JP2022549318A - 免疫療法およびワクチンの効果を増加させるための組成物および方法 - Google Patents

免疫療法およびワクチンの効果を増加させるための組成物および方法 Download PDF

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Abstract

本発明は、一般に、免疫療法およびワクチンの効果を増加させるための組成物および方法に関する。特に、本発明は、免疫療法またはワクチンと共に、薬剤（例えば、プレバイオティクス薬剤（例えば、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）、フコイダン、ジャガイモデンプン、オリゴフルクトース、およびイヌリン）を含む線維（fiber））（例えば、メラトニン）の適用を通じて、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることに関する。このような組成物および方法は、癌、感染性病原体、自己免疫疾患、神経障害、および／または肥満を治療することに対して有用である。

Description

発明の詳細な説明
〔技術分野〕
本発明は、一般に、免疫療法およびワクチンの効果を増加させるための組成物および方法に関する。特に、本発明は、免疫療法またはワクチンと共に、薬剤（例えば、プレバイオティクス薬剤（例えば、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）、フコイダン、ジャガイモデンプン、オリゴフルクトース、およびイヌリン）を含む線維（fiber））（例えば、メラトニン）の適用を通じて、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることに関する。このような組成物および方法は、癌、感染性病原体、自己免疫疾患、神経障害、および／または肥満を治療することに対して有用である。
〔背景技術〕
癌免疫療法は、癌領域に革命をもたらしつつある。しかしながら、免疫チェックポイント療法は、一部の患者（典型的には１０～３０％）にのみ有効である。免疫チェックポイント遮断の効果を改善することが非常に必要である。加えて、ワクチンを改善するための広範な研究への関心があった。
本発明はこれらの必要性に取り組む。
〔発明の概要〕
本発明の実施形態を開発する過程において実施された実験は、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）認可の薬物または栄養補助食品（例えば、プレバイオティクス薬剤）から新たな化合物を特定した。当該化合物は、免疫チェックポイント療法の効果を改善するために摂取され得る。薬剤（例えば、プレバイオティクス薬剤（例えば、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）、フコイダン、ジャガイモデンプン、オリゴフルクトース、およびイヌリン）を含む線維）（例えば、メラトニン）から成る経口製剤が、腸内細菌叢を変化させ得、その結果、有益な細菌の頻度が増加し、全身注射によって与えられる免疫チェックポイントブロッカーと相乗作用することが示された。実際、免疫療法（例えば、α－ＰＤ－１療法）にプレバイオティクス薬剤（例えば、イヌリン）を同時に適用することは、より強力な抗腫瘍効果、より強力な免疫応答（例えばＰＢＭＣ中のＡＨ１特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞頻度）、腫瘍増殖の阻害、Ｔ細胞の腫瘍内浸潤の増強、脾臓のＣＤ８＋Ｔ細胞内におけるより高いＩＦＮ－γ発現、および、対象の腸内細菌叢におけるＡｋｋｅｒｍａｎｓｉａ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、ＲｏｓｅｂｕｒｉａおよびＢｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓの存在量の増加をもたらすことが示された。
従って、本発明は一般に免疫療法およびワクチンの効果を増加させるための組成物および方法に関する。特に、本発明は、免疫療法またはワクチンと共に、薬剤（例えば、プレバイオティクス薬剤（例えば、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）、フコイダン、ジャガイモデンプン、オリゴフルクトース、およびイヌリン）を含む線維）（例えば、メラトニン）の適用を通じて、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることに関する。このような組成物および方法は、癌、感染性病原体、自己免疫疾患、神経障害、および／または肥満を治療することに対して有用である。
特定の実施形態において、本発明は１）対象への癌免疫療法またはワクチン、および２）対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の適用を通じて、癌免疫療法またはワクチン（例えば、癌ワクチン）（例えば、感染性病原体に対するワクチン）の効果を増加させるための一方法を提供する。
特定の実施形態において、本発明は、免疫機能不全を誘導する癌細胞の能力を阻害するための一方法を提供する。当該方法は、１）対象への癌免疫療法または癌ワクチン、および２）対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の適用を含む。
特定の実施形態において、本発明は、対象における癌を治療または予防するための一方法を提供する。当該方法は、１）対象に対する癌免疫療法または癌ワクチン、および２）対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与を当該対象に適用することを含む。
上記方法は、１）癌免疫療法またはワクチン（例えば、癌ワクチン）（例えば、感染性病原体に対するワクチン）を対象に投与する特定の様式、および２）対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤を投与する特定の様式に限定されない。いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与は、ワクチン（例えば、癌ワクチン）（例えば、感染性病原体に対するワクチン）または癌免疫療法の適用の前、同時、および／または後に起こる。いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与は、ワクチン（例えば、癌ワクチン）（例えば、感染性病原体に対するワクチン）または癌免疫療法の適用と同時に起こる。いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与は、ワクチン（例えば、癌ワクチン）（例えば、感染性病原体に対するワクチン）または癌免疫療法の適用前に起こる。いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与は、ワクチン（例えば、癌ワクチン）（例えば、感染性病原体に対するワクチン）または癌免疫療法の適用の前、およびワクチンまたは癌免疫療法の適用と同時に起こる。
上記方法は、特定の種類の対象に限定されない。いくつかの実施形態において、上記対象はヒト対象である。
上記方法は、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる特定のタイプまたは種類の薬剤に限定されない。いくつかの実施形態では、薬剤は、プレバイオティクス薬剤を含む繊維である。いくつかの実施形態において、プレバイオティクス薬剤を含む繊維は、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）、フコイダン、ジャガイモデンプン、オリゴフルクトースおよびイヌリンから選択される。
いくつかの実施形態において、上記薬剤はイヌリンである。イヌリンは、フルクタン群に属する多糖類である。イヌリンは、フルクトース分子のβ－２－１結合鎖からなり、この鎖はその末端に、還元末端にα－Ｄ－グルコース単位を有する。イヌリンは、例えば、チコリー根およびダリア塊茎といった種々の植物において経済的に回収可能な量で存在する。さらに、イヌリンは、例えばエルサレム・アーティチョークおよびアーティチョークから入手される。種々のイヌリンの平均鎖長およびそれらの物理化学的性質は、植物種ごとに異なる。いくつかの実施形態において、上記薬剤は、ゲルベースのイヌリン製剤である。いくつかの実施形態において、上記薬剤は、２０以上４７以下の平均重合度を有するゲルベースのイヌリン製剤である。いくつかの実施形態において、上記薬剤は、約２８（例えば、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３）（約２８の平均重合度を有するゲルベースのイヌリン製剤による驚くべき抗腫瘍効果を示す実施例１３を参照のこと）の平均重合度を有するゲルベースのイヌリン製剤である。
いくつかの実施形態において、上記ゲルベースのイヌリンｆｏｒｍｌｕａｔｉｏｎは、フルクトオリゴ糖、短鎖フルクトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、トランスガラクトオリゴ糖、ペクチン、キシロオリゴ糖、キトサンオリゴ糖、βグルカン、アラブルガム変性デンプン、耐性ジャガイモデンプン、グアーガム、ビーンガム、ゼラチン、グリセロール、ポリデキストロース、Ｄ－タガトース、アカシア繊維、カロブ、オート麦、およびかんきつ類繊維から選択される、１以上のプレバイオティクス化合物を含む。いくつかの実施形態において、上記薬剤はメラトニンである。
上記方法は、特定のタイプまたは種類のｃａｎｅｒ免疫療法（caner immunotherapy）に限定されない。いくつかの実施形態において、癌免疫療法は、１以上の免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）阻害剤を含む。いくつかの実施形態において、１以上のＩＣＩ阻害剤は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０およびＣＧＥＮ－１５０４９のうちの１つ以上に結合し、その活性をブロックし、および／またはその活性を阻害することができる。いくつかの実施形態において、１以上のＩＣＩ阻害剤は、トレメリムマブ（ＣＴＬＡ－４ブロッキング抗体）、抗ＯＸ４０、ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体（抗Ｂ７－Ｈ１；ＭＥＤＩ４７３６）、ＭＫ－３４７５（ＰＤ－１ブロッカー）、ニボルマブ（抗ＰＤ１抗体）、ＣＴ－０１１（抗ＰＤ１抗体）、ＢＹ５５モノクローナル抗体、ＡＭＰ２２４（抗ＰＤＬ１抗体）、ＢＭＳ－９３６５５９（抗ＰＤＬ１抗体）、ＭＰＬＤ３２８０Ａ（抗ＰＤＬ１抗体）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（抗ＰＤＬ１抗体）およびＹｅｒｖｏｙ／イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ－４チェックポイント阻害剤）から選択される。
上記方法は、特定のタイプまたは種類の癌に限定されない。いくつかの実施形態において、癌は、癌免疫療法または癌ワクチン治療に反応する任意のタイプの癌である。いくつかの実施形態において、癌は、乳房、卵巣、前立腺、肺、腎臓、胃、結腸、精巣、頭頸部、膵臓、脳、黒色腫、および他の組織器官の腫瘍、並びに急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、Ｔ細胞リンパ性白血病、およびＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫および白血病などの血液腫瘍のうちの１つ以上である。
いくつかの実施形態において、上記方法は、アルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、抗腫瘍抗生物質、モノクローナル抗体、白金剤、植物アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ビンカアルカロイド、タキサン、およびエピポドフィロトキシンから成る群より選択される１つ以上の化学療法剤を対象に投与することをさらに含む。
上記方法は、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の特定の投与様式に限定されない。いくつかの実施形態において、薬剤は経口的に投与される。いくつかの実施形態において、薬剤は、強制経口投与（oral gavage）によって投与される。
上記方法に対するいくつかの実施形態では、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤は、対象の腸内細菌叢におけるＡｋｋｅｒｍａｎｓｉａ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ、およびＢｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓの相対的な存在量の増加をもたらす。
上記方法のためのいくつかの実施形態において、１）対象への癌免疫療法またはワクチン（例えば、癌ワクチン）（例えば、感染性病原体に対するワクチン）、および２）対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与を適用することは、癌免疫療法またはワクチン（例えば、癌ワクチン）（例えば、感染性病原体に対するワクチン）の抗腫瘍効果の増加、より強い免疫応答（例えば、ＰＢＭＣ中の抗腫瘍Ｔ細胞頻度の増加）、および腫瘍増殖の阻害の増強のうちの１つ以上をもたらす。
特定の実施形態において、本発明は、ゲルベースのイヌリン製剤を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態において、ゲルベースのイヌリン製剤は、２０以上４７以下の平均重合度を有する。いくつかの実施形態において、ゲルベースのイヌリン製剤は、約２８（例えば、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３）の平均重合度を有する。
いくつかの実施形態において、ゲルベースのイヌリンｆｏｒｍｌｕａｔｉｏｎは、フルクトオリゴ糖、短鎖フルクトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、トランスガラクトオリゴ糖、ペクチン、キシロオリゴ糖、キトサンオリゴ糖、βグルカン、アラブルガム変性デンプン、耐性ジャガイモデンプン、グアーガム、ビーンガム、ゼラチン、グリセロール、耐性ジャガイモデンプン、グアーガム、ビーンガム、ゼラチン、グリセロール、ポリデキストロース、Ｄ－タガトース、アカシア繊維、カロブ、オート麦、およびかんきつ類繊維から選択される１つ以上のプレバイオティクス化合物を含む。
特定の実施形態において、本発明は、腸内細菌叢活性の調節不全を特徴とする状態を治療または予防するための方法であって、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の当該対象への投与を含む方法を提供する。
いくつかの実施形態において、対象はヒト対象である。
いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤は、プレバイオティクス薬剤を含む線維である。いくつかの実施形態において、プレバイオティクス薬剤を含む線維は、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）、フコイダン、ジャガイモデンプン、オリゴフルクトース、およびイヌリンから選択される。いくつかの実施形態において、プレバイオティクス薬剤を含む線維は、ゲルベースのイヌリン製剤である。いくつかの実施形態において、ゲルベースのイヌリン製剤は、２０以上４７以下の平均重合度を有する。いくつかの実施形態において、ゲルベースのイヌリン製剤は、約２８（例えば、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３）の平均重合度を有する。いくつかの実施形態において、ゲルベースのイヌリンｆｏｒｍｌｕａｔｉｏｎは、フルクトオリゴ糖、短鎖フルクトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、トランスガラクトオリゴ糖、ペクチン、キシロオリゴ糖、キトサンオリゴ糖、βグルカン、アラブルガム変性デンプン、耐性ジャガイモデンプン、グアーガム、ビーンガム、ゼラチン、グリセロール、ポリデキストロース、Ｄ－タガトース、アカシア繊維、カロブ、オート麦、およびかんきつ類繊維から選択される１つ以上のプレバイオティクス化合物を含む。いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤は、メラトニンである。
いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤は、経口的に投与される。
いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与は、当該対象の腸内細菌叢におけるＡｋｋｅｒｍａｎｓｉａ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ、およびＢｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓの相対的な存在量の増加をもたらす。
いくつかの実施形態において、腸内細菌叢活性の調節不全を特徴とする状態は、自己免疫疾患、神経疾患、糖尿病、および／または肥満である。
いくつかの実施形態において、腸内細菌叢活性の調節不全を特徴とする状態は、リウマチ性関節炎、多発性硬化症糖尿病（例えば、１型糖尿病）、甲状腺の自己免疫疾患（例えば、橋本甲状腺炎、グレーブス病）、甲状腺関連眼症および真皮症、副甲状腺機能低下症、アジソン病、早発性卵巣不全、自己免疫性甲状腺機能低下症、自己免疫性下垂体疾患、免疫性胃炎（immunogastritis）、悪性アンゲミス（pernicious angemis）、セリアック病、白斑、重症筋無力症、尋常性天疱瘡およびバリアント、水疱性類天疱瘡炎、ジューリング疱疹状皮膚炎、後天性表皮水疱症、全身性硬化症、混合性結合組織病、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、グッドパスチャー症候群、リウマチ性心疾患、自己免疫性多腺性症候群１型、アイカルディ－ゴーティエール症候群、急性膵炎加齢黄斑変性、アルコール性肝疾患、肝線維症、転移、心筋梗塞、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、パーキンソン病、多発性関節炎／胎児性および新生児貧血、敗血症、ならびに炎症性腸疾患から選択される。
いくつかの実施形態において、該方法はさらに、以下の追加の治療薬：疾患修飾性抗リウマチ薬（例えば、レフルノミド、メトトレキサート、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン）、生物学的製剤（例えば、リツキシマブ、インフリキシマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、ゴリムマブ）、非ステロイド性抗炎症薬（例えば、イブプロフェン、セレコキシブ、ケトプロフェン、ナプロキセン、ピロキシカム、ジクロフェナク）、鎮痛薬（例えば、アセトアミノフェン、トラマドール）、免疫調節薬（例えば、アナキンラ、アバタセプト）、グルココルチコイド（例えば、プレドニゾン、メチルプレドニゾン）、ＴＮＦ－α阻害剤（例えば、アダリムマブ、セルトリズマブペゴル、エタネルセプト、ゴリムマブ、インフリキシマブ）、ＩＬ－１阻害剤、およびメタロプロテアーゼ阻害剤のうち１つ以上を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態において、上記治療薬は、インフリキシマブ、アダリムマブ、エタネルセプト、非経口金または経口金を含むが、これらに限定されない。
特定の実施形態において、本発明は、１）対象へのワクチン、および２）対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与を適用することを通じて、ワクチンの効果を増加させるための一方法を提供する。
いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与は、ワクチンの投与の前、同時、および／または後に起こる。
いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与は、ワクチンの投与と同時に起こる。あるいは、いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与は、ワクチンの投与の前に起こる。いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与は、ワクチンの投与の前およびワクチンの投与と同時に起こる。
いくつかの実施形態において、上記ワクチンは、癌治療のためのワクチン、および／または感染性病原体を治療および／または感染性病原体から保護するためのワクチンである。
いくつかの実施形態において、上記対象はヒト対象である。
いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤は、プレバイオティクス薬剤を含む線維である。いくつかの実施形態において、プレバイオティクス薬剤を含む線維は、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）、フコイダン、ジャガイモデンプン、オリゴフルクトース、およびイヌリンから選択される。いくつかの実施形態において、プレバイオティクス薬剤を含む線維は、ゲルベースのイヌリン製剤である。いくつかの実施形態において、ゲルベースのイヌリン製剤は、２０以上４７以下の平均重合度を有する。いくつかの実施形態において、ゲルベースのイヌリン製剤は、約２８（例えば、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３）の平均重合度を有する。いくつかの実施形態において、ゲルベースのイヌリンｆｏｒｍｌｕａｔｉｏｎは、フルクトオリゴ糖、短鎖フルクトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、トランスガラクトオリゴ糖、ペクチン、キシロオリゴ糖、キトサンオリゴ糖、βグルカン、アラブルガム変性デンプン、耐性ジャガイモデンプン、グアーガム、ビーンガム、ゼラチン、グリセロール、ポリデキストロース、Ｄ－タガトース、アカシア繊維、カロブ、オート麦、およびかんきつ類繊維から選択される１つ以上のプレバイオティクス化合物を含む。いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤は、メラトニンである。
いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤は、経口的に投与される。
いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与は、当該対象の腸内細菌叢におけるＡｋｋｅｒｍａｎｓｉａ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ、およびＢｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓの相対的な存在量の増加をもたらす。
本発明はまた、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤（例えば、繊維ベースのプレバイオティクス）、およびワクチン（例えば、癌ワクチン）（例えば、感染性病原体に対するワクチン）、および癌免疫療法（例えば、ＩＣＩ阻害剤）のうちの１つ以上を含むキットを提供する。当該キットは、必要に応じて、他の治療薬を含み得る。
特定の実施形態において、本発明は、（例えば、複合体化、複合化、カプセル化、吸収、吸着、混合された）細菌に関連するプレバイオティクス製剤を含む組成物を提供する。
いくつかの実施形態において、プレバイオティクス製剤は、フルクトオリゴ糖、短鎖フルクトオリゴ糖、イヌリン、イソマルトオリゴ糖、トランスガラクトオリゴ糖、ペクチン、キシロオリゴ糖、キトサンオリゴ糖、βグルカン、アラブルガム変性デンプン、耐性ジャガイモデンプン、グアーガム、ビーンガム、ゼラチン、グリセロール、ポリデキストロース、Ｄ－タガトース、アカシア繊維、カロブ、オート麦、およびかんきつ類繊維から選択される１つ以上のプレバイオティクス化合物を含む。
いくつかの実施形態において、上記プレバイオティクス化合物はゲルベースである。いくつかの実施形態において、上記プレバイオティクス化合物は、ゲルベースのイヌリンである。
いくつかの実施形態において、上記細菌は、Ｅ．Ｃｏｌｉである。いくつかの実施形態において、上記細菌は、当該細菌が投与された対象の腸内細菌叢を変化させることができる。
いくつかの実施形態において、上記組成物は、対象に対する経口投与のために構成されている。
特定の実施形態において、本発明は、細菌の結腸送達のための方法を対象に提供する。当該方法は、対象にプレバイオティクス製剤（例えば、ゲルベースのイヌリン）を細菌（例えば、複合体化、複合化、カプセル化、吸収、吸着、混合された細菌）と共に投与することを含む。
特定の実施形態において、本発明は、１つ以上の（例えば、複合体化、複合化、カプセル化、吸収、吸着、混合された）プロバイオティクス細胞に関連するプレバイオティクス製剤を含む組成物を提供する。特定の実施形態において、本発明は、対象の消化系においてプロバイオティクス生物の増殖を増加させる方法を提供する。当該方法は、このような組成物を対象（例えば、哺乳動物対象、ヒト対象）に投与することを含む。
いくつかの実施形態において、プレバイオティクス製剤は、フルクトオリゴ糖、短鎖フルクトオリゴ糖、イヌリン、イソマルトオリゴ糖、トランスガラクトオリゴ糖、ペクチン、キシロオリゴ糖、キトサンオリゴ糖、βグルカン、アラブルガム変性デンプン、耐性ジャガイモデンプン、グアーガム、ビーンガム、ゼラチン、グリセロール、ポリデキストロース、Ｄ－タガトース、アカシア繊維、カロブ、オート麦、およびかんきつ類繊維から選択される１つ以上のプレバイオティクス化合物を含む。
いくつかの実施形態において、上記プレバイオティクス化合物は、ゲルベースである。いくつかの実施形態において、上記プレバイオティクス化合物は、ゲルベースのイヌリンである。
いくつかの実施形態において、１つ以上のプロバイオティクス細胞は、当該細胞が投与された対象の腸内細菌叢を変化させることができる。
いくつかの実施形態において、上記組成物は、対象に対する経口投与のために構成されている。
いくつかの実施形態において、１つ以上のプロバイオティクス細胞は、有益な細菌を含む。いくつかの実施形態において、当該有益な細菌は、Saccharomyces cereviseae、Bacillus coagulans、Bacillus licheniformis、Bacillus subtilis、Bifidobacterium angulatum、Bifidobacterium animalis、Bifidobacterium bifidum、Bifidobacterium breve、Bifidobacterium infantis、Bifidobacterium lactis、Bifidobacterium longum、Enterococcus faecium、Enterococcus faecalis、Lactobacillus acidophilus、Lactobacillus amylovorus、Lactobacillus alimentarius、Lactobacillus bulgaricus、Lactobacillus casei subsp. casei、Lactobacillus casei Shirota、Lactobacillus curvatus、Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis、Lactobacillus fermentum、Lactobacillus farciminus、Lactobacillus gasseri、Lactobacillus helveticus、Lactobacillus johnsonii、Lactobacillus lacti、Lactobacillus paracasei、Lactobacillus pentosaceus、Lactobacillus plantarum、Lactobacillus reuteri、Lactobacillus rhamnosus (Lactobacillus GG)、Lactobacillus sake、Lactobacillus salivarius、Lactococcus lactis、Lactobacillus thermotolerans、Lactobacillus mucosae、Micrococcus varians、Pediococcus acidilactici、Pediococcus pentosaceus、Pediococcus acidilactici、Pediococcus halophilus、Streptococcus faecalis、Streptococcus thermophilus、Staphylococcus carnosus、およびStaphylococcus xylosusのうち１つ以上を含む。
いくつかの実施形態において、組成物は、糖衣錠、ゲルカプセル、ゲル、エマルジョン、錠剤、ウェハーカプセル、ヒドロゲル、ナノファイバーゲル、エレクトロスピン繊維、食品バー、菓子、発酵乳、発酵チーズ、チューインガム、粉末または練り歯磨きである。
特定の実施形態において、本発明はゲルベースのプレバイオティクス製剤を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態において、当該組成物は、経口摂取のために製剤化されている。いくつかの実施形態において、当該組成物は、糖衣錠、ゲルカプセル、ゲル、エマルジョン、錠剤、ウェハーカプセル、ヒドロゲル、ナノファイバーゲル、エレクトロスピン繊維、食品バー、菓子、発酵乳、発酵チーズ、チューインガム、粉末または練り歯磨きである。
いくつかの実施形態において、上記プレバイオティクス製剤は、フルクトオリゴ糖、短鎖フルクトオリゴ糖、イヌリン、イソマルトオリゴ糖、トランスガラクトオリゴ糖、ペクチン、キシロオリゴ糖、キトサンオリゴ糖、βグルカン、アラブルガム変性デンプン、耐性ジャガイモデンプン、グアーガム、ビーンガム、ゼラチン、グリセロール、ポリデキストロース、Ｄ－タガトース、アカシア繊維、カロブ、オート麦、およびかんきつ類繊維から選択される１つ以上のプレバイオティクス化合物を含む。
いくつかの実施形態において、ゲルベースのプレバイオティクス製剤は、１つ以上のプロバイオティクス生物に関連する。いくつかの実施形態において、１つ以上のプロバイオティクス生物は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ種およびＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ種から選択される。いくつかの実施形態において、ゲルベースのプレバイオティクス製剤は、Bordetella、Borrelia、Brucella、Campylobacter、Chlamydia並びにChlamydophila、Clostridium、Corynebacterium、Enterococcus、Escherichia、Francisella、Haemophilus、Helicobacter、Legionella、Leptospira、Listeria、Mycobacterium、Mycoplasma、Neisseria、Pseudomonas、Rickettsia、Salmonella、Shigella、Staphylococcus、Streptococcus、Treponema、VibrioおよびYersiniaに特異的な１以上のバクテリオファージに関連する。いくつかの実施形態において、１つ以上のプロバイオティクス生物は、L.acidophilus、L.amylovorus、L.brevis、L.casei、L.casei subsp. rhamnosus (Lactobacillus GG)、L.caucasicus、L.crispatus、L.delbrueckii subsp. bulgaricus (L.bulgaricus)、L.fermentum (L.fermenti)、L.gasseri、L.helveticus、L.johnsonii、L.lactis、L.leichmannii、L.paracasei、L.plantarum、L.reuteriまたはL.rhamnosusから選択される。
〔図面の簡単な説明〕
〔図１Ａ～Ｆ〕α－ＰＤ－１の抗腫瘍効果を予防的に改善するための候補物質のＩｎ ｖｉｖｏスクリーニング。－７日目に、種々のサンプルを３回予防的にマウスに対して強制投与した。次いで、０日目に、１．５×１０５個のＣＴ２６細胞がＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下（s.c.）注射された。腫瘍接種後１週間中に再度３回、および７日目から１週間につき５回、マウスに対して強制投与した。１００μｇ／用量のα－ＰＤ－１を、１０、１４、１８および２４日目に腹腔内（i.p.）注射した。種々の化合物が強制投与されたマウスにおける（Ｂ）個別の腫瘍増殖曲線、および（Ｃ）平均腫瘍増殖曲線。（Ｄ）各群における生存率曲線。（Ｅ）２２日目の末梢血内におけるＡＨ１特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の平均頻度。（Ｆ）代表散布図を、フローサイトメトリーを用いて測定した。データは、平均±ＳＥＭを表す。＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１であり、（Ｂ）二元配置ＡＮＯＶＡ（two-way ANOVA）、または（Ｅ）ｔ検定、（Ｄ）ログ・ランク（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）検定によって解析した。
〔図２Ａ～Ｇ〕α－ＰＤ－１の抗腫瘍効果を改善するための候補物質のＩｎ ｖｉｖｏスクリーニング。（Ａ）０日目に、１．５×１０５個のＣＴ２６細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスに対して皮下（s.c.）注射した。７日目から（１週間につき５回）マウスに対して強制投与した。１１、１５、１９および２３日目に、１００μｇ／用量のα－ＰＤ－１を腹腔内（i.p.）注射した。（Ｂ）種々の化合物を強制投与されたマウスにおける平均腫瘍増殖曲線。データは平均±ＳＥＭを表す。各群における（Ｃ）個別の腫瘍増殖曲線および（Ｄ）生存率曲線。１８および２４日目に末梢血を収集した。（Ｅ）１８日目、（Ｆ）２４日目におけるＡＨ１特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の平均頻度および（Ｇ）代表散布図を、フローサイトメトリーを用いて測定した。データは平均±ＳＤを表す。全てのデータは２～３の独立した実験から得られた。ｎ＝１０（Ｂ、Ｃ、Ｄ）、ｎ＝７～１０（Ｅ、Ｆ）、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１であり、（Ｂ）二元配置ＡＮＯＶＡ、（Ｅ、Ｆ）一元配置ＡＮＯＶＡ、またはログ・ランク（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）検定によって解析した。
〔図３Ａ～Ｈ〕α－ＰＤ－１と併用されたメラトニンおよびイヌリンの用量効果のＩｎ ｖｉｖｏ試験。０日目に１．５×１０５個のＣＴ２６細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下（s.c.）注射した。７日目から（１週間につき５回）、マウスに対して強制投与した。１１、１５、１９および２３日目に、１００μｇ／用量のα－ＰＤ－１を腹腔内（i.p.）注射した。異なる用量の（Ａ）メラトニンおよび（Ｂ）イヌリンが強制投与されたマウスにおける平均腫瘍増殖曲線。異なる用量の（Ｃ）メラトニンおよび（Ｄ）イヌリンを用いた処置後１８日目におけるＡＨ１特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の平均頻度。異なる用量の（Ｅ）メラトニンおよび（Ｆ）イヌリンを用いた処置後２４日目における腫瘍組織全体中のＣＤ４５＋ＣＤ８＋細胞の割合。異なる用量の（Ｇ）メラトニンおよび（Ｈ）イヌリンを用いた処置後２４日目における全細胞中のＣＤ４５＋ＣＤ８＋細胞の割合。データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝５）を表す。＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１であり、（Ａ、Ｂ）二元配置ＡＮＯＶＡ、（Ｄ）２テール非対応ｔ検定（two tails, unpaired t-test）、（Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ）一元配置ＡＮＯＶＡによって解析した。
〔図４Ａ～Ｈ〕腸内細菌叢の多様性、豊富さおよび構造の応答。１．５×１０５個のＣＴ２６細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下（s.c.）注射し、７日目から（１週間につき５回）強制投与した。１１、１５、１９、および２３日目にα－ＰＤ－１（１００μｇ／用量）を腹腔内（i.p.）注射した。１６ｓ ＲＮＡ解析のために２１日目に糞便ペレットを収集した。各群における腸内細菌叢の（Ａ）ＯＴＵ数、（Ｂ）シンプソン多様度の逆数（inverse Simposon diversity）、および（Ｃ）（Ｂｒａｙ－Ｃｕｒｔｉｓに基づく）非計量多次元スケーリング（ＮＭＤＳ）スコアプロット。（Ｄ）科レベルおよび（Ｉ）属レベルでの腸内細菌叢の相対的な存在量。（Ｆ）各群におけるｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ、ｒｏｓｅｂｕｒｉａおよびＲｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ＿１の相対的な存在量。（Ｇ）腫瘍サイズとｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ、ｒｏｓｅｂｕｒｉａおよびＲｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ＿１の相対的な存在量との関係。（Ｈ）糞便ペレット中の各群におけるＳＣＦＡ（乳酸塩、プロピオン酸塩および酪酸塩）レベルのヒートマップ。データは平均±ＳＥＭを表す。＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．０００１であり、（Ａ、Ｂ、Ｆ）一元配置ＡＮＯＶＡによって解析した。
〔図５Ａ～Ｃ〕腸内細菌叢解析。１．５×１０５個のＣＴ２６細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下（s.c.）注射し、７日目から（１週間につき５回）強制投与した。１１、１５、１９、および２３日目にα－ＰＤ－１（１００μｇ／用量）を腹腔内（i.p.）注射した。１６ｓ ＲＮＡ解析のために２１日目に糞便ペレットを収集した。各群における腸内細菌叢の（Ａ）ＯＴＵ数、および（Ｃ）ＮＭＤＳスコアプロット。（Ｃ）属レベルでの腸内細菌叢の相対的な存在量。データは平均±ＳＥＭを表す。
〔図６Ａ～Ｉ〕イヌリンゲルは、α－ＰＤ－１の治療効果をさらに増強させる。（Ａ）イヌリンゲルの画像およびＳＥＭ画像。（Ｂ）イヌリンまたはイヌリンゲル（６０ｍｇ／用量）を強制投与したマウスについての平均腫瘍増殖曲線および個別の腫瘍増殖曲線。１．５×１０５個のＣＴ２６細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下（s.c.）注射した。強制投与を７日目に（１週間につき５回）開始し、１００μｇのα－ＰＤ－１を１１、１５、１９、および２３日目に腹腔内（i.p.）注射した。（Ｃ）各群の生存率曲線。（Ｄ）α－ＰＤ－１群と併用されたイヌリンゲル中の腫瘍根絶マウスに１．５×１０５個のＣＴ２６細胞を注射し、腫瘍の大きさをモニターした。ＰＢＳが対照として用いられた。（Ｅ）２３日目のＡＨ１特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度および散布図。（Ｆ）腫瘍微小環境分析：全腫瘍におけるＣＤ４５＋ＣＤ８＋Ｔ細胞；ＤＡＰＩ－ＣＤ４５＋ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＡＨ１－テトラマー陽性；成熟ＤＣ細胞（ＤＡＰＩ－ＣＤ４５＋細胞におけるＣＤ１１ｃ＋ＣＤ８６＋Ｔ細胞）および全腫瘍におけるＣＤ４５＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合。（Ｇ、Ｈ）２３日目に、ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴ試験のために脾臓を採取した。（Ｉ）ＣＴ２６担癌ＢＡＬＢ／ｃマウスに、ＣＤ８＋Ｔ細胞（αＣＤ８）、ＣＤ４＋Ｔ細胞（αＣＤ４）およびＮＫ細胞（αＡｓｉａｌｏ ＧＭ１）を標的とする抗体２００μｇを、８、１１および１６日目に注射した。α－ＰＤ－１注射およびサンプル強制投与は、上記と同じ方法を用いた。担癌マウスの平均および個別の腫瘍増殖曲線を示す。ＩｇＧ抗体が対照群として用いられた。データは平均±ＳＥＭを表す。全てのデータは２～３の独立した実験から得られた。ｎ＝１０（Ｂ、Ｃ）、ｎ＝５（Ｄ、Ｉ）、ｎ＝１０～１５（Ｅ）、ｎ＝４～７（Ｇ、Ｆ）であり、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１であり、（Ｅ、Ｆ）一元配置ＡＮＯＶＡ、（Ｂ、Ｉ）二元配置ＡＮＯＶＡ、または（Ｃ）ログ・ランク（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）検定によって解析された。
〔図７Ａ～Ｂ〕シリンジ（１ｍＬ）を通してＤＩ水にイヌリンゲルを注入した。イヌリンゲルの画像は、水中での安定性を示す。（Ｂ）イヌリンゲルを強酸環境（ｐＨ２）下でそれぞれ２時間および２４時間インキュベートした場合のイヌリンゲルの安定性。ＤＮＳ試薬をプローブで使用し、吸光度を測定して還元糖の含有量を確認した。酸性処理を行わないイヌリンゲルを標準として使用し、イヌリンを対照として使用した。
〔図８Ａ～Ｉ〕イヌリンゲルは長期の結腸保持を示した。（Ａ）異なる時点におけるイヌリンゲルの腸管保持のＩＶＩＳイメージング（白い囲いは結腸領域を示す）、および（Ｂ）結腸領域における平均蛍光強度の対応。イヌリンをＦＩＴＣで標識した。（Ｃ）強制投与後の異なる時点での糞便ペレット中のイヌリン－ＦＩＴＣの蛍光強度。（Ｄ）結腸消化物中のイヌリン含量を、市販のイヌリンキットによって測定した。矢印は、イヌリンの曲線下面積（ＡＵＣ）値を示した。２１日目に糞便ペレットを収集し、１６ｓＲＮＡ分析を行った。各群における腸内細菌叢の（Ｅ）ＯＴＵ数、シンプソン多様度の逆数（inverse Simposon diversity）、および（Ｆ）ＮＭＤＳスコアプロット（Ｂｒａｙ－Ｃｕｒｔｉｓに基づく）。腸内細菌叢の（Ｇ）属レベルおよび（Ｈ）の相対的な存在量。（Ｉ）ナイーブマウスに広域スペクトル抗生物質（アンピシリン＋コリスチン＋ストレプトマイシン）を１週間与えた。次いで、１．５×１０５個のＣＴ２６細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下接種し、マウスに通常の飲料水を５日間与え、続いて広域スペクトル抗生物質処置を継続した。α－ＰＤ－１注射およびサンプル強制投与は、上記と同じレジメンを用いた。平均腫瘍増殖曲線を示す。データは平均±ＳＥＭを表す。全てのデータは２～３の独立した実験から得られた。＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１、＊＊＊＊：ｐ＜０．０００１であり、（Ｃ、Ｅ、Ｈ）一元配置ＡＮＯＶＡ、または（Ｉ）二元配置ＡＮＯＶＡによって解析された。
〔図９Ａ～Ｅ〕（Ａ）ＭＣ３８腫瘍モデルがＣ５７ＢＬ／６マウス上で確立され、α－ＰＤ－１注射およびサンプル強制投与を受けた。２０日目に、ＰＢＭＣをＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイのために採取した。各群の（Ｄ）生存率曲線および（Ｅ）平均および個別の腫瘍増殖曲線。データは平均±ＳＥＭを表す。＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１、＊＊＊＊：ｐ＜０．０００１であり、（Ａ、Ｂ、Ｇ）一元配置ＡＮＯＶＡによって解析した。
〔図１０Ａ～Ｃ〕α－ＰＤ－１と併用されたイヌリンゲルのバイオセーフティ研究。（Ａ）好酸球、リンパ球、単球、血小板数、赤血球数、ＲＤＷ、ヘモグロビン、ＭＣＨおよび平均血小板容積を含む完全血球算定パネル。（Ｂ）ＡＬＰ、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＢＵＮ、ＣＰＫ、総タンパク質量、コレステロールおよびグルコースを含む生化学パネル。（Ｃ）２９日目におけるα－ＰＤ－１と併用されたイヌリンゲル処置後の心臓、肝臓、脾臓、肺、腎臓のＨ＆Ｅ染色。
〔図１１〕Ｅ．ｃｏｌｉの増殖曲線およびＧＦＰ発現。Ｅ．ｃｏｌｉを、２５０ｍＬ三角フラスコ中で培養した。培養物を異なる間隔でサンプリングした。ＯＤ６００および蛍光強度を測定した。
〔図１２〕ＰＢＳ中での２４時間インキュベーションおよびイヌリンゲル中への封入後の蛍光強度によってそれぞれの細胞生存率を決定した。
〔図１３Ａ～Ｅ〕他のモデルにおけるイヌリンゲル＋α－ＰＤ－１併用療法の抗腫瘍効果の検証。（Ａ）Ｔａｃｏｎｉｃ ＦａｒｍまたはＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ由来のＣＴ２６担癌ＢＡＬＢ／ｃマウスの処置レジメン。（Ｂ）Ｔａｃｏｎｉｃ Ｆａｒｍまたは（Ｃ）Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ由来のＢＡＬＢ／Ｃマウス間の腫瘍増殖を示す。Ｄ－Ｅ）（Ｄ）ＭＣ－３８結腸癌および（Ｅ）Ｂ１６Ｆ１０メラノーマを有するＣ５７ＢＬ／６マウスを、示されたように処置し（イヌリン：６０ｍｇ／用量）、腫瘍増殖をモニターした。
〔図１４〕各イヌリンサンプルの１Ｈ ＮＭＲスペクトル。
〔図１５〕イヌリンサンプルのＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量スペクトル。
〔図１６〕イヌリンゲル形成に対するイヌリン濃度および平均ＤＰの影響。様々なＤＰのイヌリンを用いて、様々なイヌリンゲル製剤を形成した。７、１０、２３、２６および２８の平均ＤＰを有するイヌリンを、種々の濃度で水に溶解した。加熱および冷却によってゲル化を誘導した後、イヌリンゲル形成が、高いイヌリン濃度および高いＤＰで観察された。
〔図１７〕様々な平均ＤＰで形成されたイヌリンゲル製剤のゲルレオロジー特性を、周波数掃引によって測定した。Ｇ’は弾性率を表し、Ｇ’’は粘性率を表す。イヌリンゲルサンプル＃１は
Figure 2022549318000002
を有していた。イヌリンゲルサンプル＃３は
Figure 2022549318000003
を有していた。イヌリンゲルサンプル＃５は
Figure 2022549318000004
を有していた。
〔図１８〕ナイーブマウスに、種々の平均ＤＰを有するイヌリンゲルを経口的に強制投与し、糞便サンプル中のイヌリン含有量を経時的に測定した。データは、平均±ＳＥＭを示す。
〔図１９〕皮下（s.c.）側腹部ＣＴ２６腫瘍を有するＢａｌｂ／ｃマウスに対して、種々のＤＰ（６０ｍｇ／用量）を強制経口投与で処置し、加えてα－ＰＤ－１（１００ｕｇ／用量）を腹腔内投与した。動物の腫瘍増殖をモニターした。データは、平均±ＳＥＭを示す。
〔図２０〕皮下（s.c.）側腹部ＣＴ２６腫瘍を有するＢａｌｂ／ｃマウスに対して、種々のＤＰ（６０ｍｇ／用量）を強制経口投与で処置し、加えてα－ＰＤ－１（１００ｕｇ／用量）を腹腔内投与した。動物の体重変化をモニターした。データは、平均±ＳＥＭを示す。
〔図２１〕イヌリンゲル形成の濃度および温度依存性。ＤＰ２３を含むイヌリンを水と混合し、１５、２０、２５、および３０％ｗ／ｖの所望の濃度を得た。混合物をそれぞれ４０、５０、６０、７０℃に５分間加熱した後、冷却した。ゲル形成を試験した。
〔図２２〕食品グレードのジャガイモデンプンを、水中で０．１、０．５、２．５、および５％ｗ／ｖの濃度において予備水和し、続いて７０℃で穏やかに撹拌した。冷却後、ゲル形成を試験した。
〔図２３〕新しい繊維ゲルのためのゲル化プロセス。＃１イヌリンゲル、＃２抵抗性ジャガイモデンプンを含むイヌリンゲル、＃３グアーガムを含むイヌリンゲル、＃４ペクチンを含むイヌリンゲル、および＃５ビーンガムを含むイヌリンゲル。材料を最初に水中で混合し（上部パネル）、７０℃で５分間加熱し（中央パネル）、続いて室温で一晩冷却し、繊維ゲルの形成をもたらした（下部パネル）。
〔図２４〕イヌリンゲルは、種々の量の天然繊維または賦形剤を添加した後に形成された。示された値は、ゲル形成を乱すことなく２３％ｗ／ｗイヌリンゲルに添加することができる各材料の最大量である。
〔図２５〕異なる繊維ゲル製剤のゲルレオロジー特性。周波数掃引によって測定された粘弾性（左）および粘度の流れ曲線によって測定された粘弾性（右）。
〔定義〕
本開示の原理の理解を促進する目的のために、好ましい実施形態が参照され、特定の言語が、それを説明するために使用される。それにも関わらず、本開示の範囲はそれによって意図されたものに限られず、本開示が関係する当業者に通常想起されるように、本明細書に例示されるような本開示のそのような変更およびさらなる修正が企図されていることが理解されるだろう。
冠詞「ａ」および「ａｎ」は本明細書では当該冠詞の文法的な対象の１つまたは２つ以上（すなわち、少なくとも１つ）を指すために使用される。一例として、「要素（ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ）」は少なくとも１つの要素を意味し、２つ以上の要素を含み得る。
「約」は、所与の値が所望の結果に影響を及ぼすことなく、端点の「わずかに上」または「わずかに下」であり得ることを提供することによって、数値範囲の端点に柔軟性を提供するために使用される。
本明細書における用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、または「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、およびその変形の使用は、その後に列挙される要素およびその均等物、ならびに追加の要素を包含することを意味する。「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む／＊（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ／＊）」、または「有する（ｈａｖｉｎｇ）」として列挙される実施形態はまた、「本質的にこれらの特定の要素から成り、かつ「これらの特定の要素から成る」と考えられる。
本明細書中の値の範囲の列挙は、本明細書中に別段の指示がない限り、単に、範囲内に入る各別個の値を個々に言及することの短縮法としての役割を果たすことを意図しており、各別個の値は、あたかもそれが本明細書中に個々に引用されたかのように明細書に組み込まれる。例えば、１％～５０％と記載されている場合、２％～４０％、１０％～３０％、または１％～３％などの値が本明細書で明確に列挙されることが意図されている。これらは特定の例にすぎず、列挙された最低値と最高値との間およびそれらを含む数値の全ての考え得る組み合わせは本明細書において明示的に記載されていると考えられるべきである。
「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、または「によって特徴付けられる（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｂｙ）」と同義である遷移用語「備える（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は包括的またはオープンエンドであり、追加の、記載されていない要素または方法ステップを除外しない。対照的に、「から成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）という移行句はクレームに記載されていない要素、工程または材料を除外するものである。「から本質的に成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）という移行句は、特定された物質またはステップ「およびクレームされた発明における基本的な、新規の特徴に対して実質的に影響しない物質またはステップ」にクレームの範囲を制限する。
本明細書中で使用される場合、用語「免疫チェックポイント阻害剤」（ＩＣＩｓ）、「チェックポイント阻害剤」および同種のものは、免疫系の制御機構の活性を阻害する化合物を指す。免疫系チェックポイント、または免疫チェックポイントは免疫系における阻害経路であり、一般的に、副次的な組織損傷を最小限に抑えるために、自己寛容を維持するように、あるいは、生理学的免疫応答の継続時間および振幅を調節するように作用する。ＩＣＩは、経路中のタンパク質の活性を阻害することによって、免疫系チェックポイントを阻害し得る。ＩＣＩタンパク質はＣＤ８０、ＣＤ２８、ＣＤ８６、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、誘導性Ｔ細胞同時刺激因子のリガンド（Ｌ－ＩＣＯＳ）、誘導性Ｔ細胞同時刺激因子（ＩＣＯＳ）、ＣＤ２７６、およびＴ細胞活性化阻害因子１（ＶＴＣＮ１）を含むＶセットドメイン、を含むが、これらに限られない。そのようなものとして、ＩＣＩ阻害剤は、例えば、ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、またはＰＤ－Ｌ１などといったＩＣＩに対するアンタゴニストを含む。例えば、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－１、またはＰＤ－Ｌ１に結合し、それらの機能に拮抗する抗体は、ＩＣＩ阻害剤である。さらに、ＩＣＩの阻害機能を阻害する任意の分子（例えば、ペプチド、核酸、小分子など）はＩＣＩ阻害剤である。
「対象」は、脊椎動物、哺乳動物、またはヒトであり得る。哺乳動物には家畜、スポーツ動物、ペット、霊長類、マウスおよびラットが含まれるが、これらに限定されない。一態様では、対象はヒトである。
別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。
〔詳細な説明〕
新たな研究により、腸内細菌叢が免疫応答の調節に重要な役割を果たすことが示唆されている。実際、免疫チェックポイント遮断のｅｆｆｉａｃｙを高めるために、糞便細菌叢転写またはプロバイオティクスを用いる努力が行われている。
Ｔ細胞の制御経路を標的として抗腫瘍免疫応答を増強する免疫チェックポイント療法は重要な臨床的進歩をもたらし、癌に対する新たな武器を提供する。この治療法により、持続的な臨床反応が得られ、患者の一部において、患者が何年間も癌の臨床徴候を示さない長期寛解が得られている。
ＣＴＬＡ－４（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ ４）および、ＰＤ－１（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｄｅａｔｈ １）などといったこれらの免疫チェックポイントの多くは、Ｔ細胞が腫瘍細胞を攻撃するのを妨げることが知られている。ＣＴＬＡ－４を標的とする抗体（例えば、イピリムマブ）およびＰＤ－１を標的とする抗体（例えば、ニボルマブおよびペンブロリズマブ）を含む治療法は癌細胞に対する免疫応答を高めることが知られており、特定の癌の治療における効果が示されている。しかし、費用および必須の投与経路（ＩＶ）は、有害な副作用と相まって、患者の承諾にたいする障害である。
本発明の実施形態を作成する過程において実施された実験は、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）認可の薬物または栄養補助食品（例えば、プレバイオティクス薬剤）から新たな化合物を特定した。当該化合物は、免疫チェックポイント療法の効果を改善するために摂取され得る。薬剤（例えば、プレバイオティクス薬剤（例えば、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）、フコイダン、ジャガイモデンプン、オリゴフルクトース、およびイヌリン）を含む線維）（例えば、メラトニン）から成る経口製剤が、腸内細菌叢を変化させ得、その結果、有益な細菌の頻度が増加し、全身注射によって与えられる免疫チェックポイントブロッカーと相乗作用することが示された。実際、免疫療法（例えば、α－ＰＤ－１療法）にプレバイオティクス剤（例えば、イヌリン）を同時に適用することは、より強力な抗腫瘍効果、より強力な免疫応答（例えばＰＢＭＣ中のＡＨ１特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞頻度）、腫瘍増殖の抑制、Ｔ細胞の腫瘍内浸潤の増強、脾臓のＣＤ８＋Ｔ細胞内におけるより高いＩＦＮ－γ発現、および、対象の腸内細菌叢におけるＡｋｋｅｒｍａｎｓｉａ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、ＲｏｓｅｂｕｒｉａおよびＢｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓの存在量の増加をもたらすことが示された。
従って、本発明は一般に免疫療法およびワクチンの効果を増加させるための組成物および方法に関する。特に、本発明は、免疫療法またはワクチンの適用と共に、薬剤（例えば、プレバイオティクス薬剤（例えば、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）、フコイダン、ジャガイモデンプン、オリゴフルクトース、およびイヌリン）を含む線維）（例えば、メラトニン）を投与することを通じて、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることに関する。このような組成物および方法は、癌、感染性病原体、自己免疫疾患、神経障害、および／または肥満を治療することに対して有用である。
特定の実施形態において、本発明は、１）対象への癌免疫療法、および２）対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与を適用することを通じて、癌免疫療法の効果を増加させるための一方法を提供する。
特定の実施形態において、本発明は、免疫機能不全を誘導する癌細胞の能力を阻害するための方法を提供する。当該方法は、１）対象への癌免疫療法、および２）対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与の適用を含む。
特定の実施形態において、本発明は、１）対象へのワクチン、および２）対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与の適用を通じて、ワクチン（例えば、癌ワクチン）（例えば、感染性病原体に対するワクチン）の効果を増加させるための一方法を提供する。
特定の実施形態において、本発明は、免疫機能不全を誘導する癌細胞の能力を阻害するための方法を提供する。当該方法は、１）対象への癌免疫療法または癌ワクチン、および２）対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与の適用を含む。
特定の実施形態において、本発明は、１）対象への癌免疫療法、および２）対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与の適用を含む、癌を治療するための方法を提供する。
特定の実施形態において、本発明は、１）対象への癌ワクチン、および２）対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与の適用を含む、癌を治療するための方法を提供する。
特定の実施形態において、本発明は、腸内細菌叢活性の調節不全を特徴とする状態を治療するための方法であって、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与を含む方法を提供する。
いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の上述のような投与は、ワクチン（例えば、癌ワクチン）（例えば、感染性病原体に対するワクチン）または癌免疫療法の適用の前、同時、または後に起こる。いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の上述のような投与は、ワクチン（例えば、癌ワクチン）（例えば、感染性病原体に対するワクチン）または癌免疫療法の適用の前に起こる。いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の上述のような投与は、ワクチン（例えば、癌ワクチン）（例えば、感染性病原体に対するワクチン）または癌免疫療法の適用の前、同時、および後に起こる。
上記方法は特定の対象に限定されない。いくつかの実施形態において、上記対象は、哺乳動物である。いくつかの実施形態において、上記対象はヒト対象である。いくつかの実施形態において、上記対象は、癌と診断されたヒト対象である。いくつかの実施形態において、上記対象は癌を発症する恐れがあるヒト対象である。いくつかの実施形態において、上記対象は腸内細菌叢活性の調節不全を特徴とする状態を有するヒト対象である。
上記方法は、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる特定の薬剤に限定されない。いくつかの実施形態において、当該薬剤は、プレバイオティクス薬剤（例えば、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）、フコイダン、ジャガイモデンプン、オリゴフルクトース、およびイヌリン）を含む線維である。いくつかの実施形態において、当該薬剤はメラトニンである。いくつかの実施形態において、薬剤は、対象の腸内細菌叢におけるＡｋｋｅｒｍａｎｓｉａ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ、およびＢｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓの存在量の増加をもたらす。いくつかの実施形態において、プレバイオティクス薬剤を含む線維は、プレバイオティクス薬剤（例えば、ゲルベースのイヌリン）を含むゲルベース線維である。
実際、治療に適したプレバイオティクスに共通して、任意の食品の一部として、または補助食品として、以下の成分が含まれる：１，４－ジヒドロキシ－２－ナフトエ酸（ＤＨＮＡ）、イヌリン、トランス－ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）、ラクツロース、マンナンオリゴ糖（ＭＯＳ）、フルクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、ネオアガロオリゴ糖（ＮＡＯＳ）、ピロデキストリン、キシロオリゴ糖（ＸＯＳ）、イソマルトオリゴ糖（ＩＭＯＳ）、アミロース耐性デンプン、大豆オリゴ糖（ＳＢＯＳ）、ラクチトール、ラクトスクロース（ＬＳ）、イソマルツロース（パラチノースを含む）、アラビノキシロ糖（ＡＸＯＳ）、ラフィノースオリゴ糖（ＲＦＯ）、アラビノキシラン（ＡＸ）、ポリフェノール、または所望の効果によって細菌叢の構成を変化させることができる任意の他の化合物。
上記方法は、特定の癌免疫療法に限定されない。
いくつかの実施形態において、癌免疫療法は、１以上の免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）阻害剤を含む。
ＩＣＩは、統計学的に有意な方法で免疫系の阻害経路をブロックまたは阻害する任意の薬剤を含む。ブロッキングまたは阻害のために標的化され得る例示的なＩＣＩは、ＣＴＬＡ－４、ＰＤＬ１、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４（ＣＤ２ファミリーの分子に属し、すべてのＮＫ、γδ、およびメモリＣＤ８＋（αβ）Ｔ細胞上で発現する）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５とも呼ばれる）、ＣＧＥＮ－１５０４９、ＣＨＫ１およびＣＨＫ２キナーゼ、Ａ２ａＲ、ならびに種々のＢ－７ファミリーリガンドを含むが、これらに限定されない。Ｂ－７ファミリーリガンドは、Ｂ７－１、Ｂ７－２、Ｂ７－ＤＣ、Ｂ７－Ｈ１、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ５、Ｂ７－Ｈ６およびＢ７－Ｈ７を含むが、これらに限定されない。ＩＣＩは、抗体またはその抗原結合断片、他の結合タンパク質、生物学的治療、あるいは小分子を含む。これらはＣＴＬＡ－４、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０およびＣＧＥＮ－１５０４９のうちの１つ以上に結合し、その活性をブロックまたは阻害する。例示的なＩＣＩは、トレメリムマブ（ＣＴＬＡ－４ブロッキング抗体）、抗ＯＸ４０、ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体（抗Ｂ７－Ｈ１；ＭＥＤＩ４７３６）、ＭＫ－３４７５（ＰＤ－１ブロッカー）、ニボルマブ（抗ＰＤ１抗体）、ＣＴ－０１１（抗ＰＤ１抗体）、ＢＹ５５モノクローナル抗体、ＡＭＰ２２４（抗ＰＤＬ１抗体）、ＢＭＳ－９３６５５９（抗ＰＤＬ１抗体）、ＭＰＬＤ３２８０Ａ（抗ＰＤＬ１抗体）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（抗ＰＤＬ１抗体）およびＹｅｒｖｏｙ／イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ－４チェックポイント阻害剤）を含む。チェックポイントタンパクリガンドは、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＣＤ２８、ＣＤ８６およびＴＩＭ－３を含むが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、本発明は、免疫チェックポイント受容体プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）とそのリガンドＰＤ－Ｌ１との間の相互作用を遮断する薬物である特異的なクラスのＩＣＩの使用を包含する（Ｍｕｌｌａｒｄ、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ：Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（２０１３）を参照のこと）、１２：４８９－４９２。ＰＤ－１はＴ細胞上において発現し、その活動を調節する。具体的には、ＰＤ－１がＰＤＬ－１に結合していない場合、Ｔ細胞は標的細胞に結合し得、標的細胞を殺傷し得る。しかしながら、ＰＤ－１がＰＤＬ－１に結合している場合、Ｔ細胞は標的細胞との結合および殺傷を中止する。さらに、他のチェックポイントとは異なり、ＰＤ－１は、ＰＤＬが癌細胞上に直接過剰発現され、それがＰＤ－１発現Ｔ細胞への増加した結合をもたらすように近接して作用する。
いくつかの実施形態において、ＰＤ－１のアゴニストとして作用することでＰＤ－１によって調節される免疫応答を調節することができる抗体であるＩＣＩが提供される。一実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、抗原結合断片であり得る。本明細書に開示される抗ＰＤ－１抗体はヒトＰＤ－１に結合し、ＰＤ－１の活性を苦しめ、それによってＰＤ－１を発現する免疫細胞の機能を阻害することができる。
いくつかの実施形態において、本発明は、ＣＴＬＡ－４を阻害する薬物である特異的なクラスのＩＣＩの使用を包含する。本発明の方法において使用するための適切な抗ＣＴＬＡ４アンタゴニスト剤には抗ＣＴＬＡ４抗体、ヒト抗ＣＴＬＡ４抗体、マウス抗ＣＴＬＡ４抗体、哺乳類抗ＣＴＬＡ４抗体、ヒト化抗ＣＴＬＡ４抗体、モノクローナル抗ＣＴＬＡ４抗体、ポリクローナル抗ＣＴＬＡ４抗体、キメラ抗ＣＴＬＡ４抗体、ＭＤＸ－０１０（イピリムマブ）、トレメリムマブ、抗ＣＤ２８抗体、抗ＣＴＬＡ４アドネクチン、抗ＣＴＬＡ４ドメイン抗体、一本鎖抗ＣＴＬＡ４断片、重鎖抗ＣＴＬＡ４断片、Ｌ鎖抗ＣＴＬＡ４断片、共刺激経路を苦しめるＣＴＬＡ４の阻害剤、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００１／０１４４２４に開示された抗体、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００４／０３５６０７に開示された抗体、米国公開番号２００５／０２０１９９４に開示された抗体、および欧州特許ＥＰ１２１２４２Ｂ１に開示された抗体が含まれるが、これらに限定されない。さらなるＣＴＬＡ－４抗体は、米国特許第５，８１１，０９７号、第５，８５５，８８７号、第６，０５１，２２７号、および第６，９８４，７２０号、ＰＣＴ公開番号ＷＯ０１／１４４２４並びにＷＯ００／３７５０４、および米国公開番号２０２２／００３９５８１並びに２００２／０８６０１４において開示されている。本発明の方法において用いられ得る他の抗ＣＴＬＡ－４抗体は、例えば、ＷＯ９８／４２７５２、米国特許第６，６８２，７３６号、並びに第６，２０７，１５６号、Ｈｕｒｗｉｔｚら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９５（１７）：１００６７－１００７１（１９９８)、Ｃａｍａｃｈｏら、Ｊ．Ｃｌｉｎ、Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、２２（１４５）：Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．２５０５（２００４）（ＣＰ－６７５２０６抗体）、Ｍｏｋｙｒら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、５８：５３０１－５３０４（１９９８）、および米国特許第５，９７７，３１８号、第６，６８２，７３６号、第７，１０９，００３号、並びに第７，１３２，２８１号において開示されたものを含む。
さらなる抗ＣＴＬＡ４アンタゴニストとしては以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＣＤ２８抗原の能力を破壊し得る任意の阻害剤であって、その同族リガンドに結合する、その同族リガンドに結合するＣＴＬＡ４の能力を阻害する、共刺激経路を介してＴ細胞応答を増強する、Ｂ７がＣＤ２８および／またはＣＴＬＡ４に結合する能力を破壊する、Ｂ７が共刺激経路を活性化する能力を破壊する、ＣＤ８０がＣＤ２８および／またはＣＴＬＡ４に結合する能力を破壊する、ＣＤ８０が共刺激経路を活性化する能力を破壊する、ＣＤ８６がＣＤ２８および／またはＣＴＬＡ４に結合する能力を破壊する、ＣＤ８６が共刺激経路を活性化する能力を破壊する、および全般に共刺激経路の活性化を乱す。これは必然的に、共刺激経路の他のメンバーの中におけるＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ４の小分子阻害剤；共刺激経路の他のメンバーの中におけるＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ４に対する抗体；共刺激経路の他のメンバーの中におけるＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ４に対するアンチセンス分子；ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ４に対するアドネクチン、共刺激経路の他のメンバーの中におけるＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ４のＲＮＡｉ阻害剤（一本鎖および二本鎖の両方）、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ４の共刺激経路の他のメンバーを含む。
一実施形態において、本発明は、ＴＩＭ－３を阻害する薬物である特異的なクラスのＩＣＩの使用を包含する。リガンドによるＴＩＭ－３の活性化を阻害すると、Ｔｈ１細胞の活性化が増大する。さらに、ＴＩＭ－３は、消耗したＣＤ８＋Ｔ細胞によって発現される重要な阻害性受容体として同定されている。ＴＩＭ－３は、核酸媒介抗腫瘍免疫の主要な調節因子としても報告されている。一例として、ＴＩＭ－３は腫瘍関連樹状細胞（ＴＡＤＣ）上でアップレギュレートされることが示されている。
上記方法は、特定の癌ワクチンの使用に限定されない。実際、癌免疫療法のために追求されている１つのアプローチは、腫瘍特異的抗原または過剰発現抗原を用いた免疫化を含む「腫瘍ワクチン」または「癌ワクチン」という用語によって包含される領域である。このアプローチでは、抗原、または腫瘍細胞に特異的な抗原、あるいは腫瘍細胞中で過剰発現された抗原を、単体で、補助剤と共に、抗原（例えば、リステリアモノサイトゲネス（Listeria Monocytogenes））を送達する細菌の一部として、あるいは細胞性および／または体液性免疫反応を誘発するために免疫細胞（樹状細胞を含むが、これらに限定されない）と共に生体外でインキュベートした後に、注射する。
いくつかの実施形態において、癌は癌腫（carcinoma）である。癌腫は上皮由来の癌である。いくつかの実施形態において、癌腫は、細葉細胞癌（acinar carcinoma）、小葉癌（acinous carcinoma）、肺胞性腺癌（alveolar adenocarcinoma）、腺腫様癌（carcinoma adenomatosum）、腺癌（adenocarcinoma）、副腎皮質癌（carcinoma of adrenal cortex）、肺胞上皮癌（alveolar carcinoma）、肺胞上皮癌（alveolar cell carcinoma）、基底細胞癌（basal cell carcinoma）、好塩基球癌（carcinoma basocellular）、類基底細胞癌（basaloid carcinoma）、基底有棘細胞癌（basosquamous cell carcinoma）、乳癌（breast carcinoma）、細気管支癌（bronchioalveolar carcinoma）、気管支肺胞上皮癌（bronchiolar carcinoma）、大脳様癌（cerebriform carcinoma）、胆管細胞癌（cholangiocellular carcinoma）、絨毛癌（chorionic carcinoma）、膠様癌（colloid carcinoma）、面皰癌（comedocarcinoma）、体癌（corpus carcinoma）、篩状癌（cribriform carcinoma）、鎧状癌（carcinoma en cuirasse）、皮膚癌（carcinoma cutaneum）、円筒状癌（cylindrical carcinoma）、円柱細胞癌（cylindrical cell carcinoma）、腺管癌（duct carcinoma）、硬性癌（carcinoma durum）、胎児性癌（embryonal carcinoma）、脳様癌（encephaloid carcinoma）、眼球上癌（epibulbar carcinoma）、類表皮癌（epidermoid carcinoma）、腺上皮癌（carcinoma epitheliate adenoids）、潰瘍癌（carcinoma exulcere）、線維癌（carcinoma fibrosum）、ゼラチン状癌（gelatinform carcinoma）、膠様癌（gelatinous carcinoma）、巨細胞癌（giant cell carcinoma）、巨細胞癌（gigantocellulare）、腺癌（glandular carcinoma）、顆粒細胞癌（granulose cell carcinoma）、毛母組織癌（hair matrix carcinoma）、血様癌（hematoid carcinoma）、肝細胞癌（hepatocellular carcinoma）、ヒュルトレ細胞癌（Hurthle cell carcinoma）、硝子状癌（hyaline carcinoma）、腎明細胞癌（hypernephroid carcinoma）、小児胎児性癌（infantile embryonal carcinoma）、上皮内癌（carcinoma in situ）、表皮内癌（intraepidermal carcinoma）、上皮内癌（intraepithelial carcinoma）、クロムペッヘルの癌（Krompecher's carcinoma）、Ｋｕｌｃｈｉｔｚｋｙ細胞癌（Kulchitzky-cell carcinoma）、レンチウイルス癌（lentivular carcinoma）、レンズ状癌（carcinoma lenticulare）、脂肪腫様癌（lipomatous carcinoma）、リンパ上皮癌（lymphoepithelial carcinoma）、乳様突起癌（carcinoma mastotoids）、延髄癌（carcinoma medullare）、髄様癌（medullary carcinoma）、黒色癌（carcinoma melanodes）、黒色癌（melanotonic carcinoma）、粘液性癌腫（mucinous carcinoma）、粘液分泌癌（carcinoma muciparum）、粘液腫癌（carcinoma mucocullare）、粘液性類表皮癌（mucoepidermoid carcinoma）、粘膜癌（mucous carcinoma）、粘液腫癌（carcinoma myxomatodes）、ｍａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ癌（masopharyngeal carcinoma）、ニグラム癌（carcinoma nigrum）、燕麦細胞癌（oat cell carcinoma）、骨化性癌（carcinoma ossificans）、オステロイド癌（osteroid carcinoma）、卵巣癌（ovarian carcinoma）、乳頭状癌（papillary carcinoma）、門脈周囲癌（periportal carcinoma）、前浸潤癌（preinvasive carcinoma）、前立腺癌（prostate carcinoma）、腎臓の腎細胞癌（renal cell carcinoma of kidney）、予備細胞癌（reserve cell carcinoma）、肉腫様癌（carcinoma sarcomatode）、シェインデリアン癌（scheinderian carcinoma）、硬癌（scirrhous carcinoma）、陰嚢癌（carcinoma scrota）、印環細胞癌（signet-ring cell carcinoma）、単純癌（carcinoma simplex）、小細胞癌（small cell carcinoma）、ソランドイド癌（solandoid carcinoma）、類球状細胞癌（spheroidal cell carcinoma）、紡錘細胞癌（spindle cell carcinoma）、海綿様癌（carcinoma spongiosum）、扁平上皮癌（squamous carcinoma）、扁平上皮細胞癌（squamous cell carcinoma）、ひも状癌（string carcinoma）、毛細血管拡張性癌（carcinoma telangiectaticum）、毛細血管拡張性癌（carcinoma telangiectodes）、移行上皮癌（transitional cell carcinoma）、結節癌（carcinoma tuberrosum）、結節癌（tuberous carcinoma）、いぼ状癌（verrucous carcinoma）、絨毛癌（carcinoma vilosum）から成る群から選択される。
いくつかの実施形態において、癌は肉腫である。肉腫は、骨および軟部組織に発生する間葉性腫瘍である。いくつかの実施形態において、肉腫は、脂肪肉腫（liposarcomas）（粘液性脂肪肉腫（myxoid liposarcomas）および多形性脂肪肉腫（pleomorphic liposarcomas）を含む）、平滑筋肉腫（leiomyosarcomas）、横紋筋肉腫（rhabdomyosarcomas）、神経線維肉腫（neurofibrosarcomas）、悪性末梢神経鞘腫瘍（malignant peripheral nerve sheath tumors）、ユーイング腫瘍（Ewing's tumors）（骨性（bone）、骨外性（extraskeletal）、または非骨性（non-bone）ユーイング肉腫（Ewing's sarcoma）を含む）並びに未分化神経外胚葉性腫瘍（PNET：primitive neuroectodermal tumors）、滑膜肉腫（synovial sarcoma）、血管内皮腫（hemangioendothelioma）、線維肉腫（fibrosarcoma）、類腱腫（desmoids tumors）、隆起性皮膚線維肉腫（DFSP：dermatofibrosarcoma protuberance）、悪性線維性組織球腫（MFH：malignant fibrous histiocytoma）、血管周囲細胞腫（hemangiopericytoma）、悪性間葉腫（malignant mesenchymoma）、胞状軟部肉腫（alveolar soft-part sarcoma）、類上皮肉腫（epithelioid sarcoma）、明細胞肉腫（clear cell sarcoma）、線維形成性小細胞腫瘍（desmoplastic small cell tumor）、消化管間質腫瘍（GIST：gastrointestinal stromal tumor）ならびに骨肉腫（osteosarcoma）（骨格性（-skeletal）および骨外性（extra-skeletal）骨肉腫（osteogenic sarcoma）としても知られる）、および軟骨肉腫（chondrosarcoma）から選択される。
いくつかの実施形態において、癌は難治性または応答性癌である。本明細書中で使用される場合、難治性癌は、処方される通常の標準治療に対して抵抗力のある癌である。これらの癌は、最初は治療に反応するが再発するおよび／または治療に完全に反応しないことがある。
いくつかの実施形態において、癌は免疫原性癌である。免疫原性癌の例は、悪性黒色腫（malignant melanoma）並びに腎細胞癌（renal cell carcinoma）、マンテル細胞リンパ腫（Mantel cell lymphoma）、濾胞性リンパ腫（follicular lymphoma）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（diffuse large B-cell lymphoma）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（T-cell acute lymphoblastic leukemia）、バーキットリンパ腫（Burkitt Lymphoma）、骨髄腫（myeloma）、免疫細胞腫（immunocytoma）、急性前骨髄球系白血病（acute promyelocyte leukemia）、慢性骨髄性／急性リンパ芽球性白血病（chronic myeloid/acute lymphoblastic leukemia）、急性白血病（acute leukemia）、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（B-cell acute lymphoblastic leukemia）、未分化大細胞性白血病（anaplastic large cell leukemia）、骨髄形成以上症候群（myelodysplasia syndrome）／急性骨髄性白血病（acute myeloid leukemia）、非ホジキンリンパ腫（non-Hodgkin's lymphoma）、慢性リンパ球性白血病（chronic lymphocytic leukemia）、急性骨髄性白血病（AML：acute myelogenous leukemia)、一般的（プレＢ）急性リンパ性白血病（common (pre-B) acute lymphocytic leukemia）、悪性黒色腫（malignant melanoma）、Ｔ細胞リンパ腫（T-cell lymphoma）、白血病（leukemia）、Ｂ細胞リンパ腫（B-cell lymphoma）、上皮性悪性疾患（epithelial malignancies）、リンパ性悪性疾患（lymphoid malignancies）、婦人科癌（gynecologic carcinoma）、胆管腺癌（biliary adenocarcinomas）、および膵臓腺癌（ductal adenocarcinomas of the pancreas）が含まれる。
いくつかの実施形態において、上記方法は、例えば、放射線治療、外科手術、従来の化学療法、または１つ以上の追加の療法の組合せなどの他の療法を適用することをさらに含む。このような他の活性成分にはグルタチオンアンタゴニスト、血管新生阻害剤、化学療法剤および抗体（例えば癌抗体）が含まれるが、これらに限定されない。本発明に記載の薬剤は、同時にまたは連続して投与され得る。投与間の時間の離隔は、分、時間、日であってもよく、またはそれより長くてもよい。
例えば、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤、および癌免疫療法または癌ワクチンは、アルキル化剤（例えば、クロラムブシル、シクロホスファミド、ｃｃｎｕ、メルファラン、プロカルバジン、チオテパ、ｂｃｎｕ、およびブスルファン）、代謝拮抗剤（例えば、６－メルカプトプリンおよび５－フルオロウラシル）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン、エピルビシン、およびミトキサントロン）、抗腫瘍抗生物質（例えば、ブレオマイシン）、モノクローナル抗体（例えば、アレムツズマブ、ベバシズマブ、セテュキマブ、ゲムツズマブ、イブリツモマブ、パニツムマブ、リツキシマブ、トシツモマブ、およびトラツズマブ）、白金（例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、およびカルボプラチン）、植物アルカロイド（例えば、ビンクリスチン）、トポイソメラーゼＩまたはＩＩ阻害剤（例えば、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド、リン酸エトポシド、およびテニポシド）、ビンカアルカロイド（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、およびビンデシン）、タキサン（例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル）、エピポドフィロトキシン（例えば、エトポシドおよびテニポシド）、ヌクレオシドアナログ、および血管新生阻害剤（例えば、ＶＥＧＦ－Ａに特異的なヒト化モノクローナル抗体であるアバスチン（ベラシズマブ）、といった化学療法剤および／または細胞毒性剤よりも前に、後に、または同時に適用され得る。
