JP2023182640A - エフェクター機能を改良したヒトＩｇＧのＦｃ領域改変体 - Google Patents

Abstract

【課題】改良したエフェクター機能を有するヒトＩｇＧのＦｃ領域改変体およびその用途を提供する。【解決手段】ヒトＩｇＧ１のＦｃポリペプチドのＦｃ改変体を含むポリペプチドであって、前記Ｆｃ改変体が、（ｉ）アラニン（Ａ）を２３６位に、ロイシン（Ｌ）を３３０位に、グルタミン酸（Ｅ）を３３２位に含み、かつ、（ｉｉ）アスパラギン酸（Ｄ）を２３９位に含まず、番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従っている、ポリペプチドを提供する。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本特許文書は、米国特許法第１１９条（ｅ）の下で、２０１７年１２月１９日に出願さ
れた米国仮出願第６２／６０７，５９１号に基づく優先権を主張する。上記で特定される
特許出願は、開示の連続性を提供するために、その全体が参照により本明細書に引用され
る。

政府の利益
本発明は、ＮＩＡＩＤおよびＮＩＨにより与えられたＰ０１ ＡＩ１００１４８のもと
、政府の支援を受けて行われた。政府は本発明において一定の権利を有する。

技術分野
本発明は、改良されたエフェクター機能を有するヒトＩｇＧのＦｃ領域改変体およびそ
の用途に関連する。

炎症性疾患および腫瘍性疾患の治療のための、ＦＤＡに承認された、多数のモノクロー
ナル抗体（ｍＡｂ）の、臨床使用における豊富な経験は、抗体の治療上の可能性が、Ｉｇ
ＧのＦｃ領域と、その同起源受容体である、エフェクター白血球の表面上に発現して様々
なＦｃエフェクター機能を媒介するＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）との相互作用に高度に依存
していることを強く示唆している（Ｎｉｍｍｅｒｊａｈｎら， Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕ
ｎ １２， １３ （２０１２））。例えば、多数のｍＡｂの治療上の効果は、受容体の
ＩｇＧに結合する能力に影響を及ぼすＦｃγＲ遺伝子のアレル改変体に関連している（Ｎ
ｉｍｍｅｒｊａｈｎら， Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎ １２， １３ （２０１２） お
よび Ｍｅｌｌｏｒら， Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ ６， １ （２０１３））
。さらに、いくつかの治療上のｍＡｂのインビボの保護活性は、Ｆｃ－ＦｃγＲ相互作用
に依存し、Ｆｃγ結合能力を高めるように最適化されたＦｃ領域改変体が改良された治療
上の効果を示すことが明らかにされている（Ｇｏｅｄｅ， Ｖ．ら， Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ
Ｍｅｄ ３７０， １１０１－１１１０ （２０１４））。ＦｃγＲの多様なシグナル
伝達活性を考慮して（Ｂｏｕｒｎａｚｏｓら， Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３
５， ２８５－３１１ （２０１７））、特定のクラスのＦｃγＲに関与して活性化する
ように前記Ｆｃ領域を操作することにより、改良されたエフェクター活性を有するＩｇＧ
抗体の開発がなされてきた。例えば、ＦＤＡに承認された抗ＣＤ２０ｍＡｂオビヌツズマ
ブは、活性化ＦｃγＲであるＦｃγＲＩＩＩａとの結合が高められるように操作されてお
り、Ｆｃが操作されていない抗ＣＤ２０ｍＡｂと比較して、優れた治療上の有効性を示す
ことが明らかにされている（Ｇｏｅｄｅ， Ｖ．ら， Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３７
０， １１０１－１１１０ （２０１４））。

しかしながら、様々な課題が残っている（Ｋｌｅｉｎら， ２０１２， ＭＡｂｓ．
４（６）： ６５３-６６３）。特に、Ｆｃ受容体の多様性、および免疫系細胞上への制
限されたその発現が、抗体媒介型活性と関連した応答の範囲に影響を与えることが示され
ている。例えば、抗体のＴ細胞の応答を誘発する能力は、ＦｃＲＩＩＡなどの樹状細胞活
性化Ｆｃ受容体の関与に依存していることが明らかにされている（ＤｉＬｉｌｌｏら，
Ｃｅｌｌ ２０１５）。同様に、ＩｇＧ抗体による好中球の活性化は、ＮＫ細胞のものと
は異なるＦｃ受容体を必要とする。さらに、本文書で開示されるように、本発明による、
新規の改変されたＩｇＧ抗体は、インビボで未改変のＩｇＧ１と同等かそれ以上の半減期
を有する。このように、全範囲にわたり低い親和性での活性化受容体の関与を可能としつ
つ、抑制性Ｆｃ受容体であるＦｃＲＩＩＢの関与が最小限であるＦｃ改変体が求められて
いる。

本文書で示される様々な実施形態は、改良されたエフェクター機能および半減期を有す
るヒトＩｇＧのＦｃ領域改変体、およびその用途を提供することにより、上記の未達の要
求および／または他の要求に対処する。

一態様では、本発明はヒトＩｇＧ１のＦｃポリペプチドのＦｃ改変体を含むポリペプチ
ドに関連する。前記Ｆｃ改変体は、（ｉ）アラニン（Ａ）を２３６位に、ロイシン（Ｌ）
を３３０位に、グルタミン酸（Ｅ）を３３２位に含み、かつ、（ｉｉ）アスパラギン酸（
Ｄ）を２３９位に含まない。番号付けは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従っている。
前記ポリペプチドまたは前記Ｆｃ改変体はさらに、ロイシン（Ｌ）を４２８位に、および
／またはセリン（Ｓ）を４３４位に含み得る。いくつかの実施形態では、前記ポリペプチ
ドまたは前記Ｆｃ改変体はセリン（Ｓ）を２３９位に含む。いくつかの例では、前記ポリ
ペプチドまたは前記Ｆｃ改変体は配列番号２または配列番号３の配列を含む。

上記のポリペプチドまたはＦｃ改変体は、抗体または融合タンパク質（例えば、Ｆｖ、
ｓＦｖまたは以下に記載されるような他の抗体改変体と融合される）の一部として含まれ
得る。従って、上記のポリペプチドまたはＦｃ改変体を含む抗体または融合タンパク質は
本発明の範囲内である。前記抗体は、対象となる任意の標的分子に対して特異性を有する
。例えば標的分子は、サイトカイン、可溶性因子または不溶性因子、病原体上に発現する
分子、細胞上に発現する分子、および癌細胞上に発現する分子からなる群から選択され得
る。因子および分子はタンパク質、ならびに炭水化物および脂質などの非タンパク質であ
り得る。抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体からなる群から選択され得る
。上記の抗体は１つまたはそれ以上の、以下に挙げる特徴：（１）配列番号１の配列を有
する参照抗体と比べて、ｈＦｃγＲＩＩＡ、ｈＦｃγＲＩＩＩＡ、ｈＦｃＲｎ、または／
およびｈＦｃγＲＩＩＩＢとのより高い結合親和性、（２）配列番号１または配列番号４
の配列を有する参照抗体と比べてより長期の血清半減期、および（３）配列番号１の配列
を有する抗体と比べて、同一またはより優れた半減期、を有し得る。上記の抗体は一般的
に、後者が異なるＦｃ配列（例えば、配列番号１または配列番号４）を有している点を除
けば、参照抗体と同様である。例えば、本明細書に開示されるＧＡＡＬＩＥ改変体（配列
番号２）は予想外にも、ＧＡＳＤＡＬＩＥ改変体（配列番号４）と比べて、より長い半減
期を有し、より安定である。

上記のポリペプチドまたは抗体をコードする配列を含む単離された核酸、前記核酸を含
む発現ベクター、および前記核酸を含む宿主細胞もまた本発明の範囲内である。前記宿主
細胞は、組み換えポリペプチドまたは抗体の製造方法に用いられ得る。前記方法は、前記
核酸によりコードされるポリペプチドまたは抗体の発現を可能にする条件下で、宿主細胞
を培地中で培養すること、および、培養された細胞または前記細胞の培地から前記ポリペ
プチドまたは前記抗体を精製することを含む。

他の態様では、本発明は、（ｉ）上記のポリペプチド、抗体、または核酸、および（ｉ
ｉ）薬学上許容される担体を含む医薬製剤を提供する。

他の態様では、本発明は、炎症性疾患、腫瘍性疾患、または感染性疾患などの疾患の治
療方法を提供する。前記方法は、それを必要とする対象に、治療上有効な量の上記のポリ
ペプチド、抗体、または核酸を投与することを含む。炎症性疾患、腫瘍性疾患、または感
染性疾患などの疾患の治療のための医薬の製造における、前記ポリペプチド、抗体、また
は核酸の使用もまた、本発明の範囲内である。

