CN117136198A

CN117136198A - 激动性抗il-2r抗体及其使用方法

Info

Publication number: CN117136198A
Application number: CN202280025358.2A
Authority: CN
Inventors: N·特林克林; K·哈里斯; K·洛伦森; H·K·马里克乔德里; K·洛夫林
Original assignee: TeneoBio Inc
Current assignee: TeneoBio Inc
Priority date: 2021-04-02
Filing date: 2022-04-01
Publication date: 2023-11-28

Abstract

披露了抗IL2R(例如，抗IL2RB、抗IL2RG、抗IL2RB/G)抗体，以及制备此类抗体的方法，包含此类抗体的组合物、包括药物组合物，以及此类抗体和组合物在治疗由IL2/IL2R信号传导途径介导的疾病和障碍中的用途。

Description

激动性抗IL-2R抗体及其使用方法

本申请要求于2021年4月2日提交的美国临时申请号63/170,383和2021年9月1日提交的美国临时申请号63/239,883的优先权权益，这些临时申请中每一者的内容通过援用以其全文并入。

本申请含有已以ASCII格式以电子方式提交且特此通过援引以其全文并入的序列表。所述ASCII副本创建于2022年3月28日，名为60792_00054WO01_(TNO-0038-WO)_SL.txt，大小为90,527字节。

本披露涉及结合白细胞介素2(IL-2)受体(IL2R)并表现出激动活性的抗体。本披露还涉及制备此类抗体、包含此类抗体的组合物(包括药物组合物)的方法，以及此类抗体和组合物在治疗由IL2/IL2R信号传导途径介导的疾病和障碍中的用途。

尽管IL-2具有强大的免疫激活活性，并且有可能在癌症患者中诱导持久的肿瘤消退，但IL-2作为免疫治疗药物的成功受到严重的剂量限制性毒性的限制。这些不良事件很大程度上是由于表达高亲和力三聚体受体IL-2Rαβγ的细胞(例如T调节性(Treg)细胞和内皮细胞)优先摄取IL-2。本披露涉及抗体(例如，多特异性抗体、多特异性仅重链抗体、双特异性抗体、双特异性仅重链抗体)，其结合并激活通过在静息T细胞和NK细胞上表达的二聚IL-2Rβγ受体复合物的信号传导。通过避免与IL-2Rα结合，本文所述的抗体消除了天然IL-2的优先Treg激活，同时保持对其他T细胞亚群以及NK细胞的有效刺激作用。另外，本文描述的示例性抗体上Fc区的存在显著延长了体内半衰期，使其超过重组IL-2的半衰期，从而允许在治疗环境中更方便的给药方案。在小鼠和食蟹猴中进行的体内研究已经证实了本文所述的示例性抗体的体内生物活性、扩展的药代动力学和增强的安全性谱。总之，这些结果支持使用此类抗体作为安全有效的IL-2R激动剂，以及使用IL-2信号传导途径作为多种癌症的治疗方法。

利用免疫系统对抗肿瘤的能力已经牢固确立，白细胞介素2(IL-2)是近40年前首先成功用于治疗癌症的重组蛋白之一。Lotze等人,Journal of Immunology[免疫学杂志]135(4),2865-75(1985)；Rosenberg,S.A.J Immunol[免疫学杂志]192,5451–58(2014)。IL-2是免疫细胞的关键调节因子，可诱导T细胞和自然杀伤细胞(NK)的增殖。然而，IL-2是一种多效性细胞因子，还诱导免疫抑制性调节性T(Treg)细胞的增殖。Fontenot等人,NatImmunol[自然免疫学]6,1142–51(2005)。IL-2的不同功能是由不同靶细胞上表达的IL-2受体复合物亚基的组成决定的。Boyman等人,Nat Rev Immunol[自然免疫学评论]12,180–90(2012)。高亲和力IL-2受体复合物由IL-2RA(CD25)、IL-2RB(CD122)和常见γ链受体IL-2RG(CD132)构成，在CD4+FoxP3+ Treg细胞上组成型表达并在激活的T细胞上瞬时表达。Waldmann,T.A.,Nat Rev Immunol[自然免疫学评论]6,595–601(2006)。中间亲和力受体仅由IL-2RB和IL-2RG构成，在静息T细胞、CD8+记忆效应T细胞和NK细胞上表达。Choudhry,H.等人,Biomed Res Int[国际生物医学研究]2018,1–7(2018)。IL-2RA亚基不是下游JAK-STAT信号传导所必需的，但它与IL-2RB和IL-2RG的关联提供了与仅由IL-2RB和IL-2RG构成的异二聚体受体相比对IL-2高100倍的亲和力。基于这些受体结合差异和细胞特异性表达，有人提出免疫抑制性Treg作为消耗低水平IL-2的缓冲剂，并为IL-2介导的效应淋巴细胞扩增产生阈值效应。Feinerman,O.等人,Mol Syst Biol[分子系统生物学]6,437(2010)。

由于其独特的信号传导特性，低剂量IL-2已在临床上用于刺激Treg细胞来治疗自身免疫，而高剂量IL-2则被开发并批准用于治疗转移性黑色素瘤和转移性肾细胞癌，其中在7％-12％的患者中观察到持久应答。McDermott,D.F.等人,J Clin Oncol[临床肿瘤学杂志]23,133–141(2004)；Payne,R.等人,J Immunother Cancer[癌症免疫疗法杂志]2,13(2014)；Atkins,M.B.等人,J Clin Oncol[临床肿瘤学杂志]17,2105–2105(1999)；Rosenberg,S.A.等人,Ann Surg[外科学年鉴]228,307–319(1998)。然而，其半衰期短和治疗窗窄给患者安全有效地使用IL-2带来了重大挑战。具体来说，/>具有严重的副作用，包括血管渗漏综合征、低血压和肝毒性，这限制了其在癌症免疫疗法中的使用。研究表明，血管渗漏毒性与血管内皮细胞和肺内皮细胞上高亲和力IL-2R的表达相关，导致肺水肿。Krieg,C.,等人,Proc National Acad Sci[美国国家科学院院刊]107,11906–11(2010)。/>的抗肿瘤作用因其优先结合Treg细胞上的高亲和力受体而进一步受到损害，削弱了其作为抗癌疗法的功效。Schwartzentruber,D.J.等人,New Engl JMedicine[新英格兰医学杂志]364,2119–2127(2011)；Rezvani,K.等人,Blood[血液]108,1291-1297(2006)。例如，在接受高剂量IL-2疗法的黑色素瘤患者中，发现共刺激物阳性(ICOS+)Treg细胞是IL-2治疗后血液中增殖最快的淋巴细胞群，大量ICOS+ Treg细胞对应于最糟糕的患者结果。Sim,G.C.等人,J Clin Invest[临床研究杂志]124,99–110(2014)。

由于天然IL-2的多效性及其作为治疗性分子的相关局限性，人们付出了大量努力来工程改造IL-2变体，以减少剂量限制性毒性，并且从而拓宽治疗窗。Murer,P.等人,NewBiotechnol[自然生物技术]52,42–53(2019)；Arenas-Ramirez,N.等人,Trends Immunol[免疫学趋势]36,763–77(2015)。避免优先激活高亲和力IL-2R表达细胞(例如Treg和血管内皮细胞)的变体蛋白是实现这一目标的一种方法。为了创造这样的分子，其他方法包括突变IL-2上的IL-2RA结合界面，将聚乙二醇附接到IL-2蛋白上，产生合成的IL-2蛋白，以及产生阻断IL-2RA结合结构域的抗体。Silva,D.-A.等人,Nature[自然]565,186–191(2019)；Charych,D.H.等人,Clin Cancer Res[临床癌症研究]22,680–690(2016)；Arenas-Ramirez,N.等人,Sci Transl Med[科学转化医学]8,367ra166-367ra166(2016)；Levin,A.M.等人,Nature[自然]484,529–533(2012)；Lopes,J.E.等人,J Immunother Cancer[癌症免疫疗法杂志]8,e000673(2020)。作为IL-2的替代品，其他人已经工程改造了与IL-2RB/IL-2RG亚基结合的IL-15变体。IL-15特异性受体亚基天然地与来自抗原呈递细胞的IL-15反式结合；因此，活性IL-15重组蛋白需要表达IL-15和受体亚基的单链构建体。Bernett,M.J.等人摘要5565:Potency-reduced IL15/IL15Rαheterodimeric Fc-fusions displayenhanced in vivo activity through increased exposure.[效力降低的IL15/IL15Rα异二聚体Fc-融合体通过增加暴露而显示增强的体内活性]5565–5565(2018)doi:10.1158/1538-7445.am2018-5565。突变的细胞因子也已与抗体或Fc结构域融合，以增加分子的体内半衰期，并将细胞因子定位于肿瘤部位。Murer,P.等人,New Biotechnol[自然生物技术]52,42–53(2019)；Klein,C.等人,Oncoimmunology[肿瘤免疫学]6:3e1277306(2017)；Schliemann,C.等人,Blood[血液]120,3716–3716(2012)。虽然其中一些工程改造的蛋白具有所期望的功能活性，但许多蛋白都存在高水平的体内免疫原性，并对体内稳定性和制造提出了挑战。Brummelen,E.M.J.van等人,Oncotarget[肿瘤靶标]9,24737–49(2018)；Groot,A.S.D.等人,Trends Immunol[免疫学趋势]28,482–90(2007)；Schellekens,H.,Nephrol Dial Transpl[肾脏透析移植]18,1257–59(2003)；Verhoef,J.J.F.,等人,DrugDiscov Today[今日药物发现]19,1945-52(2014)。因此，创造一种具有所期望生物活性、安全性谱和理想类药特性的IL-2途径抗肿瘤激动剂仍然是该领域的重大挑战。

本披露的分子将抗体的有利的类药特性与促进IL-2RB和IL-2RG相关联和下游信号传导的分子的功能行为相组合。本披露的方面包括抗体序列，例如完全人抗体序列，例如完全人多特异性(例如双特异性)抗体，其同时结合IL-2RB和IL-2RG亚基并因此模拟IL-2的活性同时避免结合IL-2RA。除了表现出免疫效应细胞所期望的激活和扩增之外，本文所述的双特异性IL-2RB/G激动剂抗体在体外和体内还避免了抑制性Treg的优先扩增。

非限制性示例实施例(第1组)

非限制性地，本披露的一些示例实施例/特征包括：

1.一种结合IL2RB的抗体，该抗体包含重链可变区，该重链可变区包含：

(a)在SEQ ID NO:1-3的任一个中具有两个或更少取代(例如，0、1或2个)的CDR1序列；和/或

(b)在SEQ ID NO:4-6的任一个中具有两个或更少取代(例如，0、1或2个)的CDR2序列；和/或

(c)在SEQ ID NO:7-10的任一个中具有两个或更少取代(例如，0、1或2个)的CDR3序列。

2.如特征1所述的抗体，其包含：

(a)包含SEQ ID NO:1-3中任一个的CDR1序列；和/或

(b)包含SEQ ID NO:4-6中任一个的CDR2序列；和/或

(c)包含SEQ ID NO:7-10中任一个的CDR3序列。

3.如特征1或2所述的抗体，其包含：

(a)包含SEQ ID NO:1-3中任一个的CDR1序列；以及

(b)包含SEQ ID NO:4-6中任一个的CDR2序列；以及

(c)包含SEQ ID NO:7-10中任一个的CDR3序列。

4.如特征1-3中任一项所述的抗体，其包含：

(a)SEQ ID NO:1的CDR1序列、SEQ ID NO:4的CDR2序列和SEQ ID NO:7的CDR3序列；或

(b)SEQ ID NO:1的CDR1序列、SEQ ID NO:4的CDR2序列和SEQ ID NO:8的CDR3序列；或

(c)SEQ ID NO:2的CDR1序列、SEQ ID NO:5的CDR2序列和SEQ ID NO:9的CDR3序列；或

(d)SEQ ID NO:3的CDR1序列、SEQ ID NO:6的CDR2序列和SEQ ID NO:10的CDR3序列。

5.如特征1-4中任一项所述的抗体，其包含与SEQ ID NO:11-14中任一个具有至少95％序列同一性的重链可变区。

6.如特征1-5中任一项所述的抗体，其包含选自SEQ ID NO:11-14的重链可变区序列。

7.一种结合IL2RB的抗体，该抗体包含重链可变区，该重链可变区包含：

(a)包含下式的CDR1序列：

G G S I S S S X1 W(SEQ ID NO:26)

其中X1是D或N；

(b)包含下式的CDR2序列：

I X2 H S G S T(SEQ ID NO:27)

其中X2是D或S；以及

(c)包含下式的CDR3序列：

X3 R G X4 W E L X5 D A F D I(SEQ ID NO:28)

其中，X3是G或A；

X4是S或Q；以及

X5是S或T。

8.一种结合IL2RB的抗体，该抗体包含重链可变区，该重链可变区包含：

(a)包含下式的CDR1序列：

G F T F S X1 Y G(SEQ ID NO:29)

其中X1是S或T；

(b)包含下式的CDR2序列：

I S Y D G S N X2(SEQ ID NO:30)

其中X2是K或R；以及

(c)包含下式的CDR3序列：

A R D L D Y D X3 L T G D P V G G F D I(SEQ ID NO:31)

其中X3是V或I。

9.一种结合IL2RG的抗体，该抗体包含重链可变区，该重链可变区包含：

(a)在SEQ ID NO:15-16的任一个中具有两个或更少取代(例如，0、1或2个)的CDR1序列；和/或

(b)在SEQ ID NO:17-19的任一个中具有两个或更少取代(例如，0、1或2个)的CDR2序列；和/或

(c)在SEQ ID NO:20-21的任一个中具有两个或更少取代(例如，0、1或2个)的CDR3序列。

10.如特征9所述的抗体，其包含：

(a)包含SEQ ID NO:15-16中任一个的CDR1序列；和/或

(b)包含SEQ ID NO:17-19中任一个的CDR2序列；和/或

(c)包含SEQ ID NO:20-21中任一个的CDR3序列。

11.如特征9或10所述的抗体，其包含：

(a)包含SEQ ID NO:15-16中任一个的CDR1序列；以及

(b)包含SEQ ID NO:17-19中任一个的CDR2序列；以及

(c)包含SEQ ID NO:20-21中任一个的CDR3序列。

12.如特征9-11中任一项所述的抗体，其包含：

(a)SEQ ID NO:15的CDR1序列、SEQ ID NO:17的CDR2序列和SEQ ID NO:20的CDR3序列；或

(b)SEQ ID NO:15的CDR1序列、SEQ ID NO:18的CDR2序列和SEQ ID NO:20的CDR3序列；或

(c)SEQ ID NO:16的CDR1序列、SEQ ID NO:18的CDR2序列和SEQ ID NO:20的CDR3序列；或

(d)SEQ ID NO:15的CDR1序列、SEQ ID NO:19的CDR2序列和SEQ ID NO:21的CDR3序列。

13.如特征9-12中任一项所述的抗体，其包含与SEQ ID NO:22-25中任一个具有至少95％序列同一性的重链可变区。

14.如特征9-13中任一项所述的抗体，其包含选自SEQ ID NO:22-25的重链可变区序列。

15.一种结合IL2RG的抗体，该抗体包含重链可变区，该重链可变区包含：

(a)包含下式的CDR1序列：

G F X1 X2 X3 X4 Y Y(SEQ ID NO:32)

其中，X1是T或I；

X2是F或V；

X3是S、N或G；以及

X4是D或N；

(b)包含下式的CDR2序列：

I S X5 S G X6 X7 I(SEQ ID NO:33)

其中，X5是S或N；

X6是D、S、G或N；以及

X7是T或I；以及

(c)包含序列ARGDAVSITGDY(SEQ ID NO:20)的CDR3序列。

16.如特征1-15中任一项所述的抗体，其中该CDR1、CDR2和CDR3序列存在于人VH框架中。

17.如特征1-16中任一项所述的抗体，其中该抗体是多特异性的。

18.如特征1-17中任一项所述的抗体，其中该抗体是双特异性的。

19.如特征1-18中任一项所述的抗体，其中该抗体结合IL2RB和IL2RG。

20.一种抗体，其包含：

结合IL2RB的第一重链可变区，该第一重链可变区包含：

SEQ ID NO:1的CDR1序列；

SEQ ID NO:4的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:7的CDR3序列；以及

结合IL2RG的第二重链可变区，该第二重链可变区包含：

SEQ ID NO:15的CDR1序列；

SEQ ID NO:17的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:20的CDR3序列。

21.如特征20所述的抗体，其中该第一重链可变区与SEQ ID NO:11具有至少95％序列同一性，并且该第二重链可变区与SEQ ID NO:22具有至少95％序列同一性。

22.如特征20或21所述的抗体，其中该第一重链可变区包含SEQ ID NO:11，并且该第二重链可变区包含SEQ ID NO:22。

23.如特征20-22中任一项所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:53的第一多肽和含有SEQ ID NO:61的第二多肽。

24.一种抗体，其包含：

结合IL2RB的第一重链可变区，该第一重链可变区包含：

SEQ ID NO:1的CDR1序列；

SEQ ID NO:4的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:8的CDR3序列；以及

结合IL2RG的第二重链可变区，该第二重链可变区包含：

SEQ ID NO:15的CDR1序列；

SEQ ID NO:18的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:20的CDR3序列。

25.如特征24所述的抗体，其中该第一重链可变区与SEQ ID NO:12具有至少95％序列同一性，并且该第二重链可变区与SEQ ID NO:23具有至少95％序列同一性。

26.如特征24或25所述的抗体，其中该第一重链可变区包含SEQ ID NO:12，并且该第二重链可变区包含SEQ ID NO:23。

27.如特征24-26中任一项所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:62的第一多肽和含有SEQ ID NO:63的第二多肽。

28.一种抗体，其包含：

结合IL2RB的第一重链可变区，该第一重链可变区包含：

SEQ ID NO:2的CDR1序列；

SEQ ID NO:5的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:9的CDR3序列；以及

结合IL2RG的第二重链可变区，该第二重链可变区包含：

SEQ ID NO:15的CDR1序列；

SEQ ID NO:18的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:20的CDR3序列。

29.如特征28所述的抗体，其中该第一重链可变区与SEQ ID NO:13具有至少95％序列同一性，并且该第二重链可变区与SEQ ID NO:23具有至少95％序列同一性。

30.如特征28或29所述的抗体，其中该第一重链可变区包含SEQ ID NO:13，并且该第二重链可变区包含SEQ ID NO:23。

31.如特征28-30中任一项所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:64的第一多肽和含有SEQ ID NO:65的第二多肽。

32.一种抗体，其包含：

结合IL2RB的第一重链可变区，该第一重链可变区包含：

SEQ ID NO:3的CDR1序列；

SEQ ID NO:6的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:10的CDR3序列；以及

结合IL2RG的第二重链可变区，该第二重链可变区包含：

SEQ ID NO:15的CDR1序列；

SEQ ID NO:17的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:20的CDR3序列。

33.如特征32所述的抗体，其中该第一重链可变区与SEQ ID NO:14具有至少95％序列同一性，并且该第二重链可变区与SEQ IDNO:22具有至少95％序列同一性。

34.如特征32或33所述的抗体，其中该第一重链可变区包含SEQ ID NO:14，并且该第二重链可变区包含SEQ ID NO:22。

35.如特征32-34中任一项所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:66的第一多肽和含有SEQ ID NO:67的第二多肽。

36.一种抗体，其包含：

结合IL2RB的第一重链可变区，该第一重链可变区包含：

SEQ ID NO:1的CDR1序列；

SEQ ID NO:4的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:8的CDR3序列；以及

结合IL2RG的第二重链可变区，该第二重链可变区包含：

SEQ ID NO:16的CDR1序列；

SEQ ID NO:18的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:20的CDR3序列。

37.如特征36所述的抗体，其中该第一重链可变区与SEQ ID NO:12具有至少95％序列同一性，并且该第二重链可变区与SEQ ID NO:24具有至少95％序列同一性。

38.如特征36或37所述的抗体，其中该第一重链可变区包含SEQ ID NO:12，并且该第二重链可变区包含SEQ ID NO:24。

39.如特征36-38中任一项所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:34的第一多肽和含有SEQ ID NO:35的第二多肽。

40.一种抗体，其包含：

结合IL2RB的第一重链可变区，该第一重链可变区包含：

SEQ ID NO:1的CDR1序列；

SEQ ID NO:4的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:8的CDR3序列；以及

结合IL2RG的第二重链可变区，该第二重链可变区包含：

SEQ ID NO:15的CDR1序列；

SEQ ID NO:19的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:21的CDR3序列。

41.如特征40所述的抗体，其中该第一重链可变区与SEQ ID NO:12具有至少95％序列同一性，并且该第二重链可变区与SEQ ID NO:25具有至少95％序列同一性。

42.如特征40或41所述的抗体，其中该第一重链可变区包含SEQ ID NO:12，并且该第二重链可变区包含SEQ ID NO:25。

43.如特征40-42中任一项所述的抗体，其包含含有SEQ ID NO:36的第一多肽和含有SEQ ID NO:37的第二多肽。

44.如特征20、24、28、32、36或40中任一项所述的抗体，其中该第一重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3序列存在于VH人框架中。

45.如特征20、24、28、32、36、40或44中任一项所述的抗体，其中该第二重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3序列存在于VH人框架中。

46.如特征1-22、24-26、28-30、32-34、36-38、40-42、44或45中任一项所述的抗体，其中该抗体包含Fc区。

47.如特征46所述的抗体，其中该Fc区是变体Fc区。

48.如特征47所述的抗体，其中该变体Fc区与天然序列Fc区至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％)同源。

49.如特征47或48所述的抗体，其中该变体Fc区包含异二聚化改变。

50.如特征49所述的抗体，其中该异二聚化改变包括以下杵臼取代(例如，在变体IgG1 Fc区中，1)一条链中的Y407T和另一条链中的T366Y；2)一条链中的Y407A和另一条链中的T366W；3)一条链中的F405A和另一条链中的T394W；4)一条链中的F405W和另一条链中的T394S；5)一条链中的Y407T和另一条链中的T366Y；6)一条链中的T366Y和F405A和另一条链中的T394W和Y407T；7)一条链中的T366W和F405W和另一条链中的T394S和Y407A；8)一条链中的F405W和Y407A和另一条链中的T366W和T394S；或9)Fc的一个多肽中的T366W和另一个中的T366S、L368A和Y407V)。

51.如特征49或50所述的抗体，其中该异二聚化改变包含产生新的二硫键的以下取代(例如，在变体IgG1 Fc区中，1)一条Fc多肽链中的Y349C和另一条中的S354C；2)一条Fc多肽链中的Y349C和另一条Fc多肽链中的E356C；3)一条Fc多肽链中的Y349C和另一条Fc多肽链中的E357C；4)一条Fc多肽链中的L351C和另一条中的S354C；5)一条Fc多肽链中的T394C和另一条中的E397C；或6)一条Fc多肽链中的D399C和另一条中的K392C)。

52.如特征49-51中任一项所述的抗体，其中该异二聚化改变包括以下电荷对取代(例如，1)一条链中的K409E加上另一条链中的D399K；2)一条链中的K409E加上另一条链中的D399R；3)一条链中的K409D加上另一条链中为D399K；4)一条链中的K409D加上另一条链中为D399R；5)一条链中的K392E加上另一条链中的D399R；6)一条链中的K392E加上另一条链中为D399K；7)一条链中的K392D加上另一链中的D399R；8)一条链中的K392D加上另一条链中为D399K；9)一条链中的K409D和K360D加上另一条链中的D399K和E356K；10)一条链中的K409D和K370D加上另一条链中的D399K和E357K；11)一条链中的K409D和K392D加上另一条链中的D399K、E356K和E357K；12)一条链条中的K409D和K392D加上另一条链条中的D399K；13)一条链中的K409D和K392D加上另一条链中的D399K和E356K；14)一条链中的K409D和K392D加上另一条链中的D399K和D357K；15)一条链条中的K409D和K370D加上另一条链条中的D399K和D357K；16)一条链条中的D399K加上另一条链条中的K409D和K360D；或17)一条链条中的K409D和K439D加上另一条链条中的D399K和E356K)。

53.如特征47-52中任一项所述的抗体，其中该变体Fc区是沉默的Fc区。

54.如特征53所述的抗体，其中该沉默的Fc区包含根据EU编号的Fc区残基238、265、269、270、297、327和329中的一个或多个(例如，两个或更多个)的取代。

55.如特征53或54所述的抗体，其中该沉默的Fc区包含改变糖基化的取代。

56.如特征53-55中任一项所述的抗体，其中该沉默的Fe区包含无效应子突变(例如，CH2区中的N297A、N297G、DANA突变(D265A+N297A)或DANG突变(D265A+N297G))和/或K322A和L234A/L235A突变。

57.如特征1-22、24-26、28-30、32-34、36-38、40-42或44-56中任一项所述的抗体，其中该抗体包含CH1序列不存在的重链恒定区序列。

58.如特征1-22、24-26、28-30、32-34、36-38、40-42或44-57中任一项所述的抗体，其中该抗体包含重链恒定区，该重链恒定区包含铰链区、CH2结构域和CH3结构域。

59.如特征58所述的抗体，其中该铰链区包含野生型人IgG4铰链区序列(SEQ IDNO:54)。

60.如特征58所述的抗体，其中该铰链区包含含有S228P突变的变体人IgG4铰链区序列(SEQ ID NO:55)。

61.如特征58-60中任一项所述的抗体，其中该CH2结构域包含野生型人IgG4 CH2结构域序列(SEQ ID NO:56)。

62.如特征58-61中任一项所述的抗体，其中该CH2结构域包含含有F234A突变、L235A突变、或F234A突变和L235A突变二者的变体人IgG4 CH2结构域。

63.如特征58-62中任一项所述的抗体，其中该CH3结构域包含野生型人IgG4 CH3结构域序列(SEQ ID NO:58)。

64.如特征58-62中任一项所述的抗体，其中该CH3结构域包含含有T366W突变的变体人IgG4 CH3结构域序列。

65.如特征58-62中任一项所述的抗体，其中该CH3结构域包含含有T366S、L368A突变和Y407V突变的变体人IgG4 CH3结构域序列。

66.如特征1-65中任一项所述的抗体，其中该抗体是人抗体。

67.如特征1-66中任一项所述的抗体，其中该抗体是分离的抗体。

68.如特征1-67中任一项所述的抗体，其中该抗体是完整的IgG分子。

69.如特征1-68中任一项所述的抗体，其中该抗体是完整的IgG1分子。

70.如特征1-68中任一项所述的抗体，其中该抗体是完整的IgG2分子。

71.如特征1-68中任一项所述的抗体，其中该抗体是完整的IgG4分子。

72.如特征1-67中任一项所述的抗体，其中该抗体是完整IgG分子的免疫活性部分。

73.如特征1-67中任一项所述的抗体，其中该抗体是完整IgG1分子的免疫活性部分。

74.如特征1-67中任一项所述的抗体，其中该抗体是完整IgG2分子的免疫活性部分。

75.如特征1-67中任一项所述的抗体，其中该抗体是完整IgG4分子的免疫活性部分。

76.如特征1-67中任一项所述的抗体，其中该抗体是三链抗体样分子。

77.如特征1-67中任一项所述的抗体，其中该抗体是仅重链抗体。

78.如特征1-77中任一项所述的抗体，其中该抗体具有约55℃至约65℃的Tm。

79.如特征1-78中任一项所述的抗体，其中该抗体具有约55℃至约65℃的Tagg。

80.如特征1-79中任一项所述的抗体，其中该抗体对IL2R具有亲和力，其Kd为约10^-11M至大约10^-6M(例如，约10^-10M至大约10^-6M；约10^-9M至大约10^-6M；约10^-8M至大约10^-6M；约10^-11M至大约10^-8M；约10^-10M至大约10^-8M；约10^-9M至大约10^-8M；约10^-11M至大约10^-9M；约10^- ¹⁰M至大约10^-9M)。

81.如特征1-80中任一项所述的抗体，其中该抗体对IL2RB具有亲和力，其Kd为约10^-8M至大约2.5x10^-7M。

82.如特征1-81中任一项所述的抗体，其中该抗体对IL2RG具有亲和力，其Kd为约10^-9M至大约2.5x10^-8M。

83.如特征80-82中任一项所述的抗体，其中Kd使用ForteBio Octet Qk384仪器以动力学模式测量。

84.如特征80-83中任一项所述的抗体，其中Kd使用包含抗人Fc捕获(AHC，18-5005)传感器的ForteBio Octet Qk384仪器以动力学模式测量。

85.如特征80-82中任一项所述的抗体，其中Kd根据本文实例中描述的方法测量。

86.如特征1-85中任一项所述的抗体，其中该抗体充当IL2受体β/γ激动剂。

87.一种药物组合物，其包含：

如特征1-86中任一项所述的抗体；以及

药学上可接受的赋形剂。

88.如特征87所述的药物组合物，其中该药物组合物适合于静脉内递送。

89.如特征87所述的药物组合物，其中该药物组合物适合于皮下递送。

90.一种多核苷酸，其编码如特征1-86中任一项所述的抗体。

91.一种载体，其包含如特征90所述的多核苷酸。

92.一种细胞(例如，CHO细胞)，其包含如特征91所述的载体。

93.一种产生如特征1-86中任一项所述的抗体的方法，该方法包括：

在允许该抗体表达的条件下培养根据特征92所述的细胞(例如，CHO细胞)；以及

从该细胞和/或该细胞生长的细胞培养基中分离该抗体。

94.一种制备如特征1-86中任一项所述的抗体的方法，该方法包括用IL2R免疫转基因动物(例如，转基因大鼠、UniRat^TM动物)并鉴定IL2R结合性重链序列。

95.一种用于治疗有需要的个体的疾病或障碍的试剂盒，该试剂盒包含：

如特征1-86中任一项所述的抗体，或如特征87-89中任一项所述的药物组合物；以及

使用说明书。

96.如特征95所述的试剂盒，其进一步包含至少一种另外的试剂。

97.如特征96所述的试剂盒，其中该至少一种另外的试剂包括化疗药物。

98.一种治疗疾病或障碍的方法，该方法包括向有需要的个体施用有效剂量的如特征1-86中任一项所述的抗体或如特征87-89中任一项所述的药物组合物。

99.如特征98所述的方法，其中该抗体或药物组合物与另一个疗程联合施用。

100.如特征98或99所述的方法，其中该抗体或药物组合物与化疗方案联合施用。

101.如特征1-86中任一项所述的抗体在制备用于治疗有需要的个体中的疾病或障碍的药物中的用途。

102.如特征101所述的用途，其中该药物旨在与另一个疗程联合施用。

103.如特征101或102所述的用途，其中该药物旨在与化疗方案联合施用。

104.如特征1-86中任一项所述的抗体或如特征87-89中任一项所述的药物组合物，用于治疗有需要的个体中的疾病或障碍。

105.如特征104所述使用的抗体或药物组合物，其中该抗体或药物组合物旨在与另一个疗程联合使用。

106.如特征104所述使用的抗体或药物组合物，其中该抗体或药物组合物旨在与化疗方案联合使用。

107.如特征95-106中任一项所述的试剂盒、方法、用途、用于使用的抗体、或用于使用的药物组合物，其中该疾病或障碍是癌症。

108.如特征107所述的试剂盒、方法、用途、用于使用的抗体、或用于使用的药物组合物，其中该癌症是晚期或转移性癌症。

109.如特征107或108所述的试剂盒、方法、用途、用于使用的抗体、或用于使用的药物组合物，其中该癌症是实体瘤癌症。

110.如特征109所述的试剂盒、方法、用途、用于使用的抗体、或用于使用的药物组合物，其中该实体瘤癌症选自肾细胞癌、黑色素瘤、尿路上皮癌、三阴性乳腺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、结直肠癌、肉瘤、头颈部鳞状细胞癌和转移性去势抵抗性前列腺癌。

