JP2022514299A - 抗体の制御されたフコシル化 - Google Patents

Abstract

【課題】コア非フコシル化を望ましいレベルとする培養パラメータを予測する改善された方法が必要とされている。【解決手段】本発明は、制御されたコアフコシル化レベルで抗体及び抗体誘導体を製造する方法を提供する。１態様において、抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルを制御する方法が本明細書で提供される。一部の実施形態において、本発明は、本発明の方法によって製造される抗体又は抗体誘導体の組成物を提供する。前記抗体及び誘導体は、治療上若しくは予防上有効量の前記抗体若しくは誘導体及び１以上の薬学的に許容される成分を含む医薬組成物として製剤することができる。【選択図】 図１Ａ

Description

関連出願の相互参照
本願は、２０１８年１２月１９日出願の米国暫定特許出願第６２／７８１，６９１号（参照によって、あらゆる点について全体が本明細書に組み込まれる）の優先権の恩恵を主張するものである。

組換え治療用タンパク質は、多くの異なる方法により製造される。一つの好ましい方法は、哺乳動物宿主細胞系からの組換えタンパク質の産生である。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの細胞系を、対象の治療用タンパク質を発現するように操作する。各種細胞系が、タンパク質の特性及び産生性などの組換えタンパク質の産生に関する利点と欠点を有する。商業生産用の細胞系の選択は、高い生産性の必要性と所定の製品の要求される属性を伴う一貫した製品品質をもたらす能力との均衡を取るものである。一貫性のある高い品質特性及び高力価プロセスを必要とする一つの重要な種類の治療用組換えタンパク質は、モノクローナル抗体である。

哺乳動物宿主細胞において産生されるモノクローナル抗体は、グリコシル化などの各種の翻訳後修飾を有し得る。ＩｇＧ１ｓなどのモノクローナル抗体は、各重鎖（完全な抗体当たり二つ）のアスパラギン２９７（Ａｓｎ２９７）におけるＮ結合型グリコシル化部位を有する。抗体上のＡｓｎ２９７に結合しているグリカンは、代表的には、非常に低量のバイセクティングＮ－アセチルグルコサミン（バイセクティングＧＩｃＮＡｃ）を含むか、又は全く含まず、少量の末端シアル酸及び可変量のガラクトースを含む複雑な二分岐構造である。グリカンも通常、高レベルのコアフコシル化を有する。抗体におけるコアフコシル化の減少が、Ｆｃエフェクター機能、特にＦｃガンマ受容体結合及びＡＤＣＣ活性を変えることが明らかになっている。この所見により、コアフコシル化が低下した抗体を産生するように細胞系を操作することに関心が寄せられるようになった。

コアフコシル化を減少させるように細胞系を操作する方法には、遺伝子ノックアウト、遺伝子ノックイン及びＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）などがあった。遺伝子ノックアウトでは、ＦＵＴ８（アルファ１，６－フコシルトランスフェラーゼ酵素）をコードする遺伝子が失活される。ＦＵＴ８は、ＧＤＰ－フコースから、Ｎ－グリカンのＡｓｎ結合型（Ｎ結合型）ＧｌｃＮａｃの６位へのフコシル残基の転移を触媒する。ＦＵＴ８は、Ａｓｎ２９７でのＮ結合型二分岐炭水化物へのフコースの付加に関与する唯一の酵素であると報告されている。遺伝子ノックインは、ＧＮＴＩＩＩ又はゴルジαマンノシダーゼＩＩなどの酵素をコードする遺伝子を付加するものである。細胞におけるそのような酵素のレベル上昇は、モノクローナル抗体をフコシル化経路から迂回させ（コアフコシル化低下をもたらす）、バイセクティングＮ－アセチルグルコサミンの量が増加している。ＲＮＡｉも代表的には、ＦＵＴ８遺伝子発現を標的として、ｍＲＮＡ転写レベルの低下又は遺伝子発現の完全なノックアウトをもたらす。細胞系操作の代替法には、グリコシル化経路における酵素に作用する小分子阻害剤の使用などがある。

一部の用途において、コアフコシル化及びコア非フコシル化抗体若しくは抗体誘導体の混合群を用いることが望ましい可能性がある。従って、コア非フコシル化を望ましいレベルとする培養パラメータを予測する改善された方法が必要とされている。

本発明は、制御されたレベルのコア非フコシル化で抗体及び抗体誘導体を製造する方法を提供する。この方法は、予測モデルへの入力として対応する培養パラメータ（例えば、細胞面積又は抗体力価の積分）と対となったフコシル化阻害剤に関連するパラメータ（例えば、フコシル化阻害剤の量又はフコシル化阻害剤添加の時間）を用いて、所与のフコシル化阻害剤（例えば、２－フルオロフコース）による抗体又は抗体誘導体非フコシル化レベルの正確な予測モデルを作ることができることを示す実施例で提供される予想外の結果に一部基づくものである。

１態様において、本明細書で提供されるのは、抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルを制御する方法であって、（ａ）所定量のフコシル化阻害剤（Ａ_ｐ）の存在下に培地中で宿主細胞を培養すること［宿主細胞は、糖鎖の還元末端のＮ－アセチルグルコサミンを介してＦｃドメインに結合した少なくとも一つの複合型Ｎ－グリコシド結合型糖鎖を有するＦｃドメインを有する抗体又は抗体誘導体を発現する。］；（ｂ）抗体又は抗体誘導体を単離することを含み、Ａ_ｐが、（ｂ）の単離された抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルが、標的レベルの非フコシル化からの最大偏差を超えない非フコシル化レベルを有するように事前に決定される方法である。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、培養の完了時に単離される。一部の実施形態において、当該方法は、Ａ_ｐを決定することをさらに含む。一部の実施形態において、

一部の実施形態において、上記Ａ_ｐを用いる抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルの制御方法のいずれかによれば、入力として複数の異なるフコシル化阻害剤量及び培養物中の宿主細胞の細胞増殖パラメータを用い、出力として単離された抗体又は抗体誘導体のフコシル化レベルを用いて生成された予測モデルに基づいてＡ_ｐを決定する。一部の実施形態において、入力として細胞増殖パラメータに正規化したフコシル化阻害剤量を用いて予測モデルを生成する。一部の実施形態において、細胞増殖パラメータは積分細胞面積（ＩＣＡ）である。一部の実施形態において、当該方法はさらに、予測モデルを生成することを含む。

別の態様において、本発明で提供されるものは、抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルを制御する方法であって、（ａ）宿主細胞を培地で培養すること［当該宿主細胞は、糖鎖の還元末端のＮ－アセチルグルコサミンを介してＦｃドメインに結合した少なくとも一つの複合型Ｎ－グリコシド結合型糖鎖を有するＦｃドメインを有する抗体又は抗体誘導体を発現する。］；（ｂ）培養中の所定時間（Ｔｐ）で培地に飽和量のフコシル化阻害剤を加えること［前記飽和量のフコシル化阻害剤により、培養ｄ０で加えた時に少なくとも約９５％非フコシル化を生じる。］；及び（ｃ）前記抗体又は抗体誘導体を単離することを含み、Ｔｐが（ｃ）の単離された抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルが非フコシル化の標的レベルからの最大偏差を超えない非フコシル化レベルを有するように予め決定される方法である。一部の実施形態において、前記抗体又は抗体誘導体は、培養完了時に単離される。一部の実施形態において、当該方法はさらに、Ｔｐを決定することを含む。

一部の実施形態において、上記のＴｐを用いて抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルを制御する方法のいずれかによれば、Ｔｐは、入力として培養における複数の異なる飽和フコシル化阻害剤添加時点での培養物中の抗体又は抗体誘導体の力価を用い、出力として単離された抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルを用いて生成される予測モデルに基づいて決定される。一部の実施形態において、当該方法はさらに、前記予測モデルを生成することを含む。

一部の実施形態において、上記の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルを制御する方法のいずれかによれば、前記フコシル化阻害剤はフコース類縁体である。一部の実施形態において、前記フコース類縁体は、２－フルオロフコース（２ＦＦ）、式Ｉの化合物、又は式ＩＩの化合物である。一部の実施形態において、前記フコース類縁体は２ＦＦである。

一部の実施形態において、上記の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルを制御する方法のいずれかによれば、非フコシル化の標的レベルは、（ａ）約１００％～約９０％；（ｂ）約９０％～約８０％；（ｃ）約８０％～約７０％；（ｄ）約７０％～約６０％；（ｅ）約６０％～約５０％；（ｆ）約５０％～約４０％；（ｇ）約４０％～約３０％；（ｈ）約３０％～約２０％；（ｉ）約２０％～約１０％；又は（ｊ）約１０％～約０％である。

一部の実施形態において、上記の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルを制御する方法のいずれかによれば、非フコシル化の標的レベルは、（ａ）約８０％より高く；（ｂ）約６０％より高く；（ｃ）約４０％より高く；（ｄ）約２０％より高く；（ｅ）約１０％より高く；又は（ｆ）約５％より高い。

一部の実施形態において、上記の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルを制御する方法のいずれかによれば、非フコシル化の標的レベルからの最大偏差は、最大１０％である。一部の実施形態において、非フコシル化の標的レベルからの最大偏差は、最大５％である。

一部の実施形態において、上記の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルを制御する方法のいずれかによれば、宿主細胞は組換え宿主細胞である。一部の実施形態において、宿主細胞はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。

一部の実施形態において、上記の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルを制御する方法のいずれかによれば、宿主細胞はハイブリドーマである。

一部の実施形態において、上記の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルを制御する方法のいずれかによれば、宿主細胞は流加培養（fed batch）で増殖する。

一部の実施形態において、上記の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルを制御する方法のいずれかによれば、宿主細胞は連続供給培養で増殖する。

一部の実施形態において、上記の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルを制御する方法のいずれかによれば、培地は少なくとも１００リットルの体積を有する。一部の実施形態において、培地は少なくとも５００リットルの体積を有する。

一部の実施形態において、上記の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルを制御する方法のいずれかによれば、培地は動物タンパク質不含培地（animal protein free media）である。

一部の実施形態において、上記の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルを制御する方法のいずれかによれば、抗体又は抗体誘導体の単離は、細胞及び／又は培地から抗体又は抗体誘導体を単離することを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体の単離は、タンパク質Ａカラムを用いることを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体の単離は、カチオン若しくはアニオン交換カラム又は疎水性相互作用カラムを用いることを含む。

一部の実施形態において、上記の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルを制御する方法のいずれかによれば、抗体又は抗体誘導体はインタクト抗体である。一部の実施形態において、インタクト抗体はＩｇＧ１抗体である。

一部の実施形態において、上記の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルを制御する方法のいずれかによれば、抗体又は抗体誘導体は一本鎖抗体である。

一部の実施形態において、上記の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルを制御する方法のいずれかによれば、抗体又は抗体誘導体は、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、及びＦｃ領域を含む。

一部の実施形態において、上記の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルを制御する方法のいずれかによれば、抗体又は抗体誘導体は、非免疫グロブリンタンパク質の抗体Ｆｃ領域及びリガンド結合ドメインを含む抗体誘導体である。

本発明のこれら態様及び他の態様は、下記の詳細な説明、具体的な実施形態の非限定的な例、及び添付の図面を参照することでより十分に理解できる。

各種濃度の２－フルオロフコース（２ＦＦ）で処理した細胞系の増殖を示す生存細胞密度（ＶＣＤ）曲線を示す図である。 異なる増殖特性を有する複数のＣＨＯ細胞系を組み合わせる［２ＦＦ濃度］／ＩＣＡの関数としての非フコシル化についての飽和モデルを示す図である。 遅延（ｄｅｌａｙｅｄ）スケジュールで２ＤＤで処理した二つの異なる細胞系についての平均力価を示す図である。 細胞系Ａについての対照、２ＦＦの添加第０日（ｄ０）、及び添加第３日（ｄ３）（日数はいずれも産生開始から数えたもの）における非フコシル化の比較を示す図である。 細胞系Ｂについての対照、２ＦＦの添加第０日（ｄ０）、及び添加第３日（ｄ３）（日数はいずれも産生開始から数えたもの）における非フコシル化の比較を示す図である。

定義
「抗体」という用語は、（ａ）免疫グロブリンポリペプチド及び免疫グロブリンポリペプチドの免疫学的に活性な部分、即ち、特異抗原（例えば、ＣＤ７０）に免疫特異的に結合する抗原結合部位及び複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖を含むＦｃドメインを含む免疫グロブリンファミリーのポリペプチド若しくはそれの断片、或いは（ｂ）抗原（例えば、ＣＤ７０）に免疫特異的に結合するそのような免疫グロブリンポリペプチド若しくは断片の保存的に置換された誘導体を意味する。抗体は、例えば、Ｈａｒｌｏｗ ＆ Ｌａｎｅ， Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， １９８８）に記載されている。文脈から別途明らかでない限り、抗体と言う場合、それは下記でより詳細に述べる抗体誘導体も含む。

「抗体誘導体」は、例えば、異種ポリペプチド（例えば、異種タンパク質のリガンド結合ドメイン）の結合による異種分子の共有結合により、或いはグリコシル化（コアフコシル化以外）、脱グリコシル化（非コアフコシル化以外）、アセチル化、リン酸化又は抗体又はＦｃドメイン若しくは領域に通常関連しない他の修飾により修飾されている、上記で定義の抗体（抗体断片を含む）又は複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖を含む抗体のＦｃドメイン若しくは領域を意味する。

「モノクローナル抗体」という用語は、真核又は原核細胞クローン、或いはファージクローンを含む単一細胞クローン由来の抗体を意味し、それを製造する方法を意味しない。従って、「モノクローナル抗体」という用語は、ハイブリドーマ技術により製造される抗体に限定されない。

「Ｆｃ領域」という用語は、抗体の定常領域、例えば、Ｃ_Ｈ４ドメインを有していても良いＣ_Ｈ１－ヒンジ－Ｃ_Ｈ２－Ｃ_Ｈ３ドメイン、又はそのようなＦｃ領域の保存的に置換された誘導体を意味する。

「Ｆｃドメイン」という用語は、抗体の定常領域ドメイン、例えば、Ｃ_Ｈ１、ヒンジ、Ｃ_Ｈ２、Ｃ_Ｈ３若しくはＣ_Ｈ４ドメイン、そのようなＦｃドメインの保存的に置換された誘導体を意味する。

「抗原」は、抗体が特異的に結合する分子である。

「特異的結合」及び「特異的に結合する」という用語は、抗体又は抗体誘導体がその相当する標的抗原と高度に選択的に結合し、複数の他の抗原と結合しないことを意味する。一般的に、抗体又は抗体誘導体は、少なくとも約１×１０^－７Ｍ、好ましくは１０^－８Ｍ～１０^－９Ｍ、１０^－１０Ｍ、１０^－１１Ｍ又は１０^－１２Ｍの親和力で結合し、所定の抗原又は密接に関連する抗原以外の非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）に対するその結合の親和力より少なくとも２倍大きい親和力で所定の抗原に結合する。

