JP2022534725A - 抗体薬物複合体の用量 - Google Patents

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Abstract

本開示は、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の医薬調製物、用法用量および投与の分野に関する。さらに具体的には、ＡＤＣは、リンカーを介してトポイソメラーゼＩ阻害剤などの抗癌剤に連結されている抗栄養膜細胞表面抗原２（ＴＲＯＰ２）抗体から構成される。【選択図】図１

Description

本開示は、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の医薬調製物、用法用量および投与の分野に関する。さらに具体的には、ＡＤＣは、リンカーを介してエキサテカンの誘導体などのトポイソメラーゼＩ阻害剤に連結されている抗栄養膜細胞表面抗原２（ＴＲＯＰ２）抗体から構成される。
関連出願
本出願は、米国特許法（３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．）１１９条（ｅ）に基づき、２０１９年５月２９日に出願された米国仮出願第６２／８５３，９７０号および２０１９年９月５日に出願された米国仮出願第６２／８９６，４７８号に対する優先権を主張するものであり、それらの内容の全体は参照により本明細書に組み込まれる。
以下の説明は、単に読者が本開示を理解するのを助けるために提供されるものであって、本開示の従来技術を記載し、構成することが承認されるものではない。
栄養膜細胞表面抗原２（ＴＲＯＰ２）は、Ｔａｃｓｔｄ２遺伝子によってコードされる３２３個のアミノ酸の膜貫通型糖タンパク質である。それは、多くの癌において差次的に発現する細胞内カルシウムシグナルトランスデューサー（Ｒｉｐａｎｉ Ｅら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、７６（５）、６７１～６７６（１９９８年）およびＥｌ Ｓｅｗｅｄｙ Ｔら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、７５（２）、３２４～３３０（１９９８年））である。それは、自己複製、増殖、浸潤および生存のために、細胞にシグナルを送る。ＴＲＯＰ２は、ヒトの栄養膜細胞および癌細胞に共通の免疫耐性にさらに関与している（Ｆａｕｌｋ ＷＰら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７５（４）、１９４７～１９５１（１９７８年）およびＬｉｐｉｎｓｋｉ Ｍら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７８（８）、５１４７～５１５０（１９８１年））。ヒトＴＲＯＰ２のＤＮＡ配列およびアミノ酸配列は、例えば受託番号ＮＭ＿００２３５３およびＮＰ＿００２３４４（ＮＣＢＩ）で、公開データベースにおいて入手可能である。
ＴＲＯＰ２は、正常上皮細胞における低レベルの発現と比較して、各種の上皮細胞癌腫において過剰発現することが分かった。ＴＲＯＰ２の発現は、とりわけ、結腸直腸癌（Ｏｈｍａｃｈｉ Ｔら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、１２（１０）、３０５７～３０６３（２００６年））、胃癌（Ｍｕｈｌｍａｎｎ Ｇら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．、６２（２）、１５２～１５８（２００９年））、膵癌（Ｆｏｎｇ Ｄら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、９９（８）、１２９０～１２９５（２００８年））、口腔癌（Ｆｏｎｇ Ｄら、Ｍｏｄ．Ｐａｔｈｏｌ．、２１（２）、１８６～１９１（２００８年））および神経膠腫（Ｎｉｎｇ Ｓら、Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．、３４（１０）、１７４５～１７５０（２０１３年））の予後不良と相関することも報告された。結腸直腸癌細胞をモデルとして用いて、ＴＲＯＰ２の発現が免疫不全マウスにおける腫瘍細胞の足場非依存性細胞増殖および腫瘍形成に関与していることがさらに報告された（Ｗａｎｇ Ｊら、Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．、７（２）、２８０～２８５（２００８年））。
ＴＲＯＰ２が各種の癌と関連することを考慮に入れて、複数の抗ＴＲＯＰ２抗体が調製され、検討されてきた。これらの抗体の中で、ヌードマウス異種移植モデルにおいて多少の抗腫瘍活性を示す非複合化抗体の報告（国際特許公開第２００８／１４４８９１号、国際特許公開第２０１１／１４５７４４号、国際特許公開第２０１１／１５５５７９号および国際特許公開第２０１３／０７７４５８号）および抗体薬物複合体（ＡＤＣ）として抗腫瘍活性を示す抗体の報告（国際特許公開第２００３／０７４５６６号、国際特許公開第２０１１／０６８８４５号、国際特許公開第２０１３／０６８９４６号および米国特許第７９９９０８３号）があった。しかし、抗ＴＲＯＰ２抗体およびＡＤＣの強度および適用範囲は、現在まで不充分であり、ＴＲＯＰ２を治療標的として利用する医療上の必要性が依然として満たされないままある。
本開示は、各種癌を処置するために、ＴＲＯＰ２特異的ＡＤＣおよびその用法用量を提供するものである。したがって、本開示は、ＴＲＯＰ２を標的とする、安全でかつ有効な癌処置の本技術分野における前記必要性を満たすものである。
ＴＲＯＰ２を標的とする抗腫瘍抗体は、現在まで成功しておらず、多くの抗腫瘍低分子化合物は、（優れた抗腫瘍効果を有する化合物を用いても）許容し得ない副作用および毒性のために安全性に問題がある。したがって、優れた治療効果を達成し、一方で、同時に安全性を増強する必要性が残っている。したがって、本開示の目的は、優れた治療有効性および安全性を有する抗腫瘍薬を提供することである。
抗腫瘍化合物エキサテカンは、腫瘍細胞を標的とすること、腫瘍細胞を認識すること、腫瘍細胞に結合すること、または腫瘍細胞内で内在化することなどが可能な抗ＴＲＯＰ２抗体への複合化によって、リンカー構造部分を介して抗体薬物複合体に転化される場合、前記抗体に基づいた細胞破壊活性を獲得することが可能であり、前記抗腫瘍化合物は、より確実に腫瘍細胞に送達されて特異的に抗腫瘍効果を示すことが可能である。したがって、抗腫瘍効果を確実に示すことが可能であり、前記化合物の単独投与と比較して前記抗腫瘍化合物の投与量を減少させることが可能であり、このことによって、正常細胞に対する負の副作用が減少し、安全性が増加する。
本明細書において、エキサテカン誘導体および抗ＴＲＯＰ２抗体を含む新規なＴＲＯＰ２標的ＡＤＣと、その使用方法とが記載される。
一態様において、本開示は、癌の処置または予防における使用のための抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体であって、前記抗体薬物複合体が、リンカーによって連結されている抗ＴＲＯＰ２抗体および抗腫瘍化合物を含む、抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体を提供するものである。
別の態様において、本開示は、リンカーによって連結されている抗ＴＲＯＰ２抗体および抗腫瘍化合物を含む抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体を癌の対象に投与することを含む、対象の癌を処置するか、または予防する方法を提供するものである。
別の態様において、本開示は、癌を処置するか、または予防するための薬物の製造における抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体の使用であって、前記抗体薬物複合体が、リンカーによって連結されている抗ＴＲＯＰ２抗体および抗腫瘍化合物を含む、使用を提供するものである。
いくつかの実施形態において、前記リンカーおよび前記抗腫瘍化合物は、以下の式：
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）
（式中、－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－は、その３位で前記抗体に連結され、かつ１位の窒素原子上においてこの構造を含むリンカー構造内のメチレン基に連結されている以下の式：
Figure 2022534725000002
によって表される構造を有し、（ＮＨ－ＤＸ）は、以下の式：
Figure 2022534725000003
によって表される基を表し、式中、１位のアミノ基の窒素原子は、連結位置である）によって表される。
いくつかの実施形態において、前記抗ＴＲＯＰ２抗体は、その重鎖可変領域内に、配列番号２３のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１と、配列番号２４のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２と、配列番号２５のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３とを、および、その軽鎖可変領域内に、配列番号２６のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１と、配列番号２７のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２と、配列番号２８のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３とを含む。
いくつかの実施形態において、前記抗腫瘍化合物の１抗体あたりの平均結合数は、２～８、または３～８の範囲内である。いくつかの実施形態において、前記抗腫瘍化合物の１抗体あたりの平均結合数は、３．４～４．５の範囲内である。いくつかの実施形態において、前記抗腫瘍化合物の１抗体あたりの平均結合数は、４である。
いくつかの実施形態において、前記抗体は、配列番号４５のアミノ酸１～１２１を含む重鎖可変領域と、配列番号４６のアミノ酸１～１０９を含む軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態において、前記抗体は、配列番号４５を含む重鎖と、配列番号４６を含む軽鎖とを含む。いくつかの実施形態において、前記抗ＴＲＯＰ２抗体は、前記重鎖のカルボキシル末端においてリジン残基を欠く。
いくつかの実施形態において、２ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内の投与量の前記抗体薬物複合体が、癌の対象に投与される。いくつかの実施形態において、約４ｍｇ／ｋｇの投与量の前記抗体薬物複合体が、癌の対象に投与される。いくつかの実施形態において、約６ｍｇ／ｋｇの投与量の前記抗体薬物複合体が、癌の対象に投与される。いくつかの実施形態において、約８ｍｇ／ｋｇの投与量の前記抗体薬物複合体が、癌の対象に投与される。
いくつかの実施形態において、前記抗体薬物複合体は、静脈内投与によって投与される。
いくつかの実施形態において、前記抗体薬物複合体は、３週間に１回または４週間に１回投与される。
いくつかの実施形態において、前記癌は、肺癌、腎臓癌、尿路上皮癌、結腸直腸癌、前立腺癌、多形性神経膠芽細胞腫、卵巣癌、膵癌、乳癌、黒色腫、肝癌、膀胱癌、胃癌、子宮頸癌、頭頚部癌および食道癌からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、前記肺癌は非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。
いくつかの実施形態において、前記癌は、耐性または不応性である。いくつかの実施形態において、前記耐性または前記不応性は、抗癌薬による処置のために前記癌が獲得した耐性または不応性である。いくつかの実施形態において、前記抗癌薬は、ＥＧＦＲ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、白金系化学療法剤またはチェックポイント阻害剤である。いくつかの実施形態において、前記抗癌薬は、ゲフィチニブ、エルロチニブ、オシメルチニブ、アファチニブ、アレクチニブ、クリゾチニブ、セリチニブ、シスプラチン、カルボプラチン、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、イピリムマブ、デュルバルマブ、チスレリズマブ、シンチリマブまたはセミプリマブである。
いくつかの実施形態において、前記癌はＴＲＯＰ２発現癌（ＴＲＯＰ２－ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｃａｎｅｒ）である。いくつかの実施形態において、前記ＴＲＯＰ２発現癌はＴＲＯＰ２過剰発現癌である。いくつかの実施形態において、前記ＴＲＯＰ２過剰発現癌は、免疫組織化学法においてＴＲＯＰ２の発現について高スコアが与えられた癌である。いくつかの実施形態において、前記ＴＲＯＰ２過剰発現癌は、インサイチュハイブリダイゼーション法においてＴＲＯＰ２の発現について高スコアが与えられた癌である。
いくつかの実施形態において、前記癌は手術不能癌または再発癌である。
活性成分としての上記の態様もしくは実施形態のいずれか１つに記載の抗体薬物複合体またはその塩と、医薬的に許容し得る製剤成分とを含む医薬組成物も、本明細書において提供される。
上記の一般的な記載および以下の「発明を実施するための形態」は、例示的でかつ説明的であり、請求される通りの本開示のさらなる説明を提供することを意図するものである。他の目的、利点および新規の特長は、本開示の以下の「図面の簡単な説明」および「発明を実施するための形態」から当業者にとって容易に明らかであろう。
トポイソメラーゼＩ阻害剤（ＤＸｄ）を有するＴＲＯＰ２標的抗体薬物複合体（本明細書において「抗体薬物複合体（１）」と称される）の構造を示す。ＡＤＣは、抗体上のシステイン残基に結合するテトラペプチドリンカーを有する。描かれたＡＤＣの薬物－抗体比は、４：１（すなわち、ＤＡＲ４）である。 本開示のＡＤＣに組み込まれ得る抗ＴＲＯＰ２抗体の重鎖配列および軽鎖配列、ならびに前記抗体に連結されている細胞毒性剤の構造式を示す。 マウス異種移植ＣＦＰＡＣ－１腫瘍モデルにおける抗体薬物複合体（１）および（２）の抗腫瘍効果を示す。 ヒトにおけるＤＳ－１０６２ａの反復投与の間の血漿濃度の推定を示す。 非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）罹患体を処置するための第１相試験デザインを示す。 初期の第１相試験（実施例５）についての罹患体の人口統計学的特性およびベースライン時の特性を示す。 因果関係にかかわらず、罹患体の１０％以上で生じた、処置により発現した有害事象（ＴＥＡＥ）を示した初期の第１相試験（実施例５）における罹患体の数を示す。 初期の第１相試験（実施例５）における対象（Ｎ＝３５）の腫瘍応答を示す。 初期の第１相試験（実施例５）におけるＤＳ－１０６２ａ処置後の標的（Ａ、ＢおよびＣ）病変および非標的（Ｄ）病変における腫瘍の応答を示す。パネルＡは、４．０ｍｇ／ｋｇのＤＳ－１０６２ａで処置された罹患体における標的病変の大きさの減少を示す。パネルＢは、４．０ｍｇ／ｋｇのＤＳ－１０６２ａで処置された別の罹患体における標的病変の大きさの減少を示す。パネルＣは、２．０ｍｇ／ｋｇのＤＳ－１０６２ａで処置された罹患体における標的病変の大きさの減少を示す。パネルＤは、パネルＣと同じ罹患体における非標的病変の数の減少を示す。 同上。 初期の第１相試験（実施例５）における対象の腫瘍の大きさの変化を示す。上のパネルは、初期の第１相試験（実施例５）における対象の標的病変のベースラインからの最長寸法測度の合計の最良のパーセンテージ変化を示す。下のパネルは、投与群によって分けられた腫瘍の大きさの変化のスパイダープロットを示す。 サイクル１（ＰＫ解析対象集団）におけるＤＳ－１０６２ａの平均血漿中濃度を示す。 初期の第１相試験（実施例５）によって示される有効性の概要を示す。 因果関係にかかわらず処置により発現した有害事象（ＴＥＡＥ）を示した新しいカットオフ日時点における第１相試験（実施例６）における罹患体の数を示す。 新しいカットオフ日時点における第１相試験（実施例６）の対象の標的病変におけるベースラインからの最長寸法測度の合計の最良のパーセンテージ変化を示す。 新しいカットオフ日時点における第１相試験（実施例６）の過程にわたる各投与群についての腫瘍の大きさのパーセンテージ変化を示すことによって応答の頻度に対する明確な投与量－効果を示す。 複数の投与量レベルにわたって認められる持続性抗腫瘍応答を示す。多くの罹患体は、部分奏効（ＰＲ）または安定疾患（ＳＤ）を示した。２人の罹患体だけが、試験（実施例６）の終了時に進行性疾患（ＰＤ）に罹患していた。 新しいカットオフ日現在の第１相試験（実施例６）における罹患体の前処置生検に基づいたＴＲＯＰ２免疫組織化学Ｈスコア（ＩＨＣ）を示す。ＩＨＣスコアは、部分奏効（ＰＲ）などの陽性結果を達成したそれらの罹患体において、より高い傾向があった。これらの図の目的のために、以下の略語が用いられた。未分化リンパ腫キナーゼ阻害剤（ＡＬＫｉ）、ベースライン（ＢＬ）、サイクル３Ｄａｙ１（Ｃ３Ｄ１）、循環遊離ＤＮＡ（ｃｆＤＮＡ）、上皮成長因子受容体阻害剤（ＥＧＦＲｉ）、処置の終了（ＥＯＴ）、ヒト上皮成長因子受容体２阻害剤（ＨＥＲ２ｉ）、免疫組織化学（ＩＨＣ）、組織スコア（Ｈスコア）、免疫腫瘍学（Ｉ／Ｏ）、評価不能（ＮＥ）、部分奏効（ＰＲ）、進行性疾患（ＰＤ）、安定疾患（ＳＤ）、罹患体（Ｐｔ）、変異体対立遺伝子頻度（ＶＡＦ）。 抗体薬物複合体（１）が、ＴＲＯＰ２陰性腫瘍（Ｃａｌｕ－６）とは対照的にＴＲＯＰ２陽性腫瘍（ＮＣＩ－Ｈ２１７０およびＨＣＣ８２７）における抗腫瘍活性がより強かった肺癌異種移植マウスモデルにおいて抗腫瘍活性を有したことを示す前臨床試験の結果を示す。 処置の過程にわたる細胞遊離ＤＮＡ（ｃｆＤＮＡ）に基づいた変異体対立遺伝子頻度の変化を示す。結果は、ｃｆＤＮＡが、処置の結果として概して減少したことを示す。 新しいカットオフ日時点の第１相試験（実施例６）の各種投与群における対象の腫瘍容積の変化によって評価される通りの全奏効率（ＯＲＲ）を示す。 新しいカットオフ日時点の第１相試験（実施例６）によって示される有効性の概要を示す。 予備的有効性試験（実施例７）の投与群による腫瘍の大きさの変化のスパイダープロットを示す。 予備的有効性試験（実施例７）の薬物動態測定によって決定される通りの抗体薬物複合体（１）、全抗体および遊離薬物（ペイロード）の血漿中濃度を示す。
以下、新規のＴＲＯＰ２－標的ＡＤＣおよびその使用方法の各種実施形態を、図面を参照しながら説明する。以下に記載される実施形態は、本発明の実施形態の典型的な例として示されるものであって、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
本発明の抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体は、抗ＴＲＯＰ２抗体がリンカー構造部分を介して抗腫瘍化合物に複合化される抗腫瘍薬であり、以下で詳細に説明される。
定義
方法は、記載されている特定の実施形態に限定されるものではなく、それ自体異なってもよいことを理解すべきである。本明細書において用いられる用語は、特定の実施形態を記載する目的のためだけにあるのであって、限定的であることを意図するものではないことも理解すべきである。本技術の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるであろう。
特に定義されない限り、本明細書において用いられる全ての専門用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似のまたは同等のいずれの方法および材料も本発明の実施または試験に用いることができるが、代表的で例示的な方法および材料がここで説明される。
値の範囲が提供される場合、その範囲の上下限の間の、文脈が明確に規定しない限り下限の単位の１０分の１までの各々の間の値、およびその示された範囲内のいずれか他の示された値または間の値は、本発明の中に包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限および下限は、より小さい範囲内に独立して含まれてもよく、示された範囲内の任意の具体的に除外された限界値を条件として、本発明の中にも包含される。示された範囲が限界の一方または両方を含む場合、それらの含まれた限界の一方または両方を除く範囲は、本発明にも含まれる。
明細書および請求項において用いられる場合、単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「前記（ｔｈｅ）」は、文脈によって明確に規定されない限り、単数および複数の参照物を含む。
本明細書において用いられる場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、組成物および方法が、列挙された要素を含むが、他のものを除外するわけではないことを意味することが意図される。「実質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、組成物および方法を定義するために用いられる場合、前記組成物または前記方法にとってなんらかの実質的な重要性のある他の要素を除外することを意味する。「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」は、請求された組成物および実質的な方法ステップについての他の成分の微量要素を超えるものを除外することを意味する。これらの移行用語の各々によって定義される実施形態は、本開示の範囲内である。したがって、方法および組成物は、さらなるステップおよび成分を含むことができる（含む）か、または、重要でないステップおよび組成物を代替的に含む（実質的になる）か、または、代替的に、記載された方法ステップもしくは組成物だけを意図する（からなる）ことが意図される。
本明細書において用いられる場合、「約（ａｂｏｕｔ）」は、プラスマイナス１０％および指定された数を意味する。例えば、「約１０」は、「１０」および「９～１１」の両方であると理解されるべきである。
本明細書において用いられる場合、「所望により存在する（ｏｐｔｉｏｎａｌ）」または「所望により（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）」は、続いて記載される事象または状況が生じても生じなくてもよく、前記記載が、前記事象または前記状況が生じる例と、前記事象または前記状況が生じない例とを含むことを意味する。
「個体（ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ）」、「対象（ｓｕｂｊｅｃｔ）」および「罹患体（ｐａｔｉｅｎｔ）」という用語は、交換可能に本明細書において用いられ、本開示の方法または使用に従って処置される任意の個体の哺乳動物、例えば、ウシ、イヌ、ネコ、ウマ、サル、ブタ、ラクダ、コウモリまたはヒトを指す。好ましい実施形態において、対象はヒトである。
本明細書において用いられる場合、「有効量（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）」、「治療上有効量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｍｏｕｎｔ）」および「治療レベル（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｌｅｖｅｌ）」という句は、そのような処置を必要とする対象においてＡＤＣが投与される、すなわち、癌（例えば、肺癌、ＴＲＯＰ２発現癌または耐性癌もしくは不応性癌）を処置または予防するための特定の薬理学的効果を提供する対象における用量または濃度を意味する。ＡＤＣの治療上有効量または治療レベルは、そのような用量が当業者によって治療上有効量であると考えられる場合であっても、本明細書において記載される癌を処置するのに必ずしも有効ではないことが強調される。便宜上のためだけに、例示的な用量、薬物送達量、治療上有効量および治療レベルが以下で提供される。当業者は、特定の対象および／または状態を処置する必要に応じて、標準的実施方法に従ってそのような量を調整することができる。治療上有効量は、投与経路および剤形、対象の年齢および体重、ならびに／または癌の型および重症度を含む対象の状態に基づいて変化してもよい。
癌に関して本明細書において用いられる通りの「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、癌を減少させること、抑制すること、もしくはなくすこと、癌細胞増殖を減少させること、抑制すること、もしくはなくすこと、癌の転移を減少させること、抑制すること、もしくはなくすこと、または腫瘍もしくは転移を消失させるか、もしくは死滅させることを指す。処置および処置することは、癌細胞増殖が阻害されないか、かつ／または癌が死滅しない場合であっても、所望により、対象のＱＯＬ（ｑｕａｌｉｔｙ ｏｒ ｌｉｆｅ）または全生存率を向上させることを意味してもよい。
癌に関して本明細書において用いられる通りの「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」または「予防すること（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」という用語は、転移（すなわち、処置の開始時に癌が存在しない二次部位における癌の増殖）の発生を阻止するか、または予防すること、および、対象が寛解を達成する場合、または癌／腫瘍が完全に破壊されるか、もしくは死滅させられる場合に、癌の再発を阻止するか、または予防することを指す。
本明細書において用いられる場合、「医薬組成物」という用語は、活性剤と、前記組成物をとりわけインビボまたはエクスビボにおける診断的使用または治療的使用に適切なものにする不活性または活性の担体との複合物を指す。
本明細書において用いられる場合、「医薬的に許容し得る担体」という用語は、リン酸緩衝生理食塩水、水、乳剤（例えば、水中油型乳剤または油中水型乳剤など）および各種型の湿潤剤などの標準的医薬担体の内のいずれかを指す。前記組成物は、安定剤および保存剤を含むこともできる。担体、安定剤およびアジュバントの例については、例えば、Ｍａｒｔｉｎ、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１５版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌ．Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ［１９７５年］を参照すること。
本願明細書において用いられる通りの「非経口投与」および「非経口的に投与される」という句は、通常は注射による、腸内投与および局所投与以外の投与様式を意味し、限定されるものではないが、静脈内注射および静脈内注入で、筋肉内注射および筋肉内注入、動脈内注射および動脈内注入、鞘内注射および鞘内注入、嚢内注射および嚢内注入、眼窩内注射および眼窩内注入、心臓内注射および心臓内注入、皮内注射および皮内注入、腹腔内注射および腹腔内注入、経気管注射および経気管注入、皮下注射および皮下注入、表皮下注射および表皮下注入、関節内注射および関節内注入、被膜下注射および被膜下注入、クモ膜下注射およびクモ膜下注入、髄腔内注射および髄腔内注入、ならびに胸骨内注射および胸骨内注入を含む。
本明細書において用いられる通りの「全身投与」、「全身的に投与される」、「末梢投与」および「末梢的に投与される」という句は、化合物、薬物または他の材料が罹患体の系に入ることによって、代謝や他の同種のプロセスを受けるような、直接の中枢神経系内への投与を除く、前記化合物、前記薬物または前記他の材料の投与、例えば、皮下投与を意味する。
本明細書において用いられる通りの「遺伝子」という用語は、ＤＮＡだけでなく、そのｍＲＮＡ、そのｃＤＮＡおよびそのｃＲＮＡも含む。
本明細書において用いられる通りの「ポリヌクレオチド」という用語は、核酸と同じ意味で用いられ、ＤＮＡ、ＲＮＡ、プローブ、オリゴヌクレオチドおよびプライマーも含む。
本明細書において用いられる通りの「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、区別なく用いられる。
本明細書において用いられる通りの「細胞」という用語は、動物の個体内の細胞および培養細胞も含む。
本明細書において用いられる通りの「ＴＲＯＰ２」という用語は、ＴＲＯＰ２タンパク質と同じ意味で用いられる。
本明細書において用いられる通りの「ＣＤＲ」という用語は、相補性決定領域（ＣＤＲ）を指す。抗体分子の重鎖および軽鎖の各々は、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を有することが知られている。ＣＤＲは、超可変ドメインとも呼ばれており、抗体の重鎖および軽鎖の各々の可変領域内に存在する。それは一次構造内における著しく高い可変性を有する部位であり、重ポリペプチド鎖および軽ポリペプチド鎖の各々の一次構造内に３つの別々のＣＤＲがある。本明細書において、抗体のＣＤＲに関して、重鎖のＣＤＲは、重鎖のアミノ酸配列のアミノ末端側からＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３で表され、軽鎖のＣＤＲは、軽鎖のアミノ酸配列のアミノ末端側からＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３で表される。これらの部位は、三次構造内においてで互いに近位であり、抗体が結合する抗原についての特異性を決定する。
本明細書において用いられる通りの「ストリンジェントな条件下でハイブリダイゼーションが行われる」という句は、商業的に入手可能なハイブリダイゼーション溶液ＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｉｎｃ．によって製造される）中において６８℃でハイブリダイゼーションを行うか、またはフィルター上に固定されるＤＮＡを有する前記フィルターを用いて０．７～１．０ＭのＮａＣｌの存在下で６８℃でハイブリダイゼーションを行った後、０．１～２×ＳＳＣ溶液（１×ＳＳＣ溶液は、１５０ｍＭのＮａＣｌおよび１５ｍＭのクエン酸ナトリウムから構成される）を用いて６８℃で、またはそれと同等の状態下で洗浄を行うことによって同定を達成することができる条件下でハイブリダイゼーションが行われるプロセスを指す。
本明細書において用いられる通りの「いくつか（ｓｅｖｅｒａｌ）」は、１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、または１～２を指す。
本明細書におけるアミノ酸置換として、保存的アミノ酸置換が好ましい。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸側鎖に関連するアミノ酸の基の中で生じる置換を指す。好ましいアミノ酸基は、以下の通りである。酸性基（アスパラギン酸およびグルタミン酸）、塩基性基（リジン、アルギニンおよびヒスチジン）、非極性基（アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニンおよびトリプトファン）および非荷電極性ファミリー（グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニンおよびチロシン）。より好ましいアミノ酸基は、以下の通りである。脂肪族ヒドロキシル基（セリンおよびスレオニン）、アミド含有基（アスパラギンおよびグルタミン）、脂肪族基（アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン）および芳香族基（フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシン）。そのようなアミノ酸置換は、好ましくは、元のアミノ酸配列を有する物質の特性を損なわない範囲内で行われる。