本発明の１つまたはそれ以上の実施形態の詳細は、以下の説明において記載される。本
発明の、他の特徴、目的、および利点は、以下の説明および請求項から明らかとなる。

図１Ａ、１Ｂ、１Ｃおよび１Ｄ（まとめて「図１」）は、ＦｃγＲのヒト化（ＦｃＲ＋）マウス中での（図１Ａおよび図１Ｃ）、およびＦｃＲの欠損（ＦｃＲヌル）マウス中での（図１Ｂおよび図１Ｄ）、Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ（「ＧＡＳＤＡＬＩＥ」）のＦｃ領域変異体のインビボでの半減期を示す図である。Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ（「ＳＤＩＥ」）改変体がコントロールとして含められている。図１Ｃおよび図１Ｄは、ＦｃγＲのヒト化（図１Ｃ）マウスおよびＦｃＲの欠損（図１Ｄ）マウスに投与してから８日後の、ヒトＩｇＧ１のＦｃ改変体の血清ＩｇＧレベルを示している。 図２Ａおよび２Ｂ（まとめて「図２」）は、アカゲザル中での、Ｆｃ領域変異体のインビボでの半減期の測定を示す図である。野生型（ＷＴ）ヒトＩｇＧ１（図２Ａ）およびＧ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ／Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ（「ＧＡＳＤＡＬＩＥ ＬＳ」）（図２Ｂ）の、３ＢＮＣ１１７ ｍＡｂのＦｃ領域改変体をアカゲザルに対して投与した（ｉ．ｖ．；２０ｍｇ／ｋｇ）。アカゲザルへの投与後の異なる時点において、ヒトＩｇＧ１のＩｇＧレベルをＥＬＩＳＡにより評価して、前記抗体の半減期（ｈと表現される）を測定した。 図３Ａおよび３Ｂ（まとめて「図３」）は、ＳＰＲ分析により測定された、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域改変体の、ヒトＦｃγＲ（ＦｃγＲＩＩａ Ｈ１３１，ＦｃγＲＩＩａ Ｒ１３１，ＦｃγＲＩＩｂ，ＦｃγＲＩＩＩａ Ｖ１５７，ＦｃγＲＩＩＩａ Ｆ１５７）に対する結合親和性を示す表である。図３Ａは親和性の測定（ＫＤ（Ｍ））を示し、図３Ｂは野生型ヒトＩｇＧ１に対する親和性の増加倍率を示している。試験した改変体：ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）；ＧＡＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ｉ３３２Ｅ）；ＧＡＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）；アフコシル化（Ｆｃ関連グリカン上の分岐フコース残基が欠如している）。 図４は、野生型ヒトＩｇＧ１（左）およびＧＡＡＬＩＥ（右）のＦｃ領域改変体の、ヒトＦｃγＲ（ＦｃγＲＩＩａ Ｈ１３１，ＦｃγＲＩＩａ Ｒ１３１，ＦｃγＲＩＩｂ，ＦｃγＲＩＩＩａ Ｖ１５７，ＦｃγＲＩＩＩａ Ｆ１５７）に対する結合のＳＰＲセンサーグラムを示す一連の図である。ラベルは検体（ＦｃγＲ）の濃度（μＭ）を表す。 図５Ａおよび５Ｂ（まとめて「図５」）は、ＳＰＲ分析により決定された、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域改変体の、マウスＦｃγＲに対する結合親和性を示す表である。図５Ａは親和性の測定（Ｋ_Ｄ（Ｍ））を示し、図５Ｂは野生型ヒトＩｇＧ１に対する親和性の増加倍率を示す。試験した改変体：ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）；ＧＡＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ｉ３３２Ｅ）；ＧＡＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）；アフコシル化（Ｆｃ関連グリカン上の分岐フコース残基が欠如している）。 図６は、野生型ヒトＩｇＧ１（左）およびＧＡＡＬＩＥ（右）のＦｃ領域改変体の、マウスＦｃγＲに対する結合のＳＰＲセンサーグラムを示す一連の図である。ラベルは検体（ＦｃγＲ）の濃度（μＭ）を表す。 図７Ａおよび７Ｂ（まとめて「図７」）は、ＳＰＲ分析により測定された、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域改変体の、アカゲザルＦｃγＲに対する結合親和性を示す表である。図７Ａは親和性の測定（Ｋ_Ｄ（Ｍ））を示し、図７Ｂは野生型ヒトＩｇＧ１に対する親和性の増加倍率を示す。試験した改変体：ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）；ＧＡＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ｉ３３２Ｅ）；ＧＡＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）；アフコシル化（Ｆｃ関連グリカン上の分岐フコース残基が欠如している）。 図８は、野生型ヒトＩｇＧ１（左）およびＧＡＡＬＩＥ（右）のＦｃ領域改変体の、アカゲザルＦｃγＲに対する結合のＳＰＲセンサーグラムを示す一連の図である。ラベルは検体（ＦｃγＲ）の濃度（μＭ）を表す。 図９は、ＦｃγＲヒト化マウス中での、６Ａ６ ｍＡｂのＦｃ改変体による血小板の枯渇を示す図である。マウスには、６Ａ６ ｍＡｂのＦｃ領域改変体（ＳＤＩＥ （Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）；ＧＡＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ｉ３３２Ｅ）；ＧＡＡＬＩＥ（Ｇ４２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ））を投与した。Ｎ２９７Ａ（非ＦｃＲ結合改変体）をコントロールとして含めた。血小板数は示された時点で分析され、値は０時間の時点での前給餌のときの値に対する血小板数の平均（±ＳＥＭ）百分率を表す。 図１０は、ＦｃγＲヒト化マウス中での、ＧＫ１．５ ｍＡｂのＦｃ改変体によるＣＤ４＋細胞の枯渇を示す図である。マウスには、ＧＫ１．５ ｍＡｂのＦｃ領域改変体（ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）；ＧＡＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ｉ３３２Ｅ）；ＧＡＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ））を投与した（１００μｇ，ｉ．ｐ．）。Ｎ２９７Ａ（非ＦｃＲ結合改変体）をコントロールとして含めた。ＣＤ４＋細胞数は、血中（Ａ）および脾臓中（Ｂ）について、ｍＡｂ投与の２４時間後に分析された。 図１１Ａ、１１Ｂ、１１Ｃおよび１１Ｄ（まとめて「図１１」）は、ｈＣＤ２０＋／ＦｃγＲヒト化マウス中での、ＣＡＴ ｍＡｂのＦｃ改変体によるＣＤ２０＋Ｂ細胞の枯渇を示す図である。マウスには、ＣＡＴ ｍＡｂのＦｃ領域改変体（ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）；ＧＡＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ｉ３３２Ｅ）；ＧＡＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ））を投与した（２００μｇ，ｉ．ｐ．）。Ｎ２９７Ａ（非ＦｃＲ結合改変体）をコントロールとして含めた。ＣＤ２０＋Ｂ細胞数および存在比率は、血中（図１１Ａおよび図１１Ｂ）および脾臓中（図１１Ｃおよび図１１Ｄ）について、ｍＡｂ投与の４８時間後に分析された。 図１２Ａおよび１２Ｂ（まとめて「図１２」）は、ｈＣＤ２０＋／ＦｃγＲヒト化マウス中での、２Ｂ８ ｍＡｂのＦｃ改変体によるＣＤ２０＋Ｂ細胞の枯渇を示す図である。マウスには、抗ＣＤ２０ｍＡｂ ２Ｂ８の、野生型ヒトＩｇＧ１またはＧＡＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）改変体を、示された用量で腹腔内に投与した。ＣＤ２０＋の存在比率（図１２Ａ）および細胞数（１２Ｂ）は、血中について、ｍＡｂ投与の４８時間後に分析された。 図１３Ａ、１３Ｂおよび１３Ｃ（まとめて「図１３」）は、ＦｃＲ欠損（ＦｃＲヌル）（図１３Ａ）およびＦｃγＲヒト化マウス（ＦｃＲ＋）（図１３Ｂ）における、Ｆｃ領域変異体のインビボでの半減期を示す図である。ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域変異体としては：ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ），ＧＡＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ｉ３３２Ｅ），およびＧＡＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）を用いた。図１３Ｃは、ＦｃγＲヒト化マウスへの投与後の異なる時点における、ヒトＩｇＧ１のＩｇＧレベルを示している。 図１４Ａおよび１４Ｂ（まとめて「図１４」）は、アカゲザルにおける、Ｆｃ領域変異体のインビボでの半減期の測定を示す図である。３ＢＮＣ１１７ ｍＡｂの、野生型（ＷＴ）ヒトＩｇＧ１（図１４Ａ）およびＧＡＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）（図１４Ｂ）のＦｃ領域改変体をアカゲザルへ投与した（ｉ．ｖ．；２０ｍｇ／ｋｇ）。ヒトＩｇＧ１のＩｇＧレベルを、アカゲザルへの投与後の異なる時点においてＥＬＩＳＡにより評価し、前記抗体の半減期（ｈと表現される）を測定した。 図１５Ａおよび１５Ｂ（まとめて「図１５」）は、アカゲザル中での、２Ｂ８ ｍＡｂのＦｃ改変体によるＣＤ２０＋Ｂ細胞の枯渇を示す図である。抗ＣＤ２０ｍＡｂ ２Ｂ８の、野生型ヒトＩｇＧ１またはＧＡＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）改変体をアカゲザルへ０．０５ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｖ．）にて投与した。ＣＤ２０＋の存在比率（図１５Ａ）および細胞数（図１５Ｂ）は、血中について、抗体投与前後の様々な時点で分析された。 図１６は、ヒトＩｇＧ１（野生型およびＦｃ領域改変体）の定常領域のタンパク質配列を示す。それぞれの改変体におけるアミノ酸置換位置には、下線が引かれている。残基の番号付けはＥＵナンバリングシステムに従っている。 図１７は、サーマルシフトアッセイにより測定された、様々なＦｃ領域変異体のタンパク質のＴｍを示す図である。ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域変異体としては：ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＧＡＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ｉ３３２Ｅ）、ＧＡＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、およびＧＡＳＤＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）を用いた。これらの変異体は、ヒトＩｇＧ１のＦｃＲｎへの親和性を増加させる、ＬＳ変異（Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）を伴っていた。 図１８は、ＳＰＲ分析により測定された、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域改変体の、ヒトＦｃＲｎ／β２ミクログロブリンに対するｐＨ ６．０における結合親和性を示す表である。親和性測定（ＫＤ（Ｍ））、および野生型ヒトＩｇＧ１に対する親和性の増加倍率が示されている。ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域変異体としては：ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＧＡＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ｉ３３２Ｅ）、およびＧＡＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）を用いた。これらの変異体は、ＬＳ変異（Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）を伴っていた。 図１９は、ヒトＦｃＲｎ／β２ミクログロブリンへの、Ｆｃ領域改変体のｐＨ ６．０における結合のＳＰＲセンサーグラムを示す一連の図である。ラベルは検体（ＦｃＲｎ）の濃度（μＭ）を表す。ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域変異体としては：ＬＳ（Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）、ＧＡＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、およびＧＡＡＬＩＥ ＬＳ（Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ／Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）を用いた。 図２０は、ヒトＦｃＲｎ／β２ミクログロブリンへの、Ｆｃ領域改変体のｐＨ ７．４における結合のＳＰＲセンサーグラムを示す一連の図である。ラベルは検体（ＦｃＲｎ）の濃度（μＭ）を表す。ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域変異体としては：ＬＳ（Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）、ＧＡＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、およびＧＡＡＬＩＥ ＬＳ（Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ／Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）を用いた。 図２１Ａ、２１Ｂおよび２１Ｃ（まとめて「図２１」）は、ＦｃＲｎ／ＦｃγＲヒト化マウスにおける、Ｆｃ領域変異体のインビボでの半減期を示す一連の図である。ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域変異体としては：ＬＳ（Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）、ＧＡＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、およびＧＡＡＬＩＥ ＬＳ（Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ／Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）を用いた。図２１Ａおよび図２１Ｂは、ＦｃＲｎ／ＦｃγＲヒト化マウスへの投与後の異なる時点における、ヒトＩｇＧ１のＩｇＧレベルを示す。図２１Ｃは、ＦｃＲｎ／ＦｃγＲヒト化マウスにおける、Ｆｃ領域改変体の算出された半減期を示す。 図２２は、ＦｃＲｎ／ＦｃγＲヒト化マウス中での、６Ａ６ ｍＡｂのＦｃ改変体による血小板の枯渇を示す図表である。マウスには、６Ａ６ ｍＡｂ（８μｇ；ｉ．ｖ．）（ＬＳ（Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）、ＧＡＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、およびＧＡＡＬＩＥ ＬＳ（Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ／Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ））のＦｃ領域改変体を投与した。Ｎ２９７Ａ（非ＦｃＲ結合改変体）をコントロールとして含めた。血小板数は示された時点で分析され、値は０時間の時点での前給餌のときの値に対する血小板数の平均（±ＳＥＭ）百分率を表す。 図２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｃおよび２３Ｄ（まとめて「図２３」）は、ｈＩｇＧ１ Ｆｃを有するｓＬｅＡ標的化抗体が、活性化ヒトＦｃγＲの関与により増強される腫瘍クリアランスを促進することを示す図である。ＦｃγＲヒト化マウスに５×１０^５個のＢ１６－ＦＵＴ３腫瘍細胞を静脈接種した。１００μｇの抗ｓＬｅＡ抗体またはアイソタイプの一致したコントロール抗体を、１、４、７、および１１日目に腹腔内投与した。接種から１４日後に、マウスを安楽死させ、肺を切除、固定し、転移病巣の数を数えた。ｎ≧５／群。＊はｐ＜０．０５、＊＊はｐ＜０．０１、＊＊＊はｐ＜０．００１、＊＊＊＊はｐ＜０．０００１である。図２３Ａおよび図２３Ｂは、抗ｓＬｅＡ ｈＩｇＧ１抗体がｓＬｅＡ＋腫瘍細胞の肺コロニー化を阻害することを示唆している。マウスは、１００μｇの抗ｓＬｅＡ抗体（５Ｂ１－ｈＩｇＧ１もしくは７Ｅ３－ｈＩｇＧ１）またはアイソタイプの一致したコントロール抗体により処置された。図２３Ａは、代表的な実験から全てのマウスについて得られたデータの集計分析を示している。図２３Ｂは、それぞれの群から得られた３つの切除された肺の代表的な図を示している。図２３Ｂはまた、Ｆｃ操作された抗ｓＬｅＡ抗体改変体が、優れた抗腫瘍効果を示すことをも示唆している。マウスは、１００μｇの抗ｓＬｅＡ抗体（クローン５Ｂ１または７Ｅ３、ｈＩｇＧ１またはＧ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅの変異を伴うｈＩｇＧ１－ＧＡＡＬＩＥ）あるいはアイソタイプの一致したコントロール抗体により処置された。図２３Ｃは、二つの別の実験（第一実験－■、第二実験－▲）からすべてのマウスについて得られたデータの集計分析を示しており、図２３Ｄは、５Ｂ１抗体により処置されたマウスから切除した肺の代表的な図を示している。 図２４Ａ、２４Ｂおよび２４Ｃ（まとめて「図２４」）は、抗体媒介型腫瘍クリアランスにはｈＦｃＲＩＩＡまたはｈＦｃＲＩＩＩＡのいずれかの関与が必要であり、かつ十分であることを示す図である。図２４Ａは、ＳＰＲ研究により測定された、ｈＩｇＧ１ Ｆｃ改変体のヒトＦｃＲに対する相対的な結合親和性を示している。図２４Ｂは、ｈＦｃＲＩＩＡもしくはｈＦｃＲＩＩＩＡまたはこれらの双方に対する結合親和性が増強された５Ｂ１－ｈＩｇＧ１抗体を示しており、当該抗体が優れた抗腫瘍効果を有していることを示している。ＦｃγＲヒト化マウスには、５×１０^５個のＢ１６－ＦＵＴ３腫瘍細胞を静脈接種した。１００μｇの抗ｓＬｅＡ抗体（５Ｂ１－ｈＩｇＧ１、Ｇ２３６Ａ変異を伴う５Ｂ１－ｈＩｇＧ１－ＧＡ、Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ変異を伴う５Ｂ１－ｈＩｇＧ１－ＡＬＩＥ、もしくはＧ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ変異を伴う５Ｂ１－ｈＩｇＧ１－ＧＡＡＬＩＥ）またはアイソタイプの一致したコントロール抗体を、１、４、７、および１１日目に腹腔内投与した。図２４Ｃは、ｓＬｅＡ＋腫瘍の効率的な腫瘍クリアランスに不可欠である、ｈＦｃＲＩＩＡまたはｈＦｃＲＩＩＩＡの関与を示している。ＦｃＲヌル（γ鎖ＫＯ）、ＦｃγＲヒト化、ｈＦｃＲＩＩＡ／ＩＩＢ遺伝子組み換え型、およびｈＦｃＲＩＩＩＡ／ＩＩＩＢ遺伝子組み換え型マウスに、５×１０^５個のＢ１６－ＦＵＴ３腫瘍細胞を静脈接種した。１００μｇの抗ｓＬｅＡ抗体（Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ変異を伴う５Ｂ１－ｈＩｇＧ１－ＧＡＡＬＩＥ）またはアイソタイプの一致したコントロール抗体を、１、４、７、および１１日目に腹腔内投与した。パネルＢ＋Ｃについて、接種から１４日後に、マウスを安楽死させ、肺を切除、固定し、転移病巣の数を数えた。ｎ≧６／群。＊はｐ＜０．０５、＊＊＊はｐ＜０．００１、＊＊＊＊はｐ＜０．０００１である。

本文書は、改良されたエフェクター機能を有するヒトＩｇＧ Ｆｃ領域改変体およびそ
の用途について説明する。ここで説明されるように、ＩｇＧのＦｃ領域改変体を有する抗
体または融合タンパク質は、活性化Ｆｃ受容体との結合が増大しており、インビボで未改
変のＩｇＧ１抗体と同等かそれ以上の半減期を有する。

抗体のＦｃ領域または定常領域は、細胞性の結合相手と相互作用して、抗体依存性エフ
ェクター機能および補体活性化などの抗体の機能および活性を媒介する。ＩｇＧ型抗体の
場合、補体ＣｌｑおよびＦｃ受容体（ＦｃγＲ）との結合部位は、Ｆｃ領域のＣＨ２領域
に位置する。異なる標的細胞上の活性化および抑制性ＦｃＲの共発現は、抗体媒介性免疫
応答を調節する。免疫応答の遠心性期への関与に加えて、ＦｃＲはＢ細胞および樹状細胞
（ＤＣ）の活性化の調節においても重要である。例えば、ＩｇＧ型抗体の場合、様々な種
類のＦｃγＲが、マクロファージによる食作用、ＮＫ細胞による抗体依存性細胞媒介型細
胞毒性、肥満細胞の脱顆粒などの、様々な細胞応答を媒介する。各ＦｃγＲは、異なる結
合親和性およびＩｇＧサブクラス特異性を示す。レクチン受容体もまた役割を果たしてい
る。例えば、ＤＣ－ＳＩＧＮは、Ｆｃの抗炎症活性において、例を挙げるとＩＶＩＧにお
いて、役割を果たすことが示されている（例として、ＵＳ２０１７０３４９６６２、ＷＯ
２００８０５７６３４、およびＷＯ２００９１３２１３０を参照）。

本明細書に記載されるように、抗体／免疫グロブリンの生物活性は、変異を導入する、
またはＦｃ領域の特定のアミノ酸を変更することにより、操作、変更、または制御するこ
とができる。本開示に照らして操作、変更、または制御することができる生物活性として
は、例えば、Ｆｃ受容体との結合、Ｆｃ受容体との親和性、Ｆｃ受容体に対する特異性、
補体活性化、シグナル伝達活性、標的指向性活性、エフェクター機能（プログラム化され
た細胞死または細胞性食作用など）、半減期、クリアランス、およびトランスサイトーシ
スの１つまたは複数が挙げられる。

１．定義
「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」という用語は、本明細書では
交換可能に使用され、ポリマー中のアミノ酸残基の配置を説明する。ペプチド、ポリペプ
チド、またはタンパク質は、希少アミノ酸および合成アミノ酸類縁体に加えて、標準の２
０種の天然アミノ酸から構成され得る。それらは、長さや翻訳後修飾（例えば、グリコシ
ル化やリン酸化）に関係なく、いかなるアミノ酸鎖でもあり得る。

「組換え」のペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質は、組換えＤＮＡ技術によっ
て、すなわち、所望のペプチドをコードする外因性ＤＮＡ構築物によって形質転換された
細胞から生成される。「合成」のペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質は、化学合
成によって調製されたペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質を指す。「組換え」と
いう用語は、例えば、細胞、または核酸、タンパク質、もしくはベクターを参照して使用
される場合には、その細胞、核酸、タンパク質、またはベクターが、異種核酸またはタン
パク質の導入によって、もしくは天然の核酸またはタンパク質の改変によって修飾されて
いること、または前記細胞がそのように修飾された細胞に由来することを示す。１つまた
はそれ以上の前述の配列および異種配列を含む融合タンパク質は、本発明の範囲内である
。異種のポリペプチド、核酸、または遺伝子は、外来種に由来するものであるか、または
、同じ種に由来する場合は元の形から実質的に修飾されているものである。２つの融合さ
れる領域または配列は、天然のタンパク質または核酸において互いに隣接していない場合
、互いに異種である。

「単離された」ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質は、天然で関連している他
のタンパク質、脂質、および核酸から分離されたものである。ポリペプチド／タンパク質
は、精製された調製物の乾燥重量で少なくとも１０％（言い換えると、１０％と１００％
との間の任意の百分率、例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８
０％、８５％、９０％。９５％および９９％）を構成し得る。純度は、任意の適切な標準
的な方法、例えば、カラムクロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、また
はＨＰＬＣ分析によって測定され得る。本発明に記載の単離されたポリペプチド／タンパ
ク質は、組換えＤＮＡ技術により生成され、トランスジェニック動物源から精製され、ま
たは化学的方法により生成され得る。ＩｇＧ Ｆｃの機能的な同等物は、例えば、１つま
たはそれ以上の点突然変異、挿入、欠失、切断、融合タンパク質、またはそれらの組み合
わせを有するタンパク質などのＩｇＧ Ｆｃのポリペプチド誘導体を指す。それは、Ｉｇ
Ｇ Ｆｃの活性、すなわち、それぞれの受容体に結合してそれぞれの細胞応答を誘発する
能力、を実質的に保持する。単離されたポリペプチドは、配列番号２または配列番号３を
含み得る。一般に、機能的な同等物は、配列番号２または配列番号３と少なくとも７５％
（例えば、７５％と１００％との間の任意の数（両端を含む）、例えば、７０％、８０％
、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％および９９％）が同一である。

「抗原」は、免疫学的反応を誘発する、またはその反応の生成物に結合する物質を指す
。「エピトープ」という用語は、抗体またはＴ細胞が結合する抗原の領域を指す。

本明細書で使用される場合、「抗体」は、最も広い意味で使用され、具体的には、それ
らが所望の生物学的活性を示す限り、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体など
）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および抗体断片
を包含している。本明細書で使用される場合、「抗体」（Ａｂ）という用語は、モノクロ
ーナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体および多反
応性抗体）、および抗体断片を含む。このように、本明細書内の任意の文脈で使用される
「抗体」という用語は、任意の特異的結合メンバー、免疫グロブリンのクラスおよび／ま
たはアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ
、ＩｇＤ、ＩｇＥおよびＩｇＭ）；並びに、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、およびｓｃ
Ｆｖ（単一鎖または関連物）などを含むがこれらに限定されない、生物学的に関連する断
片またはその特異的結合メンバーを含むがこれらに限定されないことを意図している。抗
体は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および二つ
の軽（Ｌ）鎖、またはその抗原結合部分を含む、糖タンパク質であることが当技術分野で
理解されている。重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２、
およびＣＨ３）を含む。軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）および軽鎖定常領域（ＣＬ）を含
む。重鎖および軽鎖の双方の可変領域は、フレームワーク領域（ＦＷＲ）および相補性決
定領域（ＣＤＲ）を含む。４つのＦＷＲ領域は比較的保存されているが、ＣＤＲ領域（Ｃ
ＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）は超可変領域を表し、ＮＨ_２末端からＣＯＯＨ末端
に向かってＦＷＲ１、ＣＤＲ１、ＦＷＲ２、ＣＤＲ２、ＦＷＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＷ
Ｒ４のように配置されている。重鎖および軽鎖の可変領域には、抗原と相互作用する結合
領域が含まれているが、アイソタイプによっては、定常領域が宿主の組織または因子への
免疫グロブリンの結合を媒介し得る。本明細書で使用される「抗体」の定義には、キメラ
抗体、ヒト化抗体、および組換え抗体、トランスジェニック非ヒト動物から作製されたヒ
ト抗体、ならびに当業者が利用できる濃縮技術を使用してライブラリーから選択された抗
体、もまた含まれる。

本明細書で使用される場合、「抗体断片」は、インタクト抗体の一部を含んでもよく、
一般に、当該一部としては、前記インタクト抗体の抗原結合領域および可変領域、並びに
／またはＦｃＲ結合能を保持する抗体のＦｃ領域が挙げられる。抗体断片の例としては、
抗体断片から形成された，線状抗体、一本鎖抗体分子、および多重特異性抗体が挙げられ
る。好ましくは、抗体断片は、ＩｇＧ重鎖の定常領域全体を保持し、ＩｇＧ軽鎖を含む。