「阻害する」又は「の阻害」という用語は、測定可能な量減少させること、又は完全に防止することを意味する。

「積分細胞面積」又は「ＩＣＡ」という用語は、図１Ａに示したような所与の細胞系についての生存細胞密度（ＶＣＤ）曲線下面積を表し、例えばＶＣＤ曲線を積分することで計算することができる。

「薬学的に許容される」という用語は、動物、詳細にはヒトにおける使用について、連邦若しくは州政府の規制当局により承認されているか、米国薬局方若しくは他の一般的に認知されている局方に列挙されていることを意味する。「薬学的に適合性の成分」という用語は、抗体又は抗体誘導体と共に投与される薬学的に許容される希釈剤、アジュバント、賦形剤又は媒体を意味する。

「生物学的に許容される」という用語は、抗体の製造用の細胞系の培養における使用に好適であることを意味する。具体例としての生物学的に許容される塩には、硫酸、クエン酸、酢酸、シュウ酸、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸、重硫酸、リン酸、酸性リン酸、イソニコチン酸、乳酸、サリチル酸、クエン酸、酒石酸、オレイン酸、タンニン酸、パントテン酸、重酒石酸、アスコルビン酸、コハク酸、マレイン酸、ゲンチシン酸、フマル酸、グルコン酸、グルクロン酸、サッカリン酸、ギ酸、安息香酸、グルタミン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸及びパモ酸（即ち、１，１′－メチレンビス－（２－ヒドロキシ－３－ナフトエ酸））塩などがあるが、これらに限定されるものではない。生物学的に許容される塩には、酢酸イオン、コハク酸イオン又は他の対イオンなどの他の分子の包含を伴いうる。対イオンは、親化合物上の電荷を安定化するいかなる有機又は無機部分であってもよい。さらに、生物学的に許容される塩は、その構造に複数の荷電原子を有する可能性がある。複数の荷電原子が生物学的に許容される塩の一部であるものは、複数の対イオンを有し得る。従って、生物学的塩は、１以上の荷電原子及び／又は１以上の対イオンを有し得る。

本発明の治療薬は、代表的には、望ましくない不純物を実質的に含まない。これは、薬剤が代表的には少なくとも５０重量％（重量／重量）の純度であること、並びに妨害タンパク質及び不純物が実質的にない（実質的に不含）ことを意味する。ときとして、薬剤は、少なくとも約８０重量％、より好ましくは少なくとも９０重量％又は約９５重量％の純度である。従来のタンパク質精製技術を用いて、少なくとも９９重量％の均一なペプチドを得ることができる。

本明細書で使用されるように、「アルキニルフコースペルアセテート」は、文脈によって別断に示されない限り、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）及び（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）異性体を含む６－エチニル－テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２，３，４，５－テトライルテトラアセテート、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）及び（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）異性体を含む５－（（Ｓ）－１－ヒドロキシプロプ－２－イニル）－テトラヒドロフラン－２，３，４－トリイルテトラアセテートを含む、Ｒ^１－４位（下記の式Ｉ及びＩＩを参照）にアセテート基を有するアルキニルフコース（５－エチニルアラビノース）の任意又は全ての形、並びにアルドース形を意味する。「アルキニルフコーストリアセテート」、「アルキニルフコースジアセテート」及び「アルキニルフコースモノアセテート」という用語は、それぞれアルキニルフコースの示されたトリ、ジ及びモノアセテート形を意味する。

文脈によって別断に示されない限り、「アルキル」という用語は、１～２０個の炭素原子（並びにその中の炭素原子の範囲及び特定の数の全ての組合せ及び下位組合せ）を有する置換又は非置換飽和直鎖状又は分枝状炭化水素を意味し、１～３個、１～８個又は１～１０個の炭素原子が好ましい。アルキル基の例は、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ペンイチル、２－ペンチル、３－ペンチル、２－メチル－２－ブチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－ヘプチル、ｎ－オクチル、ｎ－ノニル、ｎ－デシル、３－メチル－２－ブチル、３－メチル－１－ブチル、２－メチル－１－ブチル、１－ヘキシル、２－ヘキシル、３－ヘキシル、２－メチル－２－ペンチル、３－メチル－２－ペンチル、４－メチル－２－ペンチル、３－メチル－３－ペンチル、２－メチル－３－ペンチル、２，３－ジメチル－２－ブチル及び３，３－ジメチル－２－ブチルである。

アルキル基は、単独であるか、又は別の基の一部としてであるかを問わず、ハロゲン、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル）、アリール、－Ｃ（Ｏ）Ｒ′、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ′、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ′、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ′、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ′）_２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ′、－ＳＲ′、－ＳＯ_３Ｒ′、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ′、－Ｓ（Ｏ）Ｒ′、－ＯＨ、＝Ｏ、－ＮＨ_２、－ＮＨ（Ｒ′）、－Ｎ（Ｒ′）_２及び－ＣＮなど（これらに限定されるものではない）の１以上の基、好ましくは１～３個の基（及びハロゲンから選択される任意のさらなる置換基）で置換されていても良く、各Ｒ′は－Ｈ、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル又はアリールから独立に選択される。一部の実施形態において、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル）、アリール及びＲ′基は、さらに置換することができる。そのようなさらなる置換基としては、例えば、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル、ハロゲン、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル）、アリール、－Ｃ（Ｏ）Ｒ″、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ″、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ″、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ″、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ″）_２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ″、－ＳＲ″、－ＳＯ_３Ｒ″、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ″、－Ｓ（Ｏ）Ｒ″、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨ（Ｒ″）、－Ｎ（Ｒ″）_２及び－ＣＮなどがあり、各Ｒ″はＨ、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル又はアリールから独立に選択され、前記さらなる置換基は、好ましくは非置換である。一部の実施形態において、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル）、アリール及びＲ′基は、それ以上は置換されていない。

文脈によって別断に示されない限り、「アルケニル」及び「アルキニル」という用語は、２～２０個の炭素原子（並びにその中の炭素原子の範囲及び特定の数の全ての組合せ及び下位組合せ）を有する置換又は非置換直鎖状及び分枝状炭素鎖を意味し、２～３個、２～４個、２～８個又は２～１０個の炭素原子が好ましい。アルケニル鎖は鎖における少なくとも一つの二重結合を有し、アルキニル鎖は鎖における少なくとも一つの三重結合を有する。アルケニル基の例には、エチレン又はビニル、アリル、－１ブテニル、－２ブテニル、－イソブチレニル、－１ペンテニル、－２ペンテニル、３－メチル－１－ブテニル、－２メチル２ブテニル及び－２，３ジメチル２ブテニルなどがあるが、これらに限定されるものではない。アルキニル基の例には、アセチレン系、プロパルギル、アセチレニル、プロピニル、－１ブチニル、－２ブチニル、－１ペンチニル、－２ペンチニル及び－３メチル１ブチニルなどがあるが、これらに限定されるものではない。

アルケニル及びアルキニル基は、単独であるか、又は他の基の一部としてであるかを問わず、ハロゲン、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル）、アリール、－Ｃ（Ｏ）Ｒ′、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ′、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ′、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ′、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ′）_２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ′、－ＳＲ′、－ＳＯ_３Ｒ′、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ′、－Ｓ（Ｏ）Ｒ′、－ＯＨ、＝Ｏ、－ＮＨ_２、－ＮＨ（Ｒ′）、－Ｎ（Ｒ′）_２及び－ＣＮなど（これらに限定されるものではない）の１以上の基、好ましくは１～３個の基（及びハロゲンから選択される任意のさらなる置換基）で置換されていても良く、各Ｒ′はＨ、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル又はアリールから独立に選択される。一部の実施形態において、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル）、アリール及びＲ′基は、さらに置換されていても良い。そのようなさらなる置換基には、例えば、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル、ハロゲン、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル）、アリール、－Ｃ（Ｏ）Ｒ″、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ″、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ″、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ″、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ″）_２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ″、－ＳＲ″、－ＳＯ_３Ｒ″、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ″、－Ｓ（Ｏ）Ｒ″、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨ（Ｒ″）、－Ｎ（Ｒ″）_２及び－ＣＮなどがあり、各Ｒ″は－Ｈ、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル又はアリールから独立に選択され、前記さらなる置換基は、好ましくは非置換である。一部の実施形態において、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル）、アリール及びＲ′基は、それ以上置換されていない。

文脈によって別断に示されない限り、「アルキレン」という用語は、１～２０個の炭素原子（並びにその中の炭素原子の範囲及び特定の数の全ての組合せ及び下位組合せ）を有する置換又は非置換飽和分枝状又は直鎖状炭化水素遊離基を意味し、１～８個又は１～１０個の炭素原子が好ましく、親アルカンの同じ又は２個の異なる炭素原子から２個の水素原子を除去することによって得られる二つの一価遊離基中心を有する。代表的なアルキレンには、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オクチレン、ノニレン、デカレン、１，４－シクロヘキシレンなどがあるが、これらに限定されるものではない。

アルキレン基は、単独であるか、又は他の基の一部としてであるかを問わず、ハロゲン、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル）、アリール、－Ｃ（Ｏ）Ｒ′、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ′、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ′、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ′、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ′）_２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ′、－ＳＲ′、－ＳＯ_３Ｒ′、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ′、－Ｓ（Ｏ）Ｒ′、－ＯＨ、＝Ｏ、－ＮＨ_２、－ＮＨ（Ｒ′）、－Ｎ（Ｒ′）_２及び－ＣＮなど（これらに限定されるものではない）の１以上の基、好ましくは１～３個の基（及びハロゲンから選択される任意のさらなる置換基）で置換されていても良く、各Ｒ′はＨ、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル又は－アリールから独立に選択される。一部の実施形態において、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル）、アリール及びＲ′基は、さらに置換されていても良い。そのようなさらなる置換基には、例えば、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル、ハロゲン、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル）、－アリール、－Ｃ（Ｏ）Ｒ″、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ″、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ″、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ″、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ″）_２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ″、－ＳＲ″、－ＳＯ_３Ｒ″、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ″、－Ｓ（Ｏ）Ｒ″、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨ（Ｒ″）、－Ｎ（Ｒ″）_２及び－ＣＮなどがあり、各Ｒ″はＨ、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル又はアリールから独立に選択され、前記さらなる置換基は、好ましくは非置換である。一部の実施形態において、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル）、アリール及びＲ′基は、それ以上置換されていない。

文脈によって別断に示されない限り、「アリール」という用語は、親芳香環系の１個の炭素原子から１個の水素原子を除去することによって得られる６～２０個の炭素原子（並びにその中の炭素原子の範囲及び特定の数の全ての組合せ及び下位組合せ）の置換又は非置換一価芳香族炭化水素遊離基を意味する。一部のアリール基は、例示的な構造において、「Ａｒ」と表される。代表的なアリール基には、ベンゼン、置換ベンゼン、フェニル、ナフタレン、アントラセン、ビフェニルなどから得られる遊離基などがあるが、これらに限定されるものではない。

アリール基は、単独であるか、又は他の基の一部としてであるかを問わず、ハロゲン、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル）、アリール、－Ｃ（Ｏ）Ｒ′、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ′、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ′、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ′、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ′）_２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ′、－ＳＲ′、－ＳＯ_３Ｒ′、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ′、－Ｓ（Ｏ）Ｒ′、－ＯＨ、－ＮＯ_２、－ＮＨ_２、－ＮＨ（Ｒ′）、－Ｎ（Ｒ′）_２及び－ＣＮなど（これらに限定されるものではない）の１以上、好ましくは１～５個又は１～２個の基で置換されていても良く、各Ｒ′はＨ、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル又はアリールから独立に選択される。一部の実施形態において、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル）、アリール及びＲ′基は、さらに置換されていることができる。そのようなさらなる置換基には、例えば、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル、ハロゲン、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル）、アリール、－Ｃ（Ｏ）Ｒ″、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ″、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ″、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ″、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ″）_２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ″、－ＳＲ″、－ＳＯ_３Ｒ″、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ″、－Ｓ（Ｏ）Ｒ″、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨ（Ｒ″）、－Ｎ（Ｒ″）_２及び－ＣＮなどがあり、各Ｒ″は－Ｈ、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル又はアリールから独立に選択され、前記さらなる置換基は、好ましくは非置換である。一部の実施形態において、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル）、アリール及びＲ′基は、それ以上置換されていない。

文脈によって別断に示されない限り、「複素環」という用語は、少なくとも１個の環原子がＮ、Ｏ、Ｐ又はＳから選択されるヘテロ原子である、３～７個又は３～１０個の環原子（環員とも呼ばれる）（並びにその中の炭素原子及びヘテロ原子の範囲及び特定の数の全ての組合せ及び下位組合せ）を有する置換又は非置換単環式環系を意味する。複素環は、Ｎ、Ｏ、Ｐ又はＳから独立に選択される１～４個の環ヘテロ原子を有することができる。複素環における１以上のＮ、Ｃ又はＳ原子は、酸化されていても良い。単環式複素環は、好ましくは３～７個の環員（例えば、２～６個の炭素原子及びＮ、Ｏ、Ｐ又はＳから独立に選択される１～３個のヘテロ原子）を有する。ヘテロ原子を含む環は、芳香族又は非芳香族であり得る。別断の記載がない限り、複素環は、安定な構造をもたらすいずれかのヘテロ原子又は炭素原子でそのペンダント基に結合している。

複素環は、Ｐａｑｕｅｔｔｅ， ″Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ″（Ｗ．Ａ． Ｂｅｎｊａｍｉｎ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９６８）、特に１、３、４、６、７及び９章；″Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ， Ａ Ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ″（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９５０年から現在まで）、特に１３、１４、１６、１９及び２８章；並びにＪ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， ８２：５５６６（１９６０年）に記載されている。

「複素環」基の例には、例えば、ピリジル、ジヒドロピリジル、テトラヒドロピリジル（ピペリジル）、チアゾリル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、フコシル、アジルジニル、アゼチジニル、オキシラニル、オキセタニル及びテトラヒドロフラニルなどがあるが、これらに限定されるものではない。

複素環基は、単独であるか、又は他の基の一部としてであるかを問わず、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル、ハロゲン、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル）、アリール、－Ｃ（Ｏ）Ｒ′、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ′、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ′、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ′、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ′）_２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ′、－ＳＲ′、－ＳＯ_３Ｒ′、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ′、－Ｓ（Ｏ）Ｒ′、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨ（Ｒ′）、－Ｎ（Ｒ′）_２及び－ＣＮなど（これらに限定されるものではない）の１以上の基、好ましくは１～２個の基で置換されていても良く、各Ｒ′は－Ｈ、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル又は－アリールから独立に選択される。一部の実施形態において、Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル）、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル、アリール及びＲ′基は、さらに置換されていても良い。そのようなさらなる置換基には、例えば、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル、ハロゲン、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル）、－アリール、－Ｃ（Ｏ）Ｒ″、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ″、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ″、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ″、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ″）_２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ″、－ＳＲ″、－ＳＯ_３Ｒ″、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ″、－Ｓ（Ｏ）Ｒ″、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨ（Ｒ″）、－Ｎ（Ｒ″）_２及び－ＣＮなどがあり、各Ｒ″は－Ｈ、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル又はアリールから独立に選択され、前記さらなる置換基は、好ましくは非置換である。一部の実施形態において、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル）、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル、アリール及びＲ′基は、それ以上置換されていない。

