CN110393791B

CN110393791B - hnRNPA2B1的抗感染作用及其应用

Info

Publication number: CN110393791B
Application number: CN201910645735.2A
Authority: CN
Inventors: 曹雪涛; 王蕾; 温明岳
Original assignee: Institute of Basic Medical Sciences of CAMS
Current assignee: Institute of Basic Medical Sciences of CAMS
Priority date: 2019-07-17
Filing date: 2019-07-17
Publication date: 2021-07-06
Anticipated expiration: 2039-07-17
Also published as: CN110393791A

Abstract

本公开涉及异质性细胞核核糖蛋白A2B1(hnRNPA2B1)的抗感染作用及其应用。具体而言，本公开涉及hnRNPA2B1、编码该蛋白质的核酸分子、其促进剂或其抑制剂在制备用于预防和/或治疗感染性疾病和/或与感染相关的疾病和/或征状的产品中的用途，其相应的药物组合物或药盒。本公开可用于预防和抑制感染(如病毒感染)，诊断和治疗自身核酸相关的自身免疫性疾病，具有广泛的应用前景。

Description

hnRNPA2B1的抗感染作用及其应用

技术领域

本公开涉及生物技术和医学领域。具体而言，本公开涉及核蛋白hnRNPA2B1(即异质性细胞核核糖蛋白A2B1，heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2B1)在预防或治疗与感染相关的疾病或征状、控制感染导致损伤中的效应、作用机制、实施方法和用途。

背景技术

感染，尤其是病毒感染，是一种危害极大的临床常见疾病。人们最初对于机体抗病毒感染的分子机制并不完全了解，随着一类细胞因子——干扰素的发现，机体针对病毒感染所产生的天然免疫细胞和继发的获得性免疫细胞和及其作用的分子生物学基础逐步得到了认识。

干扰素(interferon，IFN)是一类具有强大抗病毒功能的细胞因子家族的总称。1957年，Alick Isaacs和Jean Lindenmann教授在研究流感病毒感染鸡胚的过程中发现了一种成分，这种成分能显著地阻止流感病毒的增殖，他们将这种成分命名为干扰素(Isaacs，A.等，Proc R Soc Lond B Biol Sci.1957；927:258-267.)。此后，干扰素家族的细胞因子被陆续发现具有十分广谱且有效的抗病毒效应。目前，干扰素已被广泛应用于临床上防御病毒感染及治疗病毒感染引起的各种疾病。

感染机体的不同病原体中一般含有相似的结构或分子特征，或为病毒相对保守的序列特征，或为病原微生物所共有的组成型表达分子等。这些相似的结构、特征被统称为病原体相关分子模式(Pathogen associated molecular patterns，PAMPs)；而与之相互识别的细胞表面受体则被称为模式识别受体(Pattern recognition receptors，PRRs)。例如：特异性识别RNA病毒的PPR有RNA螺旋酶视黄酸诱导基因I(RNAhelicases retinoic acid-inducible gene I，RIG-I，也叫DDX58)和黑素瘤分化相关基因5(melanomadifferentiation-associated gene 5，MDA5，也叫IFIH1)等，它们主要识别感染到细胞内的RNA病毒中富含AT元件的部分。

通常，一旦DNA病毒进入宿主细胞，它们就会在宿主细胞核内释放并复制它们的基因组DNA。然而，细胞核中病原体来源的DNA识别机制仍然未知。迄今为止，只有一种蛋白质γ-干扰素诱导蛋白16(gamma-interferon-inducible protein 16,IFI16)被认为可以识别细胞核内的病毒DNA并激活IFN-I的产生和炎症反应。

已有研究发现了许多能够识别病毒DNA并诱导IFN-α/β产生的蛋白质，如RNA聚合酶III、IFI16、DAI、LRRFIP1、LSm14A、MRE11、DNA-PK、HMGBs、DDX41和环状GMP-AMP(cGAMP)合酶(cGAS)(Goubau，D.等；Immunity，2013；38,855-869.)。这些PPR识别病毒后，通过激发宿主内的免疫应答信号通路，诱导产生大量的I型干扰素，从而迅速的建立起机体抗感染的第一道防线，抵御病原体的感染。然而，只有细胞质内的cGAS和DNA-PK经小鼠体内实验证实为DNA识别受体。还有几种蛋白质参与DNA病毒诱导的炎症反应，包括AIM2、IFI16、Rad50和Sox2。因此，关于核内DNA识别的研究亟待深入，以全面且清晰地理解抗DNA病毒的天然免疫应答，尤其是寻找将核内外源DNA识别与核外天然免疫信号传导激活关联起来的机制。

异质性细胞核核糖蛋白A2B1(heterogeneous nuclear ribonucleoproteinA2B1,hnRNP-A2B1)属于hnRNP家族，其包含至少20种表达量丰富蛋白质和其他不太丰富的蛋白质，也属于RNA结合蛋白(RNA-binding proteins,RBPs)。这些分子参与mRNA剪接、转运和其他mRNA和miRNA相关的过程。hnRNP-A2B1在N末端含有两个串联的RNA/DNA识别基序(RNA/DNA-recognition motifs,RRMs)，表明其具有DNA结合能力。目前研究发现了hnRNPA2B1在很多生命活动中的重要功能。例如：hnRNPA2B1能够直接与miRNA初级体(pri-miRNA)相结合，与miRNA微处理蛋白复合物之一DGCR8一起促使pri-miRNA成熟体的加工等。此外，hnRNPA2B1与多种肿瘤的疾病进展相关，包括肺癌(Fielding P.等，Clin CancerRes.1999Dec；5(12):4048-52)、乳腺癌(Cui H.等，Breast Cancer Res Treat.2001Apr；66(3):217-24.)、肝细胞癌(Zhou J.等，BMC Cancer.2010Jul 6；10:356.)等。然而到目前为止，hnRNPA2B1蛋白在免疫应答及抗病毒感染中的作用尚不明确。

综上所述，本领域迫切需要开发出一种可识别细胞核内病毒DNA、启动干扰素产生、增强抗病毒效应、有效抵抗病毒感染、控制病毒感染引起损伤的免疫学活性物质。

发明内容

本公开的主要目的之一在于提供hnRNPA2B1、编码该蛋白质的核酸分子、其促进剂或其抑制剂在抗感染中的用途，并进一步提供它们在治疗或预防感染性疾病以及相关的疾病或征状中的用途。本公开的药物、药物组合物或试剂盒可用于有效抵抗感染、控制感染性疾病的发生。

本公开的一些方面中，提供了异质性细胞核核糖蛋白A2B1(hnRNPA2B1)、编码该蛋白质的核酸分子、其促进剂或其抑制剂在制备用于预防和/或治疗感染性疾病和/或与感染相关的疾病和/或征状的产品中的用途。

本公开的一些方面中，还提供了一种预防和/或治疗感染性疾病和/或与感染相关的疾病和/或征状的方法，所述方法包括给予有需要的对象预防和/或治疗有效量的异质性细胞核核糖蛋白A2B1(hnRNPA2B1)、编码该蛋白质的核酸分子、其促进剂或其抑制剂。