本明細書にわたって、組成物が具体的な成分を有するか、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）か、もしくは含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）と記載されるか、または、プロセスおよび方法が具体的なステップを有するか、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）か、もしくは含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）と記載される場合、さらに、列挙された成分から実質的になるか、またはなる本開示の組成物があり、列挙された処理ステップから実質的になるか、またはなる本開示にかかるプロセスおよび方法があることが考えられる。
一般的に、パーセンテージを特定する組成物は、特に特定しない限り、重量による。さらに、変数に定義がない場合、前記変数の前の定義が優先する。
ＴＲＯＰ２
ＴＲＯＰ２は、ヒト栄養膜細胞において発現したＴＡＣＳＴＤファミリーのメンバーであり、ヒト栄養膜細胞および癌細胞に共通の免疫耐性に関与する１回膜貫通型１型細胞膜タンパク質である。
本開示の目的のために、ＴＲＯＰ２タンパク質をヒトまたは非ヒト哺乳動物（例えば、ラットまたはマウス）のＴＲＯＰ２発現細胞から直接精製し、用いることが可能であるか、または上記細胞の細胞膜画分を調製し、用いることが可能である。さらに、ＴＲＯＰ２は、そのインビトロ合成、または遺伝子操作による宿主細胞におけるその産生によって得られ得る。具体的には、遺伝子操作において、ＴＲＯＰ２ ｃＤＮＡを発現することが可能なベクターにＴＲＯＰ２ ｃＤＮＡが統合された後、ＴＲＯＰ２タンパク質は、転写および翻訳に必要な酵素、基質およびエネルギー物質を含む溶液中においてそれを合成することによって、または別の原核生物形質転換宿主細胞内もしくは真核生物形質転換宿主細胞内においてＴＲＯＰ２を発現させることによって得られ得る。代替的に、遺伝子操作された上記ＴＲＯＰ２発現細胞、またはＴＲＯＰ２を発現する細胞系をＴＲＯＰ２タンパク質として用いてもよい。
ＴＲＯＰ２のＤＮＡ配列およびアミノ酸配列は、公開データベースにおいて入手可能であり、例えば受託番号ＮＭ＿００２３５３およびＮＰ＿００２３４４（ＮＣＢＩ）で参照され得る。
さらに、ＴＲＯＰ２の上記アミノ酸配列の内のいずれかにおいて１つあるいは複数のアミノ酸が置換され、欠失され、かつ／または付加されるアミノ酸配列からなり、前記タンパク質と同等の生物学的活性も有するタンパク質もＴＲＯＰ２に含まれる。
ヒトＴＲＯＰ２タンパク質は、Ｎ末端の２６個のアミノ酸残基からなるシグナル配列と、２４８個のアミノ酸残基からなる細胞外ドメインと、２３個のアミノ酸残基からなる膜貫通ドメインと、２６個のアミノ酸残基からなる細胞内ドメインとを含む。
抗ＴＲＯＰ２抗体
本開示の抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体において用いられる抗ＴＲＯＰ２抗体は、いずれの種に由来してもよく、前記種の好ましい例としては、ヒト、ラット、マウスおよびウサギを挙げることができる。それは、ヒト種以外に由来する場合、好ましくはよく知られた手法を用いてキメラ化されるか、またはヒト化される。本発明の抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体であってもよく、好ましくはモノクローナル抗体である。
抗ＴＲＯＰ２抗体は、腫瘍細胞を標的とすること、腫瘍細胞を認識すること、腫瘍細胞に結合すること、または腫瘍細胞内に内在化することなどが可能であり、抗腫瘍活性を有する化合物にリンカーを介して複合化することによって抗体薬物複合体に転化され得る。
腫瘍細胞に対する抗体の結合活性は、フローサイトメトリを用いて確認され得る。腫瘍細胞内への抗体の内在化を確認する方法の例としては、（１）治療抗体への二次抗体（蛍光標識）結合を用いて蛍光顕微鏡下で細胞内に組み込まれた抗体を視覚化するアッセイ（Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ ａｎｄ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ（２００８年）１５、７５１～７６１）、（２）治療抗体への二次抗体（蛍光標識）結合を用いて細胞内に組み込まれた蛍光強度を測定するアッセイ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｅｌｌ、第１５巻、５２６８～５２８２、２００４年１２月）または（３）細胞内への組み込みの際に毒素が放出されて細胞増殖を阻害する、治療抗体への免疫毒素結合を用いたＭａｂ－ＺＡＰアッセイ（Ｂｉｏ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ２８：１６２～１６５、２０００年１月）を挙げることができる。ジフテリア毒素の触媒領域およびタンパク質Ｇの組換え複合タンパク質を免疫毒素として用いてもよい。
抗体薬物複合体において複合化される薬物が抗腫瘍効果を発揮するので、抗体自体が抗腫瘍効果を有することは好ましいが、必須ではない。腫瘍細胞に対する抗腫瘍化合物の細胞破壊活性を特異的にかつ選択的に発揮する目的のために、抗体が腫瘍細胞内に移動するために内在化する特性を有することは、重要であり、かつ、好ましいことでもある。
動物を抗原性ポリペプチドで免疫化し、インビボで産生された抗体を回収して精製することを含む、本技術分野において通常は実施される方法を用いて、抗ＴＲＯＰ２抗体を得ることができる。抗原の由来はヒトに限定されるものではなく、動物は、マウス、ラットおよび同種のものなどの非ヒト動物に由来する抗原で免疫化されてもよい。この場合、ヒト疾患に適用可能な抗体についてスクリーニングを行うために、得られた異種抗原に結合する抗体のヒト抗原との交差反応性を試験することができる。
代替的に、本技術分野で知られている方法（例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ（１９７５年）２５６、４９５～４９７ページ、ならびにＫｅｎｎｅｔ，Ｒ．ら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、３６５～３６７ページ、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．（１９８０年））に従って、抗原に対する抗体を産生する抗体産生細胞を骨髄腫細胞と融合させて、次にモノクローナル抗体を得ることができるハイブリドーマを確立する。
抗原タンパク質をコードする遺伝子を産生するために宿主細胞を遺伝子操作することによって抗原を得ることができる。具体的には、前記抗原遺伝子の発現を可能にするベクターを調製し、前記遺伝子が発現するように宿主細胞にトランスファーする。このようにして発現させた抗原を精製することができる。遺伝子操作された上記抗原発現細胞または前記抗原を発現する細胞系を有する動物を免疫化する方法を用いて前記抗体を得ることもできる。
本技術分野で知られている手法によって抗ＴＲＯＰ２抗体を得ることができる。
本発明において用いることができる抗ＴＲＯＰ２抗体は、特に限定されるものではないが、例えば、好ましくは、本出願の配列表に示されるアミノ酸配列によって指定されるものを用いることができる。本発明において用いられる抗ＴＲＯＰ２抗体は、好ましくは、以下に記載される通りの特性を有する。
（１）以下の特性：
（ａ）ＴＲＯＰ２に特異的に結合すること、および
（ｂ）ＴＲＯＰ２への結合によってＴＲＯＰ２発現細胞内に内在化する活性を有すること
を有する抗体。
（２）ＴＲＯＰ２がヒトＴＲＯＰ２である、（１）に記載の抗体。
（３）前記抗体が、配列番号４５の重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）Ｈ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３、ならびに／または配列番号４６の軽鎖のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３を有する、（１）または（２）に記載の抗体。代替的にまたは付加的に、前記抗体が、重鎖相補性決定領域としての、配列番号２３で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ１、配列番号２４で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ２、配列番号２５で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＨ３、ならびに、軽鎖相補性決定領域としての、配列番号２６で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ１、配列番号２７で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ２、および配列番号２８で表されるアミノ酸配列を含むＣＤＲＬ３を有する、（１）または（２）に記載の抗体。
（４）（１）～（３）のいずれかに記載の抗体であって、その定常領域がヒト由来定常領域である、抗体。
（５）前記抗体がヒト化抗体である、（１）～（４）のいずれかに記載の抗体。
（６）前記抗体が、（ａ）配列番号４５におけるアミノ酸位置１～１２１に記載されるアミノ酸配列、（ｂ）（ａ）と少なくとも９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列、および（ｃ）少なくとも１つのアミノ酸の欠失、置換または付加によって前記配列（ａ）または（ｂ）のいずれかから誘導されるアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、（ｄ）配列番号４６におけるアミノ酸位置１～１０９に記載されるアミノ酸配列、（ｅ）（ｄ）と少なくとも９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列、および（ｆ）少なくとも１つのアミノ酸の欠失、置換または付加によって前記配列（ｄ）または（ｅ）のいずれかから誘導されるアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを有する、（５）に記載の抗体。代替的にまたは付加的に、前記抗体が、（ａ）配列番号１２におけるアミノ酸位置２０～１４０に記載されるアミノ酸配列、（ｂ）配列番号１４におけるアミノ酸位置２０～１４０に記載されるアミノ酸配列、（ｃ）配列番号１６におけるアミノ酸位置２０～１４０に記載されるアミノ酸配列、（ｄ）前記配列（ａ）～（ｃ）のいずれかと少なくとも９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列、および（ｅ）少なくとも１つのアミノ酸の欠失、置換または付加によって前記配列（ａ）～（ｃ）のいずれかから誘導されるアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、（ｆ）配列番号１８におけるアミノ酸位置２１～１２９に記載されるアミノ酸配列、（ｇ）配列番号２０におけるアミノ酸位置２１～１２９に記載されるアミノ酸配列、（ｈ）配列番号２２におけるアミノ酸位置２１～１２９に記載されるアミノ酸配列、（ｉ）前記配列（ｆ）～（ｈ）のいずれかと少なくとも９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列、および（ｊ）少なくとも１つのアミノ酸の欠失、置換または付加によって前記配列（ｆ）～（ｈ）のいずれかから誘導されるアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを有する、（５）に記載の抗体。
（７）前記抗体が、配列番号４５におけるアミノ酸位置１～１２１に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４６におけるアミノ酸位置１～１０９に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを有する、（６）に記載の抗体。代替的にまたは付加的に、前記抗体が、配列番号１２におけるアミノ酸位置２０～１４０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８におけるアミノ酸位置２１～１２９に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、配列番号１２におけるアミノ酸位置２０～１４０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０におけるアミノ酸位置２１～１２９に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、配列番号１２におけるアミノ酸位置２０～１４０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２２におけるアミノ酸位置２１～１２９に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、配列番号１４におけるアミノ酸位置２０～１４０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８におけるアミノ酸位置２１～１２９に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、配列番号１４におけるアミノ酸位置２０～１４０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０におけるアミノ酸位置２１～１２９に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、配列番号１４におけるアミノ酸位置２０～１４０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２２におけるアミノ酸位置２１～１２９に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、配列番号１６におけるアミノ酸位置２０～１４０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８におけるアミノ酸位置２１～１２９に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、配列番号１６におけるアミノ酸位置２０～１４０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０におけるアミノ酸位置２１～１２９に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、ならびに配列番号１６におけるアミノ酸位置２０～１４０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２２におけるアミノ酸位置２１～１２９に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域からなる群から選択される重鎖可変領域および軽鎖可変領域を有する、（６）に記載の抗体。
（８）前記抗体が、配列番号１２におけるアミノ酸位置２０～１４０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８におけるアミノ酸位置２１～１２９に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、配列番号１４におけるアミノ酸位置２０～１４０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８におけるアミノ酸位置２１～１２９に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、配列番号１４におけるアミノ酸位置２０～１４０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２０におけるアミノ酸位置２１～１２９に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、ならびに配列番号１６におけるアミノ酸位置２０～１４０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号２２におけるアミノ酸位置２１～１２９に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域からなる群から選択される重鎖可変領域および軽鎖可変領域を有する、（７）に記載の抗体。
（９）前記抗体が、配列番号４５におけるアミノ酸位置１～４５１に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号４６におけるアミノ酸位置１～２１４に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、（６）または（７）に記載の抗体。代替的にまたは付加的に、前記抗体が、配列番号１２におけるアミノ酸位置２０～４７０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１８におけるアミノ酸位置２１～２３４に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１２におけるアミノ酸位置２０～４７０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２０におけるアミノ酸位置２１～２３４に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１２におけるアミノ酸位置２０～４７０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２２におけるアミノ酸位置２１～２３４に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１４におけるアミノ酸位置２０～４７０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１８におけるアミノ酸位置２１～２３４に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１４におけるアミノ酸位置２０～４７０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２０におけるアミノ酸位置２１～２３４に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１４におけるアミノ酸位置２０～４７０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２２におけるアミノ酸位置２１～２３４に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１６におけるアミノ酸位置２０～４７０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１８におけるアミノ酸位置２１～２３４に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１６におけるアミノ酸位置２０～４７０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２０におけるアミノ酸位置２１～２３４に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖、ならびに配列番号１６におけるアミノ酸位置２０～４７０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２２におけるアミノ酸位置２１～２３４に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖からなる群から選択される重鎖および軽鎖を含む、（６）または（７）に記載の抗体。
（１０）前記抗体が、配列番号４５で表されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号４６で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、（６）または（７）に記載の抗体。代替的にまたは付加的に、前記抗体が、配列番号１２で表されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１２で表されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２０で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１２で表されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２２で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１４で表されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１４で表されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２０で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１４で表されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２２で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１６で表されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１６で表されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２０で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖、ならびに配列番号１６で表されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２２で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖からなる群から選択される重鎖および軽鎖を含む、（６）または（７）に記載の抗体。
（１１）前記抗体が、配列番号１２におけるアミノ酸位置２０～４７０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１８におけるアミノ酸位置２１～２３４に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１４におけるアミノ酸位置２０～４７０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１８におけるアミノ酸位置２１～２３４に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖、配列番号１４におけるアミノ酸位置２０～４７０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２０におけるアミノ酸位置２１～２３４に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖、ならびに配列番号１６におけるアミノ酸位置２０～４７０に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２２におけるアミノ酸位置２１～２３４に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖からなる群から選択される重鎖および軽鎖を含む、（８）に記載の抗体。
（１２）前記抗体が、前記重鎖のカルボキシル末端においてリジン残基を欠く、（１）～（１１）のいずれかに記載の抗体。
（１３）（１）～（１２）のいずれかに記載の抗体を産生する方法によって得られる抗体であって、前記方法が、前記抗体をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞を培養するステップと、上記ステップで得られた培養物から目的の前記抗体を回収するステップとを含む、抗体。
本開示の目的のために、配列番号４５および４６の全配列を以下の表１（および図２）に示す。
Figure 2022534725000004
抗ＴＲＯＰ２抗体の産生
本発明のＴＲＯＰ２に対する抗体は、通常、ＴＲＯＰ２またはＴＲＯＰ２のアミノ酸配列から選択される任意のポリペプチドで動物を免疫化することと、インビボで産生された抗体を回収し、精製することとを含む、本技術分野において実施される方法を用いて得られ得る。抗原として用いられるＴＲＯＰ２の生物学的種はヒトであることに限定されず、マウスまたはラットなどのヒト以外の動物に由来するＴＲＯＰ２で動物を免疫化することができる。この場合、得られた異種ＴＲＯＰ２およびヒトＴＲＯＰ２への抗体結合間の交差反応性を検討することによって、ヒト疾患に適用可能な抗体を選択することができる。
さらに、知られた方法（例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ、（１９７５年）２５６、４９５～４９７ページ；Ｋｅｎｎｅｔ，Ｒ．編、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、３６５～３６７ページ、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．（１９８０年））に従って骨髄腫細胞でＴＲＯＰ２に対する抗体を産生する１つまたは複数の抗体産生細胞を融合することによって確立されるハイブリドーマからモノクローナル抗体を得ることができる。
遺伝子操作を用いて宿主細胞においてＴＲＯＰ２遺伝子を発現させることによって、抗原として用いられるＴＲＯＰ２を得ることができる。具体的には、ＴＲＯＰ２遺伝子を発現させることが可能なベクターを作製することが可能であり、得られた前記ベクターを宿主細胞内にトランスフェクトして前記遺伝子を発現させることが可能であり、次いで、発現させたＴＲＯＰ２を精製することが可能である。
代替的に、遺伝子操作された上記ＴＲＯＰ２発現細胞またはＴＲＯＰ２を発現する細胞系をＴＲＯＰ２タンパク質として用いてもよい。以下、ＴＲＯＰ２に対する抗体を得る方法を具体的に説明する。
（１）抗原の調製
抗ＴＲＯＰ２抗体を産生するために用いられる抗原の例としては、ＴＲＯＰ２、またはＴＲＯＰ２の少なくとも６つの連続するアミノ酸を含む部分アミノ酸配列からなるポリペプチド、または所定のアミノ酸配列もしくは担体をそれに付加することによって得られる誘導体が挙げられる。
ＴＲＯＰ２を、ヒト腫瘍組織またはヒト腫瘍細胞から直接精製し、用いることができる。さらに、ＴＲＯＰ２は、インビトロでそれを合成することによって、または遺伝子操作によって宿主細胞内でそれを産生することによって得られ得る。
具体的には、遺伝子操作に関して、ＴＲＯＰ２ ｃＤＮＡを発現することが可能なベクターにＴＲＯＰ２ ｃＤＮＡが統合された後、前記抗原は、転写および翻訳に必要な酵素、基質およびエネルギー物質を含む溶液中においてそれを合成することによって、または別の原核生物形質転換宿主細胞内もしくは真核生物形質転換宿主細胞内においてＴＲＯＰ２を発現させることによって得られ得る。
さらに、適切な宿主ベクター系内の抗体の定常領域に膜タンパク質であるＴＲＯＰ２の細胞外ドメインを連結することによって得られた融合タンパク質を発現させることによって、前記抗原を分泌タンパク質として得ることもできる。
例えば、鋳型としてのＴＲＯＰ２ ｃＤＮＡを発現するｃＤＮＡライブラリと、ＴＲＯＰ２ ｃＤＮＡを特異的に増幅するプライマーとを用いてポリメラーゼ連鎖反応（以下「ＰＣＲ」と記載する；Ｓａｉｋｉ，Ｒ．Ｋ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、（１９８８年）２３９、４８７～４８９ページ参照）が行われるいわゆるＰＣＲ法によって、ＴＲＯＰ２ ｃＤＮＡを得ることができる。
前記ポリペプチドのインビトロにおける合成として、例えば、Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ， Ｉｎｃ．によって製造されたＲａｐｉｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（ＲＴＳ）を例示することができるが、それに限定されるものではない。
原核生物宿主細胞の例としては、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）および枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）が挙げられる。宿主細胞を標的遺伝子で形質転換するために、レプリコン、すなわち宿主に適合性がある種に由来する複製開始点と、調節配列とを含むプラスミドベクターによって宿主細胞を形質転換する。さらに、前記ベクターは、好ましくは、前記形質転換細胞に表現型選択性を付与することが可能な配列を有する。
真核生物宿主細胞の例としては、脊椎動物細胞、昆虫細胞および酵母細胞が挙げられる。脊椎動物細胞として、例えば、サルＣＯＳ細胞（Ｇｌｕｚｍａｎ，Ｙ．、Ｃｅｌｌ、（１９８１年）２３、１７５～１８２ページ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６５０；ＡＴＣＣ：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）、マウス繊維芽細胞ＮＩＨ３Ｔ３（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ－１６５８）、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞；ＡＴＣＣ：ＣＣＬ－６１）のジヒドロ葉酸還元酵素欠失株（Ｕｒｌａｕｂ，Ｇ．およびＣｈａｓｉｎ，Ｌ．Ａ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９８０年）７７、４１２６～４２２０ページ）および同種のものが、多くの場合用いられるが、前記細胞は、それらに限定されるものではない。
このようにして得られた形質転換体を、本技術分野において通常実施される方法に従って培養することが可能であり、前記形質転換体の培養によって、標的ポリペプチドは、細胞内または細胞外で産生される。
前記培養のために使用される適切な培地は、用いられた宿主細胞に依存して、各種の一般に使用される培養培地から当業者によって選択され得る。大腸菌が用いられる場合、例えば、必要に応じてアンピシリンまたはＩＰＭＧなどの抗生物質が補充されたＬＢ培地を使用することができる。
そのような培養によって形質転換体によって細胞内または細胞外で産生された組換えタンパク質は、前記タンパク質の物理的特性または化学的特性を利用する各種の知られた分離法の内のいずれかによって分離され、精製され得る。
前記方法の具体例としては、一般的なタンパク質沈殿剤による処理、限外濾過、モレキュラーシーブクロマトグラフィー（ゲル濾過）、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーおよび親和性クロマトグラフィーなどの各種型の液体クロマトグラフィー、透析、およびそれらの組み合わせが挙げられる。