例として、また限定されないが、炭素結合複素環は、次の位置：ピリジンの２、３、４、５又は６位；ピリダジンの３、４、５又は６位；ピリミジンの２、４、５又は６位；ピラジンの２、３、５又は６位；フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール又はテトラヒドロピロールの２、３、４又は５位；オキサゾール、イミダゾール又はチアゾールの２、４又は５位；イソオキサゾール、ピラゾール又はイソチアゾールの３、４又は５位；アジリジンの２又は３位；アゼチジンの２、３又は４位で結合させることができる。例示的な炭素結合複素環には、２－ピリジル、３－ピリジル、４－ピリジル、５－ピリジル、６－ピリジル、３－ピリダジニル、４－ピリダジニル、５－ピリダジニル、６－ピリダジニル、２－ピリミジニル、４－ピリミジニル、５－ピリミジニル、６－ピリミジニル、２－ピリダジニル、３－ピリダジニル、５－ピリダジニル、６－ピリダジニル、２－チアゾリル、４－チアゾリル又は５－チアゾリルなどがあり得る。

例として、また限定されないが、窒素結合複素環は、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２－ピロリン、３－ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２－イミダゾリン、３－イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２－ピラゾリン、３－ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン又は１Ｈ－インダゾールの１位；イソインドール又はイソインドリンの２位；及びモルホリンの４位で結合させることができる。さらにより代表的には、窒素結合複素環は、１－アジリジル、１－アゼチジル、１－ピロリル、１－イミダゾリル、１－ピラゾリル及び１－ピペリジニルなどである。

別断の記載がない限り、「炭素環」という用語は、全ての環原子が炭素原子である、３～６個の環原子（並びにその中の炭素原子の範囲及び特定の数の全ての組合せ及び下位組合せ）を有する置換又は非置換飽和又は不飽和非芳香族単環式環系を意味する。

炭素環基は、単独であるか、又は他の基の一部としてであるかを問わず、ハロゲン、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル）、アリール、－Ｃ（Ｏ）Ｒ′、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ′、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ′、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ′、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ′）_２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ′、－ＳＲ′、－ＳＯ_３Ｒ′、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ′、－Ｓ（Ｏ）Ｒ′、－ＯＨ、＝Ｏ、－ＮＨ_２、－ＮＨ（Ｒ′）、－Ｎ（Ｒ′）_２及び－ＣＮなど（これらに限定されるものではない）の１以上の基、好ましくは１若しくは２個の基（及びハロゲンから選択される任意のさらなる置換基）で置換されていても良く、各Ｒ′はＨ、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル又はアリールから独立に選択される。一部の実施形態において、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル）、アリール及びＲ′基は、さらに置換されていても良い。そのようなさらなる置換基には、例えば、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル、ハロゲン、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル）、アリール、－Ｃ（Ｏ）Ｒ″、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ″、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ″、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ″、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ″）_２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ″、－ＳＲ″、－ＳＯ_３Ｒ″、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ″、－Ｓ（Ｏ）Ｒ″、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＮＨ（Ｒ″）、－Ｎ（Ｒ″）_２及び－ＣＮなどがあり、各Ｒ″はＨ、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル又はアリールから独立に選択され、前記さらなる置換基は、好ましくは非置換である。いくつかの実施形態において、－Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル、－Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルケニル）、－Ｏ－（Ｃ_２－Ｃ_８アルキニル）、アリール及びＲ′基は置換されていない。

単環式炭素環置換基の例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１－シクロペント－１－エニル、１－シクロペント－２－エニル、１－シクロペント－３－エニル、シクロヘキシル、１－シクロヘキサ－１－エニル、１－シクロヘキサ－２－エニル、１－シクロヘキサ－３－エニル、シクロヘプチル、シクロオクチル、－１，３－シクロヘキサジエニル、－１，４－シクロヘキサジエニル、－１，３－シクロヘプタジエニル、－１，３，５－シクロヘプタトリエニル及び－シクロオクタジエニルなどがある。

なんらかの可変部がいずれかの構成要素又は式中に複数ある場合、各発生におけるその定義は、他の全てにおけるその定義から独立である。置換基及び／又は可変部の組合せは、そのような組合せが安定な化合物をもたらす場合にのみ許容される。

文脈によって別断に示されない限り、ハイフン（－）は、ペンダント分子への結合の箇所を表す。従って、「－（Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン）アリール」又は「－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン（アリール）」という用語は、アルキレン遊離基がアルキレン遊離基の炭素原子のいずれかでペンダント分子に結合しており、アルキレン遊離基の炭素原子に結合している水素原子の１個が本明細書で定義するアリール遊離基で置換されている、本明細書で定義のＣ_１－Ｃ_１０アルキレン遊離基を意味する。

特定の基が「置換されて」いる場合、当基は、置換基のリストから独立に選択される、１以上の置換基、好ましくは１～５個の置換基、より好ましくは１～３個の置換基、最も好ましくは１個～２個の置換基を有していても良い。しかしながら、当基は、一般的にハロゲンから選択されるいずれかの数の置換基を有することができる。

分子の特定の位置におけるいずれかの置換基又は可変部の定義は当分子の他所におけるその定義から独立であるものとする。本発明の化合物における置換基及び置換パターンは、化学的に安定であり、当技術分野で公知の技術並びに本明細書で示す方法により容易に合成することができる化合物を提供するために当業者が選択することができると理解される。

コアフコシル化の制御方法
本発明は、特定のレベルのコア非フコシル化で抗体及び抗体誘導体を製造する方法を提供する。この方法は、予測モデルへの入力として対応する培養パラメータ（例えば、細胞面積又は抗体力価の積分）と対となったフコシル化阻害剤に関連するパラメータ（例えば、フコシル化阻害剤の量又はフコシル化阻害剤添加の時間）を用いて、所与のフコシル化阻害剤（例えば、２－フルオロフコース）による抗体又は抗体誘導体非フコシル化レベルの正確な予測モデルを作ることができることを示す実施例で提供される予想外の結果に部分的に基づくものである。本明細書で使用される場合、「コアフコシル化」は、Ｎ結合型グリカンの還元末端でのフコースのＮ－アセチルグルコサミン（「ＧｌｃＮＡｃ」）への付加（「フコシル化」）を指す。そのような方法によって製造される抗体及び抗体誘導体も提供される。

一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体のＦｃ領域（又はドメイン）に結合した複合型Ｎ－グリコシド結合型糖鎖の非フコシル化レベルは、特定量のフコシル化阻害剤を用いるか、抗体又は抗体誘導体培養時の特定の時点でフコシル化阻害剤を加えることで制御される。本明細書で使用される場合、「複合型Ｎ－グリコシド結合型糖鎖」は代表的には、アスパラギン２９７（Ｋａｂａｔの数による）に結合している．但し、複合型Ｎ－グリコシド結合型糖鎖は他のアスパラギン残基にも連結され得る。本明細書で使用される場合、複合型Ｎ－グリコシド結合型糖鎖は、主として下記の構造を有する二分岐型複合糖鎖を有する。

上記において、±は糖分子が存在していても存在していなくても良いことを示しており、数字は糖分子間の連結位置を示している。上記の構造において、アスパラギンに結合している糖鎖末端は還元末端（右側）と称され、反対側は非還元末端と称される。フコースは通常、代表的にはα１，６結合（ＧｌｃＮＡｃの６位がフコースの１位に連結している。）によって還元末端のＮ－アセチルグルコサミン（「ＧｌｃＮＡｃ」）に結合している。「Ｇａｌ」はガラクトースを指し、「Ｍａｎ」はマンノースを指す。

「複合型Ｎ－グリコシド結合型糖鎖」は、マンノースのみがコア構造の非還元末端で組み込まれている高マンノース型の糖鎖を除外するものであるが、１）コア構造の非還元末端側がガラクトース－Ｎ－アセチルグルコサミン（「ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃ」とも称される）の１以上の分岐を有し、Ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃの非還元末端側がシアル酸、バイセクティングＮ－アセチルグルコサミンなどを有していても良い複合型；又は２）コア構造の非還元末端が高マンノースＮ－グリコシド結合型糖鎖及び複合型Ｎ－グリコシド結合型糖鎖の両方の分岐を有するハイブリッド型を含む。

一部の実施形態において、「複合型Ｎ－グリコシド結合型糖鎖」は、コア構造の非還元末端側がガラクトース－Ｎ－アセチルグルコサミン（「ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃ」とも称される）の０個、１個若しくは複数の分岐を有し、Ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃの非還元末端側がさらにシアル酸、バイセクティングＮ－アセチルグルコサミン又などの構造を有していても良い複合型を含む。

本発明の方法によれば、細胞系を培養することで生成した抗体又は抗体誘導体の複合型Ｎ－グリコシド結合型糖鎖に組み込まれたフコースの量を制御することができる。例えば、各種実施形態において、当該抗体又は抗体誘導体は、約９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％又は５％（これらの値の中間の範囲を含む）のいずれかのコア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、当該抗体又は抗体誘導体は、約９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％又は５％のいずれかより大きいコア非フコシル化を有する。

抗体又は抗体誘導体のコアフコシル化／非フコシル化パーセントは、そのような測定を行うための当業界で公知のいずれかの方法を用いて計算することができる。例えば、Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ Ｔｉｍｅ ｏｆ Ｆｌｉｇｈｔ（Ｑｔｏｆ）質量スペクトル装置分析を用いて、抗体コアフコシル化／非フコシル化パーセントを計算することができる。Ｑｔｏｆは、抗体重鎖の特徴的ピークの質量単位及び強度を提供する。抗体コアフコシル化Ｑｔｏｆ分析において、スペクトラムは、二つの非還元末端にガラクトースが全くなく、コアフコシル化を有する炭化水素構造に相当するピーク（本明細書において、「Ｇ０」とも称する）；非還元末端の一つがガラクトースを有し（二つの異性体の混合物）、コアフコシル化を有する炭化水素構造に相当するピーク（本明細書において、「Ｇ１」とも称する）；非還元末端の両方がガラクトースを有し、コアフコシル化を有する炭化水素構造に相当するピーク（本明細書において、「Ｇ２」とも称する）；二つの非還元末端のどちらにもガラクトースが全くなく、コアフコシル化がない炭化水素構造に相当するピーク（本明細書において、「Ｇ０－Ｆ」とも称する）；非還元末端の一つがガラクトースを有し（二つの異性体の混合物）、コアフコシル化が全くない炭化水素構造に相当するピーク（本明細書において、「Ｇ１－Ｆ」とも称する）；及び非還元末端の両方がガラクトースを有し、コアフコシル化が全くない炭化水素構造に相当するピーク（本明細書において、「Ｇ２－Ｆ」とも称する）などのいくつかのピークを含む。フコシル化の阻害は、Ｇ０ピークの強度低下及びＧ０－Ｆピークの増加によって表すことができる。従って、非フコシル化パーセントは、下記式を用いて計算することができる。

フコシル化阻害剤の量

部の実施形態において、宿主細胞の培養によって生成する抗体又は抗体誘導体の複合型Ｎ－グリコシド結合型糖鎖に組み込まれたフコースの量は、培地に含まれるフコシル化阻害剤の量を変えることで制御することができる。一部の実施形態において、フコシル化阻害剤はフコース類縁体である。一部の実施形態において、フコース類縁体は２ＦＦ、式Ｉの化合物、又は式ＩＩの化合物である。一部の実施形態において、フコース類縁体は２ＦＦである。一部の実施形態において、加えるフコシル化阻害剤の量は、培養のｄ０で加えた時に少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上のいずれか）非フコシル化を生じる飽和量未満である。一部の実施形態において、フコシル化阻害剤の量は、入力として培地中に存在するフコシル化阻害剤の濃度及び培養パラメータを有する予測モデルを用いて求める。一部の実施形態において、培養パラメータは積分細胞面積（ＩＣＡ）である。一部の実施形態において、１以上の（例えば、２、３、４、５、又はそれ以上）追加量のフコシル化阻害剤を培養時に加える。

一部の実施形態において、宿主細胞の培養によって生成する抗体又は抗体誘導体の複合型Ｎ－グリコシド結合型糖鎖に組み込まれるフコースの量は、培養時に特定の時点Ｔ_ａで加えるフコシル化阻害剤の量を変えることで制御することができる。一部の実施形態において、Ｔ_ａは、培養のｄ０、ｄ１、ｄ２、ｄ３、ｄ４、ｄ５又はそれ以降のいずれかである。一部の実施形態において、Ｔ_ａは、培養のｄ５以内（例えば、ｄ４、ｄ３、ｄ２、ｄ１、又はｄ０のいずれか以内）である。一部の実施形態において、Ｔ_ａは培養のｄ０である。一部の実施形態において、フコシル化阻害剤はフコース類縁体である。一部の実施形態において、フコース類縁体は２ＦＦ、式Ｉの化合物、又は式ＩＩの化合物である。一部の実施形態において、フコース類縁体は２ＦＦである。一部の実施形態において、加えるフコシル化阻害剤の量はｄ０で加えた時に少なくとも約９５％（問えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のいずれか）非フコシル化を生じる飽和量未満である。一部の実施形態において、フコシル化阻害剤の量は入力としてのＴ_ａで加えられるフコシル化阻害剤の濃度及び培養パラメータを有する予測モデルを用いて求められる。一部の実施形態において、培養パラメータは積分細胞面積（ＩＣＡ）である。一部の実施形態において、１以上の（例えば、２、３、４、５又はそれ以上）追加量のフコシル化阻害剤をＴ_ａ後に加える。

従って、一部の実施形態において抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベル（例えば、パーセント）を制御する方法であって、（ａ）所定量のフコシル化の阻害剤（Ａ_ｐ）存在下に培地中で宿主細胞を培養すること［当該宿主細胞は、糖鎖の還元末端のＮ－アセチルグルコサミンを介してＦｃドメインに結合した少なくとも一つの複合型Ｎ－グリコシド結合型糖鎖を有するＦｃドメインを有する抗体又は抗体誘導体を発現する。］；及び（ｂ）抗体又は抗体誘導体を単離することを含む方法が本明細書において提供される。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、培養完了時に単離される。一部の実施形態において、Ａ_ｐは、（ｂ）の単離された抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルが非フコシル化の標的レベルからの最大偏差を超えない非フコシル化のレベルを有するように決定される。一部の実施形態において、当該方法はさらに、Ａ_ｐを決定することを含む。一部の実施形態において、フコシル化阻害剤はフコース類縁体である。一部の実施形態において、フコース類縁体は、２ＦＦ、式Ｉの化合物又は式ＩＩの化合物である。一部の実施形態において、フコース類縁体は２ＦＦである。一部の実施形態において、Ａ_ｐは、ｄ０で加えた時に少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上）非フコシル化を生じる飽和量未満である。一部の実施形態において、１以上（例えば、２、３、４、５、又はそれ以上）の追加量のフコシル化阻害剤を培養時に加える。一部の実施形態において、前記フコシル化阻害剤の追加量の１以上は独立にＡ_ｐと同じであるかほぼ同じである。一部の実施形態において、前記フコシル化阻害剤の追加量の１以上は独立に、約Ａ_ｐ未満である。

