JP2023027301A - キメラ凝固因子を使用して血友病性関節症を処置する方法 - Google Patents

キメラ凝固因子を使用して血友病性関節症を処置する方法 Download PDF

Info

Publication number
JP2023027301A
JP2023027301A JP2022200995A JP2022200995A JP2023027301A JP 2023027301 A JP2023027301 A JP 2023027301A JP 2022200995 A JP2022200995 A JP 2022200995A JP 2022200995 A JP2022200995 A JP 2022200995A JP 2023027301 A JP2023027301 A JP 2023027301A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
days
fviii
region
factor
joint
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2022200995A
Other languages
English (en)
Inventor
ジェニファー・デュモン
Dumont Jennifer
ニシャ・ジャイン
Jain Nisha
デシル・グレイズブルック
Glazebrook Desilu
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bioverativ Therapeutics Inc
Original Assignee
Bioverativ Therapeutics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bioverativ Therapeutics Inc filed Critical Bioverativ Therapeutics Inc
Publication of JP2023027301A publication Critical patent/JP2023027301A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • A61K38/37—Factors VIII
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4846—Factor VII (3.4.21.21); Factor IX (3.4.21.22); Factor Xa (3.4.21.6); Factor XI (3.4.21.27); Factor XII (3.4.21.38)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

