KR20220148198A

KR20220148198A - 항-bcma 항체, 이의 약학 조성물 및 응용

Info

Publication number: KR20220148198A
Application number: KR1020227031106A
Authority: KR
Inventors: 지안량 리; 시헹 웡; 준샤 장; 멩 티안; 웨이 카이
Original assignee: 샹하이 에이스맵 코포레이션 리미티드
Priority date: 2020-02-13
Filing date: 2021-02-09
Publication date: 2022-11-04
Also published as: CN113248611A; EP4105233A4; JP2023513923A; EP4105233A1; AU2021220996A1; CA3171009A1; US20230242656A1; WO2021160133A1

Abstract

본 발명은 항-BCMA 항체, 이의 약학 조성물 및 응용을 제공한다. 본 발명의 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 이의 약학 조성물은 B 세포 관련 질환을 치료하는 데 사용될 수 있다.

Description

항-BCMA 항체, 이의 약학 조성물 및 응용

본 발명은 항-BCMA 항체, 이의 약학 조성물 및 응용에 관한 것이다.

CD269로도 알려진 B 세포 성숙 항원(BCMA)은 184개 아미노산 잔기로 구성된다. 이의 세포내 영역에는 80개 아미노산 잔기가 포함되며, 세포외 영역 서열에서 하나의 탄수화물 인식 도메인만이 B 세포 표면 분자이다. BCMA는 신호 펩티드가 결여된 I형 막관통 신호전달 단백질에 속하는 것으로, 종양 괴사 인자 수용체 패밀리의 구성원이다. 이는 각각 B 세포 활성화 인자 BAFF 또는 증식 유도 리간드(APRIL)의 두 가지 리간드와 서로 결합할 수 있다. 정상 조직에서 BCMA는 성숙 B 세포와 형질 세포 표면에 발현된다. BCMA 유전자 녹아웃 마우스 면역 체계는 정상이고 정상적인 비장 구조는 가지며 B 림프구의 발달이 정상이다. 그러나 형질 세포 수가 현저히 감소하여 BCMA가 형질 세포의 생존 유지에 중요한 역할을 한다는 것을 증명한다. 그 기전에는 주로 BCMA와 BAFF 단백질 결합, 항세포사멸 유전자 Bcl-2, Mcl-1, Bclw 등의 상향 조절이 포함되며 세포 성장을 유지한다. 마찬가지로, 상기 기전은 골수종 세포에서도 기능을 발휘하며, 골수종 세포의 악성 증식을 촉진하는 데 중요한 역할을 한다. 연구에 따르면, BCMA는 다발성 골수종 세포주에서 보편적으로 발현되며, 다발성 골수종 환자에서의 검출에서도 일관된 결과가 나타났다. Kochenderfer 등은 기존에 보고된 내용을 기반으로 Q-PCR, 유세포 분석 및 면역조직화학적 방법을 함께 응용하여 BCMA의 발현 특징을 심층적으로 연구하여, BCMA가 성숙 B 세포, 형질 세포 이외의 정상 인체 조직에서 발현되지 않으며, CD34+ 조혈 세포에서도 발현되지 않음을 확인하였다.

본 발명은 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 상기 항-BCMA 항체는 SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 및 SEQ ID NO: 9의 서열로부터 선택되는 하나의 CDR을 적어도 포함한다.

하나 이상의 실시방식에 있어서, 상기 항-BCMA 항체는 SEQ ID NO: 1로 표시되는 HCDR1, SEQ ID NO: 2로 표시되는 HCDR2 및 SEQ ID NO: 3, 4 또는 5로 표시되는 HCDR3을 포함하고/포함하거나, SEQ ID NO: 6 또는 7로 표시되는 LCDR 1, SEQ ID NO: 8로 표시되는 LCDR 2 및 SEQ ID NO: 9로 표시되는 LCDR 3을 포함한다.

하나 이상의 실시방식에 있어서, 상기 항-BCMA 항체는 SEQ ID NO: 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92 또는 100 중 어느 하나로 표시되는 HCDR1, SEQ ID NO: 13, 21, 29, 37, 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93 또는 101 중 어느 하나로 표시되는 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 14, 22, 30, 38, 46, 54, 62, 70, 78, 86, 94 또는 102 중 어느 하나로 표시되는 HCDR3을 포함하고/포함하거나 SEQ ID NO: 15, 23, 31, 39, 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95 또는 103 중 어느 하나로 표시되는 LCDR1, SEQ ID NO: 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96 또는 104 중 어느 하나로 표시되는 LCDR2 및 SEQ ID NO: 17, 25, 33, 41, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97 또는 105 중 어느 하나로 표시되는 LCDR3을 포함한다.

하나 이상의 실시방식에 있어서, 상기 항-BCMA 항체는 하기 A군 내지 L군 중 어느 하나의 군으로 표시되는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3:

및/또는 하기 1군 내지 12군 중 어느 하나의 군으로 표시되는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3:

을 포함한다.

하나 이상의 실시방식에 있어서, 상기 항-BCMA 항체는 하기 a군 내지 l군 중 어느 하나의 군으로 표시되는 HCDR 및 LCDR:

을 포함한다.

하나 이상의 실시방식에 있어서, 상기 항-BCMA 항체 VH의 FR1은 항체 7E11, 8H7, 11B10, 11G1, 15A7, 15H6, 18D10, 20A2 또는 23C4의 FR1로부터 선택되고, FR2는 항체 7E11, 8H7, 11B10, 11G1, 15A7, 15H6, 18D10 또는 20A2의 FR2로부터 선택되고, FR3은 항체 7E11, 8H7, 11B10, 11G1, 15A7, 18D10, 20A2, 23C4 또는 31F5의 FR3으로부터 선택되고, FR4는 항체 7E11, 8H7, 11B10, 11G1, 15A7, 15H6, 20A2 또는 31F5의 FR4로부터 선택되고/선택되거나, VL의 FR1은 항체 7E11, 8H7, 11B10, 11G1, 15A7, 15H6, 18D10 또는 20A2의 FR1로부터 선택되고, FR2는 항체 7E11, 8H7, 15A7, 15H6, 20A2, 23C4 또는 31F5의 FR2로부터 선택되고, FR3은 항체 7E11, 8H7, 11B10, 11G1, 15A7, 18D10, 20A2, 23C4, 27A7 또는 31F5의 FR3으로부터 선택되고, FR4는 항체 7E11, 11B10, 11G1, 15A7 또는 18D10의 FR4로부터 선택된다.

하나 이상의 실시방식에 있어서, 상기 항-BCMA 항체 VH와 VL의 FR 영역은 항체 7E11, 8H7, 11B10, 11G1, 15A7, 15H6, 18D10, 20A2, 20A9, 23C4, 27A7 및 31F5의 어느 하나의 항체로부터 선택되는 VH와 VL의 FR 영역이다.

하나 이상의 실시방식에 있어서, 상기 항-BCMA 항체의 VH의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 10, 18, 26, 34, 42, 50, 58, 66, 74, 82, 90 및 98 중 어느 하나로 표시되고/표시되거나, VL의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 11, 19, 27, 35, 43, 51, 59, 67, 75, 83, 91 및 99 중 하나로 표시된다.

하나 이상의 실시방식에 있어서, 상기 항-BCMA 항체의 VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 10으로 표시되고, VL의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 11로 표시되거나, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 18로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 19로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 26으로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 27로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 34로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 35로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 42로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 43으로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 50으로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 51로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 58로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 59로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 66으로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 67로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 74로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 75로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 82로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 83으로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 90으로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 91로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 98로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 99로 표시된다.

하나 이상의 실시방식에 있어서, 본 발명의 어느 하나의 실시방식에 따른 BCMA 항체의 중쇄 불변 영역 서열은 SEQ ID NO: 106으로 표시되고/표시되거나, 경쇄 불변 영역 서열은 SEQ ID NO: 107로 표시된다.

하나 이상의 실시방식에 있어서, 본 발명의 어느 하나의 실시방식에 따른 항-BCMA 항체는 키메라 항체 또는 완전 인간 항체이다. 바람직하게는 완전 인간 항체이다.

본 발명은 약학 조성물을 더 제공한다. 상기 약학 조성물은 본 발명의 어느 하나의 실시방식에 따른 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 약학적으로 허용 가능한 부형제 또는 담체를 포함한다.

본 발명은 (1) 본 발명의 어느 하나의 실시방식에 따른 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열; 및 (2) (1)에 따른 폴리뉴클레오티드 서열의 상보 서열로부터 선택되는 핵산 분자를 더 제공한다.

본 발명은 B세포 관련 질환 치료에서 본 발명의 어느 하나의 실시방식에 따른 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 응용을 더 제공한다. 바람직하게는 상기 B 세포 관련 질환은 B 세포 관련 종양 또는 자가 면역 질환이다.

본 발명은 B 세포 관련 질환을 치료 또는 예방하는 방법을 더 제공한다. 상기 방법은 피룡한 환자에게 치료 유효량의 본 발명의 어느 하나의 실시방식에 따른 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 본 발명의 어느 하나의 실시방식에 따른 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 바람직하게는, 상기 B 세ㅔ포 관련 질환은 B 세포 관련 종양 또는 자가 면역 질환이다.

도 1은 실시예 2의 동물을 면역시킨 후 혈청 인간 BCMA 특이적 효소결합 면역흡착 분석 검출 결과를 도시한 것이다.
도 2는 실시예 5의 항-인간 BCMA 단일클론성 항체가 U266에 결합하여 세포 표면에 발현된 BCMA의 유세포 분석을 도시한 것이다.
도 3은 실시예 6의 정제된 항-인간 BCMA 단일클론성 항체의 SDS PAGE 겔 전기영동 분석 결과이다.

달리 정의되지 않는 한, 본 발명의 실시는 당업계의 기술 범위 내에 있는 분자 생물학(재조합 기술 포함), 미생물학, 세포 생물학, 생화학 및 면역학의 통상적인 기술을 사용한다. 이러한 기술은 문헌에 충분히 설명되어 있다. 예를 들어 Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 제2판(Sambrook 등, 1989); Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait 편집, 1984); Animal Cell Culture(R.I.Freshney 편집, 1987); Methods in Enzymology(Academic Press, Inc.); Current Protocols in Molecular Biology(F.M.Ausubel 등 편집, 1987년판 및 이의 정기 업데이트 버전); PCR: The Polymerase Chain Reaction(Mullis 등 편집, 1994); A Practical Guide to Molecular Cloning(Perbal Bernard V., 1988); Phage Display: A Laboratory Manual(Barbas 등, 2001)이 있다.

BCMA

본원에서 "BCMA"는 BAFF 및/또는 APRIL에 결합하는 세포 표면 수용체 또는 BCMA를 포함하는 수용체 복합체를 지칭한다. 인간 BCMA(huBCMA)의 아미노산 서열의 NCBI 수탁 번호는 Q02223(GI: 313104029)이다. BCMA 단백질은 변이체 및 단편을 포함할 수도 있다. 상기 단편은 전부 또는 일부 막관통을 갖지 않는 세포외 도메인, 및/또는 세포내 도메인 및 세포외 도메인의 단편을 포함한다. 가용성 형태의 huBCMA는 BAFF 및/또는 APRIL에 결합하는 능력을 보유하는 세포외 도메인 또는 세포외 도메인의 단편을 포함한다. "BCMA"는 BCMA 아미노산 서열의 번역 후 변형도 포함한다. 번역 후 변형에는 N- 및 O-연결 글리코실화가 포함되나 이에 한정되지 않는다.

BCMA의 정상 조직 발현은 B 세포 계통으로 크게 제한되며, 주로 편도선/림프절의 2차 여포/배아 중심, 형질 모세포 및 분화된 형질 세포 상에서 발현된다. BCMA는 정상 형질 세포에서 관찰되는 것보다 상대적으로 더 높은 수준으로 악성 형질 세포에서 발현되며, 특히 다발성 골수종, 무증상 골수종(smoldering myeloma) 및 MGUS(monoclonal gammopathy of undetermined meaning) 형질 세포에서 높게 발현된다. BCMA는 BCMA를 발현하는 B 세포 관련 악성 종양의 치료에 유리한 표적이다. 이는 발현이 정상 및 악성 형질 세포에 매우 제한되기 때문에, 비표적 조직 독성이 최소화되어야 한다.

항-BCMA 항체

본 발명은 BCMA에 특이적으로 결합하는 항체를 제공한다.

본원에서 용어 "항체"는 단일클론성 항체(면역글로불린 Fc 영역을 갖는 전장 항체 포함), 폴리에피토프 특이성을 갖는 항체 조성물, 다중특이적 항체(예를 들어, 이중특이적 항체), 디아바디 및 단일쇄 분자, 및 항체 단편, 특히 항원 결합 단편, 예를 들어 Fab, F(ab')₂ 및 Fv를 포함한. 본원에서 용어 "면역글로불린"(Ig)은 "항체"와 호환하여 사용할 수 있다.

