JP2022533020A - がん免疫療法アジュバント - Google Patents

Abstract

本発明は、がん免疫療法剤と組み合わせて投与される場合には、in vivoでの副作用を引き起こすことなく免疫因子の機能を活性化させて、がん免疫療法剤の抗がん作用を高める作用を示し、それによりがん免疫療法アジュバントとして有効に用いることができる、がん免疫療法アジュバントに関する。

Description

発明の背景
１．発明の分野
本発明は、がん免疫療法アジュバントに関する。

２．関連技術の説明
がんは、全身に広がる可能性がある、異常な局所的細胞増殖により特徴づけられる疾患である。がんには、肺がん、膀胱がん、前立腺がん、膵臓がん、子宮頸がん、脳がん、胃がん、結腸直腸がん、およびメラノーマを含む、数多くの種類がある。従来、腫瘍学的がんの処置方法（腫瘍学）としては、手術、放射線療法、または化学療法が最も一般的であった。しかしながら、最近、がん免疫療法が、腫瘍学的処置として極めて有望であることが示されている。

がん免疫療法は、腫瘍を直接切除または処置する従来の処置方法とは対照的に、免疫系を用いてがんを処置する腫瘍学の一分野である。この治療コンセプトは、Ｔ細胞の表面に存在している、これら細胞の免疫機能を阻害するように作用する数多くのタンパク質が見出されたことに基づいている。
腫瘍免疫における最も基本的な問題は、抗原を認識および排除する免疫系をどのように活性化させるかということである。この点について、腫瘍細胞を遺伝子操作して特定のサイトカインを分泌させるという新たな方法は、腫瘍免疫における大きな進歩をもたらした。

免疫療法に基づく遺伝子組み換え腫瘍ワクチンの理論的背景は、腫瘍を外的因子として認識することができる抗原を宿主が保有しているということである。ヒトＴリンパ球およびＢリンパ球は、発生過程を通して抗原受容体という形で、無限に近い抗原の差異を区別する能力を有している。しかしながら、実際に腫瘍免疫を成功させるためには、次の２つの基準を満たさなければならない。第一に、腫瘍細胞が、正常細胞には発現していない新たな抗原（ペプチド）を発現していなければならない。第二に、免疫細胞が、適切に活性化されてこれらの抗原を認識しなければならない。

サイトカイン遺伝子が導入された腫瘍細胞を用いた従来の免疫療法は、白色マウスを用いた動物実験でその有効性が示されていた。現在では、特定のサイトカイン遺伝子を導入した腫瘍細胞を白色マウスに注入した場合に、これらの白色マウスで新たな腫瘍を根絶することができ、腫瘍免疫を獲得することができるという研究が世界中で行われている。
世界的には、毎年１，０００万人以上ががんと診断されており、この数は、２０２０年までには年間新たに１，５００万人にまで増加するものとみられる。がんにより毎年６００万人が死亡しており、あるいは世界の死亡数のうちの１２％ががんによるものであり、がんを処置することができる方法は依然として必要とされている。かかる方法は、ヒトおよび他の哺乳動物におけるがんの予防または処置に有用な医薬組成物についての基盤を提供することができるものである。

特に、がんの処置のための併用投与は、複合的な手段で疾患を攻撃することについての利点が認識されるにつれ、ますます一般的になってきている。抗がん剤に対する耐性を示す場合でも、併用投与は有用である。加えて、併用投与は、抗がん剤の効果を高めることにより、抗がん剤の投与量を減らすことができるという利点も有している。これにより、体の各器官への毒性および副作用を最小限にしながら、抗がん効果を増大させることが可能である。過去数十年にわたって数多くの有効な併用療法が見出されてきたが、年間のがん死亡者数が引き続き多いという観点から、抗がん療法における使用のための有効な療法を見出すことは引き続き必要とされている。

特許文献１には、ｐ５３活性化剤およびｃ－Ｍｅｔ阻害剤を活性成分として含む、がんの予防または治療のための併用投与における使用のための医薬組成物が開示されている。

本発明の目的は、がん免疫療法アジュバントを提供することである。
本発明の別の目的は、がん免疫療法剤；およびがん免疫療法アジュバントを含む、がん免疫療法のための組み合わせ薬剤を提供することである。
本発明の別の目的は、がん免疫療法剤の効果を高めることにおける使用のための医薬組成物を提供することである。

本発明の別の目的は、免疫を高めることにおける使用のための医薬組成物を提供することである。
本発明の別の目的は、がんを予防または処置するための方法を提供することである。
本発明の別の目的は、抗がん処置のためのキットを提供することである。

上記目的を達成するために、本発明の一つの側面においては、本発明は、下記式１で表される化合物、その異性体、その溶媒和物、その水和物、またはその薬学的に許容し得る塩を活性成分として含む、がん免疫療法アジュバントを提供する。
［式１］

（式１において、
Ｘは、酸素または硫黄であり；

は、単結合または二重結合を表し；

Ｒ_１は、水素、ハロ、Ｃ_１－３０アルキル、Ｃ_３－１０シクロアルキル、Ｃ_２－３０アルケニル、Ｃ_３－１０シクロアルケニル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_２－１５ヘテロシクロアルキル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_３－１５ヘテロシクロアルキル、Ｃ_２－３０アルコキシアルキル、Ｃ_３－３０アルコキシアルキル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_３－１０ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_１－２０アルコール、Ｃ_１－２０アルケノール、Ｃ_２－３０アシル、Ｃ_１－１０アミド、Ｃ_１－１０アミン、Ｃ_２－１５エステル、硫酸塩、カルボキシル基、Ｃ_３－２０カルボキシアルキル、Ｃ_３－２０カルボキシアルケニル、Ｃ_３－２０アルキルカルボキシル、Ｃ_３－２０アルケニルカルボキシル、Ｃ_３－２０アルキルカルボキシアルキル、Ｃ_３－２０アルキルカルボキシアルケニル、Ｃ_３－２０アルケニルカルボキシアルキル、Ｃ_４－２０アルケニルカルボキシアルケニル、Ｃ_６－３０アリール、Ｃ_６－３０アラルキル、Ｃ_６－３０アルカリール、ヘテロ原子として窒素を含有するＣ_３－３０ヘテロアリール、またはＣ_６－３０アリールカルボニルであり；

Ｒ_２１は、Ｃ_２－３０アルキル、Ｃ_３－１０シクロアルキル、Ｃ_２－３０アルケニル、Ｃ_３－１０シクロアルケニル、Ｃ_２－３０カルボキシアルキル、Ｃ_２－３０アルキルカルボキシル、Ｃ_３－３０カルボキシアルケニル、Ｃ_３－３０アルケニルカルボキシル、Ｃ_３－３０アルキルカルボキシアルキル、Ｃ_３－３０アルキルカルボキシアルケニル、Ｃ_３－３０アルケニルカルボキシアルキル、Ｃ_４－３０アルケニルカルボキシアルケニル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_２－１０ヘテロシクロアルキル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_３－１０ヘテロシクロアルキル、Ｃ_２－３０アルコキシアルキル、Ｃ_３－３０アルコキシアルキル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_３－１０ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_１－２０アルコール、Ｃ_１－２０アルケノール、Ｃ_２－３０アシル、Ｃ_１－１０アミド、Ｃ_１－１０アミンまたはＣ_２－１５エステルであり；

Ｒ_２２は、水素、ヒドロキシ、ハロまたはＣ_１－１０アルキルであり；
Ｒ_２３は、水素、ヒドロキシまたはＣ_１－１０アルキルであり；
Ｒ_２１は、Ｒ_２２およびＲ_２３と一緒に結合している炭素に対して二重結合を形成していてもよく；
Ｒ_２３は、Ｒ_２１およびＲ_２２と一緒に結合している炭素に対して二重結合を形成していてもよく；
Ｒ_２１またはＲ_２３が前記炭素に対して二重結合を形成している場合は、Ｒ_２２は原子を含まず；ならびに
Ｒ_３およびＲ_４は、独立して水素またはＣ_１－１０アルキルである。）

本発明の別の側面においては、本発明は、がん免疫療法剤；およびがん免疫療法アジュバントを含む、がん免疫療法用の組み合わせ薬剤を提供する。
本発明の別の側面においては、本発明は、式１で表される化合物、その異性体、その溶媒和物、その水和物、またはその薬学的に許容し得る塩を活性成分として含む、がん免疫療法剤の効果を高めることにおける使用のための医薬組成物を提供する。

本発明の別の側面においては、本発明は、式１で表される化合物、その異性体、その溶媒和物、その水和物、またはその薬学的に許容し得る塩を活性成分として含む、免疫を高めることにおける使用のための医薬組成物を提供する。
本発明の別の側面においては、本発明は、がん免疫療法剤；およびがん免疫療法アジュバントを、それを必要とする対象に投与するステップを含む、がんを予防または処置するための方法を提供する。
本発明の別の側面においては、本発明は、がん免疫療法剤；およびがん免疫療法アジュバントを活性成分として含む、抗がん処置のためのキットを提供する。

有利な効果
本発明によるがん免疫療法アジュバントは、がん免疫療法剤と組み合わせて投与される場合には、in vivoでの副作用を引き起こすことなく免疫因子の機能を活性化させ、がん免疫療法剤の抗がん作用を高める作用を示し、それによりがん免疫療法アジュバントとして有効に用いることができるものである。

図１ａは、実験動物モデルの作製からその動物モデルの屠殺までの手順を示す概略図である。 図１ｂは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株の注入および薬剤投与によるマウスの腫瘍サイズにおける変化を示すグラフである。 図１ｃは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株の注入および薬剤投与によるマウスの生存率を示すグラフである。

図２ａは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株の注入および薬剤投与後における、腫瘍および脾臓切除前のマウスの写真である。 図２ｂは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株を注入しおよび薬剤を投与したマウスから摘出された脾臓の写真である。 図２ｃは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株を注入しおよび薬剤を投与したマウスから摘出された腫瘍の写真である。 図２ｄは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株を注入しおよび薬剤を投与したマウスの体重における変化を示すグラフである。 図２ｅは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株を注入しおよび薬剤を投与したマウスの腫瘍重量を示すグラフである。 図２ｆは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株を注入しおよび薬剤を投与したマウスの脾臓重量における変化を示すグラフである。

図３ａは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株を注入しおよび薬剤を投与したマウスの腫瘍についてのＦＡＣＳの結果である。 図３ｂは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株を注入しおよび薬剤を投与したマウスの腫瘍についてのＦＡＣＳの結果である。 図３ｃは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株を注入しおよび薬剤を投与したマウスの腫瘍についてのＦＡＣＳの結果である。 図３ｄは、ＣＤ４５．２＋マーカーによる各薬剤投与群における免疫因子のレベルを示すグラフである。 図３ｅは、各薬剤投与群におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞のレベルを示すグラフである。 図３ｆは、各薬剤投与群におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞のレベルを示すグラフである。 図３ｇは、各薬剤投与群におけるナチュラルキラー細胞のレベルを示すグラフである。 図３ｈは、各薬剤投与群における制御性Ｔ細胞のレベルを示すグラフである。

