JP2022549303A - 免疫細胞を拡大増殖するためのｃｂｌ阻害剤および組成物 - Google Patents

免疫細胞を拡大増殖するためのｃｂｌ阻害剤および組成物 Download PDF

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Abstract

免疫細胞の拡大増殖を強化して細胞ベース免疫療法の有効性を増加させる新規Ｃｂｌ阻害剤を使用する方法および組成物が開示される。細胞ベース免疫療法方法および組成物も提供される。

Description

[0001] 相互参照
本出願は、２０１９年９月２４日に出願された米国特許仮出願第６２／９０５，１２４号、２０１９年１２月２７日に出願された第６２／９５４，３２３号、２０２０年１月１５日に出願された第６２／９６１，５９６号、２０２０年２月１８日に出願された第６２／９７８，２５４号、および２０２０年５月２９日に出願された第６３／０３２，４６２号の利益を主張するものである、これら文献の各々の内容は、それらの全体が本明細書に組み込まれる。
[0002] 本明細書には、細胞ベース免疫療法(cell-based immunotherapies)におけるＣｂｌ阻害剤の使用に関する方法が提供される。本開示の方法および組成物は、例えば、免疫細胞組成物の調製、ならびにＴ細胞機能不全およびがんを治療するためのそれらの使用に有用である。
[0003] Ｃｂｌ（カシタスＢ系統リンパ腫）タンパク質は、細胞シグナル伝達、タンパク質ユビキチン化、およびタンパク質基質の分解に関与するユビキチンリガーゼのファミリーの一部である。このファミリーのメンバーとしては、ＲＩＮＧ型Ｅ３リガーゼｃＣｂｌ、Ｃｂｌ－ｂ、およびＣｂｌ－ｃが挙げられる。Ｃｂｌ－ｂは、免疫活性化の負の調節因子として機能するため、免疫系において重要な役割を果たす。Ｃｂｌ－ｂは、ヒトＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞で高度に発現され、その発現は、ＣＤ２８およびＣＴＬＡ－４ならびに他の共刺激シグナルおよび阻害シグナルにより厳密に調節される。Ｌｕｔｚ－Ｎｉｃｏｌａｄｏｎｉら、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、５巻（５８号）：１～１４頁（２０１５年）を参照されたい。
[0004] Ｃｂｌ－ｂは、Ｔ細胞活性化の負の調節に不可欠の役割を果たす。Ｔ細胞は、従来、活性化のために２つのシグナルを必要とする。１つ目は、Ｔ細胞受容体とＭＨＣ分子により提示されるペプチドとの相互作用により提供され、２つ目は、抗原提示細胞上の共刺激分子により提供される。Ｃｂｌ－ｂは、ＮＫ細胞の活性化およびエフェクター機能に顕著な役割を果たす。Ｂ細胞では、Ｃｂｌ－ｂは、クラスター化Ｂ細胞抗原受容体（ＢＣＲ）へと動員され、エンドサイトーシスされたＢＣＲが後期エンドソーム内へと進入するために必要である。Ｖｅｓｅｌｉｔｓら、ＰＬＯＳ Ｏｎｅ、９巻（３号）：ｅ８９７９２頁（２０１４年）を参照されたい。骨髄細胞でのＣｂｌ－ｂ活性は、完全には特徴付けられていないが、ＴＬＲシグナル伝達の負のフィードバックループに役割を含み、脂肪酸によるマクロファージ活性化を調節する。
[0005] 研究によると、Ｃｂｌ－ｂ欠損Ｔ細胞は、抗原認識受容体および共刺激分子（例えば、ＣＤ２８）による活性化に関してより低い閾値を示すことが見出されている。例えば、Ｔ細胞においてＣｂｌ－ｂが失われると、Ｔ細胞の活性化および増殖中のＣＤ２８共刺激の必要条件が切り離される。Ｂａｃｈｍａｉｅｒ，Ｋ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、４０３巻（６７６６号）：２１１～２１６頁（２０００年）を参照されたい。このようなＣｂｌ－ｂ－／－Ｔ細胞は、Ｔ細胞アネルギー、つまりＴ細胞が機能的に不活化され、Ｔ細胞増殖が大幅に損なわれる耐性機序に対して大幅に抵抗性である。Ｊｅｏｎら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、２１巻（２号）：１６７～１７７頁（２００４年）およびＳｃｈｗａｒｔｚら、Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２１巻：３０５～３４頁（２００３年）を参照されたい。この説を支持する証拠としては、ｃｂｌ－ｂノックアウトマウスにおけるＣｂｌ－ｂの喪失が、Ｔ細胞耐性の誘導障害および自己免疫の悪化をもたらすという事実が挙げられる。Ｊｅｏｎら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、２１巻（２号）：１６７～１７７（２００４年）を参照されたい。また、重要なことに、マウスにおけるＣｂｌ－ｂの喪失は、主に細胞傷害性Ｔ細胞に依存するロバストな抗腫瘍応答をもたらした。一研究では、Ｃｂｌ－ｂ－／－ＣＤ８＋Ｔ細胞は、Ｔ制御性細胞媒介性抑制に対して抵抗性であり、活性化および腫瘍浸潤の強化を呈することが示された。ナイーブＣｂｌ－ｂ－／－ＣＤ８＋Ｔ細胞の療法的移入は、樹立腫瘍の拒絶を媒介するのに十分だった。Ｌｏｅｓｅｒら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、２０４巻（４号）：８７９～８９１頁（２００７年）を参照されたい。最近の研究では、Ｃｂｌ－ｂもＮＫ細胞の活性化に役割を果たしていることが示されている。Ｃｂｌ－ｂの遺伝的欠失またはそのＥ３リガーゼ活性の標的不活化は、ＮＫ細胞が、マウスモデルにおいて転移性腫瘍を自発的に拒絶することを可能にした。Ｐａｏｌｉｎｏら、Ｎａｔｕｒｅ、５０７巻（７４９３号）：５０８～５１２頁を参照されたい。
[0006] 養子細胞療法（ACT）は、転移性黒色腫、神経膠腫、および腎癌を含む、そうでなければ治療抵抗性のがんに使用される。ＡＣＴでは、患者自身の血液または腫瘍組織からＮＫ細胞またはＴ細胞を採取し、次いで実験室にて大量に成長させ、次いで拡大増殖した細胞を患者に戻して移入し、がんに対する患者の免疫系応答を強化させる。ＡＣＴの一部の変法では、Ｔ細胞またはＮＫ細胞が患者のがん細胞を標的にして、がん細胞をより効率的に死滅させることができるように、遺伝子操作を使用してＴ細胞またはＮＫ細胞を改変する。養子細胞療法のタイプとしては、ナチュラルキラー（NK）細胞療法、腫瘍浸潤性リンパ球（TIL）療法、遺伝子操作Ｔ細胞受容体療法（TCR）、およびキメラ抗原受容体Ｔ細胞（CAR T）療法が挙げられる。
[0007] 名称が示唆するように、ＮＫ細胞療法では、自然免疫系の一部であり、感染症およびがん細胞を含む疾患に対する防御の最前線であるＮＫ細胞が使用される。ＮＫ細胞は、健常細胞とウイルスに感染した細胞または自然に形質転換された細胞とを区別する先天的能力があるため、細胞ベース免疫療法にとって魅力的なツールである。ＮＫ細胞療法としては、養子自家または同種異系細胞療法が挙げられ、ＮＫ細胞は、造血幹細胞移植を支援するために使用される。細胞は、治療前の患者から得られるか、関連ドナーから得られるか、または部分的にＨＬＡが一致する同種異系ＮＫ細胞である。また、養子移入細胞療法(Adoptive transferred cell therapy)は、ドナー、患者、臍帯血、分化した誘導多能性幹細胞に由来するか、または造血幹細胞に由来するＮＫ細胞と共に使用される。
[0008] ＴＩＬ療法は、患者の腫瘍組織からＴＩＬを単離および拡大増殖することを含む。浸潤性免疫細胞は、腫瘍成長および進行を制御するように機能することができるが、逆説的に、腫瘍の増殖促進を可能にする免疫抑制環境の作出を援助することもできる。Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ、Ｓｃｉｅｎｃｅ；３３１巻（６０２４号）：１５６５～７０頁（２０１１年）を参照されたい。腫瘍免疫回避の重要な機序は、腫瘍細胞上および浸潤性免疫細胞上の両方に、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－Ｌ１などの免疫チェックポイントモジュレーターが発現されることである。免疫チェックポイント阻害剤は、こうしたシグナル伝達経路を遮断することにより、宿主免疫系を再活性化して腫瘍を認識および制御することができる。これは、幾つかの現在療法の作用機序である。Ｐａｒｄｏｌｌ、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ、１２巻（４号）：２５２～６４頁（２０１２年）、ならびにＳａｌｇａｄｏら、Ａｄｖ．Ａｎａｔ．Ｐａｔｈｏｌ．、２４巻（５号）：２３５～２５１頁、および２４巻（６号）：３１１～３３５頁（２０１７年）を参照されたい。
[0009] ＦＤＡにより画期的療法指定が付与されているＬＮ－１４５療法は、再発性、転移性、または遺残性子宮頸がんを有する患者を治療するためのＴＩＬ療法である。ＬＮ－１４５療法の第ＩＩ相臨床研究では、腫瘍組織が患者から外科的に単離され、ＧＭＰ施設へと送付られ、そこでＴＩＬが単離され、３週間の期間にわたって拡大増殖される。輸注の１週間前に、患者には、－８日目および－７日目にシクロホスファミドＩＶ、－６日目～－２日目にフルダラビンＩＶ、ならびに－１日目にペムブロリズマブ（ヒト化抗ＰＤ－１抗体）を投与することを含むプレコンディショニング療法が施される。次いで、患者は、自家拡大増殖ＴＩＬを受け、続いて＋１～＋４日目にアルデスロイキンＩＶを受ける。次いで、患者は、疾患進行または許容できない毒性の非存在下で、２１日毎に１２か月間にわたって１サイクルのペムブロリズマブを受ける。
[00010] ＴＣＲ療法は、親和性が強化された腫瘍特異的Ｔ細胞受容体（TCR）遺伝子を発現し、それによりがん細胞を死滅させるようにＴ細胞を遺伝子操作することに関する。手短に言えば、自家Ｔ細胞を、アフェレーシスにより収集し、特定の腫瘍抗原を認識するＴ細胞を発現するように、例えばレンチウイルスベクターを使用してｉｎ ｖｉｔｒｏで形質転換する。形質転換細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏで拡大増殖してから、患者に輸注する。再輸注の７日前に、患者には、リンパ球クリアランスのために、低用量のシクロホスファミドおよび低用量のフルダラビンを投与する。拡大増殖ＴＣＲ－Ｔ細胞を（１回でまたは段階的に、のいずれかで）輸注した後、ＩＬ－２を１４日間にわたって皮下投与する（２５０，０００ＩＵ／２回／日）。この療法は効果的ではあるが、抗原が健常組織でも発現している場合、有害効果を引き起こす可能性がある。
[00011] キメラ抗原受容体療法（CAR T）では患者のＴ細胞が使用され、それを採取し、抗原結合性ドメイン、典型的には単鎖可変断片、およびＣＤ１９、ＣＤ２８、またはＣＤ１３７などの受容体に由来する追加の細胞内共刺激ドメインで構成されるキメラＴ細胞受容体を発現するように遺伝子操作する。ＣＡＲ Ｔベース細胞治療の１つ利点は、ＣＡＲ Ｔ細胞が、ＭＨＣ上に発現されている認識抗原の非存在下でも（ＴＩＬおよびＴＣＲベース細胞治療とは対照的に）がん細胞に結合することができることである。ＣＡＲ Ｔベース細胞治療は、再発性がんの治療がＦＤＡ承認されている。例えば、ＫＹＭＲＩＡＨ（登録商標）（チサゲンレクロイセル）は、小児および若年成人の再発性／難治性Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｂ細胞ＡＬＬ）の治療がＦＤＡ承認されている。患者Ｔ細胞を取り出し、マウス抗ＣＤ１９単鎖抗体断片（scFv）、ならびにＴ細胞シグナル伝達（CD3-ζ）ドメインおよび共刺激（4-1BB）ドメインを含む細胞内部分を有するＣＡＲを発現するように、レンチウイルスベクターを使用して形質導入する。アキシカブタゲン・シロロイセル（Axicabtagene ciloleucel）（YESCARTA（登録商標））は、少なくとも２つの以前の治療レジメンを受けた後にがんが進行した大細胞型Ｂ細胞リンパ腫を有する成人のＦＤＡ承認ＣＡＲ Ｔベース細胞治療である。Ｔ細胞を、白血球アフェレーシスにより患者から取り出し、ＣＤ３－ζ遺伝子およびＣＤ２８遺伝子に由来する２つのシグナル伝達ドメインに連結されている、ＣＤ１９に特異的なマウス単鎖可変断片（scFv）を有するＣＡＲを発現するように、ｉｎ ｖｉｔｒｏで形質導入する。
[00012] 現行のＣＡＲ Ｔベース細胞療法には、少なからぬ制限がある。現行のＣＡＲ Ｔベース細胞療法は、Ｔ細胞が少な過ぎて供与することができない患者にとって効果的な療法ではない場合がある。標的抗原を発現する正常細胞との交差反応性も問題となり得る。加えて、ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞により１か月の寛解を達成した、大細胞型Ｂ細胞リンパ腫を有する患者のおよそ３０～５０％が最終的に再発を起こす。ＳｈａｈおよびＦｒｙ、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１６巻：３７２～３８５頁（２０１９年）を参照されたい。最後に、ＣＡＲ Ｔベース細胞治療は、固形腫瘍に対して低い有効性を示している。
[00013] ＣＡＲ－ＮＫ細胞療法は、患者臍帯血、健常ドナー、幹細胞、またはＮＫ由来細胞株に由来するＮＫ出発物質を選択的に拡大増殖することを含む。ＮＫ細胞を、ＣＤ３＋Ｔ細胞の枯渇およびＣＤ５６＋細胞のポジティブ選択により細胞集団内で濃縮させ、次いでフィーダー細胞、ならびにＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＬ－１２、およびＩＬ－１８を含むサイトカインの存在下で選択的に拡大増殖させる。次にそれらを、例えばレンチウイルスベクター、レトロウイルスベクターもしくはレトロウイルス、トランスポゾン、またはＣＲＩＳＰＲを使用した遺伝子操作に供してから、ＩＬ－２の存在下で最終的に拡大増殖させる。細胞を、もう一度ＣＤ３＋Ｔ細胞枯渇にかけ、患者へと輸注するために製剤化するかまたは将来の輸注のために凍結保存する。Ｔｒａｇｅｒ、Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｉｎｓｉｇｈｔｓ、５巻（５号）：５８５～６００頁（２０１１年）を参照されたい。同種異系ＣＡＲ－ＮＫ細胞の最近の第１相および第２相治験では、１１人中７人の患者でリンパ腫または慢性リンパ性白血病の完全寛解が実証された。Ｌｉｕら、２０２０年、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３８２巻：５４５～５５３頁を参照されたい。
[00014] 上記に記載の細胞ベース免疫療法が有望であるにも関わらず、多数の患者は、特に、ベースラインにおいて欠損性であり免疫細胞数が少ない集中的に治療された対象から免疫細胞を収集または製造することができないため、そうした免疫療法から利益を得ることができない。十分な数の免疫細胞を製造することができる患者の場合であっても、滲出性免疫細胞(effused immune cells)の生着を向上させることにより、またはそれらの応答の耐久性を増加させることにより、臨床転帰を向上させることができる。このように、より効果的な免疫細胞療法が必要とされている。
[00015] 幾つかの態様では、本明細書では、Ｃｂｌ阻害剤により細胞治療を強化するための方法および組成物が提供される。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、採取前のｉｎ ｖｉｖｏでの免疫細胞の拡大増殖を強化する。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、ｅｘ ｖｉｖｏでの免疫細胞の初期拡大増殖を強化する。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、ｅｘ ｖｉｖｏでの免疫細胞の急速拡大増殖を強化する。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、ｅｘ ｖｉｖｏでの免疫細胞の初期拡大増殖を強化し、免疫細胞の第２の急速拡大増殖の必要性を排除する。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、共刺激の非存在下で免疫細胞を活性化することができる。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、それを必要とする患者が免疫細胞の輸注を受けることの利益を増大させる。こうした方法は、例えば、Ｔ細胞機能不全およびがんの治療に有用である。動作理論に束縛されることを意図するものではないが、こうした方法は、Ｃｂｌ阻害剤が、免疫細胞集団をメモリー細胞について濃縮し、それによりｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔｒｏでの免疫細胞応答の耐久性を強化することができるという発見に部分的に基づく。
[00016] 一態様では、本明細書では、Ｃｂｌ阻害剤を用いて、ｉｎ ｖｉｖｏでの免疫細胞の拡大増殖を強化するための方法が提供される。別の態様では、本明細書では、Ｃｂｌ阻害剤を用いて、ｅｘ ｖｉｖｏでの免疫細胞の拡大増殖を強化するための方法が提供される。別の態様では、本明細書では、本明細書で提供される方法により強化された免疫細胞が提供される。別の態様では、本明細書では、免疫細胞を含む組成物が提供される。別の態様では、本明細書では、免疫細胞または組成物を投与することを含む治療方法が提供される。別の態様では、本明細書では、Ｃｂｌ阻害剤の組合せ投与により、免疫細胞または組成物の投与を強化するための方法が提供される。さらに別の態様では、こうした態様のいずれかまたはすべてを組み合わせる。
[00017] 有用なＣｂｌ阻害剤としては、ｃＣｂｌ、Ｃｂｌ－ｂ、および／またはＣｂｌ－ｃ酵素の活性を阻害する化合物が挙げられる。Ｃｂｌ阻害剤は、小分子、ペプチド、抗体、または核酸であってもよい。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、式（A）による化合物：
Figure 2022549303000002
もしくはその互変異性体または上述のもののいずれかの薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、３～６員ヘテロシクリル、Ｃ１～Ｃ６アルキル－（Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル）、Ｃ１～Ｃ６アルキル－（３～６員ヘテロシクリル）であり；
Figure 2022549303000003
 は
Figure 2022549303000004
であり；
Ｚ１は、ＣＨもしくはＮであり；
Ｚ２は、ＣＨもしくはＮであり；
Ｚ３は、ＣＨもしくはＮであり；
Ｘは、ＣＨもしくはＮであり；
Ｒ２は、Ｈ、ハロ、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、－ＮＨ－（３～６員ヘテロシクリル）、－ＮＨ－（Ｃ１～Ｃ６アルキル）、－ＮＨ－（Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル）、－Ｏ－（３～６員ヘテロシクリル）、－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ６アルキル）、もしくは－Ｏ－（Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル）であり；
Ｒ３ａは、Ｈ、ハロ、もしくはＣ１～Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３ｂは、Ｈ、ハロ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、もしくはＣ３～Ｃ６シクロアルキルであるか；またはＲ３ａおよびＲ３ｂは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、４～８員ヘテロシクリルもしくはＣ３～Ｃ６シクロアルキルを形成し、ヘテロシクリルもしくはシクロアルキルは、任意選択により、１～３つのＲ１２基により置換されているか；またはＲ３ｂおよびＲ１１ａは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、任意選択によりＣ１～Ｃ６アルキルにより置換されているＣ３～Ｃ６シクロアルキルを形成し；
ｎは、０もしくは１であり；
Ｙは、Ｃ（Ｒ１１ａ）（Ｒ１１ｂ）もしくはＳであり、任意選択により、Ｒ３ａおよびＲ３ｂのいずれかもしくは両方がハロの場合、Ｙは、Ｃ（Ｒ１１ａ）（Ｒ１１ｂ）であり；
Ｑは、ＣＨもしくはＮであり；
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、もしくはＣ３～Ｃ６シクロアルキルであり；
Ｒ１０は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、もしくはＣ３～Ｃ６シクロアルキルであり；
Ｒ１１ａおよびＲ１１ｂは、独立して、Ｈ、ハロ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、もしくはＣ１～Ｃ６ハロアルキルであるか；またはＲ１１ａおよびＲ１１ｂは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキルを形成するか；またはＲ３ｂおよびＲ１１ａは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、任意選択によりＣ１～Ｃ６アルキルにより置換されているＣ３～Ｃ６シクロアルキルを形成し；
各Ｒ１２は、独立して、Ｃ１～Ｃ６アルキル、ハロ、ヒドロキシ、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ６アルキル）、－ＣＮ、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＣＮ、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＯＨ、もしくはＣ１～Ｃ６ハロアルキルであり；２つのジェミナルＲ１２基は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、スピロＣ３～Ｃ４シクロアルキルを形成することができる。
[00018] ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、本明細書に記載の化合物１０１～１２９から選択される。一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、抗体である。一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、ペプチドである。一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、ｓｉＲＮＡである。
[00019] 一態様では、本明細書では、それを必要とする患者の状態を治療するための拡大増殖方法、組成物、および細胞療法方法が提供される。ある特定の実施形態では、こうした方法は、Ｃｂｌ阻害剤を、ドナーの免疫細胞の活性化または拡大増殖を促進するのに好適な条件下でドナーに投与することを含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、循環免疫細胞(circulating immune cells)をドナーから採取することをさらに含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、腫瘍またはその部分から得られる免疫細胞をドナーから採取することをさらに含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、採取した免疫細胞を遺伝子改変することをさらに含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、上記ドナーに由来する免疫細胞を、ｅｘ ｖｉｖｏにて１ステップまたは２ステップで拡大増殖することをさらに含む。ある特定の実施形態では、第１のステップは拡大増殖ステップである。ある特定の実施形態では、第２のステップは、急速拡大増殖ステップである。一部の実施形態では、１つまたは複数の拡大増殖ステップは、１つまたは複数のＣｂｌ阻害剤の存在下で行われる。ある特定の実施形態では、こうした方法は、免疫細胞を、それを必要とする患者に投与することをさらに含む。一部の実施形態では、投与は、１つまたは複数のＣｂｌ阻害剤と組み合わせて行われる。
[00020] 別の態様では、本明細書では、それを必要とする患者の状態を治療するための拡大増殖方法、組成物、および細胞療法方法が提供される。ある特定の実施形態では、こうした方法は、腫瘍またはその部分をドナーから採取することを含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、Ｃｂｌ阻害剤を、ドナーの免疫細胞の活性化または拡大増殖を促進するのに好適な条件下でドナーに投与することを含む。ある特定の実施形態では、採取した細胞は、遺伝子改変される。ある特定の実施形態では、こうした方法は、上記腫瘍に由来する免疫細胞を、ｅｘ ｖｉｖｏにて１ステップまたは２ステップで拡大増殖することをさらに含む。他の実施形態では、こうした方法は、第２の拡大増殖ステップ、例えば急速拡大増殖ステップを含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、免疫細胞を、それを必要とする患者に投与することをさらに含む。
[00021] 別の態様では、本明細書では、それを必要とする患者の状態を治療するための拡大増殖方法、組成物、および細胞療法方法が提供される。ある特定の実施形態では、こうした方法は、腫瘍またはその部分に由来する免疫細胞をドナーから採取することを含む。ある特定の実施形態では、採取した細胞は、遺伝子改変される。ある特定の実施形態では、こうした方法は、上記腫瘍に由来する免疫細胞を、ｅｘ ｖｉｖｏにて１ステップまたは２ステップで拡大増殖することをさらに含む。ある特定の実施形態では、第１のステップは、Ｃｂｌ阻害剤の存在下での拡大増殖ステップである。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤の存在下での第１のステップは、十分な数の有効な免疫細胞を産出するため、第２の急速拡大増殖ステップは必要とされない。他の実施形態では、この方法は、第２の拡大増殖ステップ、例えば急速拡大増殖ステップを含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、免疫細胞を、それを必要とする患者に投与することをさらに含む。
[00022] 別の態様では、本明細書では、それを必要とする患者の状態を治療するための拡大増殖方法、組成物、および細胞療法方法が提供される。ある特定の実施形態では、こうした方法は、腫瘍またはその部分に由来する免疫細胞をドナーから採取することを含む。ある特定の実施形態では、採取した細胞は、遺伝子改変される。ある特定の実施形態では、こうした方法は、上記腫瘍に由来する免疫細胞を、ｅｘ ｖｉｖｏにて１ステップまたは２ステップで拡大増殖することをさらに含む。ある特定の実施形態では、第１のステップは拡大増殖ステップである。ある特定の実施形態では、こうした方法は、Ｃｂｌ阻害剤の存在下での第２の拡大増殖ステップ、例えば急速拡大増殖ステップを含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、免疫細胞を、それを必要とする患者に投与することをさらに含む。
[00023] 別の態様では、本明細書では、それを必要とする患者の状態を治療するための拡大増殖方法、組成物、および細胞療法方法が提供される。ある特定の実施形態では、こうした方法は、腫瘍またはその部分に由来する免疫細胞をドナーから採取することを含む。ある特定の実施形態では、採取した免疫細胞は、遺伝子改変される。ある特定の実施形態では、こうした方法は、上記腫瘍に由来する免疫細胞を、ｅｘ ｖｉｖｏにて１ステップまたは２ステップで拡大増殖することをさらに含む。ある特定の実施形態では、第１のステップは拡大増殖ステップである。他の実施形態では、こうした方法は、第２の拡大増殖ステップ、例えば急速拡大増殖ステップを含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、免疫細胞を、例えば免疫細胞の実効性を強化するために十分な量のＣｂｌ阻害剤を投与することと組み合わせて、それを必要とする患者に投与することをさらに含む。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、免疫細胞の耐久性を強化する。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、免疫細胞の生着を強化する。
[00024] ある特定の態様では、上記方法のいずれかを組み合わせる。ある特定の実施形態では、こうした方法は、採取前にＣｂｌ阻害剤をドナーに投与すること、およびＣｂｌ阻害剤と組み合わせて、拡大増殖した免疫細胞を、それを必要とする患者に投与することを含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、採取前にＣｂｌ阻害剤をドナーに投与すること、およびＣｂｌ阻害剤の存在下で第１の拡大増殖を実施することを含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、採取前にＣｂｌ阻害剤をドナーに投与すること、および第２の急速拡大増殖を実施しないことを含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、採取前にＣｂｌ阻害剤をドナーに投与すること、Ｃｂｌ阻害剤の存在下で第１の拡大増殖を実施すること、第２の急速拡大増殖を実施しないこと、および／またはＣｂｌ阻害剤と組み合わせて、拡大増殖した免疫細胞を、それを必要とする患者に投与することを含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、Ｃｂｌ阻害剤の存在下で第１の拡大増殖を実施すること、およびＣｂｌ阻害剤と組み合わせて、拡大増殖した免疫細胞を、それを必要とする患者に投与することを含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、採取前にＣｂｌ阻害剤をドナーに投与すること、およびＣｂｌ阻害剤の存在下で第１の拡大増殖を実施すること、および第２の急速拡大増殖を実施しないことを含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、採取前にＣｂｌ阻害剤をドナーに投与すること、Ｃｂｌ阻害剤の存在下で第１の拡大増殖を実施すること、およびＣｂｌ阻害剤と組み合わせて、拡大増殖した免疫細胞を、それを必要とする患者に投与することを含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、採取前にＣｂｌ阻害剤をドナーに投与すること、第２の急速拡大増殖を実施しないこと、およびＣｂｌ阻害剤と組み合わせて、拡大増殖した免疫細胞を、それを必要とする患者に投与することを含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、Ｃｂｌ阻害剤の存在下で第１の拡大増殖を実施すること、第２の急速拡大増殖を実施しないこと、およびＣｂｌ阻害剤と組み合わせて、拡大増殖した免疫細胞を、それを必要とする患者に投与することを含む。
