JP2022550072A - 気分障害を処置するための方法 - Google Patents

Abstract

ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体の阻害剤および阻害剤を使用して気分障害を防止または処置する方法が提供される。

Description

[0001]本発明は、気分障害を防止または処置するための方法であって、有効量のＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤を、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法に関する。

[0002]気分障害は、不安、うつ病、または双極性障害によって代表される精神医学的障害であり、近年増加する傾向があり、大きな社会問題となっている。不安およびうつ病は、最も多い精神医学的障害であり、他の神経精神医学的疾患、脳卒中、腫瘍などの合併症である。認知症の人の７０％超が、うつ病および／または不安の症状を有する（Ｓｅｌｂａｅｋ，Ｇ．、Ｋ．ＥｎｇｅｄａｌおよびＳ．Ｂｅｒｇｈ、Ｔｈｅ ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ａｎｄ ｃｏｕｒｓｅ ｏｆ ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｉｎ ｎｕｒｓｉｎｇ ｈｏｍｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｄｅｍｅｎｔｉａ：ａ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ．Ｊ Ａｍ Ｍｅｄ Ｄｉｒ Ａｓｓｏｃ、２０１３．１４（３）：ｐ．１６１～９）。

[0003]現在、抗不安または抗うつ病のための臨床薬は、一般に不十分な効果を有し、特に、重度の不安またはうつ病、神経変性疾患または脳卒中によって引き起こされるうつ病、および悪性腫瘍患者の不安またはうつ病に対して不良な有効性を有するまたは実質的に有効性を有しておらず、作用の遅い発現、および広範で重篤な副作用という欠点も有する。

[0004]本出願より前では、ホスホイノシチド（ＰＩ）のレベルの低下およびホスホイノシチド３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）の活性の低下がうつ病と関連すると一般に考えられていた。ＰＩ３Ｋ欠乏は、マウスの不安のレベルを増加させ、いくつかの種類の従来の抗うつ薬は、脳において不安およびうつ病と関連するＰＩの再合成に寄与する（Ｄｉ Ｐａｏｌｏ，Ｇ．およびＰ．Ｄｅ Ｃａｍｉｌｌｉ、Ｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅｓ ｉｎ ｃｅｌｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｄｙｎａｍｉｃｓ．Ｎａｔｕｒｅ、２００６．４４３（７１１２）：ｐ．６５１～７；Ｓａｉｔｏ，Ｔ．ら、Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ＰＩＫ４ＣＡ：ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｃａｎｄｉｄａｔｅ ｇｅｎｅ ｆｏｒ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ２２ｑ１１－ｌｉｎｋｅｄ ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．Ａｍ Ｊ Ｍｅｄ Ｇｅｎｅｔ Ｂ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒ Ｇｅｎｅｔ、２００３．１１６Ｂ（１）：ｐ．７７～８３；Ｂａｌｌａ，Ａ．およびＴ．Ｂａｌｌａ、Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ ４－ｋｉｎａｓｅｓ：ｏｌｄ ｅｎｚｙｍｅｓ ｗｉｔｈ ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ、２００６．１６（７）：ｐ．３５１～６１を参照されたい）。

[0005]驚くべきことに、様々な疾患を有するマウスモデルで、遺伝学的方法によるＰＩ４ＫＩＩＩαの発現もしくはＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体をアンカーするためのＥｆｒ３ａの発現の減少、またはＰＩ４ＫＩＩＩα阻害剤の適用は、マウスの不安またはうつ病の程度を減少させることができることが本出願によって見出された。したがって、本出願は、潜在的な抗気分障害標的（つまりＰＩ４ＫＩＩＩαタンパク質複合体）および気分障害を処置するための一連の潜在的な薬物を提供する。

[0006]ある態様によると、本出願は、気分障害を防止または処置するための方法であって、有効量のＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤を、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法を提供する。

[0007]一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤は、低分子化合物、抗体、ＲＮＡｉ分子、またはアンチセンス核酸である。
[0008]一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤はＥＦＲ３特異的阻害剤である。

[0009]一部の実施形態において、ＥＦＲ３特異的阻害剤は、ＥＦＲ３ａ特異的阻害剤またはＥＦＲ３ｂ特異的阻害剤である。
[0010]一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤はＰＩ４ＫＩＩＩα特異的阻害剤である。

[0011]一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα特異的阻害剤は低分子化合物である。
[0012]一部の実施形態において、低分子化合物は式（Ｉ）の構造またはその薬学的に許容される塩を有する

[0013]［式中、Ｒ_１は独立して（ａ）Ｈ、重水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、アミノ、カルバモイル、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_２～６アルキニル、Ｃ_２～６アルケニル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_１～６ハロアルキル、Ｃ_１～６アルキレン－ＮＨ_２、Ｃ_１～６アルキレン－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）Ｈ、－Ａｓ（Ｏ）、－Ｎ＝ＮＨ、－ＮＨ－（Ｃ_１～６アルキル）、－Ｎ，Ｎ－（Ｃ_１～６アルキル）_２、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨ－Ｓ（Ｏ）_２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－ＯＣ（Ｏ）Ｈ、－ＳＨ、－Ｓ（Ｏ）_２Ｈ、－Ｓ（Ｏ）_２－ＮＨ、またはヘテロシクリルから選択され、これらはＲ_２またはＲ_３によって任意選択で置換されており、Ｒ_２およびＲ_３はそれぞれ独立してアミノ、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_１～６ハロアルキル、－ＮＨ－（Ｃ_１～６アルキル）、－ＮＨ－（６～１２員のアリール）、－Ｎ，Ｎ－（Ｃ_１～６アルキル）_２、Ｃ_３～６シクロアルキル、６～１２員のアリール、または３～１２員のヘテロシクリルから選択され、これらはハロゲン、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、アミノ、カルバモイル、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_５、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ_４、６～１２員のアリール、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_２～６アルキニル、Ｃ_２～６アルケニル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_１～６ハロアルキル、３～６員のヘテロシクリル、Ｃ_３～６シクロアルキル、またはＢｎ－Ｏ－のうちの１つまたは複数によって任意選択で置換されており、Ｒ_４はＣ_１～６アルキルであり、これはハロゲン、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、アミノ、カルバモイル、６～１２員のアリール、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_２～６アルキニル、Ｃ_２～６アルケニル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_１～６ハロアルキル、３～６員のヘテロシクリル、Ｃ_３～６シクロアルキル、またはＢｎ－Ｏ－のうちの１つまたは複数によって任意選択で置換されており、Ｒ_５はＨ、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_２～６アルキニル、Ｃ_２～６アルケニル、Ｃ_１～６アルコキシ、またはＣ_１～６ハロアルキルから選択される、または
[0014]（ｂ）２個の隣接する炭素原子上のＲ_１は５～１２員のシクロアルキル、アリール、またはヘテロシクリルを形成し、これらはハロゲン、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、アミノ、カルバモイル、６～１２員のアリール、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_２～６アルキニル、Ｃ_２～６アルケニル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_１～６ハロアルキル、３～６員のヘテロシクリル、Ｃ_３～６シクロアルキル、またはＢｎ－Ｏ－のうちの１つまたは複数によって任意選択で置換されており、
[0015]ｎは０～５の整数である］。

[0016]一部の実施形態において、Ｒ_１は独立してＨ、重水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、アミノ、カルバモイル、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_１～６ハロアルキル、－Ａｓ（Ｏ）、－ＮＨ－（Ｃ_１～６アルキル）、－Ｎ，Ｎ－（Ｃ_１～６アルキル）_２、または－Ｃ（Ｏ）ＯＲ_６から選択され、ｎは０～２の整数であり、Ｒ_６はＣ_１～６アルキルである。

[0017]一部の実施形態において、Ｒ_１は独立してＨ、重水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_１～６ハロアルキル、または－Ａｓ（Ｏ）から選択され、ｎは０～２の整数である。

[0018]一部の実施形態において、Ｒ_１は独立してＨ、重水素、ハロゲン、アミノ、Ｃ_１～６アルコキシ、またはＣ_１～６ハロアルキルから選択され、ｎは１である。
[0019]一部の実施形態において、Ｒ_１は－Ａｓ（Ｏ）基のオルト位および／またはパラ位に位置する。

[0020]一部の実施形態において、ｎは０である。
[0021]一部の実施形態において、低分子化合物は、以下の化合物：

からなる群から選択される。
[0022]一部の実施形態において、抗体はモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体である。

[0023]一部の実施形態において、抗体はキメラ抗体、ヒト化抗体、または完全ヒト抗体である。
[0024]一部の実施形態において、ＲＮＡｉ分子は低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、またはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）である。

[0025]一部の実施形態において、ＲＮＡｉ分子は１８～１００塩基の長さを有する。
[0026]一部の実施形態において、ＲＮＡｉ分子はその安定性を増強するために修飾されている。

[0027]一部の実施形態において、対象はヒトまたは哺乳動物である。
[0028]一部の実施形態において、気分障害は高揚した気分、抑うつ気分、または高揚した気分および抑うつ気分の繰返しである。

[0029]一部の実施形態において、気分障害は不安、うつ病、統合失調症、または躁病である。
[0030]一部の実施形態において、気分障害は神経変性疾患、脳卒中、または悪性腫瘍によって引き起こされる。

[0031]一部の実施形態において、気分障害は神経変性疾患によって引き起こされる不安またはうつ病である。
[0032]一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤は経口、皮下、筋肉内、または静脈内投与される。

[0033]一部の実施形態において、方法は、有効量のＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤を対象に投与する前に、気分障害を有すると対象を診断するステップをさらに含む。

[0034]一部の実施形態において、方法は、第２の試薬を、それを必要とする対象に投与するステップをさらに含む。
[0035]一部の実施形態において、第２の試薬は気分障害を処置するために使用される。

[0036]一部の実施形態において、第２の試薬は神経変性疾患、脳卒中、または悪性腫瘍を処置するために使用される。
[0037]一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤は第２の試薬の前、後、またはそれと同時に投与される。

[0038]別の態様によると、本出願は、気分障害を防止または処置するための医薬の製造におけるＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤の使用を提供する。
[0039]さらに別の態様によると、本出願は、気分障害を防止または処置することにおけるＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤の使用であって、有効量のＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤を、それを必要とする対象に投与するステップを含む使用を提供する。

[0040]ＣＵＭＳモデリングおよび投与中の各群のラットの体重の変化を示す図である。 [0041]ＰＩＫ４ＩＩＩαのｍＲＮＡ発現レベルは、うつ病の程度と直線的に正に相関することを示す図である。 [0042]ＰＩ４ＫＩＩＩα阻害剤ＰＡＯは、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおいて不安行動を防止または緩和することができることを示す図である（ＷＴは野生型マウスを表し、「ＡＰＰ／ＰＳ１ ０」はＰＡＯによる処置を伴わないＡＰＰ／ＰＳ１マウスを表し、「ＡＰＰ／ＰＳ１ ０．３」はＰＡＯによる処置を伴うマウスを表し、用量は０．３ｍｇ／ｋｇであり、「＊」はＰ＜０．０５を表す）。 [0043]モリス水迷路試験におけるＡＰＰ／ＰＳ１マウスに対するＰＡＯおよびＡｒｉｃｅｐｔの効果を示す図である。 [0044]新奇環境摂食抑制試験におけるＡＰＰ／ＰＳ１マウスに対するＰＡＯおよびＡｒｉｃｅｐｔの効果を示す図である。 [0045]明暗往来試験におけるＡＰＰ／ＰＳ１マウスに対するＥｆｒ３ａのｍＲＮＡ発現減少効果を示す図である。 [0046]強制水泳試験におけるＩＣＲマウスに対するＰＡＯ誘導体ＰＩ０４、ＰＩ０５、およびＰＩ０６の効果を示す図である。黒色および灰色のバーは、マウスの各群についての第１および第２の強制水泳実験それぞれにおける最後の４分内の無動時間の合計である。 [0047]神経損傷によって引き起こされるマウスにおけるうつ病の防止または緩和に対するＰＡＯの効果を示す図である。 [0048]野生型マウスにおける不安行動の阻害に対するＰＡＯおよびその誘導体の効果を示す図である。 [0049]ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａにおけるＨｙｃｃｉｎ（ＦＡＭ１２６）、ＲＢＯ、ＴＴＣ７、およびＰ４ＫＩＩＩαの相互作用を示す図である。図１０Ａは、ｒｂｏ－ｅｇｆｐトランスジェニックおよび野生型（ｗｔ）の成体Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ頭部のホモジネートからの抗ＧＦＰ抗体の共免疫沈降物のクマシーブリリアントブルー染色を示す図である。ＲＢＯ－ＧＦＰの発現は、ｒｂｏ遺伝子ドライバーによって駆動される。図１０Ｂは、共免疫沈降－ウエスタンブロッティング（ＷＢ）によって、成体ｗｔ Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａにおいて内因性Ｈｙｃｃｉｎ、ＲＢＯ、およびＰＩ４ＫＩＩＩα（ＰＩ４Ｋ）が互いに共免疫沈降することを示す図である。図１０Ｃは、ＷＢによって、ｗｔ Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ胚、ならびにｈｙｃｃｉｎ^－／－、ｒｂｏ^－／－、およびｔｔｃ７^＊／＊変異体Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ胚の細胞膜および細胞質におけるＲＢＯおよびＨｙｃｃｉｎの発現レベルを示す図である。ＲＢＯは、細胞膜でのみ発現され、上の３種のホモ接合変異体の胚では発現しない。Ｈｙｃｃｉｎは主に細胞質に存在し、ｒｂｏ^－／－およびｔｔｃ７^＊／＊変異体の細胞質において著しい変化を伴わないレベルを有し、Ｈｙｃｃｉｎの発現がＲＢＯおよびＴＴＣ７の発現から独立していることを示す。図１０Ｄは、ウエスタンブロッティング（ＷＢ）によって、ｒｂｏ^－／＋およびｈｙｃｃｉｎ^－／＋成体ヘテロ接合変異体ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａにおけるＨｙｃｃｉｎの発現量を示し、Ｈｙｃｃｉｎの発現がＲＢＯから独立していることをさらに示す図である。図１０Ｅ：ＷＢは、同じ遺伝子背景を有するｗｔ、ｒｂｏ^－／＋、およびｈｙｃｃｉｎ^－／＋ヘテロ接合変異体成体Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ、ならびに対照およびｐｉ４ｋＩＩＩα（ｐｉ４ｋ^{ＦＱ８８／＋}、ｐｉ４ｋ^{ＦＹ２４／＋}、ｐｉ４ｋ^{ＧＪ８６／＋}、およびｐｉ４ｋ^{ＧＳ２７／＋}）成体Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａの４種のナンセンス変異ヘテロ接合体におけるＰＩ４ＫＩＩＩαおよびＲＢＯの総レベルを示す図である。ｐｉ４ｋＩＩＩαの４種のナンセンス変異は、遺伝子変異原およびスクリーニングによる処理によって対照Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａから得られる。

[0050]本発明の以下の記載は、本発明の様々な実施形態を記載することだけが意図される。記載される具体的な実施形態は、本発明の範囲を限定すると解釈されるべきでない。様々な均等な置換、変更、または変形は、本発明の精神および本質から逸脱することなく当業者によって行われてもよく、これらの均等な実施形態も本明細書に包含されることが理解されるべきである。刊行物、特許、特許出願などを含む、本明細書で引用される全ての文書は、参照によりそれらの全体が組み込まれる。

[0051]ある態様によると、本出願は、気分障害を防止または処置するための方法であって、有効量のＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤を、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法を提供する。

[0052]ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤
[0053]本出願において、用語「ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体」は、３種のタンパク質ＰＩ４ＫＩＩＩα、ＦＡＭ１２６、およびＴＴＣ７で構成される複合体を指し、これは細胞質膜に局在し、ｉｎ ｖｉｖｏでの脂質リン酸化に関与する。ＥＦＲ３ａまたはＥＦＲ３ｂは、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体を細胞質膜にアンカーする重要な分子である。

