KR20220143913A

KR20220143913A - 혈압 이상 병증의 예방 및 치료 방법과 약물

Info

Publication number: KR20220143913A
Application number: KR1020227032536A
Authority: KR
Inventors: 지난 리
Original assignee: 탈렌젠 인터내셔널 리미티드
Priority date: 2020-02-26
Filing date: 2021-02-26
Publication date: 2022-10-25
Also published as: JP2023514819A; US20230139956A1; WO2021170099A1; CA3169325A1; CN115551534A; EP4112069A1; TW202140067A; EP4112069A4

Abstract

본 발명은 피험자에게 유효량의 플라스미노겐의 활성화 경로 성분을 투여하는 단계를 포함하는 혈압 이상 병증의 치료 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 혈압 이상 병증의 치료 약물과 제품 및 이의 용도에 관한 것이다.

Description

혈압 이상 병증의 예방 및 치료 방법과 약물

본 발명은 혈압 이상 병증 및 이의 합병증의 치료 방법 및 약물에 관한 것이다.

고혈압은 전세계적으로 발병률이 높은 질환 중 하나이며, 중국에서는 해마다 발병률이 증가하고 있다. 고혈압은 심장, 뇌, 신장과 같은 내부 장기의 합병증을 유발하여 장애 및 사망을 초래한다. 고혈압의 해로운 점은 가장 흔한 합병증인 뇌졸중과 같은 심장, 뇌, 신장과 같은 여러 기관 및 시스템의 병변을 초래하는 데 있다. 다음, 고혈압은 심근비대, 관상동맥경화, 부정맥 및 심부전 등을 비롯한 관련 심장 손상을 유발한다. 고혈압은 또한 종종 신장 손상 및 말초 혈관 병변을 동반한다. 고혈압은 중기 및 말기로 진행되면 망막 병증이 발생할 수 있다. 당뇨병도 고혈압의 흔한 합병증 중 하나이다. 고혈압의 예방 및 치료에 대한 연구는 전세계 학자들로부터 점점 더 많을 관심을 받고 있으며, 동시에 고혈압의 합병증의 효과적인 예방 및 치료는 환자의 이환율과 사망률을 크게 줄일 수 있다.

본 발명은 플라스미노겐이 고혈압을 현저히 감소시키는 동시에 고혈압으로 인한 조직 및 기관 손상, 섬유화 및 기능 장애를 개선할 수 있고, 고혈압 및 이의 관련 병증, 합병증의 예방 및 치료를 위해 새로운 길을 개척할 수 있음을 발견하였다.

본 발명은 혈압 이상 병증(고혈압 병증 및 저혈압 병증 포함)을 위한 플라스미노겐의 예방 및 치료 방법, 용도 및 약물에 관한 것이다. 본 발명은 연구를 통해 플라스미노겐 활성화 경로의 성분, 예를 들어 플라스미노겐이 고혈압 병증 또는 저혈압 병증을 앓고 있는 환자의 혈압을 정상으로 회복하도록 촉진하는 동시에 혈압 이상(예를 들어 고혈압 또는 저혈압)으로 인한 조직 및 기관, 예를 들어 심장, 폐, 신장 및 간의 조직 구조 손상 및 기능 손상을 경감 및 완화시킬수 있음을 증명하였다.

구체적으로, 본 발명은 하기와 같은 각 항에 관한 것이다.

1. 일 양태에서, 고혈압 병증의 예방 또는 치료 방법은, 유효량의 플라스미노겐 활성화 경로의 성분, 플라스미노겐을 직접적으로 활성화하거나 또는 플라스미노겐 활성화 경로의 업스트림 성분을 활성화하여 플라스미노겐을 간접적으로 활성화할 수 있는 화합물, 플라스미노겐 또는 플라스민의 활성을 모방하는 화합물, 플라스미노겐 또는 플라스미노겐 활성제의 발현을 상향 조절할 수 있는 화합물, 플라스미노겐 유사체, 플라스민 유사체, tPA 또는 uPA 유사체 및 피브린 용해 억제제의 길항제로부터 선택되는 하나 이상의 화합물을 고혈압 병증을 앓고 있는 피험자에게 투여하는 단계를 포함한다.

일 양태에서, 본 발명은 또한 플라스미노겐 활성화 경로의 성분, 플라스미노겐을 직접적으로 활성화하거나 또는 플라스미노겐 활성화 경로의 업스트림 성분을 활성화하여 플라스미노겐을 간접적으로 활성화할 수 있는 화합물, 플라스미노겐 또는 플라스민의 활성을 모방하는 화합물, 플라스미노겐 또는 플라스미노겐 활성제의 발현을 상향 조절할 수 있는 화합물, 플라스미노겐 유사체, 플라스민 유사체, tPA 또는 uPA 유사체 및 피브린 용해 억제제의 길항제로부터 선택되는 화합물의 고혈압 병증의 예방 또는 치료를 위한 약물의 제조에서의 용도에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 또한 플라스미노겐 활성화 경로의 성분, 플라스미노겐을 직접적으로 활성화하거나 또는 플라스미노겐 활성화 경로의 업스트림 성분을 활성화하여 플라스미노겐을 간접적으로 활성화할 수 있는 화합물, 플라스미노겐 또는 플라스민의 활성을 모방하는 화합물, 플라스미노겐 또는 플라스미노겐 활성제의 발현을 상향 조절할 수 있는 화합물, 플라스미노겐 유사체, 플라스민 유사체, tPA 또는 uPA 유사체 및 피브린 용해 억제제의 길항제로부터 선택되는 하나 이상의 화합물을 포함하는 고혈압 병증의 예방 또는 치료를 위한 약물에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 또한 플라스미노겐 활성화 경로의 성분, 플라스미노겐을 직접적으로 활성화하거나 또는 플라스미노겐 활성화 경로의 업스트림 성분을 활성화하여 플라스미노겐을 간접적으로 활성화할 수 있는 화합물, 플라스미노겐 또는 플라스민의 활성을 모방하는 화합물, 플라스미노겐 또는 플라스미노겐 활성제의 발현을 상향 조절할 수 있는 화합물, 플라스미노겐 유사체, 플라스민 유사체, tPA 또는 uPA 유사체 및 피브린 용해 억제제의 길항제로부터 선택되는 하나 이상의 화합물의 고혈압 병증의 예방 또는 치료를 위한 용도에 관한 것이다.

2. 제1항에 있어서, 상기 플라스미노겐 활성화 경로의 성분은 플라스미노겐, 재조합 인간 플라스민, Lys-플라스미노겐, Glu-플라스미노겐, 플라스민, 플라스미노겐 및 플라스민 중 하나 이상의 kringle 도메인 및 프로테아제 도메인을 포함하는 플라스미노겐 및 플라스민의 변이체 및 유사체, 미니플라스미노겐(mini-plasminogen), 미니플라스민(mini-plasmin), 마이크로플라스미노겐(micro-plasminogen), 마이크로플라스민(micro-plasmin), 델타-플라스미노겐, 델타-플라스민(delta-plasmin), 플라스미노겐 활성제, tPA 및 uPA로부터 선택된다.

3. 제1항에 있어서, 상기 피브린 용해 억제제의 길항제는 PAI-1, 보체 C1 억제제, α2 항플라스민 또는 α2 마크로글로불린의 억제제, 예를 들어 항체이다.

4. 제1항에 있어서, 상기 고혈압 병증은 고혈압으로 인한 심장, 뇌, 폐, 간, 신장 또는 혈관의 손상 또는 합병증을 포함한다.

5. 제4항에 있어서, 상기 합병증은 부정맥, 심부전, 뇌출혈, 뇌혈전, 뇌경색, 고혈압성 신장 질환, 신부전, 요독증, 간경변, 폐동맥고혈압, 폐섬유증, 미세혈전을 포함한다.

6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 고혈압 병증을 앓고 있는 피험자의 혈압 감소, 고혈압 병증을 앓고 있는 피험자의 혈청 안지오텐신 II 수준 감소, 피험자의 ACE 또는 ACE2 수준 조절, 고혈압으로 인한 조직 및 기관 손상 경감, 손상된 조직 및 기관 복구 촉진, 조직 및 기관 섬유화 경감 및 자유 라디칼 제거 촉진으로부터 선택되는 하나 이상의 작용을 갖는다.

7. 제6항에 있어서, 상기 손상된 조직 및 기관 복구 촉진은 손상된 심장 조직, 뇌 조직, 폐 조직, 신장 조직 또는 간 조직의 구조 또는 기능의 회복을 촉진하는 것이다.

8. 제6항에 있어서, 상기 조직 및 기관 섬유화 경감은 심장 조직, 폐 조직, 신장 조직 또는 간 조직의 섬유화 경감을 포함한다.

9. 제6항에 있어서, 상기 화합물은 SOD 생성을 촉진하여 자유 라디칼을 제거한다

10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 플라스미노겐이다.

11. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 플라스미노겐은 서열 2와 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 상동성을 갖고, 플라스미노겐의 단백질 분해 활성 또는 라이신 결합 활성을 갖는다.

12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 플라스미노겐은 서열 14로 표시되는 플라스미노겐 활성 단편을 포함하고, 플라스미노겐의 단백질 분해 활성을 갖는다.

13. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 플라스미노겐은 Glu-플라스미노겐, Lys-플라스미노겐, 미니플라스미노겐, 마이크로플라스미노겐, 델타-플라스미노겐 또는 플라스미노겐의 단백질 분해 활성을 유지하는 이들의 변이체로부터 선택된다.

14. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 플라스미노겐은 천연 또는 합성 인간 플라스미노겐, 또는 플라스미노겐의 단백질 분해 활성 또는 라이신 결합 활성을 유지하는 이들의 변이체 또는 단편이다.

15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 하나 이상의 다른 치료 방법 또는 다른 약물과 병용된다.

16. 제15항에 있어서, 상기 다른 약물은 고혈압약, 호르몬, 면역 억제제, 항생제 또는 항바이러스제를 포함한다.

17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 비강 흡입, 에어로졸 흡입, 점비액, 점이액 또는 점안액, 정맥내, 복강내, 피하, 두개내, 척추강내, 동맥내, 직장내 및/또는 근육내에 의해 투여된다.

본 발명은 또한 하기와 같은 각 항에 관한 것이다.

1. 일 양태에서, 본 발명은 유효량의 플라스미노겐 활성화 경로의 성분, 플라스미노겐을 직접적으로 활성화하거나 또는 플라스미노겐 활성화 경로의 업스트림 성분을 활성화하여 플라스미노겐을 간접적으로 활성화할 수 있는 화합물, 플라스미노겐 또는 플라스민의 활성을 모방하는 화합물, 플라스미노겐 또는 플라스미노겐 활성제의 발현을 상향 조절할 수 있는 화합물, 플라스미노겐 유사체, 플라스민 유사체, tPA 또는 uPA 유사체 및 피브린 용해 억제제의 길항제로부터 선택되는 하나 이상의 화합물을 혈압 이상 병증을 앓고 있는 피험자에게 투여하는 단계를 포함하는 혈압 이상 또는 혈압 이상 병증의 예방 또는 치료 방법에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 또한 플라스미노겐 활성화 경로의 성분, 플라스미노겐을 직접적으로 활성화하거나 또는 플라스미노겐 활성화 경로의 업스트림 성분을 활성화하여 플라스미노겐을 간접적으로 활성화할 수 있는 화합물, 플라스미노겐 또는 플라스민의 활성을 모방하는 화합물, 플라스미노겐 또는 플라스미노겐 활성제의 발현을 상향 조절할 수 있는 화합물, 플라스미노겐 유사체, 플라스민 유사체, tPA 또는 uPA 유사체 및 피브린 용해 억제제의 길항제로부터 선택되는 하나 이상의 화합물의 혈압 이상 또는 혈압 이상 병증의 예방 또는 치료를 위한 약물의 제조에서의 용도에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 또한 플라스미노겐 활성화 경로의 성분, 플라스미노겐을 직접적으로 활성화하거나 또는 플라스미노겐 활성화 경로의 업스트림 성분을 활성화하여 플라스미노겐을 간접적으로 활성화할 수 있는 화합물, 플라스미노겐 또는 플라스민의 활성을 모방하는 화합물, 플라스미노겐 또는 플라스미노겐 활성제의 발현을 상향 조절할 수 있는 화합물, 플라스미노겐 유사체, 플라스민 유사체, tPA 또는 uPA 유사체 및 피브린 용해 억제제의 길항제로부터 선택되는 하나 이상의 화합물을 포함하는 혈압 이상 또는 혈압 이상 병증의 예방 또는 치료를 위한 약물에 관한 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 또한 플라스미노겐 활성화 경로의 성분, 플라스미노겐을 직접적으로 활성화하거나 또는 플라스미노겐 활성화 경로의 업스트림 성분을 활성화하여 플라스미노겐을 간접적으로 활성화할 수 있는 화합물, 플라스미노겐 또는 플라스민의 활성을 모방하는 화합물, 플라스미노겐 또는 플라스미노겐 활성제의 발현을 상향 조절할 수 있는 화합물, 플라스미노겐 유사체, 플라스민 유사체, tPA 또는 uPA 유사체 및 피브린 용해 억제제의 길항제로부터 선택되는 하나 이상의 화합물의 혈압 이상 또는 혈압 이상 병증의 예방 또는 치료를 위한 용도에 관한 것이다.

본 발명에 따른 혈압 이상 또는 혈압 이상 병증은 혈압이 정상 수준보다 높은 고혈압 또는 고혈압 병증 및 혈압이 정상 수준보다 낮은 저혈압 또는 저혈압 병증을 포함한다. 따라서, 본 발명은 상기 하나 이상의 화합물을 사용하여 고혈압 병증을 앓고 있는 피험자의 고혈압 또는 저혈압 병증을 앓고 있는 피험자의 저혈압을 정상 수준으로 회복시키는 방법, 용도 및 약물에 관한 것이다.

4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈압 이상 병증은 혈압 이상 병증으로 인한 조직 및 기관 손상 또는 합병증을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 조직 및 기관 손상 또는 합병증은 심장, 뇌, 폐, 간, 신장 또는 혈관의 손상 또는 합병증이다. 일부 실시형태에서, 상기 조직 및 기관 손상은 조직 및 기관의 구조 손상(예를 들어, 정상 조직의 구조 변화) 또는 조직 및 기관의 기능 손상(예를 들어, 조직 및 기관의 기능 저하)이다.

상기 실시형태에서, 상기 혈압 이상 병증은 고혈압 병증 또는 저혈압 병증을 포함한다.

5. 제4항에 있어서, 상기 혈압 이상 병증으로 인한 합병증은 부정맥, 심부전, 관상동맥 질환, 뇌출혈, 뇌혈전, 뇌경색, 고혈압성 신장 질환, 신부전, 요독증, 간경변, 폐동맥고혈압, 폐섬유증 또는 미세혈전을 포함하는 고혈압 병증으로 인한 합병증이다.

제4항에 있어서, 상기 혈압 이상 병증으로 인한 합병증은 심장허혈, 협심증, 쇼크, 뇌허혈, 실신, 뇌경색, 신장허혈, 핍뇨, 단백뇨, 신장 기능 부전과 같은 저혈압 병증으로 인한 조직 및 기관 허혈을 포함하는 저혈압 병증으로 인한 합병증이다.

6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 고혈압 병증을 앓고 있는 피험자의 혈압 감소, 고혈압 병증을 앓고 있는 피험자의 혈청 안지오텐신 II 수준 감소, 피험자의 ACE 또는 ACE2 수준 조절, 저혈압 병증을 앓고 있는 피험자의 혈압 증가, 고혈압 병증을 앓고 있는 피험자 또는 저혈압 병증을 앓고 있는 피험자의 혈압이 정상 수준으로 회복되도록 촉진, 고혈압 또는 저혈압으로 인한 조직 및 기관 손상 경감, 손상된 조직 및 기관 복구 촉진, 조직 및 기관 섬유화 경감 및 자유 라디칼 제거 촉진으로부터 선택되는 하나 이상의 작용을 갖는다.

7. 제1항 내지 제6 중 어느 한 항에 있어서, 상기 손상된 조직 및 기관 복구 촉진은 손상된 심장 조직, 뇌 조직, 폐 조직, 신장 조직 또는 간 조직의 구조 또는 기능 회복을 촉진하는 것이다.

8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조직 및 기관 섬유화 경감은 심장 조직, 폐 조직, 신장 조직 또는 간 조직의 섬유화 경감을 포함한다.

9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 SOD 생성을 촉진하여 자유 라디칼을 제거한다.

11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 플라스미노겐은 서열 2와 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 상동성을 갖고, 플라스미노겐의 단백질 분해 활성 또는 라이신 결합 활성을 갖는다.

13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 플라스미노겐은 Glu-플라스미노겐, Lys-플라스미노겐, 미니플라스미노겐, 마이크로플라스미노겐, 델타-플라스미노겐 또는 플라스미노겐의 단백질 분해 활성을 유지하는 이들의 변이체로부터 선택된다.

14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 플라스미노겐은 천연 또는 합성 인간 플라스미노겐, 또는 플라스미노겐의 단백질 분해 활성 또는 라이신 결합 활성을 유지하는 이들의 변이체 또는 단편이다.

16. 제15항에 있어서, 상기 다른 약물은 혈압 이상 병증이 있는 피험자의 혈압 이상 병증 이외의 다른 병증을 치료하기 위한 약물이다.

본 발명의 일 양태는 또한 피험자의 혈압 이상 병증(예를 들어, 고혈압 병증 또는 저혈압 병증) 및 이의 관련 손상 또는 합병증의 예방 또는 치료를 위한 플라스미노겐, 플라스미노겐을 포함하는 약물, 약학적 조성물, 키트, 제품에 관한 것이다.

본 발명의 일 양태는 또한 플라스미노겐, 플라스미노겐을 포함하는 약물, 약학적 조성물, 키트, 제품, 상기 방법 중의 약물, 약학적 조성물, 키트, 제품의 혈압 이상 병증을 앓고 있는 피험자의 혈압 이상 병증(예를 들어 고혈압 병증 또는 저혈압 병증) 및 이의 관련 손상 또는 합병증의 예방 또는 치료를 위한 용도에 관한 것이다.

본 발명의 상기 어느 하나의 실시형태에서, 상기 플라스미노겐은 서열 2, 6, 8, 10 또는 12와 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 상동성을 갖고, 플라스미노겐 활성을 여전히 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, 상기 플라스미노겐은 서열 2, 6, 8, 10 또는 12의 기초상에서 1 ~ 100, 1 ~ 90, 1 ~ 80, 1 ~ 70, 1 ~ 60, 1 ~ 50, 1 ~ 45, 1 ~ 40, 1 ~ 35, 1 ~ 30, 1 ~ 25, 1 ~ 20, 1 ~ 15, 1 ~ 10, 1 ~ 5, 1 ~ 4, 1 ~ 3, 1 ~ 2, 1개의 아미노산을 추가, 삭제 및/또는 치환하고, 단백질 분해 활성 또는 라이신 결합 활성을 여전히 갖는 단백질이다.

일부 실시형태에서, 상기 플라스미노겐은 是단백질 분해 활성 또는 라이신 결합 활성 단편을 포함하고, 단백질 분해 활성 또는 라이신 결합 활성을 여전히 갖는 단백질이다. 일부 실시형태에서, 상기 플라스미노겐은 Glu-플라스미노겐, Lys-플라스미노겐, 미니플라스미노겐, 마이크로플라스미노겐, 델타-플라스미노겐 또는 단백질 분해 활성 또는 라이신 결합 활성을 유지하는 이들의 변이체로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 상기 플라스미노겐은 천연 또는 합성 인간 플라스미노겐, 또는 플라스미노겐 활성을 여전히 유지하는 이들의 변이체 또는 단편이다. 일부 실시형태에서, 상기 플라스미노겐은 영장류 동물 또는 설치류 동물로부터 유래되는 인간 플라스미노겐 동원체 또는 단백질 분해 활성 또는 라이신 결합 활성을 여전히 유지하는 이들의 변이체 또는 단편이다. 일부 실시형태에서, 상기 플라스미노겐의 아미노산은 서열 2, 6, 8, 10 또는 12로 표시된 바와 같다. 일부 실시형태에서, 상기 플라스미노겐은 인간 천연플라스미노겐이다.

일부 실시형태에서, 상기 피험자는 인간이다. 일부 실시형태에서, 상기 피험자는 플라스미노겐이 결핍하거나 결실되어 있다. 일부 실시형태에서, 상기 결핍 또는 결실은 선천적, 이차적 및/또는 국소적이다.

일부 실시형태에서, 상기 약학적 조성물은 약학적으로 허용 가능한 벡터 및 전술한 방법에 사용되는 플라스미노겐을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 키트는 예방 또는 치료 키트일 수 있는 바, (i) 전술한 방법에 사용되는 플라스미노겐 및 (ii) 상기 피험자에게 상기 플라스미노겐을 전달하기 위한 수단(means)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 수단은 주사기 또는 바이알이다. 일부 실시형태에서, 상기 키트는 라벨 또는 사용설명서를 더 포함하고, 상기 라벨 또는 사용설명서는 전술한 어느 하나의 방법을 구현하기 위해 상기 플라스미노겐을 상기 피험자에게 투여하도록 지시한다.

일부 실시형태에서, 상기 제품은 라벨을 포함하는 용기; 및 (i) 전술한 방법에 사용되는 플라스미노겐 또는 플라스미노겐을 포함하는 약학적 조성물을 포함하고, 여기서 상기 라벨은 전술한 어느 하나의 방법을 구현하기 위해 상기 플라스미노겐 또는 조성물을 상기 피험자에게 투여하도록 지시한다.

일부 실시형태에서, 상기 키트 또는 제품은 하나 이상의 다른 수단 또는 용기를 더 포함하고, 상기 수단 또는 용기에는 다른 약물이 포함된다.

전술한 방법의 일부 실시형태에서, 상기 플라스미노겐은 전신 또는 국소 투여되고, 바람직하게는 비강 흡입, 에어로졸 흡입, 점비액 또는 점안액, 정맥내, 복강내, 피하, 두개내, 척추강내, 동맥내, 직장내 및/또는 근육내에 의해 플라스미노겐을 투여하여 치료한다. 전술한 방법의 일부 실시형태에서, 상기 플라스미노겐은 적절한 폴리펩티드 벡터 또는 안정화제와 병용된다. 전술한 방법의 일부 실시형태에서, 상기 플라스미노겐은 매일 0.0001 ~ 2000 mg/kg, 0.001 ~ 800 mg/kg, 0.01 ~ 600 mg/kg, 0.1 ~ 400 mg/kg, 1 ~ 200 mg/kg, 1 ~ 100 mg/kg, 10 ~ 100 mg/kg(체중 킬로그램당 계산) 또는 0.0001 ~ 2000mg/cm², 0.001 ~ 800 mg/cm², 0.01 ~ 600 mg/cm², 0.1 ~ 400 mg/cm², 1 ~ 200 mg/cm², 1 ~ 100 mg/cm², 10 ~ 100 mg/cm²(체표면적의 제곱센티미터당 계산)의 용량으로 투여되고, 바람직하게는 적어도 1회 반복되며, 바람직하게는 적어도 매일 투여된다.