기본 4-사슬 항체 단위는 2개의 동일한 경쇄(L)와 2개의 동일한 중쇄(H)로 구성된 이종사량체 당단백질이다. IgM 항체는 J 사슬로 불리는 추가 폴리펩티드와 함께 5개의 기본 헤테로사량체 단위로 구성되고 10개의 항원 결합 부위를 포함한다. 반면 IgA 항체는 J 사슬과 결합하여 다가 조립부를 형성하도록 중합될 수 있는 2 내지 5개의 기본 4-사슬 단위를 포함한다. IgG의 경우, 4-사슬 단위는 통상적으로 약 150,000달톤이다. 각 경쇄는 하나의 공유 디술파이드 결합에 의해 중쇄에 연결되는 한편, 2개의 중쇄는 하나 이상의 디술파이드 결합에 의해 서로 연결되며, 디술파이드 결합의 수는 중쇄의 이소타입에 따른다. 각 중쇄와 경좨는 규칙적으로 간격을 둔 사슬내 디술파이드 브릿지를 갖는다. 각 중쇄는 N-말단에서 가변 도메인(VH)과, 그 다음으로 3개(각 α 및 γ 사슬)와 4개(μ 및 ε 이소타입) 불변 도메인(CH)을 갖는다. 각 경쇄는 N-말단에서 가변 도메인(VL)과, 그 다음으로 다른 말단의 불변 도메인을 갖는다. VL은 VH와 정렬되고 CL은 중쇄의 제1 불변 도메인(CH1)과 정렬된다. 특정한 아미노산 잔기는 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 사이에 계면을 형성한다고 여겨진다. 쌍을 이루는 VH 및 VL은 함께 하나의 항원 결합 부위를 형성한다. 상이한 유형의 항체의 구조 및 성질에 대해, 예를 들어 Basic and Clinical Immunology, 제8판, Daniel P. Sties, Abba I. Terr 및 Tristram G. Parsolw 편집, Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, 제71페이지 및 제6장을 참조한다. 임의의 척추동물종 유래의 경쇄는 그 불변 도메인 아미노산 서열을 기반으로, κ 및 λ라고 하는 2개의 분명하게 구별되는 타입 중 하나로 지정될 수 있다. 그 중쇄 불변 도메인(CH) 아미노산 서열을 기반으로, 면역글로불린은 상이한 유형 또는 이소타입으로 지정될 수 있다. 5개 유형의 면역글로불린이 있으며, 각각 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이다. 이는 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 불리는 중쇄를 갖는다. CH 서열 및 기능의 상대적으로 비교적 작은 차이를 기반으로, γ 및 α 유형은 하위 유형으로 더 나뉠 수 있다. 예를 들어 인간은 IgG1, IgG2A, IgG2B, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2의 하위 유형을 발현한다.

항체의 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체의 중쇄 또는 경쇄의 아미노 말단 도메인을 지칭한다. 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각, "VH" 및 "VL"로 명명될 수 있다. 이들 도메인은 일반적으로 항체의 최대 가변 부분이며(동일한 유형의 다른 항체에 비해), 항원 결합 부위를 포함한다.

용어 "가변"은 가변 도메인의 특정 세그먼트가 항체 서열마다 크게 상이하다는 사실을 의미한다. 가변 도메인은 항원 결합을 매개하고 그 특정 항원에 대한 특정 항체의 특이성을 한정한다. 그러나 가변성은 가변 도메인에 걸친 모든 아미노산에 균일하게 분포되지 않는다. 반대로, 이는 초가변 영역(HVR)으로 불리우는 3개의 세그먼트(경쇄와 중쇄 가변 도메인에 모두 있음)에 집중된다. 즉, 각각 중쇄 가변 영역의 HCDR1, HCDR2, HCDR3 및 경쇄 가변 영역의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3으로 나뉜다. 가변 도메인 중에서 더욱 고도의 보존적인 부분은 프레임 영역(FR)으로 불린다. 천연 중쇄와 경쇄의 가변 도메인은 각각 4개의 FR 영역(FR1, FR2, FR3 및 FR4)을 포함한다. 이들은 대부분 β-시트 형태를 사용하여, 고리형의 연결을 이루어 어떤 상황에서는 β-시트 구조의 일부분인 3개의 HVR 연결을 형성한다. 각 사슬 중의 HVR은 FR 영역을 통해 매우 근접하게 함께 유지되고, 또 다른 사슬의 HVR과 함께 항체의 항원 결합 부위의 형성을 촉진한다(Kabat 등, Sequences of Immunological Interest, 제5판, 국립위생연구소, Bethesda, MD, 1991 참조). 통상적으로 경쇄 가변 영역의 구조는 FR1-LCDR1-FR2-LCDR2-FR3-LCDR3-FR4이고, 중쇄 가변 영역의 구조는 FR1-HCDR1-FR2-HCDR2-FR3-HCDR3-FR4이다. 불변 도메인은 항원에 대한 항체의 결합에 직접 관여하지 않지만, 다양한 이펙터 기능, 예를 들어 항체 의존성 세포 매개의 세포 독성에서 항체의 참여를 나타낸다.

본원에서 용어 "단일클론성 항체"는 기본적으로 균질한 항체들의 집단으로부터 수득한 항체를 지칭한다. 즉, 이러한 집단을 구성하는 각 항체는 소량으로 존재할 수 있는, 가능한 자연 발생 돌연변이 및/또는 번역 후 변형(예를 들어, 이성질체화, 아미드화)을 제외하고는 동일하다. 단일클론성 항체는 단일 항원 부위에 대해 지시되며 고도로 특이적이다. 다클론성 항체 제제(전형적으로 상이한 결정자(에피토프)에 대해 작용하는 상이한 항체를 포함)에 비해, 각 단일클론성 항체는 항원 상의 단일 결정자에 대해 작용한다. 이러한 특이성 이외에도, 단일클론성 항체는 하이브리도마 배양에 의해 합성되고, 다른 면역글로불린에 의해 오염되지 않는다. 수식어 "단일클론성"은 항체의 특징을 실질적으로 균일한 항체들의 집단으로부터 수득된 것으로 나타내고, 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생산을 요구하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용하는 단일클론성 항체는 다양한 기술, 예를 들어 하이브리도마 방법(예를 들어, Kohler 및 Milstein, Nature, 256: 495-97(1975); Hongo 등, Hybridoma, 14(3): 253-260(1995), Harlow 등, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 제2판, 1988; Hammerling 등, Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas, 563-681, Elsevier, N.Y., 1981), 재조합 DNA 방법(예를 들어, US 4,816,567), 파지 디스플레이 기술(예를 들어, Clackson 등, Nature, 352: 624-628(1991); Marks 등, J. Mol. Biol., 222: 581-597(1992); Sidhu 등, J. Mol. Biol., 338(2): 299-310(2004); Lee 등, J. Mol. Biol., 340(5): 1073-1093(2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101(34): 12467-12472(2004); 및 Lee 등 J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)), 및 인간 면역글로불린 유전자좌 또는 인간 면역글로불린 서열을 코딩하는 유전자의 일부 또는 전부를 갖는 동물에서 인간 또는 인간-유사 항체를 생성하는 기술(예를 들어, WO1998/24893; WO1996/34096; WO1996/33735; WO1991/10741; Jakobovits 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 2551(1993); Jakobovits 등, Nature, 362: 255-258(1993); Bruggemann 등, Year in Immunol., 7: 33(1993); US 5,545,807; US 5,545,806; US 5,569,825; US 5,625,126; US 5,633,425; 및 US 5,661,016; Marks 등, Bio/Technology, 10: 779-783(1992); Lonberg 등, Nature, 368: 856-859(1994); Morrison, Nature, 368: 812-813(1994); Fishwild 등, Nature Biotechnol., 14: 845-851(1996); Neuberger, Nature Biotechnol., 14: 826(1996); 및 Lonberg와 Huszar, Intern. Rev. Immunol., 13: 65-93(1995)을 통해 제조될 수 있다.

용어 "전장 항체", "무손상 항체" 또는 "완전 항체"는 호환하여 사용할 수 있으며, 기본적으로 그 무손상 형태의 항체(항체 단편과 대비됨)를 지칭한다. 구체적으로, 완전 항체는 중쇄 및 경쇄를 갖는 Fc 영역을 포함한다. 불변 도메인은 천연 서열 불변 도메인(예를 들어, 인간 천연 서열 불변 도메인) 또는 그의 아미노산 서열 변이체일 수 있다. 일부 경우에, 무손상 항체는 하나 이상의 이펙터 기능을 가질 수 있다.

"항체 단편"은 무손상 항체의 일부, 바람직하게는 무손상 항체의 항원 결합 및/또는 가변 영역을 포함한다. 항체 단편은 바람직하게는 항체의 항원 결합 단편이다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')₂ 및 Fv 단편; 디아바디; 선형 항체(미국 특허 제5,641,870호, 실시예 2; Zapata 등, Protein Eng. 8(10): 1057-1062, 1995 참조); 단일쇄 항체 분자; scFv-Fc 단편; 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체; 및 화학적 변형 또는 리포솜 혼입을 통해 반감기를 증가시킬 수 있는 임의 단편을 포함한다. 파파인으로 항체를 소화시키면 "Fab" 단편이라 불리는 2개의 동일한 항원 결합 단편, 및 나머지 하나의 "Fc" 단편을 생성하며, 이 명칭은 쉽게 결정되는 능력을 반영하였다. Fab 단편은 무손상 경쇄 및 중쇄 가변 도메인(VH) 및 하나의 중쇄 제1 불변 도메인(CH1)으로 구성된다. 각 Fab 단편은 항원 결합 측면에서 1가이다. 즉, 단일 항원-결합 부위를 갖는다. 항체를 펩신 처리하면 하나의 비교저거 큰 F(ab')₂ 단편을 생성하며, 이는 2개의 디술파이드 결합에 의해 서로 연결된 Fab 단편에 대략 상응한다. 이는 상이한 항원 결합 활성을 가지며 여전히 항원에 가교결합할 수 있다. Fab' 단편은 CH1 도메인의 카르복시 말단에 일부 추가적인 잔기가 증가하므로(항체 힌지 영역으로부터의 하나 이상의 시스테인을 포함) Fab 단편과 상이하다. F(ab')₂ 항체 단편은 원래 쌍을 이루는 Fab' 단편에 의해 생성된 것이며, Fab' 단편들 사이에 힌지 시스테인을 갖는다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링도 공지되어 있다. Fc 단편은 디술파이드 결합에 의해 함께 유지되는 2개 중쇄의 카르복시 말단 부분을 포함한다. 항체의 이펙터 기능은 Fc 영역 내의 서열에 의해 결정되며, 이 영역은 특정 유형의 세포 상에서 발견되는 Fc 수용체(FcR)에 의해 인식되는 영역이기도 하다.

"Fv"는 무손상 항원 인식 부위 및 항원 결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 이 단편은 긴밀하게 비공유 결합된 하나의 중쇄 가변 도메인 및 하나의 경쇄 가변 도메인의 이량체로 구성된다. 이들 2개 도메인이 폴딩되어 6개의 초가변 루프(중쇄 및 경쇄 각 3개 루프)가 형성되는데, 이는 항원 결합을 위한 아미노산 잔기를 제공하고 항체에 항원 결합 특이성을 부여한다. 그러나, 단일 가변 도메인(또는 항원에 특이적인 3개의 HVR만을 포함하는 Fv의 절반)일지라도 전체 결합 부위보다 친화성이 낮긴 하지만 항원을 인식하고 결합하는 능력을 갖는다.

"sFv" 또는 "scFv"로도 약칭되는 "단일쇄 Fv"는 단일 폴리펩티드 쇄로 연결되어 있는 VH 및 VL 도메인을 포함하는 항체 단편이다. 바람직하게는, sFv 폴리펩티드는 sFv가 항원 결합을 위한 목적하는 구조를 형성할 수 있도록 VH 및 VL 도메인 사이에 폴리펩티드 링커를 추가로 포함한다. sFv에 관해서는 The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, 제113권, Rosenburg 및 Moore 편집, Springer-Verlag, New York, pp. 269-315(1994)을 참조한다.

상기 단편의 "화학적 변형"은 폴리(알킬렌)글리콜(poly(alkylene)glycol), 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜(polyethylene glycol)("폴리에틸렌글리콜화, PEG화")를 포함한다. 여기에는 Fv, scFv, Fab, F(ab')₂ 및 Fab'의 폴리에틸렌 글리콜화 단편, 즉 Fv-PEG, scFv-PEG, Fab-PEG, F(ab')₂-PEG 및 Fab'-PEG가 포함된다. 이러한 단편은 EGFR 결합 활성을 갖는다.

바람직하게는, 상기 항체 단편, 특히 항원 결합 단편은 항체로부터 유래된 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역의 부분적 서열로 구성되거나 또는 이들을 포함한다. 상기 부분적 서열은 이의 유래 항체와 동일한 결합 특이성과 충분한 친화성을 보유하기에 충분하며, BCMA의 경우, 바람직하게는 적어도 이의 유래 항체 친화성의 1/100과 같고, 보다 바람직한 형태에서는 적어도 1/10과 같다. 이러한 항체 단편은 적어도 5개의 아미노산, 바람직하게는 이의 유래 항체 서열의 10, 15, 25, 50 및 100개의 연속 아미노산을 포함한다.

단일클론성 항체는 본원에서"키메라" 항체(면역글로불린)을 포함한다. 여기에서 중쇄 및/또는 경쇄의 일부분은 특정 물종 또는 특정 항체 유형 또는 하위 유형에 속하는 항체로부터 유도되는 상응하는 서열과 동일하거나 또는 동족이다. 사슬의 나머지 부분은 또 다른 물종 또는 또 다른 항체 유형 또는 하위 유형에 속하는 항체로부터 유도되는 상응하는 서열과 동일하거나 또는 동족이다. 이러한 항체의 단편은 원하는 생물학적 활성을 나타내기만 하면 된다(US 4,816,567; Morrison 등, Proc.Nat.Acad.Sci.USA 81: 6851-6855(1984)).

