JP2022545466A

JP2022545466A - 養子細胞療法用の免疫細胞

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Publication number: JP2022545466A
Application number: JP2022511200A
Authority: JP
Inventors: エス．ニーラプ、サットヴァ; リウ、チンウェイ
Original assignee: University of Texas System
Current assignee: University of Texas System
Priority date: 2019-08-21
Filing date: 2020-08-19
Publication date: 2022-10-27
Also published as: AU2020332350A1; CN114929262A; EP4017530A1; BR112022002955A2; EP4017530A4; US20220370495A1; TW202124711A; WO2021034982A1; CA3151633A1; MX2022002143A; KR20220050948A

Abstract

ＢＣＬ６および細胞生存促進遺伝子を発現するように操作することによって、高寿命および高増殖速度を有する無限免疫細胞を作製するための方法が提供される。その無限免疫細胞を作製するための方法および癌などの疾患を処置するためにその無限免疫細胞を使用する方法がさらに本明細書中に提供される。【選択図】図１Ａ

Description

関連出願の相互参照

本願は、２０１９年８月２１日出願の米国仮特許出願第６２／８８９，６６２号に対する優先権を主張する。この仮出願は、その全体が参照により本明細書中に援用される。

本開示は概して、少なくとも分子生物学、細胞生物学、免疫学および医学の分野に関する。より詳細には、本開示は、無限免疫細胞を作製する方法およびその使用方法に関する。

ＮＫ細胞およびＴ細胞は、養子細胞療法の研究においてよく使用される細胞傷害性リンパ球の２つのタイプである。ＮＫ細胞およびＴ細胞に由来するＣＡＲ－ＮＫ細胞、ＣＡＲＴ細胞、ＴＣＲを形質導入されたＴ細胞、ならびに微生物抗原または腫瘍抗原に特異的な内因性Ｔ細胞レセプターを有するＴ細胞は、血液悪性腫瘍と固形腫瘍の両方の処置にとって非常に有望なアプローチである。ＣＤ１９を標的化する３つのＣＡＲ－Ｔ細胞製品が、最近、Ｂ細胞悪性腫瘍用としてＦＤＡから承認され、さらに多くの製品が開発中である。現在のところ、ＴＣＲ－Ｔ細胞療法製品とＣＡＲ－Ｔ細胞療法製品の両方の作製は、まず健康ドナーまたは患者からＴ細胞を単離した後、ウイルスベクターまたは非ウイルスベクターを用いてそれらのＴ細胞にＴＣＲまたはＣＡＲを導入し、患者に注入する前にその遺伝的に改変されたＴ細胞をインビトロで拡大することが必要な多段階プロセスである。微生物抗原および腫瘍抗原に特異的なＴ細胞の作製も同様に、多段階プロセスであり、まず健康ドナーまたは患者からＴ細胞を回収した後、インビトロにおいて微生物抗原ペプチドもしくは腫瘍抗原ペプチドまたは微生物抗原タンパク質もしくは腫瘍抗原タンパク質を用いて単離および／または刺激し、患者に注入する前にそのＴ細胞をインビトロで拡大することが必要である。

そのため、各患者用の製品の作製は、コストが多大であり、煩雑であり、時間がかかる。さらに、このように作製されたＴ細胞は、老化するまでの数週間しかインビトロで拡大できないので、各患者または各健康ドナーから作製できる微生物抗原特異的Ｔ細胞および腫瘍抗原特異的Ｔ細胞、ＴＣＲ－Ｔ細胞またはＣＡＲ－Ｔ細胞の数には限界がある。

最近の報告から、遺伝子操作によってＣＡＲ－Ｔ細胞の生存を促進する因子が、より良好な治療効果と正の関連を示すことが示唆された（Ｈｕｒｔｏｎｅｔａｌ．，２０１６）。ゆえに、正常なＴ細胞および／または遺伝的に変更されたＴ細胞の寿命を延長するストラテジー、ならびにそれらの増殖性、サイトカイン産生および細胞傷害性の機能を保存するストラテジーが、それらの細胞の有効性を高める可能性があるのと同時に、養子Ｔ細胞療法アプローチを行う時間を大幅に短縮し得、そのアプローチのコストを大幅に削減し得る。細胞傷害性Ｔ細胞株であるＴＡＬＬ－１０４（米国特許第５２７２０８２号）およびＮＫ細胞株であるＮＫ－９２（米国特許出願公開第２００２００６８０４４号）は、無限に増殖でき、細胞傷害活性を有するが、それぞれＴ細胞白血病およびＮＫ細胞白血病から樹立されたものである。したがって、これらの細胞株は、変異および他の遺伝子変化を含んでおり、ヒトの治療で使用するには安全でない。したがって、正常なＴ細胞の寿命を延長するこれらの目標を達成するストラテジーには満たされていないニーズが存在する。

１つの実施形態において、本開示は、操作されていない免疫細胞と比べて長寿命を有するように操作された免疫細胞（少なくともＴ細胞またはＮＫ細胞を含む）を含む組成物を提供する。そのような細胞は、本明細書中で無限細胞と称されることがある。特定の実施形態において、方法および組成物は、Ｂ細胞リンパ腫６（ＢＣＬ６）および生存促進性遺伝子または抗アポトーシス遺伝子または細胞生存促進遺伝子の発現（異種発現を含む）を有する免疫細胞に関する。本明細書中で使用されるとき、生存促進性遺伝子とは、抗アポトーシス機能を発揮できるかまたは任意の機構によって生存を促進できる核酸ポリマーのことを指す。抗アポトーシス機能を発揮できる核酸ポリマーは、１つ以上のＢｃｌ２ファミリー遺伝子（例えば、ＢＣＬ－ｘＬ（ＢＣＬ２Ｌ１遺伝子としても知られる）、ＢＣＬ－２、ＭＣＬ１、ＢＣＬ２Ｌ２（Ｂｃｌ－ｗ）、ＢＣＬ２Ａ１（Ｂｆｌ－１）、ＢＣＬ２Ｌ１０（ＢＣＬ－Ｂ）など）であり得る。抗アポトーシス機能を発揮できる核酸ポリマーは、１つ以上のアポトーシス阻害（ＩＡＰ）ファミリー遺伝子（例えば、ＸＩＡＰ、ＢＩＲＣ２（Ｃ－ＩＡＰｌ）、ＢＩＲＣ３（Ｃ－ＩＡＰ２）、ＮＡＩＰ、ＢＩＲＣ５（サバイビン）など）であり得る。抗アポトーシス機能を発揮できる核酸は、アポトーシスにおいて役割を果たす１つ以上のカスパーゼ（例えば、カスパーゼ－１、カスパーゼ－２、カスパーゼ－３、カスパーゼ－４、カスパーゼ－５、カスパーゼ－６、カスパーゼ－７、カスパーゼ－８、カスパーゼ－９、カスパーゼ－１０、カスパーゼ－１１、カスパーゼ－１２、カスパーゼ－１３、カスパーゼ－１４）の発現を阻害またはノックアウトすることができる場合がある。ノックダウンまたはノックアウトのための核酸ポリマーは、ｓｈＲＮＡ発現カセットであり得るか、またはこれらのカスパーゼ遺伝子は、遺伝子編集法（ＣＲＩＳＰＲ、ＴＡＬＥＮ、ジンクフィンガー法など）によってもノックアウトされ得る。抗アポトーシス機能を発揮できる核酸ポリマーは、１つ以上のアポトーシス促進性遺伝子（例えば、ＢＣＬ２Ｌ１１（ＢＩＭ）、ＢＢＣ３（ＰＵＭＡ）、ＰＭＡＩＰ１（ＮＯＸＡ）、ＢＩＫ、ＢＭＦ、ＢＡＤ、ＨＲＫ、ＢＩＤ、ＢＡＸ、ＢＡＫ１、ＢＯＫなど）の発現を阻害またはノックアウトすることができる場合がある。抗アポトーシス機能を発揮できる核酸ポリマーは、抗アポトーシス効果を有し得る（例えば、ＩＧＦ１、ＨＳＰＡ４（Ｈｓｐ７０）、ＨＳＰＢ１（Ｈｓｐ２７）、ＣＬＡＲ（ｃＦＬＩＰ）、ＢＮＩＰ３、ＦＡＤＤ、ＡＫＴおよびＮＦ－κＢ、ＲＡＦ１、ＭＡＰ２Ｋ１（ＭＥＫ１）、ＲＰＳ６ＫＡ１（ｐ９０Ｒｓｋ）、ＪＵＮ、Ｃ－Ｊｕｎ、ＢＮＩＰ２、ＢＡＧ１、ＨＳＰＡ９、ＨＳＰ９０Ｂ１、ｍｉＲＮＡ２１、ｍｉＲ－１０６ｂ－２５、ｍｉＲ－２０６、ｍｉＲ－２２１／２２２、ｍｉＲ－１７－９２、ｍｉＲ－１３３、ｍｉＲ－１４３、ｍｉＲ－１４５、ｍｉＲ－１５５、ｍｉＲ－３３０など）。

特定の実施形態において、本明細書中に包含される細胞は、外部刺激の非存在下において大量のＩＬ－４（例えば、１０，０００細胞／ｍＬの細胞濃度でインキュベートされたとき、インビトロ培養物において１０００ｐｇ／ｍＬ超）を恒常的に産生でき、そのような細胞は、ＩＬ－４がＴ細胞、マクロファージおよび他の免疫細胞によって誘導される炎症を抑制できるので、臨床用途（例えば、自己免疫疾患、移植片対宿主病、サイトカイン放出症候群に関連するある特定のタイプの感染症、ＣＡＲＴ細胞療法および他の養子Ｔ細胞療法に関連する毒性、炎症性腸障害、様々な免疫療法に関連する免疫関連有害事象、血球貪食性リンパ組織球症、周期性発熱症候群などをはじめとした様々な炎症性障害を処置するため）に使用され得る。

いくつかの態様において、上記細胞生存促進遺伝子は、抗アポトーシスＢ細胞リンパ腫２（ＢＣＬ－２）ファミリー遺伝子である。ある特定の態様において、抗アポトーシスＢＣＬ－２ファミリー遺伝子は、ＢＣＬ２Ｌ１（Ｂｃｌ－ｘＬ）、ＢＣＬ－２、ＭＣＬ１、ＢＣＬ２Ｌ２（Ｂｃｌ－ｗ）、ＢＣＬ２Ａ１（Ｂｆｌ－１）、ＢＣＬ２Ｌ１０（ＢＣＬ－Ｂ）またはそれらの組み合わせである。特定の態様において、抗アポトーシスＢＣＬ－２ファミリー遺伝子は、Ｂｃｌ－ｘＬである。

さらなる態様において、上記Ｔ細胞またはＮＫ細胞は、ＩＬ－２および／またはＩＬ－１５を発現するようにさらに操作されている。

ある特定の態様において、上記Ｔ細胞またはＮＫ細胞は、健康ドナー（例えば、癌と診断されたことがないドナー）に由来する。他の態様において、上記Ｔ細胞またはＮＫ細胞は、患者に由来する。特定の態様において、ドナーは、ヒトである。

具体的な態様において、上記Ｔ細胞には、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ｉＮＫＴ細胞、ＮＫＴ細胞、γδＴ細胞、制御性Ｔ細胞、自然リンパ球系細胞またはそれらの組み合わせが含まれる。いくつかの態様において、上記Ｔ細胞には、ＣＤ８および／またはγδＴ細胞が含まれる。上記Ｔ細胞は、ナイーブＴ細胞、エフェクターＴ細胞、メモリーＴ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞、最終分化Ｔ細胞またはそれらの組み合わせである。ある特定の態様において、上記Ｔ細胞は、ＴＣＲαβ細胞またはＴＣＲγδＴ細胞である。いくつかの態様において、上記組成物は、濾胞性ヘルパー（Ｔｆｈ）Ｔ細胞を含まないかまたは本質的に含まない。いくつかの態様において、上記免疫細胞の組成物は、Ｔｈ１／Ｔｃ１、Ｔｈ２／Ｔｃ２、Ｔｈ９／Ｔｃ９、Ｔｈ１７／Ｔｃ１７、Ｔｆｈ、Ｔｈ２２、Ｔｃ２２またはそれらの組み合わせであるＴ細胞である。特定の態様において、上記Ｔ細胞は、ＩＦＮγ、グランザイムＢ、パーフォリンまたはそれらの組み合わせを発現する。

ある特定の態様において、上記Ｔ細胞またはＮＫ細胞は、ウイルス特異的であるか、または腫瘍抗原特異的である。いくつかの態様において、上記Ｔ細胞またはＮＫ細胞は、１つ以上のＣＡＲおよび／または１つ以上のＴＣＲを発現するようにさらに操作されている。いくつかの態様において、上記ＣＡＲまたはＴＣＲは、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、、ＳＬＡＭ－Ｆ７、ＣＤ１２３、ＣＤ７０、ＣＤ７２、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３８、ＣＬＬ－１、ＦＬＴ３、ＲＯＲ－１、ＴＡＣＩ、ＴＲＢＣ１、ＭＵＣ１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ１１７、ＦＲ□、ＬｅＹ、ＨＥＲ２、ＩＬ１３Ｒα２、ＤＬＬ３、ＤＲ５、ＦＡＰ、ＬＭＰ１、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＧ７、ＭＵＣ１６、ＰＭＥＬ、ＲＯＲ２、ＶＥＧＦＲ２、ＡＦＰ、ＥｐｈＡ２、ＰＳＣＡ、ＥＰＣＡＭ、ＥＧＦＲ、ＰＳＭＡ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＰＣ３、ＣＥＡ、ＧＤ２、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＴＣＬ１、メソテリンまたはＢＡＦＦ－Ｒ抗原結合領域を含む。特定の態様において、上記ＣＡＲは、ＣＤ１９抗原結合領域を含む。

ある特定の態様において、上記組成物は、少なくとも５０００万、１億、２億、５億、７億５０００万、１０億、２０億、３０億、４０億、５０億、６０億、７０億、８０億、９０億または１００億個の免疫細胞（Ｔ細胞、自然リンパ球系細胞、ＮＫ細胞またはそれらの混合物を含む）を含む。

追加の態様において、上記免疫細胞は、少なくとも１つの安全スイッチを含む。いくつかの態様において、安全スイッチは、切断型ＥＧＦＲ（例えば、ドメイン１および２を欠くＥＧＦＲ）である。いくつかの態様において、上記免疫細胞（Ｔ細胞、自然リンパ球系細胞および／またはＮＫ細胞）は、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、他の成長因子もしくは分化因子またはそれらの組み合わせを発現する。

いくつかの態様において、上記細胞は、少なくとも３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間、１０ヶ月間、１１ヶ月間、１２ヶ月間またはそれらの間の任意の範囲にわたって、増殖速度を維持する。ある特定の態様において、上記免疫細胞は、強化された抗腫瘍細胞傷害性、インビボ増殖、インビボ持続性および／または改善された機能を有する。

別の実施形態では、本実施形態のＴ細胞、自然リンパ球系細胞またはＮＫ細胞を作製するための方法が提供され、その方法は、ＢＣＬ６および細胞生存促進遺伝子をコードするベクターを前記細胞に導入する工程を含む。いくつかの態様において、その細胞生存促進遺伝子は、抗アポトーシスＢ細胞リンパ腫２（ＢＣＬ－２）ファミリー遺伝子である。いくつかの態様において、その抗アポトーシスＢＣＬ－２ファミリー遺伝子は、ＢＣＬ２Ｌ１（Ｂｃｌ－ｘＬ）、ＢＣＬ－２、ＭＣＬ１、ＢＣＬ２Ｌ２（Ｂｃｌ－ｗ）、ＢＣＬ２Ａ１（Ｂｆｌ－１）、ＢＣＬ２Ｌ１０（ＢＣＬ－Ｂ）である。特定の態様において、その抗アポトーシスＢＣＬ－２ファミリー遺伝子は、Ｂｃｌ－ｘＬである。ある特定の態様において、上記ベクターは、ＢＣＬ６およびＢｃｌ－ｘＬを２Ａ配列と連結する。具体的な態様において、２Ａ配列は、Ｔ２Ａ配列である。

いくつかの態様において、上記ベクターは、レンチウイルスベクターである。ある特定の態様において、導入する工程は、ＩＬ－２および／または他の成長因子の存在下において上記細胞にそのレンチウイルスベクターを形質導入することを含む。ある特定の態様において、ＩＬ－２は、１０ＩＵ／ｍＬ～１０００ＩＵ／ｍＬ、例えば、１０～５０ＩＵ／ｍＬ、５０～７５ＩＵ／ｍＬ、７５～１００ＩＵ／ｍＬ、１００～２５０ＩＵ／ｍＬ、２５０～５００ＩＵ／ｍＬ、５００～７５０ＩＵ／ｍＬまたは７５０～１０００ＩＵ／ｍＬの濃度で存在する。特定の態様において、ＩＬ－２は、１００、２００、３００、４００または５００ＩＵ／ｍＬの濃度で存在する。

追加の態様において、上記方法は、上記Ｔ細胞をＣＤ３およびＣＤ２８で活性化する工程をさらに含む。いくつかの態様において、上記方法は、ＩＬ－２および／またはＩＬ－１５の存在下において上記細胞を培養する工程をさらに含む。ある特定の態様において、ＩＬ－２および／またはＩＬ－１５は、１０ｎｇ／ｍＬ、２５ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、７５ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬまたは２００ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの態様において、上記細胞は、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月間（またはそれらの間の任意の範囲）にわたって増殖速度が本質的に低下することなく培養される。

さらなる態様において、上記方法は、Ｔ細胞サブセットについてソーティングする工程をさらに含む。特定の態様において、そのＴ細胞サブセットは、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞および／またはγδＴ細胞を含む。

実施形態は、免疫関連障害、感染症および／または癌を処置するための、本実施形態の細胞集団（例えば、Ｂ細胞リンパ腫６（ＢＣＬ６）および細胞生存促進遺伝子を発現するように操作された免疫細胞）を含む組成物を含む。

実施形態は、被験体における疾患または障害を処置する方法に関し、その方法は、有効量の本実施形態の免疫細胞（例えば、Ｂ細胞リンパ腫６（ＢＣＬ６）および細胞生存促進遺伝子を発現するように操作された免疫細胞）をその被験体に投与する工程を含む。

いくつかの態様において、上記疾患または障害は、感染症、癌および／または免疫関連障害である。ある特定の態様において、上記免疫関連障害は、自己免疫障害、移植片対宿主病、同種移植片拒絶または他の炎症状態である。いくつかの態様において、上記免疫細胞は、同種異系である。特定の態様において、免疫関連障害は、癌である。例えば、癌は、固形癌または血液悪性腫瘍である。

追加の態様において、上記方法は、少なくとも第２の治療薬を投与する工程をさらに含む。いくつかの態様において、上記少なくとも第２の治療薬は、化学療法、免疫療法、手術、放射線療法、薬物療法、ホルモン療法、生物療法またはそれらの組み合わせを含む。

本発明の他の目的、特徴および利点は、以下の詳細な説明から明らかになるだろう。しかしながら、この詳細な説明から当業者には本発明の趣旨および範囲内での様々な変更および改変が明らかになるので、その詳細な説明および具体例は、本発明の好ましい実施形態を示すが、単に例証として与えられることを理解するべきである。

以下の図面は、本明細書の一部を成し、本発明のある特定の態様をさらに実証するために含められる。本発明は、本明細書中に提示される具体的な実施形態の詳細な説明と併せてこれらの図面の１つ以上を参照することによって、より理解される可能性がある。

ヒトＰＧＫプロモーターによって駆動されるＢＣＬ６－Ｔ２Ａ－ＢＣＬ－ｘＬ遺伝子を含むレンチウイルスベクターのマップ。無限Ｔ細胞株の増殖速度を示しているグラフ。左上のパネルは、２ヶ月目における４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下でのＩｎ１－Ｌ４ａ（無限ＣＤ３Ｔ細胞）およびＩｅ１－Ｌ４ａＪ３（無限ＣＤ８ＣＡＲ－Ｔ）の成長曲線を示している。右上のパネルは、１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５、ＩＬ－７およびＩＬ－２１の存在下またはサイトカインの非存在下における無限ＣＤ８ＣＡＲＴ細胞（Ｉｅ１－Ｌ４ａＪ３）の成長曲線を示している。このデータは、無限Ｔ細胞がＩＬ－１５の存在下で成長するが、ＩＬ－７、ＩＬ－２１の存在下またはサイトカインの非存在下では成長しないことを示している。左下および右下のパネルは、ＣＤ４無限αβＴ細胞、ＣＤ８無限αβＴ細胞（Ｉｅ１－Ｌ４ａ）、ＣＤ８無限αβＣＡＲ－Ｔ細胞（Ｉｅ１－Ｌ４ａＪ３）、無限γδＴ細胞（Ｉｇｄ１－Ｌ４ａ）および無限γδＣＡＲ－Ｔ細胞（Ｉｇｄ１－Ｌ４ａＪ３）を含む無限Ｔ細胞が、５ヶ月目にＩＬ－２の存在下のインビトロで増殖し続けることを示している。ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１６、ＣＤ５６、ＴＣＲαβおよびＴＣＲγδの発現によって測定された無限Ｔ細胞株Ｉｎ１－Ｌ４ａの表現型を示しているグラフ。抗ＴＣＲγδ抗体を用いてソーティングされたγδＴ細胞の表現型を示しているグラフ。これらの細胞上のＴＣＲγδ、ＴＣＲαβおよびＣＤ１６の発現が示されている。抗ＴＣＲγ９抗体および抗ＴＣＲδ２抗体を用いてソーティングされたγδＴ細胞の主要サブセットを示しているグラフ。無限γδＴ細胞の大部分が、ＴＣＲγ９δ２陽性である。４ヶ月目の無限Ｔ細胞の表現型を示しているグラフ。それらの大部分は、主にＩＦＮγ、グランザイムＢおよびパーフォリンを発現するエフェクターＴ細胞およびセントラルメモリーＴ細胞である。無限ＣＡＲ－Ｔ細胞上の様々な共阻害性レセプターの発現を示しているグラフ。

抗ＣＤ１９ＣＡＲおよび切断型ヒトＥＧＦＲ発現カセットを含むレンチウイルスベクターｐＪ３のマップ。レンチウイルスベクターｐＪ３によって形質導入された、Ｉｅ１－Ｌ４ａＪ３（無限ＣＤ８ＣＡＲＴ）およびＩｎ１－Ｌ４ａＪ３（無限ＣＤ３ＣＡＲＴ）のＣＡＲ陽性パーセンテージを示しているグラフ。ＣＡＲ陽性パーセンテージは、形質導入の１０日後に、ＦＩＴＣ標識ヒトＣＤ１９タンパク質または抗ＥＧＦＲ抗体を用いるフローサイトメトリーによって測定された。Ｉｎ１－Ｌ４ａＪ３（無限ＣＤ３ＣＡＲＴ）のＣＡＲ陽性細胞パーセンテージを示しているグラフ。ｔＥＧＦＲをＡＦ６４７標識セツキシマブで染色し、抗ＣＤ１９ＣＡＲをＦＩＴＣ標識組換えヒトＣＤ１９タンパク質で染色した。ソーティング前およびソーティング後のＩｎ１－Ｌ４ａＪ３（無限ＣＤ３ＣＡＲＴ）のＣＡＲ陽性細胞のパーセンテージを示しているグラフ。ｔＥＧＦＲをＡＦ６４７－セツキシマブで染色し、抗ＣＤ１９ＣＡＲをＦＩＴＣ標識組換えヒトＣＤ１９タンパク質で染色した。

１２ウェルプレートにおける０．２：１および１：１比というエフェクター：ターゲット（Ｅ：Ｔ）比でのＲａｊｉおよびＮａｌｍ６細胞に対するＩｅ１－Ｌ４ａＪ３（無限ＣＤ８ＣＡＲＴ）のインビトロ細胞傷害性を示しているグラフ。Ｉｅ１－Ｌ４ａＪ３（無限ＣＤ８ＣＡＲＴ）細胞またはコントロールＩｅ１－Ｌ４ａ（ＣＡＲを有しない無限ＣＤ８Ｔ細胞）細胞を、ＲａｊｉまたはＮａｌｍ６細胞と５日間共培養した。０、１、３および５日目の共培養物中の腫瘍細胞のパーセンテージが示されている。

４ヶ月間拡大した後の無限Ｔ細胞のインビトロ細胞傷害性を示しているグラフ。Ｉｅ１－Ｌ４ａ（無限ＣＤ８Ｔ細胞）、Ｉｅ１－Ｌ４ａＪ３（無限ＣＤ８ＣＡＲＴ）、Ｉｇｄ１－Ｌ４ａ（無限ガンマ／デルタＴ細胞）またはＩｇｄ１－Ｌ４ａＪ３（無限γδＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＡＲ－Ｔパーセンテージが＞９０％である）細胞を、ＩＬ－１５の存在下の１２ウェルプレートにおいて、ＤａｕｄｉまたはＮａｌｍ６細胞と７日間、３：１というエフェクター：ターゲット（Ｅ：Ｔ）比で共培養した。０、１、２、４および７日目の共培養物中の腫瘍細胞のパーセンテージが示されている。これらの結果から、１）ＣＤ８無限ＣＡＲ－Ｔおよびγδ無限ＣＡＲ－Ｔ細胞は、長期のインビトロでの培養および拡大の後でさえ、特異的な細胞傷害性を維持したこと、および２）ＣＡＲを有しないが内在性γ９δ２ＴＣＲまたは他のＴＣＲを有するγδ無限Ｔ細胞は、おそらくそのγδＴＣＲによって媒介される、ある特定のタイプの腫瘍細胞の溶解を誘導できることが示唆される。例えば、Ｄａｕｄｉ細胞は、ＣＡＲを有しないγδ無限Ｔ細胞によって殺滅され得るのに対して、Ｎａｌｍ－６は、ＣＡＲを形質導入されたγδ無限Ｔ細胞によってのみ殺滅され得る。一部のリンパ腫細胞に加えて、いくつかのミエローマ細胞株および他の癌細胞株もγδＴ細胞によって殺滅されると知られている。

ＩＬ－２の存在下における、抗ＣＤ１９ＣＡＲを有するまたは有しない無限Ｔ細胞（ＣＤ４＋ＣＤ８またはＣＤ８）の成長速度。無限Ｔ細胞は、ＣＤ４Ｔ細胞とＣＤ８Ｔ細胞との両方の混合物を有し（左のパネル）、ＣＤ８無限Ｔ細胞について示されているように高純度にソーティングされ得る（右のパネル）。次いで、６ヶ月間培養中の無限Ｔ細胞をＩＬ－２（示されている）またはＩＬ－１５（図示せず）なしでインキュベートした。細胞数が６日以内に急速に減少したことから、長期のインビトロ培養後であっても無限Ｔ細胞の自律的増殖または悪性形質転換のエビデンスがなかったことが示唆される。

ＴＲＡＰｅｚｅテロメラーゼ活性検出キットを製造者の指示書に従って使用して、無限Ｔ細胞または末梢血単核球（ＰＢＭＣ）におけるテロメラーゼ活性を測定した。ＲＮＡｓｅｑ解析によって測定された、無限Ｔ細胞または対応するＰＢＭＣサンプルにおける、ヒートマップとして示されているテロメラーゼ活性に関係する遺伝子。これらの結果は、無限Ｔ細胞が非常に高いテロメラーゼ活性を有することを示唆している。

抗ＣＤ１９ＣＡＲを有するもしくは有しない無限Ｔ細胞、または末梢血Ｔ細胞から従来の方法によって作製されたＣＡＲＴ細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｅＦａｒＲｅｄで標識し、Ｄａｕｄｉ腫瘍細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔで標識し、１：１というエフェクター：ターゲット比で共培養した。３、５および７日後に生細胞の腫瘍細胞パーセント（右下のゲート）を測定した。フローサイトメトリーによってＣｏｕｎｔＢｒｉｇｈｔＡｂｓｏｌｕｔｅ計数用ビーズ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて生細胞の腫瘍細胞の絶対数も計算したところ、それらの結果は、示された生細胞の腫瘍細胞のパーセンテージと一致した。抗ＣＤ１９ＣＡＲを有するまたは有しない無限Ｔ細胞をＮＡＬＭ－６Ｂ細胞白血病細胞と１：１で共培養した。６時間後にＣＤ１０７ａ染色によって脱顆粒を測定した。これらの結果から、ＣＡＲを発現している無限Ｔ細胞が高度に細胞傷害性であり、Ｂ細胞腫瘍に応答して脱顆粒することが示唆される。抗ＣＤ１９無限ＣＡＲＴ細胞の表現型を、フローサイトメトリーによって示されるマーカーについて測定した。抗ＣＤ１９ＣＡＲの発現を、蛍光標識された組換えヒトＣＤ１９－Ｆｃタンパク質による染色によって測定した。これらの結果は、無限Ｔ細胞が、従来の疲弊マーカー（例えば、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＣＤ１６０または２Ｂ４（ＣＤ２４４））を高レベルで発現しないことを示している。抗ＣＤ１９無限ＣＡＲＴ細胞の表現型を、フローサイトメトリーによって示されるマーカーについて測定した。抗ＣＤ１９ＣＡＲの発現を、蛍光標識された組換えヒトＣＤ１９－Ｆｃタンパク質による染色によって測定した。これらの結果は、無限Ｔ細胞が、従来の疲弊マーカー（例えば、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＣＤ１６０または２Ｂ４（ＣＤ２４４））を高レベルで発現しないことを示している。

ＲＮＡｓｅｑ解析によって測定された、無限Ｔ細胞または対応するＰＢＭＣサンプルにおける、ヒートマップとして示されているＴ細胞サブセットに関係する遺伝子または遺伝子シグネチャ。ＲＮＡｓｅｑ解析によって測定された、無限Ｔ細胞または対応するＰＢＭＣサンプルにおける、ヒートマップとして示されている疲弊マーカーに関係する遺伝子または遺伝子シグネチャ。ＲＮＡｓｅｑ解析によって測定された、無限Ｔ細胞または対応するＰＢＭＣサンプルにおける、ヒートマップとして示されているケモカインレセプターに関係する遺伝子または遺伝子シグネチャ。ＲＮＡｓｅｑ解析によって測定された、無限Ｔ細胞または対応するＰＢＭＣサンプルにおける、ヒートマップとして示されている老化マーカーに関係する遺伝子または遺伝子シグネチャ。

ＲＮＡｓｅｑ解析によって測定された、無限Ｔ細胞または対応するＰＢＭＣサンプルにおける、ヒートマップとして示されているケモカイン発現に関係する遺伝子。ＲＮＡｓｅｑ解析によって測定された、無限Ｔ細胞または対応するＰＢＭＣサンプルにおける、ヒートマップとして示されているサイトカイン発現に関係する遺伝子。ＲＮＡｓｅｑ解析によって測定された、無限Ｔ細胞または対応するＰＢＭＣサンプルにおける、ヒートマップとして示されているサイトカインレセプターに関係する遺伝子。

無限Ｔ細胞またはＣＡＲを形質導入されたＴ細胞を解凍し、抗ＣＤ１９ＣＡＲの発現を抗ＥＧＦＲ抗体染色によって測定した。解凍し、インビトロでＩＬ－２とともに培養した後の抗ＣＤ１９無限ＣＡＲＴ細胞の成長速度。種々の日における培養液中の細胞数が示されている。Ａにおいて解凍された細胞の細胞傷害活性を、無限Ｔ細胞とＮＡＬＭ－６腫瘍細胞との１：１での共培養の４日後に、図７Ａのもとで説明されたように測定した。ゲートは、生細胞の腫瘍細胞パーセントを示している。

無限γδＴ細胞の表現型（下）を、フローサイトメトリーによって示されるマーカーについて測定し、健康ドナーＰＢＭＣ由来の対応するγδＴ細胞（上）と比較した。これらの結果は、無限γδＴ細胞が従来の疲弊マーカーを高レベルで発現しないことを示している。

ルシフェラーゼで標識された無限Ｔ細胞を、１および３日目に、ＩＬ－１５の注射ありまたはなしで腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。Ｔ細胞数を生物発光イメージング（ＢＬＩ）によって画像化した。これらの結果は、ＩＬ－１５が、インビボで無限Ｔ細胞の成長および拡大を促進することを示している。

ルシフェラーゼで標識されたＮＡＬＭ－６細胞を、抗ＣＤ１９ＣＡＲを有するまたは有しない無限Ｔ細胞とともに、＋／－ＩＬ－１５でＮＳＧマウスに注射した。抗腫瘍有効性をＢＬＩ（左）および生存（右）によって測定した。これらの結果は、抗ＣＤ１９無限ＣＡＲＴ細胞がインビボにおいて抗腫瘍有効性を有することを示している。

抗原特異的無限Ｔ細胞。ＨＬＡ－Ａ２^＋ドナー由来の無限Ｔ細胞を、公知のＣＤ８Ｔ細胞エピトープを有するＨＬＡ－Ａ２四量体を用いて感染症および腫瘍関連抗原に対する特異性について試験した。データは、無限Ｔ細胞の中に、内在性のＴＣＲを介して微生物抗原および腫瘍関連抗原を認識した抗原特異的Ｔ細胞が存在することを示している。

ＥＢＶ特異的無限Ｔ細胞の作製。ＨＬＡ－Ａ２＋ドナー由来の健康ドナー末梢血単核球を、０日目に、ＨＬＡ－Ａ２に結合するＥＢＶペプチドのプールで刺激し、２４時間後にＣＤ１３７陽性Ｔ細胞をフローサイトメトリーによってソーティングし、それを、ＢＣＬ６およびＢｃｌ－ｘＬを形質導入することによる先に記載されたような無限Ｔ細胞の作製に使用した。７週間の培養の後、四量体陽性細胞を磁気ビーズによって濃縮し、次いで、濃縮された細胞をさらにもう６週間培養し、ＣＤ８、およびＥＢＶ－ＢＭＬＦ１タンパク質に由来するＨＬＡ－Ａ２結合ペプチド（ＧＬＣＴＬＶＡＭＬ）に対して特異的なＢＭＬＦ１－ＨＬＡ－Ａ２四量体について染色した。これらの結果は、微生物抗原特異的または腫瘍抗原特異的な無限ＣＤ４またはＣＤ８Ｔ細胞の濃縮集団が、記載した方法を用いて作製され得ることを示唆している。

Ｔｅｔ－ｏｆｆ安全スイッチの制御下のＢＣＬ６およびＢＣＬ２Ｌ１遺伝子を用いて無限αβまたはγδＴ細胞を作製した。１μｇ／ｍＬのドキシサイクリン（Ｄｏｘ）の存在下（右）または非存在下（左）における、ＩＬ－２を用いたときの無限Ｔ細胞の成長速度が示されている。これらの結果は、無限Ｔ細胞が、ドキシサイクリンの非存在下において成長速度を維持しているが、ドキシサイクリンの存在下では増殖を停止し、徐々に細胞死を起こしたことを示唆している。無限Ｔ細胞に組み込まれたＩＬ－２またはＩＬ－１５サイトカイン遺伝子をコントロールするために、類似のｔｅｔ－ｏｆｆ安全スイッチも使用できる。

ｔｅｔ－ｏｆｆ安全スイッチを有する無限Ｔ細胞を、漸増濃度のドキシサイクリン（Ｄｏｘ）の存在下または非存在下においてＩＬ－２とともに培養し、培養液中の細胞を光学顕微鏡によって画像化した。２週間後に、細胞を染色して、フローサイトメトリーによってＣＤ２５発現を評価した。光学顕微鏡のイメージングによって、その無限Ｔ細胞は、ドキシサイクリンの濃度上昇に伴って増殖クラスターが減少するのとともに、サイズが徐々に小さくなったことが分かった。さらに、ＣＤ２５の発現が、ドキシサイクリンの存在下において顕著に減少した。

ｔｅｔ－ｏｆｆ安全スイッチを有する無限Ｔ細胞を、１μｇ／ｍＬのドキシサイクリン（Ｄｏｘ）の存在下または非存在下においてＩＬ－２とともに培養し、２週間後に、細胞を染色して、記載の表面マーカーについてフローサイトメトリーによって評価した。ＰＤ－１の発現は、ドキシサイクリンの存在下において顕著に増加した。

無限Ｔ細胞によるサイトカイン産生。抗ＣＤ１９ＣＡＲ発現ありまたはなしの無限Ｔ細胞（ＣＤ８＋）を、ＮＡＬＭ－６腫瘍細胞と５：１というエフェクター：ターゲット比で共培養した。３日後、上清中のサイトカインレベルを計測した。データは、異なる３人の健康ドナーに由来する無限Ｔ細胞の結果の代表である。これらの結果は、抗ＣＤ１９ＣＡＲを有する無限Ｔ細胞が、ＮＡＬＭ－６腫瘍細胞に応答して、かなりの量のＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮγ、ＩＬ－５およびＩＬ－１７を多分に産生したが、抗ＣＤ１９ＣＡＲを有しない無限Ｔ細胞は産生しなかったことを示している。腫瘍細胞に応答した抗ＣＤ１９無限ＣＡＲＴ細胞によるＴＮＦα、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１０またはＩＬ－１３の産生は、最小であったか、またはＣＡＲ発現なしの無限Ｔ細胞と有意に異ならなかった。しかしながら、本発明者らは、ＣＡＲ発現ありまたはなしの無限Ｔ細胞は、腫瘍細胞の存在下または非存在下において１０，０００ｐｇ／ｍＬを超える大量のＩＬ－４を産生したことを観察した（図１９およびデータ示さず）。

抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介したセツキシマブによる無限ＣＡＲＴ細胞の溶解。抗ＣＤ１９ＣＡＲおよびｔＥＧＦＲを発現する無限Ｔ細胞を、ＣＦＳＥで標識し、５μｇ／ｍＬのセツキシマブまたはリツキシマブの存在下において、記載のエフェクター：ターゲット比で、健康ドナーに由来するＮＫ細胞ありまたはなしで２つ組にて共培養した。５時間後、各ウェル内の無限Ｔ細胞の絶対数を、計数用ビーズを用いたフローサイトメトリーによって測定し、Ｔ細胞のみと比べた無限Ｔ細胞数の減少パーセントを計算し、グラフに示した。ＮＫ細胞の非存在下においてセツキシマブまたはリツキシマブを用いたときのＴ細胞の減少パーセントは、＜５％だった。

ＢＣＬ６遺伝子とＢＣＬ２Ｌ１遺伝子またはＢＣＬ６遺伝子とＢＩＲＣ５（サバイビン）遺伝子、およびＴｅｔ－ｏｆｆ安全スイッチおよびＩＬ－１５を用いた無限Ｔ細胞の作製。ＢＣＬ６遺伝子とＢＣＬ２Ｌ１遺伝子またはＢＣＬ６遺伝子とＢＩＲＣ５遺伝子、Ｔｅｔ－ｏｆｆ安全スイッチ、およびＩＬ－１５遺伝子を含むレンチウイルス構築物のデザイン。ＢＣＬ６遺伝子とＢＣＬ２Ｌ１遺伝子またはＢＣＬ６遺伝子とＢＩＲＣ５（サバイビン）遺伝子、およびＴｅｔ－ｏｆｆ安全スイッチおよびＩＬ－１５を用いた無限Ｔ細胞の作製。ヒトＴ細胞に、パネルＡに示された構築物をレンチウイルスによって形質導入し、ＩＬ－２の存在下において培養した。１２週間後に、この２つのアプローチによって作製されたＴ細胞の、類似の条件下でのインビトロ培養中の成長速度を測定した。ＢＣＬ６遺伝子とＢＣＬ２Ｌ１遺伝子またはＢＣＬ６遺伝子とＢＩＲＣ５（サバイビン）遺伝子、およびＴｅｔ－ｏｆｆ安全スイッチおよびＩＬ－１５を用いた無限Ｔ細胞の作製。パネルＡに示されたＢＣＬ６遺伝子およびＢＣＬ２Ｌ１遺伝子を含むレンチウイルス構築物を用いて、２人のドナーから無限Ｔ細胞を作製し、１μｇ／ｍＬのドキシサイクリンの存在下または非存在下においてＩＬ－２とともに培養した。それらの細胞は、ドキシサイクリンの非存在下では指数関数的速度で成長したが、ドキシサイクリンの存在下では増殖を停止し、徐々に細胞死を起こした。

Ｂｃｌ－ｘｌとともにＢＣＬ６を含む構築物（Ｌ５ｘ（ＭＳＣＶ－ＢＣＬ６－Ｐ２Ａ－ＢＣＬ－ｘｌ－Ｔ２Ａ－ｒｔＴＡ））の一例。この構造では少なくとも、野生型ＢＣＬ－６とＢＣＬ－ｘＬとの間にＰ２Ａエレメントが含まれており、ＢＣＬ－ｘＬとｒｔＴＡ（Ｔｅｔｏｎトランス活性化因子）との間にＴ２Ａエレメントが含まれている。

少なくともＢＣＬ６発現用を含む構築物の具体的な実施形態の例の図示。いくつかの実施形態は、例としてカスパーゼ９またはＢＡＫに対するものを含む、任意の種類のｓｈＲＮＡを含む。

発明の詳細な説明

例証的な実施形態の説明
ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）遺伝子の異所性発現は、正常なＴ細胞を不死化すると以前に報告された（Ｈｏｏｉｊｂｅｒｇｅｔａｌ．，２０００）。しかしながら、ｈＴＥＲＴのみの過剰発現では、Ｔリンパ球の不死化には不十分であることが観察されている。実際に、このアプローチによって作製されたＴ細胞は、しばらくすると増殖を止める（Ｍｉｇｌｉａｃｃｉｏｅｔａｌ．，２０００）。本研究は、正常なＮＫまたはＴ細胞におけるＢＣＬ６の発現が、それらの分化を停止させる可能性があること、およびＢｃｌ－ｘＬタンパク質をコードするＢＣＬ２Ｌ１のような抗アポトーシスＢＣＬ－２ファミリー遺伝子などの細胞生存促進遺伝子の発現が、それらの寿命を大幅に延長する可能性があり、それらの細胞の基本的な機能を維持しながら不死化するとみられることを検討した。

本開示の実施形態は、本明細書中に包含される改変を欠く細胞と比べて大幅に延長された寿命を有する細胞の組成物、作製および使用に関する。具体的な実施形態において、それらの細胞は、遺伝子産物が抗アポトーシス機能を有する任意の遺伝子を含む、異種ＢＣＬ６および１つ以上の生存促進性遺伝子（または抗アポトーシス遺伝子または細胞生存促進遺伝子）をコードする。例として、生存促進性遺伝子は、任意のＢＣＬ－２ファミリー遺伝子であってよく、それらとしては、ＢＣＬ－ｘＬ、ＢＣＬ－２、ＭＣＬ－１またはサバイビンが単なる例として挙げられる。追加的にまたは代替的に、それらの細胞は、１つ以上のカスパーゼ（例えば、カスパーゼ－１、カスパーゼ－２、カスパーゼ－３、カスパーゼ－４、カスパーゼ－５、カスパーゼ－６、カスパーゼ－７、カスパーゼ－８、カスパーゼ－９、カスパーゼ－１０、カスパーゼ－１１、カスパーゼ－１２、カスパーゼ－１３、カスパーゼ－１４またはそれらの組み合わせ）の発現の阻害または発現がノックアウトされている。そのような例において、１つ以上のカスパーゼ遺伝子のノックダウンまたはノックアウトのためのＤＮＡフラグメントは、ｓｈＲＮＡ発現カセットであり得る。これらのカスパーゼ遺伝子は、遺伝子編集法（ＣＲＩＳＰＲ、ＴＡＬＥＮ、ジンクフィンガー法など）によってもノックアウトされ得る。ゆえに、具体的な実施形態において、上記免疫細胞は、無限免疫細胞を作製するために、ＢＣＬ６の過剰発現または異種ＢＣＬ６に加えてカスパーゼノックアウトを含む。それらの細胞は、１つ以上の生存促進性遺伝子（または抗アポトーシス遺伝子または細胞生存促進遺伝子）を有し得、具体的な場合においては、１つ以上のカスパーゼ遺伝子のノックダウンまたはノックアウトも有し得る。

本開示は、ある特定の実施形態において、大幅に延長された寿命を有し、かつ養子免疫療法などのために迅速に多数に増殖され得る、無限数の無限免疫細胞を作製するための方法を提供する。本方法は、少なくともいくつかの場合において、１回の形質導入によって無限に拡大する能力を有する無限免疫細胞を提供する。本方法は、非常に安価であり、短期間（例えば、１ヶ月またはそれ以上）で無限数の免疫細胞を作製できる。

本明細書中に包含されるこのプラットフォームおよび系は、ＴＣＲαβＴ細胞とＴＣＲγδＴ細胞の両方を含む無限Ｔ細胞などの無限免疫細胞を作製するために使用され得る。このアプローチは、そのまま使用され得るかまたは汎用のキメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）Ｔ細胞もしくはＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）が形質導入されたＴ細胞をはじめとした所望の細胞を作製するようにさらに遺伝的に操作され得る、無限のヒトＴ細胞起源を提供する。具体的な実施形態において、それらの細胞は、癌ならびに感染性および炎症性障害を含む他の疾患を処置または予防するために使用される。例として、その系は、癌、感染症および／または炎症性疾患を処置するために使用され得る。具体例としては、Ｂ細胞リンパ腫、ＣＭＶ感染症、ＥＢＶ感染症、自己免疫障害、移植片対宿主病またはそれらの組み合わせが挙げられる。

一例として、本明細書中に包含される研究は、無限Ｔ細胞への抗ＣＤ１９ＣＡＲの形質導入によって、「抗ＣＤ１９無限ＣＡＲＴ細胞」（ＣＤ１９ｉｎＣＡＲＴ）が作製され、ヒトＢ細胞腫瘍に対する特異性が再指示されたことを示した。ＣＤ１９無限ＣＡＲＴ細胞は、たった１回の形質導入の後に無限数の抗原レセプター改変Ｔ細胞（例えば、ＣＡＲＴ細胞）を作製するための起源として働くことができ、ヒトＢ細胞リンパ腫細胞株に対して有意な細胞傷害性を示した。本開示は、無限数の免疫細胞を生成でき、製造プロセスを合理化することによって養子免疫細胞療法のコストを劇的に削減でき、その細胞の作製時間を劇的に短縮できる、汎用の免疫細胞療法プラットフォームおよびシステムを提供する。特定の実施形態では、ＢＣＬ６および１つ以上の生存促進性遺伝子（または抗アポトーシス遺伝子または細胞生存促進遺伝子）を発現させることによって無限細胞の作製が可能になり、その無限細胞は、養子細胞療法に向けたさらなる操作（例えば、操作された目的の抗原レセプターを組み込むことによるさらなる操作（例えば、ある具体的な癌に適応させるために））のための汎用細胞となる。その汎用細胞は、１つ以上の安全スイッチ（例えば、誘導システム、ならびに排除遺伝子、例えば、切断型ＥＧＦＲ（一例として、ドメイン１および／またはドメイン２を欠く）および／または１つ以上の自殺遺伝子および／または１つ以上のサイトカインを含む）もすでに含んでいてもよいし、後にこれらのうちのいずれかを、所望の特性を有するようにそれらの細胞を適応させる工程において付加してもよい。

Ｉ．定義
本明細書中で使用されるとき、特定の構成要素に関する「本質的に含まない」は、その特定の構成要素が、意図的に組成物に製剤化されていないことおよび／または夾雑物としてでさえもしくは微量でさえ存在しないことを意味するために本明細書中で使用される。ゆえに、ある組成物の任意の意図されない混入に起因する、その特定の構成要素の総量は、０．０５％未満、好ましくは、０．０１％未満である。標準的な分析方法ではその特定の構成要素の量を検出できない組成物が最も好ましい。

本明細書中で使用されるとき、「ａ」または「ａｎ」は、１つ以上を意味し得る。請求項で使用されるとき、語「ａ」または「ａｎ」は、語「～を含む」とともに使用されるとき、１つまたは１つより多いことを意味し得る。本開示のいくつかの実施形態は、本開示の１つ以上のエレメント、方法工程および／または方法からなり得るか、またはそれらから本質的になり得る。本明細書中に記載される任意の方法または組成物は、本明細書中に記載される他の任意の方法または組成物に対して実行され得ること、および異なる実施形態が組み合わされ得ることが企図される。

請求項での用語「または」の使用は、選択肢だけを指すと明示的に示されない限り、またはそれらの選択肢が相互排他的でない限り、「および／または」を意味するために使用されるが、本開示は、選択肢だけおよび「および／または」を指すという定義を支持する。例えば、「ｘ、ｙおよび／またはｚ」とは、「ｘ」のみ、「ｙ」のみ、「ｚ」のみ、「ｘ、ｙおよびｚ」、「（ｘおよびｙ）またはｚ」、「ｘまたは（ｙおよびｚ）」または「ｘまたはｙまたはｚ」のことを指し得る。ｘ、ｙまたはｚが、ある実施形態から明確に排除され得ることが明確に企図される。本明細書中で使用されるとき、「別の」は、少なくとも第２のものまたはそれ以上のものを意味し得る。用語「約」、「実質的に」および「およそ」は、一般に、述べられている値プラスまたはマイナス５％を意味する。

本明細書全体にわたって、文脈が他のことを要求しない限り、語「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、記載の工程もしくはエレメントまたは工程群もしくはエレメント群を包含するが、他の任意の工程もしくはエレメントまたは工程群もしくはエレメント群を排除しないことを暗に示すと理解される。「～からなる」は、句「～からなる」の前に何が置かれたとしても、「～を含み、それらに限定される」ことを意味する。したがって、句「～からなる」は、列挙されたエレメントが、不可欠または必須であること、および他のエレメントが存在しない可能性があることを示す。「～から本質的になる」は、この句の前に列挙される任意のエレメント、および列挙されたエレメントについて本開示に明示される活性または作用を干渉しないまたはそれらに寄与しない他のエレメントに限定されるエレメントを含むことを意味する。したがって、句「～から本質的になる」は、列挙されたエレメントが、不可欠または必須であるが、他のエレメントは自由選択ではなく、それらが列挙されたエレメントの活性または作用に影響するか否かに応じて、存在してもよいか、または存在してはならないことを示す。

