JP2023073719A - 抗ウイルス剤 - Google Patents
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Abstract
【課題】新規な抗ウイルス剤を提供する。【解決手段】ロジン、コパールおよびセラックの少なくとも一つを含む、抗ウイルス剤。【選択図】なし
Description
本発明は、抗ウイルス剤に関する。
近年、新たなウイルス感染が脅威となっている。例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（新型コロナウイルス）は、２０１９年に発見され、全世界に感染が拡大している。また、２００２年には重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１）、２０１２年には中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）による感染症が流行している。他にも、ノロウイルス、インフルエンザウイルスなどによる感染症は、定期的に流行している。
ウイルスの感染対策の一つとして、付着したウイルスの数を減らすことが挙げられる。例えば、手、指などに付いたウイルスの対策としては、洗い流すことおよびアルコール消毒が挙げられる。物品に付着したウイルス対策としては、熱水、アルコールなどによる消毒が挙げられる。
また、物品に抗ウイルス性を付与することにより、物品に付着したウイルスの数を減らす方法も用いられている。例えば、特許文献１には、樹脂、分散剤で被覆された一価の銅化合物粒子および親水性化合物からなる抗ウイルス性組成物が開示されている。
本発明は、新規な抗ウイルス剤を提供することを目的とする。
上記課題を解決するために、本発明者らは鋭意検討を行った。その結果、ロジン、コパールおよびセラックの少なくとも一つを用いることで、上記の課題が解決されうることを見出し、本発明を完成させるに至った。
すなわち、本発明の一形態によれば、ロジン、コパールおよびセラックの少なくとも一つを含む、抗ウイルス剤が提供される。
本発明によれば、新規な抗ウイルス剤を提供することができる。
以下、本発明の一形態に係る実施の形態を説明する。本発明は、以下の実施の形態のみには限定されない。
本明細書において、範囲を示す「Ｘ～Ｙ」は「Ｘ以上Ｙ以下」を意味する。また、特記しない限り、操作および物性等の測定は室温（２０～２５℃）／相対湿度４０～５０％ＲＨの条件で測定する。
＜抗ウイルス剤＞
本発明の一形態は、ロジン、コパールおよびセラックの少なくとも一つを含む、抗ウイルス剤である。
本発明の一形態は、ロジン、コパールおよびセラックの少なくとも一つを含む、抗ウイルス剤である。
本発明者らによる検討の結果、ロジン、コパールおよびセラックをそれぞれ単独で用いても、これらを組み合わせて用いても、抗ウイルス性を発揮できることが見出された（後述の実施例および試験例参照）。すなわち、ロジン、コパールおよびセラックをそれぞれ単独で含む、またはこれらを組み合わせて含む抗ウイルス剤を提供することができる。
本明細書において、「抗ウイルス剤」とは、ウイルスと接触することにより、ウイルス感染価（細胞感染性を持つウイルスの数）を減少させることができる剤を意味する。具体的には、ウイルス感染価は、ＴＣＩＤ５０測定法により測定される。また、ウイルス感染価の減少とは、実施例に記載の方法により算出された減少率が５０％以上、好ましくは７０％以上であることを意味する。
本明細書において、「抗ウイルス性」とは、ウイルス感染価（細胞感染性を持つウイルスの数）を減少させることを意味する。
本発明に係る抗ウイルス剤の対象となるウイルスとしては、エンベロープウイルスであっても、ノンエンベロープウイルスであってもよい。エンベロープウイルスとしては、コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を含む）、インフルエンザウイルス、ヘルペスウイルス、風疹ウイルスなどが挙げられる。ノンエンベロープウイルスとしては、ノロウイルス、ロタウイルスなどが挙げられる。対象となるウイルスとしては、好ましくはエンベロープウイルスであり、より好ましくはコロナウイルスである。
本発明に係る抗ウイルス剤で使用されるロジン（ロシン）、コパール（コーパル樹脂、コパイバ）およびセラック（シェラック）は、天然樹脂である。ロジンおよびコパールは、植物由来の樹脂であり、セラックは、動物由来の樹脂である。ロジンおよびセラックは、既存添加物名簿収載品目リスト（公益財団法人 日本食品化学研究振興財団、令和２年２月２６日改正）に掲載されている。コパールは、既存添加物名簿から削除されている（平成２３年厚生労働省告示第１５８号）が、「添加物として使用される範囲においてヒトの健康に対して有害影響を及ぼすような毒性はないと考えられた」と報告されている（日本食品化学研究振興財団 既存添加物の安全性の見直しに関する調査研究（平成２１年度調査））。また、コパール（コパイバ）は、天然香料基原物質リスト（日本食品化学研究振興財団）に記載されている。