비인간(예를 들어 마우스) 항체의 "인간화" 형태는 비인간 면역글로불린으로부터 유도되는 서열을 최소한으로 포함하는 키메라 항체를 의미한다. 따라서 "인간화 항체는 통상적으로 가변 도메인 프레임 영역과 인간 항체에서 발견되는 서열 교환의 비인간 항체를 의미한다. 일반적으로 인간화 항체에서, 전체 항체(CDR 제외)는 인간 유래의 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되거나 이러한 항체(CDR 제외)와 동일하다. CDR(그중 일부 또는 전부는 비인간 유기체의 핵산에 의해 코딩됨)은 인간 항체 가변 영역의 β-시트 프레임워크에 그라프팅되어 항체를 생성하며, 이의 특이성은 그라프팅된 CDR에 의해 결정된다. 이러한 항체의 생성은 예를 들어 WO92/11018; Jones, 1986, Nature, 321: 522-525; Verhoeyen 등, 1988, Science, 239: 1534-1536에 설명되어 있다. 인간화 항체는 유전자 조작된 면역 체계를 가진 마우스를 사용해 생성할 수도 있다(Roque 등, 2004, Biotechnol. Prog., 20: 639-654 참조).

"인간 항체"는 이러한 항체를 지칭하며, 이는 인간에 의해 생성된 아미노산 서열에 대응하는 아미노산 서열을 갖고/갖거나 본원에 개시된 인간 항체 생산에 사용되는 모든 기술을 사용하여 생성된다. 인간 항체의 이러한 정의는 비인간 항원 결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 명확히 배제한다. 인간 항체는 당업계에 공지된 다양한 기술, 예를 들어 파지-디스플레이 라이브러리를 사용하여 생산할 수 있다. 이러한 기술은 Hoogenboom 및 Winter, 분자 생물학 잡지, 227: 381(1991); Marks 등, 분자 생물학 잡지, 222: 581(1991)를 참조할 수 있다. 획득된 인간 단일클론성 항체의 제조 방법은 Cole 등, 단일클론성 항체 및 암 치료, Alan R. Liss, p. 77(1985); Boerner 등, 면역학 잡지, 147(1): 86-95(1991)에 설명되어 있다. van Dijk 및 van de Winkel, 현대약학 평론, 5: 368-74(2001)을 더 참조한다. 인간 항체는 다음과 같이 제조할 수 있다. 즉, 항원을 형질전환 동물에 투여하며, 이것이 변형을 거쳐 항원에 반응하여 이러한 유형의 항체를 생성하도록 유도하나 이의 내인성 유전자좌가 기능을 이미 상실한다. 예를 들어 면역 처리된 제노마우스(xenomice)가 있다(예를 들어, XENOMOUSE™ 기술에 관해서는 US6,075,181과 6,150,584를 참조). 인간 B 세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 인간 항체에 관해서는 예를 들어 Li 등, 미국국가과학원학보, 103: 3557-3562(2006)를 참조한다.

본 발명의 항-BCMA 항체는 미니바디일 수도 있다. 미니바디는 CH3 도메인에 연결된 scFv를 포함하는 최소화된 항체 유사 단백질이다(Hu 등, 1996, Cancer Res. 56: 3055-3061). 본 발명의 항-BCMA 항체는 도메인 항체일 수도 있으며, 예를 들어 US 6,248,516을 참조한다. 도메인 항체(dAb)는 인간 항체 dAB의 중쇄(VH) 또는 경쇄(VL)의 가변 구역에 대응하는 항체의 기능적 결합 도메인이며, 약 13kDa의 분자량을 갖거나 무손상 항체의 1/10 치수 미만이다. dAB는 세균, 효모 및 포유동물 세포 시스템을 포함하는 다양한 숙주 내에서 잘 발현된다. 또한 냉동건조 또는 열변형과 같은 가혹한 조건을 거친 후에도 dAb는 고도로 안정되고 활성을 유지한다. 예를 들어 US 6,291,158; 6,582,915; 6,593,081; 6,172,197; US 2004/0110941; EP 0368684; US 6,696,245, WO04/058821, WO04/003019 및 WO03/002609를 참조한다.

본 발명의 항-BCMA 항체의 HCDR1은 GX₁TX₂X₃X₄X₅X₆(SEQ ID NO: 1)을 포함할 수 있다. 여기에서 X₁은 F 또는 Y이고, X₂는 F 또는 S이고, X₃은 S, D, T, N 또는 A이고, X₄은 Y, D, S 또는 A이고, X₅는 Y, C 또는 H이고, X₆은 D, A 또는 Y이다. 일부 실시방식에 있어서, X₁은 F이고, X₂는 F이고, X₃은 A 또는 D이고, X₄는 D이고, X₅는 Y, C 또는 H이고, X₆은 A이다. 일부 실시방식에 있어서, X₁은 Y이고, X₂는 F이고, X₃은 T이고, X₄는 S 또는 A이고, X₅는 Y이고, X₆은 A 또는 Y이다. 예시적인 HCDR1의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92 또는 100 중 하나로 표시된다.

본 발명의 항-BCMA 항체의 HCDR2는 IX₁X₂X₃X₄X₅X₆X₇(SEQ ID NO: 2)을 포함할 수 있다. 여기에서 X₁은 S, N 또는 Y이고, X₂는 W, T, A 또는 P이고, X₃은 N 또는 G이고, X₄는 S 또는 N이고, X₅는 D, G 또는 V이고, X₆은 T, N, S, D 또는 H이고, X₇은 I, M 또는 T이다. 일부 실시방식에 있어서, X₁은 S이고, X₂는 W이고, X₃은 N이고, X₄는 S이고, X₅는 D 또는 V이고, X₆은 T, N, H 또는 S이고, X₇은 I이다. 바람직하게는 이러한 실시방식에서 X₅는 D이고, X₆은 H 또는 N이다. 일부 실시방식에 있어서, X₁은 N이고, X₂는 T 또는 A이고, X₃은 G이고, X₄는 N이고, X₅는 G이고, X₆은 N이고, X₇은 T 또는 I이다. 예시적인 HCDR2의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 13, 21, 29, 37, 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93 또는 101 중 하나로 표시된다.

본 발명의 항-BCMA 항체의 HCDR3은 ARGGX₁X₂X₃X₄X₅X₆X₇YYX₈YYMDV(SEQ ID NO: 3)를 포함할 수 있다. 여기에서 X₁은 S 또는 R이고, X₂는 I 또는 L이고, X₃은 T 또는 E이고, X₄는 G 또는 L이고, X₅는 N 또는 D이고, X₆은 I 또는 V이고, X₇은 F 또는 Y이고, X₈은 Y 또는 F이다. 일부 실시방식에 있어서, X₁은 R이고, X₂는 L이고, X₃은 E이고, X₄는 L이고, X₅은 D이고, X₆은 I 또는 V이고, X₇은 Y이고, X₈은 F이다. 일부 실시방식에 있어서, 본 발명의 항-BCMA 항체의 HCDR3은 X₁X₂X₃X₄X₅X₆X₇FDY(SEQ ID NO: 4)를 포함할 수 있다. 여기에서 X₁ 은 A 또는 T이고, X₂는 K, R 또는 T이고, X₃은 V 또는 IQ이고, X₄는 S, V 또는 A이고, X₅는 G, S 또는 A이고, X₆은 A 또는 S이고, X₇은 V, S, Y 또는 T이다. 일부 실시방식에 있어서, 본 발명의 항-BCMA 항체의 HCDR3은 AKDIFSPTGDX₁Y(SEQ ID NO: 5)를 포함할 수 있다. 여기에서 X₁은 G 또는 D이다. 예시적인 HCDR3의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 14, 22, 30, 38, 46, 54, 62, 70, 78, 86, 94 또는 102 중 하나로 표시된다.

본 발명의 항-BCMA 항체의 LCDR1은 QX₁IX₂X₃X₄(SEQ ID NO: 6)를 포함할 수 있다. 여기에서 X₁은 S 또는 D이고, X₂는 H, I, S 또는 R이고, X₃은 S, N, S 또는 T이고, X₄는 Y, F 또는 N이다. 일부 실시방식에 있어서, X₁은 S 또는 D이고, X₂는 I이고, X₃은 S이고, X₄는 S 또는 T이고, X₅는 Y이다. 일부 실시방식에 있어서, 본 발명의 항-BCMA 항체의 LCDR1은 QSX₁X₂X₃X₄X₅X₆X₇X₈Y(SEQ ID NO: 7)를 포함할 수 있다. 여기에서 X₁ 은 L, V 또는 F이고, X₂는 L 또는 V이고, X₃은 H, Y 또는 S이고, X₄는 S 또는 SS이고, X₅는 N, Q 또는 D이고, X₆은 G 또는 N이고, X₇은 Y, K 또는 N이고, X₈은 N 또는 T이다. 일부 실시방식에 있어서, X₁은 L 또는 V, X₂는 L이고, X₃은 H이고, X₄는 S 또는 SS이고, X₅는 N, Q 또는 D이고, X₆은 G 또는 N이고, X₇은 K이고, X₈은 N이다. 예시적인 LCDR1의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 15, 23, 31, 39, 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95 또는 103 중 하나로 표시된다.

본 발명의 항-BCMA 항체의 LCDR2는 X₁X₂S(SEQ ID NO: 8)를 포함할 수 있다. 여기에서 X₁은 L, S, W, G, A 또는 K이고, X₂는 G, A 또는 L이다. 일부 실시방식에 있어서, X₁은 S, W, G 또는 A이며，X₂는 A이다. 예시적인 LCDR2의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96 또는 104 중 어느 하나로 표시된다.

본 발명의 항-BCMA 항체의 LCDR3은 X₁X₂X₃X₄X₅X₆X₇X₈X₉(SEQ ID NO: 9)를 포함할 수 있다. 여기에서 X₁ 는 M, Q 또는 L이고, X₂는 Q, G 또는 H이고, X₃은 A, S, Y, R 또는 H이고, X₄는 L, F, Y, T 또는 N이고, X₅는 Q, S, R, I 또는 H이고, X₆은 T, I, P, V, W 또는 Y이고, X₇은 P 또는 L이고, X₈은 Y, F, L 또는 P이고, X₉는 T 또는 I이다. 일부 실시방식에 있어서, X₁는 Q이고, X₂는 Q이고, X₃은 S 또는 Y이고, X₄는 F, Y 또는 S이고, X₅는 S 또는 R이고, X₆은 I 또는 P이고, X₇은 P 또는 L이고, X₈은 Y, L 또는 F이고, X₉는 T이다. 예시적인 LCDR3의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 17, 25, 33, 41, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97 또는 105 중 어느 하나로 표시된다.

일부 실시방식에 있어서, 본 발명의 항-BCMA 항체는 SEQ ID NO: 1로 표시되는 HCDR1, SEQ ID NO: 2로 표시되는 HCDR2 및 SEQ ID NO: 3, 4 또는 5로 표시되는 HCDR3을 포함하고/포함하거나, SEQ ID NO: 6 또는 7로 표시되는 LCDR 1, SEQ ID NO: 8로 표시되는 LCDR 2 및 SEQ ID NO: 9로 표시되는 LCDR 3을 포함한다. 바람직하게는, 본 발명의 항-BCMA 항체는 SEQ ID NO: 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92 또는 100 중 어느 하나로 표시되는 HCDR1, SEQ ID NO: 13, 21, 29, 37, 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93 또는 101 중 어느 하나로 표시되는 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 14, 22, 30, 38, 46, 54, 62, 70, 78, 86, 94 또는 102 중 어느 하나로 표시되는 HCDR3을 포함하고/포함하거나 SEQ ID NO: 15, 23, 31, 39, 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95 또는 103 중 어느 하나로 표시되는 LCDR1, SEQ ID NO: 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96 또는 104 중 어느 하나로 표시되는 LCDR2 및 SEQ ID NO: 17, 25, 33, 41, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97 또는 105 중 어느 하나로 표시되는 LCDR3을 포함한다.

보다 바람직하게는, 본 발명의 항-BCMA 항체는 하기 A군 내지 L군 중 어느 하나의 군으로 표시되는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3:

을 포함한다.

보다 바람직하게는, 본 발명의 항-BCMA 항체는 하기 a군 내지 l군 중 어느 하나의 군으로 표시되는 HCDR 및 LCDR:

을 포함한다.

본 발명의 항-BCMA 항체 VH의 FR1은 항체 7E11, 8H7, 11B10, 11G1, 15A7, 15H6, 18D10, 20A2 또는 23C4의 FR1로부터 선택될 수 있고, FR2는 항체 7E11, 8H7, 11B10, 11G1, 15A7, 15H6, 18D10 또는 20A2의 FR2로부터 선택될 수 있고, FR3은 항체 7E11, 8H7, 11B10, 11G1, 15A7, 18D10, 20A2, 23C4 또는 31F5의 FR3으로부터 선택될 수 있고, FR4는 항체 7E11, 8H7, 11B10, 11G1, 15A7, 15H6, 20A2 또는 31F5의 FR4로부터 선택될 수 있고/선택될 수 있거나, VL의 FR1은 항체 7E11, 8H7, 11B10, 11G1, 15A7, 15H6, 18D10 또는 20A2의 FR1로부터 선택될 수 있고, FR2는 항체 7E11, 8H7, 15A7, 15H6, 20A2, 23C4 또는 31F5의 FR2로부터 선택될 수 있고, FR3은 항체 7E11, 8H7, 11B10, 11G1, 15A7, 18D10, 20A2, 23C4, 27A7 또는 31F5의 FR3으로부터 선택될 수 있고, FR4는 항체 7E11, 11B10, 11G1, 15A7 또는 18D10의 FR4로부터 선택될 수 있다.