111.如特征107或108所述的试剂盒、方法、用途、用于使用的抗体、或用于使用的药物组合物，其中该癌症是液体癌症。

112.如特征111所述的试剂盒、方法、用途、用于使用的抗体、或用于使用的药物组合物，其中该液体癌症是多发性骨髓瘤或急性髓性白血病。

113.一种用于刺激免疫细胞中的IL2R信号传导的方法，该方法包括使该免疫细胞与如特征1-86中任一项所述的抗体或如特征87-89中任一项所述的药物组合物接触。

114.一种用于刺激免疫细胞上的IL2RB/IL2RG二聚体受体复合物的方法，该方法包括使该免疫细胞与如特征1-86中任一项所述的抗体或如特征87-89中任一项所述的药物组合物接触。

115.如特征113或114所述的方法，其中该免疫细胞选自CD4+T细胞、CD8+ T细胞和自然杀伤(NK)细胞。

116.如特征1-86中任一项所述的抗体在制备用于刺激有需要的个体的免疫细胞中的IL2R信号传导的药物中的用途。

117.如特征1-86中任一项所述的抗体在制备用于刺激有需要的个体的免疫细胞上的IL2RB/IL2RG二聚体受体复合物的药物中的用途。

118.如特征116或117所述的用途，其中该免疫细胞选自CD4+T细胞、CD8+ T细胞和自然杀伤(NK)细胞。

119.如特征1-86中任一项所述的抗体或如特征87-89中任一项所述的药物组合物，用于刺激免疫细胞中的IL2R信号传导的方法中。

120.如特征1-86中任一项所述的抗体或如特征87-89中任一项所述的药物组合物，用于刺激免疫细胞上的IL2RB/IL2RG二聚体受体复合物的方法中。

121.如特征119或120所述使用的抗体或药物组合物，其中该免疫细胞选自CD4+ T细胞、CD8+ T细胞和自然杀伤(NK)细胞。

非限制性示例实施例(第2组)

非限制性地，本披露的一些示例实施例/条款包括：

1.一种结合IL2RB的仅重链抗体，其包含重链可变区，该重链可变区包含：

(a)在SEQ ID NO:1-3的任一个中具有两个或更少取代的CDR1序列；和/或

(b)在SEQ ID NO:4-6的任一个中具有两个或更少取代的CDR2序列；和/或

(c)在SEQ ID NO:7-10的任一个中具有两个或更少取代的CDR3序列。

2.如条款1所述的仅重链抗体，其中所述CDR1、CDR2和CDR3序列存在于人VH框架中。

3.如条款1或2所述的仅重链抗体，其进一步包含CH1序列不存在的重链恒定区序列。

4.如条款1-3中任一项所述的仅重链抗体，其包含：

(a)包含SEQ ID NO:1-3中任一个的CDR1序列；和/或

(b)包含SEQ ID NO:4-6中任一个的CDR2序列；和/或

(c)包含SEQ ID NO:7-10中任一个的CDR3序列。

5.如条款4所述的仅重链抗体，其包含：

(a)包含SEQ ID NO:1-3中任一个的CDR1序列；以及

(b)包含SEQ ID NO:4-6中任一个的CDR2序列；以及

(c)包含SEQ ID NO:7-10中任一个的CDR3序列。

6.如条款5所述的仅重链抗体，其包含：

7.如条款1-5中任一项所述的仅重链抗体，其包含与SEQ ID NO:11-14中任一个具有至少95％序列同一性的重链可变区。

8.如条款7所述的仅重链抗体，其包含选自由SEQ ID NO:11-14组成的组的重链可变区序列。

9.一种结合IL2RB的仅重链抗体，其包含重链可变区，该重链可变区包含：

(a)包含下式的CDR1序列：

G G S I S S S X1 W(SEQ ID NO:26)

其中X1是D或N；

(b)包含下式的CDR2序列：

I X2 H S G S T(SEQ ID NO:27)

其中X2是D或S；以及

(c)包含下式的CDR3序列：

X3 R G X4 W E L X5 D A F D I(SEQ ID NO:28)

其中，X3是G或A；

X4是S或Q；以及

X5是S或T。

10.一种结合IL2RB的仅重链抗体，其包含重链可变区，该重链可变区包含：

(a)包含下式的CDR1序列：

G F T F S X1 Y G(SEQ ID NO:29)

其中X1是S或T；

(b)包含下式的CDR2序列：

I S Y D G S N X2(SEQ ID NO:30)

其中X2是K或R；以及

(c)包含下式的CDR3序列：

A R D L D Y D X3 L T G D P V G G F D I(SEQ ID NO:31)

其中X3是V或I。

11.如条款9-10中任一项所述的仅重链抗体，其中该CDR1、CDR2和CDR3序列存在于VH人框架中。

12.一种结合IL2RG的仅重链抗体，其包含重链可变区，该重链可变区包含：

(a)在SEQ ID NO:15-16的任一个中具有两个或更少取代的CDR1序列；和/或

(b)在SEQ ID NO:17-19的任一个中具有两个或更少取代的CDR2序列；和/或

(c)在SEQ ID NO:20-21的任一个中具有两个或更少取代的CDR3序列。

13.如条款12所述的仅重链抗体，其中所述CDR1、CDR2和CDR3序列存在于人VH框架中。

14.如条款12或13所述的仅重链抗体，其进一步包含CH1序列不存在的重链恒定区序列。

15.如条款12-14中任一项所述的仅重链抗体，其包含：

(a)包含SEQ ID NO:15-16中任一个的CDR1序列；和/或

(b)包含SEQ ID NO:17-19中任一个的CDR2序列；和/或

(c)包含SEQ ID NO:20-21中任一个的CDR3序列。

16.如条款15所述的仅重链抗体，其包含：

(a)包含SEQ ID NO:15-16中任一个的CDR1序列；以及

(b)包含SEQ ID NO:17-19中任一个的CDR2序列；以及

(c)包含SEQ ID NO:20-21中任一个的CDR3序列。

17.如条款16所述的仅重链抗体，其包含：

18.如条款12-16中任一项所述的仅重链抗体，其包含与SEQ ID NO:22-25中任一个具有至少95％序列同一性的重链可变区。

19.如条款18所述的仅重链抗体，其包含选自由SEQ ID NO:22-25组成的组的重链可变区序列。

20.一种结合IL2RG的仅重链抗体，其包含重链可变区，该重链可变区包含：

(a)包含下式的CDR1序列：

G F X1 X2 X3 X4 Y Y(SEQ ID NO:32)

其中，X1是T或I；

X2是F或V；

X3是S、N或G；以及

X4是D或N；

(b)包含下式的CDR2序列：

I S X5 S G X6 X7 I(SEQ ID NO:33)

其中，X5是S或N；

X6是D、S、G或N；以及

X7是T或I；以及

(c)包含序列ARGDAVSITGDY(SEQ ID NO:20)的CDR3序列。

21.如条款20所述的仅重链抗体，其中该CDR1、CDR2和CDR3序列存在于VH人框架中。

22.如条款1-21中任一项所述的仅重链抗体，其是多特异性的。

23.如条款22所述的仅重链抗体，其是双特异性的。

24.如条款22或23所述的仅重链抗体，其结合IL2RB和IL2RG。

25.如条款1-24中任一项所述的仅重链抗体，其进一步包含包含铰链区、CH2结构域和CH3结构域的重链恒定区。

26.如条款25所述的仅重链抗体，其中该铰链区包含野生型人IgG4铰链区序列(SEQ ID NO:54)。

27.如条款25所述的仅重链抗体，其中该铰链区包含含有S228P突变的变体人IgG4铰链区序列(SEQ ID NO:55)。

28.如条款25-27中任一项所述的仅重链抗体，其中该CH2结构域包含野生型人IgG4 CH2结构域序列(SEQ ID NO:56)。

29.如条款25-27中任一项所述的仅重链抗体，其中该CH2结构域包含变体人IgG4CH2结构域，该结构域包含F234A突变、L235A突变、或F234A突变和L235A突变两者。

30.如条款25-29中任一项所述的仅重链抗体，其中该CH3结构域包含野生型人IgG4 CH3结构域序列(SEQ ID NO:58)。

31.如条款25-29中任一项所述的仅重链抗体，其中该CH3结构域包含含有T366W突变的变体人IgG4 CH3结构域序列。

32.如条款25-29中任一项所述的仅重链抗体，其中该CH3结构域包含含有T366S、L368A突变和Y407V突变的变体人IgG4 CH3结构域序列。

33.如条款22-32中任一项所述的仅重链抗体，其充当IL2受体β/γ激动剂。

34.一种双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体，其包含：

结合IL2RB的第一重链可变区，该第一重链可变区包含：

SEQ ID NO:1的CDR1序列；

SEQ ID NO:4的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:7的CDR3序列；以及

结合IL2RG的第二重链可变区，该第二重链可变区包含：

SEQ ID NO:15的CDR1序列；

SEQ ID NO:17的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:20的CDR3序列。

35.如条款34所述的抗体，其中该第一重链可变区与SEQ IDNO:11具有至少95％序列同一性，并且该第二重链可变区与SEQ ID NO:22具有至少95％序列同一性。

36.如条款35所述的抗体，其中该第一重链可变区包含SEQ ID NO:11，并且该第二重链可变区包含SEQ ID NO:22。

37.如条款36所述的抗体，其包含包含SEQ ID NO:53的第一多肽和包含SEQ IDNO:61的第二多肽。

38.一种双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体，其包含：

结合IL2RB的第一重链可变区，该第一重链可变区包含：

SEQ ID NO:1的CDR1序列；

SEQ ID NO:4的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:8的CDR3序列；以及

结合IL2RG的第二重链可变区，该第二重链可变区包含：

SEQ ID NO:15的CDR1序列；

SEQ ID NO:18的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:20的CDR3序列。

39.如条款38所述的抗体，其中该第一重链可变区与SEQ ID NO:12具有至少95％序列同一性，并且该第二重链可变区与SEQ ID NO:23具有至少95％序列同一性。

40.如条款39所述的抗体，其中该第一重链可变区包含SEQ ID NO:12，并且该第二重链可变区包含SEQ ID NO:23。

41.如条款40所述的抗体，其包含包含SEQ ID NO:62的第一多肽和包含SEQ IDNO:63的第二多肽。

42.一种双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体，其包含：

结合IL2RB的第一重链可变区，该第一重链可变区包含：

SEQ ID NO:2的CDR1序列；

SEQ ID NO:5的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:9的CDR3序列；以及

结合IL2RG的第二重链可变区，该第二重链可变区包含：

SEQ ID NO:15的CDR1序列；

SEQ ID NO:18的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:20的CDR3序列。

43.如条款42所述的抗体，其中该第一重链可变区与SEQ ID NO:13具有至少95％序列同一性，并且该第二重链可变区与SEQ ID NO:23具有至少95％序列同一性。

44.如条款43所述的抗体，其中该第一重链可变区包含SEQ ID NO:13，并且该第二重链可变区包含SEQ ID NO:23。

45.如条款44所述的抗体，其包含包含SEQ ID NO:64的第一多肽和包含SEQ IDNO:65的第二多肽。

46.一种双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体，其包含：

结合IL2RB的第一重链可变区，该第一重链可变区包含：

SEQ ID NO:3的CDR1序列；

SEQ ID NO:6的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:10的CDR3序列；以及

结合IL2RG的第二重链可变区，该第二重链可变区包含：

SEQ ID NO:15的CDR1序列；

SEQ ID NO:17的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:20的CDR3序列。

47.如条款46所述的抗体，其中该第一重链可变区与SEQ ID NO:14具有至少95％序列同一性，并且该第二重链可变区与SEQ ID NO:22具有至少95％序列同一性。

48.如条款47所述的抗体，其中该第一重链可变区包含SEQ ID NO:14，并且该第二重链可变区包含SEQ ID NO:22。

49.如条款48所述的抗体，其包含包含SEQ ID NO:66的第一多肽和包含SEQ IDNO:67的第二多肽。

50.一种双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体，其包含：

结合IL2RB的第一重链可变区，该第一重链可变区包含：

SEQ ID NO:1的CDR1序列；

SEQ ID NO:4的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:8的CDR3序列；以及

结合IL2RG的第二重链可变区，该第二重链可变区包含：

SEQ ID NO:16的CDR1序列；

SEQ ID NO:18的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:20的CDR3序列。

51.如条款50所述的抗体，其中该第一重链可变区与SEQ ID NO:12具有至少95％序列同一性，并且该第二重链可变区与SEQ ID NO:24具有至少95％序列同一性。

52.如条款51所述的抗体，其中该第一重链可变区包含SEQ ID NO:12，并且该第二重链可变区包含SEQ ID NO:24。

53.如条款52所述的抗体，其包含包含SEQ ID NO:34的第一多肽和包含SEQ IDNO:35的第二多肽。

54.一种双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体，其包含：

结合IL2RB的第一重链可变区，该第一重链可变区包含：

SEQ ID NO:1的CDR1序列；

SEQ ID NO:4的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:8的CDR3序列；以及

结合IL2RG的第二重链可变区，该第二重链可变区包含：

SEQ ID NO:15的CDR1序列；

SEQ ID NO:19的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:21的CDR3序列。

55.如条款54所述的抗体，其中该第一重链可变区与SEQ ID NO:12具有至少95％序列同一性，并且该第二重链可变区与SEQ ID NO:25具有至少95％序列同一性。

56.如条款55所述的抗体，其中该第一重链可变区包含SEQ ID NO:12，并且该第二重链可变区包含SEQ ID NO:25。

57.如条款56所述的抗体，其包含包含SEQ ID NO:36的第一多肽和包含SEQ IDNO:37的第二多肽。

58.一种药物组合物，其包含如条款1-57中任一项所述的抗体。

59.一种多核苷酸，其编码如条款1-57中任一项所述的抗体。

60.一种载体，其包含如条款59所述的多核苷酸。

61.一种细胞，其包含如条款60所述的载体。

62.一种产生如条款1-57中任一项所述的抗体的方法，该方法包括在允许该抗体表达的条件下培养如条款61所述细胞，并且从该细胞和/或细胞培养基中分离该抗体，其中。

63.一种制备如条款1-57中任一项所述的抗体的方法，该方法包括用IL2R免疫UniRat动物并鉴定IL2R结合重链序列。

64.一种用于治疗有需要的个体的疾病或障碍的试剂盒，该试剂盒包含如条款1-57中任一项所述的抗体、或如条款58所述的药物组合物、以及使用说明书。

65.如条款64所述的试剂盒，其进一步包含至少一种另外的试剂。

66.如条款65所述的试剂盒，其中该至少一种另外的试剂包含化疗药物。

67.一种治疗方法，其包括向有需要的个体施用有效剂量的如条款1-57中任一项所述的抗体或如条款58所述的药物组合物。

68.如条款1-57中任一项所述的抗体在制备用于治疗有需要的个体中的疾病或障碍的药物中的用途。

69.如条款1-57中任一项所述的抗体或如条款58所述的药物组合物，用于在有需要的个体中的疗法中使用。

70.一种用于治疗癌症的方法，该方法包括向患有所述癌症的受试者施用如条款1-57中任一项所述的抗体或如条款58所述的药物组合物。

71.如条款67-70中任一项所述的方法或用途，其中该癌症是晚期或转移性癌症。

72.如条款67-71中任一项所述的方法或用途，其中该癌症是实体瘤癌症。

73.如条款72所述的方法或用途，其中实体瘤癌症选自由以下组成的组：肾细胞癌、黑色素瘤、尿路上皮癌、三阴性乳腺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、结直肠癌、肉瘤、头颈部鳞状细胞癌和转移性去势抵抗性前列腺癌。

74.一种用于刺激免疫细胞中的IL2R信号传导的方法，该方法包括使该免疫细胞与如条款1-57中任一项所述的抗体或如条款58所述的药物组合物接触。

75.一种用于刺激免疫细胞上的IL2RB/IL2RG二聚体受体复合物的方法，该方法包括使该免疫细胞与如条款1-57中任一项所述的抗体或如条款58所述的药物组合物接触。

76.如条款74或75所述的方法，其中该免疫细胞选自由以下组成的组：CD4+ T细胞、CD8+ T细胞和自然杀伤(NK)细胞。

IL-2R，也称为白细胞介素2受体，是一种表达于多种免疫细胞表面的异二聚体蛋白，作为白细胞介素2(IL-2)的同源配体。IL-2R复合物由IL-2Rα(ILR2A)、IL-2Rβ(IL2RB)和IL-2Rγ(IL2RG)蛋白链的各种组合构成。IL-2RA也称为CD25，并且人IL2RA序列(UniProtKBNo.P01589)在本文中作为SEQ ID NO:38提供。IL-2RB也称为CD122，并且人IL2RB序列(UniProtKB No.P14784)在本文中作为SEQ ID NO:39提供。IL-2RG也称为CD132，并且人IL2RG序列(UniProtKB No.P31785)在本文中作为SEQ ID NO:40提供。人IL-2序列(UniProtKB No.P60568)在本文中作为SEQ ID NO:41提供。

本披露的方面涉及结合IL2RB的抗体，该抗体包含重链可变区，该重链可变区包含：(a)在SEQ ID NO:1-3中任一个中具有两个或更少(例如，0、1或2)个取代的CDR1序列；和/或(b)在SEQ ID NO:4-6中任一个中具有两个或更少(例如，0、1或2)个取代的CDR2序列；和/或(c)在SEQ ID NO:7-10中任一个中具有两个或更少(例如，0、1或2)个取代的CDR3序列。

在一些实施例中，抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:1-3中任一个的CDR1序列；和/或(b)包含SEQ ID NO:4-6中任一个的CDR2序列；和/或(c)包含SEQ ID NO:7-10中任一个的CDR3序列。

在一些实施例中，抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:1-3中任一个的CDR1序列；和(b)包含SEQ ID NO:4-6中任一个的CDR2序列；和(c)包含SEQ ID NO:7-10中任一个的CDR3序列。

在一些实施例中，抗体包含：

在一些实施例中，CDR1、CDR2和CDR3序列存在于人VH框架中。

在一些实施例中，抗体包含重链可变区，该重链可变区包含在SEQ ID NO:11-14中任一个中具有六个或更少(例如，五个或更少、四个或更少、三个或更少、两个或更少；六、五、四、三、二、一、零)个取代的序列。在一些实施例中，抗体包含与SEQ ID NO:11-14中任一个具有至少95％(例如，至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)序列同一性的重链可变区。在一些实施例中，抗体包含选自由SEQ ID NO:11-14组成的组的重链可变区序列。

在一些实施例中，抗体是分离的抗体。在一些实施例中，抗体是人抗体。在一些实施例中，抗体是分离的人抗体。

在一些实施例中，抗体是完整的IgG分子。在一些实施例中，抗体是完整的IgG1分子。在一些实施例中，抗体是完整的IgG2分子。在一些实施例中，抗体是完整的IgG4分子。在一些实施例中，抗体是完整IgG分子的免疫活性部分。在一些实施例中，抗体是完整IgG1分子的免疫活性部分。在一些实施例中，抗体是完整IgG2分子的免疫活性部分。在一些实施例中，抗体是完整IgG4分子的免疫活性部分。在一些实施例中，抗体是三链抗体样分子。在一些实施例中，抗体是仅重链抗体。

在一些实施例中，抗体包含Fc区。在一些实施例中，抗体包含变体Fc区。在一些实施例中，变体Fc区与天然序列Fc区具有至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％)同源性。

在一些实施例中，该变体Fc区包含异二聚化改变。在一些实施例中，该异二聚化改变包括以下杵臼取代(例如，在变体IgG1 Fc区中，1)一条链中的Y407T和另一条链中的T366Y；2)一条链中的Y407A和另一条链中的T366W；3)一条链中的F405A和另一条链中的T394W；4)一条链中的F405W和另一条链中的T394S；5)一条链中的Y407T和另一条链中的T366Y；6)一条链中的T366Y和F405A和另一条链中的T394W和Y407T；7)一条链中的T366W和F405W和另一条链中的T394S和Y407A；8)一条链中的F405W和Y407A和另一条链中的T366W和T394S；或9)Fc的一个多肽中的T366W和另一个中的T366S、L368A和Y407V)。在一些实施例中，该异二聚化改变包含产生新的二硫键的以下取代(例如，在变体IgG1 Fc区中，1)一条Fc多肽链中的Y349C和另一条中的S354C；2)一条Fc多肽链中的Y349C和另一条Fc多肽链中的E356C；3)一条Fc多肽链中的Y349C和另一条Fc多肽链中的E357C；4)一条Fc多肽链中的L351C和另一条中的S354C；5)一条Fc多肽链中的T394C和另一条中的E397C；或6)一条Fc多肽链中的D399C和另一条中的K392C)。在一些实施例中，该异二聚化改变包括以下电荷对取代(例如，1)一条链中的K409E加上另一条链中的D399K；2)一条链中的K409E加上另一条链中的D399R；3)一条链中的K409D加上另一条链中为D399K；4)一条链中的K409D加上另一条链中为D399R；5)一条链中的K392E加上另一条链中的D399R；6)一条链中的K392E加上另一条链中为D399K；7)一条链中的K392D加上另一链中的D399R；8)一条链中的K392D加上另一条链中为D399K；9)一条链中的K409D和K360D加上另一条链中的D399K和E356K；10)一条链中的K409D和K370D加上另一条链中的D399K和E357K；11)一条链中的K409D和K392D加上另一条链中的D399K、E356K和E357K；12)一条链条中的K409D和K392D加上另一条链条中的D399K；13)一条链中的K409D和K392D加上另一条链中的D399K和E356K；14)一条链中的K409D和K392D加上另一条链中的D399K和D357K；15)一条链条中的K409D和K370D加上另一条链条中的D399K和D357K；16)一条链条中的D399K加上另一条链条中的K409D和K360D；或17)一条链条中的K409D和K439D加上另一条链条中的D399K和E356K)。

在一些实施例中，该Fc区是沉默的Fc区。在一些实施例中，该沉默的Fc区包含根据EU编号的Fc区残基238、265、269、270、297、327和329中的一个或多个(例如，两个或更多个)的取代。在一些实施例中，该沉默的Fc区包含改变糖基化的取代。在一些实施例中，该沉默的Fe区包含无效应子突变(例如，CH2区中的N297A、N297G、DANA突变(D265A+N297A)或DANG突变(D265A+N297G))。在一些实施例中，该沉默的Fc区包含K322A和L234A/L235A突变。

在一些实施例中，抗体还包含不存在CH1序列的重链恒定区序列。在一些实施例中，抗体包含重链恒定区，该重链恒定区包含铰链区、CH2结构域和CH3结构域。在一些实施例中，该铰链区包含野生型人IgG4铰链区序列(SEQ ID NO:54)。在一些实施例中，该铰链区包含含有S228P突变的变体人IgG4铰链区序列(SEQ ID NO:55)。在一些实施例中，该CH2结构域包含野生型人IgG4 CH2结构域序列(SEQ ID NO:56)。在一些实施例中，该CH2结构域包含变体人IgG4 CH2结构域，该结构域包含F234A突变、L235A突变、或F234A突变和L235A突变两者。在一些实施例中，该CH3结构域包含野生型人IgG4 CH3结构域序列(SEQ ID NO:58)。在一些实施例中，CH3结构域包含含有T366W突变的变体人IgG4 CH3结构域序列。在一些实施例中，CH3结构域包含含有T366S、L368A突变和Y407V突变的变体人IgG4 CH3结构域序列。

在一些实施例中，抗体具有约55℃至约65℃的Tm。在一些实施例中，抗体具有约55℃至约65℃的Tagg。在一些实施例中，抗体具有约55℃至约65℃的Tm和约55℃至约65℃的Tagg。

在一些实施例中，抗体是多特异性的。在一些实施例中，抗体是双特异性的。在一些实施例中，抗体结合IL2RB和IL2RG。在一些实施例中，抗体充当IL2受体β/γ激动剂。

在一些实施例中，抗体对IL2R具有亲和力，其Kd为约10^-11M至大约10^-6M(例如，约10^-10M至大约10^-6M；约10^-9M至大约10^-6M；约10^-8M至大约10^-6M；约10^-11M至大约10^-8M；约10^-10M至大约10^-8M；约10^-9M至大约10^-8M；约10^-11M至大约10^-9M；约10^-10M至大约10^-9M)。

在一些实施例中，抗体对IL2RB具有亲和力，其Kd为约10^-8M至大约2.5x10^-7M。

在一些实施例中，抗体对IL2RG具有亲和力，其Kd为约10^-9M至大约2.5x10^-8M。

在一些实施例中，抗体对IL2RB具有亲和力(Kd为约10^-8M至大约2.5x10^-7M)，以及对IL2RG具有亲和力(Kd为约10^-9M至大约2.5x10^-8M)。

在一些实施例中，使用ForteBio Octet Qk384仪器以动力学模式测量Kd。在一些实施例中，Kd使用包含抗人Fc捕获(AHC，18-5005)传感器的ForteBio Octet Qk384仪器以动力学模式测量。在一些实施例中，Kd根据本文实例中描述的方法测量。

本披露的方面包括结合IL2RB的抗体，该抗体包含重链可变区，该重链可变区包含：

(a)包含下式的CDR1序列：

G G S I S S S X1 W(SEQ ID NO:26)

其中X1是D或N；

(b)包含下式的CDR2序列：

I X2 H S G S T(SEQ ID NO:27)

其中X2是D或S；以及

(c)包含下式的CDR3序列：

X3 R G X4 W E L X5 D A F D I(SEQ ID NO:28)

其中X3是G或A；X4是S或Q；并且X5是S或T。

在一些实施例中，CDR1、CDR2和CDR3序列存在于VH人框架中。

(a)包含下式的CDR1序列：

G F T F S X1 Y G(SEQ ID NO:29)

其中X1是S或T；

(b)包含下式的CDR2序列：

I S Y D G S N X2(SEQ ID NO:30)

其中X2是K或R；以及

(c)包含下式的CDR3序列：

A R D L D Y D X3 L T G D P V G G F D I(SEQ ID NO:31)

其中X3是V或I。

在一些实施例中，CDR1、CDR2和CDR3序列存在于VH人框架中。

本披露的方面包括结合IL2RG的抗体，该抗体包含重链可变区，该重链可变区包含：(a)在SEQ ID NO:15-16中任一个中具有两个或更少(例如，0、1或2)个取代的CDR1序列；和/或(b)在SEQ ID NO:17-19中任一个中具有两个或更少(例如，0、1或2)个取代的CDR2序列；和/或(c)在SEQ ID NO:20-21中任一个中具有两个或更少(例如，0、1或2)个取代的CDR3序列。

在一些实施例中，抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:15-16中任一个的CDR1序列；和/或(b)包含SEQ ID NO:17-19中任一个的CDR2序列；和/或(c)包含SEQ ID NO:20-21中任一个的CDR3序列。

在一些实施例中，抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:15-16中任一个的CDR1序列；和(b)包含SEQ ID NO:17-19中任一个的CDR2序列；和(c)包含SEQ ID NO:20-21中任一个的CDR3序列。

在一些实施例中，抗体包含：

在一些实施例中，CDR1、CDR2和CDR3序列存在于VH人框架中。

在一些实施例中，抗体包含重链可变区，该重链可变区包含在SEQ ID NO:22-25中任一个中具有六个或更少(例如，五个或更少、四个或更少、三个或更少、两个或更少；六、五、四、三、二、一、零)个取代的序列。在一些实施例中，抗体包含与SEQ ID NO:22-25中任一个具有至少95％(例如，至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)序列同一性的重链可变区。在一些实施例中，抗体包含选自由SEQ ID NO:22-25组成的组的重链可变区序列。

本披露的方面包括结合IL2RG的抗体，该抗体包含重链可变区，该重链可变区包含：

(a)包含下式的CDR1序列：

G F X1 X2 X3 X4 Y Y(SEQ ID NO:32)

其中X1是T或I；X2是F或V；X3是S、N或G；并且X4是D或N；

(b)包含下式的CDR2序列：

I S X5 S G X6 X7 I(SEQ ID NO:33)

其中X5是S或N；X6是D、S、G或N；并且X7是T或I；以及

(c)包含序列ARGDAVSITGDY(SEQ ID NO:20)的CDR3序列。

在一些实施例中，CDR1、CDR2和CDR3序列存在于VH人框架中。

在一些实施例中，抗体是多特异性的。在一些实施例中，抗体是双特异性的。在一些实施例中，抗体结合IL2RB和IL2RG。

在一些实施例中，抗体是含有Fc区的抗体。在一些实施例中，抗体进一步包含重链恒定区，该重链恒定区包含铰链区、CH2结构域和CH3结构域。在一些实施例中，重链恒定区不包含CH1序列。在一些实施例中，该铰链区包含野生型人IgG4铰链区序列(SEQ ID NO:54)。在一些实施例中，该铰链区包含含有S228P突变的变体人IgG4铰链区序列(SEQ ID NO:55)。在一些实施例中，该CH2结构域包含野生型人IgG4 CH2结构域序列(SEQ ID NO:56)。在一些实施例中，该CH2结构域包含变体人IgG4 CH2结构域，该结构域包含F234A突变、L235A突变、或F234A突变和L235A突变两者。在一些实施例中，该CH3结构域包含野生型人IgG4CH3结构域序列(SEQ ID NO:58)。在一些实施例中，CH3结构域包含含有T366W突变的变体人IgG4 CH3结构域序列。在一些实施例中，CH3结构域包含含有T366S、L368A突变和Y407V突变的变体人IgG4 CH3结构域序列。

在一些实施例中，抗体充当IL2受体β/γ激动剂。

本披露的方面包括抗体，其包含：

结合IL2RB的第一重链可变区，该第一重链可变区包含：SEQ ID NO:1的CDR1序列；SEQ ID NO:4的CDR2序列；和SEQ ID NO:7的CDR3序列；以及

结合IL2RG的第二重链可变区，该第二重链可变区包含：SEQ ID NO:15的CDR1序列；SEQ ID NO:17的CDR2序列；和SEQ ID NO:20的CDR3序列。

在一些实施例中，第一重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3序列存在于VH人框架中。在一些实施例中，第二重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3序列存在于VH人框架中。在一些实施例中，第一和第二重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3序列存在于VH人框架中。

在一些实施例中，第一重链可变区与SEQ ID NO:11具有至少95％(例如，至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)序列同一性，并且第二重链可变区与SEQ ID NO:22具有至少95％(例如，至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)序列同一性。在一些实施例中，该第一重链可变区包含SEQ ID NO:11，并且该第二重链可变区包含SEQ ID NO:22。

在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:53的第一多肽和含有SEQ ID NO:61的第二多肽。

