JP2022521840A - タンパク質含有製剤を安定化するための組成物および方法 - Google Patents

タンパク質含有製剤を安定化するための組成物および方法 Download PDF

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Abstract

本発明は、治療上有用な製剤中の抗体および他のタンパク質の貯蔵安定性を増強するための組成物を含む、ある特定のコール酸塩界面活性剤の使用に関する。【選択図】なし

Description

本発明は、治療上有用な製剤中の抗体および他のタンパク質の貯蔵安定性を増強するための組成物を含む、ある特定のコール酸塩界面活性剤の使用に関する。
タンパク質製剤の安定剤が、振盪、撹拌、剪断および凍結融解時の変性からタンパク質を保護するために、または界面での静止状態で必要とされる場合、非イオン性洗剤（ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ）（すなわち、界面活性剤）がしばしば使用される（例えば、米国特許第５，１８３，７４６号を参照されたい）。これは、多くのタンパク質含有製品におけるポリソルベートの使用によって例示される。例えば、ポリソルベート２０および８０（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０およびＴｗｅｅｎ（登録商標）８０としても公知）は、表面吸着の防止およびタンパク質の凝集に対する安定剤の両方のための生物治療用製品の製剤に使用される（Ｋｅｒｗｉｎ、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９７（８）：２９２４～２９３６（２００８））。ポリソルベートは、ポリオキシエチレン（ＰＯＥ）ソルビタンの脂肪酸エステルで構成される両親媒性の非イオン性界面活性剤であり、ポリソルベート２０についてはポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートであり、ポリソルベート８０についてはポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートである。
残念なことに、ポリソルベートは、酸化または加水分解のいずれかを介して分解を受ける可能性がある。ポリソルベート分子が分解すると、例えば、遊離脂肪酸、ＰＯＥソルビタン、ＰＥＧ、ＰＥＧエステルおよびアルキル酸を含む様々な分解副産物が生じる。遊離脂肪酸（ＦＦＡ）を含むこれらの副産物のいくつかは、タンパク質含有製剤の濁度およびタンパク質の凝集を増加させる可能性があり、製剤中のタンパク質を凝集または酸化から保護することができるインタクトなポリソルベートの量を減少させ得る。したがって、ポリソルベートはタンパク質安定剤として一般的に使用されているが、ポリソルベート分解から経時的に放出される脂肪酸および他の分解副産物は、ポリソルベートがタンパク質含有製剤において示す保護効果に悪影響を及ぼし得る。
タンパク質は、精製および貯蔵中に様々な程度の分解を受け、酸化（光誘起酸化を含む）は、タンパク質の安定性および効力に破壊的な影響を有する主要な分解経路の１つである。酸化反応は、アミノ酸残基の破壊、ペプチド結合加水分解、したがってタンパク質の三次構造およびタンパク質の凝集の変化によるタンパク質の不安定性を引き起こす（Ｄａｖｉｅｓ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：９８９５～９０１（１９８７））。タンパク質医薬品の酸化は、Ｎｇｕｙｅｎ（「Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」（１９９４）の第４章）、Ｈｏｖｏｒｋａ（Ｊ．Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ．９０：２５３６９（２００１））およびＬｉ（Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ４８：４９０～５００（１９９５））によって概説されている。
上記を考慮すると、タンパク質含有製剤中のタンパク質の安定性を増強し、凝集および／または酸化を防止するのに有用な組成物の同定の必要性があることは明らかである。
本開示は、ある特定のコール酸塩界面活性剤が、治療上有用な製剤中の抗体または他のタンパク質の安定化および／または凝集を低減するために、またそのような製剤中のポリソルベート界面活性剤の分解を低減するために有用であるという新規な知見に基づいている。さらに、本明細書のコール酸塩界面活性剤は、タンパク質安定化剤または凝集低減剤として、少なくとも約２．０ｍＭまたは少なくとも約０．２％（重量体積、ｗ／ｖ）の臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）値未満の濃度でタンパク質含有治療用製剤を安定化するのに有用であり得る。ある特定の実施形態では、コール酸塩系界面活性剤はまた、ＣＭＣ値未満の濃度でアルキルグリコシド界面活性剤よりも効果的に治療用タンパク質製剤を保護し得る。したがって、一態様では、本開示は、２５℃の水中で測定したＣＭＣ値より低い濃度で少なくとも１種のコール酸塩界面活性剤を含む治療的使用を意図したタンパク質などのタンパク質の製剤に関する。ある特定の実施形態では、物質の組成物中に存在するタンパク質は抗体であり、任意にモノクローナル抗体であり得る。本開示はまた、そのような製剤を保持する容器、そのような容器を含む物品、および製剤を調製する方法に関する。
いくつかの実施形態では、製剤は水性であってもよく、約２～８℃の温度で少なくとも１年間安定であり得、および／または約３０℃の温度で少なくとも１ヶ月間安定であり得る。いくつかの実施形態では、製剤は、ポリソルベートおよびポロキサマーを含まない。他の実施形態では、製剤は、ポリソルベートおよび／またはポロキサマーを含む。いくつかの実施形態では、製剤はアルキルグリコシドを含まない。他の実施形態では、製剤はアルキルグリコシドを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、コール酸塩以外の他の界面活性剤を含まない。他の実施形態では、製剤は他の界面活性剤を含む。
本開示は、とりわけ、タンパク質、および２５℃の水中で２．０ｍＭ以上または０．２％（ｗ／ｖ）以上の臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）値を有する少なくとも１種のコール酸塩界面活性剤を含むタンパク質製剤を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質は、モノクローナル抗体などの抗体である。いくつかの実施形態では、コール酸塩界面活性剤は双性イオン性、非イオン性、アニオン性であるか、またはＣＨＡＰＳ（３－［（３－コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ］－１－プロパンスルホネート）、ＳＧＨ（グリココール酸ナトリウム水和物）、タウロコール酸ナトリウム水和物（ＳＴＨ）、コール酸ナトリウム水和物（ＳＣＨ）、ＳｄＴＨ、ＳｄＣＨ、ＳｃｄＣＨ、およびＢｉｇＣＨＡＰ（Ｎ，Ｎ’－ビス－（３－Ｄ－グルコンアミドプロピル）コールアミド）から選択される。いくつかの実施形態では、製剤は、０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．１％以下、０．０５％以下、０．０４％以下、０．０２５％以下、０．０２％以下、０．０１～０．５％、０．０１～０．１％、０．０１～０．０５％、または０．０２５％～０．０５％の濃度（ｗ／ｖ）でＣＨＡＰＳを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、０．０２５％～０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度でＣＨＡＰＳを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．１％以下、０．０５％以下、０．０４％以下、０．０２５％以下、０．０２％以下、０．０１～０．５％、０．０１～０．１％、０．０１～０．０５％、または０．０２５％～０．０５％の濃度（ｗ／ｖ）でＢｉｇＣＨＡＰを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、０．０２５％～０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度でＢｉｇＣＨＡＰを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．１％以下、０．０５％以下、０．０４％以下、０．０２５％以下、０．０２％以下、０．０１～０．５％、０．０１～０．１％、０．０１～０．０５％、または０．０２５％～０．０５％の濃度（ｗ／ｖ）でＳＧＨ、ＳＴＨ、またはＳＣＨを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、０．０２５％～０．０５％の濃度でＳＧＨ、ＳＴＨ、またはＳＣＨを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１種のコール酸塩界面活性剤は、２５℃の水中でそのＣＭＣ値より低い濃度で存在する。
いくつかの実施形態では、製剤は、双性イオン性または非イオン性コール酸塩界面活性剤を含み、低イオン強度製剤である。いくつかのそのような場合、製剤は、５０ｍＭ未満の塩、４０ｍＭ未満の塩、３０ｍＭ未満の塩、または２５ｍＭ未満の塩、例えばナトリウム、アルギニン、またはヒスチジン塩を含有する。
いくつかの実施形態では、製剤は、アニオン性コール酸塩界面活性剤を含み、高イオン強度製剤である。いくつかのそのような場合、製剤は、少なくとも１７５ｍＭの塩、少なくとも２００ｍＭの塩、少なくとも２２５ｍＭの塩、または少なくとも２５０ｍＭの塩、例えばナトリウム、アルギニン、またはヒスチジン塩を含む。
いくつかの実施形態では、製剤は治療的使用に適している。いくつかの実施形態では、製剤は、すぐに使用できる液体製剤など、凍結乾燥に供されていない。あるいは、製剤は、再構成された凍結乾燥製剤である。
いくつかの実施形態では、製剤は、ポリソルベート、ポロキサマー、プルロニック、Ｂｒｉｊ、およびアルキルグリコシド界面活性剤のいずれも含まない。いくつかの実施形態では、製剤はいずれの非コール酸塩界面活性剤を含まない。いくつかの実施形態では、製剤は、少なくとも１種のコール酸塩界面活性剤、少なくとも１種のタンパク質種、少なくとも１種のバッファー種、および少なくとも１種の非界面活性剤安定剤（例えば、糖、糖アルコール、アミノ酸、ペプチド、塩、または他のタンパク質）から本質的になる。いくつかの実施形態では、製剤は、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０などの少なくとも１種のポリソルベートまたはポロキサマーをさらに含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１．０％以下、０．０５％以下、０．０４％以下、０．０２５％以下、０．０２％以下、または０．０１％以下のポリソルベート２０または８０を含む。他の実施形態では、製剤は、コール酸塩界面活性剤およびポリソルベート２０または８０以外のいかなる界面活性剤も含まない。
本開示はまた、治療用タンパク質製剤を含み、該治療用タンパク質製剤は、少なくとも１種の治療用タンパク質種、および０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．１％以下、０．０５％以下、０．０４％以下、０．０２５％以下、０．０２％以下、０．０１～０．５％、０．０１～０．１％、０．０１～０．０５％、または０．０２５％～０．０５％の濃度（ｗ／ｖ）のＣＨＡＰＳから本質的になる界面活性剤を含み、および任意に、バッファー、塩、凍結乾燥保護剤、または糖、糖アルコール、アミノ酸、もしくは他のタンパク質種のうちの１つ以上を含む安定剤のうちの１つ以上をさらに含み、任意に：（ａ）製剤は低イオン強度であり；（ｂ）少なくとも１種の治療用タンパク質は抗体であり；および／または（ｃ）製剤は、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤である。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、０．０１～０．０５％、または０．０２５％～０．０５％（ｗ／ｖ）のＣＨＡＰＳから本質的になる。いくつかの実施形態では、少なくとも１種の治療用タンパク質種、および０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．１％以下、０．０５％以下、０．０４％以下、０．０２５％以下、０．０２％以下、０．０１～０．５％、０．０１～０．１％、０．０１～０．０５％、または０．０２５％～０．０５％の濃度（ｗ／ｖ）のＢｉｇＣＨＡＰから本質的になる界面活性剤、および任意に、バッファー、塩、凍結乾燥保護剤、または糖、糖アルコール、アミノ酸、もしくは他のタンパク質種のうちの１つ以上を含む安定剤のうちの１つ以上をさらに含み、任意に、（ａ）製剤は低イオン強度であり；（ｂ）少なくとも１種の治療用タンパク質は抗体であり；および／または（ｃ）製剤は、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤である。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、０．０１～０．０５％、または０．０２５％～０．０５％（ｗ／ｖ）のＢｉｇＣＨＡＰから本質的になる。
本開示はまた、治療用タンパク質製剤を含み、該治療用タンパク質製剤は、少なくとも１種の治療用タンパク質種、および０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．１％以下、０．０５％以下、０．０４％以下、０．０２５％以下、０．０２％以下、０．０１～０．５％、０．０１～０．１％、０．０１～０．０５％、または０．０２５％～０．０５％の濃度（ｗ／ｖ）のＳＴＨ、ＳＧＨ、またはＳＣＨから本質的になる界面活性剤を含み、製剤は高イオン強度製剤であり、任意に、バッファー、塩、凍結乾燥保護剤、または糖、糖アルコール、アミノ酸、もしくは他のタンパク質種のうちの１つ以上を含む安定剤のうちの１つ以上をさらに含み、任意に、（ａ）少なくとも１種の治療用タンパク質は抗体であり；および／または（ｂ）製剤は、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤である。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、０．０１～０．０５％、または０．０２５％～０．０５％（ｗ／ｖ）のＳＴＨ、ＳＧＨ、またはＳＣＨから本質的になる。
いくつかの実施形態では、製剤は、以下の特性の１つ以上を有する：（ａ）製剤は、室温で毎分１００回転（ｒｐｍ）で２４時間撹拌した後、目に見える凝集体を示さない；（ｂ）製剤は、室温で１００ｒｐｍで２４時間撹拌した後、２％以下の高分子量タンパク質の凝集体を示す；（ｃ）製剤は、室温で１００で２４時間撹拌した後、１％以下の高分子量タンパク質の凝集体を示す；（ｄ）製剤中の高分子量タンパク質の凝集体は、撹拌していない対照と比較して、室温で１００ｒｐｍで２４時間撹拌した後に０．２％を超えて増加しない；（ｅ）製剤がポリソルベート２０またはポリソルベート８０を含む場合、製剤中のポリソルベート２０またはポリソルベート８０は、同じ成分および濃度を有するがコール酸塩を含まない製剤よりも、４０℃で２週間貯蔵した後またはカンジダ・アンタークティカ（Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ）のリパーゼＢ（ＣＡＬＢ、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ ＣＡＳ＃９００１－６２－１）リパーゼによる処理後に、大部分がインタクトである。
本開示はまた、本明細書に開示の製剤を含む容器、および製剤を含む容器を含む製品を含む。
本開示は、タンパク質を少なくとも１種のコール酸塩界面活性剤と混合してコール酸塩含有水溶液を形成することを含む、本明細書のタンパク質製剤を作製する方法をさらに含む。本開示はまた、水溶液中に存在するタンパク質の凝集を阻害する方法を含み、前記方法は、２５℃の水中で約２．０ｍＭ以上または０．２％（ｗ／ｖ）の臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）値を有する、２５℃の水中でそのＣＭＣ値より低い濃度で少なくとも１種のコール酸塩界面活性剤を水溶液に添加して、コール酸塩含有水溶液を形成することを含む。いくつかのこのような実施形態では、タンパク質はモノクローナル抗体などの抗体である。いくつかの実施形態では、方法は、コール酸塩含有水溶液を凍結乾燥することをさらに含む。他の実施形態では、方法は、コール酸塩含有水溶液を凍結乾燥することを含まない。
０．０５％（ｗ／ｖ）のコール酸塩界面活性剤または対照界面活性剤（コール酸塩ＣＨＡＰＳ、ＳＧＨ、またはＳＴＨ、ポリソルベート２０（ＰＳ２０）、またはポロキサマー１８８（ＰＸ１８８））を、ｐＨ５．５の２０ｍＭヒスチジンアセテートおよび２４０ｍＭスクロース中、１ｍｇ／ｍＬの例示的モノクローナル抗ＰＤＬ１抗体と混合した結果を示す。溶液は、１５ｍＬガラスバイアル中に５ｍＬの体積であった。上記成分を含むが界面活性剤は含まない対照溶液も調製した。この図は、毎分１００回転（ｒｐｍ）のアームシェーカー（Ｇｌａｓ－Ｃｏｌベンチトップアームシェーカー）にて、周囲温度で２４時間撹拌した後、目に見える凝集体が形成されるかどうかを示す。 ｐＨ５．８の２００ｍＭアルギニンスクシネートの溶液中、１ｍｇ／ｍＬの例示的なモノクローナル抗トリプターゼ抗体を混合することから示す。溶液は、１５ｍＬガラスバイアル中に５ｍＬの体積であった。上記成分を含むが界面活性剤は含まない対照溶液も調製した。この図は、１００ｒｐｍのアームシェーカーにて、周囲温度で２４時間撹拌した後、目に見える凝集体が形成されるかどうかを示す。 コール酸塩がタンパク質溶液中の遊離脂肪酸を沈殿から保護することができることを示す。ｐＨ５．８の５ｍｇ／ｍＬ抗トリプターゼ抗体および２００ｍＭアルギニンスクシネートおよび０．０２％ＰＳ２０を含有する溶液を、様々な濃度のコール酸塩界面活性剤と混合し、次いで５℃で０．０４単位／ｍＬ ＣＡＬＢでスパイクした。コール酸塩がＰＳ２０をＦＦＡへの分解から保護する場合、目に見えるＦＦＡ沈殿粒子はタンパク質溶液中に形成されるはずはなく、またはこのような粒子は、形成されても、コール酸塩の添加時に再可溶化するはずであり、一方、コール酸塩が保護または可溶化をもたらさない場合、目に見えるＦＦＡ沈殿粒子は、コール酸塩が添加されなかったタンパク質溶液と同程度に形成されるはずである。結果は、０．５％のＳＣＨ、ＳＧＨ、またはＣＨＡＰＳの添加が溶液中の目に見える微粒子形成を防ぐが、そのような微粒子は、０．０２％～０．１％で各界面活性剤が添加されると依然として形成することを示す。 ＣＡＬＢリパーゼの添加によって誘導されるＰＳ２０分解に対し、異なる濃度のコール酸塩界面活性剤のインキュベーション結果の要約を示す。グラフの破線は、「リパーゼのみ」の対照溶液によって示されるように、完全分解時に観察されるＰＳ２０濃度を提供する。
本発明は、具体的な実施形態および本明細書に含まれる実施例の以下の詳細な説明を参照することによって、より容易に理解されるだろう。
別段の定義がない限り、本発明に関連して使用される科学的および技術的用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈上別段の必要がない限り、単数形の用語には複数形が含まれ、複数形の用語には単数形が含まれるものとする。
本出願では、「または」の使用は、特に明記しない限り、「および／または」を意味する。多数項従属請求項の文脈では、「または」の使用は、２つ以上の先行する独立請求項または従属請求項のいずれかのみを指す。また、「要素」または「構成成分」などの用語は、特に明記しない限り、１つの単位を含む要素および構成成分と、２つ以上のサブユニットを含む要素および構成成分の両方を包含する。
本明細書に記載の場合、任意の濃度範囲、パーセンテージ範囲、比率の範囲、または整数範囲は、別段示されない限り、列挙された範囲内のあらゆる整数、および適切な場合、それらの分数（整数の１０分の１および１００分の１など）の値を含むと理解されるべきである。