바람직한 실시방식에 있어서, 본 발명의 항-BCMA 항체 VH와 VL의 FR 영역은 항체 7E11, 8H7, 11B10, 11G1, 15A7, 15H6, 18D10, 20A2, 20A9, 23C4, 27A7 및 31F5의 어느 하나의 항체로부터 선택되는 VH와 VL의 FR 영역이다. 보다 바람직하게는 이러한 유형의 항체의 HCDR은 전술한 A군 내지 L군 중 어느 하나의 군으로부터 선택되고, LCDR은 전술한 1군 내지 12군 중 어느 하나의 군으로부터 선택된다. 보다 바람직하게는 이러한 유형의 항체의 CDR은 전술한 a군 내지 l군 중 어느 하나의 군으로부터 선택된다.

일부 실시방식에 있어서, 본 발명의 항-BCMA 항체의 VH의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 10, 18, 26, 34, 42, 50, 58, 66, 74, 82, 90 및 98 중 어느 하나로 표시되고/표시되거나, VL의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 11, 19, 27, 35, 43, 51, 59, 67, 75, 83, 91 및 99 중 하나로 표시된다. 바람직하게는, 본 발명의 항-BCMA 항체의 VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 10으로 표시되고, VL의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 11로 표시되거나, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 18로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 19로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 26으로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 27로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 34로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 35로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 42로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 43으로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 50으로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 51로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 58로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 59로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 66으로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 67로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 74로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 75로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 82로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 83으로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 90으로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 91로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 98로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 99로 표시된다.

일부 실시방식에 있어서, 본 발명의 항체의 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 106으로 표시되고/표시되거나 경쇄 불변 영역의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 107로 표시된다.

본 발명의 항체는 키메라 항체, 인간화 항체 또는 완전 인간 항체일 수 있다. 바라직하게는 완전 인간 항체이다. 본 발명의 실시예에서 제공하는 항체는 완전 인간 항체임을 이해해야 한다.

항체 활성에 실질적인 영향을 미치지 않는다는 전제 하에, 당업자는 본 발명의 서열에 대해 하나 이상의(예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 이상) 아미노산을 치환, 부가 및/또는 결실하여, 상기 항체 또는 그 기능성 단변 서열의 변이체를 획득할 수 있다. 이들은 모두 본 발명의 보호 범위 내에 포함되는 것으로 간주한다. 예를 들어, 가변 영역의 FR 및/또는 CDR 영역에서 유사한 성질을 갖는 아미노산을 치환한다. 치환은 바람직하게는 보존적 치환이며, 보존적으로 치환할 수 있는 아미노산 잔기는 당업계에 공지된 것이다. 일부 실시방식에 있어서, 본 발명의 변이체의 서열은 그 유래 서열과 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는다. 본 발명의 서열 동일성은 서열 분석 소프트웨어를 사용하여 측정될 수 있다. 예를 들어 기본 매개변수의 컴퓨터 프로그램 BLAST, BLASTP 또는 TBLASTN을 사용한다.

본 발명의 항-BCMA 항체는 변형되어 기능에 영향을 미칠 수 있다. 본 발명은 변형된 글리코실화 패턴을 갖는 항-BCMA 항체를 포함한다. 변형을 수행하여 원하지 않는 글리코실화 부위를 제거하거나, 올리고당 사슬 상에 푸코스 모이어티가 존재하지 않아 항체의 의존성 세포 독성(ADCC) 기능을 강화시킬 수 있거나, 또는 갈락토실화 변형을 수행하여 보체 의존성 세포독성(CDC)를 변형할 수 있다.

본 발명의 항-BCMA 항체는 통상적으로 10^-9 내지 10^-13M의 친화성 상수를 가질 수 있다.

당업계에 잘 알려진 하이브리도마 기술과 같은 당업계의 일반적인 방법을 채택해 본 발명의 항-BCMA 항체를 제조한다. 또는 본 발명의 항-BCMA 항체는 하이브리도마 세포주 이외의 세포주에서 발현될 수 있다. 본 발명의 항체를 코딩하는 서열을 이용해 적합한 포유동물 숙주 세포를 형질전환할 수 있다. 형질전환은 예를 들어 폴리뉴클레오티드를 바이러스(또는 바이러스 벡터)에 패키징하고 숙주 세포에 바이러스(또는 벡터)를 형질도입하는 것을 포함하는 임의의 공지된 방법에 의해 수행될 수 있다. 사용되는 형질전환 절차는 형질전환할 숙주에 따라 다르다. 이종 폴리뉴클레오티드를 포유동물 세포에 도입하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있으며, 덱스트란 매개의 형질감염, 인산칼슘 침전, 폴리브렌 매개의 형질감염, 원형질체 융합, 전기천공, 리포솜 내 폴리뉴클레오티드의 캡슐화 및 핵으로의 DNA의 직접 미세주입을 포함한다. 발현을 위한 숙주로 사용될 수 있는 포유동물 세포주는 당업계에 잘 알려져 있다. ATCC(American Type Culture Collection)에서 획득할 수 있는 다양한 불멸화 세포주를 포함하나 이에 한정되지 않으며, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, HeLa 세포, 아기 햄스터 신장(BHK) 세포, 원숭이 신장 세포(COS), 인간 간세포 암종 세포(예를 들어 HepG2) 등을 포함하나 이에 한전되지 않는다. 특히 바람직한 세포주는 높은 발현 수준을 갖고 기본적인 BCMA 결합 특성을 갖는 항체를 생성하는 세포주를 결정함으로써 선택된다.

항-BCMA 항체의 폴리뉴클레오티드 서열 코딩

본 발명은 핵산 분자를 제공하며, 여기에는 본 발명의 항-BCMA 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열이 포함된다. 본원은 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역, 중쇄, 경쇄 및 각 CDR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 제공한다.

본 발명의 핵산 분자는 단일 가닥 및 이중 가닥 형태의 DNA와 RNA, 및 상응하는 상보적 서열을 포함한다. DNA는 예를 들어 cDNA, 게놈 DNA, 화학적으로 합성된 DNA, PCR 증폭 DNA, 및 이들의 조합을 포함한다. 본 발명의 핵산 분자는 전장 유전자 또는 cDNA 분자 및 이들의 단편의 조합을 포함한다. 본 발명의 핵산은 바람직하게는 인간 공급원으로부터 유래되지만, 본 발명은 비인간으로부터 유래된 핵산도 포함한다.

본 발명에서, 분리된 핵산 분자는 개별 단편의 형태 또는 더 큰 핵산 구조물의 성분으로서 핵산 분자를 지칭한다. 바람직한 일 실시방식에 있어서, 핵산은 기본적으로 내인성 물질을 오염시키지 않는다. 핵산 분자는 바람직하게는 기본적으로 순수한 형태로 적어도 1회 단리된 DNA 또는 RNA로부터 유래되며, 그 양 또는 농도는 표준 생화학적 방법을 통해 그 성분 뉴클레오티드 서열을 확인, 조작 및 회수할 수 있도록 한다. 상기 서열은 바람직하게는 내부 비번역 서열 또는 인트론(전형적으로 진핵생물 유전자에 존재함)에 의해 중단되지 않은 개방 판독 프레임 형태로 제공 및/또는 구성된다. 비번역 DNA의 서열은 개방 판독 프레임의 5' 또는 3'에 존재할 수 있으며, 이는 마찬가지로 코딩 영역의 조작 또는 발현에 영향을 미치지 않는다.

본 발명은 적당히 가혹한 조건 하에, 바람직하게는 매우 엄격한 조건 하에서 본원에 기재된 바와 같은 항-BCMA 항체를 코딩하는 핵산에 혼성화하는 핵산을 포함한다. 혼성화 조건 선택에 영향을 미치는 기본 매개변수 및 적합한 조건 설계에 대한 지침은 Sambrook, Fritsch 및 Maniatis(1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 제9장과 제11장; 및 Current Protocols in Molecular Biology, 1995, Ausubel 등 편집, John Wiley & Sons, Inc., 2.10 및 6.3-6.4)를 참조한다.

본원에 개략된 바와 같이, 통상적으로 카세트 돌연변이 유발 또는 PCR 돌연변이 유발 또는 당업계에 널리 공지된 기타 기술을 사용하여 항-BCMA 항체를 코딩하는 DNA에서 뉴클레오티드의 부위 특이적 돌연변이 유발을 통해 변이체를 코딩하는 DNA를 생성한다. 그 후 세포 배양물에서 재조합 DNA를 발현하여 본 발명에 따른 변이체를 제조한다. 그러나 많게는 약 100 내지 150개의 잔기를 포함하는 항원 결합 단편은 확립된 기술을 사용하는 시험관내 합성에 의해 제조될 수 있다.

당업자가 이해하는 바와 같이, 유전자 코드의 축퇴성으로 인해, 매우 많은 수의 핵산을 제조할 있다. 이들 모두는 본 발명의 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩한다. 따라서 특정 아미노산 서열을 확인한 상황에서, 당업자는 단백질을 코딩하는 아미노산 서열을 변경하지 않는 방식을 통해 하나 이상의 코돈의 서열을 단순히 변형함으로써 임의의 수량의 상이한 핵산을 제조할 수 있다.

본 발명은 상술한 바와 같은 적어도 하나의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 플라스미드, 발현 벡터, 전사 카세트 또는 발현 카세트 형태의 발현 시스템 및 작제물을 더 제공한다. 또한 본 발명은 상기 발현 시스템 또는 작제물을 포함하는 숙주 세포를 제공한다.

임의 숙주 세포에 사용되는 발현 벡터는 통상적으로 플라스미드 유지 및 외인성 뉴클레오티드 서열의 클로닝 및 발현을 위한 서열을 함유한다. 상기 서열(특정 실시방식에서 "플랭킹 서열"로 통칭함)은 통상적으로 프로모터, 하나 이상의 인핸서 서열, 복제 기점, 전사 종결 서열, 공여체 및 수용체 스플라이스 부위를 함유한 완전 인트론 서열, 폴리펩티드 분비를 위한 프리앰블 서열을 코딩하는 서열, 리보솜 결합 부위, 폴리아데닐화 서열, 발현할 항체를 코딩하는 핵산의 삽입을 위한 폴리링커 영역 및 선택적인 마커 요소 중 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 이하에서는 이러한 각 서열을 설명한다.

벡터는 선택적으로 "태그" 코딩 서열, 즉 항-BCMA 항체 코딩 서열의 5' 또는 3' 말단에 위치한 올리고뉴클레오티드 분자를 함유할 수 있다. 올리고뉴클레오티드 서열은 폴리히스티딘(예를 들어 6His) 또는 또 다른 "태그"를 코딩하며, 예를 들어 FLAG, HA(헤마글루티닌 인플루엔자 바이러스) 또는 myc이며 이들은 시판되는 항체이다. 이 태그는 폴리펩티드를 발현할 때 전형적으로 폴리펩티드와 융합되며, 숙주 세포로부터 항-BCMA 항체의 친화성 정제 또는 검출을 위한 수단으로 작용할 수 있다. 친화성 정제는 예를 들어 친화성 매트릭스로서 이 태그에 대한 항체를 사용하는 컬럼 크로마토그래피에 의해 완료될 수 있다. 태그는 선택적으로 분해를 위한 특정 펩티다제의 사용과 같은 다양한 수단을 통해 정제된 BCMA 항-BCMA 항체로부터 후속적으로 제거할 수 있다.

플랭킹 서열은 상동성(즉, 숙주 세포와 동일한 물종 및/또는 균주에서 유래함), 이종성(즉, 숙주 세포 물종 또는 균주 이외의 물종에서 유래함), 잡종성(즉, 상술한 유래의 플랭킹 서열의 조합에서 유래함), 합성 또는 천연일 수 있다. 마찬가지로, 플랭킹 서열의 유래는 임의 원핵 또는 진핵 유기체, 임의 척추동물 또는 무척추 동물 유기체 또는 임의 식물일 수 있으며, 조건은 플랭킹 서열은 숙주 세포 기전에서 작용하고 숙주 세포 기전을 활성화할 수 있는 것이다.

복제 기점은 전형적으로 시중에서 구매한 원핵 발현 벡터의 일부이며, 이 기점은 숙주 세포에서 벡터의 증폭에 도움을 준다. 선택한 벡터가 복제 기점을 포함하지 않는 경우, 공지된 서열을 기반으로 화학적으로 합성하고 벡터에 연결할 수 있다. 예를 들어, 플라스미드 pBR322(New England Biolabs, Beverly, MA) 유래의 복제 기점은 대부분의 그람 음성 박테리아에 적합하며, 다양한 바이러스 기점(예를 들어 SV40, 폴리오마, 아데노바이러스, 수포성 구내염 바이러스(VSV) 또는 유두종 바이러스, 예를 들어 HPV 또는 BPV)은 포유동물 세포에서 벡터를 클로닝하는 데 적합하다. 포유동물 발현 벡터는 통상적으로 복제 기점 성분을 필요로 하지 않는다(예를 들어, 바이러스 초기 프로모터도 포함하기 때문에 종종 SV40 기점만 사용함).