一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベル（例えば、パーセント）を制御する方法であって、（ａ）培地中で宿主細胞を培養すること［当該宿主細胞は、糖鎖の還元末端のＮ－アセチルグルコサミンを介してＦｃドメインに結合した少なくとも一つの複合型Ｎ－グリコシド結合型糖鎖を有するＦｃドメインを有する抗体又は抗体誘導体を発現し、所定量のフコシル化の阻害剤（Ａ_ｐ）を時間Ｔ_ａに培地に加える。］；及び（ｂ）前記抗体又は抗体誘導体を単離することが本明細書において提供される。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、培養完了時に単離される。一部の実施形態において、Ａ_ｐは、（ｂ）の単離された抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルが非フコシル化の標的レベルからの最大偏差を超えない非フコシル化のレベルを有するように決定される。一部の実施形態において、当該方法はさらに、Ａ_ｐを決定することを含む。一部の実施形態において、フコシル化阻害剤はフコース類縁体である。一部の実施形態において、フコース類縁体は、２ＦＦ、式Ｉの化合物、又は式ＩＩの化合物である。一部の実施形態において、フコース類縁体は２ＦＦである。一部の実施形態において、Ａ_ｐは、ｄ０で加えた時に少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上）非フコシル化を生じる飽和量未満である。一部の実施形態において、Ｔ_ａは培養のｄ０、ｄ１、ｄ２、ｄ３、ｄ４、ｄ５又はそれ以降のいずれかである。一部の実施形態において、Ｔ_ａは、培養のｄ５以内（例えば、ｄ４、ｄ３、ｄ２、ｄ１、又はｄ０のいずれか以内）である。一部の実施形態において、Ｔ_ａは培養のｄ０である。一部の実施形態において、１以上の（例えば、２、３、４、５、又はそれ以上）追加量のフコシル化阻害剤をＴ_ａに加える。一部の実施形態において、フコシル化阻害剤の追加量の１以上は、独立にＡ_ｐと同一又はほぼ同一である。一部の実施形態において、フコシル化阻害剤の追加量の１以上は独立に、約Ａ_ｐ未満である。

一部の実施形態において、Ａ_ｐを用いる本明細書に記載の方法のいずれかによれば、Ａ_ｐは、入力として複数の異なるフコシル化阻害剤量（例えば、ｄ０から培地に存在しているか、Ｔ_ａで加えられるもの）及び培養物中の宿主細胞の細胞増殖パラメータを用い、出力として単離された抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルを用いて生成される予測モデルに基づいて決定される。一部の実施形態において、予測モデルは、入力としての細胞増殖パラメータに正規化したフコシル化阻害剤を用いて生成される。一部の実施形態において、当該方法はさらに、予測モデルを生成することを含む。一部の実施形態において、細胞増殖パラメータは積分細胞面積（ＩＣＡ）である。

一部の実施形態において、複数のフコシル化阻害剤量（例えば、ｄ０から培地中に存在しているもの、又はＴ_ａに加えたもの）を用いて本明細書に記載の方法のいずれかによれば、少なくとも３（例えば、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、又はそれ以上）種類の異なる量のフコシル化阻害剤を用いる。一部の実施形態において、前記複数の異なるフコシル化阻害剤量は、濃度における少なくとも約１０倍（例えば、少なくとも約２５倍、５０倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、６００倍、７００倍、８００倍、９００倍、１，０００倍、２，０００倍、３，０００倍、４，０００倍、５，０００倍、６，０００倍、７，０００倍、８，０００倍、９，０００倍、１０，０００倍又はそれ以上のいずれか）差の範囲にわたる。一部の実施形態において、前記複数の異なるフコシル化阻害剤量は、濃度における少なくとも約１，０００倍差の範囲にわたる。一部の実施形態において、前記複数の異なるフコシル化阻害剤量は、ｄ０で加えた時に少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上のいずれか）非フコシル化を生じる飽和量を超えるフコシル化阻害剤の量を全く含まない。一部の実施形態において、フコシル化阻害剤はフコース類縁体である。一部の実施形態において、フコース類縁体は、２ＦＦ、式Ｉの化合物、又は式ＩＩの化合物である。一部の実施形態において、フコース類縁体は２ＦＦである。一部の実施形態において、フコシル化阻害剤は２ＦＦであり、及び前記複数の異なる２ＦＦ量は約１００μＭより大きい濃度を全く含まない。

一部の実施形態において、Ａ_ｐを用いる本明細書で記載の方法のいずれかによれば、Ａ_ｐは、ｄ０で加えた時に少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上のいずれか）非フコシル化を生じる飽和量未満である。一部の実施形態において、Ａ_ｐは、約１μＭ、５μＭ、１０μＭ、１５μＭ、２０μＭ、２５μＭ、３０μＭ、３５μＭ、４０μＭ、４５μＭ、５０μＭ、５５μＭ、６０μＭ、６５μＭ、７０μＭ、７５μＭ、８０μＭ、８５μＭ、９０μＭ、９５μＭ、１００μＭ、１２０μＭ、１４０μＭ、１６０μＭ、１８０μＭ、２００μＭ、２２０μＭ、２４０μＭ、２６０μＭ、２８０μＭ、３００μＭ、３２０μＭ、３４０μＭ、３６０μＭ、３８０μＭ、４００μＭ、４２０μＭ、４４０μＭ、４６０μＭ、４８０μＭ、５００μＭ、５２０μＭ、５４０μＭ、５６０μＭ、５８０μＭ、６００μＭ、６２０μＭ、６４０μＭ、６６０μＭ、６８０μＭ、７００μＭ、７２０μＭ、７４０μＭ、７６０μＭ、７８０μＭ、８００μＭ、８２０μＭ、８４０μＭ、８６０μＭ、８８０μＭ、９００μＭ、９２０μＭ、９４０μＭ、９６０μＭ、９８０μＭ、１，０００μＭ、又はそれ以上のいずれかであり、これらの値の中間のあらゆる範囲を含む。一部の実施形態において、フコシル化阻害剤はフコース類縁体である。一部の実施形態において、フコース類縁体は、２ＦＦ、式Ｉの化合物、又は式ＩＩの化合物である。一部の実施形態において、フコース類縁体は２ＦＦである。

一部の実施形態において、Ａ_ｐを用いる本明細書に記載の方法のいずれかによれば、フコシル化阻害剤は２ＦＦであり、Ａ_ｐは約１００μＭ未満（例えば、約９９μＭ、９８μＭ、９７μＭ、９６μＭ、９５μＭ、９４μＭ、９３μＭ、９２μＭ、９１μＭ、９０μＭ、８９μＭ、８８μＭ、８７μＭ、８６μＭ、８５μＭ、８４μＭ、８３μＭ、８２μＭ、８１μＭ、８０μＭ、７９μＭ、７８μＭ、７７μＭ、７６μＭ、７５μＭ、７４μＭ、７３μＭ、７２μＭ、７１μＭ、７０μＭ、６９μＭ、６８μＭ、６７μＭ、６６μＭ、６５μＭ、６４μＭ、６３μＭ、６２μＭ、６１μＭ、６０μＭ、５９μＭ、５８μＭ、５７μＭ、５６μＭ、５５μＭ、５４μＭ、５３μＭ、５２μＭ、５１μＭ、５０μＭ、４９μＭ、４８μＭ、４７μＭ、４６μＭ、４５μＭ、４４μＭ、４３μＭ、４２μＭ、４１μＭ、４０μＭ、３９μＭ、３８μＭ、３７μＭ、３６μＭ、３５μＭ、３４μＭ、３３μＭ、３２μＭ、３１μＭ、３０μＭ、２９μＭ、２８μＭ、２７μＭ、２６μＭ、２５μＭ、２４μＭ、２３μＭ、２２μＭ、２１μＭ、２０μＭ、１９μＭ、１８μＭ、１７μＭ、１６μＭ、１５μＭ、１４μＭ、１３μＭ、１２μＭ、１１μＭ、１０μＭ、９μＭ、８μＭ、７μＭ、６μＭ、５μＭ、４μＭ、３μＭ、２μＭ、又は１μＭのいずれか未満）である。

一部の実施形態において、予測モデルは、ＩＣＡに対して正規化した培地中に存在する２ＦＦ濃度に対して％非フコシル化をプロットし、ミカエリス・メンテン動力学式にその曲線を適合させて等式中の定数を求めることで生成される統計モデルである。

一部の実施形態において、Ａ_ｐ及びＴ_ａを用いる本明細書に記載の方法のいずれかによれば、Ｔ_ａは、培養のｄ０、ｄ１、ｄ２、ｄ３、ｄ４、ｄ５、又はそれ以降のいずれかである。一部の実施形態において、Ｔ_ａは、培養のｄ５以内（例えば、ｄ４、ｄ３、ｄ２、ｄ１、又はｄ０のいずれか以内）である。一部の実施形態において、Ｔ_ａは、培養のｄ０である。

一部の実施形態において、Ａ_ｐを用いる本明細書に記載の方法のいずれかによれば、非フコシル化の標的レベルからの最大偏差は、最大約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、又はそれ以下のいずれかである。一部の実施形態において、非フコシル化の標的レベルからの最大偏差は最大約５％である。

一部の実施形態において、Ａ_ｐを用いる本明細書に記載の方法のいずれかによれば、抗体又は抗体誘導体は、約９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、又は５％（これらの値の中間のあらゆる範囲を含む）コア非フコシル化のいずれかを有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、又は５％のいずれかより大きいコア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約１００％～約９５％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約９５％～約９０％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約９０％～約８５％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約８５％～約８０％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約８０％～約７５％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約７５％～約７０％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約７０％～約６５％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約６５％～約６０％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約６０％～約５５％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約５５％～約５０％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約５０％～約４５％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約４５％～約４０％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約４０％～約３５％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約３５％～約３０％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約３０％～約２５％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約２５％～約２０％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約２０％～約１５％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約１５％～約１０％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約１０％～約５％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約５％～約０％コア非フコシル化を有する。

一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベル（例えば、パーセント）を制御する方法であって、（ａ）所定量の２ＦＦ（Ａ_ｐ）を含む培地中で宿主細胞を培養すること［当該宿主細胞は、糖鎖の還元末端のＮ－アセチルグルコサミンを介してＦｃドメインに結合した少なくとも一つの複合型Ｎ－グリコシド結合型糖鎖を有するＦｃドメインを有する抗体又は抗体誘導体を発現する。］；及び（ｂ）抗体又は抗体誘導体を単離することを含む方法が本明細書において提供される。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、培養完了時に単離される。一部の実施形態において、Ａ_ｐは、（ｂ）の単離された抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルが、非フコシル化の標的レベルからの最大偏差を超えない非フコシル化のレベルを有するように決定される。一部の実施形態において、当該方法はさらに、Ａ_ｐを決定することを含む。一部の実施形態において、Ａ_ｐは、ｄ０で加えた時に少なくとも約９５％の（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上のいずれか）非フコシル化を生じる飽和量未満である。一部の実施形態において、Ａ_ｐは、約１００μＭ未満（例えば、約９０μＭ、８０μＭ、７０μＭ、６０μＭ、５０μＭ、４０μＭ、３０μＭ、２０μＭ、１０μＭ、５μＭ、又はそれ以下のいずれか未満）である。

一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベル（例えば、パーセント）を制御する方法であって、（ａ）所定量の２ＦＦ（Ａ_ｐ）を含む培地中で宿主細胞を培養すること［当該宿主細胞は、糖鎖の還元末端のＮ－アセチルグルコサミンを介してＦｃドメインに結合した少なくとも一つの複合型Ｎ－グリコシド結合型糖鎖を有するＦｃドメインを有する抗体又は抗体誘導体を発現する。］；及び（ｂ）抗体又は抗体誘導体を単離すること［Ａ_ｐは、入力としてＴ_ａで加えた複数の異なる２ＦＦ量及び培地中の宿主細胞の細胞増殖パラメータを用い、出力として単離された抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルを用いて生成される予測モデルに基づいて決定される。］を含む方法が本明細書において提供される。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は培養完了時に単離される。一部の実施形態において、当該予測モデルは、入力としての細胞増殖パラメータに対して正規化された２ＦＦ量を用いて生成される。一部の実施形態において、当該方法はさらに、予測モデルを生成することを含む。一部の実施形態において、細胞増殖パラメータは積分細胞面積（ＩＣＡ）である。一部の実施形態において、Ａ_ｐは、（ｂ）の単離された抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルが非フコシル化の標的レベルからの最大偏差を超えない非フコシル化のレベルを有するように決定される。一部の実施形態において、当該方法はさらに、Ａ_ｐを決定することを含む。一部の実施形態において、Ａ_ｐは、ｄ０で加えた時に少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上のいずれか）非フコシル化を生じる飽和量未満である。一部の実施形態において、Ａ_ｐは、約１００μＭ未満（例えば、約９０μＭ、８０μＭ、７０μＭ、６０μＭ、５０μＭ、４０μＭ、３０μＭ、２０μＭ、１０μＭ、５μＭ、又はそれ以下のいずれか未満）である。

フコシル阻害剤添加の時期
一部の実施形態において、宿主細胞を培養することで生成した抗体又は抗体誘導体の複合型Ｎ－グリコシド結合型糖鎖に組み込まれるフコースの量は、フコシル化阻害剤を加える培養中の時間を変えることで制御することができる。一部の実施形態において、フコシル化阻害剤は、培養のｄ０後に加えられる。一部の実施形態において、フコシル化阻害剤はフコース類縁体である。一部の実施形態において、フコース類縁体は、２－フルオロフコース（２ＦＦ）、式Ｉの化合物、又は式ＩＩの化合物である。一部の実施形態において、フコース類縁体は２ＦＦである。一部の実施形態において、加えられるフコシル化阻害剤の量は、ｄ０で加えた時に少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上のいずれか）非フコシル化を生じる飽和量若しくはほぼ飽和量である。一部の実施形態において、加えられるフコシル化阻害剤の量は、ｄ０で加えた時に少なくとも約９５％少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上のいずれか）非フコシル化を生じる約飽和量未満である。一部の実施形態において、フコシル化阻害剤の添加時間は、入力としてフコシル化阻害剤添加時間及び培養パラメータを有する予測モデルを用いて決定される。一部の実施形態において、培養パラメータは抗体力価である。一部の実施形態において、抗体力価は、フコシル化阻害剤の添加時間での抗体力価である。一部の実施形態において、１以上（例えば、２、３、４、５、又はそれ以上）の追加量のフコシル化阻害剤を、初回添加後に加える。