本明細書全体にわたる「１つの実施形態」、「ある実施形態」、「特定の実施形態」、「関連する実施形態」、「ある特定の実施形態」、「追加の実施形態」もしくは「さらなる実施形態」またはそれらの組み合わせに対する言及は、その実施形態に関連して記載される特定の特徴、構造または特性が、本発明の少なくとも１つの実施形態に含められることを意味する。したがって、本明細書全体にわたる様々な箇所における前述の句の出現は、必ずしもすべてが同じ実施形態について言及しているわけではない。さらに、特定の特徴、構造または特性が、１つ以上の実施形態において任意の好適な様式で組み合わされ得る。

「免疫障害」、「免疫関連障害」または「免疫媒介性障害」とは、免疫応答が、その疾患の発症または進行において重要な役割を果たす障害のことを指す。免疫媒介性障害としては、自己免疫障害、同種移植片拒絶、移植片対宿主病ならびに炎症状態およびアレルギー状態が挙げられる。

「免疫応答」は、刺激に対する、Ｂ細胞またはＴ細胞または自然免疫細胞などの免疫系細胞の応答である。１つの実施形態において、応答は、特定の抗原に特異的である（「抗原特異的応答」）。

「自己免疫疾患」とは、免疫系が、正常な宿主の一部である抗原（すなわち、自己抗原）に対して免疫応答（例えば、Ｂ細胞応答またはＴ細胞応答）を起こし、その結果、組織が傷害される疾患のことを指す。自己抗原は、宿主細胞に由来し得るか、または共生生物（例えば、通常、粘膜表面にコロニー形成する微生物（共生生物として知られる））に由来し得る。

疾患または状態を「処置する」またはそれらの処置とは、その疾患の徴候または症状を軽減する目的で、１つ以上の薬物を患者に投与することを含み得るプロトコルを実行することを指す。処置の望ましい効果としては、疾患の進行速度の低下、疾患状態の回復または緩和、および予後の緩解または改善が挙げられる。軽減は、現れる疾患または状態の徴候または症状が現れる前ならびに現れた後において生じ得る。したがって、「処置する」または「処置」は、疾患または望ましくない状態を「予防する」またはそれらの「予防」を含み得る。さらに、「処置する」または「処置」は、徴候または症状の完全な軽減を必要とせず、治癒を必要とせず、詳細には、患者に対して周辺効果しか及ぼさないプロトコルを含む。

本願全体にわたって使用される用語「治療効果」または「治療的に有効な」とは、この状態の医学的処置に関して被験体の福祉を増進または向上させる何らかのことを指す。これには、ある疾患の徴候または症状の頻度または重症度の低下が含まれるが、これらに限定されない。例えば、癌の処置は、例えば、腫瘍サイズの減少、腫瘍の侵襲性の低下、癌の成長速度の低下、または転移の予防を含み得る。癌の処置とは、癌を有する被験体の生存時間の延長のことも指し得る。

「被験体」および「患者」および「個体」は、相互交換可能であり得、ヒトまたは非ヒト、例えば、霊長類、哺乳動物および脊椎動物のことを指し得る。特定の実施形態において、被験体は、ヒトである。被験体は、方法または材料の対象である任意の生物または動物被験体であり得、それらとしては、哺乳動物、例えば、ヒト、実験動物（例えば、霊長類、ラット、マウス、ウサギ）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、シチメンチョウおよびニワトリ）、家庭のペット（例えば、イヌ、ネコおよびげっ歯類）、ウマおよびトランスジェニック非ヒト動物が挙げられる。被験体は、患者であり得、例えば、１つ以上の感染症、１つ以上の遺伝性障害、１つ以上の癌またはそれらの任意の組み合わせなどの疾患（病状と称され得る）を有し得るか、または有していると疑われ得る。「被験体」または「個体」は、本明細書中で使用されるとき、医療施設に収容されていてもよいし収容されていなくてもよく、医療施設の外来患者として処置されてもよい。個体は、インターネットを介して１つ以上の医学的組成物を受け取っていてもよい。個体には、任意の齢のヒトまたは非ヒト動物が含まれ得るので、個体は、成体および若年者（すなわち、小児）および乳児を含み、子宮内の個体も含む。被験体は、医学的処置の必要性を有することもあるし、有しないこともあり；個体は、臨床的であるか基礎科学研究の支援であるかを問わず、自発的または非自発的に実験の一部となる場合がある。

句「薬学的にまたは薬理学的に許容され得る」とは、ヒトなどの動物に適宜投与されたとき、有害反応、アレルギー反応または他の不都合な反応をもたらさない分子実体および組成物のことを指す。抗体またはさらなる活性成分を含む薬学的組成物の調製は、本開示に照らせば当業者に公知である。さらに、動物（例えば、ヒト）への投与の場合、調製物は、ＦＤＡＯｆｆｉｃｅｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＳｔａｎｄａｒｄｓが要求する無菌性、発熱性、一般的な安全性および純度の規格を満たすべきであることが理解される。

本明細書中で使用されるとき、「薬学的に許容され得るキャリア」は、当業者に公知であるように、任意のおよびすべての水性溶媒（例えば、水、アルコール溶液／水溶液、食塩水、非経口ビヒクル、例えば、塩化ナトリウム、リンゲルデキストロースなど）、非水溶媒（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油および注射可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチル）、分散媒、コーティング、界面活性剤、酸化防止剤、保存剤（例えば、抗菌剤または抗真菌剤、抗酸化剤、キレート剤および不活性ガス）、等張剤、吸収遅延剤、塩、薬物、薬物安定剤、ゲル、結合剤、賦形剤、崩壊剤、潤滑剤、甘味剤、香味剤、色素、流動性および栄養補給剤、そのような同様の材料ならびにそれらの組み合わせを含む。薬学的組成物のｐＨおよび薬学的組成物中の様々な構成要素の正確な濃度は、周知のパラメータに従って調整される。

ＩＩ．無限免疫細胞
本開示のある特定の実施形態は、１つ以上の遺伝子を発現するように操作された免疫細胞に関する。その１つ以上の遺伝子の発現は、その１つ以上の遺伝子の発現を欠く細胞と比べて、当該細胞の寿命の延長を直接または間接的にもたらす。特定の実施形態において、それらの細胞は、１つ以上の異種遺伝子を含む１つ以上の遺伝子を発現するように操作されている。他の場合において、それらの細胞は、それらの細胞にとって内在性の１つ以上の遺伝子の１つ以上の調節エレメントの操作などによって、それらの細胞にとって内在性の１つ以上の遺伝子の発現がアップレギュレーションするように操作されている。

特定の実施形態では、免疫細胞が、ＢＣＬ６遺伝子および１つ以上の生存促進性遺伝子または抗アポトーシス遺伝子または細胞生存促進遺伝子を発現するように操作される（かつ、生存促進性または抗アポトーシスまたは細胞生存促進と分類される遺伝子において重複があるかもしれないし、ないかもしれない）。本明細書中で使用されるとき、生存促進性遺伝子とは、抗アポトーシス機能を発揮できるかまたは任意の機構によって生存を促進できる核酸ポリマーのことを指す。抗アポトーシス機能を発揮できる核酸ポリマーは、１つ以上のＢｃｌ２ファミリー遺伝子（例えば、ＢＣＬ－ｘＬ、ＢＣＬ－２、ＭＣＬ－１、Ｂｃｌ－ｗ、Ｂｆｌ－１、ＢＣＬ－Ｂなど）であり得る。抗アポトーシス機能を発揮できる核酸ポリマーは、１つ以上のアポトーシス阻害（ＩＡＰ）ファミリー遺伝子（例えば、ＸＩＡＰ、ｃ－ＩＡＰｌ、Ｃ－ＩＡＰ２、ＮＡＩＰおよびサバイビンなど）であり得る。抗アポトーシス機能を発揮できる核酸ポリマーは、アポトーシスにおいて役割を果たす１つ以上のカスパーゼ（例えば、カスパーゼ－１、カスパーゼ－２、カスパーゼ－３、カスパーゼ－４、カスパーゼ－５、カスパーゼ－６、カスパーゼ－７、カスパーゼ－８、カスパーゼ－９、カスパーゼ－１０、カスパーゼ－１１、カスパーゼ－１２、カスパーゼ－１３、カスパーゼ－１４）の発現を阻害またはノックアウトすることができる場合がある。ノックダウンまたはノックアウトのための核酸ポリマーは、ｓｈＲＮＡ発現カセットであり得るか、またはこれらのカスパーゼ遺伝子は、遺伝子編集法（ＣＲＩＳＰＲ、ＴＡＬＥＮ、ジンクフィンガー法など）によってもノックアウトされ得る。抗アポトーシス機能を発揮できる核酸ポリマーは、１つ以上のアポトーシス促進性遺伝子（例えば、ＢＩＭ、Ｐｕｍａ、Ｎｏｘａ、Ｂｉｋ、Ｂｍｆ、Ｂａｄ、Ｈｒｋ、Ｂｉｄ、ＢＡＸ、ＢＡＫ、ＢＯＫなど）の発現を阻害またはノックアウトすることができる場合がある。抗アポトーシス機能を発揮できる核酸ポリマーは、抗アポトーシス効果を有し得る（例えば、インスリン様成長因子（ＩＧＦ－１）、Ｈｓｐ７０、Ｈｓｐ２７、ｃＦＬＩＰ、ＢＮＩＰ３、ＦＡＤＤ、ＡｋｔおよびＮＦ－κＢ、Ｒａｆ－１およびＭＥＫ１、ｐ９０Ｒｓｋ、Ｃ－Ｊｕｎ、ＢＮＩＰ２、ＢＡＧ１、ＨＳＰＡ９、ＨＳＰ９０Ｂ１、ｍｉＲＮＡ２１、ｍｉＲ－１０６ｂ－２５、ｍｉＲ－２０６、ｍｉＲ－２２１／２２２、ｍｉＲ－１７－９２、ｍｉＲ－１３３、ｍｉＲ－１４３、ｍｉＲ－１４５、ｍｉＲ－１５５、ｍｉＲ－３３０など）。

無限Ｔ細胞は、野生型ＢＣＬ６または変異ＢＣＬ６を用いて作製され得る。本発明者らは、特定の１つのヌクレオチドが異なる野生型ＢＣＬ６または変異ＢＣＬ６（つまり、野生型ＢＣＬ６の３９５位のアミノ酸のコドンがＣＣＴ（プロリン／Ｐをコードする）であり、変異ＢＣＬ６の３９５位のアミノ酸のコドンは、ＣＴＴ（ロイシン／Ｌをコードする）である）のいずれかを用いて無限Ｔ細胞を作製できることを明らかにした。それらの２つのＢＣＬ６遺伝子のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を下記に示す（野生型配列における変異点に下線を引いている）。

野生型ＢＣＬ６のａａ配列：
ＭＡＳＰＡＤＳＣＩＱＦＴＲＨＡＳＤＶＬＬＮＬＮＲＬＲＳＲＤＩＬＴＤＶＶＩＶＶＳＲＥＱＦＲＡＨＫＴＶＬＭＡＣＳＧＬＦＹＳＩＦＴＤＱＬＫＣＮＬＳＶＩＮＬＤＰＥＩＮＰＥＧＦＣＩＬＬＤＦＭＹＴＳＲＬＮＬＲＥＧＮＩＭＡＶＭＡＴＡＭＹＬＱＭＥＨＶＶＤＴＣＲＫＦＩＫＡＳＥＡＥＭＶＳＡＩＫＰＰＲＥＥＦＬＮＳＲＭＬＭＰＱＤＩＭＡＹＲＧＲＥＶＶＥＮＮＬＰＬＲＳＡＰＧＣＥＳＲＡＦＡＰＳＬＹＳＧＬＳＴＰＰＡＳＹＳＭＹＳＨＬＰＶＳＳＬＬＦＳＤＥＥＦＲＤＶＲＭＰＶＡＮＰＦＰＫＥＲＡＬＰＣＤＳＡＲＰＶＰＧＥＹＳＲＰＴＬＥＶＳＰＮＶＣＨＳＮＩＹＳＰＫＥＴＩＰＥＥＡＲＳＤＭＨＹＳＶＡＥＧＬＫＰＡＡＰＳＡＲＮＡＰＹＦＰＣＤＫＡＳＫＥＥＥＲＰＳＳＥＤＥＩＡＬＨＦＥＰＰＮＡＰＬＮＲＫＧＬＶＳＰＱＳＰＱＫＳＤＣＱＰＮＳＰＴＥＳＣＳＳＫＮＡＣＩＬＱＡＳＧＳＰＰＡＫＳＰＴＤＰＫＡＣＮＷＫＫＹＫＦＩＶＬＮＳＬＮＱＮＡＫＰＥＧＰＥＱＡＥＬＧＲＬＳＰＲＡＹＴＡＰＰＡＣＱＰＰＭＥＰＥＮＬＤＬＱＳＰＴＫＬＳＡＳＧＥＤＳＴＩＰＱＡＳＲＬＮＮＩＶＮＲＳＭＴＧＳＰＲＳＳＳＥＳＨＳＰＬＹＭＨＰＰＫＣＴＳＣＧＳＱＳＰＱＨＡＥＭＣＬＨＴＡＧＰＴＦＰＥＥＭＧＥＴＱＳＥＹＳＤＳＳＣＥＮＧＡＦＦＣＮＥＣＤＣＲＦＳＥＥＡＳＬＫＲＨＴＬＱＴＨＳＤＫＰＹＫＣＤＲＣＱＡＳＦＲＹＫＧＮＬＡＳＨＫＴＶＨＴＧＥＫＰＹＲＣＮＩＣＧＡＱＦＮＲＰＡＮＬＫＴＨＴＲＩＨＳＧＥＫＰＹＫＣＥＴＣＧＡＲＦＶＱＶＡＨＬＲＡＨＶＬＩＨＴＧＥＫＰＹＰＣＥＩＣＧＴＲＦＲＨＬＱＴＬＫＳＨＬＲＩＨＴＧＥＫＰＹＨＣＥＫＣＮＬＨＦＲＨＫＳＱＬＲＬＨＬＲＱＫＨＧＡＩＴＮＴＫＶＱＹＲＶＳＡＴＤＬＰＰＥＬＰＫＡＣ（配列番号１）

野生型ＢＣＬ６のヌクレオチド配列（野生型配列における変異点のコドンに下線を引いている）：
ＡＴＧｇｃｃｔｃｇｃｃｇｇｃｔｇａｃａｇｃｔｇｔａｔｃｃａｇｔｔｃａｃｃｃｇｃｃａｔｇｃｃａｇｔｇａｔｇｔｔｃｔｔｃｔｃａａｃｃｔｔａａｔｃｇｔｃｔｃｃｇｇａｇｔｃｇａｇａｃａｔｃｔｔｇａｃｔｇａｔｇｔｔｇｔｃａｔｔｇｔｔｇｔｇａｇｃｃｇｔｇａｇｃａｇｔｔｔａｇａｇｃｃｃａｔａａａａｃｇｇｔｃｃｔｃａｔｇｇｃｃｔｇｃａｇｔｇｇｃｃｔｇｔｔｃｔａｔａｇｃａｔｃｔｔｔａｃａｇａｃｃａｇｔｔｇａａａｔｇｃａａｃｃｔｔａｇｔｇｔｇａｔｃａａｔｃｔａｇａｔｃｃｔｇａｇａｔｃａａｃｃｃｔｇａｇｇｇａｔｔｃｔｇｃａｔｃｃｔｃｃｔｇｇａｃｔｔｃａｔｇｔａｃａｃａｔｃｔｃｇｇｃｔｃａａｔｔｔｇｃｇｇｇａｇｇｇｃａａｃａｔｃａｔｇｇｃｔｇｔｇａｔｇｇｃｃａｃｇｇｃｔａｔｇｔａｃｃｔｇｃａｇａｔｇｇａｇｃａｔｇｔｔｇｔｇｇａｃａｃｔｔｇｃｃｇｇａａｇｔｔｔａｔｔａａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｃａｇａｇａｔｇｇｔｔｔｃｔｇｃｃａｔｃａａｇｃｃｔｃｃｔｃｇｔｇａａｇａｇｔｔｃｃｔｃａａｃａｇｃｃｇｇａｔｇｃｔｇａｔｇｃｃｃｃａａｇａｃａｔｃａｔｇｇｃｃｔａｔｃｇｇｇｇｔｃｇｔｇａｇｇｔｇｇｔｇｇａｇａａｃａａｃｃｔｇｃｃａｃｔｇａｇｇａｇｃｇｃｃｃｃｔｇｇｇｔｇｔｇａｇａｇｃａｇａｇｃｃｔｔｔｇｃｃｃｃｃａｇｃｃｔｇｔａｃａｇｔｇｇｃｃｔｇｔｃｃａｃａｃｃｇｃｃａｇｃｃｔｃｔｔａｔｔｃｃａｔｇｔａｃａｇｃｃａｃｃｔｃｃｃｔｇｔｃａｇｃａｇｃｃｔｃｃｔｃｔｔｃｔｃｃｇａｔｇａｇｇａｇｔｔｔｃｇｇｇａｔｇｔｃｃｇｇａｔｇｃｃｔｇｔｇｇｃｃａａｃｃｃｃｔｔｃｃｃｃａａｇｇａｇｃｇｇｇｃａｃｔｃｃｃａｔｇｔｇａｔａｇｔｇｃｃａｇｇｃｃａｇｔｃｃｃｔｇｇｔｇａｇｔａｃａｇｃｃｇｇｃｃｇａｃｔｔｔｇｇａｇｇｔｇｔｃｃｃｃｃａａｔｇｔｇｔｇｃｃａｃａｇｃａａｔａｔｃｔａｔｔｃａｃｃｃａａｇｇａａａｃａａｔｃｃｃａｇａａｇａｇｇｃａｃｇａａｇｔｇａｔａｔｇｃａｃｔａｃａｇｔｇｔｇｇｃｔｇａｇｇｇｃｃｔｃａａａｃｃｔｇｃｔｇｃｃｃｃｃｔｃａｇｃｃｃｇａａａｔｇｃｃｃｃｃｔａｃｔｔｃｃｃｔｔｇｔｇａｃａａｇｇｃｃａｇｃａａａｇａａｇａａｇａｇａｇａｃｃｃｔｃｃｔｃｇｇａａｇａｔｇａｇａｔｔｇｃｃｃｔｇｃａｔｔｔｃｇａｇｃｃｃｃｃｃａａｔｇｃａｃｃｃｃｔｇａａｃｃｇｇａａｇｇｇｔｃｔｇｇｔｔａｇｔｃｃａｃａｇａｇｃｃｃｃｃａｇａａａｔｃｔｇａｃｔｇｃｃａｇｃｃｃａａｃｔｃｇｃｃｃａｃａｇａｇｔｃｃｔｇｃａｇｃａｇｔａａｇａａｔｇｃｃｔｇｃａｔｃｃｔｃｃａｇｇｃｔｔｃｔｇｇｃｔｃｃｃｃｔｃｃａｇｃｃａａｇａｇｃｃｃｃａｃｔｇａｃｃｃｃａａａｇｃｃｔｇｃａａｃｔｇｇａａｇａａａｔａｃａａｇｔｔｃａｔｃｇｔｇｃｔｃａａｃａｇｃｃｔｃａａｃｃａｇａａｔｇｃｃａａａｃｃａｇａｇｇｇｇｃＣｔｇａｇｃａｇｇｃｔｇａｇｃｔｇｇｇｃｃｇｃｃｔｔｔｃｃｃｃａｃｇａｇｃｃｔａｃａｃｇｇｃｃｃｃａｃｃｔｇｃｃｔｇｃｃａｇｃｃａｃｃｃａｔｇｇａｇｃｃｔｇａｇａａｃｃｔｔｇａｃｃｔｃｃａｇｔｃｃｃｃａａｃｃａａｇｃｔｇａｇｔｇｃｃａｇｃｇｇｇｇａｇｇａｃｔｃｃａｃｃａｔｃｃｃａｃａａｇｃｃａｇｃｃｇｇｃｔｃａａｔａａｃａｔｃｇｔｔａａｃａｇｇｔｃｃａｔｇａｃｇｇｇｃｔｃｔｃｃｃｃｇｃａｇｃａｇｃａｇｃｇａｇａｇｃｃａｃｔｃａｃｃａｃｔｃｔａｃａｔｇｃａｃｃｃｃｃｃｇａａｇｔｇｃａｃｇｔｃｃｔｇｃｇｇｃｔｃｔｃａｇｔｃｃｃｃａｃａｇｃａｔｇｃａｇａｇａｔｇｔｇｃｃｔｃｃａｃａｃｃｇｃｔｇｇｃｃｃｃａｃｇｔｔｃｃｃｔｇａｇｇａｇａｔｇｇｇａｇａｇａｃｃｃａｇｔｃｔｇａｇｔａｃｔｃａｇａｔｔｃｔａｇｃｔｇｔｇａｇａａｃｇｇｇｇｃｃｔｔｃｔｔｃｔｇｃａａｔｇａｇｔｇｔｇａｃｔｇｃｃｇｃｔｔｃｔｃｔｇａｇｇａｇｇｃｃｔｃａｃｔｃａａｇａｇｇｃａｃａｃｇｃｔｇｃａｇａｃｃｃａｃａｇｔｇａｃａａａｃｃｃｔａｃａａｇｔｇｔｇａｃｃｇｃｔｇｃｃａｇｇｃｃｔｃｃｔｔｃｃｇｃｔａｃａａｇｇｇｃａａｃｃｔｃｇｃｃａｇｃｃａｃａａｇａｃｃｇｔｃｃａｔａｃｃｇｇｔｇａｇａａａｃｃｃｔａｔｃｇｔｔｇｃａａｃａｔｃｔｇｔｇｇｇｇｃｃｃａｇｔｔｃａａｃｃｇｇｃｃａｇｃｃａａｃｃｔｇａａａａｃｃｃａｃａｃｔｃｇａａｔｔｃａｃｔｃｔｇｇａｇａｇａａｇｃｃｃｔａｃａａａｔｇｃｇａａａｃｃｔｇｃｇｇａｇｃｃａｇａｔｔｔｇｔａｃａｇｇｔｇｇｃｃｃａｃｃｔｃｃｇｔｇｃｃｃａｔｇｔｇｃｔｔａｔｃｃａｃａｃｔｇｇｔｇａｇａａｇｃｃｃｔａｔｃｃｃｔｇｔｇａａａｔｃｔｇｔｇｇｃａｃｃｃｇｔｔｔｃｃｇｇｃａｃｃｔｔｃａｇａｃｔｃｔｇａａｇａｇｃｃａｃｃｔｇｃｇａａｔｃｃａｃａｃａｇｇａｇａｇａａａｃｃｔｔａｃｃａｔｔｇｔｇａｇａａｇｔｇｔａａｃｃｔｇｃａｔｔｔｃｃｇｔｃａｃａａａａｇｃｃａｇｃｔｇｃｇａｃｔｔｃａｃｔｔｇｃｇｃｃａｇａａｇｃａｔｇｇｃｇｃｃａｔｃａｃｃａａｃａｃｃａａｇｇｔｇｃａａｔａｃｃｇｃｇｔｇｔｃａｇｃｃａｃｔｇａｃｃｔｇｃｃｔｃｃｇｇａｇｃｔｃｃｃｃａａａｇｃｃｔｇｃ（配列番号２）

変異ＢＣＬ６のａａ配列（ロイシン変異に下線を引いている）：
ＭＡＳＰＡＤＳＣＩＱＦＴＲＨＡＳＤＶＬＬＮＬＮＲＬＲＳＲＤＩＬＴＤＶＶＩＶＶＳＲＥＱＦＲＡＨＫＴＶＬＭＡＣＳＧＬＦＹＳＩＦＴＤＱＬＫＣＮＬＳＶＩＮＬＤＰＥＩＮＰＥＧＦＣＩＬＬＤＦＭＹＴＳＲＬＮＬＲＥＧＮＩＭＡＶＭＡＴＡＭＹＬＱＭＥＨＶＶＤＴＣＲＫＦＩＫＡＳＥＡＥＭＶＳＡＩＫＰＰＲＥＥＦＬＮＳＲＭＬＭＰＱＤＩＭＡＹＲＧＲＥＶＶＥＮＮＬＰＬＲＳＡＰＧＣＥＳＲＡＦＡＰＳＬＹＳＧＬＳＴＰＰＡＳＹＳＭＹＳＨＬＰＶＳＳＬＬＦＳＤＥＥＦＲＤＶＲＭＰＶＡＮＰＦＰＫＥＲＡＬＰＣＤＳＡＲＰＶＰＧＥＹＳＲＰＴＬＥＶＳＰＮＶＣＨＳＮＩＹＳＰＫＥＴＩＰＥＥＡＲＳＤＭＨＹＳＶＡＥＧＬＫＰＡＡＰＳＡＲＮＡＰＹＦＰＣＤＫＡＳＫＥＥＥＲＰＳＳＥＤＥＩＡＬＨＦＥＰＰＮＡＰＬＮＲＫＧＬＶＳＰＱＳＰＱＫＳＤＣＱＰＮＳＰＴＥＳＣＳＳＫＮＡＣＩＬＱＡＳＧＳＰＰＡＫＳＰＴＤＰＫＡＣＮＷＫＫＹＫＦＩＶＬＮＳＬＮＱＮＡＫＰＥＧＬＥＱＡＥＬＧＲＬＳＰＲＡＹＴＡＰＰＡＣＱＰＰＭＥＰＥＮＬＤＬＱＳＰＴＫＬＳＡＳＧＥＤＳＴＩＰＱＡＳＲＬＮＮＩＶＮＲＳＭＴＧＳＰＲＳＳＳＥＳＨＳＰＬＹＭＨＰＰＫＣＴＳＣＧＳＱＳＰＱＨＡＥＭＣＬＨＴＡＧＰＴＦＰＥＥＭＧＥＴＱＳＥＹＳＤＳＳＣＥＮＧＡＦＦＣＮＥＣＤＣＲＦＳＥＥＡＳＬＫＲＨＴＬＱＴＨＳＤＫＰＹＫＣＤＲＣＱＡＳＦＲＹＫＧＮＬＡＳＨＫＴＶＨＴＧＥＫＰＹＲＣＮＩＣＧＡＱＦＮＲＰＡＮＬＫＴＨＴＲＩＨＳＧＥＫＰＹＫＣＥＴＣＧＡＲＦＶＱＶＡＨＬＲＡＨＶＬＩＨＴＧＥＫＰＹＰＣＥＩＣＧＴＲＦＲＨＬＱＴＬＫＳＨＬＲＩＨＴＧＥＫＰＹＨＣＥＫＣＮＬＨＦＲＨＫＳＱＬＲＬＨＬＲＱＫＨＧＡＩＴＮＴＫＶＱＹＲＶＳＡＴＤＬＰＰＥＬＰＫＡＣ（配列番号３）

変異ＢＣＬ６のヌクレオチド配列（ロイシンに対するコドンに下線を引いている）：

ＡＴＧｇｃｃｔｃｇｃｃｇｇｃｔｇａｃａｇｃｔｇｔａｔｃｃａｇｔｔｃａｃｃｃｇｃｃａｔｇｃｃａｇｔｇａｔｇｔｔｃｔｔｃｔｃａａｃｃｔｔａａｔｃｇｔｃｔｃｃｇｇａｇｔｃｇａｇａｃａｔｃｔｔｇａｃｔｇａｔｇｔｔｇｔｃａｔｔｇｔｔｇｔｇａｇｃｃｇｔｇａｇｃａｇｔｔｔａｇａｇｃｃｃａｔａａａａｃｇｇｔｃｃｔｃａｔｇｇｃｃｔｇｃａｇｔｇｇｃｃｔｇｔｔｃｔａｔａｇｃａｔｃｔｔｔａｃａｇａｃｃａｇｔｔｇａａａｔｇｃａａｃｃｔｔａｇｔｇｔｇａｔｃａａｔｃｔａｇａｔｃｃｔｇａｇａｔｃａａｃｃｃｔｇａｇｇｇａｔｔｃｔｇｃａｔｃｃｔｃｃｔｇｇａｃｔｔｃａｔｇｔａｃａｃａｔｃｔｃｇｇｃｔｃａａｔｔｔｇｃｇｇｇａｇｇｇｃａａｃａｔｃａｔｇｇｃｔｇｔｇａｔｇｇｃｃａｃｇｇｃｔａｔｇｔａｃｃｔｇｃａｇａｔｇｇａｇｃａｔｇｔｔｇｔｇｇａｃａｃｔｔｇｃｃｇｇａａｇｔｔｔａｔｔａａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｃａｇａｇａｔｇｇｔｔｔｃｔｇｃｃａｔｃａａｇｃｃｔｃｃｔｃｇｔｇａａｇａｇｔｔｃｃｔｃａａｃａｇｃｃｇｇａｔｇｃｔｇａｔｇｃｃｃｃａａｇａｃａｔｃａｔｇｇｃｃｔａｔｃｇｇｇｇｔｃｇｔｇａｇｇｔｇｇｔｇｇａｇａａｃａａｃｃｔｇｃｃａｃｔｇａｇｇａｇｃｇｃｃｃｃｔｇｇｇｔｇｔｇａｇａｇｃａｇａｇｃｃｔｔｔｇｃｃｃｃｃａｇｃｃｔｇｔａｃａｇｔｇｇｃｃｔｇｔｃｃａｃａｃｃｇｃｃａｇｃｃｔｃｔｔａｔｔｃｃａｔｇｔａｃａｇｃｃａｃｃｔｃｃｃｔｇｔｃａｇｃａｇｃｃｔｃｃｔｃｔｔｃｔｃｃｇａｔｇａｇｇａｇｔｔｔｃｇｇｇａｔｇｔｃｃｇｇａｔｇｃｃｔｇｔｇｇｃｃａａｃｃｃｃｔｔｃｃｃｃａａｇｇａｇｃｇｇｇｃａｃｔｃｃｃａｔｇｔｇａｔａｇｔｇｃｃａｇｇｃｃａｇｔｃｃｃｔｇｇｔｇａｇｔａｃａｇｃｃｇｇｃｃｇａｃｔｔｔｇｇａｇｇｔｇｔｃｃｃｃｃａａｔｇｔｇｔｇｃｃａｃａｇｃａａｔａｔｃｔａｔｔｃａｃｃｃａａｇｇａａａｃａａｔｃｃｃａｇａａｇａｇｇｃａｃｇａａｇｔｇａｔａｔｇｃａｃｔａｃａｇｔｇｔｇｇｃｔｇａｇｇｇｃｃｔｃａａａｃｃｔｇｃｔｇｃｃｃｃｃｔｃａｇｃｃｃｇａａａｔｇｃｃｃｃｃｔａｃｔｔｃｃｃｔｔｇｔｇａｃａａｇｇｃｃａｇｃａａａｇａａｇａａｇａｇａｇａｃｃｃｔｃｃｔｃｇｇａａｇａｔｇａｇａｔｔｇｃｃｃｔｇｃａｔｔｔｃｇａｇｃｃｃｃｃｃａａｔｇｃａｃｃｃｃｔｇａａｃｃｇｇａａｇｇｇｔｃｔｇｇｔｔａｇｔｃｃａｃａｇａｇｃｃｃｃｃａｇａａａｔｃｔｇａｃｔｇｃｃａｇｃｃｃａａｃｔｃｇｃｃｃａｃａｇａｇｔｃｃｔｇｃａｇｃａｇｔａａｇａａｔｇｃｃｔｇｃａｔｃｃｔｃｃａｇｇｃｔｔｃｔｇｇｃｔｃｃｃｃｔｃｃａｇｃｃａａｇａｇｃｃｃｃａｃｔｇａｃｃｃｃａａａｇｃｃｔｇｃａａｃｔｇｇａａｇａａａｔａｃａａｇｔｔｃａｔｃｇｔｇｃｔｃａａｃａｇｃｃｔｃａａｃｃａｇａａｔｇｃｃａａａｃｃａｇａｇｇｇｇｃＴｔｇａｇｃａｇｇｃｔｇａｇｃｔｇｇｇｃｃｇｃｃｔｔｔｃｃｃｃａｃｇａｇｃｃｔａｃａｃｇｇｃｃｃｃａｃｃｔｇｃｃｔｇｃｃａｇｃｃａｃｃｃａｔｇｇａｇｃｃｔｇａｇａａｃｃｔｔｇａｃｃｔｃｃａｇｔｃｃｃｃａａｃｃａａｇｃｔｇａｇｔｇｃｃａｇｃｇｇｇｇａｇｇａｃｔｃｃａｃｃａｔｃｃｃａｃａａｇｃｃａｇｃｃｇｇｃｔｃａａｔａａｃａｔｃｇｔｔａａｃａｇｇｔｃｃａｔｇａｃｇｇｇｃｔｃｔｃｃｃｃｇｃａｇｃａｇｃａｇｃｇａｇａｇｃｃａｃｔｃａｃｃａｃｔｃｔａｃａｔｇｃａｃｃｃｃｃｃｇａａｇｔｇｃａｃｇｔｃｃｔｇｃｇｇｃｔｃｔｃａｇｔｃｃｃｃａｃａｇｃａｔｇｃａｇａｇａｔｇｔｇｃｃｔｃｃａｃａｃｃｇｃｔｇｇｃｃｃｃａｃｇｔｔｃｃｃｔｇａｇｇａｇａｔｇｇｇａｇａｇａｃｃｃａｇｔｃｔｇａｇｔａｃｔｃａｇａｔｔｃｔａｇｃｔｇｔｇａｇａａｃｇｇｇｇｃｃｔｔｃｔｔｃｔｇｃａａｔｇａｇｔｇｔｇａｃｔｇｃｃｇｃｔｔｃｔｃｔｇａｇｇａｇｇｃｃｔｃａｃｔｃａａｇａｇｇｃａｃａｃｇｃｔｇｃａｇａｃｃｃａｃａｇｔｇａｃａａａｃｃｃｔａｃａａｇｔｇｔｇａｃｃｇｃｔｇｃｃａｇｇｃｃｔｃｃｔｔｃｃｇｃｔａｃａａｇｇｇｃａａｃｃｔｃｇｃｃａｇｃｃａｃａａｇａｃｃｇｔｃｃａｔａｃｃｇｇｔｇａｇａａａｃｃｃｔａｔｃｇｔｔｇｃａａｃａｔｃｔｇｔｇｇｇｇｃｃｃａｇｔｔｃａａｃｃｇｇｃｃａｇｃｃａａｃｃｔｇａａａａｃｃｃａｃａｃｔｃｇａａｔｔｃａｃｔｃｔｇｇａｇａｇａａｇｃｃｃｔａｃａａａｔｇｃｇａａａｃｃｔｇｃｇｇａｇｃｃａｇａｔｔｔｇｔａｃａｇｇｔｇｇｃｃｃａｃｃｔｃｃｇｔｇｃｃｃａｔｇｔｇｃｔｔａｔｃｃａｃａｃｔｇｇｔｇａｇａａｇｃｃｃｔａｔｃｃｃｔｇｔｇａａａｔｃｔｇｔｇｇｃａｃｃｃｇｔｔｔｃｃｇｇｃａｃｃｔｔｃａｇａｃｔｃｔｇａａｇａｇｃｃａｃｃｔｇｃｇａａｔｃｃａｃａｃａｇｇａｇａｇａａａｃｃｔｔａｃｃａｔｔｇｔｇａｇａａｇｔｇｔａａｃｃｔｇｃａｔｔｔｃｃｇｔｃａｃａａａａｇｃｃａｇｃｔｇｃｇａｃｔｔｃａｃｔｔｇｃｇｃｃａｇａａｇｃａｔｇｇｃｇｃｃａｔｃａｃｃａａｃａｃｃａａｇｇｔｇｃａａｔａｃｃｇｃｇｔｇｔｃａｇｃｃａｃｔｇａｃｃｔｇｃｃｔｃｃｇｇａｇｃｔｃｃｃｃａａａｇｃｃｔｇｃ（配列番号４）

上記免疫細胞は、Ｔ細胞（例えば、制御性Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、アルファベータＴ細胞、ガンマ－デルタＴ細胞またはそれらの混合物）、ＮＫ細胞、インバリアントＮＫＴ細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞またはそれらの混合物を含む任意の種類の免疫細胞であってよい。それらの免疫細胞は、ウイルス特異的であり得、ＣＡＲを発現し得、かつ／またはＴＣＲを発現し得る。いくつかの実施形態において、それらの細胞は、単球または顆粒球、例えば、骨髄性細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞（ＤＣ）、マスト細胞、好酸球および／または好塩基球である。それらの免疫細胞を作製および操作する方法、ならびに養子細胞療法のためにそれらの細胞を使用および投与する方法（この場合、それらの細胞は自己または同種異系であり得る）も本明細書中に提供される。したがって、それらの免疫細胞は、癌細胞を標的化するためなどの免疫療法として使用され得る。これらの免疫細胞は、単一の細胞型として、または複数の免疫細胞型の組み合わせとして、治療に使用され得る。具体的な実施形態において、それらの免疫細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ１６＋またはそれらの混合物である。

上記免疫細胞は、被験体、特にヒト被験体から単離され得る。それらの免疫細胞は、目的の被験体（例えば、特定の疾患もしくは状態を有すると疑われる被験体、特定の疾患もしくは状態の素因を有すると疑われる被験体、または特定の疾患もしくは状態に対する治療を受けている被験体）から得ることができる。免疫細胞は、それらが被験体内に存在する任意の位置から回収することができ、それらの位置としては、血液、臍帯血、脾臓、胸腺、リンパ節および骨髄が挙げられるが、これらに限定されない。単離された免疫細胞は、直接使用され得るか、または凍結などによって、ある時間にわたって保存され得る。

上記免疫細胞は、それらが存在する任意の組織から濃縮／精製されてもよく、それらの組織としては、血液（血液バンクまたは臍帯血バンクによって回収された血液を含む）、脾臓、骨髄、外科手技中に除去および／または露出された組織、ならびに生検手技を介して得られた組織が挙げられるが、これらに限定されない。免疫細胞を濃縮、単離および／または精製してくるされる組織／器官は、生存している被験体と生存していない被験体の両方から単離され得る。ここで、生存していない被験体は、臓器ドナーである。特定の実施形態において、免疫細胞は、末梢血または臍帯血などの血液から単離される。いくつかの態様において、臍帯血から単離された免疫細胞は、ＣＤ４陽性またはＣＤ８陽性Ｔ細胞の抑制によって測定されるような、高い免疫調節能を有する。具体的な態様において、免疫細胞は、高い免疫調節能を求めて、プールされた血液、特に、プールされた臍帯血から単離される。プールされた血液は、２つ以上の起源（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０個以上の起源（例えば、ドナー被験体））からの血液であり得る。

免疫細胞の集団は、治療を必要とする被験体または低い免疫細胞活性に関連する疾患に罹患している被験体から得ることができる。したがって、それらの細胞は、治療を必要とする被験体にとって自己であり得る。あるいは、免疫細胞の集団は、ドナー（例えば、部分的にもしくは完全に組織適合性適合ドナーまたは完全に組織適合性不適合ドナー）から得ることができる。その免疫細胞集団は、末梢血、臍帯血、骨髄、脾臓、または免疫細胞が前記被験体もしくはドナーに存在する他の任意の器官／組織から収集され得る。それらの免疫細胞は、被験体および／またはドナーのプール、例えば、プールされた臍帯血から単離され得る。

免疫細胞集団が、被験体とは異なるドナーから得られるとき、そのドナーは、同種異系であり得るが、但し、得られる細胞は、それらの細胞が被験体に導入可能であるという点で、被験体と適合している。同種異系ドナー細胞は、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）が適合していてもよいし、そうでなくてもよい。

Ａ．Ｔ細胞
いくつかの実施形態において、上記免疫細胞は、Ｔ細胞である。機能的な抗腫瘍エフェクター細胞の誘導、活性化および拡大のためのいくつかの基本的なアプローチが、過去２０年で報告されてきた。これらとしては、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）などの自己細胞；自己ＤＣもしくはＰＢＭＣ、リンパ球、人工抗原提示細胞（ＡＰＣ）、またはＴ細胞リガンドおよび活性化抗体でコーティングされたビーズ、または標的細胞膜の捕捉によって単離された細胞を用いてエキソビボで活性化されたＴ細胞；抗宿主腫瘍Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）を天然に発現している同種異系細胞；および「Ｔ－ボディ」として知られる抗体様腫瘍認識能を示す腫瘍反応性ＴＣＲ分子またはキメラＴＣＲ分子を発現するように遺伝的に再プログラムされたまたは「再指示された」非腫瘍特異的な自己細胞または同種異系細胞が挙げられる。これらのアプローチは、本明細書中に記載される方法において使用され得る、Ｔ細胞を調製および免疫化するための数多くのプロトコルの元となった。

いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞は、血液、骨髄、リンパ液、臍帯またはリンパ系器官に由来する。いくつかの態様において、それらの細胞は、ヒト細胞である。それらの細胞は、通常、初代細胞であり、例えば、被験体から直接単離された細胞、および／または被験体から単離され、凍結された細胞である。いくつかの実施形態において、それらの細胞には、Ｔ細胞または他の細胞型の１つ以上のサブセット（例えば、Ｔ細胞集団全体、ＣＤ４^＋細胞、ＣＤ８^＋細胞、およびそれらの部分集団、例えば、機能、活性化状態、成熟度、分化の可能性、拡大、再循環、局在化および／もしくは残存能、抗原特異性、抗原レセプターのタイプ、特定の器官もしくはコンパートメントに存在すること、マーカーもしくはサイトカイン分泌のプロファイル、ならびに／または分化の程度によって定義される部分集団）が含まれる。処置される被験体に関して、それらの細胞は、同種異系細胞および／または自己細胞であり得る。いくつかの態様において、既存技術などの場合、それらの細胞は、多能性および／または複能性である（例えば、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）などの幹細胞）。いくつかの実施形態において、上記方法は、被験体から細胞を単離する工程、それらを本明細書中に記載されるように調製、処理、培養および／または操作する工程、ならびに凍結保存の前または後にそれらを同じ患者に再導入する工程を含む。

Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４^＋および／またはＣＤ８^＋Ｔ細胞）のサブタイプおよび部分集団に含まれるのは、ナイーブＴ（Ｔ_Ｎ）細胞、エフェクターＴ細胞（Ｔ_ＥＦＦ）、メモリーＴ細胞およびそのサブタイプ（例えば、幹細胞メモリーＴ（ＴＳＣ_Ｍ）、セントラルメモリーＴ（ＴＣ_Ｍ）、エフェクターメモリーＴ（Ｔ_ＥＭ）または最終分化型エフェクターメモリーＴ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、未熟Ｔ細胞、成熟Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞、内在性および獲得型（ａｄａｐｔｉｖｅ）の制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、ヘルパーＴ細胞（例えば、ＴＨ１細胞、ＴＨ２細胞、ＴＨ３細胞、ＴＨ１７細胞、ＴＨ９細胞、ＴＨ２２細胞、濾胞性ヘルパーＴ細胞）、アルファ／ベータＴ細胞およびガンマ／デルタＴ細胞である。

いくつかの実施形態において、Ｔ細胞集団の１つ以上は、表面マーカーなどの特異的マーカーが陽性であるかまたは特異的マーカーが陰性である細胞が濃縮されているか、または枯渇している。いくつかの場合において、そのようなマーカーは、ある特定のＴ細胞集団（例えば、非メモリー細胞）上に存在しないかまたは比較的低レベルでしか発現されないが、ある特定の他のＴ細胞集団（例えば、メモリー細胞）上には存在するかまたは比較的高レベルで発現されるマーカーである。

いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、非Ｔ細胞（例えば、Ｂ細胞、単球または他の白血球）上に発現されているマーカー（例えば、ＣＤ１４）のネガティブ選択によってＰＢＭＣサンプルから分離される。いくつかの態様では、ＣＤ４^＋またはＣＤ８^＋選択工程を用いることにより、ＣＤ４^＋ヘルパーＴ細胞およびＣＤ８^＋細胞傷害性Ｔ細胞が分離される。そのようなＣＤ４^＋およびＣＤ８^＋集団は、１つ以上のナイーブ、メモリーおよび／またはエフェクターＴ細胞の部分集団上に発現されているまたは比較的高い程度に発現されているマーカーのポジティブまたはネガティブ選択によって、さらに部分集団にソーティングされ得る。

いくつかの実施形態において、ＣＤ８^＋Ｔ細胞は、それぞれの部分集団に関連する表面抗原に基づくポジティブ選択またはネガティブ選択などによって、ナイーブ、セントラルメモリー、エフェクターメモリーおよび／またはセントラルメモリー幹細胞がさらに濃縮されるかまたは枯渇される。いくつかの実施形態において、セントラルメモリーＴ（Ｔ_ＣＭ）細胞または幹細胞メモリー細胞の濃縮は、投与後の長期生存率、拡大および／または生着を改善するなどの有効性を高めるために行われ、これは、いくつかの態様において、そのような部分集団において特に頑健である。

いくつかの実施形態において、上記Ｔ細胞は、自己Ｔ細胞である。この方法では、腫瘍サンプルを患者から入手し、単一細胞の懸濁液を得る。その単一細胞の懸濁液は、任意の好適な様式で、例えば、機械的に（例えば、ｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ^ＴＭＤｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ，ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ，Ａｕｂｕｒｎ，Ｃａｌｉｆ．を用いて腫瘍を脱凝集させて）または酵素的に（例えば、コラゲナーゼまたはＤＮａｓｅ）得ることができる。腫瘍の酵素消化物の単一細胞の懸濁液を、インターロイキン－２（ＩＬ－２）中または他の成長因子中で培養する。

培養されたＴ細胞は、プールされ、急速に拡大され得る。約１０～約１４日間にわたる急速な拡大によって、抗原特異的Ｔ細胞の数が少なくとも約５０倍（例えば、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００倍またはそれ以上）増加する。より好ましくは、約１０～約１４日間にわたる急速な拡大によって、少なくとも約２００倍（例えば、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００またはそれ以上）増加する。

当該分野で公知であるようないくつかの方法のうちのいずれかによって、拡大が達成され得る。例えば、Ｔ細胞は、フィーダーリンパ球と、インターロイキン－２（ＩＬ－２）またはインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）のいずれか（ＩＬ－２が好ましい）との存在下において非特異的Ｔ細胞レセプター刺激を用いて容易に拡大され得る。その非特異的Ｔ細胞レセプター刺激は、およそ３０ｎｇ／ｍｌの、マウスモノクローナル抗ＣＤ３抗体であるＯＫＴ３（Ｏｒｔｈｏ－ＭｃＮｅｉｌ（登録商標），Ｒａｒｉｔａｎ，Ｎ．Ｊ．から入手可能）を含み得る。あるいは、Ｔ細胞は、Ｔ細胞成長因子（例えば、３００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－２またはＩＬ－１５（ＩＬ－２が好ましい））の存在下において１つ以上の癌抗原（エピトープなどのその抗原性部分、または細胞を含む）で末梢血単核球（ＰＢＭＣ）をインビトロにおいて刺激することによって容易に拡大され得、その癌抗原は、必要に応じてベクターから発現され得、例えば、ヒト白血球抗原Ａ２（ＨＬＡ－Ａ２）結合ペプチドまたは他のＭＨＣクラスＩもしくはクラスＩＩ分子に結合するペプチドである。そのインビトロで誘導されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ａ２を発現している抗原提示細胞または他のＨＬＡ分子を発現している抗原提示細胞に対してパルスされた同じ癌抗原による再刺激によって急速に拡大される。そのインビトロで誘導されたＴ細胞は、抗原提示細胞の非存在下においても拡大され得る。

上記自己Ｔ細胞は、それらの自己Ｔ細胞の成長、分化および活性化を促進するＴ細胞成長因子またはＴ細胞分化因子を発現するように改変され得る。好適なＴ細胞成長因子としては、例えば、インターロイキン（ＩＬ）－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１およびＩＬ－１２が挙げられる。好適な改変方法は、当該分野で公知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，３^ｒｄｅｄ．，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．２００１；およびＡｕｓｕｂｅｌｅｔａｌ．，ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＧｒｅｅｎｅＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＡｓｓｏｃｉａｔｅｓａｎｄＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ，１９９４を参照のこと。特定の態様において、改変された自己Ｔ細胞は、Ｔ細胞成長因子を高レベルで発現する。Ｔ細胞成長因子コード配列（例えば、ＩＬ－１２のコード配列）は、Ｔ細胞成長因子コード配列への作動可能な連結が高レベル発現を促進するプロモーターと同様に、当該分野において容易に入手可能である。

Ｂ．ＮＫ細胞
いくつかの実施形態において、上記免疫細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。ＮＫ細胞は、種々の腫瘍細胞、ウイルスに感染した細胞、ならびに骨髄および胸腺における一部の正常細胞に対して自発的な細胞傷害性を有するリンパ球の部分集団である。ＮＫ細胞は、骨髄、リンパ節、脾臓、扁桃および胸腺において分化し、成熟する。ＮＫ細胞は、ヒトにおいては、ＣＤ１６、ＣＤ５６および／またはＣＤ８などの特定の表面マーカーによって検出され得る。ＮＫ細胞は、Ｔ細胞抗原レセプター、汎ＴマーカーＣＤ３、または表面免疫グロブリンＢ細胞レセプターを発現しない。

ある特定の実施形態において、ＮＫ細胞は、当該分野で周知の方法によってヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、未刺激の白血球搬出法生成物（ＰＢＳＣ）、ヒト胚性幹細胞（ｈＥＳＣ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、骨髄、組織または臍帯血から得られる。

