BR112021008710A2

BR112021008710A2 - métodos de suporte de homeostase gastrointestinal

Info

Publication number: BR112021008710A2
Application number: BR112021008710-9A
Authority: BR
Inventors: Viviane VERLHAC; Britt Blokker; Nathalie RICHARD; Jerome Schmeisser; Nicole Seifert; Estefania Perez-Calvo; Stéphane DUVAL; John M. GEREMIA
Original assignee: Dsm Ip Assets B.V.; Midori Usa Inc.
Priority date: 2018-11-08
Filing date: 2019-11-08
Publication date: 2021-08-10
Also published as: CN113631046A; EP3876750A4; WO2020097446A1; ZA202102834B; MX2021005374A; EP4162808A1; AU2019376144A1; JP2022506272A; US20220000891A1; CA3116021A1; EP3876750A1; JP7426548B2; JP2024037898A; KR20210135215A

Abstract

MÉTODOS DE SUPORTE DE HOMEOSTASE GASTROINTESTINAL. A presente revelação se refere a métodos para alimentar animais fornecendo-se aditivos de ração que modulam o microbioma intestinal para impedir ou tratar disfunções em uma barreira gastrointestinal. A presente revelação se refere adicionalmente a métodos para alimentar animais fornecendo-se aditivos de ração que modulam o microbioma intestinal para impedir ou tratar infeções.

Description

“MÉTODOS DE SUPORTE DE HOMEOSTASE GASTROINTESTINAL” PEDIDOS RELACIONADOS

[0001] Este pedido reivindica o benefício do Pedido de Patente Provisório nº US 62/757.500 depositado em 8 de novembro de 2018, e Pedido de Patente Provisório nº US 62/757.465 depositado em 8 de novembro de 2018; cujas revelações de cada um são incorporadas ao presente documento a título de referência em sua totalidade.

ANTECEDENTES

[0002] O sistema gastrointestinal de animal é a maior interface de área de superfície entre a anatomia interna do animal e do mundo externo. É responsável por digerir e absorver nutrientes e para fornecer uma proteção eficaz contra patógenos ambientais. O trato gastrointestinal (GIT) realiza interface com o sistema imunológico de animal hospedeiro e é moradia para o microbioma intestinal de animal, que compreende os vários microrganismos (bactérias, fungos, mofos, vírus, etc.) que habitam o trato digestivo.

[0003] Em animais saudáveis, o sistema gastrointestinal mantém a homeostase por meio de uma interação complexa entre a função imunológica do animal hospedeiro, fisiologia da camada mucosa intestinal e endotélio, e a bioquímica do microbioma intestinal. A mucina e a produção de muco por células calciformes intestinais, atividade de sistema imunológico não específica, quimiocina e modulação mediada por citocina e inflamatória, e junções rígidas entre as células do revestimento intestinal promovem a absorção saudável de nutrientes e proteção contra patógenos e toxinas.

[0004] A interrupção de homeostase gastrointestinal resulta em saúde negativa e consequências nutricionais para o animal. Por exemplo, a interrupção de função de proteção saudável permite a translocação de conteúdos intestinais para a circulação de hospedeiro, por exemplo, permitindo que patógenos e toxinas permeiem a mucosa e camada endotelial e impactem negativamente o animal hospedeiro. A inflamação e/ou danos às células intestinais epiteliais reduzem a habilidade do animal para absorver nutrientes. Para animais de produção, manter o sistema gastrointestinal de homeostase gastrointestinal saudável exibe resultados nutricionais e de saúde insatisfatórios, que resulta em ganho de peso reduzido, eficácia de ração reduzida, rendimento de carne reduzido, qualidade de carne inferior e mortalidade superior. Para animais domésticas, a interrupção de homeostase gastrointestinal pode degradar a qualidade de vida e a saúde geral. Há, portanto, uma necessidade considerável de fornecer composições nutricionais, que incluem rações de animal, que previnam e/ou tratem a disfunção de barreira gastrointestinal.

SUMÁRIO

[0005] Em um aspecto, são fornecidos no presente documento métodos de tratamento ou prevenção de uma disfunção de barreira gastrointestinal em um animal em necessidade do mesmo, em que o método compreende: administrar uma composição nutricional que compreende uma composição nutricional base e uma preparação de oligossacarídeo sintético ao dito animal, pelo menos n frações de oligossacarídeos, em que cada uma tem um grau distinto de polimerização selecionado a partir de 1 a n (frações de DP1 a DPn), em que n é um número inteiro maior que 3; e em que cada uma dentre a fração de DP1 e DP2 compreende independentemente de cerca de 0,5 % a cerca de 15 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa, como determinado por espectrometria de massa, para, portanto, tratar ou prevenir a dita disfunção de barreira gastrointestinal.