従って、一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルを制御する方法であって、（ａ）培地中で宿主細胞を培養すること［当該宿主細胞は、糖鎖の還元末端のＮ－アセチルグルコサミンを介してＦｃドメインに結合した少なくとも一つの複合型Ｎ－グリコシド結合型糖鎖を有するＦｃドメインを有する抗体又は抗体誘導体を発現する。］；（ｂ）培養中の所定時間（Ｔ_ｐ）で培地にある量のフコシル化の阻害剤を加えること；及び（ｃ）前記抗体又は抗体誘導体を単離することを含む方法が本明細書において提供される。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は培養完了時に単離される。一部の実施形態において、Ｔ_ｐは、（ｃ）の単離された抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルが非フコシル化の標的レベルからの最大偏差を超えない非フコシル化のレベルを有するように決定される。一部の実施形態において、当該方法はさらに、Ｔ_ｐを決定することを含む。一部の実施形態において、フコシル化阻害剤はフコース類縁体である。一部の実施形態において、フコース類縁体は、２ＦＦ、式Ｉの化合物、又は式ＩＩの化合物である。一部の実施形態において、フコース類縁体は２ＦＦである。一部の実施形態において、加えられるフコシル化阻害剤の量は、ｄ０で加えた時に少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上のいずれか）非フコシル化を生じる飽和量又は約飽和量である。一部の実施形態において、加えられるフコシル化阻害剤の量は、ｄ０で加えた時に少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上のいずれか）非フコシル化を生じる約飽和量未満である。一部の実施形態において、１以上の（例えば、２、３、４、５、又はそれ以上）追加量のフコシル化阻害剤は、初回添加後に加えられる。一部の実施形態において、１以上の前記追加量のフコシル化阻害剤は独立に、初回添加におけるフコシル化阻害剤の量と同じ又はほぼ同じである。一部の実施形態において、１以上の前記追加量のフコシル化阻害剤は独立に、初回添加におけるフコシル化阻害剤の量付近の量未満である。

一部の実施形態において、Ｔ_ｐを用いる本明細書に記載の方法のいずれかによれば、Ｔ_ｐは、入力として培養における複数の異なるフコシル化阻害剤添加時間での培養物中の抗体又は抗体誘導体の力価を用い、出力として単離された抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルを用いて生成される予測モデルに基づいて決定される。一部の実施形態において、当該方法はさらに、予測モデルを生成することを含む。

一部の実施形態において、複数の異なるフコシル化阻害剤添加時間を用いる本明細書に記載の方法のいずれかによれば、フコシル化阻害剤の少なくとも３つ（例えば、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、又はそれ以上）の異なる添加時間を用いる。一部の実施形態において、前記複数の異なるフコシル化阻害剤添加時間は、少なくとも約２４時間（例えば、少なくとも約３６時間、４８時間、６０時間、７２時間、８４時間、９６時間、１０８時間、１２０時間、１３２時間、１４４時間、１５６時間、１６８時間、１８０時間、１９２時間、２０４時間、２１６時間、２２８時間、２４０時間、又はそれ以上のいずれか）の範囲にわたる。一部の実施形態において、前記複数の異なるフコシル化阻害剤添加時間は、少なくとも約７２時間の範囲にわたる。一部の実施形態において、フコシル化阻害剤はフコース類縁体である。一部の実施形態において、フコース類縁体は、２ＦＦ、式Ｉの化合物、又は式ＩＩの化合物である。一部の実施形態において、フコース類縁体は２ＦＦである。

一部の実施形態において、Ｔ_ｐを用いる本明細書に記載の方法のいずれかによれば、Ｔ_ｐで加えられるフコシル化阻害剤の量は、１μＭ、５μＭ、１０μＭ、１５μＭ、２０μＭ、２５μＭ、３０μＭ、３５μＭ、４０μＭ、４５μＭ、５０μＭ、５５μＭ、６０μＭ、６５μＭ、７０μＭ、７５μＭ、８０μＭ、８５μＭ、９０μＭ、９５μＭ、１００μＭ、１２０μＭ、１４０μＭ、１６０μＭ、１８０μＭ、２００μＭ、２２０μＭ、２４０μＭ、２６０μＭ、２８０μＭ、３００μＭ、３２０μＭ、３４０μＭ、３６０μＭ、３８０μＭ、４００μＭ、４２０μＭ、４４０μＭ、４６０μＭ、４８０μＭ、５００μＭ、５２０μＭ、５４０μＭ、５６０μＭ、５８０μＭ、６００μＭ、６２０μＭ、６４０μＭ、６６０μＭ、６８０μＭ、７００μＭ、７２０μＭ、７４０μＭ、７６０μＭ、７８０μＭ、８００μＭ、８２０μＭ、８４０μＭ、８６０μＭ、８８０μＭ、９００μＭ、９２０μＭ、９４０μＭ、９６０μＭ、９８０μＭ、１，０００μＭ、又はそれ以上のいずれかであり、これらの値の中間の範囲を含む。一部の実施形態において、フコシル化阻害剤はフコース類縁体である。一部の実施形態において、フコース類縁体は、２ＦＦ、式Ｉの化合物、又は式ＩＩの化合物である。一部の実施形態において、フコース類縁体は２ＦＦである。

一部の実施形態において、Ｔ_ｐを用いる本明細書に記載の方法のいずれかによれば、フコシル化阻害剤は２ＦＦであり、Ｔ_ｐで加えられる２ＦＦの量は、約１００μＭ又は約１００μＭ未満（例えば、約９９μＭ、９８μＭ、９７μＭ、９６μＭ、９５μＭ、９４μＭ、９３μＭ、９２μＭ、９１μＭ、９０μＭ、８９μＭ、８８μＭ、８７μＭ、８６μＭ、８５μＭ、８４μＭ、８３μＭ、８２μＭ、８１μＭ、８０μＭ、７９μＭ、７８μＭ、７７μＭ、７６μＭ、７５μＭ、７４μＭ、７３μＭ、７２μＭ、７１μＭ、７０μＭ、６９μＭ、６８μＭ、６７μＭ、６６μＭ、６５μＭ、６４μＭ、６３μＭ、６２μＭ、６１μＭ、６０μＭ、５９μＭ、５８μＭ、５７μＭ、５６μＭ、５５μＭ、５４μＭ、５３μＭ、５２μＭ、５１μＭ、５０μＭ、４９μＭ、４８μＭ、４７μＭ、４６μＭ、４５μＭ、４４μＭ、４３μＭ、４２μＭ、４１μＭ、４０μＭ、３９μＭ、３８μＭ、３７μＭ、３６μＭ、３５μＭ、３４μＭ、３３μＭ、３２μＭ、３１μＭ、３０μＭ、２９μＭ、２８μＭ、２７μＭ、２６μＭ、２５μＭ、２４μＭ、２３μＭ、２２μＭ、２１μＭ、２０μＭ、１９μＭ、１８μＭ、１７μＭ、１６μＭ、１５μＭ、１４μＭ、１３μＭ、１２μＭ、１１μＭ、１０μＭ、９μＭ、８μＭ、７μＭ、６μＭ、５μＭ、４μＭ、３μＭ、２μＭ、又は１μＭのいずれか未満）である。

一部の実施形態において、Ｔ_ｐを用いる本明細書に記載の方法のいずれかによれば、非フコシル化の標的レベルからの最大偏差は、最大約１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、又はそれ以下のいずれかである。一部の実施形態において、非フコシル化の標的レベルからの最大偏差は、最大約５％である。

一部の実施形態において、を用いる本明細書に記載の方法のいずれかによればＴ_ｐ、抗体又は抗体誘導体は、約９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、又は５％のいずれか（これらの値の中間の範囲を含む）のコア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、又は５％のいずれかより大きいコア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約１００％～約９５％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約９５％～約９０％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約９０％～約８５％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約８５％～約８０％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約８０％～約７５％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約７５％～約７０％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約７０％～約６５％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約６５％～約６０％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約６０％～約５５％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約５５％～約５０％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約５０％～約４５％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約４５％～約４０％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約４０％～約３５％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約３５％～約３０％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約３０％～約２５％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約２５％～約２０％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約２０％～約１５％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約１５％～約１０％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約１０％～約５％コア非フコシル化を有する。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、約５％～約０％コア非フコシル化を有する。

一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルを制御する方法であって、（ａ）培地中で宿主細胞を培養すること［当該宿主細胞は、糖鎖の還元末端のＮ－アセチルグルコサミンを介してＦｃドメインに結合した少なくとも一つの複合型Ｎ－グリコシド結合型糖鎖を有するＦｃドメインを有する抗体又は抗体誘導体を発現する。］；（ｂ）培養中の所定時間（Ｔ_ｐ）で培地に２ＦＦを加えること；及び（ｃ）抗体又は抗体誘導体を単離することを含む方法が本明細書において提供される。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は培養完了時に単離される。一部の実施形態において、Ｔ_ｐは、（ｃ）の単離された抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルが、非フコシル化の標的レベルからの最大偏差を超えない非フコシル化を有するように決定される。一部の実施形態において、当該方法はさらに、Ｔ_ｐを決定することを含む。一部の実施形態において、加えられる２ＦＦの量は、ｄ０で加えた時に少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上のいずれか）非フコシル化を生じる飽和量又はほぼ飽和量である。一部の実施形態において、加えられる２ＦＦの量は、約１００μＭである。

一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルを制御する方法であって、（ａ）培地中で宿主細胞を培養すること［当該宿主細胞は、糖鎖の還元末端のＮ－アセチルグルコサミンを介してＦｃドメインに結合した少なくとも一つの複合型Ｎ－グリコシド結合型糖鎖を有するＦｃドメインを有する抗体又は抗体誘導体を発現する。］；（ｂ）培養中の所定時間（Ｔ_ｐ）で培地に２ＦＦを加えること；及び（ｃ）抗体又は抗体誘導体を単離することを含む方法が本明細書において提供され、Ｔ_ｐは、入力として培養における複数の異なる２ＦＦ添加時間での培養物中の抗体又は抗体誘導体の力価を用い、そして出力として単離された抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルを用いて生成される予測モデルに基づいて決定される。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、培養完了時に単離される。一部の実施形態において、当該方法はさらに、予測モデルを生成することを含む。一部の実施形態において、Ｔ_ｐは、（ｃ）の単離された抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルが、非フコシル化の標的レベルからの最大偏差を超えない非フコシル化のレベルを有するように決定される。一部の実施形態において、当該方法はさらに、Ｔ_ｐを決定することを含む。一部の実施形態において、加えられる２ＦＦの量は、ｄ０で加えた時に少なくとも約９５％（例えば、少なくとも約９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上のいずれか）非フコシル化を生じる飽和量又はほぼ飽和量である。一部の実施形態において、加えられる２ＦＦの量は、約１００μＭである。

一部の実施形態において、本明細書に記載の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルを制御する方法のいずれかによれば、宿主細胞は組換え宿主細胞である。一部の実施形態において、宿主細胞はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。

一部の実施形態において、本明細書に記載の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルを制御する方法のいずれかによれば、宿主細胞はハイブリドーマである。

一部の実施形態において、本明細書に記載の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルを制御する方法のいずれかによれば、宿主細胞は流加培養で増殖される。

一部の実施形態において、本明細書に記載の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルを制御する方法のいずれかによれば、宿主細胞は連続供給培養で増殖される。

一部の実施形態において、本明細書に記載の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルを制御する方法のいずれかによれば、培地は少なくとも１００リットルの体積を有する。一部の実施形態において、培地は少なくとも５００リットルの体積を有する。

一部の実施形態において、本明細書に記載の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルを制御する方法のいずれかによれば、培地は動物タンパク質不含培地である。

一部の実施形態において、本明細書に記載の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルを制御する方法のいずれかによれば、抗体又は抗体誘導体の単離は、細胞及び／又は培地から抗体又は抗体誘導体を単離することを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体の単離は、タンパク質Ａカラムを用いることを含む。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体の単離は、カチオン若しくはアニオン交換カラム又は疎水性相互作用カラムを用いることを含む。

一部の実施形態において、本明細書に記載の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルを制御する方法のいずれかによれば、抗体又は抗体誘導体はインタクト抗体である。一部の実施形態において、インタクト抗体はＩｇＧ１抗体である。

一部の実施形態において、本明細書に記載の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルを制御する方法のいずれかによれば、抗体又は抗体誘導体は一本鎖抗体である。

一部の実施形態において、本明細書に記載の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルを制御する方法のいずれかによれば、抗体又は抗体誘導体は、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、及びＦｃ領域を含む。

一部の実施形態において、本明細書に記載の抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルを制御する方法のいずれかによれば、抗体又は抗体誘導体は、非免疫グロブリンタンパク質の抗体Ｆｃ領域及びリガンド結合ドメインを含む抗体誘導体である。

フコシル化阻害剤
一部の実施形態において、本明細書に記載の方法は、フコシル化阻害剤を用いる。一部の実施形態において、フコシル化阻害剤は、対象者に投与した場合にイン・ビボで２ＦＦに変換される２－フルオロフコース（２ＦＦ）又はフコース類縁体である。想定される別のフコシル化阻害剤には、米国特許第８，１６３，５５１号及び米国特許公開第２０１５０２３８５０９号（これらは参照によって全内容が本明細書に組み込まれる）に開示のものなどがある。例えば、一部の実施形態において、フコシル化阻害剤は、下記で確認される式Ｉ又はＩＩのフコース類縁体である。

一部の実施形態において、当該フコース類縁体は、下記式（Ｉ）又は（ＩＩ）を有するか、それの生物学的に許容される塩若しくは溶媒和物である。

式中、式（Ｉ）又は（ＩＩ）のそれぞれは、α若しくはβアノマー又は相当するアルドース型であることができ；
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^２ａ、Ｒ^３、Ｒ^３ａ及びＲ^４のそれぞれは、独立に、ＯＨ、加水分解可能エステル基、加水分解可能エーテル基、及び小さい電子求引基から選択され；
Ｒ^５は、－ＣＨ_３、－ＣＨＸ_２、－ＣＨ_２Ｘ、置換されていないかハロゲンで置換されている－ＣＨ（Ｘ′）－Ｃ_１－Ｃ_４アルキル、置換されていないかハロゲンで置換されている－ＣＨ（Ｘ′）－Ｃ_２－Ｃ_４アルケン、置換されていないかハロゲンで置換されている－ＣＨ（Ｘ′）－Ｃ_２－Ｃ_４アルキン、－ＣＨ＝Ｃ（Ｒ^１０）（Ｒ^１１）、－Ｃ（ＣＨ_３）＝Ｃ（Ｒ^１２）（Ｒ^１３）、－Ｃ（Ｒ^１４）＝Ｃ＝Ｃ（Ｒ^１５）（Ｒ^１６）、置換されていないかメチル若しくはハロゲンで置換されている－Ｃ_３炭素環、置換されていないかメチル若しくはハロゲンで置換されている－ＣＨ（Ｘ′）－Ｃ_３炭素環、置換されていないかメチル又はハロゲンで置換されているＣ_３複素環、置換されていないかメチル若しくはハロゲンで置換されている－ＣＨ（Ｘ′）－Ｃ_３複素環、－ＣＨ_２Ｎ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｎ_３、及びベンジルオキシメチルからなる群から選択される構成員であり、又はＲ^５は小さい電子求引基であり；
Ｒ^１０は、水素又は置換されていないかハロゲンで置換されているＣ_１－Ｃ_３アルキルであり；
Ｒ^１１は、置換されていないかハロゲンで置換されているＣ_１－Ｃ_３アルキルであり；
Ｒ^１２は、水素、ハロゲン又は置換されていないかハロゲンで置換されているＣ_１－Ｃ_３アルキルであり；
Ｒ^１３は、水素、又は置換されていないかハロゲンで置換されているＣ_１－Ｃ_３アルキルであり；
Ｒ^１４は水素又はメチルであり；
Ｒ^１５及びＲ^１６は独立に、水素、メチル及びハロゲンから選択され；
Ｘはハロゲンであり；
Ｘ′はハロゲン又は水素であり；
さらに、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^２ａ、Ｒ^３及びＲ^３ａのそれぞれが水素であっても良く；隣接する炭素原子上の二つのＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^２ａ、Ｒ^３及びＲ^３ａが組み合わされて、当該隣接する炭素原子間で二重結合を形成していても良く；
但し、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^２ａ、Ｒ^３、Ｒ^３ａ、Ｒ^４及びＲ^５のうちの少なくとも一つが小さい電子求引基であるか、Ｒ^５がハロゲン、不飽和の部位、炭素環、複素環又はアジドを含む。

一部の選択される実施形態において、フコース類縁体は下記式を有するか、それのアルドース型である。

式中、Ｒ^１、Ｒ^３、及びＲ^４のそれぞれは独立に、－ＯＨ又は加水分解可能エステル基である。一部の実施形態において、加水分解可能エステル基は－ＯＣ（Ｏ）Ｃ_１－Ｃ_１０アルキルである。一部の選択される実施形態において、加水分解可能エステル基は－ＯＣ（Ｏ）ＣＨ_３である。一部の実施形態において、Ｒ^１、Ｒ^３及びＲ^４のそれぞれは、独立に、－ＯＨ及び－ＯＣ（Ｏ）Ｃ_１－Ｃ_１０アルキルからなる群から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^１、Ｒ^３及びＲ^４のそれぞれは、独立に、－ＯＨ及び－ＯＣ（Ｏ）ＣＨ_３からなる群から選択される。一部の実施形態において、Ｒ^１、Ｒ^３及びＲ^４のそれぞれは－ＯＨである。一部の選択される実施形態において、フコース類縁体は２－デオキシ－２－フルオロ－Ｌ－フコースである。

抗体及び抗体誘導体
本発明の方法により製造することができる抗体は、モノクローナル、キメラ、ヒト化（ベニアを含む）又はヒト抗体であることができる。適切な抗体には、単鎖抗体、複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖を有するＦｃ領域若しくはドメイン（例えば、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域若しくはドメイン）を有する同様なものなどの抗体断片などもある。Ｆｃ領域若しくはドメインは、Ｆｃガンマ受容体結合部位を含むことができる。一部の実施形態において、抗体は、げっ歯類（例えば、マウス及びラット）、ロバ、ヒツジ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ科動物、ウマ又はニワトリであることができる。

抗体は、単一特異性、二重特異性、三重特異性又はより高度の多重特異性であり得る。多重特異性抗体は、異なる標的抗原の異なるエピトープに対して特異的であってよく、或いは同じ標的抗原上の異なるエピトープに対して特異的であってよい（例えば、ＷＯ９３／１７７１５、ＷＯ９２／０８８０２、ＷＯ９１／００３６０、ＷＯ９２／０５７９３、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．， １９９１， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４７：６０－６９、米国特許第４，４７４，８９３号、第４，７１４，６８１号、第４，９２５，６４８号、第５，５７３，９２０号及び第５，６０１，８１９号、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．， １９９２， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４８， １５４７－１５５３を参照）。

抗体は、１０^－７Ｍ、５×１０^－８Ｍ、１０^－８Ｍ、５×１０^－９Ｍ、１０^－９Ｍ、５×１０^－１０Ｍ、１０^－１０Ｍ、５×１０^－１１Ｍ、１０^－１１Ｍ、５×１０^－１２Ｍ、１０^－１２Ｍ、５×１０^－１３Ｍ、１０^－１３Ｍ、５×１０^－１４Ｍ、１０^－１４Ｍ、５×１０^－１５Ｍ又は１０^－１５Ｍなどの標的抗原に対するそれらの結合親和力によっても記述することができる。

一部の実施形態において、抗体は、キメラ抗体である。キメラ抗体は、マウスモノクローナル抗体由来の可変領域及びヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体などの、抗体の異なる部分が異なる動物種由来である分子である。キメラ抗体を製造する方法は、当技術分野で公知である（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， Ｓｃｉｅｎｃｅ， １９８５，２２９：１２０２；Ｏｉ ｅｔ ａｌ．， １９８６， Ｂｉｏ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ， ４， ２１４；Ｇｉｌｌｉｅｓ ｅｔ ａｌ．， １９８９， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ， １２５：１９１－２０２、米国特許第５，８０７，７１５号、第４，８１６，５６７号及び第４，８１６，３９７号を参照）。

一部の実施形態において、抗体は、ベニア抗体を含む、ヒト化抗体であり得る。ヒト化抗体は、所望の抗原に結合する抗体分子であり、非ヒト動物種からの１以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）、並びにヒト免疫グロブリン分子からのフレームワーク及び定常領域を有する。ヒト領域におけるフレームワーク残基は、抗原結合を変化させるか、又は好ましくは改善するために、ＣＤＲドナー抗体の対応する残基で置換することが多い。これらのフレームワーク置換は、当技術分野で周知の方法により、例えば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を同定するためのＣＤＲとフレームワーク残基との相互作用のモデリング及び特定の位置における異常なフレームワーク残基を同定するための配列比較により同定される（例えば、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．、米国特許第５，５８５，０８９号、Ｒｉｅｃｂｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， １９８８， Ｎａｔｕｒｅ， ３３２， ３２３を参照）。抗体は、ＣＤＲグラフティング（欧州特許第０２３９４００号、国際公開第９１／０９９６７号、米国特許第５，２２５，５３９号、第５，５３０，１０１号及び第５，５８５，０８９号）、ベニアリング又はリサーフェシング（欧州特許第０５９２１０６号、欧州特許第０５１９５９６号、Ｐａｄｌａｎ， １９９１， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ２８（４／５）， ４８９－４９８、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．， １９９４， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， ７（６）， ８０５～８１４、Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．， １９９４， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９１， ９６９－９７３）及びチェインシャフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）（これらの参考文献のすべてが参照により本明細書に組み込まれる）などの当技術分野で公知の様々な技術を用いてヒト化することができる。

抗体は、ヒト抗体であることもできる。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列由来の抗体ライブラリーを用いるファージディスプレイ法などの当技術分野で公知の様々な技術により製造することができる。例えば、米国特許第４，４４４，８８７号及び第４，７１６，１１１号、国際公開第９８／４６６４５号、国際公開第９８／５０４３３号、国際公開第９８／２４８９３号、国際公開第９８／１６６５４号、国際公開第９６／３４０９６号、国際公開第９６／３３７３５号及び国際公開第９１／１０７４１号を参照のこと。さらに、選択されるエピトープを認識するヒト抗体は、選択される非ヒトモノクローナル抗体、例えば、マウス抗体を用いて、同じエピトープを認識する完全にヒト抗体の選択を誘導する「誘導選択（ｇｕｉｄｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）」と呼ばれる技術を用いて作製することができる（例えば、Ｊｅｓｐｅｒｓ， ｅｔ ａｌ．， １９９４， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， １２， ８９９－９０３を参照）。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現するトランスジェニックマウスを用いて産生させることもできる。抗原に対するモノクローナル抗体は、従来のハイブリドーマ法を用いて免疫化トランスジェニックマウスから得ることができる。ヒト抗体を製造する技術の概要については、Ｌｏｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ， １９９５， Ｉｎｔ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １３， ６５－９３を参照する。ヒト抗体及びヒトモノクローナル抗体を製造するこの技術の詳細な考察並びにそのような抗体を製造するためのプロトコールについては、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９２／０１０４７、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ９６／３３７３５、欧州特許第０５９８，８７７号、米国特許第５，４１３，９２３号、第５，６２５，１２６号、第５，６３３，４２５号、第５，５６９，８２５号、第５，６６１，０１６号、第５，５４５，８０６号、第５，８１４，３１８号、第５，８８５，７９３号、第５，９１６，７７１号及び第５，９３９，５９８号を参照する。

抗体の例としては、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（トラスツズマブ（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）（リツキシマブ（ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）； Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、リンツズマブ（ｌｉｎｔｕｚｕｍａｂ）（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ， Ｉｎｃ．）、パリビズマブ（Ｐａｌｉｖｉｚｕｍａｂ）（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、アレムツズマブ（Ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ）（ＢＴＧ）及びエプラツズマブ（Ｅｐｒａｔｕｚｕｍａｂ）（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）などがある。

例示的実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８又はＣＤ２７６に特異的に結合する。他の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、ＢＭＰＲ１Ｂ、ＬＡＴ１（ＳＬＣ７Ａ５）、ＳＴＥＡＰ１、ＭＵＣ１６、巨核球増強因子（ＭＰＦ）、Ｎａｐｉ３ｂ、Ｓｅｍａ ５ｂ、ＰＳＣＡ ｈｌｇ、ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型受容体）、ＳＴＥＡＰ２、ＴｒｐＭ４、ＣＲＩＰＴＯ、ＣＤ２１、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＦｃＲＨ２、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、ＮＣＡ、ＭＤＰ、ＩＬ２０Ｒα、ブレビカン（Ｂｒｅｖｉｃａｎ）、Ｅｐｈｂ２Ｒ、ＡＳＬＧ６５９、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＧＥＤＡ、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＣＸＣＲ５、ＨＬＡ－ＤＯＢ、Ｐ２Ｘ５、ＣＤ７２、ＬＹ６４、ＦＣＲＨ１又はＩＲＴＡ２に特異的に結合する。

抗体は、例えば、ウエスタンブロット、放射線免疫検定法、ＥＬＩＳＡ（酵素結合イムノソルベント検定法）、「サンドイッチ」免疫検定法、免疫沈降検定法、免疫放射線検定法、蛍光免疫検定法及びプロテインＡ免疫検定法などの技術を用いた競合的及び非競合的免疫検定システムなどの従来の方法によって標的抗原への特異的結合について検定することができる（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．， ｅｄｓ．， Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ４， １９９９）、Ｈａｒｌｏｗ ＆ Ｌａｎｅ， Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ． Ｙ．， １９９９）を参照）。

さらに、標的抗原への抗体の結合親和力及び抗体－抗原相互作用のオフレート（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）は、表面プラスモン共鳴、標識抗体を用いた競合的ＦＡＣＳ又は他の競合的結合検定法により測定することができる。競合的結合検定法の一つの例は、漸増量の非標識抗体の存在下での標識抗原（例えば、^３Ｈ又は^１２５Ｉ）と対象の抗体とのインキュベーション、及び標識抗原に結合した抗体の検出を含む放射免疫検定法である。抗体の親和力及び結合オフレートは、スキャッチャードプロット解析によりデータから決定することができる。第２抗体との競合も放射免疫検定法を用いて測定することができる。この場合、抗原を、漸増量の非標識第２抗体の存在下で標識化合物（例えば、^３Ｈ又は^１２５Ｉ）に結合した対象の抗体とともにインキュベートする。或いは、抗体の結合親和力及び抗体－抗原相互作用のオンレート及びオフレートは、表面プラスモン共鳴により測定することができる。

抗体は、抗体の種類に応じた標準的方法により標的抗原の抗原含有断片から製造することができる（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ２５６， ４９５（１９７５）、Ｈａｒｌｏｗ ＆ Ｌａｎｅ， Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （Ｃ．Ｓ．Ｈ．Ｐ．， ＮＹ， １９８８）、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ８６， １００２９－１００３３（９８９）及びＷＯ９０／０７８６１、Ｄｏｗｅｒ ｅｔ ａｌ．， ＷＯ９１／１７２７１並びにＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．， ＷＯ９２／０１０４７ （それぞれがあらゆる点に関して参照により組み込まれている）を参照）。例として、モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ、組換え及びファージディスプレイ技術又はそれらの組合せの使用を含む様々な技術を用いて製造することができる。ハイブリドーマ技術は、例えば、Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．， 前出、及びＨａｍｍｅｒｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ， ５６３－６８１ （Ｅｌｓｅｖｉｅｒ， Ｎ．Ｙ．， １９８１）に一般的に述べられている。抗体を製造するのに用いることができるファージディスプレイ法の例としては、例えば、Ｂｒｉｉｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．， １９９５， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ， １８２， ４１－５０、Ａｍｅｓ ｅｔ ａｌ．， １９９５， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ， １８４， １７７－１８６、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ ｅｔ ａｌ．， １９９４， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ２４， ９５２－９５８、Ｐｅｒｓｉｃ ｅｔ ａｌ．， １９９７， Ｇｅｎｅ， １８７， ９－１８、Ｂｕｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， １９９４， Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ５７， １９１－２８０、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４、ＰＣＴ公開ＷＯ９０／０２８０９、ＷＯ９１／１０７３７、ＷＯ９２／０１０４７、ＷＯ９２／１８６１９、ＷＯ９３／１１２３６、ＷＯ９５／１５９８２、ＷＯ９５／２０４０１並びに米国特許第５，６９８，４２６号、第５，２２３，４０９号、第５，４０３，４８４号、第５，５８０，７１７号、第５，４２７，９０８号、第５，７５０，７５３号、第５，８２１，０４７号、第５，５７１，６９８号、第５，４２７，９０８号、第５，５１６，６３７号、第５，７８０，２２５号、第５，６５８，７２７号、第５，７３３，７４３号及び第５，９６９，１０８号（開示が参照により本明細書に組み込まれている）に開示されているものなどがある。

単鎖Ｆｖｓ及び抗体を製造するのに用いることができる技術の例としては、米国特許第４，９４６，７７８号及び第５，２５８，４９８号、Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， １９９１， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ， ２０３， ４６－８８、Ｓｈｕ ｅｔ ａｌ．， １９９３， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９０， ７９９５－７９９９並びにＳｋｅｒｒａ ｅｔ ａｌ．， １９８８， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２４０， １０３８－１０４０に記載されているものなどがある。