【課題】血友病を有するヒトにおける、関節の可逆性の血友病性関節症を処置する方法を提供する。【解決手段】関節の可逆性の血友病性関節症を処置する方法における、凝固因子とＦｃ領域とを含むキメラタンパク質または組成物の使用を提供する。好ましくは、前記Ｆｃ領域は、低親和性免疫グロブリンガンマＦｃ領域受容体ＩＩ－ｂ（ＦｃγＲＩＩＢ）に特異的に結合する、使用である。より好ましくは、前記凝固因子は、第ＶＩＩ因子（ＦＶＩＩ）、第ＶＩＩａ因子（ＦＶＩＩａ）、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）、第Ｘ因子（ＦＸ）、フォンヴィルブランド因子（ＶＷＦ）、ＦＩＸおよびＦＸに特異的に結合するその抗原結合部分、またはその任意の組合せからなる群から選択される、使用である。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、その各々の全体を参照によって本明細書に組み入れる、２０１６年１２月２日に提出された米国特許仮出願第６２／４２９，５０９号、２０１７年７月７日に提出された同第６２／５２９，８９６号、２０１７年８月２５日に提出された同第６２／５５０，４８８号、および２０１７年９月１４日に提出された同第６２／５５８，７９３号の恩典を主張する。
本開示は、全般的に止血障害の治療薬の分野に関する。
血友病は、凝固タンパク質をコードする遺伝子、特にＦＶＩＩＩ活性の欠乏を引き起こす（血友病Ａ）第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）遺伝子の変異および／もしくは欠失、またはＦＩＸ活性の欠乏を引き起こす（血友病Ｂ）第ＩＸ因子遺伝子の変異および／もしくは欠失によって引き起こされるＸ連鎖出血障害である（例えば、非特許文献１を参照されたい）。疾患は、特発性出血および外傷後の過剰な出血を特徴とする。血友病の処置は、特発性出血を予防するためにＦＶＩＩＩおよび／またはＦＩＸ活性の回復を標的とする代替治療による（例えば、非特許文献２を参照されたい）。
時間と共に、しばしば幼児期に始まる筋肉および関節への繰り返しの出血は、血友病性関節症および関節の損傷を引き起こす。血友病性関節症は、血友病に関連する一般的かつ重度の合併症であり、しばしば疼痛、変形、および無能力を引き起こす。血友病性関節症に罹患する最も一般的な患者は、年齢３～１５歳の若い男性である。罹患する可能性が最も高い関節は膝であるが、血友病性関節症は、肘、足首、肩、および脊椎骨にも存在し得る。血友病性関節症は、非可逆的であることが知られている。このため、血友病性関節症の現在利用可能な処置は限られている。
Ｐｅｙｖａｎｄｉ，Ｆ．ら、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ １２：８２～８９頁（２００６年） Ｍａｎｎｕｃｃｉ，Ｐ．Ｍ．ら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：１７７３～１７７９頁（２００１年）
したがって、血友病性関節症を処置する新規方法を開発する必要がある。
本開示の一態様は、血友病を有するヒトにおける関節の可逆性の血友病性関節症を処置する方法であって、凝固因子とＦｃ領域とを含むキメラタンパク質またはキメラタンパク質を含む組成物の有効量をヒトに投与することを含む方法を提供する。一部の実施形態では、可逆性の血友病性関節症は滑膜炎を含む。ある特定の実施形態では、可逆性の血友病性関節症は、微小出血または無症状出血を含む。
本開示の別の態様は、血友病を有するヒトにおける滑膜炎を処置する方法であって、凝固因子とＦｃ領域とを含むキメラタンパク質または凝固因子とＦｃ領域とを含む組成物の
有効量をヒトに投与することを含む方法を開示する。一部の実施形態では、滑膜炎は、血友病性関節症に関連している。
本開示の別の態様は、血友病を有するヒトの関節における血管リモデリングの発生を低減させる方法であって、凝固因子とＦｃ領域とを含むキメラタンパク質の有効量をヒトに投与することを含む方法を開示する。本開示の別の態様は、血友病を有するヒトの関節における血管リモデリングの予防処置であって、凝固因子とＦｃ領域とを含むキメラタンパク質または凝固因子とＦｃ領域とを含む組成物の有効量をヒトに投与することを含む処置を提供する。
本開示の別の態様は、血友病を有するヒトの関節周囲の軟部組織を改善する方法であって、凝固因子とＦｃ領域とを含むキメラタンパク質または凝固因子とＦｃ領域とを含む組成物の有効量をヒトに投与することを含む方法を開示する。
一部の実施形態では、投与により、ヒトにおける関節健康スコア（ＨＪＨＳ）が改善される。一部の実施形態では、投与により、ヒトにおける関節痛が低減する。
ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、低親和性免疫グロブリンガンマＦｃ領域受容体ＩＩ－ｂ（ＦｃγＲＩＩＢ）に特異的に結合する。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、樹状細胞特異的細胞内接着分子－３結合ノンインテグリン（ＤＣ－ＳＩＧＮ））に特異的に結合する。
一部の態様では、方法は、処置を必要とするヒトを特定することをさらに含む。一部の実施形態では、特定することは、イメージングシステムを使用することを含む。ある特定の実施形態では、イメージングシステムは、Ｘ線撮影、磁気共鳴イメージング、超音波造影法、パワードップラー超音波検査、またはその任意の組合せを含む。一部の実施形態では、ヒトは、関節の炎症に関連する１つまたは複数のバイオマーカーを発現する。
一部の態様では、凝固因子は、第ＶＩＩ因子（ＦＶＩＩ）、第ＶＩＩａ因子（ＦＶＩＩａ）、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）、第Ｘ因子（ＦＸ）、フォンヴィルブランド因子（ＶＷＦ）、ＦＩＸおよびＦＸに特異的に結合するその抗原結合部分、またはその任意の組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、キメラタンパク質は、ＦＶＩＩＩ－Ｆｃを含む。他の実施形態では、キメラタンパク質は、ＦＩＸ－Ｆｃを含む。一実施形態では、キメラタンパク質は、第ＶＩＩＩ因子部分とＶＷＦ部分とを含み、ＦＶＩＩＩ部分はＦＶＩＩＩポリペプチドまたはその断片を含み、ＶＷＦ部分はＶＷＦポリペプチドまたはその断片を含み、ＦＶＩＩＩ部分は第１のＦｃ領域に連結され、ＶＷＦ部分は第２のＦｃ領域に連結され、および第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域は互いに会合している。
一部の実施形態では、キメラタンパク質は、半減期延長部分をさらに含む。ある特定の実施形態では、半減期延長部分は、アルブミンもしくはその断片、アルブミン結合部分、ＰＡＳ配列、ＨＡＰ配列、トランスフェリンもしくはその断片、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリシアル酸、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、その誘導体、またはその任意の組合せを含む。
一部の態様では、ＦＶＩＩＩとＦｃ領域とを含む組成物、例えば、キメラタンパク質の有効量は、約２０ＩＵ／ｋｇ～約３００ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩ－Ｆｃを含むキメラタンパク質は、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、約１８日間、約１９日間、約２
０日間、約２１日間、約２２日間、約２３日間、または約２４日間の投与間隔で投与される。
他の態様では、ＦＩＸ－Ｆｃを含むキメラタンパク質の有効量は、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、ＦＩＸ－Ｆｃを含むキメラタンパク質は、約３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、２１日間、２２日間、２３日間、２４日間、２５日間、２６日間、２７日間、または２８日間の投与間隔で投与される。
特定の一実施形態では、キメラタンパク質は、ＦＶＩＩＩ部分、ＶＷＦ部分、第１のＦｃ領域、および第２のＦｃ領域を含み；ＦＶＩＩＩ部分はＦＶＩＩＩポリペプチドもしくはその断片を含み；ＶＷＦ部分はＶＷＦポリペプチドもしくはその断片を含み；ＦＶＩＩＩ部分は第１のＦｃ領域に連結され；ＶＷＦ部分は第２のＦｃ領域に連結され；および第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域は互いに会合している。
実施形態
Ｅ１．血友病を有するヒトにおける関節の可逆性の血友病性関節症を処置する方法であって、凝固因子とＦｃ領域とを含むキメラタンパク質の有効量をヒトに投与することを含む方法。
Ｅ２．可逆性の血友病性関節症が滑膜炎を含む、Ｅ１に記載の方法。
Ｅ３．可逆性の血友病性関節症が微小出血を含む、Ｅ１またはＥ２に記載の方法。
Ｅ４．血友病を有するヒトにおける滑膜炎を処置する方法であって、凝固因子とＦｃ領域とを含むキメラタンパク質の有効量をヒトに投与することを含む方法。
Ｅ５．滑膜炎が、血友病性関節症に関連している、Ｅ４に記載の方法。
Ｅ６．血友病を有するヒトの関節における血管リモデリングの発生を防止するかまたは低減させる方法であって、凝固因子とＦｃ領域とを含むキメラタンパク質の有効量をヒトに投与することを含む方法。
Ｅ７．血友病を有するヒトの関節周囲の軟部組織を改善する方法であって、凝固因子とＦｃ領域とを含むキメラタンパク質の有効量をヒトに投与することを含む方法。
Ｅ８．投与により、ヒトにおける関節健康スコア（ＨＪＨＳ）が改善される、Ｅ１～Ｅ７のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ９．関節健康スコアが、関節総スコアと全歩行スコア（Global Gait score）の合計
である、Ｅ８に記載の方法。
Ｅ１０．関節総スコアが、腫れ、腫れの持続期間、筋萎縮、関節摩擦音、屈曲の損失、伸展の損失、関節痛、および筋力に基づいて測定される、Ｅ９に記載の方法。
Ｅ１１．全歩行スコアが、歩行、階段、ランニング、または片足でのホッピングに基づいて測定される、Ｅ９に記載の方法。
Ｅ１２．投与により、ヒトにおける関節痛が低減される、Ｅ１～Ｅ１１のいずれか一項
に記載の方法。
Ｅ１３．関節が、１つまたは両方の肘、１つまたは両方の膝、１つまたは両方の足首、１つまたは両方の肩、１つまたは両方の股関節、１つまたは両方の手首、１つまたは複数の手の関節、１つまたは複数の足の関節、およびその任意の組合せからなる群から選択される、Ｅ１～Ｅ１２のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ１４．関節が肘である、Ｅ１～Ｅ１３のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ１５．関節が膝である、Ｅ１～Ｅ１３のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ１６．関節が足首である、Ｅ１～Ｅ１３のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ１７．Ｆｃ領域が、低親和性免疫グロブリンガンマＦｃ領域受容体ＩＩ－ｂ（ＦｃγＲＩＩＢ）に特異的に結合する、Ｅ１～Ｅ１６のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ１８．Ｆｃ領域が、樹状細胞特異的細胞内接着分子－３結合ノンインテグリン（ＤＣ－ＳＩＧＮ）に特異的に結合する、Ｅ１～Ｅ１７のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ１９．処置を必要とするヒトを特定することをさらに含む、Ｅ１～Ｅ１８のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ２０．特定することが、イメージングシステムを使用することを含む、Ｅ１９に記載の方法。
Ｅ２１．イメージングシステムが、Ｘ線撮影、磁気共鳴イメージング、超音波造影法、パワードップラー超音波検査、またはその任意の組合せを含む、Ｅ２０に記載の方法。
Ｅ２２．ヒトが、関節の炎症に関連する１つまたは複数のバイオマーカーを発現する、Ｅ２１に記載の方法。
Ｅ２３．凝固因子が、第ＶＩＩ因子（ＦＶＩＩ）、第ＶＩＩａ因子（ＦＶＩＩａ）、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）、第Ｘ因子（ＦＸ）、フォンヴィルブランド因子（ＶＷＦ）、ＦＩＸおよびＦＸに特異的に結合するその抗原結合部分、またはその任意の組合せからなる群から選択される、Ｅ１～Ｅ２２のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ２４．キメラタンパク質が、ＦＶＩＩＩ－Ｆｃを含む、Ｅ１～Ｅ２３のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ２５．キメラタンパク質が、ＦＩＸ－Ｆｃを含む、Ｅ１～Ｅ２３のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ２６．キメラタンパク質が第ＶＩＩＩ因子部分とＶＷＦ部分とを含み、ＦＶＩＩＩ部分がＦＶＩＩＩポリペプチドまたはその断片を含み、ＶＷＦ部分がＶＷＦポリペプチドまたはその断片を含み、ＦＶＩＩＩ部分が第１のＦｃ領域に連結され、ＶＷＦ部分が第２のＦｃ領域に連結され、および第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域が互いに会合している、Ｅ１～Ｅ２４いずれか一項に記載の方法。
Ｅ２７．ＦＶＩＩＩポリペプチドが完全長の成熟ＦＶＩＩＩを含む、Ｅ２３、Ｅ２４、
およびＥ２６のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ２８．ＦＶＩＩＩポリペプチドがＢドメイン欠失ＦＶＩＩＩを含む、Ｅ２３、Ｅ２４、およびＥ２６のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ２９．Ｂドメイン欠失ＦＶＩＩＩが、ＦＶＩＩＩのＢドメインの全てまたは一部の欠失を含む、Ｅ２８に記載の方法。
Ｅ３０．Ｂドメイン欠失ＦＶＩＩＩが、成熟ＦＶＩＩＩのアミノ酸残基７４６～１６４８の欠失を含む、Ｅ２８またはＥ２９に記載の方法。
Ｅ３１．ＶＷＦポリペプチドがＶＷＦのＤ’ドメインおよびＤ３ドメインを含むＶＷＦ断片を含む、Ｅ２３、Ｅ２４、およびＥ２５～Ｅ３０のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ３２．キメラタンパク質が半減期延長部分をさらに含む、Ｅ１～Ｅ３１のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ３３．半減期延長部分が、アルブミンもしくはその断片、アルブミン結合部分、ＰＡＳ配列、ＨＡＰ配列、トランスフェリンもしくはその断片、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリシアル酸、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、その誘導体、またはその任意の組合せを含む、Ｅ３２に記載の方法。
Ｅ３４．半減期延長部分が、凝固因子内に挿入される、Ｅ３２またはＥ３３に記載の方法。
Ｅ３５．半減期延長部分が、凝固因子とＦｃ領域の間に挿入される、Ｅ３２またはＥ３３に記載の方法。
Ｅ３６．ＦＶＩＩＩとＦｃ領域とを含むキメラタンパク質の有効量が、約２０ＩＵ／ｋｇ～約３００ＩＵ／ｋｇである、Ｅ２４およびＥ２６～Ｅ３５のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ３７．ＦＶＩＩＩ－Ｆｃを含むキメラタンパク質の有効量が、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２７５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２５０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１７５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１５０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１２５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約９０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約８０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約７０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約６０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約４０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約３０ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約７０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約８０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約９０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約１００ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約１５０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約２００ＩＵ／ｋｇ～約３００ＩＵ／ｋｇ、約２２５ＩＵ／ｋｇ～約３００ＩＵ／ｋｇ、約２５０ＩＵ／ｋｇ～約３００ＩＵ／ｋｇ、約２７５ＩＵ／ｋｇ～約３００ＩＵ／ｋｇ、または約２５ＩＵ／ｋｇ～約７５ＩＵ／ｋｇである、Ｅ３６に記載の方法。
Ｅ３８．ＦＶＩＩＩ－Ｆｃを含むキメラタンパク質の有効量が、約２５ＩＵ／ｋｇ～約６５ＩＵ／ｋｇである、Ｅ３６またはＥ３７に記載の方法。
Ｅ３９．ＦＶＩＩＩ－Ｆｃを含むキメラタンパク質が、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、約１８日間、約１９日間、約２０日間、約２１日間、約２２日間、約２３日間、または約２４日間の投与間隔で投与される、Ｅ２４、およびＥ２６～Ｅ３８のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ４０．ＦＶＩＩＩ－Ｆｃを含むキメラタンパク質が、約１～約１４日間、約１～約１３日間、約１～約１２日間、約１～約１１日間、約１～約１０日間、約１～約９日間、約１～約８日間、約１～約７日間、約１～約６日間、約１～約５日間、約１～約４日間、約１～約３日間、約１～約２日間、約２～約１４日間、約３～約１４日間、約４～約１４日間、約５～約１４日間、約６～約１４日間、約７～約１４日間、約８～約１４日間、約９～約１４日間、約１０～約１４日間、約１１～約１４日間、約１２～約１４日間、約１３～約１４日間、または約５～約１０日間の投与間隔で投与される、Ｅ２４、およびＥ２６～Ｅ３８のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ４１．ＦＶＩＩＩ－Ｆｃを含むキメラタンパク質が、約３日間～約５日間の投与間隔で投与される、Ｅ２４、およびＥ２６～Ｅ４０のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ４２．ＦＩＸ－Ｆｃを含むキメラタンパク質の有効量が、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇである、Ｅ２５に記載の方法。
Ｅ４３．ＦＩＸ－Ｆｃを含むキメラタンパク質の有効量が、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約７０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約８０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約９０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約９０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約８０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約７０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約６０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約４０ＩＵ／ｋｇ、または約２０ＩＵ／ｋｇ～約３０ＩＵ／ｋｇである、Ｅ２５～Ｅ４２に記載の方法。
Ｅ４４．ＦＩＸ－Ｆｃを含むキメラタンパク質の有効量が、約５０ＩＵ／ｋｇ～１００ＩＵ／ｋｇである、Ｅ２５およびＥ４２～Ｅ４４のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ４５．ＦＩＸ－Ｆｃを含むキメラタンパク質が、約３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、２１日間、２２日間、２３日間、２４日間、２５日間、２６日間、２７日間、または２８日間の投与間隔で投与される、Ｅ２５およびＥ４２～Ｅ４４のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ４６．ＦＩＸ－Ｆｃを含むキメラタンパク質が、約１～約２１日間、約１～約２０日間、約１～約１９日間、約１～約１８日間、約１～約１７日間、約１～約１６日間、約１～約１５日間、約１～約１４日間、約１～約１３日間、約１～約１２日間、約１～約１１日間、約１～約１０日間、約１～約９日間、約１～約８日間、約１～約７日間、約１～約６日間、約１～約５日間、約１～約４日間、約１～約３日間、約１～約２日間、約２～約２１日間、約３～約２１日間、約４～約２１日間、約５～約２１日間、約６～約２１日間、約７～約２１日間、約８～約２１日間、約９～約２１日間、約１０～約２１日間、約１１～約２１日間、約１２～約２１日間、約１３～約２１日間、約１４～約２１日間、約１５～約２１日間、約１６～約２１日間、約１７～約２１日間、約１８～約２１日間、約１
９～約２１日間、約２０～約２１日間、約５～約１０日間、約１０～約１５日間、約１５～約２０日間の投与間隔で投与される、Ｅ２５およびＥ４２～Ｅ４５のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ４７．ＦＩＸ－Ｆｃを含むキメラタンパク質が、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、または約１４日間の投与間隔で投与される、Ｅ２５およびＥ４２～Ｅ４６のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ４８．キメラタンパク質が、ＦＶＩＩＩ部分、ＶＷＦ部分、第１のＦｃ領域、および第２のＦｃ領域を含み、ＦＶＩＩＩ部分がＦＶＩＩＩポリペプチドまたはその断片を含み、ＶＷＦ部分がＶＷＦポリペプチドまたはその断片を含み、ＦＶＩＩＩ部分が第１のＦｃ領域に連結され、ＶＷＦ部分が第２のＦｃ領域に連結され、および第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域が互いに会合している、Ｅ１～Ｅ３２のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ４９．キメラタンパク質のＦｃ領域が、キメラタンパク質の関節への局在化を促進する、Ｅ１～Ｅ４７のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ５０．ヒトが、６歳未満である、Ｅ１～Ｅ４９のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ５１．ヒトが、６歳から１２歳未満である、Ｅ１～Ｅ４９のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ５２．ヒトが、１２歳またはそれ以上である、Ｅ１～Ｅ４９のいずれか一項に記載の方法。
Ｅ５３．凝固因子が、血漿区画外ならびに血漿区画内の組織に分布する、Ｅ１～Ｅ５２のいずれか一項に記載の方法。
図１Ａ～図１Ｆは、ベースラインでの標的関節と共にＦＶＩＩＩ－Ｆｃ試験（図１Ａおよび１Ｂ）および子供に関するＦＶＩＩＩ－Ｆｃ試験（図１Ｃ～１Ｆ）に由来する対象の試験前（図１Ａ、１Ｃ、および１Ｅ）および試験中の中央値（図１Ｂ、１Ｄ、および１Ｆ）（ＩＱＲ）年間出血回数（ＡＢＲ）を示す図である。図１Ｃ～１Ｄは、子供に関するＦＶＩＩＩ－Ｆｃ試験に由来する合わせたデータを示すが、図１Ｅ～１Ｆは、対象の年齢（６歳未満および６～１２歳未満）に基づいて階層化された同じデータを示す。 図１－１の続き。 図２Ａ～２Ｂは、ＦＶＩＩＩ－Ｆｃ試験ベースラインから拡張試験２年目（図２Ａ；ｘ軸）および拡張試験３年目（図２Ｂ；ｘ軸）までの総改変血友病関節健康スコアの平均変化（ｍＨＪＨＳ；ｙ軸）を示す。図２Ｂは、ベースライン時の標的関節の存在（はい；三角）と非存在（いいえ；丸）とを区別する。 図３Ａ～３Ｃは、ＦＶＩＩＩ－Ｆｃ試験ベースラインから拡張試験２年目まで（図３Ａ；ｘ軸）および拡張試験３年目まで（図３Ｂ）、ならびに子供に関するＦＶＩＩＩ－Ｆｃ試験から、試験前予防処置を受けている対象および試験前出血時止血（オンデマンド）処置を受けている対象に関する延長２年目まで（図３Ｃ；ｘ軸）の総ｍＨＪＨＳの平均変化（ｙ軸）を示す図である。 図３－１の続き。 ＦＶＩＩＩ－Ｆｃ試験ベースライン時に標的関節を有する対象（四角）およびＦＶＩＩＩ－Ｆｃ試験ベースライン時に標的関節を有しない対象（菱形）に関する、ＦＶＩＩＩ－Ｆｃ試験ベースラインから２年目まで（ｘ軸）の総ｍＨＪＨＳの平均変化（ｙ軸）を示す図である。 ＦＶＩＩＩ－Ｆｃ試験ベースライン時のｍＨＪＨＳスコアにおける障害の最低四分位数（lowest quartile）（Ｑ１；≧１～１０）（菱形）、ＦＶＩＩＩ－Ｆｃ試験ベースライン時のｍＨＪＨＳスコアにおける障害の第２最低四分位数（Ｑ２；≧１０～２２）（四角）；ＦＶＩＩＩ－Ｆｃ試験ベースライン時のｍＨＪＨＳスコアにおける障害の第２最高四分位数（Ｑ３；≧２２～３４）（三角）、およびＦＶＩＩＩ－Ｆｃ試験ベースライン時のｍＨＪＨＳスコアにおける障害の最高四分位数（Ｑ４；≧３４～３７）（菱形）にある対象に関する、ＦＶＩＩＩ－Ｆｃ試験ベースラインから２年目まで（ｘ軸）の総ｍＨＪＨＳの平均変化（ｙ軸）を示す図である。 ＦＶＩＩＩ－Ｆｃ試験ベースライン時に標的関節を有する対象に関する、ＦＶＩＩＩ－Ｆｃ試験ベースラインから２年目まで（ｘ軸）の総ｍＨＪＨＳの平均変化（ｙ軸）を示す図である。 体重負荷関節（菱形）および非体重負荷標的関節（四角）に関する、ＦＶＩＩＩ－Ｆｃ試験ベースラインから２年目まで（ｘ軸）の総ｍＨＪＨＳの平均変化（ｙ軸）を示す図である。 腫れ（菱形）、可動域（四角）、および筋力（三角）に関する、ＦＶＩＩＩ－Ｆｃ試験ベースラインから２年目まで（ｘ軸）の総ｍＨＪＨＳの平均変化（ｙ軸）を示す図である。 関節不安定（暗灰色の四角）、腫れ（黒色の三角）、筋萎縮（明灰色の四角）、関節疼痛（明灰色の菱形）、関節摩擦音（黒色の四角）、および筋力（明灰色の丸）に関する、ＦＶＩＩＩ－Ｆｃ試験患者におけるｍＨＪＨＳの平均（ＳＥＭ）変化（ｙ軸）を示す図である。各ｍＨＪＨＳ測定に関する総ベースライン（ＢＬ）スコアを示す。 ｒＦＩＸＦｃ試験に由来する対象に関する、年間出血回数（ＡＢＲ）の試験前（図１０Ａ）および試験中中央値（図１０Ｂ）（ＩＱＲ）を示す図である。図１０Ｂは、試験中全体のＡＢＲ（暗い丸）、標的関節全体のＡＢＲ（灰色の菱形）、および標的関節の自発的ＡＢＲ（灰色の三角）をさらに示す。ＷＰ＝毎週の予防；ＩＰ＝個別化された間隔的予防；およびＭＰ＝改変された予防（図１０Ａ～１０Ｂ）。 ｒＦＩＸＦｃ試験に由来する対象に関する、年間出血回数（ＡＢＲ）の試験前（図１０Ａ）および試験中中央値（図１０Ｂ）（ＩＱＲ）を示す図である。図１０Ｂは、試験中全体のＡＢＲ（暗い丸）、標的関節全体のＡＢＲ（灰色の菱形）、および標的関節の自発的ＡＢＲ（灰色の三角）をさらに示す。ＷＰ＝毎週の予防；ＩＰ＝個別化された間隔的予防；およびＭＰ＝改変された予防（図１０Ａ～１０Ｂ）。 フォローアップの開始以来１２カ月以内に関節手術を受けていない、少なくとも１２カ月の連続フォローアップを行った対象（ｎ＝３７）において解消された、および解消されていない評価可能な標的関節（足首、膝、肘、臀部、手首、および肩）の数を示すグラフ表示である。各標的関節の数（ｎ）を、関連データ上に重ね合わせ、合計９３の標的関節を評価する。解消した（１００％）および解消していない（０％）標的関節のパーセントを、ｘ軸の下に示す。 図１２Ａ～１２Ｃは、１２５Ｉ－ＳＩＢ標識されたＦＩＸ（図１２Ａ）、１２５Ｉ－ＳＩＢ標識されたＦＩＸＦｃ（図１２Ｂ）、または１２５Ｉ－ＳＩＢ標識されたＧｌｙｃｏＰＥＧ化ＦＩＸ（図１２Ｃ）を投与されたマウスの単一光子放出型コンピューター断層撮影（ＳＰＥＣＴ）画像である。図１２Ｄ～図１２Ｇは、様々な時点での、１２５Ｉ－ＳＩＢ標識されたＦＩＸ、１２５Ｉ－ＳＩＢ標識されたＦＩＸＦｃ、または１２５Ｉ－ＳＩＢ標識されたＧｌｙｃｏＰＥＧ化ＦＩＸを投与されたマウスの直接比較を示す。ヒートマップは、それぞれのマウスにおける１２５Ｉ－ＳＩＢ標識の相対濃度（％ＩＤ／ｇ）を示す（図１２Ａ～１２Ｇ）。 図１２－１の続き。 図１２－２の続き。 図１２－３の続き。 図１３Ａ～１３Ｂは、膝（図１３Ａ）および肩（図１３Ｂ）における経時的な１２５Ｉ－ＳＩＢ標識されたＦＩＸ、１２５Ｉ－ＳＩＢ標識されたＦＩＸＦｃ、または１２５Ｉ－ＳＩＢ標識されたＧｌｙｃｏＰＥＧ化ＦＩＸの投与後の、図１２Ａ～１２Ｇに示されたマウスにおける１２５Ｉ－ＳＩＢ標識の局在化の強度を示すグラフである。データは、右膝と左膝および右肩と左肩の両方について収集し、これらを合わせて、示されたデータを生成した（それぞれ、図１３Ａおよび１３Ｂ）。 図１４Ａ～図１４Ｂは、図１４Ａは、標識されていないＦＩＸおよびＦＩＸＦｃと比較した、また、発色アッセイまたは凝固１段法によって測定された、標識されたＦＩＸおよび標識されたＦＩＸＦｃの相対活性を示すグラフである。図１４Ｂは、ＨｅｍＢマウスにおける、標識された、および標識されていないＦＩＸ分子の薬物動態を示すグラフである。 図１５Ａ～１５Ｆは、肘（屈曲：図１５Ａ；および伸展：図１５Ｂ）、膝（屈曲：図１５Ｃ；および伸展：図１５Ｄ）、および足首（足底屈曲：図１５Ｅ；および背屈：図１５Ｆ）関節の可動域と共に、改変血友病関節健康スコア（ＨＪＨＳ）および重ね合わせた屈曲／伸展の程度を示す図である。 図１５－１の続き。 図１５－２の続き。 図１６は、ＦｃγＲ結合に対するｒＦＶＩＩＩＦｃの効果、内在化、シグナル伝達およびサイトカイン産生、および遺伝子発現変化、ならびにｉｎ ｖｉｔｒｏでのその後の相互作用およびＴ細胞に対する効果を調査するために使用される方法を概略する流れ図である。 図１７Ａ～１７Ｃは、西洋わさびペルオキシダーゼ免疫複合体（ＨＲＰ－ＩＣ；陽性対照）、ＩｇＧ１、組換えＦＶＩＩＩ（ｒＦＶＩＩＩ）、またはｒＦＶＩＩＩ Ｆｃ融合タンパク質（ｒＦＶＩＩＩＦｃ）を用いる処理後のＦｃγ受容体ＣＤ１６（図１７Ａ）、ＣＤ３２（図１７Ｂ）、およびＣＤ６４（図１７Ｃ）の相対的なマクロファージおよび樹状細胞上での表面発現レベルのグラフ表示である。星印（＊）は、有意性の程度を示す（ｎ＝３；＊＝Ｐ≦０．０５、＊＊＝Ｐ≦０．０１、＊＊＊＝Ｐ≦０．００５、他の処理と比較したＨＲＰ－ＩＣの有意性は示さない）。 図１８Ａ～１８Ｃは、ｒＦＶＩＩＩまたはｒＦＶＩＩＩＦｃを用いる処理後の相対的シグナル伝達を示すグラフ表示である。図１８Ａは、ＨＲＰ－ＩＣ、ＩｇＧ１、ｒＦＶＩＩＩまたはｆＲＶＩＩＩＦｃで１５分間処理したＴＨＰ－１単球株（「ＴＨＰ－１」）、単球、末梢血単球由来マクロファージ（「マクロファージ」）、および末梢血単球由来樹状細胞中での、Ｓｙｋリン酸化によって測定されたシグナル伝達を示す。図１８Ｂは、ｒＦＶＩＩＩＦｃ（「ＷＴ」）、新生児Ｆｃ受容体に結合することができないｒＦＶＩＩＩＦｃ変異体（「ＦｃＲｎ変異体」）、またはＦｃγＲに結合することができないｒＦＶＩＩＩＦｃ変異体（「ＦｃｇＲ変異体」）で処理したマクロファージ中での相対的Ｓｙｋリン酸化を示す。図１８Ｃは、ＨＲＰ－ＩＣ、ＩｇＧ１、ｒＦＶＩＩＩまたはｒＦＶＩＩＩＦｃで処理した２４時間後のマクロファージ中での炎症性サイトカインであるインターロイキン１ｂ（ＩＬ－１ｂ）、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、および腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦａ）の相対的産生を示す。 図１８－１の続き。 図１９は、ｒＦＶＩＩＩまたはｒＦＶＩＩＩＦｃで処理した１分後、５分後、および３０分後の、Ｓｒｃ相同性領域２ドメイン含有ホスファターゼ－１（ＳＨＰ１）、ｐＳＨＰ２、ホスファチジルイノシトール－３，４，５－三リン酸５－ホスファターゼ１（ＳＨＩＰ１）、およびｐＳＨＩＰ２の相対的リン酸化状態を示す。星印（＊）は、有意性の程度を示す（ｎ＝３；＊＊Ｐ≦０．０１、＊＊＊Ｐ≦０．００５）。 図２０Ａ～２０Ｍは、ｒＦＶＩＩＩまたはｒＦＶＩＩＩＦｃで処理した後の寛容原性マクロファージの遺伝子発現パターンのグラフ表示である。図２０Ａ～２０Ｂは、ＩｇＧ１、ｒＦＶＩＩＩｃで６時間処理した単球由来マクロファージ（ｎ＝３）中で、有意に下方調節された遺伝子の分布（図２０Ａ）および有意に上方調節された遺伝子の分布（図２０Ｂ）を示すベン図である。図２０Ｃ～２０Ｇは、ｒＦＶＩＩＩまたはｒＦＶＩＩＩＦｃで処理した後に、定量的ＰＣＲによって測定された、様々なＮＲＦ２ならびにヘムオキシゲナーゼ１（Ｈｍｏｘ１；図２０Ｃ）、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ；図２０Ｄ）、リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ；図２０Ｅ）、初期増殖応答タンパク質２（ＥＧＲ２；図２０Ｆ）、および溶質運搬有機アニオン輸送体ファミリーメンバー４Ａ１（ＳＬＣＯ４Ａ１；図２０Ｇ）などの脂質代謝経路遺伝子；処理後６時間（図２０Ｉ）および１２時間（図２０Ｊ）でのＣＤ２０６；ならびにアルギナーゼ１（ＡＲＧ１；図２０Ｌ）の相対的発現を示すグラフである。星印（＊）は、有意性の程度を示す（ｎ＝８；＊Ｐ≦０．０５、＊＊Ｐ≦０．０１、＊＊＊Ｐ≦０．００５；図２０Ｃ～２０Ｇ）。図２０Ｋおよび２０Ｍは、ＣＤ２０６を発現するフローサイトメトリーによって収集された細胞数を示すグラフである。さらに、ｒＦＶＩＩＩＦｃにより教育されたマクロファージは、特徴的なＭ２様表現型を示すことがわかった（図２０Ｉ～２０Ｍ）。特に、ｒＦＶＩＩＩＦｃで処理したマクロファージは、６時間後（図２０Ｉ）および２４時間後（図２０Ｊ）に、ｒＦＶＩＩＩで処理した細胞よりも高い相対的ＣＤ２０６（マンノース受容体Ｃ－１型；ＭＲＣ１としても知られる）発現を有し、ｒＦＶＩＩＩＦｃで処理したマクロファージは、２４時間後にｒＦＶＩＩＩで処理した細胞よりも高い相対的ＡＲＧ１発現を有していた（図２０Ｍ）。 図２０－１の続き。 図２０－２の続き。 図２０－３の続き。 図２０－４の続き。 図２０－５の続き。 図２１Ａは、Ｔ細胞分化に対するｒＦＶＩＩＩＦｃ処理の効果を決定するために使用される方法を示す流れ図である。図２１Ｂは、マクロファージまたは樹状細胞をＩｇＧ１（対照）、ｒＦＶＩＩＩ、またはｒＦＶＩＩＩＦｃで２４時間処理した後、ナイーブなＣＤ４陽性Ｔ細胞との同時培養物中に入れた６日後の調節性Ｔ細胞のパーセントのグラフ表示である。図２１Ｃは、ＩｇＧ１、ｒＦＶＩＩＩ、またはｒＦＶＩＩＩＦｃで予備処理されたマクロファージまたは樹状細胞の条件化培地中でのナイーブなＣＤ４陽性Ｔ細胞の培養後の調節性Ｔ細胞のパーセントを示すグラフ表示である。 図２１－１の続き。 図２２は、ｒＦＶＩＩＩＦｃ調節性Ｔ細胞分化の提唱される機構を示す図である。 図２３は、マクロファージに対するｒＦＩＸＦｃの提唱される効果を示す図である。
本開示は、血友病を有するヒトにおける可逆性の血友病性関節症を処置する方法であって、凝固因子とＦｃ領域とを含むキメラタンパク質または凝固因子とＦｃ領域とを含む組成物の有効量をヒトに投与することを含む方法を提供する。本明細書に開示されるキメラタンパク質はまた、血友病を有するヒトの関節における滑膜炎、微小出血、１つもしくは複数の関節の炎症、血管リモデリング、またはその任意の組合せを処置するためにも使用することができる。ある特定の実施形態では、本発明の方法は、血友病を有するヒトの関節周囲の軟部組織を改善する。
Ｉ．定義
用語「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」実体は、その実体の１つまたは複数を指す；例えば、「１つのヌクレオチド配列（a nucleotide sequence）」は、１つまたは
複数のヌクレオチド配列を表すと理解される。そのため、用語「１つ（ａ）」（または「１つ（ａｎ）」）、「１つまたは複数」、および「少なくとも１つ」は、本明細書において互換的に使用することができる。
さらに、本明細書で使用される場合の「および／または」は、他の特色または構成要素の存在下または非存在下で、明記された２つの特色または構成要素の各々の具体的な開示として解釈すべきである。このため、本明細書における「Ａおよび／またはＢ」などの語句で使用される場合の用語「および／または」は、「ＡとＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）および「Ｂ」（単独）を含むと意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」などの語句で使用される場合の用語「および／または」は、以下の態様の各々を包含すると意図される：Ａ、Ｂ、およびＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）。
態様が本明細書において「含む」という言語と共に記載される場合は常に、「からなる」および／または「本質的にからなる」に関して記載される類似の態様も同様に提供されると理解される。
それ以外であると定義していない限り、本明細書で使用される全ての科学技術用語は、本開示が関連する当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。例えば、ｔｈｅ Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｕｏ、Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ、第２版、２００２、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第３版、１９９９、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；およびｔｈｅ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、改訂版、２０００、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用される用語の多くの一般的な辞書を当業者に提供する。
単位、接頭辞、および記号は、Ｓｙｓｔｅｍｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｄｅ Ｕｎｉｔｅｓ（ＳＩ）が承認した書式で記される。数値範囲は、範囲を定義する数を含む。それ以外であると示していない限り、アミノ酸配列は、左から右にアミノからカルボキシ方向に書かれている。本明細書に提供する見出しは、開示の様々な態様の制限ではなく、本明細書を全体として参照することによって得ることができる。したがって、以下に定義する用語は、本明細書をその全体で参照することによってより十分に定義される。
用語「約」は、本明細書において、およそ、ほぼ、おおよそ、またはその領域を意味するために使用される。用語「約」を数値範囲と共に使用する場合、これは記載の数値より上および下に境界を伸長させることによってその範囲を修飾する。このように、「約１０～２０」は、「約１０～約２０」を意味する。一般的に、用語「約」は、例えば１０パーセント上または下の（高いまたは低い）分散によって、記載の数値の上および下の数値を修飾することができる。
本明細書で使用される場合の「投与する」は、薬学的に許容される組成物、例えば本明細書に開示されるキメラタンパク質を、薬学的に許容される経路を介して対象に与えることを意味する。投与経路は、静脈内、例えば静脈内注射および静脈内輸注であり得る。さらなる投与経路には、例えば、皮下、筋肉内、経口、鼻、および肺投与が挙げられる。キメラタンパク質およびハイブリッドタンパク質を、少なくとも１つの賦形剤を含む医薬組成物の一部として投与することができる。
一部の実施形態では、組成物、例えばキメラタンパク質は、遺伝子治療を通してヒトに投与され、例えば凝固因子および／またはＦｃ領域をコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドはヒトに投与され、凝固因子および／またはＦｃ領域はヒトにおいて発現する。
本明細書で使用される場合の「処置する」、「処置」、または「処置すること」は、例えば、疾患または状態の重症度の低減；疾患の経過期間の低減；疾患また状態に関連する１つまたは複数の症状の緩和または消失；疾患または状態を必ずしも治癒する必要なく疾患または状態を有する対象への有益な効果の提供を指すが、血友病性関節症またはその症状の予防または防止を含まない。一部の実施形態では、用語「処置すること」、または「処置」は、対象の血友病関節健康スコア（ＨＪＨＳ）または改変ＨＪＨＳ（ｍＨＪＨＳ）を改善することを意味する。一部の実施形態では、全ＨＪＨＳまたはｍＨＪＨＳが改善される。一部の実施形態では、１つまたは複数の標的関節の個々のスコアが改善される。一部の実施形態では、用語「処置すること」または「処置」は、対象の生活の質（ＱｏＬ）を改善することを意味する。ある特定の実施形態では、ＱｏＬスコアは、スポーツおよびレジャーに関連する患者の傾向、身体の健康、血友病への取り組み、家族計画、将来に対する感覚（血友病に対する）、パートナーシップおよび性欲、処置、考え方（人に対する）、仕事および学業、またはその任意の組合せを分析する。他の実施形態では、用語「処置すること」または「処置」は、１つまたは複数の微小出血の作用および／または重症度を低減させることを意味する。別の実施形態では、用語「処置すること」または「処置」は、１つまたは複数の標的関節における腫れおよび／または炎症および／または疼痛を低減させることを意味する。別の実施形態では、用語「処置すること」、または「処置」は、１つまたは複数の標的関節における血管リモデリングを低減させることを意味する。
本明細書で使用される場合の「防止する」または「防止すること」は、特定のアウトカムの発生または重症度を減少または低減させることを指す。一部の実施形態では、アウトカムの防止は、予防処置を通して得られる。
本明細書で使用される場合の用語「比較可能な」は、例えば、キメラポリペプチドを使用することに起因する比較される速度またはレベルが、基準の速度またはレベルと等しい、実質的に等しい、または類似であることを意味する。本明細書で使用される場合の用語「類似」は、比較される速度またはレベルが、基準の速度またはレベルから１０％以下または１５％以下の差を有することを意味する（例えば、２つのＦｃ部分とプロセシングされたＦＶＩＩＩから本質的になるまたはからなるキメラポリペプチドであって、プロセシングされたＦＶＩＩＩが２つのＦｃ部分のうちの１つのＦｃに融合しているキメラタンパク質によるＦＸａ生成速度）。用語「実質的に等しい」は、基準の速度またはレベルから０．０１％、０．５％、または１％以下の差を有することを意味する。
本明細書で使用される場合の止血障害は、フィブリンクロット形成能の障害または形成不全による自然発生または外傷の結果としての出血傾向を特徴とする遺伝性または後天性状態を意味する。そのような障害の例には、血友病が挙げられる。３つの主な型は、血友病Ａ（第ＶＩＩＩ因子欠乏）、血友病Ｂ（第ＩＸ因子欠乏、または「クリスマス病」）、および血友病Ｃ（第ＸＩ因子欠乏、軽度の出血傾向）である。他の止血障害には、例えば、フォンヴィレブランド病、第ＸＩ因子欠乏（ＰＴＡ欠乏）、第ＸＩＩ因子欠乏、フィブリノゲン、プロトロンビン、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第Ｘ因子、または第ＸＩＩＩ因子の欠乏または構造異常、ＧＰＩｂの欠損または欠乏であるベルナールスーリエ症候群が挙げられる。ＶＷＦの受容体であるＧＰＩｂは、正常に機能しない場合があり、一次クロット形成（一次止血）の欠如および出血傾向の増加、ならびにグランツマン－ネーゲリ血小板無力症（グランツマン血小板無力症）が起こり得る。肝不全（急性および慢性型）では、肝臓による凝固因子の産生が不十分であり、このことが出血リスクを増加させ得る。
本明細書で使用される場合の「血漿中濃度対時間曲線下面積（ＡＵＣ）」は、薬理学の技術分野の用語と同じであり、投与後のＦＶＩＩＩの吸収の速度および程度に基づく。ＡＵＣは、１２、１８、２４、３６、４８、もしくは７２時間などの明記された期間に対して、または曲線の勾配に基づく外挿を使用して無限大で決定される。本明細書において特
に明記していない限り、ＡＵＣは、無限大で決定される。ＡＵＣの決定は、単一の対象について実行することができ、または平均を計算するために対象の集団について実行することができる。
用語「凝固促進活性」は、本発明の凝固因子、例えばＦＶＩＩＩまたはＦＩＸタンパク質が、本来の凝固因子、例えば本来のＦＶＩＩＩまたはＦＩＸの代わりに、血液中の凝固カスケードに関与する能力を意味する。例えば、本発明の組換えＦＩＸタンパク質は、例えば色素形成アッセイにおいて試験した場合に、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）の存在下で第Ｘ因子（ＦＸ）を活性化第Ｘ因子（ＦＸａ）に変換させることができることから、凝固促進活性を有する。別の実施形態では、ＦＩＸ活性は、テナーゼ複合体を生成する能力である。他の実施形態では、ＦＩＸ活性は、トロンビン（またはクロット）の生成能である。
免疫グロブリンまたは免疫グロブリン断片または領域のアミノ酸ナンバリングに対する参照は全て、その全体を参照によって本明細書に組み入れる、Ｋａｂａｔら、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ；ＭＤに基づく。ＦｃＲｎ受容体は、ヒトを含むいくつかの動物種から単離されている。ヒトＦｃＲｎ、ラットＦｃＲｎ、およびマウスＦｃＲｎ配列は公知である（その全体を参照によって本明細書に組み入れる、Ｓｔｏｒｙら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８０：２３７７（１９９４））。Ｆｃは、免疫グロブリンのヒンジ領域を伴ってまたは伴わずに、免疫グロブリンのＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含み得る。例示的なＦｃバリアントは、その全体を参照によって本明細書に組み入れる、国際公開第２００４／１０１７４０号および国際公開第２００６／０７４１９９号に提供される。
本明細書で使用される場合の「ハイブリッド」ポリペプチドおよびタンパク質は、キメラポリペプチドと第２のポリペプチドとの組合せを意味する。ハイブリッド中のキメラポリペプチドと第２のポリペプチドは、タンパク質－タンパク質相互作用、例えば電荷－電荷または疎水性相互作用を介して互いに会合することができる。ハイブリッド中のキメラポリペプチドと第２のポリペプチドは、ジスルフィド結合または他の共有結合を介して互いに会合することができる。ハイブリッドは、その各々の全体を参照によって本明細書に組み入れる、国際公開第２００４／１０１７４０号および国際公開第２００６／０７４１９９号に記載されている。同様に、その各々の全体を参照によって本明細書に組み入れる、米国特許第７，４０４，９５６号および第７，３４８，００４号も参照されたい。第２のポリペプチドは、同じキメラポリペプチドの第２のコピーであり得るか、または非同一のキメラポリペプチドであり得る。
本明細書で使用される場合、タンパク質配列における「に対応するアミノ酸」、「に対応する部位」、または「同等のアミノ酸」は、第１のタンパク質配列、例えばＦＶＩＩＩまたはＦＩＸ配列と、第２のタンパク質配列、例えば第２のＦＶＩＩＩ配列または第２のＦＩＸとの間の同一性または類似性を最大限にするためのアライメントによって同定される。第２のタンパク質配列における同等のアミノ酸を同定するために使用される番号は、第１のタンパク質配列における対応するアミノ酸を同定するために使用される番号に基づく。
本明細書で使用される場合の用語「挿入部位」は、異種部分を挿入することができる位置の直ちに上流であるポリペプチド（典型的に成熟ポリペプチド、例えば成熟ＦＶＩＩＩポリペプチドまたは成熟ＦＩＸポリペプチド）、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体におけるアミノ酸残基の番号を指す。「挿入部位」は、番号として明記され、番号は、挿入位置の直ちにＮ－末端である挿入部位が対応する、アミノ酸が明記されたタンパ
ク質配列の番号である。例えば、語句「ＥＧＦ２ドメインは、所定の配列のアミノ酸１０５に対応する挿入位置で異種部分を含む」とは、異種部分が配列のアミノ酸１０５とアミノ酸１０６に対応する２つのアミノ酸の間に位置することを示している。しかし、当業者は、表記のタンパク質の任意のバリアントにおける対応する位置を容易に同定することができ、本開示は、本開示に具体的に開示されたバリアントのみになされた挿入に限定されない。むしろ、本明細書に開示される挿入は、本明細書に開示されるバリアントの位置に対応する位置で活性を有する任意の関連するバリアントまたはその断片に行うことができる。
本明細書に使用される場合の語句「アミノ酸の直ちに下流」は、アミノ酸の末端カルボキシル基の右隣の位置を指す。同様に、語句「アミノ酸の直ちに上流」は、アミノ酸の末端アミン基の右隣の位置を指す。したがって、本明細書で使用される場合の「挿入部位の２つのアミノ酸の間」という語句は、２つの隣接するアミノ酸の間に異種部分（例えば、半減期延長部分）が挿入されている位置を指す。
本明細書で使用される場合、用語「挿入された」、「挿入される」、「～に挿入された」、またはその文法的に関連する用語は、明記されたタンパク質（例えば、ＦＶＩＩＩタンパク質またはＦＩＸタンパク質）における類似の位置と比較した、融合ポリペプチドにおける異種部分（例えば、半減期延長部分）の位置を指す。当業者は、他のポリペプチド配列、例えば他のＦＶＩＩＩバリアントおよびＦＩＸバリアントに関して対応する挿入位置を同定する方法を理解するであろう。本明細書で使用される場合、用語は、本明細書に開示される組換えポリペプチドの特徴を指し、融合ポリペプチドが作製される任意の方法または過程を示す、暗示する、または推論するものではない。例えば、本明細書に提供される融合ポリペプチドを参照して、語句「異種部分を、ＦＩＸポリペプチドの残基１０５の直ちに下流でＥＧＦ２ドメインに挿入する」という語句は、融合ポリペプチドが、例えばＦＩＸバリアントのアミノ酸１０５と１０６に対応するアミノ酸に接している、特定のＦＩＸバリアントにおけるアミノ酸１０５に対応するアミノ酸の直ちに下流で異種部分を含むことを意味する。
「融合体」または「キメラ」タンパク質は、自然界で天然に連結されていない第２のアミノ酸配列に連結された第１のアミノ酸配列を含む。異なるタンパク質に通常存在するアミノ酸配列を、融合ポリペプチドにおいて共に結合させることができ、または同じタンパク質に通常存在するアミノ酸配列を、融合ポリペプチド、例えば本発明のＦＶＩＩＩドメインまたはＦＩＸドメインとＩｇ Ｆｃドメインとの融合体において新しい配置に置くことができる。融合タンパク質は、例えば化学合成によって、またはペプチド領域が所望の関係でコードされるポリヌクレオチドを作成および翻訳することによって作成される。融合タンパク質は、共有性の非ペプチド結合または非共有結合によって第１のアミノ酸配列に会合した第２のアミノ酸配列をさらに含み得る。
用語「異種」および「異種部分」は、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、または他の部分が、それが比較される実体の部分とは別個の実体に由来することを意味する。例として、異種ポリペプチドは、合成であり得るか、または異なる種、個体の異なる細胞タイプ、または別個の個体の同じもしくは異なるタイプの細胞に由来し得る。一態様では、異種部分は、融合ポリペプチドまたはタンパク質を産生するために、別のポリペプチドに融合したポリペプチドである。別の態様では、異種部分は、ポリペプチドまたはタンパク質にコンジュゲートしたＰＥＧなどの非ポリペプチドである。
本明細書に使用される場合の用語「連結した」および「融合した」は、第２のアミノ酸配列またはヌクレオチド配列にそれぞれ、共有結合または非共有結合した第１のアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を指す。第１のアミノ酸またはヌクレオチド配列を、第２の