본 발명은 본 발명의 실시형태에 속하는 기술특징의 모든 조합을 명시적으로 포함하고, 이러한 조합된 기술적 해결수단은 상기 기술적 해결수단이 단독으로 명시적으로 공개된 것처럼 본 발명에서 명시적으로 공개되었다. 또한, 본 발명은 각 실시형태 및 이들의 구성요소 간의 조합을 명시적으로 포함하고, 상기 조합된 기술적 해결수단은 본문에서 명시적으로 공개된다.

도 1의 A ~ B는 15 ~ 16주령 당뇨병 고혈압 모델 마우스에 플라스미노겐을 21일 동안 투여한 후 혈압 측정 결과를 도시한다. 도 1의 A는 수축기 혈압이고, 도 1의 B는 평균 혈압이다. 결과에 따르면, 투여 21일 후 PBS 대조군 마우스의 혈압은 투여 전과 비교하여 유의한 변화가 없고, 플라스미노겐 투여군 마우스의 수축기 혈압과 평균 혈압은 유의하게 감소하며, 모두 비히클 PBS 투여 대조군보다 유의하게 낮고, 통계학적 차이가 현저하다(*는 P<0.05를 나타내고, **는 P<0.01을 나타냄). 이는 플라스미노겐이 15 ~ 16주령 당뇨병 마우스의 고혈압을 현저히 감소시킬 수 있음을 나타낸다.
도 2의 A ~ B는 25 ~ 26주령 당뇨병 고혈압 모델 마우스에 플라스미노겐을 21일 동안 투여한 후 혈압 측정 결과를 도시한다. 도 2의 A는 수축기 혈압이고, 도 2의 B는 평균 혈압이다. 결과에 따르면, 투여 21일 후 PBS 대조군 마우스의 수축기 혈압은 투여 전과 비교하여 유의한 변화가 없고, 플라스미노겐 투여군 마우스의 수축기 혈압은 투여 7일 후에 현저히 감소하기 시작하며, 비히클 PBS 투여 대조군보다 유의하게 낮고, 통계학적 차이가 현저하며(P=0.019); 투여 14일, 21일 후 두 그룹의 마우스도 차이가 현저하다. 투여 21일 후, 플라스미노겐군 마우스의 평균 혈압은 비히클 PBS 투여 대조군보다 낮고, 그 차이는 유의에 근접하다(P=0.09). 이는 플라스미노겐이 25 ~ 26주령 당뇨병 마우스의 높은 수축기 혈압을 현저히 감소시킬 수 있음을 나타낸다.
도 3은 15 ~ 16주령 당뇨병 고혈압 모델 마우스에 플라스미노겐을 28일 동안 투여한 후 혈청 안지오텐신 II 검출 결과를 도시한다. 결과에 따르면, 플라스미노겐을 28일 동안 투여한 후 플라스미노겐 투여군의 혈청 안지오텐신 II 수준은 비히클 PBS 투여 대조군보다 유의하게 낮다. 이는 플라스미노겐이 당뇨병 고혈압 모델 마우스의 혈청 안지오텐신 II 수준을 감소시켜 고혈압을 개선할 수 있음을 나타낸다.
도 4의 A ~ B는 25 ~ 26주령 당뇨병 고혈압 모델 마우스에 플라스미노겐을 28일 동안 투여한 후 심장 H&E 염색의 대표적인 사진을 도시한다. 도 4의 A는 비히클 PBS 투여 대조군이고, 도 4의 B는 플라스미노겐 투여군이다. 결과에 따르면, 비히클 PBS 투여 대조군(도 4의 A)에 비해 플라스미노겐 투여군(도 4의 B) 마우스의 심근 세포 사이는 더 긴밀하고 배열이 더 규칙적이다.
도 5의 A ~ B는 25 ~ 26주령 25 ~ 26주령 당뇨병 고혈압 모델 마우스에 플라스미노겐을 28일 동안 투여한 후 신장 SR 염색의 대표적인 사진을 도시한다. 도 5의 A는 비히클 PBS 투여 대조군이고, 도 5의 B는 플라스미노겐 투여군이다. 결과에 따르면, 플라스미노겐을 28일 동안 투여한 후 플라스미노겐 투여군의 신장 콜라겐 섬유 침착(화살표로 표시)은 비히클 PBS 투여 대조군보다 유의하게 적다. 이는 플라스미노겐이 당뇨병 고혈압 모델 마우스의 신장 섬유화를 유의하게 감소시킬 수 있음을 나타낸다.
도 6은 안지오텐신 II 유도 고혈압 모델 마우스에 플라스미노겐을 14일 동안 투여한 후 혈청 SOD 수준 검출 결과를 도시한다. 결과에 따르면, 블랭크 대조군의 혈청에는 일정한 수준의 SOD가 있고, 비히클 PBS 투여 대조군의 혈청 SOD 수준은 유의하게 감소하며, 플라스미노겐 투여군의 혈청 SOD 수준은 비히클 PBS 투여 대조군보다 유의하게 높고, 통계학적 차이가 현저하다(*는 P<0.05를 나타냄). 이는 플라스미노겐이 자유 라디칼을 제거하는 신체의 능력을 증강시킬 수 있음을 나타낸다.
도 7의 A ~ C는 안지오텐신 II 유도 고혈압 모델 마우스에 플라스미노겐을 14일 동안 투여한 후 신장 시리우스 적색 염색의 대표적인 사진을 도시한다. 도 7의 A는 블랭크 대조군이고, 도 7의 B는 비히클 PBS 투여 대조군이며, 도 7의 C는 플라스미노겐 투여군이다. 결과에 따르면, 블랭크 대조군 마우스의 신장에는 유의한 콜라겐 섬유 침착이 없고, 플라스미노겐 투여군의 콜라겐 섬유 침착(화살표로 표시)은 비히클 PBS 투여 대조군보다 유의하게 적다. 이는 플라스미노겐이 안지오텐신 II 유도 고혈압 모델 마우스의 신장 섬유화를 유의하게 감소시키고 고혈압으로 인한 신장 병변을 개선할 수 있음을 나타낸다.
도 8의 A ~ C는 안지오텐신 II 유도 고혈압 모델 마우스에 플라스미노겐을 14일 동안 투여한 후 심장 시리우스 적색 염색의 대표적인 사진을 도시한다. 도 8의 A는 블랭크 대조군이고, 도 8의 B는 비히클 PBS 투여 대조군이며, 도 8의 C는 플라스미노겐 투여군이다. 결과에 따르면, 블랭크 대조군 마우스의 심장은 유의한 콜라겐 섬유 침착이 없고, 플라스미노겐 투여군의 콜라겐 섬유 침착(화살표로 표시)은 비히클 PBS 투여 대조군보다 유의하게 적다. 이는 플라스미노겐이 안지오텐신 II 유도 고혈압 모델 마우스의 심장 섬유화를 유의하게 감소시키며 고혈압으로 인한 심장 병변을 개선할 수 있음을 나타낸다.
도 9의 A ~ C는 모노크로탈린 유도 폐동맥고혈압 모델 마우스에 플라스미노겐을 28일 동안 투여한 후 폐 시리우스 적색 염색의 대표적인 사진을 도시한다. 도 9의 A는 블랭크 대조군이고, 도 9의 B비히클 PBS 투여 대조군이며, 도 9의 C는 플라스미노겐 투여군이다. 결과에 따르면, 블랭크 대조군 마우스의 폐는 기본적으로 콜라겐 침착이 없고, 플라스미노겐 투여군 마우스의 폐 조직 콜라겐 침착(화살표로 표시)은 비히클 PBS 투여 대조군보다 유의하게 적다. 이는 플라스미노겐이 모노크로탈린 유도 폐동맥고혈압 모델 마우스의 폐 섬유화를 유의하게 경감할 수 있음을 나타낸다.
도 10의 A ~ C는 모노크로탈린 유도 폐동맥고혈압 모델 마우스에 플라스미노겐을 28일 동안 투여한 후 심장 시리우스 적색 염색의 대표적인 사진을 도시한다. 도 10의 A는 블랭크 대조군이고, 도 10의 B는 비히클 PBS 투여 대조군이며, 도 10의 C는 플라스미노겐 투여군이다. 결과에 따르면, 블랭크 대조군 마우스의 심장은 기본적으로 콜라겐 침착이 없고, 플라스미노겐 투여군 마우스의 심장 콜라겐 침착(화살표로 표시)은 비히클 PBS 투여 대조군보다 유의하게 적다. 이는 플라스미노겐이 모노크로탈린 유도 폐동맥고혈압 모델 마우스의 심장 섬유화를 유의하게 경감할 수 있음을 나타낸다.
도 11의 A ~ C는 모노크로탈린 유도 폐동맥고혈압 모델 마우스에 플라스미노겐을 28일 동안 투여한 후 신장 시리우스 적색 염색의 대표적인 사진을 도시한다. 도 11의 A는 블랭크 대조군이고, 도 11의 B는 비히클 PBS 투여 대조군이며, 도 11의 C는 플라스미노겐 투여군이다. 결과에 따르면, 블랭크 대조군 마우스의 신장은 기본적으로 콜라겐 침착이 없고, 플라스미노겐 투여군 마우스의 신장 콜라겐 침착(화살표로 표시)은 비히클 PBS 투여 대조군보다 유의하게 적다. 이는 플라스미노겐이 모노크로탈린 유도 폐동맥고혈압 모델 마우스의 신장 섬유화를 유의하게 경감할 수 있음을 나타낸다.
도 12의 A ~ C는 모노크로탈린 유도 폐동맥고혈압 모델 마우스에 플라스미노겐을 28일 동안 투여한 후 간 시리우스 적색 염색의 대표적인 사진을 도시한다. 도 12의 A는 블랭크 대조군이고, 도 12의 B는 비히클 PBS 투여 대조군이며, 도 12의 C는 플라스미노겐 투여군이다. 결과에 따르면, 블랭크 대조군 마우스의 간은 기본적으로 콜라겐 침착이 없고, 플라스미노겐 투여군 마우스의 간 콜라겐 침착(화살표로 표시)은 비히클 PBS 투여 대조군보다 유의하게 적다. 이는 플라스미노겐이 모노크로탈린 유도 폐동맥고혈압 모델 마우스의 간 섬유화를 유의하게 경감할 수 있음을 나타낸다.
도 13은 신장 위축 모델 마우스에 플라스미노겐을 14일 동안 투여한 후 혈압 측정 결과를 도시한다. 결과에 따르면, 플라스미노겐 투여군 및 블랭크 대조군의 수축기 혈압 및 평균 혈압은 PBS 대조군의 혈압보다 유의하게 높고, 플라스미노겐군과 PBS 대조군 사이는 통계학적 차이가 현저하다(*는 P<0.05를 나타냄). 이는 플라스미노겐이 신장 위축으로 인한 저혈압을 정상 수준으로 회복하도록 촉진할 수 있음을 나타낸다.
도 14는 안지오텐신 II 유도 고혈압 모델 마우스에 플라스미노겐을 5일 동안 투여한 후 평균 혈압 및 수축기 혈압의 측정 결과를 도시한다. 결과에 따르면, 블랭크 대조군 마우스는 일정한 수준의 평균 혈압 및 수축기 혈압을 갖고, 비히클군 마우스의 평균 혈압 및 수축기 혈압은 유의하게 증가하며, 투여군 마우스의 평균 혈압 및 수축기 혈압은 비히클군 마우스보다 유의하게 낮고, 통계학적 차이가 현저하다(*는 P<0.05를 나타내고, **는 P<0.01을 나타냄). 이는 플라스미노겐이 고혈압 모델 마우스의 혈압을 감소시킬 수 있음을 나타낸다.
도 15는 24 ~ 25주령 당뇨병 마우스에 플라스미노겐을 28일 동안 투여한 후 혈청 ACE2 수준의 검출 결과를 도시한다. 결과에 따르면, 투여군 마우스의 혈청 ACE2 수준은 비히클군보다 유의하게 높고, 통계학적 차이가 유의에 근접하다(P=0.057). 이는 플라스미노겐이 당뇨병 고혈압 모델 마우스의 혈청 ACE2 수준 증가를 촉진할 수 있음을 나타낸다.
도 16은 안지오텐신 II 유도 고혈압 모델 마우스에 플라스미노겐을 7일 동안 투여한 후 혈청 ACE2 수준의 검출 결과를 도시한다. 결과에 따르면, 블랭크 대조군 마우스의 혈액에는 일정한 수준의 ACE2가 있고, 비히클군 마우스의 혈액 내 ACE2 수준은 블랭크 대조군 마우스보다 유의하게 높으며, 투여군 마우스의 혈액 내 ACE2 수준은 비히클군 마우스보다 유의하게 낮고, 통계학적 차이가 매우 현저하다(**는 P<0.01을 나타냄). 이는 플라스미노겐이 AngII 유도 고혈압 모델 마우스의 혈청 ACE2 수준 감소를 촉진할 수 있음을 나타낸다.
도 17은 안지오텐신 II 유도 고혈압 모델 마우스에 플라스미노겐을 7일 동안 투여한 후 혈청 ACE 수준의 검출 결과를 도시한다. 결과에 따르면, 블랭크 대조군 마우스의 혈액에는 일정한 수준의 ACE가 있고, 비히클군 마우스의 혈액 내 ACE 수준은 블랭크 대조군 마우스보다 유의하게 높으며, 투여군 마우스의 혈액 내 ACE 수준은 비히클군 마우스보다 유의하게 낮고, 통계학적 차이가 유의에 근접하다(P=0.051). 이는 플라스미노겐이 AngII 유도 고혈압 모델 마우스의 혈청 ACE 수준 감소를 촉진할 수 있음을 나타낸다.
도 18은 투여 기간 동안 환자의 수축기 혈압(고혈압) 및 이완기 혈압(저혈압)의 검출 결과을 도시한다. 결과에 따르면, 투여 후 6일차부터 환자의 수축기 혈압은 141 mmHg으로 감소하고, 11일까지 혈압 변동은 불안정하며(정상 및 비정상 교대); 12일 후, 혈압이 떨어지고 일주일 동안 정상 및 안정을 유지하였다. 이는 플라스미노겐이 고혈압 환자의 혈압을 감소시킬 수 있음을 나타낸다.
도 19는 투여 기간 동안 환자의 수축기 혈압(고혈압) 및 이완기 혈압(저혈압)의 검출 결과를 도시한다. 결과에 따르면, 투여 후 13일 차에 환자의 혈압은 135/54 mmHg이고, 후기에 정상 및 안정을 유지하며, 기본적으로 고혈압약을 사용하지 않았다. 이는 플라스미노겐이 고혈압을 치료할 수 있음을 나타낸다.
도 20은 투여 기간 동안 환자의 수축기 혈압(고혈압) 및 이완기 혈압(저혈압)의 검출 결과를 도시한다. 결과에 따르면, 투여 후 이완기 혈압은 정상치에 도달하고, 원래 60 mmHg보다 낮았으며, 치료 기간 동안 혈압은 정상 및 안정을 유지하고; 치료 종료 후, 고혈압약은 반으로 줄어들고, 혈압은 기본적으로 130 ~ 140/64 ~ 76 mmHg으로 조절되었다. 이는 플라스미노겐이 고혈압 환자의 혈압을 정상으로 회복하도록 촉진할 수 있고 고혈압약의 사용량을 줄일 수 있음을 나타낸다.
도 21a ~ 도 21b는 투여 기간 동안 환자의 아침(도 21a) 및 저녁(도 21b) 수축기 혈압(고혈압) 및 이완기 혈압(저혈압)의 검출 결과를 도시한다. 투여 5일차에 아침 및 저녁 혈압이 떨어지기 시작하고 혈압차가 감소하였다. 환자는 이전에 고혈압약을 복용할 때 혈압이 140/75 mmHg 이하로 떨어진 경우가 없었고 처음으로 개선되었다고 하였다. 투여 6일차에 아침 및 저녁 혈압이 약 136/73 mmHg으로 유지되었다. 투여 7일차에 아침 및 저녁 혈압이 안정적으로 유지되고, 혈압은 약 130/70 mmHg이었다. 이는 플라스미노겐이 환자의 고혈압 증상을 개선할 수 있음을 나타낸다.
도 22는 투여 기간 동안 환자의 수축기 혈압(고혈압) 및 이완기 혈압(저혈압)의 검출 결과를 도시한다. 결과에 따르면, 투여 후 혈압이 상승하는 경향을 보였고, 투여 3일차에 처음으로 정상적인 혈압이 나타났다. 투여 9일차에 혈압이 청상화되기 시작하고, 혈압은 계속 정상을 유지하며, 약물 중단 후 혈압은 95/70 mmHg으로 유지하였다. 이는 플라스미노겐이 저혈압 환자의 혈압 회복을 촉진할 수 있음을 나타낸다.
도 23은 투여 기간 동안 환자의 수축기 혈압(고혈압) 및 이완기 혈압(저혈압)의 검출 결과를 도시한다. 결과에 따르면, 투여 후 환자의 정신 상태는 개선되고, 투여 2일차에 혈압이 정상으로 돌아왔으며, 1주일 후 약 110/70 mmHg에 도달하였다. 이는 플라스미노겐이 저혈압 환자의 혈압 회복을 촉진할 수 있음을 나타낸다.

피브린 용해 시스템(Fibrinolytic system)은 섬유소 용해 시스템이라고도 하며, 피브린 용해(섬유소 용해) 과정에 관여하는 일련의 화학 물질로 구성된 시스템으로, 주로 플라스미노겐, 플라스민, 플라스미노겐 활성제, 피브린 용해 억제제를 포함한다. 플라스미노겐 활성제는 조직형 플라스미노겐 활성제(t-PA) 및 유로키나아제형 플라스미노겐 활성제(u-PA)를 포함한다. t-PA는 혈관 내피 세포로 합성된 세린 프로테아제이다. t-PA는 플라스미노겐을 활성화하고, 이 과정은 주로 피브린에서 수행되며; 유로키나아제형 플라스미노겐 활성제(u-PA)는 신세뇨관 상피 세포 및 혈관 내피 세포에서 생성되고, 보조 인자로 피브린을 사용하지 않고도 플라스미노겐을 직접적으로 활성화할 수 있다. 플라스미노겐(PLG)은 간에서 합성되고, 혈액이 응고되는 경우 PLG는 피브린 네트워크에 대량으로 흡착되며, t-PA 또는 u-PA의 작용하에 플라스민으로 활성화되어 피브린 용해를 촉진한다. 플라스민(PL)은 세린 프로테아제로, 이의 작용은 피브린 및 피브리노겐을 분해하고; 다양한 혈액 응고 인자 Ⅴ, Ⅷ, Ⅹ, Ⅶ, XI, Ⅱ 등을 가수분해하며; 플라스미노겐을 플라스민으로 전환시키고; 보체를 가수분해하는 등이다. 피브린 용해 억제제는 플라스미노겐 활성제 억제제(PAI) 및 α2 항플라스민(α2-AP)을 포함한다. PAI는 주로 PAI-1 및 PAI-2의 두 가지 형태가 있는데, 이는 t-PA에 1:1의 비율로 특이적으로 결합되어 이를 불활성화시키는 동시에 PLG를 활성화시킬 수 있다. α2-AP는 간에서 합성되고, PL과 1:1의 비율로 결합하여 착물을 형성하여 PL 활성을 억제하며; FⅩⅢ는 α2-AP를 피브린과 공유 결합시켜 PL 작용에 대한 피브린의 민감도를 감소시킨다. 체내에서 피브린 용해 시스템 활성을 억제하는 물질은 PAI-1, 보체 C1 억제제; α2 항플라스민; α2 마크로글로불린이다.

본 발명의 용어 “플라스미노겐 활성화 경로의 성분”은,

1. 플라스미노겐, Lys-플라스미노겐, Glu-플라스미노겐, 마이크로플라스미노겐(micro-plasminogen), 델타-플라스미노겐; 이들의 변이체 또는 유사체;

2. 플라스민 및 이들의 변이체 또는 유사체; 및

3. 플라스미노겐 활성제, 예를 들어 tPA, uPA 및 하나 이상의 tPA 또는 uPA의 도메인(예를 들어, 하나 이상의 kringle 도메인 및 단백질 분해 도메인)을 포함하는 tPA 또는 uPA의 변이체 및 유사체를 포함한다.

상기 플라스미노겐, 플라스민, tPA 및 uPA의 “변이체”는 천연적으로 존재하는 모든 인간 유전 변이체 및 이러한 단백질의 다른 포유동물 형태, 및 예를 들어 1 ~ 100, 1 ~ 90, 1 ~ 80, 1 ~ 70, 1 ~ 60, 1 ~ 50, 1 ~ 45, 1 ~ 40, 1 ~ 35, 1 ~ 30, 1 ~ 25, 1 ~ 20, 1 ~ 15, 1 ~ 10, 1 ~ 5, 1 ~ 4, 1 ~ 3, 1 ~ 2, 1개의 아미노산의 첨가, 삭제 및/또는 치환을 통해 플라스미노겐, 플라스민, tPA 또는 uPA 활성을 여전히 갖는 단백질을 포함한다. 예를 들어, 플라스미노겐, 플라스민, tPA 및 uPA의 “변이체”는 예를 들어 1 ~ 100, 1 ~ 90, 1 ~ 80, 1 ~ 70, 1 ~ 60, 1 ~ 50, 1 ~ 45, 1 ~ 40, 1 ~ 35, 1 ~ 30, 1 ~ 25, 1 ~ 20, 1 ~ 15, 1 ~ 10, 1 ~ 5, 1 ~ 4, 1 ~ 3, 1 ~ 2, 1개의 보존적 아미노산 치환을 통해 획득된 이러한 단백질의 돌연변이체를 포함한다.