本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集
団から得られる抗体、すなわち、前記集団を構成する個々の抗体が、少量で存在し得る潜
在的な天然の突然変異を除いて同一であるような抗体を指す。モノクローナル抗体は、単
一の抗原部位に対して配向し、非常に特異的である。さらに、通常、異なる決定基（エピ
トープ）に対して配向する異なる抗体を含む、従来の（ポリクローナル）抗体調製物とは
対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して配向する。修飾語「
モノクローナル」は、実質的に均一な抗体の集団から得られるという抗体の特徴を示し、
特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本発明に
従って使用されるモノクローナル抗体は、参照により本明細書に引用される、Ｋｏｈｌｅ
ｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，２５６，４９５－４９７（１９７５）によっ
て最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製されてもよいし、または組換えＤＮＡ
法により作製されてもよい（例えば、参照により本明細書に引用される、米国特許第４，
８１６，５６７号を参照）。モノクローナル抗体は、例えば、それぞれ参照により本明細
書に引用される、Ｃｌａｃｋｓｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３５２，６２４－６２８（１９９
１）およびＭａｒｋｓら，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，２２２，５８１－５９７（１９９１）
に記載された技術を用いるファージ抗体ライブラリーからも単離され得る。

本明細書におけるモノクローナル抗体として、具体的には、それらが所望の生物学的活
性を示す限り、重鎖および／または軽鎖の一部が、特定の種に由来するか、または特定の
抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同である
一方で、前記鎖の残りの部分は、別の種に由来するか、他の抗体クラスまたはサブクラス
に属する抗体における対応する配列と同一または相同である、「キメラ」抗体（免疫グロ
ブリン）および当該抗体の断片が挙げられる（それぞれ参照により本明細書に引用される
、米国特許第 ４，８１６，５６７号； Ｍｏｒｒｉｓｏｎら， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ
Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ， ８１， ６８５１－６８５５ （１９８４）； Ｎｅｕｂ
ｅｒｇｅｒら， Ｎａｔｕｒｅ， ３１２， ６０４－６０８ （１９８４）； Ｔａｋ
ｅｄａら， Ｎａｔｕｒｅ， ３１４， ４５２－４５４ （１９８５）；国際特許出願
第 ＰＣＴ／ＧＢ８５／００３９２号を参照）。

非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する
最小限の配列を含むキメラ抗体である。ほとんどの部分について、ヒト化抗体は、そのレ
シピエントの超可変領域由来の残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有するマウ
ス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域から
の残基に置き換えられたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの例
では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応する非ヒト残
基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体
には見られない残基を含み得る。これらの修飾は、抗体の性能をさらに改良するために行
われる。一般に前記ヒト化抗体は、その可変領域において、すべてまたは実質的にすべて
の超可変ループが、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、すべてまたは実質的にすべて
のＦＲ残基が、ヒト免疫グロブリン配列のものである、実質的にはすべての、少なくとも
１つの、および典型的には２つの、可変領域を含む。前記ヒト化抗体は、場合により、少
なくとも一部の免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には一部のヒト免疫グロブリン
をも含む。さらなる詳細については、それぞれ参照により本明細書に引用される、Ｊｏｎ
ｅｓら， Ｎａｔｕｒｅ， ３２１， ５２２－５２５ （１９８６）； Ｒｉｅｃｈｍ
ａｎｎら， Ｎａｔｕｒｅ， ３３２， ３２３－３２９ （１９８８）； Ｐｒｅｓｔ
ａ， Ｃｕｒｒ Ｏｐ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ， ２， ５９３－５９６ （１９９２
）； 米国特許第 ５，２２５，５３９号を参照。

「ヒト抗体」は、ヒトハイブリドーマ、ヒトファージディスプレイライブラリー、また
はヒト抗体配列を発現するトランスジェニックマウスから得られ得るような、完全ヒト配
列を有する任意の抗体を指す。

「可変」という用語は、可変（Ｖ）領域の特定のセグメントの配列が抗体間で大きく異
なるという事実を意味する。前記Ｖ領域は、抗原の結合を媒介し、特定の抗原に対する特
定の抗体の特異性を決定する。しかしながら、可変性は可変領域の１１０のアミノ酸間に
わたって均等に分散されているわけではない。代わりに、Ｖ領域は、それぞれ９～１２の
アミノ酸長の「超可変領域」と呼ばれる極度に可変な短い領域によって区切られる、１５
～３０のアミノ酸のフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる比較的不変な領域から構成さ
れる。ネイティブな重鎖および軽鎖の可変領域は、それぞれ４つのＦＲを含み、前記ＦＲ
は、主にβシート構造を採用し、３つの超可変領域によって接続され、その超可変領域は
、βシート構造と結合するループを形成し、場合によっては一部がβシート構造を形成す
る。各鎖の超可変領域はＦＲによって互いに近接して保持され、他の鎖の超可変領域とと
もに、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（例として、Ｋａｂａｔら， Ｓｅｑｕｅｎ
ｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓ
ｔ， ５ｔｈ Ｅｄ． Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎ
ａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， Ｍｄ． （
１９９１）を参照）。

本明細書で使用される「超可変領域」という用語は、抗原結合に関与する抗体のアミノ
酸残基を指す。超可変領域は一般に、「補体性決定領域」（「ＣＤＲ」）由来のアミノ酸
残基を含む。

「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位および抗原結合部位を含む最小の抗体断片である。こ
の断片は、強い非共有結合による、１つの重鎖可変領域と１つの軽鎖可変領域の二量体を
含む。これらの２つの領域の折りたたみ構造から、６つの超可変ループ（Ｈ鎖およびＬ鎖
からそれぞれ３つのループ）が発生し、これが抗原結合についてアミノ酸残基に寄与し、
抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながら、単一の可変領域（または抗原に特異的
な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）であっても、結合部位全体よりも低い親和性では
あるが、抗原を認識して結合する能力を有する。

「一本鎖Ｆｖ」（「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」）は、単一のポリペプチド鎖に接続さ
れたＶＨおよびＶＬ抗体領域を含む抗体断片である。ｓＦｖポリペプチドはさらに、ＶＨ
領域とＶＬ領域との間にポリペプチドリンカーを含んでもよく、これによってｓＦｖが抗
原結合に望ましい構造を形成することが可能となる。ｓＦｖの総説について、Ｐｌｕｃｋ
ｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａ
ｎｔｉｂｏｄｉｅｓ， ｖｏｌ． １１３， Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ
ｅｄｓ．， Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ｐｐ． ２６
９－３１５ （１９９４）； Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ １９９５，後出、を参照。

「ダイアボディ」という用語は、Ｖ領域の鎖内ではなく鎖間のペアリングが達成され、
二価断片、言い換えると、２つの抗原結合部位を持つ断片、が生じるように、ＶＨ領域と
ＶＬ領域との間に短いリンカー（約５～１０残基）を有するｓＦｖ断片を構築することに
よって調製される小さな抗体断片を指す。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶＨ
およびＶＬ領域が異なるポリペプチド鎖に存在する２つの「クロスオーバーした」ｓＦｖ
断片のヘテロダイマーである。ダイアボディについては、例えばＥＰ ４０４，０９７；
ＷＯ ９３／１１１６１； および Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ
． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９０：６４４４－６４４８ （１９９３）で、よ
り十分に説明される。

完全ヒト形態で生成され得る領域抗体（ｄＡｂ）は、約１１ｋＤａから約１５ｋＤａの
範囲の、抗体の最小の既知抗原結合断片である。ｄＡｂは、免疫グロブリンの重鎖および
軽鎖（それぞれＶＨおよびＶＬ）の頑強な可変領域である。それらは微生物細胞培養で高
度に発現され、例えば溶解性および温度安定性などの、これらに限定されない、好ましい
生物物理学的特性を示し、そして、例えば、ファージディスプレイのようなインビトロ選
択システムによる選択、および親和性成熟によく適している。ｄＡｂはモノマーとして生
物活性があり、サイズが小さく固有の安定性があるため、より大きな分子へと改変するこ
とで血清半減期やその他の薬理活性を有する薬剤を作製することも可能である。この技術
の例は、例えば、ラクダ科重鎖Ｉｇ由来の抗体についてのＷＯ９４２５５９１、およびフ
ァージライブラリーからの単一領域完全ヒト抗体の単離について説明するＵＳ２００３０
１３０４９６に記載されている。

ＦｖおよびｓＦｖは、定常領域を持たずにインタクトな結合部位を持つ唯一の種である
。従って、それらは、インビボでの使用時の非特異的結合を減少させるのに適している。
ｓＦｖ融合タンパク質は、ｓＦｖのアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかでのエフ
ェクタータンパク質の融合をもたらすように構築され得る。例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ
Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， ｅｄ． Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ，前出、を参照。抗体断片は
また、例えば、米国特許第５，６４１，８７０号に記載されているような「線状抗体」で
あってもよい。そのような線状抗体断片は、単一特異性または二重特異性であり得る。

本明細書中で使用される場合、用語「Ｆｃ断片」または「Ｆｃ領域」は、免疫グロブリ
ン重鎖のＣ末端領域を決定するために使用される。そのようなＦｃ領域は、Ｆｃ受容体お
よび補体系のいくつかのタンパク質と相互作用する抗体の尾部領域である。Ｆｃ領域は、
ネイティブな配列のＦｃ領域または改変体のＦｃ領域であり得る。免疫グロブリン重鎖の
Ｆｃ領域の境界は変化し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６位のア
ミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０位から、そのカルボキシル末端まで及ぶものと定義
されている。ネイティブな配列のＦｃ領域は、自然界に見られるＦｃ領域のアミノ酸配列
と同一のアミノ酸配列を含む。当業者により理解されるような改変体のＦｃ領域は、少な
くとも１つの「アミノ酸修飾」により、ネイティブな配列のＦｃ領域のものとは異なるア
ミノ酸配列を含む。

ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＤ抗体のアイソタイプにおいては、Ｆｃ領域は、抗体の２つ
の重鎖の２番目と３番目の定常領域に由来する、２つの同一のタンパク質断片から構成さ
れる；ＩｇＭおよびＩｇＥのＦｃ領域は、各ポリペプチド鎖に３つの重鎖定常領域（ＣＨ
領域２～４）を含んでいる。ＩｇＧのＦｃ領域は、高度に保持されたＮ－グリコシル化部
位を有する。Ｆｃ断片のグリコシル化は、Ｆｃ受容体の媒介する活性において重要である
。この部位に結合しているＮ－グリカンは、主にコアがフコシル化された、複合型二分岐
構造である。さらに、少量のこれらのＮ－グリカンは交差するＧｌｃＮＡｃおよびα－２
，６結合したシアル酸残基をも有する。例えば、それぞれ参照により本明細書に引用され
る、ＵＳ２０１７０３４９６６２， ＵＳ２００８０２８６８１９， ＵＳ２０１００２
７８８０８， ＵＳ２０１００１８９７１４， ＵＳ ２００９００４１７９， ２００
８０２０６２４６， ２０１１０１５０８６７，およびＷＯ２０１３０９５９６６を参照
。

「ネイティブな配列のＦｃ領域」は、自然界に見られるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一
のアミノ酸配列を含む。「改変体のＦｃ領域」または「Ｆｃ改変体」または「Ｆｃ領域改
変体」は、当業者に理解されるように、少なくとも１つの「アミノ酸改変」により、ネイ
ティブな配列のＦｃ領域のものとは異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、改変体Ｆｃ
領域は、ネイティブな配列のＦｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して、少な
くとも１つのアミノ酸置換、例えば、ネイティブな配列のＦｃ領域または親ポリペプチド
のＦｃ領域における、約１～約１０のアミノ酸置換、好ましくは約１～約６、５、４、３
または２つのアミノ酸置換を有する。本明細書における改変体Ｆｃ領域は、好ましくは、
ネイティブな配列のＦｃ領域および／または親ポリペプチドのＦｃ領域との少なくとも約
７５または８０％の相同性、より好ましくは、少なくとも約９０％のそれらとの相同性、
より好ましくは少なくとも約９５％のそれらとの相同性、さらにより好ましくは、少なく
とも約９６％、９７％、９８％、または９９％のそれらとの相同性、を有する。「ネイテ
ィブ」または「親」という用語は、Ｆｃアミノ酸配列を含む未修飾のポリペプチドを指す
。

「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」という用語は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を説
明するために使用される。前記Ｆｃ受容体は、免疫システムの保護機能に貢献する、特に
Ｂリンパ球、濾胞樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、好中球、好酸球、
好塩基球、および肥満細胞などの特定の細胞の表面に見られるタンパク質である。その名
前は、抗体のＦｃ領域（断片結晶化可能領域）に対する結合特異性に由来している。

いくつかの抗体機能は、Ｆｃ受容体によって媒介される。例えば、Ｆｃ受容体は、感染
した細胞や侵入した病原体に付着している抗体に結合する。それらの活動は、貪食細胞ま
たは細胞毒性細胞を刺激し、抗体媒介型食作用または抗体依存性細胞媒介型細胞毒性によ
って微生物または感染細胞を破壊する。抗体のＦｃ領域は、特定のクラスのＦｃ受容体、
および補体タンパク質などの他の免疫分子、に結合することにより、各抗体が所与の抗原
に対する適切な免疫応答を生成することを確実にしていることもまた当技術分野で知られ
ている。ＦｃＲは、免疫グロブリンのアイソタイプに対する特異性によって定義される：
ＩｇＧ抗体のＦｃ受容体はＦｃγＲ、ＩｇＥの場合はＦｃεＦＲ、ＩｇＡの場合はＦｃα
Ｒと呼ばれるなどである。免疫グロブリンＧの表面受容体は、架橋時に細胞を活性化する
クラス（「活性化ＦｃＲ」）と、共結合時に活性化を阻害するクラス（「抑制性ＦｃＲ」
）の２つの異なるクラスに存在する。

哺乳類の種においては、複数の異なるクラスのＩｇＧ Ｆｃ受容体が定義されている：
例えば、マウスにおいてはＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、Ｆｃγ
ＲＩＩＩ（ＣＤＩ６）およびＦｃγＩＶ、ヒトにおいては、例えば、ＲｃＲＩ、ＦｃＲＩ
ＩＡ、Ｂ、Ｃ、ＦｃＲＩＩＩＡ、およびＢ。ＦｃγＲＩは、抗体の定常領域に対する高い
親和性および限定されたアイソタイプ特異性を示す一方で、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲ
ＩＩＩは、ＩｇＧのＦｃ領域に対する親和性は低いものの、アイソタイプの結合パターン
はより広い（Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ， １９９１； Ｈｕｌｅｔｔ ａｎ
ｄ Ｈｏｇａｒｔｈ， Ａｄｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ５７， １－１２７ （１９９４））
。ＦｃγＲＩＶは、すべての哺乳類種において、中程度の親和性および限定されたサブク
ラス特異性が保持される、最近同定された受容体である（Ｍｅｃｈｅｔｉｎａら， Ｉｍ
ｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ５４， ４６３－４６８ （２００２）； Ｄａｖｉｓら，
Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ １９０， １２３－１３６ （２００２）； Ｎｉｍｍｅｒ
ｊａｈｎら， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２３， ４１－５１ （２００５））。

機能的には、Ｆｃ受容体には二つの異なるクラス：チロシンベースの免疫受容体活性化
モチーフ（ＩＴＡＭ）または免疫受容体抑制性モチーフ（ＩＴＩＭ）を介してそれぞれ信
号を送信する、活性化受容体および抑制性受容体が存在する（Ｒａｖｅｔｃｈ， ｉｎ
Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｗ． Ｅ． Ｐａｕｌ， Ｅｄ． （
Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ， （２００３）；
Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｌａｎｉｅｒ， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９０， ８４－８９ （
２０００））。同じ細胞上での活性化分子と抑制性分子との対になった発現は、バランス
のとれた免疫応答を生じさせるための鍵である。さらに、前記ＩｇＧ Ｆｃ受容体は、特
定のアイソタイプを他のアイソタイプよりも厳密に調節し、個々の抗体のアイソタイプに
対する親和性に有意な違いを示すことが認識されている（Ｎｉｍｍｅｒｊａｈｎら， ２
００５）。

本発明の一実施形態では、ＦｃＲは、ネイティブな配列のヒトＦｃＲである。他の実施
形態では、ヒトＦｃＲなどのＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）に結合し、ＦｃγＲ
Ｉ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含み、これらの受容体の対
立遺伝子改変体および選択的スプライス形態をも含む。ＦｃγＲＩＩ受容体としては、Ｆ
ｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「抑制性受容体」）が挙げら
れ、これらは主にその細胞質領域が異なる類似のアミノ酸配列を有している。活性化受容
体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質領域にチロシンベースの免疫受容体活性化モチーフ（Ｉ
ＴＡＭ）を含む。抑制性受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質領域にチロシンベースの免
疫受容体抑制性モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む（Ｄａｒｏｎ， Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ， １５， ２０３－２３４ （１９９７）の総説を参照；ＦｃＲは、Ｒａｖｅ
ｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ， Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ， ９， ４５７－
９２ （１９９１）；Ｃａｐｅｌら， Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ， ４， ２５－３
４ （１９９４）； および ｄｅ Ｈａａｓら， Ｊ Ｌａｂ Ｃｌｉｎ Ｍｅｄ，
１２６， ３３０－４１ （１９９５）、Ｎｉｍｍｅｒｊａｈｎ ａｎｄ Ｒａｖｅｔｃ
ｈ ２００６， Ｒａｖｅｔｃｈ Ｆｃ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ Ｆｕｎｄａｍｅｎ
ｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ｅｄ Ｗｉｌｌｉａｍ Ｐａｕｌ ５ｔｈ Ｅｄ．に
おいて総説されており、それぞれ参照により本明細書に引用される）。