ロジン、コパールおよびセラックの種類としては、特に制限されないが、食品、医療、化粧品などの用途で使用されるものが好ましい。
好ましい実施形態では、本発明に係る抗ウイルス剤は、ロジンおよびセラックを含む。ロジンとセラックとを組み合わせることにより、ロジンまたはセラックを単独で用いる場合と比べて、膜を形成する際の乾燥時間を短くすることができる。また、膜の持続時間をより長くすることができる。
本発明に係る抗ウイルス剤がロジンおよびセラックを含む場合、セラックの含有量は、ロジン１．０質量部に対して、例えば０．０２～２．０質量部であり、好ましくは０．０５～１．８質量部であり、より好ましくは０．０７～１．５質量部である。
好ましい実施形態では、本発明に係る抗ウイルス剤は、ロジン、コパールおよびセラックを含む。ロジンとコパールとセラックとを組み合わせることにより、ロジン、コパールまたはセラックを単独で用いる場合と比べて、膜を形成する際の乾燥時間をより短く（例えば、１０～１５秒程度）することができ、さらに形成された膜を透明にすることができる。形成された膜は、光沢があり、その光沢を長く維持することができる。
本発明に係る抗ウイルス剤がロジン、コパールおよびセラックを含む場合、コパールの含有量は、ロジン１．０質量部に対して、例えば０．０２～２．０質量部であり、好ましくは０．１～１．５質量部であり、より好ましくは０．５～１．２質量部である。また、セラックの含有量は、ロジン１．０質量部に対して、例えば０．０２～２．０質量部であり、好ましくは０．０５～１．８質量部であり、より好ましくは０．０７～１．５質質量部である。
本発明に係るロジン、コパールおよびセラックとしては、市販品を使用することができる。
＜抗ウイルス性組成物＞
本発明の一形態は、上述の抗ウイルス剤と、溶媒とを含む、抗ウイルス性組成物である。本発明に係る抗ウイルス性組成物は、必要に応じて植物油、その他の成分などをさらに含むことができる。
本発明の一形態は、上述の抗ウイルス剤と、溶媒とを含む、抗ウイルス性組成物である。本発明に係る抗ウイルス性組成物は、必要に応じて植物油、その他の成分などをさらに含むことができる。
溶媒としては、ロジン、コパールおよび／またはセラックを溶解できるものであれば、特に制限されない。溶媒としては、例えばメタノール、エタノール、２－プロパノール（イソプロピルアルコール）、ｎ－ブタノールなどのアルコール類；酢酸エチル、酢酸ブチルなどのエステル類が挙げられる。溶媒は、好ましくはアルコール類であり、より好ましくはエタノール（特に、無水エタノール）である。
抗ウイルス性組成物において、抗ウイルス剤の含有量は、用途に応じて、適宜調整することができる。抗ウイルス剤の含有量は、抗ウイルス性組成物の全質量に対して、例えば１～５０質量％である。抗ウイルス性組成物を抗ウイルス性膜の形成に使用する場合、抗ウイルス剤の含有量は、抗ウイルス性組成物の全質量に対して、好ましくは３～３０質量％であり、より好ましくは５～１５質量％である。
抗ウイルス性組成物において、溶媒の含有量は、特に制限されないが、抗ウイルス性組成物の全質量に対して、例えば５０～９５質量％であり、好ましくは７０～９０質量％である。
一実施形態では、本発明に係る抗ウイルス性組成物は、植物油をさらに含む。植物油としては、例えばオリーブ油、ツバキ油、ヒマワリ油、ベニバナ油、マカデミアナッツ油、ナタネ油、アーモンド油、ヒマシ油、ホホバ油、バラ油などが挙げられる。
抗ウイルス性組成物において、植物油の含有量は、抗ウイルス性組成物の全質量に対して、例えば１～５質量％である。
本発明に係る抗ウイルス性組成物において、その他の成分としては、香料（植物油を除く）、高分子化合物（ロジン、コパールおよびセラックを除く）などが挙げられる。
香料としては、例えばケトン、アルデヒド、リモネン、リナロール、シトロネロール、メントール、ゲラニオール等のテルペン類の合成香料、天然香料、食品添加物として使用される香料などが挙げられる。
高分子化合物としては、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシビニルポリマー、アクリル樹脂（（メタ）アクリレート化合物に由来する構成単位を含む樹脂）が挙げられる。
抗ウイルス性組成物において、その他の成分の含有量は、抗ウイルス性組成物の全質量に対して、例えば５質量％以下であり、より好ましくは３質量％以下である（下限値：０質量％）。
抗ウイルス性組成物が植物油および香料を含む場合、植物油および香料の含有量の合計は、抗ウイルス性組成物の全質量に対して、例えば５質量％以下であり、好ましくは３～５質量％である。植物油および香料の含有量の合計がかかる範囲であることにより、膜を形成する際の速乾性を維持することができる。
