JP2023512454A

JP2023512454A - タンパク質治療のための製剤

Info

Publication number: JP2023512454A
Application number: JP2022542670A
Authority: JP
Inventors: クラッパー，ジョナサン; ビアンヴニュ，デイビッド; ストロマット，スコット; ジェイ．マクマハン，キャサリン
Original assignee: アプティーボリサーチアンドデベロップメントエルエルシー
Priority date: 2020-01-13
Filing date: 2021-01-13
Publication date: 2023-03-27
Also published as: AU2021207470A1; WO2021146328A1; BR112022013725A2; EP4090367A1; IL294458A; CN115279406A; US20230303720A1; MX2022008654A; CA3164385A1; KR20220127843A

Abstract

本明細書で記載されるのは、静脈内投与のための多重特異的ポリペプチドおよび融合タンパク質を含む、タンパク質治療薬を含む組成物である。組成物は、例えば、多重特異的タンパク質、緩衝液、賦形剤、および界面活性物質を含み得る。いくつかの実施形態では、組成物は、多重特異的タンパク質、コハク酸エステル緩衝液、スクロース、およびポリソルベート８０を含み得る。本明細書で提供されるのはまた、それを必要としている対象に組成物を投与するための投与計画を含む、臨床方法である。【選択図】図２

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年１２月４日に出願された米国特許仮出願第６３／１２１，６３３号、および２０２０年１月１３日に出願された米国特許仮出願第６２／９６０，５６２号に対する優先権を主張する。これらそれぞれの仮出願は、本出願においてその全体が本明細書に組み込まれる。
開示の分野

本開示は、タンパク質治療のための製剤に関する。具体的には、本開示は、二重特異的または多重特異的タンパク質、緩衝液、賦形剤、および界面活性物質を含む組成物に関する。より具体的には、本開示は、ＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む二重特異的または多重特異的タンパク質のための製剤に関する。本開示はまた、タンパク質治療を、それを必要としている対象へ投与するための投与計画を含む臨床方法に関する。

配列表
本出願は、電子申請された配列表を含み、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。配列表は、２０２１年１月１３日に記録され、ＡＰＶＯ＿０６１＿０２ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔと命名され、約１０３キロバイトの大きさである。

タンパク質治療の開発に成功するための重要なステップの１つは、長期貯蔵、医療専門家による取扱い、および投与中にタンパク質の物理的および化学的健全性を維持する製剤の開発である。静脈内（ｉ．ｖ．）経路により投与されるタンパク質治療薬は多くの場合、濃縮溶液で凍結貯蔵され、使用前に医院で希釈される。さらに、二重特異性抗体および多重特異的抗体などのタンパク質治療薬、特に１種または複数のｓｃＦｖドメインを含むものは、凝集体を形成する傾向があり得る。

特に、静脈内経路により投与するための、タンパク質製剤の開発は、タンパク質の性質、製剤組成物、希釈剤の選択、貯蔵温度、注入速度、光への曝露、などを含む多くの因子の注意深い考慮が必要である。当該技術分野において、特に静脈内経路による投与に用いるタンパク質治療のための安定な製剤が必要とされている。

また、Ｔ細胞エンゲージメントにより作用する二重特異的および多重特異的治療薬（すなわち、Ｔ細胞エンゲージャー）で治療される患者におけるサイトカイン放出の影響に関連するリスクを軽減する投与戦略が必要とされている。このクラスの治療薬は、ＣＤ１２３およびＣＤ３を標的とする二重特異的治療薬を含む。再発または難治性の急性骨髄性白血病およびその他のＣＤ１２３発現血液悪性腫瘍の患者を対象に評価中であるＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異的抗体分子、ｍＡｂ１４０４５（Ｘｅｎｃｏｒ）は、第１相試験において、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）による１名の死亡を含む患者２名が死亡したため、２０１９年にＦＤＡにより部分実施保留とされた。

サイトカイン放出症候群を含むサイトカイン放出の重篤な影響の可能性を低減するように設計された投与戦略は、治療に効果的でない可能性がある。従って、サイトカイン毒性を含む毒性のリスクを軽減する方式で治療有効量のＴ細胞エンゲージャー（ＣＤ１２３ｘＣＤ３治療薬など）の患者への送達方法に対する必要性が残されている。

本明細書で記載されるのは、静脈内投与のための、多重特異的ポリペプチドおよび融合タンパク質を含むタンパク質治療薬を含む組成物である。組成物は、例えば、多重特異的タンパク質、緩衝液、賦形剤、および界面活性物質を含み得る。いくつかの実施形態では、組成物は、多重特異的タンパク質、コハク酸エステル緩衝液、スクロース、およびポリソルベート８０を含み得る。いくつかの実施形態では、組成物は、静脈内または皮下投与用である。

本開示は、コハク酸エステル緩衝液およびスクロースと共に配合される多重特異的ポリペプチドを提供する。いくつかの実施形態では、多重特異的ポリペプチドは、２つ以上のｓｃＦｖ結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、多重特異的ポリペプチドは、ホモダイマーを形成する。他の実施形態では、多重特異的ポリペプチドは、ヘテロダイマーを形成する。いくつかの実施形態では、多重特異的ポリペプチドは、ｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ（例えば、ＡＤＡＰＴＩＲ（登録商標））、クアドローマ、Ｋλボディ（Ｋλ－ｂｏｄｙ）、ｄＡｂ、ディアボディ、ＴａｎｄＡｂ、ナノボディ、ＤＯＣＫ－ＡＮＤ－ＬＯＣＫ（登録商標）（ＤＮＬ（登録商標））、ＣｒｏｓｓＭａｂＦａｂ、ＣｒｏｓｓＭａｂＶＨ－ＶＬ、鎖交換改変ドメインボディ（ｓｔｒａｎｄ－ｅｘｃｈａｎｇｅｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄｄｏｍａｉｎｂｏｄｙ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）、アフィボディ、フィノマー、クニッツドメイン、Ａｌｂｕ－ｄａｂ、交換ＶＨを有する２つの改変Ｆｖフラグメント（ｔｗｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄＦｖｆｒａｇｍｅｎｔｓｗｉｔｈｅｘｃｈａｎｇｅｄＶＨｓ（例えば、二重親和性親和性再標的化分子（ｄｕａｌ－ａｆｆｉｎｉｔｙｒｅ－ｔａｒｇｅｔｉｎｇｍｏｌｅｃｕｌｅ）（Ｄ．Ａ．Ｒ．Ｔ．））、ｓｃＦｖｘｓｃＦｖ（例えば、ＢｉＴＥ）、ＳＶＤ－ＩＧ、Ｃｏｖｘ－ｂｏｄｙ、ペプチボディ、ｓｃＦｖ－Ｉｇ、ＳＶＤ－Ｉｇ、ｄＡｂ－Ｉｇ、Ｋｎｏｂ－ｉｎ－Ｈｏｌｅｓ、ＣＨ３ドメイン中に一致変異を含むＩｇＧ１抗体（ＩｇＧ１ａｎｔｉｂｏｄｙｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇｍａｔｃｈｅｄｍｕｔａｔｉｏｎｉｎｔｈｅＣＨ３ｄｏｍａｉｎ）（例えば、デュオボディ抗体）およびトリオマブからなる群より選択されるフォーマットである。

いくつかの実施形態では、本開示は、多重特異的タンパク質、緩衝液、賦形剤および界面活性物質を含む組成物を提供し、多重特異的タンパク質は、２つの同一のポリペプチドのダイマーであり、各ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端への順で、またはカルボキシル末端からアミノ末端への順で、（ｉ）第１の結合ドメイン、（ｉｉ）ヒンジ領域、（ｉｉｉ）免疫グロブリン定常領域、および（ｉｖ）第２の結合ドメイン、を含み；緩衝液は、コハク酸エステルまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは酸を含む。いくつかの実施形態では、各ポリペプチドは、配列番号３１と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含む。

いくつかの実施形態では、組成物は、約１ｍＭ～約１０ｍＭのコハク酸エステル、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは酸を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約約５ｍＭのコハク酸エステル、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは酸を含む。

いくつかの実施形態では、賦形剤は、スクロースなどの糖を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、組成物は、約１重量／体積（ｗ／ｖ）％～約１２ｗ／ｖ％の糖を含み得る。いくつかの実施形態では、組成物は、約６．５ｗ／ｖ％の糖を含む。

いくつかの実施形態では、界面活性物質は、ポリソルベート８０を含む、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、組成物は、約０．０２ｗ／ｖ％のポリソルベート８０を含む。

いくつかの実施形態では、組成物は、約０．１ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌの多重特異的タンパク質を含む。例えば、組成物は、約１ｍｇ／ｍｌ～約５ｍｇ／ｍｌの多重特異的タンパク質を含み得る。いくつかの実施形態では、組成物は、約２ｍｇ／ｍｌの多重特異的タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約５ｍＭのコハク酸エステル、約６．５重量／体積（ｗ／ｖ）％のスクロースおよび約０．０２ｗ／ｖ％のポリソルベート８０を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約４．０～約５．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、組成物は、約４．８のｐＨを有する。

いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ヒトＦｃドメインである。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２またはＩｇＤの免疫グロブリンＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。

いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＣＤ３結合ドメインであり、第２の結合ドメインは、腫瘍抗原結合ドメインである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端へ、ＣＤ３結合ドメイン、ヒンジ領域、免疫グロブリン定常領域、および腫瘍抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１のドメインは、腫瘍抗原結合ドメインであり、第２の結合ドメインは、ＣＤ３結合ドメインである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端へ、腫瘍抗原結合ドメイン、ヒンジ領域、免疫グロブリン定常領域、およびＣＤ３結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原結合ドメインは、ＣＤ１２３、ＰＳＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ３３、５Ｔ４、またはＨＥＲ２に結合する。

いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、４－１－ＢＢ結合ドメインであり、第２の結合ドメインは、腫瘍抗原結合ドメインである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端へ、４－１－ＢＢ結合ドメイン、ヒンジ領域、免疫グロブリン定常領域、および腫瘍抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、腫瘍抗原結合ドメインであり、第２の結合ドメインは、４－１－ＢＢ結合ドメインである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端へ、腫瘍抗原結合ドメイン、ヒンジ領域、免疫グロブリン定常領域、および４－１－ＢＢ結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原結合ドメインは、ＣＤ１２３、ＰＳＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ３３、５Ｔ４、またはＨＥＲ２に結合する。

いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインの少なくとも１つは、（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；および（ｉｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインおよび第２の結合ドメインの少なくとも１つは、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖの軽鎖可変領域は、ｓｃＦｖの重鎖可変領域に対しカルボキシ末端である。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖの軽鎖可変領域は、ｓｃＦｖの重鎖可変領域に対しアミノ末端である。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、リンカーポリペプチドを含む。リンカーポリペプチドは、例えば、ｓｃＦｖの軽鎖可変領域と重鎖可変領域との間に存在してよい。いくつかの実施形態では、リンカーポリペプチドは、Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ（配列番号１２８）リンカー、例えば、（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_ｎを含み、式中ｎ＝１～５である（配列番号１２９）。

いくつかの実施形態では、腫瘍抗原結合ドメインは、配列番号１０を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１２を含むＨＣＤＲ３；ならびに配列番号１３を含むＬＣＤＲ１、配列番号１４を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む抗ＣＤ１２３ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原結合ドメインは、配列番号１３６と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含むＶＨ、および配列番号１３４と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含むＶＬを含む抗ＣＤ１２３ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原結合ドメインは、抗ＣＤ１２３ｓｃＦｖであり、ｓｃＦｖは、配列番号１８と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含む。

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号１９を含むＨＣＤＲ１、配列番号２０を含むＨＣＤＲ２、および配列番号２１を含むＨＣＤＲ３；ならびに配列番号２２を含むＬＣＤＲ１、配列番号２３を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２４を含むＬＣＤＲ３を含む抗ＣＤ３ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３抗原結合ドメインは、配列番号３８３または３８７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含むＶＨ、および配列番号３８４と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含むＶＬを含む抗ＣＤ３ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号２７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含む抗ＣＤ３ｓｃＦｖである。

いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＦｃγＲ結合、ＡＤＣＣ活性、および／またはＣＤＣ活性を低減／防止するために、１個または複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＥＵナンバリングシステムに従って、置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、およびＫ３２２Ａを含むヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメインを含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＥＵナンバリングシステムに従って、置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｋ３２０ＡおよびＫ３２２Ａを含むヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメインを含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンは、配列番号１３１の配列、またはそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％同一である配列を含む。

いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域由来である。

いくつかの実施形態では、各ポリペプチドは、免疫グロブリン定常領域と第２の結合ドメインとの間にＦｃ結合ドメインリンカーを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ（配列番号１２８）配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、式（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_ｎ（式中ｎ＝１～５）（配列番号１２９）を含む。

いくつかの実施形態では、組成物は、多重特異的タンパク質の分解を実質的に防ぐ。いくつかの実施形態では、組成物は、４℃で少なくとも１年間、実質的に安定である。いくつかの実施形態では、組成物は、多重特異的タンパク質の凝集体の形成に実質的に耐性である。

本開示はまた、融合タンパク質、緩衝液、賦形剤および界面活性物質を含む組成物を提供し、融合タンパク質は、２つの同一のポリペプチドのダイマーであり、各ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端への順で、（ｉ）ＣＤ１２３に特異的に結合する第１の結合ドメイン、（ｉｉ）ヒンジ領域、（ｉｉｉ）免疫グロブリン定常領域、および（ｉｖ）ＣＤ３に特異的に結合する第２の結合ドメイン、を含み；緩衝液は、コハク酸エステルまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは酸を含むまたはそれからなる。

本開示はまた、融合タンパク質、緩衝液、賦形剤および界面活性物質を含む組成物を提供し、融合タンパク質は、ＣＤ１２３に特異的に結合する第１の結合ドメインおよびＣＤ３に特異的に結合する第２の結合ドメインを含み；緩衝液は、コハク酸エステルまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは酸を含むまたはそれからなる。

本開示はまた、融合タンパク質、緩衝液、賦形剤および界面活性物質を含む組成物を提供し、融合タンパク質は、（ｉ）ＣＤ１２３に特異的に結合する第１の結合ドメインであって、配列番号１０のＨＣＤＲ１、配列番号１１のＨＣＤＲ２、および配列番号１２のＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号１３のＬＣＤＲ１、配列番号１４のＬＣＤＲ２、および配列番号１５のＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）ＣＤ３に特異的に結合する第２の結合ドメインであって、配列番号１９のＨＣＤＲ１、配列番号２０のＨＣＤＲ２、および配列番号２１のＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号２２のＬＣＤＲ１、配列番号２３のＬＣＤＲ２、および配列番号２４のＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、結合ドメインを含み；緩衝液は、コハク酸エステルまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは酸を含むまたはそれからなる。

本開示はまた、融合タンパク質、約５ｍＭのコハク酸エステル、約６．５重量／体積（ｗ／ｖ）％のスクロースおよび約０．０２ｗ／ｖ％のポリソルベート８０を含む組成物を提供し、融合タンパク質は、（ｉ）ＣＤ１２３に特異的に結合する第１の結合ドメインであって、配列番号１０のＨＣＤＲ１、配列番号１１のＨＣＤＲ２、および配列番号１２のＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号１３のＬＣＤＲ１、配列番号１４のＬＣＤＲ２、および配列番号１５のＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、結合ドメイン；ならびに（ｉｉ）ＣＤ３に特異的に結合する第２の結合ドメインであって、配列番号１９のＨＣＤＲ１、配列番号２０のＨＣＤＲ２、および配列番号２１のＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号２２のＬＣＤＲ１、配列番号２３のＬＣＤＲ２、および配列番号２４のＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、結合ドメインを含む。

本開示はまた、融合タンパク質、緩衝液、賦形剤および界面活性物質を含む組成物を提供し、融合タンパク質は、（ｉ）ＣＤ１２３に特異的に結合する第１の結合ドメインであって、配列番号１３６を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号１３４を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）ＣＤ３に特異的に結合する第２の結合ドメインであって、配列番号３８３また３８７を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号３８４を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、結合ドメインを含み；緩衝液は、コハク酸エステルまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは酸を含むまたはそれからなる。

本開示はまた、融合タンパク質、緩衝液、賦形剤および界面活性物質を含む組成物を提供し、融合タンパク質は、（ｉ）ＣＤ１２３に特異的に結合する第１の結合ドメインであって、配列番号１８を含む、結合ドメイン；および（ｉｉ）ＣＤ３に特異的に結合する第２の結合ドメインであって、配列番号２７を含む、結合ドメインを含み；緩衝液は、コハク酸エステルまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは酸を含むまたはそれからなる。

本開示はまた、融合タンパク質、緩衝液、賦形剤および界面活性物質を含む組成物を提供し、融合タンパク質は、２つの同一のポリペプチドのダイマーであり、各ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端への順で、または、カルボキシル末端からアミノ末端への順で、（ｉ）ＣＤ１２３に特異的に結合する第１の結合ドメインであって、配列番号１０のＨＣＤＲ１、配列番号１１のＨＣＤＲ２、および配列番号１２のＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号１３のＬＣＤＲ１、配列番号１４のＬＣＤＲ２、および配列番号１５のＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、結合ドメイン、（ｉｉ）配列番号４７のヒンジ領域、（ｉｉｉ）配列番号３３の免疫グロブリン定常領域、（ｉｖ）配列番号１３２のＦｃ結合ドメインリンカー、および（ｖ）ＣＤ３に特異的に結合する第２の結合ドメインであって、配列番号１９のＨＣＤＲ１、配列番号２０のＨＣＤＲ２、および配列番号２１のＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号２２のＬＣＤＲ１、配列番号２３のＬＣＤＲ２、および配列番号２４のＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、結合ドメインを含み；緩衝液は、コハク酸エステルまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは酸を含むまたはそれからなる。

本開示はまた、融合タンパク質、約５ｍＭのコハク酸エステル、約６．５重量／体積（ｗ／ｖ）％のスクロースおよび約０．０２ｗ／ｖ％のポリソルベート８０を含む組成物を提供し、融合タンパク質は、２つの同一のポリペプチドのダイマーであり、各ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端への順で、（ｉ）ＣＤ１２３に特異的に結合する第１の結合ドメインであって、配列番号１０のＨＣＤＲ１、配列番号１１のＨＣＤＲ２、および配列番号１２のＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号１３のＬＣＤＲ１、配列番号１４のＬＣＤＲ２、および配列番号１５のＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、結合ドメイン、（ｉｉ）配列番号４７のヒンジ領域、（ｉｉｉ）配列番号３３の免疫グロブリン定常領域、（ｉｖ）配列番号１３２のＦｃ結合ドメインリンカー、および（ｖ）ＣＤ３に特異的に結合する第２の結合ドメインであって、配列番号１９のＨＣＤＲ１、配列番号２０のＨＣＤＲ２、および配列番号２１のＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号２２のＬＣＤＲ１、配列番号２３のＬＣＤＲ２、および配列番号２４のＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、結合ドメインを含む。

本開示はまた、融合タンパク質、約５ｍＭのコハク酸エステル、約６．５重量／体積（ｗ／ｖ）％スクロースおよび約０．０２ｗ／ｖ％ポリソルベート８０を含む組成物を提供し、融合タンパク質は、配列番号３１を含むまたはそれからなり、組成物は、約２ｍｇ／ｍｌの融合タンパク質を含み、組成物は、約４．８のｐＨを有する。

本開示は、乾癬プラークの成長の抑制を必要としている対象において、それを抑制するための方法をさらに提供し、方法は、対象に治療有効量の本開示の組成物を投与することを含む。

本開示は、癌治療を必要としている対象において、それを治療するための方法をさらに提供し、方法は、対象に治療有効量の本開示の組成物を投与することを含む。癌は、例えば、血液悪性腫瘍であり得る。例えば、癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、毛様細胞性白血病（ＨＣＬ）、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）であり得る。

また、提供されるのは、対象における癌の治療のための本開示の組成物の使用である。また、提供されるのは、癌の治療のための薬物の製造における本開示の組成物の使用である。例えば、本開示の組成物は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）の治療のために使用され得る。いくつかの実施形態では、本開示の組成物は、高リスクまたは高悪性度ＭＤＳの治療のために使用され得る。ＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む多重特異的タンパク質を含む組成物は、約０．３、約１、約３、約６、約９、約１２、約１８、約２０、約２４、約３０、約３６、約５０、約４８、約６０、約７５、または約１００μｇの毎週投与量で、ＩＶ注入により対象に投与され得る。有害事象のリスクを低減するために、最初の投与量は、数時間、例えば、約２０～２４時間かけて患者にＩＶにより投与され得る。いくつかの実施形態では、１回目の組成物の投与量は、約２０～２４時間の期間にわたり投与され、２回目の投与量は、約８時間の期間にわたり投与され、３回目の投与量は、約６時間の期間にわたり投与され、４回目の投与量およびその後の投与量は、約４時間の期間にわたり投与される。組成物はまた、連続的なＩＶ注入、例えば、最大で７２時間の連続的なＩＶ注入により対象に投与され得る。

治療を必要としている患者の治療のための方法は、ＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む多重特異的タンパク質を、投与量が少なくとも最初の２回または最初の３回の投与の間毎週増大されるように、患者に静脈内投与することを含み得る。例えば、組成物は、次の毎週治療スケジュールに従ってＩＶ注入により患者に送達され得る：１週目投与量：６μｇ；２週目投与量：９μｇ；３週目投与量：１２μｇ；ならびに４週目およびその後の週の投与量：１２μｇ。いくつかの実施形態では、組成物は、次の毎週治療スケジュールに従って患者の静脈内に投与され得る：１週目投与量：６μｇ；２週目投与量：９μｇ；３週目投与量：１２μｇ；ならびに４週目およびその後の週の投与量：１８μｇ。いくつかの実施形態では、患者に投与される最も多い投与量は、約２４μｇ、約３６μｇ、約４８μｇ、約６０μｇ、または約１００μｇである。いくつかの実施形態では、患者に投与される最も多い投与量は、約１００μｇ～約１３０μｇの範囲である。

いくつかの実施形態では、組成物は、約２週、約３週、約４週、約５週、約６週、またはさらに長い週にわたり続く治療サイクルで患者に投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、２、３、４、５、６、７、８、またはさらに長い治療サイクルなどの２回以上の治療サイクルにわたり患者に投与され得る。いくつかの実施形態では、治療サイクルは、４週間続き、最大６サイクルにわたり反復され得る。いくつかの実施形態では、治療サイクルは、最大で３６サイクル反復され得る。

いくつかの実施形態では、組成物は、毎週治療スケジュール：１週目投与量：６μｇ；ならびに２週目およびその後の週の投与量：９μｇに従って患者に静脈内投与され、およびいくつかの実施形態では、組成物は、毎週治療スケジュール：１週目投与量：９μｇ；ならびに２週目およびその後の週の投与量：１２μｇに従って患者に静脈内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、毎週治療スケジュール：１週目投与量：１２μｇ、ならびに２週目およびその後の週の投与量：１８μｇに従って患者の静脈内に投与される。

いくつかの実施形態では、治療を必要としている患者の治療のための方法は、ＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む多重特異的タンパク質を含む組成物を患者に、１、８、１５、および２２日目に、投与することを含む。いくつかの実施形態では、６μｇが１日目に投与され、９μｇが８日目に投与され、１２μｇが１５日目に投与され、１２μｇが２２日目に投与される。いくつかの実施形態では、６μｇが１日目に投与され、９μｇが８日目に投与され、１２μｇが１５日目に投与され、１８μｇが２２日目に投与される。いくつかの実施形態では、６μｇが1日目に投与され、９μｇが８日目に投与され、９μｇが１５日目に投与され、９μｇが２２日目に投与される。いくつかの実施形態では、９μｇが１日目に投与され、１２μｇが８日目に投与され、１２μｇが１５日目に投与され、１２μｇが２２日目に投与される。いくつかの実施形態では、１２μｇが１日目に投与され、１８μｇが８日目に投与され、１８μｇが１５日目に投与され、１８μｇが２２日目に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の方法に従って治療される患者は、骨髄芽球パーセンテージの減少を示し、いくつかの実施形態では、患者は、血液中の絶対芽球数の減少を示す。いくつかの実施形態では、治療は、治療直前の患者のレベルに比べて、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％の、またはそれを超える血液中の患者の芽球レベルの減少を生ずる。

いくつかの実施形態では、治療を必要としている患者の治療のための方法は、ＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む多重特異的タンパク質を含む組成物を、２８日サイクルの間に患者に投与することを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、患者に、２８日サイクルの間に、毎週、１回、２回、３回、または４回投与される。いくつかの実施形態では、投与量は、２８日サイクルにわたり増大される。いくつかの実施形態では、投与量は、２８日サイクルにわたり低減される。いくつかの実施形態では、投与量は、２８日サイクルにわたり毎週増大される。いくつかの実施形態では、投与量は、２８日サイクルにわたり毎週低減される。

いくつかの実施形態では、治療を必要としている患者の治療のための方法は、ＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む多重特異的タンパク質を含む組成物を患者に、最初の２８日サイクルの１、８、１５、および２２日目に、および少なくとも１回の追加の２８日サイクルの１、８、１５、および２２日目に、投与することを含む。いくつかの実施形態では、最初の２８日サイクルの２２日目に投与される用量は、少なくとも１回の追加の２８日サイクルの１、８、１５、および２２日目に投与される用量と同じである。いくつかの実施形態では、患者は、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、またはさらなる回数の追加の２８日サイクルにわたり治療され、組成物の投与は、各サイクルの１、８、１５、および２２日目に行われる。

いくつかの実施形態では、治療を必要としている患者の治療のための方法は、ＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む多重特異的タンパク質を含む組成物を患者に、最初の２８日サイクルの１、２、３、４、８、１１、１５、および２２日目に、投与することを含む。いくつかの実施形態では、治療を必要としている患者の治療のための方法は、ＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む多重特異的タンパク質を含む組成物を患者に、最初の２８日サイクルの１、２、３、４、８、１１、１５、および２２日目に、およびその後、少なくとも１回の追加の２８日サイクルの１、８、１５、および２２日目に、投与することを含む。いくつかの実施形態では、患者は、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、またはさらなる回数の追加の２８日サイクルにわたり治療され、組成物の投与は、各サイクルの１、８、１５、および２２日目に行われる。

いくつかの実施形態では、治療を必要としている患者の治療のための方法は、ＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む多重特異的タンパク質を含む組成物を患者に、最初の２８日サイクルの１、２、３、４、８、１１、１５、１８，２２、および２５日目に、投与することを含む。いくつかの実施形態では、治療を必要としている患者の治療のための方法は、ＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む多重特異的タンパク質を含む組成物を患者に、最初の２８日サイクルの１、２、３、４、８、１１、１５、１８、２２、および２５日目に、およびその後、少なくとも１回の追加の２８日サイクルの１、８、１５、および２２日目に、投与することを含む。いくつかの実施形態では、患者は、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、またはさらなる回数の追加の２８日サイクルにわたり治療され、組成物の投与は、各サイクルの１、８、１５、および２２日目に行われる。

いくつかの実施形態では、治療を必要としている患者の治療のための方法は、ＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む多重特異的タンパク質を含む組成物を患者に、最初の２８日サイクル中に投与することを含み、６μｇの多重特異的タンパク質が最初の２８日サイクルの１日目に投与され、９μｇの多重特異的タンパク質が２日目に投与され、１２μｇの多重特異的タンパク質が３日目に投与され、１８μｇの多重特異的タンパク質が４日目に投与され、１８μｇの多重特異的タンパク質が８日目に投与され、１８μｇの多重特異的タンパク質が１１日目に投与され、３６μｇの多重特異的タンパク質が１５日目に投与され、３６μｇの多重特異的タンパク質が２２日目に投与される。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも１回の追加の２８日サイクルの間に多重特異的タンパク質を患者に投与することをさらに含み、３６μｇの多重特異的タンパク質が、少なくとも１回の追加の２８日サイクルのそれぞれ１、８、１５、および２２日目に投与される。

いくつかの実施形態では、治療を必要としている患者の治療のための方法は、ＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む多重特異的タンパク質を含む組成物を患者に、最初の２８日サイクル中に投与することを含み、６μｇの多重特異的タンパク質が最初の２８日サイクルの１日目に投与され、１２μｇの多重特異的タンパク質が２日目に投与され、１８μｇの多重特異的タンパク質が３日目に投与され、２４μｇの多重特異的タンパク質が４日目に投与され、２４μｇの多重特異的タンパク質が８日目に投与され、２４μｇの多重特異的タンパク質が１１日目に投与され、４８μｇの多重特異的タンパク質が１５日目に投与され、４８μｇの多重特異的タンパク質が２２日目に投与される。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも１回の追加の２８日サイクルの間に多重特異的タンパク質を患者に投与することをさらに含み、４８μｇの多重特異的タンパク質が、少なくとも１回の追加の２８日サイクルのそれぞれ１、８、１５、および２２日目に投与される。

いくつかの実施形態では、治療を必要としている患者の治療のための方法は、ＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む多重特異的タンパク質を含む組成物を患者に、最初の２８日サイクル中に投与することを含み、６μｇの多重特異的タンパク質が最初の２８日サイクルの１日目に投与され、１２μｇの多重特異的タンパク質が２日目に投与され、２４μｇの多重特異的タンパク質が３日目に投与され、３６μｇの多重特異的タンパク質が４日目に投与され、３６μｇの多重特異的タンパク質が８日目に投与され、３６μｇの多重特異的タンパク質が１１日目に投与され、６０μｇの多重特異的タンパク質が１５日目に投与され、６０μｇの多重特異的タンパク質が２２日目に投与される。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも１回の追加の２８日サイクルの間に多重特異的タンパク質を患者に投与することをさらに含み、６０μｇの多重特異的タンパク質が、少なくとも１回の追加の２８日サイクルのそれぞれ１、８、１５、および２２日目に投与される。

いくつかの実施形態では、治療を必要としている患者の治療のための方法は、ＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む多重特異的タンパク質を含む組成物を患者に、最初の２８日サイクル中に投与することを含み、６μｇの多重特異的タンパク質が最初の２８日サイクルの１日目に投与され、１２μｇの多重特異的タンパク質が２日目に投与され、２４μｇの多重特異的タンパク質が３日目に投与され、３６μｇの多重特異的タンパク質が４日目に投与され、４８μｇの多重特異的タンパク質が８日目に投与され、４８μｇの多重特異的タンパク質が１１日目に投与され、１００μｇの多重特異的タンパク質が１５日目に投与され、１００μｇの多重特異的タンパク質が２２日目に投与される。いくつかの実施形態では、方法は、少なくとも１回の追加の２８日サイクルの間に多重特異的タンパク質を患者に投与することをさらに含み、１００μｇの多重特異的タンパク質が、少なくとも１回の追加の２８日サイクルのそれぞれ１、８、１５、および２２日目に投与される。

いくつかの実施形態では、上述のスキームのいずれか１つで患者に投与される最大投与量は、約５％～約４０％、例えば、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、約３５％、約３６％、約３７％、約３８％、約３９％、または約４０％だけ増大される。これらの実施形態では、この増大された投与量は、最大投与量が上述のスキームで以前に投与された最初の日に、患者に初めて投与され得る。