「医薬組成物」という用語は、当該組成物をインビボまたはエクスビボでの診断または
治療用途に特に適したものにする、活性剤と、不活性または活性な担体との組み合わせを
指す。

本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される担体」としては、生理学的に適合性の
ある、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤およ
び吸収遅延剤などが挙げられる。「薬学的に許容される担体」は、対象において、または
対象に投与された後に、望ましくない生理学的影響を引き起こさない。医薬組成物中の前
記担体は、それが活性成分と適合性があり、それを安定化し得るという意味においても「
許容される」ものでなければならない。１つまたはそれ以上の可溶化剤を、活性剤の運搬
のための医薬担体として利用してもよい。薬学的に許容される担体の例としては、剤形と
して使用可能な組成物を得るための、生体適合性の賦形剤、アジュバント、添加剤、およ
び希釈剤が挙げられるが、これらに限定されない。他の担体の例としては、コロイド状酸
化ケイ素、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、およびラウリル硫酸ナトリウムが挙
げられる。さらなる適切な医薬担体および希釈剤、ならびにそれらを使用するための医薬
上の必要性は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃ
ｅｓに記載されている。好ましくは、前記担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄
または表皮投与（例えば、注射または注入による）に適している。治療用の化合物は、１
つまたはそれ以上の薬学的に許容される塩を含み得る。「薬学的に許容される塩」とは、
親化合物の望ましい生物活性を保持し、望ましくない毒物学的影響を与えない塩を指す（
例えば、Ｂｅｒｇｅ， Ｓ． Ｍ．ら， （１９７７） Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｓｃｉ．
６６：１－１９を参照）。

本明細書で使用される「細胞毒性剤」という用語は、細胞の機能を阻害または抑制する
、および／または細胞の破壊を引き起こす物質を指す。この用語は、放射性同位元素（例
えば、Ａｔ２１１， Ｉ１３１， Ｉ１２５， Ｙ９０， Ｒｅ１８６， Ｒｅ１８８，
Ｓｍ１５３， Ｂｉ２１２, Ｐ３２，およびＬｕの放射性同位元素）、化学療法剤、
および小分子毒素、もしくは、その断片および／または改変体を含む、細菌、真菌、植物
または動物起源の酵素活性毒素などの毒素を含むことを意図している。

「化学療法剤」は、癌の治療に有用な化合物である。化学療法剤の例としては、チオテ
パおよびシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮＴＭ）などのアルキル化剤；ブスルファン
、インプロスルファン、ピポスルファンなどのスルホン酸アルキル類；ベンゾドパ、カル
ボコン、メトレドパ、およびウレドパなどのアジリジン類；アルトレタミン、トリエチレ
ンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスファラミド、トリメチル
オロメラミンなどのエチレンイミン類およびメチルアメラミン類；アセトゲニン類（特に
ブラタシンとブラタシノン）；カンプトテシン（合成類縁体トポテカンなど）；ブリオス
タチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレ
シン合成類縁体など）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィ
シン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ－２１８９およびＣＢ
Ｉ－ＴＭＩなど）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンギ
スタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン
、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミン、メルファラン、ノベムビチン
、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどの窒
素マスタード類；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムス
チン、ラニムスチンなどのニトロソ尿素類；エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイ
シン、例えばＡｇｎｅｗ Ｃｈｅｍ． Ｉｎｔｌ． Ｅｄ． Ｅｎｇｌ． ３３：１８３
－１８６ （１９９４）を参照；ダイネミシンＡなどのダイネミシン；エスペラマイシン
；ネオカルチノスタチン発色団および関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団
）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オートラマイシン、アザセリン、ブレオマ
イシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマ
イシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－
Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－
ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンなど）、
エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコ
フェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポフィロマイシン、
ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシ
ン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサートおよび
５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）などの代謝拮抗剤；デノプテリン、メトトレキサート
、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸類縁体；フルダラビン、６－メルカプ
トプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類縁体；アンシタビン、アザシチジ
ン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリ
ジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５－ＦＵなどのピリミジン類縁体；カルステロ
ン、プロピオン酸ドロモスタロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクト
ンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎；フ
ロリン酸などの葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブ
リン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート；デフォファ
ミン；デメコルシン；ジアジコン；エルホルミチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；
エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；メイタンシン
およびアンサマイトシンなどのメイタンシノイド類；ミトグアゾン；ミトキサントロン；
モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポドフィ
リン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）；ラゾキサン；リ
ゾキシン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，
２”－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ－２毒素、ベラクリンＡ、ロ
リジンＡおよびアンギジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マノムスチン；ミ
トブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ
－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えばパクリタキセル（ＴＡＸ
ＯＬ（登録商標）、ブリストル・マイヤーズスクイブオンコロジー、プリンストン、Ｎ．
Ｊ．）およびドキセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅ
ｎｃ Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、フランス）；クロラムブシル；ゲムシタビン；６－チ
オグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチンおよびカルボプラチン
などの白金類縁体；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド
；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；
ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネ
ート；ＣＰＴ－１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ ２０００；ジフルオロメチルオル
ニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸；カペシタビン；および上記のいずれかの薬学的に許
容される塩、酸または誘導体が挙げられる。この定義には、例えば、タモキシフェン、ラ
ロキシフェン、アロマターゼ阻害４（５）－イミダゾール、４－ヒドロキシタモキシフェ
ン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、トレミフ
ェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）を含む抗エストロゲン；およびフルタミド、ニルタミド、ビカ
ルタミド、ロイプロリド、およびゴセレリンなどの抗アンドロゲン；および上記のいずれ
かの製薬上許容される塩、酸または誘導体などの、腫瘍に対するホルモン作用を調節また
は阻害するように作用する抗ホルモン剤もまた挙げられる。

本明細書で使用する場合、「治療する」または「治療」は、疾患、疾患の症状、疾患に
続発する病状、または疾患に対する素因を、治癒、軽減、緩和、是正、発症の遅延、予防
、または改良する目的での、疾患を有する、または疾患を発症する危険性のある対象への
化合物または薬剤の投与を指す。

「予防する」、「予防すること」、「予防」、「予防的治療」などの用語は、疾患また
は症状を有さないが、発症する危険性を有する、または発症しやすい対象において疾患ま
たは症状を発症する確率を低下させることを指す。

「対象」は、ヒトおよび非ヒト動物を指す。非ヒト動物の例としては、すべての脊椎動
物、例えば、非ヒト哺乳動物、非ヒト霊長類（特に高等霊長類）、イヌ、げっ歯類（例え
ば、マウスまたはラット）、モルモット、ネコ、ウサギなどの哺乳動物、および鳥、両生
類、爬虫類などの非哺乳動物などが挙げられる。一実施形態では、前記対象はヒトである
。別の実施形態では、前記対象は実験的な非ヒト動物または疾患モデルとして適切な動物
である。

「有効量」は、治療される対象に治療効果を与えるために必要とされる活性化合物／薬
剤の量を指す。当業者に認識されるように、有効用量は、治療される種類、投与経路、賦
形剤の使用、および他の治療的処置との併用の可能性に応じて変化する。腫瘍性の症状を
治療するための、組み合わせの治療上の有効量は、例えば、未処置の動物と比較して、腫
瘍サイズの減少、腫瘍病巣の数の減少、または腫瘍の成長の遅延を引き起こす量である。

本明細書に開示されるように、いくつかの範囲の値が提供される。文脈が明確に別段の
指示をしない限り、下限値の単位の１０分の１まで、その範囲の上限と下限の間の各中間
の値をも具体的に開示されていることが理解される。所定の範囲内の任意の所定値または
中間値と、所定の範囲内の任意の他の所定値または中間値との間の、それぞれのより小さ
い範囲は、本発明に含まれる。所定の範囲内で具体的に除外されたいかなる制限に従い、
これらの小さい範囲の上限と下限は、独立して範囲に包含または除外し得て、より小さな
範囲に、どちらか一方の制限が含まれる、両方の制限を含まない、または両方の制限が含
まれる、各範囲も、本発明に含まれる。所定の範囲が制限の一方または両方を含む場合、
それらの含まれた制限のいずれかまたは両方を除外する範囲も本発明に含まれる。

「約」という用語は一般に、示された数のプラスまたはマイナス１０％を指す。例えば
、「約１０％」は９％～１１％の範囲を示し、「約１」は０．９～１．１を意味する。「
約」の他の意味は、四捨五入などの文脈から明らかになる可能性があるため、たとえば、
「約１」は、０．５～１．４を意味する場合もある。
２．ポリペプチドおよび抗体
本明細書に開示されるように、本発明は、ヒトＩｇＧ Ｆｃ（ｈＩｇＧ１ Ｆｃなど）
の改変体の配列を有する単離されたポリペプチドを提供する。一実施形態では、Ｆｃ領域
は、ｈＩｇＧ１ Ｆｃアミノ酸配列の１つまたはそれ以上の置換を含む。これに限定され
ないが、例示的なＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、以下および図１６に提供される。この配列にお
いて、各配列の２３６位、２３９位、３３０位、３３２位、４２８位、および４３４位の
アミノ酸残基は太字で示され、アミノ酸置換の位置には下線が引かれている。残基の番号
付けは、ＥＵナンバリングシステムに従い、最初の残基Ａは、ＥＵナンバリングシステム
において１１８位に対応する。

本明細書に記載されるポリペプチドのアミノ酸組成は、ポリペプチドがそれぞれの受容
体に結合する能力を妨げることなく変化し、それぞれの細胞応答を誘発し得る。例えば、
それは１つまたはそれ以上の保存的なアミノ酸置換を含み得る。本発明で開示されるペプ
チド、ポリペプチド、またはタンパク質の保存的改変体または機能的同等物は、ペプチド
、ポリペプチド、またはタンパク質のポリペプチド誘導体、例えば、１つまたはそれ以上
の点突然変異、挿入、欠失、切断、融合タンパク質、またはそれらの組み合わせを有する
タンパク質を指す。それは、親ペプチド、親ポリペプチド、または親タンパク質（本発明
で開示されるものなど）の活性を実質的に保持する。一般的に、保存的な改変体または機
能的な同等物は、親と少なくとも６０％（例えば、６０％から１００％までの任意の数（
両端を含む）、例えば、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９
６％、９７％、９８％、９９％）同一である（例えば、配列番号１、２、３または４）。
従って、１つまたはそれ以上の点突然変異、挿入、欠失、切断、融合タンパク質、または
それらの組み合わせを有するＦｃ領域、および改変体Ｆｃ領域を有する重鎖または抗体は
本発明の範囲内である。

本明細書で使用される場合、２つのアミノ酸配列間のパーセント相同性は、２つの配列
間のパーセント同一性に等しい。２つの配列の最適なアラインメントのために導入する必
要があるギャップの数と各ギャップの長さを考慮した、２つの配列間の同一性パーセント
は、配列によって共有される同一の位置の数の関数（言い換えると、％ホモロジー＝同一
位置数／全位置数×１００）である。２つの配列間における、配列の比較および同一性パ
ーセントの決定は、以下の非限定的な例に記載されるように、数学的アルゴリズムを使用
して達成され得る。

２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＰＡＭ１２０残基重み付け表、ギャップ
長ペナルティ１２、ギャップペナルティ４を使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョ
ン２．０）に組み込まれている、Ｅ． ＭｅｙｅｒｓおよびＷ． Ｍｉｌｌｅｒのアルゴ
リズム（Ｃｏｍｐｕｔ． Ａｐｐｌ． Ｂｉｏｓｃｉ．， ４：１１－１７ （１９８８
））を使用して決定され得る。さらに、２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性は、Ｂ
ＬＯＳＵＭ ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、および、ギ
ャップ重みは１６、１４、１２、１０、８、６または４、長さ重みは１、２、３、４、５
、または６、を使用して、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍから
入手可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれている、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓ
ｃｈのアルゴリズム（Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ４８：４４４－４５３ （１９７０
））を使用して決定され得る。

さらに、またはあるいは、本発明のタンパク質配列は、例えば、関連配列を同定するた
めに、公共のデータベースに対して検索を実行するための「クエリ配列」としてさらに使
用され得る。前記検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ
． ２１５：４０３－１０のＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して実
行され得る。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、本発明の分子に相同なアミノ酸配列を得るた
めに、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３で実行され得る。比較の目
的でギャップのあるアライメントを取得するには、Ａｌｔｓｃｈｕｌら，（１９９７）
Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２５（１７）：３３８９－３４０２に記載され
ているように、ギャップのあるＢＬＡＳＴが利用され得る。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅ
ｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳ
ＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトのパラメーターが使用され得る（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ
．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照）。

本明細書で使用する場合、「保存的修飾」という用語は、アミノ酸配列を含む抗体の結
合特性に有意な影響を与えたり、これを変更したりすることのないアミノ酸修飾を指す。
修飾は、アミノ酸の置換、付加、および欠失が挙げられる。修飾は、部位特異的変異誘発
およびＰＣＲ媒介変異誘発などの当技術分野で公知の標準的な技術によって本発明の抗体
に導入され得る。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残
基で置換されるものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分
野で定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖を持つアミノ酸（例えば
、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン
酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオ
ニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリ
ン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分岐側鎖
（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、
フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。

「保存的アミノ酸置換」は、前記アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置
換されるものである。従って、例えば配列番号２または配列番号３の、予測される非必須
アミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基で置換されることが好まし
い。あるいは、下記の実施例で説明するように、突然変異は、活性を保持する変異体を同
定する目的で、飽和突然変異誘発などにより、配列の全部または一部に沿って無作為に導
入されてもよく、得られた変異体は、それぞれの受容体に結合し、それぞれの細胞応答を
誘発する能力についてスクリーニングされ得る。２３６位、２３９位、３３０位、３３２
位、４２８位、および４３４位以外での保存的アミノ酸置換の例は、米国特許第９８０３
０２３号、米国特許第９６６３５８２号、およびＵＳ２０１７０３４９６６２で見られ、
その内容は本明細書に引用される。

本発明に記載されるポリペプチドは、組換えポリペプチドとして得られ得る。組換えポ
リペプチドを調製するには、それをコードする核酸（例えば、配列番号２または配列番号
３）を、融合相手、例えば、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、６ｘ－
ＨｉｓエピトープタグまたはＭ１３ Ｇｅｎｅ ３タンパク質をコードする別の核酸に結
合させればよい。得られた融合核酸は、適切な宿主細胞において、当技術分野で公知の方
法によって単離することができる融合タンパク質を発現する。単離された融合タンパク質
は、例えば、酵素消化によりさらに処理して、融合パートナーを除去し、本発明の組換え
ポリペプチドを得ることができる。

上記のＦｃ改変体を有する改変体抗体は、本発明の範囲内である。改良された親和性を
有する前記抗体配列のさらなる改変体は、当技術分野で公知の方法を使用して得ることが
でき、本発明の範囲内に含まれる。例えば、さらに改良された親和性を有する抗体を得る
ため、アミノ酸置換が使用され得る。あるいは、抗体の産生のための発現系における翻訳
の効率を改良するため、ヌクレオチド配列のコドン最適化が使用され得る。

特定の実施形態では、本発明の抗体は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む
重鎖可変領域、ならびにＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含
む。１つまたはそれ以上のこれらのＣＤＲ配列は、本明細書に記載されている好ましい抗
体またはその保存的修飾に基づく特定のアミノ酸配列を含み、抗体は望ましい機能特性（
例えば、複数のＨＩＶ－１ウイルス株などの病原体を中和する）を保持している。同様に
、本発明の抗体は、本明細書に記載される好ましい抗体のＦｃ領域、例えば、配列番号２
または配列番号３、そのセクション、またはその保存的修飾を含み得る。本発明の抗体の
ＣＤＲまたは非ＣＤＲ領域内の１つまたはそれ以上のアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリ
ーからの他のアミノ酸残基によって置換されてもよく、さらに、改変された抗体は、本明
細書に記載される機能アッセイを使用して、保持された機能について試験され得る。同様
に、本明細書に記載される改変体Ｆｃ領域は、１つまたはそれ以上の保存的アミノ酸置換
を有し得る。

抗体の他の改変もまた、本明細書の範囲に包含される。例えば、抗体は、細胞毒性剤、
化学療法剤、または様々な非タンパク質性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール、
ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、またはポリエチレングリコールとポ
リプロピレングリコールとのコポリマーの１つに結合し得る。抗体は、たとえば、コアセ
ルベーション法または界面重合（例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼ
ラチン－マイクロカプセル、およびポリ－（メチルメタクリレート）マイクロカプセル）
により、コロイド状ドラッグデリバリーシステム（例えば、リポソーム、アルブミンミク
ロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセル）内で、またはマクロ
エマルション内で調製したマイクロカプセルに封入することもまたできる。前記技術は、
例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，
１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｏｓｌｏ， Ａ．， Ｅｄ．， （１９８０）に開示さ
れている。

特定の実施形態では、記載された発明の抗体は二重特異性であり、単一の抗原の２つの
異なるエピトープに結合し得る。他のこのような抗体は、第１の抗原結合部位と第２の抗
原の結合部位とを兼ね備えることができる。二重特異性抗体は、感染細胞に細胞毒性薬を
局在化させる目的でも使用され得る。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片（例
えば、Ｆ（ａｂ’）_２二重特異性抗体）として調製され得る。例えば、ＷＯ９６／１６６
７３、米国特許第５，８３７，２３４号、ＷＯ９８／０２４６３、米国特許第５，８２１
，３３７号、およびＭｏｕｑｕｅｔら， Ｎａｔｕｒｅ． ４６７， ５９１－５ （２
０１０）を参照。

