JP2022514177A - オリゴ糖調製物を定量する方法 - Google Patents

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Abstract

本開示は、動物飼料などの栄養組成物中のオリゴ糖調製物の検出及び／又は定量のための選択的分析方法に関する。また、オリゴ糖調製物を含む栄養組成物を製造する方法も開示され、オリゴ糖調製物の存在又は濃度を選択的に検出又は決定することができる。【選択図】なし

Description

発明の詳細な説明
［関連出願の相互参照］
[0001]本出願は、２０１８年１１月８日に出願された米国仮特許出願第６２／７５７，２３１号明細書の利益を主張し、その開示内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
［背景］
[0002]オリゴ糖調製物（一般に、単糖、オリゴ糖、多糖、機能性オリゴ糖又はそれらの組み合わせを含み得る）は、動物飼料などの栄養組成物中に添加剤として使用されている。オリゴ糖調製物の添加は、動物の健康及び性能を改善することができる。しかし、栄養組成物は、通常、オリゴ糖調製物と構造的類似性を有し得る他の炭水化物源を含有するため、栄養組成物中のオリゴ糖調製物添加剤を検出又は定量することは困難である。その結果、栄養組成物中のオリゴ糖調製物を選択的に検出又は定量する方法が求められる。
［概要］
[0003]本明細書には、オリゴ糖調製物又は栄養組成物中にオリゴ糖調製物を含む組成物の検出及び／又は定量のための単純、選択的、且つ高感度の分析方法が開示される。また、オリゴ糖調製物を含む栄養組成物を製造する方法も開示され、オリゴ糖調製物の存在又は濃度を選択的に、且つ高感度で検出又は決定することができる。
[0004]一態様では、栄養組成物中の合成オリゴ糖調製物を相関させる方法が本明細書に記載され、ここで、栄養組成物は、合成オリゴ糖調製物及び天然に存在するオリゴ糖組成物を含み、この方法は、（ａ）栄養組成物のサンプルを提供するステップ、（ｂ）栄養組成物のサンプル中のオリゴ糖の少なくとも１部分のシグナルを検出するステップ、及び（ｃ）栄養組成物中の合成オリゴ糖調製物の濃度を相関させるステップを含み、シグナルは、（ｉ）１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すか、又は（ｉｉ）オリゴ糖のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合、β－（１，６）グリコシド結合、α－（１，１）－αグリコシド結合、α－（１，１）－βグリコシド結合、β－（１，１）－αグリコシド結合又はβ－（１，１）－βグリコシド結合と関連している。一態様では、栄養組成物の品質管理を実施する方法が本明細書に記載され、これは、（ａ）栄養組成物のバッチを用意するステップであって、栄養組成物は、合成オリゴ糖調製物及び天然に存在するオリゴ糖組成物を含む、ステップ、（ｂ）バッチから栄養組成物のサンプルを取得するステップ、（ｃ）分析装置を用いて、栄養組成物のサンプル中のオリゴ糖の少なくとも１部分のシグナルを検出するステップ、及び（ｄ）栄養組成物のバッチを合格又は不合格にするステップを含み、シグナルは、（ｉ）１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すか、又は（ｉｉ）オリゴ糖のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合、β－（１，６）グリコシド結合、α－（１，１）－αグリコシド結合、α－（１，１）－βグリコシド結合、β－（１，１）－αグリコシド結合又はβ－（１，１）－βグリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、シグナルは、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示す。いくつかの実施形態では、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖は、２の重合度（ＤＰ２）を有する。一態様では、栄養組成物中の品質管理を実施する方法が本明細書に記載され、これは、（ａ）栄養組成物のサンプルを用意するステップであって、栄養組成物は、天然に存在するオリゴ糖組成物を含む、ステップ、及び（ｂ）分析装置を用いて、栄養組成物のサンプル中のオリゴ糖の少なくとも１部分のシグナルを検出するステップを含み、シグナルは、２の重合度（ＤＰ２）を有する１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示す。いくつかの実施形態では、栄養組成物は、合成オリゴ糖調製物を含む。いくつかの実施形態では、本方法は、栄養組成物中の合成オリゴ糖調製物の濃度を相関させるステップを含む。いくつかの実施形態では、シグナルは、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、質量分析（ＭＳ）、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、フィールドフローフラクショネーション（ＦＦＦ）、非対称フロー式フィールドフローフラクショネーション（Ａ４Ｆ）、分取クロマトグラフィーによる画分の重量決定又はこれらの任意の組み合わせにより決定される。いくつかの実施形態では、栄養組成物は、基礎栄養組成物を含む。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、天然に存在するオリゴ糖組成物を含む。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、検出可能なレベルのアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含まない。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を実質的に含有しない。いくつかの実施形態では、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖は、合成オリゴ糖調製物に由来する。いくつかの実施形態では、シグナルは、１の重合度（ＤＰ１）を有するアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、シグナルは、レボグルコサン、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノース又はそれらの組み合わせに帰属する。いくつかの実施形態では、シグナルは、３の重合度（ＤＰ３）を有するアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、シグナルは、ＤＰ１、ＤＰ２若しくはＤＰ３アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖又はそれらの組み合わせに帰属する。いくつかの実施形態では、シグナルは、ＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、シグナルは、アンヒドロ－セロビオースに帰属する。いくつかの実施形態では、検出ステップは、１つ以上のオリゴ糖の重合度（ＤＰ）画分の重量決定を含む。いくつかの実施形態では、検出ステップは、サンプルからのアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分の重量決定を含む。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分は、１、２又は３の重合度を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖の１つ以上のＤＰ画分又はアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分は、分取クロマトグラフィーにより単離される。いくつかの実施形態では、シグナルは、少なくとも一部が、マトリックス支援レーザー脱離／イオン化質量分析（ＭＡＬＤＩ－ＭＳ）により検出される。いくつかの実施形態では、シグナルは、少なくとも一部が、液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）／ＭＳにより検出される。いくつかの実施形態では、シグナルは、少なくとも一部が、ＧＣ水素炎イオン化検出器（ＧＣ－ＦＩＤ）又はＧＣ－ＭＳにより検出される。いくつかの実施形態では、シグナルは、少なくとも一部が、ＮＭＲ分光法により検出される。いくつかの実施形態では、シグナルは、オリゴ糖のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合又はβ－（１，６）グリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、検出ステップは、ＮＭＲ分光を取得することを含む。いくつかの実施形態では、シグナルは、α－（１，２）グリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、シグナルは、α－（１，３）グリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、シグナルは、α－（１，６）グリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、シグナルは、β－（１，２）グリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、シグナルは、β－（１，３）グリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、シグナルは、β－（１，４）グリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、シグナルは、β－（１，６）グリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、検出ステップは、シグナルの存在又は非存在を決定することを含む。いくつかの実施形態では、検出ステップは、ＤＰ１若しくはＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖又はその両方の存在又は非存在を決定することを含む。いくつかの実施形態では、検出ステップは、シグナルのレベルを決定すること又は相関させることを含む。いくつかの実施形態では、検出ステップは、栄養組成物中のＤＰ１アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖のレベルを相関させることを含む。いくつかの実施形態では、検出ステップは、栄養組成物中のＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖のレベルを相関させることを含む。
[0005]一態様では、合成オリゴ糖調製物及び天然に存在するオリゴ糖組成物を含む栄養組成物の品質管理を実施する方法が本明細書に記載され、この方法は、（ａ）栄養組成物の第１サンプルを用意するステップ、（ｂ）栄養組成物の第２サンプルを用意するステップ、（ｃ）第１サンプル中のオリゴ糖の少なくとも１部分の第１シグナルを検出するステップ、（ｄ）第２サンプル中のオリゴ糖の少なくとも１部分の第２シグナルを検出するステップ、及び（ｅ）第１シグナルと第２シグナルを比較するステップを含み、第１シグナル及び第２シグナルは、独立して、（ｉ）１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すか、又は（ｉｉ）オリゴ糖のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合、β－（１，６）グリコシド結合、α－（１，１）－αグリコシド結合、α－（１，１）－βグリコシド結合、β－（１，１）－αグリコシド結合又はβ－（１，１）－βグリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、本方法は、第１サンプルの栄養組成物中の合成オリゴ糖調製物の濃度、第２サンプルの栄養組成物中の合成オリゴ糖調製物の濃度又はその両方を相関させるステップを含む。いくつかの実施形態では、第１シグナル及び第２シグナルは、各々独立して、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示す。いくつかの実施形態では、第１シグナル及び第２シグナルは、同じ種のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、第１シグナル及び第２シグナルは、異なる種のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、第１サンプル及び第２サンプルは、栄養組成物の異なるバッチから採取される。いくつかの実施形態では、第１シグナル及び第２シグナルは、各々独立して、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、質量分析（ＭＳ）、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、フィールドフローフラクショネーション（ＦＦＦ）、非対称フロー式フィールドフローフラクショネーション（Ａ４Ｆ）、分取クロマトグラフィーによる画分の重量決定法又はこれらの組み合わせにより決定される。いくつかの実施形態では、栄養組成物は、基礎栄養組成物を含む。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、天然に存在するオリゴ糖組成物を含む。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、検出可能なレベルのアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含まない。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を実質的に含有しない。いくつかの実施形態では、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖は、合成オリゴ糖調製物に由来する。いくつかの実施形態では、第１シグナル、第２シグナル又はその両方は、独立して、１の重合度（ＤＰ１）を有するアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、第１シグナル、第２シグナル又はその両方は、独立して、レボグルコサン、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノース又はそれらの組み合わせに帰属する。いくつかの実施形態では、第１シグナル、第２シグナル又はその両方は、独立して、２の重合度（ＤＰ２）を有するアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、シグナルは、アンヒドロ－セロビオースに帰属する。いくつかの実施形態では、第１シグナル、第２シグナル又はその両方は、独立して、３の重合度（ＤＰ３）を有するアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、第１シグナル、第２シグナル又はその両方は、独立して、ＤＰ１、ＤＰ２若しくはＤＰ３アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖又はそれらの組み合わせに帰属する。いくつかの実施形態では、検出ステップは、サンプル又は第２サンプルからの１つ以上の重合度（ＤＰ）画分の重量決定を含む。いくつかの実施形態では、検出ステップは、第１サンプル又は第２サンプルからのアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分の重量決定を含む。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分は、１、２又は３の重合度を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖の１つ以上のＤＰ画分又はアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分は、分取クロマトグラフィーにより単離される。いくつかの実施形態では、第１シグナル、第２シグナル又はその両方は、独立して、少なくとも一部が、マトリックス支援レーザー脱離／イオン化質量分析（ＭＡＬＤＩ－ＭＳ）により検出される。いくつかの実施形態では、第１シグナル、第２シグナル又はその両方は、独立して、少なくとも一部が、液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）／ＭＳにより検出される。いくつかの実施形態では、第１シグナル、第２シグナル又はその両方は、独立して、少なくとも一部が、ＧＣ水素炎イオン化検出器（ＧＣ－ＦＩＤ）又はＧＣ－ＭＳにより検出される。いくつかの実施形態では、第１シグナル、第２シグナル又はその両方は、独立して、少なくとも一部が、ＮＭＲ分光法により検出される。いくつかの実施形態では、第１シグナル、第２シグナル又はその両方は、独立して、オリゴ糖のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合又はβ－（１，６）グリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、検出ステップは、ＮＭＲ分光を取得することを含む。いくつかの実施形態では、第１シグナル、第２シグナル又はその両方は、α－（１，２）グリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、第１シグナル、第２シグナル又はその両方は、α－（１，３）グリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、第１シグナル、第２シグナル又はその両方は、α－（１，６）グリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、第１シグナル、第２シグナル又はその両方は、β－（１，２）グリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、第１シグナル、第２シグナル又はその両方は、β－（１，３）グリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、第１シグナル、第２シグナル又はその両方は、β－（１，４）グリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、第１シグナル、第２シグナル又はその両方は、β－（１，６）グリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、第１シグナルは、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示し、且つ第２シグナルは、オリゴ糖のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合、β－（１，６）グリコシド結合、α－（１，１）－αグリコシド結合、α－（１，１）－βグリコシド結合、β－（１，１）－αグリコシド結合又はβ－（１，１）－βグリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、検出ステップは、第１シグナル及び第２シグナルの存在又は非存在を決定することを含む。いくつかの実施形態では、検出ステップは、ＤＰ１若しくはＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖又はその両方の存在又は非存在を決定することを含む。いくつかの実施形態では、検出ステップは、第１シグナル及び第２シグナルのレベルを決定すること又は相関させることを含む。いくつかの実施形態では、検出ステップは、栄養組成物中のＤＰ１アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖のレベルを相関させることを含む。いくつかの実施形態では、検出ステップは、栄養組成物中のＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖のレベルを相関させることを含む。
[0006]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、栄養組成物のバッチを合格又は不合格にするステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、検出後に、栄養組成物中の合成オリゴ糖調製物のレベルを調節するステップを含む。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、複数のオリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、デンプン又は植物繊維を含む。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物中のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合又はβ－（１，４）グリコシド結合は、合成オリゴ糖調製物中の同じグリコシド結合のレベルより少なくとも１０％低い。いくつかの実施形態では、本方法は、検出ステップの前に誘導体化ステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、栄養組成物のサンプルからオリゴ糖を抽出するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、抽出されたオリゴ糖を濾過又は清澄化するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、抽出されたオリゴ糖を濃縮するステップを含む。いくつかの実施形態では、濃縮ステップは、凍結乾燥を含む。いくつかの実施形態では、濃縮ステップは、ナノ濾過を含む。いくつかの実施形態では、本方法は、抽出又は濃縮されたオリゴ糖に内部標準を導入するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、抽出又は濃縮されたオリゴ糖を還元するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、抽出又は濃縮されたオリゴ糖を１種以上の加水分解酵素で消化するステップを含む。いくつかの実施形態では、１種以上の加水分解酵素は、カルボヒドラターゼ、プロテアーゼ、リパーゼ又はそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１種以上の加水分解酵素は、α－アミラーゼ、アミログリコシダーゼ、インベルターゼ、α－ガラクトシダーゼ又はそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１種以上の加水分解酵素は、１種以上の天然に存在するグリコシド結合を切断する。いくつかの実施形態では、本方法は、消化されていないオリゴ糖を単離するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、抽出、濃縮、消化又は還元されたオリゴ糖を分離するステップを含む。いくつかの実施形態では、クロマトグラフィーによりオリゴ糖を分離する。いくつかの実施形態では、本方法は、分離されたオリゴ糖を単離するステップを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖は、その重合度別に分離又は単離される。いくつかの実施形態では、本方法は、１、２、３、４又は５の重合度を有するオリゴ糖を単離又は分離するステップを含む。いくつかの実施形態では、ＤＰ１オリゴ糖を単離又は分離する。いくつかの実施形態では、ＤＰ２オリゴ糖を単離又は分離する。いくつかの実施形態では、ＤＰ３オリゴ糖を単離又は分離する。いくつかの実施形態では、本方法は、ＤＰ１アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分をサンプルから単離するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分をサンプルから単離するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＤＰ３アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分をサンプルから単離するステップを含む。いくつかの実施形態では、単離又は分離されたオリゴ糖を定量する。いくつかの実施形態では、定量されるオリゴ糖の大部分は、合成オリゴ糖調製物に由来する。いくつかの実施形態では、定量されるオリゴ糖の５０重量％超、６０重量％超、７０重量％超、８０重量％超、９０重量％超、９５重量％超又は９９重量％超が、合成オリゴ糖調製物に由来する。
[0007]一態様では、栄養組成物中の合成オリゴ糖調製物を相関させる方法が本明細書に記載され、ここで、栄養組成物は、（ｉ）アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む合成オリゴ糖調製物と、（ｉｉ）天然に存在するオリゴ糖組成物とを含み、上記方法は、（ａ）栄養組成物のサンプルを用意するステップ、（ｂ）１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖をサンプルから単離するステップ、（ｃ）１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すシグナルを検出するステップであって、（ｉ）サンプルからのアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分の重量決定、又は（ｉｉ）マトリックス支援レーザー脱離／イオン化質量分析（ＭＡＬＤＩ－ＭＳ）、液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）／ＭＳ若しくはガスクロマトグラフィー（ＧＣ）－ＭＳによる、サンプルからのアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分の分析を含む、ステップ、及び（ｄ）栄養組成物中の合成オリゴ糖調製物の濃度を相関させるステップを含む。いくつかの実施形態では、検出ステップは、サンプルからの１の重合度（ＤＰ１）を有するアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分の重量決定を含む。いくつかの実施形態では、検出ステップは、サンプルからの２の重合度（ＤＰ２）を有するアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分の重量決定を含む。いくつかの実施形態では、検出ステップは、サンプルからのＤＰ１又はＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分をＭＡＬＤＩ－ＭＳにより分析することを含む。いくつかの実施形態では、検出ステップは、サンプルからのＤＰ１又はＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分をＬＣ－ＭＳ／ＭＳにより分析することを含む。いくつかの実施形態では、検出ステップは、サンプルからのＤＰ１又はＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分をＧＣ／ＭＳにより分析することを含む。いくつかの実施形態では、検出ステップは、サンプルからのＤＰ３アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分を分析することを含む。いくつかの実施形態では、単離ステップは、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を分取クロマトグラフィーにより分離するステップを含む。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、栄養組成物中において、約１～約５０００ｐｐｍ、約１～約１０００ｐｐｍ、約１～約５００ｐｐｍ、約１０～約５０００ｐｐｍ、約１０～約２０００ｐｐｍ、約１０～約１０００ｐｐｍ、約１０～約５００ｐｐｍ、約１０～約２５０ｐｐｍ、約１０～約１００ｐｐｍ、約５０～約５０００ｐｐｍ、約５０～約２０００ｐｐｍ、約５０～約１０００ｐｐｍ、約５０～約５００ｐｐｍ、約５０～約２５０ｐｐｍ又は約５０～約１００ｐｐｍの濃度で存在する。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、栄養組成物中において、１０ｐｐｍ超、５０ｐｐｍ超、１００ｐｐｍ超、２００ｐｐｍ超、３００ｐｐｍ超、４００ｐｐｍ超、５００ｐｐｍ超、６００ｐｐｍ超、１０００ｐｐｍ超又は２０００ｐｐｍ超の濃度で存在する。いくつかの実施形態では、栄養組成物は、動物飼料組成物である。
[0008]一態様では、栄養組成物を製造する方法が本明細書に記載され、これは、（ａ）基礎栄養組成物を、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む合成オリゴ糖調製物と合わせるステップ、及び（ｂ）本明細書に記載されるように品質管理方法（例えば、栄養組成物中の合成オリゴ糖調製物を相関させる方法）を実施するステップを含む。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、１～ｎから選択される異なる重合度をそれぞれ有する少なくともｎ画分のオリゴ糖（ＤＰ１～ＤＰｎ画分）を含み、ｎは、３以上の整数であり；ＤＰ１及びＤＰ２画分は、各々独立して、質量分析により測定される相対的存在量で約０．５％～約１５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、１～ｎから選択される異なる重合度をそれぞれ有する少なくともｎ画分のオリゴ糖（ＤＰ１～ＤＰｎ画分）を含み、ｎは、２以上の整数であり；ＤＰ１及びＤＰ２画分は、各々独立して、質量分析により測定される相対的存在量で約０．１％～約１５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、相対的存在量は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳにより決定される。いくつかの実施形態では、ｎ個の画分の各々におけるオリゴ糖の相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。
[0009]一態様では、本明細書には、栄養組成物中のオリゴ糖調製物を定量する方法が提供され、これは、（ａ）栄養組成物のサンプル中のシグナルのレベルを決定するステップ、及び（ｂ）シグナルのレベルに基づいて栄養組成物中のオリゴ糖調製物の濃度を計算するステップを含み、シグナルは、（ｉ）１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すか、（ｉｉ）オリゴ糖の重合度（ＤＰ）分布と関連しているか、又は（ｉｉｉ）オリゴ糖のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合、β－（１，６）グリコシド結合、α－（１，１）－αグリコシド結合、α－（１，１）－βグリコシド結合、β－（１，１）－αグリコシド結合又はβ－（１，１）－βグリコシド結合と関連している。一態様では、栄養組成物の品質管理を実施する方法が本明細書に提供され、これは、（ａ）分析装置を用いて、栄養組成物のサンプル中のシグナルを検出するステップ、及び（ｂ）シグナルの存在又は非存在に基づいて、栄養組成物のバッチを合格又は不合格にするステップを含み、その際、シグナルは、（ｉ）１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すか、（ｉｉ）オリゴ糖の重合度（ＤＰ）分布と関連しているか、又は（ｉｉｉ）オリゴ糖のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合、β－（１，６）グリコシド結合、α－（１，１）－αグリコシド結合、α－（１，１）－βグリコシド結合、β－（１，１）－αグリコシド結合又はβ－（１，１）－βグリコシド結合と関連している。別の態様では、栄養組成物の品質管理を実施する方法が本明細書に提供され、これは、（ａ）分析装置を用いて、栄養組成物の第１サンプル中の第１シグナル及び栄養組成物の第２サンプル中の第２シグナルの存在若しくは非存在を検出するステップ、及び（ｂ）第１シグナルと第２シグナルを比較するステップを含み、第１シグナル及び第２シグナルは、（ｉ）１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すか、（ｉｉ）オリゴ糖の重合度（ＤＰ）分布と関連しているか、又は（ｉｉｉ）オリゴ糖のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合、β－（１，６）グリコシド結合、α－（１，１）－αグリコシド結合、α－（１，１）－βグリコシド結合、β－（１，１）－αグリコシド結合又はβ－（１，１）－βグリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、シグナル、シグナルのレベル、第１シグナル及び／又は第２シグナルは、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、質量分析（ＭＳ）、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、フィールドフローフラクショネーション（ＦＦＦ）、非対称フロー式フィールドフローフラクショネーション（Ａ４Ｆ）又はこれらの組み合わせにより決定若しくは検出される。いくつかの実施形態では、栄養組成物は、基礎栄養組成物を含む。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び／又は第２シグナルは、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示す。いくつかの実施形態では、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖は、オリゴ糖調製物に由来する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、ＤＰ１画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、レボグルコサン、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノース又はそれらの組み合わせに帰属する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、ＤＰ２画分中の１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、セロビオサンに帰属する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、ＤＰ３画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、第１シグナル及び第２シグナルは、同じ種のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、第１シグナル及び第２シグナルは、異なる種のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、シグナル、シグナルのレベル、第１シグナル及び／又は第２シグナルは、マトリックス支援レーザー脱離／イオン化質量分析（ＭＡＬＤＩ－ＭＳ）により決定若しくは検出される。いくつかの実施形態では、シグナル、シグナルのレベル、第１シグナル及び／又は第２シグナルは、液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）／ＭＳにより決定若しくは検出される。いくつかの実施形態では、シグナル、シグナルのレベル、第１シグナル及び／又は第２シグナルは、ＧＣ水素炎イオン化検出器（ＧＣ－ＦＩＤ）又はＧＣ－ＭＳにより決定若しくは検出される。いくつかの実施形態では、シグナル、シグナルのレベル、第１シグナル及び／又は第２シグナルは、ＮＭＲにより検出される。いくつかの実施形態では、誘導体化ステップは、検出の前に実施される。いくつかの実施形態では、シグナル、シグナルのレベル、第１シグナル及び／又は第２シグナルは、分取クロマトグラフィーから単離及び／又は精製された画分の重量によって決定される。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、検出可能なレベルのアンヒドロサブユニットが欠如している。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、アンヒドロサブユニットを実質的に含有しない。特定の実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、オリゴ糖のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合、β－（１，６）グリコシド結合、α－（１，１）－αグリコシド結合、α－（１，１）－βグリコシド結合、β－（１，１）－αグリコシド結合又はβ－（１，１）－βグリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルは、ＮＭＲにより検出若しくは決定される。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、α－（１，２）グリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、α－（１，３）グリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、α－（１，６）グリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、β－（１，２）グリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、β－（１，３）グリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、β－（１，４）グリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、β－（１，６）グリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、α－（１，１）－αグリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、α－（１，１）－βグリコシド結合又はβ－（１，１）－αグリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、β－（１，１）－βグリコシド結合と関連している。特定の実施形態では、シグナル、第１シグナル及び／又は第２シグナルは、オリゴ糖のＤＰ分布と関連している。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、ＤＰ２画分中のオリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、本方法は、栄養組成物のバッチを合格又は不合格にするステップを更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、決定又は検出後にオリゴ糖調製物のレベルを調節するステップを更に含む。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、複数のオリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、デンプン及び／又は植物繊維を含む。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物中のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合又はβ－（１，４）グリコシド結合のレベルは、オリゴ糖調製物中の同じグリコシド結合のレベルより少なくとも１０％低い。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物中のα－（１，１）－αグリコシド結合、α－（１，１）－βグリコシド結合、β－（１，１）－αグリコシド結合又はβ－（１，１）－βグリコシド結合のレベルは、オリゴ糖調製物中の同じグリコシド結合のレベルより少なくとも１０％低い。いくつかの実施形態では、本方法は、栄養組成物のサンプルからオリゴ糖を抽出するステップを更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、抽出されたオリゴ糖を濾過又は清澄化するステップを更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、抽出されたオリゴ糖を濃縮するステップを更に含む。いくつかの実施形態では、抽出されたオリゴ糖を濃縮するステップは、凍結乾燥を含む。いくつかの実施形態では、本方法は、抽出又は濃縮されたオリゴ糖に内部標準を導入するステップを更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、抽出又は濃縮されたオリゴ糖を還元するステップを更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、抽出又は濃縮されたオリゴ糖を１種以上の加水分解酵素で消化するステップを更に含む。いくつかの実施形態では、１種以上の加水分解酵素は、カルボヒドラターゼ、プロテアーゼ、リパーゼ又はそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１種以上の加水分解酵素は、α－アミラーゼ、アミログリコシダーゼ、インベルターゼ、α－ガラクトシダーゼ又はそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１種以上の加水分解酵素は、１種以上の天然に存在するグリコシド結合を切断する。いくつかの実施形態では、本方法は、消化されていないオリゴ糖を単離するステップを更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、抽出、濃縮、消化又は還元されたオリゴ糖を分離するステップを更に含む。いくつかの実施形態では、クロマトグラフィーによりオリゴ糖を分離する。いくつかの実施形態では、本方法は、分離されたオリゴ糖を単離するステップを更に含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖は、その重合度別に分離又は単離される。いくつかの実施形態では、本方法は、１、２、３、４又は５の重合度を有するオリゴ糖を単離又は分離するステップを含む。いくつかの実施形態では、ＤＰ１画分中のオリゴ糖を単離又は分離する。いくつかの実施形態では、ＤＰ２画分中のオリゴ糖を単離又は分離する。いくつかの実施形態では、ＤＰ３画分中のオリゴ糖を単離又は分離する。いくつかの実施形態では、ＤＰ４画分中のオリゴ糖を単離又は分離する。いくつかの実施形態では、ＤＰ５画分中のオリゴ糖を単離又は分離する。いくつかの実施形態では、単離又は分離されたオリゴ糖を定量する。いくつかの実施形態では、単離又は分離されたオリゴ糖中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を定量する。いくつかの実施形態では、定量されるオリゴ糖の大部

分は、オリゴ糖調製物に由来する。いくつかの実施形態では、定量されるオリゴ糖の５０、６０、７０、８０、９０、９５又は９９重量％超が、オリゴ糖調製物に由来する。いくつかの実施形態では、本方法は、オリゴ糖のグリコシド結合（ここで、グリコシド結合は、α－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合、β－（１，６）グリコシド結合、α－（１，１）－αグリコシド結合、α－（１，１）－βグリコシド結合、β－（１，１）－αグリコシド結合又はβ－（１，１）－βグリコシド結合である）をＮＭＲにより分析し、これによって、対応するグリコシド結合に関連するシグナル、シグナルのレベル、第１シグナル又は第２シグナルを決定又は検出するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を質量分析により分析し、これによって、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すシグナル、シグナルのレベル、第１シグナル又は第２シグナルを決定又は検出するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖をＨＰＬＣにより分析し、これによって、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すシグナル、シグナルのレベル、第１シグナル又は第２シグナルを決定又は検出するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖をＦＦＦ若しくはＡ４Ｆにより分析し、これによって、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すシグナル、シグナルのレベル、第１シグナル又は第２シグナルを決定又は検出するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、オリゴ糖のＤＰ分布を、ＳＥＣ、ＧＣ若しくはＨＰＬＣにより分析し、これによって、ＤＰ分布に関連するシグナル、シグナルのレベル、第１シグナル又は第２シグナルを決定又は検出するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＤＰ２画分中のオリゴ糖を、ＳＥＣ、ＧＣ若しくはＨＰＬＣにより定量し、これによって、ＤＰ分布に関連するシグナル、シグナルのレベル、第１シグナル又は第２シグナルを決定又は検出するステップを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、栄養組成物に対して、１～５０００ｐｐｍ、１～１０００ｐｐｍ、１～５００ｐｐｍ、１０～５０００ｐｐｍ、１０～２０００ｐｐｍ、１０～１０００ｐｐｍ、１０～５００ｐｐｍ、１０～２５０ｐｐｍ、１０～１００ｐｐｍ、５０～５０００ｐｐｍ、５０～２０００ｐｐｍ、５０～１０００ｐｐｍ、５０～５００ｐｐｍ、５０～２５０ｐｐｍ又は５０～１００ｐｐｍである。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、栄養組成物に対して、１０ｐｐｍ超、５０ｐｐｍ超、１００ｐｐｍ超、２００ｐｐｍ超、３００ｐｐｍ超、４００ｐｐｍ超、５００ｐｐｍ超、６００ｐｐｍ超、１０００ｐｐｍ超又は２０００ｐｐｍ超である。いくつかの実施形態では、栄養組成物は、動物飼料組成物である。
[0010]一態様では、栄養組成物を製造する方法が本明細書に記載され、これは、（ａ）アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む合成オリゴ糖調製物を基礎栄養組成物と合わせるステップ、及び（ｂ）本明細書に記載されるように品質管理工程を実施するステップを含む。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、１～ｎから選択される異なる重合度をそれぞれ有する少なくともｎ画分のオリゴ糖（ＤＰ１～ＤＰｎ画分）を含み、ｎは、２以上の整数であり；各画分は質量分析により測定される相対的存在量で約０．１％～約１５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、１～ｎから選択される異なる重合度をそれぞれ有するｎ画分のオリゴ糖（ＤＰ１～ＤＰｎ画分）を含み、ｎは、３以上の整数であり；各画分は、質量分析により測定される相対的存在量で０．５％～１５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、ｎ個の画分の各々におけるオリゴ糖の相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。
[0011]本開示の追加の態様及び利点は、以下の詳細な説明から当技術分野の当業者に容易に明らかになり、ここで、本開示の例示的な実施形態のみが示され、説明される。理解されるように、本開示は、他の異なる実施形態が可能であり、そのいくつかの詳細は、全て本開示から逸脱することなく、様々な明白な点で修正することができる。従って、図面及び説明は、本質的に例証としてみなされるべきであり、限定するものではない。
［参照による援用］
[0012]本明細書に記載される全ての公報、特許及び特許出願は、各公報、特許及び特許出願が参照により援用されたことが具体的且つ個別に示されている場合、同程度参照により援用される。参照により援用される刊行物及び特許又は特許出願が明細書に含まれる開示と矛盾する範囲で、明細書は、そのような矛盾する資料に優先し、且つ／又は優先することを意図している。
[0013]本発明の新規特性を添付の特許請求の範囲に具体的に記載する。本発明の特徴及び利点のより良い理解は、本発明の原理が利用される例示的な実施形態を説明する以下の詳細な説明及び添付の図面（本明細書では、「図（ｆｉｇｕｒｅ）」及び「図（ＦＩＧ．）」とも呼ばれる）を参照することによって得られる。
実施例９．７のオリゴ糖調製物の１Ｈ，１３Ｃ－ＨＳＱＣ ＮＭＲスペクトルを示す。 アンヒドロサブユニットの存在を示す実施例９からのオリゴ糖調製物のＭＡＬＤＩ－ＭＳスペクトルを示す。 実施例９のオリゴ糖から単離されるアンヒドロ－ＤＰ１画分の１Ｄ １Ｈ－プロトンＮＭＲスペクトルを示す。 実施例９のオリゴから単離されるアンヒドロ－ＤＰ１画分の１Ｄ ＡＰＴ １３Ｃ－ＮＭＲスペクトルを示す。 ２つのアンヒドロＤＰ１化合物（１，６－β－Ｄ－グルコフラノース及び１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノース）の構造及びそれらのＮＭＲ帰属を示す。 誘導体化後の実施例９．７のオリゴ糖調製物に関するＧＣ－ＭＳクロマトグラム（ＴＩＣ及びＸＩＣ（ｍ／ｚ２２９）プロット）の拡大を示す。 実施例９からのオリゴ糖調製物を従来のデキストランと比較するＭＡＬＤＩ－ＭＳスペクトルを示す。 水中のオリゴ糖調製物の濃度１～８０μｇ／ｍＬのアンヒドロＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 図８のＬＣ－ＭＳ／ＭＳから得られる直線較正曲線を示す。 様々な対照及び処理された食餌組成物のアンヒドロ－ＤＰ２含有量の定量化を示す。 様々な対照及び処理された食餌組成物のアンヒドロ－ＤＰ２含有量の定量化を示す。 アンヒドロサブユニット含有グルコ－オリゴ糖サンプルの２Ｄ－１Ｈ ＪＲＥＳ ＮＭＲスペクトルを示す。 結合分布に使用される関連する共鳴及び割り当てによるアンヒドロサブユニット含有グルコオリゴ糖サンプルの代表的な１Ｈ，１３Ｃ－ＨＳＱＣ ＮＭＲスペクトルである。 ３つのアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の１Ｈ ＤＯＳＹスペクトルのオーバーレイを示す。 １，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコース（ＤＰ１－１８）、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－セロビオース（ＤＰ２－１８）及びアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖サンプルの比較を示す。 選択された多重反応モニタリング（ＭＲＭ）で、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖（上）及び消化されたアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖（下）のマスクロマトグラムを示す。 選択されたＭＲＭで（１）アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む飼料、（２）アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む消化飼料、及び（３）ブランク消化飼料のマスクロマトグラムを示す。 動物飼料中のオリゴ糖調製物の分析のための代表的なワークフローを示す。 ２つのＤＰ１及び１つのＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示す。 アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖（セロトリオサン）を示す。 アンヒドロサブユニットの存在を示す実施例２からのオリゴ糖調製物のＭＡＬＤＩ－ＭＳスペクトルを示す。 図２０Ａに示すＭＡＬＤＩ－ＭＳスペクトルの一部の拡大図を示す。 実施例１のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 実施例１のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 実施例１のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 実施例３のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 実施例３のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 実施例３のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 実施例４のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 実施例４のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 実施例４のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 実施例７のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 実施例７のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 実施例７のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 実施例１のオリゴ糖調製物のＤＰ１、アンヒドロＤＰ１、ＤＰ２及びアンヒドロＤＰ２画分のＧＣ－ＭＳスペクトル検出を示す。 図２５Ａに示されたＤＰ２及びアンヒドロＤＰ２画分の拡大を示す。 実施例３のオリゴ糖調製物のＤＰ１、アンヒドロＤＰ１、ＤＰ２及びアンヒドロＤＰ２画分のＧＣ－ＭＳスペクトル検出を示す。 図２６Ａに示されたＤＰ２及びアンヒドロＤＰ２画分の拡大を示す。 実施例４のオリゴ糖調製物のＤＰ１、アンヒドロＤＰ１、ＤＰ２及びアンヒドロＤＰ２画分のＧＣ－ＭＳスペクトル検出を示す。 図２７Ａに示すＤＰ２及びアンヒドロＤＰ２画分の拡大図を示す。 実施例７のオリゴ糖調製物のＤＰ１、アンヒドロＤＰ１、ＤＰ２及びアンヒドロＤＰ２画分のＧＣ－ＭＳスペクトル検出を示す。 図２８Ａに示すＤＰ２及びアンヒドロＤＰ２画分の拡大図を示す。 実施例２によるオリゴ糖調製物と比較した、オリゴ糖調製物におけるＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の含有量に対する反応時間、含水量及び反応時間の影響を示す。 異なるレーザーエネルギーでの実施例９からのオリゴ糖調製物を比較するＭＡＬＤＩ－ＭＳスペクトルを示す。