グルタチオンアンタゴニストの例としてはブチオニンスルホキシミン、シクロホスファミド、イホスファミド、アクチノマイシン－ｄおよびＮ－（４－ヒドロキシフェニル）レチナミド（４－ＨＰＲ）が挙げられるが、これらに限定されない。血管新生阻害剤の例としては２－メトキシエストラジオール（２－ＭＥ）、ＡＧ３３４０、アンギオスタチン、アンチトロンビン－ＩＩＩ、抗ＶＥＧＦ抗体、バチマスタット、ベバシズマブ（アバスチン）、ＢＭＳ－２７５２９１、ＣＡ１、カンスタチン、コンブレタスタチン、コンブレタスタチン－Ａ４リン酸塩、ＣＣ－５０１３、カプトプリル、セレコキシブ、ダルテパリン、ＥＭＤ１２１９７４、エンドスタチン、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ゲニステイン、ハロフジノン、ＩＤ１、ＩＤ３、ＩＭ８６２、メシル酸イマチニブ、誘導タンパク質－１０、インターフェロン－α、インターロイキン－１２、ラベンデュスチン－ａ、ＬＹ３１７６１５、またはＡＥ－９４１、マリマスタット、マプシン、酢酸メドロキシプロゲステロン、Ｍｅｔｈ－１、Ｍｅｔｈ－２、ネオバスタット、オステオポンチン開裂生成物、ＰＥＸ、色素上皮増殖因子（ＰＥＧＦ）、血小板増殖因子４、プロラクチン断片、プロリフェリン関連蛋白（ＰＲＰ）、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４、遺伝子組換えヒト血小板因子－４（ｒＰＦ４）、レスチン、スクアラミン、ＳＵ５４１６、ＳＵ６６６８、スラミン、タキソール、テコガラン、サリドマイド、テトラチオモリブデン酸塩（ＴＭ）、トロンボスポンジン、ＴＮＰ－４７０、トロポニンＩ、バソスタチン、ＶＥＧＦ１、ＶＥＧＦ－ＴＰｖＡＰおよびＺＤ６４７４、が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、血管新生阻害剤は、ＶＲＧＦアンタゴニストである。ＶＥＧＦアンタゴニストは、ＶＥＧＦ結合分子であり得る。ＶＥＧＦ結合分子は、ＶＥＧＦ抗体、またはその抗原結合断片を含む。ＶＥＧＦアンタゴニストの一例は、ＮｅＸｓｔａｒである。
本明細書中の任意の方法または薬剤において使用され得る化学療法剤のカテゴリの例示は、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、エトポシド、カンプトテシン、トポテカン、イリノテカン、テニポシド、ミトキサントロン）、微小管阻害剤（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン）、代謝拮抗剤（例えば、シタラビン、メトトレキサート、ヒドロキシウレア、５－フルオロウラシル、フロウリジン（flouridine）、６－チオグアニン、６－メルカプトプリン、フルダラビン、ペントスタチン、クロロデオキシアデノシン）、ＤＮＡアルキル化剤（例えば、シスプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、チオテパ、カルムスチン、ロムスチン、カルボプラチン、ダカルバジン、プロカルバジン）、およびＤＮＡ鎖断裂誘発剤（例えば、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、マイトマイシンＣ）を含むが、これらに限定されない。
化学療法剤には、合成、半合成および天然由来の薬剤が含まれる。重要な化学療法剤としては、アビシン、アクラルビシン、アコダゾール、アクロニン、アドゼレシン、アドリアマイシン、アルデスロイキン、アリトレチノイン、アムプウリノールナトリウム（AUopurinol sodium）、アルトレタミン、アンボマイシン、酢酸アメタントロン、アミノグルテチミド、アムサクリン、アナストラゾール、アセトゲニン（Annonaceous Acetogenins）、アントラマイシン、アシミシン、アスパラギナーゼ、アスペルリン、アザシチジン（azacytidine）、アゼテパ、アゾトマイシン、バチマスタト、ベンゾデパ、ベキサロテン、ビカルタミド、ビサントレン、ビスナフィド、ビゼレシン、ブレオマイシン、ブレキナール、ブロピリミン、ブラタシン、ブスルファン、カベルゴリン、カクチノマイシン、カルステロン、カラセミド、カルベチマー、カルボプラチン、カルムスチン、カルビシン、カルゼレシン、セデフィンゴール、クロラムブシル、セレコキシブ、シロレマイシン、シスプラチン、クラドリビン、クリスナトール、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ＤＡＣＡ、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ダウノマイシン、デシタビン、デニロイキン、デキソルマプラチン、デザグアニン、ジアジクオン、ドセタキセル、ドキソルビシン、ドロロキシフェン、ドロモスタノロン、ズアゾマイシン、エダトレキサート、エフロルニチン、エルサミトルシン、エストラムスチン、エタニダゾール、エトポシド、エトプリン、ファドロゾール、ファザラビン、フェンレチニド、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、フルロシタビン、５－ＦｄＵＭＰ、ホスキドン、ホステウエシン（Fosteuecine）、ＦＫ－３１７、ＦＫ－９７３、ＦＫ－６６９７９、ＦＲ－９００４８２、ゲムシタビン、ゲムツズマブ、オゾガミシン、Ｇｏｌｄ Ａｕｌ ９８、ゴセレリン、グアナコン（Guanacone）、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イルモホシン、インターフェロンαおよび類似物、イプロプラチン、イリノテカン、ランレオチド、レトロゾール、ロイプロリド、リアロゾール、ロメトレキソール、ロムスチン、ロソキサントロン、マソプロコール、メイタンシン、メクロレタミン、メゲストロール、メレンゲストロール、メルファラン、メノガリル、メトプリン、メツレデパ、ミチンドミデ、ミトカルシン、ミトギリン、ミトマラシン、マイトマイシン、マイトマイシンＣ、ミトスペル、ミトタン、ミトキサントロン、マイコフェノール酸、ノコダゾール、ノガラマイシン、オプレルベキン、オルマプラチン、オキシスラン、パクリタキセル、パミドロン酸、ペガスパルガーゼ、ペリオマイシン、ペンタムスチン、ペプロマイシン、ペルホスファミド、ピポブロマン、ピポスルファン、ピポキサントロン、プリカマイシン、プロメスタン、ポルファイマー、ポルフィロマイシン、プレドニムスチン、プロカルバジン、プロマイシン、ピラゾフリン、リボプリン、リツキシマブ、ログレチミド、ロリニアスタチン、サフィンゴール、サマリウム、セムスチン、シムトラゼン、スパルフォセート、スパルソマイシン、スピロゲルマニウム、スピロムスチン、スピロプラチン、スクアモシン、スクアモタシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ＳｒＣ１２、スルフォフェヌル（sulphofenur）、タリソマイシン、タキサン、トキソイド、テコグラン（Tecoglan）、テガフル、テロキサントロン、テモポルフィン、テニポシド、テロキシロン、テストラクトン、チアミプリン、チオテパ、チミタク、チアゾフリン、チラパザミン、トムデックス、Ｔｏｐ－５３、トポテカン、トレミキシフメ（Toremixifme）、トラスツズマブ、トレストロン、トリシリビン、トリシリビン、トリメトレキセート、グルクロン酸トリメトレキセート、トリプトレリン、ツブロゾール、ウラシルマスタード、ウレデパ、バルルビシン、バプレオチド、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビネピジン、ビングリシネート、ビンロイロシン、ビノレルビン、ビンロシジン、ビンゾリジン、ボロゾール、ゼニプラチン、ジノスタチン、ゾルビシン、２－クロロデオキシルビシン、２’－デオキシホルマイシン、９－アミノカンプトセシン、ラルチトレキセド、Ｎ－プロパルギル－５，８－ジデザホリン酸、２－コロ－２’アラビノフルオロ－２’デオキシアデノシン、２－コロ－２’－デオキシアデノシン、アニソマイシン、トリコスタチン、ｈＰＲＬ－Ｇ１２９Ｒ、ＣＥＰ－７５１、リノミド、サルファマスタード、ナイトロジェンマスタード、Ｎ－メチル－Ｎ－ニトロソウレア、ホテムスチン、ストレプトゾトシン、ダカルバジン、ミトゾロミド、テモゾロミド、ＡＺＱ、オルマプラチン、ＣＩ－９７３、ＤＷＡ２１ １４Ｒ、ＪＭ２１６、ＪＭ３３５、ビス白金、トムデックス、アザシチジン（azacytidine）、シトラビンシン（cytrabincine）、ゲムシタビン、６－メルカプトプリン、ヒポキサンチン、テニポシド、ＣＰＴ－１１、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、ダルビシン、ロソキサントロン、アムサクリン、ピラゾロアクリジン、オールトランスレチノール、１４－ヒドロキシ－レトロ－レチノール、オールトランスレチノイン酸、Ｎ－（４－ヒドロキシフェニル）レチナミド、１３－シスレチノイン酸、３－メチルＴＴＮＥＢ、９－シスレチノイン酸、フルダラビン、および２－Ｃｄａが挙げられるが、これらに限定されない。
他の化学療法剤としては、以下が挙げられる：２０－エピ１，２５－ジヒドロキシビタミンＤ３、５－エチニルウラシル、アビラテロン、アクラルビシン、アシルフルベン、アデシペノール、アドゼレシン、アルデスロイキン、ＡＬＬ－ＴＫアンタゴニスト、アルトレタミン、アンバムスチン、アミドックス、アミホスチン、アミノレブリン酸、アナグレリド、アナストロゾール、アンドログラホリド、血管形成阻害剤、アンタゴニストＤ（antagonist D）、アンタゴニストＤ（antagonists D）、アンタレリクス、抗背方化形態形成タンパク質－１、抗アンドロゲン、抗エストロゲン、抗新生物剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アフィジコリン、アポトーシス遺伝子モジュレータ、アポトーシス調節剤、アプリン酸、ａｒａ－ｃｄｐ－ｄｌ－ＰＴＢＡ、アルギニンアミナーゼ、アスラクリン、アタメスタン、アトリムスチン、アキシナマスチン１（axinamastine 1）並びにアキシナマスチン２、アキシナマスチン３、アザセトロン、アザトキシン、アザチロシン、バッカチンＩＩＩ誘導体、バラノール、ＢＣＲ／ＡＢＬアンタゴニスト、ベンゾクロリン、ベンゾイルサウロスポリン（benzoylsaurosporine）、βラクタム誘導体、β－アレチン、ペリルアルコール、フェノゼノミエイン（phenozenomyein）、酢酸フェニル、ホスファターゼ阻害剤、ピシバニール、ピロカルピン並びにその塩または類似物、ピラルビシン、ピリトレキシム、プラセチンＡ、プラセチンＢ、プラスミノゲン活性化因子阻害剤、白金錯体、フェニルエチルイソチオシアン酸塩およびその類似物、白金化合物、白金トリアミン錯体、ポドフィロトキシン、ポルフィマーナトリウム（porfimer sodium）、ポルフィロマイシン、プロピルビスアクリドン、プロスタグランジンＪ２、プロテアーゼ阻害剤、タンパク質Ａベースの免疫モジュレータ、ＰＫＣ阻害剤、ミクロアルガル(microalgal)、タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤、プルプリン、ピラゾロアクリジン、ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキシエチレン結合体、ｒａｆアンタゴニスト、ラルチトレキセド、ラモセトロン、ｒａｓファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ｒａｓ阻害剤、ｒａｓ－ＧＡＰ阻害剤、脱メチル化レテリプチン、エチドロン酸レニウムＲｅ１８６、リゾキシン、リボザイム、ＲＩＩレチナミド、ログレチミド（rogletimide）、ロサグリアタゾン（rosagliatazone）並びにその類似物および誘導体、ロヒツキン、ロムルチド、ロキニメックス、ルビギノンＢ１、ルボキシル、サフィンゴール、サイントピン、ＳａｒＣＮＵ、サクロフィトールＡ、サルグラモスチン（sargrmostim）、Ｓｄｉ１模倣剤、セムスチン、セネセンス由来阻害剤１、センスオリゴヌクレオチド、シグナル伝達阻害剤、シグナル伝達修飾因子、単鎖抗原結合タンパク質（single chain antigen binding protein）、シゾフィラン、ソブゾキサン、ボロカプテイトナトリウム、酢酸フェニルナトリウム、ソルベロール、ソマトメジン結合タンパク質、ソネルミン、スパルフォス酸、スピカマイシンＤ、スピロムスチン、スプレノペンチン、スポンギスタチン１、スクアラミン、幹細胞阻害剤、幹細胞部阻害剤（stem cell division inhibitor）、スチピアミド、ストロメライシン、スルフィノシン、超活性血管作用性小腸ペプチドアンタゴニスト、スラジスタ、スラミン、スワインソニン、グリコサミノグリカン合成物質（synthetic glycosaminoglycans）、タリムスチン、タモキシフェンメチオジド、タウロムスチン、タザロテン、タコガランナトリウム、テガフル、テルラピリリウム、テロメラーゼ阻害剤、テモポルフィン、ツメオゾロミド（tmeozolomide）、テニポシド、テトラクロロデカオキシド、テトラゾミン、サリブラスチン、サリドマイド、チオコラリン、トロンボポイエチン並びにその模倣剤、チマルファシン、チモポイエチン受容体アゴニスト、チモトリナン、甲状腺刺激ハルモン（thyroid stimulating harmone）、錫エチルエチオプルプリン、チラパザミン、チタノセン並びにその塩、トポテカン、トプセンチン、トレミフェン、全能性幹細胞因子、翻訳阻害剤、トレチノイン、トリアセチルウリジン、トリクリビン（tricribine）、トリメトレキサート、トリプトレリン、トロピセトロン、ツロステリド、チロシンキナーゼ阻害剤、チルホスチン、ＵＢＣ阻害剤、ウベニメックス、尿生殖洞由来成長阻害因子、ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト、バプレオチド、バリオリンＢ、ベクターシステム、赤血球遺伝子療法、ベラレソル、ベラミン、ベルジン、ベルテポルフィン、ビノレルビン、ビンキサルチン、ビタキシン、ボロゾール、ザノテロン、ゼニプラチン、ジラスコルブ、およびジノスタチン。
他の化学療法剤としては、以下が挙げられる：抗増殖性薬剤（例えば、ピリトレキシムイソチオシアン酸塩（piritrexim isothiocyanate））、抗前立腺肥大剤（シトグルシド）、良性前立腺過形成治療剤（例えば、トムスロシン、ＲＢＸ２２５８）、前立腺発達阻害剤（prostate growth inhibitory agent）（ペントモン）および放射性薬剤：フィブリノーゲン１１２５、フルデオキシグルコースＦ１８、フルロドパＦ１８、インスリン１１２５、ヨーベングアン１１２３、ヨージパミドナトリウム１１３１、ヨードアンチピリン１１３１、ヨードコレステロール１１３１、ヨードピラセト１１２５、イオフェタミンＨＣＬ１１２３、ヨーメチン１１３１、ヨーメチン１１３１、イオタラメートナトリウム１１２５、イオタラメート１１３１、ヨーチロシン１１３１、リオチロニン１１２５、メロスプロプロールＨｇｌ９７（Merosproprol Hgl 97）、メチルヨードベンゾグアニン（Methyl ioodobenzo guanine）（ＭＩＢＧ－１１３１またはＭＩＢＧＩ１２３）セレノメチオニンＳｅ７５、テクネチウムＴｃ９９ｍフリホスミン、テクネチウムＴｃ９９ｍグルセプテート、Ｔｃ９９ｍビシセート、Ｔｃ９９ｍジソフェニン、ＴＣ９９ｍグルセプテート、Ｔｃ９９ｍリドフェニン、Ｔｃ９９ｍメブロフェニン、Ｔｃ９９ｍメドロネート並びにそのナトリウム塩、Ｔｃ９９ｍメルチアチド、Ｔｃ９９ｍオキシドロネート、Ｔｃ９９ｍペンテテート並びにその塩、Ｔｃ９９ｍセスタムビ（Tc99m sestambi）、Ｔｃ９９ｍシボロキシム、Ｔｃ９９ｍサクシマー、Ｔｃ９９ｍ硫黄コロイド、Ｔｃ９９ｍテボロキシム、Ｔｃ９９ｍテトロフォスミン、Ｔｃ９９ｍチアチド、チロキシン１１２５、チロキシン１１３１、トルポビドン１１３１、トリオレイン１１２５、およびトレオリン１１２５（Treoline 1125）。また、トレオリン１３１、ＭＩＢＧ－Ｉ１２３並びにＭＩＢＧ－１１３１は、本発明の製薬組成物を含むニトロフランとの同時投与に対して特に好適な化学療法剤である。
化学療法剤の別のカテゴリは、抗癌補助可能薬剤（anticancer supplementary potentiating agents）であり、例えば、抗うつ薬（イミプラミン、デシプラミン、アミトリプチリン、クロミプラミン、トリミプラミン、ドクサピン、ノルトリプチリン、プロトリプチリン、アモキサピン、およびマプロチリン）または非三環式抗抑うつ薬（セルトラリン、トラゾドン、およびシタロプラム）、Ｃａ＋＋アンタゴニスト（ベラパミル、ニフェジピン、ニトレンジピン、およびカロベリン）、カルモジュリン阻害剤（プレニラミン、トリフルオペラジン、およびクロミプラミン）、アンフォテリシンＢ、トリパラノール類似物（例えばタモキシフェン）、抗不整脈薬（例えばキニジン）、抗高血圧薬（例えばレセルピン）、チオールデプレター（例えばブチオニンまたはスルホキシミン）、およびクレモフォールＥＬといった多剤耐性低減薬（multiple drug resistance reducing agent）である。
いくつかの実施形態において、腸内細菌叢活性の調節不全を特徴とする状態は、自己免疫疾患、神経疾患、糖尿病、および／または肥満である。このような状態の例は、リウマチ性関節炎、多発性硬化症糖尿病（例えば、１型糖尿病）、甲状腺の自己免疫疾患（例えば、橋本甲状腺炎、グレーブス病）、甲状腺関連眼症および真皮症、副甲状腺機能低下症、アジソン病、早発性卵巣不全、自己免疫性甲状腺機能低下症、自己免疫性下垂体疾患、免疫性胃炎（immunogastritis）、悪性アンゲミス（pernicious angemis）、セリアック病、白斑、重症筋無力症、尋常性天疱瘡およびバリアント、水疱性類天疱瘡炎、ジューリング疱疹状皮膚炎、後天性表皮水疱症、全身性硬化症、混合性結合組織病、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、グッドパスチャー症候群、リウマチ性心疾患、自己免疫性多腺性症候群１型、アイカルディ－ゴーティエール症候群、急性膵炎加齢黄斑変性、アルコール性肝疾患、肝線維症、転移、心筋梗塞、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、パーキンソン病、多発性関節炎／胎児性および新生児貧血、敗血症、ならびに炎症性腸疾患を含むがこれらに限られない。
いくつかの実施形態において、調節不全の腸内細菌叢活性障害を特徴とする状態を治療または予防するためのこのような方法は、さらなる治療薬を（例えば同時に、または異なった時点で）投与することをさらに包含する。このような治療薬は、抗リウマチ予防維持薬（例えば、レフルノミド、メソトレキセート、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン）、生物学的作用物質（例えば、リツキシマブ、インフリキシマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、ゴリムマブ）、非ステロイド性抗炎症薬（例えば、イブプロフェン、セレコキシブ、ケトプロフェン、ナプロキセン、ピロキシカム、ジクロフェナク）、鎮痛薬（例えば、アセトアミノフェン、トラマドール）、免疫調節薬（例えば、アナキンラ、アバタセプト）、グルココルチコイド（例えば、プレドニゾン、メチルプレドニゾン）、ＴＮＦ－α阻害剤（例えば、アダリムマブ、セルトリズマブペゴル、エタネルセプト、ゴリムマブ、インフリキシマブ）、ＩＬ－１阻害剤、およびメタロプロテアーゼ阻害剤を含むがこれらに限定されない。いくつかの実施形態において、治療薬は、インフリキシマブ、アダリムマブ、エタネルセプト、非経口金または経口金を含むが、これらに限定されない。
特定の実施形態において、本発明は、ゲルベースのイヌリン製剤を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態において、ゲルベースのイヌリン製剤は、２０以上４７以下の平均重合度を有する。いくつかの実施形態において、ゲルベースのイヌリン製剤は、約２８（例えば２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３）の平均重合度を有する。いくつかの実施形態において、ゲルベースのイヌリンｆｏｒｍｌｕａｔｉｏｎは、フルクトオリゴ糖、短鎖フルクトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、トランスガラクトオリゴ糖、ペクチン、キシロオリゴ糖、キトサンオリゴ糖、βグルカン、アラブルガム変性デンプン、耐性ジャガイモデンプン、グアーガム、ビーンガム、ゼラチン、グリセロール、ポリデキストロース、Ｄ－タガトース、アカシア繊維、カロブ、オート麦、およびかんきつ類繊維から選択される１つ以上のプレバイオティクス化合物を含む。
特定の実施形態において、本発明は、１）対象へのワクチン、および２）対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与を適用することを通じて、ワクチンの効果を増加させるための一方法を提供する。
いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与は、ワクチンの投与の前、同時、および／または後に起こる。
いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与は、ワクチンの投与と同時に起こる。あるいは、いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与は、ワクチンの投与の前に起こる。いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与は、ワクチンの投与の前およびワクチンの投与と同時に起こる。
いくつかの実施形態において、ワクチンは、癌治療のためのワクチン、および／または感染性病原体を治療および／または感染性病原体から保護するためのワクチンである。
いくつかの実施形態において、対象はヒト対象である。
いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤は、プレバイオティクス薬剤を含む線維である。いくつかの実施形態において、プレバイオティクス薬剤を含む繊維は、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）、フコイダン、ジャガイモデンプン、オリゴフルクトースおよびイヌリンから選択される。いくつかの実施形態において、プレバイオティクス薬剤を含む繊維は、ゲルベースのイヌリン製剤である。いくつかの実施形態において、ゲルベースのイヌリン製剤は、２０以上４７以下の平均重合度を有する。いくつかの実施形態において、ゲルベースのイヌリン製剤は、約２８（例えば２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３）の平均重合度を有する。いくつかの実施形態において、ゲルベースのイヌリンｆｏｒｍｌｕａｔｉｏｎは、フルクトオリゴ糖、短鎖フルクトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、トランスガラクトオリゴ糖、ペクチン、キシロオリゴ糖、キトサンオリゴ糖、βグルカン、アラブルガム変性デンプン、耐性ジャガイモデンプン、グアーガム、ビーンガム、ゼラチン、グリセロール、ポリデキストロース、Ｄ－タガトース、アカシア繊維、カロブ、オート麦、およびかんきつ類繊維から選択される１つ以上のプレバイオティクス化合物を含む。いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤は、メラトニンである。
いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤は、経口的に投与される。
いくつかの実施形態において、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与は、当該対象の腸内細菌叢におけるＡｋｋｅｒｍａｎｓｉａ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ、およびＢｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓの相対的な存在量の増加をもたらす。
特定の実施形態において、本発明は、（例えば、複合体化、複合化、カプセル化、吸収、吸着、混合された）細菌に関連するプレバイオティクス製剤を含む組成物を提供する。
いくつかの実施形態において、プレバイオティクス製剤は、フルクトオリゴ糖、短鎖フルクトオリゴ糖、イヌリン、イソマルトオリゴ糖、トランスガラクトオリゴ糖、ペクチン、キシロオリゴ糖、キトサンオリゴ糖、βグルカン、アラブルガム変性デンプン、耐性ジャガイモデンプン、グアーガム、ビーンガム、ゼラチン、グリセロール、ポリデキストロース、Ｄ－タガトース、アカシア繊維、カロブ、オート麦、およびかんきつ類繊維から選択される１つ以上のプレバイオティクス化合物を含む。
いくつかの実施形態において、プレバイオティクス化合物はゲルベースである。いくつかの実施形態において、プレバイオティクス化合物は、ゲルベースのイヌリンである。
いくつかの実施形態において、細菌は、Ｅ．Ｃｏｌｉである。いくつかの実施形態において、細菌は、当該細菌が投与された対象の腸内細菌叢を変化させることができる。
いくつかの実施形態において、組成物は、対象に対する経口投与のために構成されている。
特定の実施形態において、本発明は、細菌の結腸送達のための方法を対象に提供する。当該方法は、対象にプレバイオティクス製剤（例えば、ゲルベースのイヌリン）を細菌（例えば、複合体化、複合化、カプセル化、吸収、吸着、混合された細菌）と共に投与することを含む。
特定の実施形態において、本発明は、（例えば、複合体化、複合化、カプセル化、吸収、吸着、混合された）１つ以上のプロバイオティクス細胞に関連するプレバイオティクス製剤を含む組成物を提供する。特定の実施形態において、本発明は、対象の消化系においてプロバイオティクス生物の増殖を増加させる方法を提供する。当該方法は、このような組成物を対象（例えば、哺乳動物対象、ヒト対象）に投与することを含む。
いくつかの実施形態において、プレバイオティクス製剤は、フルクトオリゴ糖、短鎖フルクトオリゴ糖、イヌリン、イソマルトオリゴ糖、トランスガラクトオリゴ糖、ペクチン、キシロオリゴ糖、キトサンオリゴ糖、βグルカン、アラブルガム変性デンプン、耐性ジャガイモデンプン、グアーガム、ビーンガム、ゼラチン、グリセロール、ポリデキストロース、Ｄ－タガトース、アカシア繊維、カロブ、オート麦、およびかんきつ類繊維から選択される１つ以上のプレバイオティクス化合物を含む。
いくつかの実施形態において、プレバイオティクス化合物は、ゲルベースである。いくつかの実施形態において、プレバイオティクス化合物は、ゲルベースのイヌリンである。
いくつかの実施形態において、１つ以上のプロバイオティクス細胞は、当該細胞が投与された対象の腸内細菌叢を変化させることができる。
いくつかの実施形態において、組成物は、対象に対する経口投与のために構成されている。
いくつかの実施形態において、１つ以上のプロバイオティクス細胞は、有益な細菌を含む。いくつかの実施形態において、当該有益な細菌は、Saccharomyces cereviseae、Bacillus coagulans、Bacillus licheniformis、Bacillus subtilis、Bifidobacterium angulatum、Bifidobacterium animalis、Bifidobacterium bifidum、Bifidobacterium breve、Bifidobacterium infantis、Bifidobacterium lactis、Bifidobacterium longum、Enterococcus faecium、Enterococcus faecalis、Lactobacillus acidophilus、Lactobacillus amylovorus、Lactobacillus alimentarius、Lactobacillus bulgaricus、Lactobacillus casei subsp. casei、Lactobacillus casei Shirota、Lactobacillus curvatus、Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis、Lactobacillus fermentum、Lactobacillus farciminus、Lactobacillus gasseri、Lactobacillus helveticus、Lactobacillus johnsonii、Lactobacillus lacti、Lactobacillus paracasei、Lactobacillus pentosaceus、Lactobacillus plantarum、Lactobacillus reuteri、Lactobacillus rhamnosus (Lactobacillus GG)、Lactobacillus sake、Lactobacillus salivarius、Lactococcus lactis、Lactobacillus thermotolerans、Lactobacillus mucosae、Micrococcus varians、Pediococcus acidilactici、Pediococcus pentosaceus、Pediococcus acidilactici、Pediococcus halophilus、Streptococcus faecalis、Streptococcus thermophilus、Staphylococcus carnosus、およびStaphylococcus xylosusのうち１つ以上を含む。
いくつかの実施形態において、組成物は、糖衣錠、ゲルカプセル、ゲル、エマルジョン、錠剤、ウェハーカプセル、ヒドロゲル、ナノファイバーゲル、エレクトロスピン繊維、食品バー、菓子、発酵乳、発酵チーズ、チューインガム、粉末または練り歯磨きである。
