JP2023514819A - 血圧異常症を予防及び治療する方法並びに薬剤 - Google Patents

Abstract

本発明は、被験者に有効量のプラスミノーゲン活性化経路の成分を投与することを含む、血圧異常症を治療する方法に関する。本発明はまた、血圧異常症を治療するための薬剤及び製品、ならびにその使用に関する。

Description

本発明は、血圧異常症及びその合併症を治療する方法及び薬剤に関する。

高血圧症は世界で多発する疾患の１つであり、中国ではその発生率が年々増加している。高血圧は、心臓、脳、腎臓などの内臓の合併症を引き起こし、障害や死に至る。高血圧の害は、最も一般的な合併症の脳卒中など、心臓、脳、腎臓などの複数の臓器やシステムの病変につながる可能性があることである。そして、高血圧は、心筋肥大、冠動脈硬化症、不整脈、心不全など、関連する心臓の損傷につながる。高血圧はまた、しばしば腎臓の損傷及び末梢血管疾患が伴う。高血圧は中期から後期に進行すると、網膜症が発生することがある。糖尿病はまた、高血圧の一般的な合併症の１つである。高血圧の予防と治療に関する研究は、世界中の学者の注目を集めている。また、高血圧の合併症を効果的に予防及び治療することで、患者の罹患率と死亡率を大幅に減らすことができる。

本発明は、プラスミノーゲンが高血圧によって引き起こされる組織及び器官の損傷、線維化及び機能障害を改善しながら、高血圧を有意に低下させることができることを発見し、高血圧及び関連疾患ならびに合併症の予防及び治療のための新しい道を開く。

本出願は、プラスミノーゲンなどのプラスミノーゲン活性化経路の成分の、（高血圧症及び低血圧症を含む）血圧異常症の予防及び治療における方法、使用及び薬剤に関する。本出願は研究によって、プラスミノーゲンなどのプラスミノーゲン活性化経路の成分が、高血圧症または低血圧症を患っている被験者の血圧を正常値に戻すことを促進できるとともに、異常な血圧（例えば、高血圧または低血圧）によって引き起こされる心臓、肺、腎臓、肝臓などの組織器官の構造の損傷と機能的損傷を軽減及び緩和できることを証明した。

具体的には、本発明は下記のことに係る。

１、一態様では、本願は、プラスミノーゲン活性化経路の成分、プラスミノーゲンを直接活性化し得るか、またはプラスミノーゲン活性化経路の上流成分を活性化することによって間接的にプラスミノーゲンを活性化し得る化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミンの活性を模倣する化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミノーゲン活性化剤の発現をアップレギュレートすることができる化合物、プラスミノーゲン類縁体、プラスミン類縁体、ｔＰＡまたはｕＰＡ類縁体及び線維素溶解阻害剤の拮抗剤から選択される１つ以上の有効量の化合物を高血圧症の被験者に投与することを含む、高血圧症を予防または治療する方法に関する。

一態様では、本願はまた、プラスミノーゲン活性化経路の成分、プラスミノーゲンを直接活性化し得るか、またはプラスミノーゲン活性化経路の上流成分を活性化することによって間接的にプラスミノーゲンを活性化し得る化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミンの活性を模倣する化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミノーゲン活性化剤の発現をアップレギュレートすることができる化合物、プラスミノーゲン類縁体、プラスミン類縁体、ｔＰＡまたはｕＰＡ類縁体及び線維素溶解阻害剤の拮抗剤から選択される１つ以上の化合物の、高血圧症を予防または治療する薬剤の調製における使用に関する。

一態様では、本願はまた、プラスミノーゲン活性化経路の成分、プラスミノーゲンを直接活性化し得るか、またはプラスミノーゲン活性化経路の上流成分を活性化することによって間接的にプラスミノーゲンを活性化し得る化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミンの活性を模倣する化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミノーゲン活性化剤の発現をアップレギュレートすることができる化合物、プラスミノーゲン類縁体、プラスミン類縁体、ｔＰＡまたはｕＰＡ類縁体及び線維素溶解阻害剤の拮抗剤から選択される１つ以上の化合物を含む、高血圧症を予防または治療する薬剤に関する。

一態様では、本願はまた、プラスミノーゲン活性化経路の成分、プラスミノーゲンを直接活性化し得るか、またはプラスミノーゲン活性化経路の上流成分を活性化することによって間接的にプラスミノーゲンを活性化し得る化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミンの活性を模倣する化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミノーゲン活性化剤の発現をアップレギュレートすることができる化合物、プラスミノーゲン類縁体、プラスミン類縁体、ｔＰＡまたはｕＰＡ類縁体及び線維素溶解阻害剤の拮抗剤から選択される１つ以上の化合物の、高血圧症の予防または治療における使用に関する。

２、前記プラスミノーゲン活性化経路の成分が、プラスミノーゲン、組換えヒトプラスミノーゲン、Ｌｙｓ－プラスミノーゲン、Ｇｌｕ－プラスミノーゲン、プラスミン、プラスミノーゲンとプラスミンの１つ以上のｋｒｉｎｇｌｅドメイン及びプロテアーゼドメインを含むプラスミノーゲン及びプラスミン変異体並びに類縁体、ミニプラスミノーゲン（ｍｉｎｉ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）、ミニプラスミン（ｍｉｎｉ－ｐｌａｓｍｉｎ）、マイクロプラスミノーゲン（ｍｉｃｒｏ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）、マイクロプラスミン（ｍｉｃｒｏ－ｐｌａｓｍｉｎ）、ｄｅｌｔａ－プラスミノーゲン、ｄｅｌｔａ－プラスミン（ｄｅｌｔａ－ｐｌａｓｍｉｎ）、プラスミノーゲン活性化剤、ｔＰＡ、及びｕＰＡから選択されるものである、項１に記載の方法、使用、または薬剤。

３、前記線維素溶解阻害剤の拮抗剤が、ＰＡＩ－１、補体Ｃ１阻害剤、α２抗プラスミンまたはα２マクログロブリンの阻害剤、例えば、抗体である、項１に記載の方法、使用、または薬剤。

４、前記高血圧症が、高血圧による心臓、脳、肺、肝臓、腎臓、もしくは血管の損傷または合併症を含む、項１に記載の方法、使用、または薬剤。

５、前記合併症が、不整脈、心不全、脳出血、脳血栓症、脳梗塞、高血圧性腎症、腎不全、尿毒症、肝硬変、肺高血圧症、肺線維症、及び微小血栓症を含む、項４に記載の方法、使用、または薬剤。

６、前記化合物が、高血圧症の被験者の血圧を下げる効果、高血圧症の被験者の血清アンギオテンシンＩＩレベルを下げる効果、被験者のＡＣＥまたはＡＣＥ２のレベルを調節する効果、高血圧によって引き起こされる組織及び器官の損傷を軽減する効果、損傷した組織及び器官の修復を促進する効果、組織及び器官の繊維化を軽減する効果、及びフリーラジカルの除去を促進する効果から選択される１つ以上の効果を有する、項１～５のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。

７、前記損傷した組織及び器官の修復を促進することが、損傷した心臓組織、脳組織、肺組織、腎臓組織もしくは肝臓組織の構造または機能の回復を促進することである、項６に記載の方法、使用、または薬剤。

８、前記組織及び器官の繊維化を軽減することが、心臓組織、肺組織、腎臓組織または肝臓組織の線維化を減少させることを含む、項６に記載の方法、使用、または薬剤。

９、前記化合物がＳＯＤ産生を促進することによってフリーラジカルを除去する、項６に記載の方法、使用、または薬剤。

１０、前記化合物がプラスミノーゲンである、項１～９のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。

１１、前記プラスミノーゲンが、配列２と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有し、且つプラスミノーゲンのタンパク質加水分解活性またはリジン結合活性を有する、項１～９のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。

１２、前記プラスミノーゲンが、配列１４に示されるプラスミノーゲン活性フラグメントを含み、プラスミノーゲンのタンパク質加水分解活性を有する、項１～１１のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。

１３、前記プラスミノーゲンがＧｌｕ－プラスミノーゲン、Ｌｙｓ－プラスミノーゲン、ミニプラスミノーゲン、マイクロプラスミノーゲン、ｄｅｌｔａ－プラスミノーゲンまたはそれらの、プラスミノーゲンタンパク質加水分解活性を保持した変異体から選択されるものである、項１～９のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。

１４、前記プラスミノーゲンが、天然もしくは合成のヒトプラスミノーゲン、またはそのプラスミノーゲンのタンパク質加水分解活性もしくはリジン結合活性を保持した変異体もしくはフラグメントである、項１～９のいずれか１項に記載の方法、使用、または薬剤。

１５、前記化合物が、１つまたは複数の他の治療方法または薬剤と組み合わせて使用する、項１～１４のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。

１６、前記他の薬剤が、降圧薬、ホルモン、免疫抑制剤、抗生物質または抗ウイルス薬を含む、項１５に記載の方法、使用、または薬剤。

１７、前記化合物が、鼻吸入、エアロゾル吸入、点鼻薬、点耳薬または点眼薬によって投与され、静脈内、腹腔内、皮下、頭蓋内、髄腔内、動脈内、直腸内及び／または筋肉内によって投与される、項１～１６のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。

本発明はまた下記のことに係る。

１、一態様では、本願は、プラスミノーゲン活性化経路の成分、プラスミノーゲンを直接活性化し得るか、またはプラスミノーゲン活性化経路の上流成分を活性化することによって間接的にプラスミノーゲンを活性化し得る化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミンの活性を模倣する化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミノーゲン活性化剤の発現をアップレギュレートすることができる化合物、プラスミノーゲン類縁体、プラスミン類縁体、ｔＰＡまたはｕＰＡ類縁体及び線維素溶解阻害剤の拮抗剤から選択される１つ以上の有効量の化合物を血圧異常症の被験者に投与することを含む、異常な血圧または血圧異常症を予防または治療する方法に関する。

一態様では、本願はまた、プラスミノーゲン活性化経路の成分、プラスミノーゲンを直接活性化し得るか、またはプラスミノーゲン活性化経路の上流成分を活性化することによって間接的にプラスミノーゲンを活性化し得る化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミンの活性を模倣する化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミノーゲン活性化剤の発現をアップレギュレートすることができる化合物、プラスミノーゲン類縁体、プラスミン類縁体、ｔＰＡまたはｕＰＡ類縁体及び線維素溶解阻害剤の拮抗剤から選択される１つ以上の化合物の、異常な血圧または血圧異常症を予防または治療する薬剤の調製における使用に関する。

一態様では、本願はまた、プラスミノーゲン活性化経路の成分、プラスミノーゲンを直接活性化し得るか、またはプラスミノーゲン活性化経路の上流成分を活性化することによって間接的にプラスミノーゲンを活性化し得る化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミンの活性を模倣する化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミノーゲン活性化剤の発現をアップレギュレートすることができる化合物、プラスミノーゲン類縁体、プラスミン類縁体、ｔＰＡまたはｕＰＡ類縁体及び線維素溶解阻害剤の拮抗剤から選択される１つ以上の化合物を含む、異常な血圧または血圧異常症を予防または治療する薬剤に関する。

一態様では、本願はまた、プラスミノーゲン活性化経路の成分、プラスミノーゲンを直接活性化し得るか、またはプラスミノーゲン活性化経路の上流成分を活性化することによって間接的にプラスミノーゲンを活性化し得る化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミンの活性を模倣する化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミノーゲン活性化剤の発現をアップレギュレートすることができる化合物、プラスミノーゲン類縁体、プラスミン類縁体、ｔＰＡまたはｕＰＡ類縁体及び線維素溶解阻害剤の拮抗剤から選択される１つ以上の化合物の、異常な血圧または血圧異常症の予防または治療における使用に関する。

本出願の前記異常な血圧または血圧異常症は、血圧が正常レベルより高い高血圧または高血圧症、及び血圧が正常レベルより低い低血圧または低血圧症を含む。したがって、本出願は、上記の１つ以上の化合物を使用して、高血圧症の被験者における高血圧または低血圧症の被験者における低血圧を正常レベルに回復させるための方法、使用及び薬剤に関する。

２、前記プラスミノーゲン活性化経路の成分が、プラスミノーゲン、組換えヒトプラスミノーゲン、Ｌｙｓ－プラスミノーゲン、Ｇｌｕ－プラスミノーゲン、プラスミン、プラスミノーゲンとプラスミンの１つ以上のｋｒｉｎｇｌｅドメイン及びプロテアーゼドメインを含むプラスミノーゲン及びプラスミン変異体並びに類縁体、ミニプラスミノーゲン（ｍｉｎｉ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）、ミニプラスミン（ｍｉｎｉ－ｐｌａｓｍｉｎ）、マイクロプラスミノーゲン（ｍｉｃｒｏ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）、マイクロプラスミン（ｍｉｃｒｏ－ｐｌａｓｍｉｎ）、ｄｅｌｔａ－プラスミノーゲン、ｄｅｌｔａ－プラスミン（ｄｅｌｔａ－ｐｌａｓｍｉｎ）、プラスミノーゲン活性化剤、ｔＰＡ、及びｕＰＡから選択されるものである、項１に記載の方法、使用、または薬剤。

３、前記線維素溶解阻害剤の拮抗剤が、ＰＡＩ－１、補体Ｃ１阻害剤、α２抗プラスミンまたはα２マクログロブリンの拮抗剤、例えば、抗体である、項１に記載の方法、使用、または薬剤。

４、前記血圧異常症が、血圧異常症によって引き起こされる組織及び器官の損傷または合併症を含む、項１～３のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。いくつかの実施形態では、前記組織及び器官の損傷または合併症は、心臓、脳、肺、肝臓、腎臓または血管の損傷または合併症である。いくつかの実施形態では、前記組織及び器官の損傷は、組織器官の構造損傷（例えば、正常組織の構造の変化）または組織器官の機能損傷（例えば、組織器官の機能低下）である。

上記の実施形態において、前記血圧異常症は、高血圧症または低血圧症を含む。

５、前記血圧異常症によって引き起こされる合併症が、高血圧によって引き起こされる合併症であり、不整脈、心不全、冠状動脈性心疾患、脳出血、脳血栓症、脳梗塞、高血圧性腎症、腎不全、尿毒症、肝硬変、肺高血圧症、肺線維症、または微小血栓症を含む、項４に記載の方法、使用、または薬剤。

前記血圧異常症によって引き起こされる合併症が、低血圧によって引き起こされる合併症であり、低血圧症による組織器官への供血不足、例えば、心臓供血不足、狭心症、ショック、脳供血不足、失神、脳梗塞、腎供血不足、乏尿、タンパク尿及び腎機能不全を含む、項４に記載の方法、使用、または薬剤。

６、前記化合物が、高血圧症の被験者の血圧を下げる効果、高血圧症の被験者の血清アンギオテンシンＩＩのレベルを下げる効果、被験者のＡＣＥまたはＡＣＥ２のレベルを調節する効果、低血圧症の被験者の血圧を上昇させる効果、高血圧症の被験者または低血圧症の被験者の血圧を正常なレベルに戻すことを促進する効果、高血圧または低血圧によって引き起こされる組織及び器官の損傷を軽減する効果、損傷した組織及び器官の修復を促進する効果、組織及び器官の繊維化を軽減する効果、及びフリーラジカルの除去を促進する効果から選択される１つ以上の効果を有する、項１～５のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。

７、前記損傷した組織及び器官の修復を促進することが、損傷した心臓組織、脳組織、肺組織、腎臓組織もしくは肝臓組織の構造または機能の回復を促進することである、項１～６のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。

８、前記組織及び器官の繊維化を軽減することが、心臓組織、肺組織、腎臓組織または肝臓組織の線維化を減少させることを含む、項１～７のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。

９、前記化合物がＳＯＤ産生を促進することによってフリーラジカルを除去する、項１～８のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。

１０、前記化合物がプラスミノーゲンである、項１～９のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。

１１、前記プラスミノーゲンが、配列２と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有し、且つプラスミノーゲンのタンパク質加水分解活性またはリジン結合活性を有する、項１～１０のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。

１２、前記プラスミノーゲンが、配列１４に示されるプラスミノーゲン活性フラグメントを含み、プラスミノーゲンのタンパク質加水分解活性を有する、項１～１１のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。

１３、前記プラスミノーゲンがＧｌｕ－プラスミノーゲン、Ｌｙｓ－プラスミノーゲン、ミニプラスミノーゲン、マイクロプラスミノーゲン、ｄｅｌｔａ－プラスミノーゲンまたはそれらの、プラスミノーゲンタンパク質加水分解活性を保持した変異体から選択されるものである、項１～１２のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。

１４、前記プラスミノーゲンが、天然もしくは合成のヒトプラスミノーゲン、またはそのプラスミノーゲンのタンパク質加水分解活性もしくはリジン結合活性を保持した変異体もしくはフラグメントである、項１～１３のいずれか１項に記載の方法、使用、または薬剤。

１５、前記化合物が、１つまたは複数の他の治療方法または薬剤と組み合わせて使用する、項１～１４のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。

１６、前記他の薬剤が、血圧異常症の被験者における血圧異常症以外の他の疾患を治療するための薬剤である、項１５に記載の方法、使用、または薬剤。

１７、前記化合物が、鼻吸入、エアロゾル吸入、点鼻薬、点耳薬または点眼薬によって投与され、静脈内、腹腔内、皮下、頭蓋内、髄腔内、動脈内、直腸内及び／または筋肉内によって投与される、項１～１６のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。

本発明の一態様はまた、被験者の血圧異常症（例えば、高血圧症または低血圧症）及び関連する損傷または合併症を予防または治療するためのプラスミノーゲン、プラスミノーゲンを含む薬剤、薬剤組成物、キット、製品に関する。

