JP2023521530A - ウイルス性肺炎を治療する方法及び薬剤 - Google Patents

Abstract

被験者に治療有効量のプラスミノーゲン活性化経路の成分を投与することを含む、ウイルス性肺炎を治療する方法に関する。また、ウイルス性肺炎を治療するための、プラスミノーゲン活性化経路の成分を含む薬剤、薬剤組成物、製品、及びキットに関する。

Description

本発明は、肺の炎症を改善し、血中酸素飽和度を高め、肺炎を治療し、肺の繊維化やその他の関連する合併症を予防するように、被験者に有効量のプラスミノーゲン活性化経路の成分またはその関連化合物、例えば、プラスミノーゲン、を投与することを含む、ウイルス性肺炎、例えば、コロナウイルス感染肺炎及びその合併症を予防または治療する方法に関する。

コロナウイルス（Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓｅｓ、ＣｏＶｓ）は、エンベロープのある一本鎖のプラス鎖ＲＮＡウイルスであり、コロナウイルス科（Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ）に属し、遺伝子型によって、アルファコロナウイルス（Ａｌｐｈａ Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ、α－ＣｏＶ）、ベータコロナウイルス（Ｂｅｔａ Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ、β－ＣｏＶ）、ガンマコロナウイルス（Ｇａｍｍａ Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ、γ－ＣｏＶ）、及びデルタコロナウイルス（Ｄｅｌｔａ Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ、δ－ＣｏＶ）の４つの属に分けることができ、そのうち、α－ＣｏＶ及びβ－ＣｏＶコロナウイルスは哺乳類に対してより感受性が高い（ＣＵＩ Ｊ，Ｌｉ Ｆ，ＳＨＩ Ｚ Ｌ．Ｏｒｉｇｉｎ ａｎｄ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓｅｓ ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅｒｅｖｉｅｗｓ．Ｍｉｃｏｒｂｉｏｌｏｇｙ，２０１９，１７（３）：１８１－１９２）。

重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、すなわちβ－ＣｏＶは、非定型肺炎を主な特徴とする重症急性呼吸器症候群（ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ、ＳＡＲＳ）を引き起こす可能性がある。中東及び韓国で現れたＳＡＲＳ－ＣｏＶに似た新しいヒトコロナウイルス（ｈＣｏＶＥＭＣ／２０１２）は、ヒトに中東呼吸器症候群（Ｍｉｄｄｌｅ Ｅａｓｔ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ、ＭＥＲＳ）を引き起こす可能性がある。２０１３年、世界保健機関はその病原体を中東呼吸器症候群コロナウイルス（Ｍｉｄｄｌｅ Ｅａｓｔ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）と名付けた。この疾患はＳＡＲＳに似ているが、肝不全や腎不全などの他の合併症を引き起こす可能性が高いため、患者の死亡率は高くなる。

ＳＡＲＳウイルスは広範な組織指向性を持ち、さまざまな組織や器官に侵入し、さまざまな組織や器官に障害を引き起こす。患者の肺うっ血、出血、浮腫及び重度のびまん性肺胞損傷、ヒアリン膜形成、肺胞上皮過形成、肺間質単核細胞の炎症性浸潤、肺胞間肺胞細胞の脱落、及び肺間質線維症が現れる。

２０１９新型コロナウイルスは、β属コロナウイルスに属し、２０２０年１月１２日にＷＨＯによって正式に２０１９－ｎＣｏＶ（本出願ではＣＯＶＩＤ－１９ともいう）と命名され、その遺伝的特徴は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ及びＭＥＲＳ－ＣｏＶとは大きく異なり、コウモリのＳＡＲＳ様コロナウイルスであるｂａｔ－ＳＬ－ＣｏＶ ＺＣ４５及びｂａｔ－ＳＬ－ＣｏＶ ＺＸＣ２１により類似している（ＣＨＥＮ Ｙ，ＬＩＵ Ｑ，ＧＵＯ Ｄ．Ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓｅｓ：ｇｅｎｏｍｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ， ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｍｅｄｉｃａｌ ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２０２０）。

２０１９－ｎＣｏＶは感染力が高く、ヒトが一般的に感染しやすく、主に空咳、発熱、呼吸困難などの下気道感染症の症状として現れ、重症の場合、急性呼吸窮迫症候群（ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＡＲＤＳ）や敗血症を引き起こすことさえある（Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｗｈｅｎ ｎｏｖｅｌ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ （２０１９－ｎＣｏＶ） ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｓｓｕｓｐｅｃｔｅｄ： ｉｎｔｅｒｉｍ ｇｕｉｄａｎｃｅ． ２８ Ｊａｎｕａｒｙ ２０２０． ＷＨＯ／ｎＣｏＶ／Ｃｌｉｎｉｃａｌ／２０２０．２）。

新型コロナウイルス肺炎は病期によって、早期、進行期、重症期の３段階に分けられる。疾患の早期では、病変は限定的であり、単一または複数のスリガラス陰影（ＧＧＯ）の結節、斑点またはシート状の陰影として現れる；進行期では病変が進行し、病変が増加して範囲が拡大し、ＧＧＯは硬化陰影またはストリーク陰影と共存し、一部の硬化陰影または構造的歪曲陰影内の気管支柱状肥厚がある；重症期では、両肺にびまん性病変、肺実質の広範な浸出及び硬化があり、主に硬化陰影であり、肺構造の歪み、気管支拡張症、サブ分節性無気肺もあり、重症の場合は「白い肺」である（史河水、韓小雨、樊艶青、梁波、楊帆、韓萍、鄭伝勝、新型コロナウイルス（２０１９－ｎＣｏＶ）感染症による肺炎の臨床的特徴及びイメージング表現。臨床放射学雑誌。ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１３４３７／ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｃｒ．２０２００２０６．００２）。

本発明は、プラスミノーゲンが肺炎（２０１９－ｎＣｏＶウイルス性肺炎などのウイルス感染性肺炎を含む）、肺線維症患者の肺換気機能を有意に改善し、血中酸素飽和度を高め、呼吸困難の症状を改善し、それによって肺炎及び肺線維症に関連する疾患を治療できることを発見した。

具体的には、本発明は下記のことに係る。
１、一態様では、本願は、プラスミノーゲン活性化経路の成分、プラスミノーゲンを直接活性化し得るか、またはプラスミノーゲン活性化経路の上流成分を活性化することによって間接的にプラスミノーゲンを活性化し得る化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミンの活性を模倣する化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミノーゲン活性化剤の発現をアップレギュレートすることができる化合物、プラスミノーゲン類縁体、プラスミン類縁体、ｔＰＡまたはｕＰＡ類縁体及び線維素溶解阻害剤の拮抗剤から選択される１つ以上の治療有効量の化合物を被験者に投与することを含む、肺炎を予防及び治療する方法に関する。

一態様では、本願は、プラスミノーゲン活性化経路の成分、プラスミノーゲンを直接活性化し得るか、またはプラスミノーゲン活性化経路の上流成分を活性化することによって間接的にプラスミノーゲンを活性化し得る化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミンの活性を模倣する化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミノーゲン活性化剤の発現をアップレギュレートすることができる化合物、プラスミノーゲン類縁体、プラスミン類縁体、ｔＰＡまたはｕＰＡ類縁体及び線維素溶解阻害剤の拮抗剤から選択される１つ以上の化合物の、肺炎を予防及び治療する薬剤の調製における使用に関する。

一態様では、本願は、プラスミノーゲン活性化経路の成分、プラスミノーゲンを直接活性化し得るか、またはプラスミノーゲン活性化経路の上流成分を活性化することによって間接的にプラスミノーゲンを活性化し得る化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミンの活性を模倣する化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミノーゲン活性化剤の発現をアップレギュレートすることができる化合物、プラスミノーゲン類縁体、プラスミン類縁体、ｔＰＡまたはｕＰＡ類縁体及び線維素溶解阻害剤の拮抗剤から選択される１つ以上の化合物の、肺炎を予防及び治療する使用に関する。

一態様では、本願は、プラスミノーゲン活性化経路の成分、プラスミノーゲンを直接活性化し得るか、またはプラスミノーゲン活性化経路の上流成分を活性化することによって間接的にプラスミノーゲンを活性化し得る化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミンの活性を模倣する化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミノーゲン活性化剤の発現をアップレギュレートすることができる化合物、プラスミノーゲン類縁体、プラスミン類縁体、ｔＰＡまたはｕＰＡ類縁体及び線維素溶解阻害剤の拮抗剤から選択される１つ以上の化合物を含む、肺炎を予防及び治療する薬剤に関する。

２、前記プラスミノーゲン活性化経路の成分が、プラスミノーゲン、組換えヒトプラスミノーゲン、Ｌｙｓ－プラスミノーゲン、Ｇｌｕ－プラスミノーゲン、プラスミン、プラスミノーゲンとプラスミンの１つ以上のｋｒｉｎｇｌｅドメイン及びプロテアーゼドメインを含むプラスミノーゲン及びプラスミン変異体並びに類縁体、ミニプラスミノーゲン（ｍｉｎｉ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）、ミニプラスミン（ｍｉｎｉ－ｐｌａｓｍｉｎ）、マイクロプラスミノーゲン（ｍｉｃｒｏ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）、マイクロプラスミン（ｍｉｃｒｏ－ｐｌａｓｍｉｎ）、ｄｅｌｔａ－プラスミノーゲン、ｄｅｌｔａ－プラスミン（ｄｅｌｔａ－ｐｌａｓｍｉｎ）、プラスミノーゲン活性化剤、ｔＰＡ、及びｕＰＡから選択されるものである、項１に記載の方法、使用、または薬剤。

３、前記線維素溶解阻害剤の拮抗剤が、ＰＡＩ－１、補体Ｃ１阻害剤、α２抗プラスミンまたはα２マクログロブリンの阻害剤、例えば、抗体である、項１に記載の方法、使用、または薬剤。

４、前記肺炎が、細菌感染肺炎、ウイルス感染肺炎、マイコプラズマ感染肺炎、クラミジア感染肺炎、真菌感染肺炎、またはリケッチア感染肺炎である、項１～３のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。

５、前記肺炎が非感染性因子による肺炎である、項１～３のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。いくつかの実施形態では、前記肺炎は放射線によって引き起こされる。いくつかの実施形態では、前記肺炎は、有毒ガスの吸入によって引き起こされる、例えば、ヘイズなどの粉塵堆積物によって引き起こされる。いくつかの実施形態では、前記肺炎は自己免疫疾患（例えば、全身性硬化症）によって引き起こされる。いくつかの実施形態では、前記肺炎は、喘息などのアレルギーによって引き起こされる。いくつかの実施形態では、前記肺炎は毒性化合物（例えば、モノクロタリンまたはパラコート）によって引き起こされる。

６、前記肺炎がコロナウイルス感染性肺炎である、項４に記載の方法、使用、または薬剤。

７、前記肺炎が２０１９－ｎＣｏＶ感染性肺炎である、項６に記載の方法、使用、または薬剤。

いくつかの実施形態では、前記肺炎が２０１９－ｎＣｏＶ感染性肺炎であり、前記プラスミノーゲンが、肺組織の損傷の軽減、肺の炎症反応の軽減、肺のフィブリン沈着の低減、肺機能の改善、血中酸素飽和度の向上、２０１９－ｎＣｏＶ感染性肺炎の被験者の血圧の低下、２０１９－ｎＣｏＶ感染性肺炎の被験者の心機能の改善、２０１９－ｎＣｏＶ感染性肺炎の被験者の一般的な身体状態の改善から選択される１つ以上を実現する。

８、前記化合物が、肺組織の炎症の減少、肺組織の炎症性浸出の減少、肺組織のフィブリン沈着の減少、肺組織の線維化の減少、肺組織のアポトーシスの減少、換気機能の改善、及び血中酸素飽和度の増加からなる群から選択される１つ以上の効果を有する、項１～７のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。

９、前記プラスミノーゲンが、配列２と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有し、且つ依然としてプラスミノーゲン活性、例えば、タンパク質加水分解活性、リジン結合活性、またはタンパク質加水分解活性及びリジン結合活性を有する、項１～８のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。

１０、前記プラスミノーゲンが、配列１４に示されるプラスミノーゲン活性フラグメントと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つプラスミノーゲンのタンパク質加水分解活性またはリジン結合活性を有する、項１～８のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。いくつかの実施形態では、前記プラスミノーゲンは、配列１４に示されるプラスミノーゲン活性フラグメントを含み、且つプラスミノーゲンのタンパク質加水分解活性を有する。

１１、前記プラスミノーゲンが、配列２に示される前記プラスミノーゲンの保存的置換変異体である、項１～８のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。いくつかの実施形態では、前記プラスミノーゲンは、Ｇｌｕ－プラスミノーゲン、Ｌｙｓ－プラスミノーゲン、ミニプラスミノーゲン、マイクロプラスミノーゲン、ｄｅｌｔａ－プラスミノーゲンまたはそれらの、プラスミノーゲン活性を保持した変異体から選択されるものである。いくつかの実施形態では、前記プラスミノーゲンは、配列２、４、６、８、１０、１２または１４に示されるアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなる。

１２、前記プラスミノーゲンが、天然または合成のヒトプラスミノーゲン、または依然としてプラスミノーゲン活性を保持した変異体もしくはフラグメントである、項１～８のいずれか１項に記載の方法、使用、または薬剤。

１３、前記化合物が、１つもしくは複数の他の治療方法または薬剤と組み合わせて使用する、項１～１２のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。いくつかの実施形態では、前記他の治療方法は、人工呼吸器補助呼吸法などの体外補助呼吸法である。

１４、前記他の薬剤が、抗ウイルス薬、抗生物質、免疫調節薬、ホルモン薬（例えば、ステロイドホルモン）、ワクチン、及び疾患関連中和抗体から選択される１つ以上である、項１３に記載の方法、使用、または薬剤。

１５、前記化合物が、鼻吸入、エアロゾル吸入、点鼻薬、点耳薬、点眼薬、静脈内、腹腔内、皮下、頭蓋内、髄腔内、筋肉内、及び直腸内からなる群から選択される１つ以上の経路または方法によって投与される、項１～１４のいずれか一項に記載の方法、使用、または薬剤。

本願の上記いずれか１つの実施形態において、前記プラスミノーゲンが配列２、６、８、１０または１２と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有し、且つ依然としてプラスミノーゲン活性、例えば、タンパク質加水分解活性、リジン結合活性、またはタンパク質加水分解活性及びリジン結合活性を有し得る。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンは、配列２、６、８、１０または１２に基づいて、１～１００、１～９０、１～８０、１～７０、１～６０、１～５０、１～４５、１～４０、１～３５、１～３０、１～２５、１～２０、１～１５、１～１０、１～５、１～４、１～３、１～２、１個のアミノ酸を追加、削除、及び／または置換され、かつ依然としてプラスミノーゲン活性を有するタンパク質である。

