JP7426548B2 - 胃腸の恒常性を支持する方法 - Google Patents

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Description

発明の詳細な説明
［関連出願］
[0001]本出願は、米国特許仮出願第６２／７５７，５００号明細書（２０１８年１１月８日出願）；及び米国特許仮出願第６２／７５７，４６５号明細書（２０１８年１１月８日出願）の利益を主張するものであり、その各々の開示全体が参照により本明細書に組み込まれる。
［背景］
[0002]動物の胃腸系は、動物の内部解剖学的構造と外界との間の最大の表面積界面である。それは、栄養素の消化及び吸収並びに環境病原体に対する有効なバリアの提供に関与する。胃腸管（ＧＩＴ）は、宿主動物の免疫系と強く協調し、消化管に生息する様々な微生物（細菌、真菌、カビ、ウイルスなど）を含む動物の腸ミクロビオームが存在する。
[0003]健康な動物では、胃腸系は、宿主動物の免疫機能、腸管粘膜層及び内皮の生理機能並びに腸ミクロビオームの生化学の複雑な相互作用を介して恒常性を維持している。腸管杯細胞によるムチン及び粘液産生、非特異的免疫系活性、ケモカイン及びサイトカイン媒介及び炎症性調節並びに腸管内層の細胞間の密着結合は、栄養素の健全な吸収並びに病原体及び毒素に対する防御を促進する。
[0004]胃腸の恒常性が破壊されると、その動物にとって健康上及び栄養上の負の結果がもたらされる。例えば、健康なバリア機能の破壊は、宿主循環への腸管内容物の移動を可能にし、例えば、病原体及び毒素が粘膜及び内皮層に浸透し、宿主動物に負の影響を与えることを可能にする。上皮腸管細胞の炎症及び／又は損傷は、動物が栄養素を吸収する能力を低下させる。生産動物について、健康な胃腸恒常性の胃腸系を維持することは、不十分な栄養及び健康転帰を示し、その結果、体重増加の減少、飼料効率の低下、肉収量の低下、肉品質の低下及び死亡率の上昇をもたらす。伴侶動物について、胃腸恒常性の破壊は、生活の質及び全体的な健康を低下させ得る。従って、胃腸バリア機能不全を予防及び／又は処置する、動物飼料を含む栄養組成物を提供することがかなり必要とされている。
［概要］
[0005]一態様において、動物における胃腸バリア機能不全を処置及び予防する方法であって、基礎栄養組成物及び合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物を前記動物に投与することであって、少なくともｎ画分のオリゴ糖は、１～ｎ（ＤＰ１～ＤＰｎ画分）から選択される別個の重合度をそれぞれ有し、ｎは、３を超える整数であり、ＤＰ１及びＤＰ２画分の各々は、独立して、質量分析によって決定される相対的存在量で約０．５％～約１５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む、投与することを含み、それにより前記胃腸バリア機能不全を処置及び予防する、方法が本明細書に提供される。
[0006]いくつかの実施形態では、前記動物の胃腸バリアの透過性は、前記合成オリゴ糖調製物を前記投与する前の前記動物の前記胃腸バリアの透過性と比較して減少する。
[0007]いくつかの実施形態では、前記減少は、前記合成オリゴ糖調製物を前記投与する前の前記動物の前記胃腸バリアの前記透過性と比較して、少なくとも約０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％又は３０％の減少である。いくつかの実施形態では、前記減少は、前記合成オリゴ糖調製物を前記投与する前の前記動物の前記胃腸バリアの前記透過性と比較して、約０．５～３０％、０．５～２０％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～４％、０．５～３％、０．５～２％、０．５～１％、１～３０％、１～２０％、１～１０％、１～５％、１０～４％、１～３％又は１～２％の減少である。
[0008]いくつかの実施形態では、前記減少は、前記合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された同等の対照動物の胃腸バリアの透過性の減少と比較してより大きい減少である。いくつかの実施形態では、前記減少は、前記合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された同等の対照動物の胃腸バリアの透過性の減少と比較して、少なくとも約０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％又は６０％大きい。
[0009]いくつかの実施形態では、前記動物の胃腸バリアの透過性は、前記合成オリゴ糖調製物を前記投与する前の前記動物の前記胃腸バリアの透過性と比較して減少する。
[0010]いくつかの実施形態では、前記減少は、前記合成オリゴ糖調製物を前記投与する前の前記動物の前記胃腸バリアの透過性と比較して、少なくとも約０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％又は３０％の減少である。いくつかの実施形態では、前記減少は、前記合成オリゴ糖調製物を前記投与する前の前記動物の前記胃腸バリアの透過性と比較して、約０．５～３０％、０．５～２０％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～４％、０．５～３％、０．５～２％、０．５～１％、１～３０％、１～２０％、１～１０％、１～５％、１０～４％、１～３％又は１～２％の減少である
[0011]いくつかの実施形態では、前記胃腸バリアの前記透過性は、前記動物からの前記胃腸バリアのサンプルから決定される。いくつかの実施形態では、前記透過性は、組織学的分析、染色又はそれらの任意の組み合わせによって測定される。
[0012]いくつかの実施形態では、前記方法は、前記胃腸バリアの粘膜形態を評価することを更に含む。いくつかの実施形態では、前記評価は、絨毛の長さ、陰窩の長さ、炎症細胞浸潤のレベル又はそれらの任意の組み合わせを決定することを含む。
[0013]いくつかの実施形態では、前記胃腸バリアの前記透過性は、前記動物からの血液、糞便又は尿サンプルから決定される。いくつかの実施形態では、前記透過性は、前記サンプル中における、前記動物に経口投与されたトレーサーのレベルを決定することによって測定される。いくつかの実施形態では、前記トレーサーは、非消化性糖、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、蛍光標識デキストラン又は放射性同位体である。いくつかの実施形態では、前記透過性は、前記血液、糞便又は尿サンプル中の少なくとも１つの微生物種のレベルを決定することによって測定される。
[0014]いくつかの実施形態では、前記透過性は、前記サンプル中の少なくとも１つの微生物種に結合する抗体のレベルを決定することによって測定される。いくつかの実施形態では、前記少なくとも１つの微生物種は、前記動物の胃腸管に存在する。
[0015]いくつかの実施形態では、前記胃腸バリアの透過性の前記減少は、前記合成オリゴ糖調製物によって直接媒介される。いくつかの実施形態では、前記胃腸バリアの透過性の前記減少は、前記合成オリゴ糖調製物によって間接的に媒介される。いくつかの実施形態では、前記合成オリゴ糖調製物は、インビボで少なくとも１つの二次種に加工される。いくつかの実施形態では、前記合成オリゴ糖調製物は、前記動物の胃腸ミクロビオームの成分によってインビボで加工される。いくつかの実施形態では、前記合成オリゴ糖調製物は、前記動物の胃腸管に存在する細菌によってインビボで加工される。いくつかの実施形態では、前記胃腸透過性の減少は、前記少なくとも１つの二次種によって直接媒介される。
[0016]いくつかの実施形態では、前記胃腸バリア機能不全は、超透過性胃腸バリアである。いくつかの実施形態では、前記超透過性胃腸バリアは、管腔内空間から動物の循環への腸内容物の移動を可能にする。いくつかの実施形態では、前記腸内容物は、食物粒子、微生物、毒素又はそれらの任意の組み合わせを含む。
[0017]いくつかの実施形態では、前記胃腸バリア機能不全に関連する少なくとも１つの症状は、改善又は予防される。いくつかの実施形態では、前記少なくとも１つの症状は、前記胃腸バリア機能不全を欠く同等の対照動物と比較した粘液合成の減少、ムチン合成の減少、粘液分泌の減少、ムチン分泌の減少、栄養吸収の減少、炎症の増加、感染に対する抵抗性の減少、腸上皮細胞の増殖の減少、腸上皮細胞の成熟の減少、胃腸管における免疫細胞の増加、血液若しくは胃腸管におけるプロ炎症性サイトカイン若しくはケモカインのレベルの増加、過敏性腸症候群、炎症性腸症候群、直腸炎症、全身感染、全身炎症、栄養不良、体重増加の減少、体重減少、飼料要求率の増加、飼料効率の減少、脱毛、便失禁又は下痢である。
[0018]いくつかの実施形態では、前記動物は、感染を有する。いくつかの実施形態では、前記胃腸バリア機能不全は、感染に関連するか又は感染を原因とする。いくつかの実施形態では、前記感染は、寄生虫、細菌、真菌又はウイルス感染である。いくつかの実施形態では、前記感染は、寄生虫感染である。
[0019]いくつかの実施形態では、前記寄生虫感染は、コクシジウム症感染である。いくつかの実施形態では、前記コクシジウム症感染は、エイメリア（Ｅｉｍｅｒｉａ）感染、トキソプラズマ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ）感染、クリプトスポリジウム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）感染、イソスポラ（Ｉｓｏｓｐｏｒａ）感染又はハモンジア（Ｈａｍｍｏｎｄｉａ）感染である。いくつかの実施形態では、前記コクシジウム症感染は、エイメリア（Ｅｉｍｅｒｉａ）感染である。いくつかの実施形態では、前記エイメリア（Ｅｉｍｅｒｉａ）感染は、Ｅ．ミバチ（Ｅ．ｍｉｖａｔｉ）、Ｅ．テネラ（Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ）、Ｅ．アセルブリナ（Ｅ．ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ）又はＥ．マキシマ（Ｅ．ｍａｘｉｍａ）感染である。いくつかの実施形態では、前記コクシジウム症感染は、トキソプラズマ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ）感染である。いくつかの実施形態では、前記トキソプラズマ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ）感染は、トキソプラズマ・ゴンジイ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）である。いくつかの実施形態では、前記コクシジウム症感染は、クリプトスポリジウム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）感染である。いくつかの実施形態では、前記クリプトスポリジウム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）感染は、クリプトスポリジウム・パルブム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ）、クリプトスポリジウム・ムリス（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｍｕｒｉｓ）又はクリプトスポリジウム・ホミニス（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｈｏｍｉｎｉｓ）感染である。いくつかの実施形態では、前記コクシジウム症感染は、イソスポラ（Ｉｓｏｓｐｏｒａ）感染である。
[0020]いくつかの実施形態では、前記イソスポラ（Ｉｓｏｓｐｏｒａ）感染は、イソスポラ・カニス（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｃａｎｉｓ）、イソスポラ・オヒオエンシス（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｏｈｉｏｅｎｓｉｓ）、イソスポラ・ブロシ（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｂｕｒｒｏｓｉ）又はイソスポラ・フェリス（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｆｅｌｉｓ）感染である。いくつかの実施形態では、前記コクシジウム症感染は、ハモンジア（Ｈａｍｍｏｎｄｉａ）感染である。いくつかの実施形態では、前記ハモンジア（Ｈａｍｍｏｎｄｉａ）感染は、ハモンジア属（Ｈａｍｍｏｎｄｉａ ｓｐｐ）感染である。いくつかの実施形態では、前記コクシジウム症感染は、エイメリア・アセルブリネ（Ｅｉｍｅｒｉａ ａｃｅｒｖｕｌｉｎｅ）、エイメリア・マキシマ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｍａｘｉｍａ）、エイメリア・ミチス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｍｉｔｉｓ）、エイメリア・テネラ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｔｅｎｅｌｌａ）、トキソプラズマ・ゴンジイ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）、ハモンジア属（Ｈａｍｍｏｎｄｉａ ｓｐｐ．）、クリプトスポリジウム・パルブム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ）、クリプトスポリジウム・ムリス（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｍｕｒｉｓ）、クリプトスポリジウム・ホミニス（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｈｏｍｉｎｉｓ）、イソスポラ・カニス（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｃａｎｉｓ）、イソスポラ・オヒオエンシス（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｏｈｉｏｅｎｓｉｓ）、イソスポラ・ブロシ（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｂｕｒｒｏｓｉ）又はイソスポラ・フェリス（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｆｅｌｉｓ）感染である。
[0021]いくつかの実施形態では、前記感染は、細菌感染である。いくつかの実施形態では、前記細菌感染は、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ）感染、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）感染、カンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）感染、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）感染、エスケリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）感染又はエルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）感染である。
[0022]いくつかの実施形態では、前記感染は、前記感染を有さない同等の動物と比較して胃腸管の炎症の増加、前記動物の胃腸管における杯細胞の数の減少、前記動物の胃腸管における粘液分泌の減少、前記動物の胃腸バリアの絨毛の長さの減少、前記動物の胃腸バリアの絨毛に対する損傷、前記動物の胃腸管における免疫細胞のレベルの増加、前記動物の胃腸管におけるＣＤ８＋ Ｔ細胞のレベルの増加、肝タンパク質ＡＰＧ（α糖タンパク質）のレベルの増加、循環する抗体のレベルの増加、循環するＩｇＡ抗体のレベルの増加若しくは循環するジアミンオキシダーゼのレベルの減少又はそれらの任意の組み合わせを引き起こす。
[0023]いくつかの実施形態では、前記動物は、前記合成オリゴ糖調製物を前記投与する前の前記胃腸バリアの炎症と比較して減少した胃腸バリアの炎症を有する。いくつかの実施形態では、前記動物は、前記合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された前記同等の対照動物の胃腸バリアの炎症と比較して減少した胃腸バリアの炎症を有する。いくつかの実施形態では、前記炎症は、少なくとも１つの抗炎症性サイトカインのレベルの増加によって測定される。いくつかの実施形態では、前記抗炎症性サイトカインは、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ４、ＩＬ１０、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＩＬ－１３、ＩＬ１ＲＡ又はＴＧＦ－βである。いくつかの実施形態では、前記抗炎症性サイトカインは、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ４又はＩＬ１０である。
[0024]いくつかの実施形態では、前記動物は、前記合成オリゴ糖調製物を前記投与する前の前記動物と比較して、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の減少、ＣＤ４＋ Ｔ細胞の増加、循環するジアミンオキシダーゼのレベルの増加又は循環抗体レベル（例えば、ＩｇＡ）の減少を示す。いくつかの実施形態では、前記動物は、前記合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された同等の対照動物と比較して、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の減少、ＣＤ４＋ Ｔ細胞の増加、循環するジアミンオキシダーゼのレベルの増加又は循環抗体レベル（例えば、ＩｇＡ）の減少を示す。
[0025]いくつかの実施形態では、前記動物は、前記合成オリゴ糖調製物を前記投与する前の前記胃腸バリアと比較して、胃腸バリアを介した栄養吸収の増加を示す。いくつかの実施形態では、前記動物は、前記合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された同等の対照動物の胃腸バリアと比較して、胃腸バリアを介した栄養吸収の増加を示す。
[0026]いくつかの実施形態では、前記栄養吸収は、栄養吸収に関連する少なくとも１つの胃腸タンパク質のレベルの増加によって測定される、いくつかの実施形態では、前記タンパク質は、ＳＩ（スクラーゼ－イソマルターゼ）、ＳＬＣ５Ａ１０、ＳＬＣ３４Ａ１、ＳＬＣ２Ａ２、ＳＬＣ３４Ａ２、ＳＬＣ２３Ａ１、ＳＬＣ２３Ａ２、ＳＬＣ５Ａ８、ＳＬＣ１６Ａ３、ＳＬＣ４、ＳＬＣ４Ａ９、ＳＬＣ４Ａ２、ＳＬＣ４Ａ３、ＮＰＣ１Ｌ１、Ｃ６ｏｒｆ５８、ＤＤＣ、ＭＣＴ１、ＭＣＴ４、ＮａＳ１、ＤＴＤＳＴ、ＰＡＴ１、ＤＲＡ、ＣＬＤ、ＳＡＴ１、ＳＵＴ２、ＳＧＬＴ１、ＧＬＵＴ２、Ｂ０ＡＴ１、ＡＴＢ０＋、ＳＩＴ１、ＴＡＵＴ、ＥＡＡＣ１、ＡＳＣＴ２、ＳＮ１、ＳＮ２、ＰＥＰＴ１、ＳＮＡＴ２、ＧＬＹＴ１、ｙ＋ＬＡＴ１、ｙ＋ＬＡＴ２、ＣＤ３６、ＬＦＡＢＰ、ＮＰＣ１Ｌ１、ＡＢＣＧ５、ＡＢＣＧ８、ＳＶＣＴ１、ＳＶＣＴ２、ＳＭＶＴ、ＧＩＦ、ＡＭＮ、ＣＵＢＬ、ＭＲＰ１、ＦＯＬＴ、ＰＣＦＴ、ＦＯＬＲ１、ＯＡＴ１０、ＲＦＶＴ１、ＲＦＶＴ２、ＴＨＴＲ１、ＴＨＴＲ２、ＶＤＲ、ＤＣＹＴＢ、ＤＭＴ１、ＨＣＰ１、ＦＰＮ１、ＨＥＰＨ、ＨＡＭＰ、ＺＩＰ４、ＺＩＰ１１、ＺＩＰ８、ＺＩＰ１４Ａ、ＺＩＰ１４Ｂ、ＺｎＴ１、ＺｎＴ２、ＣＴＲ１、ＳＬＣ３Ａ１、ＳＬＣ１Ａ４、ＡＬＰＩ、Ｃ１７ｏｒｆ７８、ＭＵＣ１７、ＤＥＦＡ５、ＲＢＰ２、ＤＥＦＡ６、ＭＬＮ、ＭＥＰ１Ｂ、ＬＣＴ、ＴＭ４ＳＦ２０又はＦＡＢＰ６である。いくつかの実施形態では、前記タンパク質は、ＳＩ、ＳＬＣ５Ａ１０又はＳＬＣ３４Ａ１である。
[0027]いくつかの実施形態では、前記動物は、前記合成オリゴ糖調製物の投与前の前記動物の体重と比較して増加した体重を有する。いくつかの実施形態では、前記動物の前記体重は、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物の投与前の前記動物の前記体重と比較して、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％又は１０％増加する。いくつかの実施形態では、前記動物の前記体重は、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物の投与前の前記動物の前記体重と比較して、約１～４０％、１～３０％、１～２０％、１～１０％、１～５％、１～４％、１～３％又は１～２％増加する。いくつかの実施形態では、体重の前記増加は、前記合成オリゴ糖調製物を含まない同等の栄養組成物を投与された同等の対象動物の体重の増加と比較してより大きい増加である。いくつかの実施形態では、体重の前記増加は、前記合成オリゴ糖調製物を含まない同等の栄養組成物を投与された同等の対照動物の前記体重の増加と比較して、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％又は１０％大きい増加である。いくつかの実施形態では、体重の前記増加は、前記合成オリゴ糖調製物を含まない同等の栄養組成物を投与された同等の対照動物の体重の増加と比較して、約１～４０％、１～３０％、１～２０％、１～１０％、１～５％、１～４％、１～３％又は１～２％大きい増加である。
[0028]いくつかの実施形態では、前記動物は、前記合成オリゴ糖調製物の投与前の前記動物の飼料効率と比較して増加した飼料効率を有する。いくつかの実施形態では、前記動物の前記飼料効率は、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物の投与前の前記動物の前記飼料効率と比較して、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％又は１０％増加する。いくつかの実施形態では、前記動物の前記飼料効率は、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物の投与前の前記動物の前記体重と比較して、約１～４０％、１～３５％、１～３０％、１～２５％、１～２０％、１～１５％、１～１０％、１～５％、１～４％、１～３％又は１～２％増加する。いくつかの実施形態では、飼料効率の前記増加は、前記合成オリゴ糖調製物を含まない同等の栄養組成物を投与された同等の対象動物と比較してより大きい増加である。いくつかの実施形態では、飼料効率の前記増加は、前記合成オリゴ糖調製物を含まない同等の栄養組成物を投与された同等の対照動物の飼料効率の前記増加と比較して、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％又は１０％大きい増加である。いくつかの実施形態では、飼料効率の前記増加は、前記合成オリゴ糖調製物を含まない前記同等の栄養組成物を投与された前記同等の対照動物の飼料効率の前記増加と比較して、約１～４０％、１～３０％、１～２０％、１～１０％、１～５％、１～４％、１～３％又は１～２％大きい増加である。
[0029]いくつかの実施形態では、前記動物は、前記合成オリゴ糖調製物の投与前の前記動物の飼料要求率（ＦＣＲ）と比較して減少したＦＣＲを有する。いくつかの実施形態では、前記動物の前記飼料要求率は、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物の投与前の前記動物の飼料要求率と比較して、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％又は１０％減少する。いくつかの実施形態では、前記動物の前記飼料要求率（ＦＣＲ）は、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物の投与前の前記動物の前記体重と比較して、約１～４０％、１～３５％、１～３０％、１～２５％、１～２０％、１～１５％、１～１０％、１～５％、１～４％、１～３％又は１～２％減少する。いくつかの実施形態では、前記動物は、前記合成オリゴ糖調製物を含まない同等の栄養組成物を投与された同等の対象動物と比較してより大きい減少である、飼料要求率の前記減少を有する。いくつかの実施形態では、飼料要求率の前記減少は、前記合成オリゴ糖調製物を含まない同等の栄養組成物を投与された前記同等の対照動物の飼料要求率の減少と比較して、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％又は１０％大きい減少である。いくつかの実施形態では、飼料要求率の前記減少は、前記合成オリゴ糖調製物を含まない前記同等の栄養組成物を投与された前記同等の対照動物の飼料要求率の前記減少と比較して、約１～４０％、１～３０％、１～２０％、１～１０％、１～５％、１～４％、１～３％又は１～２％大きい減少である。
[0030]いくつかの実施形態では、前記動物の平均余命又は生存率は、前記合成オリゴ糖調製物を含まない同等の栄養組成物を投与された同等の対象動物と比較して増加する。
[0031]いくつかの実施形態では、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物は、前記胃腸バリア機能不全を処置又は予防するのに十分な量で前記動物に投与される。
[0032]いくつかの実施形態では、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物は、前記動物に少なくとも１、７、１０、１４、３０、４５、６０、９０又は１２０日間投与される。いくつかの実施形態では、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物は、前記動物に、１日に少なくとも１回、２回、３回、４回又は５回投与される。いくつかの実施形態では、前記投与は、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物を、自由に摂取するように前記動物に提供することを含む。いくつかの実施形態では、前記動物は、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物の少なくとも一部を少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、２０、３０、４０、５０、６０、９０又は１２０の２４時間の期間にわたって摂取する。
[0033]いくつかの実施形態では、前記栄養組成物は、少なくとも１００ｐｐｍ、２００ｐｐｍ、３００ｐｐｍ、４００ｐｐｍ、５００ｐｐｍ、６００ｐｐｍ、７００ｐｐｍ、８００ｐｐｍ、９００ｐｐｍ、１０００ｐｐｍ、１５００ｐｐｍ又は２０００ｐｐｍの前記合成オリゴ糖調製物を含む。いくつかの実施形態では、前記栄養組成物は、約１００ｐｐｍ、２００ｐｐｍ、３００ｐｐｍ、４００ｐｐｍ、５００ｐｐｍ、６００ｐｐｍ、７００ｐｐｍ、８００ｐｐｍ、９００ｐｐｍ、１０００ｐｐｍ、１５００ｐｐｍ又は２０００ｐｐｍの前記合成オリゴ糖調製物を含む。いくつかの実施形態では、前記栄養組成物は、約５００ｐｐｍの前記合成オリゴ糖調製物を含む。いくつかの実施形態では、前記栄養組成物は、約１００ｐｐｍ～２０００ｐｐｍ、１００ｐｐｍ～１５００ｐｐｍ、１００ｐｐｍ～１０００ｐｐｍ、１００ｐｐｍ～９００ｐｐｍ、１００ｐｐｍ～８００ｐｐｍ、１００ｐｐｍ～７００ｐｐｍ、１００ｐｐｍ～６００ｐｐｍ、１００ｐｐｍ～５００ｐｐｍ、１００ｐｐｍ～４００ｐｐｍ、１００ｐｐｍ～３００ｐｐｍ、１００ｐｐｍ～２００ｐｐｍ、２００ｐｐｍ～１０００ｐｐｍ、２００ｐｐｍ～８００ｐｐｍ、２００ｐｐｍ～７００ｐｐｍ、２００ｐｐｍ～６００ｐｐｍ、２００ｐｐｍ～５００ｐｐｍ、３００ｐｐｍ～１０００ｐｐｍ、３００ｐｐｍ～７００ｐｐｍ、３００ｐｐｍ～６００ｐｐｍ又は３００ｐｐｍ～５００ｐｐｍの前記合成オリゴ糖調製物を含む。いくつかの実施形態では、前記栄養組成物は、約３００ｐｐｍ～６００ｐｐｍの前記合成オリゴ糖調製物を含む。
[0034］いくつかの実施形態では、動物は、家禽、魚介類、ヒツジ、ウシ、畜牛、バッファロー、ビソン、ブタ、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ロバ、ラクダ、ウマ、ブタ、フェレット、アレチネズミ、ハムスター、マウス、ラット、魚、エビ又は鳥である。
[0035]いくつかの実施形態では、動物は、家禽である。いくつかの実施形態では、動物は、ニワトリ、シチメンチョウ、アヒル又はガチョウである。いくつかの実施形態では、前記ニワトリは、ブロイラー鶏、レイヤー鶏又はブリーダー鶏である。
[0036]いくつかの実施形態では、動物は、ブタである。いくつかの実施形態では、前記ブタは、幼齢ブタ、育成ブタ又は仕上げブタである。
[0037]いくつかの実施形態では、前記動物は、魚である。いくつかの実施形態では、前記魚は、サケ、ティラピア又は熱帯魚である。
[0038]いくつかの実施形態では、前記栄養組成物は、動物飼料組成物である。いくつかの実施形態では、前記基礎栄養組成物は、基本動物飼料である。
[0039]いくつかの実施形態では、前記相対的存在量は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって決定される。
[0040]いくつかの実施形態では、少なくとも５、１０、２０又は３０のＤＰ画分におけるオリゴ糖の前記相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。いくつかの実施形態では、ｎ画分の各々におけるオリゴ糖の前記相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。
[0041]いくつかの実施形態では、ｎは、少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９又は１００である。
[0042]いくつかの実施形態では、前記ＤＰ２画分は、相対的存在量で１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満又は１％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[0043]いくつかの実施形態では、前記ＤＰ２画分は、相対的存在量で約５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ２画分は、相対的存在量で約１％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ２画分は、相対的存在量で約０．５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ２画分は、相対的存在量で約２％～約１２％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[0044]いくつかの実施形態では、前記ＤＰ１画分は、相対的存在量で１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満又は１％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ１画分は、相対的存在量で約２％～約１２％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ１画分は、相対的存在量で約１％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ１画分は、相対的存在量で約０．５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ１画分は、相対的存在量で約５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[0045]いくつかの実施形態では、前記ＤＰ３画分は、相対的存在量で１５％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満又は１％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ３画分は、相対的存在量で約２％～約１２％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ３画分は、相対的存在量で約１％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ３画分は、相対的存在量で約０．５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ３画分は、相対的存在量で約５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[0046]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、相対的存在量で約２％～約１２％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、相対的存在量で約０．５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、相対的存在量で約１％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、相対的存在量で約５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[0047]いくつかの実施形態では、前記ＤＰ２画分は、相対的存在量で０．６％超、０．８％超、１．０％超、１．５％超、２％超、３％超、４％超、５％超、６％超、７％超、８％超、９％超、１０％超、１１％超又は１２％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[0048]いくつかの実施形態では、前記ＤＰ１画分は、相対的存在量で０．６％超、０．８％超、１．０％超、１．５％超、２％超、３％超、４％超、５％超、６％超、７％超、８％超、９％超、１０％超、１１％超又は１２％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[0049]いくつかの実施形態では、前記ＤＰ３画分は、相対的存在量で０．６％超、０．８％超、１．０％超、１．５％超、２％超、３％超、４％超、５％超、６％超、７％超、８％超、９％超、１０％超、１１％超又は１２％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[0050]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、相対的存在量で０．５％超、０．６％、０．８％超、１．０％超、１．５％超、２％超、３％超、４％超、５％超、６％超、７％超、８％超、９％超、１０％超、１１％超又は１２％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[0051]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、液体クロマトグラフィーによって決定される、約１重量％～約４０重量％のＤＰ１画分含有量を有する。
[0052]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、液体クロマトグラフィーによって決定される、約１重量％～約３５重量％のＤＰ２画分含有量を有する。
[0053]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、液体クロマトグラフィーによって決定される、約１重量％～約３０重量％のＤＰ３画分含有量を有する。
[0054]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、液体クロマトグラフィーによって決定される、約０．１重量％～約２０重量％のＤＰ４画分含有量を有する。
[0055]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、液体クロマトグラフィーによって決定される、約０．１重量％～約１５重量％のＤＰ５画分含有量を有する。
[0056]いくつかの実施形態では、ＤＰ２画分のＤＰ１画分との比は、液体クロマトグラフィーによって決定されて約０．０２～約０．４０である。
[0057]いくつかの実施形態では、ＤＰ３画分のＤＰ２画分との比は、液体クロマトグラフィーによって決定されて約０．０１～約０．３０である。
[0058]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物におけるＤＰ１及びＤＰ２画分の集合体含有量は、液体クロマトグラフィーによって決定されて５０％未満、４０％未満又は３０％未満である。
[0059]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、少なくとも１０３、少なくとも１０４、少なくとも１０５、少なくとも１０６又は少なくとも１０９の異なるオリゴ糖種を含む。
[0060]いくつかの実施形態では、２つ以上の独立したオリゴ糖は、異なるアンヒドロサブユニットを含む。
[0061]いくつかの実施形態では、前記アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の各々は、単糖の熱脱水生成物である１つ以上のアンヒドロサブユニットを含む。
[0062]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、アンヒドロ－グルコース、アンヒドロ－ガラクトース、アンヒドロ－マンノース、アンヒドロ－アロース、アンヒドロ－アルトロース、アンヒドロ－グルコース、アンヒドロ－インドース、アンヒドロ－タロース、アンヒドロ－フルクトース、アンヒドロ－リボース、アンヒドロ－アラビノース、アンヒドロ－ラムノース、アンヒドロ－リキソース及びアンヒドロ－キシロースから選択される１つ以上のアンヒドロサブユニットを含む。
[0063]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、１つ以上のアンヒドロ－グルコース、アンヒドロ－ガラクトース、アンヒドロ－マンノース又はアンヒドロ－フルクトースサブユニットを含む。
[0064]いくつかの実施形態では、前記ＤＰ１画分は、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノース又は１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースアンヒドロサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ１画分は、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースアンヒドロサブユニット及び１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースアンヒドロサブユニットの両方を含む。
[0065]いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、オリゴ糖調製物中で約１０：１～１：１０、約９：１～約１：１０、約８：１～約１：１０、約７：１～約１：１０、約６：１～約１：１０、約５：１～約１：１０、約４：１～約１：１０、約３：１～約１：１０、約２：１～約１：１０、約１０：１～約１：９、約１０：１～約１：８、約１０：１～約１：７、約１０：１～約１：６、約１０：１～約１：５、約１０：１～約１：４、約１０：１～約１：３、約１０：１～約１：２又は約１：１～約３：１である。いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、オリゴ糖調製物中で約１０：１、約９：１、約８：１、約７：１、約６：１、約５：１、約４：１、約３：１、約２：１、約１：１、約１：２、約１：３、約１：４、約１：５、約１：６、約１：７、約１：８、約１：９又は約１：１０である。いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、オリゴ糖調製物中で約２：１である。
[0066]いくつかの実施形態では、前記ＤＰ２画分は、少なくとも５種のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ２画分は、約５～１０種のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[0067]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、１つ以上の糖カラメル化生成物を含む。いくつかの実施形態では、前記糖カラメル化生成物は、メタノール；エタノール；フラン；メチルグリオキサール；２－メチルフラン；酢酸ビニル；グリコールアルデヒド；酢酸；アセトール；フルフラール；２－フランメタノール；３－フランメタノール；２－ヒドロキシシクロペンタ－２－エン－１－オン；５－メチルフルフラール；２（５Ｈ）－フラノン；２メチルシクロペンテノロン；レボグルコセノン；環状ヒドロキシルラクトン；１，４，３，６－ジアンヒドロ－α－Ｄ－グルコピラノース；ジアンヒドログルコピラノース；及び５－ヒドロキシメチルフルフラール（５－ｈｍｆ）からなる群から選択される。
[0068]いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は９９％超は、鎖末端アンヒドロサブユニットを含む。
[0069]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって決定される、約３００～約５０００ｇ／モルの重量平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、ＨＰＬＣによって決定される、約３００～約２５００ｇ／モルの重量平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、ＨＰＬＣによって決定される、約５００～約２０００ｇ／モルの重量平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、ＨＰＬＣによって決定される、約５００～約１５００ｇ／モルの重量平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、ＨＰＬＣによって決定される、約３００～約５０００ｇ／モルの数平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、ＨＰＬＣによって決定される、約３００～約２５００ｇ／モルの数平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、ＨＰＬＣによって決定される、約５００～約２０００ｇ／モルの数平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、ＨＰＬＣによって決定される、約５００～約１５００ｇ／モルの数平均分子量を有する。
[0070]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、約２０００～約２８００ｇ／モルの重量平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、約１０００～約２０００ｇ／モルの数平均分子量を有する。
[0071]一態様において、動物における感染を処置及び予防する方法であって、基礎栄養組成物及び合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物を前記動物に投与することであって、少なくともｎ画分のオリゴ糖は、１～ｎ（ＤＰ１～ＤＰｎ画分）から選択される別個の重合度をそれぞれ有し、ｎは、３を超える整数であり、ＤＰ１及びＤＰ２画分の各々は、独立して、質量分析によって決定される相対的存在量で約０．５％～約１５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む、投与することを含み、それにより前記感染を処置及び予防する、方法が本明細書に提供される。
[0072]いくつかの実施形態では、前記動物からのサンプル中の少なくとも１つの免疫細胞のレベルは、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物の投与前の前記動物からのサンプル中の前記少なくとも１つの免疫細胞のレベルと比較して増加する。いくつかの実施形態では、前記増加は、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物の投与前の前記少なくとも１つの免疫細胞の前記レベルと比較して少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％又は１０％増加する。いくつかの実施形態では、前記増加は、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物の投与前の前記少なくとも１つの免疫細胞の前記レベルと比較して約１～４０％、１～３５％、１～３０％、１～２５％、１～２０％、１～１５％、１～１０％、１～５％、１～４％、１～３％又は１～２％、増加する。
[0073]いくつかの実施形態では、前記動物からのサンプル中の少なくとも１つの免疫細胞のレベルは、前記合成オリゴ糖調製物を含まない同等の栄養組成物を投与された同等の対照動物からのサンプル中の前記少なくとも１つの免疫細胞のレベルと比較して増加する。いくつかの実施形態では、前記増加は、前記合成オリゴ糖調製物を含まない同等の栄養組成物を投与された前記同等の対照動物からの前記サンプル中の前記少なくとも１つの免疫細胞の前記レベルと比較して少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％又は１０％増加する。いくつかの実施形態では、前記増加は、前記合成オリゴ糖調製物を含まない同等の栄養組成物を投与された前記同等の対照動物からの前記サンプル中の前記少なくとも１つの免疫細胞の前記レベルと比較して約１～４０％、１～３５％、１～３０％、１～２５％、１～２０％、１～１５％、１～１０％、１～５％、１～４％、１～３％又は１～２％である。
[0074]いくつかの実施形態では、前記少なくとも１つの免疫細胞は、好中球、好酸球、好塩基球、マスト細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、単球、顆粒球又は樹状細胞である。いくつかの実施形態では、前記免疫細胞は、食細胞である。いくつかの実施形態では、前記食細胞は、好中球、好酸球、好塩基球、マスト細胞、マクロファージ、単球又は樹状細胞である。いくつかの実施形態では、前記免疫細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、顆粒球である。
[0075]いくつかの実施形態では、前記動物からのサンプル中の少なくとも１つのプロ炎症性サイトカインのレベルは、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物の投与前の前記動物からのサンプル中の前記少なくとも１つのプロ炎症性サイトカインのレベルと比較して増加する。いくつかの実施形態では、前記動物からのサンプル中の少なくとも１つのプロ炎症性サイトカインのレベルは、前記合成オリゴ糖調製物を含まない同等の栄養組成物を投与された同等の対照動物からのサンプル中の前記少なくとも１つのプロ炎症性サイトカインのレベルと比較して増加する。いくつかの実施形態では、前記少なくとも１つのプロ炎症性サイトカインは、ＩＬ１、ＩＬ－１２、ＩＬ１８、ＴＮＦＡ、ＩＦＮＧ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１β、ＩＬ６、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ１、ＩＬ８、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、リンホタクチン、フラクタルカイン又はＧＲＯ／ＫＣである。
[0076]いくつかの実施形態では、前記動物の胃腸バリアの透過性は、前記合成オリゴ糖調製物を前記投与する前の前記動物の前記胃腸バリアの透過性と比較して減少する。いくつかの実施形態では、前記減少は、前記合成オリゴ糖調製物を前記投与する前の前記動物の前記胃腸バリアの前記透過性と比較して、少なくとも約０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％又は３０％の減少であるか、又は前記減少は、前記合成オリゴ糖調製物を前記投与する前の前記動物の前記胃腸バリアの前記透過性と比較して、約０．５～３０％、０．５～２０％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～４％、０．５～３％、０．５～２％、０．５～１％、１～３０％、１～２０％、１～１０％、１～５％、１０～４％、１～３％又は１～２％の減少である。いくつかの実施形態では、前記減少は、前記合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された同等の対照動物の胃腸バリアの透過性の減少と比較してより大きい減少である。いくつかの実施形態では、前記減少は、前記合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された同等の対照動物の胃腸バリアの透過性の減少と比較して、少なくとも約０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％又は６０％大きい。
[0077]いくつかの実施形態では、前記動物の胃腸バリアの透過性は、前記合成オリゴ糖調製物を前記投与する前の前記動物の前記胃腸バリアの透過性と比較して減少する。いくつかの実施形態では、前記減少は、前記合成オリゴ糖調製物を前記投与する前の前記動物の前記胃腸バリアの透過性と比較して、少なくとも約０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％又は３０％の減少である。いくつかの実施形態では、前記減少は、前記合成オリゴ糖調製物を前記投与する前の前記動物の前記胃腸バリアの透過性と比較して、約０．５～３０％、０．５～２０％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～４％、０．５～３％、０．５～２％、０．５～１％、１～３０％、１～２０％、１～１０％、１～５％、１０～４％、１～３％又は１～２％の減少である。
[0078]いくつかの実施形態では、前記胃腸バリア機能不全は、感染に関連するか又は感染を原因とする。いくつかの実施形態では、前記感染は、寄生虫、細菌、真菌又はウイルス感染である。
[0079]いくつかの実施形態では、前記感染は、寄生虫感染である。いくつかの実施形態では、前記寄生虫感染は、コクシジウム症感染である。いくつかの実施形態では、前記コクシジウム症感染は、エイメリア（Ｅｉｍｅｒｉａ）感染、トキソプラズマ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ）感染、クリプトスポリジウム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）感染、イソスポラ（Ｉｓｏｓｐｏｒａ）感染又はハモンジア（Ｈａｍｍｏｎｄｉａ）感染である。いくつかの実施形態では、前記コクシジウム症感染は、エイメリア（Ｅｉｍｅｒｉａ）感染である。いくつかの実施形態では、前記エイメリア（Ｅｉｍｅｒｉａ）感染は、Ｅ．ミバチ（Ｅ．ｍｉｖａｔｉ）、Ｅ．テネラ（Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ）、Ｅ．アセルブリナ（Ｅ．ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ）又はＥ．マキシマ（Ｅ．ｍａｘｉｍａ）感染である。いくつかの実施形態では、前記コクシジウム症感染は、トキソプラズマ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ）感染である。いくつかの実施形態では、前記トキソプラズマ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ）感染は、トキソプラズマ・ゴンジイ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）である。いくつかの実施形態では、前記コクシジウム症感染は、クリプトスポリジウム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）感染である。いくつかの実施形態では、前記クリプトスポリジウム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）感染は、クリプトスポリジウム・パルブム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ）、クリプトスポリジウム・ムリス（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｍｕｒｉｓ）又はクリプトスポリジウム・ホミニス（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｈｏｍｉｎｉｓ）感染である。いくつかの実施形態では、前記コクシジウム症感染は、イソスポラ（Ｉｓｏｓｐｏｒａ）感染である。いくつかの実施形態では、前記イソスポラ（Ｉｓｏｓｐｏｒａ）感染は、イソスポラ・カニス（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｃａｎｉｓ）、イソスポラ・オヒオエンシス（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｏｈｉｏｅｎｓｉｓ）、イソスポラ・ブロシ（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｂｕｒｒｏｓｉ）又はイソスポラ・フェリス（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｆｅｌｉｓ）感染である。いくつかの実施形態では、前記コクシジウム症感染は、ハモンジア（Ｈａｍｍｏｎｄｉａ）感染である。いくつかの実施形態では、前記ハモンジア（Ｈａｍｍｏｎｄｉａ）感染は、ハモンジア属（Ｈａｍｍｏｎｄｉａ ｓｐｐ）感染である。いくつかの実施形態では、前記コクシジウム症感染は、エイメリア・アセルブリネ（Ｅｉｍｅｒｉａ ａｃｅｒｖｕｌｉｎｅ）、エイメリア・マキシマ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｍａｘｉｍａ）、エイメリア・ミチス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｍｉｔｉｓ）、エイメリア・テネラ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｔｅｎｅｌｌａ）、トキソプラズマ・ゴンジイ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）、ハモンジア属（Ｈａｍｍｏｎｄｉａ ｓｐｐ．）、クリプトスポリジウム・パルブム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ）、クリプトスポリジウム・ムリス（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｍｕｒｉｓ）、クリプトスポリジウム・ホミニス（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｈｏｍｉｎｉｓ）、イソスポラ・カニス（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｃａｎｉｓ）、イソスポラ・オヒオエンシス（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｏｈｉｏｅｎｓｉｓ）、イソスポラ・ブロシ（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｂｕｒｒｏｓｉ）又はイソスポラ・フェリス（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｆｅｌｉｓ）感染である。
[0080]いくつかの実施形態では、前記感染は、細菌感染である。いくつかの実施形態では、前記細菌感染は、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ）感染、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）感染、カンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）感染、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）感染、エスケリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）感染又はエルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）感染である。
[0081]いくつかの実施形態では、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物は、前記感染を処置又は予防するのに十分な量で前記動物に投与される。いくつかの実施形態では、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物は、前記動物に少なくとも１、７、１０、１４、３０、４５、６０、９０又は１２０日間投与される。いくつかの実施形態では、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物は、前記動物に、１日に少なくとも１回、２回、３回、４回又は５回投与される。いくつかの実施形態では、前記投与は、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物を、自由に摂取するように前記動物に提供することを含む。いくつかの実施形態では、前記動物は、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物の少なくとも一部を少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、２０、３０、４０、５０、６０、９０又は１２０の２４時間の期間にわたって摂取する。
[0082]いくつかの実施形態では、前記栄養組成物は、少なくとも１００ｐｐｍ、２００ｐｐｍ、３００ｐｐｍ、４００ｐｐｍ、５００ｐｐｍ、６００ｐｐｍ、７００ｐｐｍ、８００ｐｐｍ、９００ｐｐｍ、１０００ｐｐｍ、１５００ｐｐｍ又は２０００ｐｐｍの前記合成オリゴ糖調製物を含む。いくつかの実施形態では、前記栄養組成物は、約１００ｐｐｍ、２００ｐｐｍ、３００ｐｐｍ、４００ｐｐｍ、５００ｐｐｍ、６００ｐｐｍ、７００ｐｐｍ、８００ｐｐｍ、９００ｐｐｍ、１０００ｐｐｍ、１５００ｐｐｍ又は２０００ｐｐｍの前記合成オリゴ糖調製物を含む。いくつかの実施形態では、前記栄養組成物は、約５００ｐｐｍの前記合成オリゴ糖調製物を含む。いくつかの実施形態では、前記栄養組成物は、約１００ｐｐｍ～２０００ｐｐｍ、１００ｐｐｍ～１５００ｐｐｍ、１００ｐｐｍ～１０００ｐｐｍ、１００ｐｐｍ～９００ｐｐｍ、１００ｐｐｍ～８００ｐｐｍ、１００ｐｐｍ～７００ｐｐｍ、１００ｐｐｍ～６００ｐｐｍ、１００ｐｐｍ～５００ｐｐｍ、１００ｐｐｍ～４００ｐｐｍ、１００ｐｐｍ～３００ｐｐｍ、１００ｐｐｍ～２００ｐｐｍ、２００ｐｐｍ～１０００ｐｐｍ、２００ｐｐｍ～８００ｐｐｍ、２００ｐｐｍ～７００ｐｐｍ、２００ｐｐｍ～６００ｐｐｍ、２００ｐｐｍ～５００ｐｐｍ、３００ｐｐｍ～１０００ｐｐｍ、３００ｐｐｍ～７００ｐｐｍ、３００ｐｐｍ～６００ｐｐｍ又は３００ｐｐｍ～５００ｐｐｍの前記合成オリゴ糖調製物を含む。いくつかの実施形態では、前記栄養組成物は、約３００ｐｐｍ～６００ｐｐｍの前記合成オリゴ糖調製物を含む。
[0083]いくつかの実施形態では、動物は、家禽、魚介類、ヒツジ、ウシ、畜牛、バッファロー、ビソン、ブタ、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ロバ、ラクダ、ウマ、ブタ、フェレット、アレチネズミ、ハムスター、マウス、ラット、魚、エビ又は鳥である。
[0084]いくつかの実施形態では、動物は、家禽である。いくつかの実施形態では、動物は、ニワトリ、シチメンチョウ、アヒル又はガチョウである。いくつかの実施形態では、前記ニワトリは、ブロイラー鶏、レイヤー鶏又はブリーダー鶏である。
[0085]いくつかの実施形態では、動物は、ブタである。いくつかの実施形態では、前記ブタは、幼齢ブタ、育成ブタ又は仕上げブタである。
[0086]いくつかの実施形態では、前記動物は、魚である。いくつかの実施形態では、前記魚は、サケ、ティラピア又は熱帯魚である。
[0087]いくつかの実施形態では、前記栄養組成物は、動物飼料組成物である。いくつかの実施形態では、前記基礎栄養組成物は、基礎動物飼料である。
[0088]いくつかの実施形態では、前記相対的存在量は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって決定される。
[0089]いくつかの実施形態では、少なくとも５、１０、２０又は３０のＤＰ画分におけるオリゴ糖の前記相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。いくつかの実施形態では、ｎ画分の各々におけるオリゴ糖の前記相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。
[0090]いくつかの実施形態では、ｎは、少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９又は１００である。
[0091]いくつかの実施形態では、前記ＤＰ２画分は、相対的存在量で１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満又は１％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[0092]いくつかの実施形態では、前記ＤＰ２画分は、相対的存在量で約５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ２画分は、相対的存在量で約１％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ２画分は、相対的存在量で約０．５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ２画分は、相対的存在量で約２％～約１２％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[0093]いくつかの実施形態では、前記ＤＰ１画分は、相対的存在量で１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満又は１％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ１画分は、相対的存在量で約２％～約１２％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ１画分は、相対的存在量で約１％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ１画分は、相対的存在量で約０．５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ１画分は、相対的存在量で約５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[0094]いくつかの実施形態では、前記ＤＰ３画分は、相対的存在量で１５％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満又は１％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ３画分は、相対的存在量で約２％～約１２％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ３画分は、相対的存在量で約１％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ３画分は、相対的存在量で約０．５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ３画分は、相対的存在量で約５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[0095]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、相対的存在量で約２％～約１２％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、相対的存在量で約０．５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、相対的存在量で約１％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、相対的存在量で約５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[0096]いくつかの実施形態では、前記ＤＰ２画分は、相対的存在量で０．６％超、０．８％超、１．０％超、１．５％超、２％超、３％超、４％超、５％超、６％超、７％超、８％超、９％超、１０％超、１１％超又は１２％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[0097]いくつかの実施形態では、前記ＤＰ１画分は、相対的存在量で０．６％超、０．８％超、１．０％超、１．５％超、２％超、３％超、４％超、５％超、６％超、７％超、８％超、９％超、１０％超、１１％超又は１２％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[0098]いくつかの実施形態では、前記ＤＰ３画分は、相対的存在量で０．６％超、０．８％超、１．０％超、１．５％超、２％超、３％超、４％超、５％超、６％超、７％超、８％超、９％超、１０％超、１１％超又は１２％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[0099]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、相対的存在量で０．５％超、０．６％、０．８％超、１．０％超、１．５％超、２％超、３％超、４％超、５％超、６％超、７％超、８％超、９％超、１０％超、１１％超又は１２％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[00100]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、液体クロマトグラフィーによって決定される、約１重量％～約４０重量％のＤＰ１画分含有量を有する。
[00101]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、液体クロマトグラフィーによって決定される、約１重量％～約３５重量％のＤＰ２画分含有量を有する。
[00102]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、液体クロマトグラフィーによって決定される、約１重量％～約３０重量％のＤＰ３画分含有量を有する。
[00103]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、液体クロマトグラフィーによって決定される、約０．１重量％～約２０重量％のＤＰ４画分含有量を有する。
[00104]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、液体クロマトグラフィーによって決定される、約０．１重量％～約１５重量％のＤＰ５画分含有量を有する。
[00105]いくつかの実施形態では、ＤＰ２画分のＤＰ１画分との比は、液体クロマトグラフィーによって決定されて約０．０２～約０．４０である。
[00106]いくつかの実施形態では、ＤＰ３画分のＤＰ２画分との比は、液体クロマトグラフィーによって決定されて約０．０１～約０．３０である。
[00107]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物におけるＤＰ１及びＤＰ２画分の集合体含有量は、液体クロマトグラフィーによって決定されて５０％未満、４０％未満又は３０％未満である。
[00108]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、少なくとも１０３、少なくとも１０４、少なくとも１０５、少なくとも１０６又は少なくとも１０９の異なるオリゴ糖種を含む。
[00109]いくつかの実施形態では、２つ以上の独立したオリゴ糖は、異なるアンヒドロサブユニットを含む。
[00110]いくつかの実施形態では、前記アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の各々は、単糖の熱脱水生成物である１つ以上のアンヒドロサブユニットを含む。
[00111]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、アンヒドロ－グルコース、アンヒドロ－ガラクトース、アンヒドロ－マンノース、アンヒドロ－アロース、アンヒドロ－アルトロース、アンヒドロ－グルコース、アンヒドロ－インドース、アンヒドロ－タロース、アンヒドロ－フルクトース、アンヒドロ－リボース、アンヒドロ－アラビノース、アンヒドロ－ラムノース、アンヒドロ－リキソース及びアンヒドロ－キシロースから選択される１つ以上のアンヒドロサブユニットを含む。
[00112]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、１つ以上のアンヒドロ－グルコース、アンヒドロ－ガラクトース、アンヒドロ－マンノース又はアンヒドロ－フルクトースサブユニットを含む。
[00113]いくつかの実施形態では、前記ＤＰ１画分は、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノース又は１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースアンヒドロサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ１画分は、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースアンヒドロサブユニット及び１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースアンヒドロサブユニットの両方を含む。
[00114]いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、オリゴ糖調製物中で約１０：１～１：１０、約９：１～約１：１０、約８：１～約１：１０、約７：１～約１：１０、約６：１～約１：１０、約５：１～約１：１０、約４：１～約１：１０、約３：１～約１：１０、約２：１～約１：１０、約１０：１～約１：９、約１０：１～約１：８、約１０：１～約１：７、約１０：１～約１：６、約１０：１～約１：５、約１０：１～約１：４、約１０：１～約１：３、約１０：１～約１：２又は約１：１～約３：１である。いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、オリゴ糖調製物中で約１０：１、約９：１、約８：１、約７：１、約６：１、約５：１、約４：１、約３：１、約２：１、約１：１、約１：２、約１：３、約１：４、約１：５、約１：６、約１：７、約１：８、約１：９又は約１：１０である。いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、オリゴ糖調製物中で約２：１である。
[00115]いくつかの実施形態では、前記ＤＰ２画分は、少なくとも５種のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記ＤＰ２画分は、約５～１０種のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[00116]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、１つ以上の糖カラメル化生成物を含む。いくつかの実施形態では、前記糖カラメル化生成物は、メタノール；エタノール；フラン；メチルグリオキサール；２－メチルフラン；酢酸ビニル；グリコールアルデヒド；酢酸；アセトール；フルフラール；２－フランメタノール；３－フランメタノール；２－ヒドロキシシクロペンタ－２－エン－１－オン；５－メチルフルフラール；２（５Ｈ）－フラノン；２メチルシクロペンテノロン；レボグルコセノン；環状ヒドロキシルラクトン；１，４，３，６－ジアンヒドロ－α－Ｄ－グルコピラノース；ジアンヒドログルコピラノース；及び５－ヒドロキシメチルフルフラール（５－ｈｍｆ）からなる群から選択される。
[00117]いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は９９％超は、鎖末端アンヒドロサブユニットを含む。
[00118]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって決定される、約３００～約５０００ｇ／モルの重量平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、ＨＰＬＣによって決定される、約３００～約２５００ｇ／モルの重量平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、ＨＰＬＣによって決定される、約５００～約２０００ｇ／モルの重量平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、ＨＰＬＣによって決定される、約５００～約１５００ｇ／モルの重量平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、ＨＰＬＣによって決定される、約３００～約５０００ｇ／モルの数平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、ＨＰＬＣによって決定される、約３００～約２５００ｇ／モルの数平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、ＨＰＬＣによって決定される、約５００～約２０００ｇ／モルの数平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、ＨＰＬＣによって決定される、約５００～約１５００ｇ／モルの数平均分子量を有する。
[00119]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、約２０００～約２８００ｇ／モルの重量平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、約１０００～約２０００ｇ／モルの数平均分子量を有する。
[00120]本開示は、少なくとも部分的に、１つ以上のアンヒドロサブユニットを含むオリゴ糖が、胃腸バリアの透過性を減少させるという発見に基づく。従って、本開示は、とりわけ、本明細書に記載されるオリゴ糖調製物を投与することを含む、動物における胃腸機能不全の予防方法を特徴とする。
[00121]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の少なくとも５、１０、２０又は３０ＤＰ画分中のオリゴ糖の前記相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物のｎ画分の各々におけるオリゴ糖の相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。いくつかの実施形態では、ｎは、少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９又は１００である。
[00122]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の少なくとも１つの画分は、相対的存在量で８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％又は２％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、相対的存在量で８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％又は２％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物の各画分は、相対的存在量で８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％又は２％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物の少なくとも１つの画分は、相対的存在量で１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％又は２％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、相対的存在量で１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％又は２％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物の各画分は、相対的存在量で１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％又は２％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖の少なくとも１つの画分は、相対的存在量で２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％又は８０％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、相対的存在量で２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％又は８０％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物の各画分は、相対的存在量で２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％又は８０％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物の少なくとも１つの画分は、相対的存在量で２０％、２１％、２２％、２３％、２４％又は２５％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、相対的存在量で２０％、２１％、２２％、２３％、２４％又は２５％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物の各画分は、相対的存在量で２０％、２１％、２２％、２３％、２４％又は２５％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の９９％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％又は３０％超は、１つのみのアンヒドロサブユニットを有する。
[00123]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、相対的存在量で１～４０％のＤＰ１画分含有量を有する。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、相対的存在量で１～３５％のＤＰ２画分含有量を有する。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、相対的存在量で１～３０％のＤＰ３画分含有量を有する。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、相対的存在量で０．１～２０％のＤＰ４画分含有量を有する。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、相対的存在量で０．１～１５％のＤＰ５画分含有量を含む。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、ＤＰ２画分及びＤＰ１画分を含み、ここで、前記ＤＰ２画分の前記ＤＰ１画分との比は、相対的存在量で０．０２～０．４０である。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、ＤＰ３画分及びＤＰ２画分を含み、ここで、前記オリゴ糖調製物における前記ＤＰ３画分の前記ＤＰ２画分との比は、相対的存在量で０．０１～０．３０である。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、ＤＰ１画分及びＤＰ２画分を含み、ここで、前記オリゴ糖調製物における前記ＤＰ１及び前記ＤＰ２画分の集合体含有量は、相対的存在量で５０、３０又は１０％未満である。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、少なくとも２５、５０、７５、１００、１０３、１０４、１０５、１０６、１０９、１１０、１２０、１５０又は２００の異なるオリゴ糖種を含む。
[00124]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物の少なくとも２つの独立したオリゴ糖は、異なるアンヒドロサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、単糖の可逆的熱脱水生成物である、少なくとも１つのアンヒドロサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、少なくとも１つのアンヒドロ－グルコース、アンヒドロ－ガラクトース、アンヒドロ－マンノース、アンヒドロ－アロース、アンヒドロ－アルトロース、アンヒドロ－グルコース、アンヒドロ－インドース、アンヒドロ－タロース、アンヒドロ－フルクトース、アンヒドロ－リボース、アンヒドロ－アラビノース、アンヒドロ－ラムノース、アンヒドロ－リキソース又はアンヒドロ－キシロースサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、少なくとも１つのアンヒドロ－グルコース、アンヒドロ－ガラクトース、アンヒドロ－マンノース又はアンヒドロ－フルクトースサブユニットを含む。
[00125]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、少なくとも１つの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノース又は１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、少なくとも１つの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースサブユニット及び少なくとも１つの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースアンヒドロサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物における１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、約９：１～１：１０、８：１～１：１０、７：１～１：１０、６：１～１：１０、５：１～１：１０、４：１～１：１０、３：１～１：１０、２：１～１：１０、１０：１～１：９、１０：１～１：８、１０：１～１：７、１０：１～１：６、１０：１～１：５、１０：１～１：４、１０：１～１：３、１０：１～１：２又は１：１～３：１である。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物における１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、約１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：８、１：９又は１：１０である。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物における、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、約２：１である。いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、各画分中で約１０：１～１：１０、９：１～１：１０、８：１～１：１０、７：１～１：１０、６：１～１：１０、５：１～１：１０、４：１～１：１０、３：１～１：１０、２：１～１：１０、１０：１～１：９、１０：１～１：８、１０：１～１：７、１０：１～１：６、１０：１～１：５、１０：１～１：４、１０：１～１：３、１０：１～１：２又は１：１～３：１である。いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、前記オリゴ糖調製物の各画分中で約１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：８、１：９又は１：１０である。いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、前記オリゴ糖調製物の各画分中で約２：１である。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物における前記アンヒドロサブユニットの少なくとも１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％は、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノース及び１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースからなる群から選択される。
[00126]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、糖カラメル化生成物である少なくとも１つのアンヒドロサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、前記糖カラメル化生成物は、メタノール；エタノール；フラン；メチルグリオキサール；２－メチルフラン；酢酸ビニル；グリコールアルデヒド；酢酸；アセトール；フルフラール；２－フランメタノール；３－フランメタノール；２－ヒドロキシシクロペンタ－２－エン－１－オン；５－メチルフルフラール；２（５Ｈ）－フラノン；２メチルシクロペンテノロン；レボグルコセノン；環状ヒドロキシルラクトン；１，４，３，６－ジアンヒドロ－α－Ｄ－グルコピラノース；ジアンヒドログルコピラノース；及び５－ヒドロキシメチルフルフラール（５－ｈｍｆ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物における前記アンヒドロサブユニットの約０．１％～５％、０．１％～２％又は０．１％～１％は、カラメル化生成物である。
[00127]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物におけるアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は９９％は、鎖末端アンヒドロサブユニットを含む。
[00128]いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物の重量平均分子量は、約３００～５０００ｇ／モル、５００～５０００ｇ／モル、７００～５０００ｇ／モル、５００～２０００ｇ／モル、７００～２０００ｇ／モル、７００～１５００ｇ／モル、３００～１５００ｇ／モル、３００～２０００ｇ／モル、４００～１３００ｇ／モル、４００～１２００ｇ／モル、４００～１１００ｇ／モル、５００～１３００ｇ／モル、５００～１２００ｇ／モル、５００～１１００ｇ／モル、６００～１３００ｇ／モル、６００～１２００ｇ／モル又は６００～１１００ｇ／モルである。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物の数平均分子量は、約３００～５０００ｇ／モル、５００～５０００ｇ／モル、７００～５０００ｇ／モル、５００～２０００ｇ／モル、７００～２０００ｇ／モル、７００～１５００ｇ／モル、３００～１５００ｇ／モル、３００～２０００ｇ／モル、４００～１０００ｇ／モル、４００～９００ｇ／モル、４００～８００ｇ／モル、５００～９００ｇ／モル又は５００～８００ｇ／モルである。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物の重量平均分子量は、約２０００～２８００ｇ／モル、２１００～２７００ｇ／モル、２２００～２６００ｇ／モル、２３００～２５００ｇ／モル又は２３２０～２４２０ｇ／モルである。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物の数平均分子量は、約１０００～２０００ｇ／モル、１１００～１９００ｇ／モル、１２００～１８００ｇ／モル、１３００～１７００ｇ／モル、１４００～１６００ｇ／モル又は１４５０～１５５０ｇ／モルである。
[00129]一態様において、動物における胃腸バリア機能不全を処置及び予防する方法であって、基礎栄養組成物及び合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物を動物に投与することを含み、合成オリゴ糖調製物は、１～ｎから選択される別個の重合度をそれぞれ有する少なくともｎ画分のオリゴ糖（ＤＰ１～ＤＰｎ画分）を含み、ｎは、２より大きい整数であり；各画分は、質量分析によって測定される相対的存在量で１％～９０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む、方法を本明細書に提供する。
[00130]いくつかの実施形態では、胃腸バリアの透過性は、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の胃腸バリアの透過性よりも低い。いくつかの実施形態では、胃腸バリア機能不全は、超透過性（リーキーガット（ｌｅａｋｙ ｇｕｔ））である。
[00131]いくつかの実施形態では、胃腸バリアの透過性は、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の胃腸バリアの透過性よりも少なくとも約０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％又は３０％低い。いくつかの実施形態では、胃腸バリアの透過性は、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の胃腸バリアの透過性よりも約０．５～４０％、０．５～３０％、０．５～２０％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～１％、１～４０％、１～３０％、１～２０％、１～１０％、１～５％、１～２％、５～４０％、５～３０％、５～２０％、５～１０％、１０～４０％、１０～３０％又は１０～２０％低い。
[00132]いくつかの実施形態では、胃腸透過性の減少は、合成オリゴ糖調製物によって直接媒介される。いくつかの実施形態では、胃腸透過性の減少は、合成オリゴ糖調製物によって間接的に媒介される。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、インビボで１つ以上の二次種に加工される。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、動物の胃腸微生物叢の成分によって加工される。いくつかの実施形態では、成分は、胃腸細菌である。いくつかの実施形態では、胃腸透過性の減少は、二次種の１つ以上によって直接媒介される。
[00133]いくつかの実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物と比較して、胃腸バリア機能不全を発症する可能性が低い。
[00134]いくつかの実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の体重よりも高い体重を有する。いくつかの実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の飼料効率よりも高い飼料効率を有する。いくつかの実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の飼料要求率よりも低い飼料要求率を有する。
[00135]いくつかの実施形態では、動物は、魚（例えば、サケ、ティラピア、熱帯魚）、家禽（例えば、ニワトリ、七面鳥）、海産物（例えば、エビ）、ヒツジ、ウシ、畜牛、バッファロー、バイソン、ブタ（例えば、幼齢ブタ、育成期／仕上げブタ）、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ロバ、ラクダ、ウマ、ハト、フェレット、アレチネズミ、ハムスター、マウス、ラット、鳥又はヒトである。いくつかの実施形態では、動物は、家禽である。いくつかの実施形態では、動物は、ニワトリ（例えば、ブロイラー、産卵又は繁殖）、シチメンチョウ、アヒル又はガチョウである。いくつかの実施形態では、動物は、ブタ（例えば、幼齢ブタ、育成期／仕上げブタ）である。
[00136]いくつかの実施形態では、栄養組成物は、動物飼料組成物である。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、基本動物飼料である。
[00137]動物における杯細胞増殖を促進する方法であって、基礎栄養組成物及びオリゴ糖調製物を含む栄養組成物を動物に投与することを含み、合成オリゴ糖調製物は、１～ｎから選択される別個の重合度をそれぞれ有する少なくともｎ画分のオリゴ糖（ＤＰ１～ＤＰｎ画分）を含み、ｎは、２より大きい整数であり；各画分は、質量分析によって測定される相対的存在量で１％～９０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む、方法を本明細書に提供する。
[00138]いくつかの実施形態では、動物の胃腸管における杯細胞のレベルは、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の胃腸管における杯細胞のレベルと比較して高い。いくつかの実施形態では、動物の胃腸管における杯細胞のレベルは、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の胃腸管における杯細胞のレベルよりも少なくとも約０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％又は２０％大きい。いくつかの実施形態では、動物の胃腸管における杯細胞のレベルは、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物中の杯細胞のレベルと比較して約０．５～２０％、０．５～１５％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～１％、１～２０％、１～１５％、１～１０％、１～５％、１～２％、５～２０％、５～１５％又は５～１０％大きい。
[00139]いくつかの実施形態では、杯細胞のレベルの増加は、合成オリゴ糖調製物によって直接媒介される。いくつかの実施形態では、杯細胞のレベルの増加は、合成オリゴ糖調製物によって間接的に媒介される。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、インビボで１つ以上の二次種に加工される。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、動物の胃腸微生物叢の成分によって加工される。いくつかの実施形態では、成分は、胃腸細菌である。いくつかの実施形態では、杯細胞の数の増加は、二次種の１つ以上によって直接媒介される。
[00140]いくつかの実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の体重よりも高い体重を有する。いくつかの実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の飼料効率よりも高い飼料効率を有する。いくつかの実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の飼料要求率よりも低い飼料要求率を有する。
[00141]いくつかの実施形態では、動物は、魚（例えば、サケ、ティラピア、熱帯魚）、家禽（例えば、ニワトリ、七面鳥）、海産物（例えば、エビ）、ヒツジ、ウシ、畜牛、バッファロー、バイソン、ブタ（例えば、幼齢ブタ、育成期／仕上げブタ）、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ロバ、ラクダ、ウマ、ハト、フェレット、アレチネズミ、ハムスター、マウス、ラット、鳥又はヒトである。いくつかの実施形態では、動物は、家禽である。いくつかの実施形態では、動物は、ニワトリ（例えば、ブロイラー、産卵又は繁殖）、シチメンチョウ、アヒル又はガチョウである。いくつかの実施形態では、動物は、ブタ（例えば、幼齢ブタ、育成期／仕上げブタ）である。いくつかの実施形態では、動物は、家畜である。いくつかの実施形態では、動物は、伴侶動物である。
[00142]いくつかの実施形態では、栄養組成物は、動物飼料組成物である。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、基本動物飼料である。
[00143]動物の胃腸管における粘液産生を促進する方法であって、基礎栄養組成物及びオリゴ糖調製物を含む栄養組成物を動物に投与することを含み、合成オリゴ糖調製物は、１～ｎから選択される別個の重合度をそれぞれ有する少なくともｎ画分のオリゴ糖（ＤＰ１～ＤＰｎ画分）を含み、ｎは、２より大きい整数であり；各画分は、質量分析によって測定される相対的存在量で１％～９０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む、方法を本明細書に提供する。
[00144]いくつかの実施形態では、動物の胃腸管における粘液のレベルは、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物におけるものと比較して高い。いくつかの実施形態では、粘液のレベルは、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の胃腸管における粘液のレベルと比較して少なくとも約０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％又は２０％高い。いくつかの実施形態では、粘液のレベルは、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の胃腸管における粘液のレベルと比較して少なくとも約０．５～２０％、０．５～１５％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～２％、０．５～１％、１～２０％、１～１５％、１～１０％、１～５％、１～２％、５～２０％、５～１５％又は５～１０％高い。
[00145]いくつかの実施形態では、方法は、動物から胃腸サンプルを得ることを含む。いくつかの実施形態では、サンプルは、胃腸組織（例えば、盲腸生検）又は糞便サンプルである。いくつかの実施形態では、方法は、サンプル中の粘液のレベルを検出することを含む。いくつかの実施形態では、粘液のレベルは、粘液のタンパク質成分を検出することによって検出される。いくつかの実施形態では、タンパク質は、ムチンである。
[00146]いくつかの実施形態では、粘液のレベルの増加は、粘液オリゴ糖調製物によって直接媒介される。いくつかの実施形態では、粘液のレベルの増加は、合成オリゴ糖調製物によって間接的に媒介される。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、インビボで１つ以上の二次種に加工される。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、動物の胃腸微生物叢の成分によって加工される。いくつかの実施形態では、成分は、胃腸細菌である。いくつかの実施形態では、粘液のレベルの増加は、二次種の１つ以上によって直接媒介される。
[00147]いくつかの実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の体重よりも高い体重を有する。いくつかの実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の飼料効率よりも高い飼料効率を有する。いくつかの実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の飼料要求率よりも低い飼料要求率を有する。
[00148]いくつかの実施形態では、動物は、魚（例えば、サケ、ティラピア、熱帯魚）、家禽（例えば、ニワトリ、七面鳥）、海産物（例えば、エビ）、ヒツジ、ウシ、畜牛、バッファロー、バイソン、ブタ（例えば、幼齢ブタ、育成期／仕上げブタ）、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ロバ、ラクダ、ウマ、ハト、フェレット、アレチネズミ、ハムスター、マウス、ラット、鳥又はヒトである。いくつかの実施形態では、動物は、家禽である。いくつかの実施形態では、動物は、ニワトリ（例えば、ブロイラー、産卵又は繁殖）、シチメンチョウ、アヒル又はガチョウである。いくつかの実施形態では、動物は、ブタ（例えば、幼齢ブタ、育成期／仕上げブタ）である。いくつかの実施形態では、動物は、家畜である。いくつかの実施形態では、動物は、伴侶動物である。
[00149]いくつかの実施形態では、栄養組成物は、動物飼料組成物である。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、基本動物飼料である。
[00150]動物の感染を処置及び予防する方法であって、基礎栄養組成物及び合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物を動物に投与することを含み、合成オリゴ糖調製物は、１～ｎから選択される別個の重合度をそれぞれ有する少なくともｎ画分のオリゴ糖（ＤＰ１～ＤＰｎ画分）を含み、ｎは、２より大きい整数であり、各画分は、質量分析によって測定される相対的存在量で約１％～約９０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む、方法を本明細書に提供する。
[00151]いくつかの実施形態では動物の胃腸管における１つ以上のタイプの免疫細胞のレベルは、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の胃腸管におけるレベルと比較して高い。
[00152]いくつかの実施形態では、免疫細胞は、食作用性である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、顆粒球である。いくつかの実施形態では、動物の胃腸管における顆粒球食作用のレベルは、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の胃腸管におけるレベルと比較して高い。いくつかの実施形態では、免疫細胞又は免疫細胞活性のレベルは、合成オリゴ糖調製物によって直接媒介される。
[00153]いくつかの実施形態では、免疫細胞又は免疫細胞活性のレベルは、合成オリゴ糖調製物によって間接的に媒介される。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、インビボで１つ以上の二次種に加工される。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、動物の胃腸微生物叢の成分によって加工される。いくつかの実施形態では、成分は、胃腸細菌である。いくつかの実施形態では、免疫細胞又は免疫細胞活性のレベルは、二次種の１つ以上によって直接媒介される。
[00154]いくつかの実施形態では、動物の胃腸管における１つ以上のプロ炎症性サイトカイン又はケモカインのレベルは、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の胃腸管におけるレベルと比較して高い。いくつかの実施形態では、動物の胃腸管における１つ以上の抗炎症性サイトカイン又はケモカインのレベルは、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の胃腸管におけるレベルと比較して低い。
[00155]いくつかの実施形態では、動物の胃腸バリアの透過性は、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の胃腸バリアの透過性と比較して低い。
[00156]いくつかの実施形態では、動物の胃腸管における粘液のレベルは、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の胃腸管におけるレベルと比較して高い。
[00157]いくつかの実施形態では、動物の胃腸管における杯細胞のレベルは、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の胃腸管におけるレベルと比較して高い。
[00158]いくつかの実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の体重よりも高い体重を有する。いくつかの実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の飼料効率よりも高い飼料効率を有する。
[00159]いくつかの実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の飼料要求率よりも低い飼料要求率を有する。
[00160]いくつかの実施形態では、動物は、魚（例えば、サケ、ティラピア、熱帯魚）、家禽（例えば、ニワトリ、七面鳥）、海産物（例えば、エビ）、ヒツジ、ウシ、畜牛、バッファロー、バイソン、ブタ（例えば、幼齢ブタ、育成期／仕上げブタ）、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ロバ、ラクダ、ウマ、ハト、フェレット、アレチネズミ、ハムスター、マウス、ラット、鳥又はヒトである。いくつかの実施形態では、動物は、家禽である。いくつかの実施形態では、動物は、ニワトリ（例えば、ブロイラー、産卵又は繁殖）、シチメンチョウ、アヒル又はガチョウである。いくつかの実施形態では、動物は、ブタ（例えば、幼齢ブタ、育成期／仕上げブタ）である。いくつかの実施形態では、動物は、家畜である。いくつかの実施形態では、動物は、伴侶動物である。
[00161]いくつかの実施形態では、栄養組成物は、動物飼料組成物である。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、基本動物飼料である。
[00162]一態様において、本開示は、少なくとも部分的に、１つ以上のアンヒドロサブユニットを含むオリゴ糖が、胃腸バリアの透過性を減少させるという発見に基づく。従って、一態様において、本開示は、とりわけ、本明細書に開示されるオリゴ糖調製物を投与することを含む、動物における胃腸機能不全の処置方法を特徴とする。
[00163]一態様において、動物における胃腸バリア機能不全を処置する方法であって、基礎栄養組成物及び合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物を、胃腸バリア機能不全を有する動物に投与することを含み、合成オリゴ糖調製物は、１～ｎから選択される別個の重合度をそれぞれ有する少なくともｎ画分のオリゴ糖（ＤＰ１～ＤＰｎ画分）を含み、ｎは、２より大きい整数であり；各画分は、質量分析によって測定される相対的存在量で１％～９０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む、方法を本明細書に提供する。
[00164]いくつかの実施形態では、動物の胃腸バリアの透過性は、合成オリゴ糖調製物を含む栄養調製物の投与前の動物の胃腸バリアの透過性と比較して低い。
[00165]いくつかの実施形態では、方法は、胃腸バリア機能不全は、超透過性（リーキーガット）を含む。いくつかの実施形態では、胃腸バリアの透過性は、管腔内空間から動物の循環への腸管内容物（例えば、食物粒子、微生物、毒素）の移動を可能にする。いくつかの実施形態では、胃腸バリアの透過性は、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の胃腸バリアの透過性よりも少なくとも約０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％又は３０％低い。いくつかの実施形態では、胃腸バリアの透過性は、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の胃腸バリアの透過性よりも約０．５～４０％、０．５～３０％、０．５～２０％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～１％、１～４０％、１～３０％、１～２０％、１～１０％、１～５％、１～２％、５～４０％、５～３０％、５～２０％、５～１０％、１０～４０％、１０～３０％又は１０～２０％低い。
[00166]いくつかの実施形態では、胃腸透過性の減少は、合成オリゴ糖調製物によって直接媒介される。いくつかの実施形態では、胃腸透過性の減少は、合成オリゴ糖調製物によって間接的に媒介される。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、インビボで１つ以上の二次種に加工される。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、動物の胃腸微生物叢の成分によって加工される。いくつかの実施形態では、成分は、胃腸細菌である。いくつかの実施形態では、胃腸透過性の減少は、二次種の１つ以上によって直接媒介される。
[00167]いくつかの実施形態では、胃腸バリア機能不全の１つ以上の症状は改善される。いくつかの実施形態では、１つ以上の症状は、粘液合成の減少、ムチン合成の減少、粘液分泌の減少、ムチン分泌の減少、栄養吸収の減少、炎症の増加、感染に対する抵抗性の減少、腸管上皮細胞の増殖の減少、腸管上皮細胞の成熟の減少、栄養不良、体重増加の減少、飼料要求率の増加、飼料効率の減少、死亡率の増加である。
[00168]いくつかの実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の体重よりも高い体重を有する。いくつかの実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の飼料効率よりも高い飼料効率を有する。いくつかの実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の飼料要求率よりも低い飼料要求率を有する。
[00169]いくつかの実施形態では、動物は、家畜である。いくつかの実施形態では、動物は、コンパニオンアニマルである。いくつかの実施形態では、動物は、魚（例えば、サケ、ティラピア、熱帯魚）、家禽（例えば、ニワトリ、シチメンチョウ）、水産物（例えば、エビ）、ヒツジ、ウシ、畜牛、水牛、バイソン、ブタ（例えば、幼齢ブタ、育成／仕上げブタ）、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ロバ、ラクダ、ウマ、ハト、フェレット、アレチネズミ、ハムスター、マウス、ラット、魚、鳥又はヒトである。いくつかの実施形態では、動物は、家禽である。いくつかの実施形態では、動物は、ニワトリ（例えば、ブロイラー、レイヤー、ブリーダー）、シチメンチョウ、アヒル又はガチョウである。いくつかの実施形態では、動物は、ブタ（例えば、幼齢ブタ、育成／仕上げブタ）である。
[00170]いくつかの実施形態では、栄養組成物は、動物飼料組成物である。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、基礎動物飼料である。
[00171]本明細書では、感染を処置する方法であって、基礎栄養組成物及び合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物を動物に投与することを含み、合成オリゴ糖調製物は、１～ｎから選択される異なる重合度をそれぞれ有する少なくともｎ画分のオリゴ糖（ＤＰ１～ＤＰｎ画分）を含み、ｎは、２を超える整数であり；各画分は、質量分析法によって測定される相対的存在量で１％～９０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む、方法が提供される。
[00172]いくつかの実施形態では、動物の胃腸管における１つ以上のタイプの免疫細胞のレベルは、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の胃腸管におけるレベルと比較して高い。
[00173]いくつかの実施形態では、免疫細胞は、食作用性である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、顆粒球である。いくつかの実施形態では、動物の胃腸管における顆粒球食作用のレベルは、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の胃腸管におけるレベルと比較して高い。いくつかの実施形態では、免疫細胞又は免疫細胞活性のレベルは、合成オリゴ糖調製物によって直接媒介される。
[00174]いくつかの実施形態では、免疫細胞又は免疫細胞活性のレベルは、合成オリゴ糖調製物によって間接的に媒介される。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、インビボで１つ以上の二次種に加工される。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、動物の胃腸微生物叢の成分によって加工される。いくつかの実施形態では、成分は、胃腸細菌である。いくつかの実施形態では、粘液のレベルの増加は、二次種の１つ以上によって直接媒介される。
[00175]いくつかの実施形態では、動物の胃腸管における１つ以上のプロ炎症性サイトカイン又はケモカインのレベルは、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の胃腸管におけるレベルと比較して高い。いくつかの実施形態では、動物の胃腸管における１つ以上の抗炎症性サイトカイン又はケモカインのレベルは、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の胃腸管におけるレベルと比較して低い。
[00176]いくつかの実施形態では、動物の胃腸バリアの透過性は、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の胃腸バリアの透過性と比較して低い。いくつかの実施形態では、動物の胃腸管における粘液のレベルは、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の胃腸管におけるレベルと比較して高い。いくつかの実施形態では、動物の胃腸管における杯細胞のレベルは、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の胃腸管におけるレベルと比較して高い。
[00177]いくつかの実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の体重よりも高い体重を有する。いくつかの実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の飼料効率よりも高い飼料効率を有する。いくつかの実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の飼料要求率よりも低い飼料要求率を有する。
[00178]いくつかの実施形態では、動物は、家畜である。いくつかの実施形態では、動物は、コンパニオンアニマルである。いくつかの実施形態では、動物は、魚（例えば、サケ、ティラピア、熱帯魚）、家禽（例えば、ニワトリ、シチメンチョウ）、水産物（例えば、エビ）、ヒツジ、ウシ、畜牛、水牛、バイソン、ブタ（例えば、幼齢ブタ、育成／仕上げブタ）、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ロバ、ラクダ、ウマ、ハト、フェレット、アレチネズミ、ハムスター、マウス、ラット、魚、鳥又はヒトである。いくつかの実施形態では、動物は、家禽である。いくつかの実施形態では、動物は、ニワトリ（例えば、ブロイラー、レイヤー、ブリーダー）、シチメンチョウ、アヒル又はガチョウである。いくつかの実施形態では、動物は、ブタ（例えば、幼齢ブタ、育成／仕上げブタ）である。
[00179]いくつかの実施形態では、栄養組成物は、動物飼料組成物である。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、基礎動物飼料である。
[00180]免疫応答を増強又は誘導する方法であって、基礎栄養組成物及び合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物を動物に投与することを含み、合成オリゴ糖調製物は、１～ｎから選択される別個の重合度をそれぞれ有する少なくともｎ画分のオリゴ糖（ＤＰ１～ＤＰｎ画分）を含み、ｎは、２より大きい整数であり；各画分は、質量分析によって測定される相対的存在量で１％～９０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む、方法を本明細書に提供する。
[00181]いくつかの実施形態では、動物の胃腸管における１つ以上のタイプの免疫細胞のレベルは、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の胃腸管におけるレベルと比較して高い。
[00182]いくつかの実施形態では、動物の胃腸管における１つ以上のタイプの免疫細胞のレベルは、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の胃腸管におけるレベルと比較して高い。
[00183]いくつかの実施形態では、免疫細胞は、食作用性である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、顆粒球である。いくつかの実施形態では、動物の胃腸管における顆粒球食作用のレベルは、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の胃腸管におけるレベルと比較して高い。いくつかの実施形態では、免疫細胞又は免疫細胞活性のレベルは、合成オリゴ糖調製物によって直接媒介される。
[00184]いくつかの実施形態では、免疫細胞又は免疫細胞活性のレベルは、合成オリゴ糖調製物によって間接的に媒介される。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、インビボで１つ以上の二次種に加工される。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、動物の胃腸微生物叢の成分によって加工される。いくつかの実施形態では、成分は、胃腸細菌である。いくつかの実施形態では、粘液のレベルの増加は、二次種の１つ以上によって直接媒介される。
[00185]いくつかの実施形態では、動物の胃腸管における１つ以上のプロ炎症性サイトカイン又はケモカインのレベルは、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の胃腸管におけるレベルと比較して高い。いくつかの実施形態では、動物の胃腸管における１つ以上の抗炎症性サイトカイン又はケモカインのレベルは、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の胃腸管におけるレベルと比較して低い。
[00186]いくつかの実施形態では、動物の胃腸バリアの透過性は、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の胃腸バリアの透過性と比較して低い。いくつかの実施形態では、動物の胃腸管における粘液のレベルは、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の胃腸管におけるレベルと比較して高い。いくつかの実施形態では、動物の胃腸管における杯細胞のレベルは、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の胃腸管におけるレベルと比較して高い。
[00187]いくつかの実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の体重よりも高い体重を有する。いくつかの実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の飼料効率よりも高い飼料効率を有する。いくつかの実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物の投与前の動物の飼料要求率よりも低い飼料要求率を有する。
[00188]いくつかの実施形態では、動物は、魚（例えば、サケ、ティラピア、熱帯魚）、家禽（例えば、ニワトリ、シチメンチョウ）、水産物（例えば、エビ）、ヒツジ、ウシ、畜牛、水牛、バイソン、ブタ（例えば、幼齢ブタ、育成／仕上げブタ）、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ロバ、ラクダ、ウマ、ハト、フェレット、アレチネズミ、ハムスター、マウス、ラット、魚、鳥又はヒトである。いくつかの実施形態では、動物は、家禽である。いくつかの実施形態では、動物は、ニワトリ（例えば、ブロイラー、レイヤー、ブリーダー）、シチメンチョウ、アヒル又はガチョウである。いくつかの実施形態では、動物は、ブタ（例えば、幼齢ブタ、育成期／仕上げブタ）である。
[00189]本開示の追加の態様及び利点は、以下の詳細な説明から当技術分野の当業者に容易に明らかになり、ここで、本開示の例示的な実施形態のみが示され、説明される。理解されるように、本開示は、他の異なる実施形態が可能であり、そのいくつかの詳細は、全て本開示から逸脱することなく、様々な明白な点で修正することができる。従って、図面及び説明は、本質的に例証としてみなされるべきであり、限定するものではない。
［参照による援用］
[00190]本明細書に記載される全ての公報、特許及び特許出願は、各公報、特許及び特許出願が参照により援用されたことが具体的且つ個別に示されている場合、同程度参照により援用される。参照により援用される刊行物及び特許又は特許出願が明細書に含まれる開示と矛盾する範囲で、明細書は、そのような矛盾する資料に優先し、且つ／又は優先することを意図している。
[00191]本発明の新規特性を添付の特許請求の範囲に具体的に記載する。本発明の特徴及び利点のより良い理解は、本発明の原理が利用される例示的な実施形態を説明する以下の詳細な説明及び添付の図面（本明細書では、「図（ｆｉｇｕｒｅ）」及び「図（ＦＩＧ．）」とも呼ばれる）を参照することによって得られる。
[00192]
実施例９．２のオリゴ糖調製物の１Ｈ，１３Ｃ－ＨＳＱＣ ＮＭＲスペクトルの一部を示す。 [00193] アンヒドロサブユニットの存在を示す実施例９．７からのオリゴ糖調製物のＭＡＬＤＩ－ＭＳスペクトルを示す。 [00194] 実施例９のオリゴ糖から単離されたアンヒドロ－ＤＰ１画分の１Ｄ １Ｈプロトン ＮＭＲスペクトルを示す。 [00195] 実施例９のオリゴ糖から単離されたアンヒドロ－ＤＰ１画分の１Ｄ ＡＰＴ １３Ｃ－ＮＭＲスペクトルを示す。 [00196] 誘導体化後の実施例２．９のオリゴ糖調製物のＤＰ２及びアンヒドロ－ＤＰ２成分を示すＧＣ－ＭＳクロマトグラム（ＴＩＣ及びＸＩＣ（ｍ／ｚ２２９）プロット）を示す。 [00197] カラメル化アンヒドロサブユニットを有するオリゴ糖調製の１Ｈ，１３Ｃ－ＨＳＱＣを示す。 [00198] 異なるレーザーエネルギーでの実施例９のオリゴ糖調製物を比較するＭＡＬＤＩ－ＭＳスペクトルの一部を示す。 [00199] 水中のオリゴ糖調製物の１～８０μｇ／ｍＬの濃度でのアンヒドロＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 [00199] 図８ＡのＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出から得られる線形検量線を示す。 [00200] 様々な対照及び処理された食餌組成物のアンヒドロ－ＤＰ２含有量の定量化を示す。 様々な対照及び処理された食餌組成物のアンヒドロ－ＤＰ２含有量の定量化を示す。 [00201] アンヒドロサブユニット含有グルコ－オリゴ糖サンプルの２Ｄ－１Ｈ ＪＲＥＳ ＮＭＲスペクトルを示す。 [00202] 結合分布に使用される関連する共鳴及び割り当てによるアンヒドロサブユニット含有グルコオリゴ糖サンプルの代表的な１Ｈ，１３Ｃ－ＨＳＱＣ ＮＭＲスペクトルである。 [00203] ３つのアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の１Ｈ ＤＯＳＹスペクトルのオーバーレイを示す。 [00204] １，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコース（ＤＰ１－１８）、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－セロビオース（ＤＰ２－１８）及びアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖サンプルの比較を示す。 [00205] 選択された多重反応モニタリング（ＭＲＭ）におけるアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖（上部）及び消化されたアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖（下部）の質量クロマトグラムを示す。 [00206] 実施例９のオリゴ糖の相対的存在量対重合度（ＤＰ）のグラフを示す。グラフは、オリゴ糖調製物が単調に減少するＤＰ分布を有することを示す。 [00207] 実施例９のオリゴ糖の相対的存在量対重合度のグラフを示す。グラフは、オリゴ糖調製物が非単調に減少するＤＰ分布を有することを示す。 [00208] 健康な胃腸バリア及び漏出性胃腸バリアのグラフ描写を示す。 [00209] 健康な腸バリアの完全性の評価に使用される装置のグラフ描写を示す。 [00210] 摂取された病原体を伴う及び伴わない顆粒球を示すフローサイトグラムである。 [00211] 発現が少なくとも１．５倍増加した、選択された遺伝子についての、パイエル板組織における免疫及び炎症性サイトカイン及びケモカイン発現の倍数変化を示すグラフである。 [00212] ラムノリピド頂端ストレッサーに起因する破壊された腸バリア機能に対するオリゴ糖調製物の直接又は間接的な評価のためのチャンバを示す。 [00213] 対照食餌（白棒）と比較した、５００ｐｐｍの実施例９．３のオリゴ糖を含む食餌（黒棒）を給餌された鳥におけるＩＬ１Ｂ、ＩＬ４、ＩＬ１０及びＳＬＣ５Ａ１０の発現の倍数変化を示す棒グラフである。データは、実施例９．３のオリゴ糖を給餌された鳥についての、免疫、抗炎症応答及び栄養吸収に関連した遺伝子発現の増加を示す。 [00214] 表２６に列挙した処理グループＡ－ＢのＳＬＣ３４Ａ２の相対遺伝子発現を示す棒グラフである。データは、ＳＬＣ３４Ａ２遺伝子発現解析の増加により示されるように、実施例９．２及び９．３のオリゴ糖が、亜リン酸の回腸吸収の改善をもたらすことを実証する。 [00215] 処理グループＢ及び処理グループＤ（表２６に定義されるグループ）の鳥からの回腸組織の顕微鏡画像である。回腸組織学は、実施例９．２のオリゴ糖を含む食餌を給餌されたブロイラーにおいて、有意に少ない炎症損傷及び絨毛の長さの改善を明らかにする。 [00216] 処理グループＡ、Ｂ及びＤ（表２６に定義される）における杯細胞のパーセンテージを示す棒グラフである。データは、オリゴ糖が、炎症性チャレンジに供されたブロイラー（グループＢ）の杯細胞数を増加させることを示す。 [00217] 処理グループＡ、Ｂ、Ｃ及びＤ（表２６に定義される）の鳥からのリンパ球のパーセンテージを示す棒グラフである。データは、実施例９の選択されたオリゴ糖で処理されたブロイラー鶏が、実施例９の選択されたオリゴ糖で処理されたブロイラー鶏が、急性炎症性チャレンジに供された場合、総リンパ球のパーセンテージとして測定して、Ｔ－ヘルパー細胞の増加を促進したことを示す。 [00218] 実施例９．３のオリゴ糖を含む食餌を給餌されたブロイラー鶏からの肝臓組織の顕微鏡画像（健康な肝臓組織（左）及び炎症性損傷を示す組織（右））である。 [00218] 処理グループＡ、Ｂ又はＣ（表２６に定義される）における給餌されたブロイラーからの肝臓サンプルの組織学的損傷スコアリングの棒グラフを示す。データは、処理グループＣ（実施例９．３のオリゴ糖を含む飼料）が肝臓損傷の減少を提供することを示す。 [00218] 処理グループＡ、Ｂ及びＣ（表２６に定義される）におけるブロイラー鶏のＡＰＧレベルを示す。データは、炎症性チャレンジに供された場合の、急性相肝タンパク質ＡＧＰの減少を示す。 [00219] ２１日目の処理グループＡ、Ｂ及びＤにおけるブロイラー鶏からの血液サンプル中のＩｇＡレベルを示す棒グラフである。データは、処理グループＤのブロイラー鶏が、２１日目に加速された免疫応答を示したことを示す。 [00219] ２８日目の処理グループＡ、Ｂ及びＤにおけるブロイラー鶏からの血液サンプル中のＩｇＡレベルを示す棒グラフである。データは、ブロイラー鶏が１４日目に急性炎症チャレンジに供された場合、対照グループＡのベースラインに向けてより速い回復（２８日目）を示したことを示す。 [00220] ２１日目の処理グループＡ、Ｂ及びＤにおけるブロイラー鶏からの血液サンプル中のジアミンオキシダーゼレベルを示す棒グラフである。データは、ブロイラー鶏が１４日目に急性炎症チャレンジに供された場合、オリゴ糖を給餌しなかったトリよりも、対照グループＡのベースラインに向けてより速い回復を示したことを示す。 [00220] ２８日目の処理グループＡ、Ｂ及びＤにおけるブロイラー鶏からの血液サンプル中のレベルを示す棒グラフである。データは、ブロイラー鶏が１４日目に急性炎症チャレンジに供された場合、オリゴ糖を給餌しなかったトリよりも、対照グループＡのベースラインに向けてより速い回復を示したことを示す。 [00221] ２つのＤＰ１及び１つのＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示す。 [00222] アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖（セロトリオサン）を示す。 [00223] アンヒドロサブユニットの存在を示す実施例２からのオリゴ糖調製物のＭＡＬＤＩ－ＭＳスペクトルを示す。 [00223] アンヒドロサブユニットの存在を示す実施例２からのオリゴ糖調製物のＭＡＬＤＩ－ＭＳスペクトルを示す。 [00224] 実施例１のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２、アンヒドロＤＰ１及びＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 [00224] 実施例１のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２、アンヒドロＤＰ１及びＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 [00224] 実施例１のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２、アンヒドロＤＰ１及びＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 [00225] 実施例３のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２、アンヒドロＤＰ１及びＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 [00225] 実施例３のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２、アンヒドロＤＰ１及びＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 [00225] 実施例３のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２、アンヒドロＤＰ１及びＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 [00226] 実施例４のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２、アンヒドロＤＰ１及びＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 [00226] 実施例４のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２、アンヒドロＤＰ１及びＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 [00226] 実施例４のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２、アンヒドロＤＰ１及びＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 [00227] 実施例７のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２、アンヒドロＤＰ１及びＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 [00227] 実施例７のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２、アンヒドロＤＰ１及びＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 [00227] 実施例７のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２、アンヒドロＤＰ１及びＤＰ２種のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ検出を示す。 [00228] 実施例１のオリゴ糖調製物のＤＰ１、アンヒドロＤＰ１、ＤＰ２及びアンヒドロＤＰ２画分のＧＣ－ＭＳスペクトル検出を示す。 [00228] 図３７Ａに示されたＤＰ２及びアンヒドロＤＰ２画分の拡大を示す。 [00229] 実施例３のオリゴ糖調製物のＤＰ１、アンヒドロＤＰ１、ＤＰ２及びアンヒドロＤＰ２画分のＧＣ－ＭＳスペクトル検出を示す。 [00229] 図３８Ａに示されたＤＰ２及びアンヒドロＤＰ２画分の拡大を示す。 [00230] 実施例４のオリゴ糖調製物のＤＰ１、アンヒドロＤＰ１、ＤＰ２及びアンヒドロＤＰ２画分のＧＣ－ＭＳスペクトル検出を示す。 [00230] 図３９Ａに示されたＤＰ２及びアンヒドロＤＰ２画分の拡大を示す。 [00231] 実施例７のオリゴ糖調製物のＤＰ１、アンヒドロＤＰ１、ＤＰ２及びアンヒドロＤＰ２画分のＧＣ－ＭＳスペクトル検出を示す。 [00231] 図４０Ａに示されたＤＰ２及びアンヒドロＤＰ２画分の拡大を示す。 [00232] 実施例２によるオリゴ糖調製物と比較した、オリゴ糖調製物におけるＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の含有量に対する反応時間、含水量及び反応時間の影響を示す。 [00233] １，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノース及び１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースのＮＭＲの割り当てを示す。 [00234] 異なるレーザーエネルギーでの実施例９からのオリゴ糖調製物を比較するＭＡＬＤＩ－ＭＳスペクトルを示す。
［詳細な説明］
[00235]以下の説明及び実施例は、本開示の実施形態を詳細に説明する。本開示は、本明細書に記載される特定の実施形態に限定されず、それ自体が変化し得ることを理解すべきである。当業者は、本開示の多くの実施形態及び修正形態があり、それらがその範囲内に含まれることを理解するであろう。
[00236]全ての用語は、当業者によって理解されるように理解されることが意図される。特段の記載がない限り、本明細書で用いられる全ての科学技術用語は、本開示が属する技術分野における当業者が共通に解釈するのと同じ意味を有する。
[00237]本明細書で使用されるセクションの見出しは、構成上の目的に過ぎず、記載される主題を限定するものと解釈されるべきではない。
[00238]本開示の様々な特徴は、単一の実施形態に関連しても記載され得るが、その特徴は、別個に又は任意の好適な組み合わせで提供され得る。反対に、本開示は、明確にするために別個の実施形態に関連して本明細書に記載され得るが、本開示は、単一の実施形態でも実施され得る。
[00239]以下の定義は、当技術分野の定義を補足するものであり、本出願に向けられており、関連する又は関連しない場合、例えば、同一所有者の特許又は出願に帰属するものではない。本明細書に記載されているものと同様又は同等の任意の方法及び材料を、本開示の試験を実施するために使用できるが、好ましい材料及び方法を本明細書に記載する。従って、本明細書で使用される用語は、単に特定の実施形態を説明することを目的とし、限定することを意図しない。
［Ｉ．定義］
[00240]本明細書で使用される用語は、単に特定の場合を説明することを目的とし、限定することを意図しない。本明細書で使用する場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その」は、文脈がそれ以外であることを明らかに示さない限り、同様に複数形を含むものとする。更に、用語「包含している」、「包含する」、「有している」、「有する」、「備える」又はこれらの変形は、詳細な説明及び／又は特許請求の範囲のいずれかで使用され、このような用語は、用語「含む」と同様の方法で包括的であることが意図される。
[00241]「含む」、「含まれる」、「含んでいる」などの用語は、米国特許法においてそれに起因する意味を有することが理解され；即ち、それらは、「包含する」、「包含される」、「包含している」などを意味し、包括的又は開放形式であることが意図されており、追加の、引用されていない要素又は方法のステップを除外するものではなく；「から本質的になっている」及び「から本質的になる」などの用語は、米国特許法においてそれらに帰する意味を有し；即ち、それらは、明示的に列挙されていない要素を可能にするが、先行技術に見られる要素又は本発明の基本的若しくは新規の特徴に影響を与える要素を除外する。
[00242]本明細書の「Ａ及び／又はＢ」などの句で使用される「及び／又は」という用語は、Ａ及びＢの両方；Ａ又はＢ；Ａ（単独）；並びにＢ（単独）を含むことを意図している。同様に、「Ａ、Ｂ及び／又はＣ」などの句で使用される「及び／又は」という用語は、以下の実施形態：Ａ、Ｂ及びＣ；Ａ、Ｂ又はＣ；Ａ又はＢ；Ａ又はＣ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＢ；Ａ及びＣ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；並びにＣ（単独）の各々を包含することを意図している。
[00243]分子量などの物理的特性又は化学式などの化学的特性について本明細書で範囲が使用される場合、範囲の全ての組み合わせ及び部分的組み合わせ並びにその中の特定の実施形態が含まれることが意図される。数値又は数値範囲を指す場合の「約」という用語は、参照される数値又は数値範囲が実験的変動内（又は統計的実験誤差内）の近似値であることを意味し、従って、場合により、数値又は数値範囲は、記載されている数値又数値範囲の１％～１５％で変動する。いくつかの実施形態では、用語「約」は、所与の値又は範囲の１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％又は０．０５％以内を意味する。
[00244]本明細書で使用する場合、「投与」は、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、液体又は動物飼料組成物を、動物が、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、液体又は動物飼料組成物を自由に摂取できるように、動物に提供することを含む。このような実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物又は動物飼料組成物の一部を摂取する。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、液体又は動物飼料組成物は、動物が、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、液体又は動物飼料組成物を自由に摂取できるように、前記動物に提供される。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、液体又は動物飼料組成物は、処方された食餌として前記動物に投与される。いくつかの実施形態では合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、液体又は動物飼料組成物は、手動給餌、例えば、経口注射器給餌、経管栄養などを介して前記動物に投与される。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、液体又は動物飼料組成物は、前記動物に経口的に、例えば、自由に又は手動で投与される。いくつかの実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、液体又は動物飼料組成物の一部を、少なくとも７日間、１４日間、２１日間、３０日間、４５日間、６０日間、７５日間、９０日間又は１２０日間、２４時間ごと又は１日おきに２４時間ごとに摂取する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は水又は別の液体に溶解することができ、動物は液体を飲むことによってオリゴ糖調製物の一部を摂取する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖は、飲料水を介して動物に提供される。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物、栄養組成物、液体又は動物飼料組成物は、自由に摂取される。
