JP4578247B2 - 蛋白質含有液の保存方法及びそれに使用される希釈液 - Google Patents
蛋白質含有液の保存方法及びそれに使用される希釈液 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4578247B2 JP4578247B2 JP2005002266A JP2005002266A JP4578247B2 JP 4578247 B2 JP4578247 B2 JP 4578247B2 JP 2005002266 A JP2005002266 A JP 2005002266A JP 2005002266 A JP2005002266 A JP 2005002266A JP 4578247 B2 JP4578247 B2 JP 4578247B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- solution
- registered trademark
- food
- surfactant
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
そこで、食物アレルギー患者の適切な食品選択を助けることを目的に、食物アレルギーの原因食品(食品衛生法では特定原材料と呼ばれている)を僅かでも含む加工食品について、平成14年4月以降、その旨を表示することが食品衛生法により義務付けられた。省令により表示が義務付けられた特定原材料は、食物アレルギーを起こす頻度と重篤度から「卵、乳、小麦、そば、落花生」の5品目が定められている。その後、平成14年11月6日付けで「アレルギー物質を含む食品の検査方法について(食発第1106001号)」が厚生労働省医薬局食品保健部長通知として公表された。本通知法の中で、スクリーニング法として2種類の免疫学的測定法(エライザ法)が採用された。エライザ法は比較的簡便な操作で短時間に結果が得られる事から、様々な検査方法に応用され近年広く普及している。
しかしながら、上記の通知法では、加熱及び/又は加圧処理が施された食品(例えば缶詰、レトルトパウチ食品、焼き菓子等)からの抽出効率が極めて低く、引き続き実施するエライザ法にて検体中の蛋白質濃度を正確に測定できないことが指摘されていた。
(1)SDS:0.09〜1.5%、好適には0.125〜0.5%;
(2)尿素:2M以上、好適には4〜8M;
(3)2-ME:0.07〜3.13%、好適には0.098〜0.78%;
であることが必要であり、上記(1)〜(3)のいずれか一つの化合物が欠けたり、指定濃度範囲を外れると、蛋白質が十分に抽出できない、又は抗原性・アレルゲン性の分析ができないとされており、制約が多い。
更に、上記文献記載の方法に基づいて食品中の蛋白質(卵、牛乳、小麦、そば、落花生の蛋白質)を抽出し、当該抽出液を保存した後、常法に準じて免疫学的測定法を実施すると、食品検体溶液中の蛋白質濃度を正確に測定できず、抗原抗体反応性を維持し得ないことが判明した。また、本法により得られた標準溶液(即ち、既知量の蛋白質を含む溶液)についても、保存安定性が悪く、その抗原抗体反応性を長期間維持することはできなかった。
本発明の方法は、食品として、加熱及び/又は加圧処理された食品である場合に好適に使用される。
この問題を解決するために、本発明者らは種々検討したところ、上記の蛋白質含有液に、さらに、緩和な界面活性剤(非イオン性界面活性剤、両性界面活性剤及び/又は非界面活性剤型スルホベタイン)を含有する希釈液により、抽出原液を希釈することにより、引き続き実施する免疫学的測定法において抗原抗体反応性を維持する蛋白質溶液(標準溶液希釈液又は食品検体溶液)が得られることを見出して、この問題を解決した。蛋白質が変性・可溶化する抽出液組成に、さらに緩和な界面活性剤を添加することにより、抽出蛋白質間の凝集を防ぎ、引き続き実施する免疫学的測定法での抗原抗体反応性を維持できるものと考えられる。
上記のイオン性界面活性剤は陰イオン性界面活性剤及び陽イオン性界面活性剤が包含される。陰イオン性界面活性剤としては、例えば、アルキル硫酸塩(例えばドデシル硫酸ナトリウム、ドデシル硫酸カリウム、オクチル硫酸ナトリウム等)、アルキルベンゼンスルホン酸塩(例えばドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム等)、アルキルスルホン酸塩(例えば、ドデシルスルホン酸ナトリウム等)が挙げられ、特にドデシル硫酸ナトリウムを使用するのが好ましい。
陽イオン性界面活性剤としては、例えば、第四アンモニウム塩(例えば、塩化ドデシルトリメチルアンモニウム、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム、塩化ドデシルピリジニウム等)などが挙げられる。
係るイオン性界面活性剤は2種以上を併用してもよい。
上記のイオン性界面活性剤は、蛋白質の変性を考慮して、低濃度で使用するのが好ましく、1%(w/v%、以下同様)以下、より好ましくは0.5%程度の濃度で使用される。
また、標準溶液を調製するには、既知量の蛋白質を上記の抽出液に溶解して調製することができる。
上記の非イオン性界面活性剤、両性界面活性剤及び/又は非界面活性剤型スルホベタインを含む希釈液中の非イオン性界面活性剤、両性界面活性剤及び非界面活性剤型スルホベタイン濃度は0.01〜1%程度、好ましくは0.05〜0.8%程度、より好ましくは0.1〜0.2%程度に調整される。
また、本発明の希釈液には、保護蛋白質としてウシ血清アルブミン(BSA)を添加してもよく、BSAの濃度としては0.01〜1%程度に調整される。更に、当該希釈液には、前記のイオン性界面活性剤及び/又は還元剤を含有させてもよい。
本発明の希釈液で希釈された食品検体溶液は、含有する蛋白質が低濃度であるにもかかわらず引き続き実施する免疫学的測定法での抗原抗体反応性を長期間(6ヶ月以上)維持できる。同様に本希釈液により希釈された標準溶液もは抗原抗体反応性を維持し得る。
落花生からの標準溶液の調整例と免疫学的測定法の結果
落花生を凍結乾燥した標準粉末1gをプラスチック製遠心管に量りとり、アセトン10mlを添加した。これを激しく振とうした後、遠心分離した(10,000g×30分間)。これを3回繰り返した後、風乾した。これに抽出液(SDS; 1%、2-ME;1%)19mlを添加した後、振とう機により12時間以上振とうし抽出操作を行った。この抽出液を10,000g×30分間遠心分離し、遠心後の上清を0.8μmマイクロフィルター処理し、抽出原液とした。次にPBS(pH7.4)により1/20倍濃度に希釈し、蛋白質定量により濃度を確定し、二次希釈液とした(濃度;SDS;0.05%、2-ME;0.05%)。
二次希釈液をさらに、希釈液(濃度;SDS; 0.05%、2-ME;0.05%、TritonX-100;0.2%)により適宜希釈し50ng/ml濃度の標準溶液を作製した。標準溶液調整当日に、標準溶液中の蛋白質含量(50ng/ml)を免疫学的測定法により測定した。
上記の標準溶液を、4℃で3日間及び6ヶ月間保存し、同様に測定を行った。
実施例1において、希釈液(濃度;TritonX-100;0.2%、2-ME;0.05%)を使用した以外は同様に保存した。