Ｃ．ＮＫＴ細胞
ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞は、Ｔ細胞とナチュラルキラー細胞の両方の特性を共有する不均一なＴ細胞群である。これらの細胞の多くは、自己および外来性の脂質および糖脂質に結合する抗原提示分子である非多形性ＣＤ１ｄ分子を認識する。それらは、全末梢血Ｔ細胞のおよそ０．１％しか占めない。ＮＫＴ細胞は、αβＴ細胞レセプターを共発現するが、典型的にはＮＫ１．１などのＮＫ細胞と関連する種々の分子マーカーも発現する、Ｔ細胞のサブセットである。インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞は、転写制御因子である前骨髄球性白血病ジンクフィンガーを高レベルで発現し、それらの細胞の発達は、その転写制御因子に左右される。現在、５つの主要な異なるｉＮＫＴ細胞サブセットが存在する。これらのサブセット細胞は、活性化されると、異なるサイトカインセットを産生する。サブタイプｉＮＫＴ１、ｉＮＫＴ２およびｉＮＫＴ１７は、サイトカイン産生がＴｈ細胞サブセットに酷似している。さらに、Ｔ濾胞性ヘルパー様機能およびＩＬ－１０依存性制御機能に特化したサブタイプも存在する。

Ｄ．自然リンパ球系細胞
自然リンパ球系細胞（ＩＬＣ）は、リンパ球系共通前駆細胞（ＣＬＰ）に由来し、リンパ系に属する、自然免疫細胞の一群である。これらの細胞は、組換え活性化遺伝子（ＲＡＧ）を欠くので、抗原特異的ＢまたはＴ細胞レセプターが存在しないことによって定義される。ＩＬＣは、骨髄マーカーまたは樹状細胞マーカーを発現しない。それらは、防御免疫ならびにホメオスタシスおよび炎症の制御において役割を果たすので、それらの調節不全は、アレルギー、気管支喘息および自己免疫疾患などの免疫病理につながり得る。ＩＬＣは、それらが産生し得るサイトカインならびにそれらの発達および機能を制御する転写因子に基づいて分けられ得る。

ＩＩＩ．無限免疫細胞の作製
いくつかの態様において、本開示は、ＢＣＬ６および１つ以上の生存促進性遺伝子または抗アポトーシス遺伝子または細胞生存促進遺伝子（Ｂｘｌ－ｘＬなどの１つ以上の抗アポトーシスＢＣＬ－２ファミリー遺伝子を含む）の過剰発現によって免疫細胞の寿命を延長する方法を提供する。その遺伝子発現は、従来の分子生物学の方法（例えば、１つ以上のウイルスベクターまたは非ウイルスベクターにおいて構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターの下流にＢＣＬ６および抗アポトーシスＢＣＬ－２ファミリー遺伝子のコード配列をクローニングすること、ならびにそれらのベクターを上記免疫細胞に送達すること）によって達成され得る。あるいは、その遺伝子発現は、ＣＲＩＳＰＲまたは他のトランスポザーゼを使用して、ＢＣＬ６および抗アポトーシスＢＣＬ－２ファミリー遺伝子（一例として）のｍＲＮＡを上記免疫細胞において特異的に転写することによって達成され得る。ＢＣＬ６および／または抗アポトーシスＢＣＬ－２ファミリーメンバー（例えば、Ｂｃｌ－ｘＬ）の発現は、構成的なまたは誘導性の手段であり得ることを含めて、制御可能であり得る。いくつかの場合において、ＢＣＬ６および／または抗アポトーシスＢＣＬ－２ファミリーメンバーの発現は、第１のタイプの発現制御（例えば、構成的）を有することがあり、その系における１つ以上の他の遺伝子（例えば、同じまたは別のベクター上にある遺伝子）の発現は、同じ様式（例えば、構成的な様式）で、または異なって（例えば、誘導性の様式で）制御され得る。具体的な場合において、ＢＣＬ６－ＢＣＬ－ｘＬは、ｔｅｔ－ｏｆｆ制御機構またはｔｅｔ－ｏｎ制御機構によって制御される。

１つの例示的な方法では、ＢＣＬ６遺伝子のコード配列とＢｃｌ－ｘＬ遺伝子（単なる例）のコード配列とをつなげることができるが、それらは、最終的にＢＣＬ６分子とＢｃｌ－ｘＬ分子とが別個に生成されるのを可能にするエレメントによって隔てられ得る。例えば、ＢＣＬ６遺伝子のコード配列とＢｃｌ－ｘＬ遺伝子のコード配列とをつなげることができるが、それらは、ＢＣＬ６遺伝子とＢｃｌ－ｘＬ遺伝子とを同時に発現できる１つのオープンリーディングフレームをもたらすようにＴ２Ａ配列によって隔てられ得る。このＢＣＬ６－Ｔ２Ａ－Ｂｃｌ－ｘＬオープンリーディングフレームは、レンチウイルスベクターなどのベクターにクローニングされ得る。次いで、そのウイルスベクターによって、例えば、ＩＬ－２および／またはＩＬ－１５の存在下において、Ｔ細胞などの上記免疫細胞に形質導入され得る。この方法により、組換えヒトＩＬ－２および／またはＩＬ－１５の存在下において増殖できる「無限Ｔ細胞」と称されるＴ細胞株が健康ドナーのＴ細胞から作製され得る。いくつかの場合において、これらの細胞は、ＩＬ－２および／またはＩＬ－１５の存在下において作製され、それらの細胞自身も異種ＩＬ－２および／またはＩＬ－１５を発現するが、他の場合では、これらのパラメータのうちの１つだけが使用される。

自己切断配列の例は、以下のとおりである：

Ｔ２Ａ（ＧＳＧ）ＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号５）

Ｐ２Ａ（ＧＳＧ）ＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号６）

Ｅ２Ａ（ＧＳＧ）ＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号７）

Ｆ２Ａ（ＧＳＧ）ＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号８）

他の場合では、２Ａ配列の代わりにＩＲＥＳエレメントが使用される。

いくつかの実施形態において、上記細胞は、ヒトＢＣＬ６、２Ａ自己切断ペプチドおよびＢＣＬ－ｘｌコード配列を含むＢＣＬ６－２Ａ－ＢＣＬｘＬ配列（配列番号９）を発現するように操作されている。

ＡＴＧｇｃｃｔｃｇｃｃｇｇｃｔｇａｃａｇｃｔｇｔａｔｃｃａｇｔｔｃａｃｃｃｇｃｃａｔｇｃｃａｇｔｇａｔｇｔｔｃｔｔｃｔｃａａｃｃｔｔａａｔｃｇｔｃｔｃｃｇｇａｇｔｃｇａｇａｃａｔｃｔｔｇａｃｔｇａｔｇｔｔｇｔｃａｔｔｇｔｔｇｔｇａｇｃｃｇｔｇａｇｃａｇｔｔｔａｇａｇｃｃｃａｔａａａａｃｇｇｔｃｃｔｃａｔｇｇｃｃｔｇｃａｇｔｇｇｃｃｔｇｔｔｃｔａｔａｇｃａｔｃｔｔｔａｃａｇａｃｃａｇｔｔｇａａａｔｇｃａａｃｃｔｔａｇｔｇｔｇａｔｃａａｔｃｔａｇａｔｃｃｔｇａｇａｔｃａａｃｃｃｔｇａｇｇｇａｔｔｃｔｇｃａｔｃｃｔｃｃｔｇｇａｃｔｔｃａｔｇｔａｃａｃａｔｃｔｃｇｇｃｔｃａａｔｔｔｇｃｇｇｇａｇｇｇｃａａｃａｔｃａｔｇｇｃｔｇｔｇａｔｇｇｃｃａｃｇｇｃｔａｔｇｔａｃｃｔｇｃａｇａｔｇｇａｇｃａｔｇｔｔｇｔｇｇａｃａｃｔｔｇｃｃｇｇａａｇｔｔｔａｔｔａａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｃａｇａｇａｔｇｇｔｔｔｃｔｇｃｃａｔｃａａｇｃｃｔｃｃｔｃｇｔｇａａｇａｇｔｔｃｃｔｃａａｃａｇｃｃｇｇａｔｇｃｔｇａｔｇｃｃｃｃａａｇａｃａｔｃａｔｇｇｃｃｔａｔｃｇｇｇｇｔｃｇｔｇａｇｇｔｇｇｔｇｇａｇａａｃａａｃｃｔｇｃｃａｃｔｇａｇｇａｇｃｇｃｃｃｃｔｇｇｇｔｇｔｇａｇａｇｃａｇａｇｃｃｔｔｔｇｃｃｃｃｃａｇｃｃｔｇｔａｃａｇｔｇｇｃｃｔｇｔｃｃａｃａｃｃｇｃｃａｇｃｃｔｃｔｔａｔｔｃｃａｔｇｔａｃａｇｃｃａｃｃｔｃｃｃｔｇｔｃａｇｃａｇｃｃｔｃｃｔｃｔｔｃｔｃｃｇａｔｇａｇｇａｇｔｔｔｃｇｇｇａｔｇｔｃｃｇｇａｔｇｃｃｔｇｔｇｇｃｃａａｃｃｃｃｔｔｃｃｃｃａａｇｇａｇｃｇｇｇｃａｃｔｃｃｃａｔｇｔｇａｔａｇｔｇｃｃａｇｇｃｃａｇｔｃｃｃｔｇｇｔｇａｇｔａｃａｇｃｃｇｇｃｃｇａｃｔｔｔｇｇａｇｇｔｇｔｃｃｃｃｃａａｔｇｔｇｔｇｃｃａｃａｇｃａａｔａｔｃｔａｔｔｃａｃｃｃａａｇｇａａａｃａａｔｃｃｃａｇａａｇａｇｇｃａｃｇａａｇｔｇａｔａｔｇｃａｃｔａｃａｇｔｇｔｇｇｃｔｇａｇｇｇｃｃｔｃａａａｃｃｔｇｃｔｇｃｃｃｃｃｔｃａｇｃｃｃｇａａａｔｇｃｃｃｃｃｔａｃｔｔｃｃｃｔｔｇｔｇａｃａａｇｇｃｃａｇｃａａａｇａａｇａａｇａｇａｇａｃｃｃｔｃｃｔｃｇｇａａｇａｔｇａｇａｔｔｇｃｃｃｔｇｃａｔｔｔｃｇａｇｃｃｃｃｃｃａａｔｇｃａｃｃｃｃｔｇａａｃｃｇｇａａｇｇｇｔｃｔｇｇｔｔａｇｔｃｃａｃａｇａｇｃｃｃｃｃａｇａａａｔｃｔｇａｃｔｇｃｃａｇｃｃｃａａｃｔｃｇｃｃｃａｃａｇａｇｔｃｃｔｇｃａｇｃａｇｔａａｇａａｔｇｃｃｔｇｃａｔｃｃｔｃｃａｇｇｃｔｔｃｔｇｇｃｔｃｃｃｃｔｃｃａｇｃｃａａｇａｇｃｃｃｃａｃｔｇａｃｃｃｃａａａｇｃｃｔｇｃａａｃｔｇｇａａｇａａａｔａｃａａｇｔｔｃａｔｃｇｔｇｃｔｃａａｃａｇｃｃｔｃａａｃｃａｇａａｔｇｃｃａａａｃｃａｇａｇｇｇｇｃｃｔｇａｇｃａｇｇｃｔｇａｇｃｔｇｇｇｃｃｇｃｃｔｔｔｃｃｃｃａｃｇａｇｃｃｔａｃａｃｇｇｃｃｃｃａｃｃｔｇｃｃｔｇｃｃａｇｃｃａｃｃｃａｔｇｇａｇｃｃｔｇａｇａａｃｃｔｔｇａｃｃｔｃｃａｇｔｃｃｃｃａａｃｃａａｇｃｔｇａｇｔｇｃｃａｇｃｇｇｇｇａｇｇａｃｔｃｃａｃｃａｔｃｃｃａｃａａｇｃｃａｇｃｃｇｇｃｔｃａａｔａａｃａｔｃｇｔｔａａｃａｇｇｔｃｃａｔｇａｃｇｇｇｃｔｃｔｃｃｃｃｇｃａｇｃａｇｃａｇｃｇａｇａｇｃｃａｃｔｃａｃｃａｃｔｃｔａｃａｔｇｃａｃｃｃｃｃｃｇａａｇｔｇｃａｃｇｔｃｃｔｇｃｇｇｃｔｃｔｃａｇｔｃｃｃｃａｃａｇｃａｔｇｃａｇａｇａｔｇｔｇｃｃｔｃｃａｃａｃｃｇｃｔｇｇｃｃｃｃａｃｇｔｔｃｃｃｔｇａｇｇａｇａｔｇｇｇａｇａｇａｃｃｃａｇｔｃｔｇａｇｔａｃｔｃａｇａｔｔｃｔａｇｃｔｇｔｇａｇａａｃｇｇｇｇｃｃｔｔｃｔｔｃｔｇｃａａｔｇａｇｔｇｔｇａｃｔｇｃｃｇｃｔｔｃｔｃｔｇａｇｇａｇｇｃｃｔｃａｃｔｃａａｇａｇｇｃａｃａｃｇｃｔｇｃａｇａｃｃｃａｃａｇｔｇａｃａａａｃｃｃｔａｃａａｇｔｇｔｇａｃｃｇｃｔｇｃｃａｇｇｃｃｔｃｃｔｔｃｃｇｃｔａｃａａｇｇｇｃａａｃｃｔｃｇｃｃａｇｃｃａｃａａｇａｃｃｇｔｃｃａｔａｃｃｇｇｔｇａｇａａａｃｃｃｔａｔｃｇｔｔｇｃａａｃａｔｃｔｇｔｇｇｇｇｃｃｃａｇｔｔｃａａｃｃｇｇｃｃａｇｃｃａａｃｃｔｇａａａａｃｃｃａｃａｃｔｃｇａａｔｔｃａｃｔｃｔｇｇａｇａｇａａｇｃｃｃｔａｃａａａｔｇｃｇａａａｃｃｔｇｃｇｇａｇｃｃａｇａｔｔｔｇｔａｃａｇｇｔｇｇｃｃｃａｃｃｔｃｃｇｔｇｃｃｃａｔｇｔｇｃｔｔａｔｃｃａｃａｃｔｇｇｔｇａｇａａｇｃｃｃｔａｔｃｃｃｔｇｔｇａａａｔｃｔｇｔｇｇｃａｃｃｃｇｔｔｔｃｃｇｇｃａｃｃｔｔｃａｇａｃｔｃｔｇａａｇａｇｃｃａｃｃｔｇｃｇａａｔｃｃａｃａｃａｇｇａｇａｇａａａｃｃｔｔａｃｃａｔｔｇｔｇａｇａａｇｔｇｔａａｃｃｔｇｃａｔｔｔｃｃｇｔｃａｃａａａａｇｃｃａｇｃｔｇｃｇａｃｔｔｃａｃｔｔｇｃｇｃｃａｇａａｇｃａｔｇｇｃｇｃｃａｔｃａｃｃａａｃａｃｃａａｇｇｔｇｃａａｔａｃｃｇｃｇｔｇｔｃａｇｃｃａｃｔｇａｃｃｔｇｃｃｔｃｃｇｇａｇｃｔｃｃｃｃａａａｇｃｃｔｇｃＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＣＴＡＣＴＡＡＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＡＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＣＣＣＴＧＧＡＣＣＴＡＧＡＴＣＴＧＧＡＡＴＧＴＣＴＣＡＧＡＧＣＡＡＣＣＧＧＧＡＧＣＴＧＧＴＧＧＴＴＧＡＣＴＴＴＣＴＣＴＣＣＴＡＣＡＡＧＣＴＴＴＣＣＣＡＧＡＡＡＧＧＡＴＡＣＡＧＣＴＧＧＡＧＴＣＡＧＴＴＴＡＧＴＧＡＴＧＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＣＡＧＧＡＣＴＧＡＧＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＧＧＡＣＴＧＡＡＴＣＧＧＡＧＡＴＧＧＡＧＡＣＣＣＣＣＡＧＴＧＣＣＡＴＣＡＡＴＧＧＣＡＡＣＣＣＡＴＣＣＴＧＧＣＡＣＣＴＧＧＣＡＧＡＣＡＧＣＣＣＣＧＣＧＧＴＧＡＡＴＧＧＡＧＣＣＡＣＴＧＧＣＣＡＣＡＧＣＡＧＣＡＧＴＴＴＧＧＡＴＧＣＣＣＧＧＧＡＧＧＴＧＡＴＣＣＣＣＡＴＧＧＣＡＧＣＡＧＴＡＡＡＧＣＡＡＧＣＧＣＴＧＡＧＧＧＡＧＧＣＡＧＧＣＧＡＣＧＡＧＴＴＴＧＡＡＣＴＧＣＧＧＴＡＣＣＧＧＣＧＧＧＣＡＴＴＣＡＧＴＧＡＣＣＴＧＡＣＡＴＣＣＣＡＧＣＴＣＣＡＣＡＴＣＡＣＣＣＣＡＧＧＧＡＣＡＧＣＡＴＡＴＣＡＧＡＧＣＴＴＴＧＡＡＣＡＧＧＴＡＧＴＧＡＡＴＧＡＡＣＴＣＴＴＣＣＧＧＧＡＴＧＧＧＧＴＡＡＡＣＴＧＧＧＧＴＣＧＣＡＴＴＧＴＧＧＣＣＴＴＴＴＴＣＴＣＣＴＴＣＧＧＣＧＧＧＧＣＡＣＴＧＴＧＣＧＴＧＧＡＡＡＧＣＧＴＡＧＡＣＡＡＧＧＡＧＡＴＧＣＡＧＧＴＡＴＴＧＧＴＧＡＧＴＣＧＧＡＴＣＧＣＡＧＣＴＴＧＧＡＴＧＧＣＣＡＣＴＴＡＣＣＴＧＡＡＴＧＡＣＣＡＣＣＴＡＧＡＧＣＣＴＴＧＧＡＴＣＣＡＧＧＡＧＡＡＣＧＧＣＧＧＣＴＧＧＧＡＴＡＣＴＴＴＴＧＴＧＧＡＡＣＴＣＴＡＴＧＧＧＡＡＣＡＡＴＧＣＡＧＣＡＧＣＣＧＡＧＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＧＣＣＡＧＧＡＡＣＧＣＴＴＣＡＡＣＣＧＣＴＧＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＧＧＣＡＴＧＡＣＴＧＴＧＧＣＣＧＧＣＧＴＧＧＴＴＣＴＧＣＴＧＧＧＣＴＣＡＣＴＣＴＴＣＡＧＴＣＧＧＡＡＡｔｇＡ－３（ＳＥＱＩＤＮＯ：９）

ＢＣＬ６およびＢｃｌ－ｘＬを含む発現構築物の別の例が下記である。一重下線部がＢＣＬ６であり、下線のない部分がＰ２Ａであり、二重下線部がＢｃＬ－ｘＬである：

Ｂｃｌ－ｘｌとともにＢＣＬ６を含む構築物（Ｌ５ｘ（ＭＳＣＶ－ＢＣＬ６－Ｐ２Ａ－ＢＣＬ－ｘｌ－Ｔ２Ａ－ｒｔＴＡ）；図２１を参照のこと）の例が下記である。一般構造は、以下のとおりである：

ＮＮＮＮ－ＣＭＶプロモーターＮＮ－ＨＩＶ－ＬＴＲ－ＨＩＶ１＿プシーパック－スペーサー－ＲＲＥ－スペーサー－ｃＰＰＴ－ＭＳＣＶプロモーター－ＢＣＬ－６ＷＴ－Ｐ２Ａ－ＢＣＬ－ｘＬ－Ｔ２Ａ－ｒｔＴＡ－ＷＰＲＥ－Ｕ３ＰＰＴ－ＨＩＶ－ＬＴＲ－ｂＧＨｐＡ－ＳＶ４０複製開始点－プラスミド複製開始点－Ａｍｐｉｃｉｎ耐性遺伝子－ＡｍｐＲ＿プロモーター－ＮＮＮＮ。下記（および図２１）の構築物の特定のドメインの具体的な配列は、下記の配列番号１１のすぐ後に示す：

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ＣＭＶプロモーター

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ＨＩＶＬＴＲ

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ＨＩＶ１プシーパック

ＴＧＡＧＴＡＣＧＣＣＡＡＡＡＡＴＴＴＴＧＡＣＴＡＧＣＧＧＡＧＧＣＴＡＧＡＡＧＧＡＧＡＧＡＧ（配列番号６３）

ＲＲＥ

ＡＧＧＡＧＣＴＴＴＧＴＴＣＣＴＴＧＧＧＴＴＣＴＴＧＧＧＡＧＣＡＧＣＡＧＧＡＡＧＣＡＣＴＡＴＧＧＧＣＧＣＡＧＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＣＴＧＡＣＧＧＴＡＣＡＧＧＣＣＡＧＡＣＡＡＴＴＡＴＴＧＴＣＴＧＧＴＡＴＡＧＴＧＣＡＧＣＡＧＣＡＧＡＡＣＡＡＴＴＴＧＣＴＧＡＧＧＧＣＴＡＴＴＧＡＧＧＣＧＣＡＡＣＡＧＣＡＴＣＴＧＴＴＧＣＡＡＣＴＣＡＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣＡＴＣＡＡＧＣＡＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＡＡＴＣＣＴＧＧＣＴＧＴＧＧＡＡＡＧＡＴＡＣＣＴＡＡＡＧＧＡＴＣＡＡＣＡＧＣＴＣＣＴ（配列番号６４）

ｃＰＰＴ

ＡＡＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡ（配列番号６５）

ＭＳＣＶプロモーター

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ＢＣＬ－６ＷＴ

ＡＴＧｇｃｃｔｃｇｃｃｇｇｃｔｇａｃａｇｃｔｇｔａｔｃｃａｇｔｔｃａｃｃｃｇｃｃａｔｇｃｃａｇｔｇａｔｇｔｔｃｔｔｃｔｃａａｃｃｔｔａａｔｃｇｔｃｔｃｃｇｇａｇｔｃｇａｇａｃａｔｃｔｔｇａｃｔｇａｔｇｔｔｇｔｃａｔｔｇｔｔｇｔｇａｇｃｃｇｔｇａｇｃａｇｔｔｔａｇａｇｃｃｃａｔａａａａｃｇｇｔｃｃｔｃａｔｇｇｃｃｔｇｃａｇｔｇｇｃｃｔｇｔｔｃｔａｔａｇｃａｔｃｔｔｔａｃａｇａｃｃａｇｔｔｇａａａｔｇｃａａｃｃｔｔａｇｔｇｔｇａｔｃａａｔｃｔａｇａｔｃｃｔｇａｇａｔｃａａｃｃｃｔｇａｇｇｇａｔｔｃｔｇｃａｔｃｃｔｃｃｔｇｇａｃｔｔｃａｔｇｔａｃａｃａｔｃｔｃｇｇｃｔｃａａｔｔｔｇｃｇｇｇａｇｇｇｃａａｃａｔｃａｔｇｇｃｔｇｔｇａｔｇｇｃｃａｃｇｇｃｔａｔｇｔａｃｃｔｇｃａｇａｔｇｇａｇｃａｔｇｔｔｇｔｇｇａｃａｃｔｔｇｃｃｇｇａａｇｔｔｔａｔｔａａｇｇｃｃａｇｔｇａａｇｃａｇａｇａｔｇｇｔｔｔｃｔｇｃｃａｔｃａａｇｃｃｔｃｃｔｃｇｔｇａａｇａｇｔｔｃｃｔｃａａｃａｇｃｃｇｇａｔｇｃｔｇａｔｇｃｃｃｃａａｇａｃａｔｃａｔｇｇｃｃｔａｔｃｇｇｇｇｔｃｇｔｇａｇｇｔｇｇｔｇｇａｇａａｃａａｃｃｔｇｃｃａｃｔｇａｇｇａｇｃｇｃｃｃｃｔｇｇｇｔｇｔｇａｇａｇｃａｇａｇｃｃｔｔｔｇｃｃｃｃｃａｇｃｃｔｇｔａｃａｇｔｇｇｃｃｔｇｔｃｃａｃａｃｃｇｃｃａｇｃｃｔｃｔｔａｔｔｃｃａｔｇｔａｃａｇｃｃａｃｃｔｃｃｃｔｇｔｃａｇｃａｇｃｃｔｃｃｔｃｔｔｃｔｃｃｇａｔｇａｇｇａｇｔｔｔｃｇｇｇａｔｇｔｃｃｇｇａｔｇｃｃｔｇｔｇｇｃｃａａｃｃｃｃｔｔｃｃｃｃａａｇｇａｇｃｇｇｇｃａｃｔｃｃｃａｔｇｔｇａｔａｇｔｇｃｃａｇｇｃｃａｇｔｃｃｃｔｇｇｔｇａｇｔａｃａｇｃｃｇｇｃｃｇａｃｔｔｔｇｇａｇｇｔｇｔｃｃｃｃｃａａｔｇｔｇｔｇｃｃａｃａｇｃａａｔａｔｃｔａｔｔｃａｃｃｃａａｇｇａａａｃａａｔｃｃｃａｇａａｇａｇｇｃａｃｇａａｇｔｇａｔａｔｇｃａｃｔａｃａｇｔｇｔｇｇｃｔｇａｇｇｇｃｃｔｃａａａｃｃｔｇｃｔｇｃｃｃｃｃｔｃａｇｃｃｃｇａａａｔｇｃｃｃｃｃｔａｃｔｔｃｃｃｔｔｇｔｇａｃａａｇｇｃｃａｇｃａａａｇａａｇａａｇａｇａｇａｃｃｃｔｃｃｔｃｇｇａａｇａｔｇａｇａｔｔｇｃｃｃｔｇｃａｔｔｔｃｇａｇｃｃｃｃｃｃａａｔｇｃａｃｃｃｃｔｇａａｃｃｇｇａａｇｇｇｔｃｔｇｇｔｔａｇｔｃｃａｃａｇａｇｃｃｃｃｃａｇａａａｔｃｔｇａｃｔｇｃｃａｇｃｃｃａａｃｔｃｇｃｃｃａｃａｇａｇｔｃｃｔｇｃａｇｃａｇｔａａｇａａｔｇｃｃｔｇｃａｔｃｃｔｃｃａｇｇｃｔｔｃｔｇｇｃｔｃｃｃｃｔｃｃａｇｃｃａａｇａｇｃｃｃｃａｃｔｇａｃｃｃｃａａａｇｃｃｔｇｃａａｃｔｇｇａａｇａａａｔａｃａａｇｔｔｃａｔｃｇｔｇｃｔｃａａｃａｇｃｃｔｃａａｃｃａｇａａｔｇｃｃａａａｃｃａｇａｇｇｇｇｃｃｔｇａｇｃａｇｇｃｔｇａｇｃｔｇｇｇｃｃｇｃｃｔｔｔｃｃｃｃａｃｇａｇｃｃｔａｃａｃｇｇｃｃｃｃａｃｃｔｇｃｃｔｇｃｃａｇｃｃａｃｃｃａｔｇｇａｇｃｃｔｇａｇａａｃｃｔｔｇａｃｃｔｃｃａｇｔｃｃｃｃａａｃｃａａｇｃｔｇａｇｔｇｃｃａｇｃｇｇｇｇａｇｇａｃｔｃｃａｃｃａｔｃｃｃａｃａａｇｃｃａｇｃｃｇｇｃｔｃａａｔａａｃａｔｃｇｔｔａａｃａｇｇｔｃｃａｔｇａｃｇｇｇｃｔｃｔｃｃｃｃｇｃａｇｃａｇｃａｇｃｇａｇａｇｃｃａｃｔｃａｃｃａｃｔｃｔａｃａｔｇｃａｃｃｃｃｃｃｇａａｇｔｇｃａｃｇｔｃｃｔｇｃｇｇｃｔｃｔｃａｇｔｃｃｃｃａｃａｇｃａｔｇｃａｇａｇａｔｇｔｇｃｃｔｃｃａｃａｃｃｇｃｔｇｇｃｃｃｃａｃｇｔｔｃｃｃｔｇａｇｇａｇａｔｇｇｇａｇａｇａｃｃｃａｇｔｃｔｇａｇｔａｃｔｃａｇａｔｔｃｔａｇｃｔｇｔｇａｇａａｃｇｇｇｇｃｃｔｔｃｔｔｃｔｇｃａａｔｇａｇｔｇｔｇａｃｔｇｃｃｇｃｔｔｃｔｃｔｇａｇｇａｇｇｃｃｔｃａｃｔｃａａｇａｇｇｃａｃａｃｇｃｔｇｃａｇａｃｃｃａｃａｇｔｇａｃａａａｃｃｃｔａｃａａｇｔｇｔｇａｃｃｇｃｔｇｃｃａｇｇｃｃｔｃｃｔｔｃｃｇｃｔａｃａａｇｇｇｃａａｃｃｔｃｇｃｃａｇｃｃａｃａａｇａｃｃｇｔｃｃａｔａｃｃｇｇｔｇａｇａａａｃｃｃｔａｔｃｇｔｔｇｃａａｃａｔｃｔｇｔｇｇｇｇｃｃｃａｇｔｔｃａａｃｃｇｇｃｃａｇｃｃａａｃｃｔｇａａａａｃｃｃａｃａｃｔｃｇａａｔｔｃａｃｔｃｔｇｇａｇａｇａａｇｃｃｃｔａｃａａａｔｇｃｇａａａｃｃｔｇｃｇｇａｇｃｃａｇａｔｔｔｇｔａｃａｇｇｔｇｇｃｃｃａｃｃｔｃｃｇｔｇｃｃｃａｔｇｔｇｃｔｔａｔｃｃａｃａｃｔｇｇｔｇａｇａａｇｃｃｃｔａｔｃｃｃｔｇｔｇａａａｔｃｔｇｔｇｇｃａｃｃｃｇｔｔｔｃｃｇｇｃａｃｃｔｔｃａｇａｃｔｃｔｇａａｇａｇｃｃａｃｃｔｇｃｇａａｔｃｃａｃａｃａｇｇａｇａｇａａａｃｃｔｔａｃｃａｔｔｇｔｇａｇａａｇｔｇｔａａｃｃｔｇｃａｔｔｔｃｃｇｔｃａｃａａａａｇｃｃａｇｃｔｇｃｇａｃｔｔｃａｃｔｔｇｃｇｃｃａｇａａｇｃａｔｇｇｃｇｃｃａｔｃａｃｃａａｃａｃｃａａｇｇｔｇｃａａｔａｃｃｇｃｇｔｇｔｃａｇｃｃａｃｔｇａｃｃｔｇｃｃｔｃｃｇｇａｇｃｔｃｃｃｃａａａｇｃｃｔｇｃ（配列番号：６７）

Ｐ２Ａ

ＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＣＴＡＣＴＡＡＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＡＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＣＣＣＴＧＧＡＣＣＴ（配列番号６８）

ＢＣＬ－ｘＬ

ＡＧＡＴＣＴＧＧＡＡＴＧＴＣＴＣＡＧＡＧＣＡＡＣＣＧＧＧＡＧＣＴＧＧＴＧＧＴＴＧＡＣＴＴＴＣＴＣＴＣＣＴＡＣＡＡＧＣＴＴＴＣＣＣＡＧＡＡＡＧＧＡＴＡＣＡＧＣＴＧＧＡＧＴＣＡＧＴＴＴＡＧＴＧＡＴＧＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＣＡＧＧＡＣＴＧＡＧＧＣＣＣＣＡＧＡＡＧＧＧＡＣＴＧＡＡＴＣＧＧＡＧＡＴＧＧＡＧＡＣＣＣＣＣＡＧＴＧＣＣＡＴＣＡＡＴＧＧＣＡＡＣＣＣＡＴＣＣＴＧＧＣＡＣＣＴＧＧＣＡＧＡＣＡＧＣＣＣＣＧＣＧＧＴＧＡＡＴＧＧＡＧＣＣＡＣＴＧＧＣＣＡＣＡＧＣＡＧＣＡＧＴＴＴＧＧＡＴＧＣＣＣＧＧＧＡＧＧＴＧＡＴＣＣＣＣＡＴＧＧＣＡＧＣＡＧＴＡＡＡＧＣＡＡＧＣＧＣＴＧＡＧＧＧＡＧＧＣＡＧＧＣＧＡＣＧＡＧＴＴＴＧＡＡＣＴＧＣＧＧＴＡＣＣＧＧＣＧＧＧＣＡＴＴＣＡＧＴＧＡＣＣＴＧＡＣＡＴＣＣＣＡＧＣＴＣＣＡＣＡＴＣＡＣＣＣＣＡＧＧＧＡＣＡＧＣＡＴＡＴＣＡＧＡＧＣＴＴＴＧＡＡＣＡＧＧＴＡＧＴＧＡＡＴＧＡＡＣＴＣＴＴＣＣＧＧＧＡＴＧＧＧＧＴＡＡＡＣＴＧＧＧＧＴＣＧＣＡＴＴＧＴＧＧＣＣＴＴＴＴＴＣＴＣＣＴＴＣＧＧＣＧＧＧＧＣＡＣＴＧＴＧＣＧＴＧＧＡＡＡＧＣＧＴＡＧＡＣＡＡＧＧＡＧＡＴＧＣＡＧＧＴＡＴＴＧＧＴＧＡＧＴＣＧＧＡＴＣＧＣＡＧＣＴＴＧＧＡＴＧＧＣＣＡＣＴＴＡＣＣＴＧＡＡＴＧＡＣＣＡＣＣＴＡＧＡＧＣＣＴＴＧＧＡＴＣＣＡＧＧＡＧＡＡＣＧＧＣＧＧＣＴＧＧＧＡＴＡＣＴＴＴＴＧＴＧＧＡＡＣＴＣＴＡＴＧＧＧＡＡＣＡＡＴＧＣＡＧＣＡＧＣＣＧＡＧＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＧＣＣＡＧＧＡＡＣＧＣＴＴＣＡＡＣＣＧＣＴＧＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＧＧＣＡＴＧＡＣＴＧＴＧＧＣＣＧＧＣＧＴＧＧＴＴＣＴＧＣＴＧＧＧＣＴＣＡＣＴＣＴＴＣＡＧＴＣＧＧＡＡＡ（配列番号６９）

Ｔ２Ａ

ＧＧＣＡＧＴｇｇｃｇａｇｇｇｔａｇａｇｇｔｔｃｔｃｔｃｃｔｃａｃｔｔｇｔｇｇｔｇａｔｇｔｔｇａａｇａａａａｃｃｃｔｇｇｔｃｃａ（配列番号７０）

ｒｔＴＡ

ａｔｇｔｃｔａｇａｃｔｇｇａｃａａｇａｇｃａａａｇｔｃａｔａａａｃｇｇａｇｃｔｃｔｇｇａａｔｔａｃｔｃａａｔｇｇｔｇｔｃｇｇｔａｔｃｇａａｇｇｃｃｔｇａｃｇａｃａａｇｇａａａｃｔｃｇｃｔｃａａａａｇｃｔｇｇｇａｇｔｔｇａｇｃａｇｃｃｔａｃｃｃｔｇｔａｃｔｇｇｃａｃｇｔｇａａｇａａｃａａｇｃｇｇｇｃｃｃｔｇｃｔｃｇａｔｇｃｃｃｔｇｃｃａａｔｃｇａｇａｔｇｃｔｇｇａｃａｇｇｃａｔｃａｔａｃｃｃａｃｔｔｃｔｇｃｃｃｃｃｔｇｇａａｇｇｃｇａｇｔｃａｔｇｇｃａａｇａｃｔｔｔｃｔｇｃｇｇａａｃａａｃｇｃｃａａｇｔｃａｔａｃｃｇｃｔｇｔｇｃｔｃｔｃｃｔｃｔｃａｃａｔｃｇｃｇａｃｇｇｇｇｃｔａａａｇｔｇｃａｔｃｔｃｇｇｃａｃｃｃｇｃｃｃａａｃａｇａｇａａａｃａｇｔａｃｇａａａｃｃｃｔｇｇａａａａｔｃａｇｃｔｃｇｃｇｔｔｃｃｔｇｔｇｔｃａｇｃａａｇｇｃｔｔｃｔｃｃｃｔｇｇａｇａａｃｇｃａｃｔｇｔａｃｇｃｔｃｔｇｔｃｃｇｃｃｇｔｇｇｇｃｃａｃｔｔｔａｃａｃｔｇｇｇｃｔｇｃｇｔａｔｔｇｇａｇｇａａｃａｇｇａｇｃａｔｃａａｇｔａｇｃａａａａｇａｇｇａａａｇａｇａｇａｃａｃｃｔａｃｃａｃｃｇａｔｔｃｔａｔｇｃｃｃｃｃａｃｔｔｃｔｇａｇａｃａａｇｃａａｔｔｇａｇｃｔｇｔｔｃｇａｃｃｇｇｃａｇｇｇａｇｃｃｇａａｃｃｔｇｃｃｔｔｃｃｔｔｔｔｃｇｇｃｃｔｇｇａａｃｔａａｔｃａｔａｔｇｔｇｇｃｃｔｇｇａｇａａａｃａｇｃｔａａａｇｔｇｃｇａａａｇｃｇｇｃｇｇｇｃｃｇａｃｃｇａｃｇｃｃｃｔｔｇａｃｇａｔｔｔｔｇａｃｔｔａｇａｃａｔｇｃｔｃｃｃａｇｃｃｇａｔｇｃｃｃｔｔｇａｃｇａｃｔｔｔｇａｃｃｔｔｇａｔａｔｇｃｔｇｃｃｔｇｃｔｇａｃｇｃｔｃｔｔｇａｃｇａｔｔｔｔｇａｃｃｔｔｇａｃａｔｇｃｔｃｃｃｃｇｇｇｔａａＧＧＴｇＡ（配列番号７１）

ＷＰＲＥ

ＴＣＡＡＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＡＣＡＡＡＡＴＴＴＧＴＧＡＡＡＧＡＴＴＧＡＣＴＧＧＴＡＴＴＣＴＴＡＡＣＴＡＴＧＴＴＧＣＴＣＣＴＴＴＴＡＣＧＣＴＡＴＧＴＧＧＡＴＡＣＧＣＴＧＣＴＴＴＡＡＴＧＣＣＴＴＴＧＴＡＴＣＡＴＧＣＴＡＴＴＧＣＴＴＣＣＣＧＴＡＴＧＧＣＴＴＴＣＡＴＴＴＴＣＴＣＣＴＣＣＴＴＧＴＡＴＡＡＡＴＣＣＴＧＧＴＴＧＣＴＧＴＣＴＣＴＴＴＡＴＧＡＧＧＡＧＴＴＧＴＧＧＣＣＣＧＴＴＧＴＣＡＧＧＣＡＡＣＧＴＧＧＣＧＴＧＧＴＧＴＧＣＡＣＴＧＴＧＴＴＴＧＣＴＧＡＣＧＣＡＡＣＣＣＣＣＡＣＴＧＧＴＴＧＧＧＧＣＡＴＴＧＣＣＡＣＣＡＣＣＴＧＴＣＡＧＣＴＣＣＴＴＴＣＣＧＧＧＡＣＴＴＴＣＧＣＴＴＴＣＣＣＣＣＴＣＣＣＴＡＴＴＧＣＣＡＣＧＧＣＧＧＡＡＣＴＣＡＴＣＧＣＣＧＣＣＴＧＣＣＴＴＧＣＣＣＧＣＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＧＧＧＣＴＣＧＧＣＴＧＴＴＧＧＧＣＡＣＴＧＡＣＡＡＴＴＣＣＧＴＧＧＴＧＴＴＧＴＣＧＧＧＧＡＡＡＴＣＡＴＣＧＴＣＣＴＴＴＣＣＴＴＧＧＣＴＧＣＴＣＧＣＣＴＧＴＧＴＴＧＣＣＡＣＣＴＧＧＡＴＴＣＴＧＣＧＣＧＧＧＡＣＧＴＣＣＴＴＣＴＧＣＴＡＣＧＴＣＣＣＴＴＣＧＧＣＣＣＴＣＡＡＴＣＣＡＧＣＧＧＡＣＣＴＴＣＣＴＴＣＣＣＧＣＧＧＣＣＴＧＣＴＧＣＣＧＧＣＴＣＴＧＣＧＧＣＣＴＣＴＴＣＣＧＣＧＴＣＴＴＣＧＣＣＴＴＣＧＣＣＣＴＣＡＧＡＣＧＡＧＴＣＧＧＡＴＣＴＣＣＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＣＣＴＣＣＣＣＧＣＡ（配列番号７２）

Ｕ３ＰＰＴ

ＡＡＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡ（配列番号７３）

－ＨＩＶ－ＬＴＲ

ＧＧＧＴＣＴＣＴＣＴＧＧＴＴＡＧＡＣＣＡＧＡＴＣＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＣＴＡＡＣＴＡＧＧＧＡＡＣＣＣＡＣＴＧＣＴＴＡＡＧＣＣＴＣＡＡＴＡＡＡＧＣＴＴＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＣＴＴＣＡＡＧＴＡＧＴＧＴＧＴＧＣＣＣＧＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＡＣＴＣＴＧＧＴＡＡＣＴＡＧＡＧＡＴＣＣＣＴＣＡＧＡＣＣＣＴＴＴＴＡＧＴＣＡＧＴＧＴＧＧＡＡＡＡＴＣＴＣＴＡＧＣＡ（配列番号７４）

ｂＧＨｐＡ

ＣＧＡＣＴＧＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＴＧＴＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＴＴＧＡＣＣＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣＴＡＡＴＡＡＡＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣＡＴＣＧＣＡＴＴＧＴＣＴＧＡＧＴＡＧＧＴＧＴＣＡＴＴＣＴＡＴＴＣＴＧＧＧＧＧＧＴＧＧＧＧＴＧＧＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴＴＧＧＧＡＡＧＡＣＡＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡＴＧ（配列番号７５）

ＳＶ４０複製開始点

Ａｔｃｃｃｇｃｃｃｃｔａａｃｔｃｃｇｃｃｃａｇｔｔｃｃｇｃｃｃａｔｔｃｔｃｃｇｃｃｃｃａｔｇｇｃｔｇａｃｔａａｔｔｔｔｔｔｔｔａｔｔｔａｔｇｃａｇａｇｇｃｃｇａｇｇｃｃｇｃｃｔｃｇｇｃｃｔｃｔｇａｇｃｔａｔｔｃｃａｇａａｇｔａｇｔｇａｇｇａｇｇｃｔｔｔｔｔｔｇｇａｇｇｃｃ（配列番号７６）

プラスミド複製開始点

ＴＴＴＣＣＡＴＡＧＧＣＴＣＣＧＣＣＣＣＣＣＴＧＡＣＧＡＧＣＡＴＣＡＣＡＡＡＡＡＴＣＧＡＣＧＣＴＣＡＡＧＴＣＡＧＡＧＧＴＧＧＣＧＡＡＡＣＣＣＧＡＣＡＧＧＡＣＴＡＴＡＡＡＧＡＴＡＣＣＡＧＧＣＧＴＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＡＡＧＣＴＣＣＣＴＣＧＴＧＣＧＣＴＣＴＣＣＴＧＴＴＣＣＧＡＣＣＣＴＧＣＣＧＣＴＴＡＣＣＧＧＡＴＡＣＣＴＧＴＣＣＧＣＣＴＴＴＣＴＣＣＣＴＴＣＧＧＧＡＡＧＣＧＴＧＧＣＧＣＴＴＴＣＴＣＡＴＡＧＣＴＣＡＣＧＣＴＧＴＡＧＧＴＡＴＣＴＣＡＧＴＴＣＧＧＴＧＴＡＧＧＴＣＧＴＴＣＧＣＴＣＣＡＡＧＣＴＧＧＧＣＴＧＴＧＴＧＣＡＣＧＡＡＣＣＣＣＣＣＧＴＴＣＡＧＣＣＣＧＡＣＣＧＣＴＧＣＧＣＣＴＴＡＴＣＣＧＧＴＡＡＣＴＡＴＣＧＴＣＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＣＣＣＧＧＴＡＡＧＡＣＡＣＧＡＣＴＴＡＴＣＧＣＣＡＣＴＧＧＣＡＧＣＡＧＣＣＡＣＴＧＧＴＡＡＣＡＧＧＡＴＴＡＧＣＡＧＡＧＣＧＡＧＧＴＡＴＧＴＡＧＧＣＧＧＴＧＣＴＡＣＡＧＡＧＴＴＣＴＴＧＡＡＧＴＧＧＴＧＧＣＣＴＡＡＣＴＡＣＧＧＣＴＡＣＡＣＴＡＧＡＡＧＡＡＣＡＧＴＡＴＴＴＧＧＴＡＴＣＴＧＣＧＣＴＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＣＡＧＴＴＡＣＣＴＴＣＧＧＡＡＡＡＡＧＡＧＴＴＧＧＴＡＧＣＴＣＴＴＧＡＴＣＣＧＧＣＡＡＡＣＡＡＡＣＣＡＣＣＧＣＴＧＧＴＡＧＣＧＧＴＧＧＴＴＴＴＴＴＴＧＴＴＴＧＣＡＡＧＣＡＧＣＡＧＡＴＴＡＣＧＣＧＣＡＧＡＡＡＡＡＡＡＧＧＡＴＣＴＣＡＡ（配列番号７７）

アンピシリン耐性遺伝子

ＴＴＡＣＣＡＡＴＧＣＴＴＡＡＴＣＡＧＴＧＡＧＧＣＡＣＣＴＡＴＣＴＣＡＧＣＧＡＴＣＴＧＴＣＴＡＴＴＴＣＧＴＴＣＡＴＣＣＡＴＡＧＴＴＧＣＣＴＧＡＣＴＣＣＣＣＧＴＣＧＴＧＴＡＧＡＴＡＡＣＴＡＣＧＡＴＡＣＧＧＧＡＧＧＧＣＴＴＡＣＣＡＴＣＴＧＧＣＣＣＣＡＧＴＧＣＴＧＣＡＡＴＧＡＴＡＣＣＧＣＧＡＧＡＣＣＣＡＣＧＣＴＣＡＣＣＧＧＣＴＣＣＡＧＡＴＴＴＡＴＣＡＧＣＡＡＴＡＡＡＣＣＡＧＣＣＡＧＣＣＧＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＧＣＧＣＡＧＡＡＧＴＧＧＴＣＣＴＧＣＡＡＣＴＴＴＡＴＣＣＧＣＣＴＣＣＡＴＣＣＡＧＴＣＴＡＴＴＡＡＴＴＧＴＴＧＣＣＧＧＧＡＡＧＣＴＡＧＡＧＴＡＡＧＴＡＧＴＴＣＧＣＣＡＧＴＴＡＡＴＡＧＴＴＴＧＣＧＣＡＡＣＧＴＴＧＴＴＧＣＣＡＴＴＧＣＴＡＣＡＧＧＣＡＴＣＧＴＧＧＴＧＴＣＡＣＧＣＴＣＧＴＣＧＴＴＴＧＧＴＡＴＧＧＣＴＴＣＡＴＴＣＡＧＣＴＣＣＧＧＴＴＣＣＣＡＡＣＧＡＴＣＡＡＧＧＣＧＡＧＴＴＡＣＡＴＧＡＴＣＣＣＣＣＡＴＧＴＴＧＴＧＣＡＡＡＡＡＡＧＣＧＧＴＴＡＧＣＴＣＣＴＴＣＧＧＴＣＣＴＣＣＧＡＴＣＧＴＴＧＴＣＡＧＡＡＧＴＡＡＧＴＴＧＧＣＣＧＣＡＧＴＧＴＴＡＴＣＡＣＴＣＡＴＧＧＴＴＡＴＧＧＣＡＧＣＡＣＴＧＣＡＴＡＡＴＴＣＴＣＴＴＡＣＴＧＴＣＡＴＧＣＣＡＴＣＣＧＴＡＡＧＡＴＧＣＴＴＴＴＣＴＧＴＧＡＣＴＧＧＴＧＡＧＴＡＣＴＣＡＡＣＣＡＡＧＴＣＡＴＴＣＴＧＡＧＡＡＴＡＧＴＧＴＡＴＧＣＧＧＣＧＡＣＣＧＡＧＴＴＧＣＴＣＴＴＧＣＣＣＧＧＣＧＴＣＡＡＴＡＣＧＧＧＡＴＡＡＴＡＣＣＧＣＧＣＣＡＣＡＴＡＧＣＡＧＡＡＣＴＴＴＡＡＡＡＧＴＧＣＴＣＡＴＣＡＴＴＧＧＡＡＡＡＣＧＴＴＣＴＴＣＧＧＧＧＣＧＡＡＡＡＣＴＣＴＣＡＡＧＧＡＴＣＴＴＡＣＣＧＣＴＧＴＴＧＡＧＡＴＣＣＡＧＴＴＣＧＡＴＧＴＡＡＣＣＣＡＣＴＣＧＴＧＣＡＣＣＣＡＡＣＴＧＡＴＣＴＴＣＡＧＣＡＴＣＴＴＴＴＡＣＴＴＴＣＡＣＣＡＧＣＧＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧＡＧＣＡＡＡＡＡＣＡＧＧＡＡＧＧＣＡＡＡＡＴＧＣＣＧＣＡＡＡＡＡＡＧＧＧＡＡＴＡＡＧＧＧＣＧＡＣＡＣＧＧＡＡＡＴＧＴＴＧＡＡＴＡＣＴＣＡＴ（配列番号７８）

ＡｍｐＲ＿プロモーター

ＡＴＴＧＴＣＴＣＡＴＧＡＧＣＧＧＡＴＡＣＡＴＡＴＴＴＧＡＡ（配列番号７９）

さらなる態様において、本開示は、特定の器官部位または腫瘍マーカーへの標的化に好都合な性質を付与するように遺伝的に改変され得る無限免疫細胞を提供する。その無限免疫細胞は、重篤な有害事象が起きた場合に患者から無限免疫細胞を排除するために使用され得る１つ以上の自殺遺伝子または排除遺伝子を発現し得る。その無限免疫細胞は、インビボで適用するために無限Ｔ細胞の増殖を維持または強化し得るＩＬ－２および／またはＩＬ－１５をコードする遺伝子を含む１つ以上の遺伝子を発現し得る。ＩＬ－２および／またはＩＬ－１５の発現は、構成的発現であり得るか、または制御可能（例えば、ドキシサイクリンで制御可能（Ｔｅｔ－ｏｎまたはＴｅｔ－ｏｆｆ））であり得る。その細胞は、他の１つ以上の他のサイトカイン（例えば、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１など）；１つ以上のケモカインレセプター（例えば、ＣＣＲ１、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ７（ＡＣＫＲ３）、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＣＲＬ２（ＡＣＫＲ５）など）および／または１つ以上の他のケモカイン（例えば、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ４Ｌ１など）を発現するように操作され得る。