本披露的方面包括抗体，其包含：

结合IL2RB的第一重链可变区，该第一重链可变区包含：SEQ ID NO:1的CDR1序列；SEQ ID NO:4的CDR2序列；和SEQ ID NO:8的CDR3序列；以及

结合IL2RG的第二重链可变区，该第二重链可变区包含：SEQ ID NO:15的CDR1序列；SEQ ID NO:18的CDR2序列；和SEQ ID NO:20的CDR3序列。

在一些实施例中，第一重链可变区与SEQ ID NO:12具有至少95％(例如，至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)序列同一性，并且第二重链可变区与SEQ ID NO:23具有至少95％(例如，至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)序列同一性。在一些实施例中，该第一重链可变区包含SEQ ID NO:12，并且该第二重链可变区包含SEQ ID NO:23。

在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:62的第一多肽和含有SEQ ID NO:63的第二多肽。

本披露的方面包括抗体，其包含：

结合IL2RB的第一重链可变区，该第一重链可变区包含：SEQ ID NO:2的CDR1序列；SEQ ID NO:5的CDR2序列；和SEQ ID NO:9的CDR3序列；以及

在一些实施例中，第一重链可变区与SEQ ID NO:13具有至少95％(例如，至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)序列同一性，并且第二重链可变区与SEQ ID NO:23具有至少95％(例如，至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)序列同一性。在一些实施例中，该第一重链可变区包含SEQ ID NO:13，并且该第二重链可变区包含SEQ ID NO:23。

在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:64的第一多肽和含有SEQ ID NO:65的第二多肽。

本披露的方面包括抗体，其包含：

结合IL2RB的第一重链可变区，该第一重链可变区包含：SEQ ID NO:3的CDR1序列；SEQ ID NO:6的CDR2序列；和SEQ ID NO:10的CDR3序列；以及

在一些实施例中，第一重链可变区与SEQ ID NO:14具有至少95％(例如，至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)序列同一性，并且第二重链可变区与SEQ ID NO:22具有至少95％(例如，至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)序列同一性。在一些实施例中，该第一重链可变区包含SEQ ID NO:14，并且该第二重链可变区包含SEQ ID NO:22。

在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:66的第一多肽和含有SEQ ID NO:67的第二多肽。

本披露的方面包括抗体，其包含：

结合IL2RG的第二重链可变区，该第二重链可变区包含：SEQ ID NO:16的CDR1序列；SEQ ID NO:18的CDR2序列；和SEQ ID NO:20的CDR3序列。

在一些实施例中，第一重链可变区与SEQ ID NO:12具有至少95％(例如，至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)序列同一性，并且第二重链可变区与SEQ ID NO:24具有至少95％(例如，至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)序列同一性。在一些实施例中，该第一重链可变区包含SEQ ID NO:12，并且该第二重链可变区包含SEQ ID NO:24。

在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:34的第一多肽和含有SEQ ID NO:35的第二多肽。

本披露的方面包括抗体，其包含：

结合IL2RG的第二重链可变区，该第二重链可变区包含：SEQ ID NO:15的CDR1序列；SEQ ID NO:19的CDR2序列；和SEQ ID NO:21的CDR3序列。

在一些实施例中，第一重链可变区与SEQ ID NO:12具有至少95％(例如，至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)序列同一性，并且第二重链可变区与SEQ ID NO:25具有至少95％(例如，至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)序列同一性。在一些实施例中，该第一重链可变区包含SEQ ID NO:12，并且该第二重链可变区包含SEQ ID NO:25。

在一些实施例中，抗体包含含有SEQ ID NO:36的第一多肽和含有SEQ ID NO:37的第二多肽。

在常规IgG抗体中，重链和轻链的缔合部分是由于轻链恒定区与重链的CH1恒定结构域之间的疏水性相互作用。重链框架2(FR2)和框架4(FR4)区中存在另外的残基，这也有助于重链与轻链之间的这种疏水性相互作用。

然而，已知骆驼科(包括骆驼、单峰骆驼和美洲驼的胼足亚目)的血清含有一种主要类型的抗体，其仅由成对的H链构成(仅重链抗体或HCAb)。骆驼科(单峰驼(Camelusdromedarius)、双峰驼(Camelus bactrianus)、驼羊(Lama glama)、原驼(Lama guanaco)、羊驼(Lama alpaca)和小羊驼(Lama vicugna))的仅重链抗体具有独特的结构，由单个可变结构域(VHH)、铰链区和两个恒定结构域(CH2和CH3)组成，它们与经典抗体的CH2和CH3结构域高度同源。这些仅重链抗体缺乏存在于基因组中的恒定区的第一结构域(CH1)，但在mRNA加工期间被剪接掉。CH1结构域的缺失解释了仅重链抗体中轻链的缺失，因为此结构域是轻链的恒定结构域的锚定位置。此类仅重链抗体自然进化为通过来自常规抗体或其片段的三种CDR而赋予抗原结合特异性和高亲和力(Muyldermans,2001；J Biotechnol[生物技术期刊]74:277–302；Revets等人,2005；Expert Opin Biol Ther[生物治疗专家观点]5:111–124)。软骨鱼类，诸如鲨鱼也进化出一种独特的免疫球蛋白，被称为IgNAR，它缺乏轻多肽链，并且完全由重链构成。IgNAR分子可以通过分子工程化以产生单个重链多肽(vNAR)的可变结构域来操纵。Nuttall等人Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学杂志]270,3543-3554(2003)；Nuttall等人Function and Bioinformatics[功能与生物信息学]55,187-197(2004)；Dooley等人,Molecular Immunology[分子免疫学]40,25-33(2003)。

没有轻链的仅重链抗体结合抗原的能力是在20世纪60年代建立的(Jaton等人(1968)Biochemistry[生物化学],7,4185-4195)。与轻链物理分离的重链免疫球蛋白相对于四聚体抗体保留了80％的抗原结合活性。Sitia等人(1990)Cell[细胞],60,781-790证明了从重排的小鼠μ基因中去除CH1结构域导致在哺乳动物细胞培养中产生没有轻链的仅重链抗体。所产生的抗体保留了VH结合特异性和效应子功能。

通过免疫可以产生针对多种抗原具有高特异性和亲和力的重链抗体(van derLinden,R.H.等人Biochim.Biophys.Acta.[生物化学与生物物理学报]1431,37-46(1999))，并且可以在酵母中容易地克隆并表达VHH部分(Frenken,L.G.J.等人J.Biotechnol.[生物技术期刊]78,11-21(2000))。它们的表达水平、溶解性和稳定性显著高于经典F(ab)或Fv片段。Ghahroudi,M.A.等人FEBS Lett.[欧洲生物化学学会联合会快报]414,521-526(1997)。

其中λ(lambda)轻(L)链基因座和/或λ和κ(kappa)L链基因座已被功能沉默的小鼠以及由此类小鼠产生的抗体描述于美国专利号7,541,513和8,367,888中。例如，例如在以下中已经报告了在小鼠和大鼠中重组产生仅重链抗体：WO 2006008548；美国专利公布号20100122358；Nguyen等人,2003,Immunology[免疫学]；109(1),93-101；等人,Crit.Rev.Immunol.[免疫学评论综述]；2006,26(5):377-90；以及Zou等人,2007,J ExpMed[实验医学杂志]；204(13):3271–3283。通过锌指核酸酶的胚胎显微注射产生敲除大鼠描述于Geurts等人,2009,Science[科学],325(5939):433中。可溶性仅重链抗体和包含产生此类抗体的异源重链基因座的转基因啮齿类动物描述于美国专利号8,883,150和9,365,655中。包含单结构域抗体作为结合(靶向)结构域的CAR-T结构描述于例如Iri-Sofla等人,2011,Experimental Cell Research[实验细胞研究]317:2630-2641和Jamnani等人,2014,Biochim Biophys Acta[生物化学与生物物理学报],1840:378-386中。

本披露的方面包括结合IL2RB的仅重链抗体，其包含重链可变区，该重链可变区包含：(a)在SEQ ID NO:1-3中任一个中具有两个或更少(例如，0、1或2)个取代的CDR1序列；和/或(b)在SEQ ID NO:4-6中任一个中具有两个或更少(例如，0、1或2)个取代的CDR2序列；和/或(c)在SEQ ID NO:7-10中任一个中具有两个或更少(例如，0、1或2)个取代的CDR3序列。

在一些实施例中，仅重链抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:1-3中任一个的CDR1序列；和/或(b)包含SEQ ID NO:4-6中任一个的CDR2序列；和/或(c)包含SEQ ID NO:7-10中任一个的CDR3序列。

在一些实施例中，仅重链抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:1-3中任一个的CDR1序列；和(b)包含SEQ ID NO:4-6中任一个的CDR2序列；和(c)包含SEQ ID NO:7-10中任一个的CDR3序列。

在一些实施例中，仅重链抗体包含：

在一些实施例中，CDR1、CDR2和CDR3序列存在于人VH框架中。

在一些实施例中，仅重链抗体包含重链可变区，该重链可变区包含在SEQ ID NO:11-14中任一个中具有六个或更少(例如，五个或更少、四个或更少、三个或更少、两个或更少；六、五、四、三、二、一、零)个取代的序列。在一些实施例中，仅重链抗体包含与SEQ IDNO:11-14中任一个具有至少95％(例如，至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)序列同一性的重链可变区。在一些实施例中，仅重链抗体包含选自由SEQ ID NO:11-14组成的组的重链可变区序列。

在一些实施例中，仅重链抗体包含Fc区。在一些实施例中，仅重链抗体包含变体Fc区。在一些实施例中，变体Fc区与天然序列Fc区具有至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％)同源性。

在一些实施例中，仅重链抗体进一步包含重链恒定区序列，CH1序列不存在。在一些实施例中，仅重链抗体包含重链恒定区，该重链恒定区包含铰链区、CH2结构域和CH3结构域。在一些实施例中，该铰链区包含野生型人IgG4铰链区序列(SEQ ID NO:54)。在一些实施例中，该铰链区包含含有S228P突变的变体人IgG4铰链区序列(SEQ ID NO:55)。在一些实施例中，该CH2结构域包含野生型人IgG4 CH2结构域序列(SEQ ID NO:56)。在一些实施例中，该CH2结构域包含变体人IgG4 CH2结构域，该结构域包含F234A突变、L235A突变、或F234A突变和L235A突变两者。在一些实施例中，该CH3结构域包含野生型人IgG4 CH3结构域序列(SEQ ID NO:58)。在一些实施例中，CH3结构域包含含有T366W突变的变体人IgG4CH3结构域序列。在一些实施例中，CH3结构域包含含有T366S、L368A突变和Y407V突变的变体人IgG4CH3结构域序列。

在一些实施例中，仅重链抗体具有约55℃至约65℃的Tm。在一些实施例中，仅重链抗体具有约55℃至约65℃的Tagg。在一些实施例中，仅重链抗体具有约55℃至约65℃的Tm和约55℃至约65℃的Tagg。

在一些实施例中，仅重链抗体是多特异性的。在一些实施例中，仅重链抗体是双特异性的。在一些实施例中，仅重链抗体结合IL2RB和IL2RG。在一些实施例中，仅重链抗体充当IL2受体β/γ激动剂。

在一些实施例中，仅重链抗体对IL2R具有亲和力，其Kd为约10^-11M至大约10^-6M(例如，约10^-10M至大约10^-6M；约10^-9M至大约10^-6M；约10^-8M至大约10^-6M；约10^-11M至大约10^-8M；约10^-10M至大约10^-8M；约10^-9M至大约10^-8M；约10^-11M至大约10^-9M；约10^-10M至大约10^-9M)。

在一些实施例中，仅重链抗体对IL2RB具有亲和力，其Kd为约10^-8M至大约2.5x10^- ⁷M。

在一些实施例中，仅重链抗体对IL2RG具有亲和力，其Kd为约10^-9M至大约2.5x10^- ⁸M。

在一些实施例中，仅重链抗体对IL2RB具有亲和力(Kd为约10^-8M至大约2.5x10^- ⁷M)，以及对IL2RG具有亲和力(Kd为约10^-9M至大约2.5x10^-8M)。

本披露的方面包括结合IL2RB的仅重链抗体，其包含重链可变区，该重链可变区包含：

(a)包含下式的CDR1序列：

G G S I S S S X1 W(SEQ ID NO:26)

其中X1是D或N；

(b)包含下式的CDR2序列：

I X2 H S G S T(SEQ ID NO:27)

其中X2是D或S；以及

(c)包含下式的CDR3序列：

X3 R G X4 W E L X5 D A F D I(SEQ ID NO:28)

其中X3是G或A；X4是S或Q；并且X5是S或T。

在一些实施例中，CDR1、CDR2和CDR3序列存在于VH人框架中。

(a)包含下式的CDR1序列：

G F T F S X1 Y G(SEQ ID NO:29)

其中X1是S或T；

(b)包含下式的CDR2序列：

I S Y D G S N X2(SEQ ID NO:30)

其中X2是K或R；以及

(c)包含下式的CDR3序列：

A R D L D Y D X3 L T G D P V G G F D I(SEQ ID NO:31)

其中X3是V或I。

在一些实施例中，CDR1、CDR2和CDR3序列存在于VH人框架中。

本披露的方面包括结合IL2RG的仅重链抗体，其包含重链可变区，该重链可变区包含：(a)在SEQ ID NO:15-16中任一个中具有两个或更少(例如，0、1或2)个取代的CDR1序列；和/或(b)在SEQ ID NO:17-19中任一个中具有两个或更少(例如，0、1或2)个取代的CDR2序列；和/或(c)在SEQ ID NO:20-21中任一个中具有两个或更少(例如，0、1或2)个取代的CDR3序列。

在一些实施例中，仅重链抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:15-16中任一个的CDR1序列；和/或(b)包含SEQ ID NO:17-19中任一个的CDR2序列；和/或(c)包含SEQ ID NO:20-21中任一个的CDR3序列。

在一些实施例中，仅重链抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:15-16中任一个的CDR1序列；和(b)包含SEQ ID NO:17-19中任一个的CDR2序列；和(c)包含SEQ ID NO:20-21中任一个的CDR3序列。

在一些实施例中，仅重链抗体包含：

在一些实施例中，CDR1、CDR2和CDR3序列存在于VH人框架中。

在一些实施例中，仅重链抗体包含重链可变区，该重链可变区包含在SEQ ID NO:22-25中任一个中具有六个或更少(例如，五个或更少、四个或更少、三个或更少、两个或更少；六、五、四、三、二、一、零)个取代的序列。在一些实施例中，仅重链抗体包含与SEQ IDNO:22-25中任一个具有至少95％(例如，至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)序列同一性的重链可变区。在一些实施例中，仅重链抗体包含选自由SEQ ID NO:22-25组成的组的重链可变区序列。

本披露的方面包括结合IL2RG的仅重链抗体，其包含重链可变区，该重链可变区包含：

(a)包含下式的CDR1序列：

G F X1 X2 X3 X4 Y Y(SEQ ID NO:32)

其中X1是T或I；X2是F或V；X3是S、N或G；并且X4是D或N；

(b)包含下式的CDR2序列：

I S X5 S G X6 X7 I(SEQ ID NO:33)

其中X5是S或N；X6是D、S、G或N；并且X7是T或I；以及

(c)包含序列ARGDAVSITGDY(SEQ ID NO:20)的CDR3序列。

在一些实施例中，CDR1、CDR2和CDR3序列存在于VH人框架中。

在一些实施例中，仅重链抗体是多特异性的。在一些实施例中，仅重链抗体是双特异性的。在一些实施例中，仅重链抗体结合IL2RB和IL2RG。

在一些实施例中，仅重链抗体包含Fc区。在一些实施例中，仅重链抗体进一步包含重链恒定区，该重链恒定区包含铰链区、CH2结构域和CH3结构域。在一些实施例中，重链恒定区不包含CH1序列。在一些实施例中，该铰链区包含野生型人IgG4铰链区序列(SEQ IDNO:54)。在一些实施例中，该铰链区包含含有S228P突变的变体人IgG4铰链区序列(SEQ IDNO:55)。在一些实施例中，该CH2结构域包含野生型人IgG4 CH2结构域序列(SEQ ID NO:56)。在一些实施例中，该CH2结构域包含变体人IgG4 CH2结构域，该结构域包含F234A突变、L235A突变、或F234A突变和L235A突变两者。在一些实施例中，该CH3结构域包含野生型人IgG4 CH3结构域序列(SEQ ID NO:58)。在一些实施例中，CH3结构域包含含有T366W突变的变体人IgG4 CH3结构域序列。在一些实施例中，CH3结构域包含含有T366S、L368A突变和Y407V突变的变体人IgG4 CH3结构域序列。

在一些实施例中，仅重链抗体充当IL2受体β/γ激动剂。

本披露的方面包括双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体，其包含：

在一些实施例中，双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体包含Fc区。在一些实施例中，双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体包含变体Fc区。在一些实施例中，变体Fc区与天然序列Fc区具有至少约80％(例如，至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％)同源性。

在一些实施例中，双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体进一步包含重链恒定区序列，CH1序列不存在。在一些实施例中，双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体包含重链恒定区，该重链恒定区包含铰链区、CH2结构域和CH3结构域。在一些实施例中，该铰链区包含野生型人IgG4铰链区序列(SEQ ID NO:54)。在一些实施例中，该铰链区包含含有S228P突变的变体人IgG4铰链区序列(SEQ ID NO:55)。在一些实施例中，该CH2结构域包含野生型人IgG4 CH2结构域序列(SEQ ID NO:56)。在一些实施例中，该CH2结构域包含变体人IgG4CH2结构域，该结构域包含F234A突变、L235A突变、或F234A突变和L235A突变两者。在一些实施例中，该CH3结构域包含野生型人IgG4 CH3结构域序列(SEQ ID NO:58)。在一些实施例中，CH3结构域包含含有T366W突变的变体人IgG4 CH3结构域序列。在一些实施例中，CH3结构域包含含有T366S、L368A突变和Y407V突变的变体人IgG4 CH3结构域序列。

在一些实施例中，双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体包含含有SEQ ID NO:53的第一多肽和含有SEQ ID NO:61的第二多肽。

在一些实施例中，双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体具有约55℃至约65℃的Tm。在一些实施例中，双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体具有约55℃至约65℃的Tagg。在一些实施例中，双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体具有约55℃至约65℃的Tm和约55℃至约65℃的Tagg。

在一些实施例中，双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体对IL2R具有亲和力，其Kd为约10^-11M至大约10^-6M(例如，约10^-10M至大约10^-6M；约10^-9M至大约10^-6M；约10^-8M至大约10^-6M；约10^-11M至大约10^-8M；约10^-10M至大约10^-8M；约10^-9M至大约10^-8M；约10^-11M至大约10^-9M；约10^-10M至大约10^-9M)。

在一些实施例中，双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体对IL2RB具有亲和力，其Kd为约10^-8M至大约2.5x10^-7M。

在一些实施例中，双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体对IL2RG具有亲和力，其Kd为约10^-9M至大约2.5x10^-8M。

在一些实施例中，双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体对IL2RB具有亲和力(Kd为约10^-8M至大约2.5x10^-7M)，以及对IL2RG具有亲和力(Kd为约10^-9M至大约2.5x10^-8M)。

在一些实施例中，双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体包含含有SEQ ID NO:62的第一多肽和含有SEQ ID NO:63的第二多肽。

在一些实施例中，双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体包含含有SEQ ID NO:64的第一多肽和含有SEQ ID NO:65的第二多肽。

在一些实施例中，双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体包含含有SEQ ID NO:66的第一多肽和含有SEQ ID NO:67的第二多肽。

结合IL2RB的第一重链可变区，该第一重链可变区包含：SEQ IDNO:1的CDR1序列；SEQ ID NO:4的CDR2序列；和SEQ ID NO:8的CDR3序列；以及

在一些实施例中，双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体包含含有SEQ ID NO:34的第一多肽和含有SEQ ID NO:35的第二多肽。

在一些实施例中，双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体包含含有SEQ ID NO:36的第一多肽和含有SEQ ID NO:37的第二多肽。

本披露的方面包括药物组合物，其包含如本文所述的抗体(例如，仅重链抗体；双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体)。

本披露的方面包括编码本文所述的抗体(例如，仅重链抗体；双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体)的多核苷酸。

本披露的方面包括包含本文所述的多核苷酸的载体。

本披露的方面包括包含本文所述的载体的细胞。

本披露的方面包括产生如本文所述的抗体(例如，仅重链抗体；双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体)的方法，这些方法包括在允许该抗体表达的条件下使如本文所述的细胞生长，以及从该细胞和/或该细胞在其中生长的细胞培养基中分离该抗体。

本披露的方面包括制备如本文所述的抗体的方法，这些方法包括用IL2R免疫UniRat^TM动物并鉴定IL2R结合重链序列。

本披露的方面包括用于治疗有需要的个体中的疾病或障碍的试剂盒，这些试剂盒包含如本文所述的抗体(例如，仅重链抗体；双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体)、或如本文所述的药物组合物、以及使用说明书。

在一些实施例中，试剂盒进一步包含至少一种另外的试剂。在一些实施例中，至少一种另外的试剂包含化疗药物。

本披露的方面包括治疗方法，其包括向有需要的个体施用有效剂量的本文所述的抗体(例如，仅重链抗体；双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体)，或如本文所述的药物组合物。

本披露的方面包括如本文所述的抗体(例如，仅重链抗体；双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体)在制备用于治疗有需要的个体的疾病或障碍的药物中的用途。在一些实施例中，疾病或障碍是癌症。在一些实施例中，癌症是晚期或转移性癌症。在一些实施例中，癌症是液体癌症，例如多发性骨髓瘤或急性髓性白血病。在一些实施例中，癌症是实体瘤癌症。在一些实施例中，实体瘤癌症选自由以下组成的组：肾细胞癌、黑色素瘤、尿路上皮癌、三阴性乳腺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、结直肠癌、肉瘤、头颈部鳞状细胞癌和转移性去势抵抗性前列腺癌。

本披露的方面包括如本文所述的抗体(例如，仅重链抗体；双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体)或如本文所述的药物组合物，用于在有需要的个体中的疗法中使用。

本披露的方面包括如本文所述的抗体(例如，仅重链抗体；双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体)或如本文所述的药物组合物，用于治疗有需要的个体疾病或障碍。在一些实施例中，疾病或障碍是癌症。在一些实施例中，癌症是晚期或转移性癌症。在一些实施例中，癌症是液体癌症，例如多发性骨髓瘤或急性髓性白血病。在一些实施例中，癌症是实体瘤癌症。在一些实施例中，实体瘤癌症选自由以下组成的组：肾细胞癌、黑色素瘤、尿路上皮癌、三阴性乳腺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、结直肠癌、肉瘤、头颈部鳞状细胞癌和转移性去势抵抗性前列腺癌。

本披露的方面包括用于治疗癌症的方法，其包括向患有所述癌症的受试者施用本文所述的抗体(例如，仅重链抗体；双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体)，或如本文所述的药物组合物。在一些实施例中，癌症是晚期或转移性癌症。在一些实施例中，癌症是液体癌症，例如多发性骨髓瘤或急性髓性白血病。在一些实施例中，癌症是实体瘤癌症。在一些实施例中，实体瘤癌症选自由以下组成的组：肾细胞癌、黑色素瘤、尿路上皮癌、三阴性乳腺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、结直肠癌、肉瘤、头颈部鳞状细胞癌和转移性去势抵抗性前列腺癌。

本披露的方面包括用于刺激免疫细胞中的IL2R信号传导的方法，该方法包括使免疫细胞与本文所述的抗体(例如，仅重链抗体；双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体)或本文所述的药物组合物接触。

本披露的方面包括用于刺激免疫细胞上的IL2RB/IL2RG二聚体受体复合物的方法，该方法包括使免疫细胞与本文所述的抗体(例如，仅重链抗体；双特异性激动性抗IL2R仅重链抗体)或本文所述的药物组合物接触。

在一些实施例中，免疫细胞选自由CD4+ T细胞、CD8+ T细胞和自然杀伤(NK)细胞组成的组。

这些和另外的方面将在本披露的其余部分(包括实例)中进一步解释。

附图说明

图1是总结所列出的双特异性抗体构建体相对于人和食蟹猴IL2RB和IL2RG的结合动力学的表。

图2分图A-C是一系列热图，描绘了来自用以下以50nM处理1小时的人PBMC的CD8⁺T细胞中磷酸化STAT5(pSTAT5)的倍数诱导：抗IL2Rβ/γ双特异性UniAbs^TM(图A)；抗IL2Rβ和抗IL2Rγ单特异性UniAbs^TM以1:1混合或作为单一药剂(图B)；或IL-2作为对照(分图C)。通过流式细胞术测定pSTAT5水平，并报告为相对于未刺激细胞的gMFI的几何平均荧光强度(gMFI)。

图3分图A-C的一系列图显示了所示细胞类型的细胞结合作为所描绘的双特异性抗体构建体的浓度的函数。通过流式细胞术测定细胞结合，并以相比于仅用二抗检测抗体染色的细胞的几何平均荧光强度(gMFI)的gMFI报告。

图4分图A-E的一系列图显示人和食蟹猴PBMC中STAT5磷酸化剂量曲线作为所描绘的双特异性抗体构建体和对照分子(IL-2和IL-2变体)的浓度的函数。pSTAT5水平通过流式细胞术测定并报告为指定细胞类型的百分比。

图5分图A-D的一系列图显示了所示人细胞中的增殖(Ki67剂量曲线)作为所描绘的双特异性抗体构建体和对照分子(IL-2和IL-2变体)的浓度的函数。Ki67水平通过流式细胞术测定并报告为指定细胞类型的百分比。

图6分图A-D的一系列图显示了人全血中细胞因子分泌作为所描绘的双特异性抗体构建体和对照分子(IL-2)的浓度的函数。

图7分图A-B提供所示双特异性抗体构建体的细胞内化数据。分图A描绘了来自人PBMC的CD8⁺ T细胞对所示抗IL2Rβ/γUniAb的作为时间的函数的内化。分图B以表格式描述了该数据。通过流式细胞术检测UniAb的表面水平，并报告相对于不允许内化的细胞的情况。观察到的半衰期范围为0.27小时至0.81小时。如此处观察到的，内化可能部分依赖于双特异性抗体的特异性抗IL2RG臂，因为包含IL2RG_F16B结合序列的分子比包含不同抗IL2RG结合序列的分子内化更快并且程度更大。

图8分图A-B以图形(分图A)和表(分图B)格式提供小鼠模型PK数据。通过尾静脉注射向BALB/c小鼠(每个时间点每组n＝3只)施用1mg/kg指定的抗IL2Rβ/γUniAb。在两周内的6个时间点收集血清，并通过ELISA一起检测人IgG4。结果显示为时间函数(分图A)或表格式(分图B)。

图9是总结所示双特异性抗体构建体的几个特性的表。所有构建体均在ExpiCHO表达系统中表达并经过两步纯化。稳定性是根据热应激后SE-HPLC的聚集百分比来确定的。Tm和Tagg是使用UNcle平台测量的。对于SE-HPLC实验，20μg蛋白质在TSK gel G3000 5μm柱上运行。

图10分图A-C提供来自GVHD小鼠模型的汇总数据。每只受辐射的NSG小鼠(每个治疗组5只)被植入2000万个人PBMC。然后用仅媒剂(100μL)、每天22μg rhIL-2或以1mg/kg的100μL两种所示双特异性抗体构建体之一每周两次处理动物，直至处死(体重减轻20％)。图A提供了GVHD小鼠模型和后续给药方案的概述。图B显示了指定实验组的动物的作为时间的函数体重。图C描绘了对研究中小鼠脾细胞的分析，这些细胞是在处理的第5天后收获的。通过测量不同淋巴细胞群中的CSFE染色来比较4个处理组之间CD8+ T细胞和CD4+ T细胞的增殖。与rhIL-2和媒剂对照相比，两种测试的双特异性抗体构建体(IL2RB_F09C**IL2RG_F16A(BsAb-1)和IL2RB_F09G**IL2RG_F16B(BsAb-2))均显示出明显更多的增殖性CD8+ T细胞。CD4+ T细胞扩增程度较小；然而，与媒剂对照相比，IL2RB_F09G**IL2RG_F16B(BsAb-2)处理的小鼠中增殖性CD4+ T细胞显著增加(分图C)。数据表明，细胞因子受体激动剂在体内促进免疫效应子激活和增殖，并以与细胞因子对照相似的速度加速植入huPBMC的NSG小鼠的GVHD。

图11分图A-J的一系列图总结来自非GLP食蟹猴研究的体内药效学(PD)数据。分图A-E描绘了作为给药后时间的函数的所示细胞类型的百分比。分图F-J描绘了作为给药后时间的函数的所示细胞类型的浓度(x10⁵)/μL血液。分图K显示了作为给药后时间的函数的CD8+ T细胞与CD4+ T细胞的比率。

图12分图A的图显示作为时间(天)的函数的所示双特异性抗体的血清浓度。分图B的表显示分子、剂量和半衰期(t_1/2)信息。

图13的图显示作为时间(研究日)的函数的加速GVHD模型中的动物的体重(％)。

图14的图显示作为时间(研究日)的函数的加速GVHD模型中的动物的存活概率。

图15分图A-C的图是显示在处理后5天测量并分成处理组的指定细胞类型的细胞增殖的图的集合。分图A显示CD8+ T细胞的结果，分图B显示CD4+ T细胞的结果，分图C显示NK细胞的结果。

图16分图A-L是显示作为时间的函数，在指定给药条件下指定细胞类型的细胞增殖和绝对细胞浓度的图的集合。

除非另外指示，否则本披露的实践将采用分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学的常规技术，这些技术都在本领域的技术范围内。此类技术在文献中有充分说明，诸如“Molecular Cloning:A Laboratory Manual[分子克隆：实验室手册]”,第二版(Sambrook等人,1989)；“Oligonucleotide Synthesis[寡核苷酸合成]”(M.J.Gait编辑,1984)；“Animal Cell Culture[动物细胞培养]”(R.I.Freshney编辑,1987)；“Methods in Enzymology[酶学方法]”(美国学术出版社(Academic Press,Inc.))；“Current Protocols in Molecular Biology[最新分子生物学实验方法汇编]”(F.M.Ausubel等人编辑,1987，以及定期更新)；“PCR:The Polymerase Chain Reaction[PCR：聚合酶链式反应]”,(Mullis等人编辑,1994)；“A Practical Guide to MolecularCloning[分子克隆实用指南]”(Perbal Bernard V.,1988)；“Phage Display:ALaboratory Manual[噬菌体展示：实验室手册]”(Barbas等人,2001)；Harlow,Lane和Harlow,Using Antibodies:ALaboratory Manual:Portable Protocol No.I[使用抗体：实验室手册：I号便携式方案],冷泉港实验室(Cold Spring Harbor Laboratory)(1998)；以及Harlow和Lane,Antibodies:A Laboratory Manual[抗体：实验室手册],冷泉港实验室(Cold Spring Harbor Laboratory)；(1988)。

除非另外指示，否则本文中的抗体残基根据Kabat编号系统进行编号(例如，Kabat等人,Sequences of Immunological Interest.[具有免疫学意义的序列]第5版美国公共卫生署，美国国立卫生研究院，贝塞斯达，马里兰州(Public Health Service,NationalInstitutes of Health,Bethesda,Md.)(1991))。