単位、接頭辞、および記号は、国際単位系（ＳＩ）で受け入れられている形式で示されている。数値範囲は、範囲を定義する数を含む。測定値は、有効数字および測定に関連する誤差を考慮して、近似値であると理解される。
本明細書で使用される場合、パーセンテージ（「％」）は、別途指定されない限り、重量対体積（「ｗ／ｖ」）パーセンテージである。
本開示は、製剤を含むタンパク質およびコール酸塩に関する。このような「製剤」はまた、本明細書では互換的に「組成物」または「調製物」と呼ばれ得る。
本明細書のいくつかの実施形態では、製剤は「低イオン強度」または「高イオン強度」であり得る。「イオン強度」は、溶液中の電界の強度を表し、存在する各種のイオンのモル濃度の合計にそれらの電荷の二乗を乗じたものに等しい。本明細書で使用される場合、「低イオン強度」製剤は、５０ｍＭ以下、例えば２０ｍＭ～５０ｍＭの塩濃度（例えば、ナトリウム、アルギニン、ヒスチジン、または類似の塩）を有する。本明細書で使用される場合、高イオン強度製剤は、１５０ｍＭ以上、例えば１５０ｍＭ～３００ｍＭの塩濃度（例えば、ナトリウム、アルギニン、ヒスチジン、または類似のもの）を有する。
「等張」製剤は、ヒト血液と本質的に同じ浸透圧を有するものである。等張製剤は、一般的に、約２５０～３５０ｍＯｓｍの浸透圧を有する。「低張」という用語は、ヒト血液のものより低い浸透圧を有する製剤を表す。同様に、「高張」という用語は、ヒト血液のものより高い浸透圧を有する製剤を表すために使用される。等張性は、例えば蒸気圧浸透圧計または凝固点降下浸透圧計を使用して測定することができる。本開示の製剤は、塩および／またはバッファーの添加の結果として高張であり得る。
「凍結乾燥」製剤は、凍結乾燥された製剤または凍結乾燥プロセスに供された製剤である。本明細書の製剤は、貯蔵のために凍結乾燥されてもよく、あるいは、液体溶液として貯蔵することを意図してもよい。「再構成」製剤は、タンパク質が再構成製剤中に分散されるように、凍結乾燥したタンパク質または抗体製剤を希釈剤に溶解することによって調製されたものである。再構成製剤は、目的のタンパク質で処置される患者への投与などの使用に適し得る。
「界面活性剤」は、それらが溶液中で凝集してミセルを形成することを可能にする明確に定義された極性および非極性領域を有する分子である。極性エリアの性質に応じて、界面活性剤は、非イオン性、アニオン性、カチオン性、および双性イオン性であり得る。
本明細書で使用される場合、「コール酸塩」または「コール酸塩界面活性剤」は、コール酸骨格に基づく分子を指し、コンジュゲーション部位で官能化され、コール酸塩骨格のＣ７およびＣ１２のいずれかまたは両方のヒドロキシル基を除去することによって、コリル－ＣｏＡから誘導体化され得る。本明細書のコール酸塩は界面活性剤の一種である。
「ポリペプチド」または「タンパク質」は、その鎖長が三次構造を生成するのに十分であるアミノ酸の配列を意味する。したがって、本明細書のタンパク質は、一般にいかなる三次構造も有さない短いアミノ酸系分子である「ペプチド」とは区別される。典型的には、本明細書で使用のタンパク質は、少なくとも約５～２０ｋＤ、あるいは少なくとも約１５～２０ｋＤ、好ましくは少なくとも約２０ｋＤの分子量を有する。本明細書のポリペプチドまたはタンパク質には、例えば抗体が含まれる。
「抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領域を有する全長抗体を含む）、ポリエピトープ特異性を有する抗体組成物、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体、ダイアボディ、および一本鎖分子、ならびに抗体結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ）を含む。本明細書の抗体は、特定の抗原を共同して認識する重（Ｈ）鎖および軽（Ｌ）鎖可変ドメインに位置する相補的依存領域（ＣＤＲ）のセットを含む。本明細書の抗体は、抗原認識のためのＣＤＲのセットを含むのに十分な重鎖および軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列の少なくとも一部を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、全長の重鎖および軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、全長であってもなくてもよい重鎖および／または軽鎖定常領域をさらに含む。
「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、本明細書で抗体と互換的に使用される。
「医薬製剤」または「治療用製剤」または「治療用調製物」という用語は、少なくとも１種の有効成分（例えば、タンパク質）、および少なくとも１種の追加の構成成分または賦形物質を含み、有効成分の生物学的活性が哺乳動物対象において有効であることを可能にするような形態であり、「治療的使用に適している」または「医薬的使用に適している」調製物または組成物を指し、これは、製剤全体が哺乳動物対象に対して許容できないほど毒性ではなく、製剤が投与される哺乳動物対象に対して許容できないほど毒性であるか、またはそれらを対象に対して許容できないほど毒性にする濃度の構成成分を含有しないことを意味する。
「安定」製剤は、含まれるタンパク質が貯蔵中に物理的および／または化学的安定性を本質的に保持するものである。安定性は、選択された温度にて選択された期間測定することができる。好ましくは、製剤は、室温（約３０℃）もしくは４０℃で少なくとも１ヶ月間安定であり、および／または約２～８℃で少なくとも１年間、好ましくは少なくとも２年間安定である。例えば、貯蔵中の凝集の程度は、タンパク質の安定性の指標として用いることができる。したがって、「安定」製剤は、タンパク質の約１０％（ｗ／ｖ）未満および好ましくは５％未満、３％未満、または２％未満が製剤中に凝集体として存在するものであってよい。タンパク質の安定性を測定するための様々な分析技法が当技術分野で利用可能であり、例えば、Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、２４７～３０１、Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ編、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、Ｐｕｂｓ．（１９９１）およびＪｏｎｅｓ，Ａ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．１０：２９～９０（１９９３）に概説されている。
タンパク質含有製剤の「安定性」を増加させることは、その製剤中のタンパク質の凝集体または製剤の他の構成成分の分解産物の形成を（未処理のタンパク質含有製剤と比較して）低減させることまたは防止することを含み得、その結果、それらの他の構成成分は、タンパク質の安定性を維持するように作用し続けることができる。
「安定化剤」または「安定剤」という用語は、本明細書で使用される場合、製剤を安定または不変の状態に維持するために製剤に添加される化学物質または化合物である。場合によっては、凝集、酸化、色の変化などを防ぐのを助けるために安定剤を添加することができる。
「凝集体」または「凝集」という用語は、本明細書で使用される場合、例えばタンパク質分子の凝集のように、一緒になること、または塊もしくは全体に集まることを意味する。凝集体は、自己凝集性であり得るか、または他の要因、例えば凝集剤、沈殿剤、撹拌、またはタンパク質が一緒になる他の手段および方法の存在に起因して凝集し得る。「凝集しやすい」タンパク質は、特に撹拌時に他のタンパク質分子と凝集することが観察されているタンパク質である。凝集は、溶液中で過去には透明なタンパク質製剤が濁るかまたは沈殿物を含む場合など、視覚的に、または製剤中のタンパク質をサイズによって分離するサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）などの方法によって観察することができる。
凝集体は、タンパク質種の二量体、三量体、および多量体を含み得る。本明細書で使用される場合、「高分子量種」（ＨＭＷＳ）は、例えばサイズ排除クロマトグラフィーによって観察され得、所望のタンパク質分子の少なくとも二量体を表す、すなわち製剤中の所望のタンパク質種の分子量の少なくとも２倍を有するタンパク質の凝集体を指す。その通常の形態または所望の形態で既に多量体、例えば二量体または四量体である抗体などのタンパク質種の場合、ＨＭＷＳは、タンパク質の通常の所望の多量体形態の少なくとも二量体を表す。
撹拌誘発性凝集を「阻害する」または「防止する」とは、少なくとも１種の撹拌誘発性凝集の阻害剤を含むタンパク質含有溶液中に存在する凝集体の量を、少なくとも１種の撹拌誘発性凝集の阻害剤を含まないタンパク質含有溶液中に存在する凝集体の量と比較することによって測定される、撹拌誘発性凝集体の防止、その量を低減または減少させることを意味することが意図される。
「臨界ミセル濃度」（ＣＭＣ）は、界面活性剤が溶液中で凝集してミセルと呼ばれるクラスタを形成する閾値濃度である。本明細書で使用される場合、任意の特定の界面活性剤のＣＭＣ値は、水中２５℃で測定され、ｍＭまたはパーセント（ｗ／ｖ）の単位で表され得る。構成モノマーからのミセルの形成は平衡を伴うので、それ未満では溶液が無視できる量のミセルを含み、それを超えると実質的にすべての追加の界面活性剤が追加のミセルの形態で見出されるミセルの狭い濃度範囲の存在が確立されている。水溶液中の数百の化合物に対するＣＭＣの資料は、Ｍｕｋｅｒｊｅｅ，Ｐ．およびＭｙｓｅｌｓ，Ｋ．Ｊ．（１９７１）Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｍｉｃｅｌｌｅ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ａｑｕｅｏｕｓ Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＮＳＲＤＳ－ＮＢＳ ３６．Ｓｕｐｅｒｉｎｔｅｎｄｅｎｔ ｏｆ Ｄｏｃｕｍｅｎｔｓ、Ｕ．Ｓ．Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ Ｐｒｉｎｔｉｎｇ Ｏｆｆｉｃｅ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣに整えられている。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｎａｔｒａｃｅ．ｃｏｍ／ｄｏｃｓ／ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ＿ｄａｔａ．ｐｄｆも参照されたい。
「単離された」は、本明細書に開示の様々なポリペプチドおよび抗体を記述するために使用される場合、その産生環境の構成成分から同定、分離および／または回収されたポリペプチドまたは抗体を意味する。好ましくは、単離されたポリペプチドは、その産生環境からの他のすべての構成成分と会合していない。トランスフェクトした組換え細胞由来のものなど、その産生環境の混入成分は、典型的にはポリペプチドの診断的または治療的使用を妨害する物質であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性溶質を含み得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、（１）スピニングカップシークエネーター（ｓｐｉｎｎｉｎｇ ｃｕｐ ｓｅｑｕｅｎａｔｏｒ）を使用してＮ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、または（２）クマシーブルーもしくは好ましくは銀染色を使用して非還元条件もしくは還元条件下でＳＤＳ－ＰＡＧＥによって均一になるまで精製される。しかしながら、通常、単離されたポリペプチドまたは抗体は、少なくとも１つの精製工程によって調製されるであろう。
本明細書のいくつかの実施形態では、医薬製剤は、１種類以上の賦形剤および１つ以上の非コール酸塩界面活性剤などの成分を「含まない」。この文脈における「含まない」という表現は、除外される成分が、例えば、意図的に添加された他の成分に見られる汚染物または不純物によって、微量レベルを超えて存在しないことを意味する。
本明細書において製剤の成分の混合物を指す場合の「から本質的になる」という用語は、明示的に列挙されたもの以外の成分が存在してもよいが、そのような成分は、タンパク質濃度、タンパク質の凝集レベル、タンパク質の酸化レベル、粘度、熱安定性、オスモル濃度、およびｐＨを含む製剤の基本的な特徴が不変であるような微量、そうでなければ十分に低い量でのみ見出されることを示す。
タンパク質の凝集
タンパク質の凝集は、主に疎水性相互作用によって引き起こされ、最終的に変性をもたらす。部分的または完全に折り畳まれていないタンパク質の疎水性領域が水にさらされると、通常は埋め込まれている疎水性内部が親水性の水性環境にさらされるため、熱力学的に好ましくない状況が生じる。その結果、疎水性領域の周りの構造化水分子からのエントロピーの減少は、主に露出した疎水性領域を介して、変性タンパク質を凝集させる。したがって、タンパク質の溶解性も損なわれ得る。場合によっては、天然またはミスフォールドしたタンパク質サブユニットの自己会合が、ある特定の条件下で起こり得、これは沈殿および活性の喪失をもたらし得る。
溶液中のタンパク質の凝集に影響を及ぼす要因には、一般に、タンパク質濃度、ｐＨ、温度、他の賦形剤、および機械的ストレスが含まれる。いくつかの要因（例えば、温度）は、他の要因（例えば、機械的ストレス）よりも精製、配合、製造、貯蔵および使用中に容易に制御することができる。製剤研究は、凝集を誘発しないおよび／または実際には凝集の防止に役立つｐＨおよび賦形剤の適切な選択を決定するだろう。タンパク質濃度は、必要な治療用量によって決定され、この濃度が何であるかに応じて、より高い会合状態（二量体、四量体など）の可能性が存在するかどうかが決定され、これは溶液中での凝集をもたらし得る。どの要因がタンパク質の凝集に影響を及ぼし、次いでこれらの要因をどのように排除または制御することができるかを決定するために、製剤開発中に慎重な研究を行わなければならない。
非経口投与または他の投与に使用するための抗体または他のタンパク質の安定な溶液調製物を同定したいという要望は、物理的安定性に対する様々な添加剤の影響を評価するための試験方法論の開発につながり得る。タンパク質の凝集に影響を及ぼす既知の要因およびそのような用途の要件に基づいて、タンパク質溶液の撹拌または回転を含む機械的手順を使用して物理的安定性を評価することができる。凝集を防止するための様々な添加剤の能力を特定するための物理的ストレス試験のための方法論は、水平面内での振盪または撹拌、または垂直面内で「ｎ」ｒｐｍで回転するホイールの軸から「ｘ」ｃｍの回転への曝露を含み得る。凝集から生じる濁度は、通常、目視検査または光散乱分析によって時間の関数として決定される。あるいは、沈殿による可溶性タンパク質含有量の減少は、時間の関数としてＨＰＬＣアッセイによって定量することができる。
水の表面上のタンパク質は、特に撹拌されると、タンパク質単層のアンフォールディングおよびその後の凝集のために凝集する。界面活性剤は、タンパク質を変性させることができるが、表面変性に対してそれらを安定化させることもできる。一般に、イオン性界面活性剤はタンパク質を変性させることができる。しかしながら、非イオン性界面活性剤は通常、１％（ｗ／ｖ）の比較的高い濃度であってもタンパク質を変性させない。本開示は、ある特定のコール酸塩界面活性剤が治療上有用な製剤中の抗体または他のタンパク質の安定化または凝集を低減するのに有用であるという新規な知見に基づいている。
コール酸塩界面活性剤および製剤
本開示は、ある特定のコール酸塩界面活性剤が治療上有用な製剤中の抗体または他のタンパク質の安定化または凝集を低減するのに有用であるという新規な知見に基づいている。例示的なコール酸塩には、双性イオン性コール酸塩、例えば２５℃の水中で約８～１０ｍＭまたは０．５～０．６％の臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を有するＣＨＡＰＳ（３－［（３－コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ］－１－プロパンスルホネート）（ＣＡＳ７５６２１－０３－３）、アニオン性コール酸塩、例えばＳＧＨ（グリココール酸ナトリウム水和物）（ＣＡＳ３３８９５０－８１－５）（２５℃の水中でＣＭＣ約１３ｍＭまたは約０．６％（ｗ／ｖ））、タウロコール酸ナトリウム水和物（ＳＴＨ）（ＣＡＳ３４５９０９－２６－４）（２５℃の水中でＣＭＣ約３～１１ｍＭまたは約０．２％～０．６％）およびコール酸ナトリウム水和物（ＳＣＨ）（２５℃の水中でＣＭＣ約９～１５ｍＭまたは約０．４％～０．７％）、ならびに非イオン性コール酸塩、例えば「ＢｉｇＣＨＡＰ」（Ｎ，Ｎ’－ビス－（３－Ｄ－グルコンアミドプロピル）コールアミド）（ＣＡＳ８６３０３－２２－２）（２５℃の水中でＣＭＣ約２．９～３．４ｍＭまたは約０．２６％）が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、コール酸塩は、２５℃の水中で少なくとも１ｍＭ、または少なくとも２ｍＭ、または少なくとも０．１％（ｗ／ｖ）、または少なくとも０．２％（ｗ／ｖ）のＣＭＣを有し得る。
特定のコール酸塩は、抗体または他のタンパク質の安定化剤として単独で用いられてもよく、または他のコール酸塩との組合せで用いられてもよい。本発明の特定の実施形態では、コール酸塩（単剤として用いられる場合）またはコール酸塩（組合せで用いられる場合）は、用いられるコール酸塩のＣＭＣ値未満であり得る０．０１％～０．５％の濃度で水性抗体または他のタンパク質含有製剤中に存在してもよい。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のコール酸塩は、０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．２％以下、０．１％以下、０．０５％以下、０．０４％以下、０．０２５％以下、または０．０２％以下の濃度で存在してもよい。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のコール酸塩は、０．０１％～０．１％、０．０１％～０．０５％、０．０２５％～０．０５％、または０．０２５％～０．１％の濃度で存在してもよい。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のコール酸塩は、０．０１％～０．０５％の濃度で存在してもよい。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のコール酸塩は、０．０２５％～０．０５％の濃度で存在してもよい。
いくつかの実施形態では、特定のコール酸塩を、２５℃の水中でのそのそれぞれのＣＭＣ値よりも低い濃度で抗体または他のタンパク質の安定化剤として用いることができる。いくつかの実施形態では、コール酸塩は、２５℃の水中で少なくとも１ｍＭ、または少なくとも２ｍＭ、または少なくとも０．１％（ｗ／ｖ）、または少なくとも０．２％（ｗ／ｖ）のＣＭＣを有し得る。いくつかの実施形態では、混合物が２５℃の水中で混合物のＣＭＣ値よりも低い全体濃度であるように、コール酸塩の混合物を用いることができる。いくつかのこのような実施形態では、１つまたは複数のコール酸塩は、組成物中に存在する唯一の種類の界面活性剤であり得、したがって、他の界面活性剤は存在しない。
現在使用されているほとんどの治療上許容され得る非イオン性界面活性剤は、ポリソルベートまたはポリエーテル基のいずれかに由来する。ポリソルベート２０および８０は、上市された治療用タンパク質製剤における現在の界面活性剤安定剤である。しかしながら、治療用タンパク質製剤に使用される他の界面活性剤には、プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）（登録商標）Ｆ－６８および「Ｂｒｉｊ」クラスのメンバーおよびポロキサマーおよびアルキルグリコシドが含まれる。本明細書のいくつかの実施形態では、これらの他の界面活性剤のいずれも製剤中に存在しないが、他の実施形態では、これらの他のクラスの界面活性剤の１つ以上が含まれる。