さらに、発現対象の組換えタンパク質に６つのヒスチジン残基の標識を付着させることによって、前記タンパク質をニッケル親和性カラムで効率的に精製することができる。代替的に、発現対象の組換えタンパク質にＩｇＧ Ｆｃ領域を付着させることによって、前記タンパク質をタンパク質Ａカラムで効率的に精製することができる。
上記の方法を組み合わせることによって、大量の標的ポリペプチドを高収率および高純度で容易に生成することができる。
上記の形質転換体自体を抗原として使用することもできる。代替的に、ＴＲＯＰ２を発現する細胞系を抗原として使用してもよい。そのような細胞系の例としては、ヒト肺癌系ＮＣＩ－Ｈ３２２、ＰＣ１４、ＮＣＩＨ－Ｈ２１２２およびＬＣＡＭ１、ヒト前立腺癌系ＰＣ３、ヒト膵癌系ＢｘＰＣ－３、Ｃａｐａｎ－１およびＰＫ－１、ヒト卵巣癌系ＳＫＯＶ３ならびにヒト結腸直腸癌系ＣＯＬＯ２０５を挙げることができるが、本発明にかかる細胞系は、ＴＲＯＰ２を発現する限り、これらの細胞系に限定されるものではない。
（２）抗ＴＲＯＰ２モノクローナル抗体の産生
ＴＲＯＰ２に特異的に結合する抗体の例としては、ＴＲＯＰ２に特異的に結合するモノクローナル抗体が挙げられ、そのような抗体を得る方法は、以下で記載される通りである。
モノクローナル抗体の産生は、以下の、
（ａ）抗原として使用されるバイオポリマーを精製するか、または抗原発現細胞を調製する操作ステップ、
（ｂ）前記抗原の注射によって動物を免疫化することによって抗体産生細胞を調製し、血液を回収し、その抗体価をアッセイして、脾臓を切除する時点を決定する操作ステップ、
（ｃ）骨髄腫細胞（以下、「骨髄腫」と称する）を調製する操作ステップ、
（ｄ）前記抗体産生細胞を前記骨髄腫と融合する操作ステップ、
（ｅ）所望の抗体を産生するハイブリドーマの群をスクリーニングする操作ステップ、
（ｆ）前記ハイブリドーマを単一細胞クローンに分割する（クローン化）操作ステップ、
（ｇ）所望により、大量のモノクローナル抗体を産生するために前記ハイブリドーマを培養するか、または前記ハイブリドーマが移植された動物を飼育する操作ステップ、
（ｈ）このようにして産生されたモノクローナル抗体を生物学的活性および結合特異性について検討するか、またはそれを標識試薬として特性についてアッセイする操作ステップ、および同種のもの
を概して必要とする。
以下、上記のステップの後のモノクローナル抗体を産生する方法が詳細に記載されるが、前記方法は、それに限定されるものではなく、例えば、脾臓細胞および骨髄腫以外の抗体産生細胞を使用することができる。
（ａ）抗原の精製
抗原として、上記の通りの方法によって調製されたＴＲＯＰ２、またはその部分ペプチドを使用することができる。
さらに、ＴＲＯＰ２を発現する組換え細胞から調製される膜画分またはＴＲＯＰ２を発現する組換え細胞自体や、当業者に知られている方法によって化学的に合成される本発明のタンパク質の部分ペプチドも、抗原として使用することもできる。
さらに、ＴＲＯＰ２を発現する細胞系を抗原として使用することもできる。
（ｂ）抗体産生細胞の調製
ステップ（ａ）で得られた抗原を、フロイント完全アジュバントもしくはフロイント不完全アジュバントなどのアジュバント、または硫酸カリウムアルミニウムなどの助剤と混合し、得られた混合物を免疫原として使用して実験動物を免疫化する。代替的方法において、免疫原としての抗原発現細胞で前記実験動物を免疫化する。前記実験動物として、知られたハイブリドーマ産生方法で使用されるいずれの動物も支障なく使用することができる。具体的には、例えば、マウス、ラット、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ウマまたは同種のものを使用することができる。しかし、抽出された抗体産生細胞と融合される骨髄腫細胞の利用可能性の容易さの観点から、マウスまたはラットが、免疫化対象の動物として好ましくは使用される。
さらに、使用されるマウスまたはラットの株は、特に限定されるものではないが、マウスの場合、例えば、Ａ、ＡＫＲ、ＢＡＬＢ／ｃ、ＢＤＰ、ＢＡ、ＣＥ、Ｃ３Ｈ、５７ＢＬ、Ｃ５７ＢＬ、Ｃ５７Ｌ、ＤＢＡ、ＦＬ、ＨＴＨ、ＨＴ１、ＬＰ、ＮＺＢ、ＮＺＷ、ＲＦ、Ｒ ＩＩＩ、ＳＪＬ、ＳＷＲ、ＷＢ、および１２９などの各種株および同種のものを使用することが可能であり、ラットの場合、例えば、ウィスター、ロー（Ｌｏｗ）、ルイス、スプラーグ、ドーリー、ＡＣＩ、ＢＮ、フィッシャーおよび同種のものを使用することが可能である。
これらのマウスおよびラットは、実験動物のブリーダ／ディストリビュータ、例えば、ＣＬＥＡ Ｊａｐａｎ，Ｉｎｃ．およびＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｊａｐａｎ，Ｉｎｃ．から得られ得る。
以下に記載される骨髄腫細胞と融合する適合性を考慮して、免疫化される動物として、マウスの場合はＢＡＬＢ／ｃ株が、ラットの場合はウィスター株およびロー株が特に好ましい。
さらに、ヒトおよびマウスの間の抗原性相同性を考慮して、自己抗体を除去する生物学的機能が低下したマウス、すなわち、自己免疫疾患のマウスを使用することも好ましい。
免疫化時のそのようなマウスまたはラットの齢は、好ましくは５～１２週齢、より好ましくは６～８週齢である。
ＴＲＯＰ２またはその組換え体で動物を免疫化するために、例えば、例えばＷｅｉｒ，Ｄ．Ｍ．、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ 第Ｉ巻、第ＩＩ巻、第ＩＩＩ巻、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｏｘｆｏｒｄ（１９８７年）；Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．およびＭａｙｅｒ，Ｍ．Ｍ．、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｃｈａｒｌｅｓ Ｃ Ｔｈｏｍａｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ（１９６４年）または同種のものに詳細に記載されている知られた方法を用いることができる。
これらの免疫化方法の中で、本発明における好ましい具体的方法は、例えば、以下の通りである。
すなわち、まず、抗原の役割を果たす膜タンパク質画分または抗原を発現させる細胞を動物に皮内投与または腹腔内投与する。しかし、免疫化効率を増加させるために両投与経路の併用が好ましく、皮内投与を前半に行い、腹腔内投与を後半または最後の投与時のみに行う場合、免疫化効率は特に増加する可能性がある。
抗原の投与スケジュールは、免疫化対象の動物の型、個体差または同種のものに応じて変化する。しかし、概して、抗原の投与の頻度が３～６回で、かつ投与間隔が２～６週間である投与スケジュールが好ましく、抗原の投与の頻度が３～４回で、かつ投与間隔が２～４週間である投与スケジュールがより好ましい。
さらに、抗原の投与量は、動物の型、個体差または同種のものに応じて変化するが、投与量は、概して、０．０５～５ｍｇに、好ましくは約０．１～０．５ｍｇに設定される。
追加免疫化は、上記の通りの抗原の投与後の１～６週間、好ましくは１～４週間、より好ましくは、１～３週間行われる。免疫原が細胞である場合、１×１０６～１×１０７個の細胞が用いられる。
追加免疫化を行う際の抗原の投与量は、動物または同種のものの型または大きさに応じて変化するが、例えばマウスの場合、投与量は、概して、０．０５～５ｍｇ、好ましくは０．１～０．５ｍｇ、より好ましくは約０．１～０．２ｍｇに設定される。免疫原が細胞である場合、１×１０６～１×１０７個の細胞が用いられる。
抗体産生細胞を含む脾臓細胞またはリンパ球は、追加免疫化の１～１０日後、好ましくは２～５日後、より好ましくは２～３日後に、免疫化された動物から無菌的に除去される。この時、抗体価を測定し、抗体価が充分に増加した動物を抗体産生細胞の供給源として使用する場合、後続の手法をより効率的に実施することができる。
ここで用いられる抗体価を測定する方法の例としては、ＲＩＡ法およびＥＬＩＳＡ法が挙げられるが、前記方法はそれらに限定されるものではない。例えば、ＥＬＩＳＡ法を用いる場合、本発明における抗体価の測定は、以下に記載される通りの手法に従って実施され得る。
まず、精製された、または部分的に精製された抗原をＥＬＩＳＡのための９６ウェルプレートなどの固体相の表面に吸着させ、それに吸着された抗原がない固体相の表面をウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）などの抗原とは無関係なタンパク質で覆う。表面を洗浄した後、表面を一次抗体としての連続的に希釈された試料（例えば、マウス血清）に接触させて、前記試料中の抗体を抗原に結合させる。
さらに、二次抗体として、マウス抗体に対する酵素で標識された抗体を前記マウス抗体に付加し、結合させる。洗浄後、前記酵素のための基質を付加し、前記基質または同種のものの分解によって誘導される発色によって生じる吸光度の変化を測定し、測定に基づいて抗体価を算出する。
免疫化された動物の脾臓細胞またはリンパ球からの抗体産生細胞の分離は、知られた方法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ（１９７５年）、２５６、４９５ページ；Ｋｏｈｌｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９７７年）、６、５１１ページ；Ｍｉｌｓｔｅｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ（１９７７年）、２６６、５５０ページ；Ｗａｌｓｈ、Ｎａｔｕｒｅ（１９７７年）、２６６、４９５ページ）に従って実施され得る。例えば、脾臓細胞の場合、抗体産生細胞を、ステンレス鋼メッシュによる濾過によって細胞を得るために脾臓をホモジナイズして、イーグル最小必須培地（ＭＥＭ）中で細胞を懸濁することによって分離する一般的方法を用いることができる。
（ｃ）骨髄腫細胞（以下、「骨髄腫」と称する）の調製
細胞融合のために使用される骨髄腫細胞は、特に限定されるものではないが、知られた細胞系から適切な細胞を選択することができる。しかし、利便性を考慮して、融合細胞からハイブリドーマを選択する場合、選択手法が確立されているＨＧＰＲＴ（ヒポキサンチン－グアニンフォスフォリボシル転移酵素）欠失株を使用することが好ましい。
さらに具体的には、ＨＧＰＲＴ欠失株の例としては、マウスに由来するＸ６３－Ａｇ８（Ｘ６３）、ＮＳ１－ＡＮＳ／１（ＮＳ１）、Ｐ３Ｘ６３－Ａｇ８．Ｕ１（Ｐ３Ｕ１）、Ｘ６３－Ａｇ８．６５３（Ｘ６３．６５３）、ＳＰ２／０－Ａｇ１４（ＳＰ２／０）、ＭＰＣ１１－４５．６ＴＧ１．７（４５．６ＴＧ）、ＦＯ、Ｓ１４９／５ＸＸＯおよびＢＵ．１、ラットに由来する２１０．ＲＳＹ３．Ａｇ．１．２．３（Ｙ３）、ならびにヒトに由来するＵ２６６ＡＲ（ＳＫＯ－００７）、ＧＭ１５００・ＧＴＧ－Ａ１２（ＧＭ１５００）、ＵＣ７２９－６、ＬＩＣＲ－ＬＯＷ－ＨＭｙ２（ＨＭｙ２）および８２２６ＡＲ／ＮＩＰ４－１（ＮＰ４１）が挙げられる。これらのＨＧＰＲＴ欠失株は、例えば、ＡＴＣＣまたは同種のものから入手可能である。
これらの細胞株は、８－アザグアニン培地（グルタミン、２－メルカプトエタノール、ゲンタマイシンおよびウシ胎仔血清（以下、「ＦＢＳ」と称する）が補充されたＲＰＭＩ１６４０培地に８－アザグアニンを添加することによって得られる培地、イスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）またはダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）などの適切な培地中において継代培養される。この場合、細胞融合を行う３～４日前に、細胞を正常培地（例えば、１０％のＦＣＳを含むＡＳＦ１０４培地（Ａｊｉｎｏｍｏｔｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．によって製造される））中で継代培養して、細胞融合の日に２×１０７個以上の細胞を確保する。
（ｄ）細胞融合
抗体産生細胞および骨髄腫細胞の間の融合を、細胞の生存率が過剰に低下しないような条件下で、知られた方法（Ｗｅｉｒ，Ｄ．Ｍ．、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ 第Ｉ巻、第ＩＩ巻、第ＩＩＩ巻、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｏｘｆｏｒｄ（１９８７年）；Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．およびＭａｙｅｒ，Ｍ．Ｍ．、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｃ Ｔｈｏｍａｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ、Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ（１９６４年）など）に従って適切に行うことができる。
そのような方法として、例えば、高濃度でポリエチレングリコールなどのポリマーを含む溶液中において抗体産生細胞および骨髄腫細胞を混合する化学的方法、電気刺激を用いる物理的方法、または同種のものを用いることができる。これらの方法の中で、化学的方法の具体例は、以下に記載される通りである。
すなわち、ポリエチレングリコールが高濃度でポリマーを含む溶液中で用いられる場合、１～１０分間、好ましくは５～８分間、３０～４０℃、好ましくは３５～３８℃の温度で、分子量が１５００～６０００、より好ましくは２０００～４０００であるポリエチレングリコールの溶液中で、抗体産生細胞および骨髄腫細胞を混合する。
（ｅ）ハイブリドーマの群の選択
上記の細胞融合によって得られるハイブリドーマを選択する方法は、特に限定されるものではない。通常、ＨＡＴ（ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン）選択方法（Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ（１９７５年）、２５６、４９５ページ；Ｍｉｌｓｔｅｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ（１９７７年）、２６６、５５０ページ）が用いられる。
この方法は、アミノプテリンの存在下で生存することができないＨＧＰＲＴ欠失株の骨髄腫細胞を用いてハイブリドーマを得る場合に有効である。すなわち、ＨＡＴ培地中における非融合の細胞およびハイブリドーマを培養することによって、アミノプテリンに対して耐性があるハイブリドーマだけを選択的に生存させ、増殖させることができる。
（ｆ）単細胞クローンへの分裂（クローン化）
ハイブリドーマのためのクローン化方法として、メチルセルロース法、軟アガロース法または限界希釈法などの知られた方法を用いることができる（例えば、Ｂａｒｂａｒａ，Ｂ．Ｍ．およびＳｔａｎｌｅｙ，Ｍ．Ｓ．：Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ（１９８０年）参照）。これらの方法の中で、特に、メチルセルロース方法などの三次元培養方法が好ましい。例えば、細胞融合によって産生されるハイブリドーマの群をＣｌｏｎａＣｅｌｌ－ＨＹ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ Ｍｅｄｉｕｍ Ｄ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．によって製造、＃０３８０４）などのメチルセルロース培地中で懸濁させ、培養する。次いで、形成されたハイブリドーマコロニーを回収することによって、モノクローナルハイブリドーマを得ることができる。回収されたそれぞれのハイブリドーマコロニーを培養し、得られたハイブリドーマ培養上清中において抗体価が安定していることが確認されたハイブリドーマをＴＲＯＰ２モノクローナル抗体産生ハイブリドーマ株として選択する。
このようにして確立されたハイブリドーマ株の例としては、ＴＲＯＰ２ハイブリドーマＴＩＮＡ１が挙げられる。本明細書において、ＴＲＯＰ２ハイブリドーマＴＩＮＡ１によって産生される抗体は、「ＴＩＮＡ１抗体」、または単に「ＴＩＮＡ１」と称される。
ＴＩＮＡ１抗体の重鎖可変領域は、配列表の配列番号２で表されるアミノ酸配列を有する。さらに、ＴＩＮＡ１抗体の軽鎖可変領域は、配列表の配列番号４で表されるアミノ酸配列を有する。
（ｇ）ハイブリドーマを培養することによるモノクローナル抗体の調製
このようにして選択されたハイブリドーマを培養することによって、モノクローナル抗体を効率的に得ることができる。しかし、培養の前に、標的モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマのスクリーニングを行うことが好ましい。
そのようなスクリーニングにおいて、知られた方法を用いることができる。
本発明における抗体価の測定は、例えば、上記の項目（ｂ）において説明されたＥＬＩＳＡ法によって実施され得る。
上記の方法によって得られたハイブリドーマは、液体窒素内、または－８０℃以下の凍結器内において、凍結状態で貯蔵され得る。
クローン化の完了後、培地をＨＴ培地から正常培地に変更し、ハイブリドーマを培養する。
大量培養は、大きい培養瓶を用いる回転培養によって、または撹拌培養によって行われる。大量培養によって得られた上清から、本発明のタンパク質に特異的に結合するモノクローナル抗体を、ゲル濾過など、当業者に知られている方法を用いて精製によって得ることができる。
さらに、ハイブリドーマをハイブリドーマと同じ株（例えば、上記のＢＡＬＢ／ｃ）のマウスまたはＮｕ／Ｎｕマウスの腹腔内に注射してハイブリドーマを増殖させることによって、本発明の大量のモノクローナル抗体を含む腹水を得ることができる。
ハイブリドーマを腹腔内において投与する場合、その３～７日前に２，６，１０，１４－テトラメチルペンタデカン（プリスタン）などの鉱油を投与するならば、より大量の腹水を得ることができる。
例えば、ハイブリドーマと同じ株のマウスの腹腔内に免疫抑制剤を前もって注射して、Ｔ細胞を不活化する。その２０日後、１０６～１０７個のハイブリドーマクローン細胞を無血清培地（０．５ｍＬ）中で懸濁させ、懸濁液をマウスの腹腔内において投与する。概して、腹部が膨張して腹水で満たされる場合、マウスから腹水を回収する。この方法によって、モノクローナル抗体は、培養溶液中の濃度の約１００倍またはそれよりもずっと高い濃度で得られ得る。
上記の方法によって得られたモノクローナル抗体は、例えば、Ｗｅｉｒ，Ｄ．Ｍ．：Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ 第Ｉ巻、第ＩＩ巻、第ＩＩＩ巻、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｏｘｆｏｒｄ（１９７８年）に記載される方法によって精製され得る。
このようにして得られたモノクローナル抗体は、ＴＲＯＰ２に対する高い抗原特異性を有する。
（ｈ）モノクローナル抗体のアッセイ
このようにして得られたモノクローナル抗体のアイソタイプおよびサブクラスは、以下の通りに決定され得る。
まず、同定方法の例としては、オークタロニー法、ＥＬＩＳＡ法およびＲＩＡ法が挙げられる。
オークタロニー法は簡便であるが、モノクローナル抗体の濃度が低い場合、濃縮作業が必要となる。
一方、ＥＬＩＳＡ法またはＲＩＡ法が用いられる場合、培養上清を抗原吸着固相と直接反応させ、二次抗体として各種型のイムノグロブリンアイソタイプおよびサブクラスに対応する抗体を用いることによって、モノクローナル抗体のアイソタイプおよびサブクラスを同定することができる。
さらに、より簡便な方法として、商業的に入手可能な同定キット（例えば、Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．によって製造されたＭｏｕｓｅ Ｔｙｐｅｒ Ｋｉｔ）または同種のものを使用することもできる。
さらに、タンパク質の定量は、Ｆｏｌｉｎ Ｌｏｗｒｙ法および２８０ｎｍの吸光度に基づいた算出方法（１．４（ＯＤ２８０）＝イムノグロブリン１ｍｇ／ｍＬ）によって実施され得る。
さらに、（２）の（ａ）～（ｈ）のステップを再度行うことによってモノクローナル抗体が別々にかつ独立して得られる場合でも、ＴＩＮＡ１抗体と同等の細胞毒性活性を有する抗体、または配列番号４５を含む重鎖と配列番号４６を含む軽鎖とを含む抗体を得ることが可能である。そのような抗体の一例として、ＴＩＮＡ１抗体と同じエピトープに結合する抗体、または配列番号４５を含む重鎖と配列番号４６を含む軽鎖とを含む抗体。新しく産生されたモノクローナル抗体が、ＴＩＮＡ１抗体または配列番号４５を含む重鎖と配列番号４６を含む軽鎖とを含む抗体が結合する部分ペプチドまたは部分的三次構造に結合する場合、モノクローナル抗体が同じエピトープに結合すると決定することができる。さらに、モノクローナル抗体がＴＲＯＰ２への結合についてＴＩＮＡ１抗体または配列番号４５を含む重鎖と配列番号４６を含む軽鎖とを含む抗体と競合すること（すなわち、モノクローナル抗体が、ＴＩＮＡ１抗体または配列番号４５を含む重鎖と配列番号４６を含む軽鎖とを含む抗体およびＴＲＯＰ２の間の結合を阻害すること）を確認することによって、特異的なエピトープ配列または構造が決定されなかった場合でもモノクローナル抗体が抗ＴＲＯＰ２抗体と同じエピトープに結合すると決定することができる。モノクローナル抗体が抗ＴＲＯＰ２抗体と同じエピトープに結合することが確認される場合、モノクローナル抗体は、ＴＩＮＡ１抗体または配列番号４５を含む重鎖と配列番号４６を含む軽鎖とを含む抗体と同等の抗原結合親和性および生物学的活性を有することが強く期待される。
（３）他の抗体
本発明の抗体は、ＴＲＯＰ２に対する上記のモノクローナル抗体だけでなく、キメラ抗体、ヒト化抗体およびヒト抗体など、ヒトに対する異種抗原性を減少させる目的のための人工的修飾によって得られる組換え抗体も含む。これらの抗体は、知られた方法を用いて産生され得る。
キメラ抗体として、抗体可変領域および抗体定常領域が異なる種に由来する抗体、例えば、マウス由来抗体可変領域またはラット由来抗体可変領域がヒト由来抗体定常領域に連結されたキメラ抗体を例示することができる（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１、６８５１～６８５５、（１９８４年）参照）。
ヒト化抗体として、相補性決定領域（ＣＤＲ）だけをヒト由来抗体内に統合することによって得られる抗体（Ｎａｔｕｒｅ（１９８６年）３２１、５２２～５２５ページ参照）、およびＣＤＲグラフト法によってフレームワークのアミノ酸残基の一部およびＣＤＲ配列をヒト抗体にグラフトすることによって得られる抗体（国際公開第９０／０７８６１号）を例示することができる。
しかし、ＴＩＮＡ１抗体に由来するヒト化抗体は、ヒト化抗体がＴＩＮＡ１抗体の６つの型全てのＣＤＲ配列を有する限り、特異的ヒト化抗体に限定されるものではない。ＴＩＮＡ１抗体の重鎖可変領域は、配列表の配列番号２３で表されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１（ＴＡＧＭＱ）と、配列表の配列番号２４で表されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２（ＷＩＮＴＨＳＧＶＰＫＹＡＥＤＦＫＧ）と、配列表の配列番号２５で表されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３（ＳＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶ）とを有する。さらに、ＴＩＮＡ１抗体の軽鎖可変領域は、配列表の配列番号２６で表されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１（ＫＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ）と、配列表の配列番号２７で表されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２（ＳＡＳＹＲＹＴ）と、配列表の配列番号２８で表されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３（ＱＱＨＹＩＴＰＬＴ）とを有する。
マウス抗体ＴＩＮＡ１のヒト化抗体の例として、（１）配列表の配列番号１２、１４もしくは１６のアミノ酸残基２０～１４０または配列番号４５のアミノ酸残基１～１２１からなるアミノ酸配列、（２）上記のアミノ酸配列（１）と少なくとも９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列、および（３）上記のアミノ酸配列（１）内の１つもしくは複数のアミノ酸が欠失されるか、置換されるか、または付加されるアミノ酸配列の内のいずれか１つからなる重鎖可変領域を含む重鎖と、（４）配列表の配列番号１８、２０もしくは２２のアミノ酸残基２１～１２９または配列番号４６のアミノ酸残基１～１０９からなるアミノ酸配列、（５）上記のアミノ酸配列（４）と少なくとも９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列、および（６）上記のアミノ酸配列（４）内の１つもしくは複数のアミノ酸が、欠失されるか、置換されるか、または付加されるアミノ酸配列の内のいずれか１つからなる軽鎖可変領域を含む軽鎖との任意の組み合わせを例示することができる。
上記の重鎖と軽鎖との好ましい組み合わせを有する抗体として、配列番号４５のアミノ酸１～１２１を含む可変領域を含む重鎖と配列番号４６のアミノ酸１～１０９を含む可変領域を含む軽鎖とを含む抗体、配列番号１２のアミノ酸位置２０～１４０からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む重鎖と配列番号１８のアミノ酸位置２１～１２９からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む軽鎖とからなる抗体、配列番号１２のアミノ酸位置２０～１４０からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む重鎖と配列番号２０のアミノ酸位置２１～１２９からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む軽鎖とからなる抗体、配列番号１２のアミノ酸位置２０～１４０からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む重鎖と配列番号２２のアミノ酸位置２１～１２９からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む軽鎖とからなる抗体、配列番号１４のアミノ酸位置２０～１４０からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む重鎖と配列番号１８のアミノ酸位置２１～１２９からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む軽鎖とからなる抗体、配列番号１４のアミノ酸位置２０～１４０からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む重鎖と配列番号２０のアミノ酸位置２１～１２９からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む軽鎖とからなる抗体、配列番号１４のアミノ酸位置２０～１４０からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む重鎖と配列番号２２のアミノ酸位置２１～１２９からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む軽鎖とからなる抗体、配列番号１６のアミノ酸位置２０～１４０からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む重鎖と配列番号１８のアミノ酸位置２１～１２９からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む軽鎖とからなる抗体、配列番号１６のアミノ酸位置２０～１４０からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む重鎖と配列番号２０のアミノ酸位置２１～１２９からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む軽鎖とからなる抗体、および配列番号１６のアミノ酸位置２０～１４０からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む重鎖と配列番号２２のアミノ酸位置２１～１２９からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む軽鎖とからなる抗体を例示することができる。
さらに、上記の重鎖と軽鎖とのより好ましい組み合わせを有する抗体として、配列番号４５を含む重鎖と配列番号４６を含む軽鎖とを含む抗体、配列番号１２のアミノ酸位置２０～４７０からなるアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号１８のアミノ酸位置２１～２３４からなるアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体、配列番号１２のアミノ酸位置２０～４７０からなるアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号２０のアミノ酸位置２１～２３４からなるアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体、配列番号１２のアミノ酸位置２０～４７０からなるアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号２２のアミノ酸位置２１～２３４からなるアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体、配列番号１４のアミノ酸位置２０～４７０からなるアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号１８のアミノ酸位置２１～２３４からなるアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体、配列番号１４のアミノ酸位置２０～４７０からなるアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号２０のアミノ酸位置２１～２３４からなるアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体、配列番号１４のアミノ酸位置２０～４７０からなるアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号２２のアミノ酸位置２１～２３４からなるアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体、配列番号１６のアミノ酸位置２０～４７０からなるアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号１８のアミノ酸位置２１～２３４からなるアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体、配列番号１６のアミノ酸位置２０～４７０からなるアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号２０のアミノ酸位置２１～２３４からなるアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体、および配列番号１６のアミノ酸位置２０～４７０からなるアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号２２のアミノ酸位置２１～２３４からなるアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体を例示することができる。