在以下描述中，列出多个具体细节来提供对本披露的更完全理解。然而，对于本领域技术人员而言明显的是，本披露可以在没有一个或多个这些具体细节的情况下实践。在其他情况下，本领域技术人员熟知的熟知特征和程序尚未被描述，以避免使本披露模糊。

本披露引用的所有参考文献(包括专利申请和出版物)均通过援引以其全文并入本文。当引用的参考文献与本文提供的定义之间存在任何差异时，以本文提供的定义为准。

定义：

在一些实施例中，当与可测量的数值变量结合使用时，“约”是指变量的指示值和在指示值的实验误差内(例如，在平均值的95％置信区间内)或指示值的±10％内(以较大者为准)的变量的所有值。在一些实施例中，数值范围包括限定该范围的数字。

在提供值范围的情况下，应当理解，在该范围的上限和下限之间的每个中间值(除非上下文另有明确说明，至下限单位的十分之一)，以及在所述范围内的任何其他所述或中间值都包括在本披露内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括在也涵盖于本披露内的较小范围中，受制于所述范围内任何特别排除的限制。在所述范围包括一个或两个限制的情况下，排除那些包括的限制中的任一个或两个的范围也包括在本披露中。

“包含(comprising)”意指所列举的元素是组合物/方法/试剂盒中需要的，但也可以包括其他元素以形成权利要求或实施例范围内的组合物/方法/试剂盒等。

“基本上由…组成(consisting essentially of)”意指将所描述的组合物或方法的范围限制到不对主题披露的一个或多个基本和新颖特征产生实质性影响的指定材料或步骤。

“由…组成(consisting of)”意指从组合物、方法或试剂盒中排除权利要求或实施例中未指定的任何元素、步骤或成分。

本文中的抗体残基根据Kabat编号系统和EU编号系统进行编号。在提及可变结构域中的残基时，通常使用Kabat编号系统(大约重链的残基1-113)(例如，Kabat等人,Sequences of Immunological Interest.[具有免疫学意义的序列]第5版美国公共卫生署，美国国立卫生研究院，贝塞斯达，马里兰州(Public Health Service,NationalInstitutes of Health,Bethesda,Md.)(1991))。当提及免疫球蛋白重链恒定区中的残基时，通常使用“EU编号系统”或“EU索引”(例如，Kabat等人报道的EU索引，同上)。“如Kabat中的EU索引”是指人IgG1 EU抗体的残基编号。除非本文另外说明，否则提及抗体的可变结构域中的残基号意指通过Kabat编号系统进行的残基编号。除非本文另外说明，否则提及抗体的恒定结构域中的残基号意指通过EU编号系统进行的残基编号。

抗体，也被称为免疫球蛋白，通常包含至少一条重链和一条轻链，其中重链和轻链的氨基末端结构域在序列上是可变的，因此通常被称为可变区结构域，或可变重(VH)或可变轻(VL)结构域。这两个结构域通常缔合以形成特异性结合区，尽管正如在此将要讨论的，特异性结合也可以用仅重链可变序列获得，并且本领域已知并使用各种非天然构型的抗体。

“功能性”或“生物活性”抗体或抗原结合分子(包括例如本文所述的仅重链抗体和多特异性(例如，双特异性)抗体，以及三链抗体样分子(TCA))是能够在结构、调节、生物化学或生物物理事件中发挥其一种或多种天然活性的分子。例如，功能性抗体或其他结合分子(例如，TCA)可以具有特异性结合抗原的能力，并且结合可以进而引发或改变细胞或分子事件，诸如信号转导或酶活性。功能性抗体或其他结合分子(例如，TCA)也可以阻断受体的配体激活或充当激动剂或拮抗剂。抗体或其他结合分子(例如，TCA)发挥其一种或多种天然活性的能力取决于若干因素，包括多肽链的适当折叠和组装。

本文中的术语“抗体”以最广泛意义使用，并且特别涵盖单克隆抗体、多克隆抗体、单体、二聚体、多聚体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、仅重链抗体、三链抗体、TCA、单链Fv(scFv)、纳米抗体等，并且还包括抗体片段，只要它们表现出所期望的生物活性即可。Miller等人(2003)Jour.of Immunology[免疫学杂志]170:4854-4861。抗体可以是鼠抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体或来源于其他物种的抗体。

例如，术语抗体可以是指全长重链、全长轻链、完整免疫球蛋白分子；或任何这些多肽的免疫活性部分，即包含抗原结合位点的多肽，该抗原结合位点免疫特异性结合目的靶标或其部分的抗原，此类靶标包括但不限于癌细胞，或产生与自身免疫性疾病相关联的自身免疫性抗体的细胞。本文披露的免疫球蛋白可以是任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD和IgA)、类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类的免疫球蛋白分子，包括具有改变的Fc部分的工程化亚类，这些亚类提供降低或增强的效应细胞活性。主题抗体的轻链可以是κ轻链(Vkappa)或λ轻链(Vlambda)。免疫球蛋白可以来源于任何物种。在一方面，免疫球蛋白大部分来自人。

如本文所用，术语“单克隆抗体”是指从基本上同源的抗体群获得的一种抗体，即，构成该群体的个别抗体除以微量存在的可能天然存在的突变外是一致的。单克隆抗体是高度特异性的，针对单一抗原性位点。此外，与典型地包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的常规(多克隆)抗体制剂相反，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。根据本披露的单克隆抗体可以通过首先由Kohler等人(1975)Nature[自然]256:495描述的杂交瘤方法制备，并且还可以经由例如重组蛋白生产方法(参见例如，美国专利号4,816,567)制备。

如与抗体结合使用的术语“可变的”是指以下事实：抗体可变结构域的某些部分在抗体之间在序列上差异很大，并且用于每种特定抗体针对其特定抗原的结合和特异性。然而，可变性在整个抗体的可变结构域中并不均匀分布。在轻链可变结构域和重链可变结构域两者中，该可变性集中在被称为高变区的三个区段中。可变结构域的更高度保守的部分被称为框架区(FR)。天然的重链和轻链的可变结构域各自包含四个FR，其主要采用β-片层构型，通过三个高变区连接，这三个高变区形成环，这些环连接β-片层结构并且在一些情况下形成β-片层结构的一部分。每条链中的高变区通过FR紧密靠近地保持在一起，并且与来自另一条链的高变区一起有助于抗体的抗原结合位点的形成(参见Kabat等人,Sequencesof Proteins of Immunological Interest[具有免疫学意义的蛋白质的序列],第5版,美国公共卫生署，美国国立卫生研究院，贝塞斯达，马里兰州(1991))。恒定结构域并不直接涉及抗体与抗原的结合，但是表现出不同效应子功能，诸如抗体参与抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。

当本文使用时，术语“高变区”是指负责抗原结合的抗体的氨基酸残基。高变区通常包含来自“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基(例如，重链可变结构域中的残基31-35(H1)、50-65(H2)和95-102(H3)；Kabat等人,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest[具有免疫学意义的蛋白质的序列],第5版美国公共卫生署，美国国立卫生研究院，贝塞斯达，马里兰州(1991))和/或来自“高变环”的那些残基(重链可变结构域中的残基26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3)；Chothia和Lesk J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]196:901-917(1987))。在一些实施例中，“CDR”意指抗体的互补决定区，如在Lefranc,MP等人,IMGT,the international ImMunoGeneTics database[IMGT，国际免疫遗传学数据库],Nucleic Acids Res.[核酸研究],27:209-212(1999)中定义的。“框架区”或“FR”残基是除如本文定义的高变区/CDR残基之外的那些可变结构域残基。

本文示出了示例性CDR名称；然而，本领域技术人员将理解，CDR的许多定义是常用的，包括Kabat定义(参见“Zhao等人Agermline knowledge based computationalapproach for determining antibody complementarity determining regions.[一种用于确定抗体互补决定区的基于种系知识的计算方法]”Mol Immunol.[分子免疫学]2010；47:694–700)，其是基于序列可变性并且是最常用的。Chothia定义是基于结构环区的位置(Chothia等人“Conformations of immunoglobulin hypervariable regions.[免疫球蛋白高变区的构象]”Nature.[自然]1989；342:877-883)。替代性的目的CDR定义包括但不限于由以下披露的那些：Honegger,“Yet another numbering scheme for immunoglobulinvariabledomains:an automatic modeling and analysis tool.[免疫球蛋白可变结构域的又一种编号方案：自动建模和分析工具]”J Mol Biol.[分子生物学杂志]2001；309:657-670；Ofran等人“Automated identification of complementarity determining regions(CDRs)reveals peculiar characteristics of CDRs and B-cell epitopes.[互补决定区(CDR)的自动鉴定揭示了CDR和B细胞表位的特殊特征]”J Immunol.[免疫学杂志]2008；181:6230-6235；Almagro“Identification of differences in the specificity-determining residues of antibodies that recognize antigens of different size:implications for the rational design of antibody repertoires.[鉴定识别不同大小抗原的抗体的特异性决定残基的差异：对抗体库的合理设计的影响]”J Mol Recognit.[分子识别期刊]2004；17:132-143；以及Padlan等人“Identification of specificity-determining residues in antibodies.[抗体中特异性决定残基的鉴定]”Faseb J.[美国实验生物学会联合会杂志]1995；9:133–139.，其中的每一个特别地通过援引并入本文。

术语“仅重链抗体”和“重链抗体”在本文中可互换使用，并且在最广泛的意义上是指缺乏常规抗体的轻链的抗体，或者抗体的一个或多个部分，例如抗体的一个或多个臂(即，“重链抗体”可以由缺少轻链的抗体分离部分或除常规抗体之外的抗体形式组成)。这些术语特别地包括但不限于在CH1结构域不存在的情况下包含VH抗原结合结构域以及CH2和CH3恒定结构域的同源二聚体抗体；此类抗体的功能性(抗原结合)变体、可溶性VH变体、包含一个可变结构域(V-NAR)和五个C样恒定结构域(C-NAR)的同源二聚体的Ig-NAR及其功能片段；以及可溶性单结构域抗体(例如UniDabs^TM)。在一个实施例中，仅重链抗体由可变区抗原结合结构域构成，该可变区抗原结合结构域由框架1、CDR1、框架2、CDR2、框架3、CDR3和框架4构成。在另一个实施例中，仅重链抗体由抗原结合结构域、铰链区的至少一部分以及CH2和CH3结构域构成。在另一个实施例中，仅重链抗体由抗原结合结构域、铰链区的至少一部分和CH2结构域构成。在另一个实施例中，仅重链抗体由抗原结合结构域、铰链区的至少一部分和CH3结构域构成。本文还包括CH2和/或CH3结构域被截短的仅重链抗体。在另一个实施例中，重链由抗原结合结构域和至少一个CH(CH1、CH2、CH3或CH4)结构域构成，但没有铰链区。仅重链抗体可以呈二聚体的形式，其中两条重链彼此以二硫键或其他方式共价或非共价附接。仅重链抗体可以属于IgG亚类，但属于其他亚类(诸如IgM、IgA、IgD和IgE亚类)的抗体也包括在本文中。在特定实施例中，重链抗体可以属于IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚型，例如IgG1或IgG4亚型。在一个实施例中，重链抗体属于IgG1或IgG4亚型，其中一个或多个CH结构域被修饰以改变抗体的效应子功能。在一个实施例中，重链抗体属于IgG4亚型，其中一个或多个CH结构域被修饰以改变抗体的效应子功能。在一个实施例中，重链抗体属于IgG1亚型，其中一个或多个CH结构域被修饰以改变抗体的效应子功能。本文进一步描述了改变效应子功能的CH结构域的修饰。重链抗体的非限制性实例例如在WO 2018/039180中进行了描述，该文献的披露内容通过援引以其全文并入本文。

在一些实施例中，本文描述的仅重链抗体用作嵌合抗原受体(CAR)的结合(靶向)结构域。该定义特别地包括通过人免疫球蛋白转基因大鼠(例如UniRat^TM)产生的人仅重链抗体，例如比如UniAbs^TM。UniAbs^TM的可变区(VH)被称为UniDabs^TM，并且是多功能构建块，其可以与Fc区或血清白蛋白连接，用于开发具有多特异性、增加效力和延长半衰期的新颖治疗剂。因为同源二聚体UniAbs^TM缺乏轻链，并且因此缺乏VL结构域，所以抗原被单个结构域，即重链抗体(VH或VHH)的重链的可变结构域识别。

如本文所用的“完整抗体链”是包含全长可变区和全长恒定区(Fc)的抗体链。完整“常规”抗体包含完整轻链和完整重链，以及用于分泌IgG的轻链恒定结构域(CL)和重链恒定结构域、CH1、铰链、CH2和CH3。其他同种型，诸如IgM或IgA可以具有不同的CH结构域。恒定结构域可以是天然序列恒定结构域(例如，人天然序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。完整抗体可以具有一个或多个“效应子功能”，其是指可归因于抗体的Fc恒定区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)的那些生物活性。抗体效应子功能的实例包括C1q结合；补体依赖性细胞毒性；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；以及细胞表面受体的下调。恒定区变体包括改变效应子谱、与Fc受体的结合等的那些变体。

取决于它们的重链的Fc(恒定结构域)的氨基酸序列，抗体和各种抗原结合蛋白可以作为不同的类别提供。重链Fc区有五大类别：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些中的几种可以进一步分为“亚类”(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgA2。对应于不同类别的抗体的Fc恒定结构域可以分别被称为α、δ、ε、γ和μ。不同类别的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是熟知的。Ig形式包括铰链修饰或无铰链形式。Roux等人(1998)J.Immunol.[免疫学杂志]161:4083-4090；Lund等人(2000)Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学杂志]267:7246-7256；US2005/0048572；美国2004/0229310。基于它们的恒定结构域的氨基酸序列，可以将来自任何脊椎动物物种的轻链分配到两种类型(被称为κ(kappa)和λ(lambda))之一。根据本披露实施例的抗体可以包含κ轻链序列或λ轻链序列。

“功能性Fc区”具有天然序列Fc区的“效应子功能”。效应子功能的非限制性实例包括C1q结合；CDC；Fc受体结合；ADCC；ADCP；细胞表面受体(例如，B细胞受体)的下调等。此类效应子功能通常需要Fc区与受体，例如FcγRI；FcγRIIA；FcγRIIB1；FcγRIIB2；FcγRIIIA；FcγRIIIB受体以及低亲和力FcRn受体相互作用；并且可以使用本领域已知的各种测定来评估。“死亡”或“沉默”Fc是已经突变以保留关于例如延长血清半衰期的活性，但不激活高亲和力Fc受体，或对Fc受体的亲和力降低的Fc。

“天然序列Fc区”包含与在自然界中发现的Fc区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。天然序列人Fc区包括例如天然序列人IgG1 Fc区(非A和A同种异型)；天然序列人IgG2 Fc区；天然序列人IgG3 Fc区；和天然序列人IgG4 Fc区，以及其天然存在的变体。

“变体Fc区”包含由于至少一个氨基酸修饰，例如一个或多个(例如，两个或更多个、三个或更多个、四个或更多个)氨基酸取代而不同于天然序列Fc区的氨基酸序列。说明性地，在一些实施例中，变体Fc区与天然序列Fc区或亲本多肽的Fc区相比具有至少一个氨基酸取代，例如在天然序列Fc区或亲本多肽的Fc区中具有约一个至约十个氨基酸取代，例如约一个至约五个氨基酸取代。在一些实施例中，本文的变体Fc区将与天然序列Fc区和/或亲本多肽的Fc区具有至少约80％同源性，例如与其具有至少约85％同源性，例如与其具有至少约90％同源性，例如与其具有至少约95％同源性，例如与其具有至少约99％同源性。

如本文所用，“异二聚化改变”是指Fc区的A链和B链(即，包含Fc区的两条链，其中一条链在本文中称为“A”链，而另一条链在本文中称为“B”链)中促进异二聚体Fc区(即，其中Fc区的A链和B链不具有相同氨基酸序列的Fc区)形成的改变。在一些实施例中，异二聚化改变可以是不对称的，即，具有特定改变的A链可与具有不同改变的B链配对。这些改变促进异二聚化而不利于同二聚化。可例如通过在其中一条多肽链是假Fc而另一条是scFv-Fc的情况下由聚丙烯酰胺凝胶电泳确定的大小差异来评估是否已形成异二聚体或同二聚体。此类配对异二聚化改变的一个非限制性实例是所谓的“杵和臼(knobs and holes)”取代。参见，例如美国专利号7,695,936和美国专利申请公开号2003/0078385。如本文所用，包含一对杵臼取代的Fc区包含A链中的一个取代和B链中的另一个取代。例如，与未修饰的A链和B链中发现的相比，已发现IgG1 Fc区的A链和B链中的以下杵臼取代增加异二聚体形成，并且可用于本披露的非限制性实施例中：1)一条链中的Y407T和另一条链中的T366Y；2)一条链中的Y407A和另一条链中的T366W；3)一条链中的F405A和另一条链中的T394W；4)一条链中的F405W和另一条链中的T394S；5)一条链中的Y407T和另一条链中的T366Y；6)一条链中的T366Y和F405A和另一条链中的T394W和Y407T；7)一条链中的T366W和F405W和另一条链中的T394S和Y407A；8)一条链中的F405W和Y407A和另一条链中的T366W和T394S；以及9)Fc的一个多肽中的T366W和另一个中的T366S、L368A和Y407V。可替代地或除了此类改变之外，产生新的二硫桥的取代可促进异二聚体形成。参见例如美国专利申请公开号2003/0078385。IgG1 Fc区中的此类改变包括但不限于以下取代：一条Fc多肽链中的Y349C和另一条Fc多肽链中的S354C；一条Fc多肽链中的Y349C和另一条Fc多肽链中的E356C；一条Fc多肽链中的Y349C和另一条Fc多肽链中的E357C；一条Fc多肽链中的L351C和另一条Fc多肽链中的S354C；一条Fc多肽链中的T394C和另一条Fc多肽链中的E397C；或一条Fc多肽链中的D399C和另一条Fc多肽链中的K392C。另外地或可替代地，改变例如CH3-CH3界面中的一个或多个残基的电荷的取代可以增强异二聚体形成，如例如WO 2009/089004中所述，该文献通过引用并入本文。此类取代在本文中称为“电荷对取代”，并且包含一对电荷对取代的Fc区包含A链中的一个取代和B链中的不同取代。电荷对取代的非限制性实例包括以下：1)一条链中的K409D或K409E加上另一条链中的D399K或D399R；2)一条链中的K392D或K392E加上另一链中的D399K或D399R；3)一条链中的K439D或K439E加上另一条链中的E356K或E356R；以及4)一条链中的K370D或K370E加上另一条链中的E357K或E357R。此外，当与其他异二聚化改变一起使用时，两条链中的取代R355D、R355E、K360D或K360R可以稳定异二聚体。特定的电荷对取代可以单独使用或与其他电荷对取代一起使用。单对电荷对取代及其组合的具体实例包括以下：1)一条链中的K409E加上另一条链中为D399K；2)一条链中的K409E加上另一条链中的D399R；3)一条链中的K409D加上另一条链中为D399K；4)一条链中的K409D加上另一条链中为D399R；5)一条链中的K392E加上另一条链中的D399R；6)一条链中的K392E加上另一条链中为D399K；7)一条链中的K392D加上另一链中的D399R；8)一条链中的K392D加上另一条链中为D399K；9)一条链中的K409D和K360D加上另一条链中的D399K和E356K；10)一条链中的K409D和K370D加上另一条链中的D399K和E357K；11)一条链中的K409D和K392D加上另一条链中的D399K、E356K和E357K；12)一条链条中的K409D和K392D加上另一条链条中的D399K；13)一条链中的K409D和K392D加上另一条链中的D399K和E356K；14)一条链中的K409D和K392D加上另一条链中的D399K和D357K；15)一条链条中的K409D和K370D加上另一条链条中的D399K和D357K；16)一条链条中的D399K加上另一条链条中的K409D和K360D；和17)一条链条中的K409D和K439D加上另一条链条中的D399K和E356K。这些异二聚化改变中的任一者都可用于包含如本文所述的变体Fc区的多肽。

在一些非限制性实施例中，变体Fc序列可在CH2区中包含三个氨基酸取代以减少EU索引位置234、235和237处的FcγRI结合(参见Duncan等人,(1988)Nature[自然]332:563)。EU索引位置330和331的补体C1q结合位点中的两个氨基酸取代减少了补体固定(参见Tao等人,J.Exp.Med.[实验医学杂志]178:661(1993)以及Canfield和Morrison,J.Exp.Med.[实验医学杂志]173:1483(1991))。在位置233-236处取代为人IgG1或IgG2残基和在位置327、330和331处取代为人IgG4残基极大地减少了ADCC和CDC(参见例如，ArmourKL.等人,1999Eur J Immunol.[欧洲免疫学杂志]29(8):2613-24；和Shields R.L.等人,2001.J Biol Chem.[生物化学杂志]276(9):6591-604)。人IgG4Fc氨基酸序列(UniProtKB编号P01861)在本文中以SEQ ID NO:76提供。沉默的IgG1例如在以下中描述：Boesch,A.W.等人,“Highly parallel characterization of IgG Fc binding interactions.[IgG Fc结合相互作用的高度平行表征]”MAbs[单克隆抗体],2014.6(4):第915-27页，该文献的披露内容通过援引以其全文并入本文。

其他Fc变体是可能的，包括但不限于能够形成二硫键的区域被删除，或者某些氨基酸残基在天然Fc的N末端消除，或者向其中添加甲硫氨酸残基的Fc变体。因此，在一些实施例中，抗体的一个或多个Fc部分可在铰链区中包含一个或多个突变以消除二硫键。在又一个实施例中，Fc的铰链区可以被完全去除。在再一个实施例中，抗体可包含Fc变体。

此外，可构建Fc变体，以通过取代(突变)、缺失或添加氨基酸残基来去除或显著降低效应子功能，从而实现补体结合或Fc受体结合。例如，但不作为限制，缺失可发生在补体结合位点，诸如C1q结合位点。用于制备免疫球蛋白Fc片段的此类序列衍生物的技术在国际专利公布号WO 97/34631和WO 96/32478中披露。另外，Fc结构域可以通过磷酸化、硫酸化、酰化、糖基化、甲基化、法呢基化、乙酰化、酰胺化等进行修饰。

具有降低的效应子功能的抗体包括但不限于根据EU编号具有Fc区残基238、265、269、270、297、327和329中的一个或多个的取代的那些(参见例如美国专利号6,737,056)。在一些实施例中，具有降低的效应子功能的变体Fc区包含在根据EU编号的氨基酸位置265、269、270、297和327中的两个或更多个处的取代，包括根据EU编号其中残基265和297被取代为丙氨酸的所谓“DANA”Fc突变体(即根据EU编号，D265A和N297A)(参见例如美国专利号7,332,581)。在一些实施例中，具有降低的效应子功能的变体Fc区包含以下两个氨基酸取代：D265A和N297A。

在一些实施例中，效应子功能通过消除糖基化的恒定区中的突变(例如“效应子减少的突变”)而降低。在一些实施例中，效应子减少的突变是CH2区中的N297A或DANA突变(D265A+N297A)。Shields等人,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]276(9):6591-6604(2001)。在一些实施例中，效应子减少的突变是CH2区中的N297G或DANG突变(D265A+N297G)。在一些实施例中，变体Fc区在N297处缺乏糖基化，例如变体Fc区是在N297处缺乏糖基化的变体Fc区，如国际专利公开号WO 2014/153063中所述，其通过援引并入本文。替代性地，导致效应子功能降低或消除的其他突变包括：K322A和L234A/L235A(LALA)。替代性地，可通过生产技术降低或消除效应子功能，诸如在不糖基化的宿主细胞(例如，大肠杆菌)中的表达，或者在导致在促进效应子功能方面无效或不太有效的改变的糖基化模式的宿主细胞中的表达(例如，Shinkawa等人,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]278(5):3466-3473(2003))。

在一些实施例中，野生型人Fc区的位置329(EU编号)(P329)处的脯氨酸被甘氨酸或精氨酸或足够大以破坏Fc/Fcγ受体界面内的脯氨酸三明治结构的氨基酸残基取代，该界面在Fc的P329与FcgRIII的色氨酸残基W87和W110之间形成(Sondermann等人,Nature[自然]406,267-273(2000年7月20日))。在一些另外的实施例中，Fc变体区中的至少一个另外的氨基酸取代是S228P、E233P、L234A、L235A、L235E、N297A、N297D或P331S。在一些实施例中，至少一个另外的氨基酸取代是人IgG1 Fc区的L234A和L235A或人IgG4Fc区的S228P和L235E，全部根据EU编号(参见例如，美国专利号8,969,526，其通过援引以其全文并入本文)。

在一些实施例中，变体Fc区具有被甘氨酸取代的人IgG Fc区的P329，其中该变体Fc区在人IgG1 Fc区的L234A和L235A或人IgG4Fc区的S228P和L235E处包含至少两个另外的氨基酸取代，并且其中残基根据EU编号进行编号(参见例如美国专利号8,969,526)。在一些实施例中，包含P329G、L234A和L235A(EU编号)取代的变体Fc区表现出降低的对人FcγRIIIA和FcγRIIA的亲和力。

在一些实施例中，变体Fc区包含三重突变：在根据EU编号的位置P329处的氨基酸取代、L234A和L235A突变(P329/LALA)(参见例如，美国专利号8,969,526)。在一些实施例中，变体Fc区包含以下氨基酸取代：根据EU编号，P329G、L234A和L235A。

在一些实施例中，抗体包含含有T366W突变的变体人IgG4 CH3结构域序列，其在本文中可任选地被称为IgG4 CH3杵序列。在一些实施例中，抗体包含含有T366S突变、L368A突变和Y407V突变的变体人IgG4 CH3结构域序列，其在本文中可任选地被称为IgG4 CH3臼序列。本文所述的IgG4 CH3突变可以以任何合适的方式利用，以便在抗体二聚体中第一单体的第一重链恒定区上放置一个“杵”，并且在抗体二聚体中第二单体的第二重链恒定区上放置一个“臼”，从而促进抗体中所期望的一对重链多肽亚基的适当配对(异源二聚化)。

在一些实施例中，抗体包含含有变体人IgG4 Fc区的重链多肽亚基，该变体人IgG4Fc区包含S228P突变、F234A突变、L235A突变和T366W突变(杵)。在一些实施例中，抗体包含具有变体人IgG4 Fc区的重链多肽亚基，该变体人IgG4 Fc区包含S228P突变、F234A突变、L235A突变、T366S突变、L368A突变、和Y407V突变(臼)。

术语“包含Fc区的抗体”是指包含Fc区的抗体。Fc区的C末端赖氨酸(根据EU编号系统的残基447)可以例如在抗体纯化期间或通过编码抗体的核酸的重组工程化被去除。因此，具有根据本披露的Fc区的抗体可以包括具有或没有K447的抗体。

本披露的各方面包括包含呈单价或二价构型的仅重链可变区的抗体。如本文所用，如参考仅重链可变区结构域使用的术语“单价构型”意味着仅存在一个仅重链可变区结构域，具有单个结合位点。相比之下，如参考仅重链可变区结构域使用的术语“二价构型”意味着存在两个仅重链可变区结构域(各自具有单个结合位点)，并且通过接头序列连接。接头序列的非限制性实例在本文中进一步讨论，并且包括但不限于具有各种长度的GS接头序列。当仅重链可变区呈二价构型时，两个仅重链可变区结构域中的每一个都可以与相同抗原或不同抗原(例如，对于相同蛋白质上的不同表位；对于两个不同的蛋白质等)结合。然而，除非另外特别说明，否则表示为呈“二价构型”的仅重链可变区被理解为含有两个相同的仅重链可变区结构域，通过接头序列连接，其中两个相同的仅重链可变区结构域中的每一个都可以与相同的靶抗原结合。

本披露的方面包括具有多特异性构型的抗体，多特异性构型包括但不限于双特异性、三特异性等构型。多种方法和蛋白质构型是已知的并用于双特异性单克隆抗体(BsMAB)、三特异性抗体等。

通过重组融合两个或更多个抗体的可变结构域，已经开发了用于产生多价人工抗体的各种方法。在一些实施例中，多肽上的第一和第二抗原结合结构域通过多肽接头连接。这种多肽接头的一个非限制性实例是GS接头，其氨基酸序列为四个甘氨酸残基，接着一个丝氨酸残基，并且其中该序列重复n次，其中n是范围为从1到约10的整数(SEQ ID NO:68)，诸如2、3、4、5、6、7、8或9。此类接头的非限制性实例包括GGGGS(SEQ ID NO:49)(n＝1)和GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:50)(n＝2)。也可以使用其他合适的接头，并且描述于例如Chen等人,Adv Drug Deliv Rev.[高级药物递送综述]2013年10月15日；65(10):1357-69中，该文献的披露内容通过援引以其全文并入本文。

术语“三链抗体样分子”或“TCA”在本文中用于指抗体样分子，其包含三个多肽亚基、基本上由其组成或由其组成，其中两个包含单克隆抗体的一条重链和一条轻链、基本上由其组成或由其组成，或由此类抗体链的功能性抗原结合片段组成，该功能性抗原结合片段包含抗原结合区和至少一个CH结构域。此重链/轻链对对于第一抗原具有结合特异性。第三多肽亚基包含具有Fc部分的仅重链抗体、基本上由其组成或由其组成，该Fc部分包含CH2和/或CH3和/或CH4结构域，CH1结构域不存在，以及一个或多个结合第二抗原表位或第一抗原的不同表位的抗原结合结构域(例如，两个抗原结合结构域)，其中这种结合结构域来源于抗体重链或轻链的可变区或与其具有序列同一性。这种可变区的一部分可以由V_H和/或V_L基因片段、D和J_H基因片段或J_L基因片段编码。可变区可以由重排的V_HDJ_H、V_LDJ_H、V_HJ_L或V_LJ_L基因片段编码。

TCA结合化合物利用“仅重链抗体”或“重链抗体”或“重链多肽”，如本文所用，其意指包含重链恒定区CH2和/或CH3和/或CH4，但没有CH1结构域的单链抗体。在一个实施例中，重链抗体由抗原结合结构域、铰链区的至少一部分以及CH2和CH3结构域构成。在另一个实施例中，重链抗体由抗原结合结构域、铰链区的至少一部分和CH2结构域构成。在另一个实施例中，重链抗体由抗原结合结构域、铰链区的至少一部分和CH3结构域构成。本文还包括CH2和/或CH3结构域被截短的重链抗体。在另一个实施例中，重链由抗原结合结构域和至少一个CH(CH1、CH2、CH3或CH4)结构域构成，但没有铰链区。仅重链抗体可以呈二聚体的形式，其中两条重链彼此以二硫键或其他方式共价或非共价附接，并且可以任选地包括在一个或多个CH结构域之间的不对称界面(例如杵臼(knobs-in-holes，KiH)界面)，以有利于多肽链之间的适当配对。重链抗体可以属于IgG亚类，但属于其他亚类(诸如IgM、IgA、IgD和IgE亚类)的抗体也包括在本文中。在特定实施例中，重链抗体属于IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚型，特别是IgG1亚型或IgG4亚型。TCA结合化合物的非限制性实例例如在WO 2017/223111和WO2018/052503中进行了描述，这些文献的披露内容通过援引以其全文并入本文。