[00025] 一態様では、本明細書では、それを必要とする患者の状態を治療するための拡大増殖方法、組成物、および細胞療法方法が提供される。ある特定の実施形態では、こうした方法は、Ｃｂｌ阻害剤を、ドナーの免疫細胞の活性化または拡大増殖を促進するのに好適な条件下でドナーに投与することを含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、循環免疫細胞をドナーから採取することをさらに含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、任意選択により、採取した免疫細胞を遺伝子改変することをさらに含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、ドナーに由来する免疫細胞を、ｅｘ ｖｉｖｏで拡大増殖することをさらに含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、免疫細胞を、それを必要とする患者に投与することをさらに含む。
[00026] 別の態様では、本明細書では、それを必要とする患者の状態を治療するための拡大増殖方法、組成物、および細胞療法方法が提供される。ある特定の実施形態では、こうした方法は、循環免疫細胞をドナーから採取することを含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、任意選択により、採取した免疫細胞を遺伝子改変することをさらに含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、ｅｘ ｖｉｖｏで免疫細胞を拡大増殖することをさらに含む。ある特定の実施形態では、拡大増殖ステップは、Ｃｂｌ阻害剤の存在下で行われる。ある特定の実施形態では、こうした方法は、拡大増殖した免疫細胞を、それを必要とする患者に投与することをさらに含む。
[00027] 別の態様では、本明細書では、それを必要とする患者の状態を治療するための拡大増殖方法、組成物、および細胞療法方法が提供される。ある特定の実施形態では、こうした方法は、循環免疫細胞をドナーから採取することを含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、任意選択により、採取した免疫細胞を遺伝子改変することをさらに含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、ｅｘ ｖｉｖｏで免疫細胞を拡大増殖することをさらに含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、免疫細胞を、例えば免疫細胞の実効性を強化するために十分な量のＣｂｌ阻害剤を投与することと組み合わせて、それを必要とする患者に投与することをさらに含む。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、免疫細胞の耐久性を強化する。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、免疫細胞の生着を強化する。
[00028] ある特定の態様では、上記方法のいずれかを組み合わせる。ある特定の実施形態では、こうした方法は、循環免疫細胞を採取する前にＣｂｌ阻害剤をドナーに投与すること、任意選択により、採取した免疫細胞を遺伝子改変すること、Ｃｂｌ阻害剤の存在下で拡大増殖を実施すること、および／またはＣｂｌ阻害剤と組み合わせて、拡大増殖した免疫細胞を、それを必要とする患者に投与することを含む。
[00029] 免疫細胞は、当業者が有用であるとみなす、あらゆる免疫細胞であってもよい。免疫細胞は、腫瘍から、または血液もしくは血漿中の循環細胞から単離することができる。ある特定の実施形態では、免疫細胞は、腫瘍浸潤性リンパ球、Ｔ細胞、ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＴＣＲ Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、およびＮＫ－ＣＡＲ細胞から選択される。ある特定の実施形態では、免疫細胞は、特定の腫瘍抗原の存在について選択された、患者のＴ細胞である。ある特定の実施形態では、免疫細胞は、遺伝子操作され、例えば、Ｔ細胞受容体またはキメラ抗原受容体の存在について選択される。こうした方法は、当業者が好適であるとみなすあらゆる目的に使用することができる。ある特定の実施形態では、こうした方法は、それを必要とする患者における細胞生着を強化するために有用である。ある特定の実施形態では、こうした方法は、それを必要とする患者の免疫細胞機能不全を治療するために有用である。ある特定の実施形態では、こうした方法は、それを必要とする患者のＴ細胞機能不全を治療するために有用である。ある特定の実施形態では、こうした方法は、それを必要とする患者のがんを治療するために有用である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法により製作された細胞は、固形腫瘍の治療に使用することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法により製作された細胞は、再発性／難治性がんの治療に使用することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法により製作された細胞は、がんまたはＴ細胞機能不全を治療するために化学療法と組み合わせて使用することができる。
[00030] 別の態様では、本明細書では、ｉｎ ｖｉｔｒｏで免疫細胞を拡大増殖するための方法が提供される。ある特定の実施形態では、こうした方法は、Ｃｂｌ阻害剤が存在しない場合よりも多くのメモリー免疫細胞が産生される条件下で、Ｃｂｌ阻害剤の存在下にてｉｎ ｖｉｔｒｏで免疫細胞を拡大増殖すること、および任意選択により、拡大増殖した細胞を任意選択によりＣｂｌ阻害剤の存在下で２回目の拡大増殖に供することを含む。一部の実施形態では、免疫細胞はＴ細胞であり、Ｃｂｌ阻害剤が存在しない場合よりも多くのＴＳＣＭおよび／またはＴＣＭが産生される。一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤が存在しない場合よりも多くのＴＣＭが産生される。ある特定の実施形態では、拡大増殖した免疫細胞は、２回目の拡大増殖に供されない。ある特定の他の実施形態では、拡大増殖した免疫細胞は、任意選択によりＣｂｌ阻害剤の存在下で２回目の拡大増殖に供される。
[00031] 別の態様では、本明細書では、本明細書に記載の方法のいずれかにより製作された細胞を含む組成物が提供される。本明細書に記載の方法の組成物は、例えば、がんおよび／または免疫細胞機能不全を治療するために使用することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法により製作された細胞は、固形腫瘍の治療に使用することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法により製作される細胞は、再発性／難治性がんの治療に使用することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法により製作される細胞は、がんまたは免疫細胞機能不全を治療するために化学療法と組み合わせて使用することができる。
[00032]ヒト卵巣および結腸腫瘍断片に由来する細胞を使用したＴＩＬ研究の結果を提供し、ＩＬ－２の非存在下および存在下におけるｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞成長に対するＣｂｌ阻害剤の効果を示す図である。図１Ａは、１０μＭ、１μＭ、および０．１μＭ Ｃｂｌ阻害剤単独の存在下で２８日間培養した後の細胞数／ウェルを示す。図１Ｂは、１０μＭ、１μＭ、および０．１μＭ Ｃｂｌ阻害剤ならびに６０００ＩＵのＩＬ－２の存在下で２８日間インキュベーションした培養後の同じ供給材料に由来する細胞数を示す。 [00032]ヒト卵巣および結腸腫瘍断片に由来する細胞を使用したＴＩＬ研究の結果を提供し、ＩＬ－２の非存在下および存在下におけるｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞成長に対するＣｂｌ阻害剤の効果を示す図である。図１Ａは、１０μＭ、１μＭ、および０．１μＭ Ｃｂｌ阻害剤単独の存在下で２８日間培養した後の細胞数／ウェルを示す。図１Ｂは、１０μＭ、１μＭ、および０．１μＭ Ｃｂｌ阻害剤ならびに６０００ＩＵのＩＬ－２の存在下で２８日間インキュベーションした培養後の同じ供給材料に由来する細胞数を示す。 [00033]ＩＬ－２の非存在下（図２Ａ）および存在下（図２Ｂ）における０．１μＭ、１．０μＭ、および１０μＭ Ｃｂｌ阻害剤の存在下で１１日間拡大増殖した後のＴＩＬに対して実施したフローサイトメトリー研究の結果を提供する図である。 [00033]ＩＬ－２の非存在下（図２Ａ）および存在下（図２Ｂ）における０．１μＭ、１．０μＭ、および１０μＭ Ｃｂｌ阻害剤の存在下で１１日間拡大増殖した後のＴＩＬに対して実施したフローサイトメトリー研究の結果を提供する図である。 [00034]ＩＬ－２の非存在下および存在下における０．１μＭ、１．０μＭ、および１０μＭのＣｂｌ阻害剤の存在下で１１日間拡大増殖した後のＣＤ４＋／ＩＦＮγ（図３Ａ）およびＣＤ８＋／ＩＦＮγ（図３Ｂ）ＴＩＬのレベルを示す図である。 [00034]ＩＬ－２の非存在下および存在下における０．１μＭ、１．０μＭ、および１０μＭのＣｂｌ阻害剤の存在下で１１日間拡大増殖した後のＣＤ４＋／ＩＦＮγ（図３Ａ）およびＣＤ８＋／ＩＦＮγ（図３Ｂ）ＴＩＬのレベルを示す図である。 [00035]異なる患者に由来する腫瘍から成長させたリンパ球の％を示す図である。卵巣腫瘍に由来するＴＩＬを、ＤＭＳＯ（対照）、ＩＬ－２、ならびに１０μＭ、１μＭ、および０．１μＭ Ｃｂｌ阻害剤単独の存在下で、ＩＬ－２と組み合わせて成長させた。図４Ａ、４Ｂ、および４Ｄは、３人の別々の患者の卵巣腫瘍に由来するＴＩＬ細胞である。図４Ｃは、結腸腫瘍組織に由来するＴＩＬ細胞の結果を示す。 [00035]異なる患者に由来する腫瘍から成長させたリンパ球の％を示す図である。卵巣腫瘍に由来するＴＩＬを、ＤＭＳＯ（対照）、ＩＬ－２、ならびに１０μＭ、１μＭ、および０．１μＭ Ｃｂｌ阻害剤単独の存在下で、ＩＬ－２と組み合わせて成長させた。図４Ａ、４Ｂ、および４Ｄは、３人の別々の患者の卵巣腫瘍に由来するＴＩＬ細胞である。図４Ｃは、結腸腫瘍組織に由来するＴＩＬ細胞の結果を示す。 [00035]異なる患者に由来する腫瘍から成長させたリンパ球の％を示す図である。卵巣腫瘍に由来するＴＩＬを、ＤＭＳＯ（対照）、ＩＬ－２、ならびに１０μＭ、１μＭ、および０．１μＭ Ｃｂｌ阻害剤単独の存在下で、ＩＬ－２と組み合わせて成長させた。図４Ａ、４Ｂ、および４Ｄは、３人の別々の患者の卵巣腫瘍に由来するＴＩＬ細胞である。図４Ｃは、結腸腫瘍組織に由来するＴＩＬ細胞の結果を示す。 [00035]異なる患者に由来する腫瘍から成長させたリンパ球の％を示す図である。卵巣腫瘍に由来するＴＩＬを、ＤＭＳＯ（対照）、ＩＬ－２、ならびに１０μＭ、１μＭ、および０．１μＭ Ｃｂｌ阻害剤単独の存在下で、ＩＬ－２と組み合わせて成長させた。図４Ａ、４Ｂ、および４Ｄは、３人の別々の患者の卵巣腫瘍に由来するＴＩＬ細胞である。図４Ｃは、結腸腫瘍組織に由来するＴＩＬ細胞の結果を示す。 [00036]ＩＬ－２、Ｃｂｌ阻害剤、およびそれらの組合せの存在下で培養した結腸腫瘍由来（図５Ａ）および卵巣腫瘍由来（図５Ｂ）ＴＩＬに由来するＴＩＬの結果を提供する図である。 [00036]ＩＬ－２、Ｃｂｌ阻害剤、およびそれらの組合せの存在下で培養した結腸腫瘍由来（図５Ａ）および卵巣腫瘍由来（図５Ｂ）ＴＩＬに由来するＴＩＬの結果を提供する図である。 [00037]ＴＩＬ培養のための最適な出発物質を決定するための研究の結果を提供する図である。結腸腫瘍に由来する腫瘍断片対腫瘍細胞懸濁物を使用した研究では、腫瘍断片から１１日間成長させた培養物は、ＴＩＬ培養の出発物質として腫瘍細胞懸濁物を使用した培養物よりもおよそ１０倍高い拡大増殖を示した。 [00038]ヒト結腸腫瘍に由来するＴＩＬを培養した後のセントラルメモリー表現型（CD45RO+）を示すＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞の％の１１日目および２８日目の結果を提供する図である。 [00039]ガス透過性シリコン底部を有するガス透過性フラスコを使用して、０日目または３日目でのＩＬ－２またはＣｂｌ阻害剤の添加が比較された２つの異なる卵巣腫瘍試料を細胞拡大増殖した７日目の結果を提供する図である。「Ａ」は、０日目でのＩＬ－２単独添加である。「Ｂ」は、０日目でのＩＬ－２および１μＭ Ｃｂｌ阻害剤の添加である。「Ｃ」は、０日目でのＩＬ－２の添加および３日目でのＣｂｌ阻害剤の１μＭの添加である。「Ｄ」は、３日目でのＩＬ－２の添加および３日目でのＣｂｌ阻害剤の添加である。「Ｅ」は、０日目でのＣｂｌ阻害剤の添加である。 [00040]Ｃｂｌ阻害剤を用いて拡大増殖したＯＴ－１細胞は、一方の側腹部にＥ．Ｇ７－ＯＶＡ細胞を皮下移植したマウスにおいて樹立された腫瘍を拒絶することが可能な強力なエフェクターであることを示す結果を提供する図である。 [00041]Ｃｂｌ阻害剤を用いて拡大増殖したＯＴ－１細胞が、全ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４５＋細胞において頻度がより高いことを実証し、ｉｎ ｖｉｖｏ血中存続性であることを示す結果を提供する図である。血液中のＯＴ－１細胞を、移植の４日後または９日後に評価した。脾臓から得られたＯＴ－１細胞を分析した場合も同様のデータが得られた。 [00042]Ｃｂｌ阻害剤、ＩＬ－２、Ｃｂｌ阻害剤＋ＩＬ－２、および対照を用いて拡大増殖したＣＤ８＋ ＯＴ－１細胞を投与した後の経時的な腫瘍容積を提供する図である。 [00042]Ｃｂｌ阻害剤、ＩＬ－２、Ｃｂｌ阻害剤＋ＩＬ－２、および対照を用いて拡大増殖したＣＤ８＋ ＯＴ－１細胞を投与した後の経時的な腫瘍容積を提供する図である。 [00043]Ｃｂｌ阻害剤、ＩＬ－２、Ｃｂｌ阻害剤＋ＩＬ－２、および対照を用いて拡大増殖した抗ＣＤ３刺激ＯＴ－１細胞を投与した後の経時的な腫瘍容積（図１２Ａ）および条件付き生存率（図１２Ｂ）を提供する図である。 [00043]Ｃｂｌ阻害剤、ＩＬ－２、Ｃｂｌ阻害剤＋ＩＬ－２、および対照を用いて拡大増殖した抗ＣＤ３刺激ＯＴ－１細胞を投与した後の経時的な腫瘍容積（図１２Ａ）および条件付き生存率（図１２Ｂ）を提供する図である。 [00044]Ｃｂｌ阻害剤を用いてまたは用いずに拡大増殖したＯＴ－１細胞の全ＣＤ４５＋細胞における頻度およびｉｎ ｖｉｖｏ血中存続性を提供する図である。図１３Ａ（移入後４日目）および図１３Ｂ（移入後２２日目）。 [00044]Ｃｂｌ阻害剤を用いてまたは用いずに拡大増殖したＯＴ－１細胞の全ＣＤ４５＋細胞における頻度およびｉｎ ｖｉｖｏ血中存続性を提供する図である。図１３Ａ（移入後４日目）および図１３Ｂ（移入後２２日目）。 [00045]ＯＴ－１細胞成長に対するＣｂ１阻害剤の効果を示す図である。図１４Ａは、Ｃｂｌ阻害剤を用いて拡大増殖したＯＴ－１細胞が、腫瘍の全ＣＤ４５＋細胞中の頻度がより高いことを実証することを示す結果を提供する。図１４Ｂおよび１４Ｃは、Ｃｂｌ阻害剤を用いて拡大増殖したＯＴ－１細胞が、腫瘍における疲弊マーカーＰＤ１およびＴＩＭ３（図１４Ｂ）、ならびにＰＤ１、ＴＩＭ３、およびＬＡＧ３（図１４Ｃ）の発現を減少させることを示す結果を提供する。 [00045]ＯＴ－１細胞成長に対するＣｂ１阻害剤の効果を示す図である。図１４Ａは、Ｃｂｌ阻害剤を用いて拡大増殖したＯＴ－１細胞が、腫瘍の全ＣＤ４５＋細胞中の頻度がより高いことを実証することを示す結果を提供する。図１４Ｂおよび１４Ｃは、Ｃｂｌ阻害剤を用いて拡大増殖したＯＴ－１細胞が、腫瘍における疲弊マーカーＰＤ１およびＴＩＭ３（図１４Ｂ）、ならびにＰＤ１、ＴＩＭ３、およびＬＡＧ３（図１４Ｃ）の発現を減少させることを示す結果を提供する。 [00045]ＯＴ－１細胞成長に対するＣｂ１阻害剤の効果を示す図である。図１４Ａは、Ｃｂｌ阻害剤を用いて拡大増殖したＯＴ－１細胞が、腫瘍の全ＣＤ４５＋細胞中の頻度がより高いことを実証することを示す結果を提供する。図１４Ｂおよび１４Ｃは、Ｃｂｌ阻害剤を用いて拡大増殖したＯＴ－１細胞が、腫瘍における疲弊マーカーＰＤ１およびＴＩＭ３（図１４Ｂ）、ならびにＰＤ１、ＴＩＭ３、およびＬＡＧ３（図１４Ｃ）の発現を減少させることを示す結果を提供する。 [00046]Ｃｂｌ阻害剤を用いておよび用いずに拡大増殖した採取ＯＴ－１細胞でのペプチド再刺激に応答した、全ＣＤ４５＋細胞中の頻度を提供する図である。 [00047]ＯＴ－１細胞成長に対するＣｂ１阻害剤の効果を示す図である。図１６Ａおよび１６Ｂは、Ｃｂｌ阻害剤を用いておよび用いずに拡大増殖したペプチド再刺激ＯＴ－１細胞が多機能性（ＩＦＮ－ガンマおよびＴＮＦ－アルファ二重陽性細胞）であることを提供する。図１６Ｃは、Ｃｂｌ阻害剤を用いておよび用いずに拡大増殖した多機能性（ＩＦＮ－ガンマおよびＴＮＦ－アルファ二重陽性）ＯＴ－１細胞における疲弊マーカー（ＰＤ１およびＴＩＭ３）頻度を提供する。 [00047]ＯＴ－１細胞成長に対するＣｂ１阻害剤の効果を示す図である。図１６Ａおよび１６Ｂは、Ｃｂｌ阻害剤を用いておよび用いずに拡大増殖したペプチド再刺激ＯＴ－１細胞が多機能性（ＩＦＮ－ガンマおよびＴＮＦ－アルファ二重陽性細胞）であることを提供する。図１６Ｃは、Ｃｂｌ阻害剤を用いておよび用いずに拡大増殖した多機能性（ＩＦＮ－ガンマおよびＴＮＦ－アルファ二重陽性）ＯＴ－１細胞における疲弊マーカー（ＰＤ１およびＴＩＭ３）頻度を提供する。 [00047]ＯＴ－１細胞成長に対するＣｂ１阻害剤の効果を示す図である。図１６Ａおよび１６Ｂは、Ｃｂｌ阻害剤を用いておよび用いずに拡大増殖したペプチド再刺激ＯＴ－１細胞が多機能性（ＩＦＮ－ガンマおよびＴＮＦ－アルファ二重陽性細胞）であることを提供する。図１６Ｃは、Ｃｂｌ阻害剤を用いておよび用いずに拡大増殖した多機能性（ＩＦＮ－ガンマおよびＴＮＦ－アルファ二重陽性）ＯＴ－１細胞における疲弊マーカー（ＰＤ１およびＴＩＭ３）頻度を提供する。 [00048]脾細胞から採取したペプチド再刺激ＯＴ－１細胞におけるＩＦＮ－ガンマおよびＩＬ２産生を提供する図である。図１７Ａは、再刺激時にＩＦＮ－ガンマが産生させることを提供する。図１７Ｂは、再刺激時にＩＦＮ－ガンマおよびＩＬ－２が産生されることを提供する。 [00048]脾細胞から採取したペプチド再刺激ＯＴ－１細胞におけるＩＦＮ－ガンマおよびＩＬ２産生を提供する図である。図１７Ａは、再刺激時にＩＦＮ－ガンマが産生させることを提供する。図１７Ｂは、再刺激時にＩＦＮ－ガンマおよびＩＬ－２が産生されることを提供する。 [00049]化合物１１６の経口投与を共に用いておよび用いずに、ＩＬ－２および化合物１０３を用いて拡大増殖したＯＴ－１細胞の抗腫瘍有効性を提供する図である。 [00050]化合物１１６の経口投与を共に用いておよび用いずに、ＩＬ－２および化合物１０３を用いて拡大増殖したＯＴ－１細胞で治療したマウスの生存率を提供する図である。 [00051]化合物１１６の経口投与を共に用いておよび用いずにＩＬ－２および化合物１０３を用いて拡大増殖したＯＴ－１細胞の、全ＣＤ４５＋細胞中の頻度およびｉｎ ｖｉｖｏ存続性を提供する図である。図２０Ａ（移入後５日目）および２０Ｂ（移入後２０日目）。 [00051]化合物１１６の経口投与を共に用いておよび用いずにＩＬ－２および化合物１０３を用いて拡大増殖したＯＴ－１細胞の、全ＣＤ４５＋細胞中の頻度およびｉｎ ｖｉｖｏ存続性を提供する図である。図２０Ａ（移入後５日目）および２０Ｂ（移入後２０日目）。 [00052]Ｃｂｌ阻害剤を用いてｉｎ ｖｉｔｒｏで拡大増殖した腫瘍抗原特異的Ｔ細胞（ＯＴ－１細胞）が、後の時点での腫瘍再負荷からマウスを保護することが可能な強力なメモリー細胞になることを実証する図である。 [00053]初期ＯＴ－１ Ｔ細胞移入の１４９日後の、ＩＬ－２単独、Ｃｂｌ阻害剤単独、ならびにＩＬ－２およびＣｂｌ阻害剤の組合せを用いて拡大増殖したＯＴ－１細胞のｉｎ ｖｉｖｏ存続性を示す結果を提供する図である。 [00054]Ｃｂｌ阻害剤で拡大増殖したＯＴ－１細胞の数が、腫瘍の再負荷後に血中でより急速に増加したことを示す結果を提供する図である。 [00055]ＩＬ－２と共にＣｂｌ阻害剤を添加することにより、２４ウェル形式では、ＩＬ－２単独と比較して、ｅｘ ｖｉｖｏ ＴＩＬ拡大増殖中にＣＤ４＋Ｔ細胞が減少し、ＣＤ８＋細胞は増加することを示す結果を提供する図である。図２３Ａは、メモリー表現型ＣＤ４＋Ｔ細胞（CD3+CD8-）のパーセンテージを示すＦＡＣＳデータを提供する。図２３Ｂは、ＣＤ４５ＲＯ＋中のＣＤ８＋Ｔ細胞（CD3+CD8+）を提供する。ＦＡＣＳ結果は、平均±ＳＥＭとして表した。統計的有意性は、両側ウィルコクソン符号順位検定を使用して計算した（*、p<0.05）。 [00055]ＩＬ－２と共にＣｂｌ阻害剤を添加することにより、２４ウェル形式では、ＩＬ－２単独と比較して、ｅｘ ｖｉｖｏ ＴＩＬ拡大増殖中にＣＤ４＋Ｔ細胞が減少し、ＣＤ８＋細胞は増加することを示す結果を提供する図である。図２３Ａは、メモリー表現型ＣＤ４＋Ｔ細胞（CD3+CD8-）のパーセンテージを示すＦＡＣＳデータを提供する。図２３Ｂは、ＣＤ４５ＲＯ＋中のＣＤ８＋Ｔ細胞（CD3+CD8+）を提供する。ＦＡＣＳ結果は、平均±ＳＥＭとして表した。統計的有意性は、両側ウィルコクソン符号順位検定を使用して計算した（*、p<0.05）。 [00056]Ｃｂｌ阻害剤を添加することにより、２４ウェル形式では、ＩＬ－２単独と比較して、ｅｘ ｖｉｖｏ ＴＩＬ拡大増殖中にＣＤ８＋セントラルメモリーＴ細胞が増加することを示す結果を提供する図である。 [00057]Ｃｂｌ阻害剤は、ＧＲＥＸ１０形式では、ＩＬ－２単独と比較して、ｅｘ ｖｉｖｏ ＴＩＬ拡大増殖中にＣＤ８＋細胞を増加させることを示す結果を提供する図である。図２５Ａは、ＣＤ４５ＲＯ＋中のメモリー表現型ＣＤ８＋Ｔ細胞（CD3+CD8+）のパーセンテージを示すＦＡＣＳデータを提供する。図２５Ｂは、患者のがん組織から１４日間のｅｘ ｖｉｖｏ培養後に得られたＣＤ８＋ＴＩＬの総数を提供する。ＦＡＣＳ結果は、平均±ＳＥＭとして表した。統計的有意性は、両側ウィルコクソン符号順位検定を使用して計算した（*、p<0.05）。 [00057]Ｃｂｌ阻害剤は、ＧＲＥＸ１０形式では、ＩＬ－２単独と比較して、ｅｘ ｖｉｖｏ ＴＩＬ拡大増殖中にＣＤ８＋細胞を増加させることを示す結果を提供する図である。図２５Ａは、ＣＤ４５ＲＯ＋中のメモリー表現型ＣＤ８＋Ｔ細胞（CD3+CD8+）のパーセンテージを示すＦＡＣＳデータを提供する。図２５Ｂは、患者のがん組織から１４日間のｅｘ ｖｉｖｏ培養後に得られたＣＤ８＋ＴＩＬの総数を提供する。ＦＡＣＳ結果は、平均±ＳＥＭとして表した。統計的有意性は、両側ウィルコクソン符号順位検定を使用して計算した（*、p<0.05）。 [00058]Ｃｂｌ阻害剤は、ＧＲＥＸ１０形式では、ＩＬ－２単独と比較して、ｅｘ ｖｉｖｏ ＴＩＬ拡大増殖中にＣＤ８＋セントラルメモリーＴ細胞を増加させることを示す結果を提供する図である。統計的有意性は、両側ウィルコクソン符号順位検定を使用して計算した（*、p<0.05）。 [00059]ＧＲＥＸ１０にて拡大増殖したプレＲＥＰ ＴＩＬは、非特異的刺激に応答したＣＤ１０７ａ動員により決定して、機能的であることを示す結果を提供する図である。結腸、肺、卵巣、および乳房（n=10）に由来するＣＤ８＋ ＴＩＬ（図２７Ａ）およびＣＤ４＋（図２７Ｂ）ＴＩＬを、分泌阻害剤および抗ＣＤ１０７ａの存在下で６時間の抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激に応答したＣＤ１０７ａ＋発現についてフローサイトメトリーにより評価した。ＦＡＣＳ結果は、平均±ＳＥＭとして表した。統計的有意性は、両側ウィルコクソン符号順位検定を使用して計算した（*、p<0.05）。 [00059]ＧＲＥＸ１０にて拡大増殖したプレＲＥＰ ＴＩＬは、非特異的刺激に応答したＣＤ１０７ａ動員により決定して、機能的であることを示す結果を提供する図である。結腸、肺、卵巣、および乳房（n=10）に由来するＣＤ８＋ ＴＩＬ（図２７Ａ）およびＣＤ４＋（図２７Ｂ）ＴＩＬを、分泌阻害剤および抗ＣＤ１０７ａの存在下で６時間の抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激に応答したＣＤ１０７ａ＋発現についてフローサイトメトリーにより評価した。ＦＡＣＳ結果は、平均±ＳＥＭとして表した。統計的有意性は、両側ウィルコクソン符号順位検定を使用して計算した（*、p<0.05）。 [00060]ＧＲＥＸ１０にて拡大増殖したプレＲＥＰ ＴＩＬは、非特異的刺激に応答したグランザイム＋分泌およびグランザイムＢ＋ＣＤ１０７ａ動員により決定して、機能的であることを示す結果を提供する図である。結腸、肺、卵巣、および乳房（n=10）に由来するＣＤ８＋ ＴＩＬを、分泌阻害剤の存在下で６時間の抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激に応答したグランザイムＢ＋単独（図２８Ａ）およびグランザイムＢ＋ＣＤ１０７ａ（図２８Ｂ）発現についてフローサイトメトリーにより評価した。ＦＡＣＳ結果は、平均±ＳＥＭとして表した。統計的有意性は、両側ウィルコクソン符号順位検定を使用して計算した（*、p<0.05）。 [00060]ＧＲＥＸ１０にて拡大増殖したプレＲＥＰ ＴＩＬは、非特異的刺激に応答したグランザイム＋分泌およびグランザイムＢ＋ＣＤ１０７ａ動員により決定して、機能的であることを示す結果を提供する図である。結腸、肺、卵巣、および乳房（n=10）に由来するＣＤ８＋ ＴＩＬを、分泌阻害剤の存在下で６時間の抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激に応答したグランザイムＢ＋単独（図２８Ａ）およびグランザイムＢ＋ＣＤ１０７ａ（図２８Ｂ）発現についてフローサイトメトリーにより評価した。ＦＡＣＳ結果は、平均±ＳＥＭとして表した。統計的有意性は、両側ウィルコクソン符号順位検定を使用して計算した（*、p<0.05）。 [00061]高用量（6000 IU/ml）ＩＬ－２または高用量ＩＬ－２＋１ｕＭ Ｃｂｌ阻害剤に応答したサイトカイン分泌により決定して、プレＲＥＰ拡大増殖ＴＩＬが機能的であることを示す結果を提供する図である。結腸、肺、卵巣、および乳房（n=10）に由来するＴＩＬの１４日間拡大増殖中に分泌されたサイトカインを、Ｌｕｍｉｎｅｘを使用して評価した。ＦＡＣＳ結果は、平均±ＳＥＭとして表した。統計的有意性は、両側ウィルコクソン符号順位検定を使用して計算した（*、p<0.05）。 [00062]１μＭ Ｃｂｌ阻害剤と組み合わせて高用量ＩＬ－２（6000 IU/ml）を用いて拡大増殖したＴＩＬが、非特異的刺激に応答して、ＩＬ－２単独と比較して増加したＴ細胞化学誘引物質ＭＩＰ１Ａ（図３０Ａ）およびＭＩＰ１Ｂ（図３０Ｂ）を分泌することを示す結果を提供する図である。ＦＡＣＳ結果は、平均±ＳＥＭとして表した。統計的有意性は、両側ウィルコクソン符号順位検定を使用して計算した（*、p<0.05）。 [00062]１μＭ Ｃｂｌ阻害剤と組み合わせて高用量ＩＬ－２（6000 IU/ml）を用いて拡大増殖したＴＩＬが、非特異的刺激に応答して、ＩＬ－２単独と比較して増加したＴ細胞化学誘引物質ＭＩＰ１Ａ（図３０Ａ）およびＭＩＰ１Ｂ（図３０Ｂ）を分泌することを示す結果を提供する図である。ＦＡＣＳ結果は、平均±ＳＥＭとして表した。統計的有意性は、両側ウィルコクソン符号順位検定を使用して計算した（*、p<0.05）。 [00063]高用量ＩＬ－２（6000 IU/ml）および１μＭ化合物１０３を用いて拡大増殖したＴＩＬが、非特異的刺激に応答してＴ細胞成長因子サイトカインを分泌することを示す結果を提供する図である。ＦＡＣＳ結果は、平均±ＳＥＭとして表した。統計的有意性は、両側ウィルコクソン符号順位検定を使用して計算した（*、p<0.05）。 [00064]Ｃｂｌ阻害剤は、処理群間で共有される、固有ＣＤＲ３のパーセンテージを増加させることを示す結果を提供する図である。群は、高用量ＩＬ－２（図３２Ａ）、化合物１０３を伴う高用量ＩＬ－２（図３２Ｂ）、および化合物１０３単独（図３２Ｃ）だった。 [00064]Ｃｂｌ阻害剤は、処理群間で共有される、固有ＣＤＲ３のパーセンテージを増加させることを示す結果を提供する図である。群は、高用量ＩＬ－２（図３２Ａ）、化合物１０３を伴う高用量ＩＬ－２（図３２Ｂ）、および化合物１０３単独（図３２Ｃ）だった。 [00064]Ｃｂｌ阻害剤は、処理群間で共有される、固有ＣＤＲ３のパーセンテージを増加させることを示す結果を提供する図である。群は、高用量ＩＬ－２（図３２Ａ）、化合物１０３を伴う高用量ＩＬ－２（図３２Ｂ）、および化合物１０３単独（図３２Ｃ）だった。 [00065]Ｃｂｌ阻害剤化合物１０３は、１１日間の期間にわたって複数の温度（４℃～３７℃）で安定であることを示す結果を提供する図である。 [00066]ＴＩＬ培養でのＣｂｌ阻害剤安定性を示す結果を提供する図である。
[00067] 定義
本明細書で提供される化合物および方法で参照される場合、以下の用語は、別様に示されていない限り、以下の意味を有する。別様に定義されていない限り、本明細書で使用される技術用語および科学用語はすべて、当業者が一般的に理解するものと同じ意味を有する。本明細書において用語に複数の定義が存在する場合、別様に明記されていない限り、この節の定義が優先される。本明細書で記載または参照される技法および手順は、一般により良好に理解されており、例えば、Ｇｒｅｅｎ＆Ｓａｍｂｒｏｏｋ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ 第４版（２０１２年）、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ニューヨーク州；Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ；およびＲｏｓｅｎｂｅｒｇら、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．、８６巻（１５号）：１１５９～１１６６頁（１９９４年）に記載されている幅広く使用されている分子クローニング方法論など、従来の方法論を使用して当業者により一般的に使用されている。必要に応じて、市販のキットおよび試薬の使用を伴う手順は、別様の表記がない限り、一般に、製造業者が規定するプロトコールおよび条件に準拠して実施される。
[00068] 本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、状況が明らかに別様であることを示さない限り、複数の指示対象を含む。
[00069] 「約」という用語は、示されている値ならびにその値よりも大きなおよび小さな範囲を示し、それらを包含する。ある特定の実施形態では、「約」という用語は、指定値±１０％、±５％、または±１％を示す。ある特定の実施形態では、「約」という用語は、指定値±その値の１標準偏差を示す。対数目盛の場合、「約」は、指定値±０．１または±０．２対数単位を示す。
[00070] 「異常な細胞増殖」という用語は、本明細書で使用される場合、過形成またはがん細胞増殖を含む。がん細胞は、本明細書に記載のものなど、血液がんまたは非血液がんに由来してもよい。
[00071] ｉｎ ｖｉｖｏでの「活性化」は、本明細書で使用される場合、ｉｎ ｖｉｖｏで、特に細胞ベース免疫療法を受けている個体において、免疫細胞を有効量のＣｂｌ阻害剤と接触させて、採取前にその個体の免疫細胞集団の活性をモジュレートするために好適なセットの条件を提供することを指す。一部の実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。免疫細胞は、循環Ｔ細胞であってもよい。免疫細胞は、腫瘍浸潤性リンパ球であってもよい。任意のそのような実施形態の一部では、免疫細胞はＴ細胞であり、Ｔ細胞活性のモジュレーションは、Ｔ細胞活性化の増加、Ｔ細胞増殖の増加、Ｔ細胞疲弊の減少、およびＴ細胞耐性の減少の１つまたは複数を含む。さらなる実施形態では、Ｔ細胞活性化の増加は、ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、およびＴＮＦαからなる群から選択される１つまたは複数などのサイトカインの産生増加を含む。さらに別のさらなる実施形態では、Ｔ細胞活性化の増加は、ＣＤ２５、ＣＤ６９、およびＣＤ４５ＲＯの１つまたは複数のなどの、１つまたは複数のＴ細胞活性化マーカーの細胞表面発現の増加を含む。任意のそのような実施形態の一部では、Ｔ細胞は、単独でまたは抗ＣＤ２８抗体と組み合わせて抗ＣＤ３抗体と接触したことがあるかまたは接触している。任意のそのような実施形態の一部では、免疫細胞はＮＫ細胞であり、ＮＫ細胞活性のモジュレーションは、ＮＫ細胞活性化の増加を含む。さらなる実施形態では、ＮＫ細胞活性化の増加は、ＩＦＮ－γなどのサイトカインの産生の増加を含む。任意のそのような実施形態の一部では、免疫細胞はＢ細胞であり、Ｂ細胞活性のモジュレーションは、Ｂ細胞活性化の増加（例えば、ＣＤ６９などの増加）を含む。任意のそのような実施形態の一部では、免疫細胞はヒト免疫細胞である。
