JP2023513923A - 抗bcma抗体、その医薬組成物及び応用 - Google Patents
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Abstract
本発明は抗BCMA抗体、その医薬組成物及び応用を提供する。本発明に係る抗BCMA抗体の配列は明細書に記載される。本発明に係る抗BCMA抗体又はその抗原結合断片及びその医薬組成物はB細胞関連疾患の治療に利用される。
Description
技術分野
本発明は抗BCMA抗体、その医薬組成物及び応用に関する。
本発明は抗BCMA抗体、その医薬組成物及び応用に関する。
背景技術
B細胞成熟抗原(BCMA)はCD269とも呼ばれ、184個のアミノ酸残基からなり、その細胞内領域が80個のアミノ酸残基を含み、細胞外領域配列において1つの炭水化物認識ドメインだけがB細胞表面分子である。BCMAはシグナルペプチド欠如のI型膜貫通シグナルタンパク質であり、腫瘍壊死因子受容体ファミリーの一員であり、それぞれB細胞活性化因子BAFF又は増殖誘導リガンド(APRIL)の2つのリガンドと結合する。正常な組織において、BCMAが成熟したB細胞及び形質細胞の表面に発現されており、BCMAノックアウトマウスは免疫系が正常であり、正常な脾臓構造があり、Bリンパ球の発育が正常であるが、形質細胞の数が明らかに減少したことから、BCMAが形質細胞の生存維持にとって重要な働きを果たしていることが分かる。そのメカニズムとして、主にBCMAがBAFFタンパク質と結合して、抗アポトーシス遺伝子Bcl-2、Mcl-1及びBclwなどのアップレギュレーションを行うことで、細胞の成長を維持することを含む。同様に、該メカニズムは骨髄腫細胞においても機能されており、骨髄腫細胞の悪性増殖にとって重要な促進効果を果たしている。研究によれば、BCMAは一般的に多発性骨髄腫細胞系に発現されており、多発性骨髄腫患者における検出も同様な結果が得られた。Kochenderferらは、既存報告を基に、Q-PCR、フローサイトメトリー及び免疫組織化学法と併用することで、BCMAの発現特徴を鋭意研究した結果、成熟したB細胞や形質細胞を除く正常なヒト組織においてBCMAの発現がなく、CD34+造血細胞においてもBCMAの発現がないことが分かった。
B細胞成熟抗原(BCMA)はCD269とも呼ばれ、184個のアミノ酸残基からなり、その細胞内領域が80個のアミノ酸残基を含み、細胞外領域配列において1つの炭水化物認識ドメインだけがB細胞表面分子である。BCMAはシグナルペプチド欠如のI型膜貫通シグナルタンパク質であり、腫瘍壊死因子受容体ファミリーの一員であり、それぞれB細胞活性化因子BAFF又は増殖誘導リガンド(APRIL)の2つのリガンドと結合する。正常な組織において、BCMAが成熟したB細胞及び形質細胞の表面に発現されており、BCMAノックアウトマウスは免疫系が正常であり、正常な脾臓構造があり、Bリンパ球の発育が正常であるが、形質細胞の数が明らかに減少したことから、BCMAが形質細胞の生存維持にとって重要な働きを果たしていることが分かる。そのメカニズムとして、主にBCMAがBAFFタンパク質と結合して、抗アポトーシス遺伝子Bcl-2、Mcl-1及びBclwなどのアップレギュレーションを行うことで、細胞の成長を維持することを含む。同様に、該メカニズムは骨髄腫細胞においても機能されており、骨髄腫細胞の悪性増殖にとって重要な促進効果を果たしている。研究によれば、BCMAは一般的に多発性骨髄腫細胞系に発現されており、多発性骨髄腫患者における検出も同様な結果が得られた。Kochenderferらは、既存報告を基に、Q-PCR、フローサイトメトリー及び免疫組織化学法と併用することで、BCMAの発現特徴を鋭意研究した結果、成熟したB細胞や形質細胞を除く正常なヒト組織においてBCMAの発現がなく、CD34+造血細胞においてもBCMAの発現がないことが分かった。
発明の概要
本発明は、下記配列、即ち、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8及びSEQ ID NO:9から選ばれるCDRを少なくとも1つ含む抗BCMA抗体又はその抗原結合断片を提供する。
1つ又は複数の実施形態において、前記抗BCMA抗体は、SEQ ID NO:1に示されるHCDR1、SEQ ID NO:2に示されるHCDR2、及びSEQ ID NO:3、4又は5に示されるHCDR3を含み、及び/又はSEQ ID NO:6又は7に示されるLCDR1、SEQ ID NO:8に示されるLCDR2、及びSEQ ID NO:9に示されるLCDR3を含む。
本発明は、下記配列、即ち、SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8及びSEQ ID NO:9から選ばれるCDRを少なくとも1つ含む抗BCMA抗体又はその抗原結合断片を提供する。
1つ又は複数の実施形態において、前記抗BCMA抗体は、SEQ ID NO:1に示されるHCDR1、SEQ ID NO:2に示されるHCDR2、及びSEQ ID NO:3、4又は5に示されるHCDR3を含み、及び/又はSEQ ID NO:6又は7に示されるLCDR1、SEQ ID NO:8に示されるLCDR2、及びSEQ ID NO:9に示されるLCDR3を含む。
1つ又は複数の実施形態において、前記抗BCMA抗体は、SEQ ID NO:12、20、28、36、44、52、60、68、76、84、92又は100の何れか1つに示されるHCDR1、SEQ ID NO:13、21、29、37、45、53、61、69、77、85、93又は101の何れか1つに示されるHCDR2、及びSEQ ID NO:14、22、30、38、46、54、62、70、78、86、94又は102の、22、30、38、46、54、62、70、78、86、94又は102の何れか1つに示されるHCDR3を含み、及び/又はSEQ ID NO:15、23、31、39、47、55、63、71、79、87、95又は103の何れか1つに示されるLCDR1、SEQ ID NO:16、24、32、40、48、56、64、72、80、88、96又は104の何れか1つに示されるLCDR2、及びSEQ ID NO:17、25、33、41、49、57、65、73、81、89、97又は105の何れか1つに示されるLCDR3を含む。
1つ又は複数の実施形態において、前記抗BCMA抗体は、下記組A~組Lの何れか1組に示されるHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、
及び/又は下記組1~組12の何れか1組に示されるLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む。
及び/又は下記組1~組12の何れか1組に示されるLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む。
1つ又は複数の実施形態において、前記抗BCMA抗体のVHのFR1は抗体7E11、8H7、11B10、11G1、15A7、15H6、18D10、20A2又は23C4のFR1から選ばれ、FR2は抗体7E11、8H7、11B10、11G1、15A7、15H6、18D10又は20A2のFR2から選ばれ、FR3は抗体7E11、8H7、11B10、11G1、15A7、18D10、20A2、23C4又は31F5のFR3から選ばれ、FR4は抗体7E11、8H7、11B10、11G1、15A7、15H6、20A2又は31F5のFR4から選ばれ、及び/又はVLのFR1は抗体7E11、8H7、11B10、11G1、15A7、15H6、18D10又は20A2のFR1から選ばれ、FR2は抗体7E11、8H7、15A7、15H6、20A2、23C4又は31F5のFR2から選ばれ、FR3は抗体7E11、8H7、11B10、11G1、15A7、18D10、20A2、23C4、27A7又は31F5のFR3から選ばれ、FR4は抗体7E11、11B10、11G1、15A7又は18D10のFR4から選ばれる。
1つ又は複数の実施形態において、前記抗BCMA抗体のVH及びVLのFR領域は、抗体7E11、8H7、11B10、11G1、15A7、15H6、18D10、20A2、20A9、23C4、27A7及び31F5から選ばれる何れか1つの抗体のVH及びVLのFR領域である。
1つ又は複数の実施形態において、前記抗BCMA抗体のVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:10、18、26、34、42、50、58、66、74、82、90及び98の何れか1つに示され、及び/又はVLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:11、19、27、35、43、51、59、67、75、83、91及び99の何れか1つに示される。
1つ又は複数の実施形態において、前記抗BCMA抗体のVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:10に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:11に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:18に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:19に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:26に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:27に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:34に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:35に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:42に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:43に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:50に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:51に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:58に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:59に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:66に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:67に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:74に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:75に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:82に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:83に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:90に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:91に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:98に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:99に示される。
1つ又は複数の実施形態において、本発明の何れか1つの実施形態に係るBCMA抗体の重鎖定常領域配列はSEQ ID NO:106に示され、及び/又は軽鎖定常領域配列はSEQ ID NO:107に示される。
1つ又は複数の実施形態において、本発明の何れか1つの実施形態に係る抗BCMA抗体はキメラ抗体又は完全ヒト抗体であり、好ましくは完全ヒト抗体である。
本発明は、本発明の何れか1つの実施形態に係る抗BCMA抗体又はその抗原結合断片と、薬学的に許容される賦形剤又はベクターと、を含む医薬組成物を更に提供する。
本発明は、(1)本発明の何れか1つの実施形態に係る抗BCMA抗体又はその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチド配列、及び(2)(1)に記載されるポリヌクレオチド配列の相補配列から選ばれる核酸分子を更に提供する。
本発明は、本発明の何れか1つの実施形態に係る抗BCMA抗体又はその抗原結合断片の、B細胞関連疾患を治療するためのものの製造における応用において、好ましくは、前記B細胞関連疾患はB細胞に関連する腫瘍又は自己免疫疾患である、応用を更に提供する。
本発明は、B細胞関連疾患を治療又は予防するための方法において、前記方法は、必要とする患者に、本発明の何れか1つの実施形態に係る抗BCMA抗体又はその抗原結合断片、或いは本発明の何れか1つの実施形態に係る抗BCMA抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物を、治療有効量で投与することを含む、方法を更に提供する。好ましくは、前記B細胞関連疾患はB細胞に関連する腫瘍又は自己免疫疾患である。