いくつかの実施形態では、組成物は、ポリソルベート、プルロニック、Ｂｒｉｊ、ポロキサマー、およびアルキルグリコシド界面活性剤を含まない。他の実施形態では、組成物は、少なくとも１つの他の界面活性剤を含む。他の実施形態では、組成物はまた、ＰＳ２０またはＰＳ８０などの１つ以上のポリソルベートを含むか、またはアルキルグリコシドもしくはアルキルグリコシドの組合せを含み得る。製剤がポリソルベート界面活性剤および／またはアルキルグリコシド界面活性剤を含むいくつかのそのような場合、製剤は、コール酸塩ならびにポリソルベートおよび／またはアルキルグリコシド界面活性剤以外の他の界面活性剤を含まない。
いくつかの実施形態では、コール酸塩界面活性剤はＣＨＡＰＳである。いくつかの実施形態では、製剤は、０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．２％以下、０．１％以下、０．０５％以下、０．０４％以下、０．０２５％以下、または０．０２％以下の濃度（ｗ／ｖ）でＣＨＡＰＳを含む。いくつかの実施形態では、ＣＨＡＰＳは、０．０１％～０．１％、０．０１％～０．０５％、０．０２５％～０．０５％、または０．０２５％～０．１％の濃度で存在する。いくつかの実施形態では、ＣＨＡＰＳは、０．０１％～０．０５％の濃度で存在する。いくつかの実施形態では、ＣＨＡＰＳは、０．０２５％～０．０５％の濃度で存在する。いくつかの実施形態では、製剤の界面活性剤は、０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．２％以下、０．１％以下、０．０５％以下、０．０４％以下、０．０２５％以下、または０．０２％以下の濃度のＣＨＡＰＳから本質的になる。いくつかの実施形態では、ＣＨＡＰＳは、０．０１％～０．１％、０．０１％～０．０５％、０．０２５％～０．０５％、または０．０２５％～０．１％の濃度で存在する。いくつかの実施形態では、ＣＨＡＰＳは、０．０１％～０．０５％の濃度で存在する。いくつかの実施形態では、ＣＨＡＰＳは、０．０２５％～０．０５％の濃度で存在する。
いくつかの実施形態では、製剤は、少なくとも１種の治療用タンパク質種、および０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．１％以下、０．０５％以下、０．０４％以下、０．０２５％以下、もしくは０．０２％以下、０．０１％～０．５％、または０．０１％～０．１％、０．０１％～０．０５％、もしくは０．０２５％～０．０５％の濃度（ｗ／ｖ）のＣＨＡＰＳから本質的になる界面活性剤、任意に、バッファー、塩、凍結乾燥保護剤、または糖、糖アルコール、アミノ酸、もしくは他のタンパク質種のうちの１つ以上を含む安定剤のうちの１つ以上を含み、任意に、製剤は低イオン強度であり；少なくとも１種の治療用タンパク質は抗体であり；および／または製剤は、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤である。他の実施形態では、製剤は、ＰＳ２０またはＰＳ８０などのポリソルベートをさらに含む。
いくつかの実施形態では、コール酸塩界面活性剤はＢｉｇＣＨＡＰである。いくつかの実施形態では、製剤は、０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．２％以下、０．１％以下、０．０５％以下、０．０４％以下、０．０２５％以下、または０．０２％以下の濃度でＢｉｇＣＨＡＰを含む。いくつかの実施形態では、ＢｉｇＣＨＡＰは、０．０１％～０．１％、０．０１％～０．０５％、０．０２５％～０．０５％、または０．０２５％～０．１％の濃度で存在する。いくつかの実施形態では、ＢｉｇＣＨＡＰは、０．０１％～０．０５％の濃度で存在する。いくつかの実施形態では、ＢｉｇＣＨＡＰは、０．０２５％～０．０５％の濃度で存在する。いくつかの実施形態では、製剤の界面活性剤は、０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．２％以下、０．１％以下、０．０５％以下、０．０４％以下、０．０２５％以下、または０．０２％以下の濃度のＢｉｇＣＨＡＰから本質的になる。いくつかの実施形態では、ＢｉｇＣＨＡＰは、０．０１％～０．１％、０．０１％～０．０５％、０．０２５％～０．０５％、または０．０２５％～０．１％の濃度で存在する。いくつかの実施形態では、ＢｉｇＣＨＡＰは、０．０１％～０．０５％の濃度で存在する。いくつかの実施形態では、ＢｉｇＣＨＡＰは、０．０２５％～０．０５％の濃度で存在する。
いくつかの実施形態では、製剤は、少なくとも１種の治療用タンパク質種、および０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．１％以下、０．０５％以下、０．０４％以下、０．０２５％以下、もしくは０．０２％以下、０．０１％～０．５％、または０．０１％～０．１％、０．０１％～０．０５％、もしくは０．０２５％～０．０５％の濃度のＢｉｇＣＨＡＰから本質的になる界面活性剤、任意に、バッファー、塩、凍結乾燥保護剤、または糖、糖アルコール、アミノ酸、もしくは他のタンパク質種のうちの１つ以上を含む安定剤のうちの１つ以上を含み、任意に、製剤は低イオン強度であり；少なくとも１種の治療用タンパク質は抗体であり；および／または製剤は、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤である。他の実施形態では、製剤は、ＰＳ２０またはＰＳ８０などのポリソルベートをさらに含む。
いくつかの実施形態では、コール酸塩界面活性剤は、ＳＧＨ、ＳＴＨ、またはＳＣＨである。いくつかの実施形態では、製剤は、０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．２％以下、０．１％以下、０．０５％以下、０．０４％以下、０．０２５％以下、または０．０２％以下の濃度でＳＧＨ、ＳＴＨ、またはＳＣＨを含む。いくつかの実施形態では、ＳＧＨ、ＳＴＨまたはＳＣＨは、０．０１％～０．１％、０．０１％～０．０５％、０．０２５％～０．０５％、または０．０２５％～０．１％の濃度で存在する。いくつかの実施形態では、ＳＧＨ、ＳＴＨまたはＳＣＨは、０．０１％～０．０５％の濃度で存在する。いくつかの実施形態では、ＳＧＨ、ＳＴＨまたはＳＣＨは、０．０２５％～０．０５％の濃度で存在する。いくつかの実施形態では、製剤の界面活性剤は、０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．２％以下、０．１％以下、０．０５％以下、０．０４％以下、０．０２５％以下、または０．０２％以下の濃度のＳＧＨ、ＳＴＨ、またはＳＣＨから本質的になる。いくつかの実施形態では、ＳＧＨ、ＳＴＨまたはＳＣＨは、０．０１％～０．１％、０．０１％～０．０５％、０．０２５％～０．０５％、または０．０２５％～０．１％の濃度で存在する。いくつかの実施形態では、ＳＧＨ、ＳＴＨまたはＳＣＨは、０．０１％～０．０５％の濃度で存在する。いくつかの実施形態では、ＳＧＨ、ＳＴＨまたはＳＣＨは、０．０２５％～０．０５％の濃度で存在する。ＳＧＨ、ＳＴＨまたはＳＣＨ界面活性剤を含む上記の実施形態のいくつかでは、溶液は高イオン強度を有する。
いくつかの実施形態では、製剤は、少なくとも１種の治療用タンパク質種、および０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．１％以下、０．０５％以下、０．０４％以下、０．０２５％以下、もしくは０．０２％以下、０．０１％～０．５％、または０．０１％～０．１％、０．０１％～０．０５％、もしくは０．０２５％～０．０５％の濃度（ｗ／ｖ）のコール酸塩から本質的になる界面活性剤、任意に、バッファー、塩、凍結乾燥保護剤、または糖、糖アルコール、アミノ酸、もしくは他のタンパク質種のうちの１つ以上を含む安定剤のうちの１つ以上を含み、任意に、製剤は高イオン強度であり；少なくとも１種の治療用タンパク質は抗体であり；および／または製剤は、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤である。他の実施形態では、製剤は、ＰＳ２０またはＰＳ８０などのポリソルベートをさらに含む。
いくつかの実施形態では、製剤全体は低イオン強度を有する。本明細書の低イオン強度製剤は、例えば、５０ｍＭ以下、例えば１０～５０ｍＭ、２０～５０ｍＭ、２０～４０ｍＭ、２０～３０ｍＭ、１５～３０ｍＭ、１５～２５ｍＭ、４０ｍＭ以下、３０ｍＭ以下、２５ｍＭ以下、または２０ｍＭ以下の塩濃度（例えば、ナトリウム、酢酸塩、リン酸塩、アルギニン、ヒスチジン、クエン酸塩）を有し得る。いくつかの実施形態では、例えばアニオン性コール酸塩種を使用する場合、製剤全体は高イオン強度を有する。本明細書の高イオン強度製剤は、１５０ｍＭ以上の塩濃度、例えば１７５ｍＭ以上、２００ｍＭ以上、２５０ｍＭ以上、１５０～３００ｍＭ、２００～３００ｍＭ、２００～２５０ｍＭ、１７５～２５０ｍＭ、または１５０～２５０ｍＭを有し得る。
例示的なタンパク質
本発明の製剤は、多種多様なタンパク質またはポリペプチドと適合性である。
本明細書の定義内に包含されるポリペリプチドの例としては、哺乳動物のタンパク質、例えば、様々な抗体、レニン；ヒト成長ホルモンおよびウシ成長ホルモンを含む成長ホルモン；成長ホルモン放出因子；副甲状腺ホルモン；甲状腺刺激ホルモン；リポタンパク質；アルファ－１－アンチトリプシン；インスリンＡ鎖；インスリンＢ鎖；プロインスリン；卵胞刺激ホルモン；カルシトニン；黄体形成ホルモン；グルカゴン；凝固因子、例えば第ＶＩＩＩＣ因子、第ＩＸ因子、組織因子、およびフォン・ヴィレブランド因子；抗凝固因子、例えばプロテインＣ；心房性ナトリウム利尿因子；肺サーファクタント；プラスミノーゲン活性化因子、例えばウロキナーゼまたはヒト尿もしくは組織型プラスミノーゲン活性化因子（ｔ－ＰＡ）；ボンベシン；トロンビン；造血成長因子；腫瘍壊死因子－アルファおよび－ベータ；エンケファリナーゼ；ＲＡＮＴＥＳ（活性化時に調節され、Ｔ細胞が正常に発現および分泌している）；ヒトマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ－１－アルファ）；血清アルブミン、例えばヒト血清アルブミン；ミュラー管抑制物質；リラキシンＡ鎖；リラキシンＢ鎖；プロリラキシン；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；微生物タンパク質、例えばベータ－ラクタマーゼ；ＤＮａｓｅ；ＩｇＥ；細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原（ＣＴＬＡ）、例えばＣＴＬＡ－４；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）；ホルモンまたは成長因子の受容体；プロテインＡまたはＤ；リウマチ因子；神経栄養因子、例えば骨由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン－３、ニューロトロフィン－４、ニューロトロフィン－５、もしくはニューロトロフィン－６（ＮＴ－３、ＮＴ－４、ＮＴ－５、もしくはＮＴ－６）、または神経成長因子、例えばＮＧＦ－β；血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）；線維芽細胞増殖因子、例えばａＦＧＦおよびｂＦＧＦ；上皮成長因子（ＥＧＦ）；形質転換成長因子（ＴＧＦ）、例えばＴＧＦ－アルファおよびＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、ＴＧＦ－β３、ＴＧＦ－β４、またはＴＧＦ－β５を含むＴＧＦ－ベータ；インスリン様成長因子ＩおよびＩＩ（ＩＧＦ－ＩおよびＩＧＦ－ＩＩ）；ｄｅｓ（１－３）－ＩＧＦ－Ｉ（脳ＩＧＦ－Ｉ）、インスリン様成長因子結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ）；ＣＤタンパク質、例えばＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９およびＣＤ２０；エリスロポエチン；骨誘導因子；免疫毒素；骨形成タンパク質（ＢＭＰ）；インターフェロン、例えばインターフェロン－アルファ、インターフェロン－ベータ、およびインターフェロン－ガンマ；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えばＭ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、およびＧ－ＣＳＦ；インターロイキン（ＩＬ）、例えばＩＬ－１～ＩＬ－１０；スーパーオキシドジスムターゼ；Ｔ細胞受容体；表面膜タンパク質；崩壊促進因子；ウイルス抗原、例えばＡＩＤＳエンベロープの一部分；輸送タンパク質；ホーミング受容体；アドレシン；調節タンパク質；インテグリン、例えばＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１８、ＩＣＡＭ、ＶＬＡ－４およびＶＣＡＭ；腫瘍関連抗原、例えばＣＡ１２５（卵巣がん抗原）、またはＨＥＲ２、ＨＥＲ３、もしくはＨＥＲ４受容体；イムノアドヘシン；ならびに上述のタンパク質のうちのいずれかの断片および／またはバリアント、ならびに抗体断片であり上記のタンパク質のうちのいずれかに結合する抗体が挙げられる。
製剤化されるタンパク質は、好ましくは本質的に純粋であり、望ましくは本質的に均質である（すなわち、夾雑タンパク質を含まない）。「本質的に純粋な」タンパク質は、組成物の総重量に基づいて少なくとも約９０重量％、好ましくは少なくとも約９５重量％のタンパク質を含む組成物を意味する。「本質的に均質な」タンパク質は、組成物の総重量に基づいて少なくとも約９９重量％のタンパク質を含む組成物を意味する。
タンパク質は、所与の時点でのタンパク質の生物学的活性が、製剤が調製された時点で呈される生物学的活性の約１０％以内（アッセイの誤差以内）である場合、医薬製剤中で「生物学的活性」を保持する。標的分子または抗原に結合することによって機能することが意図される抗体またはタンパク質の場合、生物学的活性は、インビトロまたはインビボで抗原に結合し、測定可能な生物学的応答をもたらすタンパク質の能力によって決定され得る。
本明細書のタンパク質は、天然に存在するタンパク質、ならびに例えば２つの別個のタンパク質を互いに共有結合させることによって形成された融合タンパク質、および他のタンパク質または核酸、小分子薬物、もしくは固相などの非タンパク質分子に共有結合されたタンパク質を含むタンパク質コンジュゲートを広く包含する。「固相」という用語は、本発明のタンパク質が付着することができる非水性マトリックスを表す。本明細書に包含される固相の例としては、ガラス（例えば、制御された細孔ガラス）、多糖類（例えば、アガロース）、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリビニルアルコールおよびシリコーンから部分的または全体的に形成されたものが挙げられる。ある特定の実施形態では、状況に応じて、固相はアッセイプレートのウェルを含むことができ、他のものでは、精製用カラム（例えば、アフィニティークロマトグラフィーカラム）である。この用語はまた、離散粒子の不連続固相、例えば、米国特許第４，２７５，１４９号に記載されているものを含む。この用語はまた、溶液中に懸濁され得るビーズまたはチップを包含する。
本明細書のタンパク質は、抗体も包含する。
例示的な抗体
抗体は、典型的には、目的の「抗原」に対して指向する。所与の抗原に「対して指向する」または「特異的に結合する」または「特異的な」抗体は、任意の他のポリペプチドまたはポリペプチドエピトープに実質的に結合することなく、その特定の抗原に結合する抗体である。特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド抗原上のエピトープに「対して指向する」または「特異的に結合する」または「特異的な」抗体は、任意の他のポリペプチドまたはポリペプチドエピトープに実質的に結合することなく、その特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド抗原上のエピトープに結合する抗体である。
好ましくは、抗原は、生物学的に重要な分子であり、疾患または障害に罹患している哺乳動物への抗体の投与により、その哺乳動物に治療的利益がもたらされ得る。タンパク質抗原および非タンパク質抗原の両方に対して指向する抗体（腫瘍関連糖脂質抗原など；米国特許第５，０９１，１７８号を参照されたい）が企図される。抗原がタンパク質である場合、それは、膜貫通分子（例えば、受容体）または成長因子などのリガンドであり得る。例示的な抗原としては、上で論じられたタンパク質が挙げられる。本発明によって包含される抗体の例示的な分子標的には、ＣＤポリペプチド、例えばＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０およびＣＤ３４；ＨＥＲ受容体ファミリーのメンバー、例えば、ＥＧＦ受容体（ＨＥＲ１）、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３またはＨＥＲ４受容体；細胞接着分子、例えばＬＦＡ－１、Ｍａｃ１、ｐ１５０，９５、ＶＬＡ－４、ＩＣＡＭ－１、ＶＣＡＭおよびａもしくはｂサブユニットのいずれかを含むａｖ／ｂ３インテグリン（例えば抗ＣＤ１１ａ、抗ＣＤ１８または抗ＣＤ１１ｂ抗体）；成長因子、例えばＶＥＧＦ；ＩｇＥ；血液型抗原；ｆｌｋ２／ｆｌｔ３受容体；肥満（ＯＢ）受容体；ｍｐｌ受容体；ＣＴＬＡ－４；ポリペプチドＣなどが含まれる。任意に、他の分子にコンジュゲートされる可溶性抗原またはその断片は、抗体を生成するための免疫原として使用され得る。受容体などの膜貫通分子の場合、これらの断片（例えば、受容体の細胞外ドメイン）が免疫原として使用され得る。あるいは、膜貫通分子を発現する細胞が免疫原として使用され得る。このような細胞は、天然源（例えば、がん細胞株）由来であり得るか、または膜貫通分子を発現するように組換え技法によって形質転換された細胞であり得る。