［詳細な説明］
[0044]以下の説明及び実施例は、本開示の実施形態を詳細に説明する。本開示は、本明細書に記載される特定の実施形態に限定されず、それ自体が変化し得ることを理解すべきである。当業者は、本開示の多くの変形形態及び修正形態があり、それらがその範囲内に含まれることを理解するであろう。
[0045]全ての用語は、当業者によって理解されるように理解されることが意図される。特段の記載がない限り、本明細書で用いられる全ての科学技術用語は、本開示が属する技術分野における当業者が共通に解釈するのと同じ意味を有する。
[0046]本明細書で使用されるセクションの見出しは、構成上の目的に過ぎず、記載される主題を限定するものと解釈されるべきではない。
[0047]本開示の様々な特徴は、単一の実施形態に関連しても記載され得るが、その特徴は、別個に又は任意の好適な組み合わせで提供され得る。反対に、本開示は、明確にするために別個の実施形態に関連して本明細書に記載され得るが、本開示は、単一の実施形態でも実施され得る。
[0048]以下の定義は、当技術分野の定義を補足するものであり、本出願に向けられており、関連する又は関連しない場合、例えば、同一所有者の特許又は出願に帰属するものではない。本明細書に記載されているものと同様又は同等の任意の方法及び材料を、本開示の試験を実施するために使用できるが、好ましい材料及び方法を本明細書に記載する。従って、本明細書で使用される用語は、単に特定の実施形態を説明することを目的とし、限定することを意図しない。
［Ｉ．定義］
[0049]本明細書で使用する場合、「投与」は、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、液体又は動物飼料組成物を、動物が、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、液体又は動物飼料組成物を自由に摂取できるように、動物に提供することを含む。このような実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物又は動物飼料組成物の一部を摂取する。いくつかの実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、液体又は動物飼料組成物の一部を、少なくとも７日間、１４日間、２１日間、３０日間、４５日間、６０日間、７５日間、９０日間又は１２０日間、２４時間ごと又は１日おきに２４時間ごとに摂取する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は水又は別の液体に溶解することができ、動物は液体を飲むことによってオリゴ糖調製物の一部を摂取する。特定の実施形態では、オリゴ糖は、飲料水を介して動物に提供される。特定の実施形態では、オリゴ糖調製物、栄養組成物、液体又は動物飼料組成物は、自由に摂取される。
[0050]本明細書で使用される場合、「含有レベル」又は「用量」という用語は、動物に供給される栄養組成物、液体、食餌又は動物飼料組成物中のオリゴ糖調製物の濃度を指す。いくつかの実施形態では、含有レベルは、最終栄養組成物、液体、食餌又は動物飼料中のオリゴ糖調製物の質量濃度として測定される。例えば、含有レベルは、最終栄養組成物、液体、食餌又は動物飼料の総重量当たりの乾燥固形分重量に基づくオリゴ糖の百万分率（ｐｐｍ）の単位で測定され得る。特定の実施形態では、オリゴ糖調製物の乾燥固形分質量は、ＤＰ１＋種の無水ベース質量として測定される。別の実施形態では、オリゴ糖調製物の乾燥固形分質量は、ＤＰ２＋種の無水ベース質量として測定される。
[0051]本明細書で使用される場合、「具体的用量」という用語は、時間単位当たり、且つそのボディマスに対して動物により消費されるオリゴ糖調製物の量を指す。いくつかの実施形態では、具体的用量は、１日当たり動物の体重１ｋｇ当たりのオリゴ糖調製物（乾燥固形分ベースで）のｍｇの単位（即ち、ｍｇ／ｋｇ／日）で測定され得る。
[0052]本明細書で使用する場合、用語「アンヒドロサブユニット」は、単糖（又は単糖サブユニット）又は糖カラメル化生成物の熱脱水生成物を指す。例えば、「アンヒドロサブユニット」は、アンヒドロ－グルコースなどのアンヒドロ－単糖であり得る。別の例として、「アンヒドロサブユニット」は、グリコシド結合を介して１つ以上の通常の又はアンヒドロ－単糖サブユニットと結合することができる。
[0053]本明細書で使用される場合、「アンヒドロＤＰｎオリゴ糖」、「アンヒドロＤＰｎ種」又は「ＤＰｎアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖」という用語は、ｎの重合度を有し、且つ１つ以上のアンヒドロサブユニットを含むオリゴ糖を指す。従って、アンヒドロ－グルコースは、ＤＰ１アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖であり、セロトリオサンは、ＤＰ３アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖である。
[0054]本明細書で使用される場合、「飼料要求率（ＦＣＲ）」という用語は、飼料質量インプット（例えば、動物により消費される）と動物アウトプットの比を指し、ここで、動物アウトプットは、対象畜産物である。例えば、乳畜の動物アウトプットは、乳であり、食肉のために飼育される家畜の動物アウトプットは、ボディマスである。
[0055]用語「オリゴ糖」は、単糖又はグリコシド結合によって結合した２つ以上の単糖サブユニットを含有する化合物を指す。そのようなものであるから、オリゴ糖には、通常の単糖；アンヒドロ－単糖；又は２つ以上の単糖サブユニットを含有する化合物が含まれ、ここで、１つ以上の単糖サブユニットは、任意選択的に、独立して、１つ以上のアンヒドロサブユニットに置換されている。オリゴ糖は、官能化することができる。本明細書で使用する場合、オリゴ糖という用語には、オリゴ糖の全ての種を包含し、ここで、オリゴ糖中の単糖サブユニットの各々は、独立して及び任意選択的に、その対応するアンヒドロ－単糖サブユニットで官能化及び／又は置換されている。
[0056]本明細書で使用する場合、用語「オリゴ糖調製物」は、少なくとも１つのオリゴ糖を含む調製物を指す。
[0057]本明細書で使用する場合、用語「グルコ－オリゴ糖」は、グルコース又はグリコシド結合によって結合した２つ以上のグルコース単糖サブユニットを含有する化合物を指す。そのようなものであるから、グルコ－オリゴ糖には、グルコース；アンヒドロ－グルコース；又はグリコシド結合によって結合した２つ以上のグルコース単糖サブユニットを含有する化合物が含まれ、ここで、前記グルコース単糖サブユニットの１つ以上は、各々任意選択的に及び独立して、アンヒドロ－グルコースサブユニットで置換されている。
[0058]本明細書で使用する場合、用語「ガラクト－オリゴ糖」は、ガラクトース又はグリコシド結合によって結合した２つ以上のガラクトース単糖サブユニットを含有する化合物を指す。そのようなものであるから、ガラクト－オリゴ糖には、ガラクトース；アンヒドロ－ガラクトース；又はグリコシド結合によって結合した２つ以上のガラクトース単糖サブユニットを含有する化合物が含まれ、ここで、前記ガラクトース単糖サブユニットの１つ以上は、各々任意選択的に及び独立して、アンヒドロ－ガラクトースサブユニットで置換されている。
[0059]本明細書で使用する場合、用語「グルコ－ガラクト－オリゴ糖調製物」は、グルコース及びガラクトースの完全又は不完全な糖縮合反応から生成される組成物を指す。従って、いくつかの実施形態では、グルコ－ガラクトース－オリゴ糖調製物は、グルコ－オリゴ糖、ガラクト－オリゴ糖、グリコシド結合によって結合した１つ以上のグルコース単糖サブユニット及び１つ以上のガラクトース単糖サブユニットを含有する化合物又はこれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、グルコ－ガラクトース－オリゴ糖調製物は、グルコ－オリゴ糖並びにグリコシド結合によって結合した１つ以上のグルコース単糖サブユニット及び１つ以上のガラクトース単糖サブユニットを含有する化合物を含む。いくつかの実施形態では、グルコ－ガラクトース－オリゴ糖調製物は、ガラクト－オリゴ糖並びにグリコシド結合によって結合した１つ以上のグルコース単糖サブユニット及び１つ以上のガラクトース単糖サブユニットを含有する化合物を含む。いくつかの実施形態では、グルコ－ガラクトース－オリゴ糖調製物は、グリコシド結合によって結合した１つ以上のグルコース単糖サブユニット及び１つ以上のガラクトース単糖サブユニットを含有する化合物を含む。
[0060]本明細書で使用する場合、用語「単糖ユニット」及び「単糖サブユニット」は、同じ意味で用いられる。「単糖サブユニット」は、オリゴ糖の単糖モノマーを指す。重合度１を有するオリゴ糖について、オリゴ糖は、単糖サブユニット又は単糖と称され得る。重合度２以上を有するオリゴ糖について、その単糖サブユニットは、グリコシド結合を介して結合している。
[0061]本明細書で使用する場合、用語「通常の単糖」は、アンヒドロサブユニットを含有しない単糖を指す。用語「通常の二単糖」は、アンヒドロサブユニットを含有しない二糖を指す。従って、用語「通常のサブユニット」は、アンヒドロサブユニットではないサブユニットを指す。
[0062]用語「相対的存在量」又は「存在量」は、本明細書で使用する場合、種がどれほど一般的又はまれに存在するかを基準にして、種の豊富さを指す。例えば、相対的存在量で１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含むＤＰ１画分は、ＤＰ１オリゴ糖の１０％がアンヒドロ－単糖である、複数のＤＰ１オリゴ糖を指す。例えば、オリゴ糖の特定のＤＰ画分に関して、相対的存在量は、好適な分析機器、例えば、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ、ＧＣ－ＭＳ、ＨＰＬＣ－ＭＳ及びＭＡＬＤＩ－ＭＳなどの質量分析法及び液体クロマトグラフィーによって決定され得る。いくつかの実施形態では、相対的存在量は、対象の画分に対応するクロマトグラフ（例えば、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ、ＧＣ－ＭＳ及びＨＰＬＣ－ＭＳ）のピークの下の面積を積分することによって決定される。いくつかの実施形態では、相対的存在量は、ピーク強度によって決定される（例えば、ＭＡＬＤＩ－ＭＳ）。いくつかの実施形態では、相対的存在量は、液体クロマトグラフィーによる分離後の重量測定などの分析方法の組み合わせによって決定される。
[0063]本明細書で使用する場合、単数形「１つの」、「及び」及び「その」には、文脈上特に明確に指示されない限り複数形の言及が含まれる。従って、例えば、「薬剤」という言及は、複数のそのような薬剤を含み、「オリゴ糖」という言及は、１つ以上のオリゴ糖（又は複数のオリゴ糖）及び当業者であれば公知であるその均等物を含む。
[0064]本明細書で、分子量などの物理的特性又は化学式などの化学的特性に関する範囲が使用される場合、本明細書に記載される範囲及び具体的な実施形態のあらゆる組み合わせ及び部分組み合わせが包含されることが意図される。数値又は数値範囲を示す場合の「約」という用語は、示される数値又は数値範囲が、実験変動性の範囲内（又は統計的実験誤差の範囲内）の近似値であることを意味し、従って、数値又は数値範囲は、いくつかの事例では、記載される数値又は数値範囲の１％～１５％の間で変動し得る。いくつかの実施形態では、「約」という用語は、所与の数値又は範囲の１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％若しくは０．０５％以内を意味する。
[0065]「含む（こと）（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」（並びに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」若しくは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」又は「有する（こと）（ｈａｖｉｎｇ）」又は「含む（こと）（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などの関連用語）は、そのように表される事項を含むが、必ずしもそれらに限定されないことが意図される。
［ＩＩ．方法の適用］
[0066]オリゴ糖調製物は、完全動物飼料などの栄養組成物中の添加剤として使用される。こうしたオリゴ糖調製物の添加は、家禽（ブロイラー、産卵鶏、ブロイラー種鶏、七面鳥）及びブタ（子豚、飼育／仕上げ豚、雌ブタなど、並びに他の種）などの動物の健康及び性能（体重、成長速度、飼料要求効率）を改善する。
[0067]動物の健康及び性能に対するオリゴ糖調製物の影響は、オリゴ糖の化学的及び物理化学的特性に左右される。特に、オリゴ糖調製物の化学組成は、それが動物の微生物相、特に腸内微生物叢によって使用される様式に影響を及ぼし得る。続いて、動物の微生物相、特に腸内微生物叢が、動物の健康及び性能全体に影響を与える。こうした作用として、例えば、消化管への生理学的及び形態学的作用、免疫系活性化、粘液産生の刺激、腸管バリア機能の改善、栄養素の放出及び吸収の改善、腸内微生物叢の様々なメンバーの存在量の調節（例えば、病原性種の抑制、有益な共生種の増加）並びに腸内微生物叢により産生される生化学的種の調節が挙げられる。従って、オリゴ糖調製物を動物飼料などの栄養組成物に添加して、プレバイオティクスとして作用させることができる。
[0068]栄養組成物中の添加剤として使用するのに好適なオリゴ糖調製物を生産する方法が本明細書に提供される。オリゴ糖調製物はまた、他の手段によっても生産することができ、そうしたものとして、植物繊維の酵素加水分解若しくは酸性加水分解、細菌及び酵母細胞壁グリカン及び糖ペプチドの抽出、糖からの酵素濃縮並びに野生型又は組換え微生物による発酵が挙げられる。
[0069]栄養組成物及びオリゴ糖調製物のいずれも、それぞれ構造上複雑であるために、飼料材料中のオリゴ糖調製物の存在及び濃度を分析するための単純、選択的、且つ高感度の技術がない。栄養組成物は、多量且つ多様な炭水化物構造（例えば、デンプン、植物繊維及びペクチン）を含む。そのため、栄養組成物の基材として存在する膨大な他の炭水化物から少量のオリゴ糖ベースの飼料添加剤を識別することは特に困難である。従って、要求される感度及び選択性を備えた分析方法が、こうしたオリゴ糖飼料添加剤を天然オリゴマーから識別するために必要である。
[0070]飼料添加剤の存在及び／又は濃度を検定することは商業的に有用である。こうしたアッセイは、意図される用量又はレベルの含量で添加剤を含む最終栄養組成物を提供するように、添加剤が基礎栄養組成物とともに一貫してブレンドされたか否かを決定するために、品質管理の目的で実施することができる。特定の実施形態では、製造工程は、予め決定した値の範囲内で添加剤が含有されたという決定に基づいて、所定量（例えば、ロット若しくはバッチ）の最終飼料組成物を合格又は不合格のいずれかにするステップを含み得る。
[0071]こうしたオリゴ糖調製物は、オリゴ糖調製物中の様々なモノマー同士の多種多様なグリコシド結合を含む。特定の実施形態では、動物の上部消化管の消化酸及び酵素により容易に加水分解されるグリコシド結合、例えば、α－（１，４）結合の相対的存在量は低い。従って、オリゴ糖は、動物による一次消化に耐え、消化管を通って下部消化管まで達し、そこで腸内微生物叢と相互作用する。いくつかの実施形態では、植物繊維及びペクチン中で一般に認められるグリコシド結合の相対的存在量もまた低い。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、栄養組成物中のベース炭水化物（即ち、バックグラウンド炭水化物）中で低い相対的存在量でしか存在しない結合を含む。特定の実施形態では、オリゴ糖調製物は、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。特定の実施形態では、オリゴ糖調製物は、化学的に合成されたアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[0072]栄養組成物中のオリゴ糖調製物の相対的存在量を検出及び／又は定量するための必要性にもかかわらず、複合炭水化物中の様々なグリコシド結合を定量するための既存の分析方法は、感度が不足している可能性がある。特定の既存の分析方法は、数パーセンテージのレベルでグリコシド結合を解像する最小閾値を有する。しかし、飼料添加剤の商業的に関連する含有レベルは、典型的に１～５０００ｐｐｍ、１０～１０００ｐｐｍ、１０～５００ｐｐｍ又は５０～５００ｐｐｍの範囲内である。従って、飼料添加剤中のグリコシド結合は、既存の方法の一部では検出不可能である。
[0073]驚くことに、本発明者らは、本明細書に記載されるように、完全動物飼料などの複合栄養組成物中のオリゴ糖調製物を分析し、定量することができることを見出した。
［ＩＩＩ．オリゴ糖調製物］
［製造方法によるオリゴ糖］
[0074]本明細書には、栄養組成物に使用する上で好適なオリゴ糖調製物が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるオリゴ糖調製物は、単糖、オリゴ糖、多糖又はそれらの任意の組み合わせを含むことができ、ここで、単糖、オリゴ糖又は多糖のいずれかにおける１つ以上の単糖サブユニットを独立して官能基化することができる。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、セルロース及びデンプンなどの多糖の加水分解若しくは熱分解により、単糖若しくはオリゴ糖の濃縮若しくは重合により、植物繊維などの多糖の酵素加水分解若しくは酸加水分解により、細菌及び酵母細胞壁グリカン及びグリコペプチドの抽出により、糖からの酵素濃縮により、野生型若しくは組換え微生物による発酵により、又はそれらの任意の組み合わせによって生産されたオリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、当技術分野で公知の任意のオリゴ糖を含み得る。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、化学的に、自然に又は酵素により生産される。
[0075]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、合成オリゴ糖調製物である。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、生物を必要としないプロセスによって生成される複数のオリゴ糖を指す。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、酵素を必要としないプロセスによって生成される複数のオリゴ糖を指す。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、化学的プロセスによって生成される複数のオリゴ糖を指す。特定の実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、糖の縮合によって生成される複数のオリゴ糖を指す。
［重合度（ＤＰ）分布］
[0076]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、１～ｎから選択される異なる重合度をそれぞれ有する少なくともｎ画分のオリゴ糖（ＤＰ１～ＤＰｎ画分）を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物はオリゴ糖のｎ画分を含み、各画分は１～ｎから選択される異なる重合度を有する（ＤＰ１～ＤＰｎ画分）。いくつかの実施形態では、ＤＰ１画分は、１つ以上の単糖及び／又は１つ以上のアンヒドロ－単糖を含む。別の例として、いくつかの実施形態では、ＤＰ１画分は、グルコース、ガラクトース、フルクトース、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノース、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノース又はこれらの任意の組み合わせを含む。例えば、いくつかの実施形態では、ＤＰ２画分は、１つ以上の通常の二糖及び１つ以上のアンヒドロサブユニット含有二糖を含む。いくつかの実施形態では、ＤＰ２画分は、ラクトースを含む。
[0077]いくつかの実施形態では、ｎは、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、少なくとも３８、少なくとも３９、少なくとも４０、少なくとも４１、少なくとも４２、少なくとも４３、少なくとも４４、少なくとも４５、少なくとも４６、少なくとも４７、少なくとも４８、少なくとも４９、少なくとも５０、少なくとも５１、少なくとも５２、少なくとも５３、少なくとも５４、少なくとも５５、少なくとも５６、少なくとも５７、少なくとも５８、少なくとも５９、少なくとも６０、少なくとも６１、少なくとも６２、少なくとも６３、少なくとも６４、少なくとも６５、少なくとも６６、少なくとも６７、少なくとも６８、少なくとも６９、少なくとも７０、少なくとも７１、少なくとも７２、少なくとも７３、少なくとも７４、少なくとも７５、少なくとも７６、少なくとも７７、少なくとも７８、少なくとも７９、少なくとも８０、少なくとも８１、少なくとも８２、少なくとも８３、少なくとも８４、少なくとも８５、少なくとも８６、少なくとも８７、少なくとも８８、少なくとも８９、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、少なくとも９９又は少なくとも１００である。いくつかの実施形態では、ｎは、約２、３、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９又は１００である。いくつかの実施形態では、ｎは、１０未満、１１未満、１２未満、１３未満、１４未満、１５未満、１６未満、１７未満、１８未満、１９未満、２０未満、２１未満、２２未満、２３未満、２４未満、２５未満、２６未満、２７未満、２８未満、２９未満、３０未満、３１未満、３２未満、３３未満、３４未満、３５未満、３６未満、３７未満、３８未満、３９未満、４０未満、４１未満、４２未満、４３未満、４４未満、４５未満、４６未満、４７未満、４８未満、４９未満、５０未満、５１未満、５２未満、５３未満、５４未満、５５未満、５６未満、５７未満、５８未満、５９未満、６０未満、６１未満、６２未満、６３未満、６４未満、６５未満、６６未満、６７未満、６８未満、６９未満、７０未満、７１未満、７２未満、７３未満、７４未満、７５未満、７６未満、７７未満、７８未満、７９未満、８０未満、８１未満、８２未満、８３未満、８４未満、８５未満、８６未満、８７未満、８８未満、８９未満、９０未満、９１未満、９２未満、９３未満、９４未満、９５未満、９６未満、９７未満、９８未満、９９未満又は１００未満である。いくつかの実施形態では、ｎは、２～１００、５～９０、１０～９０、１０～８０、１０～７０、１０～６０、１０～５０、１０～４０、１０～３０、１５～６０、１５～５０、１５～４５、１５～４０、１５～３５又は１５～３０である。
[0078]オリゴ糖調製物の重合度の分布は、末端基法、浸透圧（浸透圧測定）、超遠心分離、粘度測定、光散乱法、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、フィールドフローフラクショネーション（ＦＦＦ）、非対称フローフィールドフローフラクショネーション（Ａ４Ｆ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）及び質量分析（ＭＳ）が挙げられるがこれらに限定されない任意の好適な分析方法及び機器によって決定することができる。例えば、重合度の分布は、マトリックス支援レーザー脱離イオン化（ＭＡＬＤＩ）－ＭＳ、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）－ＭＳ又はガスクロマトグラフィー（ＧＣ）－ＭＳなどの質量分析によって決定及び／又は検出され得る。別の例として、重合度の分布は、ゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）などのＳＥＣによって決定及び／又は検出され得る。更に別の例として、重合度の分布は、ＨＰＬＣ、ＦＦＦ又はＡ４Ｆによって決定及び／又は検出され得る。いくつかの実施形態では、重合度の分布は、ＭＡＬＤＩ－ＭＳによって決定及び／又は検出される。いくつかの実施形態では、重合度の分布は、ＧＣ－ＭＳ又はＬＣ－ＭＳによって決定及び／又は検出される。いくつかの実施形態では、重合度の分布は、ＳＥＣによって決定及び／又は検出される。いくつかの実施形態では、重合度の分布は、ＨＰＬＣによって決定及び／又は検出される。いくつかの実施形態では、重合度の分布は、ＭＡＬＤＩ－ＭＳ及びＳＥＣなどの分析機器の組み合わせによって決定及び／又は検出される。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の重合度は、その分子量及び分子量分布に基づいて決定することができる。例えば、図２は、様々な画分の重合度及び観察された全ての画分におけるアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖（－１８ｇ／モルＭＷオフセットピーク）の存在を示すＭＡＬＤＩ－ＭＳスペクトルを示す。
[0079]いくつかの実施形態では、画分の大部分におけるオリゴ糖の相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の６未満、５未満、４未満又は２未満の画分のオリゴ糖の相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少しない。
[0080]いくつかの実施形態では、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５又は少なくとも５０のＤＰ画分におけるオリゴ糖の相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。いくつかの実施形態では、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５又は少なくとも５０の連続したＤＰ画分におけるオリゴ糖の相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。いくつかの実施形態では、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０又は少なくとも３０のＤＰ画分におけるオリゴ糖の相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。いくつかの実施形態では、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０又は少なくとも３０の連続したＤＰ画分におけるオリゴ糖の相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。
[0081]いくつかの実施形態では、ｎ画分の各々におけるオリゴ糖の相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。例えば、図１０は、ｎ画分の各々におけるオリゴ糖の相対的存在量がそのＤＰとともに単調に減少するＤＰ分布の例を提供する。例えば、いくつかの実施形態では、ＤＰ３画分におけるオリゴ糖の相対的存在量のみは、その重合度とともに単調に減少しない、即ちＤＰ３画分におけるオリゴ糖の相対的存在量は、ＤＰ４画分におけるオリゴ糖の相対的存在量よりも低い。いくつかの実施形態では、ＤＰ２画分におけるオリゴ糖の相対的存在量は、ＤＰ３画分におけるオリゴ糖の相対的存在量よりも低い。例えば、図１６は、ＤＰ２画分におけるオリゴ糖の相対的存在量がその重合度とともに単調に減少しない重合度分布を示す。
[0082]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、重量又は相対的存在量で約１％～約５０％、約１％～約４０％、約１％～約３５％、約１％～約３０％、約１％～約２５％、約１％～約２０％、約１％～約１５％、約５％～約５０％、約５％～約４０％、約５％～約３５％、約５％～約３０％、約５％～約２５％、約５％～約２０％、約５％～約１５％、約１０％～約５０％、約１０％～約４０％、約１０％～約３５％、約１０％～約３０％、約１０％～約２５％、約１０％～約２０％又は約１０％～約１５％のＤＰ１画分含有量を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、重量又は相対的存在量で約１０％～約３５％、約１０％～約２０％又は約１０％～約１５％のＤＰ１画分含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＤＰ１画分の含有量は、質量分析法によって決定される。いくつかの実施形態では、ＤＰ１画分の含有量は、ＨＰＬＣによって決定される。いくつかの実施形態では、ＤＰ１画分の含有量は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ又はＧＣ－ＭＳによって決定される。
[0083]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、重量又は相対的存在量で約１％～約３５％、約１％～約３０％、約１％～約２５％、約１％～約２０％、約１％～約１５％、約１％～約１０％、約５％～約３０％、約５％～約２５％、約５％～約２０％、約５％～約１５％又は約５％～約１０％のＤＰ２画分含有量を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、重量又は相対的存在量で約５％～約２５％、約５％～約２０％、約５％～約１５％又は約５％～約１０％のＤＰ２画分含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＤＰ２画分の含有量は、質量分析法によって決定される。いくつかの実施形態では、ＤＰ２画分の含有量は、ＨＰＬＣによって決定される。いくつかの実施形態では、ＤＰ２画分の含有量は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ又はＧＣ－ＭＳによって決定される。
[0084]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、重量又は相対的存在量で約１％～約３０％、約１％～約２５％、約１％～約２０％、約１％～約１５％、約１％～約１０％、約５％～約３０％、約５％～約２５％、約５％～約２０％、約５％～約１５％又は約５％～約１０％のＤＰ３画分含有量を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、重量又は相対的存在量で約１％～約１５％、約１％～約１０％、約５％～約１５％又は約５％～約１０％のＤＰ３画分含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＤＰ３画分の含有量は、ＭＡＬＤＩ－ＭＳによって決定される。いくつかの実施形態では、ＤＰ３画分の含有量は、ＨＰＬＣによって決定される。いくつかの実施形態では、ＤＰ３画分の含有量は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ又はＧＣ－ＭＳによって決定される。
[0085]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、重量又は相対的存在量で約０．１％～約２０％、約０．１％～約１５％、約０．１％～約１０％、約０．１％～約５％、約１％～約２０％、約１％～約１５％、約１％～約１０％又は約１％～約５％のＤＰ４画分含有量を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、重量又は相対的存在量で約１％～約１５％、約１％～約１０％又は約１％～約５％のＤＰ４画分含有量を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、重量又は相対的存在量で約０．１％～約１５％、約０．１％～約１０％、約０．１％～約５％、約１％～約１５％、約１％～約１０％又は約１％～約５％のＤＰ５画分含有量を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、重量又は相対的存在量で約１％～約１０％又は約１％～約５％のＤＰ５画分含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＤＰ４画分及び／又はＤＰ５画分の含有量は、ＭＡＬＤＩ－ＭＳによって決定される。いくつかの実施形態では、ＤＰ４画分及び／又はＤＰ５画分の含有量は、ＨＰＬＣによって決定される。いくつかの実施形態では、ＤＰ４画分及び／又はＤＰ５画分の含有量は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ又はＧＣ－ＭＳによって決定される。
[0086]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物におけるＤＰ２画分のＤＰ１画分との比は、これらの重量又は相対的存在量で約０．０１～約０．８、約０．０２～約０．７、約０．０２～約０．６、約０．０２～約０．５、約０．０２～約０．４、約０．０２～約０．３、約０．０２～約０．２、約０．１～約０．６、約０．１～約０．５、約０．１～約０．４又は約０．１～約０．３である。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物におけるＤＰ２画分のＤＰ１画分との比は、これらの重量又は相対的存在量で約０．０２～約０．４である。
[0087]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物におけるＤＰ３画分のＤＰ２画分との比は、これらの重量又は相対的存在量で約０．０１～約０．７、約０．０１～約０．６、約０．０１～約０．５、約０．０１～約０．４、約０．０１～約０．３又は約０．０１～約０．２である。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物におけるＤＰ３画分のＤＰ２画分との比は、これらの重量又は相対的存在量で約０．０１～約０．３である。
[0088]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物におけるＤＰ１及びＤＰ２画分の集合体含有量は、重量又は相対的存在量で７０％未満、６０％未満、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満又は１０％未満である。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物におけるＤＰ１及びＤＰ２画分の集合体含有量は、重量又は相対的存在量で５０％未満、３０％未満又は１０％未満である。
[0089]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、２～１０の範囲内の平均ＤＰ値を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、約２～約８、約２～約５又は約２～約４の平均ＤＰ値を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、約３．５の平均ＤＰ値を有する。平均ＤＰ値は、ＳＥＣ又は元素分析によって決定することができる。
［アンヒドロサブユニットレベル］
[0090]いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるオリゴ糖調製物は、１つ以上のアンヒドロサブユニットを含む。即ち、オリゴ糖調製物は、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるオリゴ糖調製物中のオリゴ糖のｎ個の画分の各々は、独立して特定のアンヒドロサブユニットレベルを含む。例えば、いくつかの実施形態では、ＤＰ１画分は、相対的存在量で約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含み、ＤＰ２画分は、相対的存在量で約１５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。別の例について、いくつかの実施形態では、ＤＰ１、ＤＰ２及びＤＰ３画分は、それぞれ相対的存在量でそれぞれ約５％、約１０％及び約２％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖の２つ以上の画分は、同じレベルのアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、ＤＰ１及びＤＰ３画分は、それぞれ相対的存在量で約５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるオリゴ糖調製物は、アンヒドロサブユニットを一切含まない。即ち、オリゴ糖調製物は、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を一切含まない。
[0091]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物における１～ｎ画分の各々は、独立して、質量分析法、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ又はＧＣ－ＭＳにより測定される相対的存在量で約０．１％～１５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物における１～ｎ画分の各々は、独立して、質量分析法、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ又はＧＣ－ＭＳにより測定される相対的存在量で約０．５％～１５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳは、ＤＰ１、ＤＰ２及び／又はＤＰ３画分におけるオリゴ糖の相対的存在量を決定するために使用される。
[0092]いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニットの存在、種のタイプ及び／又はレベルは、任意の好適な分析方法、例えば、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、ＨＰＬＣ、ＦＦＦ、Ａ４Ｆ又はそれらの任意の組み合わせによって決定及び／又は検出することができる。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の存在及びレベルは、図２において－１８ｇ／ｍｏｌ ＭＷオフセットピークにより例示すように、ＭＡＬＤＩ－ＭＳによって決定及び／又は検出される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニットの存在及び種のタイプは、実施例１１、図３及び図４に例示するように、ＮＭＲによって決定及び／又は検出される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット若しくはアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の存在、種のタイプ及び／又はレベルは、少なくとも一部が、ＭＡＬＤＩ－ＭＳなどの質量分析によって決定及び／又は検出される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット若しくはアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の存在、種のタイプ及び／又はレベルは、少なくとも一部が、ＮＭＲによって決定及び／又は検出される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット若しくはアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の存在、種のタイプ及び／又はレベルは、少なくとも一部が、ＨＰＬＣによって決定及び／又は検出される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の相対的存在量は、ＭＡＬＤＩ－ＭＳによって決定される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の相対的存在量は、図２１Ａ～２１Ｃ、２２Ａ～２２Ｃ、２３Ａ～２３Ｃ及び２４Ａ～２４Ｃに例示されるように、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって決定される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の相対的存在量は、図２５Ａ～２５Ｂ、２６Ａ～２６Ｂ、２７Ａ～２７Ｂ及び２８Ａ～２８Ｄに例示されるように、ＧＣ－ＭＳによって決定される。いくつかの実施形態では、ＧＣ－ＭＳ又はＬＣ－ＭＳ／ＭＳを用いて、ＤＰ１、ＤＰ２及び／又はＤＰ３画分中のオリゴ糖の相対的存在量を決定する。いくつかの実施形態では、ＭＡＬＤＩ－ＭＳは、ＤＰ４画分以上のＤＰ画分におけるオリゴ糖の相対的存在量を決定するために使用される。いくつかの実施形態では、特定の画分の相対的存在量は、その画分に対応するものとして指定されているＬＣ－ＭＳ／ＭＳクロマトグラムのピークの下の面積を積分することによって決定される。いくつかの実施形態では、特定の画分の相対的存在量は、その画分に対応するものとして指定されているＧＣ－ＭＳクロマトグラムのピークの下の面積を積分することによって決定される。
[0093]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物の少なくとも１つの画分は、相対的存在量で８０％未満、７０％未満、６０％未満、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満又は１％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物の少なくとも１つの画分は、相対的存在量で１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満又は２％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。他の実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物の少なくとも１つの画分は、相対的存在量で０．５％超、０．８％超、１％超、２％超、３％超、４％超、５％超、６％超、７％超、８％超、９％超、１０％超、１１％超、１２％超、１３％超、１４％超、１５％超、１６％超、１７％超、１８％超、１９％超、２０％超、３０％超、４０％超、５０％超、６０％超、７０％超又は８０％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。他の実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物の少なくとも１つの画分は、相対的存在量で２０％超、２１％超、２２％超、２３％超、２４％超、２５％超、２６％超、２７％超、２８％超、２９％超又は３０％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の少なくとも１つの画分（ＤＰ１、ＤＰ２及び／又はＤＰ３などの）は、相対的存在量で約０．１％、約０．２％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１％、約１．５％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％又は約３０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の少なくとも１つの画分（ＤＰ１、ＤＰ２及び／又はＤＰ３などの）は、相対的存在量で約０．１％、約０．２％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％又は約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の少なくとも１つの画分（ＤＰ１、ＤＰ２及び／又はＤＰ３などの）は、相対的存在量で約０．１％～約９０％、約０．５％～約９０％、約０．５％～約８０％、約０．５％～約７０％、約０．５％～約６０％、約０．５％～約５０％、約０．５％～約４０％、約０．５％～約３０％、約０．５％～約２０％、約０．５％～約１０％、約０．５％～約９％、約０．５％～約８％、約０．５％～約７％、約０．５％～約６％、約０．５％～約５％、約０．５％～約４％、約０．５％～約３％、約０．５％～約２％、約２％～約９％、約２％～約８％、約２％～約７％、約２％～約６％、約２％～約５％、約２％～約４％、約２％～約３％又は約５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、相対的存在量は、質量分析、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ又はＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって測定される。いくつかの実施形態では、ＤＰ１及びＤＰ２画分は、各々独立して、質量分析法、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ又はＧＣ－ＭＳにより測定される相対的存在量で約０．５％～約１５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[0094]いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物の各画分は、相対的存在量で８０％未満、７０％未満、６０％未満、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満又は１％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物の各画分は、相対的存在量で１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％又は２％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。他の実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物の各画分は、相対的存在量で２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％又は８０％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。他の実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物の各画分は、相対的存在量で２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％又は３０％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物の各画分は、相対的存在量で約０．１％、約０．２％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１％、約１．５％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％又は約３０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物の各画分は、相対的存在量で約０．１％、約０．２％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％又は約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物の各画分は、相対的存在量で約０．１％～約９０％、約０．１％～約１５％、約０．５％～約９０％、約０．５％～約８０％、約０．５％～約７０％、約０．５％～約６０％、約０．５％～約５０％、約０．５％～約４０％、約０．５％～約３０％、約０．５％～約２０％、約０．５％～約１０％、約０．５％～約９％、約０．５％～約８％、約０．５％～約７％、約０．５％～約６％、約０．５％～約５％、約０．５％～約４％、約０．５％～約３％、約０．５％～約２％、約２％～約９％、約１％～約１０％、約２％～約８％、約２％～約７％、約２％～約６％、約２％～約５％、約２％～約４％、約２％～約３％又は約５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[0095]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、相対的存在量で８０％未満、７０％未満、６０％未満、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満又は１％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、相対的存在量で１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％又は１％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。他の実施形態では、オリゴ糖調製物は、相対的存在量で０．５％超超、０．８％超、１％超、２％超、３％超、４％超、５％超、６％超、７％超、８％超、９％超、１０％超、１１％超、１２％超、１３％超、１４％超、１５％超、１６％超、１７％超、１８％超、１９％超、２０％超、３０％超、４０％超、５０％超、６０％超、７０％超又は８０％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。他の実施形態では、オリゴ糖調製物は、相対的存在量で２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％又は３０％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、相対的存在量で約０．１％、約０．２％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％又は約３０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、相対的存在量で約０．１％、約０．２％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１％、約１．５％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％又は約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、相対的存在量で約０．１％～約９０％、約０．１％～約１５％、約０．５％～約９０％、約０．５％～約８０％、約０．５％～約７０％、約０．５％～約６０％、約０．５％～約５０％、約０．５％～約４０％、約０．５％～約３０％、約０．５％～約２０％、約０．５％～約１０％、約０．５％～約９％、約０．５％～約８％、約０．５％～約７％、約０．５％～約６％、約０．５％～約５％、約０．５％～約４％、約０．５％～約３％、約０．５％～約２％、約２％～約９％、約２％～約８％、約２％～約７％、約２％～約６％、約２％～約５％、約２％～約４％、約２％～約３％又は約５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[0096]いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ１画分は、相対的存在量で３０％未満、２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満又は１％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ１画分は、相対的存在量で０．１％超、０．５％超、０．８％超、１％超、１．５％超、２％超、３％超、４％超、５％超、６％超、７％超、８％超、９％超、１０％超、１１％超、１２％超、１３％超、１４％超又は１５％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ１画分は、相対的存在量で約０．５％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％又は約２０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ１画分は、相対的存在量で約０．１％～約１５％、約０．１％～約２０％、約０．５％～約２０％、０．５％～約１０％、約０．５％～約１５％、約１％～約２０％、約１％～約１５％、約１％～約１０％、約２％～約１４％、約３％～約１３％、約４％～約１２％、約５％～約１１％、約５％～約１０％、約６％～約９％若しくは約７％～約８％又はそれらの間の任意の範囲のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ１画分は、相対的存在量で約５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の相対的存在量は、質量分析法によって決定される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の相対的存在量は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって決定される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の相対的存在量は、ＧＣ－ＭＳによって決定される。