無限免疫細胞は、腫瘍または感染症を標的化する抗原特異的ＣＡＲまたはＴＣＲを発現するように改変され得る。腫瘍を標的化する別のストラテジーは、細胞外ドメイン上にＦｃレセプターを有するＣＡＲを発現するように無限Ｔ細胞を改変することであり得、それらはその後、腫瘍マーカーに対するモノクローナル抗体とともに使用できるようになる。さらに、無限免疫細胞は、目的の器官部位へのこれらの細胞の輸送を優先的に指示するために、インテグリン、セレクチン、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する接着分子、カドヘリンおよびＣＤ４４ファミリーを含む特異的なケモカインレセプターおよび／または接着分子を発現するように改変され得る。

さらなる実施形態は、任意の種類の自殺遺伝子または排除遺伝子などの１つ以上の安全スイッチを有する無限免疫細胞を提供する。いくつかの実施形態において、その系は、切断型ヒト上皮成長因子レセプター（ｈＥＧＦＲｔ）、ＨＳＶ－ＴＫ、ＳＲ３９変異ＨＳＶ－ＴＫ、酵母ＣＤ遺伝子またはその変異ＣＤ２０を使用し得る。ｈＥＧＦＲｔが使用される場合、この遺伝子は、無限Ｔ細胞が必要とされなくなったときに、セツキシマブなどのＦＤＡが承認したモノクローナル抗体によって認識され、排除される特性を無限Ｔ細胞に与えることができる。例えば、この遺伝子は、治療用の無限免疫細胞を注射した後に重篤な有害事象が起きたとき、安全スイッチとして働くことができる。ｈＥＧＦＲｔは、安全スイッチとして働くことに加えて、ＣＡＲ陽性細胞を濃縮するためのマーカーおよび患者に注入した後にこれらの細胞を追跡するためのマーカーとしても働くこともできる。

切断型ＥＧＦＲの一例が下記であり、この場合、ＥＧＦＲのドメイン１および２が欠失している：

ＤＮＡ配列：５－ＡＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＴＧＡＣＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＣＧＡＧＣＴＧＣＣＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＴＴＣＣＴＧＡＧＧＡＡＡＧＴＧＴＧＴＡＡＴＧＧＣＡＴＣＧＧＣＡＴＣＧＧＣＧＡＧＴＴＴＡＡＧＧＡＣＡＧＣＣＴＧＴＣＣＡＴＣＡＡＣＧＣＣＡＣＡＡＡＴＡＴＣＡＡＧＣＡＣＴＴＣＡＡＧＡＡＣＴＧＴＡＣＣＴＣＴＡＴＣＡＧＣＧＧＣＧＡＣＣＴＧＣＡＣＡＴＣＣＴＧＣＣＡＧＴＧＧＣＣＴＴＣＡＧＡＧＧＣＧＡＴＴＣＣＴＴＴＡＣＡＣＡＣＡＣＣＣＣＡＣＣＡＣＴＧＧＡＣＣＣＡＣＡＧＧＡＧＣＴＧＧＡＴＡＴＣＣＴＧＡＡＧＡＣＡＧＴＧＡＡＧＧＡＧＡＴＣＡＣＣＧＧＣＴＴＣＣＴＧＣＴＧＡＴＣＣＡＧＧＣＡＴＧＧＣＣＡＧＡＧＡＡＣＡＧＧＡＣＡＧＡＴＣＴＧＣＡＣＧＣＣＴＴＴＧＡＧＡＡＴＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＴＣＡＧＡＧＧＣＡＧＧＡＣＣＡＡＧＣＡＧＣＡＣＧＧＣＣＡＧＴＴＣＴＣＴＣＴＧＧＣＣＧＴＧＧＴＧＡＧＣＣＴＧＡＡＣＡＴＣＡＣＡＴＣＣＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＧＣＴＣＴＣＴＧＡＡＧＧＡＧＡＴＣＡＧＣＧＡＣＧＧＣＧＡＴＧＴＧＡＴＣＡＴＣＴＣＣＧＧＣＡＡＣＡＡＧＡＡＴＣＴＧＴＧＣＴＡＴＧＣＣＡＡＣＡＣＣＡＴＣＡＡＴＴＧＧＡＡＧＡＡＧＣＴＧＴＴＴＧＧＣＡＣＡＴＣＴＧＧＣＣＡＧＡＡＧＡＣＣＡＡＧＡＴＣＡＴＣＡＧＣＡＡＣＣＧＣＧＧＣＧＡＧＡＡＴＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＡＡＣＣＧＧＡＣＡＧＧＴＧＴＧＣＣＡＣＧＣＡＣＴＧＴＧＴＡＧＣＣＣＴＧＡＧＧＧＡＴＧＴＴＧＧＧＧＡＣＣＡＧＡＧＣＣＡＣＧＣＧＡＣＴＧＣＧＴＧＴＣＣＴＧＴＡＧＧＡＡＣＧＴＧＴＣＴＡＧＧＧＧＡＡＧＧＧＡＧＴＧＣＧＴＧＧＡＴＡＡＧＴＧＴＡＡＴＣＴＧＣＴＧＧＡＧＧＧＡＧＡＧＣＣＡＡＧＧＧＡＧＴＴＣＧＴＧＧＡＧＡＡＣＴＣＣＧＡＧＴＧＣＡＴＣＣＡＧＴＧＴＣＡＣＣＣＣＧＡＧＴＧＣＣＴＧＣＣＴＣＡＧＧＣＣＡＴＧＡＡＣＡＴＣＡＣＡＴＧＴＡＣＣＧＧＣＣＧＧＧＧＣＣＣＴＧＡＣＡＡＴＴＧＣＡＴＣＣＡＧＴＧＴＧＣＣＣＡＣＴＡＣＡＴＣＧＡＴＧＧＣＣＣＴＣＡＣＴＧＣＧＴＧＡＡＧＡＣＡＴＧＴＣＣＡＧＣＣＧＧＣＧＴＧＡＴＧＧＧＣＧＡＧＡＡＣＡＡＴＡＣＣＣＴＧＧＴＧＴＧＧＡＡＧＴＡＴＧＣＡＧＡＣＧＣＡＧＧＡＣＡＣＧＴＧＴＧＣＣＡＣＣＴＧＴＧＴＣＡＣＣＣＣＡＡＴＴＧＣＡＣＡＴＡＣＧＧＡＴＧＴＡＣＣＧＧＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＡＧＧＧＡＴＧＴＣＣＴＡＣＡＡＡＣＧＧＣＣＣＴＡＡＧＡＴＣＣＣＡＡＧＣＡＴＣＧＣＡＡＣＣＧＧＡＡＴＧＧＴＧＧＧＡＧＣＡＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＣＡＣＴＧＧＧＡＡＴＣＧＧＡＣＴＧＴＴＣＡＴＧＡＧＧＣＧＧＴＧＡ－３（配列番号１２）

ドメイン１および２を欠く切断型ＥＧＦＲのアミノ酸配列：

ＭＬＬＬＶＴＳＬＬＬＣＥＬＰＨＰＡＦＬＲＫＶＣＮＧＩＧＩＧＥＦＫＤＳＬＳＩＮＡＴＮＩＫＨＦＫＮＣＴＳＩＳＧＤＬＨＩＬＰＶＡＦＲＧＤＳＦＴＨＴＰＰＬＤＰＱＥＬＤＩＬＫＴＶＫＥＩＴＧＦＬＬＩＱＡＷＰＥＮＲＴＤＬＨＡＦＥＮＬＥＩＩＲＧＲＴＫＱＨＧＱＦＳＬＡＶＶＳＬＮＩＴＳＬＧＬＲＳＬＫＥＩＳＤＧＤＶＩＩＳＧＮＫＮＬＣＹＡＮＴＩＮＷＫＫＬＦＧＴＳＧＱＫＴＫＩＩＳＮＲＧＥＮＳＣＫＡＴＧＱＶＣＨＡＬＣＳＰＥＧＣＷＧＰＥＰＲＤＣＶＳＣＲＮＶＳＲＧＲＥＣＶＤＫＣＮＬＬＥＧＥＰＲＥＦＶＥＮＳＥＣＩＱＣＨＰＥＣＬＰＱＡＭＮＩＴＣＴＧＲＧＰＤＮＣＩＱＣＡＨＹＩＤＧＰＨＣＶＫＴＣＰＡＧＶＭＧＥＮＮＴＬＶＷＫＹＡＤＡＧＨＶＣＨＬＣＨＰＮＣＴＹＧＣＴＧＰＧＬＥＧＣＰＴＮＧＰＫＩＰＳＩＡＴＧＭＶＧＡＬＬＬＬＬＶＶＡＬＧＩＧＬＦＭＲＲ（配列番号１３）

ある特定の実施形態において、安全スイッチとしての融合タンパク質は、ＥＧＦＲ（ドメイン３）とＨＥＲ２（ドメインＩＶ）融合タンパク質との融合物である。そのような場合、ＥＧＦＲドメイン３が、抗体結合ドメインであり、ＨＥＲ２ドメイン４が、細胞外スペーサーおよび膜貫通ドメインを含む。具体的な実施形態において、この融合タンパク質は、ＣＡＲとは別個の分子である。

上記無限細胞におけるいずれか１つ以上の遺伝子または発現構築物は、例えばＴｅｔ－ｏｎまたはＴｅｔ－ｏｆｆシステムによって、ドキシサイクリンによって制御可能な様式で制御可能であってもよいし、そうでなくてもよい。Ｔｅｔ応答性プロモーターの配列の例としては、Ｔｅｔ応答性エレメントの７つのリピートを含む以下のＴｅｔ応答性プロモーターが挙げられる：

ｇａｇｔｔｔａｃｔｃｃｃｔａｔｃａｇｔｇａｔａｇａｇａａｃｇｔａｔｇｔｃｇａｇｔｔｔａｃｔｃｃｃｔａｔｃａｇｔｇａｔａｇａｇａａｃｇａｔｇｔｃｇａｇｔｔｔａｃｔｃｃｃｔａｔｃａｇｔｇａｔａｇａｇａａｃｇｔａｔｇｔｃｇａｇｔｔｔａｃｔｃｃｃｔａｔｃａｇｔｇａｔａｇａｇａａｃｇｔａｔｇｔｃｇａｇｔｔｔａｃｔｃｃｃｔａｔｃａｇｔｇａｔａｇａｇａａｃｇｔａｔｇｔｃｇａｇｔｔｔａｔｃｃｃｔａｔｃａｇｔｇａｔａｇａｇａａｃｇｔａｔｇｔｃｇａｇｔｔｔａｃｔｃｃｃｔａｔｃａｇｔｇａｔａｇａｇａａｃｇｔａｔｇｔｃｇａｇｇｔａｇｇｃｇｔｇｔａｃｇｇｔｇｇｇａｇｇｃｃｔａｔａｔａａｇｃａｇａｇｃｔｃｇｔｔｔａｇｔｇａａｃｃｇｔｃａｇａｔｃｇｃｃ（配列番号１４）

ｔｅｔシステムについて、ｔＴＡ（Ｔｅｔｏｆｆ）に対するＤＮＡ配列の例は、以下のとおりである：

ＡＴＧＡＧＣＣＧＣＣＴＧＧＡＴＡＡＧＴＣＣＡＡＡＧＴＧＡＴＣＡＡＣＴＣＴＧＣＣＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＴＧＡＡＴＧＡＡＧＴＧＧＧＣＡＴＣＧＡＧＧＧＣＣＴＧＡＣＣＡＣＡＣＧＧＡＡＧＣＴＧＧＣＣＣＡＧＡＡＧＣＴＧＧＧＡＧＴＧＧＡＧＣＡＧＣＣＡＡＣＣＣＴＧＴＡＣＴＧＧＣＡＣＧＴＧＡＡＧＡＡＣＡＡＧＣＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＧＧＡＣＧＣＣＣＴＧＧＣＣＡＴＣＧＡＧＡＴＧＣＴＧＧＡＴＣＧＧＣＡＣＣＡＣＡＣＡＣＡＣＴＴＣＴＧＣＣＣＣＣＴＧＧＡＧＧＧＡＧＡＧＴＣＣＴＧＧＣＡＧＧＡＴＴＴＣＣＴＧＣＧＧＡＡＣＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴＴＡＧＡＴＧＴＧＣＡＣＴＧＣＴＧＴＣＣＣＡＣＡＧＧＧＡＣＧＧＡＧＣＡＡＡＧＧＴＧＣＡＣＣＴＧＧＧＣＡＣＣＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＡＧＡＡＧＣＡＧＴＡＣＧＡＧＡＣＣＣＴＧＧＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＧＧＣＣＴＴＣＣＴＧＴＧＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＴＴＴＴＣＴＣＴＧＧＡＧＡＡＴＧＣＡＣＴＧＴＡＴＧＣＡＣＴＧＡＧＣＧＣＣＧＴＧＧＧＡＣＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＧＧＡＴＧＣＧＴＧＣＴＧＧＡＧＧＡＣＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＡＧＧＴＧＧＣＣＡＡＧＧＡＧＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＣＡＣＣＣＡＣＣＡＣＡＧＡＴＴＣＣＡＴＧＣＣＣＣＣＴＣＴＧＣＴＧＡＧＧＣＡＧＧＣＣＡＴＣＧＡＧＣＴＧＴＴＴＧＡＣＣＡＣＣＡＧＧＧＡＧＣＡＧＡＧＣＣＴＧＣＣＴＴＣＣＴＧＴＴＴＧＧＣＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＴＣＡＴＣＴＧＣＧＧＣＣＴＧＧＡＧＡＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＧＴＧＡＧＴＣＴＧＧＡＧＧＡＣＣＡＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＴＧＧＡＣＧＡＴＴＴＣＧＡＣＣＴＧＧＡＴＡＴＧＣＴＧＣＣＣＧＣＣＧＡＴＧＣＣＣＴＧＧＡＣＧＡＴＴＴＴＧＡＣＣＴＧＧＡＴＡＴＧＣＴＧＣＣＴＧＣＣＧＡＣＧＣＣＣＴＧＧＡＣＧＡＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＧＡＴＡＴＧＣＴＧＣＣＡＧＧＣａｃｃ（配列番号１５）

ｔＴＡ（Ｔｅｔｏｆｆ）のアミノ酸配列の例は、以下のとおりである：

ＭＳＲＬＤＫＳＫＶＩＮＳＡＬＥＬＬＮＥＶＧＩＥＧＬＴＴＲＫＬＡＱＫＬＧＶＥＱＰＴＬＹＷＨＶＫＮＫＲＡＬＬＤＡＬＡＩＥＭＬＤＲＨＨＴＨＦＣＰＬＥＧＥＳＷＱＤＦＬＲＮＮＡＫＳＦＲＣＡＬＬＳＨＲＤＧＡＫＶＨＬＧＴＲＰＴＥＫＱＹＥＴＬＥＮＱＬＡＦＬＣＱＱＧＦＳＬＥＮＡＬＹＡＬＳＡＶＧＨＦＴＬＧＣＶＬＥＤＱＥＨＱＶＡＫＥＥＲＥＴＰＴＴＤＳＭＰＰＬＬＲＱＡＩＥＬＦＤＨＱＧＡＥＰＡＦＬＦＧＬＥＬＩＩＣＧＬＥＫＱＬＫＣＥＳＧＧＰＡＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＰＡＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＰＡＤＡＬＤＤＬＤＬＤＭＬＰＧ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１６）

ｒｔＴＡ（Ｔｅｔｏｎ）のＤＮＡ配列の例は、以下のとおりである：

ａｔｇｔｃｔａｇａｃｔｇｇａｃａａｇａｇｃａａａｇｔｃａｔａａａｃｇｇａｇｃｔｃｔｇｇａａｔｔａｃｔｃａａｔｇｇｔｇｔｃｇｇｔａｔｃｇａａｇｇｃｃｔｇａｃｇａｃａａｇｇａａａｃｔｃｇｃｔｃａａａａｇｃｔｇｇｇａｇｔｔｇａｇｃａｇｃｃｔａｃｃｃｔｇｔａｃｔｇｇｃａｃｇｔｇａａｇａａｃａａｇｃｇｇｇｃｃｃｔｇｃｔｃｇａｔｇｃｃｃｔｇｃｃａａｔｃｇａｇａｔｇｃｔｇｇａｃａｇｇｃａｔｃａｔａｃｃｃａｃｔｔｃｔｇｃｃｃｃｃｔｇｇａａｇｇｃｇａｇｔｃａｔｇｇｃａａｇａｃｔｔｔｃｔｇｃｇｇａａｃａａｃｇｃｃａａｇｔｃａｔａｃｃｇｃｔｇｔｇｃｔｃｔｃｃｔｃｔｃａｃａｔｃｇｃｇａｃｇｇｇｇｃｔａａａｇｔｇｃａｔｃｔｃｇｇｃａｃｃｃｇｃｃｃａａｃａｇａｇａａａｃａｇｔａｃｇａａａｃｃｃｔｇｇａａａａｔｃａｇｃｔｃｇｃｇｔｔｃｃｔｇｔｇｔｃａｇｃａａｇｇｃｔｔｃｔｃｃｃｔｇｇａｇａａｃｇｃａｃｔｇｔａｃｇｃｔｃｔｇｔｃｃｇｃｃｇｔｇｇｇｃｃａｃｔｔｔａｃａｃｔｇｇｇｃｔｇｃｇｔａｔｔｇｇａｇｇａａｃａｇｇａｇｃａｔｃａａｇｔａｇｃａａａａｇａｇｇａａａｇａｇａｇａｃａｃｃｔａｃｃａｃｃｇａｔｔｃｔａｔｇｃｃｃｃｃａｃｔｔｃｔｇａｇａｃａａｇｃａａｔｔｇａｇｃｔｇｔｔｃｇａｃｃｇｇｃａｇｇｇａｇｃｃｇａａｃｃｔｇｃｃｔｔｃｃｔｔｔｔｃｇｇｃｃｔｇｇａａｃｔａａｔｃａｔａｔｇｔｇｇｃｃｔｇｇａｇａａａｃａｇｃｔａａａｇｔｇｃｇａａａｇｃｇｇｃｇｇｇｃｃｇａｃｃｇａｃｇｃｃｃｔｔｇａｃｇａｔｔｔｔｇａｃｔｔａｇａｃａｔｇｃｔｃｃｃａｇｃｃｇａｔｇｃｃｃｔｔｇａｃｇａｃｔｔｔｇａｃｃｔｔｇａｔａｔｇｃｔｇｃｃｔｇｃｔｇａｃｇｃｔｃｔｔｇａｃｇａｔｔｔｔｇａｃｃｔｔｇａｃａｔｇｃｔｃｃｃｃｇｇｇｔａａ（配列番号１７）

ｒｔＴＡ（Ｔｅｔｏｎ）のアミノ酸配列の例は、以下のとおりである：

ＭＳＲＬＤＫＳＫＶＩＮＧＡＬＥＬＬＮＧＶＧＩＥＧＬＴＴＲＫＬＡＱＫＬＧＶＥＱＰＴＬＹＷＨＶＫＮＫＲＡＬＬＤＡＬＰＩＥＭＬＤＲＨＨＴＨＦＣＰＬＥＧＥＳＷＱＤＦＬＲＮＮＡＫＳＹＲＣＡＬＬＳＨＲＤＧＡＫＶＨＬＧＴＲＰＴＥＫＱＹＥＴＬＥＮＱＬＡＦＬＣＱＱＧＦＳＬＥＮＡＬＹＡＬＳＡＶＧＨＦＴＬＧＣＶＬＥＥＱＥＨＱＶＡＫＥＥＲＥＴＰＴＴＤＳＭＰＰＬＬＲＱＡＩＥＬＦＤＲＱＧＡＥＰＡＦＬＦＧＬＥＬＩＩＣＧＬＥＫＱＬＫＣＥＳＧＧＰＴＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＰＡＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＰＡＤＡＬＤＤＦＤＬＤＭＬＰＧ（配列番号１８）

いくつかの態様において、無限免疫細胞は、増殖の維持または強化などのために、ＩＬ－２および／またはＩＬ－１５（例えば、誘導性ＩＬ－２および／またはＩＬ－１５）を含む１つ以上のサイトカインを発現するように操作されてもよい。しかしながら、具体的な場合においては、そのシステムにおけるいずれのサイトカインも、恒常的に制御され得る。例えば、無限免疫細胞は、自身の増殖を補助するために、ドキシサイクリンなどの誘導剤の存在下においてＩＬ－１５および／またはＩＬ－２を産生し得る。ドキシサイクリンの投与量を調整することによって、無限免疫細胞の生存および増殖を、インビボにおいて維持または制御できる。

特定のＩＬ－２配列が使用され得る。少なくともいくつかの場合において、ＩＬ－２には、ＤＮＡ配列の例が２つあり、その両方が、同じＩＬ－２アミノ酸配列をコードする。

ＩＬ－２のＤＮＡ配列１：

ＡＴＧＴＡＴＣＧＧＡＴＧＣＡＡＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＧＣＡＴＴＧＣＧＴＴＧＴＣＡＣＴＣＧＣＡＣＴＣＧＴＣＡＣＧＡＡＣＴＣＴＧＣＡＣＣＧＡＣＡＴＣＴＡＧＴＡＧＴＡＣＴＡＡＧＡＡＡＡＣＡＣＡＧＴＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＣＡＣＣＴＧＣＴＧＴＴＧＧＡＴＴＴＧＣＡＡＡＴＧＡＴＣＣＴＴＡＡＣＧＧＧＡＴＣＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＡＡＡＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＡＣＡＣＧＡＡＴＧＣＴＴＡＣＴＴＴＣＡＡＧＴＴＴＴＡＣＡＴＧＣＣＧＡＡＡＡＡＡＧＣＣＡＣＡＧＡＧＣＴＧＡＡＧＣＡＴＣＴＴＣＡＧＴＧＣＣＴＴＧＡＡＧＡＧＧＡＧＣＴＴＡＡＡＣＣＣＣＴＣＧＡＧＧＡＧＧＴＡＣＴＧＡＡＴＣＴＣＧＣＧＣＡＡＡＧＣＡＡＧＡＡＴＴＴＴＣＡＴＴＴＧＣＧＧＣＣＣＣＧＧＧＡＣＣＴＴＡＴＡＴＣＡＡＡＣＡＴＴＡＡＣＧＴＧＡＴＣＧＴＧＴＴＧＧＡＡＣＴＣＡＡＧＧＧＡＴＣＡＧＡＧＡＣＧＡＣＡＴＴＴＡＴＧＴＧＣＧＡＧＴＡＣＧＣＴＧＡＣＧＡＧＡＣＣＧＣＴＡＣＡＡＴＣＧＴＡＧＡＧＴＴＴＣＴＣＡＡＴＡＧＧＴＧＧＡＴＣＡＣＧＴＴＴＴＧＣＣＡＡＡＧＣＡＴＣＡＴＣＴＣＡＡＣＧＣＴＣ（配列番号１９）

ＩＬ－２のＤＮＡ配列２：

ＡＴＧＴＡＴＡＧＧＡＴＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＴＣＧＣＣＴＴＧＴＣＣＣＴＧＧＣＣＣＴＴＧＴＧＡＣＣＡＡＣＡＧＣＧＣＣＣＣＡＡＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＴＡＣＣＡＡＡＡＡＡＡＣＣＣＡＡＣＴＴＣＡＧＣＴＴＧＡＧＣＡＴＣＴＣＣＴＣＴＴＧＧＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＴＣＣＴＧＡＡＴＧＧＴＡＴＡＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＡＣＣＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＣＧＧＡＴＧＣＴＴＡＣＡＴＴＣＡＡＡＴＴＣＴＡＴＡＴＧＣＣＴＡＡＡＡＡＧＧＣＴＡＣＡＧＡＧＣＴＧＡＡＧＣＡＣＣＴＧＣＡＧＴＧＣＣＴＧＧＡＡＧＡＧＧＡＧＣＴＧＡＡＧＣＣＡＣＴＧＧＡＡＧＡＧＧＴＣＣＴＧＡＡＣＴＴＧＧＣＣＣＡＧＡＧＣＡＡＧＡＡＣＴＴＴＣＡＣＣＴＣＡＧＧＣＣＣＡＧＧＧＡＣＴＴＧＡＴＡＡＧＣＡＡＣＡＴＡＡＡＴＧＴＡＡＴＣＧＴＣＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＡＧＧＧＧＴＣＴＧＡＡＡＣＡＡＣＣＴＴＣＡＴＧＴＧＴＧＡＧＴＡＴＧＣＡＧＡＴＧＡＧＡＣＣＧＣＴＡＣＣＡＴＣＧＴＧＧＡＧＴＴＣＣＴＣＡＡＣＡＧＡＴＧＧＡＴＴＡＣＡＴＴＴＴＧＴＣＡＡＴＣＣＡＴＣＡＴＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＴＣＴ（配列番号２０）

ある特定の実施形態において、ある具体的なＩＬ－２アミノ酸配列が、上記細胞において使用される：

ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬ（配列番号２１）

ある特定の実施形態において、ある具体的なＩＬ－１５核酸ポリマー配列が、上記細胞において使用される：

ＡＴＧＧＧＣＣＴＧＡＣＣＴＣＴＣＡＧＣＴＧＣＴＧＣＣＡＣＣＣＣＴＧＴＴＣＴＴＴＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＧＴＧＣＣＧＧＣＡＡＴＴＴＣＧＴＧＣＡＣＧＧＣＧＣＣＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＴＧＴＧＡＴＣＴＣＴＧＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＴＣＴＧＡＴＣＣＡＧＡＧＣＡＴＧＣＡＣＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＡＴＡＣＡＧＡＧＴＣＣＧＡＴＧＴＧＣＡＣＣＣＴＴＣＴＴＧＣＡＡＧＧＴＧＡＣＡＧＣＣＡＴＧＡＡＧＴＧＴＴＴＴＣＴＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＡＧＧＴＣＡＴＣＴＣＴＣＴＧＧＡＧＡＧＣＧＧＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＴＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＴＣＴＧＡＴＣＡＴＣＣＴＧＧＣＣＡＡＣＡＡＴＡＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＣＡＡＣＧＧＣＡＡＴＧＴＧＡＣＡＧＡＧＴＣＣＧＧＣＴＧＣＡＡＧＧＡＧＴＧＴＧＡＧＧＡＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＧＧＡＧＴＴＣＣＴＧＣＡＧＴＣＣＴＴＴＧＴＧＣＡＣＡＴＣＧＴＧＣＡＧＡＴＧＴＴＴＡＴＣＡＡＴＡＣＣＴＣＴＴＧＡ（配列番号２２）

ある特定の実施形態において、ある具体的なＩＬ－１５アミノ酸配列が、上記細胞において使用される：

ＭＧＬＴＳＱＬＬＰＰＬＦＦＬＬＡＣＡＧＮＦＶＨＧＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号２３）

特定の場合において、上記免疫細胞は、ＩＬ－１５レセプターの一部または全部と融合したＩＬ－１５を含む。具体的な場合において、上記免疫細胞は、ＩＬ－１５レセプターアルファ単位のｓｕｓｈｉドメインと融合したＩＬ－１５を含み、その配列の例は、以下のとおりである：

ＭＡＰＲＲＡＲＧＣＲＴＬＧＬＰＡＬＬＬＬＬＬＬＲＰＰＡＴＲＧＩＴＣＰＰＰＭＳＶＥＨＡＤＩＷＶＫＳＹＳＬＹＳＲＥＲＹＩＣＮＳＧＦＫＲＫＡＧＴＳＳＬＴＥＣＶＬＮＫＡＴＮＶＡＨＷＴＴＰＳＬＫＣＩＲＤＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号２４）

ＩＬ－１５レセプターアルファ単位のｓｕｓｈｉドメインと融合したＩＬ－１５のＤＮＡ配列：

ＡＴＧＧＣＡＣＣＴＡＧＡＡＧＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡＴＧＴＡＧＡＡＣＡＣＴＧＧＧＡＣＴＧＣＣＡＧＣＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＴＴＧＴＴＧＣＴＧＣＴＧＡＧＡＣＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＴＣＧＣＧＧＡＡＴＣＡＣＴＴＧＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＡＴＧＡＧＴＧＴＧＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＡＣＡＴＴＴＧＧＧＴＣＡＡＧＴＣＣＴＡＣＴＣＴＣＴＧＴＡＴＴＣＣＣＧＧＧＡＧＡＧＡＴＡＴＡＴＡＴＧＴＡＡＣＴＣＴＧＧＴＴＴＣＡＡＡＣＧＣＡＡＧＧＣＡＧＧＣＡＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＴＡＣＣＧＡＧＴＧＴＧＴＧＣＴＴＡＡＣＡＡＧＧＣＡＡＣＡＡＡＴＧＴＧＧＣＴＣＡＣＴＧＧＡＣＡＡＣＡＣＣＴＴＣＴＣＴＧＡＡＧＴＧＣＡＴＴＡＧＡＧＡＴＧＧＡＧＧＣＧＧＡＧＧＡＴＣＡＧＧＴＧＧＡＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＧＧＧＴＧＧＡＴＣＡＡＡＴＴＧＧＧＴＧＡＡＣＧＴＡＡＴＴＴＣＣＧＡＣＣＴＧＡＡＡＡＡＧＡＴＣＧＡＡＧＡＴＣＴＣＡＴＴＣＡＡＡＧＣＡＴＧＣＡＴＡＴＣＧＡＴＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＡＴＡＣＣＧＡＧＡＧＣＧＡＴＧＴＣＣＡＣＣＣＡＴＣＣＴＧＣＡＡＡＧＴＴＡＣＧＧＣＧＡＴＧＡＡＡＴＧＣＴＴＣＣＴＧＣＴＣＧＡＧＣＴＣＣＡＧＧＴＴＡＴＴＴＣＴＣＴＧＧＡＧＡＧＣＧＧＧＧＡＴＧＣＣＴＣＣＡＴＣＣＡＣＧＡＴＡＣＴＧＴＣＧＡＧＡＡＣＣＴＣＡＴＴＡＴＴＣＴＧＧＣＣＡＡＴＡＡＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＡＧＣＡＡＴＧＧＣＡＡＴＧＴＧＡＣＴＧＡＡＴＣＡＧＧＴＴＧＣＡＡＧＧＡＧＴＧＣＧＡＧＧＡＧＣＴＣＧＡＡＧＡＧＡＡＡＡＡＣＡＴＡＡＡＡＧＡＡＴＴＣＣＴＧＣＡＡＴＣＣＴＴＴＧＴＣＣＡＴＡＴＣＧＴＡＣＡＧＡＴＧＴＴＴＡＴＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣ（配列番号２５）

無限免疫細胞は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２および／もしくはメソテリンなどの特異的な腫瘍マーカーを認識できる１つ以上のキメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）；ならびに／またはＥＢＶ、ＣＭＶもしくはＮＹ－ＥＳＯ－１に対するＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）などのＴＣＲを導入することによって、無限細胞に標的選択性を与えるように遺伝的に操作され得る。一例は、本明細書中の他の箇所で言及される「抗ＣＤ１９無限ＣＡＲＴ細胞」（ＣＤ１９ｉｎＣＡＲＴ）である。ＣＤ１９は、ほとんどすべての種類のＢ細胞リンパ腫またはＢ細胞白血病および正常なＢ細胞において発現される。ＣＤ１９ｉｎＣＡＲＴは、抗ＣＤ１９ＣＡＲを発現するレンチウイルスベクターまたは非ウイルスベクターを、選択された無限細胞に送達することによって作製される。

また、無限免疫細胞は、さらなる特性を付与するように遺伝的に操作され得、そのさらなる特性は、ｉ）阻害性レセプターまたは阻害性リガンドであるＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＰＤ－Ｌ１などをノックアウトまたはノックダウンすることによる、Ｔ細胞疲弊に対する抵抗性、ｉｉ）ＴＧＦ－βレセプターをノックアウトまたはノックダウンすることなどによる、免疫抑制機構に対する抵抗性、ｉｉｉ）ＴＣＲをノックアウトすることによる、移植片対宿主病の予防、ｉｖ）サイトカインまたは細胞傷害性分子などの表面分子または細胞内分子を発現することによる、有効性の改善、ならびにｖ）Ｔ細胞およびＮＫ細胞をはじめとした宿主免疫細胞による排除に対して抵抗性にすることによる、インビボにおける持続性の改善、などである。これは、宿主免疫細胞の機能を抑制または低減するために、ＭＨＣ分子をノックアウトもしくはノックダウンすること、または無限免疫細胞において表面リガンドまたは他の表面分子もしくは細胞内分子を発現することによって達成され得る。

無限免疫細胞は、特定の方法によってまたは特定の条件下において作製され得る。例えば、具体的な実施形態において、作製中の無限免疫細胞は、その作製の間に、１つ以上の特定の作用物質に供されてもよく、その１つ以上の特定の作用物質は、少なくともそれへの曝露がない場合の有効性と比べて、作製時にその細胞の有効性を高める作用物質である。例えば、いくつかの場合において、無限Ｔ細胞を作製および拡大するために、ＩＬ－２が使用される。具体的な実施形態において、サイトカイン（ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３、ＩＦＮ－ガンマ、ＴＮＦ－アルファなど）および／またはケモカインの１つ以上の異なる組み合わせが、特定の表現型および特定の機能を有する無限Ｔ細胞を調製するために使用され得る。

ＩＶ．遺伝的に操作された抗原レセプター
本開示の免疫細胞は、１つ以上の抗原レセプター（例えば、１つ以上の操作されたＴＣＲおよび／または１つ以上のＣＡＲ）を発現するように遺伝的に操作されてもよいし、されなくてもよい。例えば、それらの免疫細胞は、癌抗原または微生物抗原（病原性抗原を含む）に対する抗原特異性を有するＣＡＲおよび／またはＴＣＲを発現するように改変され得る。複数のＣＡＲおよび／またはＴＣＲ（例えば、種々の抗原に対するもの）が、それらの免疫細胞に付加され得る。いくつかの態様において、免疫細胞は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９などの遺伝子編集方法を用いて阻害性遺伝子の遺伝子座にＣＡＲまたはＴＣＲをノックインすることによって、ＣＡＲまたはＴＣＲを発現するように操作される。

好適な改変方法は、当該分野で公知である。例えば、ＳａｍｂｒｏｏｋａｎｄＡｕｓｕｂｅｌ，前出を参照のこと。例えば、上記細胞は、Ｈｅｅｍｓｋｅｒｋｅｔａｌ．，２００８およびＪｏｈｎｓｏｎｅｔａｌ．，２００９に記載されている形質導入法を用いて、癌抗原に対する抗原特異性を有するＴＣＲを発現するように形質導入され得る。

レトロウイルスによって形質導入されたＴＣＲ鎖と内在性のＴＣＲ鎖との対形成によって引き起こされる自己反応性に関する長期的な問題を克服する選択肢として、完全長ＴＣＲαおよびβ（またはγおよびδ）鎖をコードするＲＮＡのエレクトロポレーションを使用することができる。そのような代替の対形成が、一過性のトランスフェクションストラテジーにおいて起きたとしても、導入されたＴＣＲαおよびβ鎖は、一過性に発現されるだけなので、生成される可能性がある自己反応性Ｔ細胞は、しばらくするとこの自己反応性を失う。導入されたＴＣＲαおよびβ鎖の発現が減少すると、正常な自己のＴ細胞だけが残る。これは、完全長ＴＣＲ鎖が、安定したレトロウイルス形質導入によって導入されたときは当てはまらず、導入されたＴＣＲ鎖は失われることはなく、患者に絶えず自己反応性が存在するようになる。

いくつかの実施形態において、上記細胞は、１つ以上の抗原レセプターをコードする、遺伝子操作を介して導入された１つ以上の核酸ポリマー、およびそのような核酸ポリマーの遺伝的に操作された産物を含む。いくつかの実施形態において、それらの核酸ポリマーは、異種であり、すなわち、正常には、細胞または細胞から得られるサンプルに存在しない（例えば、別の生物または細胞から得られ、それは、例えば、操作されている細胞および／またはそのような細胞が由来する生物において通常見られない）。いくつかの実施形態において、それらの核酸ポリマーは、自然界に見られない核酸ポリマー（例えばキメラ）など、天然に存在しない。

いくつかの実施形態において、上記ＣＡＲは、１つ以上の抗原に特異的に結合する細胞外の抗原認識ドメインを含む。いくつかの実施形態において、その抗原は、特定の癌細胞を含む細胞表面上に発現されるタンパク質、脂質または炭水化物である。いくつかの実施形態において、上記ＣＡＲは、ＴＣＲ様ＣＡＲであり、抗原は、ＴＣＲと同様に主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子の状況において細胞表面上で認識される、プロセシングを受けたペプチド抗原（例えば、細胞内タンパク質のペプチド抗原）である。

ＣＡＲおよび組換えＴＣＲをはじめとした例示的な抗原レセプター、ならびにそれらのレセプターを操作するための方法およびそれらのレセプターを細胞に導入するための方法としては、例えば、国際特許出願公開番号ＷＯ２０００１４２５７、ＷＯ２０１３１２６７２６、ＷＯ２０１２／１２９５１４、ＷＯ２０１４０３１６８７、ＷＯ２０１３／１６６３２１、ＷＯ２０１３／０７１１５４、ＷＯ２０１３／１２３０６１、米国特許出願公開第２００２１３１９６０号、同第２０１３２８７７４８号、同第２０１３０１４９３３７号、米国特許第６，４５１，９９５号、同第７，４４６，１９０号、同第８，２５２，５９２号、同第８，３３９，６４５号、同第８，３９８，２８２号、同第７，４４６，１７９号、同第６，４１０，３１９号、同第７，０７０，９９５号、同第７，２６５，２０９号、同第７，３５４，７６２号、同第７，４４６，１９１号、同第８，３２４，３５３号および同第８，４７９，１１８号、ならびに欧州特許出願番号ＥＰ２５３７４１６に記載されているもの、および／またはＳａｄｅｌａｉｎｅｔａｌ．，２０１３；Ｄａｖｉｌａｅｔａｌ．，２０１３；Ｔｕｒｔｌｅｅｔａｌ．，２０１２；Ｗｕｅｔａｌ．，２０１２によって記載されたものが挙げられる。いくつかの態様において、遺伝的に操作された抗原レセプターには、米国特許第７，４４６，１９０号に記載されているようなＣＡＲ、および国際特許出願公開番号ＷＯ／２０１４０５５６６８Ａｌに記載されているものが含まれる。

Ａ．キメラ抗原レセプター
いくつかの実施形態において、上記ＣＡＲは、ａ）細胞内のシグナル伝達ドメイン、ｂ）膜貫通ドメイン、ｃ）抗原結合領域を含む細胞外のドメイン、および必要に応じてｄ）１つ以上の共刺激ドメインを含む。

いくつかの実施形態において、操作された抗原レセプターには、活性化型または刺激型のＣＡＲ、共刺激型のＣＡＲ（ＷＯ２０１４／０５５６６８を参照のこと）および／または阻害型のＣＡＲ（ｉＣＡＲ、Ｆｅｄｏｒｏｖｅｔａｌ．，２０１３を参照のこと）をはじめとしたＣＡＲが含まれる。それらのＣＡＲは、一般に、１つ以上の細胞内のシグナル伝達構成要素に、いくつかの態様ではリンカーおよび／または膜貫通ドメインを介して連結された、細胞外の抗原（またはリガンド）結合ドメインを含む。そのような分子は、通常、天然の抗原レセプターを介するシグナル、共刺激レセプターとともにそのようなレセプターを介するシグナル、および／または共刺激レセプターのみを介するシグナルを模倣するかまたはまねる。

本開示のある特定の実施形態は、細胞内のシグナル伝達ドメイン、膜貫通ドメイン、および１つ以上のシグナル伝達モチーフを含む細胞外のドメインを含む、抗原特異的ＣＡＲポリペプチド（免疫原性を低減するためにヒト化されたＣＡＲ（ｈＣＡＲ）を含む）をコードする核酸ポリマーを含む核酸ポリマーの使用に関する。ある特定の実施形態において、そのＣＡＲは、１つ以上の抗原の間で共有される空間を含むエピトープを認識し得る。ある特定の実施形態において、結合領域は、モノクローナル抗体の相補性決定領域、モノクローナル抗体の可変領域、および／またはそれらの抗原結合フラグメントを含み得る。別の実施形態において、その特異性は、レセプターに結合するペプチド（例えば、サイトカイン）に由来する。

ヒトＣＡＲ核酸ポリマーは、ヒト患者に対する細胞免疫療法を増強するために使用されるヒト遺伝子であり得ると企図される。具体的な実施形態において、本発明は、ＣＡＲの完全長ｃＤＮＡまたはコード領域を含む。その抗原結合領域またはドメインは、特定のヒトモノクローナル抗体に由来する一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）のＶ_Ｈ鎖およびＶ_Ｌ鎖のフラグメント（例えば、参照により本明細書中に援用される米国特許第７，１０９，３０４号に記載されているもの）を含み得る。そのフラグメントは、ヒト抗原特異的抗体の任意の数の異なる抗原結合ドメインでもあり得る。より具体的な実施形態において、そのフラグメントは、ヒト細胞における発現のためにヒトのコドン使用頻度に最適化された配列によってコードされる抗原特異的ｓｃＦｖである。

配置は、多量体であり得る（例えば、ダイアボディまたは多量体）。その多量体は、軽鎖および重鎖の可変部分がダイアボディに交差対形成することによって形成される可能性が最も高い。その構築物のヒンジ部分には、完全欠失から、１つ目のシステインが維持されること、セリン置換ではなくプロリン置換であること、１つ目のシステインまで切断されることにまで及ぶ複数の選択肢があり得る。Ｆｃ部分を欠失させることができる。安定したかつ／または二量体化する任意のタンパク質が、この目的にかない得る。Ｆｃドメインのうちの１つだけ、例えば、ヒト免疫グロブリンのＣＨ２ドメインまたはＣＨ３ドメインを使用することができる。二量体化を改善するように改変されたヒト免疫グロブリンのヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域を使用することもできる。免疫グロブリンのヒンジ部分だけを使用することもできる。ＣＤ８アルファの部分または合成分子を使用することもできる。

いくつかの実施形態において、上記ＣＡＲ核酸は、他の共刺激レセプター（例えば、特定の分子（例えばＣＤ２８など）の天然のまたは改変された、細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメイン）をコードする部分的または完全な配列を単独でまたは組み合わせて含む。他の共刺激ドメインとしては、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＯＸ－４０（ＣＤ１３４）、ＩＣＯＳ、ＨＶＥＭ、ＧＩＴＲ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ４０Ｌ、ＤＲ３、ＣＤ３０、ＳＬＡＭ、ＣＤ２、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ－１）、ＭｙＤ８８、ＣＤ２４４、ＴＭＩＧＤ２、ＢＴＮＬ３、ＮＫＧ２Ｄ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）または合成分子のうちの１つ以上が挙げられるが、これらに限定されない。ＣＤ３ζによって惹起される１次シグナルに加えて、ＣＡＲに挿入された共刺激レセプターによって提供されるさらなるシグナルが、ＮＫ細胞の完全な活性化にとって重要であり、インビボでの持続性および養子免疫療法の治療の成功の改善を助け得る。

いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、特定の抗原（またはマーカーまたはリガンド）（例えば、養子療法によって標的化される特定の細胞型において発現される抗原（例えば、癌マーカー）および／または減衰応答を誘導することを目的とした抗原（例えば、正常細胞型上または非罹患細胞型上に発現される抗原））に対する特異性を有するように構築される。したがって、上記ＣＡＲは通常、その細胞外の部分に、１つ以上の抗原結合分子（例えば、１つ以上の抗原結合フラグメント、抗原結合ドメインもしくは抗原結合部分）または１つ以上の抗体可変ドメイン、および／または抗体分子を含む。いくつかの実施形態において、上記ＣＡＲは、抗体分子の抗原結合部分（例えば、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）に由来する一本鎖抗体フラグメント（ｓｃＦｖ））を含む。

キメラ抗原レセプターのある特定の実施形態において、そのレセプターの抗原特異的部分（抗原結合領域を含む細胞外ドメインと称され得る）は、腫瘍関連抗原または病原体特異的抗原結合ドメインを含む。抗原には、デクチン－１などのパターン認識レセプターによって認識される糖鎖抗原が含まれる。腫瘍関連抗原は、腫瘍細胞の細胞表面上に発現される限り、任意の種類であってよい。腫瘍関連抗原の例示的な実施形態としては、ＣＤ１９、ＣＤ２０、癌胎児抗原、アルファフェトプロテイン、ＣＡ－１２５、ＭＵＣ－１、ＣＤ５６、ＥＧＦＲ、ｃ－Ｍｅｔ、ＡＫＴ、Ｈｅｒ２、Ｈｅｒ３、上皮性腫瘍抗原、黒色腫関連抗原、変異型ｐ５３、変異型ｒａｓなどが挙げられる。ある特定の実施形態において、ＣＡＲは、腫瘍関連抗原の量が少ないとき、持続性を改善するためにサイトカインと同時発現され得る。例えば、ＣＡＲは、ＩＬ－１５と同時発現され得る。

キメラレセプターをコードするオープンリーディングフレームの配列は、ゲノムＤＮＡ起源、ｃＤＮＡ起源から得ることができるか、または合成することができるか（例えば、ＰＣＲを介して）、またはそれらの組み合わせであり得る。イントロンはｍＲＮＡを安定化すると見出されているので、ゲノムＤＮＡのサイズおよびイントロンの数に応じて、ｃＤＮＡまたはそれらの組み合わせを使用することが望ましい場合がある。また、ｍＲＮＡを安定化するために内在性または外来性の非コード領域を使用することもさらに有益であり得る。

上記キメラ構築物は、裸のＤＮＡとしてまたは好適なベクターに入った状態で免疫細胞に導入され得ることが企図される。裸のＤＮＡを用いたエレクトロポレーションによって細胞を安定的にトランスフェクトする方法は、当該分野で公知である。例えば、米国特許第６，４１０，３１９号を参照のこと。裸のＤＮＡとは、一般に、発現にとって適切な向きでプラスミド発現ベクターに含められたキメラレセプターをコードするＤＮＡのことを指す。

あるいは、キメラ構築物を免疫細胞に導入するために、ウイルスベクター（例えば、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクターまたはレンチウイルスベクター）を用いることができる。本開示の方法に従って使用するのに適したベクターは、免疫細胞において非複製性のベクターである。ウイルスに基づくベクターが多数知られており（例えば、ＨＩＶ、ＳＶ４０、ＥＢＶ、ＨＳＶまたはＢＰＶに基づくベクター）、細胞内に維持されるそのウイルスのコピー数は、その細胞の生存能を維持するほど十分低い。

いくつかの態様において、抗原に特異的に結合する構成要素または抗原特異的認識構成要素は、１つ以上の膜貫通ドメインおよび細胞内のシグナル伝達ドメインに連結される。いくつかの実施形態において、上記ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞外ドメインに融合された膜貫通ドメインを含む。１つの実施形態において、そのＣＡＲにおけるドメインの１つと天然に会合する膜貫通ドメインが使用される。いくつかの場合において、その膜貫通ドメインは、レセプター複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限に抑えるためにそのようなドメインが同じまたは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインに結合するのを回避するように、選択されるかまたはアミノ酸置換によって改変される。

膜貫通ドメインは、いくつかの実施形態において、天然起源または合成起源に由来する。起源が天然である場合、そのドメインは、いくつかの態様において、任意の膜結合型タンパク質または膜貫通タンパク質に由来する。膜貫通領域は、Ｔ細胞レセプターのアルファ鎖、ベータ鎖またはゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ２、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８（ＣＤ８アルファを含む）、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＧＩＴＲ／ＣＤ３５７、ＮＫＧ２Ｄ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４およびＤＡＰ分子に由来する（すなわち、それらの分子の膜貫通領域を少なくとも含む）膜貫通領域を含む。あるいは、膜貫通ドメインは、いくつかの実施形態において、合成の膜貫通ドメインである。いくつかの態様において、合成の膜貫通ドメインは、ロイシンおよびバリンなどの疎水性残基を主に含む。いくつかの態様では、フェニルアラニン、トリプトファンおよびバリンのトリプレットが、合成の膜貫通ドメインの各末端に見られることがある。

上記ＣＡＲのヒンジ領域は、膜貫通ドメインに対してＮ末端に位置することがあり、いくつかの実施形態では、天然または合成の起源に由来する。ヒンジ配列は、スペーサーまたは細胞外スペーサーとも称されることがあり、一般に、膜貫通ドメインから結合単位を隔てるＣＡＲの細胞外の構造領域である。特定の実施形態において、ＣＡＲは、免疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメインヒンジを含む。そのヒンジは、一般に、効率的なＣＡＲの発現および活性に対して安定性をもたらす。ヒンジは、任意の好適な起源に由来してよいが、具体的な実施形態において、ヒンジは、ＣＤ８ａ、ＣＤ２８、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、Ｔ細胞レセプターのアルファ、ベータもしくはゼータ鎖、ＣＤ２、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８ｂ、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、ＢＴＬＡ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ４、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＧＩＴＲ／ＣＤ３５７、ＮＫＧ２Ｄ、ＬＡＧ－３、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＤＲ３、ＣＤ３０、ＣＤ２２４、ＣＤ２４４、ＳＬＡＭ、ＣＤ２２６、ＤＡＰまたはそれらの組み合わせなどに由来する。