[00245]本明細書で使用する場合、飼料要求率（ＦＣＲ）は、飼料投入量（例えば、動物により摂取されるもの）と畜産生産量との比を指し、畜産生産物は、目的の畜産物である。例えば、乳畜に関する畜産生産物が乳である一方で、肉のために飼育された動物に関する畜産生産物は体質量である。
[00246]本明細書で使用する場合、「飼料効率」は、飼料の飼料投入量（例えば、動物によって摂取されるもの）に対する畜産生産量の比率を指し、畜産生産物は、目的の畜産物である。
[00247]本明細書で使用する場合、用語「アンヒドロサブユニット」は、単糖（又は単糖サブユニット）又は糖カラメル化生成物の熱脱水生成物を指す。例えば、「アンヒドロサブユニット」は、アンヒドロ－グルコースなどのアンヒドロ－単糖であり得る。別の例として、「アンヒドロサブユニット」は、グリコシド結合を介して１つ以上の通常の又はアンヒドロ－単糖サブユニットと結合することができる。
[00248]用語「オリゴ糖」は、単糖又はグリコシド結合によって結合した２つ以上の単糖サブユニットを含有する化合物を指す。そのようなものであるから、オリゴ糖には、通常の単糖；アンヒドロ－単糖；又は２つ以上の単糖サブユニットを含有する化合物が含まれ、ここで、１つ以上の単糖サブユニットは、任意選択的に、独立して、１つ以上のアンヒドロサブユニットに置換されている。オリゴ糖は、官能化することができる。本明細書で使用する場合、オリゴ糖という用語には、オリゴ糖の全ての種を包含し、ここで、オリゴ糖中の単糖サブユニットの各々は、独立して及び任意選択的に、その対応するアンヒドロ－単糖サブユニットで官能化及び／又は置換されている。
[00249]本明細書で使用する場合、用語「オリゴ糖調製物」は、少なくとも１つのオリゴ糖を含む調製物を指す。
[00250]本明細書で使用する場合、用語「グルコ－オリゴ糖」は、グルコース又はグリコシド結合によって結合した２つ以上のグルコース単糖サブユニットを含有する化合物を指す。そのようなものであるから、グルコ－オリゴ糖には、グルコース；アンヒドロ－グルコース；又はグリコシド結合によって結合した２つ以上のグルコース単糖サブユニットを含有する化合物が含まれ、ここで、前記グルコース単糖サブユニットの１つ以上は、各々任意選択的に及び独立して、アンヒドロ－グルコースサブユニットで置換されている。
[00251]本明細書で使用する場合、用語「ガラクト－オリゴ糖」は、ガラクトース又はグリコシド結合によって結合した２つ以上のガラクトース単糖サブユニットを含有する化合物を指す。そのようなものであるから、ガラクト－オリゴ糖には、ガラクトース；アンヒドロ－ガラクトース；又はグリコシド結合によって結合した２つ以上のガラクトース単糖サブユニットを含有する化合物が含まれ、ここで、少なくとも１つの単糖サブユニットは、任意選択的に、アンヒドロ－ガラクトースサブユニットで置換されている。
[00252]本明細書で使用する場合、用語「グルコ－ガラクト－オリゴ糖調製物」は、グルコース及びガラクトースの完全又は不完全な糖縮合反応から生成される組成物を指す。従って、いくつかの実施形態では、グルコ－ガラクトース－オリゴ糖調製物は、グルコ－オリゴ糖、ガラクト－オリゴ糖、グリコシド結合によって結合した１つ以上のグルコース単糖サブユニット及び１つ以上のガラクトース単糖サブユニットを含有する化合物又はこれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、グルコ－ガラクトース－オリゴ糖調製物は、グルコ－オリゴ糖並びにグリコシド結合によって結合した１つ以上のグルコース単糖サブユニット及び１つ以上のガラクトース単糖サブユニットを含有する化合物を含む。いくつかの実施形態では、グルコ－ガラクトース－オリゴ糖調製物は、ガラクト－オリゴ糖並びにグリコシド結合によって結合した１つ以上のグルコース単糖サブユニット及び１つ以上のガラクトース単糖サブユニットを含有する化合物を含む。いくつかの実施形態では、グルコ－ガラクトース－オリゴ糖調製物は、グリコシド結合によって結合した１つ以上のグルコース単糖サブユニット及び１つ以上のガラクトース単糖サブユニットを含有する化合物を含む。
[00253]本明細書で使用する場合、用語「単糖ユニット」及び「単糖サブユニット」は、同じ意味で用いられる。「単糖サブユニット」は、オリゴ糖の単糖モノマーを指す。重合度１を有するオリゴ糖について、オリゴ糖は、単糖サブユニット又は単糖と称され得る。重合度２以上を有するオリゴ糖について、その単糖サブユニットは、グリコシド結合を介して結合している。
[00254]本明細書で使用する場合、用語「通常の単糖」は、アンヒドロサブユニットを含有しない単糖を指す。用語「通常の二単糖」は、アンヒドロサブユニットを含有しない二糖を指す。従って、用語「通常のサブユニット」は、アンヒドロサブユニットではないサブユニットを指す。
[00255]用語「相対的存在量」又は「存在量」は、本明細書で使用する場合、種がどれほど一般的又はまれに存在するかを基準にして、種の豊富さを指す。例えば、相対的存在量で１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含むＤＰ１画分は、ＤＰ１オリゴ糖の１０％がアンヒドロ－単糖である、複数のＤＰ１オリゴ糖を指す。例えば、オリゴ糖の特定のＤＰ画分に関して、相対的存在量は、好適な分析機器、例えば、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ、ＧＣ－ＭＳ、ＨＰＬＣ－ＭＳ及びＭＡＬＤＩ－ＭＳなどの質量分析法及び液体クロマトグラフィーによって決定され得る。いくつかの実施形態では、相対的存在量は、対象の画分に対応するクロマトグラフ（例えば、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ、ＧＣ－ＭＳ及びＨＰＬＣ－ＭＳ）のピークの下の面積を積分することによって決定される。いくつかの実施形態では、相対的存在量は、ピーク強度によって決定される（例えば、ＭＡＬＤＩ－ＭＳ）。いくつかの実施形態では、相対的存在量は、液体クロマトグラフィーによる分離後の重量測定などの分析方法の組み合わせによって決定される。
[00256]本明細書で使用される場合、用語「アンヒドロＤＰｎオリゴ糖」、「アンヒドロＤＰｎ種」又は「ＤＰｎアンヒドロサブユニット有オリゴ糖」は、ｎの重合度を有し、１つ以上のアンヒドロサブユニットを含むオリゴ糖を指す。従って、アンヒドログルコースは、オリゴ糖を含有するＤＰ１アンヒドロサブユニットであり、セロトリオサン（ｃｅｌｌｏｔｒｉｏｓａｎ）は、オリゴ糖を含有するＤＰ３アンヒドロサブユニットである。
[00257]本明細書で使用する場合、単数形「１つの」、「及び」及び「その」には、文脈上特に明確に指示されない限り複数形の言及が含まれる。従って、例えば、「薬剤」という言及は、複数のそのような薬剤を含み、「オリゴ糖」という言及は、１つ以上のオリゴ糖（又は複数のオリゴ糖）及び当業者であれば公知であるその均等物を含む。
［ＩＩ．オリゴ糖調製物］
[00258]本明細書では、栄養組成物での使用に好適なオリゴ糖調製物が提供される。いくつかの実施形態では、前記オリゴ糖調製物は、１～ｎから選択される異なる重合度をそれぞれ有する少なくともｎ画分のオリゴ糖（ＤＰ１～ＤＰｎ画分）を含み、ここで、ｎは、２を超える整数である。いくつかの実施形態では、ｎは、３以上の整数である。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物における１～ｎ画分の各々は、質量分析法によって測定される相対的存在量で１％～９０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、各画分におけるオリゴ糖の相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。
[00259]いくつかの実施形態では、ｎは、３以上の整数である。いくつかの実施形態では、ｎは、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０又は５０などの１～１００の範囲内の整数である。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物における１～ｎ画分の各々は、独立して、質量分析法、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ又はＧＣ－ＭＳにより測定される相対的存在量で０．１％～９０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物における１～ｎ画分の各々は、独立して、約０．１％～約１５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物における１～ｎ画分の各々は、独立して、約０．５％～約１５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、ＤＰ１及びＤＰ２画分は、各々独立して、ＭＡＬＤＩ－ＭＳなどの質量分析法、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ又はＧＣ－ＭＳにより測定される相対的存在量で約０．１％～約１５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、ＤＰ１及びＤＰ２画分は、各々独立して、約０．５％～約１５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、ＤＰ１及びＤＰ２画分は、各々独立して、質量分析法、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ又はＧＣ－ＭＳにより測定される相対的存在量で約０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．８％、１％、２％又は３％から約８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％又は１５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、各画分におけるオリゴ糖の相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。
[00260]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、合成オリゴ糖調製物である。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、生物を必要としないプロセスによって生成される複数のオリゴ糖を指す。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、酵素を必要としないプロセスによって生成される複数のオリゴ糖を指す。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、化学的プロセスによって生成される複数のオリゴ糖を指す。特定の実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、糖の縮合によって生成される複数のオリゴ糖を指す。
［Ａ．オリゴ糖のプレバイオティクス有用性］
[00261]本明細書では、動物腸内ミクロビオームなどの微生物群集の複雑な機能調節を示すアンヒドロ－糖成分及び／又は糖脱水生成物成分を含むオリゴ糖調製物が開示される。オリゴ糖調製物は、ミクロフローラによる発酵性炭素の利用を調節し、代謝フラックスを有益な種に向ける有用性を提供し、従ってミクロビオームが媒介した健康又は栄養上の利益を提供する。
[00262]難消化性炭水化物は、微生物群集に発酵性炭素源を提供することにより、プレバイオティクスとして機能し得る。例えば、可溶性植物繊維が豊富な食餌は、腸内ミクロフローラに栄養を与える能力があることが確認されている。更に、ビフィズス菌プレバイオティクスはビフィズス菌（例えば、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属のメンバー）の増殖をサポートし、乳酸菌プレバイオティクスはラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）種の増殖をサポートする。
[00263]プレバイオティクス繊維は、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）などの有益な化学種に発酵され得る。プレバイオティクス繊維としては；レジスタントスターチ；セルロース；ラムノガラクタン、アラビノガラクタン、アラビナンなどのペクチン；アラビノキシラン、キシログルカン、グルコマンナン、ガラクトマンナンなどのヘミセルロース；トウモロコシ穂軸オリゴ糖などのキシラン；穀物ｂ－グルカン、酵母ｂ－グルカン、細菌ｂ－グルカンなどのｂ－グルカン；イヌリン及びレバンなどのポリフルクタン；及びアルギネートなどのガムが挙げられる。イヌリンは、一般的なビフィドジェニックプレバイオティクス繊維である。
[00264]他の場合、プレバイオティクスは、病原性細菌が生着する能力を妨げることによって作用し、従って、細胞表面受容体部位の競合的結合などの抗付着メカニズムを介して宿主生物に感染する。特定のガラクト－オリゴ糖は、エシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）種などの様々な腸内病原性生物の効果的な付着防止を提供する。
[00265]プレバイオティクスは典型的には、食餌に組み込むことによって宿主動物に提供され、その上でそれらは用量依存的な応答を示す（少なくとも飽和閾値まで）。例えば、イヌリンなどのビフィズス菌プレバイオティクスの高用量を提供すると、ビフィドバクテイルム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種の個体数が大幅に増加する傾向がある。高用量のイヌリンは、発酵によるＳＣＦＡのより高い生成に対応する。これは、プレバイオティクスが代謝炭素源を提供し、より多くの炭素がより多くの発酵生成物に変換されるためである。同様に、より高用量の付着防止プレバイオティクスを提供することにより、表面受容体部位に競合的に結合する可能性がもたらされる。
[00266]修飾されたモノマーサブユニットを含む特定の炭水化物種は、微生物系がプレバイオティクス源として他の方法で利用可能な他の炭水化物を利用する方法に影響を与える可能性がある。例えば、このような炭水化物種は、細菌のデンプン利用システム（ＳＵＳ）、即ち細胞表面認識、グリコシド切断及びデンプン代謝物の移入に関与するタンパク質を調節する修飾炭水化物種であり得る。
[00267]動物のミクロビオータを複雑に調節することができる炭水化物組成物は、動物のミクロビオームへの影響を介して動物の健康及び栄養を改善する飼料添加物としての有用性を有する。例えば、腸内ミクロフローラによるブチレート産生の調節は、健康な腸粘膜、バリア機能を促進し、且つ抗炎症効果を介して動物に健康上の利点を与える。プロピオン酸産生の調節は、糖生成の増加を介して動物の食餌から抽出される代謝エネルギーに影響を与える。関連する微生物群集には、例えば、家禽、ブタ、イヌ、ネコ、ウマの回腸、空腸及び盲腸並びに／若しくは糞便のミクロビオータ又は畜牛、ウシ、ヒツジなどの反芻動物のミクロビオータが含まれる。他の微生物群集にはスキンフローラ、鼻内ミクロフローラが含まれる。
[00268]更に、本明細書で開示されるオリゴ糖調製物は、それらは、アンヒドロ－サブユニットの存在により、完全な動物飼料などの複合栄養組成物中で選択的に分析及び定量化できるという点で有利である。オリゴ糖調製物などの飼料添加物の存在及び／又は濃度を評価することは商業的に有用である。このような評価は、品質管理の目的で実施され、添加物が基礎栄養組成物と均一にブレンドされて、意図された用量又は含有レベルで添加物を含む最終栄養組成物を提供するかどうかを決定し得る。
[00269]しかしながら、栄養組成物自体は、大量且つ多様な炭水化物構造体（例えば、デンプン、植物繊維及びペクチン）を含む。従って、少量のオリゴ糖ベースの飼料添加物を、栄養組成物のベースとして存在する他の炭水化物の広大な海から区別することは特に困難である。そのようなものであるから、本明細書に開示されるオリゴ糖調製物は、アンヒドロ－サブユニットを介して栄養組成物中の他の炭水化物源からそれ自体を区別する手段を提供する。
［Ｂ．重合度（ＤＰ）分布］
[00270]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、１～ｎから選択される異なる重合度をそれぞれ有する少なくともｎ画分のオリゴ糖（ＤＰ１～ＤＰｎ画分）を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、１～ｎから選択される異なる重合度をそれぞれ有するオリゴ糖のｎ画分（ＤＰ１～ＤＰｎ画分）を含む。例えば、いくつかの実施形態では、ＤＰ１画分は、１つ以上の単糖及び／又は１つ以上のアンヒドロ－単糖を含む。別の例として、いくつかの実施形態では、ＤＰ１画分は、グルコース、ガラクトース、フルクトース、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノース、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノース又はこれらの任意の組み合わせを含む。更に別の例として、いくつかの実施形態では、ＤＰ２画分は、１つ以上の通常の二糖及び１つ以上のアンヒドロサブユニット含有二糖を含む。いくつかの実施形態では、ＤＰ２画分は、ラクトースを含む。
[00271]いくつかの実施形態では、ｎは、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、少なくとも３８、少なくとも３９、少なくとも４０、少なくとも４１、少なくとも４２、少なくとも４３、少なくとも４４、少なくとも４５、少なくとも４６、少なくとも４７、少なくとも４８、少なくとも４９、少なくとも５０、少なくとも５１、少なくとも５２、少なくとも５３、少なくとも５４、少なくとも５５、少なくとも５６、少なくとも５７、少なくとも５８、少なくとも５９、少なくとも６０、少なくとも６１、少なくとも６２、少なくとも６３、少なくとも６４、少なくとも６５、少なくとも６６、少なくとも６７、少なくとも６８、少なくとも６９、少なくとも７０、少なくとも７１、少なくとも７２、少なくとも７３、少なくとも７４、少なくとも７５、少なくとも７６、少なくとも７７、少なくとも７８、少なくとも７９、少なくとも８０、少なくとも８１、少なくとも８２、少なくとも８３、少なくとも８４、少なくとも８５、少なくとも８６、少なくとも８７、少なくとも８８、少なくとも８９、少なくとも９０、少なくとも９１、少なくとも９２、少なくとも９３、少なくとも９４、少なくとも９５、少なくとも９６、少なくとも９７、少なくとも９８、少なくとも９９又は少なくとも１００である。いくつかの実施形態では、ｎは、約２、３、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９又は１００である。いくつかの実施形態では、ｎは、１０未満、１１未満、１２未満、１３未満、１４未満、１５未満、１６未満、１７未満、１８未満、１９未満、２０未満、２１未満、２２未満、２３未満、２４未満、２５未満、２６未満、２７未満、２８未満、２９未満、３０未満、３１未満、３２未満、３３未満、３４未満、３５未満、３６未満、３７未満、３８未満、３９未満、４０未満、４１未満、４２未満、４３未満、４４未満、４５未満、４６未満、４７未満、４８未満、４９未満、５０未満、５１未満、５２未満、５３未満、５４未満、５５未満、５６未満、５７未満、５８未満、５９未満、６０未満、６１未満、６２未満、６３未満、６４未満、６５未満、６６未満、６７未満、６８未満、６９未満、７０未満、７１未満、７２未満、７３未満、７４未満、７５未満、７６未満、７７未満、７８未満、７９未満、８０未満、８１未満、８２未満、８３未満、８４未満、８５未満、８６未満、８７未満、８８未満、８９未満、９０未満、９１未満、９２未満、９３未満、９４未満、９５未満、９６未満、９７未満、９８未満、９９未満又は１００未満である。いくつかの実施形態では、ｎは、２～１００、５～９０、１０～９０、１０～８０、１０～７０、１０～６０、１０～５０、１０～４０、１０～３０、１５～６０、１５～５０、１５～４５、１５～４０、１５～３５又は１５～３０である。
[00272]オリゴ糖調製物の重合度の分布は、末端基法、浸透圧（浸透圧測定）、超遠心分離、粘度測定、光散乱法、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、フィールドフローフラクショネーション（ＦＦＦ）、非対称フローフィールドフローフラクショネーション（Ａ４Ｆ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）及び質量分析（ＭＳ）が挙げられるがこれらに限定されない任意の好適な分析方法及び機器によって決定することができる。例えば、重合度の分布は、マトリックス支援レーザー脱離イオン化（ＭＡＬＤＩ）－ＭＳ、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）－ＭＳ又はガスクロマトグラフィー（ＧＣ）－ＭＳなどの質量分析によって決定及び／又は検出され得る。別の例として、重合度の分布は、ゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）などのＳＥＣによって決定及び／又は検出され得る。更に別の例として、重合度の分布は、ＨＰＬＣ、ＦＦＦ又はＡ４Ｆによって決定及び／又は検出され得る。いくつかの実施形態では、重合度の分布は、ＭＡＬＤＩ－ＭＳによって決定及び／又は検出される。いくつかの実施形態では、重合度の分布は、ＧＣ－ＭＳ又はＬＣ－ＭＳによって決定及び／又は検出される。いくつかの実施形態では、重合度の分布は、ＳＥＣによって決定及び／又は検出される。いくつかの実施形態では、重合度の分布は、ＨＰＬＣによって決定及び／又は検出される。いくつかの実施形態では、重合度の分布は、ＭＡＬＤＩ－ＭＳ及びＳＥＣなどの分析機器の組み合わせによって決定及び／又は検出される。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の重合度は、その分子量及び分子量分布に基づいて決定することができる。例えば、図２は、様々な画分の重合度及び観察された全ての画分におけるアンヒドロ－サブユニット含有オリゴ糖（－１８ｇ／モルＭＷオフセットピーク）の存在を示すＭＡＬＤＩ－ＭＳスペクトルを示す。
[00273]いくつかの実施形態では、画分の大部分におけるオリゴ糖の相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の６未満、５未満、４未満又は２未満の画分のオリゴ糖の相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少しない。
[00274]いくつかの実施形態では、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５又は少なくとも５０のＤＰ画分におけるオリゴ糖の相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。いくつかの実施形態では、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５又は少なくとも５０の連続したＤＰ画分におけるオリゴ糖の相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。いくつかの実施形態では、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０又は少なくとも３０のＤＰ画分におけるオリゴ糖の相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。いくつかの実施形態では、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０又は少なくとも３０の連続したＤＰ画分におけるオリゴ糖の相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。
[00275]いくつかの実施形態では、ｎ画分の各々におけるオリゴ糖の相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。例えば、図１５は、ｎ画分の各々におけるオリゴ糖の相対的存在量がそのＤＰとともに単調に減少するＤＰ分布の例を提供する。例えば、いくつかの実施形態では、ＤＰ３画分におけるオリゴ糖の相対的存在量のみは、その重合度とともに単調に減少しない、即ちＤＰ３画分におけるオリゴ糖の相対的存在量は、ＤＰ４画分におけるオリゴ糖の相対的存在量よりも低い。いくつかの実施形態では、ＤＰ２画分におけるオリゴ糖の相対的存在量は、ＤＰ３画分におけるオリゴ糖の相対的存在量よりも低い。例えば、図１６は、ＤＰ２画分におけるオリゴ糖の相対的存在量がその重合度とともに単調に減少しない重合度分布を示す。
[00276]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、重量又は相対的存在量で約１％～約５０％、約１％～約４０％、約１％～約３５％、約１％～約３０％、約１％～約２５％、約１％～約２０％、約１％～約１５％、約５％～約５０％、約５％～約４０％、約５％～約３５％、約５％～約３０％、約５％～約２５％、約５％～約２０％、約５％～約１５％、約１０％～約５０％、約１０％～約４０％、約１０％～約３５％、約１０％～約３０％、約１０％～約２５％、約１０％～約２０％又は約１０％～約１５％のＤＰ１画分含有量を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、重量又は相対的存在量で約１０％～約３５％、約１０％～約２０％又は約１０％～約１５％のＤＰ１画分含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＤＰ１画分の含有量は、ＭＡＬＤＩ－ＭＳによって決定される。いくつかの実施形態では、ＤＰ１画分の含有量は、ＨＰＬＣによって決定される。いくつかの実施形態では、ＤＰ１画分の含有量は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ又はＧＣ－ＭＳによって決定される。
[00277]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、重量又は相対的存在量で約１％～約３５％、約１％～約３０％、約１％～約２５％、約１％～約２０％、約１％～約１５％、約１％～約１０％、約５％～約３０％、約５％～約２５％、約５％～約２０％、約５％～約１５％又は約５％～約１０％のＤＰ２画分含有量を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、重量又は相対的存在量で約５％～約２５％、約５％～約２０％、約５％～約１５％又は約５％～約１０％のＤＰ２画分含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＤＰ２画分の含有量は、ＭＡＬＤＩ－ＭＳによって決定される。いくつかの実施形態では、ＤＰ２画分の含有量は、ＨＰＬＣによって決定される。いくつかの実施形態では、ＤＰ２画分の含有量は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ又はＧＣ－ＭＳによって決定される。
[00278]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、重量又は相対的存在量で約１％～約３０％、約１％～約２５％、約１％～約２０％、約１％～約１５％、約１％～約１０％、約５％～約３０％、約５％～約２５％、約５％～約２０％、約５％～約１５％又は約５％～約１０％のＤＰ３画分含有量を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、重量又は相対的存在量で約１％～約１５％、約１％～約１０％、約５％～約１５％又は約５％～約１０％のＤＰ３画分含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＤＰ３画分の含有量は、ＭＡＬＤＩ－ＭＳによって決定される。いくつかの実施形態では、ＤＰ３画分の含有量は、ＨＰＬＣによって決定される。いくつかの実施形態では、ＤＰ３画分の含有量は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ又はＧＣ－ＭＳによって決定される。
[00279]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、重量又は相対的存在量で約０．１％～約２０％、約０．１％～約１５％、約０．１％～約１０％、約０．１％～約５％、約１％～約２０％、約１％～約１５％、約１％～約１０％又は約１％～約５％のＤＰ４画分含有量を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、重量又は相対的存在量で約１％～約１５％、約１％～約１０％又は約１％～約５％のＤＰ４画分含有量を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、重量又は相対的存在量で約０．１％～約１５％、約０．１％～約１０％、約０．１％～約５％、約１％～約１５％、約１％～約１０％又は約１％～約５％のＤＰ５画分含有量を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、重量又は相対的存在量で約１％～約１０％又は約１％～約５％のＤＰ５画分含有量を有する。いくつかの実施形態では、ＤＰ４画分及び／又はＤＰ５画分の含有量は、ＭＡＬＤＩ－ＭＳによって決定される。いくつかの実施形態では、ＤＰ４画分及び／又はＤＰ５画分の含有量は、ＨＰＬＣによって決定される。いくつかの実施形態では、ＤＰ４画分及び／又はＤＰ５画分の含有量は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ又はＧＣ－ＭＳによって決定される。
[00280]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物におけるＤＰ２画分のＤＰ１画分との比は、これらの重量又は相対的存在量で約０．０１～約０．８、約０．０２～約０．７、約０．０２～約０．６、約０．０２～約０．５、約０．０２～約０．４、約０．０２～約０．３、約０．０２～約０．２、約０．１～約０．６、約０．１～約０．５、約０．１～約０．４又は約０．１～約０．３である。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物におけるＤＰ２画分のＤＰ１画分との比は、これらの重量又は相対的存在量で約０．０２～約０．４である。
[00281]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物におけるＤＰ３画分のＤＰ２画分との比は、これらの重量又は相対的存在量で約０．０１～約０．７、約０．０１～約０．６、約０．０１～約０．５、約０．０１～約０．４、約０．０１～約０．３又は約０．０１～約０．２である。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物におけるＤＰ３画分のＤＰ２画分との比は、これらの重量又は相対的存在量で約０．０１～約０．３である。
[00282]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物におけるＤＰ１及びＤＰ２画分の集合体含有量は、重量又は相対的存在量で７０％未満、６０％未満、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満又は１０％未満である。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物におけるＤＰ１及びＤＰ２画分の集合体含有量は、重量又は相対的存在量で５０％未満、３０％未満又は１０％未満である。
[00283]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、２～１０の範囲内の平均ＤＰ値を有する。いくつかの実施形態において、オリゴ糖調製物は、約２～約８、約２～約５又は約２～約４の平均ＤＰ値を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、約３．５の平均ＤＰ値を有する。平均ＤＰ値は、ＳＥＣ又は元素分析によって決定することができる。
［Ｃ．アンヒドロサブユニットレベル］
[00284]いくつかの実施形態では、オリゴ糖のｎ画分の各々は、独立して、アンヒドロサブユニットレベルを含む。例えば、いくつかの実施形態では、ＤＰ１画分は、相対的存在量で１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含み、ＤＰ２画分は、相対的存在量で１５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。別の例について、いくつかの実施形態では、ＤＰ１、ＤＰ２及びＤＰ３画分は、それぞれ相対的存在量でそれぞれ５％、１０％及び２％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。他の実施形態では、オリゴ糖の２つ以上の画分は、同じレベルのアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＤＰ１及びＤＰ３画分は、それぞれ相対的存在量で約５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[00285]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物における１～ｎ画分の各々は、独立して、質量分析法、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ又はＧＣ－ＭＳにより測定される相対的存在量で約０．１％～１５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物における１～ｎ画分の各々は、独立して、質量分析法、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ又はＧＣ－ＭＳにより測定される相対的存在量で約０．５％～１５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳは、ＤＰ１、ＤＰ２及び／又はＤＰ３画分におけるオリゴ糖の相対的存在量を決定するために使用される。いくつかの実施形態では、ＧＣ－ＭＳは、ＤＰ１、ＤＰ２及び／又はＤＰ３画分におけるオリゴ糖の相対的存在量を決定するために使用される。いくつかの実施形態では、ＭＡＬＤＩ－ＭＳは、ＤＰ４画分以上のＤＰ画分におけるオリゴ糖の相対的存在量を決定するために使用される。いくつかの実施形態では、特定の画分の相対的存在量は、その画分に対応するものとして指定されているＬＣ－ＭＳ／ＭＳクロマトグラムのピークの下の面積を積分することによって決定される。いくつかの実施形態では、特定の画分の相対的存在量は、その画分に対応するものとして指定されているＧＣ－ＭＳクロマトグラムのピークの下の面積を積分することによって決定される。
[00286]アンヒドロサブユニットのレベルは、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、質量分析法、ＨＰＬＣ、ＦＦＦ、Ａ４Ｆ又はこれらの任意の組み合わせなどの任意の好適な分析方法によって決定することができる。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニットのレベルは、少なくとも部分的に、ＭＡＬＤＩ－ＭＳなどの質量分析法によって決定される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニットのレベルは、少なくとも部分的に、ＮＭＲによって決定される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖のレベルは、少なくとも部分的に、ＨＰＬＣによって決定される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖のレベルは、図２の－１８ｇ／モルＭＷオフセットピークによって示されるように、ＭＡＬＤＩ－ＭＳによって決定される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニットの種の存在及び型は、実施例１１、図３及び図４で示されるように、ＮＭＲによって決定及び／又は検出され得る。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の相対的存在量は、ＭＡＬＤＩ－ＭＳによって決定される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の相対的存在量は、図３３Ａ～３３Ｃ、３４Ａ～３４Ｃ、３５Ａ～３５Ｃ及び３６Ａ～３６Ｃで示されるように、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって決定される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の相対的存在量は、図３７Ａ～３７Ｂ、３８Ａ～３８Ｂ、３９Ａ～３９Ｂ及び４０Ａ～４０Ｂで示されるように、ＧＣ－ＭＳによって決定される。
[00287]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物の少なくとも１つの画分は、相対的存在量で８０％未満、７０％未満、６０％未満、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満又は１％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物の少なくとも１つの画分は、相対的存在量で１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満又は２％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。他の実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物の少なくとも１つの画分は、相対的存在量で０．５％超、０．８％超、１％超、２％超、３％超、４％超、５％超、６％超、７％超、８％超、９％超、１０％超、１１％超、１２％超、１３％超、１４％超、１５％超、１６％超、１７％超、１８％超、１９％超、２０％超、３０％超、４０％超、５０％超、６０％超、７０％超又は８０％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。他の実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物の少なくとも１つの画分は、相対的存在量で２０％超、２１％超、２２％超、２３％超、２４％超、２５％超、２６％超、２７％超、２８％超、２９％超又は３０％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の少なくとも１つの画分（ＤＰ１、ＤＰ２及び／又はＤＰ３などの）は、相対的存在量で約０．１％、約０．２％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％又は約３０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の少なくとも１つの画分（ＤＰ１、ＤＰ２及び／又はＤＰ３などの）は、相対的存在量で約０．１％、約０．２％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％又は約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の少なくとも１つの画分（ＤＰ１、ＤＰ２及び／又はＤＰ３などの）は、相対的存在量で約０．１％～約９０％、約０．５％～約９０％、約０．５％～約８０％、約０．５％～約７０％、約０．５％～約６０％、約０．５％～約５０％、約０．５％～約４０％、約０．５％～約３０％、約０．５％～約２０％、約０．５％～約１０％、約０．５％～約９％、約０．５％～約８％、約０．５％～約７％、約０．５％～約６％、約０．５％～約５％、約０．５％～約４％、約０．５％～約３％、約０．５％～約２％、約１％～約１０％、約２％～約９％、約２％～約８％、約２％～約７％、約２％～約６％、約２％～約５％、約２％～約４％、約２％～約３％又は約５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物のＤＰ１及びＤＰ２画分は、各々独立して、質量分析法、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ又はＧＣ－ＭＳにより測定される相対的存在量で約０．１％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、１．１％、１．２％、１．３％、１．４％又は１．５％から、約８％、９％、１０％、１１％、１２％又は１５％までの範囲内のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、ＤＰ１及びＤＰ２画分は、各々独立して、質量分析法、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ又はＧＣ－ＭＳにより測定される相対的存在量で約０．５％～約１５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[00288]いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物の各画分は、相対的存在量で８０％未満、７０％未満、６０％未満、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満又は２％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物の各画分は、相対的存在量で１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％又は２％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。他の実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物の各画分は、相対的存在量で２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％又は８０％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。他の実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物の各画分は、相対的存在量で２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％又は３０％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物の各画分は、相対的存在量で約０．１％、約０．２％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％又は約３０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物の各画分は、相対的存在量で約０．１％、約０．２％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％又は約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物の各画分は、相対的存在量で約０．１％～約９０％、約０．１％～約１５％、約０．５％～約９０％、約０．５％～約８０％、約０．５％～約７０％、約０．５％～約６０％、約０．５％～約５０％、約０．５％～約４０％、約０．５％～約３０％、約０．５％～約２０％、約０．５％～約１０％、約０．５％～約９％、約０．５％～約８％、約０．５％～約７％、約０．５％～約６％、約０．５％～約５％、約０．５％～約４％、約０．５％～約３％、約０．５％～約２％、約２％～約９％、約２％～約８％、約２％～約７％、約２％～約６％、約２％～約５％、約２％～約４％、約２％～約３％又は約５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[00289]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、相対的存在量で８０％未満、７０％未満、６０％未満、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満又は１％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、相対的存在量で１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％又は２％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。他の実施形態では、オリゴ糖調製物は、相対的存在量で０．５％超、０．８％超、１％超、２％超、３％超、４％超、５％超、６％超、７％超、８％超、９％超、１０％超、１１％超、１２％超、１３％超、１４％超、１５％超、１６％超、１７％超、１８％超、１９％超、２０％超、３０％超、４０％超、５０％超、６０％超、７０％超又は８０％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。他の実施形態では、オリゴ糖調製物は、相対的存在量で２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％又は３０％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、相対的存在量で約０．１％、約０．２％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％又は約３０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、相対的存在量で約０．１％、約０．２％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％又は約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、相対的存在量で約０．１％～約９０％、約０．１％～約１５％、約０．５％～約９０％、約０．５％～約８０％、約０．５％～約７０％、約０．５％～約６０％、約０．５％～約５０％、約０．５％～約４０％、約０．５％～約３０％、約０．５％～約２０％、約０．５％～約１０％、約０．５％～約９％、約０．５％～約８％、約０．５％～約７％、約０．５％～約６％、約０．５％～約５％、約０．５％～約４％、約０．５％～約３％、約０．５％～約２％、約２％～約９％、約２％～約８％、約２％～約７％、約２％～約６％、約２％～約５％、約２％～約４％、約２％～約３％又は約５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。
[00290]いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ１画分は、相対的存在量で３０％未満、２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満又は１％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ１画分は、相対的存在量で０．１％超、０．５％超、０．８％超、１％超、１．５％超、２％超、３％超、４％超、５％超、６％超、７％超、８％超、９％超、１０％超、１１％超、１２％超、１３％超、１４％超又は１５％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ１画分は、相対的存在量で約０．５％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％又は約２０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ１画分は、相対的存在量で約０．１％～約１５％、約０．１％～約２０％、約０．５％～約２０％、０．５％～約１０％、約０．５％～約１５％、約１％～約２０％、約１％～約１５％、約１％～約１０％、約２％～約１４％、約３％～約１３％、約４％～約１２％、約５％～約１１％、約５％～約１０％、約６％～約９％若しくは約７％～約８％又はそれらの間の任意の範囲のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ１画分は、相対的存在量で約０．５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の相対的存在量は、ＭＡＬＤＩ－ＭＳなどの質量分析法によって決定される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の相対的存在量は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって決定される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の相対的存在量は、ＧＣ－ＭＳによって決定される。
[00291]いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ２画分は、相対的存在量で３０％未満、２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満又は１％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ２画分は、相対的存在量で０．１％超、０．５％超、０．８％超、１％超、１．５％超、２％超、３％超、４％超、５％超、６％超、７％超、８％超、９％超、１０％超、１１％超、１２％超、１３％超、１４％超又は１５％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ２画分は、相対的存在量で約０．５％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％又は約２０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ２画分は、相対的存在量で約０．１％～約１５％、約０．１％～約２０％、約０．５％～約２０％、０．５％～約１０％、約０．５％～約１５％、約１％～約２０％、約１％～約１５％、約１％～約１０％、約２％～約１４％、約３％～約１３％、約４％～約１２％、約５％～約１１％、約５％～約１０％、約６％～約９％若しくは約７％～約８％又はそれらの間の任意の範囲のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ２画分は、相対的存在量で約５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の相対的存在量は、ＭＡＬＤＩ－ＭＳなどの質量分析法によって決定される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の相対的存在量は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって決定される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の相対的存在量は、ＧＣ－ＭＳによって決定される。
[00292]いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ３画分は、相対的存在量で３０％未満、２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満又は１％未満のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ３画分は、相対的存在量で０．１％超、０．５％超、０．８％超、１％超、１．５％超、２％超、３％超、４％超、５％超、６％超、７％超、８％超、９％超、１０％超、１１％超、１２％超、１３％超、１４％超又は１５％超のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ３画分は、相対的存在量で約０．５％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％又は約２０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ３画分は、相対的存在量で約０．１％～約１５％、約０．１％～約２０％、約０．５％～約２０％、０．５％～約１０％、約０．５％～約１５％、約１％～約２０％、約１％～約１５％、約１％～約１０％、約２％～約１４％、約３％～約１３％、約４％～約１２％、約５％～約１１％、約５％～約１０％、約６％～約９％若しくは約７％～約８％又はそれらの間の任意の範囲のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ３画分は、相対的存在量で約０．５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の相対的存在量は、ＭＡＬＤＩ－ＭＳなどの質量分析法によって決定される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の相対的存在量は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって決定される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の相対的存在量は、ＧＣ－ＭＳによって決定される。
[00293]いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖は、１つ以上のアンヒドロサブユニットを含む。例えば、ＤＰ１アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖は、１つのアンヒドロサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、ＤＰｎアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖は、１～ｎ個のアンヒドロサブユニットを含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖は、１つ又は２つのアンヒドロサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物における各オリゴ糖は、独立して、０、１又は２個のアンヒドロサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の９９％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％又は３０％超は、１つのみのアンヒドロサブユニットを有する。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の９９％、９５％、９０％、８５％又は８０％超は、１つのみのアンヒドロサブユニットを有する。
[00294]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物又はオリゴ糖調製物の各画分における１つ以上のオリゴ糖は、それぞれグリコシド結合を介して結合しているアンヒドロサブユニットを１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個含み、ここで、各アンヒドロサブユニットを結合するグリコシド結合は独立して選択される。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物又はオリゴ糖調製物の各画分における１つ以上のオリゴ糖は、それぞれグリコシド結合を介して結合しているアンヒドロサブユニットを１、２又は３個含み、ここで、各アンヒドロサブユニットを結合するグリコシド結合は独立して選択される。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物又は各画分におけるオリゴ糖の５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は９９％超は、それぞれグリコシド結合を介して結合しているアンヒドロサブユニットを１、２又は３個含み、ここで、各アンヒドロサブユニットを結合するグリコシド結合は独立して選択される。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物又は各画分における１つ以上のオリゴ糖は、グリコシド結合を介して結合しているアンヒドロサブユニットを１個含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物又は各画分におけるオリゴ糖の５０％超、６０％超、７０％超、８０％超、９０％又は９９％超は、グリコシド結合を介して結合しているアンヒドロサブユニットを１個含む。
［Ｄ．アンヒドロサブユニット種］
[00295]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、異なる種のアンヒドロサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、例示的なアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖は、図４２、図３０及び図３１に示されている。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、単糖の熱脱水生成物、即ちアンヒドロ－単糖サブユニットである、１つ以上のアンヒドロサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、単糖の可逆的熱脱水生成物である、１つ以上のアンヒドロサブユニットを含む。
[00296]アンヒドロ－単糖（又はアンヒドロ－単糖サブユニット）は、１つ以上の種の単糖の熱脱水生成物を指すと理解すべきである。例えば、いくつかの実施形態では、アンヒドロ－グルコースは、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノース（レボグルコサン）又は１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースを指す。いくつかの実施形態では、複数のアンヒドロ－グルコースは、複数の１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノース（レボグルコサン）、複数の１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノース、グルコースの複数の他の熱脱水生成物又はこれらの任意の組み合わせを指す。同様に、いくつかの実施形態では、複数のアンヒドロ－ガラクトースは、ガラクトースの複数の任意の熱脱水生成物又はこれらの任意の組み合わせを指す。
[00297]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、１つ以上のアンヒドロ－グルコース、アンヒドロ－ガラクトース、アンヒドロ－マンノース、アンヒドロ－アロース、アンヒドロ－アルトロース、アンヒドロ－グロース、アンヒドロ－インドース、アンヒドロ－タロース、アンヒドロ－フルクトース、アンヒドロ－リボース、アンヒドロ－アラビノース、アンヒドロ－ラムノース、アンヒドロ－リキソース、アンヒドロ－キシロース又はこれらのサブユニットの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、１つ以上のアンヒドロ－グルコース、アンヒドロ－ガラクトース、アンヒドロ－マンノース又はアンヒドロ－フルクトースサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、１，６－アンヒドロ－３－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシル－β－Ｄ－グルコピラノース、１，６－アンヒドロ－３－Ｏ－α－Ｄ－グルコピラノシル－β－Ｄ－グルコピラノース、１，６－アンヒドロ－２－Ｏ－β－Ｄ－グルコピラノシル－β－Ｄ－グルコピラノース、１，６－アンヒドロ－２－Ｏ－α－Ｄ－グルコピラノシル－β－Ｄ－グルコピラノース、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－セロビオース（セロビオサン）、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－セロトリオース（セロトリオサン（ｃｅｌｌｏｔｒｉｏｓａｎ））、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－セロテトラオース（セロテトラオサン（ｃｅｌｌｏｔｅｔｒａｏｓａｎ））、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－セロペンタオース（セロペンタオサン（ｃｅｌｌｏｐｅｎｔａｏｓａｎ））及び１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－マルトース（マルトサン）の１つ以上を含む。
[00298]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、１つ以上の１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、１つ以上の１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノース（レボグルコサン）サブユニットを含む。例えば、図４２は、２つのＤＰ１アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖（レボグルコサン及び１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノース）及び１つのＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖（アンヒドロ－セロビオース）を示す。
[00299]アンヒドロサブユニットの種の存在及びレベルは、オリゴ糖を製造するために使用される供給糖に基づいて変化し得る。例えば、いくつかの実施形態では、グルコ－オリゴ糖はアンヒドロ－グルコースサブユニットを含み、ガラクト－オリゴ糖はアンヒドロ－ガラクトースサブユニットを含み、グルコ－ガラクト－オリゴ糖は、アンヒドロ－グルコース及びアンヒドロ－ガラクトースサブユニットを含む。
[00300]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースアンヒドロサブユニット及び１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースアンヒドロサブユニットの両方を含む。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニットの少なくとも０．１％、１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は９９％は、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノース及び１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニットの少なくとも１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％は、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースである。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニットの少なくとも１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％又は６０％は、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースである。
[00301]いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、調製物中で約１０：１～１：１０、９：１～１：１０、８：１～１：１０、７：１～１：１０、６：１～１：１０、５：１～１：１０、４：１～１：１０、３：１～１：１０、２：１～１：１０、１０：１～１：９、１０：１～１：８、１０：１～１：７、１０：１～１：６、１０：１～１：５、１０：１～１：４、１０：１～１：３、１０：１～１：２又は１：１～３：１である。いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、調製物中で約１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：８、１：９又は１：１０である。いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、調製物中で約２：１である。
[00302]いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、各画分中で１０：１～１：１０、９：１～１：１０、８：１～１：１０、７：１～１：１０、６：１～１：１０、５：１～１：１０、４：１～１：１０、３：１～１：１０、２：１～１：１０、１０：１～１：９、１０：１～１：８、１０：１～１：７、１０：１～１：６、１０：１～１：５、１０：１～１：４、１０：１～１：３、１０：１～１：２又は１：１～３：１である。いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、各画分中で約１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：８、１：９又は１：１０である。いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、各画分中で約２：１である。
[00303]いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、少なくとも１つの画分中で約１０：１～１：１０、９：１～１：１０、８：１～１：１０、７：１～１：１０、６：１～１：１０、５：１～１：１０、４：１～１：１０、３：１～１：１０、２：１～１：１０、１０：１～１：９、１０：１～１：８、１０：１～１：７、１０：１～１：６、１０：１～１：５、１０：１～１：４、１０：１～１：３、１０：１～１：２又は１：１～３：１である。いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、少なくとも１つの画分中で約１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：８、１：９又は１：１０である。いくつかの実施形態では、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、少なくとも１つの画分中で約２：１である。
[00304]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、アンヒドロサブユニット含有ＤＰ２オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、アンヒドロ－ラクトース、アンヒドロ－スクロース、アンヒドロ－セロビオース又はこれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、約２～２０、２～１５、５～２０、５～１５又は５～１０種のＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物はセロビオサンを含まないか、又は検出可能レベルのセロビオサンを含まない。
[00305]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、糖カラメル化生成物である１つ以上のアンヒドロサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のアンヒドロサブユニットを含むオリゴ糖調製物は、メタノール；エタノール；フラン；メチルグリオキサール；２－メチルフラン；酢酸ビニル；グリコールアルデヒド；酢酸；アセトール；フルフラール；２－フランメタノール；３－フランメタノール；２－ヒドロキシシクロペンタ－２－エン－１－オン；５－メチルフルフラール；２（５Ｈ）－フラノン；２メチルシクロペンテノロン；レボグルコセノン；環状ヒドロキシルラクトン；１，４，３，６－ジアンヒドロ－α－Ｄ－グルコピラノース；ジアンヒドログルコピラノース；及び５－ヒドロキシメチルフルフラール（５－ｈｍｆ）からなる群から選択される糖カラメル化生成物である。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、５－ｈｍｆアンヒドロサブユニットを含む。
[00306]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物又はＤＰ画分の少なくとも１つにおいて、カラメル化生成物であるアンヒドロサブユニットは、単糖の熱脱水生成物であるアンヒドロサブユニットよりも豊富ではない。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物又は画分の少なくとも１つにおいて、カラメル化生成物であるアンヒドロサブユニットは、単糖の熱脱水生成物であるアンヒドロサブユニットよりも豊富である。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物又は画分の少なくとも１つにおいて、カラメル化生成物であるアンヒドロサブユニット及び単糖の熱脱水生成物であるアンヒドロサブユニットは、同様の存在比を有する。