アミノ酸またはヌクレオチド配列に直接結合させるか、または並置することができ、あるいは介在配列によって、第１の配列と第２の配列とを共有結合させることができる。用語「連結された」は、Ｃ末端またはＮ末端での第１のアミノ酸配列と第２のアミノ酸配列の融合体のみならず、第２のアミノ酸配列（または第１のアミノ酸配列、それぞれ）における任意の２つのアミノ酸への第１のアミノ酸配列（または第２のアミノ酸配列）全体の挿入を含む。一実施形態では、第１のアミノ酸配列は、ペプチド結合またはリンカーによって第２のアミノ酸配列に連結される。第１のヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合またはリンカーによって第２のヌクレオチド配列に連結することができる。リンカーは、ペプチドもしくはポリペプチド（例えば、ポリペプチド鎖の場合）、またはヌクレオチドもしくはヌクレオチド鎖（ヌクレオチド鎖の場合）、または任意の化学部分（ポリペプチドとポリヌクレオチド鎖の両方の場合）であり得る。用語「連結された」はまた、ハイフン（－）によって示される。
本明細書で使用される場合、用語「会合する」は、第１のアミノ酸鎖と第２のアミノ酸鎖との間で形成された共有結合または非共有結合を指す。一実施形態では、用語「会合する」は、共有性の非ペプチド結合または非共有結合を意味する。この会合は、コロン、すなわち（：）によって示すことができる。別の実施形態では、これはペプチド結合を除く共有結合を意味する。例えば、アミノ酸システインは、第２のシステイン残基上のチオール基とジスルフィド結合または架橋を形成することができるチオール基を含む。ほとんどの天然に存在するＩｇＧ分子では、ＣＨ１およびＣＬ領域は、ジスルフィド結合によって会合し、２つの重鎖は、Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用して２３９および２４２に対応する位置（ＥＵナンバリングシステム２２６または２２９位、）で２つのジスルフィド結合によって会合している。共有結合の例には、ペプチド結合、金属結合、水素結合、ジスルフィド結合、シグマ結合、パイ結合、デルタ結合、グリコシド結合、アゴニスト結合、曲がった結合、配位結合、π逆供与、二重結合、三重結合、四重結合、五重結合、六重結合、コンジュゲーション、ハイパーコンジュゲーション、芳香族性、ハプト数、または反結合が挙げられるがこれらに限定されない。非共有結合の非制限的な例には、イオン結合（例えば、カチオンπ結合または塩結合）、金属結合、水素結合（例えば、二水素結合、二水素複合体、低障壁水素結合、または対称性水素結合）、ファンデルワールス力、ロンドン分散力、機械的結合、ハロゲン結合、金親和性、インターカレーション、スタッキング、エントロピー力、または化学極性が挙げられる。
本明細書で使用される場合、用語「切断部位」または「酵素切断部位」は、酵素によって認識される部位を指す。ある特定の酵素切断部位は、細胞内プロセシング部位を含む。一実施形態では、ポリペプチドは、そのような部位の切断が、クロット形成部位で起こるように、凝固カスケードの際に活性化される酵素によって切断される酵素切断部位を有する。例示的なそのような部位には、例えばトロンビン、第ＸＩａ因子、または第Ｘａ因子によって認識される部位が挙げられる。他の酵素切断部位は、当技術分野で公知である。
本明細書で使用される場合、用語「プロセシング部位」または「細胞内プロセシング部位」は、ポリペプチドの翻訳後に機能する酵素の標的であるポリペプチドにおける酵素切断部位の一種を指す。一実施形態では、そのような酵素は、ゴルジ体のルーメン側からトランスゴルジ区画に輸送される際に機能する。細胞内プロセシング酵素は、細胞からタンパク質が分泌される前にポリペプチドを切断する。そのようなプロセシング部位の例には、例えば、ＰＡＣＥ／フューリン（ＰＡＣＥは、Ｐａｉｒｅｄ ｂａｓｉｃ Ａｍｉｎｏ
ａｃｉｄ Ｃｌｅａｖｉｎｇ Ｅｎｚｙｍｅの頭字語である）ファミリーエンドペプチダーゼによって標的とされる部位が挙げられる。これらの酵素は、ゴルジ膜に局在し、配列モチーフＡｒｇ－［任意の残基］－（ＬｙｓまたはＡｒｇ）－Ａｒｇのカルボキシ末端側でタンパク質を切断する。本明細書で使用される場合、「フューリン」ファミリー酵素には、例えばＰＣＳＫ１（ＰＣ１／ＰＣ３としても知られる）、ＰＣＳＫ２（ＰＣ２とし
ても知られる）、ＰＣＳＫ３（フューリンまたはＰＡＣＥとしても知られる）、ＰＣＳＫ４（ＰＣ４としても知られる）、ＰＣＳＫ５（ＰＣ５またはＰＣ６としても知られる）、ＰＣＳＫ６（ＰＡＣＥ４としても知られる）、またはＰＣＳＫ７（ＰＣ７／ＬＰＣ、ＰＣ８、またはＳＰＣ７としても知られる）が挙げられる。他のプロセシング部位は当技術分野で公知である。
１つより多くのプロセシングまたは切断部位を含む構築物では、そのような部位は同じまたは異なり得ると理解される。
本明細書で使用される「プロセシング可能なリンカー」は、本明細書において他所で記載される少なくとも１つの細胞内プロセシング部位を含むリンカーを指す。
本明細書で使用される場合の「ベースライン」は、用量を投与前の対象において所定の検体、例えば凝固因子（例えば、ＦＶＩＩＩまたはＦＩＸ）について測定された最低の血漿中レベルである。血漿中レベルは、投与前の２回の時点：スクリーニング診察時、および投与直前で測定することができる。あるいは、（ａ）その処置前の凝固因子活性が＜１％であり、検出可能な凝固因子抗原を有しないがナンセンス遺伝子型を有する対象のベースラインを、０％として定義することができ、（ｂ）処置前の凝固因子活性が＜１％であり、検出可能な凝固因子抗原を有する対象のベースラインを、０．５％に設定することができ、（ｃ）その処置前の凝固因子活性が１～２％である対象のベースラインは、Ｃｍｉｎであり（ＰＫ試験を通しての最低の活性）、および（ｄ）その処置前の凝固因子活性が≧２％である対象のベースラインを、２％に設定することができる。
本明細書で使用される場合の「同等量」は、当該ポリペプチドの分子量とは無関係な国際単位で表記される凝固因子活性、例えばＦＶＩＩＩ活性またはＦＩＸ活性の同じ用量を意味する。例えば、ＦＶＩＩＩ活性の１国際単位（ＩＵ）は、通常のヒト血漿１ミリリットル中のＦＶＩＩＩの量にほぼ対応する。欧州薬局方色素生成基質アッセイおよび凝固１段法を含む、凝固因子活性を測定するためのいくつかのアッセイが利用可能である。
本明細書で使用する場合の「投与間隔」は、対象に投与される複数の用量間で経過する投与の時間を意味する。投与間隔の比較は、単一の対象または対象集団で行うことができ、集団で得られた平均値を計算することができる。
本明細書で使用する場合の「対象」は、ヒト個体を意味する。対象は、出血性障害に現在罹患しているか、またはそのような処置を必要とすると予想される患者であり得る。一部の実施形態では、対象は、凝固因子によって過去に処置されていない（すなわち、対象は、過去に無処置の対象であるか、または過去に無処置の患者である）。一部の実施形態では、対象は胎児であり、方法は、組成物、例えばキメラポリペプチドを胎児の母親に投与する工程を含み、対象への投与は、母体から胎盤を通して起こる。一部の実施形態では、対象は小児または成人である。一部の実施形態では、対象は、１歳未満、２歳未満、３歳未満、４歳未満、５歳未満、６歳未満、７歳未満、８歳未満、９歳未満、１０歳未満、１１歳未満、または１２歳未満の小児である。一部の実施形態では、小児は１歳未満である。ある特定の実施形態では、対象は６歳未満である。他の実施形態では、対象は６歳から１２歳未満の間である。他の実施形態では、対象は１２歳またはそれ以上である。一部の実施形態では、小児または成人は、出血性障害を発症しており、出血性障害の症状の開始は、１歳以降に起こる。一部の実施形態では、組成物、例えばキメラポリペプチドの対象への投与は、凝固因子に対する液性免疫応答、細胞性免疫応答、または液性免疫応答と細胞性免疫応答の両方から選択される免疫応答の発生を予防、阻害、または低減させるために十分である。
本明細書で（互換的に）使用される場合の、「治療用量」、「用量」、「有効量」、または「投与量」は、本明細書に記載される治療目標を達成する用量を意味する。一部の実施形態では、「治療用量」は、処置前のＨＪＨＳ、ｍＨＪＨＳ、またはＱｏＬスコアと比較してＨＪＨＳ、ｍＨＪＨＳ、またはＱｏＬスコアを改善させる用量を意味する。一部の実施形態では、「治療用量」は、処置前の関節における腫れ、炎症、および／または疼痛のレベルと比較して対象の１つまたは複数の関節における腫れ、炎症、および／または疼痛を低減させる用量を意味する。一部の実施形態では、「治療用量」は、処置前の微小出血の作用および／または重症度と比較して、１つまたは複数の微小出血の作用および／または重症度を低減させる用量を意味する。別の実施形態では、「治療用量」は、処置前の血管リモデリングと比較して１つまたは複数の標的関節における血管リモデリングを低減させる用量を意味する。
同様に、ポリペプチドの断片またはバリアント、およびその任意の組合せも本発明に含まれる。本開示の方法に使用されるポリペプチドについて言及する場合の用語「断片」または「バリアント」は、基準ポリペプチドの少なくとも一部の特性（例えば、ＦｃバリアントまたはＦＶＩＩＩもしくはＦＩＸバリアントの凝固活性）を保持する任意のポリペプチドを含む。ポリペプチドの断片は、本明細書において他所で考察する特異的抗体断片に加えて、タンパク質分解断片、ならびに欠失断片を含むが、天然に存在する完全長のポリペプチド（または成熟ポリペプチド）を含まない。本開示の方法で使用されるポリペプチド結合ドメインまたは結合分子のバリアントは、上記の断片を含み、同様にアミノ酸の置換、欠失、または挿入により変化したアミノ酸配列を有するポリペプチドも含む。バリアントは、天然に存在する、または天然に存在しないバリアントであり得る。天然に存在しないバリアントを、当技術分野で公知の変異誘発技術を使用して産生することができる。バリアントポリペプチドは、保存的または非保存的アミノ酸置換、欠失、または付加を含み得る。本明細書に開示される１つの特定のＦＩＸバリアントは、Ｒ３３８Ｌ ＦＩＸ（Ｐａｄｕａ）バリアントである。例えば、その全体を参照によって本明細書に組み入れる、Ｓｉｍｉｏｎｉ，Ｐ．ら、「Ｘ－Ｌｉｎｋｅｄ Ｔｈｒｏｍｂｏｐｈｉｌｉａ ｗｉｔｈ ａ Ｍｕｔａｎｔ Ｆａｃｔｏｒ ＩＸ（Ｆａｃｔｏｒ ＩＸ Ｐａｄｕａ）」、ＮＥＪＭ ３６１：１６７１～７５頁（２００９年１０月）を参照されたい。
「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基に交換されている置換である。塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む、類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが当技術分野で定義されている。このように、ポリペプチド中のアミノ酸が同じ側鎖ファミリーの別のアミノ酸に交換されている場合、置換は保存的であると考えられる。別の実施形態では、一連のアミノ酸を、側鎖ファミリーメンバーの順序および／または組成が異なる構造的に類似の一連のアミノ酸に保存的に交換することができる。
２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列間の用語「パーセント配列同一性」は、２つの配列の最適なアライメントのために導入しなければならない付加または欠失（すなわち、ギャップ）を考慮に入れて、比較ウィンドウにわたって配列が共有する同一のマッチした位置の数を指す。マッチした位置は、同一のヌクレオチドまたはアミノ酸が標的および基準配列の両方に存在する任意の位置である。標的配列に存在するギャップは、ギャップがヌクレオチドまたはアミノ酸ではないことから計数されない。同様に、基準配列に存在するギャップは、標的配列のヌクレオチドもしくはアミノ酸が計数されない、また
は基準配列のヌクレオチドもしくはアミノ酸ではないことから、計数されない。
配列同一性のパーセンテージは、同一のアミノ酸残基または核酸塩基が両方の配列に存在する位置の数を決定して、マッチした位置の数を得る工程、マッチした位置の数を、比較ウィンドウにおける位置の総数で除算する工程、および結果に１００を乗じて配列同一性のパーセンテージを得る工程によって計算される。２つの配列間の配列の比較およびパーセント配列同一性の決定は、オンライン使用およびダウンロードの両方で容易に入手可能なソフトウェアを使用して行ってもよい。タンパク質およびヌクレオチド配列のアライメントのための適したソフトウェアプログラムは、様々な起源から入手可能である。パーセント配列同一性を決定するための１つの適したプログラムは、米国政府の国立生物工学情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ、ＢＬＡＳＴ）のウェブサイト（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から入手可能なＢＬＡＳＴプログラムスイートの一部であるｂｌ２ｓｅｑである。Ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのいずれかを使用して２つの配列間の比較を実行する。ＢＬＡＳＴＮは、核酸配列を比較するために使用され、ＢＬＡＳＴＰは、アミノ酸配列を比較するために使用される。他の適したプログラムは、例えば、Ｎｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、Ｗａｔｅｒ、またはＭａｔｃｈｅｒであり、これらはバイオインフォマティクスプログラムのＥＭＢＯＳＳスイートの一部であり、同様に欧州バイオインフォマティクス研究所（ＥＢＩ）のｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａから入手可能である。
ポリヌクレオチドまたはポリペプチド基準配列と整列する単一のポリヌクレオチドまたはポリペプチド標的配列内の異なる領域は、各々が、自身のパーセント配列同一性を有し得る。パーセント配列同一性の値は、最も近い十の位の値に四捨五入されることに注意されたい。例えば、８０．１１、８０．１２、８０．１３、および８０．１４は、８０．１に切り捨てられるが、８０．１５、８０．１６、８０．１７、８０．１８、および８０．１９は、８０．２に切り上げられる。同様に長さの値は常に整数であることにも注意されたい。
当業者は、パーセント配列同一性の計算のための配列アライメントの生成が、一次配列データのみによって促進されるバイナリ配列－配列比較に限定されないことを認識する。配列アライメントは、複数の配列アライメントから誘導することができる。複数の配列アライメントを生成するための１つの適したプログラムは、ｗｗｗ．ｃｌｕｓｔａｌ．ｏｒｇから入手可能なＣｌｕｓｔａｌＷ２である。別の適したプログラムは、ｗｗｗ．ｄｒｉｖｅ５．ｃｏｍ／ｍｕｓｃｌｅ／から入手可能なＭＵＳＣＬＥである。ＣｌｕｓｔａｌＷ２およびＭＵＳＣＬＥは、あるいは、例えばＥＢＩからも入手可能である。
配列アライメントは、配列データを、構造データ（例えば、結晶学的タンパク質構造）、機能データ（例えば、変異の位置）、または系統発生学データなどの異成分からなる起源からのデータと統合することによって生成することができることも認識されたい。異成分からなるデータを統合して複数の配列アライメントを生成する適したプログラムは、ｗｗｗ．ｔｃｏｆｆｅｅ．ｏｒｇ、あるいはＥＢＩからも入手可能なＴ－Ｃｏｆｆｅｅである。同様に、パーセント配列同一性を計算するために使用される最終的なアライメントを、自動または手動のいずれかで精選してもよいと認識されたい。
ポリヌクレオチドバリアントは、コード領域、非コード領域、またはその両方で変化を含み得る。一実施形態では、ポリヌクレオチドバリアントは、サイレント置換、付加、または欠失を産生するが、コードされるポリペプチドの特性または活性を変化させない変化を含む。別の実施形態では、ヌクレオチドバリアントは、遺伝子コードの縮重によるサイレント置換によって産生される。他の実施形態では、バリアントは、５～１０、１～５、
または１～２個のアミノ酸が、任意の組合せで置換、欠失、または付加されている。ポリヌクレオチドバリアントは、多様な理由から、例えば特定の宿主に関してコドン発現を最適化する（ヒトｍＲＮＡにおけるコドンを、他の宿主、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）などの細菌宿主のコドンに変化させる）ために産生することができる。
天然に存在するバリアントは、「アレルバリアント」と呼ばれ、生物の染色体上の所定の座を占有する遺伝子のいくつかの代替型の１つを指す（Ｇｅｎｅｓ ＩＩ、Ｌｅｗｉｎ，Ｂ．編、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８５））。これらのアレルバリアントは、ポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチドレベルで変化することができ、本開示に含まれる。あるいは、天然に存在しないバリアントを、変異誘発技術または直接合成によって産生することができる。
タンパク質操作および組換えＤＮＡ技術に関する公知の方法を使用して、ポリペプチドの特徴を改善または変化させるためにバリアントを生成することができる。例として、生物機能を実質的に失うことなく、分泌されたタンパク質のＮ末端またはＣ末端から１つまたは複数のアミノ酸を欠失させることができる。その全体を参照によって本明細書に組み入れる、Ｒｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：２９８４～２９８８頁（１９９３年）は、３、８、または２７個のアミノ末端アミノ酸残基を欠失させた後でもヘパリン結合活性を有するバリアントＫＧＦタンパク質を報告した。同様に、インターフェロンガンマは、このタンパク質のカルボキシ末端から８～１０個のアミノ酸残基を欠失させた後でも最大１０倍高い活性を示した（その全体を参照によって本明細書に組み入れる、Ｄｏｂｅｌｉら、Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７：１９９～２１６頁（１９８８年））。
その上、バリアントがしばしば、天然に存在するタンパク質と類似の生物活性を保持することは、十分な証拠により証明されている。例えば、Ｇａｙｌｅとその共同研究者（その全体を参照によって本明細書に組み入れる、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２６８：２２１０５～２２１１１頁（１９９３年））は、ヒトサイトカインＩＬ－１ａの広範な変異解析を実施した。彼らは、ランダム変異誘発を使用して、分子の全長にわたってバリアントあたり平均で２．５個のアミノ酸変化を有する３，５００個を超える個々のＩＬ－１ａ変異体を生成した。複数の変異を起こり得るあらゆるアミノ酸位置で調べた。研究者らは、「［結合または生物活性］のいずれにもほとんど影響を及ぼすことなく、分子のほとんどを変化させることができる」ことを見出した。（要約書を参照されたい）。実際に、野生型と活性が有意に異なるタンパク質を産生したのは、調べた３，５００個を超えるヌクレオチド配列のうちわずか２３個のユニークアミノ酸配列に過ぎなかった。
上記のように、ポリペプチドバリアントは、例えば改変ポリペプチドを含む。改変には、例えばアセチル化、アシル化、ＡＤＰ－リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合架橋の形成、システインの形成、ピログルタメートの形成、ホルミル化、ガンマカルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨード化、メチル化、ミリストイル化、酸化、ペグ化（その全体を参照によって本明細書に組み入れる、Ｍｅｉら、Ｂｌｏｏｄ １１６：２７０～７９頁（２０１０年））、タンパク質分解プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化などのアミノ酸のタンパク質への転移－ＲＮＡ媒介付加、およびユビキチン化が挙げられる。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩは、任意の簡便な位置で改変され、例えばペグ化される。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩは、ＦＶＩＩＩの表面露出アミノ酸、例えば操作されたシステインであり得る表面露出システインでペグ化される。同上。一部の実施形態では、改変ＦＶＩＩＩ、例えばペグ化ＦＶＩＩＩは、キメラまたは融合ＦＶＩＩＩである。
用語「下流」は、基準ヌクレオチド配列の３’に位置するヌクレオチド配列を指す。「下流」はまた、基準ペプチド配列のＣ末端に位置するペプチド配列も指し得る。
用語「上流」は、基準ヌクレオチド配列の５’に位置するヌクレオチド配列を指す。「上流」はまた、基準ペプチド配列のＮ末端に位置するペプチド配列も指し得る。
本明細書で使用される場合、用語「調節領域」は、コード領域の上流（５’非コード配列）、領域内、または下流（３’非コード配列）に位置し、会合するコード領域の転写、ＲＮＡプロセシング、安定性、または翻訳に影響を及ぼすヌクレオチド配列を指す。調節領域には、プロモーター、翻訳リーダー配列、イントロン、ポリアデニル化認識配列、ＲＮＡプロセシング部位、エフェクター結合部位およびステムループ構造が挙げられ得る。コード領域が、真核細胞での発現を意図する場合、ポリアデニル化シグナルおよび転写終止配列は通常、コード配列の３’に位置する。
遺伝子産物、例えばポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、１つまたは複数のコード領域に作動可能に会合したプロモーターおよび／または他の転写もしくは翻訳制御エレメントを含み得る。プロモーター以外の他の転写制御エレメント、例えばエンハンサー、オペレーター、リプレッサー、および転写終止シグナルもまた、コード領域に作動可能に会合して、遺伝子産物の発現を指示することができる。
多様な転写制御領域が当業者に公知である。これらには、サイトメガロウイルス（イントロンＡと共に前初期プロモーター）、シミアンウイルス４０（初期プロモーター）、およびレトロウイルス（例えば、ラウス肉腫ウイルス）のプロモーターおよびエンハンサーセグメントなどの、しかしこれらに限定されない脊椎動物細胞において機能する転写制御領域が挙げられるがこれらに限定されない。他の転写制御領域には、アクチン、熱ショックタンパク質、ウシ成長ホルモンおよびウサギβ－グロビンなどの脊椎動物遺伝子に由来する領域、ならびに真核細胞において遺伝子発現を制御することができる他の配列が挙げられる。さらに適した転写制御領域には、組織特異的プロモーターおよびエンハンサー、ならびにリンフォカイン誘導可能プロモーター（例えば、インターフェロンまたはインターロイキンによって誘導可能なプロモーター）が挙げられる。
同様に、多様な翻訳制御エレメントが当業者に公知である。これらには、リボソーム結合部位、翻訳開始および終止コドン、ならびにピコルナウイルス由来のエレメント（特に、配列内リボソーム進入部位またはＩＲＥＳ、同様にＣＩＴＥ配列とも呼ばれる）が挙げられるがこれらに限定されない。
本明細書で使用される場合の用語「発現」は、それによってポリヌクレオチドが遺伝子産物、例えばＲＮＡまたはポリペプチドを産生する過程を指す。
「ベクター」は、核酸を宿主細胞にクローニングおよび／または移入するための任意の媒体を指す。ベクターは、結合したセグメントの複製をもたらすために別の核酸セグメントを結合させてもよいレプリコンであり得る。「レプリコン」は、ｉｎ ｖｉｖｏで自律複製単位として機能する、すなわち、自身の制御下で複製することができる任意の遺伝子エレメント（例えば、プラスミド、ファージ、コスミド、染色体、ウイルス）を指す。用語「ベクター」は、核酸をｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、またはｉｎ ｖｉｖｏで細胞に導入するためのウイルスおよび非ウイルス媒体の両方を含む。例えばプラスミド、改変真核生物ウイルス、または改変細菌ウイルスを含む、多数のベクターが公知であり、当技術分野で使用される。ポリヌクレオチドの適したベクターへの挿入は、相補的付着末端を有する適切なポリヌクレオチド断片を選択したベクターにライゲートすることによっ
て行うことができる。
用語「プラスミド」は、細胞の中心代謝の一部ではなく、通常、環状二本鎖ＤＮＡ分子の形態である遺伝子をしばしば有する染色体外エレメントを指す。そのようなエレメントは、複数のヌクレオチド配列が、選択された遺伝子産物に関するプロモーター断片およびＤＮＡ配列を、適切な３’非翻訳配列と共に細胞に導入することができる独自の構成に結合または組換えされている、任意の起源に由来する、自律複製配列、ゲノム組込み配列、ファージまたはヌクレオチド配列、直線、環状、もしくはスーパーコイルの一本鎖または二本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡであり得る。
使用することができる真核生物ウイルスベクターには、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、およびポックスウイルス、例えばワクシニアウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、またはヘルペスウイルスベクターが挙げられるがこれらに限定されない。非ウイルスベクターには、プラスミド、リポソーム、帯電した脂質（サイトフェクチン）、ＤＮＡ－タンパク質複合体、およびバイオポリマーが挙げられる。
「クローニングベクター」は、結合したセグメントの複製をもたらすために別の核酸セグメントを結合させてもよい、プラスミド、ファージ、またはコスミドなどの、連続的に複製し、複製開始点を含む単位長さの核酸である「レプリコン」を指す。ある特定のクローニングベクターは、１つの細胞タイプ、例えば細菌において複製することができ、別の細胞、例えば真核細胞において発現することができる。クローニングベクターは典型的に、ベクターおよび／または目的の核酸配列を挿入するための１つもしくは複数のマルチクローニングサイトを含む細胞を選択するために使用することができる１つまたは複数の配列を含む。
用語「発現ベクター」は、宿主細胞への挿入後に、挿入された核酸配列を発現させることができるように設計された媒体を指す。挿入された核酸配列は、上記の調節領域に作動可能に会合して配置される。
ベクターは、当技術分野で周知の方法、例えばトランスフェクション、電気穿孔、マイクロインジェクション、形質導入、細胞融合、ＤＥＡＥデキストラン、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション（リソソーム融合）、遺伝子銃の使用、またはＤＮＡベクター輸送体によって宿主細胞に導入される。
「単離された」ポリペプチド、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体は、その天然の環境に存在していないポリペプチドを指す。特定の精製レベルは必要ではない。例えば、単離されたポリペプチドは、単純にその本来のまたは天然の環境から除去することができる。宿主細胞において発現された組換えによって産生されたポリペプチドおよびタンパク質は、任意の適した技術によって分離、分画、または部分的もしくは実質的に精製されている本来のまたは組換えポリペプチドと同様に、本発明の目的に関して単離されたと考えられる。
本明細書で使用される場合、用語「宿主細胞」は、組換え核酸を有する、または有することができる細胞または細胞集団を指す。宿主細胞は、原核細胞（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ））であり得るか、あるいは宿主細胞は真核細胞、例えば真菌細胞（例えば、サッカロミセスセレビジエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、ピチアパストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉ）、またはシゾサッカロミセスポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）などの酵母細胞）、および様々な動物細胞、例えば昆虫細胞（例えば、Ｓｆ－９）、または哺乳動物細胞（例えば、ＨＥＫ
２９３Ｆ、ＣＨＯ、ＣＯＳ－７、ＮＩＨ－３Ｔ３）であり得る。
本明細書で使用される場合の「定常状態での分布容積（Ｖｓｓ）」は、薬理学で使用される用語と同じ意味を有し、薬物が分布する見かけの空間（容積）である。Ｖｓｓ＝定常状態での血漿中濃度によって除算した体における薬物量。
ＩＩ．本発明の方法
本開示は、Ｆｃ領域に融合させた凝固因子を使用して血友病性関節症を逆転させることができるという発見に基づいている。血友病性関節症は、軟部組織の変化を可視化できるのがＭＲＩのみであったことから、一度発症すると非可逆的であることがこれまで知られていた。血友病性関節症を有する個体に関して現在公知の選択肢は、肥大した滑膜を除去するための手術または硬化剤を含む。放射活性材料または化学材料のいずれかである硬化剤は、軟骨および骨のさらなる悪化を妨害することができる；しかし、これは血友病性関節症を逆転させることはできない。膝および股関節の関節症では、滑膜の肥大を制御する他の試みが失敗する中で、疼痛および可動性の損失の低減に成功している。Ｈｉｌｇａｒｔｎｅｒ Ｍ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ：２００２年２月、Ｖ１４、１号、４６～４９頁。
したがって本開示は、血友病を有するヒトにおける関節の血友病性関節症を処置する方法であって、凝固因子とＦｃ領域とを含む組成物、例えばキメラタンパク質、またはキメラタンパク質をコードするポリヌクレオチドの有効量をヒトに投与することを含む方法を提供する。血友病性関節症の処置は、血友病性関節症（例えば、血友病性関節症の１つまたは複数の症状）を部分的または完全に逆転させることができる。したがって、一実施形態では、本開示は、血友病性関節症、例えば滑膜炎を既に発症している、血友病を有するヒトを処置する方法を提供する。
一般的に、血友病性関節症は、対象の関節への繰り返しの出血の長期間の結末として、血友病に罹患しているヒト対象に起こる関節疾患を指す。１つまたは複数の関節への特発性出血は、血友病患者では一般的である。６カ月以内にいくつかの連続する出血を有する関節はしばしば「標的関節」と呼ばれ、これらの関節は、しばしば血友病性関節症へと進行する。
血友病性関節症は、滑膜肥大、慢性炎症（滑膜炎を含む）、線維症、血鉄症、関節下嚢胞形成、疼痛、可動域の低減、筋萎縮、関節強直、骨粗鬆、関節裂隙の圧潰を伴う軟骨変性、およびその任意の組合せを含むがこれらに限定されない様々な症状を呈し得る。血友病性関節症は、様々なステージを含む：（ｉ）軟部組織の腫れを含むが骨格異常を含まないステージＩ；（ｉｉ）骨端の過増殖および骨粗鬆を含むが、関節の完全性が維持されているステージＩＩ。骨嚢胞は存在せず、関節軟骨裂隙の狭窄も存在しない。Ｘ線によるステージＩＩは、亜急性血友病性関節症の臨床ステージと類似である；（ｉｉｉ）軟骨下嚢胞を伴う最小から中等度の関節裂隙狭窄を含むステージＩＩＩ。膝の顆間切痕および尺骨の滑車切痕の拡大。膝では、膝蓋骨の辺縁の先鋭化が存在してもよい。関節軟骨はなおも保存され、血友病性関節症はなお可逆的である；（ｉｖ）関節裂隙の重度の狭窄を伴う関節軟骨の破壊を含むステージＩＶ。ステージＩＩＩにおいて見出される他の骨変化がより顕著である；ならびに（ｖ）関節の線維性強直炎を伴う関節裂隙の完全な喪失を含むステージＶ。骨端の重度の不規則な肥大を伴う関節構造の顕著な不適合が存在する。
本開示は、凝固因子とＦｃ領域とを含む組成物、例えばキメラタンパク質による処置が、可逆性の血友病性関節症の症状を低減するおよび／または緩和することができることを提供する。一部の実施形態では、組成物、例えばキメラタンパク質は、血友病性関節症の１つまたは複数のステージ、例えばステージＩ、ＩＩ、および／またはＩＩＩを処置する
ことができる。本明細書で使用される場合の「可逆性の」血友病性関節症は、処置後にその元の健康な状態へと部分的または完全に逆転することができる血友病性関節症の発現である。これに対し、「非可逆性の」血友病性関節症は、永続的で処置後に改善しない血友病性関節症の発現である。したがって、本発明の方法は、血友病性関節症の１つまたは複数の症状、例えば滑膜過形成、慢性炎症（滑膜炎を含む）、血鉄症、関節下嚢胞形成、疼痛、可動域の低減、腫れ、血管リモデリング、またはその任意の組合せを改善、低減、または緩和する（または部分的もしくは完全に逆転させる）ことができる。
本開示の方法を使用して処置される血友病性関節症（可逆性）は、体の任意の関節に影響を及ぼし得る。一部の実施形態では、関節は荷重負荷関節、例えば１つまたは両方の膝、１つまたは両方の足首、１つまたは両方の股関節、１つまたは複数の足の関節、およびその任意の組合せからなる群から選択される関節である。別の実施形態では、関節は、非荷重負荷関節、例えば、１つもしくは両方の肘、１つもしくは両方の肩、１つもしくは両方の手首、１つもしくは複数の手の関節、またはその任意の組合せからなる群から選択される関節である。別の実施形態では、関節は膝である。
一部の実施形態では、可逆性の血友病性関節症は、滑膜炎を含む。滑膜炎は、関節周囲の滑膜の炎症を指す。一部の実施形態では、滑膜炎は体の任意の関節の滑膜炎である。一部の実施形態では、滑膜炎は、関節の腫れとして出現し、本開示の方法は関節の腫れを低減させる。一部の実施形態では、滑膜炎は関節の疼痛として出現し、本開示の方法は関節の疼痛を低減させる。他の実施形態では、滑膜炎は関節の可動域の減少として出現し、本発明の方法は関節の可動域を増大させる。
他の実施形態では、可逆性の血友病性関節症は、関節の微小出血を含む。一部の実施形態では、可逆性の血友病性関節症は、微小出血の結果である。微小出血は、１つまたは複数の関節における非常に少量の出血を指し、これが繰り返し発生すると、血友病性関節症をもたらし得る。一部の実施形態では、可逆性の血友病性関節症は、急性の関節出血を含む。一部の実施形態では、可逆性の血友病性関節症は、急性の関節出血の結果である。急性の関節出血は、１つまたは複数の関節におけるより実質的な出血エピソードを指す。
ある特定の実施形態では、可逆性の血友病性関節症は、１つまたは複数の関節の炎症を含む。一部の実施形態では、炎症は、体の任意の関節に存在する。一部の実施形態では、炎症は関節の腫れとして出現し、本開示の方法は関節の腫れを低減させる。一部の実施形態では、炎症は関節の疼痛として出現し、本開示の方法は関節の疼痛を低減させる。他の実施形態では、炎症は関節の可動域の減少として出現し、本発明の方法は関節の可動域を増大させる。ある特定の実施形態では、方法は、凝固因子とＦｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質の有効量の投与前に１つまたは複数の関節の炎症を測定することをさらに提供する。一部の実施形態では、方法は、凝固因子とＦｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質の有効量の投与後に１つまたは複数の関節の炎症を測定することをさらに含む。
他の実施形態では、血友病性関節症は、関節の炎症および／または関節の損傷に関連する１つまたは複数のバイオマーカーの発現によって証明される。一部の実施形態では、関節の炎症および／または関節の損傷の増大を示す１つまたは複数のバイオマーカーがヒトにおいてアップレギュレートされている。一部の実施形態では、関節の炎症および／または関節の損傷の増大を示す１つまたは複数のバイオマーカーがヒトにおいてダウンレギュレートされている。一部の実施形態では、処置を必要とするヒトは、本開示の方法を使用する処置に対する反応性の増大に関連する１つまたは複数のバイオマーカーの発現に基づいて特定される。
一部の実施形態では、本発明の方法は、１つまたは複数の標的関節への凝固因子の局在化を増加させる。ある特定の実施形態では、凝固因子とＦｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質は、投与後に、凝固因子単独より多く標的関節に局在化する。ある特定の実施形態では、凝固因子とＦｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質は、投与後に凝固因子単独より長期間、１つまたは複数の標的関節に局在化し続ける。
なお他の実施形態では、本発明の方法は、可逆性の血友病性関節症の１つまたは複数のマーカーを示す対象を特定することと、次いで凝固因子とＦｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質を投与することとをさらに含む。
一部の実施形態では、本発明の方法は、血友病を有するヒトの関節における血管リモデリングの発生を防止するかまたは低減させる。血友病性関節症に関連する一般的な要素は、関節、特に標的関節周囲の血管系のリモデリングである。血管リモデリングは、血管新生の増加および関節への微小出血の発生の増加によって特徴付けることができる。一部の実施形態では、本開示は、血友病を有するヒトの関節における血管リモデリングの発生の予防処置または低減の方法であって、凝固因子とＦｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質の有効量をヒトに投与することを含む方法を提供する。他の実施形態では、本開示は、血友病を有するヒトの関節における血友病性関節症に関連する既存の血管リモデリングを逆転させる方法であって、凝固因子とＦｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質の有効量をヒトに投与することを含む方法を提供する。一部の実施形態では、血管リモデリングは体の任意の関節に存在する。ある特定の実施形態では、血管リモデリングは標的関節に存在する。他の実施形態では、血管リモデリングは標的関節以外の関節に存在する。他の実施形態では、血管リモデリングは、荷重負荷関節、例えば１つまたは両方の膝、１つまたは両方の足首、１つまたは両方の股関節、１つまたは複数の足の関節、およびその任意の組合せからなる群から選択される関節に存在する。別の実施形態では、血管リモデリングは、非荷重負荷関節、例えば、１つもしくは両方の肘、１つもしくは両方の肩、１つもしくは両方の手首、１つもしくは複数の手の関節、またはその任意の組合せからなる群から選択される関節に存在する。別の実施形態では、血管リモデリングは膝に存在する。一部の実施形態では、血管リモデリングは筋肉に存在する。一部の実施形態では、血管リモデリングは脾臓および／または肝臓に存在する。
ある特定の実施形態では、本発明の方法は、血友病を有するヒトの関節周囲の軟部組織を改善する。血友病性関節症の別の一般的な病態は、関節の軟部組織の過増殖である。一部の実施形態では、本開示の方法によって改善される軟部組織は、体の任意の関節に存在する。ある特定の実施形態では、本開示の方法によって改善される軟部組織は、標的関節に存在する。他の実施形態では、本開示の方法によって改善される軟部組織は、標的関節以外の関節に存在する。
一部の実施形態では、本発明の方法は、関節の軟部組織の過増殖に関連する１つまたは複数の症状の重症度を低減させる。一部の実施形態では、関節の軟部組織の過増殖は、関節の腫れとして出現し、本開示の方法は関節の腫れを低減させる。一部の実施形態では、関節の軟部組織の過増殖は関節の疼痛として出現し、本開示の方法は関節の疼痛を低減させる。他の実施形態では、関節の軟部組織の過増殖は、関節の可動域の減少として出現し、本発明の方法は関節の可動域を増大させる。
本明細書に開示される方法は、１つまたは複数の関節の血友病性関節症のさらなる発生を防止するために、処置されていて血友病性関節症の減少を示している対象について実践することができる。一部の実施形態では、本開示の方法は、１つまたは複数の関節の既存の血友病性関節症を処置するために、および同じまたは異なる関節におけるさらなる血友病性関節症の発生を防止するために対象に適用される。
一部の実施形態では、本開示の方法は、血漿区画外ならびに血漿区画内の組織への凝固因子の分布を可能にする。
本開示の方法は、血友病を有するヒトにおける１つまたは複数の関節の関節健康を改善する。関節の健康は、当技術分野で公知の任意の測定方法を使用して測定することができる。一部の実施形態では、関節の健康は、血友病関節健康スコア（ＨＪＨＳ）システム（Ｆｅｌｄｍａｎら、「Ｈｅｍｏｐｈｉｌｉａ Ｊｏｉｎｔ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｏｒｅ（ＨＪＨＳ）２．１」を参照されたい、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｆｈ．ｏｒｇ／ｅｎ／ｐａｇｅ．ａｓｐｘ？ｐｉｄ＝８８５で入手可能（最終アクセス２０１６年１１月１８日、その全体を参照によって本明細書に組み入れる）を使用して測定する。ＨＪＨＳは、血友病における出血によって最も一般的に影響を受ける関節：膝、足首、および肘の、体構造領域および機能（すなわち、障害）に関する関節健康を測定する。これは、軽度の関節障害（例えば、予防的に処置される）を有する年齢４～１８歳の血友病を有する小児のために主として設計されたが、任意の集団に応用することができる。一部の実施形態では、ＨＪＨＳは、血友病を有するヒトの左右の肘、左右の膝、および左右の足首の各々に関する腫れ、（腫れの）持続期間、筋萎縮、関節摩擦音、屈曲の損失、伸展の損失、関節痛、ならびに筋力を測定する。一部の実施形態では、各パラメータを、数値スコアに割付する。特定の一実施形態では、標準的なＨＪＨＳ、バージョン２．１を使用して関節の健康を測定する。一部の実施形態では、腫れを０から３で採点し、０は腫れなしであり、３は重度の腫れである。一部の実施形態では、腫れの持続期間を０から１で採点し、０は腫れなしであるかまたは６カ月未満の腫れであり、１は６カ月を超えるまたは６カ月に等しい期間の腫れである。一部の実施形態では、筋萎縮を０から２で採点し、０は萎縮なしであり、２は重度の萎縮である。一部の実施形態では、関節摩擦音を０から２で採点し、０は関節摩擦音なしであり、２は重度の関節摩擦音である。一部の実施形態では、屈曲の損失を０から３で採点し、０は５°未満の屈曲の損失であり、３は２０°を超える屈曲の損失である。一部の実施形態では、伸展の損失を０から３で採点し、０は５°未満の伸展の損失であり、３は２０°を超える伸展の損失である。一部の実施形態では、関節痛を０から２で採点し、０は、能動的可動域を通して疼痛なしであり、２は能動的可動域を通して疼痛ありである。一部の実施形態では、全歩行を以下のように採点し、０は全てのスキルが正常範囲内であることを反映し；１、２、および３は、１、２、および３のスキルがそれぞれ、正常範囲内にないことを反映し；ならびに４は、スキルが正常範囲内にないことを反映している。ある特定の実施形態では、全歩行スコアは、歩行、階段を上る、ランニング、および／または片足でのホッピングに基づいて測定される。一部の実施形態では、スコアを組み合わせて、総スコアを作成する。他の実施形態では、１つまたは複数の関節の個々のスコアを、１つまたは複数の関節の健康の指標として評価する。
他の実施形態では、改変ＨＪＨＳシステムを使用して関節の健康を測定する。一部の実施形態では、ｍＨＪＨＳは、標準的なＨＪＨＳ、バージョン２．１と、関節痛と歩行の反応の選択肢をより少ないカテゴリに集約した点、不安定性の評価を追加した点、および総スコアが標準的なＨＪＨＳ（範囲、０～１２４）より低い（範囲０～１１６；０は正常な関節機能を示し、１１６は重度の疾患を示す）という点が異なる。出血後２週間以内のスコアを除外した。外科的介入を受けた関節のスコアは、最後の観察の延長を使用することによって補完した。年毎の変化を評価するために、４つの時点（ｒＦＶＩＩＩＦｃのピボタル第３相臨床試験のベースライン、ｒＦＶＩＩＩＦｃ継続試験のベースライン、ｒＦＶＩＩＩＦｃ継続試験の１年目、およびｒＦＶＩＩＩＦｃ継続試験の２年目）でｍＨＪＨＳデータを有するｒＦＶＩＩＩＦｃ継続試験の対象を、この事後分析に含めた。ｒＦＶＩＩＩＦｃのピボタル第３相臨床試験のベースラインからｒＦＶＩＩＩＦｃ継続試験の２年目までのｍＨＪＨＳスコアの変化（負の値は改善を示す）を、記述統計値を使用して要約した。ｒＦＶＩＩＩＦｃのピボタル第３相臨床試験のベースラインから追跡時診察までのｍ
ＨＪＨＳスコアの変化を、（１）総スコア（範囲、０～１１６；試験前レジメン（予防と出血時止血（episodic）の比較）による；初回ｍＨＪＨＳに基づく機能障害の重症度による、およびベースラインでの標的関節の存在による；（２）標的関節（範囲、０～１９：単一の標的関節に関する全ての質問の合計）；（３）荷重負荷（例えば、足首および膝）および非荷重負荷（例えば、肘）関節（範囲、０～３８：単一の位置の左右関節の合計）；ならびに（４）個々の構成要素（可動域（範囲、０～３６：全ての関節に関する質問「伸展の損失［足首の背屈］」および「屈曲の損失［足首の底屈］」の組合せ）；腫れ（範囲、０～２４：全ての関節に関する質問「腫れ」および「腫れの持続期間」の組合せ）；および筋力（範囲、０～６：全ての関節の合計））に関して要約した。
一部の実施形態では、関節の採点は、６つの関節（左足首－ＬＡ、右足首－ＲＡ、左肘－ＬＥ、右肘－ＲＥ、左膝－ＬＫ、右膝－ＲＫ）に関して個別に行う。一部の実施形態では、腫れを以下に従って採点する：０＝なし；１＝軽度；２＝中等度；３＝重度。一部の実施形態では、腫れの持続期間を以下に従って採点する：０＝腫れなしまたは６カ月以下；１＝６カ月超。一部の実施形態では、筋萎縮を以下に従って採点する：０＝なし；１＝軽度；２＝重度。一部の実施形態では、関節摩擦音を以下に従って採点する：０＝なし；１＝あり。一部の実施形態では、足首の底屈の損失を含む屈曲の損失を以下に従って採点する：０＝なし；１＝軽度；２＝中等度；３＝重度。一部の実施形態では、足首の背屈の損失を含む伸展の損失を以下に従って採点する：０＝なし；１＝軽度；２＝中等度；３＝重度。一部の実施形態では、不安定性を以下に従って採点する：０＝なし；１＝有意に病的な関節弛緩。一部の実施形態では、関節痛を以下に従って採点する：０＝可動域または最終可動域のいずれかでの痛みなし；１＝あり。一部の実施形態では、筋力を以下に従って採点する：０＝正常（重力および最大抵抗に対して位置を保持する）；１＝最小の減少（重力および中等度の抵抗に対して位置を保持するが、最大抵抗では保持しない）；２＝軽度の減少（重力または最小の抵抗に対して位置を保持する）；３＝中等度の減少（重力がなければ関節を動かすことができる）；４＝重度の減少（わずかな筋収縮または筋収縮なし）。ある特定の実施形態では、膝および肘での屈曲の損失および伸展の損失の採点に関して、以下を適用する：なし＝およそ０～５°；軽度＝およそ５～１０°；中等度＝およそ１１～２０°；および重度＝およそ＞２０°。
一部の実施形態では、歩行を１回（範囲は０～２）採点し、０＝歩行または階段の昇降に問題なし；１＝歩行に問題ないが、階段は困難であり；および２＝歩行および階段が困難である。
ある特定の実施形態では、関節の採点は、以下のカテゴリおよびスケール（範囲は各関節に関して０～１９および６個全ての関節に関して０～１１４）に従って、６つの関節（左足首－ＬＡ、右足首－ＲＡ、左肘－ＬＥ、右肘－ＲＥ、左膝－ＬＫ、右膝－ＲＫ）に関して個別に行う：腫れ（０＝なし；１＝軽度；２＝中等度；３＝重度）；腫れの持続期間（０＝腫れなしまたは６カ月以下；１＝６カ月超）；筋萎縮（０＝なし；１＝軽度；２＝重度）；関節摩擦音（０＝なし；１＝あり）；足首の底屈の損失を含む屈曲の損失（０＝なし；１＝軽度；２＝中等度；３＝重度）；足首の背屈の損失を含む伸展の損失（０＝なし；１＝軽度；２＝中等度；３＝重度）；不安定性（０＝なし；１＝有意に病的な関節弛緩）；関節痛（０＝可動域または最終可動域のいずれかでの痛みなし；１＝あり）；筋力（０＝正常（重力および最大抵抗に対して位置を保持する）；１＝最小の減少（重力および中等度の抵抗に対して位置を保持するが、最大抵抗では保持しない）；２＝軽度の減少（重力または最小の抵抗に対して位置を保持する）；３＝中等度の減少（重力がなければ関節を動かすことができる）；４＝重度の減少（わずかな筋収縮または筋収縮なし））；膝および肘での屈曲の損失および伸展の損失の採点に関して、以下を適用する：なし＝およそ０～５°；軽度＝およそ５～１０°；中等度＝およそ１１～２０°；および重度＝およそ＞２０°。
一部の実施形態では、本開示は、血友病を有するヒトにおける関節の可逆性の血友病性関節症を処置する方法であって、凝固因子とＦｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質の有効量をヒトに投与することを含み、投与によって、投与前のＨＪＨＳスコアと比較してヒトのＨＪＨＳスコアが改善される方法を提供する。一部の実施形態では、ＨＪＨＳスコアは、測定した全ての関節スコアの合計に加えて全歩行スコアを含む総ＨＪＨＳスコアである。一部の実施形態では、ＨＪＨＳスコアは、測定した全ての関節スコアの合計を含むが、全歩行スコアを含まない総ＨＪＨＳスコアである。他の実施形態では、ＨＪＨＳスコアは、１つまたは両方の肘、１つまたは両方の膝、１つまたは両方の足首、またはその任意の組合せのスコアである。特定の一実施形態では、ＨＪＨＳスコアは肘のスコアである。別の実施形態では、ＨＪＨＳスコアは膝のスコアである。別の実施形態ではＨＪＨＳスコアは足首のスコアである。別の実施形態では、ＨＪＨＳスコアは全歩行を反映する。
一部の実施形態では、本開示は、血友病を有するヒトにおける関節の可逆性の血友病性関節症を処置する方法であって、凝固因子とＦｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質の有効量をヒトに投与することを含み、投与によってヒトにおける関節痛が低減する方法を提供する。一部の実施形態では、関節痛は、投与前の関節痛と比較して低減される。ある特定の実施形態では、方法は、凝固因子とＦｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質の有効量の投与前に１つまたは複数の関節における関節痛を測定することをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、凝固因子とＦｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質の有効量の投与後に１つまたは複数の関節における関節痛を測定することをさらに含む。
ある特定の実施形態では、本発明の方法の効果は、ヒトの１つまたは複数の関節において観察される。一部の実施形態では、本発明の方法の効果は、少なくとも１つの関節において観察される。一部の実施形態では、本発明の方法の効果は、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個の関節において観察される。
一部の実施形態では、本開示の方法は、処置を必要とするヒトを特定すること、例えば血友病性関節症を有する対象を特定することをさらに含む。血友病性関節症は、当技術分野で公知の任意の方法を使用して検出および／またはモニターすることができる。一部の実施形態では、イメージングシステムを使用して対象における血友病性関節症を検出および／またはモニターする。一部の実施形態では、イメージングシステムは、関節を特徴付けるために使用される当技術分野で公知の任意のイメージングシステムを含む。例えば、ある特定の実施形態では、イメージングシステムは、Ｘ線撮影、磁気共鳴イメージング、超音波造影法、パワードップラー超音波検査、またはその任意の組合せを含む。
一部の実施形態では、対象は、Ｆｃ部分に融合されていない凝固因子タンパク質によって過去に処置されている。この凝固因子は、完全長または成熟凝固因子であり得る。一部の実施形態では、そのような凝固因子は、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）、ＲＥＣＯＭＢＩＮＡＴＥ（登録商標）、ＫＯＧＥＮＡＴＥ ＦＳ（登録商標）、ＨＥＬＩＸＡＴＥ ＦＳ（登録商標）、ＸＹＮＴＨＡ（登録商標）／ＲＥＦＡＣＴＯ ＡＢ（登録商標）、ＨＥＭＯＦＩＬ－Ｍ（登録商標）、ＭＯＮＡＲＣ－Ｍ（登録商標）、ＭＯＮＯＣＬＡＴＥ－Ｐ（登録商標）、ＨＵＭＡＴＥ－Ｐ（登録商標）、ＡＬＰＨＡＮＡＴＥ（登録商標）、ＫＯＡＴＥ－ＤＶＩ（登録商標）、ＡＦＳＴＹＬＡ（登録商標）、およびＨＹＡＴＥ：Ｃ（登録商標）、ＩＤＥＬＶＩＯＮ（登録商標）であり得る。
ＩＩ．Ａ．キメラタンパク質
本明細書に開示される可逆性血友病性関節症を処置する方法は、凝固因子とＦｃ領域とを含む一般的に適用可能なキメラタンパク質または組成物であって、凝固因子が任意の公知の凝固因子、その断片、またはそのバリアントであってよく、Ｆｃ領域が任意の公知のＦｃ領域、その断片、またはそのバリアントであってよい、前記キメラタンパク質または組成物である。一部の実施形態では、組成物は、凝固因子とＦｃ領域とを含むキメラタンパク質を含む。一部の実施形態では、凝固因子は、第ＶＩＩ因子（ＦＶＩＩ）、第ＶＩＩａ因子（ＦＶＩＩａ）、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）、第Ｘ因子（ＦＸ）、フォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）、またはその任意の組合せからなる群から選択される。したがって、ＦＶＩＩＩＦｃおよびＦＩＸＦｃキメラポリペプチド、およびその使用に関する本開示は、凝固因子部分と、Ｆｃ部分とを含む他のキメラポリペプチドにも同等に適用可能である。任意の凝固因子または任意のその断片または任意のそのバリアントを、本開示の方法において使用することができる。
いかなる理論によっても束縛されるものではないが、凝固因子に融合されたＦｃ領域は、可逆性血友病性関節症の処置において有用であると考えられる。血友病における炎症は、関節への出血の間に起こる。血友病性関節症に関与する炎症性サイトカインであるＴＮＦ－αは、ＮＦ－κＢシグナル伝達を誘導し、それによって、ヒト単球中でのＦｃＲｎ発現を上方調節する（Ｌｉｕら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００７、１７９（５）：２９９９～３０１１頁）。かくして、ＦｃＲｎは、炎症部位で上方調節され、炎症プロセスの調節の一部として、受容体であるＦｃ受容体への結合によってＦｃ含有タンパク質を炎症部位に局在化させることができる。凝固因子に融合されたＦｃ領域はまた、免疫調節および炎症経路の下方調節を引き起こし得る阻害的Ｆｃ受容体と相互作用することもできる。例えば、ｒＦＶＩＩＩＦｃは、Ｆｃ新生児受容体（ＦｃＲｎ）を遮断し、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）を活性化して、炎症性および抗炎症性分子のレベルの変化をもたらすことができる。かくして、一部の実施形態では、キメラタンパク質のＦｃ領域は、キメラタンパク質の、関節、例えば、炎症および／または傷害および／または損傷の部位への局在化を容易にする。
他の実施形態では、凝固因子は、凝固因子模倣体であってよい。凝固因子模倣体は、１つまたはそれ以上の凝固因子活性を示すことができる。例えば、抗体またはその抗原結合部分は、第ＩＸ因子と第Ｘ因子との両方に結合することによって、ＦＶＩＩＩのように作用することができる。抗体またはその抗原結合部分がＦｃ領域を含有する場合、そのような抗体またはその抗原結合部分を本発明の方法のために使用することができる。別の実施形態では、凝固因子は、ＦＶＩＩＩ活性を有するペプチドである。
これに関して、本開示は、一般的には、それと必要とする対象における可逆性血友病性関節症を処置する方法であって、対象に、凝固因子部分とＦｃ部分とを含むキメラタンパク質を投与することを含む、前記方法を提供する。
ＩＩ．Ａ．１．第ＶＩＩＩ因子
本明細書で使用される場合、本出願を通して「ＦＶＩＩＩ」と省略される「第ＶＩＩＩ因子」は、別途特定しない限り、凝固におけるその通常の役割において機能的なＦＶＩＩＩポリペプチドを意味する。かくして、ＦＶＩＩＩという用語は、機能的であるポリペプチドバリアントを含む。「ＦＶＩＩＩタンパク質」は、ＦＶＩＩＩポリペプチド（もしくはタンパク質）またはＦＶＩＩＩと互換的に使用される。ＦＶＩＩＩ機能の例としては、限定されるものではないが、凝固を活性化する能力、第ＩＸ因子のためのコファクターとして作用する能力、またはＣａ２＋およびリン脂質の存在下で第ＩＸ因子とのテンナーゼ複合体を形成した後、第Ｘ因子を活性化型Ｘａに変換する能力が挙げられる。ＦＶＩＩＩタンパク質は、ヒト、ブタ、イヌ、ラット、またはマウスＦＶＩＩＩタンパク質であってもよい。さらに、ヒトおよび他の種に由来するＦＶＩＩＩ間の比較により、機能にとって
必要とされる可能性がある保存された残基が同定された（Ｃａｍｅｒｏｎら、Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．７９：３１７～２２頁（１９９８）；米国特許第６，２５１，６３２号）。多くの機能的断片、変異体および改変型と同様、完全長ポリペプチドおよびポリヌクレオチド配列が公知である。様々なＦＶＩＩＩアミノ酸およびヌクレオチド配列が、例えば、米国特許出願公開第２０１５／０１５８９２９号Ａ１、第２０１４／０３０８２８０号Ａ１、および第２０１４／０３７００３５号Ａ１ならびに国際公開第ＷＯ２０１５／１０６０５２号Ａ１に開示されており、その各々の全体が参照により本明細書に組み入れられる。ＦＶＩＩＩポリペプチドとしては、例えば、完全長ＦＶＩＩＩ、完全長ＦＶＩＩＩ－Ｎ末端のＭｅｔ、成熟ＦＶＩＩＩ（－シグナル配列）、Ｎ末端に追加のＭｅｔを有する成熟ＦＶＩＩＩ、および／またはＢドメインが完全もしくは部分的に欠失したＦＶＩＩＩが挙げられる。ＦＶＩＩＩバリアントは、部分的欠失であるにしろ、完全な欠失であるにしろ、Ｂドメインの欠失を含む。
一部の実施形態では、本開示のキメラタンパク質または組成物のＦＶＩＩＩは、Ｂドメイン欠失ＦＶＩＩＩを含む。本明細書で使用される場合、ＦＶＩＩＩの「Ｂドメイン」は、内部アミノ酸配列同一性およびトロンビンによるタンパク質分解的切断部位によって定義される、当業界で公知のＢドメインと同じであり、例えば、成熟ヒトＦＶＩＩＩの残基Ｓｅｒ７４１～Ａｒｇ１６４８である。他のヒトＦＶＩＩＩドメインは、成熟ヒトＦＶＩＩＩと比較した、以下のアミノ酸残基：成熟ＦＶＩＩＩのＡ１、残基Ａｌａ１～Ａｒｇ３７２；Ａ２、残基Ｓｅｒ３７３～Ａｒｇ７４０；Ａ３、残基Ｓｅｒ１６９０～Ｉｌｅ２０３２；Ｃ１、残基Ａｒｇ２０３３～Ａｓｎ２１７２；Ｃ２、残基Ｓｅｒ２１７３～Ｔｙｒ２３３２によって定義される。配列番号を参照せずに本明細書で使用される配列の残基番号は、別途指摘しない限り、シグナルペプチド配列（１９アミノ酸）を含まないＦＶＩＩＩ配列に一致する。ＦＶＩＩＩ重鎖としても知られる、Ａ３－Ｃ１－Ｃ２配列は、残基Ｓｅｒ１６９０～Ｔｙｒ２３３２を含む。残りの配列、残基Ｇｌｕ１６４９～Ａｒｇ１６８９は、通常、ＦＶＩＩＩ軽鎖活性化ペプチドと呼ばれる。ブタ、マウスおよびイヌＦＶＩＩＩに関する、Ｂドメインを含む、全てのドメインの境界の位置も、当業界で公知である。一実施形態では、ＦＶＩＩＩのＢドメインは欠失している（「Ｂドメイン欠失ＦＶＩＩＩ」または「ＢＤＤ ＦＶＩＩＩ」）。ＢＤＤ ＦＶＩＩＩの例は、ＲＥＦＡＣＴＯ（登録商標）（組換えＢＤＤ ＦＶＩＩＩ）である。１つの特定の実施形態では、Ｂドメイン欠失ＦＶＩＩＩバリアントは、成熟ＦＶＩＩＩのアミノ酸残基７４６～１６４８の欠失を含む。
「Ｂドメイン欠失ＦＶＩＩＩ」は、米国特許第６，３１６，２２６号、第６，３４６，５１３号、第７，０４１，６３５号、第５，７８９，２０３号、第６，０６０，４４７号、第５，５９５，８８６号、第６，２２８，６２０号、第５，９７２，８８５号、第６，０４８，７２０号、第５，５４３，５０２号、第５，６１０，２７８号、第５，１７１，８４４号、第５，１１２，９５０号、第４，８６８，１１２号、および第６，４５８，５６３号ならびに国際公開第ＷＯ２０１５１０６０５２号Ａ１（ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０１０７３８）に開示された完全な、または部分的な欠失を有してもよい。一部の実施形態では、本開示の方法において使用されるＢドメイン欠失ＦＶＩＩＩ配列は、米国特許第６，３１６，２２６号（米国特許第６，３４６，５１３号にも）の４列目、第４行～５列目、第２８行および実施例１～５に開示された欠失のいずれか１つを含む。別の実施形態では、Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子は、Ｓ７４３／Ｑ１６３８ Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子（ＳＱ ＢＤＤ ＦＶＩＩＩ）（例えば、アミノ酸７４４～アミノ酸１６３７の欠失を有する第ＶＩＩＩ因子、例えば、成熟ＦＶＩＩＩのアミノ酸１～７４３およびアミノ酸１６３８～２３３２を有する第ＶＩＩＩ因子）である。一部の実施形態では、本開示の方法において使用されるＢドメイン欠失ＦＶＩＩＩは、米国特許第５，７８９，２０３号（米国特許第６，０６０，４４７号、米国特許第５，５９５，８８６号、および米国特許第６，２２８，６２０号）の２列目、第２６～５１行および実施例５～８に開示された欠
失を有する。一部の実施形態では、Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子は、米国特許第５，９７２，８８５号の１列目、第２５行～第２列、第４０行；米国特許第６，０４８，７２０号の６列目、第１～２２行および実施例１；米国特許第５，５４３，５０２号の２列目、第１７～４６行；米国特許第５，１７１，８４４号の４列目、第２２行～５列目、第３６行；米国特許第５，１１２，９５０号の２列目、第５５～６８行、図２、および実施例１；米国特許第４，８６８，１１２号の２列目、第２行～１９列目、第２１行および表２；米国特許第７，０４１，６３５号の２列目、第１行～３列目、第１９行、３列目、第４０行～４列目、第６７行、７列目、第４３行～８列目、第２６行、および１１列目、第５行～１３列目、第３９行；または米国特許第６，４５８，５６３号の４列目、第２５～５３行に記載された欠失を有する。一部の実施形態では、Ｂドメイン欠失ＦＶＩＩＩは、ＷＯ９１／０９１２２に記載されたように、Ｂドメインの多くの欠失を有するが、２つのポリペプチド鎖への一次翻訳産物のｉｎ ｖｉｖｏでのタンパク質分解的プロセッシングにとって必須であるＢドメインのアミノ末端配列を依然として含有する。一部の実施形態では、Ｂドメイン欠失ＦＶＩＩＩは、アミノ酸７４７～１６３８の欠失、すなわち、実質的にＢドメインの完全な欠失を用いて構築される。Ｈｏｅｂｅｎ Ｒ．Ｃ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５（１３）：７３１８～７３２３頁（１９９０）。Ｂドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子はまた、ＦＶＩＩＩのアミノ酸７７１～１６６６またはアミノ酸８６８～１５６２の欠失を含有してもよい。Ｍｅｕｌｉｅｎ Ｐ．ら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．２（４）：３０１～６頁（１９８８）。本発明の一部であるさらなるＢドメイン欠失としては、アミノ酸９８２～１５６２または７６０～１６３９（Ｔｏｏｌｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９８６）８３、５９３９～５９４２頁））、７９７～１５６２（Ｅａｔｏｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９８６）２５：８３４３～８３４７頁））、７４１～１６４６（Ｋａｕｆｍａｎ（ＰＣＴ公開第ＷＯ８７／０４１８７））、７４７～１５６０（Ｓａｒｖｅｒら、ＤＮＡ（１９８７）６：５５３～５６４頁））、７４１～１６４８（Ｐａｓｅｋ（ＰＣＴ公開８８／００８３１））、または８１６～１５９８または７４１～１６４８（Ｌａｇｎｅｒ（Ｂｅｈｒｉｎｇ Ｉｎｓｔ．Ｍｉｔｔ．（１９８８）８２：１６～２５頁、ＥＰ２９５５９７））の欠失が挙げられる。１つの特定の実施形態では、Ｂドメイン欠失ＦＶＩＩＩは、成熟ＦＶＩＩＩのアミノ酸残基７４６～１６４８の欠失を含む。別の実施形態では、Ｂドメイン欠失ＦＶＩＩＩは、成熟ＦＶＩＩＩのアミノ酸残基７４５～１６４８の欠失を含む。
他の実施形態では、ＢＤＤ ＦＶＩＩＩは、１つまたはそれ以上のＮ結合グリコシル化部位、例えば、完全長ＦＶＩＩＩ配列のアミノ酸配列に対応する、残基７５７、７８４、８２８、９００、９６３、または場合により、９４３を保持するＢドメインの断片を含有するＦＶＩＩＩポリペプチドを含む。Ｂドメイン断片の例は、Ｍｉａｏ，Ｈ．Ｚ．ら、Ｂｌｏｏｄ １０３（ａ）：３４１２～３４１９頁（２００４）、Ｋａｓｕｄａ，Ａら、Ｊ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．６：１３５２～１３５９頁（２００８）、およびＰｉｐｅ，Ｓ．Ｗ．ら、Ｊ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．９：２２３５～２２４２頁（２０１１）に開示されたＢドメインの２２６アミノ酸または１６３アミノ酸を含む（すなわち、Ｂドメインの最初の２２６アミノ酸または１６３アミノ酸が保持される）。さらに他の実施形態では、ＢＤＤ ＦＶＩＩＩは、ＢＤＤ ＦＶＩＩＩタンパク質の発現を改善するために残基３０９に点突然変異（ＰｈｅからＳｅｒへの）をさらに含む。さらに他の実施形態では、ＢＤＤ ＦＶＩＩＩは、Ｂドメインの一部を含有するが、１つまたはそれ以上のフリン切断部位（例えば、Ａｒｇ１３１３およびＡｒｇ１６４８）を含有しないＦＶＩＩＩポリペプチドを含む。Ｐｉｐｅ，Ｓ．Ｗ．ら、Ｊ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．９：２２３５～２２４２頁（２０１１）を参照されたい。一部の実施形態では、ＢＤＤ
ＦＶＩＩＩは、成熟完全長ＦＶＩＩＩに対応するアミノ酸７６５～１６５２中に欠失を含有する一本鎖ＦＶＩＩＩを含む（ｒＶＩＩＩ－ＳｉｎｇｌｅＣｈａｉｎおよびＡＦＳＴＹＬＡ（登録商標）としても知られる）。米国特許第７，０４１，６３５号を参照されたい。前記欠失のそれぞれを、任意のＦＶＩＩＩ配列中で作製することができる。
上記および下記に考察されるように、多くの機能的ＦＶＩＩＩバリアントが公知である。さらに、ＦＶＩＩＩにおける数百個の非機能的変異が血友病患者において同定されており、ＦＶＩＩＩ機能に対するこれらの変異の効果が、それらが、置換の性質というよりはむしろ、ＦＶＩＩＩの３次元構造内にあることにより多く起因することが決定された（全体が参照により本明細書に組み入れられるＣｕｔｌｅｒら、Ｈｕｍ．Ｍｕｔａｔ．１９：２７４～８頁（２００２））。さらに、ヒトと他の種に由来するＦＶＩＩＩ間の比較により、機能にとって必要とされる可能性がある保存された残基が同定された（全体が参照により本明細書に組み入れられるＣａｍｅｒｏｎら、Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．７９：３１７～２２頁（１９９８）；米国特許第６，２５１，６３２号）。
一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩとＦｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質の有効量は、Ｆｃ領域を含まないＦＶＩＩＩの有効量と同等である。ある特定の実施形態では、有効量は、約１０ＩＵ／ｋｇ～約３００ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、有効量は、約２０ＩＵ／ｋｇ～約３００ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、有効量は、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２５０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１９０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１８０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１７０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１５０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１４０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１３０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１２０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１１０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約９０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約８０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約７０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約６０ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ～約９０ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ～約８０ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ～約７０ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ～約６５ＩＵ／ｋｇである。１つの特定の実施形態では、有効量は、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇである。別の実施形態では、有効量は、約２５ＩＵ／ｋｇ～約６５ＩＵ／ｋｇである。他の実施形態では、有効量は、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約７０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約８０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約９０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約９０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約８０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約７０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約６０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約４０ＩＵ／ｋｇ、または約２０ＩＵ／ｋｇ～約３０ＩＵ／ｋｇである。
一部の実施形態では、有効量は、約１０ＩＵ／ｋｇ、約１５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ、約３５ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ、約４５ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ、約５５ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ、約６５ＩＵ／ｋｇ、約７０ＩＵ／ｋｇ、約７５ＩＵ／ｋｇ、約８０ＩＵ／ｋｇ、約８５ＩＵ／ｋｇ、約９０ＩＵ／ｋｇ、約９５ＩＵ／ｋｇ、約１００ＩＵ／ｋｇ、約１０５ＩＵ／ｋｇ、約１１０ＩＵ／ｋｇ、約１１５ＩＵ／ｋｇ、約１２０ＩＵ／ｋｇ、約１２５ＩＵ／ｋｇ、約１３０ＩＵ／ｋｇ、約１３５ＩＵ／ｋｇ、約１４０ＩＵ／ｋｇ、約１４５ＩＵ／ｋｇ、約１５０ＩＵ／ｋｇ、約１５５ＩＵ／ｋｇ、約１６０ＩＵ／ｋｇ、約１６５ＩＵ／ｋｇ、約１７０ＩＵ／ｋｇ、約１７５ＩＵ／ｋｇ、約１８０ＩＵ／ｋｇ、約１８５ＩＵ／ｋｇ、約１９０ＩＵ／ｋｇ、約１９５ＩＵ／ｋｇ、約２００ＩＵ／ｋｇ、約２２５ＩＵ／ｋｇ、約２５０ＩＵ／ｋｇ、約２７５ＩＵ／ｋｇ、または約３００ＩＵ／ｋｇである。１つの特定の実施形態では、有効量は、約５０ＩＵ／ｋｇ／ｋｇである。別の実施形態では、有効量は、約１００ＩＵ／ｋｇである。別の実施形態では、有効量は、約２００ＩＵ／ｋｇである。
ＦＶＩＩＩと、Ｆｃ領域またはその断片とを含む組成物またはキメラタンパク質を投与する場合の投薬間隔は、Ｆｃドメインを含まない凝固因子の等量にとって必要とされる投薬間隔よりも少なくとも約１．５倍長いものであってもよい。投薬間隔は、Ｆｃドメインを含まないＦＶＩＩＩの等量にとって必要とされる投薬間隔よりも、少なくとも約１．５～６倍長い、１．５倍～５倍長い、１．５倍～４倍長い、１．５倍～３倍長い、または１．５倍～２倍長いものであってもよい。
一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩとＦｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質の有効用量は、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１１日、約１２日、約１３日、約１４日、約１５日、約１６日、約１７日、約１８日、約１９日、約２０日、約２１日、約２２日、約２３日、または約２４日の投薬間隔でヒトに投与される。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩとＦｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質の有効用量は、約２５日、約２６日、約２７日、約２８日、約２９日、約３０日、約４５日、または約６０日の投薬間隔でヒトに投与される。
一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩと、Ｆｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質は、約１～約１４日、約１～約１３日、約１～約１２日、約１～約１１日、約１～約１０日、約１～約９日、約１～約８日、約１～約７日、約１～約６日、約１～約５日、約１～約４日、約１～約３日、約１～約２日、約２～約１４日、約３～約１４日、約４～約１４日、約５～約１４日、約６～約１４日、約７～約１４日、約８～約１４日、約９～約１４日、約１０～約１４日、約１１～約１４日、約１２～約１４日、約１３～約１４日、または約５～約１０日の投薬間隔で投与される。他の実施形態では、ＦＶＩＩＩと、Ｆｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質は、約１～約２１日、約１～約２０日、約１～約１９日、約１～約１８日、約１～約１７日、約１～約１６日、約１～約１５日、約１～約１４日、約１～約１３日、約１～約１２日、約１～約１１日、約１～約１０日、約１～約９日、約１～約８日、約１～約７日、約１～約６日、約１～約５日、約１～約４日、約１～約３日、約１～約２日、約２～約２１日、約３～約２１日、約４～約２１日、約５～約２１日、約６～約２１日、約７～約２１日、約８～約２１日、約９～約２１日、約１０～約２１日、約１１～約２１日、約１２～約２１日、約１３～約２１日、約１４～約２１日、約１５～約２１日、約１６～約２１日、約１７～約２１日、約１８～約２１日、約１９～約２１日、約２０～約２１日、約５～約１０日、約１０～約１５日、約１５～約２０日の投薬間隔で投与される。ある特定の実施形態では、ＦＶＩＩＩと、Ｆｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質は、約２～約６日の投薬間隔で投与される。別の実施形態では、ＦＶＩＩＩと、Ｆｃ領域とを含むキメラタンパク質は、約３～約５日の投薬間隔で投与される。
一実施形態では、有効量は、２５～６５ＩＵ／ｋｇ（２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６２、６４、または６５ＩＵ／ｋｇ）であり、投薬間隔は、３～５、３～６、３～７、３、４、５、６、７、または８日もしくはそれ以上の日数毎に１回、または週に３回、または週に３回以下である。別の実施形態では、有効量は、６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は週に１回、または６～７日毎に１回である。用量は、それらが必要である限り、反復的に投与することができる（例えば、少なくとも１０、２０、２８、３０、４０、５０、５２、または５７週、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０年）。１つの特定の実施形態では、有効用量は、約２５～６５ＩＵ／ｋｇであり、投薬間隔は、３～５日毎に１回である。
ＦＶＩＩＩとＦｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質を、例えば、局所（例え
ば、経皮もしくは眼内）、経口、頬、経鼻、経膣、直腸または非経口投与を含む、任意の適切な投与様式のために製剤化することができる。
本明細書で使用される非経口という用語は、皮下、皮内、血管内（例えば、静脈内）、筋肉内、脊髄、頭蓋内、髄腔内、眼内、眼周囲、眼窩内、滑液嚢内および腹腔内注射、ならびに任意の類似する注射または輸注技術を含む。組成物はまた、例えば、懸濁液、エマルジョン、持続放出製剤、クリーム、ゲルまたは粉末であってもよい。組成物を、伝統的な結合剤およびトリグリセリドなどの担体と共に、坐剤として製剤化することができる。
一例では、医薬製剤は、液体製剤、例えば、緩衝化された等張性の水性溶液である。別の例では、医薬組成物は、生理的であるか、または生理条件に近いｐＨを有する。他の例では、水性製剤は、生理的であるか、または生理状態に近い浸透圧および塩分濃度を有する。それは、塩化ナトリウムおよび／または酢酸ナトリウムを含有してもよい。
一部の実施形態では、本発明の方法において使用されるＦＶＩＩＩとＦｃ領域とを含むキメラタンパク質は、（ａ）キメラポリペプチド；（ｂ）スクロース、トレハロース、ラフィノース、アルギニン、またはその混合物から選択される１つまたはそれ以上の安定化剤；（ｃ）塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）；（ｄ）Ｌ－ヒスチジン；（ｅ）塩化カルシウム；および（ｆ）ポリソルベート２０またはポリソルベート８０を含む医薬組成物中で製剤化される。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、（ａ）５０ＩＵ／ｍｌ～２５００ＩＵ／ｍｌのキメラポリペプチド；（ｂ）１０ｍｇ／ｍｌ～２５ｍｇ／ｍｌのスクロース；（ｃ）８．８ｍｇ／ｍｌ～１４．６ｍｇ／ｍｌの塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）；（ｄ）０．７５ｍｇ／ｍｌ～２．２５ｍｇ／ｍｌのＬ－ヒスチジン；（ｅ）０．７５ｍｇ／ｍｌ～１．５ｍｇ／ｍｌの塩化カルシウム二水和物；および（ｆ）０．０８ｍｇ／ｍｌ～０．２５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０またはポリソルベート８０を含む。一部の例では、本開示の方法において使用される医薬組成物は、凍結乾燥される。
一部の実施形態では、医薬組成物は、免疫細胞を含まない。一部の実施形態では、医薬組成物は、細胞を含まない。
ＩＩ．Ａ．２．第ＩＸ因子
ヒト第ＩＸ因子（ＦＩＸ）は、血液凝固カスケードの内在性経路の重要成分であるセリンプロテアーゼである。本明細書で使用される場合、「第ＩＸ因子」または「ＦＩＸ」とは、凝固因子タンパク質および種およびその配列バリアントを指し、限定されるものではないが、ヒトＦＩＸ前駆体ポリペプチドの４６１個の一本鎖アミノ酸配列（「プレプロ」）、成熟ヒトＦＩＸの４１５個の一本鎖アミノ酸配列、およびＲ３３８Ｌ ＦＩＸ（Ｐａｄｕａ）バリアントを含む。ＦＩＸは、血液凝固の典型的な特徴を有する任意の形態のＦＩＸ分子を含む。本明細書で使用される場合、「第ＩＸ因子」および「ＦＩＸ」は、ドメインＧｌａ（γ－カルボキシグルタミン酸残基を含有する領域）、ＥＧＦ１およびＥＧＦ２（ヒト上皮増殖因子と相同な配列を含有する領域）、活性化ペプチド（成熟ＦＩＸの残基Ｒ１３６～Ｒ１８０によって形成される「ＡＰ」）、およびＣ末端プロテアーゼドメイン（「Ｐｒｏ」）、もしくは当業界で公知のこれらのドメインのシノニムを含むポリペプチドを包含することが意図されるか、または天然タンパク質の生物活性の少なくとも一部を保持するトランケートされた断片または配列バリアントであってもよい。
ＦＩＸまたは配列バリアントは、米国特許第４，７７０，９９９号および第７，７００，７３４号に記載のようにクローニングされており、ヒト第ＩＸ因子をコードするｃＤＮＡは、単離され、特性評価され、発現ベクター中にクローニングされている（例えば、Ｃｈｏｏら、Ｎａｔｕｒｅ、２９９：１７８～１８０頁（１９８２）；Ｆａｉｒら、Ｂｌｏｏｄ ６４：１９４～２０４頁（１９８４）；およびＫｕｒａｃｈｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ． ７９：６４６１～６４６４頁（１９８２）を参照されたい）。Ｓｉｍｉｏｎｉら、２００９によって特徴付けられた、ＦＩＸの１つの特定のバリアントである、Ｒ３３９Ｌ ＦＩＸ（Ｐａｄｕａ）バリアントは、機能獲得変異を含み、天然ＦＩＸと比較したＰａｄｕａバリアントの活性のほぼ８倍の増加と相関する。ＦＩＸバリアントはまた、ＦＩＸポリペプチドのＦＩＸ活性に影響しない、１つまたはそれ以上の連続するアミノ酸置換を有する任意のＦＩＸポリペプチドを含んでもよい。
一部の実施形態では、ＦＩＸは、凝固因子ＩＸ（組換え体）、アルブミン融合タンパク質（ｒＩＸ－ＦＰおよびＩＤＥＬＶＩＯＮ（登録商標）としても知られる）を含む。
ＦＩＸポリペプチドは、５５ｋＤａであり、３つの領域：２８アミノ酸のシグナルペプチド（アミノ酸１～２８）、グルタミン酸残基のガンマカルボキシル化にとって必要とされる１８アミノ酸のプロペプチド（アミノ酸２９～４６）、および４１５アミノ酸の成熟第ＩＸ因子から構成されるプレプロポリペプチド鎖として合成される。プロペプチドは、ガンマ－カルボキシグルタミン酸ドメインのＮ末端の１８アミノ酸残基の配列である。プロペプチドは、ビタミンＫ依存的ガンマカルボキシラーゼに結合した後、内因性プロテアーゼ、十中八九、フーリンまたはＰＣＳＫ３としても知られる、ＰＡＣＥ（対形成塩基性アミノ酸切断酵素）によってＦＩＸの前駆体ポリペプチドから切断される。ガンマカルボキシル化がない場合、Ｇｌａドメインは、カルシウムに結合して、タンパク質を負に荷電したリン脂質表面に固定するのに必要な正確なコンフォメーションを取ることができず、それによって、第ＩＸ因子を非機能的なものにする。たとえ、それがカルボキシル化されるとしても、保持されたプロペプチドはカルシウムおよびリン脂質への最適な結合にとって必要なＧｌａドメインのコンフォメーション変化を阻害するため、Ｇｌａドメインはまた、適切な機能のためにプロペプチドの切断に依存する。ヒトにおいては、得られる成熟第ＩＸ因子は、約１７重量％の炭水化物を含有する４１５アミノ酸残基の一本鎖タンパク質である、不活性ザイモゲンとして肝臓細胞から血流中に分泌される（Ｓｃｈｍｉｄｔ，Ａ．Ｅ．ら（２００３）Ｔｒｅｎｄｓ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｍｅｄ、１３：３９頁）。
成熟ＦＩＸは、ＮからＣ末端の構成で、ＧＬＡドメイン、ＥＧＦ１ドメイン、ＥＧＦ２ドメイン、活性化ペプチド（ＡＰ）ドメイン、およびプロテアーゼ（または触媒）ドメインである、いくつかのドメインから構成される。短いリンカーが、ＥＧＦ２ドメインと、ＡＰドメインとを接続する。ＦＩＸは、それぞれ、Ｒ１４５－Ａ１４６およびＲ１８０－Ｖ１８１によって形成される２つの活性化ペプチドを含有する。活性化の後、一本鎖ＦＩＸは、２個の鎖がジスルフィド結合によって連結された、２鎖分子になる。活性化特異性の変化をもたらすそれらの活性化ペプチドを置き換えることにより、凝固因子を操作することができる。哺乳動物においては、成熟ＦＩＸは活性化された第ＸＩ因子によって活性化され、第ＩＸａ因子を得ると予想される。プロテアーゼドメインは、ＦＩＸからＦＩＸａへの活性化の際に、ＦＩＸの触媒活性を提供する。活性化された第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩａ）は、ＦＩＸａ活性の完全な発現のための特異的コファクターである。
他の実施形態では、ＦＩＸポリペプチドは、血漿由来第ＩＸ因子のＴｈｒ１４８対立遺伝子形態を含み、内因性第ＩＸ因子と類似する構造的および機能的特徴を有する。
非常に多くの機能的ＦＩＸバリアントが公知である。国際公開第ＷＯ０２／０４０５４４号Ａ３は、４頁、第９～３０行および１５頁、第６～３１行において、ヘパリンによる阻害に対する耐性の増大を示す変異体を開示している。国際公開第ＷＯ０３／０２０７６４号Ａ２は、表２および表３（１４～２４頁）、ならびに１２頁、第１～２７行において、Ｔ細胞免疫原性が低下したＦＩＸ変異体を開示している。国際公開第ＷＯ２００７／１４９４０６号Ａ２は、４頁、第１行～１９頁、第１１行において、タンパク質安定性の増
加、ｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔｒｏでの半減期の増大、およびプロテアーゼに対する耐性の増大を示す機能的ＦＩＸ分子変異体を開示している。ＷＯ２００７／１４９４０６Ａ２もまた、１９頁、第１２行～２０頁、第９行において、キメラおよび他のバリアントＦＩＸ分子を開示している。国際公開第ＷＯ０８／１１８５０７号Ａ２は、５頁、第１４行～６頁、第５行において、凝固活性の増大を示すＦＩＸ変異体を開示している。国際公開第ＷＯ０９／０５１７１７号Ａ２は、９頁、第１１行～２０頁、第２行において、半減期および／または回復の増加をもたらす、Ｎ結合および／またはＯ結合グリコシル化部位の数が増加したＦＩＸ変異体を開示している。国際公開第ＷＯ０９／１３７２５４号Ａ２もまた、２頁、段落［００６］～５頁、段落［０１１］および１６頁、段落［０４４］～２４頁、段落［０５７］において、グリコシル化部位の数が増加した第ＩＸ因子変異体を開示している。国際公開第ＷＯ０９／１３０１９８号Ａ２は、４頁、第２６行～１２頁、第６行において、半減期の増加をもたらす、グリコシル化部位の数が増加した機能的ＦＩＸ分子変異体を開示している。国際公開第ＷＯ０９／１４００１５号Ａ２は、１１頁、段落［００４３］～１３頁、段落［００５３］において、ポリマー（例えば、ＰＥＧ）コンジュゲーションのために使用することができる、Ｃｙｓ残基の数が増加した機能的ＦＩＸ変異体を開示している。２０１１年７月１１日に出願され、２０１２年１月１２日にＷＯ２０１２／００６６２４として公開された、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０４３５６９号に記載されたＦＩＸポリペプチドも、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
さらに、ＦＩＸ中の数百個の非機能的変異が血友病対象において同定されており、その多くは、国際公開第ＷＯ０９／１３７２５４号Ａ２の１１～１４頁の表５に開示されている。そのような非機能的変異は、本発明に含まれないが、どの変異が多かれ少なかれ機能的ＦＩＸポリペプチドをもたらす可能性があるかのさらなる指針を提供する。
第ＩＸ因子凝固活性は、国際単位（ＩＵ）として表される。１ＩＵのＦＩＸ活性は、正常ヒト血漿１ミリリットル中のＦＩＸの量にほぼ一致する。凝固１段法（活性化部分トロンボプラスチン時間；ａＰＴＴ）、トロンビン生成時間（ＴＧＡ）、および回転トロンボエラストメトリー（ＲＯＴＥＭ（登録商標））などの、いくつかのアッセイが、第ＩＸ因子活性を測定するために利用可能である。本発明は、ＦＩＸ配列、ヒト、非ヒト霊長類、哺乳類（家畜など）に由来するものなどの天然である配列断片、およびＦＩＸの生物活性もしくは生物学的機能の少なくとも一部を保持する非天然配列バリアントに対する相同性を有する、ならびに／または凝固因子関連疾患、欠損、障害もしくは状態（例えば、凝固因子の欠損の、外傷、手術と関連する出血エピソード）を防止する、処置する、媒介する、または改善するのに有用である配列を企図する。ヒトＦＩＸに対する相同性を有する配列を、ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴなどの標準的な相同性検索技術によって見出すことができる。
一部の実施形態では、ＦＩＸとＦｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質の有効量は、Ｆｃ領域を含まないＦＩＸの有効量と同等である。ある特定の実施形態では、有効量は、約０．１ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、有効量は、約１０ＩＵ／Ｋｇ～約４００ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、有効量は、約２０ＩＵ／Ｋｇ～約３００ＩＵ／ｋｇである。一部の実施形態では、有効量は、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２７５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２５０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２２５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１７５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１５０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約９０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約８０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約７０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約６０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約４０ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約３０ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋ
ｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約７０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約８０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約９０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約１００ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約１５０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、または約２５ＩＵ／ｋｇ～約７５ＩＵ／ｋｇである。１つの特定の実施形態では、有効量は、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇである。
一部の実施形態では、有効量は、約１０ＩＵ／ｋｇ、約１５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ、約３５ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ、約４５ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ、約５５ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ、約６５ＩＵ／ｋｇ、約７０ＩＵ／ｋｇ、約７５ＩＵ／ｋｇ、約８０ＩＵ／ｋｇ、約８５ＩＵ／ｋｇ、約９０ＩＵ／ｋｇ、約９５ＩＵ／ｋｇ、約１００ＩＵ／ｋｇ、約１０５ＩＵ／ｋｇ、約１１０ＩＵ／ｋｇ、約１１５ＩＵ／ｋｇ、約１２０ＩＵ／ｋｇ、約１２５ＩＵ／ｋｇ、約１３０ＩＵ／ｋｇ、約１３５ＩＵ／ｋｇ、約１４０ＩＵ／ｋｇ、約１４５ＩＵ／ｋｇ、約１５０ＩＵ／ｋｇ、約１５５ＩＵ／ｋｇ、約１６０ＩＵ／ｋｇ、約１６５ＩＵ／ｋｇ、約１７０ＩＵ／ｋｇ、約１７５ＩＵ／ｋｇ、約１８０ＩＵ／ｋｇ、約１８５ＩＵ／ｋｇ、約１９０ＩＵ／ｋｇ、約１９５ＩＵ／ｋｇ、または約２００ＩＵ／ｋｇである。１つの特定の実施形態では、有効量は、約５０ＩＵ／ｋｇである。別の実施形態では、有効量は、約１００ＩＵ／ｋｇである。
ＦＩＸとＦｃ領域またはその断片を含む組成物またはキメラタンパク質を投与する場合の投与間隔は、Ｆｃドメインを含まない前記ＦＩＸの同等の用量にとって必要とされる投与間隔よりも少なくとも約１．５倍長くてもよい。投与間隔は、Ｆｃドメインを含まない前記ＦＩＸの同等の用量にとって必要とされる投与間隔よりも少なくとも約１．５～６倍、１．５～５倍、１．５～４倍、１．５～３倍、または１．５～２倍長くてもよい。一部の実施形態では、投与間隔は、Ｆｃドメインを含まない前記ＦＩＸの同等の用量にとって必要とされる投与間隔よりも少なくとも約１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍または６倍長い。投与間隔は、約３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、もしくは１４日毎、またはそれより長くてもよい。投与間隔は、少なくとも約１．５～５日、１．５日、２日、３日、４日、もしくは５日、またはそれより長くてもよい。オンデマンド処置のために、前記キメラポリペプチドまたはハイブリッドの投与間隔は、２４～３６、２４～４８、２４～７２、２４～９６、２４～１２０、２４～１４４、２４～１６８、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、もしくは７２時間、またはそれより長い時間毎に約１回である。
一部の実施形態では、ＦＩＸと、Ｆｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質の有効用量は、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１１日、約１２日、約１３日、約１４日、約１５日、約１６日、約１７日、約１８日、約１９日、約２０日、約２１日、約２２日、約２３日、または約２４日の投与間隔でヒトに投与される。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩとＦｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質の有効用量は、約２５日、約２６日、約２７日、約２８日、約２９日、約３０日、約４５日、または約６０日の投与間隔でヒトに投与される。ある特定の実施形態では、ＦＶＩＩＩとＦｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質の有効用量は、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１１日、約１２日、約１３日、または約１４日の投与間隔でヒトに投与される。１つの特定の実施形態では、ＦＶＩＩＩとＦｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質の有効用量は、約２日（例えば、約４８時間）の投与間隔でヒトに投与される。別の実施形態では、ＦＶＩＩＩとＦｃ領域とを含む組成物またはキメ
ラタンパク質の有効用量は、約７日の投与間隔でヒトに投与される。別の実施形態では、ＦＶＩＩＩとＦｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質の有効用量は、約１０日の投与間隔でヒトに投与される。一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩとＦｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質の有効用量は、６～１０時間毎の投与間隔でヒトに投与される。ある特定の実施形態では、ＦＶＩＩＩとＦｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質の有効用量は、毎日の投与間隔でヒトに投与される。
一部の実施形態では、ＦＶＩＩＩとＦｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質は、約１～約２１日、約１～約２０日、約１～約１９日、約１～約１８日、約１～約１７日、約１～約１６日、約１～約１５日、約１～約１４日、約１～約１３日、約１～約１２日、約１～約１１日、約１～約１０日、約１～約９日、約１～約８日、約１～約７日、約１～約６日、約１～約５日、約１～約４日、約１～約３日、約１～約２日、約２～約２１日、約３～約２１日、約４～約２１日、約５～約２１日、約６～約２１日、約７～約２１日、約８～約２１日、約９～約２１日、約１０～約２１日、約１１～約２１日、約１２～約２１日、約１３～約２１日、約１４～約２１日、約１５～約２１日、約１６～約２１日、約１７～約２１日、約１８～約２１日、約１９～約２１日、約２０～約２１日、約５～約１０日、約１０～約１５日、約１５～約２０日の投与間隔で投与される。
一実施形態では、有効用量は、１～５０ＩＵ／ｄＬの循環ＦＩＸ（例えば、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０ＩＵ／ｄＬ）を維持することができる用量である。別の実施形態では、有効用量は、５０ＩＵ／ｋｇであり、投与間隔は、週１回である。別の実施形態では、有効用量は、１００ＩＵ／ｋｇであり、投与間隔は、１０日毎に１回である。用量が必要である限り（例えば、少なくとも１０、２０、２８、３０、４０、５０、５２、または５７週、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０年）、それらを反復的に投与することができる。
ＦＩＸとＦｃ領域とを含む組成物またはキメラタンパク質を、例えば、局所（例えば、経皮もしくは眼内）、経口、頬、経鼻、経膣、直腸または非経口投与を含む、任意の適切な投与様式のために製剤化することができる。
本明細書で使用される非経口という用語は、皮下、皮内、血管内（例えば、静脈内）、筋肉内、脊髄、頭蓋内、鞘内、眼内、眼周囲、眼窩内、滑液嚢内および腹腔内注射、ならびに任意の同様の注射または輸注技術を含む。組成物は、例えば、懸濁剤、エマルジョン、持続放出製剤、クリーム、ゲルまたは粉末であってもよい。組成物を、伝統的な結合剤およびトリグリセリドなどの担体を用いて、坐剤として製剤化することができる。
一例では、医薬製剤は、液体製剤、例えば、緩衝化、等張性、水性溶液である。別の例では、医薬組成物は、生理的であるか、または生理的に近いｐＨを有する。他の例では、水性製剤は、生理的な、または生理的に近い浸透圧および塩分濃度を有する。それは、塩化ナトリウムおよび／または酢酸ナトリウムを含有してもよい。
一部の実施形態では、本発明の方法において使用されるＦＩＸとＦｃ領域とを含むキメラタンパク質は、（ａ）キメラポリペプチド；（ｂ）スクロースおよびマンニトールを含む炭水化物混合物；（ｃ）塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）；（ｄ）Ｌ－ヒスチジン；ならびに（ｅ）ポリソルベート２０またはポリソルベート８０を含む医薬組成物中で製剤化される。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、（ａ）約２５ＩＵ／ｍｌ～約７００ＩＵ／ｍｌの第ＩＸ因子ポリペプチド；（ｂ）約１０ｍｇ／ｍｌ～約２０ｍｇ／ｍｌのスクロー
ス；（ｃ）約２０ｍｇ／ｍｌ～約４０ｍｇ／ｍｌのマンニトール；（ｄ）約３ｍｇ／ｍｌ～約４ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌ；（ｅ）約３ｍｇ／ｍｌ～約６ｍｇ／ｍｌのＬ－ヒスチジン；（ｆ）約０．０８ｍｇ／ｍｌ～約０．２ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０もしくはポリソルベート８０；または（ｇ）その任意の組合せを含む。一部の例では、本開示の方法において使用される医薬組成物は、凍結乾燥される。
一部の実施形態では、医薬組成物は、免疫細胞を含まない。一部の実施形態では、医薬組成物は、細胞を含まない。
ＩＩ．Ａ．３ Ｆｃ
本開示の組成物またはキメラタンパク質は、ＦｃドメインまたはＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩＩＢおよび／もしくはＦＣ－ＳＩＧＮに結合するその部分を含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、例えば、凝固因子とＦｃ領域とを含むキメラタンパク質の部分として、凝固因子に融合される。他の実施形態では、Ｆｃドメインは、凝固因子以外のポリペプチドに融合され、ここで、組成物は、（１）凝固因子および（２）Ｆｃドメインとさらなるポリペプチドとを含むキメラタンパク質を含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、凝固因子と共に同時投与される。Ｆｃドメインまたはその一部は、キメラタンパク質の薬物動態または薬力学特性を改善することができる。ある特定の実施形態では、Ｆｃドメインまたはその一部は、Ｆｃドメインまたはその一部に融合された分子の半減期を延長させる。一部の実施形態では、キメラタンパク質のＦｃ領域は、キメラタンパク質の関節への局在化を容易にする。
本明細書で使用される用語「Ｆｃドメイン」または「Ｆｃ領域」とは、その２つの重鎖のそれぞれのＦｃドメインの二量体結合によって形成される、天然のＩｇのＦｃドメインに対応するポリペプチドの機能的部分を意味する。天然のＦｃドメインは、別のＦｃドメインとホモ二量体を形成する。対照的に、本明細書で使用される場合、用語「遺伝的に融合されたＦｃ領域」または「一本鎖Ｆｃ領域」（ｓｃＦｖ領域）とは、単一のポリペプチド鎖内に遺伝的に連結された（すなわち、単一の連続する遺伝子配列中にコードされた）Ｆｃドメインを含む合成二量体Ｆｃ領域を指す。
一実施形態では、「Ｆｃ領域」とは、パパイン切断部位のすぐ上流のヒンジ領域（すなわち、重鎖定常領域の最初の残基が１１４であるとした場合、ＩｇＧ中の残基２１６）で始まり、抗体のＣ末端で終わる単一のＩｇＧ重鎖の部分を指す。したがって、完全なＦｃドメインは、少なくともヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインを含む。
Ｉｇ定常領域のＦｃ領域は、Ｉｇアイソタイプに応じて、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４ドメイン、ならびにヒンジ領域を含んでもよい。ＩｇのＦｃ領域を含むキメラタンパク質は、安定性の増大、血清半減期の増大（Ｃａｐｏｎら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ ３３７：５２５頁）ならびに新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）などのＦｃ受容体への結合（米国特許第６，０８６，８７５号、第６，４８５，７２６号、第６，０３０，６１３号；ＷＯ０３／０７７８３４；ＵＳ２００３－０２３５５３６Ａ１）を含む、キメラタンパク質上でのいくつかの望ましい特性を付与する（これらの文献は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる）。
一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＦｃＲｎに特異的に結合する。ＦｃＲｎ受容体は、ヒトを含むいくつかの哺乳動物種から単離されている。ヒトＦｃＲｎ、サルＦｃＲｎ、ラットＦｃＲｎ、およびマウスＦｃＲｎの配列が公知である（Ｓｔｏｒｙら、１９９４、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８０：２３７７頁）。ＦｃＲｎ受容体は、比較的低いｐＨでＩｇＧに結合し（ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥなどの他のＩｇクラスではなく）、内腔
中のＩｇＧを漿膜方向に活発に細胞間輸送し、次いで、間質液中に見出される比較的高いｐＨでＩｇＧを放出する。それは、肺および腸上皮（Ｉｓｒａｅｌら、１９９７、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ９２：６９頁）、腎近位尿細管上皮（Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、２００２、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｎａｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２８２：Ｆ３５８頁）ならびに鼻上皮、膣表面、および胆道系表面を含む、成体上皮組織（米国特許第６，４８５，７２６号、第６，０３０，６１３号、第６，０８６，８７５号；ＷＯ０３／０７７８３４；ＵＳ２００３－０２３５５３６Ａ１）中で発現される。
本発明において有用なＦｃ領域は、全ＩｇＧ、ＩｇＧのＦｃ断片、およびＦｃＲｎ受容体の完全な結合領域を含む他の断片を含む、ＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩＩＢ、および／またはＤＣ－ＳＩＧＮに特異的に結合することができる分子を包含する。ＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩＩＢ、および／またはＤＣ－ＳＩＧＮに結合するＩｇＧのＦｃ部分の領域は記載されている。
１つの特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、低親和性免疫グロブリンガンマＦｃ領域受容体ＩＩ－ｂ（ＦｃγＲＩＩＢ）に特異的に結合する。ＦｃγＲＩＩＢは、炎症応答の態様を制御する、阻害的Ｆｃ受容体である。特に、ＦｃγＲＩＩＢの活性化は、炎症をもたらす活性化シグナルを阻害する。かくして、実質的に、ＦｃγＲＩＩＢの活性化は、炎症を阻害する。
別の実施形態では、Ｆｃ領域は、樹状細胞特異的細胞間接着分子－３捕捉非インテグリン（ＤＣ－ＳＩＧＮ）に特異的に結合する。ＣＤ２０９としても知られる、ＤＣ－ＳＩＧＮは、ある特定の単球、樹状細胞、およびマクロファージを含む、多くの骨髄由来細胞によって発現されるＣ型レクチン受容体である。マウスにおける研究により、ＤＣ－ＳＩＧＮの活性化が炎症を阻害することができることが示されている。Ｎｉｍｅｒｊａｈｎ、Ｃｈａｐｔｅｒ ５、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｐａｔｈｗａｙｓ
Ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ Ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＩｇＧ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ａｃｔｉｖｉｔｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ ２０１３：１１３～１３８頁を参照されたい。
特異的結合とは、生理的条件下で比較的安定的である複合体を形成する２つの分子を指す。特異的結合は、通常は中程度から高い能力と共に低い親和性を有する非特異的結合から区別されるように、高い親和性および低いから中程度の能力を特徴とする。典型的には、結合は、親和性定数ＫＡが１０６Ｍ－１より高いか、または１０８Ｍ－１より高い場合、特異的であると考えられる。必要に応じて、結合条件を変化させることにより、特異的結合に実質的に影響することなく、非特異的結合を減少させることができる。当業者であれば、日常的な技術を使用して、分子の濃度、溶液のイオン強度、温度、結合させる時間、ブロッキング剤（例えば、血清アルブミン、ミルクカゼイン）の濃度などの適切な結合条件を最適化することができる。