ある特定の実施形態において、Ｔ細胞またはＮＫ細胞などの免疫細胞を遺伝的に改変するための本明細書中に開示されるプラットフォーム技術としては、（ｉ）エレクトロポレーションデバイス（例えば、ヌクレオフェクター）を用いた非ウイルス遺伝子導入、（ｉｉ）エンドドメイン（例えば、ＣＤ２８／ＣＤ３－ζ、ＣＤ１３７／ＣＤ３－ζまたは他の組み合わせ）を介してシグナル伝達するＣＡＲ、（ｉｉｉ）長さが不定の細胞外ドメインであって抗原認識ドメインを細胞表面に接続する細胞外ドメインを有するＣＡＲ、およびいくつかの場合では、（ｉｖ）ＣＡＲ^＋免疫細胞を頑強かつ数値的に拡大することができる、Ｋ５６２に由来する人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）（Ｓｉｎｇｈｅｔａｌ．，２００８；Ｓｉｎｇｈｅｔａｌ．，２０１１）が挙げられる。

ある特定の実施形態において、上記細胞は、抗ＣＤ１９抗体のＶＨおよびＶＬ、ＣＤ８ヒンジ（任意のヒンジがスペーサーまたは細胞外スペーサーと称され得る）と膜貫通領域との融合配列、ならびにＣＤ３およびＣＤ２８のシグナル伝達領域を含むＣＤ１９－ＣＡＲ配列（配列番号２６）を発現するように操作されている。

ＡＴＧＧＣＣＣＴＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡＧＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＡＴＧＣＣＧＣＴＡＧＡＣＣＣＧＡＴＡＴＡＣＡＧＡＴＧＡＣＧＣＡＧＡＣＡＡＣＧＴＣＡＡＧＴＣＴＴＴＣＣＧＣＣＡＧＣＴＴＧＧＧＡＧＡＣＣＧＡＧＴＧＡＣＴＡＴＡＴＣＴＴＧＴＡＧＡＧＣＡＡＧＣＣＡＧＧＡＴＡＴＴＴＣＴＡＡＧＴＡＴＣＴＴＡＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＡＡＡＧＣＣＣＧＡＴＧＧＡＡＣＧＧＴＴＡＡＧＣＴＧＣＴＴＡＴＡＴＡＣＣＡＴＡＣＣＡＧＴＡＧＡＣＴＣＣＡＣＴＣＣＧＧＣＧＴＡＣＣＡＴＣＡＣＧＧＴＴＴＴＣＴＧＧＣＡＧＴＧＧＣＴＣＣＧＧＧＡＣＣＧＡＣＴＡＴＴＣＴＴＴＧＡＣＧＡＴＣＴＣＴＡＡＴＣＴＣＧＡＡＣＡＡＧＡＧＧＡＴＡＴＴＧＣＡＡＣＡＴＡＣＴＴＴＴＧＴＣＡＧＣＡＡＧＧＣＡＡＴＡＣＣＴＴＧＣＣＡＴＡＴＡＣＧＴＴＴＧＧＧＧＧＣＧＧＧＡＣＡＡＡＡＣＴＴＧＡＧＡＴＡＡＣＣＧＧＣＧＧＣＧＧＴＧＧＴＴＣＡＧＧＣＧＧＴＧＧＣＧＧＴＴＣＣＧＧＴＧＧＴＧＧＧＧＧＡＴＣＡＧＡＧＧＴＴＡＡＧＣＴＴＣＡＧＧＡＡＴＣＣＧＧＡＣＣＡＧＧＴＴＴＧＧＴＴＧＣＣＣＣＣＡＧＣＣＡＡＴＣＴＣＴＣＡＧＣＧＴＴＡＣＡＴＧＣＡＣＧＧＴＴＴＣＡＧＧＣＧＴＣＡＧＴＣＴＣＣＣＣＧＡＴＴＡＣＧＧＴＧＴＡＡＧＴＴＧＧＡＴＴＣＧＧＣＡＡＣＣＴＣＣＧＣＧＡＡＡＧＧＧＴＣＴＧＧＡＡＴＧＧＣＴＧＧＧＧＧＴＴＡＴＴＴＧＧＧＧＧＡＧＴＧＡＧＡＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＡＡＣＴＣＴＧＣＡＣＴＴＡＡＧＡＧＴＣＧＧＣＴＴＡＣＣＡＴＣＡＴＣＡＡＧＧＡＴＡＡＴＴＣＡＡＡＡＴＣＡＣＡＡＧＴＡＴＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＡＡＣＴＣＡＴＴＧＣＡＡＡＣＡＧＡＴＧＡＴＡＣＡＧＣＴＡＴＡＴＡＣＴＡＴＴＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＴＴＡＣＴＡＴＴＡＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＴＡＴＧＣＡＡＴＧＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＧＣＡＡＧＧＣＡＣＧＴＣＡＧＴＧＡＣＡＧＴＧＡＧＴＴＣＡＡＣＡＡＣＴＡＣＴＣＣＡＧＣＡＣＣＡＣＧＡＣＣＡＣＣＡＡＣＡＣＣＴＧＣＴＣＣＡＡＣＴＡＴＣＧＣＡＴＣＴＣＡＡＣＣＡＣＴＴＴＣＴＣＴＡＣＧＴＣＣＡＧＡＡＧＣＡＴＧＣＣＧＡＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＴＧＣＡＧＴＴＣＡＴＡＣＧＡＧＡＧＧＴＣＴＡＧＡＴＴＴＣＧＣＡＴＧＴＧＡＴＡＴＣＴＡＣＡＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＡＴＴＧＧＣＴＧＧＧＡＣＴＴＧＴＧＧＴＧＴＣＣＴＴＣＴＣＣＴＡＴＣＡＣＴＧＧＴＴＡＴＣＡＣＣＣＴＴＴＡＣＴＧＣＴＧＧＧＴＴＡＧＡＡＧＴＡＡＡＡＧＡＡＧＴＡＧＧＣＴＡＣＴＴＣＡＴＡＧＴＧＡＴＴＡＣＡＴＧＡＡＴＡＴＧＡＣＴＣＣＴＣＧＡＣＧＡＣＣＴＧＧＴＣＣＣＡＣＣＣＧＴＡＡＧＣＡＴＴＡＴＣＡＧＣＣＣＴＡＴＧＣＡＣＣＡＣＣＡＣＧＡＧＡＴＴＴＣＧＣＡＧＣＣＴＡＴＣＧＣＴＣＣＡＧＡＧＴＴＡＡＡＴＴＴＡＧＣＡＧＡＡＧＴＧＣＡＧＡＴＧＣＴＣＣＴＧＣＧＴＡＴＡＡＡＣＡＧＧＧＴＣＡＡＡＡＣＣＡＡＣＴＡＴＡＴＡＡＴＧＡＡＣＴＡＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡＡＴＡＴＧＡＴＧＴＴＴＴＡＧＡＴＡＡＡＡＧＡＣＧＴＧＧＴＣＧＡＧＡＴＣＣＴＧＡＡＡＴＧＧＧＡＧＧＡＡＡＡＣＣＴＡＧＡＡＧＡＡＡＡＡＡＴＣＣＴＣＡＡＧＡＡＧＧＣＣＴＡＴＡＴＡＡＴＧＡＡＣＴＡＣＡＡＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＡＧＡＡＧＣＴＴＡＴＡＧＴＧＡＡＡＴＴＧＧＡＡＴＧＡＡＡＧＧＡＧＡＡＣＧＴＣＧＴＡＧＡＧＧＴＡＡＡＧＧＴＣＡＴＧＡＴＧＧＴＣＴＴＴＡＴＣＡＡＧＧＴＣＴＴＡＧＴＡＣＡＧＣＡＡＣＡＡＡＡＧＡＴＡＣＡＴＡＴＧＡＴＧＣＡＣＴＴＣＡＴＡＴＧＣＡＡＧＣＡＣＴＴＣＣＡＣＣＴＣＧＴＴＴＣＧＡＡＧＡＧＣＡＡＡＡＡＣＴＴＡＴＣ（配列番号２６）

使用され得るＣＡＲ（ＦＭＣ６３－ＣＤ８ａヒンジ／ＴＭ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ）の具体例は、以下のとおりである：

ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号２７）

ＦＭＣ６３－ＣＤ８ａヒンジ／ＴＭ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ

抗ＣＤ１９ｓｃＦｖＦＭＣ６３、ＣＤ８ａのヒンジおよび膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激ドメイン、ならびにＣＤ３ゼータ（ＦＭＣ６３－ＣＤ８ａヒンジ／ＴＭ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ）を含む抗ＣＤ１９ＣＡＲの一例は、以下のとおりである：
ＡＴＧＧＣＣＣＴＧＣＣＡＧＴＧＡＣＣＧＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＧＧＣＡＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＣＣＡＣＡＡＧＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＧＣＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＴＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＴＡＴＣＴＣＣＡＡＧＴＡＴＣＴＧＡＡＴＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＡＴＧＧＣＡＣＡＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＴＣＡＣＡＣＣＴＣＴＡＧＡＣＴＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＡＴＣＣＡＧＧＴＴＴＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＡＣＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＡＴＣＴＧＧＡＧＣＡＧＧＡＧＧＡＴＡＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＡＣＡＣＴＧＣＣＴＴＡＣＡＣＣＴＴＴＧＧＣＧＧＣＧＧＣＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＣＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＴＣＣＧＡＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＧＣＡＣＣＣＡＧＣＣＡＧＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＴＧＡＣＡＴＧＴＡＣＣＧＴＧＴＣＣＧＧＣＧＴＧＴＣＴＣＴＧＣＣＡＧＡＣＴＡＣＧＧＣＧＴＧＡＧＣＴＧＧＡＴＣＡＧＡＣＡＧＣＣＡＣＣＴＡＧＧＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＧＣＧＴＧＡＴＣＴＧＧＧＧＣＴＣＣＧＡＧＡＣＣＡＣＡＴＡＣＴＡＴＡＡＣＴＣＣＧＣＣＣＴＧＡＡＧＴＣＴＣＧＧＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＣＡＧＣＡＡＧＴＣＣＣＡＧＧＴＧＴＴＴＣＴＧＡＡＧＡＴＧＡＡＴＴＣＣＣＴＧＣＡＧＡＣＡＧＡＣＧＡＴＡＣＣＧＣＣＡＴＣＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＣＡＡＧＣＡＣＴＡＣＴＡＴＴＡＣＧＧＣＧＧＣＴＣＴＴＡＴＧＣＣＡＴＧＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＡＧＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＴＡＧＣＡＣＣＡＣＡＡＣＣＣＣＴＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＣＡＣＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＣＡＴＣＧＣＡＡＧＣＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＣＣＴＧＡＧＧＣＣＡＧＡＧＧＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＡＧＣＡＧＣＡＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＧＣＡＣＡＣＣＡＧＧＧＧＣＣＴＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＴＧＣＧＡＴＡＴＣＴＡＣＡＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＡＣＴＧＧＣＡＧＧＡＡＣＡＴＧＴＧＧＡＧＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＴＣＡＴＣＡＣＣＣＴＧＴＡＴＴＧＴＴＧＧＧＴＧＡＧＡＡＧＣＡＡＧＡＧＡＴＣＣＡＧＧＣＴＧＣＴＧＣＡＣＡＧＣＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＴＡＴＧＡＣＡＣＣＡＡＧＧＡＧＡＣＣＡＧＧＡＣＣＡＡＣＣＡＧＧＡＡＧＣＡＣＴＡＴＣＡＧＣＣＴＴＡＣＧＣＡＣＣＴＣＣＡＡＧＧＧＡＣＴＴＣＧＣＡＧＣＡＴＡＴＡＧＧＡＧＣＡＧＧＧＴＧＡＡＧＴＴＴＴＣＴＣＧＣＡＧＣＧＣＣＧＡＴＧＣＣＣＣＡＧＣＣＴＡＴｃＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＣＴＧＡＡＴＣＴＧＧＧＣＡＧＧＣＧＣＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＣＧＴＧＣＴＧＧＡＴＡＡＧＡＧＧＡＧＡＧＧＡＡＧＧＧＡＴＣＣＡＧＡＧＡＴＧＧＧＡＧＧＣＡＡＧＣＣＴＡＧＧＣＧＣＡＡＧＡＡＣＣＣＡＣＡＧＧＡＧＧＧＣＣＴＧＴＡＴＡＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＧＡＡＧＧＡＣＡＡＧＡＴＧＧＣＣＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＣＧＡＧＡＴＣＧＧＣＡＴＧＡＡＧＧＧＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＡＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＧＴＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＴＣＣＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＴＧＣＡＣＴＧＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＡＣＴＧＣＣＡＣＣＴＡＧＡ（配列番号２８）

配列番号２８の例において、当該ＣＡＲの以下の構成要素は、以下のように区切られる：
ＣＤ８シグナルペプチド
ＡＴＧＧＣＣＣＴＧＣＣＡＧＴＧＡＣＣＧＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＧＧＣＡＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＡＣＧＣＡＧＣＡＡＧＧＣＣＡ（配列番号２９）

ＦＭＣ６３軽鎖
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＣＣＡＣＡＡＧＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＧＣＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＴＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＴＡＴＣＴＣＣＡＡＧＴＡＴＣＴＧＡＡＴＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＡＴＧＧＣＡＣＡＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＴＣＡＣＡＣＣＴＣＴＡＧＡＣＴＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＡＴＣＣＡＧＧＴＴＴＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＡＣＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＡＴＣＴＧＧＡＧＣＡＧＧＡＧＧＡＴＡＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＡＣＡＣＴＧＣＣＴＴＡＣＡＣＣＴＴＴＧＧＣＧＧＣＧＧＣＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＣＣ（配列番号３０）

リンカー
ＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＴＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＴＣＣ（配列番号３１）

重鎖
ＧＡＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＧＣＡＣＣＣＡＧＣＣＡＧＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＴＧＡＣＡＴＧＴＡＣＣＧＴＧＴＣＣＧＧＣＧＴＧＴＣＴＣＴＧＣＣＡＧＡＣＴＡＣＧＧＣＧＴＧＡＧＣＴＧＧＡＴＣＡＧＡＣＡＧＣＣＡＣＣＴＡＧＧＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＧＣＧＴＧＡＴＣＴＧＧＧＧＣＴＣＣＧＡＧＡＣＣＡＣＡＴＡＣＴＡＴＡＡＣＴＣＣＧＣＣＣＴＧＡＡＧＴＣＴＣＧＧＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＣＡＧＣＡＡＧＴＣＣＣＡＧＧＴＧＴＴＴＣＴＧＡＡＧＡＴＧＡＡＴＴＣＣＣＴＧＣＡＧＡＣＡＧＡＣＧＡＴＡＣＣＧＣＣＡＴＣＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＣＡＡＧＣＡＣＴＡＣＴＡＴＴＡＣＧＧＣＧＧＣＴＣＴＴＡＴＧＣＣＡＴＧＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＡＧＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＴＡＧＣ（配列番号３２）

ＣＤ８ａヒンジ
ＡＣＣＡＣＡＡＣＣＣＣＴＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＣＡＣＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＣＡＴＣＧＣＡＡＧＣＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＣＣＴＧＡＧＧＣＣＡＧＡＧＧＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＡＧＣＡＧＣＡＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＧＣＡＣＡＣＣＡＧＧＧＧＣＣＴＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＴＧＣＧＡＴ（配列番号３３）

ＣＤ８ＴＭ
ＡＴＣＴＡＣＡＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＡＣＴＧＧＣＡＧＧＡＡＣＡＴＧＴＧＧＡＧＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＴＣＡＴＣＡＣＣＣＴＧＴＡＴＴＧＴＴＧＧＧＴＧ（配列番号３４）

ＣＤ２８共刺激ドメイン
ＡＧＡＡＧＣＡＡＧＡＧＡＴＣＣＡＧＧＣＴＧＣＴＧＣＡＣＡＧＣＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＴＡＴＧＡＣＡＣＣＡＡＧＧＡＧＡＣＣＡＧＧＡＣＣＡＡＣＣＡＧＧＡＡＧＣＡＣＴＡＴＣＡＧＣＣＴＴＡＣＧＣＡＣＣＴＣＣＡＡＧＧＧＡＣＴＴＣＧＣＡＧＣＡＴＡＴＡＧＧＡＧＣ（配列番号３５）

ＣＤ３ゼータ
ＡＧＧＧＴＧＡＡＧＴＴＴＴＣＴＣＧＣＡＧＣＧＣＣＧＡＴＧＣＣＣＣＡＧＣＣＴＡＴｃＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＣＴＧＡＡＴＣＴＧＧＧＣＡＧＧＣＧＣＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＣＧＴＧＣＴＧＧＡＴＡＡＧＡＧＧＡＧＡＧＧＡＡＧＧＧＡＴＣＣＡＧＡＧＡＴＧＧＧＡＧＧＣＡＡＧＣＣＴＡＧＧＣＧＣＡＡＧＡＡＣＣＣＡＣＡＧＧＡＧＧＧＣＣＴＧＴＡＴＡＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＧＡＡＧＧＡＣＡＡＧＡＴＧＧＣＣＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＣＧＡＧＡＴＣＧＧＣＡＴＧＡＡＧＧＧＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＡＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＧＴＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＴＣＣＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＴＧＣＡＣＴＧＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＡＣＴＧＣＣＡＣＣＴＡＧＡ（配列番号３６）

ＦＭＣ６３－ＣＤ８ａヒンジ／ＴＭ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚの対応するアミノ酸配列は、以下のとおりである：
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号３７）

配列番号３７の例において、当該ＣＡＲの以下の構成要素は、以下のように区切られる：
ＣＤ８シグナルペプチドＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ（配列番号３８）

ＦＭＣ６３軽鎖

（太字がＣＤＲである）（配列番号３９）

リンカーＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号４０）

重鎖

（太字の文字がＣＤＲである）（配列番号４１）

ＣＤ８ａヒンジＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ（配列番号４２）

ＣＤ８ＴＭＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＷＶ（配列番号４３）

ＣＤ２８共刺激ドメインＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ（配列番号４４）

ＣＤ３ゼータ
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号４５）

ＦＭＣ６３－ＣＤ２８ヒンジ／ＴＭ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ

抗ＣＤ１９ｓｃＦｖＦＭＣ６３、ＣＤ２８のヒンジおよび膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激ドメイン、ならびにＣＤ３ゼータ（ＦＭＣ６３－ＣＤ２８ヒンジ／ＴＭ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚ）を含む抗ＣＤ１９ＣＡＲの一例は、以下のとおりである：
ＡＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＣＧＴＧＡＣＣＴＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＣＧＡＧＣＴＧＣＣＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＴＴＣＣＴＧＣＴＧＡＴＣＣＣＴＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＣＡＣＡＡＧＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＧＣＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＡＡＴＣＴＣＴＴＧＴＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＴＡＴＣＴＣＣＡＡＧＴＡＴＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＡＴＧＧＣＡＣＣＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＴＣＡＣＡＣＡＴＣＴＡＧＧＣＴＧＣＡＣＡＧＣＧＧＡＧＴＧＣＣＡＴＣＣＣＧＧＴＴＴＡＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＡＴＣＴＧＧＡＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＣＡＧＧＡＧＧＡＴＡＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＴＡＣＣＣＴＧＣＣＴＴＡＣＡＣＡＴＴＴＧＧＣＧＧＣＧＧＣＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＣＣＧＧＣＡＧＣＡＣＡＴＣＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＡＡＧＣＣＡＧＧＡＴＣＣＧＧＡＧＡＧＧＧＡＴＣＴＡＣＣＡＡＧＧＧＡＧＡＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＧＣＡＣＣＣＡＧＣＣＡＧＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＴＧＡＣＣＴＧＴＡＣＡＧＴＧＴＣＣＧＧＣＧＴＧＴＣＴＣＴＧＣＣＡＧＡＣＴＡＣＧＧＣＧＴＧＡＧＣＴＧＧＡＴＣＡＧＧＣＡＧＣＣＡＣＣＴＡＧＧＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＧＣＧＴＧＡＴＣＴＧＧＧＧＣＴＣＣＧＡＧＡＣＣＡＣＡＴＡＣＴＡＴＡＡＴＡＧＣＧＣＣＣＴＧＡＡＧＴＣＣＡＧＡＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＴＣＡＡＧＧＡＴＡＡＣＡＧＣＡＡＧＴＣＣＣＡＧＧＴＧＴＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＡＡＴＴＣＣＣＴＧＣＡＧＡＣＣＧＡＣＧＡＴＡＣＡＧＣＣＡＴＣＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＣＡＡＧＣＡＣＴＡＣＴＡＴＴＡＣＧＧＣＧＧＣＴＣＣＴＡＴＧＣＣＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＴＣＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧＣＧＣＣＧＣＣＧＣＣＡＴＣＧＡＡＧＴＧＡＴＧＴＡＴＣＣＡＣＣＣＣＣＴＴＡＣＣＴＧＧＡＴＡＡＣＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＡＣＣＡＴＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＡＧＣＡＣＣＴＧＴＧＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＴＧＴＴＣＣＣＴＧＧＣＣＣＡＡＧＣＡＡＧＣＣＣＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＧＡＧＧＣＧＴＧＣＴＧＧＣＣＴＧＴＴＡＴＴＣＴＣＴＧＣＴＧＧＴＧＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＴＣＡＴＣＡＴＣＴＴＴＴＧＧＧＴＧＡＧＧＡＧＣＡＡＧＣＧＧＡＧＣＡＧＧＣＴＧＣＴＧＣＡＣＡＧＣＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＣＣＣＣＣＧＧＡＧＡＣＣＣＧＧＣＣＣＴＡＣＡＡＧＡＡＡＧＣＡＣＴＡＴＣＡＧＣＣＴＴＡＣＧＣＡＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＡＣＴＴＣＧＣＡＧＣＣＴＡＴＡＧＡＡＧＣＡＧＧＧＴＧＡＡＧＴＴＴＴＣＴＣＧＣＡＧＣＧＣＣＧＡＴＧＣＡＣＣＡＧＣＡＴＡＴＣＡＧＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＡＴＣＡＧＣＴＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＣＴＧＡＡＴＣＴＧＧＧＣＡＧＧＣＧＣＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＣＧＴＧＣＴＧＧＡＴＡＡＧＡＧＧＡＧＡＧＧＡＡＧＧＧＡＴＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＡＧＧＣＡＡＧＣＣＴＡＧＧＣＧＣＡＡＧＡＡＣＣＣＡＣＡＧＧＡＧＧＧＣＣＴＧＴＡＴＡＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＧＡＡＧＧＡＣＡＡＧＡＴＧＧＣＣＧＡＧＧＣＣＴＡＣＴＣＣＧＡＧＡＴＣＧＧＣＡＴＧＡＡＧＧＧＡＧＡＧＣＧＧＡＧＡＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＡＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＧＴＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＴＣＴＡＣＣＧＣＣＡＣＡＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＴＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＴＣＣＡＣＧＧ（配列番号４６）

ＦＭＣ６３－ＣＤ２８ヒンジ／ＴＭ－ＣＤ２８－ＣＤ３ｚのアミノ酸配列は、以下のとおりである：
ＭＬＬＬＶＴＳＬＬＬＣＥＬＰＨＰＡＦＬＬＩＰＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＡＡＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号４７）

ＦＭＣ６３－ＣＤ２８ヒンジ－ＴＭＣＡＲの核酸配列の別の例は、以下のとおりである：
ＡＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＣＧＴＧＡＣＣＴＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＣＧＡＧＣＴＧＣＣＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＴＴＣＣＴＧＣＴＧＡＴＣＣＣＴＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＣＡＣＡＡＧＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＧＣＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＡＡＴＣＴＣＴＴＧＴＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＴＡＴＣＴＣＣＡＡＧＴＡＴＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＡＴＧＧＣＡＣＣＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＴＣＡＣＡＣＡＴＣＴＡＧＧＣＴＧＣＡＣＡＧＣＧＧＡＧＴＧＣＣＡＴＣＣＣＧＧＴＴＴＡＧＣＧＧＡＴＣＣＧＧＡＴＣＴＧＧＡＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＣＡＧＧＡＧＧＡＴＡＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＴＡＣＣＣＴＧＣＣＴＴＡＣＡＣＡＴＴＴＧＧＣＧＧＣＧＧＣＡＣＡＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＣＣＧＧＣＡＧＣＡＣＡＴＣＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＡＡＧＣＣＡＧＧＡＴＣＣＧＧＡＧＡＧＧＧＡＴＣＴＡＣＣＡＡＧＧＧＡＧＡＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＧＣＡＣＣＣＡＧＣＣＡＧＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＴＧＡＣＣＴＧＴＡＣＡＧＴＧＴＣＣＧＧＣＧＴＧＴＣＴＣＴＧＣＣＡＧＡＣＴＡＣＧＧＣＧＴＧＡＧＣＴＧＧＡＴＣＡＧＧＣＡＧＣＣＡＣＣＴＡＧＧＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＧＣＧＴＧＡＴＣＴＧＧＧＧＣＴＣＣＧＡＧＡＣＣＡＣＡＴＡＣＴＡＴＡＡＴＡＧＣＧＣＣＣＴＧＡＡＧＴＣＣＡＧＡＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＴＣＡＡＧＧＡＴＡＡＣＡＧＣＡＡＧＴＣＣＣＡＧＧＴＧＴＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＡＡＴＴＣＣＣＴＧＣＡＧＡＣＣＧＡＣＧＡＴＡＣＡＧＣＣＡＴＣＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＣＡＡＧＣＡＣＴＡＣＴＡＴＴＡＣＧＧＣＧＧＣＴＣＣＴＡＴＧＣＣＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＴＣＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧＣＡＴＣＧＡＡＧＴＧＡＴＧＴＡＴＣＣＡＣＣＣＣＣＴＴＡＣＣＴＧＧＡＴＡＡＣＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＡＣＣＡＴＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＡＧＣＡＣＣＴＧＴＧＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＴＧＴＴＣＣＣＴＧＧＣＣＣＡＡＧＣＡＡＧＣＣＣＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＧＡＧＧＣＧＴＧＣＴＧＧＣＣＴＧＴＴＡＴＴＣＴＣＴＧＣＴＧＧＴＧＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＴＣＡＴＣＡＴＣＴＴＴＴＧＧＧＴＧＡＧＧＡＧＣＡＡＧＣＧＧＡＧＣＡＧＧＣＴＧＣＴＧＣＡＣＡＧＣＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＣＣＣＣＣＧＧＡＧＡＣＣＣＧＧＣＣＣＴＡＣＡＡＧＡＡＡＧＣＡＣＴＡＴＣＡＧＣＣＴＴＡＣＧＣＡＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＡＣＴＴＣＧＣＡＧＣＣＴＡＴＡＧＡＡＧＣＡＧＧＧＴＧＡＡＧＴＴＴＴＣＴＣＧＣＡＧＣＧＣＣＧＡＴＧＣＡＣＣＡＧＣＡＴＡＴＣＡＧＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＡＴＣＡＧＣＴＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＣＴＧＡＡＴＣＴＧＧＧＣＡＧＧＣＧＣＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＣＧＴＧＣＴＧＧＡＴＡＡＧＡＧＧＡＧＡＧＧＡＡＧＧＧＡＴＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＡＧＧＣＡＡＧＣＣＴＡＧＧＣＧＣＡＡＧＡＡＣＣＣＡＣＡＧＧＡＧＧＧＣＣＴＧＴＡＴＡＡＴＧＡＧＣＴＧＣＡＧＡＡＧＧＡＣＡＡＧＡＴＧＧＣＣＧＡＧＧＣＣＴＡＣＴＣＣＧＡＧＡＴＣＧＧＣＡＴＧＡＡＧＧＧＡＧＡＧＣＧＧＡＧＡＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＡＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＧＴＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＴＣＴＡＣＣＧＣＣＡＣＡＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＴＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＴＣＣＡＣＧＧ（配列番号４８）

ＣＤ２８ヒンジ：ＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰ（配列番号４９）

ＣＤ２８ヒンジ核酸配列ＡＴＣＧＡＡＧＴＧＡＴＧＴＡＴＣＣＡＣＣＣＣＣＴＴＡＣＣＴＧＧＡＴＡＡＣＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＡＣＣＡＴＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＡＧＣＡＣＣＴＧＴＧＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＴＧＴＴＣＣＣＴＧＧＣＣＣＡＡＧＣＡＡＧＣＣＣ（配列番号５０）

ＣＤ２８ＴＭドメインＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ（配列番号５１）

ＦＭＣ６３－ＰＤ－１ヒンジ－ＴＭＣＡＲ
以下の構成要素を有するＣＡＲの例は、ＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチド－ＦＭＣ６３軽鎖－リンカー－重鎖－ＰＤ１ヒンジ－ＰＤ－１ＴＭ－ＣＤ２８共刺激－ＣＤ３ゼータは、以下のとおりである：
ＭＬＬＬＶＴＳＬＬＬＣＥＬＰＨＰＡＦＬＬＩＰＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＱＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱＦＱＴＬＶＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩＥＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号５２）

ＦＭＣ６３－ＰＤ－１ヒンジ－ＴＭＣＡＲの核酸配列は、以下のとおりである：
ＡＴＧＣＴＡＣＴＧＣＴＧＧＴＧＡＣＣＡＧＣＣＴＣＣＴＧＣＴＧＴＧＣＧＡＧＣＴＧＣＣＣＣＡＣＣＣＣＧＣＧＴＴＣＣＴＧＣＴＣＡＴＣＣＣＣＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＧＡＣＣＴＣＣＴＣＧＣＴＧＡＧＴＧＣＡＴＣＡＣＴＧＧＧＡＧＡＣＣＧＣＧＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＡＴＧＣＣＧＡＧＣＴＴＣＣＣＡＧＧＡＣＡＴＴＴＣＣＡＡＧＴＡＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＡＣＧＧＣＡＣＣＧＴＣＡＡＧＣＴＧＣＴＴＡＴＣＴＡＣＣＡＣＡＣＴＡＧＴＣＧＣＣＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＧＴＧＣＣＣＴＣＴＡＧＡＴＴＴＡＧＴＧＧＣＴＣＣＧＧＣＴＣＧＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＡＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＡＣＣＴＧＧＡＡＣＡＧＧＡＧＧＡＣＡＴＡＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＴＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＴＡＴＡＣＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＣＧＧＧＴＴＣＧＡＣＣＴＣＣＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＡＧＣＣＧＧＧＧＴＣＣＧＧＡＧＡＧＧＧＣＴＣＣＡＣＴＡＡＧＧＧＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＧＧＣＣＴＧＧＧＣＴＧＧＴＡＧＣＧＣＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＴＴＡＴＣＣＧＴＧＡＣＣＴＧＴＡＣＣＧＴＧＴＣＧＧＧＡＧＴＣＴＣＧＣＴＧＣＣＴＧＡＴＴＡＣＧＧＣＧＴＧＡＧＣＴＧＧＡＴＴＣＧＣＣＡＧＣＣＧＣＣＣＣＧＣＡＡＡＧＧＣＴＴＧＧＡＡＴＧＧＣＴＡＧＧＴＧＴＧＡＴＣＴＧＧＧＧＣＴＣＣＧＡＧＡＣＣＡＣＣＴＡＴＴＡＣＡＡＣＴＣＣＧＣＣＣＴＧＡＡＧＴＣＣＣＧＧＣＴＴＡＣＧＡＴＣＡＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＣＴＣＣＡＡＧＴＣＴＣＡＧＧＴＧＴＴＣＴＴＧＡＡＧＡＴＧＡＡＣＴＣＴＣＴＴＣＡＡＡＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＣＧＣＣＡＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＴＡＣＧＣＣＡＴＧＧＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＡＡＣＴＴＣＴＧＴＴＡＣＡＧＴＴＴＣＣＴＣＴＣＡＧＧＴＣＣＣＡＡＣＡＧＣＧＣＡＴＣＣＣＴＣＴＣＣＡＡＧＣＣＣＧＣＧＴＣＣＣＧＣＴＧＧＡＣＡＧＴＴＣＣＡＧＡＣＴＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＧＣＧＴＧＧＴＧＧＧＣＧＧＧＣＴＧＣＴＧＧＧＴＴＣＴＴＴＧＧＴＧＣＴＧＣＴＧＧＴＧＴＧＧＧＴＣＣＴＣＧＣＴＧＴＣＡＴＴＧＡＧＣＧＣＡＧＣＡＡＧＣＧＣＡＧＣＣＧＣＣＴＧＴＴＧＣＡＣＡＧＣＧＡＴＴＡＣＡＴＧＡＡＴＡＴＧＡＣＴＣＣＧＣＧＣＣＧＧＣＣＴＧＧＣＣＣＡＡＣＧＣＧＴＡＡＧＣＡＣＴＡＣＣＡＧＣＣＧＴＡＣＧＣＧＣＣＣＣＣＧＡＧＡＧＡＣＴＴＣＧＣＴＧＣＡＴＡＣＡＧＧＴＣＣＣＧＣＧＴＡＡＡＡＴＴＴＴＣＧＣＧＣＴＣＴＧＣＧＧＡＣＧＣＴＣＣＴＧＣＣＴＡＴＣＡＧＣＡＧＧＧＴＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＧＣＴＣＡＡＣＣＴＧＧＧＣＣＧＴＡＧＧＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＧＣＴＣＧＡＣＡＡＡＣＧＣＣＧＴＧＧＴＣＧＧＧＡＣＣＣＧＧＡＧＡＴＧＧＧＣＧＧＴＡＡＡＣＣＴＣＧＧＣＧＣＡＡＧＡＡＴＣＣＴＣＡＧＧＡＧＧＧＣＣＴＴＴＡＣＡＡＣＧＡＧＣＴＧＣＡＧＡＡＧＧＡＣＡＡＡＡＴＧＧＣＣＧＡＧＧＣＣＴＡＣＴＣＣＧＡＧＡＴＣＧＧＴＡＴＧＡＡＧＧＧＧＧＡＡＣＧＣＣＧＴＣＧＣＧＧＣＡＡＧＧＧＣＣＡＣＧＡＴＧＧＡＴＴＧＴＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＴＣＣＡＣＣＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＧＣＡＴＡＴＧＣＡＧＧＣＣＴＴＧＣＣＧＣＣＣＣＧＣ（配列番号５３）

ＰＤ－１ヒンジＱＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱＦＱＴＬＶ（配列番号５４）

ＰＤ－１ＴＭドメインＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩ（配列番号５５）

ＦＭＣ６３－ＣＴＬＡ４ヒンジ－ＴＭＣＡＲ：
ＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチド－ＦＭＣ６３軽鎖－リンカー－重鎖－ＣＴＬＡ４ヒンジ－ＣＴＬＡ－４ＴＭ－ＣＤ２８共刺激－ＣＤ３ゼータ
ＭＬＬＬＶＴＳＬＬＬＣＥＬＰＨＰＡＦＬＬＩＰＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳｖｉｄｐｅｐｃｐｄｓｄｆｌｌｗｉｌａａｖｓｓｇｌｆｆｙｓｆｌｌｔａＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号５６）

ＡＴＧＴＴＡＣＴＧＣＴＣＧＴＴＡＣＴＴＣＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＧＣＧＡＧＣＴＧＣＣＡＣＡＣＣＣＣＧＣＧＴＴＣＴＴＧＣＴＧＡＴＴＣＣＧＧＡＴＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＧＡＣＣＴＣＣＴＣＣＣＴＣＴＣＣＧＣＴＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＣＣＧＣＧＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＡＴＧＣＣＧＡＧＣＴＴＣＣＣＡＧＧＡＣＡＴＣＴＣＴＡＡＧＴＡＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＡＴＧＧＧＡＣＣＧＴＧＡＡＧＴＴＧＣＴＣＡＴＴＴＡＣＣＡＣＡＣＣＴＣＴＣＧＴＣＴＡＣＡＣＡＧＴＧＧＴＧＴＣＣＣＴＴＣＴＣＧＣＴＴＣＴＣＧＧＧＡＴＣＣＧＧＴＴＣＴＧＧＴＡＣＡＧＡＴＴＡＣＴＣＣＴＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＡＡＡＴＣＴＴＧＡＡＣＡＧＧＡＧＧＡＣＡＴＣＧＣＣＡＣＴＴＡＴＴＴＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＡＣＧＣＴＴＣＣＧＴＡＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＧＧＣＧＧＴＡＣＴＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＣＣＧＧＣＴＣＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＴＣＧＧＧＣＡＡＧＣＣＣＧＧＣＴＣＣＧＧＣＧＡＡＧＧＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＧＡＧＧＴＧＡＡＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＣＧＧＡＣＴＧＧＴＧＧＣＧＣＣＡＡＧＣＣＡＧＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＴＧＡＣＣＴＧＣＡＣＣＧＴＧＴＣＣＧＧＣＧＴＡＴＣＴＣＴＧＣＣＣＧＡＣＴＡＣＧＧＣＧＴＴＡＧＴＴＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＧＣＣＧＣＣＣＣＧＣＡＡＡＧＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＡＧＧＧＧＴＣＡＴＡＴＧＧＧＧＣＴＣＣＧＡＧＡＣＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＡＡＣＡＧＣＧＣＡＣＴＧＡＡＡＴＣＣＣＧＣＴＴＧＡＣＣＡＴＣＡＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＣＡＧＣＡＡＧＡＧＣＣＡＧＧＴＧＴＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＡＡＴＴＣＣＴＴＧＣＡＧＡＣＴＧＡＴＧＡＣＡＣＣＧＣＣＡＴＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＡＧＣＡＣＴＡＴＴＡＣＴＡＣＧＧＴＧＧＣＡＧＣＴＡＣＧＣＧＡＴＧＧＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＴＴＣＴＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＣＴＣＣＧＴＧＡＴＴＧＡＣＣＣＧＧＡＧＣＣＡＴＧＴＣＣＴＧＡＣＡＧＴＧＡＣＴＴＣＣＴＧＣＴＴＴＧＧＡＴＣＣＴＧＧＣＣＧＣＴＧＴＣＴＣＴＴＣＴＧＧＣＣＴＴＴＴＣＴＴＴＴＡＣＴＣＣＴＴＣＣＴＧＣＴＧＡＣＡＧＣＣＡＧＧＡＧＣＡＡＧＣＧＣＡＧＣＣＧＣＣＴＧＴＴＧＣＡＣＴＣＣＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＴＣＣＴＣＧＣＣＧＣＣＣＣＧＧＧＣＣＡＡＣＣＣＧＣＡＡＧＣＡＣＴＡＣＣＡＡＣＣＣＴＡＴＧＣＴＣＣＣＣＣＧＣＧＣＧＡＣＴＴＴＧＣＧＧＣＣＴＡＣＡＧＡＴＣＡＣＧＡＧＴＣＡＡＡＴＴＴＡＧＣＣＧＣＴＣＧＧＣＧＧＡＣＧＣＴＣＣＴＧＣＣＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＴＴＡＣＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＣＣＴＧＧＧＣＡＧＡＡＧＧＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＡＧＣＧＴＣＧＣＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＣＧＡＧＡＴＧＧＧＣＧＧＴＡＡＧＣＣＴＣＧＧＣＧＣＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＧＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＣＴＧＣＡＧＡＡＧＧＡＣＡＡＡＡＴＧＧＣＣＧＡＧＧＣＴＴＡＴＴＣＧＧＡＡＡＴＣＧＧＴＡＴＧＡＡＧＧＧＧＧＡＧＣＧＧＣＧＴＣＧＴＧＧＣＡＡＡＧＧＴＣＡＴＧＡＣＧＧＣＣＴＣＴＡＣＣＡＧＧＧＧＣＴＧＴＣＣＡＣＣＧＣＣＡＣＣＡＡＡＧＡＴＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＡＴＴＡＣＡＴＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＧＣＣＧＡＧＧ（配列番号５７）

ＣＳＦ２ＲＡシグナルペプチドＭＬＬＬＶＴＳＬＬＬＣＥＬＰＨＰＡＦＬＬＩＰ（配列番号５８）

ＣＴＬＡ４ヒンジＶＩＤＰＥＰＣＰＤＳＤ（配列番号５９）

ＣＴＬＡ４ＴＭドメインＦＬＬＷＩＬＡＡＶＳＳＧＬＦＦＹＳＦＬＬＴ（配列番号６０）

Ｂ．Ｔ細胞レセプター（ＴＣＲ）
いくつかの実施形態において、遺伝的に操作された抗原レセプターには、組換えＴＣＲ、および／または天然に存在するＴ細胞からクローニングされたＴＣＲが含まれる。「Ｔ細胞レセプター」または「ＴＣＲ」とは、可変α鎖および可変β鎖（それぞれＴＣＲαおよびＴＣＲβとしても知られる）または可変γ鎖および可変δ鎖（それぞれＴＣＲγおよびＴＣＲδとしても知られる）を含む分子であって、ＭＨＣレセプターに結合した抗原ペプチドに特異的に結合することができる分子のことを指す。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、αβ型である。代替の実施形態において、上記細胞は、操作されたＴＣＲを欠き；例えば、その細胞内の内在性のＴＣＲが、癌または感染症を標的化し得る（例えば、内在性ＴＣＲを有するＣＭＶまたはＥＢＶ特異的Ｔ細胞）。

通常、αβ型およびγδ型として存在するＴＣＲは、一般に構造が似ているが、それらを発現しているＴ細胞は、解剖学的位置または機能が異なり得る。ＴＣＲは、細胞表面上にまたは可溶型として見られ得る。一般に、ＴＣＲは、Ｔ細胞（またはＴリンパ球）の表面上に見られ、通常、その表面上で、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子に結合した抗原の認識に関与する。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、定常ドメイン、膜貫通ドメイン、および／または短い細胞質テイルも含み得る（例えば、Ｊａｎｅｗａｙｅｔａｌ，１９９７を参照のこと）。例えば、いくつかの態様において、ＴＣＲの各鎖は、１つのＮ末端免疫グロブリン可変ドメイン、１つの免疫グロブリン定常ドメイン、膜貫通領域、およびＣ末端に短い細胞質テイルを有し得る。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、シグナル伝達の媒介に関わるＣＤ３複合体のインバリアントタンパク質と会合される。別段述べられない限り、用語「ＴＣＲ」は、その機能的ＴＣＲフラグメントを包含すると理解されるべきである。この用語は、αβ型またはγδ型のＴＣＲをはじめとしたインタクトなまたは完全長のＴＣＲも包含する。

したがって、本明細書中の目的では、ＴＣＲへの言及には、任意のＴＣＲまたは機能的フラグメント（例えば、ＭＨＣ分子において結合した特異的な抗原ペプチド、すなわち、ＭＨＣ－ペプチド複合体に結合するＴＣＲの抗原結合部分）が含まれる。交換可能に使用され得る、ＴＣＲの「抗原結合部分」または抗原結合フラグメントとは、ＴＣＲの構造ドメインの一部しか含まないが、完全なＴＣＲが結合する抗原（例えば、ＭＨＣ－ペプチド複合体）に結合する分子のことを指す。いくつかの場合において、抗原結合部分は、特異的なＭＨＣ－ペプチド複合体に結合するための結合部位を形成するのに十分なＴＣＲの可変ドメイン（例えば、ＴＣＲの可変ａ鎖および可変β鎖）を含み、例えば一般に、各鎖が３つの相補性決定領域を含む。

いくつかの実施形態において、ＴＣＲ鎖の可変ドメインは、会合してループ、または免疫グロブリンに類似の相補性決定領域（ＣＤＲ）を形成し、それにより、抗原認識がもたらされ、ＴＣＲ分子の結合部位を形成することによってペプチド特異性が決定され、ペプチド特異性が決定される。通常、免疫グロブリンと同様に、ＣＤＲは、フレームワーク領域（ＦＲ）によって隔てられる（例えば、Ｊｏｒｅｓｅｔａｌ．，１９９０；Ｃｈｏｔｈｉａｅｔａｌ．，１９８８；Ｌｅｆｒａｎｃｅｔａｌ．，２００３を参照のこと）。いくつかの実施形態において、ＣＤＲ３は、プロセシングされた抗原の認識に関与する主要なＣＤＲであるが、アルファ鎖のＣＤＲ１は、抗原ペプチドのＮ末端部と相互作用するとも示されているのに対して、ベータ鎖のＣＤＲ１は、そのペプチドのＣ末端部と相互作用する。ＣＤＲ２は、ＭＨＣ分子を認識すると考えられている。いくつかの実施形態において、β鎖の可変領域は、さらなる超可変性（ＨＶ４）領域を含み得る。

いくつかの実施形態において、ＴＣＲ鎖は、定常ドメインを含む。例えば、免疫グロブリンと同様に、ＴＣＲ鎖の細胞外の部分（例えば、ａ鎖、β鎖）は、２つの免疫グロブリンドメインである、Ｎ末端における可変ドメイン（例えば、Ｖ_ａまたはＶｐ；通常、ＫａｂａｔナンバリングであるＫａｂａｔｅｔａｌ．，“ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，ＵＳＤｅｐｔ．ＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓ，ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，１９９１，５^ｔｈｅｄ．に基づくアミノ酸１～１１６）、および細胞膜に隣接した１つの定常ドメイン（例えば、ａ鎖定常ドメインまたはＣ_ａ、通常、Ｋａｂａｔに基づくアミノ酸１１７～２５９、β鎖定常ドメインまたはＣｐ、通常、Ｋａｂａｔに基づくアミノ酸１１７～２９５）を含み得る。例えば、いくつかの場合、それらの２本の鎖によって形成されるＴＣＲの細胞外の部分は、２つの膜近位定常ドメイン、およびＣＤＲを含む２つの膜遠位可変ドメインを含む。ＴＣＲドメインの定常ドメインは、システイン残基がジスルフィド結合を形成する短い接続配列を含み、それにより、それらの２本の鎖の間に連結が形成される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲが、定常ドメインに２つのジスルフィド結合を含むように、そのＴＣＲは、α鎖およびβ鎖の各々に追加のシステイン残基を有してもよい。

いくつかの実施形態において、ＴＣＲ鎖は、膜貫通ドメインを含み得る。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、正に帯電している。いくつかの場合において、ＴＣＲ鎖は、細胞質テイルを含む。いくつかの場合において、その構造のおかげで、ＴＣＲはＣＤ３のような他の分子と会合することができる。例えば、膜貫通領域とともに定常ドメインを含むＴＣＲは、そのタンパク質を細胞膜に固定し得、ＣＤ３シグナル伝達装置または複合体のインバリアントサブユニットと会合し得る。

一般に、ＣＤ３は、哺乳動物においては３つの異なる鎖（γ、δおよびε）およびζ鎖を有し得る多タンパク質複合体である。例えば、哺乳動物では、この複合体は、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、２つのＣＤ３ε鎖、およびホモ二量体のＣＤ３ζ鎖を含み得る。ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖およびＣＤ３ε鎖は、単一の免疫グロブリンドメインを含む免疫グロブリンスーパーファミリーの高度に関連した細胞表面タンパク質である。ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖およびＣＤ３ε鎖の膜貫通領域は、負に帯電しており、これは、これらの鎖が、正に帯電したＴ細胞レセプター鎖と会合できるようにする特性である。ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖およびＣＤ３ε鎖の各細胞内テイルは、免疫受容活性化チロシンモチーフまたはＩＴＡＭとして知られる保存された単一のモチーフを含むのに対して、各ＣＤ３ζ鎖は、３つ含む。一般に、ＩＴＡＭは、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達能に関わる。これらのアクセサリー分子は、負に帯電した膜貫通領域を有し、ＴＣＲから細胞へのシグナルの伝播において役割を果たす。ＣＤ３鎖およびζ鎖は、ＴＣＲと一体となって、Ｔ細胞レセプター複合体として知られる複合体を形成する。

いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、２本の鎖αおよびβ（または必要に応じてγおよびδ）のヘテロ二量体であり得るか、または一本鎖ＴＣＲ構築物であり得る。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、ジスルフィド結合などによって連結された２本の別個の鎖（α鎖とβ鎖またはγ鎖とδ鎖）を含むヘテロ二量体である。いくつかの実施形態において、標的抗原（例えば、癌抗原）に対するＴＣＲが特定され、細胞に導入される。いくつかの実施形態において、ＴＣＲをコードする核酸ポリマーは、公的に入手可能なＴＣＲＤＮＡ配列のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅などによって、種々の起源から得ることができる。いくつかの実施形態において、ＴＣＲは、生物学的起源、例えば、細胞、例えば、Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞）、Ｔ細胞ハイブリドーマまたは他の公的に入手可能な起源から得られる。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、インビボで単離された細胞から得ることができる。いくつかの実施形態において、高親和性Ｔ細胞クローンが、患者から単離され得、ＴＣＲが単離され得る。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、培養されたＴ細胞ハイブリドーマまたはクローンであり得る。いくつかの実施形態において、標的抗原に対するＴＣＲクローンは、ヒト免疫系遺伝子（例えば、ヒト白血球抗原系すなわちＨＬＡ）で操作されたトランスジェニックマウスにおいて産生されたクローンである。例えば、腫瘍抗原（例えば、Ｐａｒｋｈｕｒｓｔｅｔａｌ．，２００９およびＣｏｈｅｎｅｔａｌ．，２００５）を参照のこと。いくつかの実施形態では、ファージディスプレイを用いて、標的抗原に対するＴＣＲが単離される（例えば、Ｖａｒｅｌａ－Ｒｏｈｅｎａｅｔａｌ．，２００８およびＬｉ，２００５を参照のこと）。いくつかの実施形態において、ＴＣＲまたはその抗原結合部分は、ＴＣＲの配列の知識によって合成的に作製され得る。