[00307]いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物におけるアンヒドロサブユニットの約０．０１％～約５０％、約０．０１％～約４０％、約０．０１％～約３０％、約０．０１％～約２０％、約０．０１％～約１０％、約０．０１％～約５％、約０．０１％～約４％、約０．０１％～約３％、約０．０１％～約２％、約０．０１％～約１％、約０．０１％～約０．５％、約０．１％～約５０％、約０．１％～約４０％、約０．１％～約３０％、約０．１％～約２０％、約０．１％～約１０％、約０．１％～約５％、約０．１％～約４％、約０．１％～約３％、約０．１％～約２％、約０．１％～約１％又は約０．１％～約０．５％は、カラメル化生成物である。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物におけるアンヒドロサブユニットの約０．１％～約５％、約０．１％～約２％又は約０．１％～約１％は、カラメル化生成物である。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物におけるアンヒドロサブユニットの５０％未満、４０％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満又は１％未満は、カラメル化生成物である。
[00308]いくつかの実施形態では、本明細書で記載される調製物の少なくとも１つの画分（例えば、ＤＰ１、ＤＰ２及び／又はＤＰ３画分）におけるアンヒドロサブユニットの約０．０１％～約５０％、約０．０１％～約４０％、約０．０１％～約３０％、約０．０１％～約２０％、約０．０１％～約１０％、約０．０１％～約５％、約０．０１％～約４％、約０．０１％～約３％、約０．０１％～約２％、約０．０１％～約１％、約０．０１％～約０．５％、約０．１％～約５０％、約０．１％～約４０％、約０．１％～約３０％、約０．１％～約２０％、約０．１％～約１０％、約０．１％～約５％、約０．１％～約４％、約０．１％～約３％、約０．１％～約２％、約０．１％～約１％又は約０．１％～約０．５％は、カラメル化生成物である。いくつかの実施形態では、調製物の少なくとも１つの画分（例えば、ＤＰ１、ＤＰ２及び／又はＤＰ３）におけるアンヒドロサブユニットの約０．１％～約５％、約０．１％～約２％又は約０．１％～約１％は、カラメル化生成物である。いくつかの実施形態では、調製物の少なくとも１つの画分におけるアンヒドロサブユニットの５０％、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％又は１％未満は、カラメル化生成物である。いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物のＤＰ１、ＤＰ２及び／又はＤＰ３画分におけるアンヒドロサブユニットの２０％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満又は１％未満は、カラメル化生成物である。
[00309]いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物の各画分におけるアンヒドロサブユニットの約０．０１％～約５０％、約０．０１％～約４０％、約０．０１％～約３０％、約０．０１％～約２０％、約０．０１％～約１０％、約０．０１％～約５％、約０．０１％～約４％、約０．０１％～約３％、約０．０１％～約２％、約０．０１％～約１％、約０．０１％～約０．５％、約０．１％～約５０％、約０．１％～約４０％、約０．１％～約３０％、約０．１％～約２０％、約０．１％～約１０％、約０．１％～約５％、約０．１％～約４％、約０．１％～約３％、約０．１％～約２％、約０．１％～約１％又は約０．１％～約０．５％は、カラメル化生成物である。いくつかの実施形態では、調製物の各画分におけるアンヒドロサブユニットの約０．１％～約５％、約０．１％～約２％又は約０．１％～約１％は、カラメル化生成物である。いくつかの実施形態では未満、調製物の各画分におけるアンヒドロサブユニットの５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満又は１％未満は、カラメル化生成物である。
[00310]いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物におけるオリゴ糖の各々は、独立して及び任意選択的に、アンヒドロサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、２つ以上の独立したオリゴ糖は、同一又は異なるアンヒドロサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、２つ以上の独立したオリゴ糖は、異なるアンヒドロサブユニットを含む。例えば、いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースを含むＤＰ１アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖及び１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースサブユニットを含むＤＰ２アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物における１つ以上のオリゴ糖は、２つ以上の同一の又は異なるアンヒドロサブユニットを含む。
[00311]いくつかの実施形態では、２以上の重合度を有するオリゴ糖調製物の任意の画分（即ちＤＰ２～ＤＰｎ画分）において、アンヒドロサブユニットは、１つ以上の通常の又はアンヒドロサブユニットに結合し得る。いくつかの実施形態では、ＤＰ２～ＤＰｎ画分において、少なくとも１つのアンヒドロサブユニットは、１つ、２つ又は３つの他の通常の又はアンヒドロサブユニットに結合している。いくつかの実施形態では、ＤＰ２～ＤＰｎ画分において、少なくとも１つのアンヒドロサブユニットは、１つ又は２つの通常のサブユニットに結合している。いくつかの実施形態では、ＤＰ２～ＤＰｎ画分において、少なくとも１つのアンヒドロサブユニットは、１つの通常のサブユニットに結合している。いくつかの実施形態では、ＤＰ２～ＤＰｎ画分のいずれかにおいて、アンヒドロサブユニットの９９％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％又は３０％超は、１つの通常のサブユニットに結合している。いくつかの実施形態では、ＤＰ２～ＤＰｎ画分の各々において、アンヒドロサブユニットの９９％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％又は３０％超は、１つの通常のサブユニットに結合している。
[00312]いくつかの実施形態では、２以上の重合度を有するオリゴ糖調製物の任意の画分（即ちＤＰ２～ＤＰｎ画分）において、アンヒドロサブユニットは、オリゴ糖の鎖末端に位置し得る。いくつかの実施形態では、３以上の重合度を有するオリゴ糖調製物の任意の画分（即ちＤＰ３～ＤＰｎ画分）において、アンヒドロサブユニットは、オリゴ糖の鎖末端ではない位置に位置し得る。いくつかの実施形態では、ＤＰ２～ＤＰｎ画分において、アンヒドロサブユニットの少なくとも１つは、オリゴ糖の鎖末端に位置している。いくつかの実施形態では、ＤＰ２～ＤＰｎ画分におけるアンヒドロサブユニットの９９％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％又は３０％超は、オリゴ糖の鎖末端に位置している。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物におけるアンヒドロサブユニットの９５％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％又は１０％超は、オリゴ糖の鎖末端に位置している。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は９９％超は、鎖末端アンヒドロサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％超は、鎖末端アンヒドロサブユニットを含む。
［Ｅ．グリコシド結合］
[00313]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、様々なグリコシド結合を含む。グリコシド結合の型及び分布は、オリゴ糖調製物の供給源及び製造方法に依存し得る。いくつかの実施形態では、様々なグリコシド結合の型及び分布は、ＮＭＲなどの当技術分野において公知の任意の好適な方法によって決定及び／又は検出することができる。例えば、いくつかの実施形態では、グリコシド結合は、１Ｈ ＮＭＲ、１３Ｃ ＮＭＲ、２Ｄ ＮＭＲ、例えば２Ｄ ＪＲＥＳ、ＨＳＱＣ、ＨＭＢＣ、ＤＯＳＹ、ＣＯＳＹ、ＥＣＯＳＹ、ＴＯＣＳＹ、ＮＯＥＳＹ若しくはＲＯＥＳＹなど、又はこれらの任意の組み合わせなどによって決定及び／又は検出される。いくつかの実施形態では、グリコシド結合は、少なくとも部分的に、１Ｈ ＮＭＲによって決定及び／又は検出される。いくつかの実施形態では、グリコシド結合は、少なくとも部分的に、１３Ｃ ＮＭＲによって決定及び／又は検出される。いくつかの実施形態では、グリコシド結合は、少なくとも部分的に、２Ｄ１Ｈ、１３Ｃ－ＨＳＱＣ ＮＭＲによって決定及び／又は検出される。
[00314]いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物は、１つ以上のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，４）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合、β－（１，６）グリコシド結合、α－（１，１）－αグリコシド結合、α－（１，１）－βグリコシド結合、β－（１，１）－βグリコシド結合又はこれらの組み合わせを含む。
[00315]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、α－（１，６）グリコシド結合が約０～約６０モル％、約５％～約５５モル％、約５％～約５０モル％、約５％～約４５モル％、約５％～約４０モル％、約５％～約３５モル％、約５％～約３０モル％、約５％～約２５モル％、約１０％～約６０モル％、約１０％～約５５モル％、約１０％～約５０モル％、約１０％～約４５モル％、約１０％～約４０モル％、約１０％～約３５モル％、約１５％～約６０モル％、約１５％～約５５モル％、約１５％～約５０モル％、約１５％～約４５モル％、約１５％～約４０モル％、約１５％～約３５モル％、約２０％～約６０モル％、約２０％～約５５モル％、約２０％～約５０モル％、約２０％～約４５モル％、約２０％～約４０モル％、約２０％～約３５モル％、約２５％～約６０モル％、約２５％～約５５モル％、約２５％～約５０モル％、約２５％～約４５モル％、約２５％～約４０モル％又は約２５％～約３５モル％のグリコシド結合型分布を有する。
[00316]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、α－（１，３）グリコシド結合が約０～約５０モル％、約０～約４０モル％、約０～約３５モル％、約０～約３０モル％、約０～約２５モル％、約０～約２０モル％、約５％～約４０モル％、約５％～約３５モル％、約５％～約３０モル％、約５％～約２５モル％、約５％～約２０モル％、約１０％～約４０モル％、約１０％～約３５モル％、約１０％～約２０モル％、約１５％～約４０モル％、約１５％～約３５モル％、約１５％～約３０モル％、約１５％～約２５モル％又は約１５％～約２０モル％のグリコシド結合型分布を有する。
[00317]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、α－（１，２）グリコシド結合が約０～約４０モル％、約０～約３５モル％、約０～約３０モル％、約０～約２５モル％、約０～約２０モル％、約０～約１５モル％、約０～約１０モル％、約２％～約３０モル％、約２％～約２５モル％、約２％～約２０モル％、約２％～約１５モル％、約２％～約１０モル％、約３％～約３０モル％、約３％～約２５モル％、約３％～約２０モル％、約３％～約１５モル％、約３％～約１０モル％、約５％～約３０モル％、約５％～約２５モル％、約５％～約２０モル％、約５％～約１５モル％又は約５％～約１０モル％のグリコシド結合型分布を有する。
[00318]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、α－（１，４）グリコシド結合が約０～約４０モル％、約０～約３０モル％、約０～約２５モル％、約０～約２０モル％、約０～約１５モル％、約０～約１０モル％又は約０～約５モル％のグリコシド結合型分布を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、α－（１，４）グリコシド結合が４０モル％未満、３０モル％未満、２０モル％未満、１５モル％未満、１０モル％未満、９モル％未満、８モル％未満、７モル％未満、６モル％未満、５モル％未満、４モル％未満、３モル％未満又は２モル％未満のグリコシド結合型分布を有する。
[00319]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、β－（１，６）グリコシド結合が約０～約４０モル％、約０～約３５モル％、約０～約３０モル％、約０～約２５モル％、約０～約２０モル％、約０～約１５モル％、約０～約１０モル％、約２％～約３０モル％、約２％～約２５モル％、約２％～約２０モル％、約２％～約１５モル％、約２％～約１０モル％、約５％～約３０モル％、約５％～約２５モル％、約５％～約２０モル％、約５％～約１５モル％、約５％～約１０モル％、約８％～約３０モル％、約８％～約２５モル％、約８％～約２０モル％、約８％～約１５モル％又は約１０％～約１５モル％のグリコシド結合型分布を有する。
[00320]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、β－（１，４）グリコシド結合が約０～約４０モル％、約０～約３５モル％、約０～約３０モル％、約０～約２５モル％、約０～約２０モル％、約０～約１５モル％、約０～約１０モル％、約２％～約３０モル％、約２％～約２５モル％、約２％～約２０モル％、約２％～約１５モル％、約２％～約１０モル％、約３％～約３０モル％、約３％～約２５モル％、約３％～約２０モル％、約３％～約１５モル％、約３％～約１０モル％、約５％～約３０モル％、約５％～約２５モル％、約５％～約２０モル％、約５％～約１５モル％又は約５％～約１０モル％のグリコシド結合型分布を有する。
[00321]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、β－（１，２）グリコシド結合が約０～約４０モル％、約０～約３０モル％、約０～約２５モル％、約０～約２０モル％、約０～約１５モル％、約０～約１０モル％、約０～約５モル％、約１％～約２０モル％、約１％～約１５モル％、約１％～約１０モル％、約１％～約５モル％、約２％～約２０モル％、約２％～約１５モル％、約２％～約１０モル％又は約２％～約５モル％のグリコシド結合型分布を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、β－（１，２）グリコシド結合が４０モル％未満、３０モル％未満、２０モル％未満、１５モル％未満、１０モル％未満、９モル％未満、８モル％未満、７モル％未満、６モル％未満、５モル％未満、４モル％未満、３モル％未満又は２モル％未満のグリコシド結合型分布を有する。
[00322]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、β－（１，３）グリコシド結合が約０～約４０モル％、約０～約３０モル％、約０～約２５モル％、約０～約２０モル％、約０～約１５モル％、約０～約１０モル％、約０～約５モル％、約１％～約２０モル％、約１％～約１５モル％、約１％～約１０モル％、約１％～約５モル％、約２％～約２０モル％、約２％～約１５モル％、約２％～約１０モル％又は約２％～約５モル％のグリコシド結合型分布を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、β－（１，３）グリコシド結合が４０モル％未満、３０モル％未満、２０モル％未満、１５モル％未満、１０モル％未満、９モル％未満、８モル％未満、７モル％未満、６モル％未満、５モル％未満、４モル％未満、３モル％未満又は２モル％未満のグリコシド結合型分布を有する。
[00323]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、非合成オリゴ糖調製物のグリコシド結合型分布とは異なるグリコシド結合型分布を有する。例えば、いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、基礎栄養組成物のグリコシド結合型分布とは異なるグリコシド結合型分布を有する。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、デンプン及び植物繊維などの天然炭水化物源を含む。天然炭水化物源のいくつかは、高い割合のα－（１，４）、α－（１，６）及び／又はβ－（１，６）グリコシド結合を有する。従って、いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、基礎栄養組成物よりも低い割合のα－（１，４）グリコシド結合を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、基礎栄養組成物よりも低い割合のα－（１，６）グリコシド結合を有する。他の実施形態では、オリゴ糖調製物は、基礎栄養組成物よりも高い割合のα－（１，６）グリコシド結合を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、基礎栄養組成物よりも低い割合のβ－（１，６）グリコシド結合を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、酵素によって容易に消化又は加水分解されないグリコシド結合を含む。
[00324]具体的には、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物のグリコシド結合型分布におけるα－（１，２）、α－（１，３）、α－（１，４）、α－（１，６）、β－（１，２）、β－（１，３）、β－（１，４）及び／又はβ－（１，６）グリコシド結合は、基礎栄養組成物のものよりも少なくとも５０モル％、少なくとも４０モル％、少なくとも３０モル％、少なくとも２０モル％、少なくとも１５モル％、少なくとも１０モル％、少なくとも５モル％、少なくとも２モル％又は少なくとも１モル％低い。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物のグリコシド結合型分布におけるα－（１，２）、α－（１，３）、α－（１，４）、α－（１，６）、β－（１，２）、β－（１，３）、β－（１，４）及び／又はβ－（１，６）グリコシド結合は、基礎栄養組成物のものよりも少なくとも５０モル％、少なくとも４０モル％、少なくとも３０モル％、少なくとも２０モル％、少なくとも１５モル％、少なくとも１０モル％、少なくとも５モル％、少なくとも２モル％又は少なくとも１モル％高い。
[00325]特定の型のグリコシド結合は、特定の型の単糖を含むオリゴ糖には適用できない場合があることが、当業者により理解されるべきである。例えば、いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、α－（１，２）グリコシド結合及びα－（１，６）グリコシド結合を含む。他の実施形態では、オリゴ糖調製物は、α－（１，２）グリコシド結合及びβ－（１，３）グリコシド結合を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、α－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合及びβ－（１，６）グリコシド結合を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、α－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，４）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合及びβ－（１，６）グリコシド結合を含む。
［Ｆ．分子量］
[00326]オリゴ糖調製物の分子量及び分子量分布は、任意の好適な分析手段及び機器、例えば、末端基法、浸透圧（浸透圧測定）、超遠心分離、粘度測定、光散乱法、ＳＥＣ、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、ＦＦＦ、Ａ４Ｆ、ＨＰＬＣ及び質量分析法などによって決定され得る。いくつかの実施形態では、分子量及び分子量分布は、質量分析法、例えば、ＭＡＬＤＩ－ＭＳ、ＬＣ－ＭＳ又はＧＣ－ＭＳなどによって決定される。いくつかの実施形態では、分子量及び分子量分布は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、例えばゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）などによって決定される。他の実施形態では、分子量及び分子量分布は、ＨＰＬＣによって決定される。いくつかの実施形態では、分子量及び分子量分布は、ＭＡＬＤＩ－ＭＳによって決定される。
[00327]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、約１００～約１００００ｇ／モル、約２００～約８０００ｇ／モル、約３００～約５０００ｇ／モル、約５００～約５０００ｇ／モル、約７００～約５０００ｇ／モル、約９００～約５０００ｇ／モル、約１１００～約５０００ｇ／モル、約１３００～約５０００ｇ／モル、約１５００～約５０００ｇ／モル、約１７００～約５０００ｇ／モル、約３００～約４５００ｇ／モル、約５００～約４５００ｇ／モル、約７００～約４５００ｇ／モル、約９００～約４５００ｇ／モル、約１１００～約４５００ｇ／モル、約１３００～約４５００ｇ／モル、約１５００～約４５００ｇ／モル、約１７００～約４５００ｇ／モル、約１９００～約４５００ｇ／モル、約３００～約４０００ｇ／モル、約５００～約４０００ｇ／モル、約７００～約４０００ｇ／モル、約９００～約４０００ｇ／モル、約１１００～約４０００ｇ／モル、約１３００～約４０００ｇ／モル、約１５００～約４０００ｇ／モル、約１７００～約４０００ｇ／モル、約１９００～約４０００ｇ／モル、約３００～約３０００ｇ／モル、約５００～約３０００ｇ／モル、約７００～約３０００ｇ／モル、約９００～約３０００ｇ／モル、約１１００～約３０００ｇ／モル、約１３００～約３０００ｇ／モル、約１５００～約３０００ｇ／モル、約１７００～約３０００ｇ／モル、約１９００～約３０００ｇ／モル、約２１００～約３０００ｇ／モル、約３００～約２５００ｇ／モル、約５００～約２５００ｇ／モル、約７００～約２５００ｇ／モル、約９００～約２５００ｇ／モル、約１１００～約２５００ｇ／モル、約１３００～約２５００ｇ／モル、約１５００～約２５００ｇ／モル、約１７００～約２５００ｇ／モル、約１９００～約２５００ｇ／モル、約２１００～約２５００ｇ／モル、約３００～約１５００ｇ／モル、約５００～約１５００ｇ／モル、約７００～約１５００ｇ／モル、約９００～約１５００ｇ／モル、約１１００～約１５００ｇ／モル、約１３００～約１５００ｇ／モル、約２０００～約２８００ｇ／モル、約２１００～約２７００ｇ／モル、約２２００～約２６００ｇ／モル、約２３００～約２５００ｇ／モル又は約２３２０～約２４２０ｇ／モルの重量平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の重量平均分子量は、約２０００～約２８００ｇ／モル、約２１００～約２７００ｇ／モル、約２２００～約２６００ｇ／モル、約２３００～約２５００ｇ／モル又は約２３２０～約２４２０ｇ／モルである。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、少なくとも５００ｇ／モル、７５０ｇ／モル、１０００ｇ／モル又は１５００ｇ／モルから、最大１７５０ｇ／モル、２０００ｇ／モル、２２５０ｇ／モル、２５００ｇ／モル又は３０００ｇ／モルの範囲の重量平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物の重量平均分子量は、実施例９によるＨＰＬＣによって決定される。
[00328]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、約１００～約１００００ｇ／モル、約２００～約８０００ｇ／モル、約３００～約５０００ｇ／モル、約５００～約５０００ｇ／モル、約７００～約５０００ｇ／モル、約９００～約５０００ｇ／モル、約１１００～約５０００ｇ／モル、約１３００～約５０００ｇ／モル、約１５００～約５０００ｇ／モル、約１７００～約５０００ｇ／モル、約３００～約４５００ｇ／モル、約５００～約４５００ｇ／モル、約７００～約４５００ｇ／モル、約９００～約４５００ｇ／モル、約１１００～約４５００ｇ／モル、約１３００～約４５００ｇ／モル、約１５００～約４５００ｇ／モル、約１７００～約４５００ｇ／モル、約１９００～約４５００ｇ／モル、約３００～約４０００ｇ／モル、約５００～約４０００ｇ／モル、約７００～約４０００ｇ／モル、約９００～約４０００ｇ／モル、約１１００～約４０００ｇ／モル、約１３００～約４０００ｇ／モル、約１５００～約４０００ｇ／モル、約１７００～約４０００ｇ／モル、約１９００～約４０００ｇ／モル、約３００～約３０００ｇ／モル、約５００～約３０００ｇ／モル、約７００～約３０００ｇ／モル、約９００～約３０００ｇ／モル、約１１００～約３０００ｇ／モル、約１３００～約３０００ｇ／モル、約１５００～約３０００ｇ／モル、約１７００～約３０００ｇ／モル、約１９００～約３０００ｇ／モル、約２１００～約３０００ｇ／モル、約３００～約２５００ｇ／モル、約５００～約２５００ｇ／モル、約７００～約２５００ｇ／モル、約９００～約２５００ｇ／モル、約１１００～約２５００ｇ／モル、約１３００～約２５００ｇ／モル、約１５００～約２５００ｇ／モル、約１７００～約２５００ｇ／モル、約１９００～約２５００ｇ／モル、約２１００～約２５００ｇ／モル、約３００～約２０００ｇ／モル、約５００～約３００～２０００ｇ／モル、約７００～約２０００ｇ／モル、約９００～約２０００ｇ／モル、約１１００～約２０００ｇ／モル、約３００～約１５００ｇ／モル、約５００～約１５００ｇ／モル、約７００～約１５００ｇ／モル、約９００～約１５００ｇ／モル、約１１００～約１５００ｇ／モル、約１３００～約１５００ｇ／モル、約１０００～約２０００ｇ／モル、約１１００～約１９００ｇ／モル、約１２００～約１８００ｇ／モル、約１３００～約１７００ｇ／モル、約１４００～約１６００ｇ／モル又は約１４５０～約１５５０ｇ／モルの数平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の数平均分子量は、約１０００～約２０００ｇ／モル、約１１００～約１９００ｇ／モル、約１２００～約１８００ｇ／モル、約１３００～約１７００ｇ／モル、１４００～１６００ｇ／モル又は１４５０～１５５０ｇ／モルである。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、少なくとも５００ｇ／モル、７５０ｇ／モル、１０００ｇ／モル又は１５００ｇ／モルから、最大１７５０ｇ／モル、２０００ｇ／モル、２２５０ｇ／モル、２５００ｇ／モル又は３０００ｇ／モルの範囲の数平均分子量を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物の数平均分子量は、実施例９によるＨＰＬＣによって決定される。
［Ｇ．オリゴ糖の種類］
[00329]オリゴ糖調製物中に存在するオリゴ糖の種は、１つ以上の供給糖の種類に依存し得る。例えば、いくつかの実施形態では、供給糖がグルコースを含む場合、オリゴ糖調製物は、グルコ－オリゴ糖を含む。例えば、いくつかの実施形態では、供給糖がガラクトースを含む場合、オリゴ糖調製物は、ガラクト－オリゴ糖を含む。別の例について、いくつかの実施形態では、供給糖がガラクトース及びグルコースを含む場合、オリゴ糖調製物は、グルコ－ガラクト－オリゴ糖を含む。
[00330]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、１つ以上の種の単糖サブユニットを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又はそれを超える異なる種の単糖サブユニットを有するオリゴ糖を含む。
[00331]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、１、２、３又は４つの異なる種の単糖サブユニットを有するオリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、１、２又は３つの異なる種の単糖サブユニットを有するオリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、３つの異なる種の単糖サブユニットを有するオリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、２つの異なる種の単糖サブユニットを有するオリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、１つの種の単糖サブユニットを有するオリゴ糖を含む。
[00332]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、各オリゴ糖分子が、独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０の異なる種の単糖サブユニットを含む異なるオリゴ糖種を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、１０２、１０３、１０４、１０５又はそれを超える異なるオリゴ糖種を含む。いくつかの実施形態では、調製物におけるオリゴ糖のいくつかは、１つの種の単糖サブユニットを含み、同じ調製物におけるオリゴ糖の他のいくつかは、２つ以上の種の単糖サブユニットを含む。例えば、いくつかの実施形態では、供給糖がグルコースガラクトースである場合、オリゴ糖調製物は、グルコースサブユニットのみを含むオリゴ糖、ガラクトースサブユニットのみを含むオリゴ糖、様々な比率でグルコース及びガラクトースサブユニットの両方を含むオリゴ糖又はこれらの任意の組み合わせを含み得る。
[00333]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物のｎ画分のいずれか又はその全ては、各オリゴ糖が、独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０の異なる種の単糖サブユニットを含む異なるオリゴ糖種サブユニットを含む。いくつかの実施形態では、調製物の画分におけるオリゴ糖のいくつかは、１つの種の単糖サブユニットを含み、調製物の同じ画分におけるオリゴ糖の他のいくつかは、２つ以上の種の単糖サブユニットを含む。
[00334]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、トリオース、テトロース、ペントース、ヘキソース、ヘプトース及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上の単糖サブユニットを含み、ここで、前記トリオース、テトロース、ペントース、ヘキソース又はヘプトースサブユニットの各々は、独立して及び任意選択的に、その対応するアンヒドロサブユニットの１つで官能化及び／又は置換されている。いくつかの実施形態では、対応するアンヒドロサブユニットは、単糖サブユニットの熱脱水生成物である。いくつかの実施形態では、対応するアンヒドロサブユニットは、単糖サブユニットのカラメル化生成物である。
[00335]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、ペントースサブユニット、ヘキソースサブユニット又はこれらの任意の組み合わせを含み、ここで、前記ペントース又はヘキソースサブユニットの各々は、独立して及び任意選択的に、その対応するアンヒドロサブユニットの１つで官能化及び／又は置換されている。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、ヘキソースサブユニットを含み、ここで、前記ヘキソースサブユニットの各々は、独立して及び任意選択的に、その対応するアンヒドロサブユニットの１つで官能化及び／又は置換されている。
[00336]本明細書で使用する場合、テトロースは、エリトロース、トレオース及びエリトルロースなどの４個の炭素原子を有する単糖を指す。本明細書で使用する場合、ペントースは、アラビノース、リキソース、リボース及びキシロースなどの５個の炭素原子を有する単糖を指す。本明細書で使用する場合、ヘキソースは、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース、タロース、プシコース、フルクトース、ソルボース及びタガトースなどの６個の炭素原子を有する単糖を指す。本明細書で使用する場合、ヘプトースは、セドヘプツロース及びマンノヘプツロースなどの７個の炭素原子を有する単糖を指す。
[00337]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、グルコースサブユニットを含み、ここで、少なくとも１つのグルコースサブユニットは、任意選択的に、アンヒドロ－グルコースサブユニットで置換されている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、ガラクトースサブユニットを含み、ここで、少なくとも１つのガラクトースサブユニットは、任意選択的に、アンヒドロ－ガラクトースサブユニットで置換されている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、ガラクトース及びグルコースサブユニットを含み、ここで、少なくとも１つのガラクトースサブユニット又は少なくとも１つのグルコースサブユニットは、任意選択的に、その対応するアンヒドロサブユニットの１つで置換されている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、フルクトース及びグルコースサブユニットを含み、ここで、少なくとも１つのフルクトースサブユニット又は少なくとも１つのグルコースサブユニットは、任意選択的に、その対応するアンヒドロサブユニットの１つで置換されている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、マンノース及びグルコースサブユニットを含み、ここで、少なくとも１つのマンノースサブユニット又は少なくとも１つのグルコースサブユニットは、任意選択的に、その対応するアンヒドロサブユニットの１つで置換されている。
[00338]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、グルコ－ガラクトース－オリゴ糖調製物、グルコ－オリゴ糖調製物、ガラクト－オリゴ糖調製物、フルクト－オリゴ糖調製物、マンノ－オリゴ糖調製物、アラビノ－オリゴ糖調製物、キシロ－オリゴ糖調製物、グルコ－フルクト－オリゴ糖調製物、グルコ－マンノ－オリゴ糖調製物、グルコ－アラビノ－オリゴ糖調製物、グルコ－キシロ－オリゴ糖調製物、ガラクト－フルクト－オリゴ糖調製物、ガラクト－マンノ－オリゴ糖調製物、ガラクト－アラビノ－オリゴ糖調製物、ガラクト－キシロ－オリゴ糖調製物、フルクト－マンノ－オリゴ糖調製物、フルクト－アラビノ－オリゴ糖調製物、フルクト－キシロ－オリゴ糖調製物、マンノ－アラビノ－オリゴ糖調製物、マンノ－キシロ－オリゴ糖調製物、アラビノ－キシロ－オリゴ糖調製物、ガラクト－アラビノ－キシロ－オリゴ糖調製物、フルクト－ガラクト－キシロ－オリゴ糖調製物、アラビノ－フルクト－マンノ－キシロ－オリゴ糖調製物、グルコ－フルクト－ガラクト－アラビノ－オリゴ糖調製物、フルクト－グルコ－アラビノ－マンノ－キシロオリゴ糖調製物、グルコ－ガラクト－フルクト－マンノ－アラビノキシロ－オリゴ糖調製物又はこれらの任意の組み合わせを含み、；ここで、調製物内の単糖サブユニットの各々は、独立して及び任意選択的に、その対応するアンヒドロサブユニットの１つで官能化及び／又は置換されている。
[00339]特定の実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、重量で９９％超のグルコースサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、グルコースサブユニットのみを含む。
[00340]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、重量で約４５％～５５％のグルコースサブユニット及び約５５％～４５％のガラクトースサブユニットを含む。いくつかの特定の実施形態では、オリゴ糖調製物は、重量で約５０％のグルコース及び５０％のガラクトースサブユニットを含む。
[00341]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、重量で約８０％～９５％のグルコースサブユニット及び約２０％～５％のマンノースサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、重量で約８５％～９０％のグルコースサブユニット及び約１５％～１０％のマンノースサブユニットを含む。
[00342]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、重量で約８０％～９５％のグルコースサブユニット及び約２０％～５％のガラクトースサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、重量で約８５％～９０％のグルコースサブユニット及び約１５％～１０％のガラクトースサブユニットを含む。
[00343]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、重量で約８０％～９５％のグルコースサブユニット、０％～８％のガラクトースサブユニット及び５％～２０％のマンノースサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、重量で約８０％～９０％のグルコースサブユニット、１％～５％のガラクトースサブユニット及び１０％～１５％のマンノースサブユニットを含む。
[00344]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、約１重量％～約１００重量％、約５０重量％～約１００重量％、約８０重量％～約９８重量％若しくは約８５重量％～約９５重量％又はそれらの間の任意の範囲のグルコースサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、ガラクトースサブユニットは、約０重量％～約９０重量％、約１重量％～約５０重量％、約２重量％～約２０重量％若しくは約５重量％～約１５重量％又はそれらの間の任意の範囲の量で本明細書に記載のオリゴ糖調製物中に存在する。いくつかの実施形態では、マンノースサブユニットは、約０重量％～約９０重量％、約１重量％～約５０重量％、約２重量％～約２０重量％若しくは約５重量％～約１５重量％又はそれらの間の任意の範囲の量で本明細書に記載のオリゴ糖調製物中に存在する。
[00345]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、表２９で示される単糖サブユニットの組成物を有する。
Figure 0007426548000001
［Ｈ．Ｄ型対Ｌ型］
[00346]いくつかの実施形態では、オリゴ糖における少なくとも１つの単糖サブユニットは、Ｌ型である。いくつかの実施形態では、オリゴ糖における少なくとも１つの単糖サブユニットは、Ｄ型である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物における単糖サブユニットは、天然に豊富な形態、例えば、Ｄ－グルコース、Ｄ－キシロース及びＬ－アラビノースである。
[00347]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、Ｌ型及びＤ型の単糖サブユニットの混合物を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ型対Ｄ型又はＤ型対Ｌ型の単糖サブユニットの比は、約１：１、約１：２、約１：３、約１：４、約１：５、約１：６、約１：７、約１：８、約１：９、約１：１０、約１：１２、約１：１４、約１：１６、約１：１８、約１：２０、約１：２５、約１：３０、約１：３５、約１：４０、約１：４５、約１：５０、約１：５５、約１：６０、約１：６５、約１：７０、約１：７５、約１：８０、約１：８５、約１：９０、約１：１００又は約１：１５０である。
［Ｉ．官能化オリゴ糖］
[00348]いくつかの実施形態では、調製物における１つ以上のオリゴ糖は、独立して、官能化されている。官能化オリゴ糖は、１つ以上の糖を１つ以上の官能化化合物と触媒の存在下で合わせることによって生成され得る。官能化オリゴ糖の生成方法は、国際公開第２０１２／１１８７６７号パンフレット、同第２０１４／０３１９５６号パンフレット、同第２０１６／１２２８８７号パンフレット（それら全体が、それらの開示のために、本明細書に参照により組み込まれる）に記載されている。
[00349]いくつかの実施形態では、官能化化合物は、１つ以上の酸性基（例えば、－ＣＯＯＨ）、ヒドロキシル基、Ｎ含有基（例えば、－ＣＮ、－ＮＯ２及び－Ｎ（Ｒａ）２（式中、Ｒａは、水素基、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、ハロアルキル基、ヘテロアルキル基、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロシクロアルキル基又はヘテロアリール基である）、Ｓ含有基（例えば、チオール及びサルフェート）、ハライド（例えば、－Ｃｌ）、Ｐ含有基（例えば、ホスフェート）又はこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、官能化化合物は、エーテル結合、エステル結合、酸素－硫黄結合、アミン結合又は酸素－リン結合によって少なくとも１つの単糖サブユニットに結合している。いくつかの実施形態では、１つ以上の官能化化合物は、単一の結合を介して単糖サブユニットに結合している。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの官能化化合物は、２つ以上の結合を介して１つ又は２つのオリゴ糖に結合している。
[00350]オリゴ糖調製物における各オリゴ糖について、記載された実施形態の各々は独立しており、あたかもあらゆる組み合わせが別々に記載されているかのように組み合わせることができ；従って、実施形態の任意の組み合わせが本開示に含まれることを理解すべきである。例えば、様々な実施形態は、（ｉ）アンヒドロサブユニットの有無；（ｉｉ）アンヒドロサブユニットの数及びレベル、（ｉｉｉ）アンヒドロサブユニット種の種類、（ｉｖ）アンヒドロサブユニットの位置、（ｖ）重合度、（ｖｉ）分子量、（ｖｉｉ）任意の官能基の有無、（ｖｉｉｉ）オリゴ糖の種類、（ｉｘ）グリコシド結合の型、及び（ｘ）Ｌ型対Ｄ型が挙げられるがこれらに限定されないいくつかのカテゴリにグループ化することができる。従って、記載されるオリゴ糖調製物は、異なる種の複数のオリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、少なくとも１０、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９又は１０１０の異なるオリゴ糖種を含む。いくつかの実施形態では、調製物は、少なくとも１０３、１０４、１０５、１０６又は１０９の異なるオリゴ糖種を含む。いくつかの実施形態では、調製物は、少なくとも１０３の異なるオリゴ糖種を含む。
［ＩＩＩ．オリゴ糖調製物を製造する方法］
[00351]一態様では、本明細書で、オリゴ糖調製物を製造する方法が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書で、動物飼料組成物などの栄養組成物での使用に好適であるか、又は動物に直接給餌されるオリゴ糖調製物を製造する方法が提供される。一態様では、本明細書で、１つ以上の供給糖及び触媒を含む水性組成物を、重合を誘導するのに十分な温度まで及び十分な時間加熱することを含むオリゴ糖調製物を製造する方法であって、触媒は、（＋）－カンファー－１０－スルホン酸；２－ピリジンスルホン酸；３－ピリジンスルホン酸；８－ヒドロキシ－５－キノリンスルホン酸水和物；α－ヒドロキシ－２－ピリジンメタンスルホン酸；（β）－カンファー－１０－スルホン酸；ブチルホスホン酸；ジフェニルホスフィン酸；ヘキシルホスホン酸；メチルホスホン酸；フェニルホスフィン酸；フェニルホスホン酸；ｔｅｒｔ－ブチルホスホン酸；ＳＳ）－ＶＡＰＯＬリン酸水素；６－キノリンスルホン酸、３－（１－ピリジニオ）－１－プロパンスルホネート；２－（２－ピリジニル）エタンスルホン酸；３－（２－ピリジル）－５，６－ジフェニル－１，２，４－トリアジン－ｐ，ｐ’－ジスルホン酸一ナトリウム塩水和物；リン酸水素１，１’－ビナフチル－２，２’－ジイル；ビス（４－メトキシフェニル）ホスフィン酸；フェニル（３，５－キシリル）ホスフィン酸；Ｌ－システイン酸一水和物；ポリ（スチレンスルホン酸－ｃｏ－ジビニルベンゼン）；リシン；エタンジスルホン酸；エタンスルホン酸；イセチオン酸；ホミシステイン酸；ＨＥＰＢＳ（Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－Ｎ’－（４－ブタンスルホン酸））；ＨＥＰＥＳ（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）；２－ヒドロキシ－３－モルホリノプロパンスルホン酸；２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸；メタンスルホン酸；メタニアジド；ナフタレン－１－スルホン酸；ナフタレン－２－スルホン酸；パーフルオロブタンスルホン酸；６－スルホキノボース；トリフルオロメタンスルホン酸；２－アミノエタンスルホン酸；安息香酸；クロロ酢酸；トリフルオロ酢酸；カプロン酸；エナント酸；カプリル酸；ペラルゴン酸；ラウリン酸；パルミチン酸；ステアリン酸；アラキジン酸；アスパラギン酸；グルタミン酸；セリン；トレオニン；グルタミン；システイン；グリシン；プロリン；アラニン；バリン；イソロイシン；ロイシン；メチオニン；フェニルアラニン；チロシン；トリプトファンからなる群から選択され、オリゴ糖調製物は、１（ＤＰ１画分）～ｎ（ＤＰｎ画分）から選択される別個の重合度をそれぞれ有する少なくともｎ画分のオリゴ糖を含み、ｎは、２を超える整数である、方法が提供される。
[00352]いくつかの実施形態では、ｎは、３以上の整数である。いくつかの実施形態では、ｎは、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０又は５０などの１～１００の範囲内の整数である。いくつかの実施形態では、供給糖の重合は、ステップ成長重合により達成される。いくつかの実施形態では、供給糖の重合は、重縮合により達成される。
［Ａ．供給糖］
[00353]いくつかの実施形態では、本明細書で記載されるオリゴ糖調製物を製造する方法は、１つ以上の種類の供給糖を加熱することを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の種類の供給糖は、単糖、二糖、三糖、四糖又はこれらの任意の混合物を含む。
[00354]いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、グルコースを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、グルコース及びガラクトースを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、グルコース、キシロース及びガラクトースを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、グルコース及びマンノースを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、グルコース及びフルクトースを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、グルコース、フルクトース及びガラクトースを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、グルコース、ガラクトース及びマンノースを含む。
[00355]いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、ラクトース、スクロース及びセロビオースなどの二糖を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、マルトトリオース又はラフィノースなどの三糖を含む。特定の実施形態では、１つ以上の供給糖は、グルコース、マンノース、ガラクトース、キシロース、マルト－デキストリン、アラビノース若しくはガラクトース又はこれらの任意の組み合わせを含む。特定の実施形態では、１つ以上の供給糖は、トウモロコシシロップなどの糖シロップを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、グルコース及びラクトースを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、グルコース及びスクロースを含む。
[00356]いくつかの実施形態では、供給糖の種類は、得られる製造されたオリゴ糖調製物に影響を与える可能性がある。例えば、１つ以上の供給糖が全てグルコースであるいくつかの変更形態では、得られるオリゴ糖調製物は、グルコ－オリゴ糖調製物を含む。他の実施形態では、１つ以上の供給糖が全てマンノースである場合、得られるオリゴ糖調製物は、マンノ－オリゴ糖調製物を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖が、グルコース及びガラクトースを含む場合、得られるオリゴ糖調製物は、グルコ－ガラクト－オリゴ糖調製物を含む。更に他の実施形態では、１つ以上の供給糖が、キシロース、グルコース及びガラクトースを含む場合、得られるオリゴ糖調製物は、グルコ－ガラクト－キシロ－オリゴ糖調製物を含む。
[00357]いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖の各々は、独立して、その脱水物又は水和物形態であり得る。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、グルコース、ガラクトース、フルクトース、マンノース又はこれらの任意の組み合わせを含み、グルコース、ガラクトース、フルクトース又はマンノースの各々は、独立して、その一水和物又は脱水物形態である。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、グルコース一水和物などの単糖一水和物を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、トレハロース二水和物などの糖二水和物を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、その脱水物形態の少なくとも１つの糖及びその水和物形態の少なくとも１つの糖を含む。
[00358]いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、糖を水と合わせて反応器に供給される糖溶液として提供することができる。いくつかの実施形態では、糖は固体形態で反応器に供給され、反応器内で水と組み合わせることができる。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、水を添加する前に合わせて混合する。他の実施形態では、１つ以上の供給糖は、水と合わせて、その後混合する。
[00359]いくつかの実施形態では、方法は、２つ以上の供給糖を触媒と合わせて、オリゴ糖調製物を生成することを含む。いくつかの実施形態では、２つ以上の供給糖は、グルコース、ガラクトース、フルクトース、マンノース、ラクトース又はこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、方法は、糖（例えば、単糖、二糖及び／又は三糖）の混合物を触媒と合わせて、オリゴ糖調製物を生成することを含む。他の実施形態では、方法は、糖及び糖アルコールの混合物を触媒と合わせて、オリゴ糖調製物を生成することを含む。
[00360]いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、官能化又は修飾された糖を含む。官能化又は修飾された糖は、アミノ糖、糖酸、糖アルコール、糖アミド、糖エーテル又はこれらの任意の組み合わせを含み得る。いくつかの実施形態では、アミノ糖は、ヒドロキシル基がアミン基で置換されている糖分子を指す。例示的なアミノ糖としては、Ｎ－アセチル－ｄ－グルコサミン、マンノサミン、ノイラミン酸、ムラミン酸、Ｎ－アセチル－ノイラミン、Ｎ－アセチル－ムラミン、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン、Ｎ－アセチル－マンノサミン、Ｎ－グリコリルノイラミン、アカルビオシン、Ｄ－グルコサミン及びＤ－ガラクトサミンが挙げられるが、これらに限定されない。
[00361]実施形態では、糖酸は、カルボキシル基を有する糖を指す。例示的な糖酸としては、アルドン酸（グリセリン酸、キシロン酸、グルコン酸及びアスコルビン酸など）、ウロソン酸（ノイラミン酸及びケトデオキシオクツロソン酸など）、ウロン酸（グルクロン酸、ガラクツロン酸及びイズロン酸など）及びアルダル酸（酒石酸、粘液酸及びサッカリン酸など）が挙げられるが、これらに限定されない。
[00362]いくつかの実施形態では、糖アルコールは、糖から誘導されるポリオールを指す。例示的な糖アルコールとしては、エチレングリコール、アラビトール、グリセロール、エリスリトール、トレイトール、キシリトール、リビトール、マンニトール、ソルビトール、ガラクチトール、フシトール、イジトール、イノシトール及びボレミトールが挙げられるが、これらに限定されない。
[00363]いくつかの実施形態では、糖アミドは、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ－基を含有する糖分子を指す。実施形態では、糖エーテルは、グルコシドなどのエーテル結合を含有する糖分子を指す。
[00364]いくつかの実施形態では、官能化又は修飾された糖は、グルコサミン、Ｎ－アセチルグルコサミン、グルクロン酸、ガラクツロン酸、グルシトール、キシリトール、マンニトール、ソルビトールを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の供給糖は、フコース、ラムノース、デオキシリボース又はフクロースなどのデオキシ糖を含む。
[00365]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物を製造する方法は、グラムスケールで実施される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物を製造する方法は、キログラム以上のスケールで実施される。従って、いくつかの実施形態では、方法は、０．５ｋｇ超、１ｋｇ超、２ｋｇ超、３ｋｇ超、４ｋｇ超、５ｋｇ超、６ｋｇ超、７ｋｇ超、９ｋｇ超、１０ｋｇ超、１００ｋｇ超又は１０００ｋｇ超の量で１つ以上の供給糖を含む水性組成物を加熱することを含む。いくつかの実施形態では、０．５、１、２、３、４、５、６、７、９、１０、１００、１０００又は１５００ｋｇ以下の量で１つ以上の供給糖を含む水性組成物を加熱することを含む。いくつかの実施形態では、１ｋｇ以下の量で１つ以上の供給糖を含む水性組成物を加熱することを含む。
［Ｂ．触媒］
[00366]いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、１つ以上の酸を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、鉱酸、カルボン酸；アミノ酸；スルホン酸；ボロン酸；ホスホン酸；ホスフィン酸；硫酸；リン酸；ポリ（スチレンスルホン酸－ｃｏ－ビニルベンジル－イミダゾリウムサルフェート－ｃｏ－ジビニルベンゼン）；ポリ（スチレンスルホン酸－ｃｏ－ジビニルベンゼン）；（＋）－カンファー－１０－スルホン酸；２－ピリジンスルホン酸；３－ピリジンスルホン酸；８－ヒドロキシ－５－キノリンスルホン酸水和物；α－ヒドロキシ－２－ピリジンメタンスルホン酸；（β）－カンファー－１０－スルホン酸；ブチルホスホン酸；ジフェニルホスフィン酸；ヘキシルホスホン酸；メチルホスホン酸；フェニルホスフィン酸；フェニルホスホン酸；ｔｅｒｔ－ブチルホスホン酸；ＳＳ）－ＶＡＰＯＬリン酸水素；６－キノリンスルホン酸；３－（１－ピリジニオ）－１－プロパンスルホネート；２－（２－ピリジニル）エタンスルホン酸；３－（２－ピリジル）－５，６－ジフェニル－１，２，４－トリアジン－ｐ，ｐ’－ジスルホン酸一ナトリウム塩水和物；リン酸水素１，１’－ビナフチル－２，２’－ジイル；ビス（４－メトキシフェニル）ホスフィン酸；フェニル（３，５－キシリル）ホスフィン酸；Ｌ－システイン酸一水和物；酢酸；プロピオン酸；ブタン酸；グルタミン酸；リシン；エタンジスルホン酸；エタンスルホン酸；イセチオン酸；ホミシステイン酸；ＨＥＰＢＳ（Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－Ｎ’－（４－ブタンスルホン酸））；ＨＥＰＥＳ（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）；２－ヒドロキシ－３－モルホリノプロパンスルホン酸；２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸；メタンスルホン酸；メタニアジド；ナフタレン－１－スルホン酸；ナフタレン－２－スルホン酸；パーフルオロブタンスルホン酸；６－スルホキノボース；トリフルオロメタンスルホン酸；２－アミノエタンスルホン酸；安息香酸；クロロ酢酸；トリフルオロ酢酸；カプロン酸；エナント酸；カプリル酸；ペラルゴン酸；ラウリン酸；パルミチン酸；ステアリン酸；アラキジン酸；アスパラギン酸；グルタミン酸；セリン；トレオニン；グルタミン；システイン；グリシン；プロリン；アラニン；バリン；イソロイシン；ロイシン；メチオニン；フェニルアラニン；チロシン；トリプトファン；ポリマー酸；炭素担持酸；又はこれらの任意の組み合わせを含む。
[00367]いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、（＋）－カンファー－１０－スルホン酸；２－ピリジンスルホン酸；３－ピリジンスルホン酸；８－ヒドロキシ－５－キノリンスルホン酸水和物；α－ヒドロキシ－２－ピリジンメタンスルホン酸；（β）－カンファー－１０－スルホン酸；ブチルホスホン酸；ジフェニルホスフィン酸；ヘキシルホスホン酸；メチルホスホン酸；フェニルホスフィン酸；フェニルホスホン酸；ｔｅｒｔ－ブチルホスホン酸；ＳＳ）－ＶＡＰＯＬリン酸水素；６－キノリンスルホン酸、３－（１－ピリジニオ）－１－プロパンスルホネート；２－（２－ピリジニル）エタンスルホン酸；３－（２－ピリジル）－５，６－ジフェニル－１，２，４－トリアジン－ｐ，ｐ’－ジスルホン酸一ナトリウム塩水和物；リン酸水素１，１’－ビナフチル－２，２’－ジイル；ビス（４－メトキシフェニル）ホスフィン酸；フェニル（３，５－キシリル）ホスフィン酸；Ｌ－システイン酸一水和物；ポリ（スチレンスルホン酸－ｃｏ－ジビニルベンゼン）；リシン；エタンジスルホン酸；エタンスルホン酸；イセチオン酸；ホミシステイン酸；ＨＥＰＢＳ（Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－Ｎ’－（４－ブタンスルホン酸））；ＨＥＰＥＳ（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）；２－ヒドロキシ－３－モルホリノプロパンスルホン酸；２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸；メタンスルホン酸；メタニアジド；ナフタレン－１－スルホン酸；ナフタレン－２－スルホン酸；パーフルオロブタンスルホン酸；６－スルホキノボース；トリフルオロメタンスルホン酸；２－アミノエタンスルホン酸；安息香酸；クロロ酢酸；トリフルオロ酢酸；カプロン酸；エナント酸；カプリル酸；ペラルゴン酸；ラウリン酸；パルミチン酸；ステアリン酸；アラキジン酸；アスパラギン酸；グルタミン酸；セリン；トレオニン；グルタミン；システイン；グリシン；プロリン；アラニン；バリン；イソロイシン；ロイシン；メチオニン；フェニルアラニン；チロシン；トリプトファン；又はこれらの任意の組み合わせを含む。
[00368]いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、（＋）－カンファー－１０－スルホン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、２－ピリジンスルホン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、３－ピリジンスルホン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、８－ヒドロキシ－５－キノリンスルホン酸水和物である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、α－ヒドロキシ－２－ピリジンメタンスルホン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、（β）－カンファー－１０－スルホン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、ブチルホスホン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、ジフェニルホスフィン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、ヘキシルホスホン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、メチルホスホン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、フェニルホスフィン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、フェニルホスホン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、ｔｅｒｔ－ブチルホスホン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、ＳＳ）－ＶＡＰＯＬリン酸水素である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、６－キノリンスルホン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、３－（１－ピリジニオ）－１－プロパンスルホネートである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、２－（２－ピリジニル）エタンスルホン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、３－（２－ピリジル）－５，６－ジフェニル－１，２，４－トリアジン－ｐ，ｐ’－ジスルホン酸一ナトリウム塩水和物である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、リン酸水素１，１’－ビナフチル－２，２’－ジイルである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、ビス（４－メトキシフェニル）ホスフィン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、フェニル（３，５－キシリル）ホスフィン酸である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、Ｌ－システイン酸一水和物である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、ポリ（スチレンスルホン酸－ｃｏ－ジビニルベンゼン）である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、リシンである。
[00369]いくつかの実施形態では、触媒はエタンジスルホン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はエタンスルホン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はイセチオン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はホモシステイン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はＨＥＰＢＳ（Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－Ｎ’－（４－ブタンスルホン酸））である。いくつかの実施形態では、触媒はＨＥＰＥＳ（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）である。いくつかの実施形態では、触媒は２－ヒドロキシ－３－モルホリノプロパンスルホン酸である。いくつかの実施形態では、触媒は２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はメタンスルホン酸である。実施形態では、触媒はナフタレン－１－スルホン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はいくつかの実施形態であり、触媒はメタニアジドである。いくつかでは、ナフタレン－２－スルホン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はパーフルオロブタンスルホン酸である。いくつかの実施形態では、触媒は６－スルホキノボースである。いくつかの実施形態では、触媒はトリフルオロメタンスルホン酸である。いくつかの実施形態では、触媒は２－アミノエタンスルホン酸である。いくつかの実施形態では、触媒は安息香酸である。いくつかの実施形態では、触媒はクロロ酢酸である。いくつかの実施形態では、触媒はトリフルオロ酢酸である。いくつかの実施形態では、触媒はカプロン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はエナント酸である。いくつかの実施形態では、触媒はカプリル酸である。いくつかの実施形態では、触媒はペラルゴン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はラウリン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はパルミチン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はステアリン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はアラキジン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はアスパラギン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はグルタミン酸である。いくつかの実施形態では、触媒はセリンである。いくつかの実施形態では、触媒はトレオニンである。いくつかの実施形態では、触媒はグルタミンである。いくつかの実施形態では、触媒はシステインである。いくつかの実施形態では、触媒はグリシンである。いくつかの実施形態では、触媒はプロリンである。いくつかの実施形態では、触媒はアラニンである。いくつかの実施形態では、触媒はバリンである。いくつかの実施形態では、触媒はイソロイシンである。いくつかの実施形態では、触媒はロイシンである。いくつかの実施形態では、触媒はメチオニンである。いくつかの実施形態では、触媒はフェニルアラニンである。いくつかの実施形態では、触媒はチロシンである。いくつかの実施形態では、触媒はトリプトファンである。
[00370]いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、国際公開第２０１６１２２８８７号パンフレット（その全体が参照により且つその開示のために本明細書に組み込まれる）で開示されているポリマー触媒又は炭素担持触媒である。
[00371]いくつかの実施形態では、本明細書に提供される触媒は、乾燥重量で１つ以上の飼料糖の約０．０１％～約５％、約０．０２％～約４％、約０．０３％～約３％又は約０．０５％～約２％の量で存在する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される触媒は、乾燥重量で１つ以上の飼料糖の約１％～２％の量で存在する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される触媒は、乾燥重量で１つ以上の飼料糖の約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１．０％、約１．１％、約１．２％、約１．３％、約１．４％、約１．５％、約１．６％、約１．７％、約１．８％、約１．９％、約２．０％、約２．１％、約２．２％、約２．３％、約２．４％、約２．５％、約２．６％、約２．７％、約２．８％、約２．９％又は約３．０％の量で存在する。
[00372]いくつかの実施形態では、本明細書に提供される触媒は、乾燥重量で水性組成物の約０．０１％～約５％、約０．０２％～約４％、約０．０３％～約３％又は約０．０５％～約２％の量で存在する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される触媒は、乾燥重量で水性組成物の約１％～２％の量で存在する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される触媒は、乾燥重量で水性組成物の約０．８％、約０．９％、約１．０％、約１．１％、約１．２％、約１．３％、約１．４％、約１．５％、約１．６％、約１．７％、約１．８％、約１．９％、約２．０％、約２．１％、約２．２％、約２．３％、約２．４％、約２．５％、約２．６％、約２．７％、約２．８％、約２．９％又は約３．０％の量で存在する。
[00373]いくつかの実施形態では、本明細書で提供される触媒は、２つ以上の異なる触媒の組み合わせである。いくつかの実施形態では、触媒は、樹脂及びポリマー触媒などのリサイクル可能な触媒並びにリサイクル不可能な触媒を含む。いくつかの実施形態では、触媒が少なくとも２つの異なる触媒を含む場合、触媒の各々は、本明細書で提供される量で存在する。他の実施形態では、触媒が少なくとも２つの異なる触媒を含む場合、少なくとも２つの異なる触媒は、本明細書で提供される量において凝集体で存在する。