本発明の一態様はまた、ラスミノーゲン、プラスミノーゲンを含む薬剤、薬剤組成物、キット、製品に関し、被験者の血圧異常症（例えば、高血圧症または低血圧症）及び関連する損傷または合併症の予防または治療における、以上の方法のプラスミノーゲン、プラスミノーゲンを含む薬剤、薬剤組成物、キット、製品の使用に関する。

本願の上記いずれか１つの実施形態において、前記プラスミノーゲンが配列２、６、８、１０または１２と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有し、且つ依然としてプラスミノーゲン活性を有し得る。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンは、配列２、６、８、１０または１２に基づいて、１～１００、１～９０、１～８０、１～７０、１～６０、１～５０、１～４５、１～４０、１～３５、１～３０、１～２５、１～２０、１～１５、１～１０、１～５、１～４、１～３、１～２、１個のアミノ酸を追加、削除、及び／または置換され、かつ依然としてタンパク質加水分解活性またはリジン結合活性を有するタンパク質である。

一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンはタンパク質加水分解活性またはリジン結合活性フラグメントを含み、且つ依然としてタンパク質加水分解活性またはリジン結合活性を有するタンパク質である。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンは、Ｇｌｕ－プラスミノーゲン、Ｌｙｓ－プラスミノーゲン、ミニプラスミノーゲン、マイクロプラスミノーゲン、δ－プラスミノーゲンまたはそれらのタンパク質加水分解活性またはリジン結合活性を保持した変異体である。上記実施形態において、前記プラスミノーゲンは、天然または合成のヒトプラスミノーゲン、または依然プラスミノーゲン活性を保持した変異体若しくはフラグメントである。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンは、霊長類動物またはげっ歯類動物に由来するヒトプラスミノーゲンのオルソログ、または依然としてタンパク質加水分解活性またはリジン結合活性を保持した変異体若しくはフラグメントである。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンのアミノ酸は配列２、６、８、１０または１２に示される。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンはヒト天然プラスミノーゲンである。

一部の実施形態において、前記被験者はヒトである。一部の実施形態において、前記被験者はプラスミノーゲンが不足、または欠乏している。一部の実施形態において、前記不足または欠乏は、先天的、継発的及び／または局所的である。

いくつかの実施形態では、前記医薬組成物は、薬学的に許容される担体と、前述の方法で使用するプラスミノーゲンとを含む。いくつかの実施形態では、前記キットは、（ｉ）前述の方法で使用するプラスミノーゲン、及び（ｉｉ）前記プラスミノーゲンを前記被験者に送達するための部材（ｍｅａｎｓ）を含む、予防または治療キットであり得る。いくつかの実施形態では、前記部材は注射器またはバイアルである。いくつかの実施形態では、前記キットは、前述の方法のいずれかを実施するために前記プラスミノーゲンを前記被験者に投与することを指示するためのラベルまたはプロトコルをさらに含む。

いくつかの実施形態では、前記製品は、ラベルを含む容器と、（ｉ）前述の方法で使用するためのプラスミノーゲンまたはプラスミノーゲンを含む医薬組成物とを含み、前記ラベルは、前述の方法のいずれかを実施するために前記プラスミノーゲンまたは組成物を前記被験者に投与することを指示する。

いくつかの実施形態では、前記キットまたは製品は、他の薬剤を含む１つまたは複数の追加の部材または容器をさらに含む。

前記方法の一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンは全身または局所にて投与され、好ましくは、鼻吸入、エアロゾル吸入、点鼻薬、点耳薬または点眼薬によって投与され、静脈内、腹腔内、皮下、頭蓋内、髄腔内、動脈内、直腸内及び／または筋肉内によってプラスミノーゲンを投与することで治療する。前記方法のいくつかの実施形態では、前記プラスミノーゲンは、適切なポリペプチド担体または安定剤と組み合わせて投与される。前記方法の一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンは毎日０．０００１～２０００ｍｇ／ｋｇ、０．００１～８００ｍｇ／ｋｇ、０．０１～６００ｍｇ／ｋｇ、０．１～４００ｍｇ／ｋｇ、１～２００ｍｇ／ｋｇ、１～１００ｍｇ／ｋｇ、１０～１００ｍｇ／ｋｇ（体重１キロあたりで計算）または０．０００１～２０００ｍｇ／ｃｍ^２、０．００１～８００ｍｇ／ｃｍ^２、０．０１～６００ｍｇ／ｃｍ^２、０．１～４００ｍｇ／ｃｍ^２、１～２００ｍｇ／ｃｍ^２、１～１００ｍｇ／ｃｍ^２、１０～１００ｍｇ／ｃｍ^２（体表面積平方センチメートルあたりで計算）の用量で投与し、好ましくは一回以上繰り返し、好ましくは少なくとも毎日投与する。

本発明は、本発明の実施形態に属する技術的特徴のすべての組み合わせを明確にカバーし、これらの組み合わせ後の技術構成は、上記の技術構成が別個に明確に開示されたのと同様に、本出願において明確に開示された。さらに、本発明はまた、各実施形態とそれらの要素との間の組み合わせを明確にカバーし、組み合わせ後の技術構成は、本明細書に明確に開示されている。

図１Ａ～１Ｂは、１５～１６週齢の糖尿病高血圧モデルマウスにプラスミノーゲンを２１日間投与した後の血圧測定結果を示す図である。図１Ａは収縮圧を示し、図１Ｂは平均圧を示す。その結果、投与２１日後、ＰＢＳ投与対照群のマウスの血圧は、投与前と比較して有意な変化はなかったが、プラスミノーゲン投与群のマウスの収縮圧及び平均圧は有意に低下し、いずれも溶媒ＰＢＳ投与対照群よりも有意に低く、しかもその差は統計的に有意であった（＊はＰ＜０．０５を表し、＊＊はＰ＜０．０１を表す）。これは、プラスミノーゲンが１５～１６週齢の糖尿病マウスの高血圧を有意に低下させることができることを示している。 図２Ａ～２Ｂは、２５～２６週齢の糖尿病高血圧モデルマウスにプラスミノーゲンを２１日間投与した後の血圧測定結果を示す図である。図２Ａは収縮圧を示し、図２Ｂは平均圧を示す。その結果、投与２１日後、ＰＢＳ投与対照群のマウスの収縮圧は、投与前と比較して有意な変化はなかったが、プラスミノーゲン投与群のマウスの収縮圧は投与７日後に有意に低下し始め、溶媒ＰＢＳ投与対照群よりも有意に低く、しかもその差は統計的に有意であった（Ｐ＝０．０１９）。投与の１４、２１日後に、２つの群のマウスの間の差は有意であった。投与の２１日後に、プラスミノーゲン投与群のマウスの平均圧は溶媒ＰＢＳ投与対照群よりも低く、その差は有意に近かった（Ｐ＝０．０９）。これは、プラスミノーゲンが２５～２６週齢の糖尿病マウスの高収縮圧を有意に低下させることができることを示している。 図３は、１５～１６週齢の糖尿病高血圧モデルマウスにプラスミノーゲンを２８日間投与した後の血清アンギオテンシンＩＩの検出結果を示す図である。その結果、プラスミノーゲンを２８日間投与した後、プラスミノーゲン投与群の血清アンギオテンシンＩＩのレベルは、溶媒ＰＢＳ投与対照群よりも有意に低かった。これは、プラスミノーゲンが糖尿病高血圧モデルマウスの血清アンギオテンシンＩＩのレベルを低下させ、それによって高血圧を改善できることを示している。 図４Ａ～４Ｂは、２５～２６週齢の糖尿病高血圧モデルマウスにプラスミノーゲンを２８日間投与した後の心臓のＨ＆Ｅ染色の代表的な写真を示す図である。図４Ａは溶媒ＰＢＳ投与対照群、図４Ｂはプラスミノーゲン投与群である。その結果、溶媒ＰＢＳ投与対照群（図４Ａ）と比較して、プラスミノーゲン投与群（図４Ｂ）のマウスの心筋細胞はより密集し、より規則的に配置されている。 図５Ａ～５Ｂは、２５～２６週齢の糖尿病高血圧モデルマウスにプラスミノーゲンを２８日間投与した後の腎臓のＳＲ染色の代表的な写真を示す図である。図５Ａは溶媒ＰＢＳ投与対照群、図５Ｂはプラスミノーゲン投与群である。その結果、プラスミノーゲン投与２８日後、プラスミノーゲン投与群の腎臓におけるコラーゲン線維の沈着（矢印でマーク）は、溶媒ＰＢＳ投与対照群より有意に少なかった。これは、プラスミノーゲンが糖尿病高血圧モデルマウスの腎線維化を有意に減少させることができることを示している。 図６は、アンギオテンシンＩＩによって誘発された高血圧モデルマウスにプラスミノーゲンを１４日間投与した後の血清ＳＯＤレベルの検出結果を示す図である。その結果、ブランク対照群の血清には一定レベルのＳＯＤがあり、溶媒ＰＢＳ投与対照群の血清ＳＯＤレベルは有意に低下し、プラスミノーゲン投与群の血清ＳＯＤレベルは溶媒ＰＢＳ投与対照群よりも有意に高く、しかもその差は統計学的に有意であった（＊はＰ＜０．０５を表す）。これは、プラスミノーゲンがフリーラジカルを除去する生体の能力を高めることができることを示している。 図７Ａ～７Ｃは、アンギオテンシンＩＩによって誘発された高血圧モデルマウスにプラスミノーゲンを１４日間投与した後の腎臓のシリウスレッド染色の代表的な写真を示す図である。図７Ａはブランク対照群、図７Ｂは溶媒ＰＢＳ投与対照群、図７Ｃはプラスミノーゲン投与群である。その結果、ブランク対照群のマウスの腎臓には明らかなコラーゲン線維の沈着はなく、プラスミノーゲン群のコラーゲン線維の沈着（矢印でマーク）は、溶媒ＰＢＳ投与対照群よりも有意に少なかった。これは、プラスミノーゲンがアンギオテンシンＩＩによって誘発された高血圧モデルマウスの腎線維化を有意に減少させ、高血圧による腎病変を改善できることを示している。 図８Ａ～８Ｃは、アンギオテンシンＩＩによって誘発された高血圧モデルマウスにプラスミノーゲンを１４日間投与した後の心臓のシリウスレッド染色の代表的な写真を示す図である。図８Ａはブランク対照群、図８Ｂは溶媒ＰＢＳ投与対照群、図８Ｃはプラスミノーゲン投与群である。その結果、ブランク対照群のマウスの心臓には明らかなコラーゲン線維の沈着はなく、プラスミノーゲン群のコラーゲン線維の沈着（矢印でマーク）は、溶媒ＰＢＳ投与対照群よりも有意に少なかった。これは、プラスミノーゲンがアンギオテンシンＩＩによって誘発された高血圧モデルマウスの心線維化を有意に減少させ、高血圧による心臓病変を改善できることを示している。 図９Ａ～９Ｃは、モノクロタリンによって誘発された肺動脈性肺高血圧症モデルマウスにプラスミノーゲンを２８日間投与した後の肺シリウスレッド染色の代表的な写真を示す図である。図９Ａはブランク対照群、図９Ｂは溶媒ＰＢＳ投与対照群、図９Ｃはプラスミノーゲン投与群である。その結果、ブランク対照群のマウスの肺には基本的にコラーゲン沈着はなく、プラスミノーゲン群のマウスの肺組織のコラーゲン沈着（矢印でマーク）は、溶媒ＰＢＳ投与対照群よりも有意に少なかった。これは、プラスミノーゲンがモノクロタリンによって誘発された肺高血圧症モデルマウスの肺の線維化を有意に減少させることができることを示している。 図１０Ａ～１０Ｃは、モノクロタリンによって誘発された肺動脈性肺高血圧症モデルマウスにプラスミノーゲンを２８日間投与した後の心臓シリウスレッド染色の代表的な写真を示す図である。図１０Ａはブランク対照群、図１０Ｂは溶媒ＰＢＳ投与対照群、図１０Ｃはプラスミノーゲン投与群である。その結果、ブランク対照群のマウスの心臓には基本的にコラーゲン沈着はなく、プラスミノーゲン群のマウスの心臓のコラーゲン沈着（矢印でマーク）は、溶媒ＰＢＳ投与対照群よりも有意に少なかった。これは、プラスミノーゲンがモノクロタリンによって誘発された肺動脈性肺高血圧症モデルマウスの心臓の線維化を有意に減少させることができることを示している。 図１１Ａ～１１Ｃは、モノクロタリンによって誘発された肺動脈性肺高血圧症モデルマウスにプラスミノーゲンを２８日間投与した後の腎臓のシリウスレッド染色の代表的な写真を示す図である。図１１Ａはブランク対照群、図１１Ｂは溶媒ＰＢＳ投与対照群、図１１Ｃはプラスミノーゲン投与群である。その結果、ブランク対照群のマウスの腎臓には基本的にコラーゲン沈着はなく、プラスミノーゲン群のマウスの腎臓のコラーゲン沈着（矢印でマーク）は、溶媒ＰＢＳ投与対照群よりも有意に少なかった。これは、プラスミノーゲンがモノクロタリンによって誘発された肺高血圧症モデルマウスの腎臓の線維化を有意に減少させることができることを示している。 図１２Ａ～１２Ｃは、モノクロタリンによって誘発された肺高血圧症モデルマウスにプラスミノーゲンを２８日間投与した後の肝臓のシリウスレッド染色の代表的な写真を示す図である。図１２Ａはブランク対照群、図１２Ｂは溶媒ＰＢＳ投与対照群、図１２Ｃはプラスミノーゲン投与群である。その結果、ブランク対照群のマウスの肝臓には基本的にコラーゲン沈着はなく、プラスミノーゲン群のマウスの肝臓のコラーゲン沈着（矢印でマーク）は、溶媒ＰＢＳ投与対照群よりも有意に少なかった。これは、プラスミノーゲンがモノクロタリンによって誘発された肺動脈性肺高血圧症モデルマウスの肝臓の線維化を有意に減少させることができることを示している。 図１３は、腎萎縮モデルマウスにプラスミノーゲンを１４日間投与した後の血圧測定結果を示す図である。その結果、プラスミノーゲン投与群及びブランク対照群の収縮圧及び平均圧は、ＰＢＳ対照群の血圧よりも有意に高く、プラスミノーゲン投与群とＰＢＳ対照群との間の差は統計的に有意であった（＊はＰ＜０．０５を表す）。これは、プラスミノーゲンが腎萎縮による低血圧の正常レベルへの回復を促進できることを示している。 図１４は、アンギオテンシンＩＩによって誘発された高血圧モデルマウスにプラスミノーゲンを５日間投与した平均圧及び収縮圧の測定結果を示す図である。その結果、ブランク対照群のマウスは一定レベルの平均圧及び収縮圧を有し、溶媒群のマウスの平均圧及び収縮圧は有意に上昇し、投与群のマウスの平均圧及び収縮圧は溶媒群のマウスよりも有意に低く、しかもその差は統計的に有意であった（＊はＰ＜０．０５を表し、＊＊はＰ＜０．０１を表す）。これは、プラスミノーゲンが高血圧モデルマウスの血圧を下げることができることを示している。 図１５は、２４～２５週齢の糖尿病マウスにプラスミノーゲンを２８日間投与した後の血清ＡＣＥ２レベルの検出結果を示す図である。その結果、投与群のマウスの血清ＡＣＥ２レベルは溶媒群よりも有意に高く、しかもその統計学的差は有意に近かった（Ｐ＝０．０５７）。これは、プラスミノーゲンが糖尿病高血圧モデルマウスの血清ＡＣＥ２レベルの上昇を促進できることを示している。 図１６は、アンギオテンシンＩＩによって誘発された高血圧モデルマウスにプラスミノーゲンを７日間投与した後の血清ＡＣＥ２レベルの検出結果を示す図である。その結果、ブランク対照群マウスの血液には一定レベルのＡＣＥ２があり、溶媒群マウスの血液中のＡＣＥ２レベルはブランク対照群マウスよりも有意に高く、投与群マウスの血液中のＡＣＥ２レベルは溶媒群マウスよりも有意に低く、しかもその差は統計的に極めて有意であった（＊＊はＰ＜０．０１を表す）。これは、プラスミノーゲンがＡｎｇＩＩによって誘発された高血圧モデルマウスの血清ＡＣＥ２レベルの低下を促進できることを示している。 図１７は、アンギオテンシンＩＩによって誘発された高血圧モデルマウスにプラスミノーゲンを７日間投与した後の血清ＡＣＥレベルの検出結果を示す図である。その結果、ブランク対照群マウスの血液には一定レベルのＡＣＥがあり、溶媒群マウスの血液中のＡＣＥレベルはブランク対照群マウスよりも有意に高く、投与群マウスの血液中のＡＣＥレベルは溶媒群マウスよりも有意に低く、しかもその統計学的差は有意に近かった（Ｐ＝０．０５１）。これは、プラスミノーゲンがＡｎｇＩＩによって誘発された高血圧モデルマウスの血清ＡＣＥレベルの低下を促進できることを示している。 図１８は、患者の投薬中の収縮圧（高圧）及び拡張圧（低圧）の検出結果を示す図である。その結果、患者の収縮圧は投与後６日目に１４１ｍｍＨｇまで低下し、１１日目で血圧が変動して不安定（正常と異常の交互）になり、１２日目以降は血圧が下がり、一週間内で正常で安定していた。これは、プラスミノーゲンが高血圧患者の血圧を下げることができることを示している。 図１９は、患者の投薬中の収縮圧（高圧）及び拡張圧（低圧）の検出結果を示す図である。その結果、患者の血圧は投与後１３日目に１３５／５４ｍｍＨｇであり、その後は正常で安定しており、基本的に降圧薬を必要としなかった。これは、プラスミノーゲンが高血圧を治療できることを示している。 図２０は、患者の投薬中の収縮圧（高圧）及び拡張圧（低圧）の検出結果を示す図である。その結果、投与後、拡張圧は、以前の６０ｍｍＨｇ未満から正常値に達し、治療中の血圧は正常で安定しており、治療後、降圧薬は半減し、血圧は基本的に１３０～１４０／６４～７６ｍｍＨｇに制御された。これは、プラスミノーゲンが高血圧患者の血圧を正常に戻すことを促進し、降圧薬の投与量を減らすことができることを示している。 図２１Ａ～２１Ｂは、患者の投薬中の朝（２１Ａ）及び夕方（２１Ｂ）の収縮圧（高圧）及び拡張圧（低圧）の検出結果を示す図である。投薬５日目以降、朝晩の血圧が下がり始め、血圧差が小さくなった。患者は、以前降圧薬を服用しても血圧が１４０／７５ｍｍＨｇ以下に下がったこともなかったが、初めて改善したと報告した。投薬の６日目から朝晩の血圧は約１３６／７３ｍｍＨｇを維持していた。投薬の７日目から朝晩の血圧は安定しており、血圧は約１３０／７０ｍｍＨｇであった。これは、プラスミノーゲンが患者の高血圧症の症状を改善できることを示している。 図２２は、患者の投薬中の収縮圧（高圧）及び拡張圧（低圧）の検出結果を示す図である。その結果、血圧は投与後に上昇傾向を示し、投薬３日目に初めて正常血圧が現れた。血圧は投薬９日目から正常になり始め、それ以降血圧は常に正常であり、投薬中止後、血圧は９５／７０ｍｍＨｇを維持していた。これは、プラスミノーゲンが低血圧患者の血圧回復を促進できることを示している。 図２３は、患者の投薬中の収縮圧（高圧）及び拡張圧（低圧）の検出結果を示す図である。その結果、投薬後、患者の精神状態は改善し、血圧は投薬の翌日に正常に戻り、１週間後に約１１０／７０ｍｍＨｇに達した。これは、プラスミノーゲンが低血圧患者の血圧回復を促進できることを示している。