本発明は、B細胞関連疾患を治療又は予防するための方法において、前記方法は、必要とする患者に、本発明の何れか1つの実施形態に係る抗BCMA抗体又はその抗原結合断片、或いは本発明の何れか1つの実施形態に係る抗BCMA抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物を、治療有効量で投与することを含む、方法を更に提供する。好ましくは、前記B細胞関連疾患はB細胞に関連する腫瘍又は自己免疫疾患である。
図面の簡単な説明
図1は実施例2の動物の免疫化後の血清ヒトBCMA特異的酵素結合免疫吸着測定法による検出結果を示す。
図2は実施例5の抗ヒトBCMAモノクローナル抗体がU266細胞の表面に発現されるBCMAと結合するフローサイトメトリーを示す。
図3は実施例6の精製後の各抗ヒトBCMAモノクローナル抗体のSDS PAGEゲル電気泳動を示す。
具体的な実施形態
特に断りがない限り、本発明の実施にあたって、分子生物学(組換え技術を含む)、微生物学、細胞生物学、生化学、免疫学などの通常技術を採用するが、これらの技術は本分野の技術範囲内である。これらの技術は文献により十分に説明されている。例えば、Molecular Cloning:A Laboratory Manual、第2版(Sambrookら、1989)や、Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait編集、1984)や、Animal Cell Culture(R.I.Freshney編集、1987)や、Methods in Enzymology(Academic Press、Inc.)や、Current Protocols in Molecular Biology(F.M.Ausubelら編集、1987版及びその定期更新版)や、PCR:The Polymerase Chain Reaction(Mullisら編集、1994)や、A Practical Guide to Molecular Cloning(Perbal Bernard V.、1988)や、Phage Display:A Laboratory Manual(Barbasら、2001)が挙げられる。
特に断りがない限り、本発明の実施にあたって、分子生物学(組換え技術を含む)、微生物学、細胞生物学、生化学、免疫学などの通常技術を採用するが、これらの技術は本分野の技術範囲内である。これらの技術は文献により十分に説明されている。例えば、Molecular Cloning:A Laboratory Manual、第2版(Sambrookら、1989)や、Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait編集、1984)や、Animal Cell Culture(R.I.Freshney編集、1987)や、Methods in Enzymology(Academic Press、Inc.)や、Current Protocols in Molecular Biology(F.M.Ausubelら編集、1987版及びその定期更新版)や、PCR:The Polymerase Chain Reaction(Mullisら編集、1994)や、A Practical Guide to Molecular Cloning(Perbal Bernard V.、1988)や、Phage Display:A Laboratory Manual(Barbasら、2001)が挙げられる。
BCMA
本明細書において、「BCMA」はBAFF及び/又はAPRILと結合する細胞表面受容体、又はBCMAを含む受容体複合物である。ヒトBCMA(huBCMA)のアミノ酸配列のNCBI登録番号はQ02223(GI:313104029)である。BCMAタンパク質は変異体及び断片を含んでもよい。前記断片は、完全に又は部分的に膜を貫通する細胞外ドメイン、及び/又は細胞内ドメイン並びに細胞外ドメインを有さない断片を含む。可溶タイプのhuBCMAは、BAFF及び/又はAPRILとの結合能力を持つ細胞外ドメイン又は細胞外ドメインの断片を含む。「BCMA」はBCMAのアミノ酸配列の翻訳後修飾も含む。翻訳後修飾は、N-及びO-結合型グリコシル化を含むが、これらに限定されない。
本明細書において、「BCMA」はBAFF及び/又はAPRILと結合する細胞表面受容体、又はBCMAを含む受容体複合物である。ヒトBCMA(huBCMA)のアミノ酸配列のNCBI登録番号はQ02223(GI:313104029)である。BCMAタンパク質は変異体及び断片を含んでもよい。前記断片は、完全に又は部分的に膜を貫通する細胞外ドメイン、及び/又は細胞内ドメイン並びに細胞外ドメインを有さない断片を含む。可溶タイプのhuBCMAは、BAFF及び/又はAPRILとの結合能力を持つ細胞外ドメイン又は細胞外ドメインの断片を含む。「BCMA」はBCMAのアミノ酸配列の翻訳後修飾も含む。翻訳後修飾は、N-及びO-結合型グリコシル化を含むが、これらに限定されない。
BCMAの正常な組織における発現はB細胞系に高度的に制限され、主に扁桃腺/リンパ節の二次卵胞/胚中心、形質芽細胞、分化した形質細胞に発現する。BCMAは正常な形質細胞に観測されたレベルより高いレベルで悪性形質細胞に発現し、特に多発性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症(MGUS)形質細胞に高発現する。BCMAはBCMAを発現するB細胞関連悪性腫瘍を治療するための有利なターゲットであり、その発現が正常な形質細胞及び悪性形質細胞に高度的に制限されるため、最も低いノンターゲット組織毒性を有するものとする。
抗BCMA抗体
本発明はBCMAと特異的に結合する抗体を提供する。
本発明はBCMAと特異的に結合する抗体を提供する。
本明細書において、用語「抗体」は、モノクローナル抗体(免疫グロブリンFc領域を有する完全長抗体を含む)、マルチエピトープ特異性を有する抗体組成物、多重特異性抗体(例えば、二重特異性抗体)、ダイアボディ、一本鎖分子、及び抗体断片(特に、抗原結合断片、例えば、Fab、F(ab’)2及びFv)を含む。本明細書において、用語「免疫グロブリン」(Ig)と「抗体」は互いに代用できる。
基本的な4本鎖抗体ユニットは2本の同じ軽鎖(L)と2本の同じ重鎖(H)により構成されるヘテロ四量体糖タンパク質である。IgM抗体は5個の基本的なヘテロ四量体ユニット及びJ鎖と呼ばれるその他のポリペプチドからなり、10個の抗原結合部位を含む。IgA抗体は2~5個の基本的な4本鎖ユニットを含み、J鎖と重合して、多価集合体が形成できる。IgGの場合、4本鎖ユニットは通常約150,000ダルトンである。各軽鎖は1つの共有ジスルフィド結合により重鎖と連結され、2本の重鎖は1つ又は複数のジスルフィド結合により互いに連結されるが、ジスルフィド結合の数が重鎖のアイソタイプによって決定される。各重鎖と軽鎖との間は規則的な間隔の鎖間ジスルフィド架橋を更に有する。各重鎖はN-末端に可変ドメイン(VH)を有し、更に3つ(各α及びγ鎖に対する)及び4つ(μ及びεアイソタイプに対する)の定常ドメイン(CH)を有する。各軽鎖はN-末端に可変ドメイン(VL)を有し、更にその他端の定常ドメインを有する。VLはVHと整列し、CLは重鎖の第1定常ドメイン(CH1)と整列している。特定のアミノ酸残基は軽鎖と重鎖可変ドメインとの間に界面が形成されると考えられる。対となるVHとVLは一緒に1つの抗原結合部位を形成する。抗体の種々のクラスの構造及び特性について、Basic and Clinical Immunology、第8版、Daniel P. Sties、Abba I. Terr及びTristram G. Parsolw編集、Appleton & Lange、Norwalk、CT、1994、71ページ及び第6章を参照する。任意の脊椎動物種に由来する軽鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列によって、κ及びλと呼ばれる異なる2種のうちの1種に割り当てることができる。免疫グロブリンは、それらの重鎖定常ドメイン(CH)のアミノ酸配列によって、種々のクラス又はアイソタイプに割り当てることができる。免疫グロブリンの5つのクラス:IgA、IgD、IgE、IgG及びIgMが存在し、それぞれα、δ、ε、γ及びμと呼ばれる重鎖を有する。γ及びαクラスは、CH配列及び機能の比較的に小さい相違によって、更に、例えば、ヒトに発現されるIgG1、IgG2A、IgG2B、IgG3、IgG4、IgA1及びIgA2のサブクラスに分けられる。
抗体の「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗体の重鎖又は軽鎖のアミノ基末端ドメインである。重鎖及び軽鎖の可変ドメインはそれぞれ「VH」及び「VL」と呼ばれる。これらのドメインは通常、抗体の最も可変できる部分(同じタイプのその他の抗体)であり、抗原結合部位を含む。
用語「可変」は、可変ドメインにおける特定のセグメントが抗体の間で配列が広範囲に異なることを意味する。可変ドメインは、抗原結合を媒介して、特定抗体の、その特定抗原に対する特異性を限定する。しかしながら、可変性は、可変ドメイン全てのアミノ酸スパンにわたって均一に分布しているわけではない。代わりに、超可変領域(HVR)と呼ばれる3つのセグメント(軽鎖及び重鎖可変ドメインのどちらにもある)に集中し、即ち、それぞれ重鎖可変領域のHCDR1、HCDR2、HCDR3及び軽鎖可変領域のLCDR1、LCDR2、LCDR3である。可変ドメインにおけるより高度に保存された部分はフレームワーク領域(FR)と呼ばれる。天然重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ4つのFR領域(FR1、FR2、FR3及びFR4)を含み、通常、βプリーツシート構造を採用するが、環状連結を形成すると共に場合によってβプリーツシート構造の一部を形成する3つのHVRにより連結される。各鎖におけるHVRは、FR領域により非常に近い距離で保持されており、且つ他方の鎖におけるHVRと一緒に抗体の抗原結合部位の形成を促進する(Kabatら、Sequences of Immunological Interest、第5版、国立衛生研究所、Bethesda、MD、1991を参照する)。通常、軽鎖可変領域の構造はFR1-LCDR1-FR2-LCDR2-FR3-LCDR3-FR4であり、重鎖可変領域の構造はFR1-HCDR1-FR2-HCDR2-FR3-HCDR3-FR4である。定常ドメインは、抗体と抗原との結合に直接的に関与しないが、例えば、抗体依存性細胞に仲介される細胞毒性における抗体の関与などの、様々なエフェクター機能を示している。
本明細書において、用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団により得られた抗体であり、即ち、天然に発生できる少量で存在可能な突然変異及び/又は翻訳後修飾(例えば、異性化、アミド化)を除き、集団を構成する各抗体が同様である。モノクローナル抗体は高度的な特異性を持ち、単一の抗原部位に対応するものである。ポリクローナル抗体製剤(異なる決定基(エピトープ)に対応する異なる抗体を代表的に含む)に対して、各モノクローナル抗体は抗原における単一の決定基に対応する。これらの特異性の他に、モノクローナル抗体の優位性は、ハイブリドーマの培養によって合成されるため、その他の免疫グロブリンに汚染されていないことである。修飾語「モノクローナル」は、抗体が実質的に均質な抗体の集団により得られた特徴を示し、任意の特定方法による抗体の産生を要請すると解釈するものではない。例えば、本発明に利用されるモノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ法(例えば、Kohler及びMilstein、Nature、256:495-97(1975)や、Hongoら、Hybridoma、14(3):253-260(1995)、Harlowら、Antibodies:A Laboratory Manual、Cold Spring Harbor Laboratory Press、第2版.1988や、Hammerlingら、Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas、563-681、Elsevier、N.Y.、1981)、組換えDNA法(例えば、US 4,816,567)、ファージ提示技術(例えば、Clacksonら、Nature、352:624-628(1991)や、Marksら、J. Mol. Biol.、222:581-597(1992)や、Sidhuら、J. Mol. Biol.、338(2):299-310(2004)や、Leeら、J. Mol. Biol.,340(5):1073-1093(2004)や、Fellouse、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、101(34):12467-12472(2004)や、LeeらJ. Immunol. Methods、284(1-2):119-132(2004))、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座又はヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子の一部又は全部を有する動物によりヒト又はヒト様抗体を産生するための技術(例えば、WO1998/24893や、WO1996/34096や、WO1996/33735や、WO1991/10741や、Jakobovitsら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA,90:2551(1993)や、Jakobovitsら、Nature、362:255-258(1993)や、Bruggemannら、Year in Immunol.、7:33(1993)や、US 5,545,807や、US 5,545,806や、US 5,569,825や、US 5,625,126や、US 5,633,425や、US 5,661,016や、Marksら、Bio/Technology、10:779-783(1992)や、Lonbergら、Nature、368:856-859(1994)や、Morrison、Nature、368:812-813(1994)や、Fishwildら、Nature Biotechnol.、14:845-851(1996)や、Neuberger、Nature Biotechnol.、14:826(1996)や、Lonberg及びHuszar、Intern. Rev. Immunol.、13:65-93(1995))、を含む様々な技術により産生できる。