二重特異性抗体を作製する方法は、当技術分野で知られている。完全長の二重特異性抗
体の従来の作製方法は、２つの鎖が異なる特異性を持つ２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖
ペアの同時発現に基づく（例えば、Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎら， Ｎａｔｕｒｅ， ３０５：
５３７－５３９ （１９８３）を参照）。同様の手順は、例えば、ＷＯ９３／０８８２９
， Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら， ＥＭＢＯ Ｊ．， １０：３６５５－３６５９ （１９
９１）に開示され、さらにＭｏｕｑｕｅｔら， Ｎａｔｕｒｅ． ４６７， ５９１－５
（２０１０）をも参照。抗体断片から二重特異性抗体を生成する技術も文献に記載され
ている。例えば、二重特異性抗体は、化学結合を使用して調製され得る。Ｂｒｅｎｎａｎ
ら， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２２９： ８１ （１９８５）を参照。

通常は、本発明において使用または記載される抗体は、従来のハイブリドーマ技術を使
用して生成され得るか、または当該分野で利用可能なベクターおよび方法を使用して、組
換え技術により作製され得る。ヒト抗体は、インビトロで活性化されたＢ細胞によっても
生成され得る（例えば、米国特許第５，５６７，６１０号および米国特許第５，２２９，
２７５号を参照）。本発明において有用な分子遺伝学および遺伝子工学における一般的な
方法は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕ
ａｌの最新版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （Ｆｏｕｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ） Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ．２０１２年出版）、Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉ
ｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ
． １８５， ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｄ． Ｇｏｅｄｄｅｌ， １９９１． Ａｃａｄ
ｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡ）、「Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｐｒｏ
ｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ」 ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ
ｏｇｙ （Ｍ．Ｐ． Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒら． （１９９０） Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒ
ｅｓｓ， Ｉｎｃ．）； ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ： Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ （Ｉｎｎｉｓら． １９９０． Ａ
ｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡ）， Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏ
ｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ： Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉ
ｑｕｅ， ２ｎｄ Ｅｄ． （Ｒ．Ｉ． Ｆｒｅｓｈｎｅｙ． １９８７． Ｌｉｓｓ
， Ｉｎｃ． Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＮＹ）， および Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ
ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ， ｐｐ． １０９－１２８， ｅ
ｄ． Ｅ．Ｊ． Ｍｕｒｒａｙ， Ｔｈｅ Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．， Ｃ
ｌｉｆｔｏｎ， Ｎ．Ｊ．）に記載されている。遺伝子操作用の試薬、クローニングベク
ター、キットは、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃｌｏ
ｎＴｅｃｈおよびＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．などの商業ベンダーから入手でき
る。

ファージディスプレイ、リボソームディスプレイ（ＨａｎｅｓおよびＰｌｕｃｋｔｈｕ
ｎ， １９９７， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ９４： ４９３７－
４９４２）、細菌ディスプレイ（Ｇｅｏｒｇｉｏｕら， １９９７， Ｎａｔｕｒｅ Ｂ
ｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １５： ２９－３４）、および／または酵母ディスプレイ（
Ｋｉｅｋｅら， １９９７， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １０： １３
０３－１３１０）を含むがこれらに限定されない濃縮技術を使用してライブラリーから抗
体を選択するための、当技術分野で知られている他の技術は、一本鎖抗体を選択するため
に、以前に議論された技術の代替として、利用され得る。一本鎖抗体は、繊維状ファージ
技術を直接利用して生成された一本鎖抗体のライブラリーから選択される。ファージディ
スプレイ技術は、米国特許第５，５６５，３３２号； ５，７３３，７４３号； ５，８
７１，９０７号； ５，８７２，２１５号； ５，８８５，７９３号； ５，９６２，２
５５号； ６，１４０，４７１号； ６，２２５，４４７号； ６，２９１６５０号；
６，４９２，１６０号； ６，５２１，４０４号； ６，５４４，７３１号； ６，５５
５，３１３号； ６，５８２，９１５号； ６，５９３，０８１号および他の米国の対応
特許群の出願、または１９９２年５月２４日に出願されたＧＢ ９２０６３１８の優先出
願に依拠する出願；（Ｖａｕｇｈｎら． １９９６， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎ
ｏｌｏｇｙ １４： ３０９－３１４も参照）に開示されているように、当技術分野で知
られている（例えば、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
（ＣＡＴ）による技術を参照）。一本鎖抗体は、ＤＮＡ増幅法（例えば、ＰＣＲ）などの
利用可能な組換えＤＮＡ技術を使用して、または場合によってはそれぞれのハイブリドー
マのｃＤＮＡをテンプレートとして使用して、操作および構築され得る。

ヒト抗体もまた、内因性の免疫グロブリンを産生することなく完全なレパートリーのヒ
ト抗体を産生することが可能なトランスジェニック動物（例えば、マウス）中で産生され
得る。例えば、キメラおよび生殖系列変異体マウスにおける抗体重鎖結合領域（ＪＨ）遺
伝子のホモ接合性欠失は、内因性抗体産生の完全な阻害をもたらすことが記載されている
。ヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイを前記生殖系列変異体マウスに移入すると、
抗原曝露時にヒト抗体が産生される。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら， Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９０：２５５１ （１９９３）； Ｊａ
ｋｏｂｏｖｉｔｓら， Ｎａｔｕｒｅ， ３６２：２５５－２５８ （１９９３）； Ｂ
ｒｕｇｇｅｍａｎｎら， Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ．， ７：３３ （１９９３）
； 米国特許第５，５４５，８０６号， ５，５６９，８２５号， ５，５９１，６６９
号 （すべてＧｅｎＰｈａｒｍ）； 米国特許第 ５，５４５，８０７号；およびＷＯ
９７／１７８５２を参照。前記動物は、記載された発明のポリペプチドを含むヒト抗体を
産生するように遺伝子操作され得る。

任意の既知のモノクローナル抗体は、その抗原結合セクションを本明細書に記載される
Ｆｃ領域／領域改変体に融合することにより、本明細書に開示されるＦｃ領域改変体およ
び修飾から恩恵を受け得る。既知の治療用モノクローナル抗体の例としては、以下の非限
定的な抗体のいずれかが挙げられる：３Ｆ８、８Ｈ９、アバゴボマブ、アブシキシマブ、
アビツズマブ、アブリルマブ、アクトクスマブ、アダリムマブ、アデカツムマブ、アデュ
カヌマブ、アファセビクマブ、アフェリモマブ、アフツズマブ、アラシズマブペゴル、Ａ
ＬＤ５１８、アレムツズマブ、アリロクマブ、ペンテト酸アルツモマブ、アマツキシマブ
、アナツモマブマフェナトックス、アネツマブラブタンシン、アニフロマブ、アンルキン
ズマブ、アポリズマブ、アルシツモマブ、アスクリンバクマブ、アセリズマブ、アテゾリ
ズマブ、アチヌマブ、アトリズマブ、アトリズマブ、バピネズマブ、バシリキシマブ、バ
ビツキシマブ、ベクツモマブ、ベゲロマブ、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ベルチリムマ
ブ、ベシレソマブ、ベバシズマブ、ベゾロトクスマブ、ビシロマブ、ビマグマブ、ビメキ
ズマブ、ビバツズマブメルタンシン、ブレセルマブ、ブリナツモマブ、ブロントベトマブ
、ブロゾズマブ、ボコシズマブ、ブラジクマブ、ブレンツキシマブベドチン、ブリアキヌ
マブ、ブロダルマブ、ブロルシズマブ、ブロンチクツズマブ、ブロスマブ、カビラリズマ
ブ、カナキヌマブ、カンツズマブメルタンシン、カンツズマブラブタンシン、カプラシズ
マブ、カプロマブペンデタイド、カルルマブ、カロツキシマブ、カトマキソマブ、ｃＢＲ
９６－ドキソルビシン免疫複合体、セデリズマブ、セルグツズマブアムナロイキン、セル
トリズマブペゴル、セツキシマブ、シタツズマブボガトックス、シクツムマブ、クラザキ
ズマブ、クレノリキシマブ、クリバツズマブテトラキセタン、コドリツズマブ、コルツキ
シマブラブタンシン、コナツマブ、コンシズマブ、ＣＲ６２６１、クレネズマブ、クロテ
ドマブ、ダセツズマブ、ダクリズマブ、ダロツズマブ、ダピロリズマブペゴル、ダラツマ
ブ、デクトレクマブ、デムシズマブ、デニンツズマブマフォドチン、デノスマブ、デパツ
キシズマブマフォドチン、デルロツキシマブビオチン、デツモマブ、ジヌツキシマブ、デ
ィリダブマブ、ドマグロズマブ、ドルリモマブアリトックス、ドロジツマブ、デュリゴツ
マブ、デュピルマブ、デュルバルマブ、デュシギツマブ、エクロメキシマブ、エクリズマ
ブ、エドバコマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エフングマブ、エルデルマブ、エ
ルゲムツマブ、エルツズマブ、エルシリモマブ、エマクトズマブ、エミベツズマブ、エミ
シズマブ、エナバツズマブ、エンフォルツマブベドチン、エンリモマブペゴル、エノブリ
ツズマブ、エノキズマブ、エノチマブ、エンシツキシマブ、エピツモマブシツクセタン、
エプラツズマブ、エレヌマブ、エルリズマブ、エルツマクスマブ、エタラシズマブ、エト
ロリズマブ、エビナクマブ、エボロクマブ、エクスビビルマブ、ファノレソマブ、ファラ
リモマブ、ファレツズマブ、ファシヌマブ、ＦＢＴＡ０５、フェルビズマブ、フェザキヌ
マブ、フィバツズマブ、フィクラツズマブ、フィチツムマブ、フィリブマブ、フランボツ
マブ、フレチクマブ、フォントリズマブ、フォラルマブ、フォラビルマブ、フレゾリムマ
ブ、フルラヌマブ、フツキシマブ、ガルカネズマブ、ガリキシマブ、ガニツマブ、ガンテ
ネルマブ、ガビリモマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、ゲボキズマブ、ジレンツキシマ
ブ、グレンブタムマブベドチン、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ、グセルクマブ、イバリズ
マブ、イブリツモマブチウクセタン、イクルクマブ、イダルシズマブ、イゴボマブ、ＩＭ
ＡＢ３６２、イマルマブ、インシロマブ、インガツマブ、インクラツマブ、インダツキシ
マブラブタンシン、インドゥサツマブベドチン、イネビリズマブ、インフリキシマブ、イ
ノリモマブ、イノツズマブオゾガマイシン、インテツムマブ、イピリムマブ、イラツマブ
、イサツキシマブ、イトリズマブ、イキセキズマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ、ラン
パリズマブ、ラナデルマブ、ランドグロズマブ、ラプリツキシマブエンタンシン、レブリ
キズマブ、レマレソマブ、レンダリズマブ、レンジルマブ、レルデリムマブ、レクサツマ
ブ、リビビルマブ、リファツズマブベドチン、リゲリズマブ、リロトマブサテトラキセタ
ン、リンツズマブ、リリルマブ、ロデルシズマブ、ロキベトマブ、ロルボツズマブメルタ
ンシン、ルカツマブ、ルリズマブペゴル、ルミリキシマブ、ルムツズマブ、ＭＡＢｐ１、
マプタムマブ、マルゲツキシマブ、マスリモマブ、マツズマブ、マヴリリムマブ、メポリ
ズマブ、メテリムマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ、ミルベツキシマブソラブタンシ
ン、ミツモマブ、モガムリズマブ、モナリズマブ、モロリムマブ、モタビズマブ、モキセ
ツモマブパスドトックス、ムロモナブＣＤ３、ナコロマブタフェナトックス、ナミルマブ
、ナプツモマブエスタフェナトックス、ナラツキシマブエムタンシン、ナルナツマブ、ナ
タリズマブ、ナビキシズマブ、ナビブマブ、ネバクマブ、ネシツムマブ、ネモリズマブ、
ネレリモマブ、ネスバクマブ、ニモツズマブ、ニボルマブ、ノフェツモマブメルペンタン
、オビルトキサキシマブ、オビヌツズマブ、オカラツズマブ、オクレリズマブ、オデュリ
モマブ、オファツムマブ、オララツマブ、オロキズマブ、オマリズマブ、オナルツズマブ
、オンツキシズマブ、オピシヌマブ、オポルツズマブモナトックス、オレゴボマブ、オル
ティクマブ、オテリキシズマブ、オトレルツマブ、オキセルマブ、オザネズマブ、オゾラ
リズマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ、パムレブルマブ、パニツムマブ、パンコマブ
、パノバクマブ、パルサツズマブ、パスコリズマブ、パソツキシズマブ、パテクリズマブ
、パトリツマブ、ペンブロリズマブ、ペムツモマブ、ペラキズマブ、ペルツズマブ、ペク
セリズマブ、ピジリズマブ、ピナツズマブベドチン、ピンツモマブ、プラクルマブ、プロ
ザリズマブ、ポガリズマブ、ポラツズマブベドチン、ポネズマブ、プレザリズマブ、プリ
リキシマブ、プリトキサキシマブ、プリツムマブ、ＰＲＯ １４０、キリズマブ、ラコツ
モマブ、ラドレツマブ、ラフィビルマブ、ラルパンシズマブ、ラムシルマブ、ラニビズマ
ブ、ラキシバクマブ、レファネズマブ、レガビルマブ、レスリズマブ、リロツムマブ、リ
ヌクマブ、リサンキズマブ、リツキシマブ、リババズマブペゴル、ロバツムマブ、ロレド
マブ、ロモソズマブ、ロンタリズマブ、ロバルピツズマブテシリン、ロベリズマブ、ルプ
リズマブ、サシツズマブゴビテカン、サマリズマブ、サペリズマブ、サリルマブ、サツモ
マブペンデチド、セクキヌマブ、セリバントマブ、セトキサキシマブ、セビルマブ、ＳＧ
Ｎ－ＣＤ１９Ａ、ＳＧＮ－ＣＤ３３Ａ、シブロツズマブ、シファリムマブ、シルツキシマ
ブ、シムツズマブ、シプリズマブ、シルクマブ、ソフィツズマブベドチン、ソラネズマブ
、ソリトマブ、ソネプシズマブ、ソンツズマブ、スタムルマブ、スレソマブ、スビズマブ
、タバルマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、タムツベトマ
ブ、タネズマブ、タプリツモマブパプトックス、タレクスツマブ、テフィバズマブ、テリ
モマブアリトックス、テナツモマブ、テネリキシマブ、テプリズマブ、テプロツムマブ、
テシドルマブ、テツロマブ、テゼペルマブ、ＴＧＮ１４１２、チシリムマブ、チガツズマ
ブ、チルドラキズマブ、チモルマブ、チソツマブベドチン、Ｔｎｘ－６５０、トシリズマ
ブ、トラリズマブ、トサトキズマブ、トシツモマブ、トベツマブ、トラロキマブ、トラス
ツズマブ、トラスツズマブエンタンシン、ＴＲＢＳ０７、トレガリズマブ、トレメリムマ
ブ、トレボグルマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ツビルマブ、ウブリツキシマブ、ウ
ロクプルマブ、ウレルマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、ウトミルマブ、バダツ
キシマブタリリン、バンドルツズマブベドチン、バンティックツマブ、バヌシズマブ、バ
パリキシマブ、バルリルマブ、バテリズマブ、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベパリモマ
ブ、ベセンクマブ、ビシリズマブ、ボバリリズマブ、ボロシキシマブ、ボルセツズマブマ
フォドチン、ボツムマブ、キセンツズマブ、ザルツムマブ、ザノリムマブ、ザツキシマブ
、ジラリムマブ、ゾリモマブアリトックス、及びそれらの組み合わせ。