抗体誘導体の例としては、結合ドメインが例えば、リガンド、受容体の細胞外ドメイン、ペプチド、天然に存在しないペプチドなどであり得る、結合ドメイン－Ｉｇ融合体などがある。免疫グロブリン又はＦｃ領域との具体例としての融合体としては、ｓＴＮＦＲＩＩとＦｃ領域との融合タンパク質であるエタナーセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）（米国特許第５，６０５，６９０号）、抗原提示細胞上で発現したＬＦＡ－３とＦｃ領域との融合タンパク質であるアレファセプト（ａｌｅｆａｃｅｐｔ）（米国特許第５，９１４，１１１号）、細胞障害性Ｔリンパ球関連抗原－４（ＣＴＬＡ－４）とＦｃ領域との融合タンパク質（Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．， １８１， １８６９（１９９５））、インターロイキン１５とＦｃ領域との融合タンパク質（Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １６０， ５７４２（１９９８））、第ＶＩＩ因子とＦｃ領域との融合タンパク質（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９８， １２１８０（２００１））、インターロイキン１０とＦｃ領域との融合タンパク質（Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １５４， ５５９０（１９９５））、インターロイキン２とＦｃ領域との融合タンパク質（Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １４６， ９１５（１９９１））、ＣＤ４０とＦｃ領域との融合タンパク質（Ｓｕｒｇｅｒｙ， １３２， １４９（２００２））、Ｆｌｔ－３（ｆｍｓ様チロシンキナーゼ）と抗体Ｆｃ領域との融合タンパク質（Ａｃｔａ． Ｈａｅｍａｔｏ．， ９５， ２１８（１９９６））、ＯＸ４０と抗体Ｆｃ領域との融合タンパク質（Ｊ． Ｌｅｕ． Ｂｉｏｌ．， ７２， ５２２（２００２））並びに他のＣＤ分子（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ９５（Ｆａｓ）、ＣＤ１０６（ＶＣＡＭ－Ｉ）、ＣＤ１３７）、接着分子（例えば、ＡＬＣＡＭ（活性化白血球細胞接着分子）、カドヘリン、ＩＣＡＭ（細胞内接着分子）－１、ＩＣＡＭ－２、ＩＣＡＭ－３）、サイトカイン受容体（例えば、インターロイキン－４Ｒ、インターロイキン－５Ｒ、インターロイキン－６Ｒ、インターロイキン－９Ｒ、インターロイキン－１０Ｒ、インターロイキン－１２Ｒ、インターロイキン－１３Ｒアルファ１、インターロイキン－１３Ｒアルファ２、インターロイキン－１５Ｒ、インターロイキン－２１Ｒアルファ）、ケモカイン、細胞死誘導シグナル分子（例えば、Ｂ７－Ｈ１、ＤＲ６（細胞死受容体６）、ＰＤ－１（プログラム死－１）、ＴＲＡＩＬ Ｒ１）、共刺激分子（例えば、Ｂ７－１、Ｂ７－２、Ｂ７－Ｈ２、ＩＣＯＳ（誘導共刺激因子））、成長因子（例えば、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＨＧＦＲ）、分化誘導因子（例えば、Ｂ７－Ｈ３）、活性化因子（例えば、ＮＫＧ２Ｄ）、シグナル伝達分子（例えば、ｇｐ１３０）、ＢＣＭＡ及びＴＡＣＩとの融合タンパク質などがある。

非コアフコシル化抗体及び抗体誘導体を製造する方法
本発明の方法において有用である抗体及びその誘導体は、ハイブリドーマ、骨髄腫又は他の抗体発現哺乳類細胞から組換え発現技術により製造することができる。標的抗原に結合する抗体又はその誘導体の組換え発現は概して、抗体又はその誘導体をコードする核酸を含む発現ベクターの構築を必要とする。そのようなタンパク質をコードする核酸が得られたら、当技術分野で周知の技術を用いる組換えＤＮＡ技術により、タンパク質分子の製造用のベクターを生成させることができる。Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌ， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ． Ｙ．， ３， ２００１）、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ． Ｙ．， ２， １９８９）、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．， Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ４， １９９９）並びにＧｌｉｃｋ ａｎｄ Ｐａｓｔｅｒｎａｋ， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ： Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ（ＡＳＭ Ｐｒｅｓｓ， Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ， Ｄ．Ｃ．， ２， １９９８）に記載されているような標準的技術を組換え核酸法、核酸合成、細胞培養、トランスジーン組み込み及び組換えタンパク質発現に用いることができる。

例えば、抗体の組換え発現のために、発現ベクターは、その重鎖又は軽鎖、或いはプロモーターに作動可能に連結された重鎖又は軽鎖可変ドメインをコードしてよい。発現ベクターは、例えば、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列を含んでいてよく（例えば、ＷＯ８６／０５８０７、ＷＯ８９／０１０３６及び米国特許第５，１２２，４６４号を参照）、抗体の可変ドメインは、完全な重鎖又は軽鎖の発現のためにそのようなベクター内にクローニングすることができる。発現ベクターを当技術分野で公知の技術により宿主細胞に転移し、次いで、トランスフェクト細胞をフコシル化阻害剤の存在下で当技術分野で公知の技術により培養して、抗体を産生させる。一般的に、二本鎖抗体の発現のために、重及び軽鎖の両方をコードするベクターを、完全な免疫グロブリン分子の発現のために宿主細胞中で共発現させることができる。

抗体又はその誘導体を発現させるために、様々な哺乳類細胞及び細胞株を用いることができる。例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）（例えば、ＤＧ４４、Ｄｘｂ１１、ＣＨＯ－Ｋ、ＣＨＯ－Ｋ１及びＣＨＯ－Ｓ）などの哺乳類細胞を用いることができる。一部の実施形態において、ヒト細胞株を用いる。適切な骨髄腫細胞株は、ＳＰ２／０及びＩＲ９８３Ｆ並びにＮａｍａｌｗａなどのヒト骨髄腫細胞株などである。他の適切な細胞としては、ヒト胚腎臓細胞（例えば、ＨＥＫ２９３）、サル腎臓細胞（例えば、ＣＯＳ）、ヒト上皮細胞（例えば、ＨｅＬａ）、ＰＥＲＣ６、Ｗｉｌ－２、ジャーカット、ベロ、Ｍｏｌｔ－４、ＢＨＫ及びＫ６Ｈ６などがある。他の適切な宿主細胞としては、ＹＢ２／０細胞などがある。他の実施形態において、宿主細胞は、ＹＢ２／０細胞でない。

一部の実施形態において、宿主細胞は、ハイブリドーマからの細胞である。一部の実施形態において、宿主細胞は、ＮＳ０骨髄腫細胞を用いて発生させた融合により生成させたハイブリドーマでない。他の実施形態において、宿主細胞は、ハイブリドーマでない。

一部の実施形態において、宿主細胞は、フコーストランスポーター遺伝子ノックアウトを含まない。一部の実施形態において、宿主細胞は、フコシルトランスフェラーゼ（例えば、ＦＵＴ８）遺伝子ノックアウトを含まない。一部の実施形態において、宿主細胞は、核酸をコードするＧｎＴＩＩＩのノックインを含まない。一部の実施形態において、宿主細胞は、核酸をコードするゴルジアルファマンノシダーゼＩＩのノックインを含まない。

抗体又はその誘導体を発現させるために、様々な哺乳類宿主発現ベクター系を用いることができる。例えば、ヒトサイトメガロウイルスの主要中早期遺伝子プロモーターエレメント（ｍａｊｏｒ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ ｅａｒｌｙ ｇｅｎｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ｅｌｅｍｅｎｔ）又はチャイニーズハムスター卵巣ＥＦ－１αプロモーターなどのベクターに連結したチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）（例えば、ＤＧ４４、Ｄｘｂ１１、ＣＨＯ－Ｋ、ＣＨＯ－Ｋ１及びＣＨＯ－Ｓ）などの哺乳類細胞は、抗体又はその誘導体の産生のための有効な発現系である（例えば、Ｆｏｅｃｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．， １９８６， Ｇｅｎｅ， ４５， １０１、Ｃｏｃｋｅｔｔ ｅｔ ａｌ．， １９９０， Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ８， ２、Ａｌｌｉｓｏｎ， 米国特許第５，８８８，８０９号を参照）。

細胞株を適切な培地中で培養する。適切な培地は、成長に必要な、例えば、塩、炭素源（例えば、糖）、窒素源、アミノ酸、微量元素、抗生物質、選択剤などを含むものなどである。例えば、Ｈａｍ′ｓ ＦｌＯ（Ｓｉｇｍａ）、最少必須培地（ＭＥＭ、Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ－１６４０（Ｓｉｇｍａ）、ダルベッコの修正イーグル培地（ＤＭＥＭ、Ｓｉｇｍａ）、ＰｏｗｅｒＣＨＯ（商標名）細胞培地（Ｌｏｎｚａ Ｇｒｏｕｐ Ｌｔｄ．）、ハイブリドーマ血清不含有培地（Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ Ｓｅｒｕｍ－Ｆｒｅｅ Ｍｅｄｉｕｍ）（ＨＳＦＭ）（ＧＩＢＣＯ）などの市販の培地は、宿主細胞を培養するのに適している。これらの培地のいずれかに必要に応じてホルモン及び／又は他の成長因子（インスリン、トランスフェリン又は表皮成長因子）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム及びリン酸塩など）、緩衝剤（ＨＥＰＥＳなど）ヌクレオチド（アデノシン及びチミジンなど）、抗生物質（ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮ（商標名）など）、微量元素（マイクロモル範囲の最終濃度で通常存在する無機化合物と定義される）及びグルコース又は同等のエネルギー源を追加してよい。他の必要な補足物も当業者に公知であるような適切な濃度で含めることができる。温度、ｐＨなどの培養条件は、発現のために選択した宿主細胞について以前に用いたものであってよく、当業者には明らかであろう。

抗体又は抗体誘導体を発現する細胞は、適切な体積の培地中で宿主細胞を増殖させることによって培養することができる。細胞は、Ｔフラスコ、スピンナー及びシェーカーフラスコ、ＷａｖｅＢａｇ（登録商標）バッグ、ローラボトル、バイオリアクター及び撹拌槽型バイオリアクターなどの適切な培養システムで、当技術分野で公知の方法により培養することができる。足場依存性細胞も撹拌槽型バイオリアクター中懸濁液中に保持されているマイクロ担体、例えば、ポリマースフェア上で培養することができる。或いは、細胞は、単一細胞懸濁液中で増殖させることができる。培地は、培地を単一バッチで細胞に１回加えるバッチ法で、或いは培地の小バッチを定期的に加える流加培養法（fed batch）で加えることができる。培地は、培養の終了時に、又は培養中に数回採集することができる。連続潅流培養法も当技術分野で公知であり、新鮮培地を培養中に連続供給すると同時に、同じ体積を反応器から連続的に抜き出すことを必要とする。潅流培養は、一般的にバッチ培養より高い細胞密度を達成し、これを反復収集で数週間又は数ヵ月間維持することができる。

バッチ培養で成長させる細胞について、培地の容積は、一般的に少なくとも７５０ｍＬ、１リットル、２リットル、３リットル、４リットル、５リットル、１０リットル、１５リットル、２０リットル又はそれ以上である。産業上の利用においては、培地の容積は、少なくとも１００リットル、少なくとも２００リットル、少なくとも２５０リットル、少なくとも５００リットル、少なくとも７５０リットル、少なくとも１０００リットル、少なくとも２０００リットル、少なくとも５０００リットル又は少なくとも１００００リットルであり得る。

一部の実施形態において、本発明の方法により産生される抗体又は抗体誘導体は、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％又は少なくとも５０％の非コアフコシル化タンパク質（例えば、コアフコシル化を欠く）を含む。一部の実施形態において、本発明の方法により産生される抗体又は抗体誘導体は、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％の非コアフコシル化抗体又は抗体誘導体を含む。一部の実施形態において、本発明の方法により産生される抗体又は抗体誘導体の組成物は、１００％未満の非コアフコシル化抗体及び／又は抗体誘導体を含む。

フコースが糖鎖の還元末端におけるＮ－アセチルグルコサミンに結合している糖鎖に対するフコースが糖鎖の還元末端におけるＮ－アセチルグルコサミンに結合していない糖鎖の含量（例えば、比）は、当業界で公知のいずれかの方法に従って測定することができる。そのような方法は、ヒドラジン分解又は酵素消化を行い（例えば、Ｒｅｉｋｏ Ｔａｋａｈａｓｈｉにより編集されたＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３：Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ Ｓｔｕｄｙｉｎｇ Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｕｇａｒ Ｃｈａｉｎ（Ｊａｐａｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｓｏｃｉｅｔｉｅｓ Ｐｒｅｓｓ）（１９８９）を参照）、放出された糖鎖の蛍光標識又は放射性同位体標識を行い、次いで、標識糖鎖をクロマトグラフィーにより分離する方法などである。また、放出された糖鎖の組成は、ＨＰＡＥＣ－ＰＡＤ法により糖鎖を分析することにより測定することができる（例えば、Ｊ． Ｌｉｑ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．， ６， １５５７（１９８３）を参照）（概して、米国特許出願公開第２００４－０１１０２８２号を参照）。

一部の実施形態において、本発明の方法により産生される抗体又は抗体誘導体は、フコシル化阻害剤の非存在下で産生される抗体又は抗体誘導体より高いエフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣ活性）を有する。エフェクター機能活性は、本明細書に記載の方法のいずれかによって調整することができる。ＡＤＣＣ活性は、当技術分野で公知のアッセイを用いて測定することができ、例示的な実施形態において、コアフコシル化親抗体と比較して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍又は２０倍増加する。抗原陽性培養細胞株に対する細胞障害活性は、エフェクター機能を測定することによって評価することができる（例えば、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．， ３６， ３７３（１９９３）に記載の方法に従って）。

抗体又は抗体誘導体は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析及びアフィニティクロマトグラフィーを用いて精製することができ、アフィニティクロマトグラフィーが好ましい精製技術である。アフィニティリガンドとしてのプロテインＡの適合性は、動物種及び抗体又は抗体誘導体に存在するいずれかの免疫グロブリンＦｃドメインのイソ型に依存する。プロテインＡは、ヒトＩｇＧ１、２又は４重鎖に基づく抗体又は抗体誘導体を精製するために用いることができる。

プロテインＧは、マウスイソ型並びに一部のヒト抗体又は抗体誘導体に用いることができる。アフィニティリガンドが結合しているマトリックスは、アガロースであることが最も多いが、他のマトリックスが利用可能である。細孔性ガラス又はポリ（スチレンジビニル）ベンゼンなどの機械的に安定なマトリックスにより、アガロースを用いて達成可能なものより速い流速及び短い処理時間が可能となる。抗体又は抗体誘導体がＣ_Ｈ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ（商標名）樹脂（Ｊ． Ｔ． Ｂａｋｅｒ， Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ， ＮＪ）が精製に有用である。イオン交換カラム（陽イオン又は陰イオン交換）での分別、エタノール沈澱、逆相ＨＰＬＣ、シリカでのクロマトグラフィー、ヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標名）でのクロマトグラフィー、陰イオン又は陽イオン交換樹脂（ポリアスパラギン酸カラムなど）でのクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及び硫酸アンモニウム沈澱などのタンパク質精製の他の技術も、回収する抗体又は抗体誘導体によって利用可能である。

精製段階（単数又は複数）の後、目的とする抗体又は抗体誘導体及び不純物を含む混合物を低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィー（例えば、ｐＨ約２．５～４．５の溶出緩衝液を用い、好ましくは低塩濃度（例えば、約０～０．２５Ｍ塩）で実施する）にかけることができる。

抗体又は抗体誘導体の使用
本発明の方法により調製される抗体及び抗体誘導体は、様々な治療適用分野及び治療以外の適用分野に用いることができる。例えば、抗体は、治療用抗体として用いることができる。抗体誘導体（例えば、受容体－Ｆｃ融合体）は、治療用分子として用いることができる。一部の実施形態において、抗体又は抗体誘導体は、他の分子に結合されていない。一部の実施形態において、抗体は、適切な薬物（例えば、抗体薬物結合体）又は他の活性薬に結合されている。抗体及び抗体誘導体は、診断アッセイ、予後アッセイ、放出アッセイなどの治療以外の目的にも用いることができる。

