JP2023076572A - キメラ抗原受容体または改変tcrを発現し、選択的に発現されるヌクレオチド配列を含む細胞 - Google Patents
キメラ抗原受容体または改変tcrを発現し、選択的に発現されるヌクレオチド配列を含む細胞 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2023076572A JP2023076572A JP2023057340A JP2023057340A JP2023076572A JP 2023076572 A JP2023076572 A JP 2023076572A JP 2023057340 A JP2023057340 A JP 2023057340A JP 2023057340 A JP2023057340 A JP 2023057340A JP 2023076572 A JP2023076572 A JP 2023076572A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- cell
- car
- nucleic acid
- expressed
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 title abstract description 192
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 title abstract description 19
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 title abstract description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 253
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 158
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 abstract description 67
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 abstract description 57
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 abstract description 44
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 abstract description 38
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 abstract description 33
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 abstract description 10
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 170
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 92
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 84
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 70
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 63
- YGPSJZOEDVAXAB-UHFFFAOYSA-N kynurenine Chemical compound OC(=O)C(N)CC(=O)C1=CC=CC=C1N YGPSJZOEDVAXAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 60
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 56
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 52
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 52
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 52
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 49
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 42
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 42
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 42
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 42
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 42
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 40
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 34
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 32
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 description 31
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 30
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 29
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 28
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 28
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 27
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 27
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 27
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 24
- 102100025278 Coxsackievirus and adenovirus receptor Human genes 0.000 description 22
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 22
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 21
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 20
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 20
- 102000003984 Aryl Hydrocarbon Receptors Human genes 0.000 description 18
- 108090000448 Aryl Hydrocarbon Receptors Proteins 0.000 description 18
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 18
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 17
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 17
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 17
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 17
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 16
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 16
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 15
- 230000006870 function Effects 0.000 description 15
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 14
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 14
- 102000014400 SH2 domains Human genes 0.000 description 14
- 108050003452 SH2 domains Proteins 0.000 description 14
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 14
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 14
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 13
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 12
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 12
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 12
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 12
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 12
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 12
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 12
- 230000004044 response Effects 0.000 description 12
- 101000818543 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase ZAP-70 Proteins 0.000 description 11
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 11
- 102100021125 Tyrosine-protein kinase ZAP-70 Human genes 0.000 description 11
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 11
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 11
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 10
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 10
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 10
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 10
- 102100021657 Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 6 Human genes 0.000 description 10
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 10
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 10
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 9
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 9
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 9
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 9
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 9
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 9
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 9
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 9
- 230000009258 tissue cross reactivity Effects 0.000 description 9
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 9
- 108091007741 Chimeric antigen receptor T cells Proteins 0.000 description 8
- 108010045171 Cyclic AMP Response Element-Binding Protein Proteins 0.000 description 8
- 102000005636 Cyclic AMP Response Element-Binding Protein Human genes 0.000 description 8
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 8
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 8
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 8
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 8
- 102000003675 cytokine receptors Human genes 0.000 description 8
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 description 8
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 8
- 101000617285 Homo sapiens Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 6 Proteins 0.000 description 7
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 7
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 7
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 7
- 102100033019 Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 11 Human genes 0.000 description 7
- 101710116241 Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 11 Proteins 0.000 description 7
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 7
- 238000013461 design Methods 0.000 description 7
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 7
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 7
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 7
- 238000010922 spray-dried dispersion Methods 0.000 description 7
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 7
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 7
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 6
- 108010067225 Cell Adhesion Molecules Proteins 0.000 description 6
- 102000016289 Cell Adhesion Molecules Human genes 0.000 description 6
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 6
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 6
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 6
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical class C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 description 6
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 6
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 6
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 6
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 6
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 6
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 6
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 6
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 6
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 6
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 6
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 6
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 6
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 6
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 6
- 108010031676 Kynureninase Proteins 0.000 description 5
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 5
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 5
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 5
- 210000000662 T-lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 5
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 5
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 5
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 5
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 5
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 5
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 5
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- -1 3-OH-kyneurenine Chemical compound 0.000 description 4
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 4
- 102000009410 Chemokine receptor Human genes 0.000 description 4
- 108050000299 Chemokine receptor Proteins 0.000 description 4
- 101000793115 Homo sapiens Aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator Proteins 0.000 description 4
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 4
- 101000611936 Homo sapiens Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 4
- 102100036091 Kynureninase Human genes 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000002457 bidirectional effect Effects 0.000 description 4
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 230000002463 transducing effect Effects 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- 102000042286 type I cytokine receptor family Human genes 0.000 description 4
- 108091052247 type I cytokine receptor family Proteins 0.000 description 4
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 4
- 102100030907 Aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator Human genes 0.000 description 3
- 102100029822 B- and T-lymphocyte attenuator Human genes 0.000 description 3
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 description 3
- 101150075764 CD4 gene Proteins 0.000 description 3
- 101000690445 Caenorhabditis elegans Aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator homolog Proteins 0.000 description 3
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 3
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102100027581 Forkhead box protein P3 Human genes 0.000 description 3
- 102100039869 Histone H2B type F-S Human genes 0.000 description 3
- 101000834898 Homo sapiens Alpha-synuclein Proteins 0.000 description 3
- 101000864344 Homo sapiens B- and T-lymphocyte attenuator Proteins 0.000 description 3
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 description 3
- 101000861452 Homo sapiens Forkhead box protein P3 Proteins 0.000 description 3
- 101001035372 Homo sapiens Histone H2B type F-S Proteins 0.000 description 3
- 101001043809 Homo sapiens Interleukin-7 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 3
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 3
- 101000652359 Homo sapiens Spermatogenesis-associated protein 2 Proteins 0.000 description 3
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 3
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 3
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 3
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 3
- 102100021592 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 3
- 102100021593 Interleukin-7 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 3
- 108010017736 Leukocyte Immunoglobulin-like Receptor B1 Proteins 0.000 description 3
- 102100025584 Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 1 Human genes 0.000 description 3
- 102000002727 Protein Tyrosine Phosphatase Human genes 0.000 description 3
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 3
- 108010017324 STAT3 Transcription Factor Proteins 0.000 description 3
- 108010029477 STAT5 Transcription Factor Proteins 0.000 description 3
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 3
- 102100024040 Signal transducer and activator of transcription 3 Human genes 0.000 description 3
- 102100024481 Signal transducer and activator of transcription 5A Human genes 0.000 description 3
- 101710128901 Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 6 Proteins 0.000 description 3
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 3
- 108010046882 ZAP-70 Protein-Tyrosine Kinase Proteins 0.000 description 3
- 102000007624 ZAP-70 Protein-Tyrosine Kinase Human genes 0.000 description 3
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 3
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 3
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 108091008042 inhibitory receptors Proteins 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 108020000494 protein-tyrosine phosphatase Proteins 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 3
- YXHLJMWYDTXDHS-IRFLANFNSA-N 7-aminoactinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=C(N)C=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 YXHLJMWYDTXDHS-IRFLANFNSA-N 0.000 description 2
- 108700012813 7-aminoactinomycin D Proteins 0.000 description 2
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 description 2
- 102100022970 Basic leucine zipper transcriptional factor ATF-like Human genes 0.000 description 2
- 102100036842 C-C motif chemokine 19 Human genes 0.000 description 2
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 2
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 2
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 2
- 101100118093 Drosophila melanogaster eEF1alpha2 gene Proteins 0.000 description 2
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 2
- 102000003893 Histone acetyltransferases Human genes 0.000 description 2
- 108090000246 Histone acetyltransferases Proteins 0.000 description 2
- 102000003964 Histone deacetylase Human genes 0.000 description 2
- 108090000353 Histone deacetylase Proteins 0.000 description 2
- 102000006947 Histones Human genes 0.000 description 2
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 description 2
- 101000903742 Homo sapiens Basic leucine zipper transcriptional factor ATF-like Proteins 0.000 description 2
- 101000713106 Homo sapiens C-C motif chemokine 19 Proteins 0.000 description 2
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 description 2
- 101001049181 Homo sapiens Killer cell lectin-like receptor subfamily B member 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000971533 Homo sapiens Killer cell lectin-like receptor subfamily G member 1 Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 2
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 description 2
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 2
- 102100030703 Interleukin-22 Human genes 0.000 description 2
- 102000015617 Janus Kinases Human genes 0.000 description 2
- 108010024121 Janus Kinases Proteins 0.000 description 2
- 108010043610 KIR Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000002698 KIR Receptors Human genes 0.000 description 2
- 102100023678 Killer cell lectin-like receptor subfamily B member 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100021457 Killer cell lectin-like receptor subfamily G member 1 Human genes 0.000 description 2
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 2
- 102100020943 Leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor 1 Human genes 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 102000007607 Non-Receptor Type 11 Protein Tyrosine Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108010032107 Non-Receptor Type 11 Protein Tyrosine Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 102100034404 Nuclear factor of activated T-cells, cytoplasmic 1 Human genes 0.000 description 2
- 101710151542 Nuclear factor of activated T-cells, cytoplasmic 1 Proteins 0.000 description 2
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 description 2
- 102000003993 Phosphatidylinositol 3-kinases Human genes 0.000 description 2
- 108090000430 Phosphatidylinositol 3-kinases Proteins 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical group C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 2
- 230000006154 adenylylation Effects 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000003995 blood forming stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 2
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 230000030609 dephosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006209 dephosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 2
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 108091008039 hormone receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 229940076144 interleukin-10 Drugs 0.000 description 2
- 108010074108 interleukin-21 Proteins 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- HCZHHEIFKROPDY-UHFFFAOYSA-N kynurenic acid Chemical compound C1=CC=C2NC(C(=O)O)=CC(=O)C2=C1 HCZHHEIFKROPDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000002568 pbsc Anatomy 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- SIOXPEMLGUPBBT-UHFFFAOYSA-N picolinic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=N1 SIOXPEMLGUPBBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000014493 regulation of gene expression Effects 0.000 description 2
- 230000000754 repressing effect Effects 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 108010087967 type I signal peptidase Proteins 0.000 description 2
- 102000042287 type II cytokine receptor family Human genes 0.000 description 2
- 108091052254 type II cytokine receptor family Proteins 0.000 description 2
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 2
- 239000002676 xenobiotic agent Substances 0.000 description 2
- WJXSWCUQABXPFS-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxyanthranilic acid Chemical compound NC1=C(O)C=CC=C1C(O)=O WJXSWCUQABXPFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025324 B-cell acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 102100021631 B-cell lymphoma 6 protein Human genes 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102100036301 C-C chemokine receptor type 7 Human genes 0.000 description 1
- 238000011357 CAR T-cell therapy Methods 0.000 description 1
- 108010040471 CC Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 102000001902 CC Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 101150017002 CD44 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 1
- 102000000905 Cadherin Human genes 0.000 description 1
- 108050007957 Cadherin Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008169 Co-Repressor Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010060434 Co-Repressor Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 108010003384 Colony-Stimulating Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000004626 Colony-Stimulating Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 102000001493 Cyclophilins Human genes 0.000 description 1
- 108010068682 Cyclophilins Proteins 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102100030751 Eomesodermin homolog Human genes 0.000 description 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- 108010075944 Erythropoietin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 101150027879 FOXP3 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100021260 Galactosylgalactosylxylosylprotein 3-beta-glucuronosyltransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 108010054017 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100039622 Granulocyte colony-stimulating factor receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 108010092372 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 1
- 102100034458 Hepatitis A virus cellular receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- 101000971234 Homo sapiens B-cell lymphoma 6 protein Proteins 0.000 description 1
- 101000716065 Homo sapiens C-C chemokine receptor type 7 Proteins 0.000 description 1
- 101001064167 Homo sapiens Eomesodermin homolog Proteins 0.000 description 1
- 101000894906 Homo sapiens Galactosylgalactosylxylosylprotein 3-beta-glucuronosyltransferase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 1
- 101001068133 Homo sapiens Hepatitis A virus cellular receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001027081 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL1 Proteins 0.000 description 1
- 101000945331 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL4 Proteins 0.000 description 1
- 101000945337 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL5A Proteins 0.000 description 1
- 101000945335 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL5B Proteins 0.000 description 1
- 101000945351 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 3DL1 Proteins 0.000 description 1
- 101000945493 Homo sapiens Killer cell immunoglobulin-like receptor 3DL3 Proteins 0.000 description 1
- 101001018097 Homo sapiens L-selectin Proteins 0.000 description 1
- 101001138062 Homo sapiens Leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001063392 Homo sapiens Lymphocyte function-associated antigen 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000687344 Homo sapiens PR domain zinc finger protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001136592 Homo sapiens Prostate stem cell antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000863882 Homo sapiens Sialic acid-binding Ig-like lectin 7 Proteins 0.000 description 1
- 101000863883 Homo sapiens Sialic acid-binding Ig-like lectin 9 Proteins 0.000 description 1
- 101001050288 Homo sapiens Transcription factor Jun Proteins 0.000 description 1
- 101000904499 Homo sapiens Transcription regulator protein BACH2 Proteins 0.000 description 1
- 101000795167 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13B Proteins 0.000 description 1
- 101000801234 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Proteins 0.000 description 1
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010066719 Interleukin Receptor Common gamma Subunit Proteins 0.000 description 1
- 102000018682 Interleukin Receptor Common gamma Subunit Human genes 0.000 description 1
- 108090000177 Interleukin-11 Proteins 0.000 description 1
- 102000003815 Interleukin-11 Human genes 0.000 description 1
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 1
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 description 1
- 102000004559 Interleukin-13 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010017511 Interleukin-13 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010017535 Interleukin-15 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000004556 Interleukin-15 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102100030704 Interleukin-21 Human genes 0.000 description 1
- 102000013264 Interleukin-23 Human genes 0.000 description 1
- 108010065637 Interleukin-23 Proteins 0.000 description 1
- 108010066979 Interleukin-27 Proteins 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 102000000646 Interleukin-3 Human genes 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010038486 Interleukin-4 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000010787 Interleukin-4 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 102100039897 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108010038498 Interleukin-7 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000010782 Interleukin-7 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 description 1
- 102000000585 Interleukin-9 Human genes 0.000 description 1
- 108010038414 Interleukin-9 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000010682 Interleukin-9 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102000042838 JAK family Human genes 0.000 description 1
- 230000004163 JAK-STAT signaling pathway Effects 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102100037363 Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL1 Human genes 0.000 description 1
- 102100033633 Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL4 Human genes 0.000 description 1
- 102100033628 Killer cell immunoglobulin-like receptor 2DL5B Human genes 0.000 description 1