본 발명의 “플라스미노겐 변이체”는 서열 2, 6, 8, 10 또는 12와 적어도 75％, 80％, 85％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％ 또는 99％의 서열 상동성을 갖고, 단백질 분해 활성 또는 라이신 결합 활성을 여전히 갖는 단백질을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 “플라스미노겐 변이체”는 서열 2, 6, 8, 10 또는 12의 기초상에서 1 ~ 100, 1 ~ 90, 1 ~ 80, 1 ~ 70, 1 ~ 60, 1 ~ 50, 1 ~ 45, 1 ~ 40, 1 ~ 35, 1 ~ 30, 1 ~ 25, 1 ~ 20, 1 ~ 15, 1 ~ 10, 1 ~ 5, 1 ~ 4, 1 ~ 3, 1 ~ 2, 1개의 아미노산을 첨가, 삭제 및/또는 치환하고, 단백질 분해 활성 또는 라이신 결합 활성을 여전히 갖는 단백질일 수 있다. 구체적으로, 본 발명의 플라스미노겐 변이체는 천연적으로 존재하는 모든 인간 유전 변이체 및 이러한 단백질의 다른 포유동물 형태, 및 1 ~ 100, 1 ~ 90, 1 ~ 80, 1 ~ 70, 1 ~ 60, 1 ~ 50, 1 ~ 45, 1 ~ 40, 1 ~ 35, 1 ~ 30, 1 ~ 25, 1 ~ 20, 1 ~ 15, 1 ~ 10, 1 ~ 5, 1 ~ 4, 1 ~ 3, 1 ~ 2, 1개의 보존적 아미노산 치환을 통해 획득된 이러한 단백질의 돌연변이체를 포함한다.

본 발명의 플라스미노겐은 영장류 동물 또는 설치류 동물로부터 유래되는 인간 플라스미노겐 동원체 또는 단백질 분해 활성 또는 라이신 결합 활성을 여전히 유지하는 이들의 변이체, 예를 들어 서열 2, 6, 8, 10 또는 12로 표시되는 플라스미노겐, 예를 들어 서열 2로 표시되는 인간 천연 플라스미노겐일 수 있다.

상기 플라스미노겐, 플라스민, tPA 및 uPA의 “유사체”는 각각 플라스미노겐, 플라스민, tPA 또는 uPA와 기본적으로 유사한 작용을 제공하는 화합물을 포함한다.

상기 플라스미노겐, 플라스민, tPA 및 uPA의 “변이체” 및 “유사체”는 하나 이상의 도메인(예를 들어, 하나 이상의 kringle 도메인 및 단백질 분해 도메인)을 포함하는 플라스미노겐, 플라스민, tPA 및 uPA의 “변이체” 및 “유사체”를 포함한다. 예를 들어, 플라스미노겐의 “변이체” 및 “유사체”는 하나 이상의 플라스미노겐 도메인(예를 들어, 하나 이상의 kringle 도메인 및 단백질 분해 도메인)을 포함하는 플라스미노겐 변이체 및 유사체, 예를 들어 미니플라스미노겐(mini-plasminogen)을 포함한다. 플라스민의 “변이체” 및 “유사체”는 하나 이상의 플라스민 도메인(예를 들어, 하나 이상의 kringle 도메인 및 단백질 분해 도메인)을 포함하는 플라스민 “변이체” 및 “유사체”, 예를 들어 미니플라스민(mini-plasmin) 및 δ-플라스민(delta-plasmin)을 포함한다.

상기 플라스미노겐, 플라스민, tPA 또는 uPA의 “변이체” 또는 “유사체”가 각각 플라스미노겐, 플라스민, tPA 또는 uPA의 활성을 갖는지 여부, 또는 각각 플라스미노겐, 플라스민, tPA 또는 uPA와 기본적으로 유사한 작용을 제공하는지 여부는 본 기술분야에 공지된 방법에 의해 검출될 수 있고, 예를 들어 효소측정법(enzymography), ELISA(효소 결합 면역 흡착 측정) 및 FACS(형광 활성 세포 분류 방법)에 기반하여 활성화된 플라스민 활성 수준을 통해 측정되며, 예를 들어 하기 문헌에 기재된 방법을 참조하여 측정할 수 있다. Ny, A., Leonardsson, G., Hagglund, A.C, Hagglof, P., Ploplis, V.A., Carmeliet, P. and Ny, T. (1999). Ovulation inplasminogen-deficient mice. Endocrinology 140, 5030-5035; Silverstein RL, Leung LL, Harpel PC, Nachman RL (November 1984). "Complex formation of platelet thrombospondin with plasminogen. Modulation of activation by tissue activator". J. Clin. Invest. 74 (5): 1625-33; Gravanis I, Tsirka SE (February 2008). "Tissue-type plasminogen activator as a therapeutic target in stroke". Expert Opinion on Therapeutic Targets. 12 (2): 159-70; Geiger M, Huber K, Wojta J, Stingl L, Espana F, Griffin JH, Binder BR (Aug 1989). "Complex formation between urokinase and plasma protein C inhibitor in vitro and in vivo". Blood. 74 (2): 722-8.

본 발명의 일부 실시형태에서, 본 발명의 “플라스미노겐 활성화 경로의 성분”은 플라스미노겐으로, Glu-플라스미노겐, Lys-플라스미노겐, 미니플라스미노겐, 마이크로플라스미노겐, 델타-플라스미노겐 또는 단백질 분해 활성 또는 라이신 결합 활성을 유지하는 이들의 변이체로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 상기 플라스미노겐은 천연 또는 합성 인간 플라스미노겐 또는 단백질 분해 활성 또는 라이신 결합 활성을 여전히 유지하는 이들의 보존적 돌연변이체 또는 이들의 단편이다. 일부 실시형태에서, 상기 플라스미노겐은 영장류 동물 또는 설치류 동물로부터 유래되는 인간 플라스미노겐 동원체 또는 단백질 분해 활성 또는 라이신 결합 활성을 여전히 유지하는 이들의 보존적 돌연변이체 또는 이들의 단편이다. 일부 실시형태에서, 상기 플라스미노겐의 아미노산은 예를 들어 서열 2, 6, 8, 10 또는 12로 표시된 바와 같다. 일부 실시형태에서, 상기 플라스미노겐은 인간 천연 플라스미노겐이다. 일부 실시형태에서, 상기 플라스미노겐은 서열 2로 표시되는 인간 천연 플라스미노겐이다.

“플라스미노겐을 직접적으로 활성화하거나 또는 플라스미노겐 활성화 경로의 업스트림 성분을 활성화하여 플라스미노겐을 간접적으로 활성화할 수 있는 화합물”은 플라스미노겐을 직접적으로 활성화하거나 또는 플라스미노겐 활성화 경로의 업스트림 성분을 활성화하여 플라스미노겐을 간접적으로 활성화할 수 있는 임의의 화합물을 의미하며, 예를 들어, tPA, uPA, 스트렙토키나아제(streptokinase), 사루플라제(saruplase), 알테플라제(alteplase), 레테플라제(reteplase), 테넥테플라제(tenecteplase), 아니스트레플라제(anistreplase), 몬테플라제(monteplase), 라노테플라제(lanoteplase), 파미테플라제(pamiteplase), 스타필로키나아제(staphylokinase)이다.

본 발명의 “피브린 용해 억제제의 길항제”는 피브린 용해 억제제의 작용을 길항, 약화, 차단 및 방지하는 화합물이다. 상기 피브린 용해 억제제는 예를 들어 PAI-1, 보체 C1 억제제, α2 항플라스민 및 α2 마크로글로불린이다. 상기 길항제는 예를 들어 PAI-1, 보체 C1 억제제, α2 항플라스민 또는 α2 마크로글로불린의 항체, 또는 예를 들어 PAI-1, 보체 C1 억제제, α2 항플라스민 또는 α2 마크로글로불린 발현을 차단 또는 하향 조절하는 안티센스 RNA 또는 작은 RNA, 또는 PAI-1, 보체 C1 억제제, α2 항플라스민 또는 α2 마크로글로불린의 결합 부위를 점유하지만 PAI-1, 보체 C1 억제제, α2 항플라스민 또는 α2 마크로글로불린의 기능이 없는 화합물, 또는 PAI-1, 보체 C1 억제제, α2 항플라스민 또는 α2 마크로글로불린의 결합 도메인 및/또는 활성 도메인을 차단하는 화합물이다.

플라스민은 플라스미노겐 활성화 시스템(PA 시스템)의 핵심 성분이다. 이는 피브린, 젤라틴(gelatin), 피브로넥틴(fibronectin), 라미닌(laminin) 및 프로테오글리칸(proteoglycan)을 포함하여 세포외 매트릭스(ECM)의 여러 성분을 가수분해할 수 있는 광범위 스펙트럼의 프로테아제이다. 또한, 플라스민은 일부 메탈프로테이나제 전구체(pro-MMPs)를 활성화하여 활성을 갖는 메탈로프로테이나제(MMPs)를 형성할 수 있다. 따라서 플라스민은 세포외 단백질 분해 작용의 하나의 중요한 업스트림 조절자로 간주된다. 플라스민은 플라스미노겐이 조직형 플라스미노겐 활성제(tPA) 또는 유로키나아제형 플라스미노겐 활성제(uPA)의 두 가지 생리학적 PAs를 통해 단백질 분해되어 형성된 것이다. 혈장 및 다른 체액에서 플라스미노겐의 상대적 수준이 비교적 높기 때문에 전통적으로 PA 시스템의 조절은 주로 PAs의 합성 및 활성 수준을 통해 구현되는 것으로 간주된다. PA 시스템 성분의 합성은 호르몬, 성장 인자 및 사이토카인과 같은 상이한 요인에 의해 엄격하게 조절된다. 또한, 플라스민과 PAs의 특정 생리학적 억제제도 있다. 플라스민의 주요 억제제는 α2-항플라스민(α2-antiplasmin)이다. PAs의 활성은 동시에 uPA 및 tPA의 플라스미노겐 활성제 억제제-1(PAI-1)에 의해 억제되고, 주로 uPA를 억제하는 플라스미노겐 활성제 억제제-2(PAI-2)에 의해 조절된다. 일부 세포 표면에는 직접적인 가수분해 활성을 갖는 uPA 특이적 세포 표면 수용체(uPAR)가 있다.

플라스미노겐은 하나의 단일 사슬 당단백질로 791개의 아미노산으로 구성되고 분자량은 약 92 kDa이다. 플라스미노겐은 주로 간에서 합성되고 세포외액에 대량으로 존재한다. 혈장 내 플라스미노겐 함량은 약 2 μM이다. 따라서 플라스미노겐은 조직 및 체액에서 단백질 분해 활성의 큰 잠재적 유래이다. 플라스미노겐은 글루타메이트-플라스미노겐(Glu-plasminogen) 및 라이신-플라스미노겐(Lys-plasminogen)의 두 가지 분자 형태로 존재한다. 자연적으로 분비되고 절단되지 않은 형태의 플라스미노겐은 하나의 아미노 말단(N-말단) 글루타메이트를 갖기 때문에 글루타메이트-플라스미노겐이라고 한다. 그러나, 플라스민의 존재하에 글루타메이트-플라스미노겐은 Lys76-Lys77에서 라이신-플라스미노겐으로 가수분해된다. 글루타메이트-플라스미노겐에 비해 라이신-플라스미노겐은 피브린과 더 높은 친화력을 갖고 더 높은 속도로 PAs에 의해 활성화될 수 있다. 이 두 가지 형태의 플라스미노겐의 Arg560-Val561 펩티드 결합은 uPA 또는 tPA에 의해 절단되어 이황화 결합으로 연결된 이중 사슬 프로테아제 플라스민이 형성될 수 있다. 플라스미노겐의 아미노 말단 부분은 5개의 상동 삼중 고리, 즉 소위 kringles를 포함하고, 카르복시 말단 부분은 프로테아제 도메인을 포함한다. 일부 kringles은 플라스미노겐과 피브린 및 이의 억제제 α2-AP의 특이적 상호작용을 매개하는 라이신 결합 부위를 포함한다. 최근에 발견된 하나의 플라스미노겐은 kringles1-4를 포함하는 38 kDa의 단편으로, 강력한 혈관신생 억제제이다. 이 단편은 앤지오스타틴(angiostatin)으로 명명되며, 여러 프로테아제에 의한 플라스미노겐의 가수분해에 의해 생성될 수 있다.

플라스민의 주요 기질은 피브린이고, 피브린의 용해는 병리학적 혈전증을 예방하는 관건이다. 플라스민은 또한 라미닌, 피브로넥틴, 프로테오글리칸 및 젤라틴을 비롯한 ECM의 여러 성분에 대한 기질 특이성을 갖고, 이는 플라스민이 ECM 리모델링에서도 중요한 작용을 일으킨다는 것을 나타낸다. 간접적으로, 플라스민은 또한 일부 프로테아제 전구체를 활성 프로테아제로 전환함으로써 MMP-1, MMP-2, MMP-3 및 MMP-9를 비롯한 ECM의 다른 성분을 분해할 수 있다. 따라서, 플라스민이 세포외 단백질 분해의 하나의 중요한 업스트림 조절자일 수 있다고 제시하였다. 또한, 플라스민은 일부 잠재적 형태의 성장 인자를 활성화하는 능력을 갖는다. 시험관 내에서 플라스민은 또한 보체 시스템의 성분을 가수분해하고 주화성 보체 단편을 방출할 수 있다.

“플라스민”은 피브린 응괴를 피브린 분해 산물 및 D-이량체로 가수분해할 수 있는 혈액에 존재하는 매우 중요한 효소이다.

“플라스미노겐”은 플라스민의 자이모겐(zymogen) 형태로, swiss prot 중의 서열에 따르면 신호 펩티드를 포함하는 천연 인간 플라스미노겐 아미노산 서열(서열 4)에 따라 계산되는 810개의 아미노산으로 구성되고 분자량은 약 90 kD이며, 주로 간에서 합성되고 혈액에서 순환될 수 있는 당단백질이며, 상기 아미노산 서열을 코딩하는 cDNA 서열은 서열 3으로 표시된 바와 같다. 전장 플라스미노겐은 C 말단의 세린 프로테아제 도메인, N 말단의 Pan Apple(PAp) 도메인 및 5개의 kringle 도메인(Kringle1-5) 등 7개의 도메인을 포함한다. swiss prot 중의 서열을 참조하면, 이의 신호 펩티드는 잔기 Met1-Gly19를 포함하고, PAp는 잔기 Glu20-Val98을 포함하며, Kringle1은 잔기 Cys103-Cys181을 포함하고, Kringle2는 잔기 Glu184-Cys262를 포함하며, Kringle3은 잔기 Cys275-Cys352를 포함하고, Kringle4는 잔기 Cys377-Cys454를 포함하며, Kringle5는 잔기 Cys481-Cys560을 포함한다. NCBI 데이터에 따르면, 세린 프로테아제 도메인은 잔기 Val581-Arg804를 포함한다.

Glu-플라스미노겐은 인간 천연 전장 플라스미노겐으로, 791개의 아미노산으로 구성(19개의 아미노산의 신호 펩티드를 포함하지 않음)되고, 상기 서열을 코딩하는 cDNA 서열은 서열 1로 표시된 바와 같으며, 이의 아미노산 서열은 서열 2로 표시된 바와 같다. 체내에는 또한 Glu-플라스미노겐의 76 ~ 77번 아미노산에서 가수분해되어 형성된 Lys-플라스미노겐이 존재하고, 서열 6으로 표시된 바와 같으며, 상기 아미노산 서열을 코딩하는 cDNA 서열은 서열 5로 표시된 바와 같다. 델타-플라스미노겐(δ-plasminogen)은 Kringle2-Kringle5 구조가 결실된 전장 플라스미노겐의 단편으로, Kringle1 및 세린 프로테아제 도메인(프로테아제 도메인(protease domain, PD)이라고도 함)만 포함하고, 문헌에 델타-플라스미노겐의 아미노산 서열(서열 8)이 보고되어 있으며, 상기 아미노산 서열을 코딩하는 cDNA 서열은 서열 7로 표시된 바와 같다. 미니플라스미노겐(Mini-plasminogen)은 Kringle5 및 세린 프로테아제 도메인으로 구성되고, 문헌에 잔기 Val443-Asn791(신호 펩티드를 포함하지 않는 Glu-플라스미노겐 서열의 Glu 잔기를 시작 아미노산으로 함)을 포함하는 것으로 보고되어 있으며, 이의 아미노산 서열은 서열 10으로 표시된 바와 같고, 상기 아미노산 서열을 코딩하는 cDNA 서열은 서열 9로 표시된 바와 같다. 마이크로플라스미노겐(Micro-plasminogen)은 세린 프로테아제 도메인만 포함하고, 문헌에 이의 아미노산 서열이 잔기 Ala543-Asn791(신호 펩티드를 포함하지 않는 Glu-플라스미노겐 서열의 Glu 잔기를 시작 아미노산으로 함)을 포함하는 것으로 보고되어 있으며, 특허 문헌 CN102154253A에도 이의 서열이 잔기 Lys531-Asn791(신호 펩티드를 포함하지 않는 Glu-플라스미노겐 서열의 Glu 잔기를 시작 아미노산으로 함)을 포함하는 것으로 보고되어 있으며, 본 특허 출원에서 마이크로플라스미노겐 서열은 특허 문헌 CN102154253A를 참조하고, 이의 아미노산 서열은 서열 12로 표시된 바와 같으며, 상기 아미노산 서열을 코딩하는 cDNA 서열은 서열 11로 표시된 바와 같다.

전장 플라스미노겐의 구조도 Aisina 등(Aisina R B, Mukhametova L I. Structure and function of plasminogen/plasmin system[J]. Russian Journal of Bioorganic Chemistry, 2014, 40(6):590-605)의 문장에 기재되어 있다. 상기 문장에서 Aisina 등은 플라스미노겐이 Kringle1, 2, 3, 4, 5 도메인 및 세린 프로테아제 도메인(프로테아제 도메인(protease domain, PD)이라고도 함)을 포함하고, 여기서 Kringles이 플라스미노겐과 저분자량 및 고분자량의 리간드의 결합(즉, 라이신 결합 활성)을 담당하여 플라스미노겐이 보다 개방된 배열로 전환되도록 함으로써 더 쉽게 활성화되며; 프로테아제 도메인(PD)은 잔기 Val562- Asn791이고, tPA 및 UPA가 플라스미노겐의 Arg561-Val562 활성화 결합을 특이적으로 절단하여 플라스미노겐이 플라스민으로 형성되도록 함으로써, 프로테아제 도메인(PD)은 플라스미노겐 단백질 분해 활성을 부여하는 영역이라는 것을 설명하였다.

본 발명의 “플라스민”과 “섬유소 용해 효소”, “피브린 용해 효소”는 상호교환하여 사용될 수 있고 의미는 동일하며; “플라스미노겐”과 “섬유소 용해 자이모겐”, “피브린 용해 자이모겐”은 상호교환하여 사용될 수 있고 의미는 동일하다.

본 발명에서, 상기 플라스미노겐 또는 플라스미노겐 활성의 “결핍”은 피험자 체내의 플라스미노겐 함량이 상기 피험자의 정상적인 생리 기능에 영향을 미칠만큼 정상인보다 낮다는 것을 의미하고; 상기 플라스미노겐 또는 플라스미노겐 활성의 “결실”은 피험자 체내의 플라스미노겐 함량이 정상인보다 현저히 낮고, 심지어는 활성 또는 발현이 극히 낮으며, 외부 공급에 의해서만 정상적인 생리 기능을 유지할 수 있다는 것을 의미한다.

당업자는 본 발명의 플라스미노겐의 모든 기술적 해결수단이 플라스민에 적용되기 때문에 본 발명에 기재된 기술적 해결수단이 플라스미노겐 및 플라스민을 포함하는 것을 이해할 수 있다. 순환 과정에서, 플라스미노겐은 폐쇄된 비활성 형태를 사용하지만, 혈전 또는 세포 표면에 결합되는 경우 플라스미노겐 활성제(plasminogen activator, PA)의 매개하에 개방형 형태를 갖는 활성 플라스민으로 전환된다. 활성을 갖는 플라스민은 피브린 응괴를 피브린 분해 산물 및 D-이량체로 추가 가수분해하여 혈전을 용해할 수 있다. 여기서 플라스미노겐의 PAp 도메인은 플라스미노겐이 비활성 폐쇄 형태로 유지하도록 하는 중요한 결정 인자를 포함하고, KR 도메인은 수용체 및 기질에 존재하는 라이신 잔기에 결합될 수 있다. 조직 플라스미노겐 활성제(tPA), 유로키나아제 플라스미노겐 활성제(uPA), 칼리크레인(kallikrein) 및 혈액 응고 인자 XII(하게만 인자) 등을 비롯한 다양한 효소가 플라스미노겐 활성제로 사용될 수 있다는 것이 알려져 있다.

“플라스미노겐 활성 단편”은 기질 표적 서열 중 라이신에 결합되는 활성(라이신 결합 활성), 또는 단백질 분해 기능을 발휘하는 활성(단백질 분해 활성), 또는 단백질 분해 활성 및 라이신 결합 활성을 갖는 단편을 의미한다. 본 발명에 따른 플라스미노겐의 기술적 해결수단은 플라스미노겐 활성 단편으로 플라스미노겐을 대체하는 기술적 해결수단을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 발명에 따른 플라스미노겐 활성 단편은 플라스미노겐의 세린 프로테아제 도메인을 포함하거나 또는 플라스미노겐의 세린 프로테아제 도메인으로 구성되고, 바람직하게는 본 발명에 따른 플라스미노겐 활성 단편은 서열 14 또는 서열 14와 적어도 80％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 서열 14 또는 서열 14와 적어도 80％, 90％, 95％, 96％, 97％, 98％, 99％의 동일성을 갖는 아미노산 서열로 구성된다. 일부 실시형태에서, 본 발명에 따른 플라스미노겐 활성 단편은 Kringle 1, Kringle 2, Kringle 3, Kringle 4, Kringle 5로부터 선택되는 하나 이상의 도메인을 포함하거나, 또는 Kringle 1, Kringle 2, Kringle 3, Kringle 4, Kringle 5로부터 선택되는 하나 이상의 도메인으로 구성된다. 일부 실시형태에서, 본 발명에 따른 플라스미노겐은 상기 플라스미노겐 활성 단편을 포함하는 단백질을 포함한다.

현재, 혈액 내 플라스미노겐 및 이의 활성 측정 방법은 조직 플라스미노겐 활성제 활성의 검출(t-PAA), 혈장 조직 플라스미노겐 활성제 항원의 검출(t-PAAg), 혈장 조직 플라스미노겐 활성의 검출(plgA), 혈장 조직 플라스미노겐 항원의 검출(plgAg), 혈장 조직 플라스미노겐 활성제 억제제 활성의 검출, 혈장 조직 플라스미노겐 활성제 억제제 항원의 검출, 혈장 플라스민-항플라스민 착물 검출(PAP)을 포함한다. 여기서 가장 일반적으로 사용되는 검출 방법은 발색 기질 방법으로, 검출할 혈장에 스트렙토키나아제(SK) 및 발색 기질을 첨가하고, 검출할 혈장 내의 PLG를 SK의 작용하에 PLM으로 전환하며, 후자를 발색 기질에 작용시키고, 그 다음 분광 광도계로 측정하며, 흡광도의 증가는 플라스미노겐 활성에 정비례한다. 또한, 면역화학적 방법, 겔 전기영동, 면역비탁법, 방사면역측정법을 사용하여 측정할 수도 있다.