一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンはプラスミノーゲン活性フラグメントを含み、且つ依然としてプラスミノーゲン活性を有するタンパク質である。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンは、Ｇｌｕ－プラスミノーゲン、Ｌｙｓ－プラスミノーゲン、ミニプラスミノーゲン、マイクロプラスミノーゲン、δ－プラスミノーゲンまたはそれらのプラスミノーゲン活性を保持した変異体である。上記実施形態において、プラスミノーゲンは、天然または合成のヒトプラスミノーゲン、または依然としてプラスミノーゲン活性を保持した変異体若しくはフラグメントである。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンは、霊長類動物またはげっ歯類動物に由来するヒトプラスミノーゲンのオルソログ、または依然としてプラスミノーゲン活性を保持した変異体若しくはフラグメントである。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンのアミノ酸は配列２、６、８、１０または１２に示される。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンはヒト天然プラスミノーゲンである。

一部の実施形態において、前記被験者はヒトである。一部の実施形態において、前記被験者はプラスミノーゲンが不足、または欠乏している。一部の実施形態において、前記不足または欠乏は、先天的、継発的及び／または局所的である。

いくつかの実施形態では、前記医薬組成物は、薬学的に許容される担体と、前述の方法で使用するプラスミノーゲンとを含む。いくつかの実施形態では、前記キットは、（ｉ）前述の方法で使用するプラスミノーゲン、及び（ｉｉ）前記プラスミノーゲンを前記被験者に送達するための部材（ｍｅａｎｓ）を含む、予防または治療キットであり得る。いくつかの実施形態では、前記部材は注射器またはバイアルである。いくつかの実施形態では、前記キットは、前述の方法のいずれかを実施するために前記プラスミノーゲンを前記被験者に投与することを指示するためのラベルまたはプロトコルをさらに含む。

いくつかの実施形態では、前記製品は、ラベルを含む容器と、（ｉ）前述の方法で使用するためのプラスミノーゲンまたはプラスミノーゲンを含む医薬組成物とを含み、前記ラベルは、前述の方法のいずれかを実施するために前記プラスミノーゲンまたは組成物を前記被験者に投与することを指示する。

いくつかの実施形態では、前記キットまたは製品は、他の薬剤を含む１つまたは複数の追加の部材または容器をさらに含む。

前記方法の一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンは全身または局所にて投与され、好ましくは、鼻吸入、エアロゾル吸入、点鼻薬、点耳薬、点眼薬、静脈内、腹腔内、皮下、頭蓋内、髄腔内、筋肉内、及び直腸内から選択される１つ以上の経路または方法よって投与する。前記方法のいくつかの実施形態では、前記プラスミノーゲンは、適切なポリペプチド担体または安定剤と組み合わせて投与される。前記方法の一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンは毎日０．０００１～２０００ｍｇ／ｋｇ、０．００１～８００ｍｇ／ｋｇ、０．０１～６００ｍｇ／ｋｇ、０．１～４００ｍｇ／ｋｇ、１～２００ｍｇ／ｋｇ、１～１００ｍｇ／ｋｇ、１０～１００ｍｇ／ｋｇ（体重１キロあたりで計算）または０．０００１～２０００ｍｇ／ｃｍ^２、０．００１～８００ｍｇ／ｃｍ^２、０．０１～６００ｍｇ／ｃｍ^２、０．１～４００ｍｇ／ｃｍ^２、１～２００ｍｇ／ｃｍ^２、１～１００ｍｇ／ｃｍ^２、１０～１００ｍｇ／ｃｍ^２（体表面積平方センチメートルあたりで計算）の用量で投与し、好ましくは一回以上繰り返し、好ましくは少なくとも毎日投与する。

本発明は、本発明の実施形態に属する技術的特徴のすべての組み合わせを明確にカバーし、これらの組み合わせ後の技術構成は、上記の技術構成が別個に明確に開示されたのと同様に、本出願において明確に開示された。さらに、本発明はまた、各実施形態とそれらの要素との間の組み合わせを明確にカバーし、組み合わせ後の技術構成は、本明細書に明確に開示されている。

図１Ａ～Ｃは、モノクロタリンによって誘発された肺動脈性肺高血圧症モデルマウスにプラスミノーゲンを２８日間投与した後の肺のシリウスレッド染色の代表的な写真を示す図である。Ａはブランク対照群、Ｂは溶媒ＰＢＳ投与対照群（本願において溶媒群と略称する）、Ｃはプラスミノーゲン投与群（本願において投与群と略称する）である。その結果、ブランク対照群のマウスの肺には基本的にコラーゲン沈着はなく、プラスミノーゲン群のマウスの肺組織のコラーゲン沈着（矢印でマーク）は、溶媒ＰＢＳ投与対照群よりも有意に少なかった。これは、プラスミノーゲンがモノクロタリンによって誘発された肺動脈性肺高血圧症モデルマウスの肺の線維化を有意に減少させることができることを示している。 図２Ａ～Ｃは、ブレオマイシンによって誘発された全身性硬化症モデルマウスにプラスミノーゲンを２１日間投与した後の肺シリウスレッド染色の代表的な写真を示す図である。Ａは溶媒ＰＢＳ投与対照群、Ｂはプラスミノーゲン投与群、Ｃは定量分析結果である。その結果、ブレオマイシン誘発全身性硬化症マウスモデルでは、溶媒ＰＢＳ投与群マウスの肺線維症（矢印でマーク）の程度はプラスミノーゲン投与群よりも高く、プラスミノーゲン投与群マウスの肺胞壁の形態は正常に近く、炎症細胞のレベルは有意に減少し、線維化の程度は溶媒ＰＢＳ投与群よりも有意に低く、しかもその差は統計的に有意であった（＊はＰ＜０．０５を表す)。 図３Ａ～Ｂは、パラコート誘発中毒マウスにプラスミノーゲンを１４日間投与した後の肺のシリウスレッド染色の観察結果を示す図である。Ａは溶媒ＰＢＳ投与対照群、Ｂはプラスミノーゲン投与群である。その結果、プラスミノーゲン投与群マウスにおけるコラーゲン線維の沈着は、溶媒ＰＢＳ投与対照群よりも有意に少なかった。これは、プラスミノーゲンがパラコート中毒によって引き起こされる肺線維化を減少させることができることを示している。 図４Ａ～Ｄは、プラスミノーゲンを１４日間投与した後の、ＬＰＳ誘発肺炎モデルマウスにおける肺のシリウスレッド染色の結果を示す図である。Ａはブランク対照群、Ｂは溶媒ＰＢＳ投与対照群、Ｃはプラスミノーゲン投与群、Ｄは定量分析結果である。その結果、ブランク対照群の肺組織に一定量のコラーゲン沈着があり（矢印でマーク）、溶媒群のマウスの肺組織にコラーゲン沈着が有意に増加し、投与群のマウスの肺組織におけるコラーゲン沈着は溶媒群のマウスよりも有意に少なく、しかもその差は統計的に有意であった（＊はＰ＜０．０５を表す）。これは、プラスミノーゲンが肺炎モデルマウスの肺におけるコラーゲンの沈着を減少させ、肺炎によって引き起こされる肺線維症を改善できることを示している。 図５Ａ～Ｃは、プラスミノーゲンを予め３日間投与した後の、ＬＰＳ誘発肺炎モデルマウスにおける肺のシリウスレッド染色の結果を示す図である。Ａはブランク対照群、Ｂは溶媒ＰＢＳ投与対照群、Ｃは投与群である。その結果、ブランク対照群の肺組織に一定量のコラーゲン沈着があり（矢印でマーク）、溶媒群のマウスの肺組織にコラーゲン沈着が有意に増加し、投与群のマウスの肺組織におけるコラーゲン沈着は溶媒群のマウスよりも有意に少なかった。これは、プラスミノーゲンを予め投与することで、肺炎モデルマウスの肺におけるコラーゲンの沈着が減少し、肺炎によって引き起こされる肺線維症が改善できることを示している。 図６は、プラスミノーゲンを７日間投与した後の、ＬＰＳ誘発肺炎モデルマウスの肺洗浄液中の総タンパク質の検出結果を示す図である。その結果、ブランク対照群の肺洗浄液に一定量の総タンパク質があり、溶媒群の肺洗浄液中の総タンパク質レベルは、ブランク対照群よりも有意に高く（＊＊＊はＰ＜０．００１を表す）、投与群の肺洗浄液中の総タンパク質レベルは、溶媒群よりも有意に低く、しかもその統計的差は有意に近かった（Ｐ＝０．０５２）。これは、プラスミノーゲンが肺炎モデルマウスの肺洗浄液中の総タンパク質レベルを低下させることができることを示している。 図７は、プラスミノーゲンを３日間投与した後の、ＬＰＳ誘発肺炎モデルマウスの肺フィブリンの免疫組織化学染色結果を示す図である。Ａは溶媒投与対照群、Ｂは投与群である。その結果、溶媒群マウスの肺組織におけるフィブリン沈着のレベルは、投与群よりも有意に高かった。これは、プラスミノーゲンが肺炎モデルマウスの肺フィブリン沈着を減少させることができることを示している。 図８は、一般的なＣＯＶＩＤ－１９患者の高解像度ＣＴ画像を示す図である。左側に患者のＩＤが表示されている。Ａ列は、プラスミノーゲン吸入前の胸部ＣＴ画像である。Ｂ列は、該当患者のプラスミノーゲン吸入後の胸部ＣＴ画像である。Ｃ列は、５人の患者の、Ｂ超音波検査の５日後に再検の胸部ＣＴである。黒い矢印と枠は異常を示す。ヒトプラスミノーゲンを２～３回投与した後、５人の患者の肺病変の数、範囲、及び密度が減少し、さらに部分的に消失し、斑状または点状の「スリガラス」影は、大幅に減少または吸収された。これは、ヒトプラスミノーゲンのエアロゾル吸入が、ＣＯＶＩＤ－１９感染による肺損傷を急速に改善できることを示している。 図９は、普通型、重症型、重篤型のＣＯＶＩＤ－１９患者のプラスミノーゲン吸入前後の心拍数モニタリング結果を示す図である。統計分析の結果、プラスミノーゲン投与後、普通型、重症型、重篤型の患者の平均心拍数はいずれも減少傾向を示し、一般的な患者では、投与前後の比較に統計的な差があった（Ｐ＜０．０５）。

発明の詳細な説明

線維素溶解系（Ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃ ｓｙｓｔｅｍ）は、線溶系とも呼ばれ、線維素溶解（線溶）の過程に関与する一連の化学物質からなる系であり、主にプラスミノーゲン（PLG）、プラスミン、プラスミノーゲン活性化因子、及び線維素溶解阻害剤を含む。プラスミノーゲン活性化因子には、組織型プラスミノーゲン活性化因子（ｔ－ＰＡ）、及びウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（ｕ－ＰＡ）が含まれる。ｔ－ＰＡはセリンプロテアーゼであり、血管内皮細胞によって合成される。ｔ－ＰＡはプラスミノーゲンを活性化し、このプロセスは主にフィブリンで行われる。ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（ｕ－ＰＡ）は、尿細管上皮細胞と血管内皮細胞によって産生され、補因子としてフィブリンを必要とすることなくプラスミノーゲンを直接活性化することができる。プラスミノーゲン（ＰＬＧ）は肝臓で合成される。血液が凝固すると、ＰＬＧはフィブリンネットに大量に吸着され、ｔ－ＰＡまたはｕ－ＰＡの作用によりプラスミンに活性化されて線維素溶解を促進する。プラスミナーゼ（ＰＬ）はセリンプロテアーゼであり、フィブリンとフィブリノーゲンを分解し、様々な凝固因子Ｖ、ＶＩＩＩ、Ｘ、ＶＩＩ、ＸＩ、ＩＩなどを加水分解し、プラスミノーゲンをプラスミンに変換し、補体を加水分解するなどの作用がある。線維素溶解阻害剤には、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤（ＰＡＩ）、及びα２－抗チプラスミン（α２－ＡＰ）が含まれる。ＰＡＩには主にＰＡＩ－１とＰＡＩ－２の２つの形態があり、ｔ－ＰＡに１：１の比率で特異的に結合し、それによってそれを不活性化すると同時にＰＬＧを活性化することができる。α２－ＡＰは肝臓で合成され、ＰＬと１：１の比率で結合して複合体を形成し、それによってＰＬ活性を阻害する。ＦＸＩＩＩはα２－ＡＰをフィブリンと共有結合させ、それによってＰＬに対するフィブリンの感受性を弱める。インビボでの線維素溶解系の活性を阻害する物質としては、ＰＡＩ－１、補体Ｃ１阻害剤、α２抗プラスミン、及びα２－マクログロブリンが挙げられる。

本明細書で使用される「プラスミノーゲン活性化経路の成分」という用語は、
１、プラスミノーゲン、Ｌｙｓ－プラスミノーゲン、Ｇｌｕ－プラスミノーゲン、マイクロプラスミノーゲン（ｍｉｃｒｏ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）、ｄｅｌｔａ－プラスミノーゲン、それらの変異体または類縁体；
２、プラスミン及びそれらの変異体または類縁体;及び
３、プラスミノーゲン活性化剤、例えば、ｔＰＡ及びｕＰＡ、ならびにｔＰＡまたはｕＰＡの１つ以上のドメイン（１つ以上のｋｒｉｎｇｌｅドメイン及びタンパク質加水分解ドメインなど）を含むｔＰＡまたはｕＰＡ変異体及び類縁体をカバーする。

上記プラスミノーゲン、プラスミン、ｔＰＡ及びｕＰＡの「変異体」は、すべての天然に存在するヒトの遺伝的変異体及びこれらのタンパク質の他の哺乳動物型、並びに、例えば、１～１００、１～９０、１～８０、１～７０、１～６０、１～５０、１～４５、１～４０、１～３５、１～３０、１～２５、１～２０、１～１５、１～１０、１～５、１～４、１～３、１～２、１個のアミノ酸を追加、削除、及び／または置換されてかつ依然としてプラスミノーゲン活性、プラスミン活性、ｔＰＡまたはｕＰＡ活性を有するタンパク質を含む。例えば、プラスミノーゲン、プラスミン、ｔＰＡまたはｕＰＡの「変異体」は、例えば、１～１００、１～９０、１～８０、１～７０、１～６０、１～５０、１～４５、１～４０、１～３５、１～３０、１～２５、１～２０、１～１５、１～１０、１～５、１～４、１～３、１～２、１個の保存的アミノ酸によって置換されて得られるこれらのタンパク質の突然変異体を含む。

本発明の「プラスミノーゲン変異体」は、配列２、６、８、１０または１２と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有し、且つ依然としてプラスミノーゲン活性を有するタンパク質をカバーする。例えば、本発明の「プラスミノーゲン変異体」は、配列２、６、８、１０または１２に基づいて、１～１００、１～９０、１～８０、１～７０、１～６０、１～５０、１～４５、１～４０、１～３５、１～３０、１～２５、１～２０、１～１５、１～１０、１～５、１～４、１～３、１～２、１個のアミノ酸を追加、削除、及び／または置換し、且つ依然としてプラスミノーゲン活性を有するタンパク質であり得る。具体的には、本発明のプラスミノーゲン変異体は、すべての天然に存在するヒトの遺伝的変異体及びこれらのタンパク質の他の哺乳動物型、並びに、例えば、１～１００、１～９０、１～８０、１～７０、１～６０、１～５０、１～４５、１～４０、１～３５、１～３０、１～２５、１～２０、１～１５、１～１０、１～５、１～４、１～３、１～２、１個のアミノ酸の保存的置換によって得られるこれらのタンパク質の突然変異体を含む。

本発明のプラスミノーゲンは、霊長類動物またはげっ歯類動物に由来するヒトプラスミノーゲンのオルソログ、または依然としてプラスミノーゲン活性を保持した変異体、例えば、配列２、６、８、１０または１２に示されるプラスミノーゲン、例えば、配列２に示されるヒト天然プラスミノーゲンであり得る。

上記プラスミノーゲン、プラスミン、ｔＰＡ及びｕＰＡの「類縁体」はそれぞれ、プラスミノーゲン、プラスミン、ｔＰＡまたはｕＰＡと実質的に同様の効果を与える化合物を含む。

上記プラスミノーゲン、プラスミン、ｔＰＡ及びｕＰＡの「変異体」及び「類縁体」は、１つ以上のドメイン（例えば、１つ以上のｋｒｉｎｇｌｅドメイン及びタンパク質加水分解ドメイン）を含むプラスミノーゲン、プラスミン、ｔＰＡ及びｕＰＡの「変異体」及び「類縁体」をカバーする。例えば、プラスミノーゲンの「変異体」及び「類縁体」は、１つ以上のプラスミノーゲンドメイン（例えば、１つ以上のｋｒｉｎｇｌｅドメイン及びタンパク質加水分解ドメイン）を含むプラスミノーゲン変異体及び類縁体、例えば、ミニプラスミノーゲン（ｍｉｎｉ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）をカバーする。プラスミンの「変異体」及び「類縁体」は、１つ以上のプラスミンドメイン（例えば、１つまたは複数のｋｒｉｎｇｌｅドメイン及びタンパク質加水分解ドメイン）を含むミニプラスミン（ｍｉｎｉ－ｐｌａｓｍｉｎ）やδ－プラスミン（ｄｅｌｔａ－ｐｌａｓｍｉｎ）などのプラスミンの「変異体」及び「類縁体」をカバーする。

上記プラスミノーゲン、プラスミン、ｔＰＡまたはｕＰＡの「変異体」または「類縁体」がそれぞれプラスミノーゲン、プラスミン、ｔＰＡまたはｕＰＡの活性を有するかどうか、またはそれらがプラスミノーゲン、プラスミン、ｔＰＡまたはｕＰＡと実質的に同様の効果をそれぞれ与えるかどうかは、当技術分野で知られている方法、例えば、ザイモグラフィー（ｅｎｚｙｍｏｇｒａｐｈｙ）、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）及びＦＡＣＳ（蛍光活性化細胞ソーティング法）を使用して、活性化されたプラスミン活性のレベルによって測定できる。例えば、次の文献に記載されている方法を参照して測定することができる。Ｎｙ，Ａ．，Ｌｅｏｎａｒｄｓｓｏｎ，Ｇ．，Ｈａｇｇｌｕｎｄ，Ａ．Ｃ，Ｈａｇｇｌｏｆ，Ｐ．，Ｐｌｏｐｌｉｓ，Ｖ．Ａ．，Ｃａｒｍｅｌｉｅｔ，Ｐ． ａｎｄ Ｎｙ，Ｔ． （１９９９）． Ｏｖｕｌａｔｉｏｎ ｉｎｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ－ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｍｉｃｅ． Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １４０，５０３０－５０３５；Ｓｉｌｖｅｒｓｔｅｉｎ ＲＬ， Ｌｅｕｎｇ ＬＬ， Ｈａｒｐｅｌ ＰＣ， Ｎａｃｈｍａｎ ＲＬ （Ｎｏｖｅｍｂｅｒ １９８４）． ”Ｃｏｍｐｌｅｘ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ｗｉｔｈ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ． Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ ｔｉｓｓｕｅ ａｃｔｉｖａｔｏｒ”． Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． ７４ （５）： １６２５-３３；Ｇｒａｖａｎｉｓ Ｉ， Ｔｓｉｒｋａ ＳＥ （Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２００８）． ”Ｔｉｓｓｕｅ－ｔｙｐｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ａｓ ａ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ ｉｎ ｓｔｒｏｋｅ”． Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｏｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｔａｒｇｅｔｓ． １２ （２）： １５９-７０；Ｇｅｉｇｅｒ Ｍ， Ｈｕｂｅｒ Ｋ， Ｗｏｊｔａ Ｊ， Ｓｔｉｎｇｌ Ｌ， Ｅｓｐａｎａ Ｆ， Ｇｒｉｆｆｉｎ ＪＨ， Ｂｉｎｄｅｒ ＢＲ （Ａｕｇ １９８９）． ”Ｃｏｍｐｌｅｘ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｕｒｏｋｉｎａｓｅ ａｎｄ ｐｌａｓｍａ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ”． Ｂｌｏｏｄ． ７４ （２）： ７２２-８。

本発明の一部の実施形態において、本発明の「プラスミノーゲン活性化経路の成分」はＧｌｕ－プラスミノーゲン、Ｌｙｓ－プラスミノーゲン、ミニプラスミノーゲン、マイクロプラスミノーゲン、δ－プラスミノーゲンから選ばれるプラスミノーゲンであり、またはそれらのプラスミノーゲン活性を保持した変異体である。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンは、天然または合成のヒトプラスミノーゲン、または依然としてプラスミノーゲン活性を保持した保存的突然変異体若しくはそのフラグメントである。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンは、霊長類動物またはげっ歯類動物に由来するヒトプラスミノーゲンのオルソログ、または依然としてプラスミノーゲン活性を保持した保存的突然変異体若しくはそのフラグメントである。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンのアミノ酸は配列２、６、８、１０または１２に示される。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンはヒト天然プラスミノーゲンである。一部の実施形態において、前記プラスミノーゲンは配列２に示されるヒト天然プラスミノーゲンである。

「プラスミノーゲンを直接活性化できる、若しくはプラスミノーゲン活性化経路の上流成分を活性化することによってプラスミノーゲンを間接に活性化できる化合物」とは、プラスミノーゲンを直接活性化できる、若しくはプラスミノーゲン活性化経路の上流成分を活性化することによってプラスミノーゲンを間接に活性化できる任意の化合物を指し、例えば、ｔＰＡ、ｕＰＡ、ストレプトキナーゼ、サルプラーゼ、アルテプラーゼ、レテプラーゼ、テネクテプラーゼ、アニストレプラーゼ、モンテプラーゼ、ラノテプラーゼ、パミテプラーゼ、及びスタフィロキナーゼが挙げられる。

本発明の「線維素溶解阻害剤の拮抗薬」は、線維素溶解阻害剤の作用に拮抗し、その作用を弱め、遮断し、阻止する化合物である。前記線維素溶解阻害剤は、例えば、ＰＡＩ－１、補体Ｃ１阻害剤、α２－抗プラスミン、及びα２－マクログロブリンである。前記拮抗剤は、ＰＡＩ－１、補体Ｃ１阻害剤、α２－抗プラスミンもしくはα２－マクログロブリンの抗体、または、例えばＰＡＩ－１、補体Ｃ１阻害剤、α２－抗プラスミンもしくはα２－マクログロブリンの発現を遮断またはダウンレギュレートするアンチセンスＲＮＡもしくはミニＲＮＡ、または、ＰＡＩ－１、補体Ｃ１阻害剤、α２－抗プラスミンまたはα２－マクログロブリンの結合部位を占めるが、ＰＡＩ－１、補体Ｃ１阻害剤、α２－抗プラスミンまたはα２－マクログロブリンの機能を持たない化合物、または、ＰＡＩ－１、補体Ｃ１阻害剤、α２－抗プラスミンもしくはα２－マクログロブリンの結合ドメイン及び／または活性ドメインをブロックする化合物である。

プラスミンはプラスミノーゲン活性化系（ＰＡ系）の重要な成分である。それは広スペクトルのプロテアーゼであり、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の幾つかの成分を加水分解することができ、これらの成分はフィブリン、ゼラチン、フィブロネクチン、ラミニン及びプロテオグリカンを含む。また、プラスミンは一部のプロマトリックスメタロプロテアーゼ（ｐｒｏ－ＭＭＰｓ）を活性化させて活性のあるマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰｓ）にすることができる。そのためプラスミンは細胞外タンパク加水分解作用の一つの重要な上流調節因子である。プラスミンはプラスミノーゲンが組織型プラスミノーゲン活性化剤（ｔＰＡ）またはウロキナーゼプラスミノーゲン活性化剤（ｕＰＡ）という二種類の生理性のＰＡｓタンパク質を加水分解することで形成されるものである。プラスミノーゲンは血漿及び他の体液中において、相対的レベルが比較的高く、従来的にはＰＡ系の調節は主にＰＡｓの合成及び活性レベルよって実現されると考えられている。ＰＡ系成分の合成は異なる要素によって厳格な調節を受け、例えばホルモン、成長因子及びサイトカインである。また、この他に、プラスミンとＰＡｓの特定の生理的阻害剤が存在する。プラスミンの主な阻害剤はα２－抗プラスミン（α２－ａｎｔｉｐｌａｓｍｉｎ）である。ＰＡｓの活性は、ｕＰＡとｔＰＡのプラスミノーゲン活性化剤阻害剤－１（ＰＡＩ－１）に同時に阻害され、ｕＰＡを主に阻害するプラスミノーゲン活性化剤阻害剤－２（ＰＡＩ－２）によって調節される。一部の細胞表面には直接加水分解する活性のあるｕＰＡ特異性細胞表面受容体（ｕＰＡＲ）がある。

プラスミノーゲンは単一鎖の糖タンパクであり、７９１個のアミノ酸からなり、分子量は約９２ｋＤａである。プラスミノーゲンは主に肝臓で合成され、大量に細胞外液に存在している。血漿中に含まれるプラスミノーゲンの含有量は約２μＭである。そのためプラスミノーゲンは組織及び体液中のタンパク質加水分解活性の大きな潜在的な由来である。プラスミノーゲンには二種類の分子の形が存在する：グルタミン酸－プラスミノーゲン（Ｇｌｕ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）及びリジン－プラスミノーゲン（Ｌｙｓ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）である。天然的に分泌され及び分解していない形のプラスミノーゲンは一つのアミノ基末端（Ｎ－末端）グルタミン酸を有し、そのためグルタミン酸－プラスミノーゲンと称される。しかし、プラスミンが存在する場合、グルタミン酸－プラスミノーゲンはＬｙｓ７６－Ｌｙｓ７７においてリジン－プラスミノーゲンに加水分解される。グルタミン酸－プラスミノーゲンと比較して、リジン－プラスミノーゲンはフィブリンとより高い親和力を有し、さらにより高い速度でＰＡｓによって活性化されることができる。この二種類の形のプラスミノーゲンのＡｒｇ５６０－Ｖａｌ５６１ペプチド結合はｕＰＡまたはｔＰＡによって切断され、これによりジスルフィド結合によって連結された二重鎖プロテアーゼプラスミンの形成をもたらす。プラスミノーゲンのアミノ基末端部分は五つの相同三環を含み、即ちいわゆるｋｒｉｎｇｌｅｓであり、カルボキシル基末端部分はプロテアーゼドメインを含む。一部のＫｒｉｎｇｌｅｓはプラスミノーゲンとフィブリン及びその阻害剤α２－ＡＰの特異的相互作用を介在するリジン結合部位を含む。最も新しく発見されたのは３８ｋＤａのフィブリンプラスミノーゲンフラグメントであり、ｋｒｉｎｇｌｅｌ－４を含み、血管生成の有効的な阻害剤である。このフラグメントはアンギオスタチン(Angiostatin)と命名され、幾つかのプロテアーゼ加水分解プラスミノーゲンから生成される。

プラスミンの主な基質はフィブリンであり、フィブリンの溶解は病理性血栓の形成を予防するキーポイントである^［。プラスミンはさらにＥＣＭの幾つかの成分に対する基質特異性を有し、これらの成分はラミニン、フィブロネクチン、プロテオグリカン及びゼラチンを含み、これはプラスミンがＥＣＭ再建において重要な作用を有することを示している。間接的に、プラスミンはさらにＭＭＰ－１、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－３及びＭＭＰ－９を含むいくつかのプロテアーゼ前駆体を活性プロテアーゼに変換することによりＥＣＭのその他の成分を分解する。そのため、プラスミンは細胞外タンパク加水分解の重要な上流調節因子であることを提出ことがある。また、プラスミンはいくつかの潜在的な形の成長因子を活性化させる能力を有する。インビトロで、プラスミンはさらに補体系の成分を加水分解させて走化性の補体フラグメントを放出することができる。

「プラスミン」は血液中に存在する非常に重要な酵素であり、フィブリン凝塊をフィブリン分解生成物及びＤ－二量体に加水分解する。

「プラスミノーゲン」はプラスミンの酵素前駆体の形であり、ｓｗｉｓｓ ｐｒｏｔ中の配列に基づいて、シグナルペプチドを含む天然ヒト由来プラスミノーゲンのアミノ酸配列（配列４）として計算すれば８１０個のアミノ酸からなり、分子量は約９０ｋＤであり、主に肝臓において合成され且つ血液中で循環できる糖タンパク質であり、該アミノ酸配列をコードするｃＤＮＡ配列は配列３に示される通りである。フルサイズのプラスミノーゲンは七つのドメインを含む：Ｃ末端に位置するセリンプロテアーゼドメイン、Ｎ末端に位置するＰａｎ Ａｐｐｌｅ（ＰＡｐ）ドメイン及び５つのＫｒｉｎｇｌｅドメイン（Ｋｒｉｎｇｌｅ１－５）を含む。ｓｗｉｓｓ ｐｒｏｔ中の配列を参照すれば、そのシグナルペプチドは残基Ｍｅｔ１－Ｇｌｙ１９を含み、Ｐａｐは残基Ｇｌｕ２０－Ｖａｌ９８を含み、Ｋｒｉｎｇｌｅ１は残基Ｃｙｓ１０３－Ｃｙｓ１８１を含み、Ｋｒｉｎｇｌｅ２は残基Ｇｌｕ１８４－Ｃｙｓ２６２を含み、Ｋｒｉｎｇｌｅ３は残基Ｃｙｓ２７５－Ｃｙｓ３５２を含み、Ｋｒｉｎｇｌｅ４は残基Ｃｙｓ３７７－Ｃｙｓ４５４を含み、Ｋｒｉｎｇｌｅ５は残基Ｃｙｓ４８１－Ｃｙｓ５６０を含む。ＮＣＢＩデータによれば、セリンプロテアーゼドメインは残基Ｖａｌ５８１－Ａｒｇ８０４を含む。

Ｇｌｕ－プラスミノーゲンはヒトの天然のフルサイズのプラスミノーゲンであり、７９１個のアミノ酸からなる（１９個のアミノ酸からなるシグナルペプチドを含まない）。該配列をコードするｃＤＮＡ配列は配列１に示される通りであり、そのアミノ酸配列は配列２に示される通りである。生体内において、さらにＧｌｕ－プラスミノーゲンの７６－７７番目のアミノ酸の位置で加水分解することにより形成されたＬｙｓ－プラスミノーゲンが存在し、例えば配列６に示されるものであり、該アミノ酸配列をコードするｃＤＮＡ配列は配列５が示す通りである。Ｄｅｌｔａ－プラスミノーゲン（δ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）はフルサイズのプラスミノーゲンにＫｒｉｎｇｌｅ２－Ｋｒｉｎｇｌｅ５構造の欠損が生じているフラグメントであり、Ｋｒｉｎｇｌｅ１及びセリンプロテアーゼドメインしか含有せず（プロテアーゼドメイン（ｐｒｏｔｅａｓｅ ｄｏｍａｉｎ、ＰＤ）とも呼ばれる）、δ－プラスミノーゲンのアミノ酸配列（配列８）を報告している文献があり、該アミノ酸配列をコードするｃＤＮＡ配列は例えば配列７に示される。ミニプラスミノーゲン（Ｍｉｎｉ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）はＫｒｉｎｇｌｅ５及びセリンプロテアーゼドメインからなり、残基Ｖａｌ４４３－Ａｓｎ７９１（シグナルペプチドを含まないＧｌｕ－プラスミノーゲン配列のＧｌｕ残基を開始アミノ酸とする）について文献が報告しており、そのアミノ酸配列は配列１０に示される通りであり、該アミノ酸配列をコードするｃＤＮＡ配列は配列９が示す通りである。しかしマイクロプラスミノーゲン（Ｍｉｃｒｏ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）はセリンプロテアーゼドメインのみ含有し、そのアミノ酸配列は残基Ａｌａ５４３－Ａｓｎ７９１（シグナルペプチドを含まないＧｌｕ－プラスミノーゲン配列のＧｌｕ残基は開始アミノ酸である）と文献が報告し、特許文献ＣＮ１０２１５４２５３Ａはそれが残基Ｌｙｓ５３１－Ａｓｎ７９１を含むと開示し（シグナルペプチドを含まないＧｌｕ－プラスミノーゲン配列のＧｌｕ残基を開始アミノ酸とする）、本特許出願において、マイクロプラスミノーゲンの配列は特許文献ＣＮ１０２１５４２５３Ａを参照でき、そのアミノ酸配列は配列１２に示される通りであり、該アミノ酸配列をコードするｃＤＮＡ配列は配列１１に示される通りである。

全長プラスミノーゲンの構造は、Ａｉｓｉｎａらの論文にも記載されている（Ａｉｓｉｎａ Ｒ Ｂ，Ｍｕｋｈａｍｅｔｏｖａ Ｌ Ｉ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ／ｐｌａｓｍｉｎ ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｒｕｓｓｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１４，４０（６）：５９０－６０５）。Ａｉｓｉｎａらの前記文章によれば、プラスミノーゲンにはＫｒｉｎｇｌｅ １、２、３、４、５ドメインとセリンプロテアーゼドメイン（プロテアーゼドメイン（ｐｒｏｔｅａｓｅ ｄｏｍａｉｎ、ＰＤ）とも呼ばれる）が含まれ、Ｋｒｉｎｇｌｅｓは、プラスミノーゲンが低分子量及び高分子量のリガンドに結合する役割（すなわち、リジン結合活性）を担っており、その結果、プラスミノーゲンがよりオープンな構成に変換され、より活性化しやすくなり、プロテアーゼドメイン（ＰＤ）は、残基Ｖａｌ５６２－Ａｓｎ７９１であり、ｔＰＡとＵＰＡはプラスミノーゲンのＡｒｇ５６１－Ｖａｌ５６２位活性化結合を特異的に切断し、それによってプラスミノーゲンがプラスミンを形成できる。したがって、プロテアーゼドメイン（ＰＤ）は、プラスミノーゲンのタンパク質加水分解活性を付与する領域である。

本発明の「プラスミン」と「フィブリンプラスミン」、「繊維タンパクプラスミン」は互いに置き換えて使用でき、その意味は同じである。「プラスミノーゲン」と「フィブリンプラスミノーゲン」、「繊維タンパクプラスミノーゲン」は互いに置き換えて使用でき、その意味は同じである。

本願において、前記プラスミノーゲンの「不足」とは、被験者体内のプラスミノーゲンの含有量または活性が正常な人より低く、前記被験者の正常な生理学的機能に影響を及ぼすのに十分に低いことをいう。前記プラスミノーゲンの「欠乏」の意味は、被験者体内のプラスミノーゲンの含有量または活性が正常な人より明らかに低く、ひいては活性または発現が極微量であり、外部供給によってのみ正常な生理学的機能を維持できることである。

当業者は以下のように理解できる。本発明のプラスミノーゲンのすべての技術構成はプラスミンに適用でき、そのため、本発明に記載の技術構成はプラスミノーゲン及びプラスミンをカバーするものである。循環プロセスにおいて、プラスミノーゲンは閉鎖した非活性コンフォメーションであるが、血栓または細胞表面に結合した際、プラスミノーゲン活性化剤（ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ，ＰＡ）の介在下において、開放性のコンフォメーションを有する活性プラスミンとなる。活性を有するプラスミンはさらにフィブリン凝塊をフィブリン分解生成物及びＤ－二量体に加水分解させ、これにより血栓を溶解させる。そのうちプラスミノーゲンのＰＡｐドメインはプラスミノーゲンを非活性閉鎖コンフォメーションに維持する重要なエピトープを含み、しかしＫＲドメインは受容体及び基質上のリジン残基と結合できるものである。プラスミノーゲン活性化剤としての酵素は、既に複数種類知られ、組織プラスミノーゲン活性化剤（ｔＰＡ）、ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化剤（ｕＰＡ）、カリクレイン及び凝結因子ＸＩＩ（ハーゲマン因子）などを含む。

「プラスミノーゲン活性フラグメント」とは、基質のターゲット配列中のリジンに結合する活性（リジン結合活性）フラグメント、またはタンパク質加水分解機能を発揮する活性（タンパク質加水分解活性）フラグメント、またはタンパク質加水分解活性とリジン結合活性との両方を有するフラグメントを指す。本発明のプラスミノーゲンに関する技術構成は、プラスミノーゲンをプラスミノーゲン活性フラグメントに置き換えた技術構成を包含する。いくつかの実施形態では、本発明のプラスミノーゲン活性フラグメントは、プラスミノーゲンのセリンプロテアーゼドメインを含むか、またはプラスミノーゲンのセリンプロテアーゼドメインからなり、好ましくは、本発明のプラスミノーゲン活性フラグメントは、配列１４を含むか、または配列１４と少なくとも８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、または配列１４と少なくとも８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を有するアミノ酸配列からなる。一部の実施形態において、本発明のプラスミノーゲン活性フラグメントは、Ｋｒｉｎｇｌｅ １、Ｋｒｉｎｇｌｅ ２、Ｋｒｉｎｇｌｅ ３、Ｋｒｉｎｇｌｅ ４、及びＫｒｉｎｇｌｅ ５から選択される１つ以上のドメインを含むか、またはＫｒｉｎｇｌｅ １、Ｋｒｉｎｇｌｅ ２、Ｋｒｉｎｇｌｅ ３、Ｋｒｉｎｇｌｅ ４、及びＫｒｉｎｇｌｅ ５から選択される１つ以上のドメインからなる。いくつかの実施形態では、本発明のプラスミノーゲンは、上記のプラスミノーゲン活性フラグメントを含むタンパク質を含む。

現在、血液中のプラスミノーゲン及びその活性測定方法は組織プラスミノーゲン活性化剤の活性に対する測定（ｔ－ＰＡＡ）、血漿組織プラスミノーゲン活性化剤抗原に対する測定（ｔ－ＰＡＡｇ）、血漿組織プラスミノーゲン活性に対する測定（ｐｌｇＡ）、血漿組織プラスミノーゲン抗原に対する測定（ｐｌｇＡｇ）、血漿組織プラスミノーゲン活性化剤の阻害物活性に対する測定、血漿組織プラスミノーゲン活性化剤の阻害物抗原に対する測定、血漿プラスミン－抗プラスミン複合物に対する測定（ＰＡＰ）を含む。最もよく見られる測定方法は発色基質法である：測定対象(被験者)の血漿中にストレプトキナーゼ（ＳＫ）と発光基質を添加し、測定対象の血漿中のＰＬＧはＳＫの作用下においてＰＬＭとなり、後者は発光基質に作用し、それから分光光度計で測定し、吸光度の増加はプラスミノーゲンの活性と正比例の関係となる。この他にも免疫化学法、ゲル電気泳動法、免疫比濁法、放射免疫拡散法などを用いて血液中のプラスミノーゲン活性に対して測定を行うことができる。

「オーソログまたはオルソログ（ｏｒｔｈｏｌｏｇ）」とは異なる種どうしのホモログであり、タンパク質の相同物もＤＮＡの相同物も含み、直系遺伝子ともいう。それは具体的に異なる種どうしの同じ祖先の遺伝子から進化して得られるタンパク質または遺伝子を言う。本発明のプラスミノーゲンはヒト天然プラスミノーゲンを含み、さらには異なる種に由来する、プラスミノーゲン活性を有するプラスミノーゲンのオーソログまたはオルソログを含む。

「保存的置換バリアント」とはそのうちの一つの指定されたアミノ酸残基が改変されたがタンパク質または酵素の全体のコンフォメーション及び機能を変えないものであり、これは類似の特性（例えば酸性、アルカリ性、疎水性など）のアミノ酸で親タンパク質中のアミノ酸配列中のアミノ酸を置換するものを含むがこれらに限られない。類似の性質を有するアミノ酸は知られている通りである。例えば、アルギニン、ヒスチジン及びリジンは親水性のアルカリ性アミノ酸であり且つ互いに置き換えることができる。同じように、イソロイシンは疎水アミノ酸であり、ロイシン、メチオニンまたはバリンによって置換されることができる。そのため、機能の類似する二つのタンパク質またはアミノ酸配列の類似性は異なる可能性もある。例えば、ＭＥＧＡＬＩＧＮアルゴリズムに基づいて７０％～９９％の類似性（同一性）を有する。「保存的置換バリアント」はさらにＢＬＡＳＴまたはＦＡＳＴＡアルゴリズムに基づいて６０％以上のアミノ酸同一性を有するポリペプチドまたは酵素を含み、７５％以上に達すればさらによく、最も好ましくは８５％以上に達し、さらには９０％以上に達するのが最も好ましく、さらに天然または親タンパク質または酵素と比較して同じまたは基本的に類似する性質または機能を有する。

「分離された」プラスミノーゲンとは天然環境から分離及び／または回収されたプラスミノーゲンタンパク質である。いくつかの実施形態において、前記プラスミノーゲンは（１）９０％を超える、９５％を超える、または９８％を超える純度（重量で計算した場合）になるまで精製し、例えばＬｏｗｒｙ法によって決まるもので、例えば９９％（重量で計算した場合）を超えるまで精製する、（２）少なくともスピニングカップ配列分析装置によりＮ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基が得られる程度になるまで精製する、または（３）同質性になるまで精製する。該同質性はクマシーブリリアントブルーまたは銀染色により還元性または非還元性条件下のドデシル硫酸ナトリウムーポリアクリルアミノゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）によって決まるものである。分離されたプラスミノーゲンはバイオエンジニアリング技術により組み換え細胞から製造され、さらに少なくとも一つの精製ステップで分離されたプラスミノーゲンを含む。

用語の「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」は本明細書において互いに置き換えて使用でき、いかなる長さのアミノ酸の重合体を指し、遺伝的にコードされた及び非遺伝的にコードされたアミノ酸、化学的または生化学的に修飾されまたは派生したアミノ酸、及び修飾されたペプチド主鎖を有するポリペプチドを含む。該用語は融合タンパク質を含み、異種性アミノ酸配列を有する融合タンパク質を含むがこれに限られず、異種性と同種性由来のリーダー配列（Ｎ端メチオニン残基を有するあるいは有しない）を含む融合物；等々である。

参照ペプチド配列の「アミノ酸配列同一性パーセンテージ（％）」の定義は、必要に応じてギャップを導入することで最大のパーセンテージ配列の同一性を実現した後、如何なる保存的な置換も配列同一性の一部として見なさない場合、候補配列中における参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同じアミノ酸残基のパーセンテージである。パーセンテージのアミノ酸配列の同一性を測定することを目的としたアライメントは本分野の技術範囲における複数種類の方式によって実現でき、例えば公衆が入手できるコンピュータソフトウエア、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウエアによって実現できる。当業者は配列をアライメントするための適切なパラメーターを決めることができ、該パラメーターが比較対象の配列のフルサイズに対して最大比較の要求を実現するための如何なるアルゴリズムも含む。しかし、本発明の目的のために、アミノ酸配列の同一性パーセンテージは配列比較コンピュータソフトウエアＡＬＩＧＮ－２により得られるものである。

ＡＬＩＧＮ－２を用いることによりアミノ酸配列を比較する場合、所定のアミノ酸配列Ａの所定のアミノ酸配列Ｂに対するアミノ酸配列同一性％（または所定のアミノ酸配列Ｂに対して、と、またはについてのある％のアミノ酸配列同一性を有する又は含む所定のアミノ酸配列Ａともいう）は以下のように計算される：
分数Ｘ／Ｙ×１００

ここで、Ｘは配列アライメントプログラムＡＬＩＧＮ－２において該プログラムのＡ及びＢのアライメントにおいて同一でマッチングすると評価したアミノ酸残基の数であり、且つＹはＢにおけるアミノ酸残基の総数である。以下のように理解するべきである：アミノ酸配列Ａの長さとアミノ酸配列Ｂの長さが等しくない場合、ＡのＢに対するアミノ酸配列の同一性％は、ＢのＡに対するアミノ酸配列同一性％とは異なる。特に断りのない限り、本文中において使用するすべてのアミノ酸配列同一性値％は前記の段落に記載の通りであり、ＡＬＩＧＮ－２コンピュータプログラムによって得られるものである。

本文において使用されているように、用語の「治療」は期待される薬理及び／または生理的効果が得られることを言う。前記効果は疾患またはその症状の発生、発症を完全または一部予防すること、あるいは疾患及び／またはその症状を一部または完全軽減すること、及び／または疾患及び／またはその症状を一部または完全に治癒するものとすることができる。さらに以下を含む：（ａ）疾患が被験者の体内で発生することを予防し、前記被験者は疾患の要因を持っているが、該疾患を有すると診断されていない状況であること；（ｂ）疾患を抑制し、その形成を阻害すること；及び（ｃ）疾患及び／またはその症状を減軽し、即ち疾患及び／またはその症状の減退または消失を引き起こすこと。

用語の「個体」、「被験者」及び「患者」は本明細書中において互いに置き換えて使用でき、哺乳動物を指し、ネズミ（ラット、マウス）、ヒト以外の霊長類、ヒト、イヌ、ネコ、有蹄動物（例えばウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ）などを含むがこれらに限られない。

「治療上有効量」または「有効量」とは、哺乳動物またはその他の被験者に投与して疾患の治療に用いられる際に疾患の前記予防及び／または治療を実現できるプラスミノーゲン活性化経路の成分またはその関連化合物（例えば、プラスミノーゲン）の量である。「治療上有効量」は使用するプラスミノーゲン活性化経路の成分またはその関連化合物（例えば、プラスミノーゲン）、治療しようとする被験者の疾患及び／または症状の重症度及び年齢、体重などに従って変化するものである。

本発明のプラスミノーゲンの調製
プラスミノーゲンは治療の用途に用いられるために、自然界から分離及び精製されるものでもよく、標準的な化学ペプチド合成技術によって合成することでもよい。化学的手法によりポリペプチドを合成する際、液相または固相で合成を行うことができる。固相ポリペプチド合成（ＳＰＰＳ）（配列のＣ末端アミノ酸を不溶性支持体に附着させ、順番に配列中の残りのアミノ酸を添加する）はプラスミノーゲンの化学的合成に適したものである。各種形式のＳＰＰＳ、例えばＦｍｏｃ及びＢｏｃは、プラスミノーゲンの合成に用いることができる。固相合成に用いられる技術は以下に記載されている：Ｂａｒａｎｙ及びＳｏｌｉｄ－Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；３－２８４ページ、Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ．第二巻：Ｓｐｅｃｉａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｐａｒｔ Ａ．，Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，ｔら Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８５：２１４９－２１５６（１９６３）；Ｓｔｅｗａｒｔら，Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ ｅｄ．Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．（１９８４）；及びＧａｎｅｓａｎ Ａ．２００６Ｍｉｎｉ Ｒｅｖ．Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．６：３－１０及びＣａｍａｒｅｒｏ ＪＡら ２００５Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｅｐｔ Ｌｅｔｔ．１２：７２３－８。簡単に言えば、その上にペプチド鎖が構築されている機能性ユニットにより小さい不溶性の多孔ビーズを処理する。カップリング／脱保護の繰り返し循環後に、附着した固相の遊離Ｎ末端アミンとＮ保護を受けている単一のアミノ酸ユニットをカップリングさせる。それから、該ユニットを脱保護し、他のアミノ酸と連結する新しいＮ末端アミンを露出させる。ペプチドを固相上に固定したままにし、その後それを切除する。

標準的な組み換え方法により本発明のプラスミノーゲンを生産する。例えば、プラスミノーゲンをコードする核酸を発現ベクター中に挿入し、それと発現ベクター中の制御配列を操作可能に接続させる。発現制御配列はプロモーター（例えば天然に関連されているプロモーター、または異種由来のプロモーター）、シグナル配列、エンハンサーエレメント及び転写終了配列を含むが、これらに限られない。発現の制御はベクター中の真核プロモーターシステムとすることができ、前記ベクターは真核宿主細胞（例えばＣＯＳまたはＣＨＯ細胞）を形質転換またはトランスフェクションさせる。一旦ベクターを適切な宿主に導入すれば、ヌクレオチド配列の高レベル発現及びプラスミノーゲンの収集及び精製に適した条件下において宿主を維持する。

適切な発現ベクターは通常宿主体内において遊離体または宿主染色体ＤＮＡのみ込む部分として複製される。通常、発現ベクターは選択マーカー（例えばアンピシリン耐性、ハイグロマイシン耐性、テトラサイクリン耐性、カナマイシン耐性またはネオマイシン耐性）を含み、インビトロで所望のＤＮＡ配列によって形質転換されたそれらの細胞に対して測定を行うことに有用である。

大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）は目的化合物をコードするポリヌクレオチドをクローンするための原核宿主細胞の例である。その他の使用に適した微生物宿主は桿菌を含み、例えばバチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）及びその他の腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、例えばサルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、セラチア属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、及び各種シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種である。これらの原核宿主において、発現ベクターを生成でき、通常は宿主細胞と相容する発現制御配列（例えば複製開始点）を含むものである。また、多くの公知のプロモーターが存在し、例えば乳糖プロモーターシステム、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーターシステム、β－ラクタマーゼプロモーターシステム、またはファージλ由来のプロモーターシステムである。プロモーターは一般的に発現を制御し、必要に応じて遺伝子配列を制御する場合に、転写及び翻訳を起動するために、さらにリボソームの結合位置配列などを有してもよい。

その他の微生物、例えば酵母も発現に用いることができる。酵母（例えばサッカロミセス（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））及びピキア（Ｐｉｃｈｉａ）が適した酵母宿主細胞の例であり、そのうちの適切な担体は必要に応じて発現制御配列（例えばプロモーター）、複製開始点、終止配列など含む。典型的なプロモーターは３－ホスホグリセリン酸キナーゼ及びその他の糖分解酵素を含む。誘導型酵母プロモーターには特にアルコール脱水素酵素、イソチトクロムＣ、及びマルトースとガラクトースの利用のための酵素由来のプロモーターを含む。

微生物以外に、哺乳動物細胞（例えばインビトロ細胞培養物中において培養された哺乳動物細胞）も本発明の抗－Ｔａｕ抗体（例えばかかる抗－Ｔａｕ抗体をコードするポリヌクレオチド）の発現及び生成に用いることができる。例えばＷｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎ．Ｙ．，Ｎ．Ｙ．（１９８７）参照。適した哺乳動物宿主細胞はＣＨＯ細胞系、各種Ｃｏｓ細胞系、ＨｅＬａ細胞、骨髄腫細胞系、及び形質転換されたＢ細胞またはハイブリドーマを含む。これらの細胞に用いられる発現ベクターは発現制御配列、例えば複製開始点、プロモーター、及びエンハンサー（Ｑｕｅｅｎら，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．８９：４９（１９８６））、及び必要とされる加工情報サイト、例えばリボソームの結合サイト、ＲＮＡの切断サイト、ポリアデノシン酸化サイト、及び転写ターミネーター配列を含むことができる。適切な発現制御配列の例はウサギ免疫グロブリン遺伝子、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシ乳頭腫ウィルス、サイトメガロウイルスなど由来のプロモーターである。Ｃｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９（１９９２）を参照されたい。

一旦（化学または組み換え的に）合成されれば、本分野の標準的な手順、例えば硫酸アンモニウム沈殿、アフィニテイカラム、カラムクロマトグラフィー、高速液相クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ゲル電気泳動などにより本発明に記載のプラスミノーゲンを精製することができる。該プラスミノーゲンは基本的に純粋なものであり、例えば少なくとも約８０％から８５％の純度で、少なくとも約８５％～９０％の純度で、少なくとも約９０％～９５％の純度で、または９８％～９９％の純度またはさらに純度が高いものであり、例えば汚染物を含まず、前記汚染物は例えば細胞砕片、目的生成物以外の大分子などである。

薬物配合剤
所望の純度のプラスミノーゲン活性化経路の成分またはその関連化合物（例えば、プラスミノーゲン）と必要に応じた薬用担体、賦形剤、または安定化剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１６版，Ｏｓｏｌ，Ａ．ｅｄ．（１９８０））を混合して凍結乾燥製剤または水溶液を形成して治療用の配合剤を得る。許容可能な担体、賦形剤、安定化剤は所要の用量及び濃度下において被験者に対して毒性がなく、さらに例えばリン酸塩、クエン酸塩及びその他の有機酸などの緩衝剤を含む。抗酸化剤はアスコルビン酸和メチオニンを含む；防腐剤（例えばオクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメチレンジアミン；塩化ベンザルコニウム（ｂｅｎｚａｌｋｏｎｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ベンゼトニウムクロリド；フェノール、ブタノールまたはベンジルアルコール；アルキルパラヒドロキシ安息香酸エステル、例えばメチルまたはプロピルパラヒドロキシ安息香酸エステル；ピロカテコール；レソルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；ｍ－クレゾール）；低分子量ポリペプチド（約１０個より少ない残基を有するもの）；タンパク質例えば血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性重合体、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン酸、ヒスチジン、アルギニンまたはリシンである；単糖、二糖及びその他の炭水化物はグルコース、マンノース、またはデキストリンを含む；キレート剤は例えばＥＤＴＡである；糖類は例えばショ糖、マンニトール、フコースまたはソルビトールである；塩形成対イオン、例えばナトリウム；金属複合体（例えば亜鉛－タンパク複合体）；及び／または非イオン界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮＴＭ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭまたはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。好ましい凍結乾燥された抗ＶＥＧＦ抗体製剤は、ＷＯ９７／０４８０１に記載されており、参照により本明細書に組み込まれる。

本発明の配合剤は治療を必要とする具体的な症状の必要とする一種類以上の活性化合物を含有してもよく、好ましくは活性が相補的で互いに副作用を有しないものである。

本発明のプラスミノーゲンは例えば凝集技術または界面重合によって作られるマイクロカプセル中に内包ことができ、例えば、膠質薬物輸送系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン剤、ナノ粒子及びナノカプセル）中に入れまたは粗エマルジョン状液中のヒドロキシメチルセルロースまたはゲルーマイクロカプセル及びポリ―（メタアクリル酸メチル）マイクロカプセル中に入れることができる。これらの技術はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ′ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。

体内に投与することに用いられる本発明のプラスミノーゲン活性化経路の成分またはその関連化合物（例えば、プラスミノーゲン）は必ず無菌である必要がある。これは凍結乾燥及び再度配合する前または後に除菌濾過膜で濾過することで容易に実現できる。

本発明のプラスミノーゲン活性化経路の成分またはその関連化合物（例えば、プラスミノーゲン）は徐放製剤を調製できる。徐放製剤の適切な実例は一定の形状を有し且つ糖タンパクを含む固体の疎水性重合体の半透過マトリックスを含み、例えば膜またはマイクロカプセルである。徐放性マトリックスの実例はポリエステル、水性ゲル（例えばポリ（２－ヒドロキシエチル－メタアクリル酸エステル）（Ｌａｎｇｅｒら，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．，１５：１６７－２７７（１９８１）；Ｌａｎｇｅｒ，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．，１２：９８－１０５（１９８２））またはポリ（ビニールアルコール）、ポリラクチド（米国特許３７７３９１９，ＥＰ ５８，４８１）、Ｌ－グルタミン酸とγエチル－Ｌ－グルタミン酸の共重合体（Ｓｉｄｍａｎ，ら，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２２：５４７（１９８３）），分解できないエチレン－ビニルアセテート（ｅｔｈｙｌｅｎｅ－ｖｉｎｙｌ ａｃｅｔａｔｅ）（Ｌａｎｇｅｒ，ら，出所は前記と同じ）、または分解可能な乳酸－ヒドロキシ酢酸共重合体、例えばＬｕｐｒｏｎ ＤｅｐｏｔＴＭ（乳酸－ヒドロキシ酢酸共重合体及びリュープロレリン（ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ）酢酸エステルからなる注射可能なミクロスフェア体）、及びポリＤ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸を含む。重合体、例えばエチレン－酢酸エチル及び乳酸－ヒドロキシ酢酸は、持続的に分子を１００日間以上放出することができ、しかしいくつかの水性ゲルがタンパク質を放出する時間は比較的短い。関連のメカニズムに応じてタンパク質を安定化させる合理的なストラテジーにより設計できる。例えば、凝集のメカニズムが硫化ジスルフィド結合の交換によって分子間Ｓ－Ｓ結合を形成することであれば、メルカプト基残基を修飾することにより、酸性溶液中から凍結乾燥させ、湿度を制御し、適切な添加剤を用いて、及び特定の重合体基質組成物を開発することで安定化を実現できる。

投与及び使用量
異なる方式、例えば鼻吸入、エアロゾル吸入、点鼻薬や点眼薬、静脈内、腹腔内、皮下、頭蓋内、髄腔内、動脈内（例えば、頸動脈を介して）、筋肉内、及び直腸内投与により本発明の薬物組成物の投与を実現できる。

胃腸外での投与に用いられる製造物は無菌水性または非水性溶液、懸濁液及び乳剤を含む。非水性溶媒の例はプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、例えばオリーブオイルのような植物油、及び注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルである。水性担体は水、アルコール性／水性溶液、乳剤または懸濁液を含み、食塩水及び緩衝媒介を含む。胃腸外媒介物は塩化ナトリウム溶液、リンガ―デキストロース、デキストロース及び塩化ナトリウム、または固定油である。静脈内媒介物は液体及び栄養補充物、電気分解補充物などを含む。されには防腐剤及びその他の添加剤、例えば抗微生物製剤、抗酸化剤、キレート剤、不活性ガスなども存在してもよい。

医療関係者は各種臨床的要素により用量案を決めることができる。例えば医学分野で公知のように、任意の患者の用量は複数の要素によって決められ、これらの要素は患者の体型、体表面積、年齢、投与される具体的な化合物、性別、投与回数及び経路、全体の健康度、及び同時に投与するその他の薬物を含む。本発明のプラスミノーゲンを含有する薬物組成物の用量の範囲は例えば被験者体重に対して毎日約０．０００１～２０００ｍｇ／ｋｇであり、または約０．００１～５００ｍｇ／ｋｇ（例えば０．０２ｍｇ／ｋｇ，０．２５ｍｇ／ｋｇ，０．５ｍｇ／ｋｇ，０．７５ｍｇ／ｋｇ，１０ｍｇ／ｋｇ，５０ｍｇ／ｋｇなど）とすることができる。例えば、用量は１ｍｇ／ｋｇ体重または５０ｍｇ／ｋｇ体重または１－５０ｍｇ／ｋｇの範囲とすることができ、または少なくとも１ｍｇ／ｋｇである。この例示性の範囲より高いまたは低い用量もカバーされ、特に前記の要素を考慮した場合である。前記範囲中の中間用量も本発明の範囲内に含まれるものである。被験者は毎日、隔日、毎週または経験分析によって決められた任意のスケジュール表に従ってこのような用量を投与できる。例示的な用量のスケジュール表は連続数日０．０１～１００ｍｇ／ｋｇ投与することである。本発明の薬物の投与過程において治療効果及び安全性をリアルタイムに評価する必要がある。

製品または薬物キット
本発明の一つの実施形態は、プラスミノーゲン活性化経路の成分またはその関連化合物（例えば、プラスミノーゲン）を含む製品または薬物キットに係る。前記製品は好ましくは一つの容器、ラベルまたはプロトコルを含む。適切な容器はボトル、バイアル、注射器などである。容器は各種材料例えばガラスまたはプラスチックから作られることができる。前記容器は組成物を含有し、前記組成物は本発明の疾患または症状を有効に治療し且つ無菌の入口を有する（例えば前記容器は静脈輸液用パックまたはバイアルであり、皮下注射針によって貫通される栓を含む）。前記組成物中の少なくとも一種類の活性化剤がプラスミノーゲン活性化経路の成分またはその関連化合物（例えば、プラスミノーゲン）である。前記容器上にあるまたは添付されているラベルは前記組成物を本発明の症状の治療に用いられると説明するものである。前記製品はさらに薬用緩衝液を含有する第二容器を含み、前記薬用緩衝液は例えばリン酸塩緩衝の食塩水、リンガー溶液及びグルコース溶液を含む。さらには商業及び使用者の角度から見ると必要とされるその他の物質、即ちその他の緩衝液、希釈剤、濾過物、針及び注射器を含むことができる。また、前記製品は使用説明を有するプロトコルを含み、これは例えば前記組成物の使用者にプラスミノーゲン活性化経路の成分またはその関連化合物（例えば、プラスミノーゲン）の組成物及び疾患の治療に伴うその他の薬物を患者に投与することを指示するものである。

以下の実施例で使用されるヒトプラスミノーゲンは、ヒトドナーの血漿に由来し、以下の文書：ＫｅｎｎｅｔｈＣ Ｒｏｂｂｉｎｓ，Ｌｏｕｉｓ Ｓｕｍｍａｒｉａ，Ｄａｖｉｄ Ｅｌｗｙｎ ｅｔ ａｌ．Ｆｕｒｔｈｅｒ Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｎｄ Ｐｌａｓｍｉｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９６５，２４０（１）：５４１－５５０；Ｓｕｍｍａｒｉａ Ｌ，Ｓｐｉｔｚ Ｆ，Ａｒｚａｄｏｎ Ｌ ｅｔ ａｌ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｆｏｒｍｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ Ｇｌｕ－ ａｎｄ Ｌｙｓ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎｓ ａｎｄ ｐｌａｓｍｉｎｓ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．１９７６ Ｊｕｎ ２５；２５１（１２）：３６９３－９；ＨＡＧＡＮ ＪＪ，ＡＢＬＯＮＤＩ ＦＢ，ＤＥ ＲＥＮＺＯ ＥＣ．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．１９６０ Ａｐｒ；２３５：１００５－１０に記載された方法に基づき、プロセスを最適化し、ヒトドナー血漿から精製して得られた。そこに、ヒトＬｙｓ－プラスミノーゲン（Ｌｙｓ－プラスミノーゲン）とＧｌｕ－プラスミノーゲン（Ｇｌｕ－プラスミノーゲン）は９８％を上回った。

実施例１は、プラスミノーゲンがモノクロタリンによって誘発された肺動脈性肺高血圧症モデルマウスの肺の線維化レベルを低下させることに関するものである。
１２週齢のＣ５７オスマウス１２匹を取り、体重及び血圧を測定し、血圧に応じてマウスをランダムに２つの群に分け、ブランク対照群で４匹、モデル群で８匹とした。ブランク対照群マウスに１００μｌの生理食塩水を尾静脈注射により投与し、モデル群マウスに６０ｍｇ／ｋｇ／匹でモノクロタリンを尾静脈注射により投与し、３日間連続注射し、マウスには通常食を与えた^{［３～４］}。３日後に血圧を測定し、血圧に応じてモデル群マウスをランダムに２つの群に分け、溶媒ＰＢＳ投与対照群とプラスミノーゲン投与群でそれぞれ４匹とした。ブプラスミノーゲン投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍｌ／匹／日でプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群マウスに同量(同じ体積)のＰＢＳ溶液を尾静脈注射により投与し、２８日間連続投与した。ブランク対照群マウスには投与しなかった。モデリングして投与し始めた日を１日目とし、２９日目にマウスを殺処分し、肺を採取して４％パラホルムアルデヒド固定液で２４時間固定した。固定後の肺組織をアルコール勾配で脱水させ、キシレンで透徹化処理した後にパラフィンで包埋した。組織切片の厚みは３μｍであり、切片を脱パラフィンさせ再水和してから１回水で洗った。０．１％シリウスレッド飽和ピクリン酸で３０分間染色後、流水で２分間すすぎ、ヘマトキシリンで１分間染色してから流水ですすぎ、１％塩酸アルコールで分別させ、アンモニア水でブルーイングさせ、流水ですすぎ、乾燥した後に中性ゴムに封入させ、切片を光学顕微鏡下で２００倍にて観察した。

モノクロタリンはビピロールアルカロイドであり、肝臓でＰ４５０モノオキシダーゼによって変換された後、血液循環を介して肺に到達し、肺血管に不可逆的な損傷を引き起こす可能性がある。肺血管内皮細胞はモノクロタリンの標的細胞であると考えられており、内皮細胞の損傷は肺血管リモデリングの過程で重要な役割を果たしている^{［２８，２９］}。
その結果、ブランク対照群のマウスの肺には基本的にコラーゲン沈着はなく（図１Ａ）、プラスミノーゲン群（図１Ｃ）のマウスの肺組織のコラーゲン沈着（矢印でマーク）は、溶媒ＰＢＳ投与対照群（図１Ｂ）よりも有意に少なかった。これは、プラスミノーゲンがモノクロタリンによって誘発された肺動脈性肺高血圧症モデルマウスの肺の線維化を有意に減少させることができることを示している。

実施例２は、プラスミノーゲンが全身性硬化症マウスの肺線維化を減少させることに関するものである。
１２週齢のＣ５７オスマウス１７匹を取り、ランダムに２つの群に分け、溶媒ＰＢＳ投与対照群で１１匹、プラスミノーゲン投与群で６匹とした。実験を始めた日を０日目として記録し、体重を測定して群分けし、１日目からモデリングするために投与し、２つの群のマウスに０．１ｍｇ／０．１ｍｌ／匹／日でブレオマイシンを皮下注射により投与し、全身性硬化症を誘発し^［５］、プラスミノーゲンまたはＰＢＳを投与し始め、２１日間連続投与してモデリングした。ブプラスミノーゲン投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍｌ／匹／日でプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群マウスに同量のＰＢＳ溶液を同様に投与した。２２日目にマウスを殺処分し、肺組織を採取して４％パラホルムアルデヒド固定液で２４時間固定した。固定後の肺組織をアルコール勾配で脱水させ、キシレンで透徹化処理した後にパラフィンで包埋した。組織切片の厚みは３μｍであり、切片を脱パラフィンさせ再水和してから１回水で洗った。０．１％シリウスレッド飽和ピクリン酸で３０分間染色後、流水で２分間すすぎ、ヘマトキシリンで１分間染色してから流水ですすぎ、１％塩酸アルコールで分別させ、アンモニア水でブルーイングさせ、流水ですすぎ、乾燥した後に中性ゴムに封入させ、切片を光学顕微鏡下で２００倍にて観察した。
研究の結果、ブレオマイシン誘発全身性硬化症マウスモデルでは、顕微鏡で観察した溶媒ＰＢＳ投与群（図２Ａ）のコラーゲン線維化（矢印でマーク）の程度はプラスミノーゲン投与群（図２Ｂ）よりも高く、プラスミノーゲン投与群マウスの肺の肺胞壁の形態は正常に近く、炎症細胞が有意に減少し、線維化の程度は溶媒ＰＢＳ投与群よりも有意に低く、しかもその差は統計的に有意であった（図２Ｃ)。これは、プラスミノーゲンがブレオマイシン誘発の全身性硬化症マウスの肺組織の線維化を効果的に減少させることができることを示している。

実施例３は、プラスミノーゲンがパラコート中毒マウスの肺線維化を減少させることに関するものである。
９～１０週齢のＣ５７マウス１２匹を取り、ランダムに２つの群に分け、溶媒ＰＢＳ投与対照群とラスミノーゲン投与群でそれぞれ６匹とした。２つの群のマウスに１５ｍｇ／ｋｇ体重でパラコート溶液を１回腹腔内で注射した後にすぐ投与を開始し、それを１日目として記録した^［６］。ブプラスミノーゲン投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍｌ／匹／日でプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒ＰＢＳ投与対照群マウスに同量のＰＢＳ溶液を同様に投与した。投与サイクルは１４日間であり、１５日目にマウスを殺処分し、肺組織を採取して４％中性ホルマリン固定液で２４時間固定した。固定後の肺組織をアルコール勾配で脱水させ、キシレンで透徹化処理した後にパラフィンで包埋した。組織切片の厚みは３μｍであり、切片を脱パラフィンさせ再水和してから１回水で洗った。０．１％シリウスレッドで６０分間染色後、流水ですすぎ、ヘマトキシリンで１分間染色してから流水ですすぎ、１％塩酸アルコール及びンモニア水で分別させてブルーイングさせ、流水ですすぎ、乾燥した後に封入させ、切片を光学顕微鏡下で２００倍にて観察した。
パラコートは、ヒトにとって非常に有毒な速効性の除草剤であり、人体に入ると肺、肝臓、腎臓などに損傷を与える可能性がある。肺損傷は、初期の肺胞上皮細胞の損傷、肺胞内出血及び浮腫などの症状、後期の肺胞内及び間質性線維症として現れる^［６］。現在、パラコート中毒の治療法はなく、死亡率はほぼ１００％である。
シリウスレッド染色の結果、プラスミノーゲン投与群（図３Ｂ）マウスの肺におけるコラーゲン線維の沈着は、溶媒ＰＢＳ投与対照群（図３Ａ）よりも有意に少なかった。これは、プラスミノーゲンがパラコート中毒による肺線維化を減少させることができることを示している。

実施例４は、プラスミノーゲンが肺炎モデルマウスの肺組織のコラーゲン沈着を減少させることに関するものである。
６～８週齢のＣ５７マウス１８匹を取り、体重に応じてランダムに３つの群に分け、ブランク対照群、溶媒群、及び投与群でそれぞれ６匹とした。溶媒群及び投与群マウスを２％イソフルランで麻酔した後、３ｍｇ／ｋｇ体重で１．５ｍｇ／ｍｌの細菌性リポ多糖溶液（ＬＰＳ）（Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｓｏｌａｒｂｉｏ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入、カタログ番号：Ｌ８８８０）を気管滴下注入することによって肺炎モデルを確立した^［７］。ＬＰＳ投与２時間後に、投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍｌ／匹／日でプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒群マウスに同量溶媒を尾静脈注射により投与し、１４日間連続投与した。１５日目にマウスを殺処分し、肺組織を採取して４％中性ホルマリン固定液で２４時間固定した。固定後の肺組織をアルコール勾配で脱水させ、キシレンで透徹化処理した後にパラフィンで包埋した。組織切片の厚みは３μｍであり、切片を脱パラフィンさせ再水和してから１回水で洗った。０．１％シリウスレッドで６０分間染色後、流水ですすぎ、ヘマトキシリンで１分間染色してから流水ですすぎ、１％塩酸アルコール及びンモニア水で分別させてブルーイングさせ、流水ですすぎ、乾燥した後に封入させ、切片を光学顕微鏡下で２００倍にて観察した。
その結果、ブランク対照群（図４Ａ）の肺組織に一定量のコラーゲン沈着があり（矢印でマーク）、溶媒群（図４Ｂ）のマウスの肺組織にコラーゲン沈着が有意に増加し、投与群（図４Ｃ）のマウスの肺組織におけるコラーゲン沈着は溶媒群のマウスよりも有意に少なく、しかもその差は統計的に有意であった（＊はＰ＜０．０５を表す）（図４Ｄ）。これは、プラスミノーゲンが肺炎モデルマウスの肺におけるコラーゲンの沈着を減少させ、肺炎によって引き起こされる肺線維症を改善できることを示している。

実施例５は、プラスミノーゲンを予め投与することが、肺炎モデルマウスの肺組織におけるコラーゲン沈着を減少させることに関するものである。
６～８週齢のＣ５７マウス１８匹を取り、体重に応じてランダムに３つの群に分け、ブランク対照群、溶媒群、及び投与群でそれぞれ６匹とした。投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍｌ／匹／日でプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒群マウスに同量溶媒を尾静脈注射により投与し、３日間連続投与した。４日目に、溶媒群及び投与群マウスを２％イソフルランで麻酔した後、３ｍｇ／ｋｇ体重で１．５ｍｇ／ｍｌの細菌性リポ多糖溶液（ＬＰＳ）（Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｓｏｌａｒｂｉｏ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入、カタログ番号：Ｌ８８８０）を気管滴下注入することによって肺炎モデルを確立した^［７］。９目にマウスを殺処分し、肺組織を採取して４％中性ホルマリン固定液で２４時間固定した。固定後の肺組織をアルコール勾配で脱水させ、キシレンで透徹化処理した後にパラフィンで包埋した。組織切片の厚みは３μｍであり、切片を脱パラフィンさせ再水和してから１回水で洗った。０．１％シリウスレッドで６０分間染色後、流水ですすぎ、ヘマトキシリンで１分間染色してから流水ですすぎ、１％塩酸アルコール及びンモニア水で分別させてブルーイングさせ、流水ですすぎ、乾燥した後に封入させ、切片を光学顕微鏡下で２００倍にて観察した。
その結果、ブランク対照群（図５Ａ）の肺組織に一定量のコラーゲン沈着があり（矢印でマーク）、溶媒群（図５Ｂ）のマウスの肺組織にコラーゲン沈着が有意に増加し、投与群（図５Ｃ）のマウスの肺組織におけるコラーゲン沈着は溶媒群のマウスよりも有意に少なかった。これは、プラスミノーゲンを予め投与することが、肺炎モデルマウスの肺におけるコラーゲンの沈着を減少させ、肺炎によって引き起こされる肺線維症を改善できることを示している。

実施例６は、プラスミノーゲンが肺炎モデルマウスの肺洗浄液中の総タンパク質レベルを低下させることに関するものである。
６～８週齢のＣ５７マウス１８匹を取り、体重に応じてランダムに３つの群に分け、ブランク対照群、溶媒群、及び投与群でそれぞれ６匹とした。溶媒群及び投与群マウスを２％イソフルランで麻酔した後、３ｍｇ／ｋｇ体重で１．５ｍｇ／ｍｌの細菌性リポ多糖溶液（ＬＰＳ）（Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｓｏｌａｒｂｉｏ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入、カタログ番号：Ｌ８８８０）を気管滴下注入することによって肺炎モデルを確立した^［７］。ＬＰＳ投与２時間後に、投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍｌ／匹／日でプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒群マウスに同量溶媒を尾静脈注射により投与し、７日間連続投与した。８日目に全てのマウスを殺処分し、肺を解剖し、重量を測定した。右肺気管支をＰＢＳで２回続けて合計０．７ｍｌ洗浄し、液体を回収し、４℃で７００ｇで１０分間遠心分離して上清を収集し、ビシンコニン酸（Ｂｉｃｉｎｃｈｏｎｉｎｉｃ ａｃｉｄ、ＢＣＡ）メソッドを使用して、総タンパク質を検出した。
その結果、ブランク対照群の肺洗浄液に一定量の総タンパク質があり、溶媒群の肺洗浄液中の総タンパク質レベルは、ブランク対照群よりも有意に高く（＊＊＊はＰ＜０．００１を表す）、投与群の肺洗浄液中の総タンパク質レベルは、溶媒群よりも有意に低く、しかもその統計的差は有意に近かった（Ｐ＝０．０５２）（図６）。これは、プラスミノーゲンが肺炎モデルマウスの肺洗浄液中の総タンパク質レベルを低下させることができることを示している。

実施例７は、プラスミノーゲンが肺炎モデルマウスの肺フィブリン沈着を減少させることに関するものである。
６～８週齢のＣ５７マウス１２匹を取り、体重に応じてランダムに２つの群に分け、溶媒群と投与群でそれぞれ６匹とした。溶媒群及び投与群マウスを２％イソフルランで麻酔した後、３ｍｇ／ｋｇ体重で１．５ｍｇ／ｍｌの細菌性リポ多糖溶液（ＬＰＳ）（Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｓｏｌａｒｂｉｏ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入、カタログ番号：Ｌ８８８０）を気管滴下注入することによって肺炎モデルを確立した^［７］。ＬＰＳ投与２時間後に、投与群マウスに１ｍｇ／０．１ｍｌ／匹／日でプラスミノーゲンを尾静脈注射により投与し、溶媒群マウスに同体積の溶媒を尾静脈注射により投与し、３日間連続投与した。４日目にマウスを殺処分し、左肺を採取して４％中性ホルマリン固定液で２４時間固定した。固定後の組織サンプルをアルコール勾配で脱水させ、キシレンで透徹化処理した後にパラフィンで包埋した。肺組織の冠状切片の厚みは３μｍであり、切片を脱パラフィンさせ再水和してから１回水で洗った。クエン酸で３０分間修復し、室温で１０分間冷却した後、水でやさしくすすいだ。３％過酸化水素水で１５分間インキュベーションし、ＰＡＰマーカーで組織を丸で囲んだ。１０％のヒツジ血清液（Ｖｅｃｔｏｒ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）で１時間ブロッキングした。時間になった後、ヒツジ血清液を廃棄した。ウサギ抗フィブリン（Ｆｉｂｒｉｎ）抗体（Ａｂｃａｍ）を加えて４℃で一晩インキュベーションした後、ＰＢＳで２回洗い、毎回５分間であった。ヤギ抗ウサギＩｇＧ（ＨＲＰ）抗体（Ａｂｃａｍ）の二次抗体を室温で１時間インキュベーションし、ＰＢＳで２回洗い、毎回５分間であった。ＤＡＢキット（Ｖｅｃｔｏｒ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）で呈色させ、水で３回洗浄した後にヘマトキシリンで３０秒対比染色して、流水で５分間ブルーイングさせ、ＰＢＳで１回洗浄した。勾配で脱水させて透徹にして封入させ、切片を光学顕微鏡下で２００倍にて観察した。
フィブリンは、急性呼吸困難における肺のヒアリン膜の主成分であり、ヒアリン膜は、肺胞のガス交換機能を妨げ、血中酸素飽和度の低下と呼吸困難を引き起こす^［８］。
その結果、溶媒群（図７Ａ）マウスの肺組織におけるフィブリン沈着のレベルは、投与群（図７Ｂ）よりも有意に高かった。これは、プラスミノーゲンが肺炎モデルマウスの肺フィブリン沈着を減少させることができることを示している。

以下の実施例は、本発明の実施をさらに説明するが、本発明を限定することを意図するものではない。

以下のすべての患者は、インフォームドコンセントフォームに署名して自発的に薬を服用し、病院倫理委員会の承認を得た。

病状や経過により、方法及び用量を適宜調整及び増減した。主な投与方法は、エアロゾル吸入と静脈内注射であった。エアロゾル吸入、静脈内注射によって投与したヒトドナーの血液から精製されたヒトプラスミノーゲンの濃度は、すべて５ｍｇ／ｍｌであり、溶媒として生理食塩水を使用した。

実施例８は、肺炎、肺線維症の患者に関するものである。
患者は７７歳の男性であり、脳梗塞後遺症と肺線維症があり、この薬を使用する前に肺炎を発症し、痰は多く、黄色く粘性が高く、咳をするのが困難であった。１日（２４時間）２５～２６回の喀痰吸引が必要であり、毎回大量の喀痰を吸引することができた。ずっと酸素を吸入し（ほとんど脱酸素ができなかった）、呼吸音が少し荒かった。喉頭気道切開（金属スリーブ）がある。半年近く寝たきりで、睡眠不足と精神状態の悪さが続いた。
投薬レジメン：最初の９日間はエアロゾル吸入で１０ｍｇ／回、３回／日、１０日目にエアロゾル吸入で１０ｍｇ／回、２回／日、１１日目は休薬、１２日目にエアロゾル１回吸入で１０ｍｇ、１３日目にエアロゾル吸入１回で１０ｍｇ、同時に１０ｍｇ静脈注射により投与し、１４日目に１５ｍｇ静脈注射により投与した。
治療効果：
１日目の投薬：症状が改善し、強い喀痰として現れ、気道切開部から自然に排出し、喀痰吸引回数が８回（午前８時～午後８時）に減少した。２日目の投薬：初めて脱酸素して２０分間手を支えて座り、血中酸素飽和度は９４％であり、心拍数は６５であった。２回目に脱酸素して１０分間、血中酸素飽和度は９８％であり、心拍数は７５であった。３回目に脱酸素して２０分間手を支えて座り、血中酸素飽和度は９４～９８％の間で変動し、心拍数は約７８であった。喀痰は前日より強く、吸引は６回（午前８時～午後８時）であった。投薬１４日目以降、患者は自発的に脱酸素を要求した。脱酸素後、血中酸素飽和度は９７％であり、就寝時は約９４％であり、脱酸素時間は１２時間以上に達することができ、脱酸素は基本的に可能であった。痰は、投薬前は黄色く粘り気のある粘度のあるものから、白く薄く泡立ったものに変化し、痰吸引器で主に排泄するものから、ほとんどが自発的に排泄できるものに変化した。
上記の結果は、プラスミノーゲンが、強い喀痰、自発的な痰排出、喀痰吸引回数の減少、脱酸素時間の延長、血中酸素飽和度の改善、痰の改善などを含む、患者の肺炎の症状を効果的に改善できることを示している。

実施例９は、肺線維症、喘息の患者に関するものである。
患者は８３歳の女性であり、若い頃に肺結核を患い、約２０年前に肺線維症及び喘息と診断され、徐々に悪化していた。主な症状として、肺機能が低下し、基本的にベッドでの活動しかサポートできず、ベッドを離れることができなかった。
投薬レジメン：１日目にエアロゾル吸入で１０ｍｇ／回、１回／日、２日目にエアロゾル吸入で１０ｍｇ／回、２回／日、３日目にエアロゾル吸入で１０ｍｇ／回、３回／日投与した。
治療効果：投薬後、患者は意識的にスムーズに呼吸し、ベッドを離れるより多くの活動ができるようになった。
上記の結果は、プラスミノーゲンが肺線維症及び喘息患者の肺機能を改善できることを示している。

実施例１０は、喘息患者に関するものである。
患者は５５歳の男性であり、バイタルサインが安定しており、意識がはっきりしている。主訴：高血圧、心臓病、糖尿病等の既往歴なし。患者は、トリメタジジン、バヤスピリン、イチョウカプセル、及び深海魚油を長年服用しており、３年前に脳梗塞を発症した。患者は睡眠の質が悪いことを訴え、その他の不快症状はなく、運動後に喘息が観察された。
投薬レジメン：治療は、２２日間にわたる１４回の投薬で構成され、最初の６日間は、薬剤を１日１回投与し、毎回１５０ｍｇの静脈内ボーラス注射を行い、次の１６日間は、２日に１回、毎回１５０ｍｇの静脈内ボーラス注射を行った。
治療効果：
治療効果は、患者の全体的な状態及び運動後の喘息症状をスコアリングすることによって評価した。初日、投薬を行わなかった場合の患者の全身状態及び運動後の喘息症状のスコアを１０とし、注射後の前日の患者の全身状態及び運動後の喘息症状のスコアを１０とした。１０が最も深刻であり、１が最も軽度である。
投薬４日目には、全体的な状態スコアは８であり、運動後の喘息症状スコアは８であり、患者の精神状態は良く、睡眠の質は改善された。投薬時間の延長につれて、患者の諸症状はさらに改善した。投薬２２日目には、全体的な状態スコアは５であり、運動後の喘息症状スコアは３であり、患者は不快感がなく、睡眠の質がさらに改善され、食欲が改善された。
以上から分かるように、プラスミノーゲンは、全身状態、運動後の喘息症状、精神状態、睡眠の質、食欲など、喘息患者の症状を改善することができる。

実施例１１は、非５ｑ型ＳＭＡ患者に関するものである。
患者は４０ヶ月（３歳４ヶ月）の女性であり、非５ｑ型ＳＭＡ（脊髄性筋萎縮症）と診断された。生後６ヶ月で発症し、１．５歳（１８ヶ月）でＳＭＡと診断され、肺感染症及喀痰の排出困難により気道が閉塞し、呼吸が弱くなり、人工呼吸器の間欠使用後、徐々に自然呼吸不全で人工呼吸器を離れることができなくなり、人工呼吸器を約１年半使用した。言語機能を喪失し、運動不能であり、筋力は基本的にグレード０であった。症状：人工呼吸器の使用以来、毎日、去痰薬、喀痰薬、痰吸引装置、酸素吸入、噴霧（１日２回）、及び経鼻栄養を受けた。
使用した人工呼吸器のパラメーター：圧力２０；一回換気量約１２０であった。自発呼吸はほとんどなく、酸素流量は１～１．５ｍｌ、喀痰吸引は１日１５～２０回、夜間は不規則な痰吸引（喀痰吸引により気道粘膜が損傷して出血）があり、血中酸素検出器は、酸素使用時の血中酸素飽和度が９５％以上であり（酸素吸入を中止することはできない）、心拍数が１４０回／分であることを示した。体温が長時間３７．５℃以上であった。
投薬レジメン
最初の治療コース（２週間）：エアロゾル吸入、１０ｍｇ／回、３回／日、５０～１００ｍｇの静脈内注射と組み合わせて、３日に１回投与した。
最初の治療コースの終了後、５７日間の間隔で２番目の治療コースを実行した。
２番目から４番目の治療コース（各コース間は２週間の間隔がある）：静脈内注射、１回／３日、用量は１５０～２５０ｍｇであった。
治療効果
最初の治療コース：人工呼吸器のパラメーターは変更されず、自発呼吸は増え、約２０～３０％に達し（１０回の呼吸で約２～３回の自発呼吸が発生した）、酸素の流量が変わらない場合、投薬後の血中酸素飽和度は９８～９９％に達することができた。
２番目の治療コース：１５日間の入院後、気管切開が行われてから退院して自宅で看護された。大量の痰があり、気道からあふれ続け、タイムリーに痰を吸引して除去する必要があった。人工呼吸器の圧力を下げ、退院時の１８から１６に調整し、一回換気量は１３０から１４０であり、自発呼吸の回復は良好であった。酸素をオフにすることができ、夜間は基本的に酸素は必要なく、血中酸素飽和度は９５％以上であり、心拍数は約１２０回／分であり、時々さらに良くなり、体温は正常に戻った。
３番目の治療コース：人工呼吸器の圧力は１５または１６に調整でき、一回換気量は１４０～１５０の間であり、気道はより開いており、すべて自発呼吸であり、酸素吸入の回数は少なく、喀痰吸引中に時々使用された。正常な心拍数は１２０回／分であり、投薬後４～５時間内は酸素を必要としなく、心拍数は１００回／分、血中酸素飽和度は９９％であった。患者の喀痰量が減少し、気道切開には基本的に喀痰がなく、喀痰吸引は１日５～６回行われた。
４番目の治療コース：人工呼吸器のパラメーター及び自発呼吸の状況は、３番目の治療コースと同じであり、血中酸素飽和度は通常９７～９９％であり、基本的に酸素を使用せず、痰吸引の回数が減り、１日２～３回、偶には５～６回であった。体温は正常であった。
上記の結果は、プラスミノーゲンが血中酸素飽和度の改善、自発呼吸機能の改善、気道開存、脱酸素可能または時折の酸素吸入、喀痰量の減少など、ＳＭＡ患者の肺機能を改善できることを示している。

実施例１２は、Ｉ型ＳＭＡ患者に関するものである。
患者は１８ヶ月の男性であり、６ヶ月でＩ型ＳＭＡと診断された。診断時に、医師は、このタイプの疾患の患者の平均生存期間は２年であることを伝えたが、その家族は何ら治療措置を講じなかった。肺機能の症状：血中酸素を２４時間モニタリングし、血中酸素飽和度が９２～９７％であり、呼吸時の胸の浮き沈みが小さく、睡眠中の呼吸のうねりが弱く、痰音があり、痰を自発的に排出できなかった。泣き声が弱く、元気がなかった。
治療方法：エアロゾル吸入（２～３回／日）＋静脈内注射（１回／３日）で、治療サイクルは５コース（２週間が１コース）で、各コース間の間隔は２週間であった。エアロゾル吸入投与量は５～１０ｍｇ／回、静脈内注射投与量は５０ｍｇであった。
治療効果
最初の治療コース：治療の２日目に、血中酸素飽和度は９７～９８％に達し、時には９５～９６％に達した。血中酸素飽和度が正常になり、呼吸機能が改善し、介助により痰を排出でき、喀痰量が減少した。
２番目の治療コース：血中酸素飽和度は正常のままであり、呼吸はより強くなった。
３番目の治療コース：エアロゾル吸入後、痰が排出され、朝は痰の音があり、泣いた後、痰の音が大きく、介助により痰を排出できた。
４～５番目の治療コース：効果が持続し、精神状態も良好であり、肺感染症や呼吸不全などの状態の悪化はなかった。
以上から分かるように、プラスミノーゲンは、Ｉ型ＳＭＡ患者の肺機能を改善することができ、呼吸機能を改善し、血中酸素飽和度を向上させ、治療後、血中酸素飽和度が正常値に達し、介助により喀痰が可能となり、肺感染症や呼吸不全などの悪化症状もなく、患者の様々な症状を改善することができる。

実施例１３は、２０１９コロナウイルス病（Ｃｏｒｏｎａ Ｖｉｒｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ２０１９，ＣＯＶＩＤ－１９）患者に関するものである。
患者は４８歳の男性であり、重篤な新型コロナウイルス肺炎（２０１９－ｎＣｏＶ）と診断された。集中治療室では、人工呼吸器とモニターが使用されており、酸素濃度は１００％、血中酸素飽和度は８０～９０％であった。バイタルサイン：心拍数９２回／分、呼吸４１回／分、血圧１２８／８４ｍｍＨｇであった。
投薬レジメン：エアロゾル吸入、１０ｍｇ／回、５．５時間の間隔で２回投与した。
投薬効果
初回投薬：投薬前の血中酸素飽和度は８４％、心拍数は９２回／分、呼吸は４１回／分、血圧は１２８／８４ｍｍＨｇであった。投薬１時間後の血中酸素飽和度は９０％、心拍数は８３回／分、呼吸は３７回／分、血圧は１２８／８４ｍｍＨｇであった。
２回目の投薬：投与前の血中酸素飽和度は８８％、心拍数は８１回／分、呼吸は３９回／分、血圧は１２０／８３ｍｍＨｇであった。投与１時間後の血中酸素飽和度は９１％、心拍数は７０回／分、呼吸は２８回／分、血圧は１２０／８３ｍｍＨｇであった。
投薬前後に副作用はなく、患者は気分が良くなったと報告した。
以上から分かるように、プラスミノーゲンは、新型コロナウイルス肺炎の重篤な患者の血中酸素飽和度を効果的に高め、呼吸頻度を遅くし、肺機能を改善することができる。