ある特定の実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、それにも拘わらずＦｃ領域に対してＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩＩＢおよび／またはＤＣ－ＳＩＧＮ結合特性を付与するのに十分である１つまたはそれ以上のトランケートされたＦｃ領域を含む。例えば、ＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩＩＢおよび／またはＤＣ－ＳＩＧＮに結合するＦｃ領域の部分（すなわち、ＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩＩＢおよび／またはＤＣ－ＳＩＧＮ結合部分）は、ＥＵナンバリングによる、ＩｇＧ１のおよそアミノ酸２８２～４３８を含む（主な接触部位は、ＣＨ２ドメインのアミノ酸２４８、２５０～２５７、２７２、２８５、２８８、２９０～２９１、３０８～３１１、および３１４ならびにＣＨ３ドメインのアミノ酸残基３８５～３８７、４２８、および４３３～４３６である）。かくして、本発明のＦｃ領域は、ＦｃＲｎ、Ｆ
ｃγＲＩＩＢおよび／またはＤＣ－ＳＩＧＮ結合部分を含むか、またはそれからなってもよい。ＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩＩＢおよび／またはＤＣ－ＳＩＧＮ結合部分は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプの重鎖に由来してもよい。一実施形態では、ヒトアイソタイプＩｇＧ１の抗体に由来するＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩＩＢおよび／またはＤＣ－ＳＩＧＮ結合部分が使用される。別の実施形態では、ヒトアイソタイプＩｇＧ４の抗体に由来するＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩＩＢおよび／またはＤＣ－ＳＩＧＮ結合部分が使用される。
別の実施形態では、「Ｆｃ領域」は、Ｆｃドメインの、またはＦｃドメインに由来するアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒンジ（例えば、上、中央、および／もしくは下ヒンジ領域）ドメイン（ＥＵナンバリングによる抗体Ｆｃ領域のおよそアミノ酸２１６～２３０）、ＣＨ２ドメイン（ＥＵナンバリングによる抗体Ｆｃ領域のおよそアミノ酸２３１～３４０）、ＣＨ３ドメイン（ＥＵナンバリングによる抗体Ｆｃ領域のおよそアミノ酸３４１～４３８）、ＣＨ４ドメイン、またはそのバリアント、部分、もしくは断片のうちの少なくとも１つを含む。他の実施形態では、Ｆｃ領域は、完全なＦｃドメイン（すなわち、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメイン）を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＣＨ３ドメイン（またはその一部）に融合したヒンジドメイン（またはその一部）、ＣＨ２ドメイン（またはその一部）に融合したヒンジドメイン（またはその一部）、ＣＨ３ドメイン（またはその一部）に融合したＣＨ２ドメイン（またはその一部）、ヒンジドメイン（またはその一部）とＣＨ３ドメイン（またはその一部）の両方に融合したＣＨ２ドメイン（またはその一部）を含む、それらから本質的になる、またはそれらからなる。さらに他の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＣＨ２ドメインの少なくとも一部（例えば、ＣＨ２ドメインの全部または部分）を欠く。特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵ番号２２１～４４７に対応するアミノ酸を含むか、またはそれからなる。
本明細書でＦ、Ｆ１、またはＦ２と示されるＦｃ領域を、いくつかの異なる供給源から取得することができる。一実施形態では、ポリペプチドのＦｃ領域は、ヒトＩｇに由来する。しかしながら、Ｆｃ領域は、例えば、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、ウサギ、もしくはモルモット）または非ヒト霊長類（例えば、チンパンジー、マカク）種を含む、別の哺乳動物種のＩｇに由来してもよいことが理解される。さらに、Ｆｃドメインまたはその部分のポリペプチドは、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥを含む任意のＩｇクラスならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む任意のＩｇアイソタイプに由来してもよい。別の実施形態では、ヒトアイソタイプＩｇＧ１が使用される。
ある特定の実施形態では、Ｆｃバリアントは、野生型Ｆｃドメインを含むＦｃ領域によって付与される少なくとも１つのエフェクター機能の変化（例えば、Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩもしくはＦｃγＲＩＩＩへの結合の減少またはＦｃＲｎもしくはＦｃγＲＩＩへの結合の改善）、補体タンパク質（例えば、Ｃ１ｑ）、または他のＦｃ結合パートナー（例えば、ＤＣ－ＳＩＧＮへの結合の改善）に結合する、または抗体依存的細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、食作用、もしくは補体依存的細胞傷害性（ＣＤＣＣ）を誘発するＦｃ領域の能力の改善または減少）を提供する。他の実施形態では、Ｆｃバリアントは、操作されたシステイン残基を提供する。
本発明のＦｃ領域は、エフェクター機能および／またはＦｃＲ結合の変化（例えば、増強または低下）を与えることが知られる当業界で認識されたＦｃバリアントを用いてもよい。具体的には、本発明の結合分子は、、その各々が参照により本明細書に組み込まれる、例えば、国際ＰＣＴ公開ＷＯ８８／０７０８９Ａ１、ＷＯ９６／１４３３９Ａ１、ＷＯ９８／０５７８７Ａ１、ＷＯ９８／２３２８９Ａ１、ＷＯ９９／５１６４２Ａ１、ＷＯ９
９／５８５７２Ａ１、ＷＯ００／０９５６０Ａ２、ＷＯ００／３２７６７Ａ１、ＷＯ００／４２０７２Ａ２、ＷＯ０２／４４２１５Ａ２、ＷＯ０２／０６０９１９Ａ２、ＷＯ０３／０７４５６９Ａ２、ＷＯ０４／０１６７５０Ａ２、ＷＯ０４／０２９２０７Ａ２、ＷＯ０４／０３５７５２Ａ２、ＷＯ０４／０６３３５１Ａ２、ＷＯ０４／０７４４５５Ａ２、ＷＯ０４／０９９２４９Ａ２、ＷＯ０５／０４０２１７Ａ２、ＷＯ０４／０４４８５９、ＷＯ０５／０７０９６３Ａ１、ＷＯ０５／０７７９８１Ａ２、ＷＯ０５／０９２９２５Ａ２、ＷＯ０５／１２３７８０Ａ２、ＷＯ０６／０１９４４７Ａ１、ＷＯ０６／０４７３５０Ａ２、およびＷＯ０６／０８５９６７Ａ２；米国特許出願公開第２００７／０２３１３２９号、第２００７／０２３１３２９号、第２００７／０２３７７６５号、第２００７／０２３７７６６号、第２００７／０２３７７６７号、第２００７／０２４３１８８号、第２００７０２４８６０３号、第２００７０２８６８５９号、第２００８００５７０５６号；または米国特許第５，６４８，２６０号；第５，７３９，２７７号；第５，８３４，２５０号；第５，８６９，０４６号；第６，０９６，８７１号；第６，１２１，０２２号；第６，１９４，５５１号；第６，２４２，１９５号；第６，２７７，３７５号；第６，５２８，６２４号；第６，５３８，１２４号；第６，７３７，０５６号；第６，８２１，５０５号；第６，９９８，２５３号；第７，０８３，７８４号；第７，４０４，９５６号、および第７，３１７，０９１号に開示された１つまたはそれ以上のアミノ酸位置に変化（例えば、置換）を含んでもよい。一実施形態では、特異的変化（例えば、当業界で開示された１つまたはそれ以上のアミノ酸の特異的置換）を、１つまたはそれ以上の開示されたアミノ酸位置に作製することができる。別の実施形態では、１つまたはそれ以上の開示されたアミノ酸位置での異なる変化（例えば、１つまたはそれ以上の当業界で開示されたアミノ酸位置の異なる置換）を作製することができる。
Ｆｃ領域を、部位特異的突然変異誘発などのよく認識された手順に従って改変して、ＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩＩＢおよび／またはＤＣ－ＳＩＧＮが結合する改変されたＦｃ断片またはその部分を得ることができる。そのような改変は、ＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩＩＢおよび／またはＤＣ－ＳＩＧＮ接触部位から離れた改変ならびにＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩＩＢおよび／またはＤＣ－ＳＩＧＮへの結合を保存する、またはさらには増強する接触部位内の改変を含む。例えば、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ（Ｆｃγ１）中の以下の単一のアミノ酸残基：Ｐ２３８Ａ、Ｓ２３９Ａ、Ｋ２４６Ａ、Ｋ２４８Ａ、Ｄ２４９Ａ、Ｍ２５２Ａ、Ｔ２５６Ａ、Ｅ２５８Ａ、Ｔ２６０Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｓ２６７Ａ、Ｈ２６８Ａ、Ｅ２６９Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｅ２７２Ａ、Ｌ２７４Ａ、Ｎ２７６Ａ、Ｙ２７８Ａ、Ｄ２８０Ａ、Ｖ２８２Ａ、Ｅ２８３Ａ、Ｈ２８５Ａ、Ｎ２８６Ａ、Ｔ２８９Ａ、Ｋ２９０Ａ、Ｒ２９２Ａ、Ｅ２９３Ａ、Ｅ２９４Ａ、Ｑ２９５Ａ、Ｙ２９６Ｆ、Ｎ２９７Ａ、Ｓ２９８Ａ、Ｙ３００Ｆ、Ｒ３０１Ａ、Ｖ３０３Ａ、Ｖ３０５Ａ、Ｔ３０７Ａ、Ｌ３０９Ａ、Ｑ３１１Ａ、Ｄ３１２Ａ、Ｎ３１５Ａ、Ｋ３１７Ａ、Ｅ３１８Ａ、Ｋ３２０Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｓ３２４Ａ、Ｋ３２６Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ｐ３２９Ａ、Ａ３３０Ｑ、Ｐ３３１Ａ、Ｅ３３３Ａ、Ｋ３３４Ａ、Ｔ３３５Ａ、Ｓ３３７Ａ、Ｋ３３８Ａ、Ｋ３４０Ａ、Ｑ３４２Ａ、Ｒ３４４Ａ、Ｅ３４５Ａ、Ｑ３４７Ａ、Ｒ３５５Ａ、Ｅ３５６Ａ、Ｍ３５８Ａ、Ｔ３５９Ａ、Ｋ３６０Ａ、Ｎ３６１Ａ、Ｑ３６２Ａ、Ｙ３７３Ａ、Ｓ３７５Ａ、Ｄ３７６Ａ、Ａ３７８Ｑ、Ｅ３８０Ａ、Ｅ３８２Ａ、Ｓ３８３Ａ、Ｎ３８４Ａ、Ｑ３８６Ａ、Ｅ３８８Ａ、Ｎ３８９Ａ、Ｎ３９０Ａ、Ｙ３９１Ｆ、Ｋ３９２Ａ、Ｌ３９８Ａ、Ｓ４００Ａ、Ｄ４０１Ａ、Ｄ４１３Ａ、Ｋ４１４Ａ、Ｒ４１６Ａ、Ｑ４１８Ａ、Ｑ４１９Ａ、Ｎ４２１Ａ、Ｖ４２２Ａ、Ｓ４２４Ａ、Ｅ４３０Ａ、Ｎ４３４Ａ、Ｔ４３７Ａ、Ｑ４３８Ａ、Ｋ４３９Ａ、Ｓ４４０Ａ、Ｓ４４４Ａ、およびＫ４４７Ａを、ＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩＩＢおよび／またはＤＣ－ＳＩＧＮに対するＦｃ結合親和性の有意な喪失なく置換することができ、ここで、例えば、Ｐ２３８Ａは、位置番号２３８でアラニンによって置換された野生型プロリンを表す。
例として、特定の実施形態は、高度に保存されたＮ－グリコシル化部位を除く、Ｎ２９７Ａ変異を含む。アラニンに加えて、他のアミノ酸を、上記で特定された位置で野生型ア
ミノ酸に置換することができる。変異を、Ｆｃ中に単一に導入して、天然のＦｃと異なる１００個を超えるＦｃ領域を生じさせることができる。さらに、２個、３個、またはそれ以上のこれらの個々の変異の組合せを一緒に導入して、さらに数百個のＦｃ領域を生じさせることができる。さらに、本発明の構築物のＦｃ領域の１つを変異させ、構築部の他のＦｃ領域を全く変異させないか、またはその両方を、異なる変異を用いるが変異させることができる。
一実施形態では、Ｆｃドメインまたはその一部は、米国特許第５，７３９，２７７号の配列番号３を含み、場合により、米国特許第５，７３９，２７７号の配列番号１１、１、２および３１から選択される配列をさらに含むポリペプチドである。
ある特定の実施形態では、Ｆｃドメインまたはその一部は、ヘミグリコシル化される。例えば、２つのＦｃ領域を含むキメラタンパク質は、第１の、グリコシル化されたＦｃ領域（例えば、グリコシル化されたＣＨ２領域）と、第２の、無グリコシル化されたＦｃ領域（例えば、無グリコシル化されたＣＨ２領域）とを含有してもよい。一実施形態では、グリコシル化されたＦｃ領域と無グリコシル化されたＦｃ領域との間に、リンカーを置くことができる。別の実施形態では、Ｆｃ領域は完全にグリコシル化される、すなわち、Ｆｃ領域の全てがグリコシル化される。他の実施形態では、Ｆｃ領域は無グリコシル化されてもよい、すなわち、Ｆｃ部分はいずれもグリコシル化されない。
ある特定の実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、Ｆｃドメインの抗原非依存的エフェクター機能、特に、タンパク質の循環半減期を変化させる、Ｆｃドメインまたはその一部（例えば、Ｆｃバリアント）に対するアミノ酸置換を含む。
本発明において使用されるＦｃ領域はまた、キメラタンパク質のグリコシル化を変化させる当業界で認識されたアミノ酸置換を含んでもよい。例えば、ＦＶＩＩＩタンパク質またはＦＸＩタンパク質に連結されたキメラタンパク質のＦｃ領域は、グリコシル化（例えば、Ｎ－もしくはＯ－結合グリコシル化）の減少をもたらす変異を有するＦｃ領域を含んでもよいか、または野生型Ｆｃ部分の糖型の変化（例えば、低フコースもしくは無フコースグリカン）を含んでもよい。
一実施形態では、本発明のプロセッシングされていないキメラタンパク質は、本明細書に記載のＩｇ定常領域またはその一部から独立に選択される、２つまたはそれ以上のその構成要素Ｉｇ定常領域またはその一部を有する遺伝的に融合されたＦｃ領域（すなわち、ｓｃＦｃ領域）を含んでもよい。一実施形態では、二量体Ｆｃ領域のＦｃ領域は同じである。別の実施形態では、少なくとも２つのＦｃ領域は異なる。例えば、本発明のタンパク質のＦｃ領域は、同じ数のアミノ酸残基を含むか、またはそれらは１つもしくはそれ以上のアミノ酸残基（例えば、約５個のアミノ酸残基（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸残基）、約１０個の残基、約１５個の残基、約２０個の残基、約３０個の残基、約４０個の残基、もしくは約５０個の残基）によって長さが異なってもよい。さらに他の実施形態では、本発明のタンパク質のＦｃ領域は、１つまたはそれ以上のアミノ酸位置において配列が異なっていてもよい。例えば、少なくとも２つのＦｃ領域は、約５個のアミノ酸位置（例えば、１、２、３、４もしくは５個のアミノ酸位置）、約１０個の位置、約１５個の位置、約２０個の位置、約３０個の位置、約４０個の位置、または約５０個の位置で異なっていてもよい。
一部の実施形態では、本開示の方法において使用されるキメラタンパク質は、１個より多いポリペプチド鎖を含む。一部の実施形態では、キメラタンパク質は、２個のポリペプチド鎖を含む。ある特定の実施形態では、第１のポリペプチド鎖は、凝固因子と第１のＦｃ領域とを含み、第２のポリペプチド鎖は、第２のＦｃ領域を含む。ある特定の実施形態
では、第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域は、共有結合によって結合する。一実施形態では、第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域は、ペプチド結合によって結合する。別の実施形態では、第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域は、ジスルフィド結合によって結合する。
１つの特定の実施形態では、キメラタンパク質は、第ＶＩＩＩ因子部分およびフォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）部分を含み、ここで、ＦＶＩＩＩ部分は、ＦＶＩＩＩポリペプチドまたはその断片を含み、ＶＷＦ部分は、ＶＷＦポリペプチドまたはその断片を含み、ＦＶＩＩＩ部分は、第１のＦｃ領域に連結され、ＶＷＦ部分は、第２のＦｃ領域に連結され、第１のＦｃ領域と第２のＦｃ領域は、互いに結合する。ある特定の実施形態では、ＶＷＦ部分は、ＶＷＦのＤ’およびＤ３ドメインを含む。一実施形態では、第１のポリペプチド、第２のポリペプチド、または第１のポリペプチドと第２のポリペプチドの両方は、１つまたはそれ以上の半減期延長部分をさらに含む。
本開示の方法において使用されるキメラタンパク質を産生するためのＦｃ領域またはその一部を、いくつかの異なる供給源から取得することができる。一部の実施形態では、Ｆｃ領域またはその一部は、ヒトＩｇに由来する。しかしながら、Ｆｃ領域またはその一部は、例えば、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、ウサギ、もしくはモルモット）または非ヒト霊長類（例えば、チンパンジー、マカク）種を含む、別の哺乳動物種のＩｇに由来してもよいことが理解される。さらに、Ｆｃ領域またはその一部は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥを含む任意のＩｇクラスならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む任意のＩｇアイソタイプに由来してもよい。一実施形態では、ヒトアイソタイプＩｇＧ１が使用される。
様々なＦｃ領域遺伝子配列（例えば、ヒトＦｃ遺伝子配列）が、公共的にアクセス可能な寄託物の形態で利用可能である。特定のエフェクター機能を有する（もしくは特定のエフェクター機能を欠く）、または免疫原性を低下させる特定の改変を有するＦｃ配列を選択することができる。抗体および抗体コード遺伝子の多くの配列が公開されており、好適なＦｃ領域配列を、当業界で認識された技術を使用してこれらの配列から誘導することができる。次いで、前記方法のいずれかを使用して得られた遺伝子材料を変化させるか、または合成して、本開示の方法において使用されるキメラタンパク質を取得することができる。さらに、本発明の範囲は、定常領域ＤＮＡ配列の対立遺伝子、バリアントおよび変異を包含することが理解される。
Ｆｃまたはその一部の配列を、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応および目的のドメインを増幅するように選択されるプライマーを使用してクローニングすることができる。抗体に由来するＦｃ領域またはその一部の配列をクローニングするために、ｍＲＮＡをハイブリドーマ、脾臓、またはリンパ細胞から単離し、ＤＮＡに逆転写し、抗体遺伝子をＰＣＲによって増幅することができる。ＰＣＲ増幅法は、米国特許第４，６８３，１９５号；第４，６８３，２０２号；第４，８００，１５９号；第４，９６５，１８８号；および例えば、「ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ｉｎｎｉｓら（編）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ（１９９０）；Ｈｏら、１９８９．Ｇｅｎｅ ７７：５１頁；Ｈｏｒｔｏｎら、１９９３．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：２７０頁に詳細に記載されている。コンセンサス定常領域プライマーによって、または公開された重鎖および軽鎖のＤＮＡおよびアミノ酸配列に基づくより特異的なプライマーによって、ＰＣＲを開始することができる。上記で考察された通り、ＰＣＲを使用して、抗体軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡクローンを単離することもできる。この場合、コンセンサスプライマーまたはマウス定常領域プローブなどのより大きい相同なプローブによってライブラリーをスクリーニングすることができる。抗体遺伝子の増幅にとって好適ないくつかのプライマーセットが当業界で公知である（例えば、精製された抗体のＮ末端配列に基づく５’プラ
イマー（ＢｅｎｈａｒおよびＰａｓｔａｎ、１９９４、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７：１５０９頁）；ｃＤＮＡ末端の急速増幅（Ｒｕｂｅｒｔｉ，Ｆ．ら、１９９４、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １７３：３３頁）；抗体リーダー配列（Ｌａｒｒｉｃｋら、１９８９、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１６０：１２５０頁））。抗体配列のクローニングは、参照により本明細書に組み入れられる、１９９５年１月２５日に出願されたＮｅｗｍａｎらの米国特許第５，６５８，５７０号にさらに記載されている。
ＩＩ．Ｂ．半減期延長部分
一部の実施形態では、本開示の方法において使用されるキメラタンパク質は、１つまたはそれ以上の半減期延長部分をさらに含む。凝固因子の半減期を、当業者には公知の任意の方法、例えば、血漿ＦＶＩＩＩ活性を検出するためのＦＶＩＩＩ活性アッセイ（発色アッセイもしくは１段階凝固ａＰＴＴアッセイ）または血漿ＦＶＩＩＩ／ＦＩＸ抗原レベルを検出するためのＦＶＩＩＩ／ＦＩＸ ＥＬＩＳＡによって決定することができる。特定の実施形態では、凝固因子の凝固活性の半減期は、凝固１段法によって決定される。より特定の実施形態では、凝固因子の凝固活性の半減期は、ＨｅｍＡマウスまたはＦＶＩＩＩとフォンヴィレブランド因子二重ノックアウト（ＤＫＯ）マウスにおいて決定される。
ある特定の態様では、本発明の凝固因子の半減期を増加させる異種部分は、限定されるものではないが、アルブミン、免疫グロブリンＦｃ領域、ＸＴＥＮ配列、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのβサブユニットのＣ末端ペプチド（ＣＴＰ）、ＰＡＳ配列、ＨＡＰ配列、トランスフェリン、アルブミン結合部分などの異種ポリペプチド、またはこれらのペプチドの任意の断片、誘導体、バリアント、もしくは組合せを含む。他の関連する態様では、半減期延長部分は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ヒドロキシエチルスターチ（ＨＥＳ）、ポリシアル酸などの非ポリペプチド部分、またはこれらの部分の任意の誘導体、バリアント、もしくは組合せのための結合部位を含んでもよい。ある特定の実施形態では、半減期延長部分は、アルブミンもしくはその断片、アルブミン結合部分、ＰＡＳ配列、ＨＡＰ配列、トランスフェリンもしくはその断片、またはその任意の組合せを含む。一部の実施形態では、半減期延長部分は、ＸＴＥＮを含まない。他の実施形態では、半減期延長部分は、ＸＴＥＮを含む。
他の実施形態では、本発明のキメラタンパク質は、１つまたはそれ以上のポリマーにコンジュゲートされる。ポリマーは、水溶性または非水溶性であってもよい。ポリマーを、凝固因子、Ｆｃまたは凝固因子もしくはＦｃにコンジュゲートされた他の部分に共有的または非共有的に結合することができる。ポリマーの非限定例は、ポリ（アルキレンオキシド）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリオキサゾリン、またはポリ（アクリロイルモルホリン）であってもよい。例えば、ポリマーにコンジュゲートしたＦＶＩＩＩのさらなる型は、その全体が参照により開示される、米国得特許第７，１９９，２２３号に開示されている。
ある特定の態様では、本発明のキメラタンパク質は、それぞれ同じか、または異なる分子であってもよい、１つ、２つ、３つまたはそれ以上の半減期延長部分を含んでもよい。
一部の実施形態では、半減期延長部分は、キメラポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に融合される。一部の実施形態では、半減期延長部分は、凝固因子のＮ末端またはＣ末端に融合される。一部の実施形態では、半減期延長部分は、ＦｃのＮ末端またはＣ末端に融合される。ある特定の実施形態では、半減期延長部分は、キメラタンパク質の凝固因子内に挿入される。
一部の実施形態では、キメラタンパク質は、ＦＶＩＩＩまたはその一部を含み、半減期
延長部分は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる、米国特許出願公開第２０１５－０１５８９２９号Ａ１および／または国際公開第ＷＯ２０１５１０６０５２号Ａ１に開示された１つまたはそれ以上の位置でＦＶＩＩＩ内に挿入される。１つの特定の実施形態では、半減期延長部分は、ＦＶＩＩＩのＢドメイン（またはその断片）内に挿入される。１つの特定の実施形態では、半減期延長部分は、成熟ＦＶＩＩＩのアミノ酸残基７４５のすぐ下流でＦＶＩＩＩ内に挿入される。
他の実施形態では、キメラタンパク質は、ＦＩＸまたはその一部を含み、半減期延長部分は、国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ１６／０４５４０１号に開示された１つまたはそれ以上の位置でＦＩＸ内に挿入される。１つの特定の実施形態では、半減期延長部分は、成熟Ｐａｄｕａ ＦＩＸのアミノ酸１０３、アミノ酸１０５、アミノ酸１４２、アミノ酸１４９、アミノ酸１６２、アミノ酸１６６、アミノ酸１７４、アミノ酸２２４、アミノ酸２２６、アミノ酸２２８、アミノ酸４１３からなる群から選択されるアミノ酸残基のすぐ下流の挿入部位でＦＩＸ内に挿入される。一実施形態では、キメラタンパク質は、ＦＩＸとＦｃ領域とを含み、ＦＩＸは、ＦＩＸの活性化ペプチド（ＡＰ）ドメイン内に挿入された半減期延長部分を含む。１つの特定の実施形態では、キメラタンパク質は、ＦＩＸとＦｃ領域とを含み、ＦＩＸは、成熟Ｐａｄｕａ ＦＩＸのアミノ酸残基１６６のすぐ下流でＦＩＸ内に挿入された半減期延長部分を含む。
ＩＩ．Ｂ．１．アルブミン
ある特定の態様では、本開示の方法において使用されるキメラタンパク質は、少なくとも１つのアルブミンポリペプチドまたはその断片、バリアント、もしくは誘導体を含む。ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ、またはＨＡ）、その完全長形態で６０９アミノ酸のタンパク質は、血清の浸透圧の有意な割合を占め、内因性および外因性リガンドの担体としても機能する。本明細書で使用される用語「アルブミン」は、完全長アルブミンまたはその機能的断片、バリアント、誘導体、もしくは類似体を含む。アルブミンまたはその断片もしくはバリアントの例は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる、米国特許公開第２００８／０１９４４８１号Ａ１、第２００８／０００４２０６号Ａ１、第２００８／０１６１２４３号Ａ１、第２００８／０２６１８７７号Ａ１、もしくは第２００８／０１５３７５１号Ａ１またはＰＣＴ出願公開第２００８／０３３４１３号Ａ２、第２００９／０５８３２２号Ａ１、もしくは第２００７／０２１４９４号Ａ２に開示されている。
アルブミン結合ポリペプチド（ＡＢＰ）は、限定されるものではないが、アルブミンに結合することができる、細菌アルブミン結合ドメイン、アルブミン結合ペプチド、またはアルブミン結合抗体断片を含んでもよい。Ｋｒａｕｌｉｓら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３７８：１９０～１９４頁（１９９６）およびＬｉｎｈｕｌｔら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．１１：２０６～２１３頁（２００２）によって開示された、連鎖球菌プロテインＧに由来するドメイン３は、細菌アルブミン結合ドメインの例である。アルブミン結合ペプチドの例は、Ｄｅｎｎｉｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００２、２７７：３５０３５～３５０４３頁（２００２）に開示されている。アルブミン結合抗体断片の例は、ＭｕｌｌｅｒおよびＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．９：３１９～３２６頁（２００７）；Ｒｏｏｖｅｒｓら、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５６：３０３～３１７頁（２００７）、およびＨｏｌｔら、Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．Ｄｅｓｉｇｎ Ｓｃｉ．、２１：２８３～２８８頁（２００８）に開示されており、これらはその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
ある特定の態様では、本開示の方法において使用されるキメラタンパク質は、非ポリペプチド低分子、アルブミンに結合することができるそのバリアント、または誘導体のための少なくとも１個の結合部位を含む。例えば、キメラタンパク質は、１つまたはそれ以上の有機アルブミン結合部分を含んでもよい。そのようなアルブミン結合部分の例は、Ｔｒ
ｕｓｓｅｌら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２０：２２８６～２２９２頁（２００９）によって開示されたような、２－（３－マレイミドプロパンアミド）－６－（４－（４－ヨードフェニル）ブタンアミド）ヘキサノエート（「Ａｌｂｕ」タグ）である。
ＩＩ．Ｂ．２．ＸＴＥＮ
ある特定の態様では、本開示の方法において使用されるキメラタンパク質は、少なくとも１つのＸＴＥＮポリペプチドまたはその断片、バリアント、もしくは誘導体を含む。本明細書で使用される場合、「ＸＴＥＮ配列」とは、生理的条件下で低い程度の構造を有するか、または二次もしくは三次構造を有さない配列と共に、主に小さい親水性のアミノ酸を含む、天然には存在しない、実質的に非反復的な配列を有する伸長した長さのポリペプチドを指す。キメラタンパク質パートナーと同様、ＸＴＥＮは、例えば、キメラタンパク質の凝固因子と融合した場合、またはその中に挿入された場合、ある特定の望ましい薬物動態特性、物理化学特性および薬学特性を提供する担体として働くことができる。そのような望ましい特性としては、限定されるものではないが、薬物動態パラメータおよび溶解度特性の増強が挙げられる。
本開示の方法において有用なキメラタンパク質の凝固因子と融合した、またはその中に挿入されたＸＴＥＮ配列は、キメラタンパク質に、１つまたはそれ以上の以下の有意な特性：コンフォメーションの可撓性、水性溶解度の増強、高い程度のプロテアーゼ耐性、低い免疫原性、哺乳動物受容体への低い結合、または水力学（またはＳｔｏｋｅｓ）半径の増大を提供することができる。ある特定の態様では、ＸＴＥＮ配列は、キメラタンパク質がｉｎ ｖｉｖｏに留まり、ＸＴＥＮを含まないキメラタンパク質と比較して長期間にわたって凝血促進活性を有するように、より長い半減期（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏでの半減期）または曲線下面積（ＡＵＣ）の増大などの薬物動態特性を増大させることができる。
本発明の組換えＦＶＩＩＩタンパク質中に挿入することができるＸＴＥＮ配列の例は、例えば、米国特許出願公開第２０１０／０２３９５５４号Ａ１、第２０１０／０３２３９５６号Ａ１、第２０１１／００４６０６０号Ａ１、第２０１１／００４６０６１号Ａ１、第２０１１／００７７１９９号Ａ１、もしくは第２０１１／０１７２１４６号Ａ１、または国際特許出願公開第ＷＯ２０１００９１１２２号Ａ１、第ＷＯ２０１０１４４５０２号Ａ２、第ＷＯ２０１０１４４５０８号Ａ１、第ＷＯ２０１１０２８２２８号Ａ１、第ＷＯ２０１１０２８２２９号Ａ１、第ＷＯ２０１１０２８３４４号Ａ２、もしくは第ＷＯ２０１５１０６０５２号Ａ１に開示されており、それぞれ、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。
ＩＩ．Ｂ．３．ＶＷＦまたはその断片
ある特定の態様では、本開示の方法において使用されるキメラタンパク質は、少なくとも１つのＶＷＦポリペプチドまたはその断片、バリアント、もしくは誘導体を含む。ＶＷＦ（Ｆ８ＶＷＦとしても公知である）は、血漿中に存在する大きい、多量体糖タンパク質であり、内皮（バイベル－パラーデ小体）、巨核球（血小板のα－顆粒）、および内皮下結合組織中で構成的に産生される。塩基性ＶＷＦ単量体は、２８１３アミノ酸のタンパク質である。全ての単量体は、特異的機能を有するいくつかの特異的ドメイン、Ｄ’／Ｄ３ドメイン（第ＶＩＩＩ因子に結合する）、Ａ１ドメイン（血小板ＧＰＩｂ－受容体、ヘパリン、および／またはおそらくコラーゲンに結合する）、Ａ３ドメイン（コラーゲンに結合する）、Ｃ１ドメイン（ＲＧＤドメインが、血小板インテグリンαＩＩｂβ３が活性化された場合にこれに結合する）、およびタンパク質のＣ末端の「システインノット」ドメイン（ＶＷＦが血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子－β（ＴＧＦβ）およびβ－ヒト絨毛性ゴナドトロピン（βＨＣＧ）と共有する）を含有する。
一実施形態では、ＶＷＦポリペプチドは、ＶＷＦ断片である。本明細書で使用される用
語「ＶＷＦ断片」としては、限定されるものではないが、内因性ＶＷＦのＦＶＩＩＩへの結合を阻害することができる、Ｄ’ドメインとＤ３ドメインとを含む機能的ＶＷＦ断片が挙げられる。一実施形態では、本開示の方法において使用されるキメラタンパク質は、凝固因子、Ｆｃ領域、およびＶＷＦ断片を含み、ここで、凝固因子はＦＶＩＩＩを含み、ＶＷＦ断片はＦＶＩＩＩタンパク質に結合する。別の実施形態では、ＶＷＦ断片は、ＦＶＩＩＩタンパク質上のＶＷＦ結合部位を遮断することによって、ＦＶＩＩＩタンパク質と、内因性ＶＷＦとの相互作用を阻害する。ＶＷＦ断片は、ＶＷＦのこれらの活性を保持する誘導体、バリアント、変異体、または類似体を含む。ある特定の実施形態では、ＶＷＦ断片は、ＶＷＦのＤ’ドメインとＤ３ドメインとを含む。
ヒトＶＷＦの２８１３個の単量体アミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋに受託番号ＮＰ＿０００５４３．２として報告されている。ヒトＶＷＦをコードするヌクレオチド配列は、ＧｅｎｂａｎｋにＮＭ＿０００５５２．３として報告されている。
ある特定の実施形態では、本明細書において有用なＶＷＦタンパク質をさらに改変して、ＦＶＩＩＩとのその相互作用を改善する、例えば、ＦＶＩＩＩに対する結合親和性を改善することができる。他の実施形態では、本発明にとって有用なＶＷＦタンパク質は、他の改変を有してもよく、例えば、タンパク質をペグ化、グリコシル化、ヘシル化、またはポリシアル化することができる。本開示の方法において有用な例示的なＶＷＦ配列は、例えば、米国特許出願公開第ＵＳ２０１５／００２３９５９号Ａ１、第ＵＳ２０１５／０２６６９４３号Ａ１、および第ＵＳ２０１５／０１５８９２９号に提供されている。ある特定の実施形態では、ＶＷＦタンパク質またはその断片は、ＦｃＲｎ結合パートナーに融合されるか、またはそれと同時投与される。一部の実施形態では、ＶＷＦタンパク質またはその断片は、Ｆｃに融合されるか、またはＦｃもしくはＦｃを含むポリペプチドと同時投与される。一部の実施形態では、ＶＷＦタンパク質またはその断片は、アルブミンに融合されるか、またはアルブミンもしくはアルブミンを含むポリペプチドと同時投与される。
ＩＩ．Ｂ．４．ＣＴＰ
ある特定の態様では、本開示の方法において使用されるキメラタンパク質は、ヒト絨毛性ゴナドトロピンのβサブユニットの少なくとも１つのＣ末端ペプチド（ＣＴＰ）またはその断片、バリアント、もしくは誘導体を含む。ＣＴＰペプチドは、そのタンパク質の半減期を増加させることが公知である。例えば、その全体が参照により本明細書に組み入れられる米国特許第５，７１２，１２２号を参照されたい。非限定的なＣＴＰペプチドは、参照により組み入れられる、米国特許出願公開第ＵＳ２００９／００８７４１１号Ａ１に開示されている。
ＩＩ．Ｂ．５．ＰＡＳ
ある特定の態様では、本開示の方法において使用されるキメラタンパク質は、少なくとも１つのＰＡＳペプチドまたはその断片、バリアント、もしくは誘導体を含む。本明細書で使用される場合、ＰＡＳペプチドまたはＰＡＳ配列は、主にアラニンおよびセリン残基を含むか、または主にアラニン、セリン、およびプロリン残基を含むアミノ酸配列を意味し、そのアミノ酸配列は、生理的条件下でランダムコイルコンフォメーションを形成する。したがって、ＰＡＳ配列は、キメラタンパク質において異種部分の一部として使用することができる、アラニン、セリン、およびプロリンを含む、それから本質的になる、またはそれからなる構成要素、アミノ酸ポリマー、または配列カセットである。アミノ酸ポリマーはまた、アラニン、セリン、およびプロリン以外の残基がＰＡＳ配列中のマイナーな構成要素として付加された場合、ランダムコイルコンフォメーションを形成することもできる。「マイナーな構成要素」とは、アラニン、セリン、およびプロリン以外のアミノ酸を、ある特定の程度まで、例えば、約１２％まで、すなわち、ＰＡＳ配列の１００アミノ酸のうちの約１２個まで、約１０％まで、約９％まで、約８％まで、約６％、約５％、約
４％、約３％、すなわち、約２％、または約１％のアミノ酸まで、ＰＡＳ配列中に付加することができることを意味する。アラニン、セリンおよびプロリンとは異なるアミノ酸を、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、およびＶａｌからなる群から選択することができる。生理的条件下で、ＰＡＳペプチドは、ランダムコイルコンフォメーションを形成し、それによって、本発明の組換えタンパク質に対するｉｎ ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ ｖｉｔｒｏでの安定性の増大を媒介し、凝固促進活性を有する。
ＰＡＳペプチドの非限定例は、例えば、米国特許出願公開第２０１０／０２９２１３０号Ａ１；ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２００８／１５５１３４号Ａ１；および欧州特許第ＥＰ２１７３８９０号に開示されている。
ＩＩ．Ｂ．６．ＨＡＰ
ある特定の態様では、本開示の方法において使用されるキメラタンパク質は、少なくとも１つのホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）ペプチドまたはその断片、バリアント、もしくは誘導体を含む。ＨＡＰペプチドは、少なくとも５０アミノ酸長、少なくとも１００アミノ酸長、１２０アミノ酸長、１４０アミノ酸長、１６０アミノ酸長、１８０アミノ酸長、２００アミノ酸長、２５０アミノ酸長、３００アミノ酸長、３５０アミノ酸長、４００アミノ酸長、４５０アミノ酸長、または５００アミノ酸長を有する、グリシンの反復配列を含んでもよい。ＨＡＰ配列は、ＨＡＰ配列に融合された、または連結された部分の半減期を延長することができる。ＨＡＰＰＹ配列の非限定例としては、限定されるものではないが、（Ｇｌｙ）ｎ（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎまたはＳ（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ（式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０である）が挙げられる。一実施形態では、ｎは、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２６、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０である。別の実施形態では、ｎは、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、または２００である。例えば、Ｓｃｈｌａｐｓｃｈｙ Ｍら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓｉｇｎ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ、２０：２７３～２８４頁（２００７）を参照されたい。
ＩＩ．Ｂ．７．トランスフェリン
ある特定の態様では、本開示の方法において使用されるキメラタンパク質は、少なくとも１つのトランスフェリンペプチドまたはその断片、バリアント、もしくは誘導体を含む。任意のトランスフェリンを、本開示の方法において使用されるキメラタンパク質と融合することができる。例として、野生型ヒトＴｆ（Ｔｆ）は、遺伝子複製の結果生じると考えられる、２個の主なドメイン、Ｎ（約３３０アミノ酸）およびＣ（約３４０アミノ酸）を有する、約７５ｋＤａ（グリコシル化を占めない）の６７９アミノ酸タンパク質である。ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ００１０６３、ＸＭ００２７９３、Ｍ１２５３０、ＸＭ０３９８４５、ＸＭ０３９８４７およびＳ９５９３６（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）を参照されたい（これらは全てその全体が参照により本明細書に組み入れられる）。
トランスフェリンは、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）媒介性エンドサイトーシスを介して鉄を輸送する。鉄がエンドソーム区画中に放出され、Ｔｆ－ＴｆＲ複合体が細胞表面に再循環した後、Ｔｆは鉄輸送の次のサイクルのために細胞外空間に放出し戻される。Ｔｆは、１４～１７日を上回る長い半減期を有する（Ｌｉら、Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．２３：２０６～２０９頁（２００２））。トランスフェリン融合タンパク質は、半減期延長、がん療法のための標的送達、経口送達およびプロインスリンの持続的活性化について研究されている（Ｂｒａｎｄｓｍａら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｄ
ｖ．、２９：２３０～２３８頁（２０１１）；Ｂａｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０２：７２９２～７２９６頁（２００５）；Ｋｉｍら、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．、３３４：６８２～６９２頁（２０１０）；Ｗａｎｇら、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ １５５：３８６～３９２頁（２０１１））。
ＩＩ．Ｂ．８．ＰＥＧ
ある特定の態様では、本開示の方法において使用されるキメラタンパク質は、非ポリペプチド異種部分のための少なくとも１つの結合部位またはその断片、バリアント、もしくは誘導体を含む。例えば、本開示の方法において使用されるキメラタンパク質は、凝固因子および／またはＦｃ領域中の１つまたはそれ以上のアミノ酸残基に結合した１つまたはそれ以上のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分を含んでもよい。
タンパク質のＰＥＧ化は、タンパク質と、少なくとも１つのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）分子との間に形成されるコンジュゲートを指してもよい。ＰＥＧは、様々な分子量および平均分子量範囲で商業的に入手可能である。ＰＥＧ平均分子量範囲の典型例としては、限定されるものではないが、約２００、約３００、約４００、約６００、約１０００、約１３００～１６００、約１４５０、約２０００、約３０００、約３０００～３７５０、約３３５０、約３０００～７０００、約３５００～４５００、約５０００～７０００、約７０００～９０００、約８０００、約１００００、約８５００～１１５００、約１６０００～２４０００、約３５０００、約４００００、約６００００、および約８００００ダルトンが挙げられる。これらの平均分子量は、単に例として提供されるものであり、いかなる意味でも限定を意味するものではない。
本開示の方法において使用されるキメラタンパク質を、モノ－またはポリ－（例えば、２～４個）ＰＥＧ部分を含むようにＰＥＧ化することができる。ＰＥＧ化は、当業界で公知の任意のＰＥＧ化反応によって実行することができる。ＰＥＧ化されたタンパク質産物を調製するための方法は、一般に、（ｉ）本発明のペプチドが１つまたはそれ以上のＰＥＧ基に結合するようになる条件下で、ポリペプチドと、ポリエチレングリコール（ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体など）と反応させること；および（ｉｉ）反応生成物を取得することを含むであろう。一般に、反応のための最適な反応条件は、公知のパラメータおよび所望の結果に基づいて、個別的に決定されるであろう。
当業者には利用可能ないくつかのＰＥＧ結合法が存在し、例えば、Ｍａｌｉｋ Ｆら、Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２０：１０２８～３５頁（１９９２）；Ｆｒａｎｃｉｓ、Ｆｏｃｕｓ ｏｎ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ ３（２）：４～１０頁（１９９２）；欧州特許公開第ＥＰ０４０１３８４号、第ＥＰ０１５４３１６号、および第ＥＰ０４０１３８４号；ならびに国際特許出願公開第ＷＯ９２／１６２２１号および第ＷＯ９５／３４３２６号を参照されたい。非限定例として、ＦＶＩＩＩバリアントは、システイン置換を含有してもよく、システインをＰＥＧポリマーにさらにコンジュゲートすることができる。全体が参照により本明細書に組み入れられる、Ｍｅｉら、Ｂｌｏｏｄ １１６：２７０～２７９頁（２０１０）および米国特許第７，６３２，９２１号を参照されたい。
ＩＩ．Ｂ．９．ＨＥＳ
ある特定の態様では、本開示の方法において使用されるキメラタンパク質は、少なくとも１つのヒドロキシエチルスターチ（ＨＥＳ）ポリマーを含む。ＨＥＳは、天然に存在するアミロペクチンの誘導体であり、体内でアルファ－アミラーゼによって分解される。ＨＥＳは、有意な生物学的特性を示し、診療所において血液量交換剤として、および血液希釈療法において使用される。例えば、Ｓｏｍｍｅｒｍｅｙｅｒら、Ｋｒａｎｋｅｎｈａｕｓｐｈａｒｍａｚｉｅ ８：２７１～２７８頁（１９８７）；およびＷｅｉｄｌｅｒら、
Ａｒｚｎｅｉｍ．－Ｆｏｒｓｃｈｕｎｇ／Ｄｒｕｇ Ｒｅｓ．４１：４９４～４９８頁（１９９１）を参照されたい。
ＨＥＳは、分子量分布および置換度によって主に特徴付けられる。ＨＥＳは、１～３００ｋＤ、２～２００ｋＤ、３～１００ｋＤ、または４～７０ｋＤの平均分子量（重量平均）を有する。ヒドロキシエチルスターチはさらに、０．１～３、０．１～２、０．１～０．９、または０．１～０．８のモル置換度、およびヒドロキシエチル基に関して２～２０の範囲のＣ２：Ｃ６置換比を示してもよい。約１３０ｋＤの平均分子量を有するＨＥＳは、ＦｒｅｓｅｎｉｕｓからのＶＯＬＵＶＥＮ（登録商標）である。ＶＯＬＵＶＥＮ（登録商標）は、例えば、血液量減少の療法および予防のための治療適応において使用される体積交換のために用いられる、人工コロイドである。当業者に利用可能ないくつかのＨＥＳ結合法、例えば、上記の同じＰＥＧ結合法が存在する。
ＩＩ．Ｂ．１０．ＰＳＡ
ある特定の態様では、本開示の方法において使用されるキメラタンパク質は、少なくとも１つのポリシアル酸（ＰＳＡ）ポリマーを含む。ＰＳＡは、ある特定の細菌株によって、および哺乳動物において、ある特定の細胞中で産生されるシアル酸の天然に存在する非分枝ポリマーである。例えば、Ｒｏｔｈ Ｊ．ら（１９９３）Ｐｏｌｙｓｉａｌｉｃ Ａｃｉｄ：Ｆｒｏｍ Ｍｉｃｒｏｂｅｓ ｔｏ Ｍａｎ編、Ｒｏｔｈ Ｊ．，Ｒｕｔｉｓｈａｕｓｅｒ Ｕ．、Ｔｒｏｙ Ｆ．Ａ．（ＢｉｒｋｈａｕｓｅｒＶｅｒｌａｇ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、３３５～３４８頁を参照されたい。ＰＳＡを、限定的酸加水分解またはノイラミニダーゼを用いた消化、または天然の細菌由来型のポリマーの分画によって、ｎ＝約８０またはそれ以上のシアル酸残基からｎ＝２までの様々な重合度で産生することができる。ある特定の態様では、活性化されたＰＳＡを、凝固因子内、例えば、ＦＶＩＩＩまたはＦＩＸ上、またはＦｃ領域内のシステインアミノ酸残基に結合させることもできる。例えば、米国特許第５，８４６，９５１号を参照されたい。
ＩＩ．Ｂ．１１．クリアランス受容体
ある特定の態様では、本開示の方法において使用されるキメラタンパク質の半減期を、キメラタンパク質の凝固因子がＦＶＩＩＩおよびＦＶＩＩＩクリアランス受容体の少なくとも１つの断片またはそのＦＶＩＩＩ結合断片、バリアント、もしくは誘導体を含む場合、延長することができる。低密度リポタンパク質関連タンパク質受容体ＬＲＰ１、またはその断片などの可溶型のクリアランス受容体の挿入は、ＦＶＩＩＩのクリアランス受容体への結合を遮断し、それによって、その半減期、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏでの半減期を延長することができる。ＬＲＰ１は、ＦＶＩＩＩを含む、様々なタンパク質の受容体媒介性クリアランスに関与する６００ｋＤａの内在性膜タンパク質である。例えば、Ｌｅｎｔｉｎｇら、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ １６：６～１６頁（２０１０）を参照されたい。他の好適なＦＶＩＩＩクリアランス受容体は、例えば、ＬＤＬＲ（低密度リポタンパク質受容体）、ＶＬＤＬＲ（超低密度リポタンパク質受容体）、およびメガリン（ＬＲＰ－２）、またはその断片である。例えば、Ｂｏｖｅｎｓｃｈｅｎら、Ｂｌｏｏｄ １０６：９０６～９１２頁（２００５）；Ｂｏｖｅｎｓｃｈｅｎ、Ｂｌｏｏｄ １１６：５４３９～５４４０頁（２０１０）；Ｍａｒｔｉｎｅｌｌｉら、Ｂｌｏｏｄ １１６：５６８８～５６９７頁（２０１０）を参照されたい。
ＩＩＩ．ポリヌクレオチド、ベクター、および宿主細胞
一部の態様では、本開示は、血友病を有するヒトにおける関節の可逆性血友病性関節症を処置する方法であって、ヒトに、凝固因子および／またはＦｃ領域をコードする、例えば、凝固因子とＦｃ領域とを含むキメラタンパク質をコードする、ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのセットの有効量を投与することを含む、前記方法を提供する。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのセットは、発現ベクターま
たは発現ベクターのセットの中にある。ある特定の実施形態では、発現ベクターまたは発現ベクターのセットは、１つまたはそれ以上の宿主細胞の中にある。
本開示の方法において使用される、凝固因子および／またはＦｃ領域をコードする、例えば、凝固因子とＦｃ領域とを含むキメラタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、単一のヌクレオチド配列、２つのヌクレオチド配列、３つのヌクレオチド配列、またはそれ以上であってもよい。一実施形態では、単一のヌクレオチド配列は、凝固因子（例えば、ＦＶＩＩＩまたはＦＩＸポリペプチド）とＦｃ領域とを含むキメラタンパク質をコードする。別の実施形態では、ポリヌクレオチドは、２つのヌクレオチド配列、凝固因子（例えば、ＦＶＩＩＩ）をコードする第１のヌクレオチド配列と、Ｆｃ領域をコードする第２のヌクレオチド配列とを含む。別の実施形態では、ポリヌクレオチドは、２つのヌクレオチド、凝固因子（例えば、ＦＶＩＩＩまたはＦＩＸ）とＦｃ領域とをコードする第１のヌクレオチド配列と、第２のＦｃ領域をコードする第２のヌクレオチド配列とを含む。ある特定の実施形態では、コードされたＦｃドメインは、発現後に共有結合を形成する。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、コドン最適化される。
本明細書で使用される場合、発現ベクターとは、適切な宿主細胞中に導入された場合、挿入されたコード配列の転写および翻訳のための必須エレメント、またはＲＮＡウイルスベクターの場合、複製および翻訳のための必須エレメントを含有する任意の核酸構築物を指す。発現ベクターは、プラスミド、ファージミド、ウイルス、およびその誘導体を含んでもよい。
本明細書で使用される遺伝子発現制御配列は、それが作動可能に連結されたコード核酸の効率的な転写および翻訳を容易にする、プロモーター配列またはプロモーター－エンハンサー組合せなどの、任意の調節ヌクレオチド配列である。遺伝子発現制御配列は、例えば、構成的または誘導的プロモーターなどの、哺乳動物またはウイルスプロモーターであってもよい。構成的哺乳動物プロモーターとしては、限定されるものではないが、以下の遺伝子のためのプロモーター：ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、アデノシンデアミナーゼ、ピルビン酸キナーゼ、ベータ－アクチンプロモーター、および他の構成的プロモーターが挙げられる。真核細胞中で構成的に機能する例示的なウイルスプロモーターとしては、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、サルウイルス（例えば、ＳＶ４０）、パピローマウイルス、アデノウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ラウス肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、モロニー白血病ウイルスの長い末端反復（ＬＴＲ）、および他のレトロウイルスに由来するプロモーター、ならびに単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモーターが挙げられる。他の構成的プロモーターは、当業者には公知である。本発明の遺伝子発現配列として有用なプロモーターは、誘導的プロモーターも含む。誘導的プロモーターは、誘導剤の存在下で発現される。例えば、メタロチオネインプロモーターは、ある特定の金属イオンの存在下での転写および翻訳を促進するために誘導される。他の誘導的プロモーターは、当業者には公知である。