本発明に係る抗ウイルス性組成物の製造方法は、特に制限されず、例えば、抗ウイルス剤に含まれるロジン、コパールおよびセラックの少なくとも一つと、溶媒と、必要に応じて植物油、その他の成分などとを混合することにより得ることができる。
＜用途＞
本発明に係る抗ウイルス剤および抗ウイルス性組成物は、抗ウイルス性を対象に付与する用途で使用することができる。すなわち、本発明の一実施形態は、対象に抗ウイルス性を付与する方法であって、上述の抗ウイルス剤または抗ウイルス性組成物を、対象に含ませることまたはその表面に付着させることを有する方法に関する。
本発明に係る抗ウイルス剤および抗ウイルス性組成物は、抗ウイルス性を対象に付与する用途で使用することができる。すなわち、本発明の一実施形態は、対象に抗ウイルス性を付与する方法であって、上述の抗ウイルス剤または抗ウイルス性組成物を、対象に含ませることまたはその表面に付着させることを有する方法に関する。
抗ウイルス性が付与される対象については、後述の抗ウイルス性膜において説明する。
ロジン、コパールおよびセラックは、膜を形成する性質を有するため、膜形成用として好適である。すなわち、本発明の一実施形態は、膜形成用である抗ウイルス剤または抗ウイルス性組成物に関する。
＜抗ウイルス性膜＞
本発明の一実施形態は、上述の抗ウイルス性組成物を用いて形成される抗ウイルス性膜に関する。抗ウイルス性膜は、例えば抗ウイルス性組成物を対象に塗布して硬化させることにより形成することができる。
本発明の一実施形態は、上述の抗ウイルス性組成物を用いて形成される抗ウイルス性膜に関する。抗ウイルス性膜は、例えば抗ウイルス性組成物を対象に塗布して硬化させることにより形成することができる。
抗ウイルス性組成物を塗布する対象としては、例えば金属（アルミニウム、鉄、金など）、セラミックス、ガラス、繊維、不織布、フィルム、プラスチック、ゴム、紙、木材、石材；動物（ヒトなど）の皮膚、口腔内粘膜、歯牙；食品（固体）などが挙げられる。
抗ウイルス性組成物を塗布する方法は、特に制限されず、ハケ塗り、棒塗り、指塗り、スピンコート法、ディップコート法、スプレーコート法などが挙げられる。
塗布後の硬化条件は、特に制限されず、膜が形成される時間および温度であればよい。硬化時間としては、例えば１５～３０秒間程度である。硬化温度としては、常温（１５～３０℃）であればよく、必要に応じて溶媒を蒸発させるために加熱してもよい。
＜抗ウイルス性物品＞
本発明の一実施形態は、抗ウイルス性膜を表面の少なくとも一部（例えば、ヒトが触れる部分）に有する、抗ウイルス性物品に関する。
本発明の一実施形態は、抗ウイルス性膜を表面の少なくとも一部（例えば、ヒトが触れる部分）に有する、抗ウイルス性物品に関する。
物品としては、例えば金属（アルミニウム、鉄、金など）、セラミックス、ガラス、繊維、不織布、フィルム、プラスチック、ゴム、紙、木材、石材などから形成された物品が挙げられる。物品の例としては、ドアノブ、つり革、おもちゃ、容器、家具、衣類、食器などが挙げられる。
抗ウイルス性物品の製造方法は、特に制限されず、抗ウイルス性組成物を物品に塗布して硬化させることにより形成することができる。塗布方法および硬化条件については、上記抗ウイルス膜と同様であるため、説明を省略する。
本発明の効果を、以下の実施例および比較例を用いて説明する。ただし、本発明の技術的範囲が以下の実施例のみに制限されるわけではない。
［抗ウイルス性組成物の調製例］
下記の手法により、実施例の組成物を調製した。各実施例における各原料の配合量を下記の表１に示す。また、各実施例における各構成成分の配合量を下記の表２に示す。
下記の手法により、実施例の組成物を調製した。各実施例における各原料の配合量を下記の表１に示す。また、各実施例における各構成成分の配合量を下記の表２に示す。
（実施例１）
ガムロジン（ＬＡＷＴＥＲ ＡＲＧＥＮＴＩＮＡ Ｓ．Ａ．製）１３．０質量％、３０質量％コパールエタノール溶液４３．３質量％、ラックコート５０ＥＤＳ（５０質量％セラックエタノール溶液）（日本シェラック工業株式会社製）２．０質量％、および特定アルコール９９度１級発酵無変性（無水エタノール）（甘糟化学産業株式会社製）４１．７質量％を撹拌機にてよく混合溶解し、均一な溶液の組成物を得た。
ガムロジン（ＬＡＷＴＥＲ ＡＲＧＥＮＴＩＮＡ Ｓ．Ａ．製）１３．０質量％、３０質量％コパールエタノール溶液４３．３質量％、ラックコート５０ＥＤＳ（５０質量％セラックエタノール溶液）（日本シェラック工業株式会社製）２．０質量％、および特定アルコール９９度１級発酵無変性（無水エタノール）（甘糟化学産業株式会社製）４１．７質量％を撹拌機にてよく混合溶解し、均一な溶液の組成物を得た。
３０質量％コパールエタノール溶液は、以下の方法で得た。
未精製のコーパル樹脂（固体）を特定アルコール９９度１級発酵無変性（無水エタノール）（甘糟化学産業株式会社製）で溶解後、２００メッシュシートでろ過し、得られたろ液を塗料成分試験法（ＪＩＳ Ｋ ５６０１－１－２：２００８）に従い試験し、コパール濃度を計算した。ろ液が３０質量％コパール溶液になるように特定アルコール９９度１級発酵無変性（無水エタノール）（甘糟化学産業株式会社製）を追加し、濃度調整した後、充分撹拌して均一な溶液とした。密閉容器に保管し、静置後得られた上清を３０質量％コパールエタノール溶液として使用した。