発明の詳細な説明

線維素溶解系（Ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃ ｓｙｓｔｅｍ）は、線溶系とも呼ばれ、線維素溶解（線溶）の過程に関与する一連の化学物質からなる系であり、主にプラスミノーゲン（PLG）、プラスミン、プラスミノーゲン活性化因子、及び線維素溶解阻害剤を含む。プラスミノーゲン活性化因子には、組織型プラスミノーゲン活性化因子（ｔ－ＰＡ）、及びウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（ｕ－ＰＡ）が含まれる。ｔ－ＰＡはセリンプロテアーゼであり、血管内皮細胞によって合成される。ｔ－ＰＡはプラスミノーゲンを活性化し、このプロセスは主にフィブリンで行われる。ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（ｕ－ＰＡ）は、尿細管上皮細胞と血管内皮細胞によって産生され、補因子としてフィブリンを必要とすることなくプラスミノーゲンを直接活性化することができる。プラスミノーゲン（ＰＬＧ）は肝臓で合成される。血液が凝固すると、ＰＬＧはフィブリンネットに大量に吸着され、ｔ－ＰＡまたはｕ－ＰＡの作用によりプラスミンに活性化されて線維素溶解を促進する。プラスミナーゼ（ＰＬ）はセリンプロテアーゼであり、フィブリンとフィブリノーゲンを分解し、様々な凝固因子Ｖ、ＶＩＩＩ、Ｘ、ＶＩＩ、ＸＩ、ＩＩなどを加水分解し、プラスミノーゲンをプラスミンに変換し、補体を加水分解するなどの作用がある。線維素溶解阻害剤には、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤（ＰＡＩ）、及びα２－抗チプラスミン（α２－ＡＰ）が含まれる。ＰＡＩには主にＰＡＩ－１とＰＡＩ－２の２つの形態があり、ｔ－ＰＡに１：１の比率で特異的に結合し、それによってそれを不活性化すると同時にＰＬＧを活性化することができる。α２－ＡＰは肝臓で合成され、ＰＬと１：１の比率で結合して複合体を形成し、それによってＰＬ活性を阻害する。ＦＸＩＩＩはα２－ＡＰをフィブリンと共有結合させ、それによってＰＬに対するフィブリンの感受性を弱める。インビボでの線維素溶解系の活性を阻害する物質としては、ＰＡＩ－１、補体Ｃ１阻害剤、α２抗プラスミン、及びα２－マクログロブリンが挙げられる。

本明細書で使用される「プラスミノーゲン活性化経路の成分」という用語は、
１、プラスミノーゲン、Ｌｙｓ－プラスミノーゲン、Ｇｌｕ－プラスミノーゲン、マイクロプラスミノーゲン（ｍｉｃｒｏ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）、ｄｅｌｔａ－プラスミノーゲン、それらの変異体または類縁体；
２、プラスミン及びそれらの変異体または類縁体;及び
３、プラスミノーゲン活性化剤、例えば、ｔＰＡ及びｕＰＡ、ならびにｔＰＡまたはｕＰＡの１つ以上のドメイン（１つ以上のｋｒｉｎｇｌｅドメイン及びタンパク質加水分解ドメインなど）を含むｔＰＡまたはｕＰＡ変異体及び類縁体をカバーする。

上記プラスミノーゲン、プラスミン、ｔＰＡ及びｕＰＡの「変異体」は、すべての天然に存在するヒトの遺伝的変異体及びこれらのタンパク質の他の哺乳動物型、並びに、例えば、１～１００、１～９０、１～８０、１～７０、１～６０、１～５０、１～４５、１～４０、１～３５、１～３０、１～２５、１～２０、１～１５、１～１０、１～５、１～４、１～３、１～２、１個のアミノ酸を追加、削除、及び／または置換されてかつ依然としてプラスミノーゲン活性、プラスミン活性、ｔＰＡまたはｕＰＡ活性を有するタンパク質を含む。例えば、プラスミノーゲン、プラスミン、ｔＰＡまたはｕＰＡの「変異体」は、例えば、１～１００、１～９０、１～８０、１～７０、１～６０、１～５０、１～４５、１～４０、１～３５、１～３０、１～２５、１～２０、１～１５、１～１０、１～５、１～４、１～３、１～２、１個の保存的アミノ酸によって置換されて得られるこれらのタンパク質の突然変異体を含む。

本発明の「プラスミノーゲン変異体」は、配列２、６、８、１０または１２と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有し、且つ依然としてタンパク質加水分解活性またはリジン結合活性を有するタンパク質をカバーする。例えば、本発明の「プラスミノーゲン変異体」は、配列２、６、８、１０または１２に基づいて、１～１００、１～９０、１～８０、１～７０、１～６０、１～５０、１～４５、１～４０、１～３５、１～３０、１～２５、１～２０、１～１５、１～１０、１～５、１～４、１～３、１～２、１個のアミノ酸を追加、削除、及び／または置換し、且つ依然としてタンパク質加水分解活性またはリジン結合活性を有するタンパク質であり得る。具体的には、本発明のプラスミノーゲン変異体は、すべての天然に存在するヒトの遺伝的変異体及びこれらのタンパク質の他の哺乳動物型、並びに、例えば、１～１００、１～９０、１～８０、１～７０、１～６０、１～５０、１～４５、１～４０、１～３５、１～３０、１～２５、１～２０、１～１５、１～１０、１～５、１～４、１～３、１～２、１個のアミノ酸を保存的置換によって得られるこれらのタンパク質の突然変異体を含む。

本発明のプラスミノーゲンは、霊長類動物またはげっ歯類動物に由来するヒトプラスミノーゲンのオルソログ、または依然としてタンパク質加水分解活性またはリジン結合活性を保持した変異体、例えば、配列２、６、８、１０または１２に示されるプラスミノーゲン、例えば、配列２に示されるヒト天然プラスミノーゲンであり得る。

上記プラスミノーゲン、プラスミン、ｔＰＡ及びｕＰＡの「類縁体」はそれぞれ、プラスミノーゲン、プラスミン、ｔＰＡまたはｕＰＡと実質的に同様の効果を与える化合物を含む。

上記プラスミノーゲン、プラスミン、ｔＰＡ及びｕＰＡの「変異体」及び「類縁体」は、１つ以上のドメイン（例えば、１つ以上のｋｒｉｎｇｌｅドメイン及びタンパク質加水分解ドメイン）を含むプラスミノーゲン、プラスミン、ｔＰＡ及びｕＰＡの「変異体」及び「類縁体」をカバーする。例えば、プラスミノーゲンの「変異体」及び「類縁体」は、１つ以上のプラスミノーゲンドメイン（例えば、１つ以上のｋｒｉｎｇｌｅドメイン及びタンパク質加水分解ドメイン）を含むプラスミノーゲン変異体及び類縁体、例えば、ミニプラスミノーゲン（ｍｉｎｉ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）をカバーする。プラスミンの「変異体」及び「類縁体」は、１つ以上のプラスミンドメイン（例えば、１つまたは複数のｋｒｉｎｇｌｅドメイン及びタンパク質加水分解ドメイン）を含むミニプラスミン（ｍｉｎｉ－ｐｌａｓｍｉｎ）やδ－プラスミン（ｄｅｌｔａ－ｐｌａｓｍｉｎ）などのプラスミンの「変異体」及び「類縁体」をカバーする。

上記プラスミノーゲン、プラスミン、ｔＰＡまたはｕＰＡの「変異体」または「類縁体」がそれぞれプラスミノーゲン、プラスミン、ｔＰＡまたはｕＰＡの活性を有するかどうか、またはそれらがプラスミノーゲン、プラスミン、ｔＰＡまたはｕＰＡと実質的に同様の効果をそれぞれ与えるかどうかは、当技術分野で知られている方法、例えば、ザイモグラフィー（ｅｎｚｙｍｏｇｒａｐｈｙ）、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）及びＦＡＣＳ（蛍光活性化細胞ソーティング法）を使用して、活性化されたプラスミン活性のレベルによって測定できる。例えば、次の文献に記載されている方法を参照して測定することができる。Ｎｙ，Ａ．，Ｌｅｏｎａｒｄｓｓｏｎ，Ｇ．，Ｈａｇｇｌｕｎｄ，Ａ．Ｃ，Ｈａｇｇｌｏｆ，Ｐ．，Ｐｌｏｐｌｉｓ，Ｖ．Ａ．，Ｃａｒｍｅｌｉｅｔ，Ｐ． ａｎｄ Ｎｙ，Ｔ． （１９９９）． Ｏｖｕｌａｔｉｏｎ ｉｎｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ－ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｍｉｃｅ． Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １４０，５０３０－５０３５；Ｓｉｌｖｅｒｓｔｅｉｎ ＲＬ， Ｌｅｕｎｇ ＬＬ， Ｈａｒｐｅｌ ＰＣ， Ｎａｃｈｍａｎ ＲＬ （Ｎｏｖｅｍｂｅｒ １９８４）． ”Ｃｏｍｐｌｅｘ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ｗｉｔｈ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ． Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ ｔｉｓｓｕｅ ａｃｔｉｖａｔｏｒ”． Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． ７４ （５）： １６２５-３３；Ｇｒａｖａｎｉｓ Ｉ， Ｔｓｉｒｋａ ＳＥ （Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２００８）． ”Ｔｉｓｓｕｅ－ｔｙｐｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ａｓ ａ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ ｉｎ ｓｔｒｏｋｅ”． Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｏｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｔａｒｇｅｔｓ． １２ （２）： １５９-７０；Ｇｅｉｇｅｒ Ｍ， Ｈｕｂｅｒ Ｋ， Ｗｏｊｔａ Ｊ， Ｓｔｉｎｇｌ Ｌ， Ｅｓｐａｎａ Ｆ， Ｇｒｉｆｆｉｎ ＪＨ， Ｂｉｎｄｅｒ ＢＲ （Ａｕｇ １９８９）． ”Ｃｏｍｐｌｅｘ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｕｒｏｋｉｎａｓｅ ａｎｄ ｐｌａｓｍａ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ”． Ｂｌｏｏｄ． ７４ （２）： ７２２-８。

本発明の一部の実施形態において、本発明の「プラスミノーゲン活性化経路の成分」はＧｌｕ－プラスミノーゲン、Ｌｙｓ－プラスミノーゲン、ミニプラスミノーゲン、マイクロプラスミノーゲン、δ－プラスミノーゲンから選ばれるプラスミノーゲンであり、またはそれらのタンパク質加水分解活性またはリジン結合活性を保持した変異体である。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンは、天然または合成のヒトプラスミノーゲン、または依然タンパク質加水分解活性またはリジン結合活性を保持した保存的突然変異体若しくはそのフラグメントである。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンは、霊長類動物またはげっ歯類動物に由来するヒトプラスミノーゲンのオルソログ、または依然タンパク質加水分解活性またはリジン結合活性を保持した保存的突然変異体若しくはそのフラグメントである。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンのアミノ酸は配列２、６、８、１０または１２に示される。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンはヒト天然プラスミノーゲンである。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンは配列２に示されるヒト天然プラスミノーゲンである。

「プラスミノーゲンを直接活性化できる、若しくはプラスミノーゲン活性化経路の上流成分を活性化することによってプラスミノーゲンを間接に活性化できる化合物」とは、プラスミノーゲンを直接活性化できる、若しくはプラスミノーゲン活性化経路の上流成分を活性化することによってプラスミノーゲンを間接に活性化できる任意の化合物を指し、例えば、ｔＰＡ、ｕＰＡ、ストレプトキナーゼ、サルプラーゼ、アルテプラーゼ、レテプラーゼ、テネクテプラーゼ、アニストレプラーゼ、モンテプラーゼ、ラノテプラーゼ、パミテプラーゼ、及びスタフィロキナーゼが挙げられる。

本発明の「線維素溶解阻害剤の拮抗薬」は、線維素溶解阻害剤の作用に拮抗し、その作用を弱め、遮断し、阻止する化合物である。前記線維素溶解阻害剤は、例えば、ＰＡＩ－１、補体Ｃ１阻害剤、α２－抗プラスミン、及びα２－マクログロブリンである。前記拮抗剤は、ＰＡＩ－１、補体Ｃ１阻害剤、α２－抗プラスミンもしくはα２－マクログロブリンの抗体、または、例えばＰＡＩ－１、補体Ｃ１阻害剤、α２－抗プラスミンもしくはα２－マクログロブリンの発現を遮断またはダウンレギュレートするアンチセンスＲＮＡもしくはミニＲＮＡ、または、ＰＡＩ－１、補体Ｃ１阻害剤、α２－抗プラスミンまたはα２－マクログロブリンの結合部位を占めるが、ＰＡＩ－１、補体Ｃ１阻害剤、α２－抗プラスミンまたはα２－マクログロブリンの機能を持たない化合物、または、ＰＡＩ－１、補体Ｃ１阻害剤、α２－抗プラスミンもしくはα２－マクログロブリンの結合ドメイン及び／または活性ドメインをブロックする化合物である。

プラスミンはプラスミノーゲン活性化系（ＰＡ系）の重要な成分である。それは広スペクトルのプロテアーゼであり、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の幾つかの成分を加水分解することができ、これらの成分はフィブリン、ゼラチン、フィブロネクチン、ラミニン及びプロテオグリカンを含む。また、プラスミンは一部のプロマトリックスメタロプロテアーゼ（ｐｒｏ－ＭＭＰ）を活性化させて活性のあるマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）にすることができる。そのためプラスミンは細胞外タンパク加水分解作用の一つの重要な上流調節因子である。プラスミンはプラスミノーゲンが二種類の生理性のＰＡ：組織型プラスミノーゲン活性化剤（ｔＰＡ）またはウロキナーゼプラスミノーゲン活性化剤（ｕＰＡ）をタンパク質加水分解することで形成されるものである。プラスミノーゲンは血漿及び他の体液中において、相対的レベルが比較的高く、従来的にはＰＡ系の調節は主にＰＡの合成及び活性レベルよって実現されると考えられている。ＰＡ系成分の合成は異なる要素によって厳格な調節を受け、例えばホルモン、成長因子及びサイトカインである。また、この他に、プラスミンとＰＡｓの特定の生理的阻害剤が存在する。プラスミンの主な阻害剤はα２－抗プラスミン（α２－ａｎｔｉｐｌａｓｍｉｎ）である。ＰＡｓの活性は、ｕＰＡとｔＰＡのプラスミノーゲン活性化剤阻害剤－１（ＰＡＩ－１）に同時に阻害され、ｕＰＡを主に阻害するプラスミノーゲン活性化剤阻害剤－２（ＰＡＩ－２）によって調節される。一部の細胞表面には直接加水分解する活性のあるｕＰＡ特異性細胞表面受容体（ｕＰＡＲ）がある。

プラスミノーゲンは単一鎖の糖タンパクであり、７９１個のアミノ酸からなり、分子量は約９２ｋＤａである。プラスミノーゲンは主に肝臓で合成され、大量に細胞外液に存在している。血漿中に含まれるプラスミノーゲンの含有量は約２μＭである。そのためプラスミノーゲンは組織及び体液中のタンパク質加水分解活性の大きな潜在的な由来である。プラスミノーゲンには二種類の分子の形が存在する：グルタミン酸－プラスミノーゲン（Ｇｌｕ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）及びリジン－プラスミノーゲン（Ｌｙｓ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）である。天然的に分泌され及び分解していない形のプラスミノーゲンは一つのアミノ基末端（Ｎ－末端）グルタミン酸を有し、そのためグルタミン酸－プラスミノーゲンと称される。しかし、プラスミンが存在する場合、グルタミン酸－プラスミノーゲンはＬｙｓ７６－Ｌｙｓ７７においてリジン－プラスミノーゲンに加水分解される。グルタミン酸－プラスミノーゲンと比較して、リジン－プラスミノーゲンはフィブリンとより高い親和力を有し、さらにより高い速度でＰＡｓによって活性化されることができる。この二種類の形のプラスミノーゲンのＡｒｇ５６０－Ｖａｌ５６１ペプチド結合はｕＰＡまたはｔＰＡによって切断され、これによりジスルフィド結合によって連結された二重鎖プロテアーゼプラスミンの形成をもたらす。プラスミノーゲンのアミノ基末端部分は五つの相同三環を含み、即ちいわゆるｋｒｉｎｇｌｅｓであり、カルボキシル基末端部分はプロテアーゼドメインを含む。一部のＫｒｉｎｇｌｅｓはプラスミノーゲンとフィブリン及びその阻害剤α２－ＡＰの特異的相互作用を介在するリジン結合部位を含む。最も新しく発見されたのは３８ｋＤａのフィブリンプラスミノーゲンフラグメントであり、ｋｒｉｎｇｌｅｌ－４を含み、血管生成の有効的な阻害剤である。このフラグメントはアンギオスタチン(Angiostatin)と命名され、幾つかのプロテアーゼ加水分解プラスミノーゲンから生成される。