[00072] 化合物、例えばＣｂｌ阻害剤、または本開示の細胞集団に関する「投与」およびその変化形（一部の実施形態では、化合物または細胞集団を「投与する」）は、化合物もしくは化合物のプロドラッグを、または上記化合物、例えばＣｂｌ阻害剤を用いて処理した細胞集団を、細胞の活性化または治療のために動物の系に導入することを意味する。本開示の化合物またはそのプロドラッグが、１つまたは複数の他の活性作用剤（一部の実施形態では、例えば、細胞集団の輸注、外科手術、放射線、および化学療法など）と組み合わせて提供される場合、「投与」およびその変化形は各々、化合物および他の作用剤または要素の同時導入および連続導入を含むことが理解される。
[00073] 「Ｃｂｌ」という用語は、本明細書で使用される場合、ｃＣｂｌ、Ｃｂｌ－ｂ、およびＣｂｌ－ｃを含む群から選択されるＣｂｌタンパク質を指す。この用語は、スプライスバリアントまたは対立遺伝子バリアントを含む、こうしたタンパク質の天然に存在するバリアントも含む。また、この用語は、組換えＣｂｌタンパク質またはその短縮型バリアントなどの、こうしたタンパク質の天然に存在しないバリアントを含み、これらは一般に、天然に存在するＣｂｌまたはＣｂｌの天然に存在するバリアントの結合能力（例えば、Ｅ２酵素に結合する能力）が保存されている。
[00074] 「Ｃｂｌ阻害剤」という用語は、本明細書で使用される場合、Ｃｂｌに結合し、Ｃｂｌタンパク質の活性または機能を阻害する化合物を指す。一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、Ｃｂｌ－ｂの活性を阻害する化合物である。他の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、共刺激の非存在下でＴ細胞を活性化することが可能な化合物である。
[00075] ｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、またはｉｎ ｖｉｔｒｏで細胞を「接触させる」は、集団内の１つまたは複数の細胞を、特定の化合物、分子、または試薬に曝露することを指す。細胞と接触させることができる化合物としては、サイトカイン、抗体、マイトジェン、組換えリガンド、およびレクチンが挙げられる。
[00076] 本明細書で使用される場合、「ドナー」は哺乳動物である。本開示の方法で使用される免疫細胞の供給源のための「哺乳動物」としては、ヒト；非ヒト霊長類；飼育動物および家畜動物；イヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、スナネズミ、マウス、フェレット、ラット、ネコなどの、動物園動物、スポーツ動物、またはペット動物などが挙げられる。一部の実施形態では、ドナーはヒトである。「関連ドナー」は、治療を受けている個体の近親血縁者である。「生体非関連ドナー」は、治療を受けている個体の近親血縁者でない個体である。
[00077] 「薬物強化養子細胞療法」は、養子細胞療法で使用するために採取される細胞の量を増加させるための、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞の選択および拡大増殖に必要な時間の長さを短縮するための、それを必要とする患者に輸注するために養子細胞療法で産生される細胞の数および耐久性を増加させるための、および／またはそれを必要とする患者における養子細胞療法の有効性を増加させるための、１つまたは複数のＣｂｌ阻害剤の使用を含む養子細胞療法を指す。
[00078] 「薬物強化キメラ抗原受容体療法」は、養子細胞療法で使用するために採取される細胞の量を増加させるための、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの遺伝子改変細胞の選択および拡大増殖に必要な時間の長さを短縮するための、それを必要とする患者に輸注するための遺伝子改変細胞の数および耐久性を増加させるための、および／またはそれを必要とする患者におけるキメラ抗原受容体療法の有効性を増加させるための、１つまたは複数のＣｂｌ阻害剤の使用を含むキメラ抗原療法を指す。
[00079] 「薬物強化ＴＩＬ療法」は、腫瘍断片から採取される細胞の量を増加させるための、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＴＩＬの選択および拡大増殖に必要な時間の長さを短縮するための、それを必要とする患者に輸注するために産生されるＴＩＬの数および耐久性を増加させるための、および／またはそれを必要とする患者におけるＴＩＬ療法の有効性を増加させるための、１つまたは複数のＣｂｌ阻害剤の使用を含む腫瘍浸潤性リンパ球療法を指す。
[00080] 本明細書で開示の作用剤の「有効量」は、具体的に明記されている目的の実施に十分な量である。「有効量」は、明記されている目的に関して、経験的におよび日常的な方法で決定することができる。作用剤の「有効量」または「十分な量」は、有益な臨床結果を含む有益な結果など、所望の生物学的効果を生み出すのに適した量である。一部の実施形態では、「有効量」という用語は、個体（例えば、ヒトなどの哺乳動物）の疾患または障害を「治療」するのに効果的な作用剤の量を指す。
[00081] 「濃縮された」細胞集団は、精製されているか、選別されているか、または特定の表現型もしくは機能的活性を有する細胞の生存もしくは増殖を促進する条件（例えば、特定の化合物または分子の存在下でのｉｎ ｖｉｔｒｏ培養）に一定期間にわたって曝露されている細胞の群を指す。一部の実施形態では、濃縮された細胞集団は、通常の組織環境に見出されるよりも高い濃度または割合の特定の細胞型を有することになる。
[00082] 本明細書で使用される場合、「造血細胞」という用語は、造血幹細胞および造血前駆細胞を含む。
[00083] 「免疫細胞」は、造血細胞、多能性幹細胞、骨髄前駆細胞、リンパ球前駆細胞、腫瘍浸潤性リンパ球、Ｔ細胞、Ｂ細胞、および／またはＮＫ細胞を指す。
[00084] 本明細書で使用される場合、「成長を阻害する」（例えば、腫瘍細胞などの細胞を参照して）という用語は、Ｃｂｌ阻害剤を用いて処理されている細胞と接触させた際の、細胞成長（例えば、腫瘍細胞成長）のあらゆる測定可能な減少を含むことが意図されている。ある特定の実施形態では、細胞成長は、Ｃｂｌ阻害剤を用いて処理されている１つまたは複数の細胞と接触していない同じ細胞の成長と比較される。一部の実施形態では、成長は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、または１００％阻害されてもよい。細胞成長の減少は、これらに限定されないが、タンパク質内部移行、アポトーシス、壊死、および／またはエフェクター機能媒介性活性を含む、様々な機序により生じ得る。
[00085] 本明細書で使用される場合、「予防剤（prophylactic agent）」および「予防剤（prophylactic agents）」という用語は、状態、疾患、もしくは障害、またはそれらの１つもしくは複数の症状の防止に使用することができるあらゆる作用剤を指す。ある特定の実施形態では、「予防剤」という用語は、本明細書で提供される化合物を含む。ある特定の他の実施形態では、「予防剤」という用語は、本明細書で提供される化合物を指すものではない。ある特定の実施形態では、予防剤は、がんまたは免疫媒介性障害に関連付けられる状態、疾患、または障害の発症、発達、進行、および／または重症度を防止または妨害するために有用であることが公知であるか、または使用されてきたか、または現在使用されているか、あるいは副作用の発症を防止もしくは妨害するために、または副作用（例えば、悪心、嘔吐）の重症度を低減するために有用であることが公知であるか、または使用されてきたか、または現在使用されている作用剤であってもよい。
[00086] 本明細書で使用される場合、「予防的有効量」という語句は、状態、疾患、もしくは障害と関連付けられる１つもしくは複数の症状の発達、再発、もしくは発症の防止もしくは低減をもたらすのに、または副作用を低減もしくは防止するのに、または別の療法（例えば、別の予防剤）の予防効果を強化もしくは向上させるのに十分な療法（例えば、予防剤）の量を指す。
[00087] 「選択」、「選択的濃縮」、または「選択的拡大増殖」は、個体から採取された免疫細胞をｅｘ ｖｉｖｏ培養すること、あるいはドナーに由来する免疫細胞もしくは幹細胞または細胞株を、特定のタイプの免疫細胞、例えばＣＤ８＋Ｔ細胞、もしくは（ＣＤ４５ＲＯ＋／ＣＤ９５＋）メモリーＴ細胞などの特定の表現型を有するＴ細胞の濃縮を伴う上記免疫細胞の増殖を促進する条件下でｉｎ ｖｉｔｒｏ培養することを指す。
[00088] 本明細書で使用される場合、「対象」、「個体」、および「患者」という用語は同義的に使用される。「対象」という用語は、非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット、およびマウス）、および霊長類（例えば、カニクイザル（cynomolgous monkey）などのサル、チンパンジー、およびヒト）、およびある特定の実施形態ではヒトを含む哺乳動物などの動物を指す。ある特定の実施形態では、対象は、家畜動物（例えば、ウマ、ウシ、ブタなど）またはペット（例えば、イヌまたはネコ）である。ある特定の実施形態では、対象はヒトである。
[00089] 本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞機能不全」という用語は、抗原刺激に対する免疫応答性が低減した状態を指す。「Ｔ細胞機能不全」という用語は、抗原認識は生じ得るが、その後の免疫応答が腫瘍成長の制御に対して効果を示さない、Ｔ細胞疲弊および／またはＴ細胞アネルギーの両方の一般的要素を含む。また、「Ｔ細胞機能不全」という用語は、抗原認識を、増殖、サイトカイン産生、および／または標的細胞死滅などの下流Ｔ細胞エフェクター機能へと変換する能力が損なわれているなど、抗原認識に対して不応性または非応答性であることを含む。
[00090] 「Ｔ細胞アネルギー」という用語は、Ｔ細胞受容体を介して送達されるシグナルが不完全または不十分であることに起因する、抗原刺激に対して非応答性の状態を指す。また、「Ｔ細胞アネルギー」は、共刺激の非存在下での抗原刺激の際にもたらされる場合があり、そうすると、細胞は、共刺激の状況においてでさえ抗原によるその後の活性化に対して不応性になってしまう。
[00091] 「Ｔ細胞疲弊」という用語は、がん経過中に起こり得る持続的なＴＣＲシグナル伝達から生じるＴ細胞機能不全の状態を指す。Ｔ細胞疲弊は、不完全なまたは不十分なシグナル伝達によってではなく、持続的なシグナル伝達により生じるという点でアネルギーと区別される。Ｔ細胞疲弊は、不良なエフェクター機能、阻害性受容体の持続的発現、および機能的エフェクターまたはメモリーＴ細胞の転写状態とは異なる転写状態により規定される。
[00092] 「Ｔ細胞耐久性」という用語は、移植または輸注されたＴ細胞が、リザーバーとして存続し、また輸注後一定期間にわたって増殖を継続し、そのＴ細胞による継続的な免疫監視を可能にして、現在のおよび潜在的な将来の悪性腫瘍の根絶を促進する能力を指す。こうしたＴ細胞の一部は、活性化状態にある。また、耐久性は、輸注時に生存または存続する生着細胞の能力を指す。Ｔ細胞応答または細胞生着の耐久性は、疾患寛解に関連付けられる可能性がある。
[00093] 「Ｔ細胞機能不全障害」は、抗原刺激に対するＴ細胞の応答性の減少により特徴付けられる障害または状態である。応答性の減少は、腫瘍の非効果的な制御をもたらす可能性がある。一部の実施形態では、「Ｔ細胞機能不全障害」という用語は、血液がんまたは非血液がんなどのがんを包含する。一部の実施形態では、「Ｔ細胞機能不全障害」は、Ｔ細胞が、アネルギー性であるか、またはサイトカインを分泌し、増殖し、および／もしくは細胞溶解活性を遂行する能力の減少を示す障害である。
[00094] 「Ｔ細胞機能強化」は、Ｔ細胞が持続または増幅された生物学的機能を有するように誘導、誘発、もしくは刺激すること、または疲弊もしくは不活性Ｔ細胞を更新もしくは再活性化することを意味する。Ｔ細胞機能強化の例としては、Ｔ細胞活性化の増加（例えば、サイトカイン産生の増加、Ｔ細胞活性化マーカーの発現増加など）、Ｔ細胞増殖の増加、Ｔ細胞疲弊の減少、および／またはＣｂｌ阻害剤を用いて処理する前のＴ細胞の状態と比べたＴ細胞耐性の減少が挙げられる。Ｔ細胞機能強化を測定するための方法は、当技術分野で公知である。
[00095] 本明細書で使用される場合、「治療有効量」または「有効量」という用語は、対象に投与した際に疾患または障害の治療に効果的である、タンパク質または組成物の量を指す。一部の実施形態では、治療有効量または有効量は、対象に投与した際に疾患または疾患の進行を防止もしくは改善するかまたは症状の改善をもたらすのに効果的である、組成物の量を指す。「療法剤」という用語は、Ｃｂｌ阻害剤、改変された免疫細胞集団、またはそれらの組合せもしくは組成物を指すことができる。
[00096] 任意の疾患または障害を「治療すること」または「治療」は、ある特定の実施形態では、対象に存在する疾患または障害を改善することを指す。別の実施形態では、「治療すること」または「治療」は、対象により識別が不能であってもよい少なくとも１つの物理的パラメーターを改善することを含む。さらに別の実施形態では、「治療すること」または「治療」は、物理的に（例えば、識別可能な症状の安定化）または生理学的に（例えば、物理的パラメーターの安定化）のいずれかまたはその両方で、疾患または障害をモジュレートすることを含む。さらに別の実施形態では、「治療すること」または「治療」は、疾患または障害の発症を遅延または防止することを含む。
[00097] 別の実施形態では、疾患を「治療すること」または「治療」という用語は、臨床結果を含む有益なまたは所望の結果を個体において得るための努力として、1つまたは複数の療法剤を個体（ヒトまたはその他）に投与することを含んでいてもよいプロトコールを遂行することを指す。有益なまたは所望の臨床結果としては、これらに限定されないが、１つまたは複数の症状の緩和または改善、疾患の程度の縮小、疾患の安定した（つまり、悪化しない）状態、疾患拡大の防止、疾患進行の遅延または緩徐、病状の改善または軽減、および寛解（部分的または全体的に関わりなく）が挙げられる。また、「治療」は、治療を受けていない個体の予想生存と比較して、生存を延長させることを意味する場合がある。さらに、「治療すること」および「治療」は、１用量の１つまたは複数の療法剤の投与により生じてもよく、または一連の用量の１つまたは複数の療法剤を投与した際に生じてもよい。「治療すること」または「治療」は、兆候または症状の完全な緩和を必要とせず、治癒を必要としない。また、「治療」は、治療されている個体または細胞の自然な経過を変更するように（つまり、臨床的介入の非存在下で生じると思われる個体または細胞の経過を変更するように）設計された１つまたは複数の療法剤を個体に投与することなど、臨床的介入を指す場合がある。
[00098] 「アルキル」は、本明細書で使用される場合、飽和線状（つまり、非分岐状）もしくは分岐状一価炭化水素鎖またはその組合せを指す。特定のアルキル基は、指定数の炭素原子を有するもの、例えば、１～２０個の炭素原子を有するか（「Ｃ１～Ｃ２０アルキル」）、１～１０個の炭素原子を有するか（「Ｃ１～Ｃ１０」アルキル）、１～８個の炭素原子を有するか（「Ｃ１～Ｃ８アルキル」）、１～６個の炭素原子を有するか（「Ｃ１～Ｃ６アルキル」）、２～６個の炭素原子を有するか（「Ｃ２～Ｃ６アルキル」）、または１～４個の炭素原子を有する（「Ｃ１～Ｃ４アルキル」）アルキル基である。アルキル基の例としては、これらに限定されないが、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、ｔ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチルなどの基、例えば、ｎ－ペンチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－ヘプチル、およびｎ－オクチルなどのホモログおよび異性体が挙げられる。
[00099] 「アミノ」は、－ＮＨ２基を指す。
[000100] 「アリール」は、本明細書で使用される場合、単環（例えば、フェニル）、または縮合環の１つもしくは複数は芳香族でなくともよい複数の縮合環（例えば、ナフチルまたはアントリル）を有する芳香族炭素環式基を指す。特定のアリール基は、６～１４個の環状（つまり、環）炭素原子を有するもの（「Ｃ６～Ｃ１４アリール」）である。少なくとも１つの環が非芳香族である１つよりも多くの環を有するアリール基は、芳香環位置または非芳香環位置のいずれかで親構造に接続されていてもよい。１つの変形例では、少なくとも１つの環が非芳香族である１つよりも多くの環を有するアリール基は、芳香環位置で親構造に接続されている。アリールの例としては、これらに限定されないが、フェニル、ナフチル、１－ナフチル、２－ナフチル、および１，２，３，４－テトラヒドロナフタレン－６－イルなどの基が挙げられる。
[000101] 「アリーレン」は、本明細書で使用される場合、アリールと同じであるが、二価性を有する残基を指す。特定のアリーレン基は、６～１４個の環状炭素原子を有するもの（「Ｃ６～Ｃ１４アリーレン」）である。アリーレンの例としては、これらに限定されないが、フェニレン、ｏ－フェニレン（つまり、１，２－フェニレン）、ｍ－フェニレン（つまり、１，３－フェニレン）、ｐ－フェニレン（つまり、１，４－フェニレン）、ナフチレン、１，２－ナフチレン、１，３－ナフチレン、１，４－ナフチレン、２，７－ナフチレン、および２，６－ナフチレンなどの基が挙げられる。
[000102] 「カルボシクリル」または「炭素環式」は、環員のすべてが炭素原子である、シクロヘキシル、フェニル、１，２－ジヒドロナフチルなどの、一価環式基を指す。
[000103] 「シクロアルキル」は、本明細書で使用される場合、非芳香族の飽和または不飽和環式一価炭化水素構造を指す。特定のシクロアルキル基は、指定数の環状（つまり、環）炭素原子を有するもの、例えば、３～１２個の環状炭素原子を有するシクロアルキル基（「Ｃ３～Ｃ１２シクロアルキル」）である。特定のシクロアルキルは、３～８個の環状炭素原子を有するか（「Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル」）、または３～６個の環状炭素原子を有する（「Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル」）環式炭化水素である。シクロアルキルは、シクロヘキシルなどの１つの環、またはアダマンチルなどの複数の環で構成されていてもよいが、アリール基は除外される。１つよりも多くの環を含むシクロアルキルは、縮合、スピロ、もしくは架橋、またはそれらの組合せであってもよい。シクロアルキル基の例としては、これらに限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、１－シクロヘキセニル、３－シクロヘキセニル、シクロヘプチル、およびノルボルニルなどが挙げられる。
[000104] 「シクロアルキレン」は、本明細書で使用される場合、シクロアルキルと同じであるが、二価性を有する残基を指す。特定のシクロアルキレン基は、３～１２個の環状炭素原子を有するか（「Ｃ３～Ｃ１２シクロアルキレン」）、３～８個の環状炭素原子を有するか（「Ｃ３～Ｃ８シクロアルキレン」）、または３～６個の環状炭素原子を有する（「Ｃ３～Ｃ６シクロアルキレン」）ものである。シクロアルキレン基の例としては、これらに限定されないが、シクロプロピレン、シクロブチレン、シクロペンチレン、シクロヘキシレン、１，２－シクロヘキセニレン、１，３－シクロヘキセニレン、１，４－シクロヘキセニレン、シクロヘプチレン、およびノルボルニレンなどが挙げられる。
[000105] 「ハロ」または「ハロゲン」は、原子番号９～８５を有する第１７族系列の元素を指す。ハロ基としては、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨードが挙げられる。
[000106] 「ハロアルキル」、「ハロアルキレン」、「ハロアリール」、「ハロアリーレン」、「ハロヘテロアリール」、および類似の用語は、少なくとも１つのハロ基で置換されている部分を指す。ハロアルキル部分または他のハロ置換部分は、１つよりも多くのハロゲンで置換されている場合、結合しているハロゲン部分の数に対応する接頭辞を使用することにより参照することができる。例えば、ジハロアリール、ジハロアルキル、トリハロアリール、トリハロアルキルなどは、２つ（「ジ」）または３つ（「トリ」）のハロ基で置換されているアリールおよびアルキルを指し、これらは、同じハロであってもよいが、必ずしもそうではなくともよい。したがって、例えば、ハロアリール基４－クロロ－３－フルオロフェニルは、ジハロアリールの範囲内にある。アルキル基の各水素がハロ基で置き換えられているハロアルキル基のサブセットは、「ペルハロアルキル」と呼ばれる。特定のペルハロアルキル基はトリフルオロアルキル（－ＣＦ３）である。同様に、「ペルハロアルコキシ」は、アルコキシ基のアルキル部分を構成する炭化水素の各Ｈの代わりにハロゲンが存在するアルコキシ基を指す。ペルハロアルコキシ基の例は、トリフルオロメトキシ（－ＯＣＦ３）である。「ハロアルキル」としては、モノハロアルキル、ジハロアルキル、トリハロアルキル、ペルハロアルキル、およびアルキル基において考え得る任意の他の数のハロ置換基；ならびに同様にハロアルキレン、ハロアリール、ハロアリーレン、ハロヘテロアリールなどの他の基が挙げられる。
[000107] 「ヘテロアリール」は、本明細書で使用される場合、１～１４個の環状炭素原子、およびこれらに限定されないが、窒素、酸素、および硫黄などのヘテロ原子を含む少なくとも１つの環状ヘテロ原子を有する不飽和芳香族環式基を指す。ヘテロアリール基は、単環（例えば、ピリジルまたはイミダゾリル）または縮合環の少なくとも１つが芳香族である複数の縮合環（例えば、インドリジニル、インドリル、またはキノリニル）を有していてもよい。特定のヘテロアリール基は、１～１２個の環状炭素原子、ならびに窒素、酸素、および硫黄からなる群から独立して選択される１～６個の環状ヘテロ原子を有する５～１４員環（「５～１４員ヘテロアリール」）；１～８個の環状炭素原子、ならびに窒素、酸素、および硫黄からなる群から独立して選択される１～４個の環状ヘテロ原子を有する５～１０員環（「５～１０員ヘテロアリール」）；または１～５個の環状炭素原子、ならびに窒素、酸素、および硫黄からなる群から独立して選択される１～４個の環状ヘテロ原子を有する５、６、または７員環（「５～７員ヘテロアリール」）である。一変化例では、ヘテロアリールは、１～６個の環状炭素原子、ならびに窒素、酸素、および硫黄からなる群から独立して選択される１～４個の環状ヘテロ原子を有する単環式芳香族５、６、または７員環を含む。別の変化例では、ヘテロアリールは、１～１２個の環状炭素原子、ならびに窒素、酸素、および硫黄からなる群から独立して選択される１～６個の環状ヘテロ原子を有する多環式芳香環を含む。少なくとも１つの環が非芳香族である１つよりも多くの環を有するヘテロアリール基は、芳香環位置または非芳香環位置のいずれかで親構造に接続されていてもよい。ヘテロアリールの例としては、これらに限定されないが、ピリジル、ベンズイミダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾ［ｂ］チエニル、キノリニル、インドリル、およびベンゾチアゾリルなどの基が挙げられる。また、「ヘテロアリール」は、
Figure 2022549303000005
 、２，４－ジヒドロ－３Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－オン－２－イルなどの部分を含み、２，４－ジヒドロ－３Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３－オン－２－イルは、互変異性構造
Figure 2022549303000006
 、１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－オール－１－イルを有する。
[000108] 「ヘテロアリーレン」は、本明細書で使用される場合、ヘテロアリールと同じであるが、二価性を有する残基を指す。特定のヘテロアリーレン基は、１～１２個の環状炭素原子、ならびに窒素、酸素、および硫黄からなる群から独立して選択される１～６個の環状ヘテロ原子を有する５～１４員環（「５～１４員ヘテロアリーレン」）；１～８個の環状炭素原子、ならびに窒素、酸素、および硫黄からなる群から独立して選択される１～４個の環状ヘテロ原子を有する５～１０員環（「５～１０員ヘテロアリーレン」）；または１～５個の環状炭素原子、ならびに窒素、酸素、および硫黄からなる群から独立して選択される１～４個の環状ヘテロ原子を有する５、６、または７員環（「５～７員ヘテロアリーレン」）である。ヘテロアリーレンの例としては、これらに限定されないが、ピリジレン、ベンゾイミダゾリレン（benzimidazolylene）、ベンゾトリアゾリレン（benzotriazolylene）、ベンゾ［ｂ］チエニレン、キノリニレン（quinolinylene）、インドリレン（indolylene）、およびベンゾチアゾリレン（benzothiazolylene）などの基が挙げられる。
[000109] 「ヘテロシクリル」および「複素環式基」は、本明細書で使用される場合、指定の通りの原子およびヘテロ原子の数を有するか、または原子もしくはヘテロ原子の数が指定されていない場合は、少なくとも３つの環状原子、１～１４個の環状炭素原子、ならびにこれらに限定されないが、窒素、酸素、および硫黄などのヘテロ原子を含む少なくとも１つの環状ヘテロ原子を有する非芳香族の飽和または部分的不飽和環式基を指す。複素環式基は、単環（例えば、テトラヒドロチオフェニル、オキサゾリジニル）または複数の縮合環（例えば、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロベンゾ［ｄ］オキサゾリル）を有していてもよい。複数の縮合環としては、これらに限定されないが、二環式、三環式、および四環式環、ならびに架橋またはスピロ環系が挙げられる。複素環基の例としては、これらに限定されないが、アジリジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、オキシラニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、オキサゾリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、ジオキサニル、３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピラニル、および２，３－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾリルなどが挙げられる。
[000110] 「オキソ」は、基＝Ｏ、つまり酸素原子が、炭素または別の元素に二重結合していることを指す。
[000111] 「任意選択により置換された」は、別様の指定がない限り、基が、置換されていないか、またはその基について列挙されている置換基の１つまたは複数（例えば、１、２、３、４、または５つ）で置換されていることを意味し、その場合、置換基は同じであってもよくまたは異なっていてもよい。一実施形態では、任意選択により置換された基は、置換されていない。一実施形態では、任意選択により置換された基は、１つの置換基を有する。別の実施形態では、任意選択により置換された基は、２つの置換基を有する。別の実施形態では、任意選択により置換された基は、３つの置換基を有する。別の実施形態では、任意選択により置換された基は、４つの置換基を有する。一部の実施形態では、任意選択により置換された基は、１～２、１～３、１～４、または１～５つの置換基を有する。複数の置換基が存在する場合、別様に示されていない限り、各置換基は、独立して選択される。例えば、－Ｎ（Ｃ１～Ｃ４アルキル）（Ｃ１～Ｃ４アルキル）基の各（Ｃ１～Ｃ４アルキル）置換基は、－Ｎ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）などの基を生成するように、互いに独立して選択することができる。
[000112] 「小分子」は、本明細書で使用される場合、分子量が２０００ダルトンであるかまたはそれより小さな化合物を指す。
[000113] 本明細書の開示に加えて、「置換された」という用語は、指定の基またはラジカルを修飾するために使用されている場合、指定の基またはラジカルの１つまたは複数の水素原子が各々互いに独立して、本明細書で規定の通りの同じまたは異なる置換基で置き換えられていることを意味することもできる。一部の実施形態では、置換されている基は、１、２、３、もしくは４つの置換基、１、２、もしくは３つの置換基、１もしくは２つの置換基、または１つの置換基を有する。
[000114] 置換基は、別様に示されていない限り、指定の基またはラジカルの任意の化学的に考え得る位置に結合されていてもよい。したがって、－Ｃ１～Ｃ８アルキル－ＯＨは、例えば、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＨおよび－ＣＨ（ＯＨ）－ＣＨ３、ならびに－ＣＨ２Ｃ（ＯＨ）（ＣＨ３）２を含む。
[000115] 式において元素の特定の同位体が示されない限り、本開示は、例えば化合物の重水素化誘導体（Ｈは、２Ｈ、つまりＤであってもよい）などの、本明細書で開示の化合物のすべてのアイソトポログを含む。重水素化化合物は、薬物動態（ADME）特性に好ましい変化をもたらす可能性がある。アイソトポログは、構造の任意のまたはすべての箇所に同位体置き換えを有していてもよく、構造の任意のまたはすべての箇所に天然存在比の原子を有していてもよい。
[000116] 「賦形剤」としては、本明細書で使用される場合、使用される投薬量および濃度においてそれらに曝露されている細胞または哺乳動物に対して無毒性である、薬学的に許容される賦形剤、担体、ビヒクル、または安定剤が挙げられる。多くの場合、生理学的に許容される賦形剤は、水性ｐＨ緩衝溶液である。
[000117] 「医薬製剤」および「医薬組成物」という用語は、活性成分の生物学的活性が効果的であることを可能にするような形態であり、製剤または組成物が投与されることになる個体に対して許容できないほど毒性である追加の成分を含まない調製物を指す。そのような製剤または組成物は無菌性であってもよい。
[000118] 医薬組成物に記載されている通りの化合物、または医薬組成物に対して請求項に記載されている化合物への言及は、医薬組成物の他の要素を有していない、つまり担体、賦形剤などを有していない、医薬組成物に記されている式により記載される化合物を指す。