本披露的方面包括包含与轻链可变区(VL)配对的仅重链可变区的抗体。在一些实施例中，与仅重链可变区配对的轻链可变区被称为“固定轻链”可变区。在某些实施例中，抗体包含两个仅重链可变区，每个与固定轻链可变区配对。在一些实施例中，固定轻链可变区序列与轻链恒定区序列连接以形成全长抗体轻链多肽。在一些实施例中，抗体包含两条全长重链多肽和两条全长轻链多肽。在某些实施例中，全长重链多肽包含不同的序列，而全长轻链多肽包含相同的序列(例如，两个全长轻链多肽是相同的)。

重链抗体占骆驼科动物(例如，骆驼和美洲驼)产生的IgG抗体的约四分之一(Hamers-Casterman C.等人Nature.[自然]363,446-448(1993))。这些抗体由两条重链形成，但没有轻链。因此，可变抗原结合部分被称为VHH结构域，并且它代表最小的天然存在的、完整的抗原结合位点，长度只有大约120个氨基酸(Desmyter,A.等人J.Biol.Chem.[生物化学杂志]276,26285-26290(2001))。通过免疫可以产生针对多种抗原具有高特异性和亲和力的重链抗体(van der Linden,R.H.等人Biochim.Biophys.Acta.[生物化学与生物物理学报]1431,37-46(1999))，并且可以在酵母中容易地克隆并表达VHH部分(Frenken,L.G.J.等人J.Biotechnol.[生物技术期刊]78,11-21(2000))。它们的表达水平、溶解性和稳定性显著高于经典F(ab)或Fv片段(Ghahroudi,M.A.等人FEBS Lett.[欧洲生物化学学会联合会快报]414,521-526(1997))。还显示鲨鱼在其抗体中具有单个VH样结构域，被称为VNAR。(Nuttall等人Eur.J.Biochem.[欧洲生物化学杂志]270,3543-3554(2003)；Nuttall等人Function and Bioinformatics[功能与生物信息学]55,187-197(2004)；Dooley等人,Molecular Immunology[分子免疫学]40,25-33(2003))。

本文可互换使用的术语“IL2”和“IL-2”是指白细胞介素-2，其是15.5至16kDa细胞因子信号传导蛋白分子，通过与淋巴细胞表达的IL2受体复合物结合来调节某些免疫细胞的活性。术语“IL2”包括任何人和非人动物物种的IL2蛋白，并且特别地包括人IL2以及非人哺乳动物的IL2。人IL-2序列(UniProtKB No.P60568)在本文中作为SEQ ID NO:41提供。本文使用的术语“人IL2”包括人IL2的任何变体、同种型和物种同源物，无论其来源或制备方式如何。因此，“人IL2”包括由细胞天然表达的人IL2和在用人IL2基因转染的细胞上表达的IL2。

本文可互换使用的术语“IL2R”、“IL-2R”、“IL2受体”和“IL-2受体”通常指IL2受体复合物，其由三个多肽亚基或链(称为如阿尔法、A或α链，贝塔、B或β链，以及伽马、G或γ链)构成。术语“IL2R”包括任何人和非人动物物种的任何IL2R蛋白或IL2受体复合物的任何亚基，并且具体包括人IL2R以及非人哺乳动物的IL2R。本文使用的术语“人IL2R”包括人IL2R的任何变体、同种型和物种同源物，无论其来源或制备方式如何。因此，“人IL2R”包括由细胞天然表达的人IL2R和在用人IL2R基因转染的细胞上表达的IL2R。

术语“IL2RA”也称为CD25，并且人IL2RA序列(UniProtKB No.P01589)在本文中作为SEQ ID NO:38提供。

术语“IL2RB”IL-2RB也称为CD122，并且人IL2RB序列(UniProtKB No.P14784)在本文中作为SEQ ID NO:39提供。

术语“IL2RG”IL-2RG也称为CD132，并且人IL2RG序列(UniProtKB No.P31785)在本文中作为SEQ ID NO:40提供。

术语“抗IL2R仅重链抗体”、“IL2R仅重链抗体”、“抗IL2R重链抗体”和“IL2R重链抗体”在本文中可互换使用，是指如上定义的仅重链抗体，与IL2R免疫特异性结合，包括人IL2R，如上所定义。该定义包括但不限于由转基因动物(诸如表达人免疫球蛋白的转基因大鼠或转基因小鼠，包括产生人抗IL2R UniAb^TM抗体的UniRats^TM，如上所定义)产生的人重链抗体。

本文使用的术语“激动剂”是指与不存在该分子的情况下功能或活性相比引起相同功能或活性增加的分子。因此，信号传导途径的“激动剂”是其存在导致信号传导途径的功能或活性增加的分子。本文使用的术语“激动”是指引起功能或活性的增加。在一些实施例中，可以使用本文描述的测定法来确定抗体的激动剂功能。

本文使用的术语“拮抗剂”是指与不存在该分子的情况下功能或活性相比引起相同功能或活性降低的分子。因此，信号传导途径的“拮抗剂”是其存在导致信号传导途径的功能或活性降低的分子。本文使用的术语“拮抗”是指引起功能或活性的降低。

关于参考多肽序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”定义为在用以实现最大百分比序列同一性并且不将任何保守取代视为序列同一性的一部分而比对序列和引入缺口(如果需要)之后，候选序列中与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。用于确定氨基酸序列同一性百分比的目的的比对可以以本领域技术范围内的各种方式实现，例如使用公众可用的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于比对序列的适当参数，包括为了在被比较的序列的全长上实现最大比对所需要的任何算法。然而，出于本文的目的，％氨基酸序列同一性值是使用序列比较计算机程序ALIGN-2生成的。

“分离的”抗体是已经从其天然环境的组分鉴定并且分离和/或回收的抗体。其天然环境的污染组分是会干扰该抗体的诊断或治疗用途的物质，并且可以包括酶、激素和其他蛋白或非蛋白溶质。在一些实施例中，抗体将被纯化(1)至如通过劳里法确定的大于95重量％诸如例如大于99重量％的抗体，(2)至足以获得通过使用转杯式测序仪发现的N-末端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度，或(3)至通过SDS-PAGE在还原或非还原条件下使用考马斯蓝或例如银染法发现的均质性。分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体，因为抗体的天然环境的至少一种组分将不存在。然而，通常的是，通过至少一个纯化步骤制备分离的抗体。

本披露的抗体包括多特异性抗体。多特异性抗体具有多于一种结合特异性。术语“多特异性”特别地包括“双特异性”和“三特异性”，以及高阶独立特异性结合亲和力，诸如高阶多表位特异性，以及四价抗体和抗体片段。术语“多特异性抗体”、“多特异性仅重链抗体”、“多特异性重链抗体”和“多特异性UniAb^TM”在本文中以最广泛的意义使用，并且涵盖具有多于一种结合特异性的所有抗体。本披露的多特异性重链抗IL2R抗体具体包括免疫特异性结合IL2R蛋白(例如人IL2RA、IL2RB和/或IL2RG蛋白)上的两个或更多个非重叠表位的抗体。本披露的多特异性重链抗IL2R抗体还具体包括免疫特异性结合IL2R蛋白(例如人IL2RB)上的表位和不同蛋白(例如IL2RG蛋白，例如人IL2RG)上的表位的抗体。

本披露的抗体包括单特异性抗体，具有一种结合特异性。单特异性抗体特别地包括具有单一结合特异性的抗体，以及包含具有相同结合特异性的多于一个结合单元的抗体。术语“单特异性抗体”、“单特异性仅重链抗体”、“单特异性重链抗体”和“单特异性UniAb^TM”在本文中以最广泛的意义使用，并且涵盖具有一种结合特异性的所有抗体。本披露的单特异性重链抗IL2R抗体具体包括免疫特异性结合IL2R蛋白(如人IL2R蛋白或其亚基，如人IL2RA、IL2RB或IL2RG蛋白)上一个表位的抗体。本披露的单特异性重链抗IL2R抗体特别地还包括具有多于一个结合单元的抗体(例如，多价抗体)，这些结合单元与IL2R蛋白(如人IL2R)上的表位免疫特异性结合。例如，根据本披露的实施例的单特异性抗体可以包括含有两个抗原结合结构域的重链可变区，其中每个抗原结合结构域结合IL2R蛋白(即，IL2RA、IL2RB、或IL2RG蛋白)上的相同表位。

“表位”是单个抗体分子所结合的抗原分子表面上的位点。通常，抗原具有几个或许多不同的表位，并且与许多不同的抗体反应。该术语特别地包括线性表位和构象表位。

“表位作图”是鉴定抗体在其靶抗原上的结合位点或表位的过程。抗体表位可以是线性表位或构象表位。线性表位由蛋白质中的连续氨基酸序列形成。构象表位由蛋白质序列中不连续的氨基酸形成，但在蛋白质折叠成其三维结构时将它们聚集在一起。

“多表位特异性”是指与相同或不同靶标上的两个或更多个不同表位特异性结合的能力。如上说明，本披露特别地包括具有多表位特异性的抗IL2R重链抗体，即与第一IL2R蛋白(如人IL2RB)上的一个或多个非重叠表位结合的抗IL2R重链抗体；以及与第一IL2R蛋白(例如IL2RB蛋白)上的一个或多个表位结合并与不同IL2R蛋白(例如IL2RG蛋白)上的表位结合的抗IL2R重链抗体。术语抗原的“一个或多个非重叠表位”或“一个或多个非竞争性表位”在本文中定义为意指被一对抗原特异性抗体的一个成员识别但不被另一个成员识别的一个或多个表位。靶向多特异性抗体上的相同抗原、识别非重叠表位的成对抗体或抗原结合区不竞争与此抗原的结合，并且能够同时结合此抗原。

当两种抗体识别相同或空间重叠的表位时，抗体将与参考抗体结合“基本上相同的表位”。用于确定两个表位是否与相同或空间重叠的表位结合的最广泛使用和最快速的方法是竞争测定，其可以使用标记抗原或标记抗体以所有数量的不同形式进行配置。通常，将抗原固定在96孔板上，并且使用放射性或酶标记测量未标记抗体阻断标记抗体结合的能力。

如本文所用的术语“价”是指抗体分子中指定数量的结合位点。

“单价”抗体具有一个结合位点。因此，单价抗体也是单特异性的。

“多价”抗体具有两个或更多个结合位点。因此，术语“二价”、“三价”和“四价”分别是指存在两个结合位点、三个结合位点和四个结合位点。因此，根据本披露的双特异性抗体至少是二价的，并且可以是三价的、四价的或其他多价的。根据本披露的实施例的二价抗体对于同一表位(即，二价、单互补位)或对于两个不同表位(即，二价、双互补位)可以具有两个结合位点。

各种方法和蛋白质构型是已知的并且用于制备双特异性单克隆抗体(BsMAB)、三特异性抗体等。

术语“人抗体”在本文中用于包括具有来源于人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本文中的人抗体可以包含并非由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，在体外通过随机或位点特异性诱变引入的突变或在体内通过体细胞突变引入的突变)。术语“人抗体”特别地包括具有人重链可变区序列的仅重链抗体，由转基因动物(诸如转基因大鼠或小鼠)产生，特别是由UniRats^TM产生的UniAbs^TM，如上所定义。

“嵌合抗体”或“嵌合免疫球蛋白”意指包含来自至少两个不同Ig基因座的氨基酸序列的免疫球蛋白分子，例如，包含由人Ig基因座编码的部分和由大鼠Ig基因座编码的部分的转基因抗体。嵌合抗体包括具有非人Fc区或人工Fc区以及人独特型的转基因抗体。此类免疫球蛋白可以从本披露的动物中分离，这些动物已被工程化以产生此类嵌合抗体。

如本文所用，术语“效应细胞”是指参与免疫应答的效应阶段而非免疫应答的认知和激活阶段的免疫细胞。一些效应细胞表达特定的Fc受体并执行特定的免疫功能。在一些实施例中，效应细胞诸如自然杀伤细胞能够诱导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。例如，表达FcR的单核细胞和巨噬细胞参与靶细胞的特异性杀伤，并将抗原呈递给免疫系统的其他组分，或与呈递抗原的细胞结合。在一些实施例中，效应细胞可以吞噬靶抗原或靶细胞。

“人效应细胞”是表达受体诸如T细胞受体或FcR并执行效应子功能的白细胞。例如，在一些实施例中，这些细胞至少表达FcγRIII并执行ADCC效应子功能。介导ADCC的人白细胞的实例包括自然杀伤(NK)细胞、单核细胞、细胞毒性T细胞和嗜中性粒细胞。效应细胞可以从其自然来源中分离，例如，从如本文所述的血液或PBMC中分离。

术语“免疫细胞”在本文中以最广泛的意义使用，包括但不限于骨髓或淋巴来源的细胞，例如淋巴细胞(诸如B细胞和T细胞，包括溶细胞性T细胞(CTL))、杀伤细胞、自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、多形核细胞，诸如嗜中性粒细胞、粒细胞、肥大细胞和嗜碱性粒细胞。

“抗体效应子功能”是指可归因于抗体的Fc区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)的那些生物活性。抗体效应子功能的实例包括C1q结合；补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如，B细胞受体；BCR)的下调等。

“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”和“ADCC”是指细胞介导的反应，其中表达Fc受体(FcR)的非特异性细胞毒性细胞(例如，自然杀伤(NK)细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)识别靶细胞上结合的抗体并且随后引起靶细胞的裂解。用于介导ADCC的初级细胞NK细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。造血细胞上的FcR表达在Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol[免疫学年评]9:457-92(1991)的第464页上的表3中总结。为了评估目的分子的ADCC活性，可以进行体外ADCC测定，诸如美国专利号5,500,362或5,821,337中描述的测定。用于此类测定的有用效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和自然杀伤(NK)细胞。可替代地或另外，可以在体内，例如在动物模型(诸如Clynes等人，PNAS(USA)[美国国家科学院院刊]95:652-656(1998)中披露的动物模型)中对目的分子的ADCC活性进行评估。

“补体依赖性细胞毒性”或“CDC”是指分子在补体存在的情况下裂解靶标的能力。补体激活途径是通过补体系统的第一组分(C1q)与和同源抗原复合的分子(例如，抗体)结合而启动的。为了评估补体激活，可以进行CDC测定(例如，如Gazzano-Santoro等人,J.Immunol.Methods[免疫学方法杂志]202:163(1996)中所述)。

“结合亲和力”是指分子(例如，抗体)的单个结合位点与其结合配偶体(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另外指示，否则如本文所用，“结合亲和力”是指反映结合对的成员(例如，抗体与抗原)之间的1:1相互作用的固有结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可以表示为解离常数(Kd)。亲和力可以通过本领域已知的常见方法测量。低亲和力抗体通常缓慢地结合抗原并且倾向于容易解离，而高亲和力抗体通常更快地结合抗原并且倾向于保持结合。

如本文所用，“Kd”或“Kd值”是指在动力学模式中使用Octet QK384仪器(佛特比奥公司(Fortebio Inc.)，门洛帕克，加利福尼亚州)通过生物层干涉技术确定的解离常数。例如，向抗小鼠Fc传感器加载小鼠Fc融合抗原，并且然后浸入含有抗体的孔中以测量浓度依赖性缔合速率(kon)。在最后步骤中测量抗体解离速率(koff)，其中将传感器浸入仅含有缓冲液的孔中。Kd是koff/kon的比率。(关于更多细节，参见Concepcion,J等人,Comb ChemHigh Throughput Screen[组合化学与高通量筛选],12(8),791-800,2009)。

术语“治疗(treatment)”、“治疗(treating)”等在本文中通常用于意指获得所期望的药理学和/或生理学作用。作用就完全或部分预防疾病或其症状而言可以是预防性的和/或就部分或完全治愈疾病和/或可归因于疾病的不良作用而言可以是治疗性的。如本文所用的“治疗”涵盖哺乳动物的疾病的任何治疗，并且包括：(a)防止疾病发生在可能易患该疾病但尚未被诊断为患有该疾病的受试者中；(b)抑制该疾病，即阻止其发展；或(c)缓解该疾病，即引起疾病消退。治疗剂可以在疾病或损伤发作之前、期间或之后施用。对正在发生的疾病的治疗是特别令人感兴趣的，其中该治疗稳定或减少患者的不期望的临床症状。这种治疗期望在受影响组织完全丧失功能之前进行。主题治疗可以在疾病的症状阶段期间施用，并且在一些情况下在疾病的症状阶段之后施用。

“治疗有效量”旨在用于向受试者赋予治疗益处所必需的活性剂的量。例如，“治疗有效量”是诱导、减轻或以其他方式改善与疾病相关联的病理症状、疾病进展或生理状况或提高对疾患的抵抗力的量。

术语“免疫细胞中IL2R信号传导的激活介导”广义地指其中IL2/IL2R信号传导途径关联或涉及作为疾病或障碍特征的一种或多种病理过程的任何疾病或障碍。此类障碍包括但不限于感染性疾病、自身免疫性障碍(例如克罗恩病、多发性硬化症)、癌症、炎性疾病(例如关节炎)、或与IL-2介导的信号传导缺陷、T细胞增殖缺陷或T细胞功能障碍相关的疾病或障碍。

术语“受试者”、“个体”和“患者”在本文中可互换使用，是指正在评估治疗和/或正在治疗的哺乳动物。在一个实施例中，该哺乳动物是人。术语“受试者”、“个体”和“患者”包括但不限于患有癌症的个体、患有自身免疫性疾病的个体、患有病原体感染的个体等。受试者可以是人，但也包括其他哺乳动物，特别是可用作人疾病的实验室模型的那些哺乳动物，例如小鼠、大鼠等。

术语“药物配制品”是指呈使得活性成分的生物活性有效的形式，并且不含对该配制品所施用的受试者具有不可接受的毒性的另外的组分的配制品。此类配制品是无菌的。“药学上可接受的”赋形剂(例如，媒剂、添加剂)是可合理地施用于受试哺乳动物以提供有效剂量的所用活性成分的那些。

“无菌”配制品是无菌的或不含或基本上不含所有活微生物及其孢子。“冷冻”配制品是处于低于0℃的温度下的配制品。

“稳定的”配制品是在储存之后，其中的蛋白质基本上保留其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物活性的配制品。在一些实施例中，配制品在储存时基本上保持其物理和化学稳定性以及其生物活性。储存期通常基于配制品的预期保质期来选择。用于测量蛋白质稳定性的各种分析技术在本领域中是可用的，并且在以下进行综述：例如Peptide andProtein Drug Delivery[肽和蛋白质药物递送],247-301.Vincent Lee编辑,MarcelDekker公司，纽约，纽约州(Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.)出版(1991)以及Jones.A.Adv.Drug Delivery Rev.[先进药物输送评论]10:29-90)(1993)。可以在选定的温度下在选定的时间段内测量稳定性。稳定性可以多种不同的方式定性地和/或定量地进行评估，包括评估聚集体形成(例如，使用尺寸排阻色谱法、通过测量浊度和/或通过视觉检查)；使用阳离子交换色谱法、图像毛细管等电聚焦(icIEF)或毛细管区带电泳评价电荷异质性；氨基末端或羧基末端序列分析；质谱分析；比较还原抗体和完整抗体的SDS-PAGE分析；肽图(例如，胰蛋白酶或LYS-C)分析；评价抗体的生物活性或抗原结合功能；等。不稳定性可以涉及以下中的一种或多种：聚集、脱酰胺(例如Asn脱酰胺)、氧化(例如Met氧化)、异构化(例如Asp异构化)、剪切/水解/片段化(例如铰链区片段化)、琥珀酰亚胺形成、未配对的半胱氨酸、N末端延伸、C末端加工、糖基化差异等。

抗IL2R抗体

本披露提供了结合人IL2R的各种抗体家族。本披露的方面包括密切相关的抗体家族，其成员结合特定的IL2R亚基或链，例如结合IL2RB或IL2RG或其组合。

在一些实施例中，抗IL2RB抗体包含具有以下序列式的CDR序列。X表示可变氨基酸，在一些实施例中，其可以是下面列出的特定氨基酸：

CDR1(IL2RB_F09)

G G S I S S S X1 W(SEQ ID NO:26)

其中X1是D或N；

CDR2(IL2RB_F09)

I X2 H S G S T(SEQ ID NO:27)

其中X2是D或S；以及

CDR3(IL2RB_F09)

X3 R G X4 W E L X5 D A F D I(SEQ ID NO:28)

其中：

X3是G或A；

X4是S或Q；以及

X5是S或T。

在一些实施例中，抗IL2RB抗体包含分别包含SEQ ID NO:26、27和28的序列式的CDR1和CDR2和CDR3序列的任何组合。该家族的抗体在本文中可称为IL2RB_F09抗体。

CDR1(IL2RB_F18)

G F T F S X1 Y G(SEQ ID NO:29)

其中X1是S或T；

CDR2(IL2RB_F18)

I S Y D G S N X2(SEQ ID NO:30)

其中X2是K或R；以及

CDR3(IL2RB_F18)

A R D L D Y D X3 L T G D P V G G F D I(SEQ ID NO:31)

其中X3是V或I。

在一些实施例中，抗IL2RB抗体包含分别包含SEQ ID NO:29、30和31的序列式的CDR1、CDR2和CDR3序列的任何组合。该家族的抗体在本文中可称为IL2RB_F18抗体。

根据本披露的实施例的结合IL2RB的抗体可以包含一组CDR序列，其由本文定义并由表1中列出的提供的重链CDR1、CDR2和CDR3序列以及表2中列出的重链可变区(VH)示例。这些抗体提供了许多益处，有助于作为一种或多种临床治疗剂使用。这些抗体包含具有一系列结合亲和力的成员，从而允许选择具有所期望结合亲和力的特定序列。

表1.抗IL2RB重链抗体独特CDR氨基酸序列

表2.抗IL2RB重链抗体可变区氨基酸序列

在一些实施例中，抗IL2RG抗体包含具有以下序列式的CDR序列。X表示可变氨基酸，在一些实施例中，其可以是下面列出的特定氨基酸：

CDR1(IL2RG_F16)

G F X1 X2 X3 X4 Y Y(SEQ ID NO:32)

其中：

X1是T或I；

X2是F或V；

X3是S、N或G；以及

X4是D或N；

CDR2(IL2RG_F16)

I S X5 S G X6 X7 I(SEQ ID NO:33)

其中：

X5是S或N；

X6是D、S、G或N；以及

X7是T或I；以及

CDR3(IL2RG_F16)

ARGDAVSITGDY(SEQ ID NO:20)。

在一些实施例中，抗IL2RG抗体包含分别包含SEQ ID NO:32、33和34的序列式的CDR1和CDR2和CDR3序列的任何组合。该家族的抗体在本文中可称为IL2RG_F16抗体。

在一些实施例中，抗IL2RG抗体包含以下：包含GFTFSDYY(SEQ ID NO:15)的CDR1序列、包含ISSSGTTT(SEQ ID NO:19)的CDR2(IL2RG_F18)序列和包含ARGAAVAPGFDS(SEQ IDNO:21)的CDR3(IL2RG_F18)序列。该家族的抗体在本文中可称为IL2RG_F18抗体。

根据本披露的实施例的结合IL2RG的抗体包含一组CDR序列，其由本文定义并由表3中列出的提供的重链CDR1、CDR2和CDR3序列以及表4中列出的重链可变区(VH)示例。该抗体家族提供了许多益处，有助于作为一种或多种临床治疗剂使用。这些抗体包含具有一系列结合亲和力的成员，从而允许选择具有所期望结合亲和力的特定序列。

表3.抗IL2RG重链抗体CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列

表4.抗IL2RG重链抗体可变区氨基酸序列

合适的抗体可以选自本文提供的用于开发和治疗或其他用途(包括但不限于用作多特异性抗体，例如双特异性抗体)的那些。

候选蛋白质的亲和力的确定可以使用本领域已知的方法进行，诸如Biacore测量。本文所述的抗体家族的成员可以对IL2R具有亲和力，Kd为约10^-6至大约10^-11，包括但不限于：约10^-6至大约10^-10；约10^-6至大约10^-9；约10^-6至大约10^-8；约10^-8至大约10^-11；约10^-8至大约10^-10；约10^-8至大约10^-9；约10^-9至大约10^-11；约10^-9至大约10^-10；或这些范围内的任何值。可以用调节(例如，激动)IL2R生物活性的生物评估来确认亲和力选择，包括体外测定、临床前模型和临床试验，以及潜在毒性的评估。

本文所述抗体家族的成员与食蟹猴的IL2R蛋白发生交叉反应，这有利于使用食蟹猴作为动物模型来验证，例如，本文描述的抗体的作用机制、药代动力学、毒理学和其他属性。

在一些实施例中，本文中的IL2R特异性抗体包含VH结构域，该结构域包含在人VH框架中的CDR1、CDR2和CDR3序列。例如，CDR序列可以分别位于SEQ ID NO:11-14和22-25中列出的所提供示例性可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸残基26-33、51-58和97-116附近的区域中。本领域普通技术人员将理解，如果选择不同的框架序列，则CDR序列可能处于不同的位置中，尽管通常序列的顺序将保持不变。

在特定实施例中，抗IL2RB抗体包含SEQ ID NO:1-3中任一个的CDR1序列。在特定实施例中，CDR1序列包含SEQ ID NO:1。在特定实施例中，CDR1序列包含SEQ ID NO:2。在特定实施例中，CDR1序列包含SEQ ID NO:3。

在具体的实施例中，抗IL2RB抗体包含SEQ ID NO:4-6中任一个的CDR2序列。在特定实施例中，CDR2序列包含SEQ ID NO:4。在特定实施例中，CDR2序列包含SEQ ID NO:5。在特定实施例中，CDR2序列包含SEQ ID NO:6。

在特定实施例中，抗IL2RB抗体包含SEQ ID NO:7-10中任一个的CDR3序列。在特定实施例中，CDR3序列包含SEQ ID NO:7。在特定实施例中，CDR2序列包含SEQ ID NO:8。在特定实施例中，CDR2序列包含SEQ ID NO:9。在特定实施例中，CDR2序列包含SEQ ID NO:10。

在另一个实施例中，抗IL2RB仅重链抗体包含SEQ ID NO:1的CDR1序列；SEQ IDNO:4的CDR2序列；以及SEQ ID NO:7的CDR3序列。

在另一个实施例中，抗IL2RB抗体包含SEQ ID NO:1的CDR1序列；SEQ ID NO:4的CDR2序列；以及SEQ ID NO:8的CDR3序列。

在另一个实施例中，抗IL2RB抗体包含SEQ ID NO:2的CDR1序列；SEQ ID NO:5的CDR2序列；以及SEQ ID NO:9的CDR3序列。

在另一个实施例中，抗IL2RB抗体包含SEQ ID NO:3的CDR1序列；SEQ ID NO:6的CDR2序列；以及SEQ ID NO:10的CDR3序列。

在另一个实施例中，抗IL2RB抗体包含SEQ ID NO:11-14的重链可变区氨基酸序列中的任一个(表2)。

在仍另一个实施例中，抗IL2RB抗体包含SEQ ID NO:11的重链可变区序列。在仍另一个实施例中，抗IL2RB抗体包含SEQ ID NO:12的重链可变区序列。在仍另一个实施例中，抗IL2RB抗体包含SEQ ID NO:13的重链可变区序列。在仍另一个实施例中，抗IL2RB抗体包含SEQ ID NO:14的重链可变区序列。

在一些实施例中，本披露的抗IL2RB抗体中的CDR序列包含相对于SEQ ID NO:1-10中任一个中的CDR1、CDR2和/或CDR3序列或CDR1、CDR2和CDR3序列组的一个或两个氨基酸取代(表1)。

在一些实施例中，抗IL2RB抗体包含重链可变结构域(VH)并且与IL2RB结合，其中CDR3序列在氨基酸水平下与其CDR3序列在表1中提供的任一抗体的CDR3序列具有大于或等于80％，诸如至少85％、至少90％、至少95％或至少99％序列同一性。

在一些实施例中，抗IL2RB抗体包含重链可变结构域(VH)并且与IL2RB结合，其中整组CDR 1、2和3(组合)在氨基酸水平下与其CDR序列在表1中提供的抗体的CDR 1、2和3(组合)具有大于或等于百分之八十五(85％)(例如，≥90％，≥95％，≥98％，≥99％)的序列同一性。

在一些实施例中，抗IL2RB抗体包含重链可变区序列并且与IL2RB结合，该重链可变区序列与SEQ ID NO:11-14(在表2中示出)的任一重链可变区序列具有至少约80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性、至少95％同一性、至少98％同一性或至少99％同一性。

在一些实施例中，抗IL2RB抗体包含与固定轻链序列配对的如本文所述的重链可变区序列。在一些实施例中，固定轻链包含在人VL框架中的SEQ ID NO:44的CDR1序列、SEQID NO:45的CDR2序列和SEQ ID NO:46的CDR3序列。抗IL2RB VH区和固定轻链可变区一起对IL2RB具有结合亲和力。在一些实施例中，固定轻链包含SEQ ID NO:47的轻链可变区序列。在一些实施例中，固定轻链包含与SEQ ID NO:47的重链可变区序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％同一性百分比的序列。在一些实施例中，固定轻链进一步包含轻链恒定区序列(CL)。在一些实施例中，固定轻链包含SEQ ID NO:48的序列。

在一些实施例中，抗IL2RB抗体是包含本文所述的不与轻链序列配对的重链可变区序列的仅重链抗体。

在特定实施例中，抗IL2RG抗体包含SEQ ID NO:15-16中任一个的CDR1序列。在特定实施例中，CDR1序列包含SEQ ID NO:15。在特定实施例中，CDR1序列包含SEQ ID NO:16。

在特定实施例中，抗IL2RG抗体包含SEQ ID NO:17-19中任一个的CDR2序列。在特定实施例中，CDR2序列包含SEQ ID NO:17。在特定实施例中，CDR2序列包含SEQ ID NO:18。在特定实施例中，CDR2序列包含SEQ ID NO:19。

在特定实施例中，抗IL2RG抗体包含SEQ ID NO:20-21中任一个的CDR3序列。在特定实施例中，CDR3序列包含SEQ ID NO:20。在特定实施例中，CDR2序列包含SEQ ID NO:21。

在另一个实施例中，抗IL2RG仅重链抗体包含SEQ ID NO:15的CDR1序列；SEQ IDNO:17的CDR2序列；以及SEQ ID NO:20的CDR3序列。

在另一个实施例中，抗IL2RG抗体包含SEQ ID NO:15的CDR1序列；SEQ ID NO:18的CDR2序列；以及SEQ ID NO:20的CDR3序列。

在另一个实施例中，抗IL2RG抗体包含SEQ ID NO:16的CDR1序列；SEQ ID NO:18的CDR2序列；以及SEQ ID NO:20的CDR3序列。

在另一个实施例中，抗IL2RG抗体包含SEQ ID NO:15的CDR1序列；SEQ ID NO:19的CDR2序列；以及SEQ ID NO:21的CDR3序列。

在另一个实施例中，抗IL2RG抗体包含SEQ ID NO:22-25的重链可变区氨基酸序列中的任一个(表4)。

在仍另一个实施例中，抗IL2RG抗体包含SEQ ID NO:22的重链可变区序列。在仍另一个实施例中，抗IL2RB抗体包含SEQ ID NO:23的重链可变区序列。在仍另一个实施例中，抗IL2RB抗体包含SEQ ID NO:24的重链可变区序列。在仍另一个实施例中，抗IL2RB抗体包含SEQ ID NO:25的重链可变区序列。