Ｃ．抗原提示細胞
マクロファージ、Ｂリンパ球および樹状細胞を含む抗原提示細胞は、特定のＭＨＣ分子の発現によって識別される。ＡＰＣは、抗原を内部移行し、その抗原の一部をＭＨＣ分子とともにその細胞膜の外膜上に再発現する。ＭＨＣは、複数の遺伝子座を含む大きな遺伝子複合体である。ＭＨＣ遺伝子座は、クラスＩおよびクラスＩＩＭＨＣと称されるＭＨＣ膜分子の主要な２クラスをコードする。Ｔヘルパーリンパ球は、一般に、ＭＨＣクラスＩＩ分子と会合した抗原を認識し、Ｔ細胞傷害性リンパ球は、ＭＨＣクラスＩ分子と会合した抗原を認識する。ＭＨＣは、ヒトではＨＬＡ複合体と称され、マウスではＨ－２複合体と称される。

いくつかの場合において、上記実施形態の治療的組成物および細胞療法用の生成物を調製する際には、ａＡＰＣが有用である。抗原提示システムの調製および使用に関する一般的ガイダンスについては、例えば、米国特許第６，２２５，０４２号、同第６，３５５，４７９号、同第６，３６２，００１号および同第６，７９０，６６２号；米国特許出願公開第２００９／００１７０００号および同第２００９／０００４１４２号；ならびに国際公開番号ＷＯ２００７／１０３００９を参照のこと。

ａＡＰＣシステムは、少なくとも１つの外来性の補助分子を含み得る。任意の好適な数および組み合わせの補助分子が使用され得る。補助分子は、共刺激分子および接着分子などの補助分子から選択され得る。例示的な共刺激分子としては、ＣＤ８６、ＣＤ６４（ＦｃγＲＩ）、４１ＢＢリガンドおよびＩＬ－２１が挙げられる。接着分子としては、例えば細胞間の接触または細胞とマトリックスとの接触を促進する、セレクチンなどの糖結合糖タンパク質、インテグリンなどの膜貫通結合糖タンパク質、カドヘリンなどのカルシウム依存性タンパク質、および細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）などの１回膜貫通型免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリータンパク質が挙げられ得る。例示的な接着分子としては、ＬＦＡ－３、およびＩＣＡＭ－１などのＩＣＡＭが挙げられる。共刺激分子および接着分子をはじめとした例示的な補助分子の選択、クローニング、調製および発現に有用な手法、方法および試薬は、例えば、米国特許第６，２２５，０４２号、同第６，３５５，４７９号および同第６，３６２，００１号に例証されている。

Ｄ．抗原
遺伝的に操作された抗原レセプターまたは無限免疫細胞上の天然に発現される抗原レセプター（例えば、ＴＣＲ）によって標的化される抗原には、養子細胞療法を介して標的化される疾患、状態または細胞型の状況において発現される抗原が含まれる。それらの疾患および状態には、血液癌、免疫系の癌（例えば、リンパ腫、白血病および／またはミエローマ、例えば、Ｂ、Ｔおよび骨髄性白血病、リンパ腫ならびに多発性骨髄腫）をはじめとした癌および腫瘍を含む、増殖性、腫瘍性および悪性の疾患および障害が含まれる。いくつかの実施形態において、抗原は、正常細胞もしくは正常組織または非標的化細胞もしくは非標的化組織と比べて、その疾患または状態の細胞上、例えば、腫瘍細胞上または病原性細胞上に、選択的に発現されるかまたは過剰発現される。他の実施形態において、抗原は、正常細胞上に発現され、かつ／または操作された細胞上に発現される。

任意の好適な抗原が、本方法において使用され得る。例示的な抗原としては、感染性物質、自己（ａｕｔｏ）抗原／自己（ｓｅｌｆ）抗原、腫瘍関連抗原／癌関連抗原、および腫瘍新抗原に由来する抗原性分子（Ｌｉｎｎｅｍａｎｎｅｔａｌ．，２０１５）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の態様において、それらの抗原には、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＳＬＡＭ－Ｆ７ＮＹ－ＥＳＯ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、Ｍｕｃ－１、Ｈｅｒ２、ＣＡ－１２５、ＷＴ－１、Ｍａｇｅ－Ａ３、Ｍａｇｅ－Ａ４、Ｍａｇｅ－Ａ１０、ＴＲＡＩＬ／ＤＲ４、ＣＥＡが含まれる。特定の態様において、１つまたは２つ以上の抗原レセプターに対する抗原としては、ＣＤ１９、ＥＢＮＡ、ＷＴ１、ＣＤ１２３、ＮＹ－ＥＳＯ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＭＵＣ１、ＨＥＲ２、ＣＡ－１２５、ＷＴ１、Ｍａｇｅ－Ａ３、Ｍａｇｅ－Ａ４、Ｍａｇｅ－Ａ１０、ＴＲＡＩＬ／ＤＲ４および／またはＣＥＡが挙げられるが、これらに限定されない。これらの抗原に対する配列は、当該分野で公知であり、例えば、以下のものである：ＣＤ１９（アクセッション番号ＮＧ＿００７２７５．１）、ＥＢＮＡ（アクセッション番号ＮＧ＿００２３９２．２）、ＷＴ１（アクセッション番号ＮＧ＿００９２７２．１）、ＣＤ１２３（アクセッション番号ＮＣ＿００００２３．１１）、ＮＹ－ＥＳＯ（アクセッション番号ＮＣ＿００００２３．１１）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（アクセッション番号ＮＧ＿００７７２６．３）、ＭＵＣ１（アクセッション番号ＮＧ＿０２９３８３．１）、ＨＥＲ２（アクセッション番号ＮＧ＿００７５０３．１）、ＣＡ－１２５（アクセッション番号ＮＧ＿０５５２５７．１）、ＷＴ１（アクセッション番号ＮＧ＿００９２７２．１）、Ｍａｇｅ－Ａ３（アクセッション番号ＮＧ＿０１３２４４．１）、Ｍａｇｅ－Ａ４（アクセッション番号ＮＧ＿０１３２４５．１）、Ｍａｇｅ－Ａ１０（アクセッション番号ＮＣ＿００００２３．１１）、ＴＲＡＩＬ／ＤＲ４（アクセッション番号ＮＣ＿０００００３．１２）、および／またはＣＥＡ（アクセッション番号ＮＣ＿００００１９．１０）。

腫瘍関連抗原は、前立腺癌、乳癌、直腸結腸癌、肺癌、膵臓癌、腎癌、中皮腫、卵巣癌または黒色腫に由来し得る。例示的な腫瘍関連抗原または腫瘍細胞由来抗原としては、ＭＡＧＥ１、３およびＭＡＧＥ４（または他のＭＡＧＥ抗原、例えば、国際特許公開番号ＷＯ９９／４０１８８に開示されているもの）；ＰＲＡＭＥ；ＢＡＧＥ；ＲＡＧＥ、Ｌａｇｅ（ＮＹＥＳＯ１としても知られる）；ＳＡＧＥ；およびＨＡＧＥまたはＧＡＧＥが挙げられる。腫瘍抗原のこれらの非限定的な例は、黒色腫、肺癌、肉腫および膀胱癌などの広範囲の腫瘍タイプにおいて発現される。例えば、米国特許第６，５４４，５１８号を参照のこと。前立腺癌の腫瘍関連抗原としては、例えば、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、前立腺酸性リン酸塩、ＮＫＸ３．１および前立腺の６回膜貫通上皮抗原（ＳＴＥＡＰ）が挙げられる。

他の腫瘍関連抗原としては、Ｐｌｕ－１、ＨＡＳＨ－１、ＨａｓＨ－２、ＣｒｉｐｔｏおよびＣｒｉｐｔｉｎが挙げられる。さらに、腫瘍抗原は、多くの癌の処置において有用な自己ペプチドホルモン、例えば、短い１０アミノ酸長のペプチドである完全長の性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）であり得る。

腫瘍抗原には、ＨＥＲ－２／ｎｅｕの発現などの腫瘍関連抗原の発現を特徴とする癌に由来する腫瘍抗原が含まれる。目的の腫瘍関連抗原には、系列特異的腫瘍抗原、例えば、メラノサイト－黒色腫系列抗原ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ、ｇｐ１００、ｇｐ７５、ｍｄａ－７、チロシナーゼおよびチロシナーゼ関連タンパク質が含まれる。例証的な腫瘍関連抗原としては、ｐ５３、Ｒａｓ、ｃ－Ｍｙｃ、細胞質セリン／トレオニンキナーゼ（例えば、Ａ－Ｒａｆ、Ｂ－ＲａｆおよびＣ－Ｒａｆ、サイクリン依存性キナーゼ）、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ１２、ＭＡＲＴ－１、ＢＡＧＥ、ＤＡＭ－６、－１０、ＧＡＧＥ－１、－２、－８、ＧＡＧＥ－３、－４、－５、－６、－７Ｂ、ＮＡ８８－Ａ、ＭＡＲＴ－１、ＭＣ１Ｒ、Ｇｐ１００、ＰＳＡ、ＰＳＭ、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＡＲＴ－４、ＣＡＭＥＬ、ＣＥＡ、Ｃｙｐ－Ｂ、ｈＴＥＲＴ、ｈＴＲＴ、ｉＣＥ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ホスホイノシチド３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、ＴＲＫレセプター、ＰＲＡＭＥ、Ｐ１５、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＲＴ－１、ＳＡＲＴ－３、ウィルムス腫瘍抗原（ＷＴ１）、ＡＦＰ、－カテニン／ｍ、カスパーゼ－８／ｍ、ＣＥＡ、ＣＤＫ－４／ｍ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧｎＴ－Ｖ、Ｇ２５０、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２、ＫＩＡＡ０２０５、ＭＵＭ－１、ＭＵＭ－２、ＭＵＭ－３、ミオシン／ｍ、ＲＡＧＥ、ＳＡＲＴ－２、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２、７０７－ＡＰ、アネキシンＩＩ、ＣＤＣ２７／ｍ、ＴＰＩ／ｍｂｃｒ－ａｂｌ、ＢＣＲ－ＡＢＬ、インターフェロン制御因子４（ＩＲＦ４）、ＥＴＶ６／ＡＭＬ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、Ｐｍｌ／ＲＡＲ、腫瘍関連カルシウムシグナル伝達物質１（ＴＡＣＳＴＤ１）ＴＡＣＳＴＤ２、レセプターチロシンキナーゼ（例えば、上皮成長因子レセプター（ＥＧＦＲ）（特に、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、血小板由来成長因子レセプター（ＰＤＧＦＲ）、血管内皮成長因子レセプター（ＶＥＧＦＲ））、細胞質チロシンキナーゼ（例えば、ｓｒｃファミリー、ｓｙｋ－ＺＡＰ７０ファミリー）、インテグリン結合キナーゼ（ＩＬＫ）、シグナル伝達性転写因子ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴＳおよびＳＴＡＴＥ、低酸素誘導因子（例えば、ＨＩＦ－１およびＨＩＦ－２）、核因子－カッパーＢ（ＮＦ－Ｂ）、Ｎｏｔｃｈレセプター（例えば、Ｎｏｔｃｈ１～４）、ｃ－Ｍｅｔ、ラパマイシンの哺乳動物標的（ｍＴＯＲ）、ＷＮＴ、細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）およびそれらの調節サブユニット、ＰＭＳＡ、ＰＲ－３、ＭＤＭ２、メソテリン、腎細胞癌－５Ｔ４、ＳＭ２２－アルファ、炭酸脱水酵素Ｉ（ＣＡＩ）およびＩＸ（ＣＡＩＸ）（Ｇ２５０としても知られる）、ＳＴＥＡＤ、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＧＤ２、プロテイナーゼ３、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点（ｓａｒｃｏｍａｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎｂｒｅａｋｐｏｉｎｔｓ）、ＥｐｈＡ２、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥｐＣＡＭ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、ＡＬＫ、アンドロゲンレセプター、サイクリンＢ１、ポリシアル酸、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＧＤ３、フコシルＧＭ１、メソテリアン（ｍｅｓｏｔｈｅｌｉａｎ）、ＰＳＣＡ、ｓＬｅ、ＰＬＡＣ１、ＧＭ３、ＢＯＲＩＳ、Ｔｎ、ＧＬｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＲＧｓＳ、ＳＡＲＴ３、ＳＴｎ、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、精子タンパク質１７、ＬＣＫ、ＨＭＷＭＡＡ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＸＡＧＥ１、Ｂ７Ｈ３、レグマイン（ｌｅｇｕｍａｉｎ）、ＴＩＥ２、Ｐａｇｅ４、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＦＡＰ、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ｆｏｓ関連抗原１、ＣＢＸ２、ＣＬＤＮ６、ＳＰＡＮＸ、ＴＰＴＥ、ＡＣＴＬ８、ＡＮＫＲＤ３０Ａ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＭＡＤ２Ｌ１、ＣＴＡＧ１Ｂ、ＳＵＮＣ１、ＬＲＲＮ１ならびにイディオタイプのうちのいずれか１つ以上に由来するかまたはいずれか１つ以上を含む腫瘍抗原が挙げられるが、これらに限定されない。

抗原は、腫瘍細胞において変異した遺伝子由来の、または正常細胞と比べて腫瘍細胞において異なるレベルで転写される遺伝子由来の、エピトープ領域またはエピトープペプチド（例えば、テロメラーゼ酵素、サバイビン、メソテリン、変異型ｒａｓ、ｂｃｒ／ａｂｌ再配列、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、変異型または野生型ｐ５３、シトクロムＰ４５０１Ｂ１、およびＮ－アセチルグルコサミン転移酵素－Ｖなどの異常に発現されるイントロン配列）；ミエローマおよびＢ細胞リンパ腫においてユニークなイディオタイプを生成する免疫グロブリン遺伝子のクローン性再配列；オンコウイルスのプロセスに由来するエピトープ領域またはエピトープペプチドを含む腫瘍抗原（例えば、ヒトパピローマウイルスタンパク質Ｅ６およびＥ７）；エプスタイン・バーウイルスタンパク質ＬＭＰ２；腫瘍選択的に発現する変異していない腫瘍胎児性タンパク質（例えば、癌胎児抗原およびアルファ－フェトプロテイン）を含み得る。

ある特定の実施形態において、抗原は、微生物の抗原であり得る。いくつかの実施形態において、抗原は、病原性微生物または日和見病原性微生物（本明細書中で感染症微生物とも呼ばれる）（例えば、ウイルス、真菌、寄生生物および細菌）から得られるかまたはそれらに由来する。ある特定の実施形態において、そのような微生物に由来する抗原には、完全長タンパク質が含まれる。

本明細書中に記載される方法において使用が企図される抗原を有する例証的な病原性生物としては、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、インフルエンザＡ、ＢおよびＣ、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、ポリオーマウイルス（例えば、ＢＫウイルスおよびＪＣウイルス）、アデノウイルス、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２またはＭＥＲＳなどのコロナウイルス、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）を含むブドウ球菌属の種、ならびにＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅを含む連鎖球菌属の種が挙げられる。当業者が理解するように、本明細書中に記載されるような抗原として使用するためのこれらおよび他の病原性微生物に由来するタンパク質、ならびにそれらのタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、刊行物ならびにＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）、ＳＷＩＳＳ－ＰＲＯＴ（登録商標）およびＴＲＥＭＢＬ（登録商標）などの公的データベースにおいて特定され得る。

ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に由来する抗原には、ＨＩＶビリオン構造タンパク質（例えば、ｇｐ１２０、ｇｐ４１、ｐ１７、ｐ２４）、プロテアーゼ、逆転写酵素、またはｔａｔ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、ｖｉｆ、ｖｐｒおよびｖｐｕによってコードされるＨＩＶタンパク質のうちのいずれかが含まれる。

単純ヘルペスウイルス（例えば、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２）に由来する抗原としては、ＨＳＶ後期遺伝子から発現されるタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。後期群の遺伝子は、ビリオン粒子を形成するタンパク質を主にコードする。そのようなタンパク質としては、ウイルスキャプシドを形成する（ＵＬ）の５つのタンパク質：ＵＬ６、ＵＬ１８、ＵＬ３５、ＵＬ３８ならびに主要キャプシドタンパク質ＵＬ１９、ＵＬ４５およびＵＬ２７が挙げられ、これらの各々が、本明細書中に記載されるような抗原として使用され得る。本明細書中で抗原としての使用が企図される他の例証的なＨＳＶタンパク質としては、ＩＣＰ２７（Ｈ１、Ｈ２）、糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）および糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）タンパク質が挙げられる。ＨＳＶゲノムは、少なくとも７４個の遺伝子を含み、その各々が、抗原として使用され得る可能性があるタンパク質をコードする。

サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）に由来する抗原としては、ＣＭＶ構造タンパク質、ウイルス複製の前初期および初期に発現されるウイルス抗原、糖タンパク質ＩおよびＩＩＩ、キャプシドタンパク質、コートタンパク質、低分子マトリックスタンパク質（ｌｏｗｅｒｍａｔｒｉｘｐｒｏｔｅｉｎ）ｐｐ６５（ｐｐＵＬ８３）、ｐ５２（ｐｐＵＬ４４）、ＩＥ１および１Ｅ２（ＵＬ１２３およびＵＬ１２２）、ＵＬ１２８～ＵＬ１５０の遺伝子クラスターのタンパク質産物（Ｒｙｋｍａｎ，ｅｔａｌ．，２００６）、エンベロープ糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）、ｇＨ、ｇＮ、ならびにｐｐ１５０が挙げられる。当業者が理解するように、本明細書中に記載される抗原として使用するためのＣＭＶタンパク質は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）、ＳＷＩＳＳ－ＰＲＯＴ（登録商標）およびＴＲＥＭＢＬ（登録商標）などの公的データベースにおいて特定され得る（例えば、Ｂｅｎｎｅｋｏｖｅｔａｌ．，２００４；Ｌｏｅｗｅｎｄｏｒｆｅｔａｌ．，２０１０；Ｍａｒｓｃｈａｌｌｅｔａｌ．，２００９を参照のこと）。

ある特定の実施形態において使用が企図されるエプスタイン・バンウイルス（ＥＢＶ）に由来する抗原としては、ＥＢＶ溶解性タンパク質ｇｐ３５０およびｇｐ１１０、エプスタイン・バン核抗原（ＥＢＮＡ）－１、ＥＢＮＡ－２、ＥＢＮＡ－３Ａ、ＥＢＮＡ－３Ｂ、ＥＢＮＡ－３Ｃ、ＥＢＮＡ－リーダータンパク質（ＥＢＮＡ－ＬＰ）、ならびに潜伏感染膜タンパク質（ＬＭＰ）－１、ＬＭＰ－２ＡおよびＬＭＰ－２Ｂを含む、潜伏感染サイクル中に生成されるＥＢＶタンパク質が挙げられる（例えば、Ｌｏｃｋｅｙｅｔａｌ．，２００８を参照のこと）。

本明細書中で使用が企図される呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）に由来する抗原には、ＲＳＶゲノムによってコードされる１１個のタンパク質またはそれらの抗原性フラグメント：ＮＳ１、ＮＳ２、Ｎ（ヌクレオキャプシドタンパク質）、Ｍ（マトリックスタンパク質）ＳＨ、ＧおよびＦ（ウイルスコートタンパク質）、Ｍ２（第２のマトリックスタンパク質）、Ｍ２－１（伸長因子）、Ｍ２－２（転写制御）、ＲＮＡポリメラーゼ、ならびにリンタンパク質Ｐのうちのいずれかが含まれる。

使用が企図される水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）に由来する抗原には、ＶＳＶゲノムによってコードされる主要な５つのタンパク質およびそれらの抗原性フラグメント：巨大タンパク質（Ｌ）、糖タンパク質（Ｇ）、核タンパク質（Ｎ）、リンタンパク質（Ｐ）およびマトリックスタンパク質（Ｍ）のうちのいずれか１つが含まれる（例えば、Ｒｉｅｄｅｒｅｔａｌ．，１９９９を参照のこと）。

ある特定の実施形態において使用が企図されるインフルエンザウイルスに由来する抗原としては、赤血球凝集素（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、核タンパク質（ＮＰ）、マトリックスタンパク質Ｍ１およびＭ２、ＮＳ１、ＮＳ２（ＮＥＰ）、ＰＡ、ＰＢ１、ＰＢ１－Ｆ２、ならびにＰＢ２が挙げられる。

例示的なウイルス抗原としては、アデノウイルスのポリペプチド、アルファウイルスのポリペプチド、カリシウイルスのポリペプチド（例えば、カリシウイルスのキャプシド抗原）、コロナウイルスのポリペプチド、ジステンパーウイルスのポリペプチド、エボラウイルスのポリペプチド、エンテロウイルスのポリペプチド、フラビウイルスのポリペプチド、肝炎ウイルス（ＡＥ）のポリペプチド（Ｂ型肝炎コアまたは表面抗原、Ｃ型肝炎ウイルスのＥ１もしくはＥ２糖タンパク質、コアまたは非構造タンパク質）、ヘルペスウイルスのポリペプチド（単純ヘルペスウイルスまたは水痘帯状疱疹ウイルスの糖タンパク質を含む）、感染性腹膜炎ウイルスのポリペプチド、白血病ウイルスのポリペプチド、マールブルグウイルスのポリペプチド、オルトミクソウイルスのポリペプチド、パピローマウイルスのポリペプチド、パラインフルエンザウイルスのポリペプチド（例えば、赤血球凝集素ポリペプチドおよびノイラミニダーゼポリペプチド）、パラミクソウイルスのポリペプチド、パルボウイルスのポリペプチド、ペスチウイルスのポリペプチド、ピコルナウイルスのポリペプチド（例えば、ポリオウイルスのキャプシドポリペプチド）、ポックスウイルスのポリペプチド（例えば、ワクシニアウイルスのポリペプチド）、狂犬病ウイルスのポリペプチド（例えば、狂犬病ウイルスの糖タンパク質Ｇ）、レオウイルスのポリペプチド、レトロウイルスのポリペプチド、およびロタウイルスのポリペプチドも挙げられるが、これらに限定されない。

ある特定の実施形態において、抗原は、細菌抗原であり得る。ある特定の実施形態において、目的の細菌抗原は、分泌型ポリペプチドであり得る。他のある特定の実施形態において、細菌抗原には、細菌の細胞外面上に露出したポリペプチドの一部を有する抗原が含まれる。

使用が企図される、メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）を含むブドウ球菌属の種に由来する抗原としては、ビルレンス制御因子、例えば、Ａｇｒシステム、ＳａｒおよびＳａｅ、Ａｒｌシステム、Ｓａｒホモログ（Ｒｏｔ、ＭｇｒＡ、ＳａｒＳ、ＳａｒＲ、ＳａｒＴ、ＳａｒＵ、ＳａｒＶ、ＳａｒＸ、ＳａｒＺおよびＴｃａＲ）、ＳｒｒシステムならびにＴＲＡＰが挙げられる。抗原として役立ち得る他のブドウ球菌属のタンパク質としては、Ｃｌｐタンパク質、ＨｔｒＡ、ＭｓｒＲ、アコニターゼ、ＣｃｐＡ、ＳｖｒＡ、Ｍｓａ、ＣｆｖＡおよびＣｆｖＢが挙げられる（例えば、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ：ＭｏｌｅｃｕｌａｒＧｅｎｅｔｉｃｓ，２００８ＣａｉｓｔｅｒＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，Ｅｄ．ＪｏｄｉＬｉｎｄｓａｙを参照のこと）。Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓの２種（Ｎ３１５およびＭｕ５０）のゲノムが、配列決定済みであり、例えば、ＰＡＴＲＩＣ（ＰＡＴＲＩＣ：ＴｈｅＶＢＩＰａｔｈｏＳｙｓｔｅｍｓＲｅｓｏｕｒｃｅＩｎｔｅｇｒａｔｉｏｎＣｅｎｔｅｒ，Ｓｎｙｄｅｒｅｔａｌ．，２００７）において公的に入手可能である。当業者が理解するように、抗原として使用するためのブドウ球菌属のタンパク質は、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）、Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ（登録商標）およびＴｒＥＭＢＬ（登録商標）などの他の公的データベースにおいても特定され得る。

本明細書中に記載されるある特定の実施形態において使用が企図されるＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに由来する抗原としては、ニューモリシン、ＰｓｐＡ、コリン結合タンパク質Ａ（ＣｂｐＡ）、ＮａｎＡ、ＮａｎＢ、ＳｐｎＨＬ、ＰａｖＡ、ＬｙｔＡ、Ｐｈｔおよびピリンタンパク質（ＲｒｇＡ；ＲｒｇＢ；ＲｒｇＣ）が挙げられる。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの抗原性タンパク質も、当該分野で公知であり、いくつかの実施形態において抗原として使用され得る（例えば、Ｚｙｓｋｅｔａｌ．，２０００を参照のこと）。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの毒性株の全ゲノム配列は、配列決定済みであり、当業者が理解するように、本明細書中で使用するためのＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅタンパク質は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）、ＳＷＩＳＳ－ＰＲＯＴ（登録商標）およびＴＲＥＭＢＬ（登録商標）などの他の公的データベースにおいても特定され得る。本開示に係る抗原として特に興味深いタンパク質としては、肺炎球菌の表面に露出すると予測される病原性因子およびタンパク質が挙げられる（例えば、Ｆｒｏｌｅｔｅｔａｌ．，２０１０を参照のこと）。

抗原として使用され得る細菌抗原の例としては、アクチノマイセス属のポリペプチド、バチルス属のポリペプチド、バクテロイデス属のポリペプチド、ボルデテラ属のポリペプチド、バルトネラ属のポリペプチド、ボレリア属のポリペプチド（例えば、Ｂ．ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉＯｓｐＡ）、ブルセラ属のポリペプチド、カンピロバクター属のポリペプチド、キャプノサイトファーガ属のポリペプチド、クラミジア属のポリペプチド、コリネバクテリウム属のポリペプチド、コクシエラ属のポリペプチド、デルマトフィルス属のポリペプチド、エンテロコッカス属のポリペプチド、エーリキア属のポリペプチド、エシェリキア属のポリペプチド、フランシセラ属のポリペプチド、フソバクテリウム属のポリペプチド、ヘモバルトネラ属のポリペプチド、ヘモフィルス属のポリペプチド（例えば、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅｂ型外膜タンパク質）、ヘリコバクター属のポリペプチド、クレブシエラ属のポリペプチド、Ｌ型細菌のポリペプチド、レプトスピラ属のポリペプチド、リステリア属のポリペプチド、マイコバクテリウム属のポリペプチド、マイコプラズマ属のポリペプチド、ナイセリア属のポリペプチド、ネオリケッチア属のポリペプチド、ノカルジア属のポリペプチド、パスツレラ属のポリペプチド、ペプトコッカス属のポリペプチド、ペプトストレプトコッカス属のポリペプチド、肺炎球菌のポリペプチド（すなわち、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅのポリペプチド）（本明細書中の説明を参照のこと）、プロテウス属のポリペプチド、シュードモナス属のポリペプチド、リケッチア属のポリペプチド、ロシャリメア属のポリペプチド、サルモネラ属のポリペプチド、シゲラ属のポリペプチド、ブドウ球菌属のポリペプチド、Ａ群連鎖球菌のポリペプチド（例えば、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓのＭタンパク質）、Ｂ群連鎖球菌（Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ）のポリペプチド、トレポネーマ属のポリペプチド、およびエルシニア属のポリペプチド（例えば、ＹｐｅｓｔｉｓのＦ１およびＶ抗原）が挙げられるが、これらに限定されない。

真菌抗原の例としては、アブシディア属のポリペプチド、アクレモニウム属のポリペプチド、アルテルナリア属のポリペプチド、アスペルギルス属のポリペプチド、バシジオボラス属のポリペプチド、ビポラーリス属のポリペプチド、ブラストミセス属のポリペプチド、カンジダ属のポリペプチド、コクシジオイデス属のポリペプチド、コニディオボラス属のポリペプチド、クリプトコッカス属のポリペプチド、カーバラリア属のポリペプチド、エピデルモフィトン属のポリペプチド、エクソフィアラ属のポリペプチド、ゲオトリクム属のポリペプチド、ヒストプラズマ属のポリペプチド、マヅレラ属のポリペプチド、マラセチア属のポリペプチド、ミクロスポルム属のポリペプチド、モニリエラ属のポリペプチド、モルチエレラ属のポリペプチド、ケカビ属のポリペプチド、ペシロマイセス属のポリペプチド、ペニシリウム属のポリペプチド、フィアレモニウム属（Ｐｈｉａｌｅｍｏｎｉｕｍ）のポリペプチド、フィアロフォラ属のポリペプチド、プロトテカ属のポリペプチド、シュードアレシェリア属のポリペプチド、シュードミクロドキウム属（Ｐｓｅｕｄｏｍｉｃｒｏｄｏｃｈｉｕｍ）のポリペプチド、フィチウム属のポリペプチド、リノスポリジウム属のポリペプチド、クモノスカビ属のポリペプチド、スコレコバシジウム属（Ｓｃｏｌｅｃｏｂａｓｉｄｉｕｍ）のポリペプチド、スポロトリクス属のポリペプチド、ステンフィリウム属（Ｓｔｅｍｐｈｙｌｉｕｍ）のポリペプチド、白癬菌属のポリペプチド、トリコスポロン属のポリペプチドおよびキシロヒファ属（Ｘｙｌｏｈｙｐｈａ）のポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。

原生動物の寄生生物抗原の例としては、バベシア属のポリペプチド、バランチジウム属のポリペプチド、ベスノイチア属（Ｂｅｓｎｏｉｔｉａ）のポリペプチド、クリプトスポリジウム属のポリペプチド、エイメリア属のポリペプチド、エンセファリトゾーン属のポリペプチド、エントアメーバ属のポリペプチド、ジアルジア属のポリペプチド、ハモンディア属（Ｈａｍｍｏｎｄｉａ）のポリペプチド、ヘパトゾーン属のポリペプチド、イソスポラ属のポリペプチド、リーシュマニア属のポリペプチド、微胞子虫門のポリペプチド、ネオスポラ属のポリペプチド、ノゼマ属のポリペプチド、ペンタトリコモナス属のポリペプチド、プラスモディウム属のポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。蠕虫寄生生物抗原の例としては、アカントケイロネマ属のポリペプチド、アエルロストロンギルウス属（Ａｅｌｕｒｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ）のポリペプチド、鉤虫属のポリペプチド、住血線虫属のポリペプチド、回虫属のポリペプチド、ブルギア属のポリペプチド、ブノストムム属のポリペプチド、キャピラリア属のポリペプチド、カベルチア属（Ｃｈａｂｅｒｔｉａ）のポリペプチド、クーペリア属のポリペプチド、クレノソマ属（Ｃｒｅｎｏｓｏｍａ）のポリペプチド、ディクチオカウルス属のポリペプチド、ジオクトフィーメ属のポリペプチド、ディペタロネマ属のポリペプチド、裂頭条虫属のポリペプチド、ジプリジウム属のポリペプチド、イヌ糸状虫属のポリペプチド、ドラクンクルス属のポリペプチド、エンテロビウス属のポリペプチド、フィラロイデス属（Ｆｉｌａｒｏｉｄｅｓ）のポリペプチド、ヘモンクス属のポリペプチド、ラゴキラスカリス属（Ｌａｇｏｃｈｉｌａｓｃａｒｉｓ）のポリペプチド、ロア糸状虫属（Ｌｏａ）のポリペプチド、マンソネラ属のポリペプチド、ムエレリウス属（Ｍｕｅｌｌｅｒｉｕｓ）のポリペプチド、ナノフィエツス属（Ｎａｎｏｐｈｙｅｔｕｓ）のポリペプチド、アメリカ鉤虫属のポリペプチド、ネマトジルス属のポリペプチド、腸結節虫属のポリペプチド、オンコセルカ属のポリペプチド、オピストルキス属のポリペプチド、オステルタギア属のポリペプチド、パラフィラリア属（Ｐａｒａｆｉｌａｒｉａ）のポリペプチド、肺吸虫属のポリペプチド、パラスカリス属（Ｐａｒａｓｃａｒｉｓ）のポリペプチド、フィサロプテラ属のポリペプチド、プロトストロンギルス属（Ｐｒｏｔｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ）のポリペプチド、セタリア属のポリペプチド、スピロセルカ属（Ｓｐｉｒｏｃｅｒｃａ）のポリペプチドスピロメトラ属のポリペプチド、ステファノフィラリア属のポリペプチド、ストロンギロイデス属のポリペプチド、ストロンギルス属のポリペプチド、テラジア属のポリペプチド、トキサスカリス属のポリペプチド、トキソカラ属のポリペプチド、旋毛虫属のポリペプチド、毛様線虫属のポリペプチド、鞭虫属のポリペプチド、ウンシナリア属のポリペプチドおよびウケレリア属のポリペプチド（例えば、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍのスポロゾイト周囲ポリペプチド（ＰｆＣＳＰ））、スポロゾイト表面タンパク質２（ＰｆＳＳＰ２）、肝臓状態抗原（ｌｉｖｅｒｓｔａｔｅａｎｔｉｇｅｎ）１のカルボキシル末端（ＰｆＬＳＡ１ｃ末端）、ならびに搬出タンパク質１（ＰｆＥｘｐ－１）、ニューモシスチス属のポリペプチド、サルコシスティス属のポリペプチド、住血吸虫属のポリペプチド、タイレリア属のポリペプチド、トキソプラズマ属のポリペプチド、ならびにトリパノソーマ属のポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。

外寄生生物抗原の例としては、ノミ；カタダニおよびヒメダニを含むマダニ；ハエ、例えば、小虫、蚊、スナバエ、ブユ、ウマバエ、ノサシバエ、メクラアブ、ツェツェバエ、サシバエ、ハエ幼虫症の原因となるハエおよび刺して血を吸う小さな羽虫（ｂｉｔｉｎｇｇｎａｔｓ）；アリ；クモ、シラミ；ダニ；ならびに半翅類の昆虫、例えば、トコジラミおよびサシガメのポリペプチド（抗原ならびにアレルゲンを含む）が挙げられるが、これらに限定されない。

Ｅ．自殺遺伝子
本開示の無限免疫細胞（１つ以上のＣＡＲおよび／または１つ以上の操作されたＴＣＲを発現し得る免疫細胞を含む）は、１つ以上の自殺遺伝子を含み得る。本明細書中で使用される用語「自殺遺伝子」は、プロドラッグが投与された際に、遺伝子産物が、宿主細胞を殺滅する化合物に変化する遺伝子と定義される。使用され得る自殺遺伝子／プロドラッグの組み合わせの例は、切断型ＥＧＦＲとセツキシマブ；単純ヘルペスウイルス－チミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ｔｋ）と、ガンシクロビル、アシクロビルまたはＦＩＡＵ；オキシドレダクターゼとシクロヘキシミド；シトシンデアミナーゼと５－フルオロシトシン；チミジンキナーゼチミジル酸キナーゼ（Ｔｄｋ：：Ｔｍｋ）とＡＺＴ；およびデオキシシチジンキナーゼとシトシンアラビノシドである。

Ｖ．上記細胞への送達方法
当業者であれば、本開示の抗原レセプターを発現させるために標準的な組換え手法（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．，２００１およびＡｕｓｕｂｅｌｅｔａｌ．，１９９６（両方が参照により本明細書中に援用される）を参照のこと）によってベクターを構築する能力を充分に備えているだろう。ベクターとしては、プラスミド、コスミド、ウイルス（バクテリオファージ、動物ウイルスおよび植物ウイルス）および人工染色体（例えば、ＹＡＣ）、例えば、レトロウイルスベクター（例えば、モロニーマウス白血病ウイルスベクター（ＭｏＭＬＶ）、ＭＳＣＶ、ＳＦＦＶ、ＭＰＳＶ、ＳＮＶなどに由来するもの）、レンチウイルスベクター（例えば、ＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２、ＳＩＶ、ＢＩＶ、ＦＩＶなどに由来するもの）、アデノウイルス（Ａｄ）ベクター（その複製可能型、複製欠損型およびガットレス型（ｇｕｔｌｅｓｓｆｏｒｍｓ）を含む）、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、サルウイルス４０（ＳＶ－４０）ベクター、ウシパピローマウイルスベクター、エプスタイン・バーウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、ハーベイマウス肉腫ウイルスベクター、マウス乳癌ウイルスベクター、ラウス肉腫ウイルスベクター、パルボウイルスベクター、ポリオウイルスベクター、水疱性口内炎ウイルスベクター、マラバウイルス（ｍａｒａｂａｖｉｒｕｓ）ベクターおよびＢ群アデノウイルスｅｎａｄｅｎｏｔｕｃｉｒｅｖベクターが挙げられるがこれらに限定されない。

Ａ．ウイルスベクター
ＢＣＬ６ならびに細胞生存促進遺伝子および／または抗原レセプターをコードするウイルスベクターが、本開示のある特定の態様において提供され得る。組換えウイルスベクターを作製する際、必須ではない遺伝子は、通常、異種（または非天然）タンパク質の遺伝子またはコード配列で置き換えられる。ウイルスベクターは、ウイルス配列を利用して、核酸ポリマーおよび場合によってはタンパク質を細胞に導入する一種の発現構築物である。ある特定のウイルスが細胞に感染する能力またはレセプター媒介性のエンドサイトーシスを介して細胞に侵入する能力、および宿主細胞のゲノムにインテグレートし、ウイルス遺伝子を安定かつ効率的に発現する能力によって、それらのウイルスが、外来核酸ポリマーを細胞（例えば、哺乳動物細胞）に移行させるための魅力的な候補になった。本開示のある特定の態様の核酸ポリマーを送達するために使用され得るウイルスベクターの非限定的な例を下記に記載する。

レンチウイルスは、複雑なレトロウイルスであり、一般的なレトロウイルス遺伝子であるｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖに加えて、調節機能または構造機能を有する他の遺伝子も含む。レンチウイルスベクターは、当該分野で周知である（例えば、米国特許第６，０１３，５１６号および同第５，９９４，１３６号を参照のこと）。

組換えレンチウイルスベクターは、非分裂細胞に感染することができ、インビボとエキソビボの両方において遺伝子導入および核酸ポリマー配列発現のために使用され得る。例えば、非分裂細胞に感染することができる組換えレンチウイルス（ここで、好適な宿主細胞が、パッケージング機能を有する２つ以上のベクター、すなわちｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖ、ならびにｒｅｖおよびｔａｔでトランスフェクトされる）は、参照により本明細書中に援用される米国特許第５，９９４，１３６号に記載されている。

Ｂ．調節エレメント
本開示において有用なベクターに含められる発現カセットは、特に、タンパク質コード配列に作動可能に連結された真核生物転写プロモーター、介在配列を含むスプライスシグナル、および転写終結／ポリアデニル化配列を（５’から３’の方向で）含む。タンパク質をコードする遺伝子の転写を真核細胞において制御するプロモーターおよびエンハンサーは、複数の遺伝的エレメントから構成される。細胞機構は、各エレメントによって運ばれる調節情報を集め、統合することができ、それにより、異なる遺伝子が、多くの場合は複雑なパターンである異なるパターンの転写制御を展開することが可能になる。本開示の状況において使用されるプロモーターとしては、構成的プロモーター、誘導性プロモーターおよび組織特異的プロモーターが挙げられる。

Ｃ．プロモーター／エンハンサー
本明細書中に提供される発現構築物は、抗原レセプターの発現を駆動するプロモーターを含む。プロモーターは、一般に、ＲＮＡ合成のための開始部位の位置を特定するように機能する配列を含む。これの最もよく知られている例は、ＴＡＴＡボックスであるが、哺乳動物のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ遺伝子のプロモーターおよびＳＶ４０後期遺伝子のプロモーターなど、一部のプロモーターでは、ＴＡＴＡボックスを欠き、開始部位自体と重なっている不連続なエレメントが、開始の場所を固定するのを助ける。さらなるプロモーターエレメントが、転写開始の頻度を制御する。通常、これらは、開始部位の３０１１０ｂｐ上流の領域に位置するが、いくつかのプロモーターは、開始部位の下流にも機能的エレメントを含むと示されている。コード配列をプロモーター「の支配下に」するためには、転写読み枠の転写開始部位の５’末端を、選択されたプロモーターの「下流」（すなわち、３’）に置く。「上流」のプロモーターは、ＤＮＡの転写を刺激し、コードされるＲＮＡの発現を促進する。

プロモーターエレメント間の間隔は、変更がきくことが多く、エレメントが、反転されるかまたは互いに対して移動された場合でも、プロモーターの機能は保存される。ｔｋプロモーターでは、プロモーターエレメント間の間隔は、活性が低下し始めるまで最大５０ｂｐ広げられ得る。プロモーターに応じて、個々のエレメントは、協同的にまたは独自に機能して転写を活性化し得るとみられる。プロモーターは、核酸配列の転写性の活性化に関わるシス作用性制御配列のことを指す「エンハンサー」と併せて使用されてもよいし、使用されなくてもよい。

プロモーターは、コードセグメントおよび／またはエキソンの上流に位置する５’非コード配列を単離することによって得られることがあるような、ある核酸配列と天然に会合したプロモーターであり得る。そのようなプロモーターは、「内在性」プロモーターと呼ぶことができる。同様に、エンハンサーは、ある核酸配列の下流または上流に位置する、その配列と天然に会合したエンハンサーであり得る。あるいは、ある核酸配列とその天然の環境では天然には会合していないプロモーターのことを指す、組換えプロモーターまたは異種プロモーターの支配下にコード核酸セグメントを置くことによって、一定の利点が得られる。また、組換えエンハンサーまたは異種エンハンサーは、その天然の環境では核酸配列と天然には会合していないエンハンサーのことを指す。そのようなプロモーターまたはエンハンサーには、他の遺伝子のプロモーターまたはエンハンサー、ならびに他の任意のウイルスまたは原核細胞もしくは真核細胞から単離されたプロモーターまたはエンハンサー、ならびに「天然に存在」しない、すなわち、種々の転写制御領域の種々のエレメントおよび／または発現を変化させる変異を含む、プロモーターまたはエンハンサーが含まれ得る。例えば、組換えＤＮＡの構築において最もよく使用されるプロモーターとしては、βラクタマーゼ（ペニシリナーゼ）、ラクトースおよびトリプトファン（ｔｒｐ－）プロモーターシステムが挙げられる。プロモーターおよびエンハンサーの核酸配列を合成的に作製することに加えて、組換えクローニング、および／またはＰＣＲ^ＴＭをはじめとした核酸増幅技術を用いて、ある配列が、本明細書中に開示される組成物に関連して作製され得る。さらに、核以外のオルガネラ（例えば、ミトコンドリア、葉緑体など）内での配列の転写および／または発現を指示する調節配列も同様に使用できることが企図される。

当然、発現のために選択されたオルガネラ、細胞型、組織、器官または生物におけるＤＮＡセグメントの発現を効果的に指示するプロモーターおよび／またはエンハンサーを使用することが重要になる。分子生物学の当業者は、一般に、タンパク質発現のために、プロモーター、エンハンサーおよび細胞型の組み合わせを使用することを承知している（例えば、参照により本明細書中に援用されるＳａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．１９８９を参照のこと）。使用されるプロモーターは、構成的プロモーター、組織特異的プロモーター、誘導性プロモーター、および／または導入されたＤＮＡセグメントの高レベル発現を指示する、適切な条件下において有用なプロモーター（例えば、組換えタンパク質および／または組換えペプチドの大規模生成において有益なプロモーター）であり得る。そのプロモーターは、異種であっても、内在性であってもよい。

さらに、任意のプロモーター／エンハンサーの組み合わせ（例えば、ｅｐｄ．ｉｓｂ－ｓｉｂ．ｃｈ／のワールドワイドウェブを介したＥｕｋａｒｙｏｔｉｃＰｒｏｍｏｔｅｒＤａｔａＢａｓｅＥＰＤＢに従って）も、発現を駆動するために使用され得る。Ｔ３、Ｔ７またはＳＰ６細胞質発現系の使用が、別の実行可能な実施形態である。適切な細菌ポリメラーゼが、送達複合体の一部としてまたはさらなる遺伝的発現構築物として提供される場合、真核細胞は、ある特定の細菌プロモーターからの細胞質での転写を支持し得る。

プロモーターの非限定的な例としては、初期ウイルスプロモーターまたは後期ウイルスプロモーター（例えば、ＳＶ４０初期または後期プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）初期プロモーター）；真核細胞プロモーター（例えば、ベータアクチンプロモーター、ＧＡＤＰＨプロモーター、メタロチオネインプロモーター）；および連鎖状応答エレメントプロモーター（例えば、サイクリックＡＭＰ応答エレメントプロモーター（ｃｒｅ）、血清応答エレメントプロモーター（ｓｒｅ）、ホルボールエステルプロモーター（ＴＰＡ）およびミニマルＴＡＴＡボックス近傍の応答エレメントプロモーター（ｔｒｅ））が挙げられる。ヒト成長ホルモンプロモーター配列（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋに記載されているヒト成長ホルモンミニマルプロモーター、アクセッション番号Ｘ０５２４４、ヌクレオチド２８３～３４１）またはマウス乳腺腫瘍プロモーター（ＡＴＣＣから入手可能，Ｃａｔ．Ｎｏ．ＡＴＣＣ４５００７）を使用することも可能である。ある特定の実施形態において、プロモーターは、ＣＭＶＩＥ、デクチン－１、デクチン－２、ヒトＣＤ１１ｃ、Ｆ４／８０、ＳＭ２２、ＲＳＶ、ＳＶ４０、ＡｄＭＬＰ、ベータ－アクチン、ＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩプロモーターであるが、しかしながら、治療用の遺伝子の発現を駆動するために有用な他の任意のプロモーターも本開示の実施に適用できる。

ある特定の態様において、本開示の方法は、エンハンサー配列、すなわち、プロモーターの活性を増加させる核酸配列であって、シスで、かつその向きを問わず、比較的長い距離（標的プロモーターから最大数キロベース離れた距離）にわたって作用する能力を有する核酸配列にも関する。しかしながら、エンハンサーは、所与のプロモーターに対して近位でも機能し得るので、エンハンサーの機能は必ずしもそのような長い距離に限定されない。

Ｄ．開始シグナルおよび連結発現
コード配列の効率的な翻訳のために、本開示に提供される発現構築物において、特異的な開始シグナルも使用され得る。これらのシグナルは、ＡＴＧ開始コドンまたは隣接配列を含む。外来性の翻訳制御シグナル（ＡＴＧ開始コドンを含む）が提供される必要がある場合がある。当業者であれば、これを判断することおよび必要なシグナルを提供することが容易にできるだろう。インサート全体の翻訳を確保するためには、開始コドンが、所望のコード配列の読み枠と「インフレーム」でなければならないことは周知である。その外来性の翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、天然のものまたは合成のものであり得る。適切な転写エンハンサーエレメントを含めることによって、発現効率が高められ得る。

ある特定の実施形態において、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）エレメントの使用は、多重遺伝子のメッセージ、すなわちポリシストロニックなメッセージを生成するために使用される。ＩＲＥＳエレメントは、５’メチル化キャップ依存的翻訳のリボソームスキャニングモデルを迂回し、内部の部位において翻訳を開始することができる。ピコルナウイルス科の２つのメンバー（ポリオおよび脳心筋炎）由来のＩＲＥＳエレメント、ならびに哺乳動物のメッセージ由来のＩＲＥＳが、報告されている。ＩＲＥＳエレメントは、異種のオープンリーディングフレームに連結できる。各々がＩＲＥＳによって隔てられた複数のオープンリーディングフレームを一緒に転写することができ、ポリシストロニックなメッセージを生成できる。ＩＲＥＳエレメントのおかげで、各オープンリーディングフレームが、効率的な翻訳のためにリボソームに接近できるようになる。単一のプロモーター／エンハンサーを用いて複数の遺伝子を効率的に発現して、単一のメッセージを転写することもできる。

さらに、本開示に提供される構築物内の遺伝子の連結発現または同時発現をもたらすために、ある特定の２Ａ配列エレメントが使用され得る。例えば、オープンリーディングフレームを連結して単一のシストロンを形成することによって遺伝子を同時発現するために、切断配列が使用され得る。例示的な切断配列は、Ｆ２Ａ（口蹄疫ウイルス２Ａ）または「２Ａ様」配列（例えば、Ｔｈｏｓｅａａｓｉｇｎａウイルス２Ａ；Ｔ２Ａ）である。

Ｅ．複製開始点
宿主細胞においてベクターを増殖させるために、そのベクターは、１つ以上の複製開始部位（「ｏｒｉ」と呼ばれることが多い）、例えば、複製が開始される特異的な核酸配列である、上に記載されたようなＥＢＶのｏｒｉＰまたはプログラミングにおける機能が似ているかもしくは高められた遺伝的に操作されたｏｒｉＰに対応する核酸配列を含み得る。あるいは、上に記載されたような染色体外で複製する他のウイルスの複製開始点、または自律複製配列（ＡＲＳ）を使用することができる。

Ｆ．選択マーカーおよびスクリーニング可能なマーカー
いくつかの実施形態において、本開示の構築物を含む細胞は、マーカーを発現ベクターに含めることによって、インビトロまたはインビボにおいて特定され得る。そのようなマーカーは、発現ベクターを含む細胞を容易に特定できるようにする特定可能な変化を細胞にもたらす。一般に、選択マーカーは、選択を可能にする特性を付与するマーカーである。ポジティブ選択マーカーは、そのマーカーが存在することによってその選択が可能になるマーカーであり、ネガティブ選択マーカーは、その存在が選択を妨げるマーカーである。ポジティブ選択マーカーの例は、薬物耐性マーカーである。