実施例１４は、ＣＯＶＩＤ－１９患者に関するものである。
患者は４７歳の男性であり、重篤な新型コロナウイルス肺炎（２０１９－ｎＣｏＶ）と診断された。集中治療室では、人工呼吸器とモニターが使用されており、酸素濃度は１００％、血中酸素飽和度は８０～９０％であった。バイタルサイン：体温３７．５℃、心拍数１１０回／分、呼吸３７回／分、血圧１３９／９４ｍｍＨｇであった。
投薬レジメン：エアロゾル吸入、１０ｍｇ／回、４時間５０分の間隔で２回投与した。
投薬効果
初回投薬：投薬前の血中酸素飽和度は８１％であった。投薬３時間後の血中酸素飽和度は８８～９０％であった。
２回目の投薬：投与前の血中酸素飽和度は８９～９２％、心拍数は９１回／分、呼吸は３１回／分、血圧は１３０／８７ｍｍＨｇであった。投与１時間後の血中酸素飽和度は９１％、心拍数は８９回／分、呼吸は２７回／分、血圧は１３０／８７ｍｍＨｇであった。
投薬前後に副作用はなく、患者は気分が良くなったと報告した。
以上から分かるように、プラスミノーゲンは、新型コロナウイルス肺炎の重篤な患者の血中酸素飽和度を効果的に改善し、呼吸頻度を改善することができる。

実施例１５は、プラスミノーゲンが重症のＣＯＶＩＤ－１９患者の血圧を下げることに関するものである。
患者は、４６歳の男性であり、血中酸素飽和度は９３％、呼吸数は２６回／分であり、新型コロナウイルス肺炎診断及び治療プログラム（試用版６）の臨床分類基準によって、重度のＣＯＶＩＤ－１９と診断された。治療前の患者の血圧は１３０／８０ｍｍＨｇ（収縮圧／拡張圧）であった。
ヒトプラスミノーゲン凍結乾燥粉末を５ｍｇ／ｍｌの濃度で滅菌水に溶解し、ネブライザーで噴霧して患者に投与した。１日２回、毎回１０ｍｇ投与した。
６回投与した後、患者の血圧は以前の１３０／８０ｍｍＨｇから１１６／６９ｍｍＨｇに低下した。これは、プラスミノーゲンが重度のＣＯＶＩＤ－１９患者の血圧を下げることができることを示唆している。

実施例１６は、プラスミノーゲンが重度のＣＯＶＩＤ－１９患者の呼吸数を減少させることに関するものである。
患者は、４７歳の男性であり、血中酸素飽和度は９３％であり、新型コロナウイルス肺炎診断及び治療プログラム（試用版６）の臨床分類基準によって、重度のＣＯＶＩＤ－１９と診断された。治療前の患者の呼吸数は４５回／分であった。
ヒトプラスミノーゲン凍結乾燥粉末を５ｍｇ／ｍｌの濃度で滅菌水に溶解し、ネブライザーで噴霧して患者に投与した。１日２回、毎回１０ｍｇ投与した。
２回投与した後、患者の呼吸数は以前の４５回／分から３７回／分に低下した。これは、プラスミノーゲンが重度のＣＯＶＩＤ－１９患者の呼吸数を減少させることができることを示唆している。

実施例１７は、プラスミノーゲンが重篤なＣＯＶＩＤ－１９患者の血圧を下げることに関するものである。
患者は、４８歳の男性であり、血中酸素飽和度は７９％、呼吸数は４１回／分であり、新型コロナウイルス肺炎診断及び治療プログラム（試用版６）の臨床分類基準によって、重篤なＣＯＶＩＤ－１９と診断された。治療前の患者の血圧は１２８／８４ｍｍＨｇ（収縮圧／拡張圧）であった。
ヒトプラスミノーゲン凍結乾燥粉末を５ｍｇ／ｍｌの濃度で滅菌水に溶解し、ネブライザーで噴霧して患者に投与した。１日２回、毎回１０ｍｇ投与した。
５回投与した後、患者の血圧は以前の１２８／８４ｍｍＨｇから１２０／８３ｍｍＨｇに低下した。これは、プラスミノーゲンが重篤なＣＯＶＩＤ－１９患者の血圧を下げることができることを示唆している。

実施例１８は、プラスミノーゲンが重篤なＣＯＶＩＤ－１９患者の血圧及び呼吸数を低下させることに関するものである。
患者は、４７歳の男性であり、血中酸素飽和度は８２％、呼吸数は３７回／分であり、新型コロナウイルス肺炎診断及び治療プログラム（試用版６）の臨床分類基準によって、重篤なＣＯＶＩＤ－１９と診断された。治療前の患者の血圧は１３９／９４ｍｍＨｇ（収縮圧／拡張圧）であった。
ヒトプラスミノーゲン凍結乾燥粉末を５ｍｇ／ｍｌの濃度で滅菌水に溶解し、ネブライザーで噴霧して患者に投与した。１日２回、毎回１０ｍｇ投与した。
２回投与した後、患者の血圧は以前の１３９／９４ｍｍＨｇから１２０／８３ｍｍＨｇに低下し、呼吸数は投与前の３７回／分から２７回／分に低下した。これは、プラスミノーゲンが重篤なＣＯＶＩＤ－１９患者の血圧及び呼吸数を低下させることができることを示唆している。

実施例１９は、プラスミノーゲンがＣＯＶＩＤ－１９患者の状態を改善することに関するものである。
この試験では、３０～７８歳の１３人のＣＯＶＩＤ－１９患者を募集し、新型コロナウイルス肺炎診断及び治療プログラム（試用版６）の臨床分類基準によって、１３人の患者には、５人の普通型の患者、６人の重症患者、及び２人の重篤な患者が含まれていた。この治療は、病院の倫理委員会によって承認された。すべての患者はインフォームドコンセントに署名した。
ヒトプラスミノーゲン凍結乾燥粉末を５ｍｇ／ｍｌの濃度で滅菌水に溶解し、ネブライザーで噴霧して患者に投与した。疾患の重症度に応じて異なる用量のプラスミノーゲンを投与した。普通型の患者には１０ｍｇ／回、１日１回投与し、重度及び重篤な患者には１０ｍｇ／回、１日２回投与した。患者の基本情報と投薬頻度を表１に示す。投与の数日前と投与後に高解像度胸部ＣＴ（Ｎｅｕｓｏｆｔ， ＮｅｕＶｉｚ １６ Ｃｌａｓｓｉｃ， Ｃｈｉｎａ）スキャンを行った。リアルタイムの血中酸素飽和度及び心拍数をモニター（Ｍｉｎｄａｒｙ，ｉＰＭ５，Ｃｈｉｎａ）でモニタリングし、ヒトプラスミノーゲンのエアロゾル吸入の１時間前及びエアロゾル吸入の数時間後に血中酸素飽和度及び心拍数を記録した。

表１ ＣＯＶＩＤ－１９患者におけるヒトプラスミノーゲン療法の概要

結果１：プラスミノーゲンは一般的なＣＯＶＩＤ－１９患者の肺損傷を改善する
ＣＴの結果、普通型の５人の患者は、投薬前に両側の肺に境界が不明瞭で密度が不均一な複数の斑状／点状の「スリガラス」影を示し、縦隔窓の病変領域はまばらな斑点状の影を示した。５人の患者に、ヒトプラスミノーゲンの投与前に抗生物質と漢方薬を投与したが、肺の「スリガラス」の影の密度及び範囲は時間の経過とともに増加し、悪化を示した。ヒトプラスミノーゲンを２～３回投与した後、５人の患者の肺病変の数、範囲、及び密度が減少し、さらに部分的に消失し、斑状または点状の「スリガラス」影は、大幅に減少または吸収された（図８及び表２を参照）。これは、ヒトプラスミノーゲンのエアロゾル吸入が、ＣＯＶＩＤ－１９感染による肺損傷を急速に改善できることを示している。

表２ 普通型ＣＯＶＩＤ－１９患者の高解像度胸部ＣＴスキャンの記録

結果２：プラスミノーゲンは、重症及び重篤なＣＯＶＩＤ－１９患者の血中酸素飽和度を上昇させる
プラスミノーゲン投与中、重症または重篤なＣＯＶＩＤ－１９患者には、鼻カニューレからそれぞれ８０％または１００％の定常濃度の酸素を注入し、酸素注入条件下で血中酸素飽和度をモニタリングした。
その結果、重症患者の血中酸素飽和度は正常であるにもかかわらず、ヒトプラスミノーゲンの投与後、６人の患者の中で５人の患者の血中酸素飽和度が１～４％増加した。２人の重篤な患者は、ヒトプラスミノーゲンのエアロゾル吸入後わずか１時間で、患者の血中酸素飽和度が投与前の７９～８２％から約９１％に上昇し、安定したままであった。１人の重症患者にプラスミノーゲンを投与した後、血中酸素飽和度は投与前の９１％から８９％に低下した（表３）。これらのデータは、プラスミノーゲンが一般に、重症及び重篤なＣＯＶＩＤ－１９患者の血中酸素飽和度レベルを改善でき、血中酸素飽和度が特に低い患者に対して改善役割が特に著しいことを示している。

表３ 重度及び重篤なＣＯＶＩＤ－１９患者の血中酸素飽和度値

結果３：プラスミノーゲンはＣＯＶＩＤ－１９患者の心拍数を回復させ、心臓の負担を軽減できる
心拍数モニタリングの結果、ヒトプラスミノーゲンのエアロゾル吸入後、１３人のＣＯＶＩＤ－１９患者のうち８人で心拍数が毎分約２６回低下し、２人で心拍数が増加し、３人では有意な変化がなかったことが示された（表４）。統計分析の結果、プラスミノーゲン投与後、普通型、重症、重篤の患者の平均心拍数はいずれも減少傾向を示し、普通型の患者では、投与前後の比較に統計的な差があった（Ｐ＜０．０５）（図９）。これらの結果は、ヒトプラスミノーゲンのエアロゾル吸入が、一般的にＣＯＶＩＤ－１９患者の高い心拍数を遅くし、心臓への負担を軽減できることを示している。

表４ ＣＯＶＩＤ－１９患者の心拍数モニタリングの結果

さらに、すべての患者は、ヒトプラスミノーゲンのエアロゾル吸入後に胸の圧迫感が軽減され、呼吸がよりスムーズになったと報告している。
以上によって、ヒトプラスミノーゲンのエアロゾル吸入は、ＣＯＶＩＤ－１９患者の肺損傷を軽減し、患者の血中酸素飽和度を高め、心拍数を減らし、患者の呼吸機能を改善することができる。

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配列表
配列１：
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配列５：
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配列１３：
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配列１４：
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Claims (15)

1. プラスミノーゲン活性化経路の成分、プラスミノーゲンを直接活性化し得るか、またはプラスミノーゲン活性化経路の上流成分を活性化することによって間接的にプラスミノーゲンを活性化し得る化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミンの活性を模倣する化合物、プラスミノーゲンまたはプラスミノーゲン活性化剤の発現をアップレギュレートすることができる化合物、プラスミノーゲン類縁体、プラスミン類縁体、ｔＰＡまたはｕＰＡ類縁体及び線維素溶解阻害剤の拮抗剤から選択される１つ以上の治療有効量の化合物を被験者に投与することを含む、肺炎を予防及び治療する方法。
2. 前記プラスミノーゲン活性化経路の成分が、プラスミノーゲン、組換えヒトプラスミノーゲン、Ｌｙｓ－プラスミノーゲン、Ｇｌｕ－プラスミノーゲン、プラスミン、プラスミノーゲンとプラスミンの１つ以上のｋｒｉｎｇｌｅドメイン及びプロテアーゼドメインを含むプラスミノーゲン及びプラスミン変異体並びに類縁体、ミニプラスミノーゲン（ｍｉｎｉ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）、ミニプラスミン（ｍｉｎｉ－ｐｌａｓｍｉｎ）、マイクロプラスミノーゲン（ｍｉｃｒｏ－ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ）、マイクロプラスミン（ｍｉｃｒｏ－ｐｌａｓｍｉｎ）、ｄｅｌｔａ－プラスミノーゲン、ｄｅｌｔａ－プラスミン（ｄｅｌｔａ－ｐｌａｓｍｉｎ）、プラスミノーゲン活性化剤、ｔＰＡ、及びｕＰＡから選択されるものである、請求項１に記載の方法。
3. 前記線維素溶解阻害剤の拮抗剤が、ＰＡＩ－１、補体Ｃ１阻害剤、α２抗プラスミンまたはα２マクログロブリンの拮抗剤、例えば、抗体である、請求項１に記載の方法。
4. 前記肺炎が、細菌感染肺炎、ウイルス感染肺炎、マイコプラズマ感染肺炎、クラミジア感染肺炎、真菌感染肺炎、またはリケッチア感染肺炎である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
5. 前記肺炎が非感染性因子による肺炎である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
6. 前記肺炎がコロナウイルス感染性肺炎である、請求項４に記載の方法。
7. 前記肺炎が２０１９－ｎＣｏＶ感染性肺炎であり、前記プラスミノーゲンが、肺組織の損傷の軽減、肺の炎症反応の軽減、肺のフィブリン沈着の低減、肺機能の改善、血中酸素飽和度の向上、２０１９－ｎＣｏＶ感染性肺炎の被験者の血圧の低下、２０１９－ｎＣｏＶ感染性肺炎の被験者の心機能の改善、２０１９－ｎＣｏＶ感染性肺炎の被験者の一般的な身体状態の改善から選択される１つ以上を実現する、請求項６に記載の方法。
8. 前記化合物が、肺組織の炎症の減少、肺組織の炎症性浸出の減少、肺組織のフィブリン沈着の減少、肺組織の線維化の減少、肺組織のアポトーシスの減少、換気機能の改善、及び血中酸素飽和度の増加からなる群から選択される１つ以上の効果を有する、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
9. 前記プラスミノーゲンが、配列２と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有し、且つ依然としてプラスミノーゲン活性を有する、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
10. 前記プラスミノーゲンが、配列１４に示されるプラスミノーゲン活性フラグメントと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つプラスミノーゲンのタンパク質加水分解活性またはリジン結合活性を有する、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
11. 前記プラスミノーゲンが、配列２に示される前記プラスミノーゲンの保存的置換変異体である、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
12. 前記プラスミノーゲンが、天然または合成のヒトプラスミノーゲンである、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。
13. 前記化合物が、１つもしくは複数の他の治療方法または薬剤と組み合わせて使用する、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
14. 前記他の薬剤が、抗ウイルス薬、抗生物質、免疫調節薬、ホルモン薬（例えば、ステロイドホルモン）、ワクチン、及び疾患関連中和抗体から選択される１つ以上である、請求項１３に記載の方法。
15. 前記化合物が、鼻吸入、エアロゾル吸入、点鼻薬、点耳薬、点眼薬、静脈内、腹腔内、皮下、頭蓋内、髄腔内、筋肉内、及び直腸内からなる群から選択される１つ以上の経路または方法によって投与される、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。
    
    
    

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