在一些实施例中，本披露的抗IL2RG抗体中的CDR序列包含相对于SEQ ID NO:15-21中任一个中的CDR1、CDR2和/或CDR3序列或CDR1、CDR2和CDR3序列组(表3)的一个或两个氨基酸取代。

在一些实施例中，抗IL2RG抗体包含重链可变结构域(VH)并且与IL2RG结合，其中CDR3序列在氨基酸水平下与其CDR3序列在表3中提供的任一抗体的CDR3序列具有大于或等于80％，诸如至少85％、至少90％、至少95％或至少99％序列同一性。

在一些实施例中，抗IL2RG抗体包含重链可变结构域(VH)并且与IL2RG结合，其中整组CDR 1、2和3(组合)在氨基酸水平下与其CDR序列在表3中提供的抗体的CDR 1、2和3(组合)具有大于或等于百分之八十五(85％)(例如，≥90％，≥95％，≥98％，≥99％)的序列同一性。

在一些实施例中，抗IL2RG抗体包含重链可变区序列并且与IL2RG结合，该重链可变区序列与SEQ ID NO:22-25(在表4中示出)的任一重链可变区序列具有至少约80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性、至少95％同一性、至少98％同一性或至少99％同一性。

在一些实施例中，抗IL2RG抗体包含与固定轻链序列配对的如本文所述的重链可变区序列。在一些实施例中，固定轻链包含在人VL框架中的SEQ ID NO:44的CDR1序列、SEQID NO:45的CDR2序列和SEQ ID NO:46的CDR3序列。抗IL2RG VH区和固定轻链可变区一起对IL2RG具有结合亲和力。在一些实施例中，固定轻链包含SEQ ID NO:47的轻链可变区序列。在一些实施例中，固定轻链包含与SEQ ID NO:47的重链可变区序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％同一性百分比的序列。在一些实施例中，固定轻链进一步包含轻链恒定区序列(CL)。在一些实施例中，固定轻链包含SEQ ID NO:48的序列。

在一些实施例中，抗IL2RG抗体是包含本文所述的不与轻链序列配对的重链可变区序列的仅重链抗体。

多特异性抗体

本披露的方面包括多特异性抗体，例如双特异性抗体，其可具有本文讨论的任何构型，包括但不限于双特异性二价重链抗体，其包含通过不对称(例如，杵臼(KiH))界面相互关联的两个不相同的重链多肽亚基。在某些实施例中，双特异性、二价重链抗体可包含通过不对称界面相互关联的两个不相同的重链多肽亚基，并且可任选地进一步包括各自与两个重链多肽亚基之一关联的两个相同的固定轻链多肽亚基。

在一些实施例中，双特异性抗体包含至少一个结合第一IL2R亚基的重链可变区和至少一个结合第二IL2R亚基的重链可变区。在一些实施例中，双特异性抗体包含至少一个结合IL2RB的重链可变区和至少一个结合IL2RG的重链可变区。在一些实施例中，多特异性抗体进一步包含Fc部分，该Fc部分包含CH2和/或CH3和/或CH4结构域，但不存在CH1结构域。

各种形式的多特异性抗体都在本披露的范围内，包括但不限于单链多肽、二链多肽、三链多肽、四链多肽、及其多种。本文中的多特异性抗体具体包括与IL2RB和IL2RG结合的那些。

在一些实施例中，多特异性抗体包含含有IL2RB_F09家族成员的第一可变区和含有IL2RG_F16家族成员的第二可变区，该第一可变区包含含有SEQ ID NO:26的CDR1序列、含有SEQ ID NO:27的CDR2序列和含有SEQ ID NO:28的CDR3序列，该第二可变区包含含有SEQID NO:32的CDR1序列、含有SEQ ID NO:33的CDR2序列和含有SEQ ID NO:20的CDR3序列。

在一些实施例中，多特异性抗体包含含有IL2RB_F09家族成员的第一可变区和含有IL2RG_F18家族成员的第二可变区，该第一可变区包含含有SEQ ID NO:26的CDR1序列、含有SEQ ID NO:27的CDR2序列和含有SEQ ID NO:28的CDR3序列，该第二可变区包含含有SEQID NO:15的CDR1序列、含有SEQ ID NO:19的CDR2序列和含有SEQ ID NO:21的CDR3序列。

在一些实施例中，多特异性抗体包含含有IL2RB_F18家族成员的第一可变区和含有IL2RG_F16家族成员的第二可变区，该第一可变区包含含有SEQ ID NO:29的CDR1序列、含有SEQ ID NO:30的CDR2序列和含有SEQ ID NO:31的CDR3序列，该第二可变区包含含有SEQID NO:32的CDR1序列、含有SEQ ID NO:33的CDR2序列和含有SEQ ID NO:20的CDR3序列。

在一些实施例中，多特异性抗体包含含有IL2RB_F18家族成员的第一可变区和含有IL2RG_F18家族成员的第二可变区，该第一可变区包含含有SEQ ID NO:29的CDR1序列、含有SEQ ID NO:30的CDR2序列和含有SEQ ID NO:31的CDR3序列，该第二可变区包含含有SEQID NO:15的CDR1序列、含有SEQ ID NO:19的CDR2序列和含有SEQ ID NO:21的CDR3序列。

在一些实施例中，双特异性抗体包含结合IL2RB的第一可变区和结合IL2RG的第二可变区，该第一可变区包含SEQ ID NO:1的CDR1序列、SEQ ID NO:4的CDR2序列和SEQ IDNO:7的CDR3序列，该第二可变区包含SEQ ID NO:15的CDR1序列、SEQ ID NO:17的CDR2序列和SEQ ID NO:20的CDR3序列。

在一些实施例中，双特异性抗体包含结合IL2RB的第一可变区和结合IL2RG的第二可变区，该第一可变区包含SEQ ID NO:1的CDR1序列、SEQ ID NO:4的CDR2序列和SEQ IDNO:8的CDR3序列，该第二可变区包含SEQ ID NO:15的CDR1序列、SEQ ID NO:18的CDR2序列和SEQ ID NO:20的CDR3序列。

在一些实施例中，双特异性抗体包含结合IL2RB的第一可变区和结合IL2RG的第二可变区，该第一可变区包含SEQ ID NO:2的CDR1序列、SEQ ID NO:5的CDR2序列和SEQ IDNO:9的CDR3序列，该第二可变区包含SEQ ID NO:15的CDR1序列、SEQ ID NO:18的CDR2序列和SEQ ID NO:20的CDR3序列。

在一些实施例中，双特异性抗体包含结合IL2RB的第一可变区和结合IL2RG的第二可变区，该第一可变区包含SEQ ID NO:3的CDR1序列、SEQ ID NO:6的CDR2序列和SEQ IDNO:10的CDR3序列，该第二可变区包含SEQ ID NO:15的CDR1序列、SEQ ID NO:17的CDR2序列和SEQ ID NO:20的CDR3序列。

在一些实施例中，双特异性抗体包含结合IL2RB的第一可变区和结合IL2RG的第二可变区，该第一可变区包含SEQ ID NO:1的CDR1序列、SEQ ID NO:4的CDR2序列和SEQ IDNO:8的CDR3序列，该第二可变区包含SEQ ID NO:16的CDR1序列、SEQ ID NO:18的CDR2序列和SEQ ID NO:20的CDR3序列。

在一些实施例中，双特异性抗体包含结合IL2RB的第一可变区和结合IL2RG的第二可变区，该第一可变区包含SEQ ID NO:1的CDR1序列、SEQ ID NO:4的CDR2序列和SEQ IDNO:8的CDR3序列，该第二可变区包含SEQ ID NO:15的CDR1序列、SEQ ID NO:19的CDR2序列和SEQ ID NO:21的CDR3序列。

表5提供了根据本披露的实施例的双特异性IL2RB x IL2RG抗体的各种CDR组合的总结。

表5.双特异性IL2RB x IL2RG抗体、CDR序列组合

在一些实施例中，双特异性抗体包含结合IL2RB的第一可变区(其包含SEQ ID NO:11的重链可变区序列)和结合IL2RG的第二可变区(其包含SEQ ID NO:22的重链可变区序列)。

在一些实施例中，双特异性抗体包含结合IL2RB的第一可变区(其包含SEQ ID NO:12的重链可变区序列)和结合IL2RG的第二可变区(其包含SEQ ID NO:23的重链可变区序列)。

在一些实施例中，双特异性抗体包含结合IL2RB的第一可变区(其包含SEQ ID NO:13的重链可变区序列)和结合IL2RG的第二可变区(其包含SEQ ID NO:23的重链可变区序列)。

在一些实施例中，双特异性抗体包含结合IL2RB的第一可变区(其包含SEQ ID NO:14的重链可变区序列)和结合IL2RG的第二可变区(其包含SEQ ID NO:22的重链可变区序列)。

在一些实施例中，双特异性抗体包含结合IL2RB的第一可变区(其包含SEQ ID NO:12的重链可变区序列)和结合IL2RG的第二可变区(其包含SEQ ID NO:24的重链可变区序列)。

在一些实施例中，双特异性抗体包含结合IL2RB的第一可变区(其包含SEQ ID NO:12的重链可变区序列)和结合IL2RG的第二可变区(其包含SEQ ID NO:25的重链可变区序列)。

表6提供了根据本披露的实施例的双特异性IL2RB x IL2RG抗体的各种重链可变区组合的总结。

表6.双特异性IL2RB x IL2RG抗体、VH序列组合

/>

在一些实施例中，多特异性抗体包含第一和第二多肽，即，第一和第二多肽亚基，其中每个多肽包含重链抗体的抗原结合结构域。在一些实施例中，第一和第二多肽各自进一步包括铰链区或铰链区的至少一部分，其可促进第一和第二多肽之间形成至少一个二硫键。在一些实施例中，第一和第二多肽各自进一步包括至少一个重链恒定区(CH)结构域，例如CH2结构域，和/或CH3结构域，和/或CH4结构域。在某些实施例中，CH结构域缺乏CH1结构域。第一和第二多肽各自的抗原结合结构域可掺入本文所述的任何CDR序列和/或可变区序列，以便赋予多特异性抗体抗原结合能力。因此，在某些实施例中，多特异性抗体中的每个多肽亚基可包括结合不同IL2R亚基或链(例如IL2RB和IL2RG)的抗原结合结构域。

在一些实施例中，多特异性抗体包含变体人IgG4 Fc结构域，该变体人IgG4 Fc结构域包含：含有S228P突变、F234A突变、L235A突变和T366W突变(杵)的第一重链恒定区序列，和含有S228P突变、F234A突变、L235A突变、T366S突变、L368A突变和Y407V突变(臼)的第二重链恒定区序列。该变体IgG4 Fc结构域或经修饰的IgG4 Fc结构域防止不需要的Fab交换，降低抗体的效应子功能，并且还促进重链多肽亚基的异二聚化以形成多特异性(例如，双特异性)抗体。

本文所述的多特异性抗体的组分(即CDR序列、可变区序列和Fc结构域序列(例如铰链、CH2和CH3结构域序列)可以以多种方式组合以产生多特异性抗体，该多特异性抗体结合IL2R，例如IL2RB和IL2RG，并且具有有益的特性，例如降低的效应子功能活性、增加的IL2R激动活性等。

表7提供了人IgG1和IgG4 Fc区序列的序列，以及并入赋予另外所期望特性的另外突变(变体)的这些序列的版本。

表7.人IgG1和IgG4 Fc区序列及其变体

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在一些实施例中，双特异性抗体包含结合IL2RB的可变区的第一重链多肽亚基(其中该第一重链多肽亚基包含SEQ ID NO:53的序列)和结合IL2RG的可变区的第二重链多肽亚基(其中该第二重链多肽亚基包含SEQ ID NO:61的序列)。

在一些实施例中，双特异性抗体包含结合IL2RB的可变区的第一重链多肽亚基(其中该第一重链多肽亚基包含SEQ ID NO:62的序列)和结合IL2RG的可变区的第二重链多肽亚基(其中该第二重链多肽亚基包含SEQ ID NO:63的序列)。

在一些实施例中，双特异性抗体包含结合IL2RB的可变区的第一重链多肽亚基(其中该第一重链多肽亚基包含SEQ ID NO:64的序列)和结合IL2RG的可变区的第二重链多肽亚基(其中该第二重链多肽亚基包含SEQ ID NO:65的序列)。

在一些实施例中，双特异性抗体包含结合IL2RB的可变区的第一重链多肽亚基(其中该第一重链多肽亚基包含SEQ ID NO:66的序列)和结合IL2RG的可变区的第二重链多肽亚基(其中该第二重链多肽亚基包含SEQ ID NO:67的序列)。

在一些实施例中，双特异性抗体包含结合IL2RB的可变区的第一重链多肽亚基(其中该第一重链多肽亚基包含SEQ ID NO:34的序列)和结合IL2RG的可变区的第二重链多肽亚基(其中该第二重链多肽亚基包含SEQ ID NO:35的序列)。

在一些实施例中，双特异性抗体包含结合IL2RB的可变区的第一重链多肽亚基(其中该第一重链多肽亚基包含SEQ ID NO:36的序列)和结合IL2RG的可变区的第二重链多肽亚基(其中该第二重链多肽亚基包含SEQ ID NO:37的序列)。

表8提供了根据本披露的实施例的双特异性IL2RB x IL2RG抗体的各种重链多肽亚基序列组合的总结。

表8.双特异性IL2RB x IL2RG抗体、全长多肽序列组合

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表9和10中提供了本文提及的另外的序列以供参考。

表9.另外的序列

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表10.另外的序列

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细胞内化

在一些实施例中，本披露的抗体一旦结合至结合靶标(例如，IL2R)，就内化至细胞中，其中内化与不内化的一个或多个对照抗体相比是至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、或至少约90％、至少约100％、至少约110％、至少约120％、至少约130％、至少约140％、至少约150％、至少约160％、至少约170％、至少约180％、至少约190％或至少约200％或更多。在一些实施例中，本文所述方法的方面涉及将本文所述的抗体内在化于细胞内以实现期望的效果，例如充当IL2R激动剂。

图7分图A-B提供了细胞内化结果。分图A描绘了来自人PBMC的CD8⁺ T细胞对所示抗IL2Rβ/γUniAbs^TM的作为时间的函数的内化。分图B以表格式描述了该数据。通过流式细胞术检测UniAb^TM的表面水平，并报告相对于不允许内化的细胞的情况。观察到的半衰期范围为0.27小时至0.81小时。如此处观察到的，内化可能部分依赖于双特异性抗体的特异性抗IL2RG臂，因为包含IL2RG_F16B结合序列的分子比包含不同抗IL2RG结合序列的分子内化更快并且程度更大。

抗IL2R抗体的制备

本披露的抗体可以通过本领域已知的方法制备。在一些实施例中，本文中的抗体由转基因动物(包括转基因小鼠和大鼠，例如转基因大鼠)产生，其中内源性免疫球蛋白基因被敲除或无效。在一些实施例中，本文中的重链抗体在UniRat^TM中产生。UniRat^TM的内源性免疫球蛋白基因被沉默，并且使用人免疫球蛋白重链转座点来表达多样化的自然优化的全人源HCAb库。虽然大鼠中的内源性免疫球蛋白基因座可以使用多种技术来敲除或沉默，但在UniRat^TM中，使用锌指(内)核酸酶(ZNF)技术来灭活内源性大鼠重链J基因座、轻链Cκ基因座和轻链Cλ基因座。用于显微注射到卵母细胞中的ZNF构建体可以产生IgH和IgL敲除(KO)系。关于细节，参见例如Geurts等人,2009,Science[科学]325:433。Ig重链敲除大鼠的表征已经由Menoret等人,2010,Eur.J.Immunol.[欧洲免疫学杂志]40:2932-2941报告。ZNF技术的优点是，非同源末端连接经由高达若干kb的缺失使基因或基因座沉默也可以为同源整合提供靶位点(Cui等人,2011,Nat Biotechnol[自然-生物技术]29:64-67)。UniRat^TM中产生的人重链抗体被称为UniAbs^TM，并且可以结合常规抗体无法攻击的表位。它们的高特异性、亲和力和小尺寸使其成为单特异性和多特异性应用的理想选择。

除UniAbs^TM之外，本文特别地包括缺乏骆驼科VHH框架和突变的仅重链抗体及其功能性VH区。例如，此类仅重链抗体可以在转基因大鼠或小鼠中产生，其包含例如在WO 2006/008548中描述的完全人仅重链基因座，但是也可以使用其他转基因哺乳动物，诸如兔、豚鼠、和大鼠是优选的。仅重链抗体，包括其VHH或VH功能片段，也可以通过重组DNA技术，通过在合适的真核或原核宿主中表达编码核酸来产生，该宿主例如包括哺乳动物细胞(例如，CHO细胞)、大肠杆菌或酵母。

仅重链抗体的结构域结合了抗体和小分子药物的优点：可以是单价的或多价的；具有低毒性；并且对于制造是成本有效的。由于其尺寸较小，这些结构域易于施用，包括口服或局部施用，其特征在于高稳定性，包括胃肠道稳定性；并且它们的半衰期可以根据所期望的用途或适应症进行定制。另外，HCAb的VH和VHH结构域可以以成本有效的方式制造。

在特定实施例中，本披露的重链抗体，包括UniAbs^TM，在FR4区的第一位置(根据Kabat编号系统的氨基酸位置101)处的天然氨基酸残基被另一个氨基酸残基取代，该另一个氨基酸残基能够在此位置处破坏包含天然氨基酸或与天然氨基酸残基缔合的表面暴露的疏水贴剂。此类疏水贴剂通常埋在与抗体轻链恒定区的界面中，但在HCAb中暴露在表面，并且至少部分地用于HCAb的不需要的聚集和轻链缔合。在一些实施例中，经取代的氨基酸残基带电荷。在一些实施例中，经取代的氨基酸残基带正电，例如赖氨酸(Lys，K)、精氨酸(Arg，R)或组氨酸(His，H)，例如精氨酸(R)。在一些实施例中，衍生自转基因动物的仅重链抗体在位置101处含有Trp至Arg突变。在一些实施例中，所得HCAb在不存在聚集的生理条件下具有高抗原结合亲和力和溶解度。

作为本披露的一部分，鉴定了具有来自UniRat^TM动物的独特序列的人IgG抗IL2R重链抗体(UniAb^TM)，这些抗体在ELISA蛋白和细胞结合测定中结合人IL2R。所鉴定的重链可变区(VH)序列对于人IL2R蛋白结合和/或与IL2R+细胞的结合呈阳性，并且对于与不表达IL2R的细胞的结合全部呈阴性。

与IL2R蛋白上的非重叠表位结合的重链抗体(例如，UniAbs^TM)可以通过竞争结合测定来鉴定，诸如酶联免疫测定(ELISA测定)或流式细胞术竞争结合测定。例如，可以使用与靶抗原结合的已知抗体与目的抗体之间的竞争。通过使用这种方法，可以将一组抗体分为与参考抗体竞争的抗体和不与参考抗体竞争的抗体。非竞争抗体被鉴定为与不同表位结合，该不同表位不与参考抗体所结合的表位重叠。通常，将一种抗体固定，结合抗原，并且在ELISA测定中测试被标记的(例如，生物素化)第二抗体，以确定其结合捕获的抗原的能力。这也可以通过使用表面等离子体共振(SPR)平台(包括ProteOn XPR36(伯乐公司(BioRad,Inc))、Biacore 2000和Biacore T200(通用健康生命科学公司(GE Healthcare LifeSciences))和MX96 SPR成像仪(Ibis技术私人有限公司(Ibis technologies B.V.)))以及在生物层干涉技术平台如Octet Red384和Octet HTX(佛特比奥颇尔公司(ForteBio,PallInc))上进行。关于更多细节，参见本文中的实例。

典型地，如果抗体导致参考抗体与靶抗原的结合减少约15％-100％(如通过标准技术，诸如通过以上所述的竞争结合测定确定)，则该抗体与参考抗体“竞争”。在一些实施例中，使用酶联免疫测定(ELISA测定)来测量竞争性结合。在一些实施例中，将一种抗体固定，结合抗原，并且在ELISA测定中测试被标记的(例如，生物素化)第二抗体，以确定其结合捕获的抗原的能力。这可以例如使用表面等离子体共振(SPR)平台(例如ProteOn XPR36(伯乐公司(BioRad,Inc))、Biacore 2000和Biacore T200(通用健康生命科学公司(GEHealthcare Life Sciences))和MX96 SPR成像仪(Ibis技术私人有限公司(Ibistechnologies B.V.)))以及在生物层干涉技术平台如Octet Red384和Octet HTX(佛特比奥颇尔公司(ForteBio,Pall Inc))上进行。在一些实施例中，使用流式细胞术竞争性结合测定来测量竞争性结合。

在各种实施例中，相对抑制是至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或更高。

药物组合物

本披露的另一方面提供了药物组合物，其包含与合适的药学上可接受的载剂混合的一种或多种本披露的抗体。如本文所用的药学上可接受的载剂是示例性的，但不限于辅助剂、固体载剂、水、缓冲液或本领域用于容纳治疗组分的其他载剂或其组合。

在一个实施例中，药物组合物包含与IL2R结合的重链抗体(例如，UniAb^TM)。在另一个实施例中，药物组合物包含多特异性(包括双特异性)重链抗体(例如，UniAb^TM)，其结合IL2R蛋白上的两个或更多个非重叠表位(第一IL2R多肽链(例如，IL2RB)上的第一表位和第二IL2R多肽链(例如，IL2RG)上的第二表位)。在一些实施例中，药物组合物包含结合IL2RB和IL2RG的多特异性(包括双特异性)重链抗体(例如，UniAb^TM)。

通过将具有所期望纯度的蛋白质与任选的药学上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂(参见例如，Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition[雷明顿药物科学第16版],Osol,A.编辑(1980))混合来制备根据本披露使用的抗体的药物组合物，诸如呈冻干配制品或水溶液的形式。可接受的载剂、赋形剂或稳定剂在所用剂量和浓度下对接受者是无毒的，并且包括缓冲液(诸如磷酸盐、柠檬酸盐)和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如氯化十八烷基二甲基苄基铵；氯化六甲铵；苯扎氯铵，苄索氯铵；苯酚、丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质(诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白)；亲水聚合物(诸如聚乙烯吡咯烷酮)；氨基酸(诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸)；单糖、二糖和其他碳水化合物(包括葡萄糖、甘露糖或糊精)；螯合剂(诸如EDTA)；糖(诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇)；成盐平衡离子，诸如钠；金属络合物(例如，Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子型表面活性剂(诸如TWEEN^TM、PLURONICS^TM或聚乙二醇(PEG))。

在一些实施例中，用于肠胃外施用的药物组合物是无菌且基本上等渗的，并在良好生产规范(GMP)条件下制造。药物组合物可以呈单位剂型(即，用于单次施用的剂量)提供。配制品取决于所选的施用途径。本文中的抗体可以通过静脉内注射或输注或皮下施用。对于注射施用，本文中的抗体可以在水溶液，例如在生理相容的缓冲液中配制，以减少注射部位的不适。该溶液可以含有如上所讨论的载剂、赋形剂或稳定剂。可替代地，抗体可以呈冻干形式，以供在使用之前用合适的媒剂(例如，无菌无热原水)构造。

抗体配制品披露于例如美国专利号9,034,324中。类似的配制品可以用于本披露的重链抗体，包括UniAbs^TM。皮下抗体配制品描述于例如US20160355591和US20160166689中。

使用方法

本文所述的抗IL2R抗体和药物组合物可用于治疗由免疫细胞(例如免疫效应细胞，例如效应T细胞和自然杀伤(NK)细胞)中IL2R信号传导的激活介导的疾病和病症。在一些实施例中，疾病或障碍可以是感染性疾病、自身免疫性障碍(例如克罗恩病、多发性硬化症)、癌症、炎性疾病(例如关节炎)、与IL-2介导的信号传导缺陷、T细胞增殖缺陷或T细胞功能障碍相关的疾病或障碍。

在一些实施例中，疾病或障碍是其中增加的IL-2介导的信号传导对患者具有治疗作用的疾病或障碍。在一些实施例中，疾病或障碍与T细胞应答缺陷，例如CD8+ T细胞应答缺陷相关。

在一些实施例中，治疗旨在通过以下方式预防或治疗疾病或障碍：增加CD3+ T细胞的数量、增加CD4+ T细胞的数量、增加CD8+T细胞的数量、增加CD8+效应T细胞(例如CTL)的数量、增加NK细胞的数量、增加CD8+ T细胞比CD4+ T细胞的比例，减少Treg的比例，或其任何组合。

在一些实施例中，疾病或障碍可表现为感染，或表现为无法针对感染发起有效的免疫应答。感染可以是慢性的、持续的、潜伏的或缓慢的，并且可以是细菌、病毒、真菌或寄生虫感染的结果。因此，可以向患有细菌、病毒或真菌感染的患者提供治疗。细菌感染的非限制性实例包括幽门螺杆菌感染。病毒感染的非限制性实例包括EBV、HIV、乙型肝炎或丙型肝炎感染。

在一些实施方案中，疾病或障碍可以与癌症相关，例如肿瘤免疫逃逸。许多人肿瘤表达可被T细胞识别并能够诱导免疫应答的肿瘤相关抗原。在没有T细胞功能失调的迹象的情况下也可以治疗癌症，但是使用本文描述的抗体可以促进有效的免疫应答。

在一些实施例中，治疗旨在预防与IL-2介导的信号传导缺陷和/或减少相关的疾病或障碍。因此，本文所述的抗体可用于配制药物组合物或药物，并且可针对疾病状态的发展对受试者进行预防性治疗。这可以在疾病状态的症状发作之前发生，和/或可以向被认为处于疾病或障碍的更大风险的受试者给予这样的治疗。

在某些实施例中，本文的方法涉及诱导免疫效应细胞的激活而不优先激活调节性T细胞(Treg)。不拘泥于理论，发明人发现多特异性抗体同时靶向IL2受体的β和γ亚基以诱导人免疫效应细胞中IL2R信号传导的激活(即，充当激动剂)，而不优先激活Treg，从而改变T效应细胞和NK细胞激活的平衡可改善由IL2R信号传导激活介导的疾病和障碍的治疗结果。

因此，本披露的方面包括治疗方法，其中通过施用治疗有效量的一种或多种本文所述的抗体来增强或帮助受试者的免疫应答。在一些实施例中，这些方法涉及施用本文所述的抗体以实现破坏癌细胞的免疫应答。在某些实施例中，本文所述的抗体充当IL2R信号传导途径的激动剂以实现此类结果。根据本披露的实施例的方法还包括组合疗法，其中联合另一疗程(例如化疗方案)向受试者施用本文所述的抗体。

一方面，具有IL2R信号传导途径激动剂活性的本文所述的多特异性(例如双特异性)抗体用于治疗癌症。适合这种治疗的癌症包括但不限于晚期或转移性癌症。在一些实施例中，癌症是实体瘤癌症。根据本披露的实施例的实体瘤癌症包括但不限于肾细胞癌、黑色素瘤、尿路上皮癌、三阴性乳腺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、结直肠癌、肉瘤、头颈部鳞状细胞癌和转移性去势抵抗性前列腺癌。

本披露的方面还包括用于刺激免疫细胞中的IL2R信号传导的方法，其中这些方法涉及使免疫细胞与本文所述的抗体(例如，与本文所述的激动性双特异性抗体)接触。在某些实施例中，这些方法涉及通过使免疫细胞与结合IL2RB和IL2RG两者并充当IL2R复合物的激动剂的多特异性(例如双特异性)抗体接触来刺激免疫细胞上的IL2RB/IL2RG二聚体受体复合物。表达IL2R的多种免疫细胞中的任一种可以参与主题方法，包括但不限于：CD4+ T细胞、CD8+ T细胞和自然杀伤(NK)细胞。

本披露的组合物用于治疗疾病的有效剂量根据许多不同的因素而变化，包括施用手段、靶部位、患者的生理状态、患者是人还是动物、施用的其他药物、以及治疗是预防性的还是治疗性的。通常，患者是人，但是也可以治疗非人哺乳动物，例如，伴侣动物诸如狗、猫、马等，实验室哺乳动物诸如兔、小鼠、大鼠等等。可以调整治疗剂量以优化安全性和有效性。

剂量水平可以由一般熟练的临床医生容易地确定，并且可以根据需要进行修改，例如，根据修改受试者对于疗法的应答的需要。可以与载剂材料组合以产生单一剂型的活性成分的量根据所治疗的宿主和具体施用模式而变化。剂量单位形式通常含有从约1mg至约500mg之间的活性成分。

在一些实施例中，该药剂的治疗剂量的范围可以是从约0.0001至100mg/kg，并且更通常0.01至5mg/kg宿主体重。例如，剂量可以是1mg/kg体重或10mg/kg体重或在1-10mg/kg的范围内。示例性治疗方案需要每两周一次或每月一次或每3至6个月施用一次。本披露的治疗实体通常在多个场合施用。单个剂量之间的间隔可以是每周、每月或每年。间隔也可以是不规则的，如通过测量治疗实体在患者中的血液水平所指示。可替代地，本披露的治疗实体可以作为缓释配制品施用，在这种情况下需要较少的施用频率。剂量和频率根据多肽在患者中的半衰期而变化。

典型地，将组合物制备为注射剂，作为液体溶液或悬浮液；也可以制备适用于在注射之前溶解或悬浮在液体媒剂中的固体形式。本文中的药物组合物适用于直接或在固体(例如，冻干)组合物重构之后静脉内或皮下施用。该制剂还可以乳化或包封在脂质体或微颗粒(诸如聚丙交酯、聚乙交酯或共聚物)中以增强辅助剂作用，如上所讨论的。Langer,Science[科学]249:1527,1990以及Hanes,Advanced Drug Delivery Reviews[高级药物递送综述]28:97-119,1997。本披露的药剂可以以贮库型注射剂或植入物制剂的形式施用，该形式可以以允许活性成分持续或脉动释放的方式配制。药物组合物通常被配制为无菌的、基本上等渗的，并且完全符合美国食品和药物管理局的所有良好生产规范(GMP)法规。

可以在细胞培养物或实验动物中通过标准药学程序，例如通过确定LD50(对群体的50％致死的剂量)和LD100(对群体的100％致死的剂量)来确定本文所述的抗体和抗体结构的毒性。毒性与治疗作用之间的剂量比是治疗指数。可以在配制对于在人中使用无毒的剂量范围中使用由这些细胞培养测定和动物研究获得的数据。在一些实施例中，本文所述的抗体的剂量在包括有效剂量而具有很小或没有毒性的一系列循环浓度内。该剂量可以根据所采用的剂型和所利用的施用途径在这个范围内变化。确切配制、施用途径和剂量可以由个别医师根据患者的状况来选择。