通常、薬物選択マーカーを含めることにより、形質転換体のクローニングおよび特定が助けられ、例えば、ネオマイシン、ピューロマイシン、ハイグロマイシン、ＤＨＦＲ、ＧＰＴ、ゼオシンおよびヒスチジノールに対して耐性にする遺伝子が、有用な選択マーカーである。条件の実行に基づいて形質転換体の判別を可能にする表現型を付与するマーカーに加えて、比色解析を基礎とする、ＧＦＰなどのスクリーニング可能なマーカーをはじめとした他のタイプのマーカーも企図される。あるいは、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ｔｋ）またはクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）などの、ネガティブ選択マーカーとしてスクリーニング可能な酵素が利用され得る。当業者であれば、免疫学的マーカーをおそらくはＦＡＣＳ解析と併せて使用する方法も承知しているだろう。使用されるマーカーは、遺伝子産物をコードする核酸と同時に発現されることが可能である限り、重要ではないと考えられている。選択マーカーおよびスクリーニング可能なマーカーのさらなる例は、当業者に周知である。

Ｇ．核酸ポリマーの送達方法
操作された免疫細胞は、当業者に公知の多くの確立された遺伝子導入方法のうちのいずれかを用いて構築され得る。ある特定の実施形態において、操作された細胞は、核酸ポリマーを導入するためにウイルスベクターベースの遺伝子導入方法を用いて構築される。ウイルスベクターベースの遺伝子導入方法には、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルスベクターが含まれ得る。ある特定の実施形態において、操作された細胞は、核酸ポリマーを導入するために非ウイルスベクターベースの遺伝子導入方法を用いて構築される。ある特定の実施形態において、非ウイルスベクターベースの遺伝子導入方法には、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）およびクラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）／ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質９（Ｃａｓ９）ヌクレアーゼからなる群より選択される遺伝子編集方法が含まれる。ある特定の実施形態において、非ウイルスベクターベースの遺伝子編集方法には、リポフェクション、ヌクレオフェクション、ビロソーム、リポソーム、ポリカチオンまたは脂質：核酸コンジュゲート、裸のＤＮＡ、人工ビリオン、および作用物質によって強化されるＤＮＡの取り込みからなる群より選択されるトランスフェクションまたは形質転換方法が含まれる。

上記細胞は、ランダム挿入または部位特異的挿入（例えば、メガヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターベースのヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）およびＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓシステムを含むがこれらに限定されない遺伝子編集方法などによる）によって、目的の遺伝子および／または抗原レセプターを発現するように操作され得る。

目的の遺伝子および／または抗原レセプターをコードする核酸ポリマーのウイルス送達に加えて、以下の方法が、所与の宿主細胞への組換え遺伝子送達のさらなる方法であるので、本開示において考慮される。本開示の免疫細胞へのＤＮＡまたはＲＮＡなどの核酸ポリマーの導入は、本明細書中に記載されるようにまたは当業者に公知であるように、細胞を形質転換するための核酸ポリマー送達に適した任意の方法を使用し得る。そのような方法としては、ＤＮＡの直接送達（例えば、エキソビボトランスフェクション、注射（マイクロインジェクションを含む））；エレクトロポレーション；リン酸カルシウム沈殿；ＤＥＡＥ－デキストランに続くポリエチレングリコールの使用；直接的な音波負荷；リポソーム媒介性のトランスフェクションおよびレセプター媒介性のトランスフェクション；微粒子銃（ｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ）；炭化ケイ素繊維を伴った撹拌；アグロバクテリウム媒介性の形質転換；乾燥／阻害媒介性のＤＮＡ取り込み、およびそのような方法の任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。これらの手法などの手法の適用により、オルガネラ、細胞、組織または生物が安定にまたは一過性に形質転換され得る。

ＶＩ．処置方法
本無限免疫細胞は、治療と研究の両方において使用され得る。ＣＡＲおよび／または操作されたＴＣＲを発現するＴ細胞またはＮＫ細胞を含む本無限免疫細胞は、癌、感染症、免疫障害または炎症性障害を処置するために使用され得る。

１つの方法において、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂまたはＢＡＦＦ－Ｒなどの抗原を標的化する同種異系の汎用のＣＡＲＴ細胞が、単独でまたは組み合わせて、Ｂ細胞白血病およびリンパ腫を処置するために使用され得る。同種異系の汎用の抗メソテリンＣＡＲＴ細胞は、一例として、中皮腫、膵臓腺癌または卵巣癌を処置するために使用され得る。ＮＹ－ＥＳＯ標的化ＴＣＲ－Ｔ細胞は、一例として、メラノーマまたは多発性骨髄腫を処置するために使用され得る。ＥＢＶ、ＣＭＶ、ＢＫウイルスなどのようなウイルスに対するウイルス特異的Ｔ細胞は、それぞれのウイルス感染症を処置するために使用され得る。同種異系の阻害性または制御性Ｔ細胞が、自己免疫障害、ＧＶＨＤおよび他の炎症性障害を処置するために使用され得る。

ガンマ／デルタＴ細胞およびウイルス特異的Ｔ細胞は、ＧｖＨＤを引き起こす可能性は低く、具体的な実施形態において、さらなる抗腫瘍および／または抗ウイルス機能を提供する。具体的な実施形態において、ウイルス特異的無限Ｔ細胞は、少なくとも２つの目的で使用され得る。第１に、ウイルス特異的無限Ｔ細胞は、特定のウイルス感染症（例えば、ＣＭＶまたはＥＢＶ感染症）またはある特定の癌を処置するために使用され得る。第２の実施形態は、１つ以上のＣＡＲおよび／または操作されたＴＣＲをウイルス特異的Ｔ細胞に形質導入することである。内因性のウイルス特異的ＴＣＲを有するそのような無限ＣＡＲＴ細胞は、ＧＶＨＤを引き起こす可能性が低いなどの潜在的な利点を有し得る。そのような内因性のウイルス特異的ＴＣＲを有する細胞は、そのＴ細胞においてＴＣＲをノックアウトするために遺伝子編集方法を必要としない。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９などの遺伝子編集技術を組み合わせる場合、ＣＡＲ－Ｔ細胞を作製するために必ずしもウイルス特異的Ｔ細胞は必要でない。あるいは、ＧｖＨＤを引き起こさず、ＴＣＲノックアウトを必要とすると予想されない、ガンマ／デルタ無限ＣＡＲＴ細胞またはＣＡＲ－ＮＫまたはＣＡＲ－ＮＫＴまたはＣＡＲ－自然リンパ球系細胞が使用され得る。

本発明の改変された細胞株は、ヒトにおいて使用することが意図されるとき、まず、癌の研究において通常使用されるＮＳＧマウスモデルなどの動物モデルにおいて殺腫瘍活性および治療効果について試験される。そのようなマウスでの研究は、患者において治療的な使用を試みる前に行われ得る前臨床試験である。

無限免疫細胞は、有効量の、種々の腫瘍標的に対する種々のＣＡＲまたはＴＣＲを発現する改変された細胞傷害性無限Ｔ細胞を単独でまたは組み合わせて患者に投与することなどによって、血液悪性腫瘍および非血液悪性腫瘍を含む癌を処置するために使用され得る。例えば、Ｂ細胞白血病またはリンパ腫を有する患者を処置するために、ＣＤ１９ｉｎＣＡＲＴ（そのうちの１つが、Ｉｅ１－Ｌ４ａＪ３細胞（切断型ヒトＥＦＧＲマーカーを有するヒトＣＤ１９に対するＣＡＲを形質導入された、健康ドナー１由来のＣＤ８陽性細胞）である）が、ＩＬ－２またはＩＬ－１５とともに投与され得る。そのＩｅ１－Ｌ４ａＪ３細胞は、水または緩衝食塩水などの従来の薬学的賦形剤中に存在し得る。その改変された細胞は、患者に投与されたとき、ＣＤ１９特異的殺滅によって腫瘍の成長を停止できる。ヒト患者の場合、それらの免疫細胞は、静脈内注入（ｉ．ｖ．）によって投与され得る。しかしながら、皮下（ｓ．ｃ．）注射などの他の投与方法も使用され得る。新生物細胞の根絶に成功したら、それらの免疫細胞は、ＩＬ－２もしくはＩＬ－１５の投与中止または抗ＥＧＦＲ抗体の注入によって除去され得る。

無限免疫細胞（ならびに使用されるとき、１つ以上のサイトカイン、例えば、ＩＬ－２および／またはＩＬ－１５）の適切な投与量は、レシピエントの年齢、健康状態、性別および体重、ならびに関連するまたは関連しない状態に対してそのレシピエントが受けている他の任意の同時処置に応じて、変動する。当業者は、上述の因子に応じて、患者に投与するべき改変された細胞および薬物の適切な用量を容易に決定できる。殺腫瘍性の有効量を構成する細胞数は、動物モデルを用いて決定され得る。これらのパラメータは、当業者が容易に決定できる。

腫瘍に対する本治療の有効性は、患者の末梢血もしくは骨髄のサンプル中の任意の生存腫瘍細胞を検出すること、またはＣＴ、ＭＲＩもしくはＰＥＴスキャンなどの他の画像診断によって、判定され得る。同様に、残留している任意の望まれない改変された無限Ｔ細胞は、フローサイトメトリーおよびポリメラーゼ連鎖反応などの方法を用いてモニターされ得る。

ＴＡＬＬ－１０４およびＮＫ－９２細胞などの従前の細胞傷害性細胞株と比べて、無限免疫細胞は、正常な免疫細胞から作製される。ゆえに、無限免疫細胞は他の任意の未知の腫瘍原性遺伝子変異を有すると予想されないので、ＴＡＬＬ－１０４およびＮＫ－９２と比べて、無限免疫細胞に伴う白血病誘発性のリスクは低い。さらに、無限細胞の増殖は、ＩＬ－２またはＩＬ－１５の投与中止によって止めることができる。これは、白血病由来の細胞株であるＴＡＬＬ－１０４およびＮＫ－９２にまさる、この上ない安全性の利点である。

いくつかの実施形態において、本開示は、有効量の本開示の免疫細胞を投与する工程を含む、免疫療法のための方法を提供する。本開示のある特定の実施形態において、免疫応答を誘発する免疫細胞集団の移入によって、癌または感染症が処置される。個体の癌を処置するためまたは癌の進行を遅延させるための方法が本明細書中に提供され、その方法は、有効量の抗原特異的細胞療法を個体に投与する工程を含む。本方法は、免疫障害、固形癌、血液癌およびウイルス感染症の処置に適用され得る。

本処置方法が有用な腫瘍には、任意の悪性細胞タイプ、例えば、固形腫瘍または血液腫瘍に見られる細胞タイプが含まれる。例示的な固形腫瘍としては、膵臓、結腸、盲腸、胃、脳、頭部、頸部、卵巣、腎臓、喉頭、肉腫、肺、膀胱、黒色腫、前立腺および乳房からなる群より選択される器官の腫瘍が挙げられ得るが、これらに限定されない。例示的な血液腫瘍としては、骨髄の腫瘍、ＴまたはＢ細胞悪性腫瘍、白血病、リンパ腫、芽腫、ミエローマなどが挙げられる。本明細書中に提供される方法を用いて処置され得る癌のさらなる例としては、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌および肺扁平上皮癌を含む）、腹膜癌、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）癌または胃（ｓｔｏｍａｃｈ）癌（消化器癌および消化管間質癌を含む）、膵癌、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、乳癌、結腸癌、直腸結腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌または腎癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、様々なタイプの頭頸部癌、および黒色腫が挙げられるが、これらに限定されない。

癌は、具体的には以下の組織タイプの癌であり得るが、これらに限定されない：新生物、悪性；癌腫；癌腫、未分化；巨細胞および紡錘形細胞癌；小細胞癌；乳頭状癌；扁平上皮癌；リンパ上皮癌；基底細胞癌；毛母癌；移行上皮癌；乳頭状移行上皮癌；腺癌；ガストリノーマ、悪性；胆管癌；肝細胞癌；肝細胞癌・胆管癌の混合型；索状腺癌；腺様嚢胞癌；腺腫性ポリープ内腺癌；腺癌、家族性大腸ポリポーシス；固形癌；カルチノイド腫瘍、悪性；細気管支肺胞腺癌；乳頭状腺癌；嫌色素性癌；好酸性癌；好酸性腺癌；好塩基性癌；明細胞腺癌；顆粒細胞癌；濾胞腺癌；乳頭状・濾胞腺癌；非被包性硬化癌；副腎皮質癌；類内膜癌；皮膚付属器癌；アポクリン腺癌；皮脂腺癌；耳垢腺癌；粘表皮癌；嚢胞腺癌；乳頭状嚢腺癌；乳頭状漿液性嚢胞腺癌；粘液性嚢胞腺癌；粘液性腺癌；印環細胞癌；浸潤性導管癌；髄様癌；小葉癌；炎症性癌；パジェット病、乳房；腺房細胞癌；腺扁平上皮癌；扁平上皮化生を伴う腺癌；胸腺腫、悪性；卵巣間質腫瘍、悪性；莢膜細胞腫、悪性；顆粒膜細胞腫、悪性；アンドロブラストーマ、悪性；セルトリ細胞癌；ライディッヒ細胞腫瘍、悪性；脂質細胞腫瘍、悪性；傍神経節腫、悪性；乳房外傍神経節腫、悪性；褐色細胞腫；グロムス血管肉腫；悪性黒色腫；無色素性黒色腫；表在拡大型黒色腫；悪性黒子黒色腫；末端黒子型黒色腫；結節性黒色腫；巨大色素性母斑内悪性黒色腫；類上皮細胞黒色腫；青色母斑、悪性；肉腫；線維肉腫；線維性組織球腫、悪性；粘液肉腫；脂肪肉腫；平滑筋肉腫；横紋筋肉腫；胎児性横紋筋肉腫；胞巣状横紋筋肉腫；間質肉腫；混合腫瘍、悪性；ミュラー管混合腫瘍；腎芽腫；肝芽腫；癌肉腫；間葉腫、悪性；ブレンナー腫瘍、悪性；葉状腫瘍、悪性；滑膜肉腫；中皮腫、悪性；未分化胚腫；胎児性癌；奇形腫、悪性；卵巣甲状腺腫、悪性；絨毛癌；中腎腫、悪性；血管肉腫；血管内皮腫、悪性；カポジ肉腫；血管外皮腫、悪性；リンパ管肉腫；骨肉腫；傍皮質骨肉腫；軟骨肉腫；軟骨芽細胞腫、悪性；間葉性軟骨肉腫；骨巨細胞腫瘍；ユーイング肉腫；歯原性腫瘍、悪性；エナメル上皮歯牙肉腫；エナメル上皮腫、悪性；エナメル上皮線維肉腫；松果体腫、悪性；脊索腫；グリオーマ、悪性；上衣腫；アストロサイトーマ；原形質性アストロサイトーマ；細線維性アストロサイトーマ；星芽腫；膠芽腫；乏突起膠腫；希突起芽腫；原始神経外胚葉性；小脳肉腫；神経節神経芽腫；神経芽腫；網膜芽腫；嗅神経原腫瘍；髄膜腫、悪性；神経線維肉腫；神経鞘腫、悪性；顆粒細胞腫、悪性；悪性リンパ腫；ホジキン病；ホジキン；側肉芽腫；悪性リンパ腫、小リンパ球性；悪性リンパ腫、大細胞型、びまん性；悪性リンパ腫、濾胞性；菌状息肉腫；他の特定の非ホジキンリンパ腫；Ｂ細胞リンパ腫；低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小非切れ込み型細胞ＮＨＬ；巨大病変（ｂｕｌｋｙｄｉｓｅａｓｅ）ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；ワルデンシュトレームマクログロブリン血症；悪性組織球増殖症；多発性骨髄腫；肥満細胞肉腫；免疫増殖性小腸疾患；白血病；リンパ性白血病；形質細胞性白血病；赤白血病；リンパ肉腫細胞白血病；骨髄性白血病；好塩基球性白血病；好酸球性白血病；単球性白血病；肥満細胞白血病；巨核芽球性白血病；骨髄性肉腫；ヘアリー細胞白血病；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；および慢性骨髄芽球性白血病。

本開示のある特定の実施形態において、免疫細胞は、それを必要とする個体（例えば、癌または感染症を有する個体）に送達される。次いで、それらの細胞は、その個体の免疫系を強化して、それぞれの癌細胞または病原性細胞を攻撃する。いくつかの場合では、その個体に免疫細胞が１回以上提供される。個体に免疫細胞が２回以上提供される場合、投与間の時間は、その個体において伝播するのに十分な時間であるべきであり、具体的な実施形態では、投与間の時間は、ｌ、２、３、４、５、６、７日間またはそれ以上である。

本開示のある特定の実施形態は、免疫媒介性障害を処置または予防するための方法を提供する。１つの実施形態において、被験体は、自己免疫疾患を有する。自己免疫疾患の非限定的な例としては、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性アジソン病、副腎の自己免疫疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵巣炎および自己免疫性睾丸炎、自己免疫性血小板減少症、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアック多発性皮膚炎（ｃｅｌｉａｃｓｐａｔｅ－ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）、慢性疲労免疫不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、ＣＲＥＳＴ症候群、寒冷凝集素病、クローン病、円板状狼瘡、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症－線維筋炎、糸球体腎炎、グレーヴズ病、ギランバレー、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡニューロパシー、若年性関節炎、扁平苔癬、エリテマトーデス、メニエール病、混合結合組織病、多発性硬化症、１型糖尿病または免疫媒介性糖尿病、重症筋無力症、ネフローゼ症候群（例えば、微小変化群、巣状糸球体硬化症または膜性腎症）、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発性動脈炎、多発性軟骨炎、多腺症候群、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティフ・マン症候群、全身性エリテマトーデス、エリテマトーデス、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、脈管炎（例えば、結節性多発性動脈炎、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎または疱疹状皮膚炎脈管炎）、白斑ならびにウェゲナー肉芽腫症が挙げられる。したがって、本明細書中に開示される方法を用いて処置され得る自己免疫疾患のいくつかの例としては、多発性硬化症、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、Ｉ型糖尿病、クローン病；潰瘍性大腸炎、重症筋無力症、糸球体腎炎、強直性脊椎炎、脈管炎または乾癬が挙げられるが、これらに限定されない。被験体は、喘息などのアレルギー性障害も有し得る。

さらに別の実施形態では、被験体は、移植される器官または幹細胞のレシピエントであり、拒絶反応を予防および／または処置するために免疫細胞が使用される。特定の実施形態において、被験体は、移植片対宿主病を有するか、または移植片対宿主病を発症するリスクがある。ＧＶＨＤは、血縁ドナーまたは非血縁ドナーからの幹細胞を使用するまたは含む任意の移植に関して起こり得る合併症である。ＧＶＨＤには、急性と慢性の２種類がある。急性ＧＶＨＤは、移植後の最初の３ヶ月以内に現れる。急性ＧＶＨＤの徴候としては、手および足における赤みがかった発疹が挙げられ、それは、剥皮または皮膚の水疱形成を伴って広がることがあり、より重篤になることがある。急性ＧＶＨＤは、胃および腸にも影響することがあり、その場合、筋痙攣、悪心および下痢が認められる。皮膚および目の黄変（黄疸）は、急性ＧＶＨＤが肝臓に影響していることを示す。慢性ＧＶＨＤは、その重症度に基づいて等級付けされる：ステージ／グレード１が軽度であり；ステージ／グレード４が重度である。慢性ＧＶＨＤは、移植の３ヶ月後またはそれ以降に発症する。慢性ＧＶＨＤの症状は、急性ＧＶＨＤの症状と似ているが、さらに、慢性ＧＶＨＤは、眼の粘液腺、口の唾液腺ならびに胃壁および腸を滑らかにする腺にも影響し得る。本明細書中に開示される任意の免疫細胞集団を使用することができる。移植される器官の例としては、臓器移植片、例えば、腎臓、肝臓、皮膚、膵臓、肺および／または心臓、あるいは細胞移植片、例えば、小島、肝細胞、筋芽細胞、骨髄または造血性幹細胞もしくは他の幹細胞が挙げられる。移植片は、複合性の移植片、例えば、顔面の組織であり得る。免疫細胞は、移植の前、移植と同時、または移植の後に、投与され得る。いくつかの実施形態において、免疫細胞は、移植の前に、例えば、移植の少なくとも１時間前、少なくとも１２時間前、少なくとも１日前、少なくとも２日前、少なくとも３日前、少なくとも４日前、少なくとも５日前、少なくとも６日前、少なくとも１週間前、少なくとも２週間前、少なくとも３週間前、少なくとも４週間前または少なくとも１ヶ月前に投与される。１つの非限定的な具体例では、治療有効量の免疫細胞の投与は、移植の３～５日前に行われる。

いくつかの実施形態において、被験体には、免疫細胞療法の前に骨髄非破壊的なリンパ球除去化学療法が施され得る。その骨髄非破壊的なリンパ球除去化学療法は、任意の好適な経路によって投与され得る任意の好適なそのような治療であり得る。その骨髄非破壊的なリンパ球除去化学療法は、特に、癌が転移性であり得る黒色腫である場合、例えば、シクロホスファミドおよびフルダラビンの投与を含み得る。シクロホスファミドおよびフルダラビンの例示的な投与経路は、静脈内である。同様に、任意の好適な用量のシクロホスファミドおよびフルダラビンが投与され得る。特定の態様では、およそ６０ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミドが２日間投与され、その後、およそ２５ｍｇ／ｍ^２のフルダラビンが５日間投与される。

ある特定の実施形態では、免疫細胞の増殖、分化および活性化を促進する成長因子または分化因子が、免疫細胞と同時にまたは免疫細胞に続いて被験体に投与される。免疫細胞成長因子は、免疫細胞の増殖および活性化を促進する任意の好適な成長因子であり得る。好適な免疫細胞成長因子または分化因子の例としては、インターロイキン（ＩＬ）－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５およびＩＬ－１２が挙げられ、これらは、単独でまたは様々な組み合わせ（例えば、ＩＬ－２とＩＬ－７、ＩＬ－２とＩＬ－１５、ＩＬ－７とＩＬ－１５、ＩＬ－２とＩＬ－７とＩＬ－１５、ＩＬ－１２とＩＬ－７、ＩＬ－１２とＩＬ－１５またはＩＬ－１２とＩＬ２）で使用され得る。

治療有効量の免疫細胞が、非経口投与をはじめとしたいくつかの経路、例えば、静脈内、腹腔内、筋肉内、胸骨内、心室内、髄腔内もしくは関節内の注射または注入によって投与され得る。

養子細胞療法において使用するための免疫細胞の治療有効量は、処置される被験体において所望の効果を達成する量である。例えば、これは、進行を阻害するために必要な免疫細胞の量、または自己免疫疾患もしくは同種免疫疾患を後退させるために必要な免疫細胞の量、または自己免疫疾患によって引き起こされる症状、例えば、疼痛および炎症を和らげることができる量であり得る。これは、炎症に伴う症状、例えば、疼痛、浮腫および体温上昇を和らげるために必要な量であり得る。これは、移植された器官の拒絶反応を減少させるまたは予防するために必要な量でもあり得る。

上記免疫細胞集団は、疾患状態を回復させるために、上記疾患と一致した処置レジメンで、例えば、１日から数日間にわたって１回または数回で、投与され得るか、または疾患の進行を阻害するためおよび疾患の再発を予防するために、長期間にわたる定期的な投与で投与され得る。製剤において用いられる正確な用量は、投与経路および疾患または障害の重篤度にも依存し、医師の判断および各患者の状況に従って決定されるべきである。免疫細胞の治療有効量は、処置される被験体、苦痛の重症度およびタイプならびに投与様式に依存する。いくつかの実施形態において、ヒト被験体の処置において使用され得る用量は、少なくとも３．８×１０^４、少なくとも３．８×１０^５、少なくとも３．８×１０^６、少なくとも３．８×１０^７、少なくとも３．８×１０^８、少なくとも３．８×１０^９または少なくとも３．８×１０^１０免疫細胞／ｍ^２で変動する。ある特定の実施形態において、ヒト被験体の処置において使用される用量は、約３．８×１０^９～約３．８×１０^１０免疫細胞／ｍ^２の範囲である。さらなる実施形態において、免疫細胞の治療有効量は、約５×１０^６細胞／ｋｇ体重～約７．５×１０^８細胞／ｋｇ体重、例えば、約２×１０^７細胞～約５×１０^８細胞／ｋｇ体重または約５×１０^７細胞～約２×１０^８細胞／ｋｇ体重で変動し得る。免疫細胞の正確な量は、被験体の年齢、体重、性別および生理学的状態に基づいて当業者によってすぐに決定される。有効量は、インビトロモデルまたは動物モデルの試験系から導かれた用量反応曲線から外挿され得る。

上記免疫細胞は、免疫媒介性障害を処置するための１つ以上の他の治療薬と併用して投与され得る。併用療法としては、１つ以上の抗菌剤（例えば、抗生物質、抗ウイルス剤および抗真菌剤）、抗腫瘍剤（例えば、リツキシマブ、トラスツズマブなどのようなモノクローナル抗体、フルオロウラシル、メトトレキサート、パクリタキセル、フルダラビン、エトポシド、ドキソルビシンまたはビンクリスチン）、免疫枯渇剤（例えば、フルダラビン、エトポシド、ドキソルビシンまたはビンクリスチン）、免疫抑制剤（例えば、アザチオプリンまたは糖質コルチコイド、例えば、デキサメタゾンまたはプレドニゾン）、抗炎症剤（例えば、糖質コルチコイド（例えば、ヒドロコルチゾン、デキサメタゾンまたはプレドニゾン）または非ステロイド性抗炎症剤（例えば、アセチルサリチル酸、イブプロフェンまたはナプロキセンナトリウム））、サイトカイン（例えば、インターロイキン－１０またはトランスフォーミング成長因子－ベータ）、ホルモン（例えば、エストロゲン）またはワクチンが挙げられ得るが、これらに限定されない。さらに、カルシニューリン阻害剤（例えば、シクロスポリンおよびタクロリムス）；ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、ラパマイシン）；ミコフェノール酸モフェチル、抗体（例えば、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ１５４、ＣＤ４５、ＩＶＩＧまたはＢ細胞を認識する抗体）；化学療法剤（例えば、メトトレキサート、トレオスルファン、ブスルファン）；照射；またはケモカイン、インターロイキンもしくはそれらの阻害剤（例えば、ＢＡＦＦ、ＩＬ－２、抗ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－４、ＪＡＫキナーゼ阻害剤）を含むがこれらに限定されない免疫抑制剤または免疫寛容誘発剤が投与され得る。そのようなさらなる医薬品は、所望の効果に応じて免疫細胞の投与前、投与中または投与後に投与され得る。上記細胞および作用物質のこの投与は、同じ経路または異なる経路による投与、および同じ部位または異なる部位における投与であり得る。

Ａ．薬学的組成物
無限免疫細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）および薬学的に許容され得るキャリアを含む薬学的組成物および製剤も本明細書中に提供される。

本明細書中に記載されるような薬学的組成物および製剤は、所望の程度の純度を有する活性成分（例えば、抗体またはポリペプチド）を１つ以上の自由選択の薬学的に許容され得るキャリア（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ２２^ｎｄｅｄｉｔｉｏｎ，２０１２）と混合することによって、凍結乾燥された製剤または水溶液の形態で調製され得る。薬学的に許容され得るキャリアは、一般に、使用される投与量および濃度においてレシピエントにとって無毒性であり、それらのキャリアとしては、緩衝剤（例えば、リン酸、クエン酸および他の有機酸）；酸化防止剤（アスコルビン酸およびメチオニンを含む）；保存剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノールアルコール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン（例えば、メチルパラベンまたはプロピルパラベン）；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリジン）；単糖類、二糖類および他の炭水化物（グルコース、マンノースまたはデキストリンを含む）；キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）；糖類（例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール）；塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）；および／または非イオン性界面活性剤（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ））が挙げられるが、これらに限定されない。例示的な本明細書中の薬学的に許容され得るキャリアとしては、間質薬物分散剤、例えば、中性で活性な可溶性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標），ＢａｘｔｅｒＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）がさらに挙げられる。ｒＨｕＰＨ２０を含むある特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰおよび使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号および同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。１つの態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、１つ以上のさらなるグリコサミノグリカナーゼ、例えば、コンドロイチナーゼと併用される。

Ｂ．併用療法
ある特定の実施形態において、本実施形態の組成物および方法は、少なくとも１つのさらなる治療と併用される免疫細胞集団を含む。そのさらなる治療は、放射線療法、手術（例えば、ランペクトミーおよび乳房切除術）、化学療法、標的化療法、遺伝子治療、ＤＮＡ治療、ウイルス治療、ＲＮＡ治療、免疫療法、骨髄移植、ナノ治療、モノクローナル抗体治療または前述の組み合わせであり得る。そのさらなる治療は、アジュバント療法またはネオアジュバント療法の形態であり得る。

いくつかの実施形態において、さらなる治療は、小分子酵素阻害剤または抗転移剤の投与である。いくつかの実施形態において、さらなる治療は、副作用制限剤（例えば、処置の副作用の発生率および／または重症度を下げることを目的とする作用物質、例えば、抗悪心剤など）の投与である。いくつかの実施形態において、さらなる治療は、放射線療法である。いくつかの実施形態において、さらなる治療は、手術である。いくつかの実施形態において、さらなる治療は、放射線療法と手術の併用である。いくつかの実施形態において、さらなる治療は、ガンマ線照射である。いくつかの実施形態において、さらなる治療は、ＰＢＫ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路を標的化する治療、ＨＳＰ９０阻害剤、チューブリン阻害剤、アポトーシス阻害剤および／または化学予防剤である。さらなる治療は、当該分野で公知の化学療法剤の１つ以上であり得る。

免疫細胞療法は、免疫チェックポイント療法などのさらなる癌治療の前、最中、後または様々な組み合わせで投与され得る。それらの投与は、同時から数分、数日、数週間までの範囲の間隔で行われ得る。免疫細胞療法がさらなる治療薬とは別に患者に提供される実施形態では、それら２つの化合物が、なおも患者に対して有益な併用効果を発揮できるように、各送達時点の間にかなりの期間が経過しないことを保証するのが一般的である。そのような場合、抗体療法と抗癌療法とが、互いの約１２～２４または７２時間以内に、より詳細には、互いの約６～１２時間以内に患者に提供され得ることが企図される。いくつかの状況において、それぞれの投与間に数日（２、３、４、５、６または７）から数週間（１、２、３、４、５、６、７または８）が経過した場合、処置期間をかなり延長することが望ましいことがある。

様々な組み合わせが使用され得る。下記の例の場合、免疫細胞療法が、「Ａ」であり、抗癌療法が、「Ｂ」である：
Ａ／Ｂ／ＡＢ／Ａ／ＢＢ／Ｂ／ＡＡ／Ａ／ＢＡ／Ｂ／ＢＢ／Ａ／ＡＡ／Ｂ／Ｂ／ＢＢ／Ａ／Ｂ／Ｂ
Ｂ／Ｂ／Ｂ／ＡＢ／Ｂ／Ａ／ＢＡ／Ａ／Ｂ／ＢＡ／Ｂ／Ａ／ＢＡ／Ｂ／Ｂ／ＡＢ／Ｂ／Ａ／Ａ
Ｂ／Ａ／Ｂ／ＡＢ／Ａ／Ａ／ＢＡ／Ａ／Ａ／ＢＢ／Ａ／Ａ／ＡＡ／Ｂ／Ａ／ＡＡ／Ａ／Ｂ／Ａ

本実施形態の任意の化合物または治療の患者への投与は、それらの作用物質に毒性がある場合はそれを考慮して、そのような化合物を投与するための一般的なプロトコルに従う。ゆえに、いくつかの実施形態では、併用療法に起因し得る毒性をモニタリングする工程が存在する。

１．化学療法
多種多様の化学療法剤が、本実施形態に従って使用され得る。用語「化学療法」とは、薬物を使用して癌を処置することを指す。「化学療法剤」は、癌の処置において投与される化合物または組成物を意味するために使用される。これらの作用物質または薬物は、細胞内でのそれらの活性様式によって、例えば、それらが細胞周期に影響するか否かおよびどのステージにおいて細胞周期に影響するかによって、分類される。あるいは、作用物質は、ＤＮＡを直接架橋する能力、ＤＮＡにインターカレートする能力、または核酸合成に影響することによって染色体異常および有糸分裂異常を誘導する能力に基づいて特徴付けられ得る。

化学療法剤の例としては、アルキル化剤（例えば、チオテパおよびシクロスホスファミド）；スルホン酸アルキル（例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン）；アジリジン（例えば、ベンゾドパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）およびウレドパ（ｕｒｅｄｏｐａ））；エチレンイミンおよびメチルアメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅｓ）（アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミドおよびトリメチローロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含む）；アセトゲニン（特に、ブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトテシン（合成アナログであるトポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン（ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎ）およびビゼレシン（ｂｉｚｅｌｅｓｉｎ）合成アナログを含む）；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログであるＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エレウセロビン（ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｂｉｎ）；パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；サルコジクチイン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンギスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；ナイトロジェンマスタード（例えば、クロラムブシル、クロルナファジン（ｃｈｌｏｒｎａｐｈａｚｉｎｅ）、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベンビキン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン、トロフォスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）およびウラシルマスタード）；ニトロソ尿素（例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチンおよびラニムヌスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ））；抗生物質（例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特に、カリケアマイシンガンマｌＩおよびカリケアマイシンオメガＩ１））；ジネマイシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）（ジネマイシンＡを含む）；ビスホスホネート（例えば、クロドロネート）；エスペラミシン；ならびにネオカルチノスタチンクロモフォアおよび関連色素タンパク質であるエンジイン抗生物質クロモフォア、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アウトラルニシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン（ｃａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモミシニス、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン（例えば、マイトマイシンＣ）、ミコフェノール酸、ノガラルニシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチンおよびゾルビシン；抗代謝産物（例えば、メトトレキサートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ））；葉酸アナログ（例えば、デノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、プテロプテリンおよびトリメトレキサート）；プリンアナログ（例えば、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン（ｔｈｉａｍｉｐｒｉｎｅ）およびチオグアニン）；ピリミジンアナログ（例えば、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビンおよびフロクスウリジン）；アンドロゲン（例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタンおよびテストラクトン）；抗副腎（ａｎｔｉ－ａｄｒｅｎａｌｓ）（例えば、ミトタンおよびトリロスタン）；葉酸補給剤（例えば、フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃａｃｉｄ））；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デホファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジコン；エルフォルミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍａｃｅｔａｔｅ）；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄｓ）（例えば、メイタンシンおよびアンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎｓ））；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃａｃｉｄ）；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ多糖複合体；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクォン（ｔｒｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；トリコテシン（特に、Ｔ－２トキシン、ベラクリンＡ、ロリジン（ｒｏｒｉｄｉｎ）Ａおよびアングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；タキソイド、例えば、パクリタキセルおよびドセタキセルゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；白金配位錯体（例えば、シスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチン）；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；キセロダ（ｘｅｌｏｄａ）；イバンドロネート；イリノテカン（例えば、ＣＰＴ－１１）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド（例えば、レチノイン酸）；カペシタビン；カルボプラチン、プロカルバジン、プリコマイシン、ゲムシタビエン、ナベルビン、ファルネシル－タンパク質タンスフェラーゼ阻害剤、トランスプラチナ（ｔｒａｎｓｐｌａｔｉｎｕｍ）、ならびに上記のいずれかの薬学的に許容され得る塩、酸または誘導体が挙げられる。

２．放射線療法
ＤＮＡ損傷を引き起こす、広く使用されてきた他の因子としては、γ線、Ｘ線および／または腫瘍細胞への放射性同位体の定方向送達として一般的に知られているものが挙げられる。マイクロ波、陽子ビーム照射およびＵＶ照射などの他の形態のＤＮＡ損傷因子も企図される。これらの因子のすべてが、ＤＮＡ、ＤＮＡの前駆体、ＤＮＡの複製および修復ならびに染色体のアセンブリおよび維持に対して広範囲のダメージをもたらす可能性が最も高い。Ｘ線の線量の範囲は、長期間（３～４週間）にわたる５０～２００レントゲンという１日線量から、２０００～６０００レントゲンという単回線量までの範囲である。放射性同位体の線量の範囲は、大きく異なり、同位体の半減期、放射される放射線の強度およびタイプ、ならびに腫瘍性細胞による取り込みに依存する。

３．免疫療法
当業者は、さらなる免疫療法が本開示の方法および組成物と併用してまたは併せて使用され得ることを理解する。癌の処置の状況において、免疫治療薬は、通常、癌細胞を標的化し、破壊するために免疫エフェクター細胞および免疫エフェクター分子を使用することに頼る。リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））が、そのような例である。免疫エフェクターは、例えば、腫瘍細胞の表面上の何らかのマーカーに特異的な抗体であり得る。その抗体は、単独で治療のエフェクターとして機能し得るか、または他の細胞をリクルートして、実際に細胞殺滅に影響し得る。その抗体はまた、薬物またはトキシン（化学療法剤、放射性核種、リシンＡ鎖、コレラ毒素、百日咳毒素など）に結合体化され得、標的化剤として役立ち得る。あるいは、そのエフェクターは、腫瘍細胞標的と直接または間接的に相互作用する表面分子を有するリンパ球であり得る。様々なエフェクター細胞には、細胞傷害性Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞およびＮＫ細胞が含まれる。

抗体－薬物結合体（ＡＤＣ）は、殺細胞薬に共有結合的に連結されたモノクローナル抗体（ＭＡｂ）を含み、併用療法において使用され得る。このアプローチは、抗原標的に対するＭＡｂの高い特異性を非常に強力な細胞傷害性薬物と組み合わせることから、豊富なレベルの抗原を有する腫瘍細胞にペイロード（薬物）を送達する「武装した」ＭＡｂをもたらす。また、薬物の標的化送達は、正常組織への曝露を最小限に抑えることから、毒性の低減および治療指数の改善をもたらす。例示的なＡＤＣ薬物としては、ＡＤＣＥＴＲＩＳ（登録商標）（ブレンツキシマブベドチン）およびＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）（トラスツズマブエムタンシンまたはＴ－ＤＭ１）が挙げられる。

免疫療法の１つの態様において、腫瘍細胞は、標的化の影響を受けやすい何らかのマーカー、すなわち、他の大部分の細胞上に存在しない何らかのマーカーを有さなければならない。多くの腫瘍マーカーが存在し、これらのいずれかが、本実施形態の状況において標的化に好適であり得る。一般的な腫瘍マーカーとしては、ＣＤ２０、癌胎児抗原、チロシナーゼ（ｐ９７）、ｇｐ６８、ＴＡＧ－７２、ＨＭＦＧ、ＳｉａｌｙｌＬｅｗｉｓ抗原、ＭｕｃＡ、ＭｕｃＢ、ＰＬＡＰ、ラミニンレセプター、ｅｒｂＢおよびｐ１５５が挙げられる。免疫療法の代替の態様は、抗癌効果と免疫刺激効果とを組み合わせることである。ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１２、ＧＭ－ＣＳＦ、ガンマ－ＩＦＮなどのサイトカイン、ＭＩＰ－１、ＭＣＰ－１、ＩＬ－８などのケモカイン、およびＦＬＴ３リガンドなどの成長因子をはじめとした免疫刺激分子も存在する。

免疫療法の例としては、免疫アジュバント、例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｂｏｖｉｓ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、ジニトロクロロベンゼンおよび芳香族化合物）；サイトカイン療法、例えば、インターフェロンα、βおよびγ、ＩＬ－１、ＧＭ－ＣＳＦならびにＴＮＦ；遺伝子治療、例えば、ＴＮＦ、ＩＬ－１、ＩＬ－２およびｐ５３；ならびにモノクローナル抗体、例えば、抗ＣＤ２０、抗ガングリオシドＧＭ２および抗ｐ１８５が挙げられる。１つ以上の抗癌療法が、本明細書中に記載される抗体療法とともに使用され得ることが企図される。

いくつかの実施形態において、免疫療法は、免疫チェックポイント阻害剤であり得る。免疫チェックポイントは、シグナル（例えば、共刺激分子）を強めるかまたはシグナルを弱めるかのいずれかである。免疫チェックポイントの遮断によって標的化され得る阻害性免疫チェックポイントとしては、アデノシンＡ２Ａレセプター（Ａ２ＡＲ）、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６としても知られる）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＤ１５２としても知られるＣＴＬＡ－４）、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、キラー細胞免疫グロブリン（ＫＩＲ）、リンパ球活性化遺伝子－３（ＬＡＧ３）、プログラム死１（ＰＤ－１）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ－３）、ならびにＴ細胞活性化のＶ－ドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）が挙げられる。特に、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１軸および／またはＣＴＬＡ－４を標的化する。

免疫チェックポイント阻害剤は、小分子、組換え型のリガンドまたはレセプターなどの薬物であり得るか、または特に、ヒト抗体などの抗体である。免疫チェックポイントタンパク質またはそのアナログの公知の阻害剤が、使用され得、特に、キメラ化型、ヒト化型またはヒト型の抗体が使用され得る。当業者が承知しているように、代替のおよび／または等価な名称が、本開示において述べられるある特定の抗体に対して使用され得る。そのような代替のおよび／または等価な名称は、本開示の文脈において相互交換可能である。例えば、ランブロリズマブが、代替のおよび等価な名称であるＭＫ－３４７５およびペンブロリズマブとしても知られていることは公知である。

いくつかの実施形態において、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＰＤ－１がそのリガンド結合パートナーに結合するのを阻害する分子である。具体的な態様において、ＰＤ－１リガンド結合パートナーは、ＰＤＬ１および／またはＰＤＬ２である。別の実施形態において、ＰＤＬ１結合アンタゴニストは、ＰＤＬ１がその結合パートナーに結合するのを阻害する分子である。具体的な態様において、ＰＤＬ１結合パートナーは、ＰＤ－１および／またはＢ７－１である。別の実施形態において、ＰＤＬ２結合アンタゴニストは、ＰＤＬ２がその結合パートナーに結合するのを阻害する分子である。具体的な態様において、ＰＤＬ２結合パートナーは、ＰＤ－１である。アンタゴニストは、抗体、その抗原結合フラグメント、イムノアドヘシン、融合タンパク質またはオリゴペプチドであり得る。

いくつかの実施形態において、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ－１抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体）である。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブおよびＣＴ－０１１からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、イムノアドヘシン（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合されたＰＤＬ１またはＰＤＬ２の細胞外の部分またはＰＤ－１結合部分を含むイムノアドヘシン）である。いくつかの実施形態において、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＡＭＰ－２２４である。ＭＤＸ－１１０６－０４、ＭＤＸ－１１０６、ＯＮＯ－４５３８、ＢＭＳ－９３６５５８およびＯＰＤＩＶＯ（登録商標）としても知られるニボルマブは、使用され得る抗ＰＤ－１抗体である。ＭＫ－３４７５、Ｍｅｒｃｋ３４７５、ランブロリズマブ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）およびＳＣＨ－９００４７５としても知られるペンブロリズマブは、例示的な抗ＰＤ－１抗体である。ｈＢＡＴまたはｈＢＡＴ－１としても知られるＣＴ－０１１も、抗ＰＤ－１抗体である。Ｂ７－ＤＣＩｇとしても知られるＡＭＰ－２２４は、ＰＤＬ２－Ｆｃ融合可溶性レセプターである。

本明細書中に提供される方法において標的化され得る別の免疫チェックポイントは、ＣＤ１５２としても知られる細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）である。ヒトＣＴＬＡ－４の完全ｃＤＮＡ配列は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｌ１５００６を有する。ＣＴＬＡ－４は、Ｔ細胞の表面上に見られ、抗原提示細胞の表面上のＣＤ８０またはＣＤ８６に結合したとき「切」スイッチとして作用する。ＣＴＬＡ４は、ヘルパーＴ細胞の表面上に発現される免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであり、Ｔ細胞に阻害シグナルを伝達する。ＣＴＬＡ４は、Ｔ細胞共刺激タンパク質であるＣＤ２８に似ており、両分子は、抗原提示細胞上のＣＤ８０およびＣＤ８６（それぞれＢ７－１およびＢ７－２とも呼ばれる）に結合する。ＣＴＬＡ４は、Ｔ細胞に阻害シグナルを伝達するのに対して、ＣＤ２８は、刺激シグナルを伝達する。細胞内ＣＴＬＡ４は、制御性Ｔ細胞にも見られ、それらの細胞の機能にとって重要であり得る。Ｔ細胞レセプターおよびＣＤ２８を介したＴ細胞の活性化により、Ｂ７分子に対する阻害性レセプターであるＣＴＬＡ－４が高発現される。

いくつかの実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ－４抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体）、それらの抗原結合フラグメント、イムノアドヘシン、融合タンパク質またはオリゴペプチドである。

本方法における使用に適した抗ヒトＣＴＬＡ－４抗体（またはそれ由来のＶＨおよび／もしくはＶＬドメイン）は、当該分野で周知の方法を用いて作製され得る。あるいは、当該分野で認められている抗ＣＴＬＡ－４抗体を使用することができる。例示的な抗ＣＴＬＡ－４抗体は、イピリムマブ（１０Ｄ１、ＭＤＸ－０１０、ＭＤＸ－１０１およびＹｅｒｖｏｙ（登録商標）としても知られる）またはその抗原結合フラグメントおよびバリアントである。他の実施形態において、その抗体は、イピリムマブの重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲまたは重鎖ＶＲおよび軽鎖ＶＲを含む。したがって、１つの実施形態において、その抗体は、イピリムマブのＶＨ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインならびにイピリムマブのＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む。別の実施形態において、その抗体は、ＣＴＬＡ－４上の、上述の抗体と同じエピトープへの結合について競合し、かつ／またはＣＴＬＡ－４上の、上述の抗体と同じエピトープに結合する。別の実施形態において、その抗体は、上述の抗体に対して少なくとも約９０％の可変領域アミノ酸配列同一性（例えば、イピリムマブと少なくとも約９０％、９５％または９９％の可変領域同一性）を有する。

４．手術
癌を有する人のおよそ６０％が、予防的手術、診断的手術または進行度診断手術、根治的手術および緩和手術をはじめとした何らかのタイプの手術を受ける。根治的手術には、癌性組織の全部または一部を物理的に除去、切除および／または破壊する摘出術が含まれ、他の治療（例えば、本実施形態の処置、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、遺伝子治療、免疫療法および／または代替療法）と併せて使用され得る。腫瘍摘出術とは、腫瘍の少なくとも一部を物理的に除去することを指す。手術による処置には、腫瘍摘出術に加えて、レーザー手術、凍結手術、電気手術および顕微鏡下手術（モース術）が含まれる。

癌性細胞、組織または腫瘍の一部または全部を切除する際、身体に空洞が形成され得る。処置は、さらなる抗癌療法によるその領域の灌流、直接注射または局所適用によって達成され得る。そのような処置は、例えば、１、２、３、４、５、６もしくは７日ごとに、または１、２、３、４および５週間ごとに、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１もしくは１２ヶ月ごとに、反復され得る。これらの処置は、様々な投与量の処置でもあり得る。

５．他の作用物質
処置の治療効果を改善するために、本実施形態のある特定の態様と組み合わせて他の作用物質が使用され得ることが企図される。これらのさらなる作用物質としては、細胞表面レセプターおよびギャップ結合のアップレギュレーションに影響する作用物質、細胞分裂抑制剤および分化剤、細胞接着の阻害剤、アポトーシス誘導物質に対する過剰増殖細胞の感度を高める作用物質、または他の生物学的作用物質が挙げられる。ギャップ結合数を増加させることによる細胞間のシグナル伝達の増加は、隣接する過剰増殖細胞集団に対する抗過剰増殖効果を高め得る。他の実施形態では、処置の抗過剰増殖の有効性を改善するために、本実施形態のある特定の態様と組み合わせて細胞分裂抑制剤または分化剤が使用され得る。本実施形態の有効性を改善するために、細胞接着の阻害剤が企図される。細胞接着阻害剤の例は、接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤およびロバスタチンである。アポトーシスに対する過剰増殖細胞の感度を高める他の作用物質（例えば、抗体ｃ２２５）が、処置の有効性を改善するために本実施形態のある特定の態様と組み合わせて使用され得ることがさらに企図される。

ＶＩＩ．製品またはキット
無限免疫細胞を含む製品またはキットも本明細書中に提供される。その製品またはキットは、個体の癌を処置するためもしくは癌の進行を遅延させるためにまたは癌を有する個体の免疫機能を高めるために免疫細胞を使用するための指示を含む添付文書をさらに含み得る。本明細書中に記載される抗原特異的免疫細胞のいずれかが、その製品またはキットに含められ得る。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、バッグおよびシリンジが挙げられる。その容器は、ガラス、プラスチック（例えば、ポリ塩化ビニルまたはポリオレフィン）または金属合金（例えば、ステンレス鋼またはハステロイ）などの種々の材料から形成され得る。いくつかの実施形態において、その容器は、製剤およびラベルを保持し、そのラベルは、容器に付着しているかまたは関連付けられており、その容器には、使用法が示されている場合がある。その製品またはキットは、商業的な観点およびユーザーの観点から望ましい他の材料をさらに含むことがあり、それらの材料としては、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および使用するための指示を含む添付文書が挙げられる。いくつかの実施形態において、その製品は、１つ以上の別の作用物質（例えば、化学療法剤および抗悪性腫瘍剤）をさらに含む。その１つ以上の作用物質に適した容器としては、例えば、ボトル、バイアル、バッグおよびシリンジが挙げられる。

ＩＶ．実施例
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を実証するために含められる。以下の実施例に開示される手法は、本発明の実施において十分に機能すると本発明者が発見した手法であり、ゆえにその実施に対する好ましい形式であると考えることができることが当業者によって認識されるべきである。しかしながら、当業者は、本開示に鑑みて、開示される具体的な実施形態において多くの変更を行うことができ、それらの変更は、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、なおも同様または類似の結果をもたらすと認識するはずである。