前記標的は、以下の非限定的な標的のいずれかを含み得る：β－アミロイド、４－１Ｂ
Ｂ、５ＡＣ、５Ｔ４、α－フェトプロテイン、アンジオポエチン、ＡＯＣ３、Ｂ７－Ｈ３
、ＢＡＦＦｃ－ＭＥＴ、ｃ－ＭＹＣ、Ｃ２４２抗原、Ｃ５、ＣＡ－１２５、ＣＣＬ１１、
ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１１、ＣＤ１８、ＣＤ１２５、Ｃ
Ｄ１４０ａ、ＣＤ１２７、ＣＤ１５、ＣＤ１５２、ＣＤ１４０、ＣＤ１９、ＣＤ２、ＣＤ
２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２７４、ＣＤ２７６、ＣＤ２８、
ＣＤ３、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ
４４、ＣＤ４７、ＣＤ５、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ６、ＣＤ７４、ＣＤ８０
、ＣＥＡ、ＣＦＤ、ＣＧＲＰ、ＣＬＤＮ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ２、 ＣＴＧＦＣＴＬＡ－
４、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ７、ＤＫＫ１、ＤＬＬ３、ＤＬＬ４、ＤＲ５、ＥＧＦＬ７、Ｅ
ＧＦＲ、ＥＰＣＡＭ、ＥＲＢＢ２、ＥＲＢＢ３、ＦＡＰ、ＦＧＦ２３、ＦＧＦＲ１、ＧＤ
２、ＧＤ３、ＧＤＦ－８、ＧＰＮＭＢ、ＧＵＣＹ２Ｃ、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＧＦ、Ｈ
ＩＶ－１、ＨＳＰ９０、ＩＣＡＭ－１、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ、ＩｇＥ、ＣＤ２２１、
ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＧＨＥ、ＩＬ－１ ＩＬ２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、Ｉ
Ｌ－６Ｒ、ＩＬ－９、ＩＬ－１２ ＩＬ－１５、ＩＬ－１５Ｒ、ＩＬ－１７、ＩＬ－１３
、ＩＬ－１８、ＩＬ－１べーた、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ２３Ａ、インテグリン、
ＩＴＧＡ２、ＩＧＴＢ２、ルイスＹ抗原、ＬＦＡ－１、ＬＯＸＬ２、ＬＴＡ、ＭＣＰ－１
、ＭＩＦ、ＭＳ５Ａ１、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＭＳＬＮ、ミオスタチン、ＭＭＰスーパ
ーファミリー、ＮＣＡ－９０、ＮＦＧ、ＮＯＧＯ－Ａ、Ｎｏｔｃｈ １、ＮＲＰ１、ＯＸ
－４０、ＯＸ－４０Ｌ、Ｐ２Ｘスーパーファミリー、ＰＣＳＫ９、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１
、ＰＤＣＤ１、ＰＤＧＦ－Ｒ、ＲＡＮＫＬ、ＲＨＤ、ＲＯＮ、ＴＲＮ４、血清アルブミン
、ＳＤＣ１、ＳＬＡＭＦ７、ＳＩＲＰα、ＳＯＳＴ、ＳＨＰ１、ＳＨＰ２、ＳＴＲＡＰ１
、ＴＡＧ－７２、ＴＥＭ１、ＴＩＧＩＴ、ＴＦＰＩ、ＴＧＦ－β、ＴＮＦ－α、ＴＮＦス
ーパーファミリー、ＴＲＡＩＬスーパーファミリー、Ｔｏｌｌ様受容体、ＷＮＴスーパー
ファミリー、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦＲ－１、ＶＷＦサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、インフルエンザＡ赤血球凝集素
、狂犬病ウイルス、ＨＩＶウイルス、単純ヘルペスウイルス、およびそれらの組み合わせ
。他の標的または抗原は、その内容が本明細書に引用される、米国特許第９８０３０２３
号、米国特許第９６６３５８２号、およびＵＳ２０１７０３４９６６２に見られる。

３．核酸
本発明の別の態様は、上記のポリペプチドまたはタンパク質または抗体をコードする配
列を含む単離された核酸を特徴とする。核酸とは、ＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡもしく
はゲノムＤＮＡ）、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）、またはＤＮＡもしくはＲＮＡ類縁
体を指す。ＤＮＡまたはＲＮＡ類縁体は、ヌクレオチド類縁体から合成され得る。核酸分
子は、一本鎖または二本鎖であり得て、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。「単離された核
酸」とは、その構造が天然に存在する任意の核酸の構造または天然に存在するゲノム核酸
の任意の断片の構造と同一ではない核酸を指す。従って、この用語は、例えば、（ａ）天
然に存在するゲノムＤＮＡ分子の一部の配列を持つが、天然に存在する生物のゲノムの分
子のその部分に隣接するコード配列の両方には隣接していないＤＮＡ；（ｂ）得られた分
子が天然に存在するベクターまたはゲノムＤＮＡと同一ではないような様式で、原核生物
または真核生物のベクターまたはゲノムＤＮＡに組み込まれた核酸；（ｃ）ｃＤＮＡ、ゲ
ノム断片、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって生成された断片、または制限断片な
どの別の分子；および（ｄ）ハイブリッド遺伝子、すなわち融合タンパク質をコードする
遺伝子の一部である組換えヌクレオチド配列、に及ぶ。上記の核酸は、本発明のポリペプ
チド、融合タンパク質、または抗体を発現するために使用され得る。この目的のため、発
現ベクターを生成するように、前記核酸を適切な調節配列へと作動的に結合してもよい。

ベクターは、それが連結されている別の核酸を輸送することが可能な核酸分子を指す。
ベクターは自律複製が可能であるか、または宿主ＤＮＡに統合し得る。ベクターの例とし
ては、プラスミド、コスミド、またはウイルスベクターが挙げられる。前記ベクターは、
宿主細胞における核酸の発現に適した形態の核酸を含む。好ましくは、前記ベクターは、
発現される核酸配列に作動的に連結された１つまたはそれ以上の調節配列を含む。

「調節配列」としては、プロモーター、エンハンサー、および他の発現制御要素（例え
ば、ポリアデニル化シグナル）が挙げられる。調節配列としては、ヌクレオチド配列の構
成的発現を指示するもの、ならびに組織特異的調節および／または誘導配列が挙げられる
。発現ベクターの操作は、形質転換される宿主細胞の選択、望ましいタンパク質、または
ＲＮＡの発現レベルなどのような要因に依存し得る。前記発現ベクターは、本発明のポリ
ペプチドを生成するために、宿主細胞へと導入され得る。プロモーターは、ＲＮＡポリメ
ラーゼがＤＮＡに結合してＲＮＡ合成を開始するように指示するＤＮＡ配列として定義さ
れる。強力なプロモーターは、ｍＲＮＡを高頻度で開始させるものである。

上記の任意のポリヌクレオチドまたは同じ意図された目的のために当業者が利用できる
生物学的に同等のポリヌクレオチドは、この受容体を発現する「組換えＤＮＡ分子」を形
成するために、適切な発現ベクターに挿入され、他のＤＮＡ分子と結合され得る。これら
のベクターはＤＮＡまたはＲＮＡで構成され得る；ほとんどのクローニング目的には、Ｄ
ＮＡベクターが好ましい。従来のベクターとしては、プラスミド、改変ウイルス、バクテ
リオファージ、およびコスミド、酵母人工染色体、およびエピソーム性の、または組み込
まれたＤＮＡの他の形態が挙げられる。特定の用途に適したベクターを決定することは、
まさに技術者の範囲内である。

様々な哺乳動物発現ベクターが、哺乳動物細胞で上記のＩｇＧ Ｆｃを発現させるため
に使用され得る。上記のように、発現ベクターは、適切な宿主におけるクローン化ＤＮＡ
の転写およびそれらのｍＲＮＡの翻訳に必要なＤＮＡ配列であり得る。前記ベクターは、
細菌、藍藻、植物細胞、昆虫細胞、および動物細胞などの様々な宿主で真核生物のＤＮＡ
を発現させるために使用され得る。特別に設計されたベクターは、細菌－酵母または細菌
－動物細胞などの宿主間のＤＮＡの往復を可能にする。適切に構築された発現ベクターに
は、宿主細胞における自律複製の複製起点、選択可能なマーカー、限られた数の有用な制
限酵素部位、高コピー数の能力、および活性プロモーターが含まれている必要がある。発
現ベクターとしては、クローニングベクター、改変されたクローニングベクター、特別に
設計されたプラスミドまたはウイルスが挙げられ得るが、これらに限定されない。適切で
あり得る、市販で入手可能な哺乳動物発現ベクターとしては、以下が挙げられるがこれら
に限定されない：ｐｃＤＮＡ３．ｎｅｏ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐｃＤＮＡ３．１（
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐＣＩ－ｎｅｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）、ｐＬＩＴＭＵＳ２８、ｐ
ＬＩＴＭＵＳ２９、ｐＬＩＴＭＵＳ３８、およびｐＬＩＴＭＵＳ３９（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ
ａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）、ｐｃＤＮＡＩ、ｐｃＤＮＡＩａｍｐ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ
）、ｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐＭＣｌｎｅｏ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）
、ｐＸＴ１（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、ｐＳＧ５（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、ＥＢＯ－ｐ
ＳＶ２－ｎｅｏ（ＡＴＣＣ ３７５９３）ｐＢＰＶ－１（８－２）（ＡＴＣＣ ３７１１
０）、ｐｄＢＰＶ－ＭＭＴｎｅｏ（３４２－１２）（ＡＴＣＣ ３７２２４）、ｐＲＳＶ
ｇｐｔ（ＡＴＣＣ ３７１９９）、ｐＲＳＶｎｅｏ（ＡＴＣＣ ３７１９８）、ｐＳＶ２
－ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ ３７１４６）、ｐＵＣＴａｇ（ＡＴＣＣ ３７４６０）、および
ＩＺＤ３５（ＡＴＣＣ ３７５６５）。

上記の核酸を含む宿主細胞もまた、本発明の範囲内である。例としては、細菌細胞（例
えば、大腸菌細胞、昆虫細胞（例えば、バキュロウイルス発現ベクターを使用する））、
酵母細胞、または哺乳動物細胞が挙げられる。例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ， （１９９０）
Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ： Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ
Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇ
ｏ， Ｃａｌｉｆを参照。本発明のポリペプチドを生成するために、本発明の核酸によっ
てコードされるポリペプチドの発現を可能にする条件下において、培地中で宿主細胞を培
養し、前記培養細胞または前記細胞の培地から前記ポリペプチドを精製し得る。あるいは
、本発明の核酸は、例えば、Ｔ７プロモーター調節配列およびＴ７ポリメラーゼを使用し
て、インビトロで転写および翻訳され得る。

全ての天然に存在するＩｇＧ Ｆｃ、遺伝子操作されたＩｇＧ Ｆｃ、および化学的に
合成されたＩｇＧ Ｆｃは、本明細書に開示された発明を実施するために使用され得る。
組換えＤＮＡ技術によって得られたＩｇＧ Ｆｃは、配列番号２または配列番号３と同じ
アミノ酸配列、またはその機能的に同等のアミノ酸配列を有し得る。「ＩｇＧ Ｆｃ」と
いう用語は、化学的に修飾されたバージョンにも及ぶ。化学修飾されたＩｇＧ Ｆｃの例
としては、糖鎖の構造変化、付加または欠失を受けたＩｇＧ Ｆｃ、およびポリエチレン
グリコールなどの化合物が結合されたＩｇＧ Ｆｃが挙げられる。

このようにして作製したポリペプチド／タンパク質／抗体の機能および有効性は、以下
に記載されるように動物モデルを用いて検証され得る。インビボ半減期の統計的に有意な
増加、ＦｃγＲ受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、またはＦｃγＲＩ
ＩＩＢ）、ＦｃＲｎへの親和性の増大、および／または細胞毒性活性の増強は、ポリペプ
チド／タンパク質／抗体が以下に言及する疾患を治療する候補であることを示す。技術者
は、過度の実験をすることなく、さまざまな研究ツールを組み合わせ、適合させることが
可能であろう。標準的な方法により、または以下の実施例に記載されているアッセイおよ
び方法に従って、精製および試験されると、前記ポリペプチド／タンパク質／抗体は、下
記のように疾患を治療するための医薬組成物に含まれ得る。

４．組成物
適切な担体と、ＩｇＧ Ｆｃ改変体、関連タンパク質、または関連抗体などの上記の１
つまたはそれ以上の薬剤とを含む組成物は、本発明の範囲内である。前記組成物は、薬学
的に許容される担体を含む医薬組成物、または化粧品として許容される担体を含む化粧品
組成物であり得る。

上記の形態のいずれかの組成物は、本明細書に記載される疾患を治療するために使用さ
れ得る。有効量は、処置された対象に治療効果を与えるのに必要な活性化合物／薬剤の量
を指す。当技術分野の当業者に認識されているように、治療される疾患の種類、投与経路
、賦形剤の使用、および他の治療的処置との併用の可能性に応じて、有効量は変化する。

本発明の医薬組成物は、非経口的、経口的、経鼻的、直腸的、局所的、または口腔的に
投与され得る。本明細書で使用される「非経口」という用語は、皮下、皮内、静脈内、筋
肉内、関節内、動脈内、滑膜内、胸骨内、くも膜下腔内、病巣内、または頭蓋内注射、な
らびに任意の適切な注入技術を指す。

無菌の注射可能な組成物は、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の溶液
または懸濁液であり得る。前記溶液としては、１，３－ブタンジオール、マンニトール、
水、リンガー溶液、および等張塩化ナトリウム溶液が挙げられるが、これらに限定されな
い。さらに、固定油は従来、溶媒または懸濁媒体として使用されている（例えば、合成の
モノまたはジグリセリド）。オレイン酸およびそのグリセリド誘導体などの、これらに限
定されない脂肪酸は、オリーブ油またはヒマシ油、それらのポリオキシエチル化バージョ
ンなどの、これらに限定されない天然の薬学的に許容される油と同様に、注射剤の調製に
有用である。これらの油剤または懸濁液はまた、カルボキシメチルセルロースまたは同様
の分散剤などの、これらに限定されない長鎖アルコール希釈剤または分散剤を含み得る。
ＴＷＥＥＮＳやＳＰＡＮＳ、薬学的に許容される固体、液体、または他の剤形の製造で一
般的に使用されている、その他の同様の乳化剤やバイオアベイラビリティ向上剤など、こ
れらに限定されないその他の一般的に使用される界面活性剤は、製剤化の目的にも使用し
得る。

経口投与用の組成物は、カプセル、錠剤、乳濁液、および水性懸濁液、分散液、および
溶液などの、経口的に許容される剤形であり得る。錠剤の場合、一般的に使用される担体
としては、ラクトースおよびコーンスターチが挙げられるが、これらに限定されない。ス
テアリン酸マグネシウムなどの、これに限定されない滑沢剤もまた典型的に添加される。
カプセル形態での経口投与のために、有用な希釈剤としては、ラクトースおよび乾燥コー
ンスターチが挙げられるが、これらに限定されない。水性懸濁液または乳濁液が経口投与
される場合、有効成分は、乳化剤または懸濁化剤と組み合わせた油相に懸濁または溶解さ
れ得る。必要に応じて、特定の甘味剤、香味剤、または着色剤を添加してもよい。

記載された発明による局所投与のための医薬組成物は、溶液、軟膏、クリーム、懸濁液
、ローション、粉末、ペースト、ゲル、スプレー、エアロゾル、または油として処方され
得る。あるいは、局所製剤は、任意に１つまたはそれ以上の賦形剤または希釈剤を含み得
る、活性成分を含浸させた、パッチまたは包帯の形態であり得る。いくつかの好ましい実
施形態では、前記局所製剤としては、皮膚または他の患部を介した活性剤の吸収または浸
透を増強する物質が挙げられる。前記局所用組成物は、湿疹、にきび、酒さ、乾癬、接触
性皮膚炎、およびツタウルシへの応答などの、これらに限定されない皮膚の炎症性疾患の
治療に有用である。

局所用組成物は、安全かつ有効な量の、皮膚への適用に適した皮膚科学的に許容される
担体を含む。「化粧品として許容される」または「皮膚科学的に許容される」組成物また
は成分は、過度の毒性、非適合性、不安定性、アレルギー反応などなく、ヒトの皮膚との
接触での使用に適した組成物または成分を指す。前記担体は、活性剤および任意成分を適
切な濃度で皮膚に運搬することを可能にする。従って、前記担体は、前記活性材料が適切
な濃度で選択された標的に確実に適用され、均一に分散されるようにするために、希釈剤
、分散剤、溶媒などとして機能し得る。前記担体は、固体、半固体、または液体であり得
る。前記担体は、ローション、クリーム、またはゲル、特に、前記活性物質が沈降するの
を防ぐのに十分な厚さまたは降伏点を有するもの、の形態であり得る。前記担体は不活性
であるか、または皮膚科学的利点を有し得る。それはまた、本明細書に記載される活性成
分と物理的および化学的に適合であるべきであり、組成物に関連する安定性、効能、また
は他の使用上の利点を過度に損なうべきではない。前記局所用組成物は、溶液、エアロゾ
ル、クリーム、ゲル、パッチ、軟膏、ローション、または泡などの、局所または経皮適用
のための当該技術分野で既知の形態の化粧品または皮膚科製品であり得る。

５．治療方法
上記の薬剤は、腫瘍性疾患、炎症性疾患、および感染性疾患などの様々な疾患の予防的
および治療的処置のために対象に投与され得る。例えば、前記剤は、ウイルスまたは細菌
感染、代謝疾患または自己免疫疾患、または癌もしくは他の細胞増殖性疾患の治療に使用
され得る。

Ａ．腫瘍性疾患
一態様では、本発明は、癌性腫瘍の成長および／または転移が阻害されるように、上記
の剤を使用するインビボでの対象の治療に関連する。一実施形態では、本発明は、対象に
治療上有効量の上記の剤を投与することを含む、対象における腫瘍細胞の成長を阻害し、
および／または、その転移の広がりを制限する方法を提供する。

治療に好ましい癌の非限定的な例としては、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急
性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、リンパ球性リンパ腫などの慢性または急性
の白血病、乳がん、卵巣がん、黒色腫（例えば、転移性悪性黒色腫）、腎癌（例えば、明
細胞癌）、前立腺癌（例えばホルモン不応性前立腺腺癌）、結腸癌および肺癌（例えば非
小細胞肺癌）が挙げられる。さらに、本発明としては、その増殖が本発明の抗体を使用し
て阻害され得る、不応性または再発性の悪性腫瘍が挙げられる。本発明の方法を使用して
治療され得る他の癌の例としては、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼内悪
性黒色腫、子宮癌、直腸癌、肛門部癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子
宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系癌
、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部肉腫、尿道癌、陰茎癌、固形腫瘍、膀胱癌、腎臓
または尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血
管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、
Ｔ細胞リンパ腫、アスベストによって誘発されるものなどの環境的に誘発される癌、およ
びこれらの癌の組み合わせが挙げられる。