- 102100033627 Killer cell immunoglobulin-like receptor 3DL1 Human genes 0.000 description 1
- 102100034834 Killer cell immunoglobulin-like receptor 3DL3 Human genes 0.000 description 1
- YGPSJZOEDVAXAB-QMMMGPOBSA-N L-kynurenine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(=O)C1=CC=CC=C1N YGPSJZOEDVAXAB-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 102100033467 L-selectin Human genes 0.000 description 1
- 101150030213 Lag3 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 102100030984 Lymphocyte function-associated antigen 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100026964 M1-specific T cell receptor beta chain Human genes 0.000 description 1
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 1
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 1
- 241000283923 Marmota monax Species 0.000 description 1
- 102100025169 Max-binding protein MNT Human genes 0.000 description 1
- 108010061593 Member 14 Tumor Necrosis Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005431 Molecular Chaperones Human genes 0.000 description 1
- 108010006519 Molecular Chaperones Proteins 0.000 description 1
- 101000687343 Mus musculus PR domain zinc finger protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100031789 Myeloid-derived growth factor Human genes 0.000 description 1
- 108070000018 Neuropeptide receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000028517 Neuropeptide receptor Human genes 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102100024894 PR domain zinc finger protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 108010069381 Platelet Endothelial Cell Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100024616 Platelet endothelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 description 1
- 108091036407 Polyadenylation Proteins 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Chemical group 0.000 description 1
- 108010002519 Prolactin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100029000 Prolactin receptor Human genes 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 102100036735 Prostate stem cell antigen Human genes 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010071563 Proto-Oncogene Proteins c-fos Proteins 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 230000004570 RNA-binding Effects 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 1
- 108090000184 Selectins Proteins 0.000 description 1
- 102000003800 Selectins Human genes 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 108010079723 Shiga Toxin Proteins 0.000 description 1
- 102100029946 Sialic acid-binding Ig-like lectin 7 Human genes 0.000 description 1
- 102100029965 Sialic acid-binding Ig-like lectin 9 Human genes 0.000 description 1
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical group OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010018242 Transcription Factor AP-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100023132 Transcription factor Jun Human genes 0.000 description 1
- 102100023998 Transcription regulator protein BACH2 Human genes 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100029675 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13B Human genes 0.000 description 1
- 102100028785 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14 Human genes 0.000 description 1
- 102100033728 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Human genes 0.000 description 1
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 description 1
- 108091005906 Type I transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 108091093126 WHP Posttrascriptional Response Element Proteins 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013528 artificial neural network Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000006652 catabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 1
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000010252 chemokine signaling pathway Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 229910000366 copper(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.[Cu+2].[O-]S([O-])(=O)=O JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000010250 cytokine signaling pathway Effects 0.000 description 1
- 210000005220 cytoplasmic tail Anatomy 0.000 description 1
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000006196 deacetylation Effects 0.000 description 1
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000001687 destabilization Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 231100000317 environmental toxin Toxicity 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 1
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 230000003463 hyperproliferative effect Effects 0.000 description 1
- 230000005931 immune cell recruitment Effects 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 230000003832 immune regulation Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 1
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 102000004114 interleukin 20 Human genes 0.000 description 1
- 108090000681 interleukin 20 Proteins 0.000 description 1
- 102000002467 interleukin receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010093036 interleukin receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000004073 interleukin-2 production Effects 0.000 description 1
- 108010074109 interleukin-22 Proteins 0.000 description 1
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 102000005447 kynureninase Human genes 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 108010025001 leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000011469 lymphodepleting chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical compound CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000007498 myristoylation Effects 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229940081066 picolinic acid Drugs 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Chemical group 0.000 description 1
- 230000023603 positive regulation of transcription initiation, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000007859 posttranscriptional regulation of gene expression Effects 0.000 description 1
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007781 pre-processing Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- GJAWHXHKYYXBSV-UHFFFAOYSA-N pyridinedicarboxylic acid Natural products OC(=O)C1=CC=CN=C1C(O)=O GJAWHXHKYYXBSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOAUVZALPPNFOQ-UHFFFAOYSA-N quinaldic acid Chemical compound C1=CC=CC2=NC(C(=O)O)=CC=C21 LOAUVZALPPNFOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 230000009711 regulatory function Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 210000005212 secondary lymphoid organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 108091006024 signal transducing proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034285 signal transducing proteins Human genes 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 description 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000024033 toxin binding Effects 0.000 description 1
- 238000012085 transcriptional profiling Methods 0.000 description 1
- 108091006107 transcriptional repressors Proteins 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000012250 transgenic expression Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 102000027257 transmembrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008578 transmembrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
- FBZONXHGGPHHIY-UHFFFAOYSA-N xanthurenic acid Chemical compound C1=CC=C(O)C2=NC(C(=O)O)=CC(O)=C21 FBZONXHGGPHHIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002034 xenobiotic effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
- A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
- A61K39/464412—CD19 or B4
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70517—CD8
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70521—CD28, CD152
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70532—B7 molecules, e.g. CD80, CD86
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
- A61K2239/48—Blood cells, e.g. leukemia or lymphoma
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
- C12N2310/141—MicroRNAs, miRNAs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/001—Vector systems having a special element relevant for transcription controllable enhancer/promoter combination
- C12N2830/005—Vector systems having a special element relevant for transcription controllable enhancer/promoter combination repressible enhancer/promoter combination, e.g. KRAB
Abstract
【課題】キメラ抗原受容体(CAR)または改変T細胞受容体(TCR)を発現する細胞であって、i)細胞の分化/消耗状態、またはii)細胞の微小環境における環境代謝物の存在に応じて細胞により選択的に発現される目的のヌクレオチド配列(NOI)を含む、細胞を提供すること。【解決手段】一局面において、上記NOIが、CD4+T細胞において選択的に発現される。別の局面において、上記NOIが、CD8+T細胞において選択的に発現される。一局面において、上記NOIが、制御性T細胞において選択的に発現される。【選択図】なし
Description
本発明は、キメラ抗原受容体(CAR)またはT細胞受容体(TCR)を発現する細胞に関する。CARまたはTCRの発現および/または活性は、それが発現される細胞の分化および/もしくは消耗状態ならびに/または細胞の微小環境における1つまたは複数の環境代謝物の存在に関連し得る。
伝統的には、抗原特異的T細胞は、標的抗原に対して天然に特異的な末梢血T細胞の選択的増殖により生成されている。しかし、ほとんどのがん抗原に対して特異的な多数のT細胞を選択し増殖させることは、困難であり、不可能であることが非常に多い。末梢血T細胞のバルクの集団をex vivoでウイルスベクターにより形質導入することによって、キメラ抗原受容体(CAR)のトランスジェニック発現が生じると、任意の表面抗原に対して特異的な多数のT細胞の生成が可能となるため、ベクターの組込みによる遺伝子治療は、この課題への解決策をもたらすものとなる。
キメラ抗原受容体は、モノクローナル抗体(mAb)の特異性をT細胞のエフェクター機能に移植するタンパク質である。この通常の形態は、I型膜貫通ドメインタンパク質の形態であり、抗原を認識するアミノ末端、スペーサー、膜貫通ドメインを有し、これらのすべてが化合物のエンドドメインに接続され、これにより、T細胞の生存および活性化シグナルを伝達する(図2A参照)。
このような分子の最も一般的形態は、標的抗原を認識するモノクローナル抗体に由来する一本鎖可変断片(scFv)の融合物であり、スペーサーおよび膜貫通ドメインを介してシグナル伝達エンドドメインと融合する。このような分子は、その標的のscFvによる認識に応答してT細胞の活性化を生じる。T細胞が、このようなCARを発現すると、これらは、標的抗原を発現する標的細胞を認識して殺傷する。いくつかのCARが腫瘍関連抗原に対して開発されており、このようなCARを発現するT細胞を使用する養子移植アプローチは、現在、様々ながんの処置において臨床試験中である。
CAR T細胞の臨床研究では、CAR T細胞生着、増殖および持続が、臨床活性、特には持続的応答のために必須であることが確立された。例えば、B細胞急性リンパ芽球性白血病のCD19 CAR療法において、CAR T細胞生着の失敗および結果としてのB細胞コンパートメントの復帰は、再発と関連している。いくつかの戦略により、CAR T細胞が生着、増殖および持続する傾向を高めることができる。このような戦略は、CAR T細胞のナイーブまたはセントラルメモリー表現型との比率を上昇させるCAR
T細胞生成プロセスを使用する、調製的リンパ球枯渇化学療法の実施、および共刺激性シグナルを有するCARの使用を含む。このような戦略にもかかわらず、CAR T細胞は、生着できず、結果として無効な治療となることが多い。
T細胞生成プロセスを使用する、調製的リンパ球枯渇化学療法の実施、および共刺激性シグナルを有するCARの使用を含む。このような戦略にもかかわらず、CAR T細胞は、生着できず、結果として無効な治療となることが多い。
最新のCAR T細胞療法は、現在、典型的に、CD4+T細胞、CD8+T細胞ならびにナイーブ、幹細胞メモリー、セントラルメモリーおよびエフェクターメモリーT細胞で構成されるT細胞の混合物からなる。
生理学的には、種々の状態のT細胞は、種々のシグナルに対して異なって応答する。しかし、最新のCAR療法では、CAR型および発現は、発現されるT細胞の分化状態および消耗状態にかかわらず、一定のままである。したがって、T細胞が分化するにつれて、これらは、現在、最適以下のシグナルを受領していることとなる。
その表現型に応じてT細胞に最適なシグナルを送達する1つの方法は、生成の間にT細胞を選別し、種々のベクターにより形質導入することである。例えば、T細胞をCD4およびCD8集団に選別し、形質導入してCD4またはCD8細胞に最適化した種々の共刺激シグナルを有するCARを発現させることができる。このアプローチは、各生成物に必要とされる細胞およびベクターの生成プロセスが倍増するため、高価である。さらに、他のほとんどの適用については、例えば、分化/消耗状態、すなわち表現型は、高度に動的であり、例えば、生成において形質導入するセントラルメモリーT細胞は、このコンパートメントにとどまる場合もあれば、または時間をわたって分化する場合もある。
したがって、生着、増殖および持続を最適化した、CAR発現細胞、および改変TCRを発現するT細胞の生成のための代替アプローチが必要とされている。
CAR-T細胞、特に、固形がんの処置のためのCAR-T細胞のin vivoでの持続が不十分である別の理由は、細胞が、不適な腫瘍微小環境を克服するために苦闘することである。特には、CAR T細胞は、固形がん腫瘍床において生着および増殖できないことがある。
この問題についての実験的証拠が存在し、例えば、PSCA CAR改変T細胞で処置したマウスが、腫瘍増殖の遅延を示した(Hillerdal et al (2014) BMC Cancer 14:30;およびAbate-Daga et al (2014) 25:1003-1012)。細胞は、in vitroでは高い細胞傷害を示したが、in vivoでは、腫瘍増殖は遅延したものの、腫瘍担持マウスは治癒しなかった。
CAR T細胞の持続および活性は、サイトカインの投与により、またはCAR T細胞を改変してサイトカイン、毒素または他の因子を分泌または発現させることにより増強することができる。しかし、このようなアプローチには、制限が存在し、サイトカインの全身投与が毒性であることがあり、また、サイトカインが構成的に生成されると、増殖および形質転換が制御不能となることがある(Nagarkatti et al (1994) PNAS 91:7638-7642;Hassuneh et al (1997) Blood 89:610-620)。他の因子、例えば、転写または生存因子の発現は、CAR T細胞が腫瘍内に存在する場合に発現されることが好ましい。
したがって、T細胞の生着および増殖を促進して、不適な腫瘍微小環境の作用に対抗する、代替CAR T細胞アプローチが必要とされている。
したがって、T細胞の生着および増殖を促進して、不適な腫瘍微小環境の作用に対抗する、代替CAR T細胞アプローチが必要とされている。
Hillerdalら、BMC Cancer(2014)14:30
Nagarkattiら、PNAS(1994)91:7638~7642
Hassunehら、Blood(1997)89:610~620
本発明者らは、例えば、CAR/TCR、CAR成分またはCAR/TCR活性を調節する作用物質の発現を、細胞の転写状態に合わせて調整することにより、CAR発現またはTCR発現細胞の機能を最適化することが可能であることを見出した。1つまたは複数の遺伝子の発現は、細胞の分化または消耗の状態と関連する可能性があり、このことは、CARの構造またはCARの活性が、時間をわたって制御可能であることを意味する。
この技術は、様々に適用することができ、CAR発現細胞をより「ナイーブ」な状態に偏向させて、それらの有効性および生存を患者において向上させることを含む。
例えば、CAR/TCR、CAR成分またはCAR/TCR活性を調節する作用物質の発現を、CAR/TCR発現細胞の微小環境における環境代謝物の存在に合わせて調整することにより、CAR/TCR発現および/またはCAR/TCR細胞活性のタイミングおよび/または位置をin vivoで制御することも可能である。
したがって、第1の態様において、本発明では、キメラ抗原受容体(CAR)または改変T細胞受容体(TCR)を発現する細胞であって、
i)細胞の分化/消耗状態、または
ii)細胞の微小環境における環境代謝物の存在
に応じて選択的に発現される目的のヌクレオチド配列(NOI)を含む、細胞を提供する。
i)細胞の分化/消耗状態、または
ii)細胞の微小環境における環境代謝物の存在
に応じて選択的に発現される目的のヌクレオチド配列(NOI)を含む、細胞を提供する。
本発明の第1の態様の第1の実施形態では、NOIは、細胞の分化および/または消耗状態に応じて選択的に発現される。
NOIは、例えば、CD4+T細胞、CD8+T細胞、制御性T細胞、ナイーブT細胞、セントラルメモリーT細胞、エフェクターメモリーT細胞、エフェクターT細胞、または消耗したT細胞において選択的に発現され得る。
NOIの発現は、選択的に活性なプロモーターの制御下にあり得る。
細胞は、細胞におけるNOIの発現がmiRNAにより制御され得るように、miRNA標的配列を含み得る。
細胞におけるNOIの発現は、選択的に活性なプロモーターおよびmiRNA標的配列の制御下にあり得る。
本発明の第1の態様の第2の実施形態では、NOIは、細胞の微小環境における環境代謝物の存在に応じて選択的に発現される。
環境代謝物は、アリール炭化水素受容体(AHR)を活性化し得る。
環境代謝物は、トリプトファン代謝物であり、例えば、キヌレニンである。
本発明の第1の態様の細胞の第1および第2の両方の実施形態では、NOIは、キメラ抗原受容体(CAR)または改変T細胞受容体をコードし得る。
あるいは、NOIは、CAR成分、例えば、受容体成分または細胞内シグナル伝達成分をコードし得る。
NOIは、CARまたはTCRの活性を調節する作用物質、例えば、シグナル伝達修飾タンパク質、減弱因子(dampener);阻害性CAR、サイトカインシグナル伝達ドメイン、接着分子または転写因子をコードし得る。
NOIは、細胞の活性を調節する作用物質、例えば、サイトカイン、接着分子または転写因子をコードし得る。
NOIは、標的細胞の活性を調節する作用物質をコードし得る。例えば、作用物質は、毒素を含み得る。
NOIは、標的細胞微小環境を調節する作用物質をコードし得る。例えば、作用物質は、ケモカインもしくはサイトカインであってもよいし、またはサイトカインもしくはケモカインにより媒介されるシグナル伝達に影響する作用物質、例えば、ドミナントネガティブケモカイン/サイトカインもしくはケモカイン/サイトカイン受容体、またはケモカイン/サイトカインにより媒介されるシグナル伝達を調節する結合作用物質、例えば、抗体もしくは抗体断片であってもよい。
第2の態様において、本発明では、核酸配列を提供する。
本発明の第2の態様の第1の実施形態では、それが発現される細胞の分化/消耗状態に応じて選択的に活性である目的のヌクレオチド配列(NOI)を含む核酸配列を提供する。
NOIは、それが発現される細胞の分化/消耗状態に応じて選択的に活性なプロモーターの制御下にあり得る。
あるいは、または加えて、NOIは、核酸配列が発現される細胞のある特定の分化/消耗状態において転写物分解を引き起こす特異的miRNA標的配列を含み得る。
本発明の第2の態様の第2の実施形態では、プロモーターの制御下にある、目的のヌクレオチド配列(NOI)を含む核酸配列であって、プロモーターは、それが発現される細胞の微小環境における環境代謝物の存在に応じて選択的に活性である、核酸配列を提供する。
本発明の第3の態様では、本発明の第2の態様による核酸配列を含む核酸配列のキットを提供する。
キットは、
(i)構成的に活性なプロモーターの制御下にある第1の核酸配列、および
(ii)それが発現される細胞の分化/消耗状態、またはそれが発現される細胞の微小環境における環境代謝物の存在
のいずれかに応じて、選択的に活性なプロモーターの制御下にある第2の核酸配列
を含み得る。
キットは、
(i)構成的に活性なプロモーターの制御下にある第1の核酸配列、および
(ii)それが発現される細胞の分化/消耗状態、またはそれが発現される細胞の微小環境における環境代謝物の存在
のいずれかに応じて、選択的に活性なプロモーターの制御下にある第2の核酸配列
を含み得る。
キットは、第1の選択的に活性なプロモーターの制御下にある第1の核酸配列、および第2の選択的に活性なプロモーターの制御下にある第2の核酸配列を含み得、この第1および第2のプロモーターは、核酸配列のキットが発現される細胞の異なる分化/消耗状態において活性である。
キットは、
(i)核酸配列が発現される細胞のある特定の分化/消耗状態において転写物分解を引き起こす、特異的miRNA標的配列を含む第1の核酸配列、および
(ii)特異的miRNA標的配列を欠く第2の核酸配列
を含み得る。
(i)核酸配列が発現される細胞のある特定の分化/消耗状態において転写物分解を引き起こす、特異的miRNA標的配列を含む第1の核酸配列、および
(ii)特異的miRNA標的配列を欠く第2の核酸配列
を含み得る。
キットは、第1のmiRNA標的配列を有する第1の核酸配列、および第2のmiRNA標的配列を有する第2の核酸配列を含み得、この第1および第2のmiRNA標的配列は、核酸配列のキットが発現される細胞の異なる分化/消耗状態において転写物分解を引き起こす。
第4の態様において、本発明では、本発明の第2の態様による核酸配列を含む、核酸構築物を提供する。
核酸構築物は、
(i)構成的に活性なプロモーターの制御下にある第1の核酸配列、および
(ii)それが発現される細胞の分化/消耗状態、またはそれが発現される細胞の微小環境における環境代謝物の存在のいずれかに応じて、選択的に活性なプロモーターの制御下にある第2の核酸配列
を含み得る。
(i)構成的に活性なプロモーターの制御下にある第1の核酸配列、および
(ii)それが発現される細胞の分化/消耗状態、またはそれが発現される細胞の微小環境における環境代謝物の存在のいずれかに応じて、選択的に活性なプロモーターの制御下にある第2の核酸配列
を含み得る。
核酸構築物は、第1の選択的に活性なプロモーターの制御下にある第1の核酸配列、および第2の選択的に活性なプロモーターの制御下にある第2の核酸配列を含み得、この第1および第2のプロモーターは、核酸構築物が発現される細胞の異なる分化/消耗状態において活性である。
核酸構築物は、
(i)核酸構築物が発現される細胞のある特定の分化/消耗状態において転写物分解を引き起こす特異的miRNA標的配列を含む第1の核酸配列、および
(ii)特異的miRNA標的配列を欠く第2の核酸配列
を含み得る。
(i)核酸構築物が発現される細胞のある特定の分化/消耗状態において転写物分解を引き起こす特異的miRNA標的配列を含む第1の核酸配列、および
(ii)特異的miRNA標的配列を欠く第2の核酸配列
を含み得る。
核酸構築物は、第1のmiRNA標的配列を有する第1の核酸配列、および第2のmiRNA標的配列を有する第2の核酸配列を含み得、この第1および第2のmiRNA標的配列は、核酸構築物が発現される細胞の異なる分化/消耗状態において転写物分解を引き起こす。
第1および第2の核酸配列は、構成的に活性な双方向性プロモーターの制御下にあり得る。
核酸構築物がT細胞において発現されると、CARまたはCAR成分またはTCRが構成的に発現されるが、T細胞が消耗すると、阻害性分子が選択的に発現され、この阻害性分子が、CARまたはTCRの活性の低下を引き起こすように、第1の核酸配列は、キメラ抗原受容体(CAR)、CAR成分または改変T細胞受容体(TCR)をコードし得、第2の核酸配列は、阻害性分子をコードし得る。
阻害性分子は、例えば、1つまたは複数のITAM結合ドメインを含むが、キナーゼドメインを欠く、切断型ZAP70を含み得る。
核酸構築物がT細胞において発現されると、第1のCARまたはCAR成分が構成的に発現されるが、細胞がエフェクターメモリーまたはエフェクター状態にあると、第2のCARまたはCAR成分が選択的に発現されるように、第1の核酸配列は、CD28共刺激性ドメインを含むCARまたはCAR成分をコードし得、第2の核酸配列は、OX40または41BB共刺激性ドメインを含むCARまたはCAR成分をコードし得る。
核酸構築物がT細胞において発現されると、CAR、CAR成分またはTCRが構成的に発現されるが、T細胞の微小環境における環境代謝物の存在下でサイトカインが選択的に発現されるように、第1の核酸配列は、キメラ抗原受容体(CAR)、CAR成分または改変T細胞受容体(TCR)をコードし得、第2の核酸配列は、サイトカインをコードし得る。
第5の態様において、本発明では、本発明の第2の態様による核酸配列、本発明の第3の態様による核酸配列のキット、または本発明の第4の態様による核酸構築物を含む、ベクターを提供する。
第6の態様において、本発明では、本発明の第2の態様による核酸配列、本発明の第3の態様による核酸配列のキット、もしくは本発明の第4の態様による核酸構築物、または本発明の第5の態様によるベクターを細胞に導入するステップを含む、本発明の第1の態様による細胞を生成するための方法を提供する。
細胞は、被験体から単離した試料に由来し得る。
第7の態様において、本発明では、本発明の第1の態様による複数の細胞を含む医薬組成物を提供する。
第8の態様において、本発明では、疾患の処置および/または予防における使用のための、本発明の第7の態様による医薬組成物を提供する。
第9の態様において、本発明では、本発明の第7の態様による医薬組成物を被験体に投与するステップを含む、疾患を処置および/または予防するための方法を提供する。
方法は、次のステップ:
(i)細胞を含む試料の単離、
(ii)本発明の第2の態様による核酸配列、本発明の第3の態様による核酸配列のキット、もしくは本発明の第4の態様による核酸構築物、または本発明の第5の態様によるベクターの細胞への形質導入またはトランスフェクション、および
(iii)(ii)の細胞の被験体への投与
を含み得る。
(i)細胞を含む試料の単離、
(ii)本発明の第2の態様による核酸配列、本発明の第3の態様による核酸配列のキット、もしくは本発明の第4の態様による核酸構築物、または本発明の第5の態様によるベクターの細胞への形質導入またはトランスフェクション、および
(iii)(ii)の細胞の被験体への投与
を含み得る。
第10の態様において、本発明では、疾患の処置および/または予防のための医薬の製造における、本発明の第7の態様による医薬組成物の使用を提供する。
疾患は、がんであり得る。
本発明では、細胞の転写状態または細胞の微小環境における環境代謝物の存在に応じて選択的に発現される、目的のヌクレオチド(NOI)を含む細胞を提供する。
NOIは、例えば、細胞の、ある特定の分化または消耗状態において選択的に発現され得る。
細胞は、T細胞であり得る。
T細胞の分化
活性化後、T細胞は、図1に示すように、多種多様なT細胞亜型に分化する。
活性化後、T細胞は、図1に示すように、多種多様なT細胞亜型に分化する。
T細胞分化ならびにメモリーおよびエフェクターT細胞は、病原性因子に対する免疫において重要な役割を果たす。抗原提示細胞が病原性抗原をナイーブT細胞に提示すると、細胞は、活性化し、細胞数を増加させて、感染部位に遊走し病原体を除去するエフェクター細胞に分化する。エフェクター細胞は、短命な細胞であり、一方で、形成されるメモリー細胞のサブセットは、長期生存の可能性を有する。メモリー細胞は、二次リンパ器官(セントラルメモリー細胞、T CM)または直近に感染した組織(エフェクターメモリー細胞、T EM細胞)に位置し得る。二次免疫応答の間の抗原への再曝露において、メモリーT細胞は、急速な増殖を経て、一次免疫応答と比較して、感染の除去において、より有効かつ急速な免疫応答を引き起こす。メモリー細胞は、いくつかの特有の特徴:i)以前の増殖および活性化の存在、(ii)抗原の非存在下での持続、およびiii)抗原への再曝露時の活性の上昇を有する。
別個のT細胞サブセット、または別個のT細胞分化状態は、発現される細胞表面マーカーおよび/またはこれらが生成するエフェクター分子に基づいて同定することができる。以下の表では、それらの表面表現型、転写制御因子、エフェクター分子および免疫応答における機能に関して基づく種々のT細胞サブセットをまとめる。
トランスジェニック転写を特定のT細胞状態と関連付けるために、選択的表面マーカー由来のプロモーターを使用して、トランスジェニック転写を駆動させてもよい。あるいは、その状態に対して選択的な転写因子に応答性の転写エレメントを使用してもよい。
ナイーブT細胞
1.CD4+ナイーブT細胞
2.CD8+ナイーブ細胞
セントラルメモリーT細胞
エフェクターメモリーT細胞
エフェクターT細胞
1.細胞傷害性T細胞(CTL)
2.TH1細胞
3.TH2細胞
4.TH9細胞
5.TH17細胞
6.TH22細胞
7.TFH細胞
8.ナチュラルTReg細胞
9.誘導性TReg細胞
10.TR1細胞
ナイーブT細胞
1.CD4+ナイーブT細胞
1.細胞傷害性T細胞(CTL)
本発明の文脈では、NOIは、
a)ナイーブT細胞、
b)CD4+T細胞、
c)CD8+T細胞、
d)セントラルメモリーT細胞、
e)エフェクターメモリーT細胞、
f)制御性T細胞、または
g)エフェクターT細胞
において選択的に発現され得る。
a)ナイーブT細胞、
b)CD4+T細胞、
c)CD8+T細胞、
d)セントラルメモリーT細胞、
e)エフェクターメモリーT細胞、
f)制御性T細胞、または
g)エフェクターT細胞
において選択的に発現され得る。
NOIは、特定のT細胞サブセットにおいて選択的発現を引き起こす、プロモーターの制御下にあり得る。例えば、NOIは、AP1、CREB、SRE、TCF-LEF、STAT3またはSTAT5に応答性のプロモーターの制御下にあり得る。
T細胞の消耗
T細胞の消耗は、T細胞機能障害の状態であり、多くの慢性感染およびがんにおいて生じる。これは、不十分なエフェクター機能、阻害性受容体の持続的発現、および機能性エフェクターまたはメモリーT細胞のそれと異なる転写状態により定義される。
T細胞の消耗は、T細胞機能障害の状態であり、多くの慢性感染およびがんにおいて生じる。これは、不十分なエフェクター機能、阻害性受容体の持続的発現、および機能性エフェクターまたはメモリーT細胞のそれと異なる転写状態により定義される。
外因性の負の制御経路(免疫制御性サイトカイン等)および細胞内因性の負の制御経路(PD-1等)はともに、消耗において鍵となる役割を有する。消耗したT細胞は、特徴的なT細胞分化状態を示す。
消耗したCD8+T細胞は、慢性ウイルス感染において、サイトカインを生成しない、ウイルス特異的四量体陽性CD8+T細胞として初めて同定された。消耗の間、階層的に機能の喪失が生じ、消耗したCD8+T細胞は、一部の特性を失って、その後、他の特性を失う。典型的には、IL-2生成、高増殖能およびex vivoでの殺傷のような機能は、はじめに失われる。腫瘍壊死因子を生成する能力を含む他の特性は、機能障害の、より中間の段階で失われることが多い。重度の消耗は、大量のインターフェロンγ(IFN-γ)もしくはベータケモカインを生成、または脱顆粒する能力を部分的に、または一部の場合に、完全に欠く、ウイルス特異的細胞を最終的に生じる。消耗の最終段階は、ウイルス特異的T細胞の物理的除去である。ウイルス特異的CD4+T細胞もまた、慢性ウイルス感染においてエフェクター機能を失う。
免疫制御は、T細胞消耗に中心的に関与する。このような負の経路は、細胞表面阻害性受容体(PD-1等)、可溶性因子(IL-10等)および免疫制御性細胞型(制御性T細胞(Treg細胞)および他の細胞等)の3つの主なカテゴリーに分類することができる。
いくつかの特定の転写経路は、T細胞消耗と関連付けられている。例えば、転写抑制因子Blimp-1は、CD8+T細胞の消耗に中心的に関与する。転写プロファイリングでは、消耗したCD8+T細胞において、転写因子NFATc1(NFAT2)のより高い発現を示す。
組込みゲノム方法は、PD-1ライゲーションにより誘導され、マウスおよびヒトにおけるT細胞消耗にも関与する、遺伝子を定義するために使用されている。このような研究では、消耗したT細胞において、PD-1の下流にある一般的転写経路としてBATFを同定した。BATFは、転写因子c-Junとともに二量体を形成して転写因子c-Fosに取って代わり、正準のAP-1媒介性転写を阻害することができる。
本発明の文脈では、NOIは、消耗したT細胞において選択的に発現され得る。これを達成するために、PD1、TIM3およびLag3のような消耗マーカーから入手したプロモーターによりトランスジェニック転写を駆動することができる。
選択的に活性なプロモーター
本明細書において使用する用語「プロモーター」は、プロモーターおよび/またはエンハンサーを意味する。プロモーターは、特定の遺伝子の転写を開始する、DNAの領域である。プロモーターは、そのDNAの同一の鎖上で上流(センス鎖の5’領域方向)にある遺伝子の転写開始部位の近傍に配置する。プロモーターは、通常、約100~1000塩基対の長さである。エンハンサーは、DNAの短い(50~1500bp)領域であり、転写因子により結合して、特定の遺伝子の転写が発生する可能性を高めることができる。エンハンサーは、シス作用性であり、転写開始部位から上流または下流に配置することができる。
本明細書において使用する用語「プロモーター」は、プロモーターおよび/またはエンハンサーを意味する。プロモーターは、特定の遺伝子の転写を開始する、DNAの領域である。プロモーターは、そのDNAの同一の鎖上で上流(センス鎖の5’領域方向)にある遺伝子の転写開始部位の近傍に配置する。プロモーターは、通常、約100~1000塩基対の長さである。エンハンサーは、DNAの短い(50~1500bp)領域であり、転写因子により結合して、特定の遺伝子の転写が発生する可能性を高めることができる。エンハンサーは、シス作用性であり、転写開始部位から上流または下流に配置することができる。
導入遺伝子の発現は、そのT細胞状態において導入遺伝子の発現を生理学的に方向付ける、特異的プロモーターによって、T細胞の特定の分化状態に制限することができる。例えば、CD4プロモーター由来のこの導入遺伝子の発現を駆動することにより、導入遺伝子の発現を、T細胞のCD4+細胞への分化に関連付けることができる。例えば、CD44プロモーター由来の導入遺伝子の発現を駆動することにより、導入遺伝子の発現を、ナイーブT細胞状態に関連付けることができる。例えば、CD122プロモーター由来の導入遺伝子の発現を駆動することにより、導入遺伝子の発現を、メモリーT細胞状態に関連付けることができる。例えば、FOXP3プロモーター等に由来する導入遺伝子の発現を駆動することにより、導入遺伝子の発現を、制御性T細胞状態に関連付けることができる。
CD4+T細胞に特異的な発現は、CD4遺伝子の(転写開始部位に対して)-1076~+20をプロモーターとして使用することにより達成することができる。このプロモーターのDNA配列は、配列番号1として以下に示す。導入遺伝子オープンリーディングフレーム上流のCD4遺伝子のこのセグメントをクローニングすると、CD4遺伝子がT細胞においてオンにされる場合はいつでも導入遺伝子の発現が生じる。CD8+特異的発現は、配列番号2として以下に示す、CD8遺伝子の等価な部分を使用して達成することができる。
制御性T細胞に特異的な発現は、FOXP3特異的プロモーターを使用することにより達成することができる。FOXP3に特異的なプロモーターは、FOXP3遺伝子の(転写開始部位に対して)-511~+176塩基対の領域に位置する。このプロモーターのDNA配列は、配列番号3として以下に示す。
導入遺伝子の発現は、例えば、CD44プロモーター由来の導入遺伝子の発現を駆動することにより、ナイーブT細胞状態に関連付けることができる。CD44に特異的なプロモーターは、CD44遺伝子の転写開始部位から-908~-118のCD44に位置する。このプロモーターのDNA配列は、配列番号4として以下に示す。
ナイーブ/セントラルメモリー細胞の他のマーカーは、CCR7、CD62L、CD27、CD28、CD127を含む。このような遺伝子由来のプロモーターを使用して、ナイーブ/セントラルメモリー特異的発現を生じさせ得る。CD27、CD28およびCD127のDNA配列は、配列番号5、6および7として以下にそれぞれ示す。
最終分化エフェクターT細胞の他のマーカーは、CD57、KLRG1、CD161(KLRB1)、CD58およびCD122を含む。このような遺伝子由来のプロモーターを使用して、エフェクターT細胞特異的発現を生じさせ得る。CD122プロモーターのDNA配列は、配列番号8として以下に示す。
いくつかのデータベースは、プロモーター配列情報を含有する。例えば、EPDnew(Eukaryotic Promoter Database)は、実験により検証された、ヒト(および他の)ゲノムのプロモーターの新たなコレクションである(参照:Dreos, R. et al. 2015. Nucl. Acids Res. 43 (D1):D92-D96)。
記載されていないプロモーターは、当業者により推定することができる。簡潔には、典型的に、問題の遺伝子の転写開始部位上流の、ゲノム配列の解析により推定することができる。公知のモチーフおよび他のプロモーターとの比較を行うことができる。いくつかの公開データベースおよびソフトウェアツールが利用可能であり、このような解析に役立つ。例えば:
- 古い情報であるが、Neural Network Promoter Prediction(Berkeley Drosophila Genome Project, U.S.A.)(参照:M.G. Reese 2001. Comput. Chem. 26: 51-6)
- 脊椎動物Pol IIプロモーターの転写開始部位をDNA配列において予測する、Promoter 2.0 Prediction Server(S. Knudsen, Center for Biological Sequence Analysis, Technical University of Denmark)
- プロモーター配列および転写開始部位を哺乳動物ゲノムにおいてマッピングする、PROMOSER-ヒト、マウスおよびラットプロモーター抽出サービス(Boston University, U.S.A.)(参照:S. Anason et al. 2003. Nucl. Acids. Res. 2003 31: 3554-59)。
- 古い情報であるが、Neural Network Promoter Prediction(Berkeley Drosophila Genome Project, U.S.A.)(参照:M.G. Reese 2001. Comput. Chem. 26: 51-6)
- 脊椎動物Pol IIプロモーターの転写開始部位をDNA配列において予測する、Promoter 2.0 Prediction Server(S. Knudsen, Center for Biological Sequence Analysis, Technical University of Denmark)
- プロモーター配列および転写開始部位を哺乳動物ゲノムにおいてマッピングする、PROMOSER-ヒト、マウスおよびラットプロモーター抽出サービス(Boston University, U.S.A.)(参照:S. Anason et al. 2003. Nucl. Acids. Res. 2003 31: 3554-59)。
miRNA標的ドメインを使用する制御
マイクロRNA(miRNA)は、小型の非コードRNA分子(約22ヌクレオチドを含む)であり、遺伝子発現のRNAサイレンシングおよび転写後制御において機能する。miRNAは、mRNA分子における相補的配列による塩基対形成を介して機能する。結果として、このようなmRNA分子は、次のプロセスのうちの1つまたは複数によりサイレンシングされる:(i)mRNA鎖の2つの断片への切断、(ii)ポリ(A)尾部の短縮によるmRNAの不安定化、およびリボソームによるmRNAのタンパク質へのより効率的ではない翻訳。
マイクロRNA(miRNA)は、小型の非コードRNA分子(約22ヌクレオチドを含む)であり、遺伝子発現のRNAサイレンシングおよび転写後制御において機能する。miRNAは、mRNA分子における相補的配列による塩基対形成を介して機能する。結果として、このようなmRNA分子は、次のプロセスのうちの1つまたは複数によりサイレンシングされる:(i)mRNA鎖の2つの断片への切断、(ii)ポリ(A)尾部の短縮によるmRNAの不安定化、およびリボソームによるmRNAのタンパク質へのより効率的ではない翻訳。
本発明の文脈における、発現を選択的に制御する代替方法は、特定のmiRNA標的配列を転写物の非翻訳領域へ導入することである。このようなmiRNA標的配列は、同族miRNAによる転写物の破壊を方向付ける。miRNA標的配列は、これらの同族miRNAが、導入遺伝子の発現が望ましくない場合に発現されるように選択される。
マイクロRNAは、ほぼ間違いなく、T細胞生物学の最初期および最終段階におけるT細胞に最も重要である。初期胸腺分化の第1段階では、マイクロRNAネットワークに決定的に依存し、一方で、後の段階および末梢性ホメオスタシスでは、完全ではないが、大部分がマイクロRNA非依存性である。T細胞に対する最も著明な作用は、従来型および制御性T細胞のエフェクターおよび制御性機能の活性化におけるものであり、この場合、マイクロRNAが欠乏すると、ほぼ完全に機能が失われる。T細胞分化におけるmiRNAの経時的活性は、Jeker, and Bluestone (2013; Immunol. Rev. 253, 65-81);Dooley et al (2013; Immunol. Rev. 253, 53-64)およびBaumjohann and Ansel (2013; Nat. Rev. Immunol. 13: 666-678)において総説が記載されている。
適切なmiRNA標的配列は、文献、データベースおよび予測ソフトウェアから当業者により選択することができる。
例えば、miRDB(Nathan Wong and Xiaowei Wang (2015) miRDB: an online resource for microRNA target prediction and functional annotations. Nucleic Acids Research. 43(D1):D146-152)である。
さらなる例は、microRNA.org. microRNA target predictions: The microRNA.org resource: targets and expression. Betel D, Wilson M,
Gabow A, Marks DS, Sander C., Nucleic Acids Res. 2008 Jan; 36(Database Issue): D149-53である。
Gabow A, Marks DS, Sander C., Nucleic Acids Res. 2008 Jan; 36(Database Issue): D149-53である。
環境代謝物
第2の実施形態では、本発明の第1の態様は、細胞の微小環境における環境代謝物の存在に応じて細胞により選択的に発現されるNOIを含む細胞に関する。
第2の実施形態では、本発明の第1の態様は、細胞の微小環境における環境代謝物の存在に応じて細胞により選択的に発現されるNOIを含む細胞に関する。
環境代謝物は、腫瘍微小環境において見出される代謝物であり得る。代謝物は、腫瘍により直接的または間接的に生成され得る。
アリール炭化水素受容体
環境毒素に対する細胞応答は、大部分は、アリール炭化水素受容体(AHR)の活性化により媒介される。AHR活性化は、毒素がPAS(Per-Arnt-Sim)ドメインに結合した後に発生する。これにより、構造変化が始まって細胞シャペロンの放出が生じ、これによりARNT転写因子との二量体形成が可能となる。生じるAHR/ARNTヘテロ二量体が特異的DNA配列(XRE-生体異物認識エレメント)に結合すると、細胞傷害に対する応答に必要とされる遺伝子の上方制御が生じる(図6)。
環境毒素に対する細胞応答は、大部分は、アリール炭化水素受容体(AHR)の活性化により媒介される。AHR活性化は、毒素がPAS(Per-Arnt-Sim)ドメインに結合した後に発生する。これにより、構造変化が始まって細胞シャペロンの放出が生じ、これによりARNT転写因子との二量体形成が可能となる。生じるAHR/ARNTヘテロ二量体が特異的DNA配列(XRE-生体異物認識エレメント)に結合すると、細胞傷害に対する応答に必要とされる遺伝子の上方制御が生じる(図6)。
本発明の文脈では、環境代謝物は、アリール炭化水素受容体(AHR)を活性化し得る。
目的のヌクレオチドの発現は、AHR/ARNTヘテロ二量体により上方制御され得る。
NOIを含む核酸配列はまた、1つまたは複数の生体異物認識エレメント(XRE)を含み、これは、AHR/ARNTヘテロ二量体により特異的に認識され得る。
XREコア配列は、以下に配列番号12として示す。この配列は、配列番号13として示すコンセンサス配列に含まれることが多い。
5’-GCGTG-3’(配列番号12)
5’-T/GNGCGTGA/CG/CA-3’(配列番号13)
5’-GCGTG-3’(配列番号12)
5’-T/GNGCGTGA/CG/CA-3’(配列番号13)
本発明のヌクレオチド配列は、配列番号12または13を、NOIとともに含み得る。逆方向(すなわち、アンチセンス鎖)では、XREコア配列は、配列CACGC(配列番号24)を有する。
本発明のヌクレオチド配列は、配列番号24を含み得る。例えば、XREプロモーターは、次の配列のうちの1つを含み得る。
CTGGTAAGCACGCCAATGAA(配列番号25)、または
TGAGTTCTCACGCTAGCAGATTGAGTTCTCACGCTAGCAGATTGAGTTCTCACGCTAGCAGAT(配列番号26)
CTGGTAAGCACGCCAATGAA(配列番号25)、または
TGAGTTCTCACGCTAGCAGATTGAGTTCTCACGCTAGCAGATTGAGTTCTCACGCTAGCAGAT(配列番号26)
キヌレニン経路
腫瘍微小環境は、栄養素が不十分な状況であることに加えて、強力な免疫抑制活性をも持続し、これは、微小環境におけるアデノシンの生成およびトリプトファン代謝物の生成によりある程度維持される。免疫抑制性生成物を生成するトリプトファンの分解経路は、図7に示す。
腫瘍微小環境は、栄養素が不十分な状況であることに加えて、強力な免疫抑制活性をも持続し、これは、微小環境におけるアデノシンの生成およびトリプトファン代謝物の生成によりある程度維持される。免疫抑制性生成物を生成するトリプトファンの分解経路は、図7に示す。
このような代謝物のうちの1つであるキヌレニンは、図6に模式的に示すように、XRE配列を介して、AHRに結合して転写を刺激することにより作用する。
本発明の文脈では、環境代謝物は、アデノシンまたはトリプトファン代謝物であり得る。環境代謝物は、例えば、キヌレニン、キヌレン酸、キナルジン酸、3-OH-キヌレニン(kyneurenine)、キサンツレン酸、3-OH-アントラニル酸、キノリン(quinolic)酸またはピコリン酸であり得る。特に、環境代謝物は、キヌレニンであり得る。
キメラ抗原受容体
本発明は、キメラ抗原受容体(CAR)および選択的に発現されるNOIを含む細胞を提供する。
本発明は、キメラ抗原受容体(CAR)および選択的に発現されるNOIを含む細胞を提供する。
図2に模式的に示す、古典的CARは、キメラのI型膜貫通タンパク質であり、細胞外抗原認識ドメイン(バインダー)を細胞内シグナル伝達ドメイン(エンドドメイン)に接続する。このバインダーは、典型的には、モノクローナル抗体(mAb)に由来する一本鎖可変断片(scFv)であるが、抗体様抗原結合部位を含む他の形式または標的抗原のリガンドをベースとすることができる。スペーサードメインは、バインダーを膜から隔離するため、およびバインダーの適切な方向付けを可能とするために必要であり得る。一般的に使用されるスペーサードメインは、IgG1のFcである。より小型のスペーサー、例えば、抗原に応じた、CD8α由来のストークおよび単なるIgG1ヒンジのみでも十分であり得る。膜貫通ドメインは、細胞膜内にタンパク質を固定し、スペーサーをエンドドメインに接続する。
初期のCARデザインは、FcεR1のγ鎖またはCD3ζのいずれかの細胞内部分に由来するエンドドメインを有した。結果的には、このような第1世代の受容体は、免疫シグナル1を伝達し、これは、T細胞による同族標的細胞の殺傷を引き起こすのに十分であったが、T細胞を十分に活性化して増殖および生存させることはできなかった。この制限を克服するために、複合エンドドメインが構築されており、T細胞共刺激分子の細胞内部分が、CD3ζの細胞内部分と融合すると、第2世代受容体がもたらされ、これは、抗原認識後に活性化および共刺激シグナルを同時に伝達することができる。最も一般的に使用される共刺激性ドメインは、CD28の共刺激性ドメインである。これは、最も強力な共刺激シグナル、すなわち、免疫シグナル2を供給し、これによりT細胞の増殖が引き起こされる。一部の受容体はまた、TNF受容体ファミリーエンドドメイン、例えば、密接に関わるOX40および41BBを含むと記載されており、これらは、生存シグナルを伝達する。さらにより強力な第3世代CARは、活性化、増殖および生存シグナルを伝達可能なエンドドメインを有すると、ここで記載している。
CARをコードする核酸は、例えば、レトロウイルスベクターを使用して、T細胞に移入され得る。この方法では、多数の抗原特異的T細胞を生成して、養子細胞移植することができる。CARが標的抗原に結合すると、これにより、それが発現されるT細胞への活性化シグナルの伝達が生じる。したがって、CARは、T細胞の特異性および細胞傷害を、標的化抗原を発現する細胞に方向付ける。
抗原結合ドメイン
抗原結合ドメインは、抗原を認識する、古典的CARの部分である。
抗原結合ドメインは、抗原を認識する、古典的CARの部分である。
多数の抗原結合ドメインは、当技術分野において公知であり、抗体、抗体模倣体、およびT細胞受容体の抗原結合部位をベースとするものを含む。例えば、抗原結合ドメインは、モノクローナル抗体に由来する一本鎖可変断片(scFv)、標的抗原の天然リガンド、標的に対する十分な親和性を有するペプチド、単一ドメインバインダー、例えば、ラクダ科動物(camelid)、人工バインダー、例えば、Darpin、またはT細胞受容体に由来する一本鎖を含み得る。
抗原結合ドメインは、B細胞膜抗原(BCMA)および膜貫通活性化因子およびカルシウム調節因子およびシクロフィリンリガンド相互作用因子(TACI)に結合する、増殖誘導リガンド(APRIL)を含み得る。APRILをベースとする抗原結合ドメインを含むCARは、国際公開第2015/052538号に記載されている。
膜貫通ドメイン
膜貫通ドメインは、膜を横断する、古典的CARの配列である。これは、疎水性アルファヘリックスを含み得る。膜貫通ドメインは、CD28に由来し、良好な受容体安定性をもたらし得る。
膜貫通ドメインは、膜を横断する、古典的CARの配列である。これは、疎水性アルファヘリックスを含み得る。膜貫通ドメインは、CD28に由来し、良好な受容体安定性をもたらし得る。
シグナルペプチド
CARは、シグナルペプチドを含み得、これにより、それが細胞、例えば、T細胞において発現されると、新生タンパク質が、小胞体、およびその後に、これが発現される細胞表面に方向付けられる。
CARは、シグナルペプチドを含み得、これにより、それが細胞、例えば、T細胞において発現されると、新生タンパク質が、小胞体、およびその後に、これが発現される細胞表面に方向付けられる。
シグナルペプチドのコアは、長いひと続きの疎水性アミノ酸を含み得、これは、単一のアルファヘリックスを形成する傾向を有する。このシグナルペプチドは、短い正荷電のひと続きのアミノ酸から開始し得、トランスロケーションの間にポリペプチドの適切なトポロジーを強制させるのに役立ち得る。シグナルペプチドの末端には、典型的に、シグナルペプチダーゼにより認識および切断されるひと続きのアミノ酸が存在する。シグナルペプチダーゼは、トランスロケーションの間または完了後のいずれかに切断して、遊離のシグナルペプチドおよび成熟タンパク質を生成し得る。次いで、遊離のシグナルペプチドは、特異的プロテアーゼにより消化される。
スペーサードメイン
CARは、抗原結合ドメインを膜貫通ドメインと接続させる、スペーサー配列を含み得る。可撓性のスペーサーは、抗原結合ドメインを種々の方向に方向付けて、結合を促進することを可能とする。
CARは、抗原結合ドメインを膜貫通ドメインと接続させる、スペーサー配列を含み得る。可撓性のスペーサーは、抗原結合ドメインを種々の方向に方向付けて、結合を促進することを可能とする。
スペーサー配列は、例えば、IgG1 Fc領域、IgG1ヒンジまたはヒトCD8ストークもしくはマウスCD8ストークを含み得る。あるいは、スペーサーは、IgG1 Fc領域、IgG1ヒンジまたはCD8ストークと類似の長さおよび/またはドメインスペーシング特性を有する、代替リンカー配列を含み得る。ヒトIgG1スペーサーは、Fc結合モチーフを除去するように変更され得る。
細胞内シグナル伝達ドメイン
細胞内シグナル伝達ドメインは、古典的CARのシグナル伝達部分である。
細胞内シグナル伝達ドメインは、古典的CARのシグナル伝達部分である。
最も一般的に使用されるシグナル伝達ドメイン成分は、CD3ゼータエンドドメインの成分であり、これは、3つのITAMを含む。これは、抗原が結合した後に活性化シグナルをT細胞に伝達する。CD3ゼータは、十分に適格な活性化シグナルをもたらさないことがあり、追加の共刺激シグナル伝達を必要とし得る。例えば、キメラCD28およびOX40は、CD3ゼータとともに使用して、増殖/生存シグナルを伝達することができるか、または3つすべてをともに使用することができる(図2Bに例示)。
CAR成分
本発明の細胞では、NOIは、CAR成分をコードし得る。
本発明の細胞では、NOIは、CAR成分をコードし得る。
例えば、NOIは、CARの部分、例えば、細胞内シグナル伝達ドメインをコードし得る。
CARシグナル伝達系は、2つの部分:抗原結合ドメイン、必要に応じたスペーサードメインおよび膜貫通ドメインを含む、受容体成分、ならびに細胞内シグナル伝達ドメインを含む、細胞内シグナル伝達成分を含むと以前に記載されている。1つまたは複数の共刺激性ドメインは、受容体成分および/または細胞内シグナル伝達成分上に位置し得る。
受容体成分と細胞内シグナル伝達成分との間のヘテロ二量体形成により、機能性CARを生成する。ヘテロ二量体形成は、国際公開第2016/124930号に記載のように、自然に発生し得るか、または国際公開第2015/150771号に記載のように、二量体形成の化学誘導因子(CID)の存在下でのみ発生し得る。第3の代替では、ヘテロ二量体形成を、特定の低分子のような作用物質の存在により妨害し、このため、CARにより媒介されるシグナル伝達は、作用物質の非存在下でのみ発生する。このような系は、国際公開第2016/030691号に記載されている。
本発明の細胞では、このようなCAR系の受容体成分および/または細胞内シグナル伝達成分の発現は、細胞の分化/消耗状態、または細胞の微小環境における環境代謝物の存在に応じて選択的であり得る。言い換えれば、「CAR成分」は、受容体成分または細胞内シグナル伝達成分であり得る。
特定の一実施形態では、細胞は、構成的に活性なプロモーターの制御下で受容体成分をコードするNOIを含み得る。例えば、細胞は、種々の共刺激性ドメインまたは共刺激性ドメインの組合せを有する細胞内シグナル伝達成分を、異なる選択的プロモーター/miRNA標的の制御下でそれぞれコードする、2つまたはそれよりも多い核酸を含み得る。したがって、CAR系における共刺激性ドメインまたは共刺激性ドメインの組合せは、細胞の分化または消耗の状態により変化する。
T細胞受容体
本発明ではまた、改変T細胞受容体(TCR)および選択的に発現されるNOIを含む、細胞を提供する。
本発明ではまた、改変T細胞受容体(TCR)および選択的に発現されるNOIを含む、細胞を提供する。
TCRは、T細胞の表面上に発現される分子であり、抗原の断片を、主要組織適合複合体(MHC)分子に結合するペプチドとして認識することを担う。
TCRは、2つの異なるタンパク質鎖で構成されるヘテロ二量体である。ヒトでは、T細胞の95%において、TCRは、アルファ(α)鎖およびベータ(β)鎖(TRAおよびTRBによりそれぞれコードされる)からなるが、T細胞の5%において、TCRは、ガンマおよびデルタ(γ/δ)鎖(TRGおよびTRDによりそれぞれコードされる)からなる。
TCRが、抗原性ペプチドおよびMHC(ペプチド/MHC)と係合すると、Tリンパ球は、シグナル伝達により活性化される。
抗体により方向付けられる従来の標的抗原とは対照的に、TCRにより認識される抗原は、潜在的細胞内タンパク質のアレイ全体を含むことができ、これは、プロセシングされて細胞表面にペプチド/MHC複合体として送達される。
細胞を改変して、TRAおよびTRB遺伝子、またはTRGおよびTRD遺伝子を、ベクターを使用して細胞に人工的に導入することにより、異種(すなわち、非ネイティブ)TCR分子を発現させることが可能である。例えば、改変TCRの遺伝子は、自家T細胞に再導入し、T細胞養子療法のために患者に移入し戻し得る。
目的のヌクレオチド(NOI)
本発明の細胞は、
i)細胞の分化/消耗状態、または
ii)細胞の微小環境における環境代謝物の存在
に応じて選択的に発現される、目的のヌクレオチド(NOI)を含む。
本発明の細胞は、
i)細胞の分化/消耗状態、または
ii)細胞の微小環境における環境代謝物の存在
に応じて選択的に発現される、目的のヌクレオチド(NOI)を含む。
NOIは、RNAまたはDNAであり得る。
NOIは、上記のように、CAR、CAR成分またはTCRをコードし得る。
NOIは、CARまたはTCRの活性を調節する作用物質をコードし得る。
NOIは、CARまたはTCRを発現する細胞の活性を調節する作用物質をコードし得る。
NOIは、標的細胞の活性を調節する作用物質をコードし得る。
NOIは、標的細胞微小環境を調節する作用物質をコードし得る。
細胞は、
i)細胞の分化/消耗状態、または
ii)細胞の微小環境における環境代謝物の存在
に応じて選択的に発現される、2つまたはそれよりも多いNOIを含み得る。細胞は、例えば、CAR/TCR発現細胞、標的細胞、または標的細胞微小環境に影響する作用物質の組合せを生成し得る。細胞は、例えば、複数のサイトカインもしくは複数のケモカインまたは1つのサイトカインおよび1つのケモカインの組合せを生成し得る。
i)細胞の分化/消耗状態、または
ii)細胞の微小環境における環境代謝物の存在
に応じて選択的に発現される、2つまたはそれよりも多いNOIを含み得る。細胞は、例えば、CAR/TCR発現細胞、標的細胞、または標的細胞微小環境に影響する作用物質の組合せを生成し得る。細胞は、例えば、複数のサイトカインもしくは複数のケモカインまたは1つのサイトカインおよび1つのケモカインの組合せを生成し得る。
CAR/TCR調節作用物質
本発明ではまた、CARまたは改変TCR、およびCARまたはTCRの活性を調節する作用物質を含む細胞を提供する。作用物質は、細胞の転写状態に応じて選択的に発現され得る。
本発明ではまた、CARまたは改変TCR、およびCARまたはTCRの活性を調節する作用物質を含む細胞を提供する。作用物質は、細胞の転写状態に応じて選択的に発現され得る。
CAR/TCR活性を調節する作用物質は、例えば、シグナル伝達修飾タンパク質、「減弱因子」;阻害性CARまたはサイトカインシグナル伝達ドメインであり得る。
シグナル伝達修飾タンパク質
国際公開第2016/193696号では、免疫細胞活性化後にシグナル伝達経路を調節する、様々な融合タンパク質および切断型タンパク質について記載している。
国際公開第2016/193696号では、免疫細胞活性化後にシグナル伝達経路を調節する、様々な融合タンパク質および切断型タンパク質について記載している。
シグナル伝達修飾タンパク質は、例えば、次のうちの1つであり得る:
(i)リン酸化免疫受容体活性化チロシンモチーフ(ITAM)に結合するタンパク質由来のSH2ドメインを含むが、キナーゼドメインを欠く、切断型タンパク質、
(ii)リン酸化免疫受容体抑制性チロシンモチーフ(ITIM)に結合するタンパク質由来のSH2ドメインを含むが、ホスファターゼドメインを欠く、切断型タンパク質、
(iii)(a)リン酸化免疫受容体活性化チロシンモチーフ(ITAM)に結合するタンパク質由来、またはリン酸化免疫受容体抑制性チロシンモチーフ(ITIM)に結合するタンパク質由来のSH2ドメイン、および(ii)異種ドメインを含む、融合タンパク質。
(i)リン酸化免疫受容体活性化チロシンモチーフ(ITAM)に結合するタンパク質由来のSH2ドメインを含むが、キナーゼドメインを欠く、切断型タンパク質、
(ii)リン酸化免疫受容体抑制性チロシンモチーフ(ITIM)に結合するタンパク質由来のSH2ドメインを含むが、ホスファターゼドメインを欠く、切断型タンパク質、
(iii)(a)リン酸化免疫受容体活性化チロシンモチーフ(ITAM)に結合するタンパク質由来、またはリン酸化免疫受容体抑制性チロシンモチーフ(ITIM)に結合するタンパク質由来のSH2ドメイン、および(ii)異種ドメインを含む、融合タンパク質。
シグナル伝達修飾タンパク質は、ZAP70 SH2ドメインを含むが、ZAP70キナーゼドメインを欠く、切断型タンパク質であり得る。
シグナル伝達修飾タンパク質は、PTPN6 SH2を含むが、PTPN6ホスファターゼドメインを欠く、切断型タンパク質であり得る。
シグナル伝達修飾タンパク質は、SHP-2 SH2ドメインを含むが、SHP-2ホスファターゼドメインを欠く、切断型タンパク質であり得る。
シグナル伝達修飾タンパク質は、(i)リン酸化免疫受容体活性化チロシンモチーフ(ITAM)に結合するタンパク質由来のSH2ドメイン、および(ii)ホスファターゼドメインを含む、融合タンパク質であり得る。
融合タンパク質は、例えば、ZAP70 SH2ドメイン、PTPN6またはSHP-2ホスファターゼドメインを含み得る。
シグナル伝達修飾タンパク質は、(i)リン酸化免疫受容体抑制性チロシンモチーフ(ITIM)に結合するタンパク質由来のSH2ドメイン、および(ii)キナーゼドメインを含む、融合タンパク質であり得る。
融合タンパク質は、PTPN6またはSHP-2由来のSH2ドメインを含み得る。
融合タンパク質は、Zap70キナーゼドメインを含み得る。
融合タンパク質は、AKTまたはJAKキナーゼドメインを含み得る。
シグナル伝達修飾タンパク質は、(i)リン酸化免疫受容体活性化チロシンモチーフ(ITAM)に結合するタンパク質由来、またはリン酸化免疫受容体抑制性チロシンモチーフ(ITIM)に結合するタンパク質由来のSH2ドメイン、および(ii)異種シグナル伝達ドメインを含む、融合タンパク質であり得る。
融合タンパク質は、ZAP70、PTPN6またはSHP-2由来のSH2ドメインを含み得る。
異種シグナル伝達ドメインは、通常は、ITAMまたはITIMを含む受容体により活性化されない、シグナル伝達分子由来であり得る。
異種シグナル伝達ドメインは、共刺激性ドメインであり得る。この点に関して、融合タンパク質は、CD28、OX40または41BB共刺激性ドメインを含み得る。
異種シグナル伝達ドメインは、阻害性ドメインであり得る。この点に関して、阻害性ドメインは、CD148またはCD45のエンドドメインであってもよいし、またはそれを含んでいてもよい。あるいは、異種シグナル伝達ドメインは、ICOS、CD27、BTLA、CD30、GITRまたはHVEMのエンドドメインであるか、またはこれを含む。
シグナル伝達修飾タンパク質は、(i)リン酸化免疫受容体活性化チロシンモチーフ(ITAM)に結合するタンパク質由来のSH2ドメイン、および(ii)ITAMを含むドメインを含む、融合タンパク質であり得る。
融合タンパク質は、ZAP70 SH2ドメインを含み得る。
ITAMを含むドメインは、CD3ゼータのエンドドメインであってもよいし、またはそれを含んでいてもよい。
シグナル伝達修飾タンパク質は、(i)リン酸化免疫受容体抑制性チロシンモチーフ(ITIM)に結合するタンパク質由来のSH2ドメイン、および(ii)ITIMを含むドメインを含む、融合タンパク質であり得る。
融合タンパク質は、PTPN6またはSHP-2由来のSH2ドメインを含み得る。
ITIMを含むドメインは、PD1、PDCD1、BTLA4、LILRB1、LAIR1、CTLA4、KIR2DL1、KIR2DL4、KIR2DL5、KIR3DL1またはKIR3DL3由来のエンドドメインであってもよいし、またはそれらを含んでいてもよい。
シグナル伝達修飾タンパク質が、ZAP70 SH2ドメインを含むがZAP70キナーゼドメインを欠く切断型タンパク質を含む場合、切断型タンパク質は、配列番号9に示す配列を含んでいてもよいし、またはそれからなっていてもよい。
ZAP70は、2つのSH2ドメインを、配列のN末端の、配列の残基10~102および163~254に有する。したがって、本発明の切断型タンパク質または融合タンパク質は、配列番号10および11に示す配列の一方または両方を含み得る。
融合タンパク質は、改変体配列が、必要とされる特性を有するSH2ドメイン配列であるという条件で、少なくとも80、85、90、95、98または99%の配列同一性を有する、配列番号9、10または11の改変体を含み得る。言い換えれば、改変体配列は、ZAP70の動員を可能とする、CD3ゼータの細胞質尾部のリン酸化チロシン残基に結合可能であるべきである。
減弱因子
代替の実施形態では、作用物質は、ホスファターゼ「減弱因子」であり、CARまたはTCRエンドドメインの脱リン酸化を引き起こし、ある特定の転写状態における活性化に対する閾値を上昇させ得る。
代替の実施形態では、作用物質は、ホスファターゼ「減弱因子」であり、CARまたはTCRエンドドメインの脱リン酸化を引き起こし、ある特定の転写状態における活性化に対する閾値を上昇させ得る。
減弱因子は、シグナル減衰ドメイン(SDD)を含む膜係留型シグナル減衰成分(SDC)であり得る。
SDDは、CARの細胞内シグナル伝達ドメインを阻害することが可能であり得る。
SDDは、免疫受容体活性化チロシンモチーフ(ITAM)を脱リン酸化することが可能なホスファターゼドメイン、例えば、CD148もしくはCD45のエンドドメインまたはSHP-1もしくはSHP-2のホスファターゼドメインを含み得る。
SDDは、免疫受容体抑制性チロシンモチーフ(ITIM)を含むことがあり、例えば、SDDは、次の阻害性受容体:PD1、BTLA、2B4、CTLA-4、GP49B、Lair-1、Pir-B、PECAM-1、CD22、Siglec7、Siglec9、KLRG1、ILT2、CD94-NKG2AおよびCD5のうちの1つ由来のエンドドメインを含み得る。
SDDは、Srcプロテインキナーゼ、例えば、Lckを阻害し得る。SDDは、CSKのキナーゼドメインを含み得る。
膜係留型SDCは、例えば、膜貫通ドメインまたはミリストイル化配列を含み得る。
阻害性CAR
作用物質は、阻害性CAR、すなわち、阻害性エンドドメインを含むCARであり得る。阻害性エンドドメインは、プロテインチロシンホスファターゼ(PTP)、例えば、SHP-1またはSHP-2由来のPTPドメインを含み得る。
作用物質は、阻害性CAR、すなわち、阻害性エンドドメインを含むCARであり得る。阻害性エンドドメインは、プロテインチロシンホスファターゼ(PTP)、例えば、SHP-1またはSHP-2由来のPTPドメインを含み得る。
あるいは、阻害性エンドドメインは、CD22、LAIR-1、キラー阻害性受容体ファミリー(KIR)、LILRB1、CTLA4、PD-1、BTLA等由来のもののようなエンドドメインを含むITIM(免疫受容体抑制性チロシンモチーフ)を含み得る。リン酸化されると、ITIMは、そのSH2ドメインを介して内因性PTPN6を動員する。ITAMを含むエンドドメインと共局在する場合、脱リン酸化が発生し、活性化しているCARが阻害される。
あるいは、阻害性CARは、免疫受容体活性化チロシンモチーフ(ITAM)を脱リン酸化することが可能なホスファターゼドメイン、例えば、CD148もしくはCD45のエンドドメインまたはSHP-1もしくはSHP-2のホスファターゼドメインを含み得る。
サイトカインシグナル伝達ドメイン
多くの細胞機能は、サイトカイン受容体スーパーファミリーのメンバーにより制御される。このような受容体によるシグナル伝達は、それらのヤヌスキナーゼ(JAK)との会合に依存し、このJAKは、受容体複合体に対して動員されるシグナル伝達タンパク質のチロシンリン酸化にリガンド結合をカップリングさせる。これらの中でも、シグナル伝達性転写因子(STAT)、サイトカイン応答の多様性に寄与する転写因子のファミリーがある。
多くの細胞機能は、サイトカイン受容体スーパーファミリーのメンバーにより制御される。このような受容体によるシグナル伝達は、それらのヤヌスキナーゼ(JAK)との会合に依存し、このJAKは、受容体複合体に対して動員されるシグナル伝達タンパク質のチロシンリン酸化にリガンド結合をカップリングさせる。これらの中でも、シグナル伝達性転写因子(STAT)、サイトカイン応答の多様性に寄与する転写因子のファミリーがある。
サイトカイン受容体が、そのリガンドに結合する場合、次の細胞内シグナル伝達経路:
(i)JAK-STAT経路、
(ii)MAPキナーゼ経路、および
(iii)ホスホイノシチド3キナーゼ(PI3K)経路
のうちの1つまたは複数を開始し得る。
(i)JAK-STAT経路、
(ii)MAPキナーゼ経路、および
(iii)ホスホイノシチド3キナーゼ(PI3K)経路
のうちの1つまたは複数を開始し得る。
サイトカイン受容体は、「サイトカイン型」細胞シグナル伝達を引き起こす、エンドドメインを含む。
本発明の作用物質は、サイトカイン受容体エンドドメインであってもよいし、またはそれを含んでいてもよい。
エンドドメインは、I型サイトカイン受容体に由来し得る。I型サイトカイン受容体は、細胞膜に隣接する細胞外部分に共通のアミノ酸モチーフ(WSXWS)を共有する。
エンドドメインは、II型サイトカイン受容体に由来し得る。II型サイトカイン受容体は、I型およびII型インターフェロンに結合するもの、およびインターロイキン10ファミリーのメンバー(インターロイキン10、インターロイキン20およびインターロイキン22)に結合するものを含む。
I型サイトカイン受容体は、
(i)インターロイキン受容体、例えば、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-9、IL-11、IL-12、IL-13、IL-15、IL-21、IL-23およびIL-27の受容体、
(ii)コロニー刺激因子受容体、例えば、エリスロポエチン、GM-CSFおよびG-CSFの受容体、ならびに
(iii)ホルモン受容体/神経ペプチド受容体、例えば、ホルモン受容体およびプロラクチン受容体
を含む。
(i)インターロイキン受容体、例えば、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-9、IL-11、IL-12、IL-13、IL-15、IL-21、IL-23およびIL-27の受容体、
(ii)コロニー刺激因子受容体、例えば、エリスロポエチン、GM-CSFおよびG-CSFの受容体、ならびに
(iii)ホルモン受容体/神経ペプチド受容体、例えば、ホルモン受容体およびプロラクチン受容体
を含む。
I型サイトカイン受容体ファミリーのメンバーは、種々の鎖を含み、このうち、リガンド/サイトカイン相互作用に関与するものもあれば、シグナル伝達に関与するものもある。例えば、IL-2受容体は、α鎖、β鎖およびγ鎖を含む。
IL-2受容体共通ガンマ鎖(CD132としても公知)は、IL-2受容体、IL-4受容体、IL-7受容体、IL-9受容体、IL-13受容体およびIL-15受容体の間で共有される。
CAR/TCR発現細胞を調節する作用物質
NOIは、CARまたはTCRを発現する細胞の活性を調節する作用物質をコードし得る。
NOIは、CARまたはTCRを発現する細胞の活性を調節する作用物質をコードし得る。
例えば、作用物質は、サイトカインもしくはケモカイン、接着分子、または転写因子であり得る。
サイトカイン/ケモカイン
作用物質は、サイトカインまたはケモカインであり得る。例えば、IL12、flexiIL12、GM-CSF、IL7、IL15、IL21、IL2およびCCL19から選択される。特に、作用物質は、IL-12であり得る。
作用物質は、サイトカインまたはケモカインであり得る。例えば、IL12、flexiIL12、GM-CSF、IL7、IL15、IL21、IL2およびCCL19から選択される。特に、作用物質は、IL-12であり得る。
インターロイキン12(IL-12)は、がんに対する免疫応答を再び方向付ける(redirecting)腫瘍微小環境を調節する特定の目的のための、強力な免疫調節性サイトカインである。IL-12は、全身毒性であり、このため、IL-12を局所的に生成するための方法は、大変興味深い対象である。本発明の方法では、キヌレニンのような環境代謝物の存在下で免疫調節性サイトカインを生成し得る機構を提供する。キヌレニンのような代謝物の存在下でのIL-12の選択的生成は、腫瘍微小環境内にそれが存在する場合にのみ、CARまたはTCRを発現する細胞によるIL-12の局所的生成を可能とする。
接着分子
細胞接着分子(CAM)は、細胞接着において他の細胞または細胞外基質(ECM)との結合に関与する細胞表面上に位置するタンパク質である。
細胞接着分子(CAM)は、細胞接着において他の細胞または細胞外基質(ECM)との結合に関与する細胞表面上に位置するタンパク質である。
このようなタンパク質は、典型的に膜貫通受容体であり、3つのドメイン:細胞骨格と相互作用する細胞内ドメイン、膜貫通ドメイン、および同類の他のCAM(同種親和性結合)または他のCAMもしくは細胞外基質(ヘテロ親和性結合)のいずれかと相互作用する細胞外ドメインで構成される。
ほとんどのCAMは、4つのタンパク質ファミリー:Ig(免疫グロブリン)スーパーファミリー(IgSF CAM)、インテグリン、カドヘリン、およびセレクチンに属する。
本発明の作用物質は、CARまたはTCRを発現する細胞の活性を調節する接着分子であってもよいし、またはそれを含んでいてもよい。
転写因子
本発明の作用物質は、CARまたはTCRを発現する細胞の活性を調節する転写因子であってもよいし、またはそれを含んでいてもよい。
本発明の作用物質は、CARまたはTCRを発現する細胞の活性を調節する転写因子であってもよいし、またはそれを含んでいてもよい。
転写因子は、特定のDNA配列に結合することにより、DNAからメッセンジャーRNAへの遺伝情報の転写速度を制御し、この配列を含むか、または隣接する遺伝子の発現を調節するタンパク質である。
転写因子は、RNAポリメラーゼの動員を(活性化因子として)促進または(抑制因子として)遮断することにより作用する。
転写因子は、少なくとも1つのDNA結合ドメイン(DBD)を含み、これは、DNAのエンハンサーまたはプロモーター領域のいずれかに結合する。転写因子に応じて、隣接する遺伝子の転写は、上方または下方制御される。転写因子はまた、トランス活性化ドメイン(TAD)を含み、これは、他のタンパク質、例えば、転写共制御因子の結合部位を有する。
転写因子は、RNAポリメラーゼのDNAへの結合の安定化もしくは遮断、またはヒストンタンパク質のアセチル化もしくは脱アセチル化の触媒を含む遺伝子発現の制御のための様々な機構を使用する。転写因子は、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ(HAT)活性を有し得、これは、ヒストンタンパク質をアセチル化して、DNAのヒストンとの会合を弱め、DNAを転写に到達し易くさせ、これにより、転写を上方制御する。あるいは、転写因子は、ヒストンデアセチラーゼ(HDAC)活性を有し得、これは、ヒストンタンパク質を脱アセチル化して、DNAのヒストンとの会合を強化し、DNAを転写に到達し難くさせ、これにより、転写を下方制御する。それらが機能し得る別の機構は、共活性化因子または共抑制因子タンパク質を転写因子DNA複合体に動員することによる。
転写は、構成的に活性であってもよいし、または条件的に活性であってもよく、すなわち、活性化を必要としてもよい。
転写因子は、天然に存在するものでもよいし、または人工であってもよい。
転写因子は、ナイーブ、セントラルメモリーおよび/または幹細胞メモリーT細胞のCAR-T細胞組成物における比率を上昇させ得る。
転写因子は、例えば、セントラルメモリー抑制転写因子、例えば、BCL6またはBACH2であり得る。セントラルメモリー抑制因子は、T細胞のエフェクターメモリー細胞への分化を阻害し、これにより、これらは低分化T細胞亜型、例えば、ナイーブおよび幹細胞メモリーT細胞のうちの1つにとどまる。
あるいは、この転写因子は、エフェクターメモリー抑制転写因子、例えば、BLIMP-1であり得る。
標的細胞調節作用物質
NOIは、標的細胞、例えば、腫瘍細胞の活性を調節する作用物質をコードし得る。
NOIは、標的細胞、例えば、腫瘍細胞の活性を調節する作用物質をコードし得る。
例えば、作用物質は、毒素であり得る。作用物質は、腫瘍細胞に対して毒性である毒素であり得る。例えば、作用物質は、ジフテリア毒素、pseudomonas毒素またはshigella毒素であり得る。
標的細胞微小環境調節作用物質
NOIは、標的細胞、例えば、腫瘍細胞の環境を調節する作用物質をコードし得る。
NOIは、標的細胞、例えば、腫瘍細胞の環境を調節する作用物質をコードし得る。
例えば、作用物質は、IL-7もしくはIL-12のようなサイトカインまたはCCL19のようなケモカインであり得る。あるいは、作用物質は、サイトカインまたはケモカインの発現または活性に影響し得る。例えば、作用物質は、サイトカインまたはケモカインのドミナントネガティブバージョンであり得る。ドミナントネガティブバージョンは、例えば、サイトカイン/ケモカインの変異または切断バージョンであり得、これは、受容体に結合して野生型サイトカイン/ケモカインと競合するが、サイトカイン/ケモカインシグナル伝達を引き起こさない。
例えば、作用物質は、サイトカイン受容体またはケモカイン受容体のドミナントネガティブバージョンであり得る。ドミナントネガティブバージョンは、例えば、サイトカイン/ケモカイン受容体の変異または切断バージョンであり得、これは、サイトカインに結合して、野生型サイトカイン/ケモカイン受容体へのその結合を遮断する。
あるいは、作用物質は、サイトカインまたはケモカインのシグナル伝達経路を遮断するか、他の方法で調節する、抗体または抗体断片であり得る。
細胞機能を最適化するための選択的発現の使用
本発明の核酸配列または構築物は、例えば、ナイーブ/未分化状態に細胞を維持して、最終分化を低減させるか、または消耗を低減させることにより、細胞機能を最適化するようにデザインし得る。1つまたは複数の遺伝子の発現は、特定のT細胞型、例えば、CD4+、CD8+または制御性T細胞に合わせて調整し得る。
本発明の核酸配列または構築物は、例えば、ナイーブ/未分化状態に細胞を維持して、最終分化を低減させるか、または消耗を低減させることにより、細胞機能を最適化するようにデザインし得る。1つまたは複数の遺伝子の発現は、特定のT細胞型、例えば、CD4+、CD8+または制御性T細胞に合わせて調整し得る。
例えば、細胞は、CARまたはCAR成分を構成的に発現するが、阻害性分子、例えば、切断型ZAP70、減弱因子または阻害性CARを選択的に発現する、1つの核酸配列を含み得る。T細胞が消耗した場合にのみ阻害性分子が発現されると、これにより、T細胞活性が減衰し、さらなる消耗を防ぐ。
本発明を使用して、CARの共刺激性ドメインを特定の分化状態に合わせて調整することもできる。例えば、CD28共刺激性ドメインを含むCARまたはCAR成分は、構成的に発現し得るが、OX40または41BB共刺激性ドメインを含むCARまたはCAR成分は、細胞がエフェクターメモリーに分化する場合にのみ発現し得る。このように、集団動態は、都合の良いセントラルメモリー/ナイーブT細胞に偏向させるが、分化の際には、急速に増殖させることが好ましい。
核酸配列
本発明では、上記のNOIを含む核酸配列を提供する。
本発明では、上記のNOIを含む核酸配列を提供する。
NOIは、細胞の分化/消耗の状態に応じて選択的に活性なプロモーターの制御下にあり得る。
核酸は、細胞の、ある特定の分化/消耗状態において転写物分解を引き起こす、特異的miRNA標的配列を含み得る。miRNA標的配列は、例えば、5’非翻訳領域に存在し得る。
核酸配列は、上記のように、選択的に活性なプロモーターと1つまたは複数のmiRNA標的配列の両方を含み得る。
NOIは、それが発現される細胞の微小環境における環境代謝物の存在に応じて選択的に活性なプロモーターの制御下にあり得る。
本明細書において使用する場合、用語「ポリヌクレオチド」、「ヌクレオチド」および「核酸」は、相互に同義であることが意図される。
多種多様なポリヌクレオチドおよび核酸が、遺伝子コードの縮重の結果として同一のポリペプチドをコードすることが可能であることが当業者により理解される。加えて、当業者が、常用技術を使用して、本明細書に記載のポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド配列に影響しないヌクレオチドの置換を行って、ポリペプチドが発現すべき特定の任意の宿主生物のコドン使用を反映させ得ることが理解されるべきである。
本発明による核酸は、DNAまたはRNAを含み得る。これらは、一本鎖または二本鎖であり得る。これらはまた、その中に合成または修飾ヌクレオチドを含む、ポリヌクレオチドであり得る。オリゴヌクレオチドへの多種多様な修飾は、当技術分野において公知である。このような修飾は、メチルホスホネートおよびホスホロチオエート骨格、分子の3’および/または5’末端におけるアクリジンまたはポリリジン鎖の付加を含む。本明細書に記載する使用の目的のために、ポリヌクレオチドを、当技術分野において利用可能な任意の方法により修飾し得ることが理解されるべきである。このような修飾を行って、目的のポリヌクレオチドのin vivoでの活性または寿命を増強し得る。
ヌクレオチド配列に関する用語「改変体」、「相同体」または「誘導体」は、1つ(または複数)の核酸の、配列から、または配列への任意の置換、変異、修飾、交換、欠失または付加を含む。
核酸配列のキット
本発明ではまた、その少なくとも1つが上記のものである、2つまたはそれよりも多い核酸配列を含むキットを提供する。
本発明ではまた、その少なくとも1つが上記のものである、2つまたはそれよりも多い核酸配列を含むキットを提供する。
キットは、構成的に活性なプロモーターの制御下にある1つの核酸配列、および選択的に活性なプロモーターの制御下にある1つの核酸配列を含み得る。
キットは、選択的に活性な異なるプロモーターの制御下にある2つの核酸配列を含み得る。
キットは、2つの核酸配列を含み得、その1つは特異的miRNA標的配列を含み、その1つは含まない。
キットは、異なるmiRNA標的配列を含む2つの核酸配列を含み得る。
一方または両方の核酸配列は、選択的に活性なプロモーターとmiRNA標的配列の組合せを含み得る。
核酸構築物
本発明ではまた、そのうちの少なくとも1つが上記のものである、2つまたはそれよりも多い核酸配列を含む、カセットまたは核酸構築物を提供する。
本発明ではまた、そのうちの少なくとも1つが上記のものである、2つまたはそれよりも多い核酸配列を含む、カセットまたは核酸構築物を提供する。
核酸構築物は、構成的に活性なプロモーターの制御下にある1つの核酸配列、および選択的に活性なプロモーターの制御下にある1つの核酸配列を含み得る。
核酸構築物は、選択的に活性な異なるプロモーターの制御下にある2つの核酸配列を含み得る。
核酸構築物は、2つの核酸配列を含み得、その1つは特異的miRNA標的配列を含み、その1つは含まない。
核酸構築物は、異なるmiRNA標的配列を含む2つの核酸配列を含み得る。
一方または両方の核酸配列は、選択的に活性なプロモーターとmiRNA標的配列の組合せを含み得る。
発現カセットは、分割転写系を組み込むように改変することができる。例えば、ベクターにより、2つの別々の転写物を発現させることができる。図5(b)に示す配置では、5’の選択的に活性なプロモーターが、長い転写物の転写を駆動し、ここで第1のオープンリーディングフレームは、選択的に発現される第1のタンパク質をコードする。これより下流では、第1のプロモーターと同一方向の第2の構成的に活性なプロモーターが、より短い転写物の転写を駆動し、第2のオープンリーディングフレームは、構成的に発現される第2のタンパク質をコードする。両方の転写物は、同一のポリAアデニル化シグナルを共有する。
あるいは、2つの別々のプロモーターは、2つの独立した転写物の発現を駆動することができる。転写物は、図5(c)に示すように、ヘッドトゥーヘッドに方向付けられ得、一方の転写物はセンス鎖から読み取られ、他方の転写物はアンチセンス鎖から読み取られる。あるいは、図5(d)に示すように、構成的に活性な双方向性プロモーターを使用し得、2つの転写物の転写を逆方向に生じる。各転写物は、別々のmiRNA標的配列により制御される。
T細胞は、プロモーターもしくはmiRNA標的配列、または両方によって制御される発現が独立したカセットと組み合わせて改変することができる。
より好都合には、T細胞は、種々の導入遺伝子の示差的発現を可能とする、単一のカセットを用いて改変することができる。例えば、レトロウイルスベクターカセットは、2つの転写物を転写することができ、その1つは構成的に発現し、その1つは条件的に発現される。
特異的プロモーターまたはmiRNA標的ドメインは、場合により、不十分な選択的発現を生じ得る。当業者は、発現カセットの複雑性を上昇させて、発現の選択性を高めることができる。例えば、特異的プロモーターおよび特異的miRNA標的化ドメインを組み合わせることができる。あるいは、種々の転写単位間のフィードフォワードおよびフィードバックループを利用して、発現の選択性を厳密にすることができる。
単純な転写スイッチは、良好な抑制または活性化をもたらす。しかし、これらは、目的の遺伝子を完全にオフまたはオンにすることを妨げる、漏出性を示すことが多い。一部の場合では、この漏出性は、必要とされるプロファイルに許容されるが、一部の適用では、より厳密なスイッチが必要とされる。転写スイッチは、誘導型発現(選択的プロモーター)をshRNAとカップリングさせ、これが、誘導性転写物に作用する構成的に活性な抑制因子に対抗して作用するように改変することができる。このような系は、誘導型発現が、完全にオフ/オンされるように改変することができ、正確な転写活性レベルで切り換えるように調整することができる(Deans et al (2007) Cell 130:363-372)。
ベクター/ベクターのキット
本発明ではまた、本発明の1つまたは複数の核酸配列または核酸構築物を含む、ベクターまたはベクターのキットを提供する。このようなベクターを使用して核酸配列または構築物を宿主細胞に導入し得、これにより、この宿主細胞がNOIを発現する。
本発明ではまた、本発明の1つまたは複数の核酸配列または核酸構築物を含む、ベクターまたはベクターのキットを提供する。このようなベクターを使用して核酸配列または構築物を宿主細胞に導入し得、これにより、この宿主細胞がNOIを発現する。
ベクターは、例えば、プラスミドまたはウイルスベクター、例えば、レトロウイルスベクターもしくはレンチウイルスベクター、またはトランスポゾンをベースとしたベクターまたは合成mRNAであり得る。
ベクターは、細胞にトランスフェクトまたは形質導入することが可能であり得る。
細胞
本発明の細胞は、免疫エフェクター細胞、例えば、T細胞またはナチュラルキラー(NK)細胞であり得る。
本発明の細胞は、免疫エフェクター細胞、例えば、T細胞またはナチュラルキラー(NK)細胞であり得る。
TまたはNK細胞は、患者自身の末梢血(第1者)、またはドナー末梢血由来の造血幹細胞移植片の設定において(第2者)、または無関係なドナー由来の末梢血(第3者)に由来し得る。TまたはNK細胞は、活性化および/または増殖した後に、例えば、抗CD3モノクローナル抗体による処置により、本発明の第1の態様によるCAR系を生じる分子をコードする核酸を形質導入し得る。
あるいは、TまたはNK細胞は、誘導性前駆細胞または胚性前駆細胞のT細胞へのex
vivoでの分化により誘導し得る。あるいは、その溶解性機能を維持する不死化T細胞株を使用し得る。
vivoでの分化により誘導し得る。あるいは、その溶解性機能を維持する不死化T細胞株を使用し得る。
細胞は、造血幹細胞(HSC)であり得る。HSCは、薬理学的用量のサイトカイン、例えば、G-CSF[末梢血幹細胞(PBSC)]の投与による動員後の末梢血の白血球フェレーシスにより、適切に適合するドナーの骨髄から、または出産後の胎盤から採取した臍帯血(UCB)から、移植のために入手することができる。骨髄、PBSCまたはUCBは、処理せずに移植し得るか、またはHSCは、モノクローナル抗体によるCD34表面抗原に対する免疫選択により濃縮され得る。
細胞を生成するための方法
CARまたはTCR発現細胞は、ウイルスベクターによる形質導入、DNAまたはRNAによるトランスフェクションを含む多くの方法のうちの1つによって、CARまたはTCRをコードするDNAまたはRNAを導入することにより、生成し得る。
CARまたはTCR発現細胞は、ウイルスベクターによる形質導入、DNAまたはRNAによるトランスフェクションを含む多くの方法のうちの1つによって、CARまたはTCRをコードするDNAまたはRNAを導入することにより、生成し得る。
本発明の細胞は、
(i)被験体または上に列挙した他の供給源のうちの1つからの、細胞を含む試料の単離、および
(ii)in vitroまたはex vivoでの上に定義する1つまたは複数の核酸配列または核酸構築物の細胞への形質導入またはトランスフェクション
により生成し得る。
(i)被験体または上に列挙した他の供給源のうちの1つからの、細胞を含む試料の単離、および
(ii)in vitroまたはex vivoでの上に定義する1つまたは複数の核酸配列または核酸構築物の細胞への形質導入またはトランスフェクション
により生成し得る。
次いで、細胞は、例えば、抗原結合ポリペプチドの抗原結合ドメインの発現に基づいて選択されることにより精製され得る。
医薬組成物
本発明はまた、本発明の複数の細胞を含む医薬組成物に関する。医薬組成物は、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤をさらに含み得る。医薬組成物は、必要に応じて、1つまたは複数のさらなる薬学的に活性なポリペプチドおよび/または化合物を含み得る。このような製剤は、例えば、静脈内注入に適する形態であり得る。
本発明はまた、本発明の複数の細胞を含む医薬組成物に関する。医薬組成物は、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤をさらに含み得る。医薬組成物は、必要に応じて、1つまたは複数のさらなる薬学的に活性なポリペプチドおよび/または化合物を含み得る。このような製剤は、例えば、静脈内注入に適する形態であり得る。
処置の方法
本発明では、本発明の細胞を(例えば、上記の医薬組成物により)被験体に投与するステップを含む、疾患を処置および/または予防するための方法を提供する。
本発明では、本発明の細胞を(例えば、上記の医薬組成物により)被験体に投与するステップを含む、疾患を処置および/または予防するための方法を提供する。
疾患を処置するための方法は、本発明の細胞の治療的使用に関する。この点に関して、細胞は、疾患または状態が存在している被験体に投与して、疾患と関連する少なくとも1つの症状を軽減、低減もしくは改善し、および/または疾患の進行を減速、低減もしくは遮断し得る。
疾患を予防するための方法は、本発明の細胞の予防的使用に関する。この点に関して、細胞は、疾患にまだ罹患していない、および/または疾患のいかなる症状も示していない被験体に投与して、疾患の原因を予防もしくは減損し、または疾患と関連する少なくとも1つの症状の発症を低減または予防し得る。被験体は、疾患の素因を有するか、または疾患の発症リスクがあると考えられ得る。
方法は、
(i)細胞を含む試料の単離、
(ii)本発明により提供する核酸配列またはベクターの、このような細胞への形質導入またはトランスフェクション、および
(iii)(ii)の細胞の被験体への投与
のステップを含み得る。
(i)細胞を含む試料の単離、
(ii)本発明により提供する核酸配列またはベクターの、このような細胞への形質導入またはトランスフェクション、および
(iii)(ii)の細胞の被験体への投与
のステップを含み得る。
本発明では、疾患の処置および/または予防における使用のための本発明の細胞を提供する。
本発明はまた、疾患の処置および/または予防のための医薬の製造における、本発明の細胞の使用に関する。
本発明の方法により処置および/または予防すべき疾患は、感染、例えば、ウイルス感染であり得る。
本発明の方法はまた、例えば、自己免疫疾患、アレルギーおよび移植片対宿主拒絶における、病原性免疫応答の制御のためであり得る。
方法は、癌性疾患、例えば、膀胱がん、乳がん、結腸がん、子宮内膜がん、腎がん(腎細胞)、白血病、肺がん、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵がん、前立腺がん、および甲状腺がんの処置のためであり得る。
本発明のCAR細胞は、標的細胞、例えば、がん細胞を殺傷することが可能であり得る。標的細胞は、TAAの発現、例えば、上記の表1に提示するTAAの発現により認識可能であり得る。
ここで本発明を実施例によりさらに説明するが、これは、本発明の実行において当業者の役に立つようになっているが、本発明の範囲を限定することは決して意図されない。
(実施例1 種々のT細胞サブセットにおける様々なプロモーターの制御下でのレポーター遺伝子発現の調査)
AP1/SRE/STAT3/STAT5応答性プロモーターをレポーター遺伝子eGFPのコード配列の上流にクローニングした、自己不活型レトロウイルスベクターを構築した。この第1のオープンリーディングフレームの後には、PGKプロモーターおよびRQR8細胞表面マーカーをコードする第2のコード配列を配置する。正常ドナー由来の初代ヒトT細胞に、レトロウイルスベクターを形質導入し、3μg/mLのPHAおよび50U/mLのIL-2で72時間刺激するか、または刺激せずに放置した。細胞のメモリー表現型について、フローサイトメトリーにより解析した。結果を図9に示す。種々のメモリーコンパートメント(ナイーブ、セントラルメモリー、エフェクターメモリーおよびエフェクター)は、PHAおよびIL-2による刺激後に形質導入した種々のT細胞間で異ならない。
AP1/SRE/STAT3/STAT5応答性プロモーターをレポーター遺伝子eGFPのコード配列の上流にクローニングした、自己不活型レトロウイルスベクターを構築した。この第1のオープンリーディングフレームの後には、PGKプロモーターおよびRQR8細胞表面マーカーをコードする第2のコード配列を配置する。正常ドナー由来の初代ヒトT細胞に、レトロウイルスベクターを形質導入し、3μg/mLのPHAおよび50U/mLのIL-2で72時間刺激するか、または刺激せずに放置した。細胞のメモリー表現型について、フローサイトメトリーにより解析した。結果を図9に示す。種々のメモリーコンパートメント(ナイーブ、セントラルメモリー、エフェクターメモリーおよびエフェクター)は、PHAおよびIL-2による刺激後に形質導入した種々のT細胞間で異ならない。
種々のメモリーサブセットのeGFP発現レベルをまた解析した。結果を図10に示す。種々の応答エレメントが、メモリーサブセットに応じて種々のパターンのeGFPの上方制御を誘導したことが見出され、AP1およびSTAT3応答性プロモーターは、主に、エフェクターメモリーコンパートメントにおいてeGFP発現を誘導したが、SREおよびSTAT5応答性プロモーターは、ナイーブおよびエフェクターメモリーサブセットの両方においてeGFPの上方制御を示した。
(実施例2 種々のT細胞サブセットにおけるCREB応答性プロモーターの制御下でのレポーター遺伝子発現の調査)
CREB応答性プロモーターをレポーター遺伝子eGFPのコード配列の上流にクローニングした、自己不活型レトロウイルスベクターを構築した。この第1のオープンリーディングフレームの後には、PGKプロモーターおよびRQR8細胞表面マーカーをコードする第2のコード配列を配置する。正常ドナー由来の初代ヒトT細胞に、レトロウイルスベクターを形質導入し、PHAで24時間刺激するか、または刺激せずに放置した。細胞のメモリー表現型およびeGFP発現について、フローサイトメトリーにより解析した。結果を図11および12に示す。CREB応答性プロモーターは、エフェクターメモリーおよびエフェクター細胞サブセットにおいてeGFPの上方制御を誘導した。
CREB応答性プロモーターをレポーター遺伝子eGFPのコード配列の上流にクローニングした、自己不活型レトロウイルスベクターを構築した。この第1のオープンリーディングフレームの後には、PGKプロモーターおよびRQR8細胞表面マーカーをコードする第2のコード配列を配置する。正常ドナー由来の初代ヒトT細胞に、レトロウイルスベクターを形質導入し、PHAで24時間刺激するか、または刺激せずに放置した。細胞のメモリー表現型およびeGFP発現について、フローサイトメトリーにより解析した。結果を図11および12に示す。CREB応答性プロモーターは、エフェクターメモリーおよびエフェクター細胞サブセットにおいてeGFPの上方制御を誘導した。
(実施例3 CD4+T細胞において示差的に共刺激する抗CD19 CAR-T細胞のデザインおよび構築)
自己不活型レトロウイルスベクターを構築し、これにより、CD4+T細胞に特異的な初期プロモーターを第1のCARのコード配列の上流にクローニングする。この第1のCARは、fmc63由来の抗CD19scFv、CD8スペーサーおよびCD28-CD3Zエンドドメインを使用して構築する。PGKプロモーターを、この第1のコード配列から下流にクローニングする。第2のCARをコードする第2のコード配列を、PGKプロモーターから下流にクローニングする。この第2のCARは、hd37由来の抗CD19scFv、CD8スペーサーおよび41BB-CD3Zエンドドメインを使用して構築する。このレトロウイルスカセットにより、hd37/41BB-CD3Z CARの発現をすべての細胞において生じるはずであるが、加えて、fmc63/CD28-CD3Z CARが、CD4+T細胞において選択的に発現されるはずである。T細胞にレトロウイルスベクターを形質導入する。正常ドナー由来の初代ヒトT細胞に、このレトロウイルスベクターを形質導入する。2つのCARの示差的発現を、フローサイトメトリーにより決定する。CD19に対する2つの異なるscFvの使用によって、2つの異なる抗イディオタイプ抗体を使用したフローサイトメトリーによる、独立した発現の検証が可能となる。このようなT細胞の性能は、41BB-CD3ZまたはCD28-ZのいずれかのCARを発現する単純なベクターを形質導入したT細胞に対して、in vitroでの共培養において、およびNALM6のNSGマウスへの異種移植モデルにおいても比較する。
自己不活型レトロウイルスベクターを構築し、これにより、CD4+T細胞に特異的な初期プロモーターを第1のCARのコード配列の上流にクローニングする。この第1のCARは、fmc63由来の抗CD19scFv、CD8スペーサーおよびCD28-CD3Zエンドドメインを使用して構築する。PGKプロモーターを、この第1のコード配列から下流にクローニングする。第2のCARをコードする第2のコード配列を、PGKプロモーターから下流にクローニングする。この第2のCARは、hd37由来の抗CD19scFv、CD8スペーサーおよび41BB-CD3Zエンドドメインを使用して構築する。このレトロウイルスカセットにより、hd37/41BB-CD3Z CARの発現をすべての細胞において生じるはずであるが、加えて、fmc63/CD28-CD3Z CARが、CD4+T細胞において選択的に発現されるはずである。T細胞にレトロウイルスベクターを形質導入する。正常ドナー由来の初代ヒトT細胞に、このレトロウイルスベクターを形質導入する。2つのCARの示差的発現を、フローサイトメトリーにより決定する。CD19に対する2つの異なるscFvの使用によって、2つの異なる抗イディオタイプ抗体を使用したフローサイトメトリーによる、独立した発現の検証が可能となる。このようなT細胞の性能は、41BB-CD3ZまたはCD28-ZのいずれかのCARを発現する単純なベクターを形質導入したT細胞に対して、in vitroでの共培養において、およびNALM6のNSGマウスへの異種移植モデルにおいても比較する。
(実施例4 ナイーブおよびセントラルメモリーT細胞において示差的に共刺激する抗CD19 CAR-T細胞のデザインおよび構築)
自己不活型レトロウイルスベクターを構築し、これにより、CD127特異的プロモーターを第1のCARのコード配列の上流にクローニングする。この第1のCARは、fmc63由来の抗CD19scFv、CD8スペーサーおよびCD28-CD3Zエンドドメインを使用して構築する。PGKプロモーターを、この第1のコード配列から下流にクローニングする。第2のCARをコードする第2のコード配列を、PGKプロモーターから下流にクローニングする。この第2のCARは、hd37由来の抗CD19scFv、CD8スペーサーおよび41BB-CD3Zエンドドメインを使用して構築する。このレトロウイルスカセットにより、hd37/41BB-CD3Z CARの発現をすべての細胞において生じるはずであるが、加えて、fmc63/CD28-CD3Z CARが、ナイーブおよびセントラルメモリーT細胞において選択的に発現されるはずである。T細胞にレトロウイルスベクターを形質導入する。正常ドナー由来の初代ヒトT細胞に、このレトロウイルスベクターを形質導入する。2つのCARの示差的発現を、フローサイトメトリーにより決定する。CD19に対する2つの異なるscFvの使用によって、2つの異なる抗イディオタイプ抗体を使用したフローサイトメトリーによる、独立した発現の検証が可能となる。このようなT細胞の性能は、41BB-CD3ZまたはCD28-ZのいずれかのCARを発現する単純なベクターを形質導入したT細胞に対して、in vitroでの共培養において、およびNALM6のNSGマウスへの異種移植モデルにおいても比較する。