実施例１－養子療法用の無限免疫細胞
２９３Ｔ細胞を、１０％ＦＢＳおよび１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐを含む１０ｍＬの高グルコースＤＭＥＭ培地中においてＴ７５フラスコ内で培養し、継代した。２９３Ｔ細胞が９０％の培養密度に達したら、翌日、それらをレンチウイルスベクターの作製およびプラスミドのパッケージングのためのトランスフェクションに使用した。ＢＣＬ６およびＢｃｌ－ｘＬ遺伝子のコード配列をＴ２Ａ配列とつなげることにより、ＢＣＬ６遺伝子とＢｃｌ－ｘＬ遺伝子とを同時に発現できる１つのオープンリーディングフレームを作製することができる。このＢＣＬ６－Ｔ２Ａ－Ｂｃｌ－ｘＬオープンリーディングフレームは、ＮＥＢが提供するプロトコルに従ってＧｉｂｓｏｎアセンブリを用いてレンチウイルスベクターにクローニングされ得る。最終的なベクターは、ｐＬＶ４ａプラスミドと命名された（図１Ａ）。このｐＬＶ４ａプラスミドを、ａｂｍ社のレンチウイルスベクターパッケージング混合物とともに２９３Ｔ細胞にコトランスフェクトした。ウイルス上清を、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ製のＬｅｎｔｉ－Ｘコンセントレーターを用いて濃縮した。

健康ドナー由来の無限細胞株を開発するために、正常なＴ細胞を、ＳＴＥＭＣＥＬＬＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製のＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ^ＴＭＨｕｍａｎＴＣｅｌｌＥｎｒｉｃｈｍｅｎｔＣｏｃｋｔａｉｌおよびＳｅｐＭａｔｅ^ＴＭ－５０チューブを用いて健康ドナーから単離した。次いで、単離されたＴ細胞を、１０％ＦＢＳ、２％ＨＥＰＥＳ、１％ピルビン酸ナトリウムおよび０．０１％２－メルカプトエタノール、ならびに５０～１０００ＩＵ／ｍＬＩＬ－２（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）および２５μＬ／ｍＬＩｍｍｕｎｏＣｕｌｔ^ＴＭヒトＣＤ３／ＣＤ２８／ＣＤ２Ｔ細胞アクチベーター（ＳＴＥＭＣＥＬＬＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）が補充されたＲＰＭＩ－１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ）を用いて培養した。３６～４８時間培養した後、培養された１００万個のＴ細胞に、濃縮ｐＬＶ４ａレンチウイルスベクター（図１Ａ）をレトロネクチン（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）の存在下において形質導入し、次いで、そのＴ細胞をＲＰＭＩ１６４０培地中、５０～１０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下で培養し、必要に応じて、継代培養し、分割した。形質導入された一部のＴ細胞は、無限に増殖し続けた。この方法により、組換えヒトＩＬ－２またはＩＬ－１５の存在下において増殖する「無限Ｔ細胞」と称されるＴ細胞株が健康ドナーＴ細胞から作製された。

次に、上記方法によって、いくつかの新規の無限Ｔ細胞株を作製した。それらは、複数のＴ細胞サブセットからなるＩｎ１－Ｌ４ａＴ細胞と命名された。一連のＴ細胞を単離し、Ｉｅ１－Ｌ４ａ、Ｉｆ１－Ｌ４ａ、Ｉｎ１－Ｌ４ａＪ３、Ｉｅ１－Ｌ４ａＪ３、Ｉｇｄ１－Ｌ４ａ、Ｉｇｄ１－Ｌ４ａＪ３などを含むＩｎ１－Ｌ４ａＴ細胞を用いて細胞選別または遺伝子工学によって作製した。これらのＩＬ－２またはＩＬ－１５依存性無限Ｔ細胞株の詳細な説明を表１に要約する。

Ｉｎ１－Ｌ４ａ細胞および派生細胞は、ＧｌｕｔａＭＡＸ^ＴＭ補給物、ピルビン酸ナトリウムおよび１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むＲＰＭＩ１６４０培地などの通常の培養液中で容易に維持される。さらに、５０～１０００ＩＵ／ｍＬの組換えヒトＩＬ－２を、長期間の成長のために加える（図１Ｂ）。ＩＬ－１５も、増殖を助けたが、ＩＬ７またはＩＬ－２１は、増殖を助けなかった（図１Ｂ）。懸濁培養物を週２回の培地交換で維持したとき、それらの細胞は、指数関数的なパターンで非常に急速に増殖および拡大でき、倍加時間は約２４時間だった。これらの無限Ｔ細胞を培養液中で維持したところ、ＩＬ－２の存在下では増殖速度が変化することなく３ヶ月超にわたって増殖し続けた（図１Ｂ）。

上記細胞は、その生存および増殖をＩＬ－２に強く依存しており、培養液からＩＬ－２を取り除いた後は、増殖を止め、速やかに死んだ（図１Ｂ）。無限Ｔ細胞は、ＣＤ３陽性であり、インビトロで長期間培養し、拡大した後であっても、他の表面マーカー（例えば、ＣＤ４またはＣＤ８、ＴＣＲαβまたはＴＣＲｇδまたはＣＤ１６）が、いくつかの無限Ｔ細胞サブセット上に発現された（図１Ｃ）。それらのマーカーは、無限Ｔ細胞が、異なるＴ細胞サブセットの混合集団であることを示し（図１Ｃ）、ゆえに、特異的なＴ細胞マーカーを用いた細胞選別によって特定のＴ細胞集団が単離され得る。例えば、ＣＤ８＋無限Ｔ細胞を、抗ＣＤ８抗体を用いた細胞選別によって単離した。別の特定のＴ細胞集団であるγδＴ細胞集団も、抗ＴＣＲｇδ抗体を用いた細胞選別によって単離した。選別の後、比較的純粋なγδＴ細胞株が作製された（図１Ｄ）。

成熟Ｔ細胞は、リンパ系組織において、Ｔｈ１、Ｔｈ２、Ｔｈ１７、ＴｒｅｇおよびＴｆｈなどの異なる機能的サブセットにさらに分化し得る。これらの機能的サブセットへの分化は、ユニークなマスター転写因子によって駆動される。例えば、Ｔｈ１分化は、Ｔｂｅｔによって駆動され、Ｔｈ２分化は、ＧＡＴＡ－３によって駆動され、Ｔｈ１７分化は、ＲＯＲｇｔによって駆動され、Ｔｒｅｇ分化は、Ｆｏｘｐ３によって駆動され、Ｔｆｈ分化は、ＢＣＬ６によって駆動される。したがって、既存の文献に基づくと、成熟Ｔ細胞における高レベルのＢＣＬ６の発現は、Ｔｆｈ様表現型に至ると予想され得る。しかしながら、無限Ｔ細胞ではこのタイプの分化が見られず、これは予想外のことだった。

上記細胞を、抗ＣＤ１９ＣＡＲを発現するようにさらに改変して、一連の「抗ＣＤ１９無限ＣＡＲＴ細胞」（ＣＤ１９ｉｎＣＡＲＴ）を作製した。ＣＤ３無限Ｔ細胞およびＣＤ８無限Ｔ細胞であるＩｎ１－Ｌ４ａおよびＩｅ１－Ｌ４ａを、ｐＪ３プラスミド（図２Ａ）と命名されたベクターを用いて、ヒトＣＤ１９を標的化するキメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）をそれらの表面上に発現するように改変したところ、Ｉｎ１－Ｌ４ａＪ３およびＩｅ１－Ｌ４ａＪ３無限Ｔ細胞株が得られた。Ｉｎ１－Ｌ４ａＪ３Ｔ細胞とＩｅ１－Ｌ４ａＪ３Ｔ細胞の両方が、抗ＣＤ１９ＣＡＲを発現し、組換えヒトＣＤ１９タンパク質に結合できた（図２Ｂおよび２Ｃ）。Ｉｎ１－Ｌ４ａＪ３およびＩｅ１－Ｌ４ａＪ３無限Ｔ細胞の作製は成功し、それらの細胞は、それらの親細胞と類似の増殖速度でインビトロにおいて拡大した。Ｉｅ１－Ｌ４ａＪ３は、ＩＬ－２の存在下においてＣＤ１９陽性Ｒａｊｉリンパ腫細胞株およびＮａｌｍ６白血病細胞株を０．２：１および１：１というエフェクター：ターゲット比で溶解する能力を示した（図３）。

実施例２－ＣＤ１９ｉｎＣＡＲＴ細胞を作製するためのＩｎ１－Ｌ４ａ由来Ｔ細胞株の改変
以下の例では、ＣＤ１９ｉｎＣＡＲＴ細胞を作製するためのＩｎ１－Ｌ４ａ由来無限Ｔ細胞株の改変を説明する。これらの手順は、他の無限Ｔ細胞に対しても同様に使用できる。しかしながら、簡潔さのために、これらの手順を、Ｉｎ１－Ｌ４ａおよびＩｅ１－Ｌ４ａ細胞株についてのみ詳細に説明する。当業者であれば、上記方法を、抗ＣＤ１９ＣＡＲ遺伝子を他の無限細胞株に挿入するように、または種々の異なる腫瘍に対する種々の腫瘍マーカーを標的化する他のＣＡＲもしくはＴＣＲを治療目的で挿入するように適合させることができるだろう。

ＭＳＣＶプロモーターによって駆動される抗ＣＤ１９ＣＡＲおよびｈＥＧＦＲｔを発現する組換えレンチウイルスベクターを、Ｇｉｂｓｏｎアセンブリ法（ＮＥＢ）によって作製した。そのベクターは、ｐＪ３（ＬＶ－ＭＳＣＶ－最適化Ｃ１９－ＣＤ２８ｚ－Ｔ２Ａ－ｔＥＧＦＲ）と命名された（図２Ａ）。感染性のｐＪ３ウイルスを生成するために、２９３Ｔ細胞にｐＪ３プラスミドとレンチウイルスベクターパッケージングミックス（ＡＢＭ）とをコトランスフェクトした。実施例１に記載された１００万個のＩｎ１－Ｌ４ａおよびＩｅ１－Ｌ４ａ細胞にｐＪ３レンチウイルスベクターを形質導入した。形質導入の１０日後、ＡＦ６４７標識抗ＥＧＦＲ抗体（Ｒ＆Ｄ）およびＦＩＴＣ標識組換えヒトＣＤ１９タンパク質（ＡＣＲＯＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いるフローサイトメトリーによって、ＣＡＲ陽性細胞を試験した。ｐＪ３を形質導入されたＩｅ１－Ｌ４ａおよびＩｎ１－Ｌ４ａ群におけるＣＡＲ陽性細胞のパーセンテージは、約２０％および４６．５％だった（図２Ｂ）。

上記のＣＡＲ陽性のパーセンテージは、ＦＩＴＣ標識組換えヒトＣＤ１９タンパク質およびＡＦ６４７標識セツキシマブでの二重染色によってさらに確認された（図２Ｃ）。そのＣＡＲ陽性細胞を、セルソーター（ＢＤ）を用いて細胞選別によって濃縮した。選別の後、比較的純粋な抗ＣＤ１９ＣＡＲ細胞を回収し、インビトロで拡大した（図２Ｄ）。ヒトＣＤ１９に対するＣＡＲを発現しているＩｎ１－Ｌ４ａおよびＩｅ１－Ｌ４ａ細胞を、Ｉｎ１－Ｌ４ａＪ３およびＩｅ１－Ｌ４ａＪ３と命名した。それらは、それらの親Ｉｎ１－Ｌ４ａおよびＩｅ１－Ｌ４ａ無限Ｔ細胞と類似の指数関数的な増殖速度を示した（図１Ｂ）。

ＣＤ１９陽性のリンパ腫細胞および白血病細胞に対するＣＤ１９ｉｎＣＡＲＴ細胞のインビトロ細胞傷害性：Ｒａｊｉ細胞は、リンパ腫の前臨床研究において広く使用されている、バーキットリンパ腫患者に由来するＣＤ１９＋Ｂ細胞リンパ腫細胞株であり、Ｎａｌｍ６は、急性リンパ芽球性白血病患者に由来するＣＤ１９＋Ｂ細胞白血病細胞株である。ゆえに、それらの両方を使用して、エフェクターと標的細胞とを０．２：１および１：１の比でＩＬ－２の存在下において共培養することによって、無限抗ＣＤ１９ＣＡＲＴ細胞株の細胞傷害活性を試験した。この試験は、１２ウェルプレートにおいて行われた。簡潔には、１０万個のＲａｊｉまたはＮａｌｍ６細胞を、２ｍＬの上述の培地中、１ウェルあたり２万個または１０万個のＩｅ１－Ｌ４ａＪ３細胞（抗ＣＤ１９ＣＡＲＴ）またはＩｅ１－Ｌ４ａ細胞（抗ＣＤ１９ＣＡＲを有しない）とともに培養した。共培養の５日後に、各ウェル内の細胞を、ＡＰＣ結合体化抗ＣＤ８抗体（ＢＤ）で染色し、ＢＤＦｏｔｅｓｓａＡｎａｌｙｓｅｒ（ＢＤ）を用いて細胞を取得して、生細胞のＴ細胞および腫瘍細胞のパーセンテージを測定した。フローサイトメトリーデータを、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いて解析した。データから、両方のＩｅ１－Ｌ４ａＪ３無限Ｔ細胞が、Ｒａｊｉ腫瘍細胞とＮａｌｍ６腫瘍細胞の両方をインビトロで効率的に溶解できることが実証された（図３）。対照的に、Ｉｅ１－Ｌ４ａ細胞は、抗ＣＤ１９ＣＡＲを欠くので、それらを用いたとき、ＲａｊｉまたはＮａｌｍ６腫瘍細胞の有意な溶解は観察されなかった。

実施例３－汎用の養子Ｔ細胞療法用の無限Ｔ細胞
無限Ｔ細胞は、長期間、急速に増殖する能力を有する。現在までに、本発明者らは、８人の健康ドナーから、ＢＣＬ６およびＢＣＬ２Ｌ１のレンチウイルス形質導入によって無限Ｔ細胞を作製し、それらが、ＩＬ－２またはＩＬ－１５の存在下において＞１２ヶ月にわたって継続的に急速に成長できることを観察した。レンチウイルスによってこれらの細胞に抗ＣＤ１９ＣＡＲを組み込んでも成長速度に影響しなかった。これらのＴ細胞の増加倍率は、１０日間で約１００倍、３０日間で約１００万倍であり、増殖能力は、１２ヶ月間という継続的なインビトロ培養にわたって変化しない（図５Ａ）。表現型的には、無限Ｔ細胞は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞とＣＤ８^＋Ｔ細胞との混合物からなり、これは、磁気ビーズによって高純度にソーティングできた（図５Ｂ）。ＣＤ４^＋Ｔ細胞内のＦｏｘｐ３^＋細胞は、＜５％だった（データ示さず）。任意の時点におけるサイトカインの投与中止によって、１週間以内に急速に細胞死が生じたことから、これらのＴ細胞が、悪性の表現型に形質転換しておらず、自律的増殖の能力を獲得していないことが示唆される（図５Ｃ）。

無限Ｔ細胞は、高いテロメラーゼ活性を示す。３０～４０回の集団倍化の後のＴ細胞の増殖は、テロメアの漸進的な短縮および複製老化を招くので（Ｂａｒｓｏｖｅｔａｌ．，２０１１）、本発明者らは、ＴＲＡＰｅｚｅテロメラーゼ活性検出キット（Ｓｉｇｍａ）を用いてこれらの細胞におけるテロメラーゼ活性を測定した。無限Ｔ細胞におけるｈＴＥＲＴ活性は、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）由来の対応するＴ細胞と比べて非常に高かった（図６Ａ）。これらの細胞のＲＮＡｓｅｑ解析は、無限ＣＤ４＋Ｔ細胞、無限ＣＤ８＋Ｔ細胞および無限ＣＤ８＋ＣＡＲ＋Ｔ細胞におけるこの観察結果と一致した（図６Ｂ）。これらの結果から、形質導入された遺伝子がおそらく、無限Ｔ細胞において高いテロメラーゼ活性を誘導し、その結果、テロメアの長さが安定化し、複製老化が防がれ、長期の増殖能力という特性が付与されることが示唆された。

抗ＣＤ１９ＣＡＲの組み込みは、Ｂ細胞悪性腫瘍に対する無限Ｔ細胞の特異性を再指示する。抗ＣＤ１９ＣＡＲ（ＣＤ８αヒンジ／膜貫通ドメイン、ＣＤ３ζおよびＣＤ２８シグナル伝達ドメインならびに形質導入マーカーおよび安全スイッチとしてｔＥＧＦＲを有するクローンＦＭＣ６３抗ＣＤ１９ｓｃＦｖに基づく（Ｗａｎｇｅｔａｌ．，２０１１））を無限Ｔ細胞にレンチウイルスで形質導入すると、それらの細胞は、Ｄａｕｄｉバーキットリンパ腫細胞株およびＮＡＬＭ－６急性Ｂ細胞リンパ芽球性白血病細胞株を効率的かつ特異的に脱顆粒し、殺滅することが可能になった（図７Ａ～７Ｂ）。ＣＡＲを有しない無限Ｔ細胞は、有意な細胞傷害性または脱顆粒を示さなかった。健康ドナーから単離されたばかりのＴ細胞から作製された従来のＣＡＲＴ細胞と比べて、無限Ｔ細胞は、腫瘍細胞の殺滅は遅かったが、７日目までにほぼ完全に排除した（図７Ａ）。この遅い殺滅は、サイトカイン放出症候群および神経性の毒性などの毒性の発生がより少なくなり得るので、臨床では有望な利点であり得る。これらの抗ＣＤ１９無限ＣＡＲＴ細胞は、セントラルメモリーおよびエフェクターメモリー表現型を有し（図７Ｃ）、Ｔ細胞疲弊に関連するマーカーの発現が非常に少なかったかまたは無かった（図７Ｄ）。

無限Ｔ細胞の転写プロファイル。ＰＢＭＣサンプルから単離された対応するＣＤ４^＋またはＣＤ８^＋Ｔ細胞と比べた、抗ＣＤ１９ＣＡＲを有するまたは有しない無限ＣＤ４^＋および／またはＣＤ８^＋Ｔ細胞のＲＮＡｓｅｑ解析は、これらが、メモリー表現型および細胞傷害性表現型を有し、古典的なＴ細胞疲弊に関連するマーカーを発現しないというフローサイトメトリーデータおよび機能データと一致した（図８Ａ～８Ｂ）。それらは、ナイーブＴ細胞から濾胞性ヘルパーＴ細胞（Ｔ_ＦＨ）への分化に対するマスター転写因子であるＢＣＬ６を過剰発現することによって作製されたが^３、これらの細胞は、Ｔ_ＦＨシグネチャを示さず（図８Ａ）、Ｔ_ＦＨ細胞の特徴である（Ｎｕｒｉｅｖａｅｔａｌ．，２００９；Ｒａｗａｌｅｔａｌ．，２０１３）高レベルのＣＸＣＲ５を発現しない（図８Ｃ）。しかしながら、それらは、リンパ節へのＴ細胞の輸送にとって重要なケモカインレセプターＣＣＲ４およびＣＣＲ７、ならびに骨髄への輸送にとって重要なＣＸＣＲ４の発現を保持する（図８Ｃ）（Ｖｉｏｌａｅｔａｌ．，２００６）。両方の部位が、通常、リンパ腫に関わる。無限Ｔ細胞は、Ｂ３ＧＡＴ１（ＣＤ５７）、ＣＤ１６０またはＫＬＲＧ１などの老化マーカーを発現しない（図８Ｄ）（Ｘｕｅｔａｌ．，２０１７）。ケモカイン（図９Ａ）およびサイトカイン（図９Ｂ）遺伝子の発現プロファイルは、無限Ｔ細胞と末梢血に由来する対応するＣＤ４またはＣＤ８Ｔ細胞との間でおおむね似ていた。サイトカインレセプターの遺伝子発現は、末梢血由来の対応するＣＤ４またはＣＤ８Ｔ細胞と比べて無限Ｔ細胞において、いくらかの差を示し、以下に限定されないが、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ１５ＲＡおよびＩＬ２１Ｒレベルの上昇、ならびにＩＬ４Ｒ、ＩＬ７Ｒ、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１７ＲＡ、ＩＬ１８Ｒ１およびＩＦＮＧＲ１レベルの低下を含んだ（図９Ｃ）。

無限ＣＡＲＴ細胞は、凍結融解後に増殖性および細胞傷害性の機能を保持する。ＣＡＲを有するおよび有しない無限Ｔ細胞を凍結保存し、６ヶ月後に解凍した。解凍後、それらは、抗ＥＧＦＲ抗体を用いたとき、ＣＡＲの強い発現を示した（図１０Ａ）。これらの細胞をＩＬ－２中で培養すると、細胞数が１０日間で約１００倍増加し、無限ＣＤ８ＣＡＲＴ細胞の増殖能力は凍結融解後に維持されることが確認された（図１０Ｂ）。さらに、これらの細胞は、悪性Ｂ細胞に対して非常に有意かつ特異的な細胞傷害活性を示すと示された（図１０Ｃ）。

無限γδＴ細胞は、疲弊マーカーを発現しない。無限γδＴ細胞は、古典的なＴ細胞疲弊マーカーを有意に発現しなかった（図１１）。

抗ＣＤ１９無限ＣＡＲＴ細胞は、インビボモデルにおいて抗腫瘍有効性を示す。ルシフェラーゼで標識された無限ＣＡＲＴ細胞を用いて、本発明者らは、ＮＳＧマウスに腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した後、生物発光イメージング（ＢＬＩ）によってモニターしたところ、それらのＴ細胞がサイトカインの補助なしでは７２時間以内に急速に消失したことを観察した（図１２、中央のカラム）。これは、おそらくマウスサイトカイン（ＩＬ－２とＩＬ－１５の両方）がヒトＴ細胞の成長を補助しないからである。対照的に、１および３日目に組換えヒトＩＬ－１５を注射すると、ＩＬ－１５停止後の１週間にわたって細胞が残存するのとともに、強力なＴ細胞増殖が誘導された（図１２、右のカラム）。これらの結果から、ＩＬ－１５は、インビボでの増殖および持続性を促進し、低用量で十分であり得ることが示唆された。類似の効果は、ＩＬ－２でも観察された。

次に、本発明者らは、ルシフェラーゼで標識されたＮＡＬＭ－６腫瘍細胞を、ＣＡＲを有するまたは有しない３×１０^６無限Ｔ細胞／マウスとともにＮＳＧマウスに静脈内（ＩＶ）注射し、ＩＬ－１５を０、４、７および１１日目に注射した。ＣＡＲなしの無限Ｔ細胞と対比して、無限ＣＡＲＴ細胞で処置されたマウスでは、有意に腫瘍がコントロールされ、生存時間が延長した（図１３）。まとめると、これらの結果は、インビボでの拡大および持続性を強化するためにＩＬ－２またはＩＬ－１５を分泌するように無限Ｔ細胞を操作する根拠を提供した。

微生物関連および腫瘍関連の抗原特異的無限Ｔ細胞。ＨＬＡ－Ａ２＋ドナーから作製された無限Ｔ細胞を、四量体を用いて試験したところ、微生物関連および腫瘍関連の抗原特異的Ｔ細胞の混合物の存在が明らかになった（図１４）。これらのＴ細胞の濃縮集団を作製するために、本発明者らは、ＨＬＡ－Ａ２＋ドナー由来の健康ドナー末梢血単核球を、ＥＢＶタンパク質に由来するペプチドのプールで刺激した。２４時間後、ＣＤ１３７陽性Ｔ細胞をソーティングし、それらにＢＣＬ６およびＢＣＬ２Ｌ１を発現するレンチウイルスベクターＬ５ｘ（図２２）を形質導入することによって無限Ｔ細胞の作製のために使用した。ウイルス作製および形質導入のプロトコルは、実施例１に記載した。形質導入の２週間後、形質導入されたＴ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８／ＣＤ２Ｔ細胞アクチベーターで再度刺激した後、実施例１に記載されているように培養し続けた。ＩＬ－２の存在下における７週間のインビトロでの培養および拡大の後、ＡＰＣで標識された３つの四量体（ＢＭＬＦ１－ＨＬＡ－Ａ２四量体を含む）を使用して、拡大された細胞を染色し、ＡＰＣ濃縮磁気ビーズによって濃縮し、濃縮された無限Ｔ細胞を、他のすべての無限Ｔ細胞のように継続的に培養した。１３週目に、濃縮された無限Ｔ細胞を、ＡＰＣ標識ＢＭＬＦ１－ＨＬＡ－Ａ２四量体で染色したところ、それらのＴ細胞の約７０％が、ＣＤ８陽性かつＢＭＬＦ１－ＨＬＡ－Ａ２四量体陽性であることが見出されたことから、それらがＥＢＶ－ＢＭＬＦ１タンパク質に由来するＨＬＡ－Ａ２結合ペプチド（ＧＬＣＴＬＶＡＭＬ）に対して特異的であることが示唆された（図１５）。微生物関連抗原および腫瘍関連抗原に対する他の抗原特異的Ｔ細胞を作製するために、類似のアプローチを使用することができる。そして次に、そのような抗原特異的Ｔ細胞は、二重抗原特異的Ｔ細胞を作製するために、目的のＣＡＲまたはＴＣＲの形質導入に使用することができる。

安全スイッチとしてのＴｅｔ－ｏｆｆシステム。本発明者らは、８人のドナーに由来する無限Ｔ細胞の６～＞１２ヶ月の培養においても、インビトロでの無限Ｔ細胞の悪性形質転換またはサイトカイン非依存性増殖を観察しなかった（図４）。しかしながら、臨床へのトランスレーションに向けて安全性を確保するために、ドキシサイクリンを使用することによって、形質導入されたＢＣＬ６およびＢＣＬ２Ｌ１遺伝子をオフにすることができるＴｅｔ－ｏｆｆ安全スイッチを組み込んだ。このＴｅｔ－ｏｆｆ安全スイッチを組み込んだ後でも、無限Ｔ細胞は、ドキシサイクリンの非存在下でその成長速度を維持したが、１μｇ／ｍＬのドキシサイクリンの存在下では増殖を停止し、徐々に細胞死を起こした（図１６）。このドキシサイクリンの濃度は、ヒトにおいて標準的なドキシサイクリンの治療用量で達成可能な濃度である（Ａｇｗｕｈｅｔａｌ．，２００６）。光学顕微鏡のイメージングによって、その無限Ｔ細胞は、ドキシサイクリンの濃度上昇に伴って増殖クラスターが減少するのとともに、サイズが徐々に小さくなったことが分かった（図１７）。さらに、ＣＤ２５の発現は、ドキシサイクリンの存在下において顕著に減少し（図１７）、ＰＤ－１の発現は増加したことから、おそらくＢＣＬ６および／またはＢＣＬ２Ｌ１遺伝子がこれらの分子の発現を制御したと示唆される。他のＴ細胞共阻害性レセプターの発現は、ドキシサイクリンの存在下において有意に変化しなかった（図１８）。無限Ｔ細胞に組み込まれたＩＬ－２またはＩＬ－１５サイトカイン遺伝子を制御するために、類似のｔｅｔ－ｏｆｆ安全スイッチを使用することもできる。

抗ＣＤ１９無限ＣＡＲＴ細胞は、Ｂ細胞腫瘍細胞に応答してエフェクターサイトカインを産生する。腫瘍細胞に応答して産生される無限Ｔ細胞のサイトカインプロファイルを明らかにするために、本発明者らは、５：１というエフェクター：ターゲット比で、抗ＣＤ１９ＣＡＲを形質導入されたまたはされてないＣＤ８^＋無限Ｔ細胞とＮＡＬＭ－６腫瘍細胞を共培養した。３日後、上清中のサイトカインレベルを計測した。結果から、抗ＣＤ１９ＣＡＲを有する無限Ｔ細胞は、大部分がＮＡＬＭ－６腫瘍細胞に応答してかなりの量のＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－５およびＩＬ－１７を産生したが、抗ＣＤ１９ＣＡＲを有しない無限Ｔ細胞は産生しなかったことが示された（図１９）。腫瘍細胞に応答した抗ＣＤ１９無限ＣＡＲＴ細胞によるＴＮＦ－α、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１０またはＩＬ－１３の産生は、最小だったか、またはＣＡＲ発現なしの無限Ｔ細胞と有意に異ならなかった。しかしながら、ＣＡＲ発現ありまたはなしの無限Ｔ細胞は、腫瘍細胞の存在下または非存在下において１０，０００ｐｇ／ｍＬを超える大量のＩＬ－４を産生した（図１９およびデータ示さず）。ＩＬ－４は、Ｔ細胞、マクロファージおよび他の免疫細胞によって誘導される炎症を抑制できるので、外部刺激の非存在下において大量のＩＬ－４を恒常的に産生するこの無限Ｔ細胞の特性は、様々な炎症性障害（例えば、自己免疫疾患、移植片対宿主病、サイトカイン放出症候群に関連するある特定のタイプの感染症、ＣＡＲＴ細胞療法および他の養子Ｔ細胞療法に関連する毒性、炎症性腸障害、様々な免疫療法に関連する免疫関連有害事象、血球貪食性リンパ組織球症、周期性発熱症候群など）を処置するための臨床用途を潜在的に有し得る。

抗ＣＤ１９無限ＣＡＲＴ細胞用のｔＥＦＧＲ安全スイッチ。切断型ＥＧＦＲ（ｔＥＧＦＲ）が、無限Ｔ細胞用の安全スイッチとして働くことができるかを判定するために、本発明者らは、５μｇ／ｍＬの濃度のセツキシマブの存在下において抗ＣＤ１９ＣＡＲおよびｔＥＧＦＲを発現する無限Ｔ細胞を、健康ドナーの末梢血単核球から単離されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞とともにまたはその細胞なしで共培養した。セツキシマブは、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）によって、コントロールとして使用されたリツキシマブと比べて有意な抗ＣＤ１９無限ＣＡＲＴ細胞の溶解を誘導した（図２０）。これらの結果は、ｔＥＧＦＲが、有害事象が起きた場合にインビボにおいて無限Ｔ細胞を排除するための安全スイッチとして働き得ることを示唆している。

ＢＣＬ６およびＢＩＲＣ５遺伝子の形質導入による無限Ｔ細胞の作製。本発明者らは、無限Ｔ細胞が、ヒトＴ細胞へのＢＣＬ６およびＢＣＬ２Ｌ１遺伝子の形質導入またはＢＣＬ６およびＢＩＲＣ５遺伝子の形質導入によって作製され得ることを観察した（図２１Ａ）。ＢＣＬ２Ｌ１は、抗アポトーシスタンパク質であるＢｃｌ－ｘＬをコードし、ＢＩＲＣ５は、増殖を促進し、細胞のアポトーシスを阻止する、アポトーシス阻害（ＩＡＰ）ファミリータンパク質であるサバイビンをコードする。どちらの遺伝子の組み合わせを形質導入しても、ＩＬ－２の存在下において指数関数的な成長速度で同等の長期増殖能力を有する無限Ｔ細胞が作製された（図２１Ｂ）。さらに、これらの無限Ｔ細胞を、ドキシサイクリンを使用することによって、形質導入されたＢＣＬ６およびＢＣＬ２Ｌ１またはＢＣＬ６およびＢＩＲＣ５遺伝子をオフにすることができるＴｅｔ－ｏｆｆ安全スイッチを用いて作製した。そのベクターには、これらの細胞に形質導入されるＩＬ－１５遺伝子も組み込まれた。Ｔｈ細胞は、ドキシサイクリンの非存在下では指数関数的な速度で成長したが、１μｇ／ｍＬのドキシサイクリンの存在下では、ＩＬ－１５の形質導入および培養液へのＩＬ－２の添加にもかかわらず増殖を止め、徐々に細胞死を起こした（図２１Ｃ）。

ＢＣＬ６およびＢｃｌ－ｘｌを含む構築物Ｌ５ｘ（ＭＳＣＶ－ＢＣＬ６－Ｐ２Ａ－ＢＣＬ－ｘｌ－Ｔ２Ａ－ｒｔＴＡ））の一例。この構造では少なくとも、野生型ＢＣＬ－６とＢＣＬ－ｘＬとの間にＰ２Ａエレメントが含まれており、ＢＣＬ－ｘＬとｒｔＴＡ（Ｔｅｔｏｎトランス活性化因子）との間にＴ２Ａエレメントが含まれている（図２２）。

図２３は、少なくともＢＣＬ６を含む構築物の実施形態の複数の例を提供しており；そのような例は、ＢＣＬ－ｘＬを使用していてもよいし、使用していなくてもよい。単なる一例として、例１では、ＢＣＬ６およびｒｔＴＡの過剰発現を制御するためにＭＳＣＶプロモーターを使用しており、Ｈ１プロモーターは、カスパーゼ９の発現をノックダウンするためのカスパーゼ９標的化ｓｈＲＮＡを制御する。例２では、ＢＡＫの発現をノックダウンするためのＢＡＫ遺伝子標的化ｓｈＲＮＡを制御するためのヒトＵ６プロモーターに加えて、ＢＣＬ６およびｒｔＴＡの過剰発現を制御するためにＭＳＣＶプロモーターを使用している。例３では、ＭＳＣＶプロモーターが、ＢＣＬ６およびＨＳＰ２７およびｒｔＴＡの過剰発現を制御する。例４では、ＭＳＣＶプロモーターが、ＢＣＬ６およびｒｔＴＡの発現を制御しており、Ｕ６プロモーターが、ｍｉＲＮＡ２１の発現を制御している。

本明細書中に開示および特許請求される方法のすべてが、本開示に鑑みて、過度の実験を行うことなく実施および実行され得る。本発明の組成物および方法を好ましい実施形態の点から説明してきたが、本発明の概念、趣旨および範囲から逸脱することなく、本明細書中に記載された方法および方法の工程または工程の順序に変更が適用されてもよいことが当業者には明らかだろう。より詳細には、同じまたは類似の結果が達成される限り、化学的かつ生理的に関係するある特定の作用物質を本明細書中に記載される作用物質の代わりに用いてもよいことが明らかだろう。当業者に明らかなそのような類似の代替物および改変のすべてが、添付の請求項によって定義される本発明の趣旨、範囲および概念の範囲内であるとみなされる。
参考文献
以下の参考文献は、本明細書中に示されたものを補足する例示的な手順の詳細またはその他の詳細を提供する限りにおいて、参照により本明細書中に明確に援用される。

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ＷＯ２０００／１４２５７
ＷＯ２０１２／１２９５１４
ＷＯ２０１３／１２６７２６
ＷＯ２０１３／０７１１５４
ＷＯ２０１３／１２３０６１
ＷＯ２０１３／１６６３２１
ＷＯ２０１４／０３１６８７
ＷＯ２０１４／０５５６６８
米国特許出願公開第２００２１３１９６０号
米国特許出願公開第２０１３２８７７４８号
米国特許出願公開第２０１３０１４９３３７号
米国特許第６，４１０，３１９号
米国特許第６，４５１，９９５号
米国特許第７，０７０，９９５号
米国特許第７，２６５，２０９号
米国特許第７，３５４，７６２号
米国特許第７，４４６，１７９号
米国特許第７，４４６，１９０号
米国特許第７，４４６，１９１号
米国特許第８，２５２，５９２号
米国特許第８，３２４，３５３号
米国特許第８，３３９，６４５号
米国特許第８，３９８，２８２号
米国特許第８，４７９，１１８号
欧州特許出願第２５３７４１６号

Claims

Ｂ細胞リンパ腫６（ＢＣＬ６）および１つ以上の細胞生存促進遺伝子を発現するように操作された免疫細胞を含む、組成物。
前記細胞生存促進遺伝子が、生存促進性遺伝子または抗アポトーシス遺伝子である、請求項１に記載の組成物。
免疫細胞が、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、自然リンパ球系細胞またはそれらの混合物である、請求項１に記載の組成物。
前記細胞生存促進遺伝子が、抗アポトーシスＢ細胞リンパ腫２（ＢＣＬ－２）ファミリー遺伝子である、請求項１～３のいずれか１項に記載の組成物。
前記抗アポトーシスＢＣＬ－２ファミリー遺伝子が、ＢＣＬ２Ｌ１（Ｂｃｌ－ｘＬ）、ＢＣＬ－２、ＭＣＬ１、ＢＣＬ２Ｌ２（Ｂｃｌ－ｗ）、ＢＣＬ２Ａ１（Ｂｆｌ－１）、ＢＣＬ２Ｌ１０（ＢＣＬ－Ｂ）またはそれらの組み合わせである、請求項４に記載の組成物。
前記抗アポトーシスＢＣＬ－２ファミリー遺伝子が、ＢＣＬ２Ｌ１（Ｂｃｌ－ｘＬ）である、請求項５に記載の組成物。
前記細胞生存促進遺伝子が、アポトーシス阻害ファミリー遺伝子である、請求項１～６のいずれか１項に記載の組成物。
前記アポトーシス阻害（ＩＡＰ）ファミリー遺伝子が、ＸＩＡＰ、ＢＩＲＣ２（Ｃ－ＩＡＰｌ）、ＢＩＲＣ３（Ｃ－ＩＡＰ２）、ＮＡＩＰ、ＢＩＲＣ５（サバイビン）またはそれらの組み合わせである、請求項７に記載の組成物。
前記細胞生存促進遺伝子が、１つ以上のカスパーゼの発現を阻害するかまたはノックアウトする核酸ポリマーである、請求項１～８のいずれか１項に記載の組成物。
前記カスパーゼが、カスパーゼ－１、カスパーゼ－２、カスパーゼ－３、カスパーゼ－４、カスパーゼ－５、カスパーゼ－６、カスパーゼ－７、カスパーゼ－８、カスパーゼ－９、カスパーゼ－１０、カスパーゼ－１１、カスパーゼ－１２、カスパーゼ－１３、カスパーゼ－１４またはそれらの組み合わせである、請求項９に記載の組成物。
前記細胞生存促進遺伝子が、１つ以上のアポトーシス促進性遺伝子の発現を阻害するかまたはノックアウトする核酸ポリマーである、請求項１～１０のいずれか１項に記載の組成物。
前記アポトーシス促進性遺伝子が、ＢＣＬ２Ｌ１１（ＢＩＭ）、ＢＢＣ３（ＰＵＭＡ）、ＰＭＡＩＰ１（ＮＯＸＡ）、ＢＩＫ、ＢＭＦ、ＢＡＤ、ＨＲＫ、ＢＩＤ、ＢＡＸ、ＢＡＫ１、ＢＯＫまたはそれらの組み合わせである、請求項１１に記載の組成物。
前記細胞生存促進遺伝子が、抗アポトーシス効果を有する遺伝子である、請求項１～１２のいずれか１項に記載の組成物。
抗アポトーシス効果を有する前記遺伝子が、ＩＧＦ１、ＨＳＰＡ４（Ｈｓｐ７０）、ＨＳＰＢ１（Ｈｓｐ２７）、ＣＬＡＲ（ｃＦＬＩＰ）、ＢＮＩＰ３、ＦＡＤＤ、ＡＫＴおよびＮＦ－κＢ、ＲＡＦ１、ＭＡＰ２Ｋ１（ＭＥＫ１）、ＲＰＳ６ＫＡ１（ｐ９０Ｒｓｋ）、ＪＵＮ（Ｃ－Ｊｕｎ）、ＢＮＩＰ２、ＢＡＧ１、ＨＳＰＡ９、ＨＳＰ９０Ｂ１、ｍｉＲＮＡ２１、ｍｉＲ－１０６ｂ－２５、ｍｉＲ－２０６、ｍｉＲ－２２１／２２２、ｍｉＲ－１７－９２、ｍｉＲ－１３３、ｍｉＲ－１４３、ｍｉＲ－１４５、ｍｉＲ－１５５、ｍｉＲ－３３０またはそれらの組み合わせである、請求項１３に記載の組成物。
前記免疫細胞が、外部刺激の非存在下においてＩＬ－４を産生する、請求項１～１４のいずれか１項に記載の組成物。
前記免疫細胞が、１つ以上のサイトカインを発現するように操作されている、請求項１～１５のいずれか１項に記載の組成物。
前記サイトカインが、ＩＬ－２および／またはＩＬ－１５である、請求項１６に記載の組成物。
前記免疫細胞が、癌と診断されたことがないドナーに由来する、請求項１～１７のいずれかに記載の組成物。
前記免疫細胞が、処置を必要とする個体に由来する、請求項１～１８のいずれかに記載の組成物。
前記ドナーが、ヒトである、請求項１８または１９に記載の組成物。
前記免疫細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ｉＮＫＴ細胞、ＮＫＴ細胞、γδＴ細胞、制御性Ｔ細胞、自然リンパ球系細胞またはそれらの組み合わせであるＴ細胞である、請求項１～２０のいずれかに記載の組成物。
前記免疫細胞が、ＣＤ４陽性細胞、ＣＤ８陽性細胞および／またはγδＴ細胞を含むＴ細胞である、請求項１～２１のいずれかに記載の組成物。
前記免疫細胞が、ナイーブＴ細胞、エフェクターＴ細胞、メモリーＴ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞、最終分化Ｔ細胞またはそれらの組み合わせであるＴ細胞である、請求項１～２２のいずれかに記載の組成物。
前記免疫細胞が、ＴＣＲαβ細胞、ＴＣＲγδＴ細胞またはそれらの組み合わせであるＴ細胞である、請求項１～２３のいずれかに記載の組成物。
前記免疫細胞が、Ｔｈ１／Ｔｃ２、Ｔｈ２／Ｔｃ２、Ｔｈ９／Ｔｃ９、Ｔｈ１７／Ｔｃ１７、Ｔｆｈ、Ｔｈ２２、Ｔｃ２２またはそれらの組み合わせであるＴ細胞である、請求項１～２４のいずれかに記載の組成物。
前記免疫細胞が、ＩＦＮγ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦα、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－２３、ＩＬ－３２、グランザイムＢ、パーフォリンまたはそれらの組み合わせであるサイトカインおよび細胞傷害性分子を発現する、請求項１～２５のいずれかに記載の組成物。
前記免疫細胞が、１つ以上の微生物抗原、１つ以上の自己抗原または１つ以上の腫瘍抗原に特異的である、請求項１～２６のいずれかに記載の組成物。
前記ウイルスが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、インフルエンザＡ、インフルエンザＢ、インフルエンザＣ、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、ポリオーマウイルス、ＢＫウイルス、ＪＣウイルス、アデノウイルス、コロナウイルスまたはそれらの組み合わせである、請求項２７に記載の組成物。
前記免疫細胞が、１つ以上のキメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）および／または１つ以上のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）を発現するように操作されている、請求項１～２８のいずれかに記載の組成物。
前記ＣＡＲおよび／またはＴＣＲが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、メソテリン、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＴＣＬ１、ＮＹ－ＥＳＯ、ＷＴ１および／またはＢＡＦＦ－Ｒ抗原結合領域を標的化する、請求項２９に記載の組成物。
前記ＣＡＲが、ＣＤ８ａ、ＣＤ２８、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、前記Ｔ細胞レセプターのアルファ、ベータもしくはゼータ鎖、ＣＤ２、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８ｂ、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、ＢＴＬＡ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ４、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＧＩＴＲ／ＣＤ３５７、ＮＫＧ２Ｄ、ＬＡＧ－３、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＤＲ３、ＣＤ３０、ＣＤ２２４、ＣＤ２４４、ＳＬＡＭ、ＣＤ２２６、ＤＡＰのヒンジ、またはそれらの組み合わせもしくは合成分子の部分配列または完全配列を含む、請求項２９または３０に記載の組成物。
前記ＣＡＲが、前記Ｔ細胞レセプターのアルファ鎖、前記Ｔ細胞レセプターのベータ鎖、前記Ｔ細胞レセプターのゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ２、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＧＩＴＲ／ＣＤ３５７、ＮＫＧ２Ｄ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＤＡＰ、合成分子またはそれらの組み合わせの部分的または完全な膜貫通ドメインを含む、請求項２９～３１のいずれか１項に記載の組成物。
前記ＣＡＲが、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＯＸ－４０（ＣＤ１３４）、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、４－１ＢＢまたはそれらの組み合わせの１つ以上の共刺激ドメインを含む、請求項２９～３２のいずれか１項に記載の組成物。
前記組成物が、１００，０００～１００億個の免疫細胞を含む、請求項１～３３のいずれかに記載の組成物。
前記免疫細胞が、１つ以上の安全スイッチを含む、請求項１～３４のいずれかに記載の組成物。
前記安全スイッチが、切断型ＥＧＦＲまたはその融合タンパク質である、請求項２７に記載の組成物。
前記免疫細胞が、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、１つ以上の成長因子、１つ以上の分化因子またはそれらの組み合わせを発現する、請求項１～３６のいずれかに記載の組成物。
前記細胞が、少なくとも３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間、１０ヶ月間、１１ヶ月間もしくは１２ヶ月間またはそれ以上にわたって増殖速度を維持する、請求項１～３７のいずれかに記載の組成物。
前記免疫細胞が、強化された抗腫瘍細胞傷害性、サイトカイン産生、インビボ増殖、インビボ持続性および／または改善された機能を有する、請求項１～３８のいずれかに記載の組成物。
ＢＣＬ６および細胞生存促進遺伝子をコードする１つ以上のベクターを前記細胞に導入する工程を含む、請求項１～３９のいずれかに記載の免疫細胞を作製するための方法。
前記細胞生存促進遺伝子が、抗アポトーシスＢ細胞リンパ腫２（ＢＣＬ－２）ファミリー遺伝子である、請求項４０に記載の方法。
前記抗アポトーシスＢＣＬ－２ファミリー遺伝子が、ＢＣＬ２Ｌ１（Ｂｃｌ－ｘＬ）、ＢＣＬ－２、ＭＣＬ１、ＢＣＬ２Ｌ２（Ｂｃｌ－ｗ）、ＢＣＬ２Ａ１（Ｂｆｌ－１）、ＢＣＬ２Ｌ１０（ＢＣＬ－Ｂ）またはそれらの組み合わせである、請求項４１に記載の方法。
前記抗アポトーシスＢＣＬ－２ファミリー遺伝子が、ＢＣＬ２Ｌ１（Ｂｃｌ－ｘＬ）である、請求項４２に記載の方法。
前記ベクターが、ＢＣＬ６およびＢｃｌ－ｘＬを２Ａ配列と連結する、請求項４０～４３のいずれかに記載の方法。
前記ベクターが、レンチウイルスベクターである、請求項４０～４４のいずれかに記載の方法。
導入する工程が、ＩＬ－２、ＩＬ－１５および／または１つ以上の他の成長因子の存在下において前記細胞に前記レンチウイルスベクターを形質導入することを含む、請求項４０～４５のいずれか１項に記載の方法。
ＩＬ－２が、１０ＩＵ／ｍＬ～１０００ＩＵ／ｍＬの濃度で存在する、請求項４６に記載の方法。
ＩＬ－２が、４００ＩＵ／ｍＬの濃度で存在する、請求項４６または４７に記載の方法。
前記Ｔ細胞をＣＤ３およびＣＤ２８で活性化する工程をさらに含む、請求項４０～４８のいずれかに記載の方法。
前記細胞をＩＬ－２および／またはＩＬ－１５の存在下において培養する工程をさらに含む、請求項４０～４９のいずれかに記載の方法。
前記ＩＬ－２またはＩＬ－１５が、１０～２００ｎｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項５０に記載の方法。
前記細胞が、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月間またはそれ以上にわたって増殖速度が本質的に低下することなく培養される、請求項４０～５１のいずれかに記載の方法。
Ｔ細胞サブセットについてソーティングする工程をさらに含む、請求項４０～５２のいずれかに記載の方法。
前記Ｔ細胞サブセットが、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞またはγδＴ細胞を含む、請求項５３に記載の方法。
１つ以上のサイトカインおよび／または１つ以上の安全スイッチを前記免疫細胞に導入する工程をさらに含む、請求項４０～５４のいずれか１項に記載の方法。
前記１つ以上のサイトカインおよび／または１つ以上の安全スイッチが、前記ＢＣＬ６および細胞生存促進遺伝子と同じベクター上に存在する、請求項５５に記載の方法。
前記１つ以上のサイトカインおよび／または１つ以上の安全スイッチが、前記ＢＣＬ６および細胞生存促進遺伝子と異なるベクター上に存在する、請求項５５に記載の方法。
免疫関連障害、感染症および／または癌を処置するための、請求項１～３９のいずれか１項に記載の細胞の集団を含む組成物であって、ここで、前記免疫細胞は、１つ以上の分子に対して標的化されている、組成物。
被験体における疾患または障害を処置する方法であって、有効量の請求項１～３９のいずれか１項に記載の免疫細胞を前記被験体に投与する工程を含む、方法。
前記疾患または障害が、感染症、癌または免疫関連障害である、請求項５９に記載の方法。
前記免疫関連障害が、自己免疫障害、移植片対宿主病、同種移植片拒絶または炎症状態である、請求項６０に記載の方法。
前記免疫細胞が、前記被験体に対して同種異系の免疫細胞である、請求項５９～６１のいずれか１項に記載の方法。
前記免疫細胞が、前記被験体に対して自己の免疫細胞である、請求項５９～６１のいずれか１項に記載の方法。
前記疾患が、癌である、請求項６０に記載の方法。
前記癌が、固形癌または血液悪性腫瘍である、請求項６４に記載の方法。
前記疾患または障害が、自己免疫疾患、移植片対宿主病、サイトカイン放出症候群に関連する感染症、免疫療法に関連する毒性、炎症性腸障害、免疫療法に関連する免疫関連有害事象、血球貪食性リンパ組織球症、周期性発熱症候群またはそれらの組み合わせである、請求項５９に記載の方法。
サイトカイン放出症候群に関連する前記感染症が、コロナウイルスによるものである、請求項６６に記載の方法。
前記コロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２またはＭＥＲＳである、請求項６７に記載の方法。
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、マクロファージおよび／または他の免疫細胞によって誘導される炎症を抑制するべき条件下でＩＬ－４を産生する、請求項５９～６８のいずれか１項に記載の方法。
少なくとも第２の治療薬を前記被験体に投与する工程をさらに含む、請求項５９～６９のいずれか１項に記載の方法。
前記少なくとも第２の治療薬が、化学療法、免疫療法、手術、放射線療法、薬物療法、標的化療法、ホルモン療法、生物療法またはそれらの組み合わせを含む、請求項７０に記載の方法。