特定の実施形態において、本発明はゲルベースのプレバイオティクス製剤を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態において、当該組成物は、経口摂取のために製剤化されている。いくつかの実施形態において、当該組成物は、糖衣錠、ゲルカプセル、ゲル、エマルジョン、錠剤、ウェハーカプセル、ヒドロゲル、ナノファイバーゲル、エレクトロスピン繊維、食品バー、菓子、発酵乳、発酵チーズ、チューインガム、粉末または練り歯磨きである。
いくつかの実施形態において、プレバイオティクス製剤は、フルクトオリゴ糖、短鎖フルクトオリゴ糖、イヌリン、イソマルトオリゴ糖、トランスガラクトオリゴ糖、ペクチン、キシロオリゴ糖、キトサンオリゴ糖、βグルカン、アラブルガム変性デンプン、耐性ジャガイモデンプン、グアーガム、ビーンガム、ゼラチン、グリセロール、ポリデキストロース、Ｄ－タガトース、アカシア繊維、カロブ、オート麦、およびかんきつ類繊維から選択される１つ以上のプレバイオティクス化合物を含む。
いくつかの実施形態において、ゲルベースのプレバイオティクス製剤は、１つ以上のプロバイオティクス生物に関連する。いくつかの実施形態において、１つ以上のプロバイオティクス生物は、１つ以上のプロバイオティクス生物は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ種およびＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ種から選択される。いくつかの実施形態において、ゲルベースのプレバイオティクス製剤は、Bordetella、Borrelia、Brucella、Campylobacter、Chlamydia並びにChlamydophila、Clostridium、Corynebacterium、Enterococcus、Escherichia、Francisella、Haemophilus、Helicobacter、Legionella、Leptospira、Listeria、Mycobacterium、Mycoplasma、Neisseria、Pseudomonas、Rickettsia、Salmonella、Shigella、Staphylococcus、Streptococcus、Treponema、VibrioおよびYersiniaに特異的な１以上のバクテリオファージに関連する。いくつかの実施形態において、１つ以上のプロバイオティクス生物は、L.acidophilus、L.amylovorus、L.brevis、L.casei、L.casei subsp. rhamnosus (Lactobacillus GG)、L.caucasicus、L.crispatus、L.delbrueckii subsp. bulgaricus (L.bulgaricus)、L.fermentum (L.fermenti)、L.gasseri、L.helveticus、L.johnsonii、L.lactis、L.leichmannii、L.paracasei、L.plantarum、L.reuteriまたはL.rhamnosusから選択される。
上記方法は、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の特定の投与様式に限定されない。いくつかの実施形態において、薬剤は経口的に投与（例えば強制経口投与）される。される。しかしながら、投与は、頬、歯、子宮頸管内、筋肉内、吸入、頭蓋内、リンパ管内、筋肉内、眼内、腹腔内、胸膜内、髄腔内（intrathecal）、気管内、子宮内、血管内、静脈内、膀胱内、鼻腔内、眼、耳、胆汁潅流（biliary perfusion）、心臓潅流（cardiac perfusion）、プリオドンタル（priodontal）、直腸、脊髄皮下（spinal subcutaneous）、舌下、局所、膣内、トランザーマル（transermal）、尿管、または尿道を含む任意の適切な経路を経由するものであってもよい。投薬形態は、計量エアロゾル、チュアブルバー（chewable bar）、カプセル、コーティングされたペレットを含有するカプセル、遅延放出性ペレットを含有するカプセル、徐放性ペレットを含有するカプセル、濃縮物、クリーム、増強クリーム（augmented cream）、座薬クリーム、ディスク、ドレッシング、エリキシル剤、エマルジョン、浣腸剤、徐放性線維、徐放性フィルム、ガス、ゲル、計量ゲル、顆粒、遅延放出性顆粒、起沸性顆粒（effervescent granule）、チューインガム、インプラント、吸入薬、注射可能物質、注射可能脂質複合体、注射可能リポソーム、挿入物、徐放性挿入物、子宮内器具、ゼリー、液体、徐放性液体、ローション、増強ローション、シャンプーローション（shampoo lotion）、オイル、軟膏、増強軟膏、ペースト、芳香錠（pastille）、ペレット、粉末、徐放性粉末、計量粉末、リング、シャンプー、石鹸液、潤滑油溶液（solution for slush）、溶液／点滴薬（drops）、原液、ゲル形成溶液／点滴薬、スポンジ、スプレー、計量スプレー、座薬、懸濁液、懸濁液／点滴薬、徐放性懸濁液、スワブ、シロップ、タブレット、チュアブルタブレット、コーティングされた粒子を含有するタブレット、遅延放出性タブレット、分散性タブレット、起沸性タブレット、徐放性タブレット、経口崩壊タブレット、タンポン、テープまたはトローチ／薬用キャンデー（lozenge）を含むエアロゾルであってもよい。
眼内投与は、硝子体内注射を含む注射による投与、点眼薬による投与、および経強膜送達による投与を含んでもよい。
投与は、また、哺乳動物の食餌（例えば、ヒトまたはコンパニオンアニマルのための機能性食品）に含めることによるものであってもよい。
なお、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる上述の薬剤は、経口的に投与されることが好ましい。上述の製剤は、好ましくはカプセル化され、固形の剤型の適切な担体と共に製剤化さていれる。適当な担体、賦形剤、および希釈剤のいくつかの例示は、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、ゼラチン、シロップ、メチルセルロース、メチル－およびプロピルヒドロキシ安息香酸塩、タルク、マグネシウム、ステアリン酸塩、水、鉱油などを含む。製剤はさらに、潤滑剤（lubricating agents）、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、保存剤、甘味剤または香料添加剤を含み得る。上記組成物は当技術分野で周知の手順を採用することによって、患者への投与後に、活性成分の急速な、持続性の、または遅延性の放出を提供するように製剤化されていてもよい。上記組成物はまた、タンパク質分解の劣化を軽減し、そして吸着を促進する、例えば、界面活性剤といった物質を含み得る。
具体的な用量は、患者のおおよその体重もしくは体表面積、または占有される身体空間の体積に従って計算され得る。用量はまた、選択される特定の投与経路に依存するだろう。治療のための適切な投薬量を決定するために必要な計算のさらなる改良は、当業者によって通常なされる。このような計算は特定の化合物について他の場所に記載されているようなアッセイ調製物における取り組みを考慮して、当業者による過度の実験なしに行われ得る（例えば、Ｈｏｗｉｔｚら、Ｎａｔｕｒｅ ４２５：１９１－１９６、２００３、およびこの紙に付随する補足資料を参照のこと）。正確な投与量は、標準的な用量反応研究と組み合わせて決定され得る。実際に投与される組成物の量は、治療される１つまたは複数の状態、投与される組成物の選択、個々の患者の年齢、体重、および応答、患者の症状の重症度、ならびに選択された投与経路を含む関連する状況に照らして、医師によって決定されることが理解されるだろう。
本発明は、対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤（例えば、繊維ベースのプレバイオティクス）、およびワクチン（例えば、癌ワクチン）（例えば、感染性病原体を治療、または感染性病原体から保護するためのワクチン）、および癌免疫療法（例えば、ＩＣＩ阻害剤）のうちの１つ以上を含むキットを提供する。当該キットは、必要に応じて、他の治療薬を含み得る。
〔実施例〕
以下の実施例は本発明の特定の好ましい実施形態を実証し、さらに例示するために提供されるものであり、その範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
＜実施例１＞
本実施例は、予防的環境（prophylatic setting）におけるプレバイオティクスを用いた免疫チェックポイント阻害剤の効果向上を実証する。
ＦＤＡのリストの中から、５つの候補物質が最初のスクリーニングのために選択された。松果体および消化管に存在するメラトニンは、睡眠周期と概日リズムを調節する。エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）は、植物における天然の酸化防止剤である。フコイダン、オリゴフルクトースおよびイヌリンは、食品および栄養補助食品に広く使用されている植物性多糖類である。これらの候補物質を、α－ＰＤ－１療法の抗腫瘍効果を予防的に改善する能力について最初に試験した。ＷＴ Ｂａｌｂ／ｃマウスを、腫瘍接種の１週間前に強制経口投与によりこれらの物質で処置した（図１Ａ）。α－ＰＤ－１療法と併用されたこれらすべての薬剤はα－ＰＤ－１単独と比較して、より強い抗腫瘍効果を示し、イヌリンが最も優れた効果を示した（図１ＢおよびＣ）。α－ＰＤ－１と併用されたイヌリンは、動物の生存期間を延長し、６０％のマウスが５０日目でも生存したままであった（図１Ｄ）。
次に、これらの物質の全身性免疫応答に対する効果を試験した。腫瘍特異的抗原の代理マーカーであるＣＴ－２６ ｇｐ７０（ＡＨ１）（Ｈ－２Ｌｄ制限ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ（配列番号：１））のＭＨＣ－Ｉ最小エピトープを用いて、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中のＡＨ１特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を定量した。α－ＰＤ－１ ＩｇＧと併用されたイヌリンおよびメラトニンを強制経口投与したマウスは、α－ＰＤ－１処置単独と比較して、１．７倍および１．８倍高い頻度のＡＨ１特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を誘導した（図１ＥおよびＦ）。
＜実施例２＞
本実施例では、治療環境におけるプレバイオティクスによる免疫チェックポイントブロッカーの効果の向上について述べる。イヌリンを有望な候補として同定したため、次にこれらの薬剤を治療環境で試験した。Ｂａｌｂ／ｃマウスにＣＴ－２６細胞を接種した後、担癌マウスを、７日目から開始する強制経口投与で処置した（図２Ａ）。予防的処置と一致して、α－ＰＤ－１ ＩｇＧ療法と併用されたイヌリンは動物の生存期間を延長しながら（図２Ｄ）、最も強い抗腫瘍効果を示した（図２ＢおよびＣ）。イヌリンはまた、１８日目および２４日目にＰＢＭＣ中で有意に高いＡＨ１特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を誘導した（図２Ｅ－Ｇ）。
＜実施例３＞
本実施例は、イヌリンおよびメラノチニン（melanotinin）の用量効果について述べる。
イヌリンおよびメラトニンの用量効果を次に試験した。これらは上記で同定された上位２つの候補であった。イヌリンおよびメラトニンの投与量を半分に（すなわち、イヌリンについては６０ｍｇおよびメラトニンについては５０ｍｇ／Ｋｇ）減少させても、腫瘍増殖に対するα－ＰＤ－１とのそれらの併用効果は損なわれず（図３Ａ、Ｂ）、イヌリンおよびメラトニンの比較的広い治療濃度域を示唆した。同様の結果が、ＰＢＭＣ中のＡＨ１特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度においても見出された（図３Ｃ、Ｄ）。腫瘍浸潤性リンパ球は免疫療法の転帰に中心的役割を果たすことから、腫瘍微小環境におけるＴリンパ球を試験した。α－ＰＤ－１ ＩｇＧと併用されたイヌリンまたはメラトニン処置は、α－ＰＤ－１ ＩｇＧ単独と比較して、Ｔ細胞の腫瘍内浸潤を有意に増強した（図３Ｅ－Ｈ）。
＜実施例４＞
この実施例では、腸内細菌叢の変化について述べる。
治療中の腸内細菌叢の組成を１６Ｓ ｒＤＮＡ配列解析を介して調べた。これらの物質の強制経口投与は、ＰＢＳ群と比較して、操作分類単位（ＯＵＴ、図４Ａ）ならびにシンプソン多様度の逆数値（図４Ｂ）を増加させ、処置が腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めたことを示した。非計量多次元スケーリング分析（ＮＭＤＳ）は、これらの物質、特にイヌリン、の強制経口投与が、ＰＢＳまたは非ゲル化（free）α－ＰＤ－１と比較して、細菌群集構造の明確なクラスター化をもたらすことを明らかに示した（図４Ｃ）。科／属レベルにおけるさらなる分析は、α－ＰＤ－１単独またはＰＢＳ群と比較して、α－ＰＤ－１処置が後に続くイヌリンの経口投与がＡｋｋｅｒｍａｎｓｉａ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、およびＢｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓ後の相対的な存在量を増加させることを示した（図４Ｄ－Ｆ、図５Ａ）。最近の研究はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓおよびＡｋｋｅｒｍａｎｓｉａが担癌マウスにおける免疫チェックポイント遮断の抗腫瘍効果を改善できることを示した。さらに、ＢｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓおよびＲｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓは代謝産物として酪酸塩を含む短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）を生成することが知られている。細菌叢の代謝産物ＳＣＦＡ、特に酪酸塩は、免疫応答を改善し、炎症を阻害することが知られている。驚くべきことに、非ゲル化α－ＰＤ－１処置は、ＰＢＳ群と比較して、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ（別の重要な酪酸塩産生細菌）の存在量をほぼ０％まで劇的に減少させることも見出された（図４Ｆ）。候補薬剤、特にイヌリンの強制経口投与は、消化管中のＲｏｓｅｂｕｒｉａの存在量を増加させた。糞便ペレット中のＳＣＦＡの分析により、イヌリンの強制経口投与が乳酸塩、プロピオン酸塩および酪酸塩の濃度を増加させることがさらに確認された（図４Ｇ）。対照的に、非ゲル化α－ＰＤ－１群はＰＢＳ群と比較してプロピオン酸塩および酪酸塩が低かった。さらに、フィッティング曲線とＳｐｅａｒｍａｎの相関係数分析は、腫瘍サイズがＡｋｋｅｒｍａｎｓｉａ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ、Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、およびＢｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓの相対的な存在量と負に相関することを示し（図４Ｈ）、癌治療に対するこれらの共生細菌の有益な役割を示唆した。ＮＭＤＳおよび細菌叢構成の結果はα－ＰＤ－１との併用療法の中で、非ゲル化（free）イヌリンおよびメラトニンが細菌群集構造の操作において支配的な役割を果たすが、α－ＰＤ－１は果たさないことをさらに明確に実証した（図５）。
＜実施例５＞
この実施例は、イヌリンゲルが免疫チェックポイント遮断の効果をさらに改善することを実証する。
α－ＰＤ－１と一体となったこれらの候補物質の中でイヌリンが最良の効果を示し、かつ、減少した用量（６０ｍｇ／用量）が有効性を明らかに損なわなかったことを考慮して、以下の研究においてイヌリンについて６０ｍｇ／用量を選択した。加熱冷却法によりイヌリンゲルビア（Inulin gel via）を調製した。これは容易に大規模生産を確保した（図６Ａ）。このゲルは、強制経口投与のための注射可能物質である（図７Ａ）。走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）は、イヌリンゲルが織物状の表面形態を示すことを明らかにした（図６Ａ）。還元糖アッセイは、胃様酸性環境におけるイヌリンゲルの２時間中の安定性を立証した（図７Ｂ）。α－ＰＤ－１と併用された場合の抗腫瘍効果を、非ゲル化イヌリンまたはイヌリンゲルのいずれかと比較した。驚くべきことに、イヌリンゲルは、非ゲル化イヌリンよりも有意に高い腫瘍阻害効果を示した（図７Ｂ）。イヌリンゲル群の生存率は著しく延長され、６０％のマウスは確立された腫瘍を完全に根絶した（図６Ｃ）。これらの生存者は、１．５×１０５個のＣＴ２６腫瘍細胞の腫瘍再投与に対して保護され（図６Ｄ）、腫瘍リパーゼに対する長期にわたる免疫を実証した。テトラマー染色法は、ＰＢＭＣ中のＡＨ１特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度が、イヌリンゲルの強制投与後に、非ゲル化イヌリンと比較して、有意に増加したことを明らかにした（図６Ｅ）。一方、腫瘍浸潤性ＣＤ４５＋ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４５＋ＣＤ４＋Ｔ細胞、並びに成熟ＤＣ細胞（ＣＤ８６＋＋ＣＤ１１Ｃ＋）は有意に増加した（図６Ｆ）。イヌリンゲル群におけるこれらの腫瘍浸潤性ＣＤ８＋Ｔ細胞はイヌリン群と比較して、ＡＨ１－テトラマー＋を改善する点、および細胞表面上のＰＤ－１＋バイオマーカーを減少させる点において腫瘍に対してより良好な機能性を示したことに留意されたい。脾臓におけるＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイはさらに、α－ＰＤ－１と併用されたイヌリンゲルがＣＤ８＋Ｔ細胞の間で強いＩＦＮ－γ発現を誘導することを明らかにした（図６ＧおよびＨ）。α－ＰＤ－１と併用されたイヌリンゲルのＩＦＮ－γ発現は、イヌリン＋α－ＰＤ－１群およびα－ＰＤ－１群よりそれぞれ３．５倍および４．６倍高かった。その上、α－ＣＤ８枯渇抗体の投与はイヌリンゲル＋α－ＰＤ－１の抗腫瘍効果を完全に抑止した。対照的に、α－Ａｓｉａｌｏ ＧＭ１またはα－ＣＤ４抗体の投与はイヌリンゲル＋α－ＰＤ－１療法の治療効果に影響を与えず（図６Ｉ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞は腫瘍阻害および根絶のための重要なリンパ球であるが、ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＮＫ細胞はそうでないことを明らかにした。
＜実施例６＞
この実施例は、結腸での保持力が改善されたイヌリンゲルが腸内細菌叢を変化させることを実証している。
ＦＩＴＣ－イヌリンを用いて、ＦＩＴＣ標識イヌリンゲルを合成した。ｉｎ ｖｉｖｏ消化管保持イメージングは、イヌリンゲル群が非ゲル化イヌリン群と比較して、強制投与後４．５時間で盲腸および結腸における改善された蓄積および保持を示すことを明らかにした（図８Ａ、Ｂ）。ＦＩＴＣ－イヌリンまたはＦＩＴＣ－イヌリンゲルの強制投与後の予め設定された時点で糞便ペレットを収集し、ＦＩＴＣ－イヌリンゲルの保持力がイヌリンと比較して増加していることを確認した（図８Ｃ）。これらの結果はイヌリン検出キットを使用して確認された。また、曲線下の面積値はイヌリンと比較して、結腸におけるイヌリンゲルの良好な保持を明確に実証した（図８Ｄ）。
このイヌリンゲルの長期の保持は、増加したＯＴＵおよびシンプソン多様度の逆数値をもたらした（図８Ｅ）。科レベルでのＮＭＤＳ結果および細菌叢分析は、イヌリン群とイヌリンゲル群の間で細菌群集構造にある程度のシフトがあることを示した（図８Ｆ）。属レベルの細菌叢構成は、Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ、ＲｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓおよびＲｏｓｅｂｕｒｉａの相対的な存在量が、イヌリン群と比較してイヌリンゲルの強制投与後に有意に増加することを明らかにした（図８Ｇ、Ｈ）。一方、ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓおよびＢｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓの存在量はこれら２群間で同等であった。
抗腫瘍効果における腸内細菌叢の役割を確認するため、特定病原体フリー（ＳＰＦ）飼育条件のマウスに、腫瘍接種前に７日間広域スペクトル抗生物質（アンピシリン＋コリスチン＋ストレプトマイシン）を投与し、腫瘍接種後５日目から抗生物質を連続投与した。広域スペクトル抗生物質処置は、α－ＰＤ－１と併用されたイヌリンゲルの抗腫瘍効果を劇的に損ない（図８Ｉ）、イヌリンゲル＋α－ＰＤ－１併用療法における腸内細菌叢の重要な役割を実証した。
＜実施例７＞
この実施例は、第２の腫瘍モデルにおけるイヌリンゲルの治療効果を実証する。イヌリンゲルシステムを、別のマウス株としてＣ５７ＢＬ／６マウスを用いてＭＣ３８腫瘍モデルにおいて評価した（図９Ａ）。以前の研究は、ＭＣ３８細胞がＨ－２Ｄｂ分子の状況において、Ａｄｐｇｋタンパク質（ＡＳＭＴＮＲＥＬＭ（配列番号２）→ＡＳＭＴＮＭＥＬＭ（配列番号３）突然変異）内でｎｅｏ－エピトープを突然変異させたことを示した。α－ＰＤ－１と併用されたイヌリンゲルは、α－ＰＤ－１、イヌリンゲル、または非ゲル化イヌリン＋α－ＰＤ－１と比較して、ＩＦＮ－γＥＬＩＳＰＯＴアッセイ（図９Ｂ，Ｃ）を介して、脾臓ＣＤ８＋Ｔ細胞においてより高いＩＦＮ－γ発現を誘導した。結果として、イヌリンゲルは腫瘍の増殖を有意に遅らせ、担癌マウスの生存期間を延長させた（図９Ｄ、Ｅ）。
＜実施例８＞
この実施例は、イヌリンゲル＋α－ＰＤ－１療法の安全性を実証する。
イヌリンゲルシステムの安全性を評価した。イヌリンゲル＋α－ＰＤ－１療法で処置したマウスは、ＰＢＳ処置マウスと比較して、完全血球算定および血液化学パネルにおいていかなる変化も示さなかった。加えて、主要臓器のＨ＆Ｅ染色は、イヌリンゲル＋α－ＰＤ－１後における明らかな炎症または組織損傷の徴候を示さず、併用療法の安全性を示した。
＜実施例９＞
本実施例はエクスマプル（Exmaples）Ｉ～ＶＩＩＩにおいて利用される物質および方法を提供する。
［イヌリンヒドロゲル調製および特徴付け］
３００ｍｇのイヌリン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を１．２ｍＬのＤＩ水に溶解した。次いで、イヌリン溶液を７０℃で５分間加熱し、室温で１２時間保持して、イヌリンゲルを得た。ＳＥＭ観察のために、イヌリンゲルを液体窒素中で急速冷凍し、凍結乾燥した。次いで、サンプルを３０秒間金でスパッタリング被覆した。サンプルをＭＩＲＡ３ ＴＥＳＣＡＮ（電圧１５ｋＶ）で可視化した。胃酸環境におけるイヌリンゲルの潜在的な劣化をシミュレートするために、イヌリンゲルを強酸性水（ｐＨ２）で２または２４時間穏やかに撹拌しながらインキュベートした。サンプルを遠心分離し、上清を収集した。ジニトロサリチル酸（ＤＮＳ）法（Ｍｉｌｌｅｒ，１９５９）を、上清中の還元糖の定量分析に使用した。発色の強度を、マイクロプレートリーダーを用いて５４０ｎｍで測定した。
［ｉｎ ｖｉｖｏ癌免疫療法］
マウスは、連邦、州および地方からのガイドラインの下で世話された。すべての実験動物手順は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｕｓｅ ａｎｄ Ｃａｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌｓ（ＵＣＵＣＡ）（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｍｉｃｈｉｇａｎ、Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ）によって承認された。６～８週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６またはＢＡＬＢ／ｃマウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから入手した。ＢＡＬＢ／ｃマウスにはマウス１匹当たり１．５×１０５個のＣＴ２６細胞を、一方、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにはマウス１匹当たり１．２×１０６個のＭＣ３８細胞を、皮下注射により右側腹部に接種した。担癌マウスを５日目に異なる群に無作為に割り当てた。予防的抗腫瘍研究のために、マウスに、メラトニン（１００ｍｇ／Ｋｇ体重／用量）、ＥＧＣＧ（１００ｍｇ／Ｋｇ体重／用量）、フコイダン（２００ｍｇ／Ｋｇ体重／用量）、オリゴフルクトース（１２０ｍｇ／用量）、またはイヌリン（１２０ｍｇ／用量）を、腫瘍接種の１週間前に３回強制経口投与した。腫瘍接種後、マウスに、最初の週に３回、続いて週に５回強制経口投与した。マウスにα－ＰＤ－１抗体（１００μｇ／用量）を腫瘍接種後１０、１４、１８および２２日目にｉ．ｐ．注射した。治療的療法のために、マウスに、上記のように０日目に腫瘍細胞を接種し、腫瘍接種後７日目から開始する強制経口投与により指示されたサンプルで処置した。マウスには、指示されたサンプル（予防的抗腫瘍試験と同じ用量）を週５回強制経口投与し、α－ＰＤ－１抗体（１００μｇ／用量）を腫瘍接種後１１、１５、１９および２３日目に注射した。腫瘍サイズを予め設定した時点で測定し、腫瘍体積を長さ×幅２として計算した。イヌリンゲルを用いた抗腫瘍研究では、イヌリンゲルまたはイヌリンの用量が６０ｍｇ／用量であった。生存研究のために、腫瘍サイズが直径１．５ｃｍに達した場合、または重度の体重減少（＞２０％）により瀕死状態になった、あるいは腫瘍体積の５０％を超える腫瘍潰瘍形成が認められた場合に、担癌マウスを安楽死させた。抗体枯渇研究において、ＣＴ２６担癌マウスには、上記に示されるように、イヌリンゲル（６０ｍｇ／用量）の強制経口投与およびα－ＰＤ－１処置が行われた。２００μｇ／用量の抗ＣＤ８（Ｂｉｏｘｃｅｌｌ、クローン２．４３、＃ＢＰ００６１）、抗ＣＤ４（Ｂｉｏｘｃｅｌｌ、クローンＧＫ１．５、＃ＢＰ０００３－１）、または抗Ａｓｉａｌｏ ＧＭ１（Ｗａｋｏ ｃｈｅｍｉｃａｌｓ ＵＳＡ、Ｉｎｃ、＃９８６－１０００１）を、８、１１、および１６日目にそれぞれ腹腔内投与することにより、ＣＤ８Ｔ細胞、ＣＤ４Ｔ細胞、およびＮＫ細胞を枯渇させた。
［ＰＢＭＣにおけるテトラマー分析］
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を予め事前設定された時間で収集し、全身循環中の腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を分析した。赤血球を溶解した。また、残りの細胞を抗ＣＤ１６／３２抗体で１０分間ブロックし、Ｈ－２Ｌｄ制限ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ（配列番号１）またはＨ－２Ｄｂ制限ＡＳＭＴＮＭＥＬＭ（配列番号３）を含むペプチド－ＭＨＣテトラマーで染色した。両方のテトラマーは、ＮＩＨ Ｔｅｔｒａｍｅｒ Ｃｏｒｅ Ｆａｃｉｌｉｔｙによって提供された。細胞はまた、フローサイトメトリー分析のために、抗ＣＤ８－ＡＰＣ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、＃５５３０３５）およびＤＡＰＩで染色した。
［腫瘍微小環境分析］
種々のサンプルによる処置後、腫瘍浸潤性Ｔ細胞の分析のために、腫瘍組織を予め設定された時点で切除した。腫瘍組織を切除し、小片に切断し、および穏やかに振盪しながらＩＶ型コラゲナーゼ（１ｍｇ／ｍｌ）およびＤＮａｓｅ Ｉ（０．１ｍｇ／ｍｌ）と共にインキュベートした。３０分後、細胞懸濁液を７０μｍストレーナーで濾過した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、抗ＣＤ１６／３２抗体でブロックした。次いで、細胞を、種々の抗体（ＣＤ４モノクローナル抗体（ＧＫ１．５）－ＰＥ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＡＰＣ－抗ＣＤ４５ラットモノクローナル抗体（クローン：３０－Ｆ１１）、ＦＩＴＣ－抗ＣＤ４５ラットモノクローナル抗体（クローン：３０－Ｆ１１）、ＦＩＴＣ－ラット抗マウスＣＤ８ａクローン５３－６．７（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＰＥ標識Ｈ－２Ｌｄ－制限ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ（配列番号：１）、ＦＩＴＣ－抗ＣＤ８６ラットモノクローナル抗体（クローン：ＧＬ－１、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ＰＥ－ＣＤ１１ｃアルメニアンハムスター抗マウス（クローン：Ｎ４１８、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＰＥ－Ｃｙ７－抗マウスＰＤ－１（クローン：２９Ｆ．１Ａ１２、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ＦＩＴＣ－ＣＤ４４ラット抗ヒト／マウス（クローン：ＩＭ７、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＰＥ－Ｃｙ７－ＣＤ６２Ｌモノクローナル抗体（ＭＥＬ－１４）（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＰＥ－Ｔｃｆ１／Ｔｃｆ７（Ｃ６３Ｄ９）ウサギｍＡｂ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、＃１４４５６）、ＰＥ－Ｃｙ７－抗マウスＣＤ８６（クローン：ＧＬ１、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＦＩＴＣ抗マウス／ヒトＣＤ１１ｂ（Ｍ１／７０、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ＰＥ抗マウスＦ４／８０（ＢＭ８、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、またはＡＰＣ抗マウスＣＤ２０６（ＭＭＲ、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ））で染色した。細胞を洗浄し、フローサイトメトリー分析のためにＤＡＰＩ、または７－ＡＡＤ、あるいはｅｆｌｕｏｒ４５０で染色した。