[0097]いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ２画分は、相対的存在量で３０％未満、２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満又は１％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ２画分は、相対的存在量で０．１％超、０．５％超、０．８％超、１％超、１．５％超、２％超、３％超、４％超、５％超、６％超、７％超、８％超、９％超、１０％超、１１％超、１２％超、１３％超、１４％超又は１５％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ２画分は、相対的存在量で約０．５％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％又は約２０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ２画分は、相対的存在量で約０．１％～約１５％、約０．１％～約２０％、約０．５％～約２０％、０．５％～約１０％、約０．５％～約１５％、約１％～約２０％、約１％～約１５％、約１％～約１０％、約２％～約１４％、約３％～約１３％、約４％～約１２％、約５％～約１１％、約５％～約１０％、約６％～約９％若しくは約７％～約８％又はそれらの間の任意の範囲のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ２画分は、相対的存在量で約５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の相対的存在量は、ＭＡＬＤＩ－ＭＳなどの質量分析法によって決定される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の相対的存在量は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって決定される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の相対的存在量は、ＧＣ－ＭＳによって決定される。
[0098]いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ３画分は、相対的存在量で３０％未満、２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満又は１％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ３画分は、相対的存在量で０．１％超、０．５％超、０．８％超、１％超、１．５％超、２％超、３％超、４％超、５％超、６％超、７％超、８％超、９％超、１０％超、１１％超、１２％超、１３％超、１４％超又は１５％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ３画分は、相対的存在量で約０．５％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％又は約２０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ３画分は、相対的存在量で約０．１％～約１５％、約０．１％～約２０％、約０．５％～約２０％、０．５％～約１０％、約０．５％～約１５％、約１％～約２０％、約１％～約１５％、約１％～約１０％、約２％～約１４％、約３％～約１３％、約４％～約１２％、約５％～約１１％、約５％～約１０％、約６％～約９％若しくは約７％～約８％又はそれらの間の任意の範囲のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ３画分は、相対的存在量で約５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の相対的存在量は、ＭＡＬＤＩ－ＭＳなどの質量分析法によって決定される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の相対的存在量は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって決定される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の相対的存在量は、ＧＣ－ＭＳによって決定される。
[0099]いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖は、１つ以上のアンヒドロサブユニットを含む。例えば、ＤＰ１アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖は、１つのアンヒドロサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、ＤＰｎアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖は、１～ｎ個のアンヒドロサブユニットを含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖は、１つ又は２つのアンヒドロサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物における各オリゴ糖は、独立して、０、１又は２個のアンヒドロサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の９９％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％又は３０％超は、１つのみのアンヒドロサブユニットを有する。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の９９％、９５％、９０％、８５％又は８０％超は、１つのみのアンヒドロサブユニットを有する。
[00100]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物又はオリゴ糖調製物の各画分における１つ以上のオリゴ糖は、それぞれグリコシド結合を介して結合しているアンヒドロサブユニットを１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個含み、ここで、各アンヒドロサブユニットを結合するグリコシド結合は独立して選択される。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物又はオリゴ糖調製物の各画分における１つ以上のオリゴ糖は、それぞれグリコシド結合を介して結合しているアンヒドロサブユニットを１、２又は３個含み、ここで、各アンヒドロサブユニットを結合するグリコシド結合は独立して選択される。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物又は各画分におけるオリゴ糖の５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は９９％超は、それぞれグリコシド結合を介して結合しているアンヒドロサブユニットを１、２又は３個含み、ここで、各アンヒドロサブユニットを結合するグリコシド結合は独立して選択される。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物又は各画分における１つ以上のオリゴ糖は、グリコシド結合を介して結合しているアンヒドロサブユニットを１個含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物又は各画分におけるオリゴ糖の５０％超、６０％超、７０％超、８０％超、９０％又は９９％超は、グリコシド結合を介して結合しているアンヒドロサブユニットを１個含む。
［アンヒドロサブユニット種］
[00101]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、異なる種のアンヒドロサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、例示的なアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖は、図５、図１８及び図１９に示されている。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、単糖の熱脱水生成物、即ちアンヒドロ－単糖サブユニットである、１つ以上のアンヒドロサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、単糖の可逆的熱脱水生成物である、１つ以上のアンヒドロサブユニットを含む。
[00102]アンヒドロ－単糖（又はアンヒドロ－単糖サブユニット）は、１つ以上の種の単糖の熱脱水生成物を指すと理解すべきである。例えば、いくつかの実施形態では、アンヒドロ－グルコースは、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノース（レボグルコサン）又は１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースを指す。いくつかの実施形態では、複数のアンヒドロ－グルコースは、複数の１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノース（レボグルコサン）、複数の１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノース、グルコースの複数の他の熱脱水生成物又はこれらの任意の組み合わせを指す。同様に、いくつかの実施形態では、複数のアンヒドロ－ガラクトースは、ガラクトースの複数の任意の熱脱水生成物又はこれらの任意の組み合わせを指す。
[00103]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、１つ以上のアンヒドロ－グルコース、アンヒドロ－ガラクトース、アンヒドロ－マンノース、アンヒドロ－アロース、アンヒドロ－アルトロース、アンヒドロ－グロース、アンヒドロ－インドース、アンヒドロ－タロース、アンヒドロ－フルクトース、アンヒドロ－リボース、アンヒドロ－アラビノース、アンヒドロ－ラムノース、アンヒドロ－リキソース、アンヒドロ－キシロース又はこれらのサブユニットの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、１つ以上のアンヒドロ－グルコース、アンヒドロ－ガラクトース、アンヒドロ－マンノース又はアンヒドロ－フルクトースサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、１，６－アンヒドロ－３－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシル－β－Ｄ－グルコピラノース、１，６－アンヒドロ－３－Ｏ－α－Ｄ－グルコピラノシル－β－Ｄ－グルコピラノース、１，６－アンヒドロ－２－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシル－β－Ｄ－グルコピラノース、１，６－アンヒドロ－２－Ｏ－α－Ｄ－グルコピラノシル－β－Ｄ－グルコピラノース、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－セロビオース（セロビオサン）、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－セロトリオース（セロトリオサン（ｃｅｌｌｏｔｒｉｏｓａｎ））、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－セロテトラオース（セロテトラオサン（ｃｅｌｌｏｔｅｔｒａｏｓａｎ））、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－セロペンタオース（セロペンタオサン（ｃｅｌｌｏｐｅｎｔａｏｓａｎ））及び１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－マルトース（マルトサン）の１つ以上を含む。
[00104]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、１つ以上の１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、１つ以上の１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノース（レボグルコサン）サブユニットを含む。例えば、図１８は、２つのＤＰ１アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖（レボグルコサン及び１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノース）及び１つのＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖（アンヒドロ－セロビオース）を示す。
[00105]アンヒドロサブユニットの種の存在及びレベルは、オリゴ糖を製造するために使用される供給糖に基づいて変化し得る。例えば、いくつかの実施形態では、グルコ－オリゴ糖はアンヒドロ－グルコースサブユニットを含み、ガラクト－オリゴ糖はアンヒドロ－ガラクトースサブユニットを含み、グルコ－ガラクト－オリゴ糖は、アンヒドロ－グルコース及びアンヒドロ－ガラクトースサブユニットを含む。
[00106]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースアンヒドロサブユニット及び１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースアンヒドロサブユニットの両方を含む。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニットの少なくとも０．１％、１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は９９％は、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノース及び１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニットの少なくとも１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％は、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースである。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニットの少なくとも１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％又は６０％は、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースである。
[00107]いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、調製物中で約１０：１～１：１０、９：１～１：１０、８：１～１：１０、７：１～１：１０、６：１～１：１０、５：１～１：１０、４：１～１：１０、３：１～１：１０、２：１～１：１０、１０：１～１：９、１０：１～１：８、１０：１～１：７、１０：１～１：６、１０：１～１：５、１０：１～１：４、１０：１～１：３、１０：１～１：２又は１：１～３：１である。いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、調製物中で約１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：８、１：９又は１：１０である。いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、調製物中で約２：１である。
[00108]いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、各画分中で１０：１～１：１０、９：１～１：１０、８：１～１：１０、７：１～１：１０、６：１～１：１０、５：１～１：１０、４：１～１：１０、３：１～１：１０、２：１～１：１０、１０：１～１：９、１０：１～１：８、１０：１～１：７、１０：１～１：６、１０：１～１：５、１０：１～１：４、１０：１～１：３、１０：１～１：２又は１：１～３：１である。いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、各画分中で約１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：８、１：９又は１：１０である。いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、各画分中で約２：１である。
[00109]いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、少なくとも１つの画分中で約１０：１～１：１０、９：１～１：１０、８：１～１：１０、７：１～１：１０、６：１～１：１０、５：１～１：１０、４：１～１：１０、３：１～１：１０、２：１～１：１０、１０：１～１：９、１０：１～１：８、１０：１～１：７、１０：１～１：６、１０：１～１：５、１０：１～１：４、１０：１～１：３、１０：１～１：２又は１：１～３：１である。いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、少なくとも１つの画分中で約１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：８、１：９又は１：１０である。いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、少なくとも１つの画分中で約２：１である。
[00110]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、アンヒドロサブユニット含有ＤＰ２オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、アンヒドロ－ラクトース、アンヒドロ－スクロース、アンヒドロ－セロビオース又はこれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、約２～２０、２～１５、５～２０、５～１５又は５～１０種のＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物はセロビオサンを含まないか、又は検出可能レベルのセロビオサンを含まない。
[00111]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、糖カラメル化生成物である１つ以上のアンヒドロサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のアンヒドロサブユニットを含むオリゴ糖調製物は、メタノール；エタノール；フラン；メチルグリオキサール；２－メチルフラン；酢酸ビニル；グリコールアルデヒド；酢酸；アセトール；フルフラール；２－フランメタノール；３－フランメタノール；２－ヒドロキシシクロペンタ－２－エン－１－オン；５－メチルフルフラール；２（５Ｈ）－フラノン；２メチルシクロペンテノロン；レボグルコセノン；環状ヒドロキシルラクトン；１，４，３，６－ジアンヒドロ－α－Ｄ－グルコピラノース；ジアンヒドログルコピラノース；及び５－ヒドロキシメチルフルフラール（５－ｈｍｆ）からなる群から選択される糖カラメル化生成物である。
[00112]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物又はＤＰ画分の少なくとも１つにおいて、カラメル化生成物であるアンヒドロサブユニットは、単糖の可逆的熱脱水生成物であるアンヒドロサブユニットよりも豊富ではない。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物又は画分の少なくとも１つにおいて、カラメル化生成物であるアンヒドロサブユニットは、単糖の可逆的熱脱水生成物であるアンヒドロサブユニットよりも豊富である。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物又は画分の少なくとも１つにおいて、カラメル化生成物であるアンヒドロサブユニット及び単糖の可逆的熱脱水生成物であるアンヒドロサブユニットは、同様の存在比を有する。
[00113]いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物におけるアンヒドロサブユニットの約０．０１％～約５０％、約０．０１％～約４０％、約０．０１％～約３０％、約０．０１％～約２０％、約０．０１％～約１０％、約０．０１％～約５％、約０．０１％～約４％、約０．０１％～約３％、約０．０１％～約２％、約０．０１％～約１％、約０．０１％～約０．５％、約０．１％～約５０％、約０．１％～約４０％、約０．１％～約３０％、約０．１％～約２０％、約０．１％～約１０％、約０．１％～約５％、約０．１％～約４％、約０．１％～約３％、約０．１％～約２％、約０．１％～約１％又は約０．１％～約０．５％は、カラメル化生成物である。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物におけるアンヒドロサブユニットの約０．１％～約５％、約０．１％～約２％又は約０．１％～約１％は、カラメル化生成物である。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物におけるアンヒドロサブユニットの５０％未満、４０％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満又は１％未満は、カラメル化生成物である。
[00114]いくつかの実施形態では、本明細書で記載される調製物の少なくとも１つの画分（例えば、ＤＰ１、ＤＰ２及び／又はＤＰ３画分）におけるアンヒドロサブユニットの約０．０１％～約５０％、約０．０１％～約４０％、約０．０１％～約３０％、約０．０１％～約２０％、約０．０１％～約１０％、約０．０１％～約５％、約０．０１％～約４％、約０．０１％～約３％、約０．０１％～約２％、約０．０１％～約１％、約０．０１％～約０．５％、約０．１％～約５０％、約０．１％～約４０％、約０．１％～約３０％、約０．１％～約２０％、約０．１％～約１０％、約０．１％～約５％、約０．１％～約４％、約０．１％～約３％、約０．１％～約２％、約０．１％～約１％又は約０．１％～約０．５％は、カラメル化生成物である。いくつかの実施形態では、調製物の少なくとも１つの画分（例えば、ＤＰ１、ＤＰ２及び／又はＤＰ３）におけるアンヒドロサブユニットの約０．１％～約５％、約０．１％～約２％又は約０．１％～約１％は、カラメル化生成物である。いくつかの実施形態では、調製物の少なくとも１つの画分におけるアンヒドロサブユニットの５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％又は１％未満は、カラメル化生成物である。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ１、ＤＰ２及び／又はＤＰ３画分におけるアンヒドロサブユニットの２０％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満又は１％未満は、カラメル化生成物である。
[00115]いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物の各画分におけるアンヒドロサブユニットの約０．０１％～約５０％、約０．０１％～約４０％、約０．０１％～約３０％、約０．０１％～約２０％、約０．０１％～約１０％、約０．０１％～約５％、約０．０１％～約４％、約０．０１％～約３％、約０．０１％～約２％、約０．０１％～約１％、約０．０１％～約０．５％、約０．１％～約５０％、約０．１％～約４０％、約０．１％～約３０％、約０．１％～約２０％、約０．１％～約１０％、約０．１％～約５％、約０．１％～約４％、約０．１％～約３％、約０．１％～約２％、約０．１％～約１％又は約０．１％～約０．５％は、カラメル化生成物である。いくつかの実施形態では、調製物の各画分におけるアンヒドロサブユニットの約０．１％～約５％、約０．１％～約２％又は約０．１％～約１％は、カラメル化生成物である。いくつかの実施形態では未満、調製物の各画分におけるアンヒドロサブユニットの５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満又は１％未満は、カラメル化生成物である。
[00116]いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物におけるオリゴ糖の各々は、独立して及び任意選択的に、アンヒドロサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、２つ以上の独立したオリゴ糖は、同一又は異なるアンヒドロサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、２つ以上の独立したオリゴ糖は、異なるアンヒドロサブユニットを含む。例えば、いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースを含むＤＰ１アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖及び１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースサブユニットを含むＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物における１つ以上のオリゴ糖は、２つ以上の同一の又は異なるアンヒドロサブユニットを含む。
[00117]いくつかの実施形態では、２以上の重合度を有するオリゴ糖調製物の任意の画分（即ちＤＰ２～ＤＰｎ画分）において、アンヒドロサブユニットは、１つ以上の通常の又はアンヒドロサブユニットに結合し得る。いくつかの実施形態では、ＤＰ２～ＤＰｎ画分において、少なくとも１つのアンヒドロサブユニットは、１つ、２つ又は３つの他の通常の又はアンヒドロサブユニットに結合している。いくつかの実施形態では、ＤＰ２～ＤＰｎ画分において、少なくとも１つのアンヒドロサブユニットは、１つ又は２つの通常のサブユニットに結合している。いくつかの実施形態では、ＤＰ２～ＤＰｎ画分において、少なくとも１つのアンヒドロサブユニットは、１つの通常のサブユニットに結合している。いくつかの実施形態では、ＤＰ２～ＤＰｎ画分のいずれかにおいて、アンヒドロサブユニットの９９％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％又は３０％超は、１つの通常のサブユニットに結合している。いくつかの実施形態では、ＤＰ２～ＤＰｎ画分の各々において、アンヒドロサブユニットの９９％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％又は３０％超は、１つの通常のサブユニットに結合している。
[00118]いくつかの実施形態では、２以上の重合度を有するオリゴ糖調製物の任意の画分（即ちＤＰ２～ＤＰｎ画分）において、アンヒドロサブユニットは、オリゴ糖の鎖末端に位置し得る。いくつかの実施形態では、３以上の重合度を有するオリゴ糖調製物の任意の画分（即ちＤＰ３～ＤＰｎ画分）において、アンヒドロサブユニットは、オリゴ糖の鎖末端ではない位置に位置し得る。いくつかの実施形態では、ＤＰ２～ＤＰｎ画分におけるアンヒドロサブユニットの９９％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％又は３０％超は、オリゴ糖の鎖末端に位置している。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は９９％超は、鎖末端アンヒドロサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％超は、鎖末端アンヒドロサブユニットを含む。
[00119]いくつかの実施形態では、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は９９％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖が、鎖末端アンヒドロサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖が、鎖末端アンヒドロサブユニットを含む。
［グリコシド結合］
[00120]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法に使用される本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、様々なグリコシド結合を含む。グリコシド結合の型及び分布は、オリゴ糖調製物の供給源及び製造方法に依存し得る。いくつかの実施形態では、様々なグリコシド結合の型及び分布は、ＮＭＲなどの当技術分野において公知の任意の好適な方法によって決定及び／又は検出することができる。例えば、いくつかの実施形態では、グリコシド結合は、１Ｈ ＮＭＲ、１３Ｃ ＮＭＲ、２Ｄ ＮＭＲ、例えば２Ｄ ＪＲＥＳ、ＨＳＱＣ、ＨＭＢＣ、ＤＯＳＹ、ＣＯＳＹ、ＥＣＯＳＹ、ＴＯＣＳＹ、ＮＯＥＳＹ若しくはＲＯＥＳＹなど、又はこれらの任意の組み合わせなどによって決定及び／又は検出される。いくつかの実施形態では、グリコシド結合は、少なくとも部分的に、プロトンＮＭＲによって決定及び／又は検出される。いくつかの実施形態では、グリコシド結合は、少なくとも部分的に、１３Ｃ ＮＭＲによって決定及び／又は検出される。いくつかの実施形態では、グリコシド結合は、少なくとも部分的に、２Ｄ１Ｈ、１３Ｃ－ＨＳＱＣ ＮＭＲによって決定及び／又は検出される。
[00121]いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物は、１つ以上のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，４）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合、β－（１，６）グリコシド結合、α－（１，１）－αグリコシド結合、α－（１，１）－βグリコシド結合、β－（１，１）－βグリコシド結合又はこれらの組み合わせを含む。
[00122]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、α－（１，６）グリコシド結合が約０～約６０モル％、約５％～約５５モル％、約５％～約５０モル％、約５％～約４５モル％、約５％～約４０モル％、約５％～約３５モル％、約５％～約３０モル％、約５％～約２５モル％、約１０％～約６０モル％、約１０％～約５５モル％、約１０％～約５０モル％、約１０％～約４５モル％、約１０％～約４０モル％、約１０％～約３５モル％、約１５％～約６０モル％、約１５％～約５５モル％、約１５％～約５０モル％、約１５％～約４５モル％、約１５％～約４０モル％、約１５％～約３５モル％、約２０％～約６０モル％、約２０％～約５５モル％、約２０％～約５０モル％、約２０％～約４５モル％、約２０％～約４０モル％、約２０％～約３５モル％、約２５％～約６０モル％、約２５％～約５５モル％、約２５％～約５０モル％、約２５％～約４５モル％、約２５％～約４０モル％又は約２５％～約３５モル％のグリコシド結合型分布を有する。
[00123]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、α－（１，３）グリコシド結合が約０～約５０モル％、約０～約４０モル％、約０～約３５モル％、約０～約３０モル％、約０～約２５モル％、約０～約２０モル％、約５％～約４０モル％、約５％～約３５モル％、約５％～約３０モル％、約５％～約２５モル％、約５％～約２０モル％、約１０％～約４０モル％、約１０％～約３５モル％、約１０％～約２０モル％、約１５％～約４０モル％、約１５％～約３５モル％、約１５％～約３０モル％、約１５％～約２５モル％又は約１５％～約２０モル％のグリコシド結合型分布を有する。
[00124]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、α－（１，２）グリコシド結合が約０～約４０モル％、約０～約３５モル％、約０～約３０モル％、約０～約２５モル％、約０～約２０モル％、約０～約１５モル％、約０～約１０モル％、約２％～約３０モル％、約２％～約２５モル％、約２％～約２０モル％、約２％～約１５モル％、約２％～約１０モル％、約３％～約３０モル％、約３％～約２５モル％、約３％～約２０モル％、約３％～約１５モル％、約３％～約１０モル％、約５％～約３０モル％、約５％～約２５モル％、約５％～約２０モル％、約５％～約１５モル％又は約５％～約１０モル％のグリコシド結合型分布を有する。
[00125]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、約０～約４０ｍｏｌ％、約０～約３０ｍｏｌ％、約０～約２５ｍｏｌ％、約０～約２０ｍｏｌ％、約０～約１５ｍｏｌ％、約０～約１０ｍｏｌ％又は約０～約５ｍｏｌ％のα－（１，４）グリコシド結合のグリコシド結合タイプ分布を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、α－（１，４）グリコシド結合が４０モル％未満、３０モル％未満、２０モル％未満、１５モル％未満、１０モル％未満、９モル％未満、８モル％未満、７モル％未満、６モル％未満、５モル％未満、４モル％未満、３モル％未満又は２モル％未満のグリコシド結合型分布を有する。
[00126]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、約０～約４０ｍｏｌ％、約０～約３５ｍｏｌ％、約０～約３０ｍｏｌ％、約０～約２５ｍｏｌ％、約０～約２０ｍｏｌ％、約０～約１５ｍｏｌ％、約０～約１０ｍｏｌ％、約２％～約３０ｍｏｌ％、約２％～約２５ｍｏｌ％、約２％～約２０ｍｏｌ％、約２％～約１５ｍｏｌ％、約２％～約１０ｍｏｌ％、約５％～約３０ｍｏｌ％、約５％～約２５ｍｏｌ％、約５％～約２０ｍｏｌ％、約５％～約１５ｍｏｌ％、約５％～約１０ｍｏｌ％、約８％～約３０ｍｏｌ％、約８％～約２５ｍｏｌ％、約８％～約２０ｍｏｌ％、約８％～約１５ｍｏｌ％、約８～約１０ｍｏｌ％又は約１０％～約１５ｍｏｌ％のβ－（１，６）グリコシド結合のグリコシド結合タイプ分布を有する。
[00127]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、約０～約４０ｍｏｌ％、約０～約３５ｍｏｌ％、約０～約３０ｍｏｌ％、約０～約２５ｍｏｌ％、約０～約２０ｍｏｌ％、約０～約１５ｍｏｌ％、約０～約１０ｍｏｌ％、約２％～約３０ｍｏｌ％、約２％～約２５ｍｏｌ％、約２％～約２０ｍｏｌ％、約２％～約１５ｍｏｌ％、約２％～約１０ｍｏｌ％、約３％～約３０ｍｏｌ％、約３％～約２５ｍｏｌ％、約３％～約２０ｍｏｌ％、約３％～約１５ｍｏｌ％、約３％～約１０ｍｏｌ％、約５％～約３０ｍｏｌ％、約５％～約２５ｍｏｌ％、約５％～約２０ｍｏｌ％、約５％～約１５ｍｏｌ％又は約５％～約１０ｍｏｌ％のβ－（１，４）グリコシド結合のグリコシド結合タイプ分布を有する。
[00128]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、約０～約４０ｍｏｌ％、約０～約３０ｍｏｌ％、約０～約２５ｍｏｌ％、約０～約２０ｍｏｌ％、約０～約１５ｍｏｌ％、約０～約１０ｍｏｌ％、約０～約５ｍｏｌ％、約１％～約２０ｍｏｌ％、約１％～約１５ｍｏｌ％、約１％～約１０ｍｏｌ％、約１％～約５ｍｏｌ％、約２％～約２０ｍｏｌ％、約２％～約１５ｍｏｌ％、約２％～約１０ｍｏｌ％又は約２％～約５ｍｏｌ％のβ－（１，２）グリコシド結合のグリコシド結合タイプ分布を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、β－（１，２）グリコシド結合が４０モル％未満、３０モル％未満、２０モル％未満、１５モル％未満、１０モル％未満、９モル％未満、８モル％未満、７モル％未満、６モル％未満、５モル％未満、４モル％未満、３モル％未満又は２モル％未満のグリコシド結合型分布を有する。
[00129]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、約０～約４０ｍｏｌ％、約０～約３０ｍｏｌ％、約０～約２５ｍｏｌ％、約０～約２０ｍｏｌ％、約０～約１５ｍｏｌ％、約０～約１０ｍｏｌ％、約０～約５ｍｏｌ％、約１％～約２０ｍｏｌ％、約１％～約１５ｍｏｌ％、約１％～約１０ｍｏｌ％、約１％～約５ｍｏｌ％、約２％～約２０ｍｏｌ％、約２％～約１５ｍｏｌ％又は約２％～約１０ｍｏｌ％、約２％～約５ｍｏｌ％のβ－（１，３）グリコシド結合のグリコシド結合タイプ分布を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、４０ｍｏｌ％未満、３０ｍｏｌ％未満、２０ｍｏｌ％未満、１５ｍｏｌ％未満、１０ｍｏｌ％未満、９ｍｏｌ％未満、８ｍｏｌ％未満、７ｍｏｌ％未満、６ｍｏｌ％未満、５ｍｏｌ％未満、４ｍｏｌ％未満、３ｍｏｌ％未満又は２ｍｏｌ％未満のβ－（１，３）グリコシド結合のグリコシド結合タイプ分布を有する。
[00130]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、非合成オリゴ糖調製物のグリコシド結合型分布とは異なるグリコシド結合型分布を有する。例えば、いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、基礎栄養組成物のグリコシド結合型分布とは異なるグリコシド結合型分布を有する。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、デンプン及び植物繊維などの天然炭水化物源を含む。天然炭水化物源のいくつかは、高い割合のα－（１，４）、α－（１，６）及び／又はβ－（１，６）グリコシド結合を有する。従って、いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、基礎栄養組成物よりも低い割合のα－（１，４）グリコシド結合を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、基礎栄養組成物よりも低い割合のα－（１，６）グリコシド結合を有する。他の実施形態では、オリゴ糖調製物は、基礎栄養組成物よりも高い割合のα－（１，６）グリコシド結合を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、基礎栄養組成物よりも低い割合のβ－（１，６）グリコシド結合を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、酵素によって容易に消化又は加水分解されないグリコシド結合を含む。
[00131]具体的には、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物のグリコシド結合型分布におけるα－（１，２）、α－（１，３）、α－（１，４）、α－（１，６）、β－（１，２）、β－（１，３）、β－（１，４）及び／又はβ－（１，６）グリコシド結合は、基礎栄養組成物のものよりも少なくとも５０モル％、少なくとも４０モル％、少なくとも３０モル％、少なくとも２０モル％、少なくとも１５モル％、少なくとも１０モル％、少なくとも５モル％、少なくとも２モル％又は少なくとも１モル％低い。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物のグリコシド結合型分布におけるα－（１，２）、α－（１，３）、α－（１，４）、α－（１，６）、β－（１，２）、β－（１，３）、β－（１，４）及び／又はβ－（１，６）グリコシド結合は、基礎栄養組成物のものよりも少なくとも５０モル％、少なくとも４０モル％、少なくとも３０モル％、少なくとも２０モル％、少なくとも１５モル％、少なくとも１０モル％、少なくとも５モル％、少なくとも２モル％又は少なくとも１モル％高い。
[00132]特定の型のグリコシド結合は、特定の型の単糖を含むオリゴ糖には適用できない場合があることが、当業者により理解されるべきである。例えば、いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、α－（１，２）グリコシド結合及びα－（１，６）グリコシド結合を含む。他の実施形態では、オリゴ糖調製物は、α－（１，２）グリコシド結合及びβ－（１，３）グリコシド結合を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、α－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合及びβ－（１，６）グリコシド結合を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、α－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，４）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合及びβ－（１，６）グリコシド結合を含む。
［分子量］
[00133]本明細書に記載のオリゴ糖調製物の分子量及び分子量分布は、任意の好適な分析手段及び機器、例えば、末端基法、浸透圧（浸透圧測定）、超遠心分離、粘度測定、光散乱法、ＳＥＣ、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、ＦＦＦ、Ａ４Ｆ、ＨＰＬＣ及び質量分析法などによって決定され得る。いくつかの実施形態では、分子量及び分子量分布は、質量分析法、例えば、ＭＡＬＤＩ－ＭＳ、ＬＣ－ＭＳ又はＧＣ－ＭＳなどによって決定される。いくつかの実施形態では、分子量及び分子量分布は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、例えばゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）などによって決定される。他の実施形態では、分子量及び分子量分布は、ＨＰＬＣによって決定される。いくつかの実施形態では、分子量及び分子量分布は、ＭＡＬＤＩ－ＭＳによって決定される。
[00134]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、約１００～約１００００ｇ／モル、約２００～約８０００ｇ／モル、約３００～約５０００ｇ／モル、約５００～約５０００ｇ／モル、約７００～約５０００ｇ／モル、約９００～約５０００ｇ／モル、約１１００～約５０００ｇ／モル、約１３００～約５０００ｇ／モル、約１５００～約５０００ｇ／モル、約１７００～約５０００ｇ／モル、約３００～約４５００ｇ／モル、約５００～約４５００ｇ／モル、約７００～約４５００ｇ／モル、約９００～約４５００ｇ／モル、約１１００～約４５００ｇ／モル、約１３００～約４５００ｇ／モル、約１５００～約４５００ｇ／モル、約１７００～約４５００ｇ／モル、約１９００～約４５００ｇ／モル、約３００～約４０００ｇ／モル、約５００～約４０００ｇ／モル、約７００～約４０００ｇ／モル、約９００～約４０００ｇ／モル、約１１００～約４０００ｇ／モル、約１３００～約４０００ｇ／モル、約１５００～約４０００ｇ／モル、約１７００～約４０００ｇ／モル、約１９００～約４０００ｇ／モル、約３００～約３０００ｇ／モル、約５００～約３０００ｇ／モル、約７００～約３０００ｇ／モル、約９００～約３０００ｇ／モル、約１１００～約３０００ｇ／モル、約１３００～約３０００ｇ／モル、約１５００～約３０００ｇ／モル、約１７００～約３０００ｇ／モル、約１９００～約３０００ｇ／モル、約２１００～約３０００ｇ／モル、約３００～約２５００ｇ／モル、約５００～約２５００ｇ／モル、約７００～約２５００ｇ／モル、約９００～約２５００ｇ／モル、約１１００～約２５００ｇ／モル、約１３００～約２５００ｇ／モル、約１５００～約２５００ｇ／モル、約１７００～約２５００ｇ／モル、約１９００～約２５００ｇ／モル、約２１００～約２５００ｇ／モル、約３００～約１５００ｇ／モル、約５００～約１５００ｇ／モル、約７００～約１５００ｇ／モル、約９００～約１５００ｇ／モル、約１１００～約１５００ｇ／モル、約１３００～約１５００ｇ／モル、約２０００～約２８００ｇ／モル、約２１００～約２７００ｇ／モル、約２２００～約２６００ｇ／モル、約２３００～約２５００ｇ／モル又は約２３２０～約２４２０ｇ／モルの重量平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の重量平均分子量は、約２０００～約２８００ｇ／モル、約２１００～約２７００ｇ／モル、約２２００～約２６００ｇ／モル、約２３００～約２５００ｇ／モル又は約２３２０～約２４２０ｇ／モルである。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、少なくとも５００ｇ／モル、７５０ｇ／モル、１０００ｇ／モル又は１５００ｇ／モルから、最大１７５０ｇ／モル、２０００ｇ／モル、２２５０ｇ／モル、２５００ｇ／モル又は３０００ｇ／モルの範囲の重量平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物の重量平均分子量は、実施例９によるＨＰＬＣによって決定される。
[00135]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、約１００～約１００００ｇ／モル、約２００～約８０００ｇ／モル、約３００～約５０００ｇ／モル、約５００～約５０００ｇ／モル、約７００～約５０００ｇ／モル、約９００～約５０００ｇ／モル、約１１００～約５０００ｇ／モル、約１３００～約５０００ｇ／モル、約１５００～約５０００ｇ／モル、約１７００～約５０００ｇ／モル、約３００～約４５００ｇ／モル、約５００～約４５００ｇ／モル、約７００～約４５００ｇ／モル、約９００～約４５００ｇ／モル、約１１００～約４５００ｇ／モル、約１３００～約４５００ｇ／モル、約１５００～約４５００ｇ／モル、約１７００～約４５００ｇ／モル、約１９００～約４５００ｇ／モル、約３００～約４０００ｇ／モル、約５００～約４０００ｇ／モル、約７００～約４０００ｇ／モル、約９００～約４０００ｇ／モル、約１１００～約４０００ｇ／モル、約１３００～約４０００ｇ／モル、約１５００～約４０００ｇ／モル、約１７００～約４０００ｇ／モル、約１９００～約４０００ｇ／モル、約３００～約３０００ｇ／モル、約５００～約３０００ｇ／モル、約７００～約３０００ｇ／モル、約９００～約３０００ｇ／モル、約１１００～約３０００ｇ／モル、約１３００～約３０００ｇ／モル、約１５００～約３０００ｇ／モル、約１７００～約３０００ｇ／モル、約１９００～約３０００ｇ／モル、約２１００～約３０００ｇ／モル、約３００～約２５００ｇ／モル、約５００～約２５００ｇ／モル、約７００～約２５００ｇ／モル、約９００～約２５００ｇ／モル、約１１００～約２５００ｇ／モル、約１３００～約２５００ｇ／モル、約１５００～約２５００ｇ／モル、約１７００～約２５００ｇ／モル、約１９００～約２５００ｇ／モル、約２１００～約２５００ｇ／モル、約３００～約２０００ｇ／モル、約５００～約３００～２０００ｇ／モル、約７００～約２０００ｇ／モル、約９００～約２０００ｇ／モル、約１１００～約２０００ｇ／モル、約３００～約１５００ｇ／モル、約５００～約１５００ｇ／モル、約７００～約１５００ｇ／モル、約９００～約１５００ｇ／モル、約１１００～約１５００ｇ／モル、約１３００～約１５００ｇ／モル、約１０００～約２０００ｇ／モル、約１１００～約１９００ｇ／モル、約１２００～約１８００ｇ／モル、約１３００～約１７００ｇ／モル、約１４００～約１６００ｇ／モル又は約１４５０～約１５５０ｇ／モルの数平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の数平均分子量は、約１０００～約２０００ｇ／モル、約１１００～約１９００ｇ／モル、約１２００～約１８００ｇ／モル、約１３００～約１７００ｇ／モル、１４００～１６００ｇ／モル又は１４５０～１５５０ｇ／モルである。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、少なくとも５００ｇ／モル、７５０ｇ／モル、１０００ｇ／モル又は１５００ｇ／モルから、最大１７５０ｇ／モル、２０００ｇ／モル、２２５０ｇ／モル、２５００ｇ／モル又は３０００ｇ／モルの範囲の数平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物の数平均分子量は、実施例９によるＨＰＬＣによって決定される。
［オリゴ糖の種類］
[00136]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、１つ以上の種の単糖サブユニットを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又はそれを超える異なる種の単糖サブユニットを有するオリゴ糖を含み得る。