本開示の組成物および方法で使用するための例示的治療タンパク質の構造を示す概略図である。図１Ａは、それぞれＣＤ３結合ドメインおよびＦｃドメインを含む２つの同一のポリペプチドを含むホモダイマータンパク質を示す。図１Ｂは、それぞれ腫瘍結合ドメイン（例えば、ＣＤ１２３結合ドメイン）、Ｆｃドメイン、およびＣＤ３結合ドメインを含む２つの同一のポリペプチドを含むホモダイマータンパク質を示す。例示的ＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異的治療タンパク質は、本明細書でＴＲＩ１３０と呼ばれる。本開示の組成物および方法で使用するための例示的治療タンパク質の構造を示す概略図である。図１Ａは、それぞれＣＤ３結合ドメインおよびＦｃドメインを含む２つの同一のポリペプチドを含むホモダイマータンパク質を示す。図１Ｂは、それぞれ腫瘍結合ドメイン（例えば、ＣＤ１２３結合ドメイン）、Ｆｃドメイン、およびＣＤ３結合ドメインを含む２つの同一のポリペプチドを含むホモダイマータンパク質を示す。例示的ＣＤ１２３ｘＣＤ３二重特異的治療タンパク質は、本明細書でＴＲＩ１３０と呼ばれる。第１／１ｂ相用量漸増臨床試験のデザインを示す概略図である。ここでＴＲＩ１３０は、再発性または難治性急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）の患者に投与される。図２および実施例３で記載の第１／１ｂ相試験の患者について経時的にプロットした、骨髄吸引物中の芽球のパーセンテージを示す。データは、１２μｇ以上の最大投与量を受けたコホートの患者についてグラフ化したものである。Ｎ＝ベースラインからの変化を評価可能な１４人の患者。コホート６ａおよび６ｂは、表１０に示す、異なる段階的投与計画で試験した。図２および実施例３で記載の第１／１ｂ相試験の患者について経時的にプロットした、骨髄吸引物中の芽球のパーセンテージを示す。データは、１２μｇ以上の最大投与量を受けたコホートの患者についてグラフ化したものである。Ｎ＝ベースラインからの変化を評価可能な１４人の患者。コホート６ａおよび６ｂは、表１０に示す、異なる段階的投与計画で試験した。図２および実施例３で記載の第１／１ｂ相試験の患者について経時的にプロットした、骨髄吸引物中の芽球のパーセンテージを示す。データは、１２μｇ以上の最大投与量を受けたコホートの患者についてグラフ化したものである。Ｎ＝ベースラインからの変化を評価可能な１４人の患者。コホート６ａおよび６ｂは、表１０に示す、異なる段階的投与計画で試験した。図２および実施例３で記載の第１／１ｂ相試験の患者について経時的にプロットした、骨髄吸引物中の芽球のパーセンテージを示す。データは、１２μｇ以上の最大投与量を受けたコホートの患者についてグラフ化したものである。Ｎ＝ベースラインからの変化を評価可能な１４人の患者。コホート６ａおよび６ｂは、表１０に示す、異なる段階的投与計画で試験した。図２および実施例３に記載の第１／１ｂ相試験における計画的採血（投与前、投与の約１５～３０分後、および投与の約２０～２６時間後；Ｎ＝２６）由来の患者試料中のインターロイキン－６（ＩＬ－６，図４Ａ）、インターロイキン－１０（ＩＬ－１０、図４Ｂ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ、図４Ｃ）および腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα、図４Ｄ）の血清中濃度を示す。計画的採血を、各患者に対し最初の最高計画投与量の投与時に実施した。ＩＲＲ／ＣＲＳイベントの間に、非計画的採取で観察されたピークサイトカインレベルが、比較のために示される（４人の患者で、Ｎ＝６イベント）。図２および実施例３に記載の第１／１ｂ相試験における計画的採血（投与前、投与の約１５～３０分後、および投与の約２０～２６時間後；Ｎ＝２６）由来の患者試料中のインターロイキン－６（ＩＬ－６，図４Ａ）、インターロイキン－１０（ＩＬ－１０、図４Ｂ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ、図４Ｃ）および腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα、図４Ｄ）の血清中濃度を示す。計画的採血を、各患者に対し最初の最高計画投与量の投与時に実施した。ＩＲＲ／ＣＲＳイベントの間に、非計画的採取で観察されたピークサイトカインレベルが、比較のために示される（４人の患者で、Ｎ＝６イベント）。図２および実施例３に記載の第１／１ｂ相試験における計画的採血（投与前、投与の約１５～３０分後、および投与の約２０～２６時間後；Ｎ＝２６）由来の患者試料中のインターロイキン－６（ＩＬ－６，図４Ａ）、インターロイキン－１０（ＩＬ－１０、図４Ｂ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ、図４Ｃ）および腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα、図４Ｄ）の血清中濃度を示す。計画的採血を、各患者に対し最初の最高計画投与量の投与時に実施した。ＩＲＲ／ＣＲＳイベントの間に、非計画的採取で観察されたピークサイトカインレベルが、比較のために示される（４人の患者で、Ｎ＝６イベント）。図２および実施例３に記載の第１／１ｂ相試験における計画的採血（投与前、投与の約１５～３０分後、および投与の約２０～２６時間後；Ｎ＝２６）由来の患者試料中のインターロイキン－６（ＩＬ－６，図４Ａ）、インターロイキン－１０（ＩＬ－１０、図４Ｂ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ、図４Ｃ）および腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα、図４Ｄ）の血清中濃度を示す。計画的採血を、各患者に対し最初の最高計画投与量の投与時に実施した。ＩＲＲ／ＣＲＳイベントの間に、非計画的採取で観察されたピークサイトカインレベルが、比較のために示される（４人の患者で、Ｎ＝６イベント）。

本明細書で使用されるセクション見出しは、単に構成上の目的のためであり、記載主題を限定するものと解釈されるべきではない。限定されないが、本明細書で引用される、特許出願、論文、書籍、および論説を含む全ての文書、または文書の一部は、これにより、明示的に、目的に応じて、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。１種または複数の取り込まれた文書または文書の一部が、本出願中の用語の定義と矛盾する用語を定義する場合には、本出願に記載の定義が優先される。しかし、本明細書で引用される参考文献、論文、刊行物、特許、特許公報、および特許出願への何らかの言及は、それらが有効な先行技術を構成する、または世界の任意の国における共通の一般常識の一部を形成することを承認する、または何らかの形態の示唆をするものではなく、また、そのように受け取られるべきものではない。

本明細書では、なんらかの濃度範囲、パーセンテージ範囲、比率範囲、または整数範囲は、特に断らない限り、示された範囲内の任意の整数の値および必要に応じて、その端数（整数の１０分の１および１００分の１など）を含むものと理解されるものとする。本明細書で使用される場合、用語「ａ」および「ａｎ」は、特に指示されない限り、列挙された構成要素の「１つまたは複数（ｏｎｅｏｒｍｏｒｅ）」を意味することが理解されるべきである。離接的接続詞（例えば、「または（ｏｒ）」）の使用は、代替案のいずれか一方、両方、またはそれらの任意の組み合わせを意味すると理解されるべきである。本明細書で使用される場合、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」は同義に使用される。加えて、本明細書で記載の成分（例えば、ドメインまたは領域）および置換基の種々の組み合わせを含むポリペプチドが、あたかも、それぞれのポリペプチドが個別に記載されているかと同じ程度に本出願により開示されることを理解されたい。従って、個別のポリペプチドの特定の成分の選択は、本開示の範囲内に含まれる。

定義
数値の直前の用語「約」は、数値の最大±１０％を意味する。例えば、「約４０」は、４０の±１０％（すなわち、３６～４４）、例えば±１０％まで、±９％まで、±８％まで、±７％まで、±６％まで、±５％まで、±４％まで、±３％まで、±２％まで、±１％まで、±１％未満、またはほかの値または範囲を意味する。

本明細書で使用される場合、用語「実質的に」は、当該技術分野において使われるその通常の意味を有する。例えば、「実質的に（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ）」は、「有意に（ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ）」、「かなり（ｃｏｎｓｉｄｅｒａｂｌｙ）」、「ほとんど（ｌａｒｇｅｌｙ）」、「たいてい（ｍｏｓｔｌｙ）」、または「本質的に（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ）」を意味し得る。いくつかの実施形態では、「実質的に（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ）」は、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％を意味し得る。

用語「ＣＤ１２３」は、表面抗原分類１２３、インターロイキン３受容体アルファ鎖、およびＩＬ３ＲＡとしても知られるＣＤ１２３のいずれかのアイソフォームを指し得る。ＣＤ１２３は、インターロイキン３受容体のβ鎖と結合して、受容体を形成する。ＣＤ１２３は、Ｉ型膜貫通型糖タンパク質であり、予測免疫グロブリン様ドメインおよび２つのＦｎＩＩＩドメインを含む細胞外ドメインを有する。本開示のＣＤ１２３結合ドメインは、ＣＤ１２３の細胞外ドメインに結合する。ＣＤ１２３は、ヒトインターロイキン３（ＩＬ－３）受容体のアルファ鎖としても知られる。ＣＤ１２３は、Ｉ型膜貫通型糖タンパク質であり、サイトカイン受容体スーパーファミリーのメンバーである。インターロイキン３受容体は、ＣＤ１２３およびベータ鎖（ＣＤ１３１）により形成されたヘテロダイマーである。ＩＬ－３は、ＣＤ１２３に結合し、シグナル伝達がＣＤ１３１により提供される。ＩＬ－３は、造血および免疫細胞の機能と産生を調節し、内皮細胞増殖を刺激する（Ｔｅｓｔａｅｔａｌ．，ＢｉｏｍａｒｋＲｅｓ．２：４（２０１４））。

ＣＤ１２３は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｂリンパ性白血病、芽球形質細胞様樹状細胞腫瘍（ｂｌａｓｔｉｃｐｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌｎｅｏｐｌａｓｍ）（ＢＰＤＣＮ）および毛様細胞性白血病のサブセットを含む多くの血液悪性腫瘍中で過剰発現される。ほとんどのＡＭＬ患者は、初期治療法に良好に応答するが、ＡＭＬ患者の大部分は、最終的に再発性または難治性疾患と診断される（Ｒａｍｏｓｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．４：６６５－６９５（２０１５））。高められた効率と効力および低い有害作用を有し、かつＣＤ１２３の調節不全に関連する障害の治療に使用し得る、ＣＤ１２３標的化分子が必要とされている。

「ＣＤ３」は、当該技術分野において、６鎖の多タンパク質複合体として知られており（例えば、ＡｂｂａｓａｎｄＬｉｃｈｔｍａｎ，２００３；Ｊａｎｅｗａｙｅｔａｌ．，ｐ．１７２ａｎｄ１７８，１９９９を参照）、これは、Ｔ細胞受容体複合体のサブユニットである。哺乳動物では、Ｔ細胞受容体複合体のＣＤ３サブユニットは、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、２つのＣＤ３ε鎖、およびＣＤ３ζ鎖のホモダイマーである。ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、およびＣＤ３ε鎖は、単一免疫グロブリンドメインを含む免疫グロブリンスーパーファミリーの高度に関連する細胞表面タンパク質である。ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、およびＣＤ３ε鎖の膜貫通領域は、負に帯電し、これは、これらの鎖が、正に帯電したＴ細胞受容体鎖と結合することを可能にするという特性を示す。ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、およびＣＤ３ε鎖の細胞内テイルはそれぞれ、免疫受容体チロシン活性化モチーフとして知られる単一の保存されたモチーフまたはＩＴＡＭを含み、一方、各ＣＤ３ζ鎖は、３つのＩＴＡＭを有する。ＩＴＡＭは、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達能力に重要であると考えられている。本開示で使用されるＣＤ３は、ヒト、サル、マウス、ラット、または他の哺乳動物を含む、種々の動物種由来であり得る。

「サイトカイン放出」または「サイトカインストーム」または「輸注反応」は、Ｔ細胞からのサイトカインの放出を意味する。サイトカインが循環中に放出されると、発熱、悪心、悪寒、低血圧、頻拍、無力症、頭痛、発疹、炎症気味ののど、および呼吸困難などの全身症状が起こり得る。いくらかの患者は、サイトカインの大量放出に起因する重度の命に関わる反応を経験する場合がある。「低減された」サイトカイン放出は、ＯＫＴ３抗体（ＣＤ３に結合する抗体）または他のＣＤ３結合二重特異的分子に比較して、本明細書で開示の二重特異的分子の投与後の、少なくとも１種のサイトカイン（例えば、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ－６、ＩＬ－２、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１７、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３またはＩＬ－１β）の放出の低減を指す。低減されたサイトカイン放出は、インビトロアッセイまたはインビボアッセイを用いて測定できる。

本明細書で使用される場合、「段階的投与（ｓｔｅｐｄｏｓｉｎｇ）」または「段階的投与（ｓｔｅｐｐｅｄｄｏｓｉｎｇ）」という用語、または類似の用語は、本明細書で記載の多重特異的ポリペプチドが少なくとも第１の投与日および第２の投与日に患者に投与される、投与計画を意味し、患者に投与される投与量は、第１の投与日と第２の投与日の間で一定に保持されるか、または増大される。例えば、いくつかの段階的投与計画では、患者は、第１、第２、第３、および第４の投与量を投与されてよく、各投与量は、異なる投与日に投与され、第２の投与量は、第１の投与量より多い。第３の投与量は、第２の投与量より多くてよく、または第２の投与量と同じであってもよい。第４の投与量は、第３の投与量より多くてよく、または第３の投与量と同じであってもよい。いくつかの実施形態では、患者が特定の投与量に対し有害反応を有する場合、その後の投与量を減らしてもよい。

本明細書で使用される場合、「結合ドメイン」または「結合領域」という用語は、タンパク質、ポリペプチド、オリゴペプチド、ペプチド、抗体、または抗体由来の結合ドメイン、抗原、リガンド、レセプター、基質、または阻害剤などの標的分子を特異的に認識し、それに結合する能力を有する受容体またはリガンドのドメイン、領域、部分、または部位を指す。例示的結合ドメインとしては、抗体および抗体様タンパク質またはドメイン、抗体重鎖および軽鎖可変領域、および単鎖抗体可変領域（例えば、ドメイン抗体、ｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ）、受容体外部ドメインおよびリガンド（例えば、サイトカイン、ケモカイン）が挙げられる。特定の実施形態では、結合ドメインは、抗原結合部位（例えば、可変重鎖配列および可変軽鎖配列または交互フレームワーク領域（ＦＲ）（例えば、任意選択で、１種または複数のアミノ酸置換を含むヒトＦＲ）中に配置された抗体由来の３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）および３つの重鎖ＣＤＲ））を含むまたはこれらからなる。ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、ファージディスプレイライブラリースクリーニング、およびＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）相互作用分析を含む、特定の標的を特異的に結合する本開示の結合ドメインを特定するための、種々のアッセイが知られている。

結合ドメインを含む結合ドメインまたはタンパク質は、それが１０^５Ｍ^－１以上の親和性またはＫ_ａ（すなわち、特定の結合相互作用の１／Ｍの単位の平衡結合定数）で標的を結合するが試験試料中に存在する他の成分を有意に結合しない場合、標的を「特異的に結合する」。結合ドメインは、「高親和性」結合ドメインおよび「低親和性」結合ドメインとして分類できる。「高親和性」結合ドメインは、少なくとも１０^７Ｍ^－１、少なくとも１０^８Ｍ^－１、少なくとも１０^９Ｍ^－１、少なくとも１０^１０Ｍ^－１、少なくとも１０^１１Ｍ^－１、少なくとも１０^１２Ｍ^－１、または少なくとも１０^１３Ｍ^－１のＫ_ａを有する結合ドメインを指す。「低親和性」結合ドメインは、最大で１０^７Ｍ^－１、最大で１０^６Ｍ^－１、最大で１０^５Ｍ^－１のＫ_ａを有する結合ドメインを指す。あるいは、親和性は、特定の結合相互作用の単位Ｍの平衡解離定数（Ｋ_ｄ）（例えば、１０^－５Ｍ～１０^－１３Ｍ、または約５００ｎＭ、約３００ｎＭ、約２５０ｎＭ、約２００ｎＭ、約１５０ｎＭ、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約２５ｎＭ、約１０ｎＭ、または約５ｎＭ）として定義できる。本開示による結合ドメインポリペプチドおよび単鎖ポリペプチドの親和性は、従来技術を用いて容易に測定できる（例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄｅｔａｌ．，（１９４９）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．５１：６６０、および米国特許第５，２８３，１７３号、同第５，４６８，６１４号、または同等文献を参照されたい）。

本明細書で使用される場合、「保存的置換」は、類似の特性を有する別のアミノ酸の、１つのアミノ酸による置換として、当該技術分野において明確に理解されている。例示的保存的置換［同類置換］は、当該技術分野において周知である（例えば、国際公開第９７／０９４３３号、１０ページ、１９９７年３月１３日公開；Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＳｅｃｏｎｄＥｄｉｔｉｏｎ；ＷｏｒｔｈＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．ＮＹ：ＮＹ（１９７５），ｐｐ．７１－７７；Ｌｅｗｉｎ，ＧｅｎｅｓＩＶ，ＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ，ＮＹａｎｄＣｅｌｌＰｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ（１９９０），ｐ．８参照）。特定の実施形態では、保存的置換は、ロイシンのセリンへの置換を含む。

本明細書で使用される場合、「誘導体」という用語は、酵素を用いてまたは用いないで、例えば、グリコシル化、アルキル化、アシル化、エステル形成、またはアミド形成などの化学的または生物学的手段による、ペプチドの１種または複数のアミノ酸残基の修飾を指す。

本明細書で使用される場合、指定されたポリペプチドまたはタンパク質「由来の」ポリペプチドまたはアミノ酸配列は、ポリペプチドの起源を指す。特定の実施形態では、特定の配列由来のポリペプチドまたはアミノ酸配列（「出発」または「親（ｐａｒｅｎｔ）」または「親（ｐａｒｅｎｔａｌ）」配列と呼ばれることもある）は、親配列またはその一部分と本質的に同一であるアミノ酸配列を有し、その部分は、少なくとも１０～２０アミノ酸、少なくとも２０～３０アミノ酸、または少なくとも３０～５０アミノ酸、または少なくとも５０～１５０アミノ酸からなり、または、それは、当業者には、親配列中にその起源を有するとして他の方法で特定可能である。例えば、結合ドメインは、抗体、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、などから誘導できる。

別のポリペプチドから誘導されたポリペプチドは、親ポリペプチドに比べて、１種または複数の変異または変化、例えば、別のアミノ酸残基で置換された、または１個または複数のアミノ酸挿入または欠失を有する１種または複数のアミノ酸残基を有し得る。このような実施形態では、親ポリペプチド由来の、１種または複数の変異または変化を含むポリペプチドは、「バリアント」と呼ばれる。本明細書で使用される場合、「バリアント」または「バリアント（複数）」という用語は、参照ポリヌクレオチドまたはポリペプチドのものとは異なる配列を有するが、その不可欠な特性を保持しているポリヌクレオチドまたはポリペプチドを指す。通常、バリアントポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列は、全体として、参照ポリヌクレオチドまたはポリペプチドにかなり類似しており、多くの領域では同一である。例えば、バリアントポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、参照ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの活性部分または完全長と比較して、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を示し得る。ポリペプチドは、天然起源ではないアミノ酸配列を含み得る。このような変化は、必然的に、親ポリペプチドと１００％未満の配列同一性または類似性を有する。一実施形態では、バリアントは、親ポリペプチドのアミノ酸配列と、約６０％～１００％未満のアミノ酸配列同一性または類似性を有する。別の実施形態では、バリアントは、親ポリペプチドのアミノ酸配列と、約７５％～１００％未満、約８０％～１００％未満、約８５％～１００％未満、約９０％～１００％未満、約９５％～１００％未満のアミノ酸配列同一性または類似性を有する。

本明細書で使用される場合、「配列同一性」という用語は、２つ以上のポリヌクレオチド配列間または２つ以上のポリペプチド配列間の関連性を指す。１つの配列中の位置が、比較配列の対応する位置の同一の核酸塩基またはアミノ酸残基で占められる場合、その配列は、その位置で「同一」であると言われる。配列同一性のパーセントは、両方の配列中に同一の核酸塩基またはアミノ酸残基が生ずる位置の数を決定し、同一の位置の数を得ることにより算出される。同一の位置の数は、その後、比較ウインドウ中の位置の総数により除算され、１００を乗じて配列同一性のパーセンテージを得る。配列同一性のパーセンテージは、２つの最も適切なように整列された配列を比較ウインドウにわたって比較することにより決定される。ポリヌクレオチド配列のための比較ウインドウは、例えば、少なくとも約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、約１１０、約１２０、約１３０、約１４０、約１５０、約１６０、約１７０、約１８０、約１９０、約２００、約３００、約４００、約５００、約６００、約７００、約８００、約９００または約１０００の、もしくはそれを超える核酸長であり得る。ポリペプチド配列のための比較ウインドウは、例えば、少なくとも約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、約１１０、約１２０、約１３０、約１４０、約１５０、約１６０、約１７０、約１８０、約１９０、約２００、約３００の、またはそれを超えるアミノ酸長であり得る。比較のために配列を最適整列させるために、比較ウインドウ中のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の一部は、付加またはギャップと呼ばれる欠失を含んでよく、同時に、基準配列は一定に保持される。最適整列は、ギャップを有する場合であっても、参照配列と比較配列との間で最大可能数の「同一」位置を生成する整列である。２つの配列間のパーセンテージ「配列同一性」は、プログラムバージョン「ＢＬＡＳＴ２Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」を用いて決定でき、これは、２００４年、９月１日現在、ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎから入手でき、このプログラムは、ＫａｒｌｉｎａｎｄＡｌｔｓｃｈｕｌ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０（１２）：５８７３－５８７７，１９９３）のアルゴリズムをベースにした、プログラムＢＬＡＳＴＮ（ヌクレオチド配列比較用）およびＢＬＡＳＴＰ（ポリペプチド配列比較用）を組み込んでいる。「ＢＬＡＳＴ２Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」を利用する場合、２００４年９月１日時点のデフォルトパラメーターであったパラメーター、ワードサイズ（３）、オープンギャップペナルティ（１１）、伸長ギャップペナルティ（ｅｘｔｅｎｓｉｏｎｇａｐｐｅｎａｌｔｙ）（１）、ギャップドロップオフ値（ｇａｐｄｒｏｐｏｆｆ）（５０）、期待値（１０）および限定されないが、マトリックスオプションを含む任意の他の必要なパラメーターを使用できる。２つのヌクレオチド配列またはアミノ酸配列は、２つの配列が相互に、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％同一性を有する場合、「実質的に類似の配列同一性」または「実質的配列同一性」を有すると見なされる。

本明細書で使用される場合、特別の定めのない限り、免疫グロブリン分子の可変領域中のアミノ酸残基の位置は、ＩＭＧＴナンバリング規則（Ｂｒｏｃｈｅｔ，Ｘ，ｅｔａｌ，Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．（２００８）３６，Ｗ５０３－５０８）に従ってナンバリングされ、免疫グロブリン分子の定常領域中のアミノ酸残基の位置は、ＥＵ命名法（Ｗａｒｄｅｔａｌ．，１９９５Ｔｈｅｒａｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：７７－９４）に従ってナンバリングされる。他のナンバリング規則が当技術分野において既知である（例えば、Ｋａｂａｔナンバリング規則（Ｋａｂａｔ，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，５^ｔｈｅｄ．Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ：ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ（１９９１）））。

本明細書で使用される場合、「ダイマー」という用語は、共有結合（例えば、ジスルフィド結合）および他の相互作用（例えば、静電相互作用、塩架橋、水素結合、および疎水性相互作用）を含む１種または複数の形態の分子内力を介して相互に結合した２つのサブユニットからなり、適切な条件下（例えば、生理的条件下、組換えタンパク質の発現、精製、および／または貯蔵に好適な水溶液中で、または非変性および／または非還元性電気泳動のための条件下）で安定な、生物学的実体を指す。本明細書で使用される場合、「ヘテロダイマー」または「ヘテロダイマータンパク質」は、２つの異なるポリペプチドから形成されたダイマーを指す。ヘテロダイマーは、４つのポリペプチド（すなわち、２つの軽鎖および２つの重鎖）から形成された抗体を含まない。本明細書で使用される場合、「ホモダイマー」または「ホモダイマータンパク質」は、２つの同一のポリペプチドから形成されたダイマーを指す。特性および活性（結合およびＲＴＣＣなど）を含む、ポリペプチドの全開示は、そのダイマー型ならびに他のマルチマー型のポリペプチドを含むと理解されるべきである。

本開示のポリペプチドがダイマー型（すなわち、ダイマータンパク質）である場合、それは、アミノ末端に２つの結合部位およびカルボキシル末端に２つの結合部位を含む。結合ドメインは従って、単鎖ポリペプチドがダイマー化される場合、二価である（すなわち、各末端に２つの結合部分）と見なされる。

「免疫グロブリン定常領域」または「定常領域」は、本明細書では、免疫グロブリンの１つまたは複数の定常ドメインの一部または全てに対応するまたはそれから誘導されるペプチドまたはポリペプチド配列を指すように定義される用語である。特定の実施形態では、定常領域は、ＩｇＧＣＨ２およびＣＨ３ドメイン、例えば、ＩｇＧ１ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。特定の実施形態では、定常領域は、ＣＨ１ドメインを含まない。特定の実施形態では、定常領域を構成する定常ドメインは、ヒトである。いくつかの実施形態では、本開示の融合タンパク質の定常領域は、エフェクター機能を欠くか最小限のエフェクター機能を有するが、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）などのいくつかのＦｃ受容体に結合する能力を保持し比較的長いインビボ半減期を保持する。例えば、本開示の融合タンパク質の定常領域は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、補体活性化、および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の誘導を生じないか、または実質的にそれらを低減する。他の変形例では、本開示の融合タンパク質は、ＡＤＣＣおよびＣＤＣの片方または両方などの１種または複数のエフェクター機能を保持する定常ドメインを含む。特定の実施形態では、本開示の結合ドメインは、ヒトＩｇＧ１定常領域に融合され、ＩｇＧ１定常領域は、１個または複数の次の変異導入アミノ酸を有する：位置２３４のロイシン（Ｌ２３４）、位置２３５のロイシン（Ｌ２３５）、位置２３７のグリシン（Ｇ２３７）、位置３１８のグルタミン酸（Ｅ３１８）、位置３２０のリジン（Ｋ３２０）、位置３２２のリジン（Ｋ３２２）、またはこれらの任意の組み合わせ（ＥＵによるナンバリング）。例えば、これらのアミノ酸のいずれか１個または複数は、アラニンに変更できる。さらなる実施形態では、ＩｇＧ１Ｆｃドメインは、アラニンに変異されたＬ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３７、Ｅ３１８、Ｋ３２０、およびＫ３２２（ＥＵナンバリングによる）（すなわち、それぞれ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｋ３２０Ａ、およびＫ３２２Ａ）のそれぞれを有し、および任意選択で、Ｎ２９７Ａ変異も有する（すなわち、ＣＨ２ドメインのグリコシル化を本質的に除去する）。

用語「軽鎖可変領域」（「軽鎖可変ドメイン」または「Ｖ_Ｌ」とも呼ばれる）および「重鎖可変領域」（「重鎖可変ドメイン」または「Ｖ_Ｈ」とも呼ばれる）は、それぞれ、抗体軽鎖および重鎖由来の可変結合領域を指す。可変結合領域は、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）および「フレームワーク領域」（ＦＲ）として知られる別々の明確な小領域から構成される。一実施形態では、ＦＲはヒト化されている。用語「ＣＬ」は、「免疫グロブリン軽鎖定常領域」または「軽鎖定常領域」、すなわち、抗体軽鎖由来の定常領域を指す。用語「ＣＨ」は、「免疫グロブリン重鎖定常領域」または「重鎖定常領域」を指し、これは、抗体アイソタイプに応じて、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ）、またはＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４ドメイン（ＩｇＥ、ＩｇＭ）にさらに分割できる。「Ｆａｂ」（フラグメント抗原結合）は、抗原に結合する抗体の一部であり、鎖間ジスルフィド結合を介して軽鎖に結合された重鎖の可変領域およびＣＨ１ドメインを含む。

本発明で使用する場合、用語「リンカー」は通常、ポリペプチドの２つのサブドメインを連結する短いポリペプチド配列を指す。リンカーの非限定的例は、グリシン－セリン反復を含むフレキシブルリンカー、および（ａ）膜貫通型タンパク質（例えば、Ｉ型膜貫通型タンパク質）のドメイン間領域由来；または（ｂ）免疫グロブリンヒンジ由来のリンカーを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、２つのサブ結合ドメインの相互作用と適合性があるスペーサー機能を提供し、それにより、得られたポリペプチドは、同じ軽鎖および重鎖可変領域を含む抗体と同じ標的分子に対し特異的結合親和性を保持する。特定の実施形態では、リンカーは、５個～約３５個のアミノ酸、例えば、約１５個～約２５個のアミノ酸からなる。本明細書で使用される場合、表現「ＣＨ３と、ＣＨ１またはＣＬとの間のリンカー」は、ＣＨ３ドメインのＣ末端（例えば、野生型ＣＨ３または変異導入されたＣＨ３）と、ＣＨ１ドメインまたはＣＬドメイン（例えば、Ｃκ）のＮ末端との間の１個または複数のアミノ酸残基（例えば、約２～１２個、約２～１０個、約４～１０個、約５～１０個、約６～１０個、約７～１０個、約８～１０個、約９～１０個、約８～１２個、約９～１２個、または約１０～１２個）を指す。

いくつかの実施形態では、状況に応じて、リンカーは、（１）単鎖Ｆ_Ｖ（ｓｃＦｖ）中のＶ_ＨとＶ_Ｌ領域との間のポリペプチド領域または（２）２つの結合ドメインを含む多重特異的ポリペプチド中の第１の結合ドメインと第２の結合ドメインとの間のポリペプチド領域を指し得る。後者の例では、リンカーが２つ以上の結合ドメインを連結し、このようなリンカーは、本明細書では、「Ｆｃ結合ドメインリンカー」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、２つ以上の結合ドメインを結合または連結し、次記の構造：結合ドメイン－Ｆｃ結合ドメインリンカー－結合ドメイン、を含む構築物を生じ得る。いくつかの実施形態では、本明細書で記載の多重特異的ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端への順で、（ｉ）第１の結合ドメイン、（ｉｉ）Ｆｃ結合ドメインリンカー、および（ｉｉｉ）第２の結合ドメイン、を含む。いくつかの実施形態では、多重特異的ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端への順で、（ｉ）第２の結合ドメイン、（ｉｉ）Ｆｃ結合ドメインリンカー、および（ｉｉｉ）第１の結合ドメイン、を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、少なくとも１つの結合ドメインを、免疫グロブリンＦｃドメイン（すなわち、構造：Ｉｇヒンジ－Ｉｇ定常領域、を含むポリペプチド）などの非結合ドメインポリペプチドに連結することにより、２つ以上の結合ドメインを結合または連結し得る。このような実施形態では、得られる構築物は、下記の構造：結合ドメイン－Ｆｃドメイン－Ｆｃ結合ドメインリンカー－結合ドメイン、を含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書で記載の多重特異的ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端への順で、（ｉ）第１の結合ドメイン、（ｉｉ）ヒンジ領域、（ｉｉｉ）免疫グロブリン定常領域、（ｉｖ）Ｆｃ結合ドメインリンカー、および（ｖ）第２の結合ドメイン、を含む。いくつかの実施形態では、多重特異的ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端への順で、（ｉ）第２の結合ドメイン、（ｉｉ）Ｆｃ結合ドメインリンカー、（ｉｉｉ）免疫グロブリン定常領域、（ｉｖ）ヒンジ領域、および（ｖ）第１の結合ドメイン、を含む。免疫グロブリン定常領域と、２つの結合ドメイン（例えば、Ｆｃ結合ドメインリンカー）を含む多重特異的ポリペプチド中の第２の結合ドメインとの間のポリペプチド領域はまた、多重特異的ポリペプチド内のドメインの向きに応じて、「カルボキシル末端リンカー」または「アミノ末端リンカー」とも呼ばれ得る。リンカーの非限定的例が、表１で提供される。

いくつかの実施形態では、「ヒンジ」または「ヒンジ領域」は、免疫グロブリンヒンジ領域由来のポリペプチドを指し、本明細書で記載のポリペプチド中の結合ドメインと免疫グロブリン定常領域との間に位置する。「野性型免疫グロブリンヒンジ領域」は、抗体の重鎖中に認められるＣＨ１およびＣＨ２ドメイン（ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＤに対する）間に挿入され、これらを連結する、またはＣＨ１およびＣＨ３ドメイン（ＩｇＥおよびＩｇＭに対する）間に挿入され、これらを連結する天然起源上部ヒンジおよび中間ヒンジアミノ酸配列を指す。特定の実施形態では、野生型免疫グロブリンヒンジ領域配列はヒトであり、ヒトＩｇＧヒンジ領域（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ヒンジ領域）を含み得る。

「改変免疫グロブリンヒンジ領域」または「バリアント免疫グロブリンヒンジ領域」は、対応する親野性型免疫グロブリンヒンジ領域に比べて、１つまたは複数の変異、置換、挿入、または欠失を有するヒンジ領域を指す。特定の実施形態では、改変免疫グロブリンヒンジ領域は、野性型免疫グロブリンヒンジ領域と少なくとも約７０％同一（例えば、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％同一）である。特定の実施形態では、改変免疫グロブリンヒンジ領域は、約５アミノ酸（例えば、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、約２０アミノ酸、またはそれを超えるアミノ酸）から最大約１２０アミノ酸の長さを有する（例えば、約１０～約４０アミノ酸または約１５～約３０アミノ酸または約１５～約２０アミノ酸または約２０～約２５アミノ酸の長さを有する）野生型免疫グロブリンヒンジ領域のフラグメントである。典型的には、野生型免疫グロブリンヒンジ領域のフラグメントである改変免疫グロブリンヒンジ領域は、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号および同２０１３／００９５０９７号で開示のＩｇＧコアヒンジ領域（例えば、配列Ｃ－Ｘ－Ｘ－Ｃを含むポリペプチドで、式中、Ｘは任意のアミノ酸（配列番号３９０）である）を含む。ヒンジの非限定的例が、表２で提供される。

本明細書で使用される場合、「ヒト化」という用語は、遺伝子工学技術を用いて、依然として元の抗体の結合特性を保持しながら、非ヒト種（例えば、マウスまたはラット）由来の抗体または免疫グロブリン結合タンパク質およびポリペプチドをヒトに対しより低い免疫原性にするプロセスを指す。いくつかの実施形態では、抗体または免疫グロブリン結合タンパク質およびポリペプチドの結合ドメイン（例えば、軽鎖および重鎖可変領域、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ）は、ヒト化される。非ヒト結合ドメインは、「再形成（ｒｅｓｈａｐｉｎｇ）」（Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ，ｅｔａｌ．，１９８８Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：１５３４－１５３６；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，ｅｔａｌ．，１９８８Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３－３３７；Ｔｅｍｐｅｓｔ，ｅｔａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ１９９１９：２６６－２７１）、「超キメラ化（ｈｙｐｅｒｃｈｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）」（Ｑｕｅｅｎ，ｅｔａｌ．，１９８９ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ８６：１００２９－１００３３；Ｃｏ，ｅｔａｌ．，１９９１ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ８８：２８６９－２８７３；Ｃｏ，ｅｔａｌ．，１９９２ＪＩｍｍｕｎｏｌ１４８：１１４９－１１５４）、および「ベニアリング」（Ｍａｒｋ，ｅｔａｌ．，”Ｄｅｒｉｖａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙａｃｔｉｖｅｈｕｍａｎｉｚｅｄａｎｄｖｅｎｅｅｒｅｄａｎｔｉ－ＣＤ１８ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．” Ｉｎ：ＭｅｔｃａｌｆＢＷ，ＤａｌｔｏｎＢＪ，ｅｄｓ．Ｃｅｌｌｕｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎｔｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｐｏｔｅｎｔｉａｌ．ＮｅｗＹｏｒｋ：ＰｌｅｎｕｍＰｒｅｓｓ，１９９４：２９１－３１２）を含む、ＣＤＲグラフティングとして知られる技術（Ｊｏｎｅｓｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２（１９８６））およびその変形型を用いてヒト化できる。非ヒト源から誘導する場合、抗体または免疫グロブリン結合タンパク質およびポリペプチドの、ヒンジ領域および定常領域ドメインなどの他の領域もまたヒト化できる。

本明細書で使用される場合、「免疫グロブリンダイマー化ドメイン」または「免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメイン」は、第２のポリペプチド鎖の異なる免疫グロブリンドメインと選択的に相互作用するまたは結合するポリペプチド鎖の免疫グロブリンドメインを指し、異なる免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインの相互作用は、第１および第２のポリペプチド鎖のヘテロダイマー化（すなわち、２つの異なるポリペプチド鎖間のダイマーの形成、これもまた「ヘテロダイマー」とも呼ばれる）に実質的に寄与するまたはそれを効率的に促進する。免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメイン間の相互作用は、第１のポリペプチド鎖の免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインおよび／または第２のポリペプチド鎖の免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインの非存在下で、第１および第２のポリペプチド鎖間のダイマー化において統計的に有意な低減が存在する場合、第１および第２のポリペプチド鎖のヘテロダイマー化に「実質的に寄与するまたはこれを効率的に促進する」。特定の実施形態では、第１および第２のポリペプチド鎖が共発現される場合、少なくとも６０％、少なくとも約６０％ｔｏ約７０％、少なくとも約７０％ｔｏ約８０％、少なくとも８０％ｔｏ約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％の第１および第２のポリペプチド鎖は、相互にヘテロダイマーを形成する。代表的免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、そこで提供される、野生型免疫グロブリンＣＨ１およびＣＬドメインおよび改変（または変異）免疫グロブリンＣＨ１およびＣＬドメインを含む、免疫グロブリンＣＨ１ドメイン、免疫グロブリンＣＬドメイン（例えば、ＣκまたはＣλアイソタイプ）、またはその誘導体を含む。

用語「患者」および「対象」は、同義に使用される。本明細書で使用される場合、「必要としている患者」または「必要としている対象」という用語は、本明細書で提供される結合タンパク質または多重特異的ポリペプチドまたはその組成物による治療または改善に適する疾患、障害または状態の危険のある、またはそれらを罹患している患者または対象を指す。「患者」および「対象」は、同義に使用される。

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容可能な」という用語は、当該技術分野において周知の経路を用いて投与される場合、通常、アレルギー性または他の重篤な有害反応を生じない分子実体および組成物を指す。連邦政府または州政府の規制当局により承認されているまたは米国薬局方、またはその他の一般に認められている、動物およびさらに具体的にはヒトに使用される薬局方に列挙されている分子実体および組成物は、「薬学的に許容可能」であると見なされる。

本明細書で使用される場合、「核酸」、「核酸分子」、または「ポリヌクレオチド」という用語は、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチド、および一本鎖または二本鎖形態のそのポリマーを指す。特に限定されない限り、この用語は、参照核酸と類似の結合特性を有し天然のヌクレオチドと同様に代謝される、天然ヌクレオチドの既知の類似体を含む核酸を包含する。特に指示がない限り、特定の核酸配列はまた、その保存的に改変されたそのバリアント変異体（例えば、縮重コドン置換）および相補的配列、ならびに明示的に示された配列を暗黙に包含する。具体的には、縮重コドン置換は、１個または複数の選択された（または全ての）コドンの第３の位置が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基によって置換される配列を作成することにより達成できる（Ｂａｔｚｅｒｅｔａｌ．（１９９１）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄＲｅｓ．１９：５０８１；Ｏｈｔｓｕｋａｅｔａｌ．（１９８５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５－２６０８；Ｃａｓｓｏｌｅｔａｌ．（１９９２）；Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉｅｔａｌ．（１９９４）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ８：９１－９８）。用語の核酸は、遺伝子、遺伝子によりコードされたｃＤＮＡ、およびｍＲＮＡと同義に使用される。本明細書で使用される場合、「核酸」、「核酸分子」または「ポリヌクレオチド」という用語は、ＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）、ヌクレオチド類似体を用いて生成されたＤＮＡまたはＲＮＡの類似体、およびそれらの誘導体、フラグメントおよびホモログを含むことが意図される。

用語の「発現」は、核酸によりコードされる産物の生合成を指す。例えば、目的のポリペプチドをコードする核酸セグメントの場合、発現は、核酸セグメントのｍＲＮＡへの転写およびｍＲＮＡの１個または複数のポリペプチドへの翻訳を含む。

用語「発現ユニット」および「発現カセット」は、本明細書では同義で用いられ、目的のポリペプチドをコードする核酸セグメントを示し、宿主細胞中で核酸セグメントの発現を提供できる。発現ユニットは通常、転写プロモーター、目的のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム、および転写ターミネーターを含み、全ては、動作可能な構成である。転写性プロモーターおよびターミネーターに加えて、発現ユニットは、例えば、エンハンサーまたはポリアデニル化シグナルなどの他の核酸セグメントをさらに含み得る。

本明細書で使用される場合、用語「発現ベクター」は、１つまたは複数の発現ユニットを含む、直鎖または環状の核酸分子を指す。１つまたは複数の発現ユニットに加えて、発現ベクターは、例えば、１つまたは複数の複製起点または１種または複数の選択可能マーカーなどの追加の核酸セグメントも含み得る。発現ベクターは通常、プラスミドまたはウイルス性ＤＮＡ由来であるか、または両方のエレメントを含み得る。

本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」、「ポリペプチド鎖」、または「タンパク質」は、共有結合されるアミノ酸の連続的な配置を指す。ポリペプチドは、１種または複数の鎖内ジスルフィド結合を形成し得る。本明細書で記載のポリペプチドに関して、配列番号により指定されたものに対応するアミノ酸残基の改変または変化への言及は、このような残基の翻訳後改変を含む。用語のポリペプチドタンパク質はまた、２つのポリペプチド鎖が、鎖間のジスルフィド結合を介するなどの、非直線的に一緒に連結される実施形態も包含する。例えば、天然の免疫グロブリン分子は、２つの重鎖ポリペプチドおよび２つの軽鎖ポリペプチドからなる。

本明細書で使用される場合、「多重特異的ポリペプチド」は、それぞれ、標的抗原に特異的に結合できる２つ以上の結合ドメインを含むポリペプチドを指す。例えば、本明細書で記載のポリペプチドは、２、３、４つの、またはそれを超える結合ドメインを含み得、２、３、４つの、またはそれを超える標的抗原に結合できる。いくつかの実施形態では、多重特異的ポリペプチドは、二重特異的ポリペプチドである。本明細書では、「二重特異的ポリペプチド」は、２つの結合ドメインを含み、２つの別々の標的抗原に結合できる。いくつかの実施形態では、本明細書で記載の二重特異的ポリペプチドは、標的細胞上に発現される細胞表面抗原に特異的に結合する第１の結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載の二重特異的ポリペプチドは、エフェクター細胞上に発現される細胞表面抗原に特異的に結合する結合ドメインを含む。結合ドメインは、抗体（例えば、可変重鎖および／または可変軽鎖、ｓｃＦｖ）、リガンド、または受容体から誘導され得る。

多重特異的ポリペプチドは、例えば、国際公開第２００７／１４６９６８号；国際公開第２０１０／０４０１０５号；国際公開第２０１０／００３１０８号；国際公開第２０１６／０９４８７３号；国際公開第２０１７／０５３４６９号；米国特許出願公開第２００６／００５１８４４号；および米国特許第７，１６６，７０７号；および米国特許第８，４０９，５７７号に開示される。これらの特許は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、本明細書で記載の多重特異的ポリペプチドは、二重特異的ポリペプチドであり、ｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ構造を有し得、本明細書ではＡＤＡＰＴＩＲ（商標）ポリペプチドとも呼ばれる。このような構造を含むポリペプチドの構造は、Ｎ末端からＣ末端へ：第１のｓｃＦｖ結合ドメイン－免疫グロブリン（Ｉｇ）ヒンジ領域－Ｉｇ定常領域－第２のｓｃＦｖ結合ドメイン、を含む。

タンパク質またはポリペプチドは、抗体または抗体の抗原結合フラグメントであり得る。いくつかの実施形態では、タンパク質は、組換え多重特異的タンパク質であり得る。他の実施形態では、多重特異的タンパク質は、２つの異なるモノクローナル抗体の化学的連結により、または２つのハイブリドーマ細胞株を融合して、ハイブリッドハイブリドーマを生成することにより、作製され得る。使用可能な他の多価フォーマットは、例えば、Ｋλボディ（Ｋλ－ｂｏｄｙ）、ｄＡｂ、ディアボディ、ＴａｎｄＡｂ、ナノボディ、ＳｍａｌｌＭｏｄｕｌａｒＩｍｍｕｎｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉａｌｓ（ＳＭＩＰ（商標））、ＤＯＣＫ－ＡＮＤ－ＬＯＣＫ（登録商標）（ＤＮＬ（登録商標））、ＣｒｏｓｓＭａｂＦａｂ、ＣｒｏｓｓＭａｂＶＨ－ＶＬ、鎖交換改変ドメインボディ（ｓｔｒａｎｄ－ｅｘｃｈａｎｇｅｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄｄｏｍａｉｎｂｏｄｙ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）、アフィボディ、フィノマー、クニッツドメイン、Ａｌｂｕ－ｄａｂ、交換ＶＨを有する２つの改変Ｆｖフラグメント（ｔｗｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄＦｖｆｒａｇｍｅｎｔｓｗｉｔｈｅｘｃｈａｎｇｅｄＶＨｓ（例えば、二重親和性親和性再標的化分子（ｄｕａｌ－ａｆｆｉｎｉｔｙｒｅ－ｔａｒｇｅｔｉｎｇｍｏｌｅｃｕｌｅ）（Ｄ．Ａ．Ｒ．Ｔ．））、ｓｃＦｖｘｓｃＦｖ（例えば、ＢｉＴＥ）、ＳＶＤ－ＩＧ、Ｃｏｖｘ－ｂｏｄｙ、ペプチボディ、ｓｃＦｖ－Ｉｇ、ＳＶＤ－Ｉｇ、ｄＡｂ－Ｉｇ、Ｋｎｏｂ－ｉｎ－Ｈｏｌｅ、ＣＨ３ドメイン中に一致変異を含むＩｇＧ１抗体（ＩｇＧ１ａｎｔｉｂｏｄｙｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇｍａｔｃｈｅｄｍｕｔａｔｉｏｎｉｎｔｈｅＣＨ３ｄｏｍａｉｎ）（例えば、デュオボディ抗体）およびトリオマブを含む。例示的二重特異的フォーマットは、Ｇａｒｂｅｒｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗｓＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙ１３：７９９－８０１（２０１４）で考察されている。この文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。追加の例示的二重特異的フォーマットは、Ｌｉｕｅｔａｌ．Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：３８ｄｏｉ：１０．２２８９／ｆｉｍｍｕ．２０１７．０００３８、ならびにＢｒｉｎｋｍａｎｎａｎｄＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ，ＭＡＢＳ９：２，１８２－２１２（２０１７）で考察される。これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、二重特異性抗体は、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントであり得る。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、ヒンジ領域でジスルフィド結合により連結されたテトラマー抗体分子の２つの抗原結合アームを含む。

当業者により理解されるように、タンパク質およびポリペプチドは、個別のポリペプチド鎖のアミノ酸配列により本明細書で定義され、これは、本開示を通して参照される配列番号により示される。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書で記載のｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖタンパク質またはポリペプチドは、ダイマーｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖタンパク質（例えば、ホモダイマーまたはヘテロダイマーｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖタンパク質）を形成するために、鎖間結合（例えば、鎖間ジスルフィド結合）により結合された２つのｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖポリペプチド鎖からなる。このような実施形態では、ｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖタンパク質は、個別のｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖポリペプチド鎖のアミノ酸配列により定義される。ポリペプチドおよびタンパク質はまた、炭水化物基などの、非ペプチド成分も含み得る。炭水化物および他の非ペプチド置換基は、そのタンパク質が産生される細胞によりタンパク質またはポリペプチドに付加でき、細胞型により変化する。タンパク質およびポリペプチドは、本明細書では、それらのアミノ酸骨格構造により定義される；炭水化物基などの置換基は通常、明記されないが、それにもかかわらず存在し得る。

用語「軽鎖可変領域」（「軽鎖可変ドメイン」または「ＶＬ」または「Ｖ_Ｌ」とも呼ばれる）および「重鎖可変領域」（「重鎖可変ドメイン」または「ＶＨ」または「Ｖ_Ｈ」とも呼ばれる）は、それぞれ、抗体軽鎖および重鎖由来の可変結合領域を指す。可変結合領域は、通常アミノ末端からカルボキシル末端へＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４の順に含む、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）および「フレームワーク領域」（ＦＲ）として知られる別々の明確な小領域から構成される。一実施形態では、ＦＲはヒト化される。用語「ＣＬ」は、「免疫グロブリン軽鎖定常領域」または「軽鎖定常領域」、すなわち、抗体軽鎖由来の定常領域を意味する。用語「ＣＨ」は、「免疫グロブリン重鎖定常領域」または「重鎖定常領域」を指し、これは、抗体アイソタイプに応じて、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ）、またはＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４ドメイン（ＩｇＥ、ＩｇＭ）にさらに分割できる。「Ｆａｂ」（抗原結合性フラグメント）は、抗原に結合する抗体の一部であり、鎖間ジスルフィド結合を介して軽鎖に連結合される重鎖の可変領域およびＣＨ１ドメインを含む。

用語「アミノ末端」および「カルボキシル末端」は、本明細書では、ポリペプチド内の位置を示すために使用される。文脈が許容する場合、これらの用語は、近似度または相対位置を示すために、ポリペプチドの特定の配列または部分を基準として使用される。例えば、ポリペプチド内の基準配列に対してカルボキシル末端に位置する特定の配列は、基準配列のカルボキシル末端の近位に位置するが、完全なポリペプチドのカルボキシル末端にあるとは限らない。

本明細書で使用される場合、「形質転換」、「遺伝子導入」、および「形質導入」という用語は、核酸（すなわち、ヌクレオチド高分子）の細胞への導入を指す。本明細書で使用される場合、「遺伝子形質転換」という用語は、ＤＮＡ、特に、組換えＤＮＡの細胞への導入および組み込みを指す。導入される核酸は、発現ベクターを介して細胞中に導入できる。

本明細書で使用される場合、「抗体依存性細胞傷害」および「ＡＤＣＣ」は、ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞およびマクロファージなどの単核球細胞）が標的細胞上の結合抗体（またはＦｃγＲを結合できる他のタンパク質）を認識し、その後標的細胞の溶解を引き起こす、細胞媒介プロセスを指す。原理的には、活性化ＦｃγＲを有するいずれのエフェクター細胞もＡＤＣＣの媒介を誘発できる。ＡＤＣＣを媒介するための主要細胞は、ＮＫ細胞であり、これは、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現し、一方、単球は、それらの活性化、局在化、または分化の状態に応じて、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩを発現できる。造血細胞上のＦｃγＲ発現の概説については、例えば、Ｒａｖｅｔｃｈｅｔａｌ．，１９９１，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：４５７－９２を参照されたい。

ポリペプチドまたはタンパク質に関連して、本明細書で使用される場合、用語「ＡＤＣＣ活性を有する」は、ポリペプチドまたはタンパク質、例えば、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１）由来などのＦｃドメイン（例えば、免疫グロブリンヒンジ領域およびＣＨ２およびＣＨ３ドメインを有する免疫グロブリン定常領域）を含むものが、Ｆｃ受容体を発現している細胞溶解性免疫エフェクター細胞（例えば、ＮＫ細胞）上の細胞溶解性Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＩ）の結合を介して、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介できることを意味する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインを含む多重特異的ポリペプチドまたはタンパク質は、ＣＨ２および／またはＣＨ３ドメイン中の変異の結果として、エフェクター機能を欠く場合がある（例えば、ヌルＡＤＣＣ活性）。

本明細書で使用される場合、「補体依存性細胞傷害」および「ＣＤＣ」は、正常血清中の成分（「補体」）が、標的抗原に結合した抗体または他のＣ１ｑ補体結合タンパク質結合タンパク質と一緒に、標的抗原を発現している標的細胞の溶解を示す、プロセスを指す。補体は、呼応し順序立てて作用してそれらの効果を発揮する、一群の血清タンパク質からなる。

本明細書で使用される場合、用語「古典的補体経路」および「古典的補体系」は、同義であり、補体の活性のための特定の経路を指す。古典的経路は、開始のために抗原－抗体複合体を必要とし、Ｃ１～Ｃ９と命名された９つの主要タンパク質成分の順序立てた活性化を伴う。活性化プロセスのいくつかのステップでは、産物は、その後に続くステップを触媒する酵素である。このカスケードは、比較的小さな初期シグナルにより、大量の補体の増幅と活性化をもたらす。

ポリペプチドまたはタンパク質に関連して、本明細書で使用される場合、用語「ＣＤＣ活性を有する」は、ポリペプチドまたはタンパク質、例えば、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１）由来などのＦｃドメイン（例えば、免疫グロブリンヒンジ領域およびＣＨ２およびＣＨ３ドメインを有する免疫グロブリン定常領域）を含むものが、Ｃ１ｑ補体タンパク質の結合および古典的補体系の活性化を介して、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を媒介できることを意味する。いくつかの実施形態では、多重特異的ポリペプチドまたはタンパク質は、ＣＨ２および／またはＣＨ３ドメイン中の１種または複数の変異の結果として、エフェクター機能を欠く場合がある（例えば、ヌルＣＤＣ活性）。

本明細書で使用される場合、「高められたエフェクター細胞活性化」は、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質によるエフェクター細胞応答の増大、延長、および／または増強を指す。いくつかの実施形態では、高められたエフェクター細胞活性化は、エフェクター細胞の細胞傷害活性の増大を指す。いくつかの実施形態では、高められたエフェクター細胞活性化は、エフェクター細胞の標的細胞を溶解する能力が強化されるような、サイトカイン産生、細胞増殖、または細胞表面分子発現の変化を指す。

本明細書で使用される場合、「エフェクター細胞」という用語は、腫瘍細胞などの標的細胞を溶解するまたは死滅させることができる、免疫系の細胞を指す。本明細書でエフェクター細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、またはＮＫＴ細胞などのリンパ球、単球、マクロファージ、樹状細胞、または顆粒球を指し得る。いくつかの実施形態では、用語のエフェクター細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＮＫＴ細胞を指す。

本明細書で使用される場合、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、または「回復すること（ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｎｇ）」という用語は、治療的処置または予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）処置／予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）処置を指す。処置は、処置を受けている個体における疾患の少なくとも１つの症状が改善する、または処置が個体における進行性疾患の悪化を遅らせることができる、または追加の関連疾患の発症を防止することができる場合、治療的である。

本明細書で使用される場合、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質またはその組成物の「治療的有効量（または治療的有効投与量）」または「有効量（または有効投与量）」という用語は、統計的に有意な法式で、または統計的に有意な臓器機能の改善の観点で治療されている疾患の１種または複数の症状の回復を生ずるのに十分な、化合物の量を指す。単独で投与される個別の有効成分に言及する場合、治療的有効量は、その成分単独を指す。組み合わせに言及する場合、治療的有効量は、順次または同時に（同じ製剤中で、または別の製剤で同時に）投与されたかにかかわらず、治療的効果を生ずる有効成分の組み合わされた量を指す。

医薬組成物
本明細書で記載されるのは、変性を防ぎ、および／または、特に凍結時に、凝集体の形成を防ぐまたは実質的に低減する、多重特異的ポリペプチドなどの、タンパク質治療薬の安定な医薬製剤である。治療タンパク質に加えて、本明細書で記載の医薬組成物は、緩衝液、賦形剤、および界面活性物質の１種または複数をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、組成物は、緩衝液、賦形剤および界面活性物質を含む、それらからなる、それらから本質的になり、多重特異的タンパク質は、２つの同一のポリペプチドのダイマーであり、各ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端への順で、またはカルボキシル末端からアミノ末端への順で、（ｉ）第１の結合ドメイン、（ｉｉ）ヒンジ領域、（ｉｉｉ）免疫グロブリン定常領域、および（ｉｖ）第２の結合ドメイン、を含み；緩衝液は、コハク酸エステルまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは酸を含むまたはそれからなる。

いくつかの実施形態では、組成物は、約０．１ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌの多重特異的タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約１ｍｇ／ｍｌ～約５ｍｇ／ｍｌの多重特異的タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約２ｍｇ／ｍｌの多重特異的タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約２ｍｇ／ｍｌの多重特異的タンパク質、約５ｍＭのコハク酸エステル、約６．５重量／体積（ｗ／ｖ）％のスクロースおよび約０．０２ｗ／ｖ％のポリソルベート８０を含む。

いくつかの実施形態では、組成物は、多重特異的タンパク質の分解を実質的に防ぐ。いくつかの実施形態では、組成物は、同一の貯蔵条件化でヒスチジン緩衝液中で貯蔵された同一の多重特異的ポリペプチドに比べて、多重特異的ポリペプチドの分解を遅らせる、またはその分解を低減する。いくつかの実施形態では、組成物は、４℃で少なくとも１年間、実質的に安定である。いくつかの実施形態では、組成物は、多重特異的タンパク質の凝集体の形成に実質的に耐性である。

いくつかの実施形態では、組成物は、凍結から解凍の条件に耐えることができる。いくつかの実施形態では、組成物は、同一の凍結から解凍の条件下でヒスチジン緩衝液中で貯蔵された多重特異的ポリペプチドに比べて、凍結から解凍の条件下で多重特異的ポリペプチドの分解を遅らせる、またはその分解を低減する。

他の実施形態では、本明細書で開示のように配合された場合、ＣＤ１２３ｘＣＤ３標的化多重特異的ポリペプチドは、凍結乾燥後に、ほとんどまたは全く分解を受けない。例えば、ＣＤ１２３ｘＣＤ３標的化多重特異的ポリペプチドは、ヒスチジン緩衝液で配合された同一のポリペプチドに比べて、凍結乾燥後に低減された分解を示す、コハク酸エステルとスクロースの配合物中で配合され得る。本明細書でまた提供されるのは、凍結乾燥抗ＣＤ１２３ｘ抗ＣＤ３多重特異的ポリペプチドであり、これは、限定されないが、約５ｍＭのコハク酸エステル、約６．５重量／体積（ｗ／ｖ）％のスクロースおよび約０．０２ｗ／ｖ％のポリソルベート８０中で配合されたＴＲＩ１３０およびＴＲＩ１２９を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、凍結乾燥される。

緩衝液
本明細書で使用される場合、「緩衝液」または「緩衝剤」という用語は、水溶液に添加される場合、酸またはアルカリの添加時、または溶媒で希釈時に、ｐＨの変動に対し溶液を保護することができる１種または複数の成分を指す。

いくつかの実施形態では、緩衝液は、任意の薬学的に許容可能な緩衝液を含む、それからなる、またはそれから本質的になる。例えば、緩衝液は、リン酸カリウム、酢酸／酢酸ナトリウム、クエン酸／クエン酸ナトリウム、コハク酸／コハク酸ナトリウム、酒石酸／酒石酸ナトリウム、ヒスチジン／ヒスチジンＨＣｌ、グリシン、トリス、グルタメート、アセテート、これらの混合物、またはその薬学的に許容可能な塩または酸であり得る。特定の実施形態では、緩衝液は、コハク酸エステルまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは酸を含む、それからなる、またはそれから本質的になる。

いくつかの実施形態では、組成物中の緩衝液の濃度は、約１ｍＭ～約５００ｍＭ、約１ｍＭ～約１００ｍＭ、約１ｍＭ～約５０ｍＭ、約１～約１０ｍＭ、約５ｍＭ～約５０ｍＭ、または約５ｍＭ～約２０ｍＭ、約５ｍＭ～約１０ｍＭである。いくつかの実施形態では、組成物は、約１ｍＭ～約１０ｍＭのコハク酸エステル、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは酸を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約５ｍＭのコハク酸エステル、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは酸を含む。

いくつかの実施形態では、組成物のｐＨは、３．０、３．２５、３．５、３．７５、４．０、４．２５、４．５、４．７５、５．０、５．２５、５．５、５．７５、６．０、６．２５、６．５、６．７５、７．０、７．２５、７．５、７．７５、８．０、８．２５、８．５、８．７５、９．０、９．２５、９．５、９．７５、１０．０、１０．２５、１０．５、１０．７５、１１．０、１１．２５または１１．５である。いくつかの実施形態では、組成物のｐＨは、約３．０～約６．０のｐＨである。いくつかの実施形態では、組成物は、約４．０～約５．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、組成物のｐＨは、約４．８である。

賦形剤
本明細書において言及されたように、賦形剤は、組成物の医薬有効成分と共に配合される薬理学的に不活性な物質である。賦形剤は、潤滑性、流動性、崩壊、または味覚に役立ち得、ある種の抗菌剤機能を付与し得る。

本明細書で開示の組成物で使用され得る代表的賦形剤は、医薬品結合剤、希釈剤、放出遅延賦形剤、潤滑剤、流動促進剤、ガス生成剤、コーティング系、溶媒、および着色料を含む。適切な賦形剤は、ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＥｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，ＴｈｉｒｄＥｄｉｔｉｏｎ，ＥｄｉｔｅｄｂｙＡ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ，ＡｍｅｒｉｃａｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎａｎｄＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＰｒｅｓｓ（２０００）、およびＥ．Ｔ．Ｃｏｌｅｅｔａｌ．，ＡｄｖａｎｃｅｄＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＲｅｖｉｅｗｓ６０（２００８），７４７－７５６、中の表３～５に賦形剤として言及されている物質を含む。例えば、賦形剤は、ポリプロピレングリコール；ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体、ポリオキシエチレングリセロールオキシステアレート、飽和ポリグリコール化グリセリド、ポリエチレンポリプロピレングリコール、ビタミンＥ、およびビタミンＥＴＰＧＳ（ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコールポリエチレングリコール１０００コハク酸エステル）からなる群から選択され得る。