本公开的一些方面中，还提供了异质性细胞核核糖蛋白A2B1(hnRNPA2B1)、编码该蛋白质的核酸分子、其促进剂或其抑制剂，其用于预防和/或治疗感染性疾病和/或与感染相关的疾病和/或征状。

本公开的一些方面中，提供了异质性细胞核核糖蛋白A2B1(hnRNPA2B1)、编码该蛋白质的核酸分子、其促进剂在提高干扰素(如I型干扰素，例如IFN-α和/或IFN-β)水平中的用途。在一些实施方式中，hnRNPA2B1、编码该蛋白质的核酸分子或其促进剂用于促进免疫反应以预防和/或治疗感染。

本公开的一些方面中，提供了异质性细胞核核糖蛋白A2B1(hnRNPA2B1)的抑制剂或编码该蛋白质的核酸分子的抑制剂在降低干扰素(如I型干扰素，例如IFN-α和/或IFN-β)水平中的用途。在本公开的一些方面中，hnRNPA2B1的抑制剂或编码hnRNPA2B1蛋白的核酸分子的抑制剂用于抑制过激的免疫反应。在本公开的一些方面中，hnRNPA2B1或hnRNPA2B1编码序列的抑制剂抑制细胞抗病毒感染的能力，对病毒在细胞中的复制具有促进作用。

在一些实施方式中，所述hnRNPA2B1选自：

(a)具有SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的多肽；或

(b)与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列同源或具有序列相同性(例如80％以上同源或具有80％以上序列相同性，如80％、85％、90％、95％、98％、99％)，且具有抑制感染活性的蛋白质或多肽；或

(c)(a)或(b)的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸、且具有预防和/或治疗感染性疾病和/或与感染相关的疾病和/或征状的由(a)或(b)衍生的蛋白质或多肽。

在一些实施方式中，hnRNPA2B1是：天然纯化的蛋白、化学合成的产物、或使用重组技术从原核或真核宿主中产生。所述宿主选自：细菌、酵母、高等动物和哺乳动物细胞。优选为人hnRNPA2B1。

在一些实施方式中，hnRNPA2B1为SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的多肽。

在一些实施方式中，编码hnRNPA2B1的核酸分子选自：

(i)具有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的核酸分子；或

(ii)在严格条件下与(i)限定的核苷酸序列杂交的分子；

(iii)与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列同源或具有序列相同性(例如80％以上同源或具有80％以上序列相同性，如80％、85％、90％、95％、98％、99％)、且编码具有预防和/或治疗感染性疾病和/或与感染相关的疾病和/或征状的活性的蛋白质或多肽的核酸分子；

(iv)由(i)或(ii)或(iii)的核苷酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个核苷酸、且编码具有预防和/或治疗感染性疾病和/或与感染相关的疾病和/或征状的活性的蛋白质或多肽的核酸分子。

在一些实施方式中，编码hnRNPA2B1的核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO:1或3所示。

在一些实施方式中，促进剂选自：提高hnRNPA2B1蛋白水平或促进hnRNPA2B1功能的物质，例如hnRNPA2B1或hnRNPA2B1编码序列的过表达载体；外源性hnRNPA2B1；hnRNPA2B1编码序列的裸DNA；hnRNPA2B1编码序列的脂质体包裹DNA；能够在体内转化为hnRNPA2B1的hnRNPA2B1前体蛋白或偶联物或复合物。

在一些实施方式中，抑制剂选自：针对hnRNPA2B1或编码该蛋白质的核酸分子的抗体、siRNA(例如序列如SEQ ID NO:5-8中任一所示的siRNA)、miRNA、反义寡核苷酸、拮抗剂、阻断剂。

在一些实施方式中，所述感染为DNA参与和/或介导的感染。

在一些实施方式中，所述感染为病毒感染或细菌、真菌等有DNA参与的感染或其组合引起的感染，例如DNA病毒感染，如由选自下组的一种或多种病毒引起的感染：单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、腺病毒、痘病毒、小DNA病毒、腺相关病毒。

在一些实施方式中，所述与感染相关的疾病和/或征状为选自下组中的一种或多种：所述与感染相关的疾病和/或征状为选自下组中的一种或多种：感染引起的病理损伤；感染后干扰素等细胞因子产生不足或过量；内毒素性休克或死亡；器官的炎性损伤；多器官功能衰竭，例如所述器官选自：肝脏、脾脏、脑、肾、心脏、肺、胃、肠；病毒感染导致的慢性炎症性疾病(例如自身免疫性疾病如炎症性肠病、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、慢性肾炎、结核病、慢性胃肠道疾病)。优选的，所述病毒感染导致的慢性炎症性疾病和/或其征状包括：自身免疫性疾病如炎症性肠病、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、慢性肾炎、结核病、慢性胃肠道疾病。

在一些实施方式中，所述产品为药物组合物或药盒，例如其形式适于通过选自下组方式给予的药物组合物或药盒：口服、注射(例如直接裸DNA或蛋白质注射法、脂质体包裹DNA或蛋白质注射法)、金包被基因枪轰击法、繁殖缺陷细菌携带质粒DNA法、复制缺陷腺病毒携带目的DNA法或目的基因所编码蛋白质、电致孔、鼻腔给药、肺部给药、口服给药、透皮给药、瘤内给药。

在一些实施方式中，所述产品还包含用于预防和/或治疗感染性疾病和/或与感染相关的疾病和/或征状的其他物质，例如临床常用抗生素(包括β-内酰胺类(青霉素类和头孢菌素类)、氨基糖甙类、四环素类、氯霉素类、大环内脂类、抗真菌抗生素、抗结核类抗生素)的一种或多种。

在本公开的一些方面中，提供了一种产品(例如药物组合物或药盒)，其包含：

(A)治疗或预防有效量的本文的hnRNPA2B1、编码该蛋白质的核酸分子、其促进剂和/或其抑制剂；

(B)药学上或免疫学上可接受的载体或赋形剂；

(C)可任选地，一种或多种预防或治疗感染性疾病及其相关病症和/或征状的其它活性物质。

在一些实施方式中，所述产品中hnRNPA2B1或编码hnRNPA2B1的核酸分子、其促进剂或其抑制剂占所述产品总重量的0.001～99.9wt％。

在一些实施方式中，所述产品中hnRNPA2B1或编码hnRNPA2B1的核酸分子、其促进剂或其抑制剂占所述产品总重量的1～95wt％，优选为5～90wt％，更优选10～80wt％。余量为药学上可接受的载体以及其它添加剂等物质。

在一些实施方式中，在给予本公开的产品之前、同时或之后，给予调控抗病毒感染的其它活性物质。所述其它活性物质具有预防或治疗与病毒感染相关的疾病、感染导致的损伤、感染导致的慢性炎症性疾病和/或其征状的活性。所述病毒感染为选自下组中的一种或两种以上：单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、腺病毒、痘病毒。