[00137]いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるオリゴ糖調製物は、トリオース、テトロース、ペントース、ヘキソース、ヘプトース及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の単糖サブユニットを含み、ここで、前記トリオース、テトロース、ペントース、ヘキソース又はヘプトースサブユニットの各々は、独立して、且つ任意選択的に、その対応するアンヒドロサブユニットの１つで官能基化及び／又は置換される。いくつかの実施形態では、対応するアンヒドロサブユニットは、単糖サブユニットの可逆的熱脱水の産物である。いくつかの実施形態では、対応するアンヒドロサブユニットは、単糖サブユニットのカラメル化産物である。
[00138]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、ペントースサブユニット、ヘキソースサブユニット又はこれらの任意の組み合わせを含み、ここで、前記ペントース又はヘキソースサブユニットの各々は、独立して及び任意選択的に、その対応するアンヒドロサブユニットの１つで官能化及び／又は置換されている。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、ヘキソースサブユニットを含み、ここで、前記ヘキソースサブユニットの各々は、独立して及び任意選択的に、その対応するアンヒドロサブユニットの１つで官能化及び／又は置換されている。
[00139]本明細書で使用する場合、テトロースは、エリトロース、トレオース及びエリトルロースなどの４個の炭素原子を有する単糖を指す。本明細書で使用する場合、ペントースは、アラビノース、リキソース、リボース及びキシロースなどの５個の炭素原子を有する単糖を指す。本明細書で使用する場合、ヘキソースは、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース、タロース、プシコース、フルクトース、ソルボース及びタガトースなどの６個の炭素原子を有する単糖を指す。本明細書で使用する場合、ヘプトースは、セドヘプツロース及びマンノヘプツロースなどの７個の炭素原子を有する単糖を指す。
[00140]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、グルコースサブユニットを含み、ここで、少なくとも１つのグルコースサブユニットは、任意選択的に、アンヒドロ－グルコースサブユニットで置換されている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、ガラクトースサブユニットを含み、ここで、少なくとも１つのガラクトースサブユニットは、任意選択的に、アンヒドロ－ガラクトースサブユニットで置換されている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、ガラクトース及びグルコースサブユニットを含み、ここで、少なくとも１つのガラクトースサブユニット又は少なくとも１つのグルコースサブユニットは、任意選択的に、その対応するアンヒドロサブユニットの１つで置換されている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、フルクトース及びグルコースサブユニットを含み、ここで、少なくとも１つのフルクトースサブユニット又は少なくとも１つのグルコースサブユニットは、任意選択的に、その対応するアンヒドロサブユニットの１つで置換されている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、マンノース及びグルコースサブユニットを含み、ここで、少なくとも１つのマンノースサブユニット又は少なくとも１つのグルコースサブユニットは、任意選択的に、その対応するアンヒドロサブユニットの１つで置換されている。
[00141]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、グルコ－ガラクトース－オリゴ糖調製物、グルコ－オリゴ糖調製物、ガラクト－オリゴ糖調製物、フルクト－オリゴ糖調製物、マンノ－オリゴ糖調製物、アラビノ－オリゴ糖調製物、キシロ－オリゴ糖調製物、グルコ－フルクト－オリゴ糖調製物、グルコ－マンノ－オリゴ糖調製物、グルコ－アラビノ－オリゴ糖調製物、グルコ－キシロ－オリゴ糖調製物、ガラクト－フルクト－オリゴ糖調製物、ガラクト－マンノ－オリゴ糖調製物、ガラクト－アラビノ－オリゴ糖調製物、ガラクト－キシロ－オリゴ糖調製物、フルクト－マンノ－オリゴ糖調製物、フルクト－アラビノ－オリゴ糖調製物、フルクト－キシロ－オリゴ糖調製物、マンノ－アラビノ－オリゴ糖調製物、マンノ－キシロ－オリゴ糖調製物、アラビノ－キシロ－オリゴ糖調製物、ガラクト－アラビノ－キシロ－オリゴ糖調製物、フルクト－ガラクト－キシロ－オリゴ糖調製物、アラビノ－フルクト－マンノ－キシロ－オリゴ糖調製物、グルコ－フルクト－ガラクト－アラビノ－オリゴ糖調製物、フルクト－グルコ－アラビノ－マンノ－キシロオリゴ糖調製物、グルコ－ガラクト－フルクト－マンノ－アラビノキシロ－オリゴ糖調製物又はこれらの任意の組み合わせを含み、；ここで、調製物内の単糖サブユニットの各々は、独立して及び任意選択的に、その対応するアンヒドロサブユニットの１つで官能化及び／又は置換されている。
[00142]特定の実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、重量で９９％超のグルコースサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、グルコースサブユニットのみを含む。
[00143]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、重量で約４５％～５５％のグルコースサブユニット及び約５５％～４５％のガラクトースサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、重量で約５０％のグルコース及び５０％のガラクトースサブユニットを含む。
[00144]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、重量で約８０％～９５％のグルコースサブユニット及び約２０％～５％のマンノースサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、重量で約８５％～９０％のグルコースサブユニット及び約１５％～１０％のマンノースサブユニットを含む。
[00145]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、重量で約８０％～９５％のグルコースサブユニット及び約２０％～５％のガラクトースサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、重量で約８５％～９０％のグルコースサブユニット及び約１５％～１０％のガラクトースサブユニットを含む。
[00146]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、重量で約８０％～９５％のグルコースサブユニット、０％～８％のガラクトースサブユニット及び５％～２０％のマンノースサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、重量で約８０％～９０％のグルコースサブユニット、１％～５％のガラクトースサブユニット及び１０％～１５％のマンノースサブユニットを含む。
[00147]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、約１重量％～約１００重量％、約５０重量％～約１００重量％、約８０重量％～約９８重量％若しくは約８５重量％～約９５重量％又はそれらの間の任意の範囲のグルコースサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、ガラクトースサブユニットは、約０重量％～約９０重量％、約１重量％～約５０重量％、約２重量％～約２０重量％若しくは約５重量％～約１５重量％又はそれらの間の任意の範囲の量で本明細書に記載のオリゴ糖調製物中に存在する。いくつかの実施形態では、マンノースサブユニットは、約０重量％～約９０重量％、約１重量％～約５０重量％、約２重量％～約２０重量％若しくは約５重量％～約１５重量％又はそれらの間の任意の範囲の量で本明細書に記載のオリゴ糖調製物中に存在する。
［Ｄ型対Ｌ型］
[00148]いくつかの実施形態では、オリゴ糖における少なくとも１つの単糖サブユニットは、Ｌ型である。いくつかの実施形態では、オリゴ糖における少なくとも１つの単糖サブユニットは、Ｄ型である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物における単糖サブユニットは、天然に豊富な形態、例えば、Ｄ－グルコース、Ｄ－キシロース及びＬ－アラビノースである。
[00149]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、Ｌ型及びＤ型の単糖サブユニットの混合物を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ型対Ｄ型又はＤ型対Ｌ型の単糖サブユニットの比は、約１：１、約１：２、約１：３、約１：４、約１：５、約１：６、約１：７、約１：８、約１：９、約１：１０、約１：１２、約１：１４、約１：１６、約１：１８、約１：２０、約１：２５、約１：３０、約１：３５、約１：４０、約１：４５、約１：５０、約１：５５、約１：６０、約１：６５、約１：７０、約１：７５、約１：８０、約１：８５、約１：９０、約１：１００又は約１：１５０である。
［官能化オリゴ糖］
[00150]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物における１つ以上のオリゴ糖は、独立して、官能化されている。官能化オリゴ糖は、１つ以上の糖を１つ以上の官能化化合物と触媒の存在下で合わせることによって生成され得る。官能化オリゴ糖の生成方法は、国際公開第２０１２／１１８７６７号パンフレット、同第２０１４／０３１９５６号パンフレット、同第２０１６／１２２８８７号パンフレット（それら全体が、それらの開示のために、本明細書に参照により組み込まれる）に記載されている。
[00151]いくつかの実施形態では、官能化化合物は、１つ以上の酸性基（例えば、－ＣＯＯＨ）、ヒドロキシル基、Ｎ含有基（例えば、－ＣＮ、－ＮＯ２及び－Ｎ（Ｒａ）２（式中、Ｒａは、水素基、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ハロアルキル基、ヘテロアルキル基、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロシクロアルキル基又はヘテロアリール基である）、Ｓ含有基（例えば、チオール及びサルフェート）、ハライド（例えば、－Ｃｌ）、Ｐ含有基（例えば、ホスフェート）又はこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、官能化化合物は、エーテル結合、エステル結合、酸素－硫黄結合、アミン結合又は酸素－リン結合によって少なくとも１つの単糖サブユニットに結合している。いくつかの実施形態では、１つ以上の官能化化合物は、単一の結合を介して単糖サブユニットに結合している。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの官能化化合物は、２つ以上の結合を介して１つ又は２つのオリゴ糖に結合している。
[00152]オリゴ糖調製物における各オリゴ糖について、記載された実施形態の各々は独立しており、あたかもあらゆる組み合わせが別々に記載されているかのように組み合わせることができ；従って、実施形態の任意の組み合わせが本開示に含まれることを理解すべきである。例えば、様々な実施形態は、（ｉ）アンヒドロサブユニットの有無；（ｉｉ）アンヒドロサブユニットの数及びレベル、（ｉｉｉ）アンヒドロサブユニット種の種類、（ｉｖ）アンヒドロサブユニットの位置、（ｖ）重合度、（ｖｉ）分子量、（ｖｉｉ）任意の官能基の有無、（ｖｉｉｉ）オリゴ糖の種類、（ｉｘ）グリコシド結合の型、及び（ｘ）Ｌ型対Ｄ型が挙げられるがこれらに限定されないいくつかのカテゴリにグループ化することができる。従って、記載されるオリゴ糖調製物は、異なる種の複数のオリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、少なくとも１０、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９又は１０１０の異なるオリゴ糖種を含む。いくつかの実施形態では、調製物は、少なくとも１０３、１０４、１０５、１０６又は１０９の異なるオリゴ糖種を含む。いくつかの実施形態では、調製物は、少なくとも１０３の異なるオリゴ糖種を含む。
［ＩＶ．オリゴ糖調製物を製造する方法］
[00153]一態様では、本明細書で、オリゴ糖調製物を製造する方法が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書で、動物飼料組成物などの栄養組成物での使用に好適であるか、又は動物に直接給餌されるオリゴ糖調製物を製造する方法が提供される。一態様では、本明細書で、１つ以上の供給糖及び触媒を含む水性組成物を、重合を誘導するのに十分な温度まで及び十分な時間加熱することを含むオリゴ糖調製物を製造する方法であって、触媒は、（＋）－カンファー－１０－スルホン酸；２－ピリジンスルホン酸；３－ピリジンスルホン酸；８－ヒドロキシ－５－キノリンスルホン酸水和物；α－ヒドロキシ－２－ピリジンメタンスルホン酸；（β）－カンファー－１０－スルホン酸；ブチルホスホン酸；ジフェニルホスフィン酸；ヘキシルホスホン酸；メチルホスホン酸；フェニルホスフィン酸；フェニルホスホン酸；ｔｅｒｔ－ブチルホスホン酸；ＳＳ）－ＶＡＰＯＬリン酸水素；６－キノリンスルホン酸、３－（１－ピリジニオ）－１－プロパンスルホネート；２－（２－ピリジニル）エタンスルホン酸；３－（２－ピリジル）－５，６－ジフェニル－１，２，４－トリアジン－ｐ，ｐ’－ジスルホン酸一ナトリウム塩水和物；リン酸水素１，１’－ビナフチル－２，２’－ジイル；ビス（４－メトキシフェニル）ホスフィン酸；フェニル（３，５－キシリル）ホスフィン酸；Ｌ－システイン酸一水和物；ポリ（スチレンスルホン酸－ｃｏ－ジビニルベンゼン）；リシン；エタンジスルホン酸；エタンスルホン酸；イセチオン酸；ホミシステイン酸；ＨＥＰＢＳ（Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－Ｎ’－（４－ブタンスルホン酸））；ＨＥＰＥＳ（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）；２－ヒドロキシ－３－モルホリノプロパンスルホン酸；２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸；メタンスルホン酸；メタニアジド；ナフタレン－１－スルホン酸；ナフタレン－２－スルホン酸；パーフルオロブタンスルホン酸；６－スルホキノボース；トリフルオロメタンスルホン酸；２－アミノエタンスルホン酸；安息香酸；クロロ酢酸；トリフルオロ酢酸；カプロン酸；エナント酸；カプリル酸；ペラルゴン酸；ラウリン酸；パルミチン酸；ステアリン酸；アラキジン酸；アスパラギン酸；グルタミン酸；セリン；トレオニン；グルタミン；システイン；グリシン；プロリン；アラニン；バリン；イソロイシン；ロイシン；メチオニン；フェニルアラニン；チロシン；トリプトファンからなる群から選択され、オリゴ糖調製物は、１（ＤＰ１画分）～ｎ（ＤＰｎ画分）から選択される別個の重合度をそれぞれ有する少なくともｎ画分のオリゴ糖を含み、ｎは、２以上の整数である、方法が提供される。いくつかの実施形態では、ｎは、３以上の整数である。いくつかの実施形態では、ｎは、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０又は５０などの１～１００の範囲内の整数である。いくつかの実施形態では、供給糖の重合は、ステップ成長重合により達成される。いくつかの実施形態では、供給糖の重合は、重縮合により達成される。
［供給糖］
[00154]いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物を製造する方法は、１つ以上の供給糖を加熱することを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の種類の供給糖は、単糖、二糖、三糖、四糖又はこれらの任意の混合物を含む。
[00155]いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、グルコースを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、グルコース及びガラクトースを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、グルコース、キシロース及びガラクトースを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、グルコース及びマンノースを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、グルコース及びフルクトースを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、グルコース、フルクトース及びガラクトースを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、グルコース、ガラクトース及びマンノースを含む。
[00156]いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、ラクトース、スクロース及びセロビオースなどの二糖を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、マルトトリオース又はラフィノースなどの三糖を含む。特定の実施形態では、１つ以上の供給糖は、グルコース、マンノース、ガラクトース、キシロース、マルト－デキストリン、アラビノース若しくはガラクトース又はこれらの任意の組み合わせを含む。特定の実施形態では、１つ以上の供給糖は、トウモロコシシロップなどの糖シロップを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、グルコース及びラクトースを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、グルコース及びスクロースを含む。
[00157]いくつかの実施形態では、供給糖の種類は、得られる製造されたオリゴ糖調製物に影響を与える可能性がある。例えば、１つ以上の供給糖が全てグルコースであるいくつかの変更形態では、得られるオリゴ糖調製物は、グルコ－オリゴ糖調製物を含む。他の実施形態では、１つ以上の供給糖が全てマンノースである場合、得られるオリゴ糖調製物は、マンノ－オリゴ糖調製物を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖が、グルコース及びガラクトースを含む場合、得られるオリゴ糖調製物は、グルコ－ガラクト－オリゴ糖調製物を含む。更に他の実施形態では、１つ以上の供給糖が、キシロース、グルコース及びガラクトースを含む場合、得られるオリゴ糖調製物は、グルコ－ガラクト－キシロ－オリゴ糖調製物を含む。
[00158]いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖の各々は、独立して、その脱水物又は水和物形態であり得る。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、グルコース、ガラクトース、フルクトース、マンノース又はこれらの任意の組み合わせを含み、グルコース、ガラクトース、フルクトース又はマンノースの各々は、独立して、その一水和物又は脱水物形態である。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、グルコース一水和物などの単糖一水和物を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、トレハロース二水和物などの糖二水和物を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、その脱水物形態の少なくとも１つの糖及びその水和物形態の少なくとも１つの糖を含む。
[00159]いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、糖を水と合わせて反応器に供給される糖溶液として提供することができる。いくつかの実施形態では、糖は固体形態で反応器に供給され、反応器内で水と組み合わせることができる。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、水を添加する前に合わせて混合する。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、水と合わせて、その後混合する。
[00160]いくつかの実施形態では、方法は、２つ以上の供給糖を触媒と合わせて、オリゴ糖調製物を生成することを含む。いくつかの実施形態では、２つ以上の供給糖は、グルコース、ガラクトース、フルクトース、マンノース、ラクトース又はこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、方法は、糖（例えば、単糖、二糖及び／又は三糖）の混合物を触媒と合わせて、オリゴ糖調製物を生成することを含む。他の実施形態では、方法は、糖及び糖アルコールの混合物を触媒と合わせて、オリゴ糖調製物を生成することを含む。
[00161]いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、官能化又は修飾された糖を含む。官能化又は修飾された糖は、アミノ糖、糖酸、糖アルコール、糖アミド、糖エーテル又はこれらの任意の組み合わせを含み得る。いくつかの実施形態では、アミノ糖は、ヒドロキシル基がアミン基で置換されている糖分子を指す。例示的なアミノ糖としては、Ｎ－アセチル－ｄ－グルコサミン、マンノサミン、ノイラミン酸、ムラミン酸、Ｎ－アセチル－ノイラミン、Ｎ－アセチル－ムラミン、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン、Ｎ－アセチル－マンノサミン、Ｎ－グリコリルノイラミン、アカルビオシン、Ｄ－グルコサミン及びＤ－ガラクトサミンが挙げられるが、これらに限定されない。
[00162]いくつかの実施形態では、糖酸は、カルボキシル基を有する糖を指す。例示的な糖酸としては、アルドン酸（グリセリン酸、キシロン酸、グルコン酸及びアスコルビン酸など）、ウロソン酸（ノイラミン酸及びケトデオキシオクツロソン酸など）、ウロン酸（グルクロン酸、ガラクツロン酸及びイズロン酸など）及びアルダル酸（酒石酸、粘液酸及びサッカリン酸など）が挙げられるが、これらに限定されない。
[00163]いくつかの実施形態では、糖アルコールは、糖から誘導されるポリオールを指す。例示的な糖アルコールとしては、エチレングリコール、アラビトール、グリセロール、エリスリトール、トレイトール、キシリトール、リビトール、マンニトール、ソルビトール、ガラクチトール、フシトール、イジトール、イノシトール及びボレミトールが挙げられるが、これらに限定されない。
[00164]実施形態では、糖アミドは、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ－基を含有する糖分子を指す。実施形態では、糖エーテルは、グルコシドなどのエーテル結合を含有する糖分子を指す。
[00165]いくつかの実施形態では、官能化又は修飾された糖酸は、グルコサミン、Ｎ－アセチルグルコサミン、グルクロン酸、ガラクツロン酸、グルシトール、キシリトール、マンニトール、ソルビトールを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、フコース、ラムノース、デオキシリボース又はフクロースなどのデオキシ糖を含む。
[00166]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物を製造する方法は、グラムスケールで実施される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物を製造する方法は、キログラム以上のスケールで実施される。従って、いくつかの実施形態では、方法は、０．５ｋｇ超、１ｋｇ超、２ｋｇ超、３ｋｇ超、４ｋｇ超、５ｋｇ超、６ｋｇ超、７ｋｇ超、９ｋｇ超、１０ｋｇ超、１００ｋｇ超又は１０００ｋｇ超の量で１つ以上の供給糖を含む水性組成物を加熱することを含む。いくつかの実施形態では、０．５、１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１００、１０００又は１５００ｋｇ以下の量で１つ以上の供給糖を含む水性組成物を加熱することを含む。いくつかの実施形態では、１ｋｇ以下の量で１つ以上の供給糖を含む水性組成物を加熱することを含む。
［触媒］
[00167]いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるオリゴ糖調製物の製造方法は、１種以上の触媒の添加を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、１つ以上の酸を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、鉱酸、カルボン酸；アミノ酸；スルホン酸；ボロン酸；ホスホン酸；ホスフィン酸；硫酸；リン酸；ポリ（スチレンスルホン酸－ｃｏ－ビニルベンジル－イミダゾリウムサルフェート－ｃｏ－ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレンスルホン酸－ｃｏ－ジビニルベンゼン）；（＋）－カンファー－１０－スルホン酸；２－ピリジンスルホン酸；３－ピリジンスルホン酸；８－ヒドロキシ－５－キノリンスルホン酸水和物；α－ヒドロキシ－２－ピリジンメタンスルホン酸；（β）－カンファー－１０－スルホン酸；ブチルホスホン酸；ジフェニルホスフィン酸；ヘキシルホスホン酸；メチルホスホン酸；フェニルホスフィン酸；フェニルホスホン酸；ｔｅｒｔ－ブチルホスホン酸；ＳＳ）－ＶＡＰＯＬリン酸水素；６－キノリンスルホン酸；３－（１－ピリジニオ）－１－プロパンスルホネート；２－（２－ピリジニル）エタンスルホン酸；３－（２－ピリジル）－５，６－ジフェニル－１，２，４－トリアジン－ｐ，ｐ’－ジスルホン酸一ナトリウム塩水和物；リン酸水素１，１’－ビナフチル－２，２’－ジイル；ビス（４－メトキシフェニル）ホスフィン酸；フェニル（３，５－キシリル）ホスフィン酸；Ｌ－システイン酸一水和物；酢酸；プロピオン酸；ブタン酸；グルタミン酸；リシン；エタンジスルホン酸；エタンスルホン酸；イセチオン酸；ホミシステイン酸；ＨＥＰＢＳ（Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－Ｎ’－（４－ブタンスルホン酸））；ＨＥＰＥＳ（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）；２－ヒドロキシ－３－モルホリノプロパンスルホン酸；２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸；メタンスルホン酸；メタニアジド；ナフタレン－１－スルホン酸；ナフタレン－２－スルホン酸；パーフルオロブタンスルホン酸；６－スルホキノボース；トリフルオロメタンスルホン酸；２－アミノエタンスルホン酸；安息香酸；クロロ酢酸；トリフルオロ酢酸；カプロン酸；エナント酸；カプリル酸；ペラルゴン酸；ラウリン酸；パルミチン酸；ステアリン酸；アラキジン酸；アスパラギン酸；グルタミン酸；セリン；トレオニン；グルタミン；システイン；グリシン；プロリン；アラニン；バリン；イソロイシン；ロイシン；メチオニン；フェニルアラニン；チロシン；トリプトファン；ポリマー酸；炭素担持酸；又はこれらの任意の組み合わせを含む。
[00168]いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、（＋）－カンファー－１０－スルホン酸；２－ピリジンスルホン酸；３－ピリジンスルホン酸；８－ヒドロキシ－５－キノリンスルホン酸水和物；α－ヒドロキシ－２－ピリジンメタンスルホン酸；（β）－カンファー－１０－スルホン酸；ブチルホスホン酸；ジフェニルホスフィン酸；ヘキシルホスホン酸；メチルホスホン酸；フェニルホスフィン酸；フェニルホスホン酸；ｔｅｒｔ－ブチルホスホン酸；ＳＳ）－ＶＡＰＯＬリン酸水素；６－キノリンスルホン酸、３－（１－ピリジニオ）－１－プロパンスルホネート；２－（２－ピリジニル）エタンスルホン酸；３－（２－ピリジル）－５，６－ジフェニル－１，２，４－トリアジン－ｐ，ｐ’－ジスルホン酸一ナトリウム塩水和物；リン酸水素１，１’－ビナフチル－２，２’－ジイル；ビス（４－メトキシフェニル）ホスフィン酸；フェニル（３，５－キシリル）ホスフィン酸；Ｌ－システイン酸一水和物；ポリ（スチレンスルホン酸－ｃｏ－ジビニルベンゼン）；リシン；エタンジスルホン酸；エタンスルホン酸；イセチオン酸；ホミシステイン酸；ＨＥＰＢＳ（Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－Ｎ’－（４－ブタンスルホン酸））；ＨＥＰＥＳ（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）；２－ヒドロキシ－３－モルホリノプロパンスルホン酸；２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸；メタンスルホン酸；メタニアジド；ナフタレン－１－スルホン酸；ナフタレン－２－スルホン酸；パーフルオロブタンスルホン酸；６－スルホキノボース；トリフルオロメタンスルホン酸；２－アミノエタンスルホン酸；安息香酸；クロロ酢酸；トリフルオロ酢酸；カプロン酸；エナント酸；カプリル酸；ペラルゴン酸；ラウリン酸；パルミチン酸；ステアリン酸；アラキジン酸；アスパラギン酸；グルタミン酸；セリン；トレオニン；グルタミン；システイン；グリシン；プロリン；アラニン；バリン；イソロイシン；ロイシン；メチオニン；フェニルアラニン；チロシン；トリプトファン；又はこれらの任意の組み合わせを含む。
[00169]いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、（＋）－カンファー－１０－スルホン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、２－ピリジンスルホン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、３－ピリジンスルホン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、８－ヒドロキシ－５－キノリンスルホン酸水和物である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、α－ヒドロキシ－２－ピリジンメタンスルホン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、（β）－カンファー－１０－スルホン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、ブチルホスホン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、ジフェニルホスフィン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、ヘキシルホスホン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、メチルホスホン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、フェニルホスフィン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、フェニルホスホン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、ｔｅｒｔ－ブチルホスホン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、ＳＳ）－ＶＡＰＯＬリン酸水素である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、６－キノリンスルホン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、３－（１－ピリジニオ）－１－プロパンスルホネートである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、２－（２－ピリジニル）エタンスルホン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、３－（２－ピリジル）－５，６－ジフェニル－１，２，４－トリアジン－ｐ，ｐ’－ジスルホン酸一ナトリウム塩水和物である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、リン酸水素１，１’－ビナフチル－２，２’－ジイルである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、ビス（４－メトキシフェニル）ホスフィン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、フェニル（３，５－キシリル）ホスフィン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、Ｌ－システイン酸一水和物である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、ポリ（スチレンスルホン酸－ｃｏ－ジビニルベンゼン）である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、リシンである。
[00170]いくつかの実施形態では、触媒はエタンジスルホン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はエタンスルホン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はイセチオン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はホモシステイン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はＨＥＰＢＳ（Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－Ｎ’－（４－ブタンスルホン酸））である。いくつかの実施形態では、触媒はＨＥＰＥＳ（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）である。いくつかの実施形態では、触媒は２－ヒドロキシ－３－モルホリノプロパンスルホン酸である。いくつかの実施形態では、触媒は２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はメタンスルホン酸である。実施形態では、触媒はナフタレン－１－スルホン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はいくつかの実施形態であり、触媒はメタニアジドである。いくつかでは、ナフタレン－２－スルホン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はパーフルオロブタンスルホン酸である。いくつかの実施形態では、触媒は６－スルホキノボースである。いくつかの実施形態では、触媒はトリフルオロメタンスルホン酸である。いくつかの実施形態では、触媒は２－アミノエタンスルホン酸である。いくつかの実施形態では、触媒は安息香酸である。いくつかの実施形態では、触媒はクロロ酢酸である。いくつかの実施形態では、触媒はトリフルオロ酢酸である。いくつかの実施形態では、触媒はカプロン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はエナント酸である。いくつかの実施形態では、触媒はカプリル酸である。いくつかの実施形態では、触媒はペラルゴン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はラウリン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はパルミチン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はステアリン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はアラキジン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はアスパラギン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はグルタミン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はセリンである。いくつかの実施形態では、触媒はトレオニンである。いくつかの実施形態では、触媒はグルタミンである。いくつかの実施形態では、触媒はシステインである。いくつかの実施形態では、触媒はグリシンである。いくつかの実施形態では、触媒はプロリンである。いくつかの実施形態では、触媒はアラニンである。いくつかの実施形態では、触媒はバリンである。いくつかの実施形態では、触媒はイソロイシンである。いくつかの実施形態では、触媒はロイシンである。いくつかの実施形態では、触媒はメチオニンである。いくつかの実施形態では、触媒はフェニルアラニンである。いくつかの実施形態では、触媒はチロシンである。いくつかの実施形態では、触媒はトリプトファンである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、国際公開第２０１６１２２８８７号パンフレット（その全体が参照により且つその開示のために本明細書に組み込まれる）で開示されているポリマー触媒又は炭素担持触媒である。
[00171]いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、乾燥重量で１つ以上の供給糖の約０．０１％～約５％、約０．０２％～約４％、約０．０３％～約３％又は約０．０５％～約２％の量で存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、乾燥重量で１つ以上の供給糖の約１％～２％の量で存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、乾燥重量で１つ以上の供給糖の約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１．０％、約１．１％、約１．２％、約１．３％、約１．４％、約１．５％、約１．６％、約１．７％、約１．８％、約１．９％、約２．０％、約２．１％、約２．２％、約２．３％、約２．４％、約２．５％、約２．６％、約２．７％、約２．８％、約２．９％又は約３．０％の量で存在する。
[00172]いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、乾燥重量で水性組成物の約０．０１％～約５％、約０．０２％～約４％、約０．０３％～約３％又は約０．０５％～約２％の量で存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、乾燥重量で水性組成物の約１％～２％の量で存在する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、乾燥重量で水性組成物の約０．８％、約０．９％、約１．０％、約１．１％、約１．２％、約１．３％、約１．４％、約１．５％、約１．６％、約１．７％、約１．８％、約１．９％、約２．０％、約２．１％、約２．２％、約２．３％、約２．４％、約２．５％、約２．６％、約２．７％、約２．８％、約２．９％又は約３．０％の量で存在する。
[00173]いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、２つ以上の異なる触媒の組み合わせである。いくつかの実施形態では、触媒は、樹脂及びポリマー触媒などのリサイクル可能な触媒並びにリサイクル不可能な触媒を含む。いくつかの実施形態では、触媒が少なくとも２つの異なる触媒を含む場合、触媒の各々は、本明細書で提供される量で存在する。他の実施形態では、触媒が少なくとも２つの異なる触媒を含む場合、少なくとも２つの異なる触媒は、本明細書で提供される量において凝集体で存在する。
[00174]いくつかの実施形態では、触媒は、乾燥形態で水性組成物に添加される。他の実施形態では、触媒は、水溶液などウェット形態で水性組成物に添加される。いくつかの実施形態では、水を添加する前に、触媒を１つ以上の供給糖と組み合わせる。他の実施形態では、その１つ以上の供給糖と合わせる前に、触媒を水中に溶解させる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、脱水形態の１つ以上の供給糖及びウェット形態（例えば水溶液など）の触媒を合わせることによって水性組成物を生成することを含む。
［水の添加］
[00175]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物を製造する方法は、水を添加して水性組成物を形成することを含む。いくつかの実施形態では、水性組成物中の水の全て又は一部は、遊離水として添加される。他の実施形態では、水性組成物中の水の全ては、例えば、糖一水和物又は二水和物において、結合水として添加される。いくつかの実施形態では、水性組成物中の水の全ては、グルコース一水和物などの単糖一水和物において、結合水として添加される。特定の実施形態では、水性組成物中の水の全て又は一部は、触媒とともに、すなわち触媒溶液を介して添加される。
［含水量］
[00176]オリゴ糖調製物を製造する方法が進むにつれて、反応によって水を生成することができる。例えば、いくつかの実施形態では、水は、（ｉ）グリコシド結合の形成とともに、（ｉｉ）アンヒドロサブユニットの形成とともに、又は（ｉｉｉ）他のメカニズム又は供給源により生成される。糖縮合及び脱水反応は両方とも水を伴うため、いくつかの実施形態では、含水量はオリゴ糖調製物の組成物に影響を与える。
[00177]更に、いくつかの実施形態では、含水量は、水性組成物の粘度に影響を及ぼし、これは、次に、水性組成物の混合の有効性に影響を及ぼし得る。例えば、いくつかの実施形態では、過度に粘性のある水性組成物は、水性組成物中に望ましくない不均一触媒分布をもたらす可能性がある。その上、いくつかの実施形態では、含水量が非常に低いと、水性組成物が固化し、効果的な混合が妨げられる可能性がある。他方では、他の実施形態では、含水量が極端に高いと、糖縮合反応が妨げられ、アンヒドロサブユニットのレベルが低下する可能性がある。従って、本開示は、オリゴ糖調製物の製造に好適な含水量について記載している。
[00178]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物を製造する方法は、水性組成物を形成すること及び／又は加熱することを含む。いくつかの実施形態では、水性組成物は、総重量で約０％～約８０％、約０％～約７０％、約０％～約６０％、約０％～約５０％、約０％～約４０％、約０％～約３５％、約０％～約３０％、約０％～約２５％、約０％～約２０％、約０％～約１９％、約０％～約１８％、約０％～約１７％、約０％～約１６％、約０％～約１５％、約０％～約１４％、約０％～約１３％、約０％～約１２％、約０％～約１１％、約０％～約１０％、約０％～約９％、約０％～約８％、約０％～約７％、約０％～約６％、約０％～約５％、約０％～約４％、約０％～約３％、約０％～約２％又は約０％～約１％の水を含む。いくつかの実施形態では、水性組成物は、総重量で約１％～約２０％、約１％～約１８％、約１％～約１６％、約１％～約１４％、約１％～約１２％、約１％～約１０％、約１％～約８％、約１％～約６％又は約１％～約４％の水を含む。いくつかの実施形態では、水性組成物は、総重量で約３％～約１６％、約３％～約１４％、約３％～約１２％、約３％～約１０％、約３％～約８％、約３％～約６％、約５％～約１６％、約５％～約１４％、約５％～約１２％、約５％～約１０％、約７％～約１６％、約７％～約１４％、約７％～約１２％、約７％～約１０％又は約８％～約１０％の水を含む。いくつかの実施形態では、水性組成物は、総重量で約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％又は約１５％の水を含む。いくつかの実施形態では、水性組成物は、総重量で約９％の水を含む。しかしながら、水性組成物における水の量は、反応条件及び使用される特定触媒に基づいて調節することができることを理解すべきである。いくつかの実施形態では、上記で開示されたような水性組成物における含水量は、反応の開始時に、例えば、供給糖を加熱する前に測定される。いくつかの実施形態では、上記で開示されたような水性組成物における含水量は、重合又は縮合反応の終了時に測定される。いくつかの実施形態では、上記で開示されたような水性組成物における含水量は、反応の開始時及び反応の終了時の平均含水量として測定される。
[00179]特定の実施形態では、本明細書に記載の方法は、ある期間にわたって、水性組成物中に存在する水の含有量及び／又は水の糖又は触媒との比を監視することを更に含み得る。いくつかの実施形態では、方法は、例えば、蒸留により、水性組成物中の水の少なくとも一部を除去することを更に含む。例えば、真空濾過、真空蒸留、加熱、蒸気、熱い空気及び／又は蒸発を含む当技術分野において公知の任意の方法を使用して、水性組成物から水を除去することができる。
[00180]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、吸湿性である。従って、いくつかの実施形態では、重合で形成される供給糖及びオリゴ糖の吸湿性は、水が水性組成物から除去され得る速度に影響を及ぼし得る。
[00181]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、水性組成物における含水量が、総重量で約１％～約２０％、約１％～約１８％、約１％～約１６％、約１％～約１４％、約１％～約１２％、約１％～約１０％、約１％～約８％、約２％～約１６％、約２％～約１４％、約２％～約１２％、約２％～約１０％、約２％～約８％、約２％～約６％、約４％～約１６％、約４％～約１４％、約４％～約１２％、約４％～約１０％、約４％～約８％、約６％～約１６％、約６％～約１２％、約６％～約１０％又は約６％～約８％となるように、水性組成物において、水の少なくとも一部を除去することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、水性組成物における含水量が、総重量で約２％～約１０％、約２％～約８％又は約４％～約８％となるように、水性組成物において、水の少なくとも一部を除去することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、水性組成物における含水量が、総重量で約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％又は約１０％となるように、水性組成物において、水の少なくとも一部を除去することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、水性組成物における含水量が、総重量で約４％～約８％となるように、水性組成物において、水の少なくとも一部を除去することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、重合及び／又は縮合反応の終了時の水性組成物における含水量が、上記で開示された含水量となるように、水性組成物中の水の少なくとも一部を除去することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、重合及び／又は縮合反応の開始時の水性組成物における含水量が、上記で開示された含水量となるように、水性組成物中の水の少なくとも一部を除去することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、重合及び／又は縮合反応の開始時及び終了時の水性組成物における平均含水量が、上記で開示された範囲内であるように、水性組成物中の水の少なくとも一部を除去することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、重合及び／又は縮合反応にわたって、水性組成物における含水量が、上記で開示された範囲内を維持するように、水性組成物中の水の少なくとも一部を除去することを含む。
[00182]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、水性組成物における含水量が、総重量で約１％～約２０％、約１％～約１８％、約１％～約１６％、約１％～約１４％、約１％～約１２％、約１％～約１０％、約１％～約８％、約２％～約１６％、約２％～約１４％、約２％～約１２％、約２％～約１０％、約２％～約８％、約２％～約６％、約４％～約１６％、約４％～約１４％、約４％～約１２％、約４％～約１０％、約４％～約８％、約６％～約１６％、約６％～約１２％、約６％～約１０％又は約６％～約８％となるように、水性組成物に、水の少なくとも一部を添加することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、水性組成物における含水量が、総重量で約２％～約１０％、約２％～約８％又は約４％～約８％となるように、水性組成物に、水の少なくとも一部を添加することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、水性組成物における含水量が、総重量で約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％又は約１０％となるように、水性組成物に、水の少なくとも一部を添加することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、水性組成物における含水量が、総重量で約４％～約８％となるように、水性組成物に、水の少なくとも一部を添加することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、重合及び／又は縮合反応の終了時の水性組成物における含水量が、上記で開示された含水量となるように、水性組成物に、水の少なくとも一部を添加することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、重合及び／又は縮合反応の開始時の水性組成物における含水量が、上記で開示された含水量となるように、水性組成物に、水の少なくとも一部を添加することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、重合及び／又は縮合反応の開始時及び終了時の水性組成物における平均含水量が、上記で開示された範囲内であるように、水性組成物に、水の少なくとも一部を添加することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、重合及び／又は縮合反応にわたって、水性組成物における含水量が、上記で開示された範囲内を維持するように、水性組成物に、水の少なくとも一部を添加することを含む。
[00183]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物内のオリゴ糖の重合度及び／又はアンヒドロサブユニットの量及び種類は、製造プロセスにわたって、水性組成物中に存在する水の含有量を調整又は制御することにより調節することができる。例えば、いくつかの実施形態では、オリゴ糖の重合度及び／又はアンヒドロサブユニットの量及び種類は、含水量を減らすことによって増加する。
[00184]従って、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、含水量の監視、含水量の維持、含水量の増加、含水量の減少又はこれらの任意の組み合わせを含み得る、含水量の工程内管理（ＩＰＣ）を含む。いくつかの実施形態では、ＩＰＣプロセスは、水性組成物が本明細書に記載される温度まで加熱される間、含水量を維持することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、重合を誘導するのに十分な時間、含水量を維持することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、水を添加するか若しくは水性組成物から水を除去するか、又はその両方により、開示された範囲内で含水量を維持することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、蒸留により、開示された範囲内の含水量を維持することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、真空蒸留により、開示された範囲内の含水量を維持することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、大気圧下で蒸留により、開示された範囲内の含水量を維持することを含む。
[00185]いくつかの実施形態では、水性組成物の含水量は、総重量で約１％～約２０％、約１％～約１８％、約１％～約１６％、約１％～約１４％、約１％～約１２％、約１％～約１０％、約１％～約８％、約２％～約１６％、約２％～約１４％、約２％～約１２％、約２％～約１０％、約２％～約８％、約２％～約６％、約４％～約１６％、約４％～約１４％、約４％～約１２％、約４％～約１０％、約４％～約８％、約６％～約１６％、約６％～約１２％、約６％～約１０％又は約６％～約８％の範囲内で維持される。いくつかの実施形態では、水性組成物の含水量は、総重量で約２％～約１０％、約２％～約８％又は約４％～約８％の範囲内で維持される。いくつかの実施形態では、水性組成物の含水量は、総重量で約２％～約８％の範囲内で維持される。
[00186]水性組成物の含水量は、様々な分析方法及び機器によって決定することができる。いくつかの実施形態では、含水量は、蒸発法（例えば、乾燥減量法）、蒸留法又は化学反応法（例えば、カールフィッシャー滴定）によって決定される。いくつかの実施形態では、含水量は、水分計などの分析機器によって決定される。いくつかの実施形態では、含水量は、カールフィッシャー滴定によって決定される。
[00187]いくつかの実施形態では、水性組成物の含水量は、反応中に測定され、含水量の工程内管理（ＩＰＣ）を実装するために使用される。特定の実施形態では、反応の含水量は、カールフィッシャー滴定、赤外線分光法、近赤外線分光法、伝導度、粘度、密度、トルク混合又はエネルギー混合によって測定される。いくつかの実施形態では、反応の含水量の測定を使用して、水添加ポンプ又はフローバルブなど、反応の含水量を積極的に調整する装置を制御する。
[00188]理論に束縛されるものではないが、糖重合及び／又は縮合反応の間の含水量は、本明細書に記載のオリゴ糖調製物におけるアンヒドロサブユニットのレベルに影響を与え得ると考えられている。例えば、図２９で示すように、いくつかの実施形態では、より高い含水量は、より低いレベルのアンヒドロサブユニットと相関する。いくつかの実施形態では、より低い反応温度は、より低いレベルのアンヒドロサブユニット含有量と相関し得る。
［温度］
[00189]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物内のオリゴ糖の重合度及び／又はアンヒドロサブユニットの量及び種類は、水性組成物が加熱される温度を調整することにより調節することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物を製造する方法は、約８０℃～約２５０℃、約９０℃～約２００℃、約１００℃～約２００℃、約１００℃～約１８０℃、約１１０℃～約１７０℃、約１２０℃～約１６０℃、約１３０℃～約１５０℃又は約１３５℃～約１４５℃の温度まで水性組成物を加熱することを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物を製造する方法は、約１００℃～約２００℃、約１００℃～約１８０℃、約１１０℃～約１７０℃、約１２０℃～約１６０℃、約１３０℃～約１５０℃又は約１３５℃～約１４５℃の温度まで水性組成物を加熱することを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物を製造する方法は、約１３５℃～約１４５℃の温度まで、水性組成物を加熱することを含む。他の実施形態では、オリゴ糖調製物を製造する方法は、約１２５℃～約１３５℃の温度まで、水性組成物を加熱することを含む。
［反応時間］
[00190]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物を製造する方法は、十分な時間、水性組成物を加熱することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法に従って製造されるオリゴ糖の重合度は、反応時間によって調整することができる。
[00191]いくつかの実施形態では、十分な時間は、相当数の時間で定められる。例えば、いくつかの実施形態では、十分な時間は、少なくとも３０分、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも９時間又は少なくとも１０時間である。いくつかの実施形態では、十分な時間は、約１～約２４時間、約１～約１６時間、約１～約８時間、約１～約４時間、約１～約３時間、約１～約２時間、約２～約１２時間、約２～約１０時間、約２～約８時間、約２～約６時間、約２～約４時間、約３～約８時間、約３～約６時間、約３～約５時間又は約３～約４時間である。
[00192]いくつかの実施形態では、十分な時間は、オリゴ糖調製物の１つ以上の化学的性質又は物理的性質、例えば、含水量、粘度、分子量、アンヒドロサブユニット含有量及び／又は重合度の分布を測定することにより、決定される。
[00193]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の分子量は、重合中、監視される。いくつかの実施形態では、方法は、水性組成物が、本明細書に記載の数平均分子量又は重量平均分子量を達成するのに十分な時間、水性組成物を加熱することを含む。特定の実施形態では、方法は、水性組成物が、約３００～約５０００ｇ／モル、約５００～約５０００ｇ／モル、約７００～約５０００ｇ／モル、約５００～約２０００ｇ／モル、約７００～約２０００ｇ／モル、約７００～約１５００ｇ／モル、約３００～約１５００ｇ／モル、約３００～約２０００ｇ／モル、約４００～約１０００ｇ／モル、約４００～約９００ｇ／モル、約４００～約８００ｇ／モル、約５００～約９００ｇ／モル又は約５００～約８００ｇ／モルの範囲内の数平均分子量を達成するのに十分な時間、水性組成物を加熱することを含む。特定の実施形態では、方法は、水性組成物が、約５００～約２０００ｇ／モルの数平均分子量を達成するのに十分な時間、水性組成物を加熱することを含む。特定の実施形態では、方法は、水性組成物が、約３００～約５０００ｇ／モル、約５００～約５０００ｇ／モル、約７００～約５０００ｇ／モル、約５００～約２０００ｇ／モル、約７００～約２０００ｇ／モル、約７００～約１５００ｇ／モル、約３００～約１５００ｇ／モル、約３００～約２０００ｇ／モル、約４００～約１３００ｇ／モル、約４００～約１２００ｇ／モル、約４００～約１１００ｇ／モル、約５００～約１３００ｇ／モル、約５００～約１２００ｇ／モル、約５００～約１１００ｇ／モル、約６００～約１３００ｇ／モル、約６００～約１２００ｇ／モル又は約６００～約１１００ｇ／モルの重量平均分子量を達成するのに十分な時間、水性組成物を加熱することを含む。特定の実施形態では、方法は、水性組成物が、約７００～約３０００ｇ／モルの重量平均分子量を達成するのに十分な時間、水性組成物を加熱することを含む。
[00194]いくつかの実施形態では、十分な時間は、水性組成物がそれぞれの反応温度で反応平衡に達するのに必要な時間である。従って、いくつかの実施形態では、方法は、水性組成物が平衡に達するのに十分な時間、水性組成物を加熱することを含む。例えば、いくつかの実施形態では、平衡は、水性組成物の分子量、粘度又はＤＰ分布を測定することによって決定される。
[00195]特定の実施形態では、平衡は、水性組成物の数平均又は重量平均分子量を測定することによって決定される。いくつかの実施形態では、平衡は、時間の経過とともに本質的に変化しない水性組成物の数又は重量平均分子量によって決定される。いくつかの実施形態では、平衡は、一定期間にわたって特定の割合未満である水性組成物の数又は重量平均分子量の変化によって決定される。いくつかの実施形態では、水性組成物の分子量は、ＨＰＬＣ又はＳＥＣにより測定される。
[00196]いくつかの実施形態では、平衡は、一定期間にわたって２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満又は５％未満の水性組成物の数又は重量平均分子量の変化によって決定される。いくつかの実施形態では、平衡は、３時間、２時間、１時間、３０分、２０分又は１０分にわたる水性組成物の数又は重量平均分子量の変化によって決定される。いくつかの実施形態では、平衡は、１時間にわたる１５％未満の水性組成物の重量平均分子量の変化によって決定される。
[00197]特定の実施形態では、平衡は、水性組成物の粘度を測定することによって決定される。いくつかの実施形態では、平衡は、時間の経過とともに本質的に変化しない水性組成物の粘度によって決定される。いくつかの実施形態では、平衡は、一定期間にわたって特定の割合未満である水性組成物の粘度の変化によって決定される。いくつかの実施形態では、水性組成物の粘度は、粘度計又はレオメーターにより測定される。
[00198]いくつかの実施形態では、平衡は、一定期間にわたって２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満又は５％未満の水性組成物の粘度の変化によって決定される。いくつかの実施形態では、平衡は、３時間、２時間、１時間、３０分、２０分又は１０分にわたる水性組成物の粘度の変化によって決定される。いくつかの実施形態では、平衡は、１時間にわたって１５％未満の水性組成物の粘度の変化によって決定される。
[00199]特定の実施形態では、平衡は、水性組成物のＤＰ分布を測定することによって決定される。いくつかの実施形態では、平衡は、時間の経過とともに本質的に変化しない水性組成物のＤＰ分布によって決定される。いくつかの実施形態では、水性組成物のＤＰ分布の変化は、一連のＫｍを計算することによって決定され、ここで
Figure 2022514177000002
（式中、［Ｈ２Ｏ］は、水のモル濃度（モル／Ｌ）を表し、
［ＤＰ１］、［ＤＰｍ－１］及び［ＤＰｍ］は、それぞれ、ＤＰ１、ＤＰｍ－１及びＤＰｍ画分におけるオリゴ糖のモル濃度（モル／Ｌ）を表す）
である。例えば、Ｋ２は、上記式に従って、
［ＤＰ２］［Ｈ２Ｏ］／［ＤＰ１］［ＤＰ１］
に等しい。いくつかの実施形態では、ｍは２以上且つｎ未満の整数である。いくつかの実施形態では、ｍはｎに等しい。いくつかの実施形態では、ｍは２以上、且つｎ以下の整数である。いくつかの実施形態では、ｍは、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０である。
[00200]いくつかの実施形態では、ＤＰ１、ＤＰｍ－１及びＤＰｍ画分におけるオリゴ糖の濃度は、ＳＥＣ、ＨＰＬＣ、ＦＦＦ、Ａ４Ｆ、質量分析法又は任意の他の好適な方法によって決定される。いくつかの実施形態では、ＤＰ１、ＤＰｍ－１及びＤＰｍ画分におけるオリゴ糖の濃度は、ＳＥＣ、例えばＧＰＣなどによって決定される。いくつかの実施形態では、ＤＰ１、ＤＰｍ－１及びＤＰｍ画分におけるオリゴ糖の濃度は、質量分析、例えばＧＣ－ＭＳ、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ及びＭＡＬＤＩ－ＭＳなどによって決定される。いくつかの実施形態では、ＤＰ１、ＤＰｍ－１及びＤＰｍ画分におけるオリゴ糖の濃度は、ＨＰＬＣによって決定される。いくつかの実施形態では、水の濃度は、蒸発法（例えば、乾燥減量法）、蒸留法又は化学反応法（例えば、カールフィッシャー滴定）によって決定される。いくつかの実施形態では、水の濃度は、水分計などの任意の好適な分析機器によって決定される。
[00201]いくつかの実施形態では、方法は、一連の少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０又は少なくとも５０のＫｍ数を計算することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、一連の少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０又は少なくとも１５のＫｍ数を計算することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約３、４、５、６、７、８、９、１０又は１５のＫｍ数を計算することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、Ｋ２～Ｋ４、Ｋ２～Ｋ５、Ｋ２～Ｋ６、Ｋ２～Ｋ７、Ｋ２～Ｋ８、Ｋ２～Ｋ９、Ｋ２～Ｋ１０、Ｋ２～Ｋ１１、Ｋ２～Ｋ１２、Ｋ２～Ｋ１３、Ｋ２～Ｋ１４、Ｋ２～Ｋ１５、Ｋ３～Ｋ５、Ｋ３～Ｋ６、Ｋ３～Ｋ７、Ｋ３～Ｋ８、Ｋ３～Ｋ９、Ｋ３～Ｋ１０、Ｋ３～Ｋ１１、Ｋ３～Ｋ１２、Ｋ３～Ｋ１３、Ｋ３～Ｋ１４又はＫ３～Ｋ１５を計算することを含む。特定の実施形態では、方法は、Ｋ２～Ｋ４又はＫ３～Ｋ５を計算することを含む。
[00202]いくつかの実施形態では、Ｋｍの値は、温度、水分濃度及び／又は供給糖の量と種類に依存する。いくつかの実施形態では、Ｋｍは、約０．１～約１００、約０．１～約９０、約０．１～約８０、約０．１～約７０、約０．１～約６０、約０．１～約５０、約０．１～約４０、約０．１～約３０、約０．１～約２５、約０．１～約２０又は約０．１～約１５である。いくつかの実施形態では、Ｋｍは、約１～約１００、約１～約９０、約１～約８０、約１～約７０、約１～約６０、約１～約５０、約１～約４０、約１～約３０、約１～約２５、約１～約２０、約１～約１５、約１～約１０、約５～約５０、約５～約４０、約５～約３０、約５～約２０、約５～約１５又は約５～約１０である。いくつかの実施形態では、Ｋｍは、約１～約１５又は約５～約１５である。
[00203]いくつかの実施形態では、計算された一連のＫｍについて、平均、標準偏差及び／又は相対標準偏差が決定される。本明細書で使用する場合、相対標準偏差は、パーセンテージで表され、標準偏差に１００を掛け、この積を平均で割ることによって得られる。
[00204]いくつかの実施形態では、平衡は、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満又は１％未満の一連のＫｍの相対標準偏差によって決定される。いくつかの実施形態では、平衡は、１５％未満、１０％未満又は５％未満の一連のＫｍの相対標準偏差によって決定される。
［反応後工程］
[00205]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物を製造する方法は、水性組成物をある温度で十分な時間加熱した後、１つ以上の追加の処理工程を更に含む。いくつかの実施形態では、追加の処理工程は、例えば、分離（クロマト分離など）、希釈、濃縮、乾燥、濾過、脱塩、抽出、脱色又はこれらの任意の組み合わせを含む。例えば、いくつかの実施形態では、方法は、希釈工程及び脱色工程を含む。いくつかの実施形態では、方法は、濾過工程及び乾燥工程を含む。
[00206]いくつかの実施形態では、方法は、オリゴ糖調製物に水を添加してオリゴ糖調製物のシロップを作る希釈工程を含む。いくつかの実施形態では、シロップ中のオリゴ糖調製物の濃度は、約５％～約８０％、約１０％～約７０％、約１０％～約６０％、約１０％～約５０％、約１０％～約４０％、約１０％～約３０％又は約１５％～約２５％である。他の実施形態では、方法は希釈工程を含まないが、むしろオリゴ糖調製物を固化させる。いくつかの実施形態では、方法は、濾過工程を含む。いくつかの実施形態では、方法は、濾過により触媒をリサイクルすることを含む。
[00207]いくつかの実施形態では、記載の方法は、脱色工程を含む。いくつかの実施形態では、例えば、吸収剤、活性炭、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換樹脂を使用）、水素化及び／又は濾過（例：精密濾過）による処理などの当技術分野において既知の任意の方法を使用して脱色工程を経ることができる。
[00208]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物を、塩、ミネラル及び／又は他のイオン種を除去するための材料と接触させる。特定の実施形態では、オリゴ糖調製物は、アニオン／カチオン交換カラムペアを通過する。一実施形態では、アニオン交換カラムは水酸化物の形態の弱塩基交換樹脂を含有し、カチオン交換カラムはプロトン化された形態の強酸交換樹脂を含有する。
[00209]いくつかの実施形態では、方法は、濃縮工程を含む。いくつかの実施形態では、濃縮工程は、濃度が上がったオリゴ糖調製物を生成する。例えば、いくつかの実施形態では、濃縮工程は、蒸発（例えば、真空蒸発）、乾燥（例えば、凍結乾燥及び噴霧乾燥）又はこれらの任意の組み合わせを含む。
[00210]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の少なくとも一部が分離される単離工程を含む。いくつかの実施形態では、単離工程は、結晶化、沈殿、濾過（例えば、真空濾過）及び遠心分離又はこれらの任意の組み合わせを含む。
[00211]いくつかの実施形態では、方法は、分離工程を含む。いくつかの実施形態では、分離工程は、触媒の少なくとも一部から、未反応供給糖の少なくとも一部から又はその両方から、オリゴ糖調製物の少なくとも一部を分離することを含む。いくつかの実施形態では、分離工程は、濾過、クロマトグラフィー、溶解度差、沈殿、抽出又は遠心分離を含む。
［反応器］
[00212]本明細書に記載の方法は、反応温度、ｐＨ、圧力及び他の要因を考慮して、糖縮合に好適な１つ以上の反応器の使用を含み得る。いくつかの実施形態では、１つ以上の好適な反応器には、フェドバッチ撹拌反応器、バッチ撹拌反応器、連続流撹拌反応器、連続栓流カラム反応器、摩擦反応器又は電磁場により誘導される撹拌を用いる反応器が含まれる。いくつかの実施形態では、１つ以上の好適な反応器には、Ｒｙｕ，Ｓ．Ｋ．，ａｎｄ Ｌｅｅ，Ｊ．Ｍ．，Ｂｉｏｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ ｗａｓｔｅ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ａｎ ａｔｔｒｉｔｉｏｎ ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．２５：５３－６５（１９８３）；Ｇｕｓａｋｏｖ，Ａ．Ｖ．，ａｎｄ Ｓｉｎｉｔｓｙｎ，Ａ．Ｐ．，Ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｏｆ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ：１．Ａ ｍａｔｈｅｍａｔｉｃａｌ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ａ ｂａｔｃｈ ｒｅａｃｔｏｒ ｐｒｏｃｅｓｓ，Ｅｎｚ．Ｍｉｃｒｏｂ．ＴｅｃｈｎｏＬ，７：３４６－３５２（１９８５）；Ｇｕｓａｋｏｖ，Ａ．Ｖ．，Ｓｉｎｉｔｓｙｎ，Ａ．Ｐ．，Ｄａｖｙｄｋｉｎ，Ｉ．Ｙ．，Ｄａｖｙｄｋｉｎ，Ｖ．Ｙ．，Ｐｒｏｔａｓ，Ｏ．Ｖ．，Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｕｓｉｎｇ ａ ｎｏｖｅｌ ｔｙｐｅ ｏｆ ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ ｗｉｔｈ ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ ｓｔｉｒｒｉｎｇ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｅｌｅｃｔｒｏｍａｇｎｅｔｉｃ ｆｉｅｌｄ，Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，５６：１４１－１５３（１９９６）；又はＦｅｒｎａｎｄａ ｄｅ Ｃａｓｔｉｌｈｏｓ Ｃｏｒａｚｚａ，Ｆｌａｖｉｏ Ｆａｒｉａ ｄｅ Ｍｏｒａｅｓ，Ｇｉｓｅｌｌａ Ｍａｒｉａ Ｚａｎｉｎ ａｎｄ Ｉｖｏ Ｎｅｉｔｚｅｌ，Ｏｐｔｉｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｉｎ ｆｅｄ－ｂａｔｃｈ ｒｅａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃｅｌｌｏｂｉｏｓｅ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ，Ａｃｔａ Ｓｃｉｅｎｔｉａｒｕｍ．Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２５：３３－３８（２００３）に記載されている反応器が含まれる。
[00213]いくつかの実施形態では、１つ以上の好適な反応器には、加水分解及び／又は発酵のための流動床型反応器、上昇流ブランケット型反応器、固定床型反応器、又押出機型反応器が含まれる。いくつかの実施形態では、１つ以上の好適な反応器には、開放型反応器、閉鎖型反応器又はその両方が含まれる。いくつかの実施形態では、方法が連続プロセスを含む場合、１つ以上の好適な反応器には、スクリューミキサーなどの連続ミキサーが含まれ得る。
［プロセス］
[00214]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物を製造する方法は、バッチプロセス、連続プロセス又はその両方を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物を製造する方法は、バッチプロセスを含む。例えば、バッチプロセスのいくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の後続のバッチの製造は、現在のバッチが完了するまで開始されない。いくつかの実施形態では、バッチプロセスの間、オリゴ糖調製物の全て又はかなりの量が反応器から除去される。いくつかの実施形態では、バッチプロセスの間、水性組成物が記載された温度に加熱される前又は重合が誘発される前に全ての供給糖及び触媒が反応器内で合わされる。いくつかの実施形態では、バッチプロセスの間、供給糖は、触媒の添加前、添加後又は触媒の添加と同時に添加される。
[00215]いくつかの実施形態では、バッチプロセスは、フェドバッチプロセスであり、ここで、全ての供給糖が同時に反応器に加えられるわけではない。フェドバッチプロセスのいくつかの実施形態では、供給糖の少なくとも一部は、重合中又は水性組成物が記載の温度に加熱された後に反応器に添加される。フェドバッチプロセスのいくつかの実施形態では、供給糖の少なくとも１０重量％、２０重量％、３０重量％、４０重量％、５０重量％又は６０重量％は、重合中又は水性組成物が記載の温度に加熱された後に反応器に添加される。
[00216]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物を製造する方法は、連続プロセスを含む。例えば、連続プロセスのいくつかの実施形態では、反応器の内容物は、反応器全体にわたって連続的に流れる。いくつかの実施形態では、供給糖を触媒と合わせること及びオリゴ糖調製物の少なくとも一部を除去することは同時に実施される。
[00217]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物を製造する方法は、単一容器又は多容器プロセスを含む。例えば、単一容器プロセスのいくつかの実施形態では、重合は、単一反応容器内で実施される。別の例について、多容器プロセスのいくつかの実施形態では、重合は、２つ以上の反応容器内で実施される。多容器プロセスのいくつかの実施形態では、方法は、２つ、３つ又はそれを超える反応容器を含む。多容器プロセスのいくつかの実施形態では、方法は、２つ以上の反応器からの重合生成物を組み合わせる組み合わせ工程を含む。
［Ｖ．アンヒドロサブユニットを含む栄養組成物］
[00218]本明細書では、オリゴ糖調製物を含む栄養組成物が提供される。特定の実施形態では、本明細書で、記載のオリゴ糖調製物を含む栄養組成物であって、栄養組成物内のオリゴ糖調製物の存在及び／又は濃度が、選択的に決定及び／又は検出され得る、栄養組成物が提供される。微生物群集の複雑な機能的調節を示すオリゴ糖調製物は、栄養組成物の重要な成分であり得る。従って、栄養組成物内のオリゴ糖調製物の存在及び／又は濃度は、栄養組成物の品質管理及び製造プロセスで測定する必要がある因子の１つであり得る。従って、提供される栄養組成物は、オリゴ糖調製物の存在及び／又は濃度が選択的に決定及び／又は検出され得るため、品質管理及び製造目的の観点から有利である。例えば、いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の存在及び濃度は、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に関係しているシグナルを測定することにより、決定及び／又は検出され得る。
[00219]いくつかの実施形態では、栄養組成物は、動物飼料組成物である。いくつかの実施形態では、栄養組成物は、基礎栄養組成物を含む。
［基礎栄養組成物］
[00220]いくつかの実施形態では、本明細書に記載される栄養組成物は、基礎栄養組成物と、開示されるオリゴ糖調製物とを含む。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、オリゴ糖調製物とは異なる炭水化物源を含む。例えば、いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、デンプン及び植物繊維などの天然に存在する炭水化物源（又は天然に存在するオリゴ糖組成物）を含む。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、デンプンを含む。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、植物繊維を含む。
[00221]いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、種子、根、塊茎、トウモロコシ、タピオカ、クズウコン、小麦、米、ジャガイモ、サツマイモ、サゴ、豆（例えば、ソラ豆、レンズ豆、緑豆、エンドウ豆及びヒヨコ豆）、トウモロコシ、キャッサバ又は他のデンプン質の食品（例えば、ドングリ、クズウコン、アラカーチャ、バナナ、大麦、パンノキ、ソバ、カンナ、コラカシア、カタクリ、クズ、マランガ、キビ、オート麦、オカ、タシロイモ、モロコシ、ライ麦、タロイモ、栗、ヒシの実及びヤムイモ）から誘導される１つ以上の炭水化物源を含む。
[00222]いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、マメ科植物（例えば、エンドウ豆、大豆、ハウチワマメ、サヤインゲン及び他の豆）、オート麦、ライ麦、チーア、大麦、果物（例えば、イチジク、アボカド、プラム、プルーン、ベリー、バナナ、リンゴの皮、マルメロ及びナシ）、野菜（例えば、ブロッコリー、ニンジン、カリフラワー、ズッキーニ、セロリ、ノパルサボテン及びエルサレムアーティチョーク）、根塊茎、根菜（例えば、サツマイモ及びタマネギ）、オオバコ種子の殻、種子（例えば、亜麻仁）、ナッツ（例えば、アーモンド）、全粒穀物食品、小麦、トウモロコシふすま、リグナン又はこれらの任意の組み合わせから誘導される１つ以上の炭水化物源を含む。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、小麦ふすま、ビートパルプ、ファジーコットンシード、大豆皮又はこれらの任意の組み合わせから誘導される１つ以上の植物繊維を含む。
[00223]いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、５００ｐｐｍ未満、４００ｐｐｍ未満、３００ｐｐｍ未満、２００ｐｐｍ未満、１００ｐｐｍ未満、５０ｐｐｍ未満、１０ｐｐｍ未満、５ｐｐｍ未満１ｐｐｍ未満のアンヒドロサブユニット又はアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、５０ｐｐｍ未満、１０ｐｐｍ未満、５ｐｐｍ未満１ｐｐｍ未満のアンヒドロサブユニット又はアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、アンヒドロサブユニットを本質的に含まない。
[00224]いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、検出可能レベルのアンヒドロサブユニットを含まない。検出又は決定方法に応じて、特定のしきい値を下回るアンヒドロサブユニットレベルは、検出できない可能性がある。例えば、いくつかの実施形態では、検出可能レベルのアンヒドロサブユニットは、基礎栄養組成物において、少なくとも１０００ｐｐｍ、少なくとも５００ｐｐｍ、少なくとも４００ｐｐｍ、少なくとも３００ｐｐｍ、少なくとも２００ｐｐｍ、少なくとも１００ｐｐｍ、少なくとも５０ｐｐｍ、少なくとも１０ｐｐｍ、少なくとも５ｐｐｍ又は少なくとも１ｐｐｍのアンヒドロサブユニット又はアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を指す。
[00225]いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、複数のオリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、オリゴ糖調製物とは異なるグリコシド結合型分布を含む。例えば、いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、オリゴ糖調製物よりも高い割合のα－（１，４）グリコシド結合を含む。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物におけるα－（１，４）グリコシド結合などのグリコシド結合は、１つ以上の酵素によって消化される。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物におけるグリコシド結合は、オリゴ糖調製物におけるグリコシド結合よりも容易に消化及び／又は加水分解可能である。
[00226]いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物におけるα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合又はβ－（１，６）グリコシド結合のレベルは、オリゴ糖調製物におけるそれぞれのグリコシド結合のレベルよりも、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、少なくとも１３％、少なくとも１４％又は少なくとも１５％低い。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物におけるα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合又はβ－（１，６）グリコシド結合のレベルは、オリゴ糖調製物におけるそれぞれのグリコシド結合のレベルよりも、少なくとも１０％低い。
[00227]いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物におけるα－（１，４）グリコシド結合のレベルは、オリゴ糖調製物におけるα－（１，４）グリコシド結合のレベルよりも、少なくとも５０％、少なくとも４０％、少なくとも３５％、少なくとも３０％、少なくとも２５％、少なくとも２０％、少なくとも１５％、少なくとも１０％、少なくとも５％又は少なくとも２％高い。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物におけるα－（１，４）グリコシド結合のレベルは、オリゴ糖調製物におけるα－（１，４）グリコシド結合のレベルよりも、少なくとも１０％高い。
［動物飼料組成物］
[00228]動物の種類及び年齢に応じて、栄養組成物は、オリゴ糖調製物及び基礎栄養組成物を異なる比率で含み得る。例えば、オリゴ糖調製物は、動物の種類及び年齢に好適な様々な比率で基礎栄養組成物と組み合わせることができる。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、約１～約１００００ｐｐｍ、約１～約５０００ｐｐｍ、約１～約３０００ｐｐｍ、約１～約２０００ｐｐｍ、約１～約１５００ｐｐｍ、約１～約１０００ｐｐｍ、約１～約５００ｐｐｍ、約１～約２５０ｐｐｍ、約１～約１００ｐｐｍ、約１０～約５０００ｐｐｍ、約１０～約３０００ｐｐｍ、約１０～約２０００ｐｐｍ、約１０～約１５００ｐｐｍ、約１０～約１０００ｐｐｍ、約１０～約５００ｐｐｍ、約１０～約２５０ｐｐｍ、約１０～約１００ｐｐｍ、約５０～約５０００ｐｐｍ、約５０～約３０００ｐｐｍ、約５０～約２０００ｐｐｍ、約５０～約１５００ｐｐｍ、約５０～約１０００ｐｐｍ、約５０～約５００ｐｐｍ、約５０～約２５０ｐｐｍ、約５０～約１００ｐｐｍ、約１００～約５０００ｐｐｍ、約１００～約３０００ｐｐｍ、約１００～約２０００ｐｐｍ、約１００～約１５００ｐｐｍ、約１００～約１０００ｐｐｍ、約１００～約５００ｐｐｍ、約１００～約４００ｐｐｍ、約１００～約３００ｐｐｍ、約１００～約２００ｐｐｍ、約２００～約５０００ｐｐｍ、約２００～約３０００ｐｐｍ、約２００～約２５００ｐｐｍ、約２００～約２０００ｐｐｍ、約２００～約１５００ｐｐｍ、約２００～約１０００ｐｐｍ、約２００～約５００ｐｐｍ、約５００～約５０００ｐｐｍ、約５００～約３０００ｐｐｍ、約５００～約２５００ｐｐｍ、約５００～約２０００ｐｐｍ、約５００～約１５００ｐｐｍ又は約５００～約１０００ｐｐｍの濃度で、栄養組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、約１～約５０００ｐｐｍ、約１～約１０００ｐｐｍ、約１～約５００ｐｐｍ、約１０～約５０００ｐｐｍ、約１０～約２０００ｐｐｍ、約１０～約１０００ｐｐｍ、約１０～約５００ｐｐｍ、約１０～約２５０ｐｐｍ、約１０～約１００ｐｐｍ、約５０～約５０００ｐｐｍ、約５０～約２０００ｐｐｍ、約５０～約１０００ｐｐｍ、約５０～約５００ｐｐｍ、約５０～約２５０ｐｐｍ又は約５０～約１００ｐｐｍの濃度で、栄養組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、約１～約５０００ｐｐｍ、約１０～約１０００ｐｐｍ、約１０～約５００ｐｐｍ又は約５０～約５００ｐｐｍの濃度で、栄養組成物中に存在する。
[00229]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、１０ｐｐｍ超、５０ｐｐｍ超、１００ｐｐｍ超、２００ｐｐｍ超、３００ｐｐｍ超、４００ｐｐｍ超、５００ｐｐｍ超、６００ｐｐｍ超、１０００ｐｐｍ超又は２０００ｐｐｍ超の濃度で、栄養組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、１０ｐｐｍ超、５０ｐｐｍ超、１００ｐｐｍ超、２００ｐｐｍ超又は５００ｐｐｍ超の濃度で、栄養組成物中に存在する。
[00230]いくつかの実施形態では、動物の種類及び年齢に応じて、栄養組成物は、タンパク質、ミネラル（銅、カルシウム及び亜鉛など）、塩、必須アミノ酸、ビタミン及び／又は抗生物質を更に含み得る。
[00231]いくつかの実施形態では、動物飼料のための栄養組成物を製造する方法が本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、動物は、畜牛（例えば、肉牛及び乳牛）、ブタ、水性動物、家禽及びヒトから選択される。いくつかの実施形態では、動物は、雌ブタ、子ブタ及び去勢ブタなどのブタである。他の実施形態では、動物は、ニワトリ、アヒル、シチメンチョウ、ガチョウ、ウズラ及び雌鶏などの家禽である。実施形態では、家禽は、ブロイラー、ブリーダー又はレイヤーである。いくつかの実施形態では、動物は、サケ、ナマズ、バス、ウナギ、ティラピア、ヒラメ、エビ及びカニなどの水性動物である。いくつかの実施形態では、栄養組成物は、乾燥形態、液体形態、ペースト又はこれらの組み合わせで動物に投与される。いくつかの実施形態では、投与の形態、給餌速度及び給餌スケジュールは、動物の種類及び年齢に応じて変化し得る。
［栄養組成物を生成する方法］
[00232]本明細書では、オリゴ糖調製物を基礎栄養組成物と組み合わせることを含む、栄養組成物を製造する方法が提供される。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、基礎栄養組成物のグリコシド結合型分布とは異なるグリコシド結合型分布を含む。
[00233]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、合成オリゴ糖調製物である。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、１～ｎから選択される別個の重合度をそれぞれ有する少なくともｎ画分のオリゴ糖（ＤＰ１～ＤＰｎ画分）を含む。いくつかの実施形態では、ｎは、２以上の整数である。いくつかの実施形態では、ｎは、３以上の整数である。いくつかの実施形態では、ｎは、３以上の整数である。いくつかの実施形態では、ｎは、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０又は５０などの１～１００の範囲内の整数である。いくつかの実施形態では、ＤＰ１～ＤＰｎ画分の各々は、質量分析法により測定される相対的存在量で０．１％～９０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物のＤＰ１及びＤＰ２画分は、各々独立して、質量分析法により測定される相対的存在量で約０．１％～約１５％又は約０．５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物のＤＰ１及びＤＰ２画分は、各々独立して、質量分析法により測定される相対的存在量で約０．１％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、１．１％、１．２％、１．３％、１．４％又は１．５％から、約８％、９％、１０％、１１％、１２％、１５％又は２０％までの範囲内のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、ｎ画分の各々におけるオリゴ糖の相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。いくつかの実施形態では、少なくとも５、１０、２０又は３０のＤＰ画分におけるオリゴ糖の相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。
[00234]いくつかの実施形態では、栄養組成物を製造する方法は、オリゴ糖調製物を基礎栄養組成物と混合することを含む。例えば、いくつかの実施形態では、混合は、ドラムブレンダー、ダブルコーンブレンダー、リボンブレンダー、Ｖブレンダー、剪断ミキサー及びパドルミキサーなどの工業用ブレンダー及び／又はミキサーによって実施することができる。
[00235]いくつかの実施形態では、栄養組成物を製造する方法は、本明細書に記載の品質管理工程を更に含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の品質管理工程は、栄養組成物のサンプル中のシグナルレベルを決定すること及びシグナルレベルに基づいて栄養組成物中のオリゴ糖調製物の濃度を計算することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の品質管理工程は、分析機器により栄養組成物のサンプル中のシグナルを検出すること及びシグナルの有無に基づいて栄養組成物のバッチを受け入れる又は拒否することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の品質管理工程は、分析機器により栄養組成物の第１サンプル中の第１シグナル及び栄養組成物の第２サンプル中の第２シグナルの有無を検出すること及び第１シグナルと第２シグナルとを比較することを含む。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び／又は第２シグナルは、（ｉ）１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すか、（ｉｉ）オリゴ糖の重合度（ＤＰ）分布に関係しているか、又は（ｉｉｉ）オリゴ糖のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合、β－（１，６）グリコシド結合α－（１，１）－αグリコシド結合、α－（１，１）－βグリコシド結合、β－（１，１）－αグリコシド結合又はβ－（１，１）－βグリコシド結合に関係している。
[00236]更に、いくつかの実施形態では、栄養組成物を製造する方法は、品質管理工程を実施後、更にオリゴ糖調製物を基礎栄養組成物と混合すること、オリゴ糖調製物のレベルを調整すること又はこれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物のレベル調整は、追加のオリゴ糖調製物を栄養組成物に添加すること又はオリゴ糖調製物の一部を栄養組成物から除去することを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物のレベル調整は、追加の基礎栄養組成物を栄養組成物に添加すること又は基礎栄養組成物の一部を栄養組成物から除去することを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物のレベルを調節するステップは、追加のオリゴ糖調製物を栄養組成物に添加することを含む。
［ＶＩ．オリゴ糖調製物を相関させる方法］
[00237]本明細書には、栄養組成物中の記載されるオリゴ糖調製物の存在、非存在及び／又は濃度を相関させる方法が提供される。本明細書には、オリゴ糖調製物と基礎栄養組成物を含む栄養組成物の製造工程中に品質管理方法を実施する方法が提供される。本明細書には、オリゴ糖調製物と基礎栄養組成物を含む栄養組成物の品質を決定する方法が提供される。いくつかの実施形態では、栄養組成物中の合成オリゴ糖調製物を相関させる方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、相関方法は、２つ事物の間の関係の確立、関係付け及び／又は結び付けを意味し得るとともに、２つの事物の存在及び量を比較し、２つの事物の比を評価することを指す場合もある。いくつかの実施形態では、本明細書には、栄養組成物中の合成オリゴ糖調製物の濃度、存在及び／又は非存在を検出する方法が提供される。いくつかの実施形態では、栄養組成物は、記載される合成オリゴ糖調製物及び天然に存在するオリゴ糖組成物（例えば、基礎栄養組成物）を含む。
[00238]いくつかの実施形態では、本明細書で使用される場合、「品質」という用語は、栄養組成物中のオリゴ糖調製物（例えば、合成オリゴ糖調製物）のレベル、例えば、そのレベルが、１～５０００ｐｐｍ、１０～１０００ｐｐｍ、１０～５００ｐｐｍ又は５０～５００ｐｐｍなど、指定される範囲内であるか否かを意味し得る。いくつかの実施形態では、「品質」という用語は、分析装置により示されるシグナルによって証明されるような、栄養組成物中のオリゴ糖調製物のレベル；例えば、ＮＭＲ、ＧＣ－ＭＳ、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ、ＭＡＬＤＩ－ＭＳ又はＨＰＬＣクロマトグラム若しくはスペクトル及び／又は重量決定に、指定されるピークが存在するか否かを意味し得る。
[00239]いくつかの実施形態では、「品質」という用語は、栄養組成物中のオリゴ糖調製物（例えば、合成オリゴ糖調製物）の分布、例えば、オリゴ糖調製物が、栄養組成物中に一貫して、且つ均質に分布しているか否かを意味し得る。従って、いくつかの実施形態では、栄養組成物のバッチの品質は、同じバッチから採取された栄養組成物の２つ以上のサンプル中のオリゴ糖調製物のレベル及び／又はシグナルを比較することによって決定することができる。いくつかの実施形態では、栄養組成物のバッチの品質は、異なるバッチから採取された栄養組成物の２つ以上のサンプル中のオリゴ糖調製物のレベル及び／又はシグナルを比較することによって決定することができる。
[00240]従って、本明細書には、栄養組成物中のオリゴ糖調製物を定量する方法が提供され、これは、栄養組成物のサンプル中のシグナルのレベルを決定するステップ、シグナルのレベルに基づいて栄養組成物中のオリゴ糖調製物の濃度を計算するステップを含む。本明細書には、栄養組成物の品質管理を実施する方法が提供され、これは、分析装置を用いて、栄養組成物のサンプル中のシグナルを検出するステップ及びシグナルの存在及び非存在に基づいて栄養組成物のバッチを合格又は不合格にするステップを含む。更に、栄養組成物の品質管理を実施する方法が本明細書に提供され、これは、分析装置を用いて、栄養組成物の第１サンプル中の第１シグナル及び栄養組成物の第２サンプル中の第２シグナルの存在若しくは非存在を検出するステップ、及び第１シグナルと第２シグナルを比較するステップを含む。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び／又は第２シグナルは、（ｉ）１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すか、（ｉｉ）オリゴ糖の重合度（ＤＰ）分布と関連しているか、又は（ｉｉｉ）オリゴ糖のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合、β－（１，６）グリコシド結合、α－（１，１）－αグリコシド結合、α－（１，１）－βグリコシド結合、β－（１，１）－αグリコシド結合又はβ－（１，１）－βグリコシド結合と関連している。
[00241]いくつかの実施形態では、本明細書には、栄養組成物中の合成オリゴ糖調製物を定量する方法が提供され、ここで、栄養組成物は、合成オリゴ糖調製物及び天然に存在するオリゴ糖組成物を含み、この方法は、（ａ）栄養組成物のサンプル中のシグナルのレベルを決定するステップ、及び（ｂ）シグナルのレベルに基づいて栄養組成物中のオリゴ糖調製物の濃度を相関させるステップを含み、シグナルは、（ｉ）１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すか、（ｉｉ）オリゴ糖の重合度（ＤＰ）分布と関連しているか、又は（ｉｉｉ）オリゴ糖のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合、β－（１，６）グリコシド結合、α－（１，１）－αグリコシド結合、α－（１，１）－βグリコシド結合、β－（１，１）－αグリコシド結合又はβ－（１，１）－βグリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、栄養組成物中の品質管理を実施する方法が本明細書に記載され、これは、（ａ）栄養組成物のバッチを用意するステップであって、栄養組成物は、合成オリゴ糖調製物及び天然に存在するオリゴ糖組成物を含む、ステップ、（ｂ）バッチから栄養組成物のサンプルを取得するステップ、（ｃ）分析装置を用いて、栄養組成物のサンプル中のオリゴ糖の少なくとも１部分のシグナルを検出するステップ、及び（ｄ）栄養組成物のバッチを合格又は不合格にするステップを含み、シグナルは、（ｉ）１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すか、（ｉｉ）オリゴ糖の重合度（ＤＰ）分布に関連するか、又は（ｉｉｉ）オリゴ糖のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合、β－（１，６）グリコシド結合、α－（１，１）－αグリコシド結合、α－（１，１）－βグリコシド結合、β－（１，１）－αグリコシド結合又はβ－（１，１）－βグリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、栄養組成物中の品質管理を実施する方法が本明細書に記載され、これは、（ａ）栄養組成物のサンプルを用意するステップであって、栄養組成物は、天然に存在するオリゴ糖組成物を含む、ステップ、（ｂ）分析装置を用いて、栄養組成物のサンプル中のオリゴ糖の少なくとも１部分のシグナルを検出するステップを含み、シグナルは、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すか、（ｉｉ）オリゴ糖の重合度（ＤＰ）分布と関連しているか、又は（ｉｉｉ）オリゴ糖のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合、β－（１，６）グリコシド結合、α－（１，１）－αグリコシド結合、α－（１，１）－βグリコシド結合、β－（１，１）－αグリコシド結合又はβ－（１，１）－βグリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、シグナルは、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示す。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物及び天然に存在するオリゴ糖組成物を含む栄養組成物中の品質管理を実施する方法が本明細書に記載され、この方法は、（ａ）分析装置を用いて、栄養組成物の第１サンプル中の第１シグナル及び栄養組成物の第２サンプル中の第２シグナルの存在若しくは非存在を検出するステップ、及び（ｂ）第１シグナルと第２シグナルを比較するステップを含み、第１シグナル及び第２シグナルは、（ｉ）１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すか、（ｉｉ）オリゴ糖の重合度（ＤＰ）分布と関連しているか、又は（ｉｉｉ）オリゴ糖のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合、β－（１，６）グリコシド結合、α－（１，１）－αグリコシド結合、α－（１，１）－βグリコシド結合、β－（１，１）－αグリコシド結合又はβ－（１，１）－βグリコシド結合と関連している。いくつかの実施形態では、第１シグナル及び／又は第２シグナルは、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示す。
[00242]そのタイプに応じて、シグナル（例えば、シグナルのレベル）、第１シグナル及び／又は第２シグナルは、任意の好適な分析方法により決定又は検出することができ、そうしたものとして、限定されないが、ＮＭＲ、ＨＰＬＣ、ＳＥＣ、ＦＦＦ、Ａ４Ｆ、ＧＣ、ＬＣ、ＧＣ－ＭＳ、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ、ＭＡＬＤＩ－ＭＳ、ＩＲ又はＣＤ分光法が挙げられる。シグナル、第１シグナル及び／又は第２シグナルのレベルは、ＬＣを用いてサンプルを精製し、サンプルを計量することによって決定又は検出することができる。いくつかの実施形態では、記載されるオリゴ糖調製物のシグナルは、ＭＡＬＤＩ－ＭＳにより決定又は検出される。いくつかの実施形態では、記載されるオリゴ糖調製物のシグナルは、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳにより決定又は検出される。いくつかの実施形態では、記載されるオリゴ糖調製物のシグナルは、ＧＣ－ＭＳにより決定又は検出される。いくつかの実施形態では、記載されるオリゴ糖調製物のシグナルは、２Ｄ ＨＳＱＣ ＮＭＲなどのＮＭＲにより決定又は検出される。いくつかの実施形態では、記載されるオリゴ糖調製物の相対的存在量若しくは濃度又はその両方は、オリゴ糖調製物のシグナルのレベル、例えば、質量スペクトルの１つ以上のピークの相対的存在量又はＮＭＲスペクトルの１つ以上のピークの強度に基づいて計算される。
［アンヒドロサブユニットシグナル］
[00243]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、オリゴ糖調製物のシグナルの検出を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるオリゴ糖調製物のシグナルは、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、２つ以上のシグナル、即ち、第１シグナル、第２シグナルなどの検出を含む。いくつかの実施形態では、第１シグナル及び第２シグナルの少なくとも一方は、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示す。いくつかの実施形態では、第１シグナル及び第２シグナルの両方が、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示す。
[00244]いくつかの実施形態では、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すシグナルは、任意の好適な分析装置により決定又は検出することができ、そうしたものとして、限定されないが、液体クロマトグラフィー（例えば、ＨＰＬＣ）、ＦＦＦ、Ａ４Ｆ、ＮＭＲ、ＳＥＣ、質量分析法、例えば、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ、ＧＣ－ＭＳ及びＭＡＬＤＩ－ＭＳが挙げられる。本明細書で使用される場合、いくつかの実施形態では、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すシグナルは、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属するシグナルを含み得る。
[00245]いくつかの実施形態では、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すシグナルは、質量スペクトル、ＮＭＲ若しくは液体クロマトグラフィー（例えば、ＨＰＬＣ）及び／又は重量決定に関して、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する１つ以上のピークを含む。いくつかの実施形態では、質量スペクトル、ＮＭＲ若しくは液体クロマトグラフィー（例えば、ＨＰＬＣ）及び／又は重量決定に関する１つ以上のピークは、オリゴ糖調製物に由来するアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、質量スペクトル、ＮＭＲ若しくは液体クロマトグラフィー（例えば、ＨＰＬＣ）及び／又は重量決定に関する１つ以上のピークは、オリゴ糖調製物中のＤＰ１～ＤＰｎ画分のいずれかのアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、質量スペクトル、ＮＭＲ若しくは液体クロマトグラフィー（例えば、ＨＰＬＣ）及び／又は重量決定に関する１つ以上のピークは、ＤＰ１画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、質量スペクトル、ＮＭＲ若しくは液体クロマトグラフィー（例えば、ＨＰＬＣ）及び／又は重量決定に関する１つ以上のピークは、レボグルコサン、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノース又はそれらの組み合わせに帰属する。
[00246]いくつかの実施形態では、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すシグナルは、質量スペクトル、ＮＭＲ若しくは液体クロマトグラフィー（例えば、ＨＰＬＣ）及び／又は重量決定に関して、ＤＰ２画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する１つ以上のピークを含む。いくつかの実施形態では、質量スペクトル、ＮＭＲ若しくは液体クロマトグラフィー（例えば、ＨＰＬＣ）及び／又は重量決定に関する１つ以上のピークは、アンヒドロ－セロビオースに帰属する。いくつかの実施形態では、質量スペクトル、ＮＭＲ若しくは液体クロマトグラフィー（例えば、ＨＰＬＣ）及び／又は重量決定に関する１つ以上のピークは、ＤＰ３、ＤＰ４、ＤＰ５又はＤＰ６画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。
[00247]いくつかの実施形態では、質量スペクトル、ＮＭＲ若しくは液体クロマトグラフィー（例えば、ＨＰＬＣ）及び／又は重量決定に関する１つ以上のピークは、１つ以上の画分からのアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。例えば、いくつかの実施形態では、シグナルは、ＤＰ１及びＤＰ２画分からのアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、シグナルは、ＤＰ１、ＤＰ２及びＤＰ３画分からのアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。
[00248]例えば、いくつかの実施形態では、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すシグナルは、ＤＰ２画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する１つ以上の質量スペクトルのピークを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すシグナルは、ＤＰ１画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する１つ以上の質量スペクトルのピークを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すシグナルは、ＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の重量決定を含む。いくつかの実施形態では、重量決定は、分取クロマトグラフィーにより単離及び／又は精製されたＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分について実施される。
[00249]いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、２つ以上のシグナル、即ち、第１シグナル、第２シグナル、第３シグナルなどの検出を含む。いくつかの実施形態では、第１シグナル及び第２シグナルは、同じ画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。例えば、いくつかの実施形態では、第１シグナルは、レボグロコサンに帰属し、第２シグナルは、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースに帰属する。いくつかの実施形態では、第１シグナル及び第２シグナルは、同じ種のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。例えば、いくつかの実施形態では、第１シグナル及び第２シグナルは、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースに帰属する。いくつかの実施形態では、第１シグナル及び第２シグナルは、異なる画分からのアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、第１シグナル及び第２シグナルは、異なる種のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。例えば、いくつかの実施形態では、第１シグナルは、レボグロコサンに帰属し、第２シグナルは、アンヒドロ－セロビオースに帰属する。いくつかの実施形態では、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示す第１シグナル及び第２シグナルの少なくとも１部分は、ＤＰ２画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する１つ以上の質量スペクトルのピークを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示す第１シグナル及び第２シグナルの少なくとも１部分は、ＤＰ１画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する１つ以上の質量スペクトルのピークを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示す第１シグナル及び第２シグナルの少なくとも１部分は、ＤＰ１及び／又はＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の重量決定を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示す第１シグナル及び第２シグナルの両方が、アンヒドロ－セロビオースなどのＤＰ２画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する１つ以上の質量スペクトルのピークを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示す第１シグナル及び第２シグナルの両方が、レボグルコサン、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノース又はそれらの組み合わせなどのＤＰ１画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する１つ以上の質量スペクトルのピークを含む。
[00250]いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、ＤＰ１画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの全部が、ＤＰ１画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、レボグルコサン、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノース又はそれらの組み合わせに帰属する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それら全部が、レボグルコサン、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノース又はそれらの組み合わせに帰属する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、ＤＰ２画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの全部が、ＤＰ２画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、アンヒドロ－セロビオースに帰属する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの全部が、アンヒドロ－セロビオースに帰属する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、ＤＰ３画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの全部が、ＤＰ３画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する。
[00251]いくつかの実施形態では、記載されるシグナルのレベルは、任意の好適な分析装置により決定することができ、そうしたものとして、限定されないが、平衡、液体クロマトグラフィー（例えば、ＨＰＬＣ）、ＮＭＲ、ＳＥＣ、質量分析法、例えば、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ、ＧＣ－ＦＩＤ、ＧＣ－ＭＳ及びＭＡＬＤＩ－ＭＳが挙げられる。例えば、いくつかの実施形態では、シグナルのレベルは、シグナルによって表される１種以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の相対的存在量である。いくつかの実施形態では、シグナルのレベルは、シグナルによって表される１種以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の濃度である。いくつかの実施形態では、シグナルのレベルは、記載されるオリゴ糖調製物の単離画分の少なくとも１部分（例えば、ＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖）の重量である。
［グリコシド結合シグナル］
[00252]いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるシグナルは、１つ以上のグリコシド結合に関連する。例えば、いくつかの実施形態では、シグナルは、α－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，４）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合、β－（１，６）グリコシド結合又はそれらの組み合わせに関連する。いくつかの実施形態では、シグナルは、α－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合又はβ－（１，６）グリコシド結合に関連する。
[00253]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、２つ以上のシグナル、即ち、第１シグナル、第２シグナル、第３シグナルなどの検出を含む。いくつかの実施形態では、第１シグナル及び第２シグナルの少なくとも一方は、１つ以上のグリコシド結合に関連する。例えば、いくつかの実施形態では、第１シグナル及び第２シグナルの少なくとも一方は、α－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，４）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合、β－（１，６）グリコシド結合又はそれらの組み合わせに関連する。いくつかの実施形態では、第１シグナル及び第２シグナルの少なくとも一方は、α－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合又はβ－（１，６）グリコシド結合に関連する。
[00254]いくつかの実施形態では、第１シグナル及び第２シグナルの両方が、１つ以上のグリコシド結合に関連する。例えば、いくつかの実施形態では、第１シグナル及び第２シグナルの両方が、α－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，４）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合、β－（１，６）グリコシド結合又はそれらの組み合わせに関連する。いくつかの実施形態では、第１シグナル及び第２シグナルの両方が、α－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合又はβ－（１，６）グリコシド結合に関連する。
[00255]いくつかの実施形態では、１つ以上のグリコシド結合に関連するシグナルは、任意の好適な分析装置、例えば、限定されないが、１Ｄ１Ｈ ＮＭＲ、１Ｄ １３Ｃ ＮＭＲをはじめとするＮＭＲ、２Ｄ ＪＲＥＳ、ＨＳＱＣ、ＤＯＳＹ、ＨＭＢＣ、ＣＯＳＹ、ＥＣＯＳＹ、ＴＯＣＳＹ、ＮＯＥＳＹ若しくはＲＯＥＳＹなどの２Ｄ ＮＭＲ又はそれらの組み合わせによって決定又は検出することができる。いくつかの実施形態では、１つ以上のグリコシド結合に関連するシグナルは、そのシグナルが１つ以上のグリコシド結合に帰属すると言うことができる。
[00256]いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、α－（１，２）グリコシド結合に関連する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの全部が、α－（１，２）グリコシド結合に関連する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、α－（１，３）グリコシド結合に関連する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの全部が、α－（１，３）グリコシド結合に関連する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、α－（１，６）グリコシド結合に関連する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの全部が、α－（１，６）グリコシド結合に関連する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、β－（１，２）グリコシド結合に関連する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの全部が、β－（１，２）グリコシド結合に関連する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、β－（１，３）グリコシド結合に関連する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの全部が、β－（１，３）グリコシド結合に関連する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、β－（１，４）グリコシド結合に関連する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの全部が、β－（１，４）グリコシド結合に関連する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、β－（１，６）グリコシド結合に関連する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの全部が、β－（１，６）グリコシド結合に関連する。
[00257]いくつかの実施形態では、１つ以上のグリコシド結合に関連するシグナルは、１つ以上のグリコシド結合に帰属するＮＭＲスペクトルの１つ以上のピークを含む。いくつかの実施形態では、シグナルの位置、強度、形状及びその他の特徴は、ＮＭＲスペクトルのタイプ及びＮＭＲを実施する条件に応じて変動し得る。いくつかの実施形態では、１つ以上のグリコシド結合に関連するシグナルの存在又は非存在は、１つ以上のグリコシド結合に帰属するＮＭＲスペクトルの１つ以上のピークの存在又は非存在を意味する。いくつかの実施形態では、シグナルのレベルは、１つ以上のグリコシド結合に帰属するＮＭＲスペクトルの１つ以上のピークの強度を意味し、ここで、１つ以上のグリコシド結合の相対的存在量及び／又は濃度は、その強度に基づいて計算してもよいし、しなくてもよい。
［ＤＰ分布シグナル］
[00258]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のシグナルは、オリゴ糖のＤＰ分布に関連する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、２つ以上のシグナル、即ち、第１シグナル、第２シグナル、第３シグナルなどの検出を含む。いくつかの実施形態では、第１シグナル及び第２シグナルの少なくとも一方は、オリゴ糖のＤＰ分布に関連する。いくつかの実施形態では、第１シグナル及び第２シグナルの両方が、オリゴ糖のＤＰ分布に関連する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖のＤＰ分布は、主として、オリゴ糖調製物に帰属する。
[00259]いくつかの実施形態では、オリゴ糖のＤＰ分布に関連するシグナルは、任意の好適な分析方法により決定又は検出することができ、そうしたものとして、限定されないが、ＨＰＬＣ、ＳＥＣ、ＦＦＦ、Ａ４Ｆ、質量分析法、例えば、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ、ＧＣ－ＭＳ及びＭＡＬＤＩ－ＭＳが挙げられる。いくつかの実施形態では、オリゴ糖のＤＰ分布に関連するシグナルは、オリゴ糖の分子量分布に基づいて決定することができる。
[00260]いくつかの実施形態では、オリゴ糖のＤＰ分布に関連するシグナルは、好適な分析装置により取得される、ＤＰ１～ＤＰｎ画分のいずれか１つ以上に帰属するシグナルを意味し得る。いくつかの実施形態では、オリゴ糖のＤＰ分布に関連するシグナルは、ＤＰ１、ＤＰ２、ＤＰ３、ＤＰ４，又はＤＰ５画分中のオリゴ糖に帰属する。
[00261]いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、ＤＰ１画分中のオリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの全部が、ＤＰ１画分中のオリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、ＤＰ２画分中のオリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの全部が、ＤＰ２画分中のオリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの１つ以上は、ＤＰ３画分中のオリゴ糖に帰属する。いくつかの実施形態では、いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び第２シグナルのうち、それらの全部が、ＤＰ３画分中のオリゴ糖に帰属する。
[00262]分析装置のタイプに応じて、いくつかの実施形態では、シグナルに関連するオリゴ糖の濃度及び／又は相対的存在量をシグナルのレベルに基づいて決定することができる。いくつかの実施形態では、オリゴ糖のＤＰ分布に関連するシグナルは、ＤＰ２画分に帰属し、ＳＥＣにより決定又は検出され、ここで、オリゴ糖中のＤＰ２画分の量は、ＳＥＣにより決定することができる。いくつかの実施形態では、オリゴ糖のＤＰ分布に関連するシグナルは、ＤＰ２画分に帰属し、ＨＰＬＣにより決定又は検出され、ここで、オリゴ糖中のＤＰ２画分の量は、ＨＰＬＣにより決定することができる。いくつかの実施形態では、オリゴ糖のＤＰ分布に関連するシグナルは、ＤＰ２画分に帰属し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳにより決定又は検出され、ここで、オリゴ糖中のＤＰ２画分の量は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳにより決定することができる。
[00263]シグナル（例えば、第１シグナル及び第２シグナル）の各々を独立して選択、決定及び／又は検出できることは理解すべきである。例えば、いくつかの実施形態では、第１シグナルは、ＤＰ分布に関連するため、ＳＥＣにより決定されるのに対し、第２シグナルは、ＤＰ２画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すため、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって決定される。いくつかの実施形態では、第１シグナルは、α－（１，６）グリコシド結合と関連し、２Ｄ１Ｈ、１３Ｃ－ＨＳＱＣにより検出されるのに対し、第２シグナルは、ＤＰ１画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって決定又は検出される。いくつかの実施形態では、第１シグナル及び第２シグナルはいずれもＤＰ１画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すとともにそれに帰属し、質量分析法によって決定又は検出される。いくつかの実施形態では、第１シグナル及び第２シグナルはいずれもＤＰ２画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すとともにそれに帰属し、質量分析法によって決定又は検出される。いくつかの実施形態では、第１シグナル及び第２シグナルはいずれもＤＰ２画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すとともにそれに帰属し、分取クロマトグラフィーによる単離後の重量決定によって決定又は検出される。
［抽出］
[00264]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、栄養組成物のサンプルからのオリゴ糖の少なくとも１部分を抽出するステップを含む。いくつかの実施形態では、抽出溶媒は、オリゴ糖を溶解させるか、又は一部溶解させることができる１種以上の溶媒を含む。いくつかの実施形態では、抽出溶媒は、水、アルコール（例えば、エタノール、メタノール若しくはプロパノール）、バッファー、１種以上の有機溶媒又はそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、抽出に好適なバッファーは、クエン酸、酢酸、リン酸塩、ＣＨＥＳ、ホウ酸塩、ジエチルバルビツール酸、炭酸、重炭酸、塩酸、水酸化ナトリウム、酢酸ナトリウム、イミダゾール、炭酸ナトリウム、それらの任意の組み合わせ又は当技術分野で公知の他のバッファーを含み得る。いくつかの実施形態では、バッファーは、７未満のｐＨを有する。他の実施形態では、バッファーは、７以上のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、抽出溶媒は、約５：９５、約１０：９０、約２０：８０、約３０：７０、約４０：６０、約５０：５０、約６０：４０、約７０：３０、約８０：２０、約９０：１０又は約９５：５の重量又は体積比で水とエタノールを含む。いくつかの実施形態では、抽出溶媒は、約５０：５０の重量比で水とエタノールを含む。いくつかの実施形態では、抽出溶媒は、約５０：５０の体積比で水とエタノールを含む。いくつかの実施形態では、抽出溶媒は、３０重量％超、４０重量％超、５０重量％超、６０重量％超、７０重量％超、８０重量％超、９０重量％超、９５重量％超又は９９重量％超の水を含む。いくつかの実施形態では、抽出溶媒は、水である。
[00265]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、様々な抽出時間及び抽出温度を含む。当業者であれば、オリゴ糖及び栄養組成物の化学及び物理的特性に基づいて、好適な抽出溶媒、抽出時間及び抽出温度を選択することができる。例えば、いくつかの実施形態では、抽出温度は、約２０～約１００℃、約３０～約９５℃、約４０～約９５℃、約５０～約９５℃、約６０～約９５℃、約７０～約９５℃、約８０～約８９５℃、約６０～約９０℃、約７０～約９０℃又は約７５～約９５℃である。いくつかの実施形態では、抽出温度は、約６０～約９０℃である。いくつかの実施形態では、抽出温度は、約８０℃である。例えば、特定の実施形態では、抽出溶媒を所望の抽出温度に加熱する。
[00266]溶解速度に応じて、一部の抽出溶媒及び／又はオリゴ糖は、より長い抽出時間を必要とし得る。いくつかの実施形態では、抽出時間は、約５分～２４時間、５分～１０時間、５分～５時間、５分～２時間、５分～１時間、５分～１時間、１０分～１０時間、１０分～５時間、１０分～２時間又は１０分～１時間である。いくつかの実施形態では、抽出時間は、およそ５分～１時間である。いくつかの実施形態では、抽出時間は、約３０分である。
[00267]いくつかの実施形態では、抽出は、例えば、ミルで粉砕することにより、栄養組成物のサンプルを微細な断片に物理的に破砕するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、例えば、溶液から固形分を除去するために、抽出されたオリゴ糖を濾過するステップを含む。いくつかの実施形態では、濾過ステップは、濾紙、限外濾過、精密濾過、遠心分離、沈殿又は他の任意の分離技術により実施することができる。いくつかの実施形態では、本方法は、抽出オリゴ糖を清澄化するステップを含む。特定の実施形態では、抽出されたオリゴ糖を清澄化するステップは、活性炭及びイオン交換樹脂などの色素吸収材と抽出オリゴ糖溶液とを接触させるステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、複数の抽出ステップを含む。例えば、本方法は、固液抽出ステップ並びに１回以上の液液抽出及び／又は固液抽出ステップを含み得る。
［濃度］
[00268]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、抽出されたオリゴ糖の少なくとも１部分を濃縮するステップを含む。いくつかの実施形態では、抽出されたオリゴ糖の濃度は、濃縮ステップ後に１０００倍超、５００倍超、１００倍超、１０倍超又は５倍超増加する。いくつかの実施形態では、抽出されたオリゴ糖の濃度は、濃縮ステップ後に１００倍超増加する。
[00269]いくつかの実施形態では、濃縮ステップは、凍結乾燥、真空蒸留、膜分離、溶媒抽出、オリゴ糖溶液中の溶媒の室温若しくは高温での蒸発又はそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、濃縮ステップは、凍結乾燥を含む。いくつかの実施形態では、濃縮ステップは、真空及び／又は高温でオリゴ糖溶液中の溶媒を蒸発させることを含む。いくつかの実施形態では、濃縮ステップは、ナノ濾過を含む。いくつかの実施形態では、濃縮ステップは、ナノ濾過を使用して、ＤＰ１アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を濃縮することを含む。いくつかの実施形態では、濃縮ステップは、ナノ濾過を使用して、ＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を濃縮することを含む。いくつかの実施形態では、濃縮ステップは、ナノ濾過を使用して、ＤＰ３アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を濃縮することを含む。
[00270]いくつかの実施形態では、抽出及び濃縮されたオリゴ糖は、濃縮されたＤＰ１、ＤＰ２、ＤＰ３、ＤＰ４又はＤＰ５画分を有する。いくつかの実施形態では、抽出及び濃縮されたオリゴ糖は、濃縮されたアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を有する。
[00271]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、抽出又は濃縮されたオリゴ糖に内部標準を導入するステップを含む。例えば、内部標準は、ＭＳ定量目的のために導入される。いくつかの実施形態では、内部標準は、１３Ｃを含む合成オリゴ糖調製物などの同位体標識物質である。いくつかの実施形態では、内部標準は、１３Ｃグルコースから合成されたグルコ－オリゴ糖である。
［消化］
[00272]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、炭水化物源を基礎栄養組成物中で選択的に分解するステップを含む。例えば、基礎栄養組成物中の天然に存在する炭水化物源は、合成オリゴ糖調製物よりも酵素加水分解を被りやすい可能性がある。従って、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、抽出又は濃縮されたオリゴ糖の少なくとも１部分を１種以上の加水分解酵素で消化するステップを含む。いくつかの実施形態では、１種以上の加水分解酵素は、天然に存在する多糖の加水分解を促進する任意の酵素を含み得る。いくつかの実施形態では、１種以上の加水分解酵素は、１つ以上の天然に存在するグリコシド結合を切断する任意の酵素を含み得る。いくつかの実施形態では、１種以上の加水分解酵素は、α－（１，４）グリコシド結合又は天然に存在するα－（１，４）グリコシド結合を選択的に切断する。いくつかの実施形態では、１種以上の加水分解酵素は、カルボヒドラターゼ、プロテアーゼ、リパーゼ、アミラーゼ（例えば、α－アミラーゼ及びβ－アミラーゼ）、アミログリコシダーゼ、インベルターゼ、α－ガラクトシダーゼ、セルラーゼ、キシラナーゼ、キチナーゼ、リゾチーム、グルコアミラーゼ、プルラナーゼ又はそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１種以上の加水分解酵素は、カルボヒドラターゼ、プロテアーゼ、リパーゼ又はそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１種以上の加水分解酵素は、α－アミラーゼ、アミログリコシダーゼ、インベルターゼ、α－ガラクトシダーゼ又はそれらの任意の組み合わせを含む。
[00273]いくつかの実施形態では、１種以上の加水分解酵素の濃度は、酵素各々について約０．１～４０Ｕ／ｍＬ、０．１～２０Ｕ／ｍＬ、０．５～２０Ｕ／ｍＬ、０．５～１５Ｕ／ｍＬ、０．５～１０Ｕ／ｍＬ、０．５～９Ｕ／ｍＬ、０．５～８Ｕ／ｍＬ、０．５～７Ｕ／ｍＬ、０．５～６Ｕ／ｍＬ、０．５～５Ｕ／ｍＬ、０．５～４Ｕ／ｍＬ、１～１０Ｕ／ｍＬ、１～９Ｕ／ｍＬ、１～８Ｕ／ｍＬ、１～７Ｕ／ｍＬ、１～６Ｕ／ｍＬ、１～５Ｕ／ｍＬ、２～５Ｕ／ｍＬ又は３～４Ｕ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、１種以上の加水分解酵素の濃度は、酵素各々について約１～１０Ｕ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、１種以上の加水分解酵素の濃度は、酵素各々について約３～４Ｕ／ｍＬである。
[00274]酵素のタイプ及び濃度並びにその他の消化条件に応じて、消化時間は変動し得る。いくつかの実施形態では、消化時間は、約１０分～２４時間、３０分～１２時間、１時間～１２時間、２時間～１１時間、３時間～１０時間、４時間～１２時間、４時間～１１時間、４時間～１０時間、４時間～９時間、２時間～１０時間、２時間～８時間、２時間～６時間、３時間～８時間又は３時間～５時間である。いくつかの実施形態では、消化時間は、約４時間～１２時間である。いくつかの実施形態では、消化時間は、約４時間である。
[00275]特定の実施形態では、消化温度の変化は、酵素の消化速度に影響を与え得る。いくつかの実施形態では、消化温度は、約２０～１００℃、３０～９０℃、４０～８０℃、５０～７０℃又は５５～６５℃である。いくつかの実施形態では、消化温度は、約４０～８０℃である。いくつかの実施形態では、消化温度は、約６０℃である。
[00276]いくつかの実施形態では、本方法は、複数の消化ステップを含む。例えば、消化ステップは、基礎栄養組成物からの全て又は実質的に全ての炭水化物源が加水分解されるまで複数回繰り返すことができる。
[00277]特定の実施形態では、本方法は、抽出又は濃縮されたオリゴ糖を還元するステップを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖をそれぞれのアルジトールに還元するステップにより、より単純なクロマトグラム、即ち、より鮮明なピーク、従って、より高感度の検出を達成することができる。いくつかの実施形態では、抽出又は濃縮されたオリゴ糖は、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）、硫酸鉄、二酸化硫黄、ジチオン酸塩、チオ硫酸塩、ヨウ化物、ヒドラジン及びアスコルビン酸などの１種以上の還元剤により還元される。いくつかの実施形態では、抽出又は濃縮されたオリゴ糖は、水素化ホウ素ナトリウムにより還元される。
［分離、単離及び定量］
[00278]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、分離及び／又は単離ステップを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、抽出、濃縮、消化又は還元されたオリゴ糖の少なくとも１部分を分離するステップを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、抽出されたオリゴ糖を分離するステップを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、濃縮されたオリゴ糖を分離するステップを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、消化されたオリゴ糖を分離するステップを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、還元されたオリゴ糖を分離するステップを含む。
[00279]オリゴ糖は、任意の好適な手段により分離することができる。例えば、いくつかの実施形態では、オリゴ糖は、フラッシュクロマトグラフィー、低、中若しくは高圧液体クロマトグラフィー、限外濾過、膜濾過、逆浸透膜又はそれらの任意の組み合わせによって分離する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖は、フラッシュクロマトグラフィーにより分離する。いくつかの実施形態では、クロマトグラフィーによりオリゴ糖を分離する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖は、沈殿により分離する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖は、ナノ濾過により分離する。いくつかの実施形態では、ＤＰ１アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖又はＤＰ１オリゴ糖は、ナノ濾過により分離する。いくつかの実施形態では、ＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖又はＤＰ１オリゴ糖は、ナノ濾過により分離する。いくつかの実施形態では、ＤＰ３アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖又はＤＰ１オリゴ糖は、ナノ濾過により分離する。
[00280]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、抽出、濃縮、未消化、還元又は分離オリゴ糖の少なくとも１部分を単離するステップを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、未消化のオリゴ糖を単離するステップを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、分離されたオリゴ糖を単離するステップを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、分離されたオリゴ糖の各画分を単離するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を単離するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＤＰ１又はＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖などのアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の特定の画分を単離するステップを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖を単離するステップは、類似する特徴、例えば重合度を有するオリゴ糖を濃縮し、且つ／又は合わせることを含み得る。
[00281]特定の実施形態では、オリゴ糖は、重合度別に分離及び／又は単離される。いくつかの実施形態では、本方法は、１、２、３、４又は５の重合度を有するオリゴ糖を単離及び／又は分離するステップを含む。いくつかの実施形態では、ＤＰ１画分中のオリゴ糖の少なくとも１部分を単離及び／又は分離する。いくつかの実施形態では、ＤＰ２画分中のオリゴ糖の少なくとも１部分を単離及び／又は分離する。いくつかの実施形態では、ＤＰ３画分中のオリゴ糖の少なくとも１部分を単離及び／又は分離する。いくつかの実施形態では、ＤＰ４画分中のオリゴ糖の少なくとも１部分を単離及び／又は分離する。いくつかの実施形態では、ＤＰ５画分中のオリゴ糖の少なくとも１部分を単離及び／又は分離する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖の２つ以上の画分を単離及び／又は分離する。いくつかの実施形態では、ＤＰ１及びＤＰ２画分中のオリゴ糖を単離及び／又は分離する。いくつかの実施形態では、ＤＰ１、ＤＰ２及びＤＰ３画分中のオリゴ糖を単離及び／又は分離する。
[00282]特定の実施形態では、オリゴ糖は、それらが、アンヒドロサブユニットを含むか否かによって分離及び／又は単離する。いくつかの実施形態では、本方法は、１、２、３、４又は５の重合度を有するアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を単離及び／又は分離するステップを含む。いくつかの実施形態では、ＤＰ１画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分を単離及び／又は分離する。いくつかの実施形態では、ＤＰ２画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分を単離及び／又は分離する。いくつかの実施形態では、ＤＰ３画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分を単離及び／又は分離する。いくつかの実施形態では、ＤＰ４画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分を単離及び／又は分離する。いくつかの実施形態では、ＤＰ５画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分を単離及び／又は分離する。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の２つ以上の画分を単離及び／又は分離する。
[00283]特定の実施形態では、本明細書に記載の方法は、定量ステップを含む。いくつかの実施形態では、消化、未消化、抽出、濃縮、分離及び／又は単離オリゴ糖の少なくとも１部分が定量される。いくつかの実施形態では、分離及び／又は単離されたオリゴ糖を定量する。いくつかの実施形態では、単離されたオリゴ糖を定量する。
[00284]いくつかの実施形態では、重量、濃度及び／又は相対的存在量によりオリゴ糖を定量する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖を重量により定量する。いくつかの実施形態では、ＤＰ２画分中のオリゴ糖の少なくとも１部分を単離した後、重量により定量する。いくつかの実施形態では、ＤＰ２画分中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分を単離した後、重量により定量する。いくつかの実施形態では、単離されたオリゴ糖内のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を、例えば、質量分析を用いた相対的存在量により定量する。例えば、単離されたＤＰ２画分中のアンヒドロサブユニットＤＰ２含有オリゴ糖は、質量分析に示される相対的存在量により定量する。
[00285]いくつかの実施形態では、定量されたオリゴ糖の大部分は、オリゴ糖調製物に由来する。いくつかの実施形態では、重量により定量されたオリゴ糖の３０％超、４０％超、５０％超、６０％超、７０％超、８０％超、９０％超、９５％超又は９９％超が、オリゴ糖調製物に由来する。いくつかの実施形態では、相対的存在量により定量されたオリゴ糖の３０％超、４０％超、５０％超、６０％超、７０％超、８０％超、９０％超、９５％超又は９９％超が、オリゴ糖調製物に由来する。
［シグナル分析］
[00286]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、抽出、消化、未消化、分離又は濃縮オリゴ糖の少なくとも１部分を分析するステップを含み、シグナルを取得する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、分析装置を用いて、分離されたオリゴ糖を分析するステップを含む。いくつかの実施形態では、分析装置を用いて、単離されたオリゴ糖を分析するステップを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、分析装置を用いて、消化されたオリゴ糖を分析するステップを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、分析装置を用いて、定量されたオリゴ糖を分析するステップを含む。
[00287]一部の事例では、オリゴ糖の誘導体化ステップは、様々な計器によりそれらを分析する前又は分析時のいずれかに実施される。誘導体化ステップを実施して、オリゴ糖の化学及び／又は物理的特性を改変し、それらの定量又は分離を促進することができる。誘導体化中に、１つ以上の官能基又はタグ付け基をオリゴ糖に結合させることができる。誘導体化ステップは、極性又は非極性基をオリゴ糖に付加する化学反応を含み得るが；例えば、シリル化、アシル化、アルキル化、エステル化及びエステル交換などの化学反応を実施することができる。誘導体化の方法は、当技術分野において、例えば、本明細書にその全体が参照により組み込まれるＲｕｉｚ－Ｍａｔｕｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ｂ，ｖｏｌ．８７９（１７－１８），１２２６－１２４０及びＳ．Ａｈｕｊａ，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｖｏｌ ６５（２），Ｆｅｂ １９７６，１６３－１８２に記載されている。いくつかの実施形態では、誘導体化ステップは、シグナルの検出前に実施される。
[00288]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、ＮＭＲによりオリゴ糖のグリコシド結合を分析し、それによって、対応するグリコシド結合と関連する１つ以上の記載のシグナル（例えば、複数のシグナル、第１シグナル及び第２シグナルのレベル）を決定又は検出するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、１Ｄ１Ｈ ＮＭＲ、１Ｄ １３Ｃ ＮＭＲ、２Ｄ ＮＭＲ、例えば２Ｄ ＪＲＥＳ、ＨＳＱＣ、ＨＭＢＣ、ＣＯＳＹ、ＥＣＯＳＹ、ＴＯＣＳＹ、ＮＯＥＳＹ及びＲＯＥＳＹ又はそれらの組み合わせによってグリコシド結合を分析するステップを含む。いくつかの実施形態では、分析されるグリコシド結合は、オリゴ糖のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合、β－（１，６）グリコシド結合、α－（１，１）－αグリコシド結合、α－（１，１）－βグリコシド結合、β－（１，１）－αグリコシド結合又はβ－（１，１）－βグリコシド結合である。
[00289]いくつかの実施形態では、本方法は、ＮＭＲによりオリゴ糖のα－（１，２）グリコシド結合を分析し、それによって、α－（１，２）グリコシド結合と関連する記載のシグナルを決定又は検出するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＮＭＲによりオリゴ糖のα－（１，３）グリコシド結合を分析し、それによって、α－（１，３）グリコシド結合と関連する記載のシグナルを決定又は検出するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＮＭＲによりオリゴ糖のα－（１，６）グリコシド結合を分析し、それによって、α－（１，６）グリコシド結合と関連する記載のシグナルを決定又は検出するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＮＭＲによりオリゴ糖のβ－（１，２）グリコシド結合を分析し、それによって、β－（１，２）グリコシド結合と関連する記載のシグナルを決定又は検出するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＮＭＲによりオリゴ糖のβ－（１，３）グリコシド結合を分析し、それによって、β－（１，３）グリコシド結合と関連する記載のシグナルを決定又は検出するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＮＭＲによりオリゴ糖のβ－（１，４）グリコシド結合を分析し、それによって、β－（１，４）グリコシド結合と関連する記載のシグナルを決定又は検出するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＮＭＲによりオリゴ糖のβ－（１，６）グリコシド結合を分析し、それによって、β－（１，６）グリコシド結合と関連する記載のシグナルを決定又は検出するステップを含む。
[00290]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を分析し、それによって、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示す記載のシグナル（例えば、複数のシグナル、第１シグナル及び第２シグナルのレベル）を決定又は検出するステップを含む。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖は、重量決定、ＨＰＬＣ、ＮＭＲ、ＳＥＣ、質量分析法、例えばＬＣ－ＭＳ／ＭＳ、ＧＣ－ＭＳ及びＭＡＬＤＩ－ＭＳ又はそれらの組み合わせにより分析する。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳにより分析する。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖は、ＧＣ－ＭＳにより分析する。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖は、ＭＡＬＤＩ－ＭＳにより分析する。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖は、ＨＰＬＣにより分析する。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖は、液体クロマトグラフィーにより単離及び／又は精製された画分の重量決定によって分析する。
[00291]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、ＤＰ１からＤＰｎ画分のいずれか１つ以上におけるアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を分析するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＤＰ１からＤＰ５画分のいずれか１つにおけるアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を分析するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＤＰ１画分におけるアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を分析するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＤＰ２画分におけるアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を分析するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＤＰ３画分におけるアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を分析するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＤＰ４画分におけるアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を分析するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＤＰ５画分におけるアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を分析するステップを含む。
[00292]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、オリゴ糖のＤＰ分布を分析し、それによって、ＤＰ分布と関連する記載のシグナル（例えば、複数のシグナル、第１シグナル及び第２シグナルのレベル）を決定又は検出するステップを含む。いくつかの実施形態では、記載のシグナルは、ＨＰＬＣ又はＳＥＣにより提供される。
[00293]いくつかの実施形態では、オリゴ糖のＤＰ分布を分析するステップは、ＤＰ１～ＤＰｎ画分のいずれか１つ以上におけるオリゴ糖を決定、検出又は定量するステップを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖のＤＰ分布を分析するステップは、ＤＰ１～ＤＰ５画分のいずれか１つにおけるオリゴ糖を決定、検出又は定量するステップを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖のＤＰ分布を分析するステップは、ＤＰ１画分中のオリゴ糖を決定、検出又は定量するステップを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖のＤＰ分布を分析するステップは、ＤＰ２画分中のオリゴ糖を決定、検出又は定量するステップを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖のＤＰ分布を分析するステップは、ＤＰ３画分中のオリゴ糖を決定、検出又は定量するステップを含む。
[00294]いくつかの実施形態では、本方法は、ＤＰ１～ＤＰｎ画分のいずれか１つにおけるオリゴ糖の少なくとも１部分を定量するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＤＰ１～ＤＰ５画分のいずれか１つにおけるオリゴ糖の少なくとも１部分を定量するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＤＰ１画分中のオリゴ糖の少なくとも１部分を定量するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＤＰ２画分中のオリゴ糖の少なくとも１部分を定量するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＤＰ３画分中のオリゴ糖の少なくとも１部分を定量するステップを含む。
[00295]分析装置に応じて、本明細書に記載の方法は、様々な変形態様を含み得る。一部の変形態様では、本方法は、シグナルの存在又は非存在を検出するステップを含む。いくつかの実施形態では、検出ステップは、手動で、自動的に、例えば機械により、又はそれらの任意の組み合わせによって実施することができる。一部の変形態様では、本方法は、限定されないが、シグナルの強度、強さ、形状及び／又は面積を含め、シグナルの特徴を決定するステップを含む。いくつかの実施形態では、シグナルの特徴を決定するステップは、シグナルの存在又は非存在を決定する方法を含む。いくつかの実施形態では、シグナルの特徴を決定するステップは、シグナルのレベルを決定することを含む。
[00296]例えば、いくつかの実施形態では、質量分析法でのＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖シグナルの非存在は、栄養組成物のサンプルがオリゴ糖調製物を含有しないか、又は検出可能なレベルのオリゴ糖調製物を含有しないことを示す。別の例として、いくつかの実施形態では、質量分析法でのＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖シグナルの存在及び／又はレベルは、栄養組成物のサンプルが、シグナルのレベルに対応するオリゴ糖調製物のレベルを含有し得ることを示す。また別の例として、いくつかの実施形態では、ＮＭＲスペクトルでのα－（１，６）グリコシド結合シグナルの存在及び／又はレベルは、栄養組成物のサンプルが、シグナルのレベルに対応するオリゴ糖調製物のレベルを含有し得ることを示す。
[00297]いくつかの実施形態では、本方法は、記載されるシグナル（例えば、特定のシグナル、第１シグナル及び第２シグナルのレベル）に基づいて栄養組成物中のオリゴ糖調製物の濃度を相関させる（例えば、計算又は推定する）ステップを含む。例えば、オリゴ糖の相対的存在量は、質量分析シグナルに基づいて相関させることができる。いくつかの実施形態では、オリゴ糖の濃度及び／又は相対的存在量は、ＳＥＣ、ＨＬＰＣ及び／又はＮＭＲシグナルに基づいて相関させることができる。
[00298]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物を分析して、栄養組成物中のその濃度を計算又は推定することができる。例えば、いくつかの実施形態では、品質管理ステップで、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すシグナルを決定又は検出する際に、オリゴ糖調製物中のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖のレベルを計算する。別の例として、いくつかの実施形態では、品質管理ステップで、オリゴ糖のＤＰ分布と関連するシグナルを決定又は検出する際に、オリゴ糖調製物のＤＰ分布を決定する。また別の例として、いくつかの実施形態では、品質管理ステップで、α－（１，６）グリコシド結合と関連するシグナルを決定又は検出する際に、オリゴ糖調製物のα－（１，６）グリコシド結合の相対的存在量を決定する。
[00299]いくつかの実施形態では、本方法は、シグナルを比較するステップを含み、ここで、シグナルの任意の特徴を比較することができる。例えば、いくつかの実施形態では、本方法は、第１シグナルと第２シグナルを比較するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、第１シグナルのレベルと第２シグナルのレベルを比較するステップを含む。いくつかの実施形態では、第１シグナルと第２シグナルの間の相違は、栄養組成物中のオリゴ糖調製物の分布にむらがあることを示す。他の実施形態では、第１シグナルと第２シグナルの間の類似性は、オリゴ糖調製物が栄養組成物中に一貫して分布していることを示す。
[00300]本明細書に提供される品質管理方法が、上記のステップ及び実施形態の任意の組み合わせを含み得ることは理解すべきである。更に、いくつかの実施形態では、品質管理方法は繰り返される。特定の実施形態では、品質管理方法は、栄養組成物の同じバッチ又は異なるバッチから採取された複数のサンプルについて実施される。
[00301]特定の実施形態では、第１サンプルと第２サンプルは、栄養組成物の同じバッチから採取する。特定の実施形態では、第１サンプルと第２サンプルは、栄養組成物の異なるバッチから採取する。いくつかの実施形態では、第１シサンプルと第２サンプルは、同じ又は異なる製造施設から採取する。いくつかの実施形態では、第１サンプルと第２サンプルは、同じ又は異なる時点で採取する。特定の実施形態では、第２サンプルは、第１サンプルの採取から１日超、１週間超、１か月超、６か月超又は１年超経過後に採取する。特定の実施形態では、第１サンプルと第２サンプルは、１日、１週間、１か月、６か月又は１年の期間内で採取する。いくつかの実施形態では、第１サンプルと第２サンプルは、オリゴ糖調製物と基礎栄養組成物を合わせた同じミキサーの異なる位置から採取する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物と栄養組成物の混合物工程中に第１サンプルを採取し、混合物後に第２サンプルを採取する。
[00302]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法について検出限界が存在し、ここで、検出限界を超えるオリゴ糖調製物のレベルは、本方法によって検出することができない。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の検出限界は、栄養組成物に対して１ｐｐｍ超、５ｐｐｍ超、１０ｐｐｍ超、５０ｐｐｍ超、１００ｐｐｍ超、２００ｐｐｍ超、３００ｐｐｍ超、４００ｐｐｍ超、５００ｐｐｍ超、６００ｐｐｍ超、７００ｐｐｍ超、８００ｐｐｍ超、９００ｐｐｍ超又は１０００ｐｐｍ超である。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の検出限界は、栄養組成物に対して１０ｐｐｍ超、５０ｐｐｍ超、１００ｐｐｍ超又は５００ｐｐｍ超である。
［追加ステップ］
[00303]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、栄養組成物のバッチを合格又は不合格にするステップを含む。いくつかの実施形態では、品質管理ステップ後（又は本明細書に記載の方法を実施した後）に、栄養組成物のバッチを合格又は不合格にする。いくつかの実施形態では、合格又は不合格にするステップは、手動で、機械によるなど自動的に又はそれらの組み合わせにより実施される。
[00304]いくつかの実施形態では、合格又は不合格にするステップは、全体又は一部が、記載のシグナルの存在又は非存在に基づいて行われる。他の実施形態では、合格又は不合格にするステップは、全体又は一部が、記載されるシグナルのレベルに基づいて行われ、このシグナルに基づいて栄養組成物中のオリゴ糖調製物の濃度が計算される。いくつかの実施形態では、合格又は不合格にするステップは、全体又は一部が、第１シグナル及び第２シグナルの比較に基づいて行われる。
[00305]さらなる実施形態では、合格又は不合格にするステップは、全体又は一部が、栄養組成物中のオリゴ糖調製物の予め決定される濃度の範囲に基づいて行われる。例えば、予め決定される濃度範囲は、特定の動物飼料組成物に応じて変動し得る。一例として、いくつかの実施形態では、栄養組成物のバッチは、シグナルのレベルにより、オリゴ糖調製物が栄養組成物に対して１０～１０００ｐｐｍ、１０～５００ｐｐｍ又は５０～５００ｐｐｍ以内ではないことを示す場合に不合格とされ得る。
[00306]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、決定又は検出後、例えば、品質管理ステップ後にオリゴ糖調製物のレベルを調節するステップを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物のレベルを調節するステップは、基礎栄養組成物のレベルを調節すること、オリゴ糖調製物のレベルを調節すること又はそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物のレベルを調節するステップは、追加オリゴ糖調製物を栄養組成物に添加すること又は栄養組成物からオリゴ糖調製物の１部分を取り出すことを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物のレベルを調節するステップは、追加基礎栄養組成物を栄養組成物に添加すること又は栄養組成物から基礎栄養組成物の１部分を取り出すことを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物のレベルを調節するステップは、追加オリゴ糖調製物を栄養組成物に添加することを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物のレベルを調節するステップは、栄養組成物を混合して、稠度を高めることを含む。特定の実施形態では、本方法は、オリゴ糖調製物のレベルを、予め決定した範囲に調節するステップを含み、その範囲は具体的な動物飼料組成物に応じて変動し得る。
[00307]本発明及びその利点を詳細に説明してきたが、添付される特許請求の範囲に記載される通り、本発明の趣旨及び範囲を逸脱することなく、様々な変化、代用及び改変を実施できることは理解すべきである。
[00308]以下の実施例において本発明を更に詳しく説明するが、これらの実施例は、あくまで説明の目的のために付与され、本発明を何ら限定する意図はない。
［実施例］
［実施例１：グルコ－ガラクト－オリゴ糖調製物の合成］
[00309]ｋｇスケールで好適な生産を可能にするために選択された触媒負荷、反応時間及び反応温度を使用して、グルコ－ガラクト－オリゴ糖調製物の合成を３リットルの反応槽内で実施した。
[00310]Ｄ－グルコース一水和物（８２５．１６ｇ）、Ｄ－ラクトース一水和物（２６３．４８ｇ）及び２－ピリジンスルホン酸（１．００７９ｇ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＵＳ）を、中央の２９／４２すり合わせ及び２つのサイドの２４／４０すり合わせを備えた３リットルの３口丸底フラスコに添加した。１３３ｍｍのテフロン撹拌羽根を、ＰＴＦＥテープを使用してガラス撹拌シャフトに固定した。撹拌棒は、テフロンベアリングアダプターを使用して中心点を介して固定し、フレキシブルカプラーを介してオーバーヘッド高トルクメカニカルミキサーに取り付けた。フラスコを、サイドポートの１つにあるゴム隔膜に挿入されたＪ型ワンド熱電対を介して、温度制御ユニットによって操作される半球形の電気加熱マントル内に固定した。熱電対の先端を、混合部品の上に数ｍｍのすきまで反応混合物内に存在するように調整した。補助温度モニターに接続された第２の温度プローブも同じ方法で挿入し、固定した。フラスコの第２のサイドポートには、再循環バス冷却装置によって４℃未満に維持された水－グリコール混合物によって冷却された還流凝縮器を取り付けた。
[00311]反応混合物を、８０～１００ｒｐｍの撹拌速度で連続的に混合しながら、徐々に１３０℃に加熱した。反応混合物が１２０℃に達したとき、還流凝縮器を蒸留構成体に再配置し、蒸留物を氷浴中に配置した２５０ｍＬの丸底フラスコに集めた。混合物を１３０℃で維持し、６時間連続混合した後、熱電対ボックスの電源を切った。蒸留装置を取り外し、３９０ｇの６０℃蒸留水を３口フラスコに徐々に添加した。得られた混合物を４０ＲＰＭで１０時間撹拌したままにした。およそ１，２５０ｇの粘性のある明るい琥珀色の材料が収集され、屈折率で７１．６ブリックスの濃度を有すると測定された。
［実施例２：グルコ－オリゴ糖調製物の合成］
[00312]ｋｇスケールで好適な生産を可能にするために選択された触媒負荷、反応時間及び反応温度を使用して、グルコ－オリゴ糖調製物の合成を３リットルの反応槽内で実施した。
[00313]Ｄ－グルコース一水和物（１，１５０ｇ）を、１つの中央の２９／４２すり合わせ及び２つのサイドの２４／４０すり合わせを備えた３リットルの３口丸底フラスコに添加した。１３３ｍｍのテフロン撹拌羽根を、ＰＴＦＥテープを使用してガラス撹拌シャフトに固定した。撹拌棒は、テフロンベアリングアダプターを使用してフラスコの中心点を介して固定し、フレックスカップリングを介してオーバーヘッド高トルクメカニカルミキサーに取り付けた。フラスコを、サイドポートの１つにあるゴム隔膜に挿入されたＪ型ワンド熱電対を介して、温度制御ユニットによって操作される半球形の電気加熱マントル内に固定した。熱電対の先端を、混合部品の上に数ｍｍのすきまで反応混合物内に存在するように調整した。補助温度モニターに接続された第２の温度プローブも同じ方法で挿入し、固定した。フラスコの第２のサイドポートには、再循環バス冷却装置によって４Ｃ未満に維持された水－グリコール混合物によって冷却された還流凝縮器を取り付けた。
[00314]反応混合物を、８０～１００ｒｐｍの撹拌速度で連続的に混合しながら、徐々に１３０℃に加熱した。反応温度が１２０℃から１３０℃の間に上昇すると、（＋）－カンファー－１０－スルホン酸（１．１６ｇ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）を３口フラスコに添加し、装置は、還流凝縮器から、氷浴中に配置した丸底収集フラスコを備えた蒸留構成体に切り替えた。この設定を１時間３０分間維持した後、熱電対ボックスの電源を切り、蒸留装置を取り外し、３９０ｇの２３℃蒸留水を３口フラスコに徐々に添加した。得られた混合物を、収集の瞬間まで４０ｒｐｍで１０時間撹拌したままにした。およそ１３００ｇの粘性のある暗い琥珀色の材料が収集され、７２．６ブリックスの濃度を有すると測定された。
［実施例３：グルコ－ガラクト－マンノ－オリゴ糖調製物の合成］
[00315]ｋｇスケールで好適な生産を可能にするために選択された触媒負荷、反応時間及び反応温度を使用して、グルコ－ガラクト－マンノ－オリゴ糖調製物の合成を３リットルの反応槽内で実施した。ＭＨ４７－３２－Ａ／ＭＨ４６－３５－Ｂ：８／１０／１８
[00316]グルコ－ガラクト－マンノ－オリゴ糖調製物は、独立して収集された別々の反応槽で合成された２つの別々の成分として調製した。各合成は異なる出発反応物質を使用したが、完了するまで同じ手順及び方法に従った。最終グルコ－ガラクト－マンノ－オリゴ糖調製物は、両方の合成生成物の混合から形成された均質なシロップであった。
[00317]第１の成分の合成について、９９０．５４ｇのグルコース一水和物、１０５．５８ｇのラクトース一水和物、１．００ｇの２－ピリジンスルホン酸を、２つの２４／４０すり合わせが隣接する１つの中央の２９／４２すり合わせを備えた３リットルの３口丸底フラスコに添加した。１３３ｍｍのテフロン撹拌羽根を、ＰＴＦＥテープを使用して４４０ｍｍガラス撹拌シャフトに固定した。撹拌棒は、テフロンベアリングアダプターを使用して中心点を介して固定し、フレキシブルカプラーを介してオーバーヘッド高トルクメカニカルミキサーに取り付けた。フラスコを、サイドポートの１つにあるゴム隔膜に挿入されたＪ型ワンド熱電対を介して、温度制御ユニットによって操作される半球形の電気加熱マントル内に置いた。熱電対の先端を、混合部品の上に数ｍｍのすきまで反応混合物内に存在するように調整した。補助温度モニターに接続された第２の温度プローブも同じ方法で挿入し、固定した。フラスコの第２のサイドポートには、再循環バス冷却装置によって４℃未満に維持された水－グリコール混合物によって冷却された還流凝縮器を取り付けた。
[00318]反応混合物を、８０～１００ｒｐｍの撹拌速度で連続的に混合しながら、徐々に１３０℃に加熱した。１２０Ｃ～１３０℃の間の温度制御ボックスの読み取り値が観察されると、装置は、還流凝縮器から、氷浴中に配置した丸底収集フラスコを備えた蒸留構成体に切り替えた。この設定をおよそ６時間１０分間維持した後、加熱マントルの電源を切った。蒸留装置を取り外し、３９０ｇの６０℃蒸留水を３口フラスコに徐々に添加した。得られた混合物を、収集の瞬間まで４０ｒｐｍで１０時間撹拌したままにした。およそ１２５０ｇの粘性のある明るい琥珀色の材料が収集され、屈折率で７３．１ブリックスの濃度を有すると測定された。
[00319]第２の成分の合成について、８２５．０４ｇのグルコース一水和物、２５１．１６ｇの木由来の純マンノース、２５．１０ｇの蒸留水及び１．００ｇの２－ピリジンスルホン酸を、２つの２４／４０すり合わせが隣接する１つの中央の２９／４２すり合わせを備えた３リットルの３口丸底フラスコに添加した。第２の成分の合成の残部は、収集の瞬間まで、第１のものと同じ手順及び方法に従った。およそ１２５０ｇの粘性のある暗い琥珀色の材料が収集され、７２．３ブリックスの濃度を有すると測定された。
[00320]第１及び第２の成分全体を適切なサイズのＨＤＰＥ容器に移し、均質になるまで手で完全に混合した。最終シロップ混合物はおよそ２．５ｋｇで、色は濃い琥珀色で、粘性があり、およそ７２ブリックスの濃度であると測定された。
［実施例４：グルコ－マンノ－オリゴ糖調製物の合成］
[00321]ｋｇスケールで好適な生産を可能にするために選択された触媒負荷、反応時間及び反応温度を使用して、グルコ－オリゴ糖調製物の合成を３リットルの反応槽内で実施した。
[00322]グルコ－マンノ－オリゴ糖調製物は、独立して収集された別々の反応槽で合成された２つの別々の成分として調製した。各合成は異なる出発反応物質を使用したが、完了するまで同じ手順及び方法に従った。最終グルコ－マンノ－オリゴ糖調製物は、両方の合成生成物の混合から形成された均質なシロップであった。
[00323]第１の成分の合成について、１２６４．８０ｇのグルコース一水和物を、２つの２４／４０すり合わせが隣接する１つの中央の２９／４２すり合わせを備えた３リットルの３口丸底フラスコに添加した。１３３ｍｍのテフロン撹拌羽根を、ＰＴＦＥテープを使用して４４０ｍｍガラス撹拌シャフトに固定した。撹拌棒は、テフロンベアリングアダプターを使用して中心点を介して固定し、フレキシブルカプラーを介してオーバーヘッド高トルクメカニカルミキサーに取り付けた。フラスコを、サイドポートの１つにあるゴム隔膜に挿入されたＪ型ワンド熱電対を介して、温度制御ユニットによって操作される半球形の電気加熱マントル内に置いた。熱電対の先端を、混合部品の上に数ｍｍのすきまで反応混合物内に存在するように調整した。補助温度モニターに接続された第２の温度プローブも同じ方法で挿入し、固定した。フラスコの第２のサイドポートには、再循環バス冷却装置によって４℃未満に維持された水－グリコール混合物によって冷却された還流凝縮器を取り付けた。
[00324]反応混合物を、８０～１００ｒｐｍの撹拌速度で連続的に混合しながら、徐々に１３０℃に加熱した。１２０℃～１３０℃の間の温度制御ボックスの読み取り値が観察されると、１．１５ｇの（＋）－カンファー－１０－スルホン酸を３口フラスコに添加し、装置は、還流凝縮器から、氷浴中に配置した丸底収集フラスコを備えた蒸留構成体に切り替えた。この設定をおよそ１時間維持した後、熱電対ボックスの電源を切り、蒸留装置を取り外し、３９０ｇの２３℃蒸留水を３口フラスコに徐々に添加した。得られた混合物を、収集の瞬間まで４０ｒｐｍで１０時間撹拌したままにした。およそ１３５０ｇの粘性のある明るい琥珀色の材料が収集され、７１．８ブリックスの濃度を有すると測定された。
[00325]第２の成分の合成について、９４９．００ｇのグルコース一水和物、２８８．００ｇの木由来の純マンノース、２７．９４ｇの蒸留水及び１．１５ｇの２－ピリジンスルホン酸を、２つの２４／４０すり合わせが隣接する１つの中央の２９／４２すり合わせを備えた３リットルの３口丸底フラスコに添加した。還流凝縮器が蒸留構成体に切り替えられ、得られた設定がおよそ６時間維持されたため、（＋）－カンファー－１０－スルホン酸が添加されなかったことを除いては、第２の成分の合成の残部は、収集の瞬間まで、第１のものと同じ手順及び方法に従った。およそ１３５０ｇの粘性のある暗い琥珀色の材料が収集され、７２．０ブリックスの濃度を有すると測定された。
[00326]第１及び第２の成分全体を適切なサイズのＨＤＰＥ容器に移し、均質になるまで手で完全に混合した。最終シロップ混合物はおよそ２．７ｋｇで、色は濃い琥珀色で、粘性があり、屈折率でおよそ７２ブリックスの濃度であると測定された。
［実施例５：グルコ－マンノ－オリゴ糖調製物の合成］
[00327]１ｋｇスケールでの生産に好適であると判明した触媒負荷、反応時間及び反応温度を使用して、オリゴ糖調製物のキログラムスケールの生産を３リットルの反応槽内で実施した。
[00328]グルコ－マンノ－オリゴ糖調製物は、独立して収集された別々の反応槽で合成された２つの別々の成分として調製した。各合成は異なる出発反応物質を使用したが、完了するまで同じ手順及び方法に従った。最終グルコ－マンノ－オリゴ糖調製物は、両方の合成生成物の混合から形成された均質なシロップであった。
[00329]第１の成分の合成について、１２６１．００ｇのグルコース一水和物及び１．１５ｇの２－ピリジンスルホン酸を、２つの２４／４０すり合わせが隣接する１つの中央の２９／４２すり合わせを備えた３リットルの３口丸底フラスコに添加した。１３３ｍｍのテフロン撹拌羽根を、ＰＴＦＥテープを使用して４４０ｍｍガラス撹拌シャフトに固定した。撹拌棒は、テフロンベアリングアダプターを使用して中心点を介して固定し、フレキシブルカプラーを介してオーバーヘッド高トルクメカニカルミキサーに取り付けた。フラスコを、サイドポートの１つにあるゴム隔膜に挿入されたＪ型ワンド熱電対を介して、温度制御ユニットによって操作される半球形の電気加熱マントル内に固定した。熱電対の先端を、混合部品の上に数ｍｍのすきまで反応混合物内に存在するように調整した。補助温度モニターに接続された第２の温度プローブも同じ方法で挿入し、固定した。フラスコの第２のサイドポートには、再循環バス冷却装置によって４℃未満に維持された水－グリコール混合物によって冷却された還流凝縮器を取り付けた。
[00330]反応混合物を、８０～１００ｒｐｍの撹拌速度で連続的に混合しながら、徐々に１３０℃に加熱した。１２０℃～１３０℃の間の温度制御ボックスの読み取り値が観察されると、装置は、還流凝縮器から、氷浴中に配置した丸底収集フラスコを備えた蒸留構成体に切り替えた。この設定をおよそ６時間維持した後、熱電対ボックスの電源を切り、蒸留装置を取り外し、３９０ｇの２３℃蒸留水を３口フラスコに徐々に添加した。得られた混合物を、収集の瞬間まで４０ｒｐｍで１０時間撹拌したままにした。およそ１２５０ｇの粘性のある明るい琥珀色の材料が収集され、７３．５ブリックスの濃度を有すると測定された。
[00331]第２の成分の合成について、９４９．００ｇのグルコース一水和物、２８８．００ｇの木由来の純マンノース、２８．９４ｇの蒸留水及び１．１５ｇの２－ピリジンスルホン酸を、２つの２４／４０すり合わせが隣接する１つの中央の２９／４２すり合わせを備えた３リットルの３口丸底フラスコに添加した。第２の成分の合成の残部は、収集の瞬間まで、第１のものと同じ手順及び方法に従った。およそ１２５０ｇの粘性のある暗い琥珀色の材料が収集され、７３．３ブリックスの濃度を有すると測定された。
[00332]第１及び第２の成分全体を適切なサイズのＨＤＰＥ容器に移し、均質になるまで手で完全に混合した。最終シロップ混合物はおよそ２．５ｋｇで、色は濃い琥珀色で、粘性があり、およそ７３ブリックスの濃度であると測定された。
［実施例６：グルコ－ガラクト－オリゴ糖調製物の合成］
[00333]１ｋｇスケールでの生産に好適であると判明した触媒負荷、反応時間及び反応温度を使用して、オリゴ糖調製物のキログラムスケールの生産を３リットルの反応槽内で実施した。
[00334]３Ｌの３口フラスコには、直径１０ｍｍのガラス製撹拌シャフトを介して１４ｃｍの三日月形の混合部品に接続されたオーバーヘッドミキサーを取り付けた。混合部品は、フラスコの壁からおよそ５ｍｍのすきまで配置された。フラスコは、反応フラスコに挿入されたワンド型熱電対プローブに接続された温度制御ユニットによって動力を供給される半球形の電気加熱マントルを介して加熱した。熱電対プローブは、混合部品の上に５～１０ｍｍのすきまを提供するように配置した。フラスコに、５７６グラムの食品グレードデキストロース一水和物及び５７７グラムの食品グレードＤ－ガラクトース一水和物を充填し、およそ１１５℃まで加熱して溶けた糖シロップを得た。シロップが得られたら、冷却したグリコール／水及び温度を循環させることによって４℃に冷却し、ジャケット付き還流凝縮器をフラスコに取り付けた。３１グラムのＤｏｗｅｘ Ｍａｒａｔｈｏｎ Ｃ（水分含有量０．４８ｇＨ２Ｏ／ｇ樹脂）を混合物に添加して、撹拌懸濁液を形成した。凝縮器を蒸留構成体に再配置し、懸濁液を１４５℃まで加熱した。
[00335]およそ８０ＲＰＭの混合速度及び１４５℃の温度を３．８時間維持した後、温度制御ユニットの設定値を８０℃まで下げ、１１９ｍＬの６０℃脱イオン水を徐々にフラスコに添加し、残留Ｄｏｗｅｘ樹脂を含有する暗い琥珀色のシロップを得た。得られた懸濁液を更に６０ブリックスまで希釈し、室温まで冷却し、０．４５ミクロンフィルターを通して真空濾過して樹脂を除去した。６０ブリックス濃度の１，２００グラムの明るい琥珀色のシロップが得られた。
［実施例７：グルコ－オリゴ糖調製物の合成］
[00336]１ｋｇスケールでの生産に好適であると判明した触媒負荷、反応時間及び反応温度を使用して、オリゴ糖調製物のキログラムスケールの生産を３リットルの反応槽内で実施した。
[00337]３Ｌの３口フラスコには、直径１０ｍｍのガラス製撹拌シャフトを介して１４ｃｍの三日月形の混合部品に接続されたオーバーヘッドミキサーを取り付けた。混合部品は、フラスコの壁からおよそ５ｍｍのすきまで配置された。フラスコは、反応フラスコに挿入されたワンド型熱電対プローブに接続された温度制御ユニットによって動力を供給される半球形の電気加熱マントルを介して加熱した。熱電対プローブは、混合部品の上に５～１０ｍｍのすきまを提供するように配置した。フラスコに１，１４８グラムの食品グレードデキストロース一水和物を充填し、およそ１１５℃まで加熱して溶けた糖シロップを得た。シロップが得られたら、冷却したグリコール／水を循環させることにより４℃に冷却したジャケット付き蒸留凝縮器をフラスコに取り付けた。反応温度を１４５℃まで徐々に上昇させた。温度が得られて安定したら、３１グラムのＤｏｗｅｘ Ｍａｒａｔｈｏｎ Ｃ（水分含有量０．４８ｇＨ２Ｏ／ｇ樹脂）を混合物に添加し、およそ８０ＲＰＭの混合速度及び１４５℃の温度を３．８時間維持した。
[00338]３．８時間後、温度制御ユニットの設定値を８０℃まで下げ、１１９ｍＬの６０℃脱イオン水を徐々にフラスコに添加し、残留Ｄｏｗｅｘ樹脂を含有する暗い琥珀色のシロップを得た。得られた懸濁液を更に６０ブリックスまで希釈し、室温まで冷却し、０．４５ミクロンフィルターを通して真空濾過して樹脂を除去した。１，１１３グラムの６０ブリックス濃度の１，１１３グラムの暗い琥珀色のグルコ－オリゴ糖シロップが得られた。
［実施例８：オリゴ糖調製物の単一容器合成］
[00339]単一容器反応に好適であると判明した触媒負荷、反応時間及び反応温度を使用して、実施例３からのオリゴ糖の単一容器（単一成分）の合成を、１リットルの反応槽内において３００グラムスケールで実施した。
[00340]２７２．３０ｇのトウモロコシ由来食品グレードＤ－グルコース一水和物、３７．５０ｇの木由来食品グレードＤ－マンノース、１５．６０ｇの食品グレードＤ－ラクトース一水和物、３．９６ｇの蒸留水及び０．２７０ｇの２－ピリジンスルホン酸（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）を、２つの２４／４０すり合わせが隣接する１つの中央の２９／４２すり合わせを備えた１リットルの３口丸底フラスコに添加した。テフロン撹拌羽根を、ＰＴＦＥテープを使用して２２０ｍｍガラス撹拌シャフトに固定した。撹拌棒は、テフロンベアリングアダプターを使用して中心点を介して固定し、フレキシブルカプラーを介してオーバーヘッド高トルクメカニカルミキサーに取り付けた。フラスコを、サイドポートの１つにあるゴム隔膜に挿入されたＪ型ワンド熱電対を介して、温度制御ユニットによって操作される半球形の電気加熱マントル内に固定した。熱電対の先端を、混合部品の上に数ｍｍのすきまで反応混合物内に存在するように調整した。補助温度モニターに接続された第２の温度プローブも同じ方法で挿入し、固定した。フラスコの第２のサイドポートには、再循環バス冷却装置によって４℃未満に維持された水－グリコール混合物によって冷却された還流凝縮器を取り付けた。
[00341]反応混合物を、８０～１００ｒｐｍの撹拌速度で連続的に混合しながら、徐々に１３０℃に加熱した。１２０℃～１３０℃の間の温度制御ボックスの読み取り値が観察されると、装置は、還流凝縮器から、氷浴中に配置した丸底収集フラスコを備えた蒸留構成体に切り替えた。混合物をおよそ５時間４０分間連続的に撹拌しながら１３０℃で維持し、その後、加熱マントル及び蒸留装置を取り外した。およそ４０ｇの２３℃蒸留水を３口フラスコに徐々に添加した。得られた混合物を、収集の瞬間まで４０ｒｐｍで１０時間撹拌したままにした。およそ３８９ｇの粘性のある暗い琥珀色の材料が収集され、６７．０ブリックスの濃度を有すると測定された。実施例３からのオリゴ糖調製物による粘稠度は、ＳＥＣクロマトグラフィー及び２Ｄ １Ｈ，１３Ｃ－ＨＳＱＣ ＮＭＲ分光法によって確認した。
［実施例９：オリゴ糖調製物の特性評価］
[00342]実施例１～８の方法及び手順を使用して、実施例１～７のオリゴ糖の複製バッチ及びブレンドを調製した。得られた物質は、分子量分布を特性決定するためにＨＰＬＣサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により、ＤＰ２アンヒドロ－糖含量を定量するためにＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析により、また対応するオリゴ糖調製物の分子構造をフィンガープリントするために２Ｄ１Ｈ、１３Ｃ－ＨＳＱＣ ＮＭＲにより分析した。
[00343]実施例９．１：実施例１からのオリゴ糖調製物の１１のバッチを調製し、４つの個別ロットにブレンドした。
[00344]実施例９．２：実施例２からのオリゴ糖調製物の７つのバッチを調製し、２つの個別ロットにブレンドした。
[00345]実施例９．３：実施例３からのオリゴ糖調製物の１２のバッチを調製し、５つの個別ロットにブレンドした。
[00346]実施例９．４：実施例４からのオリゴ糖調製物の４つのバッチを調製し、単一ロットにブレンドした。
[00347]実施例９．５：実施例５からのオリゴ糖調製物の４つのバッチを調製し、単一ロットにブレンドした。
[00348]実施例９．６：実施例６からのオリゴ糖調製物の２つのバッチを調製し、単一ロットにブレンドした。
[00349]実施例９．７：実施例７からのオリゴ糖調製物の２つのバッチを調製し、単一ロットにブレンドした。
[00350]実施例９．１～９．７のバッチにおいて、それぞれの合成スキームのマルチポット（多成分）及びシングルポットバリアントを使用した。
[00351]実施例１～７の方法を用いるが、出発糖組成、酸、酸負荷、時間及び反応温度を変えて、実施例１～７のオリゴ糖調製物のさらなる構造バリアントを３００グラムスケールで合成した。オリゴ糖調製物は以下のように合成した：
[00352]実施例９．８：３００グラムのショ糖、３グラムのリン酸及び２７グラムの水を１２５℃で約１時間反応させて、暗褐色のオリゴ糖シロップを取得した後、これを蒸留水で６０Ｂｒｉｘまで希釈した。
[00353]実施例９．９：２７０グラムのグルコース、３０グラムのショ糖、０．３グラムのフェニルホスホン酸及び２７グラムの水を１３０℃で１～４時間反応させて、暗褐色のオリゴ糖シロップを取得した後、これを蒸留水で６０Ｂｒｉｘまで希釈した。
[00354]実施例９．１０：２２５グラムのグルコース、７５グラムのラクトース、３グラムのブチルホスホン酸及び２７グラムの水を１３０℃で１～４時間反応させて、暗い琥珀色のオリゴ糖シロップを取得した後、これを蒸留水で６０Ｂｒｉｘまで希釈した。
[00355]実施例９．１１：２２５グラムのグルコース、７５グラムのラクトース、３グラムのフェニルホスホン酸及び２７グラムの水を１３０℃で１～５時間反応させて、暗い琥珀色のオリゴ糖シロップを取得した後、これを蒸留水で６０Ｂｒｉｘまで希釈した。
[00356]実施例９．１２：２７０グラムのグルコース、３０グラムのラクトース、３グラムのフェニルホスフィン酸及び２７グラムの水を１３０℃で３～５時間反応させて、暗褐色のオリゴ糖シロップを取得した後、これを蒸留水で６０Ｂｒｉｘまで希釈した。
[00357]実施例９．１３：３００グラムのグルコース、３グラムのフェニルホスフィン酸及び２７グラムの水を１３０℃で１～３時間反応させて、暗い琥珀色のオリゴ糖シロップを取得した後、これを蒸留水で６０Ｂｒｉｘまで希釈した。
[00358]実施例９．１４：３００グラムのグルコース、２グラムのプロピオン酸及び２７グラムの水を１３０℃で１～４時間反応させて、琥珀色のオリゴ糖シロップを取得した後、これを蒸留水で６０Ｂｒｉｘまで希釈した。
[00359]実施例９．１５：３００グラムのグルコース、０．１５グラムの８－ヒドロキシ－５－キノリンスルホン酸水和物及び２７グラムの水を１３０℃で２～４時間反応させて、琥珀色のオリゴ糖シロップを取得した後、これを蒸留水で６０Ｂｒｉｘまで希釈した。
[00360]上の反応物において、量は全て、純粋な成分量を指し、反応体の水の総量は、水分量及び／又は反応体の糖の水和の水によりもたらされるあらゆる同伴水を包含した。
［オリゴ糖調製物の特性決定：］
[00361]得られた材料をＨＰＬＣサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）で分析して分子量分布を特性評価し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析でＤＰ２アンヒドロ糖含有量を定量化し、２Ｄ １Ｈ，１３Ｃ－ＨＳＱＣＮＭＲで対応するオリゴ糖調製物の分子構造の指紋を採取した。
［ＨＰＬＣによるポリマーＭＷ分析：］
[00362]実施例９．１～９．７のオリゴ糖調製物の数平均分子量（ＭＷｎ）及び重量平均分子量（ＭＷｗ）を、ＨＰＬＣによって決定した。ＳＥＣ分析は、移動相として０．４５ｍＬ／分の蒸留水を使用して４０℃でＡｇｉｌｅｎｔＰＬアクアゲル－ＯＨ２０カラムを使用し、屈折率検出を備えたＡｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズＨＰＬＣで実施した。分子量が既知の標準溶液を使用してＭＷ較正までの保持時間を実行し、当技術分野の標準法を使用して、ＳＥＣクロマトグラムから様々な分布特性を決定した。
Figure 2022514177000003
［ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによるアンヒドロ－ＤＰ２含有量の分析：］
[00363]オリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２オリゴ糖含有量は、Ｃａｐｃｅｌｌ Ｐａｋ ＮＨ２（Ｓｈｉｓｅｉｄｏ；２５０×４．６ｍｍ、５μｍ）カラムを使用し、水／アセトニトリル ３５／６５のアイソクラティック条件下で１ｍＬ／分の流速でＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって決定した。ＭＳの前に、フローを１：４に分割し、イオン化を強化するために５０μＬの０．０５％ＮＨ４ＯＨのメークアップフローを追加した。ＭＳ検出について、ＥＳＩプローブがネガティブモードで使用され、多重反応モニタリング（ＭＲＭ）法によりターゲット分析が可能になった。
[00364]オリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２含有量は、最初に、参照組成物としての実施例９．７のオリゴ糖調製物の含有量と比較して決定された。次いで、実施例９．７の参照オリゴ糖調製物の絶対アンヒドロＤＰ２含有量は、ＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって約１０％であると決定され、次いで、実施例９．１～９．６のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２含有量を計算によって得た。相対及び絶対ＤＰ２含有量は、以下のように決定された。
Figure 2022514177000004
［２Ｄ １Ｈ，１３Ｃ－ＨＳＱＣ ＮＭＲによる分子指紋採取：］
[00365]実施例９のオリゴ糖調製物の分子構造は、２Ｄ １Ｈ，１３Ｃ－ＨＳＱＣ ＮＭＲ分光法によって特性評価した。サンプルは、５０ｍｇのオリゴ糖調製物を、Ｄ２Ｏに溶解することによって調製した。４００ＭＨｚのプロトン周波数で動作するＢｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ＮＭＲ分光計又は極低温に冷却された５ｍｍＴＣＩプローブを備えた６００ＭＨｚのプロトン周波数で動作するＢｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ＩＩＩＮＭＲ分光計のいずれかで３００Ｋにて、ＮＭＲスペクトルを取得した。図１は、実施例９．７のオリゴ糖調製物の例示的な２Ｄ １Ｈ，１３Ｃ ＨＳＱＣ ＮＭＲスペクトルを提供する。
[00366]１Ｈ，１３Ｃ－ＨＳＱＣスペクトルのアノマー領域であるＦ２（δ１Ｈ）＝４．２－６．０ｐｐｍ及びＦ１（δ１３Ｃ）＝９０－１２０ｐｐｍを使用して、オリゴ糖調製物の結合分布を指紋採取した。アノマー領域の各ピークが統合され、その相対的存在量は、アノマー領域全体のピークと比較して決定された。実施例９．１のオリゴ糖調製物の４つのロットに対して２Ｄ１Ｈ、１３Ｃ ＨＳＱＣフィンガープリンティングを実施したとこと、以下の表３に記載される相対的存在量が得られた。
Figure 2022514177000005
［実施例１０：オリゴ糖調製物のアンヒドロ糖サブユニットの決定］
[00367]実施例９のオリゴ糖調製物におけるアンヒドロ糖サブユニットの相対的存在量は、Ｂｒｕｋｅｒ Ｕｌｔｒａｆｌｅｘ装置のＭＡＬＤＩ－ＭＳによって決定された。サンプルを１０ｍｇ／ｍＬの濃度まで水に溶解し、そこから５μＬをマトリックス溶液（８０％エタノール中の３０ｍｇ／ｍＬ ＤＨＢ及び水が１：１０の比率）と混合した。プレートは、１μＬの分析物溶液を標的プレートに適用することによって調製し、周囲空気で乾燥させた。場合により、ＭＳ分析の前に１μＬのエタノールを適用することにより、サンプルを再結晶化した。
[00368]図２は、実施例９からのオリゴ糖調製物の例示的なＭＡＬＤＩスペクトルを提供する。アンヒドロ－糖サブユニットは、それぞれの主要なＤＰ親に対して－１８ｇ／モルだけシフトしたオフセットピークとして明確に観察される。ＤＰの全ての値でオフセットピークが観察され、アンヒドロ糖サブユニットが全てのオリゴ糖サイズで検出されることを示す。アンヒドロサブユニットピークの相対強度は、各ＤＰについて総ピーク強度の約１０％であることが判明した。
[00369]図２０Ａ及び図２０Ｂは、実施例２からのオリゴ糖調製物のＭＡＬＤＩスペクトルを示す。全てのＤＰレベルで、５～１０％の相対強度を有するアンヒドロサブユニットが観測された。
［実施例１１：オリゴ糖調製物のアンヒドロサブユニットの特性評価］
[00370]実施例９のオリゴ糖調製物のアンヒドロ糖サブユニットは、ＬＣ－ＭＳ、ＧＣ－ＭＳ、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ及びＮＭＲ法の組み合わせを使用して特性評価される。
［アンヒドロ－ＤＰ１成分の特性評価：］
[00371]実施例９からのオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ１オリゴ糖成分を分取液体クロマトグラフィーによって単離した。単離したアンヒドロ－ＤＰ１成分は、０．７５ｍＬのＤ２Ｏ中に溶解することによりＮＭＲ用に調製した。図３は、実施例９のオリゴ糖から単離されたアンヒドロＤＰ１画分の例示的な１Ｄ１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを提供し、図４は、同じく単離されたアンヒドロＤＰ１画分の例示的なＡＰＴ１３Ｃ－ＮＭＲスペクトルを提供する。ＮＭＲピーク帰属を表４及び図５に記載する。
Figure 2022514177000006
[00372]１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースと１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフピラノースの比は、ＮＭＲにより２：１であることが判明した。
［実施例１２：オリゴ糖調製物のアンヒドロサブユニットの特性決定］
[00373]ＬＣ－ＭＳ、ＧＣ－ＭＳ、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ及びＮＭＲ法の組み合わせを用いて、実施例９のオリゴ糖調製物のアンヒドロ糖を特性決定した。
［アンヒドロ－ＤＰ２成分の特性決定］
[00374]実施例９のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２オリゴ糖含有量は、ＧＣ－ＭＳ及びＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析によって決定された。ガスクロマトグラフィーは、ＨＰ－５ＭＳ固定相を含む３０ｍ×０．２５ｍｍの溶融シリカカラムを使用し、２１．５７ｐｓｉの定圧ヘリウムをキャリアガスとして使用して実施した。アリコートは、２０ｍｇのサンプルを０．５ｍＬの無水酢酸を含む０．５ｍＬのピリジンに６０℃で３０分間溶解することにより、アセチル化によって事前に誘導体化した。１μＬのサンプルを３００℃で注入し、オーブン温度プログラムを７０℃で開始し、毎分１０℃ずつ３１５℃まで上昇させた。検出は、７０ｅＶの電子エネルギーにおいてＡｇｉｌｅｎｔ５９７５ＣＭＳＤで実施した。
[00375]図６は、実施例９．７のオリゴ糖調製物に関するＧＣ－ＭＳクロマトグラムの拡大を示す。ＴＩＣ及びＸＩＣ（ｍ／ｚ ２２９）プロットは、アンヒドロＤＰ２成分がＤＰ２成分より先に溶離することを示す。
[00376]図２５Ａ～２５Ｂ、２６Ａ～２６Ｂ、２７Ａ～２７Ｂ及び２８Ａ～２８Ｂは、それぞれ、実施例１、実施例３、実施例４及び実施例７のオリゴ糖調製物においてＧＣ－ＭＳによって検出されたＤＰ１、アンヒドロＤＰ１、ＤＰ２及びアンヒドロＤＰ２画分の存在を示す。図２５Ａ～２５Ｂ、２６Ａ～２６Ｂ、２７Ａ～２７Ｂ及び２８Ａ～２８Ｂに示すように、アンヒドロＤＰ１及びＤＰ１画分の保持時間は約１２～１７分であり、アンヒドロＤＰ２及びＤＰ２画分の保持時間は約２２～２５分である。
[00377]図３０は、異なるレーザーエネルギーでの実施例９からのオリゴ糖調製物を比較するＭＡＬＤＩ－ＭＳスペクトルを示す。シグナルの相対的存在量はほとんど変化せず、これは、レーザーイオン化によって水の損失が発生しないことを示す。従って、オリゴ糖調製物中のアンヒドロ－糖サブユニットの存在を証明する。
［実施例１３：比較例］
[00378]市販の５ｋＤａデキストランをＭＡＬＤＩ－ＭＳで、アンヒドロ糖サブユニットの存在について分析した。図７は、主要なＤＰピークから－１８ｇ／モルシフトしたオフセットピークの明確な存在を示す（８５１．２６８ｇ／モルのＮａ＋付加物）。対照的に、デキストランサンプルは本質的にアンヒドロ糖サブユニットを含まないことが見出された。
［実施例１４：ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによるアンヒドロＤＰ成分の定量化］
[00379]サンプルを水に溶解し、Ｃａｐｃｅｌｌ Ｐａｋ ＮＨ２（Ｓｈｉｓｅｉｄｏ；２５０×４、６ｍｍ、５μｍ）カラムを使用し、水／アセトニトリル ３５／６５のアイソクラティック条件下で１ｍＬ／分の流速でＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって分離した。場合により、クロマトグラフィー分離後、イオン化を促進するために５０μＬの０．０５％ＮＨ４ＯＨを添加した。アンヒドロＤＰ２オリゴ糖含有量は、ＭＳ／ＭＳ検出によって決定された。ＭＳ検出について、ＥＳＩプローブがネガティブモードで使用され、ＭＲＭ法によりターゲット分析が可能になった。図８は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳクロマトグラムの下の領域から濃度までの線形検量線（図９に示される）とともに、水中で１～８０μｇ／ｍＬの濃度範囲にわたる実施例９からのオリゴ糖調製物の検出を示す。
[00380]図２１Ａ～２１Ｃ、２２Ａ～２２Ｃ、２３Ａ～２３Ｃ及び２４Ａ～２４Ｃは、それぞれ、実施例１、実施例３、実施例４及び実施例７のオリゴ糖調製物おいてＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって検出されたアンヒドロＤＰ２、アンヒドロＤＰ１及びＤＰ２種を示す。
［実施例１５：オリゴ糖調製物を含む飼料の調製］
[00381]家禽及びブタ食餌を調製し、オリゴ糖調製物の食餌への組み込みを実証した。様々な成分組成を示す対照飼料及び実施例９のオリゴ糖調製物でそれぞれの対照飼料を増強することによって得られた対応する処理飼料は、以下のように調製された。
[00382]実施例飼料１５．１：対照飼料１５．１（ＣＴＲ）は、６２％のコーンミール及び３２％の大豆ミールを使用して調製した。処理飼料１５．１（ＴＲＴ）は、対照飼料１５．１（ＣＴＲ）を実施例９からのオリゴ糖調製物５００ｍｇ／ｋｇで増強することによって調製した。処理された食餌について、オリゴ糖をキャリアとしての粉砕した籾殻上で乾燥させ、ペレット化する前に微量成分天秤を使用して粉末をミキサーに添加することにより、オリゴ糖調製物を粉末形態で提供した。
[00383]実施例飼料１５．２：対照飼料１５．２（ＣＴＲ）は、６２％のコーンミール、３％大豆濃縮物及び２６％の大豆ミールを使用して調製した。処理飼料１５．２（ＴＲＴ）は、対照飼料１５．２（ＣＴＲ）を実施例９からのオリゴ糖調製物５００ｍｇ／ｋｇで増強することによって調製した。処理された食餌について、オリゴ糖をキャリアとしての粉砕した籾殻上で乾燥させ、ペレット化する前に微量成分天秤を使用して粉末をミキサーに添加することにより、オリゴ糖調製物を粉末形態で提供した。
[00384]実施例飼料１５．３：対照飼料１５．３（ＣＴＲ）は、５２％のコーンミール、６％のコーンスターチ、５％の大豆濃縮物、２６％の大豆ミール及び酸化チタンマイクロトレーサーを使用して調製した。処理飼料１５．３（ＴＲＴ）は、対照飼料１５．３（ＣＴＲ）をオリゴ糖調製物５００ｍｇ／ｋｇで増強することによって調製した。処理された食餌について、オリゴ糖をキャリアとしての粉砕した籾殻上で乾燥させ、ペレット化する前に微量成分天秤を使用して粉末をミキサーに添加することにより、オリゴ糖調製物を粉末形態で提供した。
[00385]実施例飼料１５．４：対照飼料１５．４（ＣＴＲ）は、５５％のコーンミール及び３９％の大豆ミールを使用して調製した。処理飼料１５．４（ＴＲＴ）は、対照飼料１５．４（ＣＴＲ）をオリゴ糖調製物１，０００ｍｇ／ｋｇで増強することによって調製した。処理された食餌について、オリゴ糖をキャリアとしての粉砕した籾殻上で乾燥させ、ペレット化する前に微量成分天秤を使用して粉末をミキサーに添加することにより、オリゴ糖調製物を粉末形態で提供した。
[00386]実施例飼料１５．５：対照飼料１５．５（ＣＴＲ）は、６２％のコーンミール、３％大豆濃縮物及び２６％の大豆ミールを使用して調製した。処理飼料１５．５（ＴＲＴ）は、対照飼料１５．５（ＣＴＲ）を実施例９からのオリゴ糖調製物５００ｍｇ／ｋｇで増強することによって調製した。処理された食餌について、ペレット化する前に微量成分天秤を使用して粉末をミキサーに添加することにより、オリゴ糖調製物を粉末形態で提供した。
[00387]実施例飼料１５．６：対照飼料１５．６（ＣＴＲ）は、米国の市販のトウモロコシ－大豆幼動物家禽飼料であった。処理飼料１５．６（ＴＲＴ）は、５００ｐｐｍのオリゴ糖調製物を含有する米国の市販のトウモロコシ－大豆幼動物家禽飼料であった。処理された食餌について、ペレット化する前に微量成分天秤を使用して粉末をミキサーに添加することにより、オリゴ糖調製物を粉末形態で提供した。
[00388]実施例飼料１５．７：対照飼料１５．７（ＣＴＲ）は、次の食餌組成の研究用トウモロコシ大豆家禽飼料であった：コーンミール６２．３９％、大豆ミール３１．８０％、炭酸カルシウム０．１５％、リン酸二カルシウム２．２％、塩化ナトリウム０．１５％、ＤＬ－メチオニン０．１５％、Ｌ－リシン０．１０％、大豆油２．００％、ビタミンミネラルプレミックス１．００％及びコクシジウム抑制薬０．０６％。処理飼料１５．７（ＴＲＴ）は、対照飼料１５．７（ＣＴＲ）を実施例９．１のオリゴ糖調製物１０００ｐｐｍで補強することによって得た。処理された食餌について、オリゴ糖調製物は、水中の６０％シロップとして提供され、ペレット化後の飼料にシロップを噴霧することによって適用された。
[00389]実施例飼料１５．８：対照飼料１５．８（ＣＴＲ）は、次の組成の研究用トウモロコシ大豆家禽飼料であった：小麦ミール４８．４５％、大豆ミール３２．００％、ライ麦１２％、炭酸カルシウム０．２０％、リン酸二カルシウム２．００％、塩化ナトリウム０．２０％、ＤＬ－メチオニン０．１５％、大豆油４．００％及びビタミン－ミネラルプレミックス１．００％。処理飼料１５．７（ＴＲＴ）は、対照飼料１５．７（ＣＴＲ）を実施例９．３のオリゴ糖調製物１０００ｐｐｍで補強することによって得た。処理された食餌について、オリゴ糖調製物は、水中の６０％シロップとして提供され、ペレット化後の飼料にシロップを噴霧することによって適用された。
[00390]当業者によって理解されるように、１５．１～１５．６は、業界標準レベルの脂肪、ビタミン、ミネラル、アミノ酸、他の微量栄養素及び供給酵素も含んでいた。場合により、飼料にコクシジウム抑制薬が含まれていたが、抗生物質増殖促進剤の全ての場合で含まれなかった。飼料は、標準的な慣行に従って、マッシュ、ペレット又は砕いた飼料のいずれかとして提供された。
［実施例１６：飼料サンプルの抽出］
[00391]実施例１５の手順に従って調製された飼料は、抽出によって処理された。飼料サンプルはミルで粉砕した。得られた粉砕飼料５グラムを５０ｍＬメスフラスコに量り入れ、熱水（約８０℃）を添加した。振盪後、混合物を８０℃において３０分間超音波水浴でインキュベートした。冷却後、溶液を３０００ｘｇで２０分間遠心分離し、上清を１．２μｍフィルター、続いて０．４５μｍフィルター（場合により０．２２μｍフィルター）で濾過した。得られた濾過溶液をロータリーエバポレーターで蒸発乾固させた。
[00392]場合により、代替抽出溶媒として水中の５０重量％エタノールを使用して抽出を実施した。いくつかの場合、５，０００ダルトンの分子量カットオフメンブレンフィルターを使用して濾過工程を実施した。抽出及び消化のための飼料サンプルの一覧を表５に記載する。
［実施例１７：飼料抽出物の酵素処理］
[00393]実施例１６の飼料抽出物を１つ以上の酵素加水分解工程に供して、飼料中において天然に存在するオリゴ糖を消化した。α－アミラーゼ及びアミログリコシダーゼの混合物を使用して、グルコオリゴ糖とデンプンのα（１，４）結合を消化した。インベルターゼ及びα－ガラクトシダーゼを使用して、スクロース、ラフィノース及び他の一般的な繊維糖類を除去した。
[00394]酵素溶液は、以下のようにして調製した：酢酸アンモニウム緩衝液（０．５ｍＭのＭｇＣｌ２及び２００ｍＭのＣａＣｌ２を含む０．２Ｍ、ｐＨ５の酢酸アンモニウム）中８００Ｕ／ｍＬのアミログルコシダーゼ（Ａ．ニガー（Ａ．ｎｉｇｅｒ））３６０００Ｕ／ｇ溶液：酢酸アンモニウム中の８００Ｕ／ｍＬのα－アミラーゼ（ブタ膵臓）（Ｍｅｇａｚｙｍｅ）１０００００Ｕ／ｇの溶液：酢酸アンモニウム緩衝液中の６００Ｕ／ｍＬのパン用酵母（Ｓ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））由来のインベルターゼ（Ｓｉｇｍａ）３００Ｕ／ｍｇ溶液：Ａ．ニガー（Ａ．ｎｉｇｅｒ）Ｍｅｇａｚｙｍｅ由来のα－ガラクトシダーゼ１０００Ｕ／ｍＬ。
[00395]実施例１６の乾燥飼料抽出物を１０ｍＬの酢酸アンモニウム緩衝液に再懸濁した。５０μＬのα－アミラーゼ（４Ｕ／ｍＬ最終）、５０μＬのアミログルコシダーゼ（４Ｕ／ｍＬ最終）、５０μＬのインベルターゼ（３Ｕ／ｍＬ最終）を添加した。２０μＬのα－ガラクトシダーゼ（２Ｕ／ｍＬ最終）を任意選択的に添加した。溶液を６０℃で４時間インキュベートした。次いで、消化された抽出物を限外濾過フィルター（Ｖｉｖａｓｐｉｎ Ｔｕｒｂｏ４、５０００ＭＷＣＯ、ザルトリウス）で濾過した後、窒素蒸発システムで蒸発乾固させた。酵素消化の変更形態では、上記酵素の１つ以上を組み合わせて使用し、消化期間を４時間から一晩の消化まで変化させた。酵素濃度は上記の負荷の２倍まで変化させ、完全な酵素消化手順を同じ飼料で順番に複数回繰り返した。
Figure 2022514177000007
Figure 2022514177000008
Figure 2022514177000009
[00396]アンヒドロ－オリゴマーは、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を指す。
[00397]ブランク飼料は、アンヒドロ－オリゴマーが添加されない栄養組成物を指す。
[00398]酵素ａ＝アミログルコシダーゼ（Ａ．ニガー（Ａ．Ｎｉｇｅｒ））３６０００Ｕ／ｇ Ｍｅｇａｚｙｍｅ
[00399]酵素ｂ＝α－アミラーゼ（ブタ膵臓）１０００００Ｕ／ｇ Ｍｅｇａｚｙｍｅ
[00400］酵素ｃ＝パン用酵母（Ｓ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））由来のインベルターゼ３００Ｕ／ｍｇ Ｓｉｇｍａ
[00401]酵素ｄ＝Ａ．ニガー（Ａ．Ｎｉｇｅｒ）由来のα－ガラクトシダーゼ６２０Ｕ／ｍｇ Ｍｅｇａｚｙｍｅ
［実施例１８：飼料中のオリゴ糖調製物の検出］
[00402]オリゴ糖調製物の有無を検出するために、実施例１５による対照及び処理食餌を評価した。食餌製造後、最終飼料から１ｋｇのサンプルを採取した。飼料の抽出可能な固形分は、実施例１６の手順を使用する水抽出によって得られた。得られた抽出物を、実施例１４の手順に従って、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによってアンヒドロＤＰ種の存在について分析した。
[00403]図１０は、実施例１５．１（ＣＴＲ）～１５．６（ＣＴＲ）の対照飼料にアンヒドロＤＰ２種が存在しないのに対して、実施例１５．１（ＴＲＴ）～１５．６（ＴＲＴ）の処理飼料にアンヒドロＤＰ２種が存在することを明確に示す。得られたＬＣ－ＭＳ／ＭＳクロマトグラムの積分を使用して、最終飼料中の実施例９のオリゴ糖組成物の存在を決定した。具体的には、アンヒドロ－ＤＰ２ピークの下の面積が検出限界（又は方法で確立された任意の他の好適なしきい値）を超えた場合、飼料にはそれぞれのオリゴ糖調製物が含まれていると判断された。
［実施例１９：飼料中のオリゴ糖調製物の定量化］
[00404]最終飼料中のオリゴ糖調製物の濃度を決定するために、実施例１５による対照及び処理食餌を評価した。食餌製造後、最終飼料から１ｋｇのサンプルを採取した。飼料の抽出可能な固形分は、実施例１６の手順を使用する水抽出によって得られた。得られた抽出物を、実施例１４の手順に従って、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによってアンヒドロＤＰ種の存在について分析し、アンヒドロ－ＤＰ２ピークの面積を標準検量線と比較して、飼料中のオリゴ糖調製物の濃度を決定した。
Figure 2022514177000010
［実施例２０：アンヒドロサブユニット含有グルコ－オリゴ糖のＮＭＲの特性評価］
[00405]アンヒドロサブユニットを含むグルコ－オリゴ糖調製物を、ｉ）重合度及びｉｉ）グルコースユニットのグリコシド結合分布により特性評価した。
[00406]α－（１，１）－α、α－（１，１）－β、β－（１，１）－β、α－（１，２）、β－（１，２）、α－（１，３）、β－（１，３）、α－（１，４）、β－（１，４）、α－（１，６）及びβ－（１，６）結合の相対モル存在量は、ＮＭＲ分光法により決定した。結合分布の決定には、Ｊ－ＲＥＳ及び１Ｈ、１３Ｃ－ＨＳＱＣを使用した。いくつかのサンプルについて、ＨＳＱＣ法が優れた性能を示した。各分析について、およそ５０ｍｇの凍結乾燥生成物をＤ２Ｏに溶解し、５ｍｍＮＭＲチューブに移した。任意の残留触媒又は固形分は、濾過により除去された。ＮＭＲ実験は、１５０ＭＨｚの炭素ラーモア周波数に対応する６００ＭＨｚのプロトンで動作するＢｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ＩＩＩＮＭＲ分光計で実施された。機器に、極低温で冷却された５ｍｍＴＣＩプローブを取り付けた。全ての実験は２９８Ｋで実施される。１Ｈ ＮＭＲスペクトルが記録され、重水素化水（４．７５ｐｐｍ）中で較正された。１３Ｃ ＮＭＲスペクトルは、アセトン（３０．９ｐｐｍ）で較正された。データはＴｏｐＳｐｉｎ３．５を使用して取得され、パーソナルコンピューターで実行されているＡＣＤ／Ｌａｂｓで処理された。
[00407]図１１は、溶媒が事前飽和されたアンヒドロサブユニット含有グルコ－オリゴ糖サンプルの代表的な２Ｄ－１Ｈ ＪＲＥＳ ＮＭＲスペクトルを提供する。
[00408]図１２は、アンヒドロサブユニット含有グルコ－オリゴ糖サンプルの代表的な１Ｈ、１３Ｃ－ＨＳＱＣ ＮＭＲスペクトルを示す。
[00409]図１３は、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の１Ｈ ＤＯＳＹスペクトルの重なりを示す。拡散係数、従ってＭＷホモログにより、拡散秩序化ＮＭＲ分光法（ＤＯＳＹ）を実施して、異なる種のＮＭＲシグナルを分離した。図１３のＤＯＳＹスペクトルの上方部分のシグナルは、拡散の遅いＤＰ種に対応し、拡散の速いＤＰ種は下方に表示される。
［実施例２１：ＤＰ１及びＤＰ２画分のセミ分取単離］
[00410]ＤＰ１画分の分取単離は、Ｗａｔｅｒｓ ＢＥＨ Ａｍｉｄｅ１９×１５０ｍｍカラムを使用した分取ＨＰＬＣで実施した。移動相として、溶媒Ａとして水を使用し、溶媒Ｂとしてアセトニトリルを使用し、各々０．１％のアンモニアを含んでいた。適用した勾配を表７に示す。収集された８つの分離のＤＰ１画分をプールし、乾燥させ、前述のようにＮＭＲ分析のために０．７５ｍｌのＤ２Ｏに再溶解した。
[00411]ＤＰ２画分の特性評価のために、２段階の精製を行った。第１の工程は、ＥＬＳＤ（蒸発光散乱検出器）を使用して、フラッシュクロマトグラフィーシステムで実施した。２ｍＬ（２．６５ｇ）のオリゴ糖調製物を、１ｍＬのＤＭＳＯ、０．５ｍＬの水及び０．５ｍＬのアセトニトリルで希釈した。溶液を混合し、１５分間超音波処理した。１ｍＬの溶液をＹＭＣ ＤｉｓｐｏＰａｃｋＡＴ、ＮＨ２、球状、２５μｍ、１２０ｇカラムに注入した。オリゴ糖調製物は、水中の７５％アセトニトリルを４０ｍＬ／分で使用するアイソクラティックグラジエント法を実行して分離した。ＤＰ２含有画分を窒素で乾燥させ、ＤＭＳＯ／水（８０：２０、ｖ／ｖ）に再溶解させた。
[00412]第２の精製工程では、４０°のＹＭＣ ＮＨ２ ４．６×２５０ｍｍ（５μｍ）カラムを備えた分析ＵＰＬＣシステムを使用した。ＤＰ２画分は、アイソクラティックグラジエント（表８）及び１ｍＬ／分の流速で精製した。ＥＬＳＤによる収集をトリガーするために、１：５のこぼれたポストカラムを使用した。１２個のクロマトグラフィー分析からのＤＰ２画分をプールし、アセトニトリルを加熱窒素で除去し、残留水を凍結乾燥で除去した。乾燥画分を、その後のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ及びＮＭＲ分析のために再溶解させた。
Figure 2022514177000011
Figure 2022514177000012
[00413]第２の手法であるＵＰＬＣ法は、アミドカラムを用いたＨＩＬＩＣモード分離に基づいてセットアップした。
[00414]方法の詳細：システム、Ｗａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ－ＳＱ ＭＳ／ＥＬＳＤ；溶媒Ａ、３０／７０アセトニトリル／水：０．１％アンモニア；溶媒Ｂ、８０／２０アセトニトリル／水：０．１％アンモニア；ウィークニードル洗浄：８０／２０アセトニトリル／水；ストロングニードル洗浄：２０／８０アセトニトリル／水；カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＢＥＨ Ａｍｉｄｅ ２．１×１００ｍｍ、１．７μｍ；注射：水中０．５μｍ。
Figure 2022514177000013
[00415]この方法によって、一連の糖参照化合物の優れた分離が達成された。しかし、グルコース及びガラクトースだけが、異なるピーク形状で、共溶出している。
[00416]アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖サンプルと比較して、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコース（ＤＰ１－１８）及び１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－セロビオース（ＤＰ２－１８）の分析を図１４に示す。
[00417]分取ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ／ＭＳによる分取：分取ＨＰＬＣ分離の最適化は、通常、分析カラムで開始することにより実施される。分離が最適であれば、カラム充填実験を実施する。続くアップスケールの間、粒度、長さ、孔径、相、線流速（ｃｍ／分）などの全てのカラムパラメータは同じに維持するが、カラムの直径のみを変える。
［実施例２２：消化された飼料サンプルの分析］
[00418]アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の分析を用いた飼料抽出物中の天然オリゴ糖による干渉は、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を分解することなく、バックグラウンド飼料成分の選択的消化によって低減した。図１５は、選択したＭＲＭでのアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖（上）及び消化アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖（下）の質量クロマトグラムを示す。図１６は、選択したＭＲＭでの（１）アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む飼料、（２）アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む消化飼料、及び（３）ブランク消化飼料の質量クロマトグラムを示す。飼料中のより高いＤＰ種は排除又は縮小した。例えば、図１６に示すように、ＤＰ３レベルでの第２ピークはほとんど除去され、ＤＰ２レベルでは、両方のピークが大幅に縮小されている。
［実施例２３：オリゴ糖調製物を定量するためのワークフロー］
[00419]図１７は、オリゴ糖調製物を定量するために用いられるワークフローを示す。これは、飼料からの水溶性オリゴ糖調製物の抽出ステップ、続いて蒸発又は凍結乾燥による水の除去から構成される。得られた抽出物は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ又はＮＭＲのいずれかによるオリゴ糖調製物の直接分析が可能であれば、検査する。そうでなければ、飼料マトリックスからの干渉オリゴ糖を酵素消化により除去する必要があるだろう。これは、オリゴ糖調製物中のほとんどのグリコシド結合が、基礎栄養組成物中には天然に存在しない連結性及び立体化学を有するという事実を利用することができる。従って、オリゴ糖調製物は、消化中に安定していると予想される。オリゴ糖調製物中において、原則として酵素［主にα－（１，４）、α－（１，６）、β－（１，６）］により切断することができるグリコシド結合が存在する場合、大部分の分子について、分枝による立体障害がこれを妨害し得る。酵素消化に続いて、定量の前に濃縮ステップが必要となる。
[00420]低ＤＰオリゴ糖、特に、アンヒドロ－ＤＰ１、アンヒドロ－ＤＰ２及びＤＰ２オリゴ糖は、一般に、比較的少数の化学実体から構成され、比較的高い濃度を有する。これらの断片は定量することができる。加えて、小さいオリゴマーは、大きいオリゴマーよりもＬＣ－ＭＳ検出ではるかに高い感度を示し得る。
[00421]ＭＳによる定量のために、典型的には同位体で標識された物質を内部標準として使用することができる。１３Ｃ標識合成オリゴ糖調製物を使用することができる。定量後、ＮＭＲ及び／又はＭＳを実施して、定量されたオリゴ糖を分析する。
［実施例２４：追加の代表的ワークフロー］
[00422]いくつかの実施形態では、本方法は、以下のワークフローを含む：
[00423]（ａ）栄養組成物のサンプルを取得又は調製するステップ；（ｂ）溶媒（水、水アルコール混合物）を用いて、サンプルから可溶性種を抽出するステップ；（ｃ）（任意選択的に）内部標準を抽出物に導入するステップ；（ｄ）（任意選択的に）抽出物を濾過又は清澄化する（例えば、微小粒子を除去するために）ステップ；（ｅ）（任意選択的に）抽出物を濃縮するステップ；（ｆ）（任意選択的に）加水分解酵素（カルボヒドラターゼ、プロテアーゼ、リパーゼなど）のカクテルを用いて、バックグラウンド炭水化物の１部分を消化するステップ；（ｇ）（任意選択的に）例えば、沈殿、ナノ濾過などにより、（消化、濃縮された）抽出物の成分の粗分離を実施するステップ；（ｈ）抽出物に含まれる種の一部又は全部、特に、ＤＰ２炭水化物種をクロマトグラフィーにより分離するステップ；（ｉ）（任意選択的に）栄養組成物自体に一般には豊富に存在しないグリコシド結合を主として含む種を定量するステップ；（ｊ）（任意選択的に）特定のアンヒドロＤＰ１及びＤＰ２種の存在を検出し、定量するステップ；並びに（ｋ）例えば、既知量の炭水化物調製物が添加された栄養組成物を含む１組の一次標準についてアッセイを実施することにより作成した標準曲線を参照にして、飼料中の炭水化物調製物の濃度を計算するステップ。
[00424]栄養組成物は、家禽飼料、ブタ飼料、魚飼料又は反芻動物飼料であり得る。
［実施例２５：オリゴ糖組成物が給餌された商業用ブロイラー鶏の成長性能］
[00425]ブロイラー鶏を、実施例１５．６の食餌で成長させて、動物の成長性能に対するオリゴ糖調製物の効果を測定した。具体的には、可溶性物質添加乾燥蒸留穀物残渣（ＤＤＧＳ）、コクシジウム抑制薬及び標準的な微量栄養素ブレンドを含む商業用トウモロコシ－大豆粕家禽飼料を、業界の慣行及び３段階の給餌プログラムに従って製造した。近似分析により、以下に示すように飼料組成を決定した（表１０）。
Figure 2022514177000014
[00426]対照（ＣＴＲ）及び処理（ＴＲＴ）食餌を実施例１５．６に記載される各段階について調製し、ここで、処理食餌は、実施例９．７のオリゴ糖調製物を使用して、処理したショートトン当たり１ポンドで対照食餌を増強することによって調製した。合計で、約５０ショートトンの各食餌を製造した。
[00427]孵化の日のＨｕｂｂａｒｄ Ｍ９９×Ｃｏｂｂ ５００未鑑別ひよこを、商業用の家禽孵化場から入手し、トンネル換気された土床の鶏舎に建設された３６フィート×４０フィートの囲いにランダムに配置した。合計およそ３０，０００羽の鳥を配置し、各囲いに同数の鳥を配置した。ハウスの寝床は、上面を新鮮な木の削りくずで覆われた寝わらで構成されていた。標準的な商業環境及び照明プログラムを用いた。動物及び飼育設備は、一般的な健康状態、飼料消費量、給水量及び設備の温度の記録など、毎日検査した。死亡率を毎日記録した。
[00428]奇数番号の囲いの鳥には処理食餌を与え（即ち２ポンド／トン含有量の飼料添加物を含む）、偶数番号の囲いの鳥には対照食餌を与えた。全ての食餌は、各囲いの自動給餌器を介して且つ初日から７日目まで給餌トレイで自由に与えられた。水はニップルの飲用ラインから自由に与えられた。
[00429]幼動物期は０日目から１３日目まで、育成期は１４日目から２７日目まで、中止期は２８日目から研究の終わりである３１日目であった。囲いごとの鳥の体重は、０日目及び３１日目に記録した。消費された飼料の総質量は、各囲いについて記録した。次いで、体重増加量及びＦＣＲを、標準的な業界の慣行に従って各囲いについて決定した。
[00430]３１日目に、血液及び盲腸のサンプリングのために、各囲いから６羽のオスの鳥をランダムに選択した。サンプリングされた各鳥の生体重を記録した。血液サンプルを、ウイングパンクチャーによってバキュテイナーチューブに収集し、凝固及び血清分離後に凍結した。次いで、サンプリングされた各鳥を、頸椎脱臼により安楽死させた後、標準的な獣医法を使用して盲腸を摘出した。解剖後、盲腸内容物を１５ｍＬのコニカルチューブに移し、盲腸内容物の重量を記録し、内容物を－８０℃まで急速冷凍した。サンプリングされた鳥の重量から、処理群は１１ポイントの体重の増加を示し、Ｐ＜０．０５で有意であった（ＡＮＯＶＡによる）。
［実施例２６：シロップ産物の配合］
[00431]実施例２１の手順に従い、食品グレード水酸化ナトリウムを用いて、実施例９．７のオリゴ糖調製物のｐＨを４．２のｐＨに調節した。得られたシロップを、不正開封防止キャップ付きの２０リットルのカーボイに梱包した。容器に密閉する直前に、５００グラムのサンプルを採取し、品質テストを実施した。シロップの総固形分含有量は、ＦＣＣ ＡＰＰＥＮＤＩＸ Ｘ：炭水化物（デンプン、糖及び関連物質）：ＴＯＴＡＬ ＳＯＬＩＤＳの方法に従って、７０重量％超であることが確認された。還元糖含有量は、ＦＣＣ ＡＰＰＥＮＤＩＸ Ｘ：炭水化物（デンプン、糖及び関連物質）：ＲＥＤＵＣＩＮＧ ＳＵＧＡＲＳ ＡＳＳＡＹの方法に従って、乾燥重量基準でＤ－グルコースとして５０％未満であることが確認された。硫酸化灰は、ＦＣＣ ＡＰＰＥＮＤＩＸ ＩＩ：物理的試験及び決定：Ｃ．ＯＴＨＥＲＳ：ＲＥＳＩＤＵＥ ＯＮ ＩＧＮＩＴＩＯＮ（硫酸化灰）Ｍｅｔｈｏｄ ＩＩ（液体用）の方法を使用して、乾燥重量基準で１％未満であることが確認された。二酸化硫黄含有量は、最適化されたモニエルウィリアムズ法を使用して４０ｍｇ／ｋｇ未満であることが確認された。鉛含有量は、ＡＯＡＣ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｏｆｆｉｃｉａｌ Ｍｅｔｈｏｄ ２０１３．０６の方法を使用して、１ｍｇ／ｋｇ未満であることが確認された。総好気性プレート数は、ＣＭＭＥＦ Ｃｈａｐｔｅｒ ７の方法を使用して、１０００ｃｆｕ／ｇ未満であることが確認された。総酵母及びカビは、ＡＡＣＣ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ａｐｐｒｏｖｅｄ Ｍｅｔｈｏｄ ４２－５０の方法を使用して、１００ｃｆｕ／ｇ未満であることが確認された。大腸菌群は、ＦＤＡ ＢＡＭ Ｃｈａｐｔｅｒ ４の方法を使用して、１０ＭＰＮ／ｇ未満であることが確認された。Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）は、ＦＤＡ ＢＡＭ Ｃｈａｐｔｅｒ ４の方法を使用して、３ＭＰＮ／ｇ未満であることが確認された。サルモネラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）は、ＦＤＡ ＢＡＭ Ｃｈａｐｔｅｒ ５の方法に従って、サンプル２５グラム当たりで検出されないことが確認された。スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）は、ＦＤＡ ＢＡＭ Ｃｈａｐｔｅｒ １２の方法を使用して、１０ｃｆｕ／ｇ未満であることが確認された。色は、目視検査によってカラメル色であることが確認された。
[00432]容器を密閉し、残りの保持サンプルを凍結し、将来の参照用に保管して、結果のロットに対して分析証明書を発行した。
［実施例２７：処理飲料水の調製］
実施例９．７のオリゴ糖調製物２５０ｐｐｍを含有する飲料水を以下のとおり調製した。実施例３３のオリゴ糖シロップ３７ｍＬ及びソルビン酸カリウム４０グラムを、５５ガロンのブルーポリドラム内の飲料用水道水５０ガロンに徐々に添加した。パドルを使用して、溶液を室温において１０分間手動で混合した。
[00433]以上、本発明の好ましい実施形態を図示、説明したが、こうした実施形態は、あくまで例として与えられたものであることが当業者に明らかであろう。本発明は、本明細書内で提供される特定の実施例によって限定されることを意図するものではない。本発明は、前述の本明細書を参照して説明されてきたが、本明細書の実施形態の説明及び図解は、限定的な意味で解釈されることを意味するものではない。当業者であれば、本発明から逸脱することなく多くの変形形態、変更形態及び代替形態が想到されるであろう。更に、本発明の全ての態様は、様々な条件及び変数に依存する、本明細書に記載の特定の描写、構成又は相対的な比率に限定されないことを理解されたい。本発明の実施に際して、本明細書で述べた実施形態に様々な代替形態を用い得ることが理解されるべきである。従って、本発明は、そのような代替形態、修正形態、変形形態又は均等物も包含するものと考えられる。

Claims (129)

  1. 栄養組成物中の合成オリゴ糖調製物を相関させる方法であって、
    前記栄養組成物は、前記合成オリゴ糖調製物及び天然に存在するオリゴ糖組成物を含み、
    前記方法は、
    ａ．前記栄養組成物のサンプルを提供するステップ、
    ｂ．前記栄養組成物のサンプル中のオリゴ糖の少なくとも１部分のシグナルを検出するステップ、及び
    ｃ．前記栄養組成物中の前記合成オリゴ糖調製物の濃度を相関させるステップ
    を含み、
    前記シグナルは、（ｉ）１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すか、又は（ｉｉ）オリゴ糖のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合、β－（１，６）グリコシド結合、α－（１，１）－αグリコシド結合、α－（１，１）－βグリコシド結合、β－（１，１）－αグリコシド結合又はβ－（１，１）－βグリコシド結合と関連している、方法。
  2. 栄養組成物の品質管理を実施する方法であって、
    ａ．前記栄養組成物のバッチを用意するステップであって、前記栄養組成物は、合成オリゴ糖調製物及び天然に存在するオリゴ糖組成物を含む、ステップ、
    ｂ．前記バッチから前記栄養組成物のサンプルを取得するステップ、
    ｃ．分析装置を用いて、前記栄養組成物のサンプル中のオリゴ糖の少なくとも１部分のシグナルを検出するステップ、及び
    ｄ．前記栄養組成物のバッチを合格又は不合格にするステップ
    を含み、
    前記シグナルは、（ｉ）１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すか、又は（ｉｉ）オリゴ糖のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合、β－（１，６）グリコシド結合、α－（１，１）－αグリコシド結合、α－（１，１）－βグリコシド結合、β－（１，１）－αグリコシド結合又はβ－（１，１）－βグリコシド結合と関連している、方法。
  3. 前記シグナルは、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示す、請求項１又は２に記載の方法。
  4. １つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖は、２の重合度（ＤＰ２）を有する、請求項３に記載の方法。
  5. 栄養組成物中の品質管理を実施する方法であって、
    ａ．栄養組成物のサンプルを用意するステップであって、前記栄養組成物は、天然に存在するオリゴ糖組成物を含む、ステップ、及び
    ｂ．分析装置を用いて、前記栄養組成物のサンプル中のオリゴ糖の少なくとも１部分のシグナルを検出するステップ
    を含み、前記シグナルは、２の重合度（ＤＰ２）を有する１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示す、方法。
  6. 前記栄養組成物は、合成オリゴ糖調製物を含む、請求項５に記載の方法。
  7. 前記栄養組成物中の前記合成オリゴ糖調製物の濃度を相関させるステップを含む、請求項２又は６に記載の方法。
  8. 前記シグナルは、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、質量分析（ＭＳ）、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、フィールドフローフラクショネーション（ＦＦＦ）、非対称フロー式フィールドフローフラクショネーション（Ａ４Ｆ）、分取クロマトグラフィーによる画分の重量決定又はこれらの任意の組み合わせにより決定される、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
  9. 前記栄養組成物は、基礎栄養組成物を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
  10. 前記基礎栄養組成物は、前記天然に存在するオリゴ糖組成物を含む、請求項９に記載の方法。
  11. 前記基礎栄養組成物は、検出可能なレベルのアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含まない、請求項９又は１０に記載の方法。
  12. 前記基礎栄養組成物は、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を実質的に含有しない、請求項９～１１のいずれか一項に記載の方法。
  13. 前記１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖は、前記合成オリゴ糖調製物に由来する、請求項１～４又は６～１２のいずれか一項に記載の方法。
  14. 前記シグナルは、１の重合度（ＤＰ１）を有するアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する、請求項１～３又は８～１３のいずれか一項に記載の方法。
  15. 前記シグナルは、レボグルコサン、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノース又はそれらの組み合わせに帰属する、請求項１４に記載の方法。
  16. 前記シグナルは、３の重合度（ＤＰ３）を有するアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する、請求項１～３又は８～１３のいずれか一項に記載の方法。
  17. 前記シグナルは、ＤＰ１、ＤＰ２若しくはＤＰ３アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖又はそれらの組み合わせに帰属する、請求項１～３又は８～１３のいずれか一項に記載の方法。
  18. 前記シグナルは、アンヒドロ－セロビオースに帰属する、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
  19. 前記検出ステップは、１つ以上のオリゴ糖の重合度（ＤＰ）画分の重量決定を含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
  20. 前記検出ステップは、前記サンプルからのアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分の重量決定を含む、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。
  21. 前記アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分は、１、２又は３の重合度を有する、請求項２０に記載の方法。
  22. オリゴ糖の前記１つ以上のＤＰ画分又はアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の前記少なくとも１部分は、分取クロマトグラフィーにより単離される、請求項１９～２１のいずれか一項に記載の方法。
  23. 前記シグナルは、少なくとも一部は、マトリックス支援レーザー脱離／イオン化質量分析（ＭＡＬＤＩ－ＭＳ）により検出される、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。
  24. 前記シグナルは、少なくとも一部は、液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）／ＭＳにより検出される、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。
  25. 前記シグナルは、少なくとも一部は、ＧＣ水素炎イオン化検出器（ＧＣ－ＦＩＤ）又はＧＣ－ＭＳにより検出される、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。
  26. 前記シグナルは、少なくとも一部は、ＮＭＲ分光法により検出される、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。
  27. 前記シグナルは、オリゴ糖のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合又はβ－（１，６）グリコシド結合と関連している、請求項１～２又は８～１２のいずれか一項に記載の方法。
  28. 前記検出ステップは、ＮＭＲスペクトルを取得することを含む、請求項２７に記載の方法。
  29. 前記シグナルは、α－（１，２）グリコシド結合と関連している、請求項２７又は２８に記載の方法。
  30. 前記シグナルは、α－（１，３）グリコシド結合と関連している、請求項２７又は２８に記載の方法。
  31. 前記シグナルは、α－（１，６）グリコシド結合と関連している、請求項２７又は２８に記載の方法。
  32. 前記シグナルは、β－（１，２）グリコシド結合と関連している、請求項２７又は２８に記載の方法。
  33. 前記シグナルは、β－（１，３）グリコシド結合と関連している、請求項２７又は２８に記載の方法。
  34. 前記シグナルは、β－（１，４）グリコシド結合と関連している、請求項２７又は２８に記載の方法。
  35. 前記シグナルは、β－（１，６）グリコシド結合と関連している、請求項２７又は２８に記載の方法。
  36. 前記検出ステップは、前記シグナルの存在又は非存在を決定することを含む、請求項１～３５のいずれか一項に記載の方法。
  37. 前記検出ステップは、ＤＰ１若しくはＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖又はその両方の存在又は非存在を決定することを含む、請求項３６に記載の方法。
  38. 前記検出ステップは、前記シグナルのレベルを決定すること又は相関させることを含む、請求項１～３７のいずれか一項に記載の方法。
  39. 前記検出ステップは、前記栄養組成物中のＤＰ１アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖のレベルを相関させることを含む、請求項３８に記載の方法。
  40. 前記検出ステップは、前記栄養組成物中のＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖のレベルを相関させることを含む、請求項３８又は３９に記載の方法。
  41. 合成オリゴ糖調製物及び天然に存在するオリゴ糖組成物を含む栄養組成物の品質管理を実施する方法であって、
    ａ．前記栄養組成物の第１サンプルを用意するステップ、
    ｂ．前記栄養組成物の第２サンプルを用意するステップ、
    ｃ．前記第１サンプル中のオリゴ糖の少なくとも１部分の第１シグナルを検出するステップ、
    ｄ．前記第２サンプル中のオリゴ糖の少なくとも１部分の第２シグナルを検出するステップ、及び
    ｅ．前記第１シグナルと前記第２シグナルを比較するステップ
    を含み、
    前記第１シグナル及び前記第２シグナルは、独立して、（ｉ）１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すか、又は（ｉｉ）オリゴ糖のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合、β－（１，６）グリコシド結合、α－（１，１）－αグリコシド結合、α－（１，１）－βグリコシド結合、β－（１，１）－αグリコシド結合又はβ－（１，１）－βグリコシド結合と関連している、方法。
  42. 前記第１サンプルの栄養組成物中の前記合成オリゴ糖調製物の濃度、前記第２サンプルの栄養組成物中の前記合成オリゴ糖調製物の濃度又はその両方を相関させるステップを含む、請求項４１に記載の方法。
  43. 前記第１シグナル及び前記第２シグナルは、各々独立して、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示す、請求項４１又は４２に記載の方法。
  44. 前記第１シグナル及び前記第２シグナルは、同じ種のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する、請求項４３に記載の方法。
  45. 前記第１シグナル及び前記第２シグナルは、異なる種のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する、請求項４３に記載の方法。
  46. 前記第１シグナル及び前記第２シグナルは、前記栄養組成物の異なるバッチから採取される、請求項４１～４５のいずれか一項に記載の方法。
  47. 前記第１シグナル及び第２シグナルは、各々独立して、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、質量分析（ＭＳ）、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、フィールドフローフラクショネーション（ＦＦＦ）、非対称フロー式フィールドフローフラクショネーション（Ａ４Ｆ）、分取クロマトグラフィーによる画分の重量決定又はこれらの任意の組み合わせにより決定される、請求項４１～４６のいずれか一項に記載の方法。
  48. 前記栄養組成物は、基礎栄養組成物を含む、請求項４１～４７のいずれか一項に記載の方法。
  49. 前記基礎栄養組成物は、前記天然に存在するオリゴ糖組成物を含む、請求項４８に記載の方法。
  50. 前記基礎栄養組成物は、検出可能なレベルのアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含まない、請求項４８又は４９に記載の方法。
  51. 前記基礎栄養組成物は、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を実質的に含有しない、請求項４８～５０のいずれか一項に記載の方法。
  52. 前記１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖は、前記合成オリゴ糖調製物に由来する、請求項４１～５１のいずれか一項に記載の方法。
  53. 前記第１シグナル、前記第２シグナル又はその両方は、独立して、１の重合度（ＤＰ１）を有するアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する、請求項４１～５２のいずれか一項に記載の方法。
  54. 前記第１シグナル、前記第２シグナル又はその両方は、独立して、レボグルコサン、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノース又はそれらの組み合わせに帰属する、請求項５３に記載の方法。
  55. 前記第１シグナル、前記第２シグナル又はその両方は、独立して、２の重合度（ＤＰ２）を有するアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する、請求項４１～５２のいずれか一項に記載の方法。
  56. 前記シグナルは、アンヒドロ－セロビオースに帰属する、請求項５５に記載の方法。
  57. 前記第１シグナル、前記第２シグナル又はその両方は、独立して、３の重合度（ＤＰ３）を有するアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に帰属する、請求項４１～５２のいずれか一項に記載の方法。
  58. 前記第１シグナル、前記第２シグナル又はその両方は、独立して、ＤＰ１、ＤＰ２若しくはＤＰ３アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖又はそれらの組み合わせに帰属する、請求項４１～５２のいずれか一項に記載の方法。
  59. 前記検出ステップは、前記サンプル又は前記第２サンプルからの１つ以上の重合度（ＤＰ）画分の重量決定を含む、請求項４１～５８のいずれか一項に記載の方法。
  60. 前記検出ステップは、前記第１サンプル又は前記第２サンプルからのアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分の重量決定を含む、請求項４１～５９のいずれか一項に記載の方法。
  61. 前記アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分は、１、２又は３の重合度を有する、請求項６０に記載の方法。
  62. オリゴ糖の前記１つ以上のＤＰ画分又はアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の前記少なくとも１部分は、分取クロマトグラフィーにより単離される、請求項５９～６１のいずれか一項に記載の方法。
  63. 前記第１シグナル、前記第２シグナル又はその両方は、独立して、少なくとも一部は、マトリックス支援レーザー脱離／イオン化質量分析（ＭＡＬＤＩ－ＭＳ）により検出される、請求項４１～６２のいずれか一項に記載の方法。
  64. 前記第１シグナル、前記第２シグナル又はその両方は、独立して、少なくとも一部は、液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）／ＭＳにより検出される、請求項４１～６２のいずれか一項に記載の方法。
  65. 前記第１シグナル、前記第２シグナル又はその両方は、独立して、少なくとも一部は、ＧＣ水素炎イオン化検出器（ＧＣ－ＦＩＤ）又はＧＣ－ＭＳにより検出される、請求項４１～６２のいずれか一項に記載の方法。
  66. 前記第１シグナル、前記第２シグナル又はその両方は、独立して、少なくとも一部は、ＮＭＲ分光法により検出される、請求項４１～６２のいずれか一項に記載の方法。
  67. 前記第１シグナル、前記第２シグナル又はその両方は、独立して、オリゴ糖のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合又はβ－（１，６）グリコシド結合と関連している、請求項４１又は４７～６６のいずれか一項に記載の方法。
  68. 前記検出ステップは、ＮＭＲ分光を取得することを含む、請求項６７に記載の方法。
  69. 前記第１シグナル、前記第２シグナル又はその両方は、独立して、α－（１，２）グリコシド結合と関連している、請求項６７又は６８に記載の方法。
  70. 前記第１シグナル、前記第２シグナル又はその両方は、独立して、α－（１，３）グリコシド結合と関連している、請求項６７又は６８に記載の方法。
  71. 前記第１シグナル、前記第２シグナル又はその両方は、独立して、α－（１，６）グリコシド結合と関連している、請求項６７又は６８に記載の方法。
  72. 前記第１シグナル、前記第２シグナル又はその両方は、独立して、β－（１，２）グリコシド結合と関連している、請求項６７又は６８に記載の方法。
  73. 前記第１シグナル、前記第２シグナル又はその両方は、独立して、β－（１，３）グリコシド結合と関連している、請求項６７又は６８に記載の方法。
  74. 前記第１シグナル、前記第２シグナル又はその両方は、独立して、β－（１，４）グリコシド結合と関連している、請求項６７又は６８に記載の方法。
  75. 前記第１シグナル、前記第２シグナル又はその両方は、独立して、β－（１，６）グリコシド結合と関連している、請求項６７又は６８に記載の方法。
  76. 前記第１シグナルは、１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示し、且つ前記第２シグナルは、オリゴ糖のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合、β－（１，６）グリコシド結合、α－（１，１）－αグリコシド結合、α－（１，１）－βグリコシド結合、β－（１，１）－αグリコシド結合又はβ－（１，１）－βグリコシド結合と関連している、請求項４１又は４７～６６のいずれか一項に記載の方法。
  77. 前記検出ステップは、前記第１シグナル及び第２シグナルの存在又は非存在を決定することを含む、請求項４１～７６のいずれか一項に記載の方法。
  78. 前記検出ステップは、ＤＰ１若しくはＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖又はその両方の存在又は非存在を決定することを含む、請求項７７に記載の方法。
  79. 前記検出ステップは、前記第１シグナル及び第２シグナルのレベルを決定すること又は相関させることを含む、請求項４１～７６のいずれか一項に記載の方法。
  80. 前記検出ステップは、前記栄養組成物中のＤＰ１アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖のレベルを相関させることを含む、請求項７９に記載の方法。
  81. 前記検出ステップは、前記栄養組成物中のＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖のレベルを相関させることを含む、請求項７９又は８０に記載の方法。
  82. 前記栄養組成物のバッチを合格又は不合格にするステップを更に含む、請求項１又は３～８１のいずれか一項に記載の方法。
  83. 前記検出後に、前記栄養組成物中の前記合成オリゴ糖調製物のレベルを調節するステップを更に含む、請求項１～４又は６～８２のいずれか一項に記載の方法。
  84. 前記基礎栄養組成物は、複数のオリゴ糖を含む、請求項９～４０又は４８～８３のいずれか一項に記載の方法。
  85. 前記基礎栄養組成物は、デンプン又は植物繊維を含む、請求項８４に記載の方法。
  86. 前記基礎栄養組成物中のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合又はβ－（１，４）グリコシド結合は、前記合成オリゴ糖調製物中の同じグリコシド結合のレベルより少なくとも１０％低い、請求項９～４０又は４８～８５のいずれか一項に記載の方法。
  87. 前記検出ステップの前に誘導体化ステップを含む、請求項１～８６のいずれか一項に記載の方法。
  88. 前記栄養組成物のサンプルからオリゴ糖を抽出するステップを更に含む、請求項１～８７のいずれか一項に記載の方法。
  89. 前記抽出されたオリゴ糖を濾過又は清澄化するステップを更に含む、請求項８８に記載の方法。
  90. 前記抽出されたオリゴ糖を濃縮するステップを更に含む、請求項８８又は８９に記載の方法。
  91. 前記濃縮ステップは、ナノ濾過を含む、請求項９０に記載の方法。
  92. 前記濃縮ステップは、凍結乾燥を含む、請求項９０に記載の方法。
  93. 前記抽出又は濃縮されたオリゴ糖に内部標準を導入するステップを更に含む、請求項８８～９２のいずれか一項に記載の方法。
  94. 前記抽出又は濃縮されたオリゴ糖を還元するステップを更に含む、請求項８８～９３のいずれか一項に記載の方法。
  95. 前記抽出又は濃縮されたオリゴ糖を１種以上の加水分解酵素で消化するステップを更に含む、請求項８８～９３のいずれか一項に記載の方法。
  96. 前記１種以上の加水分解酵素は、カルボヒドラターゼ、プロテアーゼ、リパーゼ又はそれらの任意の組み合わせを含む、請求項９５に記載の方法。
  97. 前記１種以上の加水分解酵素は、α－アミラーゼ、アミログリコシダーゼ、インベルターゼ、α－ガラクトシダーゼ又はそれらの組み合わせを含む、請求項９５又は９６に記載の方法。
  98. 前記１種以上の加水分解酵素は、１種以上の天然に存在するグリコシド結合を切断する、請求項９５～９７のいずれか一項に記載の方法。
  99. 消化されていないオリゴ糖を単離するステップを更に含む、請求項９５～９８のいずれか一項に記載の方法。
  100. 前記抽出、濃縮、消化又は還元されたオリゴ糖を分離するステップを更に含む、請求項８８～９８のいずれか一項に記載の方法。
  101. 前記オリゴ糖は、クロマトグラフィーにより分離される、請求項１００に記載の方法。
  102. 前記オリゴ糖は、ナノ濾過により分離される、請求項１００に記載の方法。
  103. 前記分離されたオリゴ糖を単離するステップを更に含む、請求項１０１又は１０２に記載の方法。
  104. 前記オリゴ糖は、その重合度別に分離又は単離される、請求項１００～１０３のいずれか一項に記載の方法。
  105. 前記方法は、１、２、３、４又は５の重合度を有するオリゴ糖を単離又は分離するステップを含む、請求項１０４に記載の方法。
  106. 前記ＤＰ１オリゴ糖は、単離又は分離される、請求項１０５に記載の方法。
  107. 前記ＤＰ２オリゴ糖は、単離又は分離される、請求項１０５に記載の方法。
  108. 前記ＤＰ３オリゴ糖は、単離又は分離される、請求項１０５に記載の方法。
  109. 前記ＤＰ１アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分を前記サンプルから単離するステップを含む、請求項１～１０５のいずれか一項に記載の方法。
  110. 前記ＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分を前記サンプルから単離するステップを含む、請求項１～１０５のいずれか一項に記載の方法。
  111. 前記ＤＰ３アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分を前記サンプルから単離するステップを含む、請求項１～１０５のいずれか一項に記載の方法。
  112. 前記単離又は分離されたオリゴ糖は、定量される、請求項９９～１１１のいずれか一項に記載の方法。
  113. 前記定量されるオリゴ糖の大部分は、前記合成オリゴ糖調製物に由来する、請求項１１２に記載の方法。
  114. 前記定量されるオリゴ糖の５０重量％超、６０重量％超、７０重量％超、８０重量％超、９０重量％超、９５重量％超又は９９重量％超は、前記合成オリゴ糖調製物に由来する、請求項１１２又は１１３に記載の方法。
  115. 栄養組成物中の合成オリゴ糖調製物を相関させる方法であって、
    前記栄養組成物は、（ｉ）アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む合成オリゴ糖調製物と、（ｉｉ）天然に存在するオリゴ糖組成物とを含み、
    前記方法は、
    ａ．前記栄養組成物のサンプルを用意するステップ、
    ｂ．１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を前記サンプルから単離するステップ、
    ｃ．前記１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すシグナルを検出するステップであって、（ｉ）前記サンプルからのアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分の重量決定、又は（ｉｉ）マトリックス支援レーザー脱離／イオン化質量分析（ＭＡＬＤＩ－ＭＳ）、液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）／ＭＳ若しくはガスクロマトグラフィー（ＧＣ）－ＭＳによる、前記サンプルからのアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分の分析を含む、ステップ、及び
    ｄ．前記栄養組成物中の合成オリゴ糖調製物の濃度を相関させるステップ
    を含む方法。
  116. 前記検出ステップは、前記サンプルからの１の重合度（ＤＰ１）を有する前記アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分の重量決定を含む、請求項１１５に記載の方法。
  117. 前記検出ステップは、前記サンプルからの２の重合度（ＤＰ２）を有する前記アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分の重量決定を含む、請求項１１５に記載の方法。
  118. 前記検出ステップは、前記サンプルからのＤＰ１又はＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分をＭＡＬＤＩ－ＭＳにより分析することを含む、請求項１１５に記載の方法。
  119. 前記検出ステップは、前記サンプルからのＤＰ１又はＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分をＬＣ－ＭＳ／ＭＳにより分析することを含む、請求項１１５に記載の方法。
  120. 前記検出ステップは、前記サンプルからのＤＰ１又はＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分をＧＣ／ＭＳにより分析することを含む、請求項１１５に記載の方法。
  121. 前記検出ステップは、前記サンプルからのＤＰ３アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも１部分を重量決定、ＭＡＬＤＩ－ＭＳ、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ又はＧＣ－ＭＳにより分析することを含む、請求項１１５に記載の方法。
  122. 前記単離ステップは、前記１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を分取クロマトグラフィーにより分離するステップを含む、請求項１１５～１２１のいずれか一項に記載の方法。
  123. 前記合成オリゴ糖調製物は、前記栄養組成物中において、約１～約５０００ｐｐｍ、約１１～約１０００ｐｐｍ、約１～約５００ｐｐｍ、約１０～約５０００ｐｐｍ、約１０～約２０００ｐｐｍ、約１０～約１０００ｐｐｍ、約１０～約５００ｐｐｍ、約１０～約２５０ｐｐｍ、約１０～約１００ｐｐｍ、約５０～約５０００ｐｐｍ、約５０～約２０００ｐｐｍ、約５０～約１０００ｐｐｍ、約５０～約５００ｐｐｍ、約５０～約２５０ｐｐｍ又は約５０～約１００ｐｐｍの濃度で存在する、請求項１～４又は６～１２２のいずれか一項に記載の方法。
  124. 前記合成オリゴ糖調製物は、前記栄養組成物中において、１０ｐｐｍ超、５０ｐｐｍ超、１００ｐｐｍ超、２００ｐｐｍ超、３００ｐｐｍ超、４００ｐｐｍ超、５００ｐｐｍ超、６００ｐｐｍ超、１０００ｐｐｍ超又は２０００ｐｐｍ超の濃度で存在する、請求項１～４又は６～１２２のいずれか一項に記載の方法。
  125. 前記栄養組成物は、動物飼料組成物である、請求項１～１２４のいずれか一項に記載の方法。
  126. 栄養組成物を製造する方法であって、
    ａ．基礎栄養組成物を、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む合成オリゴ糖調製物と合わせるステップ、及び
    ｂ．請求項１～１２５のいずれか一項に記載の品質管理方法を実施するステップ
    を含む方法。
  127. 前記合成オリゴ糖調製物は、１～ｎから選択される異なる重合度をそれぞれ有する少なくともｎ画分のオリゴ糖（ＤＰ１～ＤＰｎ画分）を含み、ｎは、３以上の整数であり；前記ＤＰ１及びＤＰ２画分は、各々独立して、質量分析（ＭＳ）により測定される相対的存在量で約０．１％～約１５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む、請求項１２６に記載の方法。
  128. 前記相対的存在量は、液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）／ＭＳにより決定される、請求項１２７に記載の方法。
  129. 前記ｎ個の画分の各々におけるオリゴ糖の前記相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する、請求項１２７又は１２８に記載の方法。
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