上記の重鎖と軽鎖とのより優れた好ましい組み合わせを有する抗体として、配列番号４５のアミノ酸１～１２１を含む可変領域を含む重鎖と配列番号４６のアミノ酸１～１０９を含む可変領域を含む軽鎖とからなる抗体、配列番号１２のアミノ酸残基２０～１４０からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む重鎖と配列番号１８のアミノ酸残基２１～１２９からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む軽鎖とからなる抗体、配列番号１４のアミノ酸残基２０～１４０からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む重鎖と配列番号１８のアミノ酸残基２１～１２９からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む軽鎖とからなる抗体、配列番号１４のアミノ酸残基２０～１４０からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む重鎖と配列番号２０のアミノ酸残基２１～１２９からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む軽鎖とからなる抗体、および配列番号１６のアミノ酸残基２０～１４０からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む重鎖と配列番号２２のアミノ酸残基２１～１２９からなるアミノ酸配列からなる可変領域を含む軽鎖とからなる抗体を例示することができる。
さらに、上記の重鎖と軽鎖との別のより好ましい組み合わせを有する抗体として、配列番号４５を含む重鎖と配列番号４６を含む軽鎖とからなる抗体、配列番号１２のアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号１８のアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体、配列番号１２のアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号２０のアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体、配列番号１２のアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号２２のアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体、配列番号１４のアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号１８のアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体、配列番号１４のアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号２０のアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体、配列番号１４のアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号２２のアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体、配列番号１６のアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号１８のアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体、配列番号１６のアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号２０のアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体、配列番号１６のアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号２２のアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体を例示することができる。
上記の重鎖と軽鎖とのより優れた好ましい組み合わせを有する抗体として、配列番号４５を含む重鎖と配列番号４６を含む軽鎖とを含む抗体、配列番号１２のアミノ酸位置２０～４７０からなるアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号１８のアミノ酸位置２１～２３４からなるアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体、配列番号１４のアミノ酸位置２０～４７０からなるアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号１８のアミノ酸位置２１～２３４からなるアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体、配列番号１４のアミノ酸位置２０～４７０からなるアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号２０のアミノ酸位置２１～２３４からなるアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体、および配列番号１６のアミノ酸位置２０～４７０からなるアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号２２のアミノ酸位置２１～２３４からなるアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体を例示することができる。
さらに、上記の重鎖と軽鎖とのさらにより優れた好ましい組み合わせを有する抗体として、配列番号１２のアミノ酸位置２０～４６９からなるアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号１８のアミノ酸位置２１～２３４からなるアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体、配列番号１４のアミノ酸位置２０～４６９からなるアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号１８のアミノ酸位置２１～２３４からなるアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体、配列番号１４のアミノ酸位置２０～４６９からなるアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号２０のアミノ酸位置２１～２３４からなるアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体、および配列番号１６のアミノ酸位置２０～４６９からなるアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号２２のアミノ酸位置２１～２３４からなるアミノ酸配列からなる軽鎖とからなる抗体を例示することができる。
上記の重鎖アミノ酸配列と高い相同性を有する配列を上記の軽鎖アミノ酸配列と高い相同性を有する配列と組み合わせることによって、上記の抗体の各々と同等の生物学的活性を有する抗体を選択することが可能である。そのような相同性は、概して８０％以上の相同性であり、好ましくは９０％以上の相同性であり、より好ましくは９５％以上の相同性であり、最も好ましくは９９％以上の相同性である。さらに、１つ～いくつかのアミノ酸残基が重鎖アミノ酸配列または軽鎖アミノ酸配列において置換されるか、欠失されるか、または付加されるアミノ酸配列を組み合わせることによって、上記の抗体の各々と同等の生物学的活性を有する抗体を選択することも可能である。
２つのアミノ酸配列間の相同性は、Ｂｌａｓｔアルゴリズムバージョン２．２．２のデフォルトパラメータを用いて決定され得る（Ａｌｔｓｃｈｕｌ、Ｓｔｅｐｈｅｎ Ｆ．、Ｔｈｏｍａｓ Ｌ．Ｍａｄｄｅｎ、Ａｌｅｊａｎｄｒｏ Ａ．Ｓｃｈａｅｆｆｅｒ、Ｊｉｎｇｈｕｉ Ｚｈａｎｇ、Ｚｈｅｎｇ Ｚｈａｎｇ、Ｗｅｂｂ Ｍｉｌｌｅｒ、およびＤａｖｉｄ Ｊ．Ｌｉｐｍａｎ（１９９７）、「Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ ａｎｄ ＰＳＩ－ＢＬＡＳＴ：ａ ｎｅｗ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄａｔａｂａｓｅ ｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒａｍｓ」、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９～３４０２）。Ｂｌａｓｔアルゴリズムは、サイトｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｌａｓｔにアクセスすることによって、インターネットを通して使用され得る。
配列表の配列番号１２、１４または１６で表される重鎖アミノ酸配列において、アミノ酸残基１～１９からなるアミノ酸配列はシグナル配列であり、アミノ酸残基２０～１４０からなるアミノ酸配列は可変領域であり、アミノ酸残基１４１～４７０からなるアミノ酸配列は定常領域である。
さらに、配列表の配列番号１８、２０または２２で表される軽鎖アミノ酸配列において、アミノ酸残基１～２０からなるアミノ酸配列はシグナル配列であり、アミノ酸残基２１～１２９からなるアミノ酸配列は可変領域であり、アミノ酸残基１３０～２３４からなるアミノ酸配列は定常領域である。
さらに、本発明の抗体は、ＴＲＯＰ２に結合するヒト抗体を含む。抗ＴＲＯＰ２ヒト抗体は、ヒト染色体に由来する抗体の配列だけを有するヒト抗体を指す。抗ＴＲＯＰ２ヒト抗体は、ヒト抗体の重鎖遺伝子および軽鎖遺伝子を含むヒト染色体断片を有するヒト抗体産生マウスを用いる方法によって得られ得る（Ｔｏｍｉｚｕｋａ，Ｋ．ら、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（１９９７年）１６、１３３～１４３ページ；Ｋｕｒｏｉｗａ，Ｙ．ら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（１９９８年）２６、３４４７～３４４８ページ；Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｈ．ら、Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ａｓｐｅｃｔｓ 第１０巻、６９～７３ページ（Ｋｉｔａｇａｗａ，Ｙ．、Ｍａｔｕｄａ，Ｔ．およびＩｉｊｉｍａ，Ｓ．編）、Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９９年；Ｔｏｍｉｚｕｋａ，Ｋ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（２０００年）９７、７２２～７２７ページなど参照）。
そのようなヒト抗体産生マウスは、具体的には以下のように作製され得る。内在性イムノグロブリン重鎖遺伝子座および内在性イムノグロブリン軽鎖遺伝子座が破壊され、その代わりにヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座およびヒト免疫グロブリン軽鎖遺伝子座が酵母人工染色体（ＹＡＣ）ベクターまたは同種のものを介して導入された遺伝子修飾動物は、ノックアウト動物およびトランスジェニック動物を作製し、これらの動物を交尾させることによって作製される。
さらに、組換えＤＮＡ技術に従って、ヒト抗体のそのような重鎖および軽鎖の各々をコードするｃＤＮＡおよび好ましくはそのようなｃＤＮＡを含むベクターを用いることによって、真核生物細胞が形質転換され、組換えヒトモノクローナル抗体を産生する形質転換細胞を培養され、それによって、培養上清から抗体を得ることもできる。
ここで、宿主として、例えば、真核生物細胞、好ましくは哺乳動物細胞、例えば、ＣＨＯ細胞、リンパ球または骨髄腫細胞を使用することができる。
さらに、ヒト抗体ライブラリから選択されるファージディスプレイ由来ヒト抗体を得る方法（Ｗｏｒｍｓｔｏｎｅ，Ｉ．Ｍ．ら、Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ ＆ Ｖｉｓｕａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ．（２００２年）４３（７）、２３０１～２３０８ページ；Ｃａｒｍｅｎ，Ｓ．ら、Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ ｉｎ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ（２００２年）、１（２）、１８９～２０３ページ；Ｓｉｒｉｗａｒｄｅｎａ，Ｄ．ら、Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ（２００２年）１０９（３）、４２７～４３１ページなど参照）も知られている。
例えば、ヒト抗体の可変領域を単鎖抗体（ｓｃＦｖ）としてのファージの表面上に発現させ、抗原と結合するファージを選択するファージディスプレイ法（Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００５年）、２３、（９）、１１０５～１１１６年）を用いることができる。
抗原への結合に基づいて選択されるファージの遺伝子を分析することによって、抗原に結合するヒト抗体の可変領域をコードするＤＮＡ配列を決定することができる。
抗原に結合するｓｃＦｖのＤＮＡ配列を決定する場合、前記配列を含む発現ベクターを調製し、前記ベクターを適切な宿主内に導入してそれを発現させることによって、ヒト抗体を得ることができる（国際公開第９２／０１０４７号、国際公開第９２／２０７９１号、国際公開第９３／０６２１３号、国際公開第９３／１１２３６号、国際公開第９３／１９１７２号、国際公開第９５／０１４３８号、国際公開第９５／１５３８８号；Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９４年）１２、４３３～４５５ページ；Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００５年）２３（９）、１１０５～１１１６ページ）。
新しく産生されたヒト抗体が、ＴＩＮＡ１抗体が結合する部分ペプチドまたは部分的三次構造に結合する場合、ヒト抗体がＴＩＮＡ１抗体と同じエピトープに結合すると決定することができる。さらに、ヒト抗体がＴＲＯＰ２への結合についてＴＩＮＡ１抗体と競合する（すなわち、ヒト抗体が、ＴＩＮＡ１抗体とＴＲＯＰ２との間の結合を阻害する）ことを確認することによって、特異的なエピトープ配列またはエピトープ構造が決定されなかった場合であってもヒト抗体がＴＩＮＡ１抗体と同じエピトープに結合することを決定することができる。ヒト抗体がＴＩＮＡ１抗体と同じエピトープに結合することが確認される場合、ヒト抗体は、ＴＩＮＡ１抗体と同等の生物学的活性を有することが強く期待される。
上記の方法によって得られるキメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体を、知られた方法または同種のものによって、抗原への結合特性について評価することが可能であり、好ましい抗体を選択することができる。
抗体の特性の比較における使用のための別の指標の一例として、抗体の安定性を例示することができる。示差走査熱量測定（ＤＳＣ）は、タンパク質の相対的立体配座安定性の良好な指標として用いられる熱変性中点温度（Ｔｍ）を迅速かつ正確に測定することが可能な方策である。ＤＳＣを用いてＴｍ値を測定し、前記値を比較することによって、熱安定性の差を比較することができる。抗体の貯蔵安定性は、抗体の熱安定性との多少の相関性を示すことが知られており（Ｌｏｒｉ Ｂｕｒｔｏｎら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００７年）１２、２６５～２７３ページ）、熱的安定性を指標として用いることによって好ましい抗体を選択することができる。抗体を選択するための他の指標の例としては、以下の特徴、すなわち、適切な宿主細胞における収率が高いこと、および水溶液中の凝集性が低いこと、が挙げられる。例えば、最も高い収率を示す抗体が必ずしも最も高い熱安定性を示すわけではなく、ゆえに、上記の指標に基づいて総合評価を行うことによってヒトへの投与に最も適切な抗体を選択することが必要である。
本発明において、抗体の修飾変異体も含まれる。修飾変異体は、本発明の抗体の化学的修飾または生物学的修飾を行うことによって得られる変異体を指す。化学的修飾変異体の例としては、化学的部分をアミノ酸骨格に連結することによって化学的修飾をほどこした変異体、Ｎ連結型炭水化物鎖またはＯ連結型炭水化物鎖と化学的修飾をほどこした変異体などが挙げられる。生物学的修飾変異体の例としては、翻訳後修飾（例えば、Ｎ連結型グリコシル化もしくはＯ連結型グリコシル化、Ｎ末端プロセシングもしくはＣ末端プロセシング、アミド分解、アスパラギン酸の異性化、またはメチオニンの酸化）によって得られる変異体、メチオニン残基が原核生物宿主細胞内で発現させることによってＮ末端に付加された変異体が挙げられる。
さらに、本発明の抗体または抗原の検出または単離を可能にするように標識される抗体、例えば、酵素標識抗体、蛍光標識抗体および親和性標識抗体も修飾変異体の意味に含まれる。本発明の抗体のそのような修飾変異体は、抗体の安定性および血液貯溜を向上させること、その抗原性を低下させること、抗体または抗原を検出または単離することなどのために有用である。
さらに、本発明の抗体に連結されているグリカンの修飾（グリコシル化、脱フコシル化など）を調節することによって、抗体依存性細胞毒性活性を増強することが可能である。抗体のグリカンの修飾を調節するための手法として、国際公開第１９９９／５４３４２号、国際公開第２０００／６１７３９号、国際公開第２００２／３１１４０号などが知られている。しかし、前記手法はそれらに限定されるものではない。本発明の抗体において、グリカンの修飾が調節される抗体も含まれる。
まず抗体遺伝子を単離し、次いで前記遺伝子を適切な宿主内に導入することによって抗体を産生する場合、適切な宿主および適切な発現ベクターの組み合わせを用いることができる。抗体遺伝子の具体例としては、本明細書に記載される抗体の重鎖配列をコードする遺伝子とその軽鎖配列をコードする遺伝子との組み合わせが挙げられる。宿主細胞を形質転換する場合、重鎖配列遺伝子および軽鎖配列遺伝子を、同じ発現ベクター内に挿入することが可能であり、異なる発現ベクター内に別々に挿入することも可能である。
真核生物細胞を宿主として使用する場合、動物細胞、植物細胞および真核微生物を使用することができる。動物細胞として、哺乳動物細胞、例えば、サルＣＯＳ細胞（Ｇｌｕｚｍａｎ，Ｙ．、Ｃｅｌｌ、（１９８１年）２３、１７５～１８２ページ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６５０）、マウス繊維芽細胞ＮＩＨ３Ｔ３（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ－１６５８）、およびチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞；ＡＴＣＣ：ＣＣＬ－６１）のジヒドロ葉酸還元酵素欠失株（Ｕｒｌａｕｂ，Ｇ．およびＣｈａｓｉｎ，Ｌ．Ａ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９８０年）７７、４１２６～４２２０ページ）を例示することができる。
原核細胞を使用する場合、例えば、大腸菌および枯草菌を例示することができる。
形質転換によって所望の抗体遺伝子をこれらの細胞内に導入し、このように形質転換された細胞をインビトロで培養することによって、抗体を得ることができる。上記の培養方法において、収率は、抗体の配列に応じて変化する場合がある可能性があり、ゆえに、同等の結合活性を有する抗体における指標として収率を用いることによって医薬品として容易に作製される抗体を選択することが可能である。ゆえに、本発明の抗体において、形質転換された宿主細胞を培養するステップと、培養ステップで得られた培養産物から所望の抗体を回収するステップとを含むことを特徴とする、抗体を産生する方法によって得られた抗体も含まれる。
培養哺乳動物細胞において産生された抗体の重鎖のカルボキシル末端のリジン残基を欠失させることが知られており（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ、７０５：１２９～１３４（１９９５年））、培養哺乳動物細胞において産生された抗体の重鎖のカルボキシル末端の２つのアミノ酸残基（グリシンおよびリジン）を欠失させ、新しくカルボキシル末端に位置するプロリン残基をアミド化させることも知られている（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３６０：７５～８３（２００７年））。しかし、重鎖配列のそのような欠失および修飾は、抗体の抗原結合親和性およびエフェクタ機能（補体の活性化、抗体依存性細胞毒性など）に影響を及ぼさない。ゆえに、本発明の抗体において、そのような修飾をほどこした抗体および前記抗体の機能的断片も含まれ、１つまたは２つのアミノ酸が重鎖のカルボキシル末端で欠失された欠失変異体、前記欠失変異体のアミド化によって得られた変異体（例えば、カルボキシ末端プロリン残基がアミド化された重鎖）および同種のものも包含される。本発明にかかる抗体の重鎖のカルボキシル末端に欠失を有する欠失変異体の型は、抗原結合親和性およびエフェクタ機能が保存される限り、上記の変異体に限定されるものではない。本発明にかかる抗体を構成する２つの重鎖は、完全長重鎖および上記の欠失変異体からなる群から選択される１つの型のものであってもよいか、またはそれらから選択される組み合わせにおける２つの型のものであってもよい。各欠失変異体の量の比は、本発明にかかる抗体を産生する培養哺乳動物細胞の型および培養条件に影響を受ける可能性があるが、カルボキシル末端の１つのアミノ酸残基が本発明にかかる抗体中において主要な成分として含まれる２つの重鎖の両方において欠失されている場合を例示することができる。
本発明の抗体のアイソタイプとして、例えば、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）を例示することが可能であり、好ましくはＩｇＧ１またはＩｇＧ２を例示することが可能である。
抗体の生物学的活性として、概して、抗原結合活性、抗原への結合によって抗原を発現する細胞内で内在化する活性、抗原の活性を中和する活性、抗原の活性を増強する活性、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）活性、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）活性および抗体依存性細胞媒介食作用（ＡＤＣＰ）活性を例示することができる。本発明の抗体の機能は、ＴＲＯＰ２への結合活性、好ましくは、ＴＲＯＰ２への結合によってＴＲＯＰ２発現細胞内で内在化する活性である。さらに、本発明の抗体は、細胞内在化活性の他に、ＡＤＣＣ活性、ＣＤＣ活性および／またはＡＤＣＰ活性を有してもよい。
得られた抗体は、均質になるまで精製され得る。抗体の分離および精製は、従来のタンパク質分離および精製方法を用いて実施されてもよい。例えば、カラムクロマトグラフィー、フィルター濾過、限外濾過、塩沈澱、透析、調製用ポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動および同種のものを適切に選択し、組み合わせることによって、抗体を分離し、精製することができるが（Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｕｒｓｅ Ｍａｎｕａｌ、Ｄａｎｉｅｌ Ｒ．Ｍａｒｓｈａｋら編、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９９６年）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ．Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８年））、前記方法は、それらに限定されるものではない。
そのようなクロマトグラフィーの例としては、親和性クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィーおよび吸着クロマトグラフィーが挙げられる。
そのようなクロマトグラフィーは、ＨＰＬＣまたはＦＰＬＣなどの液体クロマトグラフィーを用いて実施され得る。
親和性クロマトグラフィーで使用されるカラムとして、タンパク質Ａカラムおよびタンパク質Ｇカラムを例示することができる。例えば、タンパク質Ａカラムを用いたカラムとして、Ｈｙｐｅｒ Ｄ、ＰＯＲＯＳ、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）および同種のものを例示することができる。
さらに、担体であって、その上に固定される抗原を有する前記担体を使用することによって、前記抗原への前記抗体の結合特性を利用して前記抗体を精製することもできる。
抗癌化合物
本セクションにおいて、本発明の開示された抗体薬物複合体の一部として抗ＴＲＯＰ２抗体に複合化される抗腫瘍化合物を説明する。
本発明において用いられる抗腫瘍化合物は、抗腫瘍効果および置換基、またはリンカー構造への連結を可能にする部分構造を有する化合物である場合、特に限定されるものではない。部分的な、または全部のリンカーを腫瘍細胞内で開裂させる場合、抗腫瘍化合物部分が放出されて抗腫瘍化合物の抗腫瘍効果を示す。リンカーが薬物への連結位置で開裂されると、抗腫瘍化合物は、その無修飾構造内で放出されて、その内因性抗腫瘍効果を示す。
本発明において使用される抗腫瘍化合物として、カンプトセシン誘導体の内の１種であるエキサテカン（以下の式に示される（（１Ｓ，９Ｓ）－１－アミノ－９－エチル－５－フルオロ－２，３－ジヒドロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１０，１３（９Ｈ，１５Ｈ）－ジオン）が好ましくは使用され得る。エキサテカンは、式１において以下で示される。
Figure 2022534725000005
エキサテカンは、優れた抗腫瘍効果を有するが、抗腫瘍薬として商品化されていない。前記化合物を知られた方法によって容易に得ることが可能であり、好ましくは１位のアミノ基をリンカー構造への連結位置として用いることが可能である。さらに、リンカーの一部を依然として付着させると共に腫瘍細胞内でエキサテカンを放出することも可能であり、それは、そのような構造においても優れた抗腫瘍効果を示す優れた抗癌化合物のままである。
エキサテカンはカンプトセシン構造を有するので、平衡は、水性酸性媒体（例えば、ｐＨ３程度）中において閉ラクトン環（閉環）を有する構造に移動するが、水性塩基性媒体（例えば、ｐＨ１０程度）中において開ラクトン環（開環）を有する構造に移動することが知られている。閉環構造に対応するエキサテカン残基が薬物複合体に導入されている場合、開環構造が同じ抗腫瘍効果を有することも期待され、これらの状況のいずれも本発明の範囲内である。
抗腫瘍化合物の他の例としては、ドキソルビシン、ダウノルビシン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、シクロシチジン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メトトレキセート、白金系抗腫瘍剤（シスプラチンまたはその誘導体）、タキソールまたはその誘導体、およびカンプトセシンまたはその誘導体（特開平６－８７７４６号に記載されている抗腫瘍剤）を挙げることができる。
抗体薬物複合体に関して、抗体分子１個当たりの複合化薬物分子の数は、有効性および安全性に影響がある主要な因子である。抗体薬物複合体の作製は、一定数の複合化薬物分子を有するように反応のための原料および試薬の使用量を含む反応条件を明確にすることによって行われ、抗体薬物複合体は、概して、低分子化合物の化学反応とは異なって、異なる数の複合化薬物分子を含む混合物として得られる。抗体分子において複合化される薬物の数は、平均値、すなわち、複合化薬物分子の平均数で表されるか、または指定される。具体的に原理として記載されない限り、複合化薬物分子の数は、それが異なる数の複合化薬物分子を有する抗体薬物複合体混合物に含まれる具体的な数の複合化薬物分子を有する抗体薬物複合体を表す場合を除いて、平均値を意味する。抗体分子に複合化されるエキサテカン分子の数は制御可能であり、抗体１個当たりの複合化薬物分子の平均数として、約１～１０個のエキサテカンを連結することができる。いくつかの実施形態において、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のエキサテカンを連結することができる。好ましくは、それは、２～８であり、より好ましくは３～８であり、より好ましくは、３．５～４．５、または４である。一方、当業者は、本出願の実施例の記載に基づいて、必要数の薬物分子を抗体分子に複合化するための反応を設計することが可能であり、制御された数のエキサテカン分子を有する抗体薬物複合体を得ることが可能である。
リンカー構造
本発明の抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体に関して、抗腫瘍化合物を抗ＴＲＯＰ２抗体に複合化するためのリンカー構造を説明する。リンカーは、以下の式の構造を有する。
－Ｌ１－Ｌ２－ＬＰ－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ１－Ｌａ－（ＣＨ２）ｎ２－Ｃ（＝Ｏ）－
前記抗体は、Ｌ１の末端（Ｌ２への連結部の反対側の末端）に連結され、前記抗腫瘍化合物は、－Ｌａ－（ＣＨ２）ｎ２－Ｃ（＝Ｏ）－部分のカルボニル基に連結されている。
ｎ１は、０～６の整数を表し、好ましくは１～５、より好ましくは、１～３の整数である。
Ｌ１
Ｌ１は、－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－（ＣＨ２）ｎ３－Ｃ（＝Ｏ）－の構造で表される。
上記において、ｎ３は、２～８の整数であり、「－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－」は、以下の式で表される構造を有する。
Figure 2022534725000006
上記の部分構造の３位は、抗ＴＲＯＰ２抗体に対する連結位置である。３位の抗ＴＲＯＰ２抗体に対する結合は、チオエーテル形成により結合していることを特徴とする。構造部分の１位の窒素原子は、前記構造を含むリンカー内に存在するメチレンの炭素原子に連結されている。具体的に、－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－（ＣＨ２）ｎ３－Ｃ（＝Ｏ）－Ｌ２－は、以下の式（本願明細書において、「抗体－Ｓ－」は、抗体に由来する）で表される構造である。
Figure 2022534725000007
前記式において、ｎ３は、２～８、好ましくは２～５の整数である。
Ｌ１の具体例としては、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－
を挙げることができる。
Ｌ２
Ｌ２は、以下の構造で表されるリンカーである。