（実施例２）
ガムロジン（ＬＡＷＴＥＲ ＡＲＧＥＮＴＩＮＡ Ｓ．Ａ．製）１０．０質量％、ラックコート５０ＥＤＳ（５０質量％セラックエタノール溶液）（日本シェラック工業株式会社製）２０．０質量％、および特定アルコール９９度１級発酵無変性（無水エタノール）（甘糟化学産業株式会社製）７０．０質量％を撹拌機にてよく混合溶解し、均一な溶液の組成物を得た。
ガムロジン（ＬＡＷＴＥＲ ＡＲＧＥＮＴＩＮＡ Ｓ．Ａ．製）１０．０質量％、ラックコート５０ＥＤＳ（５０質量％セラックエタノール溶液）（日本シェラック工業株式会社製）２０．０質量％、および特定アルコール９９度１級発酵無変性（無水エタノール）（甘糟化学産業株式会社製）７０．０質量％を撹拌機にてよく混合溶解し、均一な溶液の組成物を得た。
（実施例３）
ガムロジン（ＬＡＷＴＥＲ ＡＲＧＥＮＴＩＮＡ Ｓ．Ａ．製）１３．０質量％、３０質量％コパールエタノール溶液４３．３質量％、ラックコート５０ＥＤＳ（５０質量％セラックエタノール溶液）（日本シェラック工業株式会社製）２．０質量％、オリーブ油 リファインド（ＤＳＰ五協フード＆ケミカル株式会社製）２．０質量％、および特定アルコール９９度１級発酵無変性（無水エタノール）（甘糟化学産業株式会社製）３９．７質量％を撹拌機にてよく混合溶解し、均一な溶液の組成物を得た。
ガムロジン（ＬＡＷＴＥＲ ＡＲＧＥＮＴＩＮＡ Ｓ．Ａ．製）１３．０質量％、３０質量％コパールエタノール溶液４３．３質量％、ラックコート５０ＥＤＳ（５０質量％セラックエタノール溶液）（日本シェラック工業株式会社製）２．０質量％、オリーブ油 リファインド（ＤＳＰ五協フード＆ケミカル株式会社製）２．０質量％、および特定アルコール９９度１級発酵無変性（無水エタノール）（甘糟化学産業株式会社製）３９．７質量％を撹拌機にてよく混合溶解し、均一な溶液の組成物を得た。
（実施例４）
ガムロジン（ＬＡＷＴＥＲ ＡＲＧＥＮＴＩＮＡ Ｓ．Ａ．製）１３．０質量％、および特定アルコール９９度１級発酵無変性（無水エタノール）（甘糟化学産業株式会社製）８７．０質量％を撹拌機にてよく混合溶解し、均一な溶液の組成物を得た。
ガムロジン（ＬＡＷＴＥＲ ＡＲＧＥＮＴＩＮＡ Ｓ．Ａ．製）１３．０質量％、および特定アルコール９９度１級発酵無変性（無水エタノール）（甘糟化学産業株式会社製）８７．０質量％を撹拌機にてよく混合溶解し、均一な溶液の組成物を得た。
（実施例５）
３０質量％コパールエタノール溶液４３．３質量％、および特定アルコール９９度１級発酵無変性（無水エタノール）（甘糟化学産業株式会社製）５６．７質量％を撹拌機にてよく混合溶解し、均一な溶液の組成物を得た。
３０質量％コパールエタノール溶液４３．３質量％、および特定アルコール９９度１級発酵無変性（無水エタノール）（甘糟化学産業株式会社製）５６．７質量％を撹拌機にてよく混合溶解し、均一な溶液の組成物を得た。
（実施例６）
ラックコート５０ＥＤＳ（５０％セラックエタノール溶液）（日本シェラック工業株式会社製）２０．０質量％、および特定アルコール９９度１級発酵無変性（無水エタノール）（甘糟化学産業株式会社製）８０．０質量％を撹拌機にてよく混合溶解し、均一な溶液の組成物を得た。
ラックコート５０ＥＤＳ（５０％セラックエタノール溶液）（日本シェラック工業株式会社製）２０．０質量％、および特定アルコール９９度１級発酵無変性（無水エタノール）（甘糟化学産業株式会社製）８０．０質量％を撹拌機にてよく混合溶解し、均一な溶液の組成物を得た。
［抗ウイルス性の評価］
以下の試験において、無水エタノールとして特定アルコール９９度１級発酵無変性（無水エタノール）（甘糟化学産業株式会社製）を使用した。細胞維持細胞として、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製 ｃｏｄｅＭ４６５５ Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ Ｅａｇｌｅ（０．２％ゲンタマイシン添加）を使用した。
以下の試験において、無水エタノールとして特定アルコール９９度１級発酵無変性（無水エタノール）（甘糟化学産業株式会社製）を使用した。細胞維持細胞として、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製 ｃｏｄｅＭ４６５５ Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ Ｅａｇｌｅ（０．２％ゲンタマイシン添加）を使用した。
（試験例１）
・試験資材
１：実施例１の組成物
２：実施例２の組成物
各資材は等量の無水エタノールに溶解し、１辺５ｃｍの大きさにカットしたプラスチック（ポリスチレン）片に、各１ｍＬ（各資材として０．５ｍＬ）を滴下後、コンラージで均一に広がるように塗布した。その後、開放条件で約３時間乾燥させ、エタノール分を蒸発させて、試験片とした。