プラスミンの主な基質はフィブリンであり、フィブリンの溶解は病理性血栓の形成を予防するキーポイントである^［。プラスミンはさらにＥＣＭの幾つかの成分に対する基質特異性を有し、これらの成分はラミニン、フィブロネクチン、プロテオグリカン及びゼラチンを含み、これはプラスミンがＥＣＭ再建において重要な作用を有することを示している。間接的に、プラスミンはさらにＭＭＰ－１、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－３及びＭＭＰ－９を含むいくつかのプロテアーゼ前駆体を活性プロテアーゼに変換することによりＥＣＭのその他の成分を分解する。そのため、プラスミンは細胞外タンパク加水分解の重要な上流調節因子であることを提出ことがある。また、プラスミンはいくつかの潜在的な形の成長因子を活性化させる能力を有する。体外において、プラスミンはさらに補体系の成分を加水分解させて走化性の補体フラグメントを放出することができる。

「プラスミン」は血液中に存在する非常に重要な酵素であり、フィブリン凝塊をフィブリン分解生成物及びＤ－二量体に加水分解する。

「プラスミノーゲン」はプラスミンの酵素前駆体の形であり、ｓｗｉｓｓ ｐｒｏｔ中の配列に基づいて、シグナルペプチドを含む天然ヒト由来プラスミノーゲンのアミノ酸配列（配列４）として計算すれば８１０個のアミノ酸からなり、分子量は約９０ｋＤであり、主に肝臓において合成され且つ血液中で循環できる糖タンパク質であり、該アミノ酸配列をコードするｃＤＮＡ配列は配列３に示される通りである。フルサイズのプラスミノーゲンは七つのドメインを含む：Ｃ末端に位置するセリンプロテアーゼドメイン、Ｎ末端に位置するＰａｎ Ａｐｐｌｅ（ＰＡｐ）ドメイン及び５つのＫｒｉｎｇｌｅドメイン（Ｋｒｉｎｇｌｅ１－５）を含む。ｓｗｉｓｓ ｐｒｏｔ中の配列を参照すれば、そのシグナルペプチドは残基Ｍｅｔ１－Ｇｌｙ１９を含み、ＰＡｐは残基Ｇｌｕ２０－Ｖａｌ９８を含み、Ｋｒｉｎｇｌｅ１は残基Ｃｙｓ１０３－Ｃｙｓ１８１を含み、Ｋｒｉｎｇｌｅ２は残基Ｇｌｕ１８４－Ｃｙｓ２６２を含み、Ｋｒｉｎｇｌｅ３は残基Ｃｙｓ２７５－Ｃｙｓ３５２を含み、Ｋｒｉｎｇｌｅ４は残基Ｃｙｓ３７７－Ｃｙｓ４５４を含み、Ｋｒｉｎｇｌｅ５は残基Ｃｙｓ４８１－Ｃｙｓ５６０を含む。ＮＣＢＩデータによれば、セリンプロテアーゼドメインは残基Ｖａｌ５８１－Ａｒｇ８０４を含む。

Ｇｌｕ－プラスミノーゲンはヒトの天然のフルサイズのプラスミノーゲンであり、７９１個のアミノ酸からなる（１９個のアミノ酸からなるシグナルペプチドを含まない）。該配列をコードするｃＤＮＡ配列は配列１に示される通りであり、そのアミノ酸配列は配列２に示される通りである。体内において、さらにＧｌｕ－プラスミノーゲンの第７６－７７位のアミノ酸の位置で加水分解することにより形成されたＬｙｓ－プラスミノーゲンが存在し、例えば配列６に示されるものであり、該アミノ酸配列をコードするｃＤＮＡ配列は配列５が示す通りである。Ｄｅｌｔａ－プラスミノーゲン（δ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）はフルサイズのプラスミノーゲンにＫｒｉｎｇｌｅ２－Ｋｒｉｎｇｌｅ５構造の欠損が生じているフラグメントであり、Ｋｒｉｎｇｌｅ１及びセリンプロテアーゼドメインしか含有せず（プロテアーゼドメイン（ｐｒｏｔｅａｓｅ ｄｏｍａｉｎ、ＰＤ）とも呼ばれる）、δ－プラスミノーゲンのアミノ酸配列（配列８）を報告している文献があり、該アミノ酸配列をコードするｃＤＮＡ配列は例えば配列７である。ミニプラスミノーゲン（Ｍｉｎｉ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）はＫｒｉｎｇｌｅ５及びセリンプロテアーゼドメインからなり、残基Ｖａｌ４４３－Ａｓｎ７９１（シグナルペプチドを含まないＧｌｕ－プラスミノーゲン配列のＧｌｕ残基を開始アミノ酸とする）について文献が報告しており、そのアミノ酸配列は配列１０に示される通りであり、該アミノ酸配列をコードするｃＤＮＡ配列は配列９が示す通りである。しかしマイクロプラスミノーゲン（Ｍｉｃｒｏ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）はセリンプロテアーゼドメインのみ含有し、そのアミノ酸配列は残基Ａｌａ５４３－Ａｓｎ７９１（シグナルペプチドを含まないＧｌｕ－プラスミノーゲン配列のＧｌｕ残基は開始アミノ酸である）と文献が報告し、特許文献ＣＮ１０２１５４２５３Ａはそれが残基Ｌｙｓ５３１－Ａｓｎ７９１を含むと開示し（シグナルペプチドを含まないＧｌｕ－プラスミノーゲン配列のＧｌｕ残基を開始アミノ酸とする）、本特許出願において、マイクロプラスミノーゲンの配列は特許文献ＣＮ１０２１５４２５３Ａを参照でき、そのアミノ酸配列は配列１２に示される通りであり、該アミノ酸配列をコードするｃＤＮＡ配列は配列１１に示される通りである。

全長プラスミノーゲンの構造は、Ａｉｓｉｎａらの論文にも記載されている（Ａｉｓｉｎａ Ｒ Ｂ，Ｍｕｋｈａｍｅｔｏｖａ Ｌ Ｉ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ／ｐｌａｓｍｉｎ ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｒｕｓｓｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１４，４０（６）：５９０－６０５）。Ａｉｓｉｎａらの前記文章によれば、プラスミノーゲンにはＫｒｉｎｇｌｅ １、２、３、４、５ドメインとセリンプロテアーゼドメイン（プロテアーゼドメイン（ｐｒｏｔｅａｓｅ ｄｏｍａｉｎ、ＰＤ）とも呼ばれる）が含まれ、Ｋｒｉｎｇｌｅｓは、プラスミノーゲンが低分子量及び高分子量のリガンドに結合する役割（すなわち、リジン結合活性）を担っており、その結果、プラスミノーゲンがよりオープンな構成に変換され、より活性化しやすくなり、プロテアーゼドメイン（ＰＤ）は、残基Ｖａｌ５６２－Ａｓｎ７９１であり、ｔＰＡとＵＰＡはプラスミノーゲンのＡｒｇ５６１－Ｖａｌ５６２位活性化結合を特異的に切断し、それによってプラスミノーゲンがプラスミンを形成できる。したがって、プロテアーゼドメイン（ＰＤ）は、プラスミノーゲンのタンパク質加水分解活性を付与する領域である。

本発明の「プラスミン」と「フィブリンプラスミン」、「繊維タンパクプラスミン」は互いに置き換えて使用でき、その意味は同じである。「プラスミノーゲン」と「フィブリンプラスミノーゲン」、「繊維タンパクプラスミノーゲン」は互いに置き換えて使用でき、その意味は同じである。

本願において、前記プラスミノーゲンの「欠乏」とは、被験者体内のプラスミノーゲンの含有量または活性が正常な人より低く、前記被験者の正常な生理学的機能に影響を及ぼすのに十分に低いことをいう。前記プラスミノーゲンの「欠乏」の意味は、被験者体内のプラスミノーゲンの含有量または活性が正常な人より明らかに低く、活性または発現が極微量であり、外部供給によってのみ正常な生理学的機能を維持できることである。

当業者は以下のように理解できる。本発明のプラスミノーゲンのすべての技術構成はプラスミンに適用でき、そのため、本発明に記載の技術構成はプラスミノーゲン及びプラスミンをカバーするものである。循環プロセスにおいて、プラスミノーゲンは閉鎖した非活性コンフォメーションであるが、血栓または細胞表面に結合した際、プラスミノーゲン活性化剤（ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ，ＰＡ）の介在下において、開放性のコンフォメーションを有する活性プラスミンとなる。活性を有するプラスミンはさらにフィブリン凝塊をフィブリン分解生成物及びＤ－二量体に加水分解させ、これにより血栓を溶解させる。そのうちプラスミノーゲンのＰＡｐドメインはプラスミノーゲンを非活性閉鎖コンフォメーションにする重要なエピトープであり、しかしＫＲドメインは受容体及び基質上のリジン残基と結合できるものである。プラスミノーゲン活性化剤としての酵素は、既に複数種類知られ、組織プラスミノーゲン活性化剤（ｔＰＡ）、ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化剤（ｕＰＡ）、カリクレイン及び凝結因子ＸＩＩ（ハーゲマン因子）などを含む。

「プラスミノーゲン活性フラグメント」とは、基質のターゲット配列中のリジンに結合する活性（リジン結合活性）フラグメント、またはタンパク質加水分解機能を発揮する活性（タンパク質加水分解活性）フラグメント、またはタンパク質加水分解活性とリジン結合活性との両方を有するフラグメントを指す。本発明のプラスミノーゲンに関する技術構成は、プラスミノーゲンをプラスミノーゲン活性フラグメントに置き換えた技術構成を包含する。いくつかの実施形態では、本発明のプラスミノーゲン活性フラグメントは、プラスミノーゲンのセリンプロテアーゼドメインを含むか、またはプラスミノーゲンのセリンプロテアーゼドメインからなり、好ましくは、本発明のプラスミノーゲン活性フラグメントは、配列１４を含むか、または配列１４と少なくとも８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、または配列１４と少なくとも８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列からなる。一部の実施形態において、本発明のプラスミノーゲン活性フラグメントは、Ｋｒｉｎｇｌｅ １、Ｋｒｉｎｇｌｅ ２、Ｋｒｉｎｇｌｅ ３、Ｋｒｉｎｇｌｅ ４、及びＫｒｉｎｇｌｅ ５から選択される１つ以上のドメインを含むか、またはＫｒｉｎｇｌｅ １、Ｋｒｉｎｇｌｅ ２、Ｋｒｉｎｇｌｅ ３、Ｋｒｉｎｇｌｅ ４、及びＫｒｉｎｇｌｅ ５から選択される１つ以上のドメインからなる。いくつかの実施形態では、本発明のプラスミノーゲンは、上記のプラスミノーゲン活性フラグメントを含むタンパク質を含む。

現在、血液中のプラスミノーゲン及びその活性測定方法は組織プラスミノーゲン活性化剤の活性に対する測定（ｔ－ＰＡＡ）、血漿組織プラスミノーゲン活性化剤抗原に対する測定（ｔ－ＰＡＡｇ）、血漿組織プラスミノーゲン活性に対する測定（ｐｌｇＡ）、血漿組織プラスミノーゲン抗原に対する測定（ｐｌｇＡｇ）、血漿組織プラスミノーゲン活性化剤の阻害物活性に対する測定、血漿組織プラスミノーゲン活性化剤の阻害物抗原に対する測定、血漿プラスミン－抗プラスミン複合物に対する測定（ＰＡＰ）を含む。最もよく見られる測定方法は発色基質法である：測定対象(被験者)の血漿中にストレプトキナーゼ（ＳＫ）と発光基質を添加し、測定対象の血漿中のＰＬＧはＳＫの作用下においてＰＬＭとなり、後者は発光基質に作用し、それから分光光度計で測定し、吸光度の増加はプラスミノーゲンの活性と正比例の関係となる。この他にも免疫化学法、ゲル電気泳動法、免疫比濁法、放射免疫拡散法などを用いて血液中のプラスミノーゲン活性に対して測定を行うことができる。

「オーソログまたはオルソログ（ｏｒｔｈｏｌｏｇ）」とは異なる種どうしのホモログであり、タンパク質の相同物もＤＮＡの相同物も含み、直系遺伝子ともいう。それは具体的に異なる種どうしの同じ祖先の遺伝子から進化して得られるタンパク質または遺伝子を言う。本発明のプラスミノーゲンはヒト天然プラスミノーゲンを含み、さらには異なる種に由来する、プラスミノーゲン活性を有するプラスミノーゲンのオーソログまたはオルソログを含む。

「保存的置換バリアント」とはそのうちの一つの指定されたアミノ酸残基が改変されたがタンパク質または酵素の全体のコンフォメーション及び機能を変えないものであり、これは類似の特性（例えば酸性、アルカリ性、疎水性など）のアミノ酸で親タンパク質中のアミノ酸配列中のアミノ酸を置換するものを含むがこれらに限られない。類似の性質を有するアミノ酸は知られている通りである。例えば、アルギニン、ヒスチジン及びリジンは親水性のアルカリ性アミノ酸であり且つ互いに置き換えることができる。同じように、イソロイシンは疎水アミノ酸であり、ロイシン、メチオニンまたはバリンによって置換されることができる。そのため、機能の類似する二つのタンパク質またはアミノ酸配列の類似性は異なる可能性もある。例えば、ＭＥＧＡＬＩＧＮアルゴリズムに基づいて７０％～９９％の類似性（同一性）を有する。「保存的置換バリアント」はさらにＢＬＡＳＴまたはＦＡＳＴＡアルゴリズムに基づいて６０％以上のアミノ酸同一性を有するポリペプチドまたは酵素を含み、７５％以上に達すればさらによく、最も好ましくは８５％以上に達し、さらには９０％以上に達するのが最も好ましく、さらに天然または親タンパク質または酵素と比較して同じまたは基本的に類似する性質または機能を有する。

「分離された」プラスミノーゲンとは天然環境から分離及び／または回収されたプラスミノーゲンタンパク質である。いくつかの実施形態において、前記プラスミノーゲンは（１）９０％を超える、９５％を超える、または９８％を超える純度（重量で計算した場合）になるまで精製し、例えばＬｏｗｒｙ法によって決まるもので、例えば９９％（重量で計算した場合）を超えるまで精製する、（２）少なくともスピニングカップ配列分析装置によりＮ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基が得られる程度になるまで精製する、または（３）同質性になるまで精製する。該同質性はクマシーブリリアントブルーまたは銀染色により還元性または非還元性条件下のドデシル硫酸ナトリウムーポリアクリルアミノゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）によって決まるものである。分離されたプラスミノーゲンはバイオエンジニアリング技術により組み換え細胞から製造され、さらに少なくとも一つの精製ステップで分離されたプラスミノーゲンを含む。

用語の「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」は本明細書において互いに置き換えて使用でき、いかなる長さのアミノ酸の重合体を指し、遺伝的にコードされた及び非遺伝的にコードされたアミノ酸、化学的または生化学的に修飾されまたは派生したアミノ酸、及び修飾されたペプチド主鎖を有するポリペプチドを含む。該用語は融合タンパク質を含み、異種性アミノ酸配列を有する融合タンパク質を含むがこれに限られず、異種性と同種性由来のリーダー配列（Ｎ端メチオニン残基を有するあるいは有しない）を含む融合物；等々である。

参照ペプチド配列の「アミノ酸配列同一性パーセンテージ（％）」の定義は、必要に応じてギャップを導入することで最大のパーセンテージ配列の同一性を実現した後、如何なる保存的な置換も配列同一性の一部として見なさない場合、候補配列中における参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同じアミノ酸残基のパーセンテージである。パーセンテージのアミノ酸配列の同一性を測定することを目的とした比較は本分野の技術範囲における複数種類の方式によって実現でき、例えば公衆が入手できるコンピュータソフトウエア、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウエアによって実現できる。当業者は配列をアライメントするための適切なパラメーターを決めることができ、該パラメーターが比較対象の配列のフルサイズに対して最大比較の要求を実現するための如何なるアルゴリズムも含む。しかし、本発明の目的のために、アミノ酸配列の同一性パーセンテージは配列比較コンピュータソフトウエアＡＬＩＧＮ－２により得られるものである。

ＡＬＩＧＮ－２を用いることによりアミノ酸配列を比較する場合、所定のアミノ酸配列Ａの所定のアミノ酸配列Ｂに対するアミノ酸配列同一性％（または所定のアミノ酸配列Ｂに対して、と、またはについてのある％のアミノ酸配列同一性を有する又は含む所定のアミノ酸配列Ａともいう）は以下のように計算される：
分数Ｘ／Ｙ×１００

ここで、Ｘは配列アライメントプログラムＡＬＩＧＮ－２において該プログラムのＡ及びＢのアライメントにおいて同一でマッチングすると評価したアミノ酸残基の数であり、且つＹはＢにおけるアミノ酸残基の総数である。以下のように理解するべきである：アミノ酸配列Ａの長さとアミノ酸配列Ｂの長さが等しくない場合、ＡのＢに対するアミノ酸配列の同一性％は、ＢのＡに対するアミノ酸配列同一性％とは異なる。特に断りのない限り、本文中において使用するすべてのアミノ酸配列同一性値％は前記の段落に記載の通りであり、ＡＬＩＧＮ－２コンピュータプログラムによって得られるものである。