－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ）ｎ４－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
Ｌ２が存在しない場合があり、そのような場合、Ｌ２は単結合である。上記において、ｎ４は、１～６、好ましくは２～４の整数である。Ｌ２は、その末端アミノ基でＬ１に連結され、他方の末端におけるそのカルボニル基でＬＰに連結されている。
Ｌ２の具体例としては、
－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－
を挙げることができる。
ＬＰ
ＬＰは、２～７個のアミノ酸からなるペプチド残基である。具体的に、それは、２～７個のアミノ酸がペプチド結合によって連結されているオリゴペプチド残基からなる。ＬＰは、そのＮ末端でＬ２に連結され、そのＣ末端でリンカーの－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ１－Ｌａ－（ＣＨ２）ｎ２－Ｃ（＝Ｏ）－部分のアミノ基に連結されている。
リンカー内においてＬＰを構成するアミノ酸は、特に限定されるものではないが、その例としては、Ｌ－アミノ酸またはＤ－アミノ酸、好ましくはＬ－アミノ酸が挙げられる。そして、それは、α－アミノ酸の他に、β－アラニン、ε－アミノカプロン酸またはγ－アミノ酪酸などの構造を有するアミノ酸であることが可能であり、さらに、それは、Ｎ－メチル化アミノ酸などの非天然型アミノ酸であることが可能である。
ＬＰのアミノ酸配列は、特に限定されるものではないが、構成アミノ酸の例としては、フェニルアラニン（Ｐｈｅ；Ｆ）、チロシン（Ｔｙｒ；Ｙ）、ロイシン（Ｌｅｕ；Ｌ）、グリシン（Ｇｌｙ；Ｇ）、アラニン（Ａｌａ；Ａ）、バリン（Ｖａｌ；Ｖ）、リジン（Ｌｙｓ；Ｋ）、シトルリン（Ｃｉｔ）、セリン（Ｓｅｒ；Ｓ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ；Ｅ）およびアスパラギン酸（Ａｓｐ；Ｄ）が挙げられる。
それらの中で、好ましい例としては、フェニルアラニン、グリシン、バリン、リジン、シトルリン、セリン、グルタミン酸およびアスパラギン酸が挙げられる。アミノ酸の型に応じて、薬剤放出パターンを制御することができる。アミノ酸の数は、２～７個の間であることができる。
ＬＰの具体例としては、
－ＧＧＦ－、
－ＤＧＧＦ－、
－（Ｄ－）Ｄ－ＧＧＦ－、
－ＥＧＧＦ－、
－ＧＧＦＧ－、
－ＳＧＧＦ－、
－ＫＧＧＦ－、
－ＤＧＧＦＧ－、
－ＧＧＦＧＧ－、
－ＤＤＧＧＦＧ－、
－ＫＤＧＧＦＧ－、
－ＧＧＦＧＧＧＦ－
を挙げることができる。
上記において、「（Ｄ－）Ｄ」は、Ｄ－アスパラギン酸を表す。
本発明の抗体薬物複合体のためのＬＰの特に好ましい例としては、－ＧＧＦＧ－のテトラペプチド残基を挙げることができる。
Ｌａ－（ＣＨ２）ｎ２－Ｃ（＝Ｏ）－
Ｌａ－（ＣＨ２）ｎ２－Ｃ（＝Ｏ）－におけるＬａは、－Ｏ－の構造または単結合である。ｎ２は、０～５、より好ましくは０～３、より好ましくは０または１の整数である。
Ｌａ－（ＣＨ２）ｎ２－Ｃ（＝Ｏ）－の例としては、以下の構造、
－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－
を有するものを挙げることができる。
それらの中で、－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、またはＬａが単結合であり、かつｎ２が０である場合が好ましい。
リンカー内における－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ１－Ｌａ－（ＣＨ２）ｎ２－Ｃ（＝Ｏ）－で表される構造の具体例としては、
－ＮＨ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、
－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－
を挙げることができ、
－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、または－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－が好ましい。
リンカー内において、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ１－Ｌａ－（ＣＨ２）ｎ２－Ｃ（＝Ｏ）－の鎖長は、好ましくは４～７個の原子の鎖長であり、より好ましくは５個または６個の原子の鎖長である。
本発明の抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体に関して、抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体が腫瘍細胞の内部にトランスファーされる場合、リンカー部分が開裂され、ＮＨ２－（ＣＨ２）ｎ１－Ｌａ－（ＣＨ２）ｎ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）で表される構造を有する薬物誘導体が放出されて抗腫瘍作用を発現することが考えられる。本発明の抗体薬物複合体からの放出によって抗腫瘍効果を示す抗腫瘍誘導体の例としては、リンカーの－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ１－Ｌａ－（ＣＨ２）ｎ２－Ｃ（＝Ｏ）－で表される構造が末端アミノ基を有する構造部分を有する抗腫瘍誘導体が挙げられ、特に好ましいものとしては、以下のものが挙げられる。
ＮＨ２－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
ＮＨ２－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
ＮＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
ＮＨ２－ＣＨＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）
一方、ＮＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）の場合、分子中のアミナール構造が不安定であると、それは再度自己分解を経て以下の
ＨＯ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）
を放出することが確認された。好ましくは、それらの化合物を本発明の抗体薬物複合体の生成中間体として使用することもできる。
エキサテカンが薬物として使用される本発明の抗体薬物複合体について、以下の構造を有する薬物－リンカー構造部分［－Ｌ１－Ｌ２－ＬＰ－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ１－Ｌａ－（ＣＨ２）ｎ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）］が抗体に連結されていることが好ましい。抗体１個当たりの前記薬物－リンカー構造部分の平均複合化数は、１～１０、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であることができる。好ましくは、それは、２～８であり、より好ましくは３～８であり、より好ましくは、３．５～４．５、または４である。
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）
それらの中で、より好ましいものは、以下のものである。
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）
特に好ましいものは、以下のものである。
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）
本発明の抗体薬物複合体において抗ＴＲＯＰ２抗体および薬物を複合化するためのリンカー構造に関して、好ましいリンカーは、上記で説明されるリンカーの部分毎に示される好ましい構造を連結することによって構築され得る。リンカー構造に関して、好ましくは、以下の構造を有するものを使用することができる。一方、前記構造の左の末端は、抗体との連結位置であり、右の末端は、薬物との連結位置である。
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－
その中で、より好ましいものは、以下のものである。
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－
特に好ましいものは、以下のものが挙げられる。
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－、
－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－
本発明において使用される抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体に関して、それが腫瘍細胞の内部にトランスファーされる場合、リンカー部分が開裂され、式：
ＮＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）
で表される構造を有する薬物誘導体が放出され得る。
薬物誘導体の分子中のアミナール構造が不安定であると、それは再度自己分解を経て、式：ＨＯ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）で表される化合物を放出することが確認された。
前記化合物は、以下の式：
Figure 2022534725000008
（以下、本発明において「化合物１」とも称される）で表され得る。
化合物１は、本発明において使用される抗体薬物複合体が有する抗腫瘍活性の主要な医薬的活性物質であると考えられ、トポイソメラーゼＩ阻害効果を有することが確認された（Ｏｇｉｔａｎｉ Ｙ．ら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２０１６年１０月１５日；２２（２０）：５０９７～５１０８、Ｅｐｕｂ ２０１６年３月２９日）。
生成方法
次に、本発明の抗体薬物複合体またはその生成中間体を生成するための代表的方法について説明する。一方、前記化合物は、以下で本明細書において、各化学反応式に示される化合物番号と共に記載される。具体的に、それらは、「式（１）の化合物」、「化合物（１）」または同種のものと称される。それら以外の番号を伴う化合物も同様に記載される。
生成方法Ａ
チオエーテルを介して薬物－リンカー構造に連結されている式（１）で表される抗体薬物複合体は、例えば、以下の方法によって生成され得る。
Figure 2022534725000009
前記式において、ＡＢは、スルフヒドリル基を有する抗体を表し、Ｌ１’は、リンカー末端がマレイミジル基であるＬ１リンカー構造（以下で示される式）を表す。
Figure 2022534725000010
前記式において、窒素原子は連結位置であり、具体的には、Ｌ１の－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－（ＣＨ２）ｎ３－Ｃ（＝Ｏ）－における－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－部分がマレイミジル基である基を表す。さらに、－（ＮＨ－ＤＸ）は、以下の式：
Figure 2022534725000011
で表される構造を表し、それは、エキサテカンの１位においてアミノ基の１個の水素原子を除去することによって誘導される基を表す。
さらに、上記化学反応式における式（１）の化合物は、薬物からリンカー末端までに相当する１つの構造部分が１つの抗体に連結している構造であると解釈される。しかし、それは便宜上示される記載に過ぎず、実際には、複数の構造部分が１つの抗体分子に連結されている場合が多くある。以下で記載される生成方法の説明も同様である。
抗体薬物複合体（１）は、以下で記載される方法によって入手可能な化合物（２）を、スルフヒドリル基を有する抗体（３ａ）と反応させることによって生成され得る。
スルフヒドリル基を有する抗体（３ａ）は、本技術分野においてよく知られた方法（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、５６～１３６ページ、４５６～４９３ページ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（１９９６年））によって得られ得る。例としては：トラウトの試薬を抗体のアミノ基と反応させる；Ｎ－スクシンイミジルＳ－アセチルチオアルカノエートを抗体のアミノ基と反応させた後、ヒドロキシルアミンとの反応を行う；Ｎ－スクシンイミジル３－（ピリジルジチオ）プロピオネートとの反応の後、抗体を還元剤と反応させる；抗体をジチオスレイトール、２－メルカプトエタノールおよびトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）などの還元剤と反応させて、抗体内のジスルフィド結合を還元させてスルフヒドリル基を形成する、が挙げられるが、それらに限定されるものではない。
具体的に、抗体内における１つのジスルフィドにつき還元剤として０．３～３モル当量のＴＣＥＰを用いて、キレート剤を含む緩衝溶液中における抗体と反応させて、抗体内に部分的にまたは完全に還元されたジスルフィドを有する抗体を得ることもできる。キレート剤の例としては、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）およびジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）が挙げられる。それは、１ｍＭ～２０ｍＭの濃度で使用され得る。使用することができる緩衝溶液の例としては、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウムまたは酢酸ナトリウムの溶液が挙げられる。具体的に、抗体を、４℃～３７℃で、１～４時間、ＴＣＥＰと反応させることによって、部分的にまたは完全に還元されたスルフヒドリル基を有する抗体（３ａ）を得ることができる。
一方、スルフヒドリル基を薬物－リンカー部分に付加するための反応を行うことによって、チオエーテル結合で薬物－リンカー部分を複合化することができる。
スルフヒドリル基を有する抗体（３ａ）１つにつき２～２０モル当量の化合物（２）を用いて、抗体１つにつき２～８個の薬物分子が複合化される抗体薬物複合体（１）を生成することができる。具体的に、その中に溶解された化合物（２）を含む溶液を、前記反応のためのスルフヒドリル基を有する抗体（３ａ）を含む緩衝溶液に加えることで充分である。本明細書において、使用することができる緩衝溶液の例としては、酢酸ナトリウム溶液、リン酸ナトリウムおよびホウ酸ナトリウムが挙げられる。前記反応のためのｐＨは、５～９であり、より好ましくは、前記反応は、ほぼｐＨ７で行われる。化合物（２）を溶解させるための溶媒の例としては、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）およびＮ－メチル－２－ピリドン（ＮＭＰ）などの有機溶媒が挙げられる。
その中に溶解される化合物（２）を含む有機溶媒溶液を、前記反応のためのスルフヒドリル基を有する抗体（３ａ）を含む緩衝溶液に１～２０％ｖ／ｖで加えることで充分である。反応温度は、０～３７℃、より好ましくは１０～２５℃であり、反応時間は、０．５～２時間である。チオール含有試薬との未反応の化合物（２）の反応性を非活性化することによって前記反応を終了させることができる。チオール含有試薬の例としては、システインおよびＮ－アセチル－Ｌ－システイン（ＮＡＣ）が挙げられる。より具体的には、使用される化合物（２）に１～２モル当量のＮＡＣを加え、室温で１０～３０分間インキュベートすることによって前記反応を終了させることができる。
生成された抗体薬物複合体（１）に対して、濃縮後に、緩衝液交換、精製、以下で記載される一般的手法による抗体濃度および抗体分子１個当たりの複合化薬物分子の平均数の測定、抗体薬物複合体（１）の同定を行うことができる。
一般的手法Ａ：抗体または抗体薬物複合体の水溶液の濃縮
Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ（５０，０００ＭＷＣＯ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）容器に抗体または抗体薬物複合体の溶液を加え、遠心分離機（Ａｌｌｅｇｒａ Ｘ－１５Ｒ、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．）を用いて、遠心分離（２０００Ｇ～３８００Ｇで５～２０分間の遠心分離）によって抗体または抗体薬物複合体の溶液を濃縮した。
一般的手法Ｂ：抗体濃度の測定
ＵＶ検出器（Ｎａｎｏｄｒｏｐ１０００、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．）を用いて、製造業者によって規定された方法に従って抗体濃度の測定を行った。その時、各抗体について異なる２８０ｎｍ吸収係数（１．３ｍＬｍｇ－１ｃｍ－１～１．８ｍＬｍｇ－１ｃｍ－１）を用いた。
一般的手法Ｃ－１：抗体のための緩衝液交換
Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５担体を用いたＮＡＰ－２５カラム（Ｃａｔ．Ｎｏ．１７－０８５２－０２、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｊａｐａｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を、製造業者によって規定された方法に従って、塩化ナトリウム（１３７ｍＭ）およびエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ、５ｍＭ）を含むリン酸緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ６．０；それは本明細書においてＰＢＳ６．０／ＥＤＴＡと称される）で平衡させた。抗体の水溶液を２．５ｍＬの量で単一ＮＡＰ－２５カラムに適用し、次いで、３．５ｍＬのＰＢＳ６．０／ＥＤＴＡで溶出させた画分（３．５ｍＬ）を回収した。得られた画分を一般的手法Ａによって濃縮した。一般的手法Ｂを用いて抗体の濃度を測定した後、ＰＢＳ６．０／ＥＤＴＡを用いて抗体濃度を１０ｍｇ／ｍＬに調整した。
一般的手法Ｃ－２：抗体のための緩衝液交換
Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５担体を用いたＮＡＰ－２５カラム（Ｃａｔ．Ｎｏ．１７－０８５２－０２、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｊａｐａｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を、製造業者によって規定された方法に従って、塩化ナトリウム（５０ｍＭ）およびＥＤＴＡ（２ｍＭ）を含むリン酸緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ６．５；それは本明細書においてＰＢＳ６．５／ＥＤＴＡと称される）で平衡させた。抗体の水溶液を２．５ｍＬの量で単一ＮＡＰ－２５カラムに適用し、次いで、３．５ｍＬのＰＢＳ６．５／ＥＤＴＡで溶出させた画分（３．５ｍＬ）を回収した。得られた画分を一般的手法Ａによって濃縮した。一般的手法Ｂを用いて抗体の濃度を測定した後、ＰＢＳ６．５／ＥＤＴＡを用いて抗体濃度を２０ｍｇ／ｍＬに調整した。
一般的手法Ｄ：抗体薬物複合体の精製
ＮＡＰ－２５カラムを、商業的に入手可能なリン酸緩衝液（ＰＢＳ７．４、Ｃａｔ．Ｎｏ．１００１０－０２３、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、塩化ナトリウム（１３７ｍＭ）を含むリン酸ナトリウム緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ６．０；それはＰＢＳ６．０と称される）、およびソルビトール（５％）を含む酢酸緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ５．５；それは本明細書においてＡＢＳと称される）から選択される任意の緩衝液で平衡させた。抗体薬物複合体反応の水溶液を約１．５ｍＬの量でＮＡＰ－２５カラムに適用し、次いで、製造業者によって規定された量の緩衝液で溶出させて抗体画分を回収した。回収された画分をＮＡＰ－２５カラムに再び適用し、緩衝液による溶出のためのゲル濾過精製プロセスを合計で２～３回繰り返すことによって、非複合化薬物リンカーおよび低分子化合物（トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）、Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン（ＮＡＣ）およびジメチルスルホキシド）を除く抗体薬物複合体を得た。
一般的手法Ｅ：抗体薬物複合体中における抗体濃度の測定、および抗体分子（１）１個当たりの複合化薬物分子の平均数。
２８０ｎｍおよび３７０ｎｍの２つの波長で抗体薬物複合体の水溶液のＵＶ吸光度を測定することによって抗体薬物複合体中における複合化薬物濃度を算出した後、以下で示される算出を行うことができる。
任意の波長の総吸光度が系内に存在する全ての光吸収化学種の吸光度の合計に等しいので（吸光度の加法性）、抗体および薬物のモル吸収係数が抗体および薬物の間の複合化の前後で変わらない場合、抗体薬物複合体中における抗体濃度および薬物濃度は、以下の式で表される。
Ａ２８０＝ＡＤ，２８０＋ＡＡ，２８０＝εＤ，２８０ＣＤ＋εＡ，２８０ＣＡ 式（Ｉ）
Ａ３７０＝ＡＤ，３７０＋ＡＡ，３７０＝εＤ，３７０ＣＤ＋εＡ，３７０ＣＡ 式（ＩＩ）
上記において、Ａ２８０は、２８０ｎｍにおける抗体薬物複合体の水溶液の吸光度を表し、Ａ３７０は、３７０ｎｍにおける抗体薬物複合体の水溶液の吸光度を表し、ＡＡ，２８０は、２８０ｎｍにおける抗体の吸光度を表し、ＡＡ，３７０は、３７０ｎｍにおける抗体の吸光度を表し、ＡＤ，２８０は、２８０ｎｍにおける複合体前駆体の吸光度を表し、ＡＤ，３７０は、３７０ｎｍにおける複合体前駆体の吸光度を表し、εＡ，２８０は、２８０ｎｍにおける抗体のモル吸収係数を表し、εＡ，３７０は、３７０ｎｍにおける抗体のモル吸収係数を表し、εＤ，２８０は、２８０ｎｍにおける複合体前駆体のモル吸収係数を表し、εＤ，３７０は、３７０ｎｍにおける複合体前駆体のモル吸収係数を表し、ＣＡは、抗体薬物複合体中における抗体濃度を表し、ＣＤは、抗体薬物複合体中における薬物濃度を表す。
上記におけるεＡ，２８０、εＡ，３７０、εＤ，２８０およびεＤ，３７０に関して、事前に用意された値（化合物のＵＶ測定によって得られた算出値または測定値に基づいた推定値）を用いる。例えば、知られた算出方法を用いて抗体のアミノ酸配列からεＡ，２８０を推定することができる（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９５年、第４巻、２４１１～２４２３）。εＡ，３７０は、概してゼロである。用いられる複合体前駆体が特定のモル濃度で溶解する溶液の吸光度を測定することによって、ランバート－ベールの法則（吸光度＝モル濃度×モル吸収係数×セル光路長）に基づいてεＤ，２８０およびεＤ，３７０を得ることができる。抗体薬物複合体の水溶液のＡ２８０およびＡ３７０を測定し、前記値を用いて連列方程式（Ｉ）および（ＩＩ）を解くことによって、ＣＡおよびＣＤを得ることができる。さらに、ＣＤをＣＡで除す（ｄｉｖｉｎｇ）ことによって、抗体１つ当たりの複合化薬物の平均数を得ることができる。
一般的手法Ｆ：抗体薬物複合体内における抗体分子１個当たりの複合化薬物分子の平均数の測定－（２）。
上述の一般的手法Ｅの他に、以下で記載される方法を用いて、抗体薬物複合体内における抗体分子１個当たりの複合化薬物分子の平均数を高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析によって決定することもできる。
［Ｆ－１．ＨＰＬＣ分析のための試料の調製（抗体薬物複合体の還元）］
抗体薬物複合体溶液（約１ｍｇ／ｍＬ、６０μＬ）をジチオスレイトール（ＤＴＴ）水溶液（１００ｍＭ、１５μＬ）と混合する。混合物を３７℃で３０分間インキュベートして、抗体薬物複合体のＬ鎖およびＨ鎖の間のジスルフィド結合を開裂する。得られた試料をＨＰＬＣ分析で用いる。
［Ｆ－２．ＨＰＬＣ分析］
以下の測定条件でＨＰＬＣ分析を行う。
ＨＰＬＣシステム：Ａｇｉｌｅｎｔ１２９０ＨＰＬＣシステム（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．）
検出器：ＵＶ吸収分光計（測定波長：２８０ｎｍ）
カラム：ＰＬＲＰ－Ｓ（２．１×５０ｍｍ、８μｍ、１０００オングストローム；Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｐ／Ｎ ＰＬ１９１２－１８０２）
カラム温度：８０℃
移動相Ａ：０．０４％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）水溶液
移動相Ｂ：０．０４％ＴＦＡを含むアセトニトリル溶液
勾配プログラム：２９％～３６％（０分～１２．５分）、３６％～４２％（１２．５～１５分）、４２％～２９％（１５分～１５．１分）、２９％～２９％（１５．１分～２５分）
試料注射量：１５μＬ
［Ｆ－３．データ分析］
［Ｆ－３－１］非複合化抗体のＬ鎖（Ｌ０）およびＨ鎖（Ｈ０）と比較して、薬物複合化Ｌ鎖（１個の薬物分子に連結されたＬ鎖：Ｌ１）およびＨ鎖（１個の薬物分子に連結されたＨ鎖：Ｈ１、２個の薬物分子に連結されたＨ鎖：Ｈ２、３個の薬物分子に連結されたＨ鎖：Ｈ３）は、複合化薬物分子の数に比例して、より高い疎水性を示し、ゆえに、保持時間がより大きい。ゆえに、これらの鎖は、Ｌ０およびＬ１、またはＨ０、Ｈ１、Ｈ２およびＨ３の順序で溶離する。保持時間とＬ０およびＨ０との比較によって、検出ピークをＬ０、Ｌ１、Ｈ０、Ｈ１、Ｈ２およびＨ３のいずれかに割り当てることができる。
［Ｆ－３－２］薬物リンカーがＵＶ吸収を有するので、ピーク面積値は、Ｌ鎖、Ｈ鎖および薬物リンカーのモル吸収係数を用いて、以下の式に従って、複合化薬物リンカー分子の数に応じて補正される。
Figure 2022534725000012
Figure 2022534725000013
ここで、各抗体のＬ鎖またはＨ鎖のモル吸光係数（２８０ｎｍ）に関して、知られた算出方法（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９５年、第４巻、２４１１～２４２３）によって各抗体のＬ鎖またはＨ鎖のアミノ酸配列から推定された値を用いることができる。ｈＴＩＮＡの場合、そのアミノ酸配列に従って、３４６９０のモル吸光係数（ｍｏｌａｒ ｅｘｔｉｎｃｔｉｏ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ）および９５０００のモル吸光係数をそれぞれＬ鎖およびＨ鎖についての推定値として用いた。薬物リンカーのモル吸光係数（２８０ｎｍ）に関して、各薬物リンカーのメルカプトエタノールまたはＮ－アセチルシステインとの反応によってマレイミド基がスクシンイミドチオエーテルに転化された化合物の測定モル吸光係数（２８０ｎｍ）を用いた。
［Ｆ－３－３］以下の式に従って、ピーク面積の補正値の合計について、各鎖のピーク面積比（％）を算出する。
Figure 2022534725000014
［Ｆ－３－４］抗体薬物複合体において抗体分子１個当たりの複合化薬物分子の平均数は、以下の式に従って算出される。
複合化薬物分子の平均数＝（Ｌ０ピーク面積比×０＋Ｌ０ピーク面積比×１＋Ｈ０ピーク面積比×０＋Ｈ１ピーク面積比×１＋Ｈ２ピーク面積比×２＋Ｈ３ピーク面積比×３）／１００×２
生成方法１における式（２）によって表される化合物は、以下の式によって表される化合物である。
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－（ＣＨ２）ｎ３－Ｃ（＝Ｏ）－Ｌ２－ＬＰ－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ１－Ｌａ－（ＣＨ２）ｎ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）
式において、
ｎ３は、２～８の整数を表し、
Ｌ２は、－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ）ｎ４－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－または単結合を表し、式中、ｎ４は、１～６の整数を表し、
ＬＰは、フェニルアラニン、グリシン、バリン、リジン、シトルリン、セリン、グルタミン酸およびアスパラギン酸から選択される２～７個のアミノ酸からなるペプチド残基を表し、
ｎ１は、０～６の整数を表し、
ｎ２は、０～５の整数を表し、
Ｌａは、－Ｏ－または単結合を表し、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－は、以下の式によって表されるマレイミジル基（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル基）であり、
Figure 2022534725000015
（式中、窒素原子は、連結位置である）
－（ＮＨ－ＤＸ）は、以下の式によって表される基である。
Figure 2022534725000016
（式中、１位のアミノ基の窒素原子は、連結位置である）
Ｌ２が単結合または－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ）ｎ４－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－である場合、ｎ４が２～４の整数である化合物が生成中間体として好ましい。
ＬＰのペプチド残基に関して、フェニルアラニン、グリシン、バリン、リジン、シトルリン、セリン、グルタミン酸およびアスパラギン酸から選択されるアミノ酸を含むペプチド残基を有する化合物が生成中間体として好ましい。それらのペプチド残基の中で、ＬＰが４つのアミノ酸からなるペプチド残基である化合物が生成中間体として好ましい。より具体的に、ＬＰが－ＧＧＦＧ－のテトラペプチド残基である化合物が生成中間体として好ましい。
さらに、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ１－Ｌａ－（ＣＨ２）ｎ２－に関して、－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－、－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－、または－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－を有する化合物が生成中間体として好ましい。－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－、または－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２を有する化合物がより好ましい。