“동원체 또는 병렬상동체(ortholog)”는 단백질 동원체 뿐만 아니라 DNA 동원체도 포함하는 상이한 종 사이의 동원체를 의미하고, 이종상동체 및 수직 동원체라고도 한다. 구체적으로 상이한 종의 동일한 조상 유전자에서 진화한 단백질 또는 유전자를 의미한다. 본 발명의 플라스미노겐은 인간 천연 플라스미노겐을 포함하고, 상이한 종으로부터 유래되고 플라스미노겐 활성을 갖는 플라스미노겐 동원체 또는 병렬상동체를 더 포함한다.

“보존적 치환 변이체”는 그 중 하나의 주어진 아미노산 잔기가 변경되나 단백질 또는 효소의 전체 형태 및 기능이 변경되지 않는 것을 의미하며, 이는 유사한 특성(예를 들어 산성, 염기성, 소수성 등)의 아미노산으로 모 단백질의 아미노산 서열 중의 아미노산을 치환하는 것을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 유사한 특성을 갖는 아미노산은 잘 알려져 있다. 예를 들어 아르기닌, 히스티딘 및 라이신은 친수성 염기성 아미노산이고 상호교환할 수 있다. 이와 같이, 이소류신이 소수성 아미노산이면, 류신, 메티오닌 또는 발린으로 대체될 수 있다. 따라서, 유사한 기능의 두 단백질 또는 아미노산 서열의 유사성은 상이할 수 있다. 예를 들어, MEGALIGN 알고리즘 기반의 70％ 내지 99%의 유사성(동일성)이다. “보존적 치환 변이체”는 BLAST 또는 FASTA 알고리즘을 통해 결정된 60％ 이상, 바람직하게는 75% 이상, 보다 바람직하게는 85% 이상, 또는 가장 바람직하게는 90% 이상의 아미노산 동일성을 갖는 폴리펩티드 또는 효소를 더 포함하고, 천연 또는 모 단백질 또는 효소에 비해 동일하거나 기본적으로 유사한 특성 또는 기능을 갖는다.

“분리된” 플라스미노겐은 자연 환경에서 분리 및/또는 회수된 플라스미노겐 단백질을 의미한다. 일부 실시형태에서, 상기 플라스미노겐은 (1) 90%, 95% 또는 98%보다 큰 순도(중량 기준), 예를 들어 Lowry 방법에 의해 결정된 99％(중량 기준)를 초과한 순도, (2) 스피닝 컵 서열 분석기를 사용하여 N 말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개의 잔기를 획득하기에 충분한 정도, 또는 (3) 환원 또는 비환원 조건에서 나트륨 도데실 설페이트-폴리아크릴아미드 겔 전기영동(SDS-PAGE)을 통해 쿠마시 블루 또는 은 염색을 사용하여 결정된 균질성으로 정제된다. 분리된 플라스미노겐은 또한 생물공학 기술을 통해 재조합 세포로부터 제조되고 적어도 하나의 정제 단계를 통해 분리된 플라스미노겐을 포함한다.

용어 “폴리펩티드”, “펩티드” 및 “단백질”은 본문에서 상호교환하여 사용될 수 있고, 유전적으로 코딩된 아미노산 및 비유전적으로 코딩된 아미노산, 화학적으로 또는 생화학적으로 변형되거나 유도체화된 아미노산, 및 변형된 펩티드 골격을 갖는 폴리펩티드를 포함할 수 있는 임의의 길이의 아미노산의 중합 형태를 의미한다. 상기 용어는 이종 아미노산 서열을 갖는 융합 단백질, 이종 및 상동 리더 서열(N 말단 메티오닌 잔기가 있거나 없음)을 갖는 융합체 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는 융합 단백질을 포함한다.

참조 폴리펩티드 서열에 대한 “아미노산 서열 상동성 백분율(%)”은 최대 백분율 서열 상동성을 달성하기 위해 필요시 갭을 도입한 후 임의의 보존적 치환을 서열 상동성의 일부로 고려하지 않는 경우, 참조 폴리펩티드 서열 중의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열의 아미노산 잔기의 백분율로 정의한다. 백분율 아미노산 서열 상동성을 측정하기 위한 정렬은 본 기술분야의 기술적 범위 내에서 다양한 방식으로 구현될 수 있고, 예를 들어 공개적으로 이용 가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예를 들어 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign(DNASTAR) 소프트웨어를 사용할 수 있다. 당업자는 비교될 서열의 전장에 대해 최대 정렬을 구현하는 데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여 서열을 정렬하기 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다. 그러나, 본 발명의 목적을 위해 아미노산 서열 상동성의 백분율 값은 서열 비교를 위한 컴퓨터 프로그램 ALIGN-2를 사용하여 생성된다.

ALIGN-2를 사용하여 아미노산 서열을 비교하는 경우, 주어진 아미노산 서열 B에 대한 주어진 아미노산 서열 A의 ％ 아미노산 서열 상동성(또는 주어진 아미노산 서열 B에 대하여, 주어진 아미노산 서열 B와 또는 이와 관련하여 ％ 아미노산 서열 상동성을 갖거나 포함하는 주어진 아미노산 서열 A로 표현될 수 있음)은 하기와 같이 계산된다.

분수 X/Y 곱하기 100

여기서 X는 서열 정렬 프로그램 ALIGN-2에 의한 A 및 B 정렬에서 동일한 매치로 스코어링된 아미노산 잔기의 수이고, 여기서 Y는 B 중의 아미노산 잔기의 총 수이다. 아미노산 서열 A의 길이가 아미노산 서열 B의 길이와 동일하지 않은 경우, B에 대한 A의 ％ 아미노산 서열 상동성은 A에 대한 B의 ％ 아미노산 서열 상동성과 같지 않다는 것을 이해해야 한다. 달리 명시적으로 설명되지 않는 한, 본문에 사용된 모든 ％ 아미노산 서열 상동성 값은 상술한 바와 같이 ALIGN-2 컴퓨터 프로그램을 사용하여 획득된다.

본문에 사용된 바와 같이, 용어 “치료”는 원하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 획득함을 의미한다. 상기 효과는 질환 또는 이의 증상의 발생, 발작을 완전히 또는 부분적으로 예방하거나, 질환 및/또는 이의 증상을 부분적으로 또는 완전히 경감하거나, 및/또는 질환 및/또는 이의 증상을 부분적으로 또는 완전히 치유할 수 있는 것이며, (a) 질환의 소인을 가질 수 있지만 질환이 있는 것으로 진단되지 않은 피험자 체내에서 질환의 발생 또는 발작을 예방하는 것; (b) 질환을 억제하는 것, 즉 질환의 발달을 막는 것; 및 (c) 질환 및/또는 이의 증상을 완화시키는 것, 즉 질환 및/또는 이의 증상을 퇴행 또는 소실시키는 것을 포함한다.

용어 “개체”, “피험자” 및 “환자”는 본문에서 상호교환하여 사용될 수 있고, 쥐(래트, 마우스), 비인간 영장류, 인간, 개, 고양이, 발굽이 있는 동물(예를 들어 말, 소, 양, 돼지, 염소) 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는 포유동물을 의미한다.

“치료 유효량” 또는 “유효량”은 질환을 치료하기 위해 포유동물 또는 다른 피험자에게 투여될 때 질환을 예방 및/또는 치료하기에 충분한 플라스미노겐 활성화 경로의 성분 또는 이의 관련 화합물(예를 들어, 플라스미노겐)의 양을 의미한다. “치료 유효량”은 사용된 플라스미노겐 활성화 경로의 성분 또는 이의 관련 화합물(예를 들어, 플라스미노겐), 치료할 피험자의 질환 및/또는 이의 증상의 중증도, 연령, 체중 등에 따라 변화된다.

본 발명의 “손상된 조직 및 기관 복구 촉진”은 손상된 조직 및 기관의 구조 및 기능의 복구를 촉진하여 손상된 조직 및 기관 해부학적 구조의 완전성 및 기능이 가능한 한 정상으로 회복되도록 하는 것을 의미한다.

본 발명의 “고혈압” 또는 “고혈압 병증”은 전신 동맥압이 정상보다 높은 상태를 의미한다. 1999년 세계보건기구/국제고혈압학회의 치료 지침에 따르면, 고혈압의 진단 기준은 수축기 혈압≥18.7 Kpa(140 mmHg) 또는 이완기 혈압≥12.0 Kpa(90 mmHg)이다. “저혈압” 또는 “저혈압 병증”은 전신 동맥압이 정상보다 낮은 상태를 의미한다. 저혈압의 진단은 통일된 기준이 없다. 일반적으로 성인의 상지 동맥의 수축기 혈압/이완기 혈압이 각각 12/8 kPa(90/60 mmHg)보다 작으면 저혈압으로 간주된다. “고혈압” 또는 “고혈압 병증” 및 “저혈압” 또는 “저혈압 병증”의 혈압 지표 진단 기준은 여러 국가의 질환 진단 매뉴얼의 구체적인 규정을 참조할 수도 있다.

본 발명에서, “고혈압” 또는 “고혈압 병증”이 있는 피험자에 대한 치료는 “고혈압” 또는 “고혈압 병증”을 앓고 있는 피험자의 고혈압을 “감소”시키거나 또는 “저하”시키는 것을 포함하고, 상기 “감소” 또는 “저하”는 피험자의 혈압을 투여하지 않은 대조군과 비교하여 또는 투여 전의 피험자의 혈압과 비교하여 혈압이 감소되며, 예를 들어 피험자의 혈압을 정상화시키거나 정상에 근접하도록 하거나 정상 수준으로 회복하도록 하는 것을 의미한다. 마찬가지로, 본 발명에서, 저혈압” 또는 “저혈압 병증”이 있는 피험자에 대한 치료는 “저혈압” 또는 “저혈압 병증”을 앓고 있는 피험자의 저혈압을 “상승”시키는 것을 포함한다. 상기 “상승”은 피험자의 혈압을 투여하지 않은 대조군과 비교하여 또는 투여 전의 피험자의 혈압과 비교하여 혈압이 상승되며, 예를 들어 피험자의 혈압을 정상화시키거나 정상에 근접하도록 하거나 정상 수준으로 회복하도록 하는 것을 의미한다.

“합병증”은 질환이 발달 과정에서 다른 질환 또는 증상의 발생을 유발하고, 후자는 전자의 합병증이며, 즉 후자의 질환의 발생은 전자의 질환에 의해 유발되거나, 또는 질환의 진단 및 치료 과정에서 환자가 이러한 질환과 관련된 다른 또는 여러 질환이 발생함을 의미한다.

“고혈압 합병증”은 고혈압으로 인한 심장, 뇌, 폐, 간, 신장 또는 혈관 손상을 포함하는 고혈압으로 인한 합병증을 의미한다. 고혈압으로 인한 심장 손상의 합병증은 예를 들어 좌심실 비대, 협심증, 심근경색 및 심부전이 있고; 고혈압으로 인한 뇌 조직 손상의 합병증은 예를 들어 뇌출혈, 뇌혈전, 뇌경색, 출혈성 뇌졸중, 허혈성 뇌졸중, 고혈압성 뇌병증이 있으며; 고혈압으로 인한 신장 손상은 예를 들어 천천히 진행되는 세동맥 신경화증, 악성 세동맥 신경화증, 만성 신부전, 고혈압성 신장 질환, 신부전, 요독증이 있다. 고혈압의 가장 흔한 합병증은 뇌혈관 발작이고, 다음으로 고혈압성 심장 질환, 심부전이며, 그 다음으로 신부전이다. 드물지만 심각한 합병증은 대동맥 박리성 동맥류이다.

“저혈압 합병증”은 저혈압으로 인한 합병증을 의미한다. 저혈압의 흔한 합병증은 대부분 중요한 장기의 불충분한 관류로 인해 발생한다. 예를 들어 뇌에 혈액 공급이 부족하면 주로 이명, 현기증 등으로 나타나고, 심각한 경우 뇌경색이 동반될 수 있으며; 심장에 혈액 공급이 부족하면 주로 심계항진, 가슴 답답함 등으로 나타나고; 신장에 혈액 공급이 부족하면 주로 핍뇨, 단백뇨로 나타나고, 심각한 경우 무뇨증과 같은 신장 기능 부전 현상이 발생한다.

본 발명의 플라스미노겐의 제조

플라스미노겐은 자연계에서 분리되고 정제되어 추가적인 치료 용도에 사용되거나, 표준 화학 펩티드 합성 기술을 통해 합성될 수 있다. 폴리펩티드가 화학적으로 합성되는 경우, 액상 또는 고상을 통해 합성될 수 있다. 고상 폴리펩티드 합성(SPPS)(여기서 서열의 C 말단 아미노산을 불용성 지지체 부착한 다음, 서열의 나머지 아미노산을 순차적으로 첨가함)은 플라스미노겐의 화학적 합성에 적합한 방법이다. Fmoc 및 Boc와 같은 다양한 형태의 SPPS는 플라스미노겐의 합성에 사용할 수 있다. 고상 합성 기술은 Barany 및 Solid-Phase Peptide Synthesis; 제3-284페이지 The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology. 제2권: Special Methods in Peptide Synthesis, Part A., Merrifield, 등. J.Am.Chem.Soc., 85:2149-2156(1963); Stewart 등, Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd ed. Pierce Chem.Co., Rockford, Ill.(1984); 및 Ganesan A.2006Mini Rev.Med Chem.6:3-10 및 Camarero JA 등 2005 Protein Pept Lett.12:723-8에 기재되어 있다. 간단히 말해서, 펩티드 사슬이 구축되어 있는 기능성 단위로 작은 불용성 다공성 비드를 처리한다. 커플링/탈보호의 반복된 주기 후에, 부착된 고상이 없는 N 말단 아민과 단일 N 보호 아미노산 단위를 커플링한다. 그 다음 이 단위를 탈보호하여 다른 아미노산에 부착될 수 있는 새로운 N 말단 아민을 나타낸다. 펩티드는 고상에 고정된 상태로 유지되며, 그 후에 이를 절단한다.

표준 재조합 방법을 사용하여 본 발명의 플라스미노겐을 생산할 수 있다. 예를 들어, 플라스미노겐을 코딩하는 핵산을 발현 벡터에 삽입하여 발현 벡터 중의 조절 서열에 작동 가능하게 연결되도록 한다. 발현 조절 서열은 프로모터(예를 들어, 천연적으로 연관된 또는 이종 프로모터), 신호 서열, 인핸서 요소 및 전사 종결 서열을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 발현 조절은 진핵 숙주 세포(예를 들어, COS 또는 CHO 세포)를 형질전환 또는 형질감염시킬 수 있는 벡터 중의 진핵 프로모터 시스템일 수 있다. 벡터가 적합한 숙주에 통합되면, 뉴클레오티드 서열의 고수준 발현 및 플라스미노겐의 수집 및 정제에 적합한 조건하에 숙주가 유지된다.

적합한 발현 벡터는 통상적으로 숙주 유기체에서 에피솜 또는 숙주 염색체 DNA의 통합 부분으로서 복제된다. 통상적으로, 발현 벡터는 선택 가능한 마커(예를 들어, 암피실린(ampicillin) 내성, 하이그로마이신(hygromycin) 내성, 테트라사이클린(tetracycline) 내성, 카나마이신(kanamycin) 내성 또는 네오마이신(neomycin) 내성)을 포함하여 원하는 외인성 DNA 서열로 형질전환된 세포를 검출하는 데 도움이 된다.

대장균(Escherichia coli)은 주제 화합물을 클로닝하여 폴리뉴클레오티드를 코딩하는 원핵 숙주 세포의 예일 수 있다. 사용하기에 적합한 다른 미생물 숙주는 간균, 예를 들어 고초균(Bacillus subtilis) 및 다른 장내세균과(enterobacteriaceae), 예를 들어 살모넬라속(Salmonella), 셀라티아속(Serratia), 및 다양한 슈도모나스속(Pseudomonas) 종을 포함한다. 이러한 원핵 숙주에서 또한 발현 벡터를 생성할 수 있고, 이는 통상적으로 숙주 세포와 양립할 수 있는 발현 조절 서열(예를 들어, 복제 기점)을 포함할 수 있다. 또한, 락토오스 프로모터 시스템, 트립토판(trp) 프로모터 시스템, beta-락타마제 프로모터 시스템, 또는 박테리오파지 λ로부터의 프로모터 시스템과 같은 공지된 다양한 프로모터가 있다. 프로모터는 선택적으로 작동 유전자 서열의 경우에 통상적으로 발현을 제어하고, 전사 및 번역을 개시 및 완료하기 위해 리보솜 결합 부위 서열 등을 갖는다.

효모와 같은 다른 미생물도 발현에 사용될 수 있다. 효모(예를 들어, 출아형 효모(S.cerevisiae)) 및 피키아(Pichia)는 적절한 효모 숙주 세포의 예로, 여기서 적절한 벡터는 필요에 따라 발현 조절 서열(예를 들어, 프로모터), 복제 기점, 종결 서열 등을 갖는다. 전형적인 프로모터는 3-포스포글리세르산 키나아제 및 기타 당분해 효소를 포함한다. 특히 유도성 효모 프로모터는 에탄올 탈수소 효소, 이소시토크롬 C, 및 말토스 및 갈락토스 이용을 담당한 효소로부터의 프로모터를 포함한다.

미생물 외에, 포유동물 세포(예를 들어, 시험관내 세포 배양물에서 배양된 포유동물 세포)는 또한 본 발명의 플라스미노겐(예를 들어, 플라스미노겐을 코딩하는 폴리뉴클레오티드)을 발현 및 생성하는 데 사용될 수 있다. Winnacker,From Genes to Clones,VCH Publishers,N.Y.,N.Y.(1987)를 참조한다. 적합한 포유동물 숙주 세포는 CHO 세포주, 다양한 Cos 세포주, HeLa 세포, 골수종 세포주, 및 형질전환된 B 세포 또는 하이브리도마를 포함한다. 이러한 세포에 사용되는 발현 벡터는 복제 기점, 프로모터 및 인핸서(Queen 등, Immunol.Rev.89:49(1986))와 같은 발현 조절 서열, 및 리보솜 결합 부위, RNA 스플라이싱 부위, 폴리아데닐화 부위 및 전사 종결자 서열과 같은 필수적인 가공 정보 부위를 포함할 수 있다. 적합한 발현 조절 서열의 예는 면역글로불린 유전자, SV40, 아데노바이러스, 소유두종바이러스, 거대세포바이러스 등으로부터 유래된 프로모터이다. Co 등, J.Immunol.148:1149(1992)를 참조한다.

일단 합성(화학적 또는 재조합적 방식)되면, 황산암모늄 침전, 친화성 컬럼, 컬럼 크로마토그래피, 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC), 겔 전기영동 등을 포함하는 본 기술분야의 표준 절차에 따라 본 발명에 따른 플라스미노겐을 정제할 수 있다. 상기 플라스미노겐은 기본적으로 순수하고, 예를 들어 적어도 약 80% 내지 85%, 적어도 약 85% 내지 90%, 적어도 약 90% 내지 95% 순수하거나, 또는 98% 내지 99% 순수하거나 더 순수하며, 예를 들어 세포 파편, 플라스미노겐 이외의 거대 분자 등과 같은 오염 물질을 포함하지 않는다.

약물 제제

원하는 순도의 플라스미노겐을 선택 가능한 약학적으로 허용 가능한 벡터, 부형제 또는 안정화제(Remington's Pharmaceutical Sciences, 16판, Osol, A.ed.(1980))와 혼합하여 동결건조제 또는 수용액을 형성함으로써 치료 제제를 제조할 수 있다. 허용 가능한 벡터, 부형제, 안정화제는 사용된 용량 및 농도하에 피험자에게 무독성이고, 인산염, 시트르산염 및 다른 유기산과 같은 완충제; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 방부제(예를 들어 옥타데실디메틸벤질암모늄 클로라이드; 헥산디아민 클로라이드; 벤잘코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부탄올 또는 벤질 알코올; 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라히드록시벤조에이트; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; m-크레졸); 저분자량 폴리펩티드(약 10개 미만의 잔기); 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 라이신과 같은 아미노산; 단당류, 이당류 및 포도당, 만노오스 또는 덱스트린을 포함하는 다른 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 수크로스, 만니톨, 푸코스 또는 소르비톨과 같은 당류; 나트륨과 같은 염 형성 반대 이온; 금속 착물(예를 들어, 아연-단백질 착물); 및/또는 TWEENTM, PLURONICSTM 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 비이온성 계면활성제를 포함한다.

본 발명의 제제는 또한 치료해야 할 구체적인 병증에 필요한 하나 이상의 활성 화합물을 포함할 수 있고, 바람직하게는 활성이 상보적이며 서로 부작용이 없는 것이다. 예를 들어, 항고혈압 약물, 항부정맥 약물, 당뇨병 치료 약물 등이다.

본 발명의 플라스미노겐은 코아세르베이션(coacervation) 또는 계면 중합과 같은 기술을 통해 제조된 마이크로캡슐에 캡슐화될 수 있으며, 예를 들어 콜로이드성 약물 전달 시스템(예를 들어, 리포솜, 알부민 마이크로스피어, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐) 또는 매크로에멀젼의 히드록시메틸셀룰로스 또는 겔-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸 메타크릴레이트) 마이크로캡슐에 배치할 수 있다. 이러한 기술은 Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.(1980)에 공개되어 있다.

체내 투여를 위한 본 발명의 플라스미노겐은 무조건 멸균된 것이다. 이는 동결 건조 및 재조제 전후에 멸균 필터를 통한 여과에 의해 쉽게 구현될 수 있다.