本発明の目的のために、いくつかの発現ベクター系を用いることができる。これらの発現ベクターは、典型的には、エピソームまたは宿主染色体ＤＮＡの完全な部分として宿主細胞中で複製可能である。発現ベクターは、限定されるものではないが、プロモーター（例えば、天然で関連する、または異種性のプロモーター）、エンハンサー、シグナル配列、スプライスシグナル、エンハンサーエレメント、および転写終結配列を含む、発現制御配列を含んでもよい。好ましくは、発現制御配列は、真核宿主細胞を形質転換するか、またはトランスフェクトすることができるベクター中の真核プロモーター系である。発現ベクターはまた、ウシパピローマウイルス、ポリオーマウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、バキュロウイルス、レトロウイルス（ＲＳＶ、ＭＭＴＶもしくはＭＯＭＬ
Ｖ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、またはＳＶ４０ウイルスなどの動物ウイルスに由来するＤＮＡエレメントを利用することもできる。その他は、内部リボソーム結合部位を有する多シストロン系の使用を含む。
一般に、発現ベクターは、所望のＤＮＡ配列をトランスフェクトされた細胞の検出を可能にするための選択マーカー（例えば、アンピシリン耐性、ヒグロマイシン耐性、テトラサイクリン耐性またはネオマイシン耐性）を含有する（例えば、Ｉｔａｋｕｒａら、米国特許第４，７０４，３６２号）。トランスフェクトされた宿主細胞の選択を可能にする１つまたはそれ以上のマーカーを導入することによって、ＤＮＡをその染色体中に組み込んだ細胞を選択することができる。マーカーは、栄養要求性宿主に対する原栄養性、殺生物剤耐性（例えば、抗生物質）または銅などの重金属に対する耐性を提供することができる。選択マーカー遺伝子を、発現させようとするＤＮＡ配列に直接連結するか、または同時形質転換によって同じ細胞中に導入することができる。
本開示の方法において使用されるキメラタンパク質の最適化された発現にとって有用なベクターの例は、ＮＥＯＳＰＬＡである（米国特許第６，１５９，７３０号）。このベクターは、サイトメガロウイルスプロモーター／エンハンサー、マウスベータグロビン主要プロモーター、ＳＶ４０複製起点、ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列、ネオマイシンホスホトランスフェラーゼエクソン１およびエクソン２、ジヒドロ葉酸リダクターゼ遺伝子およびリーダー配列を含有する。このベクターは、可変および定常領域遺伝子の組込み、細胞中へのトランスフェクション、次いで、Ｇ４１８含有培地中での選択およびメトトレキサート増幅の際に、抗体の非常に高レベルの発現をもたらすことがわかっている。ベクター系は、それぞれその全体が参照により本明細書に組み入れられる、米国特許第５，７３６，１３７号および第５，６５８，５７０号にも教示されている。この系は、高い発現レベル、例えば、３０ｐｇ／細胞／日を超える発現レベルを提供する。他の例示的なベクター系は、例えば、米国特許第６，４１３，７７７号に開示されている。
他の実施形態では、本発明のポリペプチドを、多シストロン性構築物を使用して発現させる。これらの発現系では、多量体結合タンパク質の複数のポリペプチドなどの目的の複数の遺伝子産物を、単一の多シストロン性構築物から産生させることができる。これらの系は、真核宿主細胞中での比較的高いレベルのポリペプチドを提供するために、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を有利に使用する。適合性のＩＲＥＳ配列は、本明細書にも組み入れられる米国特許第６，１９３，９８０号に開示される。
より一般には、一度、ポリペプチドをコードするベクターまたはＤＮＡ配列が調製されたら、発現ベクターを適切な宿主細胞中に導入することができる。すなわち、宿主細胞を形質転換することができる。プラスミドの宿主細胞中への導入を、上記で考察されたような、当業者には周知の様々な技術によって達成することができる。形質転換された細胞を、キメラタンパク質の産生にとって適切な条件下で増殖させ、キメラタンパク質合成についてアッセイする。例示的なアッセイ技術としては、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、または蛍光活性化細胞選別分析（ＦＡＣＳ）、免疫組織化学などが挙げられる。
ここで本発明を詳細に説明してきたが、同じことは、例示のみのために本明細書に含まれ、本発明の限定を意図するものではない、以下の実施例を参照することによってより明確に理解されるであろう。
標的関節および重篤な血友病Ａを有する小児、青年、および成人対象におけるｒＦＶＩＩＩＦｃ予防の長期効能
血友病を有する人々にとって、同じ関節（標的関節）への頻繁な出血は、血友病性関節症（慢性関節疾患）に寄与し得る。ｒＦＶＩＩＩＦｃは、従来のＦＶＩＩＩ産物と比較して第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）の半減期を延長するために開発された（Ｐｅｔｅｒｓら、Ｊ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．１１（１）：１３２～４１頁（２０１３））。完了したｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０１１８１１２８；Ｍａｈｌａｎｇｕら、Ｂｌｏｏｄ １２３（３）：３１７～２５頁（２０１４））および子供のｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験（ＮＣＴ０１４５８１０６；Ｙｏｕｎｇら、Ｊ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．１３（６）：９６７～７７頁（２０１５））は、それぞれ、重篤な血友病Ａを有する、成人／青年（１２歳またはそれ以上の患者）および小児（１２歳未満の患者）間でのｒＦＶＩＩＩＦｃの安全性および効能を確立した。ｒＦＶＩＩＩＦｃの長期安全性および効能は、進行中のｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験（ＮＣＴ０１４５４７３９；Ｎｏｌａｎら、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ ２２（１）：７２～８０（２０１６））において評価されている。
本試験の目的は、２回目のｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験中間データカット（２０１４年１２月８日）現在で、ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験および小児ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験への登録時に標的関節を有する対象におけるｒＦＶＩＩＩＦｃの持続可能な効能およびＱＯＬに関する累積データを報告することである。
方法
利用可能な試験前（すなわち、親試験前）および試験中のデータ（標的関節－特定および全体）を有していた親試験（すなわち、ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験または小児ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験）への登録時に１つ以上の標的関節（６カ月間で３回以上の出血エピソードを有する主要関節（Ｗｏｒｌｄ Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｈｅｍｏｐｈｉｌｉａ、Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅｍｏｐｈｉｌｉａ ２ｎｄ ｅｄ．、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ：Ｍｏｎｔｒｅａｌ、Ｃａｎａｄａ（２０１２）を参照されたい））を有する対象を評価した。ｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験には４つの処置群がある（表１）。
Figure 2023027301000001
標的関節を有する対象のアウトカムを、２回目のｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験中間データカットまで親試験の累積期間にわたってポストホックで分析した。アウトカムは、ＡＢＲ、標的関節出血エピソードの回数および解消、ならびに予防的用量および投与頻度を含んでいた。標的関節における解消の分析を、１２カ月以上の連続フォローアップ時間を有し
、フォローアップ期間の開始以来、標的関節に大きな手術（すなわち、交換または除去）を受けていない対象について実施した。連続する１２カ月の期間に標的関節において２回以下の自発的な出血エピソードがあった場合、標的関節は臨床的に解消されたと考えた（Ｂｌａｎｃｈｅｔｔｅら、Ｊ Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ．１２（１１）：１９３５～３９頁（２０１４））。
ＱＯＬ尺度を、１７歳以上の年齢であり、試験中に１つ以上の解消した標的関節を有し、ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験ベースライン時とｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験の２年目との両方においてＨａｅｍ－Ａ－ＱＯＬスコアを有していた予防対象においてＨａｅｍ－Ａ－ＱＯＬ指数によって評価した。小児ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験に由来する対象の中で、Ｃａｎａｄｉａｎ Ｈｅｍｏｐｈｉｌｉａ Ｏｕｔｃｏｍｅｓ－Ｋｉｄｓ Ｌｉｆｅ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｔｏｏｌ（ＣＨＯ－ＫＬＡＴ）によってＱＯＬを測定した。
結果
試験集団
ベースライン時に標的関節を有していたｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験に由来する１１３人の対象のうち、試験前予防または出血時止血レジメンおよび試験中データを有する１１１人の対象は、ベースライン時に２８７の標的関節を有していた（中央値年齢、３１．０歳；四分位範囲（ＩＱＲ）、２４．０～４４．０歳；表２）。小児ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験に由来する１３人の対象は、ベースライン時に１５の標的関節を有し、試験前および試験中データを有していた（中央値年齢、６．０歳；ＩＱＲ、５．０～８．０歳；表２）。
Figure 2023027301000002
出血回数
ｒＦＶＩＩＩＦｃ予防を有する中央値（ＩＱＲ）試験中全ＡＢＲは、成人／青年および１２歳またはそれより若い小児に関する試験前予防に関する出血速度よりも低かった（図１Ａ～１Ｄ）。小児ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験データを、患者の年齢によってさらに階層化し、中央値試験前および試験中ＡＢＲを、図１Ｅおよび１Ｆに示す。試験前に、６歳未満の患者は、６～１２歳の患者よりも低い中央値（ＩＱＲ）ＡＢＲを有していた（図１Ｅ）。試験中に、６歳未満の患者は、６～１２歳の患者よりも高い全試験中ＡＢＲ、全標的関節ＡＢＲ、および標的関節自発的ＡＢＲを有していた（図１Ｆ）。
ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験中、個別化された予防の４６．３％、毎週の予防の４０．７％、および改変された予防の２１．４％の対象は、標的関節出血エピソードを有していたが、小児ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験における個別化された予防の５３．８％の対象は、標的関節出血エピソードを有していなかった。
臨床標的関節における解消
ベースライン時および１２カ月のフォローアップ時に標的関節を有していた予防中の対象のうち、ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験の１００％（９３／９３）および小児ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験の１００％（７／７）の対象が、１つ以上の解消した標的関節を有していた（すなわち、連続する１２カ月の間に２回以下の自発的出血エピソ
ード）；また、ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験および小児ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験の対象における標的関節の、それぞれ、９８．３％（２３１／２３５）および１００％（９／９）（全ての出血に基づく）が解消した。
予防因子消費量
ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験（ｎ＝１０５）および小児ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験（ｎ＝１３）の、ベースライン時に標的関節を有する予防対象間の中央値（ＩＱＲ）毎週の予防因子消費量は、それぞれ、７６．０（６８．０～９０．９）ＩＵ／ｋｇおよび８３．５（７９．９～１１１．６）ＩＵ／ｋｇであった。
消費量は、ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験／小児ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験の両方の前ならびにｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験／小児ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験およびｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験の間に予防にあり、利用可能な試験前および試験中投与データを有していた親試験における対象と類似していた（ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験、ｎ＝７９、７５．０［７０．０～１１３．８］ＩＵ／ｋｇ；小児ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験、ｎ＝５４、９５．０［７５．０～１１３．０］ＩＵ／ｋｇ）。
両方の患者集団について、中央値（ＩＱＲ）投与間隔も、ベースライン時に標的関節を有する予防対象（ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験、ｎ＝１０５、３．８［３．５～５．６］日；小児ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験、ｎ＝１３、３．５［３．５～３．５］日）と、利用可能な試験前および試験中投与データを有していた親試験における予防対象（ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験、ｎ＝７９、３．５［３．０～５．０］日；小児ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験、ｎ＝５４、３．５［３．５～３．５］日）との間で類似していた。
小児ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験データを、患者年齢によってさらに階層化した。６歳より下の患者における平均週消費量は、３．５（３．５～３．５）日の投与間隔で８９．６（７５．３～９７．５；ｎ＝６）ＩＵ／ｋｇであった。６～１２歳の年齢の患者については、平均週消費量は、３．５（３．０～３．６）日の投与間隔で８２．２（７９．４～１１３．２）ＩＵ／ｋｇであった。
生活の質
ＱＯＬは、ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験ベースラインと比較して、成人／青年（ｎ＝４８）間でｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験２年目において１８％改善した（表３）。小児ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験ベースラインおよびｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験１年目（ｎ＝６）において自己報告されたＣＨＯ－ＫＬＡＴスコアを有していた小児ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験の対象のうち、平均（標準偏差［ＳＤ］）ベースラインスコアは、８５．５（１２．１）であった；ｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験１年目において、ＣＨＯ－ＫＬＡＴスコアは、２８％改善した（２４．１［１５．３］の平均［ＳＤ］の改善）。
Figure 2023027301000003
結論
第３相ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験および小児ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相治験および進行中のｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験に由来する効能データは、長期的なｒＦＶＩＩＩＦｃ予防された重篤な血友病Ａを有する小児、青年、および成人の対象における、持続的な低い年間標的関節出血回数（ＡＢＲ）および有効な標的関節における解消を示す。ベースライン時に標的関節を有する対象のこの分析における毎週の予防因子消費量は、以前に公開されたｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験および小児ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相治験の全集団におけるものと一致していた。生活の質（ＱＯＬ）の改善は、予防因子消費量または投与間隔の変化なしにｒＦＶＩＩＩＦｃ予防を用いて標的関節における解消を示した対象において見られた。
重篤な血友病Ａを有する対象における、組換え第ＶＩＩＩ因子Ｆｃ融合タンパク質（ｒＦＶＩＩＩＦｃ）予防を用いた長期的改変血友病関節健康スコア（ｍＨＪＨＳ）のアウトカム
血友病性関節症は、依然として血友病の管理における課題である（Ｋｎｏｂｅら、Ｊ Ｃｏｍｏｒｂｉｄｉｔｙ．２０１１；１（１）：５１～５９頁；Ｓｉｍｐｓｏｎら、Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｈｅｍａｔｏｌ．２０１２；５（４）：４５９～６８頁）。血友病関節健康スコア（ＨＪＨＳ）は、血友病性関節症の発生を検出するために使用することができる第１選択の手段である（Ｏｙｍａｋら、Ｊ Ｐｅｄｉａｔｒ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ．２０１５；３７（２）：ｅ８０～５頁）。骨格筋アウトカムの改善は、血友病Ａのための予防処置の有効性の重要な尺度である（Ｂｌａｎｃｈｅｔｔｅら、Ｈａｅｍｏｐ
ｈｉｌｉａ．２００４；１０（Ｓｕｐｐｌ．Ｓ４）：９７～１０４頁）。それぞれ、ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験（Ｍａｈｌａｎｇｕら、Ｂｌｏｏｄ．２０１４；１２３（３）：３１７～３２５頁）および小児ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相治験（Ｙｏｕｎｇら、Ｊ Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ．２０１５；１３（６）：９６７～９７７頁）を完了した成人／青年および小児間でのｒＦＶＩＩＩＦｃの長期安全性および効能が、進行中のｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験に由来する中間データを使用して確立されている（Ｎｏｌａｎら、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ．２０１６；２２（１）：７２～８０頁）。骨格筋アウトカムに対するｒＦＶＩＩＩＦｃの長期的影響の決定には、さらなる試験を必要とするであろう。
本試験の目的は、改変血友病関節健康スコア（ｍＨＪＨＳ）を使用して、ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験およびｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験に由来する長期的関節健康データを報告することである。
試験の参加者および設計
分析集団は、ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験を完了し、２年間のｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験に登録した成人／青年（１２歳以上）を含んでいた。患者は、試験前の予防または出血時止血処置を受けていてもよい。ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験スクリーニング（プロトコール補正後）時およびベースライン時に、次いで、ｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験のためにその後、毎年、ｍＨＪＨＳを使用して関節健康を評価した。
ｍＨＪＨＳは、関節疼痛および歩行に関する応答選択肢を、より少ないカテゴリーに要約し、不安定性に関する評価を加え、総スコアが標準的なＨＪＨＳ（範囲、０～１２４）と比較して低い（範囲、０～１１６；０は正常な関節機能を示し、１１６は重篤な疾患を示す）という点で、標準的なＨＪＨＳと異なる（表４を参照されたい）。２週間以内の出血の前のスコアは除外した。外科的介入を受けた関節に関するスコアを、最後の観察の繰り越しを使用して帰属させた。年々の変化を評価するために、４つの時点（ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験ベースライン、ｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験ベースライン、ｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験１年目、およびｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験２年目）でｍＨＪＨＳデータを有していたｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験の対象を、このポストホック分析に含有させた。ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験ベースラインからｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験２年目までのｍＨＪＨＳスコアの変化（負の値は改善を示す）を、記述統計値を使用してまとめた。ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験ベースラインからフォローアップ訪問までのｍＨＪＨＳスコアの変化を、（１）総スコア（範囲、０～１１６；試験前レジメン（予防と出血時止血）による；初期ｍＨＪＨＳに基づく機能障害の重篤度による；およびベースライン時の標的関節の存在による）；（２）標的関節（範囲、０～１９：単一の標的関節に関する全ての質問の合計）；（３）体重負荷（例えば、足首および膝）および非体重負荷（例えば、肘）関節（範囲、０～３８：単一の位置での左右の関節の合計）；ならびに（４）個々の構成要素（可動域（範囲、０～３６：全ての関節の「伸展喪失［足首の背屈］」および「屈曲喪失［足首の底屈］の質問の組合せ）；腫れ（範囲、０～２４：全ての関節の「腫れ」および「腫れの持続期間」の質問の組合せ）；および筋力（範囲、０～６：全ての関節の合計））についてまとめた。
Figure 2023027301000004
ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験ベースラインと、ｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験２年目との差異を、対応のあるｔ検定を使用して分析した。この分析はアドホックであったため、統計的有意性を推測するためにＰ値を使用しなかった。サブグループ分析のために、記述統計値のみを提供する。
結果
ベースライン特徴
ベースライン特徴は、この分析に含まれた完了者の集団（ｎ＝４７）と、ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験ベースライン時にｍＨＪＨＳを収集し、ｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験に登録した患者集団（ｎ＝７４）との間で類似していた（表５）。
Figure 2023027301000005
長期的関節健康
ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験ベースラインからｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験２年目までのｍＨＪＨＳスコアにおいて継続的な改善が観察され、総スコアの平均減少は、２３．４から１９．３であった（図２Ａ）。７４人の対象のうち、２４人を拡張試験３年目で評価し、ｍＨＪＨＳスコアのこれらの改善は、ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験についてベースライン時の標的関節の存在に関係なく、拡張試験３年目で見られた（図２Ｂ）。平均フォローアップ期間は、２．８（２．５～３．３）年であった。患者の試験前処置（図３）またはｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験ベースライン時の標的関節の存在（図４）に関係なく、継続的な改善が観察された。拡張試験３年目で評価されたこれらの患者において、全ての時点でのデータに関する成人／青年に関する平均ｍＨＪＨＳ総スコアは、ベースライン時に２５．０（平均の標準誤差［ＳＥＭ］、２．９）であった。ベースラインからの平均（ＳＥＭ）変化は、拡張試験ベースライン時に－２．０（１．２）、拡張試験１年目に－３．８（１．５）、拡張試験２年目に－４．５（１．６）、および拡張試験３年目に－５．１（１．５）であった（図３Ｂ）。ベースラインから拡張試験３年目までの変化は、統計的に有意であった（Ｐ＜０．００２）。小児ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験分析集団（ｎ＝２４）もまた、ベースラインから拡張試験２年目までに統計的に有意な平均（ＳＥＭ）改善を示した（－１．２［０．５６］；Ｐ＜０．０５）（図３Ｃ）。ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験ベースライン時にｍＨＪＨＳスコアの障害の最高四分位数を有する対象は、ベースラインからｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験２年目までにｍＨＪＨＳ総スコアの最も大きい改善を示した（図５）。ｍＨＪＨＳ標的関節スコアの継続的な改善が、ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験ベースラインからｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験２年目まで観察され、ベースライン時の７．０の平均からｒＦＶＩＩＩＦｃ拡
張試験２年目の５．３の平均まで改善した（図６）。体重負荷関節に関するｍＨＪＨＳ関節スコアは、ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験ベースラインからｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験２年目まで、８．０の平均から６．８の平均まで低下し、非体重負荷関節については、６．７の平均から４．８の平均まで低下した（図７）。体重負荷関節（足首および膝）および非体重負荷関節（肘）スコアの算出のために、左右の関節の対（足首、膝、または肘）に関する関節あたりのスコアの合計としてスコアを最初に誘導した。次いで、体重負荷関節スコアを、足首および膝に関するスコアの平均として算出し、非体重関節スコアは、肘に関するスコアと同じであった。さらに、腫れ、可動域、および筋力の特定の改善も、ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験ベースラインからｒＦＶＩＩＩＦｃ拡張試験２年目までに観察され、これは、ｍＨＪＨＳ総スコアの変化に最も有意に寄与する因子であった（図８）。
ｒＦＶＩＩＩＦｃピボタル第３相試験ベースラインからの統計的に有意な平均の改善は、３年目に体重負荷関節と非体重負荷関節の両方について観察された（それぞれ、－１．１［ＳＥＭ、０．５；Ｐ＝０．０３６］および－３．０［ＳＥＭ、０．８；Ｐ＝０．００１］）。ベースラインから３年目までに２０％以上の減少を示したｍＨＪＨＳの個々の成分は、腫れ（－４７％）、筋萎縮（－２６％）、関節摩擦音（－２０％）（３つ全ての成分についてＰ＜０．０５）ならびに関節不安定（－８９％）、関節疼痛（－３１％）、および筋力（－２６％）であった（図９）。
血友病Ｂを有する成人および青年におけるｒＦＩＸＦｃを用いた予防に関する標的関節のアウトカム
重篤な血友病Ｂを有する患者において、十分な処置を行わない関節への繰り返しの出血は、深刻な慢性関節疾患、疼痛、および生活の質の低下をもたらし得る（Ｄｊａｍｂａｓ
Ｋｈａｙａｔ、Ｊ Ｂｌｏｏｄ Ｍｅｄ．７：２７５～８２頁（２０１６））。組換え第ＩＸ因子Ｆｃ融合タンパク質（ｒＦＩＸＦｃ）を用いた予防処置は、重篤な血友病Ｂを有する青年および成人において、より少ない年間出血回数（ＡＢＲ）およびより少ない自発的／外傷的出血事象をもたらした（Ｋａｖａｋｌｉら、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ ２２（３）：３８１～８８頁（２０１６）；Ｐｏｗｅｌｌら、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ． ３６９（２４）：２３１３～２３頁（２０１３）；Ｐｏｗｅｌｌら、Ｂｒ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌ． １６８（１）：１２４～３４頁（２０１５）；Ｐｏｗｅｌｌら、Ｂｒ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌ． １６８（１）：１１３～２３頁（２０１５））。関節損傷の防止および出血事象の低減に加えて、従来のｒＦＩＸと長期作用型ｒＦＩＸの両方を用いた予防処置は、仕事または学校の中断の減少、より少ない入院、あまり頻繁でないモニタリング、および生活の質の改善をもたらし得る（Ｋａｖａｋｌｉら、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ ２２（３）：３８１～８８頁（２０１６）；Ｗｙｒｗｉｃｈら、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ
２２（６）：８６６～７２頁（２０１６））。人生の初期に開始した予防処置は、出血を低減し、関節損傷を防止する。一度、関節損傷が起こった以後の人生において開始した場合でも、予防処置は依然として関節への出血を含む、出血回数を有意に低減させることができる（Ｆｉｓｃｈｅｒら、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ ２０（Ｓｕｐｐｌ ４）：１０６～１３頁（２０１４））。ｒＦＩＸＦｃピボタル第３相試験（ＮＣＴ０１０２７３６４）を完了した重篤な血友病Ｂを有する成人／青年は、ｒＦＩＸＦｃの安全性および効能を評価する長期拡張試験（ＮＣＴ０１４２５７２３；Ｐａｓｉら、Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ．１１７（３）：５０８～１８（２０１７））に登録することができた。ｒＦＩＸＦｃピボタル第３相試験への登録時に標的関節を有していた対象から長期拡張試験までの長期的アウトカムを、ここで報告する。
本試験の目的は、登録時に標的関節を有していた対象から拡張試験の２回目の中間データカット（２０１５年９月１１日）までのｒＦＩＸＦｃピボタル第３相試験長期的データ
のアウトカムを提供することである。
方法
試験設計および集団
拡張試験における４つの処置群：（１）毎週の予防（ＷＰ；７日毎に２０～１００ＩＵ／ｋｇ）；（２）個別化された間隔的予防（ＩＰ；８～１６日毎に１００ＩＵ／ｋｇ）；（３）改変された予防（ＭＰ；調査者はＩＰまたはＷＰを用いた場合に最適な投与を達成していない対象のために投与を個別化することができる）；および（４）出血時止血処置（ＥＴ；出血エピソードの型および重篤度に基づくオンデマンド投与）のうちの１つに登録したｒＦＩＸＦｃピボタル第３相試験を完了する重篤な血友病Ｂを有する対象（２ＩＵ／ｄＬ以下の内因性ＦＩＸ）。対象は、拡張試験への登録時および試験中はいつでも、その処置群を切り換えることができた。処置群を切り換えた対象を、その処置レジメンに費やした期間についてそれぞれの処置群の分析に含有させたため、個々の対象を分析において１つを超える処置群において計数した。ピボタル第３相試験登録時に１つ以上の標的関節（３カ月間で３回以上の出血エピソードを示した大きな関節）を有する対象を評価した。
アウトカム尺度および統計分析
アウトカムを、ｒＦＩＸＦｃピボタル第３相試験から２回目のＢ－ＹＯＮＤ中間データカット（２０１５年９月１１日）までの累積期間にわたって分析した。標的関節における解消の分析を実施した。標的関節における解消を、連続１２カ月間にわたる標的関節における２回以下の自発的出血と定義した（Ｂｌａｎｃｈｅｔｔｅら、Ｊ Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ．１２（１１）：１９３５～３９頁（２０１４））。
結果
標的関節を有する対象に関するベースライン特徴を、表６に示す。試験中データを有する１１７人のｒＦＩＸＦｃピボタル第３相試験対象のうち、６０人がベースライン時に合計１６６の標的関節を有していた。これらの対象は、３．４（１．４～４．２）年の累積中央値（四分位範囲［ＩＱＲ］）期間についてｒＦＩＸＦｃを受けた。
Figure 2023027301000006
予防的投与
平均週用量および投与間隔を、表７にまとめた。
Figure 2023027301000007
出血回数
試験前および試験中の出血データを、それぞれ、図１０Ａおよび図１０Ｂに示す。試験中に標的関節が再出血しなかったｒＦＩＸＦｃ予防を受けている対象は、以下の通りであった：ＷＰ：４０人中１５人（３７．５％）；ＩＰ：１２人中１人（８．３％）；ＭＰ：１２人中４人（３３．３％）；ＥＴ：１４人中０人（０％）。ベースライン時に標的関節
を有していた対象においては、ｒＦＩＸＦｃ予防を用いた試験中の全ＡＢＲおよび標的関節ＡＢＲは、試験前処置を用いた場合の出血回数よりも低かった（図１０Ａおよび１０Ｂ）。
Figure 2023027301000008
標的関節における解消
全体として、１２カ月間での２回またはそれ未満の自発的出血に示されたように、標的関節（３７人中）の１００％（９３／９３）が解消した（図１１）。
結論
重篤な血友病Ｂを有する成人／青年において、長期的なｒＦＩＸＦｃ予防は、全処置群にわたって、ベースライン時に評価可能な標的関節を有していた対象の１００％において標的関節における解消をもたらし、低い標的関節ＡＢＲをもたらした。医師は、処置予防計画を設計する時にｒＦＩＸＦｃを用いて達成された標的関節を有する患者に関する有益かつ有意に改善された長期的アウトカムを考慮するべきである。
ｉｎ ｖｉｖｏでの単一光子放出型コンピューター断層撮影（ＳＰＥＣＴ）によるＨｅｍＢマウスにおける１２５Ｉ標識されたＦＩＸＦｃ、ＦＩＸ、およびＧｌｙｃｏＰＥＧ化されたＦＩＸの生体分布
ｉｎ ｖｉｖｏでの単一光子放出型コンピューター断層撮影（ＳＰＥＣＴ）により、投与後複数の時点でのＦＩＸタンパク質の生体分布を評価するために、ｉｎ ｖｉｖｏでのマウス試験を行った。ＦＩＸタンパク質を、１２５Ｉ標識されたＳＩＢリンカーを使用してリシン残基で標識した。標識されたＦＩＸタンパク質を、単回治療関連用量によって７～１２週齢のＨｅｍＢマウスに投与した。１２５Ｉ－ＳＩＢ－ＦＩＸを、１ｍｇ／ｋｇの単回用量として投与した（ｎ＝３）；１２５Ｉ－ＳＩＢ－ＦＩＸＦｃを、２ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝３）の単回用量として投与し（ｎ＝３）、１２５Ｉ－ＳＩＢ－ＦＩＸ－ＰＥＧを、１ｍｇ／ｋｇの単回用量として投与した（ｎ＝３）。
標識されたＦＩＸタンパク質の局在化を、０．５時間、２．５時間、２０時間、４８時間、９２時間、１２０時間、１６８時間、および／または２１６時間で画像化した（図１０Ａ～１０Ｃ）。関節領域（例えば、右／左膝および右／左肩）、心臓（左心室）、および肝臓への特異的局在化を、関心領域（ＲＯＩ）配置を使用して分析した。左心室および肝臓のＲＯＩは、正確な臓器内に置かれた、固定容積対象物であった。膝関節のＲＯＩを、大腿骨下約半分から脛骨／腓骨下半分までの骨の周囲に円筒を置くことによって定義し
た。肩のＲＯＩを、肩の中心に均一な球体を置いた後、その球体内に骨に関する閾値を置いた後、ＲＯＩを拡張することによって定義した。
標識されたＦＩＸＦｃは、投与後、３０分（図１２Ｄ）および２．５時間（図１２Ｅ）で、関節周囲の領域に分布し、投与後４８～２１６時間持続する（図１２Ｆ～１２Ｇ）ことがわかったが、これは、それぞれ、半減期および半減期の５倍に相当する。膝（図１３Ａ）および肩（図１３Ｂ）へのＦＩＸＦｃ局在化は、同じ関節領域へのＦＩＸおよびＧｌｙｃｏＰＥＧ－ＦＩＸの局在化よりも顕著であった。
１２５Ｉ－ＳＩＢ標識は、標識されたＦＩＸタンパク質のＦＩＸ活性に影響せず（図１４Ａ）、標識は、ＨｅｍＢマウスへの投与後に、標識されていないＦＩＸタンパク質と比較して、ＦＩＸタンパク質の薬物動態特性にも影響しなかった（図１４Ｂ）。
ベースライン関節評価
６つの関節（左足首－ＬＡ、右足首－ＲＡ、左肘－ＬＥ、右肘－ＲＥ、左膝－ＬＫ、右膝－ＲＫ）を、以下の基準：腫れ、持続期間、筋萎縮、関節摩擦音、屈曲喪失、伸展喪失、不安性、関節疼痛、および筋力に従って、０～１９の尺度でスコア化する。歩行を、歩きおよび階段上昇に基づいて０～２の尺度でスコア化する。総スコアは、６つ全部の関節に由来するスコア＋歩行スコアの合計である（０～１１６の範囲であり、０は正常であり、１１６は最も重篤な疾患である）。
スクリーニング訪問
身体のそれぞれの側にある肘、膝および足首を、スクリーニング時に関節疾患について評価する。関節機能を、活発な出血エピソードの非存在下で評価するべきである。０の関節スコアは、正常状態を反映する。
スコアリングの詳細
１．関節スコアリングを、これらのカテゴリーおよび尺度（範囲は、各関節については０～１９であり、６つ全部の関節については０～１１４である）に従って、６つの関節（ＬＡ、ＲＡ、ＬＥ、ＲＥ、ＬＫ、ＲＫ）について別々に行う：腫れ（０＝なし；１＝軽度；２＝中等度；３＝重度）；腫れの持続期間（０＝腫れなしまたは６カ月以下；１＝６カ月を超える）；筋萎縮（０＝なし；１＝軽度；２＝重度）；運動時の摩擦音（０＝なし；１＝あり）；足首の足底屈の喪失などの屈曲喪失（０＝なし；１＝軽度；２＝中等度；３＝重度）；不安定（０＝なし；１＝有意な病的関節弛緩）；関節疼痛（０＝可動域全体または可動域末端で疼痛なし；１＝あり）；筋力（０＝正常（重力および最大抵抗に対して位置を保持する）；１＝最小減少（重力および中程度の抵抗に対して位置を保持するが、最大抵抗では保持しない）；２＝軽度の減少（重力または最小抵抗に対して位置を保持する）；３＝中程度の減少（重力が除去された場合に関節を動かすことができる）；４＝重度の減少（わずかな筋収縮または筋収縮なし）。膝および肘での屈曲喪失および伸展喪失をスコアリングするために、以下を適用する：なし＝約０～５°；軽度＝約５～１０°；中等度＝約１１～２０°；および重度＝約２０°を超える。
２．歩行を、０＝歩きまたは階段昇降に困難なし；１＝歩きには困難がないが、階段には困難がある；および２＝歩きと階段に困難がある、として１回スコア化する（範囲は０～２である）。
この改変血友病関節健康スコア（ＨＪＨＳ）は、血友病を有する少年における関節スコアリング信頼性試験において使用されるスコアリングシステムに基づく（その全体が参照により本明細書に組み入れられる、Ｈｉｌｌｉａｒｄ、Ｆｕｎｋら、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌ
ｉａ １２（５）：５１８～５２５頁（２００６））。それは、４～１７歳の２０人の少年のコホートにおける骨格筋のアウトカムを評価するための手段として使用されてきた（その全体が参照により本明細書に組み入れられる、Ｓａｕｌｙｔｅ Ｔｒａｋｙｍｉｅｎｅ、Ｉｎｇｅｒｓｌｅｖら、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ １６（３）：４７９～４８６頁（２０１０））。このスコアリングシステムを、成人血友病集団に適合させるために、および国際血友病予防研究グループによる最近の検証試験におけるコメントに従って、改変を行った（その全体が参照により本明細書に組み入れられる、Ｆｅｌｄｍａｎ、Ｆｕｎｋら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｃａｒｅ Ｒｅｓ（Ｈｏｂｏｋｅｎ）、２０１０）。
血友病Ａにおける因子を用いた交換療法の主な合併症は、重篤な血友病Ａを有する患者の約３０％におけるインヒビター（中和抗第ＶＩＩＩ因子抗体）の形成である。インヒビターの発生は、処置の効能ならびに罹患した個体の生活の質に影響する。免疫系が組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）にどのように応答するかのさらなる理解は、インヒビターを効率的に根絶するための血友病研究における進行中の努力である。半減期が延長されたｒＦＶＩＩＩ Ｆｃ融合タンパク質（ｒＦＶＩＩＩＦｃ）は、出血エピソードを防止し、制御するための有効かつ良好に許容された療法である。この分子のＦｃ領域は、前臨床動物モデル（Ｋｒｉｓｈｎａｍｏｏｒｔｈｙ Ｓ．ら、Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０１：３０～３９頁（２０１６））において示されたように、また、免疫寛容誘導症例報告（Ｇｒｏｏｍｅｓ ＣＬら、Ｐｅｄｉａｔｒ Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ ６３（５）：９２２～２４頁（２０１６）；Ｍａｌｅｃ ＬＭら、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ ２２（６）：ｅ５５２～ｅ５５４頁（２０１６）；Ｒａｇｎｉ ＭＶら、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ
２２（５）：ｅ４６２～ｅ４６４頁（２０１６））によって示唆されたように、ｒＦＶＩＩＩ半減期の増加の原因となるだけでなく、抗原特異的寛容も促進することができる。
方法
末梢血由来ヒトＡＰＣまたはＴＨＰ－１単球を使用して、ＦｃγＲ結合、内在化、シグナル伝達およびサイトカイン産生に対するｒＦＶＩＩＩＦｃの効果、および遺伝子発現変化、ならびにｉｎ ｖｉｔｒｏでのその後の相互作用およびＴ細胞に対する効果を精査した（図１６）。
結果
ＦｃγＲの細胞表面発現の減少は、ｒＦＶＩＩＩＦｃ処置の際の内在化を示す（図１７Ａ～１７Ｃ）。単球由来マクロファージおよび樹状細胞を、陽性対照としての西洋わさびペルオキシダーゼ免疫複合体（ＨＲＰ－ＩＣ）、陰性対照としてのヒト免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１）、および等モル濃度（２００ｎＭ）の組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）またはｒＦＶＩＩＩ Ｆｃ融合タンパク質（ｒＦＶＩＩＩＦｃ）で２４時間処理した。Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）ＣＤ１６（図１７Ａ）、ＣＤ３２（図１７Ｂ）、およびＣＤ６４（図１７Ｃ）の細胞表面発現を、フローサイトメトリーにより測定した（ｎ＝３；＊＊Ｐ≦０．０１、＊＊＊Ｐ≦０．００５、他の処理に対するＨＲＰ－ＩＣの有意性は示さない）。ｒＦＶＩＩＩＦｃによる処理は、ｒＦＶＩＩＩによる処理後の細胞表面と比較して、ＣＤ１６（図１７Ａ）、ＣＤ３２（図１７Ｂ）、およびＣＤ６４（図１７Ｃ）の細胞表面発現の減少と相関していた。
ｒＦＶＩＩＩＦｃは、ＦｃγＲと係合し、その後の炎症性サイトカイン産生なしに、単球およびマクロファージにおけるシグナル伝達を誘導する（図１８Ａ～１８Ｃ）。ＴＨＰ－１単球細胞株、単球、末梢血単球由来マクロファージ、および末梢血単球由来樹状細胞を、ＨＲＰ－ＩＣ、ＩｇＧ１、ｒＦＶＩＩＩまたはｒＦＶＩＩＩＦｃで１５分間処理した（図１８Ａ）。Ｓｙｋリン酸化を、ＭＳＤプラットフォームを使用して、細胞溶解物中で測定した（ｎ＝３～７、＊Ｐ≦０．０５）。Ｓｙｋリン酸化を、ｒＦＶＩＩＩＦｃ（ＷＴ
）、新生児Ｆｃ受容体に結合することができないｒＦＶＩＩＩＦｃ変異体（ＦｃＲｎ変異体）、またはＦｃγＲに結合することができないｒＦＶＩＩＩＦｃ変異体（ＦｃγＲ変異体）でマクロファージを処理した後に測定した（ｎ＝４、＊Ｐ≦０．０５）（図１８Ｂ）。２４時間処理したマクロファージの炎症性サイトカイン産生を、ＭＳＤ ＥＬＩＳＡによって測定した（ｎ＝４、有意性は示さない）（図１８Ｃ）。
ｒＦＶＩＩＩＦｃは、活性化および炎症性サイトカイン産生において役割を果たしている分子よりもむしろ、免疫調節に関与する分子をリン酸化する（表９および図１９）。ｒＦＶＩＩＩＦｃで１５分間処理した単球由来マクロファージに由来する溶解物中のリン酸化されたタンパク質を、プロテオームプロファイラーホスホキナーゼおよびホスホ免疫受容体アレイを使用して問い合わせた。プロテオームプロファイラーアレイによって同定されたｒＦＶＩＩＩＦｃで処理されたマクロファージ中のリン酸化された分子の一覧を、表９に示す。阻害的シグナル伝達を担うホスファターゼのリン酸化を、ＭＳＤプラットフォームを使用して測定した（ｎ＝３；＊＊Ｐ≦０．０１、＊＊＊Ｐ≦０．００５）（図１９）。
Figure 2023027301000009
ｒＦＶＩＩＩＦｃは、寛容原性マクロファージに特徴的な遺伝子発現パターンを誘導する（図２０Ａ～２０Ｇ）。探索的ＲＮＡ配列決定を、有意に下方調節された遺伝子（図２０Ａ）について、および有意に上方調節された遺伝子（図２０Ｂ）について、ＩｇＧ１、ｒＦＶＩＩＩ、またはｒＦＶＩＩＩＦｃで６時間処理した単球由来マクロファージ上で実施し（ｎ＝３）、ｒＦＶＩＩＩで処理された細胞と比較した、これらの細胞中で選択性を示した分子経路を精査するために、ｒＦＶＩＩＩＦｃにより上方調節された遺伝子に対して経路分析を行った（表９）。ＮＲＦ２およびＰＰＡＲ－ガンマ経路の様々な遺伝子、ならびに様々な他の免疫調節因子が上方調節されることがわかった（図２０Ｈ）。ＮＲＦ２および脂質代謝経路の選択された遺伝子を、Ｑ－ＰＣＲによって検証した（ｎ＝８；＊Ｐ≦０．０５、＊＊Ｐ≦０．０１、＊＊＊Ｐ≦０．００５）（図２０Ｃ～２０Ｇ）。さらに、ｒＦＶＩＩＩＦｃにより教育されたマクロファージは、特徴的なＭ２様表現型を示すことがわかった（図２０Ｉ～２０Ｍ）。特に、ｒＦＶＩＩＩＦｃで処理されたマクロファージは、６時間後（図２０Ｉ）および２４時間後（図２０Ｊ）にｒＦＶＩＩＩで処理された細胞よりも高い相対的ＣＤ２０６発現を有し、ｒＦＶＩＩＩＦｃで処理されたマクロファージは、２４時間後（図２０Ｍ）にｒＦＶＩＩＩで処理された細胞よりも高い相対的ＡＲＧ１発現を有していた。
Figure 2023027301000010
ｒＦＶＩＩＩＦｃで処理された抗原提示細胞は、ＡＰＣ－Ｔ細胞の細胞接触を必要とする調節性Ｔ細胞分化に影響する（図２１Ａ～２１Ｃ）。末梢血単球由来マクロファージを、ＩｇＧ１、ｒＦＶＩＩＩ、またはｒＦＶＩＩＩＦｃで処理した後、同じドナーに由来する末梢血から単離されたナイーブなＣＤ４陽性Ｔ細胞と共に同時培養物に入れた。同時培養物中で６日後（図２１Ａ）、調節性Ｔ細胞のパーセント（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋）を、フローサイトメトリーを使用して定量した（ｎ＝４）（図２１Ｂ）。ナイーブなＴ細胞を、ＩｇＧ１、ｒＦＶＩＩＩ、またはｒＦＶＩＩＩＦｃで予備処理したＡＰＣの条件化培地中で培養した場合の調節性Ｔ細胞のパーセントも定量した（ｎ＝４）（図２１Ｃ）。
結論
ｒＦＶＩＩＩＦｃは、ＡＰＣ上のＦｃγ受容体を介して結合し、内在化およびシグナル伝達を誘導すると考えられる。このシグナル伝達は、炎症性サイトカイン産生に変換されず、ＡＰＣを活性化しない（データは示さない）。ｒＦＶＩＩＩＦｃ処理の際に、免疫調節性シグナル伝達事象が開始される。これらの事象は、ＮＲＦ２およびＰＰＡＲγ経路の上方調節（図２０Ｈ）ならびにＣＤ２０６およびアルギナーゼ１分子の上方調節を特徴とするＭ２様表現型に向かうマイクロファージ分化を駆動すると考えられる。様々な他の免疫調節因子も、発現の増加を示したが、少なくともグアニル酸シクラーゼ１可溶性サブユニットベータ（２ＧＵＣＹ１Ｂ２）、プロトポルフィリノゲンオキシダーゼ（ＰＰＯＸ）、およびサイトカインシグナル伝達の抑制因子３（ＳＯＣＳ３）は、ｒＦＶＩＩＩＦｃ処理された細胞における発現の減少を示した（図２０Ｈ）。これらのマクロファージは、調節性Ｔ細胞分化、ＦＶＩＩＩ寛容化、および抗ＦＶＩＩＩインヒビター減少などの、以前に報告された有益な免疫学的効果を実行することができる（図２２および２３）。
第ＩＸ因子（ＦＩＸ）の薬物動態（ＰＫ）プロファイルは、ＦＩＸの大部分が血漿コンパートメントの外部の空間（血管外空間）に分布する２コンパートメントモデルと一致する。本発明者らは、血友病ＢにおけるｒＦＩＸＦｃおよびｒＦＩＸ生体分布プロファイルが、ＦＩＸが血漿コンパートメントの外部の組織に分布することができるが、ＧｌｙｃｏＰＥＧ化されたｒＦＩＸの多くはＰＥＧ部分によって課される改変に起因して血漿コンパートメント中に残存するという仮説と一致することを、ＳＰＥＣＴイメージングを使用して以前に示した。この試験において、本発明者らは、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）におけるｒＦＩＸおよびｒＦＩＸＦｃの分布を評価した。
ｒＦＩＸＦｃおよびｒＦＩＸを、１２４Ｉ－ＳＩＢ（スクシンイミジルヨード安息香酸
）を使用してリシン残基で標識した。カニクイザルに、約２ｍＣｉ微用量の１２４Ｉ－ＳＩＢ－ｒＦＩＸＦｃ（２ｍｇ／ｋｇ）または１２４Ｉ－ＳＩＢ－ｒＦＩＸ（１ｍｇ／ｋｇ）の単回ＩＶボーラス注射を投与した。再構築された全身ＰＥＴ／ＣＴスキャンを、最大強度投影（ＭＩＰ）画像を生成するために使用し、ｉｎ ｖｉｖｏでの生体分布を、関心領域（ＲＯＩ）分析のために決定した。
ＮＨＰにおけるＰＥＴイメージングは、血液プール、心臓、肝臓および腎臓における１２４Ｉ－ＳＩＢ－ｒＦＩＸＦｃおよび１２４Ｉ－ＳＩＢ－ｒＦＩＸの初期分布を示した。より後の時点で、ｒＦＩＸＦｃとｒＦＩＸの両方が、肩関節ならびに他の骨関節（手首、足首および顎）への分布を示し、ｒＦＩＸＦｃは、ＦＩＸ血漿レベルが検出レベルより下であった時点でも、これらの領域への有意により高い分布を示した。ｉｎ ｖｉｖｏとｅｘ ｖｉｖｏの両方のデータは、ｒＦＩＸＦｃおよびｒＦＩＸの血液プールクリアランスを示した。ＴＣＡ沈降データは、９５％を超える放射活性がＦＩＸと関連することを示していた。
ｒＦＩＸＦｃおよびｒＦＩＸ生体分布プロファイルＮＨＰは、血友病Ｂマウスにおいて観察されるものと類似し、ＦＩＸが血漿コンパートメントの外部の組織に分布することができるという仮説と一致する。ｒＦＩＸと比較した、ｒＦＩＸＦｃの関節領域への有意により高い分布は、Ｆｃ媒介性機構またはＰＫの改善によるこれらの組織での保持を潜在的に反映することができる。出血の防止および関節健康の全体的防御における血管外分布の役割は依然として調査領域であるが、本試験は、血漿レベルがＦＩＸバリアントにわたって同等ではないか、または同じ意味を有することを示唆するＦＩＸバリアントの生体分布の差異を示したマウスにおける観察と一致している。
特定の実施形態の前記記載は、他者が、当業界の技術の範囲内にある知識を適用することによって、過度の実験なく、本発明の一般的概念から逸脱することもなく、そのような特定の実施形態を容易に改変する、および／または様々な適用に適合させることができる、本発明の一般的性質を完全に示すものである。したがって、そのような適合化および改変は、本明細書に提示される教示および指針に基づいて、開示された実施形態の等価物の意味および範囲の中にあることが意図される。本明細書における表現または用語は、説明のためのものであり、限定するためのものではないことが理解されるべきであり、本明細書の用語または表現は、教示および指針を考慮して当業者によって解釈されるべきである。
本発明の他の実施形態は、本明細書および本明細書に開示された本発明の実施の考慮から当業者には明らかであろう。本明細書および実施例は、例示のみとして考慮され、本発明の真の範囲および精神は、以下の特許請求の範囲によって示されることが意図される。
本明細書に開示される全ての刊行物、特許、および特許出願は、あたかもそれぞれ個々の刊行物、特許または特許出願が具体的かつ個別的に参照により組み入れられると示されたのと同程度に、参照により組み入れられる。

Claims (16)

  1. 血友病を有するヒトにおける関節の可逆性の血友病性関節症を処置する方法における、凝固因子とＦｃ領域とを含むキメラタンパク質または組成物の使用。
  2. 可逆性の血友病性関節症は、滑膜炎、微小出血、または両方を含む、請求項１に記載の使用。
  3. 血友病を有するヒトの関節における血管リモデリングの発生を低減させるか、または血管リモデリングを予防的に処置する方法における、凝固因子とＦｃ領域とを含むキメラタンパク質または組成物の使用。
  4. 血友病を有するヒトの関節周囲の軟部組織を改善する方法における、凝固因子とＦｃ領域とを含むキメラタンパク質または組成物の使用。
  5. 投与により、ヒトにおける関節健康スコア（ＨＪＨＳ）が改善される、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用。
  6. 投与により、ヒトにおける関節痛が低減する、請求項１～５のいずれか一項に記載の使用。
  7. 関節は、１つまたは両方の肘、１つまたは両方の膝、１つまたは両方の足首、１つまたは両方の肩、１つまたは両方の股関節、１つまたは両方の手首、１つまたは複数の手の関節、１つまたは複数の足の関節、およびその任意の組合せからなる群から選択される、請求項１～６のいずれか一項に記載の使用。
  8. Ｆｃ領域は、低親和性免疫グロブリンガンマＦｃ領域受容体ＩＩ－ｂ（ＦｃγＲＩＩＢ）に特異的に結合する、請求項１～７のいずれか一項に記載の使用。
  9. Ｘ線撮影、磁気共鳴イメージング、超音波造影法、パワードップラー超音波検査、またはその任意の組合せからなる群から選択されるイメージングシステムを使用して、処置を必要とするヒトを特定することをさらに含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の使用。
  10. 凝固因子は、第ＶＩＩ因子（ＦＶＩＩ）、第ＶＩＩａ因子（ＦＶＩＩａ）、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）、第Ｘ因子（ＦＸ）、フォンヴィルブランド因子（ＶＷＦ）、ＦＩＸおよびＦＸに特異的に結合するその抗原結合部分、またはその任意の組合せからなる群から選択される、請求項１～９のいずれか一項に記載の使用。
  11. キメラタンパク質は、ＦＶＩＩＩ－ＦｃまたはＦＩＸ－Ｆｃを含む、請求項５～１０のいずれか一項に記載の使用。
  12. ＦＶＩＩＩ－Ｆｃを含むキメラタンパク質の有効量は、約２０ＩＵ／ｋｇ～約３００ＩＵ／ｋｇである、請求項１１に記載の使用。
  13. ＦＶＩＩＩ－Ｆｃを含むキメラタンパク質は、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、約１８日間、約１９日間、約２０日間、約２１日間、約２２日間、約２３日間、または約２４日間の投与間隔で投与される、請求項１１または１２に記載の使用。
  14. ＦＩＸ－Ｆｃを含むキメラタンパク質の有効量は、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇである、請求項１１に記載の使用。
  15. ＦＩＸ－Ｆｃを含むキメラタンパク質は、約３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、２１日間、２２日間、２３日間、２４日間、２５日間、２６日間、２７日間、または２８日間の投与間隔で投与される、請求項１１または１４に記載の使用。
  16. 凝固因子は、血漿区画外ならびに血漿区画内の組織に分布する、請求項１～１５のいずれか一項に記載の使用。
JP2022200995A 2016-12-02 2022-12-16 キメラ凝固因子を使用して血友病性関節症を処置する方法 Pending JP2023027301A (ja)