さらに、式（２）で表される化合物において、ｎ３が２～５の整数であり、Ｌ２が単結合であり、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ１－Ｌａ－（ＣＨ２）ｎ２－が－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－、－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－、または－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－である化合物が生成中間体として好ましい。－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ１－Ｌａ－（ＣＨ２）ｎ２－は－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－、－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－、または－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－である化合物がより好ましい。ｎ３が２または５の整数である化合物がさらに好ましい。
さらに、式（２）で表される化合物において、ｎ３が２～５の整数であり、Ｌ２が－ＮＨ－（ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ）ｎ４－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－であり、ｎ４が２～４の整数であり、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ１－Ｌａ－（ＣＨ２）ｎ２－は－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－、－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－、または－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－である化合物が生成中間体として好ましい。ｎ４が２または４の整数である化合物がより好ましい。－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ１－Ｌａ－（ＣＨ２）ｎ２－は－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－、または－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－である化合物がさらに好ましい。
本発明の化合物の生成において有用なそのような好ましい中間体として、以下のものを例示することができる。
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）
生成中間体化合物の上記群から選択される薬物－リンカー化合物を抗ＴＲＯＰ２抗体またはその反応性誘導体と反応させ、抗ＴＲＯＰ２抗体内に存在するジスルフィド結合部位でチオエーテル結合を形成することによって、本発明の抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体を生成することができる。この場合、抗ＴＲＯＰ２抗体の反応性誘導体が、好ましくは用いられる。特に、抗ＴＲＯＰ２抗体を還元することによって得られる反応性誘導体が好ましい。
以下のものが、生成中間体としてより好ましい化合物である。
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）
中間体化合物の上記群の中で、以下の式：
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）、または
（Ｍａｌｅｉｍｉｄ－Ｎ－ｙｌ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）で表される化合物が、さらに好ましい化合物である。
前記複合体の量を確保するために、同等の数（例えば、約±１）の薬物を有するように同様の生成条件下で得られた複数の複合体を混合して新しいロットを調製することができる。この場合、薬物の平均数は、前記混合前における前記複合体内の薬物の平均数の間にある。
生成方法２
前の生成方法で用いられる中間体として式（２）で表される化合物およびその薬理学的に許容し得る塩は、例えば、以下の方法によって生成され得る。
Figure 2022534725000017
前記式において、Ｌ１’は、マレイミジル基を表し、Ｐ１、Ｐ２およびＰ３は、各々保護基を表す。
化合物（６）は、カルボン酸（５）を活性エステル、混合酸無水物、酸ハロゲン化物または同種のものに誘導体化し、それを塩基の存在下でＮＨ２－ＤＸ（４）またはその薬理学的に許容し得る塩と反応させることによって生成され得る。ＮＨ２－ＤＸ（４）は、エキサテカン（化学名：（１Ｓ，９Ｓ）－１－アミノ－９－エチル－５－フルオロ－２，３－ジヒドロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１０，１３（９Ｈ，１５Ｈ）－ジオン）を表す。
ペプチド合成のために一般に用いられる反応試薬および反応条件を前記反応のために用いることができる。各種の活性エステルがある。例えば、それは、Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミドまたは１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩などの縮合剤を用いて、ｐ－ニトロフェノール、Ｎ－ヒドロキシベンゾトリアゾール、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドまたは同種のものなどのフェノールをカルボン酸（５）と反応させることによって生成され得る。さらに、前記活性エステルは、カルボン酸（５）とトリフルオロ酢酸ペンタフルオロフェニルまたは同種のものとの反応、カルボン酸（５）と１－ベンゾトリアゾリルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファイトとの反応、カルボン酸（５）とシアノホスホン酸ジエチルとの反応（塩入法方法）、カルボン酸（５）とトリフェニルホスフィンおよび２，２’－ジピリジルジスルフィドとの反応（Ｍｕｋａｉｙａｍａの方法）、カルボン酸（５）と４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（ＤＭＴＭＭ）などのトリアジン誘導体との反応または同種のものによっても生成され得る。さらに、前記反応は、例えば、カルボン酸（５）を塩基の存在下で塩化チオニルおよび塩化オキサリルなどの酸ハロゲン化物で処理する酸ハロゲン化物法によっても行われ得る。
上記のように得られたカルボン酸（５）の活性エステル、混合酸無水物または酸ハロゲン化物を－７８℃～１５０℃の反応温度で不活性溶媒中における適切な塩基の存在下で化合物（４）と反応させることによって、化合物（６）を生成することができる。一方、「不活性溶媒」は、溶媒が用いられる標的反応を阻害しない溶媒を示す。
上記の各ステップのために用いられる塩基の具体例としては、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、ナトリウムエトキシド、カリウムブトキシド、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水素化ナトリウムおよび水素化カリウムを含むアルカリ金属またはアルカリ土金属のカーボネート、アルコキシド、水酸化物または水素化物、ｎ－ブチルリチウムや、リチウムジイソプロピルアミドを含むジアルキルアミノリチウムを含むアルキルリチウムに代表される有機金属塩基、リチウムビス（トリメチルシリル）アミドを含むビスシリルアミンの有機金属塩基、ならびに第三アミンまたは窒素含有複素環化合物、例えば、ピリジン、２，６－ルチジン、コリジン、４－ジメチルアミノピリジン、トリエチルアミン、Ｎ－メチルモルホリン、ジイソプロピルエチルアミンおよびジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）を含む有機塩基を挙げることができる。
本発明の反応のために用いられる不活性溶媒の例としては、ジクロロメタン、クロロホルムおよび四塩化炭素などのハロゲン化炭化水素溶媒、テトラヒドロフラン、１，２－ジメトキシエタンおよびジオキサンなどのエーテル溶媒、ベンゼンおよびトルエンなどの芳香族炭化水素溶媒、ならびにＮ、Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ、Ｎ－ジメチルアセトアミドおよびＮ－メチルピロリジン－２－オンなどのアミド溶媒が挙げられる。それらの他に、場合によって、ジメチルスルホキシドおよびスルホランなどのスルホキシド溶媒、アセトンおよびメチルエチルケトンなどのケトン溶媒、ならびにメタノールおよびエタノールなどのアルコール溶媒を用いてもよい。さらに、これらの溶媒を使用のために混合してもよい。
化合物（６）の末端アミノ基のための保護基Ｐ１に関して、ペプチド合成のために概して用いられるアミノ基のための保護基、例えば、ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル基、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル基およびベンジルオキシカルボニル基を用いることができる。アミノ基のための他の保護基の例としては、アセチル基などのアルカノイル基、メトキシカルボニル基およびエトキシカルボニル基などのアルコキシカルボニル基、パラメトキシベンジルオキシカルボニル基およびパラ（またはオルト）ニトロベンジルオキシカルボニル基（ｐａｒａ （ｏｒ ｏｒｔｈｏ）ｎｉｔｒｏｙｂｅｎｚｙｌｏｘｙ ｃａｒｂｏｎｙｌ ｇｒｏｕｐ）などのアリールメトキシカルボニル基、ベンジル基およびトリフェニルメチル基などのアリールメチル基、ベンゾイル基などのアロイル基、ならびに２，４－ジニトロベンゼンスルホニル基およびオルトニトロベンゼンスルホニル基などのアリールスルホニル基を挙げることができる。保護基Ｐ１は、例えば、保護対象のアミノ基を有する化合物の特性に応じて選択され得る。
得られた化合物（６）の末端アミノ基のための保護基Ｐ１を脱保護することによって、化合物（７）を生成することができる。この脱保護のために、保護基に応じて試薬および条件を選択することができる。
Ｐ２で保護されたＮ末端を有するペプチドカルボン酸（８）を活性エステル、混合酸無水物または同種のものに誘導体化し、それを得られた化合物（７）と反応させることによって、化合物（９）を生成することができる。ペプチドカルボン酸（８）および化合物（７）の間のペプチド結合を形成するために用いられる反応条件、試薬、塩基および不活性溶媒を、化合物（６）の合成について記載されるものから適切に選択し、用いることができる。化合物（６）の保護基について記載されるものから保護基Ｐ２を適切に選択し、用いることが可能であり、例えば、保護対象のアミノ基を有する化合物の特性に基づいて前記選択を行うことが可能である。ペプチド合成で一般に用いられるように、伸長のためのペプチドカルボン酸（８）を構成するアミノ酸またはペプチドの反応および脱保護を連続して繰り返すことによって、化合物（９）を生成することもできる。
得られた化合物（９）のアミノ基のための保護基Ｐ２を脱保護することによって、化合物（１０）を生成することができる。この脱保護のために、保護基に応じて試薬および条件を選択することができる。
カルボン酸（１１）を活性エステル、混合酸無水物、酸ハロゲン化物または同種のものに誘導体化し、それを得られた化合物（１０）に反応させることによって、化合物（２）を生成することが可能である。カルボン酸（１１）および化合物（１０）の間のペプチド結合を形成するために用いられる反応条件、試薬、塩基および不活性溶媒を、化合物（６）の合成について記載されるものから適切に選択し、用いることができる。
例えば、以下の方法によって、化合物（９）を生成することもできる。
Ｐ２で保護されたＮ末端を有するペプチドカルボン酸（８）を活性エステル、混合酸無水物または同種のものに誘導体化し、それを、塩基の存在下で、Ｐ３で保護されたカルボキシ基を有するアミン化合物（１２）と反応させることによって、化合物（１３）を生成することができる。ペプチドカルボン酸（８）および化合物（１２）の間のペプチド結合を形成するために用いられる反応条件、試薬、塩基および不活性溶媒を、化合物（６）の合成について記載されるものから適切に選択し、用いることができる。
化合物（１３）のアミノ基のための保護基Ｐ２は、一般に用いられる保護基で保護されてもよい。
具体的に、ヒドロキシル基のための保護基の例としては、メトキシメチル基などのアルコキシメチル基、ベンジル基、４－メトキシベンジル基およびトリフェニルメチル基などのアリールメチル基、アセチル基などのアルカノイル基、ベンゾイル基などのアロイル基、およびｔｅｒｔ－ブチルジフェニルシリル基などのシリル基が挙げられる。カルボキシ基は、例えば、メチル基、エチル基およびｔｅｒｔ－ブチル基などのアルキル基、アリル基、またはベンジル基などのアリールメチル基を有するエステルとして保護され得る。アミノ基のための保護基の例としては、例えば、ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル基、メトキシカルボニル基およびエトキシカルボニル基などのアルキルオキシカルボニル基、アリルオキシカルボニル基、または９－フルオレニルメチルオキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基、パラメトキシベンジルオキシカルボニル基およびパラ（またはオルト）ニトロベンジルオキシカルボニル基などのアリールメトキシカルボニル基、アセチル基などのアルカノイル基、ベンジル基およびトリフェニルメチル基などのアリールメチル基、ベンゾイル基などのアロイル基、ならびに２，４－ジニトロベンゼンスルホニル基またはオルトニトロベンゼンスルホニル基などのアリールスルホニル基が挙げられる。
カルボキシ基のための保護基Ｐ３に関して、有機合成化学、特にペプチド合成においてカルボキシ基のための保護基として一般に用いられる保護基を用いることができる。具体例としては、メチル基、エチル基またはｔｅｒｔ－ブチルなどのアルキル基を有するエステル、アリルエステルおよびベンジルエステルが挙げられ、保護基は、上記の保護基から適切に選択され得る。そのような場合、アミノ基のための保護基と、カルボキシ基のための保護基とは、好ましくは異なる方法または異なる条件によって除去されるものであることができることが好ましい。例えば、代表例としては、Ｐ２がｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル基であり、Ｐ３がベンジル基である組み合わせが挙げられる。保護基は、例えば、保護対象のアミノ基およびカルボキシ基を有する化合物の特性に応じて、上述されたものから選択され得る。保護基の除去のために、試薬および条件は、保護基に応じて選択され得る。
得られた化合物（１３）のカルボキシ基のための保護基Ｐ３を脱保護することによって、化合物（１４）を生成することができる。この脱保護のために、試薬および条件は、保護基に応じて選択される。
得られた化合物（１４）を活性エステル、混合酸無水物、酸ハロゲン化物または同種のものに誘導体化し、塩基の存在下で化合物（４）と反応させることによって、化合物（９）を生成することができる。前記反応のために、ペプチド合成のために概して用いられる反応試薬および反応条件を用いることも可能であり、前記反応のために用いられる反応条件、試薬、塩基および不活性溶媒を、化合物（６）の合成について記載されるものから適切に選択することが可能である。
例えば、以下の方法によって、化合物（２）を生成することもできる。
化合物（１３）のアミノ基のための保護基Ｐ２を脱保護することによって、化合物（１５）を生成することができる。この脱保護のために、保護基に応じて試薬および条件を選択することができる。
カルボン酸誘導体（１１）を活性エステル、混合酸無水物、酸ハロゲン化物または同種のものに誘導体化し、それを、塩基の存在下で、得られた化合物（１５）と反応させることによって、化合物（１６）を生成することができる。ペプチドカルボン酸（１１）および化合物（１５）の間のアミド結合を形成するために用いられる反応条件、試薬、塩基および不活性溶媒を、化合物（６）の合成について記載されるものから適切に選択することができる。
得られた化合物（１６）のカルボキシ基のための保護基を脱保護することによって、化合物（１７）を生成することができる。この脱保護は、化合物（１４）を生成するためのカルボキシ基における脱保護と同様に実施され得る。
化合物（１７）を活性エステル、混合酸無水物、酸ハロゲン化物または同種のものに誘導体化し、それを塩基の存在下で化合物（４）と反応させることによって、化合物（２）を生成することができる。前記反応のために、ペプチド合成のために概して用いられる反応試薬および反応条件を用いることも可能であり、前記反応のために用いられる反応条件、試薬、塩基および不活性溶媒を、化合物（６）の合成について記載されるものから適切に選択することが可能である。
生成方法３
中間体の式（２）で表される化合物を、以下の方法によって生成することもできる。
Figure 2022534725000018
前記式において、Ｌ１’は、末端がマレイミジル基に転化され、Ｐ４が保護基を表す構造を有するＬ１に相当する。
化合物（１１）を活性エステル、混合酸無水物または同種のものに誘導体化し、それを、塩基の存在下で、Ｐ４で保護されたＣ末端を有するペプチドカルボン酸（１８）と反応させることによって、化合物（１９）を生成することができる。ペプチドカルボン酸（１８）および化合物（１１）の間のペプチド結合を形成するために用いられる反応条件、試薬、塩基および不活性溶媒を、化合物（６）の合成について記載されるものから適切に選択することができる。化合物（１８）のカルボキシ基のための保護基Ｐ４は、上記の保護基から適切に選択され得る。
得られた化合物（１９）のカルボキシ基のための保護基を脱保護することによって、化合物（２０）を生成することができる。この脱保護は、化合物（１４）を生成するためのカルボキシ基の脱保護と同様に実施され得る。
得られた化合物（２０）を活性エステル、混合酸無水物または同種のものに誘導体化し、それを化合物（７）と反応させることによって、化合物（２）を生成することができる。前記反応のために、ペプチド合成のために概して用いられる反応試薬および反応条件を用いることも可能であり、前記反応のために用いられる反応条件、試薬、塩基および不活性溶媒を、化合物（６）の合成のために記載されるものから適切に選択することが可能である。
生成方法４
以下、本明細書において、生成方法２に記載される生成中間体（１０）においてｎ１＝１、Ｌａ＝Ｏである化合物（１０ｂ）を生成するための方法を詳細に記載する。例えば、以下の方法に従って、式（１０ｂ）で表される化合物、その塩または溶媒和化合物を生成することができる。
Figure 2022534725000019
前記式において、ＬＰは、上記で定義される通りであり、Ｌは、アセチル基などのアルカノイル基もしくはベンゾイル基などのアロイ基（ａｌｌｏｙ ｇｒｏｕｐ）などのアシル基、水素原子または同種のものを表し、ＸおよびＹは、各々１～３個のアミノ酸からなるオリゴペプチドを表し、Ｐ５およびＰ７は、各々アミノ基のための保護基を表し、Ｐ６は、カルボキシ基のための保護基を表す。
特開２００２－６０３５１号または文献（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、第５１巻、３１９６ページ、１９８６年）に記載されている方法を用いるか、または適用し、必要に応じて保護基の除去または官能基の修飾を行うことによって、式（２１）で表される化合物を生成することができる。代替的に、保護された末端アミノ基でアミノ酸を処理することによって、またはアルデヒドもしくはケトンを有する保護されたアミノ基でオリゴペプチドの酸アミドを処理することによって、それを得ることもできる。
化合物（２１）を、酸または塩基の存在下で不活性溶媒中において冷却温度条件下から室温までの範囲の温度でヒドロキシル基を有する化合物（２２）と反応させることによって、化合物（２３）を生成することができる。
ここで使用され得る前記酸の例としては、フッ化水素酸、塩化水素、硫酸、硝酸、リン酸およびホウ酸などの無機酸、酢酸、クエン酸、パラトルエンスルホン酸およびメタンスルホン酸などの有機酸、ならびにテトラフルオロホウ酸塩、クロロ亜鉛、塩化スズ、塩化アルミニウムおよび塩化鉄などのルイス酸を挙げることができる。それらの中で、スルホン酸、特にパラトルエンスルホン酸が好ましい。塩基に関して、上述の塩基のいずれか１種を適切に選択し、用いることができる。それらの好ましい例としては、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシドなどのアルカリ金属アルコキシド、水酸化ナトリウムおよび水酸化カリウムなどのアルカリ金属水酸化物、水素化ナトリウムおよび水素化カリウムなどのアルカリ金属水素化物、リチウムジイソプロピルアミドなどのジアルキルアミノリチウムによって代表される有機金属塩基、およびリチウムビス（トリメチルシリル）アミドなどのビスシリルアミンの有機金属塩基が挙げられる。前記反応のために用いられる溶媒の例としては、テトラヒドロフランおよび１，４－ジオキサンなどのエーテル溶媒、ならびにベンゼンおよびトルエンなどの芳香族炭化水素溶媒が挙げられる。それらの溶媒を水との混合物として調製することができる。さらに、Ｐ５によって例示される通りのアミノ基のための保護基は、アミノ基の保護のために一般に用いられる基である場合、特に限定されるものではない。代表例としては、生成方法２に記載されるアミノ基のための保護基が挙げられる。しかし、本反応において、Ｐ５によって例示される通りのアミノ基のための保護基が開裂される場合がある可能性がある。そのような場合、保護基を再度導入することが必要になる可能性があるので、アミノ基を保護するための適切な試薬との反応を行うことが必要である。
化合物（２３）の保護基Ｐ６を除去することによって化合物（２４）を生成することができる。本明細書において、Ｐ６によって例示される通りのカルボキシ基のための保護基の代表例は生成方法２に記載されており、それらから適切なものを選択することができる。化合物（２３）において、アミノ基のための保護基Ｐ５およびカルボキシ基のための保護基Ｐ６は、異なる方法または異なる条件によって除去され得る保護基であることが望ましい。例えば、代表例としては、Ｐ５が９－フルオレニルメチルオキシカルボニル基であり、Ｐ６がベンジル基である組み合わせが挙げられる。例えば、保護対象のアミノ基およびカルボキシ基を有する化合物の特性に応じて、保護基を選択することができる。保護基の除去のために、試薬および条件は、保護基に応じて選択される。
カルボン酸（２４）を活性エステル、混合酸無水物、酸ハロゲン化物または同種のものに誘導体化し、それを化合物（４）またはその薬理学的に許容し得る塩と反応させて化合物（２５）を生成した後、得られた化合物（２５）の保護基Ｐ５を除去することによって、化合物（２６）を生成することができる。化合物（４）とカルボン酸（２４）との間の反応ならびに保護基Ｐ６を除去するための反応のために、生成方法２のために記載されるものと同じ試薬および反応条件を用いることができる。
化合物（２６）を、保護された末端アミノ基を有するアミノ酸または保護されたアミノ基を有するオリゴペプチド（２７）と反応させて化合物（９ｂ）を生成し、得られた化合物（９ｂ）の保護基Ｐ７を除去することによって、化合物（１０ｂ）を生成することができる。Ｐ７で表されるアミノ基のための保護基は、アミノ基の保護のために概して用いられる場合、特に限定されるものではない。その代表例としては、生成方法２に記載されているアミノ基のための保護基が挙げられる。保護基を除去するために、試薬および条件は、保護基に応じて選択される。化合物（２６）と化合物（２７）との間の反応のために、ペプチド合成のために一般に用いられる反応試薬および反応条件を用いることができる。上述の方法によって生成された化合物（１０ｂ）は、上記の方法に従って本発明の化合物（１）に誘導体化され得る。
本発明の抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体は、空気中に残っているか、または例えば精製のために再結晶化される場合、湿気を吸収して、吸着水を有するか、または水和物に変化する可能性があり、そのような化合物、および塩を含む水も、本発明に含まれる。
各種の放射性同位体または非放射性同位体で標識された化合物も本発明に含まれる。本発明の抗体薬物複合体を構成する１つまたは複数の原子は、非天然比で原子同位体を含んでもよい。原子同位体の例としては、ジウテリウム（２Ｈ）、トリチウム（３Ｈ）、ヨウ素１２５（１２５Ｉ）および炭素１４（１４Ｃ）が挙げられる。さらに、本発明の化合物は、トリチウム（３Ｈ）、ヨウ素１２５（１２５Ｉ）、炭素１４（１４Ｃ）、銅６４（６４Ｃｕ）、ジルコニウム８９（８９Ｚｒ）、ヨウ素１２４（１２４Ｉ）、フッ素１８（１８Ｆ）、インジウム１１１（１１１Ｉ）、炭素１１（１１Ｃ）およびヨウ素１３１（１３１Ｉ）などの放射性同位体で放射性標識されてもよい。放射性同位体で標識された化合物は、治療剤または予防剤、アッセイ試薬などの研究用試薬、およびインビボ診断用撮像剤などの診断用剤として有用である。放射活性に関連することなく、本発明の抗体薬物複合体のいずれの同位体異型も本発明の範囲内である。
抗体薬物複合体（ＡＤＣ）
本開示は、抗ＴＲＯＰ２抗体とトポイソメラーゼＩ阻害剤（ＤＸｄ）などの抗癌化合物とを含むＴＲＯＰ２標的抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を提供するものである。図１を参照のこと。いくつかの実施形態において、ＴＲＯＰ２標的ＡＤＣは、以下に示す通りの式１３を含んでもよい。
Figure 2022534725000020
いくつかの実施形態において、ＡＤＣの重鎖は、
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTTAGMQWVRQAPGQGLEWMGWINTHSGVPKYAEDFKGRVTISADTSTSTAYLQLSSLKSEDTAVYYCARSGFGSSYWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(配列番号45)
を含んでもよい。
いくつかの実施形態において、ＡＤＣの軽鎖は、
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAVYYCQQHYITPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(配列番号46)
を含んでもよい。
本発明の抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体は、癌細胞に対する細胞毒性活性を示し、したがって、薬物として、特に癌のための治療剤および／または予防剤として使用され得る。
すなわち、本発明の抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体は、癌を処置するための主要な方法である化学療法のための薬物として選択的に使用され得、その結果、癌細胞の発育を遅延させ、その増殖を阻害し、さらに癌細胞を死滅させることができる。このことによって、癌罹患体は、癌によって引き起こされる病徴がなくなるか、または癌罹患体のＱＯＬの改善を達成する可能性があり、癌罹患体の寿命を持続させることによって治療効果が達成される。本発明の抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体は、癌細胞の死滅を達成しない場合であっても、癌細胞の増殖を阻害するか、または制御することによって、癌罹患体のより長期の生存期間を達成すると共に、癌罹患体のより高いＱＯＬを達成する可能性がある。
そのような薬物治療において、それを、単独での薬物として、およびアジュバント治療における追加治療と併用した薬物として使用することが可能であり、外科的手術、放射線治療、ホルモン治療または同種のものと併用することが可能である。さらに、ネオアジュバント治療における薬物治療のための薬物として、それを使用することもできる。
上記の通りの治療用途の他に、微小転移癌細胞の増殖を抑制し、さらに、これらの癌細胞に結合することによってそれらを死滅させる効果も、抗原への抗体の結合特性によって期待することができる。特に、原発性癌細胞においてＴＲＯＰ２の発現が確認される場合、本発明の抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体を投与することによって、癌転移の阻害、または予防効果を期待することができる。例えば、転移の過程における体液中における癌細胞を阻害し、死滅させる効果、または、例えば、任意の組織内における埋入の直後に微小癌細胞を阻害し、死滅させる効果を期待することができる。さらに、特に癌の外科的切除の後、癌転移の阻害、または予防効果を期待することができる。したがって、癌転移を阻害する効果を期待することができる。
本発明の抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体は、罹患体への全身治療としての投与、および、付加的に、癌組織への局所投与によって治療効果を発揮することが期待され得る。
本発明の抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体が適用される癌型の例としては、肺癌、腎臓癌、尿路上皮癌、結腸直腸癌、前立腺癌、多形性神経膠芽細胞腫、卵巣癌、膵癌、乳癌、黒色腫、肝癌、膀胱癌、胃癌、子宮頸癌、頭頚部癌または食道癌が挙げられるが、処置対象としての癌細胞内において、抗体薬物複合体内の抗体が認識することができるタンパク質を発現する癌細胞である限り、それらに限定されるものではない。
本発明の抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体は、好ましくは哺乳動物に投与され得るが、より好ましくはヒトに投与される。
医薬組成物および投与様式
本発明の抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体を含む医薬組成物において用いられる物質は、用量または投与濃度に鑑みて、本技術分野において概して用いられる製剤添加剤または同種のものから適切に選択され、適用され得る。
本発明の抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体は、少なくとも１種の医薬的に適切な成分を含む医薬組成物として投与され得る。例えば、前記医薬組成物は、典型的には、少なくとも１種の医薬担体（例えば、滅菌された液体）を含む。いくつかの実施形態において、前記液体は、例えば、水および油（石油、および動物由来、植物由来または合成由来の油）を含む。前記油は、例えば、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油またはゴマ油であってもよい。前記医薬組成物を静脈内投与する場合、水は、より典型的な担体である。特に注射溶液のための液体担体として、食塩溶液、水性デキストロース溶液および水性グリセロール溶液を用いることもできる。適切な医薬的ビヒクルは、本技術分野で知られている。所望により、上記の組成物は、極微量の保湿剤、乳化剤またはｐＨ緩衝剤を含んでもよい。適切な医薬担体の例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に開示されている。製剤は、投与様式に対応する。
各種剤形のための薬理学的に許容し得る担体は、本技術分野において知られている。例えば、固体調製物のための賦形剤、滑沢剤、結合剤および崩壊剤は知られており、液体調製物のための溶媒、可溶化剤、懸濁化剤、等張剤、緩衝液および無痛化剤は知られている。いくつかの実施形態において、前記医薬組成物は、１種または複数種の保存剤、抗酸化剤、安定化剤および同種のものなどの１種または複数種の追加的成分を含む。