[0054]本出願において、用語「ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤」は、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体の活性を低下させる、減少させる、および排除することができる任意の物質を指す。一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤は、ＰＩ４ＫＩＩＩαまたはＦＡＭ１２６またはＴＴＣ７またはＥＦＲ３遺伝子の転写もしくは翻訳を阻害する阻害剤である。一部の他の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤は、ＰＩ４ＫＩＩＩαが脂質をリン酸化する能力を阻害する阻害剤である。一部の他の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤は、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体の形成を阻害する阻害剤である。一部の他の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤は、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体が細胞質膜にアンカーされることを阻害する阻害剤である。

[0055]一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤は、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体の活性を少なくとも５％、１０％、２０％、４０％、５０％、８０％、９０％、９５％またはそれ以上減少させることができる。

[0056]本出願において、「活性」は、増加または低下と共に使用される場合、検出された機能活性を意味し、これは含有量の変化または未変化の含有量を伴う機能活性の変化として表され得る。一部の実施形態において、活性は脂質リン酸化と関連する。一部の実施形態において、活性は気分障害と関連する。

[0057]一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤は低分子化合物、抗体、ＲＮＡｉ分子、またはアンチセンス核酸である。
[0058]一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤は低分子化合物である。

[0059]本出願において、用語「低分子化合物」は、３０００、２５００、２０００、１５００、１０００、または５００ダルトン未満の分子量を有する天然もしくは化学的に合成された有機化合物を指す。

[0060]一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤は抗体である。
[0061]本出願において、用語「抗体」は、特定の抗原に結合することができる任意の免疫グロブリン、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多価抗体、二価抗体、一価抗体、または抗体を含む。本出願において、用語「抗体」は、４つの鎖を有する通常の抗体および４つの鎖を有しない特殊な抗体（例えば、軽鎖を天然に欠く抗体）を広く包含することが意図される。

[0062]通常の無傷の抗体は、２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含有するヘテロ四量体である。５種類の哺乳動物重鎖：α、δ、ε、γ、およびμがある。各重鎖は、１つの可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）ならびに第１、第２、および第３の定常ドメイン（Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、およびＣ_Ｈ３）からなる。２種類の哺乳動物軽鎖：λおよびκがある。各軽鎖は１つの可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）および１つの定常ドメインからなる。通常の抗体は、ジスルフィド結合によって結合した２つの重鎖の第２および第３の定常ドメインからなる首を有する「Ｙ」字型構造を有する。「Ｙ」字型構造の各アームは、１つの軽鎖の可変ドメインおよび定常ドメインと結合した、２つの重鎖のうちの１つの可変ドメインおよび第１の定常ドメインを含む。軽鎖および重鎖の可変ドメインは、抗原への結合を決定する。各鎖の可変ドメインは、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される３つの超可変領域を含有する（軽鎖のＣＤＲはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、重鎖のＣＤＲはＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む）。本出願で開示される抗体および抗原結合断片のＣＤＲ境界は、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ命名法によって命名または識別され得る（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ，Ｂ．、Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．、Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２７３（４）、９２７（１９９７）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ら、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．Ｄｅｃ ５；１８６（３）：６５１～６３（１９８５）；Ｃｈｏｔｈｉａ，ＣおよびＬｅｓｋ，Ａ．Ｍ．、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６、９０１（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ら、Ｎａｔｕｒｅ．Ｄｅｃ ２１－２８；３４２（６２５２）：８７７～８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ Ｅ．Ａ．ら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｍａｒｙｌａｎｄ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ（１９９１）；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２７：５５～７７（２００３）；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１（３）、（２００５）；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｂ ｃｅｌｌｓ（第２版）、２６章、４８１～５１４、（２０１５））。３つのＣＤＲは、フレームワーク領域（ＦＲ）の横方向の隣接部分によって分離され、ＦＲはＣＤＲよりも高度に保存され、足場を形成し、超可変ループを支持する。重鎖および軽鎖の定常領域は抗原への結合に関与しないが、複数のエフェクター機能を有する。

[0063]抗体は重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づいていくつかのクラスに分けられ得る。重鎖の種類α、δ、ε、γ、およびμは、抗体の５つの主なクラスまたはアイソタイプＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭを生じさせる。主な抗体クラスは、ＩｇＧ１（γ１重鎖）、ＩｇＧ２（γ２重鎖）、ＩｇＧ３（γ３重鎖）、ＩｇＧ４（γ４重鎖）、ＩｇＡ１（α１重鎖）、またはＩｇＡ２（α２重鎖）などのサブクラスにさらに細分され得る。

[0064]一部の実施形態において、抗体は完全長抗体または抗原結合断片である。
[0065]本出願において、用語「抗原結合断片」は、抗体構造全体はないが１つまたは複数のＣＤＲを含む抗体断片によって形成される抗体断片を指す。例えば抗原結合断片はこれらに限定されないが、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｖ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ二量体、ラクダ化単一ドメイン抗体、およびナノボディを含む。抗原結合断片は親抗体と同じ抗原に結合することができる。

[0066]抗体の「Ｆａｂ」断片は、ジスルフィド結合によって結合した１つの軽鎖（可変ドメインおよび定常ドメインを含む）ならびに１つの重鎖の可変ドメインおよび第１の定常ドメインからなる抗体の部分を指す。

[0067]「Ｆａｂ’」断片は、ヒンジ領域の一部を含有するＦａｂ断片を指す。
[0068]「Ｆ（ａｂ’）_２」断片はＦａｂ’の二量体を指す。
[0069]抗体の「Ｆｖ」断片は、１つの軽鎖の可変ドメインおよび１つの重鎖の可変ドメインからなる。

[0070]「一本鎖抗体分子」または「ｓｃＦｖ」は、直接またはペプチド鎖によって結合した軽鎖の可変ドメインおよび重鎖の可変ドメインから作製された操作された抗体を指す。詳細はＨｕｓｔｏｎ ＪＳら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、８５：５８７９（１９８８）に見出され得る。

[0071]「ｓｃＦｖ二量体」は２つのｓｃＦｖによって形成されたオリゴマーを指す。
[0072]「ラクダ化単一ドメイン抗体」（「重鎖抗体」または「重鎖のみの抗体（ＨＣＡｂ）」とも称される）は、２つの重鎖可変ドメインを含有し、軽鎖を含有しない抗体を指す（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｌ．およびＭｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ．、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｄｅｃ １０；２３１（１－２）：２５～３８（１９９９）；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ．、Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｊｕｎ；７４（４）：２７７～３０２（２００１）；ＷＯ９４／０４６７８；ＷＯ９４／２５５９１；米国特許第６，００５，０７９号）。重鎖抗体は本来、ラクダ科（ラクダ類、ヒトコブラクダ、およびラマ）に由来する。軽鎖を欠くが、ラクダ化単一ドメイン抗体は抗原に結合するための全ての機能を有し（Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ Ｃ．ら、Ｎａｔｕｒｅ．３６３（６４２８）：４４６～８（１９９３）；Ｎｇｕｙｅｎ ＶＫ．ら、「Ｈｅａｖｙ－ｃｈａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｃａｍｅｌｉｄａｅ；ａ ｃａｓｅ ｏｆ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ」、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ．５４（１）：３９～４７（２００２）；Ｎｇｕｙｅｎ ＶＫ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１０９（１）：９３～１０１（２００３）を参照されたい）、これはその全体が参照により組み込まれる。

[0073]「ナノボディ」は、重鎖抗体からの１つの重鎖可変ドメインならびに２つの定常ドメインＣ_Ｈ２およびＣ_Ｈ３からなる。
[0074]一部の実施形態において、抗体はモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体である。

[0075]一部の実施形態において、抗体はマウス抗体、ウサギ抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、または完全ヒト抗体である。
[0076]本出願において、用語「完全ヒト」は、抗体または抗原結合断片において使用される場合、抗体または抗原結合断片のアミノ酸配列が、ヒトもしくはヒト免疫細胞によって産生された、またはヒト抗体ライブラリーもしくはヒト抗体をコードする他の配列に基づいてトランスジェニック非ヒト動物などの非ヒト供給源に由来する抗体のアミノ酸配列に対応することを意味する。

[0077]本出願において、用語「ヒト化」は、抗体または抗原結合断片において使用される場合、非ヒト動物に由来するＣＤＲ、ヒトに由来するＦＲ、および適用可能な場合はヒトに由来する定常ドメインを含む抗体または抗原結合断片を指す。ヒト化抗体または抗原結合断片は、免疫原性が低いので、一部の実施形態においてヒト用の治療剤として使用され得る。一部の実施形態において、非ヒト動物は哺乳動物（例えばマウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、モルモットまたはハムスター）である。一部の実施形態において、ヒト化抗体または抗原結合断片は、ＣＤＲ配列が非ヒトであることを除いて本質的に完全にヒト配列からなる。

[0078]本出願において、用語「キメラ」は、抗体または抗原結合断片において使用される場合、同じ種に由来する一部分および異なる種に由来する他の部分を有する重鎖ならびに／もしくは軽鎖を含む抗体または抗原結合断片を指す。一部の実施形態において、キメラ抗体は、ヒトに由来する定常ドメインおよび非ヒト動物（例えばマウスまたはウサギ）に由来する可変ドメインを含み得る。

[0079]一部の実施形態において、本出願における抗体は単一特異性抗体、二重特異性抗体、または多重特異性抗体である。
[0080]一部の実施形態において、本出願における抗体はさらに印を付けられ得る。

[0081]一部の実施形態において、本出願における抗体は、ＰＩ４ＫＩＩＩαまたはＦＡＭ１２６またはＴＴＣ７またはＥＦＲ３に特異的な抗体である。一部の実施形態において、本出願における抗体は、ＰＩ４ＫＩＩＩαまたはＥＦＲ３に特異的な抗体である。

[0082]一部の実施形態において、本出願における抗体は、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体の形成を阻害することができる、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体が細胞質膜にアンカーされるのを阻害することができる、またはＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体のリン酸化活性を阻害することができる。

[0083]一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤はＲＮＡｉ分子である。
[0084]本出願において、用語「ＲＮＡｉ分子」は、ＲＮＡ干渉を指示するのに標的ＲＮＡと配列が十分に相補的であるＲＮＡまたはその類似体を指す。一部の実施形態において、ＲＮＡを産生するために使用され得るＤＮＡも含まれる。ＲＮＡｉは、標的分子（例えば標的遺伝子、タンパク質、またはＲＮＡ）が下方調節される配列特異的選択のプロセスである。

[0085]一部の実施形態において、ＲＮＡｉ分子は低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、またはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）である。
[0086]本出願において、用語「低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）」は、約１０～５０ヌクレオチドの長さ、好ましくは約１５～２５ヌクレオチドの長さ、より好ましくは約１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５ヌクレオチドの長さを有するＲＮＡ分子、好ましくは二本鎖分子を指す。任意選択で、鎖は例えば、ＲＮＡの分解を指示もしくは媒介し得る１つ、２つ、または３つのオーバーハングヌクレオチド（またはヌクレオチド類似体）を含むオーバーハング末端を有する。天然に存在するｓｉＲＮＡは、細胞のＲＮＡｉ機構（例えばＤｉｃｅｒまたはそのホモログ）を通じて、より長いｄｓＲＮＡ（＞２５ヌクレオチドを有する）から産生され、ＲＩＳＣ複合体を形成してｍＲＮＡを分解する。

[0087]本出願において、用語「短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）」は、互いに相補的である第１の領域および第２の領域を含むステムループ構造を有するＲＮＡ分子を指す。相補性の程度および領域の配向は、領域間に塩基対が生じるのに十分である。第１の領域および第２の領域は、ループ領域によって連結される。ループは、ループ領域におけるヌクレオチド（またはヌクレオチド類似体）間に塩基対合が存在しないことにより生じる。

[0088]本出願において、用語「マイクロＲＮＡ」または「ｍｉＲＮＡ」は、約１６～２６ヌクレオチド（ｎｔ）の長さ（例えば約１６～２９ｎｔ、１９～２２ｎｔ、２０～２５ｎｔ、または２１～２３ｎｔ）を有する短い、天然に存在する一本鎖ノンコーディングＲＮＡ分子であり、通常ｉｎ ｖｉｖｏでの遺伝子発現の調節において機能する。真核細胞において、ｍｉＲＮＡ遺伝子は、ＤＮＡ転写酵素ＩＩによって転写されて「一次産物」（ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ）になり、ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡはリボヌクレアーゼＩＩＩ（Ｄｒｏｓｈａ）によってすぐにプロセシングされてｍｉＲＮＡ「前駆体」（ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ）になり、ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡは核から細胞質に輸送され、次いで別のリボヌクレアーゼＩＩＩ（Ｄｉｃｅｒ）によって認識および切断されて成熟ｍｉＲＮＡになる。成熟ｍｉＲＮＡ分子は、１つまたは複数のｍＲＮＡに部分的に相補的であり、タンパク質の発現を調節する。公知のｍｉＲＮＡ配列は、公開データベース、例えば、ｍｉＲＮＡ配列情報、機能注釈、予測される遺伝子標的、および他の情報を提供するｍｉＲＢａｓｅデータベース（ｗｗｗ．ｍｉｒｂａｓｅ．ｏｒｇ）から得ることができる。本発明において、ｍｉＲＮＡは、人工的に合成されたプラスミドによって細胞において発現され、天然のｍｉＲＮＡ分子のように対応するｍＲＮＡを標的化し、タンパク質へのｍＲＮＡの翻訳を防止する天然のｍｉＲＮＡと同様の構造および機能を有するＲＮＡ分子も含む。

[0089]一部の実施形態において、ＲＮＡｉ分子は、例えばＰＩ４ＫＡ遺伝子をノックダウンすることによってＰＩ４ＫＩＩＩαの発現を減少させることができる。
[0090]一部の実施形態において、ＲＮＡｉ分子は配列番号１の配列［５’－ＴＧＣＴＣＡＴＴＡＧＣＡＧＴＡＡＡＧＡ－３’］を有する。

[0091]一部の実施形態において、ＲＮＡｉ分子は１８～１００塩基の長さを有する。
[0092]一部の実施形態において、ＲＮＡｉ分子はその安定性を増強するために修飾されている。

[0093]一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤はアンチセンス核酸である。
[0094]本出願において、用語「アンチセンス核酸」は、標的配列に完全に相補的なヌクレオチドおよびアンチセンス核酸が標的配列に特異的にハイブリダイズできる限り、１つまたは複数のヌクレオチドミスマッチを有するヌクレオチドを含む。例えば本出願におけるアンチセンス核酸は、少なくとも７０％以上、好ましくは８０％以上、より好ましくは９０％以上、さらにより好ましくは９５％以上の相同性を有し、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さのポリヌクレオチドを含む。標的遺伝子の転写および／または標的ｍＲＮＡの翻訳は、ハイブリッドの形成により減少するまたは妨げられる。アンチセンス技術を含む標準方法が記載されている（例えばＭｅｌａｎｉら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（１９９１）５１：２８９７～２９０１を参照されたい）。

[0095]一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤はＥＦＲ３特異的阻害剤である。
[0096]本出願において、用語「ＥＦＲ３特異的阻害剤」は、ＥＦＲ３（すなわち酵母由来ホルミル－ＣｏＡ還元酵素）遺伝子の転写もしくは翻訳および／またはＥＦＲ３タンパク質の活性を特異的に低下させ、減少させ、排除することができる任意の阻害剤を指す。一部の実施形態において、ＥＦＲ３特異的阻害剤は、ＥＦＲ３の活性を少なくとも５％、１０％、２０％、４０％、５０％、８０％、９０％、９５％またはそれ以上減少させることができる。一部の実施形態において、ＥＦＲ３の活性は、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体を細胞質膜にアンカーする活性を指す。