[000119] 本開示は、本明細書に記載の化合物のすべての塩、ならびに化合物のそのような塩を使用するための方法を包含することが意図されている。一実施形態では、化合物の塩は、薬学的に許容される塩を含む。薬学的に許容される塩は、薬物または医薬品としてヒトおよび／または動物に投与することができ、投与時に、遊離化合物（中性化合物または非塩化合物）の生物学的活性の少なくとも一部を保持する塩である。塩基性化合物の所望の塩は、化合物を酸で処理することにより、当業者に公知の方法で調製することができる。無機酸の例としては、これらに限定されないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、およびリン酸が挙げられる。有機酸の例としては、これらに限定されないが、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、スルホン酸、およびサリチル酸が挙げられる。また、アスパラギン酸塩およびグルタミン酸塩など、塩基性化合物とアミノ酸との塩を調製することができる。酸性化合物の所望の塩は、化合物を塩基で処理することにより、当業者に公知の方法で調製することができる。酸性化合物の無機塩の例としては、これらに限定されないが、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、およびカルシウム塩などのアルカリ金属およびアルカリ土類塩；アンモニウム塩；ならびにアルミニウム塩が挙げられる。酸性化合物の有機塩の例としては、これらに限定されないが、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ－エチルピペリジン、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、およびトリエチルアミン塩が挙げられる。また、リジン塩など、酸性化合物とアミノ酸との塩を調製することができる。薬学的に許容される塩のリストは、例えば、Ｐ．Ｈ．ＳｔａｈｌおよびＣ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（編）「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ，Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ」Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ、２０１１年（ISBN: 978-3-90639-051-2）を参照されたい。幾つかの薬学的に許容される塩は、Ｂｅｒｇｅ、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６巻：１頁（１９７７年）に開示されている。
概要
[000120] 本明細書では、細胞療法のためにＣｂｌ阻害剤を使用するための方法および組成物が提供される。細胞は、当業者が有用であるとみなす任意の免疫細胞であってもよい。ある特定の実施形態では、細胞は、腫瘍浸潤性リンパ球、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＴＣＲ－Ｔ細胞、またはＮＫ－ＣＡＲ細胞である。一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、Ｔ細胞を活性化して、本明細書に記載の通りの所望の結果を可能にするために使用される。一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、共刺激の非存在下でＴ細胞を活性化して、本明細書に記載の通りの所望の結果を可能にするために使用される。
[000121] 細胞療法のための方法は周知であり、本明細書で提供されるステップには、別様の特定がない限り、当業者に公知の標準的技法を使用することができる。一般に、こうした方法は、以下のステップのいずれかまたはすべてを含む。以下に詳細に記載されている通り、１つまたは複数のＣｂｌ阻害剤は、ステップの１つまたは複数を強化することができる。
[000122] 第１のステップでは、細胞をドナーから採取する。採取は、標準的技法で進めることができる。ある特定の実施形態では、循環免疫細胞、例えば血液細胞を、ドナーから採取する。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の腫瘍または腫瘍組織をドナーから得て、断片化し、次いで腫瘍断片から免疫細胞を単離および採取する。第２のステップでは、採取した免疫細胞を１ステップまたは２ステップで拡大増殖する。一般に、採取した循環免疫細胞は、得られる細胞の数が比較的多いため、典型的には１ステップで拡大増殖する。対照的に、腫瘍から採取した免疫細胞は、腫瘍断片から得られる免疫細胞が、血液からのものと比較して数が少ないため、典型的には２ステップで拡大増殖する必要がある。いずれの場合でも、採取した免疫細胞を、拡大増殖前に任意選択により遺伝子改変してもよい。いずれの場合でも、第１の拡大増殖は、３～２８日間、好ましくは３～１４日間にわたって進行させることができる。第１の拡大増殖は、免疫細胞数の数倍の増加をもたらすはずである。
[000123] 一部の方法は、任意選択により第２の拡大増殖を含む。第２の拡大増殖では、細胞培養培地を補完して、そのような補完を用いずに得ることができるよりも、免疫細胞の成長を強化することができる。第２の拡大増殖は、３～１４日間、好ましくは７～１４日間にわたって進行させることができる。重要なことには、ある特定の有利な実施形態では、より以前のステップにおけるＣｂｌ阻害剤の効果のため、腫瘍から採取した免疫細胞には第２の拡大増殖は必要ではない。したがって、ある特定の実施形態では、第２の拡大増殖ステップは存在しない。拡大増殖後（１ステップまたは２ステップに関わらず）、拡大増殖した免疫細胞を回収する。免疫細胞は保管することができる。さらなるステップでは、回収した免疫細胞を、標準的技法、例えば輸注により患者に投与する。下記に詳細に記載されている通り、１つまたは複数のＣｂｌ阻害剤は、採取前の宿主における免疫細胞の成長、拡大増殖、および発達を強化することができ、拡大増殖ステップのいずれかを強化することができ、療法のために免疫細胞の投与を強化することができ、および／または投与後の免疫細胞を強化してそれらの生着を強化することができる。実施形態は、以下の段落には簡潔に、下記の節にはより詳細に記載されている。
[000124] Ｃｂｌ阻害剤は、こうした方法の１つまたは複数のステップに有用である。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、１つのステップで使用される。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、１つよりも多くのステップで使用される。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、２つのステップで使用される。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、３つのステップで使用される。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、ドナーにおけるｉｎ ｖｉｖｏでの免疫細胞の拡大増殖を強化する。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、ｅｘ ｖｉｖｏでの免疫細胞の第１の拡大増殖を強化する。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、ｅｘ ｖｉｖｏでの免疫細胞の第２のまたは急速な拡大増殖を強化する。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、投与された免疫細胞の患者における投与後生着を強化する。ある特定の実施形態では、患者に投与されたＣｂｌ阻害剤は、そのような免疫細胞療法を必要とする患者における、投与された免疫細胞の利益を強化する。
[000125] ある特定の実施形態では、こうした方法は、Ｃｂｌ阻害剤を個体に投与することを含む。個体は、免疫細胞のドナーであってもよい。ドナーは、自家ドナーであり、また療法を必要とする患者であってもよい。また、ドナーは、同種異系療法のために細胞を提供する個体であってもよい。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、免疫細胞の採取前にドナーに投与される。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、ドナーから採取することができる免疫細胞の全体数を増加させる。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、ドナーにおける活性化細胞のレベルを増加させる。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、特定の活性を有する細胞を増加させ、例えば、特定の腫瘍またはがんタイプに対して細胞傷害性であるかまたは結合する。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、腫瘍浸潤性リンパ球のレベルを増加させる。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、循環Ｔ細胞のレベルを増加させる。
[000126] ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、免疫細胞の拡大増殖を強化する。免疫細胞は、標準的技法に従って採取することができる。ある特定の実施形態では、細胞試料は、免疫細胞を含む循環血液細胞または血漿である。ある特定の実施形態では、細胞試料は、免疫細胞を含む腫瘍組織である。ある特定の実施形態では、採取した免疫細胞は、１つまたは複数のＣｂｌ阻害剤の存在下でｅｘ ｖｉｖｏで培養される。一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤の存在下での培養は、腫瘍断片から採取される免疫細胞の収量の増加をもたらす。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤の存在下での培養は、より高い倍増速度をもたらす。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤の存在下での培養は、活性化された免疫細胞の表現型を提示するより高いパーセンテージの倍増細胞をもたらす。例えば、Ｃｂｌ阻害剤の存在下で培養した場合、多数の異なる腫瘍源、つまり黒色腫、乳がん、卵巣腫瘍、または結腸腫瘍の１つから培養した細胞は、ある特定の実施形態では、一部のタイプの細胞ベース免疫療法に望ましい表現型の発現増加を示す。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤の存在下での免疫細胞の培養は、より高い寛解率に関連付けられるより耐久性の免疫応答を促進するメモリー表現型（例えば、CD45RO+/CD95+）を有する細胞をより高いレベルで産出する。Ｃｂｌ阻害剤の存在下で選択的に拡大増殖した免疫細胞は、別のサイトカインであるＩＬ－２、またはそれらの組合せ（例えば、ＩＬ－７およびＩＬ－１５と組み合わせたＩＬ－２）の存在下で培養されたものとは異なる表現型を提示し、それを必要とする患者への輸注時に免疫細胞のより効果的な生着を提供することができる。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤の存在下での拡大増殖は、免疫細胞の第２の急速拡大増殖の必要性を排除する。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、第２の急速拡大増殖ステップを強化する。ある特定の実施形態では、拡大増殖ステップのいずれかにおけるＣｂｌ阻害剤は、化合物１０３である。
[000127] ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、それを必要とするレシピエントまたは患者への免疫細胞の投与を強化する。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、拡大増殖した免疫細胞と組み合わせて、それを必要とする個体に投与される。ある特定の実施形態では、投与は、免疫細胞の生着および／または成長速度を促進する。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤の投与は、免疫応答の耐久性を強化する。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤の投与は、疾患進行速度の顕著な減少および／またはより高い寛解率をもたらす。ある特定の実施形態では、本明細書では、それを必要とする個体における細胞性免疫療法のための方法であって、細胞性免疫療法の強化に有効な量のＣｂｌ阻害剤を個体に投与すること；および細胞性免疫療法のために有効な量の拡大増殖免疫細胞を個体に投与することを含む方法が提供される。Ｃｂｌ阻害剤は、当業者が好適であるとみなす任意の時点で投与することができる。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、採取前、採取後、輸注前、輸注後、またはそれらの任意の組合せで投与される。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、輸注後１日目に投与され、当業者が好適であるとみなす日数にわたって継続される。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、輸注後１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０日間、または最大で１５、２０、２５、３０、もしくは３５日間にわたって毎日投与される。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、経口、静脈内、皮下、または腫瘍内で個体に投与される。ある特定の実施形態では、患者に投与されるＣｂｌ阻害剤は、経口的に送達される化合物１１６である。ある特定の実施形態では、こうした方法を、本明細書に記載の免疫細胞拡大増殖実施形態のいずれかと組み合わせる。ある特定の実施形態では、拡大増殖ステップは、本明細書に記載の通りの化合物１０３の使用を含み、投与ステップは、本明細書に記載の通りの化合物１１６の経口使用を含む。
Ｃｂｌ阻害剤
[000128] Ｃｂｌ阻害剤としては、Ｃｂｌ酵素を阻害する小分子、ペプチド、核酸、または抗体が挙げられる。Ｃｂｌ酵素としては、ｃＣｂｌ、Ｃｂｌ－ｂ、およびＣｂｌ－ｃが挙げられる。本開示の治療方法および組成物に使用するためのＣｂｌ阻害剤としては、これらに限定されないが、細胞ベース免疫療法のための化合物および医薬組成物が挙げられる。Ｃｂｌ阻害剤をｉｎ ｖｉｖｏ治療法で使用して、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、循環Ｔ細胞、腫瘍浸潤性リンパ球、およびＢ細胞の活性化を増加させることなど、免疫系をモジュレートすることができるか、輸注したｅｘ ｖｉｖｏ拡大増殖免疫細胞の生着を増加させることができるか、または輸注したｅｘ ｖｉｖｏ拡大増殖免疫細胞に対する応答の耐久性を増加させることできる。加えて、Ｃｂｌ阻害剤を使用して、このような免疫細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで拡大増殖して、成長および増殖の増加を援助するか、得られる拡大増殖免疫細胞の表現型モジュレーションを援助することができる。
[000129] ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、式（A）による化合物：
Figure 2022549303000007
 もしくはその互変異性体または上述のいずれかの薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、３～６員ヘテロシクリル、Ｃ１～Ｃ６アルキル－（Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル）、Ｃ１～Ｃ６アルキル－（３～６員ヘテロシクリル）であり；
Figure 2022549303000008
 は
Figure 2022549303000009
 であり、
Ｚ１は、ＣＨもしくはＮであり；
Ｚ２は、ＣＨもしくはＮであり；
Ｚ３は、ＣＨもしくはＮであり；
Ｘは、ＣＨもしくはＮであり；
Ｒ２は、Ｈ、ハロ、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、－ＮＨ－（３～６員ヘテロシクリル）、－ＮＨ－（Ｃ１～Ｃ６アルキル）、－ＮＨ－（Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル）、－Ｏ－（３～６員ヘテロシクリル）、－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ６アルキル）、もしくは－Ｏ－（Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル）であり；
Ｒ３ａは、Ｈ、ハロ、もしくはＣ１～Ｃ６アルキルであり；
Ｒ３ｂは、Ｈ、ハロ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、もしくはＣ３～Ｃ６シクロアルキルであるか；またはＲ３ａおよびＲ３ｂは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、４～８員ヘテロシクリルもしくはＣ３～Ｃ６シクロアルキルを形成し、ヘテロシクリルもしくはシクロアルキルは、任意選択により、１～３個のＲ１２基により置換されているか；
または、Ｒ３ｂおよびＲ１１ａは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、任意選択によりＣ１～Ｃ６アルキルにより置換されているＣ３～Ｃ６シクロアルキルを形成し；
ｎは、０もしくは１であり；
Ｙは、Ｃ（Ｒ１１ａ）（Ｒ１１ｂ）もしくはＳであり、任意選択により、Ｒ３ａおよびＲ３ｂのいずれかもしくは両方がハロの場合、Ｙは、Ｃ（Ｒ１１ａ）（Ｒ１１ｂ）であり；
Ｑは、ＣＨもしくはＮであり；
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、もしくはＣ３～Ｃ６シクロアルキルであり；
Ｒ１０は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、もしくはＣ３～Ｃ６シクロアルキルであり；
Ｒ１１ａおよびＲ１１ｂは、独立して、Ｈ、ハロ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、もしくはＣ１～Ｃ６ハロアルキルであるか；またはＲ１１ａおよびＲ１１ｂは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキルを形成するか；またはＲ３ｂおよびＲ１１ａは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、任意選択によりＣ１～Ｃ６アルキルにより置換されているＣ３～Ｃ６シクロアルキルを形成し；
各Ｒ１２は、独立して、Ｃ１～Ｃ６アルキル、ハロ、ヒドロキシ、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ６アルキル）、－ＣＮ、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＣＮ、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＯＨ、もしくはＣ１～Ｃ６ハロアルキルであり；２つのジェミナルＲ１２基は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、スピロＣ３～Ｃ４シクロアルキルを形成することができる。
[000130] ある特定の実施形態では、Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、
Figure 2022549303000010
 である。
[000131] 一部の実施形態では、Ｒ１は、
Figure 2022549303000011
 である。一部の実施形態では、Ｒ１は
Figure 2022549303000012
 である。一部の実施形態では、Ｒ１は、
Figure 2022549303000013
 である。
[000132] 一部の実施形態では、Ｒ１は、
Figure 2022549303000014
 である。
[000133] 式（A）の一部の実施形態では、ＸはＣＨである。一部の実施形態では、ＸはＮである。
[000134] 式（A）の一部の実施形態では、Ｒ２はＨである。一部の実施形態では、Ｒ２は、－ＮＨ－（Ｃ１～Ｃ６アルキル）である。
[000135] 一部の実施形態では、Ｒ２は、－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ６アルキル）である。
[000136] 式（A）の一部の実施形態では、Ｒ３ａおよびＲ３ｂは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、
Figure 2022549303000015
 を形成する。一部の実施形態では、Ｒ３ａおよびＲ３ｂは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、
Figure 2022549303000016
 を形成する。
[000137] 式（A）の一部の実施形態では、Ｒ３ｂは、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキルである。一部の実施形態では、Ｒ３ｂは、シクロブチルである。一部の実施形態では、Ｒ３ａはＨである。
[000138] 式（A）の一部の実施形態では、Ｒ３ｂおよびＲ１１ａは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、任意選択によりＣ１～Ｃ６アルキルにより置換されているＣ３～Ｃ６シクロアルキルを形成する。
[000139] 式（A）の一部の実施形態では、ｎは０である。一部の実施形態では、ｎは１である。
[000140] 式（A）の一部の実施形態では、Ｙは、Ｃ（Ｒ１１ａ）（Ｒ１１ｂ）である。一部の実施形態では、Ｒ１１ａおよびＲ１１ｂは、独立して、Ｈ、Ｆ、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２、またはＣＦ３である。一部の実施形態では、ＹはＣＨ２である。
[000141] 式（A）の一部の実施形態では、ＱはＣＨである。一部の実施形態では、ＱはＮである。
[000142] 式（A）の一部の実施形態では、Ｒ４はＨである。一部の実施形態では、Ｒ４はＣＨ３である。
[000143] 式（A）の一部の実施形態では、Ｒ５ａはＨである。
[000144] 式（A）の一部の実施形態では、Ｒ１は、
Figure 2022549303000017
 である。
[000145] 式（A）の一部の実施形態では、Ｒ５ｂはＨである。
[000146] 式（A）の一部の実施形態では、Ｒ１は、
Figure 2022549303000018
 である。
[000147] 式（A）の一部の実施形態では、Ｒ１は、
Figure 2022549303000019
 である。
[000148] 式（A）の一部の実施形態では、Ｒ１は、メチルである。式（A）の一部の実施形態では、Ｒ１は、トリフルオロメチルである。
[000149] 式（A）の一部の実施形態では、Ｚ１はＣＨである。一部の実施形態では、Ｚ１はＮである。一部の実施形態では、Ｚ２はＣＨである。一部の実施形態では、Ｚ２はＮである。一部の実施形態では、Ｚ３はＣＨである。一部の実施形態では、Ｚ３はＮである。
[000150] 式（A）の一部の実施形態では、Ｒ１０はＨである。一部の実施形態では、Ｒ１０はＣＨ３である。一部の実施形態では、Ｒ１０はＣＦ３である。一部の実施形態では、Ｒ１０はシクロプロピルである。一部の実施形態では、Ｒ１０はシクロプロピルであり、Ｒ１はメチルである。
[000151] 式（A）の一部の実施形態では、Ｒ３ａおよびＲ３ｂは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、任意選択により１つのＲ１２基により置換されているＣ３～Ｃ６シクロアルキルを形成する。一部の実施形態では、Ｒ３ａおよびＲ３ｂは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｃ１～Ｃ６アルキル、－ＣＮ、またはＣ１～Ｃ６アルキル－ＣＮにより置換されているＣ３～Ｃ６シクロアルキルを形成する。
[000152] 一部の実施形態では、Ｒ３ａおよびＲ３ｂは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、任意選択によりＣＮまたはＣＨ３により置換されているＣ３～Ｃ６シクロアルキルを形成する。
[000153] ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、表１の化合物である。化合物は、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０２０／０２７４９２号パンフレットもしくはＰＣＴ／ＵＳ２０２０／０３３２７４号パンフレットまたは米国特許仮出願第６２／８８８，８４５号明細書もしくは第６２／８８８，８７０号明細書に従って調製される。これら文献の各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
Figure 2022549303000020
Figure 2022549303000021
[000154] 一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物および方法で使用するための、表１の化合物番号１０１～１２９から選択される化合物、もしくはその互変異性体、または上述のいずれかの薬学的に許容される塩が提供される。
[000155] 一部の実施形態では、参照によりその全体が組み込まれる国際公開第２０１９／１４８００５号パンフレットに開示されている小分子Ｃｂｌ阻害剤の１つまたは複数が、本明細書に記載の方法に使用される。
[000156] また、本開示は、本明細書に記載の化合物の任意のエナンチオマーまたはジアステレオマー形態、およびシス／トランスまたはＥ／Ｚ異性体を含む、立体化学形態のいずれかまたはすべてを含む。化学構造または名称において立体化学が明示的に示されていない限り、構造または名称は、図示されている化合物のすべての考え得る立体異性体を包含することが意図されている。加えて、特定の立体化学形態が図示されている場合、化合物のラセミ、非ラセミ、高エナンチオ純度、およびスケールミック（scalemic）混合物が包含されるように、開示されているものの２つまたはそれよりも多くの立体化学形態の任意の比の混合物を含む、すべての他の立体化学形態、ならびに本開示の化合物の一般的な非立体特異的形態および任意の比の混合物も、本開示により記載および包含されていることが理解される。その特定の立体化学形態を含む実質的に純粋な化合物の組成物など、本開示の化合物を含む組成物も意図されている。化合物のラセミ、非ラセミ、高エナンチオ純度、およびスケールミック混合物が本開示に包含されるように、開示化合物の２つまたはそれよりも多くの立体化学形態の任意の比の混合物を含む組成物を含む、開示化合物の任意の比の混合物を含む組成物も、本開示により包含される。分子の１つまたは複数の部分について立体化学が明示的に示されているが、分子の別の１つまたは複数の部分については示されていない場合、構造は、立体化学が明示的に示されていない１つまたは複数の部分についてすべての考え得る立体異性体を包含することが意図されている。本開示は、本明細書に記載の化合物のありとあらゆる互変異性形態を包含する。
[000157] 本開示は、本明細書に記載の化合物のすべての塩、ならびに化合物のそのような塩を使用するための方法を包含する。一実施形態では、化合物の塩は、薬学的に許容される塩を含む。薬学的に許容される塩は、薬物または医薬品としてヒトおよび／または動物に投与することができ、投与時に、遊離化合物（中性化合物または非塩化合物）の生物学的活性の少なくとも一部を保持する塩である。塩基性化合物の所望の塩は、化合物を酸で処理することにより、当業者に公知の方法で調製することができる。無機酸の例としては、これらに限定されないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、およびリン酸が挙げられる。有機酸の例としては、これらに限定されないが、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、スルホン酸、およびサリチル酸が挙げられる。また、アスパラギン酸塩およびグルタミン酸塩など、塩基性化合物とアミノ酸との塩を調製することができる。酸性化合物の所望の塩は、化合物を塩基で処理することにより、当業者に公知の方法で調製することができる。酸性化合物の無機塩の例としては、これらに限定されないが、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、およびカルシウム塩などのアルカリ金属およびアルカリ土類塩；アンモニウム塩；ならびにアルミニウム塩が挙げられる。酸性化合物の有機塩の例としては、これらに限定されないが、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ－エチルピペリジン、Ｎ、Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、およびトリエチルアミン塩が挙げられる。また、リジン塩など、酸性化合物とアミノ酸との塩を調製することができる。薬学的に許容される塩のリストは、例えば、Ｐ．Ｈ．ＳｔａｈｌおよびＣ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（編）「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ，Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ」Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ、２０１１年（ISBN: 978-3-90639-051-2）を参照されたい。幾つかの薬学的に許容される塩は、Ｂｅｒｇｅ、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６巻：１頁（１９７７年）にも開示されている。
[000158] 一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、国際公開第２０１９／１４８００５号パンフレットに開示の通りに調製される。この文献は、参照によりその全体が組み込まれる。一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、これに限定されないが、Ｐｒｏｇｅｎｒａ，Ｉｎｃ社を含む供給元から市販されている。
[000159] 一部の実施形態では、化合物１０１～１２９のいずれか、またはそれらの２つまたはそれよりも多くの組合せが、本明細書に記載の組成物および／または方法に使用される。他の実施形態では、参照によりその全体が組み込まれる国際公開第２０１９／１４８００５号パンフレットに開示の通りのＣｂｌ阻害剤化合物の１つまたは複数が、本開示の方法における阻害剤として使用される。