実施例1において、希釈液(濃度;TritonX-100;0.2%、SDS; 0.05%)を使用した以外は同様に保存した。
実施例1において、希釈液(濃度;TritonX-100;0.2%)を使用した以外は同様に保存した。
実施例1において、希釈液(濃度;SDS; 0.05%、2-ME;0.05%)を使用した以外は同様に保存した。
実施例1において、希釈液(濃度;SDS; 0.05%)を使用した以外は同様に保存した。
食品(クッキー)中の牛乳蛋白質抽出と免疫学的測定法の結果
市販のクッキー(原材料にバターオイルの表示あり)1gをプラスチック製遠心管に量りとり、これに抽出液(SDS;1%、2-ME;1%)19mlを添加した後、振とう機により12時間以上振とうし抽出操作を行った。この抽出液を3000g×20分間遠心分離し、遠心後の上清を食品検体溶液とした。次に、希釈液(濃度;BSA;0.5%、TritonX-100;0.2%)により1/20倍濃度に希釈し測定溶液を作製し(抽出と希釈を併せ最終1/400倍濃度)、4℃で3時間保存した後、免疫学的測定法により牛乳蛋白質を測定した。
実施例5において、希釈液(PBS)を使用した以外は同様に保存した。
Claims (4)
- 食品から、イオン性界面活性剤と還元剤からなる液を用いて抽出した蛋白質含有液、又は
標準蛋白質をイオン性界面活性剤と還元剤からなる液で溶解した蛋白質含有標準溶液を、
非イオン性界面活性剤を含む希釈液で希釈することからなる蛋白質含有液の保存方法。 - 食品が、加熱及び/又は加圧処理された食品である請求項1記載の方法。
- 非イオン性界面活性剤が、BigCHAP, DeoxyBigCHAP, Brij (登録商標) 35, Brij (登録商標) 58P, Cymal-1, Cymal-2, Cymal-5, Cymal-6, Decyl-β-D-maltopyranoside,
n-Dodecyl-β-D-maltoside, n-Hexadecyl-β-D-maltoside, Undecyl-β-D-maltoside,
Decyl-β-D-1-thiomaltopyranoside, Octyl-β-D-glucopyranoside,
Decyl-β-D-1-thioglucopyranoside, Octyl-β-D-thioglucopyranoside, Digitonin,
Dimethyldecylphosphine oxide (APO-10), Dodecyldimethylphosphine oxide (APO-12),
IGEPAL (登録商標) CA-630, N-Octanoyl-N-methylglucamine (MEGA-8),
N-Nonanoyl-N-methylglucamine (MEGA-9), N-Decanoyl-N-methylglucamine (MEGA-10),
Nonidet (登録商標) P40-substitute, Pluronic (登録商標) F-68, Saponin,
Thesit, Triton (登録商標) X-100, Triton (登録商標) X-114,
TWEEN (登録商標) 20, TWEEN (登録商標) 40, TWEEN (登録商標) 80からなる群から選択される少なくとも一種である請求項1又は2記載の方法。
- 請求項1に記載の方法に使用される、非イオン性界面活性剤を含む、蛋白質含有液の希釈液。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2005002266A JP4578247B2 (ja) | 2005-01-07 | 2005-01-07 | 蛋白質含有液の保存方法及びそれに使用される希釈液 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2005002266A JP4578247B2 (ja) | 2005-01-07 | 2005-01-07 | 蛋白質含有液の保存方法及びそれに使用される希釈液 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2006189358A JP2006189358A (ja) | 2006-07-20 |
JP4578247B2 true JP4578247B2 (ja) | 2010-11-10 |
Family
ID=36796713
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2005002266A Active JP4578247B2 (ja) | 2005-01-07 | 2005-01-07 | 蛋白質含有液の保存方法及びそれに使用される希釈液 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP4578247B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2015079977A1 (ja) * | 2013-11-26 | 2015-06-04 | シャープ株式会社 | 抗体分離方法、抗体評価方法、医薬の評価方法、及び、抗体の2次元電気泳動用キット |
CA3133652A1 (en) * | 2019-04-01 | 2020-10-08 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for stabilizing protein-containing formulations |
CN117136304A (zh) * | 2021-04-01 | 2023-11-28 | 富士瑞必欧株式会社 | 生物学样品的处理方法 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3600231B1 (ja) * | 2003-09-30 | 2004-12-15 | 森永製菓株式会社 | イムノアッセイ |
-
2005
- 2005-01-07 JP JP2005002266A patent/JP4578247B2/ja active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3600231B1 (ja) * | 2003-09-30 | 2004-12-15 | 森永製菓株式会社 | イムノアッセイ |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2006189358A (ja) | 2006-07-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Xu et al. | Effect of chlorogenic acid covalent conjugation on the allergenicity, digestibility and functional properties of whey protein | |