用語「完全長抗体」、「無傷抗体」又は「全抗体」は互いに代用できるが、(抗体断片に対して)実質的に完全な形式の抗体であることを意味する。具体的に、全抗体は、Fc領域を含む重鎖および軽鎖を伴うものを含む。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン(例えば、ヒト天然配列定常ドメイン)又はそのアミノ酸配列変異体であってもよい。幾つかの様態において、無傷抗体は、1種又は複数種のエフェクター機能を有してもよい。
「抗体断片」は無傷抗体の一部、好ましくは無傷抗体の抗原結合領域及び/又は可変領域を含む。抗体断片は抗体の抗原結合断片が好ましい。抗体断片の例として、Fab、Fab’、F(ab’)2及びFv断片や、ダイアボディや、線状抗体(アメリカ特許5,641,870、実施例2や、Zapataら、Protein Eng.、8(10):1057-1062、1995を参照)や、一本鎖抗体分子や、scFv-Fc断片や、抗体断片により形成される多重特異性抗体や、化学的修飾又はリポソームに組込まれることにより半減期が増加可能な任意の断片が挙げられる。抗体のパパイン消化は、「Fab」断片と呼ばれる2つの同一の抗原結合断片、ならびに残余「Fc」断片(この名称は容易に結晶化する能力を反映している)を産生した。Fab断片は完全な軽鎖及び重鎖可変ドメイン(VH)と1本の重鎖第1定常ドメイン(CH1)により構成される。各Fab断片は抗原結合に関して1価であり、即ち、単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、1つの大型F(ab’)2断片を生じるが、これは、異なる抗原結合活性を有する2つのジスルフィド結合Fab断片におおよそ対応し、依然として抗原に架橋し得る。Fab’断片は、CH1ドメインのカルボキシ基末端に幾つかのその他の残基(抗体ヒンジ領域に由来する1つ又は複数のシステインを含む)が付加されているため、Fab断片と異なる。F(ab’)2抗体断片は、元来対となるFab’断片として産生され、Fab’断片の間にヒンジシステインがある。抗体断片のその他の化学カップリングは既に知られている。Fc断片はジスルフィド結合により一体に保持されている2本の重鎖のカルボキシ基末端部分を含む。抗体のエフェクター機能はFc領域における配列によって決定されるが、該領域は幾つかの種類の細胞に発見されたFc受容体(FcR)により認識された領域でもある。
「Fv」は完全な抗原認識及び結合部位を含む最小抗体断片である。該断片は、強く非共有結合的に会合している1本の重鎖可変ドメイン及び1本の軽鎖可変ドメインの二量体からなる。これら2つのドメインが折り畳まれると、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、抗体に対する抗原結合特異性を与える6つの超可変ループ(重鎖及び軽鎖にそれぞれ3つのループ)が突出されるしかしながら、結合部位全体よりも親和性は低いものの、単一可変ドメイン(又は抗原に特異的な3つのみのHVRからなる半分のFv)であっても抗原を認識し、結合能力を有する。
「一本鎖Fv」は「sFv」又は「scFv」と略され、抗体VH及びVLドメインを含むと共に1本のポリペプチド鎖に連結される抗体断片である。好ましくは、sFvポリペプチドはVHとVLドメインとの間にポリペプチドリンカーを更に含み、sFvを所望の抗原結合構造に形成させる。sFvの概説について、The Pharmacology of Monoclonal Antibodies、第113巻、Rosenburg及びMoore編集、Springer-Verlag、New York、pp.269-315(1994)を参照する。
前記断片の「化学修飾」は、例えば、ポリエチレングリコールなどのポリ(アルキレン)グリコールの付加(「ポリエチレングリコール化、PEG化」)を含み、Fv、scFv、Fab、F(ab')2及びFab'のポリエチレングリコール化断片、即ち、Fv-PEG、scFv-PEG、Fab-PEG、F(ab')2-PEG及びFab'-PEGを含む。これらの断片はEGFR結合活性を有する。
好ましくは、前記抗体断片、特に抗原結合断片は、その由来抗体の重鎖可変領域又は軽鎖可変領域の一部の配列により構成され、或いはこれらを含む。前記一部の配列は、その由来抗体と同じ結合特異性及び十分な親和力を十分に保持している。BCMAに対して、好ましくは少なくともその由来抗体の親和力の1/100に相当する。より好ましい様態において、少なくとも1/10に相当する。このような抗体断片は、少なくとも5個のアミノ酸、好ましくはその由来抗体の配列の10、15、25、50及び100個の連続アミノ酸を含む。
本明細書において、モノクローナル抗体は、「キメラ」抗体(免疫グロブリン)を含み、これは、所望の生物学的活性を示す限りにおいて、重鎖及び/または軽鎖の一部が、特定の種に由来する、または特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同である一方、鎖の残部は、別の種に由来する、または別の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同であり、並びに、このような抗体の断片である(US 4,816,567や、Morrison ら、Proc. Nat. Acad. Sci. USA、81:6851-6855、1984を参照)。
非ヒト(例えば、マウス)抗体の「ヒト化」型は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最低限の配列を含むキメラ抗体である。従って、「ヒト化抗体」は、通常、可変ドメインフレームワーク領域がヒト抗体に発見された配列と交換した非ヒト抗体である。通常、ヒト化抗体において、抗体全体(CDRを除く)は、ヒト由来のポリヌクレオチドによりコードされ、又はこのような抗体(CDRを除く)と同じである。CDR(その一部又は全部が非ヒト生体に由来する核酸によりコードされる)がヒト抗体可変領域のβ-プリーツシート骨格に移植されて抗体が産生されるが、その特異性は移植されるCDRによって決定される。このような抗体の産生は、例えば、WO92/11018や、Jones、1986、Nature、321:522~525や、Verhoeyenら、1988、Science、239:1534-1536などに記載されている。ヒト化抗体は遺伝子工学免疫系を有するマウスを利用して産生してもよい(Roqueら、2004、Biotechnol. Prog.、20:639-654を参照)。
「ヒト抗体」は、ヒトから産生された抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有し、及び/又は本願に開示されたヒト抗体を産生するための任意の技術を利用して産生されるような抗体である。このヒト抗体の定義は非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明らかに排除した。ヒト抗体は、ファージ提示ライブラリーを含む、本分野における様々な既存技術を利用して産生してもよい。このような技術は、Hoogenboom及びWinter、分子生物学誌、227:381(1991)や、Marksら、分子生物学誌、222:581(1991)を参照する。得られたヒトモノクローナル抗体の製造方法は、Coleら、モノクローナル抗体及びがん治療、Alan R. Liss、p.77(1985)や、Boernerら、免疫学誌、147(1):86-95(1991)に記載されている。van Dijk及びvan de Winkel、現代薬学評論、5:368-74(2001)を更に参照する。ヒト抗体は、下記の方法により製造されてもよい。即ち、抗原を例えば、免疫異種移植マウス(xenomice)などの遺伝子組換え動物に投与して、修飾により抗原に応答し、このような抗体を活性化させて産生するが、その内因性遺伝子座が既に能力を失った(例えば、US 6,075,181及び6,150,584、XENOMOUSETM技術に関してを参照)。例えば、Liら、アメリカ国家科学院学報、103:3557-3562(2006)、ヒトB細胞ハイブリドーマ技術により産生されたヒト抗体に関してを更に参照する。
本発明の抗BCMA抗体は、マイクロ抗体であってもよい。マイクロ抗体は、CH3ドメインと連結されたscFvを含む最小化抗体様タンパク質である(Huら、1996、Cancer Res.、56:3055-3061)。本発明の抗BCMA抗体はドメイン抗体であってもよいが、例えば、US6,248,516を参照する。ドメイン抗体(dAb)は抗体の機能的結合ドメインであり、ヒト抗体dABの重鎖(VH)又は軽鎖(VL)の可変領域に対応するが、約13kDaの分子量又は無傷抗体の10分の1のサイズ未満である。dABは細菌、酵母及び哺乳動物細胞系を含む様々な宿主に十分に発現される。また、例えば、冷凍乾燥又は熱変性後などの苛酷条件においても、dAbは依然として高度的に安定であり、且つ活性を保持している。例えば、US 6,291,158、US 6,582,915、US 6,593,081、US 6,172,197、US 2004/0110941、EP 0368684、US 6,696,245、WO04/058821、WO04/003019及びWO03/002609を参照する。
本発明の抗BCMA抗体のHCDR1はGX1TX2X3X4X5X6(SEQ ID NO:1)を含んでもよいが、X1がF又はYであり、X2がF又はSであり、X3がS、D、T、N又はAであり、X4がY、D、S又はAであり、X5がY、C又はHであり、X6がD、A又はYである。幾つかの実施形態において、X1がFであり、X2がFであり、X3がA又はDであり、X4がDであり、X5がY、C又はHであり、X6がAである。幾つかの実施形態において、X1がYであり、X2がFであり、X3がTであり、X4がS又はAであり、X5がYであり、X6がA又はYである。例示的なHCDR1のアミノ酸配列は、SEQ ID NO:12、20、28、36、44、52、60、68、76、84、92又は100の何れか1つに示される。
本発明の抗BCMA抗体のHCDR2はIX1X2X3X4X5X6X7(SEQ ID NO:2)を含んでもよいが、X1がS、N又はYであり、X2がW、T、A又はPであり、X3がN又はGであり、X4がS又はNであり、X5がD、G又はVであり、X6がT、N、S、D又はHであり、X7がI、M又はTである。幾つかの実施形態において、X1がSであり、X2がWであり、X3がNであり、X4がSであり、X5がD又はVであり、X6がT、N、H又はSであり、X7がIである。好ましくは、これらの実施形態において、X5がDであり、X6がH又はNである。幾つかの実施形態において、X1がNであり、X2がT又はAであり、X3がGであり、X4がNであり、X5がGであり、X6がNであり、X7がT又はIである。例示的なHCDR2のアミノ酸配列は、SEQ ID NO:13、21、29、37、45、53、61、69、77、85、93又は101の何れか1つに示される。
本発明の抗BCMA抗体のHCDR3はARGGX1X2X3X4X5X6X7YYX8YYMDV(SEQ ID NO:3)を含んでもよいが、X1がS又はRであり、X2がI又はLであり、X3がT又はEであり、X4がG又はLであり、X5がN又はDであり、X6がI又はVであり、X7がF又はYであり、X8がY又はFである。幾つかの実施形態において、X1がRであり、X2がLであり、X3がEであり、X4がLであり、X5がDであり、X6がI又はVであり、X7がYであり、X8がFである。幾つかの実施形態において、本発明の抗BCMA抗体のHCDR3はX1X2X3X4X5X6X7FDY(SEQ ID NO:4)を含んでもよいが、X1がA又はTであり、X2がK、R又はTであり、X3がV又はIQであり、X4がS、V又はAであり、X5がG、S又はAであり、X6がA又はSであり、X7がV、S、Y又はTである。幾つかの実施形態において、本発明の抗BCMA抗体のHCDR3はAKDIFSPTGDX1Y(SEQ ID NO:5)を含んでもよいが、X1がG又はDである。例示的なHCDR3のアミノ酸配列はSEQ ID NO:14、22、30、38、46、54、62、70、78、86、94又は102の何れか1つに示される。
本発明の抗BCMA抗体のLCDR1はQX1IX2X3X4(SEQ ID NO:6)を含んでもよいが、X1がS又はDであり、X2がH、I、S又はRであり、X3がS、N、S又はTであり、X4がY、F又はNである。幾つかの実施形態において、X1がS又はDであり、X2がIであり、X3がSであり、X4がS又はTであり、X5がYである。幾つかの実施形態において、本発明の抗BCMA抗体のLCDR1はQSX1X2X3X4X5X6X7X8Y(SEQ ID No:7)を含んでもよいが、X1がL、V又はFであり、X2がL又はVであり、X3がH、Y又はSであり、X4がS又はSSであり、X5がN、Q又はDであり、X6がG又はNであり、X7がY、K又はNであり、X8がN又はTである。幾つかの実施形態において、X1がL又はVであり、X2がLであり、X3がHであり、X4がS又はSSであり、X5がN、Q又はDであり、X6がG又はNであり、X7がKであり、X8がNである。例示的なLCDR1のアミノ酸配列はSEQ ID NO:15、23、31、39、47、55、63、71、79、87、95又は103の何れか1つに示される。
本発明の抗BCMA抗体のLCDR2はX1X2S(SEQ ID NO:8)を含んでもよいが、X1がL、S、W、G、A又はKであり、X2がG、A又はLである。幾つかの実施形態において、X1がS、W、G又はAであり、X2がAである。例示的なLCDR2のアミノ酸配列はSEQ ID NO:16、24、32、40、48、56、64、72、80、88、96又は104の何れか1つに示される。
本発明の抗BCMA抗体のLCDR3はX1X2X3X4X5X6X7X8X9(SEQ ID NO:9)を含んでもよいが、X1がM、Q又はLであり、X2がQ、G又はHであり、X3がA、S、Y、R又はHであり、X4がL、F、Y、T又はNであり、X5がQ、S、R、I又はHであり、X6がT、I、P、V、W又はYであり、X7がP又はLであり、X8がY、F、L又はPであり、X9がT又はIである。幾つかの実施形態において、X1がQであり、X2がQであり、X3がS又はYであり、X4がF、Y又はSであり、X5がS又はRであり、X6がI又はPであり、X7がP又はLであり、X8がY、L又はFであり、X9がTである。例示的なLCDR3のアミノ酸配列はSEQ ID NO:17、25、33、41、49、57、65、73、81、89、97又は105の何れか1つに示される。
幾つかの実施形態において、本発明の抗BCMA抗体は、SEQ ID NO:1に示されるHCDR1、SEQ ID NO:2に示されるHCDR2、及びSEQ ID NO:3、4又は5に示されるHCDR3、及び/又はSEQ ID NO:6又は7に示されるLCDR1、SEQ ID NO:8に示されるLCDR2、及びSEQ ID NO:9に示されるLCDR3を含む。好ましくは、本発明の抗BCMA抗体は、SEQ ID NO:12、20、28、36、44、52、60、68、76、84、92又は100の何れか1つに示されるHCDR1、SEQ ID NO:13、21、29、37、45、53、61、69、77、85、93又は101の何れか1つに示されるHCDR2、及びSEQ ID NO:14、22、30、38、46、54、62、70、78、86、94又は102の何れか1つに示されるHCDR3、及び/又はSEQ ID NO:15、23、31、39、47、55、63、71、79、87、95又は103の何れか1つに示されるLCDR1、SEQ ID NO:16、24、32、40、48、56、64、72、80、88、96又は104の何れか1つに示されるLCDR2、及びSEQ ID NO:17、25、33、41、49、57、65、73、81、89、97又は105の何れか1つに示されるLCDR3を含む。
より好ましくは、本発明の抗BCMA抗体は、下記組A~組Lの何れか1組に示されるHCDR1、HCDR2及びHCDR3を含み、
及び/又は下記組1~組12の何れか1組に示されるLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む。
及び/又は下記組1~組12の何れか1組に示されるLCDR1、LCDR2及びLCDR3を含む。
本発明の抗BCMA抗体のVHのFR1は抗体7E11、8H7、11B10、11G1、15A7、15H6、18D10、20A2又は23C4のFR1から選ばれてもよく、FR2は抗体7E11、8H7、11B10、11G1、15A7、15H6、18D10又は20A2のFR2から選ばれてもよく、FR3は抗体7E11、8H7、11B10、11G1、15A7、18D10、20A2、23C4又は31F5的FR3から選ばれてもよく、FR4は抗体7E11、8H7、11B10、11G1、15A7、15H6、20A2又は31F5のFR4から選ばれてもよく、及び/又はVLのFR1は抗体7E11、8H7、11B10、11G1、15A7、15H6、18D10又は20A2のFR1から選ばれてもよく、FR2は抗体7E11、8H7、15A7、15H6、20A2、23C4又は31F5のFR2から選ばれてもよく、FR3は抗体7E11、8H7、11B10、11G1、15A7、18D10、20A2、23C4、27A7又は31F5のFR3から選ばれてもよく、FR4は抗体7E11、11B10、11G1、15A7又は18D10のFR4から選ばれてもよい。
好ましい実施形態において、本発明の抗BCMA抗体のVH及びVLのFR領域は、抗体7E11、8H7、11B10、11G1、15A7、15H6、18D10、20A2、20A9、23C4、27A7及び31F5から選ばれる何れか1つの抗体のVH及びVLのFR領域である。より好ましくは、このような抗体のHCDRは前記組A~組Lの何れか1組から選ばれ、LCDRは前記組1~組12の何れか1組から選ばれる。より好ましくは、このような抗体のCDRは前記組a~組lの何れか1組から選ばれる。
幾つかの実施形態において、本発明の抗BCMA抗体のVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:10、18、26、34、42、50、58、66、74、82、90及び98の何れか1つに示され、及び/又はVLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:11、19、27、35、43、51、59、67、75、83、91及び99の何れか1つに示される。好ましくは、本発明の抗BCMA抗体のVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:10に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:11に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:18に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:19に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:26に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:27に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:34に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:35に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:42に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:43に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:50に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:51に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:58に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:59に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:66に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:67に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:74に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:75に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:82に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:83に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:90に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:91に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:98に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:99に示される。
幾つかの実施形態において、本発明の抗体の重鎖定常領域のアミノ酸配列はSEQ ID NO:106に示され、及び/又は軽鎖定常領域のアミノ酸配列はSEQ ID NO:107に示される。
本発明の抗体はキメラ抗体、ヒト化抗体又は完全ヒト抗体であってもよく、好ましくは完全ヒト抗体である。本発明の実施例に係る抗体は完全ヒト抗体と理解されるべきである。
抗体活性に実質的な影響を与えない前提で、当業者は本発明の配列に対して1個以上(例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10個以上)のアミノ酸を置換、付加及び/又は欠失して、前記抗体又はその機能性断片配列の変異体を得ることができる。これらは本発明により請求される範囲内に含まれると見なされる。例えば、可変領域のFR及び/又はCDR領域で類似する特性を有するアミノ酸を置換する。置換は保存的な置換が好ましい。保存的な置換できるアミノ酸残基は本分野で周知されている。幾つかの実施形態において、本発明に係る変異体の配列はその由来配列と少なくとも95%、96%、97%、98%又は99%の同一性を有してもよい。本発明に係る配列同一性は配列分析ソフトウエアを利用して測定できる。例えば、デフォルト引数を使用するコンピュータプログラムBLAST、特にBLASTP又はTBLASTNが挙げられる。
本発明の抗BCMA抗体は機能が影響されるように修飾されてもよい。本発明は修飾を有するグリコシル化様態の抗BCMA抗体を含む。修飾により望まないグリコシル化部位を除去してもよく、或いはオリゴ糖鎖にフコース部分を存在させないことで抗体の依存性細胞傷害(ADCC)機能を強化してもよく、或いはガラクトシル化修飾により補体依存性細胞傷害(CDC)を改変してもよい。
本発明の抗BCMA抗体は、通常、約10-9~約10-13Mの親和力定数を有してもよい。
例えば、本分野でよく知られているハイブリドーマ技術など、本分野の常用方法により本発明の抗BCMA抗体を製造してもよい。或いは、本発明の抗BCMA抗体はハイブリドーマ細胞系を除く細胞系に発現してもよい。本発明の抗体をコードする配列で適切な哺乳動物宿主細胞を変換してもよい。変換は、例えば、ポリヌクレオチドをウイルス(又はウイルスベクター)にパッケージングしてウイルス(又はベクター)で宿主細胞に対して形質導入を行うことなどを含む、任意の既知方法を採用してもよい。使用される変換工程は変換する宿主によって決定される。ヘテロポリヌクレオチドを哺乳動物細胞に導入するための方法は本分野においてよく知られており、デキストランにより仲介されるトランスフェクション、リン酸カルシウム沈殿、ポリブレンにより仲介されるトランスフェクション、プロトプラスト融合、エレクトロポレーション、ポリヌクレオチドのリポソームへのカプセル化、及びDNAの細胞核への直接マイクロインジェクションなどを含む。発現するための宿主として利用できる哺乳動物細胞系は本分野においてよく知られており、アメリカンタイプカルチャーコレクション(ATCC)から入手できる様々な不死化細胞系を含むが、これらに限定されず、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞、HeLa細胞、ベビーハムスター腎臓(BHK)細胞、サル腎臓細胞(COS)、ヒト肝細胞がん細胞(例えば、HepG2)などを含むが、これらに限定されない。特に好ましい細胞系は、高発現レベルを有するとともに、基本的なBCMA結合特性を有する抗体を産生細胞系を特定することで選定する。
抗BCMA抗体をコードするポリヌクレオチド配列
本発明は、本発明に係る抗BCMA抗体をコードするポリヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供する。本明細書は重鎖可変領域、軽鎖可変領域、重鎖、軽鎖及び各CDRをコードするポリヌクレオチド配列を提供する。
本発明は、本発明に係る抗BCMA抗体をコードするポリヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供する。本明細書は重鎖可変領域、軽鎖可変領域、重鎖、軽鎖及び各CDRをコードするポリヌクレオチド配列を提供する。
本発明の核酸分子は一本鎖及び二本鎖形態のDNAとRNA、及び対応する相補配列を含む。DNAは、例えば、cDNA、ゲノムDNA、化学合成によるDNA、PCR増幅によるDNA及びこれらの組合せを含む。本発明の核酸分子は全長遺伝子又はcDNA分子及びその断片の組合せを含む。本発明の核酸はヒト由来が好ましいが、本発明において非ヒト由来の核酸も含む。
本発明において、分離された核酸分子は単独断片の形態又は大きい核酸コンストラクトの成分とする核酸分子である。好ましい一実施形態において、核酸には汚染性を持つ内因性物質が殆ど含まない。好ましくは、核酸分子は、ほぼ純粋な形態で少なくとも1回単離され、且つ標準的な生化学方法によりその成分であるヌクレオチド配列を認識、操作及び回収できるような量又は濃度を有するDNA又はRNAに由来する。好ましくは、前記配列は、内部非翻訳配列又はイントロン(代表的に真核遺伝子に存在)による中断を受けていないオープンリーディングフレーム形態で提供及び/又は構築される。非翻訳DNAの配列はオープンリーディングフレームの5'又は3’部位に存在してもよく、同様にコード領域の操作又は発現に影響しない。