上記の治療はまた、標準的な癌治療と組み合わされ得る。例えば、それは化学療法レジ
メンと効果的に組み合わされ得る。これらの例では、投与される化学療法試薬の用量を減
らすことが可能であり得る（Ｍｏｋｙｒ， Ｍ．ら． （１９９８） Ｃａｎｃｅｒ Ｒ
ｅｓｅａｒｃｈ ５８： ５３０１－５３０４）。

宿主の免疫応答性を活性化するために使用され得る他の抗体は、本発明の因子と組み合
わせて使用され得る。これらとしては、ＤＣ機能および抗原提示を活性化する、樹状細胞
の表面を標的とする分子が挙げられる。例えば、抗ＣＤ４０抗体はＴ細胞ヘルパー活性を
効果的に置換することができ（Ｒｉｄｇｅ， Ｊ．ら． （１９９８） Ｎａｔｕｒｅ
３９３： ４７４－４７８）、本発明の多重特異性分子と組み合わせて使用され得る（Ｉ
ｔｏ， Ｎ．ら． （２０００） Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ ２０１ （５） ５２
７－４０）。同様に、ＣＴＬＡ－４（例えば、米国特許第５，８１１，０９７号）、ＣＤ
２８（Ｈａａｎ， Ｊ．ら． （２０１４） Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ
１６２：１０３-１１２）、ＯＸ－４０（Ｗｅｉｎｂｅｒｇ， Ａ．ら． （２０００）
Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４： ２１６０－２１６９）、４－１ＢＢ（Ｍｅｌｅｒｏ， Ｉ
．ら． （１９９７） Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３： ６８２－６８５ （１
９９７））、およびＩＣＯＳ（Ｈｕｔｌｏｆｆ， Ａ．ら． （１９９９） Ｎａｔｕｒ
ｅ ３９７： ２６２－２６６）などのＴ細胞共刺激分子を標的とする抗体、またはＰＤ
－１（米国特許第８００８４４９号）、ＰＤ－１Ｌ（米国特許第７９４３７４３号および
８１６８１７９号）を標的とする抗体は、高められたレベルのＴ細胞活性化を備え得る。
他の例では、本発明の多重特異性分子は、例として、リツキサン（リツキシマブ）、ハー
セプチン（トラスツズマブ）、ベクサール（トシツモマブ）、ゼバリン（イブリツモマブ
）、キャンパス（アレムツズマブ）、リンホサイド（エプラツズマブ）、アバスチン（ベ
バシズマブ）、およびタルセバ（エルロチニブ）などの抗腫瘍性抗体と組み合わせて使用
され得る。

Ｂ．炎症性疾患
記載された発明は、対象において炎症性疾患を治療するための方法を提供する。「炎症
性疾患」という用語は、自己免疫疾患などの、異常なまたは望ましくない炎症を特徴とす
る疾患を指す。自己免疫疾患は、非活性化条件下での免疫細胞の慢性的な活性化を特徴と
する疾患である。例としては、乾癬、炎症性腸疾患（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎
）、関節リウマチ、乾癬性関節炎、多発性硬化症、狼瘡、Ｉ型糖尿病、原発性胆汁性肝硬
変、および移植が挙げられる。

本発明の方法によって治療され得る炎症性疾患の他の例としては、喘息、心筋梗塞、脳
卒中、炎症性皮膚病（例えば、皮膚炎、湿疹、アトピー性皮膚炎、アレルギー性接触皮膚
炎、蕁麻疹、壊死性血管炎、皮膚血管炎、過敏性血管炎、好酸球性筋炎、多発性筋炎、皮
膚筋炎、および好酸球性筋膜炎）、急性呼吸窮迫症候群、劇症肝炎、過敏性肺疾患（例え
ば、過敏性肺炎、好酸球性肺炎、遅延型過敏症、間質性肺疾患（ＩＬＤ）、特発性肺線維
症、関節リウマチに関連するＩＬＤ）、およびアレルギー性鼻炎が挙げられる。追加の例
としては、重症筋無力症、若年発症糖尿病、糸球体腎炎、自己免疫性甲状腺炎、強直性脊
椎炎、全身性硬化症、急性および慢性の炎症性疾患（例えば、全身性アナフィラキシーま
たは過敏反応、薬物アレルギー、虫刺されアレルギー、同種移植拒絶反応、および移植片
対宿主病）、およびシェーグレン症候群もまた挙げられる。

炎症性疾患の治療を受ける対象は、疾患の標準的な診断技術によって特定され得る。必
要に応じて、前記対象は、当該分野で公知の方法によって、前記対象から得られた試験サ
ンプルの、１つまたはそれ以上のサイトカインまたは細胞のレベルまたは割合について試
験され得る。前記レベルまたは割合が（正常な対象から得ることができる）閾値以下であ
る場合、前記対象は本明細書に記載される治療のための候補である。前記抑制または治療
を確認するために、治療後の対象における、１つまたはそれ以上の、上記のサイトカイン
または細胞のレベルまたは割合を、評価および／または検証してもよい。

Ｃ．感染性疾患
本発明はまた、病原体上または病原体中の抗原を標的とする上記の剤を使用する感染性
疾患の治療に関連する。本明細書における感染性疾患の例としては、ウイルス、細菌、真
菌、原生動物、および寄生虫などの病原体によって引き起こされる疾患が挙げられる。感
染性疾患は、アデノウイルス、サイトメガロウイルス、デング熱、エプスタインバー、ハ
ンタ、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、単純ヘルペスＩ型、単純ヘルペスＩＩ型、ヒト免
疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、インフルエンザ、麻疹
、おたふく風邪、パポバウイルス、ポリオ、呼吸器合胞体ウイルス、牛疫、ライノウイル
ス、ロタウイルス、風疹、ＳＡＲＳウイルス、天然痘、ウイルス性髄膜炎などにより引き
起こされ得る。感染性疾患は、炭疽菌、ボレリア・ブルグドルフェリ、カンピロバクター
・ジェジュニ、クラミジア・トラコマチス、ボツリヌス菌、クロストリジウム・テタニ、
ジフテリア、大腸菌、レジオネラ、ヘリコバクターピロリ、マイコバクテリウムリケッチ
ア、マイコプラズマネセセリア、百日咳、緑膿菌、肺炎球菌、連鎖球菌、ブドウ球菌、コ
レラ菌、ペスト菌、およびその同類のものなどの細菌によっても引き起こされ得る。感染
性疾患は、アスペルギルス・フミガツス、ブラストミセス・デルマティティジス、カンジ
ダ・アルビカンス、コクシジオイデス・イミチス、クリプトコックス・ネオフォルマンス
、ヒストプラズマ・カプスラーツム、ペニシリウム・マルネッフェイ、およびその同類の
ものなどの真菌によっても引き起こされ得る。感染性疾患は、クラミジア、コクジディオ
ア、リーシュマニア、マラリア、リケッチア、トリパノソーマ、およびその同類などの原
虫や寄生虫によっても引き起こされ得る。

前記治療方法は、インビボまたはエクスビボで、単独で、または他の薬物または療法と
組み合わせて実施され得る。治療的有効量は、１回またはそれ以上の投与、適用または投
薬で投与することができ、特定の製剤または投与経路に限定されることを意図していない
。

前記剤は、インビボまたはエクスビボで、単独で、または他の薬物または療法と併せて
同時投与で（すなわち、カクテル療法で）、投与され得る。本明細書中で使用される場合
、用語「同時投与」または「同時投与された」は、対象への少なくとも２つの剤または療
法の投与を指す。いくつかの実施形態では、２つまたはそれ以上の剤／療法の同時投与が
同時に行われる。他の実施形態では、第１の剤／療法は、第２の剤／療法の前に投与され
る。当業者は、使用される様々な剤／療法の処方および／または投与経路が異なり得るこ
とを理解する。

インビボアプローチでは、化合物または剤が対象に投与される。一般に、前記化合物ま
たは剤は、薬学的に許容される担体（例えば、これに限定されないが、生理食塩水など）
に懸濁され、さらに経口投与または静脈内注入により投与され、または皮下、筋肉内、髄
腔内、腹腔内、直腸内、膣内、鼻腔内、胃内、気管内、または肺内に、注射または移植さ
れる。

必要な投与量は、投与経路の選択；製剤の性質；患者の病気の性質；対象のサイズ、体
重、表面積、年齢、性別；投与されている他の薬物；および主治医の判断によって決定さ
れる。適切な投与量は、０．０１～１００ｍｇ／ｋｇの範囲である。必要な投与量の変動
は、利用可能な化合物／剤の多様性、および様々な投与経路によって異なる効率を考慮し
て予測されるべきである。例えば、経口投与は、静脈内注入による投与よりも多くの投与
量を必要とすると予測される。これらの投与量レベルの変動は、当技術分野でよく理解さ
れているように、最適化のための標準的な経験的ルーチンを使用して調整され得る。適切
な運搬媒体（例えば、ポリマー微粒子または埋め込み型デバイス）への化合物の封入は、
特に経口運搬の場合、運搬の効率を高め得る。

６．実施例
実施例１
本実施例では、以下の実施例２～３で使用される材料および方法について説明する。

材料と方法
マウス系統
すべてのマウスのインビボ実験は、連邦法および施設のガイドラインに従って行われ、
ロックフェラー大学施設内動物管理および使用委員会によって承認された。マウスはロッ
クフェラー大学の比較生物科学センターで飼育され、維持された。以下の系統を実験に使
用した：（ｉ）Ｓｍｉｔｈ， Ｐら． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ
Ａ １０９， ６１８１－６１８６ （２０１２）において、以前に開発され、特徴付
けられたＦｃγＲ欠損マウス（ＦｃγＲ^ｎｕｌｌ）；（ｉｉ）Ｓｍｉｔｈ， Ｐら． Ｐ
ｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０９， ６１８１－６１８６ （
２０１２）において生成され、広範囲に特徴付けられたＦｃγＲヒト化マウス（ｍＦｃγ
Ｒα^ｎｕｌｌ、Ｆｃｇｒｌ^－／－、ｈＦＣＧＲ１Ａ^＋、ｈＦＣＧＲ２Ａ^＋、ｈＦＣＧＲ２
Ｂ^＋、ｈＦＣＧＲ３Ａ^＋、ｈＦＣＧＲ３Ｂ^＋）；（ｉｉｉ）ＦｃγＲ／ＦｃＲｎヒト化マ
ウス（ｍＦｃγＲα^ｎｕｌｌ、Ｆｃｇｒ１^－／－、Ｆｃｇｒｔ^－／－、ｈＦＣＧＲ１Ａ^＋
、ｈＦＣＧＲ２Ａ^＋、ｈＦＣＧＲ２Ｂ^＋、ｈＦＣＧＲ３Ａ^＋、ｈＦＣＧＲ３Ｂ^＋、ｈＦＣ
ＧＲＴ^＋）は、ＦｃγＲヒト化マウスとＦｃＲｎヒト化マウスとを交配することにより生
成された（Ｐｅｔｋｏｖａ， Ｓ． Ｂ．ら． Ｉｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８， １７
５９－１７６９において開発された）；（ｉｖ）ＦｃγＲ／ＣＤ２０ヒト化マウス（ｍＦ
ｃγＲα^ｎｕｌｌ、Ｆｃｇｒｌ^－／－、ｈＦＣＧＲ１Ａ^＋、ｈＦＣＧＲ２Ａ^＋、ｈＦＣＧ
Ｒ２Ｂ^＋、ｈＦＣＧＲ３Ａ^＋、ｈＦＣＧＲ３Ｂ^＋、ｈＣＤ２０^＋）。

表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析
前記ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域改変体のＦｃγＲおよびＦｃＲｎへの結合親和性を、以前
に記載されたプロトコルを使用して、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定した（
Ｗａｎｇ， Ｔ． Ｔ．ら． Ｓｃｉｅｎｃｅ ３５５， ３９５－３９８ （２０１７
）およびＬｉ， Ｔ．ら． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １１
４， ３４８５－３４９０， （２０１７））。すべての実験を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２
００ ＳＰＲシステム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で、２５℃のＨＢＳ－ＥＰ^＋緩衝
液（ＦｃγＲの場合はｐＨ ７．４、ＦｃＲｎの場合はｐＨ ６．０）で行った。組換え
プロテインＧ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を、５００共鳴単位（ＲＵ）の濃度でアミ
ンカップリング化学を使用して、表面のＦｃＭ５センサーチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃ
ａｒｅ）に固定化した。ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ改変体はプロテインＧ結合表面に捕捉され（
２５０ ｎＭを２０μｌ／分で６０秒間注入）、組換えヒト、アカゲザル、またはマウス
のＦｃγＲエクト領域（７．８１２５～２０００ ｎＭ； Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃ
ａｌ）またはヒトＦｃＲｎ／β２ミクログロブリン（１．９５～５００ ｎＭ；Ｓｉｎｏ
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）を、フローセルを通して２０μｌ／分の流速で注入した。会合
時間は６０秒で、その後６００秒の解離段階が続く。各サイクルの終わりに、センサー表
面を１０ｍＭグリシン、ｐＨ ２．０（５０μｌ／分； ４０秒）で再生させた。固定化
されたブランクフローセルとのバックグラウンド結合を差し引き、１：１ラングミュア結
合モデルを使用し、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェア（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃ
ａｒｅ）を使用して親和性定数を算出した。

インビボ細胞毒性モデル
血小板、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、およびｈＣＤ２０^＋Ｂ細胞の枯渇実験を、以前に記載された
プロトコルを使用して、ＦｃγＲヒト化およびＦｃγＲ／ＦｃＲｎヒト化マウスで行った
（Ｓｍｉｔｈ， Ｐら． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０９
， ６１８１－６１８６ （２０１２）およびＷａｎｇ， Ｔ． Ｔ．ら． Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ３５５， ３９５－３９８ （２０１７））。アカゲザルでのＢ細胞の枯渇実験で
は、アカゲザルに対して０．０５ｍｇ／ｋｇで、抗ＣＤ２０ ｍＡｂ ２Ｂ８の野生型ヒ
トＩｇＧ１またはＧＡＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ ／ Ａ３３０Ｌ ／ Ｉ３３２Ｅ）改変体
を投与（ｉ．ｖ．）した。ＣＤ２０^＋存在比率および細胞数を、抗体投与前後のさまざま
な時点でフローサイトメトリーによって血中で分析した。

抗体の発現、精製、分析
以前にＢｏｕｒｎａｚｏｓ， Ｓ．ら． Ｃｅｌｌ １５８， １２４３－１２５３
（２０１４）において記載されているように、ＨＥＫ２９３ＴまたはＥｘｐｉ２９３細胞
の一過性トランスフェクションによって抗体を産生させた。抗体は、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇ
Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｆａｓｔ ＦｌｏｗまたはＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ
ＬＸアフィニティ精製培地（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して精製した。精製さ
れたタンパク質をＰＢＳで透析し、滅菌濾過した（０．２２μｍ）。純度は、ＳＤＳ－Ｐ
ＡＧＥおよびクマシー染色によって評価され、＞９０％であると推定された。プロテイン
Ｔｍは、ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ ６Ｋ Ｆｌｅｘリアルタイムサーマルサイクラーに関
連する製造業者の指示に従って、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｓｈｉｆｔ Ｄｙｅ
Ｋｉｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用して測定した。

血清ＩｇＧレベルの定量
ヒトＩｇＧ１改変体の血清濃度の定量には、ニュートラアビジンコーティングプレート
を使用した（５μｇ／ｍｌ、一晩）。プレートは、マウス血清サンプルの場合はビオチン
化ヤギ抗ヒトＩｇＧ（吸収処理したマウスＩｇＧ、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓ
ｅａｒｃｈ）、アカゲザル血漿サンプルの場合はＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ^ＴＭ Ｈｕ
ｍａｎＩｇＧ－Ｆｃ ＰＫ Ｂｉｏｔｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅのいずれかと培養した。
培養（室温で６０分）の後、プレートはＰＢＳ＋２％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ＋０．０５％（ｖ
／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０で２時間ブロックした。段階希釈された（最初の１：１０希釈で開
始して１：３）血清サンプルを１時間培養した。ＩｇＧ結合については、ヤギ抗ヒトＩｇ
Ｇを使用して検出した（Ｆｃγ特異的、１時間；１：５０００；Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍ
ｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）。プレートは、ＴＭＢ（３，３’、５，５’－テトラメチルベ
ンジジン）２成分ペルオキシダーゼ基質キット（ＫＰＬ）を使用して発色させ、１Ｍリン
酸を添加して反応を停止させた。ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｐｌｕｓ分光光度計（Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して、４５０ｎｍでの吸光度を直ちに記録し、ネガ
ティブコントロールサンプルからのバックグラウンド吸光度を差し引いた。