本明細書で精製される抗体の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：４２８５～４２８９（１９９２）、米国特許第５，７２５，８５６号）およびペルツズマブ（ＯＭＮＩＴＡＲＧ（商標））（ＷＯ０１／００２４５）を含むＨＥＲ２抗体；ＣＤ２０抗体（下記参照）；ＩＬ－８抗体（Ｓｔ Ｊｏｈｎら、Ｃｈｅｓｔ、１０３：９３２（１９９３）、および国際公開ＷＯ９５／２３８６５）；ヒト化ＶＥＧＦ抗体ｈｕＡ４．６．１ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））およびラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標））（Ｋｉｍら、Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ、７：５３～６４（１９９２）、国際公開ＷＯ９６／３００４６、および１９９８年１０月１５日公開のＷＯ９８／４５３３１）などのヒト化および／または親和性成熟ＶＥＧＦ抗体を含むＶＥＧＦまたはＶＥＧＦ受容体抗体；ＰＳＣＡ抗体（ＷＯ０１／４０３０９）；エファリズマブ（ＲＡＰＴＩＶＡ（登録商標））を含むＣＤ１１ａ抗体（米国特許第６，０３７，４５４号、米国特許第５，６２２，７００号、ＷＯ９８／２３７６１、Ｓｔｏｐｐａら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｉｎｔｌ．４：３～７（１９９１）、およびＨｏｕｒｍａｎｔら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５８：３７７～３８０（１９９４））；オマリズマブ（ＸＯＬＡＩＲ（登録商標））を含むＩｇＥに結合する抗体（Ｐｒｅｓｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３～２６３２（１９９３）、および国際公開ＷＯ９５／１９１８１；１９９８年２月３日発行の米国特許第５，７１４，３３８号、または１９９２年２月２５日発行の米国特許第５，０９１，３１３号、１９９３年３月４日公開のＷＯ９３／０４１７３、または１９９８年６月３０日出願の国際公開ＰＣＴ／ＵＳ９８／１３４１０、米国特許第５，７１４，３３８号）；ＣＤ１８抗体（１９９７年４月２２日発行の米国特許第５，６２２，７００号、または１９９７年７月３１日公開のＷＯ９７／２６９１２のように）；Ａｐｏ－２受容体抗体抗体（１９９８年１１月１９日公開のＷＯ９８／５１７９３）；組織因子（ＴＦ）抗体（１９９４年１１月９日登録の欧州特許第０ ４２０ ９３７ Ｂ１）；α４－α７インテグリン抗体（１９９８年２月１９日発行のＷＯ９８／０６２４８）；ＥＧＦＲ抗体（例えばキメラまたはヒト化２２５抗体、セツキシマブ、ＥＲＢＵＴＩＸ（登録商標）１９９６年１２月１９日公開のＷＯ９６／４０２１０のように）；ＣＤ３抗体、例えばＯＫＴ３（１９８５年５月７日発行の米国特許第４，５１５，８９３号）；ＣＤ２５またはＴａｃ抗体、例えばＣＨＩ－６２１（ＳＩＭＵＬＥＣＴ（登録商標））およびＺＥＮＡＰＡＸ（登録商標）（１９９７年１２月２日発行の米国特許第５，６９３，７６２号を参照されたい）；ＣＤ４抗体、例えばｃＭ－７４１２抗体（Ｃｈｏｙら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ３９（１）：５２～５６（１９９６））；ＣＤ５２抗体、例えばＣＡＭＰＡＴＨ－１Ｈ（ＩＬＥＸ／Ｂｅｒｌｅｘ）（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３～３３７（１９８８））；Ｆｃ受容体抗体、例えばＦｃγＲＩに対して指向するＭ２２抗体（Ｇｒａｚｉａｎｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５（１０）：４９９６～５００２（１９９５））のように）；癌胎児性抗原（ＣＥＡ）抗体、例えばｈＭＮ－１４（Ｓｈａｒｋｅｙら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５（２３付録）：５９３５ｓ～５９４５ｓ（１９９５））；ｈｕＢｒＥ－３、ｈｕ－Ｍｃ３およびＣＨＬ６を含む乳腺上皮細胞に対して指向する抗体（Ｃｅｒｉａｎｉら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５（２３）：５８５２ｓ～５８５６ｓ（１９９５）；およびＲｉｃｈｍａｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５（２３付録）：５９１６ｓ～５９２０ｓ（１９９５））；結腸癌細胞、例えばＣ２４２に結合する抗体（Ｌｉｔｔｏｎら、Ｅｕｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６（１）：１～９（１９９６））；ＣＤ３８抗体、例えばＡＴ１３／５（Ｅｌｌｉｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５（２）：９２５～９３７（１９９５））；ＣＤ３３抗体、例えばＨｕＭ１９５（Ｊｕｒｃｉｃら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ５５（２３付録）：５９０８ｓ～５９１０ｓ（１９９５））およびＣＭＡ－６７６またはＣＤＰ７７１；ＥｐＣＡＭ抗体、例えば１７－１Ａ（ＰＡＮＯＲＥＸ（登録商標））；ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ抗体、例えばアブシキシマブまたはｃ７Ｅ３ Ｆａｂ（ＲＥＯＰＲＯ（登録商標））；ＲＳＶ抗体、例えばＭＥＤＩ－４９３（ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標））；ＣＭＶ抗体、例えばＰＲＯＴＯＶＩＲ（登録商標）；ＨＩＶ抗体、例えばＰＲＯ５４２；肝炎抗体、例えばＨｅｐＢ抗体ＯＳＴＡＶＩＲ（登録商標）；抗ＭＵＣ１６を含むＣＡ１２５抗体（ＷＯ２００７／００１８５１；Ｙｉｎ，ＢＷＴおよびＬｌｏｙｄ，ＫＯ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：２７３７１～２７３７５（２００１））およびＯｖａＲｅｘ；イディオタイプＧＤ３エピトープ抗体ＢＥＣ２；αｖβ３抗体（例えばＶＩＴＡＸＩＮ（登録商標）；Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）；ヒト腎細胞癌抗体、例えばｃｈ－Ｇ２５０；ＩＮＧ－１；抗ヒト１７－１Ａｎ抗体（３６２２Ｗ９４）；抗ヒト結腸直腸腫瘍抗体（Ａ３３）；ＧＤ３ガングリオシドに対して指向する抗ヒト黒色腫抗体Ｒ２４；抗ヒト有棘細胞癌（ＳＦ－２５）；ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）抗体、例えばＳｍａｒｔ ＩＤ１０および抗ＨＬＡ ＤＲ抗体Ｏｎｃｏｌｙｍ（Ｌｙｍ－１）；ＣＤ３７抗体、例えばＴＲＵ０１６（Ｔｒｕｂｉｏｎ）；ＩＬ－２１抗体（Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ／Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）；抗Ｂ細胞抗体（Ｉｍｆｅｒｏｎ）；Ｂ細胞標的化ＭＡｂ（Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ／Ａｖｅｎｔｉｓ）；１Ｄ０９Ｃ３（Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ／ＧＰＣ）；ＬｙｍｐｈｏＲａｄ１３１（ＨＧＳ）；Ｌｙｍ－１抗体、例えばＬｙｍ－１Ｙ－９０（ＵＳＣ）または抗Ｌｙｍ－１ Ｏｎｃｏｌｙｍ（ＵＳＣ／Ｐｅｒｅｇｒｉｎｅ）；ＬＩＦ２２６（Ｅｎｈａｎｃｅｄ Ｌｉｆｅｓｃｉ．）；ＢＡＦＦ抗体（例えばＷＯ０３／３３６５８）；ＢＡＦＦ受容体抗体（例えばＷＯ０２／２４９０９を参照されたい）；ＢＲ３抗体；Ｂｌｙｓ抗体、例えばベリムマブ；ＬＹＭＰＨＯＳＴＡＴ－Ｂ（商標）；ＩＳＦ１５４（ＵＣＳＤ／Ｒｏｃｈｅ／Ｔｒａｇｅｎ）；ゴミリキシマ（Ｉｄｅｃ１５２；Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）；ＩＬ－６受容体抗体、例えばアトリズマブ（ＡＣＴＥＭＲＡ（商標）；中外製薬株式会社／Ｒｏｃｈｅ）；ＩＬ－１５抗体、例えばＨｕＭａｘ－Ｉｌ－１５（Ｇｅｎｍａｂ／Ａｍｇｅｎ）；ケモカイン受容体抗体、例えばＣＣＲ２抗体（例えばＭＬＮ１２０２；Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ）；抗補体抗体、例えばＣ５抗体（例えばエクリズマブ、５Ｇ１．１；Ａｌｅｘｉｏｎ）；ヒト免疫グロブリンの経口製剤（例えばＩｇＰＯ；Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；ＩＬ－１２抗体、例えばＡＢＴ－８７４（ＣＡＴ／Ａｂｂｏｔｔ）；テネリキシマブ（ＢＭＳ－２２４８１８；ＢＭＳ）；Ｓ２Ｃ６およびそのヒト化バリアントを含むＣＤ４０抗体（ＷＯ００／７５３４８）およびＴＮＸ１００（Ｃｈｉｒｏｎ／Ｔａｎｏｘ）；ｃＡ２またはインフリキシマブを含むＴＮＦ－α抗体（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）、ＣＤＰ５７１、ＭＡＫ－１９５、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（商標））、ペグ化ＴＮＦ－α抗体断片、例えばＣＤＰ－８７０（Ｃｅｌｌｔｅｃｈ）、Ｄ２Ｅ７（Ｋｎｏｌｌ）、抗ＴＮＦ－αポリクローナル抗体（例えばＰａｓｓＴＮＦ；Ｖｅｒｉｇｅｎ）；ＣＤ２２抗体、例えばエプラツズマブＹ－９０およびエプラツマブＩ－１３１を含むＬＬ２またはエプラツズマブ（ＬＹＭＰＨＯＣＩＤＥ（登録商標）；Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）、Ａｂｉｏｇｅｎ社のＣＤ２２抗体（Ａｂｉｏｇｅｎ、Ｉｔａｌｙ）、ＣＭＣ５４４（Ｗｙｅｔｈ／Ｃｅｌｌｔｅｃｈ）、ｃｏｍｂｏｔｏｘ（ＵＴ Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ）、ＢＬ２２（ＮＩＨ）およびＬｙｍｐｏＳｃａｎ Ｔｃ９９（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）。
ＣＤ２０抗体の例としては、以下が挙げられる：現在は「リツキシマブ」（「ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）」）と呼ばれている「Ｃ２Ｂ８」（米国特許第５，７３６，１３７号）；「Ｙ２Ｂ８」と命名されたイットリウム－［９０］－標識２Ｂ８マウス抗体またはＩＤＥＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から市販されている「イブリツモマブチウキセタン」（ＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標））（米国特許第５，７３６，１３７号、１９９３年６月２２日に受託番号ＨＢ１１３８８でＡＴＣＣに寄託されている２Ｂ８）；「トシツモマブ」とも呼ばれ、任意に１３１Ｉで標識されて「１３１Ｉ－Ｂ１」を生成するマウスＩｇＧ２ａ「Ｂ１」、またはＣｏｒｉｘａから市販されている「ヨウ素Ｉ１３１トシツモマブ」抗体（ＢＥＸＸＡＲ（商標））（米国特許第５，５９５，７２１号も参照されたい）；マウスモノクローナル抗体「１Ｆ５」（Ｐｒｅｓｓら、Ｂｌｏｏｄ ６９（２）：５８４～５９１（１９８７））および「フレームワークパッチド」またはヒト化１Ｆ５（ＷＯ２００３／００２６０７、Ｌｅｕｎｇ，Ｓ．；ＡＴＣＣ受託ＨＢ－９６４５０）を含むそのバリアント；マウス２Ｈ７およびキメラ２Ｈ７抗体（米国特許第５，６７７，１８０号）；ヒト化２Ｈ７（ＷＯ２００４／０５６３１２、Ｌｏｗｍａｎら、）；２Ｆ２（ＨｕＭａｘ－ＣＤ２０）、Ｂ細胞の細胞膜中のＣＤ２０分子を標的とする完全ヒト高親和性抗体（Ｇｅｎｍａｂ、デンマーク；例えばＧｌｅｎｎｉｅおよびｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ、Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ ８：５０３～５１０（２００３）ならびにＣｒａｇｇら、Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５～１０５２（２００３）；ＷＯ２００４／０３５６０７；ＵＳ２００４／０１６７３１９を参照されたい）；ＷＯ２００４／０３５６０７およびＵＳ２００４／０１６７３１９に記載のヒトモノクローナル抗体（Ｔｅｅｌｉｎｇら）；ＵＳ２００４／００９３６２１に記載のＦｃ領域にＮ－グリコシド結合複合型糖鎖が結合した抗体（Ｓｈｉｔａｒａら）；ＣＤ２０に結合するモノクローナル抗体および抗原結合断片（ＷＯ２００５／０００９０１、Ｔｅｄｄｅｒら）、例えばＨＢ２０－３、ＨＢ２０－４、ＨＢ２０－２５、およびＭＢ２０－１１；抗体のＡＭＥシリーズのようなＣＤ２０結合分子、例えばＷＯ２００４／１０３４０４およびＵＳ２００５／００２５７６４に記載のＡＭＥ３３抗体（Ｗａｔｋｉｎｓら、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ／Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ、ＡＭＥ）；ＵＳ２００５／００２５７６４に記載のＣＤ２０結合分子（Ｗａｔｋｉｎｓら）；Ａ２０抗体またはそのバリアント、例えばキメラもしくはヒト化Ａ２０抗体（それぞれ、ｃＡ２０、ｈＡ２０）またはＩＭＭＵ－１０６（ＵＳ２００３／０２１９４３３、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）；ＵＳ２００５／００６９５４５Ａ１およびＷＯ２００５／１６９６９（Ｃａｒｒら）に記載のように、エピトープ欠失Ｌｅｕ－１６、１Ｈ４または２Ｂ８を含み、任意にＩＬ－２とコンジュゲートしたＣＤ２０結合抗体；ＣＤ２２およびＣＤ２０に結合する二重特異性抗体、例えばｈＬＬ２ｘｈＡ２０（ＷＯ２００５／１４６１８、Ｃｈａｎｇら）；Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｔｙｐｉｎｇ Ｗｏｒｋｓｈｏｐから入手可能なモノクローナル抗体Ｌ２７、Ｇ２８－２、９３－１Ｂ３、Ｂ－Ｃ１またはＮＵ－Ｂ２（Ｖａｌｅｎｔｉｎｅら、
Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｔｙｐｉｎｇ ＩＩＩ（ＭｃＭｉｃｈａｅｌ編、４４０頁、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８７））；１Ｈ４（Ｈａｉｓｍａら、Ｂｌｏｏｄ ９２：１８４（１９９８））；抗ＣＤ２０アウリスタチンＥコンジュゲート（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）；抗ＣＤ２０－ＩＬ２（ＥＭＤ／Ｂｉｏｖａｔｉｏｎ／Ｃｉｔｙ ｏｆ Ｈｏｐｅ）；抗ＣＤ２０ＭＡｂ療法（ＥｐｉＣｙｔｅ）；抗ＣＤ２０抗体ＴＲＵ０１５（Ｔｒｕｂｉｏｎ）。
例示的な抗体構造
基本的な４本鎖の抗体ユニットは、２つの同一な軽（Ｌ）鎖と２つの同一な重（Ｈ）鎖とから構成されるヘテロ四量体糖タンパク質である。ＩｇＭ抗体は、５つの基本的なヘテロ四量体ユニットと併せて、Ｊ鎖と呼ばれる追加のポリペプチドからなり、１０個の抗原結合部位を含むが、一方でＩｇＡ抗体は、２～５個の基本的な４本鎖ユニットから構成されており、このユニットは、重合してＪ鎖と組み合わさった多価集合体を形成することができる。ＩｇＧの場合、４本鎖ユニットは、一般に、約１５０，０００ダルトンである。各Ｌ鎖は、１つのジスルフィド共有結合によってＨ鎖に連結されているが、一方で２つのＨ鎖は、Ｈ鎖アイソタイプに応じて１つ以上のジスルフィド結合によって互いに連結されている。Ｈ鎖およびＬ鎖はそれぞれ、規則的に離間した鎖内ジスルフィド架橋も有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、続いてαおよびγ鎖のそれぞれについては３つの定常ドメイン（ＣＨ）、ならびにμおよびεアイソタイプについては４つのＣＨドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、続いてその反対側の末端に定常ドメインを有する。ＶＬは、ＶＨと整列しており、ＣＬは、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）と整列している。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間に界面を形成すると考えられている。ＶＨとＶＬとが一緒に対合することにより、単一の抗原結合部位を形成する。様々なクラスの抗体の構造および特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第８版、Ｄａｎｉｅｌ Ｐ．Ｓｔｉｅｓ，Ａｂｂａ Ｉ．ＴｅｒｒおよびＴｒｉｓｔｒａｍ Ｇ．Ｐａｒｓｏｌｗ（編）、Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ、Ｎｏｒｗａｌｋ、Ｃｏｎｎ．、１９９４、７１頁および第６章を参照されたい。
任意の脊椎動物種に由来するＬ鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパおよびラムダと呼ばれる２つの明確に異なる種類のうちの１つに割り当てられ得る。それらの重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、異なるクラスまたはアイソタイプに割り当てられ得る。免疫グロブリンには、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭの５つのクラスがあり、それぞれ、α、δ、ε、γおよびμと表記される重鎖を有する。γおよびαクラスは、ＣＨ配列および機能における比較的わずかな相違に基づいてさらにサブクラスに分類され、例えば、ヒトは、以下のサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２を発現する。
「可変領域」または「可変ドメイン」または「Ｖドメイン」または「Ｖ領域」という用語は、重鎖および軽鎖のある特定のセグメントの配列が抗体間で大きく異なるという事実を指す。Ｖドメインは、抗原結合を媒介し、特定の抗体の、その特定の抗原に対する特異性を規定する。しかしながら、可変性は、可変ドメイン全体に均等に分布しているわけではない。代わりに、Ｖ領域は、各々およそ９～１２アミノ酸残基長である「超可変領域」（ＨＶＲ）または時として「相補性決定領域」と呼ばれる極度に可変性なより短い領域によって分離した約１５～３０アミノ酸残基のフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる相対的に不変のストレッチからなる。天然重鎖および軽鎖の可変ドメインは各々、主にβシート構成を採用する４つのＦＲを含み、これらは、３つの超可変領域により連結され、これら超可変領域はβシート構造を連結し、ある場合にはその一部を形成するループを形成する。各鎖内の超可変領域は、ＦＲによって近接近し、一緒に保持されており、他方の鎖からの超可変領域と共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、（１９９１）を参照されたい。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）への関与などの様々なエフェクター機能を呈する。
「超可変領域」（「相補性決定領域」またはＣＤＲとしても公知）という用語は、本明細書で使用される場合、抗原結合部位を形成し、抗原特異性の主な決定基である免疫グロブリンのＶ領域ドメイン内にある（通常、極端に配列可変性な３つまたは４つの短い領域）抗体のアミノ酸残基を指す。ＣＤＲ残基を同定するために、少なくとも２つの方法がある：（１）種間配列可変性に基づくアプローチ（すなわち、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍ Ｓ １９９１）；（２）抗原抗体複合体の結晶学的研究に基づくアプローチ（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１～９１７（１９８７））。しかしながら、２つの残基同定技法が、重複するが同一ではない領域を定義する範囲で、それらを組み合わせてハイブリッドＣＤＲを定義することができる。
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指す。すなわち、その集団をなす個々の抗体は、微量で存在する可能性がある、自然に起こり得る変異および／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化、脱アミド化）を除き、同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位に対して指向されている。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対して指向する様々な抗体を典型的に含む従来の（ポリクローナル）抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ培養により合成され、他の免疫グロブリンが混入していないという点で、有利である。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体の集団から得られるという抗体の特徴を示すものであり、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈すべきではない。例えば、本明細書に従って使用されるモノクローナル抗体は、最初にＫｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５（１９７５）によって記載されたハイブリドーマ法によって作製されても、または組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）によって作製されてもよい。「モノクローナル抗体」はまた、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４～６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１～５９７（１９９１）に記載の技法を使用してファージ抗体ライブラリから単離され得る。