本文において使用されているように、用語の「治療」は期待される薬理及び／または生理的効果が得られることを言う。前記効果は疾患またはその症状の発生、発症を完全または一部予防すること、あるいは疾患及び／またはその症状を一部または完全軽減すること、及び／または疾患及び／またはその症状を一部または完全に治癒するものとすることができる。さらに以下を含む：（ａ）疾患が被験者の体内で発生することを予防し、前記被験者は疾患の要因を持っているが、該疾患を有すると診断されていない状況であること；（ｂ）疾患を抑制し、その形成を阻害すること；及び（ｃ）疾患及び／またはその症状を減軽し、即ち疾患及び／またはその症状を減退させること。

用語の「個体」、「被験者」及び「患者」は本明細書中において互いに置き換えて使用でき、哺乳動物を指し、ネズミ（ラット、マウス）、ヒト以外の霊長類、ヒト、イヌ、ネコ、有蹄動物（例えばウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ）などを含むがこれらに限られない。

「治療上有効量」または「有効量」とは、哺乳動物またはその他の被験者に投与して疾患の治療に用いられる際に疾患の前記予防及び／または治療を実現できるプラスミノーゲン活性化経路の成分またはその関連化合物（例えば、プラスミノーゲン）の量である。「治療上有効量」は使用するプラスミノーゲン活性化経路の成分またはその関連化合物（例えば、プラスミノーゲン）、治療しようとする被験者の疾患及び／または症状の重症度及び年齢、体重などに従って変化するものである。

本出願において、「損傷した組織及び器官の修復を促進する」とは、損傷した組織及び器官の解剖学的構造の完全性及び機能をできるだけ正常に回復させるために、損傷した組織及び器官の構造及び機能の修復を促進することを指す。

本明細書において「高血圧」または「高血圧症」とは、全身の動脈圧が正常よりも高い状態を指す。１９９９年の世界保健機関／国際高血圧学会の治療ガイドラインによると、高血圧の診断基準は、収縮圧が１８．７Ｋｐａ（１４０ｍｍＨｇ）以上または拡張圧が１２．０Ｋｐａ（９０ｍｍＨｇ）以上である。「低血圧」または「低血圧症」は、全身の動脈圧が正常よりも低い状態を指す。低血圧の診断には統一された基準はない。一般に、成人の上肢動脈の収縮圧／拡張圧がそれぞれ１２／８ｋＰａ（９０／６０ｍｍＨｇ）未満である場合には、低血圧として考えられている。「高血圧」または「高血圧症」及び「低血圧」または「低血圧症」の血圧指標の診断基準は、各国の診断マニュアルの特定の規定を参照してもよい。

本願において、「高血圧」または「高血圧症」を有する被験者を治療することは、「高血圧」または「高血圧症」を患っている被験者の高血圧を「下げる」または「低下させる」ことを含み、前記「下げる」または「低下させる」こととは、薬剤投与していない場合と比較して、または投与前の被験者の血圧と比較して、被験者の血圧を下げることを指し、例えば、被験者の血圧を正常化するか、正常に近づけるか、または正常なレベルに戻すことを指す。同様に、本出願において、「低血圧」または「低血圧症」を有する被験者を治療することは、「低血圧」または「低血圧症」に罹患している被験者の低血圧を「上昇させる」ことを含む。前記「上昇させる」こととは、投与していない対照と比較して、または投与前の被験者の血圧と比較して、被験者の血圧を上昇させること、例えば、被験者の血圧を正常化するか、正常に近づけるか、または正常なレベルに戻すことを指す。

「合併症」とは、ある疾患が発生過程で別の疾患または症状の発生を引き起こし、後者が前者の合併症であり、つまり、後者の疾患の発生が前者の疾患によって引き起こされ、あるいは、疾患の診断治療中に、患者がその疾患に関連する別の１つ以上の疾患を合併して発症することを意味する。

「高血圧合併症」とは、高血圧によって引き起こされる心臓、脳、肺、肝臓、腎臓、または血管の損傷を含む、高血圧によって引き起こされる合併症を意味する。高血圧によって引き起こされる心臓損傷の合併症としては、左心室肥大、狭心症、心筋梗塞、心不全などが挙げられる。高血圧によって引き起こされる脳組織損傷の合併症としては、脳出血、脳血栓、脳梗塞、出血性脳卒中、虚血性脳卒中、高血圧性脳症などが挙げられる。高血圧によって引き起こされる腎損傷としては、緩徐進行性小動脈性腎硬化症、悪性小動脈性腎硬化症、慢性腎不全、高血圧性腎症、腎不全、尿毒症などが挙げられる。高血圧の最も一般的な合併症は脳血管障害であり、次に高血圧性心疾患、心不全であり、そして腎不全である。まれではあるが深刻な合併症は、大動脈解離性動脈瘤である。

「低血圧合併症」とは、低血圧による合併症を指す。低血圧の一般的な合併症は、主に重要な器官の不十分な灌流によって引き起こされる。例えば、脳への血液供給が不十分になると、耳鳴り、めまいなどの症状が多く、重症になると脳梗塞を合併することもある。心臓への血液供給が不十分になると、主に動悸、息切れ、胸の圧迫感などの症状が現れる。腎臓への血液供給が不十分になると、ほとんどの場合、乏尿、タンパク尿として現れ、重症の場合は無尿などの腎不全が起こる。

本発明のプラスミノーゲンの調製
プラスミノーゲンは治療の用途に用いられるために、自然界から分離及び精製されるものでもよく、標準的な化学ペプチド合成技術によって合成することでもよい。化学的手法によりポリペプチドを合成する際、液相または固相で合成を行うことができる。固相ポリペプチド合成（ＳＰＰＳ）（配列のＣ末端アミノ酸を不溶性支持体に附着させ、順番に配列中の残りのアミノ酸を添加する）はプラスミノーゲンの化学的合成に適したものである。各種形式のＳＰＰＳ、例えばＦｍｏｃ及びＢｏｃは、プラスミノーゲンの合成に用いることができる。固相合成に用いられる技術は以下に記載されている：Ｂａｒａｎｙ及びＳｏｌｉｄ－Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；３－２８４ページ、Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ．第二巻：Ｓｐｅｃｉａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｐａｒｔ Ａ．，Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，ｔら Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８５：２１４９－２１５６（１９６３）；Ｓｔｅｗａｒｔら，Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ ｅｄ．Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．（１９８４）；及びＧａｎｅｓａｎ Ａ．２００６Ｍｉｎｉ Ｒｅｖ．Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．６：３－１０及びＣａｍａｒｅｒｏ ＪＡら ２００５Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｅｐｔ Ｌｅｔｔ．１２：７２３－８。簡単に言えば、その上にペプチド鎖が構築されている機能性ユニットにより小さい不溶性の多孔ビーズを処理する。カップリング／脱保護の繰り返し循環後に、附着した固相の遊離Ｎ末端アミンとＮ保護を受けている単一のアミノ酸ユニットをカップリングさせる。それから、該ユニットを脱保護し、他のアミノ酸と連結する新しいＮ末端アミンを露出させる。ペプチドを固相上に固定したままにし、それからそれを切除する。

標準的な組み換え方法により本発明のプラスミノーゲンを生産する。例えば、プラスミノーゲンをコードする核酸を発現ベクター中に挿入し、それと発現ベクター中の制御配列を操作可能に接続させる。発現制御配列はプロモーター（例えば天然に関連されているプロモーター、または異種由来のプロモーター）、シグナル配列、エンハンサーエレメント及び転写終了配列を含むが、これらに限られない。発現の制御はベクター中の真核プロモーターシステムとすることができ、前記ベクターは真核宿主細胞（例えばＣＯＳまたはＣＨＯ細胞）を形質転換またはトランスフェクションさせる。一旦ベクターを適切な宿主に導入すれば、ヌクレオチド配列の高レベル発現及びプラスミノーゲンの収集及び精製に適した条件下において宿主を維持する。

適切な発現ベクターは通常宿主体内において遊離体または宿主染色体ＤＮＡの組み込む部分として複製される。通常、発現ベクターは選択マーカー（例えばアンピシリン耐性、ハイグロマイシン耐性、テトラサイクリン耐性、カナマイシン耐性またはネオマイシン耐性）を含み、インビトロで所望のＤＮＡ配列によって形質転換されたそれらの細胞に対して測定を行うことに有用である。

大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）は目的化合物をコードするポリヌクレオチドをクローンするための原核宿主細胞の例である。その他の使用に適した微生物宿主は桿菌を含み、例えばバチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）及びその他の腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、例えばサルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、セラチア属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、及び各種シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種である。これらの原核宿主において、発現ベクターを生成でき、通常は宿主細胞と相容する発現制御配列（例えば複製開始点）を含むものである。また、多くの公知のプロモーターが存在し、例えば乳糖プロモーターシステム、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーターシステム、β－ラクタマーゼプロモーターシステム、またはファージλ由来のプロモーターシステムである。プロモーターは一般的に発現を制御し、必要に応じて遺伝子配列を制御する場合に、転写及び翻訳を起動するために、さらにリボソームの結合位置配列などを有してもよい。

その他の微生物、例えば酵母も発現に用いることができる。酵母（例えばサッカロミセス（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））及びピキア（Ｐｉｃｈｉａ）が適した酵母宿主細胞の例であり、そのうちの適切な担体は必要に応じて発現制御配列（例えばプロモーター）、複製開始点、終止配列など含む。典型的なプロモーターは３－ホスホグリセリン酸キナーゼ及びその他の糖分解酵素を含む。誘導型酵母プロモーターには特にアルコール脱水素酵素、イソチトクロムＣ、及びマルトースとガラクトースの利用のための酵素のプロモーターを含む。

微生物以外に、哺乳動物細胞（例えばインビトロ細胞培養物中において培養された哺乳動物細胞）も本発明のプラスミノーゲン（例えばプラスミノーゲンをコードするポリヌクレオチド）の発現及び生成に用いることができる。例えばＷｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎ．Ｙ．，Ｎ．Ｙ．（１９８７）参照。適した哺乳動物宿主細胞はＣＨＯ細胞系、各種Ｃｏｓ細胞系、ＨｅＬａ細胞、骨髄腫細胞系、及び形質転換されたＢ細胞またはハイブリドーマを含む。これらの細胞に用いられる発現ベクターは発現制御配列、例えば複製開始点、プロモーター、及びエンハンサー（Ｑｕｅｅｎら，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．８９：４９（１９８６））、及び必要とされる加工情報サイト、例えばリボソームの結合サイト、ＲＮＡの切断サイト、ポリアデノシン酸化サイト、及び転写ターミネーター配列を含むことができる。適切な発現制御配列の例はウサギ免疫グロブリン遺伝子、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシ乳頭腫ウィルス、サイトメガロウイルスなど由来のプロモーターである。Ｃｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９（１９９２）を参照すること。

一旦（化学または組み換え的に）合成されれば、本分野の標準的な手順、例えば硫酸アンモニウム沈殿、アフィニテイカラム、カラムクロマトグラフィー、高速液相クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ゲル電気泳動などにより本発明に記載のプラスミノーゲンを精製することができる。該プラスミノーゲンは基本的に純粋なものであり、例えば少なくとも約８０％から８５％の純度で、少なくとも約８５％～９０％の純度で、少なくとも約９０％～９５％の純度で、または９８％～９９％の純度またはさらに純度が高いものであり、例えば汚染物を含まず、前記汚染物は例えば細胞砕片、プラスミノーゲン以外の大分子などである。

薬物配合剤
所望の純度のプラスミノーゲンと必要に応じた薬用担体、賦形剤、または安定化剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１６版，Ｏｓｏｌ，Ａ．ｅｄ．（１９８０））を混合して凍結乾燥製剤または水溶液を形成して治療用の配合剤を得る。許容可能な担体、賦形剤、安定化剤は所要の用量及び濃度下において被験者に対して毒性がなく、さらに例えばリン酸塩、クエン酸塩及びその他の有機酸などの緩衝剤を含む。抗酸化剤はアスコルビン酸和メチオニンを含む；防腐剤（例えばオクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメチレンジアミン；塩化ベンザルコニウム（ｂｅｎｚａｌｋｏｎｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ベンゼトニウムクロリド；フェノール、ブタノールまたはベンジルアルコール；アルキルパラヒドロキシ安息香酸エステル、例えばメチルまたはプロピルパラヒドロキシ安息香酸エステル；ピロカテコール；レソルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；ｍ－クレゾール）；低分子量ポリペプチド（約１０個より少ない残基を有するもの）；タンパク質例えば血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性重合体、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン酸、ヒスチジン、アルギニンまたはリシンである；単糖、二糖及びその他の炭水化物はグルコース、マンノース、またはデキストリンを含む；キレート剤は例えばＥＤＴＡである；糖類は例えばショ糖、マンニトール、フコースまたはソルビトールである；塩形成対イオン、例えばナトリウム；金属複合体（例えば亜鉛－タンパク複合体）；及び／または非イオン界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮＴＭ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭまたはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。

本発明の配合剤は治療を必要とする具体的な症状の必要とする一種類以上の活性化合物を含有してもよく、好ましくは活性が相補的で互いに副作用を有しないものである。例えば、降圧薬、抗不整脈薬、糖尿病薬などが挙げられる。

本発明のプラスミノーゲンは例えば凝集技術または界面重合によって作られるマイクロカプセル中に内包ことができ、例えば、膠質薬物輸送系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン剤、ナノ粒子及びナノカプセル）中に入れまたは粗エマルジョン状液中のヒドロキシメチルセルロースまたはゲルーマイクロカプセル及びポリ―（メタアクリル酸メチル）マイクロカプセル中に入れることができる。これらの技術はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ′ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。

体内に投与することに用いられる本発明のプラスミノーゲンは必ず無菌である必要がある。これは凍結乾燥及び再度配合する前または後に除菌濾過膜で濾過することで容易に実現できる。

本発明のプラスミノーゲンは徐放製剤を調製できる。徐放製剤の適切な実例は一定の形状を有し且つ糖タンパクを含む固体の疎水性重合体の半透過マトリックスを含み、例えば膜またはマイクロカプセルである。徐放性マトリックスの実例はポリエステル、水性ゲル（例えばポリ（２－ヒドロキシエチル－メタアクリル酸エステル）（Ｌａｎｇｅｒら，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．，１５：１６７－２７７（１９８１）；Ｌａｎｇｅｒ，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．，１２：９８－１０５（１９８２））またはポリ（ビニールアルコール）、ポリラクチド（米国特許３７７３９１９，ＥＰ ５８，４８１）、Ｌ－グルタミン酸とエチル－Ｌ－グルタミン酸の共重合体（Ｓｉｄｍａｎ，ら，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２２：５４７（１９８３）），分解できないエチレン－ビニルアセテート（ｅｔｈｙｌｅｎｅ－ｖｉｎｙｌ ａｃｅｔａｔｅ）（Ｌａｎｇｅｒ，ら，出所は前記と同じ）、または分解可能な乳酸－ヒドロキシ酢酸共重合体、例えばＬｕｐｒｏｎ ＤｅｐｏｔＴＭ（乳酸－ヒドロキシ酢酸共重合体及びリュープロレリン（ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ）酢酸エステルからなる注射可能なミクロスフェア体）、及びポリＤ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸を含む。重合体、例えばエチレン－酢酸エチル及び乳酸－ヒドロキシ酢酸は、持続的に分子を１００日間以上放出することができ、しかしいくつかの水性ゲルがタンパク質を放出する時間は比較的短い。関連のメカニズムに応じてタンパク質を安定化させる合理的なストラテジーにより設計できる。例えば、凝集のメカニズムが硫化ジスルフィド結合の交換によって分子間Ｓ－Ｓ結合を形成することであれば、メルカプト基残基を修飾することにより、酸性溶液中から凍結乾燥させ、湿度を制御し、適切な添加剤を用いて、及び特定の重合体基質組成物を開発することで安定化を実現できる。

投与及び使用量
異なる方式、例えば鼻吸入、エアロゾル吸入、点鼻薬、点眼薬、点耳薬、静脈内、腹腔内、皮下、頭蓋内、髄腔内、動脈内（例えば、頸動脈を介して）、直腸内、筋肉内、及び直腸内投与により本発明の薬物組成物の投与を実現できる。

胃腸外での投与に用いられる製造物は無菌水性または非水性溶液、懸濁液及び乳剤を含む。非水性溶媒の例はプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、例えばオリーブオイルのような植物油、及び注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルである。水性担体は水、アルコール性／水性溶液、乳剤または懸濁液を含み、食塩水及び緩衝媒介を含む。胃腸外媒介物は塩化ナトリウム溶液、リンガ―デキストロース、デキストロース及び塩化ナトリウム、または固定油である。静脈内媒介物は液体及び栄養補充物、電気分解補充物などを含む。されには防腐剤及びその他の添加剤、例えば抗微生物製剤、抗酸化剤、キレート剤、不活性ガスなども存在してもよい。

医療関係者は各種臨床的要素により用量案を決めることができる。例えば医学分野で公知のように、任意の患者の用量は複数の要素によって決められ、これらの要素は患者の体型、体表面積、年齢、投与される具体的な化合物、性別、投与回数及び経路、全体の健康度、及び同時に投与するその他の薬物を含む。本発明のプラスミノーゲンを含有する薬物組成物の用量の範囲は例えば被験者体重に対して毎日約０．０００１～２０００ｍｇ／ｋｇであり、または約０．００１～５００ｍｇ／ｋｇ（例えば０．０２ｍｇ／ｋｇ，０．２５ｍｇ／ｋｇ，０．５ｍｇ／ｋｇ，０．７５ｍｇ／ｋｇ，１０ｍｇ／ｋｇ，５０ｍｇ／ｋｇなど）とすることができる。例えば、用量は１ｍｇ／ｋｇ体重または５０ｍｇ／ｋｇ体重または１－５０ｍｇ／ｋｇの範囲とすることができ、または少なくとも１ｍｇ／ｋｇである。この例示性の範囲より高いまたは低い用量もカバーされ、特に前記の要素を考慮した場合である。前記範囲中の中間用量も本発明の範囲内に含まれるものである。被験者は毎日、隔日、毎週または経験分析によって決められた任意のスケジュール表に従ってこのような用量を投与できる。例示的な用量のスケジュール表は連続数日０．０１～１００ｍｇ／ｋｇ投与することである。本発明の薬物の投与過程において治療効果及び安全性をリアルタイムに評価する必要がある。