[0006] Em algumas modalidades, a permeabilidade de uma barreira gastrointestinal do dito animal é diminuída com relação à permeabilidade da dita barreira gastrointestinal do dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

[0007] Em algumas modalidades, a dita diminuição é uma diminuição de pelo menos cerca de 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 % ou 30 % com relação à dita permeabilidade da dita barreira gastrointestinal do dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a dita diminuição é uma diminuição de cerca de 0,5-30 %, 0,5-20 %, 0,5-10 %, 0,5-5 %, 0,5-4 %, 0,5-3 %, 0,5-2 %, 0,5-1 %, 1- 30 %, 1-20 %, 1-10 %, 1-5 %, 10-4 %, 1-3 % ou 1-2 % com relação à dita permeabilidade da dita barreira gastrointestinal do dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

[0008] Em algumas modalidades, a dita diminuição é uma diminuição maior em comparação com uma diminuição em permeabilidade de uma barreira gastrointestinal de um animal de controle comparável ao que se administrou uma composição nutricional que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a dita diminuição é uma diminuição pelo menos cerca de 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 % ou 60 % maior em comparação com uma diminuição em permeabilidade de uma barreira gastrointestinal de um animal de controle comparável ao que se administrou uma composição nutricional que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

[0009] Em algumas modalidades, a permeabilidade de uma barreira gastrointestinal do dito animal é diminuída com relação à permeabilidade da dita barreira gastrointestinal do dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

[0010] Em algumas modalidades, a dita diminuição é uma diminuição de pelo menos cerca de 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 % ou 30 % com relação à permeabilidade da dita barreira gastrointestinal do dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a dita diminuição é uma diminuição de cerca de 0,5-30 %, 0,5-20 %, 0,5-10 %, 0,5-5 %, 0,5-4 %, 0,5-3 %, 0,5-2 %, 0,5-1 %, 1- 30 %, 1-20 %, 1-10 %, 1-5 %, 10-4 %, 1-3 % ou 1-2 % com relação à permeabilidade da dita barreira gastrointestinal do dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

[0011] Em algumas modalidades, a dita permeabilidade da dita barreira gastrointestinal é determinada a partir de uma amostra da dita barreira gastrointestinal do dito animal. Em algumas modalidades, a dita permeabilidade é medida por análise histológica, colorização ou qualquer combinação dos mesmos.

[0012] Em algumas modalidades, o dito método compreende adicionalmente avaliar a morfologia de mucosa da dita barreira gastrointestinal. Em algumas modalidades, a dita avaliação compreende determinar o comprimento de vilosidade, comprimento de cripta, um nível de infiltração celular inflamatória ou qualquer combinação dos mesmos.

[0013] Em algumas modalidades, a dita permeabilidade da dita barreira gastrointestinal é determinada a partir de uma amostra sanguínea, fecal ou urinária do dito animal. Em algumas modalidades, a dita permeabilidade é medida determinando-se um nível de um marcador administrado oralmente ao dito animal na dita amostra. Em algumas modalidades, o dito marcador é um açúcar não digerível, um polietileno glicol (PEG), um dextrano fluorescentemente marcado, ou um radioisótopo. Em algumas modalidades, a dita permeabilidade é medida determinando-se um nível de pelo menos uma espécie microbiana na dita amostra sanguínea, fecal ou urinária.

[0014] Em algumas modalidades, a dita permeabilidade é medida determinando-se um nível de um anticorpo que se liga a pelo menos uma espécie microbiana na dita amostra. Em algumas modalidades, a dita pelo menos uma espécie microbiana está presente no trato gastrointestinal do dito animal.

[0015] Em algumas modalidades, a dita diminuição em permeabilidade da dita barreira gastrointestinal é diretamente mediada pela dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a dita permeabilidade diminuída da dita barreira gastrointestinal é mediada indiretamente pela dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo sintético é processada in vivo em pelo menos uma espécie secundária. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo sintético é processada in vivo por um componente do microbioma gastrointestinal do dito animal. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo sintético é processada in vivo por uma bactéria presente no trato gastrointestinal do dito animal. Em algumas modalidades, a dita diminuição na permeabilidade gastrointestinal é mediada diretamente pela dita pelo menos uma espécie secundária.

[0016] Em algumas modalidades, a dita disfunção de barreira gastrointestinal é uma barreira gastrointestinal hiperpermeável. Em algumas modalidades, a dita barreira gastrointestinal hiperpermeável permite a translocação de conteúdos intestinais de um espaço intraluminal em circulação do animal. Em algumas modalidades, os ditos conteúdos intestinais compreendem partículas de comida, microrganismos, toxinas, ou qualquer combinação dos mesmos.