本明細書におけるモノクローナル抗体には、具体的には、重鎖および／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来するか、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体内の対応する配列と同一または相同である一方で、鎖（複数可）の残りの部分が、別の種に由来するか、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体内の対応する配列と同一または相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）、ならびに所望の生物学的活性を呈する限り、そのような抗体の断片が含まれる（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：６８５１～６８５５（１９８４））。本明細書の目的のキメラ抗体には、非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル、類人猿など）に由来する可変ドメイン抗原結合配列、およびヒト内容領域配列とを含む、「霊長類化」抗体が含まれる。
「インタクトな」または「全長」抗体は、抗原結合部位ならびにＣＬおよび少なくとも重鎖ドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含むものである。定常ドメインは、天然型配列の定常ドメイン（例えば、ヒトの天然型配列の定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列バリアントであり得る。好ましくは、インタクトな抗体は、１つ以上のエフェクター機能を有する。
「抗体」という用語は、「抗体断片」および「抗原結合断片」を含む。「抗体断片」または「抗原結合断片」は、インタクトな抗体の抗原結合部分および／または可変領域を含み、抗原に特異的に結合するインタクトな抗体の部分を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片；ダイアボディ：直鎖状抗体（米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２；Ｚａｐａｔａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７～１０６２［１９９５］）：一本鎖抗体分子、ならびに抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられる。
抗体のパパイン消化により、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片と、容易に結晶化する能力を反映して名付けられた残留「Ｆｃ」断片とが生じる。Ｆａｂ断片は、Ｈ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）と合わせたＬ鎖全体、および１つの重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）からなる。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関しては一価である。すなわち、単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、異なる抗原結合活性を有する２つのジスルフィド連結Ｆａｂ断片におおよそ対応する単一の大きなＦ（ａｂ’）２断片を生じ、これは依然として抗原を架橋することができる。Ｆａｂ’断片は、抗体のヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含む、ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に数個の追加の残基を有することにより、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を保有するＦａｂ’の本明細書における名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元来、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として産生された。抗体断片の他の化学的カップリングも既知である。
Ｆｃ断片または「Ｆｃ」は、ジスルフィドによって一緒に保持された両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域における配列によって決定され、この領域はまた、ある特定の細胞型に見られるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によって認識される。
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識および抗原結合部位を含む最小抗体断片である。この断片は１つの重鎖および１つの軽鎖可変領域ドメインが、非共有結合で緊密に会合した二量体からなる。これらの２つのドメインの折畳みにより、抗原結合のためのアミノ酸残基を提供し、かつ抗原結合特異性を抗体に与える６つの超可変ループ（Ｈ鎖およびＬ鎖から各３つのループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的なＣＤＲを３つのみ含むＦｖの半分）でさえも、全結合部位よりも低い親和性ではあるが、抗原を認識してそれに結合する能力を有する。
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略される「一本鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖に接続されたＶＨおよびＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、このリンカーにより、ｓＦｖが抗原結合に望ましい構造を形成することが可能となっている。ｓＦｖの概説については、ＰｌｕｃｋｔｈｕｎのＴｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、第１１３巻、ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、２６９～３１５頁（１９９４）を参照されたい。
「ダイアボディ」という用語は、鎖内ではなく鎖間のＶドメイン対合を達成し、それによって二価断片、すなわち、２つの抗原結合部位を有する断片が得られるように、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に短いリンカー（約５～１０）残基）を用いてｓＦｖ断片（前の段落を参照されたい）を構築することによって調製される小さな抗体断片を指す。二重特異的ダイアボディは、２つの抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在する２つの「クロスオーバー」ｓＦｖ断片のヘテロ二量体である。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４～６４４８（１９９３）にさらに詳述されている。
非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含む、多くがヒト配列のキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはそれらの断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または抗体の他の抗原結合部分配列など）である。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であり、レシピエントの超可変領域（ＣＤＲでもある）からの残基が、所望の特異性、親和性および能力を有するマウス、ラット、ウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基によって置き換えられている。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられている。さらに、「ヒト化抗体」は、本明細書で使用される場合、レシピエント抗体にもドナー抗体にもいずれにも見られない残基も含み得る。これらの修飾を行って、抗体性能をさらに改良および最適化する。ヒト化抗体はまた、最も有利には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部も含むことになる。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２～５２５（１９８６）；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３～３２９（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．、２：５９３～５９６（１９９２）を参照されたい。「ヒト」または「完全ヒト」抗体には、ヒト抗体に見られるフレームワークおよび定常ドメイン配列を含むものが含まれる。
本明細書で使用される場合、「イムノアドヘシン」という用語は、異種タンパク質（「アドヘシン」）の結合特異性と、免疫グロブリン定常ドメインのエフェクター機能とを組み合わせた、抗体様分子を表す。構造的には、イムノアドヘシンは、抗体（すなわち、「異種の」）の抗原認識および結合部位以外である所望の結合特異性を持つアミノ酸配列と、免疫グロブリン定常ドメイン配列との融合物を含む。イムノアドヘシン分子のアドヘシン部分は、典型的には、少なくとも受容体またはリガンドの結合部位を含む連続するアミノ酸配列である。イムノアドヘシンにおける免疫グロブリン定常ドメイン配列は、ＩｇＧ－１、ＩｇＧ－２、ＩｇＧ－３、またはＩｇＧ－４サブタイプ、ＩｇＡ（ＩｇＡ－１およびＩｇＡ－２を含む）、ＩｇＥ、ＩｇＤまたはＩｇＭなどの任意の免疫グロブリンから得られ得る。Ｉｇ融合物は、好ましくは、Ｉｇ分子内の少なくとも１つの可変領域の場所に、本明細書に記載のポリペプチドまたは抗体のドメインの置換を含む。特に好ましい実施形態では、免疫グロブリン融合物は、ＩｇＧ１分子のヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３、またはヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３領域を含む。免疫グロブリン融合物の生産については、１９９５年６月２７日発行の米国特許第５，４２８，１３０号も参照されたい。
タンパク質製剤および追加の賦形剤
本明細書の開示は、例えば治療的使用のための特定のタンパク質製剤に関する。本明細書の製剤は、少なくとも１種のタンパク質種および少なくとも１種のコール酸塩界面活性剤を含むが、以下に記載のように、他の賦形剤または成分を含んでもよい。例えば、本明細書の製剤は、薬学的に許容され得る酸または塩基、バッファー、塩、凍結乾燥保護剤（製剤が凍結乾燥される場合）、糖、糖アルコール、アミノ酸、追加のタンパク質種、希釈剤、保存剤、多価金属塩、および場合によっては別の界面活性剤のうちの１つ以上を含み得る。
例えば、いくつかの実施形態では、製剤は、タンパク質、コール酸塩界面活性剤、および少なくとも１つのバッファーまたは塩を含み得る。いくつかの実施形態では、製剤は、製剤化されるタンパク質の必要性に応じて、糖、糖アルコール、アミノ酸または多価金属塩などの１つ以上の安定剤をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、製剤は、ポリソルベート、ポロキサマー、プルロニック、Ｂｒｉｊ、またはアルキルグリコシド界面活性剤などのさらなる界面活性剤を含み得る。
本明細書の「安定剤」は、製剤を安定なまたは不変の状態に維持することを助けるために、製剤に添加される任意の添加賦形剤を意味する。場合によっては、凝集、酸化、色の変化などを防ぐのを助けるために安定剤を添加することができる。
「薬学的に許容され得る酸」は、製剤化される濃度および様式にて非毒性である無機および有機酸を含む。例えば、適切な無機酸には、塩酸、過塩素酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、硫酸、スルホン酸、スルフィン酸、スルファニル酸、リン酸、炭酸などが含まれる。適切な有機酸には、直鎖および分岐鎖アルキル、芳香族、環状、脂環式、アリール脂肪族、複素環式、飽和、不飽和のモノ、ジおよびトリカルボン酸（例えばギ酸、酢酸、２－ヒドロキシ酢酸、トリフルオロ酢酸、フェニル酢酸、トリメチル酢酸、ｔ－ブチル酢酸、アントラニル酸、プロパン酸、２－ヒドロキシプロパン酸、２－オキソプロパン酸、プロパン二酸、シクロペンタンプロピオン酸、シクロペンタンプロピオン酸、３－フェニルプロピオン酸、ブタン酸、ブタン二酸、安息香酸、３－（４－ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、２－アセトキシ－安息香酸、アスコルビン酸、ケイ皮酸、ラウリル硫酸、ステアリン酸、ムコン酸、マンデル酸、コハク酸、エンボン酸、フマル酸、リンゴ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、マロン酸、乳酸、クエン酸、酒石酸、グリコール酸、グリコン酸、グルコン酸、ピルビン酸、グリオキサル酸、シュウ酸、メシル酸、コハク酸、サリチル酸、フタル酸、パルモ酸、パルメイン酸、チオシアン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２－エタンジスルホン酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４－コロベンゼンスルホン酸、ナフタレン－２－スルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、４－メチルビシクロ［２．２．２］－オクト－２－エン－１－カルボン酸、グルコヘプトン酸、４，４’－メチレンビス－３－（ヒドロキシ－２－エン－１－カルボン酸）、ヒドロキシナフトエ酸が含まれる。
「薬学的に許容され得る塩基」は、製剤化される濃度および様式にて非毒性である無機および有機塩基を含む。例えば、好適な塩基には、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アンモニウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウムなどの無機塩基を形成する金属から形成されるもの；Ｎ－メチルグルカミン、モルホリン、ピペリジン、ならびに有機非毒性塩基（第一級、第二級、および第三級アミン、置換アミン、環状アミン、ならびに塩基性イオン交換樹脂、［例えばＮ（Ｒ’）４＋（式中、Ｒ’は、独立して、ＨまたはＣ１－４アルキル例えばアンモニウム、トリス）］を含む）、例えばイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２－ジエチルアミノエタノール、トリメタミン、ジシクロヘキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ－エチルピペリジン、ポリアミン樹脂など）が含まれる。特に好ましい有機非毒性塩基は、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、トリメタミン、ジシクロヘキシルアミン、コリン、およびカフェインである。
本発明で使用することができるさらなる薬学的に許容され得る酸および塩基には、アミノ酸、例えばヒスチジン、グリシン、フェニルアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、およびアスパラギンに由来するものが含まれる。
本明細書の製剤はまた、１つ以上のバッファーまたは塩を含み得る。バッファーおよび塩には、上記の酸および塩基の酸および塩基付加塩の両方に由来するものが含まれる。具体的なバッファーおよび／または塩には、アルギニン、ヒスチジン、スクシネート、およびアセテートが含まれる。
製剤を凍結乾燥させる場合、凍結乾燥保護剤を添加してもよい。「凍結乾燥保護剤」は、目的のタンパク質と組み合わせた場合、凍結乾燥およびその後の貯蔵時のタンパク質の物理化学的不安定性を有意に防止または低減する分子である。例示的な凍結乾燥保護剤には、糖およびそれらの対応する糖アルコール；アミノ酸、例えばグルタミン酸一ナトリウムまたはヒスチジン；メチルアミン、例えばベタイン；リオトロピック塩、例えば硫酸マグネシウム；ポリオール、例えば三価またはそれより高い分子量の糖アルコール、例えばグリセリン、デキストラン、エリトリトール、グリセロール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、およびマンニトール；プロピレングリコール；ポリエチレングリコール；プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ）（登録商標）；ならびにそれら組合せが含まれる。さらなる例示的な凍結乾燥保護剤には、グリセリンおよびゼラチン、ならびに糖メリビオース、メレジトース、ラフィノース、マンノトリオース、およびスタキオースが含まれる。還元糖の例としては、グルコース、マルトース、ラクトース、マルツロース、イソマルツロース、およびラクツロースが挙げられる。非還元糖の例としては、糖アルコールおよび他の直鎖多価アルコールから選択されるポリヒドロキシ化合物の非還元グリコシドが挙げられる。好ましい糖アルコールは、モノグリコシド、特にラクトース、マルトース、ラクツロース、およびマルツロースなどの二糖類の還元により得られる化合物である。グリコシド側鎖は、グルコシドまたはガラクトシドのいずれかであり得る。糖アルコールのさらなる例は、グルシトール、マルチトール、ラクチトール、およびイソマルツロースである。好ましい凍結乾燥保護剤は、非還元糖トレハロースまたはスクロースである。
凍結乾燥保護剤は、「凍結乾燥保護量」で凍結乾燥前製剤に添加され、これは、凍結乾燥保護剤の凍結乾燥保護量の存在下でのタンパク質の凍結乾燥後、タンパク質が凍結乾燥および貯蔵時にその物理化学的安定性を本質的に保持することを意味する。
「薬学的に許容され得る糖」は、目的のタンパク質と混合した場合に、貯蔵の際のタンパク質の物理化学的不安定性を有意に防止または低減する分子である。製剤を凍結乾燥させ、次いで再構成することを意図する場合、「薬学的に許容され得る糖」は、「凍結乾燥保護剤」としても知られ得る。例示的な糖およびそれらに対応する糖アルコールには、アミノ酸、例えばグルタミン酸一ナトリウムまたはヒスチジン；メチルアミン、例えばベタイン；リオトロピック塩、例えば硫酸マグネシウム；ポリオール、例えば三価またはそれより高い分子量の糖アルコール、例えばグリセリン、デキストラン、エリトリトール、グリセロール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、およびマンニトール；プロピレングリコール；ポリエチレングリコール；プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ）（登録商標）；ならびにそれら組合せが含まれる。さらなる例示的な凍結乾燥保護剤には、グリセリンおよびゼラチン、ならびに糖メリビオース、メレジトース、ラフィノース、マンノトリオース、およびスタキオースが含まれる。還元糖の例としては、グルコース、マルトース、ラクトース、マルツロース、イソマルツロース、およびラクツロースが挙げられる。非還元糖の例としては、糖アルコールおよび他の直鎖多価アルコールから選択されるポリヒドロキシ化合物の非還元グリコシドが挙げられる。好ましい糖アルコールは、モノグリコシド、特にラクトース、マルトース、ラクツロース、およびマルツロースなどの二糖類の還元により得られる化合物である。グリコシド側鎖は、グルコシドまたはガラクトシドのいずれかであり得る。糖アルコールのさらなる例は、グルシトール、マルチトール、ラクチトール、およびイソマルツロースである。好ましい薬学的に許容され得る糖は、非還元糖トレハロースまたはスクロースである。
薬学的に許容され得る糖は、タンパク質がその物理化学的安定性を貯蔵中（例えば再構成および貯蔵の後）に本質的に保持することを意味する「保護量」（例えば凍結乾燥前）で製剤に添加される。