本発明は、適切な苛酷条件、好ましくは高度な苛酷条件で本明細書に係る抗BCMA抗体をコードする核酸とハイブリダイゼーションを行う核酸を更に含む。ハイブリダイゼーション条件の選定に影響する基本パラメータ及び設計の適切条件に関する指導は、Sambrook、Fritsch及びManiatis(1989、Molecular Cloning:A Laboratory Manual、Cold Spring Harbor Laboratory Press、Cold Spring Harbor、N.Y.、第9章及び第11章、並びにCurrent Protocols in Molecular Biology、1995、Ausubelら編集、John Wiley & Sons, Inc.、2.10節及び6.3-6.4節)を参照する。
本明細書に記載される通り、通常、カセット変異導入法又はPCR変異導入法又は本分野でよく知られているその他の技術を利用して、抗BCMA抗体をコードするDNAでヌクレオチドの部位特異的変異導入により変異体をコードするDNAを産生し、その後細胞培養物で組換えDNAを発現して、本発明に係る変異体を製造した。しかしながら、確定された技術を利用してインビトロで合成することで、約100~150個にも達する残基を含む抗原結合断片を製造してもよい。
当業者に理解されるように、遺伝コードの縮重により大量の核酸を製造できるが、このような核酸の全ては本発明の抗BCMA抗体又はその抗原結合断片をコードする。従って、特定のアミノ酸配列が既に同定された場合、当業者はタンパク質をコードするアミノ酸配列を改変しない方式で1つ又は複数のコドンを簡単に修飾する配列により、任意数の異なる核酸を製造できる。
本発明は、上記のようなポリヌクレオチドを少なくとも1つ含むプラスミド、発現ベクター、転写カセット又は発現カセット方式の発現系及びコンストラクトを更に提供する。また、本発明は、前記発現系又はコンストラクトを含む宿主細胞を提供する。
任意の宿主細胞に使用される発現ベクターは、通常、プラスミドの維持及び外因性ヌクレオチド配列のクローンと発現に使用される配列を含む。前記配列(幾つかの実施形態において「隣接配列」と総称される)は通常、1つ又は複数の下記ヌクレオチド配列、即ち、プロモーター、1つ又は複数のエンハンサー配列、複製起点、転写終結配列、供与体及び受容体スプライス部位を含む完全イントロン配列、ポリペプチド分泌に利用されるリーダー配列をコードする配列、リボソーム結合部位、ポリアデニル化配列、発現しようとする抗体をコードする核酸を挿入するためのマルチコネクソン領域及び任意の標識エレメントを含む。下記によりこれらの配列をそれぞれ記述する。
ベクターは、「タグ」コード配列、即ち、抗BCMA抗体コード配列の5'又は3'末端に位置するオリゴヌクレオチド分子を任意に含む。オリゴヌクレオチド配列はポリヒスチジン(例えば、6His)又は別の「タグ」、例えば、FLAG、HA(インフルエンザウイルス血球凝集素)又はmyc(これらについては、市販の抗体に存在する)などをコードする。このタグは代表的には、ポリペプチドの発現の際にポリペプチドと融合すると共に、宿主細胞により抗BCMA抗体のアフィニティ精製又は検出のための手段として機能し得る。アフィニティ精製は、例えば、これらのタグに対応する抗体をアフィニティーマトリックスとして利用するカラムクロマトグラフィーにより実施される。タグは、その後、任意に、例えば、切断のためにに特定のペプチダーゼを利用する様々な方式により、精製されたBCMA抗BCMA抗体から除去されてもよい。
隣接配列は、相同(即ち、宿主細胞と同じ種及び/又は株由来)、異種(即ち、宿主細胞種又は株以外の種由来)、ハイブリッド(即ち、2つ以上の供給源由来の隣接配列の組合せ)、合成又は天然であってもよい。同様に、隣接配列の供給源が、この隣接配列が宿主細胞のメカニズムで機能すると共に宿主細胞のメカニズムにより活性化される前提で、任意の原核又は真核生体、任意の脊椎動物又は無脊椎動物生体又は任意の植物であってもよい。
複製起点は代表的には、市販される原核発現ベクターの一部であり、このような起点はベクターの宿主細胞における増幅に繋がる。選定されるベクターが複製起点部位を含まない場合、既知の配列に基づいて化学合成によりベクターに連結してもよい。例えば、プラスミドpBR322(New England Biolabs、Beverly、MA)に由来する複製起点は、ほとんどグラム陰性菌に適し、様々なウイルス起点(例えば、SV40、ポリオーマウイルス、アデノウイルス、水疱性口内炎ウイルス(VSV)又は例えば、HPV又はBPVなどのパピローマウイルス)は哺乳動物細胞におけるクローニングベクターに有用である。哺乳動物発現ベクターは通常、複製起点の成分を必要としない(例えば、ウイルス初期プロモーターをも含むことから、一般的にSV40起点は単独で用いられる)。
転写終結配列は代表的にポリペプチドコード領域の3'末端に位置して、転写を終結させる。原核細胞における転写終結配列は、通常、G-Cリッチ断片であり、ポリT配列が続く。
選択マーカー遺伝子は、選択性の培養培地において増殖される宿主細胞の生存および増殖に必要なタンパク質をコードする。代表的な選択マーカー遺伝子は、(a)抗生物質又はその他の毒素(例えば、原核宿主細胞については、アンピシリン、テトラサイクリン又はカナマイシン)に対する耐性を付与するか、(b)細胞の栄養要求性欠損を補完するか、或いは(c)複合物又は決定された培地により得られない重要栄養素を供給する、タンパク質をコードする。特異性の任意の標識はカナマイシン耐性遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子及びテトラサイクリン耐性遺伝子である。有利なことに、ネオマイシン耐性遺伝子も原核及び真核宿主細胞における選択に用いることができる。
リボソーム結合部位は、通常rnRNA の翻訳開始に必要とされ、且つShine-Dalgarno配列(原核生物)又はKozak配列(真核生物)により特徴付けられる。このエレメントは代表的にプロモーターの3'部位及び発現されるべきポリペプチドのコード配列の5'部位に位置する。
本発明の発現及びクローニングベクターは代表的に、宿主生体により認識されると共に抗BCMA抗体をコードする分子と操作可能に連結されるプロモーターを含む。プロモーターは、構造遺伝子の転写を制御する構造遺伝子(通常、約100~1000bp以内)の開始コドン上流に位置する非転写配列である。
本分野において、酵母宿主と一緒に使用される適切なプロモーターもよく知られている。酵母エンハンサーは酵母プロモーターとともに有利に用いられる。哺乳動物宿主細胞と一緒に使用される適切なプロモーターはよく知られており、例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス(例えば、アデノウイルス2)、牛パピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、B型肝炎ウイルス及び最も好ましいシミアンウイルス40(SV40)などのウイルスゲノムにより得られたプロモーターを含むが、これらに限定されない。その他の適切な哺乳動物プロモーターは、例えば、熱ショックプロモーター、アクチンプロモーターなどの異種哺乳動物プロモーターを含む。
エンハンサー配列をベクターに挿入して、高等真核生物により本発明の抗BCMA抗体を構成する軽鎖又は重鎖をコードするDNAの転写を増加させる。エンハンサーはプロモーターに作用して転写を増加させるDNAのシス作用エレメントであり、長さが通常約10~300bpである。エンハンサーは相対的な方向及びロケーションの独立性を有し、既に転写ユニットの5’及び3’部位に見出されている。哺乳動物遺伝子から得られる幾つかのエンハンサー配列は公知であり、例えば、グロブリン、エラスターゼ、アルブミン、アルファフェトプロテイン及びインスリンのエンハンサー配列である。しかしながら、代表的にウイルス由来のエンハンサーを使用する。本分野においてよく知られているSV40エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、ポリオーマウイルスエンハンサー及びアデノウイルスエンハンサーは、真核プロモーターを活性化させる例示的なエンハンサーエレメントである。
本発明の発現ベクターは開始ベクター(例えば、市販ベクター)により構築されてもよい。このようなベクターは所望の全ての隣接配列を含んでも含まなくてもよい。本明細書に記載される隣接配列の1つ又は複数はベクターに存在していない場合、個々に入手してベクターと連結してもよい。隣接配列の各々を得るために用いた方法は、当業者に周知である。
ベクターを構築して、抗BCMA抗体を含む軽鎖、重鎖又は軽鎖及び重鎖をコードする核酸分子をベクターの適切な部位に挿入した後、完成されたベクターを適切な宿主細胞に挿入して、増幅及び/又はポリペプチド発現に利用する。選択された宿主細胞への抗BCMA抗体についての発現ベクターの形質転換は、トランスフェクション、感染、リン酸カルシウム共沈殿、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、リポフェクション、DEAE-デキストラン媒介性トランスフェクション又はその他の既知技術を含む周知の方法によって達成され得る。選定された方法の一部は使用される宿主細胞のタイプに依存する。
宿主細胞は適切な条件で培養された場合、抗BCMA抗体を合成して、その後、抗BCMA抗体は培地から(宿主細胞がこの抗体を培地に分泌した場合)収集され、又は(分泌しない場合)この抗体を産生する宿主細胞から直接的に収集される。適切な宿主細胞は上記に記載される通りである。
治療目的に利用される抗BCMA抗体の用途
本明細書に記載される抗BCMA抗体の全ての様態は本明細書に記載される様々な病状及び疾患を治療するための薬物の製造に利用できるが、前記病状及び疾患は特に病状がBCMAを発現するB細胞(特にメモリーB細胞及びプラズマB細胞)に関連する疾患又は病状である。これらの疾患、特に病状は、BCMAを比較的に高いレベルで悪性形質細胞及び意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症(MGUS)形質細胞に発現する。幾つかの実施形態において、前記病状及び疾患は、B細胞関連がんであり、形質細胞性白血病、形質細胞性腫瘍、B細胞前リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、B細胞非ホジキンリンパ腫(NHL)、急性骨髄性白血病(AML)、慢性骨髄性白血病(CML)、急性リンパ性白血病(ALL)、慢性リンパ性白血病(CLL)、濾胞性リンパ腫(濾胞性非ホジキンリンパ腫タイプを含む)、バーキットリンパ腫(風土病バーキットリンパ腫、散発性バーキットリンパ腫)、辺縁帯リン パ腫(粘膜関連リンパ組織、MALT/MALToma、単球様B細胞リンパ腫、脾リンパ腫合併絨毛状リンパ球)、マントル細胞リンパ腫、大細胞型リンパ腫(びまん性大細胞、びまん性混合細胞、免疫芽球性リンパ腫、縦隔原発B細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫-肺B細胞)、小リンパ球性リンパ腫(SLL)、前駆B-リンパ芽球性リンパ腫、骨髄性白血病(顆粒球、骨髄性、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、亜急性骨髄性白血病、骨髄肉腫、緑色腫、顆粒球性肉腫、急性前骨髄球性白血病、急性単球性白血病)、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症又はその他のB細胞リンパ腫に限定されない。
本明細書に記載される抗BCMA抗体の全ての様態は本明細書に記載される様々な病状及び疾患を治療するための薬物の製造に利用できるが、前記病状及び疾患は特に病状がBCMAを発現するB細胞(特にメモリーB細胞及びプラズマB細胞)に関連する疾患又は病状である。これらの疾患、特に病状は、BCMAを比較的に高いレベルで悪性形質細胞及び意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症(MGUS)形質細胞に発現する。幾つかの実施形態において、前記病状及び疾患は、B細胞関連がんであり、形質細胞性白血病、形質細胞性腫瘍、B細胞前リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、B細胞非ホジキンリンパ腫(NHL)、急性骨髄性白血病(AML)、慢性骨髄性白血病(CML)、急性リンパ性白血病(ALL)、慢性リンパ性白血病(CLL)、濾胞性リンパ腫(濾胞性非ホジキンリンパ腫タイプを含む)、バーキットリンパ腫(風土病バーキットリンパ腫、散発性バーキットリンパ腫)、辺縁帯リン パ腫(粘膜関連リンパ組織、MALT/MALToma、単球様B細胞リンパ腫、脾リンパ腫合併絨毛状リンパ球)、マントル細胞リンパ腫、大細胞型リンパ腫(びまん性大細胞、びまん性混合細胞、免疫芽球性リンパ腫、縦隔原発B細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫-肺B細胞)、小リンパ球性リンパ腫(SLL)、前駆B-リンパ芽球性リンパ腫、骨髄性白血病(顆粒球、骨髄性、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、亜急性骨髄性白血病、骨髄肉腫、緑色腫、顆粒球性肉腫、急性前骨髄球性白血病、急性単球性白血病)、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症又はその他のB細胞リンパ腫に限定されない。
幾つかの実施形態において、前記病状及び疾患はB細胞に関連する自己免疫疾患であり、全身性エリテマトーデス(SLE)、関節リウマチ(RA)、多発性硬化症(MS)、シェーグレン症候群、免疫仲介の血小板減少症、溶血性貧血、水疱性類天疱瘡、重症筋無力症、I型糖尿病、グレーブス病、アディソン病、落葉状天疱瘡、乾癬、乾癬性関節炎及び強直性脊椎炎などを含むが、これらに限定されない。
診断用途、測定及び試薬キット
本発明の抗BCMA抗体は診断測定に利用でき、例えば、組織(例えば、骨髄)又は細胞(例えば、形質細胞)に発現するBCMAを測定により検出及び/又は定量する。抗BCMA抗体はBCMAの疾患における作用の鋭意研究に利用できる。抗BCMA抗体はBCMAの単独重合及び/又はヘテロ重合受容体複合物の形成における作用、及び前記BCMA受容体複合物の疾患における作用の鋭意研究に利用できる。
本発明の抗BCMA抗体は診断測定に利用でき、例えば、組織(例えば、骨髄)又は細胞(例えば、形質細胞)に発現するBCMAを測定により検出及び/又は定量する。抗BCMA抗体はBCMAの疾患における作用の鋭意研究に利用できる。抗BCMA抗体はBCMAの単独重合及び/又はヘテロ重合受容体複合物の形成における作用、及び前記BCMA受容体複合物の疾患における作用の鋭意研究に利用できる。
BCMAの血清含有量は予後のものであってもよく、腫瘍量を測定するための新しいツールでもある(SanchezEら、Serum B-cell maturationantigen is elevated in multiple myeloma and correlates with disease status and survival、Br J Haematology、158、727-38(2012))。本発明の実施形態は、可溶性BCMAが腫瘍細胞における膜結合BCMAの潜在的な代用品であるかを測定するために、診断測定及び試薬キットを含み、。
本発明の抗BCMA抗体はBCMAに関連する疾患及び/又は病状を検出、診断又は監視するための診断目的に利用できる。本発明は当業者によく知られている代表的な免疫組織学方法によりサンプルにおけるBCMAの存在を検出することを提供する(例えば、Tijssen、1993、Practice and Theory of Enzyme Immunoassays、第15巻、R.H. Burdon及びP.H.vanKnippenberg編集、Elsevier、Amsterdamや、Zola、1987、Monoclonal Antibodiesや、A Manual of Techniques、147-158ページ、CRC Press、Inc.や、Jalkanenら、1985、J. Cell. Biol.、101:976-985や、Jalkanenら、1987、J. Cell Biol.、105:3087-3096)。インビボ又はインビトロでBCMAを検出できる。BCMAの存在検出に適する方法の実例はELISA、FACS、RIAなどを含む。
診断応用について、通常、検出できる標識基により抗BCMA抗体を標識する。適切な標識基は、下記のもの、即ち、放射性同位体又は放射性核種(例えば、3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I)、発蛍光団(例えば、FITC、ローダミン、ランタニドリン光剤)、酵素団(例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β-ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ)、化学発光団、ビオチン団又は二次レポーターにより認識された予定ポリペプチドエピトープ(例えば、ロイシンジッパー配列、二次抗体に利用される結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ)を含むが、これらに限定されない。幾つかの実施形態において、標識基は各長さのサブスペーサーにより抗BCMA抗体とカップリングして、潜在的な立体障害を低減させる。タンパク質を標識するための各方法は本分野においてよく知られていると共に、本発明を実施できる。
本発明の一様態はBCMAを認識又は発現する細胞を提供する。具体的な一実施形態において、標識基で抗体を標識すると共に、標識された抗体とBCMAとの結合を検出する。具体的な別の実施形態において、インビボで抗体とBCMAとの結合を検出する。具体的な別の実施形態において、本分野においてよく知られている技術により抗体-BCMAを分離及び測定する。
本発明の別の様態は本発明の抗体に対してBCMAと競合的に結合する試験分子の存在の検出を提供する。前記測定の実例は、試験分子が存在する、又は存在しない場合の、BCMAを一定量で含む溶液における遊離抗体の量の検出に関する。遊離抗体(即ち、BCMAと結合していない抗体)の量の増加は、該抗体に対して試験分子がBCMAと競合的に結合できることを示す。一実施形態において、標識基で抗体を標識する。或いは、試験分子を標識すると共に、抗体が存在する、又は存在しない場合に遊離試験分子の量を監視する。
医薬組成物、投与経路
本発明は、治療有効量の1種又は複数種の本発明の抗BCMA抗体と、薬学的に許容される希釈剤、ベクター、可溶化剤、乳化剤、防腐剤及び/又はアジュバントとを含む医薬組成物を提供する。
本発明は、治療有効量の1種又は複数種の本発明の抗BCMA抗体と、薬学的に許容される希釈剤、ベクター、可溶化剤、乳化剤、防腐剤及び/又はアジュバントとを含む医薬組成物を提供する。
幾つかの実施形態において、医薬組成物に許容される希釈剤、ベクター、可溶化剤、乳化剤、防腐剤及び/又はアジュバントなどは、好ましくは、採用される用量及び濃度で受験者に対して無毒である。幾つかの実施形態において、医薬組成物は、例えば、組成物のpH値、浸透性、粘度、清澄度、色、等張性、におい、無菌性、安定性、溶解又は放出速度、吸収又は浸透を改善、維持又は保留するための物質を含んでもよい。これらの物質は既存技術でよく知られており、例えば、REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES、第18版、A. R. Genrmo編集、1990、Mack Publishing Companyを参照する。所望の投与経路、送達方式及び必要とされる用量によって最適な医薬組成物を決定する。
本発明の医薬組成物は非経口送達で使用してもよい。或いは、組成物は吸入又は消化器(例えば、経口)送達で使用してもよい。前記薬学的に許容される組成物は本分野の技術により製造する。
その他の医薬組成物は当業者にとって明らかであり、持続的に又は制御的に放出される送達調製物に抗BCMA抗体が含まれる調製物を含む。幾つかのその他の持続的又は制御可能な送達方式を提供するための技術(例えば、リポソームベクター、生分解性微粒子又は多孔質ビーズ及びデポ注射)も当業者によく知られている。
インビボで投与する医薬組成物は、通常、無菌製剤の形態で提供する。無菌ろ過膜によりろ過することで殺菌を実現する。組成物を凍結乾燥する場合、凍結乾燥及び再構成の前に又はその後にこの方法により殺菌する。非経口投与に利用される組成物は凍結乾燥の形態又は溶液で保存できる。非経口組成物は、通常、無菌アクセスポートを有する容器、例えば皮下注射針によって穿通可能な栓を有する静脈内溶液バッグ、またはバイアルに入れられる。
医薬組成物は、調製されると、溶液、懸濁液、ゲル、乳液、固体、結晶、或いは脱水又は凍結乾燥粉末の形態で無菌バイアルに保存される。前記調製物はレディー・ツー・ユースの形態又は投与直前再構成の形態(例えば、凍結乾燥)のいずれで保存できる。本発明は単回用量投与単位を生成するための試薬キットを更に提供する。本発明の試薬キットは乾燥タンパク質を有する第1容器と含水調製物を有する第2容器をそれぞれ含む。本発明の幾つかの実施形態において、シングルチャンバー及びマルチチャンバープレフィルドシリンジ(例えば、液体用シリンジ及び凍結乾燥用シリンジ)を含む試薬キットを提供する。
本発明は、本発明の何れか1つの実施形態に係る抗BCMA抗体又はその抗原結合断片又はその医薬組成物を投与することで、患者(特に患者のB細胞関連疾患、例えば、B細胞関連がん及び自己免疫疾患)を治療する方法を提供する。
本明細書において、用語「患者」、「被験者」、「個体」、「対象」は互いに交換して使用できるが、任意の生体を含み、好ましくは動物であり、より好ましくは哺乳動物(例えば、ラット、マウス、イヌ、ネコ、ウサギなど)であり、最も好ましくはヒトである。「治療」は、被験者に対して本明細書に記載される治療方案を採用して、少なくとも1つの陽性治療効果(例えば、がん細胞数減少、腫瘍体積減少、がん細胞の周辺器官への浸潤速度低下又は腫瘍転移又は腫瘍成長の速度低下)を得ることである。患者を有効的に治療する治療方案は様々な要素(例えば、患者の疾患状態、年齢、体重及び療法の被験者の抗がん反応を活性化させる能力)によって変更する。
採用しようとする本発明の抗BCMA抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物の治療有効量は、例えば、治療程度及び目標によって決定される。当業者に理解されるように、治療に使用される適切な用量レベルは部分的に送達される分子、適応症、投与経路及び患者の大きさ(体重、体表又は器官の大きさ)及び/又は状況(年齢及び一般健康状況)によって変化する。幾つかの実施形態において、最適の治療効果を得るために、臨床医が投薬量を設定して、投与経路を改変してもよい。
投与頻度は使用される調製物における特定の抗BCMA抗体の薬物動態パラメータに依存する。代表的には、臨床医は組成物を所望の効果を実現する投薬量まで投与する。従って、組成物は1回用量として投与してもよく、或いは2回以上の用量(必要とされる分子を同じ量で含んでもよく又は含まなくてもよい)として経時的に、または移植デバイス又はカテーテルを介して連続注入として投与してもよい。
医薬組成物の投与経路は、持続放出システムによるかまたは移植デバイスによる、例えば、経口、静脈内、腹膜内、脳内(脳実質内)、脳室内、筋肉内、眼内、動脈内、門脈又は病巣内の経路による注射を通じた公知の方法に従う。
下記は具体的な実施例により本発明を説明する。これらの実施例は説明するためのものであり、意図的に本発明の範囲を限定するものではない。実施例に使用される方法及び材料は別途で断りのない限り、本分野でよく知られている材料及び方法である。
実施例1:免疫マウスに抗ヒトBCMAのモノクローナル抗体を産生
ヒトBCMA全長タンパク質(配列はUniprotデータベースを参照、番号Q02223)を発現する発現ベクターpcDNA3.1(+)を利用して、6週齢の免疫グロブリンヒト化マウスAceMouseに対して免疫を行った。5回目ブースター免疫は商品化の組換えヒトBCMA抗原タンパク質(Fcタグ、製品番号CS79、仕入先Novoprotein)及び標準完全フロイントアジュバントを利用して25μgヒト組換えBCMAタンパク質抗原/マウスの用量で行った。
ヒトBCMA全長タンパク質(配列はUniprotデータベースを参照、番号Q02223)を発現する発現ベクターpcDNA3.1(+)を利用して、6週齢の免疫グロブリンヒト化マウスAceMouseに対して免疫を行った。5回目ブースター免疫は商品化の組換えヒトBCMA抗原タンパク質(Fcタグ、製品番号CS79、仕入先Novoprotein)及び標準完全フロイントアジュバントを利用して25μgヒト組換えBCMAタンパク質抗原/マウスの用量で行った。
実施例2:免疫化後のマウス血清に対して酵素結合免疫吸着測定法により検出
PBSでヒト組換えBCMA抗原タンパク質(Novoprotein、製品番号CS79)を0.5ng/μLとなるように希釈させ、Maxisorpの96ウェルフラットベースELISA用プレートに抗原を100μL/ウェルで入れて、ラップで密封してから、4℃で一晩置いた。翌日、抗原を捨ててから、PBS(200μL/ウェル)で1回洗浄し、更にPBSを捨ててから、吸取紙で水分を拭き取り、各ウエルに200μLブロッキングバッファー(10%ウシ胎児血清を含むPBS)を入れて、室温で2時間ブロッキングした。ブロッキング終了後、ブロッキングバッファーを捨て、吸取紙で水分を拭き取った。100μL希釈液(5%ウシ胎児血清を含むPBS)を入れ、血清を濃度勾配希釈させて、室温で1時間置いた。その後、サンプルを捨て、洗浄液(0.05% Tween-20を含むPBS)で3回洗浄し、最後に洗浄液を捨ててから、吸取紙で水分を拭き取った。100μL希釈液を入れ、HRPカップリングのヤギ抗マウスIgG二次抗体(最終濃度0.4μg/mL、メーカーBiolegend、製品番号405306)を希釈させて、室温で1時間置いた。その後、液体を捨て、洗浄液(200μL/ウェル)で5回洗浄し、最後に洗浄液を捨ててから、吸取紙で水分を拭き取った。TMB-過酸化水素尿素溶液(メーカーThermo ScientificTM、製品番号34029)基質溶液を50μL/ウェルで入れ、室温で遮光で3~5分間置き、0.25M硫酸を50μL/ウェルで入れて、反応を終了させた。その後、多機能マイクロプレートリーダーにより450nm波長における吸光度を検出した。結果は図2に示される。
PBSでヒト組換えBCMA抗原タンパク質(Novoprotein、製品番号CS79)を0.5ng/μLとなるように希釈させ、Maxisorpの96ウェルフラットベースELISA用プレートに抗原を100μL/ウェルで入れて、ラップで密封してから、4℃で一晩置いた。翌日、抗原を捨ててから、PBS(200μL/ウェル)で1回洗浄し、更にPBSを捨ててから、吸取紙で水分を拭き取り、各ウエルに200μLブロッキングバッファー(10%ウシ胎児血清を含むPBS)を入れて、室温で2時間ブロッキングした。ブロッキング終了後、ブロッキングバッファーを捨て、吸取紙で水分を拭き取った。100μL希釈液(5%ウシ胎児血清を含むPBS)を入れ、血清を濃度勾配希釈させて、室温で1時間置いた。その後、サンプルを捨て、洗浄液(0.05% Tween-20を含むPBS)で3回洗浄し、最後に洗浄液を捨ててから、吸取紙で水分を拭き取った。100μL希釈液を入れ、HRPカップリングのヤギ抗マウスIgG二次抗体(最終濃度0.4μg/mL、メーカーBiolegend、製品番号405306)を希釈させて、室温で1時間置いた。その後、液体を捨て、洗浄液(200μL/ウェル)で5回洗浄し、最後に洗浄液を捨ててから、吸取紙で水分を拭き取った。TMB-過酸化水素尿素溶液(メーカーThermo ScientificTM、製品番号34029)基質溶液を50μL/ウェルで入れ、室温で遮光で3~5分間置き、0.25M硫酸を50μL/ウェルで入れて、反応を終了させた。その後、多機能マイクロプレートリーダーにより450nm波長における吸光度を検出した。結果は図2に示される。
実施例3:免疫化後のマウス脾臓細胞から電気融合技術によりハイブリドーマ細胞の取得
事前にAg8マウス骨髄腫細胞を蘇生させた。融合当日、Ag8マウス骨髄腫細胞を取って計数した。免疫が正確に行われたBCMAマウス脾臓を輸送培地RPMI1640に置き、すぐに脾臓の細胞を抽出して分離し、計数して使用に備える。得られた脾臓細胞及び骨髄腫細胞のそれぞれに10mLRPMI 1640を入れ、1回洗浄してから、4x107個脾臓細胞と1x107個Ag8マウス骨髄腫の比率で混合させた。混合してから、200Gで5分間遠心分離し、上澄を捨て、10mLの融合液で2回洗浄して、使用に備える。200G及び室温で5分間遠心分離し、上澄を捨て、2.5mL電気融合緩衝液を入れて、再懸濁させ、沈殿させた。15mL遠心管を用意して、予熱された4.8mLRPMI 1640培地を入れた。混合細胞懸濁液を75%アルコールで消毒され且つ乾燥されたCUY497P2電極に入れ、ECFG21電気融合マシン(メーカーNEPAGENE、型番ECFG21)の標準操作フローにより細胞電気融合を行った。融合終了後、細胞を吸出して、インキュベーターで事前に予熱された4.8mLRPMI1640培基に入れた。HAT培地で細胞を再懸濁させ、2×105細胞/ウェルで96ウェルフラットベースプレートにプレーティングした。96ウェルプレートを37℃インキュベーターに静置して培養し、毎日細胞を観察し、10日間目に上澄を取り、ELISA予備スクリーニングを行った。
事前にAg8マウス骨髄腫細胞を蘇生させた。融合当日、Ag8マウス骨髄腫細胞を取って計数した。免疫が正確に行われたBCMAマウス脾臓を輸送培地RPMI1640に置き、すぐに脾臓の細胞を抽出して分離し、計数して使用に備える。得られた脾臓細胞及び骨髄腫細胞のそれぞれに10mLRPMI 1640を入れ、1回洗浄してから、4x107個脾臓細胞と1x107個Ag8マウス骨髄腫の比率で混合させた。混合してから、200Gで5分間遠心分離し、上澄を捨て、10mLの融合液で2回洗浄して、使用に備える。200G及び室温で5分間遠心分離し、上澄を捨て、2.5mL電気融合緩衝液を入れて、再懸濁させ、沈殿させた。15mL遠心管を用意して、予熱された4.8mLRPMI 1640培地を入れた。混合細胞懸濁液を75%アルコールで消毒され且つ乾燥されたCUY497P2電極に入れ、ECFG21電気融合マシン(メーカーNEPAGENE、型番ECFG21)の標準操作フローにより細胞電気融合を行った。融合終了後、細胞を吸出して、インキュベーターで事前に予熱された4.8mLRPMI1640培基に入れた。HAT培地で細胞を再懸濁させ、2×105細胞/ウェルで96ウェルフラットベースプレートにプレーティングした。96ウェルプレートを37℃インキュベーターに静置して培養し、毎日細胞を観察し、10日間目に上澄を取り、ELISA予備スクリーニングを行った。
実施例4:酵素結合免疫吸着測定法により抗ヒトBCMAモノクローナル抗体をスクリーニングした
PBSでBCMA抗原(Novoprotein cat:CS79)を0.5ng/μLとなるように希釈させた。Maxisorpの96ウェルフラットベースELISA用プレートに抗原を100μL/ウェルで入れて、ラップで密封してから、4℃で一晩置いた。翌日、抗原を捨ててから、PBS(200μL/ウェル)で1回洗浄し、更にPBSを捨ててから、吸取紙で水分を拭き取り、各ウエルに200μLブロッキングバッファーを入れて、室温で2時間ブロッキングした。ブロッキング終了後、ブロッキングバッファーを捨て、吸取紙で水分を拭き取った。50μLサンプル(実施例3で得られたBCMAハイブリドーマ細胞の培養上澄)を入れ、室温で1時間置いた。その後、サンプルを捨て、洗浄液で3回洗浄し、最後に洗浄液を捨ててから、吸取紙で水分を拭き取った。希釈液で希釈されたHRPカップリングのヤギ抗マウスIgG二次抗体50μLを室温で1時間置いた。その後、液体を捨て、洗浄液(200μL/ウェル)で5回洗浄し、最後に洗浄液を捨ててから、吸取紙で水分を拭き取った。TMB-過酸化水素尿素溶液基質溶液を50μL/ウェルで入れ、室温で遮光で3~5分間置き、0.25M硫酸を50μL/ウェルで入れて、反応を終了させた。その後、多機能マイクロプレートリーダーにより450nm波長における吸光度を検出した。結果は下記表1に示される。
PBSでBCMA抗原(Novoprotein cat:CS79)を0.5ng/μLとなるように希釈させた。Maxisorpの96ウェルフラットベースELISA用プレートに抗原を100μL/ウェルで入れて、ラップで密封してから、4℃で一晩置いた。翌日、抗原を捨ててから、PBS(200μL/ウェル)で1回洗浄し、更にPBSを捨ててから、吸取紙で水分を拭き取り、各ウエルに200μLブロッキングバッファーを入れて、室温で2時間ブロッキングした。ブロッキング終了後、ブロッキングバッファーを捨て、吸取紙で水分を拭き取った。50μLサンプル(実施例3で得られたBCMAハイブリドーマ細胞の培養上澄)を入れ、室温で1時間置いた。その後、サンプルを捨て、洗浄液で3回洗浄し、最後に洗浄液を捨ててから、吸取紙で水分を拭き取った。希釈液で希釈されたHRPカップリングのヤギ抗マウスIgG二次抗体50μLを室温で1時間置いた。その後、液体を捨て、洗浄液(200μL/ウェル)で5回洗浄し、最後に洗浄液を捨ててから、吸取紙で水分を拭き取った。TMB-過酸化水素尿素溶液基質溶液を50μL/ウェルで入れ、室温で遮光で3~5分間置き、0.25M硫酸を50μL/ウェルで入れて、反応を終了させた。その後、多機能マイクロプレートリーダーにより450nm波長における吸光度を検出した。結果は下記表1に示される。
表1
注記:ELISAスクリーニングを実施した場合のハイブリドーマ上澄の希釈倍数が1:100である20A2を除き、その他のクローンは、ELISAスクリーニングを実施した場合のハイブリドーマ上澄の希釈倍数が全て1:50である。
注記:ELISAスクリーニングを実施した場合のハイブリドーマ上澄の希釈倍数が1:100である20A2を除き、その他のクローンは、ELISAスクリーニングを実施した場合のハイブリドーマ上澄の希釈倍数が全て1:50である。
実施例5:フローサイトメータにより抗ヒトBCMA抗体とU266細胞表面BCMAとの結合を検出した分析
200GでU266細胞を遠心分離して収集し、3%FCSを含むPBSで1回洗浄してから、3%FCSを含むPBS1.5mLに再懸濁させ、細胞を各ウエル25μL細胞(2.5×105)で96ウェルプレートに入れ、それぞれ75μLサンプル(実施例3で得られたBCMAハイブリドーマ細胞の培養上澄)を入れ、陽性対照ウエルを設けて、75μL抗BCMA抗体(クローン19F2、メーカーBiolegend、最終濃度1μg/mL)を入れた。陰性対照ウエル1に75 μLIgG2a isotype対照(クローンMG2a-53、メーカーBiolegend、最終濃度1μg/mL)を入れた。陰性対照ウエル2及び陰性対照ウエル3に3%FCSを含むPBS75μLを入れ、4℃冷蔵庫で1時間インキュベートしてから、3%FCSを含むPBSで2回洗浄した。上澄を捨ててから、サンプルウエル、陽性対照ウエル、陰性対照ウエル1及び陰性対照ウエル2に500 ng/mL濃度の二次抗体50μL(メーカーebioscience、ヤギ抗マウスIgG-PE、製品番号12-4010-82)を入れた。陰性対照ウエル3に3%FCSを含むPBS50μLだけ入れてから、プレートを4℃冷蔵庫に置き、遮光で30分間インキュベートしてから、3%FCSを含むPBSで2回洗浄し、最後に細胞を3%FCSを含むPBS50μLに再懸濁させ、フローサイトメータにより検出した。結果は図2に示される。
200GでU266細胞を遠心分離して収集し、3%FCSを含むPBSで1回洗浄してから、3%FCSを含むPBS1.5mLに再懸濁させ、細胞を各ウエル25μL細胞(2.5×105)で96ウェルプレートに入れ、それぞれ75μLサンプル(実施例3で得られたBCMAハイブリドーマ細胞の培養上澄)を入れ、陽性対照ウエルを設けて、75μL抗BCMA抗体(クローン19F2、メーカーBiolegend、最終濃度1μg/mL)を入れた。陰性対照ウエル1に75 μLIgG2a isotype対照(クローンMG2a-53、メーカーBiolegend、最終濃度1μg/mL)を入れた。陰性対照ウエル2及び陰性対照ウエル3に3%FCSを含むPBS75μLを入れ、4℃冷蔵庫で1時間インキュベートしてから、3%FCSを含むPBSで2回洗浄した。上澄を捨ててから、サンプルウエル、陽性対照ウエル、陰性対照ウエル1及び陰性対照ウエル2に500 ng/mL濃度の二次抗体50μL(メーカーebioscience、ヤギ抗マウスIgG-PE、製品番号12-4010-82)を入れた。陰性対照ウエル3に3%FCSを含むPBS50μLだけ入れてから、プレートを4℃冷蔵庫に置き、遮光で30分間インキュベートしてから、3%FCSを含むPBSで2回洗浄し、最後に細胞を3%FCSを含むPBS50μLに再懸濁させ、フローサイトメータにより検出した。結果は図2に示される。
実施例6:実施例3で得られたBCMAハイブリドーマ上澄からrProteinGアガロースマトリックス磁性微小球により抗ヒトBCMAモノクローナル抗体を分析して精製した
実施例3で得られたBCMAハイブリドーマ細胞の培養から8mLのハイブリドーマ上澄を得て、200μLrProteinGアガロースマトリックス磁性微小球懸濁液(メーカー常州天地人和生物科技有限公司、製品番号SM004C)を入れてから、回転式ミキサーにより遠心管を軽く反転させ、室温で均一に1時間振動させた。遠心管に5倍磁気ビーズ体積の雑物洗浄液を入れ、2回洗浄してから、600μL溶出液を入れ、ピペッターで5回吹いてから、室温で回転式ミキサーに置き、遠心管を軽く反転させ、10分間溶出し、溶液が透き通ってから、上澄を吸い取り、溶出成分を収集して、目的抗原とし、上澄を新しい遠心管に収集して、すぐに60μL中和液を入れ、溶出成分をpH値が7.0~8.0となるように調整した。精製された抗体を少量取り、200μg/mLとなるように希釈させ、10μLの抗体溶液に2.5μLの5×タンパク質サンプルロード緩衝液(非変性)(メーカーSangon Biotech、製品番号C506032)を入れ、均一に混合させてから三色染色の染色済みタンパク質Marker(メーカーSangon Biotech、製品番号C510010)とそれぞれ12% Tris-Glycine電気泳動既製ゲル(メーカーSangon Biotech、製品番号C661102)サンプルウエルに入れて、事前に既製ゲルをTris-SDS電気泳動緩衝液(メーカーSangon Biotech、製品番号 C520001)が十分に添加された電気泳動槽に置き、既製ゲルメーカー標準フローにより電気泳動を行い、電気泳動完了後、汎用型タンパク質染色液(メーカーSangon Biotech、製品番号C516024)を利用して2時間染色してから、溶出して図をスキャンした。結果は図3に示される。その後の機能分析に利用するために、精製された残留モノクローナル抗体を-20℃で保存した。
実施例3で得られたBCMAハイブリドーマ細胞の培養から8mLのハイブリドーマ上澄を得て、200μLrProteinGアガロースマトリックス磁性微小球懸濁液(メーカー常州天地人和生物科技有限公司、製品番号SM004C)を入れてから、回転式ミキサーにより遠心管を軽く反転させ、室温で均一に1時間振動させた。遠心管に5倍磁気ビーズ体積の雑物洗浄液を入れ、2回洗浄してから、600μL溶出液を入れ、ピペッターで5回吹いてから、室温で回転式ミキサーに置き、遠心管を軽く反転させ、10分間溶出し、溶液が透き通ってから、上澄を吸い取り、溶出成分を収集して、目的抗原とし、上澄を新しい遠心管に収集して、すぐに60μL中和液を入れ、溶出成分をpH値が7.0~8.0となるように調整した。精製された抗体を少量取り、200μg/mLとなるように希釈させ、10μLの抗体溶液に2.5μLの5×タンパク質サンプルロード緩衝液(非変性)(メーカーSangon Biotech、製品番号C506032)を入れ、均一に混合させてから三色染色の染色済みタンパク質Marker(メーカーSangon Biotech、製品番号C510010)とそれぞれ12% Tris-Glycine電気泳動既製ゲル(メーカーSangon Biotech、製品番号C661102)サンプルウエルに入れて、事前に既製ゲルをTris-SDS電気泳動緩衝液(メーカーSangon Biotech、製品番号 C520001)が十分に添加された電気泳動槽に置き、既製ゲルメーカー標準フローにより電気泳動を行い、電気泳動完了後、汎用型タンパク質染色液(メーカーSangon Biotech、製品番号C516024)を利用して2時間染色してから、溶出して図をスキャンした。結果は図3に示される。その後の機能分析に利用するために、精製された残留モノクローナル抗体を-20℃で保存した。
実施例7:候補抗体配列の取得
候補ハイブリドーマ細胞を培養して、細胞を1000rpmで遠心分離して収集し、Trizolにより総RNAを抽出した。これをテンプレートとして、第1鎖cDNAを合成した後、第1鎖cDNAを後続のテンプレートとしてハイブリドーマ細胞に対応する可変領域DNA配列を増幅した(Jones and Bendig、1991)。50μl反応系にcDNA 1μl、10×PCR緩衝液5μl、上流と下流プライマーそれぞれ1μl(25 pmol)、dNTP 1μl、25 mmol PL MgCl2 1μl、H2O 39μlをそれぞれ入れて、95℃で10min前変性を行い、Taq酵素1μlを入れて、温度サイクルを開始して、PCR増幅を行った。反応条件として、94℃で1min変性し、58℃で1min焼鈍し、72℃で15s延長し、計32サイクルを行ってから、72℃で10min保温した。
候補ハイブリドーマ細胞を培養して、細胞を1000rpmで遠心分離して収集し、Trizolにより総RNAを抽出した。これをテンプレートとして、第1鎖cDNAを合成した後、第1鎖cDNAを後続のテンプレートとしてハイブリドーマ細胞に対応する可変領域DNA配列を増幅した(Jones and Bendig、1991)。50μl反応系にcDNA 1μl、10×PCR緩衝液5μl、上流と下流プライマーそれぞれ1μl(25 pmol)、dNTP 1μl、25 mmol PL MgCl2 1μl、H2O 39μlをそれぞれ入れて、95℃で10min前変性を行い、Taq酵素1μlを入れて、温度サイクルを開始して、PCR増幅を行った。反応条件として、94℃で1min変性し、58℃で1min焼鈍し、72℃で15s延長し、計32サイクルを行ってから、72℃で10min保温した。
増幅生成物をシークエンシングしてから、下記に示される候補ハイブリドーマの抗体配列を得た。
7E11
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8H7
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11B10
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20A2
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20A9
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23C4
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27A7
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31F5
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VH(SEQ ID NO:98):
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LCDR2:AAS(SEQ ID NO:104)
LCDR3:QQSFSIPFT(SEQ ID NO:105)
前記抗体の重鎖定常領域配列は、
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:106)であり、
軽鎖定常領域は、
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:107)である。
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:106)であり、
軽鎖定常領域は、
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:107)である。
実施例8:抗ヒトBCMAモノクローナル抗体とヒトBCMAとの結合の親和力分析
該実施例で使用される試薬キット、消耗品及び機器はGE Healthcareより購入された。試薬キットの取扱説明書により、ヒトBCMA抗原(6Hisタグ、製品番号CC28、仕入先Novoprotein)をチップ表面にカップリングしてから、HBS-EP+緩衝液で倍希釈させ、異なる濃度の分析待ち抗体をそれぞれ調製し、濃度ゼロ点及び濃度品質管理点を設けた。Biacore T200のメーカー標準設定フローにより、リガンドを捕獲するフローセルを検出通路とし、捕獲していないフローセルを対照通路とし、HBS-EP+緩衝液を流動相として、異なる濃度の分析待ち抗体溶液をそれぞれ注入した。Biacore T200 Control SoftwareソフトウエアによりSPRシグナルを採集し、更にBiacore T200 Evaluation分析ソフトウエアによりデータを処理した。最後に得られた動力学曲線に対して動力学分析又は定常状態分析を行って、Ka、Kd及びKD値を算出した。結果は下記表2に示される。
表2
該実施例で使用される試薬キット、消耗品及び機器はGE Healthcareより購入された。試薬キットの取扱説明書により、ヒトBCMA抗原(6Hisタグ、製品番号CC28、仕入先Novoprotein)をチップ表面にカップリングしてから、HBS-EP+緩衝液で倍希釈させ、異なる濃度の分析待ち抗体をそれぞれ調製し、濃度ゼロ点及び濃度品質管理点を設けた。Biacore T200のメーカー標準設定フローにより、リガンドを捕獲するフローセルを検出通路とし、捕獲していないフローセルを対照通路とし、HBS-EP+緩衝液を流動相として、異なる濃度の分析待ち抗体溶液をそれぞれ注入した。Biacore T200 Control SoftwareソフトウエアによりSPRシグナルを採集し、更にBiacore T200 Evaluation分析ソフトウエアによりデータを処理した。最後に得られた動力学曲線に対して動力学分析又は定常状態分析を行って、Ka、Kd及びKD値を算出した。結果は下記表2に示される。
表2
Claims (10)
- SEQ ID NO:1に示されるHCDR1、SEQ ID NO:2に示されるHCDR2、及びSEQ ID NO:3、4又は5に示されるHCDR3を含み、及び/又はSEQ ID NO:6又は7に示されるLCDR1、SEQ ID NO:8に示されるLCDR2及びSEQ ID NO:9に示されるLCDR3を含むことを特徴とする、抗BCMA抗体又はその抗原結合断片。
- 請求項1に記載の抗BCMA抗体又はその抗原結合断片において、前記抗BCMA抗体はSEQ ID NO:12、20、28、36、44、52、60、68、76、84、92又は100の何れか1つに示されるHCDR1、SEQ ID NO:13、21、29、37、45、53、61、69、77、85、93又は101の何れか1つに示されるHCDR2、及びSEQ ID NO:14、22、30、38、46、54、62、70、78、86、94又は102の何れか1つに示されるHCDR3を含み、及び/又はSEQ ID NO:15、23、31、39、47、55、63、71、79、87、95又は103の何れか1つに示されるLCDR1、SEQ ID NO:16、24、32、40、48、56、64、72、80、88、96又は104の何れか1つに示されるLCDR2、及びSEQ ID NO:17、25、33、41、49、57、65、73、81、89、97又は105の何れか1つに示されるLCDR3を含むことを特徴とする、抗BCMA抗体又はその抗原結合断片。
- 請求項1~4の何れか1項に記載の抗BCMA抗体又はその抗原結合断片において、前記抗BCMA抗体のVHのFR1は抗体7E11、8H7、11B10、11G1、15A7、15H6、18D10、20A2又は23C4のFR1から選ばれ、FR2は抗体7E11、8H7、11B10、11G1、15A7、15H6、18D10又は20A2のFR2から選ばれ、FR3は抗体7E11、8H7、11B10、11G1、15A7、18D10、20A2、23C4又は31F5のFR3から選ばれ、FR4は抗体7E11、8H7、11B10、11G1、15A7、15H6、20A2又は31F5のFR4から選ばれ、及び/又はVLのFR1は抗体7E11、8H7、11B10、11G1、15A7、15H6、18D10又は20A2のFR1から選ばれ、FR2は抗体7E11、8H7、15A7、15H6、20A2、23C4又は31F5のFR2から選ばれ、FR3は抗体7E11、8H7、11B10、11G1、15A7、18D10、20A2、23C4、27A7又は31F5のFR3から選ばれ、FR4は抗体7E11、11B10、11G1、15A7、又は18D10のFR4から選ばれ、好ましくは、前記抗BCMA抗体のVH及びVLのFR領域は抗体7E11、8H7、11B10、11G1、15A7、15H6、18D10、20A2、20A9、23C4、27A7及び31F5から選ばれる何れか1つの抗体のVH及びVLのFR領域であることを特徴とする、抗BCMA抗体又はその抗原結合断片。
- 請求項1に記載の抗BCMA抗体又はその抗原結合断片において、前記抗BCMA抗体のVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:10、18、26、34、42、50、58、66、74、82、90及び98の何れか1つに示され、及び/又はVLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:11、19、27、35、43、51、59、67、75、83、91及び99の何れか1つに示され、好ましくは、前記抗BCMA抗体のVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:10に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:11に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:18に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:19に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:26に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:27に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:34に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:35に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:42に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:43に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:50に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:51に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:58に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:59に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:66に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:67に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:74に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:75に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:82に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:83に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:90に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:91に示され、又はVHのアミノ酸配列はSEQ ID NO:98に示され、VLのアミノ酸配列はSEQ ID NO:99に示されることを特徴とする、抗BCMA抗体又はその抗原結合断片。
- 請求項1~4の何れか1項に記載の抗BCMA抗体又はその抗原結合断片において、前記抗BCMA抗体はキメラ抗体又は完全ヒト抗体であり、好ましくは完全ヒト抗体であることを特徴とする、抗BCMA抗体又はその抗原結合断片。
- 請求項1~7の何れか1項に記載の抗BCMA抗体又はその抗原結合断片と、薬学的に許容される賦形剤又はベクターとを含むことを特徴とする、医薬組成物。
- (1)請求項1~7の何れか1項に記載の抗BCMA抗体又はその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチド配列、及び
(2)(1)に記載されるポリヌクレオチド配列の相補配列、から選ばれる核酸分子。 - 請求項1~7の何れか1項に記載の抗BCMA抗体又はその抗原結合断片の、B細胞関連疾患を治療するためのものの製造における応用において、好ましくは、前記B細胞関連疾患はB細胞に関連する腫瘍又は自己免疫疾患である、応用。
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