전사 종결 서열은 전형적으로 폴리펩티드 코딩 영역의 3' 말단에 위치하며, 전사를 종결하는 데 사용된다. 원핵생물 중의 전사 종결 서열은 통상적으로 G-C가 풍부한 단편이며, 폴리 T 서열이 뒤따른다.

선택 가능한 마커 유전자는 선택성 배지에서 성장한 숙주 세포의 생존 및 성장에 필요한 단백질을 코딩한다. 전형적인 선택 마커 유전자는 (a) 항생제 또는 기타 독소에 대한(예를 들어, 원핵생물 숙주 세포의 경우 암피실린, 테트라사이클린 또는 카나마이신에 대한) 내성을 부여하고, (b) 세포의 영양요구성을 보완하거나, (c) 복합체나 결정된 배지에서 획득할 수 없는 중요한 영양소의 단백질을 제공한다. 특이성의 선택적 마커는 카나마이신 내성 유전자, 암피실린 내성 유전자 및 테트라사이클린 내성 유전자이다. 유리하게는, 네오마이신 내성 유전자도 원핵 및 진핵 숙주 세포에서 선택을 위해 사용될 수 있다.

리보솜 결합 부위는 rnRNA의 번역 개시에 통상적으로 필요한 것이며 Shine-Dalgarno 서열(원핵생물) 또는 Kozak 서열(진핵생물)로 특성화한다. 이 요소는 전형적으로 프로모터의 3' 및 발현할 폴리펩티드의 코딩 서열의 5'에 위치한다.

본 발명의 발현 및 클로닝 벡터는 전형적으로 숙주 유기체에 의해 인식되고 항-BCMA 항체를 코딩하는 분자와 작동 가능하도록 연결된 프로모터를 함유한다. 프로모터는 구조 유전자의 전사를 제어하는 구조 유전자(통상적으로 100 내지 1000bp 이내)의 개시 코돈 상류에 위치한 비전사 서열이다.

당업계에는 효모 숙주와 함께 사용하는 적합 프로모터가 공지되어 있다. 효모 인핸서는 효모 프로모터와 함께 사용하기에 유리하다. 포유동물 숙주 세포와 함께 사용하는 적합 프로모터는 잘 알려져 있으며, 예를 들어 폴리오마 바이러스, 계두 바이러스, 아데노바이러스(예를 들어 아데노바이러스 2), 소 유두종 바이러스, 조류 육종 바이러스, 거대세포 바이러스, 레트로 바이러스, B형 간염 바이러스 및 가장 바람직하게는 원숭이 바이러스40(SV40)의 바이러스 게놈으로부터 획득된 프로모터가 포함되나 이에 한정되지 않는다. 다른 적합한 포유동물 프로모터는 열 충격 프로모터 및 액틴 프로모터와 같은 이종 포유동물 프로모터를 포함한다.

인핸서 서열을 벡터에 삽입하여 고등 진핵생물을 통해 본 발명의 항-BCMA 항체를 구성하는 경쇄 또는 중쇄를 코딩하는 DNA의 전사를 증가시킬 수 있다. 인핸서는 프로모터에 작용하여 전사된 DNA의 시스 작용을 증가시키는 요소이며, 길이가 통상적으로 약 10 내지 300bp이다. 인핸서는 상대적인 방향 및 위치 독립성을 가지며, 전사 단위의 5' 및 3' 위치에서 인핸서가 이미 발견되었다. 글로불린, 엘라스타제, 알부민, 알파-태아단백 및 인슐린과 같은 포유동물 유전자로부터 획득 가능한 몇몇 인핸서 서열이 공지되어 있다. 그러나 전형적으로 바이러스 유래의 인핸서가 사용된다. 당업계에 공지된 SV40 인핸서, 거대세포 바이러스 초기 프로모터 인핸서, 폴리오마 인핸서, 및 아데노바이러스 인핸서는 진핵생물 프로모터를 활성화하기 위한 예시적인 인핸서 요소이다.

본 발명의 발현 벡터는 출발 벡터(예를 들어 시판되는 벡터)로 구축될 수 있다. 이러한 벡터는 모든 필요한 플랭킹 서열을 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. 본원에 따른 하나 이상의 플랭킹 서열이 벡터에 이미 존재하지 않는 경우, 이는 별도로 획득하여 벡터에 연결할 수 있다. 당업자는 각 플랭킹 서열을 획득 방법을 익히 알고 있다.

벡터를 구축하고 항-BCMA 항체를 포함하는 경쇄, 중쇄 또는 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 핵산 분자를 벡터의 적절한 부위에 삽입한 후, 완성된 벡터를 적합한 숙주 세포에 삽입하여 증폭 및/또는 폴리펩티드 발현에 사용할 수 있다. 공지된 방법을 통해 항-BCMA 항체의 발현 벡터를 선택한 숙주 세포에 형질전환한다. 상기 방법은 형질감염, 감염, 인산칼슘 공침전, 전기천공, 미세주입, 리포펙션, DEAE-덱스트란 매개의 형질감염 또는 기타 공지된 기술을 포함한다. 선택한 방법 부분은 사용할 숙주 세포의 유형에 따라 다를 수 있다.

적절한 조건에서 숙주 세포를 배양하여 항-BCMA 항체를 합성하도록 하면, 항-BCMA 항체는 배지로부터 수집하거나(숙주 세포가 이를 배지로 분비하는 경우) 직접 이를 생성하는 숙주 세포로부터 수집할 수 있다(분비하지 않는 경우). 적합한 숙주 세포는 앞서 설명한 바와 같다.

항-BCMA 항체의 치료 목적 용도

본원에 기술된 항-BCMA 항체의 모든 측면은 본원에 기술된 다양한 병태 및 질환을 치료하는 약물을 제조하는 데 사용될 수 있다. 상기 병태 및 질환은 특히 BCMA를 발현하는 B 세포(특히 기억 B 세포 및 혈장 B 세포) 관련 질환 또는 병태이다. 이러한 질환은 특히 BCMA를 상대적으로 높은 수준으로 발현하는 악성 형질 세포와 MGUS(monoclonal gammopathy of undetermined meaning)이다. 일부 실시방식에 있어서, 상기 병태 및 질환은 B 세포 관련 암이지만, 형질 세포 백혈병, 형질 세포 종양, B 세포 전림프구성 백혈병, 모발 세포 백혈병, B 세포 비호지킨 림프종(NHL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 여포성 림프종(여포성 비호지킨 림프종 유형 포함), 터트 림프종(풍토성 버킷 림프종, 산발성 버킷 림프종), 변연부 림프종(점막 관련 림프 조직, MALT/MALToma, 단핵구 B 세포 림프종, 융모 림프구가 있는 비장 림프종), 외투 세포 림프종, 대세포 림프종(미만성 거대 세포, 미만성 혼합 세포, 면역모세포성 림프종, 원발성 종격동 B 세포 림프종, 혈관 중심성 림프종-폐 B 세포), 소림프성 림프종(SLL), 전구 B-림프모구 림프종, 골수성 백혈병 (과립구성, 골수성, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 아급성 골수성 백혈병, 골수 육종, 클로로마, 과립구 육종, 급성 전골수구성 백혈병; 급성 골수단구성 백혈병), 발덴스트롬 마크로글로불린혈증 또는 기타 B 세포 림프종에 한정되지 않는다.

일부 실시방식에 있어서, 상기 병태 및 질환은 B 세포 관련 자가면역 질환으로, 전신성 홍반성 루푸스(SLE), 류마티스 관절염(RA), 다발성 경화증(MS), 쇼그렌병, 면역 매개 혈소판 감소증, 용혈성 빈혈, 수포성 천포창, 중증 근무력증, 제1형 당뇨병, 그레이브스병, 애디슨병, 낙엽상 천포창, 건선, 건선성 관절염, 강직성 척추염 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

진단 용도, 측정 및 키트

본 발명의 항-BCMA 항체는 진단 측정에 사용될 수 있다. 예를 들어 결합 측정하여 조직(예를 들어 골수) 또는 세포(예를 들어 형질 세포)에서 발현된 BCMA를 검출 및/또는 정량하는 데 사용될 수 있다. 항-BCMA 항체는 질병에서 BCMA의 작용을 연구하는 추가 연구에서 사용될 수 있다. 항-BCMA 항체는 동종 중합 및/또는 이종 중합 수용체 복합체의 형성에서 BCMA의 작용과 질환에서 상기 BCMA 수용체 복합체의 작용을 추가로 연구하는 데 사용될 수 있다.

BCMA의 혈청 함량은 예후가 될 수 있으며, 종양 부담을 측정하는 새로운 도구일 수 있다(SanchezE 등, Serum B-cell maturationantigen is elevated in multiple myeloma and correlates with disease status and survival, Br J Haematology, 158, 727-38(2012)). 본 발명의 실시방식은 종양 세포에 대한 막결합 BCMA에 대한 잠재적 대체물로서 가용성 BCMA를 측정하기 위한 진단 측정 및 키트를 포함한다.

본 발명의 항-BCMA 항체는 BCMA와 관련된 질환 및/또는 병태를 검출, 진단 또는 모니터링하기 위한 진단 목적으로 사용될 수 있다. 본 발명은 당업자에게 공지된 고전적 면역조직학적 방법을 사용하여 샘플에서 BCMA의 존재를 검출하는 것을 제공한다(예를 들어, Tijssen, 1993, Practice and Theory of Enzyme Immunoassays, 제15권, R.H. Burdon 및 P.H.vanKnippenberg 편집, Elsevier, Amsterdam; Zola, 1987, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, 제147-158페이지, CRC Press, Inc.; Jalkanen 등, 1985, J. Cell. Biol., 101: 976-985; Jalkanen 등, 1987, J. Cell Biol., 105: 3087-3096). BCMA의 검출은 생체내 또는 시험관내에서 수행될 수 있다. BCMA의 존재를 검출하기에 적합한 방법의 예시에는 ELISA, FACS, RIA 등이 포함된다.

진단 적용을 위해 항-BCMA 항체는 통상적으로 검출 가능한 마커 그룹으로 표지된다. 적합한 마커 그룹에는 방사성 동위원소 또는 방사성 핵종(예를 들어 ³H, ¹⁴C, ¹⁵N, ³⁵S, ⁹⁰Y, ⁹⁹Tc, ¹¹¹In, ¹²⁵I, ¹³¹I), 형광 그룹(예를 들어 FITC, 로다민, 란탄족 원소 인광체), 효소 그룹(예를 들어 양고추냉이 퍼옥시다제, β-갈락토시다제, 루시페라제, 알칼리성 포스파타제), 화학발광 그룹, 바이오티닐 그룹 또는 2차 리포터에 의해 인식되는 소정의 폴리펩티드 에피토프(예를 들어 류신 지퍼 쌍 서열, 2차 항체에 대한 결합 부위, 금속 결합 도메인, 에피토프 태그)가 포함되나 이에 한정되지 않는다. 일부 실시방식에 있어서, 마커 그룹은 다양한 길이의 스페이서 암을 통해 항-BCMA 항체과 커플링되어 잠재적인 입체 장애를 줄인다. 단백질 표지에 사용되는 다양한 방법은 당업계에 공지되어 있으며 본 발명을 수행하는 데 사용될 수 있다.

본 발명의 일 양상은 BCMA 발현을 확인하는 세포를 제공한다. 구체적인 일 실시방식에 있어서, 마커 그룹을 이용해 항체를 표지하고 표지된 항체와 BCMA의 결합을 검출한다. 구체적인 일 실시방식에 있어서, 생체내에서 항체와 BCMA의 결합을 검출한다. 다른 구체적인 일 실시방식에 있어서, 당업계에 공지된 기술을 사용해 항체-BCMA를 분리 및 측정한다.

본 발명의 다른 일 양상은 본 발명의 항체와 경쟁적으로 BCMA를 결합하는 시험 분자의 존재에 대한 검출을 제공한다. 상기 측정의 예시는 시험 분자의 존재 또는 부재 하에 일정량의 BCMA를 함유한 용액 중의 유리 항체의 양을 검출하는 것에 관한 것이다. 유리 항체(즉, BCMA에 결합하지 않는 항체)의 양 증가는 시험 분자가 해당 항체와 경쟁적으로 BCMA를 결합할 수 있음을 의미한다. 일 실시방식에 있어서, 마커 그룹을 이용해 항체를 표지한다. 또는 시험 분자를 표지하고 항체의 존재 또는 부재 하에서 유리 시험 분자의 양을 모니터링한다.

약학 조성물, 투여 경로

본 발명은 약학 조성물을 제공한다. 여기에는 치료학적 유효량의 하나 이상의 본 발명에 따른 항-BCMA 항체 및 약학적으로 허용 가능한 희석제, 담체, 가용화제, 유화제, 보존제 및/또는 보조제가 포함된다.