[000160] 種々の実施形態では、本明細書にさらに記載されている通り、本明細書で提供される通りのＣｂｌ阻害剤化合物（ならびに本明細書に記載の化合物を含む組成物、およびそうした化合物または組成物を使用するための方法）は、国際公開第２０１９／１４８００５号パンフレットの生物学的実施例１に記載の通りのｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｃｂｌ阻害アッセイで測定して、１ｎＭ未満、１～１００ｎＭ、１００ｎＭ～３００ｎＭ、３０１ｎＭ～１０００ｎＭ、１，００１ｎＭ～３，０００ｎＭ、３，００１ｎＭ～１０，０００ｎＭ、または１０，０００ｎＭよりも大きなＩＣ５０値を有する。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、国際公開第２０１９／１４８００５号パンフレットの生物学的実施例１に記載の通りのｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｃｂｌ阻害アッセイにおいて約０．１～１０ｎＭのＩＣ５０を有する。さらなる実施形態では、本明細書にさらに記載されている通り、本明細書で提供される通りの化合物（ならびに本明細書に記載の化合物を含む組成物、およびそうした化合物または組成物を使用するための方法）は、国際公開第２０１９／１４８００５号パンフレットの生物学的実施例１に記載の通りのｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｃｂｌ阻害アッセイにおいて、１００ｎＭ未満のＩＣ５０値を有する。さらなる実施形態では、本明細書にさらに記載されている通り、本明細書で提供される通りの化合物（ならびに本明細書に記載の化合物を含む組成物、およびそうした化合物または組成物を使用するための方法）は、国際公開第２０１９／１４８００５号パンフレットの生物学的実施例１に記載の通りのｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｃｂｌ阻害アッセイで決定して、１００ｎＭ～３００ｎＭのＩＣ５０値を有する。さらなる実施形態では、本明細書にさらに記載されている通り、本明細書で提供される通りの化合物（ならびに本明細書に記載の化合物を含む組成物、およびそうした化合物または組成物を使用するための方法）は、国際公開第２０１９／１４８００５号パンフレットの生物学的実施例１に記載の通りのｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｃｂｌ阻害アッセイで決定して、３０１ｎＭ～１０００ｎＭのＩＣ５０値を有する。さらなる実施形態では、本明細書にさらに記載されている通り、本明細書で提供される通りの化合物（ならびに本明細書に記載の化合物を含む組成物、およびそうした化合物または組成物を使用するための方法）は、国際公開第２０１９／１４８００５号パンフレットの生物学的実施例１に記載の通りのｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｃｂｌ阻害アッセイで決定して、１，００１ｎＭ～３，０００ｎＭのＩＣ５０値を有する。さらなる実施形態では、本明細書にさらに記載されている通り、本明細書で提供される通りの化合物（ならびに本明細書に記載の化合物を含む組成物、およびそうした化合物または組成物を使用するための方法）は、国際公開第２０１９／１４８００５号パンフレットの生物学的実施例１に記載の通りのｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｃｂｌ阻害アッセイで決定して、３，００１ｎＭ～１０，０００ｎＭのＩＣ５０値を有する。さらなる実施形態では、本明細書にさらに記載されている通り、本明細書で提供される通りの化合物（ならびに本明細書に記載の化合物を含む組成物、およびそうした化合物または組成物を使用するための方法）は、国際公開第２０１９／１４８００５号パンフレットの生物学的実施例１に記載の通りのｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｃｂｌ阻害アッセイで決定して、１０，０００ｎＭよりも大きなＩＣ５０値を有する。
[000161] 一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、合成または天然に存在するペプチドである。一部の実施形態では、ペプチドは融合タンパク質である。ペプチドは、例えば、チロシン（６０８）リン酸化インスリン受容体基質－１（IRS-1）のＤＧｐＹＭＰペプチドミメティック（Cblin）であってもよく、または、例えば、細胞送達部分およびカシタスｂ系統リンパ腫－ｂ（Cbl）結合ペプチドを含む融合ペプチドであって、Ｃｂｌ結合ペプチドは、配列Ｎ／ＤＸ１ＰＹＸ２Ｐを有し、配列中、Ｘ、Ｘ１、およびＸ２は、任意のアミノ酸から選択され、Ｎ／Ｄは、アスパラギン（N）またはアスパラギン酸（D）のいずれかであり、ｐＹは、Ｃｂｌのチロシンキナーゼ結合（TKB）ドメインに結合するホスホチロシンであり、一部の実施形態では、Ｃｂｌ結合ペプチドは、脾臓チロシンキナーゼ（Syk）のペプチド断片である、融合ペプチドであってもよい。
[000162] 一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、抗体、例えば、Ｃｂｌエピトープに選択的に結合し、それによりＣｂｌを不活化するものである。モノクローナルおよびポリクローナル抗Ｃｂｌ抗体は、本開示の方法および組成物に使用することができる。
[000163] 一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、核酸、例えば、Ｃｂｌタンパク質、例えばＣｂｌを標的とするｓｉＲＮＡである。例えば、米国特許第１０，４２１，９４５号明細書を参照されたい。米国特許第１０，４２１，９４５号明細書、米国特許第９，１８６，３７３号明細書、または米国特許第８，８０９，２８８号明細書に記載の通りのｓｉＲＮＡ組成物も、本開示の方法に使用することができる。
[000164] ある特定の実施形態では、本開示のＣｂｌ阻害剤は、自家細胞ベース免疫療法を受けている個体に、経口、静脈内、皮下、腫瘍内、もしくは肺投与によりｉｎ ｖｉｖｏで投与されるか、または同種異系細胞ベース免疫療法の場合は、経口、静脈内、皮下、または肺投与により、免疫細胞を提供するドナーに投与される。
細胞の採取
[000165] 本明細書に記載の細胞療法方法では、細胞はドナーから採取される。細胞は、当業者が好適であるとみなす任意の細胞であってもよい。採取は、標準的技法によるものであってもよい。ある特定の実施形態では、免疫細胞がドナーから採取される。ある特定の実施形態では、免疫細胞は循環免疫細胞であり、アフェレーシスにより採取される。ある特定の実施形態では、循環細胞は、白血球アフェレーシスにより採取される。ある特定の実施形態では、免疫細胞は、ドナーから得られる腫瘍から採取される。ある特定の実施形態では、腫瘍は、生検または固形腫瘍組織の外科的除去によりドナーから得られる。一部の実施形態では、腫瘍組織を個体から取り出し、断片化するかまたは酵素消化に供して細胞外マトリックスを破壊し、および／または機械的破壊して、培養前に腫瘍細胞懸濁物を製作し、そこから免疫細胞を単離することになる。初期細胞集団は、末梢血、臍帯血、腫瘍もしくは腫瘍生検、リンパ、皮膚、腫瘍浸潤性リンパ球に由来するか、または幹細胞前駆体および誘導多能性幹細胞に由来する不均質な細胞集団であってもよい。培養条件は、得られる細胞集団で所望の免疫細胞が濃縮されるように、他の細胞タイプよりも免疫細胞の成長に有利である。
[000166] 本明細書に記載の方法では、ドナーがＣｂｌ阻害剤で前処置されているか否かに関わらず、同じ除去および拡大増殖ステップを使用することができる。
[000167] 一部の実施形態では、１０６～１０１０個の細胞が、選択および拡大増殖のために白血球アフェレーシスにより収集される。一部の実施形態では、１０８～１０１０個の細胞が、選択および拡大増殖のために白血球アフェレーシスにより収集される。一部の実施形態では、１０９～１０１０個の細胞が、選択および拡大増殖のために収集される。
[000168] ある特定の実施形態では、ＴＩＬの単離および拡大増殖のために、例えば、１ｍｍ３～２ｃｍ３の腫瘍断片が患者から単離される。一部の実施形態では、収集される腫瘍断片は、０．５ｍｍ３～１ｃｍ３である。一部の実施形態では、腫瘍断片は、１ｍｍ３～８ｍｍ３である。一部の実施形態では、収集される腫瘍断片は、１ｍｍ３～５ｍｍ３である。一部の実施形態では、収集される腫瘍断片は、１ｍｍ３～３ｍｍ３である。
[000169] ある特定の実施形態では、１つまたは複数のＣｂｌ阻害剤は、採取ステップを強化する。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のＣｂｌ阻害剤は、採取前にｉｎ ｖｉｖｏで免疫細胞を活性化する。そのような実施形態では、１つまたは複数のＣｂｌ阻害剤は、採取するための所望の細胞を強化するのに十分な量でドナーに投与される。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のＣｂｌ阻害剤は、採取前に個体に投与される。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、ｉｎ ｖｉｖｏ活性化を強化する。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、ｉｎ ｖｉｖｏ分化を強化する。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、ｉｎ ｖｉｖｏ刺激を強化する。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、細胞のｉｎ ｖｉｖｏプライミングを強化する。一部の個体では、Ｃｂｌ阻害剤の投与は、患者が罹患しているがんまたは腫瘍を特異的に認識する免疫細胞の増殖を刺激する。
[000170] Ｃｂｌ阻害剤の用量は、当業者が好適であるとみなす任意の用量であってもよい。ある特定の実施形態では、用量は、採取が所望である細胞の強化に効果的である。ある特定の実施形態では、用量は、０．００１～５０００ｍｇ、０．０１～２５００ｍｇ、０．１～２０００ｍｇ、１～１５００ｍｇ、１～１０００ｍｇ、１～７５０ｍｇ、１～５００ｍｇ、１～４００ｍｇ、１～３００ｍｇ、１～２５０ｍｇ、１～２００ｍｇ、１～１００ｍｇ、１～１０ｍｇ、０．１～１０ｍｇ、０．１～５ｍｇ、または０．１～１ｍｇのＣｂｌ阻害剤である。ある特定の実施形態では、用量は、１～５０００ｍｇ、１～２５００ｍｇ、１～２０００ｍｇ、１～１５００ｍｇ、１～１０００ｍｇ、１～７５０ｍｇ、１～５００ｍｇ、１～４００ｍｇ、１～３００ｍｇ、１～２５０ｍｇ、１～２００ｍｇ、１～１００ｍｇ、１～１０ｍｇ、０．１～１０ｍｇ、０．１～５ｍｇ、または０．１～１ｍｇである。
[000171] 用量は、当業者が好適であるとみなすスケジュールで一定期間にわたって投与される。ある特定の実施形態では、投薬量は、採取しようとする所望の細胞の強化に十分である。一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤による治療期間、つまりｉｎ ｖｉｖｏ活性化期間は、約１分～約１時間、約５分～約１時間、約１０分から約１時間、約１５分～約１時間、約２０分～約１時間、約３０分～約１時間、約４５分～約１時間、約１時間～約２時間、約１時間～約４時間、約１時間～約６時間、約１時間～約８時間、約１時間～約１２時間、約１時間～約２４時間、約２時間～約２４時間、約６時間～約７時間、約６時間～約２４時間、約８時間～約２４時間、約１０時間～約２４時間、約１５時間～約２４時間、約２０時間～約２４時間、約１２時間～約４８時間、約２４時間～約４８時間、または約３６時間～約４８時間である。一部の実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏ活性化期間は、約１分間、約５分間、約１０分間、約１５分間、約２０分間、約３０分間、約４０分間、約５０分間、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１２時間、約１４時間、約１６時間、約１８時間、約２０時間、約２２時間、または約２４時間である。一部の実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏ活性化期間は、約１日間、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、または約７日間、１～２日間、１～３日間、１～４日間、１～５日間、１～６日間、１～７日間、１～１０日間、１～１４日間、１～２１日間、１～２８日間、または１～４５日間、１～６０日間、２～３日間、２～４日間、２～５日間、２～６日間、２～７日間、２～１０日間、２～１４日間、２～２１日間、２～２８日間、または２～４５日間、２～６０日間、４～５日間、４～６日間、４～７日間、４～１０日間、４～１４日間、４～２１日間、４～２８日間、４～４５日間、４～６０日間、７～１０日間、７～１４日間、７～２１日間、７～２８日間、７～４５日間、または７～６０日間である。一部の実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏ拡大増殖期の長さは、０～４日間、０～７日間、０～１１日間、０～１４日間、または０～３０日間である。
[000172] 一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、または顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（G-MCSF）、またはそれらの組合せからなる群から選択される作用剤と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、ＩＬ－２と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、ＩＬ－４と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、ＩＬ－７と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、ＩＬ－１５と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、ＩＬ－７およびＩＬ－１５と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、ＩＬ－１２と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、ＩＬ－２１と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、Ｇ－ＭＣＳＦと組み合わせて投与される。
[000173] 一部の実施形態では、ドナーの免疫細胞集団の生物学的活性は、活性化の前および後ならびに／または採取前に測定される。免疫細胞は、当技術分野で公知の方法により測定することができる。評価するパラメーターとしては、活性化前および後の細胞の総数または活性が挙げられる。例えば、ｉｎ ｖｉｖｏで（例えば、画像化により）またはｅｘ ｖｉｖｏで（例えば、ＥＬＩＳＡまたはフローサイトメトリーにより）、改変された免疫細胞または他の免疫細胞の抗原に対する特異的結合を測定することができる。一部の実施形態では、標的細胞を破壊する免疫細胞の能力は、例えば、Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ、３２巻（７号）：６８９～７０２頁（２００９年）およびＨｅｒｍａｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ、２８５巻（１号）：２５～４０頁（２００４年）に記載の細胞傷害性アッセイなどの、当技術分野で公知の任意の好適な方法を使用して測定することができる。また、一部の実施形態では、免疫細胞の生物学的活性は、ＩＬ－２およびＩＦＮγなど、ある特定のサイトカインの発現および／または分泌をアッセイすることにより測定することができる。一部の実施形態では、治療を開始する前に、腫瘍の初期サイズおよび／または数が評価される。
[000174] 一部の実施形態では、免疫細胞は、細胞株に由来する。一部の実施形態では、免疫細胞は、拡大増殖前に遺伝子操作されている。一部の実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞株、Ｂ細胞株、およびＮＫ細胞株から選択される細胞株に由来する。一部の実施形態では、選択的に拡大増殖しようとする免疫細胞、または選択的に拡大増殖し、任意選択により遺伝子操作しようとする免疫細胞を含む細胞集団は、細胞株（例えば、Ｔ細胞株、Ｂ細胞株、ＮＫ細胞株など）に由来する。一部の実施形態では、免疫細胞は、マウス、ラット、非ヒト霊長類、またはブタなどの異種供給源から得られる。一部の実施形態では、細胞株は、細胞ベース免疫療法に使用するために、採取前にＣｂｌ阻害剤に曝露される。
[000175] ある特定の実施形態では、採取した細胞を、凍結保存培地で製剤化し、少なくとも１か月間、２か月間、３か月間、４か月間、６か月間、１年間、２年間、３年間、または少なくとも５年間の長期保管のために、液体窒素冷凍庫（－１９５℃）または超低温冷凍庫（－６５℃、－８０℃、または－１２０°Ｃ）などの凍結保存ユニットに入れる。凍結保存培地は、培養培地または６．０～６．５、６．５～７．０、６．５～７．５、７．０～７．５、７．５～８．０、もしくは８．０～８．５のｐＨを維持するための生理学的緩衝剤と共に、グリセロール、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、ＮａＣｌ、デキストロース、デキストラン硫酸、および／またはヒドロキシエチルスターチ（HES）を含んでいてもよい。凍結細胞は、解凍して、刺激および／または拡大増殖の繰り返しに供することができる。一部の実施形態では、凍結保存細胞は、解凍して、組換えＴ細胞受容体またはキメラＴ細胞受容体を発現するように遺伝子改変される。
[000176] 一部の実施形態では、解凍した細胞を、本明細書に記載の方法により拡大増殖する。Ｔ細胞をさらに凍結保存して、凍結培地１ｍＬ当たり少なくとも約１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９個の、または少なくとも約１０１０個の細胞の少なくとも約１、５、１０、１００、１５０、２００、または５００個のバイアルの量の細胞バンクを生成することができる。凍結保存細胞バンクは、それらの機能性を保持することができ、解凍してさらに刺激および拡大増殖することができる。
[000177] 一部の態様では、解凍した細胞は、細胞培養バッグおよび／またはバイオリアクターなどの好適な密閉容器内で刺激および拡大増殖して、大量の細胞を同種異系細胞産物として生成することができる。
[000178] ある特定の実施形態では、凍結保存Ｔ細胞は、それらの生物学的機能を、極低温保存条件下で少なくとも約６か月間、７か月間、８か月間、９か月間、１０か月間、１１か月間、１２か月間、１３か月間、１５か月間、１８か月間、２０か月間、２４か月間、３０か月間、３６か月間、４０か月間、５０か月間、または少なくとも約６０か月間維持する。
[000179] ある特定の実施形態では、採取した細胞集団は、細胞集団をｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで拡大増殖する前に、ある特定のタイプの免疫細胞が濃縮される選択的条件下で単離または培養する。一部の実施形態では、選択的条件により、細胞集団は特定のＴ細胞集団が濃縮される。他の実施形態では、選択的条件により、細胞集団は、所望のＴ細胞成熟レベル、表現型、または特異性が優勢になるように濃縮される。
遺伝子改変細胞
[000180] ある特定の実施形態では、採取した免疫細胞は、例えば、拡大増殖前に遺伝子操作される。一部の実施形態では、免疫細胞はＴ細胞であり、Ｔ細胞は、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞）または組換えＴ細胞受容体（TCR）を発現するように遺伝子改変されている。Ｔ細胞は、当技術分野で確立されている方法により、ＣＡＲ受容体またはＴＣＲ受容体を発現して、がん関連抗原または悪性腫瘍関連抗原を認識するように遺伝子改変されていてもよい。例えば、Ｂｒｅｎｎｅｒら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２２巻（２号）：２５１～２５７頁（２０１０年）；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ、８巻（４号）：２９９～３０８頁（２００８年）を参照されたい。Ｔ細胞は、抗原認識部分およびＴ細胞活性化ドメインで構成される融合タンパク質であるキメラ抗原受容体（CAR）を発現するように遺伝子改変されていてもよい。例えば、Ｅｓｈｈａｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０巻（２号）：７２０～７２４頁（１９９３年）およびＳａｄｅｌａｉｎら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２１巻（２号）：２１５～２２３頁（２００９年）を参照されたい。一部の実施形態では、免疫細胞はＮＫ細胞であり、ＮＫ細胞は、キメラ抗原受容体（ＮＫ ＣＡＲ細胞）または組換えＴ細胞受容体（TCR）を発現するように遺伝子改変されている。
免疫細胞の拡大増殖
[000181] ある特定の実施形態では、本明細書に記載の免疫細胞は、当業者が好適であるとみなす任意の方法により培養で拡大増殖される。その場合、標準的技法が有用である。一部の実施形態では、免疫細胞のｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏ拡大増殖は、ガス透過性膜を含む１つまたは複数の培養容器で実施される。他の実施形態では、免疫細胞のｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで拡大増殖は、Ｇ－Ｒｅｘ（商標）細胞培養容器を使用して実施される。
循環免疫細胞
[000182] ある特定の実施形態では、血液に由来する免疫細胞は、１回の拡大増殖で拡大増殖される。一部の実施形態では、免疫細胞は、ガス透過性膜を含む培養容器を使用して拡大増殖される。ある特定の実施形態では、免疫細胞は、Ｇ－Ｒｅｘ（商標）細胞培養容器を使用した単回拡大増殖を使用して拡大増殖される。有利なことに、一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤の存在下での拡大増殖により、十分な数および／または活性の免疫細胞が産出される。
[000183] 一部の実施形態では、循環免疫細胞を、患者から収集し、得られた細胞を患者へと輸注する前にｅｘ ｖｉｖｏで拡大増殖して細胞数を約１０９～約２×１０１１細胞へと増加させる。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、その非存在下での拡大増殖と比べて、細胞数を増加させる。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、その非存在下での拡大増殖と比べて、細胞の１つまたは複数の表現型を向上させる。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、その非存在下での拡大増殖と比べて、拡大増殖時間を減少させる。ある特定の実施形態では、拡大増殖は、１０日後またはそれよりも短日数で完了する。ある特定の実施形態では、免疫細胞は、Ｃｂｌ阻害剤の非存在下での拡大増殖と比べて、Ｃｂｌ阻害剤を有する培養中で少なくとも１回の追加の倍加を完了する。
[000184] ある特定の実施形態では、血液に由来する免疫細胞は、１回の拡大増殖で拡大増殖される。一部の実施形態では、免疫細胞は、ガス透過性膜を含む培養容器を使用して拡大増殖される。ある特定の実施形態では、免疫細胞は、Ｇ－Ｒｅｘ（商標）細胞培養容器を使用した単回拡大増殖を使用して拡大増殖される。有利なことに、一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤の存在下での拡大増殖により、十分な数および／または活性の免疫細胞が産出される。
腫瘍免疫細胞
[000185] 一部の実施形態では、腫瘍免疫細胞を患者から収集し、ｅｘ ｖｉｖｏで２回拡大増殖する。１回目は所望の免疫細胞を選択的に拡大増殖するためであり、その後の２回目の拡大増殖は、得られた細胞を患者へと輸注する前に、細胞数を約１０９～約２×１０１１細胞へとさらに増加させるためである（「倍加拡大増殖(double expansion)」）。他の実施形態では、免疫細胞を患者から収集し、得られた細胞を患者に輸注する前に、約１０９～約２×１０１１細胞の細胞数へとｅｘ ｖｉｖｏで１回だけ拡大増殖する（「単回拡大増殖」）。他の実施形態では、単回拡大増殖は、Ｇ－Ｒｅｘ（商標）細胞培養容器で生じる。一部の実施形態では、倍加拡大増殖は、単一の細胞培養容器で生じる。他の実施形態では、倍加拡大増殖は、同じＧ－Ｒｅｘ（商標）細胞培養容器で生じる。
拡大増殖培養
[000186] ある特定の方法では、拡大増殖中の細胞を、増殖を促進するための１つまたは複数の作用剤または化合物の存在下で培養し、これは、それを必要とする個体へと輸注する前に特に所望の成熟レベルの細胞を濃縮することを含む。有用な化合物としては、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの組合せなどの、炎症促進性サイトカインが挙げられる。一部の実施形態では、サイトカインはＩＬ－２である。一部の実施形態では、サイトカインはＩＬ－４である。一部の実施形態では、サイトカインはＩＬ－７である。一部の実施形態では、サイトカインはＩＬ－１２である。一部の実施形態では、サイトカインはＩＬ－１５である。一部の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－７およびＩＬ－１５の組合せである。一部の実施形態では、サイトカインはＩＬ－２１である。一部の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－７、およびＩＬ－１５の組合せである。
[000187] 各サイトカインは、０～２５０００ＩＵ／ｍｌ、または０～１０，０００ＩＵ／ｍｌ、または０～５０００ＩＵ／ｍｌ、または０～２５００ＩＵ／ｍｌ、または０～１０００ＩＵ／ｍｌ、または０～５００ＩＵ／ｍｌ、または０～１００ＩＵ／ｍｌの濃度で使用することができる。拡大増殖中に使用されるサイトカインは、培養中に細胞により使用された量を置き換えるために、任意選択により培養中に補充してもよい。
[000188] ある特定の方法では、拡大増殖中の細胞には、培養中に細胞により使用された量を補充するために追加のＩＬ－２が提供される。一部の実施形態では、ＩＬ－２は、単回拡大増殖(single expansion)中に補充される。他の実施形態では、ＩＬ－２は、倍加拡大増殖中に補充されるが、選択的拡大増殖期にのみ補充される。他の実施形態では、ＩＬ－２は、倍加拡大増殖中に補充されるが、第２の拡大増殖期中にのみ補充される。他の実施形態では、ＩＬ－２は、倍加拡大増殖中の選択的拡大増殖期中および第２の拡大増殖期中の両方で補充される。他の実施形態では、ＩＬ－２は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１日毎に培養へと添加される（単回拡大増殖中であるか、選択的拡大増殖中であるか、第２の拡大増殖中であるか、または選択的拡大増殖中および第２の拡大増殖中の両方であるかに関わらず）。他の実施形態では、ＩＬ－２は、拡大増殖中に１回、２回、または３回のみ補充される（単回拡大増殖中であるか、選択的拡大増殖中であるか、第２の拡大増殖中であるか、または選択的拡大増殖中および第２の拡大増殖中の両方であるかに関わらず）。
[000189] ある特定の方法では、拡大増殖中の細胞には、培養中に細胞により使用された量を補充するために、追加のＩＬ－７およびＩＬ－１５が提供される。一部の実施形態では、ＩＬ－７およびＩＬ－１５は、単回拡大増殖中に補充される。他の実施形態では、ＩＬ－７およびＩＬ－１５は、倍加拡大増殖中に補充されるが、選択的拡大増殖期にのみ補充される。他の実施形態では、ＩＬ－７およびＩＬ－１５は、倍加拡大増殖中に補充されるが、第２の拡大増殖期中にのみ補充される。他の実施形態では、ＩＬ－７およびＩＬ－１５は、倍加拡大増殖中の選択的拡大増殖期中および第２の拡大増殖期中の両方に補充される。他の実施形態では、ＩＬ－７およびＩＬ－１５は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１日毎に培養へと添加される（単回拡大増殖中であるか、選択的拡大増殖中であるか、第２の拡大増殖中であるか、または選択的拡大増殖中および第２の拡大増殖中の両方であるかに関わらず）。他の実施形態では、ＩＬ－７およびＩＬ－１５は、拡大増殖中に１回、２回、または３回のみ補充される（単回拡大増殖中であるか、選択的拡大増殖中であるか、第２の拡大増殖中であるか、または選択的拡大増殖中および第２の拡大増殖中の両方であるかに関わらず）。
[000190] ある特定の方法では、細胞は、免疫刺激剤の存在下で培養される。一部の実施形態では、免疫刺激剤は、免疫細胞の表面受容体に結合する化合物である。表面受容体は、当業者により認識される任意のそのような表面受容体のいずれであってもよい。一部の実施形態では、免疫刺激剤は、Ｔ細胞受容体に結合する化合物である。一部の実施形態では、免疫刺激剤は、ＣＤ３に結合する化合物である。一部の実施形態では、免疫刺激剤は、抗ＣＤ３抗体である。一部の実施形態では、免疫刺激剤は、ＣＤ２８に結合する化合物である。一部の実施形態では、免疫刺激剤は、抗ＣＤ２８抗体である。一部の実施形態では、免疫刺激剤は、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体の組合せである。他の実施形態では、免疫刺激剤は、表面に固定化されている。他の実施形態では、免疫刺激剤は、磁気ビーズに固定化されている。
[000191] ある特定の方法では、細胞は、フィーダー細胞の存在下で培養される。フィーダー細胞は、典型的には、それら自体は増殖せず、代わりに刺激剤もしくは有益な作用剤のいずれかまたはその両方の供給源としての免疫細胞の増殖または活性化を助けるように処理されている。一部の実施形態では、フィーダー細胞は、放射性線照射されている。一般に、フィーダー細胞は、腫瘍から採取した免疫細胞を拡大増殖するために使用され、典型的には、倍加拡大増殖の第２の拡大増殖期中に添加される。一部の実施形態では、フィーダー細胞は、放射線照射された末梢血単核細胞である。ある特定の実施形態では、フィーダー細胞は、第２の拡大増殖中に添加され、フィーダー細胞は、放射線照射された末梢血単核細胞である。
[000192] ある特定の方法では、細胞は、フィーダー細胞および免疫刺激剤の両方の存在下で培養される。一般に、フィーダー細胞および免疫刺激剤の組合せは、腫瘍から採取した免疫細胞を拡大増殖するために使用され、典型的には、倍加拡大増殖の第２の拡大増殖期中に添加される。一部の実施形態では、フィーダー細胞は、放射線照射された末梢血単核細胞であり、免疫刺激剤は、抗ＣＤ３抗体である。
[000193] ある特定の実施形態では、１つまたは複数の拡大増殖ステップは、Ｃｂｌ阻害剤で強化される。有利なことに、Ｃｂｌ阻害剤は、拡大増殖ステップの時間を低減することができ、複数の拡大増殖が必要とされる場合でも、追加の１つまたは複数の拡大増殖ステップを排除することができる。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、追加の免疫刺激剤の必要性を低減または排除することができる。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、フィーダー細胞の必要性を排除する。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、免疫刺激剤およびフィーダー細胞の必要性を排除する。ある特定の実施形態では、拡大増殖ステップは、放射線照射された末梢血単核細胞の非存在下で進行する。ある特定の実施形態では、拡大増殖ステップは、抗ＣＤ３抗体の非存在下で進行する。ある特定の実施形態では、拡大増殖ステップは、ＯＫＴ３の非存在下で進行する。ある特定の実施形態では、拡大増殖ステップは、４－ＩＢＢアゴニスト、例えば４－ＢＢＬの非存在下で進行する。ある特定の実施形態では、拡大増殖ステップは、放射線照射された末梢血単核細胞の非存在下で、抗ＣＤ３抗体の非存在下で、および４－ＩＢＢアゴニストの非存在下で進行する。ある特定の実施形態では、拡大増殖ステップは、本明細書に記載の通りのＣｂｌ阻害剤およびＩＬ－２の存在下で、放射線照射された末梢血単核細胞の非存在下で、抗ＣＤ３抗体、例えばＯＫＴ３の非存在下で、および４－ＩＢＢアゴニスト、例えば４－ＢＢＬの非存在下で進行する。ある特定の実施形態では、拡大増殖ステップは、本明細書に記載の通りのＣｂｌ阻害剤、ＩＬ－２、ＯＫＴ３、および放射線照射された末梢血単核細胞の存在下で、および４－ＩＢＢアゴニスト、例えば４－ＢＢＬの非存在下で進行する。