在一些实施方式中，其它活性物质包括但不限于选自下组中的一种或多种：临床常用抗生素，包括β-内酰胺类(青霉素类和头孢菌素类)、氨基糖甙类、四环素类、氯霉素类、大环内脂类、抗真菌抗生素、抗结核类抗生素；临床常用抗病毒药物(三环胺类、焦磷酸类、蛋白酶抑制药、核苷类药物及干扰素、反义寡核苷酸类等)；临床常用免疫抑制剂(包括糖皮质激素、环磷酰胺、氯喹、环孢霉素A、雷公藤、中药制剂、抗TNF单克隆抗体)。

在本公开的一些方面中，提供了一种筛选通过促进hnRNPA2B1来抗感染的药物的方法，其包括：

(A)用候选物质处理被感染的细胞、组织或动物；

(B)检测所述细胞、组织或动物中hnRNPA2B1或编码该蛋白质的核酸分子的水平；以及

(C)若hnRNPA2B1或编码该蛋白质的核酸分子的水平高于候选物质处理前的水平或高于正常对照中的水平，则表明所述候选物质具有通过促进hnRNPA2B1来抗感染的作用。

本领域的技术人员可对前述的技术方案和技术特征进行任意组合而不脱离本公开的发明构思和保护范围。本公开的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

附图说明

下面结合附图对本公开作进一步说明，其中这些显示仅为了图示说明本公开的实施方案，而不是为了局限本公开的范围。

图1：HSV-1感染小鼠原代腹腔巨噬细胞细胞后，hnRNPA2B1直接识别结合HSV-1DNA，图为PCR之后核酸电泳检测HSV-1DNA。

图2：针对hnRNPA2B1的干扰RNA(siRNA)转染小鼠巨噬细胞，导致HSV-1感染后I型干扰素转录水平下降。图为荧光定量PCR检测IFN-α(Ifna4)、IFN-β(Ifnb1)mRNA水平(***，P<0.001；**，P<0.01)。UI：uninfected，未刺激组。

图3：针对hnRNPA2B1的干扰RNA(siRNA)转染小鼠巨噬细胞，导致HSV-1感染后IFN-β蛋白水平下降。图为ELISA分析(***，P<0.001)。UI：uninfected，未刺激组。

图4：针对hnRNPA2B1的干扰RNA(siRNA)转染人THP1细胞，导致HSV-1感染后I型干扰素转录水平下降。图为荧光定量PCR检测IFN-α(Ifna4)、IFN-β(Ifnb1)mRNA水平(***，P<0.001)。UI：uninfected，未刺激组。

图5：在小鼠巨噬细胞中过表达hnRNPA2B1，导致HSV-1感染后IFN-β蛋白水平分泌增强。图为ELISA分析(***，P<0.001)。

图6：野生型小鼠与髓系细胞特异性hnRNPA2B1基因敲除(Hnrnpa2b1cKO)小鼠腹腔感染7×10⁸噬斑形成单位(PFU)的HSV-1，6小时后通过ELISA检测血中IFN-β水平，hnRNP-A2B1基因敲除小鼠的血清IFN-β水平显著低于野生型小鼠(***，P<0.001)。

图7：野生型小鼠与髓系细胞特异性hnRNPA2B1基因敲除(Hnrnpa2b1cKO)小鼠腹腔感染7×10⁸噬斑形成单位(PFU)的HSV-1，4天后通过噬斑实验检测脑部病毒滴度，hnRNP-A2B1基因敲除小鼠的脑中病毒滴度显著高于野生型小鼠(***，P<0.001)。

图8：野生型小鼠与髓系细胞特异性hnRNPA2B1基因敲除(Hnrnpa2b1cKO)小鼠腹腔感染7×10⁸噬斑形成单位(PFU)的HSV-1，hnRNP-A2B1基因敲除小鼠的生存率显著降低(P<0.001)。

图9：敲除hnRNPA2B1的表达，导致AdV感染后I型干扰素转录水平下降。图为荧光定量PCR检测IFN-βmRNA水平(**，P<0.01)。UI：uninfected,未刺激组。

具体实施方式

本申请中通过大量的研究和动物模型试验，发现hnRNPA2B1在感染性疾病中，能有效抑制病毒感染、改善器官功能状态、提高患者的生存率。在此基础上完成了本公开。

本公开针对新型免疫调节分子hnRNPA2B1在抗感染方面的功能和作用进行了研究，并且验证了应用该分子对被感染动物的治疗和保护作用。实验证明：1)hnRNPA2B1可以在病毒感染后结合病毒DNA；2)干扰hnRNPA2B1表达抑制病毒感染后I型干扰素的产生；3)hnRNPA2B1敲除可以增加小鼠脑中HSV-1的感染，提高死亡率；4)hnRNPA2B1过表达可以促进病毒感染后I型干扰素的产生。这些实验结果提示hnRNPA2B1具备治疗DNA参与和/或介导的感染(例如病毒感染性，如HSV-1、AdV的感染等)疾病的应用前景。由此，本公开提供了将抗感染分子hnRNPA2B1应用于抑制感染，或用于感染性疾病的预防和治疗中的方法和策略，特别是用于控制病毒感染，如病毒感染所导致的肝脏损伤。

本文中提供的所有数值范围旨在清楚地包括落在范围端点之间的所有数值及它们之间的数值范围。可对本公开提到的特征或实施例提到的特征进行组合。本说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。

如本文所用，“含有”、“具有”或“包括”包括了“包含”、“主要由……构成”、“基本上由……构成”、和“由……构成”；“主要由……构成”、“基本上由……构成”和“由……构成”属于“含有”、“具有”或“包括”的下位概念。

hnRNPA2B1蛋白(多肽)

如本文所用，术语“hnRNPA2B1蛋白(多肽)”、“hnRNPA2B1”可互换使用，是指异质性细胞核核糖蛋白A2B1。本公开的hnRNPA2B1蛋白可为由SEQ ID NO:1的序列(人cDNA全长序列)或SEQ ID NO:3(小鼠CDS序列)所编码的蛋白质或这些蛋白质具有促进干扰素表达作用的同源序列(例如可通过本领域已知的数据库或比对软件获得hnRNPA2B1的同源序列)、变异体或修饰形式。例如，所述hnRNPA2B1蛋白可选自：(a)SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；或(b)在(a)限定的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有促进干扰素表达的活性的由(a)衍生的蛋白质或多肽。

本公开的蛋白质或多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等动物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。本公开中hnRNPA2B1蛋白或多肽优选由人hnRNPA2B1基因或其同源基因或家族基因编码。

本公开蛋白质或多肽的变异形式包括(但并不限于)：一个或多个(通常为1-50个，较佳地1-30个，更佳地1-20个，最佳地1-10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一个或数个(通常为20个以内，较佳地为10个以内，更佳地为5个以内)氨基酸。例如，在本领域中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，通常不会改变蛋白质或多肽的功能。又比如，在C末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸通常也不会改变蛋白质或多肽的功能，例如本公开的hnRNPA2B1蛋白质或多肽可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基而仍然具有抑制感染的活性。