［腸内細菌叢分析］
担癌マウスには、上記のような処置を施した。２０日目に、糞便ペレットを収集し、腸内細菌叢分析の前に－８０℃で保存した。ミシガン大学細菌システム分子生物学研究所が、細菌ＤＮＡ単離および１６Ｓ ｒＲＮＡシークエンシングの両方を完了した。マウス糞便サンプルからの細菌ＤＮＡの単離は、Ｑｉａｇｅｎ ＭａｇＡｔｔｒａｃｔ Ｐｏｗｅｒ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｍｅキットを用いて行った。１６Ｓ ｒＲＮＡをコードする遺伝子のＶ４領域を、Ｋｏｚｉｃｈら（１）によって開発されたバーコードされたデュアルインデックスプライマーを使用して、抽出されたＤＮＡから増幅した。簡単に述べると、１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子のＶ４領域に特異的なバーコード化デュアルインデックスプライマーがＤＮＡを増幅した。ＰＣＲの状態は、９５℃で２分間、次に９５℃で２０秒間、５５℃で１５秒間、７２℃で５分の３０サイクル、そして７２℃で１０分間であった。アンプリコンライブラリーのサイズ（～３９９ｂｐ）をＡｇｉｌｅｎｔ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒによって確認した。次いで、試薬カートリッジに加えるカスタムリード１／リード２プライマー、およびインデックスプライマーを含むプライマーセットを改変したうえで、製造業者の説明書に従い、５００サイクルのＭｉＳｅｑ Ｖ２試薬キット（カタログ番号ＭＳ－１０２－２００３）を使用して、Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＭｉＳｅｑプラットフォーム上で、プールしたアンプリコンライブラリーを配列決定した。「ＭｉＳｅｑ上の配列決定のためのライブラリーの調製」（ｐａｒｔ１５０３９７４０、Ｒｅｖ．Ｄ）プロトコルを使用して、５．５ｐＭの最終負荷濃度を有するライブラリーを調製し、１５％ＰｈｉＸでスパイクして、ラン内で多様性を作成した。マウス糞便収集からの細菌の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子配列決定データはＭｏｔｈｕｒにより処理された。シルバ参照ファイル（ｒｅｌｅａｓｅ１３２）を使用して配列を整列させ、オープン参照ＯＴＵピッキングプロトコルを９７％の配列同一性で使用した。
［糞便ｐＨおよびＳＣＦＡ測定］
腫瘍接種および処置後２０日目に、マウスの新鮮な糞便ペレットを収集し、重量を測定した。糞便ペレットをＤＩ水中でホモジナイズし、３０００Ｘｇで５分間遠心分離した。上清のｐＨをｐＨメーターで検出した。ＳＣＦＡ測定のために、ＳＣＦＡを、Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水を用いて糞便ペレットから抽出した。この溶液を１００００Ｘｇ（４℃）で５分間遠心分離して、細菌および他の固体をペレット化した。上清を収集し、ＳＣＦＡをミシガン大学生物学ステーションのイオンクロマトグラフィーにより測定した。ＳＣＦＡの濃度は、外部標準法を用いて決定した。
［ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ］
ＣＴ２６担癌ＢＡＬＢ／ｃマウスに、腫瘍接種の７日目から開始して週に５回、指示されたサンプルを、強制経口投与により与えた。動物にはまた、１１、１５および１９日目にα－ＰＤ－１抗体（１００μｇ）を腹腔内投与した。２３日目に、動物を安楽死させ、そしてそれらの脾臓をＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイを用いて抗腫瘍Ｔ細胞応答について分析した。ＥＬＩＳＰＯＴプレートを捕捉抗体で２４時間コーティングし、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳで２時間ブロックした。これらの脾細胞を、２×１０５生細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレートに加えた。一方、脾細胞を刺激するために、ＡＨ１ペプチド（ＳＰＳＹＶＹＨＱＦ（配列番号１）、２０μｇ／ｍＬ）を添加した。イオノマイシンおよびＰＭＡを陽性対照として用いた。１８時間後、ＩＦＮ－γスポットをビオチン化検出抗体、続いてストレプトアビジン－ＨＲＰおよびＡＥＣ基質キットで検出した。ＩＦＮ－γスポット数は、ミシガン大学の癌センター免疫学コアで測定した。ＭＣ３８担癌Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイについても、同様の方法で実施した。２０日目に得られたＰＢＭＣをＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイに用いた。
［消化器系におけるイヌリンヒドロゲル保持］
消化器系におけるイヌリンゲルの保持をＦＩＴＣ－イヌリンゲルを用いて測定した。ＦＩＴＣ標識イヌリンヒドロゲルを調製するために、４７．５ｍｇのイヌリンおよび１２．５ｍｇのＦＩＴＣ－イヌリン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を２００μＬのＤＩ水中で混合した。イヌリンのインビボイメージングのために、マウスに、ＦＩＴＣ標識イヌリンまたはイヌリンゲルを強制経口投与し、予め設定した時点で安楽死させた。胃、小腸、盲腸、結腸および直腸を収集し、ＰＢＳで洗浄した後、ＩＶＩＳ光学イメージングシステムで蛍光画像化した。糞便ペレット中のイヌリン含量の検出のために、ＦＩＴＣ標識イヌリンまたはイヌリンゲルをマウスに経口強制経口投与し、糞便ペレットを予め設定した時点で収集した。糞便ペレットの重量を測定し、ＤＩ水に再懸濁した。次に、サンプル溶液を遠心分離し、マイクロプレートリーダーを用いて上清の蛍光強度を測定した。蛍光強度を、１ｍｇ／ｍＬの糞便サンプルに対して標準化した。結腸におけるイヌリン含量の検出のために、マウスにイヌリンまたはイヌリンゲル（６０ｍｇ／用量）を強制投与し、強制投与後の予め設定された時点で安楽死させた。結腸中の糞便ペレットを収集し、重量を測定し、ホモジナイズし、遠心分離した。上清を２０倍希釈し、イヌリンの検出に使用した。イヌリンは、ＰｉｃｏＰｒｏｂｅ（商標）Ｉｎｕｌｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ）を介して、製造者のプロトコルに従って検出した。
［抗生物質水処理］
マウスに腫瘍接種前の１週間、抗生物質を含む滅菌飲料水を与えた。腫瘍接種後、腫瘍の移植および形成に対する抗生物質の直接的な影響を避けるため、動物には通常の飲料水を５日間与えた。５日後、担癌マウスに、研究のリマインダ（reminder）のために抗生物質を含む飲料水を与えた。アンピシリン（０．３ｍｇ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（２．５ｍｇ／ｍｌ）、およびコリスチン（０．３ｍｇ／ｍｌ）を含有する抗生物質飲料水を毎週２回交換した。
［バイオセーフティ評価］
ＣＴ２６担癌マウスを上述のようなレジメンで処理した。２９日目に、完全血球算定（ＣＢＣ）（好酸球、リンパ球、単球、血小板、赤血球、ヘモグロビン、平均血小板容積、赤血球分布幅（ＲＤＷ）および平均赤血球ヘモグロビン（ＭＣＨ）を含む）のために血液サンプルを収集した。アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、グルコース、コレステロール、およびクレアチンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）を含む生化学分析のために血清サンプルを用いた。２９日目にマウスを安楽死させ、肺、肝臓、脾臓、心臓および腎臓をＨ＆Ｅ染色のために収集した。
［統計解析］
動物試験は無作為化後に実施した。データは、対または非対試験または一元または二元配置分析（ＡＮＯＶＡ）によって分析し、続いてＰｒｉｓｍ８．０（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）との多重比較検定によって分析した。ｐ＜０．０５を統計学的に有意とみなした。
＜実施例１０＞
本実施例は、イヌリン－ゲル製剤を用いて細菌およびプロバイオティクスを送達する一方法を実証する。
健康上の利益を改善するための、プロバイオティクスの結腸標的送達に対する研究的関心が集中している。細菌（プロバイオティクス）の同時送達のためにプレバイオティクスベースのゲル製剤を使用する新しい戦略が開発された。概念の証明として、Ｅ．ｃｏｌｉをモデル細菌生物として使用し、そしてＥ．ｃｏｌｉをカプセル化しそして送達するために、前述したイヌリン－ゲル製剤を使用した。
ＧＦＰを発現するＥ．ｃｏｌｉを使用して、イヌリン－ゲル製剤中のＥ．ｃｏｌｉのエントラップメント（entrapment）および増殖を評価した。イヌリンゲルにエントラップされたＥ．ｃｏｌｉは、４つの相の典型的な細菌増殖パターンを示した（図１０）。細胞密度は、定常期に達する前のＧＦＰ発現に比例した。細胞数は定常期では定数であり、栄養の枯渇と代謝産物の生成により遅滞期で崩壊したが、蛍光は徐々に蓄積した。これは、イヌリン－ゲルがＥ．ｃｏｌｉをエントラップし、その生存率を維持するために利用できることを実証した。
培養皿中のＥ．ｃｏｌｉの増殖を、イヌリン－ゲル中と比較した。Ｅ．ｃｏｌｉはイヌリンゲルエントラップ群とＰＢＳ対照群（すなわち、培養皿）との間で同程度の蛍光強度を示した。イヌリンゲルは、ＧＦＰの波長でごくわずかな自己蛍光を発した。
Ｅ．ｃｏｌｉの生存率をＣＦＵ計数によって比較した場合、イヌリンゲルにエントラップされたＥ．ｃｏｌｉが生存率の増加を示すことが観察された（表１）。イヌリンゲル群の計算されたＣＦＵは、ＰＢＳで得られた数よりも３倍高かった。これは、イヌリンゲルが細菌をエントラップし、その増殖を促進することができることを実証している。これらの結果は、先の実施例に示された結果と組み合わせて、結腸保持のために設計されたイヌリンゲルが細菌（プロバイオティクス）をエントラップし、それらを結腸組織に送達するために使用され得ることを示す。
Figure 2022549318000005
＜実施例１１＞
本実施例は、実施例１０において利用される物質および方法を述べる。
［Ｅ．ｃｏｌｉ培養およびＣＦＵ計数］
１００μｇ／ｍＬアンピシリンを補充したトリプシン大豆ブロス（ＴＳＢ）培地中において、３７℃、２００ｒｐｍで一晩Ｅ．ｃｏｌｉを培養した。６００ｎｍにおける光学密度を測定した。１０倍連続希釈（10-fold serial dilution）を細胞培養に適用し、希釈液をＴＳＢ寒天平板上に広げ、３７℃で１２時間培養した。ＣＦＵは、各希釈係数の数によって計算した。
［イヌリンゲル調製物およびＥ．ｃｏｌｉ封入］
イヌリン（３３０ｍｇ／ｍＬ）を、ボルテックスを用いて滅菌ＰＢＳバッファに懸濁した。懸濁液を５分間に７０℃に加熱し、次いで室温で１０分間冷却した。７．５×１０９ＣＦＵ／ｍＬの密度のＥ．ｃｏｌｉ培養物を、冷却した懸濁液に、Ｅ．ｃｏｌｉ：イヌリン＝１：９の比率で添加し、７．５×１０８ＣＦＵ＠３００ｍｇ／ｍＬの最終濃度を有するＥ．ｃｏｌｉゲルを得た。
＜実施例１２＞
図１～１０は、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから得られたＢＡＢＬ／ｃマウスにおいて生成された結果を示した。異なる動物販売業者のマウスは異なる腸内細菌叢を有することが知られているため、他の動物販売業者から入手したマウスにおけるイヌリンゲル＋α－ＰＤ－１併用療法の治療効果の有効性を検証しようとする実験が実施された。図１３Ａに示すように、Ｃｈａｒｌｅｓ ＲｉｖｅｒおよびＴａｃｏｎｉｃ Ｆａｒｍから入手したＢＡＢＬ／ｃマウスにＣＴ２６腫瘍細胞を接種し、イヌリンゲル＋α－ＰＤ－１併用療法で処置した。イヌリンゲル＋α－ＰＤ－１併用療法はＣｈａｒｌｅｓ ＲｉｖｅｒおよびＴａｃｏｎｉｃ Ｆａｒｍから得られたＢＡＢＬ／Ｃマウスにおいて抗腫瘍効果を発揮したことから（図１３Ｂ～Ｃ）、併用療法の抗腫瘍効果は販売業者特異的な効果ではないことが示された。
ＢＡＢＬ／ｃマウスのＣＴ２６腫瘍モデルに加えて、他の腫瘍モデルでこれらの結果を検証しようとする実験が行われた。イヌリンゲル（６０ｍｇ／用量）＋α－ＰＤ－１併用療法はまた、ＭＣ－３８結腸癌またはＢ１６Ｆ１０黒色腫のいずれかを有するＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）において強力な抗腫瘍効果を有する強いＣＤ８＋Ｔ細胞反応を生じさせた（図１３Ｄ～Ｅ）。このように、イヌリンゲル＋α－ＰＤ－１併用療法は、複数のマウス系統における複数の腫瘍モデルにおけるこの方策の有用性を示した。
＜実施例１３＞
ｉｎ ｖｉｖｏの結果に対するイヌリンゲルの組成物の影響を理解するために、種々の重合度（ＤＰ）のイヌリンを用いて種々のイヌリンゲル製剤を合成する実験を行った。
材料および方法
イヌリンサンプルは、Ｎｏｗ Ｆｏｏｄｓ、Ｓｗａｎｓｏｎ Ｈｅａｌｔｈ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、および Ｏｒａｆｔｉから購入した。
１Ｈ－ＮＭＲ。各５ｍｇのイヌリン粉末を、それぞれ６００μＬのＤ２Ｏに溶解させて、１Ｈ－ＮＭＲサンプルを調製した。ホストソフトウェアＶＮＭＲＪ３．２によって操作される、多核能力を有する５ｍｍＯＮＥプローブを備えるＡｇｉｌｅｎｔ／Ｖａｒｉａｎ ４００ＭＨｚ ＮＭＲ分析計上でサンプルを泳動した。ＤＰは、前述のように１Ｈ－ＮＭＲスペクトルにより計算した（ＴＢａｒｋｈａｔｏｖａ、ＭＮａｚａｒｅｎｋｏ、ＭＫｏｚｈｕｋｈｏｖａ、ＩＫｈｒｉｐｋｏ、Ｆｏｏｄｓ ａｎｄ Ｒａｗ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ２０１５、３）。
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ。各１０ｍｇのイヌリンサンプルを、１．００ｍｌの水、０．２５ｍｌのメタノール、および０．２５ｍｌのアセトニトリルに溶解した。次いで、２μＬのサンプル溶液をマトリックス溶液と混合し、そして標的プレート上にスポットした。マトリックス溶液は４ｍｇ／ｍＬの濃度の２，５－ＤＨＢであり、０．１％ＴＦＡを含む５０／５０のアセトニトリル／水に溶解した。Ｂｒｕｋｅｒ Ａｕｔｏｆｌｅｘ Ｓｐｅｅｄにおいて、線形モードでサンプルを泳動した。器具を、２，５－ＤＨＢマトリックス中のウシインスリンおよびシトクロムＣ上の混合物で質量較正した。
イヌリンゲルの調製。所望の重量のイヌリン粉末を１．０ｍＬの脱イオン水に溶解した。次に、イヌリン溶液を１０００ｒｐｍ振盪しながら７０℃で５分間加熱し、ゼラチン化のために室温で一晩保持した。
レオロジー試験。レオロジー試験のためのイヌリンゲル（サンプル３および５）を、１．０ｍＬの純水に対してイヌリン３００ｍｇの濃度で、上述のように調製した。イヌリン（３）懸濁液を、加熱および冷却手順なしで、同じ濃度で調製した。イヌリンゲル（サンプル１）を、１．０ｍＬの脱イオン水中に７００ｍｇのイヌリン濃度であることを除いて、同じゼラチン化工程を用いて調製した。測定は、０．１００ｍｍギャップの並列ＰＰ６０ Ｔｉプレートを装着したＡｎｔｏｎ Ｐａａｒ社製のＭＣＲ７０２ ＴｗｉｎＤｒｉｖｅレオメーターを用い、２５℃で行った。全ての試験は、試験したサンプルの線形粘弾性領域の範囲にある１％の歪みで行った。Ｇ’は弾性率を表し、Ｇ’’は粘性率を表す。
糞便サンプル中のイヌリン含有量。糞便サンプル中のイヌリン含有量を検出するために、マウスにイヌリンゲル（６０ｍｇ／用量）を強制投与した。そして、マウスの新鮮な糞便ペレットを収集し、強制投与後の予め設定された時点（０、２．５、５、７．５、１０および１２．５時間）で体重を測定した。各糞便ペレットを８００μＬのＤＩ水中でホモジナイズし、２００００ＲＣＦで１０分間遠心分離した。次いで、ＰｉｃｏＰｒｏｂｅ（商標）Ｉｎｕｌｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ）を用いて、製造業者の説明書に従って、イヌリン含有量を定量するために上清を２５倍に希釈した。
Ｉｎ ｖｉｖｏ試験。Ｔ２６担癌ＢＡＬＢ／ｃマウス（雌、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、６～８週齢）を無作為に異なる群に割り付け、処置を行った。マウスにイヌリンゲル（６０ｍｇ／用量）を５日毎に４回強制投与し、α－ＰＤ－１抗体（１００μｇ／用量）を４日毎に１回腹腔内注射により投与した。腫瘍接種後５日目から開始し、腫瘍体積およびマウス体重を１日おきに測定した。腫瘍体積を（長さ×幅２）／２として計算した。
統計解析。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ８を使用して統計データを分析した。結果を平均±ＳＥＭとして表す。群間の差は、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較検定を用いた二元配置ＡＮＯＶＡにより分析した。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１および＊＊＊ｐ＜０．００１のｐ値について、差を有意とみなした。
結果
種々の重合度を有するイヌリンサンプルを種々の会社から入手し、１Ｈ－ＮＭＲにより分析した（図１４）。１Ｈ－ＮＭＲスペクトル分析は、以下のことを明らかにした（図１４）。イヌリンサンプル＃１は
Figure 2022549318000006
、
Figure 2022549318000007
を有する。イヌリンサンプル＃２は
Figure 2022549318000008
、
Figure 2022549318000009
を有する。イヌリンサンプル＃３は
Figure 2022549318000010
、
Figure 2022549318000011
を有する。イヌリンサンプル＃４は
Figure 2022549318000012
、
Figure 2022549318000013
を有する。イヌリンサンプル＃５は、
Figure 2022549318000014
、
Figure 2022549318000015
を有する。
さらに、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ分析は、イヌリンサンプル＃１、＃２、＃３、＃４および＃５が９９０～６３３６Ｄａのモル質量を有することを明らかにした（図１５）。しかし、９９０～２１２４Ｄａ付近のピーク強度の増加は、５～１２の間のより低いＤＰのイヌリン鎖の優勢を示唆した。低いＤＰを有するイヌリン鎖はより短く、励起されて検出されやすい。一方、より高いＤＰを有する長いイヌリン鎖は互いに密接に絡み合い、基質から励起されにくく、シグナルＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ分析のより低い強度を導く。
次に、種々のＤＰを有するこれらのイヌリンサンプルを用いてイヌリンゲル形成を試験する実験を行った。図１６に示されるように、ＤＰ７およびＤＰ１０を有するイヌリンサンプル（サンプル１および２）は、より高いＤＰを有するイヌリンサンプル（サンプル３～５）と比較して、加熱前において水に対する溶解性が高かった。同じ条件下でのイヌリンゲル形成のために、ＤＰ７を有するイヌリンサンプル１には、より高いＤＰを有する他の４つのイヌリンサンプルと比較して、はるかに高い濃度（７００ｍｇ／ｇ水）のイヌリンが必要であった。最も高いＤＰ２８を有するイヌリンサンプル５は、水中１００ｍｇ／ｇという低いイヌリン濃度であっても、イヌリンゲルを形成することができた。これらの結果は、より高いＤＰを有するイヌリンは水への溶解性が低く、イヌリンゲルを形成するために必要な濃度が低いことを示した。
イヌリンのＤＰはまた、ゲルのレオロジー特性に影響を及ぼす。図１７において、ＤＰが７（サンプル１）から２８（サンプル５）に上昇するにつれて、弾性率（Ｇ’）および粘性率（Ｇ’’）の両方が～１０倍増加した。イヌリンサンプル３は、イヌリンサンプル１および５と比較して中間値のＧ’およびＧ’’を示した。非ゲル化イヌリン溶液と比較して、イヌリンサンプル１、３、および５を用いて形成された３つのイヌリンゲルはすべて、より大きなＧ’およびＧ’’値を有していた。これらの結果はこれらのサンプルが液体よりもむしろより固体様であることを示し、イヌリンゲル形成の成功を確認した。
次に、ｉｎ ｖｉｖｏでの種々のイヌリンゲル製剤の結腸保持挙動を評価する実験を行った。ナイーブマウスに、種々のＤＰを含むイヌリンゲルを強制経口投与し、経時的にイヌリン含有量について糞便サンプルを分析した。図１８に示すように、より低いＤＰを有するイヌリンゲルはより早いピーク時間を有し、イヌリンサンプル１については強制投与後６．１７時間、イヌリンサンプル２については強制経口投与後５．３８時間であった。また、より高いＤＰを有するイヌリンゲルについては、より長いピーク時間が観察され、イヌリンサンプル３については７．７３時間、イヌリンサンプル５については１０．２５時間であった。さらに、糞便中の相対的な総イヌリン含有量は曲線下の面積に関連し、ＤＰが上昇するにつれて減少した。これらはより高いＤＰを有するイヌリンゲルが消化管におけるイヌリンの保持時間を延長することを示した。イヌリンの保持時間を延長することは、腸細菌叢によるイヌリンの利用をさらに増加させ得る。
次に、種々のイヌリンゲル製剤、すなわちＤＰ７、１０、２３および２８で形成されたイヌリンゲルの治療効果を評価する実験を行った。ｓ．ｃ．側腹部ＣＴ２６腫瘍を有するＢａｌｂ／ｃマウスに対して、ＤＰ可変イヌリンゲル（６０ｍｇ／用量）を強制経口投与する処置に加え、α－ＰＤ－１（１００ｕｇ／用量）を腹腔内に投与する処置をおこなった。腫瘍体積およびマウス体重を１日おきに記録した。α－ＰＤ－１単独処置群が中程度の抗腫瘍効果を示したのに対し、ＤＰ１０またはＤＰ２３のいずれかで形成されたイヌリンゲルと併用されたα－ＰＤ－１処置は改善された抗腫瘍効果を示した（図１９）。特に、ＤＰ２８を有するイヌリンゲルは、ＤＰ１０またはＤＰ２３を有するイヌリンゲルと比較して、顕著に増強された抗腫瘍効力を示した（図１９）。また、７という低いＤＰを有するイヌリンゲルは、α－ＰＤ－１療法の抗腫瘍効果を低下させると考えられることが観察された。これらの結果から、イヌリンゲルの組成物はα－ＰＤ－１療法の抗腫瘍効果に重要な役割を果たしており、図１８に示すように、より長いＤＰのイヌリンゲルは、消化管内での保持時間が延長され得ることにより、優れた腫瘍効果を示すことが示唆された。種々のイヌリンゲル製剤＋α－ＰＤ－１療法を用いて処置された全ての動物において、大きな毒性および動物体重のいかなる負の変化も観察されず（図２０）、イヌリンゲル＋α－ＰＤ－１併用療法の安全性が示された。
＜実施例１４＞
次に、イヌリンゲル形成に対するイヌリン濃度および温度の影響を調べる実験を行った。平均ＤＰ２３を有するイヌリン（Ｓｉｇｍａ）を最初に水と混合し、１５、２０、２５および３０％ｗ／ｖの所望の濃度を得た。混合物をそれぞれ４０、５０、６０、７０℃に５分間加熱した。室温で一晩冷却した後、エッペンドルフ管をひっくり返すことによってゲル形成を試験した。所与のＤＰ２３のイヌリンについては、イヌリン濃度が高いほどイヌリンゲル形成もたらされた（図２１）。ゲル化プロセスの間におけるより高い温度の適用は、イヌリンゲル形成を促進した（図２１）。これらの結果は、イヌリンゲル形成における濃度および温度依存性を示した。
＜実施例１５＞
次に、別のプレバイオティクス天然繊維であるジャガイモデンプンを用いてゲル形成を試験する実験を行った。ジャガイモデンプン濃度がゲル形成に及ぼす影響を調べた。食品用のジャガイモデンプン（Ｂｏｂ’ｓ Ｒｅｄ Ｍｉｌｌ）を、水中において０．１、０．５、２．５、および５％ｗ／ｖの所望の濃度で予備水和し、続いて７０℃で穏やかに撹拌した。図２２は、ジャガイモデンプンゲルを示す。膨潤が完了したとき、５％ｗ／ｖを超える濃度のジャガイモデンプンは即座に糊化した。
＜実施例１６＞
次に、イヌリンを他の天然食物繊維または医薬賦形剤と組み合わせることによる新たな繊維ゲルの形成を含む実験を行った。簡単に述べると、２３％ｗ／ｗイヌリンを、耐性ジャガイモデンプン、ペクチン、グアーガム、ビーンガム、ゼラチン、またはグリセロールを含む他の賦形剤と一緒に最初に混合することによってイヌリンゲルを製造した。他の天然繊維は共生細菌叢のための追加の栄養源を提供した。一方、他の賦形剤は、これらの形成において濃厚化試薬（thickening reagents）としての機能を果たした。次いで、混合物を７０℃で５分間加熱し、続いて室温で一晩冷却した。製造プロセスの間、水中の個々の溶解に基づいて、賦形剤を添加するために、予備溶解および乾燥ブレンドの両方を使用した。図２３は、＃１イヌリンゲル、＃２、耐性ジャガイモデンプンを含有するイヌリンゲル、＃３イヌリンゲル含有グアーガム、＃４イヌリンゲル含有ペクチン、および＃５イヌリンゲル含有ビーンガムのゲル化プロセスを示す。材料を最初に水（上部パネル）中で混合し、７０℃で５分間加熱し（中央パネル）、続いて室温で一晩冷却し、繊維ゲルの形成をもたらした（下部パネル）（図２３）。
次に、イヌリンゲルに添加される天然繊維および賦形剤の量を変化させ、繊維ゲルを形成するための理想的な組成を決定する実験を行った。図２４に示すように、２３％ｗ／ｗのイヌリン含有量を含むイヌリンゲルに対して、以下の量の天然繊維または医薬賦形剤が確実に添加され得る：５％ジャガイモデンプン、２％ペクチン、０．５％グアーガム、１．０％ビーンガム、５．０％ゼラチン、または５０％グリセロール（ｗ／ｗ）。示された値は、ゲル形成を乱すことなく２３％ｗ／ｗイヌリンゲルに添加され得る各材料の最大量である。
次に、これらの最適化された繊維ゲルのレオロジー特性を測定する実験を行った。レオロジー測定は、０．１００ｍｍギャップを持つ並列４０ｍｍプレートを装備したＭＣＲ７０２ＴｗｉｎＤｒｉｖｅレオメーター（Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ社、米国）を用い、２５℃で実施した。全ての周波数掃引測定は、研究される製剤の線形粘弾性領域の範囲にある１％の歪みで行った。Ｇ’は弾性率、Ｇ’’は粘性率を表す。流れ曲線は、２５℃における１０－１から１０２ｓ－１の範囲内でのせん断速度の関数として得られた。報告された結果は、少なくとも３反復の平均である（図２５）。全ての試験された新たなゲル製剤は、より低いＧ’およびＧ’’の値によって示されるように、純粋なイヌリンゲルと比較して、より弱いゲル強度を示した。しかしながら、ジャガイモデンプンと組み合わせたイヌリンゲルは、粘度の項目において、～１０倍の増加を示した。
〔参照による組み込み〕
本明細書中で参照される特許文献および科学論文それぞれの開示全体は、すべての目的のために参照により組み込まれる。
〔同等物〕
本発明は、その精神または本質的特性から逸脱することなく、他の特定の形態内で実施されてもよい。したがって、前述の実施形態は、本明細書で説明される本発明を限定するものではなく、すべての点において例示的であると見なされるべきである。したがって、本発明の範囲は前述の説明によってではなく、添付の特許請求の範囲によって示されるものであり、特許請求の範囲の同等性の意味および範囲の中に入るすべての変更は、その中に包含されることが意図される。