본 발명의 플라스미노겐은 서방형 제제로 제조될 수 있다. 서방형 제제의 적합한 예는 멤브레인 또는 마이크로캡슐과 같이 일정한 형태를 갖고 당단백질을 포함하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함한다. 서방형 매트릭스의 예는 폴리에스테르, 하이드로겔(예를 들어, 폴리(2-히드록시에틸-메타크릴레이트)(Langer 등, J.Biomed.Mater.Res.,15:167-277(1981); Langer,Chem.Tech.,12:98-105(1982)) 또는 폴리(비닐 알코올), 폴리락티드(미국 특허 3773919,EP 58,481), L-글루탐산과 γ에틸-L-글루탐산의 공중합체(Sidman, 등, Biopolymers 22:547(1983)), 비분해성 에틸렌-비닐 아세테이트(ethylene-vinyl acetate)(Langer, 등, 출처는 상기와 같음), 또는 Lupron DepotTM(젖산-글리콜산 공중합체 및 류프롤라이드(leuprolide) 아세테이트로 구성된 주사 가능한 마이크로스피어)과 같은 분해성 젖산-글리콜산 공중합체, 및 폴리D-(-)-3-히드록시부티르산을 포함한다. 에틸렌-비닐 아세테이트 및 젖산-글리콜산과 같은 중합체는 100일 이상 동안 연속적으로 분자를 방출할 수 있지만 일부 하이드로겔은 단백질을 방출하는 시간이 비교적 짧다. 관련 메커니즘에 따라 단백질의 안정화를 위한 합리적인 전략을 설계할 수 있다. 예를 들어, 축합 메커니즘이 티오디설피드 교환을 통해 분자간 S-S 결합을 형성하는 것으로 발견되면, 설프히드릴 잔기를 변형시키고 산성 용액에서 동결 건조하며 습도를 조절하고 적절한 첨가제를 사용하며 특정된 중합체 매트릭스 조성물을 개발하여 안정화를 구현할 수 있다.

투여 및 용량

비강 흡입, 에어로졸 흡입, 점비액 또는 점안액, 정맥내, 복강내, 피하, 두개내, 척추강내, 동맥내(예를 들어, 경동맥을 통해), 직장내, 근육내, 직장 투여와 같이 상이한 방식을 통해 본 발명의 약학적 조성물의 투여를 구현할 수 있다.

비경구 투여를 위한 제조물은 멸균된 수성 또는 비수성 용액, 현탁액 및 에멀젼을 포함한다. 비수성 용매의 예로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 및 에틸 올레이트와 같은 주사 가능한 유기 에스테르이다. 수성 벡터는 물, 알코올성/수성 용액, 염수 및 완충 매질을 포함한 에멀젼 또는 현탁액을 포함한다. 비경구 비히클은 염화나트륨 용액, 링거 덱스트로스, 덱스트로스 및 염화나트륨 또는 고정유를 포함한다. 정맥내 비히클은 액체 및 영양 보충제, 전해질 보충제 등을 포함한다. 또한 방부제 및 다른 첨가제, 예를 들어 항미생물제, 항산화제, 킬레이트제 및 불활성 가스 등이 존재할 수 있다.

의료진은 다양한 임상 요인에 기반하여 용량 방법을 결정한다. 의료 분야에 공지된 바와 같이, 임의의 환자의 용량은 환자의 체격, 체표면적, 연령, 투여할 구체적인 화합물, 성별, 투여 횟수 및 경로, 일반적인 건강 및 동시에 투여되는 다른 약물을 비롯한 다양한 요인에 따라 결정된다. 본 발명의 플라스미노겐을 포함하는 약학적 조성물의 용량 범위는 예를 들어 매일 약 0.0001 내지 2000 mg/kg, 또는 약 0.001 내지 500 mg/kg(예를 들어 0.02 mg/kg, 0.25 mg/kg, 0.5 mg/kg, 0.75 mg/kg, 10 mg/kg, 50 mg/kg 등) 피험자 체중일 수 있다. 예를 들어, 용량은 1 mg/kg 체중 또는 50 mg/kg 체중 또는 1 ~ 50 mg/kg 범위, 또는 적어도 1 mg/kg일 수 있다. 이 예시적인 범위보다 높거나 낮은 용량도 특히 상기 요인을 고려하여 포함된다. 상기 범위 중의 중간 용량도 본 발명의 범위 내에 포함된다. 피험자는 매일, 격일, 매주 또는 경험적 분석에 의해 결정된 임의의 다른 일정에 따라 이러한 용량을 투여할 수 있다. 예시적인 용량 일정은 연속적으로 몇일 0.01 ~ 100 mg/kg을 포함한다. 본 발명의 약물 투여 과정에서 치료 효과 및 안전성을 실시간으로 평가해야 한다.

제품 또는 키트

본 발명의 일 실시형태는 고혈압 및 이의 관련 질환을 치료할 수 있는 본 발명의 플라스미노겐 또는 플라스민을 포함하는 제품 또는 키트에 관한 것이다. 상기 제품은 바람직하게는 하나의 용기, 라벨 또는 패키지 인서트를 포함한다. 적합한 용기는 병, 바이알, 주사기 등이 있다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로 제조될 수 있다. 상기 용기는 조성물을 포함하고, 상기 조성물은 본 발명의 질환 또는 병증을 효과적으로 치료하고 멸균 접근 포트(예를 들어, 상기 용기는 피하 주사바늘이 관통할 수 있는 마개를 포함하는 정맥내 용액 팩 또는 바이알일 수 있음)를 갖는다. 상기 조성물 중 적어도 하나의 활성제는 플라스미노겐/플라스민이다. 상기 용기 상의 또는 부착된 라벨은 상기 조성물이 본 발명에 따른 고혈압 및 이의 관련 병증의 치료에 사용됨을 나타낸다. 상기 제품은 약학적으로 허용 가능한 완충액을 포함하는 제2 용기를 추가로 포함할 수 있는 바, 예를 들어 인산완충식염수, 링거 용액 및 포도당 용액이다. 다른 완충액, 희석제, 필터, 바늘 및 주사기를 포함하여 상업적 및 사용자 관점에서 요구되는 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 제품은 사용 지침이 있는 패키지 인서트를 포함하고, 예를 들어 상기 조성물의 사용자가 플라스미노겐 조성물 및 수반되는 질환의 치료를 위한 다른 약물을 환자에게 투여하도록 지시하는 것을 포함한다.

실시예

하기 실시예에서 사용되는 모든 플라스미노겐은 공여자 혈장에서 유래된 인간 플라스미노겐이고, KennethC Robbins,Louis Summaria, David Elwyn et al. Further Studies on the Purification and Characterization of Human Plasminogen and Plasmin. Journal of Biological Chemistry, 1965, 240 (1) :541-550; Summaria L, Spitz F, Arzadon L et al. Isolation and characterization of the affinity chromatography forms of human Glu- and Lys-plasminogens and plasmins. J Biol Chem. 1976 Jun 25; 251(12):3693-9; HAGAN JJ, ABLONDI FB, DE RENZO EC. Purification and biochemical properties of human plasminogen. J Biol Chem. 1960 Apr;235:1005-10에 기재된 방법에 기반하여, 공정 최적화를 수행하고, 인간 혈장으로부터 정제하여 획득하며, 여기서 인간 Lys-플라스미노겐(Lys-플라스미노겐) 및 Glu-플라스미노겐(Glu-플라스미노겐)>98%이다.

하기 실시예 1 ~ 5에서 db/db 마우스(Nanjing Institute of Biomedicine에서 구입, 균주명 BKS.Cg-Dock7m+/-Leprdb/JNju)를 고혈압 모델로 사용하고, 고혈압에 대한 플라스미노겐의 작용을 연구하였다. 여러 문헌에서 db/db 마우스가 11 ~ 14주에 자발적으로 고혈압이 발생하고, 연령이 증가함에 따라 혈압이 지속적으로 상승하는 경향이 있다고 보고하였다^[24,25].

실시예 1 15 ~ 16주령 당뇨병 마우스의 고혈압을 감소시키는 플라스미노겐

12마리의 15 ~ 16주령 db/db 수컷 마우스를 취하였다. 투여 하루 전, 무게를 측정한 후 기저 혈압을 검출하고, 혈압에 따라 랜덤으로 두 그룹으로 나누었는 바, 비히클 PBS 투여 대조군 및 플라스미노겐 투여군으로 각각 6마리이다. 플라스미노겐 투여군 마우스는 2 mg/0.2 ml/마리/일에 따라 플라스미노겐을 꼬리 정맥 주사하고, 비히클 PBS 투여 대조군 마우스는 동일한 부피의 PBS 용액을 꼬리 정맥 주사하며, 21일 동안 연속 투여하였다. 투여 시작일을 1일차로 하고, 0, 8, 15, 22일차에 혈압을 측정하며, 각 마우스는 5회 연속 측정하고, 매회 측정된 수축기 혈압 및 평균 혈압을 기록하였다. 수축기 혈압 및 평균 혈압은 각각 5회 측정하여 얻은 수축기 혈압 및 평균 혈압 데이터의 평균값이다. 평균 혈압의 계산 방법은 1/3의 수축기 혈압+2/3의 이완기 혈압이다. 마우스의 혈압은 비침습적 혈압계(MRBP-M01, IITC Life science)를 사용하여 검출하였다.

결과에 따르면, 투여 21일 후 PBS 대조군 마우스의 혈압은 투여 전과 비교하여 유의한 변화가 없고, 플라스미노겐 투여군 마우스의 수축기 혈압(도 1의 A)과 평균 혈압(도 1의 B)은 유의하게 감소하며, 모두 비히클 PBS 투여 대조군보다 유의하게 낮고, 통계학적 차이가 현저하다(*는 P<0.05를 나타내고, **는 P<0.01을 나타냄). 이는 플라스미노겐이 15 ~ 16주령 당뇨병 마우스의 고혈압을 현저히 감소시킬 수 있음을 나타낸다.

실시예 2 25 ~ 26주령 당뇨병 마우스의 고혈압을 감소시키는 플라스미노겐

13마리의 25 ~ 26주령 db/db 수컷 마우스를 취하였다. 투여 하루 전, 무게를 측정한 후 기저 혈압을 검출하고, 혈압에 따라 랜덤으로 두 그룹으로 나누었는 바, 비히클 PBS 투여 대조군은 6마리이고 플라스미노겐 투여군은 7마리이다. 플라스미노겐 투여군 마우스는 2 mg/0.2 ml/마리/일에 따라 플라스미노겐을 꼬리 정맥 주사하고, 비히클 PBS 투여 대조군 마우스는 동일한 부피의 PBS 용액을 꼬리 정맥 주사하며, 21일 동안 연속 투여하였다. 투여 시작일을 1일차로 하고, 0, 8, 15, 22일차에 혈압을 측정하며, 각 마우스는 5회 연속 측정하고, 매회 측정된 수축기 혈압 및 평균 혈압을 기록하였다. 수축기 혈압 및 평균 혈압은 각각 5회 측정하여 얻은 수축기 혈압 및 평균 혈압 데이터의 평균값이다. 마우스의 혈압은 비침습적 혈압계(MRBP-M01, IITC Life science)를 사용하여 검출하였다.

결과에 따르면, 투여 21일 후 PBS 대조군 마우스의 수축기 혈압은 투여 전과 비교하여 유의한 변화가 없고, 플라스미노겐 투여군 마우스의 수축기 혈압은 투여 7일 후에 현저히 감소하기 시작하며, 비히클 PBS 투여 대조군보다 유의하게 낮고, 통계학적 차이가 현저하며(P=0.019); 투여 14일, 21일 후 두 그룹의 마우스도 차이가 현저하다(도 2의 A). 투여 21일 후, 플라스미노겐군 마우스의 평균 혈압은 비히클 PBS 투여 대조군보다 낮고, 그 차이는 유의에 근접하다(P=0.09)(도 2의 B). 이는 플라스미노겐이 25 ~ 26주령 당뇨병 마우스의 높은 수축기 혈압을 현저히 감소시킬 수 있음을 나타낸다.

실시예 3 당뇨병 고혈압 모델 마우스의 혈청 안지오텐신 II 수준을 감소시키는 플라스미노겐

12마리의 15 ~ 16주령 db/db 수컷 마우스를 취하였다. 투여 하루 전, 무게를 측정한 후 기저 혈압을 검출하고, 혈압에 따라 랜덤으로 두 그룹으로 나누었는 바, 비히클 PBS 투여 대조군 및 플라스미노겐 투여군으로 각각 6마리이다. 플라스미노겐 투여군 마우스는 2 mg/0.2 ml/마리/일에 따라 플라스미노겐을 꼬리 정맥 주사하고, 비히클 PBS 투여 대조군 마우스는 동일한 부피의 PBS 용액을 꼬리 정맥 주사하며, 28일 동안 연속 투여하였다. 29일차에 안구를 적출하여 혈액을 채취하고, 원심분리하여 상층액을 얻었다. 안지오텐신 II 검출 키트(제조업체: Wuhan Huamei Biological Engineering Co., Ltd., 제품번호: CSB-E04495m)의 설명서에 따라 혈청 안지오텐신 II 수준을 검출하였다.

결과에 따르면, 플라스미노겐을 28일 동안 투여한 후 플라스미노겐 투여군의 혈청 안지오텐신 II 수준은 비히클 PBS 투여 대조군(도 3)보다 유의하게 낮다. 이는 플라스미노겐이 당뇨병 고혈압 모델 마우스의 혈청 안지오텐신 II 수준을 감소시켜 고혈압을 개선할 수 있음을 나타낸다.

실시예 4 당뇨병 고혈압 모델 마우스의 심장 손상 복구를 촉진하는 플라스미노겐

13마리의 25 ~ 26주령 db/db 수컷 마우스를 취하였다. 투여 하루 전, 무게를 측정한 후 기저 혈압을 검출하고, 혈압에 따라 랜덤으로 두 그룹으로 나누었는 바, 비히클 PBS 투여 대조군은 6마리이고 플라스미노겐 투여군은 7마리이다. 플라스미노겐 투여군 마우스는 2 mg/0.2 ml/마리/일에 따라 플라스미노겐을 꼬리 정맥 주사하고, 비히클 PBS 투여 대조군 마우스는 동일한 부피의 PBS 용액을 꼬리 정맥 주사하며, 28일 동안 연속 투여하였다. 29일차에 마우스를 희생시키고 심장을 취하여 4% 파라포름알데히드 고정액에 24시간 동안 고정시켰다. 고정된 조직 샘플을 알코올 구배로 탈수하고 자일렌으로 투명하게 한 후 파라핀 포매를 수행하였다. 조직 절편의 두께는 4 μm이고, 절편을 탈납 및 재수화하고 헤마톡실린 및 에오신으로 염색(H&E 염색)하며, 1% 염산 알코올로 분화하고 암모니아수로 파란색으로 되돌리며 알코올 구배로 탈수하고 절편을 밀봉하며, 절편을 200배 광학 현미경으로 관찰하였다.

결과에 따르면, 비히클 PBS 투여 대조군(도 4의 A)에 비해 플라스미노겐 투여군(도 4의 B) 마우스의 심근 세포 사이는 더 긴밀하고 배열이 더 규칙적이다. 이는 플라스미노겐이 당뇨병 고혈압 모델 마우스의 심장 손상을 유의하게 개선할 수 있음을 나타낸다.

실시예 5 당뇨병 고혈압 모델 마우스의 신장 섬유화를 경감하는 플라스미노겐

13마리의 25 ~ 26주령 db/db 수컷 마우스를 취하였다. 투여 하루 전, 무게를 측정한 후 기저 혈압을 검출하고, 혈압에 따라 랜덤으로 두 그룹으로 나누었는 바, 비히클 PBS 투여 대조군은 6마리이고 플라스미노겐 투여군은 7마리이다. 플라스미노겐 투여군 마우스는 2 mg/0.2 ml/마리/일에 따라 플라스미노겐을 꼬리 정맥 주사하고, 비히클 PBS 투여 대조군 마우스는 동일한 부피의 PBS 용액을 꼬리 정맥 주사하며, 28일 동안 연속 투여하였다. 29일차에 마우스를 희생시키고 신장을 취하여 4% 파라포름알데히드 고정액에 24시간 동안 고정시켰다. 고정된 조직을 알코올 구배로 탈수하고 자일렌으로 투명하게 한 후 파라핀 포매를 수행하였다. 조직 절편의 두께는 3 μm이고, 절편을 물로 탈납한 후 물로 1회 세척하며, 0.1% 시리우스 적색 포화 피크르산으로 30분 동안 염색하고, 흐르는 물로 2 min 동안 헹구며, 헤마톡실린으로 1분 동안 염색하고, 흐르는 물로 헹구며, 1% 염산 알코올로 분화하고 암모니아수로 파란색으로 되돌린 다음 흐르는 물로 헹구며, 건조 후 중성 검으로 절편을 밀봉하고, 200배 광학 현미경으로 관찰하였다.

시리우스 적색 염색은 콜라겐을 영구적으로 염색할 수 있고, 병리학적 절편을 위한 특수 염색법으로 시리우스 적색 염색은 콜라겐 조직을 특이적으로 표시할 수 있다.

결과에 따르면, 플라스미노겐을 28일 동안 투여한 후 플라스미노겐 투여군(도 5의 B)의 신장 콜라겐 섬유 침착(화살표로 표시)은 비히클 PBS 투여 대조군(도 5의 A)보다 유의하게 적다. 이는 플라스미노겐이 당뇨병 고혈압 모델 마우스의 신장 섬유화를 유의하게 감소시킬 수 있음을 나타낸다.

실시예 6 안지오텐신 II 유도 고혈압 모델 마우스의 혈청 SOD 수준을 증가시키는 플라스미노겐

14마리의 21 ~ 22주령 Plg+/+ 수컷 마우스를 취하여 혈압 및 체중을 측정하고, 혈압 및 체중에 따라 마우스를 랜덤으로 세 그룹으로 나누었는 바, 블랭크 대조군은 4마리이고, 비히클 PBS 투여 대조군 및 플라스미노겐 투여군은 각각 5마리이다. 블랭크 대조군 마우스는 0.1 ml의 생리식염수를 피하 주사하고, 비히클 PBS 투여 대조군 및 플라스미노겐 투여군 마우스는 1 mg/kg/마리/일에 따라 안지오텐신 II를 피하 주사하며, 14일 동안 연속 주사 및 모델링하였다^[26]. 모델링을 시작하는 동시에 플라스미노겐 또는 비히클을 투여하기 시작하고, 플라스미노겐 투여군 마우스는 1 mg/0.1 ml/마리/일에 따라 플라스미노겐을 꼬리 정맥 주사하고, 비히클 PBS 투여 대조군 마우스는 동일한 부피의 PBS 용액을 꼬리 정맥 주사하며, 14일 동안 연속 투여하고; 블랭크 대조군 마우스는 투여 처리를 수행하지 않았다. 모델링 및 투여 시작일을 1일차로 하고, 15일차에 안구를 적출하여 혈액을 채취하고, 원심분리하여 상층액을 얻어, 혈청 내 과산화물제거효소(Super Oxide Dismutase, SOD) 수준을 검출하였다. SOD 검출은 SOD 검출 키트(Nanjing Jiancheng Bioengineering Research Institute, 제품번호 A001-1)를 사용하고, 설명서에 표시된 방법에 따라 검출하였다.

SOD는 신체에서 자유 라디칼을 제거하는 중요한 효소 시스템으로 과산화물음이온(o2-)을 제거할 수 있고, o2-는 활성 산소의 시작 자유 라디칼이며, 연구에 따르면 SOD는 고혈압에 대해 보호 효과가 있고, 고혈압 환자의 SOD 수준은 감소된다^[27].

결과에 따르면, 블랭크 대조군의 혈청에는 일정한 수준의 SOD가 있고, 비히클 PBS 투여 대조군의 혈청 SOD 수준은 유의하게 감소하며, 플라스미노겐 투여군의 혈청 SOD 수준은 비히클 PBS 투여 대조군보다 유의하게 높고, 통계학적 차이가 현저하다(*는 P<0.05를 나타냄)(도 6). 이는 플라스미노겐이 자유 라디칼을 제거하는 신체의 능력을 증강시킬 수 있음을 나타낸다.

실시예 7 안지오텐신 II 유도 고혈압 모델 마우스의 신장 섬유화를 경감하는 플라스미노겐

14마리의 21 ~ 22주령 Plg+/+ 수컷 마우스를 취하여 혈압 및 체중을 측정하고, 혈압 및 체중에 따라 마우스를 랜덤으로 세 그룹으로 나누었는 바, 블랭크 대조군은 4마리이고, 비히클 PBS 투여 대조군 및 플라스미노겐 투여군은 각각 5마리이다. 블랭크 대조군 마우스는 0.1 ml의 생리식염수를 피하 주사하고, 비히클 PBS 투여 대조군 및 플라스미노겐 투여군 마우스는 1 mg/kg/마리/일에 따라 안지오텐신 II를 피하 주사하며, 14일 동안 연속 피하 주사 및 모델링하였다^[26]. 모델링을 시작하는 동시에 플라스미노겐 또는 비히클을 투여하기 시작하고, 플라스미노겐 투여군 마우스는 1 mg/0.1 ml/마리/일에 따라 플라스미노겐을 꼬리 정맥 주사하고, 비히클 PBS 투여 대조군 마우스는 동일한 부피의 PBS 용액을 꼬리 정맥 주사하며, 14일 동안 연속 투여하고; 블랭크 대조군 마우스는 투여 처리를 수행하지 않았다. 모델링 및 투여 시작일을 1일차로 하고, 15일차에 마우스를 희생시키고 신장을 취하여 4% 파라포름알데히드 고정액에 24시간 동안 고정시켰다. 고정된 신장 조직을 알코올 구배로 탈수하고 자일렌으로 투명하게 한 후 파라핀 포매를 수행하였다. 조직 절편의 두께는 3 μm이고, 절편을 물로 탈납한 후 물로 1회 세척하며, 0.1% 시리우스 적색 포화 피크르산으로 30분 동안 염색하고, 흐르는 물로 2 min 동안 헹구며, 헤마톡실린으로 1분 동안 염색하고, 흐르는 물로 헹구며, 1% 염산 알코올로 분화하고 암모니아수로 파란색으로 되돌린 다음 흐르는 물로 헹구며, 건조 후 중성 검으로 절편을 밀봉하고, 200배 광학 현미경으로 관찰하였다.

결과에 따르면, 블랭크 대조군(도 7의 A) 마우스의 신장에는 유의한 콜라겐 섬유 침착이 없고, 플라스미노겐 투여군(도 7의 C)의 콜라겐 섬유 침착(화살표로 표시)은 비히클 PBS 투여 대조군(도 7의 B)보다 유의하게 적다. 이는 플라스미노겐이 안지오텐신 II 유도 고혈압 모델 마우스의 신장 섬유화를 유의하게 감소시키고 고혈압으로 인한 신장 병변을 개선할 수 있음을 나타낸다.