可采用辐射或暴露于诱变剂下来产生随机诱变，也可通过定点诱变法或其它已知的分子生物学技术来获得上述(b)中的蛋白质或多肽。可利用编码所述蛋白质或多肽的编码序列来构建转基因动物，并观察该转基因动物对病毒感染是否具有抵抗作用或对病毒的抵抗性是否有所改良来筛选和鉴别所得蛋白质或多肽。

根据重组生产方案所用的宿主，本公开的蛋白质或多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。该术语还包括hnRNPA2B1蛋白的活性片段和活性衍生物。

该多肽的变异形式包括：同源序列、保守性变异体、等位变异体、天然突变体、诱导突变体、在高或低的严紧度条件下能与hnRNPA2B1蛋白编码序列杂交的序列所编码的蛋白、以及利用抗hnRNPA2B1蛋白的抗血清获得的多肽或蛋白。本公开还可使用其它多肽，如包含hnRNPA2B1蛋白或其片段的融合蛋白。除了几乎全长的多肽外，本公开还包括了hnRNPA2B1蛋白的可溶性片段。通常，该片段具有hnRNPA2B1蛋白序列的至少约10个连续氨基酸，通常至少约30个连续氨基酸，较佳地至少约50个连续氨基酸，更佳地至少约80个连续氨基酸，最佳地至少约100个连续氨基酸。

编码hnRNPA2B1的核酸分子

如本文所用，术语“hnRNPA2B1基因”、“hnRNPA2B1编码基因”、“hnRNPA2B1蛋白编码基因”或“编码hnRNPA2B1的核酸分子”可互换使用，均是指一种编码本公开所述的hnRNPA2B1蛋白或多肽的核苷酸序列，其可为例如SEQ ID NO:1(人CDS)序列、SEQ ID NO:3(小鼠CDS)序列所示的核苷酸序列、在严格条件下与这些序列杂交的分子、或与上述分子高度同源的家族基因分子，所述基因的表达对干扰素的产生和影响具有一定的促进作用。hnRNPA2B1基因在人与小鼠中高度保守。人的Gene ID是3181，鼠的Gene ID是53379。

本公开的hnRNPA2B1基因可选自：(i)SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3；或(ii)在严格条件下与(i)限定的序列杂交且具有促进干扰素产生的分子。

如本文所用，术语“严格条件”是指：(1)在较低离子强度和较高温度下的杂交和洗脱，如0.2×SSC，0.1％SDS，60℃；或(2)杂交时加有变性剂，如50％(v/v)甲酰胺，0.1％小牛血清/0.1％Ficoll，42℃等；或(3)仅在两条序列之间的相同性至少在50％，优选55％以上、60％以上、65％以上、70％以上、75％以上、80％以上、85％以上或90％以上，更优选是95％以上时才发生杂交。例如，所述序列可为(a)中所限定序列的互补序列。

本公开的hnRNPA2B1基因核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据本公开所公开的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次PCR扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。

应理解，本公开的hnRNPA2B1基因优选获自人，获自其它动物的与人hnRNPA2B1基因高度同源(如具有50％以上，优选55％以上、60％以上、65％以上、70％以上、75％以上、80％以上，更优选85％以上如85％、90％、95％、98％甚至99％或以上的序列相同性)的其它基因也在本公开优选考虑的等同范围之内。比对序列相同性的方法和工具也是本领域周知的，如BLAST。

hnRNPA2B1或hnRNPA2B1编码序列的促进剂和抑制剂

本公开中还涉及hnRNPA2B1或hnRNPA2B1编码序列的“促进剂”。术语“促进剂”或“hnRNPA2B1或其编码序列的促进剂”可互换使用，是指可提高hnRNPA2B1或其编码核酸分子的水平或活性的物质。可用于本公开中的促进剂包括但不限于：hnRNPA2B1表达载体、外源性hnRNPA2B1、hnRNPA2B1或其编码序列的裸DNA、hnRNPA2B1或其编码序列的脂质体包裹DNA、hnRNPA2B1蛋白。

本公开的hnRNPA2B1或hnRNPA2B1编码序列或其促进剂可抑制病毒感染，从而可进一步用于预防或治疗与病毒感染相关的疾病、和/或病毒感染引发的相关征状，以及感染导致的慢性炎症性疾病、和/或其征状。

本公开中还涉及hnRNPA2B1或hnRNPA2B1编码序列的“抑制剂”。术语“抑制剂”或“hnRNPA2B1或其编码核酸分子的抑制剂”可互换使用，是指可降低hnRNPA2B1或其编码核酸分子的水平或活性的物质。可用于本公开中的抑制剂包括但不限于：针对hnRNPA2B1或编码该蛋白质的核酸分子的抗体、siRNA(例如序列如SEQ ID NO:5-8中任一所示的siRNA)、miRNA、反义寡核苷酸、拮抗剂、阻断剂。

本公开的抑制剂可抑制过激的抗感染反应(如干扰素产生)，从而可进一步用于预防或治疗与感染相关的疾病和/或相关征状，例如感染导致的慢性炎症性疾病(例如自身免疫性疾病如炎症性肠病、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、慢性肾炎、结核病、慢性胃肠道疾病)。

载体、宿主及转基因动物

本公开还涉及包含hnRNPA2B1基因的载体，以及用该载体经基因工程产生的宿主细胞，以及通过转基因获得高表达hnRNPA2B1的转基因动物。

通过常规的重组DNA技术(Science，1984；224：1431)，可利用本公开的编码序列可用来表达或生产重组的hnRNPA2B1蛋白。一般来说有以下步骤：

(1)用本公开的编码hnRNPA2B1蛋白的多核苷酸(或变异体)，或用含有该多核苷酸的重组表达载体转化或转导合适的宿主细胞；

(2)在合适的培养基中培养的宿主细胞；

(3)从培养基或细胞中分离、纯化蛋白质或多肽。

本公开中，术语“载体”与“重组表达载体”可互换使用，指本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、动物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒或其它载体。总之，只要能在宿主体内复制和稳定，任何质粒和载体都可以用。表达载体的一个重要特征是通常含有复制起点、启动子、标记基因和翻译控制元件。

本领域的技术人员熟知的方法能用于构建含hnRNPA2B1编码序列和合适的转录/翻译控制信号的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等。所述的DNA序列可有效连接到表达载体中的适当启动子上，以指导mRNA合成。表达载体还包括翻译起始用的核糖体结合位点和转录终止子。本公开中优选使用pcDNA3.1载体表达系统。

此外，表达载体优选地包含一个或多个选择性标记基因，以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状，如真核细胞培养用的二氢叶酸还原酶、新霉素抗性以及绿色荧光蛋白(GFP)，或用于大肠杆菌的四环素或氨苄青霉素抗性。

包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体，可以用于转化适当的宿主细胞，以使其能够表达蛋白质或多肽。宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如动物细胞。代表性例子有：大肠杆菌，链霉菌属、农杆菌；真菌细胞如酵母；动物细胞等。在本公开中，优选采用大肠杆菌细菌细胞、人的肝脏细胞作为宿主细胞。