付加的に、開示された医薬組成物は、高薬物濃度に適切な溶液、マイクロエマルション、リポソームまたは他の規則構造として製剤化され得る。前記担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールおよび同種のもの）およびそれらの適切な混合物を含む溶媒または分散媒であることができる。例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散の場合は必要粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、適切な流動性を維持することができる。いくつかの実施形態において、前記組成物中において、等張剤、例えば、糖、多価アルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウムを含むことが好ましい。吸収を遅延させる剤、例えば、モノステアレート塩およびゼラチンを前記組成物中に含むことによって、前記注射用組成物の持続的吸収を生じさせることができる。
必要に応じて、上記で列挙された成分の１種または組み合わせを有する適切な溶媒中に必要量の活性化合物を組み込んだ後、滅菌微量濾過を行うことによって、滅菌注射用溶液を調製することができる。概して、塩基性分散媒と、上記で列挙されるものからの必要な他の成分とを含む滅菌ビヒクルに活性化合物を組み込むことによって、分散物を調製する。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌粉剤の場合、好ましい調製方法は、活性成分と事前に滅菌濾過されたその溶液からの任意の追加的な所望の成分との粉剤が得られる真空乾燥および凍結－乾燥（凍結乾燥）である。
各種送達系が知られており、本発明の抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体を投与するために使用され得る。投与経路の例としては、皮内経路、筋肉内経路、腹腔内経路、静脈内経路および皮下経路が挙げられるが、それらに限定されるものではない。前記投与は、例えば、注射またはボーラス注射によりなされ得る。具体的な好ましい実施形態によれば、抗体薬物複合体の投与は、注射によって行われる。非経口投与が好ましい投与経路である。
代表的な実施形態によれば、医薬組成物は、従来の手法に従って、ヒトへの静脈内投与のために適切な医薬組成物として規定される。静脈内投与のための組成物は、典型的には、滅菌および等張水性緩衝液中における溶液である。必要に応じて、前記薬物は、可溶化剤と、注射部位における疼痛を緩和するための局所麻酔剤（例えば、リグノカイン）とを含んでもよい。概して、上記の成分は、ある量の活性剤を有するアンプルまたはサシェ内における封止によって得られる容器内に含まれる凍結乾燥粉末もしくは無水濃縮物のいずれか１種として、または単位剤形の混合物として、個別に提供される。前記薬物は、注射による投与の形態である場合、滅菌医薬グレードの水または食塩水を含む注射瓶から投与されてもよい。前記薬物を注射によって投与する場合、投与前に上述の成分が互いに混合されるように、注射のための滅菌水または滅菌食塩水のアンプルを提供してもよい。
本発明の医薬組成物は、本出願の抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体のみを含む医薬組成物、または抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体と前記複合体以外の少なくとも１種の癌処置剤とを含む医薬組成物であってもよい。本発明の抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体を、他の癌処置剤と共に、同時に、または連続的に、個体に投与することができる。それに応じて抗癌効果を増強させることができる。そのような目的のために用いられる別の抗癌剤を、前記抗体薬物複合体と同時に、前記抗体薬物複合体と別々に、または前記抗体薬物複合体に続いて投与してもよく、各々についての投与間隔を変化させつつ投与してもよい。癌処置剤の例としては、アブラキサン、パクリタキセル、シスプラチン、ゲムシタビン、イリノテカン（ＣＰＴ－１１）、パクリタキセル、ペメトレキセド、ソラフェニブ、ビノレルビン、国際公開第２００３／０３８０４３号に記載されている薬物、ＬＨ－ＲＨ類似体（リュープリン、ゴセレリンまたは同種のもの）、リン酸エストラムスチン、エストロゲンアンタゴニスト（タモキシフェン、ラロキシフェンまたは同種のもの）およびアロマターゼ阻害剤（アナストロゾール、レトロゾール、エクセメスタンまたは同種のもの）が挙げられるが、それは、抗腫瘍活性を有する薬物である限り、限定されるものではない。
前記医薬組成物は、所望の組成物と必要な純度とを有する製剤としての凍結乾燥製剤または液体製剤に製剤化され得る。それは、凍結乾燥製剤として製剤化される場合、本技術分野において用いられる適切な製剤添加剤を含む製剤であってもよい。液体製剤についても、それは、本技術分野において用いられる各種製剤添加剤を含む液体製剤として製剤化され得る。
前記医薬組成物の組成および濃度は、投与方法に応じて変化してもよい。しかし、本発明の医薬組成物に含まれる抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体は、前記抗体薬物複合体が、抗原に対するより高い親和性、すなわち、抗原に対する解離定数（すなわち、Ｋｄ値）に関してより高い親和性（＝より低いＫｄ値）を有する場合、少ない用量でも医薬効果事象を示すことができる。したがって、抗体薬物複合体の用量を決定するために、前記抗体薬物複合体および抗原の間の親和性に関する状況に鑑みて前記用量を決定することができる。本発明の抗体薬物複合体をヒトに投与する場合、例えば、約０．００１～１００ｍｇ／ｋｇを１回投与することができるか、または、１回の間隔が１～１８０日間で数回投与することができる。
ＴＲＯＰ２発現癌
ＴＲＯＰ２は上皮癌において高発現し、その発現は低生存率に関連する。ＴＲＯＰ２発現癌の例としては、肺癌、腎臓癌、尿路上皮癌、結腸直腸癌、前立腺癌、多形性神経膠芽細胞腫、卵巣癌、膵癌、乳癌、黒色腫、肝癌、膀胱癌、胃癌、子宮頸癌、頭頚部癌および食道癌が挙げられるが、それらに限定されるものではない。これらの癌の内のいずれかは、開示されたＡＤＣおよびＡＤＣの用法用量によって処置されてもよい。しかし、癌細胞は、ＴＲＯＰ２を発現する限り、癌の上記の列挙されたカテゴリに入らない場合であっても、開示された方法に従って処置されてもよいことを理解すべきである。
非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）は、開示されたＡＤＣおよび用法用量を利用する処置のために特に適切である肺癌の型である。例えば、実施例５～７では、開示されたＡＤＣをＮＳＣＬＣの対象に投与する第１相臨床試験が詳述される。
上記のＴＲＯＰ２発現癌の内のいずれかを処置するために、開示されたＴＲＯＰ２標的ＡＤＣを使用することができる。
処置方法および使用
本開示は、本明細書において開示される通りの抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体を投与することを含む癌の処置方法を提供する。癌の処置における使用のための開示された抗ＴＲＯＰ ＡＤＣのいずれかも、本明細書において提供される。
いくつかの実施形態において、前記癌は、ＴＲＯＰ２発現癌である。ＴＲＯＰ２発現癌としては、肺癌（例えば、非小細胞肺癌またはＮＳＣＬＣ）、腎臓癌、尿路上皮癌、結腸直腸癌、前立腺癌、多形性神経膠芽細胞腫、卵巣癌、膵癌、乳癌、黒色腫、肝癌、膀胱癌、胃癌、子宮頸癌、頭頚部癌および食道癌を挙げることができるが、それらに限定されるものではない。
本開示の目的のために、「ＴＲＯＰ２過剰発現癌」という用語は、当業者によってＴＲＯＰ２過剰発現癌であると認識される限り、特に限定されるものではない。ＴＲＯＰ２過剰発現癌の好ましい例としては、免疫組織化学法（ＩＨＣ）またはインサイチュハイブリダイゼーション法（ＩＳＨ）においてＴＲＯＰ２の発現について高いスコアが付けられた癌を挙げることができる。本発明のインサイチュハイブリダイゼーション法としては、蛍光インサイチュハイブリダイゼーション法（ＦＩＳＨ）および二色インサイチュハイブリダイゼーション法（ＤＩＳＨ）が挙げられる。
免疫組織化学法によってＴＲＯＰ２発現の程度のスコア付けを行うための方法、またはインサイチュハイブリダイゼーション法によってＴＲＯＰ２発現に対する陽性または陰性を決定する方法は、当業者によって認識される限り、特に限定されるものではない。
ＡＤＣならびに本発明の処置方法および使用は、好ましくは手術不能癌または再発癌の処置のために用いられ得る。
いくつかの実施形態において、ＡＤＣならびに本発明の処置方法および使用は、活性成分としての、本発明において用いられる抗体薬物複合体、その塩、またはその水和物と、医薬的に許容し得る製剤成分とを含む、癌の処置のための医薬組成物としても用いられ得る。
いくつかの実施形態において、ＡＤＣならびに本発明の処置方法および使用は、既存の抗癌薬に対する耐性を示す癌（すなわち、耐性癌）、特に、既存の抗癌薬に対する耐性を獲得した癌（すなわち、続発性耐性癌）に対する優れた抗腫瘍活性を示す。したがって、本発明の処置のためのＡＤＣは、癌罹患体の中で、既存の抗癌薬に対する耐性を有する癌の罹患体群（既存の抗癌薬による処置の既往歴を有する罹患体）に適用される場合、著しい抗腫瘍効果を発揮する。特に、処置対象の癌は、ＥＧＦＲ阻害剤処置（すなわち、ゲフィチニブ、エルロチニブ、オシメルチニブ、アファチニブ）、ＡＬＫ阻害剤処置（すなわち、アレクチニブ、クリゾチニブ、セリチニブ）、白金系化学療法（すなわち、シスプラチン、カルボプラチン）および／またはチェックポイント阻害剤処置（すなわち、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、イピリムマブ、デュルバルマブ、チスレリズマブ、シンチリマブ、セミプリマブ）による処置に対して耐性または不応性があってもよい。
本発明の処置のためのＡＤＣは、既存の抗癌薬の代わりに、またはこれらの既存の抗癌薬と併用して癌罹患体に投与されることによって、例えば、これらの既存の抗癌薬に対する耐性を獲得した癌に対して高い治療効果を示すことができる。
したがって、開示された方法および使用のいくつかの実施形態において、処置対象の癌は、肺癌（例えば、非小細胞肺癌またはＮＳＣＬＣ）、腎臓癌、尿路上皮癌、結腸直腸癌、前立腺癌、多形性神経膠芽細胞腫、卵巣癌、膵癌、乳癌、黒色腫、肝癌、膀胱癌、胃癌、子宮頸癌、頭頚部癌および食道癌の耐性形態であってもよい。
ＡＤＣ、および本発明の処置のための方法または使用は、癌細胞の発育を遅延させること、その増殖を阻害すること、および、さらに癌細胞を死滅させることが可能である。これらの効果によって、癌罹患体は、癌によって引き起こされる病徴がなくなるか、または癌罹患体の生活の質（ＱＯＬ）の改善を達成する可能性があり、癌罹患体の寿命を持続させることによって治療効果が達成される。本発明の抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体は、癌細胞の死滅を達成しない場合であっても、癌細胞の増殖を阻害するか、または制御することによって、より長期の生存期間を達成すると共に、癌罹患体のより高いＱＯＬを提供する可能性がある。
開示された方法および使用のいくつかの実施形態において、ＡＤＣを、単独での薬物として使用することが可能であるか、またはアジュバント治療における追加治療と併用した薬物として使用することが可能であり、外科的手術、放射線治療、ホルモン治療または同種のものと併用することが可能である。さらに、ネオアジュバント治療における薬物治療のための薬物として、それを使用することもできる。いくつかの実施形態において、ＡＤＣは、例えば、アブラキサン、パクリタキセル、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、イリノテカン（ＣＰＴ－１１）、ペメトレキセド、ソラフェニブ、ビノレルビン、国際公開第２００３／０３８０４３号に記載されている薬物、ＬＨ－ＲＨ類似体（リュープリン、ゴセレリンまたは同種のもの）、リン酸エストラムスチン、エストロゲンアンタゴニスト（タモキシフェン、ラロキシフェンまたは同種のもの）、アロマターゼ阻害剤（アナストロゾール、レトロゾール、エクセメスタンまたは同種のもの）、ＥＧＦＲ阻害剤処置（ゲフィチニブ、エルロチニブ、オシメルチニブ、アファチニブ）、ＡＬＫ阻害剤処置（アレクチニブ、クリゾチニブ、セリチニブ）および／またはチェックポイント阻害剤処置（ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、イピリムマブ、デュルバルマブ、チスレリズマブ、シンチリマブ、セミプリマブ）が挙げられるが、それらに限定されるものではない抗癌剤と併用されてもよい。
上記の治療方法および使用の他に、小転移癌細胞の増殖を抑制し、さらにそれらを死滅させる予防効果を期待することもできる。特に、原発性癌細胞においてＴＲＯＰ２の発現が確認される場合、本発明の抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体を投与することによって、癌転移の阻害、または予防効果を期待することができる。例えば、転移の過程における体液中における癌細胞を阻害し、死滅させる効果、または、例えば、任意の組織内における埋入の直後に小癌細胞を阻害し、死滅させる効果を期待することができる。したがって、特に癌の外科的除去の後、癌転移の阻害、または予防的効果を期待することができる。
前記方法および前記使用のいくつかの実施形態において、癌（例えば、ＴＲＯＰ２発現癌）の対象に、約０．１～約１５ｍｇ／ｋｇ、約０．５～約１２ｍｇ／ｋｇ、約１．０～約１０ｍｇ／ｋｇ、または約４～約８ｍｇ／ｋｇ投与されてもよい。すなわち、いくつかの実施形態において、前記対象に投与される前記ＡＤＣの投与量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ以上、約０．２ｍｇ／ｋｇ以上、約０．３ｍｇ／ｋｇ以上、約０．４ｍｇ／ｋｇ以上、約０．５ｍｇ／ｋｇ以上、約０．６ｍｇ／ｋｇ以上、約０．７ｍｇ／ｋｇ以上、約０．８ｍｇ／ｋｇ以上、約０．９ｍｇ／ｋｇ以上、約１．０ｍｇ／ｋｇ以上、約１．２５ｍｇ／ｋｇ以上、約１．５ｍｇ／ｋｇ以上、約１．７５ｍｇ／ｋｇ以上、約２．０ｍｇ／ｋｇ以上、約２．２５ｍｇ／ｋｇ以上、約２．５ｍｇ／ｋｇ以上、約２．７５ｍｇ／ｋｇ以上、約３．０ｍｇ／ｋｇ以上、約３．２５ｍｇ／ｋｇ以上、約３．５ｍｇ／ｋｇ以上、約３．７５ｍｇ／ｋｇ以上、約４．０ｍｇ／ｋｇ以上、約４．２５ｍｇ／ｋｇ以上、約４．５ｍｇ／ｋｇ以上、約４．７５ｍｇ／ｋｇ以上、約５．０ｍｇ／ｋｇ以上、約５．２５ｍｇ／ｋｇ以上、約５．５ｍｇ／ｋｇ以上、約５．７５ｍｇ／ｋｇ以上、約６．０ｍｇ／ｋｇ以上、約６．２５ｍｇ／ｋｇ以上、約６．５ｍｇ／ｋｇ以上、約６．７５ｍｇ／ｋｇ以上、約７．０ｍｇ／ｋｇ以上、約７．２５ｍｇ／ｋｇ以上、約７．５ｍｇ／ｋｇ以上、約７．７５ｍｇ／ｋｇ以上、約８．０ｍｇ／ｋｇ以上、約８．２５ｍｇ／ｋｇ以上、約８．５ｍｇ／ｋｇ以上、約８．７５ｍｇ／ｋｇ以上、約９．０ｍｇ／ｋｇ以上、約９．２５ｍｇ／ｋｇ以上、約９．５ｍｇ／ｋｇ以上、約９．７５ｍｇ／ｋｇ以上、約１０．０ｍｇ／ｋｇ以上、約１０．２５ｍｇ／ｋｇ以上、約１０．５ｍｇ／ｋｇ以上、約１０．７５ｍｇ／ｋｇ以上、約１１．０ｍｇ／ｋｇ以上、約１１．２５ｍｇ／ｋｇ以上、約１１．５ｍｇ／ｋｇ以上、約１１．７５ｍｇ／ｋｇ以上、または約１２ｍｇ／ｋｇ以上であってもよい。いくつかの実施形態において、前記対象に投与される前記ＡＤＣの前記投与量は、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．２５、１．５、１．７５、２．０、２．２５、２．５、２．７５、３．０、３．２５、３．５、３．７５、４．０、４．２５、４．５、４．７５、５．０、５．２５、５．５、５．７５、６．０、６．２５、６．５、６．７５、７．０、７．２５、７．５、７．７５、８．０、８．２５、８．５、８．７５、９．０、９．２５、９．５、９．７５、１０．０、１０．２５、１０．５、１０．７５、１１．０、１１．２５、１１．５、１１．７５、または１２ｍｇ／ｋｇ以上であってもよい。いくつかの実施形態において、前記投与量は、約２ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ～約８ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ～約８ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、または約６ｍｇ／ｋｇ～約８ｍｇ／ｋｇであってもよい。好ましい実施形態において、前記投与量は、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇであってよいが、より好ましくは、４ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、または８ｍｇ／ｋｇであってもよい。
前記方法および前記使用のいくつかの実施形態において、抗ＴＲＯＰ２ ＡＤＣまたはその医薬組成物は、非経口投与を介して癌の対象に投与される。投与の好ましい非経口経路としては、静脈内注射、筋肉内注射および皮下注射などの注射が挙げられるが、それらに限定されるものではない。本発明において用いられる抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体は、罹患体への全身治療としての適用によって、および、付加的に、癌組織への局所適用によって、治療効果を発揮することが期待され得る。
投与のタイミングまたは用法は、１週間毎に１回（ｑ１ｗ）、２週間毎に１回（ｑ２ｗ）、３週間毎に１回（ｑ３ｗ）、４週間毎に１回（ｑ４ｗ）、５週間毎に１回（ｑ５ｗ）、６週間毎に１回（ｑ６ｗ）、７週間毎に１回（ｑ７ｗ）、８週間毎に１回（ｑ８ｗ）、９週間毎に１回（ｑ９ｗ）または１０週間毎に１回（ｑ１０ｗ）であってもよいが、好ましくは３週間毎または４週間毎に１回である。
用法用量は、最適な所望の応答（例えば、腫瘍退縮または腫瘍寛解などの治療応答）を提供するように調整されてもよい。例えば、いくつかの実施形態において、用法用量は、３週間毎に１回（ｑ３ｗ）２ｍｇ／ｋｇ、３週間毎に１回（ｑ３ｗ）４ｍｇ／ｋｇ、３週間毎に１回（ｑ３ｗ）６ｍｇ／ｋｇ、３週間毎に１回（ｑ３ｗ）８ｍｇ／ｋｇ、４週間毎に１回（ｑ４ｗ）２ｍｇ／ｋｇ、４週間毎に１回（ｑ４ｗ）４ｍｇ／ｋｇ、４週間毎に１回（ｑ４ｗ）６ｍｇ／ｋｇ、または４週間毎に１回（ｑ４ｗ）８ｍｇ／ｋｇであってもよい。そして、いくつかの実施形態において、単回ボーラスを投与してもよく、一方で、いくつかの実施形態において、いくつかの分割投与量を経時的に投与してもよく、または、状況によって示されるように投与量を比例的に減少または増加させてもよい。
さらに、前記方法および前記使用の対象は、概して癌罹患体であるが、前記罹患体の年齢は限定されない。開示された前記方法および前記使用は、全ての年齢群および年齢コホートにわたる様々な再発転帰および予後転帰を伴う癌、悪性疾患または癌細胞増殖を処置するために有用である。したがって、いくつかの実施形態において、前記対象は小児対象であってもよいが、他の実施形態において、前記対象は成体対象であってもよい。
本発明を例示するために、以下の実施例を示す。しかし、本発明は、これらの実施例に記載される具体的な条件または詳細に限定されるものではないことを理解すべきである。
［実施例］
抗体薬物複合体の生成
国際公開第２０１５／０９８０９９号および国際公開第２０１７／００２７７６号に開示されている生成方法に従って、抗ＴＲＯＰ２抗体（例えば、配列番号４５におけるアミノ酸位置１～４５１におけるアミノ酸配列からなる重鎖と、配列番号４６におけるアミノ酸位置１～２１４におけるアミノ酸配列からなる軽鎖とを含む抗体）を用いて、
前記抗ＴＲＯＰ２抗体が、チオエーテル結合を介して、以下の式：
Figure 2022534725000021
（式中、ｎは、単一抗体分子１個当たりの平均薬物－抗体比（ＤＡＲ）を表し、前記抗体薬物複合体（１）のｎの値は、３．５～４．５の範囲内にあり、前記抗体薬物複合体（２）のｎの値は、６．５～８．０の範囲内にある）で表される薬物リンカーに結合する、抗体薬物複合体（１）および抗体薬物複合体（２）（以下、「抗体薬物複合体（１）」および「抗体薬物複合体（２）」と称する）を生成した。
抗体薬物複合体（１）および抗体薬物複合体（２）の概略の構造および配列は、図１および図２において認められる。
抗体薬物複合体の抗腫瘍効果についての試験
この実験の目的のために、５～６週齢の雌性ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｊａｐａｎ）に実験を行った。ＡＴＣＣから購入されたヒト膵臓腺癌細胞系（ＣＦＰＡＣ－１細胞）を食塩水中に懸濁し、４×１０６個の細胞を前記雌性ヌードマウスの各々の体の右側部分に移植した。移植の１４日後、前記マウスを組分けた（Ｄａｙ０）。単回投与群（３週間毎に１回）において、抗体薬物複合体（１）および（２）を、Ｄａｙ０に０．３ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した。頻回投与群（１週間につき１回を３週間）において、抗体薬物複合体（１）および（２）を、Ｄａｙ０、Ｄａｙ８およびＤａｙ１４に０．３ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した。ビヒクル投与群を対照群として決定した。Ｄａｙ２２における腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）を算出によって得た。投与群のいずれにおいても、体重減少などの特に顕著な所見は確認されなかった。
測定／計算式：電子デジタルノギス（ＣＤ－１５ＣＸ、株式会社ミツトヨ）によって１週間につき２回腫瘍の長軸および短軸を測定し、腫瘍容積（ｍｍ３）を算出した。計算式は、以下に示される通りである。
腫瘍容積（ｍｍ３）＝１／２×長軸（ｍｍ）×［短軸（ｍｍ）］２
以下の計算式に従って腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）を算出した。
腫瘍増殖阻害（％）＝１００×（１－Ｔ／Ｃ）
（式中、Ｔは、試験物質投与マウス群の平均腫瘍容積を表し、Ｃは、対照マウス群の平均腫瘍容積を表す）。
抗体薬物複合体（１）および（２）を酢酸緩衝食塩水（ｐＨ５．５）（ナカライテスク株式会社製、以下、「ＡＢＳ緩衝液」と称する）で各々希釈した。尾静脈を介して希釈溶液（１０ｍＬ／ｋｇ）を投与した。
抗体薬物複合体（１）および（２）の抗腫瘍効果は、図３に示される。抗体薬物複合体（１）において、０．３ｍｇ／ｋｇの投与量の単回投与群のＴＧＩは１５％であり、１ｍｇ／ｋｇの投与量の単回投与群のＴＧＩは８６％であったが、投与量（０．３ｍｇ／ｋｇ）の頻回投与群のＴＧＩは３４％であった。抗体薬物複合体（２）において、０．３ｍｇ／ｋｇの投与量の単回投与群のＴＧＩは４３％であり、１ｍｇ／ｋｇの投与量の単回投与群のＴＧＩは９４％であったが、投与量（０．３ｍｇ／ｋｇ）の頻回投与群のＴＧＩは８０％であった。
上記の結果から、抗体薬物複合体（１）および（２）の両方の場合において、１ｍｇ／ｋｇの投与量の単回投与群を０．３ｍｇ／ｋｇの投与量の頻回投与群と比較する場合、両方とも合計でほとんど同等の投与量が提供されるが、単回投与群のＴＧＩは、頻回投与群より高かった。このことから、３週間で１回だけ総投与量を投与する単回投与方法は、１週間で３回前記投与量の投与を反復する頻回投与方法より優れた有効性を有することが示された。抗体薬物複合体（１）および（２）の間の比較において、１ｍｇ／ｋｇの投与量の抗体薬物複合体（１）の単回投与群のＴＧＩは、０．３ｍｇ／ｋｇの投与量の抗体薬物複合体（２）の単回投与群のＴＧＩより高く、１ｍｇ／ｋｇの投与量の抗体薬物複合体（２）の単回投与群のＴＧＩより低い。このことから、抗体薬物複合体（１）および（２）の間の治療量の差が３倍の範囲内にあることが示された。
抗体薬物複合体の安全性評価
実施例１に従って生成された抗体薬物複合体（１）および（２）を別々に交差反応種（カニクイザル）に投与した。さらに具体的には、抗体薬物複合体（１）については、３週間毎に１回の間隔で合計３回投与したが、抗体薬物複合体（２）については、１週間に１回の間隔で合計２回投与した。抗体薬物複合体（１）の場合、最終投与の翌日まで観察を継続した。抗体薬物複合体（２）の場合、最終投与の翌週まで観察を継続した。その結果、抗体薬物複合体（２）の重篤な毒性が発現しない最大投与量（ＨＮＳＴＤ）は１０ｍｇ／ｋｇ未満であったが、抗体薬物複合体（１）のＨＮＳＴＤは３０ｍｇ／ｋｇであった。したがって、抗体薬物複合体（１）は、抗体薬物複合体（２）より良好な安全性を有することが示された。
ヒトにおける抗体薬物複合体（１）の有効用量／投与量の推定
以下、「抗体薬物複合体（１）」は、「ＤＳ－１０６２ａ」と称されてもよい。
抗体薬物複合体（１）（すなわち、ＤＳ－１０６２ａ）を、カニクイザルに、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇまたは６ｍｇ／ｋｇの投与量で１回静脈内投与した。その後、抗体薬物複合体（１）の血漿中濃度に基づいて、標的媒介薬物動態モデルを用いて薬物動態パラメータを算出した。さらに、ヒトへの反復投与の間の経時的な抗体薬物複合体の血漿中濃度の変化を推定した。抗体薬物複合体（１）を、３週間毎に１回で３回（ｑ３ｗ×３）、０．２７ｍｇ／ｋｇ、０．５４ｍｇ／ｋｇ、０．８１ｍｇ／ｋｇ、１．６ｍｇ／ｋｇ、３．２ｍｇ／ｋｇおよび６．４ｍｇ／ｋｇからなる投与サイクルを反復することによって投与した。結果を図４に示す。ヒトにおいて推定された抗体薬物複合体（１）の経時的な血漿中濃度の変化をＣＦＰＡＣ－１担腫瘍マウスモデルにおけるＤａｙ２１の血漿中濃度と比較した。その結果、３週間毎に１回（ｑ３ｗ）におけるヒトへの投与時に推定された血漿中濃度が、投与間隔の半分およびほとんどの部分において、マウスにおいて腫瘍退縮効果を示す最小濃度（１ｍｇ／ｋｇ投与群、０．３１２μｇ／ｍＬ）を超える投与量は、それぞれ、０．２７ｍｇ／ｋｇおよび０．８１ｍｇ／ｋｇであった。このことから、ヒトにおける抗体薬物複合体（１）の有効用量／投与量は、３週間毎に１回で、０．２７ｍｇ／ｋｇ以上であることが推定された。
初期の第１相臨床試験
序文
ＤＳ－１０６２ａは、新規なトポイソメラーゼＩ阻害剤（エキサテカン誘導体；ＤＸｄ）を有する栄養膜細胞表面抗原２（ＴＲＯＰ２）－標的抗体薬物複合体である。ＤＳ－１０６２ａは、細胞表面上のＴＲＯＰ２に結合し、トポイソメラーゼＩを阻害し、標的細胞のアポトーシスをもたらす酵素処理の後、細胞質内にＤＸｄを内在化させ、放出する。
ＴＲＯＰ２は、肺癌を含む上皮癌において高発現し、低生存率に関連する。前臨床試験において、ＤＳ－１０６２ａは、異種移植マウスモデルにおいて有望な抗腫瘍活性を示した。
目的
本試験の目的は、ＤＳ－１０６２ａの安全性および忍容性を評価し、最大耐用量（ＭＴＤ）および展開用量パートにおける推奨用量（ＲＤＥ）を決定することであった（ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ識別子ＮＣＴ０３４０１３８５参照）。
試験デザインおよび方法
第１相試験は、米国および日本における対象を組み入れたＤＳ－１０６２ａの多施設共同、非盲検、反復投与、ｆｉｒｓｔ ｉｎ ｈｕｍａｎ試験であった。前記試験は、図５に示すように、用量漸増群および用量拡大群を含んだ。用量漸増群は、ＤＳ－１０６２ａの単回静脈内注入および２１日間の用量制限毒性（ＤＬＴ）観察期間（サイクル１）を含んだ。用量拡大群は、ＲＤＥにおけるＤＳ－１０６２ａの投与量をＮＳＣＬＣ対象に投与することを含んだ。
用量漸増群の主要目的（ｐｒｉｍａｒｙ ｏｂｊｅｃｔｉｏｎ）は、ＲＤＥのためのＭＴＤを同定し、前記用量の安全性および忍容性を評価することであった。
用量拡大群のための主要目的は、ＲＤＥにおけるＤＳ－１０６２ａの安全性および忍容性を確認することであった。
副次目的は、ＤＳ－１０６２ａの薬物動態学的（ＰＫ）特性、総ＴＲＯＰ２抗体、薬物成分、およびＤＳ１０６２ａの抗腫瘍活性を測定することを含んだ。探索的目的は、ＤＳ－１０６２ａに対する応答と相関するバイオマーカーを評価することを含んだ。
組み入れ基準は、標準処置の選択肢のない病理学的に確定された転移性ＮＳＣＬＣの２０歳以上（日本）または１８歳以上（米国）の年齢の罹患体、米東部腫瘍共同研究グループパフォーマンスステータス０または１、ＲＥＣＩＳＴバージョン１．１に基づいた測定可能な疾患、３ヵ月以上の余命、および免疫組織化学による最近のＴＲＯＰ２レベルの測定のための入手可能な腫瘍組織を含んだ。
除外基準は、複数の原発性悪性腫瘍（適切に切除された非黒色腫皮膚癌、治癒的に処置されたインサイチュ疾患、または３年以上の疾患のエビデンスなしで治癒的に処置された他の固形腫瘍を除く）または臨床的に重要な／疑わしい肺疾患の罹患体を含んだ。
罹患体評価は、事前に指定された来院時における心エコーまたはＭＵＧＡスキャン、１２誘導心電図、ＡＥ、ＰＫ、ヒト抗ヒト抗体、バイオマーカーおよび腫瘍評価を含んだ。この初期の第１相試験に組み入れられた罹患体の人口統計学的特性およびベースライン時の特性は、図６に示される。
ＭＴＤを決定するためのＤＳ－１０６２ａの用量漸増は、ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｏｖｅｒｄｏｓｅ ｃｏｎｔｒｏｌの原則に従うベイズ流ロジスティック回帰モデルを用いた、改変された連続再評価法によって導かれた。客観的奏効率（ＯＲＲ）は、クロッパー－ピアソン法を用いて９５％信頼区間（ＣＩ）によってまとめられ、無増悪生存期間（ＰＦＳ）／全生存率（ＯＳ）は、カプラン－マイヤー法を用いてまとめられた。安全性評価項目、ＤＳ－１０６２ａのＰＫパラメータ、抗ＴＲＯＰ２抗体、ＤＸｄおよび血漿抗薬物抗体は、記述統計を用いてまとめられた。
結果
３９人の罹患体を、７つのＤＳ－１０６２ａ投与群、ならびに罹患体の人口統計学的特性およびベースライン時の特性の中にカットオフ時に組み入れた。罹患体（Ｎ＝３９）を、８．８６（３．０～３１．１）週間の期間中央値（範囲）にわたって、ＤＳ－１０６２ａによる３．０（１～１０）回の処置サイクルの中央値（範囲）に曝露させた。
２人の罹患体がＤＳ－１０６２ａの投与の中断を必要としたが（４ｍｇ／ｋｇ群における１人、および８ｍｇ／ｋｇ群における１人）、６．０ｍｇ／ｋｇ群における１人の罹患体が用量減量を必要とした。全体として、２３人（５４．８％）の罹患体がＤＳ－１０６２ａによる処置を中止した。主要な中止理由は、１３人の罹患体におけるＲＥＣＩＳＴ毎のＰＤであった（［０．５ｍｇ／ｋｇおよび２．０ｍｇ／ｋｇ］については、各々ｎ＝４；［１．０ｍｇ／ｋｇ］については、ｎ＝３；［０．２７ｍｇ／ｋｇおよび４．０ｍｇ／ｋｇ］については、各々ｎ＝１。２人の罹患体が臨床的進行のために中止し（０．２７ｍｇ／ｋｇおよび６．０ｍｇ／ｋｇについては、各々の１人）、２人の罹患体が中止し（０．５ｍｇ／ｋｇおよび４．０ｍｇ／ｋｇについて、各々１人）、１人の罹患体が医師の決定に基づいて中止した（１．０ｍｇ／ｋｇ群）。５人の罹患体（１．０ｍｇ／ｋｇ群においてｎ＝３、０．２７ｍｇ／ｋｇ群においてｎ＝２）が、「その他」の理由のために中止した。
全体的に、罹患体の８７．２％（３４／３９）が１つ以上のＴＥＡＥを報告したが、報告されたＴＥＡＥの内の１つを除く全てがグレード３以下と考えられた（図７）。最も高頻度で発現したＴＥＡＥは、罹患体の内の１３人（３３．３％）において報告された疲労であった。グレード３の全てのＴＥＡＥが、２人の罹患体（０．５ｍｇ／ｋｇ投与群および２．０ｍｇ／ｋｇ投与群において各々１人）において報告されたグレード３の疲労を除いて、各々１人の罹患体のみに報告された。
２３／３９（５９．０％）罹患体において薬物関連ＴＥＡＥが報告されたが、これらのＴＥＡＥを有する罹患体の内のこれらの罹患体の２１／２３（９１．３％）は、重症度がグレード１または２であった。頻度の降順による（３人以上の罹患体において）最も高頻度で発現したＴＥＡＥは、悪心（ｎ＝１０）、注入関連反応（ｎ＝８）、疲労（ｎ＝７）、脱毛症（ｎ＝６）、嘔吐（ｎ＝５）、貧血および発疹（各々ｎ＝４｝、ならびに食欲減退および口内炎（各々ｎ＝３）であった。注入関連反応は、全てグレードは１または２の事象であり、管理可能／可逆性であった。