製品または薬物キット
本発明の一つの実施形態は、高血圧及び関連症状の治療に使用できる本発明のプラスミノーゲンまたはプラスミンを含む製品または薬物キットに係る。前記製品は好ましくは一つの容器、ラベルまたはプロトコルを含む。適切な容器はボトル、バイアル、注射器などである。容器は各種材料例えばガラスまたはプラスチックから作られることができる。前記容器は組成物を含有し、前記組成物は本発明の疾患または症状を有効に治療し且つ無菌の入口を有する（例えば前記容器は静脈輸液用パックまたはバイアルであり、皮下注射針によって貫通される栓を含む）。前記組成物中の少なくとも一種類の活性化剤がプラスミノーゲン／プラスミンである。前記容器上にあるまたは添付されているラベルは前記組成物を本発明の高血圧及びその関連症状の治療に用いられると説明するものである。前記製品はさらに薬用緩衝液を含有する第二容器を含み、前記薬用緩衝液は例えばリン酸塩緩衝の食塩水、リンガー溶液及びグルコース溶液を含む。さらには商業及び使用者の角度から見ると必要とされるその他の物質、即ちその他の緩衝液、希釈剤、濾過物、針及び注射器を含むことができる。また、前記製品は使用説明を有するプロトコルを含み、これは例えば前記組成物の使用者にプラスミノーゲン組成物及び疾患の治療に伴うその他の薬物を患者に投与することを指示するものである。

以下の実施例で使用されるプラスミノーゲンはすべてヒトプラスミノーゲンであり、ヒトドナーの血漿に由来し、以下の文書：ＫｅｎｎｅｔｈＣ Ｒｏｂｂｉｎｓ，Ｌｏｕｉｓ Ｓｕｍｍａｒｉａ，Ｄａｖｉｄ Ｅｌｗｙｎ ｅｔ ａｌ．Ｆｕｒｔｈｅｒ Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｎｄ Ｐｌａｓｍｉｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９６５，２４０（１）：５４１－５５０；Ｓｕｍｍａｒｉａ Ｌ，Ｓｐｉｔｚ Ｆ，Ａｒｚａｄｏｎ Ｌ ｅｔ ａｌ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｆｏｒｍｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ Ｇｌｕ－ ａｎｄ Ｌｙｓ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎｓ ａｎｄ ｐｌａｓｍｉｎｓ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．１９７６ Ｊｕｎ ２５；２５１（１２）：３６９３－９；ＨＡＧＡＮ ＪＪ，ＡＢＬＯＮＤＩ ＦＢ，ＤＥ ＲＥＮＺＯ ＥＣ．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．１９６０ Ａｐｒ；２３５：１００５－１０に記載された方法に基づき、プロセスを最適化し、ヒトドナー血漿から精製して得られた。そこに、ヒトＬｙｓ－プラスミノーゲン（Ｌｙｓ－プラスミノーゲン）とＧｌｕ－プラスミノーゲン（Ｇｌｕ－プラスミノーゲン）は９８％を上回った。

以下の実施例１～５において、ｄｂ／ｄｂマウス（南京生物医薬研究院から購入、系統名ＢＫＳ．Ｃｇ－Ｄｏｃｋ７ｍ＋／－Ｌｅｐｒｄｂ／ＪＮｊｕ）を高血圧モデルとして使用して、高血圧に対するプラスミノーゲンの効果を研究した。いくつかの文献では、ｄｂ／ｄｂマウスが１１～１４週で自然に高血圧を発症し、年齢の増加とともに血圧が上昇し続けたと報告されている^{［２４，２５］}。

実施例１は、プラスミノーゲンが１５～１６週齢の糖尿病マウスの高血圧を低下させることに関するものである。
１５～１６週齢のｄｂ／ｄｂオスマウス１２匹を取り、投与前日に体重測定後に基底血圧を測定し、血圧に応じてランダムに溶媒ＰＢＳ投与対照群とプラスミノーゲン投与群の２つの群に分け、各群で６匹とした。ブプラスミノーゲン投与群マウスに２ｍｇ／０．２ｍｌ／匹／日でプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群マウスに同じ体積（同量）のＰＢＳ溶液を尾静脈注射により投与し、２１日間連続投与した。投与し始めた日を１日目とし、０、８、１５、及び２２日目に血圧を測定し、マウス１匹あたり５回連続して測定し、測定ごとに収縮圧及び平均圧を記録した。収縮圧及び平均血圧はそれぞれ、５回の測定から得られた収縮圧及び平均圧データの平均値である。平均血圧は、収縮圧の１／３＋拡張圧の２／３として計算される。マウスの血圧は、非侵襲的血圧計（ＭＲＢＰ－Ｍ０１、ＩＩＴＣ Ｌｉｆｅ ｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して測定した。
その結果、投与２１日後、ＰＢＳ投与対照群のマウスの血圧は、投与前と比較して有意な変化はなかったが、プラスミノーゲン投与群のマウスの収縮圧（図１Ａ）及び平均圧（図１Ｂ）は有意に低下し、いずれも溶媒ＰＢＳ投与対照群よりも有意に低く、しかもその差は統計的に有意であった（＊はＰ＜０．０５を表し、＊＊はＰ＜０．０１を表す）。これは、プラスミノーゲンが１５～１６週齢の糖尿病マウスの高血圧を有意に低下させることができることを示している。

実施例２は、プラスミノーゲンが２５～２６週齢の糖尿病マウスの高血圧を低下させることに関するものである。
２５～２６週齢のｄｂ／ｄｂオスマウス１３匹を取り、投与前日に体重測定後に基底血圧を測定し、血圧に応じてランダムに２つの群に分け、溶媒ＰＢＳ投与対照群で６匹、プラスミノーゲン投与群で７匹とした。ブプラスミノーゲン投与群マウスに２ｍｇ／０．２ｍｌ／匹／日でプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群マウスに同量のＰＢＳ溶液を尾静脈注射により投与し、２１日間連続投与した。投与し始めた日を１日目とし、０、８、１５、及び２２日目に血圧を測定し、マウス１匹あたり５回連続して測定し、測定ごとに収縮圧及び平均圧を記録した。収縮圧及び平均血圧はそれぞれ、５回の測定から得られた収縮圧及び平均圧データの平均値である。マウスの血圧は、非侵襲的血圧計（ＭＲＢＰ－Ｍ０１、ＩＩＴＣ Ｌｉｆｅ ｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して測定した。
その結果、投与２１日後、ＰＢＳ投与対照群のマウスの収縮圧は、投与前と比較して有意な変化はなかったが、プラスミノーゲン投与群のマウスの収縮圧は投与７日後に有意に低下し始め、溶媒ＰＢＳ投与対照群よりも有意に低く、しかもその差は統計的に有意であった（Ｐ＝０．０１９）。投与の１４、２１日後に、２つの群のマウスの間の差は有意であった（図２Ａ）。投与の２１日後に、プラスミノーゲン投与群のマウスの平均圧は溶媒ＰＢＳ投与対照群よりも低く、その差は有意に近かった（Ｐ＝０．０９）（図２Ｂ）。これは、プラスミノーゲンが２５～２６週齢の糖尿病マウスの高収縮圧を有意に低下させることができることを示している。

実施例３は、プラスミノーゲンが糖尿病高血圧モデルマウスの血清アンギオテンシンＩＩレベルを低下させることに関するものである。
１５～１６週齢のｄｂ／ｄｂオスマウス１２匹を取り、投与前日に体重測定後に基底血圧を測定し、血圧に応じてランダムに溶媒ＰＢＳ投与対照群とプラスミノーゲン投与群の２つの群に分け、各群で６匹とした。ブプラスミノーゲン投与群マウスに２ｍｇ／０．２ｍｌ／匹／日でプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群マウスに同量のＰＢＳ溶液を尾静脈注射により投与し、２８日間連続投与した。２９日目に眼球を摘出して採血し、遠心分離により上清を得た。血清アンギオテンシンＩＩレベルは、アンギオテンシンＩＩ検出キット（製造元：武漢華美生物工学有限公司、カタログ番号：ＣＳＢ－Ｅ０４４９５ｍ）の説明書に従って検出した。
その結果、プラスミノーゲンを２８日間投与した後、プラスミノーゲン投与群の血清アンギオテンシンＩＩレベルは、溶媒ＰＢＳ投与対照群よりも有意に低かった（図３）。これは、プラスミノーゲンが糖尿病高血圧モデルマウスの血清アンギオテンシンＩＩレベルを低下させ、それによって高血圧を改善できることを示している。

実施例４は、プラスミノーゲンが糖尿病高血圧モデルマウスの心臓損傷の修復を促進することに関するものである。
２５～２６週齢のｄｂ／ｄｂオスマウス１３匹を取り、投与前日に体重測定後に基底血圧を測定し、血圧に応じてランダムに２つの群に分け、溶媒ＰＢＳ投与対照群で６匹、プラスミノーゲン投与群で７匹とした。ブプラスミノーゲン投与群マウスに２ｍｇ／０．２ｍｌ／匹／日でプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群マウスに同量のＰＢＳ溶液を尾静脈注射により投与し、２８日間連続投与した。２９日目に、マウスを殺処分し、心臓を採取して４％パラホルムアルデヒド固定液で２４時間固定した。固定後の組織サンプルをアルコール勾配で脱水させ、キシレンで透徹化処理した後にパラフィンで包埋した。組織切片の厚みは４μｍであり、切片を脱パラフィンさせ再水和してから水に浸し、ヘマトキシリン及びエオジン染色（Ｈ＆Ｅ染色）をし、１％塩酸アルコールで分別した後、アンモニア水でブルーイングさせ、アルコール勾配で脱水させて封入させ、切片を光学顕微鏡下で２００倍にて観察した。
その結果、溶媒ＰＢＳ投与対照群（図４Ａ）と比較して、プラスミノーゲン投与群（図４Ｂ）のマウスの心筋細胞はより密集し、より規則的に配置されている。これは、プラスミノーゲンが糖尿病高血圧モデルマウスの心臓損傷を有意に改善できることを示している。

実施例５は、プラスミノーゲンが糖尿病高血圧モデルマウスの腎線維化を減少させることに関するものである。
２５～２６週齢のｄｂ／ｄｂオスマウス１３匹を取り、投与前日に体重測定後に基底血圧を測定し、血圧に応じてランダムに２つの群に分け、溶媒ＰＢＳ投与対照群で６匹、プラスミノーゲン投与群で７匹とした。ブプラスミノーゲン投与群マウスに２ｍｇ／０．２ｍｌ／匹／日でプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群マウスに同量のＰＢＳ溶液を尾静脈注射により投与し、２８日間連続投与した。２９日目に、マウスを殺処分し、腎臓を採取して４％パラホルムアルデヒド固定液で２４時間固定した。固定後の組織をアルコール勾配で脱水させ、キシレンで透徹化処理した後にパラフィンで包埋した。組織切片の厚みは３μｍであり、切片を脱パラフィンさせ再水和してから１回水で洗った。０．１％シリウスレッド飽和ピクリン酸で３０分間染色後、流水で２分間すすぎ、ヘマトキシリンで１分間染色してから流水ですすぎ、１％塩酸アルコールで分化させ、アンモニア水でブルーイングさせ、流水ですすぎ、乾燥した後に中性ゴムに封入させ、切片を光学顕微鏡下で２００倍にて観察した。
シリウスレッド染色は、コラーゲンを永久に染色することができる。病理切片の特殊な染色方法として、シリウスレッド染色は、コラーゲン組織を特異的に表示することができる。
その結果、プラスミノーゲン投与２８日後、プラスミノーゲン投与群（図５Ｂ）の腎臓におけるコラーゲン線維の沈着（矢印でマーク）は、溶媒ＰＢＳ投与対照群（図５Ａ）より有意に少なかった。これは、プラスミノーゲンが糖尿病高血圧モデルマウスの腎線維化を有意に減少させることができることを示している。

実施例６は、プラスミノーゲンがアンギオテンシンＩＩによって誘発された高血圧モデルマウスの血清ＳＯＤレベルを上昇させることに関するものである。
２１～２２週齢のＰｌｇ＋／＋オスマウス１４匹を取り、血圧及び体重を測定し、血圧及び体重に応じてマウスをランダムに３つの群に分け、ブランク対照群で４匹、溶媒ＰＢＳ投与対照群及びプラスミノーゲン投与群でそれぞれ５匹とした。ブランク対照群マウスに０．１ｍｌの生理食塩水を皮下注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群及びプラスミノーゲン投与群マウスに１ｍｇ／ｋｇ／匹／日でアンギオテンシンＩＩを皮下注射により投与し、１４日間連続注射してモデリングした^［２６］。モデリング開始と同時にプラスミノーゲンまたは溶媒の投与を開始し、ブプラスミノーゲン投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍｌ／匹／日でプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群マウスに同量のＰＢＳ溶液を尾静脈注射により投与し、１４日間連続投与した。ブランク対照群マウスには投与しなかった。モデリングして投与し始めた日を１日目とし、１５日目に眼球を摘出して採血し、血清スーパーオキシドジスムターゼ（Ｓｕｐｅｒ Ｏｘｉｄｅ Ｄｉｓｍｕｔａｓｅ、ＳＯＤ）レベルを検出するために、遠心分離により上清を得た。ＳＯＤの検出は、ＳＯＤ検出キット（南京建成生物工学研究所、カタログ番号Ａ００１－１）を用い、取扱説明書に記載の方法に従って行った。
ＳＯＤは体がフリーラジカルを除去するための重要な酵素システムであり、スーパーオキシドアニオン（ｏ２－）を除去することができる。ｏ２－は酸素フリーラジカルの開始フリーラジカルである。研究によると、ＳＯＤが高血圧に対する保護効果があり、高血圧患者のＳＯＤレベルは低下する^［２７］。
その結果、ブランク対照群の血清には一定レベルのＳＯＤがあり、溶媒ＰＢＳ投与対照群の血清ＳＯＤレベルは有意に低下し、プラスミノーゲン投与群の血清ＳＯＤレベルは溶媒ＰＢＳ投与対照群よりも有意に高く、しかもその差は統計学的に有意であった（＊はＰ＜０．０５を表す）（図６）。これは、プラスミノーゲンがフリーラジカルを除去する生体の能力を高めることができることを示している。

実施例７は、プラスミノーゲンがアンギオテンシンＩＩによって誘発された高血圧モデルマウスの腎線維化を減少させることに関するものである。
２１～２２週齢のＰｌｇ＋／＋オスマウス１４匹を取り、血圧及び体重を測定し、血圧及び体重に応じてマウスをランダムに３つの群に分け、ブランク対照群で４匹、溶媒ＰＢＳ投与対照群及びプラスミノーゲン投与群でそれぞれ５匹とした。ブランク対照群マウスに０．１ｍｌの生理食塩水を皮下注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群及びプラスミノーゲン投与群マウスに１ｍｇ／ｋｇ／匹／日でアンギオテンシンＩＩを皮下注射により投与し、１４日間連続注射してモデリングした^［２６］。モデリング開始と同時にプラスミノーゲンまたは溶媒の投与を開始し、ブプラスミノーゲン投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍｌ／匹／日でプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群マウスに同量のＰＢＳ溶液を尾静脈注射により投与し、１４日間連続投与した。ブランク対照群マウスには投与しなかった。モデリングして投与し始めた日を１日目とし、１５日目にマウスを殺処分し、腎臓を採取して４％パラホルムアルデヒド固定液で２４時間固定した。固定後の腎臓組織をアルコール勾配で脱水させ、キシレンで透徹化処理した後にパラフィンで包埋した。組織切片の厚みは３μｍであり、切片を脱パラフィンさせ再水和してから１回水で洗った。０．１％シリウスレッド飽和ピクリン酸で３０分間染色後、流水で２分間すすぎ、ヘマトキシリンで１分間染色してから流水ですすぎ、１％塩酸アルコールで分化させ、アンモニア水でブルーイングさせ、流水ですすぎ、乾燥した後に中性ゴムに封入させ、切片を光学顕微鏡下で２００倍にて観察した。
その結果、ブランク対照群（図７Ａ）のマウスの腎臓には明らかなコラーゲン線維の沈着はなく、プラスミノーゲン群（図７Ｃ）のコラーゲン線維の沈着（矢印でマーク）は、溶媒ＰＢＳ投与対照群（図７Ｂ）よりも有意に少なかった。これは、プラスミノーゲンがアンギオテンシンＩＩによって誘発された高血圧モデルマウスの腎線維化を有意に減少させ、高血圧による腎病変を改善できることを示している。