[0017] Em algumas modalidades, pelo menos um sintoma associado à dita disfunção de barreira gastrointestinal é melhorado ou prevenido. Em algumas modalidades, o dito pelo menos um sintoma é síntese de muco diminuída, síntese de mucina diminuída, secreção de muco diminuída, secreção de mucina diminuída, absorção de nutriente diminuída, inflamação aumentada, resistência diminuída a infecção, proliferação diminuída de células epiteliais intestinais, maturação de células epiteliais intestinais diminuída, células imunológicas aumentadas em trato gastrointestinal, nível aumentado de citocinas ou quimiocinas pró- inflatamórias no sangue ou trato gastrointestinal, síndrome do intestino irritável, síndrome do intestino inflamatório, inflamação retal, infecção por sistema, inflamação de sistema, má nutrição, ganho de peso diminuído, perda de peso,

razão de conversão de ração aumentada, eficácia de ração diminuída, perda de cabelo, inconsistência fecal, ou diarreia, com relação a um animal de controle comparável que carece da dita disfunção de barreira gastrointestinal.

[0018] Em algumas modalidades, o dito animal tem uma infecção. Em algumas modalidades, a dita disfunção de barreira gastrointestinal é associada a ou causada por uma infecção. Em algumas modalidades, a dita infecção é uma infecção parasítica, bacteriana, fúngica ou viral. Em algumas modalidades, a dita infecção é uma infecção parasítica.

[0019] Em algumas modalidades, a dita infecção parasítica é uma infecção por coccídios. Em algumas modalidades, a dita infecção por coccídios é uma infecção por Eimeria, infecção por Toxoplasma, uma infecção por Cryptosporidium, infecção por Isospora ou uma infecção por Hammondia. Em algumas modalidades, a dita infecção por coccídios é uma infecção por Eimeria. Em algumas modalidades, a dita infecção por Eimeria é uma infecção por E. mivati, E. tenella, E. acervulina, ou E. maxima. Em algumas modalidades, a dita infecção por coccídios é uma infecção por Toxoplasma. Em algumas modalidades, dita infecção por Toxoplasma é uma infecção por Toxoplasma gondii. Em algumas modalidades, a dita infecção por coccídios é uma infecção por Cryptosporidium. Em algumas modalidades, a dita infecção por Cryptosporidium é uma infecção por Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium muris ou Cryptosporidium hominis. Em algumas modalidades, a dita infecção por coccídios é uma infecção por Isospora.

[0020] Em algumas modalidades, a dita infecção por

Isospora é uma infecção por Isospora canis, Isospora ohioensis, Isospora burrosi ou Isospora felis. Em algumas modalidades, a infecção por coccídios é uma infecção por Hammondia. Em algumas modalidades, a dita infecção por Hammondia infecção é uma infecção por Hammondia spp. Em algumas modalidades, a dita infecção por coccídios é infecção por Eimeria acervuline, Eimeria maxima, Eimeria mitis, Eimeria tenella, Toxoplasma gondii, Hammondia spp. Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium muris, Cryptosporidium hominis, Isospora canis, Isospora ohioensis, Isospora burrosi ou Isospora felis.

[0021] Em algumas modalidades, a dita infecção é uma infecção bacteriana. Em algumas modalidades, a dita infecção bacteriana é uma infecção estafilocócica, infecção por Shigella, infecção por Campylobacter, infecção por Salmonella, infecção por Escherichia ou infecção por Yersinia.

[0022] Em algumas modalidades, a dita infecção causa um aumento em inflamação de trato gastrointestinal, uma diminuição no número de células calciforme no trato gastrointestinal do dito animal, uma diminuição em secreção de muco no trato gastrointestinal do dito animal, uma diminuição no comprimento de vilos de uma barreira gastrointestinal do dito animal, danos aos vilos de uma barreira gastrointestinal do dito animal, um nível aumentado de células imunológicas no trato gastrointestinal do dito animal, um nível aumentado de células T CD8+ no trato gastrointestinal do dito animal, um aumento no nível de proteína hepática APG (glicoproteína alfa), um aumento em um nível de anticorpos circulantes, um aumento em um nível de anticorpos de IgA circulantes, ou uma diminuição em um nível de diamina oxidase circulante, ou qualquer combinação dos mesmos, com relação a um animal comparável sem a dita infecção.

[0023] Em algumas modalidades, o dito animal tem inflamação diminuída de uma barreira gastrointestinal com relação a inflamação da dita barreira gastrointestinal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o dito animal tem inflamação diminuída de uma barreira gastrointestinal com relação a inflamação da dita barreira gastrointestinal de um animal de controle comparável ao que se administrou uma composição nutricional que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a dita inflamação é medida por um aumento em um nível de pelo menos uma citocina anti-inflamatória. Em algumas modalidades, a dita citocina anti-inflamatória é IL1B, IL4, IL10, IL-6, IL- 11, IL-13, IL1RA ou TGF-β. Em algumas modalidades, a dita citocina anti-inflamatória é IL1B, IL4 ou IL10.

[0024] Em algumas modalidades, o dito animal exibe uma diminuição em células T CD8+, um aumento em CD4+ células T, um aumento em um nível de diamina oxidase circulante, ou uma diminuição na circulação de níveis de anticorpo (por exemplo, IgA), com relação ao dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o dito animal exibe uma diminuição em células T CD8+, um aumento em CD4+ células T, um aumento em um nível de diamina oxidase circulante, ou uma diminuição na circulação de níveis de anticorpo (por exemplo, IgA), com relação a um animal de controle comparável administrado uma composição nutricional que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

[0025] Em algumas modalidades, o dito animal exibe absorção de nutriente aumentada por meio de uma barreira gastrointestinal com relação à dita barreira gastrointestinal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o dito animal exibe absorção de nutriente aumentada por meio de uma barreira gastrointestinal com relação a uma barreira gastrointestinal de um animal de controle comparável ao que se administrou uma composição nutricional que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

[0026] Em algumas modalidades, a dita absorção de nutriente é medida por um aumento em um nível de pelo menos uma proteína gastrointestinal associada a absorção de nutriente. Em algumas modalidades, a dita proteína é SI (sacarase-isomaltase), SLC5A10, SLC34A1, SLC2A2, SLC34A2, SLC23A1, SLC23A2, SLC5A8, SLC16A3, SLC4, SLC4A9, SLC4A2, SLC4A3, NPC1L1, C6orf58, DDC, MCT1, MCT4, NaS1, DTDST, PAT1, DRA, CLD, SAT1, SUT2, SGLT1, GLUT2, B0AT1, ATB0+, SIT1, TAUT, EAAC1, ASCT2, SN1, SN2, PEPT1, SNAT2, GLYT1, y+LAT1, y+LAT2, CD36, LFABP, NPC1L1, ABCG5, ABCG8, SVCT1, SVCT2, SMVT, GIF, AMN, CUBL, MRP1, FOLT, PCFT, FOLR1, OAT10, RFVT1, RFVT2, THTR1, THTR2, VDR, DCYTB, DMT1, HCP1, FPN1, HEPH, HAMP, ZIP4, ZIP11, ZIP8, ZIP14A, ZIP14B, ZnT1, ZnT2, CTR1, SLC3A1, SLC1A4, ALPI, C17orf78, MUC17, DEFA5, RBP2, DEFA6, MLN, MEP1B, LCT, TM4SF20 ou FABP6. Em algumas modalidades, a dita proteína é SI, SLC5A10 ou SLC34A1.

[0027] Em algumas modalidades, o dito animal tem um peso corporal aumentada com relação a um peso corporal do dito animal antes da administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

Em algumas modalidades, o dito peso corporal do dito animal é pelo menos 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 % ou 10 % aumentada com relação ao dito peso corporal do dito animal antes da administração da dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético.

Em algumas modalidades, o dito peso corporal do dito animal é de cerca de 1-40 %, 1-30 %, 1-20 %, 1-10 %, 1-5 %, 1-4 %, 1-3 % ou 1- 2 %, aumentou com relação ao dito peso corporal do dito animal antes da administração da dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético.

Em algumas modalidades, o dito aumento no peso corporal é um aumento maior em relação a um aumento no peso corporal em um animal de controle comparável ao que se administrou uma composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

Em algumas modalidades, o dito aumento no peso corporal é um aumento pelo menos 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 % ou 10 % maior em relação a um aumento no peso corporal em um animal de controle comparável ao que se administrou uma composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

Em algumas modalidades, o dito aumento no peso corporal é um aumento cerca de 1-40 %, 1-30 %, 1-20 %, 1-10 %, 1-5 %, 1-4 %, 1-3 % ou 1-2 % maior em relação a um aumento no peso corporal em um animal de controle comparável ao que se administrou uma composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

[0028] Em algumas modalidades, o dito animal tem uma eficácia de ração aumentada com relação a uma eficácia de ração do dito animal antes da administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

Em algumas modalidades, a dita eficácia de ração do dito animal é pelo menos 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 % ou 10 % aumentada com relação à dita eficácia de ração do dito animal antes da administração da dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético.

Em algumas modalidades, a dita eficácia de ração do dito animal é cerca de 1-40 %, 1-35 %, 1-30 %, 1-25 %, 1-20 %, 1- 15 %, 1-10 %, 1-5 %, 1-4 %, 1-3 % ou 1-2 % aumentada com relação ao dito peso corporal do dito animal antes da administração da dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético.

Em algumas modalidades, o dito aumento na eficácia de ração é um aumento maior em relação a um animal de controle comparável ao que se administrou uma composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

Em algumas modalidades, o dito aumento na eficácia de ração é um aumento pelo menos 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 % ou 10 % maior em relação ao dito aumento na eficácia de ração no dito animal de controle comparável administrado com a dita composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

Em algumas modalidades, o dito aumento na eficácia de ração é um aumento cerca de 1-40 %, 1-30 %, 1-20 %, 1-10 %, 1-5 %, 1-4 %, 1-3 % ou 1-2 % maior em relação ao dito aumento na eficácia de ração no dito animal de controle comparável administrado com a dita composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

[0029] Em algumas modalidades, o dito animal tem uma razão de conversão de ração diminuída (FCR) com relação a uma FCR do dito animal antes da administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a dita razão de conversão de ração do dito animal é pelo menos 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 % ou 10 % diminuída com relação à razão de conversão de ração do dito animal antes da administração da dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a dita razão de conversão de ração (FCR) do dito animal é cerca de 1-40 %, 1-35 %, 1-30 %, 1- 25 %, 1-20 %, 1-15 %, 1-10 %, 1-5 %, 1-4 %, 1-3 % ou 1-2 % diminuída com relação ao dito peso corporal do dito animal antes da administração da dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o dito animal tem a dita diminuição na razão de conversão de ração que é uma diminuição menor com relação a um animal de controle comparável ao que se administrou uma composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a dita diminuição na razão de conversão de ração é pelo menos uma diminuição 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 % ou 10 % maior com relação à dita diminuição na razão de conversão de ração no dito animal de controle comparável administrado com a dita composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a dita diminuição na razão de conversão de ração é uma diminuição de cerca de 1-40 %, 1-30 %, 1-20 %, 1-10 %, 1-5 %, 1-4 %, 1-3 % ou 1-2 % maior com relação à dita diminuição na razão de conversão de ração no dito animal de controle comparável administrado com a dita composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

[0030] Em algumas modalidades, uma expectativa de vida ou taxa de sobrevivência do dito animal é aumentada com relação a um animal de controle comparável que foi administrado com uma composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

[0031] Em algumas modalidades, a dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético é administrada ao dito animal em uma quantidade suficiente para tratar ou prevenir a dita disfunção de barreira gastrointestinal.

[0032] Em algumas modalidades, a dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético é administrada ao dito animal por pelo menos 1, 7, 10, 14, 30, 45, 60, 90 ou 120 dias. Em algumas modalidades, a dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético é administrada ao dito animal pelo menos uma vez, duas vezes, três, quatro ou cinco vezes ao dia. Em algumas modalidades, a dita administração compreende fornecer a dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético ao dito animal para ingerir à vontade. Em algumas modalidades, o dito animal ingere pelo menos uma porção da dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético em mais que pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 90 ou 120 períodos de vinte e quatro horas.

[0033] Em algumas modalidades, a dita composição nutricional compreende pelo menos 100 ppm, 200 ppm, 300 ppm, 400 ppm, 500 ppm, 600 ppm, 700 ppm, 800 ppm, 900 ppm, 1000 ppm, 1500 ppm ou 2000 ppm da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a dita composição nutricional compreende cerca de 100 ppm, 200 ppm, 300 ppm, 400 ppm, 500 ppm, 600 ppm, 700 ppm, 800 ppm, 900 ppm, 1000 ppm, 1500 ppm ou 2000 ppm da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a dita composição nutricional compreende cerca de 500 ppm da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a dita composição nutricional compreende de cerca de 100 ppm - 2000 ppm, 100 ppm - 1500 ppm, 100 ppm - 1000 ppm, 100 ppm - 900 ppm, 100 ppm - 800 ppm, 100 ppm - 700 ppm, 100 ppm - 600 ppm, 100 ppm - 500 ppm, 100 ppm - 400 ppm, 100 ppm - 300 ppm, 100 ppm - 200 ppm, 200 ppm - 1000 ppm, 200 ppm - 800 ppm, 200 ppm - 700 ppm, 200 ppm - 600 ppm, 200 ppm - 500 ppm, 300 ppm - 1000 ppm, 300 ppm - 700 ppm, 300 ppm - 600 ppm ou 300 ppm - 500 ppm da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a dita composição nutricional compreende de cerca de 300 ppm - 600 ppm da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

[0034] Em algumas modalidades, o animal é uma ave, marisco, ovelha, vaca, gado, búfalo, bisão, porco, gato, cachorro, coelho, bode, porquinho-da-índia, burro, camelo, cavalo, pombo, furão, gerbo, hamster, camundongo, rato, peixe, camarão ou pássaro.

[0035] Em algumas modalidades, o animal é ave. Em algumas modalidades, o animal é uma galinha, peru, pato ou ganso. Em algumas modalidades, a dita galinha é uma galinha para consumo, uma galinha poedeira ou uma galinha reprodutora.

[0036] Em algumas modalidades, o animal é um porco. Em algumas modalidades, o dito porco é um leitão, um porco em crescimento ou um porco de abate.

[0037] Em algumas modalidades, o dito animal é um peixe. Em algumas modalidades, o dito peixe é um salmão, uma tilápia ou um peixe tropical.

[0038] Em algumas modalidades, a dita composição nutricional é uma composição de ração animal. Em algumas modalidades, a dita composição nutricional base é ração animal base.

[0039] Em algumas modalidades, a dita abundância relativa é determinada por LC-MS/MS.

[0040] Em algumas modalidades, a dita abundância relativa de oligossacarídeos em pelo menos 5, 10, 20 ou 30 frações de DP diminui monotonicamente com seu grau de polimerização. Em algumas modalidades, a dita abundância relativa de oligossacarídeos em cada uma das n frações diminui monotonicamente com seu grau de polimerização.

[0041] Em algumas modalidades, n é pelo menos 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100.

[0042] Em algumas modalidades, a dita fração de DP2 compreende menos que 12 %, menos que 11 %, menos que 10 %,

menos que 9 %, menos que 8 %, menos que 7 %, menos que 6 %, menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 %, menos que 2 % ou menos que 1 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

[0043] Em algumas modalidades, a dita fração de DP2 compreende de cerca de 5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita fração de DP2 compreende de cerca de 1 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita fração de DP2 compreende de cerca de 0,5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita fração de DP2 compreende de cerca de 2 % a cerca de 12 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

[0044] Em algumas modalidades, a dita fração de DP1 compreende menos que 12 %, menos que 11 %, menos que 10 %, menos que 9 %, menos que 8 %, menos que 7 %, menos que 6 %, menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 %, menos que 2 % ou menos que 1 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita fração de DP1 compreende de cerca de 2 % a cerca de 12 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita fração de DP1 compreende de cerca de 1 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita fração de DP1 compreende de cerca de 0,5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita fração de DP1 compreende de cerca de 5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

[0045] Em algumas modalidades, a dita fração de DP3 compreende menos que 15 %, menos que 12 %, menos que 11 %, menos que 10 %, menos que 9 %, menos que 8 %, menos que 7 %, menos que 6 %, menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 %, menos que 2 % ou menos que 1 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita fração de DP3 compreende de cerca de 2 % a cerca de 12 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita fração de DP3 compreende de cerca de 1 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita fração de DP3 compreende de cerca de 0,5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita fração de DP3 compreende de cerca de 5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

[0046] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende de cerca de 2 % a cerca de 12 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende de cerca de 0,5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende de cerca de 1 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende de cerca de 5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

[0047] Em algumas modalidades, a dita fração de DP2 compreende mais que 0,6 %, mais que 0,8 %, mais que 1,0 %, mais que 1,5 %, mais que 2 %, mais que 3 %, mais que 4 %, mais que 5 %, mais que 6 %, mais que 7 %, mais que 8 %, mais que 9 %, mais que 10 %, mais que 11 % ou mais que 12 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

[0048] Em algumas modalidades, a dita fração de DP1 compreende mais que 0,6 %, mais que 0,8 %, mais que 1,0 %, mais que 1,5 %, mais que 2 %, mais que 3 %, mais que 4 %, mais que 5 %, mais que 6 %, mais que 7 %, mais que 8 %, mais que 9 %, mais que 10 %, mais que 11 % ou mais que 12 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

[0049] Em algumas modalidades, a dita fração de DP3 compreende mais que 0,6 %, mais que 0,8 %, mais que 1,0 %, mais que 1,5 %, mais que 2 %, mais que 3 %, mais que 4 %, mais que 5 %, mais que 6 %, mais que 7 %, mais que 8 %, mais que 9 %, mais que 10 %, mais que 11 % ou mais que 12 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

[0050] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende mais que 0,5 %, mais que 0,6 %, mais que 0,8 %, mais que 1,0 %, mais que 1,5 %, mais que

2 %, mais que 3 %, mais que 4 %, mais que 5 %, mais que 6 %, mais que 7 %, mais que 8 %, mais que 9 %, mais que 10 %, mais que 11 % ou mais que 12 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

[0051] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um teor de fração de DP1 de cerca de 1 % a cerca de 40 % em peso, como determinado por cromatografia líquida.

[0052] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um teor de fração de DP2 de cerca de 1 % a cerca de 35 % em peso, como determinado por cromatografia líquida.

[0053] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um teor de fração de DP3 de cerca de 1 % a cerca de 30 % em peso, como determinado por cromatografia líquida.

[0054] Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo tem um teor de fração de DP4 de cerca de 0,1 % a cerca de 20 % em peso, como determinado por cromatografia líquida.

[0055] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um teor de fração de DP5 de cerca de 0,1 % a cerca de 15 % em peso, como determinado por cromatografia líquida.

[0056] Em algumas modalidades, uma razão da fração de DP2 para a fração de DP1 é de cerca de 0,02 a cerca de 0,40, como determinado por cromatografia líquida.

[0057] Em algumas modalidades, uma razão do DP3 fração para a fração de DP2 é de cerca de 0,01 a cerca de 0,30, como determinado por cromatografia líquida.

[0058] Em algumas modalidades, um teor agregado das frações de DP1 e DP2 na preparação de oligossacarídeo é menor que 50 %, menor que 40 % ou menor que 30 %, como determinado por cromatografia líquida.

[0059] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende pelo menos 103, pelo menos 104, pelo menos 105, pelo menos 106 ou pelo menos 109 espécies de oligossacarídeos diferentes.

[0060] Em algumas modalidades, dois ou mais oligossacarídeos independentes compreendem subunidades anidras diferentes.

[0061] Em algumas modalidades, cada um dos ditos oligossacarídeos que contêm subunidade anidra compreende uma ou mais subunidades anidras que são produtos de desidratação térmica de monossacarídeos.

[0062] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende uma ou mais subunidades anidras selecionadas a partir de glicose anidra, galactose anidra, manose anidra, alose anidra, altrose anidra, gulose anidra, indose anidra, talose anidra, frutose anidra, ribose anidra, arabinose anidra, ramnose anidra, lixose anidra e xilose anidra.

[0063] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende uma ou mais subunidades de glicose anidra, galactose anidra, manose anidra ou frutose anidra.

[0064] Em algumas modalidades, a dita fração de DP1 compreende subunidades anidras de 1,6-anidro-β-D- glicofuranose ou 1,6-anidro-β-D-glicopiranose. Em algumas modalidades, a dita fração de DP1 compreende tanto subunidades anidras 1,6-anidro-β-D-glicofuranose quanto de 1,6-anidro-β-D-glicopiranose.

[0065] Em algumas modalidades, a razão da 1,6-anidro-β- D-glicofuranose para a 1,6-anidro-β-D-glicopiranose é de cerca de 10:1 a 1:10, de cerca de 9:1 a cerca de 1:10, de cerca de 8:1 a cerca de 1:10, de cerca de 7:1 a cerca de 1:10, de cerca de 6:1 a cerca de 1:10, de cerca de 5:1 a cerca de 1:10, de cerca de 4:1 a cerca de 1:10, de cerca de 3:1 a cerca de 1:10, de cerca de 2:1 a cerca de 1:10, de cerca de 10:1 a cerca de 1:9, de cerca de 10:1 a cerca de 1:8, de cerca de 10:1 a cerca de 1:7, de cerca de 10:1 a cerca de 1:6, de cerca de 10:1 a cerca de 1:5, de cerca de 10:1 a cerca de 1:4, de cerca de 10:1 a cerca de 1:3, de cerca de 10:1 a cerca de 1:2 ou de cerca de 1:1 a cerca de 3:1 na reparação de oligossacarídeo. Em algumas modalidades, a razão da 1,6-anidro-β-D-glicofuranose para a 1,6-anidro- β-D-glicopiranose é de cerca de 10:1, cerca de 9:1, cerca de 8:1, cerca de 7:1, cerca de 6:1, cerca de 5:1, cerca de 4:1, cerca de 3:1, cerca de 2:1, cerca de 1:1, cerca de 1:2, cerca de 1:3, cerca de 1:4, cerca de 1:5, cerca de 1:6, cerca de 1:7, cerca de 1:8, cerca de 1:9 ou cerca de 1:10 na preparação de oligossacarídeo. Em algumas modalidades, a razão da 1,6- anidro-β-D-glicofuranose para a 1,6-anidro-β-D- glicopiranose é de cerca de 2:1 na preparação de oligossacarídeo.

[0066] Em algumas modalidades, a dita fração de DP2 compreende pelo menos 5 espécies de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra. Em algumas modalidades, a dita fração de DP2 compreende cerca de 5 a 10 espécies de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra.

[0067] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende um ou mais produtos de caramelização de açúcar. Em algumas modalidades, os ditos produtos de caramelização de açúcar são selecionados a partir de um grupo que consiste em: metanol; etanol; furano; metilglioxal; 2-metil furano; acetato de vinila; glicolaldeído; ácido acético; acetol; furfural; 2- furanometanol; 3-furanometanol; 2-hidróxi ciclopent-2-en-1- ona; 5-metil furfural; 2(5H)-furanona; 2 metil ciclopentenolona; levoglicosenona; lactona de hidroxila cíclica; 1,4,3,6-dianidro-α-D-glicopiranose; dianidro glicopiranose; e 5-hidróxi metil furfural (5-hmf).

[0068] Em algumas modalidades, mais que 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 % ou 99 % dos oligossacarídeos que contêm subunidade anidra compreendem uma subunidade anidra de extremidade de cadeia.

[0069] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular ponderal médio de cerca de 300 a cerca de 5000 g/mol, como determinado por cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC). Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular ponderal médio de cerca de 300 a cerca de 2500 g/mol como determinado por HPLC. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular ponderal médio de cerca de 500 a cerca de 2000 g/mol como determinado por HPLC. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular ponderal médio de cerca de 500 a cerca de 1500 g/mol como determinado por HPLC. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular numérico médio de cerca de 300 a cerca de 5000 g/mol como determinado por HPLC. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular numérico médio de cerca de 300 a cerca de 2500 g/mol como determinado por HPLC. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular numérico médio de cerca de 500 a cerca de 2000 g/mol como determinado por HPLC. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular numérico médio de cerca de 500 a cerca de 1500 g/mol como determinado por HPLC.