本明細書の目的の「希釈剤」は、薬学的に許容され得る（ヒトへの投与について安全かつ非毒性である）、液体製剤の調製物、例えば凍結乾燥後に再構成される製剤のために有用であるものである。例示的な希釈剤には、滅菌水、注射用の静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝溶液（例えばリン酸緩衝生理食塩水）、滅菌食塩水溶液、リンゲル液、またはデキストロース溶液が含まれる。代替の実施形態では、希釈剤は、塩の水溶液、および／またはバッファーを含み得る。
「保存剤」は、細菌の活性を低減するために本明細書の製剤に添加することができる化合物である。保存剤の添加は、例えば、複数使用（複数回用量）製剤の製造を容易にすることがある。可能性のある保存剤の例としては、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ヘキサメトニウムクロリド、ベンザルコニウムクロリド（アルキル基が長鎖化合物であるアルキルベンジルジメチルアンモニウムクロリドの混合物）およびベンゼトニウムクロリドが挙げられる。他の種類の保存剤には、芳香族アルコール、例えばフェノール、ブチル、およびベンジルアルコール、アルキルパラベン、例えばメチルまたはプロピルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、およびｍ－クレゾールが含まれる。本明細書の最も好ましい保存剤は、ベンジルアルコールである。
本明細書に記載の製剤は、再構成凍結乾燥製剤として調製され得る。本明細書に記載のタンパク質または抗体を凍結乾燥し、次いで再構成して本発明の液体製剤を作製する。この特定の実施形態では、上記の目的のタンパク質の調製後、「凍結乾燥前製剤」が作製される。凍結乾燥前製剤中に存在するタンパク質の量は、所望の用量体積、投与様式などを考慮して決定される。例えば、インタクトな抗体の出発濃度は、約２ｍｇ／ｍｌ～約５０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約５ｍｇ／ｍｌ～約４０ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは約２０～３０ｍｇ／ｍｌであり得る。
製剤化されるタンパク質は、一般に溶液中に存在する。例えば、本発明の液体製剤において、タンパク質は、約４～８、好ましくは約５～７のｐＨのｐＨ緩衝溶液中に存在し得る。バッファー濃度は、例えば、バッファーおよび製剤の（例えば、再構成された製剤の）所望の張度に応じて、約１ｍＭ～約２０ｍＭ、あるいは約３ｍＭ～約１５ｍＭであり得る。例示的なバッファーおよび／または塩は、薬学的に許容され得、適切な酸、塩基およびそれらの塩、例えば「薬学的に許容され得る」酸、塩基またはバッファーの下で定義されるものから作製され得るものである。
いくつかの実施形態では、凍結乾燥保護剤を凍結乾燥前製剤に添加する。凍結乾燥前製剤中の凍結乾燥保護剤の量は、一般に、再構成時に得られる製剤が等張になるような量である。しかしながら、高張性再構成製剤も好適であり得る。さらに、凍結乾燥保護剤の量は、凍結乾燥時にタンパク質が許容できない量の分解／凝集が起こるほどに低すぎてはならない。しかしながら、凍結乾燥前製剤中の例示的な凍結乾燥保護剤濃度は、約１０ｍＭ～約４００ｍＭ、あるいは約３０ｍＭ～約３００ｍＭ、あるいは約５０ｍＭ～約１００ｍＭである。例示的な凍結乾燥保護剤には、糖および糖アルコール、例えばスクロース、マンノース、トレハロース、グルコース、ソルビトール、マンニトールが含まれる。しかしながら、特定の状況下では、ある特定の凍結乾燥保護剤も製剤の粘度の増加に寄与し得る。したがって、この効果を最小化または中和する特定の凍結乾燥保護剤を選択するように注意すべきである。さらなる凍結乾燥保護剤は、本明細書において「薬学的に許容され得る糖」とも呼ばれる「凍結乾燥保護剤」の定義の下で上に記載されている。
凍結乾燥保護剤に対するタンパク質の比は、それぞれの特定のタンパク質または抗体と凍結乾燥保護剤との組合せごとに異なり得る。選択されるタンパク質としての抗体および高タンパク質濃度を有する等張性再構成製剤を生成するための凍結乾燥保護剤としての糖（例えば、スクロースまたはトレハロース）の場合、抗体に対する凍結乾燥保護剤のモル比は、抗体１モルに対して約１００～約１５００モルの凍結乾燥保護剤、好ましくは抗体１モルに対して約２００～約１０００モルの凍結乾燥保護剤、例えば抗体１モルに対して約２００～約６００モルの凍結乾燥保護剤であり得る。
凍結乾燥前製剤の調製において、凍結乾燥保護剤（スクロースまたはトレハロースなど）と増量剤（例えば、マンニトールまたはグリシン）との混合物を使用してもよい。増量剤は、その中に過剰なポケットなどがない均一な凍結乾燥ケーキの生産を可能にし得る。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ第１６版、Ｏｓｏｌ，Ａ．編（１９８０）に記載されているような他の薬学的に許容され得る担体、賦形剤、または安定剤は、それらが製剤の所望の特徴に悪影響を及ぼさない限り、凍結乾燥前製剤（および／または凍結乾燥製剤および／または再構成製剤）に含まれ得る。許容され得る担体、賦形剤、または安定剤は、用いられる投与量および濃度ではレシピエントに対して無毒であり、さらなる緩衝剤；保存剤；共溶媒；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；ＥＤＴＡなどのキレート剤；金属複合体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）；ポリエステルなどの生分解性ポリマー；および／またはナトリウムなどの塩形成対イオンを含む。
凍結乾燥製剤の場合、タンパク質、任意の凍結乾燥保護剤および他の任意の構成要素を一緒に混合した後、製剤を凍結乾燥する。この目的のために、Ｈｕｌｌ５０（商標）（Ｈｕｌｌ、米国）またはＧＴ２０（商標）（Ｌｅｙｂｏｌｄ－Ｈｅｒａｅｕｓ、ドイツ）凍結乾燥機などの多くの異なる凍結乾燥機が利用可能である。凍結乾燥は、製剤を凍結し、続いて一次乾燥に適した温度で凍結物から氷を昇華させることによって達成される。この条件下では、生成物の温度は、共晶点または製剤の崩壊温度より低い。典型的には、一次乾燥のための保存温度は、典型的には約５０～２５０ｍＴｏｒｒの範囲の適切な圧力で約－３０～２５℃の範囲である（ただし、生成物が一次乾燥中に凍結したままであることを条件とする）。試料を保持する容器（例えば、ガラスバイアル）の製剤、サイズおよび種類、ならびに液体の体積は、乾燥に必要な時間を主に決定し、これは数時間から数日（例えば、４０～６０時間）の範囲であり得る。任意に、生成物中の所望の残留水分レベルに応じて、二次乾燥段階を実施することもできる。二次乾燥が実施される温度は、主に容器の種類およびサイズならびに用いられるタンパク質の種類に応じて、約０～４０℃の範囲である。例えば、凍結乾燥の水除去段階全体にわたる保存温度は、約１５～３０℃（例えば、約２０℃）であり得る。二次乾燥に必要な時間および圧力は、例えば温度および他のパラメータに依存して、適切な凍結乾燥ケーキを生成する時間および圧力である。二次乾燥の時間は、生成物中の所望の残留水分レベルによって決定され、典型的には少なくとも約５時間（例えば、１０～１５時間）かかる。圧力は、一次乾燥工程中に用いられる圧力と同じであってもよい。凍結乾燥条件は、製剤およびバイアルサイズに応じて変えることができる。
患者への投与前に、凍結乾燥製剤は、典型的には、再構成製剤中のタンパク質濃度が少なくとも約５０ｍｇ／ｍｌ、例えば約５０ｍｇ／ｍｌ～約４００ｍｇ／ｍｌ、あるいは約８０ｍｇ／ｍｌ～約３００ｍｇ／ｍｌ、あるいは約９０ｍｇ／ｍｌ～約１５０ｍｇ／ｍｌであるように、薬学的に許容され得る希釈剤で再構成される。再構成製剤中のそのような高いタンパク質濃度は、再構成製剤の皮下送達が意図される場合に特に有用であると考えられる。しかしながら、静脈内投与などの他の投与経路では、再構成製剤中のタンパク質のより低い濃度が望ましい場合がある（例えば、再構成製剤中の約５～５０ｍｇ／ｍｌまたは約１０～４０ｍｇ／ｍｌのタンパク質）。ある特定の実施形態では、再構成製剤中のタンパク質濃度は、凍結乾燥前製剤中のタンパク質濃度よりも有意に高い。例えば、再構成製剤中のタンパク質濃度は、凍結乾燥前製剤の約２～４０倍、あるいは３～１０倍、あるいは３～６倍（例えば、少なくとも３倍または少なくとも４倍）であり得る。
再構成は、一般に、完全な水和を確実にするために約２５℃の温度で行われるが、必要に応じて他の温度を用いてもよい。再構成に必要な時間は、例えば、希釈剤の種類、賦形剤（複数可）およびタンパク質の量に依存する。例示的な希釈剤には、滅菌水、注射用の静菌水（ＢＷＦ）、ｐＨ緩衝溶液（例えばリン酸緩衝生理食塩水）、滅菌食塩水溶液、リンゲル液、またはデキストロース溶液が含まれる。希釈剤は、任意に保存剤を含む。例示的な保存剤が上に記載されており、芳香族アルコール、例えばベンジルまたはフェノールアルコールが好ましい保存剤である。用いられる保存剤の量は、タンパク質との適合性および保存効力試験のために異なる保存剤濃度を評価することによって決定される。例えば、保存剤が芳香族アルコール（ベンジルアルコールなど）である場合、約０．１～２．０％、好ましくは約０．５～１．５％、最も好ましくは約１．０～１．２％の量で存在し得る。
好ましくは、再構成製剤は、１０μｍ以上のサイズで、バイアル当たり６０００個未満の粒子を有する。
本明細書の製剤は、処置される特定の適応症に必要な２種以上のタンパク質も含んでいてもよく、好ましくは、他のタンパク質に有害な影響を与えない相補的な活性を有するものを含んでいてもよい。例えば、所望の標的（例えば、受容体または抗原）に結合する２種以上の抗体を単一の製剤で提供することが望ましい場合がある。このようなタンパク質は、意図される目的に有効な量で組み合わせて好適に存在する。
アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミンまたはウシ血清アルブミン）または免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ定常領域）などの追加のタンパク質を添加して、目的のタンパク質をさらに安定化してもよい。
インビボ投与のために使用される製剤は、滅菌されていなければならない。これは、凍結乾燥および再構成の前または後に、滅菌濾過膜を通す濾過によって容易に達成される。あるいは、混合物全体の無菌性は、例えば、タンパク質を除く成分を約１２０℃で約３０分間オートクレーブすることによって達成され得る。
治療用製剤は、所望の純度を有する有効成分をさらなる任意の担体、賦形剤または安定剤と混合することによって貯蔵のために調製される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ第１８版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．１８０４２［１９９０］）。許容され得る担体、賦形剤、または安定剤は、用いられる投与量および濃度でレシピエントに非毒性であり、バッファー、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ、およびメタ重亜硫酸ナトリウムを含む抗酸化剤、保存剤、等張剤、安定剤、金属複合体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）、および／またはＥＤＴＡなどのキレート剤を含む。
治療剤が抗体断片である場合、標的タンパク質の結合ドメインに特異的に結合する最小断片が好ましい場合がある。例えば、抗体の可変領域配列に基づいて、標的タンパク質配列に結合する能力を保持する抗体断片またはペプチド分子さえも設計することができる。このようなペプチドは、組換えＤＮＡ技術によって化学的に合成および／または産生され得る（例えば、Ｍａｒａｓｃｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：７８８９～７８９３［１９９３］を参照されたい）。
バッファーは、特に安定性がｐＨ依存的である場合、治療有効性を最適化する範囲でｐＨを制御するために使用される。バッファーは、好ましくは、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭの範囲の濃度で存在する。本発明での使用に適した緩衝剤には、有機酸および無機酸の両方ならびにそれらの塩が含まれる。例えば、シトレート、ホスフェート、スクシネート、タルテート、フマレート、グルコネート、オキサレート、ラクテート、アセテート。さらに、バッファーは、ヒスチジンおよびトリメチルアミン塩、例えばトリスから構成され得る。
保存剤は、微生物の成長を遅らせるために添加されてもよく、典型的には０．２％～１．０％（ｗ／ｖ）の範囲で存在する。本発明での使用に適した保存剤には、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；ベンザルコニウムハライド（例えば、クロリド、ブロミド、ヨージド）、ベンゼトニウムクロリド；チメロサール、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール、３－ペンタノールおよびｍ－クレゾールが含まれる。
例えば、液体組成物の張度を調整または維持するために、等張化剤を含めてもよい。タンパク質および抗体などの大きい荷電生体分子と共に使用される場合、そのような薬剤は、アミノ酸側鎖の荷電基と相互作用し、それによって、分子間および分子内相互作用の可能性を低減させ得る。等張化剤は、他の成分の相対量を考慮して、０．１重量％～２５重量％、好ましくは、１％～５％の量で存在し得る。好ましい等張化剤には、多価糖アルコール、好ましくは、三価以上の糖アルコール、例えばグリセリン、エリトリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトールおよびマンニトールが含まれる。
本明細書のいくつかの製剤では、追加の界面活性剤が含まれる。本明細書の他の製剤には、コール酸塩界面活性剤のみが含まれ、他の種類の界面活性剤は含まれない。
さらなる界面活性剤の例としては、ポリソルベート、例えばポリソルベート２０（ＰＳ２０）およびポリソルベート８０（ＰＳ８０）が挙げられる。他のさらなる界面活性剤には、ポロキサマーおよびプルロニック、例えばポロキサマー１８８またはプルロニックＦ６８、またはＢｒｉｊが含まれ得る。他のさらなる界面活性剤には、アルキルグリコシド、例えば、オクチルマルトシド、デシルマルトシド、ドデシルマルトシドまたはオクチルグルコシドが含まれ得る。より一般的には、「アルキルグリコシド」は、当技術分野で公知のように、任意の疎水性アルキルへのリンケージによって連結された任意の糖を含む。疎水性アルキル鎖と親水性糖との間のリンケージは、他の可能性の中でも、グリコシド、エステル、チオグリコシド、チオエステル、エーテル、アミドもしくはウレイド結合またはリンケージを含むことができる。例示的なアルキルグリコシドは、例えば、ＷＯ２０１１／１６３４５８に提供されている。
さらなる賦形剤には、以下の１つ以上として働くことができる薬剤が含まれる：（１）増量剤、（２）溶解度向上剤、（３）安定剤、および（４）変性または容器壁への付着を防止する薬剤。このような賦形剤には、以下が含まれる：多価糖アルコール（上に列挙）；アミノ酸、例えばアラニン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リジン、オルニチン、ロイシン、２－フェニルアラニン、グルタミン酸、トレオニンなど；有機糖または糖アルコール、例えばスクロース、ラクトース、ラクチトール、トレハロース、スタキオース、マンノース、ソルボース、キシロース、リボース、リビトール、ミオイニシトース、ミオイニシトール、ガラクトース、ガラクチトール、グリセロール、シクリトール（例えば、イノシトール）、ポリエチレングリコール；硫黄含有還元剤、例えば尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α－モノチオグリセロールおよびチオ硫酸ナトリウム；低分子量タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチンまたは他の免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；単糖類（例えばキシロース、マンノース、フルクトース、グルコース）；二糖類（例えば、ラクトース、マルトース、スクロース）；三糖類、例えばラフィノース；ならびに多糖類、例えばデキストリンまたはデキストラン。
本明細書の製剤は、処置される特定の適応症に必要な２種以上の活性化合物、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない相補的な活性を有する化合物も含んでいてもよい。あるいは、または加えて、組成物は、細胞傷害性薬剤、サイトカインまたは成長阻害剤を含み得る。このような分子は、意図される目的に有効な量で、組み合わせて好適に存在する。
有効成分はまた、例えば、コアセルベーション技術によって、もしくは界面重合によって調製されたマイクロカプセル（例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ－（メチルメタクリレート）マイクロカプセル）中に、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子、およびナノカプセル）中に、またはマクロエマルション中に取り込まれ得る。このような技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、上記に開示されている。
徐放性調製物を調製してもよい。徐放性調製物の好適な例としては、抗体を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、これらのマトリックスは、成形物品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２－ヒドロキシエチル－メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ－グルタミン酸とγ－エチル－Ｌ－グルタメートとのコポリマー、非分解性エチレン－ビニルアセテート、分解性の乳酸－グリコール酸コポリマー、例えばＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸－グリコール酸コポリマーおよびロイプロリドアセテートから構成される注射用ミクロスフェア）、ならびにポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸が挙げられる。徐放性のための組換えタンパク質のマイクロカプセル化は、ヒト成長ホルモン（ｒｈＧＨ）、インターフェロン－（ｒｈＩＦＮ－）、インターロイキン－２およびＭＮ ｒｐｇ １２０を用いて首尾よく行われている。Ｊｏｈｎｓｏｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２：７９５～７９９（１９９６）；Ｙａｓｕｄａら、Ｂｉｏｍｅｄ．Ｔｈｅｒ．２７：１２２１～１２２３（１９９３）；Ｈｏｒａら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ８：７５５～７５８（１９９０）；Ｃｌｅｌａｎｄ、Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈの「Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｉｎｇｌｅ Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ Ｕｓｉｎｇ Ｐｏｌｙｌａｃｔｉｄｅ Ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｄｅ Ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ」、ＰｏｗｅｌｌおよびＮｅｗｍａｎ編、（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９５）、４３９～４６２頁；ＷＯ９７／０３６９２；ＷＯ９６／４００７２；ＷＯ９６／０７３９９；および米国特許第５，６５４，０１０号。