Watanabe et al. | Novel ELISA for the detection of raw and processed egg using extraction buffer containing a surfactant and a reducing agent | |
Li et al. | Effects of high hydrostatic pressure treatment on allergenicity and structural properties of soybean protein isolate for infant formula | |
Verhoeckx et al. | Food processing and allergenicity | |
Zeece et al. | Effect of high-pressure treatment on in-vitro digestibility of β-lactoglobulin | |
Sen et al. | Protein structure plays a critical role in peanut allergen stability and may determine immunodominant IgE-binding epitopes | |
Rozenfeld et al. | Detection and identification of a soy protein component that cross-reacts with caseins from cow's milk | |
Zhenxing et al. | The influence of gamma irradiation on the allergenicity of shrimp (Penaeus vannamei) | |
Monaci et al. | Food allergens: Classification, molecular properties, characterization, and detection in food sources | |
JP4578247B2 (ja) | 蛋白質含有液の保存方法及びそれに使用される希釈液 | |
EP2400301A1 (en) | Allergen detection method using immunochromatography | |
Benedé et al. | Influence of the carbohydrate moieties on the immunoreactivity and digestibility of the egg allergen ovomucoid | |
Savolainen et al. | IgE, IgA, and IgG responses to common yeasts in atopic patients | |
Pacharn et al. | Identification of wheat sensitization using an in-house wheat extract in Coca-10% alcohol solution in children with wheat anaphylaxis | |
EP1424345B1 (en) | Method for extracting gluten contained in heat-processed and non-heat-processed foodstuffs, compatible with an enzyme-linked immunosorbent assay, composition and kits comprising said composition | |
WO2021050009A3 (en) | Composition of renaturation buffer solution for dimeric proteins and method of renaturation dimeric proteins using the composition thereof | |
Sánchez et al. | HPP in dairy products: Impact on quality and applications | |
Marzban et al. | Conformational changes of Mal d 2, a thaumatin-like apple allergen, induced by food processing | |
JP2018077171A (ja) | チョコレート試料中のアレルゲンの検出方法 | |
Banach et al. | Microstructural changes in high‐protein nutrition bars formulated with extruded or toasted milk protein concentrate | |
De Angelis et al. | Two‐dimensional electrophoresis and IgE‐mediated food allergy | |
JP2020020759A (ja) | イムノクロマト法によるアレルゲンの検出方法及びそのキット | |
US20100112709A1 (en) | Highly sensitive method for detecting protein in food | |
JP6473662B2 (ja) | イムノアッセイ法を用いた残留農薬検査のための前処理方法、及び残留農薬検査方法 | |
JP2007024645A (ja) | 乳化安定性の評価方法、乳化剤の評価方法及び飲食品 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20071227 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20091202 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20091225 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100223 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100519 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100715 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20100818 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20100824 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130903 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4578247 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |