JP2022553856A - ウイルス分子レベルを低減する方法 - Google Patents

Abstract

本出願は、ウイルスレベルを低減し、対象におけるウイルス感染を治療することを目的とする。この治療は、対象における細胞宿主因子を標的とすることによって達成され、細胞宿主因子は、ＧＲＰ７８／ＢＩＰ、ＳＲＳＦ１、ＨＮＲＮＰ Ａ２Ｂ １、ＲＰＬＰ１、及びＲＰＬＰ２である。この標的化は、オリゴヌクレオチド阻害剤、特にｓｉＲＮＡを使用して達成される。治療されることとなるウイルス性感染症には、Ｂ型肝炎ウイルス及びコロナウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ２などの呼吸器ウイルスが挙げられる。ＲＮＡを標的とする単離オリゴヌクレオチド阻害剤、及びこれらのオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物もまた想定される。

Description

（優先権出願を参照することによる組み込み）
本出願は、２０１９年１１月７日出願の米国特許仮出願第６２／９３１，９６２号に対する優先権を主張し、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

（発明の分野）
本出願は、ウイルス分子のレベルを低減する方法及び／又はウイルス複製に関与する標的ＲＮＡ若しくは標的タンパク質である細胞宿主因子を標的とする治療薬と感染細胞を接触させることによってウイルス性感染症を治療する方法に関する。

Ｂ型肝炎ウイルス（hepatitis B virus、ＨＢＶ）は、ＤＮＡウイルスであり、Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅファミリーのメンバーである。ＨＢＶは、世界中で３億を超える人に感染し、慢性肝炎、硬変、及び肝細胞癌などの肝癌及び肝疾患の原因病原体である。ＨＢＶ感染は、急性かつ／又は慢性であり得る。急性ＨＢＶ感染は、無症候性であるか、又は症候性急性肝炎を示すかのいずれかであり得る。慢性Ｂ型肝炎は、数十年も存続する可能性があるＨＢＶによる肝細胞の永続的感染を特徴とする。ＨＢＶは、１０種類の遺伝子型Ａ～Ｊに分類される。

ＨＢＶは、約３．２キロベース（ｋｂ）対の部分二本鎖環状ＤＮＡを有する。ＨＢＶ複製経路は、極めて詳細に研究されている（１）。複製の一部分は、共有結合閉環状ＤＮＡ（covalently closed circular DNA、ｃｃｃＤＮＡ）形態の形成を含む。ｃｃｃＤＮＡの存在は、宿主生物の寿命にわたってウイルスの再出現のリスクを引き起こす。ＨＢＶ保有者は、数年にわたって疾患を伝播させることができる。毎年、Ｂ型肝炎の死者は、世界中で７５０，０００人を超えると推定されている。加えて、免疫抑制個体又は化学療法を受けている個体は、特にＨＢＶ感染の再活性化のリスクがある。

ＨＢＶは、ウイルスを含有する血液、精液、及び／又は別の体液によって伝播され得る。これは、血液と血液との直接接触、無防備な性交渉、針の共有により起こることがあり、感染した母親からその乳児に出産過程中に起こることもる。ＨＢＶ表面抗原（HBV surface antigen、ＨＢｓＡｇ）は、ＨＢｓＡｇの大部分がＨＢＶビリオンに存在するため、この感染の存在をスクリーニングするために最も頻繁に使用される。現在利用可能な薬剤は、ＨＢＶ感染を治癒しない。むしろ、薬剤は、ウイルスの複製を抑制する。

コロナウイルス疾患２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）（新型コロナウイルス肺炎又は２０１９－ｎＣｏＶ急性呼吸器疾患とも呼ばれる）は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２、重度急性呼吸器症候群コロナウイルス２（新型コロナウイルス２０１９又は２０１９－ｎＣｏＶとも呼ばれる）による感染に起因する。この疾患は、２０１９年１２月に初めて同定され、世界的に広がり、パンデミックを引き起こした。ＣＯＶＩＤ－１９の症状には、発熱、咳、息切れ、倦怠感、頭痛、嗅覚の喪失、鼻閉、咽頭炎、痰の形成、筋肉又は関節の疼痛、悪寒、悪心、嘔吐、及び下痢が挙げられる。重度の場合では、症状は、歩行困難、錯乱、青白い顔色、喀血、白血球数の減少、及び臓器不全を含み得る。合併症は、肺炎、ウイルス敗血症、急性呼吸窮迫症候群、及び腎不全を含み得る。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、疾患を引き起こす唯一のコロナウイルスではない。これは、β－コロナウイルス、すなわち、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ（重度急性呼吸器症候群の起因菌）、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ（中東呼吸器症候群の起因菌）、及びＨＣｏＶ－ＯＣ４３（感冒の一起因菌）を含む他のヒト病原体を含むコロナウイルス属である。これらのウイルスの感染性、及びそれらが引き起こす疾患の重症度は、大きく異なる。β－コロナウイルスはまた、ヒト及び動物に広がり、ヒト及び動物から広がる人畜共通感染症として発現し得る。更に、ラクダ、コウモリ、トラ、非ヒト霊長類、及びウサギなどの非ヒト種は、β－コロナウイルスに対して感受性の可能性がある。複数のコロナウイルスの治療又は治癒のために差し迫った必要性がある。

本開示は、ＨＢＶ及びコロナウイルスなどの呼吸器ウイルスを含む、ウイルス複製のための細胞宿主因子を利用するウイルスに対して有用な分子を提供する。したがって、本開示は、ヒトにおけるそのような感染症を安全かつ効果的に治療又は予防するために使用され得る化合物に対する当該技術分野における必要性を満たす。

ウイルスのゲノムを複製し、かつ／又はウイルス性感染症の結果を調節するために、ＨＢＶ及び他のウイルスによって利用される特定の分子の産生における役割を有するものとして、様々な細胞因子が現在特定されている。これらの細胞因子を標的とすることによって感染細胞による対応するウイルス分子（複数可）の産生を低減するために、オリゴヌクレオチド及びｓｉＲＮＡが開発されている。

一実施形態は、感染細胞により産生されるウイルス分子のレベルを低減する方法であって、

感染細胞を、細胞宿主因子を標的とする有効量のオリゴヌクレオチド阻害剤と接触させることによって、感染細胞による細胞宿主因子の産生を阻害し、感染細胞により産生されるウイルス分子の量を低減することを含み、

感染細胞は、（ａ）ＧＲＰ７８／ＢＩＰ ＲＮＡ、ＧＲＰ７８／ＢＩＰタンパク質、ＳＲＳＦ１ ＲＮＡ、ＳＲＳＦ１タンパク質、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１ ＲＮＡ、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１タンパク質、ＲＰＬＰ１ ＲＮＡ、ＲＰＬＰ１タンパク質、ＲＰＬＰ２ ＲＮＡ、及びＲＰＬＰ２タンパク質から選択される標的ＲＮＡ又は標的タンパク質である、少なくとも１つの細胞宿主因子と、（ｂ）ウイルスが複製のために利用するある量の少なくとも１つのウイルス分子と、を産生し、ウイルス分子は、ウイルスタンパク質、ウイルスＤＮＡ、又はウイルスＲＮＡである、方法、を提供する。一実施形態では、ウイルスは、ＨＢＶである。別の実施形態では、ウイルスは、コロナウイルスである。一実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、ウイルス分子のアッセイによって決定される際、１００ｎＭ未満のＥＣ₅₀値を有する。

別の実施形態は、ウイルス性感染症を治療する方法であって、

治療有効量のオリゴヌクレオチド阻害剤を、オリゴヌクレオチド阻害剤を必要とする対象に投与することであって、オリゴヌクレオチド阻害剤は、細胞宿主因子を標的とすることによって、対象の感染細胞による細胞宿主因子の産生を低減する、ことを含み、

感染細胞は、標的ＲＮＡ又はＧＲＰ７８／ＢＩＰ ＲＮＡ、ＧＲＰ７８／ＢＩＰタンパク質、ＳＲＳＦ１ ＲＮＡ、ＳＲＳＦ１タンパク質、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１ ＲＮＡ、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１タンパク質、ＲＰＬＰ１ ＲＮＡ、ＲＰＬＰ１タンパク質、ＲＰＬＰ２ ＲＮＡ、及びＲＰＬＰ２タンパク質から選択される標的ＲＮＡ又は標的タンパク質である、少なくとも１つの細胞宿主因子を産生する、方法、を提供する。一実施形態では、感染症を引き起こすウイルスは、ＨＢＶである。別の実施形態では、感染症を引き起こすウイルスは、コロナウイルスである。一実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、ウイルス分子のアッセイによって決定される際、１００ｎＭ未満のＥＣ₅₀値を有する。

別の実施形態は、対象におけるウイルス性感染症を治療するための医薬組成物であって、

薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、又はそれらの組み合わせと、

ＧＲＰ７８／ＢＩＰ ＲＮＡ、ＧＲＰ７８／ＢＩＰタンパク質、ＳＲＳＦ１ ＲＮＡ、ＳＲＳＦ１タンパク質、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１ ＲＮＡ、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１タンパク質、ＲＰＬＰ１ ＲＮＡ、ＲＰＬＰ１タンパク質、ＲＰＬＰ２ ＲＮＡ、ＲＰＬＰ２タンパク質、及び上記のうちの任意の組み合わせから選択される標的ＲＮＡ又は標的タンパク質のうちの少なくとも１つを標的とする、治療有効量のオリゴヌクレオチド阻害剤と、を含む、医薬組成物、を提供する。一実施形態では、感染ウイルスは、Ｂ型肝炎ウイルスである。別の実施形態では、ウイルス性感染症は、ＣＯＶＩＤ－１９である。一実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、感染細胞により産生されるウイルス分子のアッセイによって決定される際、１００ｎＭ未満のＥＣ₅₀値を有する。

これら及び他の実施形態は、以下により詳細に記載される。

図１Ａは、宿主因子ｍＲＮＡ、アメリカ国立生物工学情報センター（National Center of Biotechnology Information、ＮＣＢＩ）のアクセッション番号、及び本出願においてｓｉＲＮＡに対する標的配列を特定するために使用される核酸塩基の番号付けの概略図である。タンパク質をコードするオープンリーディングフレームは、長方形として示され、開始コドンの最初のアデニレートは、ヌクレオチド１として表記されている。図１Ｂは、細胞生存率及びＨＢｓＡｇレベルに対するｓｉＲＮＡノックダウンの要約を示す表である。細胞生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬を使用して決定されたＡＴＰレベル及びｍｏｃｋ処理細胞のレベルに対して正規化された結果によって評価された。ＨＢｓＡｇレベルは、ＥＬＩＳＡ及びｍｏｃｋ処理細胞内のレベルに対して正規化したデータを使用して定量した。結果は、ＧＲＰ７８、ＳＲＳＦ１、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１、及びＲＰＬＰ２を標的とするｓｉＲＮＡがＨｅｐＧ２．２．１５細胞によって作製されたＨＢｓＡｇレベルを低減することを示す。図１Ｃは、ｓｉＲＮＡが標的とする細胞タンパク質のレベルを低減することを示す、試料のウエスタンブロット画像である。ブロットは、標的に特異的な抗血清でプローブした。Ｌ．Ｃ．は、ローディングコントロールの意味である。 図２Ａは、ＨｅｐＧ２．２．１５細胞において細胞因子をノックダウンすることができるｓｉＲＮＡの細胞毒性（ＣＣ₅₀）の試料分析を示すプロットである。図２Ｂは、ＨＢｓＡｇレベルをｍｏｃｋ処理サンプルの５０％に低減することができるｓｉＲＮＡによって実証されるように、ＨｅｐＧ２．２．１５細胞において細胞因子をノックダウンすることができる２つのｓｉＲＮＡの有効濃度（ＥＣ₅₀）の試料分析を示すプロットである。図２Ｃは、ＨＥｐＧ２．２．１５細胞において細胞因子をノックダウンすることができるｓｉＲＮＡの細胞毒性（ＣＣ₅₀）の試料分析を示すプロットである。図２Ｄは、ＨＢｓＡｇレベルをｍｏｃｋ処理サンプルの５０％に低減することができるｓｉＲＮＡによって実証されるように、ＨｅｐＧ２．２．１５細胞において細胞因子をノックダウンすることができる２つのｓｉＲＮＡの有効濃度（ＥＣ₅₀）の試料分析を示すプロットである。図２Ｅは、ＨｅｐＧ２．２．１５細胞の細胞因子を単独で又は組み合わせてのいずれかでノックダウンすることができるｓｉＲＮＡの細胞毒性（ＣＣ₅₀）及び有効濃度（ＥＣ₅₀）を要約する表である。 図３Ａは、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１、ＧＲＰ７８、ＲＰＬＰ１、ＲＰＬＰ２、及びＳＲＳＦ１を標的とするｓｉＲＮＡが、ＨｅｐＧ２．２．１５細胞の生存率に対して最小限の影響を有したことを示すプロットである。細胞生存率に対する影響は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬を使用して定量された。全てのデータは、ｍｏｃｋ処理細胞により産生されたタンパク質の量に対して正規化された。 図３Ｂは、ｍｏｃｋ処理ＨｅｐＧ２．２．１５細胞と比較したとき、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１、ＧＲＰ７８、ＲＰＬＰ１、ＲＰＬＰ２、及びＳＲＳＦ１を標的とするｓｉＲＮＡが、ＨＢｓＡｇレベルの低減を引き起こしたことを示すプロットである。ｓｉＲＮＡによる処理後にＨｅｐＧ２．２．１５細胞により産生されたＨＢＶタンパク質を、ＥＬＩＳＡを使用して定量した。 図３Ｃは、ｍｏｃｋ処理ＨｅｐＧ２．２．１５細胞と比較したとき、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１、ＧＲＰ７８、ＲＰＬＰ１、ＲＰＬＰ２、及びＳＲＳＦ１を標的とするｓｉＲＮＡが、ＨＢｅＡｇレベルの低減を引き起こしたことを示すプロットである。結果は、ｓｉＲＮＡで処理した後、ＨｅｐＧ２．２．１５細胞によって作製されたＨＢＶタンパク質の定量を示す。細胞培養培地中のＨＢｅＡｇを、ＥＬＩＳＡを使用して評価した。 図３Ｄは、ｍｏｃｋ処理ＨｅｐＧ２．２．１５細胞と比較したとき、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１、ＧＲＰ７８、及びＳＲＳＦ１を標的とするｓｉＲＮＡが、コアレベルの低減を引き起こしたことを示すプロットである。結果は、ｓｉＲＮＡで処理した後、ＨｅｐＧ２．２．１５細胞によって作製されたＨＢＶタンパク質の定量を示す。図３Ｅは、ｍｏｃｋ処理ＨｅｐＧ２．２．１５細胞と比較したとき、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１、ＲＰＬＰ１、ＲＰＬＰ２、及びＲＰＬＰ１とＲＰＬＰ２との組み合わせを標的とするｓｉＲＮＡが、分泌ＨＢＶ ＤＮＡレベルの低減を引き起こしたことを示すプロットである。結果は、細胞培養培地に見られるＨＢＶ ＤＮＡの量の定量を示す。ＤＮＡのコピー数は、ｑＰＣＲを使用して決定された。図３Ａ～図３Ｅは、宿主因子を標的とするｓｉＲＮＡが、ＨｅｐＧ２．２．１５細胞において複数のＨＢＶ分子のレベルを低減することができることを示す。全てのｓｉＲＮＡを１０ｎＭの最終濃度で細胞に導入したが、５ｎＭの最終濃度のｓｉＲＮＡの各セットで処理した、ＲＰＬＰ１及びＲＰＬＰ２に対して２つのｓｉＲＮＡで処理した細胞を除く。 図４Ａ～図４Ｃは、宿主因子を標的とするｓｉＲＮＡがコロナウイルスのウイルス産生を阻害し得ることを示す。図４Ａは、宿主因子を標的とするｓｉＲＮＡがＨＣＴ８細胞のＨＣｏＶ－ＯＣ４３感染により産生されるビリオンＲＮＡに影響を及ぼし得るかどうかを評価するために使用される実験の概略図である。図４Ｂは、ＯＣ４３感染ＨＣＴ８細胞で試験した宿主因子ｓｉＲＮＡが、１０ｎＭ又は５ｎＭのいずれかで試験されたときに細胞生存率に影響を及ぼさないことを示すグラフである。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬を使用して細胞生存率の結果を得た。図４Ｃは、ＨＣＴ８細胞にトランスフェクトされた宿主因子ｓｉＲＮＡ及び培養細胞に添加されたレムデシビルが、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３ビリオンＲＮＡ産生を低減することができることを示すグラフである。ｖＲＮＡは、逆転写及び定量的ポリメラーゼ連鎖反応を使用して定量された。 図５Ａ～図５Ｃは、ＲＰＬＰ１及びＲＰＬＰ２を標的とするｓｉＲＮＡのうちのいくつかの特性を示す。図５Ａは、細胞生存率に影響を与えることなくＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇのレベルを阻害したｓｉＲＮＡの２つの例のグラフである。プロットは、複数の特性、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（ＣＴＧ）試薬の使用によって決定される際、ＨＢＶ Ｓ－抗原（ＨＢｓＡｇ）及びＨＢＶ Ｅ－抗原（ＨＢｅＡｇ）の用量依存的な低減及び細胞生存率に対する影響を示す。例示的なｓｉＲＮＡは、それぞれ、ＲＰＬＰ１及びＲＰＬＰ２を標的とする、番号２４及び３４である（表２を参照されたい）。図５Ｂは、ｓｉＲＮＡによって標的とされるＲＮＡにおける低減の例のグラフである。標的ｍＲＮＡの量をｑＰＣＲによって定量した。図５Ｃは、ｓｉＲＮＡによって標的とされるタンパク質における低減の例の図である。ゲル画像は、抗原特異的抗体でプローブされたウエスタンブロット由来である。ＲＰＬＰ１及びＲＰＬＰ２は、ヘテロ二量体として機能し、一方のタンパク質の存在量を低減すると、他方のタンパク質の同等の低減がもたらされる。Ｐ５４ｎｒｂ及びＧＡＰＤＨのレベルは、ローディングコントロールとして機能する。 図６は、宿主因子を標的とするｓｉＲＮＡが、コロナウイルスビリオンＲＮＡの量を低減し得ることを示す。図６Ａは、宿主因子を標的とするｓｉＲＮＡが、感染細胞により産生されるＨＣｏＶ－ＯＣ４３ビリオンＲＮＡを低減することができる例のグラフである。ｓｉＲＮＡを、１０ｎＭの最終濃度でＨＣＴ８細胞にトランスフェクトした。コロナウイルス感染症の阻害の陽性対照であるレムデシビル（Ｒｅｍ）を０．９μＭで使用した。ビリオンＲＮＡ（virion RNA、ｖＲＮＡ）は、ＯＣ４３ ＲＮＡに特異的な分岐ＤＮＡアッセイを使用して定量された。図６Ｂは、１０ｎＭの濃度の各ｓｉＲＮＡで２つのｓｉＲＮＡで処理した細胞により産生されるＨＣｏＶ－ＯＶ４３ビリオンＲＮＡの低減の例のグラフである。２つのｓｉＲＮＡは、ｓｉＲＮＡ標的化ＧＲＰ７８、すなわちｓｉＧＲＰ７８と共に、水平バーにおいて化合物番号（表２を参照されたい）によって呼ばれるものである。コロナウイルス感染症の阻害の陽性対照であるレムデシビル（Ｒｅｍ）を０．９μＭで使用した。ｖＲＮＡは、ＯＣ４３ ＲＮＡに特異的な分岐ＤＮＡアッセイを使用して定量された。

定義

別段の定めがない限り、本明細書で使用される全ての技術及び科学用語は、当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書で参照される全ての特許、出願、公開出願、及び他の出版物は、特に明記しない限り、参照によりそれらの全体が組み込まれる。本明細書のある用語に対して複数の定義が存在する場合、特に明記しない限り、この節にある定義が優先される。

本明細書で使用される場合、「オリゴヌクレオチド」（又は「オリゴ」）という用語は、当業者によって理解されるような通常の意味を有し、したがってオリゴデオキシヌクレオチド、オリゴデオキシリボヌクレオチド、及びオリゴリボヌクレオチドを含む化合物のクラスを指す。したがって、「オリゴヌクレオチド」は、リボ核酸（ribonucleic acid、ＲＮＡ）若しくはデオキシリボ核酸（deoxyribonucleic acid、ＤＮＡ）若しくはそれらの模倣体のオリゴマー又はポリマーを指し、天然に存在する核酸塩基、糖及びホスホジエステル（ＰＯ）ヌクレオシド間（骨格）結合からなるオリゴヌクレオチド、並びに、同様に機能する天然に存在しない部分を有する、かつ／又は、循環半減期を増加させる、かつ／若しくはオリゴヌクレオチドの分解、例えば、エンドヌクレアーゼによる分解を低減し、細胞取り込みを増加させるＧａｌＮＡｃなどの修飾を含む、「修飾」若しくは置換オリゴヌクレオチドへの言及を含む。「オリゴヌクレオチド阻害剤」は、標的化されるＲＮＡ又はタンパク質の細胞による産生を少なくとも部分的に阻害するオリゴヌクレオチドである。

「アンチセンス」オリゴヌクレオチド（antisense oligonucleotide、ＡＳＯ）は、配列特異的様式で標的ＲＮＡを認識するか又は標的ＲＮＡに特異的にアニールする合成オリゴヌクレオチドである。ｓｉＲＮＡ又はＡＳＯによって認識される標的ＲＮＡの配列は、ｍＲＮＡのタンパク質コード配列のヌクレオチド数によって定義され、開始コドン（ＡＵＧ）のアデニレートはヌクレオチド１と表記される。本出願で使用される配列は、細胞内で高い特異性で標的を認識することができる長さ及び配列のものである。特異性は、１ｎＭのｓｉＲＮＡの二本鎖と、生理食塩（１５５ｍＭ）に設定された標的ＲＮＡ配列との二本鎖の計算された融解温度によって、最も近い隣接パラメータを使用して表すことができる。特異性はまた、アニールされた二本鎖の熱力学的定数、ギブス自由エネルギーの変化（ΔＧ）によって表すこともできる。ｓｉＲＮＡ／標的二本鎖のＴｍ及び熱力学定数を計算するためのコンピュータプログラムは、Ｔｈｅ ＯｌｉｇｏＣａｌｃとして入手可能である（１９）。

本明細書で使用される場合、「ｓｉＲＮＡ」という用語は、当業者によって理解されるような通常の意味を有し、したがって、低分子干渉ＲＮＡ、短鎖干渉ＲＮＡ及び／又はサイレンシングＲＮＡと呼ばれるオリゴヌクレオチドのクラスを指す。これらの化合物は、ＲＮＡ干渉（RNA interference、ＲＮＡｉ）経路内で動作し、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖に相補的なヌクレオチド配列を含有する特定の遺伝子の発現を妨害し、ｍＲＮＡの分解を媒介する、非コード二本鎖ＲＮＡ分子、典型的には１９～２５塩基対の長さである。ｍＲＮＡのレベルが低減されると、標的タンパク質の翻訳及び量が減少することとなる。本明細書におけるｓｉＲＮＡへの言及は、天然に存在する核酸塩基、糖及びホスホジエステル（ＰＯ）ヌクレオシド間（骨格）結合からなるｓｉＲＮＡ、並びに同様に機能する天然に存在しない部分を有する、かつ／又は、循環半減期を増加させる、かつ／若しくはオリゴヌクレオチドの分解、例えば、エンドヌクレアーゼによる分解を低減し、細胞取り込みを増加させるＧａｌＮＡｃなどの修飾を含む、「修飾」又は置換ｓｉＲＮＡへの言及を含むと理解されるべきである。

本明細書で使用される場合、「標的とする」、「標的としている」、及び同様の用語は、塩基対合を介して標的ＲＮＡを認識するオリゴヌクレオチド阻害剤の文脈で使用される場合、当業者によって理解されるような通常の意味を有し、オリゴヌクレオチド阻害剤が標的ＲＮＡにハイブリダイズし、標的とされるＲＮＡ又はタンパク質の産生を少なくとも部分的に阻害するプロセスを指す。例えば、ｓｉＲＮＡは、ｍＲＮＡを低減することによってｍＲＮＡをコードする遺伝子のサイレンシングを引き起こし得、したがって、標的ＲＮＡからのタンパク質を含む合成される産生物を減少させ得る。様々なアッセイ技術を使用して、オリゴヌクレオチド阻害剤が、標的とされるＲＮＡ又はタンパク質の産生を少なくとも部分的に阻害する程度を決定することができる。そのようなｓｉＲＮＡ及びｓｉＲＮＡが標的とする様々なＲＮＡの非限定的な例を表１及び表２に記載する。

本明細書で使用される場合、「ウイルス分子」という用語は、当業者によって理解されるような通常の意味を有し、したがって、ウイルスのゲノムから作製される分子のクラスを指す。ウイルス分子は、典型的には、ウイルスタンパク質、ウイルスＤＮＡ、又はウイルスＲＮＡである。これらの分子は、ウイルスによって利用される又は必要とされて、それらのゲノムを複製するか、又はウイルス性感染症の結果を調節することができる。例えば、「ＨＢＶ分子」という用語は、ＨＢＶゲノムから作製される分子のクラスを指す。ＨＢＶ分子の例には、Ｓ－抗原、Ｅ－抗原、コア抗原、ＨＢＶ ＲＮＡ、及びＨＢＶ ＤＮＡが挙げられる。一実施形態では、ウイルス分子は、コロナウイルスＲＮＡなどのコロナウイルス分子である。

本明細書で使用される場合、「細胞宿主因子」、「細胞因子」、「宿主因子」、及び同様の用語という用語は、当業者によって理解されるような通常の意味を有し、したがって、細胞により産生され、複製のためにウイルスによって利用されるＲＮＡ又はタンパク質を指す。上記のように、様々な細胞因子は、複製するために、ＨＢＶ及び他のウイルスによって利用される特定のウイルス分子の産生に関与するとして現在特定されている。

本明細書で使用される場合、「ウイルスアッセイ（virus assay）」及び「ウイルスアッセイ（viral assay）」という用語は、当業者によって理解されるような通常の意味を有し、したがって、ウイルス分子を定量的に評価するアッセイを指す。例えば、「ＨＢＶアッセイ」は、ＨＢＶ分子又は感染細胞に対するＨＢＶ感染の影響を定量的に評価するアッセイを指す。ＨＢＶアッセイの例には、ＨＢｓＡｇアッセイ、ＨＢｅＡｇアッセイ、ＨＢＶコアアッセイ、ＨＢＶ ＲＮＡアッセイ、及びＨＢＶ ＤＮＡアッセイが挙げられる。同様に、「コロナウイルスアッセイ」は、呼吸器ウイルスの分子若しくは複数の分子、又は感染細胞に対するウイルス性感染症の影響を定量的に評価する、呼吸器ウイルスアッセイの例である。コロナウイルスアッセイの例には、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（quantitative polymerase chain reaction、ｑＰＣＲ）アッセイ及び分岐ＤＮＡアッセイが挙げられる。好適なウイルスアッセイを使用して、ウイルスに感染している細胞及び／又は対象を特定することができる。

本明細書で使用される場合、「担体」は、細胞、組織、及び／又は身体器官への化合物の通過、送達、及び／又は組み込みを促進する化合物又は粒子を指す。例えば、限定するものではないが、ｓｉＲＮＡを細胞の細胞質に送達することができるｓｉＲＮＡの脂質担体。別の例は、ナノ粒子（ＬＮＰ）であり、オリゴヌクレオチド及び／又はｓｉＲＮＡをカプセル化することによってオリゴヌクレオチド阻害剤を血流を通過する間の分解から保護する、かつ／又は肝臓などの所望の器官への送達を促進することができる担体の一種である。

本明細書で使用される場合、「希釈剤」は、薬理活性はないが、薬学的に必要又は望ましい可能性がある、医薬組成物中の成分を指す。例えば、希釈剤は、製造及び／又は投与には質量が小さ過ぎる、効力のある薬物のかさ増しのために使用されてもよい。それはまた、注射、摂取、又は吸入によって投与される薬物を溶解させるための液体であってもよい。当該技術分野において一般的な希釈剤の形態は、限定するものではないが、ヒト血液の組成を模したリン酸緩衝生理食塩水などの、緩衝水溶液である。

本明細書で使用される場合、「賦形剤」は、限定するものではないが、かさ、稠度、安定性、結合能力、潤滑、崩壊能力などを組成物に提供するために、医薬組成物に添加される、不活性の物質を指す。「希釈剤」は、ある種の賦形剤である。
ウイルス分子を低減してウイルス性感染症を治療する方法

以下の実施例に示されるように、細胞タンパク質ＧＲＰ７８／ＢＩＰ、ＳＲＳＦ１、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１、ＲＰＬＰ１、及びＲＰＬＰ２は、ウイルス複製及び感染に関与する細胞宿主因子として現在特定されている。このような宿主因子を標的とすることによってウイルス分子のレベルを低減するために、様々な方法が現在開発されている。例えば、一実施形態は、感染細胞により産生されるウイルス分子の分量を低減する方法を提供し、感染細胞を、本明細書に記載のような標的ＲＮＡ又は標的、タンパク質の低減のうちの少なくとも１つを標的とする、有効量のオリゴヌクレオチド阻害剤と接触させることを含む。そのような接触は、細胞宿主因子の感染細胞による産生を阻害し、感染細胞により産生されるウイルス分子の量を低減するのに有効である。当業者は、本明細書に記載の方法が、オリゴヌクレオチド阻害剤の対応する使用の説明も提供することを認識している。例えば、様々な実施形態は、本明細書に記載のような方法、例えば、ウイルスレベルを低減する、かつ／又はウイルス性感染症を治療する方法で使用するためのオリゴヌクレオチド阻害剤を提供する。他の実施形態は、本明細書に記載のような方法、例えば、産生されるウイルスの量を低減する、かつ／又はウイルス性感染症を治療する方法によって対象に投与可能な薬剤の調製に使用するためのオリゴヌクレオチド阻害剤を提供する。

一実施形態は、感染細胞により産生されるウイルス分子のレベルを低減する方法であって、
感染細胞を、細胞宿主因子を標的とする有効量のオリゴヌクレオチド阻害剤と接触させて、感染細胞による細胞宿主因子の産生を阻害し、感染細胞により産生されるウイルス分子の量を低減することを含み、
感染細胞は、（ａ）ＧＲＰ７８／ＢＩＰ ＲＮＡ、ＧＲＰ７８／ＢＩＰタンパク質、ＳＲＳＦ１ ＲＮＡ、ＳＲＳＦ１タンパク質、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１ ＲＮＡ、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１タンパク質、ＲＰＬＰ１ ＲＮＡ、ＲＰＬＰ１タンパク質、ＲＰＬＰ２ ＲＮＡ、及びＲＰＬＰ２タンパク質から選択される標的ＲＮＡ又は標的タンパク質である、少なくとも１つの細胞宿主因子と、（ｂ）ウイルスが複製のために利用するある量の少なくとも１つのウイルス分子と、を産生し、ウイルス分子は、ウイルスタンパク質、ウイルスＤＮＡ、又はウイルスＲＮＡである、方法を提供する。

一実施形態では、ウイルスに感染した細胞は、哺乳動物細胞である。例えば、一実施形態では、哺乳動物細胞は、ヒト細胞である。ＨＢＶ感染の場合、感染細胞は、典型的には肝細胞などの肝臓由来の細胞である。

一実施形態では、ウイルスは、ＨＢＶであり、ウイルス分子は、ＨＢＶ分子である。例えば、様々な実施形態では、ＨＢＶ分子は、Ｓ－抗原（ＨＢｓＡｇ）、Ｅ－抗原（ＨＢｅＡｇ）、コア抗原、ＨＢＶ ＲＮＡ、又はＨＢＶ ＤＮＡである。一実施形態では、ＨＢＶ分子は、Ｓ－抗原（ＨＢｓＡｇ）である。

別の実施形態では、ウイルスは、呼吸器ウイルスであり、ウイルス分子は、呼吸器ウイルス分子である。一実施形態では、呼吸器ウイルスは、コロナウイルス、例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３（別名ＯＣ４３）、又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ２（Ｃｏｖｉｄ－１９を引き起こすウイルス）などのコロナウイルスである。一実施形態では、コロナウイルス分子は、コロナウイルスＲＮＡ又はウイルスゲノムである。

ウイルス性感染症を治療するための様々な方法もまた開発されている。例えば、一実施形態は、ウイルス性感染症を治療する方法であって、
治療有効量のオリゴヌクレオチド阻害剤を、オリゴヌクレオチド阻害剤を必要とする対象に投与することであって、オリゴヌクレオチド阻害剤は、細胞宿主因子を標的とすることによって、対象の感染細胞による細胞宿主因子の産生を低減する、ことを含み、
感染細胞は、標的ＲＮＡ又はＧＲＰ７８／ＢＩＰ ＲＮＡ、ＧＲＰ７８／ＢＩＰタンパク質、ＳＲＳＦ１ ＲＮＡ、ＳＲＳＦ１タンパク質、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１ ＲＮＡ、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１タンパク質、ＲＰＬＰ１ ＲＮＡ、ＲＰＬＰ１タンパク質、ＲＰＬＰ２ ＲＮＡ、及びＲＰＬＰ２タンパク質から選択される標的ＲＮＡ又は標的タンパク質である、少なくとも１つの細胞宿主因子を産生する、方法を提供する。

文脈が他に示されない限り、様々な発明の特徴又は態様の本明細書の説明は、感染細胞により産生されるウイルス分子のレベルを低減する方法のそのような実施形態及びウイルス性感染症を治療する方法のそのような実施形態の両方に適用されると理解されるべきである。一実施形態では、ウイルスに感染した対象は哺乳動物対象であり、その場合、感染細胞は、哺乳動物細胞である。例えば、一実施形態では、哺乳動物対象は、ヒト対象であり、感染細胞は、ヒト細胞である。様々な実施形態では、本方法は、感染細胞を有効量のオリゴヌクレオチド阻害剤と接触させる前に、かつ／又は治療有効量のオリゴヌクレオチド阻害剤を対象に投与する前に、細胞及び／又は対象をウイルスに感染していると特定することを更に含む。

様々な実施形態では、対象の感染細胞により産生される細胞宿主因子は、本明細書に記載のようなＲＮＡ又はタンパク質である。様々な実施形態では、対象の感染細胞による細胞宿主因子の低減は、感染細胞により産生されるウイルス分子の低減を決定することによって決定される。一実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、感染細胞により産生されるウイルス分子のレベルを低減することによって対象のウイルス負荷を低減する。一実施形態では、対象に感染するウイルスはＨＢＶであり、細胞宿主因子の産生の低減は、ＨＢＶ分子の低減レベルによって示される。例えば、様々な実施形態では、ＨＢＶ分子は、Ｓ－抗原（ＨＢｓＡｇ）、Ｅ－抗原（ＨＢｅＡｇ）、コア抗原、ＨＢＶ ＲＮＡ、又はＨＢＶ ＤＮＡである。一実施形態では、ＨＢＶ分子は、Ｓ－抗原（ＨＢｓＡｇ）である。したがって、一実施形態では、細胞宿主因子の産生の低減は、ＨＢｓＡｇアッセイによって決定される際、ＨＢｓＡｇの低減レベルによって示される。

別の実施形態では、対象に感染するウイルスは、呼吸器ウイルスであり、ウイルス分子は、呼吸器ウイルス分子である。一実施形態では、呼吸器ウイルスは、コロナウイルス、例えば、ヒトコロナウイルスであり、呼吸器ウイルス分子は、ヒトコロナウイルス分子である。例えば、一実施形態では、コロナウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、又はＨＣｏＶ－ＯＣ４３などのβ－コロナウイルスである。

様々な実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、ＧＲＰ７８／ＢＩＰ ＲＮＡ、ＳＲＳＦ１ ＲＮＡ、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１ ＲＮＡ、ＲＰＬＰ１ ＲＮＡ、及びＲＰＬＰ２ ＲＮＡから選択される標的ＲＮＡのうちの少なくとも１つを標的とする。他の実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、ＧＲＰ７８／ＢＩＰタンパク質、ＳＲＳＦ１タンパク質、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１タンパク質、ＲＰＬＰ１タンパク質、及びＲＰＬＰ２タンパク質から選択される標的タンパク質のうちの少なくとも１つを標的とする。一実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、標的ＲＮＡを認識するアンチセンスオリゴヌクレオチド（anti-sense oligonucleotide、ＡＳＯ）であり、標的ＲＮＡは、ｍＲＮＡを含む。別の実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、標的ＲＮＡを認識するサイレンシングＲＮＡ（silencing RNA、ｓｉＲＮＡ）であり、標的ＲＮＡは、ｍＲＮＡを含む。様々な実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、標的ＲＮＡ又は標的タンパク質に対するオリゴヌクレオチド阻害剤の結合を増強する１つ以上の化学修飾ヌクレオチドを含む。

標的ＲＮＡ又は標的タンパク質のうちの少なくとも１つを標的とするオリゴヌクレオチド及びｓｉＲＮＡは、商業的供給源から得ることができる、その既知の方法又は修飾によって調製することができる、かつ／又は本明細書の他の箇所に記載されるように調製することができる。ＧＲＰ７８／ＢＩＰ、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１、ＲＰＬＰ１、ＲＰＬＰ２、及びＳＲＳＦ１を標的とするｓｉＲＮＡの非限定的な例を表１及び表２に列挙し、以下の実施例に記載する。一実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、表１及び表２に記載されるようなｓｉＲＮＡ、又はその修飾バージョンである。様々な実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、ヌクレアーゼによるオリゴヌクレオチドの分解を低減するように修飾されている。別の実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、標的ＲＮＡ又は標的タンパク質に対するオリゴヌクレオチド阻害剤の結合を増強するように修飾されている。別の実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、アミノ糖又は脂質にコンジュゲートされている。

一実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、ＧＲＰ７８／ＢＩＰ ＲＮＡ及びＧＲＰ７８／ＢＩＰタンパク質のうちの少なくとも１つを標的とする。別の実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、ＳＲＳＦ１ ＲＮＡ及びＳＲＳＦ１タンパク質のうちの少なくとも１つを標的とする。別の実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１ ＲＮＡ及びＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１タンパク質のうちの少なくとも１つを標的とする。別の実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、ＲＰＬＰ１ ＲＮＡ及びＲＰＬＰ１タンパク質のうちの少なくとも１つを標的とする。別の実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、ＲＰＬＰ２ ＲＮＡ及びＲＰＬＰ２タンパク質のうちの少なくとも１つを標的とする。

一実施形態では、本明細書に記載のようなオリゴヌクレオチド阻害剤は、感染細胞により産生されるウイルス分子のレベルを低減することによって対象のウイルス負荷を低減するのに有効な量で、対象に投与される。標的ＲＮＡ又は標的タンパク質のうちの少なくとも１つを標的とするオリゴヌクレオチド阻害剤は、好適なウイルスアッセイ、例えば、ＨＢＶアッセイ又は呼吸器ウイルスのアッセイによって決定される際、１００ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、３０ｎＭ未満、又は１０ｎＭ未満のＥＣ₅₀値を有し得る。様々な好適なウイルスアッセイは、当業者に既知であり、低減のために選択されるウイルス分子に基づいて選択され得る。例えば、コロナウイルスＲＮＡのレベルの低減は、感染細胞によるビリオン産生の低減を測定することによって決定することができる。ＨＢＶ分子の例には、Ｓ－抗原（ＨＢｓＡｇ）、Ｅ－抗原（ＨＢｅＡｇ）、コア抗原、ＨＢＶ ＲＮＡ、及びＨＢＶ ＤＮＡが挙げられる。一実施形態では、ＨＢＶアッセイは、ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶコア、ＨＢＶ ＲＮＡ、又はＨＢＶ ＤＮＡを定量的に評価する。いくつかの状況では、ＨＢＶアッセイの選択は、低減のために選択されるＨＢＶ分子に基づいて必ずしも行われるわけではなく、例えば、ＨＢＶ分子が既知ではない状況、複数のＨＢＶ分子が存在する状況、及び／又は対象がＨＢＶに対して治療されている状況が挙げられる。そのような状況では、ＨＢｓＡｇアッセイは、既定のＨＢＶアッセイとして選択される。例えば、本明細書に記載のようなＨＢＶ感染症を治療する方法の一実施形態では、ＨＢＶアッセイは、ＨＢｓＡｇアッセイである。

様々な実施形態では、ウイルス分子のレベルは、ウイルス感染細胞を本明細書に記載のような有効量のオリゴヌクレオチド阻害剤と接触させることによって相当低減することができる。例えば、ウイルス感染細胞と有効量のオリゴヌクレオチド阻害剤との接触は、ウイルス分子のレベルを少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、又は少なくとも５０％低減し得る。一実施形態では、細胞は、ＨＢＶに感染し、ウイルス分子は、ＨＢＶ分子である。別の実施形態では、細胞は、コロナウイルス（β－コロナウイルスなど）に感染し、ウイルス分子は、コロナウイルス分子である。ウイルス分子のレベルの低減は、本明細書の他の箇所に記載されるように、好適なウイルスアッセイを使用して決定され得る。そのようなアッセイは、レベルの低減が決定されるウイルス分子に基づいて選択され得、この場合もまたＨＢｓＡｇアッセイが既定のＨＢＶアッセイである。

本明細書に記載のいくつかの実施形態は、ウイルス性感染症に罹患していると特定された対象に、本明細書に記載のような有効量のオリゴヌクレオチド阻害剤、又は本明細書に記載のような有効量のオリゴヌクレオチド阻害剤を含む医薬組成物を投与することを含み得る、ウイルス性感染症（例えば、ＨＢＶ感染症又はコロナウイルス感染症などの呼吸器ウイルス感染症）を治療する方法に関する。本明細書に記載の他の実施形態は、ウイルス性感染症（例えば、ＨＢＶ感染症又はコロナウイルス感染症などの呼吸器ウイルス感染症）を治療するための薬剤の製造において、本明細書に記載のようなオリゴヌクレオチド阻害剤を使用することに関する。本明細書に記載の更に他の実施形態は、ウイルス性感染症（例えば、ＨＢＶ感染症又はコロナウイルス感染症などの呼吸器ウイルス感染症）を治療するための、本明細書に記載のようなオリゴヌクレオチド阻害剤又は本明細書に記載のようなオリゴヌクレオチド阻害剤を含む医薬組成物の使用に関する。

様々な実施形態は、本明細書に記載されるように、有効量のオリゴヌクレオチド阻害剤を対象に投与することによって、ウイルス性感染症を治療する方法を提供する。他の実施形態は、そのようなウイルス性感染症の治療における使用、及び／又はウイルス性感染症のそのような治療のための薬剤の製造における使用のための、本明細書に記載のようなオリゴヌクレオチド阻害剤を提供する。様々な実施形態では、そのような方法及び使用は、有効量の第２の療法をオリゴヌクレオチド阻害剤と組み合わせて対象に投与することを更に含む。第２の療法は、ウイルス性感染症の治療のための様々な治療様式から選択され得る。一実施形態では、第２の療法は、有効量の第２の治療用分子をオリゴヌクレオチド阻害剤と組み合わせて対象に投与することを含む。例えば、様々な実施形態では、第２の治療用分子は、本明細書に記載のような第２のオリゴヌクレオチド阻害剤、ヌクレオシド、ヌクレオチド、ヌクレオチドプロドラッグ、インターフェロン、カプシド集合モジュレータ、プロテアーゼ阻害剤、又はそれらの組み合わせを含む。例えば、一実施形態では、第２の治療用分子は、レムデシビルである。一実施形態では、第２の治療用分子は、第２のオリゴヌクレオチド阻害剤を含む。一実施形態では、第２のオリゴヌクレオチド阻害剤は、少なくとも１つの細胞宿主因子を標的とする。第２のオリゴヌクレオチド阻害剤によって標的とされる細胞宿主因子は、第１のオリゴヌクレオチド阻害剤によって標的とされる細胞宿主因子と同じであってもよいか、又は異なっていてもよい。一実施形態では、第１のオリゴヌクレオチド阻害剤は、ＲＰＬＰ１を標的とし、第２のオリゴヌクレオチド阻害剤は、ＲＰＬＰ２を標的とする。別の実施形態では、第１のオリゴヌクレオチド阻害剤は、ＧＲＰ７８を標的とし、第２のオリゴヌクレオチド阻害剤は、ＲＰＬＰ１を標的とする。別の実施形態では、第１のオリゴヌクレオチド阻害剤は、ＧＲＰ７８を標的とし、第２のオリゴヌクレオチド阻害剤は、ＲＰＬＰ２を標的とする。

本明細書の他の場所で示されるように、様々な経路を使用して、オリゴヌクレオチド阻害剤をオリゴヌクレオチド阻害剤を必要とする対象に投与してもよい。一実施形態では、有効量のオリゴヌクレオチド阻害剤、又はオリゴヌクレオチド阻害剤を含む有効量の医薬組成物は、非経口経路によって対象に投与される。例えば、一実施形態では、有効量のオリゴヌクレオチド阻害剤、又はオリゴヌクレオチド阻害剤を含む有効量の医薬組成物は、対象に静脈内投与される。別の実施形態では、有効量のオリゴヌクレオチド阻害剤、又はオリゴヌクレオチド阻害剤を含む有効量の医薬組成物は、対象に皮下投与される。別の実施形態では、有効量のオリゴヌクレオチド阻害剤、又はオリゴヌクレオチド阻害剤を含む有効量の医薬組成物は、吸入によって対象に投与される。
単離合成オリゴヌクレオチド阻害剤

様々な実施形態は、本明細書に記載のような標的ＲＮＡに高い特異性でハイブリダイズするアンチセンス鎖を有する単離合成オリゴヌクレオチド阻害剤を提供する。そのようなオリゴヌクレオチド阻害剤の例を表２に記載する。ハイブリダイゼーションの特異性は、少なくとも約４８℃、約４９℃、又は約５０℃の計算された融解温度（Ｔｍ）によって表すことができる。例えば、一実施形態では、ハイブリダイゼーションの特異性は、５０℃以上の計算されたＴｍによって表される。一実施形態では、ハイブリダイゼーションの特異性は、表２に示されるＴｍの計算値のうちのいずれか以上である計算されたＴｍによって表される。

一実施形態は、標的ＲＮＡにハイブリダイズするアンチセンス鎖を有する単離合成オリゴヌクレオチド阻害剤を提供し、
標的ＲＮＡは、ＧＲＰ７８／ＢＩＰ ＲＮＡ、ＳＲＳＦ１ ＲＮＡ、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１ ＲＮＡ、ＲＰＬＰ１ ＲＮＡ、ＲＰＬＰ２ ＲＮＡから選択され、
アンチセンス鎖は、
ＧＲＰ７８／ＢＩＰ ＲＮＡの核酸塩基１３７９～１３９７、
ＳＲＳＦ１ ＲＮＡの核酸塩基５１～６９、
ＳＲＳＦ１ ＲＮＡの核酸塩基５２３～５４１、
ＲＰＬＰ１ ＲＮＡの核酸塩基２８６～３０５、
ＲＰＬＰ１ ＲＮＡの核酸塩基８１～１０１、
ＲＰＬＰ１ ＲＮＡの核酸塩基２８３～３０３、
ＲＰＬＰ１ ＲＮＡの核酸塩基３３１～３５１、
ＲＰＬＰ１ ＲＮＡの核酸塩基－１～２０、
ＲＰＬＰ１ ＲＮＡの核酸塩基９～２９、
ＲＰＬＰ１ ＲＮＡの核酸塩基７４～９４、
ＲＰＬＰ１ ＲＮＡの核酸塩基１２５～１４５、
ＲＰＬＰ１ ＲＮＡの核酸塩基２７２～２９２、
ＲＰＬＰ１ ＲＮＡの核酸塩基３２９～３４９、
ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基１３５～１５５、
ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基３２７～３４７、
ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基３３６～３５６、
ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基１３６～１５６、
ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基１９０～２１０、
ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基２７３～２９３、
ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基３０２～３２２、
ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基３２５～３４５、
ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基５２～７２、
ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基１３２～１５３、
ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基１４２～１６２、
ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基３３３～３５１、
ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基５６～７４、
ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基１４７～１６５、
ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基１０８～１２６、及び
ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基１２０～１３８から選択される標的ＲＮＡの１５～２１長セクションに対して高い特異性によりハイブリダイズすることができる任意の１５～２１ｍｅｒアンチセンス鎖である。

核酸塩基は、図１Ａに示されるように、それぞれ対応する標的ＲＮＡに示されるように番号付けされた位置に従って番号付けされている。様々な実施形態では、ハイブリダイゼーションの特異性は、少なくとも約４８℃、約４９℃、又は約５０℃の計算されたＴｍによって表される。例えば、一実施形態では、ハイブリダイゼーションの特異性は、表２に示されるＴｍの計算値のうちのいずれか１つ以上の計算されたＴｍなどの、５０℃以上の計算されたＴｍによって表される。

様々な実施形態では、単離合成オリゴヌクレオチド阻害剤のアンチセンス鎖は、配列番号２１～５２のいずれか１つのアンチセンス鎖内の任意の１５～２１ｍｅｒ、１６～２１ｍｅｒ、１７～２１ｍｅｒ、１８～２１ｍｅｒ、１９～２１ｍｅｒ、又は２０～２１ｍｅｒアンチセンス鎖であるが、ただし、単離合成オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖は、配列番号１～２０のうちのいずれか１つではない。例えば、一実施形態では、単離合成オリゴヌクレオチド阻害剤のアンチセンス鎖は、配列番号２１～４２、４４～４５、４７～５０、及び５２のうちのいずれか１つのアンチセンス鎖内の任意の１５～２１ｍｅｒアンチセンス鎖である。別の実施形態では、単離合成オリゴヌクレオチド阻害剤のアンチセンス鎖は、配列番号２１～４２、４４～５０、及び５２のうちのいずれか１つのアンチセンス鎖内の任意の１７～２１ｍｅｒアンチセンス鎖である。
ウイルス分子を低減してウイルス性感染症を治療する方法の考察

ウイルスは、ウイルスの再生産及び伝播に必要な多くの代謝産物及び因子について宿主細胞に依存する細胞内寄生体である。細胞宿主因子は、細胞の健康に必須ではない限り、治療的介入の潜在的な標的である。細胞分子の産生は、典型的には、ウイルス核酸合成の特色を表すエラーを起こしやすい合成となりにくいため、直接作用性抗ウイルス剤と比較した場合、ウイルス性感染症を低減するために細胞タンパク質を標的とすることは、耐性ウイルスを選別する可能性が低くなり得る（２）。

ＨＢＶは、エンベロープウイルスの最小のものの１つである（１）。ＨＢＶは肝細胞を攻撃し、その感染症は、急性であり宿主によって排除されるか、又は慢性であるかのいずれかであり得る。慢性感染症及び結果として生じる炎症応答は、肝炎、肝硬変、及び肝細胞癌を発症する患者を招く可能性がある。世界中で１億８０００万人を超える人々がＨＢＶに慢性的に感染している。ＨＢＶポリメラーゼを阻害することができる既存の薬物が利用可能であり、ウイルス負荷を低減するのに有効であるが、その薬物は、ウイルス性感染症の治癒をもたらさない。

ＨＢＶは、タウロコール酸ナトリウム共輸送ポリペプチド（ＮＣＴＰ）と命名された肝臓特異的胆汁酸輸送体を介して肝細胞への進入を増加させる（３）。細胞内に放出されたヌクレオカプシドは、部分二本鎖ＤＮＡをｃｃｃＤＮＡと呼ばれる共有結合閉鎖環に変換することができるウイルスポリメラーゼに共有結合した弛緩部分二本鎖ＤＮＡゲノムを含有する。ｃｃｃＤＮＡは、プロセシングされ、次いで翻訳されていくつかのタンパク質を形成することができるＨＢＶ ＲＮＡのネストの転写のテンプレート、又はＨＢＶ ＤＮＡを形成するために複製され得るＨＢＶプレゲノムＲＮＡである（１）。発見される第１のＨＢＶタンパク質は、ＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓＡｇ）であり、ＨＢＶ表面抗原は、分泌されて免疫応答に影響を及ぼし、かつヌクレオカプシドの周りに集められて感染性ウイルスを形成する。コアタンパク質（コア抗原としても知られる）は、ＨＢＶゲノムの周りに集められて二十面体ヌクレオカプシドを形成する構造タンパク質である。Ｅ－抗原（ＨＢｅＡｇ）は、コアに融合したリーダーペプチドを含有するＲＮＡスプライス変異体から産生され、感染細胞からのＥ－抗原の分泌を可能にし、宿主免疫応答を妨害する結果があり得る。ＨＢＶはまた、それ自身のＤＮＡポリメラーゼ、すなわち、ＲＮＡテンプレート又はＤＮＡテンプレートのいずれかからＤＮＡを合成することができる逆転写酵素を産生する。ＨＢＸと呼ばれるＨＢＶタンパク質は、細胞シグナル伝達を調節することができ、かつ肝臓病理に寄与することができる多官能性タンパク質である。

ＨＢＶ複製は、培養細胞において広く研究されている。ヒト肝芽細胞腫細胞株、すなわち、ＨｅｐＧ２細胞は、特にそれらがＮＣＴＰ受容体を過剰発現する場合、ＨＢＶビリオンに感染し得る（４）。ＨＢＶゲノムの一体型コピーを含有するＨｅｐＧ２細胞から誘導されたＨｅｐＧ．２．２．１５細胞もまた、ＨＢＶ分子を産生し、感染性ビリオンを形成するために使用されている（５）。

細胞タンパク質は、ＨＢＶ複製／感染プロセス全体を通して重要な役割を果たすと考えられている。これらの宿主因子のうちのいくつかが同定されており、ＨＢＶタンパク質の合成、折り畳み、修飾、及び輸送において役割を果たすものを含む（６）。ＨＢＶ核酸のプロセシングと相互作用する宿主因子もまた同定されているが、ＨＢＶ感染におけるそれらの役割は十分に研究されておらず理解されていない。宿主タンパク質は、イプシロン要素、すなわち、ＨＢＶプレゲノムＲＮＡの２つの末端及びＨＢＶ ｍＲＮＡの３’末端に存在するＲＮＡモチーフと相互作用することが知られている（７）。イプシロン要素は、ＨＢＶ核酸合成及びカプシド形成に必要である（８）。

ＧＲＰ７８／ＢＩＰ ＲＮＡ、ＧＲＰ７８／ＢＩＰタンパク質、ＳＲＳＦ１ ＲＮＡ、ＳＲＳＦ１タンパク質、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１ ＲＮＡ、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１タンパク質、ＲＰＬＰ１ ＲＮＡ、ＲＰＬＰ１タンパク質、ＲＰＬＰ２ ＲＮＡ、及びＲＰＬＰ２タンパク質として知られるＲＮＡ及びタンパク質は、既知であるが、オリゴヌクレオチド阻害剤は、ＨＢＶ分子レベル若しくは呼吸器ウイルス分子レベルを低減する、かつ及び／又はＨＢＶ感染症若しくは呼吸器ウイルス感染症を治療するための標的化の候補としてこれまで同定されていない。ＧＲＰ７８又はＢＩＰとして称され得るＧＲＰ７８／ＢＩＰタンパク質は、細胞生存率、タンパク質合成、及びタンパク質分解に影響を及ぼし得る誤って折り畳まれたタンパク質の認識を調節するタンパク質シャペロンであると考えられている（９）。ＧＲＰ７８タンパク質レベルは、ＨＢＶ感染中に上昇する場合があり、過剰発現ＨＢｓＡｇと関連があり得る（１０）。ＳＲＳＦ１タンパク質は、ＲＮＡスプライシング、ＲＮＡ輸送、及び翻訳可能性に影響を与えるＲＮＡ結合タンパク質であり、ナンセンス媒介性ｍＲＮＡ崩壊を調節することができる（１１）。ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１タンパク質は、Ｎ６－メチル化アデニレートを有するＲＮＡを含むＲＮＡを認識して、ＲＮＡ安定性、プロセシング、及び翻訳可能性を調節する（１２）。ＨＢＶ ＲＮＡは、ＨＢＶ ＲＮＡ安定性、複製及び翻訳可能性に関与するイプシロン要素の塩基にＮ６－メチルアデニレートを有することが示されている（１３）。ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１はまた、ウイルス性感染症に対する宿主自然免疫応答を活性化することができる炎症誘発性サイトカイン産生の調節に関与し得る（１４）。ＲＰＬＰ２タンパク質は、翻訳伸長の効率を調節すると考えられているリボソーム関連タンパク質である（１５）。ＲＰＬＰ２タンパク質は、２つの追加のタンパク質、ＲＰＬＰ０及びＲＰＬＰ１と複合体で機能して、いくつかの膜貫通タンパク質の翻訳を増強するために翻訳伸長因子と相互作用することができる酸性リボソームストークと呼ばれる構造を含む（１６）。ＲＰＬＰ１及びＲＰＬＰ２の両方は、いくつかのプラス鎖ＲＮＡウイルスからのエンベロープタンパク質の野生型レベルの産生に関与し、両方とも感染性に影響を与える（１７、１８）。
医薬組成物

本明細書に記載のいくつかの実施形態は、本明細書に記載のようなオリゴヌクレオチド阻害剤と、薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、又はそれらの組み合わせと、を含み得る、医薬組成物に関する。例えば、一実施形態は、ウイルス性感染症（例えば、ＨＢＶ感染症又はコロナウイルス感染症などの呼吸器ウイルス感染症）を治療するための医薬組成物であって、
薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、又はそれらの組み合わせと、
ＧＲＰ７８／ＢＩＰ ＲＮＡ、ＧＲＰ７８／ＢＩＰタンパク質、ＳＲＳＦ１ ＲＮＡ、ＳＲＳＦ１タンパク質、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１ ＲＮＡ、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１タンパク質、ＲＰＬＰ１ ＲＮＡ、ＲＰＬＰ１タンパク質、ＲＰＬＰ２ ＲＮＡ、ＲＰＬＰ２タンパク質、及び上記のうちの任意の組み合わせから選択される標的ＲＮＡ又は標的タンパク質のうちの少なくとも１つを標的とする、有効量の１つ以上のオリゴヌクレオチド阻害剤と、を含む、医薬組成物、を提供する。

一実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、好適なアッセイ（例えば、ＨＢＶアッセイ又はコロナウイルスアッセイなどの呼吸器ウイルスのアッセイ）によって決定される際、１００ｎＭ未満のＥＣ₅₀値を有する。

当業者は、医薬組成物に含まれるオリゴヌクレオチド阻害剤が、本明細書の他の箇所に記載されるように、標的ＲＮＡ又は標的タンパク質のうちの少なくとも１つを標的とする様々なオリゴヌクレオチド阻害剤のうちの任意の１つ以上であり得ることを理解するであろう。例えば、一実施形態では、医薬組成物中のｓｉＲＮＡは、表１に記載されるようなｓｉＲＮＡ又はその修飾バージョンである。別の実施形態では、医薬組成物中のｓｉＲＮＡは、表２に記載されるようなｓｉＲＮＡ又はその修飾バージョンである。

医薬組成物の適切な製剤設計は、選択される投与経路による。本明細書に記載のオリゴヌクレオチド阻害剤の製剤設計及び投与のための技術は、当業者に既知である。オリゴヌクレオチド阻害剤を投与する複数の技術は、吸入、静脈内、又は皮下送達などによる非経口送達を含むがこれらに限定されない、当該技術分野において存在する。医薬組成物は、一般に、意図される具体的な投与経路に合わせて調整される。例えば、一実施形態では、医薬組成物は、非経口送達による対象への投与に好適な形態である。様々な実施形態では、そのような非経口送達形態は、送達を増強する担体を含む。例えば、一実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、血流を通過する間の分解からオリゴヌクレオチド阻害剤を保護する、かつ／又は肝臓などの所望の器官への送達を促進する脂質中にカプセル化される。

特許請求の範囲を決して限定するものではない、更なる実施形態が、以下の実施例において更に詳細に開示される。
実施例１～２０

ＨＢＶ分子レベルを低減するために細胞宿主因子を標的とする一連のｓｉＲＮＡは、調製するか又は商業的供給源から得られた。表１には、各ｓｉＲＮＡ及び対応する標的ＲＮＡの配列を記載している。

¹標的ｍＲＮＡの開始コドン（ＡＵＧ）中の最初のアデニレートは、ｎｔ．１と表記される。
²Ｔｍは、１５５ｍＭ塩（Ｎａ＋）中の１ｎＭ二本鎖ＲＮＡについて最近傍パラメータを使用して決定された。
³ΔＧを、１Ｍ ＮａＣｌ、２５℃、ｐＨ７．０での熱力学的一定条件で、１ｎＭのアニーリングされたｄｓＲＮＡについて計算した。
実施例２１～５２

ウイルス分子レベルを低減するために細胞因子を標的とする一連のｓｉＲＮＡを調製した。表２には、各ｓｉＲＮＡ及び対応する標的ＲＮＡの配列を記載している。

¹標的ｍＲＮＡの開始コドン（ＡＵＧ）中の最初のアデニレートは、ｎｔ．１と表記される。
²Ｔｍは、１５５ｍＭ塩（Ｎａ＋）中の１ｎＭ二本鎖ＲＮＡについて最近傍パラメータを使用して決定された。
³ΔＧを、１Ｍ ＮａＣｌ、２５℃、ｐＨ７．０での熱力学的一定条件で、１ｎＭのアニーリングされたｄｓＲＮＡについて計算した。

実施例Ａ１

細胞タンパク質ＧＲＰ７８／ＢＩＰ、ＳＲＳＦ１、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１、ＲＰＬＰ１、及びＲＰＬＰ２は、ＨＢＶ複製及び感染に関与すると同定された。これらのタンパク質をコードするＲＮＡを標的とする様々なｓｉＲＮＡ及びそれらの組み合わせを、７．５ｎＭの最終濃度でＨｅｐＧ２．２．１５細胞と接触させた。ｓｉＲＮＡの導入は、細胞生存率に対して最小限の影響を有した（図１Ｂを参照されたい）。図１Ｂ及び図１Ｃに示すように、これらのｓｉＲＮＡは、ＨＢｓＡｇアッセイによって決定される際、ｍｏｃｋと比較して、Ｓ－抗原（ＨＢｓＡｇ）の５０％を超える低減によって示されるように、ＨＢＶ分子のレベルを低減した。ＲＰＬＰ１のノックダウンは、ＲＰＬＰ２のノックダウンを超えてＨＢｓＡｇレベルを低減した。更に、ＨｅｐＧ２．２．１５細胞においてＲＰＬＰ１及びＲＰＬＰ２の両方をノックダウンするｓｉＲＮＡは、単独のＲＰＬＰ１又はＲＰＬＰ２を標的とするｓｉＲＮＡで処理された細胞と比較した場合、ＨＢｓＡｇレベルの追加の減少をもたらし、細胞因子が最適なＨＢｓＡｇ蓄積のために協調して作用し得ることを示している。同様に、ＧＲＰ７８及びＲＰＬＰ２の両方を標的とするｓｉＲＮＡは、いずれかの個々の因子のノックダウンよりも、ＨＢｓＡｇのレベルを低減した。
実施例Ａ２

ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１、ＧＲＰ７８、ＲＰＬＰ１、ＲＰＬＰ２、及び／又はＳＲＳＦ１を標的とするいくつかのｓｉＲＮＡ及びｓｉＲＮＡの組み合わせのＥＣ₅₀値は、ＨｅｐＧ２．２．１５細胞におけるＨＢｓＡｇレベルを低減する能力に関して決定された。図２Ａ～図２Ｅを参照されたい。ＧＲＰ７８を標的とするｓｉＲＮＡは、１ｎＭのＥＣ₅₀値でＨＢｓＡｇレベルを低下させ、ＨｅｐＧ２．２．１５細胞の生存率に影響を及ぼさないことが見出された（図２Ａ、図２Ｂ、及び図２Ｅ）。ＲＰＬＰ１を標的とするｓｉＲＮＡのＨＢｓＡｇレベルに対する効果も同様に強力であり、約０．９ｎＭのＥＣ₅₀値を生じ、１００ｎＭを超えるＣＣ₅₀を有した（図２Ｃ、図２Ｄ、及び図２Ｅ）。ＲＰＬＰ１及びＲＰＬＰ２の両方を標的とするｓｉＲＮＡは、約０．３ｎＭのＥＣ₅₀値及び１００ｎＭを超えるＣＣ₅₀の値を有した。ＳＲＳＦ１及びＲＰＬＰ２を標的とするｓｉＲＮＡはまた、約１．５ｎＭ以下のＥＣ₅₀値を有し、１００ｎＭを超えるＣＣ₅₀値を有した。（図２Ｄ及び図２Ｅ）。
実施例Ａ３

次いで、複数のＨＢＶ分子の産生の低減をもたらす宿主因子を標的とするｓｉＲＮＡの能力を、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１、ＧＲＰ７８、ＲＰＬＰ１、ＲＰＬＰ２、及びＳＲＳＦ１を標的とする１０ｎＭのｓｉＲＮＡと接触させた後、ＨｅｐＧ２．２．１５細胞により産生されたＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、及びコアタンパク質の量を定量することによって評価した。また、ＲＰＬＰ１及びＲＰＬＰ２の両方を標的とする５ｎＭのｓｉＲＮＡの各セットに細胞を接触させた。ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、及びコアのレベルは、全てＥＬＩＳＡを使用して決定された。ｓｉＲＮＡの導入は、細胞生存率又は細胞毒性に対して最小限の影響を有した（図３Ａ）。ｓｉＲＮＡは、ｍｏｃｋ処理細胞と比較した場合、ＨＢｓＡｇレベルの低下を引き起こし、ＧＲＰ７８及びＲＰＬＰ１のノックダウンは、最大の低減を引き起こし、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１のノックダウンは、中間的な効果を有した（図３Ｂ）。ＧＲＰ７８及びＲＰＬＰ１のノックダウンは、この場合もまた、ＨＢｅＡｇのレベルの最大の低減を引き起こし（図３Ｃ）、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１のノックダウンに関連するＨＢｅＡｇの減少は、より少なかった（図３Ｃ）。コア抗原の場合、ＳＲＳＦ１のノックダウンは、最も顕著な減少を引き起こした。ＲＰＬＰ１及びＲＰＬＰ２の両方をノックダウンしたｓｉＲＮＡは、ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの最大の低減を生じたが、コアタンパク質のレベルへの影響は認められなかった（図３Ｃ～図３Ｄ）。最後に、ＲＰＬＰ１及びＲＰＬＰ２のノックダウンは、分泌ＨＢＶ ＤＮＡの量の低減を引き起こした（図３Ｅ）。

要するに、これらの結果は、細胞因子がＨＢＶ感染の肝細胞モデルにおける複数のＨＢＶ分子のレベルに寄与し得、特定の宿主因子（複数可）がＨＢＶ分子の蓄積に寄与し得ることを示す。重要なことに、宿主因子をコードするＲＮＡを標的とするｓｉＲＮＡ及びオリゴヌクレオチドは、感染の成功に必要とされるＨＢＶ分子のレベルを減少させることができる。
実施例Ａ４

ＨＢＶ複製に影響を及ぼすことを特定した宿主因子はまた、コロナウイルス感染に関与している。ヒトコロナウイルスＯＣ４３は、高病原性ＳＡＲＳ－ＣｏＶ及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ２と同じ、β－コロナウイルス属のメンバーである（２０）。コロナウイルスがヒト腸管に感染し、下痢を引き起こす可能性があるため、ヒト結腸上皮細胞株であるＨＣＴ８に感染させるためのＯＣ４３用の手順を確立した。ＨＣＴ８細胞は、ＧＲＰ７８、ＲＰＬＰ１／２、ＳＲＳＦ１、及びＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１を発現し、これらの宿主因子を標的とするｓｉＲＮＡのトランスフェクションは、これらの宿主因子の特異的ノックダウンをもたらした。ＯＣ４３感染におけるｓｉＲＮＡの効果を調べるために、ＨＣＴ８細胞は、最初に感染ウイルスであり、次いでｓｉＲＮＡでトランスフェクトされ、ＯＣ４３Ｎ遺伝子に特異的なプライマーを有する逆転写定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ｑＰＣＲ）を使用して、感染由来で産生されたウイルスの量を定量した（図４Ａ）。実験の陽性対照は、コロナウイルス複製を阻害することができるヌクレオチドプロドラッグであるレムデシビルの効果を評価することであった（２１）。最後に、細胞生存率はまた、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬を使用して評価した。これらの実験では、０．５μＭのレムデシビルは、ＯＣ４３ビリオン産生を５％未満まで低減することができた。更に、ＲＰＬＰ１及びＧＲＰ７８を標的とするｓｉＲＮＡは、ＨＣＴ８細胞の生存率に明らかな有害な影響を与えずにＯＣ４３ ＲＮＡを低減した（図４Ｂ及び図４Ｃ）。他の実験では、ＲＰＬＰ２及びＳＲＳＦ１のノックダウンもまた、ｍｏｃｋ処理細胞に対してＯＣ４３ ＲＮＡを低減した。これらの結果は、ＲＰＬＰ１／２、ＧＲＰ７８、及びＳＲＳＦ１がコロナウイルス感染に関与し、ＨＢＶ感染に必要な宿主因子を標的とするｓｉＲＮＡもまた、コロナウイルス感染を阻害することができることを実証する。
実施例Ａ５

ＧＲＰ７８、ＳＲＳＦ１、ＲＰＬＰ１、及びＲＰＬＰ２を標的とするｓｉＲＮＡのライブラリを設計して合成した。このライブラリがＲＰＬＰ１及びＲＰＬＰ２を有利にするようにバイアスされたのは、これらのタンパク質が体細胞に非必須であり、それらがＧＲＰ７８の上流で機能するためである。すなわち、ＲＰＬＰ１タンパク質及びＲＰＬＰ２タンパク質の欠乏に起因して失敗したウイルスタンパク質合成は、シャペロンタンパク質ＧＲＰ７８によって救済することができない。
実施例Ａ６

実施例Ａ５のｓｉＲＮＡのライブラリを、ＨｅｐＧ２．２．１５細胞によって分泌されたＨＢｓＡｇの低減及びＨＢＶビリオンにおけるＨＢｓＡｇの低減について試験した。表３に要約するように、ｓｉＲＮＡのうち１種類がＧＲＰ７８を標的とし、２種類がＳＲＳＦ２を標的とし、１０種類がＲＰＬＰ１を標的とし、１９種類がＲＰＬＰ２を標的とし、全てが１０ｎＭ未満のＥＣ₅₀値でＨＢｓＡｇレベルを低減することが見出された。実際、ｓｉＲＮＡの大部分は、１ｎＭ未満のＥＣ₅₀値を有した。更に、試験された最高濃度、８０ｎＭでは、ｓｉＲＮＡのいずれも明らかな細胞毒性を有さなかった（表３）。最後に、有効なｓｉＲＮＡは、別の主要なＨＢＶ分子であるＨＢｅＡｇのレベルを低減した。ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇの低減の用量応答並びに２つのｓｉＲＮＡ（配列番号２４及び３４）の細胞毒性プロファイルの例を図５Ａに示す。

^*１０ｎＭのｓｉＲＮＡを細胞にトランスフェクトした
ＮＤ：未決定。

実施例Ａ７

実施例Ａ６に記載されるように特定されたｓｉＲＮＡは、ＲＩＳＣ複合体に取り込まれて同族ｍＲＮＡを切断し、ｍＲＮＡの分解をもたらすことを含む機構によって機能するはずである。ｓｉＲＮＡが標的ｍＲＮＡを低減するのに有効であるかどうかを調べるために、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ｑＰＣＲ）と組み合わせた逆転写を使用して、ＨｅｐＧ２．２．１５細胞における標的ｍＲＮＡのレベルを評価した。表２に記載の全３２種類のｓｉＲＮＡは、ｍＲＮＡを７５％超低減した（表３）。ｓｉＲＮＡによる標的ｍＲＮＡの低減パーセントのサンプリングを図５Ｂに示す。
実施例Ａ７

宿主因子は、タンパク質としてウイルス性感染症において機能する可能性が高い。したがって、ｓｉＲＮＡが標的タンパク質の量を減少させることができるかどうかを決定した。１０ｎＭの各ｓｉＲＮＡで７２時間トランスフェクトされた細胞を溶解し、標的特異的抗体でプローブされたウエスタンブロットを使用して標的タンパク質を同定した。表３に記載の有効なｓｉＲＮＡは、ｍｏｃｋ処理試料の２８～９２％までタンパク質のレベルを低下させた。タンパク質の低減が標的ｍＲＮＡの低減よりも少ないのは、タンパク質が延長された半減期を有し、タンパク質の分解に必要な時間がより長いためと思われる。ウエスタンブロット分析を使用して検出されたＲＰＬＰ１及びＲＰＬＰ２の低減の例を図５Ｄに示す。特に、ＲＰＬＰ１のノックダウンは、ＲＰＬＰ１のレベルを低下させるだけでなく、ＲＰＬＰ２の減少ももたらし、逆もまた同様である。これは、一方のタンパク質の低減が他方のタンパク質の劣化に対する脆弱性を増加させるように、ヘテロ二量体として機能するＲＰＬＰ１及びＲＰＬＰ２に起因することが理由である。タンパク質の同様の随伴性減少は、Ｃａｍｐｏｓ ｅｔ ａｌ．によって報告された（１７）。最後に、ｓｉＲＮＡによって標的とされない２つの細胞タンパク質であるＰ５４ｎｒｂ及びＧＡＰＤＨのレベルは、影響を受けなかった。結果は、ｓｉＲＮＡがｓｉＲＮＡの標的に対して特異性を有することを示す。
実施例Ａ８

表２に列挙したｓｉＲＮＡをヒト結腸上皮ＨＣＴ８細胞にトランスフェクトし、産生されたＯＣ４３ビリオンの量を定量した。これらのアッセイでは、ＯＣ４３ ｖＲＮＡは、分岐ＤＮＡアッセイ（ＱｕａｎｔｉＧｅｎｅ遺伝子発現アッセイ：ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用して定量した。陽性阻害対照として、感染細胞をレムデシビルで処理した。０．９μＭのレムデシビルによる処理は、ＯＣ４３ ｖＲＮＡの９８％超の低減をもたらした。更に、１０ｎＭの最終濃度でＨＣＴ８細胞にトランスフェクトされたｓｉＲＮＡは、３６～９４％のＯＣ４３ ｖＲＮＡの低減をもたらした（表３）。ＯＣ４３ ｖＲＮＡの阻害の例を図５Ａに示す。これらの結果は、宿主因子を標的とするｓｉＲＮＡがヒトコロナウイルス感染を阻害し得ることを確実にする。
実施例Ａ９

複数の宿主因子の協奏及びノックダウンにおけるＨＢＶ複製機能のための宿主因子は、ＨＢＶ複製及びＨＢｓＡｇ産生のより顕著な低減をもたらした（図１Ｂ）。宿主因子を標的とするｓｉＲＮＡの組み合わせは、ＯＣ４３ビリオン産生をより強力に低減するはずである。これを説明するために、ＨＣＴ８細胞を表２からの１０ｎＭのｓｉＲＮＡで、ＧＲＰ７８を標的とする１０ｎＭのｓｉＲＮＡと共にトランスフェクトした。産生されたビリオンＲＮＡは、分岐ＤＮＡアッセイを使用して定量された。結果は、ＧＲＰ７８を標的とするｓｉＲＮＡが、ＳＲＳＦ１、ＲＰＬＰ１又はＲＰＬＰ２を標的とするｓｉＲＮＡと共に、ＯＣ４３ビリオンＲＮＡの有意な低減をもたらしたことを示している（表３）。この活性の例を図６Ｂに示す。宿主因子ＧＲＰ７８、ＳＲＳＦ１、ＲＰＬＰ１、及びＲＰＬＰ２を標的とするｓｉＲＮＡの組み合わせは、感染細胞からのヒトコロナウイルスビリオンＲＮＡの産生の有意な低減をもたらし得る。

表３及び図１～図６に示される結果は、感染細胞を、細胞宿主因子を標的とする有効量のオリゴヌクレオチド阻害剤と接触させることによって、細胞宿主因子の感染細胞による産生を阻害し、感染細胞により産生されるウイルス分子の量を低減することによって、感染細胞により産生されるウイルス分子のレベルを低減する方法を示す。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、配列番号１～２０によって表される構造を有するｓｉＲＮＡである。他の実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、表２の配列番号２１～５２によって表される構造を有するｓｉＲＮＡである。
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１８．Ｃａｍｐｏｓ Ｒ．Ｋ．ｅｔ ａｌ．，２０１９．Ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ｓｔａｌｋ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ＲＰＬＰ１ ａｎｄ ＲＰＬＰ２ ｐｒｏｍｏｔｅ ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｆｌａｖｉｖｉｒａｌ ａｎｄ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｍｕｌｔｉ－ｐａｓｓ ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ．ＢｉｏＲｘｉｖ．Ｄｏｉ １０．１１０／７１３０１６。

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２０．Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ Ｓｔｕｄｙ Ｇｒｏｕｐ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｔａｘｏｎｏｍｙ ｏｆ Ｖｉｒｕｓｅｓ．２０２０．Ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ Ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ：ｃｌａｓｓｉｆｙｉｎｇ ｔｈｅ ２０１９－ｎＣｏＶ ａｎｄ ｎａｍｉｎｇ ｉｔ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２．Ｎａｔｕｒｅ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ５，５３６－５４４。

２１．Ｗａｎｇ Ｍ．Ｃａｏ Ｒ．，Ｚｈａｎｇ Ｌ．，Ｙａｎｇ Ｘ．，Ｌｉｕ Ｊ．ｅｔ ａｌ．２０２０．Ｒｅｍｄｅｓｉｖｉｒ ａｎｄ ｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｈｅ ｒｅｃｅｎｔｌｙ ｅｍｅｒｇｅｄ ｎｏｖｅｌ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ（２０１９－ｎＣｏＶ）ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３０，２６９－２７１。

Claims (65)

1. 感染細胞により産生されるウイルス分子のレベルを低減する方法であって、
   前記感染細胞を、細胞宿主因子を標的とする有効量のオリゴヌクレオチド阻害剤と接触させることによって、前記感染細胞による前記細胞宿主因子の産生を阻害し、前記感染細胞により産生される前記ウイルス分子の量を低減することを含み、
   前記感染細胞は、（ａ）ＧＲＰ７８／ＢＩＰ ＲＮＡ、ＧＲＰ７８／ＢＩＰタンパク質、ＳＲＳＦ１ ＲＮＡ、ＳＲＳＦ１タンパク質、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１ ＲＮＡ、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１タンパク質、ＲＰＬＰ１ ＲＮＡ、ＲＰＬＰ１タンパク質、ＲＰＬＰ２ ＲＮＡ、及びＲＰＬＰ２タンパク質から選択される標的ＲＮＡ又は標的タンパク質である、少なくとも１つの細胞宿主因子と、（ｂ）ウイルスが複製のために利用するある量の少なくとも１つのウイルス分子と、を産生し、前記ウイルス分子は、ウイルスタンパク質、ウイルスＤＮＡ、又はウイルスＲＮＡである、方法。
2. 前記細胞は、哺乳動物細胞である、請求項１に記載の方法。
3. 前記哺乳動物細胞は、ヒト細胞である、請求項２に記載の方法。
4. 前記ウイルスは、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）又は呼吸器ウイルスである、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
5. 前記ウイルス分子は、ＨＢＶ分子である、請求項４に記載の方法。
6. 前記ＨＢＶ分子は、Ｓ抗原、Ｅ抗原、コア抗原、ＨＢＶ ＲＮＡ、又はＨＢＶ ＤＮＡである、請求項５に記載の方法。
7. 影響を受けた前記ウイルス分子は、呼吸器ウイルス分子である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
8. 前記呼吸器ウイルスは、コロナウイルスである、請求項７に記載の方法。
9. 前記感染細胞と前記有効量の前記オリゴヌクレオチド阻害剤との前記接触は、前記ウイルス分子のアッセイによって決定される際、前記感染細胞により産生される前記ウイルス分子の量を少なくとも２０％低減する、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
10. 前記感染細胞と前記有効量の前記オリゴヌクレオチド阻害剤との前記接触は、前記ウイルス分子のアッセイによって決定される際、前記感染細胞により産生される前記ウイルス分子の量を少なくとも３０％低減する、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
11. 前記感染細胞と前記有効量の前記オリゴヌクレオチド阻害剤との前記接触は、前記ウイルス分子のアッセイによって決定される際、前記感染細胞により産生される前記ウイルス分子の量を少なくとも４０％低減する、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
12. 前記感染細胞と前記有効量の前記オリゴヌクレオチド阻害剤との前記接触は、前記ウイルス分子のアッセイによって決定される際、前記感染細胞により産生される前記ウイルス分子の量を少なくとも５０％低減する、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
13. 前記ウイルス分子の前記アッセイは、ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶコア抗原、ＨＢＶ ＲＮＡ、又はＨＢＶ ＤＮＡを定量的に評価するＨＢＶアッセイである、請求項９～１２のいずれか一項に記載の方法。
14. 前記ウイルス分子の前記アッセイは、前記呼吸器ウイルスの前記ウイルス分子又は前記感染細胞に対する前記呼吸器ウイルスの影響を定量的に評価する呼吸器ウイルスアッセイである、請求項９～１２のいずれか一項に記載の方法。
15. 前記呼吸器ウイルスアッセイは、コロナウイルスアッセイである、請求項１４に記載の方法。
16. 前記オリゴヌクレオチド阻害剤は、前記ウイルス分子の前記アッセイによって決定される際、１００ｎＭ未満のＥＣ₅₀値を有する、請求項９～１５のいずれか一項に記載の方法。
17. ウイルス性感染症を治療する方法であって、
    治療有効量のオリゴヌクレオチド阻害剤を、前記オリゴヌクレオチド阻害剤を必要とする対象に投与することであって、前記オリゴヌクレオチド阻害剤は、細胞宿主因子を標的とすることによって、前記対象の感染細胞による前記細胞宿主因子の産生を低減する、ことを含み、
    前記感染細胞は、ＧＲＰ７８／ＢＩＰ ＲＮＡ、ＧＲＰ７８／ＢＩＰタンパク質、ＳＲＳＦ１ ＲＮＡ、ＳＲＳＦ１タンパク質、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１ ＲＮＡ、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１タンパク質、ＲＰＬＰ１ ＲＮＡ、ＲＰＬＰ１タンパク質、ＲＰＬＰ２ ＲＮＡ、及びＲＰＬＰ２タンパク質から選択される標的ＲＮＡ又は標的タンパク質である、少なくとも１つの細胞宿主因子を産生する、方法。
18. 前記ウイルスは、ＨＢＶである、請求項１７に記載の方法。
19. 前記ウイルスは、呼吸器ウイルスである、請求項１７に記載の方法。
20. 前記呼吸器ウイルスは、コロナウイルスである、請求項１９に記載の方法。
21. 前記対象は、哺乳動物である、請求項１７～２０のいずれか一項に記載の方法。
22. 前記対象は、ヒトである、請求項２１に記載の方法。
23. 前記オリゴヌクレオチド阻害剤は、前記感染細胞により産生されるウイルス分子のレベルを低減することによって、前記対象のウイルス負荷を低減する、請求項１７～２２のいずれか一項に記載の方法。
24. 前記オリゴヌクレオチド阻害剤は、前記ウイルス分子のアッセイによって決定される際、１００ｎＭ未満のＥＣ₅₀値を有する、請求項２３に記載の方法。
25. 前記ＥＣ₅₀値は、５０ｎＭ未満である、請求項２４に記載の方法。
26. 前記ＥＣ₅₀値は、３０ｎＭ未満である、請求項２４に記載の方法。
27. 前記ＥＣ₅₀値は、１０ｎＭ未満である、請求項２４に記載の方法。
28. 前記ウイルス分子の前記アッセイは、ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶコア抗原、ＨＢＶ ＲＮＡ、又はＨＢＶ ＤＮＡを定量的に評価する、請求項２４～２７のいずれか一項に記載の方法。
29. 前記ウイルス分子の前記アッセイは、前記呼吸器ウイルスの分子又は前記細胞に対する前記ウイルス性感染症の影響を定量的に評価する、呼吸器ウイルスのためのアッセイである、請求項２４～２７のいずれか一項に記載の方法。
30. 前記呼吸器ウイルスの前記アッセイは、コロナウイルスアッセイである、請求項２９に記載の方法。
31. 有効量の第２の治療用分子を、前記オリゴヌクレオチド阻害剤と組み合わせて前記対象に投与することを更に含む、請求項１７～３０のいずれか一項に記載の方法。
32. 前記第２の治療用分子は、第２のオリゴヌクレオチド阻害剤、ヌクレオシド、ヌクレオチド、ヌクレオチドプロドラッグ、インターフェロン、カプシド集合モジュレータ、プロテアーゼ阻害剤、又はそれらの組み合わせを含む、請求項３１に記載の方法。
33. 前記第２の治療用分子は、第２のオリゴヌクレオチド阻害剤を含む、請求項３２に記載の方法。
34. 前記第２のオリゴヌクレオチド阻害剤は、第１のオリゴヌクレオチド阻害剤によって標的化された前記細胞宿主因子と同じ又は異なる少なくとも１つの細胞宿主因子を標的とする、請求項３３に記載の方法。
35. 前記オリゴヌクレオチド阻害剤は、前記ＧＲＰ７８／ＢＩＰ ＲＮＡ及び前記ＧＲＰ７８／ＢＩＰタンパク質のうちの少なくとも１つを標的とする、請求項１～３４のいずれか一項に記載の方法。
36. 前記オリゴヌクレオチド阻害剤は、前記ＳＲＳＦ１ ＲＮＡ及び前記ＳＲＳＦ１タンパク質のうちの少なくとも１つを標的とする、請求項１～３４のいずれか一項に記載の方法。
37. 前記オリゴヌクレオチド阻害剤は、前記ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１ ＲＮＡ及び前記ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１タンパク質のうちの少なくとも１つを標的とする、請求項１～３４のいずれか一項に記載の方法。
38. 前記オリゴヌクレオチド阻害剤は、前記ＲＰＬＰ１ ＲＮＡ及び前記ＲＰＬＰ１タンパク質のうちの少なくとも１つを標的とする、請求項１～３４のいずれか一項に記載の方法。
39. 前記オリゴヌクレオチド阻害剤は、前記ＲＰＬＰ２ ＲＮＡ及び前記ＲＰＬＰ２タンパク質のうちの少なくとも１つを標的とする、請求項１～３４のいずれか一項に記載の方法。
40. 前記オリゴヌクレオチド阻害剤は、前記標的ＲＮＡを特異的に認識するアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、前記標的ＲＮＡは、ｍＲＮＡを含む、請求項１～３９のいずれか一項に記載の方法。
41. 前記オリゴヌクレオチド阻害剤は、前記標的ＲＮＡに特異的にハイブリダイズするサイレンシングＲＮＡであり、前記標的ＲＮＡは、ｍＲＮＡを含む、請求項１～３９のいずれか一項に記載の方法。
42. 前記オリゴヌクレオチド阻害剤は、配列番号１～５２のいずれか１つの配列によって表されるｓｉＲＮＡである、請求項１～４１のいずれか一項に記載の方法。
43. 前記オリゴヌクレオチド阻害剤は、前記標的ＲＮＡ又は前記標的タンパク質に対する前記オリゴヌクレオチド阻害剤の結合を増強する１つ以上の化学修飾ヌクレオチドを含む、請求項１～４１のいずれか一項に記載の方法。
44. 対象におけるウイルス性感染症を治療するための医薬組成物であって、
    薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、又はそれらの組み合わせと、
    ＧＲＰ７８／ＢＩＰ ＲＮＡ、ＧＲＰ７８／ＢＩＰタンパク質、ＳＲＳＦ１ ＲＮＡ、ＳＲＳＦ１タンパク質、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１ ＲＮＡ、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１タンパク質、ＲＰＬＰ１ ＲＮＡ、ＲＰＬＰ１タンパク質、ＲＰＬＰ２ ＲＮＡ、及びＲＰＬＰ２タンパク質から選択される標的ＲＮＡ又は標的タンパク質のうちの少なくとも１つである細胞宿主因子を標的とする、治療有効量のオリゴヌクレオチド阻害剤と、を含む、医薬組成物。
45. 前記ウイルス性感染症は、ＨＢＶに起因する、請求項４４に記載の医薬組成物。
46. 前記ウイルス性感染症は、呼吸器ウイルスに起因する、請求項４４に記載の医薬組成物。
47. 前記呼吸器ウイルスは、コロナウイルスである、請求項４６に記載の医薬組成物。
48. 前記オリゴヌクレオチド阻害剤は、前記医薬組成物が投与される対象の感染細胞による前記ＧＲＰ７８／ＢＩＰ ＲＮＡ及び前記ＧＲＰ７８／ＢＩＰタンパク質のうちの少なくとも１つの産生を低減する、請求項４４～４７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
49. 前記オリゴヌクレオチド阻害剤は、前記医薬組成物が投与される対象の感染細胞による前記ＳＲＳＦ１ ＲＮＡ及び前記ＳＲＳＦ１タンパク質のうちの少なくとも１つの産生を低減する、請求項４４～４７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
50. 前記オリゴヌクレオチド阻害剤は、前記医薬組成物が投与される対象の感染細胞による前記ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１ ＲＮＡ及び前記ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１タンパク質のうちの少なくとも１つの産生を低減する、請求項４４～４７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
51. 前記オリゴヌクレオチド阻害剤は、前記医薬組成物が投与される対象の感染細胞による前記ＲＰＬＰ１ ＲＮＡ及び前記ＲＰＬＰ１タンパク質のうちの少なくとも１つの産生を低減する、請求項４４～４７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
52. 前記オリゴヌクレオチド阻害剤は、前記医薬組成物が投与される前記対象の感染細胞による前記ＲＰＬＰ２ ＲＮＡ及び前記ＲＰＬＰ２タンパク質のうちの少なくとも１つの産生を低減する、請求項４４～４７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
53. 前記オリゴヌクレオチド阻害剤は、前記標的ＲＮＡを認識するアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、前記標的ＲＮＡは、ｍＲＮＡを含む、請求項４４～５２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
54. 前記オリゴヌクレオチド阻害剤は、前記標的ＲＮＡを認識するサイレンシングＲＮＡであり、前記標的ＲＮＡは、ｍＲＮＡを含む、請求項４４～５２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
55. 前記オリゴヌクレオチド阻害剤は、配列番号１～５２のいずれか１つの配列によって表されるｓｉＲＮＡである、請求項４４～５２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
56. 前記オリゴヌクレオチド阻害剤は、前記標的ＲＮＡ又は前記標的タンパク質に対する前記オリゴヌクレオチド阻害剤の結合を増強する１つ以上の化学修飾ヌクレオチドを含む、請求項４４～５５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
57. 前記オリゴヌクレオチド阻害剤は、前記オリゴヌクレオチド阻害剤のヌクレアーゼ分解を低減するように構成された修飾を含む、請求項４４～５６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
58. 前記医薬組成物は、非経口送達による対象への投与に好適な形態である、請求項４４～５７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
59. 前記非経口送達は、静脈内送達を含む、請求項５８に記載の医薬組成物。
60. 前記非経口送達は、皮下送達を含む、請求項５８に記載の医薬組成物。
61. 前記薬学的に許容される担体は、前記オリゴヌクレオチド阻害剤をカプセル化するリポソームを含む、請求項４４～６０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
62. 標的ＲＮＡにハイブリダイズするアンチセンス鎖を含む単離合成オリゴヌクレオチド阻害剤であって、
    前記標的ＲＮＡは、ＧＲＰ７８／ＢＩＰ ＲＮＡ、ＳＲＳＦ１ ＲＮＡ、ＨＮＲＮＰＡ２Ｂ１ ＲＮＡ、ＲＰＬＰ１ ＲＮＡ、ＲＰＬＰ２ ＲＮＡから選択され、
    前記アンチセンス鎖は、
    前記ＧＲＰ７８／ＢＩＰ ＲＮＡの核酸塩基１３７９～１３９７、
    前記ＳＲＳＦ１ ＲＮＡの核酸塩基５１～６９、
    前記ＳＲＳＦ１ ＲＮＡの核酸塩基５２３～５４１、
    前記ＲＰＬＰ１ ＲＮＡの核酸塩基２８６～３０５、
    前記ＲＰＬＰ１ ＲＮＡの核酸塩基８１～１０１、
    前記ＲＰＬＰ１ＲＮＡの核酸塩基２８３～３０３、
    前記ＲＰＬＰ１ ＲＮＡの核酸塩基３３１～３５１、
    前記ＲＰＬＰ１ ＲＮＡの核酸塩基－１～２０、
    前記ＲＰＬＰ１ ＲＮＡの核酸塩基９～２９、
    前記ＲＰＬＰ１ ＲＮＡの核酸塩基７４～９４、
    前記ＲＰＬＰ１ ＲＮＡの核酸塩基１２５～１４５、
    前記ＲＰＬＰ１ ＲＮＡの核酸塩基２７２～２９２、
    前記ＲＰＬＰ１ ＲＮＡの核酸塩基３２９～３４９、
    前記ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基１３５～１５５、
    前記ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基３２７～３４７、
    前記ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基３３６～３５６、
    前記ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基１３６～１５６、
    前記ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基１９０～２１０、
    前記ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基２７３～２９３、
    前記ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基３０２～３２２、
    前記ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基３２５～３４５、
    前記ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基５２～７２、
    前記ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基１３２～１５３、
    前記ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基１４２～１６２、
    前記ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基３３３～３５１、
    前記ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基５６～７４、
    前記ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基１４７～１６５、
    前記ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基１０８～１２６、及び
    前記ＲＰＬＰ２ ＲＮＡの核酸塩基１２０～１３８から選択される前記標的ＲＮＡの１５～２１長セクションに対して高い特異性によりハイブリダイズすることができる任意の１５～２１ｍｅｒアンチセンス鎖であり、
    前記核酸塩基は、図１Ａに示すように、それぞれ対応する標的ＲＮＡに示されるように番号付けされた位置に従って番号付けされ、
    ハイブリダイゼーションの前記特異性は、５０℃以上の計算された融解温度（Ｔｍ）によって表される、単離合成オリゴヌクレオチド阻害剤。
63. 前記アンチセンス鎖は、配列番号２１～４２、４４～４５、４７～５０、及び５２のうちのいずれか１つのアンチセンス鎖内の任意の１５～２１ｍｅｒアンチセンス鎖である、請求項６２に記載の単離合成オリゴヌクレオチド阻害剤。
64. 前記アンチセンス鎖は、配列番号２１～４２、４４～５０、及び５２のうちのいずれか１つのアンチセンス鎖内の任意の１７～２１ｍｅｒアンチセンス鎖である、請求項６２に記載の単離合成オリゴヌクレオチド阻害剤。
65. 対象におけるウイルス性感染症を治療するための医薬組成物であって、
    薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、又はそれらの組み合わせと、
    請求項６２～６４のいずれか一項に記載の治療有効量の単離合成オリゴヌクレオチド阻害剤と、を含む、医薬組成物。

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