특정 실시방식에 있어서, 약학 조성물 중 허용 가능한 희석제, 담체, 가용화제, 유화제, 보존제 및/또는 보조제 등은 바람직하게는 사용되는 용량 및 농도에서 수용자에게 독성이 없다. 특정 실시방식에 있어서, 약학 조성물은 예를 들어 pH, 투과성, 점도, 투명도, 색상, 등장성, 냄새, 무균성, 안정성, 용해 또는 방출 속도, 흡수 또는 침투를 개선, 유지 또는 보존하는 이러한 물질을 함유할 수 있다. 이러한 물질은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 제18판, A. R. Genrmo 등, 1990, Mack Publishing Company를 참조할 수 있다.최적의 약학 조성물은 의도된 투여 경로, 전달 방식 및 원하는 용량에 의해 결정될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 비경구 전달을 위해 선택될 수 있다. 또는 조성물은 흡입 또는 소화관(예를 들어 경구)을 통한 전달을 위해 선택될 수 있다. 상기 약학적으로 허용 가능한 조성물의 제조는 당업계 기술 내에 속한다.

기타 약학 조성물은 당업계에 공지된 것으로, 지속적 또는 제어 방출 전달 제형에 항-BCMA 항체를 포함하는 제형을 포함한다. 다양한 기타 지속적 또는 제어 전달 방식을 제형화하는 기술(예를 들어 리포솜 담체, 생분해성 미세입자 또는 다공성 비드 및 데포 주사)도 당업자에게 공지되어 있다.

생체내 투여를 위한 약학 조성물은 일반적으로 멸균 제형의 형태로 제공된다. 멸균은 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 달성된다. 조성물이 동결건조될 때, 동결건조 및 재수화 전 또는 후에 이 방법을 사용하여 멸균할 수 있다. 비경구 투여용 조성물은 동결건조된 형태 또는 용액으로 저장할 수 있다. 비경구 조성물은 통상적으로 멸균 주입 구멍이 있는 용기에 넣는다. 예를 들어 피하 주사 바늘로 뚫을 수 있는 마개가 있는 정맥내 주사 용액 스트립 또는 바이알이 있다.

약학 조성물은 일단 제형화되면, 용액, 현탁액, 겔, 에멀젼, 고체, 결정 또는 탈수 또는 동결건조 분말의 형태로 멸균 바이알에 저장된다. 상기 제형은 즉시 사용 가능한 형태 또는 투여 전에 재수화의 형태로(예를 들어 동결건조)로 저장될 수 있다. 본 발명은 단일 용량 투여 단위를 제조하기 위한 키트도 제공한다. 본 발명의 키트는 각각 건조된 단백질이 담긴 제1 용기 및 수성 제형이 담긴 제2 용기를 함유할 수 있다. 본 발명의 특정 실시방식에 있어서, 단일-챔버 및 다중-챔버의 미리 채워진 주사기(예를 들어, 액체 주사기 및 동결건조 주사기)를 포함하는 키트가 제공된다.

본 발명은 본 발명의 어느 하나의 실시방식에 따른 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 약학 조성물을 투여함으로써 환자(특히 B 세포 관련 질환, 예를 들어 B 세포 관련 암 및 자가 면역 질환을 앓고 있는 환자)를 치료하는 방법도 제공한다.

본 명세서에서, 용어 "환자", "피험자", "개체", "대상체"는 본 명세서에서 호환하여 사용할 수 있다. 여기에는 임의 유기체, 바람직하게는 동물, 보다 바람직하게는 포유동물(예를 들어, 래트, 마우스, 개, 고양이, 토끼 등), 가장 바람직하게는 인간이 포함된다. "치료"는 피험자에게 본원에 따른 치료 방식을 채택하여 적어도 하나의 양성 치료 효과(예를 들어, 암 세포 수의 감소, 종양 부피의 감소, 주변 기관으로의 암세포 침윤 속도의 감소 또는 종양 전이 또는 종양 성장의 속도 감소)에 도달하는 것을 의미한다. 환자를 효과적으로 치료하는 치료 방식은 다양한 요소(예를 들어 환자의 질병 상태, 연령, 체중 및 피험자에서 항암 반응을 이끌어내는 요법의 능력)에 따라 달라질 수 있다.

사용되는 본 발명의 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유하는 약학 조성물의 치료학적 유효량은 예를 들어 치료 정도와 목표에 따라 다르다. 당업자는 치료를 위한 적절한 투여량 수준이 부분적으로 전달된 분자, 적응증, 투여 경로 및 환자의 크기(체중, 체표면 또는 장기 크기) 및/또는 상태(나이 및 일반 건강 상황)에 따라 다름을 이해한다. 특정 실시방식에 있어서, 임상의는 용량을 적정하고 투여 경로를 변경하여 최적의 치료 효과를 얻을 수 있다.

투여 빈도는 사용된 제형에서 특정 항-BCMA 항체의 약동학적 매개변수에 따라 달라진다. 임상의는 일반적으로 원하는 효과를 달성하는 용량에 도달할 때까지 조성물을 투여한다. 조성물은 단일 용량으로 투여되거나, 시간 경과에 따른 2회 이상의 용량(필요한 분자의 동일한 양을 함유하거나 함유하지 않을 수 있음)으로 투여되거나, 이식 장치 또는 카테터를 통한 연속 액체 주입 방식으로서 투여될 수 있다.

약학 조성물의 투여 경로는 공지된 방법이다. 예를 들어 경구, 정맥내, 복강내, 뇌내(실질내), 뇌실내, 근육내, 안구내, 동맥내, 문맥 또는 병변내 경로 주사가 있으며, 연속 방출 시스템을 통하거나 이식 장치를 통할 수 있다.

이하에서는 구체적인 실시예를 참조하여 본 발명을 상세하게 설명한다. 이러한 실시예는 예시적인 것일 뿐이며 본 발명의 범위를 제한하려는 것이 아님을 이해해야 한다. 실시예에 사용된 방법과 재료는 달리 명시되지 않는 한 당업계에서 일반적으로 사용하는 방법과 재료이다.

실시예 1: 인간 BCMA의 단일클론성 항체를 생산하기 위한 마우스의 면역화

인간 BCMA 전장 단백질(서열 참조 Uniprot 데이터베이스, 번호 Q02223)의 발현 벡터 pcDNA3.1(+)를 채택해 6주령 면역글로불린 인간화 마우스 AceMouse를 면역화한다. 제5차 강화 면역화는 상업용 재조합 BCMA 항원 단백질(Fc 태그, 카탈로그 번호 CS79, 공급업체 Novoprotein) 및 표준 프로인트 완전 보조제를 채택해 25㎍ 인간 재조합 BCMA 단백질 항원/마우스의 용량에 따라 수행한다.

실시예 2: 면역화된 마우스 혈청에 대한 효소결합 면역흡착 분석

인간 재조합 BCMA 항원 단백질(Novoprotein, 카탈로그 번호 CS79)을 PBS로 0.5ng/㎕로 희석하고, 항원 100㎕/well을 Maxisorp의 96-웰 평면 바닥 ELISA 플레이트에 첨가하며 신선보호 필름으로 밀봉한 후 밤새 4℃에 둔다. 하루 뒤에 항원을 쏟아낸 후 PBS(200㎕/well)로 1회 세척하고 PBS를 쏟아낸 후 흡수지 상에서 두드려 건조시키고 후 각 웰에 200㎕ 블로킹 용액(10% 소태아혈청을 함유한 PBS)을 첨가하며 실온에서 2시간 동안 블로킹하여 방치한다. 블로킹 종료 후, 블로킹 용액을 쏟아낸 후 흡수지 상에서 두드려 건조시킨다. 100㎕ 희석액(5% 소태아혈청을 포함한 PBS)을 첨가하고 혈청을 농도 구배 희석하고 실온에서 1시간 방치한다. 그 후 시료를 쏟아내고 세척액(0.05% Tween-20을 포함하는 PBS)으로 3회 세척한다. 마지막으로 세척액을 쏟아낸 후 흡수지 상에서 두드려 건조시킨다. 100㎕ 희석액을 첨가하여 HRP 커플링된 염소 항-마우스 IgG 2차 항체(최종 농도 0.4㎕/ml, 제조사 Biolegend, 카탈로그 번호 405306)를 희석시키고 실온에서 1시간 동안 방치한 후 액체를 쏟아낸다. 세척액(200㎕/well)으로 5회 세척하며, 마지막으로 세척액을 따라낸 후 흡수지 상에서 두드려 건조시킨다. 50㎕/well의 TMB-과산화수소 요소 용액(제조사 Thermo Scientific^TM, 카탈로그 번호 34029) 기질액을 첨가하고 실온에서 빛을 차단하고 3 내지 5분간 방치한다. 50㎕/well의 0.25M 황산을 첨가하여 반응을 정지시킨다. 그 후 다기능 마이크로플레이트 리더 상에서 450nm 파장에서의 흡광도를 측정하였다. 결과는 도 2에 도시된 바와 같다.

실시예 3: 전기융합 기술을 이용하여 면역화된 마우스 비장 세포로부터 하이브리도마 세포 획득

Ag8 마우스 골수종 세포를 미리 소생시킨다. Ag8 마우스 골수종 세포는 융합 당일에 계수한다. 성공적인 면역화 후 BCMA 마우스의 비장을 수송 배지 RPMI1640에 넣고 분리된 비장의 세포를 즉시 추출하고 계수하여 준비한다. 획득한 비장 세포와 골수종 세포는 각각 10ml의 RPMI 1640을 첨가하고 1회 세척한 후 4×10⁷개 비장 세포와 1×10⁷개 Ag8 마우스 골수종의 비율에 따라 혼합한다. 혼합 후 200G에서 5분간 원심분리하고 상층액을 버리며 10ml의 융합 용액으로 2회 세척하여 준비한다. 200G 실온에서 5분 동안 원심분리하고 상층액을 버리며 2.5ml 전기 융합 완충액을 첨가하여 재현탁하여 침전시킨다. 하나의 15mL 원심분리 튜브를 준비하고, 4.8mL의 예열한 RPMI 1640 배지를 첨가한다. 75% 알코올로 소독하고 공기 건조시킨 CUY497P2 전극에 혼합 세포 현탁액을 첨가하고 ECFG21 전기 융합 장치(제조사 NEPAGENE, 모델 ECFG21)의 표준 조작 프로세스를 채택해 세포를 전기 융합시킨다. 융합 완료 후 세포를 흡인하여 이전 배양 상자에 예열된 4.8ml의 RPMI1640 배지에 넣는다. HAT 배지에 세포를 재현탁하고 2×10⁵개 cell/well로 96-웰 평평한 바닥 플레이트에 놓는다. 96-웰 플레이트를 37℃ 배양 상자에 정치하여 배양한다. 매일 세포를 관찰하고 10일째에 상청액을 취하여 ELISA 1차 스크리닝을 수행한다.

실시예 4: 효소결합 면역흡착 분석을 이용한 항-인간 BCMA 단일클론성 항체 스크리닝

BCMA 항원(Novoprotein cat: CS79)을 PBS를 이용해 0.5ng/㎕로 희석한다. Maxisorp의 96-웰 평평한 바닥 ELISA 플레이트에 100㎕/well의 항원을 첨가하고 신선유지 필름으로 밀봉한 후 4℃에서 밤새 방치한다. 하루 뒤 항원을 쏟아낸 후 PBS(200㎕/well)로 1회 세척하고 PBS를 쏘아낸 후 흡수지 상에서 두드려 건조시키며 각 웰에 블로킹 용액 200㎕를 첨가하여 실온에서 1시간 동안 블로킹시킨다. 블로킹 종료 후, 블로킹 용액을 쏟아낸 후 흡수지 상에서 두드려 건조시킨다. 50㎕ 샘플(실시예 3에서 획득한 BCMA 하이브리도마 세포배양 상청액)을 첨가하고 실온에서 1시간 방치한 후 샘플을 따라내고 세척액으로 3회 세척한다. 마지막으로 세척액을 쏟아낸 후 흡수지 상에서 두드려 건조시킨다. 50㎕의 희석액으로 희석한 HRP 커플링된 염소 항-마우스 IgG 2차항체 첨가하여 실온에서 1시간 방치한 후 액체를 쏟아낸다. 세척액(200㎕/well)으로 5회 세척하며, 마지막으로 세척액을 K아낸 후 흡수지 상에서 두드려 건조시킨다. 10㎕/well의 TMB-과산화수소 요소 용액 기질액을 첨가하여 실온에서 3 내지 5분간 방치한다. 50㎕/well의 0.25M 황산을 첨가하여 반응을 정지시킨 후, 다기능 마이크로플레이트 리더 상에서 450nm 파장에서의 흡광도를 측정하였다. 결과는 표 1과 같다.

각주: 20A2가 ELISA 스크리닝 수행 시 하이브리도마 상청액 희석배수가 1:100인 것 이외에, 나머지 클론 ELISA 스크리닝에서 하이브리도마 상청액 희석배수는 1:50이다.