실시예 8 안지오텐신 II 유도 고혈압 모델 마우스의 심장 섬유화를 경감하는 플라스미노겐

14마리의 21 ~ 22주령 Plg+/+ 수컷 마우스를 취하여 혈압 및 체중을 측정하고, 혈압 및 체중에 따라 마우스를 랜덤으로 세 그룹으로 나누었는 바, 블랭크 대조군운 4마리이고, 비히클 PBS 투여 대조군 및 플라스미노겐 투여군은 각각 5마리이다. 블랭크 대조군 마우스는 0.1 ml의 생리식염수를 피하 주사하고, 비히클 PBS 투여 대조군 및 플라스미노겐 투여군 마우스는 1 mg/kg/마리/일에 따라 안지오텐신 II를 피하 주사하며, 14일 동안 연속 피하 주사 및 모델링하였다^[26]. 모델링을 시작하는 동시에 플라스미노겐 또는 비히클을 투여하기 시작하고, 플라스미노겐 투여군 마우스는 1 mg/0.1 ml/마리/일에 따라 플라스미노겐을 꼬리 정맥 주사하고, 비히클 PBS 투여 대조군 마우스는 동일한 부피의 PBS 용액을 꼬리 정맥 주사하며, 14일 동안 연속 투여하고; 블랭크 대조군 마우스는 투여 처리를 수행하지 않았다. 모델링 및 투여 시작일을 1일차로 하고, 15일차에 마우스를 희생시키고 심장을 취하여 4% 파라포름알데히드 고정액에 24시간 동안 고정시켰다. 고정된 심장 조직을 알코올 구배로 탈수하고 자일렌으로 투명하게 한 후 파라핀 포매를 수행하였다. 조직 절편의 두께는 3 μm이고, 절편을 물로 탈납한 후 물로 1회 세척하며, 0.1% 시리우스 적색 포화 피크르산으로 30분 동안 염색하고, 흐르는 물로 2 min 동안 헹구며, 헤마톡실린으로 1분 동안 염색하고, 흐르는 물로 헹구며, 1% 염산 알코올로 분화하고 암모니아수로 파란색으로 되돌린 다음 흐르는 물로 헹구며, 건조 후 중성 검으로 절편을 밀봉하고, 200배 광학 현미경으로 관찰하였다.

결과에 따르면, 블랭크 대조군(도 8의 A) 마우스의 심장은 유의한 콜라겐 섬유 침착이 없고, 플라스미노겐 투여군(도 8의 C)의 콜라겐 섬유 침착(화살표로 표시)은 비히클 PBS 투여 대조군(도 8의 B)보다 유의하게 적다. 이는 플라스미노겐이 안지오텐신 II 유도 고혈압 모델 마우스의 심장 섬유화를 유의하게 감소시키며 고혈압으로 인한 심장 병변을 개선할 수 있음을 나타낸다.

실시예 9 모노크로탈린 유도 폐동맥고혈압 모델 마우스의 폐섬유증을 경감하는 플라스미노겐

12마리의 12주령 C57 수컷 마우스를 취하여 무게를 측정하고, 혈압을 측정하며, 혈압에 따라 랜덤으로 두 그룹으로 나누었는 바, 블랭크 대조군은 4마리의 마우스이고, 모델군은 8마리의 마우스이다. 블랭크 대조군 마우스는 100 μl의 생리식염수를 꼬리 정맥 주사하고, 모델군 마우스는 60 mg/kg/마리에 따라 모노크로탈린을 1회 꼬리 정맥 주사하며, 3일 동안 연속 주사하고, 마우스는 정상적으로 식이하였다^[28,29]. 3일 후 혈압을 측정하고, 혈압에 따라 모델군 마우스를 랜덤으로 두 그룹으로 나누었는 바, 비히클 PBS 투여 대조군 및 플라스미노겐 투여군은 각각 4마리이다. 플라스미노겐 투여군 마우스는 1 mg/0.1 ml/마리/일에 따라 플라스미노겐을 꼬리 정맥 주사하고, 비히클 PBS 투여 대조군 마우스는 동일한 부피의 PBS 용액을 꼬리 정맥 주사하며, 28일 동안 연속 투여하고; 블랭크 대조군 마우스는 투여 처리를 수행하지 않았다. 모델링 및 투여 시작일을 1일차로 하고, 29일차에 마우스를 희생시키고 폐를 취하여 4% 파라포름알데히드 고정액에 24시간 동안 고정시켰다. 고정된 폐 조직을 알코올 구배로 탈수하고 자일렌으로 투명하게 한 후 파라핀 포매를 수행하였다. 조직 절편의 두께는 3 μm이고, 절편을 물로 탈납한 후 물로 1회 세척하며, 0.1% 시리우스 적색 포화 피크르산으로 30분 동안 염색하고, 흐르는 물로 2 min 동안 헹구며, 헤마톡실린으로 1분 동안 염색하고, 흐르는 물로 헹구며, 1% 염산 알코올로 분화하고 암모니아수로 파란색으로 되돌린 다음 흐르는 물로 헹구며, 건조 후 중성 검으로 절편을 밀봉하고, 200배 광학 현미경으로 관찰하였다.

모노크로탈린은 디피롤 알칼로이드이고, 간에서 P450 모노옥시다아제에 의해 전환된 후, 혈액 순환을 통해 폐에 도달하여 폐혈관에 비가역적인 손상을 일으킬 수 있다. 폐혈관 내피 세포는 모노크로탈린의 표적 세포로 간주되고, 내피 세포 손상은 폐혈관 리모델링 과정에서 핵심적인 작용을 일으킨다^[28,29].

결과에 따르면, 블랭크 대조군 마우스의 폐는 기본적으로 콜라겐 침착이 없고(도 9의 A), 플라스미노겐 투여군(도 9의 C) 마우스의 폐 조직 콜라겐 침착(화살표로 표시)은 비히클 PBS 투여 대조군(도 9의 B)보다 유의하게 적다. 이는 플라스미노겐이 모노크로탈린 유도 폐동맥고혈압 모델 마우스의 폐 섬유화를 유의하게 경감할 수 있음을 나타낸다.

실시예 10 모노크로탈린 유도 폐동맥고혈압 모델 마우스의 심장 섬유화를 경감하는 플라스미노겐

12마리의 12주령 C57 수컷 마우스를 취하여 무게를 측정하고, 혈압을 측정하며, 혈압에 따라 랜덤으로 두 그룹으로 나누었는 바, 블랭크 대조군은 4마리의 마우스이고, 모델군은 8마리의 마우스이다. 블랭크 대조군 마우스는 100 μl의 생리식염수를 꼬리 정맥 주사하고, 모델군 마우스는 60 mg/kg/마리에 따라 모노크로탈린을 1회 꼬리 정맥 주사하며, 3일 동안 연속 주사하고, 마우스는 정상적으로 식이하였다^[28,29]. 3일 후 혈압을 측정하고, 혈압에 따라 모델군 마우스를 랜덤으로 두 그룹으로 나누었는 바, 비히클 PBS 투여 대조군 및 플라스미노겐 투여군은 각각 4마리이다. 플라스미노겐 투여군 마우스는 1 mg/0.1 ml/마리/일에 따라 플라스미노겐을 꼬리 정맥 주사하고, 비히클 PBS 투여 대조군 마우스는 동일한 부피의 PBS 용액을 꼬리 정맥 주사하며, 28일 동안 연속 투여하고; 블랭크 대조군 마우스는 투여 처리를 수행하지 않았다. 모델링 및 투여 시작일을 1일차로 하고, 29일차에 마우스를 희생시키고 심장을 취하여 4% 파라포름알데히드 고정액에 24시간 동안 고정시켰다. 고정된 심장 조직을 알코올 구배로 탈수하고 자일렌으로 투명하게 한 후 파라핀 포매를 수행하였다. 조직 절편의 두께는 3 μm이고, 절편을 물로 탈납한 후 물로 1회 세척하며, 0.1% 시리우스 적색 포화 피크르산으로 30분 동안 염색하고, 흐르는 물로 2 min 동안 헹구며, 헤마톡실린으로 1분 동안 염색하고, 흐르는 물로 헹구며, 1% 염산 알코올로 분화하고 암모니아수로 파란색으로 되돌린 다음 흐르는 물로 헹구며, 건조 후 중성 검으로 절편을 밀봉하고, 200배 광학 현미경으로 관찰하였다.

결과에 따르면, 블랭크 대조군 마우스의 심장은 기본적으로 콜라겐 침착이 없고(도 10의 A), 플라스미노겐 투여군(도 10의 C) 마우스의 심장 콜라겐 침착(화살표로 표시)은 비히클 PBS 투여 대조군(도 10의 B)보다 유의하게 적다. 이는 플라스미노겐이 모노크로탈린 유도 폐동맥고혈압 모델 마우스의 심장 섬유화를 유의하게 경감할 수 있음을 나타낸다.

실시예 11 모노크로탈린 유도 폐동맥고혈압 모델 마우스의 신장 섬유화를 경감하는 플라스미노겐

12마리의 12주령 C57 수컷 마우스를 취하여 무게를 측정하고, 혈압을 측정하며, 혈압에 따라 랜덤으로 두 그룹으로 나누었는 바, 블랭크 대조군은 4마리의 마우스이고, 모델군은 8마리의 마우스이다. 블랭크 대조군 마우스는 100 μl의 생리식염수를 꼬리 정맥 주사하고, 모델군 마우스는 60 mg/kg/마리에 따라 모노크로탈린을 1회 꼬리 정맥 주사하며, 3일 동안 연속 주사하고, 마우스는 정상적으로 식이하였다^[28,29]. 3일 후 혈압을 측정하고, 혈압에 따라 모델군 마우스를 랜덤으로 두 그룹으로 나누었는 바, 비히클 PBS 투여 대조군 및 플라스미노겐 투여군은 각각 4마리이다. 플라스미노겐 투여군 마우스는 1 mg/0.1 ml/마리/일에 따라 플라스미노겐을 꼬리 정맥 주사하고, 비히클 PBS 투여 대조군 마우스는 동일한 부피의 PBS 용액을 꼬리 정맥 주사하며, 28일 동안 연속 투여하고; 블랭크 대조군 마우스는 투여 처리를 수행하지 않았다. 모델링 및 투여 시작일을 1일차로 하고, 29일차에 마우스를 희생시키고 신장을 취하여 4% 파라포름알데히드 고정액에 24시간 동안 고정시켰다. 고정된 신장 조직을 알코올 구배로 탈수하고 자일렌으로 투명하게 한 후 파라핀 포매를 수행하였다. 조직 절편의 두께는 3 μm이고, 절편을 물로 탈납한 후 물로 1회 세척하며, 0.1% 시리우스 적색 포화 피크르산으로 30분 동안 염색하고, 흐르는 물로 2 min 동안 헹구며, 헤마톡실린으로 1분 동안 염색하고, 흐르는 물로 헹구며, 1% 염산 알코올로 분화하고 암모니아수로 파란색으로 되돌린 다음 흐르는 물로 헹구며, 건조 후 중성 검으로 절편을 밀봉하고, 200배 광학 현미경으로 관찰하였다.

결과에 따르면, 블랭크 대조군 마우스의 신장은 기본적으로 콜라겐 침착이 없고(도 11의 A), 플라스미노겐 투여군(도 11의 C) 마우스의 신장 콜라겐 침착(화살표로 표시)은 비히클 PBS 투여 대조군(도 11의 B)보다 유의하게 적다. 이는 플라스미노겐이 모노크로탈린 유도 폐동맥고혈압 모델 마우스의 신장 섬유화를 유의하게 경감할 수 있음을 나타낸다.

실시예 12 모노크로탈린 유도 폐동맥고혈압 모델 마우스의 간 섬유화를 경감하는 플라스미노겐

12마리의 12주령 C57 수컷 마우스를 취하여 무게를 측정하고, 혈압을 측정하며, 혈압에 따라 랜덤으로 두 그룹으로 나누었는 바, 블랭크 대조군은 4마리의 마우스이고, 모델군은 8마리의 마우스이다. 블랭크 대조군 마우스는 100 μl의 생리식염수를 꼬리 정맥 주사하고, 모델군 마우스는 60 mg/kg/마리에 따라 모노크로탈린을 1회 꼬리 정맥 주사하며, 3일 동안 연속 주사하고, 마우스는 정상적으로 식이하였다^[28,29]. 3일 후 혈압을 측정하고, 혈압에 따라 모델군 마우스를 랜덤으로 두 그룹으로 나누었는 바, 비히클 PBS 투여 대조군 및 플라스미노겐 투여군은 각각 4마리이다. 플라스미노겐 투여군 마우스는 1 mg/0.1 ml/마리/일에 따라 플라스미노겐을 꼬리 정맥 주사하고, 비히클 PBS 투여 대조군 마우스는 동일한 부피의 PBS 용액을 꼬리 정맥 주사하며, 28일 동안 연속 투여하고; 블랭크 대조군 마우스는 투여 처리를 수행하지 않았다. 모델링 및 투여 시작일을 1일차로 하고, 29일차에 마우스를 희생시키고 간을 취하여 4% 파라포름알데히드 고정액에 24시간 동안 고정시켰다. 고정된 간 조직을 알코올 구배로 탈수하고 자일렌으로 투명하게 한 후 파라핀 포매를 수행하였다. 조직 절편의 두께는 3 μm이고, 절편을 물로 탈납한 후 물로 1회 세척하며, 0.1% 시리우스 적색 포화 피크르산으로 30분 동안 염색하고, 흐르는 물로 2 min 동안 헹구며, 헤마톡실린으로 1분 동안 염색하고, 흐르는 물로 헹구며, 1% 염산 알코올로 분화하고 암모니아수로 파란색으로 되돌린 다음 흐르는 물로 헹구며, 건조 후 중성 검으로 절편을 밀봉하고, 200배 광학 현미경으로 관찰하였다.

결과에 따르면, 블랭크 대조군 마우스의 간은 기본적으로 콜라겐 침착이 없고(도 12의 A), 플라스미노겐 투여군(도 12의 C) 마우스의 간 콜라겐 침착(화살표로 표시)은 비히클 PBS 투여 대조군(도 12의 B)보다 유의하게 적다. 이는 플라스미노겐이 모노크로탈린 유도 폐동맥고혈압 모델 마우스의 간 섬유화를 유의하게 경감할 수 있음을 나타낸다.

실시예 13 허혈성 신장 위축 마우스의 혈압 상승을 촉진하는 플라스미노겐

18마리의 6 ~ 7주령 C57 수컷 마우스를 취하고, 랜덤으로 두 그룹으로 나누었는 바, 블랭크 대조군은 4마리이고, 모델군은 14마리이다. 블랭크 대조군 마우스는 아무런 처리도 하지 않았다. 모델군 마우스는 3% 펜토바르비탈 나트륨(50 mg/kg)을 복강내 주사하여 마취시키고, 외과 수술 방법을 통해 복부 정중선에서 피부, 근막 및 근육층을 절개하고, 장, 췌장 등 장기 조직을 열어 수술 부위를 노출시키며, 왼쪽 신장의 신우 부위의 대동맥과 주정맥을 둔적 분리하고, 분리된 혈관을 5번 견사로 결찰하며, 결찰이 완료됨을 확보한 후 장, 췌장 등 장기 조직을 대응되는 생리적 위치로 되돌리고, 외과 수술 방법을 통해 근육층을 연속 봉합하며, 결찰로 피부를 봉합한 다음, 의료용 요오도퍼로 상처를 소독하고, 동물을 37℃의 가열 패드에 놓고 깨어날 때까지 관찰하면서 기다리며, 동물이 완전히 깨어날 때까지 물을 주지 않았다. 항생제(5000 U/마리)를 근육내 주사하고, 진통제(2 mg/kg)를 피하 주사하며, 3일 동안 연속 주사하였다. 수술 결찰 14일 후, 모델군 마우스는 3% 펜토바르비탈 나트륨을 복강내 주사하여 마취시켜 복부를 절개하고, 왼쪽 신장 혈관의 결찰선을 푼 다음, 복강을 신속하게 봉합하며, 의료용 요오도퍼로 상처를 소독하고, 동물을 37℃의 가열 패드에 놓고 깨어날 때까지 관찰하면서 기다리며, 동물이 완전히 깨어날 때까지 물을 주지 않았다. 항생제(5000 U/마리)를 근육내 주사하고, 진통제(2 mg/kg)를 피하 주사하며, 3일 동안 연속 주사하였다^[30]. 봉합사를 제거한 후 모든 마우스의 체중을 측정하고, 모델군 마우스는 랜덤으로 두 그룹으로 나누었는 바, 플라스미노겐 투여군 및 PBS 대조군으로 각각 7마리이며, 투여를 시작하였다. 투여 시작일을 1일차로 하고, 플라스미노겐 투여군 마우스는 1 mg/0.1 ml/마리/일에 따라 플라스미노겐을 꼬리 정맥 주사하고, 비히클 PBS 투여 대조군 마우스는 동일한 부피의 PBS 용액을 꼬리 정맥 주사하며, 14일 동안 연속 투여하였다. 15일차에 비침습적 혈압계(MRBP-M01, IITC Life science)를 사용하여 마우스의 혈압(수축기 혈압 및 평균 혈압)을 검출하였다.

결과에 따르면, 플라스미노겐 투여군 및 블랭크 대조군의 수축기 혈압 및 평균 혈압은 PBS 대조군의 혈압보다 유의하게 높고, 플라스미노겐군과 PBS 대조군 사이는 통계학적 차이가 현저하다(*는 P<0.05를 나타냄)(도 13). 이는 플라스미노겐이 신장 위축으로 인한 저혈압을 정상 수준으로 회복하도록 촉진할 수 있음을 나타낸다.

실시예 14 안지오텐신 II 유도 고혈압 모델 마우스의 혈압을 감소시키는 플라스미노겐

21마리의 8 ~ 9주령 C57 수컷 마우스를 취하고, 랜덤으로 세 그룹으로 나누었는 바, 블랭크 대조군, 비히클군 및 투여군으로 각각 7마리이다. 블랭크 대조군 마우스는 아무런 처리도 하지 않았다. 투여군 및 비히클군에서, 모든 마우스는 1 mg/kg/마리에 따라 0.25 mg/ml의 안지오텐신 II 용액을 8시간 간격으로 1일 2회 피하 주사하고, 6일 동안 연속 모델링하였다[31]. 안지오텐신 II을 1차 주사하여 2시간 동안 모델링한 후, 투여군 및 비히클군에 투여하기 시작하고, 즉 1일차로 하며, 투여군 마우스는 1 mg/0.1 ml/마리/일에 따라 플라스미노겐을 꼬리 정맥 주사하고, 비히클군 마우스는 동일한 부피의 비히클을 꼬리 정맥 주사하며, 5일 동안 연속 투여하고, 블랭크 대조군은 투여 처리를 수행하지 않았다. 6일차에 모든 마우스의 혈압을 측정하였다. 각 마우스는 5회 연속 측정하고, 매회 측정된 수축기 혈압 및 평균 혈압을 기록하였다. 수축기 혈압 및 평균 혈압은 각각 5회 측정하여 얻은 수축기 혈압 및 평균 혈압 데이터의 평균값이다. 마우스의 혈압은 비침습적 혈압계(MRBP-M01, IITC Life science)를 사용하여 검출하였다.

결과에 따르면, 비히클군 마우스의 평균 혈압 및 수축기 혈압은 유의하게 증가하며, 투여군 마우스의 평균 혈압 및 수축기 혈압은 비히클군 마우스보다 유의하게 낮고, 통계학적 차이가 현저하다(*는 P<0.05를 나타내고, **는 P<0.01을 나타냄)(도 14). 이는 플라스미노겐이 고혈압 모델 마우스의 혈압을 감소시킬 수 있음을 나타낸다.

실시예 15 당뇨병 고혈압 모델 마우스의 안지오텐신전환효소 2 수준 증가를 촉진하는 플라스미노겐

12마리의 24 ~ 25주령 db/db 수컷 마우스를 취하였다. 투여 하루 전, 무게를 측정한 후 기저 혈압을 검출하고, 혈압에 따라 랜덤으로 두 그룹으로 나누었는 바, 비히클군 및 투여군으로 각각 6마리이다. 투여군 마우스는 2 mg/0.2 ml/마리/일에 따라 플라스미노겐을 꼬리 정맥 주사하고, 비히클군 마우스는 동일한 부피의 PBS 용액을 꼬리 정맥 주사하며, 28일 동안 연속 투여하였다. 29일차에 안구를 적출하여 혈액을 채취하고, 원심분리하여 상층액을 얻었다. 안지오텐신전환효소 2(ACE2) 검출 키트(제조업체: Wuhan Huamei Biological Engineering Co., Ltd., 제품번호: CSB-E17204m)의 설명서에 따라 혈청 ACE2 수준을 검출하였다.

안지오텐신전환효소 2(ACE2)는 레닌-안지오텐신 시스템의 중요한 음성 조절자로, 체내에서 안지오텐신 II(AngII)를 분해하는 주요 경로이다. ACE2의 작용하에 AngII는 Angl-7로 전환되고; 또한, ACE2는 AngI에서 Ang(1-9)로의 분해를 촉매할 수도 있으며, 후자는 ACE를 통해 Angl-7로 전환된다. AngII에 대한 ACE2의 친화력은 Ang I의 400배이고, AngII에서 Ang(1-7)로의 전환을 촉매하는 것은 ACE2의 주요 기능이다. ACE2의 생리 작용은 고혈압, 심장 기능, 심장 기능 및 당뇨병과 관련이 있고, 중증급성호흡기증후군 코로나바이러스의 수용체로 작용한다^[32].

결과에 따르면, 투여군 마우스의 혈청 ACE2 수준은 비히클군보다 유의하게 높고, 통계학적 차이가 유의에 근접하다(P=0.057)(도 15). 이는 플라스미노겐이 당뇨병 고혈압 모델 마우스의 혈청 ACE2 수준 증가를 촉진할 수 있음을 나타낸다.