本公开的多核苷酸在高等真核细胞中表达时，如果在载体中插入增强子序列时将会使转录得到增强。增强子是DNA的顺式作用因子，通常大约有10到300个碱基对，作用于启动子以增强基因的转录。本领域一般技术人员都清楚如何选择适当的载体、启动子、增强子和宿主细胞。

本公开中术语“转基因动物”、或“转化动物”可互换使用，均指通过常规转基因的方法获得的转入本公开hnRNPA2B1基因并稳定高表达hnRNPA2B1蛋白或多肽的细胞、器官、组织或个体。

在上面的方法中的重组多肽可在细胞内或在细胞膜上表达或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于：常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。

产品

本公开还提供了一种产品，其可为例如药物、药物组合物或试剂盒/药盒，其中含有有效量的本公开的hnRNPA2B1或编码hnRNPA2B1的核酸分子、其促进剂或其抑制剂，以及药学上或免疫学上可接受的载体。如本文所用，术语“活性物质”或“本公开的活性物质”可互换使用，是指hnRNPA2B1或hnRNPA2B1编码序列、其促进剂或其抑制剂。

在较佳的实施方案中，所述产品可用于预防或治疗与病毒感染相关的疾病、病毒感染导致的慢性炎症性疾病、和/或其征状；例如，本公开的药物组合物可用于预防或治疗与现有技术中已知可治疗或预防病毒感染性疾病，例如病毒感染引起的组织损伤；器官的炎性损伤；多器官功能衰竭。

如本文所用，术语“含有”或“包括”包括了“包含”、“基本上由……构成”、和“由……构成”。如本文所用，术语“药学上可接受的”成分是适用于人和/或动物而无过度不良反应(如毒性、刺激和变态反应)的，即有合理的效益/风险比的物质。如本文所用，术语“有效量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。

如本文所用，术语“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。该术语指这样一些药剂载体：它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的，在《雷明顿药物科学》(Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack Pub.Co.，N.J.1991)中可找到关于药学上可接受的赋形剂的充分讨论。

在组合物中药学上可接受的载体可含有液体，如水、盐水、甘油和乙醇。另外，这些载体中还可能存在辅助性的物质，如填充剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、泡腾剂、润湿剂或乳化剂、矫味剂、pH缓冲物质等。通常，可将这些物质配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体介质中，其中pH通常约为5-8，较佳地，pH约为6-8。

本公开的产品中的活性物质占组合物总重量的0.001～99.9wt％；优选为组合物总重量的1～95wt％，较优选为5～90wt％，更优选10～80wt％。余量为药学上可接受的载体以及其它添加剂等物质。

如本文所用，术语“单位剂型”是指为了服用方便，将本公开的产品制备成单次服用所需的剂型，包括但不限于各种固体剂(如片剂)、液体剂、胶囊剂、缓释剂。

在本公开的另一优选实施方式中，所述产品为单位剂型或多剂型，且其中活性物质的含量为0.01～2000mg/剂，优选0.1～1500mg/剂，更优选1～1000mg/剂。在本公开的另一个优选例中，每天施用1～6剂本公开的组合物，优选施用1～3剂；最优选的，每天服用的剂量为1剂。

应理解，所用hnRNPA2B1蛋白或其编码序列等活性物质的有效剂量可随待施用或治疗的对象的严重程度而变化。具体情况根据对象的个体情况(例如对象体重、年龄、身体状况、所需达到的效果)来决定，这在熟练医师可以判断的范围内。

本公开的产品可以为固态(如颗粒剂、片剂、冻干粉、栓剂、胶囊、舌下含片)或液态(如口服液)或其它合适的形状。给药途径可采用：(1)直接裸DNA或者蛋白质注射法；(2)将hnRNPA2B1的cDNA、mRNA和蛋白质与转铁蛋白/多聚L-赖氨酸复合物连接，以增强其生物效应；(3)cDNA、mRNA和蛋白质与带正电荷的脂类形成复合物，以克服磷酸骨架负电荷所致的穿越细胞膜的困难；(4)用脂质体包裹cDNA、mRNA和蛋白质后介导进入细胞，既有利于大分子的顺利进入又免受细胞外各种酶的水解作用；(5)cDNA、mRNA和蛋白质与胆固醇结合使其胞浆保持时间增加10倍；(6)用免疫脂质体转运cDNA、mRNA和蛋白质可使其特异性转运至靶组织和靶细胞；(7)将cDNA、mRNA和蛋白质体外转染给转载细胞(如成纤维细胞)也可较好地将HNRNPA2B1相关药物载入靶细胞内；(8)电打孔(electroporation)，即借助于电流将cDNA、mRNA和蛋白质导入靶细胞。

此外，本公开的产品中还可含有用于改善和治疗病毒感染性疾病的其它活性物质，所述的其它活性物质选自下组：临床常用抗生素，包括β-内酰胺类(青霉素类和头孢菌素类)、氨基糖甙类、四环素类、氯霉素类、大环内脂类、抗真菌抗生素、抗结核类抗生素中的一种或多种。

本公开的hnRNPA2B1相关的核苷酸和蛋白质药物相互间可以联合应用，还可以与其它药物和治疗手段联合，用于细菌性感染疾病的预防和治疗。

实施例

下面结合具体实施例，进一步阐述本公开。应理解，这些实施例仅用于说明本公开而不用于限制本公开的范围。本领域技术人员可对本公开做出适当的修改、变动，这些修改和变动都在本公开的范围之内。

下列实施例中未注明具体条件的实验方法，可采用本领域中的常规方法，例如参考《分子克隆实验指南》(第三版，纽约，冷泉港实验室出版社，New York：Cold SpringHarbor Laboratory Press，1989)或按照供应商所建议的条件。DNA的测序方法为本领域常规的方法，也可由商业公司提供测试。

除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本公开方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

实施例1：hnRNPA2B1直接识别核内病原体来源的DNA

获取小鼠原代腹腔巨噬细胞：用C57BL/6小鼠(6-8周龄，雌性，购自上海必凯实验动物有限公司)，腹腔注射2ml的3％巯基乙酸盐(购自Sigma-Aldrich公司)溶液一次，三天后，颈椎脱臼法处死小鼠，使用无血清培养基冲洗腹腔，吸出后离心获得细胞。

原代腹腔巨噬细胞细胞用DMEM培养基培养，在HSV-1(F株，购自ATCC)感染2小时后，分离核蛋白并通过抗hnRNPA2B1抗体(购自Santa Cruz)或对照抗体(IgG，购自SantaCruz)进行免疫沉淀，通过PCR检测HSV-1DNA。

hnRNPA2B1结合HSV-1DNA的情况如图1所示。

结果显示：感染2小时后通过抗hnRNPA2B1抗体沉淀下来的hnRNPA2B1蛋白结合有HSV-1DNA。

该结果表明：hnRNPA2B1在感染期间结合HSV-1DNA。

实施例2：干扰hnRNPA2B1的表达对HSV-1感染诱导的I型干扰素具有抑制作用

原代腹腔巨噬细胞细胞用DMEM培养基培养，人THP1细胞(购自ATCC)用1640培养基培养。用针对hnRNPA2B1的小干扰RNA(hnRNPA2B1siRNA)及模拟物对照(对照siRNA)转染细胞(转染试剂INTERFERin购自Polyplus公司)。