実施例８は、プラスミノーゲンがアンギオテンシンＩＩによって誘発された高血圧モデルマウスの心線維化を減少させることに関するものである。
２１～２２週齢のＰｌｇ^＋／＋オスマウス１４匹を取り、血圧及び体重を測定し、血圧及び体重に応じてマウスをランダムに３つの群に分け、ブランク対照群で４匹、溶媒ＰＢＳ投与対照群及びプラスミノーゲン投与群でそれぞれ５匹とした。ブランク対照群マウスに０．１ｍｌの生理食塩水を皮下注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群及びプラスミノーゲン投与群マウスに１ｍｇ／ｋｇ／匹／日でアンギオテンシンＩＩを皮下注射により投与し、１４日間連続注射してモデリングした^［２６］。モデリング開始と同時にプラスミノーゲンまたは溶媒の投与を開始し、ブプラスミノーゲン投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍｌ／匹／日でプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群マウスに同量のＰＢＳ溶液を尾静脈注射により投与し、１４日間連続投与した。ブランク対照群マウスには投与しなかった。モデリングして投与し始めた日を１日目とし、１５日目にマウスを殺処分し、心臓を採取して４％パラホルムアルデヒド固定液で２４時間固定した。固定後の心臓組織をアルコール勾配で脱水させ、キシレンで透徹化処理した後にパラフィンで包埋した。組織切片の厚みは３μｍであり、切片を脱パラフィンさせ再水和してから１回水で洗った。０．１％シリウスレッド飽和ピクリン酸で３０分間染色後、流水で２分間すすぎ、ヘマトキシリンで１分間染色してから流水ですすぎ、１％塩酸アルコールで分化させ、アンモニア水でブルーイングさせ、流水ですすぎ、乾燥した後に中性ゴムに封入させ、切片を光学顕微鏡下で２００倍にて観察した。
その結果、ブランク対照群（図８Ａ）のマウスの心臓には明らかなコラーゲン線維の沈着はなく、プラスミノーゲン群（図８Ｃ）のコラーゲン線維の沈着（矢印でマーク）は、溶媒ＰＢＳ投与対照群（図８Ｂ）よりも有意に少なかった。これは、プラスミノーゲンがアンギオテンシンＩＩによって誘発された高血圧モデルマウスの心線維化を有意に減少させ、高血圧による心臓病変を改善できることを示している。

実施例９は、プラスミノーゲンがモノクロタリンによって誘発された肺動脈性肺高血圧症モデルマウスの肺の線維化を減少させることに関するものである。
１２週齢のＣ５７オスマウス１２匹を取り、体重及び血圧を測定し、血圧に応じてマウスをランダムに２つの群に分け、ブランク対照群で４匹、モデル群で８匹とした。ブランク対照群マウスに１００μｌの生理食塩水を尾静脈注射により投与し、モデル群マウスに６０ｍｇ／ｋｇ／匹でモノクロタリンを尾静脈注射により投与し、３日間連続注射し、マウスには通常食を与えた^{［２８，２９］}。３日後に血圧を測定し、血圧に応じてモデル群マウスをランダムに２つの群に分け、溶媒ＰＢＳ投与対照群とプラスミノーゲン投与群でそれぞれ４匹とした。ブプラスミノーゲン投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍｌ／匹／日でプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群マウスに同量のＰＢＳ溶液を尾静脈注射により投与し、２８日間連続投与した。ブランク対照群マウスには投与しなかった。モデリングして投与し始めた日を１日目とし、２９日目にマウスを殺処分し、肺を採取して４％パラホルムアルデヒド固定液で２４時間固定した。固定後の肺組織をアルコール勾配で脱水させ、キシレンで透徹化処理した後にパラフィンで包埋した。組織切片の厚みは３μｍであり、切片を脱パラフィンさせ再水和してから１回水で洗った。０．１％シリウスレッド飽和ピクリン酸で３０分間染色後、流水で２分間すすぎ、ヘマトキシリンで１分間染色してから流水ですすぎ、１％塩酸アルコールで分化させ、アンモニア水でブルーイングさせ、流水ですすぎ、乾燥した後に中性ゴムに封入させ、切片を光学顕微鏡下で２００倍にて観察した。
モノクロタリンはビピロールアルカロイドであり、肝臓でＰ４５０モノオキシダーゼによって変換された後、血液循環を介して肺に到達し、肺血管に不可逆的な損傷を引き起こす可能性がある。肺血管内皮細胞はモノクロタリンの標的細胞であると考えられており、内皮細胞の損傷は肺血管リモデリングの過程で重要な役割を果たしている^{［２８，２９］}。
その結果、ブランク対照群のマウスの肺には基本的にコラーゲン沈着はなく（図９Ａ）、プラスミノーゲン群（図９Ｃ）のマウスの肺組織のコラーゲン沈着（矢印でマーク）は、溶媒ＰＢＳ投与対照群（図９Ｂ）よりも有意に少なかった。これは、プラスミノーゲンがモノクロタリンによって誘発された肺動脈性肺高血圧症モデルマウスの肺の線維化を有意に減少させることができることを示している。

実施例１０は、プラスミノーゲンがモノクロタリンによって誘発された肺動脈性肺高血圧症モデルマウスの心線維化を減少させることに関するものである。
１２週齢のＣ５７オスマウス１２匹を取り、体重及び血圧を測定し、血圧に応じてマウスをランダムに２つの群に分け、ブランク対照群で４匹、モデル群で８匹とした。ブランク対照群マウスに１００μｌの生理食塩水を尾静脈注射により投与し、モデル群マウスに６０ｍｇ／ｋｇ／匹でモノクロタリンを尾静脈注射により投与し、３日間連続注射し、マウスには通常食を与えた^{［２８，２９］}。３日後に血圧を測定し、血圧に応じてモデル群マウスをランダムに２つの群に分け、溶媒ＰＢＳ投与対照群とプラスミノーゲン投与群でそれぞれ４匹とした。ブプラスミノーゲン投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍｌ／匹／日でプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群マウスに同量のＰＢＳ溶液を尾静脈注射により投与し、２８日間連続投与した。ブランク対照群マウスには投与しなかった。モデリングして投与し始めた日を１日目とし、２９日目にマウスを殺処分し、心臓を採取して４％パラホルムアルデヒド固定液で２４時間固定した。固定後の心臓組織をアルコール勾配で脱水させ、キシレンで透徹化処理した後にパラフィンで包埋した。組織切片の厚みは３μｍであり、切片を脱パラフィンさせ再水和してから１回水で洗った。０．１％シリウスレッド飽和ピクリン酸で３０分間染色後、流水で２分間すすぎ、ヘマトキシリンで１分間染色してから流水ですすぎ、１％塩酸アルコールで分化させ、アンモニア水でブルーイングさせ、流水ですすぎ、乾燥した後に中性ゴムに封入させ、切片を光学顕微鏡下で２００倍にて観察した。
その結果、ブランク対照群のマウスの心臓には基本的にコラーゲン沈着はなく（図１０Ａ）、プラスミノーゲン群（図１０Ｃ）のマウスの心臓のコラーゲン沈着（矢印でマーク）は、溶媒ＰＢＳ投与対照群（図１０Ｂ）よりも有意に少なかった。これは、プラスミノーゲンがモノクロタリンによって誘発された肺動脈性肺高血圧症モデルマウスの心臓の線維化を有意に減少させることができることを示している。

実施例１１は、プラスミノーゲンがモノクロタリンによって誘発された肺動脈性肺高血圧症モデルマウスの腎臓の線維化を減少させることに関するものである。
１２週齢のＣ５７オスマウス１２匹を取り、体重及び血圧を測定し、血圧に応じてマウスをランダムに２つの群に分け、ブランク対照群で４匹、モデル群で８匹とした。ブランク対照群マウスに１００μｌの生理食塩水を尾静脈注射により投与し、モデル群マウスに６０ｍｇ／ｋｇ／匹でモノクロタリンを尾静脈注射により投与し、３日間連続注射し、マウスには通常食を与えた^{［２８，２９］}。３日後に血圧を測定し、血圧に応じてモデル群マウスをランダムに２つの群に分け、溶媒ＰＢＳ投与対照群とプラスミノーゲン投与群でそれぞれ４匹とした。ブプラスミノーゲン投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍｌ／匹／日でプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群マウスに同量のＰＢＳ溶液を尾静脈注射により投与し、２８日間連続投与した。ブランク対照群マウスには投与しなかった。モデリングして投与し始めた日を１日目とし、２９日目にマウスを殺処分し、腎臓を採取して４％パラホルムアルデヒド溶液で２４時間固定した。固定後の腎臓組織をアルコール勾配で脱水させ、キシレンで透徹化処理した後にパラフィンで包埋した。組織切片の厚みは３μｍであり、切片を脱パラフィンさせ再水和してから１回水で洗った。０．１％シリウスレッド飽和ピクリン酸で３０分間染色後、流水で２分間すすぎ、ヘマトキシリンで１分間染色してから流水ですすぎ、１％塩酸アルコールで分化させ、アンモニア水でブルーイングさせ、流水ですすぎ、乾燥した後に中性ゴムに封入させ、切片を光学顕微鏡下で２００倍にて観察した。
その結果、ブランク対照群のマウスの腎臓には基本的にコラーゲン沈着はなく（図１１Ａ）、プラスミノーゲン群（図１１Ｃ）のマウスの腎臓のコラーゲン沈着（矢印でマーク）は、溶媒ＰＢＳ投与対照群（図１１Ｂ）よりも有意に少なかった。これは、プラスミノーゲンがモノクロタリンによって誘発された肺動脈性肺高血圧症モデルマウスの腎臓の線維化を有意に減少させることができることを示している。

実施例１２は、プラスミノーゲンがモノクロタリンによって誘発された肺動脈性肺高血圧症モデルマウスの肝臓の線維化を減少させることに関するものである。
１２週齢のＣ５７オスマウス１２匹を取り、体重及び血圧を測定し、血圧に応じてマウスをランダムに２つの群に分け、ブランク対照群で４匹、モデル群で８匹とした。ブランク対照群マウスに１００μｌの生理食塩水を尾静脈注射により投与し、モデル群マウスに６０ｍｇ／ｋｇ／匹でモノクロタリンを尾静脈注射により投与し、３日間連続注射し、マウスには通常食を与えた^{［２８，２９］}。３日後に血圧を測定し、血圧に応じてモデル群マウスをランダムに２つの群に分け、溶媒ＰＢＳ投与対照群とプラスミノーゲン投与群でそれぞれ４匹とした。ブプラスミノーゲン投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍｌ／匹／日でプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群マウスに同量のＰＢＳ溶液を尾静脈注射により投与し、２８日間連続投与した。ブランク対照群マウスには投与しなかった。モデリングして投与し始めた日を１日目とし、２９日目にマウスを殺処分し、肝臓を採取して４％パラホルムアルデヒド固定液で２４時間固定した。固定後の肝臓組織をアルコール勾配で脱水させ、キシレンで透徹化処理した後にパラフィンで包埋した。組織切片の厚みは３μｍであり、切片を脱パラフィンさせ再水和してから１回水で洗った。０．１％シリウスレッド飽和ピクリン酸で３０分間染色後、流水で２分間すすぎ、ヘマトキシリンで１分間染色してから流水ですすぎ、１％塩酸アルコールで分化させ、アンモニア水でブルーイングさせ、流水ですすぎ、乾燥した後に中性ゴムに封入させ、切片を光学顕微鏡下で２００倍にて観察した。
その結果、ブランク対照群のマウスの肝臓には基本的にコラーゲン沈着はなく（図１２Ａ）、プラスミノーゲン群（図１２Ｃ）のマウスの肝臓のコラーゲン沈着（矢印でマーク）は、溶媒ＰＢＳ投与対照群（図１２Ｂ）よりも有意に少なかった。これは、プラスミノーゲンがモノクロタリンによって誘発された肺動脈性肺高血圧症モデルマウスの肝臓の線維化を有意に減少させることができることを示している。

実施例１３は、プラスミノーゲンが虚血性腎萎縮のマウスの血圧の上昇を促進することに関するものである。
６～７週齢のＣ５７オスマウス１８匹を取り、ランダムに２つの群に分け、ブランク対照群で４匹、モデル群で１４匹とした。ブランク対照群マウスには何ら処理もしなかった。３％ペントバルビタールナトリウム（５０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射によりモデル群マウスを麻酔し、皮膚、筋膜、及び筋肉層を外科的方法で腹部の正中線で切開し、腸、膵臓などの臓器組織を開き、手術野を露出させ、左腎臓の腎盂の大動脈と主静脈を鈍的に分離し、分離した血管を５号絹糸で結紮し、結紮が完了したことを確認した後、腸や膵臓などの臓器組織を対応する生理学的位置に戻し、筋肉層を外科的方法で連続的に縫合し、皮膚を結節縫合し、縫合後、傷を医療用ヨードホールで消毒し、動物を３７℃の加熱パッドの上に置き、観察して蘇るのを待ち、動物が完全に蘇るまで水を与えなかった。抗生物質（５０００Ｕ／匹）を筋肉内注射し、鎮痛剤（２ｍｇ／ｋｇ）を皮下注射し、３日間連続して注射した。外科的結紮の１４日後、モデル群のマウスを３％ペントバルビタールナトリウムの腹腔内注射により麻酔し、開腹し、左腎血管の結紮線を緩め、腹腔を迅速に縫合し、傷を医療用ヨードホールで消毒し、動物を３７℃の加熱パッドの上に置き、観察して蘇るのを待ち、動物が完全に蘇るまで水を与えなかった。抗生物質（５０００Ｕ／匹）を筋肉内注射し、鎮痛剤（２ｍｇ／ｋｇ）を皮下注射し、３日間連続して注射した^［３０］。抜糸後、全てのマウスの体重を測定し、モデル群のマウスをプラスミノーゲン投与群とＰＢＳ対照群の２つの群にランダムに分け、各群で７匹とし、投与を開始した。投与し始めた日を１日目とし、ブプラスミノーゲン投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍｌ／匹／日でプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群マウスに同量のＰＢＳ溶液を尾静脈注射により投与し、１４日間連続投与した。１５日目に非侵襲的血圧計（ＭＲＢＰ－Ｍ０１、ＩＩＴＣ Ｌｉｆｅ ｓｃｉｅｎｃｅ）を用いてマウスの血圧（収縮圧と平均圧）を測定した。
その結果、プラスミノーゲン投与群及びブランク対照群の収縮圧及び平均圧は、ＰＢＳ対照群の血圧よりも有意に高く、プラスミノーゲン投与群とＰＢＳ対照群との間の差は統計的に有意であった（＊はＰ＜０．０５を表す）（図１３）。これは、プラスミノーゲンが腎萎縮による低血圧の正常レベルへの回復を促進できることを示している。

実施例１４は、プラスミノーゲンがアンギオテンシンＩＩによって誘発された高血圧モデルマウスの血圧を下げることに関するものである。
８～９週齢のＣ５７オスマウス２１匹を取り、ブランク対照群、溶媒群及び投与群の３つの群にランダムに分け、各群で７匹とした。ブランク対照群のマウスには何ら処理もしなかった。投与群と溶媒群のマウスに１ｍｇ／ｋｇ／匹で０．２５ｍｇ／ｍｌのアンギオテンシンＩＩ溶液を皮下注射し、８時間の間隔で１日２回、６日間連続してモデリングした^［３１］。アンギオテンシンＩＩの初回注射から２時間モデリング後、投与群及び溶媒群に投与を始め、それを１日目とし、投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍｌ／匹／日でプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒群マウスに同量のＰＢＳ溶液を尾静脈注射により投与し、５日間連続投与し、ブランク対照群には投与しなかった。６日目に全てのマウスの血圧を測定し、マウス１匹あたり５回連続して測定し、測定ごとに収縮圧及び平均圧を記録した。収縮圧及び平均血圧はそれぞれ、５回の測定から得られた収縮圧及び平均圧データの平均値である。マウスの血圧は、非侵襲的血圧計（ＭＲＢＰ－Ｍ０１、ＩＩＴＣ Ｌｉｆｅ ｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して測定した。
その結果、溶媒群のマウスの平均圧及び収縮圧は有意に上昇し、投与群のマウスの平均圧及び収縮圧は溶媒群のマウスよりも有意に低く、しかもその差は統計的に有意であった（＊はＰ＜０．０５を表し、＊＊はＰ＜０．０１を表す）（図１４）。これは、プラスミノーゲンが高血圧モデルマウスの血圧を下げることができることを示している。

実施例１５は、プラスミノーゲンが糖尿病性高血圧モデルマウスのアンギオテンシン変換酵素２のレベルを増加させることに関するものである。
２４～２５週齢のｄｂ／ｄｂオスマウス１２匹を取り、投与前日に体重測定後に基底血圧を測定し、血圧に応じてランダムに溶媒群と投与群の２つの群に分け、各群で６匹とした。投与群マウスに２ｍｇ／０．２ｍｌ／匹／日でプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒群マウスに同量のＰＢＳ溶液を尾静脈注射により投与し、２８日間連続投与した。２９日目に眼球を摘出して採血し、遠心分離により上清を得た。血清ＡＣＥ２レベルは、アンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）検出キット（製造元：武漢華美生物工学有限公司、カタログ番号：ＣＳＢ－Ｅ１７２０４ｍ）の説明書に従って検出した。
アンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）は、レニン－アンギオテンシン系の重要な負の調節因子であり、体内のアンギオテンシンＩＩ（ＡｎｇＩＩ）の分解の主な経路である。ＡＣＥ２の作用下で、ＡｎｇＩＩはＡｎｇｌ－７に変換される。また、ＡＣＥ２はＡｎｇＩのＡｎｇ（１－９）への分解を触媒することもでき、後者はＡＣＥによってＡｎｇｌ－７に変換される。ＡｎｇＩＩに対するＡＣＥ２の親和性はＡｎｇＩの４００倍であり、ＡＣＥ２の主な機能はＡｎｇＩＩからＡｎｇ（１－７）への変換を触媒することである。ＡＣＥ２の生理的役割は、高血圧、心機能、心機能、及び糖尿病に関連しており、重症急性呼吸器症候群コロナウイルスの受容体としての役割も果たしている^［３２］。
その結果、投与群のマウスの血清ＡＣＥ２レベルは溶媒群よりも有意に高く、しかもその統計学的差は有意に近かった（Ｐ＝０．０５７）（図１５）。これは、プラスミノーゲンが糖尿病高血圧モデルマウスの血清ＡＣＥ２レベルの上昇を促進できることを示している。