図１Ａ～Ｆ。α－ＰＤ－１の抗腫瘍効果を予防的に改善するための候補物質のＩｎ ｖｉｖｏスクリーニング。－７日目に、種々のサンプルを３回予防的にマウスに対して強制投与した。次いで、０日目に、１．５×１０５個のＣＴ２６細胞がＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下（s.c.）注射された。腫瘍接種後１週間中に再度３回、および７日目から１週間につき５回、マウスに対して強制投与した。１００μｇ／用量のα－ＰＤ－１を、１０、１４、１８および２４日目に腹腔内（i.p.）注射した。種々の化合物が強制投与されたマウスにおける（Ｂ）個別の腫瘍増殖曲線、および（Ｃ）平均腫瘍増殖曲線。（Ｄ）各群における生存率曲線。（Ｅ）２２日目の末梢血内におけるＡＨ１特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の平均頻度。（Ｆ）代表散布図を、フローサイトメトリーを用いて測定した。データは、平均±ＳＥＭを表す。＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１であり、（Ｂ）二元配置ＡＮＯＶＡ（two-way ANOVA）、または（Ｅ）ｔ検定、（Ｄ）ログ・ランク（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）検定によって解析した。 図２Ａ～Ｇ。α－ＰＤ－１の抗腫瘍効果を改善するための候補物質のＩｎ ｖｉｖｏスクリーニング。（Ａ）０日目に、１．５×１０５個のＣＴ２６細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスに対して皮下（s.c.）注射した。７日目から（１週間につき５回）マウスに対して強制投与した。１１、１５、１９および２３日目に、１００μｇ／用量のα－ＰＤ－１を腹腔内（i.p.）注射した。（Ｂ）種々の化合物を強制投与されたマウスにおける平均腫瘍増殖曲線。データは平均±ＳＥＭを表す。各群における（Ｃ）個別の腫瘍増殖曲線および（Ｄ）生存率曲線。１８および２４日目に末梢血を収集した。（Ｅ）１８日目、（Ｆ）２４日目におけるＡＨ１特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の平均頻度および（Ｇ）代表散布図を、フローサイトメトリーを用いて測定した。データは平均±ＳＤを表す。全てのデータは２～３の独立した実験から得られた。ｎ＝１０（Ｂ、Ｃ、Ｄ）、ｎ＝７～１０（Ｅ、Ｆ）、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１であり、（Ｂ）二元配置ＡＮＯＶＡ、（Ｅ、Ｆ）一元配置ＡＮＯＶＡ、またはログ・ランク（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）検定によって解析した。 図３Ａ～Ｈ。α－ＰＤ－１と併用されたメラトニンおよびイヌリンの用量効果のＩｎ ｖｉｖｏ試験。０日目に１．５×１０５個のＣＴ２６細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下（s.c.）注射した。７日目から（１週間につき５回）、マウスに対して強制投与した。１１、１５、１９および２３日目に、１００μｇ／用量のα－ＰＤ－１を腹腔内（i.p.）注射した。異なる用量の（Ａ）メラトニンおよび（Ｂ）イヌリンが強制投与されたマウスにおける平均腫瘍増殖曲線。異なる用量の（Ｃ）メラトニンおよび（Ｄ）イヌリンを用いた処置後１８日目におけるＡＨ１特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の平均頻度。異なる用量の（Ｅ）メラトニンおよび（Ｆ）イヌリンを用いた処置後２４日目における腫瘍組織全体中のＣＤ４５＋ＣＤ８＋細胞の割合。異なる用量の（Ｇ）メラトニンおよび（Ｈ）イヌリンを用いた処置後２４日目における全細胞中のＣＤ４５＋ＣＤ８＋細胞の割合。データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝５）を表す。＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１であり、（Ａ、Ｂ）二元配置ＡＮＯＶＡ、（Ｄ）２テール非対応ｔ検定（two tails, unpaired t-test）、（Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ）一元配置ＡＮＯＶＡによって解析した。 図４Ａ～Ｈ。腸内細菌叢の多様性、豊富さおよび構造の応答。１．５×１０５個のＣＴ２６細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下（s.c.）注射し、７日目から（１週間につき５回）強制投与した。１１、１５、１９、および２３日目にα－ＰＤ－１（１００μｇ／用量）を腹腔内（i.p.）注射した。１６ｓ ＲＮＡ解析のために２１日目に糞便ペレットを収集した。各群における腸内細菌叢の（Ａ）ＯＴＵ数、（Ｂ）シンプソン多様度の逆数（inverse Simposon diversity）、および（Ｃ）（Ｂｒａｙ－Ｃｕｒｔｉｓに基づく）非計量多次元スケーリング（ＮＭＤＳ）スコアプロット。（Ｄ）科レベルおよび（Ｉ）属レベルでの腸内細菌叢の相対的な存在量。（Ｆ）各群におけるｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ、ｒｏｓｅｂｕｒｉａおよびＲｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ＿１の相対的な存在量。（Ｇ）腫瘍サイズとｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ、ｒｏｓｅｂｕｒｉａおよびＲｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ＿１の相対的な存在量との関係。（Ｈ）糞便ペレット中の各群におけるＳＣＦＡ（乳酸塩、プロピオン酸塩および酪酸塩）レベルのヒートマップ。データは平均±ＳＥＭを表す。＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．０００１であり、（Ａ、Ｂ、Ｆ）一元配置ＡＮＯＶＡによって解析した。 図５Ａ～Ｃ。腸内細菌叢解析。１．５×１０５個のＣＴ２６細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下（s.c.）注射し、７日目から（１週間につき５回）強制投与した。１１、１５、１９、および２３日目にα－ＰＤ－１（１００μｇ／用量）を腹腔内（i.p.）注射した。１６ｓ ＲＮＡ解析のために２１日目に糞便ペレットを収集した。各群における腸内細菌叢の（Ａ）ＯＴＵ数、および（Ｃ）ＮＭＤＳスコアプロット。（Ｃ）属レベルでの腸内細菌叢の相対的な存在量。データは平均±ＳＥＭを表す。 図６Ａ～Ｉ。イヌリンゲルは、α－ＰＤ－１の治療効果をさらに増強させる。（Ａ）イヌリンゲルの画像およびＳＥＭ画像。（Ｂ）イヌリンまたはイヌリンゲル（６０ｍｇ／用量）を強制投与したマウスについての平均腫瘍増殖曲線および個別の腫瘍増殖曲線。１．５×１０５個のＣＴ２６細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下（s.c.）注射した。強制投与を７日目に（１週間につき５回）開始し、１００μｇのα－ＰＤ－１を１１、１５、１９、および２３日目に腹腔内（i.p.）注射した。（Ｃ）各群の生存率曲線。（Ｄ）α－ＰＤ－１群と併用されたイヌリンゲル中の腫瘍根絶マウスに１．５×１０５個のＣＴ２６細胞を注射し、腫瘍の大きさをモニターした。ＰＢＳが対照として用いられた。（Ｅ）２３日目のＡＨ１特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度および散布図。（Ｆ）腫瘍微小環境分析：全腫瘍におけるＣＤ４５＋ＣＤ８＋Ｔ細胞；ＤＡＰＩ－ＣＤ４５＋ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＡＨ１－テトラマー陽性；成熟ＤＣ細胞（ＤＡＰＩ－ＣＤ４５＋細胞におけるＣＤ１１ｃ＋ＣＤ８６＋Ｔ細胞）および全腫瘍におけるＣＤ４５＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合。（Ｇ、Ｈ）２３日目に、ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴ試験のために脾臓を採取した。（Ｉ）ＣＴ２６担癌ＢＡＬＢ／ｃマウスに、ＣＤ８＋Ｔ細胞（αＣＤ８）、ＣＤ４＋Ｔ細胞（αＣＤ４）およびＮＫ細胞（αＡｓｉａｌｏ ＧＭ１）を標的とする抗体２００μｇを、８、１１および１６日目に注射した。α－ＰＤ－１注射およびサンプル強制投与は、上記と同じ方法を用いた。担癌マウスの平均および個別の腫瘍増殖曲線を示す。ＩｇＧ抗体が対照群として用いられた。データは平均±ＳＥＭを表す。全てのデータは２～３の独立した実験から得られた。ｎ＝１０（Ｂ、Ｃ）、ｎ＝５（Ｄ、Ｉ）、ｎ＝１０～１５（Ｅ）、ｎ＝４～７（Ｇ、Ｆ）であり、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１であり、（Ｅ、Ｆ）一元配置ＡＮＯＶＡ、（Ｂ、Ｉ）二元配置ＡＮＯＶＡ、または（Ｃ）ログ・ランク（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）検定によって解析された。 図７Ａ～Ｂ。シリンジ（１ｍＬ）を通してＤＩ水にイヌリンゲルを注入した。イヌリンゲルの画像は、水中での安定性を示す。（Ｂ）イヌリンゲルを強酸環境（ｐＨ２）下でそれぞれ２時間および２４時間インキュベートした場合のイヌリンゲルの安定性。ＤＮＳ試薬をプローブで使用し、吸光度を測定して還元糖の含有量を確認した。酸性処理を行わないイヌリンゲルを標準として使用し、イヌリンを対照として使用した。 図８Ａ～Ｉ。イヌリンゲルは長期の結腸保持を示した。（Ａ）異なる時点におけるイヌリンゲルの腸管保持のＩＶＩＳイメージング（白い囲いは結腸領域を示す）、および（Ｂ）結腸領域における平均蛍光強度の対応。イヌリンをＦＩＴＣで標識した。（Ｃ）強制投与後の異なる時点での糞便ペレット中のイヌリン－ＦＩＴＣの蛍光強度。（Ｄ）結腸消化物中のイヌリン含量を、市販のイヌリンキットによって測定した。矢印は、イヌリンの曲線下面積（ＡＵＣ）値を示した。２１日目に糞便ペレットを収集し、１６ｓＲＮＡ分析を行った。各群における腸内細菌叢の（Ｅ）ＯＴＵ数、シンプソン多様度の逆数（inverse Simposon diversity）、および（Ｆ）ＮＭＤＳスコアプロット（Ｂｒａｙ－Ｃｕｒｔｉｓに基づく）。腸内細菌叢の（Ｇ）属レベルおよび（Ｈ）の相対的な存在量。（Ｉ）ナイーブマウスに広域スペクトル抗生物質（アンピシリン＋コリスチン＋ストレプトマイシン）を１週間与えた。次いで、１．５×１０５個のＣＴ２６細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下接種し、マウスに通常の飲料水を５日間与え、続いて広域スペクトル抗生物質処置を継続した。α－ＰＤ－１注射およびサンプル強制投与は、上記と同じレジメンを用いた。平均腫瘍増殖曲線を示す。データは平均±ＳＥＭを表す。全てのデータは２～３の独立した実験から得られた。＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１、＊＊＊＊：ｐ＜０．０００１であり、（Ｃ、Ｅ、Ｈ）一元配置ＡＮＯＶＡ、または（Ｉ）二元配置ＡＮＯＶＡによって解析された。 図９Ａ～Ｅ。（Ａ）ＭＣ３８腫瘍モデルがＣ５７ＢＬ／６マウス上で確立され、α－ＰＤ－１注射およびサンプル強制投与を受けた。２０日目に、ＰＢＭＣをＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＰＯＴアッセイのために採取した。各群の（Ｄ）生存率曲線および（Ｅ）平均および個別の腫瘍増殖曲線。データは平均±ＳＥＭを表す。＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１、＊＊＊＊：ｐ＜０．０００１であり、（Ａ、Ｂ、Ｇ）一元配置ＡＮＯＶＡによって解析した。 図１０Ａ～Ｃ。α－ＰＤ－１と併用されたイヌリンゲルのバイオセーフティ研究。（Ａ）好酸球、リンパ球、単球、血小板数、赤血球数、ＲＤＷ、ヘモグロビン、ＭＣＨおよび平均血小板容積を含む完全血球算定パネル。（Ｂ）ＡＬＰ、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＢＵＮ、ＣＰＫ、総タンパク質量、コレステロールおよびグルコースを含む生化学パネル。（Ｃ）２９日目におけるα－ＰＤ－１と併用されたイヌリンゲル処置後の心臓、肝臓、脾臓、肺、腎臓のＨ＆Ｅ染色。 Ｅ．ｃｏｌｉの増殖曲線およびＧＦＰ発現。Ｅ．ｃｏｌｉを、２５０ｍＬ三角フラスコ中で培養した。培養物を異なる間隔でサンプリングした。ＯＤ６００および蛍光強度を測定した。 ＰＢＳ中での２４時間インキュベーションおよびイヌリンゲル中への封入後の蛍光強度によってそれぞれの細胞生存率を決定した。 図１３Ａ～Ｅ。他のモデルにおけるイヌリンゲル＋α－ＰＤ－１併用療法の抗腫瘍効果の検証。（Ａ）Ｔａｃｏｎｉｃ ＦａｒｍまたはＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ由来のＣＴ２６担癌ＢＡＬＢ／ｃマウスの処置レジメン。（Ｂ）Ｔａｃｏｎｉｃ Ｆａｒｍまたは（Ｃ）Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ由来のＢＡＬＢ／Ｃマウス間の腫瘍増殖を示す。Ｄ－Ｅ）（Ｄ）ＭＣ－３８結腸癌および（Ｅ）Ｂ１６Ｆ１０メラノーマを有するＣ５７ＢＬ／６マウスを、示されたように処置し（イヌリン：６０ｍｇ／用量）、腫瘍増殖をモニターした。 各イヌリンサンプルの１Ｈ ＮＭＲスペクトル。 イヌリンサンプルのＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量スペクトル。 イヌリンゲル形成に対するイヌリン濃度および平均ＤＰの影響。様々なＤＰのイヌリンを用いて、様々なイヌリンゲル製剤を形成した。７、１０、２３、２６および２８の平均ＤＰを有するイヌリンを、種々の濃度で水に溶解した。加熱および冷却によってゲル化を誘導した後、イヌリンゲル形成が、高いイヌリン濃度および高いＤＰで観察された。 様々な平均ＤＰで形成されたイヌリンゲル製剤のゲルレオロジー特性を、周波数掃引によって測定した。Ｇ’は弾性率を表し、Ｇ’’は粘性率を表す。イヌリンゲルサンプル＃１は
Figure 2022549318000016
を有していた。イヌリンゲルサンプル＃３は
Figure 2022549318000017
を有していた。イヌリンゲルサンプル＃５は
Figure 2022549318000018
を有していた。
ナイーブマウスに、種々の平均ＤＰを有するイヌリンゲルを経口的に強制投与し、糞便サンプル中のイヌリン含有量を経時的に測定した。データは、平均±ＳＥＭを示す。 皮下（s.c.）側腹部ＣＴ２６腫瘍を有するＢａｌｂ／ｃマウスに対して、種々のＤＰ（６０ｍｇ／用量）を強制経口投与で処置し、加えてα－ＰＤ－１（１００ｕｇ／用量）を腹腔内投与した。動物の腫瘍増殖をモニターした。データは、平均±ＳＥＭを示す。 皮下（s.c.）側腹部ＣＴ２６腫瘍を有するＢａｌｂ／ｃマウスに対して、種々のＤＰ（６０ｍｇ／用量）を強制経口投与で処置し、加えてα－ＰＤ－１（１００ｕｇ／用量）を腹腔内投与した。動物の体重変化をモニターした。データは、平均±ＳＥＭを示す。 イヌリンゲル形成の濃度および温度依存性。ＤＰ２３を含むイヌリンを水と混合し、１５、２０、２５、および３０％ｗ／ｖの所望の濃度を得た。混合物をそれぞれ４０、５０、６０、７０℃に５分間加熱した後、冷却した。ゲル形成を試験した。 食品グレードのジャガイモデンプンを、水中で０．１、０．５、２．５、および５％ｗ／ｖの濃度において予備水和し、続いて７０℃で穏やかに撹拌した。冷却後、ゲル形成を試験した。 新しい繊維ゲルのためのゲル化プロセス。＃１イヌリンゲル、＃２抵抗性ジャガイモデンプンを含むイヌリンゲル、＃３グアーガムを含むイヌリンゲル、＃４ペクチンを含むイヌリンゲル、および＃５ビーンガムを含むイヌリンゲル。材料を最初に水中で混合し（上部パネル）、７０℃で５分間加熱し（中央パネル）、続いて室温で一晩冷却し、繊維ゲルの形成をもたらした（下部パネル）。 イヌリンゲルは、種々の量の天然繊維または賦形剤を添加した後に形成された。示された値は、ゲル形成を乱すことなく２３％ｗ／ｗイヌリンゲルに添加することができる各材料の最大量である。 異なる繊維ゲル製剤のゲルレオロジー特性。周波数掃引によって測定された粘弾性（左）および粘度の流れ曲線によって測定された粘弾性（右）。

Claims (107)

  1. １）対象への癌免疫療法またはワクチン、および２）前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与を適用することを通じて、前記癌免疫療法または前記ワクチンの効果を増加させる、方法。
  2. 前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤の投与は、前記ワクチンまたは前記癌免疫療法の適用の前、同時、および／または後に起こる、請求項１に記載の方法。
  3. 前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤の投与は、前記ワクチンまたは前記癌免疫療法の適用と同時に起こる、または、
    前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤の投与は、前記ワクチンまたは前記癌免疫療法の適用の前に起こる、請求項１に記載の方法。
  4. 前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤の投与は、前記ワクチンまたは前記癌免疫療法の適用の前および前記ワクチンまたは前記癌免疫療法の適用と同時に起こる、請求項１に記載の方法。
  5. 前記ワクチンは、癌治療のためのワクチン、および／または感染性病原体を治療および／または感染性病原体から保護するためのワクチンである、請求項１に記載の方法。
  6. 前記対象は、ヒト対象である、請求項１に記載の方法。
  7. 対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤は、プレバイオティクス薬剤を含む繊維である、請求項１に記載の方法。
  8. プレバイオティクス薬剤を含む前記線維は、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）、フコイダン、ジャガイモデンプン、オリゴフルクトース、およびイヌリンから選択される、請求項７に記載の方法。
  9. プレバイオティクス薬剤を含む前記繊維は、２０以上４７以下の平均重合度を有するゲルベースのイヌリン製剤である、請求項７に記載の方法。
  10. 前記ゲルベースのイヌリン製剤は、
    約２８の平均重合度を有しており、
    フルクトオリゴ糖、短鎖フルクトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、トランスガラクトオリゴ糖、ペクチン、キシロオリゴ糖、キトサンオリゴ糖、βグルカン、アラブルガム変性デンプン、耐性ジャガイモデンプン、グアーガム、ビーンガム、ゼラチン、グリセロール、ポリデキストロース、Ｄ－タガトース、アカシア繊維、カロブ、オート麦、およびかんきつ類繊維から選択される、１以上のプレバイオティクス化合物を含む、請求項９に記載の方法。
  11. 対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤は、メラトニンである、請求項１に記載の方法。
  12. 前記癌免疫療法は、１以上の免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）阻害剤を含む、請求項１に記載の方法。
  13. 前記１以上のＩＣＩ阻害剤は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０およびＣＧＥＮ－１５０４９のうちの１つ以上に結合し、その活性をブロックし、および／またはその活性を阻害することができる、請求項１２に記載の方法。
  14. 前記１以上のＩＣＩ阻害剤は、トレメリムマブ（ＣＴＬＡ－４ブロッキング抗体）、抗ＯＸ４０、ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体（抗Ｂ７－Ｈ１；ＭＥＤＩ４７３６）、ＭＫ－３４７５（ＰＤ－１ブロッカー）、ニボルマブ（抗ＰＤ１抗体）、ＣＴ－０１１（抗ＰＤ１抗体）、ＢＹ５５モノクローナル抗体、ＡＭＰ２２４（抗ＰＤＬ１抗体）、ＢＭＳ－９３６５５９（抗ＰＤＬ１抗体）、ＭＰＬＤ３２８０Ａ（抗ＰＤＬ１抗体）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（抗ＰＤＬ１抗体）およびＹｅｒｖｏｙ／イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ－４チェックポイント阻害剤）から選択される、請求項１２に記載の方法。
  15. 前記癌（cancer）は、癌免疫療法または癌ワクチン治療に反応する任意のタイプの癌である、請求項１に記載の方法。
  16. 前記癌（cancer）は、乳房、卵巣、前立腺、肺、腎臓、胃、結腸、精巣、頭頸部、膵臓、脳、黒色腫、および他の組織器官の腫瘍、並びに急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、Ｔ細胞リンパ性白血病、およびＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫および白血病などの血液腫瘍のうちの１つ以上である、請求項１に記載の方法。
  17. アルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、抗腫瘍抗生物質、モノクローナル抗体、白金剤、植物アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ビンカアルカロイド、タキサン、およびエピポドフィロトキシンから成る群より選択される１つ以上の化学療法剤を前記対象に投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
  18. 前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤は、経口的に投与される、請求項１に記載の方法。
  19. 前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤は、前記対象の腸内細菌叢におけるＡｋｋｅｒｍａｎｓｉａ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ、およびＢｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓの相対的な存在量の増加をもたらす、請求項１に記載の方法。
  20. １）対象への癌免疫療法またはワクチン、および２）前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与を適用することは、
    前記癌免疫療法または前記ワクチンの抗腫瘍効果の増加、
    より強い免疫応答（例えば、ＰＢＭＣ中の抗腫瘍Ｔ細胞頻度の増加）、
    および腫瘍増殖の阻害の増強のうちの１つ以上をもたらす、請求項１に記載の方法。
  21. 免疫機能不全を誘導する癌細胞の能力を阻害するための方法であって、
    １）対象への癌免疫療法またはワクチン、および２）前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の適用を含み、
    前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤の投与は、前記ワクチンまたは前記癌免疫療法の適用と同時に起こる、または、
    前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤の投与は、前記ワクチンまたは前記癌免疫療法の適用の前に起こる、方法。
  22. 前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤の投与は、前記癌ワクチンまたは前記癌免疫療法の適用の前および前記癌ワクチンまたは前記癌免疫療法の適用と同時に起こる、請求項２１に記載の方法。
  23. 前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤の投与は、前記ワクチンまたは前記癌免疫療法の適用の前および前記ワクチンまたは前記癌免疫療法の適用と同時に起こる、請求項２１に記載の方法。
  24. 前記ワクチンは、癌治療のためのワクチン、および／または感染性病原体を治療および／または感染性病原体から保護するためのワクチンである、請求項２１に記載の方法。
  25. 前記対象は、ヒト対象である、請求項２１に記載の方法。
  26. 対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤は、プレバイオティクス薬剤を含む繊維である、請求項２１に記載の方法。
  27. プレバイオティクス薬剤を含む前記線維は、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）、フコイダン、ジャガイモデンプン、オリゴフルクトース、およびイヌリンから選択される、請求項２６に記載の方法。
  28. プレバイオティクス薬剤を含む前記繊維は、２０以上４７以下（例えば、約２８（例えば、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３））の平均重合度を有するゲルベースのイヌリン製剤である、および／または、
    前記ゲルベースのイヌリン製剤は、フルクトオリゴ糖、短鎖フルクトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、トランスガラクトオリゴ糖、ペクチン、キシロオリゴ糖、キトサンオリゴ糖、βグルカン、アラブルガム変性デンプン、耐性ジャガイモデンプン、グアーガム、ビーンガム、ゼラチン、グリセロール、ポリデキストロース、Ｄ－タガトース、アカシア繊維、カロブ、オート麦、およびかんきつ類繊維から選択される、１以上のプレバイオティクス化合物を含む、請求項２６に記載の方法。
  29. 対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤は、メラトニンである、請求項２１に記載の方法。
  30. 前記癌免疫療法は、１以上の免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）阻害剤を含む、請求項２１に記載の方法。
  31. 前記１以上のＩＣＩ阻害剤は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０およびＣＧＥＮ－１５０４９のうちの１つ以上に結合し、その活性をブロックし、および／またはその活性を阻害することができる、請求項３０に記載の方法。
  32. 前記１以上のＩＣＩ阻害剤は、トレメリムマブ（ＣＴＬＡ－４ブロッキング抗体）、抗ＯＸ４０、ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体（抗Ｂ７－Ｈ１；ＭＥＤＩ４７３６）、ＭＫ－３４７５（ＰＤ－１ブロッカー）、ニボルマブ（抗ＰＤ１抗体）、ＣＴ－０１１（抗ＰＤ１抗体）、ＢＹ５５モノクローナル抗体、ＡＭＰ２２４（抗ＰＤＬ１抗体）、ＢＭＳ－９３６５５９（抗ＰＤＬ１抗体）、ＭＰＬＤ３２８０Ａ（抗ＰＤＬ１抗体）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（抗ＰＤＬ１抗体）およびＹｅｒｖｏｙ／イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ－４チェックポイント阻害剤）から選択される、請求項３０に記載の方法。
  33. 前記癌（cancer）は、癌免疫療法または癌ワクチン治療に反応する任意のタイプの癌である、請求項２１に記載の方法。
  34. 前記癌（cancer）は、乳房、卵巣、前立腺、肺、腎臓、胃、結腸、精巣、頭頸部、膵臓、脳、黒色腫、および他の組織器官の腫瘍、並びに急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、Ｔ細胞リンパ性白血病、およびＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫および白血病などの血液腫瘍のうちの１つ以上である、請求項２１に記載の方法。
  35. アルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、抗腫瘍抗生物質、モノクローナル抗体、白金剤、植物アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ビンカアルカロイド、タキサン、およびエピポドフィロトキシンから成る群より選択される１つ以上の化学療法剤を前記対象に投与することをさらに含む、請求項２１に記載の方法。
  36. 前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤は、経口的に投与される、請求項２１に記載の方法。
  37. 前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤は、前記対象の腸内細菌叢におけるＡｋｋｅｒｍａｎｓｉａ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ、およびＢｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓの相対的な存在量の増加をもたらす、請求項２１に記載の方法。
  38. １）対象への癌免疫療法またはワクチン、および２）前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与を適用することは、
    前記癌免疫療法または前記ワクチンの抗腫瘍効果の増加、
    より強い免疫応答（例えば、ＰＢＭＣ中の抗腫瘍Ｔ細胞頻度の増加）、
    および腫瘍増殖の阻害の増強のうちの１つ以上をもたらす、請求項２１に記載の方法。
  39. 対象における癌を治療するための方法であって、１）対象に対する癌免疫療法または癌ワクチン、および２）前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与を前記対象に適用することを含む、方法。