用于施用的组合物通常包含溶解在药学上可接受的载剂(例如水性载剂)中的抗体或其他烧蚀剂。可以使用多种水性载剂，例如缓冲盐水等。这些溶液是无菌的，并且通常不含不期望的物质。这些组合物可以通过常规的、熟知的灭菌技术来灭菌。这些组合物可以含有药学上可接受的辅助物质，如近似生理条件所需的辅助物质，诸如pH调节剂和缓冲剂、毒性调节剂等，例如乙酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、乳酸钠等。这些配制品中活性剂的浓度可以变化很大，并且将主要根据所选择的特定施用模式和患者的需要，基于流体体积、粘度、体重等进行选择(例如，Remington's Pharmaceutical Science[雷明顿药物科学](第15版,1980)和Goodman和Gillman,The Pharmacological Basis of Therapeutics[治疗学的药理学基础](Hardman等人编辑,1996))。

包括本披露的活性剂及其配制品以及使用说明书的试剂盒也在本披露的范围内。试剂盒可以进一步含有至少一种另外的试剂，例如化疗药物等。试剂盒典型地包括指示试剂盒的内容物的预期用途的标签。如本文所用，术语“标签”包括在试剂盒上或与试剂盒一起提供的或以其他方式伴随试剂盒的任何书写或记录材料。

现在正在充分描述示例实施例，对于本领域普通技术人员而言明显的是，可以在不脱离本披露的精神或范围的情况下进行各种变化和修改。

实例

材料与方法：

抗体构建体名称

下表(表11)提供了本文评估的六种双特异性抗体构建体的简写命名法：

表11.简写命名法

简称	序列名称
		BsAb-1	IL2RB_F09C**IL2RG_F16A
BsAb-2	IL2RB_F09G**IL2RG_F16B
		BsAb-3	IL2RB_F09G**IL2RG_F16C
BsAb-4	IL2RB_F09G**IL2RG_F18A
		BsAb-5	IL2RB_F09K**IL2RG_F16B
BsAb-6	IL2RB_F18E**IL2RG_F16A

免疫、下一代测序、克隆型分析和克隆

方法基本上如Harris等人Front Immunol.[免疫学前沿]2018年4月24日；9:889(60)所述。简而言之，在48天方案中使用标准佐剂(完全弗氏佐剂或Titermax/Ribi)以及重组蛋白抗原或使用DNA免疫对UniRat动物进行免疫。对于蛋白质免疫，加强免疫包括将10μg重组蛋白与适当的佐剂注射到每只动物的每条腿中。在DNA免疫的情况下，金颗粒被含有靶抗原cDNA的载体包被，随后使用基因枪每7天皮下施用一次。免疫后收集血浆样品，通过ELISA评估针对抗原的血清滴度。

免疫约7周(蛋白质抗原)或10周(DNA抗原)后，收获引流淋巴结并分离总RNA。使用第一链cDNA合成和PCR 5'RACE扩增Ig重链序列，遵循与Harris等人Front Immunol.[免疫学前沿]2018年4月24日；9:889先前描述的方法类似的方法然后通过凝胶提取纯化。

下一代测序是使用具有2x300双末端读段的MiSeq平台(亿明达公司(Illumina))完成的。为了实现样品的多重分析，通过引物延伸添加了索引标记。每个样品覆盖了大约100,000个配对读段，那些与人Ig基因座的比对少于20个核苷酸的读段被丢弃。VH区域的合并正向和反向读段被翻译成IGBLAST(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/)鉴定的开放阅读框和框架和CDR区域。使用凝聚聚类确定样品的克隆型(由具有至少80％序列相似性的CDR3蛋白序列定义)。CDR3克隆型按照该克隆型定义的样品中总读段的百分比进行排序。那些丰度最大的优先被高通量克隆到含有CH1缺失的人IgG1 Fc区的表达载体中，并通过桑格测序进行验证。将质粒转化到在LB培养基中生长的大肠杆菌中，然后纯化以能够瞬时转染96孔格式中的HEK 293细胞。表达几天后，收获含有抗体的上清液并通过离心澄清。

高通量ELISA

方法基本上如Harris等人Front Immunol.[免疫学前沿]2018年4月24日；9:889所述。简而言之，使用BupH碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液(人IL-2Rβ，(Acro生物系统公司；食蟹猴IL-2Rβ，义翘神州公司)在4℃下将重组蛋白包被在96孔板中过夜。然后用TBST(20mM Tris、150mM NaCl、0.05％Tween-20、pH 7.6)洗涤板并用封闭缓冲液(含1％干奶粉的TBST)封闭。将含有抗体的HEK 293上清液在封闭缓冲液中按1:100稀释并添加到抗原包被的板中。使用HRP标记的抗人Ig二抗与化学发光底物一起完成结合抗体的检测。

对发光进行定量(SpectraMax i3X，分子装置公司(Molecular devices))，并通过除以与未转染的HEK 293细胞的上清液一起孵育的抗原包被孔的平均背景发光来归一化每个孔的信号。

细胞系和PBMC

M07e细胞获自DSMZ，并在含有10％胎牛血清(FBS)、1％青霉素/链霉素和10ng/mLrhGM-CSF的RPMI培养基中生长。HSC-F细胞获自非人灵长类动物试剂资源(The NonhumanPrimate Reagent Resource)，并在补充有20％FBS、1％青霉素/链霉素和55μMβ-巯基乙醇的RPMI培养基中培养。293-F是从吉博科公司获得的，并根据他们的建议进行培养。

为了创建表达人IL-2Rβ或食蟹猴IL-2Rβ的稳定细胞系，表达构建体携带抗原的全长cDNA和NeoR选择盒。然后将每个表达构建体线性化并用于电穿孔CHO细胞。转染三天后，使用遗传霉素处理对细胞进行3-6周的选择。在选择期结束时，所有未转染和阴性对照细胞系被杀死，而所有转染池均显示出如成功转染池所预期的再生长。然后通过流式细胞术测定每个靶标的四个池与阳性对照抗体的结合。CHO细胞的培养基为EX-325PF CHO培养基，含有8mM L-谷氨酰胺、0.1μg/L IGF-1、5％透析FBS、0.45mg/mL遗传霉素和0.45mg/mL潮霉素。细胞在悬浮液中生长并维持在0.5x10⁶/mL至2x10⁶/mL之间的浓度。

通过Paque Premium(通用健康生命科学公司(GE Healthcare LifeSciences))密度梯度离心从新鲜白细胞分离包(干细胞公司(StemCell))中内部分离人PBMC。

根据流式细胞术的细胞结合

细胞、抗体和试剂的所有洗涤和稀释均使用流动缓冲液(1X PBS、1％BSA、0.1％NaN3、pH 7.4)进行。染色在圆底96孔板(康宁公司(Corning))中进行，接种量为100,000个细胞/孔，所有孵育均在4℃或冰上进行。对于初次和二次筛选，将细胞与预稀释的测试抗体(二次筛选和剂量曲线)或含有抗体的1:5稀释HEK 293上清液(对于初次筛选和多样性筛选)以总体积50μL孵育30分钟。用200μL流动缓冲液洗涤细胞两次。然后将细胞与0.625μg/mL的检测抗体(山羊F(ab')2抗人IgG-PE，南方生物科技公司(Southern Biotech))在流动缓冲液中孵育30分钟。再洗涤2次后，将细胞重悬于最终体积为150μL的流动缓冲液中。在BDFACSCelesta或Guava easyCyte8-HT流式细胞仪上分析细胞。收集了至少3000个事件，并将PE平均荧光强度作为相对于背景(仅与第二检测抗体孵育的细胞)的倍数作图。在一些涉及人或食蟹猴PBMC的二次筛选中，包括另外的CD4抗体(博奇公司(BioLegend))和/或CD8抗体(博奇公司)以进一步表征细胞结合。

通过流式细胞术检测pSTAT5

为了通过流式细胞术检测pSTAT5，从冷冻全血(食蟹猴)或冷冻LeukoPak(人)制备PBMC。将细胞解冻，用完全RPMI培养基洗涤两次，并以5x10⁶细胞/mL重悬。然后将100μL/孔的这些细胞转移至无菌圆底96孔板(康宁公司)并用AeraSeal^TM(依科赛科学公司(ExcelScientific))密封。然后将板在37℃和5％CO₂下孵育1小时。孵育后，将100μL预稀释抗体(或IL-2/IL-2变体)添加到适当的孔中。在对照孔中使用最终浓度为10nM IL-2(R&D系统公司(R&DSystems))以确保可检测到pSTAT5。然后将板重新密封并放回培养箱中另外1小时。孵育后，将细胞离心并用预冷至4℃的PBS洗涤两次。然后用人TruStain FcX(博奇公司)封闭细胞，然后用可固定活性染料(Fixable Viability Dye)(英杰公司)和针对CD3、CD4、CD8、CD25和/或CD56的抗体染色30分钟。染色后，再次离心细胞并用预冷的PBS洗涤两次。然后添加200μL/孔固定缓冲液(博奇公司)固定细胞，并在室温下孵育30分钟。固定后，将细胞离心并用流动缓冲液(1X PBS、1％BSA、0.1％NaN₃，pH 7.4)洗涤两次。接下来，将细胞通过重悬于预冷至-20℃的200μL/孔True-Phos缓冲液(博奇公司)中进行透化，并转移至-20℃冰箱过夜。第二天早上，将细胞离心，用流动缓冲液洗涤两次，随后用抗pSTAT5(BD生物科学公司)染色30分钟。再洗涤两次后，将细胞重悬于125μL/孔流动缓冲液中，并在BDFACSCelesta上采集。

通过流式细胞术检测Ki67

为了通过流式细胞术检测Ki67，将冷冻人PBMC(之前从LeukoPak内部分离)解冻并在完全RPMI培养基中以1x10⁶个细胞/mL静置过夜。测定当天早上，用完全RPMI洗涤PBMC，并以1e6个细胞/mL重悬。然后，向无菌96孔板的每个孔中添加100μL PBMC、50μL 0.16XImmunoCult(干细胞技术公司(StemCellTech))和50μL稀释抗体或rhIL-2(R&D系统公司)。0.5X ImmunoCult用于染色对照，以确保可检测到的Ki67和CD25信号进行补偿。然后将板盖上并在37℃和5％CO₂下孵育。3天后，用100μL/孔相应浓度的抗体和ImmunoCult更新培养基，然后放回培养箱。再过3天(总共6天)，将细胞离心并用预冷至4℃的PBS洗涤两次。然后用人TruStain FcX(博奇公司)封闭细胞，然后用可固定活性染料(Fixable ViabilityDye)(英杰公司)和针对CD3、CD4、CD8、CD25和/或CD56的抗体染色30分钟。染色后，再次离心细胞并用预冷的PBS洗涤两次。然后固定细胞并用200μL/孔FoxP3/转录因子染色缓冲液工作溶液(英杰公司)透化1小时。透化后，将细胞离心，用透化缓冲液洗涤两次，随后用抗FoxP3(博奇公司)和抗Ki67(博奇公司)染色30分钟。再洗涤两次后，将细胞重悬于125μL/孔流动缓冲液中，并在BD FACSCelesta上采集。

全血细胞因子释放测定

使用从AllCells获得的新鲜人全血(肝素化)检测细胞因子分泌。以下方法改编自B.Wolf等人Cytokine[细胞因子]60(2012)828–837(61)。将12.5μL 20X浓缩(在1X PBS中稀释)的测试物品添加到无菌96孔圆底板的每个孔中。为此，用最少的移液将237.5μL新鲜人全血添加到每个孔中，以减少非特异性激活。将板盖上并在37℃和5％CO₂下孵育过夜。第二天早上，将板以1800x g离心10分钟，然后将50μL血清转移至96孔微孔板中。然后立即通过MSD(#K15010K-1或定制U-Plex板)测试血清或冷冻在-80℃下以供以后测试。

小鼠药代动力学(PK)评估

在单次尾静脉注射1mg/kg后，在6只雄性BALB/c小鼠中分别评估BsAb-1和BsAb-2的PK(n＝3*6组，阿拉贡生物科学公司(Aragen Biosciences)，摩根希尔(Morgan Hill)，加利福尼亚州)。在给药后14天的选定时间点采集血清样品。

在单次尾静脉注射1mg/kg或10mg/kg(每个剂量组9只小鼠，科荣生物公司(CrownBio)，圣地亚哥，加利福尼亚州)后，在两组9只雌性BALB/c小鼠中评估BsAb-5的PK。在给药后14天的选定时间点采集血清样品。

小鼠加速GVHD研究

每只免疫受损的NSG小鼠(8-9周龄，来自法国查尔斯河(Charles River))在研究第-1天接受1.5Gy照射。将小鼠分为4组(n＝5)，并使用2个不同的PBMC供体进行2次独立实验。在研究第0天，每只小鼠采用来自2个供体之一的2000万个人PBMC进行IV过继转移，并且每只小鼠均用媒剂对照(100μL)、22μg rhIL-2(350,000UI/小鼠，Proleukin，诺华公司(Novartis))每天一次、1mg/kg BsAb-1每周两次、或1mg/kg BsAb-2每周两次进行治疗。通过测量所有动物随时间的体重减轻来评估GVHD。当观察到体重减轻20％时对动物实施安乐死。

在第二个实验中，NSG小鼠(8-9周龄，来自法国查尔斯河)在研究第-1天接受1.5Gy照射。将小鼠分为4组，并使用2个不同的PBMC供体进行2次独立实验。在研究第0天，每只小鼠采用2名供体之一的2000万个CSFE标记的人PBMC进行IV过继转移，每只小鼠均用媒剂对照(100μL)(n＝7)、22μg rhIL-2(350,000UI/小鼠)每天一次(n＝6)，1mg/kg BsAb-1每周两次(n＝6)或1mg/kg BsAb-2每周两次(n＝6)进行治疗。所有动物均在研究第5天处死。

通过流式细胞术对处死当天小鼠脾制备的单细胞悬浮液进行移植的PBMC的免疫表型分析。检测方法与上述通过流式细胞仪检测Ki67的方法基本相同，但使用不同的抗体组以更好地区分人PBMC和宿主细胞。用抗人CD45、CD3、CD4、CD8、CD25、CD16、CD19和/或CD69对细胞进行表面染色。固定和透化后，一些细胞用抗人FoxP3染色。然后将样品收集在流式细胞仪上并使用FlowJo分析软件进行分析。

对于BsAb-5，转移了1000万个PBMC，而不是2000万个，并将小鼠分为3组。

食蟹猴药效学(PD)研究

在12只2-4岁的初治食蟹猴中单次IV(缓慢推注)剂量0.03、0.1或0.3mg/kg后，评估了BsAb-1和BsAb-2的PD谱。每个治疗组包含1只雄性和1只雌性食蟹猴(查尔斯河实验室(Charles River Lab)，美国，里诺，内华达州)。在给药后21天的选定时间点采集血样，用于血液学、血清化学、细胞因子和PD终点的分析。研究结束后，将研究中的动物放回普通群体。所有程序均经CRL IACUC批准，并按照Animal Welfare Act[动物福利法]》、Guide forCare and Use of Laboratory Animals[实验动物的护理和使用指南]和实验动物福利办公室[Office of Laboratory Animal Welfare]规定进行。

食蟹猴血液免疫表型分析

每个收集时间点的一部分血液用于通过流式细胞术进行免疫表型分析和定量。通过流式细胞术检测Ki67的方法与上述基本相同，但使用不同的食蟹猴反应性抗体组。使用针对CD3、CD4、CD8、CD20、CD25和CD159a的抗体对细胞进行表面染色。固定和透化后，细胞用FoxP3和Ki67抗体染色。然后将样品收集在流式细胞仪上并使用FlowJo分析软件进行分析。

同时，将每个血样的一部分转移至BD TruCount管中并用CD45染色，以实时定量外周血细胞绝对计数。将上述血液分析中的细胞亚群百分比应用于相应TruCount管中的总细胞数。

αIgG4 ELISA

使用抗原捕获ELISA测定小鼠血清中BsAb-1和BsAb-2的血清浓度。所有洗涤和稀释均使用新鲜制备的TBS-T(Accuris公司)进行。除包被、封闭和清洗体积为200μL/孔外，所有体积均应假定为100μL/孔。测定前一天晚上，Nunc MaxiSorp^TM平底板(英杰公司)包被在碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液(赛默飞世尔科技公司)中稀释至1μg/mL的重组人IL2Rγ蛋白，并置于4℃下。第二天，洗板5次，然后用1％BSA封闭30分钟。将板洗涤一次，然后添加血清样品的多个稀释液以及参考标准。使用已知浓度的BsAb-1和BsAb-2储备液来制作标准曲线。室温下1小时后，将板洗涤8次，然后添加稀释至3μg/mL的生物素化抗人IgG4-Fc(抗体技术公司(MABTECH))。将板在室温下再孵育30分钟，然后再次洗涤8次。接下来，将板与1:4000稀释的HRP-链霉亲和素(赛默飞世尔科技公司)一起孵育30分钟。再洗涤8次后，将板用室温1-Step Ultra TMB(赛默飞世尔科技公司)在黑暗中孵育6分钟。用100μL/孔2N硫酸终止反应。在450nm和570nm处评估吸光度。

蛋白质表达和纯化

按照制造商的说明(赛默飞世尔公司A29133，标准方案)在ExpiCHO细胞中表达单特异性UniAb。第7天收获澄清的上清液，并使用KingFisher Flex平台(赛默飞世尔公司)使用蛋白A磁珠进行纯化。抗体在0.1M柠檬酸盐、0.1M NaCl、10％甘油、10％蔗糖、pH 3.5中洗脱。

为了表达双特异性UniAb，用两种表达载体(杵和臼载体，杵载体包含C末端His标签)转染ExpiCHO细胞，并根据制造商的说明使用高滴度方案在ExpiCHO细胞中表达。收获澄清的上清液并通过IMAC(NiExcel，赛替富生命科学公司(Cytive LifeSciences))使用咪唑梯度进行洗脱来纯化抗体。将含有IL-2Rβγ双特异性UniAb的级分合并、浓缩，并通过阳离子交换进一步纯化，以去除任何与产品相关的杂质(Mono/>10/100GL柱(赛替富生命科学公司))。所有抗体均通过SEC-UPLC和SDS-PAGE进行分析，以确认其大小和纯度。

食蟹猴IL-2Rγ序列获自Uniprot.org(UniProt登录ID：G7Q2Z6)，胞外结构域(aaMet1-Asn254)被克隆到含有内源前导序列和C末端His标签的专有载体中。根据供应商的说明(高滴度方案，赛默飞世尔公司)，IL-2Rγ试剂在ExpiCHO细胞中表达。第8天收获细胞，并将上清液进行SDS-PAGE(NuPAGE 4-12％Bis Tris Gel)运行以验证靶蛋白表达。使用Ni-Sepharose Excel树脂(赛替富生命科学公司)通过IMAC使用咪唑梯度进行洗脱来纯化澄清的收获物。将峰合并并使用QiaXpert(凯杰公司)定量。

突变型IL-2蛋白(T3A、F42A、Y45A、L72G、C125A)的克隆、表达和纯化在莱克制药公司(Lake Pharma)完成。添加C末端His标签，以便能够通过IMAC使用标准程序和咪唑梯度洗脱进行纯化。

基于Octet的解离速率测量

所有解离速率测量均在Octet Qk384仪器(佛特比奥公司(ForteBio))上在96孔微孔板中于25℃下使用抗人IgG Fc捕获(AHC，18–5005)传感器以振荡速度1000rpm进行。为了确定解离速率，将抗体以5μg/mL加载到AHC传感器上。动力学缓冲液(0.02％Tween20、0.1％BSA、0.05％叠氮化钠、1X PBS)中的短基线之后。对以下物质进行了解离速率测量：人IL-2Rβ(Acro生物系统公司)、人IL-2Rγ(义翘神州公司)、食蟹猴IL-2Rβ(义翘神州公司)、食蟹猴IL-2Rγ(使用ExpiCHO表达系统在内部表达和纯化，然后进行Ni-NTA His-tag纯化)、小鼠IL-2Rγ(义翘神州公司)、小鼠IL-2Rβ(义翘神州公司)、人IL-2Rα(义翘神州公司)、IL-4R(义翘神州公司)、IL-7R(义翘神州公司)、IL-9R(R&D系统公司)和IL-21R(义翘神州公司)。使用以下抗体作为阳性对照来验证靶标结合和试剂质量：抗人IL-9R(R&D系统公司)、抗人IL-21R(R&D系统公司)、抗人IL-7R(R&D系统公司)和抗人IL-4Ra(R&D系统公司)。然后将加载的传感器浸入含有浓度为100nM的抗原的孔中以进行缔合步骤。在动力学缓冲液中监测解离。捕获表面再生60秒。使用佛特比奥公司数据分析软件将数据拟合至1:1结合模型以提取缔合速率和解离速率。

基于Octet的动力学测量

所有动力学测量实验均在佛特比奥公司Octet Qk384仪器上使用抗人Fc捕获(AHC，18-5005)传感器进行。双特异性UniAb和抗原在动力学缓冲液(0.02％Tween20、0.1％BSA、0.05％叠氮化钠、1XPBS)中稀释至最终浓度。动力学测量针对以下抗原：人IL-2RB(Acro生物系统公司)、人IL-2RG(Acro生物系统公司)、食蟹猴IL-2RB(义翘神州公司)、食蟹猴IL-2RG(使用ExpiCHO表达系统在内部表达和纯化，然后进行Ni-NTA his标签纯化)。将抗体以5μg/mL加载到AHC传感器上，以实现最大加载。在动力学缓冲液中的短基线之后，将传感器暴露于一系列分析物浓度(7.8nM至500nM)以进行缔合步骤，并使用背景扣除来校正传感器漂移。在动力学缓冲液中监测解离。捕获表面再生60秒。所有实验均在1000rpm的振荡下进行。使用佛特比奥公司数据分析软件将数据拟合至1:1结合模型以提取缔合速率和解离速率。KD使用kd/ka比率计算。图1中提供了六种双特异性抗体构建体的动力学数据。

生物物理表征测定(Tm、Tagg)

Tm和Tagg是在UNcle平台上测量的。简而言之，将每个样品的9μL一式两份装入Uni(UNcle盒)中，并以1℃/min的恒定速率从20℃升温至70℃。UNcle分析3.1软件用于使用荧光强度重心平均值(BCM)的一阶导数计算每个样品的Tm。使用266nm处的散射光强度计算每个样品的Tagg。

热应力和稳定性表征

双特异性UniAb分子在20mM柠檬酸盐和0.1M NaCl pH 6.2中浓缩至10mg/mL。在分析型赛默飞世尔公司UltiMate^TM3000UPLC上通过SEC在2-8℃和37℃温度胁迫前以及胁迫后1个月测定高分子量和低分子量物质(％HMW和％LMW)的存在情况。

实例1：具有激动剂活性的IL-2Rβγ双特异性抗体组合的鉴定

IL-2受体复合物的激活触发信号级联，导致STAT5(pSTAT5)磷酸化、pSTAT5二聚体易位至细胞核以及STAT5调节基因的转录(M.Rickert等人,Science[科学]308,1477–1480(2005)；G.C.Sim等人,Cytokine Growth F R[细胞因子和生长因子评论]25,377–390(2014))。作为确定靶向IL-2Rβ和γ亚基的双特异性抗体是否可以诱导IL-2R信号传导激活的主要测定，来自独特CDR3家族的5个抗IL-2Rβ结合臂和来自独特CDR3家族的5个抗IL-2Rγ结合臂组合起来制成25种双特异性UniAb，用于对激动剂活性进行全面筛选。双特异性UniAb使用杵臼技术在沉默且稳定的人IgG4 Fc(CH1结构域缺失)上表达，以促进重链异二聚体形成，杵臂上有单个抗IL-2RγVH和臼臂上有单个抗IL-2RβVH(J.B.B.Ridgway等人,Protein Eng Des Sel[蛋白质工程设计与选择]9,617-621(1996)；S.M.Canfield,等人,JExp Medicine[实验医学杂志]173,1483-1491(1991)；D.Xu等人,Cell Immunol[细胞免疫学]200,16-26(2000)；J.W.Bloom等人,Protein Sci[蛋白质科学]6,407-415(1997)；M.P.Reddy等人,J Immunol[免疫学杂志]164,1925-1933(2000)；A.M.Merchant等人,NatBiotechnol[自然生物技术]16,677-681(1998))。

使用磷酸流式细胞术测定测量并比较25种IL-2RβγUniAb组合与rhIL-2相比对人CD8+ T细胞的STAT5磷酸化。任何抗IL-2Rβ或抗IL-2Rγ单特异性UniAb均未观察到STAT5磷酸化。类似地，当在pSTAT5测定中以混合物形式测试抗IL-2Rβ和抗IL-2Rγ单特异性UniAb时，也没有观察到STAT5磷酸化(图2，分图B)。相反，具有一个抗IL-2Rβ臂和一个抗IL-2Rγ臂的双特异性UniAb表现出不同水平的激动剂活性，总结于图2分图B中。有意义的是，诱导STAT5激动剂活性磷酸化的能力似乎高度依赖于双特异性组合中存在的抗IL-2Rβ臂，而激动程度似乎依赖于抗IL-2Rγ臂。对照数据如图2分图C所示。

为了鉴定具有更大范围激动剂活性的抗体，启动了二次多样性筛选，以调查在STAT5活性双特异性筛选中鉴定的4个先导CDR3克隆型家族中的3个中的其他独特VH序列。这些另外的VH序列选自先导CDR3克隆型家族，并包含CDR1、CDR2和框架区的序列变异。总共，另外157个独特的家族成员经历了第二轮高通量基因组装、表达，并评估了与IL-2R表达细胞的结合。对于IL-2Rβ，在多样性筛选中鉴定出与人和食蟹猴IL-2Rβ细胞结合的另外33个IL-2Rβ家族F09成员和另外22个IL-2Rβ家族F18成员。另外29个IL-2Rγ家族F16成员被鉴定出与人和食蟹猴IL-2Rγ重组蛋白以及多样性筛选中的细胞结合。这组大量且多样化的新型IL-2R结合UniAb使得后续工作能够鉴定出一组具有一系列功能活性的先导IL-2Rβγ双特异性组合。

实例2：IL-2Rβγ双特异性UniAb的体外表征

根据初次和二次结合筛选结果以及所有双特异性UniAb筛选中观察到的STAT5磷酸化，选择6个IL-2Rβγ双特异性UniAb分子进行另外的体外表征。6个IL-2Rβγ双特异性UniAb以一定范围的EC50值有效结合人和食蟹猴T细胞(图3)。根据Octet解离速率分析，6个双特异性UniAb均未与其他常见γ链配偶体(IL-4R、IL-7R、IL-9R或IL-21R)或IL-2Rα结合。

与rhIL-2和rhIL-2变体(其包含突变(F42A、Y45A、L72G)，这些突变已被证明破坏了与IL-2Rα的结合，同时保留了结合并激活中间亲和力IL-2Rβγ受体的能力)相比，STAT5磷酸化呈剂量依赖性增加，证实了IL-2Rβγ双特异性UniAb刺激人CD4+ T、CD8+ T和NK细胞中IL-2R信号传导的能力(图4，分图A-C)(C.Klein等人,Oncoimmunology[肿瘤免疫学]6:3e1277306(2017))。在CD8+ T细胞上，双特异性UniAb在pSTAT5测定中表现出一系列EC50值，多种构建体(BsAb-1、BsAb-3、BsAb-4)显示出与rhIL-2和rhIL-2变体几乎相同的活性(图4，分图A)。然而，这与CD4+CD25+FoxP3+ T调节细胞中的pSTAT5水平(其中双特异性UniAb在表达高水平IL-2Rα的细胞上显示出与rhIL-2相比显著更低的效力)形成鲜明对比(图4，分图C-D)。因此，IL-2Rβγ双特异性UniAb避免了T-reg的优先激活，这是这些分子的关键功能标准。所有6个双特异性UniAb也被证实可激活食蟹猴T细胞上的IL-2R信号传导，在后续研究中将食蟹猴建立为合适的非人灵长类动物模型(图4，分图E)。

为了进一步比较6个双特异性UniAb和rhIL-2之间的功能活性，进行了细胞增殖测定。响应双特异性IL-2R激动剂UniAb或IL-2细胞因子对照的处理，免疫效应细胞(衍生自健康供体PBMC的T和NK细胞)表现出剂量依赖性增殖(图5，分图A-D)。虽然在用IL-2Rβγ双特异性UniAb处理的PBMC中观察到对CD8+ T细胞和NK细胞的增殖的一系列效力，但其中几种(BsAb-1、BsAb-3、BsAb-4)显示出与rhIL-2和rhIL-2变体对照相似的一定水平的增殖诱导作用，而所有分子均达到相似水平的最大增殖(图5，分图A-B)。相反，rhIL-2比双特异性激动剂UniAb和rhIL-2变体对照对CD4+细胞(包括T-reg)更有活性(图5，分图C-D)。

在离体人全血测定中评估了双特异性IL-2R激动剂UniAb与rhIL-2相比的细胞因子释放谱。在存在IL-2Rβγ双特异性UniAb或rhIL-2的情况下孵育24小时后，所有测试品均观察到IFN-γ、TNF-α、IL-6和IL-8的剂量依赖性增加(图6，分图A-D)。在所有测试的细胞因子中，双特异性UniAb中的两个(BsAb-3和BsAb-4)诱导的细胞因子中水平(最大浓度或EC50)等于或高于rhIL-2，但其余四个诱导的水平低于细胞因子对照。

总之，六个双特异性IL-2Rβγ抗体被鉴定为具有一系列激动剂活性。通过STAT5磷酸化和增殖测定测量，BsAb-1在免疫效应细胞中表现出与rhIL-2相似的激动剂活性水平。相反，在相同的体外测定中，与rhIL-2和BsAb-1相比，BsAb-2显示出较低的效力。两种抗体均显示出通过SEC测量的低聚集，具有有利的解链温度，并且在37℃下稳定一个月(图9)。这些结果与BsAb-1和BsAb-2有利的细胞因子释放谱相组合，导致选择这两个双特异性抗体进行进一步的体内表征。

实例3：IL-2Rβγ双特异性UniAb BsAb-1和BsAb-2的体内表征

在进行体内功能研究之前，在小鼠中测量了双特异性抗体的体内稳定性和药代动力学。观察到的每个双特异性抗体的5-7天半衰期与小鼠中人IgG4抗体的半衰期一致(图8，分图A)(R.Deng等人,Mabs[单克隆抗体]3,61-66(2011))。为了评估双特异性抗体的体内功能活性，使用加速图相比于宿主疾病(GVHD)模型来比较BsAb-1、BsAb-2和rhIL-2的功能活性(图10，分图A-C)。在第一个实验中，受辐射的NSG小鼠被植入人PBMC，随后用媒剂、rhIL-2每天一次或两个双特异性激动剂抗体之一每周两次处理小鼠，直至处死。正如预期的那样，用媒剂对照处理的动物在第20天左右表现出GVHD的发作(通过体重减轻来测量)，并且在大约第35天时在体重减轻20％时处死。相比之下，双特异性IL-2Rβγ激动剂抗体(BsAb-1、BsAb-2)以及rhIL-2处理的动物在大约第8天表现出GVHD发作，并在第9天和第13天之间在体重减轻20％时被处死，表明与媒剂对照相比GVHD加速，与处理的小鼠中免疫效应细胞的增强激活一致(图10，分图B)。