重篤なＴＥＡＥが１０／３９（２５．６％）の罹患体において報告されたが、大部分（ｎ＝８）はグレード３であり、各々１人がグレード２およびグレード５（グレード５の敗血症；６．０ｍｇ／ｋｇ投与群）であった。２人以上の罹患体において発現する重篤なＴＥＡＥはなかった。１例の重篤なＴＥＡＥのみが薬物関連であると考えられた（発熱、グレード２；４．０ｍｇ／ｋｇ投与群）。
６．０ｍｇ／ｋｇ投与群の罹患体において１例の用量制限毒性（ＤＬＴ）（斑状丘疹状皮疹、グレード３；消失）が発現したが、ＭＴＤに達しなかった。
図８に示されるように、３５人の腫瘍評価可能罹患体の中で、７例のＰＲ（ＲＥＣＩＳＴに基づいたものであるが、単一点ＰＲを含むものの、奏効がまだ確認されていない）が認められた。データカットの後、合計１０例のＰＲについて３例の追加的なＰＲ（８．０ｍｇ投与群における全例）が認められた。
３人の罹患体においてコンピュータ放出（図９Ａ、図９Ｃおよび図９Ｄ）およびポジトロン放出（図形９Ｂ）を撮影した。４．０ｍｇ／ｋｇ投与群における２人の罹患体は、ＤＳ－１０６２ａによる処置の開始から４．５ヵ月後に腫瘍の大きさが最大で３６．６％（図９Ａ）および３８．４％（図９Ｂ）の減少を示した。２ｍｇ／ｋｇ投与群における別の罹患体は、ＤＳ－１０６２ａによる処置の開始から３ヵ月後に腫瘍の大きさが最大で６５．５％の減少を示し（図９Ｃ）、処置開始の３ヵ月後および７ヵ月後において複数の肺転移（非標的病変）の数の顕著な減少を示した（図９Ｄ）。
標的病変におけるベースラインからの最長寸法の合計の最良のパーセント変化を図１０に示す。最良のパーセント変化（６８％の腫瘍減少）は、２．０ｍｇ／ｋｇ投与群の罹患体で認められた。
薬物動態に関して、図１１に示されるように、ＤＳ－１０６２ａに対する全身曝露は、ほとんど用量に比例した様式で増加した。ＤＳ－１０６２ａの血漿中レベルおよび総抗ＴＲＯＰ２抗体は同様であったが、このことにより、ＤＳ－１０６２ａが循環において安定したことが示唆された。ＤＸｄの曝露は、ＤＳ－１０６２ａよりも低かった。
要約
データカット時点で、ＤＳ－１０６２ａの忍容性は良好だった。６．０ｍｇ／ｋｇ投与群において、一過性でかつ可逆性であったグレード３の皮膚発疹の１例のＤＬＴが認められた。ＤＳ－１０６２ａにより、１０例のＰＲおよび１６例の安定疾患が認められた。ＰＲの罹患体の内の２人は、従来のＥＧＦＲ阻害剤処置またはＡＬＫ阻害剤処置（すなわち、アレクチニブ、クリゾチニブ、セリチニブ、オシメルチニブ）を受けた。前記試験の全体的有効率は、図１２において提供される。
新しいカットオフ日時点における第１相臨床試験
初期データカットの後、さらなる罹患体を第１相試験に組み入れ、被験者の全体数を５９（Ｎ＝５９）とした。全ての罹患体は、再発した／標準治療（ＳＯＣ）に不応性だった非切除の進行性ＮＳＣＬＣ腫瘍に罹患していた。罹患体は、５７．７％が男性であり、８８．５％がステージＩＶの疾患を認め、７３．１％が腺癌組織学的検査を受け、８０．８％が米東部腫瘍共同研究グループパフォーマンスステータス（ＥＣＯＧ ＰＳ）が１であり、８６．５％が従来の免疫チェックポイント阻害剤処置が無効であった。同じ用量漸増および用量拡大試験デザインを用いた。
因果関係にかかわらない試験治療下での発現有害事象（ＴＥＡＥ）が生じた新しいカットオフ日時点における第１相試験における罹患体の数を図１３に示す。簡潔に述べれば、用量制限毒性（ＤＬＴ）は１０ｍｇ／ｋｇに達し、最大耐用量（ＭＴＤ）は、将来の用量拡大パートにおける展開用量パートにおける推奨用量（ＲＤＥ）でもあった８ｍｇ／ｋｇにおいて確立された。罹患体に対する曝露期間の中央値は、１０．６（範囲３．０～４３．１）週間であった。重篤なＴＥＡＥは、１４人（２６．９％）の罹患体に発現し、３人（５．８％）の罹患体が死亡したが、死亡は治験薬との関連がなかった。用量減少、中断または中止に関連するＴＥＡＥは、それぞれ、５人（９．６％）、５人（９．６％）および２人（３．８％）の罹患体において発現した。６．０ｍｇ／ｋｇの用量で処置された疾患進行を伴う１人の罹患体（１．９％）は、間質性肺疾患（ＩＬＤ）ではないと判定された呼吸不全（グレード５）の、特別な関心がもたれる肺有害事象を発症した。データカットオフ後の症例を含めて、まだ判定されていない潜在的ＩＬＤの４例の報告が認められた（グレード２の肺臓炎１例［６．０ｍｇ／ｋｇ］、グレード２の器質化肺炎１例［８ｍｇ／ｋｇ］、グレード２の肺臓炎１例［８ｍｇ／ｋｇ］、およびグレード５が１例［疾患進行を伴う罹患体における呼吸不全；８．０ｍｇ／ｋｇ］）。
前記試験の用量漸増群において全ての用量にわたって、１２例の部分奏効（少なくとも１０例は確認された）が認められた。８ｍｇ／ｋｇにおいて、５／７の罹患体は部分奏効（ＰＲ）を示し、２／７は安定疾患（ＳＤ）を示した。この群において、６／７が処置を継続した。図１４は、対象の標的病変におけるベースラインからの最長寸法測度の合計の最良のパーセンテージ変化を示し、図１５は、より高い投与群におけるそれらの罹患体がより一貫した、顕著な腫瘍の大きさの減少を示した場合、応答の頻度に対する明確な投与量－効果を示し、図１６は、各種処置群において認められた抗腫瘍活性を示す（事前にＥＧＦＲ標的治療、ＡＬＫ標的治療およびＨＥＲ２標的治療による処置を受けた罹患体が示される。
ＴＲＯＰ２発現を決定するために免疫組織化学によって前処置腫瘍生検を評価したが、罹患体応答を図１７に示す。図１２、図１７、図２１および図２６に示されるように、幾人かの罹患体は、従来のＥＧＦＲ阻害剤治療もしくはＡＬＫ阻害剤治療を受けたか、または免疫腫瘍学処置を受けた。部分奏効（ＰＲ）を達成した８人の罹患体のうちの６人が、Ｈスコアが中央値より大きかったが、一方で安定疾患（ＳＤ）の８／１５および進行性疾患の４／１２が、Ｈスコアが中央値より大きかった。このことは、抗体薬物複合体（１）（すなわち、ＤＳ－１０６２ａ）が、ＴＲＯＰ２陰性腫瘍（Ｃａｌｕ－６）と対照的に、ＴＲＯＰ２陽性腫瘍（ＮＣＩ－Ｈ２１７０およびＨＣＣ８２７）における、より強い抗腫瘍活性を有する肺癌異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍活性を有したことを示す前臨床データ（図１８参照）と一致している。
細胞遊離ＤＮＡ（ｃｆＤＮＡ）を評価することによって可変対立遺伝子頻度（ＶＡＦ）の変化も決定した。サイクル３、Ｄａｙ１（Ｃ３Ｄ１）および処置の終了（ＥＯＴ）においてＶＡＦを確認した。図１９に示されるこれらの結果によって、ＤＳ－１０６２ａがＳＤおよびＰＲを達成した罹患体においてｃｆＤＮＡを減少させたことが示された。
要約すると、ＤＳ－１０６２ａは、ＭＴＤおよびＲＤＥとして確立された最高８ｍｇ／ｋｇの用量で忍容性が良好であった。１０ｍｇ／ｋｇは、２人の対象がグレード３の粘膜炎を発現し、忍容性が示されなかった。８ｍｇ／ｋｇおよび６ｍｇ／ｋｇの両方は、忍容性は良好であったが、８ｍｇ／ｋｇは、６ｍｇ／ｋｇと比較して、８ｍｇ／ｋｇにおけるより高い全奏効率（ＯＲＲ）と共に、より良好な予備的有効性シグナルを示した。実際、図２０は、ＯＲＲが８ｍｇ／ｋｇ投与群において最良であったことを示す。
抗腫瘍活性に対する用量依存的効果が、２．０～８．０ｍｇ／ｋｇの範囲にわたって認められた。免疫チェックポイント阻害剤を含む標準治療（ＳＯＣ）から再発または進行した、強い前処置を受けた非選択ＮＳＣＬＣ罹患体における用量漸増の間、１２例の部分奏効が認められた。有効性の結果の要約は、図２１に提供される。
抗体薬物複合体の予備的有効性
２０１９年１１月１６日時点で、ＤＳ－１０６２ａで処置された９５人の対象の内の８８人が、奏効に関して評価可能であった。
治験責任医師によって評価された全奏効率（ＯＲＲ；未確認）は、６ｍｇ／ｋｇ投与群（５／１８の対象が奏効、全てＰＲ）において２７．８％（９５％ＣＩ：９．７、５３．５）および８ｍｇ／ｋｇ投与群（１３／３４、全てＰＲ）において３８．２％（９５％ＣＩ：２２．２、５６．４）であった（表２および図２２）。病勢コントロール率（ＤＣＲ＝ＣＲ＋ＰＲ＋ＳＤ）は、６ｍｇ／ｋｇにおいて７２．２％であり、８ｍｇ／ｋｇにおいて７９．４％であった。
データカットオフ日において、６ｍｇ／ｋｇの投与群におけるＰＲの５人の対象全ては、疾患進行または死亡なしで処置が進行中であった。
８ｍｇ／ｋｇ投与群において、ＰＲの１３人の対象の内の６人は、疾患進行または死亡なしで処置が進行中であり、２人は進行性疾患を発現し、１人は死亡し、４人は、疾患進行または死亡以外の理由のためにＤＳ－１０６２ａを中止した。
Figure 2022534725000022
効果評価可能対象は、ベースライン時の腫瘍評価およびベースライン後の腫瘍評価の両方を行った対象か、または試験処置を中止した対象であった。
薬物動態
ＤＳ－１０６２ａ（０．２７ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ）の投与を受けた６１人の対象における非コンパートメント解析を用いて、予備的単回投与ＰＫおよび予備的反復投与ＰＫを評価した。
図２３は、８ｍｇ／ｋｇのＤＳ－１０６２ａの反復投与における、ＤＳ－１０６２ａの血漿中濃度、全抗体および遊離薬物（図においてペイロードと称される）を示す。平均ＡＵＣｌａｓｔ、Ｃｍａｘおよび消失半減期の平均値（ｔ１／２）は、それぞれ、９１４μｇ・ｄ／ｍＬ、１９６μｇ／ｍＬおよび５．４５日であった。
ＤＳ－１０６２ａの血漿中レベルおよび総抗ＴＲＯＰ２抗体は同様であり、遊離薬物の曝露がＤＳ－１０６２ａの曝露より低かったが、このことは、ＤＳ－１０６２ａが循環において安定であったことを示唆している。
結論
このＤＳ－１０６２ａは、第Ｉ相試験において最高８ｍｇ／ｋｇの用量で忍容性があり、かつ安全であったことが示された。
８８人の有効性評価可能対象の中で、ＤＳ－１０６２ａは、２ｍｇ／ｋｇ以上の用量で有効であったが、８ｍｇ／ｋｇ群において３８．２％（１３／３４の対象）のＯＲＲおよび７９．４％（２７／３４の対象）のＤＣＲを達成した。
結果は、ＮＳＣＬＣにおける免疫チェックポイント阻害剤および白金系化学療法の後の標準治療として用いられるドセタキセルより優れている（表３）。
さらに、ＰＲ対象の９０．９％（２０／２２の対象）が、事前に免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、イピリムマブ、デュルバルマブ）で処置され、全ての対象が、事前に白金系化学療法薬（例えば、シスプラチン、カルボプラチン）で処置された。したがって、ＤＳ－１０６２ａは、これらの標準治療に不応性であるか、または忍容性がないＮＳＣＬＣ対象を含む対象におけるドセタキセルと置き換える可能性を示した。
さらに、米国において開発されたＴＲＯＰ２を標的とする競合的抗体薬物複合体であるサシツズマブゴビテカン（Ｓａｃｔｉｚｕｍａｂ ｇｏｖｉｔｅｃａｎ）は、標準治療を受けた対象における第２相試験において、ＮＳＣＬＣにおけるＯＲＲが１９％であるが、このことは、ＤＳ－１０６２ａが前記競合的薬物より有効であるかもしれないことを示唆する。
したがって、本発明において用いられるＤＳ－１０６２ａを含む治療剤および治療的医薬組成物、ならびに本発明のＤＳ－１０６２ａを投与することを特徴とする治療的方法は、標準治療に対して不応性であるか、もしくは再発するか、または標準治療が適用可能でない、切除不能な進行非小細胞肺癌の対象における処置のために優れていることが示された。
４ｍｇ、６ｍｇおよび８ｍｇの安全性および予備的有効性の評価は、第Ｉ相試験において継続されている。
さらに、２０２０年に開始する予定である複数の第ＩＩ相試験が計画されている。
Figure 2022534725000023
1. Borghaei H、Paz-Ares L、Horn Lら、Nivolumab versus Docetaxel in advanced nonsquamous non-small-cell lung cancer.N Engl J Med.2015年;373(17):1627～39
2. Garon EB、Ciuleanu TE、Arrieta Oら、Ramucirumab plus docetaxel versus placebo plus docetaxel for second-line treatment of stage IV non-small-cell lung cancer after disease progression on platinum-based therapy(REVEL):a multicentre,double-blind,randomised phase 3 trial Lancet.2014年;384(9944):665～73、Suppl.:3
本明細書に記載される全ての特許および刊行物は、本開示が関連する当業者のレベルを示す。全ての特許および刊行物は、個々の刊行物が参照により具体的かつ個別に組み込まれることが示される場合と同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
さらに、当業者は、本開示が目的を実施し、記載された目的および利点ならびにそれらの中の固有のものを得るのに充分に適していることを容易に認識する。当業者であれば、その中の修正および他の使用を思いつくであろう。これらの修正は、本開示の精神の範囲内に包含され、本開示の非限定的な実施形態を示す請求項の範囲によって規定される。

Claims (66)

  1. 癌の処置または予防における使用のための抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体であって、前記抗体薬物複合体が、リンカーによって連結されている抗ＴＲＯＰ２抗体および抗腫瘍化合物を含み、
    前記リンカーおよび前記抗腫瘍化合物が、以下の式：
    －（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）
    （式中、－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－は、その３位で前記抗体に連結され、かつ１位の窒素原子上においてこの構造を含むリンカー構造内のメチレン基に連結されている以下の式：
    Figure 2022534725000024
    によって表される構造を有し、
    （ＮＨ－ＤＸ）は、以下の式：
    Figure 2022534725000025
    によって表される基を表し、式中、１位のアミノ基の窒素原子は、連結位置である）によって表され、
    前記抗ＴＲＯＰ２抗体が、その重鎖可変領域内に、配列番号２３のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１と、配列番号２４のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２と、配列番号２５のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３とを、および、その軽鎖可変領域内に、配列番号２６のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１と、配列番号２７のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２と、配列番号２８のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３とを含む、
    抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体。
  2. 前記抗腫瘍化合物の１抗体あたりの平均結合数が、２～８、または３～８の範囲内である、請求項１に記載の抗体薬物複合体。
  3. 前記抗腫瘍化合物の１抗体あたりの平均結合数が、３．５～４．５である、請求項１または２に記載の抗体薬物複合体。
  4. 前記抗体が、配列番号４５のアミノ酸１～１２１を含む重鎖可変領域と、配列番号４６のアミノ酸１～１０９を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体。
  5. 前記抗体が、配列番号４５を含む重鎖と、配列番号４６を含む軽鎖とを含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体。
  6. 前記抗ＴＲＯＰ２抗体が、前記重鎖のカルボキシル末端においてリジン残基を欠く、請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体。
  7. ２ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内の投与量の前記抗体薬物複合体が、癌の対象に投与される、請求項１～６のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体。
  8. 約４ｍｇ／ｋｇの投与量の前記抗体薬物複合体が、癌の対象に投与される、請求項１～７のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体。
  9. 約６ｍｇ／ｋｇの投与量の前記抗体薬物複合体が、癌の対象に投与される、請求項１～７のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体。
  10. 約８ｍｇ／ｋｇの投与量の前記抗体薬物複合体が、癌の対象に投与される、請求項１～７のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体。
  11. 前記抗体薬物複合体が、静脈内投与によって投与される、請求項１～１０のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体。
  12. 前記抗体薬物複合体が、３週間に１回または４週間に１回投与される、請求項１～１１のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体。
  13. 前記癌が、肺癌、腎臓癌、尿路上皮癌、結腸直腸癌、前立腺癌、多形性神経膠芽細胞腫、卵巣癌、膵癌、乳癌、黒色腫、肝癌、膀胱癌、胃癌、子宮頸癌、頭頚部癌および食道癌からなる群から選択される、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体。
  14. 前記肺癌が非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である、請求項１３に記載の抗体薬物複合体。
  15. 前記癌が、耐性または不応性である、請求項１～１４のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体。
  16. 前記耐性または前記不応性が、抗癌薬による処置のために前記癌が獲得した耐性または不応性である、請求項１５に記載の抗体薬物複合体。
  17. 前記抗癌薬が、ＥＧＦＲ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、白金系化学療法薬またはチェックポイント阻害剤である、請求項１６に記載の抗体薬物複合体。
  18. 前記抗癌薬が、ゲフィチニブ、エルロチニブ、オシメルチニブ、アファチニブ、アレクチニブ、クリゾチニブ、セリチニブ、シスプラチン、カルボプラチン、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、イピリムマブ、デュルバルマブ、チスレリズマブ、シンチリマブまたはセミプリマブである、請求項１６に記載の抗体薬物複合体。
  19. 前記癌がＴＲＯＰ２発現癌である、請求項１～１８のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体。
  20. 前記ＴＲＯＰ２発現癌がＴＲＯＰ２過剰発現癌である、請求項１９に記載の抗体薬物複合体。
  21. 前記癌が手術不能癌または再発癌である、請求項１～２０のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体。
  22. 活性成分としての請求項１～２１のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体またはその塩と、医薬的に許容し得る製剤成分とを含む医薬組成物。
  23. リンカーによって連結されている抗ＴＲＯＰ２抗体および抗腫瘍化合物を含む抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体を癌の対象に投与することを含む、対象の癌を処置するか、または予防する方法であって、
    前記リンカーおよび前記抗腫瘍化合物が、以下の式：
    －（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）
    （式中、－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－は、その３位で前記抗体に連結され、かつ１位の窒素原子上においてこの構造を含むリンカー構造内のメチレン基に連結されている以下の式：
    Figure 2022534725000026
    によって表される構造を有し、
    （ＮＨ－ＤＸ）は、以下の式：
    Figure 2022534725000027
    によって表される基を表し、式中、１位のアミノ基の窒素原子は、連結位置である）によって表され、
    前記抗ＴＲＯＰ２抗体が、その重鎖可変領域内に、配列番号２３のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１と、配列番号２４のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２と、配列番号２５のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３とを、および、その軽鎖可変領域内に、配列番号２６のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１と、配列番号２７のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２と、配列番号２８のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３とを含む、
    方法。
  24. 前記抗腫瘍化合物の１抗体あたりの平均結合数が、２～８、または３～８の範囲内である、請求項２３に記載の方法。
  25. 前記抗腫瘍化合物の１抗体あたりの平均結合数が、３．５～４．５である、請求項２３または２４に記載の方法。
  26. 前記抗体が、配列番号４５のアミノ酸１～１２１を含む重鎖可変領域と、配列番号４６のアミノ酸１～１０９を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項２３～２５のいずれか１項に記載の方法。
  27. 前記抗体が、配列番号４５を含む重鎖と、配列番号４６を含む軽鎖とを含む、請求項２３～２６のいずれか１項に記載の方法。
  28. 前記抗ＴＲＯＰ２抗体が、前記重鎖のカルボキシル末端においてリジン残基を欠く、請求項２３～２７のいずれか１項に記載の方法。
  29. ２ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内の投与量の前記抗体薬物複合体が、癌の対象に投与される、請求項２３～２８のいずれか１項に記載の方法。
  30. 約４ｍｇ／ｋｇの投与量の前記抗体薬物複合体が、癌の対象に投与される、請求項２３～２９のいずれか１項に記載の方法。
  31. 約６ｍｇ／ｋｇの投与量の前記抗体薬物複合体が、癌の対象に投与される、請求項２３～２９のいずれか１項に記載の方法。
  32. 約８ｍｇ／ｋｇの投与量の前記抗体薬物複合体が、癌の対象に投与される、請求項２３～２９のいずれか１項に記載の方法。
  33. 前記抗体薬物複合体が、静脈内投与によって投与される、請求項２３～３２のいずれか１項に記載の方法。
  34. 前記抗体薬物複合体が、３週間に１回または４週間に１回投与される、請求項２３～３３のいずれか１項に記載の方法。
  35. 前記癌が、肺癌、腎臓癌、尿路上皮癌、結腸直腸癌、前立腺癌、多形性神経膠芽細胞腫、卵巣癌、膵癌、乳癌、黒色腫、肝癌、膀胱癌、胃癌、子宮頸癌、頭頚部癌および食道癌からなる群から選択される、請求項２３～３４のいずれか１項に記載の方法。
  36. 前記肺癌が非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である、請求項３５に記載の方法。
  37. 前記癌が、耐性または不応性である、請求項２３～３６のいずれか１項に記載の方法。
  38. 前記耐性または前記不応性が、抗癌薬による処置のために前記癌が獲得した耐性または不応性である、請求項３７に記載の方法。
  39. 前記抗癌薬が、ＥＧＦＲ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、白金系化学療法薬またはチェックポイント阻害剤である、請求項３８に記載の方法。
  40. 前記抗癌薬が、ゲフィチニブ、エルロチニブ、オシメルチニブ、アファチニブ、アレクチニブ、クリゾチニブ、セリチニブ、シスプラチン、カルボプラチン、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、イピリムマブ、デュルバルマブ、チスレリズマブ、シンチリマブまたはセミプリマブである、請求項３８に記載の方法。
  41. 前記癌がＴＲＯＰ２発現癌である、請求項２３～４０のいずれか１項に記載の方法。
  42. 前記ＴＲＯＰ２発現癌がＴＲＯＰ２過剰発現癌である、請求項４１に記載の方法。
  43. 前記癌が手術不能癌または再発癌である、請求項２３～４２のいずれか１項に記載の方法。
  44. 前記抗体薬物複合体が、少なくとも１種の医薬的に許容し得る製剤成分を含む医薬組成物中において投与される、請求項２３～４３のいずれか１項に記載の方法。
  45. 癌を処置するか、または予防するための薬物の製造における抗ＴＲＯＰ２抗体薬物複合体の使用であって、
    前記抗体薬物複合体が、リンカーによって連結されている抗ＴＲＯＰ２抗体および抗腫瘍化合物を含み、
    前記リンカーおよび前記抗腫瘍化合物が、以下の式：
    －（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＧＧＦＧ－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－（ＮＨ－ＤＸ）
    （式中、－（Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄ－３－ｙｌ－Ｎ）－は、その３位で前記抗体に連結され、かつ１位の窒素原子上においてこの構造を含むリンカー構造内のメチレン基に連結されている以下の式：
    Figure 2022534725000028
    によって表される構造を有し、
    （ＮＨ－ＤＸ）は、以下の式：
    Figure 2022534725000029
    によって表される基を表し、式中、１位のアミノ基の窒素原子は、連結位置である）によって表され、
    前記抗ＴＲＯＰ２抗体が、その重鎖可変領域内に、配列番号２３のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１と、配列番号２４のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２と、配列番号２５のアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３とを、および、その軽鎖可変領域内に、配列番号２６のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１と、配列番号２７のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２と、配列番号２８のアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３とを含む、
    使用。
  46. 前記抗腫瘍化合物の１抗体あたりの平均結合数が、２～８、または３～８の範囲内である、請求項４５に記載の使用。
  47. 前記抗腫瘍化合物の１抗体あたりの平均結合数が、３．５～４．５である、請求項４５または４６に記載の使用。
  48. 前記抗体が、配列番号４５のアミノ酸１～１２１を含む重鎖可変領域と、配列番号４６のアミノ酸１～１０９を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項４５～４７のいずれか１項に記載の使用。
  49. 前記抗体が、配列番号４５を含む重鎖と、配列番号４６を含む軽鎖とを含む、請求項４５～４８のいずれか１項に記載の使用。
  50. 前記抗ＴＲＯＰ２抗体が、前記重鎖のカルボキシル末端においてリジン残基を欠く、請求項４５～４９のいずれか１項に記載の使用。
  51. ２ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内の投与量の前記抗体薬物複合体が、癌の対象に投与される、請求項４５～５０のいずれか１項に記載の使用。
  52. 約４ｍｇ／ｋｇの投与量の前記抗体薬物複合体が、癌の対象に投与される、請求項４５～５１のいずれか１項に記載の使用。
  53. 約６ｍｇ／ｋｇの投与量の前記抗体薬物複合体が、癌の対象に投与される、請求項４５～５１のいずれか１項に記載の使用。
  54. 約８ｍｇ／ｋｇの投与量の前記抗体薬物複合体が、癌の対象に投与される、請求項４５～５１のいずれか１項に記載の使用。
  55. 前記抗体薬物複合体が、静脈内投与によって投与される、請求項４５～５４のいずれか１項に記載の使用。
  56. 前記抗体薬物複合体が、３週間に１回または４週間に１回投与される、請求項４５～５５のいずれか１項に記載の使用。
  57. 前記癌が、肺癌、腎臓癌、尿路上皮癌、結腸直腸癌、前立腺癌、多形性神経膠芽細胞腫、卵巣癌、膵癌、乳癌、黒色腫、肝癌、膀胱癌、胃癌、子宮頸癌、頭頚部癌および食道癌からなる群から選択される、請求項４５～５６のいずれか１項に記載の使用。
  58. 前記肺癌が非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である、請求項５７に記載の使用。
  59. 前記癌が、耐性または不応性である、請求項４５～５８のいずれか１項に記載の使用。
  60. 前記耐性または前記不応性が、抗癌薬による処置のために前記癌が獲得した耐性または不応性である、請求項５９に記載の使用。
  61. 前記抗癌薬が、ＥＧＦＲ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、白金系化学療法薬またはチェックポイント阻害剤である、請求項６０に記載の使用。
  62. 前記抗癌薬が、ゲフィチニブ、エルロチニブ、オシメルチニブ、アファチニブ、アレクチニブ、クリゾチニブ、セリチニブ、シスプラチン、カルボプラチン、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、イピリムマブ、デュルバルマブ、チスレリズマブ、シンチリマブまたはセミプリマブである、請求項６０に記載の使用。
  63. 前記癌がＴＲＯＰ２発現癌である、請求項４５～６２のいずれか１項に記載の使用。
  64. 前記ＴＲＯＰ２発現癌がＴＲＯＰ２過剰発現癌である、請求項６３に記載の使用。
  65. 前記癌が手術不能癌または再発癌である、請求項４５～６４のいずれか１項に記載の使用。
  66. 前記抗体薬物複合体が、少なくとも１種の医薬的に許容し得る製剤成分を含む医薬組成物中において投与される、請求項４５～６５のいずれか１項に記載の使用。
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