[00374]いくつかの実施形態では、触媒は、乾燥形態で水性組成物に添加される。他の実施形態では、触媒は、水溶液などウェット形態で水性組成物に添加される。いくつかの実施形態では、水を添加する前に、触媒を１つ以上の供給糖と組み合わせる。他の実施形態では、その１つ以上の供給糖と合わせる前に、触媒を水中に溶解させる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、脱水形態の１つ以上の供給糖及びウェット形態（例えば水溶液など）の触媒を合わせることによって水性組成物を生成することを含む。
［Ｃ．水の添加］
[00375]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物を製造する方法は、水を添加して水性組成物を形成することを含む。いくつかの実施形態では、水性組成物中の水の全て又は一部は、遊離水として添加される。他の実施形態では、水性組成物中の水の全ては、例えば、糖一水和物又は二水和物において、結合水として添加される。いくつかの実施形態では、水性組成物中の水の全ては、グルコース一水和物などの単糖一水和物において、結合水として添加される。特定の実施形態では、水性組成物中の水の全て又は一部は、触媒とともに、すなわち触媒溶液を介して添加される。
［Ｄ．含水量］
[00376]オリゴ糖調製物を製造する方法が進むにつれて、反応によって水を生成することができる。例えば、いくつかの実施形態では、水は、（ｉ）グリコシド結合の形成とともに、（ｉｉ）アンヒドロサブユニットの形成とともに、又は（ｉｉｉ）他のメカニズム又は供給源により生成される。糖縮合及び脱水反応は両方とも水を伴うため、いくつかの実施形態では、含水量はオリゴ糖調製物の組成物に影響を与える。
[00377]更に、いくつかの実施形態では、含水量は、水性組成物の粘度に影響を及ぼし、これは、次に、水性組成物の混合の有効性に影響を及ぼし得る。例えば、いくつかの実施形態では、過度に粘性のある水性組成物は、水性組成物中に望ましくない不均一触媒分布をもたらす可能性がある。その上、いくつかの実施形態では、含水量が非常に低いと、水性組成物が固化し、効果的な混合が妨げられる可能性がある。他方では、他の実施形態では、含水量が極端に高いと、糖縮合反応が妨げられ、アンヒドロサブユニットのレベルが低下する可能性がある。従って、本開示は、オリゴ糖調製物の製造に好適な含水量について記載している。
[00378]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物を製造する方法は、水性組成物を形成すること及び／又は加熱することを含む。いくつかの実施形態では、水性組成物は、総重量で約０％～約８０％、約０％～約７０％、約０％～約６０％、約０％～約５０％、約０％～約４０％、約０％～約３５％、約０％～約３０％、約０％～約２５％、約０％～約２０％、約０％～約１９％、約０％～約１８％、約０％～約１７％、約０％～約１６％、約０％～約１５％、約０％～約１４％、約０％～約１３％、約０％～約１２％、約０％～約１１％、約０％～約１０％、約０％～約９％、約０％～約８％、約０％～約７％、約０％～約６％、約０％～約５％、約０％～約４％、約０％～約３％、約０％～約２％又は約０％～約１％の水を含む。いくつかの実施形態では、水性組成物は、総重量で約１％～約２０％、約１％～約１８％、約１％～約１６％、約１％～約１４％、約１％～約１２％、約１％～約１０％、約１％～約８％、約１％～約６％又は約１％～約４％の水を含む。いくつかの実施形態では、水性組成物は、総重量で約３％～約１６％、約３％～約１４％、約３％～約１２％、約３％～約１０％、約３％～約８％、約３％～約６％、約５％～約１６％、約５％～約１４％、約５％～約１２％、約５％～約１０％、約７％～約１６％、約７％～約１４％、約７％～約１２％、約７％～約１０％又は約８％～約１０％の水を含む。いくつかの実施形態では、水性組成物は、総重量で約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％又は約１５％の水を含む。いくつかの実施形態では、水性組成物は、総重量で約９％の水を含む。しかしながら、水性組成物における水の量は、反応条件及び使用される特定触媒に基づいて調節することができることを理解すべきである。いくつかの実施形態では、上記で開示されたような水性組成物における含水量は、反応の開始時に、例えば、供給糖を加熱する前に測定される。いくつかの実施形態では、上記で開示されたような水性組成物における含水量は、重合又は縮合反応の終了時に測定される。いくつかの実施形態では、上記で開示されたような水性組成物における含水量は、反応の開始時及び反応の終了時の平均含水量として測定される。
[00379]特定の実施形態では、本明細書に記載の方法は、ある期間にわたって、水性組成物中に存在する水の含有量及び／又は水の糖又は触媒との比を監視することを更に含み得る。いくつかの実施形態では、方法は、例えば、蒸留により、水性組成物中の水の少なくとも一部を除去することを更に含む。例えば、真空濾過、真空蒸留、加熱、蒸気、熱い空気及び／又は蒸発を含む当技術分野において公知の任意の方法を使用して、水性組成物から水を除去することができる。
[00380]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、吸湿性である。従って、いくつかの実施形態では、重合で形成される供給糖及びオリゴ糖の吸湿性は、水が水性組成物から除去され得る速度に影響を及ぼし得る。
[00381]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、水性組成物における含水量が、総重量で約１％～約２０％、約１％～約１８％、約１％～約１６％、約１％～約１４％、約１％～約１２％、約１％～約１０％、約１％～約８％、約２％～約１６％、約２％～約１４％、約２％～約１２％、約２％～約１０％、約２％～約８％、約２％～約６％、約４％～約１６％、約４％～約１４％、約４％～約１２％、約４％～約１０％、約４％～約８％、約６％～約１６％、約６％～約１２％、約６％～約１０％又は約６％～約８％となるように、水性組成物において、水の少なくとも一部を除去することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、水性組成物における含水量が、総重量で約２％～約１０％、約２％～約８％又は約４％～約８％となるように、水性組成物において、水の少なくとも一部を除去することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、水性組成物における含水量が、総重量で約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％又は約１０％となるように、水性組成物において、水の少なくとも一部を除去することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、水性組成物における含水量が、総重量で約４％～約８％となるように、水性組成物において、水の少なくとも一部を除去することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、重合及び／又は縮合反応の終了時の水性組成物における含水量が、上記で開示された含水量となるように、水性組成物中の水の少なくとも一部を除去することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、重合及び／又は縮合反応の開始時の水性組成物における含水量が、上記で開示された含水量となるように、水性組成物中の水の少なくとも一部を除去することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、重合及び／又は縮合反応の開始時及び終了時の水性組成物における平均含水量が、上記で開示された範囲内であるように、水性組成物中の水の少なくとも一部を除去することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、重合及び／又は縮合反応にわたって、水性組成物における含水量が、上記で開示された範囲内を維持するように、水性組成物中の水の少なくとも一部を除去することを含む。
[00382]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、水性組成物における含水量が、総重量で約１％～約２０％、約１％～約１８％、約１％～約１６％、約１％～約１４％、約１％～約１２％、約１％～約１０％、約１％～約８％、約２％～約１６％、約２％～約１４％、約２％～約１２％、約２％～約１０％、約２％～約８％、約２％～約６％、約４％～約１６％、約４％～約１４％、約４％～約１２％、約４％～約１０％、約４％～約８％、約６％～約１６％、約６％～約１２％、約６％～約１０％又は約６％～約８％となるように、水性組成物に、水の少なくとも一部を添加することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、水性組成物における含水量が、総重量で約２％～約１０％、約２％～約８％又は約４％～約８％となるように、水性組成物に、水の少なくとも一部を添加することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、水性組成物における含水量が、総重量で約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％又は約１０％となるように、水性組成物に、水の少なくとも一部を添加することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、水性組成物における含水量が、総重量で約４％～約８％となるように、水性組成物に、水の少なくとも一部を添加することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、重合及び／又は縮合反応の終了時の水性組成物における含水量が、上記で開示された含水量となるように、水性組成物に、水の少なくとも一部を添加することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、重合及び／又は縮合反応の開始時の水性組成物における含水量が、上記で開示された含水量となるように、水性組成物に、水の少なくとも一部を添加することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、重合及び／又は縮合反応の開始時及び終了時の水性組成物における平均含水量が、上記で開示された範囲内であるように、水性組成物に、水の少なくとも一部を添加することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、重合及び／又は縮合反応にわたって、水性組成物における含水量が、上記で開示された範囲内を維持するように、水性組成物に、水の少なくとも一部を添加することを含む。
[00383]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物内のオリゴ糖の重合度及び／又はアンヒドロサブユニットの量及び種類は、製造プロセスにわたって、水性組成物中に存在する水の含有量を調整又は制御することにより調節することができる。例えば、いくつかの実施形態では、オリゴ糖の重合度及び／又はアンヒドロサブユニットの量及び種類は、含水量を減らすことによって増加する。
[00384]従って、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、含水量の監視、含水量の維持、含水量の増加、含水量の減少、又はこれらの任意の組み合わせを含み得る、含水量の工程内管理（ＩＰＣ）を含む。いくつかの実施形態では、ＩＰＣプロセスは、水性組成物が本明細書に記載される温度まで加熱される間、含水量を維持することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、重合を誘導するのに十分な時間、含水量を維持することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、水を添加するか若しくは水性組成物から水を除去するか、又はその両方により、開示された範囲内で含水量を維持することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、蒸留により、開示された範囲内の含水量を維持することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、真空蒸留により、開示された範囲内の含水量を維持することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、大気圧下で蒸留により、開示された範囲内の含水量を維持することを含む。
[00385]いくつかの実施形態では、水性組成物の含水量は、総重量で約１％～約２０％、約１％～約１８％、約１％～約１６％、約１％～約１４％、約１％～約１２％、約１％～約１０％、約１％～約８％、約２％～約１６％、約２％～約１４％、約２％～約１２％、約２％～約１０％、約２％～約８％、約２％～約６％、約４％～約１６％、約４％～約１４％、約４％～約１２％、約４％～約１０％、約４％～約８％、約６％～約１６％、約６％～約１２％、約６％～約１０％又は約６％～約８％の範囲内で維持される。いくつかの実施形態では、水性組成物の含水量は、総重量で約２％～約１０％、約２％～約８％又は約４％～約８％の範囲内で維持される。いくつかの実施形態では、水性組成物の含水量は、総重量で約２％～約８％の範囲内で維持される。
[00386]水性組成物の含水量は、様々な分析方法及び機器によって決定することができる。いくつかの実施形態では、含水量は、蒸発法（例えば、乾燥減量法）、蒸留法、又は化学反応法（例えば、カールフィッシャー滴定）によって決定される。いくつかの実施形態では、含水量は、水分計などの分析機器によって決定される。いくつかの実施形態では、含水量は、カールフィッシャー滴定によって決定される。
[00387]いくつかの実施形態では、水性組成物の含水量は、反応中に測定され、含水量の工程内管理（ＩＰＣ）を実装するために使用される。特定の実施形態では、反応の含水量は、カールフィッシャー滴定、赤外線分光法、近赤外線分光法、伝導度、粘度、密度、トルク混合、又はエネルギー混合によって測定される。いくつかの実施形態では、反応の含水量の測定を使用して、水添加ポンプ又はフローバルブなど、反応の含水量を積極的に調整する装置を制御する。
[00388]理論に束縛されるものではないが、糖重合及び／又は縮合反応の間の含水量は、本明細書に記載のオリゴ糖調製物におけるアンヒドロサブユニットのレベルに影響を与え得ると考えられている。例えば、図３０で示すように、いくつかの実施形態では、より高い含水量は、より低いレベルのアンヒドロサブユニットと相関する。いくつかの実施形態では、より低い反応温度は、より低いレベルのアンヒドロサブユニット含有量と相関し得る。
［Ｅ．温度］
[00389]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物内のオリゴ糖の重合度及び／又はアンヒドロサブユニットの量及び種類は、水性組成物が加熱される温度を調整することにより調節することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物を製造する方法は、約８０℃～約２５０℃、約９０℃～約２００℃、約１００℃～約２００℃、約１００℃～約１８０℃、約１１０℃～約１７０℃、約１２０℃～約１６０℃、約１３０℃～約１５０℃、又は約１３５℃～約１４５℃の温度まで水性組成物を加熱することを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物を製造する方法は、約１００℃～約２００℃、約１００℃～約１８０℃、約１１０℃～約１７０℃、約１２０℃～約１６０℃、約１３０℃～約１５０℃、又は約１３５℃～約１４５℃の温度まで水性組成物を加熱することを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物を製造する方法は、約１３５℃～約１４５℃の温度まで、水性組成物を加熱することを含む。他の実施形態では、オリゴ糖調製物を製造する方法は、約１２５℃～約１３５℃の温度まで、水性組成物を加熱することを含む。
［Ｆ．反応時間］
[00390]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物を製造する方法は、十分な時間、水性組成物を加熱することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法に従って製造されるオリゴ糖の重合度は、反応時間によって調整することができる。
[00391]いくつかの実施形態では、十分な時間は、相当数の時間で定められる。例えば、いくつかの実施形態では、十分な時間は、少なくとも３０分、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも９時間、又は少なくとも１０時間である。いくつかの実施形態では、十分な時間は、約１～約２４時間、約１～約１６時間、約１～約８時間、約１～約４時間、約１～約３時間、約１～約２時間、約２～約１２時間、約２～約１０時間、約２～約８時間、約２～約６時間、約２～約４時間、約３～約８時間、約３～約６時間、約３～約５時間、又は約３～約４時間である。
[00392]いくつかの実施形態では、十分な時間は、オリゴ糖調製物の１つ以上の化学的性質又は物理的性質、例えば、含水量、粘度、分子量、アンヒドロサブユニット含有量及び／又は重合度の分布を測定することにより、決定される。
[00393]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の分子量は、重合中、監視される。いくつかの実施形態では、方法は、水性組成物が、本明細書に記載の数平均分子量又は重量平均分子量を達成するのに十分な時間、水性組成物を加熱することを含む。特定の実施形態では、方法は、水性組成物が、約３００～約５０００ｇ／モル、約５００～約５０００ｇ／モル、約７００～約５０００ｇ／モル、約５００～約２０００ｇ／モル、約７００～約２０００ｇ／モル、約７００～約１５００ｇ／モル、約３００～約１５００ｇ／モル、約３００～約２０００ｇ／モル、約４００～約１０００ｇ／モル、約４００～約９００ｇ／モル、約４００～約８００ｇ／モル、約５００～約９００ｇ／モル、又は約５００～約８００ｇ／モルの範囲内の数平均分子量を達成するのに十分な時間、水性組成物を加熱することを含む。特定の実施形態では、方法は、水性組成物が、約５００～約２０００ｇ／モルの数平均分子量を達成するのに十分な時間、水性組成物を加熱することを含む。特定の実施形態では、方法は、水性組成物が、約３００～約５０００ｇ／モル、約５００～約５０００ｇ／モル、約７００～約５０００ｇ／モル、約５００～約２０００ｇ／モル、約７００～約２０００ｇ／モル、約７００～約１５００ｇ／モル、約３００～約１５００ｇ／モル、約３００～約２０００ｇ／モル、約４００～約１３００ｇ／モル、約４００～約１２００ｇ／モル、約４００～約１１００ｇ／モル、約５００～約１３００ｇ／モル、約５００～約１２００ｇ／モル、約５００～約１１００ｇ／モル、約６００～約１３００ｇ／モル、約６００～約１２００ｇ／モル、又は約６００～約１１００ｇ／モルの重量平均分子量を達成するのに十分な時間、水性組成物を加熱することを含む。特定の実施形態では、方法は、水性組成物が、約７００～約３０００ｇ／モルの重量平均分子量を達成するのに十分な時間、水性組成物を加熱することを含む。
[00394]いくつかの実施形態では、十分な時間は、水性組成物がそれぞれの反応温度で反応平衡に達するのに必要な時間である。従って、いくつかの実施形態では、方法は、水性組成物が平衡に達するのに十分な時間、水性組成物を加熱することを含む。例えば、いくつかの実施形態では、平衡は、水性組成物の分子量、粘度、又はＤＰ分布を測定することによって決定される。
[00395]特定の実施形態では、平衡は、水性組成物の数平均又は重量平均分子量を測定することによって決定される。いくつかの実施形態では、平衡は、時間の経過とともに本質的に変化しない水性組成物の数又は重量平均分子量によって決定される。いくつかの実施形態では、平衡は、一定期間にわたって特定の割合未満である水性組成物の数又は重量平均分子量の変化によって決定される。いくつかの実施形態では、水性組成物の分子量は、ＨＰＬＣ又はＳＥＣにより測定される。
[00396]いくつかの実施形態では、平衡は、一定期間にわたって２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、又は５％未満の水性組成物の数又は重量平均分子量の変化によって決定される。いくつかの実施形態では、平衡は、３時間、２時間、１時間、３０分、２０分、又は１０分にわたる水性組成物の数又は重量平均分子量の変化によって決定される。いくつかの実施形態では、平衡は、１時間にわたる１５％未満の水性組成物の重量平均分子量の変化によって決定される。
[00397]特定の実施形態では、平衡は、水性組成物の粘度を測定することによって決定される。いくつかの実施形態では、平衡は、時間の経過とともに本質的に変化しない水性組成物の粘度によって決定される。いくつかの実施形態では、平衡は、一定期間にわたって特定の割合未満である水性組成物の粘度の変化によって決定される。いくつかの実施形態では、水性組成物の粘度は、粘度計又はレオメーターにより測定される。
[00398]いくつかの実施形態では、平衡は、一定期間にわたって２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、又は５％未満の水性組成物の粘度の変化によって決定される。いくつかの実施形態では、平衡は、３時間、２時間、１時間、３０分、２０分、又は１０分にわたる水性組成物の粘度の変化によって決定される。いくつかの実施形態では、平衡は、１時間にわたって１５％未満の水性組成物の粘度の変化によって決定される。
[00399]特定の実施形態では、平衡は、水性組成物のＤＰ分布を測定することによって決定される。いくつかの実施形態では、平衡は、時間の経過とともに本質的に変化しない水性組成物のＤＰ分布によって決定される。いくつかの実施形態では、水性組成物のＤＰ分布の変化は、一連のＫｍを計算することによって決定され、ここで
Figure 0007426548000002
（式中、［Ｈ２Ｏ］は、水のモル濃度（モル／Ｌ）を表し、
［ＤＰ１］、［ＤＰｍ－１］及び［ＤＰｍ］は、それぞれ、ＤＰ１、ＤＰｍ－１及びＤＰｍ画分におけるオリゴ糖のモル濃度（モル／Ｌ）を表す）
である。例えば、Ｋ２は、上記式に従って、
［ＤＰ２］［Ｈ２Ｏ］／［ＤＰ１］［ＤＰ１］
に等しい。いくつかの実施形態では、ｍは２以上且つｎ未満の整数である。いくつかの実施形態では、ｍは２以上、且つｎ以下の整数である。いくつかの実施形態では、ｍはｎに等しい。いくつかの実施形態では、ｍは、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０である。
[00400]いくつかの実施形態では、ＤＰ１、ＤＰｍ－１及びＤＰｍ画分におけるオリゴ糖の濃度は、ＳＥＣ、ＨＰＬＣ、ＦＦＦ、Ａ４Ｆ、質量分析法、又は任意の他の好適な方法によって決定される。いくつかの実施形態では、ＤＰ１、ＤＰｍ－１及びＤＰｍ画分におけるオリゴ糖の濃度は、ＳＥＣ、例えばＧＰＣなどによって決定される。いくつかの実施形態では、ＤＰ１、ＤＰｍ－１及びＤＰｍ画分におけるオリゴ糖の濃度は、質量分析、例えばＧＣ－ＭＳ、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ及びＭＡＬＤＩ－ＭＳなどによって決定される。いくつかの実施形態では、ＤＰ１、ＤＰｍ－１及びＤＰｍ画分におけるオリゴ糖の濃度は、ＨＰＬＣによって決定される。いくつかの実施形態では、水の濃度は、蒸発法（例えば、乾燥減量法）、蒸留法、又は化学反応法（例えば、カールフィッシャー滴定）によって決定される。いくつかの実施形態では、水の濃度は、水分計などの任意の好適な分析機器によって決定される。
[00401]いくつかの実施形態では、方法は、一連の少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、又は少なくとも５０のＫｍ数を計算することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、一連の少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、又は少なくとも１５のＫｍ数を計算することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、約３、４、５、６、７、８、９、１０、又は１５のＫｍ数を計算することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、Ｋ２～Ｋ４、Ｋ２～Ｋ５、Ｋ２～Ｋ６、Ｋ２～Ｋ７、Ｋ２～Ｋ８、Ｋ２～Ｋ９、Ｋ２～Ｋ１０、Ｋ２～Ｋ１１、Ｋ２～Ｋ１２、Ｋ２～Ｋ１３、Ｋ２～Ｋ１４、Ｋ２～Ｋ１５、Ｋ３～Ｋ５、Ｋ３～Ｋ６、Ｋ３～Ｋ７、Ｋ３～Ｋ８、Ｋ３～Ｋ９、Ｋ３～Ｋ１０、Ｋ３～Ｋ１１、Ｋ３～Ｋ１２、Ｋ３～Ｋ１３、Ｋ３～Ｋ１４、又はＫ３～Ｋ１５を計算することを含む。特定の実施形態では、方法は、Ｋ２～Ｋ４又はＫ３～Ｋ５を計算することを含む。
[00402]いくつかの実施形態では、Ｋｍの値は、温度、水分濃度及び／又は供給糖の量と種類に依存する。いくつかの実施形態では、Ｋｍは、約０．１～約１００、約０．１～約９０、約０．１～約８０、約０．１～約７０、約０．１～約６０、約０．１～約５０、約０．１～約４０、約０．１～約３０、約０．１～約２５、約０．１～約２０、又は約０．１～約１５である。いくつかの実施形態では、Ｋｍは、約１～約１００、約１～約９０、約１～約８０、約１～約７０、約１～約６０、約１～約５０、約１～約４０、約１～約３０、約１～約２５、約１～約２０、約１～約１５、約１～約１０、約５～約５０、約５～約４０、約５～約３０、約５～約２０、約５～約１５、又は約５～約１０である。いくつかの特定の実施形態では、Ｋｍは、約１～約１５又は約５～約１５である。
[00403]いくつかの実施形態では、計算された一連のＫｍについて、平均、標準偏差及び／又は相対標準偏差が決定される。本明細書で使用する場合、相対標準偏差は、パーセンテージで表され、標準偏差に１００を掛け、この積を平均で割ることによって得られる。
[00404]いくつかの実施形態では、平衡は、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、又は１％未満の一連のＫｍの相対標準偏差によって決定される。いくつかの実施形態では、平衡は、１５％未満、１０％未満、又は５％未満の一連のＫｍの相対標準偏差によって決定される。
［Ｇ．反応後工程］
[00405]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物を製造する方法は、水性組成物をある温度で十分な時間加熱した後、１つ以上の追加の処理工程を更に含む。いくつかの実施形態では、追加の処理工程は、例えば、分離（クロマト分離など）、希釈、濃縮、乾燥、濾過、脱塩、抽出、脱色、又はこれらの任意の組み合わせを含む。例えば、いくつかの実施形態では、方法は、希釈工程及び脱色工程を含む。いくつかの実施形態では、方法は、濾過工程及び乾燥工程を含む。
[00406]いくつかの実施形態では、方法は、オリゴ糖調製物に水を添加してオリゴ糖調製物のシロップを作る希釈工程を含む。いくつかの実施形態では、シロップ中のオリゴ糖調製物の濃度は、約５％～約８０％、約１０％～約７０％、約１０％～約６０％、約１０％～約５０％、約１０％～約４０％、約１０％～約３０％又は約１５％～約２５％である。他の実施形態では、方法は希釈工程を含まないが、むしろオリゴ糖調製物を固化させる。いくつかの実施形態では、方法は、濾過工程を含む。いくつかの実施形態では、方法は、濾過により触媒をリサイクルすることを含む。
[00407]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、脱色工程を更に含む。いくつかの実施形態では、例えば、吸収剤、活性炭、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換樹脂を使用）、水素化及び／又は濾過（例：精密濾過）による処理などの当技術分野において既知の任意の方法を使用して脱色工程を経ることができる。
[00408]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物を、塩、ミネラル及び／又は他のイオン種を除去するための材料と接触させる。特定の実施形態では、オリゴ糖調製物は、アニオン／カチオン交換カラムペアを通過する。一実施形態では、アニオン交換カラムは水酸化物の形態の弱塩基交換樹脂を含有し、カチオン交換カラムはプロトン化された形態の強酸交換樹脂を含有する。
[00409]いくつかの実施形態では、方法は、濃縮工程を含む。いくつかの実施形態では、濃縮工程は、濃度が上がったオリゴ糖調製物を生成する。例えば、いくつかの実施形態では、濃縮工程は、蒸発（例えば、真空蒸発）、乾燥（例えば、凍結乾燥及び噴霧乾燥）又はこれらの任意の組み合わせを含む。
[00410]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の少なくとも一部が分離される単離工程を含む。いくつかの実施形態では、単離工程は、結晶化、沈殿、濾過（例えば、真空濾過）及び遠心分離又はこれらの任意の組み合わせを含む。
[00411]いくつかの実施形態では、方法は、分離工程を含む。いくつかの実施形態では、分離工程は、触媒の少なくとも一部から、未反応供給糖の少なくとも一部から又はその両方から、オリゴ糖調製物の少なくとも一部を分離することを含む。いくつかの実施形態では、分離工程は、濾過、クロマトグラフィー、溶解度差、沈殿、抽出又は遠心分離を含む。
［Ｈ．反応器］
[00412]本明細書に記載の方法は、反応温度、ｐＨ、圧力及び他の要因を考慮して、糖縮合に好適な１つ以上の反応器の使用を含み得る。いくつかの実施形態では、１つ以上の好適な反応器には、フェドバッチ撹拌反応器、バッチ撹拌反応器、連続流撹拌反応器、連続栓流カラム反応器、摩擦反応器又は電磁場により誘導される撹拌を用いる反応器が含まれる。いくつかの実施形態では、１つ以上の好適な反応器には、Ｒｙｕ，Ｓ．Ｋ．，ａｎｄ Ｌｅｅ，Ｊ．Ｍ．，Ｂｉｏｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ ｗａｓｔｅ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ａｎ ａｔｔｒｉｔｉｏｎ ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．２５：５３－６５（１９８３）；Ｇｕｓａｋｏｖ，Ａ．Ｖ．，ａｎｄ Ｓｉｎｉｔｓｙｎ，Ａ．Ｐ．，Ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｏｆ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ：１．Ａ ｍａｔｈｅｍａｔｉｃａｌ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ａ ｂａｔｃｈ ｒｅａｃｔｏｒ ｐｒｏｃｅｓｓ，Ｅｎｚ．Ｍｉｃｒｏｂ．ＴｅｃｈｎｏＬ，７：３４６－３５２（１９８５）；Ｇｕｓａｋｏｖ，Ａ．Ｖ．，Ｓｉｎｉｔｓｙｎ，Ａ．Ｐ．，Ｄａｖｙｄｋｉｎ，Ｉ．Ｙ．，Ｄａｖｙｄｋｉｎ，Ｖ．Ｙ．，Ｐｒｏｔａｓ，Ｏ．Ｖ．，Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ ｕｓｉｎｇ ａ ｎｏｖｅｌ ｔｙｐｅ ｏｆ ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ ｗｉｔｈ ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ ｓｔｉｒｒｉｎｇ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｅｌｅｃｔｒｏｍａｇｎｅｔｉｃ ｆｉｅｌｄ，Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，５６：１４１－１５３（１９９６）；又はＦｅｒｎａｎｄａ ｄｅ Ｃａｓｔｉｌｈｏｓ Ｃｏｒａｚｚａ，Ｆｌａｖｉｏ Ｆａｒｉａ ｄｅ Ｍｏｒａｅｓ，Ｇｉｓｅｌｌａ Ｍａｒｉａ Ｚａｎｉｎ ａｎｄ Ｉｖｏ Ｎｅｉｔｚｅｌ，Ｏｐｔｉｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｉｎ ｆｅｄ－ｂａｔｃｈ ｒｅａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃｅｌｌｏｂｉｏｓｅ ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ，Ａｃｔａ Ｓｃｉｅｎｔｉａｒｕｍ．Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２５：３３－３８（２００３）に記載されている反応器が含まれる。
[00413]いくつかの実施形態では、１つ以上の好適な反応器には、加水分解及び／又は発酵のための流動床型反応器、上昇流ブランケット型反応器、固定床型反応器、又押出機型反応器が含まれる。いくつかの実施形態では、１つ以上の好適な反応器には、開放型反応器、閉鎖型反応器又はその両方が含まれる。いくつかの実施形態では、方法が連続プロセスを含む場合、１つ以上の好適な反応器には、スクリューミキサーなどの連続ミキサーが含まれ得る。
［Ｉ．プロセス］
[00414]いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物を製造する方法は、バッチプロセス、連続プロセス又はその両方を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物を製造する方法は、バッチプロセスを含む。例えば、バッチプロセスのいくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の後続のバッチの製造は、現在のバッチが完了するまで開始されない。いくつかの実施形態では、バッチプロセスの間、オリゴ糖調製物の全て又はかなりの量が反応器から除去される。いくつかの実施形態では、バッチプロセスの間、水性組成物が記載された温度に加熱される前又は重合が誘発される前に全ての供給糖及び触媒が反応器内で合わされる。いくつかの実施形態では、バッチプロセスの間、供給糖は、触媒の添加前、添加後又は触媒の添加と同時に添加される。
[00415]いくつかの実施形態では、バッチプロセスは、フェドバッチプロセスであり、ここで、全ての供給糖が同時に反応器に加えられるわけではない。フェドバッチプロセスのいくつかの実施形態では、供給糖の少なくとも一部は、重合中又は水性組成物が記載の温度に加熱された後に反応器に添加される。フェドバッチプロセスのいくつかの実施形態では、供給糖の少なくとも１０重量％、２０重量％、３０重量％、４０重量％、５０重量％又は６０重量％は、重合中又は水性組成物が記載の温度に加熱された後に反応器に添加される。
[00416]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物を製造する方法は、連続プロセスを含む。例えば、連続プロセスのいくつかの実施形態では、反応器の内容物は、反応器全体にわたって連続的に流れる。いくつかの実施形態では、供給糖を触媒と合わせること及びオリゴ糖調製物の少なくとも一部を除去することは同時に実施される。
[00417]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物を製造する方法は、単一容器又は多容器プロセスを含む。例えば、単一容器プロセスのいくつかの実施形態では、重合は、単一反応容器内で実施される。別の例について、多容器プロセスのいくつかの実施形態では、重合は、２つ以上の反応容器内で実施される。多容器プロセスのいくつかの実施形態では、方法は、２つ、３つ又はそれを超える反応容器を含む。多容器プロセスのいくつかの実施形態では、方法は、２つ以上の反応器からの重合生成物を組み合わせる組み合わせ工程を含む。
［ＩＶ．オリゴ糖調製物を含む栄養組成物］
[00418]本明細書では、オリゴ糖調製物を含む栄養組成物が提供される。特定の実施形態では、本明細書で、記載のオリゴ糖調製物を含む栄養組成物であって、栄養組成物内のオリゴ糖調製物の存在及び／又は濃度が、選択的に決定及び／又は検出され得る、栄養組成物が提供される。微生物群集の複雑な機能的調節を示すオリゴ糖調製物は、栄養組成物の重要な成分であり得る。従って、栄養組成物内のオリゴ糖調製物の存在及び／又は濃度は、栄養組成物の品質管理及び製造プロセスで測定する必要がある因子の１つであり得る。従って、提供される栄養組成物は、オリゴ糖調製物の存在及び／又は濃度が選択的に決定及び／又は検出され得るため、品質管理及び製造目的の観点から有利である。例えば、いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の存在及び濃度は、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖に関係しているシグナルを測定することにより、決定及び／又は検出され得る。
[00419]いくつかの実施形態では、栄養組成物は、動物飼料組成物である。いくつかの実施形態では、栄養組成物は、基礎栄養組成物を含む。
［Ａ．基礎栄養組成物］
[00420]いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、オリゴ糖調製物とは異なる炭水化物源を含む。例えば、いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、デンプン及び植物繊維などの天然に存在する炭水化物源を含む。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、デンプンを含む。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、植物繊維を含む。
[00421]いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、種子、根、塊茎、トウモロコシ、タピオカ、クズウコン、小麦、米、ジャガイモ、サツマイモ、サゴ、豆（例えば、ソラ豆、レンズ豆、緑豆、エンドウ豆及びヒヨコ豆）、トウモロコシ、キャッサバ又は他のデンプン質の食品（例えば、ドングリ、クズウコン、アラカーチャ、バナナ、大麦、パンノキ、ソバ、カンナ、コラカシア、カタクリ、クズ、マランガ、キビ、オート麦、オカ、タシロイモ、モロコシ、ライ麦、タロイモ、栗、ヒシの実及びヤムイモ）から誘導される１つ以上の炭水化物源を含む。
[00422]いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、マメ科植物（例えば、エンドウ豆、大豆、ハウチワマメ、サヤインゲン及び他の豆）、オート麦、ライ麦、チーア、大麦、果物（例えば、イチジク、アボカド、プラム、プルーン、ベリー、バナナ、リンゴの皮、マルメロ及びナシ）、野菜（例えば、ブロッコリー、ニンジン、カリフラワー、ズッキーニ、セロリ、ノパルサボテン及びエルサレムアーティチョーク）、根塊茎、根菜（例えば、サツマイモ及びタマネギ）、オオバコ種子の殻、種子（例えば、亜麻仁）、ナッツ（例えば、アーモンド）、全粒穀物食品、小麦、トウモロコシふすま、リグナン又はこれらの任意の組み合わせから誘導される１つ以上の炭水化物源を含む。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、小麦ふすま、ビートパルプ、ファジーコットンシード、大豆皮又はこれらの任意の組み合わせから誘導される１つ以上の植物繊維を含む。
[00423]いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、５００ｐｐｍ未満、４００ｐｐｍ未満、３００ｐｐｍ未満、２００ｐｐｍ未満、１００ｐｐｍ未満、５０ｐｐｍ未満、１０ｐｐｍ未満、５ｐｐｍ未満１ｐｐｍ未満のアンヒドロサブユニット又はアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、５０ｐｐｍ未満、１０ｐｐｍ未満、５ｐｐｍ未満１ｐｐｍ未満のアンヒドロサブユニット又はアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、アンヒドロサブユニットを本質的に含まない。
[00424]いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、検出可能レベルのアンヒドロサブユニットを含まない。検出又は決定方法に応じて、特定のしきい値を下回るアンヒドロサブユニットレベルは、検出できない可能性がある。例えば、いくつかの実施形態では、検出可能レベルのアンヒドロサブユニットは、基礎栄養組成物において、少なくとも１０００ｐｐｍ、少なくとも５００ｐｐｍ、少なくとも４００ｐｐｍ、少なくとも３００ｐｐｍ、少なくとも２００ｐｐｍ、少なくとも１００ｐｐｍ、少なくとも５０ｐｐｍ、少なくとも１０ｐｐｍ、少なくとも５ｐｐｍ又は少なくとも１ｐｐｍのアンヒドロサブユニット又はアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を指す。
[00425]いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、複数のオリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、オリゴ糖調製物とは異なるグリコシド結合型分布を含む。例えば、いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物は、オリゴ糖調製物よりも高い割合のα－（１，４）グリコシド結合を含む。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物におけるα－（１，４）グリコシド結合などのグリコシド結合は、１つ以上の酵素によって消化される。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物におけるグリコシド結合は、オリゴ糖調製物におけるグリコシド結合よりも容易に消化及び／又は加水分解可能である。
[00426]いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物におけるα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合又はβ－（１，６）グリコシド結合のレベルは、オリゴ糖調製物におけるそれぞれのグリコシド結合のレベルよりも、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、少なくとも１３％、少なくとも１４％又は少なくとも１５％低い。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物におけるα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合又はβ－（１，６）グリコシド結合のレベルは、オリゴ糖調製物におけるそれぞれのグリコシド結合のレベルよりも、少なくとも１０％低い。
[00427]いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物におけるα－（１，４）グリコシド結合のレベルは、オリゴ糖調製物におけるα－（１，４）グリコシド結合のレベルよりも、少なくとも５０％、少なくとも４０％、少なくとも３５％、少なくとも３０％、少なくとも２５％、少なくとも２０％、少なくとも１５％、少なくとも１０％、少なくとも５％又は少なくとも２％高い。いくつかの実施形態では、基礎栄養組成物におけるα－（１，４）グリコシド結合のレベルは、オリゴ糖調製物におけるα－（１，４）グリコシド結合のレベルよりも、少なくとも１０％高い。
［Ｂ．動物飼料組成物］
[00428]動物の種類及び年齢に応じて、栄養組成物は、オリゴ糖調製物及び基礎栄養組成物を異なる比率で含み得る。例えば、オリゴ糖調製物は、動物の種類及び年齢に好適な様々な比率で基礎栄養組成物と組み合わせることができる。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、約１～約１００００ｐｐｍ、約１～約５０００ｐｐｍ、約１～約３０００ｐｐｍ、約１～約２０００ｐｐｍ、約１～約１５００ｐｐｍ、約１～約１０００ｐｐｍ、約１～約５００ｐｐｍ、約１～約２５０ｐｐｍ、約１～約１００ｐｐｍ、約１０～約５０００ｐｐｍ、約１０～約３０００ｐｐｍ、約１０～約２０００ｐｐｍ、約１０～約１５００ｐｐｍ、約１０～約１０００ｐｐｍ、約１０～約５００ｐｐｍ、約１０～約２５０ｐｐｍ、約１０～約１００ｐｐｍ、約５０～約５０００ｐｐｍ、約５０～約３０００ｐｐｍ、約５０～約２０００ｐｐｍ、約５０～約１５００ｐｐｍ、約５０～約１０００ｐｐｍ、約５０～約５００ｐｐｍ、約５０～約２５０ｐｐｍ、約５０～約１００ｐｐｍ、約１００～約５０００ｐｐｍ、約１００～約３０００ｐｐｍ、約１００～約２０００ｐｐｍ、約１００～約１５００ｐｐｍ、約１００～約１０００ｐｐｍ、約１００～約５００ｐｐｍ、約１００～約４００ｐｐｍ、約１００～約３００ｐｐｍ、約１００～約２００ｐｐｍ、約２００～約５０００ｐｐｍ、約２００～約３０００ｐｐｍ、約２００～約２５００ｐｐｍ、約２００～約２０００ｐｐｍ、約２００～約１５００ｐｐｍ、約２００～約１０００ｐｐｍ、約２００～約５００ｐｐｍ、約５００～約５０００ｐｐｍ、約５００～約３０００ｐｐｍ、約５００～約２５００ｐｐｍ、約５００～約２０００ｐｐｍ、約５００～約１５００ｐｐｍ又は約５００～約１０００ｐｐｍの濃度で、栄養組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、約１～約５０００ｐｐｍ、約１～約１０００ｐｐｍ、約１～約５００ｐｐｍ、約１０～約５０００ｐｐｍ、約１０～約２０００ｐｐｍ、約１０～約１０００ｐｐｍ、約１０～約５００ｐｐｍ、約１０～約２５０ｐｐｍ、約１０～約１００ｐｐｍ、約５０～約５０００ｐｐｍ、約５０～約２０００ｐｐｍ、約５０～約１０００ｐｐｍ、約５０～約５００ｐｐｍ、約５０～約２５０ｐｐｍ又は約５０～約１００ｐｐｍの濃度で、栄養組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、約１～約５０００ｐｐｍ、約１０～約１０００ｐｐｍ、約１０～約５００ｐｐｍ又は約５０～約５００ｐｐｍの濃度で、栄養組成物中に存在する。
[00429]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、１０ｐｐｍ超、５０ｐｐｍ超、１００ｐｐｍ超、２００ｐｐｍ超、３００ｐｐｍ超、４００ｐｐｍ超、５００ｐｐｍ超、６００ｐｐｍ超、１０００ｐｐｍ超又は２０００ｐｐｍ超の濃度で、栄養組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、１０ｐｐｍ超、５０ｐｐｍ超、１００ｐｐｍ超、２００ｐｐｍ超又は５００ｐｐｍ超の濃度で、栄養組成物中に存在する。
[00430]いくつかの実施形態では、動物の種類及び年齢に応じて、栄養組成物は、タンパク質、ミネラル（銅、カルシウム及び亜鉛など）、塩、必須アミノ酸、ビタミン及び／又は抗生物質を更に含み得る。
[00431]本明細書では、基礎栄養組成物及び本開示のオリゴ糖調製物を含む栄養組成物を動物に投与する方法も提供される。いくつかの実施形態では、動物は、畜牛（例えば、肉牛及び乳牛）、ブタ、水性動物及び家禽から選択される。いくつかの実施形態では、動物は、雌ブタ、子ブタ及び去勢ブタなどのブタである。他の実施形態では、動物は、ニワトリ、アヒル、シチメンチョウ、ガチョウ、ウズラ及び雌鶏などの家禽である。実施形態では、家禽は、ブロイラー、ブリーダー又はレイヤーである。いくつかの実施形態では、動物は、サケ、ナマズ、バス、ウナギ、ティラピア、ヒラメ、エビ及びカニなどの水性動物である。いくつかの実施形態では、栄養組成物は、乾燥形態、液体形態、ペースト又はこれらの組み合わせで動物に投与される。いくつかの実施形態では、投与の形態、給餌速度及び給餌スケジュールは、動物の種類及び年齢に応じて変化し得る。
［Ｃ．栄養組成物を生成する方法］
[00432]本明細書では、オリゴ糖調製物を基礎栄養組成物と組み合わせることを含む、栄養組成物を製造する方法が提供される。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、アンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、基礎栄養組成物のグリコシド結合型分布とは異なるグリコシド結合型分布を含む。
[00433]いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、合成オリゴ糖調製物である。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物は、１～ｎから選択される別個の重合度をそれぞれ有する少なくともｎ画分のオリゴ糖（ＤＰ１～ＤＰｎ画分）を含む。いくつかの実施形態では、ｎは、２以上の整数である。いくつかの実施形態では、ｎは、３以上の整数である。いくつかの実施形態では、ｎは、３以上の整数である。いくつかの実施形態では、ｎは、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０又は５０などの１～１００の範囲内の整数である。いくつかの実施形態では、ＤＰ１～ＤＰｎ画分の各々は、質量分析法により測定される相対的存在量で０．１％～９０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物のＤＰ１及びＤＰ２画分は、各々独立して、質量分析法により測定される相対的存在量で約０．１％～約１５％又は約０．５％～約１０％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物のＤＰ１及びＤＰ２画分は、各々独立して、質量分析法により測定される相対的存在量で約０．１％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、１．１％、１．２％、１．３％、１．４％又は１．５％から、約８％、９％、１０％、１１％、１２％、１５％又は２０％までの範囲内のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む。いくつかの実施形態では、ｎ画分の各々におけるオリゴ糖の相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。いくつかの実施形態では、少なくとも５、１０、２０又は３０のＤＰ画分におけるオリゴ糖の相対的存在量は、その重合度とともに単調に減少する。
[00434]いくつかの実施形態では、栄養組成物を製造する方法は、オリゴ糖調製物を基礎栄養組成物と混合することを含む。例えば、いくつかの実施形態では、混合は、ドラムブレンダー、ダブルコーンブレンダー、リボンブレンダー、Ｖブレンダー、剪断ミキサー及びパドルミキサーなどの工業用ブレンダー及び／又はミキサーによって実施することができる。
[00435]いくつかの実施形態では、栄養組成物を製造する方法は、本明細書に記載の品質管理工程を更に含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の品質管理工程は、栄養組成物のサンプル中のシグナルレベルを決定すること及びシグナルレベルに基づいて栄養組成物中のオリゴ糖調製物の濃度を計算することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の品質管理工程は、分析機器により栄養組成物のサンプル中のシグナルを検出すること及びシグナルの有無に基づいて栄養組成物のバッチを受け入れる又は拒否することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の品質管理工程は、分析機器により栄養組成物の第１サンプル中の第１シグナル及び栄養組成物の第２サンプル中の第２シグナルの有無を検出すること及び第１シグナルと第２シグナルとを比較することを含む。いくつかの実施形態では、シグナル、第１シグナル及び／又は第２シグナルは、（ｉ）１つ以上のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を示すか、（ｉｉ）オリゴ糖の重合度（ＤＰ）分布に関係しているか、又は（ｉｉｉ）オリゴ糖のα－（１，２）グリコシド結合、α－（１，３）グリコシド結合、α－（１，６）グリコシド結合、β－（１，２）グリコシド結合、β－（１，３）グリコシド結合、β－（１，４）グリコシド結合又はβ－（１，６）グリコシド結合に関係している。
[00436]更に、いくつかの実施形態では、栄養組成物を製造する方法は、品質管理工程を実施後、更にオリゴ糖調製物を基礎栄養組成物と混合すること、オリゴ糖調製物のレベルを調整すること又はこれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物のレベル調整は、追加のオリゴ糖調製物を栄養組成物に添加すること又はオリゴ糖調製物の一部を栄養組成物から除去することを含む。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物のレベル調整は、追加の基礎栄養組成物を栄養組成物に添加すること又は基礎栄養組成物の一部を栄養組成物から除去することを含む。いくつかの特定の実施形態では、オリゴ糖調製物のレベル調整は、追加のオリゴ糖調製物を栄養組成物に添加することを含む。
［Ｄ．動物飼料プレミックス］
[00437]いくつかの実施形態では、栄養組成物は、記載のオリゴ糖調製物を含む動物飼料プレミックスを含む。
[00438]いくつかの実施形態では、動物飼料プレミックスは、オリゴ糖調製物と組み合わされて動物飼料プレミックスを生成し得るキャリア材料を含む。いくつかの実施形態では、キャリア材料は、栄養組成物中のオリゴ糖調製物と組み合わせるのに好適な乾燥又は液体形態の任意の材料であり得る。いくつかの実施形態では、キャリア材料は、乾燥蒸留粕、粘土、バーミキュライト、珪藻土、粉砕籾殻及び粉砕オート麦殻などの殻、飼料グレードのシリカゲル及び飼料グレードのヒュームドシリカなどのシリカ、トウモロコシグルテンフィード、トウモロコシグルテンミール及び粉砕したトウモロコシなどのトウモロコシ又はこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、キャリア材料は、粉砕したトウモロコシである。他の実施形態では、キャリア材料は、籾殻又は粉砕オート麦殻である。
[00439]いくつかの実施形態では、動物飼料プレミックスは、キャリア材料をオリゴ糖調製物と、両方とも乾燥形態で組み合わせることにより生成される。いくつかの実施形態では、動物飼料プレミックスは、キャリア材料をオリゴ糖調製物（２つのうちの１つは乾燥形態である）と組み合わせることにより生成される。いくつかの実施形態では、動物飼料プレミックスは、キャリア材料をオリゴ糖調製物と、両方とも液体形態で組み合わせることにより生成される。例えば、いくつかの実施形態では、液体形態のオリゴ糖調製物は、溶液のオリゴ糖、例えば、シロップなどのオリゴ糖の水溶液を指す。
[00440]いくつかの実施形態では、動物飼料プレミックスは、キャリア材料を、オリゴ糖調製物を含むシロップと組み合わせることにより生成される。いくつかの実施形態では、シロップ中のオリゴ糖調製物の濃度は、少なくとも４０重量％、少なくとも４５重量％、少なくとも５０重量％、少なくとも５５重量％、少なくとも６０重量％、少なくとも６５重量％、少なくとも７０重量％、少なくとも７５重量％又は少なくとも８０重量％である。いくつかの実施形態では、シロップ中のオリゴ糖調製物の濃度は、約４０重量％～８０重量％、５０重量％～７５重量％又は６０重量％～７０重量％である。
[00441]いくつかの実施形態では、動物飼料プレミックスは、粉末（例えば、流動性粉末）、スラッシュ、スラリー、ペレット形態又は液体形態である。いくつかの実施形態では、動物飼料プレミックスは、４０重量％、３０重量％、２０重量％、１５重量％、１０重量％又は５重量％未満の水分含有量を有する。いくつかの実施形態では、動物飼料プレミックスは、１０重量％又は５重量％未満の水分含有量を有する。いくつかの実施形態では、動物飼料プレミックスは、５重量％、１０重量％、１５重量％、２０重量％、２５重量％又は３０重量％超の水分含有量を有する。更なる実施形態では、動物飼料プレミックスの水分含有量は、任意の記載の範囲に調整される。例えば、いくつかの実施形態では、動物飼料プレミックスを乾燥させて、水分含有量を記載された範囲まで増加させる。
[00442]いくつかの実施形態では、特定の用途に応じて、動物飼料プレミックスは、様々なレベルのオリゴ糖調製物を含む。いくつかの実施形態では、動物飼料プレミックスは、乾燥重量で少なくとも１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は９９％のオリゴ糖調製物を含む。いくつかの実施形態では、動物飼料プレミックスは、乾燥重量で最大５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は９９％のオリゴ糖調製物を含む。
[00443]いくつかの実施形態では、動物飼料プレミックス又はキャリア材料は、ミネラル、脂肪及びタンパク質などの他の動物栄養素を更に含む。いくつかの実施形態では、キャリア材料又は動物飼料プレミックスは、銅、亜鉛又はその両方を含む。いくつかの実施形態では、キャリア材料又は動物飼料プレミックスは、イオノフォア又はコクシジウム抑制薬を含む。いくつかの実施形態では、キャリア材料又は動物飼料プレミックスは、抗生物質を含む。いくつかの実施形態では、キャリア材料は、炭水化物源を含む。いくつかの実施形態では、キャリア材料中の炭水化物源は、アンヒドロサブユニットを含まない。いくつかの実施形態では、キャリア材料中の炭水化物源は、オリゴ糖調製物のグリコシド結合型分布とは異なるグリコシド結合型分布を含む。
[00444]従って、いくつかの実施形態では、栄養組成物を製造する方法は、動物飼料プレミックスを基礎栄養組成物と組み合わせることを含む。
［Ｖ．オリゴ糖調製物を動物に提供する方法］
[00445]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、オリゴ糖調製物を動物に提供することを含む。特定の変更形態では、動物は、オリゴ糖調製物が給餌又は提供されることにより処理される。いくつかの実施形態では、動物は、意図された特定用量でオリゴ糖調製物が提供される。特定用量は、例えば、単位時間当たりに動物により摂取されるオリゴ糖調製物の質量（例えば、１日当たりのグラム）として、又は単位動物体重当たりの単位時間当たりの動物により摂取されるオリゴ糖調製物の質量（例えば、１日当たりの体重１ｋｇ当たりのオリゴ糖のｍｇ）として定量化され得る。特定の実施形態では、オリゴ糖調製物の特定用量は、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３５０、４００、４５０、５００、１０００、１５００、２０００、３０００、４０００、５０００又は１００００ｍｇ／ｋｇ／日である。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の質量は、乾燥固形分に基づいて、ＤＰ１＋含有量として測定される。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の質量は、乾燥固形分に基づいて、ＤＰ２＋含有量として測定される。
[00446]いくつかの実施形態では、動物は、栄養組成物を介した経口投与によってオリゴ糖調製物を提供される。いくつかの実施形態では、栄養組成物は、一定の濃度又は含有レベルでオリゴ糖調製物を含むように配合される。栄養組成物におけるオリゴ糖濃度又は含有レベルは、例えば、最終飼料又は栄養組成物の総質量当たりのオリゴ糖調製物の質量分率によって定量化することができる。いくつかの実施形態では、濃度又は含有レベルは、最終的な栄養組成物ごとに、現状まま、乾燥固形分に基づいてオリゴ糖の百万分率（ｐｐｍ）で測定される。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の濃度は、乾燥固形分に基づいて、ＤＰ１＋種の質量分率として測定される。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物の濃度は、乾燥固形分に基づいて、ＤＰ２＋種の質量分率として測定される。
[00447]当業者は、意図された特定用量を達成するために、栄養組成物又は最終飼料におけるオリゴ糖調製物の濃度を決定するための様々な方法及び技術を知っているであろう。例えば、年齢の関数としての平均１日飼料摂取量は、異なる種のブロイラー鶏について確立されており、栄養士又は獣医師が最終飼料に含める望ましいレベルを決定するために使用する場合がある。
[00448]いくつかの実施形態では、動物は、消費される液体を介した経口投与によってオリゴ糖調製物が提供される。いくつかの実施形態では、オリゴ糖調製物は、飲料水を介して提供される。いくつかの実施形態では、飲料水におけるオリゴ糖調製物の濃度は、意図される特定用量のオリゴ糖調製物を動物に提供するように選択される。
［ＶＩ．胃腸バリア機能不全］
[00449]いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、動物における胃腸バリアの機能不全を予防又は処置することを含む。動物の胃腸バリアは、粘液の層及び上皮腸管細胞（例えば、杯細胞を含む）の層を含む。腸管上皮は、外来抗原、微生物及びそれらの毒素並びに他の腸管内容物（例えば、食物粒子）を含む有害な管腔内実体の通過を防ぐためのバリアとして作用する。腸管上皮は、必須の食餌栄養素、電解質及び水分の腸管腔から循環への移動を可能にする選択的フィルターとしても作用する。
[00450]胃腸上皮は、経上皮／経細胞及び傍細胞という２つの主要経路を介して選択的透過性を媒介する。経細胞透過性は、一般に、上皮細胞を通った溶質輸送に関連し、アミノ酸、電解質、短鎖脂肪酸及び糖のための選択的輸送体によって主に調節される。傍細胞透過性は、上皮細胞間の空間における輸送に関連し、頂端－外側膜接合部に及び外側膜に沿って局在する細胞間複合体によって調節される。腸管上皮細胞間の接触には、３つの主要な構成要素：デスモソーム、接着結合及び密接結合が含まれる。
[00451]胃腸バリアの透過性は、例えば、外因性因子、上皮アポトーシス、サイトカイン、免疫細胞及び胃腸ミクロビオームを含む、複数の因子によって調節される。ミクロビオームの細菌及び腸内病原体は、細胞表面分子に結合し、密接結合タンパク質発現の変化を誘導することにより、腸管バリアを直接破壊することができる。ミクロビオームの細菌及び腸内病原体は、細胞損傷及びアポトーシスも促進し、上皮イオン輸送を変化させ、密接結合及び細胞骨格を破壊する毒素及びプロテアーゼを産生することができる。
[00452]胃腸バリアの機能不全は、例えば病原体及び毒素を含む腸管内容物の循環への移動を可能にし、これは動物の健康に負の影響を与え、疾患を引き起こす可能性がある。上皮細胞の炎症及び／又は損傷は、動物が栄養素を吸収する能力も低下させる。従って、胃腸バリアが損なわれた動物は不十分な栄養及び健康転帰を示し、その結果、体重増加の減少、体重減少、飼料効率の低下、肉収量の低下、飼料要求率の増加、肉品質の低下及び死亡率の上昇をもたらす。
［Ａ、胃腸バリア機能不全の予防方法］
[00453]いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、動物における胃腸バリアの機能不全を予防する方法を含む。いくつかの実施形態では、胃腸バリアの機能不全は、健康な状態の透過性を超える胃腸バリアの透過性の増加であり、これは、例えば、部分的に消化された食物、病原体及び毒素を含む部分的に消化された食物、病原体及び毒素を含む腸管内容物の循環への移動を可能にする。いくつかの実施形態では、胃腸バリア機能不全は、胃腸バリアの超透過性である。超透過性は、当技術分野で「リーキーガット」としても知られる。上述したように、リーキーガットは、毒素、細菌及び食物粒子を胃腸管の内層に浸透させ、体内の血流に進入させることができる。リーキーガットは、急性又は慢性の状態を指し得る。リーキーガットは、感染症、敗血症、腸内層の損傷を引き起こす場合がある。
[00454]リーキーガットの症状としては、粘液合成の減少、ムチン合成の減少、粘液分泌の減少、ムチン分泌の減少、栄養吸収の減少、炎症の増加、感染に対する抵抗性の減少、腸管上皮細胞の増殖の減少、腸管上皮細胞の成熟の減少、栄養不良、体重増加の減少、飼料要求率の増加、飼料効率の減少、死亡率の増加が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、リーキーガットの症状を含む、胃腸バリア機能不全の１つ以上の症状を予防する。
[00455]いくつかの実施形態では、機能不全は、動物の胃腸バリアの透過性を減少させることによって予防される。いくつかの実施形態では、胃腸バリアの透過性は、前記合成オリゴ糖調製物の投与前の前記動物の胃腸バリアの透過性と比較して約０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％又は５０％低い。いくつかの実施形態では、胃腸バリアの透過性は、前記合成オリゴ糖調製物の投与前の前記動物の胃腸バリアの透過性と比較して約０．５～４０％、０．５～３０％、０．５～２０％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～４％、０．５～３％、０．５～３％、０．５～２％、０．５～１％、１～４０％、１～３０％、１～２０％、１～１０％、１～５％、１～４％、１～３％、１～２％、５～４０％、５～３０％、５～２０％、５～１０％、１０～４０％、１０～３０％又は１０～２０％低い。
[00456]いくつかの実施形態では、機能不全は、動物の胃腸バリアの透過性を減少させることによって予防される。いくつかの実施形態では、胃腸バリアの透過性は、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の胃腸バリアの透過性よりも約０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％又は５０％低い。いくつかの実施形態では、胃腸バリアの透過性は、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物を投与された動物の胃腸バリアの透過性よりも約０．５～４０％、０．５～３０％、０．５～２０％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～４％、０．５～３％、０．５～３％、０．５～２％、０．５～１％、１～４０％、１～３０％、１～２０％、１～１０％、１～５％、１～４％、１～３％、１～２％、５～４０％、５～３０％、５～２０％、５～１０％、１０～４０％、１０～３０％又は１０～２０％低い。
［Ｂ．胃腸バリア機能不全の処置方法］
[00457]いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、動物における胃腸バリアの機能不全を処置する方法を含む。いくつかの実施形態では、胃腸バリアの機能不全は、健康な状態の透過性を超える胃腸バリアの透過性の増加であり、これは、例えば、部分的に消化された食物、病原体及び毒素を含む部分的に消化された食物、病原体及び毒素を含む腸管内容物の循環への移動を可能にする。
[00458]いくつかの実施形態では、胃腸バリア機能不全は、胃腸バリアの超透過性である。超透過性は、当技術分野で「リーキーガット」としても知られる。上述したように、リーキーガットは、毒素、細菌及び食物粒子を胃腸管の内層に浸透させ、体内の血流に進入させることができる。リーキーガットは、急性又は慢性の状態を指し得る。リーキーガットは、感染症、敗血症、腸内層の損傷を引き起こす場合がある。
[00459]リーキーガットの症状としては、粘液合成の減少、ムチン合成の減少、粘液分泌の減少、ムチン分泌の減少、栄養吸収の減少、炎症の増加、感染に対する抵抗性の減少、腸管上皮細胞の増殖の減少、腸管上皮細胞の成熟の減少、栄養不良、体重増加の減少、飼料要求率の増加、飼料効率の減少、死亡率の増加が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、リーキーガットの症状の１つ以上は、改善される。
[00460]いくつかの実施形態では、機能不全は、動物の胃腸バリアの透過性を減少させることによって予防される。いくつかの実施形態では、胃腸バリアの透過性は、前記合成オリゴ糖調製物の投与前の前記動物の胃腸バリアの透過性と比較して約０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％又は５０％低い。いくつかの実施形態では、胃腸バリアの透過性は、前記合成オリゴ糖調製物の投与前の前記動物の胃腸バリアの透過性と比較して約０．５～４０％、０．５～３０％、０．５～２０％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～４％、０．５～３％、０．５～３％、０．５～２％、０．５～１％、１～４０％、１～３０％、１～２０％、１～１０％、１～５％、１～４％、１～３％、１～２％、５～４０％、５～３０％、５～２０％、５～１０％、１０～４０％、１０～３０％又は１０～２０％低い。
[00461]いくつかの実施形態では、機能不全は、動物の胃腸バリアの透過性を減少させることによって処置される。いくつかの実施形態では、胃腸バリアの透過性は、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物の投与前の動物の胃腸バリアの透過性よりも約０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％又は３０％低い。いくつかの実施形態では、胃腸バリアの透過性は、合成オリゴ糖調製物を含まない栄養組成物の投与前の動物の胃腸バリアの透過性よりも約０．５～４０％、０．５～３０％、０．５～２０％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～１％、１～４０％、１～３０％、１～２０％、１～１０％、１～５％、１～２％、５～４０％、５～３０％、５～２０％、５～１０％、１０～４０％、１０～３０％又は１０～２０％低い。
［Ｃ．胃腸バリア透過性及び栄養吸収の検出方法］
[00462]胃腸バリア透過性は、ラクツロース－マンニトール試験のような当技術分野で公知の方法によって実証することができ、動物に、マンニトール及びラクツロースを含有する溶液を与え、尿を６時間収集し、試験する。ラクツロース（二糖類）及びマンニトール（単糖類）は、２つの水溶性の非代謝糖分子である。マンニトールは、容易に吸収され、細胞に受動的に浸透し、一方、より大きい分子量及び大きさを有するラクツロースは、健康な胃腸バリアによって部分的にのみ吸収される。収集された尿サンプル中のマンニトール及びラクツロースのレベルが高い場合、胃腸管の透過性が高すぎることを示す。両方の分子のレベルが低いことは、栄養素の吸収不良を示している。高レベルのマンニトール及び低レベルのラクツロースは、動物が正常な胃腸バリア機能を有することを示している。
[00463]胃腸バリア透過性は、消化機能に関する糞便材料の試験、脂質、タンパク質、炭水化物及び他の栄養素が小腸及び結腸で吸収される程度並びにカンジダ（ｃａｎｄｉｄａ）又は他の細菌感染、ディスバイオシス（腸管細菌の不均衡）、寄生虫感染及び消化機能不全の他の指標の存在を含む消化便分析を用いて評価することもできる。本明細書に記載される合成オリゴ糖調製物の投与によって引き起こされる腸機能の改善は、下痢の減少、リーキーガットの１つ以上の症状の減少、固形便の増加、５－ヒドロキシ－トリプトファン及び５－ヒドロキシトリプタミン及び２－メチル－５－ヒドロキシトリプタミンの産生の増加並びに細菌集団によって作製され得る他の神経伝達物質前駆体（セロトニン前駆体）によっても測定することができる。胃腸バリア透過性評価は、蛍光トレーサーを使用しても行うことができる（例えば、Ｄｒｏｓｈｏｗ ｅｔ ａｌ．，「Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｇｕｔ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｕｓｉｎｇ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｔｒａｃｅｒ ａｇｅｎｔ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，」Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ，７：１０８８８８（２０１７）に記載されるように）。他の方法としては、例えば、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ，」Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，４２１：４４－５３（２０１５）；Ｇａｌｉｐｅａｕ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｏｔｉｌｉｔｙ，２８：７（２０１６）に開示され；及び本明細書の実施例に記載されるものが挙げられる。胃腸透過性は、当技術分野で公知の多様な非消化性糖、標識デキストラン及び放射性同位体使用しても試験することができる。
[00464]胃腸バリア透過性は、前記胃腸バリアの組織サンプル又は細胞サンプルの組織学的分析によっても評価することができる。いくつかの実施形態では、１つ以上の染色剤又は標識が、当技術分野で公知のこのような分析において使用される。それらには、例えば、Ｈ＆Ｅ染色、免疫蛍光染色、免疫蛍光抗体又は他の標的化剤の使用が含まれる。顕微鏡法には、当技術分野で公知のもの全て、例えば、光学顕微鏡法、共焦点顕微鏡法、電子顕微鏡法などが含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、前記胃腸バリアの粘膜形態を評価することを含む。いくつかの実施形態では、前記評価は、絨毛の長さ、陰窩の長さ、炎症細胞浸潤のレベル又はそれらの任意の組み合わせを決定することを含む。
[00465]上記の方法と類似の方法を用いて、胃腸管が栄養素を吸収する能力を評価することができる。例えば、特定の多量又は微量栄養素、例えば脂肪のレベルは、便サンプル中で評価することができる。汗サンプルを分析して、栄養素を適切に方向付けるのに必要な酵素のレベルを検出することができる。ラクトース水素呼気試験を用いて、乳糖（例えば、ラクトース）溶液後の動物の呼気を決定することができる。栄養吸収を評価するために、胃腸バリアの生検を行うことができる。胃腸管が栄養素を吸収する能力を測定するための多数の試験が、当技術分野で公知であり、本明細書に組み込まれる。
[00466]いくつかの実施形態では、胃腸バリアによって発現される少なくとも１つの（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９又は１０）栄養輸送体のレベルを分析して、胃腸バリアが一般的に又は特定の多量若しくは微量栄養素を吸収する能力を決定する。そのような分析方法は、当技術分野で知られており、参照により本明細書に組み込まれる。輸送体としては、タンパク質又はＳＩ（スクラーゼ－イソマルターゼ）、ＳＬＣ５Ａ１０、ＳＬＣ３４Ａ１、ＳＬＣ２Ａ２、ＳＬＣ３４Ａ２、ＳＬＣ２３Ａ１、ＳＬＣ２３Ａ２、ＳＬＣ５Ａ８、ＳＬＣ１６Ａ３、ＳＬＣ４、ＳＬＣ４Ａ９、ＳＬＣ４Ａ２、ＳＬＣ４Ａ３、ＮＰＣ１Ｌ１、Ｃ６ｏｒｆ５８、ＤＤＣ、ＭＣＴ１、ＭＣＴ４、ＮａＳ１、ＤＴＤＳＴ、ＰＡＴ１、ＤＲＡ、ＣＬＤ、ＳＡＴ１、ＳＵＴ２、ＳＧＬＴ１、ＧＬＵＴ２、Ｂ０ＡＴ１、ＡＴＢ０＋、ＳＩＴ１、ＴＡＵＴ、ＥＡＡＣ１、ＡＳＣＴ２、ＳＮ１、ＳＮ２、ＰＥＰＴ１、ＳＮＡＴ２、ＧＬＹＴ１、ｙ＋ＬＡＴ１、ｙ＋ＬＡＴ２、ＣＤ３６、ＬＦＡＢＰ、ＮＰＣ１Ｌ１、ＡＢＣＧ５、ＡＢＣＧ８、ＳＶＣＴ１、ＳＶＣＴ２、ＳＭＶＴ、ＧＩＦ、ＡＭＮ、ＣＵＢＬ、ＭＲＰ１、ＦＯＬＴ、ＰＣＦＴ、ＦＯＬＲ１、ＯＡＴ１０、ＲＦＶＴ１、ＲＦＶＴ２、ＴＨＴＲ１、ＴＨＴＲ２、ＶＤＲ、ＤＣＹＴＢ、ＤＭＴ１、ＨＣＰ１、ＦＰＮ１、ＨＥＰＨ、ＨＡＭＰ、ＺＩＰ４、ＺＩＰ１１、ＺＩＰ８、ＺＩＰ１４Ａ、ＺＩＰ１４Ｂ、ＺｎＴ１、ＺｎＴ２、ＣＴＲ１、ＳＬＣ３Ａ１、ＳＬＣ１Ａ４、ＡＬＰＩ、Ｃ１７ｏｒｆ７８、ＭＵＣ１７、ＤＥＦＡ５、ＲＢＰ２、ＤＥＦＡ６、ＭＬＮ、ＭＥＰ１Ｂ、ＬＣＴ、ＴＭ４ＳＦ２０又はＦＡＢＰ６によって発現されるタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。
[00467]胃腸バリア透過性は、例えば本明細書に記載される多様なサンプルを使用して評価することができる。例えば、前記サンプルとしては、胃腸バリアの組織サンプル、胃腸バリアの生検、胃腸バリアの細胞サンプル、血液サンプル、血清サンプル、尿サンプル、糞便サンプル、盲腸（例えば、盲腸内容物）、汗サンプル又は唾液サンプルが挙げられるが、これらに限定されない。
[00468]胃腸バリアには、胃腸管、例えば、回腸、盲腸、小腸、結腸、胃、十二指腸、空腸の任意のバリアが含まれる。
［Ｄ．杯細胞増殖及び粘液産生］
[00469]いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、動物の胃腸管における杯細胞増殖を増加させることを含む。杯細胞は、胃腸バリアの上皮内層の一部を構成する単層円柱上皮細胞である。杯細胞は粘液を分泌し、粘液には、ムチンとよばれる大きい糖タンパク質が含まれている。胃腸バリアの粘液層は、上皮細胞を保護し、微生物、毒素などによる上皮細胞の破壊を防止するように作用する。
[00470]当業者に公知の標準的なアッセイを用いて、杯細胞増殖を評価することができる。例えば、本明細書の実施例に記載のインビトロアッセイを用いることができる。杯細胞に特徴的な遺伝子発現又はタンパク質発現、例えば、ムチンを含むがこれらに限定されない、多様な分子又は生化学的マーカーを使用して杯細胞増殖を評価することもできる。特定のムチン遺伝子、例えばＭＵＣ５Ｂは、胃腸管で発現し、粘液で高度に表される遺伝子産物を有する。従って、ムチン遺伝子の発現は、粘液の産生を決定するための適切なマーカーを提供する。
[00471]ムチン遺伝子発現は、ノーザンブロット分析、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、ムチン遺伝子プロモーターの検査又はインサイチュー分析のような従来の技術によって評価され得る。代わりに、ムチンタンパク質は、検出可能に標識された抗体を使用して、ウェスタンブロット分析、ＥＬＩＳＡ、免疫化学などのような従来の方法論によって評価される。形態学的基準を使用して、例えば、Ａｌｃｉａｎブルー／ＰＡＳ染色を用いてムチンについて染色して（Ｌｏｕ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１５７：１９２７－１９３４）、培養物中の杯細胞の存在又は比存在を決定することもできる。ムチンに対する抗体を、ＥＬＩＳＡアッセイを用いて検査することができる。
[00472]インビボアッセイを用いて動物における杯細胞増殖を評価することができる。動物の胃腸組織を、杯細胞の存在量について評価することができる。動物の胃腸組織サンプルを、上記のインビトロアッセイについて記載したものと同じ分子及び生化学的マーカーをについて評価することができる。
［Ｅ．感染に対する感受性］
[00473]いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、動物の感染に対する感受性を減少させることを含む。方法は、動物の集団における感染を予防することも含む。上述したように、胃腸バリア透過性の増加をもたらす胃腸バリア機能不全は、管腔内空間から循環への病原性微生物の移動を可能にする。本明細書に記載される方法は、胃腸バリア透過性を減少させることにより、動物における感染を予防する。本明細書に記載される方法は、胃腸バリア透過性を減少させることにより、感染に対する動物の感受性も減少させる。感染は、胃腸管の管腔内に存在する任意の病原性微生物によってもたらされ得る。病原体は、汚染食物を介して胃腸管に接近し得る。いくつかの実施形態では、病原体は、微生物である。いくつかの実施形態では、病原体は、細菌、ウイルス、寄生虫又は真菌である。いくつかの実施形態では、病原体は、プロテオバクテリア（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）門のものである。いくつかの実施形態では、病原体は細菌であり、ヘリコバクター（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）属、エスケリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）属、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属又はエルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）属に分類される。いくつかの実施形態では、病原体は細菌であり、トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ）、連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、リケッチア（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ）、オリエンチア（Ｏｒｉｅｎｔｉａ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、ナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）、マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）、マイコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）、レプトスピラ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）、レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、ヘモフィルス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）、フランシセラ（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ）、エーリキア（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ）、エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、コクシエラ（Ｃｏｘｉｅｌｌａ）、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）、クラミドフィラ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ）、カンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、バークホルデリア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）、ブルセラ（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）、ボレリア（Ｂｏｒｒｅｌｉａ）、ボルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）及びバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に分類される。細菌種としては、ヘリコバクター・プロルム（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｕｌｌｏｒｕｍ）、プロテオバクテリア・ジョンソニイ（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）及びラクトバチルス・クリスパツス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、病原体は、アエロモナス・ヒドロフィラ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）、カンピロバクター・フェツス（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｆｅｔｕｓ）、プレシオモナス・シゲロイデス（Ｐｌｅｓｉｏｍｏｎａｓ ｓｈｉｇｅｌｌｏｉｄｅｓ）、バチルス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）、カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）、クロストリジウム・ボツリヌム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、腸管凝集性大腸菌（ｅｎｔｅｒｏａｇｇｒｅｇａｔｉｖｅ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、腸管出血性大腸菌（ｅｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、腸管組織侵入性大腸菌（ｅｎｔｅｒｏｉｎｖａｓｉｖｅ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、毒素原性大腸菌（ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）、クレブシエラ・ニューモニア（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｙｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、プレシオモナス・シゲロイデス（Ｐｌｅｓｉｏｍｏｎａｓ ｓｈｉｇｅｌｌｏｉｄｅｓ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｓｐｐ．）、サルモネラ・チフィ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ）、サルモネラ・パラチフィ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｐａｒａｔｙｐｈｉ）、赤痢菌属（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｐｐ．）、ブドウ球菌属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．）、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、バンコマイシン耐性エンテロコッカス属（ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．）、ビブリオ属（Ｖｉｂｒｉｏ ｓｐｐ．）、ビブリオ・コレラエ（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ）、ビブリオ・パラヘモリティカス（Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）、ビブリオ・バルニフィカス（Ｖｉｂｒｉｏ ｖｕｌｎｉｆｉｃｕｓ）及びエルシニア・エンテロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）である。いくつかの実施形態では、病原体は、単剤又は多剤耐性である。１つ以上の病原体による動物の感染は、当業者に公知の標準的な方法によって評価することができる。
[00474]いくつかの実施形態では、病原体は、寄生虫である。いくつかの実施形態では、前記寄生虫は、エイメリア（Ｅｉｍｅｒｉａ）寄生虫である。いくつかの実施形態では、前記寄生虫は、エイメリア・アセルブリネ（Ｅｉｍｅｒｉａ ａｃｅｒｖｕｌｉｎｅ）、エイメリア・マキシマ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｍａｘｉｍａ）、エイメリア・ミチス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｍｉｔｉｓ）、エイメリア・テネラ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｔｅｎｅｌｌａ）、トキソプラズマ・ゴンジイ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）、ハモンジア属（Ｈａｍｍｏｎｄｉａ ｓｐｐ．）、クリプトスポリジウム・パルブム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ）、クリプトスポリジウム・ムリス（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｍｕｒｉｓ）、クリプトスポリジウム・ホミニス（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｈｏｍｉｎｉｓ）、イソスポラ・カニス（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｃａｎｉｓ）、イソスポラ・オヒオエンシス（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｏｈｉｏｅｎｓｉｓ）、イソスポラ・ブロシ（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｂｕｒｒｏｓｉ）、イソスポラ・フェリス（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｆｅｌｉｓ）である。いくつかの実施形態では、前記病原体は、コクシジウム原生動物である。いくつかの実施形態では、前記コクシジウム原生動物は、エイメリア・アセルブリネ（Ｅｉｍｅｒｉａ ａｃｅｒｖｕｌｉｎｅ）、エイメリア・マキシマ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｍａｘｉｍａ）、エイメリア・ミチス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｍｉｔｉｓ）、エイメリア・テネラ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｔｅｎｅｌｌａ）、トキソプラズマ・ゴンジイ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）、ハモンジア属（Ｈａｍｍｏｎｄｉａ ｓｐｐ．）、クリプトスポリジウム・パルブム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ）、クリプトスポリジウム・ムリス（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｍｕｒｉｓ）、クリプトスポリジウム・ホミニス（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｈｏｍｉｎｉｓ）、イソスポラ・カニス（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｃａｎｉｓ）、イソスポラ・オヒオエンシス（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｏｈｉｏｅｎｓｉｓ）、イソスポラ・ブロシ（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｂｕｒｒｏｓｉ）又はイソスポラ・フェリス（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｆｅｌｉｓ）である。
[00475]いくつかの実施形態では、動物の胃腸管の少なくとも１つのプロ炎症性サイトカイン又はケモカインのレベルは、増加する。例示的なサイトカイン及びケモカインとしては、中でも、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、例えばＴＮＦ－α及びＴＮＦ－β、ＴＮＦスーパーファミリー分子、例えばＦａｓＬ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、Ｏｘ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＴＲＡＩＬ、ＴＷＥＡＫ並びにＡｐｏ３Ｌ、ＩＬ－１α及びＩＬ－１βを含むインターロイキン－１（ＩＬ－１）、ＩＬ－２、インターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）、ＩＦＮ－α／β、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＬＩＦ、ＣＣＬ５、ＧＲＯα、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、ＲＡＮＴＥＳ、マクロファージコロニー刺激因子（ＭＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、ＣＸＣＬ２、ＣＣＬ２、リンホタクチン、フラクタルカイン又はＧＲＯ／ＫＣが挙げられるが、これらに限定されない、
[00476]いくつかの実施形態では、動物の胃腸管の少なくとも１つの抗炎症性サイトカイン又はケモカインのレベルは、減少する。例示的な抗炎症性サイトカイン及びケモカインとしては、インターロイキン（ＩＬ）－１受容体アンタゴニスト、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１３及びＴＧＦβが挙げられるが、これらに限定されない、
[00477]いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫細胞のレベルは、動物の胃腸管において増加する。別の実施形態では、少なくとも１つの免疫細胞のレベルは、動物のリンパ系において増加する。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、自然免疫細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、適応免疫細胞である。例示的な免疫細胞としては、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、樹状細胞、顆粒球（例えば、好塩基球、好酸球及び好中球を含む）、マスト細胞及び単球が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、食細胞である。食作用性免疫細胞としては、好中球、単球、マクロファージ、マスト細胞及び樹状細胞が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、免疫細胞の食作用活性は、増加する。特定の実施形態では、免疫細胞分化は、パイエル板内で行われる。
［Ｆ．胃腸サンプル］
[00478]特定の実施形態では、本明細書に記載される方法は、動物の胃腸管における特性（例えば、粘液のレベル、免疫細胞のレベル、サイトカインのレベル、ケモカインのレベルなどを含む）を検出することを含む。特定の実施形態では、特性は、動物からの胃腸サンプルにおいて検出又は定量化される。胃腸サンプルは、動物の胃腸管の代謝内容物を反映する任意の標準形態で動物から得ることができる。胃腸サンプルは、例えば、内視鏡生検によって得られた胃腸組織サンプルを含む。胃腸組織には、例えば、口腔組織、食道、胃、腸、回腸、盲腸、結腸又は直腸が含まれる。サンプルには、糞便、唾液、尿及び胃腸腹水も含まれる。胃腸サンプルを得る方法は、標準的であり、当業者に公知である。いくつかの実施形態では、前記サンプルは、血液又は血清サンプルである。
[00479]いくつかの実施形態では、サンプルは、単一の動物からの単一のサンプルである。いくつかの実施形態では、サンプルは、単一の動物からの複数のサンプルの組み合わせである。いくつかの実施形態では、細胞又はタンパク質は、分析前にサンプルから精製される。いくつかの実施形態では、単一のサンプルからの細胞又はタンパク質は、精製される。いくつかの実施形態では、単一の動物からの複数のサンプルからの細胞又はタンパク質は、精製され、続いて、分析前に組み合わされる。
［ＶＩＩ．動物のパフォーマンスを向上させる方法］
［Ａ．飼料要求率］
[00480]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、動物の飼料要求率を低下させることを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物を投与された動物は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された動物と比較してより低い飼料要求率を有する。本明細書で使用する場合、飼料要求率（ＦＣＲ）という用語は、飼料投入量（例えば、動物により摂取されるもの）の畜産生産量との比を指し、畜産生産物は、目的の畜産物である。例えば、乳畜に関する畜産生産物が乳である一方で、肉のために飼育された動物に関する畜産生産物は体質量である。
[00481]いくつかの実施形態では、動物は肉のために飼育され、目的の畜産生産物は体質量である。従って、いくつかの実施形態では、ＦＣＲは、摂取された飼料の重量を処理前の動物の最終体重と比較した比を指す。いくつかの実施形態では、ＦＣＲは、摂取された飼料の重量を処理前の動物の最終体重増加量と比較した比を指す。ＦＣＲが異なる期間にわたり動物又は動物の集団について測定され得ると理解すべきである。例えば、いくつかの実施形態では、ＦＣＲは、動物の生存期間全体にわたるＦＣＲである。他の実施形態では、ＦＣＲは、１日のＦＣＲ若しくは１週間のＦＣＲ又は特定の時点（例えば、特定の日）に至るまで測定された累積ＦＣＲである。
[00482]性能目標最小値ＦＣＲ（最適ＦＣＲ）が、異なる種類の動物について異なる場合があり、１種類の動物の異なる品種（例えば、異なる品種のブロイラー鶏又は異なる品種のブタ）について異なる場合があることは、当業者であれば認識しているであろう。性能目標最小値ＦＣＲは、動物の年齢（例えば、仕上げ期と比較して育成期にあるニワトリ又はブタ）又は動物の性別に応じて異なる場合もある。最適ＦＣＲがこれらの要素の任意の組み合わせに応じて異なり得ることは明らかであろう。
[00483]性能目標最小値は、概して、理想的な成長条件、理想的な動物の健康及び理想的な食餌栄養の下で、所与の動物及び品種で観察される、最も低い飼料効率を指す。一般的な成長条件下で動物が性能目標最小値ＦＣＲを達成しない場合があることは、当業者に周知である。動物は、健康、栄養、環境及び／又は群集による多様な影響のために、その性能目標最小値ＦＣＲを達成しない場合がある。動物は、例えば、環境病原性ストレス、過度の環境温度（熱ストレス）、過度の環境湿度、過密又は飼料若しくは飲料水の入手困難などの他の社会的相互作用の影響を含み得る負荷環境で飼育される場合、その性能目標最小値ＦＣＲを達成しない場合がある。いくつかの実施形態では、動物は、疾患又は環境病原性ストレスのために、その性能目標最小値ＦＣＲを達成しない場合がある。他の実施形態では、動物は、過度の環境温度（熱ストレス）又は過度の環境湿度のために、その性能目標最小値ＦＣＲを達成しない場合がある。更に他の実施形態では、動物は、過密又は飼料若しくは飲料水の入手困難などの他の社会的相互作用の影響のために、その性能目標最小値ＦＣＲを達成しない場合がある。
[00484]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された動物は、性能目標最小値ＦＣＲより少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％又は１０％高い、ＦＣＲを有する。特定の実施形態では、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された動物は、性能目標最小値より１％～１０％高いか、性能目標最小値より２％～１０％高いか、又は性能目標最小値より５％～１０％高い、ＦＣＲを有する。
[00485]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された動物は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された動物と比較して、性能目標最小値により近いＦＣＲを有する。特定の実施形態では、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された動物は、性能目標最小値より０～１０％高いか、性能目標最小値より０～５％高いか、又は性能目標最小値より０～２％高い、ＦＣＲを有する。
[00486]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された動物は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された動物と比較してより低い飼料要求率を有する。例えば、特定の実施形態では、合成オリゴ糖調製物を含む食餌が提供された動物は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された動物と比較して少ない食物を摂取するが、同じ畜産生産量を有する。他の実施形態では、合成オリゴ糖調製物を含む食餌が提供された動物は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された動物と比較して同じ量の食物を摂取するが、より高い畜産生産量を有する。更に他の実施形態では、合成オリゴ糖調製物を含む食餌が提供された動物は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された動物と比較して少ない食物を摂取し、より高い畜産生産量を有する。
[00487]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された動物のＦＣＲは、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された動物と比較して、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも４％、少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも１０％、少なくとも１２％、１～１０％、４～１０％、１～８％、４～８％、１～６％又は４～６％低減する。いくつかの実施形態では、動物は、家禽である。特定の実施形態では、家禽のＦＣＲは、０～１４日齢にかけて、１５～２８日齢にかけて、２９～３５日齢にかけて、３５日にわたり、４２日にわたり、６週にわたり、６．５週にわたり、０～３５日齢にかけて、０～４２日齢にかけて、０～６週齢にかけて、０～６．５週齢にかけて、１５～３５日齢にかけて、３６～４２日齢にかけて、１５～３９日齢にかけて又は４０～４６日齢にかけて低減する。
[00488]一実施形態では、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の３５日にわたるＦＣＲは、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された家禽と比較して４～６％低減する。例えば、特定の実施形態では、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物について説明する栄養組成物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の３５日にわたるＦＣＲは１．５３であり、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された家禽の３５日にわたるＦＣＲは１．６１であり、オリゴ糖調製物を含む栄養組成物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽のＦＣＲは、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された家禽と比較して約５％低減する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の４２日、６週又は６．５週の日数にわたるＦＣＲは、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された家禽と比較して４～６％低減する。
[00489]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物、栄養調製物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された動物集団は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された動物集団と比較してより低いＦＣＲを有し、ＦＣＲは、動物集団の死亡率に対して補正される。
[00490]特定の実施形態では、合成オリゴ糖調製物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された動物は、合成オリゴ糖調製物を含まないが１つ以上の抗生物質、１つ以上のイオノフォア、可溶性トウモロコシ繊維、変性コムギデンプン若しくは酵母マンナン又はこれらの組み合わせを含む食餌が提供された動物よりも、低いＦＣＲを有する。
[00491]ＦＣＲを決定する際、少数の統計によるノイズを低減させるためにＦＣＲを死亡率に対して調整し得るは、当技術分野において既知である。ＦＣＲを死亡率に対して調整するための方法は、当業者に周知である。
[00492]前述の実施形態のいずれとも組み合わされ得るいくつかの実施形態では、家禽は個々の家禽であり、他の実施形態では、家禽は家禽集団である。
[00493]いくつかの実施形態では、動物は、家禽であり、動物飼料組成物は、家禽飼料であり、合成オリゴ糖調製物、家禽栄養組成物、家禽飼料プレミックス又は家禽飼料組成物飼料は、家禽に給餌されると合成オリゴ糖調製物を含まない飼料組成物が給餌された家禽と比較して、飼料要求率（ＦＣＲ）を最大約１０％若しくは約５％又は１％～１０％、２％～１０％、３％～１０％、４％～１０％、５％～１０％、２％～５％、２％～６％、２％～７％、２％～８％、２％～９％若しくは１％～５％低減させる。
[00494]特定の実施形態では、家禽は、疾患若しくは障害を患っているか、又は負荷環境で飼育されており、合成オリゴ糖調製物、家禽栄養組成物、家禽飼料プレミックス又は家禽飼料組成物飼料は、家禽に給餌されると、合成オリゴ糖調製物を含まない飼料組成物が給餌された家禽と比較して、飼料要求率（ＦＣＲ）を最大約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％若しくは約５％又は１％～３０％、５％～３０％、１０％～３０％、５％～２０％、１０％～２０％、１％～２０％、１％～１５％、１％～１０％、２％～１０％、３％～１０％、４％～１０％、５％～１０％、２％～５％、２％～６％、２％～７％、２％～８％、２％～９％若しくは１％～５％低減させる。
[00495]いくつかの実施形態では、動物は、ブタであり、動物飼料組成物は、ブタ飼料であり、合成オリゴ糖調製物、ブタ栄養組成物、ブタ飼料プレミックス又はブタ飼料組成物は、ブタに給餌されると、合成オリゴ糖調製物を含まない飼料組成物が給餌されたブタと比較して、飼料要求率（ＦＣＲ）を最大約１５％、約１０％若しくは約５％又は１％～１５％、２％～１５％、３％～１５％、４％～１５％、５％～１５％、１０％～１５％、１％～１０％、２％～１０％、３％～１０％、４％～１０％、５％～１０％、２％～５％、２％～６％、２％～７％、２％～８％、２％～９％若しくは１％～５％低減させる。
[00496]特定の実施形態では、ブタは、疾患若しくは障害を患っているか、又は負荷環境で飼育されており、合成オリゴ糖調製物、ブタ栄養組成物、ブタ飼料プレミックス又はブタ飼料組成物は、ブタに給餌されると、合成オリゴ糖調製物を含まない飼料組成物が給餌されたブタと比較して、飼料要求率（ＦＣＲ）を最大約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％若しくは約５％又は１％～４０％、５％～４０％、１０％～４０％、１５％～４０％、２０％～４０％、２５％～４０％、３０％～４０％、１％～３０％、５％～３０％、１０％～３０％、５％～２０％、１０％～２０％、１％～２０％、１％～１５％、１％～１０％、２％～１０％、３％～１０％、４％～１０％、５％～１０％、２％～５％、２％～６％、２％～７％、２％～８％、２％～９％若しくは１％～５％低減させる。
［Ｂ．体重］
[00497]いくつかの実施形態では、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が給餌される対象動物は、オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が給餌されない対照動物と比較して、体重増加量の増加を経験し得る。特定の実施形態では、対象動物と対照動物との両方が、重量基準で同じ量の飼料を摂取するが、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された対象動物は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が給餌される対照動物と比較して、体重増加量の増加を経験する。
[00498]動物の体重増加量は、当技術分野で既知の任意の好適な方法によって決定され得る。例えば、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物の給餌レジメンを受ける動物の体重増加量を決定するために、当業者は、その給餌レジメン前の動物の質量を測定し、動物に合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が給餌された後の動物の質量を測定し、これら２つの測定値の差を決定することができる。
[00499]いくつかの実施形態では、体重増加量は、平均１日体重増加量（平均１日増体量（ＡＤＧ）とも称される）、平均週間体重増加量（ＡＷＧ）又は最終体重増加量（ＢＷＧ）であり得る。
［Ｃ．平均１日体重増加量］
[00500]いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物を動物に提供すると、合成オリゴ糖調製物を含まない飼料が提供された動物よりも増加した平均１日体重増加量がもたらされる。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物を動物集団に提供すると、合成オリゴ糖調製物を含まない飼料が提供された動物集団よりも増加した平均１日体重増加量がもたらされる。
[00501]一実施形態では、動物の平均１日体重増加量は、個々の動物が１日毎に増加させた体重を所与の期間にわたって平均したものである。いくつかの実施形態では、動物集団の平均１日体重増加量は、個々の各動物の平均１日体重増加量を集団全体で平均したものであり、平均１日体重増加量は、個々の動物が１日毎に増加させた体重を所与の期間にわたって平均したものである。更に他の実施形態では、動物集団の平均１日体重増加量は、集団が１日毎に増加させた全体重を集団内の個々の動物の数で除し、所与の期間にわたって平均したものである。例えば、動物集団全体での平均１日体重増加量をもたらすように、１日体重増加量又は平均１日体重増加量を更に平均し得ることが理解されるべきである。
[00502]特定の実施形態では、動物は、家禽であり、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽は、１日当たり少なくとも２０グラム、１日当たり少なくとも３０グラム、１日当たり少なくとも４０グラム、１日当たり少なくとも５０グラム、１日当たり少なくとも６０グラム、１日当たり少なくとも７０グラム、１日当たり少なくとも８０グラム、１日当たり少なくとも９０グラム、１日当たり２０～１００グラム、１日当たり２０～８０グラム、１日当たり３０～５０グラム、１日当たり４０～６０グラム、１日当たり５０～７０グラム又は１日当たり７０～９０グラムの平均１日体重増加量を有する。一実施形態では、動物は、家禽であり、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽は、１日当たり少なくとも５０グラムの平均１日体重増加量を有する。特定の実施形態では、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された家禽の平均１日体重増加量より少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、１～１０％、２～８％又は３～５％高い平均１日体重増加量を有する。
[00503]特定の実施形態では、動物は、家禽であり、家禽は０～１４日齢であり、平均１日体重増加量は、１日当たり少なくとも３０グラム、少なくとも４０グラム又は少なくとも５０グラムである。
[00504]他の実施形態では、動物は、家禽であり、家禽は１４～２８日齢であり、平均１日体重増加量は、１日当たり少なくとも７０グラム、少なくとも８０グラム又は少なくとも９０グラムである。
[00505]更に他の実施形態では、動物は、家禽であり、家禽は２９～３５日齢であり、平均１日体重増加量は、１日当たり少なくとも５０グラム、少なくとも６０グラム又は少なくとも７０グラムである。
[00506]前述の内容と組み合わされ得るいくつかの実施形態では、動物は、家禽であり、動物飼料組成物は、家禽飼料であり、合成オリゴ糖調製物、家禽栄養組成物、家禽飼料プレミックス又は家禽飼料組成物は、家禽に給餌されると、合成オリゴ糖調製物を含まない飼料組成物が給餌された家禽と比較して、家禽の平均１日増体量を最大約１０％若しくは約５％又は１％～１０％、２％～１０％、３％～１０％、４％～１０％、５％～１０％、２％～５％、２％～６％、２％～７％、２％～８％、２％～９％若しくは１％～５％増加させる。
[00507]特定の実施形態では、家禽は、疾患若しくは障害を患っているか、又は負荷環境で飼育されており、合成オリゴ糖調製物、家禽栄養組成物、家禽飼料プレミックス又は家禽飼料組成物は、家禽に給餌されると、合成オリゴ糖調製物を含まない飼料組成物が給餌された家禽と比較して、家禽の平均１日増体量を最大約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％若しくは約５％又は１％～３０％、５％～３０％、１０％～３０％、５％～２０％、１０％～２０％、１％～２０％、１％～１５％、１％～１０％、２％～１０％、３％～１０％、４％～１０％、５％～１０％、２％～５％、２％～６％、２％～７％、２％～８％、２％～９％若しくは１％～５％増加させる。
[00508]前述の内容と組み合わされ得るいくつかの実施形態では、動物は、ブタであり、動物飼料組成物は、ブタ飼料であり、合成オリゴ糖調製物、ブタ栄養調製物、ブタ飼料プレミックス又はブタ飼料組成物は、ブタに給餌されると、合成オリゴ糖調製物を含まない飼料組成物が給餌されたブタと比較して、ブタの平均１日増体量を最大約１５％、約１０％若しくは約５％又は１％～１５％、２％～１５％、３％～１５％、４％～１５％、５％～１５％、１０％～１５％、１％～１０％、２％～１０％、３％～１０％、４％～１０％、５％～１０％、２％～５％、２％～６％、２％～７％、２％～８％、２％～９％若しくは１％～５％増加させる。
[00509]特定の実施形態では、ブタは、疾患若しくは障害を患っているか、又は負荷環境で飼育されており、オリゴ糖調製物、ブタ栄養組成物、ブタ飼料プレミックス又はブタ飼料組成物は、ブタに給餌されると、合成オリゴ糖調製物を含まない飼料組成物が給餌されたブタと比較して、ブタの平均１日増体量を最大４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％若しくは約５％又は１％～４０％、５％～４０％、１０％～４０％、１５％～４０％、２０％～４０％、２５％～４０％、３０％～４０％、１％～３０％、５％～３０％、１０％～３０％、５％～２０％、１０％～２０％、１％～２０％、１％～１５％、１％～１０％、２％～１０％、３％～１０％、４％～１０％、５％～１０％、２％～５％、２％～６％、２％～７％、２％～８％、２％～９％若しくは１％～５％増加させる。
[00510]特定の実施形態では、動物は、ブタであり、合成オリゴ糖調製物、ブタ栄養調製物、ブタ飼料プレミックス又はブタ飼料組成物が提供されたブタは、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供されたブタの平均１日体重増加量より少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、１～１０％、２～８％又は３～５％高い平均１日体重増加量を有する。
［Ｄ．平均週間体重増加量］
[00511]いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物を動物に提供すると、合成オリゴ糖調製物を含まない飼料が提供された動物よりも増加した平均週間体重増加量がもたらされる。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物を動物集団に提供すると、合成オリゴ糖調製物を含まない飼料が提供された動物集団よりも増加した平均週間体重増加量がもたらされる。
[00512]一実施形態では、動物の平均週間体重増加量は、個々の動物が各週に増加させた体重を所与の期間にわたって平均したものである。いくつかの実施形態では、動物集団の平均週間体重増加量は、個々の各動物の平均週間体重増加量を集団全体で平均したものであり、平均週間体重増加量は、個々の動物が各週に増加させた体重を所与の期間にわたって平均したものである。更に他の実施形態では、動物集団の平均週間体重増加量は、集団が各週に増加させた全体重を集団内の個々の動物の数で除し、所与の期間にわたって平均したものである。例えば、動物集団全体での平均週間体重増加量をもたらすように、平均週間体重増加量を更に平均し得ることが理解されるべきである。
[00513]特定の実施形態では、動物は、家禽であり、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽は、１週当たり少なくとも１００グラム、１週当たり少なくとも２００グラム、１週当たり少なくとも３００グラム、１週当たり少なくとも４００グラム、１週当たり少なくとも５００グラム、１週当たり少なくとも６００グラム、１週当たり少なくとも７００グラム、１週当たり少なくとも８００グラム、１週当たり１００～８００グラム、１週当たり１００～４００グラム、１週当たり３００～６００グラム、１週当たり５００～８００グラム又は１週当たり３５０～５５０グラムの平均週間体重増加量を有する。一実施形態では、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽は、１週当たり少なくとも４００グラムの平均週間体重増加量を有する。特定の実施形態では、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽は、オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された家禽の平均週間体重増加量より少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、１～１０％、２～８％又は３～５％高い平均週間体重増加量を有する。
[00514]特定の実施形態では、動物は、ブタであり、合成オリゴ糖調製物、ブタ栄養組成物、ブタ飼料プレミックス又はブタ飼料組成物が提供されたブタは、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供されたブタの平均週間体重増加量より少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、１～１０％、２～８％又は３～５％高い平均週間体重増加量を有する。
［Ｅ．最終体重増加量］
[00515]いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物を動物に提供すると、合成オリゴ糖調製物を含まない飼料が提供された動物よりも増加した最終体重増加量がもたらされる。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物を動物集団に提供すると、合成オリゴ糖調製物を含まない飼料が提供された動物集団よりも増加した平均最終体重増加量がもたらされる。
[00516]いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物を動物若しくは動物集団に提供すると、合成オリゴ糖調製物を含まない飼料が提供される動物若しくは動物集団よりも性能目標最大値に近い、最終体重増加量又は平均最終体重増加量がもたらされる。性能目標最大値は概して、理想的な成長条件、理想的な動物の健康及び理想的な食餌栄養の下で、所与の種類の動物及び品種に関して観察される、最も高い実際の体重増加量を指す。
[00517]一実施形態では、最終体重増加量は、個々の動物がある期間にわたって増加させる体重の量である。例えば、一実施形態では、全体重増加量は、個々の動物が、０日齢から、動物の処理前に測定される最終体重又は動物の処理の日に測定される最終体重までに増加させる体重の量である。例えば、一実施形態では、動物の０日目～２８日目の全体重増加量は、個々の動物が０日齢から２８日齢までに増加させる体重の量である。
[00518]別の実施形態では、平均全体重増加量は、個々の動物がある期間にわたって増加させる体重の量を動物集団全体で平均したものである。例えば、一実施形態では、平均全体重増加量は、個々の動物が、０日齢から、動物の処理前に測定される最終体重又は動物の処理の日に測定される最終体重までに増加させる体重の量を、動物集団全体で平均したものである。更に別の実施形態では、平均全体重増加量は、動物集団がある期間にわたって増加させる体重の量を、集団内の個々の動物の数で除したものである。例えば、一実施形態では、平均全体重増加量は、動物集団が、０日齢から、動物集団の処理前に測定される最終体重又は動物の処理の日に測定される最終体重までに増加させる体重の量を、集団内の個々の動物の数で除したものである。
[00519]全体重増加量及び平均全体重増加量の値を更に平均し得ることが理解されるべきである。例えば、同じ種類の動物の異なる集団の平均全体重増加量を平均して、集団全体の平均全体重増加量を得ることができる。
[00520]特定の実施形態では、動物は、家禽であり、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽は、少なくとも３ｋｇ、少なくとも２．５ｋｇ、少なくとも２ｋｇ、少なくとも１．５ｋｇ、少なくとも１ｋｇ、１～３ｋｇ又は１．５～２．５ｋｇの最終体重増加量を有する。一実施形態では、合成オリゴ糖調製物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽は、少なくとも２ｋｇの最終体重増加量を有する。特定の実施形態では、合成オリゴ糖調製物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された家禽の最終体重増加量より少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、１～１０％、２～８％又は３～５％高い最終体重増加量を有する。特定の実施形態では、合成オリゴ糖調製物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された家禽の最終体重増加量より少なくとも０．０１ｋｇ、少なくとも０．０２ｋｇ、少なくとも０．０３ｋｇ、少なくとも０．０４ｋｇ、少なくとも０．０５ｋｇ、少なくとも０．０６ｋｇ、少なくとも０．０７ｋｇ、少なくとも０．０８ｋｇ、少なくとも０．０９ｋｇ、少なくとも０．１ｋｇ、０．０１～０．１ｋｇ、０．０３～０．０７ｋｇ又は０．０４～０．０６ｋｇ高い最終体重増加量を有する。
[00521]特定の実施形態では、動物は、家禽であり、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽は、少なくとも３ｋｇ、少なくとも２．５ｋｇ、少なくとも２ｋｇ、少なくとも１．５ｋｇ、少なくとも１ｋｇ、１～３ｋｇ又は１．５～２．５ｋｇの平均最終体重増加量を有する。一実施形態では、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽は、少なくとも２ｋｇの平均最終体重増加量を有する。特定の実施形態では、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された家禽の平均最終体重増加量より少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、１～１０％、２～８％又は３～５％高い平均最終体重増加量を有する。特定の実施形態では、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された家禽の平均最終体重増加量より少なくとも０．０１ｋｇ、少なくとも０．０２ｋｇ、少なくとも０．０３ｋｇ、少なくとも０．０４ｋｇ、少なくとも０．０５ｋｇ、少なくとも０．０６ｋｇ、少なくとも０．０７ｋｇ、少なくとも０．０８ｋｇ、少なくとも０．０９ｋｇ、少なくとも０．１ｋｇ、０．０１～０．１ｋｇ、０．０３～０．０７ｋｇ又は０．０４～０．０６ｋｇ高い平均最終体重増加量を有する。
[00522]いくつかの実施形態では、動物は、家禽であり、家禽は０～１４日齢、１５～２８日齢、２９～３５日齢、０～４２日齢、０～６週齢又は０～６．５週齢である。いくつかの実施形態では、幼動物期は０～１４日齢であり、育成期は１５～２８日齢であり、仕上げ期は２９～３５日齢である。他の実施形態では、幼動物期は０～１４日齢であり、育成期は１５～３５日齢であり、仕上げ期は３６～４２日齢である。更に他の実施形態では、幼動物期は０～１４日齢であり、育成期は１５～３９日齢であり、仕上げ期は４０～４６日齢である。家禽の幼動物期、育成期及び仕上げ期の長さは、家禽の意図される用途又は家禽産物に応じて変化し得ると理解すべきである。例えば、いくつかの実施形態では、幼動物期、育成期及び仕上期の長さは、家禽の意図される用途がパック詰め鶏肉のための加工と比較してブロイラー鶏である場合に異なり得る。
[00523]前述の実施形態のいずれとも組み合わされ得るいくつかの実施形態では、家禽は個々の家禽であり、他の実施形態では、家禽は家禽集団である。
[00524]特定の実施形態では、合成オリゴ糖調製物、ブタ栄養組成物、ブタ飼料プレミックス又はブタ飼料組成物が提供されたブタは、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供されたブタの最終体重増加量より少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、１～１０％、２～８％又は３～５％高い最終体重増加量を有する。
[00525]特定の実施形態では、合成オリゴ糖調製物、ブタ栄養組成物、ブタ飼料プレミックス又はブタ飼料組成物が提供されたブタは、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供されたブタの平均最終体重増加量より少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、１～１０％、２～８％又は３～５％高い平均最終体重増加量を有する。
[00526]前述の実施形態のいずれとも組み合わされ得るいくつかの実施形態では、ブタは個々のブタであり、他の実施形態では、ブタはブタ集団である。
［Ｆ．畜産物の収率］
[00527]特定の実施形態では、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物を動物に提供すると、合成オリゴ糖調製物を含まない飼料が提供された動物と比較して増加した畜産物の収率がもたらされる。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された動物は、合成オリゴ糖調製物を含まない飼料が提供された動物と比較して少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、１～１０％、４～１０％、６～１０％又は２～８％多くの畜産物を生産する。例えば、いくつかの実施形態では、畜産物は動物の肉であり、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物が提供された動物は、オリゴ糖調製物が提供されない動物と比較してより多くの量の肉を生産する。いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物を動物集団に提供すると、合成オリゴ糖調製物を含まない飼料が提供された動物集団と比較して増加した畜産物の平均収率がもたらされる。いくつかの実施形態では、平均畜産物収率は、個々の各動物から得られた畜産物の量を動物集団全体で平均したものである。
[00528]いくつかの実施形態では、畜産物は、動物の肉（例えば、消費者に販売されても、食品を生産するために加工されても、ヒトによって摂取され得る肉）である。特定の実施形態では、動物は、家禽であり、畜産物は、家禽中抜き屠体、家禽中抜き屠体からの脚肉、家禽中抜き屠体からの胸肉、家禽中抜き屠体からのドラム肉、家禽中抜き屠体からの脂肪、家禽骨抜き屠体からの胸肉又は家禽骨抜き屠体からの脚肉である。他の実施形態では、動物は、家禽であり、畜産物は、白肉、胸肉のフィレ及び胸肉のテンダーである。別の実施形態では、動物は、家禽であり、産物はパック詰め鶏肉である。更に別の実施形態では、動物は、家禽であり、産物は臓物抜きの丸鳥（ＷＯＧ）である。
[00529]いくつかの実施形態では、畜産物の収率は、個々の動物から得られる収率である。いくつかの実施形態では、畜産物の平均収率は、動物集団内の個々の各動物から得られた収率を集団全体で平均したものである。更に別の実施形態では、畜産物の平均収率は、動物集団から得られた畜産物の全収率を、動物集団内の個々の動物の数で除したものである。
[00530]いくつかの実施形態では、動物は、家禽であり、家禽中抜き屠体からの脚肉の収率は、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の生体重の少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも１０％、少なくとも１２％、６～１２％、８～１２％、１０～１８％、１２～１６％又は１２～１４％である。特定の実施形態では、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の家禽中抜き屠体からの脚肉の収率は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された家禽のものより少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、１～１０％、２～８％又は３～５％高い。
[00531]いくつかの実施形態では、動物は、家禽であり、家禽中抜き屠体からの脚肉の平均収率は、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の生体重の少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも１０％、少なくとも１２％、６～１２％、８～１２％、１０～１８％、１２～１６％又は１２～１４％である。特定の実施形態では、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の家禽中抜き屠体からの脚肉の平均収率は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された家禽のものより少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、１～１０％、２～８％又は３～５％高い。
[00532]いくつかの実施形態では、動物は、家禽であり、家禽中抜き屠体からの胸肉の収率は、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の生体重の少なくとも１０％、少なくとも１２％、少なくとも１５％、少なくとも１６％、少なくとも１８％、少なくとも２０％、少なくとも２２％、少なくとも２４％、少なくとも２８％、１０～１８％、１２～１６％、１８～２９％、２０～２７％又は２０～２５％である。特定の実施形態では、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の家禽中抜き屠体からの胸肉の平均収率は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された家禽のものより少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、１～１０％、２～８％又は３～５％高い。
[00533]いくつかの実施形態では、動物は、家禽であり、家禽中抜き屠体からの胸肉の平均収率は、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の生体重の少なくとも１０％、少なくとも１２％、少なくとも１５％、少なくとも１６％、少なくとも１８％、少なくとも２０％、少なくとも２２％、少なくとも２４％、少なくとも２８％、１０～１８％、１２～１６％、１８～２９％、２０～２７％又は２０～２５％である。特定の実施形態では、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の家禽中抜き屠体からの胸肉の平均収率は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された家禽のものより少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、１～１０％、２～８％又は３～５％高い。
[00534]いくつかの実施形態では、動物は、家禽であり、家禽中抜き屠体からのドラム肉の収率は、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の生体重の少なくとも５％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、５～１４％、７～１０％、７～１５％、９～１３％又は９～１１％である。特定の実施形態では、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の家禽中抜き屠体からのドラム肉の収率は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された家禽のものより少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、１～１０％、２～８％又は３～５％高い。
[00535]いくつかの実施形態では、動物は、家禽であり、家禽中抜き屠体からのドラム肉の平均収率は、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の生体重の少なくとも５％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、５～１４％、７～１０％、７～１５％、９～１３％又は９～１１％である。特定の実施形態では、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の家禽中抜き屠体からのドラム肉の平均収率は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された家禽のものより少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、１～１０％、２～８％又は３～５％高い。
[00536]いくつかの実施形態では、動物は、家禽であり、家禽骨抜き屠体からの胸肉の収率は、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の生体重の少なくとも１４％、少なくとも１６％、少なくとも１８％、少なくとも２０％、少なくとも２２％、少なくとも２４％、１４～１６％、１８～３０％、２０～２８％又は２０～２６％である。特定の実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の家禽骨抜き屠体からの胸肉の収率は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された家禽のものより少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、１～１０％、２～８％又は３～５％高い。
[00537]いくつかの実施形態では、動物は、家禽であり、家禽骨抜き屠体からの胸肉の平均収率は、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の生体重の少なくとも１４％、少なくとも１６％、少なくとも１８％、少なくとも２０％、少なくとも２２％、少なくとも２４％、１４～１６％、１８～３０％、２０～２８％又は２０～２６％である。特定の実施形態では、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の家禽骨抜き屠体からの胸肉の平均収率は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された家禽のものより少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、１～１０％、２～８％又は３～５％高い。
[00538]いくつかの実施形態では、動物は、家禽であり、家禽骨抜き屠体からの脚肉の収率は、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の生体重の少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも１０％、少なくとも１２％、少なくとも１４％、少なくとも１６％、少なくとも１８％、６～１８％、８～１６％、１２～２１％、１４～１９％又は１４～１７％である。特定の実施形態では、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の家禽骨抜き屠体からの脚肉の収率は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された家禽のものより少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、１～１０％、２～８％又は３～５％高い。
[00539]いくつかの実施形態では、動物は、家禽であり、家禽骨抜き屠体からの脚肉の平均収率は、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の生体重の少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも１０％、少なくとも１２％、少なくとも１４％、少なくとも１６％、少なくとも１８％、６～１８％、８～１６％、１２～２１％、１４～１９％又は１４～１７％である。特定の実施形態では、本明細書に記載のオリゴ糖調製物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の家禽骨抜き屠体からの脚肉の平均収率は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された家禽のものより少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、１～１０％、２～８％又は３～５％高い。
[00540]いくつかの実施形態では、動物は、家禽であり、家禽中抜き屠体からの脂肪の収率は、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の生体重の少なくとも０．１％、少なくとも０．２％、少なくとも０．３％、少なくとも０．４％、少なくとも０．５％、少なくとも０．６％、少なくとも０．７％、少なくとも０．８％、少なくとも０．９％、少なくとも１％、少なくとも１．２％、少なくとも１．４％、少なくとも１．６％、０．１～２％、０．２～１％、０．５～２％又は０．３～０．７％である。特定の実施形態では、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の家禽中抜き屠体からの脂肪の収率は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された家禽のものより少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、１～１０％、２～８％又は３～５％高い。
[00541]いくつかの実施形態では、動物は、家禽であり、家禽中抜き屠体からの脂肪の平均収率は、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の生体重の少なくとも０．１％、少なくとも０．２％、少なくとも０．３％、少なくとも０．４％、少なくとも０．５％、少なくとも０．６％、少なくとも０．７％、少なくとも０．８％、少なくとも０．９％、少なくとも１％、少なくとも１．２％、少なくとも１．４％、少なくとも１．６％、０．１～２％、０．２～１％、０．５～２％又は０．３～０．７％である。特定の実施形態では、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の家禽中抜き屠体からの脂肪の平均収率は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された家禽のものより少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、１～１０％、２～８％又は３～５％高い。
[00542]いくつかの実施形態では、動物は、家禽であり、家禽中抜き屠体の収率は、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の生体重の少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、５０～９５％、６０～８５％又は６５～７５％である。特定の実施形態では、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の家禽中抜き屠体の収率は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された家禽のものより少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、１～１０％、２～８％又は３～５％高い。
[00543]いくつかの実施形態では、動物は、家禽であり、家禽中抜き屠体の平均収率は、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の生体重の少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、５０～９５％、６０～８５％又は６５～７５％である。特定の実施形態では、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された家禽の家禽中抜き屠体の平均収率は、合成オリゴ糖調製物を含まない食餌が提供された家禽のものより少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、１～１０％、２～８％又は３～５％高い。
[00544]家禽屠体の骨抜き方法は、家禽処理の当業者に周知である。家禽から得られる肉が、例えば、処理前の鳥の最終体重に対する回収された肉の質量の比として測定され得ると理解すべきである。いくつかの実施形態では、動物は、家禽であり、家禽は、家禽中抜き屠体、家禽骨抜き屠体、白肉、胸肉のフィレ及び胸肉のテンダー、パック詰め鶏肉、臓物抜きの丸鳥（ＷＯＧ）又は上述の肉を生産するために家禽が処理される前に、少なくとも３５日齢、少なくとも４２日齢、少なくとも６週齢、少なくとも６．５週齢である。
[00545]他の実施形態では、動物は、家禽であり、畜産物は卵である。いくつかの実施形態では、動物は、ブタであり、ブタ産物は、ブタの肉（例えば、消費者に販売されても、食品を生産するために加工されても、ヒトによって摂取され得る肉）である。いくつかの実施形態では、ブタ産物の収率は、個々のブタから得られる収率である。いくつかの実施形態では、ブタ産物の平均収率は、ブタ集団内の個々の各ブタから得られた収率を集団全体で平均したものである。更に別の実施形態では、ブタ産物の平均収率は、ブタ集団から得られたブタ産物の全収率を、ブタ集団内の個々のブタの数で除したものである。
[00546]特定の実施形態では、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供された動物若しくは動物集団は、合成オリゴ糖調製物を含まないが１つ以上の抗生物質、１つ以上のイオノフォア、可溶性トウモロコシ繊維、変性コムギデンプン若しくは酵母マンナン又はこれらの任意の組み合わせを含む食餌が提供された動物若しくは動物集団よりも、高い平均１日体重増加量、高い平均週間体重増加量、高い最終体重増加量、高い平均最終体重増加量若しくは増加した畜産物の平均収率又はそれらの任意の組み合わせを有する。
[00547]理論上の最大体重増加量が、異なる種類の動物について異なる場合があり、同じ種類の動物の異なる品種（例えば、異なる種類のブロイラー鶏又は異なる種類のブタ）について異なる場合があることは、当業者であれば認識しているであろう。
[00548]理論上の最大体重増加量が、異なる種類の動物について異なる場合があり、同じ種類の動物の異なる品種（例えば、異なる種類のブロイラー鶏又は異なる種類のブタ）について異なる場合があることは、当業者であれば認識しているであろう。
[00549]いくつかの実施形態では、動物は、家禽である。前述の実施形態のいずれとも組み合わされ得るいくつかの実施形態では、家禽は個々の家禽であり、他の実施形態では、家禽は家禽集団である。他の実施形態では、動物は、ブタである。前述の実施形態のいずれとも組み合わされ得るいくつかの実施形態では、ブタは、個々のブタであり、他の実施形態では、ブタは、ブタ集団である。
［Ｇ．飼料摂取量］
[00550]特定の実施形態では、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物を動物に提供すると、合成オリゴ糖調製物を含まない飼料が提供された動物と比較して増加した平均１日飼料摂取量がもたらされる。
[00551]平均１日飼料摂取量（ＡＤＦＩ）は、規定の期間にわたって動物により摂取された飼料の平均質量を指す。特定の実施形態では、平均１日飼料摂取量は、既知の質量の飼料を一定数の動物群に分配し、この群の動物に規定の日数にわたって分配された飼料を自由に（不断で）摂取させ、期間終了時に未消費の飼料の質量を秤量し、分配された飼料質量から残留する飼料質量を差し引いた差として平均１日飼料摂取量（ＡＤＦＩ）を計算し、群内の動物の数で除し、期間中の日数で除すことによって測定される。他の実施形態では、平均１日飼料摂取量は、死亡した又は群から間引かれたあらゆる動物について、当業者に既知である方法を使用して補正され得る。
[00552]いくつかの実施形態では、動物は、家禽であり、動物飼料組成物は、家禽飼料であり、合成オリゴ糖調製物、家禽飼料プレミックス又は家禽飼料組成物飼料は、家禽に給餌されると、合成オリゴ糖調製物を含まない飼料組成物が給餌された家禽と比較して、平均１日飼料摂取量を最大約１０％若しくは約５％又は１％～１０％、２％～１０％、３％～１０％、４％～１０％、５％～１０％、２％～５％、２％～６％、２％～７％、２％～８％、２％～９％若しくは１％～５％増加させる。
[00553]特定の実施形態では、家禽は、疾患を患っているか、又は負荷環境で飼育されており、合成オリゴ糖調製物、家禽栄養組成物、家禽飼料プレミックス又は家禽飼料組成物は、家禽に給餌されると、合成オリゴ糖調製物を含まない飼料組成物が給餌された家禽と比較して、平均１日飼料摂取量を最大約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％若しくは約５％又は１％～３０％、５％～３０％、１０％～３０％、５％～２０％、１０％～２０％、１％～２０％、１％～１５％、１％～１０％、２％～１０％、３％～１０％、４％～１０％、５％～１０％、２％～５％、２％～６％、２％～７％、２％～８％、２％～９％若しくは１％～５％増加させる。
[00554]前述の内容と組み合わされ得るいくつかの実施形態では、動物は、ブタであり、動物飼料組成物は、ブタ飼料であり、オリゴ糖調製物、ブタ栄養組成物、ブタ飼料プレミックス又はブタ飼料組成物は、ブタに給餌されると、合成オリゴ糖調製物を含まない飼料組成物が給餌されたブタと比較して、平均１日飼料摂取量を最大約１５％、約１０％若しくは約５％又は１％～１５％、２％～１５％、３％～１５％、４％～１５％、５％～１５％、１０％～１５％、１％～１０％、２％～１０％、３％～１０％、４％～１０％、５％～１０％、２％～５％、２％～６％、２％～７％、２％～８％、２％～９％若しくは１％～５％増加させる。
[00555]特定の実施形態では、ブタは、疾患を患っているか、又は負荷環境で飼育されており、合成オリゴ糖調製物、ブタ栄養組成物、ブタ飼料プレミックス又はブタ飼料組成物は、ブタに給餌されると、合成オリゴ糖調製物を含まない飼料組成物が給餌されたブタと比較して、平均１日飼料摂取量を最大約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％若しくは約５％又は１％～４０％、５％～４０％、１０％～４０％、１５％～４０％、２０％～４０％、２５％～４０％、３０％～４０％、１％～３０％、５％～３０％、１０％～３０％、５％～２０％、１０％～２０％、１％～２０％、１％～１５％、１％～１０％、２％～１０％、３％～１０％、４％～１０％、５％～１０％、２％～５％、２％～６％、２％～７％、２％～８％、２％～９％若しくは１％～５％増加させる。
[00556]本明細書に記載の動物若しくは動物集団の成長を増進する方法は、オリゴ糖調製物、動物飼料プレミックス又は動物飼料を、動物若しくは動物集団に提供することを含む。オリゴ糖調製物、動物飼料プレミックス又は動物飼料は、動物若しくは動物集団の成長を増進するために、任意の好適な形態で、任意の好適な種類の動物に、任意の好適な給餌スケジュールを使用して提供され得る。
［Ｈ．畜産物の品質］
[00557]いくつかの実施形態では、動物の肉などの畜産物は、品質が向上する。本明細書に記載の畜産物には、牛乳及び卵などの肉以外の製品が含まれる。動物の肉の品質としては、例えば、色、無傷性、食感、風味、口当たり、香り又は柔らかさが挙げられる。動物の肉の品質が動物の種類に依存することは当業者に明らかである。当業者に既知の標準的な評価法を使用して、例えば、色、風味、柔らかさ及び香りを含む動物の肉の品質を評価することができる。本明細書に記載される動物の肉は、訓練を受けた人間官能試験員を使用して評価することができる。製品の外観、色、無傷性、食感、風味及び口当たりなどを判断するために、評価には、製品の観察、感触、咀嚼及び味見などが含まれ得る。官能試験員は、赤色又は白色光の下でサンプルが提供され得る。サンプルにはランダムな３桁の数字を割り当てられ、偏りを防ぐために投票位置で回転させることができる。感覚的判断は、「受容性」又は「好ましさ」に応じて基準化するか、特別な用語を使用することができる。例えば、文字基準（Ａは優れている、Ｂは良い、Ｃは悪い）又は数字基準（１＝嫌い、２＝普通、３＝良い、４＝非常に良い、５＝優れている）を使用し得る。基準を使用して、動物の肉の全体的な受容性や品質又は食感や風味などの特定の品質属性を評価することができる。官能試験員は、サンプルの合間に水で口をすすぐように促され、各サンプルについてコメントする機会が与えられる。
［ＶＩＩＩ．動物］
[00558]合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物は、任意の好適な動物に提供され得る。いくつかの実施形態では、動物は単胃性である。単胃動物は単室の胃を有することが一般に理解されている。他の実施形態では、動物は反芻動物である。反芻動物は複数室の胃を有することが一般に理解されている。いくつかの実施形態では、動物は、前反芻期の反芻動物である。このような前反芻期の反芻動物の例としては、幼齢ウシが挙げられる。
[00559]いくつかの実施形態では、動物は、家畜である。いくつかの実施形態では、動物は、伴侶動物である。いくつかの実施形態では、動物は、魚（例えば、サケ、ティラピア、熱帯魚）、家禽（例えば、ニワトリ、シチメンチョウ）、水産物（例えば、エビ）、ヒツジ、ウシ、畜牛、水牛、バイソン、ブタ（例えば、幼齢ブタ、育成／仕上げブタ）、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ロバ、ラクダ、ウマ、ハト、フェレット、アレチネズミ、ハムスター、マウス、ラット、魚、鳥又はヒトである。
[00560]いくつかの実施形態では、動物は、家禽である。家禽の例としては、ニワトリ、アヒル、シチメンチョウ、ガチョウ、ウズラ又はコーニッシュゲームヘンが挙げられる。一変更形態では、動物はニワトリである。いくつかの実施形態では、家禽は、レイヤー雌鳥、ブロイラー鶏又はシチメンチョウである。他の実施形態では、動物は、例えば、ウシ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、シカ、バイソン、ウサギ、アルパカ、ラマ、ラバ、ウマ、トナカイ、水牛、ヤク、モルモット、ラット、マウス、アルパカ、イヌ、ネコ又はヒトを含む、哺乳動物である。一変更形態では、動物は、ウシである。別の変更形態では、動物は、ブタである。動物飼料組成物は、水産養殖で使用され得る。いくつかの実施形態では、動物は水生動物である。水生動物の例としては、マス、サケ、バス、ティラピア、エビ、カキ、ムール貝、ハマグリ、ロブスター又はザリガニを挙げることができる。一変更形態では、動物は、魚である。
［ＩＸ．投与］
[00561]いくつかの実施形態では、投与は、本明細書に記載の合成オリゴ糖調製物、栄養組成物又は動物飼料組成物を、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物又は動物飼料組成物を動物が自由に摂取できるように、動物に提供することを含む。このような実施形態では、動物は、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物又は動物飼料組成物の一部を摂取する。
[00562]合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物は、任意の適切なスケジュールで動物に提供され得る。いくつかの実施形態では、動物は、毎日、毎週、毎月、１日おきに、毎週少なくとも３日間にわたって又は毎月少なくとも７日間にわたって、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物が提供される。
[00563]例えば、一部の動物は、０～１４日齢の間、幼動物食が提供される。他の実施形態では、動物は、１５～２８日齢、１５～３５日齢又は１５～３９日齢の間、育成食が提供される。更に他の実施形態では、動物は、２９～３５日齢、３６～４２日齢又は４０～４６日齢の間、仕上食が提供される。
[00564]特定の実施形態では、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物は、幼動物食期、育成食期若しくは仕上食期又はこれらの任意の組み合わせの間に動物に提供される。
[00565]特定の実施形態では、動物は、家禽であり、家禽には、０～１５日齢で幼動物食、１６～２８日齢で育成食、２９～３５日齢で仕上食が提供される。他の実施形態では、動物は、家禽であり、家禽には、０～１４日齢で幼動物食、１５～３５日齢で育成食、３６～４２日齢で仕上食が提供される。更に他の実施形態では、動物は、家禽であり、家禽には、０～１４日齢で幼動物食、１５～３９日齢で育成食、２０～４６日齢で仕上食が提供される。
[00566]いくつかの実施形態では、合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物は、幼動物食期、育成食期若しくは仕上食期又はこれらの任意の組み合わせの間に家禽に提供される。
[00567]本明細書に記載のオリゴ糖調製物は、個々の動物又は動物集団に給餌され得る。例えば、動物が家禽である一変更形態では、オリゴ糖調製物は、個々の家禽又は家禽集団に給餌され得る。
[00568]合成オリゴ糖調製物、栄養組成物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物は、例えば、固体形態、液体形態又はこれらの組み合わせを含む、任意の適切な形態で動物に提供され得る。特定の実施形態では、オリゴ糖調製物又は動物飼料組成物は、シロップ又は溶液などの液体である。他の実施形態では、オリゴ糖調製物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物は、ペレット又は粉末などの固体である。更に他の実施形態では、オリゴ糖調製物、動物飼料プレミックス又は動物飼料組成物は、液体成分と固体成分との両方で、例えばマッシュなどで動物に給餌され得る。
［実施例］
［実施例１］
［グルコ－ガラクト－オリゴ糖調製物の合成］
[00569]ｋｇスケールで好適な生産を可能にするために選択された触媒負荷、反応時間及び反応温度を使用して、グルコ－ガラクト－オリゴ糖調製物の合成を３リットルの反応槽内で実施した。
[00570]Ｄ－グルコース一水和物（８２５．１６ｇ）、Ｄ－ラクトース一水和物（２６３．４８ｇ）及び２－ピリジンスルホン酸（１．００７９ｇ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＵＳ）を、中央の２９／４２すり合わせ及び２つのサイドの２４／４０すり合わせを備えた３リットルの３口丸底フラスコに添加した。１３３ｍｍのテフロン撹拌羽根を、ＰＴＦＥテープを使用してガラス撹拌シャフトに固定した。撹拌棒は、テフロンベアリングアダプターを使用して中心点を介して固定し、フレキシブルカプラーを介してオーバーヘッド高トルクメカニカルミキサーに取り付けた。フラスコを、サイドポートの１つにあるゴム隔膜に挿入されたＪ型ワンド熱電対を介して、温度制御ユニットによって操作される半球形の電気加熱マントル内に固定した。熱電対の先端を、混合部品の上に数ｍｍのすきまで反応混合物内に存在するように調整した。補助温度モニターに接続された第２の温度プローブも同じ方法で挿入し、固定した。フラスコの第２のサイドポートには、再循環バス冷却装置によって４℃未満に維持された水－グリコール混合物によって冷却された還流凝縮器を取り付けた。
[00571]反応混合物を、８０～１００ｒｐｍの撹拌速度で連続的に混合しながら、徐々に１３０℃に加熱した。反応混合物が１２０℃に達したとき、還流凝縮器を蒸留構成体に再配置し、蒸留物を氷浴中に配置した２５０ｍＬの丸底フラスコに集めた。混合物を１３０℃で維持し、６時間連続混合した後、熱電対ボックスの電源を切った。蒸留装置を取り外し、３９０ｇの６０℃蒸留水を３口フラスコに徐々に添加した。得られた混合物を４０ＲＰＭで１０時間撹拌したままにした。およそ１，２５０ｇの粘性のある明るい琥珀色の材料が収集され、屈折率で７１．６ブリックスの濃度を有すると測定された。
[00572]反応器の生成物の最終含水量は、反応の終了時に取り出された反応器の内容物の代表的なアリコートについてカールフィッシャー滴定によって測定した。１３０℃の反応温度で、反応生成物の含水量は、現状のまま、５．８重量％の水であると決定された。
［実施例２］
［グルコ－オリゴ糖調製物の合成］
[00573]ｋｇスケールで好適な生産を可能にするために選択された触媒負荷、反応時間及び反応温度を使用して、グルコ－オリゴ糖調製物の合成を３リットルの反応槽内で実施した。
[00574]Ｄ－グルコース一水和物（１，１５０ｇ）を、１つの中央の２９／４２すり合わせ及び２つのサイドの２４／４０すり合わせを備えた３リットルの３口丸底フラスコに添加した。１３３ｍｍのテフロン撹拌羽根を、ＰＴＦＥテープを使用してガラス撹拌シャフトに固定した。撹拌棒は、テフロンベアリングアダプターを使用してフラスコの中心点を介して固定し、フレックスカップリングを介してオーバーヘッド高トルクメカニカルミキサーに取り付けた。フラスコを、サイドポートの１つにあるゴム隔膜に挿入されたＪ型ワンド熱電対を介して、温度制御ユニットによって操作される半球形の電気加熱マントル内に固定した。熱電対の先端を、混合部品の上に数ｍｍのすきまで反応混合物内に存在するように調整した。補助温度モニターに接続された第２の温度プローブも同じ方法で挿入し、固定した。フラスコの第２のサイドポートには、再循環バス冷却装置によって４Ｃ未満に維持された水－グリコール混合物によって冷却された還流凝縮器を取り付けた。
[00575]反応混合物を、８０～１００ｒｐｍの撹拌速度で連続的に混合しながら、徐々に１３０℃に加熱した。反応温度が１２０℃から１３０℃の間に上昇すると、（＋）－カンファー－１０－スルホン酸（１．１６ｇ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）を３口フラスコに添加し、装置は、還流凝縮器から、氷浴中に配置した丸底収集フラスコを備えた蒸留構成体に切り替えた。この設定を１時間３０分間維持した後、熱電対ボックスの電源を切り、蒸留装置を取り外し、３９０ｇの２３℃蒸留水を３口フラスコに徐々に添加した。得られた混合物を、収集の瞬間まで４０ｒｐｍで１０時間撹拌したままにした。およそ１３００ｇの粘性のある暗い琥珀色の材料が収集され、７２．６ブリックスの濃度を有すると測定された。
［実施例３］
［グルコ－ガラクト－マンノ－オリゴ糖調製物の合成］
[00576]ｋｇスケールで好適な生産を可能にするために選択された触媒負荷、反応時間及び反応温度を使用して、グルコ－ガラクト－マンノ－オリゴ糖調製物の合成を３リットルの反応槽内で実施した。

[00577]グルコ－ガラクト－マンノ－オリゴ糖は、独立して収集された別々の反応槽で合成された２つの別々の成分として調製した。各合成は異なる出発反応物質を使用したが、完了するまで同じ手順及び方法に従った。最終グルコ－ガラクト－マンノ－オリゴ糖は、両方の合成生成物の混合から形成された均質なシロップであった。
[00578]第１の成分の合成について、９９０．５４ｇのグルコース一水和物、１０５．５８ｇのラクトース一水和物、１．００ｇの２－ピリジンスルホン酸を、２つの２４／４０すり合わせが隣接する１つの中央の２９／４２すり合わせを備えた３リットルの３口丸底フラスコに添加した。１３３ｍｍのテフロン撹拌羽根を、ＰＴＦＥテープを使用して４４０ｍｍガラス撹拌シャフトに固定した。撹拌棒は、テフロンベアリングアダプターを使用して中心点を介して固定し、フレキシブルカプラーを介してオーバーヘッド高トルクメカニカルミキサーに取り付けた。フラスコを、サイドポートの１つにあるゴム隔膜に挿入されたＪ型ワンド熱電対を介して、温度制御ユニットによって操作される半球形の電気加熱マントル内に置いた。熱電対の先端を、混合部品の上に数ｍｍのすきまで反応混合物内に存在するように調整した。補助温度モニターに接続された第２の温度プローブも同じ方法で挿入し、固定した。フラスコの第２のサイドポートには、再循環バス冷却装置によって４℃未満に維持された水－グリコール混合物によって冷却された還流凝縮器を取り付けた。
[00579]反応混合物を、８０～１００ｒｐｍの撹拌速度で連続的に混合しながら、徐々に１３０℃に加熱した。１２０Ｃ～１３０℃の間の温度制御ボックスの読み取り値が観察されると、装置は、還流凝縮器から、氷浴中に配置した丸底収集フラスコを備えた蒸留構成体に切り替えた。この設定をおよそ６時間１０分間維持した後、加熱マントルの電源を切った。蒸留装置を取り外し、３９０ｇの６０℃蒸留水を３口フラスコに徐々に添加した。得られた混合物を、収集の瞬間まで４０ｒｐｍで１０時間撹拌したままにした。およそ１２５０ｇの粘性のある明るい琥珀色の材料が収集され、屈折率で７３．１ブリックスの濃度を有すると測定された。
[00580]第２の成分の合成について、８２５．０４ｇのグルコース一水和物、２５１．１６ｇの木由来の純マンノース、２５．１０ｇの蒸留水及び１．００ｇの２－ピリジンスルホン酸を、２つの２４／４０すり合わせが隣接する１つの中央の２９／４２すり合わせを備えた３リットルの３口丸底フラスコに添加した。第２の成分の合成の残部は、収集の瞬間まで、第１のものと同じ手順及び方法に従った。およそ１２５０ｇの粘性のある暗い琥珀色の材料が収集され、７２．３ブリックスの濃度を有すると測定された。
[00581]第１及び第２の成分全体を適切なサイズのＨＤＰＥ容器に移し、均質になるまで手で完全に混合した。最終シロップ混合物はおよそ２．５ｋｇで、色は濃い琥珀色で、粘性があり、およそ７２ブリックスの濃度であると測定された。
［実施例４］
［グルコ－マンノ－オリゴ糖調製物の合成］
[00582]ｋｇスケールで好適な生産を可能にするために選択された触媒負荷、反応時間及び反応温度を使用して、グルコ－オリゴ糖調製物の合成を３リットルの反応槽内で実施した。
[00583]グルコ－マンノ－オリゴ糖は、独立して収集された別々の反応槽で合成された２つの別々の成分として調製した。各合成は異なる出発反応物質を使用したが、完了するまで同じ手順及び方法に従った。最終グルコ－マンノ－オリゴ糖は、両方の合成生成物の混合から形成された均質なシロップであった。
[00584]第１の成分の合成について、１２６４．８０ｇのグルコース一水和物を、２つの２４／４０すり合わせが隣接する１つの中央の２９／４２すり合わせを備えた３リットルの３口丸底フラスコに添加した。１３３ｍｍのテフロン撹拌羽根を、ＰＴＦＥテープを使用して４４０ｍｍガラス撹拌シャフトに固定した。撹拌棒は、テフロンベアリングアダプターを使用して中心点を介して固定し、フレキシブルカプラーを介してオーバーヘッド高トルクメカニカルミキサーに取り付けた。フラスコを、サイドポートの１つにあるゴム隔膜に挿入されたＪ型ワンド熱電対を介して、温度制御ユニットによって操作される半球形の電気加熱マントル内に置いた。熱電対の先端を、混合部品の上に数ｍｍのすきまで反応混合物内に存在するように調整した。補助温度モニターに接続された第２の温度プローブも同じ方法で挿入し、固定した。フラスコの第２のサイドポートには、再循環バス冷却装置によって４℃未満に維持された水－グリコール混合物によって冷却された還流凝縮器を取り付けた。
[00585]反応混合物を、８０～１００ｒｐｍの撹拌速度で連続的に混合しながら、徐々に１３０℃に加熱した。１２０℃～１３０℃の間の温度制御ボックスの読み取り値が観察されると、１．１５ｇの（＋）－カンファー－１０－スルホン酸を３口フラスコに添加し、装置は、還流凝縮器から、氷浴中に配置した丸底収集フラスコを備えた蒸留構成体に切り替えた。この設定をおよそ１時間維持した後、熱電対ボックスの電源を切り、蒸留装置を取り外し、３９０ｇの２３℃蒸留水を３口フラスコに徐々に添加した。得られた混合物を、収集の瞬間まで４０ｒｐｍで１０時間撹拌したままにした。およそ１３５０ｇの粘性のある明るい琥珀色の材料が収集され、７１．８ブリックスの濃度を有すると測定された。
[00586]第２の成分の合成について、９４９．００ｇのグルコース一水和物、２８８．００ｇの木由来の純マンノース、２７．９４ｇの蒸留水及び１．１５ｇの２－ピリジンスルホン酸を、２つの２４／４０すり合わせが隣接する１つの中央の２９／４２すり合わせを備えた３リットルの３口丸底フラスコに添加した。還流凝縮器が蒸留構成体に切り替えられ、得られた設定がおよそ６時間維持されたため、（＋）－カンファー－１０－スルホン酸が添加されなかったことを除いては、第２の成分の合成の残部は、収集の瞬間まで、第１のものと同じ手順及び方法に従った。およそ１３５０ｇの粘性のある暗い琥珀色の材料が収集され、７２．０ブリックスの濃度を有すると測定された。
[00587]第１及び第２の成分全体を適切なサイズのＨＤＰＥ容器に移し、均質になるまで手で完全に混合した。最終シロップ混合物はおよそ２．７ｋｇで、色は濃い琥珀色で、粘性があり、屈折率でおよそ７２ブリックスの濃度であると測定された。
［実施例５］
［グルコ－マンノ－オリゴ糖調製物の合成］
[00588]１ｋｇスケールでの生産に好適であると判明した触媒負荷、反応時間及び反応温度を使用して、オリゴ糖調製物のキログラムスケールの生産を３リットルの反応槽内で実施した。
[00589]グルコ－マンノ－オリゴ糖は、独立して収集された別々の反応槽で合成された２つの別々の成分として調製した。各合成は異なる出発反応物質を使用したが、完了するまで同じ手順及び方法に従った。最終グルコ－マンノ－オリゴ糖は、両方の合成生成物の混合から形成された均質なシロップであった。
[00590]第１の成分の合成について、１２６１．００ｇのグルコース一水和物及び１．１５ｇの２－ピリジンスルホン酸を、２つの２４／４０すり合わせが隣接する１つの中央の２９／４２すり合わせを備えた３リットルの３口丸底フラスコに添加した。１３３ｍｍのテフロン撹拌羽根を、ＰＴＦＥテープを使用して４４０ｍｍガラス撹拌シャフトに固定した。撹拌棒は、テフロンベアリングアダプターを使用して中心点を介して固定し、フレキシブルカプラーを介してオーバーヘッド高トルクメカニカルミキサーに取り付けた。フラスコを、サイドポートの１つにあるゴム隔膜に挿入されたＪ型ワンド熱電対を介して、温度制御ユニットによって操作される半球形の電気加熱マントル内に固定した。熱電対の先端を、混合部品の上に数ｍｍのすきまで反応混合物内に存在するように調整した。補助温度モニターに接続された第２の温度プローブも同じ方法で挿入し、固定した。フラスコの第２のサイドポートには、再循環バス冷却装置によって４℃未満に維持された水－グリコール混合物によって冷却された還流凝縮器を取り付けた。
[00591]反応混合物を、８０～１００ｒｐｍの撹拌速度で連続的に混合しながら、徐々に１３０℃に加熱した。１２０℃～１３０℃の間の温度制御ボックスの読み取り値が観察されると、装置は、還流凝縮器から、氷浴中に配置した丸底収集フラスコを備えた蒸留構成体に切り替えた。この設定をおよそ６時間維持した後、熱電対ボックスの電源を切り、蒸留装置を取り外し、３９０ｇの２３℃蒸留水を３口フラスコに徐々に添加した。得られた混合物を、収集の瞬間まで４０ｒｐｍで１０時間撹拌したままにした。およそ１２５０ｇの粘性のある明るい琥珀色の材料が収集され、７３．５ブリックスの濃度を有すると測定された。
[00592]第２の成分の合成について、９４９．００ｇのグルコース一水和物、２８８．００ｇの木由来の純マンノース、２８．９４ｇの蒸留水及び１．１５ｇの２－ピリジンスルホン酸を、２つの２４／４０すり合わせが隣接する１つの中央の２９／４２すり合わせを備えた３リットルの３口丸底フラスコに添加した。第２の成分の合成の残部は、収集の瞬間まで、第１のものと同じ手順及び方法に従った。およそ１２５０ｇの粘性のある暗い琥珀色の材料が収集され、７３．３ブリックスの濃度を有すると測定された。
[00593]第１及び第２の成分全体を適切なサイズのＨＤＰＥ容器に移し、均質になるまで手で完全に混合した。最終シロップ混合物はおよそ２．５ｋｇで、色は濃い琥珀色で、粘性があり、およそ７３ブリックスの濃度であると測定された。
［実施例６］
［グルコ－ガラクト－オリゴ糖調製物の合成］
[00594]１ｋｇスケールでの生産に好適であると判明した触媒負荷、反応時間及び反応温度を使用して、オリゴ糖調製物のキログラムスケールの生産を３リットルの反応槽内で実施した。
[00595]３Ｌの３口フラスコには、直径１０ｍｍのガラス製撹拌シャフトを介して１４ｃｍの三日月形の混合部品に接続されたオーバーヘッドミキサーを取り付けた。混合部品は、フラスコの壁からおよそ５ｍｍのすきまで配置された。フラスコは、反応フラスコに挿入されたワンド型熱電対プローブに接続された温度制御ユニットによって動力を供給される半球形の電気加熱マントルを介して加熱した。熱電対プローブは、混合部品の上に５～１０ｍｍのすきまを提供するように配置した。フラスコに、５７６グラムの食品グレードデキストロース一水和物及び５７７グラムの食品グレードＤ－ガラクトース一水和物を充填し、およそ１１５℃まで加熱して溶けた糖シロップを得た。シロップが得られたら、冷却したグリコール／水及び温度を循環させることによって４℃に冷却し、ジャケット付き還流凝縮器をフラスコに取り付けた。３１グラムのＤｏｗｅｘ Ｍａｒａｔｈｏｎ Ｃ（水分含有量０．４８ｇＨ２Ｏ／ｇ樹脂）を混合物に添加して、撹拌懸濁液を形成した。凝縮器を蒸留構成体に再配置し、懸濁液を１４５℃まで加熱した。
[00596]およそ８０ＲＰＭの混合速度及び１４５℃の温度を３．８時間維持した後、温度制御ユニットの設定値を８０℃まで下げ、１１９ｍＬの６０℃脱イオン水を徐々にフラスコに添加し、残留Ｄｏｗｅｘ樹脂を含有する暗い琥珀色のシロップを得た。得られた懸濁液を更に６０ブリックスまで希釈し、室温まで冷却し、０．４５ミクロンフィルターを通して真空濾過して樹脂を除去した。６０ブリックス濃度の１，２００グラムの明るい琥珀色のシロップが得られた。
［実施例７］
［グルコ－オリゴ糖調製物の合成］
[00597]１ｋｇスケールでの生産に好適であると判明した触媒負荷、反応時間及び反応温度を使用して、オリゴ糖調製物のキログラムスケールの生産を３リットルの反応槽内で実施した。
[00598]３Ｌの３口フラスコには、直径１０ｍｍのガラス製撹拌シャフトを介して１４ｃｍの三日月形の混合部品に接続されたオーバーヘッドミキサーを取り付けた。混合部品は、フラスコの壁からおよそ５ｍｍのすきまで配置された。フラスコは、反応フラスコに挿入されたワンド型熱電対プローブに接続された温度制御ユニットによって動力を供給される半球形の電気加熱マントルを介して加熱した。熱電対プローブは、混合部品の上に５～１０ｍｍのすきまを提供するように配置した。フラスコに１，１４８グラムの食品グレードデキストロース一水和物を充填し、およそ１１５℃まで加熱して溶けた糖シロップを得た。シロップが得られたら、冷却したグリコール／水を循環させることにより４℃に冷却したジャケット付き蒸留凝縮器をフラスコに取り付けた。反応温度を１４５℃まで徐々に上昇させた。温度が得られて安定したら、３１グラムのＤｏｗｅｘ Ｍａｒａｔｈｏｎ Ｃ（水分含有量０．４８ｇＨ２Ｏ／ｇ樹脂）を混合物に添加し、およそ８０ＲＰＭの混合速度及び１４５℃の温度を３．８時間維持した。
[00599]３．８時間後、温度制御ユニットの設定値を８０℃まで下げ、１１９ｍＬの６０℃脱イオン水を徐々にフラスコに添加し、残留Ｄｏｗｅｘ樹脂を含有する暗い琥珀色のシロップを得た。得られた懸濁液を更に６０ブリックスまで希釈し、室温まで冷却し、０．４５ミクロンフィルターを通して真空濾過して樹脂を除去した。１，１１３グラムの６０ブリックス濃度の１，１１３グラムの暗い琥珀色のグルコ－オリゴ糖シロップが得られた。
［実施例８］
［オリゴ糖調製物の単一容器合成］
[00600]単一容器反応に好適であると判明した触媒負荷、反応時間及び反応温度を使用して、実施例３からのオリゴ糖の単一容器（単一成分）の合成を、１リットルの反応槽内において３００グラムスケールで実施した。
[00601]３０ｇのトウモロコシ由来食品グレードＤ－グルコース一水和物、３７．５０ｇの木由来食品グレードＤ－マンノース、１５．６０ｇの食品グレードＤ－ラクトース一水和物、３．９６ｇの蒸留水及び０．２７０ｇの２－ピリジンスルホン酸（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）を、２つの２４／４０すり合わせが隣接する１つの中央の２９／４２すり合わせを備えた１リットルの３口丸底フラスコに添加した。テフロン撹拌羽根を、ＰＴＦＥテープを使用して２２０ｍｍガラス撹拌シャフトに固定した。撹拌棒は、テフロンベアリングアダプターを使用して中心点を介して固定し、フレキシブルカプラーを介してオーバーヘッド高トルクメカニカルミキサーに取り付けた。フラスコを、サイドポートの１つにあるゴム隔膜に挿入されたＪ型ワンド熱電対を介して、温度制御ユニットによって操作される半球形の電気加熱マントル内に固定した。熱電対の先端を、混合部品の上に数ｍｍのすきまで反応混合物内に存在するように調整した。補助温度モニターに接続された第２の温度プローブも同じ方法で挿入し、固定した。フラスコの第２のサイドポートには、再循環バス冷却装置によって４℃未満に維持された水－グリコール混合物によって冷却された還流凝縮器を取り付けた。
[00602]反応混合物を、８０～１００ｒｐｍの撹拌速度で連続的に混合しながら、徐々に１３０℃に加熱した。１２０℃～１３０℃の間の温度制御ボックスの読み取り値が観察されると、装置は、還流凝縮器から、氷浴中に配置した丸底収集フラスコを備えた蒸留構成体に切り替えた。混合物をおよそ５時間４０分間連続的に撹拌しながら１３０℃で維持し、その後、加熱マントル及び蒸留装置を取り外した。およそ４０ｇの２３℃蒸留水を３口フラスコに徐々に添加した。得られた混合物を、収集の瞬間まで４０ｒｐｍで１０時間撹拌したままにした。およそ３８９ｇの粘性のある暗い琥珀色の材料が収集され、６７．０ブリックスの濃度を有すると測定された。実施例３からのオリゴ糖調製物による粘稠度は、ＳＥＣクロマトグラフィー及び２Ｄ ＨＳＱＣ ＮＭＲ分光法によって確認した。
［実施例９］
［オリゴ糖調製物の特性評価］
[00603]実施例１～８の方法及び手順を使用して、実施例１～７のオリゴ糖の複製バッチ及びブレンドを調製した。実施例９．１～９．７の様々なバッチを調製する際に、各々の合成スキームのマルチポット（多成分）及びシングルポット変法の両方を使用した。得られた材料をＨＰＬＣサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）で分析して分子量分布を特性評価し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析でＤＰ２アンヒドロ糖含有量を定量化し、２Ｄ １Ｈ，１３Ｃ－ＨＳＱＣＮＭＲで対応するオリゴ糖調製物の分子構造の指紋を採取した。材料は下記のように調整した。
[00604]実施例９．１：実施例１からのオリゴ糖調製物のバッチを１１個調製し、４つの別々のロットにブレンドして、オリゴ糖９．１を生成した。
[00605]実施例９．２：実施例２からのオリゴ糖調製物のバッチを７個調製し、２つの別々のロットにブレンドして、オリゴ糖９．２を生成した。
[00606]実施例９．３：実施例３からのオリゴ糖調製物のバッチを１２個調製し、５つの別々のロットにブレンドして、オリゴ糖９．３を生成した。
[00607]実施例９．４：実施例４からのオリゴ糖調製物のバッチを４個調製し、単一のロットにブレンドして、オリゴ糖９．４を生成した。
[00608]実施例９．５：実施例５からのオリゴ糖調製物のバッチを４個調製し、単一のロットにブレンドして、オリゴ糖９．５を生成した。
[00609]実施例９．６：実施例６からのオリゴ糖調製物のバッチを２個調製し、単一のロットにブレンドして、オリゴ糖９．６を生成した。
[00610]実施例９．７：実施例７からのオリゴ糖調製物のバッチを２個調製し、単一のロットにブレンドして、オリゴ糖９．７を生成した。
[00611]実施例１～７のオリゴ糖調製物の更なる構成変形物を、実施例１～７の方法を使用して３００グラムスケールで合成したが、出発糖組成物、酸、酸負荷、時間及び反応温度を変化させた。オリゴ糖調製物は以下のように合成した。
[00612]実施例９．８：３００グラムのスクロース、３グラムのリン酸及び２７グラムの水を１２５℃で約１時間反応させて、暗褐色のオリゴ糖シロップを得て、次いで、これを蒸留水で６０ブリックスに希釈した。
[00613]実施例９．９：２７０グラムグルコース、３０グラムのスクロース、０．３グラムのフェニルホスホン酸及び２７グラムの水を１３０℃で１～４時間反応させて、暗褐色のオリゴ糖シロップを得て、次いで、これを蒸留水で６０ブリックスに希釈した。
[00614]実施例９．１０：２２５グラムのグルコース、７５グラムのラクトース、３グラムのブチルホスホン酸及び２７グラムの水を１３０℃で１～４時間反応させて、暗褐色のオリゴ糖シロップを得て、次いで、これを蒸留水で６０ブリックスに希釈した。
[00615]実施例９．１１：２２５グラムのグルコース、７５グラムのラクトース、３グラムのフェニルホスホン酸及び２７グラムの水を１３０℃で１～５時間反応させて、暗褐色のオリゴ糖シロップを得て、次いで、これを蒸留水で６０ブリックスに希釈した。
[00616]実施例９．１２：２７０グラムのグルコース、３０グラムのラクトース、３グラムのフェニルホスフィン酸及び２７グラムの水を１３０℃で３～５時間反応させて、暗褐色のオリゴ糖シロップを得て、次いで、これを蒸留水で６０ブリックスに希釈した。
[00617]実施例９．１３：３００グラムのグルコース、３グラムのフェニルホスフィン酸及び２７グラムの水を１３０℃で１～３時間反応させて、暗褐色のオリゴ糖シロップを得て、次いで、これを蒸留水で６０ブリックスに希釈した。
[00618]実施例９．１４：３００グラムのグルコース、２グラムのプロピオン酸及び２７グラムの水を１３０℃で１～４時間反応させて、褐色のオリゴ糖シロップを得て、次いで、これを蒸留水で６０ブリックスに希釈した。
[00619]実施例９．１５：３００グラムのグルコース、０．１５グラムの８－ヒドロキシ－５－キノリンスルホン酸水和物及び２７グラムの水を１３０℃で２～４時間反応させて、褐色のオリゴ糖シロップを得て、次いで、これを蒸留水で６０ブリックスに希釈した。
[00620]上記反応において、全ての質量は純粋な成分の質量を指し、反応水の総質量は、反応物の糖の水分含有量及び／又は水和の水によって提供される任意の携行水を含んでいた。
[00621]実施例９．１６：１０グラムのグルコース、０．０１グラムの８－ヒドロキシ－５－キノリンスルホン酸水和物及び１グラムの水を１３０℃で反応させて、アンバーオリゴ糖シロップを得、次いでこれを蒸留水で６０Ｂｒｉｘに希釈した。
[00622]実施例９．１７：約８グラムのグルコース、約２グラムのラクトース、０．０１グラムの２－ピリジンスルホン酸及び１グラムの水を１３０℃で反応させて、アンバーオリゴ糖シロップを得、次いでこれを蒸留水で６０Ｂｒｉｘに希釈した。
[00623]［オリゴ糖調製物の特性評価：］
[00624]得られた材料をＨＰＬＣサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）で分析して分子量分布を特性評価し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析でＤＰ２アンヒドロ糖含有量を定量化し、２Ｄ １Ｈ，１３Ｃ－ＨＳＱＣＮＭＲで対応するオリゴ糖調製物の分子構造の指紋を採取した。
[00625]［ＨＰＬＣによって決定されるポリマー分子量：］
[00626]実施例９．１～９．７のオリゴ糖調製物の数平均分子量（ＭＷｎ）及び重量平均分子量（ＭＷｗ）を、ＨＰＬＣによって決定した。ＳＥＣ分析は、移動相として０．４５ｍＬ／分の蒸留水を使用して４０℃でＡｇｉｌｅｎｔＰＬアクアゲル－ＯＨ２０カラムを使用し、屈折率検出を備えたＡｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズＨＰＬＣで実施した。分子量が既知の標準溶液を使用してＭＷ較正までの保持時間を実行し、当技術分野の標準法を使用して、ＳＥＣクロマトグラムから様々な分布特性を決定した。複数のロットを有するオリゴ糖調製物のＭＷｎ及びＭＷｗを以下の表１に示す。
Figure 0007426548000003
[00627]［ＧＣ－ＭＳによるアンヒドロ－ＤＰ２含有量の分析：］
[00628]オリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２含有量は、Ｃａｐｃｅｌｌ Ｐａｋ ＮＨ２（Ｓｈｉｓｅｉｄｏ；２５０×４．６ｍｍ、５μｍ）カラムを使用し、水／アセトニトリル ３５／６５のアイソクラティック条件下で１ｍＬ／分の流速でＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって決定した。ＭＳの前に、フローを１：４に分割し、イオン化を強化するために５０μＬの０．０５％ＮＨ４ＯＨのメークアップフローを追加した。ＭＳ検出について、ＥＳＩプローブがネガティブモードで使用され、ＭＲＭ法によりターゲット分析が可能になった。
[00629]オリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２含有量は、最初に、参照組成物としての実施例９．７のオリゴ糖調製物の含有量と比較して決定された。次いで、実施例９．７の参照オリゴ糖調製物の絶対アンヒドロＤＰ２含有量は、ＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって約１０％であると決定され、次いで、実施例９．１～９．６のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２含有量を計算によって得た。相対及び絶対ＤＰ２含有量は、表２に記載されているように決定された。
Figure 0007426548000004
[00630]［２Ｄ １Ｈ，１３Ｃ－ＨＳＱＣ ＮＭＲによる分子指紋採取：］
[00631]実施例９のオリゴ糖調製物の分子構造は、２Ｄ １Ｈ，１３Ｃ－ＨＳＱＣ ＮＭＲ分光法によって特性評価した。サンプルは、１２５ｍｇ（乾燥固形分ベース）のオリゴ糖調製物を４０℃で乾燥させ、Ｄ２Ｏを含有する０．１％アセトンに再溶解することによって調製した。４００ＭＨｚのプロトン周波数で動作するＢｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ＮＭＲ分光計又は極低温に冷却された５ｍｍＴＣＩプローブを備えた６００ＭＨｚのプロトン周波数で動作するＢｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ＩＩＩＮＭＲ分光計のいずれかで３００Ｋにて、ＮＭＲスペクトルを取得した。図１は、オリゴ糖調製物９．７のオリゴ糖調製物の例示的な２Ｄ １Ｈ，１３Ｃ ＨＳＱＣ ＮＭＲスペクトルを提供する。
[00632]１Ｈ，１３Ｃ－ＨＳＱＣスペクトルのアノマー領域であるＦ２（δ１Ｈ）＝４．２－６．０ｐｐｍ及びＦ１（δ１３Ｃ）＝９０－１２０ｐｐｍを使用して、オリゴ糖調製物の結合分布を指紋採取した。アノマー領域の各ピークが統合され、その相対的存在量は、アノマー領域全体のピークと比較して決定された。２Ｄ １Ｈ，１３Ｃ ＨＳＱＣ指紋採取を、オリゴ糖調製物９．１の４つのロットで実施した。
Figure 0007426548000005
［実施例１０］
［オリゴ糖調製物のアンヒドロ糖サブユニットの決定］
[00633]実施例９のオリゴ糖調製物におけるアンヒドロ糖サブユニットの相対的存在量は、Ｂｒｕｋｅｒ Ｕｌｔｒａｆｌｅｘ装置のＭＡＬＤＩ－ＭＳによって決定された。サンプルを１０ｍｇ／ｍＬの濃度まで水に溶解し、そこから５μＬをマトリックス溶液（８０％エタノール中の３０ｍｇ／ｍＬ ＤＨＢ及び水が１：１０の比率）と混合した。プレートは、１μＬの分析物溶液を標的プレートに適用することによって調製し、周囲空気で乾燥させた。場合により、ＭＳ分析の前に１μＬのエタノールを適用することにより、サンプルを再結晶化した。
[00634]図２は、実施例９からのオリゴ糖調製物の例示的なＭＡＬＤＩスペクトルを提供する。アンヒドロ－糖サブユニットは、それぞれの主要なＤＰ親に対して－１８ｇ／モルだけシフトしたオフセットピークとして明確に観察される。ＤＰの全ての値でオフセットピークが観察され、アンヒドロ糖サブユニットが全てのオリゴ糖サイズで検出されることを示す。アンヒドロサブユニットピークの相対強度は、各ＤＰの総ピーク強度の約１０％であると決定され、そこから、総アンヒドロサブユニットの相対的存在量は、約１０％であると決定された。図３２Ａ及び図３２Ｂは、実施例２からのオリゴ糖調製物のＭＡＬＤＩスペクトルを示す。アンヒドロ糖サブユニットは、５～１０％の範囲の相対強度を有する全てのＤＰレベルで観察される。
［実施例１１］
［オリゴ糖調製物のアンヒドロサブユニットの特性評価］
[00635]実施例９のオリゴ糖調製物のアンヒドロ糖サブユニットは、ＬＣ－ＭＳ、ＧＣ－ＭＳ、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ及びＮＭＲ法の組み合わせを使用して特性評価される。
[00636]［アンヒドロ－ＤＰ１成分の特性評価：］
[00637]実施例９からのオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ１成分を、分取液体クロマトグラフィーによって単離した。単離したアンヒドロ－ＤＰ１成分は、０．７５ｍＬのＤ２Ｏ中に溶解し、ＮＭＲ用に調製した。図３は、実施例９のオリゴ糖から単離されたアンヒドロＤＰ１画分の例示的な１Ｄ１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを提供し、図４は、同じく単離されたアンヒドロＤＰ１画分の例示的なＡＰＴ１３Ｃ－ＮＭＲスペクトルを提供する。
[00638]表４の以下のピーク割り当てを使用して、１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコフラノースの１，６－アンヒドロ－β－Ｄ－グルコピラノースとの比は、ＮＭＲによって２：１であると決定された。
Figure 0007426548000006
[00639]［アンヒドロ－ＤＰ２成分の特性評価］
[00640]実施例９のオリゴ糖調製物のアンヒドロ糖サブユニットは、ＬＣ－ＭＳ、ＧＣ－ＭＳ、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ及びＮＭＲ法の組み合わせを使用して特性評価される。実施例９のオリゴ糖調製物のアンヒドロＤＰ２含有量は、ＧＣ－ＭＳ及びＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析によって決定された。ガスクロマトグラフィーは、ＨＰ－５ＭＳ固定相を含む３０ｍ×０．２５ｍｍの溶融シリカカラムを使用し、２１．５７ｐｓｉの定圧ヘリウムをキャリアガスとして使用して実施した。アリコートは、２０ｍｇのサンプルを０．５ｍＬの無水酢酸を含む０．５ｍＬのピリジンに６０℃で３０分間溶解することにより、アセチル化によって事前に誘導体化した。１μＬのサンプルを３００℃で注入し、オーブン温度プログラムを７０℃で開始し、毎分１０℃ずつ３１５℃まで上昇させた。検出は、７０ｅＶの電子エネルギーにおいてＡｇｉｌｅｎｔ５９７５ＣＭＳＤで実施した。
[00641]図５は、オリゴ糖調製物９．７に関するＧＣ－ＭＳクロマトグラムの拡大を示す。ＴＩＣ及びＸＩＣ（ｍ／ｚ ２２９）プロットは、ＤＰ２及びアンヒドロＤＰ２成分が明確に分解されていることを示す。図３７Ａ～３７Ｂ、３８Ａ～３８Ｂ、３９Ａ～３９Ｂ及び４０Ａ～４０Ｂは、それぞれ、実施例１、実施例３、実施例４及び実施例７のオリゴ糖調製物においてＧＣ－ＭＳによって検出されたＤＰ１、アンヒドロＤＰ１、ＤＰ２及びアンヒドロＤＰ２画分の存在を示す。図３７Ａ～３７Ｂ、３８Ａ～３８Ｂ、３９Ａ～３９Ｂ及び４０Ａ～４０Ｂに示すように、アンヒドロＤＰ１及びＤＰ１画分の保持時間は約１２～１７分であり、アンヒドロＤＰ２及びＤＰ２画分の保持時間は約２２～２５分である。
[00642]図４３は、異なるレーザーエネルギーでの実施例９からのオリゴ糖調製物を比較するＭＡＬＤＩ－ＭＳスペクトルを示す。シグナルの相対的存在量はほとんど変化しておらず、これは、レーザーイオン化によって水の損失が発生しないことを示す。従って、オリゴ糖調製物中のアンヒドロ－糖サブユニットの存在を証明する。
［実施例１２］
［オリゴ糖調製物におけるカラメル化サブユニットの観察］
[00643]５－ヒドロキシメチルフルフラールカラメル化サブユニットを含むオリゴ糖調製物は、ＨＰＬＣ分析及び２Ｄ １Ｈ，１３Ｃ ＨＳＱＣ ＮＭＲの組み合わせによって実証した。実施例９からのオリゴ糖調製物の５０ｍｇアリコートをＤ２Ｏ０．８ｍＬに溶解した。得られた２Ｄ １Ｈ，１３Ｃ ＨＳＱＣスペクトルを、５－ｈｍｆとグルコースのアノマー炭素との間にグリコシド結合が存在するかどうかを分析した。ピークの割り当ては次のとおりである：１Ｈ ＮＭＲ：δ＝９．３９ｐｐｍ（ＣＨＯ，ｍ），７．４４ｐｐｍ（Ａｒ－Ｈ，ｍ），６．６８ｐｐｍ（Ａｒ－Ｈ，ｍ），４．６０ｐｐｍ（ＣＨ２，ｍ）；及び１３Ｃ ＮＭＲ：δ＝１８０．０，１５０．６，１２６．２，１１２．７，１５９．９，６４．５。遊離５－ｈｍｆの非存在は、３０００ｍｍ Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ａｍｉｎｅｘ ８７Ｈを装備したＡｇｉｌｅｎｔ １１００ ＨＰＬＣシステムを用いたＨＰＬＣにより、２５ｍＭ硫酸水溶液を用いて、０．６５ｍＬ／分の定組成溶出及びＵＶ検出で確認した。５－ｈｍｆを真正サンプルに対して定量化した。実施例９のオリゴ糖調製物中に５－ｈｍｆピークは観察されなかったが、加水分解物中に遊離５－ｈｍｆを生成することが予想されない条件下でのオリゴ糖調製物の低温酸加水分解後に観察された。図６は、カラメル化サブユニットを組み込むオリゴ糖調製物の例示的な２Ｄ １Ｈ、１３Ｃ－ＨＳＱＣ ＮＭＲスペクトルを提供する。
［実施例１３］
［比較例］
[00644]市販の５ｋＤａデキストランをＭＡＬＤＩ－ＭＳで、アンヒドロ糖サブユニットの存在について分析した。図７は、主要なＤＰピークから－１８ｇ／モルシフトしたオフセットピークの明確な存在を示す（８５１．２６８ｇ／モルのＮａ＋付加物）。対照的に、デキストランサンプルは本質的にアンヒドロ糖サブユニットを含まないことが見出された。
［実施例１４］
［ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによるアンヒドロＤＰ成分の定量化］
[00645]オリゴ糖調製物のＤＰ２画分を、液体クロマトグラフィーによって単離した。サンプルを水に溶解し、Ｃａｐｃｅｌｌ Ｐａｋ ＮＨ２（Ｓｈｉｓｅｉｄｏ；２５０×４、６ｍｍ、５μｍ）カラムを使用し、水／アセトニトリル ３５／６５のアイソクラティック条件下で１ｍＬ／分の流速でＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって分離した。場合により、クロマトグラフィー分離後、イオン化を促進するために５０μＬの０．０５％ＮＨ４ＯＨを添加した。アンヒドロＤＰ２含有量は、ＭＳ／ＭＳ検出によって決定された。ＭＳ検出について、ＥＳＩプローブがネガティブモードで使用され、ＭＲＭ法によりターゲット分析が可能になった。図８Ａは、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳクロマトグラムの下の領域から濃度までの線形検量線（図８Ｂに示される）とともに、水中で１～８０μｇ／ｍＬの濃度範囲にわたる実施例９からのオリゴ糖調製物の検出を示す。
[00646]図３３Ａ～３３Ｃ、３４Ａ～３４Ｃ、３５Ａ～３５Ｃ及び３６Ａ～３６Ｃは、それぞれ、実施例１、実施例３、実施例４及び実施例７のオリゴ糖調製物おいてＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって検出されたアンヒドロＤＰ２、アンヒドロＤＰ１及びＤＰ２種を示す。
［実施例１５］
［オリゴ糖調製物を含む飼料の調製］
[00647]家禽及びブタ食餌を調製し、オリゴ糖調製物の食餌への組み込みを実証した。様々な成分組成を示す対照飼料及び実施例９のオリゴ糖調製物でそれぞれの対照飼料を増強することによって得られた対応する処理飼料は、以下のように調製された。
[00648]実施例飼料１５．１：対照飼料１５．１（ＣＴＲ）は、６２％のコーンミール及び３２％の大豆ミールを使用して調製した。処理飼料１５．１（ＴＲＴ）は、対照飼料１５．１（ＣＴＲ）を実施例９からのオリゴ糖調製物５００ｍｇ／ｋｇで増強することによって調製した。処理された食餌について、オリゴ糖をキャリアとしての粉砕した籾殻上で乾燥させ、ペレット化する前に微量成分天秤を使用して粉末をミキサーに添加することにより、オリゴ糖調製物を粉末形態で提供した。
[00649]実施例飼料１５．２：対照飼料１５．２（ＣＴＲ）は、６２％のコーンミール、３％大豆濃縮物及び２６％の大豆ミールを使用して調製した。処理飼料１５．２（ＴＲＴ）は、対照飼料１５．２（ＣＴＲ）を実施例９からのオリゴ糖調製物５００ｍｇ／ｋｇで増強することによって調製した。処理された食餌について、オリゴ糖をキャリアとしての粉砕した籾殻上で乾燥させ、ペレット化する前に微量成分天秤を使用して粉末をミキサーに添加することにより、オリゴ糖調製物を粉末形態で提供した。
[00650]実施例飼料１５．３：対照飼料１５．３（ＣＴＲ）は、５２％のコーンミール、６％のコーンスターチ、５％の大豆濃縮物、２６％の大豆ミール及び酸化チタンマイクロトレーサーを使用して調製した。処理飼料１５．３（ＴＲＴ）は、対照飼料１５．３（ＣＴＲ）をオリゴ糖調製物５００ｍｇ／ｋｇで増強することによって調製した。処理された食餌について、オリゴ糖をキャリアとしての粉砕した籾殻上で乾燥させ、ペレット化する前に微量成分天秤を使用して粉末をミキサーに添加することにより、オリゴ糖調製物を粉末形態で提供した。
[00651]実施例飼料１５．４：対照飼料１５．４（ＣＴＲ）は、５５％のコーンミール及び３９％の大豆ミールを使用して調製した。処理飼料１５．４（ＴＲＴ）は、対照飼料１５．４（ＣＴＲ）をオリゴ糖調製物１，０００ｍｇ／ｋｇで増強することによって調製した。処理された食餌について、オリゴ糖をキャリアとしての粉砕した籾殻上で乾燥させ、ペレット化する前に微量成分天秤を使用して粉末をミキサーに添加することにより、オリゴ糖調製物を粉末形態で提供した。
[00652]実施例飼料１５．５：対照飼料１５．５（ＣＴＲ）は、６２％のコーンミール、３％大豆濃縮物及び２６％の大豆ミールを使用して調製した。処理飼料１５．５（ＴＲＴ）は、対照飼料１５．５（ＣＴＲ）を実施例９からのオリゴ糖調製物５００ｍｇ／ｋｇで増強することによって調製した。処理された食餌について、ペレット化する前に微量成分天秤を使用して粉末をミキサーに添加することにより、オリゴ糖調製物を粉末形態で提供した。
[00653]実施例飼料１５．６：対照飼料１５．６（ＣＴＲ）は、米国の市販のトウモロコシ－大豆幼動物家禽飼料であった。処理飼料１５．６（ＴＲＴ）は、５００ｐｐｍのオリゴ糖調製物を含有する米国の市販のトウモロコシ－大豆幼動物家禽飼料であった。処理された食餌について、ペレット化する前に微量成分天秤を使用して粉末をミキサーに添加することにより、オリゴ糖調製物を粉末形態で提供した。
[00654]実施例飼料１５．７：対照飼料１５．７（ＣＴＲ）は、次の食餌組成の研究用トウモロコシ大豆家禽飼料であった：コーンミール６２．３９％、大豆ミール３１．８０％、炭酸カルシウム０．１５％、リン酸二カルシウム２．２％、塩化ナトリウム０．１５％、ＤＬ－メチオニン０．１５％、Ｌ－リシン０．１０％、大豆油２．００％、ビタミンミネラルプレミックス１．００％及びコクシジウム抑制薬０．０６％。処理飼料１５．７（ＴＲＴ）は、対照飼料１５．７（ＣＴＲ）を実施例９．１のオリゴ糖調製物１０００ｐｐｍで補強することによって得た。処理された食餌について、オリゴ糖調製物は、水中の６０％シロップとして提供され、ペレット化後の飼料にシロップを噴霧することによって適用された。
[00655]実施例飼料１５．８：対照飼料１５．８（ＣＴＲ）は、次の組成の研究用トウモロコシ大豆家禽飼料であった：小麦ミール４８．４５％、大豆ミール３２．００％、ライ麦１２％、炭酸カルシウム０．２０％、リン酸二カルシウム２．００％、塩化ナトリウム０．２０％、ＤＬ－メチオニン０．１５％、大豆油４．００％及びビタミン－ミネラルプレミックス１．００％。処理飼料１５．７（ＴＲＴ）は、対照飼料１５．７（ＣＴＲ）を実施例９．３のオリゴ糖調製物１０００ｐｐｍで補強することによって得た。処理された食餌について、オリゴ糖調製物は、水中の６０％シロップとして提供され、ペレット化後の飼料にシロップを噴霧することによって適用された。
[00656]当業者によって理解されるように、１５．１～１５．６は、業界標準レベルの脂肪、ビタミン、ミネラル、アミノ酸、他の微量栄養素及び供給酵素も含んでいた。場合により、飼料にコクシジウム抑制薬が含まれていたが、抗生物質増殖促進剤の全ての場合で含まれなかった。飼料は、標準的な慣行に従って、マッシュ、ペレット又は砕いた飼料のいずれかとして提供された。
［実施例１６］
［飼料サンプルの抽出］
[00657]実施例１５の手順に従って調製された飼料は、抽出によって処理された。飼料サンプルはミルで粉砕した。得られた粉砕飼料５グラムを５０ｍＬメスフラスコに量り入れ、熱水（約８０℃）を添加した。振盪後、混合物を８０℃において３０分間超音波水浴でインキュベートした。冷却後、溶液を３０００ｘｇで２０分間遠心分離し、上清を１．２μｍフィルター、続いて０．４５μｍフィルター（場合により０．２２μｍフィルター）で濾過した。得られた濾過溶液をロータリーエバポレーターで蒸発乾固させた。
[00658]場合により、代替抽出溶媒として水中の５０重量％エタノールを使用して抽出を実施した。場合により、５，０００ダルトンの分子量カットオフメンブレンフィルターを使用して濾過工程を実施した。
［実施例１７］
［飼料抽出物の酵素処理］
[00659]実施例１６の飼料抽出物を１つ以上の酵素加水分解工程に供して、飼料中において天然に存在するオリゴ糖を消化した。α－アミラーゼ及びアミログリコシダーゼの混合物を使用して、グルコオリゴ糖とデンプンのα（１，４）結合を消化した。インベルターゼ及びα－ガラクトシダーゼを使用して、スクロース、ラフィノース及び他の一般的な繊維糖類を除去した。
[00660]酵素溶液は、以下のようにして調製した：酢酸アンモニウム緩衝液（０．５ｍＭのＭｇＣｌ２及び２００ｍＭのＣａＣｌ２を含む０．２Ｍ、ｐＨ５の酢酸アンモニウム）中８００Ｕ／ｍＬのアミログルコシダーゼ（Ａ．ニガー（Ａ．ｎｉｇｅｒ））３６０００Ｕ／ｇ溶液：酢酸アンモニウム中の８００Ｕ／ｍＬのα－アミラーゼ（ブタ膵臓）（Ｍｅｇａｚｙｍｅ）１０００００Ｕ／ｇの溶液：酢酸アンモニウム緩衝液中の６００Ｕ／ｍＬのパン用酵母（Ｓ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））由来のインベルターゼ（Ｓｉｇｍａ）３００Ｕ／ｍｇ溶液：Ａ．ニガー（Ａ．ｎｉｇｅｒ）Ｍｅｇａｚｙｍｅ由来のα－ガラクトシダーゼ１０００Ｕ／ｍＬ。
[00661]実施例１６の乾燥飼料抽出物を１０ｍＬの酢酸アンモニウム緩衝液に再懸濁した。５０μＬのα－アミラーゼ（４Ｕ／ｍＬ最終）、５０μＬのアミログルコシダーゼ（４Ｕ／ｍＬ最終）、５０μＬのインベルターゼ（３Ｕ／ｍＬ最終）を添加した。２０μＬのα－ガラクトシダーゼ（２Ｕ／ｍＬ最終）を任意選択的に添加した。溶液を６０℃で４時間インキュベートした。次いで、消化された抽出物を限外濾過フィルター（Ｖｉｖａｓｐｉｎ Ｔｕｒｂｏ４、５０００ＭＷＣＯ、ザルトリウス）で濾過した後、窒素蒸発システムで蒸発乾固させた。酵素消化の変更形態では、上記酵素の１つ以上を組み合わせて使用し、消化期間を４時間から一晩の消化まで変化させた。酵素濃度は上記の負荷の２倍まで変化させ、完全な酵素消化手順を同じ飼料で順番に複数回繰り返した。
Figure 0007426548000007
Figure 0007426548000008
［実施例１８］
［飼料中のオリゴ糖調製物の検出］
[00662]オリゴ糖調製物の有無を検出するために、実施例１５による対照及び処理食餌を評価した。食餌製造後、最終飼料から１ｋｇのサンプルを採取した。飼料の抽出可能な固形分は、実施例１６の手順を使用する水抽出によって得られた。得られた抽出物を、実施例１４の手順に従って、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによってアンヒドロＤＰ種の存在について分析した。
[00663]図９は、実施例１５．１（ＣＴＲ）～１５．６（ＣＴＲ）の対照飼料にアンヒドロＤＰ２種が存在しないのに対して、実施例１５．１（ＴＲＴ）～１５．６（ＴＲＴ）の処理飼料にアンヒドロＤＰ２種が存在することを示す。得られたＬＣ－ＭＳ／ＭＳクロマトグラムの積分を使用して、最終飼料中の実施例９のオリゴ糖調製物の存在を決定した。具体的には、アンヒドロ－ＤＰ２ピークの下の面積が検出限界（又は方法で確立された任意の他の好適なしきい値）を超えた場合、飼料にはそれぞれのオリゴ糖調製物が含まれていると判断された。
［実施例１９］
［飼料中のオリゴ糖調製物の定量化］
[00664]最終飼料中のオリゴ糖調製物の濃度を決定するために、実施例１５による対照及び処理食餌を評価した。食餌製造後、最終飼料から１ｋｇのサンプルを採取した。飼料の抽出可能な固形分は、実施例１６の手順を使用する水抽出によって得られた。得られた抽出物を、実施例１４の手順に従って、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによってアンヒドロＤＰ種の存在について分析し、アンヒドロ－ＤＰ２ピークの面積を標準検量線と比較して、飼料中のオリゴ糖調製物の濃度を決定した（表６）。
Figure 0007426548000009
［実施例２０］
［アンヒドロサブユニット含有グルコ－オリゴ糖のＮＭＲの特性評価］
[00665]アンヒドロサブユニットを含むグルコ－オリゴ糖調製物を、ｉ）重合度及びｉｉ）グルコースユニットのグリコシド結合分布により特性評価した。
[00666]α（１，１）α、α（１，１）β、β（１，１）β、α（１，２）、β（１，２）、α（１，３）、β（１，３）、α（１，４）、β（１，４）、α（１，６）及びβ（１，６）結合の相対モル存在量を、ＮＭＲ分光法により同定した。アノマープロトンの１Ｈ ＮＭＲ化学シフトは次のように決定された：領域ｄ＝４．５－５．５ｐｐｍが考慮され、Ｃ－２からＣ－６の共有結合の共鳴は約ｄ３．２及び３．９ｐｐｍでクラスター化された。Ｃ－２でのＨ原子との結合により、アノマープロトンはダブレットとして現れ、軸方向の位置は赤道位置よりも高い磁場で表示される。糖の立体配座は、隣接するプロトンの結合定数から解明された：赤道－赤道、赤道－軸（小さい結合定数）又は軸－軸（大きい結合定数）。
[00667]グリコシド結合の解明は、１３Ｃ ＮＭＲでも行った。一次、二次、三次及び四次炭素は、プロトンオフオフレゾナンスデカップリング又は分極移動によって区別された。メトキシ基に結合した炭素は、遊離ヒドロキシ基を有する対応する炭素原子よりも低い磁場で共鳴し、軸方向のヒドロキシ基を有する環炭素原子は、一般に、赤道方向のヒドロキシ基を有する対応する炭素よりも高い磁場で吸収する。従って、これらのガイドラインに従い、文献で報告されている類似糖の１Ｈ及び１３Ｃの両方の化学シフトと比較すると、ほとんどのシグナルが割り当てられている。
[00668]結合分布の決定には、Ｊ－ＲＥＳ及び１Ｈ、１３Ｃ－ＨＳＱＣを使用した。いくつかのサンプルについて、ＨＳＱＣ法が優れた性能を示した。各分析について、およそ５０ｍｇの凍結乾燥生成物をＤ２Ｏに溶解し、５ｍｍＮＭＲチューブに移した。任意の残留触媒又は固形分は、濾過により除去された。ＮＭＲ実験は、１５０ＭＨｚの炭素ラーモア周波数に対応する６００ＭＨｚのプロトンで動作するＢｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ＩＩＩＮＭＲ分光計で実施された。機器に、極低温で冷却された５ｍｍＴＣＩプローブを取り付けた。全ての実験は２９８Ｋで実施される。１Ｈ ＮＭＲスペクトルが記録され、重水素化水（４．７５ｐｐｍ）中で較正された。１３Ｃ ＮＭＲスペクトルは、アセトン（３０．９ｐｐｍ）で較正された。データはＴｏｐＳｐｉｎ３．５を使用して取得され、パーソナルコンピューターで実行されているＡＣＤ／Ｌａｂｓで処理された。
[00669]図１０は、溶媒が事前飽和されたアンヒドロサブユニット含有グルコ－オリゴ糖サンプルの代表的な２Ｄ－１Ｈ ＪＲＥＳ ＮＭＲスペクトルを提供する。異なるグリコシド結合の割り当ては、表７に従って行われた。
Figure 0007426548000010
[00670]表７で示すように、いくつかのサンプルについて、２Ｄ－１Ｈ ＪＲＥＳ ＮＭＲ分析用に異なる機器を使用して、異なるラボで実施された実験間で不一致が観察された。
[00671]図１１は、結合分布に使用される関連する共鳴及び割り当てによるアンヒドロサブユニット含有グルコオリゴ糖サンプルの代表的な１Ｈ，１３Ｃ－ＨＳＱＣ ＮＭＲスペクトルを提供する。対照的に、１Ｈ、１３Ｃ－ＨＳＱＣ ＮＭＲによる測定では、表８に示すように、２つの異なるラボと機器間で一貫していることが判明した。
Figure 0007426548000011
[00672]拡散係数、従ってＭＷにより、拡散秩序化ＮＭＲ分光法（ＤＯＳＹ）を実施して、異なる種のＮＭＲシグナルを分離した。図１２のＤＯＳＹスペクトルの上方部分のシグナルは、高ＤＰ種に対応し、低ＤＰ種は下方に表示される。図１２は、表８の３つのアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖の１Ｈ ＤＯＳＹスペクトルのオーバーレイを示す。
［実施例２１］
［ＤＰ１及びＤＰ２画分のセミ分取単離］
[00673]ＤＰ１画分の分取単離は、Ｗａｔｅｒｓ ＢＥＨ Ａｍｉｄｅ１９×１５０ｍｍカラムを使用した分取ＨＰＬＣで実施した。移動相として、溶媒Ａとして水を使用し、溶媒Ｂとしてアセトニトリルを使用し、各々０．１％のアンモニアを含んでいた。適用した勾配を表９に示す。収集された８つの分離のＤＰ１画分をプールし、乾燥させ、前述のようにＮＭＲ分析のために０．７５ｍｌのＤ２Ｏに再溶解した。
[00674]ＤＰ２画分の特性評価のために、２段階の精製を行った。第１の工程は、ＥＬＳＤ（蒸発光散乱検出器）を使用して、フラッシュクロマトグラフィーシステムで実施した。２ｍＬ（２．６５ｇ）のオリゴ糖調製物を、１ｍＬのＤＭＳＯ、０．５ｍＬの水及び０．５ｍＬのアセトニトリルで希釈した。溶液を混合し、１５分間超音波処理した。１ｍＬの溶液をＹＭＣ ＤｉｓｐｏＰａｃｋＡＴ、ＮＨ２、球状、２５μｍ、１２０ｇカラムに注入した。オリゴ糖調製物は、水中の７５％アセトニトリルを４０ｍＬ／分で使用するアイソクラティックグラジエント法を実行して分離した。ＤＰ２含有画分を窒素で乾燥させ、ＤＭＳＯ／水（８０：２０、ｖ／ｖ）に再溶解させた。
[00675]第２の精製工程では、４０°のＹＭＣ ＮＨ２ ４．６×２５０ｍｍ（５μｍ）カラムを備えた分析ＵＰＬＣシステムを使用した。ＤＰ２画分は、アイソクラティックグラジエント（表１０）及び１ｍＬ／分の流速で精製した。ＥＬＳＤによる収集をトリガーするために、１：５のこぼれたポストカラムを使用した。１２個のクロマトグラフィー分析からのＤＰ２画分をプールし、アセトニトリルを加熱窒素で除去し、残留水を凍結乾燥で除去した。乾燥画分を、その後のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ及びＮＭＲ分析のために再溶解させた。
Figure 0007426548000012
Figure 0007426548000013
［実施例２２］
［単調に減少するＤＰ分布を有するオリゴ糖調製物の合成］
[00676]３３０グラムのＤ－グルコース一水和物及び０．３グラムの（＋）－カンファー－１０－スルホン酸を、フレックスカップリングを介して高トルクメカニカルミキサーによって提供されるオーバーヘッド機械混合を備えた１リットルの３口フラスコに添加した。フラスコは、反応混合物に挿入されたワンド型熱電対を介した温度制御ユニットによって操作される半球形の電気加熱マントル内に固定した。熱電対の先端を、混合部品の上に数ｍｍのすきまで反応混合物内に存在するように調整した。再循環バス冷却装置によって４℃未満に維持された水－グリコール混合物によって冷却された還流凝縮器をフラスコに取り付けた。
[00677]反応混合物を、８０～１００ｒｐｍの撹拌速度で連続的に混合しながら、徐々に１３０℃に加熱した。反応温度が１２０℃～１３０℃の間まで上昇すると、装置は、還流凝縮器から、氷浴中に配置した丸底受けフラスコを備えた蒸留構成体に切り替えた。反応を１３０℃に維持し、１２０ＲＰＭで６０分間混合し、受けフラスコに収集した凝縮物の質量を１０分間隔の関数時間として記録した。蒸留水を添加して熱を取り除くことにより反応をクエンチした。生成物の混合物を室温まで冷却した後、生成物のシロップのアリコートを、屈折率によって決定される、約１ブリックスに希釈した。希釈したアリコートを、０．２ミクロンシリンジフィルターを使用してマイクロフィルター処理し、ＨＰＬＣサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）で分析した。ＳＥＣ分析は、移動相として０．４５ｍＬ／分の蒸留水を使用して４０℃でＡｇｉｌｅｎｔＰＬアクアゲル－ＯＨ２０カラムを使用し、屈折率検出を備えたＡｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズＨＰＬＣで実施した。ＭＷ較正までの保持時間は、既知の分子量の標準溶液を使用して実施した。ＤＰ平衡定数はＫ＝３．３であると決定され、ＤＰ分布は単調に減少していることが判明した。図１５及び図１６は、ＨＰＬＣ－ＳＥＣによって決定された、実施例９の異なるオリゴ糖調製物のＤＰ分布の形状を示す。
［実施例２３］
［非単調なＤＰ分布を有するオリゴ糖調製物の合成］
[00678]３３０グラムのＤ－グルコース一水和物及び０．３グラムの（＋）－カンファー－１０－スルホン酸を、フレックスカップリングを介して高トルクメカニカルミキサーによって提供されるオーバーヘッド機械混合を備えた１リットルの３口フラスコに添加した。フラスコは、反応混合物に挿入されたワンド型熱電対を介した温度制御ユニットによって操作される半球形の電気加熱マントル内に固定した。熱電対の先端を、混合部品の上に数ｍｍのすきまで反応混合物内に存在するように調整した。再循環バス冷却装置によって４℃未満に維持された水－グリコール混合物によって冷却された還流凝縮器をフラスコに取り付けた。
[00679]反応混合物を、８０～１００ｒｐｍの撹拌速度で連続的に混合しながら、徐々に１３５℃に加熱した。反応温度が１３０℃に上昇すると、装置は、還流凝縮器から、氷浴中に配置した丸底収集フラスコを備えた蒸留構成体に切り替えた。反応を１３５℃に維持し、１２０ＲＰＭで３５分間混合した。蒸留水を添加して熱を取り除くことにより反応をクエンチした。生成物の混合物を室温まで冷却した後、生成物のシロップのアリコートを、屈折率によって決定される、約１ブリックスに希釈した。希釈したアリコートを、０．２ミクロンシリンジフィルターを使用してマイクロフィルター処理し、ＨＰＬＣサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）で分析した。ＳＥＣ分析は、移動相として０．４５ｍＬ／分の蒸留水を使用して４０℃でＡｇｉｌｅｎｔＰＬアクアゲル－ＯＨ２０カラムを使用し、屈折率検出を備えたＡｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズＨＰＬＣで実施した。ＭＷ較正までの保持時間は、既知の分子量の標準溶液を使用して実施した。ＤＰ分布は、非単調な減少であることが判明した。図１６は、ＤＰ３含有量がＤＰ２含有量よりも大きく、ＤＰ４及びＤＰ５含有量が本質的に等しいことを示す。
［実施例２４］
［オリゴ糖調製物のフェドバッチ合成］
[00680]３３０グラムのＤ－グルコース一水和物及び０．３グラムの２－ピリジンスルホン酸を、フレックスカップリングを介して高トルクメカニカルミキサーによって提供されるオーバーヘッド機械混合を備えた１リットルの３口フラスコに添加した。フラスコは、反応混合物に挿入されたワンド型熱電対を介した温度制御ユニットによって操作される半球形の電気加熱マントル内に固定した。熱電対の先端を、混合部品の上に数ｍｍのすきまで反応混合物内に存在するように調整した。再循環バス冷却装置によって４℃未満に維持された水－グリコール混合物によって冷却された還流凝縮器をフラスコに取り付けた。
[00681]反応混合物を、８０～１００ｒｐｍの撹拌速度で連続的に混合しながら、徐々に１３０℃に加熱した。反応温度が１２０℃～１３０℃の間まで上昇すると、装置は、還流凝縮器から、氷浴中に配置した丸底受けフラスコを備えた蒸留構成体に切り替えた。反応を、１２０ＲＰＭで１３０℃に維持し、受けフラスコに収集した凝縮物の質量を２０分間隔の関数時間として記録した。２１０分後、追加の１１０グラムのＤ－グルコース一水和物を、反応に添加した。４２０分後、蒸留水を添加して熱を取り除くことにより反応をクエンチした。生成物の混合物を室温まで冷却した後、生成物のシロップのアリコートを、屈折率によって決定される、約１ブリックスに希釈した。希釈したアリコートを、０．２ミクロンシリンジフィルターを使用してマイクロフィルター処理し、ＨＰＬＣサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）で分析した。ＳＥＣ分析は、移動相として０．４５ｍＬ／分の蒸留水を使用して４０℃でＡｇｉｌｅｎｔＰＬアクアゲル－ＯＨ２０カラムを使用し、屈折率検出を備えたＡｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズＨＰＬＣで実施した。ＭＷ較正までの保持時間は、既知の分子量の標準溶液を使用して実施した。ＤＰ平衡定数はＫ＝０．８であると決定され、ＤＰ分布は単調に減少していることが判明した。
［実施例２５］
［オリゴ糖調製物が給餌された商業用ブロイラー鶏の成長性能］
[00682]ブロイラー鶏を、実施例１５．６の食餌で成長させて、動物の成長性能に対するオリゴ糖調製物の効果を測定した。具体的には、可溶性物質添加乾燥蒸留穀物残渣（ＤＤＧＳ）、コクシジウム抑制薬及び標準的な微量栄養素ブレンドを含む商業用トウモロコシ－大豆粕家禽飼料を、業界の慣行及び３段階の給餌プログラムに従って製造した。近似分析により、表１１に示すように飼料組成を決定した。
Figure 0007426548000014
[00683]対照（ＣＴＲ）及び処理（ＴＲＴ）食餌を実施例１５．６に記載される各段階について調製し、ここで、処理食餌は、実施例９．７のオリゴ糖調製物を使用して、処理したショートトン当たり１ポンドで対照食餌を増強することによって調製した。合計で、約５０ショートトンの各食餌を製造した。
[00684]孵化の日のＨｕｂｂａｒｄ Ｍ９９×Ｃｏｂｂ ５００未鑑別ひよこを、商業用の家禽孵化場から入手し、トンネル換気された土床の鶏舎に建設された３６フィート×４０フィートの囲いにランダムに配置した。合計およそ３０，０００羽の鳥を配置し、各囲いに同数の鳥を配置した。ハウスの寝床は、上面を新鮮な木の削りくずで覆われた寝わらで構成されていた。標準的な商業環境及び照明プログラムを用いた。動物及び飼育設備は、一般的な健康状態、飼料消費量、給水量及び設備の温度の記録など、毎日検査した。死亡率を毎日記録した。
[00685]奇数番号の囲いの鳥には処理食餌を与え（即ち２ポンド／トン含有量の飼料添加物を含む）、偶数番号の囲いの鳥には対照食餌を与えた。全ての食餌は、各囲いの自動給餌器を介して且つ初日から７日目まで給餌トレイで自由に与えられた。水はニップルの飲用ラインから自由に与えられた。
[00686]幼動物期は０日目から１３日目まで、育成期は１４日目から２７日目まで、中止期は２８日目から研究の終わりである３１日目であった。囲いごとの鳥の体重は、０日目及び３１日目に記録した。消費された飼料の総質量は、各囲いについて記録した。次いで、体重増加量及びＦＣＲを、標準的な業界の慣行に従って各囲いについて決定した。
[00687]３１日目に、血液及び盲腸のサンプリングのために、各囲いから６羽のオスの鳥をランダムに選択した。サンプリングされた各鳥の生体重を記録した。血液サンプルを、ウイングパンクチャーによってバキュテイナーチューブに収集し、凝固及び血清分離後に凍結した。次いで、サンプリングされた各鳥を、頸椎脱臼により安楽死させた後、標準的な獣医法を使用して盲腸を摘出した。解剖後、盲腸内容物を１５ｍＬのコニカルチューブに移し、盲腸内容物の重量を記録し、内容物を－８０℃まで急速冷凍した。
[00688]サンプリングされた鳥の重量から、処理群は１１ポイントの体重の増加を示し、Ｐ＜０．０５で有意であった（ＡＮＯＶＡによる）。
［実施例２６］
［家禽の盲腸ミクロビオータのショットガン配列決定］
[00689]同定された分類群の相対的存在量は、実施例２５の研究から得られた合計９６羽のサンプリングされた鳥について決定された。実施例２５で得られた各ミクロビオータサンプルについて、盲腸内容物を解凍し、標準的な方法を使用してＤＮＡを抽出した。抽出されたＤＮＡをイルミナＨｉＳｅｑ－Ｘ機器で、２×１５０ｂｐの読み取りで分析した。トリミング（アダプター、ＢＢＤｕｋ）、エントロピーフィルタリング（ｋ＝５、ウィンドウ＝２０、最小＝５０、ＢＢＤｕｋ）、品質フィルタリング（平均Ｑ２０、ＢＢＤｕｋ）、ガルスフィルタリング（Ｇａｌｌｕｓ）フィルタリング（Ｂｏｗｔｉｅ２）を含む生のシーケンスデータを処理するために、標準的な分析を実施した。ＭｅｔａＰｈｌＡｎ２（ｄｂ＿ｖ２０）データベースに対して分類学的割り当てが行われた。
［実施例２７］
［未消化飼料及びオリゴ糖調製物の微生物変換］
[00690]未消化飼料の微生物発酵によって産生された代謝物のプロファイルに対するオリゴ糖調製物の効果を、実施例２５のサンプリングされた鳥から得られた家禽盲腸ミクロビオータにおいてエクスビボで評価した。
[00691]試験されるオリゴ糖調製物のアリコートを、水中で２０重量％のオリゴ糖に希釈し、０．２２ミクロンのＰＥＳシリンジフィルターを通してマイクロフィルター処理し、嫌気性条件下で脱気した。家禽飼料消化物（模擬盲腸消化物）を調製し、同時に、商業用トウモロコシ大豆ブロイラー飼料のサンプル１０ｇを５０ｍＬの水に懸濁し、１２０℃で５分間オートクレーブ処理を２サイクル行うことにより滅菌し、続いて水性抽出及び再懸濁した。得られた飼料消化物を嫌気性条件下で脱気した。
[00692]抽出した盲腸サンプルを嫌気性条件下で解凍して使用し、１５％グリセロールを含むｐＨ７．４のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の２０％ｗ／ｖ懸濁液を調製した。得られた盲腸スラリーを分析して、その系統発生的組成が最初にサンプリングされたミクロビオータ（実施例２４で配列決定された）のものを厳密に表していることを確認した。盲腸スラリーは、１サンプル当たり１２，２３０リードの希薄カットオフを使用して、標準の１６Ｓ ｒＲＮＡパイプライン（ＵＳＥＡＲＣＨ及びＳＩＬＶＡ（ｖ４）ＤＢ）に従って１６Ｓ ｒＲＮＡ分析（１６Ｓｖ４ ＰＣＲ／イルミナＭｉＳｅｑシーケンシング ２ｓ２５０ｂｐ）によって評価した。門の存在量では、盲腸スラリーは、およそ７０％のフィルミクテス門（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）、２０％のバクテロイデス門（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）、７％のテネリクテス門（Ｔｅｎｅｒｉｃｕｔｅｓ）並びに残部はプロテオバクテリア門（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、シアノバクテリア門（Ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）、アクチノバクテリア門（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）及びウェルコミクロビウム門（Ｖｅｒｒｕｃｏｍｉｃｒｏｂｉａ）を含むと決定された。
[00693]嫌気性条件下で作業し、懸濁液のアリコートを２，０００ｘｇで遠心分離し、上清をピペットで除去し、ペレットを再懸濁して：９００ｍｇ／Ｌの塩化ナトリウム、２６ｍｇ／Ｌの塩化カルシウム二水和物、２０ｍｇ／Ｌの塩化マグネシウム六水和物、１０ｍｇ／Ｌの塩化マンガン四水和物、４０ｍｇ／Ｌの硫酸アンモニウム、４ｍｇ／Ｌの硫酸鉄七水和物、１ｍｇ／Ｌの塩化コバルト六水和物、３００ｍｇ／Ｌの二塩基性リン酸カリウム、１．５ｇ／Ｌの二塩基性リン酸ナトリウム、５ｇ／Ｌの重炭酸ナトリウム、０．１２５ｍｇ／Ｌのビオチン、１ｍｇ／Ｌのピリドキシン、１ｍ／Ｌのパントテネート、７５ｍｇ／Ｌのヒスチジン、７５ｍｇ／Ｌのグリシン、７５ｍｇ／Ｌのトリプトファン、１５０ｍｇ／Ｌのアルギニン、１５０ｍｇ／Ｌのメチオニン、１５０ｍｇ／Ｌのトレオニン、２２５ｍｇ／Ｌのバリン、２２５ｍｇ／Ｌのイソロイシン、３００ｍｇ／Ｌのロイシン、４００ｍｇ／Ｌのシステイン及び４５０ｍｇ／Ｌのプロリンの無菌水性混合物からなる最小増殖培地で１％ｗ／ｖの盲腸スラリーを形成した。
[00694]実施例９の各オリゴ糖調製物について、２０重量％のオリゴ糖溶液の２５μＬアリコート、飼料消化物の２２５μＬアリコート及び２５０μＬの１％盲腸スラリーを、９６ウェルディープウェルマイクロタイタープレート（例えば、Ｃｏｓｔａｒ３９５８プレート）のウェルに三重にロードした。各プレートには、２５μＬの水、２２５μＬの飼料消化物及び２５０μＬの１％盲腸スラリーを組み合わせて調製した一連のブランクウェルを入れた。次いで、ロードしたプレートを嫌気性条件下において３７℃で４５時間インキュベートした。インキュベーション後、ウェルの内容物を１．５ｍＬのエッペンドルフチューブに移し、２０００ｘｇで最低５分間マイクロ遠心分離し、得られた上清を回収した。
［実施例２８］
［オリゴ糖調製物による杯細胞増殖刺激］
[00695]実施例９からのオリゴ糖調製物の存在下での杯細胞増殖をインビトロで評価した。９６ウェルＦａｌｃｏｎプレート中のウェルに、２００ｕＬの増殖培地及び４０，０００杯細胞を播種し、３日間増殖させた。実施例９からのオリゴ糖調製物を、対照（増殖培地のみ）に対して０．１ｍｇ／ｍＬの濃度で反復して試験した（オリゴあたりｎ＝６ウェル）。細胞を４日間分化させ、２日後に増殖培地を完全に変えた。次いで、プレートをリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、細胞を４％パラホルムアルデヒド（Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ ＃２８９０６、ＰＢＳで１：４に希釈）で３０分間処理することによって固定した。次いで、プレートをＰＢＳで２回洗浄し、Ａｌｃｉａｎ Ｂｌｕｅ（Ａｂｃａｍ ａｂ１５０６６２ｐＨ ２．５）ムチン染色で染色した。染色は、細胞を酢酸溶液中で３分間インキュベートし、続いて細胞をＡｌｃｉａｎ Ｂｌｕｅ溶液中において３０分間室温でインキュベートし、次いで水で２分間洗浄し、最終的に蒸留水で２回濯ぐことによって行った。
[00696]核を、Ｈｏｅｃｈｓｔ染色及び６４１×６４１ミクロンの視野サイズを有する自動顕微鏡法（１０×対物レンズ、４９視野）によって定量化した。０．１ｍｇ／ｍＬでは、様々なオリゴ糖調製物は、杯細胞増殖の約１％～約５％の増加をもたらした（表１２）。
Figure 0007426548000015
［実施例２９］
［オリゴ糖調製物による粘液産生刺激］
[00697]杯細胞による粘液産生に対するオリゴ糖調製物の効果をインビトロで評価した。９６ウェルＦａｌｃｏｎプレート中のウェルに、２００ｕＬの増殖培地及び４０，０００杯細胞を播種し、３日間増殖させた。オリゴ糖調製物を、実施例２７のオリゴ糖調製物のエクスビボ発酵によって得られた上清で細胞増殖培地を増強することにより、反復して（オリゴあたりｎ＝６ウェル）試験した。各オリゴ糖調製物について、実施例２７からの対応する上清を培養培地で１：２０に希釈し、マイクロ濾過した。対照は、発酵培地の１：２０希釈によって与えられた。細胞を４日間分化させ、２日後に増殖培地を完全に変えた。次いで、プレートをリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、４％パラホルムアルデヒド（Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ ＃２８９０６、ＰＢＳで１：４に希釈）で３０分間処理することによって固定した。次いで、プレートをＰＢＳで２回洗浄し、Ａｌｃｉａｎ Ｂｌｕｅ（Ａｂｃａｍ ａｂ１５０６６２ｐＨ ２．５）ムチン染色で染色した。染色は、細胞を酢酸溶液中で３分間インキュベートし、続いて細胞をＡｌｃｉａｎ Ｂｌｕｅ溶液中において３０分間室温でインキュベートし、次いで水で２分間洗浄し、最終的に蒸留水で２回濯ぐことによって行った。核を、Ｈｏｅｃｈｓｔ染色及び６４１×６４１ミクロンの視野サイズを有する自動顕微鏡法（１０×対物レンズ、４９視野）によって定量化した。
[00698]ムチン産生を、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘプレートリーダー上で６００ｎｍでの吸光度によって定量化した。ウェル間の細胞数の差を補償するために、吸光度を１００，０００細胞当たりＯＤ６００に正規化した。表１３に示すように、杯細胞粘液産生に対する明確で統計学的に有意な効果が観察された。
Figure 0007426548000016
［実施例３０］
［健康な腸バリアの完全性の刺激］
[00699]健康な腸バリア機能に対するオリゴ糖調製物の効果をインビトロで評価した。Ｃａｃｏ－２細胞を半透膜上の杯細胞と共培養し、分化させ、次いで実施例２５のサンプリングされた盲腸微生物叢を使用して得られた実施例２７のミクロビオーム上清で処理した。経内皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）の変化を対照に対して測定した。具体的には、図１８に示すように、Ｃａｃｏ－２及び杯細胞を半透性インサート上に播種し、適切な増殖培地を含むチャンバに入れた。細胞を１３日間増殖させて、密接結合を示す分化した単層を達成し、これはベースラインＴＥＥＲ測定を行うことによって確認した。
[00700]実施例９の複数のオリゴ糖調製物を、ｎ＝６反復で分析した。各オリゴ糖調製物について、実施例２７からの対応する上清を増殖培地で１：２０に希釈し、０．２ミクロンフィルターを通してマイクロ濾過し、チャンバの頂端側に適用した。対照は、増殖培地の１：２０希釈を適用することによって提供した。２４時間後、各オリゴ糖調製物についてＴＥＥＲ測定を行った。各々について、処理前に対する処理後のＴＥＥＲの変化を決定した。対照のＴＥＥＲの変化を１００％に正規化した。
[00701]ＴＥＥＲによって測定した健康な腸バリア機能の統計的に有意な改善が、特定のオリゴ糖調製物について観察された。様々なオリゴ糖調製物についてのＴＥＥＲの改善は、対照と比較して約０％～約１５％であった。特に、実施例９．２のオリゴ糖調製物は、対照と比較してＴＥＥＲの１４％の増加を提供した。結果を表１４に示す。
Figure 0007426548000017
［実施例３１］
［非特異的免疫機能の刺激］
[00702]非特異的食作用に対するオリゴ糖調製物の効果をインビトロで決定した。子豚の顆粒球を、２つの異なる濃度、１ｍｇ／ｍＬ及び２ｍｇ／ｍＬのＥｘ．９．３のオリゴ糖調製物の存在下での、オプソニン化大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）細胞の摂取についてフローサイトメトリーで分析した。摂取した病原体を有する顆粒球の数を、病原体を摂取しなかった顆粒球の数と比較して、食作用指数を決定した。
[00703]１ｍｇ／ｍＬのオリゴ糖調製物Ｅｘ．９．３の存在下、食作用指数は８２であると決定されたが、２ｍｇ／ｍＬの濃度では、食作用指数は１０６であると決定され、これは病原体の摂取における２９％の増加を反映している。図１９は、摂取された病原体を有する及び有さない顆粒球の同定を示す例示的なフローサイトグラムを提供する。
[00704]一般的な病原体に供されたブロイラー鶏について、免疫及び炎症応答に対するオリゴ糖調製物の効果をインビボで測定した。
[00705]表１５に記載される２つのバックグラウンド食餌タイプを使用して、処理グループにおいて鳥に給餌した。オリゴ糖調製物を含む食餌を、表１６に記載の処理グループに提供した。
Figure 0007426548000018
Figure 0007426548000019
[00706]１日齢の雄Ｃｏｂｂ ５００ブロイラー鶏が、商業的な孵化場によって供給された。到着日（－８日目）に、ニワトリを、８日間の導入期間の間、５０羽のグループに入れた。導入期間の間、動物に対照食餌を給餌した。０日目に、動物を体重によって各々８羽の鳥のグループに分け、１０ｘ用量のＰａｒａｃｏｘ－５（ＭＳＤ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ）弱毒経口コクシジウム症ワクチン（Ｅ．アセルブリナ（Ｅ．ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ）、Ｅ．マキシマ（Ｅ．ｍａｘｉｍａ）、Ｅ．ミチス（Ｅ．ｍｉｔｉｓ）及びＥ．テネラ（Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ）の混合物）を食餌タイプ２の全鳥に個々の経管栄養により投与した。次いで、各グループをバッテリーケージに入れ、処理グループに無作為に割り当て、各々、グループ当たり２複製を用いた。
[00707]動物を、環境的に制御された部屋に収容し、温度を鳥の年齢に適合させた。水及び全ての食餌を自由に与えた。７日目及び１４日目に、各複製からの鳥を無作為に選択し、安楽死させた。サンプリングした鳥を直ちに解剖した。標準的な方法を用いて、回腸内容物、盲腸内容物、回腸組織及びパイエル板組織のサンプルを得た。組織サンプルを、炎症及び免疫系サイトカイン及びケモカインに対応する遺伝子発現についてＰＣＲアレイにより分析した。
[00708]７日目に、対照２処理グループ（食餌タイプ２）の鳥についてのＩＬ１２β、ＩＬ１８、ＩＦＮ■、ＩＬ１０、ＩＬ２２、ＩＬ１β、ＩＬ２１及びＩＬ６のパイエル板発現は、図２０に示すように、対照１処理グループ（食餌タイプ１）の鳥の少なくとも１．５倍増加した。ＩＬ１２β、ＩＦＮ■、ＩＬ１７α、ＩＬ１６、ＩＬ２１、ＩＬ８Ｌ１及びＴＮＦＳＦ１３βの回腸発現も、対照２処理グループで少なくとも１．５倍増加した。サイトカイン及びケモカイン発現データは、エイメリア（Ｅｉｍｅｒｉａ）病原体に曝露された食餌タイプ２の鳥についての炎症性及び免疫応答を示すものであった。
[00709]実施例９．１及び９．３のオリゴ糖調製物を各々給餌した処理グループ３及び６の鳥について、改善された免疫応答が観察された。サイトカイン及びケモカイン発現データから、顆粒球及び幹細胞刺激と同様に、２型Ｔヘルパー細胞に対応する適応免疫系活性の増加が７日目に観察された。発現データは、多能性造血幹細胞の骨髄前駆細胞への分化の増加、顆粒球増殖の増加並びにＴ細胞、Ｂ細胞及びマスト細胞の全体的な活性化と一致していた。
[00710]１４日目までに、インターロイキン発現データは、制御性Ｔ細胞からのＩＬ９シグナル伝達及びＩＬ６抗炎症性ミオカイン活性を含む、免疫系調節及び抗炎症経路を示した。発現データは、病原体チャレンジに曝露されたがオリゴ糖調製を与えられなかった対照グループ２のトリと比較して、食餌タイプ２関連病原体に対する適応免疫応答の増加と、それに続く恒常性へのより迅速な復帰を示唆していた。
［実施例３２］
［チャレンジされた腸バリアの完全性の回復］
[00711]実施例９の複数のオリゴ糖調製物を、ｎ＝６反復で分析した。各オリゴ糖調製物について、実施例２７からの対応する上清を増殖培地で１：２０に希釈し、０．２ミクロンフィルターを通してマイクロ濾過し、チャンバの頂端側に適用した。対照は、増殖培地の１：２０希釈を適用することによって提供した。２４時間後、各オリゴ糖調製物についてＴＥＥＲ測定を行った。各々について、処理前に対する処理後のＴＥＥＲの変化を決定した。対照のＴＥＥＲの変化を１００％に正規化した。
[00712]リーキーガットバリア機能に対するオリゴ糖の効果をインビトロで評価した。オリゴ糖調製物自体の直接効果及びオリゴ糖調製物から得られたミクロビオーム生成物の間接効果の両方を評価した。Ｃａｃｏ－２及び杯細胞を半透性インサート上に播種し、適切な増殖培地を含むチャンバに挿入し、実施例２からの様々なオリゴ糖調製物又は実施例３からの対応する上清で処理した。経内皮電気抵抗を使用し、蛍光色素の透過性を測定することによってバリアの完全性を評価した。
[00713]Ｃａｃｏ－２及び杯細胞を半透性インサート上に播種し、図２１に示すように、適切な増殖培地を含むチャンバに入れた。オリゴ糖調製物、培地のみを含む負の対照及び培地のみを含む正の対照を、ｎ＝６反復で評価した。各々について、細胞を１３日間増殖させて、分化した単層を達成した。細胞を洗浄し、ＴＥＥＲ測定を行って、ベースライン読み取り値を確立した。対照を１００％に正規化した。
[00714]実施例９の複数のオリゴ糖調製物を、ｎ＝６反復で分析した。試験した各オリゴ糖調製物について、実施例９からの対応するシロップを蒸留水で５％に希釈し、更に蒸留水で１：２０に希釈し、０．２ミクロンフィルターを通してマイクロ濾過し、チャンバの頂端側に適用した。試験した各オリゴ糖調製物についての間接効果を評価するために、実施例２５からの対応する上清を蒸留水で１：２０に希釈し、０．２ミクロンフィルターを通してマイクロ濾過し、チャンバの頂端側に適用した。対照は、増殖培地の１：２０希釈を適用することによって提供した。
[00715]ベースラインＴＥＥＲ読み取り後、オリゴ糖調製物及び正の対照の各々について、ラムノリピド頂端ストレッサーを頂端チャンバに適用した。蛍光色素Ｌｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗを、オリゴ糖調製物、正の対照及び負の対照の各々について頂端チャンバに適用した。頂端ストレッサー及びＬｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗ色素の存在下で３時間後、第２のＴＥＥＲ測定を行って、バリア完全性に対するストレッサーの影響を評価した。バリア透過性は、細胞層及び膜の頂端から基底外側へのＬｕｃｉｆｅｒ Ｙｅｌｌｏｗ透過の程度を測定することによって評価した。
[00716]ＴＥＥＲ及び色素透過性によって測定した、破壊された腸バリア機能の統計的に有意な改善が、特定のオリゴ糖調製物について観察された。様々なオリゴ糖調製物についてのＴＥＥＲの改善は、対照と比較して約０％～約３０％であった。オリゴ糖調製物の直接及び間接効果の両方が観察された。
[00717]特に、実施例９．３のオリゴ糖調製物は、対照と比較して色素透過性の有意な直接的減少を提供した一方、実施例９．２のオリゴ糖は、対照と比較して色素透過性の有意な間接的減少を提供した。実施例９．７のオリゴ糖は、色素透過性の直接的又は間接的な減少を提供せず、実施例９．６のオリゴ糖の直接適用は、頂端ストレッサーによるバリア機能破壊を悪化させた。
［実施例３３］
［ブロイラー鶏の生きた成長性能研究のメタアナリシス］
[00718]商業用ブロイラー鶏の生きた成長性能に対するオリゴ糖調製剤の影響は、様々な地域、時期、背景の食餌の種類、鳥の遺伝学及び寝わらの取り扱いやコクシジウム症制御プログラムを含む管理慣行にわたって実施された一連の独立した研究を通じて、インビボで評価した。各研究では、鳥は１つの対照群と１つ以上の処理した群を含む処理群に分けた。対照群には、バックグラウンド食餌のみを給餌した。処理した群には、実施例９のオリゴ糖調製物の特定用量で補強されたバックグラウンド食餌が給餌された。選択された研究では、比較例として、家禽産業で使用される商業用飼料添加物が含まれている。
[00719]各研究では、鳥は典型的なブロイラーハウスの中にある囲い（各囲いには指定された数（Ｈｄ／Ｒｅｐ）の鳥がいた）に収容された。統計的複製は、囲いを処理群にランダムに割り当て、処理ごとに指定された数（Ｒｅｐｓ／Ｔｒｔ）の複製で実装された。表１７は、分析に含まれる各研究のプロトコルの詳細をまとめたものである。
Figure 0007426548000020
[00720]研究結果には、鳥の体重（ＢＷ）、飼料摂取量（ＦＩ）、飼料要求率（ＦＣＲ）、パーセント死亡率（頭別）及び死亡体重が含まれていた。囲いは統計単位であった。可能な場合、空間ブロッキングが実装され、処理群がランダムにブロックに分けられた。
[00721]［バックグランド食餌：］
[00722]鳥は、３５～４９日間の総研究期間の間、地元の業界慣行に従った食餌期で給餌された。幼動物期の食餌は、典型的には、鳥の配置から研究１５日目まで、くずとして提供された。全ての食餌には抗生物質成長促進剤は含まれなかった。初期対照食餌の構成は、表１８に記載される（ＮＡ＝現場より入手不可能なデータ）。
Figure 0007426548000021
[00723]育成期の食餌は、１６日目から２４日目を通してペレットとして提供された。育成期対照食餌の構成は、表１９に列挙される（ＮＡ＝現場より入手不可能なデータ）。
Figure 0007426548000022
[00724]後期の食餌は、１６日目から２４日目を通してペレットとして提供された。後期対照食餌の構成は、表２０に列挙される（ＮＡ＝現場より入手不可能なデータ）。
Figure 0007426548000023
[00725]［処理群：］
[00726]各研究について、オリゴ糖調製物と対照食餌の効果を比較するように取り扱い群を設計した。選択された研究では、オリゴ糖調製物の用量反応曲線を評価するために処理群を設計した。最終的なオリゴ糖含有量が指定された用量（乾燥固形分ベースのｐｐｍの単位）を達成するように、実施例９からの対応するオリゴ糖調製物の十分な量をブレンドすることにより、処理された食餌を得た。選択された研究では、比較実施例（比較例３６）は、市販の全酵母製品（Ｄｉａｍｏｎｄ Ｖ ＸＰＣ Ｏｒｉｇｉｎａｌ）によって提供された。表２１に従って処理群を割り当てた。
Figure 0007426548000024
[00727]当技術分野で既知の標準的な装置及び方法を使用して、バックグラウンド食餌及び処理食餌の両方を調製した。処理食餌について、オリゴ糖調製物及び比較生成物は、バックグラウンド食餌の上部に配合され、ミキサーの事前ペレット化に追加された。オリゴ糖の含有は、インフィードアッセイによって確認された。
[00728]［生成長期及びサンプリング：］
[00729]飼料及び水は、自由に提供された。商業用照明及び温度プログラムは、対応する地域の地元の業界慣行に従って、各研究で実施した。囲いは毎日検査され、死亡者の数及び体重を研究ログに記録した。獣医の介入は必要なかった。
[00730]各食餌期について、囲いの総体重増加、鳥の開始数と終了数及び総飼料消費量を各囲いについて測定した。各囲いについて、鳥の平均の体重（ＢＷ）は、囲いの総重量を計量時の囲い内の鳥の数で割ることによって計算した。各囲いについて、飼料要求率（ＦＣＲ）は、ある間隔の総飼料摂取量を対応する囲いの総体重増加で割ることによって計算した。ＦＣＲは、期間中の死亡者の総重量を加算することにより、死亡率（ＦＣＲｍａ）を調節した。囲いの重量の違いを説明するために、ＦＣＲｍａは、当技術分野で既知の方法を使用して、各囲いの補正されたＦＣＲ（ｃＦＣＲ）を得るために共通の体重に補正された。対応する遺伝学の成長日の関数として公開されたＢＷ及びＦＣＲのパフォーマンス目標を使用して、様々な鳥の遺伝学の補正係数を決定した。
[00731]選択された研究では、各囲いから１羽の鳥をランダムに選択し、１５日目及び／又は最終研究日のいずれかにサンプリングした。サンプリングされた各鳥について、５ｍＬの血液を翼の静脈から血清バキュテナーに採取した。凝固後、血清を遠心分離によって回収し、除去し、後の処理のためにドライアイス上で凍結した。次いで、サンプリングされた各鳥を、地域の倫理的手順に従って安楽死させ、解剖した。盲腸の内容物を５ｍＬのコニカルチューブに移し、ミクロビオームの全ゲノムシーケンスと盲腸のメタボロミクスのためにすぐにフラッシュ凍結した。回腸組織の小さい切除を行い、ＲＮＡを不活性化するために処理して、後の遺伝子発現分析のために凍結した。
［実施例３４］
［メタアナリシスの研究］
[00732]実施例３６のインビボでの研究の統計的メタアナリシスを実施して、オリゴ糖飼料添加物及び比較生成物の、対照飼料を給餌した鳥に対する鳥の性能に及ぼす影響を評価した。分析では、ブロックに入れられた研究についての固定効果及びランダムな効果として処理群を使用した混合線形モデルを採用した。統計分析は、Ｒバージョン３．４．４（２０１８－０３－１５）で実施した。結果は最小二乗平均によって評価され、Ｐ＜０．０５で統計的有意性があった。対比較を、テューキーの方法に従って実施し、アルファベットのラベル：ａ、ｂ、ｃ、ｄ…を割り当てた。テューキーのグループ化ラベルに共通の文字がない処理は、Ｐ＜０．０５での対比較の下で有意に異なった。
[00733]［飼料要求率：］
[00734]ｃＦＣＲの研究効果は、Ｐ＜０．０５で有意であった。オリゴ糖処理は、１２５０ｐｐｍの含有量でｃＦＣＲが２．２ｐｔ改善された比較実施例と比較して、５００ｐｐｍの含有量で対照食餌よりもｃＦＣＲが少なくとも２．７ｐｔ改善された。実施例９．４のオリゴ糖は、５００ｐｐｍの含有量でｃＦＣＲの６．４ポイントの改善をもたらした。ｃＦＣＲについてのメタアナリシスの結果を表２２に示している。
Figure 0007426548000025
[00735]オリゴ糖処理群は、比較実施例である比較例３６と比較してより高い粘稠度の効果を示した。複数の研究に含まれる各オリゴ糖について、ｃＦＣＲに対するその効果の粘稠度は、ｃＦＣＲの改善の対照に対する所与の値が観察された研究の割合を決定することによって評価された。例えば、５００ｐｐｍの含有量での実施例９．２のオリゴ糖により、研究の８０％で少なくとも３ｐｔのｃＦＣＲ利益、研究の６０％で少なくとも４ｐｔのｃＦＣＲ利益、研究の４０％で少なくとも５ｐｔのｃＦＣＲ利益及び研究の４０％で少なくとも６ｐｔのｃＦＣＲ利益がもたらされた。１２５０ｐｐｍの含有量での比較例により、研究の２５％のみで３ｐｔのｃＦＣＲ利益がもたらされ、どの研究でも４ｐｔ以上のｃＦＣＲ利益は得られなかった。
Figure 0007426548000026
[00736]ｃＦＣＲと食餌中のオリゴ糖の含有率との間に明確な用量反応が観察された。実施例９．２のオリゴ糖について、２．４ｐｔのｃＦＣＲ利益が１００ｐｐｍの含有量で観察され（Ｐ＞０．０５）、３．７ｐｔのｃＦＣＲ利益が２５０ｐｐｍの含有量で観察され（Ｐ＜０．０５）、６．４ｐｔのｃＦＣＲ利益が１０００ｐｐｍの含有量で観察された（Ｐ＜０．０５）。
[00737]［鳥の体重：］
[00738]ＢＷの研究効果は、Ｐ＜０．０５で有意であった。１２５０ｐｐｍの含有量で３９．６グラムの体重増加がもたらされた比較実施例に対し、オリゴ糖処理により、５００ｐｐｍの含有量で対照食餌よりも少なくとも４８．９グラムの体重増加がもたらされた。実施例９．５のオリゴ糖は、５００ｐｐｍの含有量で対照よりも８１．８グラムのＢＷ増加がもたらされた。鳥の体重のメタアナリシスの結果を表２４に示している。
Figure 0007426548000027
[00739]［群れの斉一性：］
[00740]５００ｐｐｍの含有量でオリゴ糖調製物が給餌された鳥は、対照食餌が給餌された鳥と比較して、改善された群れの斉一性を示した。各処理群について、群れの斉一性は、対応する研究の鳥の平均体重周辺の±５％の範囲内にある鳥の体重の割合を計算することによって評価した。全ての研究の平均３６．１～３６．１５で、対照飼料が給餌された鳥の８１．７％は、鳥の平均体重の±５％以内に収まったが、実施例９．２のオリゴ糖で処理された飼料が給餌された鳥の９１．３％は、鳥の平均体重の±５％以内に収まった。ノンパラメトリックアンサリ・ブラッドレイ（Ａｎｓａｒｉ－Ｂｒａｄｌｅｙ）検定で測定した場合、斉一性効果はＰ＜０．０１で有意であった。
［実施例３５］
［オリゴ糖を給餌されたブロイラーにおける炎症の減少及び栄養吸収の改善］
[00741]炎症応答及び栄養吸収に対するオリゴ糖の効果を、市販ブロイラー鶏にてインビボで評価した。１日齢の雄ブロイラー鶏（Ｃｏｂｂ ５００）を、商業的な孵化場（Ｊｏｓｅｐｈ Ｇｒｅｌｉｅｒ Ｓ．Ａ．、Ｅｌｅｖａｇｅ ａｖｉｃｏｌｅ ｄｅ ｌａ Ｂｏｈａｄｉｅｒｅ、Ｆ－４９２９０ Ｓａｉｎｔ－Ｌａｕｒｅｎｔ ｄｅ ｌａ Ｐｌａｉｎｅ、Ｆｒａｎｃｅ）から得た。
[00742]［処理及び食餌：］
[00743]ＤＤＧＳを含むが抗菌性成長促進剤及び抗コクシジウム剤を含まない標準的な市販のトウモロコシ／大豆ミールを、鳥に給餌した。食餌は、２つの食餌相で給餌された：初期相（Ｓｔａｒｔｅｒ Ｐｈａｓｅ）食餌は１～２２日目に給餌され、２１０ｇ／ｋｇの粗タンパク質及び１２．５ＭＪ／ｋｇのＭＥを提供するように配合された。育成期相（Ｇｒｏｗｅｒ Ｐｈａｓｅ）食餌は２３～３６日目に給餌され、１９０ｇ／ｋｇの粗タンパク質及び１２．９ＭＪ／ｋｇのＭＥを提供するように配合された。全ての食餌は、フィターゼ飼料酵素（Ｒｏｎｏｚｙｍｅ ＨｉＰｈｏｓ）を１００ｍｇ／ｋｇ飼料の標準用量で補充された。
[00744]到着日（１日目）に、鳥をペン当たり１８羽の鳥でフロアペンに入れ、リターを木くずによって提供した。ペンを４つの処理グループのうちの１つに無作為に割り当て、処理当たり１２回の反復を行った。対照グループにはオリゴ糖を添加しない食餌を給餌した一方、処理グループには対照食餌の上にオリゴ糖を添加することによって得られた食餌を給餌した。異なる処理グループを表２５に示す。
Figure 0007426548000028
[00745]［成長及びサンプリング：］
[00746]鳥を、環境的に制御された部屋に収容し、温度及び照明を鳥の年齢に適合させた。研究の最初の数日間、赤外線電気加熱ランプを各ペン内に配置した。飼料及び水を自由に与え、飼料は、研究の最初の１０日間は砕かれたペレットとして、残りの成長の間はペレット化された飼料として与えられた。１日目、２２日目及び２６日目に、ペン重量及び飼料摂取量を記録した。死亡率を毎日記録した。
[00747]３６日目に、各ペンから１羽の鳥を無作為に選択し、安楽死させ、解剖した。回腸内容物及び盲腸内容物を収集し、分析のために直ちに凍結した。空腸の始まりの約１０ｃｍ下で収集した約１平方ｃｍの回腸組織を処理して、ＲＮＡ及び遺伝子発現解析のための遺伝物質を保存した。
[00748]［遺伝子発現解析：］
[00749]回腸組織を、腸健康アレイを用いて分析して、炎症応答及び免疫に関連する１８の遺伝子、腸完全性に関連する５つの遺伝子及び栄養吸収に関連する４つの遺伝子の発現レベルを定量化した。遺伝子発現レベルを、オリゴ糖を含む食餌を給餌した鳥と、対照食餌を給餌した鳥との間で比較した。統計的に有意な効果は、図２２に示すように、５００ｐｐｍの実施例９．３のオリゴ糖を含む食餌を給餌した鳥において、４つの遺伝子について観察された。免疫及び抗炎症遺伝子ＩＬ１Ｂ、ＩＬ４、ＩＬ１０の発現の１．５～２倍の増加が観察された。炭水化物輸送体遺伝子ＳＬＣ５Ａ１０の２倍の増加が観察された。これらのデータは、対照食餌を給餌した鳥に対して、実施例９．３のオリゴ糖を給餌した鳥の回腸炎症の減少と、栄養吸収の改善を示している。対照的に、実施例９．１のオリゴ糖を含む食餌を給餌した鳥は、プロ炎症応答に関連する遺伝子ＩＦＮＧ及びＩＬ１７Ｂの発現の増加を示した。
［実施例３６］
［炎症チャレンジに供された鳥に対するオリゴ糖の効果］
[00750]局所及び全身の免疫応答、炎症応答、臓器の健康及び腸の形態に対するオリゴ糖の効果を、ブロイラー鶏においてインビボで評価した。
[00751]［処理、食餌及び炎症性チャレンジ］
[00752]１日齢の雄鳥（Ｃｏｂｂ ５００）を、ケージ当たり１０羽の鳥でバッテリーケージに割り当てた。研究の最初の８日間、全ての鳥に、フィターゼ（Ｒｏｎｏｚｙｍｅ ＨｉＰｈｏｓ）を１００ｍｇ／ｋｇ飼料の標準用量で補充したが、抗菌性成長促進剤及び抗コクシジウム剤を含まない従来のトウモロコシ－大豆家禽飼料を含む同じ対照飼料を給餌した。
[00753]９日目から開始して、ケージを４つの処理グループのうちの１つに割り当て、処理グループ毎に２つのケージであった。各処理グループの詳細を表２６に示す。
Figure 0007426548000029
[00754]処理Ａ（対照グループ）は、８日目まで給餌されたのと同じ食餌を受け続けた。処理Ｂ（チャレンジグループ）には、１％ジャガイモタンパク質で補充した対照食餌を給餌して、消化管に軽度の食餌ストレスを誘発した。処理Ｃには、５００ｐｐｍの実施例９．３のオリゴ糖で補充したチャレンジ食餌を給餌した。処理Ｄには、５００ｐｐｍの実施例９．２のオリゴ糖で補充したチャレンジ食餌を給餌した。
[00755]鳥は、環境的に制御された部屋に収容し、飼料及び水を自由に与えた。１４日目に、処理グループＢ、Ｃ及びＤの全ての鳥は１０ｘ用量のコクシジウム症ワクチン（Ｐａｒａｃｏｘ（登録商標）－５、ＭＳＤ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ）を受けて、弱毒化したエイメリア・アセルブリナ（Ｅｉｍｅｒｉａ ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ）、Ｅ．マキシマ（Ｅ．ｍａｘｉｍａ）、Ｅ．ミチス（Ｅ．ｍｉｔｉｓ）及びＥ．テネラ（Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ）の胞子形成オーシストに曝露することによって腸炎症応答を誘発した。
[00756]［生物学的サンプリング：］
[00757]２１及び２８日目の各々に、各処理グループから１ケージを取り出した。各ケージからの鳥を安楽死させ、生物学的サンプリング及び分析のために解剖した。回腸組織及びパイエル板を収集し、遺伝子発現及び組織学的分析のために処理した。血液サンプルを採取して、リンパ球の表現型決定（パイエル板）を介した局所免疫応答と、免疫グロビン（ＩｇＡ）及びα－糖タンパク質（急性相肝応答タンパク質）の測定を介した全身性免疫及び炎症応答とを分析した。また血液をジアミンオキシダーゼ（ＤＡＯ）レベルについて分析し、肝臓組織を組織学的検査のために収集した。
[00758]炎症チャレンジの投与から１週間後と２週間後の両方で分析を行うことにより、動物の免疫及び炎症応答の大きさと時間依存性の両方に対するオリゴ糖の効果の評価が得られた。
[00759]［回腸栄養吸収］
[00760]回腸遺伝子発現解析は、処理Ｂの炎症チャレンジが、炭水化物、タンパク質及び亜リン酸栄養素の回腸吸収を有意に減少させることを明らかにした。２１日目に、処理Ｂのチャレンジグループと処理Ａの対照グループとの間で、輸送遺伝子ＳＩ、ＳＬＣ３４Ａ２及びＳＣＬ１５Ａ１の発現に２～３倍の減少が観察された。
[00761]対照的に、実施例９．３及び９．２のオリゴ糖を含む処理グループＣ及びＤは、それぞれ回腸吸収において半分未満の減少を示した。２８日目に、処理Ｃ及びＤについてＳＬＣ３４Ａ２発現によって示される亜リン酸吸収は、対照と統計的に類似しており、図２３に示されるように改善された。
[00762]［回腸絨毛の質及び杯細胞数］
[00763]処理グループＤの鳥からサンプリングされた回腸組織と、処理グループＢのものとの画像を図２４に示す。処理グループＤの鳥は、回腸組織学により明らかであるように、有意に増加した絨毛長及びより少ない炎症性損傷を示した。従って、実施例９の特定のオリゴ糖を給餌した鳥は、実施例９のオリゴ糖を給餌していない鳥と比較して、急性炎症性チャレンジから生じる回腸組織損傷に対する改善された耐性を示した。
[00764]回腸杯細胞数の有意な（Ｐ＜０．０５）増加が、グループＢのチャレンジ鳥と比較してグループＤで観察された（図２５）。杯細胞は、回腸の他の重要な機能の中でもムチン産生に関与する。従って、実施例９の特定のオリゴ糖を給餌した鳥は、実施例９のオリゴ糖を給餌していない鳥と比較して、急性炎症性チャレンジから生じる健康な回腸機能を維持する能力の改善を示した。
[00765]［Ｔ細胞分化：］
[00766]図２６に示すように、処理グループＣ及びＤの鳥は、チャレンジグループＢのものと比較して、Ｔヘルパー細胞増殖の増加を示した。グループＤの鳥は、グループＡの非チャレンジ鳥と統計的に区別できない、総パイエル板リンパ球のパーセンテージとして測定されたＴ－ヘルパー細胞のレベルを示した。更に、グループＣ及びＤの鳥は、チャレンジグループＢの鳥と比較した場合、Ｔ－細胞傷害性細胞として分化したリンパ球のパーセンテージが低かった。
[00767]［肝臓組織学及び急性相肝タンパク質：］
[00768]肝臓組織学及び血液分析は、処理グループＣの鳥が、グループＢの鳥と比較して、炎症性損傷の減少を示したことを示し、実施例９．３のオリゴ糖が肝臓損傷に対する保護を提供したことを示した（図２７Ａ）。組織学的スコアリングを、図２７Ｂに例示されるように行った。グループＣの鳥は、グループＢの鳥と同様、非チャレンジ対照グループＡに対して、肝臓損傷の約５０％低い増加を示した。グループＢの鳥は、急性相肝α－糖タンパク質糖タンパク質（ＡＧＰ）の循環の有意な増加を示した（図２７Ｃ）。研究の２８日目までに、実施例９．３のオリゴ糖を給餌した鳥は、グループＡの非チャレンジ対照鳥と統計的に区別できない血液ＡＧＰレベルを示した。
[00769]［免疫グロビン及びジアミンオキシダーゼレベルの回復の増強：］
[00770]免疫グロビンＡ（ＩｇＡ）の血清レベルを測定して、炎症性チャレンジに供された鳥の免疫応答及び回復速度に対するオリゴ糖の効果を観察した。ＩｇＡは、特に膜の免疫機能及び炎症応答に関与する抗体である。炎症チャレンジ投与の１週間後の２１日目に、グループＢの鳥は、グループＡの非チャレンジ対照鳥の約１．８５ｍｇ／ｍＬに対して約２．２５ｍｇ／ｍＬの血清ＩｇＡ濃度の増加を示した。対照的に、実施例９．２のオリゴ糖調製物を給餌したグループＤの鳥は、約４．４ｍｇ／ｍＬのＩｇＡ応答の増加を示した。炎症チャレンジの投与の２週間後の２８日目、グループＢの鳥は、約４．３５ｍｇ／ｍＬの血清ＩｇＡ濃度を示したが、グループＤの鳥は、約２．１ｍｇ／ｍＬに低下した血清ＩｇＡ濃度を示した。実施例９．２のオリゴ糖調製物を給餌したグループＤの鳥は、炎症性チャレンジに対してより速い免疫応答を示し、より速い回復を示すことが結論付けられた。血清ＩｇＡレベルは、オリゴ糖調製物を給餌しなかったグループＢのチャレンジ鳥よりも速く上昇し、グループＡのベースライン対照レベルに向かって逆に減少した。
[00771]ジアミンオキシダーゼ（ＤＡＯ）の血清レベルを測定して、炎症性チャレンジに供された鳥の炎症応答及び回復速度に対するオリゴ糖の効果を観察した。ヒスタミン調節及び炎症経路に関与するＤＡＯである。炎症チャレンジの投与の１週間後の２１日目、グループＢ及びＤの鳥は、グループＡの非チャレンジ対照鳥の約２８．５マイクログラム／ｍＬの濃度と比較して、血清ＤＡＯ濃度の約２５％～３０％の低下を示した。実施例９．２のオリゴ糖を給餌したグループＤの鳥のＤＡＯ濃度の低下は、オリゴ糖調製物を給餌しなかったグループＢのものよりも数値的に大きかった。炎症性チャレンジの投与の２週間後の２８日目、実験誤差内で、グループＤの鳥は、グループＡの非チャレンジ鳥で観察されたように、ＤＡＯのベースライン濃度への復帰を示した。実施例９．２のオリゴ糖調製物を給餌したトリは、オリゴ糖を給餌しなかったトリと比較して、同様の炎症応答を示し、恒常性への速い回復を示すと結論付けられた。
［実施例３７］
［マイクロアレイ遺伝子発現解析］
[00772]ブロイラー鶏の回腸における全ての既知の遺伝子の回腸遺伝子発現を、マイクロアレイ解析により行った。実施例３６．４のブロイラーからの回腸組織を解析して、オリゴ糖調製物を給餌していない対照鳥と比較した、回腸遺伝子発現に対するオリゴ糖調製物及び用量の効果を決定した。組織サンプルを実施例３３及び３６の方法に従って得た。
[00773]マイクロアレイ解析用に調製するために、ＲＮＡサンプルを増幅し、Ｔ７ ＲＮＡポリメラーゼに基づく反応で標識した。Ａｇｉｌｅｎｔ Ｌｏｗ Ｉｎｐｕｔ Ｑｕｉｃｋ Ａｍｐ Ｌａｂｅｌｉｎｇ Ｋｉｔ、Ｏｎｅ－Ｃｏｌｏｒを使用して、１色処理のための１００ｎｇの総ＲＮＡのサンプル入力ＲＮＡを用いて蛍光ｃＲＮＡ（相補的ＲＮＡ）を生成した。この方法はＴ７ ＲＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｂｌｅｎｄを使用し、これは、標的物質を同時に増幅し、Ｃｙａｎｉｎｅ ３－ＣＴＰを組み込んだ。増幅は、典型的には、総ＲＮＡからｃＲＮＡまで少なくとも１００倍であった。
[00774]二本鎖ｃＤＮＡを逆転写によって生成し、これは標識リボヌクレオチドの存在下で行い、アレイハイブリダイゼーション用のマイクログラム量の標識ＲＮＡを生成した。標識ｃＲＮＡをマイクロアレイスライド上に、サンプル当たり１．６５μｇの濃度で一晩ハイブリダイズした。ハイブリダイゼーション（少なくとも１７時間）後、スライドを洗浄し、Ａｇｉｌｅｎｔ ＳｕｒｅＳｃａｎ Ｍｉｒｃｒｏａｒｒａｙ Ｓｃａｎｎｅｒ上でスキャンする。Ｐａｒｔｅｋ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ｓｕｉｔｅを使用してデータを分析した。機構及びオントロジーのグループ化を表２７に示すように行った。
Figure 0007426548000030
[00776]更に、以下のような多段階アプローチを用いて、非標的分析を行った。対照グループに対して、オリゴ糖を給餌した動物間で最も高い倍数変化が観察された１０の注釈付き遺伝子を同定した。対照グループに対して、オリゴ糖を給餌した動物間で最も低い倍数変化が観察された１０の注釈付き遺伝子を同定した。最後に、対照グループに対して、オリゴ糖を給餌した動物間で、差の統計的信頼度が最も高い１０の注釈付き遺伝子を同定した。ゲノム及び遺伝子発現解析ソフトウェア（Ｐａｒｔｅｋ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）を使用して、セキショクヤケイ（ｇａｌｌｕｓ ｇａｌｌｕｓ）ＫＥＧＧ経路に対して経路解析を行った。
［実施例３８］
［コクシジウム症からの回復を促進する方法］
[00777]コクシジウム症は、例えば、エイメリア・アセルブリネ（Ｅｉｍｅｒｉａ ａｃｅｒｖｕｌｉｎｅ）、エイメリア・マキシマ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｍａｘｉｍａ）、エイメリア・ミチス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｍｉｔｉｓ）、エイメリア・テネラ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｔｅｎｅｌｌａ）、トキソプラズマ・ゴンジイ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）、ハモンジア属（Ｈａｍｍｏｎｄｉａ ｓｐｐ．）、クリプトスポリジウム・パルブム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ）、クリプトスポリジウム・ムリス（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｍｕｒｉｓ）、クリプトスポリジウム・ホミニス（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｈｏｍｉｎｉｓ）、イソスポラ・カニス（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｃａｎｉｓ）、イソスポラ・オヒオエンシス（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｏｈｉｏｅｎｓｉｓ）、イソスポラ・ブロシ（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｂｕｒｒｏｓｉ）、イソスポラ・フェリス（Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｆｅｌｉｓ）及びその他を含むコクシジウム原生動物への曝露を原因とする、動物の胃腸管の寄生虫疾患である。
[00778]実施例３６のブロイラー鶏を、以下のレベルの、コクシジウムの早熟株に由来する胞子形成オーシストに曝露した。エイメリア・アセルブリネ（Ｅｉｍｅｒｉａ ａｃｅｒｖｕｌｉｎｅ）ＨＰからの５，０００～６，０００オーシスト、エイメリア・マキシマ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｍａｘｉｍａ）ＣＰの２，０００～２，３００オーシスト、エイメリア・マキシマ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｍａｘｉｍａ）ＭＦＰの１，０００～１，３００オーシスト、エイメリア・ミチス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｍｉｔｉｓ）ＨＰの１０，０００～１３，０００オーシスト及びエイメリア・テネラ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｔｅｎｅｌｌａ）ＨＰの５，０００～６，５００オーシスト。曝露された鳥は、実施例３６の血清ＩｇＡ、血清ＤＡＯ、肝臓組織学及び腸管組織学により観察されるように、強い炎症応答を示した。
[00779]５００ｐｐｍの実施例９．２のオリゴ糖調製物を給餌された実施例３６のグループＤの鳥は、未処理鳥と比較して、有意に減少した腸管及び肝臓損傷と、より速い恒常性への回復を示した。オリゴ糖処理を給餌された鳥は、グループＢの未処理のチャレンジ鳥と比較して、栄養吸収の改善及びＴ細胞分化の改善も示した。
［実施例３９］
［コクシジウム症ワクチンに対する耐性の改善方法］
[00780]実施例３５の鳥は、１０ｘ用量の、ブロイラー産業で使用される市販のコクシジウム症ワクチンに曝露された場合、肝臓損傷の減少、腸組織学の改善、栄養吸収の改善及びより速い炎症回復を示した。
［実施例４０］
［製造のための複製バッチスケールアップ］
[00781]オリゴ糖調製物の生産規模は、７２０Ｌのオーバーヘッド撹拌槽型反応器の生産規模に拡大した。実施例９．２のものから誘導されたスケールアップ手順を使用する１２のバッチ反応を、７２０Ｌスケールで実施した。得られたオリゴ糖調製物は、バッチ定性化を実施し、プロセスの安定性を評価するために、事前に決定されたＱＣ許容基準に対して特性評価した。
[00782]１２のバッチについて、温度、反応時間及び反応圧力などのプロセス条件を、実施例９．２の公称条件の周りの範囲で意図的に変化させて、典型的な製造環境で予想される可能性のあるプロセス条件の合理的な変更形態に対する、結果として得られる生成物の感度を評価する。選択されたバッチについて、ｉｎ ｓｉｔｕ粘度プローブを使用して、反応器の内容物の粘度の時間依存性を監視した。特定のバッチでは、反応停止時間は、連続粘度測定に基づく工程内管理（ＩＰＣ）を採用した。反応物、蒸留水及び発生した凝縮物の分配量を含む材料の量は、反応器及び補助タンク上のロードセルを介した質量又は体積流量及び時間のいずれかによって測定された。
[00783]反応器の生成物の最終含水量は、反応の終了時、即ちｐＨの中和及び希釈前に、取り出された反応器の内容物の代表的なアリコートについてカールフィッシャー滴定によって測定した。１２０℃の反応温度で、反応生成物の含水量は、現状のまま、８及び９重量％の水であると決定された。１３０℃の反応温度で、反応生成物の含水量は、現状のまま、５～７重量％の水であると決定された。
[00784]得られた全てのバッチのオリゴ糖シロップの外観は、カラメルシロップとして目視検査によって決定された。総溶解固形物含有量はカールフィッシャー滴定によって決定され、残留モノマー含有量、ＭＷｎ及びＭＷｗは、ＨＰＬＣ／ＧＰＣクロマトグラフィーによって決定され、ｐＨは較正されたｐＨメーターによって決定され、アンヒドロＤＰ２含有量はＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって決定された。表２８で示すように、以下のバッチ特性評価データが得られた（Ｎ／Ｒ＝「データ報告なし」）。
Figure 0007426548000031
［実施例４１］
［オリゴ糖調製物のｐＨ調整］
[00785]５０重量％の固形分での実施例９．２のオリゴ糖調製物のｐＨは、オリゴ糖調製物の５．００±０．０５グラムのアリコートを１．８０±０．０２ｍＬの脱イオン水で希釈し、ボルテックス撹拌によって混合して均一な濃度を得ることによって３回測定した。各アリコートのｐＨは、較正済みｐＨメーター（ＶＷＲ，Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｂ３０ＰＣＩ）で測定して、２．４ｐＨ単位の平均読み取り値を取得した。
[00786]実施例９．２のオリゴ糖調製物１．２ｋｇに、６．５３ｍＬの１．０モル水酸化ナトリウム水溶液を添加した。得られた混合物を激しく混合して、均一なｐＨ調整シロップを達成した。次いで、固形分が５０重量％で得られた調整済みシロップのｐＨを、上記のように３回測定して、平均４．１のｐＨ単位を得た。
[00787]ｐＨ調整手順は、様々なスケールでの複製バッチ合成のために繰り返されたが、塩基が生成物であるオリゴ糖組成物に提供される手順に特定の変更形態があった。１つのバッチについて、ｐＨ調整は、反応水の希釈前に、反応の最終工程として実施した。別のバッチでは、ｐＨ調整は、最初に必要な量の塩基を希釈水に溶解することにより、希釈工程と同時に実施し；従って、塩基と希釈水を一緒に添加して、反応を単一工程でクエンチし、所望のｐＨで最終シロップを生成した。別のバッチでは、塩基は食品グレードの水酸化ナトリウムペレットとして提供された。別のバッチでは、１０ｐｐｍの食品グレードのシリコーンエマルション（Ｄｏｗ Ｘｉａｍｅｔｅｒ ＡＦＥ－０１００）を、希釈及びｐＨ調整前に、反応に添加した。
［実施例４２］
［オリゴ糖調製物のガラス粉末配合物の調製］
[00788]実施例９．１のおよそ５０グラムのオリゴ糖調製物を乾燥トレイに分注し、６０℃の強制空気対流ヒーターに入れて、カラメル色の脆いガラスを製造した。ガラスを乾燥トレイから取り出し、剪断回転ミルで粉砕して、薄オレンジ色の流動性粉末を得た。粉末の粒径は、ふるい分けにより、１００～２０００ミクロンとなるように決定し、質量の９０％が１３５０ミクロン未満であった。粗粉砕粉末の真密度は、ヘリウムピクノメトリーによって１．３０６３ｇ／ｍＬであると決定された。得られた粉末は、流動性であることが観察された。
[00789]ハンマーミルを使用して配合手順を繰り返し、粉末の質量の９０％が１９６ミクロン未満の粒径を示す微細粉末を得た。微細粉砕粉末の真密度は、１．５２６３ｇ／ｍＬであると決定された。得られた粉末は、安定しておらず、流動性でもなかった。
[00790]２つの温度サイクルプログラムを使用して粉末に対してＤＳＣ測定を実施した。第１のプログラムでは、温度を５℃／分の速度で０℃から１６０℃に上昇させ、次に－５℃／分の速度で０℃にアニーリングして戻し、最後に加熱して１６０℃まで戻した。第２のプログラムでは、温度を５℃／分の速度で－５０℃から５０℃に上昇させ、－５℃／分の速度で－６０℃にアニーリングしてから、５℃／分の速度で６０℃に加熱した。粉末は、５～１０重量％の水分の固体の残留含水量に応じて、２０～４０℃のガラス転移温度を示すことが観察された。
[00791]ミリング配合プロセスを、実施例９．２、実施例９．３、実施例９．４及び実施例９．５のオリゴ糖調製物の各々について繰り返した。粉末は水及びアルコール－水混合物に容易に再溶解したが、アセトン、メタノール及び無水エタノールには不溶性であった。
［実施例４３］
［キャリア充填粉末配合物の調製］
[00792]実施例９．２のオリゴ糖調製物の７０重量％水性シロップ及び珪藻土の等質量を室温で合わせ、安定な流動性粉末を得た。得られた粉末は、約３５重量％の吸着オリゴ糖（乾燥固形分ベース）及び約５０重量％のキャリアを含んでいた。粉末の粒径分布をふるい分けによって測定した。粉末の１０重量％は２９０マイクロメートル未満の粒径を示し、粉末の５０重量％は５１１マイクロメートル未満の粒径を示し、粉末の９０重量％は８８６マイクロメートル未満の粒径を示した。標準的な通気及び圧縮性試験を使用して決定されたように、粉末は分離及び凝集に対して安定であった。得られた粉末の真密度は、ヘリウムピクノメトリーによって１．８５４１ｇ／ｍＬであると測定された。
[00793]キャリア充填配合物を、飼料グレードのシリカを使用して繰り返し、最終粉末に対して少なくとも５０重量％のオリゴ糖調製物（乾燥固形分ベース）の負荷を有する、安定な、流動性粉末を得た。得られた粉末の真密度は、１．５５６２ｇ／ｍＬであると測定された。
［実施例４４］
［押出固体形態の調製］
[00794]実施例９．２のオリゴ糖調製物２０％をセモリナとブレンドすることにより固体押出生成物を調製し、ジャケット付き二軸染料押出機を通して混合物を配合して、質量の９０％が２ｍｍ未満の粒径を有する、０．２ｍｍ～３．０ｍｍの粒径の流動性粉末を形成した。得られた粉末は、流動性且つ安定であることが観察された。
［実施例４５］
［安定な粉末配合物の調製］
[00795]実施例４２～４４のものを含む固体配合物を評価して、それらの安定性及び吸湿性を決定した。実施例４２の粗粉砕粉末が分離に関して不安定であることが観察されたのに対し、実施例４３及び４４の粉末は分離及び凝集に対して安定であることが観察された。
[00796]試験される各粉末配合物のサンプルを、相対湿度５０％及び相対湿度６５％の密閉された気候チャンバに入れ、２５℃で最大２週間暴露した。試験されたフォームのうち、いくつかは湿度への暴露時にほとんど又は全く質量増加を示さず、２週間の暴露期間後も流動性を維持した。実施例４３の微粉砕された粉末は、湿気に暴露されると不安定であることが見出された。
［実施例４６］
［糖調製物における残留触媒の決定］
[00797]オリゴ糖調製物の残留酸触媒をイオンクロマトグラフィーによって決定した。オリゴ糖調製物の粉末配合物（例えば、実施例４２に記載されるように得られる）の８０～１００ミリグラムを正確に１．００ミリリットルに溶解し、必要に応じて遠心分離して粒子を除去した。得られた溶液を、伝導度検出、４ｘ２５０ｍｍのＩｏｎ Ｐａｃ ＡＳ１９Ａカラム、Ｉｏｎ Ｐａｃ ＡＳ１９Ｇ ５０ ４ｘ５０ｍｍプレカラム及び溶離液として水中のＫＯＨを使用する連続的に再生されたＣＲ－ＡＴＣアニオントラップを備えたＴｈｅｒｍｏ ＤｉｏｎｅｘＩＣＳ－３０００システムを使用して、３０℃のイオンクロマトグラフィーで分析した。溶出は、注入後最初の１０分間は１０ｍＭ ＫＯＨで行い、続いて２５分で５５ｍＭ ＫＯＨまで直線的に増加し、２６分で１０ｍＭ ＫＯＨに減少し、プログラムの終わりまで１０ｍＭ ＫＯＨを維持する勾配溶出を行った。
[00798]実施例９．２のオリゴ糖調製物について、残留触媒の濃度は、（＋）－カンファー－１０－スルホン酸の標準サンプルを使用して生成された標準検量線を参照して決定した。実施例９．２のオリゴ糖調製物の代表的なバッチを分析し、残留触媒濃度を、７０重量％のシロップ１グラム当たり０．６２ｍｇと決定した。
［実施例４７］
［バッチ受容のための残留触媒濃度の定性化］
[00799]実施例４６の残留触媒の決定をバッチ受容基準と比較して、更なる使用のためのバッチの適合性を決定した。生成物であるオリゴ糖調製物中の残留触媒濃度の受容限界は、生成物シロップ１グラム当たり１．０ｍｇ未満であることが事前に確立されていた。残留触媒の測定値は、生成物シロップ１グラム当たり０．６２ｍｇであった。従って、試験されたバッチの受容基準が満たされ、バッチは更なる使用のために受け入れられた。
［実施例４８］
［シロップ生成物の配合］
[00800]実施例９．７のオリゴ糖調製物は、実施例４１の手順に従って、食品グレードの水酸化ナトリウムでｐＨ４．２にｐＨ調整した。得られたシロップを、不正開封防止キャップ付きの２０リットルのカーボイに梱包した。容器に密閉する直前に、５００グラムのサンプルを採取し、品質テストを実施した。シロップの総固形分含有量は、ＦＣＣ ＡＰＰＥＮＤＩＸ Ｘ：炭水化物（デンプン、糖及び関連物質）：ＴＯＴＡＬ ＳＯＬＩＤＳの方法に従って、７０重量％超であることが確認された。還元糖含有量は、ＦＣＣ ＡＰＰＥＮＤＩＸ Ｘ：炭水化物（デンプン、糖及び関連物質）：ＲＥＤＵＣＩＮＧ ＳＵＧＡＲＳ ＡＳＳＡＹの方法に従って、乾燥重量基準でＤ－グルコースとして５０％未満であることが確認された。硫酸化灰は、ＦＣＣ ＡＰＰＥＮＤＩＸ ＩＩ：物理的試験及び決定：Ｃ．ＯＴＨＥＲＳ：ＲＥＳＩＤＵＥ ＯＮ ＩＧＮＩＴＩＯＮ（硫酸化灰）Ｍｅｔｈｏｄ ＩＩ（液体用）の方法を使用して、乾燥重量基準で１％未満であることが確認された。二酸化硫黄含有量は、最適化されたモニエルウィリアムズ法を使用して４０ｍｇ／ｋｇ未満であることが確認された。鉛含有量は、ＡＯＡＣ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｏｆｆｉｃｉａｌ Ｍｅｔｈｏｄ ２０１３．０６の方法を使用して、１ｍｇ／ｋｇ未満であることが確認された。総好気性プレート数は、ＣＭＭＥＦ Ｃｈａｐｔｅｒ ７の方法を使用して、１０００ｃｆｕ／ｇ未満であることが確認された。総酵母及びカビは、ＡＡＣＣ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ａｐｐｒｏｖｅｄ Ｍｅｔｈｏｄ ４２－５０の方法を使用して、１００ｃｆｕ／ｇ未満であることが確認された。大腸菌群は、ＦＤＡ ＢＡＭ Ｃｈａｐｔｅｒ ４の方法を使用して、１０ＭＰＮ／ｇ未満であることが確認された。Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）は、ＦＤＡ ＢＡＭ Ｃｈａｐｔｅｒ ４の方法を使用して、３ＭＰＮ／ｇ未満であることが確認された。サルモネラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）は、ＦＤＡ ＢＡＭ Ｃｈａｐｔｅｒ ５の方法に従って、サンプル２５グラム当たりで検出されないことが確認された。スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）は、ＦＤＡ ＢＡＭ Ｃｈａｐｔｅｒ １２の方法を使用して、１０ｃｆｕ／ｇ未満であることが確認された。色は、目視検査によってカラメル色であることが確認された。容器を密閉し、残りの保持サンプルを凍結し、将来の参照用に保管して、結果のロットに対して分析証明書を発行した。
［実施例４９］
［処理飲料水の調製］
[00801]実施例９．７のオリゴ糖調製物２５０ｐｐｍを含有する飲料水を以下のとおり調製した。実施例４１のオリゴ糖シロップ３７ｍＬ及びソルビン酸カリウム４０グラムを、５５ガロンのブルーポリドラム内の飲料用水道水５０ガロンに徐々に添加した。パドルを使用して、溶液を室温において１０分間手動で混合した。
[00802]ソルビン酸カリウムを組み込まずにこの方法を繰り返した。
[00803]以上、本発明の好ましい実施形態を図示、説明したが、こうした実施形態は、あくまで例として与えられたものであることが当業者に明らかであろう。本発明は、本明細書内で提供される特定の実施例によって限定されることを意図するものではない。本発明は、前述の本明細書を参照して説明されてきたが、本明細書の実施形態の説明及び図解は、限定的な意味で解釈されることを意味するものではない。当業者であれば、本発明から逸脱することなく多くの変形形態、変更形態及び代替形態が想到されるであろう。更に、本発明の全ての態様は、様々な条件及び変数に依存する、本明細書に記載の特定の描写、構成又は相対的な比率に限定されないことを理解されたい。本発明の実施に際して、本明細書で述べた実施形態に様々な代替形態を用い得ることが理解されるべきである。従って、本発明は、そのような代替形態、修正形態、変形形態又は均等物も包含するものと考えられる。

Claims (26)

  1. 胃腸バリア機能不全の処置又は予防を、それを必要とする動物（ヒトを除く。）において行う方法であって、
    基礎栄養組成物及び合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物を前記動物に投与することであって、
    少なくともｎ画分のオリゴ糖は、１～ｎ（ＤＰ１～ＤＰｎ画分）から選択される別個の重合度をそれぞれ有し、ｎは、３を超える整数であり；ＤＰ１及びＤＰ２画分の各々は、独立して、質量分析によって決定される相対的存在量で０．５％～１５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む、投与すること
    を含み、それにより前記胃腸バリア機能不全を処置又は予防する、方法。
  2. 前記動物の胃腸バリアの透過性は、前記合成オリゴ糖調製物を前記投与する前の前記動物の前記胃腸バリアの透過性と比較して減少する、請求項１に記載の方法。
  3. 前記減少は、前記合成オリゴ糖調製物を前記投与する前の前記動物の前記胃腸バリアの前記透過性と比較して、少なくとも０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％又は３０％の減少である、請求項２に記載の方法。
  4. 前記胃腸バリアの前記透過性は、前記動物からの血液、糞便又は尿サンプルから決定される、請求項３に記載の方法。
  5. 前記透過性は、前記血液、糞便又は尿サンプル中の少なくとも１つの微生物種のレベルを決定することによって測定される、請求項４に記載の方法。
  6. 前記胃腸バリアの透過性の前記減少は、前記合成オリゴ糖調製物によって間接的に媒介される、請求項５に記載の方法。
  7. 前記胃腸バリア機能不全に関連する少なくとも１つの症状は、改善又は予防される、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
  8. 前記胃腸バリア機能不全は、感染に関連するか又は感染を原因とする、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
  9. 感染の処置又は予防を、それを必要とする動物（ヒトを除く。）において行う方法であって、
    基礎栄養組成物及び合成オリゴ糖調製物を含む栄養組成物を前記動物に投与することであって、
    少なくともｎ画分のオリゴ糖は、１～ｎ（ＤＰ１～ＤＰｎ画分）から選択される別個の重合度をそれぞれ有し、ｎは、３を超える整数であり；ＤＰ１及びＤＰ２画分の各々は、独立して、質量分析によって決定される相対的存在量で０．５％～１５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む、投与すること
    を含み、それにより前記感染を処置又は予防する、方法。
  10. 前記動物からのサンプル中の少なくとも１つの免疫細胞のレベルは、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物の投与前の前記動物からのサンプル中の前記少なくとも１つの免疫細胞のレベルと比較して増加する、請求項９に記載の方法。
  11. 前記増加は、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物の投与前の前記少なくとも１つの免疫細胞の前記レベルと比較して、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％又は１０％増加する、請求項１０に記載の方法。
  12. 前記動物からのサンプル中の少なくとも１つのプロ炎症性サイトカインのレベルは、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物の投与前の前記動物からのサンプル中の前記少なくとも１つのプロ炎症性サイトカインのレベルと比較して増加する、請求項１１に記載の方法。
  13. 前記動物の胃腸バリアの透過性は、前記合成オリゴ糖調製物を前記投与する前の前記動物の前記胃腸バリアの透過性と比較して減少する、請求項９～１２のいずれか一項に記載の方法。
  14. 動物の胃腸バリア機能不全の処置又は予防のための栄養組成物であって、基礎栄養組成物及び合成オリゴ糖調製物を含み、
    少なくともｎ画分のオリゴ糖は、１～ｎ（ＤＰ１～ＤＰｎ画分）から選択される別個の重合度をそれぞれ有し、ｎは、３を超える整数であり；ＤＰ１及びＤＰ２画分の各々は、独立して、質量分析によって決定される相対的存在量で０．５％～１５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む、栄養組成物。
  15. 前記動物の胃腸バリアの透過性は、前記合成オリゴ糖調製物を投与する前の前記動物の前記胃腸バリアの透過性と比較して減少する、請求項１４に記載の栄養組成物。
  16. 前記減少は、前記合成オリゴ糖調製物を前記投与する前の前記動物の前記胃腸バリアの前記透過性と比較して、少なくとも０．５％、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％又は３０％の減少である、請求項１５に記載の栄養組成物。
  17. 前記胃腸バリアの前記透過性は、前記動物からの血液、糞便又は尿サンプルから決定される、請求項１６に記載の栄養組成物。
  18. 前記透過性は、前記血液、糞便又は尿サンプル中の少なくとも１つの微生物種のレベルを決定することによって測定される、請求項１７に記載の栄養組成物。
  19. 前記胃腸バリアの透過性の前記減少は、前記合成オリゴ糖調製物によって間接的に媒介される、請求項１８に記載の栄養組成物。
  20. 前記胃腸バリア機能不全に関連する少なくとも１つの症状を、改善又は予防するための、請求項１４～１９のいずれか一項に記載の栄養組成物。
  21. 前記胃腸バリア機能不全は、感染に関連するか又は感染を原因とする、請求項１４～２０のいずれか一項に記載の栄養組成物。
  22. 動物の感染の処置又は予防のための栄養組成物であって、
    基礎栄養組成物及び合成オリゴ糖調製物を含み、
    少なくともｎ画分のオリゴ糖は、１～ｎ（ＤＰ１～ＤＰｎ画分）から選択される別個の重合度をそれぞれ有し、ｎは、３を超える整数であり；ＤＰ１及びＤＰ２画分の各々は、独立して、質量分析によって決定される相対的存在量で０．５％～１５％のアンヒドロサブユニット含有オリゴ糖を含む、栄養組成物。
  23. 前記動物からのサンプル中の少なくとも１つの免疫細胞のレベルは、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物の投与前の前記動物からのサンプル中の前記少なくとも１つの免疫細胞のレベルと比較して増加する、請求項２２に記載の栄養組成物。
  24. 前記増加は、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物の投与前の前記少なくとも１つの免疫細胞の前記レベルと比較して、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％又は１０％増加する、請求項２３に記載の栄養組成物。
  25. 前記動物からのサンプル中の少なくとも１つのプロ炎症性サイトカインのレベルは、前記合成オリゴ糖調製物を含む前記栄養組成物の投与前の前記動物からのサンプル中の前記少なくとも１つのプロ炎症性サイトカインのレベルと比較して増加する、請求項２４に記載の栄養組成物。
  26. 前記動物の胃腸バリアの透過性は、前記合成オリゴ糖調製物を投与する前の前記動物の前記胃腸バリアの透過性と比較して減少する、請求項２２～２５のいずれか一項に記載の栄養組成物。
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