针对hnRNPA2B1的小干扰RNA(hnRNPA2B1siRNA)及模拟物对照(对照siRNA)购自Genephama公司。小鼠hnRNPA2B1siRNA的序列如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示，人hnRNPA2B1siRNA的序列如SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示，对照siRNA的序列如SEQ IDNO：9和SEQ ID NO：10所示，合成时在3'增加2个dT使序列更加稳定。具体序列如下：

hnRNPA2B1siRNA序列：

小鼠hnRNPAB1siRNA：

5'-GAGGAAAUUAUGGAAGUGGTT-3'(顺义，SEQ ID NO:5)；

5'-CCACUUCCAUAAUUUCCUCCT-3'(反义，SEQ ID NO:6)。

人hnRNPAB1siRNA：

5'-CUUUGGUGGUAGCAGGAACTT-3'(顺义，SEQ ID NO:7)；

5'-GUUCCUGCUACCACCAAAGTT-3'(反义，SEQ ID NO:8)。”

对照siRNA序列：

5'-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3'(顺义，SEQ ID NO:9)；

5'-ACGUGACACGUUCGGAGAATT-3′(反义，SEQ ID NO:10)。

转染48小时后的小鼠腹腔巨噬细胞(2×10⁵个细胞/孔)及人THP1细胞(1×10⁶个细胞/孔)，用HSV-1(MOI,10)刺激，感染7小时后收集贴壁细胞，提取细胞的总RNA，实时荧光定量PCR方法检测I型干扰素(IFN-α、IFN-β)的转录水平；感染18小时后收集细胞培养上清，ELISA方法检测IFN-β蛋白水平。

I型干扰素(IFN-α，IFN-β)的转录水平如图2、4所示，IFN-β蛋白水平如图3所示。其中，图2、3中针对小鼠细胞采用的是鼠hnRNPAB1siRNA；图4是针对人细胞采用的是人hnRNPAB1siRNA。

结果显示：针对hnRNPA2B1的小干扰RNA转染小鼠巨噬细胞可极为显著地抑制HSV-1感染诱导的I型干扰素的产生。

该结果表明：干扰hnRNPA2B1表达导致HSV-1感染诱导的I型干扰素降低，提示了hnRNPA2B1在抗感染中可起到重要作用。

实施例3：过表达hnRNPA2B1抑制细胞中IFN-β分泌

首先，按照常规方法将hnRNPA2B1(NM_182650)的cDNA导入真核表达载体pcDNA3.1质粒(购自Addgene)中，构建hnRNPA2B1表达载体。

将hnRNPA2B1表达载体以1μg/ml的密度转染小鼠腹腔巨噬细胞，48小时后更换新鲜DMEM培养基。

以4×10⁵个细胞/ml，HSV-1(MOI,10)感染细胞，12小时后收集细胞培养上清，用ELISA试剂盒检测细胞培养上清中IFN-β水平。

IFN-β分泌情况如图5所示。

结果显示：hnRNPA2B1质粒转染细胞可促进HSV-1诱导的IFN-β产生。

该结果表明：过表达hnRNPA2B1可以促进HSV-1感染诱导的IFN-β的产生，提示了hnRNPA2B1在抗感染中可起到重要作用。

实施例4：敲除hnRNPA2B1抑制体内HSV-1感染诱导的血清中IFN-β水平

构建hnRNPA2B1髓系细胞条件敲除小鼠(购自上海南方模式生物科技股份有限公司，构建方法可参考Jnyner AL.Gene Targeting,Oxford University Press.1994)，在Hnrnpa2b1基因第2-6个外显子处加入可被CRE内切酶特异识别的loxP序列。Hnrnpa2b1^fl/fl小鼠回交C57BL/6背景，再同Lyz2-Cre小鼠杂交，从而实现髓系细胞内特异性敲除Hnrnpa2b1基因的2-6外显子。Hnrnpa2b1^fl/flLyz2-Cre^+/–小鼠和Hnrnpa2b1^fl/flLyz2-Cre^–/–小鼠交配产生髓系细胞特异性hnRNPA2B1基因敲除(Hnrnpa2b1cKO)小鼠和同窝对照野生型小鼠，这些小鼠在无特殊病原体洁净级别(SPF)环境中饲养。

使野生型小鼠与髓系细胞特异性hnRNPA2B1基因敲除(Hnrnpa2b1cKO)小鼠腹腔感染7×10⁸噬斑形成单位(PFU)的HSV-1，6小时后取血，分离血清，通过ELISA检测血中IFN-β水平。检测结果如图6所示。

结果显示：hnRNP-A2B1基因敲除小鼠的血清IFN-β水平显著低于野生型小鼠(***，P<0.001)。

该结果表明：hnRNPA2B1敲除抑制HSV-1病毒感染诱导的IFN-β产生，提示了hnRNPA2B1在抗感染中可起到重要作用。

实施例5：敲除hnRNPA2B1促进HSV-1在小鼠脑中的复制

构建hnRNPA2B1髓系细胞条件敲除小鼠(同实施例4)。使野生型小鼠与髓系细胞特异性hnRNPA2B1基因敲除(Hnrnpa2b1cKO)小鼠腹腔感染7×10⁸噬斑形成单位(PFU)的HSV-1，4天后通过噬斑实验检测脑部病毒滴度。

小鼠脑中HSV-1复制情况检测结果如图7所示。

结果显示：hnRNP-A2B1基因敲除小鼠的脑中病毒滴度显著高于野生型小鼠(***，P<0.001)。

该结果表明：hnRNPA2B1敲除促进HSV-1病毒在体内的复制，提示了hnRNPA2B1在抗感染中可起到重要作用。

实施例6：敲除hnRNPA2B提高病毒感染引起的死亡率

构建hnRNPA2B1髓系细胞条件敲除小鼠(同实施例3)。使野生型小鼠与髓系细胞特异性hnRNPA2B1基因敲除(Hnrnpa2b1cKO)小鼠腹腔感染7×10⁸噬斑形成单位(PFU)的HSV-1，持续观察小鼠的死亡情况。结果如图8所示。

结果显示：hnRNP-A2B1基因敲除小鼠的生存率显著降低(***，P<0.001)。

该结果表明：hnRNPA2B1敲除可以升高病毒感染引起的死亡率，提示了hnRNPA2B1在抗感染中可起到重要作用。

实施例7：敲除hnRNPA2B抑制腺病毒(AdV)感染诱导的I型干扰素

利用CRISPR/Cas9技术删除hnRNPA2B1基因第2外显子，构建hnRNPA2B1敲除的RAW264.7细胞系。使对照RAW264.7细胞(购自ATCC)和hnRNPA2B1敲除RAW264.7细胞感染AdV(MOI,10；Ad5型，购自汉恒生物技术(上海)有限公司)，感染7小时后收集贴壁细胞，提取细胞的总RNA，实时荧光定量PCR方法检测IFN-βmRNA的表达水平。

IFN-βmRNA的表达水平如图9所示。

结果显示：hnRNPA2B1敲除可显著地抑制AdV感染诱导的IFN-β的产生。

该结果表明：敲除hnRNPA2B1导致AdV感染诱导的I型干扰素降低，提示了hnRNPA2B1在抗感染中可起到重要作用。

在本公开提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本公开的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本公开作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

序列表

<110> 中国医学科学院基础医学研究所

<120> hnRNPA2B1的抗感染作用及其应用

<130> 195591 1CNCN

<160> 10

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 1026

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 1

atggagagag aaaaggaaca gttccgtaag ctctttattg gtggcttaag ctttgaaacc 60

acagaagaaa gtttgaggaa ctactacgaa caatggggaa agcttacaga ctgtgtggta 120

atgagggatc ctgcaagcaa aagatcaaga ggatttggtt ttgtaacttt ttcatccatg 180

gctgaggttg atgctgccat ggctgcaaga cctcattcaa ttgatgggag agtagttgag 240

ccaaaacgtg ctgtagcaag agaggaatct ggaaaaccag gggctcatgt aactgtgaag 300

aagctgtttg ttggcggaat taaagaagat actgaggaac atcaccttag agattacttt 360

gaggaatatg gaaaaattga taccattgag ataattactg ataggcagtc tggaaagaaa 420

agaggctttg gctttgttac ttttgatgac catgatcctg tggataaaat cgtattgcag 480

aaataccata ccatcaatgg tcataatgca gaagtaagaa aggctttgtc tagacaagaa 540

atgcaggaag ttcagagttc taggagtgga agaggaggca actttggctt tggggattca 600

cgtggtggcg gtggaaattt cggaccagga ccaggaagta actttagagg aggatctgat 660

ggatatggca gtggacgtgg atttggggat ggctataatg ggtatggagg aggacctgga 720

ggtggcaatt ttggaggtag ccccggttat ggaggaggaa gaggaggata tggtggtgga 780

ggacctggat atggcaacca gggtgggggc tacggaggtg gttatgacaa ctatggagga 840

ggaaattatg gaagtggaaa ttacaatgat tttggaaatt ataaccagca accttctaac 900

tacggtccaa tgaagagtgg aaactttggt ggtagcagga acatgggggg accatatggt 960

ggaggaaact atggtccagg aggcagtgga ggaagtgggg gttatggtgg gaggagccga 1020

tactga 1026

<210> 2

<211> 341

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 2

Met Glu Arg Glu Lys Glu Gln Phe Arg Lys Leu Phe Ile Gly Gly Leu

1 5 10 15

Ser Phe Glu Thr Thr Glu Glu Ser Leu Arg Asn Tyr Tyr Glu Gln Trp

20 25 30

Gly Lys Leu Thr Asp Cys Val Val Met Arg Asp Pro Ala Ser Lys Arg

35 40 45

Ser Arg Gly Phe Gly Phe Val Thr Phe Ser Ser Met Ala Glu Val Asp

50 55 60

Ala Ala Met Ala Ala Arg Pro His Ser Ile Asp Gly Arg Val Val Glu

65 70 75 80

Pro Lys Arg Ala Val Ala Arg Glu Glu Ser Gly Lys Pro Gly Ala His

85 90 95

Val Thr Val Lys Lys Leu Phe Val Gly Gly Ile Lys Glu Asp Thr Glu

100 105 110

Glu His His Leu Arg Asp Tyr Phe Glu Glu Tyr Gly Lys Ile Asp Thr

115 120 125

Ile Glu Ile Ile Thr Asp Arg Gln Ser Gly Lys Lys Arg Gly Phe Gly

130 135 140

Phe Val Thr Phe Asp Asp His Asp Pro Val Asp Lys Ile Val Leu Gln

145 150 155 160

Lys Tyr His Thr Ile Asn Gly His Asn Ala Glu Val Arg Lys Ala Leu

165 170 175

Ser Arg Gln Glu Met Gln Glu Val Gln Ser Ser Arg Ser Gly Arg Gly

180 185 190

Gly Asn Phe Gly Phe Gly Asp Ser Arg Gly Gly Gly Gly Asn Phe Gly

195 200 205

Pro Gly Pro Gly Ser Asn Phe Arg Gly Gly Ser Asp Gly Tyr Gly Ser

210 215 220

Gly Arg Gly Phe Gly Asp Gly Tyr Asn Gly Tyr Gly Gly Gly Pro Gly

225 230 235 240

Gly Gly Asn Phe Gly Gly Ser Pro Gly Tyr Gly Gly Gly Arg Gly Gly

245 250 255

Tyr Gly Gly Gly Gly Pro Gly Tyr Gly Asn Gln Gly Gly Gly Tyr Gly

260 265 270

Gly Gly Tyr Asp Asn Tyr Gly Gly Gly Asn Tyr Gly Ser Gly Asn Tyr

275 280 285

Asn Asp Phe Gly Asn Tyr Asn Gln Gln Pro Ser Asn Tyr Gly Pro Met

290 295 300

Lys Ser Gly Asn Phe Gly Gly Ser Arg Asn Met Gly Gly Pro Tyr Gly

305 310 315 320

Gly Gly Asn Tyr Gly Pro Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Tyr Gly