[000194] ある特定の実施形態では、こうした方法は、Ｃｂｌ阻害剤の存在下での拡大増殖を含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、Ｃｂｌ阻害剤の存在下および追加の免疫刺激剤の不添加での拡大増殖を含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、Ｃｂｌ阻害剤の存在下およびフィーダー細胞の添加無しでの拡大増殖を含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、Ｃｂｌ阻害剤の存在下および第２の拡大増殖ステップ無しでの拡大増殖を含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、Ｃｂｌ阻害剤の存在下および免疫刺激剤の添加無しおよび第２の拡大増殖ステップ無しでの拡大増殖を含む。ある特定の実施形態では、こうした方法は、Ｃｂｌ阻害剤の存在下およびフィーダー細胞の添加無しおよび第２の拡大増殖ステップ無しでの拡大増殖を含む。
[000195] ある特定の実施形態では、免疫細胞は、１ｐＭ～約１００ｍＭ、約０．００１ｐＭ～約１００μＭ、約０．０１ｐＭ～約５０μＭ、約０．００１ｎＭ～約５０μＭ、約１００ｎＭ～約１０μＭ、約０．０１μＭ～約２５μＭ、約０．１μＭ～約１５μＭ、約１μＭ～約１０μＭ、約０．１ｐＭ～約１００ｎＭ、約１ｐＭ～約１０ｎＭ、約１ｐＭ～約１ｎＭの濃度のＣｂｌ阻害剤の存在下で、ｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで培養される。一部の実施形態では、免疫細胞を含む組成物（例えば、細胞培養培地）に添加されるＣｂｌ阻害剤の濃度は、約１μＭ、約２μＭ、約３μＭ、約４μＭ、または約５μＭである。一部の実施形態では、免疫細胞を含む組成物（例えば、細胞培養培地）に添加されるＣｂｌ阻害剤の濃度は、約１μＭである。一部の実施形態では、免疫細胞を含む組成物（例えば、細胞培養培地）に添加されるＣｂｌ阻害剤の濃度は、約０．１～約１μＭである。一部の実施形態では、免疫細胞を含む組成物（例えば、細胞培養培地）に添加されるＣｂｌ阻害剤の濃度は、約１μＭである。
[000196] ある特定の方法では、Ｃｂｌ阻害剤の存在下で拡大増殖中の細胞には、培養中に細胞により使用された量を補充するために追加のＣｂｌ阻害剤が提供される。一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、単回拡大増殖中に補充される。他の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、倍加拡大増殖中に補充されるが、選択的拡大増殖期中にのみ補充される。他の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、拡大増殖中に補充されるが、第２の拡大増殖期中にのみ補充される。他の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、拡大増殖中の選択的拡大増殖期中および第２の拡大増殖期中の両方に補充される。他の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、拡大増殖中に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１日毎に培養へと添加される（単回拡大増殖中であるか、選択的拡大増殖中であるか、第２の拡大増殖中であるか、または選択的拡大増殖中および第２の拡大増殖中の両方であるかに関わらず）。他の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、拡大増殖中に１回、２回、または３回のみ補充される（単回拡大増殖中であるか、選択的拡大増殖中であるか、第２の拡大増殖中であるか、または選択的拡大増殖中および第２の拡大増殖中の両方であるかに関わらず）。
[000197] ある特定の方法では、細胞は、フィーダー細胞を添加せずに、および抗ＣＤ３無しで、および／または抗ＣＤ２８抗体無しで、ｅｘ ｖｉｖｏ拡大増殖中に培養され、Ｃｂｌ阻害剤またはＩＬ－２は、２または３日毎に培養へと添加される。一部の実施形態では、細胞は、放射線照射された末梢血単核細胞を添加せずに、および抗ＣＤ３抗体無しで単回拡大増殖を使用して培養され、Ｃｂｌ阻害剤およびＩＬ－２は２または３日毎に培養へと添加される。他の実施形態では、細胞は、第２の増殖期中、放射線照射された末梢血単核細胞を添加せずにおよび抗ＣＤ３抗体無しで倍加拡大増殖を使用して培養され、Ｃｂｌ阻害剤およびＩＬ－２は、選択的拡大増殖期および第２の拡大増殖期中、２または３日毎に培養物に添加される。
[000198] ある特定の実施形態では、免疫細胞は、約１日間～約４８日間、約７日間～約２８日間、約７日間～約２４日間、約１１日間～約２４日間、１日間～約２８日間、約２日間～約２４日間、約３日間～約２０日間、約４日間～約１７日間、約５日間～約１５日間、約５日間～約１４日間、約５日間～約１２日間、約６日間～約１４日間、約６日間～約１２日間、または約８日間～約１４日間の期間にわたって、本明細書に記載の方法を使用した拡大増殖に供される。
[000199] 一部の実施形態では、拡大増殖は、単回拡大増殖であり、約７日間～約２８日間の期間わたってなされる。他の実施形態では、拡大増殖は、単回拡大増殖であり、約１１日間～約２８日間の期間にわたってなされる。他の実施形態では、拡大増殖は、単回拡大増殖であり、約１０日間～約２４日間の期間にわたってなされる。他の実施形態では、拡大増殖は、単回拡大増殖であり、約７日間～約１４日間の期間にわたってなされる。他の実施形態では、拡大増殖は、単回拡大増殖であり、１０日間にわたってなされる。他の実施形態では、拡大増殖は、単回拡大増殖であり、１１日間にわたってなされる。
[000200] 一部の実施形態では、拡大増殖は、選択的拡大増殖が、約３日間から約７日間、約３日間～８日間、約３日間～１０日間、約３日間～１２日間、約３日間～１４日間、３日間～１８日間、３日間～２２日間、約４日間～約７日間、約４日間～８日間、約４日間～１０日間、約４日間～１２日間、約４日間～１４日間、約４日間～１８日間、約４日間～約２２日間、約５日間～８日間、約５日間～１０日間、約５日間～約１８日間、約５日間～約２１日間、約５日間～約２８日間、約６日間～８日間、約６日間～１０日間、約６日間～１２日間、約６日間～１４日間、約６日間～約１８日間、約６日間～約２１日間、約６日間～約２８日間、約７日間～８日間、約７日間～１０日間、約７日間～１２日間、約７日間～１４日間、約７日間～約１８日間、約７日間～約２１日間、約８日間～１０日間、約８日間～１２日間、約８日間～１４日間、約８日間～約１８日間、約８日間～約２１日間、または約８日間～約２８日間である倍加拡大増殖である。他の実施形態では、拡大増殖は、第２の拡大増殖が、約３日間～約１５日間、約４日間～１４日間、約５日間～１３日間、約６日間～１２日間、約７日間～１１日間、約６日間～約１８日間、約６日間～約２１日間、約６日間～約２８日間、約７日間～８日間、約７日間～１０日間、約７日間～１２日間、約７日間～１４日間、約７日間～約１８日間、約７日間～約２１日間、約８日間～１０日間、約８日間～１２日間、約８日間～１４日間、約８日間～約１８日間、約８日間～約２１日間、または約８日間～約２８日間である倍加拡大増殖である。
[000201] 一部の実施形態では、ｅｘ ｖｉｖｏ拡大増殖の合計期間は、約１日間、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１４日間、約１８日間、約２２日間、または約２８日間である。他の実施形態では、ｅｘ ｖｉｖｏ拡大増殖の全体期間は、１０日間～１４日間である。さらに他の実施形態では、ｅｘ ｖｉｖｏ拡大増殖の合計期間は、１4日間～２２日間である。好ましい実施形態では、がん患者またはそれを必要とする患者に輸注する前に、細胞を１４日間未満で拡大増殖する。より好ましい実施形態では、がん患者またはそれを必要とする患者に輸注する前に、細胞を１１日間未満で拡大増殖する。
拡大増殖免疫細胞の表現型
[000202] 一般に、輸注集団（患者に輸注される免疫細胞）の所望の表現型としては、より良好な患者治療転帰と相関する形質が挙げられる。したがって、ある特定の実施形態における所望の表現型は、細胞の開始集団（例えば、拡大増殖した免疫細胞が直接使用されるか否か、または拡大増殖した免疫細胞が望ましい特性についてさらにスクリーニングされているか否か）に関わりなく同じになるだろう。
[000203] ある特定の方法では、拡大増殖した免疫細胞は、望ましい特性についてスクリーニングされ、拡大増殖した細胞の部分集団が患者への輸注用に選択される。この場合、開始集団は、拡大増殖した免疫細胞であり、輸注集団は、輸注のために選択された拡大増殖した細胞のサブセットである。一部の実施形態では、輸注集団は、腫瘍認識活性を呈する免疫細胞が濃縮されている。他の実施形態では、輸注集団は、遺伝子操作Ｔ細胞受容体を発現する免疫細胞が濃縮されている。他の実施形態では、輸注集団は、遺伝子操作キメラ抗原受容体を発現する免疫細胞が濃縮されている。
[000204] ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤の存在下で拡大増殖した免疫細胞は、望ましい特性を有する細胞がすでに濃縮されている。結果として、ある特定の実施形態においてＣｂｌ阻害剤の存在下で拡大増殖した免疫細胞は、患者への輸注に望ましい部分集団を識別するためのさらなる選択ステップを必要としない。
[000205] 一部の実施形態では、拡大増殖した免疫細胞は、ＩＬ－２および／またはＩＦＮγを産生するそれらの能力についてスクリーニングされ、ＩＬ－２またはＩＦＮγ産生細胞が濃縮された細胞の部分集団が選択される。他の実施形態では、免疫細胞は、成熟段階特異的マーカーを使用してＴ細胞表現型がスクリーニングされ、所望の成熟段階について濃縮された細胞の部分集団が選択される。例えば、望ましい特性は、以下のマーカー：ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ４５ＲＡ－、ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＤ９５＋、ＣＤ９５－、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ６２Ｌ－、ＣＣＲ７－、ＣＤ５６＋、ＩＬ－２Ｒβ＋、およびＩＬ－２Ｒβ－の１つまたは複数を発現する免疫細胞であってもよい。他の実施形態では、免疫細胞は、メモリー表現型を有するＴ細胞がスクリーニングされ、メモリーＴ細胞が濃縮された細胞の部分集団が選択される。他の実施形態では、免疫細胞は、ＴＣＭまたはＴＳＣＭ細胞がスクリーニングされ、ＴＣＭまたはＴＳＣＭ細胞が濃縮された細胞の部分集団が選択される。ＴＣＭとＴＳＣＭとを区別する方法は、例えば、Ｓｃｈｍｕｅｃｋ－Ｈｅｎｎｅｒｅｓｓｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９４巻（１１号）：５５５９～５５６７頁（２０１５年）およびＢｅｒｇｅｒら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、１１８巻（１号）：２９４～３０５頁（２００８年）に記載されている。
[000206] 一部の実施形態では、輸注集団は、開始集団よりも、より大きなパーセンテージおよび／またはより多数のＴＩＬを含む。他の実施形態では、輸注集団は、開始集団よりも、より大きなパーセンテージおよび／またはより多数のＴ細胞を含む。他の実施形態では、輸注は、開始集団よりも、より大きなパーセンテージおよび／またはより多数のＴＣＭまたはＴＳＣＭ細胞を含む。他の実施形態では、輸注集団は、開始集団よりも、より大きなパーセンテージおよび／またはより多数のＴＥＭ細胞を含む。他の実施形態では、輸注集団は、開始集団よりも、より小さなパーセンテージおよび／またはより少数のナイーブＴ細胞を含む。
[000207] 本明細書に記載の一部の実施形態では、輸注集団は、約１０～約２０％のメモリーＴ細胞を含む。他の実施形態では、輸注集団は、約５～約4０％のメモリーＴ細胞を含む。さらに他の実施形態では、輸注集団は、約１０～約３０％のメモリーＴ細胞を含む。一部の実施形態では、メモリーＴ細胞は、ＴＣＭまたはＴＳＣＭである。一部の実施形態では、メモリーＴ細胞は、ＣＤ４５ＲＯ＋細胞である。
[000208] ある特定の実施形態では、こうした方法は、ＣＤ８＋細胞が濃縮されている拡大増殖ＴＩＬを提供する。ある特定の実施形態では、こうした方法は、ＣＤ４＋細胞の量が減少されている拡大増殖ＴＩＬを提供する。ある特定の実施形態では、こうした方法は、ＣＤ８＋セントラルメモリー細胞が濃縮されている拡大増殖ＴＩＬを提供する。ある特定の実施形態では、こうした方法は、ＣＤ１０７ａの分泌が増加されている拡大増殖ＴＩＬを提供する。ある特定の実施形態では、こうした方法は、グランザイム、例えば、グランザイムＢの分泌が増加されている拡大増殖ＴＩＬを提供する。ある特定の実施形態では、こうした方法は、１つまたは複数のサイトカインの分泌が増加されている拡大増殖ＴＩＬを提供する。ある特定の実施形態では、サイトカインは、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、ＧＭＣＳＦ、ＭＩＰ１α、ＭＩＰ１βｂ、ＩＰ１０、ＩＬ－２、ＩＬ－８、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、およびそれらの組合せから選択される。本明細書で使用される場合、濃縮または増加または減少は、Ｃｂｌ阻害剤の非存在下で採取または拡大増殖された同様のＴＩＬに対してである。ある特定の実施形態では、濃縮、増加、または減少は、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、１００％、２００％、またはそれよりも大きい。量は、本明細書の実施例に記載のものなど、標準的技法により測定することができる。
[000209] 一部の実施形態では、輸注集団を、凍結保存培地に製剤化し、少なくとも１か月間、２か月間、３か月間、４か月間、６か月間、１年間、２年間、３年間、または少なくとも５年間の長期保管のために、液体窒素冷凍庫（－１９５℃）または超低温冷凍庫（－６５℃、－８０℃、または－１２０°Ｃ）などの凍結保存ユニットに入れる。凍結保存培地は、培養培地または６．０～６．５、６．５～７．０、６．５～７．５、７．０～７．５、７．５～８．０、もしくは８．０～８．５のｐＨを維持するための生理学的緩衝剤と共に、グリセロール、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、ＮａＣｌ、デキストロース、デキストラン硫酸、および／またはヒドロキシエチルスターチ（HES）を含んでいてもよい。凍結細胞は、解凍して、追加の刺激および／または拡大増殖に供することができる。凍結保存Ｔ細胞は、それらの生物学的機能を、極低温保存条件下で少なくとも約６か月間、７か月間、８か月間、９か月間、１０か月間、１１か月間、１２か月間、１３か月間、１５か月間、１８か月間、２０か月間、２４か月間、３０か月間、３６か月間、４０か月間、５０か月間、または少なくとも約６０か月間維持する。一部の態様では、製剤には保存剤は使用されていない。凍結保存Ｔ細胞は、解凍して、同種異系既製細胞産物(allogeneic off-the-shelf cell product)として複数の患者に投与（例えば、輸注）することができる。
治療方法
[000210] 本明細書で提供される細胞療法方法では、拡大増殖した細胞を、それを必要とする患者に投与する。ある特定の実施形態では、患者は、ドナーと同じである。ある特定の実施形態では、患者およびドナーは同じ個体ではない。ある特定の実施形態では、ドナーは異種性であり、患者はヒトである。一部の実施形態では、患者には、本明細書に記載の方法による自家細胞が投与される。一部の実施形態では、患者には、本明細書に記載の方法による同種異系細胞が投与される。
[000211] 本明細書には、細胞ベース免疫療法の方法が開示されている。細胞ベース免疫療法方法としては、養子細胞療法、腫瘍浸潤性リンパ球（TIL）ベース療法、キメラＴ細胞受容体（CAR）T細胞療法、遺伝子操作Ｔ細胞受容体（TCR）療法、ナチュラルキラー細胞（NK）療法、またはナチュラルキラーキメラ抗原受容体療法（NK CAR）が挙げられる。一部の実施形態では、個体には、1回よりも多くの治療セッションで輸注集団を投与してもよい。
[000212] ある特定の実施形態では、こうした方法は、治療を必要とする個体に、本明細書で提供される通りにｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで産生された有効量の免疫細胞を含む組成物を投与することを含む。輸注集団の治療有効用量は、約１０００万～約１０００億個の細胞（例えば、約２０００万個の細胞、約３０００万個の細胞、約４０００万個の細胞、約６０００万個の細胞、約７０００万個の細胞、約８０００万個の細胞、約９０００万個の細胞、約１００億個の細胞、約２５０億個の細胞、約５００億個の細胞、約７５０億個の細胞、約９００億個の細胞、または上述の値のいずれか２つにより規定される範囲）などの、例えば１００万～約５００億個（例えば、約５００万個の細胞、約２５００万個の細胞、約５億個の細胞、約１０億個の細胞、約５０億個の細胞、約２００億個の細胞、約３００億個の細胞、約４００億個の細胞、または上述の値のいずれか２つにより規定される範囲）などの、約１００万～約２０００億個の細胞、および一部の場合では、約１億個の細胞～約５００億個の細胞（例えば、約１億２０００万個の細胞、約２億５０００万個の細胞、約３億５０００万個の細胞、約４億５０００万個の細胞、約６億５０００万個の細胞、約８億個の細胞、約９億個の細胞、約３０億個の細胞、約３００億個の細胞、約４５０億個の細胞）の範囲、またはこうした範囲間の任意の値であってもよい。一部の実施形態では、方法は、体重１ｋｇ当たり２×１０６～２×１０８個の生存免疫細胞を投与することを含む。
[000213] 輸注集団およびその組成物は、標準的な投与技法、製剤、および／またはデバイスを使用して、それを必要とする個体に投与することができる。組成物を保管および投与するための注射器およびバイアルなどのデバイスと共に製剤および投与が提供される。免疫細胞を含む製剤または医薬組成物としては、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、または肺投与用のものが挙げられる。一部の実施形態では、免疫細胞は、非経口投与される。「非経口」という用語は、本明細書で使用される場合、静脈内、筋肉内、皮下、直腸、膣、および腹腔内投与を含む。一部の実施形態では、細胞集団は、静脈内、腹腔内、または皮下注射による末梢全身性送達を使用して対象に投与される。改変された免疫細胞の組成物は、無菌液体調製物、例えば、等張性水溶液、懸濁物、エマルジョン、分散物、または粘性組成物として提供することができ、これらは、一部の態様では、選択されたｐＨに緩衝されていてもよい。粘性組成物は、特定の組織とのより長い接触期間を提供するために、適切な粘度範囲内に製剤化することができる。液体または粘性組成物は、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール）、およびそれらの好適な混合物を含む溶媒または分散媒であってもよい担体を含んでいてもよい。滅菌注射用溶液は、好適な担体、希釈剤、または滅菌水、生理食塩水、グルコース、もしくはデキストロースなどの賦形剤と混合するなど、免疫細胞を溶媒に組み込むことにより調製することができる。
[000214] 一部の実施形態では、輸注集団は、１つまたは複数の追加の療法剤と共投与されるか、または別の療法介入に関連して同時にもしくは任意の順序で連続して投与される。
[000215] 一部の実施形態では、個体は、免疫細胞の輸注集団が投与される前に、予備的レジメンを受ける。例えば、輸注集団を受け取る前に、個体は、免疫抑制、免疫枯渇、リンパ球クリアランス、または幹細胞フラッシング（stem cell flushing）の１つまたは複数を受けていてもよい。
[000216] 免疫抑制に使用することができる作用剤として、これらに限定されないが、以下のものが挙げられる：シクロスポリン、タクロリムス、リロナセプト、カナキヌマブ、ブロダルマブ、アナキンラ、レスリズマブ、ウステキヌマブ、メポリズマブ、トシリズマブ、デュピルマブ、イキセキズマブ、セクキヌマブ、グセルクマブ、チルドラキズマブ、ベンラリズマブ、サリルマブ、バシリキシマブ、リサンキズマブ（risankizumab）、シルツキシマブ、ダクリズマブ、ポマリドマイド、メトトレキサート、オマリズマブ、アザチオプリン、レナリドマイド、サリドマイド、アレファセプト、シロリムス、エファリズマブ、ミコフェノール酸、ミコフェノール酸モフェチル、ベリムマブ、ナタリズマブ、フィンゴリモド、レフルノミド、フマル酸ジメチル、エベロリムス、アバタセプト、テリフルノミド、ベドリズマブ、エベロリムス、エマパルマブ、シポニモド、ベラセプト、バリシチニブ、ムロモナブ－ｃｄ３、エクリズマブ、ラブリズマブ（ravulizumab）、エベロリムス、エタネルセプト、インフリキシマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、またはアダリムマブ。
[000217] 免疫枯渇に使用することができる作用剤としては、これらに限定されないが、シクロホスファミド（シトキサン）、フルダラビン、ベンダムスチン、シスプラチン、エトポシド、パクリタキセル、およびゲムシタビンが挙げられる。
[000218] リンパ球クリアランスに使用することができる作用剤としては、これに限定されないが、エトドラクが挙げられる。
[000219] 幹細胞動員または幹細胞フラッシングに使用することができる作用剤としては、これらに限定されないが、Ｇ－ＣＳＦ、ペグフィルグラスチム、シクロホスファミド、およびプレリキサホル（モゾビル、Ｇｅｎｚｙｍｅ）が挙げられる。
[000220] 一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、補完的な輸注前処置として、こうした作用剤の１つと併せて投与される。
[000221] 本開示の一部の実施形態では、個体は、治療前の免疫抑制、免疫枯渇、リンパ球クリアランス、または幹細胞フラッシングを、細胞輸注前に０～６０日間、０～３０日間、０～１５日間、０～１４日間、０～１３日間、０～１２日間、０～１１日間、０～１０日間、０～９日間、０～８日間、０～７日間、０～６日間、０～５日間、０～４日間、０～３日間、０～２日間、または０～１日間にわたって受ける。
[000222] 一部の実施形態では、患者は、シクロホスファミドおよびフルダラビンの組合せによる免疫枯渇により条件付けられる。シクロホスファミドおよびフルダラビンは、標準的技法に従って投与することができる。ある特定の実施形態では、シクロホスファミドの投与は、約２００ｍｇ／ｍ２／日～約２０００ｍｇ／ｍ２／日（例えば、２００ｍｇ／ｍ２／日、３００ｍｇ／ｍ２／日、または５００ｍｇ／ｍ２／日）の用量でなされる。ある特定の実施形態では、シクロホスファミドの用量は、約３００ｍｇ／ｍ２／日である。ある特定の実施形態では、フルダラビンの投与は、約２０ｍｇ／ｍ２／日～約９００ｍｇ／ｍ２／日（例えば、２０ｍｇ／ｍ２／日、２５ｍｇ／ｍ２／日、３０ｍｇ／ｍ２／日、または６０ｍｇ／ｍ２／日）の用量でなされる。ある特定の実施形態では、フルダラビンの用量は、約２５ｍｇ／ｍ２／日である。ある特定の実施形態では、シクロホスファミドの投与は、約２００ｍｇ／ｍ２／日～約２０００ｍｇ／ｍ２／日（例えば、２００ｍｇ／ｍ２／日、３００ｍｇ／ｍ２／日、または５００ｍｇ／ｍ２／日）の用量でなされ、フルダラビンの投与は、約２０ｍｇ／ｍ２／日～約９００ｍｇ／ｍ２／日（例えば、２０ｍｇ／ｍ２／日、２５ｍｇ／ｍ２／日、３０ｍｇ／ｍ２／日、または６０ｍｇ／ｍ２／日）の用量でなされる。ある特定の実施形態では、シクロホスファミドの投与は、約５００ｍｇ／ｍ２／日の用量でなされ、フルダラビンの投与は、約３０ｍｇ／ｍ２／日の用量でなされる。例示的な実施形態では、シクロホスファミドの投薬は、３日間にわたって５００ｍｇ／ｍ２／日でなされ、フルダラビンの投薬は、３日間にわたって３０ｍｇ／ｍ２／日でなされる。リンパ球枯渇の投薬は、０日目のＴ細胞輸注を基準として－６日目～－４日目にスケジュールすることができる（＋／－１日ウィンドウ、つまり－７日目～－５日目に投薬）。リンパ球枯渇の投薬は、０日目のＴ細胞輸注を基準として－５日目～－３日目にスケジュールすることができる（＋／－１日ウィンドウ、つまり－４日目～－２日目に投薬）。
[000223] 一部の実施形態では、患者には、細胞療法と共にサイトカインが投与される。ある特定の実施形態では、サイトカインはＩＬ－２である。ＩＬ－２は、標準的技法に従って投与される。ある特定の実施形態では、ＩＬ－２は、１００，０００ＩＵ／ｋｇ～１，０００，０００ＩＬ／ｋｇの用量で投与される。ある特定の実施形態では、ＩＬ－２用量は、４００，０００ＩＵ／ｋｇ～８００，０００ＩＵ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、ＩＬ－２用量は、約６００，０００ＩＵ／ｋｇである。サイトカインの投薬は、０日目のＴ細胞輸注を基準として１日目～３日目にスケジュールすることができる（＋／－１日ウィンドウ、つまり２日目～４日目に投薬）。ある特定の実施形態では、サイトカインは、投薬スケジュールにわたって８時間毎に合計で６用量が投与される。ある特定の実施形態では、ＩＬ－２は、１日目～３日目にて８時間毎に合計で６用量が投与される。
[000224] 一部の実施形態では、個体には、改変された細胞を１つよりも多くの治療セッションで輸注することができる。
[000225] 本開示の一部の実施形態では、細胞ベース免疫療法は、別の抗がん療法と組み合わせて投与される。
Ｃｂｌ阻害剤との組合せ療法
[000226] ある特定の実施形態では、細胞療法は、１つまたは複数のＣｂｌ阻害剤と組み合わせて投与される。例えば、本開示の一部の療法レジメンでは、改変された免疫細胞およびＣｂｌ阻害剤の両方が、それを必要とする対象に投与され、Ｃｂｌ阻害剤は、本明細書に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である。
[000227] 一部の実施形態では、参照によりその全体が組み込まれる国際公開第２０１９／１４８００５号パンフレットに開示されている小分子Ｃｂｌ阻害剤の１つまたは複数が、本明細書に記載の治療方法に使用される。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、式（A）による。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、化合物１０１～１２９から選択される。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、化合物１１６である。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤の組合せが使用される。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、抗体である。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、ペプチドである。ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、ｓｉＲＮＡである。
[000228] ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、療法用細胞を受け取った患者に投与され、そうした細胞の生着を支援する。
[000229] こうした実施形態の一部では、移植されるそのような細胞は、組織または器官として組織化される。こうした実施形態では、１つまたは複数のＣｂｌ阻害剤は、移植された骨髄、皮膚、角膜、腱、骨組織、血管、または心臓弁の生着を支援するために投与される。一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、心臓、肺、腎臓、肝臓、および膵臓を含む移植可能な器官を含む群から選択される１つまたは複数の移植器官の生着を支援するために投与される。他の実施形態では、免疫細胞を受け取った患者にＣｂｌ阻害剤を投与して、そうした免疫細胞の生着を支援する。
[000230] 療法用細胞を受け取った個体に対する、そうした療法用細胞の生着を支援するためのＣｂｌ阻害剤の１日投薬量は、１～５０００ｍｇ、１～２５００ｍｇ、１～２０００ｍｇ、１～１５００ｍｇ、１～１０００ｍｇ、１～７５０ｍｇ、１～５００ｍｇ、１～４００ｍｇ、１～３００ｍｇ、１～２５０ｍｇ、１～２００ｍｇ、１～１００ｍｇ、１～１０ｍｇ、０．１～１０ｍｇ、０．１～５ｍｇ、または０．１～１ｍｇである。
[000231] 療法用細胞を受け取った患者には、免疫細胞の輸注後１～２日間、１～３日間、１～４日間、１～５日間、１～６日間、１～７日間、１～１０日間、１～１４日間、１～２１日間、１～２８日間、１～４５日間、１～６０日間、２～３日間、２～４日間、２～５日間、２～６日間、２～７日間、２～１０日間、２～１４日間、２～２１日間、２～２８日間、２～４５日間、２～６０日間、４～５日間、４～６日間、４～７日間、４～１０日間、４～１４日間、４～２１日間、４～２８日間、４～４５日間、４～６０日間、７～１０日間、７～１４日間、７～２１日間、７～２８日間、７～４５日間、または７～６０日間にわたってＣｂｌ阻害剤を投与して、そうした細胞の生着を支援することができる。
[000232] 輸注により受け取った療法用細胞の生着を支持するための有効量のＣｂｌ阻害剤は、それを必要とする患者に投与されると、患者内で０～０．５μＭ、０～１μＭ、０～５μＭ、０～１０μＭ、０～２５μＭ、０～５０μＭ、０～１００μＭ、または０～１０００μＭの上記Ｃｂｌ阻害剤の濃度をもたらす。
[000233] また、ある特定の実施形態では、療法用細胞の輸注後に、Ｃｂｌ阻害剤に加えて、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、およびそれらの組合せを含む群から選択される１つまたは複数の作用剤または化合物を患者に投与して、輸注された療法用細胞の生着を促進する。ある特定の実施形態では、追加の作用剤はＩＬ－２である。ある特定の実施形態では、追加の作用剤はＩＬ－７である。ある特定の実施形態では、追加の作用剤はＩＬ－１５である。ある特定の実施形態では、追加の作用剤はＩＬ－２１である。ある特定の実施形態では、追加の作用剤は、ＩＬ－７およびＩＬ－１５の組合せである。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の作用剤は、シクロホスファミドおよびフルダラビンを含む。
[000234] ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤の投与は、１つまたは複数の追加の作用剤のいずれかまたはすべての投与の必要性を低減するかまたはさらに排除する。ある特定の実施形態では、シクロホスファミドは、Ｃｂｌ阻害剤を用いない療法と比較して低減された用量で投与される。ある特定の実施形態では、フルダラビンは、Ｃｂｌ阻害剤を用いない療法と比較して低減された用量で投与される。ある特定の実施形態では、ＩＬ－２は、Ｃｂｌ阻害剤を用いない療法と比較して低減された用量で投与される。ある特定の実施形態では、ＩＬ－２は投与されない。ある特定の実施形態では、シクロホスファミドの投与は、約５００ｍｇ／ｍ２／日の用量でなされ、フルダラビンの投与は、約２５ｍｇ／ｍ２／日の用量でなされる。例示的な実施形態では、シクロホスファミドの投薬は、３日間にわたって５００ｍｇ／ｍ２／日でなされ、フルダラビンの投薬は、３日間にわたって２５ｍｇ／ｍ２／日でなされる。リンパ球枯渇の投薬は、０日目のＴ細胞輸注を基準として－５日目～－３日目にスケジュールすることができる（＋／－１日ウィンドウ、つまり－４日目～－２日目に投薬）。ある特定の実施形態では、シクロホスファミドの投与は、約５００ｍｇ／ｍ２／日の用量でなされ、フルダラビンの投与は、約２５ｍｇ／ｍ２／日の用量でなされ、ＩＬ－２は投与されない。
Ｔ細胞機能不全
[000235] ある特定の実施形態では、有効量のＣｂｌ阻害剤は、Ｔ細胞機能不全を治療するためにそれを必要とする患者に投与することができる。
[000236] Ｔ細胞機能不全を罹患している個体に対するＣｂｌ阻害剤の１日投薬量は、１～５０００ｍｇ、１～２５００ｍｇ、１～２０００ｍｇ、１～１５００ｍｇ、１～１０００ｍｇ、１～７５０ｍｇ、１～５００ｍｇ、１～４００ｍｇ、１～３００ｍｇ、１～２５０ｍｇ、１～２００ｍｇ、１～１００ｍｇ、１～１０ｍｇ、０．１～１０ｍｇ、０．１～５ｍｇ、または０．１～１ｍｇである。
[000237] Ｔ細胞機能不全を治療するための有効量のＣｂｌ阻害剤は、それを必要とする患者に投与されると、患者内で０．０００１～０．５μＭ、０．００１～１μＭ、０．００１～５μＭ、０．０１～１０μＭ、０．１～２５μＭ、０．１～５０μＭ、０．０１～１００μＭ、０．１～１０００の上記Ｃｂｌ阻害剤の濃度をもたらすことになる。
[000238] Ｔ細胞機能不全を罹患している患者は、１～２日間、１～３日間、１～４日間、１～５日間、１～６日間、１～７日間、１～１０日間、１～１４日間、１～２１日間、１～２８日間、または１～４５日間、１～６０日間、２～３日間、２～４日間、２～５日間、２～６日間、２～７日間、２～１０日間、２～１４日間、２～２１日間、２～２８日間、または２～４５日間、２～６０日間、４～５日間、４～６日間、４～７日間、４～１０日間、４～１４日間、４～２１日間、４～２８日間、４～４５日間、４～６０日間、７～１０日間、７～１４日間、７～２１日間、７～２８日間、７～４５日間、または７～６０日間にわたってＣｂｌ阻害剤で処置してもよい。
Ｃｂｌ阻害剤による輸注後処置
[000239] ある特定の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、免疫細胞の輸注後に個体に投与される。免疫細胞の輸注とＣｂｌ阻害剤の投与との間、またはその逆の時間の長さは、約１分～約１時間、約５分～約１時間、約１０分から約１時間、約１５分～約１時間、約２０分～約１時間、約３０分～約１時間、約４５分～約１時間、約１時間～約２時間、約１時間～約４時間、約１時間～約６時間、約１時間～約８時間、約１時間～約１２時間、約１時間～約２４時間、約２時間～約２４時間、約６時間～約７時間、約６時間～約２４時間、約８時間～約２４時間、約１０時間～約２４時間、約１５時間～約２４時間、約２０時間～約２４時間、約１２時間～約４８時間、約２４時間～約４８時間、または約３６時間～約４８時間であってもよい。
[000240] 一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、輸注後の支持療法として投与される。一部の実施形態では、この期間は、約１日間～約７日間、約２日間～約７日間、約３日間～約７日間、約４日間～約７日間、約５日間～約７日間、６日間～約７日間、１日間～約２週間、または１週間～約３週間、１週間～約４週間、１週間～約６週間、１週間～約９週間、１週間～約１２週間、１週間～約２４週間、１週間～約４８週間、１週間～約５２週間、１週間～約６０週間、１週間～約１００週間であってもよい。
[000241] したがって、一部の実施形態では、療法レジメンは、養子細胞療法および化学療法を両方とも含む。本明細書に記載の療法レジメンの一部の実施形態は、薬物強化養子細胞療法（DE-ACT）、薬物強化腫瘍浸潤性リンパ球（DE-TIL）療法、薬物強化キメラ抗原受容体療法（DE-CART）、または薬物強化ＮＫ－ＣＡＲ細胞療法を含む。
[000242] 輸注集団を個体に投与した後、当技術分野で公知の方法により個体の輸注後免疫細胞の生物学的活性を測定することができる。評価するパラメーターとしては、ｉｎ ｖｉｖｏでの（例えば、画像化による）またはｅｘ ｖｉｖｏでの（例えば、ＥＬＩＳＡまたはフローサイトメトリーによる）改変された免疫細胞または他の免疫細胞と抗原との特異的結合が挙げられる。一部の実施形態では、標的細胞を破壊する改変された免疫細胞の能力は、例えば、Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ、３２巻（７号）：６８９～７０２頁（２００９年）およびＨｅｒｍａｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ、２８５巻（１号）：２５～４０頁（２００４年）に記載の細胞傷害性アッセイなどの、当技術分野で公知の任意の好適な方法を使用して測定することができる。また、一部の実施形態では、個体の輸注後免疫細胞の生物学的活性は、ＩＬ－２およびＩＦＮγなど、ある特定のサイトカインの発現および／または分泌をアッセイすることにより測定することができる。一部の態様では、輸注後免疫細胞の生物学的活性は、腫瘍サイズまたは腫瘍数の低減などの臨床転帰を評価することにより測定される。
治療される状態
[000243] 本明細書の方法および組成物は、当業者が好適であるとみなす任意の状態の治療に使用することができる。ある特定の実施形態では、状態は、がんである。ある特定の実施形態では、状態は、腫瘍である。ある特定の実施形態では、状態は、血液がんである。
[000244] 本明細書の方法の一部の実施形態では、がんは、リンパ腫、白血病、または骨髄腫などの血液がんである。本明細書で企図される通りの血液がんとしては、これらに限定されないが、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「BALL」）、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「TALL」）、急性リンパ性白血病（ALL）などの１つまたは複数の白血病；これらに限定されないが、慢性骨髄性白血病（CML）および慢性リンパ性白血病（CLL）を含む1つまたは複数の慢性白血病；これらに限定されないが、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、芽球性形質細胞様樹状細胞新生物、バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、有毛細胞白血病、小細胞または大細胞濾胞性リンパ腫、悪性リンパ増殖性状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫、脊髄形成異常症および脊髄形成異常症候群、非ホジキンリンパ腫、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞新生物、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、および骨髄性血液細胞の産生が非効率的（または形成異常）であることより統合される血液学的状態の多様なコレクションである「前白血病」を含む、追加の血液がんまたは血液学的状態が挙げられる。
[000245] 本明細書の方法の一部の実施形態では、がんは、肉腫、癌腫、または黒色腫などの非血液がんである。本明細書で企図される非血液がんとしては、これらに限定されないが、神経芽細胞腫、腎細胞癌、結腸がん、結腸直腸がん、乳がん、上皮扁平上皮がん、黒色腫、胃がん、脳がん、肺がん（例えば、NSCLC）、膵臓がん、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、前立腺がん、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、副腎がん、および頭頸部がんが挙げられる。ある特定の実施形態では、がんは黒色腫である。ある特定の実施形態では、がんは子宮頸がんである。ある特定の実施形態では、がんは卵巣がんである。ある特定の実施形態では、がんは頭頸部扁平上皮癌である。ある特定の実施形態では、がんは非小細胞肺がんである。
[000246] 一部の実施形態では、がんは、１つよりも多くの全身性療法後に、再発性または難治性である。
剤形
[000247] 一部の実施形態では、本開示のＣｂｌ阻害剤は、個体への経口投与用に、丸剤、カプセル剤、錠剤、シロップ剤、アンプル剤、トローチ剤、散剤として製剤化されている。一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、輸注または注射用に製剤化されている。一部の実施形態では、Ｃｂｌ阻害剤は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏでの細胞培養に使用するために製剤化されている。
[000248] 本開示の一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣｂｌ阻害剤は、医薬組成物または単一単位剤形である。本明細書で提供される医薬組成物および単一単位剤形は、予防有効量または治療有効量の１つまたは複数のＣｂｌ阻害剤を含む。免疫細胞を提供する前にｉｎ ｖｉｖｏ活性化を受ける個体における、Ｃｂｌ阻害剤の量は、未処理参照試料と比較して、免疫細胞の活性をｉｎ ｖｉｖｏでモジュレートするのに十分な量である。Ｃｂｌ阻害剤は、１日１回、２回、または３回、１日４回、または５回投与することができる。
[000249] ある特定の実施形態では、細胞ベース免疫療法のための、個体に対するＣｂｌ阻害剤の１日投薬量は、１～５０００ｍｇ、１～２５００ｍｇ、１～２０００ｍｇ、１～１５００ｍｇ、１～１０００ｍｇ、１～７５０ｍｇ、１～５００ｍｇ、１～４００ｍｇ、１～３００ｍｇ、１～２５０ｍｇ、１～２００ｍｇ、１～１００ｍｇ、１～１０ｍｇ、０．１～１０ｍｇ、０．１～５ｍｇ、または０．１～１ｍｇである。
[000250] ある特定の実施形態では、有効量のＣｂｌ阻害剤は、個体に投与されると、ｉｎ ｖｉｖｏ活性化期中に罹患組織もしくは腫瘍または隣接もしくは周囲領域内で０～０．５μＭ、０～１μＭ、０～５μＭ、０～１０μＭ、０～２５μＭ、０～５０μＭ、０～１００μＭ、または０～１０００μＭの上記阻害剤の濃度をもたらす。
[000251] 本明細書で提供される方法により産生された細胞は、標準的技法に従って製剤化および投与することができる。手短に言えば、医薬組成物は、１つまたは複数の薬学的にまたは生理学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて、本明細書に記載の通りの細胞集団を含んでいてもよい。そのような組成物は、中性緩衝生理食塩水およびリン酸緩衝生理食塩水などの緩衝液；グルコース、マンノース、スクロース、デキストラン、またはマンニトールなどの炭水化物；タンパク質；ポリペプチドまたはグリシンなどのアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡまたはグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；ならびに保存剤を含んでいてもよい。ある特定の実施形態では、細胞組成物は、静脈内投与用に製剤化されている。本発明の医薬組成物は、治療（または予防）しようとする疾患に適切な様式で投与することができる。投与の量および頻度は、患者の状態、ならびに患者の疾患のタイプおよび重症度などの要因により決定され、適切な投薬量は、臨床治験により決定することができる。
実施例１：腫瘍組織からヒト腫瘍浸潤性リンパ球（TIL）をｅｘ ｖｉｖｏで拡大増殖するためのＣｂｌ阻害剤の評価。
[000252] ヒト卵巣および結腸腫瘍の試料を、Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｈｕｍａｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｎｅｔｗｏｒｋ（CHTN、Vanderbilt University Medical Center、ナッシュビル、テネシー州）から得た。固形腫瘍標本を、周囲脂肪および壊死領域が含まれないように注意深く解体した。メスおよびメスホルダーを使用して無菌条件下で腫瘍を８ｍｍ３（２×２×２ｍｍ３）断片にスライスした。
[000253] 腫瘍細胞株生成のため、複数の断片を、無血清ＲＰＭＩ １６４０培地中１ｍｇ／ｍｌワージントンコラゲナーゼ４型、１０μｇ／ｍｌゲンタマイシン、および３０００Ｕ／ｍｌ ＤＮＡｓｅの混合物に浸漬した。腫瘍断片を、まずＭｉｌｔｅｎｙｉ ｇｅｎｔｌｅｍａｃｓ ｏｃｔｏ ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒを使用して処理し、３７℃で３０分間穏やかに攪拌しながらインキュベートした。単一細胞スラリーを滅菌メッシュに通して、未消化組織断片を除去した。得られた細胞スラリーを洗浄し、培地に再懸濁した。細胞懸濁物を、１００％フィコール、および７５％フィコール、および２５％培地を有する２段階勾配の上に重ねて配置した。２０００ｒｐｍで２０分間遠心分離した後、界面を収集した。上部の腫瘍細胞濃縮画分を、Ｔ７５組織培養フラスコ（VWR）中の２０％ウシ胎児血清（FBS）を含むＲＰＭＩ培地に約１×１０６腫瘍細胞で播種した。
[000254] ＴＩＬ生成のため、単一の８ｍｍ３腫瘍断片を、０．１～１０μＭのＣｂｌ阻害剤の存在下もしくは非存在下で６０００ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２を有するか、または０．１～１０μＭのＣｂｌ阻害剤単独を有するかのいずれかである、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０％熱不活化ヒトＡＢ血清、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、１０μｇ／ｍｌゲンタマイシン、および０．２５μｇ／ｍｌファンギゾン（完全培地；CM）を含む２ｍＬ ＲＰＭＩ培地を含む、２４ウェルプレートの各ウェルに添加した。プレートを、５％ＣＯ２の加湿３７℃インキュベーターに入れた。培養開始後、培地の半分を２日毎に交換した。ウェルがコンフルエントになったら、内容物を激しく混合し、２つの娘ウェルに分割し、０．１～１０μＭのＣｂｌ阻害剤の存在下もしくは非存在下で６０００ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２を有するかまたは０．１～１０μＭのＣｂｌ阻害剤単独を有するかのいずれかであるＲＰＭＩ培地を１ウェルあたり２ｍＬで満たした。その後、培地の半分を週３回交換し、培養物を分割して１×１０６細胞／ｍＬの細胞密度を維持した。ＴＩＬをプールし、１７日目および２８日目に計数し、２８日目に、ＩＣＯＳ、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ９５、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ３ε、ＣＤ８α、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｃ、ＴＣＦ１、ＰＤ－１、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１２７、ＰＤ－１、ＣＤ１２２、ＣＤ１３２、ＫＬＲＧ－１、ＨＬＡ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ３３、ＣＤ６１、Ｃｄ２３５、ＴＣＲγ、ＴＣＲδ、ＣＤ３８、ＣＤ６９、ＣＤ１１ａ、ＣＤ５８、ＣＤ９９、ＣＤ１０３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＬＡ、ＣＤ１６１、ＩＬ－１８Ｒａ、ｃ－Ｋｉｔ、およびＣＤ１３０を含む、系統（CD4、CD8）、分化、および他のＴ細胞マーカーの発現を測定することによりフローサイトメトリーで免疫表現型を決定した。Ｍｉｔｏｔｒａｃｋｅｒ、Ｍｉｔｏｐｒｏｂｅ、および２－ＮＢＤＧを含むミトコンドリアマーカーを使用して、細胞の分化および／または活性化を評価することもできる。初期ＴＩＬ生成ステップを、２８日間から約７～１１日間へと短縮し、同様の結果を得ることができる。
[000255] 図および表２～７のデータは、化合物１０３を用いたものである。図１には、１ウェル当たりの平均細胞数および腫瘍試料間のＴＩＬ拡大増殖変動性の程度が示されている。そのため、表２では、全細胞数は、ＩＬ－２単独条件のパーセンテージとして示されている。図１Ａには、ＩＬ－２単独によるかまたはＣｂｌ阻害剤単独による平均細胞数が示されている。図１Ｂには、ＩＬ－２単独によるか、または０．１、１、もしくは１０μＭのＣｂｌ阻害剤と組み合わせたＩＬ－２による平均細胞数が示されている。図４Ａ～４Ｄには、ＩＬ－２単独によるか；０．１、１、もしくは１０μＭのＣｂｌ阻害剤によるか；または０．１、１、もしくは１０μＭのＣｂｌ阻害剤と組み合わせたＩＬ－２による、卵巣ＴＩＬおよび結腸ＴＩＬでの平均細胞数が示されている。図５Ａには、ＩＬ－２単独によるか；０．５μＭのＣｂｌ阻害剤によるか；または０．５０μＭのＣｂｌ阻害剤と組み合わせたＩＬ－２による、結腸ＴＩＬでの平均細胞数が示されている。図５Ｂには、ＩＬ－２単独によるか；０．３、０．５、もしくは１０μＭのＣｂｌ阻害剤によるか；または０．３、０．５、もしくは１０μＭのＣｂｌ阻害剤と組み合わせたＩＬ－２による、結腸ＴＩＬでの平均細胞数が示されている。図６には、ＩＬ－２単独によるか；０．５μＭのＣｂｌ阻害剤によるか；または０．５０μＭのＣｂｌ阻害剤と組み合わせたＩＬ－２による、腫瘍断片に由来するかまたは腫瘍懸濁物に由来する結腸ＴＩＬでの平均細胞数が示されている。注目すべきには、Ｃｂｌ阻害剤の存在下でＴＩＬを培養すると、ＩＬ－２が存在しない場合でさえ、ＴＩＬのかなりの拡大増殖がもたらされた。これは、Ｃｂｌ阻害剤およびＩＬ－２の両方の非存在下で培養した腫瘍試料が生存細胞を一切産出しなかったことを考慮すると、驚くべきことである。加えて、ＩＬ－２およびＣｂｌ阻害剤の両方の存在下でＴＩＬを培養すると、ＩＬ－２またはＣｂｌ阻害剤のいずれか単独の存在下でＴＩＬを培養した場合よりも、４つの腫瘍試料のうち２つ（ＴＩＬ１およびＴＩＬ４）から実質的により多くのＴＩＬの産生がもたらされた。したがって、Ｃｂｌ阻害剤は、ＩＬ２の非存在下で細胞生存性を支援し、一部の腫瘍試料ではＩＬ－２の効果を強化する。
Figure 2022549303000022
[000256] 急速拡大増殖プロトコール
[000257] 急速拡大増殖プロトコール（REP）では、放射線照射された同種異系フィーダー細胞（Astarte Biologics）の存在下で、ＯＫＴ３（抗ＣＤ３）抗体（Thermo Fisher Scientific）およびＩＬ－２を、２００：１比のフィーダー細胞対対応するＴＩＬ細胞で使用した。ＰＢＭＣ、ＯＫＴ３抗体（３０ｎｇ／ｍＬ）、完全培地（「CM」）、ＡＩＭ Ｖ培地（GIBCO/BRL）、およびＴＩＬエフェクター細胞を一緒にし、混合し、７５ｃｍ２組織培養フラスコにアリコートした。フラスコを、５％ＣＯ２中３７℃で直立させてインキュベートした。２日目にＩＬ－２（６０００ＩＵ／ｍＬ）および／またはＣｂｌ阻害剤（０．１、１、１０μＭ）を添加した。５日目に培養上清を吸引により除去し、培地を、６０００ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２および／またはＣｂｌ阻害剤を含む、ＣＭ／ＡＩＭ Ｖの１：１混合物と交換した。６日目におよびその後は毎日、細胞濃度を決定し、必要に応じて、細胞密度を約１×１０６細胞／ｍＬに維持するために、６０００ＣＵ／ｍＬ ＩＬ－２／Ｃｂｌ阻害剤を含む追加の培地を有する追加のフラスコに細胞を分割した。ＲＥＰ開始の約１４日後、細胞を採取し、将来の実験分析のために凍結保存した。
[000258] ＲＥＰ前プロトコール中に拡大増殖されたＴＩＬのみを、ＲＥＰプロトコールにおいてさらに拡大増殖した：ＴＩＬ１、ＴＩＬ３、ＴＩＬ４、およびＴＩＬ６。ＲＥＰ中のＴＩＬ拡大増殖の程度は、腫瘍試料間で様々だった。そのため、表３では、全細胞数は、ＲＥＰ拡大増殖プロトコール中のＩＬ－２単独条件のパーセンテージとして示されている。
Figure 2022549303000023
[000259] Ｔリンパ球は、発生モデル（Restifo, Blood, 124:476-477, 2014）に従って系統および分化マーカー発現に基づき、表４に示されているように画定した。興味深いことに、Ｃｂｌ阻害剤の存在下でｅｘ ｖｉｖｏにて拡大増殖したヒトＴＩＬは、表５に示されているように、ＴＣＭ（CD45RO+、CD95+、CCR7+、CD62L+）またはＴＥＭ（CD45RO+、CD95+、CCR7-、CD62L-）表現型を有する。加えて、Ｃｂｌ阻害剤は、図７に示されているように、悪性卵巣腫瘍試料からＣＤ８＋Ｔリンパ球を選択的に拡大増殖させることが見出された。これは、ＩＬ－２単独でｅｘ ｖｉｖｏにてＴＩＬを培養した場合、本質的に等価数のＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔリンパ球が産生されたことを考慮すると、注目に値する。単球（CD14+）、Ｂ細胞（CD20+）、およびＮＫ細胞（CD56+）は、全細胞数の＜１０％を占めていた。
Figure 2022549303000024
Figure 2022549303000025
＾キメラ抗原受容体（CAR）を発現するように遺伝子操作されたＴ細胞を同様に拡大増殖してもよい。手短に言えば、患者の全血、バフィーコート、またはロイコパックからＴ細胞を分離し、上記に記載のように拡大増殖する。レンチウイルス形質導入により、ＣＡＲをＴ細胞に導入する。Ｔ細胞を、生成された全細胞数ならびにそれらの表現型についてフローサイトメトリー分析により評価して、メモリー、エフェクター、疲弊、および幹細胞性（例えば、CD95、TCF7、CD62L、CCR7、CD45RO、およびCD45RA、TOX、PD-1、TIM3、LAG3）、および形質導入効率を決定する。得られたＣＡＲ Ｔ細胞を拡大増殖し、ＣＡＲに対する特異的抗原または一般的なＴ細胞活性化法（例えば、抗ＣＤ３／ＣＤ２８）による再活性化後にサイトカイン（例えば、IFNγ）を産生する能力を評価する。
実施例２：末梢血単核細胞から抗原特異的ヒトＴ細胞を拡大増殖するためのＣｂｌ阻害剤の評価。
[000260] Ｃｂｌ阻害剤の存在下における末梢血単核細胞からのｅｘ ｖｉｖｏ Ｔ細胞拡大増殖を評価した。
[000261] ＣＭＶ ｐｐ６５（495～503）反応性Ｔ細胞を、ＣＭＶ血清陽性ドナー（Conversant）を解凍することにより拡大増殖し、２×１０６細胞／ｍｌを、１％ＧｌｕｔａＭａｘ（Gibco）、１％非必須アミノ酸（NEAA）、ペニシリン／ストレプトマイシン（Gibco）、１０％熱不活化ヒトＡＢ血清（Corning）、１μｇ／ｍｌ ＣＭＶ ｐｐ６５（495～503）（Anaspec）、２ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－２（R&D）、および／またはＣｂｌ阻害剤（０１、１、１０μＭ）で補完されたＲＰＭＩ培地（Gibco）に再懸濁した。ＰＢＭＣを、ＩＬ－２および／またはＣｂｌ阻害剤と共に８日間培養し、３日目および５日目に補充した。８日目に細胞を採取し、低用量のＩＬ－２（１００Ｕ／ｍｌ）および／またはＣｂｌ阻害剤を有する完全ＲＰＭＩ培地に２００万個／ｍｌで２日間再播種した。１１日目に細胞をプールして計数し、１１日目に、系統（CD4、CD8）および分化（CD45RA、CD45RO、CD95、CCR7、CD62L、TCF1、PD-1、TIM3、LAG3を含む）マーカーの発現を測定することによりフローサイトメトリーで免疫表現型を決定した。
[000262] 拡大増殖の程度は、試料間で様々だった。注目すべきには、Ｃｂｌ阻害剤の存在下でＴ細胞を培養すると、ＩＬ－２が存在しない場合でさえ、Ｔ細胞のかなりの拡大増殖がもたらされた。
Figure 2022549303000026
[000263] Ｔリンパ球は、発生モデル（Restifo, Blood, 124:476-477, 2014）に従って系統および分化マーカー発現に基づき、表４に示されているように画定した。興味深いことに、Ｃｂｌ阻害剤の存在下でｅｘ ｖｉｖｏにて拡大増殖したヒトＴ細胞は、表７に示されているように、ＴＳＣＭ（CD45RA+、CD95+、CCR7+、CD62L+）、ＴＣＭ（CD45RO+、CD95+、CCR7+、CD62L+）、またはＴＥＭ（CD45RO+、CD95+、CCR7-、CD62L-）表現型を有する。加えて、Ｃｂｌ阻害剤は、図２Ａおよび２Ｂに示されているように、ドナーＰＢＭＣからＣＤ８＋Ｔリンパ球を選択的に拡大増殖させることが見出された。図２Ａは、ＩＬ－２の非存在下（図２Ａ）および存在下（図２Ｂ）における、ＩＬ－２、０．１μＭ Ｃｂｌ阻害剤、１μＭ Ｃｂｌ阻害剤、および１０μＭ Ｃｂｌ阻害剤の存在下での、ＰＢＭＣ試料からのＴ細胞の選択的拡大増殖を示す。０．１または０．５μＭのＣｂｌ阻害剤と組み合わせてＩＬ－２の存在下で培養した細胞は、培養中で最も高いパーセンテージのＣＤ８＋細胞を示した。加えて、１μＭ Ｃｂｌ阻害剤単独で培養した細胞は、ＩＬ－２単独で培養した細胞よりも高いパーセンテージのＣＤ８＋細胞を示した。
Figure 2022549303000027
[000264] Ｔ細胞活性を、サイトカイン分泌を分析することにより決定した。こうした拡大増殖Ｔ細胞が、細胞外刺激に対して応答可能であるか否かを調査するため、Ｔ細胞を、２５ｎｇ／ｍＬホルボールミリステートアセテート（PMA）および０．５μＭイオノマイシンで刺激した。刺激の９０分後、モネンシン１：５０（GolgiStop、BD Biosciences）を添加した。６時間後、細胞を、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ９５＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋の表面発現について染色し、その後固定し、透過処理し、細胞内サイトカインＩＦＮ－γについて染色した。６時間後、本発明者らは、Ｔ細胞をＩＬ－２およびＣｂｌ阻害剤を用いて拡大増殖すると、抗腫瘍応答の重要なエフェクターである細胞内ＩＦＮ－γ蓄積の明らかな増加を観察した。本発明者らは、ＣＤ４／８＋Ｔ細胞のおよそ５０％が、ＩＬ－２拡大増殖Ｔ細胞でのＩＦＮ－γ発現について陽性であり、８５％よりも多くの、ＩＬ－２およびＣｂｌ阻害剤拡大増殖ＣＤ４／８＋Ｔ細胞が、ＩＦＮ－γを産生可能であることを見出した。図３Ａには、Ｃｂｌ阻害剤およびＩＬ－２の存在下で培養したＴ細胞が、ＩＬ－２単独またはＣｂｌ阻害剤単独の存在下で培養したＴ細胞よりも高いレベルのＣＤ４／ＣＤ８＋およびＩＦＮγ＋の両方である細胞を示したことが示されている。ＣＤ４／８＋およびＩＦＮγ＋の両方である細胞の発現は、ＩＬ－２およびＣｂｌ阻害剤拡大増殖Ｔ細胞が、抗腫瘍応答を誘発する機能的可能性を含むことを示唆する。
実施例３：ガス透過性フラスコを使用して腫瘍組織からヒト腫瘍浸潤性リンパ球（TIL）をｅｘ ｖｉｖｏで拡大増殖するためのＣｂｌ阻害剤の評価
[000265] 図６は、ＴＩＬ培養のための最適な出発物質を決定するための研究の結果を提供する。結腸腫瘍に由来する腫瘍断片対腫瘍細胞懸濁物を使用した研究では、腫瘍断片から１１日間成長させた培養物は、ＴＩＬ培養の出発物質として腫瘍細胞懸濁物を使用した培養よりもおよそ１０倍高い拡大増殖を示した。
[000266] 培養は、容量が４０ｍＬで１０ｃｍ２のガス透過性シリコン底部を有するガス透過性フラスコ（GREX6M；Wilson Wolf Manucaturing、ミネソタ州）で開始し、各フラスコの４０ｍＬ培地に５つの腫瘍断片を投入し、ＩＬ－２または１ｕＭ Ｃｂｌ阻害剤のいずれか単独または組合せを０日目（D0）または３日目（D3）に添加した。Ｇ－ＲＥＸウェルを、３７℃で５％ＣＯ２の加湿インキュベーター内で７～２８日間インキュベートした。
[000267] 図８は、０日目または３日目におけるＩＬ－２またはＣｂｌ阻害剤の添加を比較した、ガス透過性シリコン底部を有するガス透過性フラスコを使用した２つの異なる卵巣腫瘍試料の細胞拡大増殖の７日目の結果を提供する。「Ａ」は、０日目でのＩＬ－２単独添加である。「Ｂ」は、０日目でのＩＬ－２および１μＭ Ｃｂｌ阻害剤の添加である。「Ｃ」は、０日目でのＩＬ－２の添加および３日目でのＣｂｌ阻害剤の１μＭの添加である。「Ｄ」は、３日目でのＩＬ－２の添加および３日目でのＣｂｌ阻害剤の添加である。「Ｅ」は、０日目でのＣｂｌ阻害剤の添加である。
実施例４：腫瘍モデルにおける有効性および作用機序を決定するためにｉｎ ｖｉｖｏ移入した抗原特異的Ｔ細胞のｅｘ ｖｉｖｏでの拡大増殖に対するＣｂｌ阻害剤効果の評価。
[00268] Ｃｂｌ阻害剤の存在下での腫瘍特異的Ｔ細胞のｅｘ ｖｉｖｏ培養は、ＩＬ－２単独を使用した標準的培養条件と比較して優れた抗腫瘍効果を付与することができる。この例では、Ｔ細胞を、単独のまたはＩＬ－２と組み合わせた化合物１０３に３日間という短期間でｅｘ ｖｉｖｏ曝露した場合でさえ、細胞を担がん動物に移入すると、対照と比較して、１か月間よりも長期間にわたって持続する抗腫瘍表現型が付与されたことが示された。
[00269] トランスジェニックマウスに由来する抗原特異的Ｔ細胞は、Ｃｂｌ阻害剤を用いたｅｘ ｖｉｖｏでのＣＡＲ ＴまたはＴＩＬ拡大増殖のモデルとして活用することができる。市販されているＯＴ－１トランスジェニック動物は、ＭＨＣＩ分子により提示されるとＯＶＡペプチドａａ２５７～２６４を認識するＣＤ８Ｔ細胞を有する。ＯＴ－１マウスに由来するＣＤ８＋Ｔ細胞を、ネガティブ選択により脾細胞の単一細胞懸濁物から単離した（StemCell Technologies カタログ番号19853 EasySep（商標）マウスＣＤ８＋Ｔ細胞単離キット）。次いで、細胞を、完全培地（RPMI1640、１０％熱不活化ＦＢＳ、１×ペニシリン／ストレプトマイシン、１×グルタミン、およびβ－メルカプトエタノール）に、１ｍＬ当たり０．５×１０６個の濃度で再懸濁した。６ウェル組織培養プレート（Falcon）を、＞３時間で３７℃にて２ｕｇ／ｍＬの抗マウスＣＤ３（Bio Xcell カタログ番号BE0001-1-R100mg ＩｎＶｉｖｏＭＡｂ抗マウスＣＤ３εクローン：145-2C11）でコーティングし、細胞添加前にＰＢＳ（MediaTech）で洗浄した。ｅｘ ｖｉｖｏ拡大増殖のため、１．５×１０６細胞／ウェルを、ＩＬ－２（３００ＩＵ）（R&D Systems）、Ｃｂｌ阻害剤（１μＭ）、またはＩＬ－２およびＣｂｌ阻害剤の組合せの存在下で培養した。Ｃｂｌ阻害剤は、マウスＣＢＬＢと相互作用し、増殖およびサイトカイン分泌の強化に関して同様のプロファイルを示すことが示されている。ＯＴ－１ Ｔ細胞活性化および拡大増殖の３日後、細胞を収集し、計数し、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５、ＣＤ２５、グランザイムＢ、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１２７、ＰＤ－１、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＫＬＲＧ－１、ＩＣＯＳ、ＴＣＦ１、Ｋｉ６７、Ｔ－ｂｅｔ、およびＦＯＸＰ３を含む、分化および追加のＴ細胞マーカーの発現を測定することによりフローサイトメトリーで免疫表現型を決定した。グランザイムおよびＴ－ｂｅｔの強化が測定されると共に、拡大増殖中のＣＢＬ阻害剤の包含に応答してエフェクター機能が増加する傾向が見出された。