Applications Claiming Priority (10)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662429509P 2016-12-02 2016-12-02
US62/429,509 2016-12-02
US201762529896P 2017-07-07 2017-07-07
US62/529,896 2017-07-07
US201762550488P 2017-08-25 2017-08-25
US62/550,488 2017-08-25
US201762558793P 2017-09-14 2017-09-14
US62/558,793 2017-09-14
JP2019529528A JP2020500874A (ja) 2016-12-02 2017-12-01 キメラ凝固因子を使用して血友病性関節症を処置する方法
PCT/US2017/064302 WO2018102743A1 (en) 2016-12-02 2017-12-01 Methods of treating hemophilic arthropathy using chimeric clotting factors

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2019529528A Division JP2020500874A (ja) 2016-12-02 2017-12-01 キメラ凝固因子を使用して血友病性関節症を処置する方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2023027301A true JP2023027301A (ja) 2023-03-01

Family

ID=61006302

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2019529528A Pending JP2020500874A (ja) 2016-12-02 2017-12-01 キメラ凝固因子を使用して血友病性関節症を処置する方法
JP2022200995A Pending JP2023027301A (ja) 2016-12-02 2022-12-16 キメラ凝固因子を使用して血友病性関節症を処置する方法

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2019529528A Pending JP2020500874A (ja) 2016-12-02 2017-12-01 キメラ凝固因子を使用して血友病性関節症を処置する方法

Country Status (13)

Country Link
US (1) US20190381149A1 (ja)
EP (1) EP3548066A1 (ja)
JP (2) JP2020500874A (ja)
KR (2) KR20240069834A (ja)
CN (1) CN110520150A (ja)
AU (1) AU2017366709A1 (ja)
BR (1) BR112019011115A2 (ja)
CA (1) CA3045660A1 (ja)
IL (2) IL266972B2 (ja)
MA (1) MA46967A (ja)
MX (1) MX2019006444A (ja)
TW (1) TWI777994B (ja)
WO (1) WO2018102743A1 (ja)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG10201707600XA (en) 2013-03-15 2017-11-29 Biogen Ma Inc Factor ix polypeptide formulations
MX2020012397A (es) 2018-05-18 2021-04-12 Bioverativ Therapeutics Inc Metodos de tratamiento de la hemofilia a.
CN114364796B (zh) * 2019-09-02 2023-07-11 甘李药业股份有限公司 嵌合蛋白

Family Cites Families (114)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4704362A (en) 1977-11-08 1987-11-03 Genentech, Inc. Recombinant cloning vehicle microbial polypeptide expression
EP0154316B1 (en) 1984-03-06 1989-09-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified lymphokine and production thereof
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US4965188A (en) 1986-08-22 1990-10-23 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences using a thermostable enzyme
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
ES8801674A1 (es) 1985-04-12 1988-02-16 Genetics Inst Un procedimiento para la preparacion de una proteina que presenta actividad procoagulante.
WO1986006408A1 (en) 1985-04-22 1986-11-06 Genetics Institute, Inc. HIGH YIElD PRODUCTION OF ACTIVE FACTOR IX
KR910006424B1 (ko) 1985-08-21 1991-08-24 인코텍스 비.브이 편성브리프(brief) 제조방법
ATE87663T1 (de) 1986-01-03 1993-04-15 Genetics Inst Verfahren zur herstellung von faktor-viii:c-typ- proteinen.
US5595886A (en) 1986-01-27 1997-01-21 Chiron Corporation Protein complexes having Factor VIII:C activity and production thereof
US4800159A (en) 1986-02-07 1989-01-24 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences
US5543502A (en) 1986-06-24 1996-08-06 Novo Nordisk A/S Process for producing a coagulation active complex of factor VIII fragments
JP3101690B2 (ja) 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
US6060447A (en) 1987-05-19 2000-05-09 Chiron Corporation Protein complexes having Factor VIII:C activity and production thereof
IE69026B1 (en) 1987-06-12 1996-08-07 Immuno Ag Novel proteins with factor VIII activity process for their preparation using genetically-engineered cells and pharmaceutical compositions containing them
US6346513B1 (en) 1987-06-12 2002-02-12 Baxter Trading Gmbh Proteins with factor VIII activity: process for their preparation using genetically-engineered cells and pharmaceutical compositions containing them
DE3720246A1 (de) 1987-06-19 1988-12-29 Behringwerke Ag Faktor viii:c-aehnliches molekuel mit koagulationsaktivitaet
FR2619314B1 (fr) 1987-08-11 1990-06-15 Transgene Sa Analogue du facteur viii, procede de preparation et composition pharmaceutique le contenant
US6780613B1 (en) 1988-10-28 2004-08-24 Genentech, Inc. Growth hormone variants
EP0401384B1 (en) 1988-12-22 1996-03-13 Kirin-Amgen, Inc. Chemically modified granulocyte colony stimulating factor
DE69029799T2 (de) 1989-02-21 1997-05-28 Washington University, St. Louis, Mo. Modifizierte formen von fortpflanzungshormonen
SE465222C5 (sv) 1989-12-15 1998-02-10 Pharmacia & Upjohn Ab Ett rekombinant, humant faktor VIII-derivat och förfarande för dess framställning
US6552170B1 (en) 1990-04-06 2003-04-22 Amgen Inc. PEGylation reagents and compounds formed therewith
AU1674292A (en) 1991-03-15 1992-10-21 Synergen, Inc. Pegylation of polypeptides
US5846951A (en) 1991-06-06 1998-12-08 The School Of Pharmacy, University Of London Pharmaceutical compositions
MX9204374A (es) 1991-07-25 1993-03-01 Idec Pharma Corp Anticuerpo recombinante y metodo para su produccion.
CA2149326C (en) 1992-11-13 2007-04-17 Mitchell E. Reff Fully impaired consensus kozak sequences for mammalian expression
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
SE504074C2 (sv) 1993-07-05 1996-11-04 Pharmacia Ab Proteinberedning för subkutan, intramuskulär eller intradermal administrering
GB9422383D0 (en) 1994-11-05 1995-01-04 Wellcome Found Antibodies
US6030613A (en) 1995-01-17 2000-02-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of therapeutics
US6485726B1 (en) 1995-01-17 2002-11-26 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of therapeutics
US6086875A (en) 1995-01-17 2000-07-11 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of immunogens
US5739277A (en) 1995-04-14 1998-04-14 Genentech Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
SE9503380D0 (sv) 1995-09-29 1995-09-29 Pharmacia Ab Protein derivatives
GB9524973D0 (en) 1995-12-06 1996-02-07 Lynxvale Ltd Viral vectors
US6458563B1 (en) 1996-06-26 2002-10-01 Emory University Modified factor VIII
CA2262405A1 (en) 1996-08-02 1998-02-12 Bristol-Myers Squibb Company A method for inhibiting immunoglobulin-induced toxicity resulting from the use of immunoglobulins in therapy and in vivo diagnosis
WO1998023289A1 (en) 1996-11-27 1998-06-04 The General Hospital Corporation MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
CA2225189C (en) 1997-03-06 2010-05-25 Queen's University At Kingston Canine factor viii gene, protein and methods of use
CA2283740C (en) 1997-03-14 2006-06-27 Idec Pharmaceuticals Corporation Method for integrating genes at specific sites in mammalian cells via homologous recombination and vectors for accomplishing the same
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6242195B1 (en) 1998-04-02 2001-06-05 Genentech, Inc. Methods for determining binding of an analyte to a receptor
DK1068241T3 (da) 1998-04-02 2008-02-04 Genentech Inc Antistofvarianter og fragmenter deraf
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
WO2000009560A2 (en) 1998-08-17 2000-02-24 Abgenix, Inc. Generation of modified molecules with increased serum half-lives
EP1006183A1 (en) 1998-12-03 2000-06-07 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Recombinant soluble Fc receptors
BR0008758A (pt) 1999-01-15 2001-12-04 Genentech Inc Variantes de polipeptìdeos parentais com funçãoefetora alterada, polipeptìdeos, composição ácidonucleico isolado, vetor, célula hospedeira,método para produzir uma variante depolipeptìdeo, método para o tratamento de umadesordem em mamìferos e método para produziruma região fc variante
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US20030171267A1 (en) 2000-04-12 2003-09-11 Rosen Craig A. Albumin fusion proteins
AU2002226028A1 (en) 2000-11-14 2002-05-27 Board Of Regents, Unversity Of Texas Systems Mutant human factor ix with an increased resistance to inhibition by heparin
GB0029407D0 (en) 2000-12-01 2001-01-17 Affitech As Product
EP2354149B1 (en) 2000-12-12 2017-08-30 MedImmune, LLC Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
PL369065A1 (en) 2001-09-04 2005-04-18 Merck Patent Gmbh Modified factor ix
KR101271635B1 (ko) 2001-12-21 2013-06-12 휴먼 게놈 사이언시즈, 인코포레이티드 알부민 융합 단백질
US20080194481A1 (en) 2001-12-21 2008-08-14 Human Genome Sciences, Inc. Albumin Fusion Proteins
EP1997829A1 (en) 2001-12-21 2008-12-03 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
US20040002587A1 (en) 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
WO2003074569A2 (en) 2002-03-01 2003-09-12 Immunomedics, Inc. Bispecific antibody point mutations for enhancing rate of clearance
EP1487992A4 (en) 2002-03-15 2007-10-31 Brigham & Womens Hospital CENTRAL AIRWAY DELIVERY FOR SYSTEMIC DRUG DELIVERY
EP1534335B9 (en) 2002-08-14 2016-01-13 Macrogenics, Inc. Fcgammariib-specific antibodies and methods of use thereof
ATE541857T1 (de) 2002-09-27 2012-02-15 Xencor Inc Optimierte fc-varianten und herstellungsverfahren dafür
CA2502904C (en) 2002-10-15 2013-05-28 Protein Design Labs, Inc. Alteration of fcrn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
GB2395337B (en) 2002-11-14 2005-12-28 Gary Michael Wilson Warning Unit
AU2004204494B2 (en) 2003-01-09 2011-09-29 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
US7041635B2 (en) 2003-01-28 2006-05-09 In2Gen Co., Ltd. Factor VIII polypeptide
AU2004215912B2 (en) 2003-02-26 2009-03-26 Nektar Therapeutics Polymer-factor VIII moiety conjugates
US8388955B2 (en) 2003-03-03 2013-03-05 Xencor, Inc. Fc variants
US20090010920A1 (en) 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
US7348004B2 (en) 2003-05-06 2008-03-25 Syntonix Pharmaceuticals, Inc. Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
EP2298347B1 (en) 2003-05-06 2015-09-30 Biogen Hemophilia Inc. Clotting factor chimeric proteins for treatment of a hemostatic disorder
GB0324368D0 (en) 2003-10-17 2003-11-19 Univ Cambridge Tech Polypeptides including modified constant regions
EP1697520A2 (en) 2003-12-22 2006-09-06 Xencor, Inc. Fc polypeptides with novel fc ligand binding sites
EP1706424B1 (en) 2004-01-12 2009-07-22 Applied Molecular Evolution, Inc. Fc region variants
EP1737890A2 (en) 2004-03-24 2007-01-03 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the fc region
WO2005123780A2 (en) 2004-04-09 2005-12-29 Protein Design Labs, Inc. Alteration of fcrn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
WO2006085967A2 (en) 2004-07-09 2006-08-17 Xencor, Inc. OPTIMIZED ANTI-CD20 MONOCONAL ANTIBODIES HAVING Fc VARIANTS
CN101014619B (zh) 2004-07-15 2010-11-03 赞科股份有限公司 优化的Fc变体
WO2006047350A2 (en) 2004-10-21 2006-05-04 Xencor, Inc. IgG IMMUNOGLOBULIN VARIANTS WITH OPTIMIZED EFFECTOR FUNCTION
DK1824988T3 (en) 2004-11-12 2017-08-07 Bayer Healthcare Llc LOCATION-SPECIFIC MODIFICATION OF FVIII
JP2009504157A (ja) 2005-08-12 2009-02-05 ヒューマン ジノーム サイエンシーズ， インコーポレイテッド アルブミン融合タンパク質
US8048848B2 (en) 2006-02-03 2011-11-01 Prolor Biotech Ltd. Long-acting interferons and derivatives thereof and methods thereof
TW200804416A (en) 2006-06-19 2008-01-16 Nautilus Technology Llc Modified coagulation factor IX polypeptides and use thereof for treatment
JP2010503396A (ja) 2006-09-14 2010-02-04 ヒューマン ジノーム サイエンシーズ， インコーポレイテッド アルブミン融合タンパク質
US7700734B2 (en) 2007-01-09 2010-04-20 Shu-Wha Lin Recombinant human factor IX and use thereof
ATE502114T1 (de) 2007-06-21 2011-04-15 Univ Muenchen Tech Biologisch aktive proteine mit erhöhter in-vivo- und/oder in-vitro-stabilität
EP2209487A4 (en) 2007-10-15 2012-06-20 Univ North Carolina VARIANTS OF HUMAN FACTOR IX WITH EXTENDED HALF-TIME
JP2011517950A (ja) 2008-04-16 2011-06-23 バイエル・ヘルスケア・エルエルシー 第ｉｘ因子の部位特異的修飾
RU2010146387A (ru) 2008-04-16 2012-05-27 БАЙЕР ХЕЛСКЕР ЛЛСи (US) Модифицированные полипептиды фактора ix и их применение
JP5665733B2 (ja) 2008-04-21 2015-02-04 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アーゲー 高度にグリコシル化されたヒト凝固第ｉｘ因子
US8680050B2 (en) 2009-02-03 2014-03-25 Amunix Operating Inc. Growth hormone polypeptides fused to extended recombinant polypeptides and methods of making and using same
US8703717B2 (en) 2009-02-03 2014-04-22 Amunix Operating Inc. Growth hormone polypeptides and methods of making and using same
DK3178835T3 (da) 2009-02-03 2019-06-24 Amunix Pharmaceuticals Inc Forlængede rekombinante polypeptider og sammensætninger omfattende samme
US20110046060A1 (en) 2009-08-24 2011-02-24 Amunix Operating, Inc., Coagulation factor IX compositions and methods of making and using same
PE20121539A1 (es) 2009-06-08 2012-12-06 Amunix Operating Inc Polipeptidos de la hormona de crecimiento y metodos de preparacion
PT2440228T (pt) 2009-06-08 2018-12-24 Amunix Operating Inc Polipéptidos de regulação da glicose e métodos de preparação e utilização dos mesmos
WO2011028344A2 (en) 2009-08-25 2011-03-10 Amunix Operating Inc. Interleukin-1 receptor antagonist compositions and methods of making and using same
US9670475B2 (en) 2010-07-09 2017-06-06 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor IX polypeptides and methods of use thereof
PL2804623T3 (pl) 2012-01-12 2020-03-31 Bioverativ Therapeutics Inc. Chimeryczne polipeptydy czynnika viii i ich zastosowania
CA2863329C (en) 2012-01-12 2023-01-03 Biogen Idec Ma Inc. Methods of reducing immunogenicity against factor viii in individuals undergoing factor viii therapy
BR112014020694A2 (pt) 2012-02-15 2018-05-08 Amunix Operating Inc. proteína de fusão do fator viii compreendendo polipeptídeo do fator viii fusionado a polipeptí-deo recombinante estendido (xten) e seu método de fabricação, ácido nucleico, vetores, célula hospedeira, bem como composição farmacêutica e seu uso no tratamento de coagulopatia, episódio de hemorragia e hemofilia a
EA029685B1 (ru) 2012-07-11 2018-04-30 Амуникс Оперэйтинг Инк. Комплекс фактора viii с xten и белком фактора фон виллебранда и его применение (варианты)
EP3943102A1 (en) * 2012-10-30 2022-01-26 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of using fviii polypeptide
SG10201707600XA (en) * 2013-03-15 2017-11-29 Biogen Ma Inc Factor ix polypeptide formulations
TWI629993B (zh) 2013-03-15 2018-07-21 美商生物化學醫療公司 因子ｖｉｉｉ多肽調配物
RS63583B1 (sr) 2014-01-10 2022-10-31 Bioverativ Therapeutics Inc Himerni proteini faktora viii i njihova upotreba

Also Published As

Publication number Publication date
IL266972A (en) 2019-07-31
IL266972B2 (en) 2024-04-01
MA46967A (fr) 2019-10-09
TWI777994B (zh) 2022-09-21
KR20190090827A (ko) 2019-08-02
JP2020500874A (ja) 2020-01-16
CA3045660A1 (en) 2018-06-07
US20190381149A1 (en) 2019-12-19
AU2017366709A1 (en) 2019-07-18
BR112019011115A2 (pt) 2019-10-01
IL308416A (en) 2024-01-01
CN110520150A (zh) 2019-11-29
MX2019006444A (es) 2019-10-30
KR20240069834A (ko) 2024-05-20
EP3548066A1 (en) 2019-10-09
WO2018102743A1 (en) 2018-06-07
IL266972B1 (en) 2023-12-01
TW201827072A (zh) 2018-08-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6641340B2 (ja) 第ＶＩＩＩ−Ｆｃ因子キメラおよびハイブリッドポリペプチドならびにその使用法
TWI764092B (zh) 因子viii嵌合及雜交多肽，及其使用方法
TWI690325B (zh) 因子viii多肽調配物
EP2870250B1 (en) Cell line expressing single chain factor viii polypeptides and uses thereof
JP2023027301A (ja) キメラ凝固因子を使用して血友病性関節症を処置する方法
EP3552619A1 (en) Factor ix polypeptides and methods of use thereof
EP2908847B1 (en) Methods of using a fixed dose of a clotting factor
JP2021523878A (ja) 血友病ａを処置する方法
JP2023027231A (ja) 凝固因子に対する免疫寛容を誘導する方法
NZ794264A (en) Methods of treating hemophilic arthropathy using chimeric clotting factors
EA045449B1 (ru) Способы лечения гемофилической артропатии с помощью химерных факторов свертывания крови
NZ795161A (en) Methods of inducing immune tolerance to clotting factors

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20230113

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20240109

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20240409