  40. 前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤の投与は、前記癌ワクチンまたは前記癌免疫療法の適用の前、同時、および／または後に起こる、請求項３９に記載の方法。
  41. 前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤の投与は、前記癌ワクチンまたは前記癌免疫療法の適用と同時に起こる、請求項３９に記載の方法。
  42. 前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤の投与は、前記癌ワクチンまたは前記癌免疫療法の適用の前に起こる、請求項３９に記載の方法。
  43. 前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤の投与は、前記癌ワクチンまたは前記癌免疫療法の適用の前および前記癌ワクチンまたは前記癌免疫療法の適用と同時に起こる、請求項３９に記載の方法。
  44. 前記対象は、ヒト対象である、請求項３９に記載の方法。
  45. 対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤は、プレバイオティクス薬剤を含む繊維である、請求項３９に記載の方法。
  46. プレバイオティクス薬剤を含む前記線維は、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）、フコイダン、ジャガイモデンプン、オリゴフルクトース、およびイヌリンから選択される、請求項４５に記載の方法。
  47. プレバイオティクス薬剤を含む前記繊維は、２０以上４７以下（例えば、約２８（例えば、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３））の平均重合度を有するゲルベースのイヌリン製剤である、および／または、
    前記ゲルベースのイヌリン製剤は、フルクトオリゴ糖、短鎖フルクトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、トランスガラクトオリゴ糖、ペクチン、キシロオリゴ糖、キトサンオリゴ糖、βグルカン、アラブルガム変性デンプン、耐性ジャガイモデンプン、グアーガム、ビーンガム、ゼラチン、グリセロール、ポリデキストロース、Ｄ－タガトース、アカシア繊維、カロブ、オート麦、およびかんきつ類繊維から選択される、１以上のプレバイオティクス化合物を含む、請求項４５に記載の方法。
  48. 対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤は、メラトニンである、請求項３９に記載の方法。
  49. 前記癌免疫療法は、１以上の免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）阻害剤を含む、請求項３９に記載の方法。
  50. 前記１以上のＩＣＩ阻害剤は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０およびＣＧＥＮ－１５０４９のうちの１つ以上に結合し、その活性をブロックし、および／またはその活性を阻害することができる、請求項４９に記載の方法。
  51. 前記１以上のＩＣＩ阻害剤は、トレメリムマブ（ＣＴＬＡ－４ブロッキング抗体）、抗ＯＸ４０、ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体（抗Ｂ７－Ｈ１；ＭＥＤＩ４７３６）、ＭＫ－３４７５（ＰＤ－１ブロッカー）、ニボルマブ（抗ＰＤ１抗体）、ＣＴ－０１１（抗ＰＤ１抗体）、ＢＹ５５モノクローナル抗体、ＡＭＰ２２４（抗ＰＤＬ１抗体）、ＢＭＳ－９３６５５９（抗ＰＤＬ１抗体）、ＭＰＬＤ３２８０Ａ（抗ＰＤＬ１抗体）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（抗ＰＤＬ１抗体）およびＹｅｒｖｏｙ／イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ－４チェックポイント阻害剤）から選択される、請求項４９に記載の方法。
  52. 前記癌は、癌免疫療法または癌ワクチン治療に反応する任意のタイプの癌である、請求項３９に記載の方法。
  53. 前記癌は、乳房、卵巣、前立腺、肺、腎臓、胃、結腸、精巣、頭頸部、膵臓、脳、黒色腫、および他の組織器官の腫瘍、並びに急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、Ｔ細胞リンパ性白血病、およびＢ細胞リンパ腫を含むリンパ腫および白血病などの血液腫瘍のうちの１つ以上である、請求項３９に記載の方法。
  54. アルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、抗腫瘍抗生物質、モノクローナル抗体、白金剤、植物アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ビンカアルカロイド、タキサン、およびエピポドフィロトキシンから成る群より選択される１つ以上の化学療法剤を前記対象に投与することをさらに含む、請求項３９に記載の方法。
  55. 前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤は、経口的に投与される、請求項３９に記載の方法。
  56. 対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤は、前記対象の腸内細菌叢におけるＡｋｋｅｒｍａｎｓｉａ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ、およびＢｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓの相対的な存在量の増加をもたらす、請求項３９に記載の方法。
  57. １）対象への癌免疫療法または癌ワクチン、および２）前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与を適用することは、
    前記癌免疫療法または癌ワクチンの抗腫瘍効果の増加、
    より強い免疫応答（例えば、ＰＢＭＣ中の抗腫瘍Ｔ細胞頻度の増加）、
    および腫瘍増殖の阻害の増強のうちの１つ以上をもたらす、請求項３９に記載の方法。
  58. 腸内細菌叢活性の調節不全を特徴とする状態を治療または予防するための方法であって、前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の前記対象への投与を含む、方法。
  59. 前記対象は、ヒト対象である、請求項５８に記載の方法。
  60. 対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤は、プレバイオティクス薬剤を含む繊維である、請求項５８に記載の方法。
  61. プレバイオティクス薬剤を含む前記線維は、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）、フコイダン、ジャガイモデンプン、オリゴフルクトース、およびイヌリンから選択される、請求項６０に記載の方法。
  62. プレバイオティクス薬剤を含む前記繊維は、２０以上４７以下（例えば、約２８（例えば、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３））の平均重合度を有するゲルベースのイヌリン製剤である、および／または、
    前記ゲルベースのイヌリン製剤は、フルクトオリゴ糖、短鎖フルクトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、トランスガラクトオリゴ糖、ペクチン、キシロオリゴ糖、キトサンオリゴ糖、βグルカン、アラブルガム変性デンプン、耐性ジャガイモデンプン、グアーガム、ビーンガム、ゼラチン、グリセロール、ポリデキストロース、Ｄ－タガトース、アカシア繊維、カロブ、オート麦、およびかんきつ類繊維から選択される、１以上のプレバイオティクス化合物を含む、請求項６０に記載の方法。
  63. 対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤は、メラトニンである、請求項５８に記載の方法。
  64. 対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤は、経口的に投与される、請求項５８に記載の方法。
  65. 前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤は、前記対象の腸内細菌叢におけるＡｋｋｅｒｍａｎｓｉａ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ、およびＢｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓの相対的な存在量の増加をもたらす、請求項５８に記載の方法。
  66. 腸内細菌叢活性の調節不全を特徴とする前記状態は、自己免疫疾患、神経疾患、糖尿病、および／または肥満である、請求項５８に記載の方法。
  67. 腸内細菌叢活性の調節不全を特徴とする前記状態は、リウマチ性関節炎、多発性硬化症糖尿病（例えば、１型糖尿病）、甲状腺の自己免疫疾患（例えば、橋本甲状腺炎、グレーブス病）、甲状腺関連眼症および真皮症、副甲状腺機能低下症、アジソン病、早発性卵巣不全、自己免疫性甲状腺機能低下症、自己免疫性下垂体疾患、免疫性胃炎（immunogastritis）、悪性アンゲミス（pernicious angemis）、セリアック病、白斑、重症筋無力症、尋常性天疱瘡およびバリアント、水疱性類天疱瘡炎、ジューリング疱疹状皮膚炎、後天性表皮水疱症、全身性硬化症、混合性結合組織病、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、グッドパスチャー症候群、リウマチ性心疾患、自己免疫性多腺性症候群１型、アイカルディ－ゴーティエール症候群、急性膵炎加齢黄斑変性、アルコール性肝疾患、肝線維症、転移、心筋梗塞、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、パーキンソン病、多発性関節炎／胎児性および新生児貧血、敗血症、ならびに炎症性腸疾患から選択される、請求項５８に記載の方法。
  68. 以下の追加の治療薬：疾患修飾性抗リウマチ薬（例えば、レフルノミド、メトトレキサート、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン）、生物学的製剤（例えば、リツキシマブ、インフリキシマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、ゴリムマブ）、非ステロイド性抗炎症薬（例えば、イブプロフェン、セレコキシブ、ケトプロフェン、ナプロキセン、ピロキシカム、ジクロフェナク）、鎮痛薬（例えば、アセトアミノフェン、トラマドール）、免疫調節薬（例えば、アナキンラ、アバタセプト）、グルココルチコイド（例えば、プレドニゾン、メチルプレドニゾン）、ＴＮＦ－α阻害剤（例えば、アダリムマブ、セルトリズマブペゴル、エタネルセプト、ゴリムマブ、インフリキシマブ）、ＩＬ－１阻害剤、およびメタロプロテアーゼ阻害剤のうち１つ以上を前記対象に投与することを含む、請求項５８に記載の方法。いくつかの実施形態において、前記治療薬は、インフリキシマブ、アダリムマブ、エタネルセプト、非経口金または経口金を含むが、これらに限定されない。
  69. １）対象へのワクチン、および２）前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる薬剤の投与を適用することを通じて、前記ワクチンの効果を増加させるための方法。
  70. 前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤の投与は、前記ワクチンの適用の前、同時、および／または後に起こる、請求項６９に記載の方法。
  71. 前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤の投与は、前記ワクチンの適用と同時に起こる、または、
    前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤の投与は、前記ワクチンの適用の前に起こる、請求項６９に記載の方法。
  72. 前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤の投与は、前記ワクチンの適用の前および前記ワクチンの適用と同時に起こる、請求項６９に記載の方法。
  73. 前記ワクチンは、癌治療のためのワクチン、および／または感染性病原体を治療および／または感染性病原体から保護するためのワクチンである、請求項６９に記載の方法。
  74. 前記対象は、ヒト対象である、請求項６９に記載の方法。
  75. 対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤は、プレバイオティクス薬剤を含む繊維である、請求項６９に記載の方法。
  76. プレバイオティクス薬剤を含む前記線維は、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）、フコイダン、ジャガイモデンプン、オリゴフルクトース、およびイヌリンから選択される、請求項７５に記載の方法。
  77. プレバイオティクス薬剤を含む前記繊維は、２０以上４７以下（例えば、約２８（例えば、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３））の平均重合度を有するゲルベースのイヌリン製剤である、および／または、
    前記ゲルベースのイヌリン製剤は、フルクトオリゴ糖、短鎖フルクトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、トランスガラクトオリゴ糖、ペクチン、キシロオリゴ糖、キトサンオリゴ糖、βグルカン、アラブルガム変性デンプン、耐性ジャガイモデンプン、グアーガム、ビーンガム、ゼラチン、グリセロール、ポリデキストロース、Ｄ－タガトース、アカシア繊維、カロブ、オート麦、およびかんきつ類繊維から選択される、１以上のプレバイオティクス化合物を含む、請求項７５に記載の方法。
  78. 対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤は、メラトニンである、請求項６９に記載の方法。
  79. 前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤は、経口的に投与される、請求項６９に記載の方法。
  80. 前記対象の腸内細菌叢の豊富さおよび多様性を高めることができる前記薬剤は、前記対象の腸内細菌叢におけるＡｋｋｅｒｍａｎｓｉａ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ、およびＢｕｔｙｒｉｃｉｃｏｃｃｕｓの相対的な存在量の増加をもたらす、請求項６９に記載の方法。
  81. １つ以上の（例えば、複合体化、複合化、カプセル化、吸収、吸着、混合された）プロバイオティクス細胞に関連するプレバイオティクス製剤を含む、組成物。
  82. 前記プレバイオティクス製剤は、フルクトオリゴ糖、短鎖フルクトオリゴ糖、イヌリン、イソマルトオリゴ糖、トランスガラクトオリゴ糖、ペクチン、キシロオリゴ糖、キトサンオリゴ糖、βグルカン、アラブルガム変性デンプン、耐性ジャガイモデンプン、グアーガム、ビーンガム、ゼラチン、グリセロール、ポリデキストロース、Ｄ－タガトース、アカシア繊維、カロブ、オート麦、およびかんきつ類繊維から選択される１つ以上のプレバイオティクス化合物を含む、請求項８１に記載の組成物。
  83. 前記プレバイオティクス化合物はゲルベースである、請求項８１に記載の組成物。
  84. 前記プレバイオティクス化合物はゲルベースのイヌリンである、請求項８３に記載の組成物。
  85. １つ以上の前記プロバイオティクス細胞は、当該細胞が投与された対象の腸内細菌叢を変化させることができる、請求項８１に記載の組成物。
  86. 対象に対する経口投与のために構成されている、請求項８１に記載の組成物。
  87. １つ以上の前記プロバイオティクス細胞は、有益な細菌を含む、請求項８１に記載の組成物。
  88. 前記有益な細菌は、Saccharomyces cereviseae、Bacillus coagulans、Bacillus licheniformis、Bacillus subtilis、Bifidobacterium angulatum、Bifidobacterium animalis、Bifidobacterium bifidum、Bifidobacterium breve、Bifidobacterium infantis、Bifidobacterium lactis、Bifidobacterium longum、Enterococcus faecium、Enterococcus faecalis、Lactobacillus acidophilus、Lactobacillus amylovorus、Lactobacillus alimentarius、Lactobacillus bulgaricus、Lactobacillus casei subsp. casei、Lactobacillus casei Shirota、Lactobacillus curvatus、Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis、Lactobacillus fermentum、Lactobacillus farciminus、Lactobacillus gasseri、Lactobacillus helveticus、Lactobacillus johnsonii、Lactobacillus lacti、Lactobacillus paracasei、Lactobacillus pentosaceus、Lactobacillus plantarum、Lactobacillus reuteri、Lactobacillus rhamnosus (Lactobacillus GG)、Lactobacillus sake、Lactobacillus salivarius、Lactococcus lactis、Lactobacillus thermotolerans、Lactobacillus mucosae、Micrococcus varians、Pediococcus acidilactici、Pediococcus pentosaceus、Pediococcus acidilactici、Pediococcus halophilus、Streptococcus faecalis、Streptococcus thermophilus、Staphylococcus carnosus、およびStaphylococcus xylosusのうち１つ以上を含む、請求項８７に記載の組成物。
  89. 糖衣錠、ゲルカプセル、ゲル、エマルジョン、錠剤、ウェハーカプセル、ヒドロゲル、ナノファイバーゲル、エレクトロスピン繊維、食品バー、菓子、発酵乳、発酵チーズ、チューインガム、粉末または練り歯磨きである、請求項８１に記載の組成物。
  90. 対象の消化系においてプロバイオティクス生物の増殖を増加させる方法であって、請求項８１に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
  91. 前記対象は、哺乳動物対象である、請求項９０に記載の方法。
  92. 前記対象は、ヒト対象である、請求項９０に記載の方法。
  93. ゲルベースのプレバイオティクス製剤を含む、組成物。
  94. 経口摂取のために製剤化されている、請求項９３に記載の組成物。
  95. 糖衣錠、ゲルカプセル、ゲル、エマルジョン、錠剤、ウェハーカプセル、ヒドロゲル、ナノファイバーゲル、エレクトロスピン繊維、食品バー、菓子、発酵乳、発酵チーズ、チューインガム、粉末または練り歯磨きである、請求項９３に記載の組成物。
  96. 前記プレバイオティクス製剤は、１つ以上のプロバイオティクス生物に関連する、請求項９３に記載の組成物。
  97. １つ以上の前記プロバイオティクス生物は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ種およびＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ種から選択される、請求項９６に記載の組成物。
  98. 前記ゲルベースのプレバイオティクス製剤は、Bordetella、Borrelia、Brucella、Campylobacter、Chlamydia並びにChlamydophila、Clostridium、Corynebacterium、Enterococcus、Escherichia、Francisella、Haemophilus、Helicobacter、Legionella、Leptospira、Listeria、Mycobacterium、Mycoplasma、Neisseria、Pseudomonas、Rickettsia、Salmonella、Shigella、Staphylococcus、Streptococcus、Treponema、VibrioおよびYersiniaに特異的な１以上のバクテリオファージに関連する、請求項９６に記載の組成物。
  99. １つ以上の前記プロバイオティクス生物は、L.acidophilus、L.amylovorus、L.brevis、L.casei、L.casei subsp. rhamnosus (Lactobacillus GG)、L.caucasicus、L.crispatus、L.delbrueckii subsp. bulgaricus (L.bulgaricus)、L.fermentum (L.fermenti)、L.gasseri、L.helveticus、L.johnsonii、L.lactis、L.leichmannii、L.paracasei、L.plantarum、L.reuteriまたはL.rhamnosusから選択される、請求項９６に記載の組成物。
  100. 前記ゲルベースのプレバイオティクス製剤は、フルクトオリゴ糖、短鎖フルクトオリゴ糖、イヌリン、イソマルトオリゴ糖、トランスガラクトオリゴ糖、ペクチン、キシロオリゴ糖、キトサンオリゴ糖、βグルカン、アラブルガム変性デンプン、耐性ジャガイモデンプン、グアーガム、ビーンガム、ゼラチン、グリセロール、ポリデキストロース、Ｄ－タガトース、アカシア繊維、カロブ、オート麦、およびかんきつ類繊維から選択される、１以上のプレバイオティクス化合物を含む、請求項９６に記載の組成物。
  101. 感染性病原体、自己免疫疾患、神経障害、および／または肥満を治療または予防するための方法であって、請求項９３に記載の組成物を対象に投与することを含む、方法。
  102. 感染性病原体、自己免疫疾患、神経障害、および／または肥満を治療または予防するための方法であって、請求項８１に記載の組成物を対象に投与することを含む、方法。
  103. フルクトオリゴ糖、短鎖フルクトオリゴ糖、イヌリン、イソマルトオリゴ糖、トランスガラクトオリゴ糖、ペクチン、キシロオリゴ糖、キトサンオリゴ糖、βグルカン、アラブルガム変性デンプン、耐性ジャガイモデンプン、グアーガム、ビーンガム、ゼラチン、グリセロール、ポリデキストロース、Ｄ－タガトース、アカシア繊維、カロブ、オート麦、およびかんきつ類繊維から選択される、（例えば、複合体化、複合化、カプセル化、吸収、吸着、混合された）１つ以上のプレバイオティクス化合物に関連するプレバイオティクス製剤を含む、組成物。
  104. 前記プレバイオティクス化合物は、ゲルベースである、請求項１０３に記載の組成物。
  105. 前記プレバイオティクス化合物は、ゲルベースのイヌリンである、請求項１０４に記載の組成物。
  106. 対象に対する経口投与のために構成されている、請求項１０３に記載の組成物。
  107. 糖衣錠、ゲルカプセル、ゲル、エマルジョン、錠剤、ウェハーカプセル、ヒドロゲル、ナノファイバーゲル、エレクトロスピン繊維、食品バー、菓子、発酵乳、発酵チーズ、チューインガム、粉末または練り歯磨きである、請求項１０３に記載の組成物。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3181432A1 (en) * 2020-06-16 2021-12-23 Yoon-Keun Kim Composition for preventing or treating neurological or mental disorders comprising vesicles derived from lactobacillus paracasei
CN113215030B (zh) * 2021-04-12 2022-10-25 天津中医药大学 约氏乳杆菌eu03及其用途
TW202317162A (zh) * 2021-06-16 2023-05-01 南韓商Ｇｉ細胞股份有限公司 發酵乳酸桿菌菌株與自然殺手細胞用於組合療法以抑制體重增加以及預防或治療代謝疾病的用途
CN114344342B (zh) * 2021-12-29 2023-06-30 广东南芯医疗科技有限公司 副干酪乳杆菌Lp. R3在制备预防或治疗肿瘤药物中的应用
CN114470008B (zh) * 2022-01-26 2024-01-26 佛山市第一人民医院 短乳杆菌或罗伊氏乳杆菌在制备治疗卵巢早衰的产品中的应用
CN115109718B (zh) * 2022-05-25 2023-09-12 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） 一株屎肠球菌菌株及其用途
CN114984061A (zh) * 2022-07-15 2022-09-02 比菲德(北京)生物科技有限公司 一种用于缓解自身免疫性疾病的益生菌粉及其应用
CN117159596A (zh) * 2023-07-17 2023-12-05 浙江大学 肠乳杆菌atcc 49335在预防和/或治疗结直肠癌产品制备中的应用

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6149962A (en) * 1996-03-01 2000-11-21 Kraft Foods, Inc. Gel composition method of making and products containing same
US6706287B2 (en) * 2001-05-15 2004-03-16 Kibow Biotech Inc. Prebiotic and probiotic compositions and methods for their use in gut-based therapies
EP3200766B1 (en) * 2014-09-30 2019-07-03 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Synergistic prebiotic composition
US20190282632A1 (en) * 2014-10-23 2019-09-19 Institut Gustave Roussy Methods and products for modulating microbiota composition for improving the efficacy of a cancer treatment with an immune checkpoint blocker
US20160206666A1 (en) * 2014-12-22 2016-07-21 Synlogic, Inc. Bacteria engineered to treat diseases that benefit from reduced gut inflammation and/or tighten gut mucosal barrier
LT3285777T (lt) * 2015-04-23 2021-11-25 Kaleido Biosciences, Inc. Glikanų terapiniai preparatai ir gydymo būdai
EP3518946A4 (en) * 2016-09-27 2020-09-09 Board of Regents, The University of Texas System METHODS TO IMPROVE IMMUNE CHECKPOINT BLOCKING TREATMENT BY MODULATING THE MICROBIOME
WO2018094190A2 (en) * 2016-11-18 2018-05-24 Sanford Burnham Prebys Medical Discovery Institute Gut microbiota and treatment of cancer
US20200129570A1 (en) * 2017-06-02 2020-04-30 Board Of Regents, The University Of Texas System Specific Bacterial Species and Metabolite That Improves Immune Checkpoint Inhibitor Therapy Efficacy
CN112805020A (zh) * 2018-09-25 2021-05-14 国立研究开发法人国立循环器病研究中心 抗肿瘤效果增强剂

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