自己不活型レトロウイルスベクターを構築し、これにより、CD127特異的プロモーターを第1のCARのコード配列の上流にクローニングする。この第1のCARは、fmc63由来の抗CD19scFv、CD8スペーサーおよびCD28-CD3Zエンドドメインを使用して構築する。PGKプロモーターを、この第1のコード配列から下流にクローニングする。第2のCARをコードする第2のコード配列を、PGKプロモーターから下流にクローニングする。この第2のCARは、hd37由来の抗CD19scFv、CD8スペーサーおよび41BB-CD3Zエンドドメインを使用して構築する。このレトロウイルスカセットにより、hd37/41BB-CD3Z CARの発現をすべての細胞において生じるはずであるが、加えて、fmc63/CD28-CD3Z CARが、ナイーブおよびセントラルメモリーT細胞において選択的に発現されるはずである。T細胞にレトロウイルスベクターを形質導入する。正常ドナー由来の初代ヒトT細胞に、このレトロウイルスベクターを形質導入する。2つのCARの示差的発現を、フローサイトメトリーにより決定する。CD19に対する2つの異なるscFvの使用によって、2つの異なる抗イディオタイプ抗体を使用したフローサイトメトリーによる、独立した発現の検証が可能となる。このようなT細胞の性能は、41BB-CD3ZまたはCD28-ZのいずれかのCARを発現する単純なベクターを形質導入したT細胞に対して、in vitroでの共培養において、およびNALM6のNSGマウスへの異種移植モデルにおいても比較する。
(実施例5 T細胞分化状態に応じてIL-2を示差的に発現する抗CD19 CAR-T細胞のデザインおよび構築)
自己不活型レトロウイルスベクターを構築し、これにより、EOMES応答性プロモーターを構成的に活性なIL2構築物のコード配列の上流にクローニングする。この第1のオープンリーディングフレームの後には、PGKプロモーターを配置する。CARをコードする第2のコード配列を、PGKプロモーターから下流にクローニングする。このCARは、hd37由来の抗CD19scFv、CD8スペーサーおよび41BB-CD3Zエンドドメインを使用して構築する。このレトロウイルスカセットにより、IL2構築物の発現を分化T細胞において生じるが、ナイーブまたはセントラルメモリーT細胞においては生じないはずである。CARは、すべてのT細胞において発現されるはずである。正常ドナー由来の初代ヒトT細胞に、このレトロウイルスベクターを形質導入する。2つの構築物の示差的発現を、フローサイトメトリーにより決定する。このようなT細胞の性能は、CAR単独またはIL2構築物の共発現を制御しないCARのいずれかを発現する単純なベクターを形質導入したT細胞に対して、in vitroでの共培養において、およびNALM6のNSGマウスへの異種移植モデルにおいても比較する。
自己不活型レトロウイルスベクターを構築し、これにより、EOMES応答性プロモーターを構成的に活性なIL2構築物のコード配列の上流にクローニングする。この第1のオープンリーディングフレームの後には、PGKプロモーターを配置する。CARをコードする第2のコード配列を、PGKプロモーターから下流にクローニングする。このCARは、hd37由来の抗CD19scFv、CD8スペーサーおよび41BB-CD3Zエンドドメインを使用して構築する。このレトロウイルスカセットにより、IL2構築物の発現を分化T細胞において生じるが、ナイーブまたはセントラルメモリーT細胞においては生じないはずである。CARは、すべてのT細胞において発現されるはずである。正常ドナー由来の初代ヒトT細胞に、このレトロウイルスベクターを形質導入する。2つの構築物の示差的発現を、フローサイトメトリーにより決定する。このようなT細胞の性能は、CAR単独またはIL2構築物の共発現を制御しないCARのいずれかを発現する単純なベクターを形質導入したT細胞に対して、in vitroでの共培養において、およびNALM6のNSGマウスへの異種移植モデルにおいても比較する。
(実施例6 キヌレニンの存在に対して感受性のCAR-T細胞のデザインおよび構築)
キヌレニンは、アミノ酸トリプトファンから酵素IDOの作用により合成される免疫抑制代謝物である。腫瘍細胞により発現されるIDOは、固形腫瘍の微小環境において高レベルのキヌレニンをもたらすことが多く、次いで、このキヌレニンは、高度に免疫抑制性の環境を生成し、これにより、腫瘍反応性CAR T細胞の機能が阻害されて腫瘍拒絶が妨げられる。CAR T細胞がキヌレニンの存在に反応可能な機構を、望ましい導入遺伝子を発現させることによりデザインすると、このようなT細胞が、キヌレニンにより媒介される免疫抑制を克服することが可能となる。
キヌレニンは、アミノ酸トリプトファンから酵素IDOの作用により合成される免疫抑制代謝物である。腫瘍細胞により発現されるIDOは、固形腫瘍の微小環境において高レベルのキヌレニンをもたらすことが多く、次いで、このキヌレニンは、高度に免疫抑制性の環境を生成し、これにより、腫瘍反応性CAR T細胞の機能が阻害されて腫瘍拒絶が妨げられる。CAR T細胞がキヌレニンの存在に反応可能な機構を、望ましい導入遺伝子を発現させることによりデザインすると、このようなT細胞が、キヌレニンにより媒介される免疫抑制を克服することが可能となる。
形質導入マーカー、例えば、RQR8に結合するキヌレニン応答性プロモーターの制御下、および構成的に活性なプロモーター、例えば、PGKまたはEF1aプロモーターの制御下にある、所望の導入遺伝子からなるレトロウイルス構築物を生成する。3つのキヌレニン応答性導入遺伝子:蛍光マーカータンパク質、緑色蛍光タンパク質(GFP);特定のリガンドに対するCAR、抗CD19 CAR;およびキヌレニンがCAR T細胞機能を抑制することを防ぐ酵素、キヌレニナーゼについて調査する。
キヌレニン応答性プロモーター(配列番号16)の制御下にあるGFPの場合では、形質導入したT細胞は、0μM(キヌレニンなし)、0.5μM、1μM、2μM、5μM、10μM、20μMおよび50μMの濃度のキヌレニンにおいて、0.5時間、1時間、2時間、4時間、6時間、12時間および24時間を含む様々な時間培養する。キヌレニンにより誘導されるGFPの発現は、このような細胞を各時点で形質導入マーカー(RQR8)について共染色し、このマーカーとGFPとの共発現を、キヌレニン処理細胞において、キヌレニンに曝露していない対照細胞と比較して評価することにより測定する。GFP発現の強度は、誘導の強さを反映する。
キヌレニンにより誘導される抗CD19 CAR発現の場合では、形質導入したT細胞は、0μM(キヌレニンなし)、0.5μM、1μM、2μM、5μM、10μM、20μMおよび50μMの濃度の増加量のキヌレニンの存在下で、0.5時間、1時間、2時間、4時間、6時間、12時間および24時間を含む様々な時間培養する。次いで、T細胞の表面上でキヌレニンにより誘導されるCARの発現は、機能アッセイにおいて、CAR T細胞応答を評価することにより測定する。形質導入したT細胞は、CD19+Raji細胞(B細胞由来腫瘍株)と4:1、1:1および1:4のT細胞:標的比で、24時間および72時間共培養する。次いで、このような共培養物を、T細胞マーカーCD3、形質導入マーカーRQR8、および生存色素、例えば、7-AADによる細胞生存度について染色する。生標的細胞は、それらがCD3およびRQR8を欠くこと、ならびにそれらが7-AADを排除することにより同定する。生標的細胞は、各共培養条件について数え上げ、キヌレニンに曝露していないためCARにより媒介される殺傷が生じていないT細胞との共培養物と比較する。このような共培養物の上清はまた、T細胞サイトカインIFNガンマおよびIL2のレベルについて、特定のELISAにより評価する。発現されるCARにより、CD19を発現する標的に応答してT細胞の活性化が引き起こされるため、キヌレニンにより誘導されるCAR発現により、このようなサイトカインのレベルが共培養物上清において上昇すると予想される。
キヌレニナーゼの場合では、抗CD19 CARに結合するキヌレニン応答性プロモーター(配列番号16)の制御下、および構成的に活性なプロモーター、例えば、PGKまたはEF1aプロモーターの制御下にある、キヌレニナーゼからなるレトロウイルス構築物を生成する。キヌレニンにより誘導されるキヌレニナーゼとCARとを共発現する形質導入したT細胞は、0μM(キヌレニンなし)、0.5μM、1μM、2μM、5μM、10μM、20μMおよび50μMの濃度のキヌレニンの存在下で、CD19発現Raji細胞と4:1、1:1および1:4のT細胞:標的比で、24時間または72時間共培養する。CARにより媒介されるRaji細胞の殺傷は、上記のような時点で、IFNガンマおよびIL2の分泌とともに評価する。キヌレニンは、CAR機能を阻害し、この阻害は、キヌレニナーゼの誘導および発現の際に防止され得ると予想される。
上記の明細書で言及されたすべての刊行物は、参照により本明細書に組み込まれる。記載される本発明の方法および系の様々な修飾および変形は、本発明の範囲および趣旨から逸脱することなく、当業者に明らかである。本発明を特定の好ましい実施形態と関連して説明したが、特許請求される本発明は、このような特定の実施形態に不当に限定されるべきでないことが理解されるべきである。実際、本発明を実行するための記載の方法の様々な修飾は、分子生物学または関連する分野の当業者に明白であり、これらは、以下の特許請求の範囲内にあることが意図される。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目1)
キメラ抗原受容体(CAR)または改変T細胞受容体(TCR)を発現する細胞であって、
i)前記細胞の分化/消耗状態、または
ii)前記細胞の微小環境における環境代謝物の存在
に応じて前記細胞により選択的に発現される目的のヌクレオチド配列(NOI)を含む、細胞。
(項目2)
前記NOIが、CD4+T細胞において選択的に発現される、項目1に記載の細胞。
(項目3)
前記NOIが、CD8+T細胞において選択的に発現される、項目1に記載の細胞。
(項目4)
前記NOIが、制御性T細胞において選択的に発現される、項目1に記載の細胞。
(項目5)
NOIが、ナイーブT細胞において選択的に発現される、項目1に記載の細胞。
(項目6)
NOIが、セントラルメモリーT細胞において選択的に発現される、項目1に記載の細胞。
(項目7)
NOIが、エフェクターメモリーT細胞において選択的に発現される、項目1に記載の細胞。
(項目8)
前記NOIが、エフェクターT細胞において選択的に発現される、項目1に記載の細胞。
(項目9)
前記NOIが、消耗したT細胞において選択的に発現される、項目1に記載の細胞。
(項目10)
NOIが、選択的に活性なプロモーターの制御下にある、前記項目のいずれかに記載の細胞。
(項目11)
前記細胞におけるNOIの発現がmiRNAにより制御されるように、miRNA標的配列を含む、項目1から9のいずれかに記載の細胞。
(項目12)
前記NOIの発現が、選択的に活性なプロモーターおよびmiRNA標的配列の制御下にある、項目10または11に記載の細胞。
(項目13)
前記NOIが、前記細胞の微小環境における環境代謝物の存在に応じて選択的に発現され、前記環境代謝物が、アリール炭化水素受容体(AHR)を活性化する、項目10に記載の細胞。
(項目14)
前記環境代謝物が、トリプトファン代謝物である、項目13に記載の細胞。
(項目15)
前記環境代謝物が、キヌレニンである、項目14に記載の細胞。
(項目16)
前記NOIが、キメラ抗原受容体(CAR)をコードする、前記項目のいずれかに記載の細胞。
(項目17)
前記NOIが、CAR成分をコードする、項目1から15のいずれかに記載の細胞。
(項目18)
前記CAR成分が、受容体成分および細胞内シグナル伝達成分から選択される、項目17に記載の細胞。
(項目19)
前記NOIが、改変T細胞受容体(TCR)をコードする、項目1から15のいずれかに記載の細胞。
(項目20)
前記NOIが、CARまたはTCRの活性を調節する作用物質をコードする、項目1から15のいずれかに記載の細胞。
(項目21)
前記CARまたはTCRの活性を調節する作用物質が、シグナル伝達修飾タンパク質、減弱因子;阻害性CAR、およびサイトカインシグナル伝達ドメインから選択される、項目20に記載の細胞。
(項目22)
前記NOIが、前記細胞の活性を調節する作用物質をコードする、項目1から15のいずれかに記載の細胞。
(項目23)
前記細胞の活性を調節する作用物質が、サイトカイン、接着分子および転写因子から選択される、項目22に記載の細胞。
(項目24)
標的細胞上の標的抗原を結合するCARまたはTCRを発現し、前記NOIが、前記標的細胞の活性を調節する作用物質をコードする、項目1から15のいずれかに記載の細胞。
(項目25)
前記作用物質が、毒素を含む、項目24に記載の細胞。
(項目26)
標的細胞上の標的抗原に結合するCARまたはTCRを発現し、前記NOIが、前記標的細胞の微小環境を調節する作用物質をコードする、項目1から15のいずれかに記載の細胞。
(項目27)
前記作用物質が、ケモカインもしくはサイトカインであるか、またはサイトカインもしくはケモカインにより媒介されるシグナル伝達に影響する作用物質である、項目26に記載の細胞。
(項目28)
プロモーターの制御下にある目的のヌクレオチド配列(NOI)を含む核酸配列であって、前記プロモーターは、前記NOIが発現される細胞の分化/消耗状態に応じて選択的に活性である、核酸配列。
(項目29)
プロモーターの制御下にある目的のヌクレオチド配列(NOI)を含む核酸配列であって、前記プロモーターは、前記NOIが発現される細胞の微小環境における環境代謝物の存在に応じて選択的に活性である、核酸配列。
(項目30)
目的のヌクレオチド配列(NOI)、および特異的miRNA標的配列を含む核酸配列であって、前記特異的miRNA標的配列は、前記核酸配列が発現される細胞のある特定の分化/消耗状態において転写物分解を引き起こす、核酸配列。
(項目31)
前記NOIの発現が、前記NOIが発現される細胞の分化/消耗状態に応じて選択的に活性なプロモーターの制御下にあり、前記核酸配列が、前記核酸配列が発現される細胞のある特定の分化/消耗状態において転写物分解を引き起こす特異的miRNA標的配列を含む、項目30に記載の核酸配列。
(項目32)
項目28から31のいずれかに記載の核酸配列を含む核酸配列のキット。
(項目33)
(i)構成的に活性なプロモーターの制御下にある第1の核酸配列、および
(ii)第2の核酸配列であって、前記第2の核酸配列が発現される細胞の分化/消耗状態、または前記第2の核酸配列が発現される細胞の微小環境における環境代謝物の存在のいずれかに応じて、選択的に活性なプロモーターの制御下にある第2の核酸配列
を含む、項目32に記載の核酸配列のキット。
(項目34)
第1の選択的に活性なプロモーターの制御下にある第1の核酸配列、および第2の選択的に活性なプロモーターの制御下にある第2の核酸配列を含み、前記第1のプロモーターおよび前記第2のプロモーターが、前記核酸配列のキットが発現される細胞の異なる分化/消耗状態において活性である、項目32に記載の核酸配列のキット。
(項目35)
(i)第1の核酸配列であって、前記核酸配列が発現される細胞のある特定の分化/消耗状態において転写物分解を引き起こす特異的miRNA標的配列を含む第1の核酸配列、および
(ii)特異的miRNA標的配列を欠く第2の核酸配列
を含む、項目32に記載の核酸配列のキット。
(項目36)
第1のmiRNA標的配列を有する第1の核酸配列、および第2のmiRNA標的配列を有する第2の核酸配列を含み、前記第1のmiRNA標的配列および前記第2のmiRNA標的配列が、前記核酸配列のキットが発現される細胞の異なる分化/消耗状態において転写物分解を引き起こす、項目32に記載の核酸配列のキット。
(項目37)
項目28から31のいずれかに記載の核酸配列を含む、核酸構築物。
(項目38)
(i)構成的に活性なプロモーターの制御下にある第1の核酸配列、および
(ii)第2の核酸配列であって、前記第2の核酸配列が発現される細胞の分化/消耗状態、または前記第2の核酸配列が発現される細胞の微小環境における環境代謝物の存在のいずれかに応じて、選択的に活性なプロモーターの制御下にある第2の核酸配列
を含む、項目37に記載の核酸構築物。
(項目39)
第1の選択的に活性なプロモーターの制御下にある第1の核酸配列、および第2の選択的に活性なプロモーターの制御下にある第2の核酸配列を含み、前記第1のプロモーターおよび前記第2のプロモーターが、前記核酸構築物が発現される細胞の異なる分化/消耗状態において活性である、項目37に記載の核酸構築物。
(項目40)
(i)前記核酸構築物が発現される細胞のある特定の分化/消耗状態において転写物分解を引き起こす特異的miRNA標的配列を含む第1の核酸配列、および
(ii)特異的miRNA標的配列を欠く第2の核酸配列
を含む、項目37に記載の核酸構築物。
(項目41)
第1のmiRNA標的配列を有する第1の核酸配列、および第2のmiRNA標的配列を有する第2の核酸配列を含み、前記第1のmiRNA標的配列および前記第2のmiRNA標的配列が、前記核酸構築物が発現される細胞の異なる分化/消耗状態において転写物分解を引き起こす、項目37に記載の核酸構築物。
(項目42)
前記第1の核酸配列および前記第2の核酸配列が、構成的に活性な双方向性プロモーターの制御下にある、項目41に記載の核酸構築物。
(項目43)
前記第1の核酸配列が、キメラ抗原受容体(CAR)、CAR成分または改変T細胞受容体(TCR)をコードし、前記第2の核酸配列が、阻害性分子をコードし、ここで前記核酸構築物がT細胞において発現されると、前記CAR、CAR成分またはTCRが構成的に発現されるが、前記T細胞が消耗すると、前記阻害性分子が選択的に発現され、前記阻害性分子が、CARまたはTCRの活性の低下を引き起こす、項目38に記載の核酸構築物。
(項目44)
前記阻害性分子が、1つまたは複数のITAM結合ドメインを含むが、キナーゼドメインを欠く、切断型ZAP70を含む、項目43に記載の核酸構築物。
(項目45)
前記第1の核酸配列が、CD28共刺激性ドメインを含むCARまたはCAR成分をコードし、前記第2の核酸配列が、OX40または41BB共刺激性ドメインを含むCARまたはCAR成分をコードし、ここで前記核酸構築物がT細胞において発現されると、第1のCARまたはCAR成分が構成的に発現されるが、前記細胞がエフェクターメモリーまたはエフェクター状態にあると、第2のCARまたはCAR成分が選択的に発現される、項目38に記載の核酸構築物。
(項目46)
前記第1の核酸配列が、キメラ抗原受容体(CAR)、CAR成分または改変T細胞受容体(TCR)をコードし、前記第2の核酸配列が、サイトカインをコードし、ここで前記核酸構築物がT細胞において発現されると、前記CAR、CAR成分またはTCRが構成的に発現されるが、前記T細胞の微小環境における環境代謝物の存在下で前記サイトカインが選択的に発現される、項目38に記載の核酸構築物。
(項目47)
項目28から31のいずれかに記載の核酸配列、項目32から36のいずれかに記載の核酸配列のキット、または項目37から46のいずれかに記載の核酸構築物を含む、ベクター。
(項目48)
項目1から25のいずれかに記載の細胞を生成するための方法であって、項目28から31のいずれかに記載の核酸配列、項目32から36のいずれかに記載の核酸配列のキット、項目37から46のいずれかに記載の核酸構築物、または項目47に記載のベクターを細胞に導入するステップを含む、方法。
(項目49)
前記細胞が、被験体から単離した試料に由来する、項目48に記載の方法。
(項目50)
項目1から25のいずれかに記載の複数の細胞を含む医薬組成物。
(項目51)
疾患の処置および/または予防における使用のための、項目50に記載の医薬組成物。(項目52)
項目50に記載の医薬組成物を被験体に投与するステップを含む、疾患を処置および/または予防するための方法。
(項目53)
次のステップ:
(i)細胞を含む試料の単離、
(ii)項目28から31のいずれかに記載の核酸配列、項目32から36のいずれかに記載の核酸配列のキット、項目37から46のいずれかに記載の核酸構築物、または項目47に記載のベクターの前記細胞への形質導入またはトランスフェクション、および
(iii)(ii)の細胞の被験体への投与
を含む、項目52に記載の方法。
(項目54)
疾患の処置および/または予防のための医薬の製造における、項目50に記載の医薬組成物の使用。
(項目55)
前記疾患が、がんである、項目51に記載の使用のための医薬組成物、項目52もしくは53に記載の方法、または項目54に記載の使用。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目1)
キメラ抗原受容体(CAR)または改変T細胞受容体(TCR)を発現する細胞であって、
i)前記細胞の分化/消耗状態、または
ii)前記細胞の微小環境における環境代謝物の存在
に応じて前記細胞により選択的に発現される目的のヌクレオチド配列(NOI)を含む、細胞。
(項目2)
前記NOIが、CD4+T細胞において選択的に発現される、項目1に記載の細胞。
(項目3)
前記NOIが、CD8+T細胞において選択的に発現される、項目1に記載の細胞。
(項目4)
前記NOIが、制御性T細胞において選択的に発現される、項目1に記載の細胞。
(項目5)
NOIが、ナイーブT細胞において選択的に発現される、項目1に記載の細胞。
(項目6)
NOIが、セントラルメモリーT細胞において選択的に発現される、項目1に記載の細胞。
(項目7)
NOIが、エフェクターメモリーT細胞において選択的に発現される、項目1に記載の細胞。
(項目8)
前記NOIが、エフェクターT細胞において選択的に発現される、項目1に記載の細胞。
(項目9)
前記NOIが、消耗したT細胞において選択的に発現される、項目1に記載の細胞。
(項目10)
NOIが、選択的に活性なプロモーターの制御下にある、前記項目のいずれかに記載の細胞。
(項目11)
前記細胞におけるNOIの発現がmiRNAにより制御されるように、miRNA標的配列を含む、項目1から9のいずれかに記載の細胞。
(項目12)
前記NOIの発現が、選択的に活性なプロモーターおよびmiRNA標的配列の制御下にある、項目10または11に記載の細胞。
(項目13)
前記NOIが、前記細胞の微小環境における環境代謝物の存在に応じて選択的に発現され、前記環境代謝物が、アリール炭化水素受容体(AHR)を活性化する、項目10に記載の細胞。
(項目14)
前記環境代謝物が、トリプトファン代謝物である、項目13に記載の細胞。
(項目15)
前記環境代謝物が、キヌレニンである、項目14に記載の細胞。
(項目16)
前記NOIが、キメラ抗原受容体(CAR)をコードする、前記項目のいずれかに記載の細胞。
(項目17)
前記NOIが、CAR成分をコードする、項目1から15のいずれかに記載の細胞。
(項目18)
前記CAR成分が、受容体成分および細胞内シグナル伝達成分から選択される、項目17に記載の細胞。
(項目19)
前記NOIが、改変T細胞受容体(TCR)をコードする、項目1から15のいずれかに記載の細胞。
(項目20)
前記NOIが、CARまたはTCRの活性を調節する作用物質をコードする、項目1から15のいずれかに記載の細胞。
(項目21)
前記CARまたはTCRの活性を調節する作用物質が、シグナル伝達修飾タンパク質、減弱因子;阻害性CAR、およびサイトカインシグナル伝達ドメインから選択される、項目20に記載の細胞。
(項目22)
前記NOIが、前記細胞の活性を調節する作用物質をコードする、項目1から15のいずれかに記載の細胞。
(項目23)
前記細胞の活性を調節する作用物質が、サイトカイン、接着分子および転写因子から選択される、項目22に記載の細胞。
(項目24)
標的細胞上の標的抗原を結合するCARまたはTCRを発現し、前記NOIが、前記標的細胞の活性を調節する作用物質をコードする、項目1から15のいずれかに記載の細胞。
(項目25)
前記作用物質が、毒素を含む、項目24に記載の細胞。
(項目26)
標的細胞上の標的抗原に結合するCARまたはTCRを発現し、前記NOIが、前記標的細胞の微小環境を調節する作用物質をコードする、項目1から15のいずれかに記載の細胞。
(項目27)
前記作用物質が、ケモカインもしくはサイトカインであるか、またはサイトカインもしくはケモカインにより媒介されるシグナル伝達に影響する作用物質である、項目26に記載の細胞。
(項目28)
プロモーターの制御下にある目的のヌクレオチド配列(NOI)を含む核酸配列であって、前記プロモーターは、前記NOIが発現される細胞の分化/消耗状態に応じて選択的に活性である、核酸配列。
(項目29)
プロモーターの制御下にある目的のヌクレオチド配列(NOI)を含む核酸配列であって、前記プロモーターは、前記NOIが発現される細胞の微小環境における環境代謝物の存在に応じて選択的に活性である、核酸配列。
(項目30)
目的のヌクレオチド配列(NOI)、および特異的miRNA標的配列を含む核酸配列であって、前記特異的miRNA標的配列は、前記核酸配列が発現される細胞のある特定の分化/消耗状態において転写物分解を引き起こす、核酸配列。
(項目31)
前記NOIの発現が、前記NOIが発現される細胞の分化/消耗状態に応じて選択的に活性なプロモーターの制御下にあり、前記核酸配列が、前記核酸配列が発現される細胞のある特定の分化/消耗状態において転写物分解を引き起こす特異的miRNA標的配列を含む、項目30に記載の核酸配列。
(項目32)
項目28から31のいずれかに記載の核酸配列を含む核酸配列のキット。
(項目33)
(i)構成的に活性なプロモーターの制御下にある第1の核酸配列、および
(ii)第2の核酸配列であって、前記第2の核酸配列が発現される細胞の分化/消耗状態、または前記第2の核酸配列が発現される細胞の微小環境における環境代謝物の存在のいずれかに応じて、選択的に活性なプロモーターの制御下にある第2の核酸配列
を含む、項目32に記載の核酸配列のキット。
(項目34)
第1の選択的に活性なプロモーターの制御下にある第1の核酸配列、および第2の選択的に活性なプロモーターの制御下にある第2の核酸配列を含み、前記第1のプロモーターおよび前記第2のプロモーターが、前記核酸配列のキットが発現される細胞の異なる分化/消耗状態において活性である、項目32に記載の核酸配列のキット。
(項目35)
(i)第1の核酸配列であって、前記核酸配列が発現される細胞のある特定の分化/消耗状態において転写物分解を引き起こす特異的miRNA標的配列を含む第1の核酸配列、および
(ii)特異的miRNA標的配列を欠く第2の核酸配列
を含む、項目32に記載の核酸配列のキット。
(項目36)
第1のmiRNA標的配列を有する第1の核酸配列、および第2のmiRNA標的配列を有する第2の核酸配列を含み、前記第1のmiRNA標的配列および前記第2のmiRNA標的配列が、前記核酸配列のキットが発現される細胞の異なる分化/消耗状態において転写物分解を引き起こす、項目32に記載の核酸配列のキット。
(項目37)
項目28から31のいずれかに記載の核酸配列を含む、核酸構築物。
(項目38)
(i)構成的に活性なプロモーターの制御下にある第1の核酸配列、および
(ii)第2の核酸配列であって、前記第2の核酸配列が発現される細胞の分化/消耗状態、または前記第2の核酸配列が発現される細胞の微小環境における環境代謝物の存在のいずれかに応じて、選択的に活性なプロモーターの制御下にある第2の核酸配列
を含む、項目37に記載の核酸構築物。
(項目39)
第1の選択的に活性なプロモーターの制御下にある第1の核酸配列、および第2の選択的に活性なプロモーターの制御下にある第2の核酸配列を含み、前記第1のプロモーターおよび前記第2のプロモーターが、前記核酸構築物が発現される細胞の異なる分化/消耗状態において活性である、項目37に記載の核酸構築物。