いくつかの実施形態では、組成物は、約１重量／体積（ｗ／ｖ）％～約２０ｗ／ｖ％、約１ｗ／ｖ％～約１０ｗ／ｖ％、約５ｗ／ｖ％～約１５ｗ／ｖ％、または約１０ｗ／ｖ％の賦形剤を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約１ｗ／ｖ％～約１２ｗ／ｖ％の賦形剤、例えば、約６．５ｗ／ｖ％の賦形剤を含む。

いくつかの実施形態では、賦形剤は、糖を含むか、またはそれからなる、またはそれから本質的になる。いくつかの実施形態では、組成物は、約１ｗ／ｖ％～約１２ｗ／ｖ％の糖を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約４ｗ／ｖ％～約８ｗ／ｖ％の糖を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約６．５ｗ／ｖ％の糖を含む。いくつかの実施形態では、糖は、スクロースである。

界面活性物質
本明細書で記載される場合、「界面活性物質」は、疎水性部分（例えば、アルキル鎖）および親水性部分（例えば、カルボキシルおよびカルボキシレート基）の両方を含む界面活性分子である。

本明細書で記載の組成物中での使用に好適な界面活性物質としては、限定されないが、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０または８０）；ポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）；ソルビタンエステルおよび誘導体；トリトン；ラウリル硫酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍｌａｕｒｙｌｓｕｌｆａｔｅ）；オクチル配糖体ナトリウム；ラウリル－、ミリスチル－、リノレイル－、またはステアリル－スルホベタイン（ｓｕｌｆｏｂｅｔａｉｎｅ）；ラウリル－、ミリスチル－、リノレイル－、またはステアリル－サルコシン；リノレイル－、ミリスチル－、またはセチル－ベタイン；ラウラミドプロピル－、コカミドプロピル－、リノールアミドプロピル－、ミリスタミドプロピル－、パルミドプロピル－、またはイソステアルアミドプロピル－ベタイン（例えば、ラウラミドプロピル（ｌａｕｒａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ））；ミリスタミドプロピル－、パルミドプロピル－、またはイソステアルアミドプロピル－ジメチルアミン；ナトリウムメチルココイル－、または二ナトリウムメチルオレイル－タウレート；およびＭＯＮＡＱＵＡＴ（商標）シリーズ（ＭｏｎａＩｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｐａｔｅｒｓｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、ポリエチレングリコール、ポリプロピルグリコール、およびエチレンおよびプロピレングリコールのコポリマー（例えば、プルロニック、ＰＦ６８、など）が挙げられる。特定の実施形態では、界面活性物質は、ポリソルベート８０を含む、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、組成物は、約０．００１ｗ／ｖ％～約１ｗ／ｖ％、約０．０１ｗ／ｖ％～約０．５ｗ／ｖ％、または約０．０１ｗ／ｖ％～約０．１ｗ／ｖ％の界面活性物質を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約０．０２ｗ／ｖ％の界面活性物質を含む。

いくつかの実施形態では、組成物は、約０．００１ｗ／ｖ％～約１ｗ／ｖ％、約０．０１ｗ／ｖ％～約０．５ｗ／ｖ％、または約０．０１ｗ／ｖ％～約０．１ｗ／ｖ％のポリソルベート８０を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約０．０２ｗ／ｖ％のポリソルベート８０を含む。

治療的タンパク質
本明細書で記載の組成物は、本明細書で記載の多くの異なるタンパク質治療薬と関連して使用され得る。

結合ドメイン
いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、結合ドメインを含む。結合ドメインは、少なくとも１種の細胞表面分子（例えば、細胞表面受容体）に特異的結合を提供し得る。結合ドメインは、抗体またはそのフラグメント、または異なるフォーマットのいずれかの融合タンパク質の形態であり得る（例えば、融合タンパク質は、二重特異的または多重特異的分子の形態であり得る）。他の実施形態では、結合ドメインは、例えば、結合ドメインポリペプチドを、例えば、特定の細胞型、毒素、追加の細胞受容体、または抗体に向ける特定のサイトカインまたは分子を含み得る。

いくつかの実施形態では、本明細書で記載の結合ドメインは、抗体由来であり、可変重鎖（Ｖ_Ｈ）および可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）を含む。例えば、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ鎖を含むｓｃＦｖ。これらの結合ドメインおよび可変鎖は、標的に対しある程度の結合を依然として保持する任意の順で配置され得る。いくつかの実施形態では、結合ドメインは、（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）；および（ｉｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドおよびタンパク質は、ｓｃＦｖである結合ドメインを含む。このような実施形態では、結合ドメインは、ｓｃＦｖドメインと呼ばれる場合もある。いくつかの実施形態では、結合ドメインは、目的の標的に特異的なＶ_ＨおよびＶ_Ｌ領域を含む単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態では、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ領域は、ヒトのものである、またはヒト化される。いくつかの変形例では、結合ドメインは、ペプチドリンカーで連結されたＶ_ＬおよびＶ_Ｈ領域を含む単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。

特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドの結合ドメインは、（ｉ）ＣＤＲＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）、および（ｉｉ）ＣＤＲＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチド構築物に対し提供されるアミノ酸配列は、ヒト免疫グロブリンリーダー配列を含まない。示されるＣＤＲ配列およびアミノ酸置換位置は、ＩＭＧＴ基準（Ｂｒｏｃｈｅｔｅｔａｌ，Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．（２００８）３６，Ｗ５０３－５０８）を用いて定義されるものである。

特定の実施形態では、本開示の結合ドメインＶ_Ｌおよび／またはＶ_Ｈ領域は、親Ｖ_Ｌおよび／またはＶ_Ｈ領域のＶ_Ｌおよび／またはＶ_Ｈ由来であり（例えば、国際公開第２０１６／１８５０１６号に記載の１６１８／１６１９）、既知のモノクローナル抗体のＶ_Ｌおよび／またはＶ_Ｈ配列に比べた場合、約１個または複数（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）の挿入、約１個または複数（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）の欠失、約１個または複数（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換または非保存的アミノ酸置換）、または上記変化の組み合わせを任意選択で含む。挿入、欠失または置換は、各ＣＤＲがゼロ変化または最大で１、２、または３個の変化を含むことを条件として、この領域のアミノまたはカルボキシル末端または両末端を含む、Ｖ_Ｌおよび／またはＶ_Ｈ領域中のどこにでも存在し得る。いくつかの実施形態では、改変ＶＬおよび／またはＶＨ領域を含む結合ドメインは依然として、親結合ドメインと類似の、またはそれより高い親和性で、その標的に特異的に結合できる。

Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈ領域の連結のためのペプチドリンカーの使用は、当該技術分野において周知であり、多数の論文がこの特定の分野において存在する。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、１５マーであり、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号１２８）アミノ酸配列の３回反復（（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_３）（配列番号５９）からなる。他のリンカーが使用されてきており、ファージディスプレイ技術、ならびに選択的感染ファージ技術（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｉｎｆｅｃｔｉｖｅｐｈａｇｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）が、リンカー配列を多様化し、適切なリンカー配列を選択するために使用された（Ｔａｎｇｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１，１５６８２－１５６８６，１９９６；Ｈｅｎｎｅｃｋｅｅｔａｌ．，ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ．１１，４０５－４１０，１９９８）。特定の実施形態では、Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈ領域が、式（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_ｎ（式中ｎ＝１～５）（配列番号１２９）を含むアミノ酸配列を有するペプチドリンカーにより連結される。例えば、いくつかの実施形態では、リンカーは、（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_４（配列番号６１）を含む。他の好適なリンカーは、ランダム変異誘発により単純なリンカーを最適化することにより得ることができる。いくつかの実施形態では、本明細書で記載のｓｃＦｖのＶ_Ｈ領域は、リンカー配列に対しＮ末端に配置され得る。いくつかの実施形態では、本明細書で記載のｓｃＦｖのＶ_Ｌ領域は、リンカー配列に対しＣ末端に配置され得る。

いくつかの実施形態では、結合ドメインは、ＣＤ１２３、ＰＳＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ３３、５Ｔ４、またはＨＥＲ２などの、腫瘍抗原に結合し得る。いくつかの実施形態では、結合部位は、ＣＤ３結合ドメインであり得る。いくつかの実施形態では、結合ドメインは、４－１－ＢＢに結合し得る。いくつかの実施形態では、結合ドメインは、ＯＸ４０に結合し得る。いくつかの実施形態では、配合された多重特異的タンパク質は、４－１－ＢＢおよびＯＸ４０の両方に結合する。

ヒンジ
結合ドメインに加えて、治療的ポリペプチドは、ヒンジ領域をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、ヒンジは、野生型免疫グロブリンヒンジ領域の１個または複数のシステイン残基が１個または複数のアミノ酸残基（例えば、セリンまたはアラニン）で置換される、改変免疫グロブリンヒンジである。例示的改変免疫グロブリンヒンジ、カルボキシル末端リンカーおよびアミノ末端リンカーは、野生型ヒトＩｇＧ１ヒンジ中に認められる１、２または３個のシステイン残基が、１、２または３個の異なるアミノ酸残基（例えば、セリンまたはアラニン）により置換された、免疫グロブリンヒトＩｇＧ１ヒンジ領域を含む。改変免疫グロブリンヒンジは、別のアミノ酸（例えば、セリンまたはアラニン）で置換されたプロリンを追加で有し得る。例えば、上述した改変ヒトＩｇＧ１ヒンジは、野生型ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域の３個のシステインに対しカルボキシル末端に位置する別のアミノ酸残基で置換されたプロリンを追加で有し得る。一実施形態では、コアヒンジ領域のプロリンは、置換されない。特定の実施形態では、ヒンジ、カルボキシル末端リンカー、またはアミノ末端リンカーポリペプチドは、野生型ヒトＩｇＧ１ヒンジ、野生型ヒトＩｇＧ２ヒンジ、または野生型ヒトＩｇＧ４ヒンジなどの野生型免疫グロブリンヒンジ領域と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である配列を含む、またはその配列である。
免疫グロブリン定常ドメイン
治療的タンパク質はまた、免疫グロブリン定常（Ｆｃ）ドメイン（本明細書では、定常領域、Ｆｃドメイン、Ｆｃ領域、などとも呼ばれる）を含み得る。いくつかの実施形態では、定常領域は、ＩｇＧＣＨ２およびＣＨ３ドメイン、例えば、ＩｇＧ１ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、定常領域は、ＣＨ１ドメインを含まない。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ヒトＦｃドメインである。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＦｃγＲ１，ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩＩｂへの結合を低減するまたは防ぐために、野性型免疫グロブリン定常領域と比べて、１個、２個、３個のまたはこれを超えるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、定常領域を構成する定常ドメインは、ヒトまたはヒト配列由来である。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、補体結合およびＦｃγ受容体との相互作用を低減するまたは防ぐために、Ｆｃ領域に１個または複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、Ｆｃ媒介Ｔ細胞活性化を低減するまたは防ぐために、野性型免疫グロブリン定常領域と比べて、１個、２個、３個のまたはこれを超えるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＣＤＣ活性を防ぐまたは低減するために、野性型免疫グロブリン定常領域と比べて、１個、２個、３個のまたはこれを超えるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＡＤＣＣ活性を防ぐまたは低減するために、野性型免疫グロブリン定常領域と比べて、１個、２個、３個のまたはこれを超えるアミノ酸置換を含む。

いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵナンバリングシステムによる、ＣＨ２ドメインの位置２３４、２３５、２３７および３２２に１個または複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ＥＵナンバリングシステムによる、ＣＨ２ドメインの位置２３４、２３５、２３７、３１８、３２０および３２２に変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ＥＵナンバリングシステムによる、ＣＨ２ドメインの変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡおよびＫ３２２Ａを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ＥＵナンバリングシステムによる、ＣＨ２ドメインの変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｋ３２０Ａ、およびＫ３２２Ａを含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＥＵナンバリングシステムによる、置換Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、およびＫ３２２ＡならびにＧ２３６の欠失を含む、ヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＦｃドメインはヒトＩｇＧ１由来である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１Ｆｃドメイン中の２個以上の変異は、Ｆｃ媒介架橋を介したシグナル伝達を防ぐまたは実質的に低減する。

いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、配列番号３２～３５のいずれか１つのアミノ酸配列、またはそのバリアントを含む。免疫グロブリン定常領域の包含は、対象への投与後の本開示のポリペプチドおよびタンパク質の循環からの排出を遅らせる。変異または他の変化により、免疫グロブリン定常領域は、ポリペプチドエフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、ＣＤＣ、補体結合、およびＦｃ受容体への結合）の比較的容易な調節をさらに可能にし、これは、当技術分野において既知のように、および本明細書で記載のように、治療される疾患に応じて、増大されるまたは低減され得る。特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドおよびタンパク質は、１種または複数のこれらのエフェクター機能を媒介できる免疫グロブリン定常領域を含む。他の実施形態では、１種または複数のこれらのエフェクター機能は、本開示で記載のポリペプチドまたはタンパク質の免疫グロブリン定常領域において、対応する野性型免疫グロブリン定常領域に比べて、低減されるか、または存在しない。

本開示のポリペプチドおよびタンパク質中に存在する定常領域は、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＣＨ４ドメイン、またはこれらの任意の組み合わせの一部または全てを含み得る、またはこれらから誘導され得る。例えば、免疫グロブリン定常領域は、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインの両方、ＣＨ３およびＣＨ４ドメインの両方、２つのＣＨ３ドメイン、ＣＨ４ドメイン、２つのＣＨ４ドメイン、およびＣＨ２ドメインとＣＨ３ドメインの一部を含み得る。特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質は、ＣＨ１ドメインを含まない。

本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質は、特定の免疫グロブリンクラスまたはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、またはＩｇＤ）由来の、および種々の種（ヒト、マウス、ラット、および他の哺乳動物を含む）由来の野生型免疫グロブリンＣＨ２ドメインまたは改変免疫グロブリンＣＨ２ドメインを含み得る。特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質のＣＨ２ドメインは、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号１１５、１９９～２０１および１９５～１９７でそれぞれ示されるヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、またはＩｇＤの野生型ＣＨ２ドメインなどの、野生型ヒト免疫グロブリンＣＨ２ドメインである（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。特定の実施形態では、ＣＨ２ドメインは、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号１１５で示される野生型ヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメインである（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。

特定の実施形態では、本開示のポリペプチドまたはタンパク質中の改変ＣＨ２領域は、野生型ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４、またはマウスＩｇＧ２ａ（例えば、ＩＧＨＧ２ｃ）のＣＨ２領域などの野生型免疫グロブリンＣＨ２領域と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一である配列を含む、またはその配列である。

本開示のポリペプチドまたはタンパク質中の改変免疫グロブリンＣＨ２領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、またはＩｇＤなどの種々の免疫グロブリンアイソタイプ、および種々の種（ヒト、マウス、ラット、および他の哺乳動物を含む）のＣＨ２領域から誘導できる。特定の実施形態では、本開示の融合タンパク質中の改変免疫グロブリンＣＨ２領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４、またはマウスマウスＩｇＧ２ａ（例えば、ＩＧＨＧ２ｃ）のＣＨ２領域から誘導でき、これらの配列は、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号１１５、１９９、２０１、および３２０で示される（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質の改変ＣＨ２ドメインは、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、ＣＤＣ、補体結合、Ｆｃ受容体結合、またはこれらの任意の組み合わせなどの免疫学的活性（すなわち、エフェクター機能）を高めるまたは低減する、当該技術分野において既知の変異を有する改変ヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメインである。

特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質のＣＨ２ドメインは、１種または複数のアミノ酸欠失または置換を含む、改変免疫グロブリンＣＨ２領域（例えば、改変ヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメイン）である。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、位置２９７の位置のアスパラギンのアミノ酸置換を含む（例えば、アスパラギンからアラニンへの置換）。このようなアミノ酸置換は、この位置でのグリコシル化を低減または除去し、ＦｃγＲおよびＣ１ｑへの効率的Ｆｃ結合を抑止する。位置２９７でＡｓｎからＡｌａへの置換を有する改変ヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメインの配列は、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号３２４で示される（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、改変ＣＨ２ドメインは、位置２３４～２３８で少なくとも１個の置換または欠失を含む。例えば、免疫グロブリンＣＨ２領域は、位置２３４、２３５、２３６、２３７または２３８；位置２３４および２３５；位置２３４および２３６；位置２３４および２３７；位置２３４および２３８；位置２３４～２３６；位置２３４、２３５および２３７；位置２３４、２３６および２３８；位置２３４、２３５、２３７、および２３８；位置２３６～２３８での置換；または位置２３４～２３８での２、３、４、または５個のアミノ酸の任意の他の組み合わせの置換を含み得る。いくつかの実施形態では、改変ＣＨ２領域は、位置２３４～２３８で、１個または複数（例えば、２個、３個、４個または５個）の、例えば、位置２３６また配置２３７の１つで、アミノ酸欠失を含み、同時に、他の位置は置換される。特定の実施形態では、位置２３４～２３８の１つまたは複数でアミノ酸残基が、１個または複数のアラニン残基で置換されている。さらなる実施形態では、位置２３４～２３８で１個のみのアミノ酸残基が、欠失されており、同時に、位置２３４～２３８で残りのアミノ酸の１個または複数が、別のアミノ酸（例えば、アラニンまたはセリン）で置換され得る。

いくつかの実施形態では、上記変異は、改変ＣＨ２ドメインを含むポリペプチドのＡＤＣＣ活性またはＦｃ受容体結合能力を低減するまたは除去する。

特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質のＣＨ２ドメインは、位置２５３、３１０、３１８、３２０、３２２、おび３３１での１個または複数のアミノ酸置換を含む、改変免疫グロブリンＣＨ２領域（例えば、改変ヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメイン）である。例えば、免疫グロブリンＣＨ２領域は、位置２５３、３１０、３１８、３２０、３２２、または３３１、位置３１８および３２０、位置３１８および３２２、位置３１８、３２０および３２２での置換、または位置２５３、３１０、３１８、３２０、３２２、または３３１での２個、３個、４個、５個または６個のアミノ酸の任意の他の組み合わせの置換を含み得る。このような実施形態では、上記変異は、改変ＣＨ２ドメインを含むポリペプチドのＣＤＣ活性を低減するまたは除去する。

特定の実施形態では、位置２９７でのアミノ酸置換に加えて、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質の改変ＣＨ２領域（例えば、改変ヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメイン）は、位置２３４～２３８で１個または複数（例えば、２個、３個、４個、または５個）の追加の置換をさらに含み得る。例えば、免疫グロブリンＣＨ２領域は、位置２３４および２９７、位置２３４、２３５、および２９７、位置２３４、２３６、および２９７、位置２３４～２３５、および２９７、位置２３４、２３５、２３７および２９７、位置２３４、２３６、２３８および２９７、位置２３４、２３５、２３７、２３８および２９７、位置２３６～２３８および２９７での置換、または位置２９７に加えて位置２３４～２３８での２個、３個、４個、または５個のアミノ酸の任意の他の組み合わせの置換を含み得る。追加して、または代わりに、改変ＣＨ２領域は、位置２３６また配置２３７などの位置２３４～２３８で、１個または複数（例えば、２個、３個、４個または５個）のアミノ酸欠失を含み得る。追加の変異は、改変ＣＨ２ドメインを含むポリペプチドのＡＤＣＣ活性またはＦｃ受容体結合能力を低減するまたは除去する。特定の実施形態では、位置２３４～２３８の１つまたは複数でアミノ酸残基が、１個または複数のアラニン残基で置換されている。さらなる実施形態では、位置２３４～２３８で１個のみのアミノ酸残基が、欠失されており、同時に、位置２３４～２３８で残りのアミノ酸の１個または複数が、別のアミノ酸（例えば、アラニンまたはセリン）で置換され得る。

特定の実施形態では、位置２３４～２３８での１個または複数（例えば、２個、３個、４個、または５個）のアミノ酸置換に加えて、本開示の融合タンパク質中の本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質の変異ＣＨ２領域（例えば、改変ヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメイン）は、補体結合に関与する１つまたは複数の位置（例えば、位置Ｉ２５３、Ｈ３１０、Ｅ３１８、Ｋ３２０、Ｋ３２２、またはＰ３３１）で１個または複数（例えば、２個、３個、４個、５個、または６個）の追加のアミノ酸置換（例えば、アラニンでの置換）を含み得る。変異免疫グロブリンＣＨ２領域の例は、位置２３４、２３５、２３７（存在する場合）、３１８、３２０および３２２でアラニン置換を有するヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４、およびマウスＩｇＧ２ａＣＨ２領域を含む。例示的変異免疫グロブリンＣＨ２領域は、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３７、Ｅ３１８、Ｋ３２０、およびＫ３２２でアラニン置換を有するマウスＩＧＨＧ２ｃＣＨ２領域である。

またさらなる実施形態では、位置２９７でのアミノ酸置換および位置２３４～２３８での追加の欠失または置換に加えて、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質の改変ＣＨ２領域（例えば、改変ヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメイン）は、位置２５３、３１０、３１８、３２０、３２２、および３３１で１個または複数（例えば、２個、３個、４個、５個、または６個）の追加の置換をさらに含み得る。例えば、免疫グロブリンＣＨ２領域は、（１）位置２９７で置換、（２）位置２３４～２３８で１個または複数の置換または欠失またはこれらの組み合わせ、および位置Ｉ２５３、Ｈ３１０、Ｅ３１８、Ｋ３２０、Ｋ３２２、およびＰ３３１で１個または複数（例えば、２個、３個、４個、５個、または６個）のアミノ酸置換、例えば、位置Ｅ３１８、Ｋ３２０およびＫ３２２で１個、２個、３個の置換を含み得る。上記位置でアミノ酸は、アラニンまたはセリンにより置換され得る。

特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質の置換ＣＨ２領域は、（ｉ）位置２９７のアスパラギンのアミノ酸置換および位置２３４、２３５、２３６または２３７での１個のアミノ酸置換；（ｉｉ）位置２９７のアスパラギンのアミノ酸置換および位置２３４～２３７の２つの位置でのアミノ酸置換；（ｉｉｉ）位置２９７のアスパラギンのアミノ酸置換および位置２３４～２３７の３つの位置でのアミノ酸置換；（ｉｖ）位置２９７のアスパラギンのアミノ酸置換、位置２３４、２３５および２３７でのアミノ酸置換、および位置２３６でのアミノ酸欠失；（ｖ）位置２３４～２３７の３つの位置でのアミノ酸置換および位置３１８、３２０および３２２でのアミノ酸置換；または（ｖｉ）位置２３４～２３７の３つの位置でのアミノ酸置換、位置２３６でのアミノ酸欠失、および位置３１８、３２０および３２２でのアミノ酸置換、を含む。

位置２９７のアスパラギンのアミノ酸置換を有する例示的改変免疫グロブリンＣＨ２領域は、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３７およびＮ２９７にアラニン置換およびＧ２３６に欠失を有するヒトＩｇＧ１ＣＨ２領域（米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号３２５、前記配列は参照により本明細書に組み込まれる）、Ｖ２３４、Ｇ２３６、およびＮ２９７にアラニン置換を有するヒトＩｇＧ２ＣＨ２領域（米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号３２６、上記配列は参照により本明細書に組み込まれる）、Ｆ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３７およびＮ２９７にアラニン置換およびＧ２３６の欠失を有するヒトＩｇＧ４ＣＨ２領域（米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号３２２、上記配列は参照により本明細書に組み込まれる）、Ｆ２３４およびＮ２９７にアラニン置換を有するヒトＩｇＧ４ＣＨ２領域（米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号３４３、上記配列は参照により本明細書に組み込まれる）、Ｌ２３５およびＮ２９７にアラニン置換を有するヒトＩｇＧ４ＣＨ２領域（米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号３４４、上記配列は参照により本明細書に組み込まれる）、Ｇ２３６およびＮ２９７にアラニン置換を有するヒトＩｇＧ４ＣＨ２領域（米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号３４５、上記配列は参照により本明細書に組み込まれる）、およびＧ２３７およびＮ２９７にアラニン置換を有するヒトＩｇＧ４ＣＨ２領域（米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号３４６、上記配列は参照により本明細書に組み込まれる）を含む。これらのＣＨ２領域は、本開示のポリペプチド中で使用できる。

特定の実施形態では、上記アミノ酸置換に加えて、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質の改変ＣＨ２領域（例えば、改変ヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメイン）は、上記位置以外の１つまたは複数の位置で１個または複数の追加のアミノ酸置換を含み得る。このようなアミノ酸置換は、保存的または非保存的アミノ酸置換であり得る。例えば、特定の実施形態では、改変ＩｇＧ２ＣＨ２領域中では、Ｐ２３３は、Ｅ２３３に変更できる（例えば、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号３２６を参照、上記配列は参照により本明細書に組み込まれる）。追加で、または代わりに、特定の実施形態では、改変ＣＨ２領域は、１個または複数のアミノ酸挿入、欠失、またはその両方を含み得る。挿入、欠失または置換は、ＣＨ２領域と別の領域（例えば、結合ドメインまたは免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメイン）とのヒンジを介した連結から得られる野生型免疫グロブリンＣＨ２領域のＮまたはＣ末端の位置などの、免疫グロブリンＣＨ２領域のどこにでも存在し得る。

特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質の改変ＣＨ２ドメインは、位置２３５、３１８、３２０、および３２２でのアラニン置換（すなわち、Ｌ２３５Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｋ３２０ＡおよびＫ３２２Ａ置換を有するヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメイン）を有するヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメイン（米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号５９５、上記配列は参照により本明細書に組み込まれる）であり、任意選択で、Ｎ２９７変異（例えば、アラニンへの変異）を有する。特定の実施形態では、改変ＣＨ２ドメインは、位置２３４、２３５、２３７、３１８、３２０、および３２２でのアラニン置換（すなわち、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｋ３２０ＡおよびＫ３２２Ａ置換を有するヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメイン）を有するヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメイン（米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号５９６、上記配列は参照により本明細書に組み込まれる）であり、任意選択で、Ｎ２９７変異（例えば、アラニンへの変異）を有する。

いくつかの実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質の免疫グロブリン定常領域は、ＥＵナンバリングシステムによる、置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、およびＫ３２２Ａを含むヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメインを含む。

本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質の免疫グロブリン定常領域を形成できるＣＨ３ドメインは、種々の種（ヒト、マウス、ラット、および他の哺乳動物を含む）の特定の免疫グロブリンクラスまたはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ）由来の野生型免疫グロブリンＣＨ３ドメインまたはその改変免疫グロブリンＣＨ３ドメインであり得る。特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドのＣＨ３ドメインは、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号１１６、２０８～２１０、２０４～２０７、および２１２でそれぞれ示されるヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、またはＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭの野生型ＣＨ３ドメインなどの、野生型ヒト免疫グロブリンＣＨ３ドメインである（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。特定の実施形態では、ＣＨ３ドメインは、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号１１６で示される野生型ヒトＩｇＧ１ＣＨ３ドメインである（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。

特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドのＣＨ３ドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、またはＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭの野生型ＣＨ３ドメインをベースにした、またはそれから誘導される改変ＣＨ３ドメインなどの、改変ヒト免疫グロブリンＣＨ３ドメインである。例えば、改変ＣＨ３ドメインは、位置Ｈ４３３およびＮ４３４（位置は、ＥＵナンバリングに従ってナンバリングされる）で１個または２個の変異を有するヒトＩｇＧ１ＣＨ３ドメインであり得る。このような位置での変異は、補体結合に関与できる。特定の他の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドの改変ＣＨ３ドメインは、位置Ｆ４０５またはＹ４０７で１個または２個のアミノ酸置換を有すること以外は、ヒトＩｇＧ１ＣＨ３ドメインであり得る。このような位置でのアミノ酸は、別のＣＨ３ドメインとの相互作用に関与する。特定の他の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドの改変ＣＨ３ドメインは、その最後のリジンが欠失された改変ヒトＩｇＧ１ＣＨ３ドメインであり得る。この改変ＣＨ３ドメインの配列は、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号７６１で示される（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。

特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質は、所謂「ノブイントゥホール（ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓ）」変異（ＭａｒｖｉｎａｎｄＺｈｕ，ＡｃｔａＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａＳｉｎｉｃａ２６：６４９－５８，２００５；Ｒｉｄｇｗａｙｅｔａｌ．，ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ９：６１７－２１，１９６６を参照）を含む、ＣＨ３ドメインを含む。より具体的には、ＣＨ３／ＣＨ３結合のために必要な立体的相補性のために、これらの２つのＣＨ３ドメインを相互に対形成させるように、変異を各ポリペプチド鎖のＣＨ３ドメインのそれぞれ中に導入できる。例えば、ポリペプチドヘテロダイマーの１つの単鎖ポリペプチド中のＣＨ３ドメインは、Ｔ３６６Ｗ変異（「ノブ」変異、これは、小さいアミノ酸をより大きなアミノ酸と置換する）を含み、ポリペプチドヘテロダイマーの他の単鎖ポリペプチド中のＣＨ３ドメインは、Ｙ４０７Ａ変異（「ホール」変異、これは、大きなアミノ酸を小さいアミノ酸と置換する）を含んでよい。他の例示的ノブイントゥホール変異は、（１）１つのＣＨ３ドメイン中のＴ３６６Ｙ変異、およびほかのＣＨ３ドメイン中のＹ４０７Ｔ変異、および（２）１つのＣＨ３ドメイン中のＴ３６６Ｗ変異および他のＣＨ３ドメイン中のＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖ変異、を含む。

本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質の免疫グロブリン定常領域を形成できるＣＨ４ドメインは、ＩｇＥまたはＩｇＭ分子由来の、野生型免疫グロブリンＣＨ４ドメインまたはその改変免疫グロブリンＣＨ４ドメインであり得る。特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドのＣＨ４ドメインは、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号２１３およびおよび２１４でそれぞれ示されるヒトＩｇＥおよびＩｇＭの野生型ＣＨ４ドメインなどの、野生型ヒト免疫グロブリンＣＨ４ドメインである（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドのＣＨ４ドメインは、ヒトＩｇＥまたはＩｇＭのＣＨ４ドメインをベースにした、またはそれから誘導される改変ＣＨ４ドメインなどの改変ヒト免疫グロブリンＣＨ４ドメインであり、これは、ＩｇＥまたはＩｇＭＦｃ領域と結合することが既知の免疫学的活性を増大または低減させる変異を有する。

特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質の免疫グロブリン定常領域は、ＣＨ２、ＣＨ３またはＣＨ４ドメインの組み合わせ（すなわち、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４から選択される２つ以上の定常領域ドメイン）を含む。例えば、免疫グロブリン定常領域は、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインまたはＣＨ３およびＣＨ４ドメインを含み得る。特定の他の実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、２つのＣＨ３ドメインを含み、ＣＨ２またはＣＨ４ドメインを不含であり得る（すなわち、２つ以上のＣＨ３のみ）。本明細書で記載のポリペプチドの免疫グロブリン定常領域を形成する複数の定常領域ドメインは、同じ免疫グロブリン分子、または同じクラスまたはサブクラスの免疫グロブリン分子をベースにでき、またはそれから誘導できる。特定の実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧＣＨ２－ＣＨ３（例えば、ＩｇＧ１ＣＨ２－ＣＨ３、ＩｇＧ２ＣＨ２－ＣＨ３、およびＩｇＧ４ＣＨ２－ＣＨ３）であり、ヒトの（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４）ＣＨ２ＣＨ３であり得る。例えば、特定の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドの免疫グロブリン定常領域は、（１）野生型ヒトＩｇＧ１ＣＨ２およびＣＨ３ドメイン、（２）Ｎ２９７Ａ変異を有するヒトＩｇＧ１ＣＨ２（すなわち、ＣＨ２（Ｎ２９７Ａ））および野生型ヒトＩｇＧ１ＣＨ３、または（３）ヒトＩｇＧ１ＣＨ２（Ｎ２９７Ａ）および最後のリジンが欠失された改変ヒトＩｇＧ１ＣＨ３、を含む。あるいは、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質の複数の定常領域ドメインは、異なる免疫グロブリン分子、または異なるクラスまたはサブクラスの免疫グロブリン分子をベースにでき、またはそれから誘導できる。例えば、特定の実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ヒトＩｇＭＣＨ３ドメインおよびヒトＩｇＧ１ＣＨ３ドメインの両方を含む。本明細書で記載のポリペプチドの免疫グロブリン定常領域を形成する複数の定常領域ドメインは、直接一緒に連結でき、または１個または複数の（例えば、約２～１０個の）アミノ酸を介して、相互に連結できる。

本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質で使用できる例示的免疫グロブリン定常領域は、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号３０５～３０９、３２１、３２３、３４１、３４２、および７６２で示される（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質で使用できるさらなる例示的免疫グロブリン定常領域は、下表で提供される。

特定の実施形態では、本明細書で記載のホモダイマーまたはヘテロダイマータンパク質の各ポリペプチド鎖の免疫グロブリン定常領域は、相互に同一である。特定の他の実施形態では、ヘテロダイマーの１つのポリペプチド鎖の免疫グロブリン定常領域は、ヘテロダイマーの他のポリペプチド鎖の免疫グロブリン定常領域とは異なる。例えば、ヘテロダイマータンパク質の１つの免疫グロブリン定常領域は、「ノブ」変異を有するＣＨ３ドメインを含んでよく、一方、ヘテロダイマータンパク質の他の免疫グロブリン定常領域は、「ホール」変異を有するＣＨ３ドメインを含んでよい。

Ｆｃ結合ドメインリンカー
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｆｃ結合ドメインリンカーをさらに含み得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、免疫グロブリン定常領域をＣ末端結合ドメイン（例えば、ＣＤ３結合ドメイン）に連結するために使用できる。いくつかの実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、ヒンジドメインとして使用でき、および／またはｓｃＦｖ中に組み込まれる。いくつかの実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、Ｇｌｙ_４Ｓｅｒリンカー（配列番号１２８）である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、２０マーであり、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ（配列番号１２８）アミノ酸配列の４回反復（（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_４）（配列番号６１）からなる。いくつかの実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、配列番号５０～７０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。他のリンカーが使用されてきており、ファージディスプレイ技術、ならびに選択的感染ファージ技術（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｉｎｆｅｃｔｉｖｅｐｈａｇｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）がリンカー配列を多様化し、適切なリンカー配列を選択するために使用されている（Ｔａｎｇｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１，１５６８２－１５６８６，１９９６；Ｈｅｎｎｅｃｋｅｅｔａｌ．，ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ．１１，４０５－４１０，１９９８）。特定の実施形態では、Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈ領域は、式（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_ｎ（式中ｎ＝１～５）（配列番号１２９）を含むアミノ酸配列を有するペプチドリンカーにより連結される。他の好適なリンカーは、ランダム変異誘発により単純なリンカーを最適化することにより得ることができる。いくつかの実施形態では、二重特異的分子は、ヒンジ領域または定常領域を含まない。

特定の実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、グリシン－セリン（例えば、Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ、配列番号１２８）反復を含むフレキシブルリンカー配列である。特定の実施形態では、リンカーは、３回のＧｌｙ_４Ｓｅｒ反復（配列番号５９）と、これに続くプロリン残基を含む。特定の実施形態では、プロリン残基は、その後に、グリシン、アルギニンおよびセリンからなる群より選択されるアミノ酸が続く。いくつかの実施形態では、Ｆｃ結合ドメインリンカーは、配列番号５０～７０から選択される配列を含む、またはそれからなる。

本開示による使用に好適な、いくつかの例示的ヒンジ、Ｆｃ結合ドメインリンカー配列を表２に示す。追加の例示的ヒンジおよびリンカー領域は、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号２４１～２４４、６０１、７８、７６３～７９１、２２８、３７９～４３４、６１８～７４９で示される（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。

上述のドメインに加えて、治療的ポリペプチドは、免疫グロブリンダイマー化／ヘテロダイマー化ドメイン、接合アミノ酸、タグ、追加の結合ドメイン、などをさらに含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドおよびタンパク質は、薬物または毒性部分に結合される。

二重特異的／多重特異的タンパク質
いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、二重特異的または多重特異的タンパク質であり得る。二重特異的分子の非限定的例は、ｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ分子、ｓｃＦｖ－Ｉｇ分子およびｓｃＦｖ－ｓｃＦｖ分子を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載の二重特異的分子は、第２の結合ドメインｓｃＦｖに結合された第１の結合ドメインｓｃＦｖを含む、またはこれからなり、免疫グロブリン定常領域などの他の配列を含まない。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端への、またはカルボキシル末端からアミノ末端への順で、（ｉ）第１の結合ドメイン、（ｉｉ）ヒンジ領域、（ｉｉｉ）免疫グロブリン定常領域、（ｉｖ）（任意選択で）Ｆｃ結合ドメインリンカー、および（ｖ）第２の結合ドメインを含む、二重特異的または多重特異的タンパク質であり得る。

いくつかの実施形態では、多重特異的タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端へ、ＣＤ３結合ドメイン、ヒンジ領域、免疫グロブリン定常領域、および腫瘍抗原結合ドメインを含み得る。腫瘍抗原結合ドメインは、例えば、ＣＤ１２３、ＰＳＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ３３、５Ｔ４、またはＨＥＲ２に結合し得る。

いくつかの実施形態では、多重特異的タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端へ、腫瘍抗原結合ドメイン、ヒンジ領域、免疫グロブリン定常領域、およびＣＤ３結合ドメインを含み得る。腫瘍抗原結合ドメインは、例えば、ＣＤ１２３、ＰＳＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ３３、５Ｔ４、またはＨＥＲ２に結合し得る。

いくつかの実施形態では、多重特異的タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端へ、４－１－ＢＢ結合ドメイン、ヒンジ領域、免疫グロブリン定常領域、および腫瘍抗原結合ドメインを含み得る。腫瘍抗原結合ドメインは、例えば、ＣＤ１２３、ＰＳＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ３３、５Ｔ４、またはＨＥＲ２に結合し得る。

いくつかの実施形態では、多重特異的タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端へ、腫瘍抗原結合ドメイン、ヒンジ領域、免疫グロブリン定常領域、および４－１－ＢＢ結合ドメインを含み得る。腫瘍抗原結合ドメインは、例えば、ＣＤ１２３、ＰＳＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ３３、５Ｔ４、またはＨＥＲ２に結合し得る。

ホモダイマー／ヘテロダイマー
いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、ホモダイマーまたはヘテロダイマーであり得る。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、２個の同一のポリペプチドのダイマーであり、各ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端への順で、またはカルボキシル末端からアミノ末端への順で、（ｉ）第１の結合ドメイン、（ｉｉ）ヒンジ領域、（ｉｉｉ）免疫グロブリン定常領域、（ｉｖ）（任意選択で）Ｆｃ結合ドメインリンカー、および（ｖ）第２の結合ドメイン、を含む。いくつかの実施形態では、二重特異的または多重特異的タンパク質は、２個の同一のポリペプチドのダイマーであり、各ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端への順で、またはカルボキシル末端からアミノ末端への順で、（ｉ）第１の結合ドメイン、（ｉｉ）ヒンジ領域、（ｉｉｉ）免疫グロブリン定常領域、（ｉｖ）（任意選択で）Ｆｃ結合ドメインリンカー、および（ｖ）第２の結合ドメイン、を含む。他の実施形態では、本明細書で記載の二重特異的タンパク質は、ディアボディである。

特定の実施形態では、別のポリペプチド鎖とヘテロダイマーを形成するポリペプチド中に存在するヒンジは、野性型免疫グロブリンヒンジ領域またはその改変免疫グロブリンヒンジ領域などの、免疫グロブリンヒンジであり得る。特定の他の実施形態では、ヘテロダイマータンパク質の１つのポリペプチド鎖のヒンジは、ヘテロダイマーの他のポリペプチド鎖の対応するヒンジと同一である。特定の他の実施形態では、１つの鎖のヒンジは、他の鎖（それらの長さまたは配列中の）のヒンジとは異なる。異なる鎖中の異なるヒンジは、ヒンジが連結される結合ドメインの結合親和性の異なる操作を可能にし、それにより、ヘテロダイマーは、他の結合ドメインの標的よりも、１つの結合ドメインの標的に選択的に結合できる。

他の実施形態では、本明細書で記載のポリペプチドおよびタンパク質は、第２の同一でないポリペプチド鎖中の異なるヘテロダイマー化ドメインとヘテロダイマー化できる、ヘテロダイマー化ドメインを含む。特定の変形例では、ヘテロダイマー化のための第２のポリペプチド鎖は、第２の結合ドメインを含む。従って、本開示の特定の実施形態では、１つが第１の結合ドメインを含みかつ２つ目が任意選択で第２の結合ドメインを含む、２つの同一でないポリペプチド鎖が、ダイマー化してヘテロダイマー結合タンパク質を形成する。片方または両方のポリペプチド鎖が結合ドメインを含み、２つの同一でないポリペプチド鎖からヘテロダイマーを形成することが望ましい場合、ダイマー化／ヘテロダイマー化ドメインを使用できる。特定の実施形態では、本明細書で記載の特定のヘテロダイマーの１つのポリペプチド鎖メンバーは、結合ドメインを含まない。ヘテロダイマーのタイプの例は、米国特許出願公開第２０１３／００９５０９７号および同第２０１３／０１２９７２３号、および国際公開第２０１６／０９４８７３号に記載されているものを含む。

特定の実施形態では、第１および第２のポリペプチド鎖は、「免疫グロブリンダイマー化ドメイン」または「免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメイン」の含有を介してダイマー化する。本明細書では、「免疫グロブリンダイマー化ドメイン」または「免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメイン」は、第２のポリペプチド鎖の異なる免疫グロブリンドメインと選択的に相互作用または結合する第１のポリペプチド鎖の免疫グロブリンドメインを指し、異なる免疫グロブリンドメインの相互作用は、第１および第２のポリペプチド鎖のヘテロダイマー化（すなわち、２つの異なるポリペプチド鎖間のダイマーの形成、これもまた「ヘテロダイマー」とも呼ばれる）に実質的に寄与するまたはそれを効率的に促進する。ヘテロダイマーのポリペプチド鎖中の免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、相互に異なり、従って、両鎖のヘテロダイマー化を促進し、かつどちらかの鎖のホモダイマー化を最小化するように差次的に改変できる。本明細書で提供される免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、異なるポリペプチド間の効率的ヘテロダイマー化を可能にし、得られるヘテロダイマータンパク質の精製を容易にする。

本明細書で提供されるように、本開示によるによる２つの異なるポリペプチド鎖のヘテロダイマー化の促進に有用な免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、野性型および改変免疫グロブリンＣＨ１およびＣＬドメイン、例えば、ヒトＣＨ１およびＣＬドメインを含む。特定の実施形態では、免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、例えば、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号１１４、１８６～１９２および１９４、または米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号の配列番号１１４で、それぞれ示される、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭＣＨ１ドメインなどの、野生型ＣＨ１ドメインである（上記配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。さらなる実施形態では、野生型免疫グロブリンＣＬドメイン（例えば、ヒトＣＬ）とのジスルフィド結合の形成に関与する野性型ＣＨ１ドメイン（例えば、ヒトＣＨ１）のシステイン残基は、改変免疫グロブリンＣＨ１ドメイン中で欠失または置換され、それによりジスルフィド結合は、改変ＣＨ１ドメインと野性型ＣＬドメインの間で形成されない。

本明細書で記載のポリペプチドおよびタンパク質は、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７２３号および同第２０１３／００９５０９７号で一般的に開示されるような足場を用いて作製され得る。これらの特許出願公開は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本明細書で記載のポリペプチドは、２つの同一でないポリペプチド鎖を含み得、それぞれのポリペプチド鎖は、免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインを含む。相互作用する免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、異なる。一実施形態では、免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、ＣＨ１ドメインまたはその誘導体を含む。別の実施形態では、免疫グロブリンヘテロダイマー化ドメインは、ＣＬドメインまたはその誘導体を含む。一実施形態では、ＣＬドメインは、ＣκまたはＣλアイソタイプまたはその誘導体である。

例示的タンパク質治療薬：抗ＣＤ１２３ｘ抗ＣＤ３ポリペプチドおよびそのダイマー
例示的タンパク質治療薬は、Ｔ細胞上のＣＤ１２３発現細胞およびＴ細胞受容体複合体の両方を結合して、標的依存性Ｔ細胞細胞傷害性、活性化および増殖を誘導し得る。

従って、特定の実施形態では、本明細書で記載の方法および組成物に関連して使用される治療的タンパク質は、ＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む二重特異的単鎖分子である。いくつかの実施形態では、ＣＤ１２３および／またはＣＤ３結合ドメインは、抗体由来であり、可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）を含む。例えば、ＣＤ１２３および／またはＣＤ３結合ドメインは、ＶＨおよびＶＬを含むｓｃＦｖであり得る。これらの結合ドメインおよび可変鎖は、標的に対するある程度の結合を依然として保持する、任意の順で配置され得る。例えば、可変ドメインは、（ＶＨＣＤ１２３）－（ＶＬＣＤ１２３）－（ＶＨＣＤ３）－（ＶＬＣＤ３）、（ＶＬＣＤ１２３）－（ＶＨＣＤ１２３）－（ＶＨＣＤ３）－（ＶＬＣＤ３）、（ＶＨＣＤ１２３）－（ＶＬＣＤ１２３）－（ＶＬＣＤ３）－（ＶＨＣＤ３）、（ＶＬＣＤ１２３）－（ＶＨＣＤ１２３）－（ＶＬＣＤ３）－（ＶＨＣＤ３）、（ＶＨＣＤ３）－（ＶＬＣＤ３）－（ＶＨＣＤ１２３）－（ＶＬＣＤ１２３）、（ＶＬＣＤ３）－（ＶＨＣＤ３）－（ＶＬＣＤ１２３）－（ＶＨＣＤ１２３）、（ＶＨＣＤ３）－（ＶＬＣＤ３）－（ＶＬＣＤ１２３）－（ＶＨＣＤ１２３）、または（ＶＬＣＤ３）－（ＶＨＣＤ３）－（ＶＨＣＤ１２３）－（ＶＬＣＤ１２３）などの順で配置され得る。ＣＤ３に結合する結合ドメイン中のＶＨ領域およびＶＬ領域の対は、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）のフォーマットであり得る。ＶＨおよびＶＬ領域は、ＶＨ－ＶＬまたはＶＬ－ＶＨの順で配置される。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、同じ方向で同じＶＨおよびＶＬ領域配列を含む抗体よりも高い効率でＣＤ１２３に結合し得る。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、ＶＨ－ＶＬ方向よりもＶＬ－ＶＨ方向中で高い効率でＣＤ１２３に結合し得る。ＶＨ領域は、リンカー配列に対しＮ末端に配置され得る。ＶＬ領域は、リンカー配列に対しＣ末端に配置され得る。二重特異的単鎖分子のＣＤ３結合ドメイン中のドメイン配置は、ＶＨ－ＶＬであり得、ＣＤ３結合ドメインは、ＣＤ１２３結合ドメインに対しＣ末端に配置される。二重特異的分子は、ＣＤ１２３に結合するｓｃＦｖに連結される、ＣＤ３に結合するｓｃＦｖを含み得る。これらのｓｃＦｖは、短鎖ペプチドで連結される。いくつかの実施形態では、二重特異的単鎖分子は、ヒンジ領域または定常領域を含まない（例えば、米国特許出願公開第２０１３／０２９５１２１号、国際公開第２０１０／０３７８３６号、同第２００４／１０６３８１号および同第２０１１／１２１１１０号を参照されたい；それぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

ＣＤ１２３－二重特異的結合構築物は、表３、表４、および／または表５に示す１つまたは複数の配列を含み得る。

特定の実施形態では、ＣＤ１２３結合ドメインは、（ｉ）ＣＤＲＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）、ならびに（ｉｉ）ＣＤＲＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１４４で示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号１４６で示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号１４８で示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤ１２３結合ドメインは、（ｉ）ＣＤＲＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）、および（ｉｉ）ＣＤＲＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。いくつかのこのような実施形態では、（ｉ）ＬＣＤＲ１は、配列番号１３８で示されるアミノ酸配列または少なくとも１個のアミノ酸置換により配列番号１３８とは異なる配列を有し；（ｉｉ）ＬＣＤＲ２は、配列番号１４０で示されるアミノ酸配列または少なくとも１個のアミノ酸置換により配列番号１４０とは異なる配列を有し；（ｉｉｉ）ＬＣＤＲ３は、配列番号１４２で示されるアミノ酸配列または少なくとも１個のアミノ酸置換により配列番号１４２とは異なる配列を有し；（ｉｖ）ＨＣＤＲ１は、配列番号１４４で示されるアミノ酸配列または少なくとも１個のアミノ酸置換により配列番号１４４とは異なる配列を有し；（ｖ）ＨＣＤＲ２は、配列番号１４６で示されるアミノ酸配列または少なくとも１個のアミノ酸置換により配列番号１４６とは異なる配列を有し；および（ｖｉ）ＨＣＤＲ３は、配列番号１４８で示されるアミノ酸配列または少なくとも１個のアミノ酸置換により配列番号１４８とは異なる配列を有する。上記のアミノ酸置換は、保存的または非保存的アミノ酸置換であり得る。いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、および／またはＨＣＤＲ３は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸だけ詳述した配列とは異なる。特定の実施形態では、本開示のＣＤＲは、既知のモノクローナル抗体のＣＤＲ配列と比較して、約１個または複数（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）の挿入、約１個または複数（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）の欠失、約１個または複数（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換または非保存的アミノ酸置換）、または上記変化の組み合わせを含む。例えば、本開示は、（ｉ）配列番号１３８で示されるアミノ酸配列または１個または２個のアミノ酸置換により配列番号１３８とは異なる配列を有するＬＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号１４０で示されるアミノ酸配列または１個または２個のアミノ酸置換により配列番号１４０とは異なる配列を有するＬＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号１４２で示されるアミノ酸配列または１個または２個のアミノ酸置換により配列番号１４２とは異なる配列を有するＬＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号１４４で示されるアミノ酸配列または１個または２個のアミノ酸置換により配列番号１４４とは異なる配列を有するＨＣＤＲ１；（ｖ）配列番号１４６で示されるアミノ酸配列または１個または２個のアミノ酸置換により配列番号１４６とは異なる配列を有するＨＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号１４８で示されるアミノ酸配列または１個または２個のアミノ酸置換により配列番号１４８とは異なる配列を有するＨＣＤＲ３、を含む組換えポリペプチドを含む。上記アミノ酸置換は、保存的または非保存的アミノ酸置換であり得る。

関連実施形態では、本開示の組換えポリペプチドは、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）のアミノ酸配列（例えば、配列番号１３４）、または重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）のアミノ酸配列（例えば、配列番号１３６）、または両方と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約８８％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または１００％同一である配列を含む、またはその配列である。一実施形態では、組換えポリペプチドのＣＤ１２３結合ドメインは、ＶＨ－ＶＬ方向で、配列番号１３６を含む可変重鎖および配列番号１３４を含む可変軽鎖を含むｓｃＦｖである。別の実施形態では、組換えポリペプチドのＣＤ１２３結合ドメインは、ＶＬ－ＶＨ方向で、配列番号１３４を含む可変軽鎖および配列番号１３６を含む可変重鎖を含むｓｃＦｖである。例えば、特定の実施形態では、本開示のポリペプチドは、配列番号３３７のアミノ酸配列を含む。本開示は、配列番号３３７のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約８８％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または１００％同一である組換えポリペプチドを含む。

特定の実施形態では、ＣＤ１２３結合ドメインは、（ｉ）ＣＤＲＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）、および（ｉｉ）ＣＤＲＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含む。いくつかのこのような実施形態では、（ｉ）ＬＣＤＲ１は、配列番号１５４で示されるアミノ酸配列または少なくとも１個のアミノ酸置換により配列番号１５４とは異なる配列を有し；（ｉｉ）ＬＣＤＲ２は、配列番号１５６で示されるアミノ酸配列または少なくとも１個のアミノ酸置換により配列番号１５６とは異なる配列を有し；（ｉｉｉ）ＬＣＤＲ３は、配列番号１５８で示されるアミノ酸配列または少なくとも１個のアミノ酸置換により配列番号１５８とは異なる配列を有し；（ｉｖ）ＨＣＤＲ１は、配列番号１６０で示されるアミノ酸配列または少なくとも１個のアミノ酸置換により配列番号１６０とは異なる配列を有し；（ｖ）ＨＣＤＲ２は、配列番号１６２で示されるアミノ酸配列または少なくとも１個のアミノ酸置換により配列番号１６２とは異なる配列を有し；および（ｖｉ）ＨＣＤＲ３は、配列番号１６４で示されるアミノ酸配列または少なくとも１個のアミノ酸置換により配列番号１６４とは異なる配列を有する。上記アミノ酸置換は、保存的または非保存的アミノ酸置換であり得る。いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、および／またはＨＣＤＲ３は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸だけ詳述した配列とは異なる。特定の実施形態では、本開示のＣＤＲは、既知のモノクローナル抗体のＣＤＲ配列と比較して、約１個または複数（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）の挿入、約１個または複数（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）の欠失、約１個または複数（例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換または非保存的アミノ酸置換）、または上記変化の組み合わせを含む。

関連実施形態では、ＣＤ１２３結合ドメインは、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）のアミノ酸配列（例えば、配列番号１７）、または重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）のアミノ酸配列（例えば、配列番号１６）、または両方と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約８８％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または１００％同一である配列を含む、またはその配列である。

特定の実施形態では、ＣＤ１２３結合ドメインは、ヒト化免疫グロブリンＶ_Ｌおよび／またはＶ_Ｈ領域を含む。免疫グロブリンＶ_ＬおよびＶ_Ｈ領域をヒト化する技術は、当技術分野において既知であり、例えば、米国特許出願公開第２００６／０１５３８３７号で考察されている。特定の実施形態では、ＣＤ１２３結合ドメインは、ヒト免疫グロブリンＶ_Ｌおよび／またはＶ_Ｈ領域を含む。

本質的に、ＣＤＲグラフト化によるヒト化は、非ヒト抗体のＣＤＲのみを、ヒト可変領域フレームワークおよびヒト定常領域上に組み換えることを含む。理論的には、これは、免疫原性を実質的に低減または除去するはずである（アロタイプまたはイディオタイプ差異が存在する場合を除いて）。しかし、元の抗体のいくつかのフレームワーク残基はまた、保存される必要があることも報告されている（Ｒｅｉｃｈｍａｎｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３（１９８８）；Ｑｕｅｅｎｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：１０，０２９（１９８９））。

保存される必要があるフレームワーク残基は、コンピューターモデル化により特定できる。あるいは、不可欠なフレームワーク残基は、既知の抗原結合部位構造を比較することにより特定できる可能性がある（Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３１（３）：１６９－２１７（１９９４），ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄｈｅｒｅｉｎｂｙｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）。

抗原結合に影響を与える可能性のある残基は、いくつかのグループに分類される。第１のグループは、抗原部位表面と隣接している残基を含み、これは従って、抗原と直接接触し得る。これらの残基は、アミノ末端残基およびＣＤＲに隣接する残基を含む。第２のグループは、抗体中でＣＤＲまたは別のペプチド鎖に接触することにより、ＣＤＲの構造またはその相対的整列を変え得る残基を含む。第３のグループは、可変ドメインの構造健全性に影響を与え得る埋め込まれた側鎖を有するアミノ酸を含む。これらのグループの残基は通常、同じ位置で見つかる（Ｐａｄｌａｎ，１９９４、前出）が、特定されたそれらの位置は、ナンバリングシステムに応じて異なり得る（Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，”Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈｅｄ．，Ｐｕｂ．Ｎｏ．９１－３２４２，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ＆ＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１を参照）。

当該技術分野におけるヒト化抗体についての知識は、本開示によるポリペプチドが抗体でないとしても、それらに適用可能である。

いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２３ｓｃＦｖは、配列番号１０を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１２を含むＨＣＤＲ３；ならびに配列番号１３を含むＬＣＤＲ１、配列番号１４を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１５を含むＬＣＤＲ３、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２３ｓｃＦｖは、配列番号１３６と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含むＶＨ、および配列番号１３４と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２３ｓｃＦｖは、配列番号１６と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２３ｓｃＦｖは、配列番号１７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原結合ドメインは、抗ＣＤ１２３ｓｃＦｖであり、ｓｃＦｖは、配列番号１８と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含む。

いくつかの実施形態では、本開示は、ＣＤ１２３結合ドメインに関し、（ｉ）免疫グロブリン軽鎖可変領域は、配列番号１３４で示されるアミノ酸配列と、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み、および免疫グロブリン重鎖可変領域は、配列番号１３６で示されるアミノ酸配列と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。

さらなる実施形態では、各ＣＤＲは、目的の標的（例えば、ＣＤ１２３）に特異的に結合する、モノクローナル抗体またはフラグメントまたはその誘導体由来のものに比べて、１個、２個、または３個以下の置換、挿入または欠失を含む。

特定の実施形態では、ＣＤ１２３結合ドメインは、ＣＤ１２３へのＩＬ－３結合を阻害しない。

特定の実施形態では、ＣＤ１２３結合分子またはタンパク質は、ＣＤ１２３を発現する標的細胞へのＴ細胞の動員のための細胞結合ドメインを含み得る。特定の実施形態では、本明細書で記載のＣＤ１２３結合タンパク質は、（ｉ）ＴＣＲ複合体またはその成分（例えば、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、およびＣＤ３ε）に特異的に結合する結合ドメイン、および（ｉｉ）ＣＤ１２３に特異的に結合する別の結合ドメイン、を含み得る。ＣＤ１２３結合タンパク質は、Ｔ細胞を結合する任意の結合ドメイン、例えば、抗体由来結合ドメインを、本質的に利用できる。ＣＤ３結合ドメインが誘導できる例示的抗ＣＤ３抗体としては、ＣＲＩＳ－７モノクローナル抗体（Ｒｅｉｎｈｅｒｚ，Ｅ．Ｌ．ｅｔａｌ．（ｅｄｓ．），ＬｅｕｋｏｃｙｔｅｔｙｐｉｎｇＩＩ．，ＳｐｒｉｎｇｅｒＶｅｒｌａｇ，ＮｅｗＹｏｒｋ，（１９８６）；配列番号３４１（ＱＶＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＦＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＳＳＫＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＴＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＲＮＰＰＴＦＧＧＧＴＫＬＱＩＴＲ）配列番号３４２（ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＡＲＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＳＴＭＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＳＳＡＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＳＰＱＶＨＹＤＹＮＧＦＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ））でそれぞれ示されるＶ_ＬおよびＶ_Ｈアミノ酸配列；ＨｕＭ２９１（Ｃｈａｕｅｔａｌ．（２００１）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ７１：９４１－９５０；配列番号３４３（ｄｉｑｍｔｑｓｐｓｓｌｓａｓｖｇｄｒｖｔｉｔｃｓａｓｓｓｖｓｙｍｎｗｙｑｑｋｐｇｋａｐｋｒｌｉｙｄｔｓｋｌａｓｇｖｐｓｒｆｓｇｓｇｓｇｔｄｆｔｌｔｉｓｓｌｑｐｅｄｆａｔｙｙｃｑｑｗｓｓｎｐｐｔｆｇｇｇｔｋｖｅｉｋ）および配列番号３４４（ｑｖｑｌｖｑｓｇａｅｖｋｋｐｇａｓｖｋｖｓｃｋａｓｇｙｔｆｉｓｙｔｍｈｗｖｒｑａｐｇｑｇｌｅｗｍｇｙｉｎｐｒｓｇｙｔｈｙｎｑｋｌｋｄｋａｔｌｔａｄｋｓａｓｔａｙｍｅｌｓｓｌｒｓｅｄｔａｖｙｙｃａｒｓａｙｙｄｙｄｇｆａｙｗｇｑｇｔｌｖｔｖｓｓ））でそれぞれ示されるＶ_ＬおよびＶ_Ｈアミノ酸配列；ＢＣ３モノクローナル抗体（Ａｎａｓｅｔｔｉｅｔａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７２：１６９１）；ＯＫＴ３モノクローナル抗体（ＯｒｔｈｏｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒＴｒａｎｓｐｌａｎｔＳｔｕｄｙＧｒｏｕｐ（１９８５）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３１３：３３７）およびＯＫＴ３ａｌａ－ａｌａ（ＯＫＴ３ＡＡ－ＦＬまたはＯＫＴ３ＦＬとも呼ばれる）、位置２３４および２３５にアラニン置換を有するヒト化、Ｆｃバリアント（Ｈｅｒｏｌｄｅｔａｌ．（２００３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１：４０９）などのその誘導体；ビジリズマブ（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒｅｔａｌ．（２００２）Ｂｌｏｏｄ９９：２７１２）、Ｇ１９－４モノクローナル抗体（Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒｅｔａｌ．，１９８６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３６：３９４５）、１４５－２Ｃ１１モノクローナル抗体（Ｈｉｒｓｃｈｅｔａｌ．（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：３７６６）およびＩ２Ｃモノクローナル抗体（例えば、米国特許出願公開第２０１１／０２９３６１９号および同第２０１２０２４４１６２を参照）が挙げられる。
例えば、ＣＤ３結合ドメインは、米国特許出願公開第２０１２／０２４４１６２号で開示のＣＤ３結合ドメインを含み得、これは、米国特許出願公開第２０１２／０２４４１６２号の配列番号１７、２１、３５、３９、５３、５７、７１、７５、８９、８３、１０７、１１１、１２５、１２９、１４３、１４７、１６１、１６５、１７９および１８３から選択されるＶＬ領域および／または米国特許出願公開第２０１２／０２４４１６２号の配列番号１５、１９、３３、３７、５１、５５、６９、７３、８７、９１、１０５、１０９、１２３、１２７、１４１、１４５、１５９、１６３、１７７および１８１から選択されるＶＨ領域を含むＣＤ３結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、米国特許出願公開第２０１２／０２４４１６２号の配列番号２３、２５、４１、４３、５９、６１、７７、７９、９５、９７、１１３、１１５、１３１、１３３、１４９、１５１、１６７、１６９、１８５、および１８７から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、国際公開第２００４／１０６３８０号、同第２００５／０４０２２０Ａ１、米国特許出願公開第２０１４／００９９３１８号に記載のもの、またはそのＣＤ３結合ドメイン由来のものである。例示的抗ＴＣＲ抗体は、ＢＭＡ０３１モノクローナル抗体である（Ｂｏｒｓｔｅｔａｌ．（１９９０）ＨｕｍａｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ２９：１７５－１８８）。ＣＤ３結合ドメインは、国際公開第２０１３／１５８８５６号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載の抗体または配列のいずれか由来であり得る。

いくつかの実施形態では、本明細書で記載のＣＤ１２３結合ポリペプチドの第２の結合ドメインは、（ｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域、および（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域を含み、（ａ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３４８、３４９および３５０で示されるアミノ酸配列を有し、およびＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３４５、３４６および３４７で示されるアミノ酸配列を有する；または（ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３５４、配列番号３５５、および配列番号３５６で示されるアミノ酸配列を有し、およびＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３５１、配列番号３５２、および配列番号３５３で示されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で記載のＣＤ１２３結合ポリペプチドの第２の結合ドメインは、（ｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域、および（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域を含み、（ａ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１８２、１８３および１８４で示されるアミノ酸配列を有し、およびＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３５１、３５２および３５３で示されるアミノ酸配列を有し、ならびにＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３５７、３５９および３５９で示されるアミノ酸配列を有し、または（ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３５９、３６７および３６８で示されるアミノ酸配列を有し、およびＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３６３、３６４および３６５で示されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で記載のＣＤ１２３結合ポリペプチドの第２の結合ドメインは、（ｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域、および（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域を含み、（ａ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３７２、３７３および３７４で示されるアミノ酸配列を有し、または（ｂ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３７８、３７９および３８０で示されるアミノ酸配列を有し、およびＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号３７５、３７６および３７７で示されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、本段落中で詳述したＣＤＲ配列を含む第２の結合ドメインはヒト化される。

ＣＤ３εを特異的に結合する２の結合ドメインを含むＣＤ１２３結合タンパク質のいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＣＤ３εへの結合について、ＣＲＩＳ－７、ＨｕＭ２９１またはＩ２Ｃモノクローナル抗体と競合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、ＣＲＩＳ－７、ＨｕＭ２９１またはＩ２Ｃモノクローナル抗体由来の免疫グロブリン軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）および免疫グロブリン重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含む（例えば、第２の結合ドメインのＶ_ＬおよびＶ_Ｈは、それぞれモノクローナル抗体の軽鎖ＣＤＲおよび重鎖ＣＤＲを含むヒト化可変領域であり得る）。第２の結合ドメインは、ＤＲＡ２２２、ＴＳＣ４５５、またはＴＳＣ４５６ＣＤ３結合ドメインの軽鎖可変領域、重鎖可変領域、またはその両方を含み得る。ＤＲＡ２２２、ＴＳＣ４５５、およびＴＳＣ４５６のアミノ酸配列は、表４で提供される。ＤＲＡ２２２結合ドメインは、国際公開第２０１３／１５８８５６号にも記載されている。ＴＳＣ４５５は、ＴＳＣ３９４Ｆ８７Ｙとも呼ばれる。ＴＳＣ４５５は、ＴＳＣ３９４Ｅ８６ＤＦ８７ＹまたはＴＳＣ３９４ＤＹとも呼ばれる。

いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＣＤ３を特異的に結合し、免疫グロブリン軽鎖可変領域および免疫グロブリン重鎖可変領域を含み；免疫グロブリン軽鎖可変領域は、配列番号３８４のアミノ酸配列と、少なくとも９３％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列；または配列番号３８５のアミノ酸配列と、少なくとも９４％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含み；免疫グロブリン重鎖可変領域は、配列番号３８３のアミノ酸配列と少なくとも８２％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも８７％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９２％同一、少なくとも９５％同一、少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、または少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、配列番号１９を含むＨＣＤＲ１、配列番号２０を含むＨＣＤＲ２、および配列番号２１を含むＨＣＤＲ３；ならびに配列番号２２を含むＬＣＤＲ１、配列番号２３を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２４を含むＬＣＤＲ３を含む、ＣＤ３結合ドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３抗原結合ドメインは、配列番号３８３または３８７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含むＶＨ、および配列番号３８４と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含むＶＬを含む、抗ＣＤ３ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号２５と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一の配列を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号２６と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一の配列を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、配列番号２７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含む、抗ＣＤ３ｓｃＦｖである。

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインをさらに含むＣＤ１２３結合ポリペプチドまたはタンパク質は、ポリペプチドまたはタンパク質の組換え発現の間に生成された低レベルの高分子量凝集体を有し得る。ＣＤ３結合ドメインをさらに含むＣＤ１２３結合ポリペプチドまたはタンパク質は、ポリペプチドまたはタンパク質中に存在するＣＤ３結合ドメインに応じて、ヒト血清中で比較的長い安定性を示し得る。

特定の変形例では、ＣＤ３結合ドメインは、米国特許出願公開第２０１３／０１２９７３０号、同第２０１１／０２９３６１９、米国特許第７，６３５，４７２号、国際公開第２０１０／０３７８３６号、同第２００４／１０６３８１号、または同第２０１１／１２１１１０号で開示の１種または複数のＣＤ３結合配列（例えば、ＣＤＲまたは可変領域）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、表６に示す１個または複数の変異を含む。

種々の実施形態では、ＣＤ３結合ドメインは、表７に示す１つまたは複数の配列を含む。

いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、アミノ末端からカルボキシル末端への順で、第１の結合ドメイン、ヒンジ領域、免疫グロブリン定常領域、および第２の結合ドメイン、を含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２またはＩｇＤの免疫グロブリンＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；およびＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は配列番号１０を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号１１を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号１２を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ１は配列番号１３を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号１４を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号１５を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は配列番号１０を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号１１を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号１２を含み；およびＬＣＤＲ１は配列番号１３を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号１４を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号１５を含む。いくつかの実施形態では、第１の結合ドメインは、配列番号１８と少なくとも９５％同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；および（ｉｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は配列番号１９を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２０を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号２１を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ１は配列番号２２を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号２３を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は配列番号１９を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２０を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号２１を含み；およびＬＣＤＲ１は配列番号２２を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号２３を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、配列番号２７と少なくとも９５％または１００％同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、治療的タンパク質は、配列番号３１の配列を含む。

本明細書で開示の多重特異的抗ＣＤ１２３および抗ＣＤ３分子の構造的フォーマットは、別の構造フォーマットの多重特異的抗ＣＤ１２３および抗ＣＤ３分子に比べて、強力な腫瘍細胞溶解を誘導するが、サイトカイン放出を低減する。如何なる理論にも縛られるものではないが、本明細書で開示のポリペプチド構造的フォーマット（例えば、アミノ末端からカルボキシル末端への順で、（ａ）ＣＤ１２３結合ドメインである結合ドメイン；（ｂ）ヒンジ領域；（ｃ）免疫グロブリン定常領域；および（ｄ）Ｔ細胞、ＣＤ３、ＣＤ３εまたはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体を特異的に結合するヒトまたはヒト化結合ドメインである第２の結合ドメイン）は、他のＴ細胞エンゲージャーに比べて、適度のレベルのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）刺激を誘導する。ＴＣＲシグナルの強度または大きさがＴ細胞活性化の結果を調節することは、広く実証されている。ＴＣＲ刺激は、エフェクター機能の開始（例えば、細胞溶解性）、ならびにサイトカイン分泌および細胞分裂（Ｃｏｒｓｅ，ＧｏｔｔｓｃｈａｌｋａｎｄＡｌｌｉｓｏｎ．ＪＩｍｍｕｎｏｌ２０１１，１８６：５０３９－５０４５）を含む、多数の細胞イベントを誘発する。これらの別々の細胞イベントは、異なる動力学により進むことができ、ＴＣＲ刺激および追加の因子の強度に応じて、様々な最大レベルに到達できる。本明細書で開示の多重特異的構造的フォーマットは、複数の日にわたり腫瘍細胞の溶解を起こし、かつ複数回のＴ細胞分裂を誘導するのに十分強力であるが、サイトカイン分泌の量を制限するには十分に適度である。

いくつかの実施形態では、ＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む多重特異的ポリペプチドは、Ｔ細胞上のＣＤ３タンパク質に結合される場合、ＯＫＴ３抗体対照に比べて、上記Ｔ細胞からの低減されたサイトカイン放出を誘導する。いくつかの実施形態では、ＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む多重特異的ポリペプチドは、ＯＫＴ３またはＩ２Ｃ由来のＣＤ３結合ドメインを含む多重特異的ポリペプチドに比べて、上記Ｔ細胞からのサイトカイン放出を低減する。いくつかの実施形態では、ＣＤ１２３結合ドメイン（例えば、配列番号３１２および／または配列番号３３７と、少なくとも９３％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一のアミノ酸配列を含むＣＤ１２３結合ドメイン）およびＣＤ３結合ドメインを含み、ｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖフォーマットの多重特異的ポリペプチドは、非ヒト霊長類またはヒト中で、二重特異的Ｔ細胞エンゲージャー（ｓｃＦｖ－ｓｃＦｖ）フォーマットまたは二重親和性再標的化フォーマットのＣＤ１２３結合ドメインおよびＩ２Ｃ由来ＣＤ３結合ドメインを含む二重特異的ポリペプチドに比べて、低減されたサイトカイン放出を誘導する。

また本明細書では、本明細書で記載の治療的タンパク質を含む医薬組成物も提供される。いくつかの実施形態では、組成物は、１～２０ｍｇ／ｍｌ、２．５～１２ｍｇ／ｍｌ、または５～１０ｍｇ／ｍｌの治療タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約２．５ｍｇ／ｍｌ～約１２ｍｇ／ｍｌ、または約５ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌの治療的タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、または約１２ｍｇ／ｍｌの治療的タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約５ｍｇ／ｍｌの治療的タンパク質を含む。

使用の方法
本開示は、疾患または障害の対象を治療するための方法を提供し、方法は、治療有効量の少なくとも１種の本開示の組成物を対象に投与することを含む。

いくつかの実施形態では、疾患または障害は、癌である。癌は、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、毛様細胞性白血病（ＨＣＬ）、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）から選択され得る。

いくつかの実施形態では、疾患または障害は、炎症性疾患または障害であり得る。いくつかの実施形態では、炎症性疾患または障害は、自己免疫疾患または障害であり得る。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患または障害は、過敏性腸症候群、炎症性腸疾患（例えば、クローン病または潰瘍性大腸炎）、乾癬、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、全身性エリテマトーデス、喘息、多発性硬化症、皮膚筋炎、多発性筋炎、悪性貧血、原発性胆汁性肝硬変、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群（ａＰＬ）、自己免疫性肝炎、１型糖尿病、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病、尋常性天疱瘡、シェーグレン症候群、側頭動脈炎、自己免疫性溶血性貧血、水疱性類天疱瘡、血管炎、セリアック病、子宮内膜症、化膿性汗腺炎、間質性膀胱炎、モルフェア、強皮症、ナルコレプシー、神経性筋強直症、白斑症、自己免疫性内耳疾患および重症筋無力症から選択される。いくつかの実施形態では、炎症性疾患または障害は、乾癬である。

いくつかの実施形態では、炎症性疾患または障害は、神経障害性疼痛、変形性関節症、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、およびアルツハイマー病などの「神経免疫疾患」であり得る。

いくつかの実施形態では、炎症性疾患または障害は、有害移植関連イベント、すなわち、移植拒絶反応、同種移植片疾患または移植片対宿主病であり得る。

いくつかの実施形態では、本明細書で記載の治療方法および使用のために、本明細書で記載のタンパク質またはポリペプチドは、治療が必要とされる疾患または障害の管理に関連する従来の方法と適合する方法で送達される。本明細書の本開示では、タンパク質またはポリペプチドの治療有効量が、疾患または障害の予防または治療に十分な時間と条件下でこのような治療を必要としている対象に投与される。

本開示のタンパク質の投与のための対象は、特定の障害を発生するリスクのある患者ならびにこのような障害の存在を示している患者を含む。典型的には、対象は、治療が必要とされる障害を有すると診断されている。さらに、対象は、治療過程中の障害の何らかの変化（例えば、障害の臨床症状の増大または減少）を監視され得る。また、いくつかの変形例では、対象は、治療を必要とする別の障害を罹患していない。

予防的適用では、本開示のタンパク質を含む医薬組成物または薬物は、特定の障害の影響を受けやすい、あるいは、そのリスクのある患者に、障害のリスクを取り除くまたは減らす、または障害の発生を遅らせるのに十分な量で投与される。治療的適用では、本開示のタンパク質を含む組成物または薬物は、このような障害と疑われる、または既に罹患している患者に、障害の症状およびその合併症を治癒または少なくとも部分的に抑止するのに十分な量で投与される。これを達成するための適切な量は、治療的有効投与量または治療的有効量と呼ばれる。予防的および治療的投与計画の両方で、薬剤は通常、十分な応答（例えば、不適切な血管新生活性の抑制）が達成されるまで、いくつかの投与量で投与される。典型的には、応答は、監視され、望ましい応答が弱まり始める場合、反復投与量が、投与される。

本開示の方法による治療のための対象患者を特定するために、認められているスクリーニング方法を用いて特定の障害に関連するリスク因子を決定でき、または対象で特定される既存の障害の状態を決定できる。このような方法は、例えば、個体が特定の障害であると診断されている親族を有するかどうかを決定することを含み得る。スクリーニング方法はまた、例えば、遺伝性要素を有することが既知の、特定の障害に関する家族性状態を決定するための通常の精密検査も含み得る。例えば、種々の癌はまた、特定の遺伝性要素を有することも知られている。癌の遺伝性要素は、例えば、形質転換している複数の遺伝子中の変異（例えば、Ｒａｓ、Ｒａｆ、ＥＧＦＲ、ｃＭｅｔ、など）、特定のＨＬＡおよびキラー細胞抑制受容体（ＫＩＲ）分子、または癌細胞がＮＫ細胞およびＴ細胞などの細胞の免疫抑制を直接的にまたは間接的に調節できる機序（例えば、ＬｊｕｎｇｇｒｅｎａｎｄＭａｌｍｂｅｒｇ，ＮａｔｕｒｅＲｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：３２９－３３９，２００７；ＢｏｙｔｏｎａｎｄＡｌｔｍａｎｎ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：１－８，２００７を参照）を含む。この目的で、ヌクレオチドプローブをルーチン的に用いて、目的の特定の障害に関連する遺伝子マーカーを保持する個体を特定できる。加えて、特異的障害のマーカーの特定に有用な多種多様の免疫学的な方法が、当技術分野において既知である。例えば、モノクローナル抗体プローブを用いて特異的腫瘍に関連する抗原を検出する、種々のＥＬＩＳＡイムノアッセイ法が利用でき、当該技術分野において既知である。スクリーニングを、既知の患者症候学、年齢因子、関連リスク因子、などにより示されるように実施できる。これらの方法は、臨床医が治療のために本明細書記載の方法の必要な患者をルーチン的に選択することを可能にする。

投与のために、本開示の医薬組成物は、（ｉ）治療タンパク質／ポリペプチド；および（ｉｉ）薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤、を含み得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、（ｉ）治療タンパク質／ペプチド、（ｉｉ）緩衝液、（ｉｉｉ）賦形剤、および（ｉｖ）界面活性物質、を含み得る。

本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質を含む医薬組成物は、経口単位剤形、静脈内単位剤形、鼻腔内単位剤形、坐剤単位剤形、皮内単位剤形、筋肉内単位剤形、腹腔内単位剤形、皮下単位剤形、硬膜外単位剤形、舌下単位剤形、および脳内単位剤形からなる群より選択される剤形に処方され得る。経口単位剤形は、タブレット、丸薬、ペレット、カプセル、粉末、トローチ剤、顆粒、溶液、懸濁液、乳剤、シロップ、エリキシル剤、徐放製剤、エアロゾル、および噴霧剤からなる群から選択され得る。

本明細書に記載のポリペプチドまたはタンパク質を含む医薬組成物は、治療的有効量で対象に投与され得る。本開示の方法では、本明細書で記載のポリペプチドまたはタンパク質は、例えば、筋肉内、皮下、静脈内、心房内、関節内、非経口、鼻腔内、肺内、経皮、胸膜内、くも膜下腔内、および経口投与経路を含む、種々の投与方法により対象に投与できる。予防および治療の目的のために、アンタゴニストを、単回のボーラス送達により、長期にわたり連続的な送達により、または反復投与プロトコル（例えば、毎時間、毎日、毎週、または毎月を基準として）により、対象に投与できる。

これに関して、有効投与量の決定は、典型的には動物モデル調査とそれに続くヒトでの臨床実験に基づき、さらにモデル対象での対象の障害の発生または重症度を有意に低減する有効投与量および投与プロトコルを決定することより導かれる。本開示の組成物の有効量は、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、患者がヒトか動物か、投与された他の薬物、治療が予防的か治療的か、ならびに組成物それ自体の比活性および個体における所望の応答を誘発するその能力、を含む多くの種々の要因に応じて変化する。通常、患者はヒトであるが、いくつかの疾患では、患者は非ヒト哺乳動物であり得る。典型的には、投与計画は、最適な治療的応答を提供するように、すなわち、安全性および有効性を最適化するように、調節される。

また、本明細書で提供されるのは、癌の治療のための薬物の製造における本開示の組成物の使用である。例えば、本開示の組成物は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）の治療のために使用され得る。また、提供されるのは、患者にＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む多重特異的ポリペプチドを含む組成物を、約０．３、約１、約３、約６、約９、約１２、約１８、約２０、約２４、約３０、約３６、約５０、約４８、約６０、約７５、または約１００μｇの毎週投与量でＩＶ注入により投与することを含む方法である。典型的には、患者は、週１回または２回、４～６週間にわたり治療される。患者は、毎週同じ投与量を受けてよく、または投与量は、例えば、毎週、増大されてもよい。

いくつかの実施形態では、投与量は、毎週増大され、最初の投与量は、患者が耐容性を示すと予測され得る量未満である。このタイプの漸増治療計画は、患者が注入関連反応またはサイトカイン放出症候群を発生するリスクを低減する。いくつかの実施形態では、ＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む多重特異的タンパク質（例えば、ＴＲＩ１３０またはＴＲＩ１２９）は、少なくとも最初の２回または最初の３回の投与量が毎週増大されるように、患者の静脈内に投与され得る。例えば、本開示の組成物は、次の毎週治療スケジュールに従ってＩＶ注入により投与され得る：１週目投与量：６μｇ；２週目投与量：９μｇ；３週目投与量：１２μｇ；ならびに４週目およびその後の週の投与量：１２μｇ。いくつかの実施形態では、患者は、次の毎週治療スケジュールに従って本開示の組成物を静脈内に投与され得る：１週目投与量：６μｇ；２週目投与量：９μｇ；３週目投与量：１２μｇ；ならびに４週目およびその後の週の投与量：１８μｇ。いくつかの実施形態では、組成物は、毎週治療スケジュール：１週目投与量：６μｇ；ならびに２週目およびその後の週の投与量：９μｇに従って患者に静脈内投与され、およびいくつかの実施形態では、組成物は、毎週治療スケジュール：１週目投与量：９μｇ；ならびに２週目およびその後の週の投与量：１２μｇに従って患者に静脈内投与される。他の実施形態では、組成物は、毎週治療スケジュール：１週目投与量：１２μｇ、ならびに２週目およびその後の週の投与量：１８μｇ、に従って患者の静脈内に投与される。

いくつかの実施形態では、患者は、次の毎週治療スケジュールに従って本開示の組成物を静脈内に投与され得る：１週目投与量：６μｇ；２週目投与量：９μｇ；３週目投与量：１２μｇ；ならびに４週目およびその後の週の投与量：１２μｇ。いくつかの実施形態では、患者は、次の毎週治療スケジュールに従って本開示の組成物を静脈内に投与され得る：１週目投与量：６μｇ；２週目投与量：９μｇ；３週目投与量：１２μｇ；ならびに４週目およびその後の週の投与量：１８μｇ。いくつかの実施形態では、患者は、次の毎週治療スケジュールに従って本開示の組成物を静脈内に投与され得る：１週目投与量：６μｇ；２週目投与量：１２μｇ；３週目投与量：１２μｇ；ならびに４週目およびその後の週の投与量：１２μｇ。いくつかの実施形態では、患者は、次の毎週治療スケジュールに従って本開示の組成物を静脈内に投与され得る：１週目投与量：６μｇ；２週目投与量：１２μｇ；３週目投与量：１８μｇ；ならびに４週目およびその後の週の投与量：２４μｇ。いくつかの実施形態では、患者は、次の毎週治療スケジュールに従って本開示の組成物を静脈内に投与され得る：１週目投与量：６μｇ；２週目投与量：１２μｇ；３週目投与量：１８μｇ；ならびに４週目およびその後の週の投与量：３６μｇ。いくつかの実施形態では、患者は、次の毎週治療スケジュールに従って本開示の組成物を静脈内に投与され得る：１週目投与量：６μｇ；２週目投与量：１２μｇ；３週目投与量：１８μｇ；ならびに４週目およびその後の週の投与量：４８μｇ。いくつかの実施形態では、患者は、次の毎週治療スケジュールに従って本開示の組成物を静脈内に投与され得る：１週目投与量：６μｇ；２週目投与量：１２μｇ；３週目投与量：１８μｇ；ならびに４週目およびその後の週の投与量：６０μｇ。

いくつかの実施形態では、患者は、次の治療スケジュールに従って本開示の組成物を静脈内に投与され得る：１日目：６μｇ；２日目：９μｇ；３日目：１２μｇ；４日目：１８μｇ；８日目：１８μｇ；１１日目：１８μｇ；１５日目：３６μｇ；２２日目：３６μｇ；続けて、毎週３６μｇの投与量。

いくつかの実施形態では、患者は、次の治療スケジュールに従って本開示の組成物を静脈内に投与され得る：１日目：６μｇ；２日目：１２μｇ；３日目：１８μｇ；４日目：２４μｇ；８日目：２４μｇ；１１日目：２４μｇ；１５日目：４８μｇ；２２日目：４８μｇ；続けて、毎週４８μｇの投与量。

いくつかの実施形態では、患者は、次の治療スケジュールに従って本開示の組成物を静脈内に投与され得る：１日目：６μｇ；２日目：１２μｇ；３日目：２４μｇ；４日目：３６μｇ；８日目：３６μｇ；１１日目：３６μｇ；１５日目：６０μｇ；２２日目：６０μｇ；続けて、毎週６０μｇの投与量。

いくつかの実施形態では、患者は、次の治療スケジュールに従って本開示の組成物を静脈内に投与され得る：１日目：６μｇ；２日目：１２μｇ；３日目：２４μｇ；４日目：３６μｇ；８日目：４８μｇ；１１日目：４８μｇ；１５日目：１００μｇ；２２日目：１００μｇ；続けて、毎週１００μｇの投与量。

いくつかの実施形態では、治療を必要としている患者の治療のための方法は、患者にＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む多重特異的タンパク質を含む組成物を、１、８、１５、および２２日目に、投与することを含む。いくつかの実施形態では、６μｇが１日目に投与され、９μｇが８日目に投与され、１２μｇが１５日目に投与され、１２μｇが２２日目に投与される。いくつかの実施形態では、６μｇが１日目に投与され、９μｇが８日目に投与され、１２μｇが１５日目に投与され、１８μｇが２２日目に投与される。いくつかの実施形態では、６μｇが1日目に投与され、９μｇが８日目に投与され、９μｇが１５日目に投与され、９μｇが２２日目に投与される。いくつかの実施形態では、９μｇが１日目に投与され、１２μｇが８日目に投与され、１２μｇが１５日目に投与され、１２μｇが２２日目に投与される。いくつかの実施形態では、１２μｇが１日目に投与され、１８μｇが８日目に投与され、１８μｇが１５日目に投与され、１８μｇが２２日目に投与される。

いくつかの実施形態では、本開示の方法に従って治療された患者は、骨髄芽球パーセンテージの減少を示し、いくつかの実施形態では、患者は、血液中の絶対芽球数の減少を示す。いくつかの実施形態では、治療は、治療直前の患者のレベルに比べて、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％の、またはそれを超える患者の芽球レベルの減少を生ずる。

いくつかの実施形態では、本開示の方法に従って治療された患者は、完全寛解（ＣＲ）を示す。本明細書で使用される場合、完全寛解は、骨髄芽球の５％までの減少、循環芽球およびアウエル小体を有する芽球の非存在、骨髄外疾患の非存在、および好中球絶対数（ＡＮＣ）≧１．０ｘ１０^９／Ｌ（１，０００／μＬ）およびＰＬＴ≧１００ｘ１０^９／Ｌ（１００，０００／μＬ）を指す。いくつかの実施形態では、本開示の方法に従って治療された患者は、微小残存病変（ＣＲ_ＭＲＤ）なしにＣＲを示す。本明細書で使用される場合、ＣＲ_ＭＲＤは、定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ｑＰＣＲ）による遺伝子マーカー陰性であるＣＲ、または多パラメータフローサイトメトリーにより陰性であるＣＲを指す。いくつかの実施形態では、本開示の方法に従って治療された患者は、造血機能の回復が不十分な完全寛解（ＣＲ_ｉ）であるＣＲを示す。ＣＲ_ｉは、残留好中球減少（ＡＮＣ＜１．０ｘ１０^９／Ｌ［１，０００／μＬ］）または血小板減少（ＰＬＴ＜１００ｘ１０^９／Ｌ［１００，０００／μＬ］）を除く、上記のＣＲの全ての基準を含む。

いくつかの実施形態では、本開示の方法に従って治療された患者は、形態学的に白血病細胞がない状態（ＭＬＦＳ）を示す。本明細書で使用される場合、ＭＬＦＳは、骨髄芽球＜５％（すなわち、骨髄は、単に「再生不良性」であるべきではない；少なくとも２００細胞が数え上げられるかまたは細胞充実性が少なくとも１０％であるべきである）；アウエル小体を有する芽球の非存在；および骨髄外疾患の非存在を指す。血液学的回復は必要とされない。

いくつかの実施形態では、本開示の方法に従って治療された患者は、部分寛解（ＰＲ）を示す。本明細書で使用される場合、ＰＲは、上記のＣＲの全ての血液学的基準＋骨髄芽球パーセンテージの５～２５％への減少、および前処理骨髄芽球骨髄パーセンテージの少なくとも５０％の減少、を含む。

いくつかの実施形態では、本開示の方法に従って治療された患者は、安定疾患（ＳＤ）を示し、ＣＲ_ＭＲＤ、ＣＲ、ＣＲ_ｉ、ＰＲ、およびＭＬＦＳにより特徴づけられるが、進行性疾患（すなわち、血液中の骨髄芽球パーセンテージの増大、および／または絶対芽球数の増大）はない。

ＣＤ１２３ｘＣＤ３標的化多重特異的ポリペプチド（例えば、ＴＲＩ１３０またはＴＲＩ１２９）を用いて、毎週同じ投与量でまたは漸増治療計画で治療された患者はまた、輸注反応またはサイトカイン放出症候群の可能性をさらに減らすように注入時間（すなわち、注入の長さ）も調節され得る。有害事象のリスクを低減するために、最初の投与量は、数時間、例えば、約２０～２４時間かけて患者にＩＶ投与される。いくつかの実施形態では、１回目の組成物の投与量は約２０～２４時間の期間にわたり投与され、２回目の投与量は約８時間の期間にわたり投与され、３回目の投与量は約６時間の期間にわたり投与され、４回目の投与量およびその後の投与量は約４時間の期間にわたり投与される。いくつかの実施形態では、１回目の組成物の投与量は約２０～２４時間の期間にわたり投与され、２回目の投与量は約８時間の期間にわたり投与され、３回目の投与量は約６時間の期間にわたり投与され、４回目の投与量およびその後の投与量は約４時間の期間にわたり投与され、１回目、２回目、３回目、および４回目のそれぞれの投与量は同じである。組成物はまた、連続的なＩＶ注入、例えば、最大で７２時間の連続的なＩＶ注入により対象に投与され得る。

ＣＤ１２３ｘＣＤ３標的化多重特異的ポリペプチド（例えば、ＴＲＩ１３０またはＴＲＩ１２９）で治療された患者はまた、１種または複数の追加の治療薬でも治療され得る。１種または複数の追加の治療薬は、ＣＤ１２３ｘＣＤ３標的化多重特異的ポリペプチドと同時に、またはほぼ同時に投与され得る。いくつかの実施形態では、１種または複数の追加の治療薬は、投与の約１～３時間前などの多重特異的ポリペプチドの投与の前に（すなわち、「前投薬」として）、投与される。いくつかの実施形態では、１種または複数の追加の治療薬は、１種または複数の多重特異的ポリペプチドの投与の後で投与される。

いくつかの実施形態では、１種または複数の追加の治療薬は、ジフェンヒドラミン、アセトアミノフェン、および／またはデキサメタゾンである。いくつかの実施形態では、１種または複数の追加の治療薬は、静脈内にまたは経口で投与され得る。いくつかの実施形態では、デキサメタゾンは、約１０～約２０ｍｇの投与量で投与され得る。いくつかの実施形態では、メチルプレドニゾロンは、約１ｍｇ／ｋｇの投与量で投与され得る。いくつかの実施形態では、アセトアミノフェンは、約６５０または約１，０００ｍｇの投与量で投与され得る。いくつかの実施形態では、アセトアミノフェンは、１日３回、１日間投与され、最初の投与量は、ＣＤ１２３ｘＣＤ３標的化多重特異的ポリペプチドの投与の１～３時間前に投与される。いくつかの実施形態では、１種または複数の追加の治療薬は、ジフェンヒドラミンなどの抗ヒスタミン剤を含み得る。ジフェンヒドラミンは、約５０ｍｇの投与量で投与され得る。いくつかの実施形態では、１種または複数の追加の治療薬は、アロプリノールを含み得る。いくつかの実施形態では、アロプリノールは、ＣＤ１２３ｘＣＤ３標的化多重特異的ポリペプチドの投与の少なくとも２日前に投与される。いくつかの実施形態では、１種または複数の追加の治療薬は、トシリズマブを含み得る。

いくつかの実施形態では、治療を必要としている患者におけるＣＤ１２３の過剰発現を特徴とする障害の治療のための方法は、ＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む組換えポリペプチド（例えば、ＴＲＩ１３０またはＴＲＩ１２９）を含む有効量の医薬組成物を本明細書で記載のいずれかの投与量または投与計画で患者に投与することを含む。いくつかの実施形態では、治療を必要としている患者におけるＣＤ１２３の過剰発現を特徴とする障害の治療のための方法は、ＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む組換えポリペプチド（例えば、ＴＲＩ１３０またはＴＲＩ１２９）を含む有効量の医薬組成物を本明細書で記載のいずれかの投与量または投与計画で患者に投与することを含み、医薬組成物の投与は、（ａ）組換えポリペプチドのＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む二重親和性再標的化抗体；または（ｂ）組換えポリペプチドのＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む二重特異的Ｔ細胞エンゲージャー分子、の投与に比べて、対象中の低減されたサイトカインレベルを誘導する。いくつかの実施形態では、障害は、癌、例えば、ＡＭＬまたはＭＤＳである。いくつかの実施形態では、対象は、異なるＣＤ１２３結合分子で以前に治療され、対象は、以前の治療後に有害事象を経験した。いくつかの実施形態では、有害事象は、過剰サイトカイン放出であった。いくつかの実施形態では、サイトカインレベルは、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ－６、ＩＬ－２、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１７、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、またはＩＬ－１β、またはこれらの任意の組み合わせのレベルであった。いくつかの実施形態では、サイトカインレベルは、ＩＦＮγ、ＩＬ－２、ＴＮＦαおよびＩＬ－１０のレベルであった。いくつかの実施形態では、サイトカインレベルは、インビトロ活性化Ｔ細胞アッセイで測定される。

本明細書で記載のタンパク質およびポリペプチドを含む医薬組成物は、本明細書で記載の医薬組成物を含む容器を含むキットとして供給できる。医薬組成物は、例えば、単回または複数回投与のための注射溶液の形態で、または注射の前に再構成される無菌粉末として提供できる。このようなキットは、医薬組成物の適応症および使用法に関する書面での情報をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、キットは、医薬組成物およびＩＶ安定化溶液（多重特異的ポリペプチドのプラスチック配管およびバッグへの付着の可能性を防止または減らすように設計された、０．１Ｍコハク酸エステル緩衝液、および０．０８重量／体積％のポリソルベート８０、ｐＨ６．０または類似の溶液）を含む。

本開示は、本開示の単なる例示であり、制限することを全く意図しない以下の実施例により、さらに明らかになるであろう。

実施例
以下の実施例への言及により、本発明はさらに詳細に説明される。これらの実施例は、例示のみの目的のために提供され、別段の指定がない限り、限定する意図はない。従って、本発明は、次の実施例に限定されるものと解釈されるべきではなく、むしろ、本明細書で提供される教示の結果として明らかになる任意のおよびすべての変形例を包含するものと解釈されるべきである。
さらに記載がなくても、当業者なら、前の記載および次の実例を用いて、本発明の化合物を作製および利用し、請求方法を実施できると考えられる。以下の実施例は、従って、本発明の好ましい実施形態を具体的に示し、開示の残部を多少なりとも限定すると解釈されるべきではない。

実施例１：抗ＣＤ１２３ｘ抗ＣＤ３二重特異的タンパク質の配合
治療的タンパク質薬物は、集配送センター、輸送、および貯蔵および投与場所としての使用での長期貯蔵中にそれらの製剤品質を維持することが重要である。タンパク質は、産生および配合後に、凍結（－８０℃、－２０℃）、冷蔵（４℃）および室温（２５℃）を含む、種々の温度に曝露され得る。タンパク質薬物の安定性に影響を与える条件は、ｐＨ、タンパク質濃度ならびに配合物に含まれ得る塩および賦形剤の濃度を含む。

抗ＣＤ１２３ｘ抗ＣＤ３二重特異性（抗ＣＤ１２３－ヒンジ領域－ＣＨ２－ＣＨ３－抗ＣＤ３）のための５ｍＭのコハク酸エステル、６．５％のスクロース、０．０２重量／体積％のポリソルベート８０（ＳＳｕＴと省略）、ｐＨ４．８配合物を評価するために、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を、ＴＲＩ－１２９またはＴＲＩ－１３０を選択マーカーと共にコードするＤＮＡプラスミドで安定に遺伝子導入した。遺伝子導入後、これらの細胞を選択圧下で増殖して、二重特異的タンパク質エンコード遺伝子のＣＨＯ細胞ゲノムへの安定な組み込み、および選択マーカーを含まなかった細胞の死滅を確実にした。

ＴＲＩ－１２９およびＴＲＩ－１３０ＣＨＯプールを最初に、振盪フラスコ中で増殖させ、その後、１０Ｌのバイオリアクター中に移し、所定の動物成分不含培地中で培養した。約２週間の培養後に、細胞培養上清を、深層濾過および除菌濾過の組み合わせを用いて清澄化した後、親和性および混合モードカラムクロマトグラフィーの組み合わせを用いて精製した。２段階精製されたタンパク質を、タンジェント流濾過（ＴＦＦ）装置を用いて、コハク酸エステル緩衝液中に透析濾過した後、適切な体積の濃縮ストックスクロース溶液およびポリソルベート８０を加えて、所定の組成物を得た。ＴＲＩ－１２９およびＴＲＩ－１３０ＡＤＡＰＴＩＲタンパク質を、２ｍｇ／ｍＬおよび１０ｍｇ／ｍＬの両方の好ましい処方緩衝液中で評価した。ＳＳｕＴ中の安定性を、ダルベッコリン酸塩緩衝生理食塩水（ｄＰＢＳ）中のタンパク質と比較した。

一実験では、ＴＲＩ－１２９およびＴＲＩ－１３０をＳＳｕｔまたはＰＢＳ中で配合し、試料を４℃および２５℃で貯蔵した。試料の純度を、分析的サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）アッセイを用いて、試験の始めと、貯蔵の９日後に測定した。９日後の製剤の％純度の変化を、下表８で報告する。ｄＰＢＳ中の試料の負の値は、試料の純度が減少しつつあることを示し、主ピークから凝集物／より高分子量種（ＨＭＷ）に再分布する製剤ピーク面積を示す。９日後に、ＳＳｕＴ中のＴＲＩ－１２９およびＴＲＩ－１３０の両方は、ＤＰＢＳ中の試料に比べて、遙かに小さい純度の変化を示し、この配合物が有意な安定化特性を有することを示す。

産生および／または貯蔵中に、タンパク質治療薬を１回または複数の－８０℃または－２０℃～４℃または室温の凍結－解凍サイクルに供するのは一般的である。選択されたバルク医薬品有効成分および製剤配合物がタンパク質を安定化し、かつ薬物品質の劇的変化を防止することは、重要である。ＳＳｕＴ中で処方されたＴＲＩ－１２９およびＴＲＩ－１３０を、凍結凝集に耐えるそれらの能力について調査した。凍結凝集は、タンパク質溶液の凍結および解凍により生ずる凝集の形成である。ＴＲＩ－１２９およびＴＲＩ－１３０の安定性を、２および１０ｍｇ／ｍＬで調査した。試料の純度を分析的ＳＥＣで評価した後、２００μＬを－８０℃または－２０℃に数時間置いて、試料が完全に凍結するのに十分な時間を可能にした。試料を冷凍庫から取り出し、室温で完全に解凍させた。試料を、合計３回の－８０℃または－２０℃で凍結－解凍サイクルに供した後、ＳＥＣで再試験して、％ＭＰの変化を測定した。下表９に示すように、ＴＲＩ－１２９およびＴＲＩ－１３０の両方は、－８０℃または－２０℃で最小限の％ＭＰの変化を示した。１０ｍｇ／ｍＬでのより高いタンパク質濃度試料は、２ｍｇ／ｍＬでの試料よりもわずかに大きい％ＭＰの変化を示した。

実施例２：ＴＲＩ１３０についての無毒性量（ＮＯＡＥＬ）および推定最小薬理作用量（ＭＡＢＥＬ）の決定
無毒性量（ＮＯＡＥＬ）
５週の回復期間を含む２８日反復投与毒性試験を、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）で実施した。４試験群中の動物は、ビークル、または０．５、２．５、もしくは１０ｍｇ／ｋｇのＴＲＩ１３０の毎週投与を受けた。測定したパラメーターは、安全性薬理作用、実験室評価、および完全病理組織学による剖検を含んだ。ＴＲＩ１３０に関連する病理組織診断での臨床的有害所見、動物体重または臓器重量の変化、および異常巨視的または顕微鏡的知見は、存在しなかった。最小限のサイトカインが、投与後に検出され、初回に比べて、２回目の投与後に減弱した。分子の抗ＣＤ３結合ドメインの予測される薬力学的効果が、Ｔ細胞の一過性再分配に伴って観察された。排出半減期は、高投与量で約７３時間であった。無毒性量（ＮＯＡＥＬ）は、ＮＨＰで１０ｍｇ／ｋｇであり、これは、約３．２ｍｇ／ｋｇのヒト等価用量（ＨＥＤ）になる。

推定最小薬理作用量（ＭＡＢＥＬ）
ＴＲＩ１３０は、標的抗原ＣＤ１２３を発現する腫瘍細胞を溶解するためにＴ細胞を動員し、最大活性は、極めて低いレベルのＴＣＲ占有率で起こる（データは示さず）。推定最小薬理作用量（ＭＡＢＥＬ）を計算するために、インビトロ活性アッセイを、インビトロ受容体占有率に代えて用いた。

ＭＡＢＥＬを、１０％活性（ＥＣ１０）（Ｍｕｌｌｅｒｅｔａｌ．，２００９）を誘発するために必要な有効濃度を用いて決定した。これらのＴ細胞活性化アッセイにおけるＴＲＩ１３０の効力は、Ｔ細胞の活性化の程度およびエフェクター細胞と標的細胞の比率（Ｅ：Ｔ）に応じて変化し得るが、活性化アッセイは、リダイレクトＴ細胞細胞傷害性（ｒｅｄｉｒｅｃｔｅｄＴｃｅｌｌｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）（ＲＴＣＣ）アッセイに比べて、ＭＡＢＥＬの計算のための、より高感度なアッセイである。ＲＴＣＣおよびＴ細胞活性化の両方は、出発臨床用量に対するＭＡＢＥＬを予測する可能なアッセイとして評価された。精製されたＴ細胞をＣＤ１２３＋ＫＧ１ａ腫瘍細胞株と１０：１のＥ：Ｔ比で使用するＲＴＣＣアッセイは、５人のドナーから評価して５．８ｐＭの平均ＥＣ１０を有した（評価ドナー全体で４．４～６．７ｐＭの範囲）。対照的に、Ｔ細胞活性化アッセイは、ＭＡＢＥＬを推定するのにより高感度なアッセイであった。インビトロで誘導されるＴ細胞活性化を測定するために、Ｔ細胞を、末梢血単核球から単離し、ＣＤ１２３＋腫瘍細胞（ＭＯＬＭ－１３）の存在下で、ＴＲＩ１３０とインキュベートした。Ｔ細胞上のＣＤ６９およびＣＤ２５の発現上昇を、生存ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞にゲートをかけた後、マルチカラーフローサイトメトリーを用いて２０時間監視した。これらのアッセイは、３人のドナーのＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞両方の活性化を評価した。これらのアッセイに対する平均ＥＣ１０計算は、ＣＤ４Ｔ細胞で１．２ｐＭ（範囲０．７～１．６ｐＭ）およびＣＤ８Ｔ細胞で１．３ｐＭ（範囲０．９～２．０ｐＭ）であった。このアッセイは、ＭＡＢＥＬのより控えめな推定であり、患者のための開始用量の推定に使用された。ＴＲＩ１３０の場合、０．７ｐＭ（０．１１３ｎｇ／ｍｌ）は、ドナーからのＣＤ４＋Ｔ細胞応答に基づく、ＭＡＢＥＬに対する最も慎重な手法であった。

単一用量ＮＨＰ試験におけるグループ４の排出と体積推定値を、静脈内（ＩＶ）投与のためのＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（ｖ６．４）プレコンパイルド２コンパートメントモデルを用いて測定した。相対成長率を用いて、０．７ｐＭのＥＣ１０（ＭＡＢＥＬ）値未満のＣｍａｘ、活性化アッセイで個別のドナーから測定された最も低いＥＣ１０、を生じ得る投与戦略をシミュレートするために使用され得る、ヒト排出および体積パラメーター推定値を予測した。このモデル化を用いると、約０．００５μｇ／ｋｇの投与量は、０．１１３ｎｇ／ｍＬ（０．７ｐＭ）のＭＡＢＥＬ濃度未満のＣｍａｘを有するであろう。

体重に基づく用量ではなく、固定用量（ｆｌａｔｄｏｓｅ）または固定用量（ｆｉｘｅｄｄｏｓｅ）が、この試験では利用される。いくつかの試験は、体重ベース投与に比べて固定投与は類似の多くのモノクローナル抗体全体にわたり同様に機能したこと、およびいずれかの投与計画により導入されたＰＫの変動は薬力学、有効性、および安全性で通常観察される変動に比べて適度であることを示した（Ｗａｎｇｅｔａｌ．，２００９）。６０ｋｇの患者および０．００５μｇ／ｋｇのＭＡＢＥＬ用量を仮定して、試験の開始用量は０．３μｇである。

実施例３：患者へのＴＲＩ１３０、処方抗ＣＤ１２３ｘ抗ＣＤ３治療薬候補の投与
再発性または難治性急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）の患者の、進行中の第１／１ｂ相非盲検、用量漸増試験で、処方されたＴＲＩ１３０（５ｍＭのコハク酸エステル、６．５％のスクロース、００２重量／体積％ポリソルベート８０、ｐＨ４．８）が、患者に投与される。試験は、２つのパートで行われる。第１のパートは、第１ｂ相のための推奨投与量を決定するための、第１相非盲検、用量漸増試験である。第１ｂ相は、推奨投与量の薬物の臨床的活性および安全性を評価するための非盲検増殖試験である。試験デザインは、図２に概略が示される。評価項目は、安全性、免疫原性、薬物動態学、薬力学、および臨床的活性を含む。

表１０は、コホート１～１０が毎週投与（ＩＶ投与）（用量漸増コホート）される量を示す、投与スケジュールである。試験の両パートで、患者は、疾患進行、耐えられない毒性、または早期の同意の撤回が生じることがない限り、薬物を毎週、６回の２８日サイクルにわたり静脈内投与を受ける。患者が応答する場合、より長期の治療のオプションがある。

薬物は、２ｍｇ／ｍＬの濃度で１ｍＬの液体中に２ｍｇの製剤を含む単回使用バイアルにより供給される。製剤は、ＩＶ安定化溶液と混合されて、製剤のＩＶバッグおよびＩＶ配管セットへの付着を防止する。安定化溶液は、０．１Ｍのコハク酸エステル緩衝液および０．０８重量／体積％のポリソルベート８０、ｐＨ６．０からなる１０ｍＬバイアル中で無菌で供給され、冷蔵（２～８℃）される。

コホート１～４の場合、投与は、第１の投与の間（サイクル１、１日目）、約２０～２４時間にわたり、第２の投与の間（サイクル１、８日目）８時間（±１時間）にわたり、第３の投与の間（サイクル１、１５日目）６時間（±１時間）にわたり、およびその後の全ての投与の間（サイクル１、２２日目およびそれ以降）４時間（±１時間）にわたり、ＩＶ注入により行われる。コホート５以降では、投与は、第１の投与の２０～２４時間の間、１時間毎に投与量が増大されるＩＶ注入により行われる。第２回目に同じ投与量が投与され、それは８時間（±３０分）にわたり輸注され、第３回目に６時間（±３０分）にわたり、および第４回目におよび全てのその後の回で４時間（±３０分）にわたり、輸注される。

必要に応じ、全ての有害事象、特に注入関連反応（ＩＲＲ）またはサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）を管理するまたは防ぐために、全ての投与量注入を、遅らせ、および／または中断させて、投与時間を最大で７２時間延長し得る。注入を６０時間を超えて延長する場合、患者を、注入完了後１２時間にわたり観察する必要がある。表１０は、ＩＲＲおよび／またはＣＲＳの可能性を減らす潜在性を有する階段状投与計画を開示する（コホート５で開始）。

患者への投与の頻度は、最大で６か月間にわたり毎週である。毎週投与スケジュールは、漸増ＴＲＩ１３０投与のカニクイザル毒物学試験に基づいて選択された（データは示さず）。０．２５～１ｍｇ／ｋｇを投与された個別の動物に対する単回投与後のＴＲＩ１３０の半減期は、約２５～１１３時間の範囲であり、より長い半減期の推定値は、高投与量群（１ｍｇ／ｋｇ）の動物に関連していた。

注入関連反応（ＩＲＲ）およびサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）を軽減するために、患者は、前投薬：ジフェンヒドラミン、アセトアミノフェン、およびデキサメタゾン後に投与される。全ての前投薬は、注入が開始される１～３時間前に投与される。いずれかの前投薬の用量は、試験責任医師の意見で、合併症のために必要な場合、減らされてよい。デキサメタゾンは、患者がそれより前の投与でＩＲＲまたはＣＲＳを経験しない限り、サイクル２、１５日目後のオプションである。３種の前投薬の投与量は、
１．デキサメタゾン１０～２０ｍｇＩＶ、またはメチルプレドニゾロン１ｍｇ／ｋｇＩＶ、または等価量；投与量は、患者の合併症に基づき試験責任医師の自由裁量による。
２．アセトアミノフェン６５０または１，０００ｍｇ、または等価量、経口（ＰＯ）経由で３回／日を１日間（試験責任医師の裁量で、６５０ｍｇまたは１，０００ｍｇの投与量）、第１の投与量は試験薬注入の１～３時間前に投与される。および
３．抗ヒスタミン剤：ジフェンヒドラミン５０ｍｇＰＯまたはＩＶ、または等価量である。
試験責任医師が腫瘍溶解予防のためにアロプリノールの投与を選択する場合、それは、試験薬の開始の少なくとも２日前に開始される必要がある。

第１相－用量漸増試験
投与は、患者コホートにおいて推定最小薬理作用量（ＭＡＢＥＬ）で開始された。登録患者は、１）再発性または難治性ＡＭＬを有し、集中的な化学療法または同種幹細胞移植を拒否される、またはそれに不適格である、または２）再発性または難治性ＭＤを有し、骨髄中に５％超の芽球、または末梢血中にいずれかの循環芽球を有し、前のメチル化阻害薬（ＨＭＡ）で奏功しなかった；奏功しない、はＨＭＡに対する不耐性、応答の欠如（少なくとも６サイクルでＣＲなし）、またはＨＭＡで治療の間またはその後にＩＷＧ定義の進行、と定義される。進行中の第１相用量漸増試験（コホート７を通して）への登録３２人の患者の人口統計を、下表１１に示す。コホート７を通して登録された患者について、年齢中央値は６７才であり、７９％の患者がＡＭＬであった。患者当り投与された平均投与回数は８．５回であり、平均治療期間は、５４日であった。

進行中の第１相用量漸増試験への登録３２人の患者の治療関連有害事象を、下表１２に示す。３４％の患者が１種または複数のＩＲＲ／ＣＲＳイベント（グレード≧３、１６％で報告）を経験した。最もよくある症状は、呼吸困難、発熱、低血圧、低酸素、頻拍、および悪寒／冷えであった。特に、ＩＲＲ／ＣＲＳは、２人以上の患者で発生する唯一の治療関連重篤有害事象であった。ＩＲＲ／ＣＲＳイベントを経験した１１人の患者のうちの３人は、これを治療するためにトシリズマブを受けた。

患者の骨髄吸引物中の芽球のパーセンテージを、経時的に監視した。図３Ａ～３Ｄに示すように、骨髄芽球の減少が、１２μｇを以上の最高投与量を受けた数人の患者で観察された。２人の患者はそれぞれ、２９％～０％（コホート６ｂ、図３Ｃ）、および３３％～４％（コホート６ａ、図３Ｂ）の骨髄芽球の減少を有した。絶対好中球数および血小板数は、完全寛解基準に適合した。両方の患者、ならびにコホート７の芽球減少の１人の患者は、試験継続中である。

血清サイトカインは、各患者の最大投与量の投与の前後のスケジュールされた時点で評価され、また、注入関連反応またはサイトカイン放出症候群イベント中に間隔を置いて評価された。図４Ａ～４Ｄに示すように、サイトカインは、スケジュールされた収集の間には評価されなかった。増加されたサイトカイン、特にＩＬ－６が、ＩＲＲ／ＣＲＳ有害事象中に観察された。特に、この小さいデータセットでは、相関は、最高サイトカイン濃度と投与レベルまたはイベントグレードとの間で観察されなかった。

従って、この予備的試験では、２４μｇの用量によるＴＲＩ１３０の投与は、管理しやすい安全プロファイルを有し容認された。上述のように、２人の患者は、完全寛解（ＣＲ）を有した。サイトカインは、ＩＲＲ／ＣＲＳ有害事象が同時に存在しない限り、有意に上昇しなかった。予備的データは、治療誘導抗薬物抗体（ＡＤＡ）の証拠を示唆しなかった。

第１相－追加の用量漸増コホート
コホート７の用量規制毒性（ＤＬＴ）観察期間の完了後、４つの追加の逐次コホート（コホートＡ、Ｂ、ＣおよびＤ）で患者が登録され、一方でコホート８以上は治療される。これらのコホートは、順次実行され、コホート８～１０とは別であり、より急速な用量漸増が達成される。

コホートＡ、Ｂ、ＣおよびＤの患者は、連続的なＩＶ投与（２０～２４時間／日）をサイクル１の最初の４日間にわたり受け、その後、２週目の間に週２回、続いて、その後、サイクル１および残りのサイクルで週１回の投与を受ける。表１４は、コホートＡ、Ｂ、ＣおよびＤの投与スケジュールを示す。コホートＡの投与の第１週は、コホート６ａで試験された投与（１日目に６μｇ、２日目に９μｇ、３日目に１２μｇ、および４日目に１８μｇ）を利用する。第２週の間に、１８μｇの投与量が８日目および１１日目に投与される。３週目には、投与量は、３６μｇに増大され、このレベルで維持される。第１週中に一日量を漸増する利点は、Ｃ_ｍａｘが徐々に増大されることであり、これは、ＩＲＲ／ＣＲＳの発生の傾向を下げ得る。トシリズマブによる積極的治療は、グレード≧２の対症療法および投与中段の２時間以内に応答しないＩＲＲまたはＣＲＳに対して投与される。

コホートＡ～Ｄについて、投与は、第１の投与の２０～２４時間にわたりＩＶ注入により行われ、１時間毎に投与量が増大される。第２回目に同じ投与量が投与され、それは８時間（±３０分）にわたり輸注され、第３回目に６時間（±３０分）にわたり、および第４回目におよび全てのその後の回で、４時間（±３０分）にわたり輸注される。

前投薬は、サイクル１、１日目；サイクル１、８日目；サイクル１、１１日目；サイクル１、１５日目；およびサイクル１、２２日目の前に投与される。全ての後続の投与量について、デキサメタゾンはオプションであるが、アセトアミノフェンおよびジフェンヒドラミンが必要とされる。

第１ｂ相－増殖
推奨投与計画が、同じタイプの患者からなる次の２つの増殖コホートでさらに調査される：１）コホート１は、集中的な化学療法または同種幹細胞移植に不適格である、再発性または難治性ＡＭＬを有する２４人の患者からなり、２）コホート２は、骨髄中に５％超の芽球、または末梢血中にいずれかの循環芽球を有し、かつ前のＨＭＡで奏功しなかった、再発性または難治性ＭＤを有する２４人の患者からなり；奏功しない、は、ＨＭＡに対する不耐性、応答の欠如（少なくとも６サイクルでＣＲなし）、またはＨＭＡで治療の間のまたはその後のＩＷＧ定義の進行、として定義される。
血清試料が、薬物レベルの連続的ＰＫ評価のために収集される。