[0097]一部の実施形態において、ＥＦＲ３特異的阻害剤は、好ましくは複合体混合物からＥＦＲ３タンパク質を認識することができる。ＥＦＲ３タンパク質への阻害剤の結合定数は、別の非特異的結合タンパク質への阻害剤の結合定数の少なくとも２倍である。一部の実施形態において、ＥＦＲ３タンパク質からのＥＦＲ３特異的阻害剤の平衡解離定数は１０^－５Ｍまたは１０^－６Ｍ以下である。一部の実施形態において、ＥＦＲ３タンパク質からのＥＦＲ３特異的阻害剤の平衡解離定数は１０^－６Ｍまたは１０^－７Ｍ以下である。一部の実施形態において、ＥＦＲ３タンパク質からのＥＦＲ３特異的阻害剤の平衡解離定数は１０^－７Ｍまたは１０^－８Ｍ以下である。一部の実施形態において、ＥＦＲ３特異的阻害剤はＥＦＲ３ａ特異的阻害剤またはＥＦＲ３ｂ特異的阻害剤である。

[0098]一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤はＰＩ４ＫＩＩＩα特異的阻害剤である。
[0099]本出願において、用語「ＰＩ４ＫＩＩＩα特異的阻害剤」は、ＰＩ４ＫＩＩＩα遺伝子の転写もしくは翻訳および／またはＰＩ４ＫＩＩＩαタンパク質の活性を特異的に低下させ、減少させ、排除することができる任意の物質を指す。一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα特異的阻害剤は、ＰＩ４ＫＩＩＩαの活性を少なくとも５％、１０％、２０％、４０％、５０％、８０％、９０％、９５％またはそれ以上減少させることができる。一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩαの活性は、脂質（例えばホスホイノシチド（ＰＩ））をリン酸化する（例えばホスファチジルイノシトール－４－リン酸（ＰＩ４Ｐ）への変換）ＰＩ４ＫＩＩＩαの活性を指す。

[0100]一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα特異的阻害剤は、好ましくは複合体混合物からＰＩ４ＫＩＩＩαタンパク質を認識することができる。ＰＩ４ＫＩＩＩαタンパク質への阻害剤の結合定数は、別の非特異的結合タンパク質への阻害剤の結合定数の少なくとも２倍である。一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩαタンパク質からのＰＩ４ＫＩＩＩα特異的阻害剤の平衡解離定数は１０^－５Ｍまたは１０^－６Ｍ以下である。一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩαタンパク質からのＰＩ４ＫＩＩＩα特異的阻害剤の平衡解離定数は１０^－６Ｍまたは１０^－７Ｍ以下である。一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩαタンパク質からのＰＩ４ＫＩＩＩα特異的阻害剤の平衡解離定数は１０^－７Ｍまたは１０^－８Ｍ以下である。

[0101]一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα特異的阻害剤は、ＰＩ４ＫＩＩ（例えばＰＩ４ＫＩＩαまたはＰＩ４ＫＩＩβ）を阻害するよりもＰＩ４ＫＩＩＩαを少なくとも１倍、２倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍、または１００００倍強く阻害する。一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα特異的阻害剤は、ＰＩ４ＫＩＩＩβを阻害するよりもＰＩ４ＫＩＩＩαを少なくとも１倍、２倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍、または１００００倍強く阻害する。一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα特異的阻害剤はＰＩ４ＫＩＩ（例えばＰＩ４ＫＩＩαまたはＰＩ４ＫＩＩβ）を実質的に阻害せず、１０μＭ、２０μＭ、３０μＭ、４０μＭ、５０μＭ、６０μＭ、８０μＭ、１００μＭ、１５０μＭ、２００μＭ、または５００μＭ以上のＩＣ_５０を有する。

[0102]一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα特異的阻害剤はＰＩ４ＫＩＩＩαを１００μＭ、８０μＭ、５０μＭ、３０μＭ、２０μＭ、１０μＭ、５μＭ、３μＭ、２μＭ、１μＭ、０．５μＭ、０．２μＭ、０．１μＭ、０．０５μＭ、０．０２μＭ、０．０１μＭ、０．００５μＭ、０．００２μＭ、または０．００１μＭ以下のＩＣ_５０で阻害する。

[0103]一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα特異的阻害剤は低分子化合物である。
[0104]一部の実施形態において、本出願における低分子化合物は式（Ｉ）の構造またはその薬学的に許容される塩を有する

[0105]［式中、Ｒ_１は独立して（ａ）Ｈ、重水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、アミノ、カルバモイル、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_２～６アルキニル、Ｃ_２～６アルケニル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_１～６ハロアルキル、Ｃ_１～６アルキレン－ＮＨ_２、Ｃ_１～６アルキレン－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）Ｈ、－Ａｓ（Ｏ）、－Ｎ＝ＮＨ、－ＮＨ－（Ｃ_１～６アルキル）、－Ｎ，Ｎ－（Ｃ_１～６アルキル）_２、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨ－Ｓ（Ｏ）_２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－ＯＣ（Ｏ）Ｈ、－ＳＨ、－Ｓ（Ｏ）_２Ｈ、－Ｓ（Ｏ）_２－ＮＨ、またはヘテロシクリルから選択され、これらはＲ_２またはＲ_３によって任意選択で置換されており、Ｒ_２およびＲ_３はそれぞれ独立してアミノ、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_１～６ハロアルキル、－ＮＨ－（Ｃ_１～６アルキル）、－ＮＨ－（６～１２員のアリール）、－Ｎ，Ｎ－（Ｃ_１～６アルキル）_２、Ｃ_３～６シクロアルキル、６～１２員のアリール、または３～１２員のヘテロシクリルから選択され、これらはハロゲン、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、アミノ、カルバモイル、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_５、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ_４、６～１２員のアリール、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_２～６アルキニル、Ｃ_２～６アルケニル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_１～６ハロアルキル、３～６員のヘテロシクリル、Ｃ_３～６シクロアルキル、またはＢｎ－Ｏ－のうちの１つまたは複数によって任意選択で置換されており、Ｒ_４はＣ_１～６アルキルであり、これはハロゲン、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、アミノ、カルバモイル、６～１２員のアリール、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_２～６アルキニル、Ｃ_２～６アルケニル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_１～６ハロアルキル、３～６員のヘテロシクリル、Ｃ_３～６シクロアルキル、またはＢｎ－Ｏ－のうちの１つまたは複数によって任意選択で置換されており、Ｒ_５はＨ、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_２～６アルキニル、Ｃ_２～６アルケニル、Ｃ_１～６アルコキシ、またはＣ_１～６ハロアルキルから選択される、または
[0106]（ｂ）２個の隣接する炭素原子上のＲ_１は５～１２員のシクロアルキル、アリール、またはヘテロシクリルを形成し、これらはハロゲン、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、アミノ、カルバモイル、６～１２員のアリール、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_２～６アルキニル、Ｃ_２～６アルケニル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_１～６ハロアルキル、３～６員のヘテロシクリル、Ｃ_３～６シクロアルキル、またはＢｎ－Ｏ－のうちの１つまたは複数によって任意選択で置換されている］。

[0107]一部の実施形態において、ｎは０、１、２、または３である。一部の実施形態において、ｎは０、１、または２である。一部の実施形態において、ｎは０または１である。

[0108]一部の実施形態において、Ｒ_１は独立してＨ、重水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、アミノ、カルバモイル、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_１～６ハロアルキル、－Ａｓ（Ｏ）、－ＮＨ－（Ｃ_１～６アルキル）、－Ｎ，Ｎ－（Ｃ_１～６アルキル）_２、または－Ｃ（Ｏ）ＯＲ_６から選択され、ｎは０～２の整数であり、Ｒ_６はＣ_１～６アルキルである。

[0109]一部の実施形態において、Ｒ_１は独立してＨ、重水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_１～６ハロアルキル、または－Ａｓ（Ｏ）から選択され、ｎは０～２の整数である。

[0110]一部の実施形態において、Ｒ_１は独立してＨ、重水素、ハロゲン、アミノ、Ｃ_１～６アルコキシ、またはＣ_１～６ハロアルキルから選択され、ｎは１である。
[0111]一部の実施形態において、Ｒ_１は－Ａｓ（Ｏ）基のオルト位またはパラ位に位置する。一部の実施形態において、Ｒ_１はＨである。

[0112]本出願において、用語「置換されている」は、化学基の１つまたは複数の水素原子が除去され、置換基で置換されていることを意味する。
[0113]本出願において、用語「置換基」は、当技術分野で公知のその一般的な意味を有し、親基に共有結合している、または適切な場合は親基に縮合している化学部分を指す。

[0114]本出願において、用語「Ｃ_ｎ～Ｃ_ｍ」は炭素原子数の範囲を表し、ｎおよびｍは整数であり、炭素数の範囲は終点（すなわちｎおよびｍ）およびそれらの間の整数点を含む。例えばＣ_１～Ｃ_６は、１、２、３、４、５、および６つの炭素原子を含む１～６個の炭素原子の範囲を表す。

[0115]本出願において、用語「アルキル」は、別の用語の一部として使用されようと単独で使用されようと、直鎖または分岐鎖であり得る飽和ヒドロカルビル基を指す。用語「Ｃ_ｎ～Ｃ_ｍアルキル」は、ｎ～ｍ個の炭素原子を有するアルキル基を指す。一部の実施形態において、アルキル基は１～１２、１～８、１～６、１～４、１～３、または１～２個の炭素原子を含有する。例えばアルキル基はこれらに限定されないが、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、２－メチル－１－ブチル、ｎ－ペンチル、３－ペンチル、ｎ－ヘキシル、および１，２，２－トリメチルプロピルなどの化学基を含む。

[0116]本出願において、用語「アルケニル」は、別の用語の一部として使用されようと単独で使用されようと、少なくとも１つの炭素－炭素二重結合を有する直鎖または分岐鎖であり得る不飽和ヒドロカルビル基を指す。一部の実施形態において、アルケニル基は２～１２、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、または２～３個の炭素原子を含有する。一部の実施形態において、アルケニル基は１～６、１～５、１～４、１～３、１～２、または１つの炭素－炭素二重結合も含有し得る。例えばアルケニル基はこれらに限定されないが、ビニル、ｎ－プロペニル、イソプロペニル、ｎ－ブテニル、およびｓｅｃ－ブテニルなどの化学基を含む。

[0117]本出願において、用語「アルキニル」は、別の用語の一部として使用されようと単独で使用されようと、少なくとも１つの炭素－炭素三重結合を有する直鎖または分岐鎖であり得る不飽和アルキニル基を指す。一部の実施形態において、アルキニル基は２～１２、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、または２～３個の炭素原子を含有する。一部の実施形態において、アルキニル基は１～６、１～５、１～４、１～３、１～２、または１つの炭素－炭素三重結合も含有し得る。例えばアルキニル基はこれらに限定されないが、エチニル、プロピニル、およびブチニルなどの化学基を含む。

[0118]本出願において、用語「シクロアルキル」は、少なくとも３つの原子からなる環アルキル基を指す。用語「ｎ～ｍ員のシクロアルキル」は、環の形成のためのｎ～ｍ個のメンバーを有するシクロアルキル基を指す。加えて、環は完全共役系を有しない１つまたは複数の二重結合も含有し得る。一部の実施形態において、シクロアルキル基は、環の形成のための３～８、３～６、または４～６個の炭素原子を含有する。例えばシクロアルキル基はこれらに限定されないが、シクロプロパン、シクロブタン、およびシクロペンチルなどを含む。

[0119]本出願において、用語「ヘテロシクリル」は、環中の少なくとも１個の原子がヘテロ原子であり、残りの原子が炭素原子である、環基を指す。用語「ｎ～ｍ員のヘテロシクリル」は、環の形成のためのｎ～ｍ個のメンバーを有するヘテロシクリル基を指す。本出願において、用語「ヘテロシクリル」はヘテロアリールおよびヘテロシクロアルキルを含む。加えて、環は１つまたは複数の二重結合も含有し得る。一部の実施形態において、ヘテロシクリルは飽和ヘテロシクロアルキル基である。例えばヘテロ原子はこれらに限定されないが、酸素、硫黄、窒素、およびリンなどを含む。

[0120]本出願において、用語「ヘテロシクロアルキル」は、環中の少なくとも１個の原子がヘテロ原子であり、残りの原子が炭素原子である、シクロアルキル基を指す。用語「ｎ～ｍ員のヘテロシクロアルキル」は、環の形成のためのｎ～ｍ個のメンバーを有するヘテロシクロアルキル基を指す。加えて、環は完全共役系を有しない１つまたは複数の二重結合も含有し得る。一部の実施形態において、ヘテロシクロアルキルは飽和ヘテロシクロアルキル基である。例えばヘテロ原子はこれらに限定されないが、酸素、硫黄、窒素、およびリンを含む。一部の実施形態において、ヘテロシクロアルキル基は、環の形成のための３～８、３～６、または４～６個の炭素原子を含有する。例えばヘテロシクロアルキル基はこれらに限定されないが、アゼチジン、アジリジン、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリン、およびホモピペラジンなどを含む。

[0121]本出願において、用語「アリール」は、別の用語の一部として使用されようと単独で使用されようと、環を形成する炭素原子の間に二重結合および単結合が交互にある単炭素環または多炭素環基を指す。用語「Ｃ_ｎ～Ｃ_ｍアリール」は、環の形成のためのｎ～ｍ個の炭素原子を有するアリール基を指す。一部の実施形態において、アリール環系は、１つまたは複数の環に６～１２、６～１０、または６～８個の炭素原子を含有する。一部の実施形態において、アリール環系は２つ以上の縮合環を含有する。例えばアリール基はこれらに限定されないが、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、およびインデニルなどの化学基を含む。

[0122]本出願において、用語「ヘテロアリール」は、少なくとも１個の環原子がヘテロ原子であり、残りの環原子が炭素原子であるアリール基を指す。用語「ｎ～ｍ員のヘテロアリール」は、環の形成のためのｎ～ｍ個のメンバーを有するヘテロアリール基を指す。例えばヘテロ原子はこれらに限定されないが、酸素、硫黄、窒素、およびリンなどを含む。一部の実施形態において、ヘテロアリール基は、環の形成のための５～１０、５～８、または５～６個のメンバーを含有し得る。一部の実施形態において、ヘテロアリール基は５または６員のヘテロアリールである。例えばヘテロアリール基はこれらに限定されないが、フリル、チエニル、ピリジル、キノリル、ピロリル、Ｎ－低級アルキルピロリル、ピリジル－Ｎ－オキシド、ピリミジニル、ピラジニル、イミダゾリル、およびインドリルを含む。

[0123]本出願において、用語「アルコキシ」は、別の用語の一部として使用されようと単独で使用されようと、「－Ｏ－アルキル」基を指す。用語「Ｃ_ｎ～Ｃ_ｍアルコキシ」は、アルコキシ基のアルキル部分がｎ～ｍ個の炭素原子を含有することを意味する。一部の実施形態において、アルキル部分は１～６、１～４、または１～３個の炭素原子を含有する。例えばアルコキシ基はこれらに限定されないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ（例えばｎ－プロポキシおよびイソプロポキシ）、およびｔ－ブトキシなどの化学基を含む。

[0124]本出願において、用語「ハロアルキル」は、別の用語の一部として使用されようと単独で使用されようと、「－アルキル－Ｘ」基を指し、Ｘはフッ素、塩素、臭素およびヨウ素からなる群から選択されるハロゲンである。用語「Ｃ_ｎ～Ｃ_ｍハロアルキル」は、ハロアルキル基のアルキル部分がｎ～ｍ個の炭素原子を含有することを意味する。一部の実施形態において、アルキル部分は１～６、１～４、または１～３個の炭素原子を含有する。例えばハロアルキル基はこれらに限定されないが、ハロメチル、ハロエチル、ハロプロピル（例えばｎ－ハロプロピルおよびイソハロプロピル）、およびｔ－ハロブチルなどの化学基を含む。

[0125]本出願において、ｎが整数である用語「ｎ員の」は、環を形成する環系中の原子の数を記載するために一般に環系と共に使用される。例えば、ピペリジニルは６員のヘテロシクロアルキル基のうちの１つであり、ピラゾリルは５員のヘテロアリール基のうちの１つであり、ピリジルは６員のヘテロアリール基のうちの１つであり、１，２，３，４－テトラヒドロ－ナフタレンは１０員のアリール基のうちの１つである。