실시예 16 안지오텐신 II 유도 고혈압 모델 마우스의 혈청 ACE2 수준을 감소시키는 플라스미노겐

21마리의 8 ~ 9주령 수컷 C57 마우스를 취하고, 랜덤으로 세 그룹으로 나누었는 바, 블랭크 대조군 7마리, 비히클군 7마리 및 투여군 7마리이다. 투여군 및 비히클군 마우스는 그룹화 후 1 mg/kg/마리에 따라 0.25 mg/ml의 안지오텐신 II 용액을 8시간 간격으로 1일 2회 피하 주사하고, 7일 동안 연속 모델링하였다. 안지오텐신 II 용액의 조제: 먼저 안지오텐신 II 분말(제품번호: A9292-10 mg, 제조업체: Beijing 7 Soleibao Biotechnology Co., Ltd.)을 1 ml의 탈이온수에 용해시키고, 10 mg/ml의 용액으로 조제하며, 별도로 포장하고 반복적인 동결 및 해동을 피하며, 사용시 40배로 희석하여 0.25 mg/ml로 조제하고, 사용시 즉석 제조하며, 원액을 -20℃에서 보관하였다. 1차 주사 및 모델링 2시간 후, 투여군 및 비히클군은 투여하기 시작하고, 즉 1일차로 하며, 투여군 마우스는 1 mg/0.1 ml/마리/일에 따라 플라스미노겐을 꼬리 정맥 주사하고, 비히클군 마우스는 동일한 부피의 비히클을 꼬리 정맥 주사하며, 7일동안 지속적으로 투여하고, 블랭크 대조군은 투여 처리를 수행하지 않았다. 8일차에 안구를 적출하여 혈액을 채취하고, 원심분리하여 상층액을 얻었다. 안지오텐신전환효소 2(ACE2) 검출 키트(제조업체: Shanghai Ximei Chemical Co., Ltd., 제품번호: CSB-E17204m)의 설명서에 따라 혈청 ACE2 수준을 검출하였다.

결과에 따르면, 블랭크 대조군 마우스의 혈액에는 일정한 수준의 ACE2가 있고, 비히클군 마우스의 혈액 내 ACE2 수준은 블랭크 대조군 마우스보다 유의하게 높으며, 투여군 마우스의 혈액 내 ACE2 수준은 비히클군 마우스보다 유의하게 낮고, 통계학적 차이가 매우 현저하다(**는 P<0.01을 나타냄)(도 16). 이는 플라스미노겐이 AngII 유도 고혈압 모델 마우스의 혈청 ACE2 수준 감소를 촉진할 수 있음을 나타낸다.

실시예 17 안지오텐신 II 유도 고혈압 모델 마우스의 혈청 ACE 수준을 감소시키는 플라스미노겐

21마리의 8 ~ 9주령 수컷 C57 마우스를 취하고, 랜덤으로 세 그룹으로 나누었는 바, 블랭크 대조군 7마리, 비히클군 7마리 및 투여군 7마리이다. 투여군 및 비히클군 마우스는 그룹화 후 1 mg/kg/마리에 따라 0.25 mg/ml의 안지오텐신 II 용액을 8시간 간격으로 1일 2회 피하 주사하고, 7일 동안 연속 모델링하였다. 안지오텐신 II 용액의 조제: 먼저 안지오텐신 II 분말(제품번호: A9292-10 mg, 제조업체: Beijing 7 Soleibao Biotechnology Co., Ltd.)을 1 ml의 탈이온수에 용해시키고, 10 mg/ml의 용액으로 조제하며, 별도로 포장하고 반복적인 동결 및 해동을 피하며, 사용시 40배로 희석하여 0.25 mg/ml로 조제하고, 사용시 즉석 제조하며, 원액을 -20℃에서 보관하였다. 1차 주사 및 모델링 2시간 후, 투여군 및 비히클군은 투여하기 시작하고, 즉 1일차로 하며, 투여군 마우스는 1 mg/0.1 ml/마리/일에 따라 플라스미노겐을 꼬리 정맥 주사하고, 비히클군 마우스는 동일한 부피의 비히클을 꼬리 정맥 주사하며, 7일동안 지속적으로 투여하고, 블랭크 대조군은 투여 처리를 수행하지 않았다. 8일차에 안구를 적출하여 혈액을 채취하고, 원심분리하여 상층액을 얻었다. 안지오텐신전환효소(ACE) 검출 키트(제조업체: Wuhan Huamei Biological Engineering Co., Ltd., 제품번호: CSB-E04492m)의 설명서에 따라 혈청 ACE 수준을 검출하였다.

안지오텐신전환효소(ACE)는 레닌-안지오텐신 시스템의 핵심 효소이고, AngII 생산 과정에서 관건적인 작용을 일으킨다^[32].

결과에 따르면, 블랭크 대조군 마우스의 혈액에는 일정한 수준의 ACE가 있고, 비히클군 마우스의 혈액 내 ACE 수준은 블랭크 대조군 마우스보다 유의하게 높으며, 투여군 마우스의 혈액 내 ACE 수준은 비히클군 마우스보다 유의하게 낮고, 통계학적 차이가 유의에 근접하다(P=0.051)(도 17). 이는 플라스미노겐이 AngII 유도 고혈압 모델 마우스의 혈청 ACE 수준 감소를 촉진할 수 있음을 나타낸다.

실시예 18 임상 지원자에 대한 플라스미노겐의 치료 효과

하기는 임상 지원자의 데이터이고, 모든 환자는 동의서에 서명하여 자발적으로 약물을 사용하며, 병원윤리위원회의 승인을 받았다. 아래에서 사용되는 플라스미노겐은 생리식염수로 희석하고, 농도는 5 또는 10 mg/ml이다. 에어로졸 투여시, 플라스미노겐 용액은 에어로졸 분사기로 사용된다.

사례 1

환자, 여, 72세, 30년 이상의 고혈압 병력이 있으며, 수축기 혈압은 160 mmHg이고, 간혹 180 mmHg이며, 고혈압약 복용 후 혈압은 약 130/80 mmHg으로 조절된다. 환자는 인간 플라스미노겐을 1일 1회 정맥내 주사하고, 시작 용량은 50 mg/회이며, 그 후 점차적으로 135 mg/회까지 증가하였다. 투여 후 6일차부터 환자의 수축기 혈압은 141 mmHg으로 떨어지고, 11일까지 혈압 변동이 불안정하며(정상 및 비정상 교대); 12일차 후, 혈압이 떨어지고 1주일 동안 정상 및 안정을 유지하였다. 환자는 상기 플라스미노겐의 정맥내 주사 치료 기간 동안 임의의 고혈압약을 복용하지 않았다. 투여 기간 동안 환자의 혈압 상황은 도 18에 나타내었고, 이는 플라스미노겐이 고혈압 환자의 혈압을 감소시켜 정상 수준에 근접하도록 할 수 있음을 나타낸다.

사례 2

환자, 여, 79세, 20년 이상 관상동맥 질환을 앓아왔으며, 2014년 뇌경색을 앓았다. 23년의 당뇨병 병력이 있고, 장기간 인슐린을 주사하였다. 고혈압 5년, 고혈압약 복용 후 아침 혈압 130 ~ 150/50 ~ 60 mmHg, 오후 약 150/60 mmHg으로 진단받았다. 환자는 인간 플라스미노겐을 1일 1회 100 mg/회씩 정맥내 주사하였다.

투여 후 13일차에 환자의 혈압은 135/54 mmHg이고, 후기에 고혈압약을 사용하지 않고도 혈압은 정상 수준으로 안정되었다. 투여 기간 동안 환자의 혈압 상황은 도 19에 나타내었다.

사례 3

환자, 여, 76세, 당뇨병 병력 20년, 고혈압 병력 10년, 최고 혈압 168/70 mmHg, 니페디핀 서방정 경구 투여, 혈압은 약 114/55 mmHg으로 조절되고, 이완기 혈압은 정상치보다 낮다. 정맥내 주사를 통해 환자는 인간 플라스미노겐을 1일 1 ~ 2회 투여하고, 1일 투여량은 35 ~ 75 mg이다.

투여 후 이완기 혈압은 60 mmHg 미만에서 정상치에 도달하고, 치료 기간 동안 혈압은 정상 및 안정을 유지하며; 치료 후, 고혈압약은 반으로 줄어들고, 혈압은 기본적으로 130 ~ 140/64 ~ 76 mmHg으로 유지되었다. 투여 기간 동안 환자의 혈압 상황은 도 20에 나타내었다.

플라스미노겐은 고혈압 환자의 혈압을 정상으로 회복하도록 촉진할 수 있고 고혈압약의 사용량을 줄일 수 있다.

사례 4

환자, 남, 57세, 병원 내원 시 복부 대동맥이 두꺼워진 소견이 발견되고, 대동맥 박리 진단을 받았다. 병원에서 수술 치료를 권장하였다. 심장병 가족력이 있고, 10년 이상의 고혈압 병력이 있다. 환자는 조영제에 알레르기가 있고, 습진과 두드러기가 있다. 혈압은 아침저녁으로 높고, 최고 수축기 혈압은 200 mmHg에 달할 수 있으며, 혈압차가 크고 80 mmHg 이상에 달할 수 있다. 수면의 질이 좋지 않고 잠이 늦게 들며 밤에 3 ~ 4회 깨어나 수면에 영향을 미친다.

인간 플라스미노겐을 1일 1 ~ 2회 정맥내 주사하고, 투여량은 50 ~ 150 mg/일이다.

투여 5일차에 아침저녁으로 혈압이 떨어지기 시작하고 혈압차가 감소하였다. 환자는 스스로 이전에 고혈압약을 복용할 때 혈압이 140/75 mmHg 이하로 떨어진 적이 없는데, 처음으로 개선되었다고 하였다. 투여 6일차에 아침 및 저녁 혈압은 약 136/73 mmHg으로 유지되었다.

투여 7일차에 아침저녁으로 혈압이 안정적으로 유지되고, 혈압은 약 130/70 mmHg이었다. 투여 기간 동안 환자의 혈압 상황은 도 21에 나타내었다.

또한, 투여 5일차에 환자의 수면은 개선되고 밤에 깨어나지 않았다. 습진 및 두드러기 증상도 개선되었다. 그 후, 환자의 증상은 지속적으로 개선되었다.

사례 5

환자, 78세, 위중증 신종 코로나바이러스 폐렴으로 진단받았고, 입원 시 혈압이 150/78 mmHg까지 상승한 것으로 발견되었으며, 고혈압 병력이 없었고, 건강검진을 받은 적도 없었다. 환자는 인간 플라스미노겐을 10 mg씩 1일 2회 에어로졸 흡입하였다. 1일 후 혈압은 정상으로 회복되었다. 투여 기간 동안 환자의 혈압 상황은 표 1 및 표 2에 나타내었다.

이는 인간 플라스미노겐이 위중증 신종 코로나바이러스 폐렴 환자의 고혈압을 정상으로 회복시킬 수 있음을 나타낸다.

[표 1]

[표 2]

사례 6

환자는 위중증 신종 코로나바이러스 폐렴으로 진단받았고, 관련 임상 증상 외에 혈압은 139/94 mmHg이며, 이완기 혈압은 정상치보다 높다. 환자는 플라스미노겐을 10 mg씩 1일 2회 에어로졸 흡입하였다. 1차 치료 후 이완기 혈압은 정상으로 회복되고, 투여 기간 동안 환자의 혈압 상황은 표 3에 나타내었다.

플라스미노겐은 위중증 신종 코로나바이러스 폐렴 환자의 고혈압을 정상으로 회복시킬 수 있다.

[표 3]

사례 7

환자, 여, 67세, 환자는 병상에 누워 있고, 기관절개술로 인해 말할 수 없으며, 당뇨병, 심장병, 고혈압 병력이 없고, 알레르기 병력이 없으며, 6년 동안 파킨슨병을 앓고 있고, 4년 동안 걷지 못하였으며, 3년 동안 병상에 누워 있고, 1.5년 동안 유치도뇨하였으며, 환자는 스스로 몸을 돌릴 수 없고, 혼자서 팔다리를 움직일 수 있으며, 매일 낮은 유량으로 산소를 계속 흡입하였다. 혈압은 80/45 mmHg이다. 저혈압 및 파킨슨병을 진단받았다. 환자는 플라스미노겐을 1일 1회 정맥내 주사하고, 투여량은 50 ~ 250 mg/일이며, 시작 용량은 50 mg/일이고, 점차적으로 증가하였다. 7일 동안 연속 투여하고, 9일차, 11일차, 13일차에 계속 투여하며, 8일차, 10일차, 12일차에 약물을 중단하여 관찰하였다.

치료 효과:

투여 후 혈압은 상승하는 경향을 보이고, 투여 3일차에 처음으로 정상적인 혈압이 나타났다. 투여 9일 후 혈압은 정상으로 유지되고, 약물 중단 후 혈압은 95/70 mmHg으로 유지되었다. 투여 기간 동안 환자의 혈압 측정 결과는 도 22에 나타내었다.

이는 플라스미노겐이 저혈압 환자의 혈압 회복을 촉진할 수 있음을 나타낸다.

사례 8

환자, 여, 50세, 수년간 저혈압을 앓고 있고, 평일 혈압은 80/60 mmHg으로 낮으며, 아침에 일어나면 가끔 어지러워한다. 저혈압을 진단받았다. 치료 방법: 정맥 주사, 1일 1회, 투여량 100 mg.

치료 효과:

환자의 혈압은 투여 2일차에 정상에 도달하였고, 1주일 후 약 110/70 mmHg에 도달하였다. 투여 기간 동안 환자의 혈압 측정 결과는 도 23에 나타내었다.

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서열 2:

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서열 3:

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서열 4:

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서열 8:

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서열 9:

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서열 10:

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서열 12:

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서열 14:

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Sequence listing <110> Talengen International Limited <120> Method and Drug for Preventing and Treating Abnormal Blood Pressure condition <130> FE00351US <150> 2020101197309 <151> 2020-02-26 <160> 14 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 2376 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Nucleic acid sequence of natural plasminogen (Glu-PLG, Glu-plasminogen) without signal peptide <400> 1 gagcctctgg atgactatgt gaatacccag ggggcttcac tgttcagtgt cactaagaag 60 cagctgggag caggaagtat agaagaatgt gcagcaaaat gtgaggagga cgaagaattc 120 acctgcaggg cattccaata tcacagtaaa gagcaacaat gtgtgataat ggctgaaaac 180 aggaagtcct ccataatcat taggatgaga gatgtagttt tatttgaaaa gaaagtgtat 240 ctctcagagt gcaagactgg gaatggaaag aactacagag ggacgatgtc caaaacaaaa 300 aatggcatca cctgtcaaaa atggagttcc acttctcccc acagacctag attctcacct 360 gctacacacc cctcagaggg actggaggag aactactgca ggaatccaga caacgatccg 420 caggggccct ggtgctatac tactgatcca gaaaagagat atgactactg cgacattctt 480 gagtgtgaag aggaatgtat gcattgcagt ggagaaaact 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ttccgaagaa 1380 gactgtatgt ttgggaatgg gaaaggatac cgaggcaaga gggcgaccac tgttactggg 1440 acgccatgcc aggactgggc tgcccaggag ccccatagac acagcatttt cactccagag 1500 acaaatccac gggcgggtct ggaaaaaaat tactgccgta accctgatgg tgatgtaggt 1560 ggtccctggt gctacacgac aaatccaaga aaactttacg actactgtga tgtccctcag 1620 tgtgcggccc cttcatttga ttgtgggaag cctcaagtgg agccgaagaa atgtcctgga 1680 agggttgtag gggggtgtgt ggcccaccca cattcctggc cctggcaagt cagtcttaga 1740 acaaggtttg gaatgcactt ctgtggaggc accttgatat ccccagagtg ggtgttgact 1800 gctgcccact gcttggagaa gtccccaagg ccttcatcct acaaggtcat cctgggtgca 1860 caccaagaag tgaatctcga accgcatgtt caggaaatag aagtgtctag gctgttcttg 1920 gagcccacac gaaaagatat tgccttgcta aagctaagca gtcctgccgt catcactgac 1980 aaagtaatcc cagcttgtct gccatcccca aattatgtgg tcgctgaccg gaccgaatgt 2040 ttcatcactg gctggggaga aacccaaggt acttttggag ctggccttct caaggaagcc 2100 cagctccctg tgattgagaa taaagtgtgc aatcgctatg agtttctgaa tggaagagtc 2160 caatccaccg aactctgtgc tgggcatttg gccggaggca ctgacagttg ccagggtgac 2220 agtggaggtc ctctggtttg cttcgagaag gacaaataca ttttacaagg agtcacttct 2280 tggggtcttg gctgtgcacg ccccaataag cctggtgtct atgttcgtgt ttcaaggttt 2340 gttacttgga ttgagggagt gatgagaaat aattaa 2376 <210> 2 <211> 791 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acid sequence of natural plasminogen (Glu-PLG, Glu-plasminogen) without signal peptide <400> 2 Glu Pro Leu Asp Asp Tyr Val Asn Thr Gln Gly Ala Ser Leu Phe Ser 1 5 10 15 Val Thr Lys Lys Gln Leu Gly Ala Gly Ser Ile Glu Glu Cys Ala Ala 20 25 30 Lys Cys Glu Glu Asp Glu Glu Phe Thr Cys Arg Ala Phe Gln Tyr His 35 40 45 Ser Lys Glu Gln Gln Cys Val Ile Met Ala Glu Asn Arg Lys Ser Ser 50 55 60 Ile Ile Ile Arg Met Arg Asp Val Val Leu Phe Glu Lys Lys Val Tyr 65 70 75 80 Leu Ser Glu Cys Lys Thr Gly Asn Gly Lys Asn Tyr Arg Gly Thr Met 85 90 95 Ser Lys Thr Lys Asn Gly Ile Thr Cys Gln Lys Trp Ser Ser Thr Ser 100 105 110 Pro His Arg Pro Arg Phe Ser Pro Ala Thr His Pro Ser Glu Gly Leu 115 120 125 Glu Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp 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600 atgtctggac tggaatgcca ggcctgggac tctcagagcc cacacgctca tggatacatt 660 ccttccaaat ttccaaacaa gaacctgaag aagaattact gtcgtaaccc cgatagggag 720 ctgcggcctt ggtgtttcac caccgacccc aacaagcgct gggaactttg tgacatcccc 780 cgctgcacaa cacctccacc atcttctggt cccacctacc agtgtctgaa gggaacaggt 840 gaaaactatc gcgggaatgt ggctgttacc gtgtccgggc acacctgtca gcactggagt 900 gcacagaccc ctcacacaca taacaggaca ccagaaaact tcccctgcaa aaatttggat 960 gaaaactact gccgcaatcc tgacggaaaa agggccccat ggtgccatac aaccaacagc 1020 caagtgcggt gggagtactg taagataccg tcctgtgact cctccccagt atccacggaa 1080 caattggctc ccacagcacc acctgagcta acccctgtgg tccaggactg ctaccatggt 1140 gatggacaga gctaccgagg cacatcctcc accaccacca caggaaagaa gtgtcagtct 1200 tggtcatcta tgacaccaca ccggcaccag aagaccccag aaaactaccc aaatgctggc 1260 ctgacaatga actactgcag gaatccagat gccgataaag gcccctggtg ttttaccaca 1320 gaccccagcg tcaggtggga gtactgcaac ctgaaaaaat gctcaggaac agaagcgagt 1380 gttgtagcac ctccgcctgt tgtcctgctt ccagatgtag agactccttc cgaagaagac 1440 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gtggctgtta ccgtgtccgg gcacacctgt 600 cagcactgga gtgcacagac ccctcacaca cataacagga caccagaaaa cttcccctgc 660 aaaaatttgg atgaaaacta ctgccgcaat cctgacggaa aaagggcccc atggtgccat 720 acaaccaaca gccaagtgcg gtgggagtac tgtaagatac cgtcctgtga ctcctcccca 780 gtatccacgg aacaattggc tcccacagca ccacctgagc taacccctgt ggtccaggac 840 tgctaccatg gtgatggaca gagctaccga ggcacatcct ccaccaccac cacaggaaag 900 aagtgtcagt cttggtcatc tatgacacca caccggcacc agaagacccc agaaaactac 960 ccaaatgctg gcctgacaat gaactactgc aggaatccag atgccgataa aggcccctgg 1020 tgttttacca cagaccccag cgtcaggtgg gagtactgca acctgaaaaa atgctcagga 1080 acagaagcga gtgttgtagc acctccgcct gttgtcctgc ttccagatgt agagactcct 1140 tccgaagaag actgtatgtt tgggaatggg aaaggatacc gaggcaagag ggcgaccact 1200 gttactggga cgccatgcca ggactgggct gcccaggagc cccatagaca cagcattttc 1260 actccagaga caaatccacg ggcgggtctg gaaaaaaatt actgccgtaa ccctgatggt 1320 gatgtaggtg gtccctggtg ctacacgaca aatccaagaa aactttacga ctactgtgat 1380 gtccctcagt gtgcggcccc ttcatttgat tgtgggaagc ctcaagtgga gccgaagaaa 1440 tgtcctggaa gggttgtagg ggggtgtgtg gcccacccac attcctggcc ctggcaagtc 1500 agtcttagaa caaggtttgg aatgcacttc tgtggaggca ccttgatatc cccagagtgg 1560 gtgttgactg ctgcccactg cttggagaag tccccaaggc cttcatccta caaggtcatc 1620 ctgggtgcac accaagaagt gaatctcgaa ccgcatgttc aggaaataga agtgtctagg 1680 ctgttcttgg agcccacacg aaaagatatt gccttgctaa agctaagcag tcctgccgtc 1740 atcactgaca aagtaatccc agcttgtctg ccatccccaa attatgtggt cgctgaccgg 1800 accgaatgtt tcatcactgg ctggggagaa acccaaggta cttttggagc tggccttctc 1860 aaggaagccc agctccctgt gattgagaat aaagtgtgca atcgctatga gtttctgaat 1920 ggaagagtcc aatccaccga actctgtgct gggcatttgg ccggaggcac tgacagttgc 1980 cagggtgaca gtggaggtcc tctggtttgc ttcgagaagg acaaatacat tttacaagga 2040 gtcacttctt ggggtcttgg ctgtgcacgc cccaataagc ctggtgtcta tgttcgtgtt 2100 tcaaggtttg ttacttggat tgagggagtg atgagaaata attaa 2145 <210> 6 <211> 714 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acid sequence of LYS77-PLG(Lys-plasminogen) <400> 6 Lys Val Tyr 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Asn Arg Tyr Glu Phe Leu Asn 625 630 635 640 Gly Arg Val Gln Ser Thr Glu Leu Cys Ala Gly His Leu Ala Gly Gly 645 650 655 Thr Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Phe Glu 660 665 670 Lys Asp Lys Tyr Ile Leu Gln Gly Val Thr Ser Trp Gly Leu Gly Cys 675 680 685 Ala Arg Pro Asn Lys Pro Gly Val Tyr Val Arg Val Ser Arg Phe Val 690 695 700 Thr Trp Ile Glu Gly Val Met Arg Asn Asn 705 710 <210> 7 <211> 1245 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Nucleic acid sequence of delta-plg(delta-plasminogen) <400> 7 gagcctctgg atgactatgt gaatacccag ggggcttcac tgttcagtgt cactaagaag 60 cagctgggag caggaagtat agaagaatgt gcagcaaaat gtgaggagga cgaagaattc 120 acctgcaggg cattccaata tcacagtaaa gagcaacaat gtgtgataat ggctgaaaac 180 aggaagtcct ccataatcat taggatgaga gatgtagttt tatttgaaaa gaaagtgtat 240 ctctcagagt gcaagactgg gaatggaaag aactacagag ggacgatgtc caaaacaaaa 300 aatggcatca cctgtcaaaa atggagttcc acttctcccc acagacctag attctcacct 360 gctacacacc cctcagaggg actggaggag aactactgca ggaatccaga caacgatccg 420 caggggccct ggtgctatac tactgatcca gaaaagagat atgactactg cgacattctt 480 gagtgtgaag aggcggcccc ttcatttgat tgtgggaagc ctcaagtgga gccgaagaaa 540 tgtcctggaa gggttgtagg ggggtgtgtg gcccacccac attcctggcc ctggcaagtc 600 agtcttagaa caaggtttgg aatgcacttc tgtggaggca ccttgatatc cccagagtgg 660 gtgttgactg ctgcccactg cttggagaag tccccaaggc cttcatccta caaggtcatc 720 ctgggtgcac accaagaagt gaatctcgaa ccgcatgttc aggaaataga agtgtctagg 780 ctgttcttgg agcccacacg aaaagatatt gccttgctaa agctaagcag tcctgccgtc 840 atcactgaca aagtaatccc agcttgtctg ccatccccaa attatgtggt cgctgaccgg 900 accgaatgtt tcatcactgg ctggggagaa acccaaggta cttttggagc tggccttctc 960 aaggaagccc agctccctgt gattgagaat aaagtgtgca atcgctatga gtttctgaat 1020 ggaagagtcc aatccaccga actctgtgct gggcatttgg ccggaggcac tgacagttgc 1080 cagggtgaca gtggaggtcc tctggtttgc ttcgagaagg acaaatacat tttacaagga 1140 gtcacttctt ggggtcttgg ctgtgcacgc cccaataagc ctggtgtcta tgttcgtgtt 1200 tcaaggtttg ttacttggat tgagggagtg atgagaaata attaa 1245 <210> 8 <211> 414 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acid sequence of delta-plg(delta-plasminogen) <400> 8 Glu Pro Leu Asp Asp Tyr Val Asn Thr Gln Gly Ala Ser Leu Phe Ser 1 5 10 15 Val Thr Lys Lys Gln Leu Gly Ala Gly Ser Ile Glu Glu Cys Ala Ala 20 25 30 Lys Cys Glu Glu Asp Glu Glu Phe Thr Cys Arg Ala Phe Gln Tyr His 35 40 45 Ser Lys Glu Gln Gln Cys Val Ile Met Ala Glu Asn Arg Lys Ser Ser 50 55 60 Ile Ile Ile Arg Met Arg Asp Val Val Leu Phe Glu Lys Lys Val Tyr 65 70 75 80 Leu Ser Glu Cys Lys Thr Gly Asn Gly Lys Asn Tyr Arg Gly Thr Met 85 90 95 Ser Lys Thr Lys Asn Gly Ile Thr Cys Gln Lys Trp Ser Ser Thr Ser 100 105 110 Pro His Arg Pro Arg Phe Ser Pro Ala Thr His Pro Ser Glu Gly Leu 115 120 125 Glu Glu Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Asn Asp Pro Gln Gly Pro Trp 130 135 140 Cys Tyr Thr Thr Asp Pro Glu Lys Arg Tyr Asp Tyr Cys Asp Ile Leu 145 150 155 160 Glu Cys Glu Glu Ala Ala Pro Ser Phe Asp Cys Gly Lys Pro Gln Val 165 170 175 Glu Pro Lys Lys Cys Pro Gly Arg Val Val Gly Gly Cys Val Ala His 180 185 190 Pro His Ser Trp Pro Trp Gln Val Ser Leu Arg Thr Arg Phe Gly Met 195 200 205 His Phe Cys Gly Gly Thr Leu Ile Ser Pro Glu Trp Val Leu Thr Ala 210 215 220 Ala His Cys Leu Glu Lys Ser Pro Arg Pro Ser Ser Tyr Lys Val Ile 225 230 235 240 Leu Gly Ala His Gln Glu Val Asn Leu Glu Pro His Val Gln Glu Ile 245 250 255 Glu Val Ser Arg Leu Phe Leu Glu Pro Thr Arg Lys Asp Ile Ala Leu 260 265 270 Leu Lys Leu Ser Ser Pro Ala Val Ile Thr Asp Lys Val Ile Pro Ala 275 280 285 Cys Leu Pro Ser Pro Asn Tyr Val Val Ala Asp Arg Thr Glu Cys Phe 290 295 300 Ile Thr Gly Trp Gly Glu Thr Gln Gly Thr Phe Gly Ala Gly Leu Leu 305 310 315 320 Lys Glu Ala Gln Leu Pro Val Ile Glu Asn Lys Val Cys Asn Arg Tyr 325 330 335 Glu Phe Leu Asn Gly Arg Val Gln Ser Thr Glu Leu Cys Ala Gly His 340 345 350 Leu Ala Gly Gly Thr Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu 355 360 365 Val Cys Phe Glu Lys Asp Lys Tyr Ile Leu Gln Gly Val Thr Ser Trp 370 375 380 Gly Leu Gly Cys Ala Arg Pro Asn Lys Pro Gly Val Tyr Val Arg Val 385 390 395 400 Ser Arg Phe Val Thr Trp Ile Glu Gly Val Met Arg Asn Asn 405 410 <210> 9 <211> 1104 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Nucleic acid sequence of Mini-plg(small plasminogen) <400> 9 gtcaggtggg agtactgcaa cctgaaaaaa tgctcaggaa cagaagcgag tgttgtagca 60 cctccgcctg ttgtcctgct tccagatgta gagactcctt ccgaagaaga ctgtatgttt 120 gggaatggga aaggataccg aggcaagagg gcgaccactg ttactgggac gccatgccag 180 gactgggctg cccaggagcc ccatagacac agcattttca ctccagagac aaatccacgg 240 gcgggtctgg aaaaaaatta ctgccgtaac cctgatggtg atgtaggtgg tccctggtgc 300 tacacgacaa atccaagaaa actttacgac tactgtgatg tccctcagtg tgcggcccct 360 tcatttgatt gtgggaagcc tcaagtggag ccgaagaaat gtcctggaag ggttgtaggg 420 gggtgtgtgg cccacccaca ttcctggccc tggcaagtca gtcttagaac aaggtttgga 480 atgcacttct gtggaggcac cttgatatcc ccagagtggg tgttgactgc tgcccactgc 540 ttggagaagt ccccaaggcc ttcatcctac aaggtcatcc tgggtgcaca ccaagaagtg 600 aatctcgaac cgcatgttca ggaaatagaa gtgtctaggc tgttcttgga gcccacacga 660 aaagatattg ccttgctaaa gctaagcagt cctgccgtca tcactgacaa agtaatccca 720 gcttgtctgc catccccaaa ttatgtggtc gctgaccgga ccgaatgttt catcactggc 780 tggggagaaa cccaaggtac ttttggagct ggccttctca aggaagccca gctccctgtg 840 attgagaata aagtgtgcaa tcgctatgag tttctgaatg gaagagtcca atccaccgaa 900 ctctgtgctg ggcatttggc cggaggcact gacagttgcc agggtgacag tggaggtcct 960 ctggtttgct tcgagaagga caaatacatt ttacaaggag tcacttcttg gggtcttggc 1020 tgtgcacgcc ccaataagcc tggtgtctat gttcgtgttt caaggtttgt tacttggatt 1080 gagggagtga tgagaaataa ttaa 1104 <210> 10 <211> 367 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acid sequence of Mini-plg(small plasminogen) <400> 10 Val Arg Trp Glu Tyr Cys Asn Leu Lys Lys Cys Ser Gly Thr Glu Ala 1 5 10 15 Ser Val Val Ala Pro Pro Pro Val Val Leu Leu Pro Asp Val Glu Thr 20 25 30 Pro Ser Glu Glu Asp Cys Met Phe Gly Asn Gly Lys Gly Tyr Arg Gly 35 40 45 Lys Arg Ala Thr Thr Val Thr Gly Thr Pro Cys Gln Asp Trp Ala Ala 50 55 60 Gln Glu Pro His Arg His Ser Ile Phe Thr Pro Glu Thr Asn Pro Arg 65 70 75 80 Ala Gly Leu Glu Lys Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Gly Asp Val Gly 85 90 95 Gly Pro Trp Cys Tyr Thr Thr Asn Pro Arg Lys Leu Tyr Asp Tyr Cys 100 105 110 Asp Val Pro Gln Cys Ala Ala Pro Ser Phe Asp Cys Gly Lys Pro Gln 115 120 125 Val Glu Pro Lys Lys Cys Pro Gly Arg Val Val Gly Gly Cys Val Ala 130 135 140 His Pro His Ser Trp Pro Trp Gln Val Ser Leu Arg Thr Arg Phe Gly 145 150 155 160 Met His Phe Cys Gly Gly Thr Leu Ile Ser Pro Glu Trp Val Leu Thr 165 170 175 Ala Ala His Cys Leu Glu Lys Ser Pro Arg Pro Ser Ser Tyr Lys Val 180 185 190 Ile Leu Gly Ala His Gln Glu Val Asn Leu Glu Pro His Val Gln Glu 195 200 205 Ile Glu Val Ser Arg Leu Phe Leu Glu Pro Thr Arg Lys Asp Ile Ala 210 215 220 Leu Leu Lys Leu Ser Ser Pro Ala Val Ile Thr Asp Lys Val Ile Pro 225 230 235 240 Ala Cys Leu Pro Ser Pro Asn Tyr Val Val Ala Asp Arg Thr Glu Cys 245 250 255 Phe Ile Thr Gly Trp Gly Glu Thr Gln Gly Thr Phe Gly Ala Gly Leu 260 265 270 Leu Lys Glu Ala Gln Leu Pro Val Ile Glu Asn Lys Val Cys Asn Arg 275 280 285 Tyr Glu Phe Leu Asn Gly Arg Val Gln Ser Thr Glu Leu Cys Ala Gly 290 295 300 His Leu Ala Gly Gly Thr Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro 305 310 315 320 Leu Val Cys Phe Glu Lys Asp Lys Tyr Ile Leu Gln Gly Val Thr Ser 325 330 335 Trp Gly Leu Gly Cys Ala Arg Pro Asn Lys Pro Gly Val Tyr Val Arg 340 345 350 Val Ser Arg Phe Val Thr Trp Ile Glu Gly Val Met Arg Asn Asn 355 360 365 <210> 11 <211> 750 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Nucleic acid sequence of Micro-plg(micro-plasminogen) <400> 11 gccccttcat ttgattgtgg gaagcctcaa gtggagccga agaaatgtcc tggaagggtt 60 gtaggggggt gtgtggccca cccacattcc tggccctggc aagtcagtct tagaacaagg 120 tttggaatgc acttctgtgg aggcaccttg atatccccag agtgggtgtt gactgctgcc 180 cactgcttgg agaagtcccc aaggccttca tcctacaagg tcatcctggg tgcacaccaa 240 gaagtgaatc tcgaaccgca tgttcaggaa atagaagtgt ctaggctgtt cttggagccc 300 acacgaaaag atattgcctt gctaaagcta agcagtcctg ccgtcatcac tgacaaagta 360 atcccagctt gtctgccatc cccaaattat gtggtcgctg accggaccga atgtttcatc 420 actggctggg gagaaaccca aggtactttt ggagctggcc ttctcaagga agcccagctc 480 cctgtgattg agaataaagt gtgcaatcgc tatgagtttc tgaatggaag agtccaatcc 540 accgaactct gtgctgggca tttggccgga ggcactgaca gttgccaggg tgacagtgga 600 ggtcctctgg tttgcttcga gaaggacaaa tacattttac aaggagtcac ttcttggggt 660 cttggctgtg cacgccccaa taagcctggt gtctatgttc gtgtttcaag gtttgttact 720 tggattgagg gagtgatgag aaataattaa 750 <210> 12 <211> 249 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acid sequence of Micro-plg(micro-plasminogen) <400> 12 Ala Pro Ser Phe Asp Cys Gly Lys Pro Gln Val Glu Pro Lys Lys Cys 1 5 10 15 Pro Gly Arg Val Val Gly Gly Cys Val Ala His Pro His Ser Trp Pro 20 25 30 Trp Gln Val Ser Leu Arg Thr Arg Phe Gly Met His Phe Cys Gly Gly 35 40 45 Thr Leu Ile Ser Pro Glu Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Leu Glu 50 55 60 Lys Ser Pro Arg Pro Ser Ser Tyr Lys Val Ile Leu Gly Ala His Gln 65 70 75 80 Glu Val Asn Leu Glu Pro His Val Gln Glu Ile Glu Val Ser Arg Leu 85 90 95 Phe Leu Glu Pro Thr Arg Lys Asp Ile Ala Leu Leu Lys Leu Ser Ser 100 105 110 Pro Ala Val Ile Thr Asp Lys Val Ile Pro Ala Cys Leu Pro Ser Pro 115 120 125 Asn Tyr Val Val Ala Asp Arg Thr Glu Cys Phe Ile Thr Gly Trp Gly 130 135 140 Glu Thr Gln Gly Thr Phe Gly Ala Gly Leu Leu Lys Glu Ala Gln Leu 145 150 155 160 Pro Val Ile Glu Asn Lys Val Cys Asn Arg Tyr Glu Phe Leu Asn Gly 165 170 175 Arg Val Gln Ser Thr Glu Leu Cys Ala Gly His Leu Ala Gly Gly Thr 180 185 190 Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Phe Glu Lys 195 200 205 Asp Lys Tyr Ile Leu Gln Gly Val Thr Ser Trp Gly Leu Gly Cys Ala 210 215 220 Arg Pro Asn Lys Pro Gly Val Tyr Val Arg Val Ser Arg Phe Val Thr 225 230 235 240 Trp Ile Glu Gly Val Met Arg Asn Asn 245 <210> 13 <211> 684 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Nucleic acid sequence of serine protease domain <400> 13 gttgtagggg ggtgtgtggc ccacccacat tcctggccct ggcaagtcag tcttagaaca 60 aggtttggaa tgcacttctg tggaggcacc ttgatatccc cagagtgggt gttgactgct 120 gcccactgct tggagaagtc cccaaggcct tcatcctaca aggtcatcct gggtgcacac 180 caagaagtga atctcgaacc gcatgttcag gaaatagaag tgtctaggct gttcttggag 240 cccacacgaa aagatattgc cttgctaaag ctaagcagtc ctgccgtcat cactgacaaa 300 gtaatcccag cttgtctgcc atccccaaat tatgtggtcg ctgaccggac cgaatgtttc 360 atcactggct ggggagaaac ccaaggtact tttggagctg gccttctcaa ggaagcccag 420 ctccctgtga ttgagaataa agtgtgcaat cgctatgagt ttctgaatgg aagagtccaa 480 tccaccgaac tctgtgctgg gcatttggcc ggaggcactg acagttgcca gggtgacagt 540 ggaggtcctc tggtttgctt cgagaaggac aaatacattt tacaaggagt cacttcttgg 600 ggtcttggct gtgcacgccc caataagcct ggtgtctatg ttcgtgtttc aaggtttgtt 660 acttggattg agggagtgat gaga 684 <210> 14 <211> 228 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acid sequence of serine protease domain <400> 14 Val Val Gly Gly Cys Val Ala His Pro His Ser Trp Pro Trp Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Arg Thr Arg Phe Gly Met His Phe Cys Gly Gly Thr Leu Ile 20 25 30 Ser Pro Glu Trp Val Leu Thr Ala Ala His Cys Leu Glu Lys Ser Pro 35 40 45 Arg Pro Ser Ser Tyr Lys Val Ile Leu Gly Ala His Gln Glu Val Asn 50 55 60 Leu Glu Pro His Val Gln Glu Ile Glu Val Ser Arg Leu Phe Leu Glu 65 70 75 80 Pro Thr Arg Lys Asp Ile Ala Leu Leu Lys Leu Ser Ser Pro Ala Val 85 90 95 Ile Thr Asp Lys Val Ile Pro Ala Cys Leu Pro Ser Pro Asn Tyr Val 100 105 110 Val Ala Asp Arg Thr Glu Cys Phe Ile Thr Gly Trp Gly Glu Thr Gln 115 120 125 Gly Thr Phe Gly Ala Gly Leu Leu Lys Glu Ala Gln Leu Pro Val Ile 130 135 140 Glu Asn Lys Val Cys Asn Arg Tyr Glu Phe Leu Asn Gly Arg Val Gln 145 150 155 160 Ser Thr Glu Leu Cys Ala Gly His Leu Ala Gly Gly Thr Asp Ser Cys 165 170 175 Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Phe Glu Lys Asp Lys Tyr 180 185 190 Ile Leu Gln Gly Val Thr Ser Trp Gly Leu Gly Cys Ala Arg Pro Asn 195 200 205 Lys Pro Gly Val Tyr Val Arg Val Ser Arg Phe Val Thr Trp Ile Glu 210 215 220 Gly Val Met Arg 225

Claims

혈압 이상의 양방향 치료 방법으로서,
유효량의 플라스미노겐 활성화 경로의 성분, 플라스미노겐을 직접적으로 활성화하거나 또는 플라스미노겐 활성화 경로의 업스트림 성분을 활성화하여 플라스미노겐을 간접적으로 활성화할 수 있는 화합물, 플라스미노겐 또는 플라스민의 활성을 모방하는 화합물, 플라스미노겐 또는 플라스미노겐 활성제의 발현을 상향 조절할 수 있는 화합물, 플라스미노겐 유사체, 플라스민 유사체, tPA 또는 uPA 유사체 및 피브린 용해 억제제의 길항제로부터 선택되는 하나 이상의 화합물을 혈압 이상을 앓고 있는 피험자에게 투여하는 단계를 포함하되, 상기 혈압 이상은 고혈압 또는 저혈압이고, 상기 화합물은 고혈압 또는 저혈압을 앓고 있는 피험자의 혈압을 정상화시키거나 정상에 근접하도록 하거나 정상으로 회복하도록 하는 방법.
제1항에 있어서,
상기 플라스미노겐 활성화 경로의 성분은 플라스미노겐, 재조합 인간 플라스민, Lys-플라스미노겐, Glu-플라스미노겐, 플라스민, 플라스미노겐 및 플라스민 중 하나 이상의 kringle 도메인 및 프로테아제 도메인을 포함하는 플라스미노겐 및 플라스민의 변이체 및 유사체, 미니플라스미노겐(mini-plasminogen), 미니플라스민(mini-plasmin), 마이크로플라스미노겐(micro-plasminogen), 마이크로플라스민(micro-plasmin), 델타-플라스미노겐, 델타-플라스민(delta-plasmin), 플라스미노겐 활성제, tPA 및 uPA로부터 선택되는 방법.
제1항에 있어서,
상기 피브린 용해 억제제의 길항제는 PAI-1, 보체 C1 억제제, α2 항플라스민 또는 α2 마크로글로불린의 억제제, 예를 들어 항체인 방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물은 또한 혈압 이상으로 인한 조직 및 기관 손상 또는 합병증을 완화시키는 방법.
제4항에 있어서,
상기 혈압 이상으로 인한 합병증은 고혈압으로 인한 합병증이고, 상기 합병증은 부정맥, 심부전, 관상동맥 질환, 뇌출혈, 뇌혈전, 뇌경색, 고혈압성 신장 질환, 신부전, 요독증, 간경변, 폐동맥고혈압, 폐섬유증 및 미세혈전 중 하나 이상으로부터 선택되는 방법.
제4항에 있어서,
상기 혈압 이상으로 인한 합병증은 저혈압으로 인한 합병증이고, 상기 합병증은 심장허혈, 협심증, 쇼크, 뇌허혈, 실신, 뇌경색, 신장허혈, 핍뇨, 단백뇨 및 신장 기능 부전 중 하나 이상으로부터 선택되는 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물은 고혈압을 앓고 있는 피험자의 혈압 감소, 고혈압을 앓고 있는 피험자의 혈청 안지오텐신 II 수준 감소, 피험자의 ACE 또는 ACE2 수준 조절, 고혈압을 앓고 있는 피험자의 혈압이 정상 수준으로 회복되도록 촉진, 저혈압을 앓고 있는 피험자의 혈압 증가, 저혈압을 앓고 있는 피험자의 혈압이 정상 수준으로 회복되도록 촉진, 혈압 이상으로 인한 조직 및 기관 손상 경감, 손상된 조직 및 기관 복구 촉진, 조직 및 기관 섬유화 경감 및 자유 라디칼 제거 촉진으로부터 선택되는 하나 이상의 작용을 갖는 방법.
제7항에 있어서,
상기 손상된 조직 및 기관 복구 촉진은 손상된 심장 조직, 뇌 조직, 폐 조직, 신장 조직 또는 간 조직의 구조 또는 기능의 회복을 촉진하는 것인 방법.
제7항 또는 제8항에 있어서,
상기 조직 및 기관 섬유화 경감은 심장 조직, 폐 조직, 신장 조직 또는 간 조직의 섬유화를 경감하는 것인 방법.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물은 SOD 생성을 촉진하여 자유 라디칼을 제거하는 방법.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물은 플라스미노겐인 방법.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 플라스미노겐은 서열 2와 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 상동성을 갖고, 플라스미노겐의 단백질 분해 활성 또는 라이신 결합 활성을 갖는 방법.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 플라스미노겐은 서열 14로 표시되는 플라스미노겐 활성 단편을 포함하고, 플라스미노겐의 단백질 분해 활성을 갖는 방법.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 플라스미노겐은 Glu-플라스미노겐, Lys-플라스미노겐, 미니플라스미노겐, 마이크로플라스미노겐, 델타-플라스미노겐 또는 플라스미노겐의 단백질 분해 활성을 유지하는 이들의 변이체로부터 선택되는 방법.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 플라스미노겐은 천연 또는 합성 인간 플라스미노겐, 또는 플라스미노겐의 단백질 분해 활성 또는 라이신 결합 활성을 유지하는 이들의 변이체 또는 단편인 방법.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물은 하나 이상의 다른 치료 방법 또는 다른 약물과 병용되는 방법.
제16항에 있어서,
상기 다른 약물은 혈압 이상 병증이 있는 피험자의 혈압 이상 병증 이외의 다른 병증을 치료하기 위한 약물인 방법.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화합물은 비강 흡입, 에어로졸 흡입, 점비액, 점이액 또는 점안액, 정맥내, 복강내, 피하, 두개내, 척추강내, 동맥내, 직장내 및/또는 근육내에 의해 투여되는 방법.