Claims

多重特異的タンパク質、緩衝液、賦形剤、および界面活性物質を含む組成物であって、
（ａ）前記多重特異的タンパク質が、２個の同一のポリペプチドのダイマーであり、各ポリペプチドが、アミノ末端からカルボキシル末端への順で、またはカルボキシル末端からアミノ末端への順で、
（ｉ）第１の結合ドメイン、
（ｉｉ）ヒンジ領域、
（ｉｉｉ）免疫グロブリン定常領域、および
（ｉｖ）第２の結合ドメイン、
を含み、かつ
（ｂ）前記緩衝液が、コハク酸エステルまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは酸を含むまたはそれからなる、
組成物。
約１ｍＭ～約１０ｍＭのコハク酸エステルまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは酸を含む、請求項１に記載の組成物。
約５ｍＭのコハク酸エステルまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは酸を含む、請求項２に記載の組成物。
前記賦形剤が、糖を含むまたはそれからなる、請求項１～３のいずれか１項に記載の組成物。
前記糖が、スクロースである、請求項４に記載の組成物。
約１重量／体積（ｗ／ｖ）％～約１２ｗ／ｖ％の前記糖を含む、請求項４または５に記載の組成物。
約６．５（ｗ／ｖ）％の前記糖を含む、請求項６に記載の組成物。
前記界面活性物質が、ポリソルベート８０を含むまたはそれからなる、請求項１～７のいずれか１項に記載の組成物。
約０．０２ｗ／ｖ％のポリソルベート８０を含む、請求項８に記載の組成物。
約０．１ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌの前記多重特異的タンパク質を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の組成物。
約１ｍｇ／ｍｌ～約５ｍｇ／ｍｌの前記多重特異的タンパク質を含む、請求項１０に記載の組成物。
約２ｍｇ／ｍｌの前記多重特異的タンパク質を含む、請求項１１に記載の組成物。
約５ｍＭのコハク酸エステル、約６．５重量／体積（ｗ／ｖ）％のスクロースおよび約０．０２ｗ／ｖ％のポリソルベート８０を含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載の組成物。
約４．０～約５．５のｐＨを有する、請求項１～１３のいずれか１項に記載の組成物。
約４．８のｐＨを有する、請求項１４に記載の組成物。
前記免疫グロブリン定常領域が、ヒトＦｃドメインである、請求項１～１５のいずれか１項に記載の組成物。
前記免疫グロブリン定常領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２またはＩｇＤの免疫グロブリンＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む、請求項１～１６のいずれか１項に記載の組成物。
前記第１の結合ドメインが、ＣＤ３結合ドメインでありかつ前記第２の結合ドメインが、腫瘍抗原結合ドメインである、請求項１～１７のいずれか１項に記載の組成物。
前記ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端へ、前記ＣＤ３結合ドメイン、前記ヒンジ領域、前記免疫グロブリン定常領域、および前記腫瘍抗原結合ドメインを含む、請求項１８に記載の組成物。
前記第１のドメインが、腫瘍抗原結合ドメインであり、および前記第２の結合ドメインが、ＣＤ３抗原結合ドメインである、請求項１～１７のいずれか１項に記載の組成物。
前記ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端へ、前記腫瘍抗原結合ドメイン、前記ヒンジ領域、前記免疫グロブリン定常領域、および前記ＣＤ３結合ドメインを含む、請求項２０に記載の組成物。
前記第１の結合ドメインが、４－１－ＢＢ結合ドメインでありかつ前記第２の結合ドメインが、腫瘍抗原結合ドメインである、請求項１～１７のいずれか１項に記載の組成物。
前記ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端へ、前記４－１－ＢＢ結合ドメイン、前記ヒンジ領域、前記免疫グロブリン定常領域、および前記腫瘍抗原結合ドメインを含む、請求項２２に記載の組成物。
前記第１の結合ドメインが、腫瘍抗原ドメインであり、かつ前記第２の結合ドメインが、４－１－ＢＢ結合ドメインである、請求項１～１７のいずれか１項に記載の組成物。
前記ポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端へ、前記腫瘍抗原結合ドメイン、前記ヒンジ領域、前記免疫グロブリン定常領域、および前記４－１－ＢＢ結合ドメインドメインを含む、請求項２４に記載の組成物。
前記腫瘍抗原結合ドメインが、ＣＤ１２３、ＰＳＭＡ、ＣＤ１９、ＣＤ３３、またはＨＥＲ２に結合する、請求項１８～２５のいずれか１項に記載の組成物。
前記第１の結合ドメインまたは前記第２の結合ドメインが、４－１－ＢＢ結合ドメインである、請求項１～１７のいずれか１項に記載の組成物。
前記第１の結合ドメインまたは前記第２の結合ドメインが、ＯＸ４０結合ドメインである、請求項１～１７のいずれか１項に記載の組成物。
前記第１の結合ドメインが、４－１－ＢＢ結合ドメインでありかつ前記第２の結合ドメインが、ＯＸ４０結合ドメインである、請求項１～１７のいずれか１項に記載の組成物。
前記第１の結合ドメインが、ＯＸ４０結合ドメインでありかつ前記第２の結合ドメインが、４－１－ＢＢ結合ドメインである、請求項１～１７のいずれか１項に記載の組成物。
前記４－１－ＢＢ結合ドメインが、ｓｃＦｖでありかつ前記ＯＸ４０結合ドメインが、ｓｃＦｖである、請求項２９または３０に記載の組成物。
前記第１の結合ドメインが、ＯＸ４０ドメインでありかつ前記第２の結合ドメインが、腫瘍抗原結合ドメインである、請求項１～１７のいずれか１項に記載の組成物。
前記第１の結合ドメインが、腫瘍抗原結合ドメインでありかつ前記第２の結合ドメインが、ＯＸ４０結合ドメインである、請求項１～１７のいずれか１項に記載の組成物。
前記第１の結合ドメインおよび前記第２の結合ドメインの少なくとも１つが、
（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；および
（ｉｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）、
を含む、請求項１～３３のいずれか１項に記載の組成物。
前記第１の結合ドメインおよび前記第２の結合ドメインの少なくとも１つが、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である、請求項１～３４のいずれか１項に記載の組成物。
前記ｓｃＦｖの軽鎖可変領域が、前記ｓｃＦｖの重鎖可変領域に対しカルボキシ末端である、請求項３５に記載の組成物。
前記ｓｃＦｖの軽鎖可変領域が、前記ｓｃＦｖの重鎖可変領域に対しアミノ末端である、請求項３５に記載の組成物。
前記ｓｃＦｖが、リンカーポリペプチドを含む、請求項３５～３７のいずれか１項に記載の組成物。
前記リンカーポリペプチドが、前記ｓｃＦｖの前記軽鎖可変領域と前記重鎖可変領域の間にある、請求項３８に記載の組成物。
前記リンカーポリペプチドが、Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ（配列番号１２８）を含む、請求項３８または３９に記載の組成物。
前記リンカーポリペプチドが、式（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_ｎ、式中ｎ＝１～５（配列番号１２９）を含む、請求項４０に記載の組成物。
前記腫瘍抗原結合ドメインが、
配列番号１９を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１２を含むＨＣＤＲ３；ならびに
配列番号１３を含むＬＣＤＲ１、配列番号１４を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１５を含むＬＣＤＲ３、
を含む抗ＣＤ１２３ｓｃＦｖである、請求項１８～２６のいずれか１項に記載の組成物。
前記腫瘍抗原結合ドメインが、配列番号１３６と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含むＶＨ、および配列番号１３４と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含むＶＬを含む抗ＣＤ１２３ｓｃＦｖである、請求項１８～２６のいずれか１項に記載の組成物。
前記腫瘍抗原結合ドメインが、抗ＣＤ１２３ｓｃＦｖであり、かつ前記ｓｃＦｖが、配列番号２７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含む、請求項１８～２６のいずれか１項に記載の組成物。
前記ＣＤ３結合ドメインが、
配列番号１９を含むＨＣＤＲ１、配列番号２０を含むＨＣＤＲ２、および配列番号２１を含むＨＣＤＲ３；ならびに
配列番号２２を含むＬＣＤＲ１、配列番号２３を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２４を含むＬＣＤＲ３、
を含む抗ＣＤ３ｓｃＦｖである、請求項１８～２１のいずれか１項に記載の組成物。
前記ＣＤ３抗原結合ドメインが、配列番号３８３または３８７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含むＶＨ、および配列番号３８４と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含むＶＬを含む抗ＣＤ３ｓｃＦｖである、請求項１８～２１のいずれか１項に記載の組成物。
前記ＣＤ３結合ドメインが、配列番号２７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含む抗ＣＤ３ｓｃＦｖである、請求項１８～２１のいずれか１項に記載の組成物。
各ポリペプチドが、配列番号３１と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含む、請求項１８～２１または４５～４７のいずれか１項に記載の組成物。
前記免疫グロブリン定常領域が、ＦｃγＲ１，ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩＩｂへの結合を低減するまたは防ぐために野性型免疫グロブリン定常領域と比べて１個、２個、３個のまたはこれを超えるアミノ酸置換を含む、請求項１～４８のいずれか１項に記載の組成物。
前記免疫グロブリン定常領域が、Ｆｃ媒介Ｔ細胞活性化を低減するまたは防ぐために野性型免疫グロブリン定常領域と比べて１個、２個、３個のまたはこれを超えるアミノ酸置換を含む、請求項１～４８のいずれか１項に記載の組成物。
前記免疫グロブリン定常領域が、ＣＤＣ活性を防ぐまたは低減するために野性型免疫グロブリン定常領域と比べて１個、２個、３個のまたはこれを超えるアミノ酸置換を含む、請求項１～４８のいずれか１項に記載の組成物。
前記免疫グロブリン定常領域が、ＡＤＣＣ活性を防ぐまたは低減するために野性型免疫グロブリン定常領域と比べて１個、２個、３個のまたはこれを超えるアミノ酸置換を含む、請求項１～４８のいずれか１項に記載の組成物。
前記免疫グロブリン定常領域が、野性型ヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメインと比べて１個、２個、３個のまたはこれを超えるアミノ酸置換を有するヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメインを含む、請求項１～５２のいずれか１項に記載の組成物。
前記免疫グロブリン定常領域が、ＥＵナンバリングシステムに従って、置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、およびＫ３２２Ａを含むヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメインを含む、請求項１～５３のいずれか１項に記載の組成物。
前記免疫グロブリン定常領域が、ＥＵナンバリングシステムに従って、置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｋ３２０ＡおよびＫ３２２Ａを含むヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメインを含む、請求項５４に記載の組成物。
前記免疫グロブリン定常領域が、ＥＵナンバリングシステムに従って、置換Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、およびＫ３２２Ａ、ならびにＧ２３６の欠失を含むヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメインを含む、請求項１～５３のいずれか１項に記載の組成物。
前記ヒンジ領域が、免疫グロブリンヒンジ領域由来である、請求項１～５６のいずれか１項に記載の組成物。
各ポリペプチドが、前記免疫グロブリン定常領域と前記第２の結合ドメインの間にＦｃ結合ドメインリンカーを含む、請求項１～５７のいずれか１項に記載の組成物。
前記Ｆｃ結合ドメインリンカーが、Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ（配列番号１２８）配列を含む、請求項５８に記載の組成物。
前記Ｆｃ結合ドメインリンカーが、式（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_ｎ、式中ｎ＝１～５（配列番号１２９）を含む、請求項５９に記載の組成物。
静脈内のまたは皮下の投与のためである、請求項１～６０のいずれか１項に記載の組成物。
多重特異的タンパク質の分解を実質的に防ぐ、請求項１～６１のいずれか１項に記載の組成物。
同一の貯蔵条件化でヒスチジン緩衝液中で貯蔵される同一の多重特異的ポリペプチドに比べて前記多重特異的ポリペプチドの分解を遅らせるまたは低減する、請求項１～６２のいずれか１項に記載の組成物。
４℃で少なくとも１年間実質的に安定である、請求項１～６３のいずれか１項に記載の組成物。
多重特異的タンパク質の凝集体の形成に対し実質的に耐性である、請求項１～６４のいずれか１項に記載の組成物。
同一の貯蔵条件化でヒスチジン緩衝液中で貯蔵される同一の多重特異的ポリペプチドに比べてより少ない凝集体を形成する、請求項１～６５のいずれか１項に記載の組成物。
融合タンパク質、緩衝液、賦形剤、および界面活性物質を含む組成物であって、
（ａ）前記融合タンパク質が、２個の同一のポリペプチドのダイマーであり、各ポリペプチドが、アミノ末端からカルボキシル末端への順で、
（ｉ）ＣＤ１２３に特異的に結合する第１の結合ドメイン、
（ｉｉ）ヒンジ領域、
（ｉｉｉ）免疫グロブリン定常領域、および
（ｉｖ）ＣＤ３に特異的に結合する第２の結合ドメイン、
を含み、
（ｂ）前記緩衝液が、コハク酸エステルまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは酸を含むまたはそれからなる、
組成物。
約５ｍＭのコハク酸エステル、約６．５重量／体積（ｗ／ｖ）％のスクロースおよび約０．０２ｗ／ｖ％のポリソルベート８０を含む、請求項６７に記載の組成物。
約０．１ｍｇ／ｍｌ～約１０ｍｇ／ｍｌの前記多重特異的タンパク質を含む、請求項６７または６８に記載の組成物。
約１ｍｇ／ｍｌ～約５ｍｇ／ｍｌの前記多重特異的タンパク質を含む、請求項６９に記載の組成物。
約２ｍｇ／ｍｌの前記多重特異的タンパク質を含む、請求項７０に記載の組成物。
約４．０～約５．５のｐＨを有する、請求項６７～７１のいずれか１項に記載の組成物。
約４．８のｐＨを有する、請求項７２に記載の組成物。
前記免疫グロブリン定常領域が、ヒトＦｃドメインである、請求項６７～７３のいずれか１項に記載の組成物。
前記免疫グロブリン定常領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２またはＩｇＤの免疫グロブリンＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む、請求項６７～７４のいずれか１項に記載の組成物。
前記ＣＨ２ドメインが、野性型ヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメインと比べて１個、２個、３個のまたはこれを超えるアミノ酸置換を有するヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメインである、請求項１～７５のいずれか１項に記載の組成物。
前記免疫グロブリン定常領域が、ＥＵナンバリングシステムに従って、置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、およびＫ３２２Ａを含むヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメインを含む、請求項６７～７６のいずれか１項に記載の組成物。
前記免疫グロブリン定常領域が、ＥＵナンバリングシステムに従って、置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｋ３２０ＡおよびＫ３２２Ａを含むヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメインを含む、請求項６７～７７のいずれか１項に記載の組成物。
前記免疫グロブリン定常領域が、ＥＵナンバリングシステムに従って、置換Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、およびＫ３２２ＡならびにＧ２３６の欠失を含むヒトＩｇＧ１ＣＨ２ドメインを含む、請求項６７～７６のいずれか１項に記載の組成物。
前記ヒンジ領域が、免疫グロブリンヒンジ領域由来である、請求項６７～７９のいずれか１項に記載の組成物。
各ポリペプチドが、前記免疫グロブリン定常領域と前記第２の結合ドメインの間にＦｃ結合ドメインリンカーを含む、請求項６７～８０のいずれか１項に記載の組成物。
前記Ｆｃ結合ドメインリンカーが、Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ（配列番号１２８）配列を含む、請求項８１に記載の組成物。
前記Ｆｃ結合ドメインリンカーが、式（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_ｎ、式中ｎ＝１～５（配列番号１２９）を含む、請求項８２に記載の組成物。
静脈内のまたは皮下の投与のためである、請求項６７～８３のいずれか１項に記載の組成物。
前記第１の結合ドメインおよび前記第２の結合ドメインの少なくとも１つが、
（ｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；および
（ｉｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）、
を含む、請求項６７～８４のいずれか１項に記載の組成物。
前記第１の結合ドメインおよび前記第２の結合ドメインの少なくとも１つが、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である、請求項６７～８５のいずれか１項に記載の組成物。
前記ｓｃＦｖの軽鎖可変領域が、前記ｓｃＦｖの重鎖可変領域に対しカルボキシ末端である、請求項８６に記載の組成物。
前記ｓｃＦｖの軽鎖可変領域が、前記ｓｃＦｖの重鎖可変領域に対しアミノ末端である、請求項８６に記載の組成物。
前記ｓｃＦｖが、リンカーポリペプチドを含む、請求項８６～８８のいずれか１項に記載の組成物。
前記リンカーポリペプチドが、前記ｓｃＦｖの前記軽鎖可変領域と前記重鎖可変領域の間にある、請求項８９に記載の組成物。
前記リンカーポリペプチドが、Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ（配列番号１２８）リンカーを含む、請求項８９または９０に記載の組成物。
前記リンカーポリペプチドが、式（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_ｎ、式中ｎ＝１～５（配列番号１２９）を含む、請求項９１に記載の組成物。
前記第１の結合ドメインが、
配列番号１０の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１２の配列を含むＨＣＤＲ３；ならびに
配列番号１３の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１４の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号１５の配列を含むＬＣＤＲ３、
を含む抗ＣＤ１２３ｓｃＦｖである、請求項６７～９２のいずれか１項に記載の組成物。
前記第１の結合ドメインが、配列番号１３６と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含むＶＨ、および配列番号１３４と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含むＶＬを含む抗ＣＤ１２３ｓｃＦｖである、請求項６７～９２のいずれか１項に記載の組成物。
前記第１の結合ドメインが、配列番号１８と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含む抗ＣＤ１２３ｓｃＦｖである、請求項６７～９２のいずれか１項に記載の組成物。
前記第２の結合ドメインが、
配列番号１９の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２０の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号２１の配列を含むＨＣＤＲ３；ならびに
配列番号２２の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２３の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号２４の配列を含むＬＣＤＲ３、
を含む抗ＣＤ３ｓｃＦｖである、請求項６７～９５のいずれか１項に記載の組成物。
前記第２の結合ドメインが、配列番号３８３または３８７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含むＶＨ、および配列番号３８４と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含むＶＬを含む抗ＣＤ３ｓｃＦｖである、請求項６７～９５のいずれか１項に記載の組成物。
前記第２の結合ドメインが、配列番号２７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一である配列を含む抗ＣＤ３ｓｃＦｖである、請求項６７～９５のいずれか１項に記載の組成物。
各ポリペプチドが、配列番号３１の配列を含む、または配列番号３１と少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一である配列を含む、請求項６７～９５のいずれか１項に記載の組成物。
前記第１の結合ドメインが、配列番号１０のＨＣＤＲ１、配列番号１１のＨＣＤＲ２、および配列番号１２のＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号１３のＬＣＤＲ１、配列番号１４のＬＣＤＲ２、および配列番号１５のＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ１２３ｓｃＦｖであり、かつ
前記第２の結合ドメインが、配列番号１９のＨＣＤＲ１、配列番号２０のＨＣＤＲ２、および配列番号２１のＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号２２のＬＣＤＲ１、配列番号２３のＬＣＤＲ２、および配列番号２４のＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ３ｓｃＦｖである、
請求項６７～９５のいずれか１項に記載の組成物。
前記多重特異的タンパク質の分解を実質的に防ぐ、請求項６７～１００のいずれか１項に記載の組成物。
同一の貯蔵条件化でヒスチジン緩衝液中で貯蔵される同一の多重特異的ポリペプチドに比べて前記多重特異的ポリペプチドの分解を遅らせるまたは低減する、請求項６７～１０１のいずれか１項に記載の組成物。
４℃で少なくとも１年間実質的に安定である、請求項６７～１０２のいずれか１項に記載の組成物。
多重特異的タンパク質の凝集体の形成に対し実質的に耐性である、請求項６７～１０３のいずれか１項に記載の組成物。
同一の貯蔵条件化でヒスチジン緩衝液中で貯蔵される同一の多重特異的ポリペプチドに比べてより少ない凝集体を形成する、請求項６７～１０４のいずれか１項に記載の組成物。
融合タンパク質、緩衝液、賦形剤、および界面活性物質を含む組成物であって、
（ａ）前記融合タンパク質が、
（ｉ）ＣＤ１２３に特異的に結合する第１の結合ドメインであって、
配列番号１０のＨＣＤＲ１、配列番号１１のＨＣＤＲ２、および配列番号１２のＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号１３のＬＣＤＲ１、配列番号１４のＬＣＤＲ２、および配列番号１５のＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、第１の結合ドメイン、および
（ｉｉ）ＣＤ３に特異的に結合する第２の結合ドメインであって、配列番号１９のＨＣＤＲ１、配列番号２０のＨＣＤＲ２、および配列番号２１のＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号２２のＬＣＤＲ１、配列番号２３のＬＣＤＲ２、および配列番号２４のＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、第２の結合ドメイン
を含み、
（ｂ）前記緩衝液が、コハク酸エステルまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは酸を含むまたはそれからなる、
組成物。
融合タンパク質、約５ｍＭのコハク酸エステル、約６．５重量／体積（ｗ／ｖ）％のスクロースおよび約０．０２ｗ／ｖ％のポリソルベート８０を含む組成物であって、前記融合タンパク質が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｓｃＦｖｘｓｃＦｖ（ＢｉＴＥ）、ｓｃＦｖ－Ｆｃ（ＳＭＩＰ）、ｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ、クアドローマ、Ｋλボディ（Ｋλ－ｂｏｄｙ）、ｄＡｂ、ディアボディ、ナノボディ、ＤＯＣＫ－ＡＮＤ－ＬＯＣＫ（登録商標）（ＤＮＬ（登録商標））、ＣｒｏｓｓＭａｂＦａｂ、ＣｒｏｓｓＭａｂＶＨ－ＶＬ、鎖交換改変ドメインボディ（ｓｔｒａｎｄ－ｅｘｃｈａｎｇｅｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄｄｏｍａｉｎｂｏｄｙ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）、アフィボディ、フィノマー、クニッツドメイン、Ａｌｂｕ－ｄａｂ、交換されたＶＨを有する２つの改変Ｆｖフラグメント（ｔｗｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄＦｖｆｒａｇｍｅｎｔｓｗｉｔｈｅｘｃｈａｎｇｅｄＶＨｓ（例えば、二重親和性親和性再標的化分子（ｄｕａｌ－ａｆｆｉｎｉｔｙｒｅ－ｔａｒｇｅｔｉｎｇｍｏｌｅｃｕｌｅ）（Ｄ．Ａ．Ｒ．Ｔ．））、ＳＶＤ－ＩＧ、Ｃｏｖｘ－ｂｏｄｙ、ペプチボディ、ＳＶＤ－Ｉｇ、ｄＡｂ－Ｉｇ、Ｋｎｏｂ－ｉｎ－Ｈｏｌｅ、ＣＨ３ドメイン中に一致した変異を含むＩｇＧ１抗体（ＩｇＧ１ａｎｔｉｂｏｄｙｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇｍａｔｃｈｅｄｍｕｔａｔｉｏｎｉｎｔｈｅＣＨ３ｄｏｍａｉｎ）（例えば、デュオボディ抗体）およびトリオマブを含む、組成物。
融合タンパク質、約５ｍＭのコハク酸エステル、約６．５重量／体積（ｗ／ｖ）％のスクロースおよび約０．０２ｗ／ｖ％のポリソルベート８０を含む組成物であって、
（ａ）前記融合タンパク質が、
（ｉ）ＣＤ１２３に特異的に結合する第１の結合ドメインであって、
配列番号１０のＨＣＤＲ１、配列番号１１のＨＣＤＲ２、および配列番号１２のＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号１３のＬＣＤＲ１、配列番号１４のＬＣＤＲ２、および配列番号１５のＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、第１の結合ドメイン、および
（ｉｉ）ＣＤ３に特異的に結合する第２の結合ドメインであって、
配列番号１９のＨＣＤＲ１、配列番号２０のＨＣＤＲ２、および配列番号２１のＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号２２のＬＣＤＲ１、配列番号２３のＬＣＤＲ２、および配列番号２４のＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、第２の結合ドメイン
を含む、組成物。
融合タンパク質、緩衝液、賦形剤、および界面活性物質を含む組成物であって、
（ａ）前記融合タンパク質が、
（ｉ）ＣＤ１２３に特異的に結合する第１の結合ドメインであって、
配列番号１３６を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号１３４を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、第１の結合ドメイン、および
（ｉｉ）ＣＤ３に特異的に結合する第２の結合ドメインであって、
配列番号３８３または３８７を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；および配列番号３８４を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、第２の結合ドメイン
を含み、かつ
（ｂ）前記緩衝液が、コハク酸エステルまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは酸を含むまたはそれからなる、
組成物。
融合タンパク質、緩衝液、賦形剤、および界面活性物質を含む組成物であって、
（ａ）前記融合タンパク質が、
（ｉ）ＣＤ１２３に特異的に結合する第１の結合ドメインであって、配列番号１８を含む、第１の結合ドメイン、および
（ｉｉ）ＣＤ３に特異的に結合する第２の結合ドメインであって、配列番号２７を含む、第２の結合ドメインを含み、
（ｂ）前記緩衝液が、コハク酸エステルまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは酸を含むまたはそれからなる、
組成物。
融合タンパク質、緩衝液、賦形剤、および界面活性物質を含む組成物であって、
（ａ）前記融合タンパク質が、２個の同一のポリペプチドのダイマーであり、各ポリペプチドが、アミノ末端からカルボキシル末端への順で、またはカルボキシル末端からアミノ末端への順で、
（ｉ）ＣＤ１２３に特異的に結合する第１の結合ドメインであって、
配列番号１０のＨＣＤＲ１、配列番号１１のＨＣＤＲ２、および配列番号１２のＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号１３のＬＣＤＲ１、配列番号１４のＬＣＤＲ２、および配列番号１５のＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、第１の結合ドメイン、
（ｉｉ）配列番号４７のヒンジ領域、
（ｉｉｉ）配列番号１３１の免疫グロブリン定常領域、
（ｉｖ）配列番号１３２のＦｃ結合ドメインリンカー、および
（ｖ）ＣＤ３に特異的に結合する第２の結合ドメインであって、
配列番号１９のＨＣＤＲ１、配列番号２０のＨＣＤＲ２、および配列番号２１のＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号２２のＬＣＤＲ１、配列番号２３のＬＣＤＲ２、および配列番号２４のＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、第２の結合ドメイン
を含み、
（ｂ）前記緩衝液が、コハク酸エステルまたはその薬学的に許容可能な塩もしくは酸を含むまたはそれからなる、
組成物。
融合タンパク質、約５ｍＭのコハク酸エステル、約６．５重量／体積（ｗ／ｖ）％のスクロースおよび約０．０２ｗ／ｖ％のポリソルベート８０を含む組成物であって、
前記融合タンパク質が、２個の同一のポリペプチドのダイマーであり、各ポリペプチドが、アミノ末端からカルボキシル末端への順で、
（ｉ）ＣＤ１２３に特異的に結合する第１の結合ドメインであって、
配列番号１０のＨＣＤＲ１、配列番号１１のＨＣＤＲ２、および配列番号１２のＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号１３のＬＣＤＲ１、配列番号１４のＬＣＤＲ２、および配列番号１５のＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、第１の結合ドメイン、
（ｉｉ）配列番号４７のヒンジ領域、
（ｉｉｉ）配列番号１３１の免疫グロブリン定常領域、
（ｉｖ）配列番号１３２のＦｃ結合ドメインリンカー、および
（ｖ）ＣＤ３に特異的に結合する第２の結合ドメインであって、
配列番号１９のＨＣＤＲ１、配列番号２０のＨＣＤＲ２、および配列番号２１のＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号２２のＬＣＤＲ１、配列番号２３のＬＣＤＲ２、および配列番号２４のＬＣＤＲ３を含む免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、第２の結合ドメイン、
を含む、組成物。
融合タンパク質、約５ｍＭのコハク酸エステル、約６．５重量／体積（ｗ／ｖ）％のスクロースおよび約０．０２ｗ／ｖ％のポリソルベート８０を含む組成物であって、
前記融合タンパク質が、配列番号３１を含むまたはそれからなり、
約２ｍｇ／ｍｌの前記融合タンパク質を含み、
約４．８のｐＨを有する、
組成物。
それを必要としている対象において自己免疫疾患を治療するための方法であって、請求項１～１１３のいずれか１項に記載の組成物の治療的有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
前記自己免疫疾患が、過敏性腸症候群、炎症性腸疾患、乾癬、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、全身性エリテマトーデス、喘息、多発性硬化症、皮膚筋炎、多発性筋炎、悪性貧血、原発性胆汁性肝硬変、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群（ａＰＬ）、自己免疫性肝炎、１型糖尿病、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病、尋常性天疱瘡、シェーグレン症候群、側頭動脈炎、自己免疫性溶血性貧血、水疱性類天疱瘡、血管炎、セリアック病、子宮内膜症、化膿性汗腺炎、間質性膀胱炎、モルフェア、強皮症、ナルコレプシー、神経性筋強直症、白斑症、自己免疫性内耳疾患または重症筋無力症である、請求項１１４に記載の方法。
それを必要としている対象において癌を治療するための方法であって、請求項１～１１３のいずれか１項に記載の組成物の治療的有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
前記癌が、癌腫または肉腫から選択される、請求項１１６に記載の方法。
前記癌が、黒色腫、腎臓癌、膵臓癌、肺癌、腸癌、前立腺癌、乳癌、肝臓癌、脳癌、結腸癌、卵巣癌、または血液癌から選択される、請求項１１６に記載の方法。
前記血液癌が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、毛様細胞性白血病（ＨＣＬ）、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）である、請求項１１８に記載の方法。
対象において自己免疫疾患を治療するための請求項１～１１３のいずれか１項に記載の組成物の使用。
自己免疫疾患を治療するための薬物の製造における請求項１～１１３のいずれか１項に記載の組成物の使用。
対象において癌を治療するための請求項１～１１３のいずれか１項に記載の組成物の使用。
癌を治療するための薬物の製造における請求項１～１１３のいずれか１項に記載の組成物の使用。
０．３、１、３、６、９、１２、１８、２０、２４、３０、３６、４８、５０、６０、７５、または１００μｇの投与量でＩＶ注入により対象にＣＤ１２３結合ドメインおよびＣＤ３結合ドメインを含む多重特異的タンパク質を含む組成物を投与することを含む患者において癌を治療する方法。
０．３、１、３、６、９、１２、１８、２０、２４、３０、３６、４８、５０、６０、７５、または１００μｇの投与量でＩＶ注入により患者に請求項４２～４８、９３～１００、および１０８～１１１のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含む対象において癌を治療する方法。
前記第１の投与量の組成物が、２０～２４時間の期間にわたりＩＶ注入により前記患者に投与される、請求項１２４または１２５に記載の方法。
第２の投与量の前記組成物が、８時間の期間にわたりＩＶ注入により前記患者に投与され、前記第２の投与量が、前記第１の投与量と同じである、請求項１２６に記載の方法。
第３の投与量の前記組成物が、６時間の期間にわたりＩＶ注入により前記患者に投与され、前記第３の投与量が、前記第１および前記第２の投与量と同じである、請求項１２７に記載の方法。
第４の投与量およびその後の投与量の前記組成物が、約２０～約４時間の期間にわたりＩＶ注入により前記患者に投与される、請求項１２４～１２８のいずれか１項に記載の方法。
前記組成物が、最大で７２時間連続的なＩＶ注入により前記患者に投与される、請求項１２４または１２５に記載の方法。
前記組成物が、１、８、１５、および２２日目に投与される、請求項１２４～１３０のいずれか１項に記載の方法。
６μｇが、１日目に投与され、９μｇが、８日目に投与され、１２μｇが、１５日目に投与され、および１２μｇが、２２日目に投与される、請求項１３１に記載の方法。
６μｇが、１日目に投与され、９μｇが、８日目に投与され、１２μｇが、１５日目に投与され、および１８μｇが、２２日目に投与される、請求項１３１に記載の方法。
６μｇが、１日目に投与され、９μｇが、８日目に投与され、９μｇが、１５日目に投与され、および９μｇが、２２日目に投与される、請求項１３１に記載の方法。
９μｇが、１日目に投与され、１２μｇが、８日目に投与され、１２μｇが、１５日目に投与され、および１２μｇが、２２日目に投与される、請求項１３１に記載の方法。
１２μｇが、１日目に投与され、１８μｇが、８日目に投与され、１８μｇが、１５日目に投与され、および１８μｇが、２２日目に投与される、請求項１３１に記載の方法。
前記組成物が、次の毎週治療スケジュールに従ってＩＶにより患者に投与される、請求項１２４～１３０のいずれか１項に記載の方法。
１週目投与量：６μｇ；
２週目投与量：９μｇ；
３週目投与量：１２μｇ；
４週目投与量およびそれに続く週の投与量：１２μｇ。
前記組成物が、次の毎週治療スケジュールに従ってＩＶにより患者に投与される、請求項１２４～１３０のいずれか１項に記載の方法。
１週目投与量：６μｇ；
２週目投与量：９μｇ；
３週目投与量：１２μｇ；
４週目投与量およびそれに続く週の投与量：１８μｇ。
前記組成物が、次の毎週治療スケジュールに従ってＩＶにより患者に投与される、請求項１２４～１３０のいずれか１項に記載の方法。
１週目投与量：６μｇ；
２週目投与量：１２μｇ；
３週目投与量：１２μｇ；
４週目投与量およびそれに続く週の投与量：１２μｇ。
前記組成物が、次の毎週治療スケジュールに従ってＩＶにより患者に投与される、請求項１２４～１３０のいずれか１項に記載の方法。
１週目投与量：６μｇ；
２週目投与量：１２μｇ；
３週目投与量：１８μｇ；
４週目投与量およびそれに続く週の投与量：２４μｇ。
前記組成物が、次の毎週治療スケジュールに従ってＩＶにより患者に投与される、請求項１２４～１３０のいずれか１項に記載の方法。
１週目投与量：６μｇ；
２週目投与量：１２μｇ；
３週目投与量：１８μｇ；
４週目投与量およびそれに続く週の投与量：３６μｇ。
前記組成物が、次の毎週治療スケジュールに従ってＩＶにより患者に投与される、請求項１２４～１３０のいずれか１項に記載の方法。
１週目投与量：６μｇ；
２週目投与量：１２μｇ；
３週目投与量：１８μｇ；
４週目投与量およびそれに続く週の投与量：４８μｇ。
前記組成物が、次の毎週治療スケジュールに従ってＩＶにより患者に投与される、請求項１２４～１３０のいずれか１項に記載の方法。
１週目投与量：６μｇ；
２週目投与量：１２μｇ；
３週目投与量：１８μｇ；
４週目投与量およびそれに続く週の投与量：６０μｇ。
前記組成物が、次の毎週治療スケジュールに従ってＩＶにより患者に投与される、請求項１２４～１３０のいずれか１項に記載の方法。
１週目投与量：６μｇ；および
２週目投与量およびそれに続く週の投与量：９μｇ。
前記組成物が、次の毎週治療スケジュールに従ってＩＶにより患者に投与される、請求項１２４～１３０のいずれか１項に記載の方法。
１週目投与量：９μｇ；および
２週目投与量およびそれに続く週の投与量：１２μｇ。
前記組成物が、次の毎週治療スケジュールに従ってＩＶにより患者に投与される、請求項１２４～１３０のいずれか１項に記載の方法。
１週目投与量：１２μｇ；および
２週目投与量およびそれに続く週の投与量：１８μｇ。
前記組成物が、最初の２８日サイクル中に患者に投与され、６μｇの前記多重特異的タンパク質が、１日目に投与され、９μｇの前記多重特異的タンパク質が、２日目に投与され、１２μｇの前記多重特異的タンパク質が、３日目に投与され、１８μｇの前記多重特異的タンパク質が、４日目に投与され、１８μｇの前記多重特異的タンパク質が、８日目に投与され、１８μｇの前記多重特異的タンパク質が、１１日目に投与され、３６μｇの前記多重特異的タンパク質が、１５日目に投与され、かつ３６μｇの前記多重特異的タンパク質が、最初の２８日サイクルの２２日目に投与される、請求項１２４～１３０のいずれか１項に記載の方法。
少なくとも１回の追加の２８日サイクルの間に前記患者に前記多重特異的タンパク質を投与することをさらに含み、３６μｇの前記多重特異的タンパク質が、少なくとも１回の追加の２８日サイクルのそれぞれ１、８、１５、および２２日目に投与される、請求項１４７に記載の方法。
前記組成物が、最初の２８日サイクル中に患者に投与され、６μｇの前記多重特異的タンパク質が、１日目に投与され、１２μｇの前記多重特異的タンパク質が、２日目に投与され、１８μｇの前記多重特異的タンパク質が、３日目に投与され、２４μｇの前記多重特異的タンパク質が、４日目に投与され、２４μｇの前記多重特異的タンパク質が、８日目に投与され、２４μｇの前記多重特異的タンパク質が、１１日目に投与され、４８μｇの前記多重特異的タンパク質が、１５日目に投与され、かつ４８μｇの前記多重特異的タンパク質が、最初の２８日サイクルの２２日目に投与される、請求項１２４～１３０のいずれか１項に記載の方法。
少なくとも１回の追加の２８日サイクルの間に前記患者に前記多重特異的タンパク質を投与することをさらに含み、４８μｇの前記多重特異的タンパク質が、少なくとも１回の追加の２８日サイクルのそれぞれ１、８、１５、および２２日目に投与される、請求項１４９に記載の方法。
前記組成物が、最初の２８日サイクル中に患者に投与され、６μｇの前記多重特異的タンパク質が、１日目に投与され、１２μｇの前記多重特異的タンパク質が、２日目に投与され、２４μｇの前記多重特異的タンパク質が、３日目に投与され、３６μｇの前記多重特異的タンパク質が、４日目に投与され、３６μｇの前記多重特異的タンパク質が、８日目に投与され、３６μｇの前記多重特異的タンパク質が、１１日目に投与され、６０μｇの前記多重特異的タンパク質が、１５日目に投与され、かつ６０μｇの前記多重特異的タンパク質が、最初の２８日サイクルの２２日目に投与される、請求項１２４～１３０のいずれか１項に記載の方法。
少なくとも１回の追加の２８日サイクルの間に前記患者に前記多重特異的タンパク質を投与することをさらに含み、６０μｇの前記多重特異的タンパク質が、少なくとも１回の追加の２８日サイクルのそれぞれ１、８、１５、および２２日目に投与される、請求項１５１に記載の方法。
前記組成物が、最初の２８日サイクル中に患者に投与され、６μｇの前記多重特異的タンパク質が、１日目に投与され、１２μｇの前記多重特異的タンパク質が、２日目に投与され、２４μｇの前記多重特異的タンパク質が、３日目に投与され、３６μｇの前記多重特異的タンパク質が、４日目に投与され、４８μｇの前記多重特異的タンパク質が、８日目に投与され、４８μｇの前記多重特異的タンパク質が、１１日目に投与され、１００μｇの前記多重特異的タンパク質が、１５日目に投与され、かつ１００μｇの前記多重特異的タンパク質が、最初の２８日サイクルの２２日目に投与される、請求項１２４～１３０のいずれか１項に記載の方法。
少なくとも１回の追加の２８日サイクルの間に前記患者に前記多重特異的タンパク質を投与することをさらに含み、１００μｇの前記多重特異的タンパク質が、少なくとも１回の追加の２８日サイクルのそれぞれ１、８、１５、および２２日目に投与される、請求項１５３に記載の方法。
前記組成物が、ＩＶにより患者に投与され、かつ投与量が、最初の数週間毎週増大される、請求項１２４～１３０のいずれか１項に記載の方法。
前記患者が、毎週１回、２回、３回、または４回前記組成物を投与される、請求項１２４～１３０のいずれか１項に記載の方法。
前記組成物が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）の前記患者に投与される、請求項１２４～１５６のいずれか１項に記載の方法。