実施例１６は、プラスミノーゲンがアンギオテンシンＩＩによって誘発された高血圧モデルマウスの血清ＡＣＥ２レベルを低下させることに関するものである。
８～９週齢のＣ５７オスマウス２１匹を取り、ブランク対照群、溶媒群、及び投与群の３つの群にランダムに分け、各群で７匹とした。群分けが完了した後、投与群及び溶媒群のマウスに１ｍｇ／ｋｇ／匹で０．２５ｍｇ／ｍｌのアンギオテンシンＩＩ溶液を皮下注射し、８時間の間隔で１日２回、７日間連続してモデリングした。アンギオテンシンＩＩ溶液の調製：まずアンギオテンシンＩＩ粉末（カタログ番号：Ａ９２９２－１０ｍｇ、製造元：Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｓｏｌａｒｂｉｏ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）を１ｍｌの脱イオン水に溶解し、１０ｍｇ／ｍｌの溶液を調製し、凍結融解を繰り返さないように分注して包装し、使用時に４０倍希釈して０．２５ｍｇ／ｍｌに調製して使用し、原液は－２０℃で保存した。初回注射から２時間モデリング後、投与群及び溶媒群に投与を始め、それを１日目とし、投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍｌ／匹／日でプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒群マウスに同量の溶媒を尾静脈注射により投与し、７日間連続投与し、ブランク対照群には投与しなかった。８日目に眼球を摘出して採血し、遠心分離により上清を得た。血清ＡＣＥ２レベルは、アンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）検出キット（製造元：上海希美化学有限公司、カタログ番号：ＣＳＢ－Ｅ１７２０４ｍ）の説明書に従って検出した。
その結果、ブランク対照群マウスの血液には一定レベルのＡＣＥ２があり、溶媒群マウスの血液中のＡＣＥ２レベルはブランク対照群マウスよりも有意に高く、投与群マウスの血液中のＡＣＥ２レベルは溶媒群マウスよりも有意に低く、しかもその差は統計的に極めて有意であった（＊＊はＰ＜０．０１を表す）（図１６）。これは、プラスミノーゲンがアンギオテンシンＩＩによって誘発された高血圧モデルマウスの血清ＡＣＥ２レベルの低下を促進できることを示している。

実施例１７は、プラスミノーゲンがアンギオテンシンＩＩによって誘発された高血圧モデルマウスの血清ＡＣＥレベルを低下させることに関するものである。
８～９週齢のＣ５７オスマウス２１匹を取り、ブランク対照群、溶媒群、及び投与群の３つの群にランダムに分け、各群で７匹とした。群分けが完了した後、投与群及び溶媒群のマウスに１ｍｇ／ｋｇ／匹で０．２５ｍｇ／ｍｌのアンギオテンシンＩＩ溶液を皮下注射し、８時間の間隔で１日２回、７日間連続してモデリングした。アンギオテンシンＩＩ溶液の調製：まずアンギオテンシンＩＩ粉末（カタログ番号：Ａ９２９２－１０ｍｇ、製造元：Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｓｏｌａｒｂｉｏ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）を１ｍｌの脱イオン水に溶解し、１０ｍｇ／ｍｌの溶液を調製し、凍結融解を繰り返さないように分注して包装し、使用時に４０倍希釈して０．２５ｍｇ／ｍｌに調製して使用し、原液は－２０℃で保存した。初回注射から２時間モデリング後、投与群及び溶媒群に投与を始め、それを１日目とし、投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍｌ／匹／日でプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒群マウスに同量の溶媒を尾静脈注射により投与し、７日間連続投与し、ブランク対照群には投与しなかった。８日目に眼球を摘出して採血し、遠心分離により上清を得た。血清ＡＣＥレベルは、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）検出キット（製造元：武漢華美生物工学有限公司、カタログ番号：ＣＳＢ－Ｅ０４４９２ｍ）の説明書に従って検出した。
アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）は、レニン－アンギオテンシン系の重要な酵素であり、ＡｎｇＩＩの産生において重要な役割を果たしている^［３２］。
その結果、ブランク対照群マウスの血液には一定レベルのＡＣＥがあり、溶媒群マウスの血液中のＡＣＥレベルはブランク対照群マウスよりも有意に高く、投与群マウスの血液中のＡＣＥレベルは溶媒群マウスよりも有意に低く、しかもその統計学的差は有意に近かった（Ｐ＝０．０５１）（図１７）。これは、プラスミノーゲンがＡｎｇＩＩによって誘発された高血圧モデルマウスの血清ＡＣＥレベルの低下を促進できることを示している。

実施例１８は、プラスミノーゲンが臨床ボランティアに対する治療効果に関するものである。
以下は臨床ボランティアのデータであり、すべての患者は自発的に薬を服用するためのインフォームドコンセントフォームに署名し、病院倫理委員会の承認を得た。以下に使用したプラスミノーゲンは、生理食塩水で５または１０ｍｇ／ｍｌの濃度に希釈したものを使用した。吸入投与の場合、プラスミノーゲン溶液を噴霧器で霧化（エアロゾル化）してから使用した。

ケース１
患者は７２歳の女性であり、３０年以上の高血圧歴があり、収縮圧は１６０ｍｍＨｇ、時々１８０ｍｍＨｇであり、降圧薬の服用後、血圧を１３０／８０ｍｍＨｇ程度に制御した。患者は、ヒトプラスミノーゲンの静脈内注射を１日１回受け、開始用量は５０ｍｇ／回であり、徐々に１３５ｍｇ／回まで増加した。患者の収縮圧は、投与後６日目に１４１ｍｍＨｇまで低下し、１１日目までに血圧が変動して不安定（正常と異常の交互）になり、１２日目以降は血圧が下がり、一週間内で正常で安定していた。患者は、上記の静脈内プラスミノーゲン療法を受けている間、降圧薬を服用していなかった。投与期間中の患者の血圧を図１８に示す。これは、プラスミノーゲンが高血圧患者の血圧を下げ、正常レベルに近づけることができることを示している。

ケース２
患者は７９歳の女性であり、２０年以上冠状動脈性心疾患を患っており、２０１４年に脳梗塞を発症した。２３年の糖尿病歴があり、長期インスリン注射を受けていた。５年間高血圧と診断され、降圧薬の服用後、血圧は朝に１３０～１５０／５０～６０ｍｍＨｇであり、午後に約１５０／６０ｍｍＨｇであった。ヒトプラスミノーゲンを１日１回、１００ｍｇ／回で静脈内注射により患者に投与した。
患者の血圧は投与後１３日目に１３５／５４ｍｍＨｇであり、その後は降圧薬をなしで血圧も正常レベルで安定した。投与期間中の患者の血圧を図１９に示す。

ケース３
患者は７６歳の女性であり、２０年の糖尿病歴があり、高血圧歴が１０年であり、血圧は最高１６８／７０ｍｍＨｇであった。経口でニフェジピン徐放性錠剤を投与した後、血圧を１１４／５５ｍｍＨｇ程度に制御し、拡張圧は正常値よりも低かった。ヒトプラスミノーゲンを１日１～２回、１日３５～７５ｍｇの用量で静脈内注射により患者に投与した。
投与後、拡張圧は、以前の６０ｍｍＨｇ未満から正常値に達し、治療中の血圧は正常で安定しており、治療後、降圧薬は半減し、血圧は基本的に１３０～１４０／６４～７６ｍｍＨｇに制御された。投与期間中の患者の血圧を図２０に示す。
プラスミノーゲンは、高血圧患者の血圧を正常に戻すことを促進し、降圧薬の投与量を減らすことができる。

ケース４
患者は５７歳の男性であり、再検査のために入院し、腹部大動脈が肥厚していることが発見され、大動脈解離と診断された。病院は手術を勧めた。心臓病の家族歴があり、高血圧歴は１０年以上であった。患者は造影剤にアレルギーがあり、湿疹と蕁麻疹があった。朝晩は血圧が高く、収縮圧の最高値は２００ｍｍＨｇに達し、血圧差は大きく、８０ｍｍＨｇ以上に達することもあった。睡眠不足、眠りにつくのが遅く、夜中に３～４回目が覚め、睡眠に影響を与えた。
ヒトプラスミノーゲンを１日１～２回、５０～１５０ｍｇ／日の用量で静脈内注射により患者に投与した。
投与５日目以降、朝晩の血圧が下がり始め、血圧差が小さくなった。患者は、以前降圧薬を服用しても血圧が１４０／７５ｍｍＨｇ以下に下がったこともなかったが、初めて改善したと報告した。投薬の６日目から朝晩の血圧は約１３６／７３ｍｍＨｇを維持していた。
投薬の７日目から朝晩の血圧は安定しており、血圧は約１３０／７０ｍｍＨｇであった。投与期間中の患者の血圧を図２１に示す。
また、当薬５日目には、患者の睡眠は有意に改善され、夜中に目が覚めることはなかった。湿疹や蕁麻疹の症状も有意に改善した。それ以来、患者の症状は改善し続けている。

ケース５
患者は７８歳であり、新型コロナウイルス肺炎の重症と診断され、入院治療期間中に血圧が１５０／７８ｍｍＨｇに上昇したことが判明し、高血圧の既往歴はないため、医師の診察を受けなかった。ヒトプラスミノーゲンを１日２回、１０ｍｇ／回のエアロゾル吸入によって患者に投与した。血圧は１日後正常に戻った。治療期間中の患者の血圧を表１及び表２に示す。
これは、プラスミノーゲンが新型コロナウイルス肺炎の重症患者の高血圧の正常への回復を促進できることを示している。
表１ 新型コロナウイルス肺炎重症患者の投薬初日の血圧測定結果

表２ 新型コロナウイルス肺炎重症患者の投薬２日目の血圧測定結果

ケース６
患者は新型コロナウイルス肺炎の重症と診断され、関連する臨床症状に加えて、血圧が１３９／９４ｍｍＨｇであり、拡張圧が正常値より高かった。プラスミノーゲンを１日２回、毎回１０ｍｇのエアロゾル吸入によって患者に投与した。拡張圧は、１回の治療で正常に戻った。治療期間中の患者の血圧を表３に示す。
プラスミノーゲンは、新型コロナウイルス肺炎の重症患者の高血圧の正常への回復を促進できる。
表３ 新型コロナウイルス肺炎重症患者の投薬中の血圧測定結果

ケース７
患者は６７歳の女性であり、寝たきり、気管切開のせいで発声不能であり、糖尿病、心疾患、高血圧歴、及びアレルギー歴はなく、パーキンソン病を６年患っており、歩行不能４年、寝たきり３年、カテーテル留置１年半、患者は自力で寝返りができず、手足を自分で動かすことができ、毎日低流量で酸素を継続的に吸入していた。血圧は８０／４５ｍｍＨｇであった。低血圧及びパーキンソン病と診断された。プラスミノーゲンを１日１回、５０～２５０ｍｇ／日の用量で静脈内注射によって患者に投与し、初回投与量は５０ｍｇ／日であり、徐々に増量した。７日間連続投与し、９、１１、１３日目に投与を継続し、８、１０、１２日目に投与を中止して観察した。
治療効果：
血圧は投与後に上昇傾向を示し、投薬３日目に初めて正常血圧が現れた。血圧は投薬９日目以降に正常に保たれ、投薬中止後、血圧は９５／７０ｍｍＨｇを維持していた。治療期間中の患者の血圧の測定結果を図２２に示す。
これは、プラスミノーゲンが低血圧患者の血圧回復を促進できることを示している。

ケース８
患者は５０歳の女性であり、長年低血圧であり、平日は血圧が８０／６０ｍｍＨｇと低く、朝起きた時にめまいが時々あった。低血圧と診断された。治療方法：静脈内注射、１日１回、投与量は１００ｍｇであった。
治療結果：
投薬後、患者の血圧は投薬の翌日に正常に戻り、１週間後に約１１０／７０ｍｍＨｇに達した。治療期間中の患者の血圧の測定結果を図２３に示す。これは、プラスミノーゲンが低血圧患者の血圧回復を促進できることを示している。

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配列表
配列１：
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配列２：
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配列３：
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配列４：
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配列５：
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配列６：
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配列７：
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配列８：
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配列９：
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配列１０：
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配列１１：
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配列１２：
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配列１３：
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配列１４：
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Claims (18)

1. プラスミノーゲン活性化経路の成分、プラスミノーゲンを直接活性化し得るか、またはプラスミノーゲン活性化経路の上流成分を活性化することによって間接的にプラスミノーゲンを活性化し得る化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミンの活性を模倣する化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミノーゲン活性化剤の発現をアップレギュレートすることができる化合物、プラスミノーゲン類縁体、プラスミン類縁体、ｔＰＡまたはｕＰＡ類縁体及び線維素溶解阻害剤の拮抗剤から選択される１つ以上の有効量の化合物を血圧異常な被験者に投与することを含む、血圧異常の双方向治療方法であって、前記血圧異常が高血圧または低血圧であり、前記化合物が、高血圧または低血圧に罹患している被験者の血圧を正常化するか、正常に近くするか、または正常に戻らせる、前記方法。
2. 前記プラスミノーゲン活性化経路の成分が、プラスミノーゲン、組換えヒトプラスミノーゲン、Ｌｙｓ－プラスミノーゲン、Ｇｌｕ－プラスミノーゲン、プラスミン、プラスミノーゲンとプラスミンの１つ以上のｋｒｉｎｇｌｅドメイン及びプロテアーゼドメインを含むプラスミノーゲン及びプラスミン変異体並びに類縁体、ミニプラスミノーゲン（ｍｉｎｉ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）、ミニプラスミン（ｍｉｎｉ－ｐｌａｓｍｉｎ）、マイクロプラスミノーゲン（ｍｉｃｒｏ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）、マイクロプラスミン（ｍｉｃｒｏ－ｐｌａｓｍｉｎ）、ｄｅｌｔａ－プラスミノーゲン、ｄｅｌｔａ－プラスミン（ｄｅｌｔａ－ｐｌａｓｍｉｎ）、プラスミノーゲン活性化剤、ｔＰＡ、及びｕＰＡから選択されるものである、請求項１に記載の方法。
3. 前記線維素溶解阻害剤の拮抗剤が、ＰＡＩ－１、補体Ｃ１阻害剤、α２抗プラスミンまたはα２マクログロブリンの拮抗剤、例えば、抗体である、請求項１に記載の方法。
4. 前記化合物が、血圧異常によって引き起こされる組織及び器官の損傷または合併症をさらに緩和する、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
5. 前記血圧異常によって引き起こされる合併症が、高血圧によって引き起こされる合併症であり、前記合併症が、不整脈、心不全、冠状動脈性心疾患、脳出血、脳血栓症、脳梗塞、高血圧性腎症、腎不全、尿毒症、肝硬変、肺高血圧症、肺線維症、及び微小血栓症から選択される１つ以上である、請求項４に記載の方法。
6. 前記血圧異常によって引き起こされる合併症が、低血圧によって引き起こされる合併症であり、前記合併症が、心臓供血不足、狭心症、ショック、脳供血不足、失神、脳梗塞、腎供血不足、乏尿、タンパク尿及び腎機能不全から選択される１つ以上である、請求項４に記載の方法。
7. 前記化合物が、高血圧症の被験者の血圧を下げる効果、高血圧症の被験者の血清アンギオテンシンＩＩレベルを下げる効果、被験者のＡＣＥまたはＡＣＥ２のレベルを調節する効果、高血圧症の被験者の血圧を正常レベルに戻すことを促進する効果、低血圧症の被験者の血圧を上昇させる効果、低血圧症の被験者の血圧を正常なレベルに戻すことを促進する効果、異常な血圧によって引き起こされる組織及び器官の損傷を軽減する効果、損傷した組織及び器官の修復を促進する効果、組織及び器官の繊維化を軽減する効果、及びフリーラジカルの除去を促進する効果から選択される１つ以上の効果を有する、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
8. 前記損傷した組織及び器官の修復を促進することが、損傷した心臓組織、脳組織、肺組織、腎臓組織もしくは肝臓組織の構造または機能の回復を促進することである、請求項７に記載の方法。
9. 前記組織及び器官の繊維化を軽減することが、心臓組織、肺組織、腎臓組織または肝臓組織の線維化を減少させることである、請求項７または８に記載の方法。
10. 前記化合物がＳＯＤ産生を促進することによってフリーラジカルを除去する、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
11. 前記化合物がプラスミノーゲンである、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
12. 前記プラスミノーゲンが、配列２と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有し、且つプラスミノーゲンのタンパク質加水分解活性またはリジン結合活性を有する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
13. 前記プラスミノーゲンが、配列１４に示されるプラスミノーゲン活性フラグメントを含み、プラスミノーゲンのタンパク質加水分解活性を有する、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
14. 前記プラスミノーゲンがＧｌｕ－プラスミノーゲン、Ｌｙｓ－プラスミノーゲン、ミニプラスミノーゲン、マイクロプラスミノーゲン、ｄｅｌｔａ－プラスミノーゲンまたはそれらの、プラスミノーゲンタンパク質加水分解活性を保持した変異体から選択されるものである、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
15. 前記プラスミノーゲンが、天然もしくは合成のヒトプラスミノーゲン、またはそのプラスミノーゲンのタンパク質加水分解活性もしくはリジン結合活性を保持した変異体もしくはフラグメントである、請求項１～１４のいずれか１項に記載の方法。
16. 前記化合物が、１つまたは複数の他の治療方法または薬剤と組み合わせて使用する、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。
17. 前記他の薬剤が、血圧異常症の被験者における血圧異常症以外の他の疾患を治療するための薬剤である、請求項１６に記載の方法。
18. 前記化合物が、鼻吸入、エアロゾル吸入、点鼻薬、点耳薬または点眼薬によって投与され、静脈内、腹腔内、皮下、頭蓋内、髄腔内、動脈内、直腸内及び／または筋肉内によって投与される、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
    
    
    

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