図４ａは、各薬剤投与群におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞の増殖能を全量％として示すグラフである。 図４ｂは、各薬剤投与群におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖能を全量％として示すグラフである。 図４ｃは、各薬剤投与群におけるナチュラルキラー細胞の増殖能を全量％として示すグラフである。 図４ｄは、各薬剤投与群におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞の増殖能をＭＦＩ（平均蛍光強度（mean fluorescence intensity））として示すグラフである。 図４ｅは、各薬剤投与群におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖能をＭＦＩ（平均蛍光強度）として示すグラフである。 図４ｆは、各薬剤投与群におけるナチュラルキラー細胞の増殖能をＭＦＩ（平均蛍光強度）として示すグラフである。

図５ａは、各薬剤投与群のＣＤ４^＋Ｔ細胞におけるＣＤ１０７ａのレベルを示すグラフである。 図５ｂは、各薬剤投与群のＣＤ８^＋Ｔ細胞におけるＣＤ１０７ａのレベルを示すグラフである。 図６ａは、各薬剤投与群のＣＤ４^＋Ｔ細胞におけるＴＮＦαのレベルを示すグラフである。 図６ｂは、各薬剤投与群のＣＤ８^＋Ｔ細胞におけるＴＮＦαのレベルを示すグラフである。 図７ａは、各薬剤投与群のＣＤ４^＋Ｔ細胞におけるＩＦＮγのレベルを示すグラフである。 図７ｂは、各薬剤投与群のＣＤ８^＋Ｔ細胞におけるＩＦＮγのレベルを示すグラフである。

図８ａは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株を注入しおよび薬剤を投与したマウスの腫瘍についてのＦＡＣＳの結果である。 図８ｂは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株を注入しおよび薬剤を投与したマウスの腫瘍についてのＦＡＣＳの結果である。 図８ｃは、各薬剤投与群の脾臓におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞のＣＤ１０７ａレベルを示すグラフである。 図８ｄは、各薬剤投与群の脾臓におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞のＴＮＦαレベルを示すグラフである。 図８ｅは、各薬剤投与群の脾臓におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞のＩＦＮγレベルを示すグラフである。 図８ｆは、各薬剤投与群の脾臓におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞のＣＤ１０７ａレベルを示すグラフである。 図８ｇは、各薬剤投与群の脾臓におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞のＴＮＦαレベルを示すグラフである。 図８ｈは、各薬剤投与群の脾臓におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞のＩＦＮγレベルを示すグラフである。

図９ａは、各薬剤投与群における腫瘍内接着結合の発現レベルを示す蛍光写真である。 図９ｂは、各薬剤投与群における腫瘍内接着結合の発現レベルの定量化による蛍光密度を示すグラフである。 図１０は、各薬剤投与群におけるＰＤＬ１およびＣＤ３の発現レベルを示す蛍光写真である。

図１１ａは、各薬剤投与群における炎症促進性サイトカインおよび抗炎症性サイトカインの発現についてのＲＴ－ＰＣＲの結果を示す写真である。 図１１ｂは、各薬剤投与群におけるＣＸＣＬ９、ｉＮＯＳおよびＧａｐｄｈの発現についてのＲＴ－ＰＣＲの結果を示す写真である。 図１１ｃは、各群のｍＲＮＡ発現レベルをＲＴ－ＰＣＲによりグラフ化して示す写真である。

図１２ａは、ＣＤ４／８＋Ｔ、ＮＫ除去、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株注入および薬剤投与の手順を示す概略図である。 図１２ｂは、ＣＤ４／８＋Ｔ、ＮＫ除去、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株注入および薬剤投与による結果がフローサイトメトリーで確認されたこと、ならびに免疫細胞の除去が順調に進んだことを確認する図である。 図１２ｃは、ＣＤ４／８＋ＴおよびＮＫ除去による、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株注入および薬剤投与後のマウスの生存率を示す図であり、ＣＤ８＋Ｔ細胞を除去した実験群マウスは生存率が最も低かったことを確認している。 図１２ｄは、図１２ｃと同様のプロセスを説明する図であり、ＣＤ４／８＋Ｔ除去による、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株注入および薬剤投与後の腫瘍の増殖率を経時的に示しており、ＣＤ８＋Ｔ細胞を除去した実験群マウスは腫瘍増殖率が最も高かったことを確認している。 図１２ｅは、ＣＤ４／８＋ＴおよびＮＫ除去による、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株の注入および薬剤投与後の各実験群での腫瘍のサイズ比較を示す図であり、ＣＤ８＋Ｔ細胞を除去した実験群マウスで腫瘍サイズが最も大きかったことを確認している。

図１３ａは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株注入および長期薬剤投与の手順を示す概略図である。 図１３ｂは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株注入および長期薬剤投与によるマウスの生存率を示すグラフである。 図１３ｃは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株注入および長期薬剤投与によるマウスの腫瘍サイズを示すグラフである。

好ましい態様の説明
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の態様は、他の様々な形態に改変することが可能であり、本発明の範囲は下記の態様に限定されない。本発明の態様が本発明をより正確に説明するために記載されるものであることは、当該分野における平均的な知識を有する者にはよく理解されるところである。加えて、本明細書全体を通じてある要素を「包含すること」は、特に別段の記載がない限り、他の要素を排除するものでなく、他の要素を包含し得る。

本発明の一つの側面においては、本発明は、がん免疫療法アジュバントを提供する。
特に、本発明は、下記式１で表される化合物、その異性体、その溶媒和物、その水和物、またはその薬学的に許容し得る塩を活性成分として含む、がん免疫療法アジュバントを提供する。
［式１］

（式１において、
Ｘは、酸素または硫黄であり；

は、単結合または二重結合を表し；

Ｒ_１は、水素、ハロ、Ｃ_１－３０アルキル、Ｃ_３－１０シクロアルキル、Ｃ_２－３０アルケニル、Ｃ_３－１０シクロアルケニル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_２－１５ヘテロシクロアルキル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_３－１５ヘテロシクロアルキル、Ｃ_２－３０アルコキシアルキル、Ｃ_３－３０アルコキシアルキル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_３－１０ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_１－２０アルコール、Ｃ_１－２０アルケノール、Ｃ_２－３０アシル、Ｃ_１－１０アミド、Ｃ_１－１０アミン、Ｃ_２－１５エステル、硫酸塩、カルボキシル基、Ｃ_３－２０カルボキシアルキル、Ｃ_３－２０カルボキシアルケニル、Ｃ_３－２０アルキルカルボキシル、Ｃ_３－２０アルケニルカルボキシル、Ｃ_３－２０アルキルカルボキシアルキル、Ｃ_３－２０アルキルカルボキシアルケニル、Ｃ_３－２０アルケニルカルボキシアルキル、Ｃ_４－２０アルケニルカルボキシアルケニル、Ｃ_６－３０アリール、Ｃ_６－３０アラルキル、Ｃ_６－３０アルカリール、ヘテロ原子として窒素を含有するＣ_３－３０ヘテロアリール、またはＣ_６－３０アリールカルボニルであり；

Ｒ_２１は、Ｃ_２－３０アルキル、Ｃ_３－１０シクロアルキル、Ｃ_２－３０アルケニル、Ｃ_３－１０シクロアルケニル、Ｃ_２－３０カルボキシアルキル、Ｃ_２－３０アルキルカルボキシル、Ｃ_３－３０カルボキシアルケニル、Ｃ_３－３０アルケニルカルボキシル、Ｃ_３－３０アルキルカルボキシアルキル、Ｃ_３－３０アルキルカルボキシアルケニル、Ｃ_３－３０アルケニルカルボキシアルキル、Ｃ_４－３０アルケニルカルボキシアルケニル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_２－１０ヘテロシクロアルキル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_３－１０ヘテロシクロアルキル、Ｃ_２－３０アルコキシアルキル、Ｃ_３－３０アルコキシアルキル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_３－１０ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_１－２０アルコール、Ｃ_１－２０アルケノール、Ｃ_２－３０アシル、Ｃ_１－１０アミド、Ｃ_１－１０アミンまたはＣ_２－１５エステルであり；

Ｒ_２２は、水素、ヒドロキシ、ハロまたはＣ_１－１０アルキルであり；
Ｒ_２３は、水素、ヒドロキシまたはＣ_１－１０アルキルであり；
Ｒ_２１は、Ｒ_２２およびＲ_２３と一緒に結合している炭素に対して二重結合を形成していてもよく；
Ｒ_２３は、Ｒ_２１およびＲ_２２と一緒に結合している炭素に対して二重結合を形成していてもよく；
Ｒ_２１またはＲ_２３が前記炭素に対して二重結合を形成している場合は、Ｒ_２２は原子を含まず；ならびに
Ｒ_３およびＲ_４は、独立して水素またはＣ_１－１０アルキルである。）

式１において、Ｘは、酸素であってもよい。
式１において、Ｒ_１は、水素、ハロ、Ｃ_１－１０アルキル、Ｃ_３－８シクロアルキル、Ｃ_２－１０アルケニル、Ｃ_３－８シクロアルケニル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_２－８ヘテロシクロアルキル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_３－１０ヘテロシクロアルキル、Ｃ_２－２０アルコキシアルキル、Ｃ_３－２０アルコキシアルキル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_３－８ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_１－１０アルコール、Ｃ_１－１０アルケノール、Ｃ_２－２０アシル、Ｃ_１－１０アミド、Ｃ_１－５アミン、Ｃ_２－１５エステル、硫酸塩、カルボキシル基、Ｃ_３－２０カルボキシアルキル、Ｃ_３－２０カルボキシアルケニル、Ｃ_３－２０アルキルカルボキシル、Ｃ_３－２０アルケニルカルボキシル、Ｃ_３－２０アルキルカルボキシアルキル、Ｃ_３－２０アルキルカルボキシアルケニル、Ｃ_３－２０アルケニルカルボキシアルキル、Ｃ_４－２０アルケニルカルボキシアルケニル、Ｃ_６－２０アリール、Ｃ_６－２０アラルキル、Ｃ_６－２０アルカリール、ヘテロ原子として窒素を含有するＣ_３－２０ヘテロアリール、またはＣ_６－２０アリールカルボニルであってもよい。

式１において、Ｒ_１は、水素、Ｃ_１－１０アルキル、Ｃ_３－８シクロアルキル、Ｃ_２－１０アルケニル、Ｃ_３－８シクロアルケニル、ヘテロ原子として酸素を含有するＣ_２－８ヘテロシクロアルキル、ヘテロ原子として酸素を含有するＣ_３－１０ヘテロシクロアルキル、Ｃ_２－２０アルコキシアルキル、Ｃ_３－１０アルコキシアルキル、ヘテロ原子として酸素を含有するＣ_３－８ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_１－１０アルコール、Ｃ_１－１０アルケノール、Ｃ_１－１０アミド、Ｃ_１－５アミン、Ｃ_２－１５エステル、硫酸塩、カルボキシル基、Ｃ_３－２０カルボキシアルキル、Ｃ_３－２０カルボキシアルケニル、Ｃ_３－２０アルキルカルボキシル、Ｃ_３－２０アルケニルカルボキシル、Ｃ_３－２０アルキルカルボキシアルキル、Ｃ_３－２０アルキルカルボキシアルケニル、Ｃ_３－２０アルケニルカルボキシアルキル、Ｃ_４－２０アルケニルカルボキシアルケニル、Ｃ_６－２０アリール、Ｃ_６－２０アラルキル、Ｃ_６－２０アルカリール、ヘテロ原子として窒素を含有するＣ_３－２０ヘテロアリール、またはＣ_６－２０アリールカルボニルであってもよい。

式１のＲ_１において、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルは、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ_１－５アルキル、Ｃ_１－５アルコール、Ｃ_１－５アルコキシ、Ｃ_２－８アルコキシアルキル、Ｃ_６－２０アリール、Ｃ_７－２０アリールカルボキシルまたはそれらの組み合わせで置換されていてもよく；Ｃ_３－１０シクロアルケニルまたはヘテロシクロアルケニルは、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ_１－５アルキル、Ｃ_２－８アルキルカルボキシル、Ｃ_３－８アルキルカルボキシルアルキル、Ｃ_１－５アルコール、Ｃ_１－５アルコキシ、Ｃ_２－８アルコキシアルキル、Ｃ_６－２０アリール、Ｃ_７－２０アリールカルボキシルまたはそれらの組み合わせで置換されていてもよく；アリールは、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ_１－５アルキル、Ｃ_１－５アルコール、Ｃ_１－５アルコキシ、Ｃ_２－８アルコキシアルキル、ニトロ、Ｃ_２－８アルキルカルボキシルアミノまたはそれらの組み合わせで置換されていてもよく；アラルキルは、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ_１－５アルキル、Ｃ_１－５アルコール、Ｃ_１－５アルコキシ、Ｃ_２－８アルコキシアルキル、ニトロ、Ｃ_２－８アルキルカルボキシルアミノまたはそれらの組み合わせで置換されていてもよく；アルカリールは、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ_１－５アルキル、Ｃ_１－５アルコール、Ｃ_１－５アルコキシ、Ｃ_２－８アルコキシアルキル、ニトロ、Ｃ_２－８アルキルカルボキシルアミノまたはそれらの組み合わせで置換されていてもよく；アリールカルボニルは、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ_１－５アルキル、Ｃ_１－５アルコール、Ｃ_１－５アルコキシ、Ｃ_２－８アルコキシアルキル、ニトロ、Ｃ_２－８アルキルカルボキシルアミノまたはそれらの組み合わせで置換されていてもよく；および、ヘテロアリールは、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ_１－５アルキル、Ｃ_１－５アルコール、Ｃ_１－５アルコキシ、Ｃ_２－８アルコキシアルキル、ニトロ、Ｃ_２－８アルキルカルボキシルアミノまたはそれらの組み合わせで置換されていてもよい。

式１において、Ｒ_２１は、直鎖または分岐Ｃ_２－１５アルキル、Ｃ_３－１０シクロアルキル、Ｃ_２－１５アルケニル、Ｃ_３－１０シクロアルケニル、Ｃ_２－１５カルボキシアルキル、Ｃ_２－１５アルキルカルボキシル、Ｃ_３－１５カルボキシアルケニル、Ｃ_２－１５アルケニルカルボキシル、Ｃ_３－１５アルキルカルボキシアルキル、Ｃ_３－１５アルキルカルボキシアルケニル、Ｃ_３－１５アルケニルカルボキシアルキル、Ｃ_２－３０アルケニルカルボキシアルケニル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_２－１０ヘテロシクロアルキル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_３－１０ヘテロシクロアルキル、Ｃ_２－２０アルコキシアルキル、Ｃ_３－３０アルコキシアルキル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_３－１０ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_１－２０アルコール、Ｃ_１－２０アルケノール、Ｃ_２－３０アシル、Ｃ_１－１０アミド、Ｃ_１－１０アミンまたはＣ_２－１５エステルであってもよい。

式１において、Ｒ_２３は、Ｃ_１－５アルキルであるか、またはＲ_２１およびＲ_２２と一緒に結合している炭素に対して二重結合を形成していてもよい。
式１において、

は、二重結合であってもよい。
式１で表される化合物の例には、下記式２

で表される化合物が含まれる。

本発明の式１で表される化合物は、薬学的に許容し得る塩の形態として用いることができ、この場合、塩は、好ましくは薬学的に許容し得る遊離酸により形成される酸付加塩である。本明細書における酸付加塩は、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜硝酸、および亜リン酸などの無機酸；脂肪族モノおよびジカルボン酸塩、フェニル置換アルカン酸塩、ヒドロキシアルカン酸塩およびアルカン二酸塩、芳香族酸、ならびに脂肪族および芳香族スルホン酸などの非毒性有機酸；ならびにトリフルオロ酢酸、酢酸塩、安息香酸、クエン酸、乳酸、マレイン酸、グルコン酸、メタンスルホン酸、４－トルエンスルホン酸、酒石酸、およびフマル酸などの有機酸から得ることができる。

薬学的に非毒性である塩としては、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、フッ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソ酪酸塩、カプリン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオール酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、カバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン－１，４－ジオン酸塩、ヘキサン－１，６－ジオン酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、テレフタル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、クロロベンゼンスルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、β－ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、プロパンスルホン酸塩、ナフタレン－１－スルホン酸塩、ナフタレン－２－スルホン酸塩、およびマンデル酸塩が例示される。

本発明による酸付加塩は、当業者に知られている従来の方法により調製することができる。例えば、式１で表される誘導体を、メタノール、エタノール、アセトン、塩化メチレン、およびアセトニトリルなどの有機溶媒に溶解し、これに有機酸または無機酸を加えて沈殿を誘導する。次いで、沈殿物をろ過し、乾燥させて塩を得る。あるいは、溶媒および過剰な酸を減圧下で蒸留し、乾燥させて塩を得る。あるいは、沈殿物を有機溶媒中で結晶化させて同様のものを得る。

薬学的に許容し得る金属塩は、塩基を用いて調製することができる。アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩は、下記プロセス：化合物を過剰なアルカリ金属水酸化物またはアルカリ土類金属水酸化物溶液に溶解すること；非溶解性の化合物塩をろ過すること；残った溶液を蒸発させること、およびそれを乾燥させることにより得られる。この場合、金属塩は好ましくは、薬学的に適した、ナトリウム塩、カリウム塩、またはカルシウム塩の形態で調製される。ならびに、対応する銀塩は、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩と適切な銀塩（例；硝酸銀）との反応により調製される。

加えて、本発明には、式１で表される化合物だけでなく、その薬学的に許容し得る塩、およびそれらから生成され得る溶媒和物、光学異性体、または水和物も含まれる。
用語「水和物」は、非共有結合性の分子間力で結合した化学量論的または非化学量論的な量の水を含む、本発明の化合物またはその塩をいう。本発明の式１で表される化合物の水和物は、非共有結合性の分子間力で結合した化学量論的または非化学量論的な量の水を含むことができる。水和物は、１当量を超える水を含むことができ、好ましくは、１～５当量の水を含むことができる。かかる水和物は、本発明の式１で表される化合物、その異性体、またはその薬学的に許容し得る塩を、水または水を含有する溶媒から結晶化させることにより調製することができる。

用語「溶媒和物」は、非共有結合性の分子間力で結合した化学量論的または非化学量論的な量の溶媒を含む、本発明の化合物またはその塩をいう。そのための好ましい溶媒には、揮発性、非毒性、および／またはヒトへの投与に適した、溶媒が含まれる。
用語「異性体」は、同じ化学式または分子式を有するが、構造的または立体的に異なっている本発明の化合物またはその塩をいう。かかる異性体には、互変異性体などの構造異性体、幾何学異性体（トランス、シス）および光学異性体（エナンチオマー）などの立体異性体が含まれる。全てのこれら異性体およびその混合物もまた、本発明の範囲に含まれる。

本発明によるがん免疫療法アジュバントにおいて、式１で表される化合物またはその薬学的に許容し得る塩は、臨床投与時には様々な製剤で経口または非経口的に投与することができる。より好ましくは、これは非経口投与製剤であってもよい。式１で表される化合物またはその薬学的に許容し得る塩は、一般的に用いられる希釈剤または充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、および界面活性剤などの賦形剤と混合することにより、経口または非経口投与用に調製することができる。経口投与用固形製剤は、錠剤、丸剤、粉剤、顆粒、およびカプセルである。これら固形製剤は、本発明の式１で表される化合物またはその薬学的に許容し得る塩を、デンプン、炭酸カルシウム、ショ糖または乳糖、ゼラチンなどの１種類以上の適した賦形剤と混合することにより調製される。単純な賦形剤以外では、例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの潤滑剤を用いることができる。

経口投与用の液体製剤は、懸濁液、溶液、乳濁液、およびシロップであり、上記製剤は、水または流動パラフィンなどの一般的に用いられる単純な希釈剤に加えて、湿潤剤、甘味料、香料、および防腐剤などの様々な賦形剤を含有し得る。非経口投与用製剤は、滅菌水溶液、水不溶性賦形剤、懸濁液、および乳濁液である。水不溶性賦形剤および懸濁液は、活性化合物または化合物に加えて、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、オレイン酸エチルのような注射用エステル等を含有し得る。

式１で表される化合物またはその薬学的に許容し得る塩を活性成分として含むがん免疫療法アジュバントは、非経口的に投与することができ、非経口的投与には、皮下注入、静脈内注入、筋肉内注入、または胸腔内注入が含まれる。

式１で表される化合物またはその薬学的に許容し得る塩を非経口投与用製剤として調製するためには、式１で表される化合物またはその薬学的に許容し得る塩を、水中で安定剤または緩衝剤と混合して溶液または懸濁液を生成し、次いでこれをアンプルまたはバイアルとして製剤化する。本明細書における組成物は、滅菌されていてもよく、さらに防腐剤、安定剤、湿潤性粉末または乳化剤、浸透圧調節のための塩および／または緩衝剤、ならびに他の治療上有用な物質を含有し、組成物は、従来の混合、造粒または被覆方法により製剤化することができる。

経口投与用製剤としては、錠剤、丸剤、ハード／ソフトカプセル、溶液、懸濁液、乳濁液、シロップ、顆粒、エリキシル、およびトローチが例示される。これら製剤は、活性成分に加えて、希釈剤（例えば、乳糖、ブドウ糖、ショ糖、マンニトール、ソルビトール、セルロース、および／またはグリシン）および潤滑剤（例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸エステルおよびそのマグネシウム塩またはカルシウム塩、および／またはポリエチレングリコール）を含むことができる。錠剤は、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、デンプンペースト、ゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピロリドンなどの結合剤を含むことができ、必要に応じてさらに、デンプン、アガロース、アルギン酸またはそのナトリウム塩または共沸混合物などの崩壊剤、吸収剤、着色剤、香味剤、および甘味料を含むことができる。

がん免疫療法アジュバントは、がん免疫療法剤の効果を高めることができ、より具体的には、免疫因子を活性化させてがん免疫療法剤の抗がん活性を補助することにより、がん免疫療法剤の効果を高めることができる。免疫因子は、ヘルパーＴ細胞、細胞障害性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、およびサイトカインからなる群から選択される少なくとも１種であり得る。
がん免疫療法アジュバントは、がん免疫療法剤と同時にまたは逐次的に投与することができ、逐次的に投与する場合は、がん免疫療法剤を投与した後にがん免疫療法アジュバントを投与してもよく、または、がん免疫療法剤を投与した後にがん免疫療法アジュバントを投与してもよい。しかしながら、投与方法は一例に過ぎず、抗がん免疫作用を高めるために投与方法を変更してもよい。本発明の一つの態様においては、がん免疫療法アジュバントを毎日静脈内注入により投与し、かつがん免疫療法剤を週に３回腹腔内注入により投与したが、必ずしもこれに限定されない。

がん免疫療法アジュバントは、ヘルパーＴ細胞、細胞障害性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）およびサイトカインからなる群から選択される１種以上の免疫因子を活性化させることができる。がん免疫療法アジュバントは、免疫因子を活性化させることにより、がん免疫療法剤の抗がん作用を高める作用を示す。
この場合、がん免疫療法アジュバントは、がん免疫療法剤と組み合わせて投与することにより、がんを予防または処置することができる。

がんは、偽粘液腫、肝内胆管癌腫、肝芽腫、肝臓がん、甲状腺がん、大腸がん、精巣がん、骨髄異形成症候群、膠芽腫、口腔がん、口唇がん、菌状息肉症、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、基底細胞癌腫、卵巣上皮がん、卵巣胚細胞がん、男性乳がん、脳がん、下垂体腺腫、多発性骨髄腫、胆嚢がん、胆道がん、結腸直腸がん、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、網膜芽腫、脈絡膜メラノーマ、ファーター膨大部がん、膀胱がん、腹膜がん、副甲状腺がん、副腎がん、鼻腔がん、非小細胞肺がん、舌がん、星状細胞腫、小細胞肺がん、若年性脳がん、若年性リンパ腫、若年性白血病、小腸がん、髄膜腫、食道がん、神経膠腫、腎盂がん、腎臓がん、心臓がん、十二指腸がん、悪性軟部がん、悪性骨がん、悪性リンパ腫、悪性中皮腫、悪性メラノーマ、眼がん、外陰部がん、尿管がん、尿道がん、原発不明がん、胃リンパ腫、胃がん、胃癌腫、消化管間質がん、ウィルムスがん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、肉腫、陰茎がん、咽頭がん、妊娠性絨毛疾患、子宮頸がん、子宮内膜がん、子宮肉腫、前立腺がん、転移性骨がん、転移性脳がん、縦隔がん、直腸がん、直腸癌腫、膣がん、脊髄がん、前庭神経鞘腫、膵臓がん、唾液腺がん、カポジ肉腫、パジェット病、扁桃がん、扁平上皮細胞癌腫、肺腺がん、肺がん、肺扁平上皮細胞癌腫、皮膚がん、肛門がん、横紋筋肉腫、喉頭がん、胸膜がん、血液がん、および胸腺がんからなる群から選択される少なくとも１種であり得る。

がん免疫療法アジュバントは、当業者に従来から知られている周知のがん免疫療法剤と一緒に、制限なく併用投与することができる。例えば、がん免疫療法アジュバントは、抗ＰＤ１、抗ＰＤＬ１、抗ＣＴＬＡ４、抗ＬＡＧ３、抗ＶＩＳＴＡ、抗ＢＴＬＡ、抗ＴＩＭ３、抗ＨＶＥＭ、抗ＣＤ２７、抗ＣＤ１３７、抗ＯＸ４０、抗ＣＤ２８、抗ＰＤＬ２、抗ＧＩＴＲ、抗ＩＣＯＳ、抗ＳＩＲＰα、抗ＩＬＴ２、抗ＩＬＴ３、抗ＩＬＴ４、抗ＩＬＴ５、抗ＥＧＦＲ、抗ＣＤ１９および抗ＴＩＧＩＴからなる群から選択される１種以上のがん免疫療法剤と組み合わせて投与することができるが、必ずしもこれに限定されない。

本発明の他の側面において、本発明は、がん免疫療法用の組み合わせ薬剤を提供する。
特に、本発明は、がん免疫療法剤およびがん免疫療法アジュバントを含む、がん免疫療法用の組み合わせ薬剤を提供する。
がん免疫療法剤、がん免疫療法アジュバントおよび組み合わせ薬剤の具体的な説明は、がん免疫療法アジュバントの具体的な説明と同様である。

本発明の他の側面において、本発明は、がん免疫療法剤の効果を高めることにおける使用のための医薬組成物を提供する。
特に、本発明は、式１で表される化合物、その異性体、その溶媒和物、その水和物、またはその薬学的に許容し得る塩を活性成分として含む、がん免疫療法剤の効果を高めることにおける使用のための医薬組成物を提供する。

［式１］

式１における、Ｒ_１～Ｒ_４およびＸの具体的な説明は、がん免疫療法アジュバントにおける式１の具体的な説明と同様である。
加えて、がん免疫療法剤の効果を高めることにおける使用のための医薬組成物の具体的な説明は、がん免疫療法アジュバントの具体的な説明と同様である。

本発明の他の側面において、本発明は、免疫を高めることにおける使用のための医薬組成物を提供する。
特に、本発明は、式１で表される化合物、その異性体、その溶媒和物、その水和物、またはその薬学的に許容し得る塩を活性成分として含む、免疫を高めることにおける使用のための医薬組成物を提供する。

［式１］

式１における、Ｒ_１～Ｒ_４およびＸの具体的な説明は、がん免疫療法アジュバントにおける式１の具体的な説明と同様である。
加えて、免疫を高めることにおける使用のための医薬組成物の具体的な説明は、がん免疫療法アジュバントの具体的な説明と同様である。

本発明の他の側面において、本発明は、がん免疫療法剤およびがん免疫療法アジュバントを、それを必要とする対象に投与するステップを含む、がんを予防または処置するための方法を提供する。
がん免疫療法アジュバントおよびがん免疫療法剤は、組み合わせて投与してもよく、または異なる時点で投与してもよい。

本発明の他の側面において、本発明は、がん免疫療法アジュバントおよび免疫療法剤の、がんの予防または処置における使用を提供する。
本発明の他の側面において、本発明は、がん免疫療法アジュバントおよびがん免疫療法剤を、それを必要とする対象に投与するステップを含む、がんの処置のための組み合わせ療法を提供する。
本発明の他の側面において、本発明は、がん免疫療法剤およびがん免疫療法アジュバントを活性成分として含む、がんを予防または処置するためのキットを提供する。

以下に、下記の例および実験例により本発明を詳細に説明する。
しかしながら、下記の例および実験例は、本発明を説明するためのものに過ぎず、本発明の内容はこれに限定されない。

例１：がん免疫療法アジュバント（ＳＡＣ－１００４）の調製
［式２］

式２で表される化合物ＳＡＣ－１００４は、がん免疫療法剤との併用投与のための本発明の医薬組成物であるが、韓国特許公開第１０－２０１１－００４７１７０号に基づき、下記反応式１に従って調製した。

［反応式１］

１３．４ｍｇのＳＡＣ－１００３をテトラヒドロフラン１ｍＬに溶解し、これにアルゴン雰囲気下でトリ－Ｏ－アセチル－Ｄ－グルカール（Aldrich）２６ｍｇおよび三フッ化ホウ素ジエチルエーテル（Aldrich）０．０１２ｍＬを加え、次いで０℃で１０時間撹拌した。反応溶液を室温まで昇温させた後、ジエチルエーテル５ｍＬを加えて希釈し、炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、残渣を酢酸エチル／ヘキサン（１：１０）の混合溶出液を用いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、目的化合物ＳＡＣ－１００４（１１ｍｇ、５６％）を得た： ¹H-NMR (300MHz, CDCl₃) δ5.89-5.80 (m, 2H), 5.37-5.27 (m, 2H), 5.17-5.14 (m, 2H), 4.23-4.16 (m, 3H), 3.66 (s, 3H), 3.56 (m, 1H), 2.38-2.28 (m, 4H), 2.17-0.53 (m, 37H)。

＜実験方法＞
１．実験動物モデルの作製
ＭＣ－３８結腸直腸がん細胞（５ｘ１０^５細胞）を７週齢のＣ５７ＢＬ／６雄性マウスに皮下注入した。結腸直腸がん細胞を注入して７日後、皮下ＭＣ－３８腫瘍の平均腫瘍体積は約４０ｍｍ^３であった。上記の通りのマウス腫瘍注入方法は、下記４群全てに対し同様に適用した。その後、実験群を、ビヒクル投与対照群、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群、ＳＡＣ－１００４単独投与群、ならびに抗ＰＤ１単独投与群に分けて、実験を行った。
図１ａは、実験動物モデルの作製からその動物モデルの屠殺までの手順を示す概略図である。

具体的には、投与は下記の通りに行った。血管漏出抑制剤であるＳＡＣ－１００４をＰＢＳ中のＤＭＳＯに溶解し、マウス体重ｋｇあたり１ｍｇを静脈内注入により毎日投与した。免疫チェックポイント阻害剤である抗ＰＤ１は、２００ｎｇ／マウスの濃度で、２００ｎｇのラットｉｇＧ２ａと共に腹腔内注入により週３回投与した。上記の通りにＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１を各群に７日間投与し、８日目に腫瘍および脾臓を摘出した。

２．ＲＮＡ単離、ｃＤＮＡ合成およびＰＣＲ解析
摘出した腫瘍組織からTrizol試薬を用いて全ＲＮＡを単離した。単離したＲＮＡの濃度は、nano-drop（ND-1000、Thermo scientific）を用いて２６０／２８０ｎｍにおける吸光度を測定することにより決定し、ＲＮＡ２μｇを含み全量が２０μｌになるようにしてｃＤＮＡを合成した。

３．マウス腫瘍の蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）
コラゲナーゼを用いて腫瘍組織から細胞を分離した後、細胞に培地を加えて遠心し、沈殿した細胞を回収して計数した。生細胞を３７℃で約３０分間染色した。生細胞のみを染色した後、続いてＰＢＳで３回洗浄した。生／死染色によりキャリブレーションを行った。加えて、Cantoを用いてＦＡＣＳを行った。これにより、Ｔ細胞の活性比を比較することができた。

Ｔ細胞は適応免疫反応に関与しており、ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４^＋Ｔ細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８^＋Ｔ細胞）、およびＣＤ４^＋Ｔ細胞由来であるが細胞傷害性Ｔ細胞を抑制する制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞）に分けられる。加えて、自然免疫反応に関与する細胞傷害性を持つナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）があるため、各群におけるこれらの細胞レベルを測定した。
ヘルパーＴ細胞であるＣＤ４^＋Ｔ細胞を測定するマーカーとしてＣＤ４抗体を用い、ならびに細胞傷害性Ｔ細胞であるＣＤ８^＋Ｔ細胞を測定するマーカーとしてＣＤ８抗体を用いた。加えて、制御性Ｔ細胞を測定するためにＣＤ２５抗体およびＦｏｘｐ^３抗体を用い、ならびにナチュラルキラー細胞を測定するためにＮＫ１．１抗体を用いた。

４．ＩＨＣ染色
腫瘍組織を直ちに取り出し、次いで４％ＰＦＡ中においてＯ／Ｎでインキュベートした（４℃で保存）。腫瘍組織を順次１５％～３０％ショ糖に浸して沈めた後、ドライアイス上でＯＣＴサンプリングを行った。２０μｍの切片を各一次抗体および二次抗体で染色した。

５．Ｔ細胞機能の解析
Ｔ細胞の機能は、主に２つの様式で測定される。一つの方法は、サイトカイン産生能解析であり、これは、炎症促進性サイトカインであるＩＦＮγまたはＴＮＦαのＴ細胞からの分泌を測定する。もう一つの方法は、細胞障害性を測定する方法であり、この場合、腫瘍細胞にパーフォリンまたはグランザイムＢを挿入することにより、腫瘍細胞は直接的に連結され死滅する。

実験例１：ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株注入および薬剤投与によるマウスの腫瘍サイズ変化の解析
対照群、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群、ＳＡＣ－１００４単独投与群、抗ＰＤ１単独投与群からなる全４群において、実験動物モデルでの上記の通りの７日間の薬剤投与による腫瘍サイズの変化を解析した。
図１ｂは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株注入および薬剤投与によるマウスの腫瘍サイズにおける変化を示すグラフである。
図２ａは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株注入および薬剤投与後における、腫瘍および脾臓切除前のマウスの写真である。
図２ｃは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株を注入しおよび薬剤を投与したマウスから摘出された腫瘍の写真である。

特に、抗ＰＤ１単独投与群およびＳＡＣ－１００４単独投与群においては、対照群と比べて腫瘍サイズが減少しており、ならびに、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群においては、前記の単独投与群に比べて腫瘍サイズが縮小していた。この結果は、二元配置ＡＮＯＶＡによって統計的に証明された。
上記結果は、ＳＡＣ－１００４および免疫療法剤を組み合わせて投与した場合には、単独で投与した場合よりも、がんに対する予防的または治療的作用が有意に増大することを示している。

実験例２：ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株注入および薬剤投与によるマウスの生存率の解析
対照群、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群、ＳＡＣ－１００４単独投与群、ならびに抗ＰＤ１単独投与群からなる全４群において、実験動物モデルでの上記の通りの７日間の薬剤投与によるマウスの生存率を解析した。
図１ｃは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株注入および薬剤投与によるマウスの生存率を示すグラフである。

特に、抗ＰＤ１単独投与群においては、対照群またはＳＡＣ－１００４単独投与群よりも薬剤投与によるマウスの生存率が高く、ならびに、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群においては、抗ＰＤ１単独投与群よりもマウスの生存率が高かった。この結果は、二元配置ＡＮＯＶＡによって統計的に証明された。
上記結果は、ＳＡＣ－１００４および免疫療法剤を組み合わせて投与した場合には、単独で投与した場合よりも、がんに対する予防的または治療的作用が有意に増大することを示している。

実験例３：ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株注入および薬剤投与によるマウスの体重変化の解析
対照群、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群、ＳＡＣ－１００４単独投与群、ならびに抗ＰＤ１単独投与群からなる全４群において、実験動物モデルでの上記の通りの７日間の薬剤投与によるマウスの体重変化を解析した。
図２ｄは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株を注入しおよび薬剤を投与したマウスの体重における変化を示すグラフである。

特に、全群において同程度の体重が測定されたが、これは、薬剤の長期投与後であってもマウスに何ら異常が観察されないことを意味している。上記結果は、本発明による併用投与における使用のための医薬組成物が、単独でまたは組み合わせて投与する場合であってもin vivoでの副作用を引き起こさず、安全性が確保されたものであることを示している。

実験例４：ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株を注入しおよび薬剤を投与したマウスの脾臓サイズおよび重量の比較
対照群、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群、ＳＡＣ－１００４単独投与群、ならびに抗ＰＤ１単独投与群からなる全４群で、実験動物モデルにおいて上記の通り薬剤を７日間処置したマウスの脾臓サイズを解析した。
図２ｂは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株を注入しおよび薬剤を投与したマウスから摘出された脾臓の写真である。
図２ｆは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株を注入しおよび薬剤を投与したマウスの脾臓重量における変化を示すグラフである。

特に、ＳＡＣ－１００４単独投与群マウスは、対照群マウスよりも、脾臓重量が多く、抗ＰＤ１単独投与群マウスは、ＳＡＣ－１００４単独投与群マウスよりも、脾臓重量が多く、ならびに、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群マウスは、抗ＰＤ１単独投与群マウスよりも、脾臓重量が多かった。しかしながら、これは、一元配置ＡＮＯＶＡによる検証では統計的に有意ではなかった。
上記結果は、本発明による併用投与における使用のための医薬組成物が、単独でまたは組み合わせて投与する場合であってもin vivoでの副作用を引き起こさず、安全性が確保されたものであることを示している。

実験例５：ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株を注入しおよび薬剤を投与したマウスの腫瘍重量の比較
対照群、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群、ＳＡＣ－１００４単独投与群、ならびに抗ＰＤ１単独投与群からなる全４群で、実験動物モデルにおいて上記の通り薬剤を７日間処置したマウスの腫瘍重量を解析した。
図２ｅは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株を注入しおよび薬剤を投与したマウスの腫瘍重量を示すグラフである。

特に、抗ＰＤ１単独投与群マウスは、対照群マウスよりも、腫瘍重量が少なく、ＳＡＣ－１００４単独投与群マウスは、抗ＰＤ１単独投与群マウスよりも、腫瘍重量が少なく、ならびに、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群マウスは、ＳＡＣ－１００４単独投与群マウスよりも、腫瘍重量が少なかった。この結果は、一元配置ＡＮＯＶＡによって統計的に証明された。
上記結果は、ＳＡＣ－１００４およびがん免疫療法剤を組み合わせて投与した場合には、単独で投与した場合よりも、がんに対する予防的または治療的作用が有意に増大することを示している。

実験例６：マウス腫瘍のＦＡＣＳ解析
対照群、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群、ＳＡＣ－１００４単独投与群、ならびに抗ＰＤ１単独投与群からなる全４群で、実験動物モデルにおいて上記の通り薬剤を７日間処置したマウスの腫瘍についてＦＡＣＳ（蛍光活性化セルソーティング）解析を行った。
ヘルパーＴ細胞であるＣＤ４^＋Ｔ細胞を測定するためにはＣＤ４抗体を用い、および細胞障害性Ｔ細胞であるＣＤ８^＋Ｔ細胞を測定するためにはＣＤ８抗体を用いた。加えて、制御性Ｔ細胞を測定するためにはＣＤ２５抗体およびＦｏｘｐ^３抗体を用い、およびナチュラルキラー細胞を測定するためにはＮＫ１．１抗体を用いた。
図２ｅは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株を注入しおよび薬剤を投与したマウスの腫瘍重量を示すグラフである。

図３ａ～３ｃは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株を注入しおよび薬剤を投与したマウスの腫瘍についてのＦＡＣＳの結果である。
図３ｄは、ＣＤ４５．２＋マーカーによる各薬剤投与群における免疫因子のレベルを示すグラフである。
図３ｅは、各薬剤投与群におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞のレベルを示すグラフである。
図３ｆは、各薬剤投与群におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞のレベルを示すグラフである。
図３ｇは、各薬剤投与群におけるナチュラルキラー細胞のレベルを示すグラフである。
図３ｈは、各薬剤投与群における制御性Ｔ細胞のレベルを示すグラフである。

特に、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群では、細胞障害性Ｔ細胞およびヘルパーＴ細胞のレベルが有意に高く、ナチュラルキラー細胞のレベルもまた高かったが、細胞障害性Ｔ細胞を抑制する制御性Ｔ細胞のレベルは減少していた。この結果は、一元配置ＡＮＯＶＡによって統計的に証明された。
したがって、ＳＡＣ－１００４およびがん免疫療法剤を組み合わせて投与した場合には、単独で投与した場合よりも、Ｔ細胞を活性化させる作用がより強いことが確認された。
上記結果は、ＳＡＣ－１００４およびがん免疫療法剤を組み合わせて投与した場合には、単独で投与するよりも、免疫関連因子であるＴ細胞を活性化させる作用がより優れていることを示している。上記結果から、本発明の併用投与における使用のための医薬組成物は、免疫因子を活性化させることにより、がん免疫療法剤の抗がん作用を高めることができることが確認された。

実験例７：マウス腫瘍における免疫因子の増殖能の解析
対照群、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群、ＳＡＣ－１００４単独投与群、ならびに抗ＰＤ１単独投与群からなる全４群で、実験動物モデルにおいて上記の通り薬剤を７日間処置したマウスの腫瘍における免疫因子の増殖能を解析した。増殖能を測定するために、増殖マーカーであるＫｉ６７を用いた。
図４ａは、各薬剤投与群におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞の増殖能を全量％として示すグラフである。
図４ｂは、各薬剤投与群におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖能を全量％として示すグラフである。
図４ｃは、各薬剤投与群におけるナチュラルキラー細胞の増殖能を全量％として示すグラフである。
図４ｄは、各薬剤投与群におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞の増殖能をＭＦＩ（平均蛍光強度（mean fluorescence intensity））として示すグラフである。
図４ｅは、各薬剤投与群におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖能をＭＦＩ（平均蛍光強度）として示すグラフである。
図４ｆは、各薬剤投与群におけるナチュラルキラー細胞の増殖能をＭＦＩ（平均蛍光強度）として示すグラフである。

特に、ヘルパーＴ細胞、細胞障害性Ｔ細胞、およびナチュラルキラー細胞の増殖能は、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群においては他の群よりも高かった。
上記結果は、ＳＡＣ－１００４およびがん免疫療法剤を組み合わせて投与した場合には、ＳＡＣ－１００４およびがん免疫療法剤を単独で投与した場合よりも、免疫関連因子の増殖能を高める作用がより優れていることを示している。上記結果から、本発明の併用投与における使用のための医薬組成物は、免疫因子を活性化させることにより、がん免疫療法剤の抗がん作用を高めることができることが確認された。

実験例８：マウス腫瘍におけるＴ細胞の細胞障害性の解析
対照群、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群、ＳＡＣ－１００４単独投与群、ならびに抗ＰＤ１単独投与群からなる全４群で、実験動物モデルにおいて上記の通りの７日間薬剤投与によるマウスの腫瘍におけるＴ細胞の細胞障害性を解析した。
細胞障害性を測定するために、ナチュラルキラー細胞の脱顆粒およびＣＤ８^＋Ｔ細胞の活性化に関与するＣＤ１０７ａをマーカーとして用い、ペプチドおよびＰＭＡ／イオノマイシンで処理してＴ細胞を活性化させた。ペプチドにより処理する群では、腫瘍で発現するペプチドをin vitroで加えた。ＰＭＡ／イオノマイシンで処理する群では、Ｔ細胞のカルシウムシグナルを刺激することにより全てのＴ細胞を活性化させた。
図５ａは、各薬剤投与群のＣＤ４^＋Ｔ細胞におけるＣＤ１０７ａのレベルを示すグラフである。
図５ｂは、各薬剤投与群のＣＤ８^＋Ｔ細胞におけるＣＤ１０７ａのレベルを示すグラフである。

特に、ペプチドおよびＰＭＡ／イオノマイシンで処理しなかった群では、ペプチドで処理した群よりも、Ｔ細胞におけるＣＤ１０７ａのレベルは低く、ならびにＰＭＡ／イオノマイシンで処理した群では、ペプチドで処理した群よりも、Ｔ細胞におけるＣＤ１０７ａのレベルが高かった。とりわけ、ＰＭＡ／イオノマイシンで処理した場合には、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群でＣＤ８^＋Ｔ細胞におけるＣＤ１０７ａのレベルが高かった。
上記結果は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞における活性化が相対的に増加したものの、全群で有意でなかった。ＳＡＣ－１００４およびがん免疫療法剤を組み合わせて投与した場合には、単独で投与した場合よりも、Ｔ細胞を活性化させてがん細胞を死滅させる細胞傷害作用が優れていた。上記結果から、本発明の併用投与における使用のための医薬組成物は、がん免疫療法剤との併用投与により、抗がん作用を高めることができることが確認された。

実験例９：マウス腫瘍におけるＴ細胞のサイトカイン産生能の解析
対照群、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群、ＳＡＣ－１００４単独投与群、ならびに抗ＰＤ１単独投与群からなる全４群で、実験動物モデルにおいて上記の通りの７日間薬剤投与によるマウスの腫瘍におけるＴ細胞のサイトカイン産生能を解析した。
（９－１）
サイトカイン産生能を測定するためには、炎症促進性サイトカインのレベルを比較して、炎症促進性サイトカインマーカーであるＴＮＦαを用いることができる。実験例８における通り、ペプチドおよびＰＭＡ／イオノマイシン処理でＴ細胞を活性化させた後、ＴＮＦαのレベルを測定した。

図６ａは、各薬剤投与群のＣＤ４^＋Ｔ細胞におけるＴＮＦαのレベルを示すグラフである。
図６ｂは、各薬剤投与群のＣＤ８^＋Ｔ細胞におけるＴＮＦαのレベルを示すグラフである。
特に、ペプチドおよびＰＭＡ／イオノマイシンで処理しなかった場合には、各薬剤投与群においてＴＮＦαのレベルでの差異は有意でなかったが、ペプチドおよびＰＭＡ／イオノマイシンで処理した場合には、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群におけるＴＮＦαのレベルは有意に増加していた。
上記結果は、ＳＡＣ－１００４およびがん免疫療法剤を組み合わせて投与した場合には、単独で投与した場合よりも、免疫関連因子であるＴ細胞を活性化させる作用が優れていたことを示している。上記結果から、本発明の併用投与における使用のための医薬組成物は、免疫因子を活性化させるより、がん免疫療法剤の抗がん作用を高めることができることが確認された。

（９－２）
ＩＦＮγもまた、炎症促進性サイトカインマーカーである。同様に、ペプチドおよびＰＭＡ／イオノマイシン処理でＴ細胞を活性化させた後、ＩＦＮγのレベルを測定した。
図７ａは、各薬剤投与群のＣＤ４^＋Ｔ細胞におけるＩＦＮγのレベルを示すグラフである。
図７ｂは、各薬剤投与群のＣＤ８^＋Ｔ細胞におけるＩＦＮγのレベルを示すグラフである。

特に、ペプチドおよびＰＭＡ／イオノマイシンで処理しなかった場合には、各薬剤投与群においてＩＦＮγのレベルでの差異は有意でなかったが、ペプチドおよびＰＭＡ／イオノマイシンで処理した場合には、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群におけるＩＦＮγのレベルは有意に増加していた。
上記結果は、ＳＡＣ－１００４およびがん免疫療法剤を組み合わせて投与した場合には、単独で投与した場合よりも、免疫関連因子であるＴ細胞を活性化させる作用が優れていたことを示している。上記結果から、本発明の併用投与における使用のための医薬組成物は、免疫因子を活性化させるより、がん免疫療法剤の抗がん作用を高めることができることが確認された。

実験例１０：マウス脾臓におけるＴ細胞のサイトカイン産生能の解析
対照群、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群、ＳＡＣ－１００４単独投与群、ならびに抗ＰＤ１単独投与群からなる全４群で、実験動物モデルにおいて上記の通り薬剤を７日間処置したマウスの脾臓におけるＴ細胞の機能を比較するため、ＣＤ１０７ａ、ＴＮＦαおよびＩＦＮγマーカーを用いて、ＦＡＣＳ解析、細胞障害性解析およびサイトカイン産生能解析を行った。加えて、実験例８および９における通り、ペプチドおよびＰＭＡ／イオノマイシンを処理してＴ細胞を活性化させた。

図８ａおよび８ｂは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株を注入しおよび薬剤を投与したマウスの腫瘍についてのＦＡＣＳの結果である。
図８ｃは、各薬剤投与群の脾臓におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞のＣＤ１０７ａレベルを示すグラフである。
図８ｄは、各薬剤投与群の脾臓におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞のＴＮＦαレベルを示すグラフである。
図８ｅは、各薬剤投与群の脾臓におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞のＩＦＮγレベルを示すグラフである。
図８ｆは、各薬剤投与群の脾臓におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞のＣＤ１０７ａレベルを示すグラフである。
図８ｇは、各薬剤投与群の脾臓におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞のＴＮＦαレベルを示すグラフである。
図８ｈは、各薬剤投与群の脾臓におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞のＩＦＮγレベルを示すグラフである。

特に、ＰＭＡ／イオノマイシンにより脾臓のＣＤ４^＋Ｔ細胞およびＣＤ８^＋Ｔ細胞処理することによりＴ細胞が活性化された場合には、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群でＣＤ１０７ａ、ＴＮＦαおよびＩＦＮγのレベルが増加していた。
上記結果は、ＳＡＣ－１００４およびがん免疫療法剤を組み合わせて投与した場合には、単独で投与した場合よりも、がん細胞を死滅させる細胞傷害作用が優れており、ならびに免疫関連因子であるＴ細胞を活性化させる作用も優れていたことを示している。上記結果から、本発明の併用投与における使用のための医薬組成物は、免疫因子を活性化させることにより、がん免疫療法剤の抗がん作用を高めることができることが確認された。

実験例１１：マウス腫瘍における接着結合発現の解析
対照群、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群、ＳＡＣ－１００４単独投与群、ならびに抗ＰＤ１単独投与群からなる全４群で、実験動物モデルにおいて７日間にわたるＳＡＣ－１００４の毎日投与および抗ＰＤ１の週３回投与により１４日間薬剤を投与する以外は上記の通り薬剤を処置したマウスの腫瘍における接着結合の発現を解析した。
図９ａは、各薬剤投与群における腫瘍内接着結合の発現レベルを示す蛍光写真である。
図９ｂは、各薬剤投与群における腫瘍内接着結合の発現レベルの定量化による蛍光密度を示すグラフである。

特に、図９ａはＩＨＣ染色の結果を示しており、核を染色するためにＤＡＰＩを用い、血管を染色するためにＣＤ３１を用い、および接着接合を視覚化するためにＶＥ－カドヘリン（接着タンパク質）を用いた。この際、ＶＥ－カドヘリンが十分に発現している場合には、薬剤の送達が良好であるので抗がん作用が増加し、ならびに、内皮細胞間の接着が良好であって、血管が安定しているのでＴ細胞は腫瘍内に十分に浸潤する。
図９ａおよび９ｂに示されている通り、ＳＡＣ－１００４単独投与群では、対照群および抗ＰＤ１単独投与群よりも、腫瘍内ＶＥ－カドヘリンの比率が増加しており、ならびにＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群では、ＳＡＣ－１００４単独投与群よりも、腫瘍内ＶＥ－カドヘリンがより多く発現していた。

上記結果は、ＳＡＣ－１００４およびがん免疫療法剤を組み合わせて投与した場合には、単独で投与した場合よりも、がん免疫療法剤が良好に送達され、Ｔ細胞が腫瘍内に十分に侵入し、ならびに抗がん作用が増加したことを示している。上記結果から、本発明の併用投与における使用のための医薬組成物は、がん免疫療法剤の抗がん作用を高めることができることが確認された。

実験例１２：マウス腫瘍におけるＰＤＬ１発現の解析
対照群、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群、ＳＡＣ－１００４単独投与群、ならびに抗ＰＤ１単独投与群からなる全４群で、実験動物モデルにおいて上記の通りの７日間薬剤投与によるマウスの腫瘍におけるＰＤＬ１（プログラム細胞死リガンド１）の発現を解析した。ＰＤＬ１は腫瘍において発現するリガンドであり、およびＣＤ３はＴ細胞マーカーとして用いられる。
図１０は、各薬剤投与群におけるＰＤＬ１およびＣＤ３の発現レベルを示す蛍光写真である。

特に、図１０はＩＨＣ染色の結果を示しており、ＰＤＬ１の増加は、抗ＰＤ１が良好に送達されて免疫活性化が生じたことを意味している。ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群では、抗ＰＤ１単独投与群よりも、ＰＤＬ１およびＣＤ３の発現レベルが高かった。
上記結果は、ＳＡＣ－１００４およびがん免疫療法剤を組み合わせて投与した場合には、単独で投与した場合よりも、がん免疫療法剤が良好に送達され、免疫活性化が十分に生じ、ならびに抗がん作用が増加したことを示している。上記結果から、本発明の併用投与における使用のための医薬組成物は、がん免疫療法剤の抗がん作用を高めることができることが確認された。

実験例１３：マウス腫瘍におけるサイトカイン発現レベルの解析
対照群、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群、ＳＡＣ－１００４単独投与群、ならびに抗ＰＤ１単独投与群からなる全４群で、実験動物モデルにおいて上記の通りの７日間薬剤投与によるマウスの腫瘍におけるサイトカイン発現レベルを解析した。サイトカインマーカーとして、炎症促進性サイトカインおよび抗炎症性サイトカインを用い、ＲＴ－ＰＣＲを行った。
図１１ａは、各薬剤投与群における炎症促進性サイトカインおよび抗炎症性サイトカインの発現についてのＲＴ－ＰＣＲの結果を示す写真である。
図１１ｂは、各薬剤投与群におけるＣＸＣＬ９、ｉＮＯＳおよびＧａｐｄｈの発現についてのＲＴ－ＰＣＲの結果を示す写真である。
図１１ｃは、各群のｍＲＮＡ発現レベルをＲＴ－ＰＣＲによりグラフ化して示す写真である。

特に、炎症促進性サイトカインのうち、ＩＦＮγが抗ＰＤ１を投与した群において増加していたが、これは、抗ＰＤ１を投与した群よりも、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群においてさらに増加していた。
上記結果は、ＳＡＣ－１００４およびがん免疫療法剤を組み合わせて投与した場合には、単独で投与した場合よりも、免疫関連因子であるＴ細胞を活性化させる作用が優れていたことを示している。上記結果から、本発明の併用投与における使用のための医薬組成物は、免疫因子を活性化させることにより、がん免疫療法剤の抗がん作用を高めることができることが確認された。

実験例１４：ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株増殖および薬剤注入の場合における、ＣＤ４／８ ^＋ Ｔ細胞およびＮＫ細胞枯渇後の薬剤投与による、マウスの生存率の解析
対照群、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群、ＳＡＣ－１００４単独投与群、ならびに抗ＰＤ１単独投与群からなる全４群で、ＣＤ４／８^＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞枯渇後、実験動物モデルにおいて上記の通りの７日間薬剤投与によるマウスの生存率を解析した。
図１２ａは、ＣＤ４／８＋Ｔ、ＮＫ除去、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株注入および薬剤投与の手順を示す概略図である。
図１２ｂは、ＣＤ４／８＋Ｔ、ＮＫ除去、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株注入および薬剤投与による結果がフローサイトメトリーで確認されたこと、ならびに免疫細胞の除去が順調に進んだことを確認する図である。
図１２ｃは、ＣＤ４／８＋ＴおよびＮＫ除去による、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株注入および薬剤投与後のマウスの生存率を示す図であり、ＣＤ８＋Ｔ細胞を除去した実験群マウスは生存率が最も低かったことを確認している。

図１２ｄは、図１２ｃと同様のプロセスを説明する図であり、ＣＤ４／８＋Ｔ除去による、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株注入および薬剤投与後の腫瘍の増殖率を経時的に示しており、ＣＤ８＋Ｔ細胞を除去した実験群マウスは腫瘍増殖率が最も高かったことを確認している。
図１２ｅは、ＣＤ４／８＋ＴおよびＮＫ除去による、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株の注入および薬剤投与後の各実験群での腫瘍のサイズ比較を示す図であり、ＣＤ８＋Ｔ細胞を除去した実験群マウスで腫瘍サイズが最も大きかったことを確認している。
上記結果は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞の除去が最も高い腫瘍増殖率を示したこと、ならびにＮＫ細胞およびＣＤ４^＋Ｔ細胞を除去した実験群が高い腫瘍増殖率を示したことを示している。このことは、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与が、ＣＤ８^＋Ｔ細胞依存的に誘導されるプロセスであることを示唆している。

実験例１５：長期薬剤投与による結果の解析
対照群、ＳＡＣ－１００４および抗ＰＤ１の併用投与群、ＳＡＣ－１００４単独投与群、ならびに抗ＰＤ１単独投与群からなる全４群で、長期薬剤注入後に生存率を解析した。
図１３ａは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株注入および長期薬剤投与の手順を示す概略図である。
図１３ｂは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株注入および長期薬剤投与によるマウスの生存率を示すグラフである。
図１３ｃは、ＭＣ３８結腸直腸がん細胞株注入および長期薬剤投与によるマウスの腫瘍サイズを示すグラフである。
長期薬剤処置後であっても、一貫して同様の結果が示された。したがって、上記実験手順の信頼性が確認され、ならびに長期薬剤投与にもかかわらず薬剤毒性がないことが証明された。

製造例１：粉剤の調製
式１で表される化合物 ２ｇ
乳糖 １ｇ
従来の粉剤調製方法にしたがって、上記の全成分を混合することにより粉剤を調製し、これを気密パックへ充填した。

製造例２：錠剤の調製
式１で表される化合物 １００ｍｇ
トウモロコシデンプン １００ｍｇ
乳糖 １００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ２ｍｇ
従来の錠剤調製方法にしたがって上記の全成分を混合することにより、錠剤を調製した。

製造例３：カプセルの調製
式１で表される化合物 １００ｍｇ
トウモロコシデンプン １００ｍｇ
乳糖 １００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ２ｍｇ
従来のカプセル調製方法にしたがって、上記の全成分を混合し、これをゼラチンカプセルに充填することにより、カプセルを調製した。

製造例４：注射溶液の調製
式１で表される化合物 １００ｍｇ
マンニトール １８０ｍｇ
Ｎａ_２ＨＰＯ_４・２Ｈ_２Ｏ ２６ｍｇ
蒸留水 ２９７４ｍｇ
従来の注射溶液調製方法で、上記の全成分を混合することにより注射溶液を調製した。

製造例５：軟膏の調製
式１で表される化合物 ５ｇ
パルミチン酸セチル ２０ｇ
セタノール ４０ｇ
ステアリルアルコール ４０ｇ
ミリスチン酸イソプロピル ８０ｇ
ポリソルベート ６０ｇ
ｐ－ヒドロキシ安息香酸プロピル １ｇ
ｐ－ヒドロキシ安息香酸メチル １ｇ
リン酸および純水 適量
従来の軟膏調製方法で、上記の全成分を混合することにより軟膏を調製した。

Claims (21)

1. 下記式１
   ［式１］
   

   

   
   （式１において、
   Ｘは、酸素または硫黄であり；
   

   

   
   は、単結合または二重結合を表し；
   Ｒ_１は、水素、ハロ、Ｃ_１－３０アルキル、Ｃ_３－１０シクロアルキル、Ｃ_２－３０アルケニル、Ｃ_３－１０シクロアルケニル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_２－１５ヘテロシクロアルキル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_３－１５ヘテロシクロアルキル、Ｃ_２－３０アルコキシアルキル、Ｃ_３－３０アルコキシアルキル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_３－１０ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_１－２０アルコール、Ｃ_１－２０アルケノール、Ｃ_２－３０アシル、Ｃ_１－１０アミド、Ｃ_１－１０アミン、Ｃ_２－１５エステル、硫酸塩、カルボキシル基、Ｃ_３－２０カルボキシアルキル、Ｃ_３－２０カルボキシアルケニル、Ｃ_３－２０アルキルカルボキシル、Ｃ_３－２０アルケニルカルボキシル、Ｃ_３－２０アルキルカルボキシアルキル、Ｃ_３－２０アルキルカルボキシアルケニル、Ｃ_３－２０アルケニルカルボキシアルキル、Ｃ_４－２０アルケニルカルボキシアルケニル、Ｃ_６－３０アリール、Ｃ_６－３０アラルキル、Ｃ_６－３０アルカリール、ヘテロ原子として窒素を含有するＣ_３－３０ヘテロアリール、またはＣ_６－３０アリールカルボニルであり；
   Ｒ_２１は、Ｃ_２－３０アルキル、Ｃ_３－１０シクロアルキル、Ｃ_２－３０アルケニル、Ｃ_３－１０シクロアルケニル、Ｃ_２－３０カルボキシアルキル、Ｃ_２－３０アルキルカルボキシル、Ｃ_３－３０カルボキシアルケニル、Ｃ_３－３０アルケニルカルボキシル、Ｃ_３－３０アルキルカルボキシアルキル、Ｃ_３－３０アルキルカルボキシアルケニル、Ｃ_３－３０アルケニルカルボキシアルキル、Ｃ_４－３０アルケニルカルボキシアルケニル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_２－１０ヘテロシクロアルキル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_３－１０ヘテロシクロアルキル、Ｃ_２－３０アルコキシアルキル、Ｃ_３－３０アルコキシアルキル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_３－１０ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_１－２０アルコール、Ｃ_１－２０アルケノール、Ｃ_２－３０アシル、Ｃ_１－１０アミド、Ｃ_１－１０アミンまたはＣ_２－１５エステルであり；
   Ｒ_２２は、水素、ヒドロキシ、ハロまたはＣ_１－１０アルキルであり；
   Ｒ_２３は、水素、ヒドロキシまたはＣ_１－１０アルキルであり；
   Ｒ_２１は、Ｒ_２２およびＲ_２３と一緒に結合している炭素に対して二重結合を形成していてもよく；
   Ｒ_２３は、Ｒ_２１およびＲ_２２と一緒に結合している炭素に対して二重結合を形成していてもよく；
   Ｒ_２１またはＲ_２３が前記炭素に対して二重結合を形成している場合は、Ｒ_２２は原子を含まず；ならびに
   Ｒ_３およびＲ_４は、独立して水素またはＣ_１－１０アルキルである）
   で表される化合物、その異性体、その溶媒和物、その水和物、またはその薬学的に許容し得る塩を活性成分として含む、がん免疫療法アジュバント。
2. 式１において、Ｘが酸素である、請求項１に記載のがん免疫療法アジュバント。
3. 式１において、Ｒ_１が、水素、ハロ、Ｃ_１－１０アルキル、Ｃ_３－８シクロアルキル、Ｃ_２－１０アルケニル、Ｃ_３－８シクロアルケニル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_２－８ヘテロシクロアルキル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_３－１０ヘテロシクロアルキル、Ｃ_２－２０アルコキシアルキル、Ｃ_３－２０アルコキシアルキル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_３－８ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_１－１０アルコール、Ｃ_１－１０アルケノール、Ｃ_２－２０アシル、Ｃ_１－１０アミド、Ｃ_１－５アミン、Ｃ_２－１５エステル、硫酸塩、カルボキシル基、Ｃ_３－２０カルボキシアルキル、Ｃ_３－２０カルボキシアルケニル、Ｃ_３－２０アルキルカルボキシル、Ｃ_３－２０アルケニルカルボキシル、Ｃ_３－２０アルキルカルボキシアルキル、Ｃ_３－２０アルキルカルボキシアルケニル、Ｃ_３－２０アルケニルカルボキシアルキル、Ｃ_４－２０アルケニルカルボキシアルケニル、Ｃ_６－２０アリール、Ｃ_６－２０アラルキル、Ｃ_６－２０アルカリール、ヘテロ原子として窒素を含有するＣ_３－２０ヘテロアリール、またはＣ_６－２０アリールカルボニルである、請求項１に記載のがん免疫療法アジュバント。
4. 式１において、Ｒ_１が、水素、Ｃ_１－１０アルキル、Ｃ_３－８シクロアルキル、Ｃ_２－１０アルケニル、Ｃ_３－８シクロアルケニル、ヘテロ原子として酸素を含有するＣ_２－８ヘテロシクロアルキル、ヘテロ原子として酸素を含有するＣ_３－１０ヘテロシクロアルキル、Ｃ_２－２０アルコキシアルキル、Ｃ_３－１０アルコキシアルキル、ヘテロ原子として酸素を含有するＣ_３－８ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_１－１０アルコール、Ｃ_１－１０アルケノール、Ｃ_１－１０アミド、Ｃ_１－５アミン、Ｃ_２－１５エステル、硫酸塩、カルボキシル基、Ｃ_３－２０カルボキシアルキル、Ｃ_３－２０カルボキシアルケニル、Ｃ_３－２０アルキルカルボキシル、Ｃ_３－２０アルケニルカルボキシル、Ｃ_３－２０アルキルカルボキシアルキル、Ｃ_３－２０アルキルカルボキシアルケニル、Ｃ_３－２０アルケニルカルボキシアルキル、Ｃ_４－２０アルケニルカルボキシアルケニル、Ｃ_６－２０アリール、Ｃ_６－２０アラルキル、Ｃ_６－２０アルカリール、ヘテロ原子として窒素を含有するＣ_３－２０ヘテロアリール、またはＣ_６－２０アリールカルボニルである、請求項３に記載のがん免疫療法アジュバント。
5. 式１のＲ_１において、シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルは、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ_１－５アルキル、Ｃ_１－５アルコール、Ｃ_１－５アルコキシ、Ｃ_２－８アルコキシアルキル、Ｃ_６－２０アリール、Ｃ_７－２０アリールカルボキシルまたはそれらの組み合わせで置換されていてもよく；Ｃ_３－１０シクロアルケニルまたはヘテロシクロアルケニルは、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ_１－５アルキル、Ｃ_２－８アルキルカルボキシル、Ｃ_３－８アルキルカルボキシルアルキル、Ｃ_１－５アルコール、Ｃ_１－５アルコキシ、Ｃ_２－８アルコキシアルキル、Ｃ_６－２０アリール、Ｃ_７－２０アリールカルボキシルまたはそれらの組み合わせで置換されていてもよく；アリールは、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ_１－５アルキル、Ｃ_１－５アルコール、Ｃ_１－５アルコキシ、Ｃ_２－８アルコキシアルキル、ニトロ、Ｃ_２－８アルキルカルボキシルアミノまたはそれらの組み合わせで置換されていてもよく；アラルキルは、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ_１－５アルキル、Ｃ_１－５アルコール、Ｃ_１－５アルコキシ、Ｃ_２－８アルコキシアルキル、ニトロ、Ｃ_２－８アルキルカルボキシルアミノまたはそれらの組み合わせで置換されていてもよく；アルカリールは、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ_１－５アルキル、Ｃ_１－５アルコール、Ｃ_１－５アルコキシ、Ｃ_２－８アルコキシアルキル、ニトロ、Ｃ_２－８アルキルカルボキシルアミノまたはそれらの組み合わせで置換されていてもよく；アリールカルボニルは、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ_１－５アルキル、Ｃ_１－５アルコール、Ｃ_１－５アルコキシ、Ｃ_２－８アルコキシアルキル、ニトロ、Ｃ_２－８アルキルカルボキシルアミノまたはそれらの組み合わせで置換されていてもよく；および、ヘテロアリールは、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ_１－５アルキル、Ｃ_１－５アルコール、Ｃ_１－５アルコキシ、Ｃ_２－８アルコキシアルキル、ニトロ、Ｃ_２－８アルキルカルボキシルアミノまたはそれらの組み合わせで置換されていてもよい、請求項１に記載のがん免疫療法アジュバント。
6. 式１において、Ｒ_２１が、直鎖または分岐Ｃ_２－１５アルキル、Ｃ_３－１０シクロアルキル、Ｃ_２－１５アルケニル、Ｃ_３－１０シクロアルケニル、Ｃ_２－１５カルボキシアルキル、Ｃ_２－１５アルキルカルボキシル、Ｃ_３－１５カルボキシアルケニル、Ｃ_２－１５アルケニルカルボキシル、Ｃ_３－１５アルキルカルボキシアルキル、Ｃ_３－１５アルキルカルボキシアルケニル、Ｃ_３－１５アルケニルカルボキシアルキル、Ｃ_２－３０アルケニルカルボキシアルケニル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_２－１０ヘテロシクロアルキル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_３－１０ヘテロシクロアルキル、Ｃ_２－２０アルコキシアルキル、Ｃ_３－３０アルコキシアルキル、ヘテロ原子として酸素、硫黄もしくは窒素を含有するＣ_３－１０ヘテロシクロアルケニル、Ｃ_１－２０アルコール、Ｃ_１－２０アルケノール、Ｃ_２－３０アシル、Ｃ_１－１０アミド、Ｃ_１－１０アミンまたはＣ_２－１５エステルである、請求項１に記載のがん免疫療法アジュバント。
7. 式１において、Ｒ_２３が、Ｃ_１－５アルキルであるか、またはＲ_２１およびＲ_２２と一緒に結合している炭素に対して二重結合を形成している、請求項１に記載のがん免疫療法アジュバント。
8. 式１において、
   

   

   
   が、二重結合である、請求項１に記載のがん免疫療法アジュバント。
9. 式１の化合物が、下記式２
   

   

   
   で表される化合物である、請求項１に記載のがん免疫療法アジュバント。
10. がん免疫療法アジュバントが、がん免疫療法剤の効果を高める、請求項１に記載のがん免疫療法アジュバント。
11. がん免疫療法アジュバントが、免疫増強作用を示す、請求項１に記載のがん免疫療法アジュバント。
12. がん免疫療法アジュバントが、がん免疫療法剤と同時にまたは逐次的に投与されてもよい、請求項１に記載のがん免疫療法アジュバント。
13. がん免疫療法アジュバントが、ヘルパーＴ細胞、細胞障害性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）およびサイトカインからなる群から選択される少なくとも１種の免疫因子を活性化させる、請求項１に記載のがん免疫療法アジュバント。
14. がん免疫療法アジュバントが、偽粘液腫、肝内胆管癌腫、肝芽腫、肝臓がん、甲状腺がん、大腸がん、精巣がん、骨髄異形成症候群、膠芽腫、口腔がん、口唇がん、菌状息肉症、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、基底細胞癌腫、卵巣上皮がん、卵巣胚細胞がん、男性乳がん、脳がん、下垂体腺腫、多発性骨髄腫、胆嚢がん、胆道がん、結腸直腸がん、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、網膜芽腫、脈絡膜メラノーマ、ファーター膨大部がん、膀胱がん、腹膜がん、副甲状腺がん、副腎がん、鼻腔がん、非小細胞肺がん、舌がん、星状細胞腫、小細胞肺がん、若年性脳がん、若年性リンパ腫、若年性白血病、小腸がん、髄膜腫、食道がん、神経膠腫、腎盂がん、腎臓がん、心臓がん、十二指腸がん、悪性軟部がん、悪性骨がん、悪性リンパ腫、悪性中皮腫、悪性メラノーマ、眼がん、外陰部がん、尿管がん、尿道がん、原発不明がん、胃リンパ腫、胃がん、胃癌腫、消化管間質がん、ウィルムスがん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、肉腫、陰茎がん、咽頭がん、妊娠性絨毛疾患、子宮頸がん、子宮内膜がん、子宮肉腫、前立腺がん、転移性骨がん、転移性脳がん、縦隔がん、直腸がん、直腸癌腫、膣がん、脊髄がん、前庭神経鞘腫、膵臓がん、唾液腺がん、カポジ肉腫、パジェット病、扁桃がん、扁平細胞癌腫、肺腺がん、肺がん、肺扁平細胞癌腫、皮膚がん、肛門がん、横紋筋肉腫、喉頭がん、胸膜がん、血液がん、および胸腺がんからなる群から選択される少なくとも１種のがんを予防または処置する、請求項１に記載のがん免疫療法アジュバント。
15. がん免疫療法アジュバントが、抗ＰＤ１、抗ＰＤＬ１、抗ＣＴＬＡ４、抗ＬＡＧ３、抗ＶＩＳＴＡ、抗ＢＴＬＡ、抗ＴＩＭ３、抗ＨＶＥＭ、抗ＣＤ２７、抗ＣＤ１３７、抗ＯＸ４０、抗ＣＤ２８、抗ＰＤＬ２、抗ＧＩＴＲ、抗ＩＣＯＳ、抗ＳＩＲＰα、抗ＩＬＴ２、抗ＩＬＴ３、抗ＩＬＴ４、抗ＩＬＴ５、抗ＥＧＦＲ、抗ＣＤ１９および抗ＴＩＧＩＴからなる群から選択される少なくとも１種のがん免疫療法剤と一緒に併用投与される、請求項１に記載のがん免疫療法アジュバント。
16. がん免疫療法剤；および請求項１に記載のがん免疫療法用アジュバントを含む、抗がん用組み合わせ薬剤。
17. 組み合わせ薬剤が、がん免疫療法用の組み合わせ薬剤である、請求項１６に記載の抗がん用組み合わせ薬剤。
18. 下記式１
    ［式１］
    

    

    
    で表される化合物、その異性体、その溶媒和物、その水和物、またはその薬学的に許容し得る塩を活性成分として含む、がん免疫療法剤の効果を高めることにおける使用のための医薬組成物。
19. 下記式１
    ［式１］
    

    

    
    で表される化合物、その異性体、その溶媒和物、その水和物、またはその薬学的に許容し得る塩を活性成分として含む、免疫を高めることにおける使用のための医薬組成物。
20. がん免疫療法剤；および請求項１に記載のがん免疫療法アジュバントを、それを必要とする対象に投与するステップを含む、がんを予防または処置するための方法。
21. がん免疫療法剤；および請求項１に記載のがん免疫療法アジュバントを活性成分として含む、抗がん処置のためのキット。

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