第二个研究旨在直接测量BsAb-1和BsAb-2在体内刺激免疫效应细胞增殖的能力。与第一个实验类似，受辐射的NSG小鼠被植入用CSFE标记的人PBMC，并用媒剂、rhIL-2、BsAb-1或BsAb-2处理。治疗第5天后，收获脾并通过测量不同淋巴细胞群中的CSFE染色来比较4个处理组之间CD8+ T细胞和CD4+ T细胞的增殖。与rhIL-2和媒剂对照相比，BsAb-1和BsAb-2均显示出明显更多的增殖性CD8+T细胞(图10，分图C)。CD4+ T细胞扩增程度较小；然而，与媒剂对照相比，BsAb-2处理的小鼠的增殖性CD4+ T细胞显著增加。

双特异性抗体激动剂临床前评估的一个重要方面是建立食蟹猴作为测量分子药效学的适当体内模型。为了确定人和食蟹猴功能等效性，确认双特异性抗体在食蟹猴原代T细胞中离体激活pSTAT5信号传导，其水平与在原代人T细胞中观察到的水平相似(图4，分图C和E)。在建立人和食蟹猴之间的功能等效性后，进行了一项非GLP食蟹猴研究，以进一步研究BsAb-1和BsAb-2在非人灵长类动物模型中的体内活性。将这两个双特异性激动剂抗体给予以2只为一组的食蟹猴，这些食蟹猴接受单次静脉内(缓慢推注)剂量0.03、0.1或0.3mg/kg的BsAb-1或BsAb-2。在使用两个分子的所有剂量下，观察到外周CD8+ T和NK细胞的显著扩增(图11)。在淋巴细胞数量最初短暂下降后，CD8+ T、NK细胞以及较小程度的CD4+ T细胞在血液中表现出剂量依赖性增殖和扩增，在第4-7天左右达到峰值，然后在第14天左右恢复到基线水平(图11，分图A-C、F-H)。重要的是，没有观察到CD4+CD25+FoxP3+ T-调节细胞的显著扩增，这与双特异性激动剂抗体避免优先激活三聚体IL-2受体一致(图11，分图D、I)。这种效应通过CD8+:CD4+ T细胞的比率进一步证实，该比率偏向于CD8+ T细胞亚群(图11，分图K)。此外，IL-2Rβγ激动剂抗体在所有测试剂量水平下在猴中均具有良好的耐受性，没有迹象表明出现血管渗漏综合征或其他明显的毒性。

实例4：IL-2Rβγ双特异性UniAb BsAb-5的体内表征

在进行体内功能研究之前，在小鼠中以两个剂量水平测量了双特异性抗体的体内稳定性和药代动力学：1mg/kg和10mg/kg。BsAb-5(IL2RB_F09K**IL2RG_F16B)的观察到的5天半衰期与小鼠中人IgG4抗体的半衰期一致(图12，分图A和B)(R.Deng等人,Mabs[单克隆抗体]3,61-66(2011))。为了评估双特异性抗体的体内功能活性，使用加速图相比于宿主疾病(GVHD)模型来比较BsAb-5和rhIL-2的功能活性(图13-14)。在第一个实验中，受辐射的NSG小鼠被植入人PBMC，随后用媒剂、rhIL-2每天一次或BsAb-5每周两次处理小鼠，直至处死。正如预期的那样，用媒剂对照处理的动物在第20天左右表现出GVHD的发作(通过体重减轻来测量)，并且在大约第35天时在体重减轻20％时处死。相比之下，BsAb-5处理的动物以及rhIL-2处理的动物在大约第8天表现出GVHD发作，并在第9天和第13天之间在体重减轻20％时被处死，表明与媒剂对照相比GVHD加速，与处理的小鼠中免疫效应细胞的增强激活一致(图14)。

第二个研究旨在直接测量BsAb-5在体内刺激免疫效应细胞增殖的能力。与第一个实验类似，受辐射的NSG小鼠被植入用CPD450标记的人PBMC，并用媒剂、rhIL-2或BsAb-5处理。治疗第5天后，收获脾并通过测量不同群体中的CPD450稀释度来比较3个处理组之间CD8+ T细胞、CD4+ T细胞和NK细胞的增殖。在所有三个测量的细胞类型中，BsAb-5比rhIL-2或媒剂对照诱导显著更多的增殖(图15，分图A-C)。

双特异性抗体激动剂临床前评估的一个重要方面是建立食蟹猴作为测量分子药效学的适当体内模型。为了确定人和食蟹猴功能等效性，确认双特异性抗体在食蟹猴原代T细胞中离体激活pSTAT5信号传导，其水平与在原代人T细胞中观察到的水平相似(图4，分图C和E)。在建立人和食蟹猴之间的功能等效性后，进行了一项非GLP食蟹猴研究，以进一步研究BsAb-5在非人灵长类动物模型中的体内活性。BsAb-5以0.1、0.3或0.5mg/kg的单次静脉内(缓慢推注)剂量施用给食蟹猴。前两个剂量水平以2只猴为一组，0.5mg/kg剂量水平以4只猴为一组。在所有剂量水平下，观察到外周CD8+ T-、NK-和NKT-细胞的显著扩增(图16，图A-F)。在淋巴细胞数量最初短暂下降后，CD8+ T-、NK-、NKT-细胞以及较小程度的CD4+ T细胞在血液中表现出剂量依赖性增殖和扩增，在第4-7天左右达到峰值，然后在第14天左右恢复到基线水平(图16，分图A-H)。重要的是，没有观察到CD4+CD25+Foxp3+ T-调节细胞的优先扩增，这与双特异性激动剂抗体避免优先激活三聚体IL-2受体一致(图16，分图A-J)。另外，由于缺乏IL-2受体表达而充当有用的阴性对照的B细胞不响应BsAb-5增殖(图16，分图K-L)。此外，IL-2Rβγ激动剂抗体在高达0.5mg/kg下在猴中均具有良好的耐受性，没有迹象表明出现血管渗漏综合征或其他明显的毒性。

虽然本文已经示出和描述了本披露的非限制性示例实施例，但对于本领域的技术人员来说将显而易见，此类实施例仅作为实例提供。在不脱离本披露的情况下，本领域技术人员现在将清楚许多变型、改变和替代。应理解，本文所述的本披露实施例的各种替代物可以用于实践本披露。意图在于，以下权利要求限定本披露的范围，并且由此覆盖这些权利要求及其等同物范围内的方法和结构。

序列表

<110> 特尼奥生物股份有限公司

<120> 激动性抗IL-2R抗体及其使用方法

<130> 60792.00054WO01 (TNO-0038-WO)

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<141>

<150> 63/239,883

<151> 2021-09-01

<150> 63/170,383

<151> 2021-04-02

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20 25 30

Asp Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

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50 55 60

Met Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser

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Gly Arg Gly Ser Trp Glu Leu Ser Asp Ala Phe Asp Ile Arg Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 12

<211> 120

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

多肽"

<400> 12

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Ser Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30

Asp Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Met Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ser Trp Glu Leu Thr Asp Ala Phe Asp Ile Arg Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 13

<211> 120

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

多肽"

<400> 13

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Ser Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30

Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Glu Ile Ser His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Gly Arg Gly Ser Trp Glu Leu Thr Asp Ala Phe Asp Ile Arg Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 14

<211> 126

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

多肽"

<400> 14

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Thr Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Glu Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Leu Asp Tyr Asp Val Leu Thr Gly Asp Pro Val Gly Gly

100 105 110

Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 15

<211> 8

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

肽"

<400> 15

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr

1 5

<210> 16

<211> 8

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

肽"

<400> 16

Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr Tyr

1 5

<210> 17

<211> 8

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

肽"

<400> 17

Ile Ser Ser Ser Gly Asp Thr Ile

1 5

<210> 18

<211> 8

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

肽"

<400> 18

Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile

1 5

<210> 19

<211> 8

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

肽"

<400> 19

Ile Ser Ser Ser Gly Thr Thr Thr

1 5

<210> 20

<211> 12

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

肽"

<400> 20

Ala Arg Gly Asp Ala Val Ser Ile Thr Gly Asp Tyr

1 5 10

<210> 21

<211> 12

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

肽"

<400> 21

Ala Arg Gly Ala Ala Val Ala Pro Gly Phe Asp Ser

1 5 10

<210> 22

<211> 119

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

多肽"

<400> 22

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Ser Ser Gly Asp Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Glu Asn Ser Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Asp Ala Val Ser Ile Thr Gly Asp Tyr Arg Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 23

<211> 119

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

多肽"

<400> 23

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Asp Ala Val Ser Ile Thr Gly Asp Tyr Arg Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 24

<211> 119

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

多肽"

<400> 24

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser His Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Asn Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met His Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Asp Ala Val Ser Ile Thr Gly Asp Tyr Arg Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 25

<211> 119

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

多肽"

<400> 25

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser His Ile Ser Ser Ser Gly Thr Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Glu Gly Arg Phe Thr Ile Thr Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Ala Val Ala Pro Gly Phe Asp Ser Arg Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

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<211> 9

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

肽"

<220>

<221> 变体

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<220>

<221> 位点

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<223> /注释="序列中给出的变异残基相对于

变异位置注释中的那些

没有偏好"

<400> 26

Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Asp Trp

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<210> 27

<211> 7

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

肽"

<220>

<221> 变体

<222>(2)..(2)

<223> /替换="S"

<220>

<221> 位点

<222>(1)..(7)

<223> /注释="序列中给出的变异残基相对于

变异位置注释中的那些

没有偏好"

<400> 27

Ile Asp His Ser Gly Ser Thr

1 5

<210> 28

<211> 13

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

肽"

<220>

<221> 变体

<222>(1)..(1)

<223>/替换="A”

<220>

<221> 变体

<222>(4)..(4)

<223>/替换="Q"

<220>

<221> 变体

<222>(8)..(8)

<223>/替换="T"

<220>

<221> 位点

<222>(1)..(13)

<223> /注释="序列中给出的变异残基相对于

变异位置注释中的那些

没有偏好"

<400> 28

Gly Arg Gly Ser Trp Glu Leu Ser Asp Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 29

<211> 8

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

肽"

<220>

<221> 变体

<222>(6)..(6)

<223>/替换="T"

<220>

<221> 位点

<222>(1)..(8)

<223> /注释="序列中给出的变异残基相对于

变异位置注释中的那些

没有偏好"

<400> 29

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly

1 5

<210> 30

<211> 8

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

肽"

<220>

<221> 变体

<222>(8)..(8)

<223>/替换="R"

<220>

<221> 位点

<222>(1)..(8)

<223> /注释="序列中给出的变异残基相对于

变异位置注释中的那些

没有偏好"

<400> 30

Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys

1 5

<210> 31

<211> 19

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

肽"

<220>

<221> 变体

<222>(8)..(8)

<223>/替换="I"

<220>

<221> 位点

<222>(1)..(19)

<223> /注释="序列中给出的变异残基相对于

变异位置注释中的那些

没有偏好"

<400> 31

Ala Arg Asp Leu Asp Tyr Asp Val Leu Thr Gly Asp Pro Val Gly Gly

1 5 10 15

Phe Asp Ile

<210> 32

<211> 8

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

肽"

<220>

<221> 变体

<222>(3)..(3)

<223>/替换="I"

<220>

<221> 变体

<222>(4)..(4)

<223>/替换="V"

<220>

<221> 变体

<222>(5)..(5)

<223>/替换="N" 或 "G"

<220>

<221> 变体

<222>(6)..(6)

<223>/替换="N"

<220>

<221> 位点

<222>(1)..(8)

<223> /注释="序列中给出的变异残基相对于

变异位置注释中的那些

没有偏好"

<400> 32

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr

1 5

<210> 33

<211> 8

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

肽"

<220>

<221> 变体

<222>(3)..(3)

<223>/替换="N"

<220>

<221> 变体

<222>(6)..(6)

<223>/替换="S" 或 "G" 或 "N"

<220>

<221> 变体

<222>(7)..(7)

<223>/替换="I"

<220>

<221> 位点

<222>(1)..(8)

<223> /注释="序列中给出的变异残基相对于

变异位置注释中的那些

没有偏好"

<400> 33

Ile Ser Ser Ser Gly Asp Thr Ile

1 5

<210> 34

<211> 349

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

多肽"

<400> 34

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Ser Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30

Asp Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Met Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ser Trp Glu Leu Thr Asp Ala Phe Asp Ile Arg Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

115 120 125

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

130 135 140

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

145 150 155 160

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

165 170 175

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

180 185 190

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

195 200 205

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

210 215 220

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

225 230 235 240

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

245 250 255

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys

260 265 270

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

275 280 285

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

290 295 300

Ser Phe Phe Leu Val Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

305 310 315 320

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

325 330 335

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

340 345

<210> 35

<211> 348

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

多肽"

<400> 35

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser His Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Asn Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met His Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Asp Ala Val Ser Ile Thr Gly Asp Tyr Arg Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro

115 120 125

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

130 135 140

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

145 150 155 160

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe

165 170 175

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

180 185 190

Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

195 200 205

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

210 215 220

Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

225 230 235 240

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln

245 250 255

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly

260 265 270

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

275 280 285

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

290 295 300

Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu

305 310 315 320

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

325 330 335

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

340 345

<210> 36

<211> 349

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

多肽"

<400> 36

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Ser Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30

Asp Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Met Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ser Trp Glu Leu Thr Asp Ala Phe Asp Ile Arg Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

115 120 125

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

130 135 140

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

145 150 155 160

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

165 170 175

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

180 185 190

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

195 200 205

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

210 215 220

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

225 230 235 240

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

245 250 255

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys

260 265 270

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

275 280 285

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

290 295 300

Ser Phe Phe Leu Val Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

305 310 315 320

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

325 330 335

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

340 345

<210> 37

<211> 348

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

多肽"

<400> 37

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser His Ile Ser Ser Ser Gly Thr Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Glu Gly Arg Phe Thr Ile Thr Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Ala Val Ala Pro Gly Phe Asp Ser Arg Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro

115 120 125

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

130 135 140

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

145 150 155 160

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe

165 170 175

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

180 185 190

Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

195 200 205

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

210 215 220

Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

225 230 235 240

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln

245 250 255

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly

260 265 270

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

275 280 285

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

290 295 300

Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu

305 310 315 320

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

325 330 335

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

340 345

<210> 38

<211> 272

<212>PRT

<213> 智人

<400> 38

Met Asp Ser Tyr Leu Leu Met Trp Gly Leu Leu Thr Phe Ile Met Val

1 5 10 15

Pro Gly Cys Gln Ala Glu Leu Cys Asp Asp Asp Pro Pro Glu Ile Pro

20 25 30

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<213> 人工序列

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<213> 人工序列

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<213> 人工序列

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100 105 110

<210> 57

<211> 110

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

多肽"

<400> 57

Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

1 5 10 15

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

20 25 30

Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr

35 40 45

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

50 55 60

Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

65 70 75 80

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

85 90 95

Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

100 105 110

<210> 58

<211> 107

<212>PRT

<213> 智人

<400> 58

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu

1 5 10 15

Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

20 25 30

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

35 40 45

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

50 55 60

Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly

65 70 75 80

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

85 90 95

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

100 105

<210> 59

<211> 107

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

多肽"

<400> 59

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu

1 5 10 15

Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe

20 25 30

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

35 40 45

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

50 55 60

Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly

65 70 75 80

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

85 90 95

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

100 105

<210> 60

<211> 107

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

多肽"

<400> 60

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu

1 5 10 15

Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe

20 25 30

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

35 40 45

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

50 55 60

Phe Leu Val Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly

65 70 75 80

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

85 90 95

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

100 105

<210> 61

<211> 348

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

多肽"

<400> 61

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Ser Ser Gly Asp Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Glu Asn Ser Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Asp Ala Val Ser Ile Thr Gly Asp Tyr Arg Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro

115 120 125

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

130 135 140

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

145 150 155 160

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe

165 170 175

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

180 185 190

Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

195 200 205

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

210 215 220

Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

225 230 235 240

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln

245 250 255

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly

260 265 270

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

275 280 285

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

290 295 300

Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu

305 310 315 320

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

325 330 335

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

340 345

<210> 62

<211> 349

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

多肽"

<400> 62

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Ser Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30

Asp Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Met Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ser Trp Glu Leu Thr Asp Ala Phe Asp Ile Arg Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

115 120 125

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

130 135 140

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

145 150 155 160

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

165 170 175

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

180 185 190

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

195 200 205

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

210 215 220

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

225 230 235 240

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

245 250 255

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys

260 265 270

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

275 280 285

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

290 295 300

Ser Phe Phe Leu Val Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

305 310 315 320

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

325 330 335

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

340 345

<210> 63

<211> 348

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

多肽"

<400> 63

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Asp Ala Val Ser Ile Thr Gly Asp Tyr Arg Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro

115 120 125

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

130 135 140

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

145 150 155 160

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe

165 170 175

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

180 185 190

Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

195 200 205

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

210 215 220

Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

225 230 235 240

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln

245 250 255

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly

260 265 270

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

275 280 285

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

290 295 300

Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu

305 310 315 320

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

325 330 335

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

340 345

<210> 64

<211> 349

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

多肽"

<400> 64

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Ser Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30

Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Glu Ile Ser His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser

65 70 75 80

Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Gly Arg Gly Ser Trp Glu Leu Thr Asp Ala Phe Asp Ile Arg Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

115 120 125

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

130 135 140

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

145 150 155 160

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

165 170 175

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

180 185 190

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

195 200 205

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

210 215 220

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

225 230 235 240

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

245 250 255

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys

260 265 270

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

275 280 285

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

290 295 300

Ser Phe Phe Leu Val Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

305 310 315 320

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

325 330 335

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

340 345

<210> 65

<211> 348

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

多肽"

<400> 65

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Asp Ala Val Ser Ile Thr Gly Asp Tyr Arg Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro

115 120 125

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

130 135 140

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

145 150 155 160

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe

165 170 175

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

180 185 190

Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

195 200 205

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

210 215 220

Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

225 230 235 240

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln

245 250 255

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly

260 265 270

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

275 280 285

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

290 295 300

Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu

305 310 315 320

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

325 330 335

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

340 345

<210> 66

<211> 355

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

多肽"

<400> 66

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Thr Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Glu Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Leu Asp Tyr Asp Val Leu Thr Gly Asp Pro Val Gly Gly

100 105 110

Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Ser

115 120 125

Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly

130 135 140

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

145 150 155 160

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln

165 170 175

Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

180 185 190

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr

195 200 205

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

210 215 220

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile

225 230 235 240

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

245 250 255

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

260 265 270

Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

275 280 285

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

290 295 300

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Arg Leu Thr Val

305 310 315 320

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

325 330 335

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

340 345 350

Leu Gly Lys

355

<210> 67

<211> 348

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

多肽"

<400> 67

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Ser Ser Gly Asp Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Glu Asn Ser Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Asp Ala Val Ser Ile Thr Gly Asp Tyr Arg Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro

115 120 125

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

130 135 140

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

145 150 155 160

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe

165 170 175

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

180 185 190

Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

195 200 205

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

210 215 220

Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

225 230 235 240

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln

245 250 255

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly

260 265 270

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

275 280 285

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

290 295 300

Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu

305 310 315 320

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

325 330 335

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

340 345

<210> 68

<211> 50

<212>PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的

多肽"

<220>

<221> 位点

<222>(1)..(50)

<223> /注释="该序列可包含1-10个‘Gly Gly Gly Gly Ser’

重复单元"

<400> 68

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly

20 25 30

Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

35 40 45

Gly Ser

50

Claims

(c)在SEQ ID NO:7-10的任一个中具有两个或更少取代的CDR3序列。

2.如权利要求1所述的抗体，其包含：

(a)包含SEQ ID NO:1-3中任一个的CDR1序列；和/或

(b)包含SEQ ID NO:4-6中任一个的CDR2序列；和/或

(c)包含SEQ ID NO:7-10中任一个的CDR3序列。

3.如权利要求1或2所述的抗体，其包含：

(a)包含SEQ ID NO:1-3中任一个的CDR1序列；以及

(b)包含SEQ ID NO:4-6中任一个的CDR2序列；以及

(c)包含SEQ ID NO:7-10中任一个的CDR3序列。

4.如权利要求1-3中任一项所述的抗体，其包含：

5.如权利要求1-4中任一项所述的抗体，其包含与SEQ ID NO:11-14中任一个具有至少95％序列同一性的重链可变区。

6.如权利要求1-5中任一项所述的抗体，其包含选自SEQ ID NO:11-14的重链可变区序列。

(a)包含下式的CDR1序列：

G G S I S S S X1 W(SEQ ID NO:26)

其中X1是D或N；

(b)包含下式的CDR2序列：

I X2 H S G S T(SEQ ID NO:27)

其中X2是D或S；以及

(c)包含下式的CDR3序列：

X3 R G X4 W E L X5 D A F D I(SEQ ID NO:28)

其中，X3是G或A；

X4是S或Q；并且

X5是S或T。

(a)包含下式的CDR1序列：

G F T F S X1 Y G(SEQ ID NO:29)

其中X1是S或T；

(b)包含下式的CDR2序列：

I S Y D G S N X2(SEQ ID NO:30)

其中X2是K或R；以及

(c)包含下式的CDR3序列：

A R D L D Y D X3 L T G D P V G G F D I(SEQ ID NO:31)

其中X3是V或I。

(c)在SEQ ID NO:20-21的任一个中具有两个或更少取代的CDR3序列。

10.如权利要求9所述的抗体，其包含：

(a)包含SEQ ID NO:15-16中任一个的CDR1序列；和/或

(b)包含SEQ ID NO:17-19中任一个的CDR2序列；和/或

(c)包含SEQ ID NO:20-21中任一个的CDR3序列。

11.如权利要求9或10所述的抗体，其包含：

(a)包含SEQ ID NO:15-16中任一个的CDR1序列；以及

(b)包含SEQ ID NO:17-19中任一个的CDR2序列；以及

(c)包含SEQ ID NO:20-21中任一个的CDR3序列。

12.如权利要求9-11中任一项所述的抗体，其包含：

13.如权利要求9-12中任一项所述的抗体，其包含与SEQ ID NO:22-25中任一个具有至少95％序列同一性的重链可变区。

14.如权利要求9-13中任一项所述的抗体，其包含选自SEQ ID NO:22-25的重链可变区序列。

(a)包含下式的CDR1序列：

G F X1 X2 X3 X4 Y Y(SEQ ID NO:32)

其中，X1是T或I；

X2是F或V；

X3是S、N或G；并且

X4是D或N；

(b)包含下式的CDR2序列：

I S X5 S G X6 X7 I(SEQ ID NO:33)

其中，X5是S或N；

X6是D、S、G或N；并且

X7是T或I；以及

(c)包含序列ARGDAVSITGDY(SEQ ID NO:20)的CDR3序列。

16.如权利要求1-15中任一项所述的抗体，其中这些CDR1、CDR2和CDR3序列存在于人VH框架中。

17.如权利要求1-16中任一项所述的抗体，其中该抗体是多特异性的。

18.如权利要求1-17中任一项所述的抗体，其中该抗体是双特异性的。

19.如权利要求1-18中任一项所述的抗体，其中该抗体与IL2RB和IL2RG结合。

20.一种抗体，其包含：

结合IL2RB的第一重链可变区，该第一重链可变区包含：

SEQ ID NO:1的CDR1序列；

SEQ ID NO:4的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:7的CDR3序列；以及

结合IL2RG的第二重链可变区，该第二重链可变区包含：

SEQ ID NO:15的CDR1序列；

SEQ ID NO:17的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:20的CDR3序列。

21.如权利要求20所述的抗体，其中该第一重链可变区与SEQ ID NO:11具有至少95％序列同一性，并且该第二重链可变区与SEQ ID NO:22具有至少95％序列同一性。

22.如权利要求20或21所述的抗体，其中该第一重链可变区包含SEQ ID NO:11，并且该第二重链可变区包含SEQ ID NO:22。

23.如权利要求20-22中任一项所述的抗体，其包含包含SEQ ID NO:53的第一多肽和包含SEQ ID NO:61的第二多肽。

24.一种抗体，其包含：

结合IL2RB的第一重链可变区，该第一重链可变区包含：

SEQ ID NO:1的CDR1序列；

SEQ ID NO:4的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:8的CDR3序列；以及

结合IL2RG的第二重链可变区，该第二重链可变区包含：

SEQ ID NO:15的CDR1序列；

SEQ ID NO:18的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:20的CDR3序列。

25.如权利要求24所述的抗体，其中该第一重链可变区与SEQ ID NO:12具有至少95％序列同一性，并且该第二重链可变区与SEQ ID NO:23具有至少95％序列同一性。

26.如权利要求24或25所述的抗体，其中该第一重链可变区包含SEQ ID NO:12，并且该第二重链可变区包含SEQ ID NO:23。

27.如权利要求24-26中任一项所述的抗体，其包含包含SEQ ID NO:62的第一多肽和包含SEQ ID NO:63的第二多肽。

28.一种抗体，其包含：

结合IL2RB的第一重链可变区，该第一重链可变区包含：

SEQ ID NO:2的CDR1序列；

SEQ ID NO:5的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:9的CDR3序列；以及

结合IL2RG的第二重链可变区，该第二重链可变区包含：

SEQ ID NO:15的CDR1序列；

SEQ ID NO:18的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:20的CDR3序列。

29.如权利要求28所述的抗体，其中该第一重链可变区与SEQ ID NO:13具有至少95％序列同一性，并且该第二重链可变区与SEQ ID NO:23具有至少95％序列同一性。

30.如权利要求28或29所述的抗体，其中该第一重链可变区包含SEQ ID NO:13，并且该第二重链可变区包含SEQ ID NO:23。

31.如权利要求28-30中任一项所述的抗体，其包含包含SEQ ID NO:64的第一多肽和包含SEQ ID NO:65的第二多肽。

32.一种抗体，其包含：

结合IL2RB的第一重链可变区，该第一重链可变区包含：

SEQ ID NO:3的CDR1序列；

SEQ ID NO:6的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:10的CDR3序列；以及

结合IL2RG的第二重链可变区，该第二重链可变区包含：

SEQ ID NO:15的CDR1序列；

SEQ ID NO:17的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:20的CDR3序列。

33.如权利要求32所述的抗体，其中该第一重链可变区与SEQ ID NO:14具有至少95％序列同一性，并且该第二重链可变区与SEQ ID NO:22具有至少95％序列同一性。

34.如权利要求32或33所述的抗体，其中该第一重链可变区包含SEQ ID NO:14，并且该第二重链可变区包含SEQ ID NO:22。

35.如权利要求32-34中任一项所述的抗体，其包含包含SEQ ID NO:66的第一多肽和包含SEQ ID NO:67的第二多肽。

36.一种抗体，其包含：

结合IL2RB的第一重链可变区，该第一重链可变区包含：

SEQ ID NO:1的CDR1序列；

SEQ ID NO:4的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:8的CDR3序列；以及

结合IL2RG的第二重链可变区，该第二重链可变区包含：

SEQ ID NO:16的CDR1序列；

SEQ ID NO:18的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:20的CDR3序列。

37.如权利要求36所述的抗体，其中该第一重链可变区与SEQ ID NO:12具有至少95％序列同一性，并且该第二重链可变区与SEQ ID NO:24具有至少95％序列同一性。

38.如权利要求36或37所述的抗体，其中该第一重链可变区包含SEQ ID NO:12，并且该第二重链可变区包含SEQ ID NO:24。

39.如权利要求36-38中任一项所述的抗体，其包含包含SEQ ID NO:34的第一多肽和包含SEQ ID NO:35的第二多肽。

40.一种抗体，其包含：

结合IL2RB的第一重链可变区，该第一重链可变区包含：

SEQ ID NO:1的CDR1序列；

SEQ ID NO:4的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:8的CDR3序列；以及

结合IL2RG的第二重链可变区，该第二重链可变区包含：

SEQ ID NO:15的CDR1序列；

SEQ ID NO:19的CDR2序列；以及

SEQ ID NO:21的CDR3序列。

41.如权利要求40所述的抗体，其中该第一重链可变区与SEQ ID NO:12具有至少95％序列同一性，并且该第二重链可变区与SEQ ID NO:25具有至少95％序列同一性。

42.如权利要求40或41所述的抗体，其中该第一重链可变区包含SEQ ID NO:12，并且该第二重链可变区包含SEQ ID NO:25。

43.如权利要求40-42中任一项所述的抗体，其包含包含SEQ ID NO:36的第一多肽和包含SEQ ID NO:37的第二多肽。

44.如权利要求20、24、28、32、36或40中任一项所述的抗体，其中：

该第一重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3序列存在于VH人框架中；和/或

该第二重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3序列存在于VH人框架中。

45.如权利要求1-22、24-26、28-30、32-34、36-38、40-42或44中任一项所述的抗体，其中该抗体包含变体Fc区。

46.如权利要求45所述的抗体，其中该变体Fc区是沉默的Fc区。

47.如权利要求1-22、24-26、28-30、32-34、36-38、40-42、或44-46中任一项所述的抗体，其中该抗体包含CH1序列不存在的重链恒定区序列。

48.如权利要求1-22、24-26、28-30、32-34、36-38、40-42、或44-47中任一项所述的抗体，其中该抗体包含重链恒定区，该重链恒定区包含铰链区、CH2结构域和CH3结构域。

49.如权利要求48所述的抗体，其中该铰链区包含：

野生型人IgG4铰链区序列(SEQ ID NO:54)；或

包含S228P突变的变体人IgG4铰链区序列(SEQ ID NO:55)。

50.如权利要求48或49所述的抗体，其中该CH2结构域包含：

野生型人IgG4 CH2结构域序列(SEQ ID NO:56)；或

包含F234A突变、L235A突变、或F234A突变和L235A突变两者的变体人IgG4 CH2结构域。

51.如权利要求48-50中任一项所述的抗体，其中该CH3结构域包含：

野生型人IgG4 CH3结构域序列(SEQ ID NO:58)；

包含T366W突变的变体人IgG4 CH3结构域序列；或

包含T366S、L368A突变和Y407V突变的变体人IgG4 CH3结构域序列。

52.如权利要求1-51中任一项所述的抗体，其中该抗体是人抗体和/或分离的抗体。

53.如权利要求1-52中任一项所述的抗体，其中该抗体是仅重链抗体。

54.如权利要求1-53中任一项所述的抗体，其中：

该抗体对IL2R具有亲和力，其Kd为约10^-11M至大约10^-6M；和/或

该抗体对IL2RB具有亲和力，其Kd为约10^-8M至大约2.5x 10^-7M；和/或

该抗体对IL2RG具有亲和力，其Kd为约10^-9M至大约2.5x 10^-8M。

55.如权利要求1-54中任一项所述的抗体，其中该抗体作为IL2受体β/γ激动剂起作用。

56.一种药物组合物，其包含：

如权利要求1-55中任一项所述的抗体；以及

药学上可接受的赋形剂。

57.如权利要求56所述的药物组合物，其中该药物组合物适于静脉内或皮下递送。

58.一种治疗癌症的方法，该方法包括向有需要的个体施用有效剂量的如权利要求1-55中任一项所述的抗体或如权利要求56或67所述的药物组合物。

59.如权利要求58所述的方法，其中该抗体或药物组合物与化疗方案联合施用。

60.一种用于刺激免疫细胞上的IL2RB/IL2RG二聚体受体复合物和/或刺激免疫细胞中的IL2R信号传导的方法，该方法包括使该免疫细胞与如权利要求1-55中任一项所述的抗体或如权利要求56或57所述的药物组合物接触。