実施例２
ヒトＩｇＧ１のアミノ酸骨格に特定の変異（Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ
３３２Ｅ）を含むＦｃ領域改変体（ＧＡＳＤＡＬＩＥと呼ばれる）を開発した。この改変
体は、活性化ヒトＦｃγＲ、ＦｃγＲＩＩａおよびＦｃγＲＩＩＩａへの、選択的に増強
された結合を示す（Ｓｍｉｔｈ， Ｐ．， ＤｉＬｉｌｌｏ， Ｄ．Ｊ．， Ｂｏｕｒｎ
ａｚｏｓ， Ｓ．， Ｌｉ， Ｆ． および Ｒａｖｅｔｃｈ， Ｊ．Ｖ． Ｍｏｕｓｅ
ｍｏｄｅｌ ｒｅｃａｐｉｔｕｌａｔｉｎｇ ｈｕｍａｎ Ｆｃｇａｍｍａ ｒｅｃｅ
ｐｔｏｒ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０９， ６１８１－６１８
６ （２０１２））。細菌およびウイルスへの感染に対する抗体媒介性の保護の多様なモ
デルにおいて、保護ｍＡｂのＧＡＳＤＡＬＩＥ Ｆｃ領域改変体は、野生型ヒトＩｇＧ１
と比較して有意に向上した保護活性を示した。Ｓｍｉｔｈ， Ｐ．ら， Ｐｒｏｃ Ｎａ
ｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０９， ６１８１－６１８６ （２０１２）；
Ｂｏｕｒｎａｚｏｓ， Ｓ．ら Ｃｅｌｌ １５８， １２４３－１２５３ （２０１４
）；Ｂｏｕｒｎａｚｏｓ， Ｓ．ら， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １２４， ７２５
－７２９ （２０１４）；およびＤｉＬｉｌｌｏ， Ｄ．Ｊ．ら， Ｎａｔ Ｍｅｄ ２
０， １４３－１５１ （２０１４）を参照。

さらに重要なことに、ＣＤ２０＋リンパ腫のマウスモデルにおける抗ＣＤ２０ ｍＡｂ
のＧＡＳＤＡＬＩＥ改変体の治療活性を評価したところ、この改変体が、ＣＤ２０＋リン
パ腫細胞に対して改良された細胞毒性活性を示しただけでなく、その後のリンパ腫攻撃に
対する保護を付与する、長期Ｔ細胞記憶応答の誘導をも促進したことが明らかとなってい
る（ＤｉＬｉｌｌｏ， Ｄ．Ｊ．ら Ｃｅｌｌ １６１， １０３５－１０４５ （２０
１５））。メカニズムの研究によると、原発性リンパ腫攻撃中の増強された細胞毒性が、
単球やマクロファージのように、エフェクター白血球へのＦｃγＲＩＩＩａの増強された
関与を通じて媒介されるのに対し、樹状細胞上のＦｃγＲＩＩａの架橋は、樹状細胞の成
熟および二次攻撃時の保護を媒介するＴ細胞記憶応答の誘導を促進したことが明らかとな
った（ＤｉＬｉｌｌｏ， Ｄ．Ｊ．ら Ｃｅｌｌ １６１， １０３５－１０４５ （２
０１５））。総じて、これらの研究により、ヒトＦｃγＲＩＩａおよびＦｃγＲＩＩＩａ
への選択的に増強される結合を媒介して達成されるＧＡＳＤＡＬＩＥ Ｆｃ領域改変体の
改良された治療活性が明らかとなった。

改良されたＦｃエフェクター機能にもかかわらず、ＧＡＳＤＡＬＩＥ改変体は、主にＦ
ｃγＲヒト化マウスの中で、および比較的程度は低いが、ＦｃγＲの全てのクラスの欠損
マウス系統において、インビボで有意に短い半減期を示した（図１）。この効果は、Ｆｃ
γＲの親和性の増大、およびインビボでのタンパク質安定性の低下が原因であった可能性
がある。ＧＡＳＤＡＬＩＥ Ｆｃ領域改変体は、ＦｃＲｎへの親和性を高め、半減期を延
長するＦｃ領域変異（例えば、ＬＳ：Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）と組み合わせた場合でも
、非ヒト霊長類において、インビボで非常に短い半減期を示した（図２）。

本発明者らは、ＦｃγＲＩＩａおよびＦｃγＲＩＩＩａへの親和性の増大といくつかの
ｍＡｂ媒介性細胞毒性モデルにおける細胞毒性活性の強化などの、ＧＡＳＤＡＬＩＥ改変
体のすべての特徴を示すＦｃ領域改変体（ＧＡＡＬＩＥと呼ばれる）を開発したが、予期
しないことに、それは生物学的半減期をも維持する。以下に示す研究において、本発明者
は、すでにヒトにおいて評価されており生体内での安定性と半減期に大きな障害をもたら
すことなくＦｃγＲへの結合親和性の増大を示すＦｃ領域改変体（アフコシル化改変体お
よびＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ改変体）を挙げた。Ｇｏｅｄｅ， Ｖ．ら Ｎ Ｅｎｇｌ
Ｊ Ｍｅｄ ３７０， １１０１－１１１０ （２０１４）；Ｚａｌｅｖｓｋｙ， Ｊ．
ら Ｂｌｏｏｄ １１３， ３７３５－３７４３ （２００９）；およびＷｏｙａｃｈ
， Ｊ．Ａ．ら Ｂｌｏｏｄ １２４， ３５５３－３５６０ （２０１４）。

前記ＧＡＡＬＩＥ改変体（Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）は、ヒト、アカゲザ
ル、およびマウスのすべてのクラスのＦｃγＲへの親和性について（図３～８）、および
ＦｃγＲヒト化マウスの血小板、ＣＤ４＋Ｔ細胞、およびＢ細胞の枯渇モデルにおけるそ
の細胞毒性エフェクター活性について（図９～１２）特徴付けられた。ＦｃγＲヒト化マ
ウスおよびＦｃγＲ欠損マウス、ならびにアカゲザルでＧＡＡＬＩＥ改変体の半減期を評
価したところ、それが生理的半減期を示すことが明らかとなった（図１３～１４）。さら
に、ＧＡＡＬＩＥ改変体のインビボ細胞毒性を、ＣＤ２０＋Ｂ細胞のｍＡｂ媒介性枯渇の
モデルにおいて非ヒト霊長類（アカゲザル）で評価した（図１５）。

実施例３
前記ＧＡＡＬＩＥ改変体のインビボ半減期をさらに延長するために、それをＦｃγＲ結
合に影響を与えずにＦｃＲｎへの親和性を増大させる変異と組み合わせた（Ｚａｌｅｖｓ
ｋｙ， Ｊ．ら Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２８， １５７－１５９ （２０１０
）およびＧｒｅｖｙｓ， Ａ．ら Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９４， ５４９７－５５０８
（２０１５））。これらの変異としては、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ（ＬＳ改変体、
Ｚａｌｅｖｓｋｙ， Ｊ．ら Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２８， １５７－１５９
（２０１０））が挙げられ、生成されたＦｃ領域改変体のアミノ酸配列を図１６に示す
。ＦｃγＲ／ＦｃＲｎ増強改変体のタンパク質融解温度およびＦｃＲｎ結合の親和性を測
定した（図１７～２０）。さらに、これらの改変体のインビボ半減期を、ＦｃＲｎ／Ｆｃ
γＲヒト化マウスにおいて評価した（図２１）。予期していたように、ＧＡＡＬＩＥ Ｌ
Ｓ （Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ／Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ）は、ＦｃγＲ／
ＦｃＲｎヒト化マウスにおけるｍＡｂ媒介型血小板枯渇のモデルにおいて長期の半減期を
示したことから、長期の、および増強されたＦｃエフェクター活性が示された（図２２）
。

実施例４
ヒトＦｃを用いた臨床使用のために設計された抗体の、ヒトＦｃＲとの相互作用を再現
するために、Ｂ１６－ＦＵＴ３細胞をＦｃγＲヒト化マウス、つまり全てのヒトＦｃγＲ
の導入遺伝子を有する一方で全てのマウスＦｃＲを欠損する系統（Ｓｍｉｔｈ， Ｐ．ら
， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０９， ６１８１－６１８
６ （２０１２））に接種し、完全に免疫能のあるマウスのバックグラウンドにおける、
ヒトＦｃＲの細胞発現パターンの再現をもたらした。Ｂ１６腫瘍を有するマウスは、ｓＬ
ｅＡ標的抗体、クローン５Ｂ１および７Ｅ３を用いて処置され、ｈＩｇＧ１サブクラスを
発現した。５Ｂ１および７Ｅ３の双方のクローンは同等の治療効果を示し（図２３Ａ）、
肺における転移巣の数の有意な減少をもたらした。キメラヒト－マウス抗体で観察された
ように（データは示されていない）、ヒトのＦｃＲに関与する能力を無効にするＦｃ変異
（Ｎ２９７Ａ）を用いて５Ｂ１－ｈＩｇＧ１を設計することは、ｓＬｅＡ標的抗体の治療
効果の損失をもたらす（データは示されていない）。

抗体誘発腫瘍クリアランスの媒介における、ＦｃＲの活性化の上記の役割に照らして、
活性化ＦｃＲとのアフィニティを増加させることにより、ｓＬｅＡ標的化抗体の治療効力
を増加させることが求められた。そうすることで、３つの点変異（Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０
Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）（「ＧＡＡＬＩＥ」）を導入することにより、ｈＩｇＧ１ ｓＬｅＡ－
標的抗体を再設計した。前記ＧＡＡＬＩＥ点変異は、ｓＬｅＡへの結合親和性を抑制する
ことなく、抑制性受容体であるｈＦｃＲＩＩＢへの結合を低減しながら、２つの活性化ヒ
トＦｃＲ：ｈＦｃγＲＩＩＡおよびｈＦｃγＲＩＩＩＡとの、ｓＬｅＡを標的とする抗体
の親和性を有意に増強した。再設計された５Ｂ１および７Ｅ３抗体改変体は、野生型ｈＩ
ｇＧ１のＦｃ部分を有する親抗体と比較して、優れた抗腫瘍活性を示した（図２４Ｂ）。
これらの研究結果は、ＦｃＲの活性化の関与が、効率的な抗体媒介腫瘍クリアランスの過
程における重要な段階であるという結論を裏付ける。

実施例５
活性化受容体ｈＦｃγＲＩＩＡの関与は、腫瘍クリアランスを媒介するには不十分であ
ったが、ｈＦｃγＲＩＩＩＡのみの関与は、いくつかの腫瘍モデルにおける抗体媒介腫瘍
クリアランスに必要かつ十分である。この研究では、これらの研究結果が、炭水化物を標
的とする抗体にも当てはまるかどうかを判断することを目的とした。ＦｃγＲ－ヒト化腫
瘍を有するマウスにおける、ｈＦｃγＲＩＩＡ（ＧＡ）、ｈＦｃγＲＩＩＩＡ（ＡＬＩＥ
）、またはこれらの双方（ＧＡＡＬＩＥ）のいずれかに対する、増強された親和性を有す
る３つのＦｃ改変体の抗腫瘍活性を比較した（図２４Ａ）。ＧＡおよびＡＬＩＥ ｈＩｇ
Ｇ１のＦｃ改変体の、異なるヒトＦｃＲに対する親和性が報告されている（９，３４，３
５）；前記ＧＡＬＬＩＥ Ｆｃ改変体は、ｈＦｃＲＩＩＢに対する親和性が低下し、ｈＦ
ｃＲＩＩＡおよびｈＦｃＲＩＩＩＡに対してより高い親和性を示し、親ｈＩｇＧ１と比較
して優れたＡＤＣＣ機能を示しながら、ｈＩｇＧ１に匹敵するインビボ半減期を示す（デ
ータは示されていない）。

３つ全てのＦｃ改変体は、野生型の親ヒトＩｇＧ１抗体よりも有意に高い、同等の抗腫
瘍能を示した（図２４Ｂ）。これらの研究結果を確認するために、ヒトＦｃＲを発現する
いくつかの組換えマウス系統におけるＦｃ改変体５Ｂ１－ｈＩｇＧ１－ＧＡＡＬＩＥ（双
方の活性化ＦｃＲに対する増強された親和性を有する）の抗腫瘍活性を比較した。図２４
Ｃは、５Ｂ１－ｈＩｇＧ１－ＧＡＡＬＩＥ改変体が、ＦｃγＲヒト化マウスだけでなく、
ｈＦｃγＲＩＩＡのみのマウスおよびｈＦｃγＲＩＩＩＡのみのマウスにおいても、顕著
であるが同等の抗腫瘍活性を示すことを示している。予測した通り、腫瘍クリアランスは
ＦｃＲヌルマウスでは観察されなかった。ＮＫの枯渇は、このｓＬｅＡを標的とする抗体
の抗腫瘍活性を実質的に阻害せず（データは示していない）、腫瘍細胞の枯渇は主に、マ
クロファージなどのｈＦｃγＲＩＩＩＡおよびｈＦｃＲγＩＩＡを発現するエフェクター
細胞によって媒介されることが示唆された。

前述の好ましい実施形態の例および説明は、特許請求の範囲によって定義される本発明
を限定するものとしてではなく、例示するものとして解釈されるべきである。容易に理解
されるように、特許請求の範囲に記載されている本発明から逸脱することなく、上記に記
載された特徴の多数の変形および組み合わせを利用することができる。そのような変形は
、本発明の範囲からの逸脱とは見なされず、すべてのそのような変形は、以下の特許請求
の範囲内に含まれることが意図されている。本明細書で引用されるすべての参考文献は、
その全体が参照により引用される。

Claims (20)

1. ヒトＩｇＧ１のＦｃポリペプチドのＦｃ改変体を含むポリペプチドであって、前記Ｆｃ
   改変体が、（ｉ）アラニン（Ａ）を２３６位に、ロイシン（Ｌ）を３３０位に、グルタミ
   ン酸（Ｅ）を３３２位に含み、かつ、（ｉｉ）アスパラギン酸（Ｄ）を２３９位に含まず
   、番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従っている、ポリペプチド。
2. 前記Ｆｃ改変体が、ロイシン（Ｌ）を４２８位に、セリン（Ｓ）を４３４位にさらに含
   む、請求項１に記載のポリペプチド。
3. 前記Ｆｃ改変体が、セリン（Ｓ）を２３９位に含む、請求項１または２に記載のポリペ
   プチド。
4. 前記Ｆｃ改変体が配列番号２または配列番号３の配列を含む、請求項１～３のいずれか
   １項に記載のポリペプチド。
5. 請求項１～４のいずれか１項に記載のポリペプチドを含む抗体。
6. 標的分子に対して特異性を有する、請求項５に記載の抗体。
7. 前記標的分子が、サイトカイン、可溶性因子、病原体上に発現する分子、細胞上に発現
   する分子、および癌細胞上に発現する分子からなる群から選択される、請求項６に記載の
   抗体。
8. キメラ抗体、ヒト化抗体、およびヒト抗体からなる群から選択される、請求項１～７の
   いずれか１項に記載の抗体。
9. １つまたはそれ以上の、以下に挙げる特徴：（１）配列番号１の配列を有する抗体と比
   べて、ｈＦｃγＲＩＩＡ、ｈＦｃγＲＩＩＩＡ、ｈＦｃＲｎ、または／およびｈＦｃγＲ
   ＩＩＩＢとのより高い結合親和性、（２）配列番号４の配列を有する抗体と比べてより長
   期の血清半減期、および（３）配列番号１の配列を有する抗体と比べて、同一またはより
   優れた半減期、を有する、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体。
10. 請求項１～９のいずれか１項に記載のポリペプチドまたは抗体をコードする配列を含む
    核酸。
11. 請求項１０に記載の核酸を含む発現ベクター。
12. 請求項１０に記載の核酸を含む宿主細胞。
13. 前記核酸によってコードされるポリペプチドまたは抗体の発現を可能にする条件下で、
    請求項１２に記載の宿主細胞を培地中で培養すること、および、培養された細胞または前
    記細胞の培地から、前記ポリペプチドまたは前記抗体を精製することを含む、ポリペプチ
    ドまたは抗体の製造方法。
14. （ｉ）請求項１～９のいずれか１項に記載のポリペプチドもしくは抗体、または請求項
    １０に記載の核酸、および（ｉｉ）薬学的に許容される担体を含む、医薬製剤。
15. それを必要とする対象に、治療上有効な量の、請求項１～９のいずれか１項に記載のポ
    リペプチドもしくは抗体、または請求項１０に記載の核酸を投与することを含む、炎症性
    疾患の治療方法。
16. それを必要とする対象に、治療上有効な量の、請求項１～９のいずれか１項に記載のポ
    リペプチドもしくは抗体、または請求項１０に記載の核酸を投与することを含む、腫瘍性
    疾患の治療方法。
17. それを必要とする対象に、治療上有効な量の、請求項１～９のいずれか１項に記載のポ
    リペプチドもしくは抗体、または請求項１０に記載の核酸を投与することを含む、感染性
    疾患の治療方法。
18. 炎症性疾患を治療するための医薬の製造における、請求項１～９のいずれか１項に記載
    のポリペプチドもしくは抗体、または請求項１０に記載の核酸の使用。
19. 腫瘍性疾患を治療するための医薬の製造における、請求項１～９のいずれか１項に記載
    のポリペプチドもしくは抗体、または請求項１０に記載の核酸の使用。
20. 感染性疾患を治療するための医薬の製造における、請求項１～９のいずれか１項に記載
    のポリペプチドもしくは抗体、または請求項１０に記載の核酸の使用。