸序列。
  116. 如請求項114或115所述的抗VEGF適體，其中該第一共有序列包含形成該抗VEGF參考適體的第一莖和第一環的核苷酸序列。
  117. 如請求項114至116中任一項所述的抗VEGF適體，其中該第一共有序列不包含在形成該抗VEGF參考適體的第二莖或第二環的核苷酸序列中。
  118. 如請求項115至117中任一項所述的抗VEGF適體，其中該第二共有序列包含形成該抗VEGF參考適體的第二莖和第二環的核苷酸序列。
  119. 如請求項115至118中任一項所述的抗VEGF適體，其中該第二共有序列不包含在形成該抗VEGF參考適體的第一莖或第一環的核苷酸序列中。
  120. 如請求項112至119中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF參考適體包含如SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列，或其變體或截短形式。
  121. 如請求項120所述的抗VEGF適體，其中該變體包含與SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列具有至少50%同一性的核苷酸序列。
  122. 如請求項120至121中任一項所述的抗VEGF適體，其中該變體包含具有一個或多個核苷酸添加、缺失和/或取代的如SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列。
  123. 如請求項112至122中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF參考適體包含約10個至約150個核苷酸。
  124. 如請求項114至123中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF參考適體包含該第一共有序列和該第二共有序列，並且其中該第一共有序列位於該第二共有序列的5’。
  125. 如請求項114至123中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF參考適體包含該第一共有序列和該第二共有序列，並且其中該第二共有序列位於該第一共有序列的5’。
  126. 如請求項70至125中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體包含二級結構，該二級結構從5’至3’方向包含第一莖、第一環、第二莖和第二環。
  127. 如請求項70至126中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體包含二級結構，該二級結構從5’至3’方向由第一莖、第一環、第二莖和第二環組成。
  128. 如請求項70至127中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體包含第一共有序列，該第一共有序列包含如SEQ ID NO：136-137中的任一個所示的核苷酸序列。
  129. 如請求項70至128中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體包含第二共有序列，該第二共有序列包含如SEQ ID NO：138-139中的任一個所示的核苷酸序列。
  130. 如請求項128或129所述的抗VEGF適體，其中該第一共有序列包含形成該抗VEGF適體的第一莖和第一環的核苷酸序列。
  131. 如請求項128至130中任一項所述的抗VEGF適體，其中該第一共有序列不包含在形成該抗VEGF適體的第二莖或第二環的核苷酸序列中。
  132. 如請求項129至131中任一項所述的抗VEGF適體，其中該第二共有序列包含形成該抗VEGF適體的第二莖和第二環的核苷酸序列。
  133. 如請求項129至132中任一項所述的抗VEGF適體，其中該第二共有序列不包含在形成該抗VEGF適體的第一莖或第一環的核苷酸序列中。
  134. 如請求項70至133中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體包含如SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列，或其變體或截短形式。
  135. 如請求項134所述的抗VEGF適體，其中該變體包含與SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列具有至少50%同一性的核苷酸序列。
  136. 如請求項134或135所述的抗VEGF適體，其中該變體包含具有一個或多個核苷酸添加、缺失和/或取代的如SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列。
  137. 如請求項128至136中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體包含該第一共有序列和該第二共有序列，並且其中該第一共有序列位於該第二共有序列的5’。
  138. 如請求項128至136中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體包含該第一共有序列和該第二共有序列，其中該第二共有序列位於該第一共有序列的5’。
  139. 一種劑，其包含如請求項70至138中任一項所述的抗VEGF適體，其中該抗VEGF適體綴合聚乙二醇(PEG)部分。
  140. 如請求項139所述的劑，其中至少一個PEG部分綴合於該抗VEGF適體的5’末端。
  141. 如請求項139或140所述的劑，其中至少一個PEG部分綴合該抗VEGF適體的3’末端。
  142. 一種雙特異性適體，其包含如請求項1至69中任一項所述的抗Ang2適體和如請求項70至141中任一項所述的抗VEGF適體。
  143. 如請求項142所述的雙特異性適體，其具有式A1-(L)n-A2，其中：
    A1為該抗VEGF適體，並且A2為該抗Ang2適體，或者A1為該抗VEGF適體，並且A2為該抗VEGF適體；
    L為接頭；以及
    n為至少為0的數字。
  144. 如請求項142或143所述的雙特異性適體，其能夠與VEGF和Ang2特異性結合。
  145. 如請求項142至144中任一項所述的雙特異性適體，其與VEGF-121結合，其中KD值約為500pM或更小，並與Ang2結合，其中KD值約為500pM或更小ng2。
  146. 如請求項142至145中任一項所述的雙特異性適體，其與VEGF-121結合，其中KD值約為200pM或更小，並與Ang2結合，其中KD值約為200pM或更小。
  147. 如請求項142至146中任一項所述的雙特異性適體，其與VEGF-121結合，其中KD值約為100pM或更小，並與Ang2結合結合，其中KD值約為100pM或更小。
  148. 如請求項143至147中任一項所述的雙特異性適體，其中n為0至20。
  149. 如請求項143至148中任一項所述的雙特異性適體，其中n為0至10。
  150. 如請求項143至149中任一項所述的雙特異性適體，其中L選自天然存在的核苷酸接頭、經修飾的核苷酸接頭、烴接頭、聚乙二醇接頭及其組合。
  151. 如請求項143至150中任一項所述的雙特異性適體，其中至少一個L是聚乙二醇接頭。
  152. 如請求項143至151中任一項所述的雙特異性適體，其中至少一個L是六乙二醇接頭。
  153. 如請求項143至152中任一項所述的雙特異性適體，其中L是六乙二醇接頭，並且n為0-10。
  154. 如請求項143至153中任一項所述的雙特異性適體，其中A1是抗VEGF適體，其包含如SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列，或其變體或截短形式；並且A2是抗Ang2適體，其包含如SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列，或其變體或截短形式。
  155. 如請求項143至154中任一項所述的雙特異性適體，其中A1是抗Ang2適體，其包含如SEQ ID NO：1-12中的任一個所示的核苷酸序列，或 其變體或截短形式；並且A2是抗VEGF適體，其包含如SEQ ID NO：46-135、SEQ ID NO：200-201中的任一個所示的核苷酸序列，或其變體或截短形式。
  156. 如請求項143至155中任一項所述的雙特異性適體，其中：
    1)A1是抗VEGF適體，其包含如SEQ ID NO：83所示的核苷酸序列或其截短形式，A2是抗Ang2適體，其包含如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列或其截短形式，L是六乙二醇接頭，並且n為0-10；
    2)A1是抗VEGF適體，其包含如SEQ ID NO：128所示的核苷酸序列或其截短形式，A2是抗Ang2適體，其包含如SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列或其截短形式，L是六乙二醇接頭，n為0-10；
    3)A1是抗Ang2適體，其包含如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列或其截短形式，A2是抗VEGF適體，其包含如SEQ ID NO：83所示的核苷酸序列或其截短形式，L是六乙二醇接頭並且n為0-10；或者
    4)A1是抗Ang2適體，其包含如SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列或其截短形式，A2是抗VEGF適體，其包含如SEQ ID NO：128所示的核苷酸序列或其截短形式，L是六乙二醇接頭，並且n為0至10。
  157. 如請求項142至156中任一項所述的雙特異性適體，其選自r-AMSB107.0、r-AMSB108.0、r-AMSB107.1、r-AMSB107.2、r-AMSB107、r-AMSB107.4、r-AMSB107.5、r-AMSB107.6、r-AMSB107.7、r-AMSB107.8、r-AMSB107.9、r-AMSB107.10、r-AMSB107.11、r-AMSB107.12、r-AMSB107.13、r-AMSB107.14、r-AMSB107.15、r-AMSB107.16、r-AMSB107.17、r-AMSB107.18、r-AMSB107.19、r-AMSB107.22、r-AMSB107.23、r-AMSB107.24、r-AMSB107.25、r-AMSB107.26、r-AMSB107.27、AMSB107.0、AMSB108.0、AMSB107. 1、AMSB107.2、AMSB107、AMSB107.4、AMSB107.5、AMSB107.6、AMSB107.7、AMSB107.8、AMSB107.9、AMSB107.10、AMSB107.11、AMSB107.12、AMSB107.13、AMSB107.14、AMSB107.15、AMSB107.16、AMSB107.17、AMSB107.18、AMSB107.19、AMSB107.20、AMSB107.21、AMSB107.22、AMSB107.23、AMSB107.24、AMSB107.25、AMSB107.26、AMSB107.P6、AMSB107.P40K、AMSB107P和AMSB107.27。
  158. 如請求項142至157中任一項所述的雙特異性適體，其包含如SEQ ID NO：140-195、SEQ ID NO：202-204中的任一個所示的核苷酸序列。
  159. 一種組成物，其包含如請求項1至69中任一項所述的抗Ang2適體、如請求項70至141中任一項所述的抗VEGF適體和/或如請求項142至158中任一項所述的雙特異性適體。
  160. 如請求項159所述的組成物，其為醫藥組成物。
  161. 如請求項159或160所述的組成物，其包含藥學上可接受的賦形劑或載體。
  162. 如請求項159至161中任一項所述的組成物，其用於治療新生血管疾病、紊亂或病況
  163. 如請求項162所述的組成物，其中該新生血管疾病、紊亂或病況是眼部新生血管疾病、紊亂或病況。
  164. 如請求項162或163所述的組成物，其中該新生血管疾病、紊亂或病況選自年齡相關性黃斑變性、脈絡膜新血管形成、糖尿病性黃斑水腫、視網膜靜脈阻塞和糖尿病性視網膜病。
  165. 如請求項162至164中任一項所述的組成物，其中該新生血管疾病、紊亂或病況選自濕性年齡相關性黃斑變性、近視性脈絡膜新血管形成和增生性糖尿病性視網膜病。
  166. 一種用於治療新生血管疾病、紊亂或病況的方法，其包括向有此需要的受試者施用有效量的如請求項1至69中任一項所述的抗Ang2適體、有效量的如請求項70至141中任一項所述的抗VEGF適體、有效量的如請求項142至158中任一項所述的雙特異性適體和/或有效量的如請求項159至165中任一項所述的組成物。
  167. 如請求項166所述的方法，其中該新生血管疾病、紊亂或病況是眼部新生血管疾病、紊亂或病況。
  168. 如請求項166或167所述的方法，其中該新生血管疾病、紊亂或病況選自年齡相關性黃斑變性、脈絡膜新血管形成、糖尿病性黃斑水腫、視網膜靜脈阻塞和糖尿病性視網膜病。
  169. 如請求項166至168中任一項所述的方法，其中該新生血管疾病、紊亂或病況選自濕性年齡相關性黃斑變性、近視性脈絡膜新血管形成和增生性糖尿病性視網膜病。
  170. 一種如請求項1至69中任一項所述的抗Ang2適體、如請求項70至141中任一項所述的抗VEGF適體、如請求項142至158中任一項所述的雙特異性適體和/或如請求項159至165中任一項所述的組成物在製備用於治療新生血管疾病、紊亂或病況的醫藥方面的用途。
  171. 如請求項170所述的用途，其中該新生血管疾病、紊亂或病況是眼部新生血管疾病、紊亂或病況。
  172. 如請求項170或171所述的用途，其中該新生血管疾病、紊亂或病況選自年齡相關性黃斑變性、脈絡膜新血管形成、糖尿病性黃斑水腫、視網膜靜脈阻塞和糖尿病性視網膜病。
  173. 如請求項170至172中任一項所述的用途，其中該新生血管疾病、紊亂或病況選自濕性年齡相關性黃斑變性、近視性脈絡膜新血管形成和增生性糖尿病性視網膜病。
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