[00270] 死細胞を除去してから（Miltenyi Biotec カタログ番号130-090-101）ｉｎ ｖｉｖｏ移入して、ＯＶＡ抗原を発現するＥＧ．７リンパ腫モデルにおけるそれらの輸送および機能をモニターした。１マウス当たりおよそ５００万個の細胞を、平均腫瘍量が約７０ｍｍ３であるマウスに移入した。ＯＴ－１細胞のｉｎ ｖｉｖｏ移入後、抗腫瘍応答を経時的にモニターし、免疫応答の質および量を種々の時点で評価した。血液および脾臓由来のＯＴ－１細胞は、移入４日後および９日後に分析すると、全ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４５＋細胞中の頻度がより高く、ｉｎ ｖｉｖｏ存続性であることが示された。加えて、Ｃｂｌ阻害剤を用いて拡大増殖したＯＴ－１細胞は、幹マーカーＴＣＦ１＋、ＰＤ－１＋、およびＴＩＭ－３－を発現した細胞のパーセンテージがより高いことが示された。
[00271] 図９は、Ｃｂｌ阻害剤を用いて拡大増殖したＯＴ－１細胞が、Ｅ．Ｇ７－ＯＶＡ細胞を皮下移植したマウスにおいて樹立された腫瘍を拒絶することが可能な強力なエフェクターであることを示す結果を提供する。
[00272] 図１０は、Ｃｂｌ阻害剤を用いて拡大増殖したＯＴ－１細胞は、全ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４５＋細胞中の頻度がより高く、血中でｉｎ ｖｉｖｏ存続性であることを示す結果を提供する。血液中のＯＴ－１細胞を、移入の４日後または９日後に評価した。脾臓から得られたＯＴ－１細胞を分析した場合も同様のデータが得られた。
実施例５：Ｃｂｌ阻害剤拡大増殖腫瘍抗原特異的Ｔ細胞の評価
[00273] この例では、Ｃｂｌ－ｂ阻害剤の存在下で拡大増殖した細胞の療法有効性を評価する。
[00274] 手短に言えば、オバルブミン（OT-1）に特異的なトランスジェニックＴ細胞受容体を発現する腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を、プレートに結合しているＣＤ３＋１）１μＭのＣｂｌ阻害剤、２）３００ＩＵのＩＬ－２、ならびに３）Ｃｂｌ阻害剤およびＩＬ－２の組合せの存在下で３日間ｉｎ ｖｉｔｒｏで拡大増殖した。拡大増殖したＯＴ－１細胞を、ＦＡＣＳ分析で特徴付け、オバルブミン（OVA）発現腫瘍を有するＥ．Ｇ７－ＯＶＡマウスに移入した。拡大増殖したＯＴ－１細胞をｉｎ ｖｉｖｏ移入した後、抗腫瘍応答を経時的にモニターし、免疫応答の質および量を種々の時点で評価した。分析には、血液、腫瘍、および脾臓試料に対するＦＡＣＳ分析が含まれていた。分析には、抗原特異的エフェクターＴ細胞の多機能性を評価するためのＯＶＡクラスＩペプチドによる脾細胞の再刺激も含まれていた。
[00275] ０日目に、Ｅ．Ｇ７－ＯＶＡ細胞を各マウスに移植した。５日目に、約５×１０６個のｉｎ ｖｉｔｒｏ拡大増殖ＯＴ－１細胞を各マウスの尾に注射した。９日目に、血液をＦＡＣＳで分析した。１４日目に、血液、腫瘍、および脾臓試料をＦＡＣＳで分析した。２７日目に、血液をＦＡＣＳで分析した。腫瘍容積を、移植の約５０日後までおよそ５日毎に測定した。
[00276] 図１１Ａおよび１１Ｂに示されているように、化合物１０３を用いて拡大増殖したＣＤ８＋ＯＴ－１細胞は、ＩＬ－２を用いて拡大増殖したＣＤ８＋ＯＴ－１細胞と少なくとも同程度に強力だった。化合物１０３およびＩＬ－２の組合せを用いた拡大増殖も、移植後少なくとも２０日まで同様の効力を示した。
[00277] 図１２に示されている第２の研究では、ＣＤ３単独を用いて拡大増殖した対照細胞は、最低限の抗腫瘍活性を示した。化合物１０３を用いて拡大増殖した細胞は、腫瘍成長のより顕著な阻害（パネルＡ）および長期生存（B）により示されるように、ＩＬ－２拡大増殖細胞と比較して効力増加を示した。また、化合物１０３＋ＩＬ－２拡大増殖細胞は、腫瘍成長のより顕著な阻害（パネルＡ）および長期生存（B）により示されるように、ＩＬ－２と比較して効力増加を示した。
[00278] 図１２に図示されている実験により、化合物１０３を用いて拡大増殖したＯＴ－１細胞は、腫瘍成長のより顕著な阻害（図１２Ａ）および長期生存の向上（図１２Ｂ）により示されるように、ＩＬ－２拡大増殖細胞と比較して効力増加を示したことが実証される。重要なことには、化合物１０３＋ＩＬ－２を用いて拡大増殖したＯＴ－１細胞は、腫瘍成長のより顕著な阻害（図１２Ａ）および優れた長期生存（図１２Ｂ）により示されるように、単一の作用剤単独、ＩＬ－２、または化合物１０３と比較して効力増加を示した。
実施例６：Ｃｂｌ阻害剤拡大増殖腫瘍抗原特異的Ｔ細胞は、ＩＬ－２を用いて拡大増殖した同じ細胞と比較して優れた特性を示す。
[00279] ＯＴ－１細胞を、以前の例に従って拡大増殖し、オバルブミン（OVA）発現腫瘍を有するＥ．Ｇ７－ＯＶＡマウスに投与した。細胞のｉｎ ｖｉｖｏ特性を評価した。
[00280] 血液中の拡大増殖ＯＴ－１細胞を、移入の４日後または２２日後に評価した。図１３Ａ（４日目）および図１３Ｂ（２２日目）に示されているように、Ｃｂｌ阻害剤拡大増殖細胞は、ＩＬ－２単独を用いて拡大増殖した細胞よりも全ＣＤ４５＋細胞中の頻度がより高く、より長期間にわたって存続し、抗ＣＤ３単独を用いて拡大増殖した細胞よりもより長期間にわたって存続した。Ｃｂｌ阻害剤およびＩＬ－２の組合せを用いて拡大増殖した細胞は、全ＣＤ４５＋細胞中の頻度がさらにより高く、より高い存続性を示した。
[00281] 腫瘍中の拡大増殖ＯＴ－１細胞を、移入の４日後に評価した。図１４Ａに示されているように、Ｃｂｌ阻害剤拡大増殖細胞は、ＩＬ－２単独を用いて拡大増殖した細胞および抗ＣＤ３単独を用いて拡大増殖した細胞と比較して、全ＣＤ４５＋細胞中の頻度がより高いことにより示されるように、腫瘍に浸潤する能力の増加を示す。Ｃｂｌ阻害剤およびＩＬ－２の組合せを用いて拡大増殖した細胞は、全ＣＤ４５＋細胞中で頻度が最も高いことにより示されるように、腫瘍へとより良好に浸潤する。さらに、Ｃｂｌ阻害剤またはＣｂｌ阻害剤＋ＩＬ－２を用いて拡大増殖したＯＴ－１細胞は、ＩＬ－２単独を用いて拡大増殖したＯＴ－１細胞と比較して、疲弊マーカーＰＤ１およびＴＩＭ３（図１４Ｂ）ならびにＰＤ１、ＴＩＭ３、およびＬＡＧ３（図１４Ｃ）の発現レベルがより低いことが示された。
[00282] 脾細胞からの拡大増殖ＯＴ－１細胞を、移入の１１日後に評価した。採取した脾細胞を、ＯＶＡクラスＩペプチドで７２時間再刺激した。図１５に示されているように、Ｃｂｌ阻害剤拡大増殖細胞は、ＩＬ－２単独を用いて拡大増殖した細胞と比較して、ペプチド再刺激に応答して増殖する優れた内在的能力を示した。Ｃｂｌ阻害剤およびＩＬ－２の組合せを用いて拡大増殖した細胞は、ペプチド再刺激に応答して増殖するさらにより大きな内在的能力を示した。
[00283] 脾細胞からの拡大増殖ＯＴ－１細胞を、移入の１１日後に評価した。採取した脾細胞を、ＯＶＡクラスＩペプチドで４時間再刺激した。図１６Ａおよび１６Ｂに示されているように、Ｃｂｌ阻害剤拡大増殖細胞は、ＩＬ－２単独を用いて拡大増殖した細胞と比較して、ペプチド再刺激ＯＴ－１細胞において同等の多機能性（ＩＦＮ－ガンマおよびＴＮＦ－アルファ二重陽性細胞）を示した。図１６Ｃに示されているように、Ｃｂｌ阻害剤増殖細胞は、ＩＬ－２単独を用いて拡大増殖した細胞と比較して、多機能性（ＩＦＮ－ガンマおよびＴＮＦ－アルファ二重陽性）細胞においてより低いレベルの疲弊マーカー（ＰＤ１およびＴＩＭ３）の発現を示した。
[00284] 脾細胞からの拡大増殖ＯＴ－１細胞を、移入の１１日後に評価した。採取した脾細胞を、ＯＶＡクラスＩペプチドで２４時間再刺激した。ペプチド再刺激の２４時間後にＩＬ－２産生を測定した。図１７Ａに示されているように、拡大増殖条件は、ＩＦＮ－ガンマ産生に影響を及ぼさなかった。図１７Ｂに示されているように、Ｃｂｌ阻害剤拡大増殖細胞は、再刺激時にＩＬ－２産生の増加を示した。細胞をＣｂｌ阻害剤の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏ拡大増殖した場合、全ＩＬ－２および二重ＩＦＮ－ｇ／ＩＬ－２産生細胞が両方とも増加した。
実施例７：経口Ｃｂｌ阻害剤処置は、拡大増殖ＯＴ－１細胞の抗腫瘍有効性を強化する。
腫瘍容積を、細胞移入後ほぼ５日毎に測定した。図１８に示されているように、化合物１１６の経口投与は、化合物１０３＋ＩＬ－２を用いて拡大増殖したＯＴ－１細胞の抗腫瘍有効性を強化した。図１９に示されているように、化合物１１６の経口投与は、化合物１１６の経口処置を受け取っていないマウスと比較した場合、化合物１０３＋ＩＬ－２を用いて拡大増殖したＯＴ－１細胞で処置したマウスの生存を増強した。
[00285] マウス血液中のＯＴ－１細胞を、移入の５日後または２０日後に評価した。図２０Ａおよび２０Ｂに示されているように、化合物１１６は、Ｃｂｌ阻害剤＋ＩＬ－２を用いて拡大増殖したＯＴ－１細胞の頻度増加を誘導した。また化合物１１６は、Ｃｂｌ阻害剤＋ＩＬ－２を用いて拡大増殖したＯＴ－１細胞のより長期の存続性を誘導した。
実施例８：拡大増殖ＯＴ－１細胞の長期抗腫瘍有効性。
[00286] ＯＴ－１細胞が長期腫瘍保護可能であるか否かを決定するために、上記の実験（図１２）の長期生存個体に、ｉｎ ｖｉｔｒｏ拡大増殖ＯＴ－１細胞の初期養子移入の１４９日後に、致死用量のＥ．Ｇ７－ＯＶＡ腫瘍細胞を再負荷(re-challenge)した。再負荷は、オバルブミン抗原を発現するＥ．Ｇ７－ＯＶＡ腫瘍細胞を移植した部位にてＯＴ－１細胞拡大増殖を誘導し、それにより腫瘍成長を効果的に制御した（図２１）。図２１の結果は、腫瘍を拒絶したマウスが、初期ＯＴ－１ Ｔ細胞移入の１４９日後の腫瘍再負荷に対して抵抗性であったことを示す（図２１）。
[00287] 記憶応答の効力を判断するため、腫瘍再負荷前の０日目（初期養子移入の１４９日後）、再負荷の５日後、１２日後、２０日後、および２７日後に、血液中のＯＴ－１細胞数を評価した。図２２Ａに示されているように、初期養子移入の１４９日後、Ｃｂｌ阻害剤またはＣｂｌ阻害剤＋ＩＬ－２の組合せを用いてｉｎ ｖｉｔｒｏ拡大増殖したＯＴ－１細胞は、血液中により多数存在した。これは、ｉｎ ｖｉｖｏでの存続能力が優れていることを示す。
[00288] Ｃｂｌ阻害剤（単独でまたはＩＬ－２と組み合わせて）を用いて拡大増殖したメモリーＯＴ－１細胞の記憶応答を判断するため、血液中のＯＴ－１細胞数を、腫瘍再負荷の５日後、１２日後、２０日後、および２７日後に評価した。図２２Ｂに示されているように、Ｃｂｌ阻害剤またはＣｂｌ阻害剤＋ＩＬ－２の組合せを用いてｉｎ ｖｉｔｒｏ拡大増殖したＯＴ－１細胞は、５日目の血液１ｍｌ当たりのＯＴ－１細胞数がより多いことにより示されるように（図２２Ｂ）、ＩＬ－２単独で拡大増殖したＯＴ－１細胞と比較して、有意により迅速な記憶応答を開始することができた。
実施例９：Ｃｂｌ阻害剤を用いて拡大増殖した細胞の表現型
[00289] Ｃｂｌ阻害剤の存在下で培養した細胞を広範に特徴付けた。
[00290] 初期研究には、卵巣およびＣＲＣ腫瘍組織（平均で約０．５～０．８ｇ）でのＴＩＬ拡大増殖が含まれていた。これらを、複数の小片（サイズはおよそ２ｍｍ３）に断片化し、２４ウェルプレート当たり１つの断片を添加した。こうした断片を、急速拡大増殖前（ＲＥＰ前）に、６０００ＩＵ ＩＬ－２または６０００ＩＵ ＩＬ－２＋１ｕＭ化合物１０３のいずれかと共に２８日間培養した。次いで、ウェルを処理してプールし、全細胞数をフローサイトメトリーで評価した。ＴＩＬ拡大増殖後、細胞の表現型を特徴付けた。細胞は、大部分がＣＤ４５ＲＯ＋およびＣＤ４＋およびＣＤ８＋だった。図２３Ａでは、ＣＤ４％の減少があった。図２４Ｂでは、細胞におけるそれに対応するＣＤ８の増加があった。両方とも、ＩＬ－２＋化合物１０３を用いて拡大増殖して、ＩＬ－２単独と比較した。これは、Ｃｂｌ阻害剤が、複数の腫瘍においてＣＤ８Ｔ細胞を選択的に拡大増殖させることを示す。
[00291] がん組織断片の２８日間のｅｘ ｖｉｖｏ培養後に得られた、新鮮な卵巣および結腸がん組織（新鮮、n=8）に直接由来するＴＩＬをフローサイトメトリーで分析した。図２４は、それぞれ、ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＯ＋中のセントラルメモリー（ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＣＲ７＋）およびエフェクターメモリー（ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＣＲ７－）表現型のパーセンテージを示すＦＡＣＳデータを提供する。ＦＡＣＳ結果は、平均±ＳＥＭとして表した。統計的有意性は、両側ウィルコクソン符号順位検定を使用して計算した（＊、p<0.05）。ＣＤ８Ｔ細胞を、Ｔ細胞分化表現型マーカー：ＣＣＲ７およびＣＤ４５ＲＯを評価することによりさらに特徴付けた。ＩＬ－２単独と比較して、セントラルメモリーＴ細胞（ＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＯ＋細胞）の有意な増加が、ＩＬ－２＋化合物１０３を用いて拡大増殖したＴＩＬで観察された（図２４）。これは、分化度のより低い存続性Ｔ細胞の拡大増殖を示す。
[00292] がん組織断片の１４日間のｅｘ ｖｉｖｏ培養後に得られた、新鮮な卵巣、結腸、および乳がん組織（新鮮、n=7）に直接由来するＴＩＬをフローサイトメトリーで分析した。腫瘍を断片化し、５つの断片を、５０ｍｌ容量のＩＬ－２またはＩＬ－２＋化合物１０３のいずれかを含むＧＲＥＸ１０フラスコに１４日間添加し、細胞には５日毎に栄養補給した。ＣＤ８Ｔ細胞に焦点を当てると、ＩＬ－２＋化合物１０３を用いたＣＤ８Ｔ細胞の拡大増殖の増加、ならびにＣＤ８Ｔ％（図２５Ａ）および総数（図２５Ｂ）の増加が観察された。
[00293] がん組織断片の１４日間のｅｘ ｖｉｖｏ培養後に得られた、新鮮な卵巣および結腸がん組織（新鮮、n=7）に直接由来するＴＩＬをフローサイトメトリーで分析した。図２６は、それぞれ、ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＯ＋中のセントラルメモリー（ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＤ８＋）およびエフェクターメモリー（ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＤ８－）表現型のパーセンテージを示すＦＡＣＳデータを提供する。ＦＡＣＳ結果は、平均±ＳＥＭとして表した。これは、黒色で強調されている通り、セントラルメモリー細胞の有意な増加を示す。
[00294] 拡大増殖したＴＩＬが細胞外刺激に応答可能であるか否かを調査するため、ＴＩＬを、分泌阻害剤および抗ＣＤ１０７ａの存在下にて６時間にわたって抗ＣＤ３／ＣＤ２８で刺激した。６時間後、ＣＤ１０７ａの表面発現の明らかな増加が観察された。これは、Ｔ細胞の脱顆粒および細胞傷害活性に関連付けられる。刺激時に、ＩＬ２を用いて拡大増殖したＣＤ８＋ＴＩＬは平均で４０％がＣＤ１０７Ａ発現陽性であり、ＩＬ２＋化合物１０３を用いて拡大増殖したＣＤ８＋ＴＩＬは６０％よりも多くがＣＤ１０７ａを産生することが可能だった（図２７Ａ）。刺激時に、ＩＬ２を用いて拡大増殖したＣＤ４＋ＴＩＬは平均で５０％がＣＤ１０７Ａ発現陽性であり、ＩＬ２＋化合物１０３を用いて拡大増殖したＣＤ４＋ＴＩＬは６０％よりも多くがＣＤ１０７ａを産生することが可能だった（図２７Ｂ）。
[00295] 細胞傷害性の状況では、アポトーシスを媒介するために分泌されるプロテアーゼであるグランザイムＢ（Grb）を評価した。刺激時に、ＩＬ－２＋化合物１０３を用いて拡大増殖したＴＩＬにて産生されるＧｒｂは、ＩＬ－２単独と比較して有意に増加した（図２８Ａ）。また、ＣＤ１０７Ａ＋ＧＲＢ＋細胞を評価した。この場合も、刺激時に、ＩＬ－２＋化合物１０３を用いて拡大増殖した細胞の有意な増加が観察された（図２８Ｂ）。このことから、本発明者らは、Ｃｂｌ阻害剤は、細胞傷害性能力が増加されたＴＩＬを拡大増殖させると考えられると結論付ける。
[00296] また、ＧＲＥＸでの１４日間拡大増殖中に分泌されたサイトカインおよびケモカインを評価した。ＩＬ－２＋化合物１０３を用いて拡大増殖したフラスコでは、ＩＦＮ－γが有意に増加し、ＧＭＣＳＦ、ＭＩＰ１α、ＭＩＰ１β、およびＩＰ１０の増加傾向が観察された（図２９）。
[00297] Ｃｂｌ阻害剤を添加した場合の観察には、サイトカイン分泌により証明されるように機能の点でより強力であり得る細胞、品質が潜在的により良好でより存続性のセントラルメモリーＴ細胞の数の増加、ならびにグランザイムＢおよび脱顆粒マーカーＣＤ１０７Ａの発現増加が含まれていた。これらは、固形腫瘍徴候を有する患者のための新しい臨床手法を支持する。
[00298] 処理細胞における化学走化性分泌を評価するため、高用量ＩＬ－２＋／－１μＭ化合物１０３のいずれかを用いてＧＲＥＸ１０にて複数の腫瘍徴候（n=10)から拡大増殖した１×１０５個のＴＩＬを＋／－抗３／ＣＤ２８で２４時間培養した。上清をＬｕｍｉｎｅｘで評価した。ＩＬ－２および化合物１０３を用いて拡大増殖したＴＩＬは、刺激時にＭＩＰ１α（図３０Ａ）およびＭＩＰ１β（図３０Ｂ）の分泌の有意な増加を示した。
[00299] 処理細胞におけるサイトカイン分泌を評価するため、高用量ＩＬ－２＋／－１μＭ化合物１０３のいずれかを用いてＧＲＥＸ１０にて複数の腫瘍徴候（n=10)から拡大増殖した１×１０５個のＴＩＬを＋／－抗３／ＣＤ２８で２４時間培養した。ＩＬ－２および化合物１０３を用いて拡大増殖したＴＩＬは、刺激時に、ＩＬ－２、ＩＬ－５、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ＴＮＦ－α、およびＩＦＮ－γの有意な分泌を示した（図３１）。
[00300] ＣＤＲ３多様性を評価するため、代表的な乳房ＴＩＬを、高用量ＩＬ－２（図３２Ａ）、化合物１０３を伴う高用量ＩＬ－２（図３２Ｂ）、または化合物１０３単独（図３２Ｃ）を用いて拡大増殖した。ＴＩＬを、ＧＲＥＸ１０で１４日間培養した。ＩＬ－２＋／－化合物１０３を用いて拡大増殖したＴＩＬの全ＲＮＡを単離し、ｉＲｅｐｅｒｔｏｉｒｅ（ハンツビル、アラバマ州、米国）によるＲＴ－ＰＣＲおよび配列決定に供した。生データは、改変型スミス－ウォーターマンアルゴリズム（modified Smith-Waterman algorithm）によるＩＲｍａｐプログラムを使用してｉＲｅｐｅｒｔｏｉｒｅにより分析された。ＣＤＲ３ａｌｇｅｒｂｒａソフトウェアを使用して、示されている処理を行った試料間で共有されるＣＤＲ３の計算を評価した。データはＣＤＲ３の頻度でフィルタリングされていたため、元データで頻度が事前に設定された共有ＣＤＲ３配列のみが表示された。試料間の読取り深度の違いを考慮して、すべてのＣＤＲ３頻度を１０００万個の読取りにスケーリングした。各ｕＣＤＲ３－ＶＤＪ組合せが、読取り数に関わりなく１の量として扱われるようにデータを正規化し、次いでＶユーセージ（V usage）およびＪユーセージ（J usage）について分析した。固有ＣＤＲ３は、化合物１０３群で増加した。
実施例１０：Ｃｂｌ阻害剤を用いて拡大増殖した細胞の表現型
[00301] 化合物安定性を評価するため、１日目に、１μＭ化合物１０３またはＤＭＳＯを、１０％ヒト血清を含む完全ＲＭＰＩに添加し、４℃、２２℃、または３７℃のいずれかで１１日間の期間にわたって保管した。化合物１０３の濃度を、各表示時点および保管温度で質量分析により評価した。化合物１０３は、ＲＰＭＩ培地で少なくとも１１日間安定だった（図３３）。
[00302] 培養中の化合物安定性を評価するため、ＴＩＬを、１μＭ化合物１０３の存在下で培養し、１μＭ化合物１０３を１４日間にわたって４日毎に連続して添加し、続いてＰＢＳで２回洗浄した（Ｗ１：洗浄１、Ｗ２：洗浄２）。化合物１０３の量を、初期培地中、および両連続洗浄（Ｗ１＆Ｗ２）後の再懸濁緩衝液中、および細胞ペレット溶解物（最終産物）中で測定した（図３４）。化合物１０３の残留量は、産物の薬理効果レベル（PEL）を下回っていた。
実施例１１：拡大増殖プロトコール
[00303] －１日目に、腫瘍組織を採取し、断片化する。０日目に、細胞を、化合物１０３およびＩＬ－２（６０００ＩＵ）と共に１０％血清を含むＲＰＭＩ培地で拡大増殖する。４日目に、化合物１０３を添加する。７日目に、化合物１０３を再び添加する。１１日目に、細胞を採取する。１１日目に、化合物１０３、ＩＬ－２（３０００ＩＵ）、および任意選択によりＯＫＴ３、および任意選択により放射線照射された末梢血単核細胞を用いて、採取した細胞での急速拡大増殖を開始する。１６日目に、化合物１０３およびＩＬ－２（３０００ＩＵ）を添加する。２２日目に、拡大増殖した細胞を採取し、輸注の準備をする。２４日目に、細胞を患者に投与する。
[00304] 本明細書に引用されている刊行物および特許出願はすべて、個々の刊行物または特許出願が参照により組み込まれることが具体的におよび個別に示されているかの如く、参照により本明細書に組み込まれる。特許請求の主題は種々の実施形態の観点で説明されているが、当業者であれば、その趣旨から逸脱することなく、種々の改変、置換、省略、および変更をなすことができることを理解するだろう。したがって、主題の範囲は、その等価物を含む以下の特許請求の範囲によってのみ限定されることが意図されている。

Claims (42)

  1. 拡大増殖した免疫細胞を産生するための方法であって、
    ａ．免疫細胞を、相当な数の拡大増殖した免疫細胞が第１の拡大増殖にて産生される条件下での培養においてＣｂｌ阻害剤の存在下にてｉｎ ｖｉｔｒｏで拡大増殖するステップを含む方法。
  2. 前記第１の拡大増殖ステップを含み、さらなる拡大増殖ステップを含まない、請求項１に記載の方法。
  3. 前記第１の拡大増殖ステップａ．および１つまたは複数のさらなる拡大増殖を含む、請求項１に記載の方法。
  4. 前記第１の拡大増殖は、８～１２日間である、請求項３に記載の方法。
  5. 第２の拡大増殖は、８～１２日間であり、さらなる拡大増殖は存在しない、請求項３に記載の方法。
  6. 前記Ｃｂｌ阻害剤は、３～５日毎に前記培養に添加される、請求項１～５のいずれかに記載の方法。
  7. 前記Ｃｂｌ阻害剤は、前記第１の拡大増殖の０日目、４日目、および７日目にまたは約０日目、４日目、および７日目に前記培養に添加される、請求項１～６のいずれかに記載の方法。
  8. 前記Ｃｂｌ阻害剤は、前記第２の拡大増殖ステップの０日目および５日目にまたは約０日目および５日目に前記培養に添加される、請求項１～７のいずれかに記載の方法。
  9. 前記培養はＩＬ－２を含む、請求項１～８のいずれかに記載の方法。
  10. ＩＬ－２は、０日目に前記第１の拡大増殖へと、ならびに０日目および５日目に前記第２の拡大増殖へと添加される、請求項１～９のいずれかに記載の方法。
  11. 前記培養は、前記免疫細胞の表面受容体に結合する成分を含まない、請求項１～１０のいずれかに記載の方法。
  12. 前記培養は、抗ＣＤ３抗体またはＯＫＴ３を含まない、請求項１～１１のいずれかに記載の方法。
  13. 前記培養は、添加されたフィーダー細胞を含まない、請求項１～１２のいずれかに記載の方法。
  14. 前記培養は、添加された放射線照射された末梢血単核細胞を含まない、請求項１～１３のいずれかに記載の方法。
  15. 前記培養は、添加された４－ＩＢＢアゴニストを含まない、請求項１～１４のいずれかに記載の方法。
  16. 前記免疫細胞は、ドナーから採取される、請求項１～１５のいずれかに記載の方法。
  17. 前記免疫細胞は、腫瘍または腫瘍断片に由来する、請求項１～１６のいずれかに記載の方法。
  18. 前記免疫細胞は、Ｔ細胞である、請求項１～１７のいずれかに記載の方法。
  19. 前記免疫細胞は、腫瘍浸潤性リンパ球である、請求項１～１８のいずれかに記載の方法。
  20. 少なくとも１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０、または１０１１個の拡大増殖した免疫細胞を産生する、請求項１～１９のいずれかに記載の方法。
  21. 前記拡大増殖した免疫細胞は、さらなる拡大増殖を行わずに療法に使用することが可能である、請求項１～２０のいずれかに記載の方法。
  22. 前記拡大増殖した免疫細胞は、炎症促進性サイトカインを分泌する、請求項１～２１のいずれかに記載の方法。
  23. 前記分泌される炎症促進性サイトカインは、ＩＬ－２である、請求項１～２２のいずれかに記載の方法。
  24. 前記分泌される炎症促進性サイトカインは、ＩＦＮγである、請求項１～２３のいずれかに記載の方法。
  25. 前記第１の拡大増殖の長さは、０～４日間、０～７日間、０～１１日間、０～１４日間、または０～３０日間である、請求項１～２４のいずれかに記載の方法。
  26. 前記第２の拡大増殖の長さは、０～４日間、０～７日間、０～１１日間、０～１４日間、または０～３０日間である、請求項１～２５のいずれかに記載の方法。
  27. すべての拡大増殖を合わせた長さは、０～４日間、０～７日間、０～１１日間、０～１４日間、または０～３０日間である、請求項１～２６のいずれかに記載の方法。
  28. 前記免疫細胞は、ガス透過性急速拡大増殖細胞培養膜を含む培養容器においてｉｎ ｖｉｔｒｏで拡大増殖される、請求項１～２７のいずれかに記載の方法。
  29. 前記免疫細胞は、Ｇ－Ｒｅｘ（商標）容器においてｉｎ ｖｉｔｒｏで拡大増殖される、請求項１～２８のいずれかに記載の方法。
  30. Ｃｂｌ－ｂ阻害剤は、０．５～５０μＭの濃度である、請求項１～２９のいずれかに記載の方法。
  31. 前記Ｃｂｌ阻害剤は、ｃＣｂｌ、Ｃｂｌ－ｂ、およびＣｂｌ－ｃからなる群から選択される酵素の活性を阻害する、請求項１～３０のいずれかに記載の方法。
  32. 前記Ｃｂｌ阻害剤は、Ｃｂｌ－ｂの活性を阻害する、請求項１～３１のいずれかに記載の方法。
  33. 前記Ｃｂｌ阻害剤は、小分子、ペプチド、抗体、または核酸である、請求項１～３２のいずれかに記載の方法。
  34. 前記Ｃｂｌ阻害剤は、式（A）の化合物：
    Figure 2022549303000028
     もしくはその互変異性体または上述のいずれかの薬学的に許容される塩であり、式中、
    Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、３～６員ヘテロシクリル、Ｃ１～Ｃ６アルキル－（Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル）、Ｃ１～Ｃ６アルキル－（３～６員ヘテロシクリル）であり；
    Figure 2022549303000029
     は、
    Figure 2022549303000030
     であり、
    Ｚ１は、ＣＨもしくはＮであり；
    Ｚ２は、ＣＨもしくはＮであり；
    Ｚ３は、ＣＨもしくはＮであり；
    Ｘは、ＣＨもしくはＮであり；
    Ｒ２は、Ｈ、ハロ、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル、－ＮＨ－（３～６員ヘテロシクリル）、－ＮＨ－（Ｃ１～Ｃ６アルキル）、－ＮＨ－（Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル）、－Ｏ－（３～６員ヘテロシクリル）、－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ６アルキル）、または－Ｏ－（Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル）であり；
    Ｒ３ａは、Ｈ、ハロ、もしくはＣ１～Ｃ６アルキルであり；
    Ｒ３ｂは、Ｈ、ハロ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、もしくはＣ３～Ｃ６シクロアルキルであるか；またはＲ３ａおよびＲ３ｂは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、４～８員ヘテロシクリルもしくはＣ３～Ｃ６シクロアルキルを形成し、前記ヘテロシクリルもしくはシクロアルキルは、任意選択により１～３個のＲ１２基により置換されているか；
    または、Ｒ３ｂおよびＲ１１ａは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、任意選択によりＣ１～Ｃ６アルキルにより置換されているＣ３～Ｃ６シクロアルキルを形成し；
    ｎは、０もしくは１であり；
    Ｙは、Ｃ（Ｒ１１ａ）（Ｒ１１ｂ）もしくはＳであり、但しＲ３ａおよびＲ３ｂのいずれか、もしくは両方がハロの場合、Ｙは、Ｃ（Ｒ１１ａ）（Ｒ１１ｂ）であり；
    Ｑは、ＣＨもしくはＮであり；
    Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、もしくはＣ３～Ｃ６シクロアルキルであり；
    Ｒ１０は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、もしくはＣ３～Ｃ６シクロアルキルであり；
    Ｒ１１ａおよびＲ１１ｂは、独立して、Ｈ、ハロ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、もしくはＣ１～Ｃ６ハロアルキルであるか；またはＲ１１ａおよびＲ１１ｂは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、Ｃ３～Ｃ６シクロアルキルを形成するか；またはＲ３ｂおよびＲ１１ａは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、任意選択によりＣ１～Ｃ６アルキルにより置換されているＣ３～Ｃ６シクロアルキルを形成し；
    各Ｒ１２は、独立して、Ｃ１～Ｃ６アルキル、ハロ、ヒドロキシ、－Ｏ（Ｃ１～Ｃ６アルキル）、－ＣＮ、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＣＮ、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＯＨ、もしくはＣ１～Ｃ６ハロアルキルであり；２つのジェミナルＲ１２基は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、スピロＣ３～Ｃ４シクロアルキルを形成することができる、請求項２４に記載の方法。
  35. 前記Ｃｂｌ阻害剤は、化合物１０１～１２９ならびにそれらの薬学的に許容される塩および溶媒和物からなる群から選択される小分子である、請求項２４に記載の方法。
  36. 前記Ｃｂｌ阻害剤は、ペプチドである、請求項２４に記載の方法。
  37. 前記Ｃｂｌ阻害剤は、抗体である、請求項２４に記載の方法。
  38. 前記核酸は、ｓｉＲＮＡである、請求項２４に記載の方法。
  39. 請求項１～３８のいずれかに記載の方法により産生される拡大増殖した免疫細胞を含む組成物。
  40. それを必要とする患者のＴ細胞機能不全を治療するための方法であって、前記患者に、有効量の請求項２９に記載の組成物を投与することを含む方法。
  41. それを必要とする患者のがんを治療するための方法であって、前記患者に、有効量の請求項２９に記載の組成物を投与することを含む方法。
  42. 前記患者に、治療を強化するのに有効な量のＣｂｌ阻害剤またはその塩もしくは薬学的に許容される組成物を投与することをさらに含む、請求項３１または３２に記載の方法。
JP2022518710A 2019-09-24 2020-09-23 免疫細胞を拡大増殖するためのｃｂｌ阻害剤および組成物 Pending JP2022549303A (ja)

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