실시예 5: 유세포 분석을 이용한 항-인간 BCMA 항체 결합 U266 세포 표면 BCMA 검출 분석

200G 원심분리로 U266 세포를 수집하고 3% FCS를 포함하는 PBS로 1회 세척한다. 그 후 1.5ml의 3% FCS를 포함하는 PBS에 재재현탁하고, 세포를 96-웰 플레이트에 웰당 25㎕의 세포(2.5×10⁵)를 첨가하고, 웰당 75㎕ 샘플(실시예 3에서 획득하 BCMA 하이브리도마 세포 배양 상청액)을 첨가하며, 양성 참조 웰을 설치하여 75㎕ 하이브리도마 항-BCMA 항체(클론 19F2, 제조사 Biolegend 최종 농도 1㎍/ml)를 첨가한다. 음성 참조 웰 1은 75㎕ IgG2a 이소타입 대조군(클론 MG2a-53, 제조사 Biolegend, 최종 농도 1㎍/ml)를 첨가한다. 음성 참조 웰2와 음성 참조 웰3은 75㎕의 3% FCS를 포함하는 PBS를 첨가하고, 4℃ 냉장고에서 1시간 동안 배양한 다음 3% FCS를 포함하는 PBS로 2회 세척한다. 상청액을 따라낸 후 샘플 웰, 양성 참조 웰, 음성 참조 웰1 및 음성 참조 웰2에 50㎕의 500ng/ml 농도의 2차 항체(제조사 ebioscience, 염소 항-마우스 IgG-PE, 카탈로그 번호 12-4010-82)를 첨가한다. 음성 참조 웰3은 50㎕의 3% FCS를 포함하는 PBS만 첨가한 후 4℃ 냉장고에서 빛을 차단하여 30분간 배양한 다음 3% FCS를 포함하는 PBS로 2회 세척한다. 마지막으로 세포를 50㎕의 3% FCS를 함유하는 PBS에 재현탁하여 유세포 분석을 이용해 검출한다. 결과는 도 2에 도시된 바와 같다.

실시예 6: rProteinG 아가로스 기질 자기 미소구체를 이용한 실시예 3에서 획득한 BCMA 하이브리도마 상청액 분석 및 항-인간 BCMA 단일클론성 항체 정제

실시예 3에서 획득한 BCMA 하이브리도마 세포 배양에서 하이브리도마 상청액 8ml를 획득하고, 200㎕ rProteinG 아가로스 기질 자기 미소구체 현탁액(제조사 Changzhou Tiandiren Biotechnology, 카탈로그 번호 SM004C)을 첨가한 후 반전 믹서에 넣고 원심 분리 튜브를 부드럽게 뒤집어 실온에서 1 시간 동안 균일하게 흔든다. 원심분리 튜브에 5배의 자성 비드 부피의 불순물 세척액을 첨가해 2회 세척한 후 600㎕ 용리액을 첨가한다. 5회 피펫팅한 후 실온에서 반전 믹서에 넣고 부드럽게 원심분리 튜브를 뒤집어 10분간 용출시킨다. 용액이 상청액으로 변한 후 상청액을 흡인하여 용출 성분, 즉 표적 항원을 수집한다. 새로운 원심분리 튜브에 상청액을 수집하고, 즉시 60㎕ 중화액에 첨가한다. 용출 성분 pH를 7.0 내지 8.0으로 조절한다. 소량의 정제된 항체를 취하여 200μg/ml로 희석하고, 10㎕의 항체 용액에 2.5㎕의 5×단백질 로딩 완충액(비변성)(제조사 Sangon Biotech, 카탈로그 번호 C506032)을 첨가한다. 균일하게 혼합한 후 3개의 사전 염색된 단백질 마커(제조사 Sangon Biotech, 카탈로그 번호 C510010)와 각각 12% Tris-Glycine 전기영동 사전제작 겔(제조사 Sangon Biotech, 카탈로그 번호 C661102) 샘플 웰에 첨가한다. 사전제작 겔은 미리 Tris-SDS 전기영동 완충액(제조사 Sangon Biotech, 카탈로그 번호 C520001)을 채운 전기영동 탱크 내에 넣는다. 사전제작겔 제조사 표준 프로세스에 따라 전기영동을 수행한다. 전기영동 완료 후 범용 단백질 염색액(제조사 Sangon Biotech, 카탈로그 번호 C516024) 내에서 2시간 동안 염색한 후 용출 후 이미지를 스캔한다. 결과는 도 3에 도시된 바와 같다. 후속적 기능 분석을 위해 나머지 정제된 단일클론성 항체를 -20℃에서 보관한다.

실시예 7: 후보 항체 서열의 획득

후보 하이브리도마 세포를 배양하고, 1000rpm에서 원심분리하여 세포를 수집하며, 총 RNA를 Trizol로 추출한다. 이를 템플릿으로 사용하여 첫 번째 사슬 cDNA를 합성한 후, 첫 번째 사슬 cDNA를 후속 템플릿으로 사용하여 하이브리도마 세포에 대응하는 가변 영역의 DNA 서열을 증폭시킨다(Jones and Bendig, 1991). 50μl 반응 시스템에서 각각 1μl cDNA, 5μl 10×PCR 완충액, 1μl(25pmol) 업스트림 및 다운스트림 프라이머, 1μl dNTP, 1μl 25mmol PL MgCl2, 39μl H2O를 첨가하고, 95℃에서 10분간 사전 변성하며, Taq 효소 1μl를 추가하고 온도 주기를 입력하며 PCR 증폭을 수행한다. 반응 조건은 94℃에서 1분간 변성, 58℃에서 1분간 어닐링, 72℃에서 15초 연신이며, 총 32사이클 후 72℃에서 10분간 보온한다.

증폭된 산물을 시퀀싱한 후, 이하에 도시된 바와 같은 후보 하이브리도마의 항체 서열을 획득한다.

7E11

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8H7

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11B10

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11G1

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15A7

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15H6

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18D10

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20A2

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20A9

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23C4

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31F5

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상술한 항체의 중쇄 불변 영역 서열:

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:106);

경쇄 불변 영역:

RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:107)

실시예 8: 항-인간 BCMA 단일클론성 항체 결합 인간 BCMA의 친화도 분석

상기 실시예에 사용된 키트, 소모재 및 기구는 모두 GE Healthcare에서 구입하였다. 키트의 지침에 따라 인간 BCMA 항원(6His 태그, 카탈로그 번호 CC28, 공급업체 Novoprotein)을 칩 표면에 커플링한다. 그 후 HBS-EP+ 완충액으로 배율에 다라 희석하여, 각각 상이한 농도의 분석할 항체를 제조한다. 동시에 0 농도점 및 품질 관리 농도점을 설정한다. Biacore T200의 제조사 표준 설정 절차에 따라, 리간드를 포획한 플로우 셀을 검출 채널로, 미포획된 플로우 셀을 참조 채널로, HBS-EP+완충액을 이동상으로 사용하여, 각각 상이한 농도의 분석할 항체 용액을 주입한다. Biacore T200 Control Software 소프트웨어를 사용하여 SPR 신호를 수집한 후 Biacore T200 Evaluation 소프트웨어를 이용해 데이터 처리를 수행한다. 최종적으로 수득한 동역학 곡선의 동역학 분석 또는 정상 상태 분석을 통해 Ka, Kd 및 KD 값을 계산한다. 그 결과는 하기 표 2와 같다.

sequence listing <110> HUNAN ACEMAB CORPORATION LIMITED <120> ANTI-BCMA ANTIBODY, PHARMACEUTICAL COMPOSITION OF SAME, AND APPLICATIONS THEREOF <130> 19A249 <150> CN 202010090567.8 <151> 2020-02-13 <160> 107 <170> SIPOSequenceListing 1.0 <210> 1 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Xaa is F or Y <220> <221> MUTAGEN <222> (4)..(4) <223> Xaa is F or S <220> <221> MUTAGEN <222> (5)..(5) <223> Xaa is S, D, T, N or A <220> <221> MUTAGEN <222> (6)..(6) <223> Xaa is Y, D, S or A <220> <221> MUTAGEN <222> (7)..(7) <223> Xaa is Y, C or H <220> <221> MUTAGEN <222> (8)..(8) <223> Xaa is D, A or Y <400> 1 Gly Xaa Thr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 2 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR2 <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Xaa is S, N or Y <220> <221> MUTAGEN <222> (3)..(3) <223> Xaa is W, T, A or P <220> <221> MUTAGEN <222> (4)..(4) <223> Xaa is N or G <220> <221> MUTAGEN <222> (5)..(5) <223> Xaa is S or N <220> <221> MUTAGEN <222> (6)..(6) <223> Xaa is D, G or V <220> <221> MUTAGEN <222> (7)..(7) <223> Xaa is T, N, S, D or H <220> <221> MUTAGEN <222> (8)..(8) <223> Xaa is I, M or T <400> 2 Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 3 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 <220> <221> MUTAGEN <222> (5)..(5) <223> Xaa is S or R <220> <221> MUTAGEN <222> (6)..(6) <223> Xaa is I or L <220> <221> MUTAGEN <222> (7)..(7) <223> Xaa is T or E <220> <221> MUTAGEN <222> (8)..(8) <223> Xaa is G or L <220> <221> MUTAGEN <222> (9)..(9) <223> Xaa is N or D <220> <221> MUTAGEN <222> (10)..(10) <223> Xaa is I or V <220> <221> MUTAGEN <222> (11)..(11) <223> Xaa is F or Y <220> <221> MUTAGEN <222> (14)..(14) <223> Xaa is F or Y <400> 3 Ala Arg Gly Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Tyr Xaa Tyr Tyr 1 5 10 15 Met Asp Val <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 <220> <221> MUTAGEN <222> (1)..(1) <223> Xaa is A or T <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Xaa is K, R or T <220> <221> MUTAGEN <222> (3)..(3) <223> Xaa is V or IQ <220> <221> MUTAGEN <222> (4)..(4) <223> Xaa is S, V or A <220> <221> MUTAGEN <222> (5)..(5) <223> Xaa is G, S or A <220> <221> MUTAGEN <222> (6)..(6) <223> Xaa is A or S <220> <221> MUTAGEN <222> (7)..(7) <223> Xaa is V, S, Y or T <400> 4 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 5 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 <220> <221> MUTAGEN <222> (11)..(11) <223> Xaa is G or D <220> <221> UNSURE <222> (11)..(11) <223> The 'Xaa' at location 11 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu. <400> 5 Ala Lys Asp Ile Phe Ser Pro Thr Gly Asp Xaa Tyr 1 5 10 <210> 6 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Xaa is S or D <220> <221> MUTAGEN <222> (4)..(4) <223> Xaa is H, I, S or R <220> <221> MUTAGEN <222> (5)..(5) <223> Xaa is S, N, S or T <220> <221> MUTAGEN <222> (6)..(6) <223> Xaa is Y, F or N <400> 6 Gln Xaa Ile Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 7 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 <220> <221> MUTAGEN <222> (3)..(3) <223> Xaa is L, V or F <220> <221> MUTAGEN <222> (4)..(4) <223> Xaa is L or V <220> <221> MUTAGEN <222> (5)..(5) <223> Xaa is H, Y or S <220> <221> MUTAGEN <222> (6)..(6) <223> Xaa is S or SS <220> <221> MUTAGEN <222> (7)..(7) <223> Xaa is N, Q or D <220> <221> MUTAGEN <222> (8)..(8) <223> Xaa is G or N <220> <221> MUTAGEN <222> (9)..(9) <223> Xaa is Y, K or N <220> <221> MUTAGEN <222> (10)..(10) <223> Xaa is N or T <400> 7 Gln Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr 1 5 10 <210> 8 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR2 <220> <221> MUTAGEN <222> (1)..(1) <223> Xaa is L, S, W, G, A or K <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Xaa is G, A or L <400> 8 Xaa Xaa Ser 1 <210> 9 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR3 <220> <221> MUTAGEN <222> (1)..(1) <223> Xaa is M, Q or L <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Xaa is Q, G or H <220> <221> MUTAGEN <222> (3)..(3) <223> Xaa is A, S, Y, R or H <220> <221> MUTAGEN <222> (4)..(4) <223> Xaa is L, F, Y, T or N <220> <221> MUTAGEN <222> (5)..(5) <223> Xaa is Q, S, R, I or H <220> <221> MUTAGEN <222> (6)..(6) <223> Xaa is T, I, P, V, W or Y <220> <221> MUTAGEN <222> (7)..(7) <223> Xaa is P or L <220> <221> MUTAGEN <222> (8)..(8) <223> Xaa is Y, F, L or P <220> <221> MUTAGEN <222> (9)..(9) <223> Xaa is T or I <400> 9 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 10 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH <400> 10 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Tyr 20 25 30 Asp Met His Trp Val Arg Gln Gly Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Gly Thr Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser Leu Asn Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Gly Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Pro Tyr Tyr Tyr Asn Ser Ser Gly Tyr Tyr Ser Tyr Asp Ala 100 105 110 Leu Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Thr Ser 115 120 125 <210> 11 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL <400> 11 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Gly Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 12 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 <400> 12 Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Tyr Asp 1 5 <210> 13 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR2 <400> 13 Ile Gly Thr Ser Gly Asp Thr 1 5 <210> 14 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 <400> 14 Ala Arg Gly Pro Tyr Tyr Tyr Asn Ser Ser Gly Tyr Tyr Ser Tyr Asp 1 5 10 15 Ala Leu Asp Ile 20 <210> 15 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 <400> 15 Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr 1 5 10 <210> 16 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR2 <400> 16 Leu Gly Ser 1 <210> 17 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR3 <400> 17 Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 18 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH <400> 18 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Ile Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Asp Thr Ile Ala Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Val Ser Gly Ala Val Phe Asp Tyr Cys Gly Gln Gly Thr Gln 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 19 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL <400> 19 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Lys 1 5 10 15 Asp Arg Val Ile Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile His Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Phe Ser Ile Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 20 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 <400> 20 Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala 1 5 <210> 21 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR2 <400> 21 Ile Ser Trp Asn Ser Asp Thr Ile 1 5 <210> 22 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 <400> 22 Ala Lys Val Ser Gly Ala Val Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 23 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 <400> 23 Gln Ser Ile His Ser Tyr 1 5 <210> 24 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR2 <400> 24 Ser Ala Ser 1 <210> 25 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR3 <400> 25 Gln Gln Ser Phe Ser Ile Pro Tyr Thr 1 5 <210> 26 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH <400> 26 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Gly Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ser Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Ser Ile Thr Gly Asn Ile Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr 100 105 110 Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ala Ser 115 120 125 <210> 27 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL <400> 27 Asp Ile Val Val Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Phe Leu Ser Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Ser Ile Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile 100 105 110 Lys <210> 28 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 <400> 28 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Ala 1 5 <210> 29 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR2 <400> 29 Ile Asn Thr Gly Asn Gly Asn Thr 1 5 <210> 30 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 <400> 30 Ala Arg Gly Gly Ser Ile Thr Gly Asn Ile Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr 1 5 10 15 Met Asp Val <210> 31 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 <400> 31 Gln Ser Phe Leu Ser Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr 1 5 10 <210> 32 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR2 <400> 32 Trp Ala Ser 1 <210> 33 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR3 <400> 33 Gln Gln Tyr Tyr Ser Ile Pro Phe Thr 1 5 <210> 34 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH <400> 34 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Asp Asn Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ile Gln Ser Gly Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 35 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL <400> 35 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ile Asn Phe 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Cys Cys Gln Gln Ser Ser Ser Ile Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 36 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 <400> 36 Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala 1 5 <210> 37 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR2 <400> 37 Ile Ser Trp Asn Ser Asp Asn Ile 1 5 <210> 38 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 <400> 38 Ala Lys Ile Gln Ser Gly Ser Ser Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 39 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 <400> 39 Gln Ser Ile Ile Asn Phe 1 5 <210> 40 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR2 <400> 40 Gly Ala Ser 1 <210> 41 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR3 <400> 41 Gln Gln Ser Ser Ser Ile Pro Leu Thr 1 5 <210> 42 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH <400> 42 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Cys 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Asp Thr Met Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Leu Tyr His Cys 85 90 95 Thr Arg Val Arg Ala Ala Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 43 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL <400> 43 Asp Ile His Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Thr Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Arg Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Phe Ser Pro Leu Tyr 85 90 95 Ile Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 44 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 <400> 44 Gly Phe Thr Phe Asp Asp Cys Ala 1 5 <210> 45 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR2 <400> 45 Ile Ser Trp Asn Ser Asp Thr Met 1 5 <210> 46 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 <400> 46 Thr Arg Val Arg Ala Ala Val Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 47 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 <400> 47 Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 1 5 <210> 48 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR2 <400> 48 Ala Ala Ser 1 <210> 49 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR3 <400> 49 Gln Gln Ser Phe Ser Pro Leu Tyr Ile 1 5 <210> 50 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH <400> 50 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Ala Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Ala Gly Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ser Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Arg Leu Glu Leu Asp Ile Tyr Tyr Tyr Phe Tyr Tyr 100 105 110 Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 51 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL <400> 51 Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Thr Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu His Ser 20 25 30 Ser Gln Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Asn Pro Leu Ile His Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Arg Val Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile 100 105 110 Lys <210> 52 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 <400> 52 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Ala 1 5 <210> 53 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR2 <400> 53 Ile Asn Ala Gly Asn Gly Asn Thr 1 5 <210> 54 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 <400> 54 Ala Arg Gly Gly Arg Leu Glu Leu Asp Ile Tyr Tyr Tyr Phe Tyr Tyr 1 5 10 15 Met Asp Val <210> 55 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 <400> 55 Gln Ser Val Leu His Ser Ser Gln Asn Lys Asn Tyr 1 5 10 <210> 56 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR2 <400> 56 Trp Ala Ser 1 <210> 57 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR3 <400> 57 Gln Gln Tyr Tyr Arg Val Pro Phe Thr 1 5 <210> 58 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH <400> 58 Glu Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ser Asn Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Asp Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Val Val Ser Ala Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 59 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL <400> 59 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Ser Ile Ser Thr Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Lys Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gly Ser Tyr Ile Ile Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 60 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 <400> 60 Gly Phe Thr Ser Asn Asp Tyr Ala 1 5 <210> 61 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR2 <400> 61 Ile Ser Trp Asn Ser Asp Ser Ile 1 5 <210> 62 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 <400> 62 Ala Thr Val Val Ser Ala Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 63 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 <400> 63 Gln Ser Ile Ser Thr Tyr 1 5 <210> 64 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR2 <400> 64 Ala Ala Ser 1 <210> 65 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR3 <400> 65 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Tyr Lys Leu Ser Ser Arg Asp Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Met Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Arg 85 90 95 Thr His Trp Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 68 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 <400> 68 Gly Tyr Thr Phe Thr Ala Tyr Tyr 1 5 <210> 69 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR2 <400> 69 Ile Tyr Pro Asn Ser Gly Asp Thr 1 5 <210> 70 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 <400> 70 Ala Arg Gly Phe Asn Trp Asn Tyr Glu Gly Gly Phe Asp Ile 1 5 10 <210> 71 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 <400> 71 Gln Ser Leu Val Tyr Ser Asp Gly Asn Thr Tyr 1 5 10 <210> 72 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR2 <400> 72 Lys Leu Ser 1 <210> 73 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR3 <400> 73 Met Gln Arg Thr His Trp Pro Pro Thr 1 5 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Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Arg Val Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile 100 105 110 Lys <210> 76 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 <400> 76 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Ala 1 5 <210> 77 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR2 <400> 77 Ile Asn Ala Gly Asn Gly Asn Ile 1 5 <210> 78 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 <400> 78 Ala Arg Gly Gly Arg Leu Glu Leu Asp Val Tyr Tyr Tyr Phe Tyr Tyr 1 5 10 15 Met Asp Val <210> 79 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 <400> 79 Gln Ser Val Leu His Ser Ser Gln Asn Lys Asn Tyr 1 5 10 <210> 80 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR2 <400> 80 Trp Ala Ser 1 <210> 81 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR3 <400> 81 Gln Gln Tyr Tyr Arg Val Pro Phe Thr 1 5 <210> 82 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH <400> 82 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ala Asp His 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Asp His Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Ile Phe Ser Pro Thr Gly Asp Gly Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 83 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL <400> 83 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg Asn Asn 20 25 30 Leu Gly Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Thr Pro Lys Arg Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ile Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu His His Asn Ser Tyr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 84 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 <400> 84 Gly Phe Thr Phe Ala Asp His Ala 1 5 <210> 85 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR2 <400> 85 Ile Ser Trp Asn Ser Asp His Ile 1 5 <210> 86 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 <400> 86 Ala Lys Asp Ile Phe Ser Pro Thr Gly Asp Gly Tyr 1 5 10 <210> 87 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 <400> 87 Gln Asp Ile Arg Asn Asn 1 5 <210> 88 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR2 <400> 88 Ala Ala Ser 1 <210> 89 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR3 <400> 89 Leu His His Asn Ser Tyr Pro Pro Thr 1 5 <210> 90 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH <400> 90 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp His 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Val His Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Ile Phe Ser Pro Thr Gly Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 91 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL <400> 91 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg Asn Asn 20 25 30 Leu Gly Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Thr Pro Lys Arg Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu His His Asn Ser Tyr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 92 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 <400> 92 Gly Phe Thr Phe Asp Asp His Ala 1 5 <210> 93 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR2 <400> 93 Ile Ser Trp Asn Ser Val His Ile 1 5 <210> 94 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 <400> 94 Ala Lys Asp Ile Phe Ser Pro Thr Gly Asp Asp Tyr 1 5 10 <210> 95 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 <400> 95 Gln Asp Ile Arg Asn Asn 1 5 <210> 96 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR2 <400> 96 Ala Ala Ser 1 <210> 97 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR3 <400> 97 Leu His His Asn Ser Tyr Pro Pro Thr 1 5 <210> 98 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH <400> 98 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Asp Asn Ile Ala Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Glu Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Val Ala Ala Ala Thr Phe Asp Tyr Arg Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 99 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL <400> 99 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Phe Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Ser Cys Gln Gln Ser Phe Ser Ile Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys 100 105 <210> 100 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR1 <400> 100 Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala 1 5 <210> 101 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR2 <400> 101 Ile Ser Trp Asn Ser Asp Asn Ile 1 5 <210> 102 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HCDR3 <400> 102 Ala Lys Val Ala Ala Ala Thr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 103 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR1 <400> 103 Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 1 5 <210> 104 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR2 <400> 104 Ala Ala Ser 1 <210> 105 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LCDR3 <400> 105 Gln Gln Ser Phe Ser Ile Pro Phe Thr 1 5 <210> 106 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain constant region <400> 106 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 107 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain constant region <400> 107 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105

Claims

항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서,
상기 항-BCMA 항체는 SEQ ID NO: 1로 표시되는 HCDR1, SEQ ID NO: 2로 표시되는 HCDR2 및 SEQ ID NO: 3, 4 또는 5로 표시되는 HCDR3을 포함하고/포함하거나, SEQ ID NO: 6 또는 7로 표시되는 LCDR 1, SEQ ID NO: 8로 표시되는 LCDR 2 및 SEQ ID NO: 9로 표시되는 LCDR 3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제1항에 있어서,
상기 항-BCMA 항체는 SEQ ID NO: 12, 20, 28, 36, 44, 52, 60, 68, 76, 84, 92 또는 100 중 어느 하나로 표시되는 HCDR1, SEQ ID NO: 13, 21, 29, 37, 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93 또는 101 중 어느 하나로 표시되는 HCDR2, 및 SEQ ID NO: 14, 22, 30, 38, 46, 54, 62, 70, 78, 86, 94 또는 102 중 어느 하나로 표시되는 HCDR3을 포함하고/포함하거나 SEQ ID NO: 15, 23, 31, 39, 47, 55, 63, 71, 79, 87, 95 또는 103 중 어느 하나로 표시되는 LCDR1, SEQ ID NO: 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, 72, 80, 88, 96 또는 104 중 어느 하나로 표시되는 LCDR2 및 SEQ ID NO: 17, 25, 33, 41, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97 또는 105 중 어느 하나로 표시되는 LCDR3을 포함하는 것을 특징으로 하는 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제1항에 있어서,
상기 항-BCMA 항체는 하기 A군 내지 L군 중 어느 하나의 군으로 표시되는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3:

및/또는 하기 1군 내지 12군 중 어느 하나의 군으로 표시되는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3:

을 포함하는 것을 특징으로 하는 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제1항에 있어서,
상기 항-BCMA 항체는 하기 a군 내지 l군 중 어느 하나의 군으로 표시되는 HCDR 및 LCDR:

을 포함하는 것을 특징으로 하는 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항-BCMA 항체 VH의 FR1은 항체 7E11, 8H7, 11B10, 11G1, 15A7, 15H6, 18D10, 20A2 또는 23C4의 FR1로부터 선택되고, FR2는 항체 7E11, 8H7, 11B10, 11G1, 15A7, 15H6, 18D10 또는 20A2의 FR2로부터 선택되고, FR3은 항체 7E11, 8H7, 11B10, 11G1, 15A7, 18D10, 20A2, 23C4 또는 31F5의 FR3으로부터 선택되고, FR4는 항체 7E11, 8H7, 11B10, 11G1, 15A7, 15H6, 20A2 또는 31F5의 FR4로부터 선택되고/선택되거나, VL의 FR1은 항체 7E11, 8H7, 11B10, 11G1, 15A7, 15H6, 18D10 또는 20A2의 FR1로부터 선택되고, FR2는 항체 7E11, 8H7, 15A7, 15H6, 20A2, 23C4 또는 31F5의 FR2로부터 선택되고, FR3은 항체 7E11, 8H7, 11B10, 11G1, 15A7, 18D10, 20A2, 23C4, 27A7 또는 31F5의 FR3으로부터 선택되고, FR4는 항체 7E11, 11B10, 11G1, 15A7 또는 18D10의 FR4로부터 선택되고, 바람직하게는 상기 항-BCMA 항체 VH와 VL의 FR 영역은 항체 7E11, 8H7, 11B10, 11G1, 15A7, 15H6, 18D10, 20A2, 20A9, 23C4, 27A7 및 31F5의 어느 하나의 항체로부터 선택되는 VH와 VL의 FR 영역인 것을 특징으로 하는 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제1항에 있어서,
상기 항-BCMA 항체의 VH의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 10, 18, 26, 34, 42, 50, 58, 66, 74, 82, 90 및 98 중 어느 하나로 표시되고/표시되거나, VL의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 11, 19, 27, 35, 43, 51, 59, 67, 75, 83, 91 및 99 중 하나로 표시되고, 바람직하게는 상기 항-BCMA 항체의 VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 10으로 표시되고, VL의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 11로 표시되거나, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 18로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 19로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 26으로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 27로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 34로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 35로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 42로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 43으로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 50으로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 51로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 58로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 59로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 66으로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 67로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 74로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 75로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 82로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 83으로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 90으로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 91로 표시되고, VH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 98로 표시되고, VL 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 99로 표시되는 것을 특징으로 하는 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항-BCMA 항체는 키메라 항체 또는 완전 인간 항체이고, 바람직하게는 완전 인간 항체인 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
약학 조성물로서,
상기 약학 조성물은 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 약학적으로 허용 가능한 부형제 또는 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
핵산 분자으로서,
(1) 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열; 및
(2) (1)에 따른 폴리뉴클레오티드 서열의 상호 서열로부터 선택되는 핵산 분자.
B세포 관련 질환 치료에서 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 응용으로서,
바람직하게는 상기 B 세포 관련 질환은 B 세포 관련 종양 또는 자가 면역 질환인 응용.