これらのタンパク質の徐放性製剤は、その生体適合性および広範囲の生分解性のために、ポリ乳酸－コグリコール酸（ＰＬＧＡ）ポリマーを使用して開発されてもよい。ＰＬＧＡ、乳酸およびグリコール酸の分解産物は、人体内で迅速に除去され得る。さらに、このポリマーの分解性は、その分子量および組成に応じて数ヶ月から数年に調整することができる。Ｌｅｗｉｓ，Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ ａｓ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓの「Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ｂｉｏａｃｔｉｖｅ ａｇｅｎｔｓ ｆｒｏｍ ｌａｃｔｉｄｅ／ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ ｐｏｌｙｍｅｒ」（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ；Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９０）、Ｍ．ＣｈａｓｉｎおよびＲ．Ｌａｎｇｅｒ（編）１～４１頁。
エチレン－酢酸ビニルおよび乳酸－グリコール酸などのポリマーが１００日間超にわたり分子の放出を可能にする一方で、ある特定のヒドロゲルは、より短い期間にわたってタンパク質を放出する。カプセル化抗体が長期間体内に留まると、それらは、３７℃での水分への曝露の結果として変性または凝集する場合があり、生物学的活性の喪失および免疫原性に考えられる変化をもたらし得る。関与する機序に応じて、安定化のための合理的な戦略が講じられ得る。例えば、凝集の機序がチオ－ジスルフィド交換による分子間Ｓ－Ｓ結合の形成であると見出される場合、安定化は、スルフヒドリル残基を修飾し、酸性溶液から凍結乾燥し、水分含量を制御し、適切な添加剤を使用し、特定のポリマーマトリックス組成物を開発することにより達成してもよい。
リポソーム組成物またはプロテノイド組成物はまた、本明細書に開示のタンパク質または抗体を製剤化するために使用され得る。米国特許第４，９２５，６７３号および同第５，０１３，５５６号を参照されたい。
本明細書に記載のタンパク質および抗体の安定性は、非毒性「水溶性多価金属塩」の使用によって増強され得る。例としては、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、Ｚｎ２＋、Ｆｅ２＋、Ｆｅ３＋、Ｃｕ２＋、Ｓｎ２＋、Ｓｎ３＋、Ａｌ２＋およびＡｌ３＋が挙げられる。上記多価金属カチオンと水溶性塩を形成することができるアニオンの例としては、無機酸および／または有機酸から形成されるものが挙げられる。そのような水溶性塩は、少なくとも約２０ｍｇ／ｍｌ、あるいは少なくとも約１００ｍｇ／ｍｌ、あるいは少なくとも約２００ｍｇ／ｍｌの水への溶解度（２０℃）を有する。
「水溶性多価金属塩」を形成するために使用することができる適切な無機酸には、塩酸、酢酸、硫酸、硝酸、チオシアン酸およびリン酸が含まれる。使用することができる適切な有機酸には、脂肪族カルボン酸および芳香族酸が含まれる。この定義内の脂肪族の酸は、飽和または不飽和Ｃ２－９カルボン酸（例えば、脂肪族モノ－、ジ－およびトリ－カルボン酸）として規定され得る。例えば、この定義内の例示的なモノカルボン酸には、飽和Ｃ２－９モノカルボン酸酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、カプロン酸、エナント酸、カプリルペラルゴン酸およびカプリオニック酸、ならびに不飽和Ｃ２－９モノカルボン酸アクリル酸、プロプリオールメタクリル酸、クロトン酸およびイソクロトン酸が含まれる。例示的なジカルボン酸には、飽和Ｃ２－９ジカルボン酸マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸およびピメリン酸が含まれ、一方、不飽和Ｃ２－９ジカルボン酸には、マレイン酸、フマル酸、シトラコン酸およびメサコン酸が含まれる。例示的なトリカルボン酸には、飽和Ｃ２－９トリカルボン酸トリカルバリル酸および１，２，３－ブタントリカルボン酸が含まれる。さらに、この定義のカルボン酸はまた、ヒドロキシカルボン酸を形成するために１つまたは２つのヒドロキシル基を含み得る。例示的なヒドロキシカルボン酸には、グリコール酸、乳酸、グリセリン酸、タルトロン酸、リンゴ酸、酒石酸およびクエン酸が含まれる。この定義内の芳香族の酸には、安息香酸およびサリチル酸が含まれる。
本発明のカプセル化ポリペプチドの安定化を助けるために使用され得る一般的に用いられる水溶性多価金属塩には、例えば、以下が含まれる：（１）ハライド（例えば、塩化亜鉛、塩化カルシウム）、スルフェート、ニトレート、ホスフェートおよびチオシアネートの無機酸金属塩；（２）脂肪族カルボン酸金属塩（例えば、酢酸カルシウム、酢酸亜鉛、プロピオン酸カルシウム、グリコール酸亜鉛、乳酸カルシウム、乳酸亜鉛および酒石酸亜鉛）；ならびに（３）ベンゾエートおよびサリチレートの芳香族カルボン酸金属塩（例えば、安息香酸亜鉛）。
製剤の特性
コール酸塩界面活性剤を含む本明細書のある特定の製剤は、貯蔵またはストレスに供されていない対照溶液と比較して、貯蔵後またはストレス（撹拌または高温貯蔵などの）後に、目に見える凝集体または高分子量種（ＨＭＷＳ）の存在のいずれかで、タンパク質の凝集体の程度の低下を示し得る。
「撹拌誘発性凝集の阻害」量のコール酸塩が、本明細書のいくつかの製剤に含まれ得る。これは、室温で２４時間１００ｒｐｍで撹拌するなどの特定の条件セットの下、コール酸塩の非存在下で同一に処理されたタンパク質と比較して、タンパク質の撹拌誘発性凝集を検出可能に阻害するコール酸塩の量である。例えば、製剤中の凝集を非撹拌対照溶液と比較して、目に見える凝集体またはＨＭＷＳの存在を調べることができる。
本明細書のいくつかの実施形態では、製剤は、撹拌誘発性凝集実験後に以下の特性の１つ以上を有する。このような実験は、以下の実施例に記載されるように、１００ｒｐｍなどの速度で適切な実験室振盪装置で行うことができる。具体的には、製剤は、室温で１００ｒｐｍで２４時間撹拌した後、目に見える凝集体を示さない場合がある；室温で１００ｒｐｍで２４時間撹拌した後、２％以下の高分子量タンパク質の凝集体を示し得る；室温で１００ｒｐｍで２４時間撹拌した後、１％以下の高分子量タンパク質の凝集体を示し得る；および／または製剤中の高分子量タンパク質の凝集体は、撹拌していない対照と比較して、室温で１００ｒｐｍで２４時間撹拌した後、０．２％を超えて増加しない場合がある。例えば、単純な目視検査を使用して、溶液の濁りまたは沈殿物の存在のいずれかによって、目に見える凝集体の存在をチェックすることができる。高分子量種は、例えば、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって検出され得る。高分子量種を検出することができるか、またはサイズ、電荷、疎水性もしくは質量に応じて製剤中の種を分離することができる他の手段には、ゲル電気泳動、等電点電気泳動、キャピラリー電気泳動、クロマトグラフィー、例えばイオン交換クロマトグラフィー、逆相高速液体クロマトグラフィー、ペプチドマッピング、オリゴ糖マッピング、質量分析、紫外線吸光分光、蛍光分光、円二色性分光、等温滴定熱量測定、示差走査熱量測定、分析用超遠心分離、動的光散乱、タンパク質分解および架橋、濁度測定、フィルタ遅延アッセイ、免疫学的アッセイ、蛍光色素結合アッセイ、タンパク質染色アッセイ、顕微鏡、ならびにＥＬＩＳＡまたは他の結合アッセイによる凝集体の検出が含まれる。
いくつかの実施形態では、製剤がポリソルベート２０またはポリソルベート８０を含む場合、製剤中のポリソルベート２０またはポリソルベート８０は、同じ成分および濃度を含むがコール酸塩を含まない製剤よりも、４０℃で２週間貯蔵した後、または代替的にＣＡＬＢリパーゼで処理した後に、大部分がインタクトなままである。例えば、いくつかの実施形態では、例えば０．０５％～０．５％のコール酸塩界面活性剤の添加は、４０℃で２週間貯蔵した後、またはＣＡＬＢリパーゼ処理後の製剤から、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０の遊離脂肪酸の目に見える沈殿を低減または根絶させる。例えば、いくつかの実施形態では、０．０５％～０．５％のＣＨＡＰＳの添加は、４０℃で２週間貯蔵した後、またはＣＡＬＢリパーゼ処理後の製剤から、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０の遊離脂肪酸の目に見える沈殿を低減または根絶させる。
本開示の製剤を利用する治療的処置
「処置」とは、治療的処置および予防的または防止措置の両方を指す。処置を必要とする者には、障害を既に有する者、および障害を予防するべき者が含まれる。処置には、障害の症状の軽減、対象の生活の質の改善、ならびに障害の安定化、本開示の悪化の予防、治癒、再発のリスクの低減などの対象の任意の緩和または改善が含まれる。
「対象」および「患者」は互換的に使用され、一般に処置を受けている哺乳動物を指す。処置の目的のための「哺乳動物」は、哺乳動物として分類される任意の動物、例えば、ヒト、家畜および農場動物、ならびに動物園、スポーツまたはペット動物、例えば、イヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、アレチネズミ、マウス、フェレット、ラット、ネコなどを指す。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。
「障害」とは、タンパク質での処置から利益を得る任意の状態である。これには、哺乳動物を問題の障害に罹りやすくする病理学的状態を含む慢性および急性障害または疾患が含まれる。本明細書で処置される障害の非限定的な例としては、癌腫および炎症が挙げられる。
「治療有効量」は、特定の障害の測定可能な処置をもたらすために少なくとも必要最小限の濃度である。既知のタンパク質薬物の治療有効量は当技術分野で周知であるが、以下に見られるタンパク質の有効量は、当業者、例えば通常の医師の技術の範囲内にある標準的な技法によって決定することができる。
抗体および他のタンパク質は、液体形態または凍結乾燥形態のいずれかで本発明に従って製剤化され得る。投与経路は、単回もしくは複数回のボーラスまたは好適な様式での長期間にわたる注入、例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、病巣内、もしくは関節内による、局所投与、吸入または徐放手段もしくは持続放出手段による注射もしくは注入の既知の認められている方法に従う。
障害の処置のために、活性薬剤の適切な投与量は、上記に定義されるように、処置される障害の種類、障害の重症度および経過、薬剤が予防目的または治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴および薬剤への反応、ならびに担当医の裁量に依存するだろう。薬剤は、好適には、患者に一度にまたは一連の処置にわたって投与される。
本明細書の方法は、併用または追加の処置工程として、または治療製剤の追加の構成成分として、障害に対する既知の処置方法と組み合わせることができる。本明細書の医薬組成物の投与量および所望の薬物濃度は、想定される特定の使用に応じて変化し得る。
凍結乾燥されていない液体製剤および再構成製剤を含むがこれらに限定されない本発明の製剤は、ボーラスとしての静脈内投与または一定期間にわたる連続注入、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑液嚢内、髄腔内、経口、局所、または吸入経路などの公知の方法に従って、タンパク質による処置を必要とする哺乳動物、例えばヒトに投与され得る。いくつかの実施形態では、製剤は、皮下（すなわち、皮膚の下）投与によって哺乳動物に投与される。このような目的のために、製剤は、シリンジを使用して注射され得る。しかしながら、注射デバイス（例えば、Ｉｎｊｅｃｔ－ｅａｓｅ（商標）およびＧｅｎｊｅｃｔ（商標）デバイス）；ペン型注射器（ＧｅｎＰｅｎ（商標）など）；自動注射デバイス、無針デバイス（例えば、ＭｅｄｉＪｅｃｔｏｒ（商標）およびＢｉｏＪｅｃｔｏｒ（商標））；および皮下パッチ送達システムなどの製剤を投与するための他のデバイスが利用可能である。
いくつかの具体的な実施形態では、本開示は、本発明の製剤を含む容器に関する。例えば、製剤は、単回使用もしくは複数回使用バイアルまたは単回用量投与ユニット用のキットに包装され得る。本発明の別の実施形態では、製剤を含む容器を含み、その使用説明書も提供し得る製品が提供される。適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル（例えば、デュアルチャンバーバイアル）、シリンジ（シングルまたはデュアルチャンバーシリンジなど）および試験管が含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。このような容器またはキットは、シングルチャンバーまたはマルチチャンバーの充填済シリンジの両方を含む。例示的な充填済シリンジは、ドイツ、ＲａｖｅｎｓｂｕｒｇのＶｅｔｔｅｒ ＧｍｂＨから入手可能である。製剤を保持する容器上にあるかまたはそれに付随するラベルは、再構成および／または使用のための指示を示し得る。ラベルは、製剤が皮下投与に有用であるか、または皮下投与を意図していることをさらに示し得る。製剤を保持する容器は、反復投与（例えば、２～６回の投与）を可能にする複数回使用バイアルであり得る。製品は、例えば、凍結乾燥製剤の再構成のための適切な希釈剤（例えば、ＢＷＦＩ）を含む第２の容器をさらに含み得る。製品は、他のバッファー、希釈剤、フィルタ、針、シリンジ、および使用に関する指示を有する添付文書を含む、商業的観点および使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。
タンパク質の適切な投与量（「治療有効量」）は、例えば、処置される状態、状態の重症度および経過、タンパク質が予防目的または治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴およびタンパク質への応答、使用されるタンパク質の種類、ならびに担当医の裁量に依存するだろう。タンパク質は、一度にまたは一連の処置にわたって患者に好適に投与され、診断時から任意の時点で患者に投与され得る。タンパク質は、唯一の処置として、または問題になっている状態の処置に有用な他の薬物もしくは療法と共に投与され得る。
本発明は、以下の例を参照することにより、より完全に理解されるであろう。しかしながら、これらの例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
実施例１：タンパク質／抗体の凝集を予防するためのコール酸塩界面活性剤の調査
一般的な方法
振盪または撹拌誘発性凝集
この一連の研究では、モノクローナル抗体の緩衝溶液（２０ｍＭヒスチジンアセテートまたは２００ｍＭアルギニンスクシネートまたは２０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５～５．８）を室温で１００ｒｐｍのアームシェーカーでの振盪に供した。これらの研究は、１５ｃｃガラスバイアルに充填した５ｍＬの抗体溶液を使用して実施した。試料を一定の時間間隔で取り出し、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を使用してサイズバリアント分布について分析した。コール酸塩のクラスの様々な界面活性剤を、振盪中のタンパク質の凝集を防止するためのそれらの有効性について評価した。界面活性剤は、それぞれの臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）未満またはそれを超える濃度で使用した。
実験および結果
本発明者らはまず、０．０５％（ｗ／ｖ）のコール酸塩が、低イオン強度または高イオン強度の製剤条件で、激しい撹拌条件からモノクローナル抗体を保護するのに十分であるかどうかを調べた。本発明者らは、０．０５％（ｗ／ｖ）のコール酸塩界面活性剤（ＣＨＡＰＳ、ＳＧＨまたはＳＴＨ）または対照界面活性剤（ＰＳ２０またはＰＸ１８８）を、ｐＨ５．５の２０ｍＭヒスチジンアセテートおよび２４０ｍＭスクロースの低イオン強度溶液中で１ｍｇ／ｍＬの例示的モノクローナル抗体（抗ＰＤＬ１）またはｐＨ５．８の２００ｍＭアルギニンスクシネートの高イオン強度溶液中で１ｍｇ／ｍＬの別の例示的モノクローナル抗体（抗トリプターゼ）と混合した。両溶液を１５ｃｃガラスバイアル中に、充填体積５ｍＬで充填した。上記成分を含むが界面活性剤は含まない対照溶液も調製し、充填した。溶液を、１００ｒｐｍのアームシェーカー（Ｇｌａｓ－Ｃｏｌベンチトップアームシェーカー）にて、周囲温度で２４時間撹拌した。図１および図２に示すように、界面活性剤を含まない対照溶液の撹拌は、目に見える濁った溶液をもたらしたが、他のすべての溶液は視覚的に透明のままであった。
各溶液中のＨＭＷＳのパーセンテージも、タンパク質の凝集の程度を決定する手段として、２４時間の撹拌後にＳＥＣによって測定した。結果を、以下の表１および表２に示す。
表１－撹拌試験－低イオン強度バッファーに製剤化した抗ＰＤＬ１抗体－ＨＭＷＳ（％）
Figure 2022521840000001
表１は、ｐＨ５．５の２０ｍＭヒスチジンアセテートおよび２４０ｍＭスクロースの低イオン強度溶液中で１ｍｇ／ｍＬの抗ＰＤＬ１抗体を２４時間撹拌した後の総ＨＭＷＳパーセンテージを示す。アニオン性ＳＧＨおよびＳＴＨ界面活性剤は、対照および他の界面活性剤クラスよりも少なくとも約２倍高い総ＨＭＷＳパーセントを示す。界面活性剤を含まない対照試料は、ＨＭＷＳパーセントの有意な増加を示す。
表２－撹拌試験－高イオン強度バッファーに製剤化した抗トリプターゼ抗体－ＨＭＷＳ（％）
Figure 2022521840000002
表２は、ｐＨ５．８の２００ｍＭアルギニンスクシネートを含む高イオン強度溶液中で１ｍｇ／ｍＬの抗トリプターゼ抗体を２４時間撹拌した後の総ＨＭＷＳパーセントを示す。表２に示すように、すべての界面活性剤は、高イオン強度バッファー条件で撹拌誘発性可溶性凝集体の形成から低濃度の抗トリプターゼ抗体を保護した。
双性イオン性ＣＨＡＰＳ界面活性剤は、低イオン強度バッファー（表１；図１）および高イオン強度バッファー（表２；図２）の両方における可溶性凝集体の形成に対する抗体の保護において良好に機能したので、イオン強度製剤は、アニオン性界面活性剤（ＳＧＨおよびＳＴＨ）を効果的に機能させる役割を果たすことが可能である。製剤中の高いイオン強度の存在は、ＳＧＨおよびＳＴＨなどのアニオン性界面活性剤が主に界面活性剤として作用するように電荷遮蔽を形成する可能性がある。この仮説を試験するために、本発明者らは、２つの溶液中の抗体を入れ替え、実験を繰り返した。結果を、以下の表３に示す。
表３：撹拌試験－高および低イオン強度バッファーに製剤化された抗トリプターゼ抗体（ＨＭＷＳ（％））（表２も参照）
Figure 2022521840000003
表３は、撹拌していない対照と比較した各バッファー中の総ＨＭＷＳパーセントを示す。結果は、ＣＨＡＰＳ、ＰＳ２０およびＰＸ１８８がすべて、イオン強度にかかわらず、撹拌誘発性凝集から抗トリプターゼを保護することを示す。アニオン性コール酸塩界面活性剤、ＳＧＨおよびＳＴＨは、高イオン強度製剤中の抗トリプターゼを可溶性凝集体の形成から保護するが、低イオン強度製剤では保護しない。同様の結果が抗ＰＤＬ１について表４に示されている。
表４：撹拌試験－高および低イオン強度バッファーに製剤化された抗ＰＤＬ１抗体－ＨＭＷＳ（％）（表１も参照）
Figure 2022521840000004
実施例２：コール酸塩界面活性剤による凝集保護に対するイオン強度の影響の試験
撹拌後の目に見える微粒子を、以下の界面活性剤の濃縮ストック溶液から０．０１％、０．０２５％、または０．０５％（ｗ／ｖ）のスパイクインで様々なコール酸塩界面活性剤を含む、低イオン強度製剤（２０ｍＭヒスチジンアセテート、２４０ｍＭスクロース、ｐＨ５．５）および高イオン強度製剤（２０ｍＭヒスチジンアセテート、２７２ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ５．５）で１ｍｇ／ｍＬの抗タウモノクローナル抗体を含む溶液中で評価した：グリココール酸ナトリウム水和物（ＳＧＨ）、タウロコール酸ナトリウム水和物（ＳＴＨ）、コール酸ナトリウム水和物（ＳＣＨ）、デオキシタウロコール酸ナトリウム水和物（ＳＤＴＨ）、デオキシコール酸ナトリウム水和物（ＳＤＣＨ）、ケノデオキシコール酸ナトリウム水和物（ＳＣＤＣＨ）、ＣＨＡＰＳ、およびＢｉｇＣＨＡＰ。すべての製剤をヒスチジンアセテートバッファーを使用して調製し、高イオン強度製剤をアルギニンスクシネートの代わりに塩化ナトリウムを使用して調製した。これは、バッファー種を同じに保つためである。目的は、イオン強度が実際にＨＭＷＳ形成を防止する役割を果たすが、製剤に使用されるバッファー種（例えば、アルギニン）は防止しないかどうかを理解することである。