・試験資材
１：実施例１の組成物
２：実施例２の組成物
各資材は等量の無水エタノールに溶解し、１辺５ｃｍの大きさにカットしたプラスチック（ポリスチレン）片に、各１ｍＬ（各資材として０．５ｍＬ）を滴下後、コンラージで均一に広がるように塗布した。その後、開放条件で約３時間乾燥させ、エタノール分を蒸発させて、試験片とした。
実施例１の組成物を用いて形成した塗膜は、高い透明度を有していた。実施例２の組成物を用いて形成した塗膜は、透明であった。
なお、対照区（比較例１）として、無水エタノールのみをプラスチック（ポリスチレン）片に同様に塗布し、乾燥させたものを使用した。
・区の設定
・試験ウイルス液の調製
試験ウイルス：豚流行性下痢（ＰＥＤ）ウイルス Ｐ－５Ｖ株
宿主細胞：ｖｅｒｏ細胞（アフリカミドリザルの腎臓上皮由来株化細胞）
（１）試験ウイルスをｖｅｒｏ細胞シートに接種した；
（２）３７℃で１時間吸着後、接種ウイルス液を除去し、滅菌ＰＢＳで２回洗浄した；
（３）細胞維持培地を加え、３７℃、５％ＣＯ２下で培養した；
（４）７０～８０％程度の細胞変性が観察された時点で、培養上清を回収した；
（５）回収した培養上清を、３０００ｒｐｍで３０分間遠心分離後、遠心上清を分注し、－７０℃以下で保存したものを試験ウイルス液とした。
試験ウイルス：豚流行性下痢（ＰＥＤ）ウイルス Ｐ－５Ｖ株
宿主細胞：ｖｅｒｏ細胞（アフリカミドリザルの腎臓上皮由来株化細胞）
（１）試験ウイルスをｖｅｒｏ細胞シートに接種した；
（２）３７℃で１時間吸着後、接種ウイルス液を除去し、滅菌ＰＢＳで２回洗浄した；
（３）細胞維持培地を加え、３７℃、５％ＣＯ２下で培養した；
（４）７０～８０％程度の細胞変性が観察された時点で、培養上清を回収した；
（５）回収した培養上清を、３０００ｒｐｍで３０分間遠心分離後、遠心上清を分注し、－７０℃以下で保存したものを試験ウイルス液とした。
・試験ウイルス液の接種およびウイルス力価（ウイルス感染価）の測定
試験実施前に、後述の試験方法と同様の処理を行った試験資材塗布試験片を、細胞維持培地１０ｍＬで洗い出した後、さらに１０倍段階希釈し、各希釈液を培養細胞に接種し、３７℃、５％ＣＯ２下で５日間培養した。培養細胞が正常な形状を示さなかった場合、資材による細胞毒性有りと判定し、本試験では細胞毒性が確認された希釈倍率を試験から除外した。
試験実施前に、後述の試験方法と同様の処理を行った試験資材塗布試験片を、細胞維持培地１０ｍＬで洗い出した後、さらに１０倍段階希釈し、各希釈液を培養細胞に接種し、３７℃、５％ＣＯ２下で５日間培養した。培養細胞が正常な形状を示さなかった場合、資材による細胞毒性有りと判定し、本試験では細胞毒性が確認された希釈倍率を試験から除外した。
その結果、洗い出し液原液で細胞毒性は確認されなかったため、本試験における検出限界は、洗い出し液中の濃度として１００．５ＴＣＩＤ５０／ｍＬとした。
（１）対照区及び試験区の試験片に試験開始１８時間前から細胞維持培地０．２ｍＬを滴下して滅菌フィルム（ポリエチレンフィルム）を被覆した状態で保管した；
（２）上記保管経過後の試験片の被覆フィルムを剥がし、試験ウイルス液を０．２ｍＬ添加して、再度被覆フィルムを被せて、乾燥しないよう密閉容器に入れて反応開始とした；
（３）試験設定に従い室温下で６時間静置し反応時間とした；
（４）感作時間経過後、被覆フィルムごと滅菌バックに移し、細胞維持培地１０ｍＬを添加しよく混合してウイルスを洗い出した；
（５）洗い出し液について、さらに細胞維持培地で１０倍段階希釈を行い、希釈液を９６ｗｅｌｌマイクロプレートの培養細胞に接種し、５％ＣＯ２ガス存在下で３７℃、５日間培養した；
（６）培養後のＣＰＥ（細胞変成効果）の有無又は培養上清の１％鶏赤血球凝集反応の有無から、ウイルス力価（ウイルス感染価）（ＴＣＩＤ５０）を測定した。
（２）上記保管経過後の試験片の被覆フィルムを剥がし、試験ウイルス液を０．２ｍＬ添加して、再度被覆フィルムを被せて、乾燥しないよう密閉容器に入れて反応開始とした；
（３）試験設定に従い室温下で６時間静置し反応時間とした；
（４）感作時間経過後、被覆フィルムごと滅菌バックに移し、細胞維持培地１０ｍＬを添加しよく混合してウイルスを洗い出した；
（５）洗い出し液について、さらに細胞維持培地で１０倍段階希釈を行い、希釈液を９６ｗｅｌｌマイクロプレートの培養細胞に接種し、５％ＣＯ２ガス存在下で３７℃、５日間培養した；
（６）培養後のＣＰＥ（細胞変成効果）の有無又は培養上清の１％鶏赤血球凝集反応の有無から、ウイルス力価（ウイルス感染価）（ＴＣＩＤ５０）を測定した。
・評価
試験結果において、検査時点ごとに、対照区に対する試験区の減少率（％）を算出し、効果を確認した。
試験結果において、検査時点ごとに、対照区に対する試験区の減少率（％）を算出し、効果を確認した。
なお、本試験において、減少率は以下の式で算出した。結果を以下の表４に示す。
表４に示すように、試験開始時においてはウイルス感染価で１０５．５（ＴＣＩＤ５０／試験片）であった。
６時間後では、対照区では自然減衰がみられ１０４．５（ＴＣＩＤ５０／試験片）、試験区１では１０３．９（ＴＣＩＤ５０／試験片）で７５．３％減少、試験区２では１０３．１（ＴＣＩＤ５０／試験片）で９５．９％減少となった。
以上より、実施例１および２の組成物を用いてコーティングした試験片では、６時間接触させることで、ＰＥＤウイルスに対して、高いウイルス減少効果を得られることが分かる。
（試験例２）
・試験資材
１：実施例２の組成物
２：実施例３の組成物
各資材は等量の無水エタノールに溶解し、２５ｃｍ２平底フラスコ底面（ポリスチレン製）に、各１ｍＬ（各資材として０．５ｍＬ）を滴下後、均一に広がるように塗布した。その後、キャップを閉じずに約１２時間乾燥させ、エタノール分を蒸発させて試験片とした。試験例２では、エタノールの影響を除去するため、乾燥時間を試験例１より長く設定した。
・試験資材
１：実施例２の組成物
２：実施例３の組成物
各資材は等量の無水エタノールに溶解し、２５ｃｍ２平底フラスコ底面（ポリスチレン製）に、各１ｍＬ（各資材として０．５ｍＬ）を滴下後、均一に広がるように塗布した。その後、キャップを閉じずに約１２時間乾燥させ、エタノール分を蒸発させて試験片とした。試験例２では、エタノールの影響を除去するため、乾燥時間を試験例１より長く設定した。
なお、試験例２および後述の試験例３～４において、試験ウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）の感染危害回避のために密閉可能な平底フラスコを使用した。試験例１で使用したプラスチック（ポリスチレン）片を用いた試験片と試験例２～４で使用した平面フラスコを用いた試験片（平底フラスコ底面）は、同じ２５ｃｍ２のポリスチレン面とみなすことができるため、試験例１～４の実験条件は整合している。
実施例２の組成物を用いて形成した塗膜は、透明であった。実施例３の組成物を用いて形成した塗膜は、高い透明度を有していた。
なお、対照区（比較例２）として、無水エタノールのみを２５ｃｍ２平底フラスコ底面に同様に塗布し、乾燥させたものを使用した。
・区の設定
・試験ウイルス液の調製
試験ウイルス：Ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）
宿主細胞：ｖｅｒｏ細胞（アフリカミドリザルの腎臓上皮由来株化細胞）
なお、試験ウイルスは、ヒト由来分離株である。ヒト唾液よりｖｅｒｏ細胞を用いて分離培養後、リアルタイムＰＣＲを用いてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２遺伝子の増幅の確認（厚生労働省通知法）を行ったウイルス株を使用した。
試験ウイルス：Ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）
宿主細胞：ｖｅｒｏ細胞（アフリカミドリザルの腎臓上皮由来株化細胞）
なお、試験ウイルスは、ヒト由来分離株である。ヒト唾液よりｖｅｒｏ細胞を用いて分離培養後、リアルタイムＰＣＲを用いてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２遺伝子の増幅の確認（厚生労働省通知法）を行ったウイルス株を使用した。
（１）試験ウイルスをｖｅｒｏ細胞シートに接種した；
（２）３７℃で１時間吸着後、接種ウイルス液を除去し、滅菌ＰＢＳで２回洗浄した；
（３）細胞維持培地を加え、３７℃、５％ＣＯ２下で培養した；
（４）７０～８０％程度の細胞変性が観察された時点で、培養上清を回収した；
（５）回収した培養上清を、３０００ｒｐｍで３０分間遠心分離後、遠心上清を分注し、－７０℃以下で保存したものを試験ウイルス液とした。
（２）３７℃で１時間吸着後、接種ウイルス液を除去し、滅菌ＰＢＳで２回洗浄した；
（３）細胞維持培地を加え、３７℃、５％ＣＯ２下で培養した；
（４）７０～８０％程度の細胞変性が観察された時点で、培養上清を回収した；
（５）回収した培養上清を、３０００ｒｐｍで３０分間遠心分離後、遠心上清を分注し、－７０℃以下で保存したものを試験ウイルス液とした。
・試験ウイルス液の接種およびウイルス力価（ウイルス感染価）の測定
試験実施前に、後述の試験方法と同様の処理を行った試験資材塗布試験片を、細胞維持培地１０ｍＬで洗い出した後、さらに１０倍段階希釈し、各希釈液を培養細胞に接種し、３７℃、５％ＣＯ２下で５日間培養した。培養細胞が正常な形状を示さなかった場合、資材による細胞毒性有りと判定し、本試験では細胞毒性が確認された希釈倍率を試験から除外した。
試験実施前に、後述の試験方法と同様の処理を行った試験資材塗布試験片を、細胞維持培地１０ｍＬで洗い出した後、さらに１０倍段階希釈し、各希釈液を培養細胞に接種し、３７℃、５％ＣＯ２下で５日間培養した。培養細胞が正常な形状を示さなかった場合、資材による細胞毒性有りと判定し、本試験では細胞毒性が確認された希釈倍率を試験から除外した。
その結果、洗い出し液原液で細胞毒性は確認されなかったため、本試験における検出限界は、洗い出し液中の濃度として１００．５ＴＣＩＤ５０／ｍＬとした。
（１）対照区及び試験区の試験片に試験開始１８時間前から細胞維持培地０．２ｍＬを滴下して滅菌フィルム（ポリエチレンフィルム）を被覆した状態で保管した。
（２）上記保管経過後の試験片の被覆フィルムを剥がし、試験ウイルス液を０．２ｍＬ添加して、再度フィルムを被せて、乾燥しないようキャップを閉じて密閉して反応開始とした。
（３）試験設定に従い室温下で６時間静置し反応時間とした。
（４）感作時間経過後、フラスコ内に細胞維持培地１０ｍＬを添加、フィルムを剥がしつつよく混合してウイルスを洗い出した。
（５）洗い出し液について、さらに細胞維持培地で１０倍段階希釈を行い、各希釈液を９６ｗｅｌｌマイクロプレートの培養細胞に接種し、５％ＣＯ２ガス存在下で、３７℃、５日間培養した。
（６）培養後のＣＰＥ（細胞変成効果）の有無又は培養上清の１％鶏赤血球凝集反応の有無から、ウイルス力価（ウイルス感染価）（ＴＣＩＤ５０）を測定した。
・評価
試験結果において、検査時点ごとに、対照区に対する試験区の抗ウイルス活性値及び減少率を算出し、効果を確認した。
試験結果において、検査時点ごとに、対照区に対する試験区の抗ウイルス活性値及び減少率を算出し、効果を確認した。
なお、本試験において抗ウイルス活性値及び減少率（％）は以下の式で算出した。結果を表６に示す。
表６に示すように、試験開始時においてウイルス感染価で１０５．７（ＴＣＩＤ５０／試験片）であった。
６時間後では、対照区では自然減衰がみられ１０５．１（ＴＣＩＤ５０／試験片）、試験区１では１０３．３（ＴＣＩＤ５０／試験片）で抗ウイルス活性値１．８及び減少率９８．４％、試験区２では１０３．５（ＴＣＩＤ５０／試験片）で抗ウイルス活性値１．６および減少率９７．５％となった。
以上より、実施例２および３の組成物を用いてコーティングした試験片では、６時間接触させることで、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して、高いウイルス減少効果を得られることが分かる。
（試験例３）
・試験資材
１：実施例３の組成物
資材は等量の無水エタノールに溶解し、２５ｃｍ２平底フラスコ底面（ポリスチレン製）に、１ｍＬ（資材として０．５ｍＬ）を滴下後、均一に広がるように塗布した。その後、キャップを閉じずに約１２時間乾燥させ、エタノール分を蒸発させて試験片とした。試験例３では、エタノールの影響を除去するため、乾燥時間を長く設定した。
・試験資材
１：実施例３の組成物
資材は等量の無水エタノールに溶解し、２５ｃｍ２平底フラスコ底面（ポリスチレン製）に、１ｍＬ（資材として０．５ｍＬ）を滴下後、均一に広がるように塗布した。その後、キャップを閉じずに約１２時間乾燥させ、エタノール分を蒸発させて試験片とした。試験例３では、エタノールの影響を除去するため、乾燥時間を長く設定した。
実施例３の組成物を用いて形成した塗膜は、高い透明度を有していた。
なお、対照区（比較例３）として、無水エタノールのみを２５ｃｍ２平底フラスコ底面に同様に塗布し、乾燥させたものを使用した。
・区の設定
・試験ウイルス液の調製
試験例２と同様の方法により、試験ウイルス液を調製した。
試験例２と同様の方法により、試験ウイルス液を調製した。
・試験ウイルス液の接種およびウイルス力価（ウイルス感染価）の測定
試験実施前に、後述の試験方法と同様の処理を行った試験資材塗布試験片を、細胞維持培地１０ｍＬで洗い出した後、さらに１０倍段階希釈し、各希釈液を培養細胞に接種し、３７℃、５％ＣＯ２下で５日間培養した。培養細胞が正常な形状を示さなかった場合、資材による細胞毒性有りと判定し、本試験では細胞毒性が確認された希釈倍率を試験から除外した。
試験実施前に、後述の試験方法と同様の処理を行った試験資材塗布試験片を、細胞維持培地１０ｍＬで洗い出した後、さらに１０倍段階希釈し、各希釈液を培養細胞に接種し、３７℃、５％ＣＯ２下で５日間培養した。培養細胞が正常な形状を示さなかった場合、資材による細胞毒性有りと判定し、本試験では細胞毒性が確認された希釈倍率を試験から除外した。
その結果、洗い出し液原液で細胞毒性は確認されなかったため、本試験における検出限界は、洗い出し液中の濃度として１００．５ＴＣＩＤ５０／ｍＬとした。
（１）対照区及び試験区の試験片に試験開始１８時間前から細胞維持培地０．２ｍＬを滴下して滅菌フィルム（ポリエチレンフィルム）を被覆した状態で保管した。
（２）上記保管経過後の試験片の被覆フィルムを剥がし、試験ウイルス液を０．２ｍＬ添加して、再度フィルムを被せて、乾燥しないようキャップを閉じて密閉して反応開始とした。
（３）試験設定に従い室温下で２時間静置し反応時間とした。
（４）感作時間経過後、フラスコ内に細胞維持培地１０ｍＬを添加、フィルムを剥がしつつよく混合してウイルスを洗い出した。
（５）洗い出し液について、さらに細胞維持培地で１０倍段階希釈を行い、各希釈液を９６ｗｅｌｌマイクロプレートの培養細胞に接種し、５％ＣＯ２ガス存在下で、３７℃、５日間培養した。
（６）培養後のＣＰＥの有無から、ウイルス力価（ウイルス感染価）（ＴＣＩＤ５０）を測定した。
・評価
試験例２と同様にして、抗ウイルス活性値及び減少率（％）を算出した。結果を表８に示す。
試験例２と同様にして、抗ウイルス活性値及び減少率（％）を算出した。結果を表８に示す。
表８に示すように、試験開始時においてウイルス感染価で１０５．７（ＴＣＩＤ５０／試験片）であった。
２時間後では、対照区ではやや自然減衰がみられ１０５．５（ＴＣＩＤ５０／試験片）、試験区では１０３．７（ＴＣＩＤ５０／試験片）で抗ウイルス活性値１．８及び減少率９８．４％となった。
以上より、実施例３の組成物を用いてコーティングした試験片では、２時間接触させることで、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して、高いウイルス減少効果を得られることが分かる。
（試験例４）
・試験資材
１：実施例４の組成物
２：実施例５の組成物
３：実施例６の組成物
各資材は等量の無水エタノールに溶解し、２５ｃｍ２平底フラスコ底面（ポリスチレン製）に、各１ｍＬ（各資材として０．５ｍＬ）を滴下後、均一に広がるように塗布した。その後、キャップを閉じずに約１２時間乾燥させ、エタノール分を蒸発させて試験片とした。試験例４では、エタノールの影響を除去するため、乾燥時間を長く設定した。
・試験資材
１：実施例４の組成物
２：実施例５の組成物
３：実施例６の組成物
各資材は等量の無水エタノールに溶解し、２５ｃｍ２平底フラスコ底面（ポリスチレン製）に、各１ｍＬ（各資材として０．５ｍＬ）を滴下後、均一に広がるように塗布した。その後、キャップを閉じずに約１２時間乾燥させ、エタノール分を蒸発させて試験片とした。試験例４では、エタノールの影響を除去するため、乾燥時間を長く設定した。
実施例４～６の組成物を用いて形成した塗膜は、透明であった。
なお、対照区（比較例４）として、無水エタノールのみを２５ｃｍ２平底フラスコ底面に同様に塗布し、乾燥させたものを使用した。
・区の設定
・試験ウイルス液の調製
試験例２と同様の方法により、試験ウイルス液を調製した。
試験例２と同様の方法により、試験ウイルス液を調製した。
・試験ウイルス液の接種およびウイルス力価（ウイルス感染価）の測定
試験例３と同様の方法により、試験ウイルス液の接種およびウイルス感染価の測定を行った。
試験例３と同様の方法により、試験ウイルス液の接種およびウイルス感染価の測定を行った。
・評価
試験例２と同様にして、抗ウイルス活性値及び減少率（％）を算出した。結果を表１０に示す。
試験例２と同様にして、抗ウイルス活性値及び減少率（％）を算出した。結果を表１０に示す。
表１０に示すように、対照区では試験開始後から、試験開始後２時間までの間にウイルス量の自然減衰が見られた（１０５．７→１０５．５ＴＣＩＤ５０／試験片）。
試験区１では、開始後２時間で１０４．５（ＴＣＩＤ５０／試験片）で抗ウイルス活性値１．０及び減少率９０．０％、試験区２では１０４．１（ＴＣＩＤ５０／試験片）で抗ウイルス活性値１．４及び減少率９５．９％となった。試験区３では１０３．７（ＴＣＩＤ５０／試験片）で抗ウイルス活性値１．８及び減少率９８．４％となった。
以上より、実施例４～６の組成物を用いてコーティングした試験片では、２時間接触させることで、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して、高いウイルス減少効果を得られることが分かる。
Claims (10)
- ロジン、コパールおよびセラックの少なくとも一つを含む、抗ウイルス剤。
- 前記ロジンおよび前記セラックを含む、請求項１に記載の抗ウイルス剤。
- 前記ロジン１．０質量部に対して、前記セラックを０．０２～２．０質量部含む、請求項２に記載の抗ウイルス剤。
- 前記ロジン、前記コパールおよび前記セラックを含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の抗ウイルス剤。
- 前記ロジン１．０質量部に対して、前記コパールを０．０２～２．０質量部含み、前記セラックを０．０２～２．０質量部含む、請求項４に記載の抗ウイルス剤。
- 請求項１～５のいずれか１項に記載の抗ウイルス剤と、溶媒とを含む、抗ウイルス性組成物。
- 植物油をさらに含む、請求項６に記載の抗ウイルス性組成物。
- 膜形成用である、請求項６または７に記載の抗ウイルス性組成物。
- 請求項８に記載の抗ウイルス性組成物を用いて形成される、抗ウイルス性膜。
- 請求項９に記載の抗ウイルス性膜を表面の少なくとも一部に有する、抗ウイルス性物品。
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