医薬組成物
本発明の方法により調製される抗体及び抗体誘導体は、治療適用分野及び治療以外の適用分野向けに製剤することができる。抗体及び誘導体は、治療上又は予防上有効な量の抗体又は誘導体及び１以上の薬学的に適合性のある（許容される）成分を含む医薬組成物として製剤することができる。例えば、医薬又は非医薬組成物は、一般的に１以上の担体（例えば、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油などの石油、動物、植物又は合成由来のものを含む、水及び油などの滅菌液体）を含む。水は、医薬組成物を静脈内投与する場合のより一般的な担体である。生理食塩溶液並びにデキストロース及びグリセロール水溶液も特に注射用溶液の液体担体として用いることができる。適切な賦形剤としては、例えば、アミノ酸、デンプン、グルコース、乳糖、ショ糖、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどがある。組成物は、所望の場合、微量の湿展剤若しくは乳化剤、又はｐＨ緩衝剤も含んでいてよい。これらの組成物は、液剤、懸濁液剤、乳濁液剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、徐放性製剤などの形態をとり得る。適切な医薬担体の例は、Ｅ．Ｗ． Ｍａｒｔｉｎにより「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ′ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載されている。そのような組成物は代表的には、患者への適切な投与のための形を与えるための、適切な量の担体とともに、代表的には精製された形の治療上有効な量のタンパク質を含む。製剤は、投与方法に対応する。

代表的には、静脈内投与用組成物は、滅菌等張性水性緩衝液に溶解した溶液である。必要な場合、該薬剤は、可溶化剤及び注射部位の疼痛を軽減するためにリグノカインなどの局所麻酔薬も含んでいてよい。一般的に、成分は、例えば、活性物質の量を表示したアンプル又はサシェットなどの密封容器に入れた乾燥した凍結乾燥粉末又は水不含有濃縮物として別個に又は合わせて混合して単位剤形で供給する。該薬剤を注入により投与すべきである場合、滅菌医薬用水又は生理食塩水を含む注入瓶を用いて調剤することができる。該薬剤を注射により投与する場合、投与前に成分を混合することができるように、滅菌注射用水又は生理食塩水のアンプルを提供することができる。

本発明について、下記の実施例でさらに説明するが、それらの実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
（実施例）

ｍＡｂ％非フコシル化の２ＦＦ濃度及びＩＣＡ依存性
本試験では、工業的に関連するチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞系を用いた。細胞系は、ジヒドロ葉酸マイナス（ｄｈｆｒ－）ＣＨＯ宿主（Ｕｒｌａｕｂ Ｇ， Ｃｈａｓｉｎ ＬＡ， Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈａｍｓｔｅｒ ｃｅｌｌ ｍｕｔａｎｔｓ ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｉｎ ｄｉｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ７７：４２１６－４２２０， １９８０）由来であった。工業標準的特許取得既知組成培地を用い、振盪フラスコ中で細胞を培養及び維持した。振盪フラスコ培養条件は、規模拡大及び培養終了を通じて３７℃、５％ＣＯ_２であった。細胞の培養には、工業標準的特許取得基礎培地及び流加培地を用いた。培養物には、可変の供給体積を加えた。培養を通じて、グルコース濃度を維持した。

２－フルオロフコース（２ＦＦ）を、細胞培養プロセス開始時に、１０～１００ｍＭ原液で細胞培地に加えた。０～１００μＭの範囲の複数の濃度を、異なる抗体配列を産生する複数の細胞系について試験した。培養の全期間にわたり１日１回１ｍＬのサンプルを採取して、細胞培養プロセスをモニタリングし、自動細胞カウンターを用いて生存細胞密度（ＶＣＤ）を測定した。図１Ａに、調べた例示的細胞系についての代表的な増殖曲線を示している。培養終了後、細胞培養液を回収し、遠心し、タンパク質Ａクロマトグラフィー法を用いて精製した。ＨＩＬＩＣ（疎水性相互作用クロマトグラフィー）アッセイを用いて、タンパク質Ａ精製サンプルについてグリコシル化を測定することで、ｍＡｂ中の非フコシル化種％を比として定量した。

２ＦＦ濃度及び細胞密度を用いる調整
２ＦＦの消費率（積分細胞面積（ＩＣＡ）にわたる２ＦＦ濃度の比、生存細胞密度曲線下の面積）を、調べる濃度範囲で推算した。％非フコシル化を、［２ＦＦ濃度］／ＩＣＡに対してプロットして、複数の細胞系に関して非フコシル化についての単一飽和曲線を形成した（図１Ｂ参照）。この曲線は、複数の細胞系横断的な非フコシル化の予測を一元化するものである。この曲線をミカエリス・メンテン動力学式に当てはめて、その式における定数を決定した。

図１Ｂに示したように、超えたらさらなる２ＦＦが非フコシル化を増加させない飽和限界を観察した。この経験的モデルは、ＩＣＡが既知である場合に特定の細胞系についての非フコシル化の推算を可能とし、複数のＣＨＯ細胞系横断的に関係を一元化するものである。さらに、そのモデルは、非フコシル化を調整して完全飽和若しくは部分飽和を達成する手段を提供するものである。

ｍＡｂ％非フコシル化の飽和２ＦＦ添加時間及び飽和２ＦＦ添加時の抗体力価への依存性
本試験では、工業的に妥当なチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞系を用いた。細胞系は、ジヒドロ葉酸マイナス（ｄｈｆｒ－）ＣＨＯ宿主（Ｕｒｌａｕｂ Ｇ， Ｃｈａｓｉｎ ＬＡ， Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈａｍｓｔｅｒ ｃｅｌｌ ｍｕｔａｎｔｓ ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｉｎ ｄｉｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ７７：４２１６－４２２０， １９８０）由来であった。工業標準的特許取得既知組成培地を用い、振盪フラスコ中で細胞を培養及び維持した。振盪フラスコ培養条件は、規模拡大及び培養終了を通じて３７℃、５％ＣＯ_２であった。細胞の培養には、工業標準的特許取得基礎培地及び流加培地を用い、培養物には、可変の供給体積を加えた。培養を通じて、グルコース濃度を維持した。

２ＦＦ添加時間を用いる調整
非フコシル化に対するフコシル化阻害剤２ＦＦ添加のタイミングの効果を、異なる抗体を産生する二つの工業的に関連するＣＨＯ細胞系（細胞系Ａ及び細胞系Ｂ）を用いて調べた。図２Ａに示したように、前記二つの細胞系についての抗体産生曲線は異なる動力学を有する。２ＦＦを、１００ｍＭ原液から細胞培地に加えて、１００μＭの最終濃度に到達させた。添加は、培養プロセスの第０日及又は第３日に行った。培養終了後、細胞培養溶液を回収し、遠心し、タンパク質Ａクロマトグラフィー法を用いて精製した。実施例１に記載のＨＩＬＩＣアッセイを用いて、非フコシル化レベルについてサンプルを分析した。第３日までに抗体のかなりの割合を生じた細胞系Ａにおいて、部分非フコシル化が観察され（図２Ｂ）、それとは異なり、細胞系Ｂ（図２Ｃ）では、第３日までに最終日抗体力価のあまり多くの割合を生じなかった。この経験的モデルは、抗体産生曲線が既知である場合に特定の細胞系についての非フコシル化の推算を可能とするものである。

本発明は、本明細書に記載の具体的な実施形態により範囲が限定されるものではない。本明細書に記載のものに加えて、本発明の各種改変が、前記の説明及び添付図面から当業者には明らかになるであろう。そのような改変は、添付の特許請求の範囲に包含されるものである。文脈から別断に明らかでない限り、本発明のあらゆる段階、要素、実施形態、特徴又は態様は、任意の他のものと組み合わせて用いることができる。本願で言及された全ての特許出願、並びに科学刊行物、受託番号などは、あたかも個別に示されたかのように同程度まで、あらゆる点に関して全体が参照により本明細書に組み込まれる。

Claims (42)

1. 抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルを制御する方法であって、
   （ａ）所定量のフコシル化阻害剤（Ａ_ｐ）の存在下に培地中で宿主細胞を培養すること［当該宿主細胞は、糖鎖の還元末端のＮ－アセチルグルコサミンを介してＦｃドメインに結合した少なくとも一つの複合型Ｎ－グリコシド結合型糖鎖を有するＦｃドメインを有する抗体又は抗体誘導体を発現する。］；
   （ｂ）抗体又は抗体誘導体を単離することを含み、
   Ａ_ｐは、（ｂ）の単離された抗体又は抗体誘導体の非フコシル化のレベルが標的レベルの非フコシル化からの最大偏差を超えない非フコシル化レベルを有するように事前に決定される、方法。
2. 前記抗体又は抗体誘導体が培養完了時に単離される、請求項１に記載の方法。
3. Ａ_ｐを決定することをさらに含む、請求項１又は２に記載の方法。
4. Ａ_ｐが、入力として複数の異なるフコシル化阻害剤量及び培養物中の宿主細胞の細胞増殖パラメータを用い、出力として単離された抗体又は抗体誘導体のフコシル化レベルを用いて生成された予測モデルに基づいて決定される、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
5. 前記予測モデルが、入力として前記細胞増殖パラメータに対して正規化されたフコシル化阻害剤量を用いて生成される、請求項４に記載の方法。
6. 前記細胞増殖パラメータが積分細胞面積（ＩＣＡ）である、請求項４又は５に記載の方法。
7. 前記予測モデルを生成することをさらに含む、請求項４～６のいずれか１項に記載の方法。
8. 前記フコシル化阻害剤がフコース類縁体である、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
9. 前記フコース類縁体が、２－フルオロフコース（２ＦＦ）、式Ｉの化合物、又は式ＩＩの化合物である、請求項８に記載の方法。
10. 前記フコース類縁体が２ＦＦである、請求項９に記載の方法。
11. 非フコシル化の標的レベルが、
    （ａ）約１００％～約９０％；
    （ｂ）約９０％～約８０％；
    （ｃ）約８０％～約７０％；
    （ｄ）約７０％～約６０％；
    （ｅ）約６０％～約５０％；
    （ｆ）約５０％～約４０％；
    （ｇ）約４０％～約３０％；
    （ｈ）約３０％～約２０％；
    （ｉ）約２０％～約１０％；又は
    （ｊ）約１０％～約０％
    である、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。
12. 非フコシル化の標的レベルが、
    （ａ）約８０％より高く；
    （ｂ）約６０％より高く；
    （ｃ）約４０％より高く；
    （ｄ）約２０％より高く；
    （ｅ）約１０％より高く；又は
    （ｆ）約５％より高い、
    請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。
13. 非フコシル化の標的レベルからの最大偏差が最大１０％である、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。
14. 非フコシル化の標的レベルからの最大偏差が最大５％である、請求項１３に記載の方法。
15. 抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルを制御する方法であって、
    （ａ）宿主細胞を培地で培養すること［当該宿主細胞は、糖鎖の還元末端のＮ－アセチルグルコサミンを介してＦｃドメインに結合した少なくとも一つの複合型Ｎ－グリコシド結合型糖鎖を有するＦｃドメインを有する抗体又は抗体誘導体を発現する。］；
    （ｂ）培養中の所定時間（Ｔｐ）で培地に飽和量のフコシル化阻害剤を加えること［前記飽和量のフコシル化阻害剤により、培養ｄ０で加えた時に少なくとも約９５％非フコシル化を生じる。］；及び
    （ｃ）前記抗体又は抗体誘導体を単離すること
    を含み、
    Ｔｐが、（ｃ）の単離された抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルが非フコシル化の標的レベルからの最大偏差を超えない非フコシル化レベルを有するように予め決定される、方法。
16. 前記抗体又は抗体誘導体を培養完了時に単離する、請求項１５に記載の方法。
17. Ｔｐを決定することをさらに含む、請求項１５又は１６に記載の方法。
18. Ｔｐが、入力として培養における複数の異なる飽和フコシル化阻害剤添加時点での培養物中の抗体又は抗体誘導体の力価を用い、出力として単離された抗体又は抗体誘導体の非フコシル化レベルを用いて生成される予測モデルに基づいて決定される、請求項１５～１７のいずれか１項に記載の方法。
19. 前記予測モデルを生成することをさらに含む、請求項１８に記載の方法。
20. 前記フコシル化阻害剤がフコース類縁体である、請求項１５～１９のいずれか１項に記載の方法。
21. 前記フコース類縁体が２ＦＦ、式Ｉの化合物、又は式ＩＩの化合物である、請求項２０に記載の方法。
22. 前記フコース類縁体が２ＦＦである、請求項２１に記載の方法。
23. 非フコシル化の標的レベルが、
    （ａ）約１００％～約９０％；
    （ｂ）約９０％～約８０％；
    （ｃ）約８０％～約７０％；
    （ｄ）約７０％～約６０％；
    （ｅ）約６０％～約５０％；
    （ｆ）約５０％～約４０％；
    （ｇ）約４０％～約３０％；
    （ｈ）約３０％～約２０％；
    （ｉ）約２０％～約１０％；又は
    （ｊ）約１０％～約０％
    である、請求項１５～２２のいずれか１項に記載の方法。
24. 非フコシル化の標的レベルが、
    （ａ）約８０％より高く；
    （ｂ）約６０％より高く；
    （ｃ）約４０％より高く；
    （ｄ）約２０％より高く；
    （ｅ）約１０％より高く；又は
    （ｆ）約５％より高い、
    請求項１５～２２のいずれか１項に記載の方法。
25. 非フコシル化の標的レベルからの最大偏差が最大１０％である、請求項１５～２４のいずれか１項に記載の方法。
26. 非フコシル化の標的レベルからの最大偏差が最大５％である、請求項２５に記載の方法。
27. 前記宿主細胞が組換え宿主細胞である、請求項１～２６のいずれか１項に記載の方法。
28. 前記宿主細胞がチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項２７に記載の方法。
29. 前記宿主細胞がハイブリドーマである、請求項１～２６のいずれか１項に記載の方法。
30. 前記宿主細胞が流加培養で増殖される、請求項１～２９のいずれか１項に記載の方法。
31. 前記宿主細胞が連続供給培養で増殖される、請求項１～２９のいずれか１項に記載の方法。
32. 前記培地が少なくとも１００リットルの体積を有する、請求項１～３１のいずれか１項に記載の方法。
33. 前記培地が少なくとも５００リットルの体積を有する、請求項３２に記載の方法。
34. 前記培地が動物タンパク質不含培地である、請求項１～３３のいずれか１項に記載の方法。
35. 前記抗体又は抗体誘導体の単離が前記細胞及び／又は前記培地から抗体又は抗体誘導体を単離することを含む、請求項１～３４のいずれか１項に記載の方法。
36. 前記抗体又は抗体誘導体の単離がタンパク質Ａカラムを用いることを含む、請求項３５に記載の方法。
37. 塩基抗体又は抗体誘導体の単離がカチオン若しくはアニオン交換カラム又は疎水性相互作用カラムを用いることを含む、請求項３５に記載の方法。
38. 前記抗体又は抗体誘導体がインタクト抗体である、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。
39. 前記インタクト抗体がＩｇＧ１抗体である、請求項３８に記載の方法。
40. 前記抗体又は抗体誘導体が一本鎖抗体である、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。
41. 前記抗体又は抗体誘導体が、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、及びＦｃ領域を含む、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。
42. 前記抗体又は抗体誘導体が非免疫グロブリンタンパク質の抗体Ｆｃ領域及びリガンド結合ドメインを含む抗体誘導体である、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。

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