特定の条件下で目に見える微粒子が観察されたかどうかを以下の表５および表６に示し、一方、撹拌していない対照と比較したＨＭＷＳの形成を以下の表７および表８に示す。
表５：撹拌試験－低イオン強度バッファーに製剤化された抗タウ－目に見える微粒子の分析
Figure 2022521840000005
表６：撹拌試験－高イオン強度バッファーに製剤化された抗タウ－目に見える微粒子の分析
Figure 2022521840000006
表５および表６の結果は、アニオン性界面活性剤が、０．０２５％または０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度で試験した場合に、より高いイオン強度の製剤での撹拌誘発性不溶性凝集体の形成（目に見える粒子の形成）から抗タウ抗体をより良好に保護することを示す。すべてのアニオン性界面活性剤（試験した濃度のいずれにおいても目に見える粒子の形成から抗タウを保護しなかったＳｄＣＨおよびＳｃｄＣＨを除く）および双性イオン性のＣＨＡＰＳは、少なくとも０．０２５％（ｗ／ｖ）の濃度で目に見える粒子の形成から十分に抗体を保護した。ＢｉｇＣＨＡＰは、製剤のイオン強度にかかわらず、試験したすべての濃度で撹拌誘発性の目に見える粒子の形成から抗タウを保護した。
表７：撹拌試験－低イオン強度バッファーに製剤化された抗タウ
－ＨＭＷＳ（％）
Figure 2022521840000007
表８：撹拌試験－高イオン強度バッファーに製剤化された抗タウ
－ＨＭＷＳ（％）
Figure 2022521840000008
表７および表８の結果は、アニオン性界面活性剤が、０．０２５％または０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度である場合に、より高いイオン強度の製剤での撹拌誘発性可溶性凝集体の形成から抗タウ抗体をより良好に保護することを示す。双性イオン性ＣＨＡＰＳ、ＢｉｇＣＨＡＰおよびアニオン性ＳＴＨは、０．０２５％（ｗ／ｖ）または０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度で、低イオン強度製剤および高イオン強度製剤の両方における可溶性凝集体の形成から抗タウを保護する。すべてのアニオン性界面活性剤は、試験した濃度のいずれにおいても可溶性凝集体の形成から抗タウを保護しなかったＳｄＣＨおよびＳｃｄＣＨを除いて、少なくとも０．０２５％（ｗ／ｖ）の濃度で可溶性凝集体の形成から抗タウを十分に保護した。
これらの研究からの結果は、アニオン性界面活性剤が、撹拌誘発性の物理的不安定性からモノクローナル抗体を保護することを可能にしたのは製剤のイオン強度であり、製剤に使用された賦形剤の種類（塩化ナトリウムアルギニン）ではないことを確認している。
実施例３：タンパク質電荷不均一性に対するコール酸塩界面活性剤の効果（ｉＣＩＥＦ）－撹拌研究
抗体電荷バリアント分布を、画像化キャピラリー等電点電気泳動（ｉＣＩＥＦ）を使用して実施例２に記載の撹拌実験に従って評価し、コール酸塩が試験された抗体の相対電荷バリアント分布に影響を及ぼすかどうかを判定した。以下の表９および表１０に示す結果は、撹拌後に電荷バリアント分布が維持されたこと、およびコール酸塩は、それらが荷電種であるにもかかわらず、抗体の電荷不均一性を変化させなかったことを示す。抗ＰＤＬ１（１ｍｇ／ｍＬ）を、２０ｍＭヒスチジンアセテートｐＨ５．５の低イオン強度バッファー（表９）中で０．０５％の界面活性剤と共にインキュベートした。抗トリプターゼ（１ｍｇ／ｍＬ）を、２００ｍＭアルギニンスクシネートｐＨ５．８の高イオン強度バッファー（表１０）中で０．０５％の界面活性剤と共にインキュベートした。
表９：撹拌試験－低イオン強度バッファーに製剤化された抗ＰＤＬ１－電荷バリアントアッセイ結果（ｉｃＩＥＦ）
Figure 2022521840000009
表１０：撹拌試験－低イオン強度バッファーに製剤化された抗トリプターゼ－電荷バリアントアッセイ結果（ｉｃＩＥＦ）
Figure 2022521840000010
＊これは予想外の変化または値であり、アッセイのアーチファクトである可能性がある
本明細書の実施例１～３の結果に基づいて、すべてのゼロ正味電荷のコール酸塩界面活性剤は、２４時間の振盪ストレス後、０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度で可溶性凝集体の形成を防止する。アニオン性界面活性剤（ＳＧＨ、ＳＴＨ、ＳＣＨおよびＳＤＴＨ）は、２０ｍＭヒスチジンアセテート（ＨｉｓＯＡｃ）などの低イオン強度バッファーと比較して、２００ｍＭアルギニンスクシネートなどの高イオン強度バッファーにおいて可溶性凝集体の形成をより良好に防止するようである。対照的に、双性イオン性界面活性剤ＣＨＡＰＳは、高いイオン強度または低いイオン強度に対する優先性を示さず、イオン強度は、アニオン性コール酸塩界面活性剤で見られる差異において役割を果たすことを示している。
長期間貯蔵すると、ポリソルベート２０（ＰＳ２０）は分解して、溶液から沈殿する可能性がある遊離脂肪酸種（ＦＦＡ）になる可能性があり、おそらく溶液中のタンパク質の保護が少なくなり、タンパク質製剤中または再構成時に形成するＰＳ２０関連微粒子の存在は望ましくない。このような分解は、ＰＳ２０を含有する治療用タンパク質製剤の保存可能期間を制限し得る。低濃度のコール酸塩界面活性剤の添加が、ＰＳ２０分解を加速した形式で模倣する条件下でポリソルベートの安定性に影響を与えるかどうかを試験するために、本発明者らは、ＰＳ２０を含有する製剤にコール酸塩をスパイクし、リパーゼを使用して強制的にＰＳ２０を分解し、ＰＳ２０の分解を測定した。
具体的には、ｐＨ５．８の２００ｍＭアルギニンスクシネート、０．０２％（ｗ／ｖ）ＰＳ２０中に製剤化された５ｍｇ／ｍＬ抗トリプターゼ抗体を含む溶液を様々な濃度のコール酸塩界面活性剤と混合し、次いで０．０４単位／ｍＬ ＣＡＬＢでスパイクし、５℃で１２時間インキュベートした。製剤中のコール酸塩の存在がＦＦＡへの分解からＰＳ２０を保護するか、または形成されたＦＦＡを可溶化する場合、目に見えるＦＦＡ関連粒子はタンパク質溶液中で観察されないはずである。コール酸塩が保護または可溶化をもたらさない場合、目に見えるＦＦＡ関連粒子は、コール酸塩が添加されていないタンパク質溶液と同程度に形成されるはずである。
この実験の結果を図３および図４に示す。
結果は、０．５％のＳＣＨ、ＳＧＨまたはＣＨＡＰＳの添加が溶液中の目に見える微粒子形成を防ぐが、そのような微粒子は各界面活性剤が０．０２％～０．１％で添加されると、依然として形成されることを示している（図３）。
ＰＳ２０の量を出発材料中で測定して、０．２５ｍｇ／ｍＬの標準曲線法を用いてＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ（Ｈｅｗｉｔｔら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．１２１５（２００８）１５６～１６０）によって対照の最大量を得た。図４に示すように、リパーゼ処理後、インタクトなＰＳ２０の濃度は０．１ｍｇ／ｍＬ未満に低下する。対照的に、ＣＨＡＰＳ、ＳＧＨおよびＳＴＨは、０．１％～０．５％（ｗ／ｖ）の濃度で溶液中のＰＳ２０を分解から保護した。具体的には、界面活性剤を添加しないリパーゼ分解後に０．０５ｍｇ／ｍＬに低下させながら、開始ＰＳ２０の濃度を０．２５ｍｇ／ｍＬ超として測定した。０．１％～０．５％（ｗ／ｖ）のＣＨＡＰＳの添加により、リパーゼ処理時にＰＳ２０の濃度を約０．１３％～０．１７％（ｗ／ｖ）の間に維持することができた。０．１％～０．５％（ｗ／ｖ）のＳＧＨの添加により、リパーゼ処理時にＰＳ２０の濃度を約０．０６％～０．１３％（ｗ／ｖ）に維持することができた。０．１％～０．５％（ｗ／ｖ）のＳＴＨの添加により、リパーゼ処理時にＰＳ２０の濃度を０．１０％超～約０．１６％（ｗ／ｖ）に維持することができた。
実施例５：タンパク質製剤中のポリソルベート２０の熱分解に対するコール酸塩界面活性剤の効果
コール酸塩がＰＳ２０含有タンパク質溶液を安定化できるかどうかをさらに試験するために、本発明者らは、ＰＳ２０を含有するタンパク質溶液にＣＨＡＰＳまたはＳＧＨのいずれかを添加し、溶液を４０℃で２週間の熱ストレスに供した。試料を０日目（Ｄ０）、Ｄ７およびＤ１４に取り出し、インタクトなＰＳ２０ ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ定量法を使用して試験した。以下の２つのモノクローナル抗体をそれらのベース製剤で試験した：２０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ５．５中の３０ｍｇ／ｍＬ抗ＰＤＬ１および２００ｍＭアルギニンスクシネートｐＨ５．８中の抗トリプターゼ。界面活性剤スパイクイン設定および抗ＰＤＬ１および抗トリプターゼ抗体を使用した試験の結果を表１１に示す。
表１１：抗体溶液に共製剤化された界面活性剤－４０℃で２週間の熱ストレス
Figure 2022521840000011
データは、ＣＨＡＰＳがＰＳ２０と共製剤化された場合に、熱分解からＰＳ２０を保護するのに特に効果的であることを示唆している。

Claims (41)

  1. タンパク質、および２５℃の水中で２．０ｍＭ以上または０．２％（ｗ／ｖ）以上の臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）値を有する少なくとも１種のコール酸塩界面活性剤を含む、タンパク質製剤。
  2. 前記タンパク質が抗体である、請求項１に記載の製剤。
  3. 前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項２に記載の製剤。
  4. 前記コール酸塩界面活性剤が、双性イオン性、非イオン性、アニオン性であるか、またはＣＨＡＰＳ（３－［（３－コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ］－１－プロパンスルホネート）、ＳＧＨ（グリココール酸ナトリウム水和物）、タウロコール酸ナトリウム水和物（ＳＴＨ）、コール酸ナトリウム水和物（ＳＣＨ）、ＳｄＴＨ、ＳｄＣＨ、ＳｃｄＣＨおよびＢｉｇＣＨＡＰ（Ｎ，Ｎ’－ビス－（３－Ｄ－グルコンアミドプロピル）コールアミド）から選択される、請求項１から３のいずれか一項に記載の製剤。
  5. ０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．１％以下、０．０５％以下、０．０４％以下、０．０２５％以下、０．０２％以下、０．０１～０．５％、０．０１～０．１％、０．０１～０．０５％、または０．０２５％～０．０５％の濃度（ｗ／ｖ）でＣＨＡＰＳを含む、請求項４に記載の製剤。
  6. ０．０２５％～０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度でＣＨＡＰＳを含む、請求項５に記載の製剤。
  7. ０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．１％以下、０．０５％以下、０．０４％以下、０．０２５％以下、０．０２％以下、０．０１～０．５％、０．０１～０．１％、０．０１～０．０５％、または０．０２５％～０．０５％の濃度（ｗ／ｖ）でＢｉｇＣＨＡＰを含む、請求項４に記載の製剤。
  8. ０．０２５％～０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度でＢｉｇＣＨＡＰを含む、請求項７に記載の製剤。
  9. ０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．１％以下、０．０５％以下、０．０４％以下、０．０２５％以下、０．０２％以下、０．０１～０．５％、０．０１～０．１％、０．０１～０．０５％、または０．０２５％～０．０５％の濃度（ｗ／ｖ）でＳＧＨ、ＳＴＨ、またはＳＣＨを含む、請求項４に記載の製剤。
  10. ０．０２５％～０．０５％の濃度でＳＧＨ、ＳＴＨまたはＳＣＨを含む、請求項９に記載の製剤。
  11. 前記少なくとも１種のコール酸塩界面活性剤が、２５℃の水中でそのＣＭＣ値より低い濃度で存在する、請求項１から１０のいずれか一項に記載の製剤。
  12. 双性イオン性または非イオン性コール酸塩界面活性剤を含み、低イオン強度製剤である、請求項１から８、または１１のいずれか一項に記載の製剤。
  13. ５０ｍＭ未満の塩、４０ｍＭ未満の塩、３０ｍＭ未満の塩、または２５ｍＭ未満の塩、例えばナトリウム、アルギニン、またはヒスチジン塩を含む、請求項１２に記載の製剤。
  14. アニオン性コール酸塩界面活性剤を含み、高イオン強度製剤である、請求項１から４、９、または１０のいずれか一項に記載の製剤。
  15. 少なくとも１７５ｍＭの塩、少なくとも２００ｍＭの塩、少なくとも２２５ｍＭの塩、または少なくとも２５０ｍＭの塩、例えばナトリウム、アルギニン、またはヒスチジン塩を含む、請求項１４に記載の製剤。
  16. 治療的使用に適している、請求項１から１５のいずれか一項に記載の製剤。
  17. 凍結乾燥に供されていない、請求項１から１６のいずれか一項に記載の製剤。
  18. すぐに使用できる液体製剤である、請求項１７に記載の製剤。
  19. 再構成凍結乾燥製剤である、請求項１から１６のいずれか一項に記載の製剤。
  20. ポリソルベート、ポロキサマー、プルロニック、Ｂｒｉｊ、またはアルキルグリコシド界面活性剤のいずれも含まない、請求項１から１９のいずれか一項に記載の製剤。
  21. 非コール酸塩界面活性剤をいずれも含まない、請求項１から２０のいずれか一項に記載の製剤。
  22. 少なくとも一種のコール酸塩界面活性剤、少なくとも一種のタンパク質種、少なくとも一種のバッファー種、および少なくとも一種の非界面活性剤の安定剤（例えば、糖、糖アルコール、アミノ酸、ペプチド、塩、または他のタンパク質）から本質的になる、請求項２０または２１に記載の製剤。
  23. 少なくとも１種のポリソルベートまたはポロキサマーをさらに含む、請求項１から１９のいずれか一項に記載の製剤。
  24. ポリソルベート２０またはポリソルベート８０をさらに含む、請求項２３に記載の製剤。
  25. ０．０５％以下または０．０１％以下のポリソルベート２０または８０を含む、請求項２４に記載の製剤。
  26. 前記コール酸塩界面活性剤および前記ポリソルベート２０または８０以外のいずれの界面活性剤も含まない、請求項２５に記載の製剤。
  27. 少なくとも１種の治療用タンパク質種、および０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．１％以下、０．０５％以下、０．０４％以下、０．０２５％以下、０．０２％以下、０．０１～０．５％、０．０１～０．１％、０．０１～０．０５％、または０．０２５％～０．０５％の濃度（ｗ／ｖ）のＣＨＡＰＳから本質的になる界面活性剤を含む治療用タンパク質製剤であって、任意に、バッファー、塩、凍結乾燥保護剤、または糖、糖アルコール、アミノ酸、もしくは他のタンパク質種のうちの１つ以上を含む安定剤のうちの１つ以上をさらに含み、任意に、
    ａ．前記製剤が低イオン強度であり；
    ｂ．前記少なくとも１種の治療用タンパク質が抗体であり；および／または
    ｃ．前記製剤が、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤である、治療用タンパク質製剤。
  28. 前記界面活性剤が、０．０１％～０．０５％または０．０２５％～０．０５％（ｗ／ｖ）のＣＨＡＰＳから本質的になる、請求項２７に記載の製剤。
  29. 少なくとも１種の治療用タンパク質種、および０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．１％以下、０．０５％以下、０．０４％以下、０．０２５％以下、０．０２％以下、０．０１～０．５％、０．０１～０．１％、０．０１～０．０５％、または０．０２５％～０．０５％の濃度（ｗ／ｖ）のＢｉｇＣＨＡＰから本質的になる界面活性剤を含む治療用タンパク質製剤であって、任意に、バッファー、塩、凍結乾燥保護剤、または糖、糖アルコール、アミノ酸、もしくは他のタンパク質種のうちの１つ以上を含む安定剤のうちの１つ以上をさらに含み、任意に、
    ａ．前記製剤が低イオン強度であり；
    ｂ．前記少なくとも１種の治療用タンパク質が抗体であり；および／または
    ｃ．前記製剤が、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤である、治療用タンパク質製剤。
  30. 前記界面活性剤が、０．０１～０．０５％または０．０２５％～０．０５％（ｗ／ｖ）のＢｉｇＣＨＡＰから本質的になる、請求項２９に記載の製剤。
  31. 少なくとも１種の治療用タンパク質種、および０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．１％以下、０．０５％以下、０．０４％以下、０．０２５％以下、０．０２％以下、０．０１～０．５％、０．０１～０．１％、０．０１～０．０５％、または０．０２５％～０．０５％の濃度（ｗ／ｖ）のＳＴＨ、ＳＧＨ、またはＳＣＨから本質的になる界面活性剤を含む治療用タンパク質製剤であって、前記製剤が高イオン強度製剤であり、任意に、バッファー、塩、凍結乾燥保護剤、または糖、糖アルコール、アミノ酸、もしくは他のタンパク質種のうちの１つ以上を含む安定剤のうちの１つ以上をさらに含み、任意に
    ａ．前記少なくとも１種の治療用タンパク質が抗体であり；および／または
    ｂ．前記製剤が、使用前に凍結乾燥されていない液体製剤である、治療用タンパク質製剤。
  32. 前記界面活性剤が、０．０１～０．０５％、または０．０２５％～０．０５％（ｗ／ｖ）のＳＴＨ、ＳＧＨ、またはＳＣＨから本質的になる、請求項２７に記載の製剤。
  33. 以下の特性：
    ａ．前記製剤が、室温で１００ｒｐｍで２４時間撹拌した後、目に見える凝集体を示さない；
    ｂ．前記製剤が、室温で１００ｒｐｍで２４時間撹拌した後、２％以下の高分子量タンパク質の凝集体を示す；
    ｃ．前記製剤が、室温で１００ｒｐｍで２４時間撹拌した後、１％以下の高分子量タンパク質の凝集体を示す；
    ｄ．前記製剤中の高分子量タンパク質の凝集体が、撹拌していない対照と比較して、室温で１００ｒｐｍで２４時間撹拌した後、０．２％を超えて増加しない；
    ｅ．前記製剤がポリソルベート２０またはポリソルベート８０を含む場合、前記製剤中の前記ポリソルベート２０またはポリソルベート８０は、同じ成分および濃度を有するがコール酸塩を含まない製剤よりも、４０℃で２週間貯蔵した後、またはＣＡＬＢリパーゼで処理した後に、大部分がインタクトなままである、のうちの１つ以上を有する、請求項１から３２のいずれか一項に記載の製剤。
  34. 請求項１から３３のいずれか一項に記載の製剤を含む容器。
  35. 請求項３４に記載の容器を含む製品。
  36. 請求項１から３３のいずれか一項に記載のタンパク質製剤を製造する方法であって、前記タンパク質を前記少なくとも１種のコール酸塩界面活性剤と混合して、コール酸塩含有水溶液を形成することを含む、方法。
  37. 水溶液中に存在するタンパク質の凝集を阻害する方法であって、２５℃の水中で約２ｍＭ以上または０．２％（ｗ／ｖ）の臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）値を有する少なくとも１種のコール酸塩界面活性剤を、２５℃の水中でそのＣＭＣ値より低い濃度で前記水溶液に添加して、コール酸塩含有水溶液を形成することを含む、方法。
  38. 前記タンパク質が抗体である、請求項３７に記載の方法。
  39. 前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項３８に記載の方法。
  40. 前記コール酸塩含有水溶液を凍結乾燥することをさらに含む、請求項３６から３９のいずれか一項に記載の方法。
  41. 前記コール酸塩含有水溶液を凍結乾燥することを含まない、請求項３６から３９のいずれか一項に記載の方法。
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