(項目40)
(i)前記核酸構築物が発現される細胞のある特定の分化/消耗状態において転写物分解を引き起こす特異的miRNA標的配列を含む第1の核酸配列、および
(ii)特異的miRNA標的配列を欠く第2の核酸配列
を含む、項目37に記載の核酸構築物。
(項目41)
第1のmiRNA標的配列を有する第1の核酸配列、および第2のmiRNA標的配列を有する第2の核酸配列を含み、前記第1のmiRNA標的配列および前記第2のmiRNA標的配列が、前記核酸構築物が発現される細胞の異なる分化/消耗状態において転写物分解を引き起こす、項目37に記載の核酸構築物。
(項目42)
前記第1の核酸配列および前記第2の核酸配列が、構成的に活性な双方向性プロモーターの制御下にある、項目41に記載の核酸構築物。
(項目43)
前記第1の核酸配列が、キメラ抗原受容体(CAR)、CAR成分または改変T細胞受容体(TCR)をコードし、前記第2の核酸配列が、阻害性分子をコードし、ここで前記核酸構築物がT細胞において発現されると、前記CAR、CAR成分またはTCRが構成的に発現されるが、前記T細胞が消耗すると、前記阻害性分子が選択的に発現され、前記阻害性分子が、CARまたはTCRの活性の低下を引き起こす、項目38に記載の核酸構築物。
(項目44)
前記阻害性分子が、1つまたは複数のITAM結合ドメインを含むが、キナーゼドメインを欠く、切断型ZAP70を含む、項目43に記載の核酸構築物。
(項目45)
前記第1の核酸配列が、CD28共刺激性ドメインを含むCARまたはCAR成分をコードし、前記第2の核酸配列が、OX40または41BB共刺激性ドメインを含むCARまたはCAR成分をコードし、ここで前記核酸構築物がT細胞において発現されると、第1のCARまたはCAR成分が構成的に発現されるが、前記細胞がエフェクターメモリーまたはエフェクター状態にあると、第2のCARまたはCAR成分が選択的に発現される、項目38に記載の核酸構築物。
(項目46)
前記第1の核酸配列が、キメラ抗原受容体(CAR)、CAR成分または改変T細胞受容体(TCR)をコードし、前記第2の核酸配列が、サイトカインをコードし、ここで前記核酸構築物がT細胞において発現されると、前記CAR、CAR成分またはTCRが構成的に発現されるが、前記T細胞の微小環境における環境代謝物の存在下で前記サイトカインが選択的に発現される、項目38に記載の核酸構築物。
(項目47)
項目28から31のいずれかに記載の核酸配列、項目32から36のいずれかに記載の核酸配列のキット、または項目37から46のいずれかに記載の核酸構築物を含む、ベクター。
(項目48)
項目1から25のいずれかに記載の細胞を生成するための方法であって、項目28から31のいずれかに記載の核酸配列、項目32から36のいずれかに記載の核酸配列のキット、項目37から46のいずれかに記載の核酸構築物、または項目47に記載のベクターを細胞に導入するステップを含む、方法。
(項目49)
前記細胞が、被験体から単離した試料に由来する、項目48に記載の方法。
(項目50)
項目1から25のいずれかに記載の複数の細胞を含む医薬組成物。
(項目51)
疾患の処置および/または予防における使用のための、項目50に記載の医薬組成物。(項目52)
項目50に記載の医薬組成物を被験体に投与するステップを含む、疾患を処置および/または予防するための方法。
(項目53)
次のステップ:
(i)細胞を含む試料の単離、
(ii)項目28から31のいずれかに記載の核酸配列、項目32から36のいずれかに記載の核酸配列のキット、項目37から46のいずれかに記載の核酸構築物、または項目47に記載のベクターの前記細胞への形質導入またはトランスフェクション、および
(iii)(ii)の細胞の被験体への投与
を含む、項目52に記載の方法。
(項目54)
疾患の処置および/または予防のための医薬の製造における、項目50に記載の医薬組成物の使用。
(項目55)
前記疾患が、がんである、項目51に記載の使用のための医薬組成物、項目52もしくは53に記載の方法、または項目54に記載の使用。
Claims (1)
- 本明細書に記載の発明。
Applications Claiming Priority (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB1712407.4 | 2017-08-02 | ||
GBGB1712407.4A GB201712407D0 (en) | 2017-08-02 | 2017-08-02 | Cell |
GBGB1806372.7A GB201806372D0 (en) | 2018-04-19 | 2018-04-19 | Cell |
GB1806372.7 | 2018-04-19 | ||
PCT/GB2018/052204 WO2019025800A1 (en) | 2017-08-02 | 2018-08-01 | CELLS EXPRESSING A CHIMERIC ANTIGENIC RECEPTOR OR A MANIPULATED TCR AND COMPRISING A SELECTIVELY EXPRESSED SELECTIVE NUCLEOTIDE SEQUENCE |
JP2020505194A JP2020530993A (ja) | 2017-08-02 | 2018-08-01 | キメラ抗原受容体または改変tcrを発現し、選択的に発現されるヌクレオチド配列を含む細胞 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020505194A Division JP2020530993A (ja) | 2017-08-02 | 2018-08-01 | キメラ抗原受容体または改変tcrを発現し、選択的に発現されるヌクレオチド配列を含む細胞 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2023076572A true JP2023076572A (ja) | 2023-06-01 |
Family
ID=63371717
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020505194A Pending JP2020530993A (ja) | 2017-08-02 | 2018-08-01 | キメラ抗原受容体または改変tcrを発現し、選択的に発現されるヌクレオチド配列を含む細胞 |
JP2023057340A Pending JP2023076572A (ja) | 2017-08-02 | 2023-03-31 | キメラ抗原受容体または改変tcrを発現し、選択的に発現されるヌクレオチド配列を含む細胞 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020505194A Pending JP2020530993A (ja) | 2017-08-02 | 2018-08-01 | キメラ抗原受容体または改変tcrを発現し、選択的に発現されるヌクレオチド配列を含む細胞 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20210130775A1 (ja) |
EP (1) | EP3662055A1 (ja) |
JP (2) | JP2020530993A (ja) |
CN (1) | CN111164203A (ja) |
AU (1) | AU2018311345A1 (ja) |
CA (1) | CA3071495A1 (ja) |
WO (1) | WO2019025800A1 (ja) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20220056407A1 (en) * | 2018-12-14 | 2022-02-24 | Autolus Limited | Cell |
US11969443B2 (en) * | 2019-03-06 | 2024-04-30 | Lentigen Technology, Inc. | Compositions and methods for treating cancer with self-driving chimeric antigen receptors |
WO2021028359A1 (en) * | 2019-08-09 | 2021-02-18 | Sangamo Therapeutics France | Controlled expression of chimeric antigen receptors in t cells |
CN114585371A (zh) * | 2019-08-20 | 2022-06-03 | 森迪生物科学公司 | 嵌合抑制性受体 |
Family Cites Families (58)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2008095141A2 (en) | 2007-01-31 | 2008-08-07 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Redirected, genetically-engineered t regulatory cells and their use in suppression of autoimmune and inflammatory disease |
US8465743B2 (en) * | 2009-10-01 | 2013-06-18 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Anti-vascular endothelial growth factor receptor-2 chimeric antigen receptors and use of same for the treatment of cancer |
GB201206559D0 (en) * | 2012-04-13 | 2012-05-30 | Ucl Business Plc | Polypeptide |
US10117896B2 (en) * | 2012-10-05 | 2018-11-06 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Use of a trans-signaling approach in chimeric antigen receptors |
CN111139256A (zh) * | 2013-02-20 | 2020-05-12 | 诺华股份有限公司 | 使用人源化抗EGFRvIII嵌合抗原受体治疗癌症 |
UY35468A (es) * | 2013-03-16 | 2014-10-31 | Novartis Ag | Tratamiento de cáncer utilizando un receptor quimérico de antígeno anti-cd19 |
GB201317929D0 (en) * | 2013-10-10 | 2013-11-27 | Ucl Business Plc | Chimeric antigen receptor |
EP3858378A1 (en) * | 2013-11-21 | 2021-08-04 | Autolus Limited | Cell |
GB201322798D0 (en) * | 2013-12-20 | 2014-02-05 | Oxford Biomedica Ltd | Production system |
AU2014368383B2 (en) * | 2013-12-20 | 2020-01-16 | Cellectis | Method of engineering multi-input signal sensitive T cell for immunotherapy |
US11385233B2 (en) * | 2015-03-05 | 2022-07-12 | Autolus Limited | Methods of depleting malignant T-cells |
PT3125934T (pt) * | 2014-03-05 | 2019-12-16 | Ucl Business Plc | Recetor de antigénio quimérico (car) com domínios de ligação a antigénio para a região constante beta do recetor de células t |
GB201403972D0 (en) * | 2014-03-06 | 2014-04-23 | Ucl Business Plc | Chimeric antigen receptor |
GB201405845D0 (en) * | 2014-04-01 | 2014-05-14 | Ucl Business Plc | Signalling system |
GB201415347D0 (en) * | 2014-08-29 | 2014-10-15 | Ucl Business Plc | Signalling system |
CA3224507A1 (en) * | 2014-12-24 | 2016-06-30 | Autolus Limited | Cell co-expressing chimeric antigen receptors binding cd19 and cd22 |
GB201501936D0 (en) * | 2015-02-05 | 2015-03-25 | Ucl Business Plc | Signalling system |
GB201503133D0 (en) * | 2015-02-24 | 2015-04-08 | Ucl Business Plc And Syncona Partners Llp | Chimeric protein |
GB201503742D0 (en) * | 2015-03-05 | 2015-04-22 | Ucl Business Plc | Chimeric antigen receptor |
GB201504840D0 (en) * | 2015-03-23 | 2015-05-06 | Ucl Business Plc | Chimeric antigen receptor |
GB201507119D0 (en) * | 2015-04-27 | 2015-06-10 | Ucl Business Plc | Nucleic Acid Construct |
GB201507111D0 (en) * | 2015-04-27 | 2015-06-10 | Ucl Business Plc | Nucleic acid construct |
GB201507108D0 (en) * | 2015-04-27 | 2015-06-10 | Ucl Business Plc | Nucleic acid construct |
GB201507115D0 (en) * | 2015-04-27 | 2015-06-10 | Ucl Business Plc | Nucleic Acid Construct |
GB201507368D0 (en) * | 2015-04-30 | 2015-06-17 | Ucl Business Plc | Cell |
CA2986060A1 (en) * | 2015-05-29 | 2016-12-08 | Valerie Odegard | Composition and methods for regulating inhibitory interactions in genetically engineered cells |
GB201514874D0 (en) * | 2015-08-20 | 2015-10-07 | Autolus Ltd | Cell |
WO2017035251A1 (en) * | 2015-08-25 | 2017-03-02 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | T cells modified to overexpress c-myb |
US10286092B2 (en) * | 2015-08-25 | 2019-05-14 | Ucl Business Plc | Detecting a therapeutic cell |
CN108135932A (zh) * | 2015-08-28 | 2018-06-08 | 宾夕法尼亚大学董事会 | 表达嵌合细胞内信号传导分子的细胞的方法和组合物 |
CN109310744A (zh) * | 2015-09-23 | 2019-02-05 | 赛通免疫有限责任公司 | 用于免疫治疗的flt3定向car细胞 |
GB201518817D0 (en) * | 2015-10-23 | 2015-12-09 | Autolus Ltd | Cell |
WO2017075537A1 (en) * | 2015-10-30 | 2017-05-04 | Aleta Biotherapeutics Inc. | Compositions and methods for treatment of cancer |
GB201519900D0 (en) * | 2015-11-11 | 2015-12-23 | Ucl Business Plc | Chimeric antigen receptor |
WO2017133175A1 (en) * | 2016-02-04 | 2017-08-10 | Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. | Engineered mammalian cells for cancer therapy |
GB201609604D0 (en) * | 2016-06-01 | 2016-07-13 | Ucl Business Plc | Cell |
GB201610515D0 (en) * | 2016-06-16 | 2016-08-03 | Autolus Ltd | Cell |
GB201610512D0 (en) * | 2016-06-16 | 2016-08-03 | Autolus Ltd | Chimeric antigen receptor |
CA2937157A1 (en) * | 2016-07-25 | 2018-01-25 | Ucl Business Plc | Protein-based t-cell receptor knockdown |
US20180064758A1 (en) * | 2016-09-05 | 2018-03-08 | Ucl Business Plc | Chimeric antigen receptor |
IL265045B2 (en) * | 2016-09-08 | 2023-09-01 | Bluebird Bio Inc | Variants of endonuclease pd-1, compositions and methods of use |
US20190352409A1 (en) * | 2016-11-11 | 2019-11-21 | Autolus Limited | Chimeric antigen receptor |
GB201621891D0 (en) * | 2016-12-21 | 2017-02-01 | Autolus Ltd | Transcription system |
WO2018193231A1 (en) * | 2017-04-18 | 2018-10-25 | Autolus Limited | Cell |
GB201707779D0 (en) * | 2017-05-15 | 2017-06-28 | Autolus Ltd | Cell |
GB201716728D0 (en) * | 2017-10-12 | 2017-11-29 | Autolus Ltd | Cell |
EP3684919A1 (en) * | 2017-10-19 | 2020-07-29 | Cellectis | Targeted gene integration of nk inhibitors genes for improved immune cells therapy |
GB201718697D0 (en) * | 2017-11-13 | 2017-12-27 | Autolus Ltd | Cell |
GB201800298D0 (en) * | 2018-01-09 | 2018-02-21 | Autolus Ltd | Method |
JP7335272B2 (ja) * | 2018-05-15 | 2023-08-29 | オートラス リミテッド | キメラ抗原受容体 |
GB201807862D0 (en) * | 2018-05-15 | 2018-06-27 | Ucl Business Plc | Chimeric antigen receptor |
GB201807870D0 (en) * | 2018-05-15 | 2018-06-27 | Autolus Ltd | A CD79-specific chimeric antigen receptor |
MX2021003636A (es) * | 2018-09-27 | 2021-07-21 | Autolus Ltd | Receptor antigenico quimerico. |
GB201816522D0 (en) * | 2018-10-10 | 2018-11-28 | Autolus Ltd | Methods and reagents for analysing nucleic acids from single cells |
US20220056407A1 (en) * | 2018-12-14 | 2022-02-24 | Autolus Limited | Cell |
EP3934666A1 (en) * | 2019-03-08 | 2022-01-12 | Autolus Limited | Compositions and methods comprising engineered chimeric antigen receptor and modulator of car |
GB201906202D0 (en) * | 2019-05-02 | 2019-06-19 | Autolus Ltd | Cell |
GB201910651D0 (en) * | 2019-07-25 | 2019-09-11 | Autolus Ltd | Virus-like particle |
-
2018
- 2018-08-01 JP JP2020505194A patent/JP2020530993A/ja active Pending
- 2018-08-01 AU AU2018311345A patent/AU2018311345A1/en not_active Abandoned
- 2018-08-01 WO PCT/GB2018/052204 patent/WO2019025800A1/en unknown
- 2018-08-01 EP EP18759677.0A patent/EP3662055A1/en active Pending
- 2018-08-01 CN CN201880062710.3A patent/CN111164203A/zh active Pending
- 2018-08-01 CA CA3071495A patent/CA3071495A1/en not_active Abandoned
- 2018-08-01 US US16/635,740 patent/US20210130775A1/en active Pending
-
2023
- 2023-03-31 JP JP2023057340A patent/JP2023076572A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN111164203A (zh) | 2020-05-15 |
EP3662055A1 (en) | 2020-06-10 |
US20210130775A1 (en) | 2021-05-06 |
CA3071495A1 (en) | 2019-02-07 |
JP2020530993A (ja) | 2020-11-05 |
WO2019025800A1 (en) | 2019-02-07 |
AU2018311345A1 (en) | 2020-02-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7008350B2 (ja) | Car発現ベクター及びcar発現t細胞 | |
US20220267404A1 (en) | Cell | |
US20220411753A1 (en) | Transgenic t cell and chimeric antigen receptor t cell compositions and related methods | |
Figueroa et al. | Chimeric antigen receptor engineering: a right step in the evolution of adoptive cellular immunotherapy | |
JP7082046B2 (ja) | 受容体 | |
JP2023076572A (ja) | キメラ抗原受容体または改変tcrを発現し、選択的に発現されるヌクレオチド配列を含む細胞 | |
Thomas et al. | An optimized GD2-targeting retroviral cassette for more potent and safer cellular therapy of neuroblastoma and other cancers | |
JP2019509764A (ja) | 初代細胞のためのトランスポゾンに基づく転移システム | |
AU2015289644A1 (en) | Engineered cells for adoptive cell therapy | |
JP2020537521A (ja) | 細胞 | |
CN114350613A (zh) | Suv39h1缺陷的免疫细胞 | |
JP2023112191A (ja) | 核酸構築物 | |
WO2021027785A1 (zh) | 共表达趋化因子受体的免疫效应细胞 | |
WO2017192536A1 (en) | Eliminating mhc restriction from the t cell receptor as a strategy for immunotherapy | |
JP2022512450A (ja) | Gpc3を標的とする免疫エフェクター細胞およびその応用 | |
US20210214439A1 (en) | Chimeric antigen receptors and gene editing of cd2 for immunotherapy of t-cell malignancies | |
JP2022548468A (ja) | Car-cd123ベクター及びその使用 | |
KR20230079010A (ko) | 듀얼 car-t 세포들 | |
JP7054181B2 (ja) | キメラ抗原受容体 | |
RU2784531C2 (ru) | ИММУННЫЕ КЛЕТКИ, ДЕФЕКТНЫЕ ПО Suv39h1 | |
원혜지 | Cloning and characterization of a recombinant gene for generation of CAR-iTreg harnessing CD40-CD154 interaction | |
NZ737662B2 (en) | Cell | |
Duong et al. | Engineering T Cell Function Using Chimeric Antigen Receptors Identified |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20230331 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20240219 |