[0126]本出願において、用語「ハロゲン」はフッ素、塩素、臭素およびヨウ素からなる群から選択される原子を指す。
[0127]本出願において、用語「シアノ」は「－ＣＮ」基を指す。

[0128]本出願において、用語「ヒドロキシル」は「－ＯＨ」基を指す。
[0129]本出願において、用語「ニトロ」は「－ＮＯ_２」基を指す。
[0130]本出願において、用語「アミノ」は「－ＮＨ_２」基を指す。

[0131]本出願において、用語「カルバモイル」は「－ＨＮＣＯＮＨ_２」基を指す。
[0132]本出願において、用語「化合物」は、示されている構造の全ての立体異性体（例えばエナンチオマーおよびジアステレオマー）、幾何異性体、互変異性体、および同位体を含むことが意図される。

[0133]本出願において、本出願における化合物は不斉であり得る（例えば１つまたは複数の立体中心を有する）。別段の指定がない限り、エナンチオマーおよびジアステレオマーなどの全ての立体異性体が含まれる。不斉に置換された炭素原子を含有する本出願における化合物は、光学活性またはラセミ形態で単離され得る。光学活性を有しない初期原料から光学活性形態を調製するための方法は当技術分野で公知であり、例えばラセミ混合物の分割または立体選択的合成である。本出願における化合物は、オレフィンおよび炭素－炭素二重結合などの様々な幾何異性体も含むことができ、これらの安定な異性体の全てが本出願に包含されている。本出願に記載される化合物のシスおよびトランス幾何異性体は、異性体の混合物としてまたは個々の異性体として単離され得る。

[0134]一部の実施形態において、本出願における化合物はＲ立体配置を有する。一部の実施形態において、本出願における化合物はＳ立体配置を有する。
[0135]化合物のラセミ混合物は当技術分野で公知の任意の方法によって分割され得る。例えば方法は、光学活性を有する塩形成有機酸であるキラル分割酸を用いる分別結晶を含む。分別結晶に適正な分割試薬は、例えば光学活性酸（例えばＤおよびＬ型の酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、および乳酸）または様々な光学活性なカンファースルホン酸である。分別結晶のための他の分割試薬は、Ｎ－メチルベンジルアミン、２－フェニルグリシノール、ノルエフェドリン、エフェドリン、Ｎ－メチルエフェドリン、シクロヘキシルエチルアミン、および１，２－ジアミノシクロヘキサンなどの立体異性的に純粋な形態を含む。

[0136]ラセミ混合物の分割は、光学活性な分割試薬（例えばジニトロベンゾイルフェニルグリシン）を有するクロマトグラフィーカラムでの溶出によって行われ得る。溶出に適正な溶媒は当業者によって決定され得る。

[0137]本出願における化合物は互変異性の形態も含む。互変異性の形態は、プロトンの移動を伴う、単結合の隣接する二重結合との交換により生じる。互変異性の形態は、同じ化学式および総電荷を有する異性体プロトン化状態のプロトンの互変異性体を含む。例えばプロトンの互変異性体は、ケト－エノール対、アミド－イミド酸対、ラクタム－ラクチム対、エナミン－イミン対、およびプロトンが複素環系の２つ以上の位置を占め得る環状形態、例えば１Ｈ－および３Ｈ－イミダゾール；１Ｈ－、２Ｈ－および４Ｈ－１，２，４－トリアゾール；１Ｈ－および２Ｈ－イソインドール；ならびに１Ｈ－および２Ｈ－ピラゾールを含む。互変異性の形態は、平衡状態であり得るまたは適切な置換によって１つの形態に立体的に固定され得る。

[0138]本出願における化合物は、中間体または最終化合物に生じる原子の全ての同位体も含み得る。同位体は、同じ原子番号を有するが、異なる質量数を有する原子を含む。例えば水素の同位体はプロチウム、重水素、およびトリチウムを含む。

[0139]一部の実施形態において、本出願における低分子化合物は有機的に合成され得る。化合物の塩、エステル、水和物、または溶媒を含む、本出願における化合物を調製するために、任意の公知の有機合成技術および様々な可能な合成経路が使用され得る。

[0140]本出願における化合物は、有機合成の当業者によって容易に選択され得る適正な溶媒で調製され得る。適正な溶媒は、反応温度（例えば溶媒の凍結温度～溶媒の沸騰温度の温度範囲）で初期原料（反応物質）、中間体、または生成物と実質的に非反応性である。所与の反応は、１種の溶媒または１種より多くの溶媒の混合物中で行われ得る。当業者は特定の反応ステップに適正な溶媒を選択することができる。

[0141]本出願における化合物の調製は様々な化学基の保護および脱保護を含み得る。当業者は、保護または脱保護が必要かどうか、および適正な保護基の選択を容易に決定することができる。化学における保護基について、参照によりその全体が組み込まれるＴ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第３版、Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９９）を参照されたい。

[0142]反応は、当技術分野で公知の任意の適切な方法に従ってモニタリングされ得る。例えば生成物の形成は、分光法、例えば核磁気共鳴分光法（例えば^１Ｈまたは^１３Ｃ）、赤外分光法、分光光度法（例えばＵＶ－Ｖｉｓ）、もしくは質量分析法によって、またはクロマトグラフィー、例えば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、液体クロマトグラフィー－質量分析法（ＬＣＭＳ）、もしくは薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によってモニタリングされ得る。当業者は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（参照によりその全体が組み込まれる「Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ＬＣ－ＭＳ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｍｅｔｈｏｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ」Ｋａｒｌ Ｆ．Ｂｌｏｍ、Ｂｒｉａｎ Ｇｌａｓｓ、Ｒｉｃｈａｒｄ Ｓｐａｒｋｓ、Ａｎｄｒｅｗ Ｐ．Ｃｏｍｂｓ Ｊ．Ｃｏｍｂｉ．Ｃｈｅｍ．２００４、６（６）、８７４～８８３を参照されたい）および順相シリカゲルクロマトグラフィーを含む様々な方法によって化合物を精製することができる。

[0143]一部の実施形態において、本出願における低分子化合物は商業的に入手可能であり得る。
[0144]一部の実施形態において、低分子化合物は、

である。
[0145]本出願において、用語「ＰＡＯ」は、具体的には以下の通りの基本構造としてアルセニックオキシド（ａｒｓｅｎｉｃ ｏｘｉｄｅ）基およびベンゼン環を有する低分子化合物を指す。

[0146]気分障害
[0147]本出願において、用語「気分障害」は、ある特定の期間持続する異常な気分（情動）に起因し、日常生活にある種の支障をきたす苦痛の状態を指す。

[0148]一部の実施形態において、気分障害は、高揚した気分、抑うつ気分、または高揚した気分および抑うつ気分の繰返しである。
[0149]本出願において、用語「高揚した気分」は、典型的には患者に良い気持ちとして現れ、したがって、とても嬉しそう、得意げ、気楽に見えるなどの躁病エピソードの主な初発症状を指す。この元気の良い気分は、非常に伝染性であり、周囲の人々の笑いにつながることが多い。躁病エピソードを有する一部の患者は、興奮性の主な徴候を有し、いたるところで平静を失い、破壊的および攻撃的行動を有することさえあり得る。

[0150]本出願において、用語「抑うつ気分」は、これらに限定されないが、悲しみおよび憂うつを含む気持ちを伴い、破壊的行動につながる精神状態を指す。患者は、元気のない暗い調子で、抑うつ、苦痛、および悲しみを感じる。うつ病エピソードの抑うつ気分は２つの重要な特徴を有し、１つ目は「著しさおよび持続性」であり、これはこの抑うつ気分が通常、少なくとも２週間続く陰うつからひどい失望まで自分自身および／または他人によって明らかに感じられることを意味し、２つ目は「実際の状況と釣り合わないこと」であり、これはこの抑うつ気分が歪められ誇張された「うつ病」であり、客観的事実で説明することが難しいことを意味する。

[0151]本出願において、用語「高揚した気分および抑うつ気分の繰返し」は、高揚した気分および抑うつ気分を交互に繰り返す精神状態を指す。
[0152]一部の実施形態において、気分障害は不安、うつ病、統合失調症、または躁病である。

[0153]本出願において、用語「不安」は、広場恐怖症を伴うまたは伴わないパニック障害、パニック障害の履歴を伴わない広場恐怖症、特定の恐怖症、社会不安障害、強迫性障害、心的外傷後ストレス障害、急性ストレス障害、全般性不安障害、一般的医学的状態に起因する不安障害、物質誘発性不安障害、および他に列挙されていない不安障害を含む。本明細書で使用される場合、用語「不安」は、不安の診断および統計マニュアルに記載されているそれらの関連障害を含む（例えばＤｉａｇｎｏｓｔｉｃ ａｎｄ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｍｅｎｔａｌ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ、ＤＳＭ－ＩＶ、１９９４、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、Ｄ．Ｃ．を参照されたい）。当業者は、神経学的および精神医学的障害、特に不安障害が、医学の発展と共に進化する代替の命名系、疾患分類系、および分類系を含むことをわかっているはずである。したがって、用語「不安」は、他の診断情報源に記載されている同様の障害を含むことが意図される。

[0154]本出願において、用語「うつ病」は、例えば単発または再発性の重大な抑うつおよび気分変調性障害、抑うつ神経症、および機能性うつ病を含む。本出願におけるうつ病は、食欲不振、過度の体重減少、不眠症および早朝の目覚め、および精神運動遅滞を含むメランコリー型うつ病；食欲増加、過眠症、精神運動性激越または興奮性、不安障害、および恐怖症を含む非定型うつ病（または反応性うつ病）；ならびに季節的情動障害を含む。本明細書で使用される場合、用語「うつ病」はＤＳＭ－ＩＶに記載されている関連障害を含む。

[0155]本出願において、用語「統合失調症」は、重度の慢性外傷を特徴とし、青年期に現れる症状を伴い、その後に社会的機能障害の期間が続く精神障害である。統合失調症は、聴覚性および視覚性幻覚、妄想症、妄想（陽性症状）、感情鈍麻、うつ病、無快感、寡黙、記憶および注意欠損、引きこもり（陰性症状）などとして現れる。

[0156]本出願において、用語「躁病」は、高揚した感情または興奮性を主に特徴とし、行動力の増加、多弁、多動、および重度の場合は幻覚、妄想、および緊張を伴う精神医学的障害である。躁病エピソードは、通常一時的経過において少なくとも１週間続く。患者は、各エピソード後に正常な精神状態を伴う間欠的寛解になる。ほとんどの患者は再発エピソードを有する傾向がある。

[0157]一部の実施形態において、気分障害は神経変性疾患、脳卒中、または悪性腫瘍によって引き起こされる。
[0158]一部の実施形態において、気分障害は、神経変性疾患によって引き起こされる不安またはうつ病、例えばアルツハイマー病によって引き起こされる不安またはうつ病である。

[0159]薬物投与および医学的使用
[0160]本出願において、用語「薬学的に許容される」は、健全な医学的判断の範囲で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴うことなく、適正なリターン／リスク比でヒトおよび動物組織と接触して使用するのに適切な薬学的に許容される化合物、物質、組成物、および／または剤形を指す。一部の実施形態において、薬学的に許容される化合物、物質、組成物、および／または剤形は、動物（とりわけヒト）において使用するための、規制当局（例えば米国食品医薬品局、中国国家食品薬品監督管理局、または欧州医薬品庁）によって承認されたもの、または一般的に認められている薬局方（例えば米国薬局方、中国薬局方、または欧州薬局方）に列挙されているものを指す。

[0161]本出願において、用語「対象」はヒトおよび非ヒト動物を含み得る。非ヒト動物は、哺乳動物および非哺乳動物などの全ての脊椎動物を含む。「対象」は、家畜（例えばウシ、ブタ、ヒツジ、ニワトリ、ウサギ、またはウマ）、または齧歯類（例えばラットまたはマウス）、または霊長類（例えばゴリラまたはサル）、または飼育動物（例えばイヌまたはネコ）であり得る。「対象」はオスでもまたはメスでもよく、異なる年齢であってもよい。ヒト「対象」は、コーカサス人、アフリカ人、アジア人、セム人、または他の人種、または異なる人種の混血であり得る。ヒト「対象」は、高齢者、成人、青年、小児、または幼児であり得る。

[0162]一部の実施形態において、本出願における対象はヒトまたは哺乳動物である。一部の実施形態において、本出願における対象はヒトまたは非ヒト霊長類である。
[0163]本出願で開示されるＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤は、注射（皮下注射、腹腔内注射、静脈内注射（点滴または注入）、筋肉内注射、または皮内注射を含む）、または非注射（経口投与、鼻腔投与、舌下投与、直腸投与、または局所投与を含む）などの当技術分野で公知の投与経路によって投与され得る。一部の実施形態において、本出願におけるＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤は、経口、皮下、筋肉内、または静脈内投与される。一部の実施形態において、本出願におけるＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤は経口投与される。

[0164]本出願において、用語「治療有効量」は、対象において疾患もしくは症状を緩和もしくは排除することができる、または疾患もしくは症状の発生を予防的に阻害もしくは防止することができる薬物の量を指す。治療有効量は、対象の１つまたは複数の疾患または症状をある特定の程度まで緩和する薬物の量であってもよく、疾患または症状の原因と関連する１つもしくは複数の生理的または生化学的パラメーターを部分的にまたは完全に正常に回復させる薬物の量であってもよく、および／または疾患もしくは症状の可能性を減少させる薬物の量であってもよい。一部の実施形態において、用語「治療有効量」は、対象において気分障害（例えば不安またはうつ病）を緩和または排除することができる薬物の量を指す。

[0165]本出願によって提供されるＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤の治療有効量は、体重、年齢、過去の病歴、現在受けている処置、体力、アレルギー、過敏症、および健康状態と薬物の相互作用の副作用、投与経路、および疾患進行の程度などの当技術分野で公知の様々な因子に依存する。当業者（例えば医師または獣医）は、これらのまたは他の条件または要件に従って用量を相応に減少または増加させることができる。

[0166]一部の実施形態において、方法は、有効量のＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤を対象に投与する前に、気分障害を有すると対象を診断するステップをさらに含む。対象は、精神科の臨床医によって使用される従来の診断方法および基準によって気分障害と診断され得る。

[0167]一部の実施形態において、処置は第２の試薬を、それを必要とする対象に投与するステップをさらに含む。
[0168]一部の実施形態において、第２の試薬は、これらに限定されないが、三環系抗うつ薬、選択的セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＳＲＩ）、またはセロトニン－ノルエピネフリン再取り込み阻害剤（ＳＮＲＩ）を含む気分障害を処置するために使用される。

[0169]一部の実施形態において、第２の試薬は神経変性疾患、脳卒中、または悪性腫瘍を処置するために使用される。一部の実施形態において、神経変性疾患を処置するために使用される試薬はこれらに限定されないが、レボドパ、カルビドパ、セレギリン、ラサギリン、エンタカポン、トルカポン、アマンタジン、メマンチン、リルゾール、ブロモクリプチン、ペルゴリド、アポモルヒネ、ロピニロール、プラミペキソール、アトロピン、スコポラミン、トリヘキシフェニジル、ベンザトロピン、プロシクリジン、タクリン、ドネペジル塩酸塩、ガランタミン、フペルジンＡ、およびリバスチグミンを含む。一部の実施形態において、脳卒中を処置するために使用される試薬はこれらに限定されないが、ジピリダモール、低分子量デキストラン、ウロキナーゼ、ヘパリン、およびアスピリンを含む。一部の実施形態において、悪性腫瘍を処置するために使用される試薬はこれらに限定されないが、シクロホスファミド、チオテパ、カルムスチン、シスプラチン、カルボプラチン、メトトレキサート、ペメトレキセド、カペシタビン、シタラビン、ゲムシタビン、パクリタキセル、ドセタキセル、およびビンクリスチンを含む。

[0170]一部の実施形態において、ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤は第２の試薬の前、後、またはそれと同時に投与される。
[0171]本出願は、気分障害を防止または処置するための医薬の製造におけるＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤の使用、および気分障害を防止または処置することにおけるＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤の使用も含む。

[0172]薬物スクリーニング
[0173]本出願はＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤をスクリーニングする方法であって、薬物候補をＰＩ４ＫＩＩＩα、ＦＡＭ１２６、ＴＴＣ７、もしくはＥＦＲ３ａタンパク質もしくは核酸、またはＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体と接触させることを可能にするステップと、薬物候補がＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体の形成または活性を阻害することができるかどうかを検出するステップとを含む方法をさらに提供する。

[0174]本出願は気分障害を防止または処置するための薬物をスクリーニングする方法であって、薬物候補をＰＩ４ＫＩＩＩα、ＦＡＭ１２６、ＴＴＣ７、もしくはＥＦＲ３ａタンパク質もしくは核酸、またはＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体と接触させることを可能にするステップと、薬物候補がＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体の形成または活性を阻害することができるかどうかを検出するステップとを含む方法をさらに提供する。

[0175]実施例
[0176]実施例１：ラットの慢性的予測不能中程度ストレスモデルに対する経口投与ＰＡＯの抗うつ効果
[0177]１．１ 実験原理
[0178]慢性的予測不能中程度ストレス（ＣＵＭＳ）モデルは、Ｋａｔｚによって記載された慢性的予測不能ストレスから着想を得たＷｉｌｌｎｅｒらによって１９８７年に提案されたラットのうつ病モデルであり、適当に改変されている。それは現在の文献において広く使用されている。このモデルは、人々がそれらの日常生活で遭遇し得る「困難」をより現実的に模擬する。このモデルにおいて、ストレス因子の多様性および予測不能性はモデル作製の鍵である。１０種より多くのストレス因子を実験全体において無作為に選択し、動物が刺激の発生を予期できないようにする。このモデルは、非常に有効であり、基本的にうつ病モデルの要件を満たし、他のモデルによって解決できない問題を扱うために使用され得る。軽度ストレスの長期刺激後、スクロース水の消費量の減少は内因性うつ病の中心症状、つまり無快感を反映し、他の主要な抑うつ障害の症状、例えば運動能力および社会的相互作用能力の低下、探索能力の低下、積極的攻撃能力の欠落、ならびに性欲の低下も模擬される。慢性ストレス媒介行動異常は数カ月間持続することがあり、抗うつ薬の長期使用はこれらの異常を正すことができるが、他の種類の向精神薬は無効である。

[0179]１．２ 実験目的
[0180]この実験の目的は、慢性的予測不能中程度ストレスラットモデルにおける砂糖水の嗜好性に対するＰＡＯの経口投与の効果を観察し、ＰＡＯが良好な抗うつ効果を有するかどうかを決定することである。

[0181]１．３． 実験材料
[0182]１．３．１ 実験試料
[0183]名称：ＰＡＯ
[0184]調製方法：ＰＡＯの必要量を秤量し、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で３０ｍｇ／ｍＬの濃度のストック溶液を調製し、次いでストック溶液を水で希釈した。
[0185]強制投与による経口投与：０．１～３．０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量および体重１００ｇ当たり０．５ｍＬの体積を用いる。

[0186]１．３．２ 陽性対照
[0187]名称：ベンラファキシン塩酸塩カプセル（Ｅｆｆｅｘｏｒ ＸＲ）
[0188]規格：１５０ｍｇ／カプセル
[0189]調製方法：２つのベンラファキシン塩酸塩カプセル（１５０ｍｇ／カプセル）を押しつぶし、次いで超音波処理下で０．５％ＣＭＣ－Ｎａに懸濁し、０．５％ＣＭＣ－Ｎａで体積を正確に調整し、１００ｍＬの最終体積にした。

[0190]１．３．３ 実験動物
[0191]種：Ｗｉｓｔａｒラット
[0192]数および性別：６０匹、オス
[0193]体重：２００～２２０ｇ（群分け前）
[0194]供給源：Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｓｉｌａｉｋｅ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ Ａｎｉｍａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．

[0195]１．４ 実験方法
[0196]１．４．１ 動物の群分け
[0197]環境に５日間慣れさせた後、２２０～２５０ｇの体重を有する健康なＳＤラットを実験用に選択し、以下の表１に従って群分けした。

[0198]１．４．２ 動物のモデリングおよび投与方法
[0199]１．４．２．１ 砂糖水嗜好性の基本的検出
[0200]ラットを１週間適応的に飼育し、次いで砂糖水嗜好性の基本的実験に供した。最初の２４時間は全てのラットに、ケージの左右の隅に置いた２つのボトル内の１％スクロース水を与えた。次の２４時間は全てのラットに、やはりケージの左右の隅に置いた２つのボトル内のそれぞれ１％スクロース水および通常の飲料水を与えた。その後、全てのラットに固形物および液体を２３時間絶食させ、次いで砂糖水嗜好性の実験に供した：全てのラットに１％スクロース水および通常の飲料水を与え、１時間以内にラットによって消費されたスクロース水および通常の飲料水の量を、ボトルを秤量することによってそれぞれ測定した。ラットを、体重、液体消費量、および砂糖水消費量に従って表１に示される通りに均等に群分けし、次いで慢性的予測不能中程度ストレス（「ＣＵＭＳ」）に供した。

[0201]１．４．２．２ ＣＵＭＳうつ病モデリング
[0202]ブランク群を除く全ての群にＣＵＭＳうつ病モデリングを行った。１０種より多くのストレス因子をラットに毎週代わる代わる与え、ラットがストレス因子による各刺激の持続時間および次に与えられる刺激を予測できないようにした。実験のためのストレス因子は以下の通りであった：２回の７時間の閃光；１回の１７時間の不潔な寝藁環境（１５０ｍＬの水を寝藁に注ぐ）；１回の３時間の間欠的雑音および１回の５時間の間欠的雑音；１回の常夜灯（３６時間続く）；１回の７時間のケージ傾斜および１回の２２時間のケージ傾斜；１回の１７時間の群内飼育（１つのケージに５匹のラット）；１回の１７時間の馴染みのない臭いがある環境での飼育；１回の７時間の異物がある環境での飼育；３回のそれぞれ１９時間、２２時間、および２４時間の固形物の絶食と各絶食後の２時間の制限された飼料供給；ならびに４回のそれぞれ１７時間、１９時間、２０時間、および２１時間の液体の絶食と各絶食後に１時間空のボトルを置くこと（表２）。

[0203]１．４．２．３ 投与方法
[0204]最初の２週間のＣＵＭＳモデリングの間は、ＰＡＯをラットに投与しなかった。２週間のＣＵＭＳモデリング後の１週目に、ＰＡＯまたはベンラファキシンをラットに経口投与した。同時に飲料水をブランク群およびモデル群のラットに与えた。投与を１日１回表１に示される用量でＣＵＭＳモデリングの終了まで行った。ＣＵＭＳ刺激は投与中継続して行った。

[0205]１．４．３ 抑うつ行動指標－砂糖水の嗜好性の検出
[0206]毎週、固形物および液体の絶食後、液体消費量を測定し（金曜に）、各ラットについて、体重（火曜に記録）、総流体摂取量、水摂取量、および砂糖水摂取量を記録した。各ラットについて、砂糖水の嗜好性のパーセンテージ（以下の通り算出した：［嗜好性＝（砂糖水摂取量／総流体摂取量）×１００％］）および体重１グラム当たりの砂糖水消費量を算出した。この実験を９週間の期間行った。

[0207]１．４．４ 統計的方法
[0208]ＳＰＳＳソフトウェアを使用することによって統計分析を行い、データを平均±標準誤差（

）として表した。ブランク群のラットと他の群のラットの体重差を二元配置分散分析によって統計的に分析した。１週間および２週間の投与後、モデル群と他の群の砂糖水の嗜好性の差異およびブランク群と他の群の砂糖水の嗜好性の差異を、有意性について対応のないｔ検定によって試験し、^＊はＰ＜０．０５を示し、^＊＊はＰ＜０．０１を示した。

[0209]１．５ 実験結果
[0210]１．５．１ ＣＵＭＳモデリングおよび投与後の体重の変化
[0211]初めの群分け時、全ての群のラットの体重は同様であり、有意差がない。ＣＵＭＳの進行と共に、未処置ブランク群を除いて、ＣＵＭＳモデリングに起因して他の群のラットの体重増加が著しく遅くなる（表３、図１）。１週目の刺激以来、ＣＵＭＳによって刺激された他の群のラットの体重は、毎週の測定でブランク群のラットの体重より低く（表３、図１）、この実験におけるうつ病モデリングのためのＣＵＭＳの使用が非常に有効であり、うつ病発症中の体重減少を大いに模擬していることを示す。

[0212]１．５．２ ＰＡＯの複数回投与の抗うつ効果
[0213]初めの群分け時、全ての群のラットは、砂糖水と同様の嗜好性を有する。６週間の投与後、３ｍｇ／ｋｇおよび０．７５ｍｇ／ｋｇの用量のＰＡＯおよびベンラファキシンの両方がラットにおける砂糖水の嗜好性を増加させることができ、モデル群との有意差（Ｐ＜０．０５またはＰ＜０．０１）を有し、ブランク群と同様の砂糖水の嗜好性を有する（Ｐ＞０．０５）（表４）。この実験の結果は、ラットのＣＵＭＳうつ病モデルにおいて、ＰＡＯの経口投与が有意な抗うつ効果を有し、ベンラファキシンの強制投与による経口投与よりわずかに遅い発現時間を有することを示す。

[0214]１．６ 結論
[0215]１日１回６週間の３ｍｇ／ｋｇまたは０．７５ｍｇ／ｋｇの用量のＰＡＯまたは陽性薬ベンラファキシンの経口投与は、ＣＵＭＳうつ病ラットモデルにおける砂糖水の嗜好性を正常ラットと同様のレベルまで増加させることができ、抗うつ効果を反映する。１．５ｍｇ／ｋｇの用量のＰＡＯの経口投与も砂糖水の嗜好性を増加させることができる。

[0216]実施例２：ＰＡＯの抗不安および抗うつ病効果のさらなる検証および機序研究
[0217]２．１ マウスの系統、飼養、および繁殖
[0218]本発明において使用したマウス系統は、Ｃ５７／６ＢおよびＩＣＲ野生型マウス、Ｅｆｒ３ａ^－／＋マウス（Ｅｆｒ３ａの第２のエクソンが無条件にノックアウトされ、次いでその後の遺伝子コードシフトをもたらす）、Ｐｉ４ｋａＧｔ（ＲＲＯ０７３）^{Ｂｙｇ／＋}（略してＰｉ４ｋ^－／＋）マウス、およびＡＰＰ／ＰＳ１マウスを含む。

[0219]Ｍｕｔａｎｔ Ｍｏｕｓｅ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＣｅｎｔｅｒからのＰｉ４ｋａＧｔ（ＲＲＯ０７３）^{Ｂｙｇ／＋}］マウス（ＭＭＲＲＣ、カタログ番号０１６３５１－ＵＣＤ）とＣ５７／６Ｂマウスを５世代を超えて戻し交配することによってＰｉ４ｋａＧｔ（ＲＲＯ０７３）^{Ｂｙｇ／＋}マウスを得た。この種類のマウスにおいて、トランスポゾンをＰＩ４ＫＡ遺伝子（ＰＩ４ＫＩＩＩαをコードする）に挿入し、ｐｏｌｙＡを導入し、ＰＩ４ＫＡの転写が早めに終了し得るようにした。ＡＰＰ／ＰＳ１マウスは、Ｂ６．Ｃｇ－Ｔｇ（ＡＰＰｓｗｅ、ＰＳＥＮ１ｄＥ９）８５Ｄｂｏ／Ｍｍｊａｘ（ＭＭＲＲＣ ＩＤ ０３４８３２－ＪＡＸ）の遺伝子型を有するダブルトランスジェニックマウスであり、アルツハイマー病（ＡＤ）のモデルのマウスである。

[0220]本出願において、マウスをケージ当たり５匹、時にはケージ当たり４または６匹の標準サイズのケージにおいて飼育した。別段の指定がない限り、マウスが自由に飲食できるようにした。

[0221]２．２ 不安およびうつ病のホルモン誘発性マウスモデルの確立
[0222]ＩＣＲマウスにコルチコステロン（ＧＣ、１１β，２１－ジヒドロキシプロゲステロンとしても公知である）を経口で１カ月間投与し、マウスうつ病モデルを得た。３５μｇ／ｍＬのＧＣ濃度を有する水溶液を、可溶化剤として０．４５％ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン（β－ＣＤ）を用いて調製した。

[0223]６０匹のオスのＣ５７Ｂ／６ＷＴマウスを各群１０匹の６つの群に分けた。マウスが３カ月齢のときに、マウスの４つの群の飲料水を水性ＧＣ溶液と交換し、他の２つの群には通常の飲料水を与え続け、マウスの体重変化および水摂取量を毎週記録した。１カ月後、ＧＣ溶液および水を別々に与えたマウスから２つの群を無作為に選択し、ＰＡＯ溶液を強制投与によって投与した。ＰＡＯを毎日決まった時間に強制投与によって、０．２ｍｇ／ｋｇおよび０．４ｍｇ／ｋｇの用量で、３００μＬの総体積で投与した。１カ月の投与後、つまりマウスが５カ月齢のときに、マウスの行動実験分析を行った。

[0224]２．３ ＰＡＯまたはその誘導体の調製
[0225]ＰＡＯストック溶液の調製：≦３０ｍｇのＰＡＯを１．０ｍＬの純粋なＤＭＳＯ溶媒に添加し、次いでＰＡＯが完全に溶解するまで超音波処理したまたは振動させた。次いで混合物を水で希釈し、必要濃度および０．１％の最終ＤＭＳＯ濃度にした。

[0226]一部の実施例では、ＰＡＯまたはその誘導体を中鎖トリグリセリドに溶解し、１．０ｍｇ／ｇの濃度を有するストック溶液を得、ストック溶液を中鎖トリグリセリドで希釈し、強制投与用の特定の濃度にする。

[0227]２．４ マウス行動実験方法
[0228]２．４．１ 強制水泳試験（ＦＳＴ）
[0229]強制水泳試験において、動物が逃げようと必死にもがくが、逃げることができない、したがって、回避できない抑圧的な環境を提供する制限された環境（例えば水）に実験動物を置く。ある期間の後、動物は典型的な「無動状態」を示す。これは「行動的絶望状態」として公知のうつ病のモデルである。１５ｃｍの内径および３０ｃｍの高さを有する透明のプラスチックシリンダーで実験を行う。注水の高さは１５ｃｍであり、これはマウスの尾が底に触れることができず、マウスがシリンダーから飛び出すことができない高さに適正に調整することができる。実験中、水温は２２～２５℃に維持すべきである。強制水泳画像取得システムは、水中でのマウスの四肢の動きを明瞭に記録できる、シリンダーからのある特定の距離でＦＳＴデバイスの前に置くべきである。各ＦＳＴは６分間行う必要がある。２分目から６分目のマウスの無動時間を分析する。実験後、マウスを直ちに取り出し、乾燥させる。マウスが実験中に溺死しかけている場合、直ちに取り出すべきであり、ＦＳＴ実験を中止すべきである。実験中、絶対的に静かな環境を作り、維持すべきである。マウスがある特定の期間無動のままであることが長いほど、マウスはいっそう抑うつである。

[0230]２．４．２ 明／暗箱（ＬＤＢ）試験
[0231]明／暗箱試験は、動物の暗所嗜癖（暗箱）および探索習性（明箱）に基づく、動物における不安行動評価の試験である。同じサイズの９つの升目を有する明箱（２７×２７ｃｍ）および同じサイズの６つの升目を有する暗箱（１８×２７ｃｍ）からなる、カバーのない全体が長方形の箱（４５×２７×２７ｃｍ）を使用してＬＤＢを行う。明箱および暗箱は、小窓（７．５×７．５ｃｍ）を有するパネルによって分けられている。画像取得システムを箱の真上に置き、設定時間内で、明箱と暗箱の間のマウスの距離および軌跡、明箱および暗箱に出入りする回数、ならびに明箱または暗箱で費やした時間を記録する。マウスが明箱および暗箱に頻繁に出入りするほど、箱間の距離が長いほど、または暗箱内で費やす時間が長いほど、マウスはいっそう不安である。実験前にケージをスズ箔で包むべきであるが、空気交換のための開口部を設けるべきである。実験は３０分間遮光した後に開始すべきである。目的は、マウスに暗い環境に前もって適応させ、マウスの実験パニックおよび不安状態を排除することである。マウスを明箱または暗箱の中心に、小窓の向きに置く。５分３０秒以内で明箱および暗箱に出入りする回数、明箱と暗箱の距離、ならびに各箱内で費やした時間を記録する。画像取得後に行動分析を行う。各実験後に、マウスが明箱および暗箱内で触れた領域を７０％エタノールで徹底的に拭き取り、エタノールの臭いが完全に消えてから次のマウスの実験を開始し、前のマウスの臭跡による後のマウスの行動における不要な迷いおよび干渉を回避するようにする。実験中、絶対的に静かな環境を作り、維持すべきである。

[0232]２．４．３ 高架式十字迷路（ＥＰＭ）試験
[0233]高架式十字迷路は、齧歯類における不安反応を評価するための実験方法の１つである。有害な刺激（例えば、電気刺激、雑音刺激、食餌の剥奪、および捕食者の臭いへの曝露など）によって引き起こされるマウスにおける不安行動の検出と比較して、この実験は単純な操作および低い有害性という利点を有し、マウスの条件反応を直感的に反映することができる。ＥＰＭは十字形に交差する２つの開いたアームおよび２つの閉じたアームからなり、交わる部分は地面から約７５ｃｍ上の中心領域である。原理は、新しい物（開いたアーム）を前にしてマウスは探索する好奇心を抱くが、暗所嗜癖性も有し、探索と回避の間の葛藤行動が不安をもたらすというものである。実験中、単一のマウスを中心領域に、閉じたアームの向きに置き、５分３０秒以内で、開いたアームおよび閉じたアームを出入りする回数、ならびに各アームで費やした時間を記録する。マウスが開いたアームおよび閉じたアームに頻繁に入るほど、または閉じたアームで費やした時間が長いほど、マウスはいっそう不安である。各実験後、マウスがＥＰＭにおいて触れた領域を７０％エタノールで徹底的に拭き取り、エタノールの臭いが完全に消えてから次のマウスの実験を開始し、前のマウスの臭跡による後のマウスの行動における不要な迷いおよび干渉を回避するようにする。実験中、絶対的に静かな環境を作り、維持すべきである。

[0234]２．４．４ 新奇環境摂食抑制（ＮＳＦ）試験
[0235]新奇環境摂食抑制試験は、絶食および飢餓後の齧歯類における新奇環境での摂食と新奇環境の恐怖の間の葛藤を検出することである。実験場所は、３０×３０四方、２０ｃｍの高さの白い不透明なプレキシガラス箱であり、マウス用の一切れの通常の餌が箱の底の中心に置かれている。２４時間の絶食後、単一のマウスを箱の隅に、頭を箱の隅に向けて無作為に置く。箱内でのマウスの活動を、マウスが餌を食べ始めるまで観察する。次いでマウスを取り出し、箱内に置いてから餌を食べ始めるまでの時間（摂食潜時）を記録する。別段の設計または指定がない限り、マウスが餌を５分以内に食べない場合もマウスを取り出し、マウスの摂食潜時を５分と記録する。摂食潜時が長いほど、マウスはいっそう不安である。

[0236]２．４．５ 慢性的予測不能中程度ストレス（ＣＵＭＳ）モデル
[0237]実験は８～１０週間続く。様々なストレス因子のうちの２種を無作為に選択し、マウスに毎日与える。ストレス因子は、１５分間尾を挟むこと、４時間の強い光刺激、１０分間の雑音、２４時間の４５°でのケージ傾斜、１０分間逆さにつるすこと、４時間の活動空間の制限、２４時間の不潔な寝藁環境（１５０ｍＬの水を寝藁に注ぐ）、常夜灯（３６時間）、７時間の馴染みのない異物がある環境、２４時間の固形物の絶食（絶食中に寝藁を除去する）、および２４時間の液体の絶食（絶食中に寝藁を除去する）を含む。しかし、液体の絶食は週に１回だけ行い、不潔な寝藁環境と重ならない。液体の絶食後、各マウスを秤量し、砂糖水の嗜好性を測定する。砂糖水の嗜好性の測定について、一方は純水を含有し、他方は１％砂糖水を含有する、前もって秤量した２つのボトルを置いた新しいケージに単一のマウスを入れる。マウスが１５分間飲んだ後、２つのボトルを交換し、次いでマウスは４５分間飲む。２つのボトルを取り出し、別々に秤量する。実験直後にマウスに十分な水および餌を提供する。

[0238]２．４．６ モリス水迷路（ＭＷＭ）試験
[0239]モリス水迷路試験デバイスは３つの部分：水迷路、水迷路画像取得システム、およびソフトウェア分析システムからなる。水迷路は主に水プール（直径＝１．２ｍ）および高さが調整可能で、除去可能な円形の透明なプラットホーム（直径＝５ｃｍ）からなる。水プールは二酸化チタンを含有し、これを各実験の開始前に均一に撹拌および混合し、マウスが水プール内のプラットホームを直感的に見つけることができないようにすべきである。水温を実験中約２０℃で維持する。水プール内のマウスの行動を、水迷路の上に置いたカメラによって取得し、オンラインまたはオフラインでの分析および保存のために、カメラに接続されたコンピュータに送信する。

[0240]モリス水迷路試験は主に３つの相：適応訓練、習得訓練、探索訓練、および時には逆転習得訓練（ｒｅｖｅｒｓｅ ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ ｔｒａｉｎｉｎｇ）からなる。簡潔なステップは以下の通りである：
[0241]適応訓練：習得学習の開始の前日に、水を適正な温度に調整し、均一に混合し、水面から０．５ｃｍ出るプラットホームを水プールの第３象限に置く。マウスをプールの壁に向けて水プール内に置き、自由に１分間泳げるようにし、次いでマウスを取り出し、拭いて乾かす。マウスがプラットホームに１分以内に上ることができる場合、マウスをプラットホームに０．５分間留まれるようにする。

[0242]習得訓練：通常７日間続くが、より長くてもまたはより短くてもよい。水プールを４つの象限に分け、プラットホームを第１象限の真ん中に置く。マウスをプールの壁に向けて４つの象限のそれぞれから水中に無作為に置く。三角形、四角形、４点星形、および円形の４種の異なる標識をそれぞれ、水プールの４つの象限の壁に貼り付け、マウスの記憶および学習を容易にする。マウスが水面下のプラットホームを見つけるのにかかる時間を記録する。時間が６０秒を超える場合、マウスをプラットホームに誘導し、プラットホームに３０秒間留まれるようにし、次いで取り出し、拭いて乾かす。マウスが６０秒より前にプラットホームを見つける場合、その時間を記録し、マウスをプラットホームに３０秒間留まれるようにし、次いで取り出し、拭いて乾かす。マウスが学習および記憶する能力を有する場合、プラットホームを見つけるのにかかる時間は日ごとに短くなる。

[0243]探索訓練：最後の習得訓練の翌日、プラットホームを第１象限から除去し、６０秒の探索訓練を開始する。マウスを水中に第３象限または第４象限（第１象限から最も遠い）から入れ、第１象限（プラットホームが前に置かれていた象限）においてマウスが費やした時間のパーセンテージを空間記憶の検出指標として記録する。実験が終了した後、マウスを直ちに取り出し、拭いて乾かすべきである。一般に、習得訓練においてプラットホームを見つけるのに各象限において最少の時間を費やすことができるマウスまたは探索訓練において第１象限で費やす時間の高いパーセンテージを有するマウスは強い学習および記憶能力を有する。実験中、絶対的に静かな環境を作り、維持すべきである。

[0244]逆転習得訓練：探索相後、プラットホームを元の位置と対側の象限に置き、訓練を各マウスに１日につき４つの象限において、合計４回、毎回６０秒間行う。マウスが隠されたプラットホームを見つけた後に、プラットホームに３０秒間留まれるようにする。マウスがプラットホームを見つけない場合、プラットホームに誘導し、プラットホームに３０秒間留まれるようにする。マウス間の訓練間隔は１５～２０分である。

[0245]２．５ マウスの脳におけるＰＩＫ４ＩＩＩαのｍＲＮＡレベルの定量ＰＣＲ分析
[0246]２．５．１ 主な機器および試薬

[0247]２．５．２ プライマー情報

[0248]２．５．３ 実験ステップ
[0249]ＲＮＡ抽出：１０００μＬのＲＮＡｉｓｏ Ｐｌｕｓを各脳組織試料（半分の脳）に添加し、次いで組織破砕装置（１０回転／秒×１０秒／サイクル×１０サイクル）で砕き、室温で５分間静置するようにし、１２０００ｇで、４℃で１０分間遠心分離した。９００μＬの上澄みを取り出し、新しい１．５ｍＬ ＥＰチューブに添加し、次いで２００μＬのクロロホルムを添加し、均一に混合し、室温で５分間静置するようにし、１２０００ｇで、４℃で１５分間遠心分離した。４００μＬの上澄みを新しい１．５ｍＬ ＥＰチューブに移し、次いで８００μＬのイソプロパノールを添加し、室温で１０分間静置するようにし、１２０００ｇで、４℃で１０分間遠心分離し、次いで上澄みを除去した。沈殿物を、１ｍＬの７５％エタノールを含有するチューブに添加し、均一に混合し、次いで７５００ｇ、４℃で５分間遠心分離し、次いで上澄みを除去した。沈殿物を室温で乾燥させ、次いで５０μＬのＨ_２Ｏで溶解させた。

[0250]逆転写：２０μＬ系を有するＤＮＡフリー逆転写キットを使用した。１μｇのＲＮＡ、２μＬの５×ｇＤＮＡ ｅｒａｓｅｒ ｂｕｆｆｅｒ、および１μＬのｇＤＮＡ ｅｒａｓｅｒを２００μＬ ＰＣＲチューブに添加し、次いでＨ_２Ｏを添加して１０μＬにした。ＤＮＡの消化を４２℃で２分間行った。１μＬのＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＲＴ Ｅｎｚｙｍｅ ＭＩＸ Ｉ、１μＬのＲＴ ｐｒｉｍｅｒ ｍｉｘ、４μＬの５×ｐｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ｂｕｆｆｅｒ２（ｆｏｒ ｒｅａｌ ｔｉｍｅ）、および４μＬのＲＮａｓｅフリーＨ_２Ｏを反応溶液に添加した。３７℃で１５分間、８５℃で５秒間、４℃の手順に従って逆転写を行った。得られたｃＤＮＡをすぐに使用したまたは使用するために－２０℃で保存した。

[0251]リアルタイム定量ＰＣＲ：ｃＤＮＡをＲＮａｓｅフリーＨ_２Ｏで１０倍希釈した。反応系は１２．５μＬのＴＢ Ｇｒｅｅｎ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ ＩＩ、各々１μＬのフォワードおよびリバースプライマー（１０μＭ）、２μＬのｃＤＮＡ鋳型、ならびに８．５μＬのＲＮａｓｅフリーＨ_２Ｏ、合計２５μＬであった。反応プロセスは２つのステップ：９５℃で３０秒間の初期変性；９５℃で５秒間および６０℃で３０秒間、合計４０サイクルのＰＣＲ反応を含む。最後に、融解曲線をプロットする手順を行った。各試料は３回の技術的反復を行った。

[0252]２．５．４ データ分析：相対的定量を標的遺伝子についてΔＣＴ法によって行った。
[0253]２．６ データ分析および統計
[0254]ＳＰＳＳソフトウェアを使用することによってデータの比較分析を行う。本件におけるデータ統計は平均±標準誤差の形態で提示される。有意差を有するデータの基準はｐ＜０．０５である。

[0255]２．７ 実験結果
[0256]２．７．１ マウスの脳におけるＰＩＫ４ＩＩＩαのｍＲＮＡレベルはうつ病の程度と正に相関する
[0257]２カ月齢の３５匹のオスのＩＣＲマウスを第１の強制水泳試験に供し、回避できない抑圧を経験させた。その７日後にマウスを第２の強制水泳試験に供し、合計６分の第２の強制水泳試験の最後の４分間に各マウスが「無動状態」である時間を記録した。次いで、各マウスの脳をすぐに取り出し、脳組織内のトータルＲＮＡを抽出し、逆転写し、ｃＤＮＡを得た。各マウスについて、定量ＰＣＲをＰＩ４ＫＩＩＩαのｃＤＮＡおよび内部参照ベータ－アクチンについて行い、内部参照ＲＮＡに対する脳組織におけるＰＩ４ＫＩＩＩαのＲＮＡの量をΔＣＴ法によって算出し、分析した。１０秒未満または１６０秒超の「無動状態」の時間のデータを除外してから「無動状態」の残りの時間をＸ軸値とし、ＰＩ４ＫＩＩＩαのＲＮＡの相対量をＹ軸値として散布図を作成した（図２）。結果は、マウスの脳におけるＰＩＫ４ＩＩＩαのｍＲＮＡレベルはうつ病の程度と直線的に正に相関することを示す。この実験の結論は、ＰＩ４ＫＩＩＩαがうつ病重症度の調節または媒介の役割を果たすことを示す。

[0258]２．７．２ ＰＩ４ＫＩＩＩα阻害剤はＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおいて不安および抑うつ行動を緩和する
[0259]マウスの２つの群があった：６カ月齢の９匹のオスのＡＰＰ／ＰＳ１マウスおよび９匹のオスの野生型同腹仔。マウスの２つの群にＰＡＯ溶液（体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇの用量で）を強制投与によって１日１回月曜から金曜まで投与し、土曜および日曜は飛ばした。同じ年齢の別の９匹のオスのＡＰＰ／ＰＳ１マウスにＰＡＯを含まない溶液を強制投与によって同時に投与した。２カ月後、マウスの３つの群は、他の実験目的で８日間のＭＷＭ訓練、続いて１日の記憶試験を経験した。マウスが１０カ月齢のときに、１５ｃｍの長さ、幅、および高さを有し、改変された家庭用電気蚊たたきを箱の底に置いた、不透明でカバーのないＰＭＭＡ箱内に各マウスを移した。マウスは、たたきの中心にいるとき１秒間の電気ショックを与えられた。次いでマウスをホームケージに戻した。７日後、マウスをＥＰＭ試験に供し、各マウスの開いたアームで費やした時間を記録し、ＥＰＭで費やした合計時間における開いたアームで費やした時間のパーセンテージを算出した。図３に示される通り、ＰＡＯ処置を伴わないＡＰＰ／ＰＳ１マウスの開いたアームで費やした時間のパーセンテージは、野生型マウスのものより有意に少なく、ＰＡＯ処置を伴うＡＰＰ／ＰＳ１マウスの開いたアームで費やした時間のパーセンテージは野生型マウスのものと有意に異ならない。図３に示される通り、ＰＡＯはＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおいて不安症状を防止または緩和することができる。

[0260]ＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおける不安行動に対する薬物の治療効果とＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおける学習および記憶障害に対する薬物の治療効果の必然的な相互依存が存在するかどうかを調べるために、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおける不安ならびに学習および記憶障害に対するＰＡＯおよびＡｒｉｃｅｐｔ（ドネペジル塩酸塩）の治療効果を試験した。Ｃ５７Ｂ／６と交配したＡＰＰ／ＰＳ１の子孫である４カ月齢の３２匹のオスのＡＰＰ／ＰＳ１同腹仔マウスを２つの群に無作為に分け、マウスの一方の群（ＡＰＰ／ＰＳ１ ＰＡＯマウスと称される）にＰＡＯを（体重１ｋｇ当たり０．１ｍｇの用量で）強制投与によって１日１回月曜から土曜まで投与し、マウスの他方の群（ＡＰＰ／ＰＳ１ Ａｒｉｃｅｐｔマウスと称される）にＡｒｉｃｅｐｔを（体重１ｋｇ当たり１．０ｍｇの用量で）強制投与によって１日１回月曜から土曜まで投与した。加えて、４カ月齢のオスの同腹仔である１６匹のＷＴマウスおよび２０匹のＡＰＰ／ＰＳ１マウスに０．１％水性ＤＭＳＯ溶液を強制投与によって投与した。５週間後にＭＷＭ試験を行った。図４に示される通り、処置を伴わないＡＰＰ／ＰＳ１マウスは水迷路において最も成績が悪く、ＷＴマウスは最も成績が良い。ＰＡＯによる処置を伴うマウスは、習得訓練および逆転習得訓練の両方において、処置を伴わないＡＰＰ／ＰＳ１マウスより有意に成績が良好であり、ＰＡＯがＡＰＰ／ＰＳ１マウスの学習および記憶能力を有意に改善することを示す。Ａｒｉｃｅｐｔによる処置を伴うマウスは、習得訓練において処置を伴わないＡＰＰ／ＰＳ１マウスと成績に有意差はないが、逆転習得訓練においてＰＡＯによる処置を伴うマウスと同様の成績であり、処置を伴わないマウスより成績が良好であり、ＡｒｉｃｅｐｔがＡＰＰ／ＰＳ１マウスの学習および記憶能力を有意に改善するが、ＰＡＯほど良好でない処置効果を有することを示す。

[0261]ＭＷＭ試験の１週間後、マウスをＮＳＦ試験に供した。図５に示される通り、処置を伴わないＡＰＰ／ＰＳ１マウスはＷＴマウスより有意に長い摂食潜時を有し、ＰＡＯによる処置を伴うＡＰＰ／ＰＳ１マウスはＷＴマウスと有意に異ならない摂食潜時を有し、ＰＡＯはＡＰＰ／ＰＳ１マウスの不安レベルを有意に減少させることができるが、Ａｒｉｃｅｐｔによる処置を伴うＡＰＰ／ＰＳ１マウスは処置を伴わないＡＰＰ／ＰＳ１マウスと有意に異ならないまたはさらにそれより高い不安レベルを有し、ＡｒｉｃｅｐｔはＡＰＰ／ＰＳ１マウスの学習および記憶能力を有意に改善することができるが、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスの不安レベルを減少させることはできないことを示す。したがって、学習および記憶の改善は不安レベルの減少に必ずしも関連しない。

[0262]２．７．３ 野生型マウスにおけるＰＩ４ＫＩＩＩαの下方調節はうつ病および不安徴候を防止または緩和することができる
[0263]Ｃ５７／６Ｂと交配したＰｉ４ｋ^－／＋の子孫である１５匹の２カ月齢のＷＴマウスおよび１５匹の２カ月齢のＰｉ４ｋ^－／＋マウスを１週間の適応のために行動実験室に移した。ＣＵＭＳ実験を２週目から開始した。ＣＵＭＳの３週目から、ＷＴマウスは体重増加が停止したまたは体重低下さえ有したが、Ｐｉ４ｋ^－／＋マウスは継続的な体重増加を有した。ＣＵＭＳの６週目から、Ｐｉ４ｋ^－／＋マウスはＷＴマウスと有意に異なる（表７）。砂糖水の嗜好性について、ＣＵＭＳの前およびＣＵＭＳの最初の２週間の間、マウスの２つの群は砂糖水の著しい嗜好性を有し、互いに有意差を有しなかった。ＣＵＭＳの３週目から、マウスの２つの群は週ごとに低下する砂糖水の嗜好性を有し、ＷＴマウスはＰｉ４ｋ^－／＋マウスより早く低下する砂糖水の嗜好性を有し、ＣＵＭＳの７週目でＷＴマウスはＰｉ４ｋ^－／＋マウスより有意に低い砂糖水の嗜好性を有する（表８）。実験結果は、ＰＩ４ＫＩＩＩα発現の下方調節がうつ病症状を防止または緩和することができることを示す。

[0264]ＣＵＭＳ実験の翌日、マウスに十分な水および餌を与えた。２日目に、固形物の絶食、水の供給、および寝藁除去を午前９：００に開始した。３日目にＮＳＦ試験を行った。結果はＷＴマウスがＰｉ４ｋ^－／＋マウスより有意に長い平均摂食潜時を有することを示す（ＷＴ：２１２±４５秒、Ｐｉ４ｋ^－／＋：１５４±２７秒、Ｔ検定、Ｐ＜０．０５）。実験結果は、ＰＩ４ＫＩＩＩα発現の下方調節が不安症状を防止または緩和することができることを示す。

[0265]２．７．４ ＰＩ４ＫＩＩＩαの下方調節は神経変性疾患モデルのマウスにおけるうつ病および不安徴候を防止または緩和することができる
[0266]ＰＩ４ＫＩＩＩα発現の下方調節が他の疾患、特に神経系疾患と関連する不安およびうつ病を防止または緩和することができるかどうかを試験するために、Ｃ５７／６Ｂ遺伝子バックグラウンドを有するＡＰＰ／ＰＳ１と交配したＰｉ４ｋ^－／＋の子孫である、４カ月齢の１５匹の「ＡＰＰ／ＰＳ１」マウスおよび４カ月齢の１５匹の「ＡＰＰ／ＰＳ１；Ｐｉ４ｋ^－／＋」マウスをＣＵＭＳ実験に供し、砂糖水の嗜好性をマウスの２つの群について毎週測定した。表９に示される通り、ＡＰＰ／ＰＳ１；Ｐｉ４ｋ^－／＋マウスはＡＰＰ／ＰＳ１マウスより有意に遅く低下する砂糖水の嗜好性を有し、ＰＩ４ＫＩＩＩα発現の下方調節がＡＰＰ／ＰＳ１マウスのうつ病症状を防止または緩和することができることを示す。

[0267]同様に、ＣＵＭＳ実験の翌日に、マウスに十分な水および餌を与えた。２日目に固形物の絶食、水の供給、および寝藁除去を午前９：００に開始した。３日目にＮＳＦ試験を行った。結果は、ＡＰＰ／ＰＳ１；Ｐｉ４Ｋ^－／＋マウスがＡＰＰ／ＰＳ１マウスより有意に短い平均摂食潜時を有することを示す（ＡＰＰ／ＰＳ１：２４２秒、Ｐｉ４ｋ^－／＋：１８３秒、Ｔ検定、Ｐ＜０．０５）。実験結果は、ＰＩ４ＫＩＩＩα発現の下方調節がＡＰＰ／ＰＳ１マウスにおいて不安症状を防止または緩和することができることを示す。

[0268]２．７．５ Ｅｆｒ３ａの下方調節は神経変性疾患モデルのマウスにおいてうつ病および不安徴候を防止または緩和することができる
[0269]Ｅｆｒ３ａ^－／＋と交配したＡＰＰ／ＰＳ１の子孫の同腹仔である、１５匹のＷＴマウス、４匹のＥｆｒ３ａ^－／＋マウス、１４匹のＡＰＰ／ＰＳ１マウス、および９匹のＡＰＰ／ＰＳ１；Ｅｆｒ３ａ^－／＋マウスがあった。マウスが８カ月齢のときにＬＤＢ試験を行った。図６に示される通り、８カ月齢のＡＰＰ／ＰＳ１マウスは、ＷＴマウスと比較して有意に増加した、マウスが明箱内を歩く升目の量（歩行距離）を有するのに対し、同じ年齢のＡＰＰ／ＰＳ１；Ｅｆｒ３ａ^－／＋マウスはＷＴマウスと有意差を有しないが、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスと比較して有意に減少した歩行距離を有する。これは、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスがＷＴマウスより有意に高い不安レベルを有し、Ｅｆｒ３ａ遺伝子の１つのコピーのノックアウトはＡＰＰ／ＰＳ１マウスの不安レベルを有意に防止するまたは減少させることができることを示す。

[0270]実施例３：マウスにおける不安およびうつ病に対するＰＡＯおよびその誘導体の阻害効果
[0271]この実験では、明らかな他の疾患症状も神経学的損傷もない野生型マウスにおける不安およびうつ病に対するＰＩ４ＫＩＩＩａ阻害剤ＰＡＯおよびその誘導体の阻害効果を試験した。

[0272]３．１ ＰＡＯ誘導体は野生型マウスにおいて抑うつ行動を阻害する
[0273]ＦＳＴにおけるＩＣＲマウスに対するＰＡＯ誘導体の効果も試験した。例えばＰＡＯ誘導体は、ＰＡＯのベンゼン環のパラ位の－Ｈを－Ｆで置換することによって形成されるＰＩ０４、ＰＡＯのベンゼン環のパラ位の－Ｈを－ＣＦ_３で置換することによって形成されるＰＩ０５、およびＰＡＯのベンゼン環のパラ位の－Ｈを－Ｉで置換することによって形成されるＰＩ０６を含む。これらの３種のＰＡＯ誘導体のそれぞれを最初に中鎖トリグリセリド－ＭＩＧＬＹＯＬ ８１２Ｎ（ＩＯＩ Ｏｌｅｏ ＧｍｂＨ）と共にストック溶液に１．０ｍｇ／ｇの濃度で配合した。マウスに同じ中鎖トリグリセリドで、３ステップ勾配で０．０３３ｍｇ／ｍＬに希釈した溶液を強制投与によって毎日０．３ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。対照群（ビヒクル）には中鎖トリグリセリドだけを投与した。

[0274]８０匹の２カ月齢のＩＣＲマウスを４つの群に無作為に分けた。強制水泳実験室における１週間の適応後、マウスを第１の６分強制水泳に供し、最後の４分以内の無動時間を記録した。１０秒未満または１６０秒超の無動時間のデータを除外した後、１６匹のビヒクル（中鎖トリグリセリドだけを投与した）マウス、１４匹のＰＩ０４マウス、１７匹のＰＩ０５マウス、および１５匹のＰＩ０６マウスが残った。次いでマウスの各群に強制投与によって０．３ｍｇ／ｋｇの用量で１日１回６日間投与した。７日目にマウスを第２の６分強制水泳に供した。各マウスに同じ用量で強制水泳の６０分前に投与した。各マウスについて、最後の４分以内の無動時間を記録した。図７に示される通り、中鎖トリグリセリドだけを投与したマウスにおいて、第１および第２の強制水泳実験の無動時間に有意差はなく、ＰＩ０４、ＰＩ０５、およびＰＩ０６群のマウスは、第１の強制水泳実験と比較して有意に減少した第２の強制水泳実験における無動時間を有し、ＰＡＯ誘導体ＰＩ０４、ＰＩ０５、およびＰＩ０６が不安およびうつ病の行動パフォーマンスを緩和することができることを示す。

[0275]３．２ ＰＡＯは神経損傷によって引き起こされる不安およびうつ病を防止または緩和する
[0276]低分子化合物１－メチル－４－フェニル－１，２，３，６－テトラヒドロピリジン（ＭＰＴＰ）はモノアミン酸化酵素Ｂ（ＭＡＯ－Ｂ）によって脱水素化され、ＭＰＰ^＋イオンを生成する。このイオンはミトコンドリア複合体Ｉを阻害し、細胞傷害性およびさらに細胞死をもたらす。ＭＰＰ^＋イオンは黒質においてドーパミンニューロンによって大量に特異的に取り込まれる。ＭＰＰ^＋は、ミトコンドリア呼吸鎖の複合体Ｉを妨げ、ドーパミンニューロンにおける神経変性変化をもたらす。

[0277]４カ月齢の５０匹のオスのＣ５７Ｂ６マウスを、１０匹のマウスを含むブランク群、神経損傷を有する２０匹のマウスを含むプラセボ（ＰＤ－対照）群、および神経損傷を有する２０匹のマウスを含むＰＡＯ処置（ＰＤ－ＰＡＯ）群に無作為に分けた。ＭＰＴＰを最初にＤＭＳＯで溶解し、次いで生理食塩水で希釈した。プロベネシドを５％水性重炭酸ナトリウム溶液で溶解した。最初に、ＰＤ－対照群およびＰＤ－ＰＡＯ群の各マウスにＭＰＴＰ（供給元：ＣＳＮ Ｐｈａｒｍ）を２５ｍｇ／ｋｇの用量で１日１回５日間腹腔内注射し、２日間休薬し、次いで１週目のように５日間注射した。３週目に、各マウスに最初にプロベネシド（２５０ｍｇ／ｋｇ）を１日１回５日間腹腔内注射し、次いでＭＰＴＰ（２５ｍｇ／ｋｇ）を１日１回５日間注射した。ブランク群において、各マウスに対応する溶媒だけを最初の３週間注射した。４週目に、ブランク群およびＰＤ－対照群の各マウスに０．１％ＤＭＳＯ溶液を強制投与によって毎日７日間投与し、一方ＰＤ－ＰＡＯ群の各マウスにＰＡＯを０．３ｍｇ／ｋｇの用量で（ＰＡＯを０．１％水性ＤＭＳＯ溶液に溶解することによって）強制投与によって毎日７日間投与した。

[0278]全てのマウスが固形物の絶食を経験したが、４週目の６日目に水を供給された。７日目に砂糖水の嗜好性実験を行った。図８Ａに示される通り、ブランク群のマウスは明らかな砂糖水の嗜好性を有し、ＰＤ－対照群のマウスは有意に減少した砂糖水の嗜好性を有し（一元配置分散分析、ｐ＜０．０５）、ＰＤ－ＰＡＯ群のマウスは砂糖水の嗜好性を依然として有し、これはブランク群と有意に異ならない。砂糖水嗜好性実験後、注射および強制投与による投与を各群において停止した。全てのマウスが固形物の絶食を経験したが、６週目の６日目に水を供給された。７日目に砂糖水嗜好性実験を行った。図８Ｂに示される通り、３つの群の全てのマウスが明らかな砂糖水の嗜好性を有し、互いに有意差はない。

[0279]上の実験中に、１２匹のマウスがＰＤ－対照群において死亡し、６匹のマウスがＰＤ－ＰＡＯ群において死亡し、ブランク群において死亡はなかった。
[0280]３．３ ＰＡＯおよびその誘導体は野生型マウスにおいて不安行動を阻害する
[0281]３カ月齢の４２匹のオスのＩＣＲマウスを２つの群に無作為に分けた。第１の群の２２匹のマウスにプラセボ（０．１％水性ＤＭＳＯ溶液）を強制投与によって毎日、プラセボ群（ビヒクル）として１２日間投与した。第２の群の他のマウスにＰＡＯを０．１％水性ＤＭＳＯ溶液と共に、体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇの用量で強制投与によって毎日、ＰＡＯ処置群として１２日間投与した。１２日目にＮＳＦ試験を行った。ＮＳＦ試験の２４時間前に全てのマウスが固形物の絶食を経験したが、水は供給された。図９Ａに示される通り、新しい環境に入った後、プラセボ群のマウスは食べ始めるのに平均２０１．６±２１．５秒（ｎ＝２２）を必要とするが、ＰＡＯ処置群のマウスは平均１５９．６±２０．３秒（ｎ＝２０）しか必要とせず、これはプラセボ群より有意に短い（Ｔ検定、ｐ＜０．０５）。したがって、ＰＡＯは新しい環境において野生型マウスの不安行動を阻害することができる。

[0282]別の３カ月齢の４７匹のＩＣＲマウスを３つの群に無作為に分けた。第１の群の１６匹のマウスにプラセボ（０．１％の水性ＤＭＳＯ溶液）を強制投与によって毎日、プラセボ群（ビヒクル）として７日間投与した。第２の群の１５匹のマウスにＰＩ０５を０．１％水性ＤＭＳＯ溶液と共に体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇの用量で強制投与によって毎日、ＰＩ０５処置群として７日間投与した。第３の群の１６匹のマウスにＰＩ０６を０．１％水性ＤＭＳＯ溶液と共に体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇの用量で強制投与によって毎日、ＰＩ０６処置群として７日間投与した。７日目にＮＳＦ試験を行った。ＮＳＦ試験の２４時間前に全てのマウスが固形物の絶食を経験したが、水は供給された。図９Ｂに示される通り、新しい環境に入った後、プラセボ群のマウスは食べ始めるのに平均２１６．６±２１．２秒（ｎ＝１６）を必要とするが、ＰＩ０５処置群およびＰＩ０６処置群のマウスはそれぞれ平均１９４．６±２１．７秒（ｎ＝１５）および平均１５４．２±２１．２秒（ｎ＝１６）を必要とする。ＰＩ０６処置群はプラセボ群と比較して有意に減少した摂食潜時を有し（一元配置分散分析、ｐ＜０．０５）、ＰＩ０５処置群は減少した摂食潜時の傾向を示す。
[0283]したがって、ＰＡＯおよびその誘導体は新しい環境において野生型マウスの不安行動を阻害することができる。

[0284]実施例４：ＰＩ４ＫＩＩＩα複合体の発現に対するＰＩ４ＫＩＩＩα、ＴＴＣ７、Ｈｙｃｃｉｎ、およびＲＢＯの阻害の効果
[0285]材料および方法
[0286]Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ系統および遺伝学
[0287]羽化したＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ成体を標準的なＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ生息環境で１２／１２時間明／暗サイクルを用いて２５℃で飼育した。

[0288]使用したＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ系統は、ｒｂｏ^２／Ｃｙｏ－ＧＦＰ（ｒｂｏ^２はｒｂｏ遺伝子のノックアウト変異であり、Ｃｙｏ－ＧＦＰは緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現するバランサー染色体であり、ｒｂｏ^－／＋）、ｒｂｏ^２／ｒｂｏ^２；ｒｂｏ－ｅｇｆｐ／ｒｂｏ－ｅｇｆｐ（ｒｂｏ^２変異のホモ接合体およびｒｂｏ－ｅｇｆｐ導入遺伝子のホモ接合体の変異体であり、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ系統は略してｒｂｏ－ｇｆｐと称される）（ｒｂｏ－ｅｇｆｐ導入遺伝子は、完全ｒｂｏを含有するゲノムＤＮＡ断片から構築された組換えＤＮＡであり、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）をコードするＤＮＡ配列がｒｂｏの終止コドンの前に挿入され、したがってｒｂｏ－ｅｇｆｐ導入遺伝子はＲＢＯ－ＧＦＰ融合タンパク質を発現する）、Ｐ［ｌａｃＷ］ｌ（２）ｋ１４７１０^{ｋ１５６０３}／Ｃｙｏ－ＧＦＰ（トランスポゾンＰ［ｌａｃＷ］の挿入によって形成されるｔｔｃ７遺伝子変異体、ｔｔｃ７^－／＋とも称される）、１０４５７７／Ｃｙｏ－ＧＦＰ（１０４５７７はｈｙｃｃｉｎ遺伝子およびその周囲のＤＮＡセグメントの欠失から生じる染色体変異であり、ｈｙｃｃｉｎ^－／＋とも称される）、ｐｉ４ｋ^{ＧＳ２７／＋}、ｐｉ４ｋ^{ＦＹ２４／＋}、ｐｉ４ｋ^{ＦＱ８８／＋}、およびｐｉ４ｋ^{ＧＪ８６／＋}（ＰＩ４ＫＩＩＩαタンパク質をコードする遺伝子のナンセンス変異の４つのヘテロ接合体であり、全てが、ＧＦＰを発現するバランサー染色体ＦＭ７およびＧｒ－ＧＦＰを有し、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、ＵＳＡのＳｃｈｕｐｂａｃｈの研究室によって構築される）を含む。

[0289]ウエスタンブロッティングおよび共免疫沈降実験
[0290]各遺伝子型の５００個（共免疫沈降用）および１００個（ウエスタンブロッティング用）のＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ頭部を採取し、均一に処理した。Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ頭部を氷上に置き、１％ＮＰ４０およびプロテアーゼ阻害剤を含有する予め冷やしたＴｒｉｓ緩衝液で溶解し、次いでホモジナイズした。共免疫沈降実験をＰｉｅｒｃｅ（登録商標）共免疫沈降（Ｃｏ－ＩＰ）キット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）の使用説明書に従って行った。共免疫沈降実験からの生成物を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルを使用して分離し、クマシーブリリアントブルーで染色した。使用した一次抗体は、抗ＧＦＰ（Ｃａｓｉｃｏ）、抗ＲＢＯおよびＰＩ４ＫＩＩＩα（Ｚｈａｎｇら、Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、２０１７、ｐｐ．４９２８～４９４１）、抗Ｈｙｃｃｉｎ（ＦＡＭ１２６断片ＲＬＰＰＩＫＮＰＲＱを抗原として使用するＡｂｍａｒｔ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）製）、抗ｎｅｕｒｏｇｌｉｎ（ＤＳＨＢ、クローンＢＰ１０４）、抗β－アクチン、および抗チューブリン（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を含む。

[0291]組織溶解物からのＰＭ断片の単離
[0292]Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ脳組織を氷上に置き、１％ＮＰ４０およびプロテアーゼ阻害剤を含有する予め冷やしたＴｒｉｓ緩衝液で処理した。次いで溶解物を採取し、１５０００ｇで、４℃で１時間遠心分離した。上澄みを新しいＥＰチューブに移し、沈殿物を上と同じＴｒｉｓ緩衝液で再懸濁した。上澄みおよび再懸濁した沈殿物の両方をＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルおよびウエスタンブロッティングによる単離に供した。

[0293]統計分析
[0294]ソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用してデータ分析を行った。全てのデータは、平均±ＳＥＭとして提示し、ｐ＜０．０５（^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．０１、および^＊＊＊ｐ＜０．００１）で統計的に有意である。

[0295]結果
[0296]ＰＩ４ＫＩＩＩα、ＴＴＣ７、Ｈｙｃｃｉｎ、およびＲＢＯは細胞膜上で相互作用し、タンパク質複合体であるＰＩ４ＫＩＩＩα複合体を形成し、それらは全てＰＩ４ＫＩＩＩα複合体の必須部分である。

[0297]ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動におけるクマシーブリリアントブルー染色（図１０Ａ）から、抗ＧＦＰ抗体がＲＢＯ－ＧＦＰ融合タンパク質（ｒｂｏ－ｇｆｐ）を発現するＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ頭部のホモジネートからのＰＩ４ＫＩＩＩα、ＴＴＣ７、Ｈｙｃｃｉｎ、およびＲＢＯ－ＧＦＰタンパク質を共免疫沈降できるが、ＲＢＯ－ＧＦＰ融合タンパク質を発現しないＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ頭部のホモジネートからのものは共免疫沈降できないことが示され得る。ＰＩ４ＫＩＩＩα、ＴＴＣ７、およびＨｙｃｃｉｎタンパク質は、タンパク質質量分析法によって、ＲＢＯ－ＧＦＰ融合タンパク質と共免疫沈降したタンパク質から同定することができる（表１０）。これと一致して、タンパク質質量分析法によって、抗ＲＢＯ抗体が野生型Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ頭部のホモジネートからのＰＩ４ＫＩＩＩα、ＴＴＣ７、Ｈｙｃｃｉｎ、およびＲＢＯタンパク質を共免疫沈降できることが分析でき（表１１）、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動でのウエスタンブロッティングから、ＰＩ４ＫＩＩＩα、Ｈｙｃｃｉｎ、およびＲＢＯタンパク質が互いに共免疫沈降することを確認することができる（図１０Ｂ）。

[0298]ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動でのウエスタンブロッティング（図１０Ｃ）から、ＲＢＯタンパク質は細胞膜でのみ発現され、一方Ｈｙｃｃｉｎタンパク質は細胞膜および細胞質の両方で発現されるが、主に細胞質に位置し、ｈｙｃｃｉｎ、ｒｂｏ、またはｔｔｃ７遺伝子のノックアウトはＲＢＯの欠失をもたらし、ｒｂｏまたはｔｔｃ７遺伝子のノックアウトは細胞膜におけるＨｙｃｃｉｎタンパク質の欠失または著しい減少ももたらすが、細胞質におけるＨｙｃｃｉｎタンパク質の発現レベルを著しく変化させないことが示され得る。これは、細胞膜上のＰＩ４ＫＩＩＩα、ＴＴＣ７、Ｈｙｃｃｉｎ、およびＲＢＯタンパク質が発現において相互依存しており、全てがＰＩ４ＫＩＩＩα複合体の必須部分であることを示す。しかし、細胞質におけるＨｙｃｃｉｎ発現はＴＴＣ７およびＲＢＯから独立している。

[0299]ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動でのウエスタンブロッティング（図１０Ｄ）から、ｈｙｃｃｉｎの１つのコピーのノックアウトはＨｙｃｃｉｎの総発現レベルを著しく減少させることができるが、ｒｂｏの１つのコピーのノックアウトはＨｙｃｃｉｎの総発現レベルを変化させないことが示され得る。

[0300]ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動動でのウエスタンブロッティング（図１０Ｅ）から、ＰＩ４ＫＩＩＩαの１つのコピーのノックアウトもＲＢＯの発現レベルを著しく減少させることができ、ＰＩ４ＫＩＩＩα複合体の成分の相互依存をさらに示すことが示され得る。

Claims (31)

1. 気分障害を防止または処置するための方法であって、有効量のＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤を、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法。
2. ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤が低分子化合物、抗体、ＲＮＡｉ分子、またはアンチセンス核酸である、請求項１に記載の方法。
3. ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤がＥＦＲ３特異的阻害剤である、請求項１に記載の方法。
4. ＥＦＲ３特異的阻害剤がＥＦＲ３ａ特異的阻害剤またはＥＦＲ３ｂ特異的阻害剤である、請求項３に記載の方法。
5. ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤がＰＩ４ＫＩＩＩα特異的阻害剤である、請求項１に記載の方法。
6. ＰＩ４ＫＩＩＩα特異的阻害剤が低分子化合物である、請求項５に記載の方法。
7. 低分子化合物が式（Ｉ）の構造またはその薬学的に許容される塩を有する、請求項２または６に記載の方法
   

   

   ［式中、Ｒ_１は独立して
   （ａ）Ｈ、重水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、アミノ、カルバモイル、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_２～６アルキニル、Ｃ_２～６アルケニル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_１～６ハロアルキル、Ｃ_１～６アルキレン－ＮＨ_２、Ｃ_１～６アルキレン－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）Ｈ、－Ａｓ（Ｏ）、－Ｎ＝ＮＨ、－ＮＨ－（Ｃ_１～６アルキル）、Ｎ，Ｎ－（Ｃ_１～６アルキル）_２、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨ－Ｓ（Ｏ）_２Ｈ、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－ＯＣ（Ｏ）Ｈ、－ＳＨ、－Ｓ（Ｏ）_２Ｈ、－Ｓ（Ｏ）_２－ＮＨ、またはヘテロシクリルから選択され、これらはＲ_２またはＲ_３によって任意選択で置換されており、Ｒ_２およびＲ_３はそれぞれ独立してアミノ、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_１～６ハロアルキル、－ＮＨ－（Ｃ_１～６アルキル）、－ＮＨ－（６～１２員のアリール）、－Ｎ，Ｎ－（Ｃ_１～６アルキル）_２、Ｃ_３～６シクロアルキル、６～１２員のアリール、または３～１２員のヘテロシクリルから選択され、これらはハロゲン、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、アミノ、カルバモイル、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ_５、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ_４、６～１２員のアリール、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_２～６アルキニル、Ｃ_２～６アルケニル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_１～６ハロアルキル、３～６員のヘテロシクリル、Ｃ_３～６シクロアルキル、もしくはＢｎ－Ｏ－のうちの１つまたは複数によって任意選択で置換されており、Ｒ_４はＣ_１～６アルキルであり、これはハロゲン、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、アミノ、カルバモイル、６～１２員のアリール、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_２～６アルキニル、Ｃ_２～６アルケニル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_１～６ハロアルキル、３～６員のヘテロシクリル、Ｃ_３～６シクロアルキル、もしくはＢｎ－Ｏ－のうちの１つまたは複数によって任意選択で置換されており、Ｒ_５はＨ、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_２～６アルキニル、Ｃ_２～６アルケニル、Ｃ_１～６アルコキシ、またはＣ_１～６ハロアルキルから選択される、または
   （ｂ）２個の隣接する炭素原子上のＲ_１は５～１２員のシクロアルキル、アリール、またはヘテロシクリルを形成し、これらはハロゲン、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、アミノ、カルバモイル、６～１２員のアリール、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_２～６アルキニル、Ｃ_２～６アルケニル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_１～６ハロアルキル、３～６員のヘテロシクリル、Ｃ_３～６シクロアルキル、またはＢｎ－Ｏ－のうちの１つまたは複数によって任意選択で置換されており、
   ｎは０～５の整数である］。
8. Ｒ_１がそれぞれ独立してＨ、重水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、アミノ、カルバモイル、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_１～６ハロアルキル、－Ａｓ（Ｏ）、－ＮＨ－（Ｃ_１～６アルキル）、－Ｎ，Ｎ－（Ｃ_１～６アルキル）_２、または－Ｃ（Ｏ）ＯＲ_６から選択され、ｎが０～２の整数であり、Ｒ_６がＣ_１～６アルキルである、請求項７に記載の方法。
9. Ｒ_１がそれぞれ独立してＨ、重水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシ、Ｃ_１～６ハロアルキル、または－Ａｓ（Ｏ）から選択され、ｎが０～２の整数である、請求項７に記載の方法。
10. Ｒ_１がそれぞれ独立してＨ、重水素、ハロゲン、アミノ、Ｃ_１～６アルコキシ、またはＣ_１～６ハロアルキルから選択され、ｎが１である、請求項７に記載の方法。
11. Ｒ_１が－Ａｓ（Ｏ）基のオルト位および／またはパラ位に位置する、請求項７～１０のいずれか一項に記載の方法。
12. ｎが０である、請求項１１に記載の方法。
13. 低分子化合物が、以下の化合物：
    

    

    

    

    

    からなる群から選択される、請求項６に記載の方法。
14. 抗体がモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体である、請求項２に記載の方法。
15. 抗体がキメラ抗体、ヒト化抗体、または完全ヒト抗体である、請求項２または１４に記載の方法。
16. ＲＮＡｉ分子が低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、またはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）である、請求項２に記載の方法。
17. ＲＮＡｉ分子が１８～１００塩基の長さを有する、請求項２または１６に記載の方法。
18. ＲＮＡｉ分子がその安定性を増強するために修飾されている、請求項２および１６～１７のいずれか一項に記載の方法。
19. 対象がヒトまたは哺乳動物である、請求項１に記載の方法。
20. 気分障害が高揚した気分、抑うつ気分、または高揚した気分および抑うつ気分の繰返しである、請求項１に記載の方法。
21. 気分障害が不安、うつ病、統合失調症、または躁病である、請求項１に記載の方法。
22. 気分障害が神経変性疾患、脳卒中、または悪性腫瘍によって引き起こされる、請求項１に記載の方法。
23. 気分障害が神経変性疾患によって引き起こされる不安またはうつ病である、請求項１に記載の方法。
24. ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤が経口、皮下、筋肉内、または静脈内投与される、請求項１に記載の方法。
25. 有効量のＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤を対象に投与する前に、気分障害を有すると対象を診断するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
26. 第２の試薬を、それを必要とする対象に投与するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
27. 第２の試薬が気分障害を処置するために使用される試薬である、請求項２６に記載の方法。
28. 第２の試薬が神経変性疾患、脳卒中、または悪性腫瘍を処置するために使用される試薬である、請求項２６に記載の方法。
29. ＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤が第２の試薬の前、後、またはそれと同時に投与される、請求項２６に記載の方法。
30. 気分障害を防止または処置するための医薬の製造におけるＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤の使用。
31. 気分障害を防止または処置することにおけるＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤の使用であって、有効量のＰＩ４ＫＩＩＩα／ＦＡＭ１２６／ＴＴＣ７複合体阻害剤を、それを必要とする対象に投与するステップを含む使用。
    

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