325 330 335

Gly Arg Ser Arg Tyr

340

<210> 3

<211> 906

<212> DNA

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 3

atggagagag aaaaggaaca gttccgaaag ctctttattg gtggcttaag ctttgaaacc 60

acagaagaaa gtttgagaaa ctactatgag caatggggaa agctcacaga ctgtgtggtt 120

atgcgggatc ctgcaagcaa aagatcaaga ggatttggct ttgtaacttt ctcatccatg 180

gccgaggttg acgctgccat ggctgcaagg ccccattcca ttgatggcag ggtagttgag 240

ccaaaacgtg ctgtagcaag agaggagtct ggaaaaccag gagcccatgt gactgtgaag 300

aagctgtttg ttggtggaat taaggaagat actgaggaac accaccttag agattacttt 360

gaagagtatg gaaaaattga tactattgaa ataattaccg ataggcagtc tggaaagaaa 420

agaggctttg gctttgttac ttttgatgac catgatcctg tggataaaat tgtcttgcaa 480

aaatatcaca ccataaatgg tcacaatgca gaagttagaa aggcattgtc tagacaagaa 540

atgcaggaag tccaaagttc taggagtgga agaggaggaa actttggttt tggggattct 600

cgtggtggcg gtggcaattt tggaccagga ccaggaagca actttagggg gggatctgat 660

ggatacggaa gtggacgtgg atttggggat ggctataatg ggtatggagg aggacctgga 720

ggaaattatg gaagtggaag ttacaatgat tttggaaatt ataaccagca gccttctaac 780

tatggtccaa tgaagagtgg aaactttggg ggtagcagga acatgggagg accatatggt 840

ggagggaact atggtcctgg aggaagtgga ggaagtggtg gctatggtgg aaggagcaga 900

tattaa 906

<210> 4

<211> 301

<212> PRT

<213> 小鼠（Mus musculus）

<400> 4

Met Glu Arg Glu Lys Glu Gln Phe Arg Lys Leu Phe Ile Gly Gly Leu

1 5 10 15

Ser Phe Glu Thr Thr Glu Glu Ser Leu Arg Asn Tyr Tyr Glu Gln Trp

20 25 30

Gly Lys Leu Thr Asp Cys Val Val Met Arg Asp Pro Ala Ser Lys Arg

35 40 45

Ser Arg Gly Phe Gly Phe Val Thr Phe Ser Ser Met Ala Glu Val Asp

50 55 60

Ala Ala Met Ala Ala Arg Pro His Ser Ile Asp Gly Arg Val Val Glu

65 70 75 80

Pro Lys Arg Ala Val Ala Arg Glu Glu Ser Gly Lys Pro Gly Ala His

85 90 95

Val Thr Val Lys Lys Leu Phe Val Gly Gly Ile Lys Glu Asp Thr Glu

100 105 110

Glu His His Leu Arg Asp Tyr Phe Glu Glu Tyr Gly Lys Ile Asp Thr

115 120 125

Ile Glu Ile Ile Thr Asp Arg Gln Ser Gly Lys Lys Arg Gly Phe Gly

130 135 140

Phe Val Thr Phe Asp Asp His Asp Pro Val Asp Lys Ile Val Leu Gln

145 150 155 160

Lys Tyr His Thr Ile Asn Gly His Asn Ala Glu Val Arg Lys Ala Leu

165 170 175

Ser Arg Gln Glu Met Gln Glu Val Gln Ser Ser Arg Ser Gly Arg Gly

180 185 190

Gly Asn Phe Gly Phe Gly Asp Ser Arg Gly Gly Gly Gly Asn Phe Gly

195 200 205

Pro Gly Pro Gly Ser Asn Phe Arg Gly Gly Ser Asp Gly Tyr Gly Ser

210 215 220

Gly Arg Gly Phe Gly Asp Gly Tyr Asn Gly Tyr Gly Gly Gly Pro Gly

225 230 235 240

Gly Asn Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Asn Asp Phe Gly Asn Tyr Asn Gln

245 250 255

Gln Pro Ser Asn Tyr Gly Pro Met Lys Ser Gly Asn Phe Gly Gly Ser

260 265 270

Arg Asn Met Gly Gly Pro Tyr Gly Gly Gly Asn Tyr Gly Pro Gly Gly

275 280 285

Ser Gly Gly Ser Gly Gly Tyr Gly Gly Arg Ser Arg Tyr

290 295 300

<210> 5

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

gaggaaauua uggaaguggt t 21

<210> 6

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

ccacuuccau aauuuccucc t 21

<210> 7

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

cuuugguggu agcaggaact t 21

<210> 8

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

guuccugcua ccaccaaagt t 21

<210> 9

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

uucuccgaac gugucacgut t 21

<210> 10

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 10

acgugacacg uucggagaat t 21

Claims

1. 异质性细胞核核糖蛋白A2B1 (hnRNPA2B1)、编码该蛋白质的核酸分子、或其促进剂在制备用于治疗DNA病毒感染性疾病和/或与DNA病毒感染相关的疾病和/或征状的产品中的用途，其中，所述促进剂选自：hnRNPA2B1或hnRNPA2B1编码序列的过表达载体；外源性hnRNPA2B1；hnRNPA2B1编码序列的裸DNA；hnRNPA2B1编码序列的脂质体包裹DNA；能够在体内转化为hnRNPA2B1的hnRNPA2B1前体蛋白或偶联物或复合物。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述hnRNPA2B1为具有SEQ ID NO:2或SEQ IDNO:4所示氨基酸序列的多肽。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述核酸分子为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO: 3所示核苷酸序列的核酸分子。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述感染为由选自下组的一种或多种DNA病毒引起的感染：单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒、腺病毒、痘病毒、小DNA病毒、腺相关病毒。

5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述与DNA病毒感染相关的疾病和/或征状为选自下组中的一种或多种：DNA病毒感染引起的病理损伤；DNA病毒感染后细胞因子产生不足或过量；内毒素性休克或死亡；器官的炎性损伤；多器官功能衰竭；DNA病毒感染导致的慢性炎症性疾病。

6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，

所述细胞因子为干扰素；和/或

所述器官选自：肝脏、脾脏、脑、肾、心脏、肺、胃、肠；和/或

所述慢性炎症性疾病为自身免疫性疾病。

7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述慢性炎症性疾病选自：炎症性肠病、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、慢性肾炎、结核病、慢性胃肠道疾病。

8.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述产品为药物组合物或药盒。

9.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述产品为适于通过选自下组方式给予的药物组合物或药盒：口服、注射、金包被基因枪轰击法、繁殖缺陷细菌携带质粒DNA法、复制缺陷腺病毒携带目的DNA法或目的基因所编码蛋白质、电致孔、鼻腔给药、肺部给药、透皮给药、瘤内给药。

10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述注射选自：直接裸DNA或蛋白质注射法、脂质体包裹DNA或蛋白质注射法。

11.如权利要求1所述的用途，其中，所述产品还包含用于治疗感染性疾病和/或与感染相关的疾病和/或征状的其他物质，其中，所述其他物质为选自下组中的一种或多种：临床常用抗生素；临床常用抗病毒药物；临床常用免疫抑制剂。

12.如权利要求11所述的用途，其特征在于，

所述临床常用抗生素选自：β-内酰胺类、氨基糖甙类、四环素类、氯霉素类、大环内脂类、抗真菌抗生素、抗结核类抗生素；和/或

所述临床常用抗病毒药物选自：三环胺类、焦磷酸类、蛋白酶抑制药、核苷类药物及干扰素、反义寡核苷酸类；和/或

所述临床常用免疫抑制剂选自：糖皮质激素、环磷酰胺、氯喹、环孢霉素A、中药制剂、抗TNF单克隆抗体。

13.如权利要求11所述的用途，其中，所述临床常用免疫抑制剂为雷公藤。

14.一种药物组合物或药盒，其包含：

(A) 治疗有效量的hnRNPA2B1、编码该蛋白质的核酸分子和/或其促进剂；

(B) 药学上或免疫学上可接受的载体或赋形剂，

其中，所述促进剂选自：hnRNPA2B1或hnRNPA2B1编码序列的过表达载体；外源性hnRNPA2B1；hnRNPA2B1编码序列的裸DNA；hnRNPA2B1编码序列的脂质体包裹DNA；能够在体内转化为hnRNPA2B1的hnRNPA2B1前体蛋白或偶联物或复合物。

15.如权利要求14所述的药物组合物或药盒，其还包含：一种或多种治疗感染性疾病及其相关病症和/或征状的其他活性物质，其中，所述其他活性物质为选自下组中的一种或多种：临床常用抗生素；临床常用抗病毒药物；临床常用免疫抑制剂。

16.如权利要求15所述的药物组合物或药盒，其特征在于，

17.如权利要求15所述的药物组合物或药盒，其中，所述临床常用免疫抑制剂为雷公藤。