[0070] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular ponderal médio de cerca de 2000 a cerca de 2800 g/mol. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular numérico médio de cerca de 1000 a cerca de 2000 g/mol.

[0071] Em um aspecto, são fornecidos no presente documento métodos de tratamento ou prevenção de uma infecção em um animal em necessidade do mesmo, o método que compreende administrar uma composição nutricional que compreende uma composição nutricional base e uma preparação de oligossacarídeo sintético ao dito animal, pelo menos n frações de oligossacarídeos, em que cada uma tem um grau distinto de polimerização selecionado a partir de 1 a n (frações de DP1 a DPn), em que n é um número inteiro maior que 3; e em que cada uma dentre a fração de DP1 e DP2 compreende independentemente de cerca de 0,5 % a cerca de 15 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa, como determinado por espectrometria de massa; para, portanto, tratar ou prevenir a dita infecção.

[0072] Em algumas modalidades, um nível de pelo menos uma célula imunológica em uma amostra do dito animal é aumentado com relação a um nível da dita pelo menos uma célula imunológica em uma amostra do dito animal antes da administração da dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o dito aumento é pelo menos 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 % ou 10 % aumentada com relação ao dito nível da dita pelo menos uma célula imunológica antes da administração da dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o dito aumento de cerca de 1-40 %, 1-35 %, 1-30 %, 1-25 %, 1-20 %, 1-15 %, 1-10 %, 1-5 %, 1- 4 %, 1-3 % ou 1-2 %, aumentou com relação ao dito nível da dita pelo menos uma célula imunológica antes da administração da dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético.

[0073] Em algumas modalidades, um nível de pelo menos uma célula imunológica em uma amostra do dito animal é aumentado com relação a um nível da dita pelo menos uma célula imunológica em uma amostra de um animal de controle comparável que foi administrada uma composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o dito aumento é pelo menos 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 % ou 10 % aumentada com relação ao dito nível da dita pelo menos uma célula imunológica na dita amostra do dito animal de controle comparável que foi administrada uma composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o dito aumento de cerca de 1-40 %, 1-35 %, 1-30 %, 1-25 %, 1-20 %, 1-15 %, 1-10 %, 1-5 %, 1-4 %, 1-3 % ou 1-2 %, aumentou com relação ao dito nível da dita pelo menos uma célula imunológica na dita amostra do dito animal de controle comparável que foi administrada uma composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

[0074] Em algumas modalidades, a dito pelo menos uma célula imunológica é um neutrófilo, eosinófilo, basófilo, mastócito, célula T, célula B, macrófago, monócito, granulócito, ou célula dendrítica. Em algumas modalidades, a dita célula imunológica é uma célula fagocítica. Em algumas modalidades, as ditas células fagocíticas é um neutrófilo, eosinófilo, basófilo, mastócito, macrófago, monócito ou célula dendrítica. Em algumas modalidades, a dita célula imunológica é uma célula T. Em algumas modalidades, a célula imunológica é um granulócito.

[0075] Em algumas modalidades, um nível de pelo menos uma citocina pró-inflamatória em uma amostra do dito animal é aumentado com relação a um nível do dito pelo menos uma citocina pró-inflamatória em uma amostra do dito animal antes da administração da dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, um nível de pelo menos uma citocina pró-inflamatória em uma amostra do dito animal é aumentado com relação a um nível da dita pelo menos uma citocina pró- inflamatória em uma amostra de um animal de controle comparável que foi administrada uma composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a dito pelo menos uma citocina pró-inflamatória é IL1, IL-12, IL18, TNFA, IFNG,

GM-CSF, IL-1β, IL6, RANTES, MCP1, IL8, MIP-1α, MIP-1β, linfotactina, fractalquina ou GRO/KC.

[0076] Em algumas modalidades, a permeabilidade de uma barreira gastrointestinal do dito animal é diminuída com relação à permeabilidade da dita barreira gastrointestinal do dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a dita diminuição é uma diminuição de pelo menos cerca de 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 % ou 30 % com relação à dita permeabilidade da dita barreira gastrointestinal do dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético; ou a dita diminuição é uma diminuição de cerca de 0,5-30 %, 0,5-20 %, 0,5-10 %, 0,5-5 %, 0,5-4 %, 0,5-3 %, 0,5-2 %, 0,5-1 %, 1- 30 %, 1-20 %, 1-10 %, 1-5 %, 10-4 %, 1-3 % ou 1-2 % com relação à dita permeabilidade da dita barreira gastrointestinal do dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a dita diminuição é uma diminuição maior em comparação com uma diminuição em permeabilidade de uma barreira gastrointestinal de um animal de controle comparável ao que se administrou uma composição nutricional que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a dita diminuição é uma diminuição pelo menos cerca de 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 % ou 60 % maior em comparação com uma diminuição em permeabilidade de uma barreira gastrointestinal de um animal de controle comparável ao que se administrou uma composição nutricional que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

[0077] Em algumas modalidades, a permeabilidade de uma barreira gastrointestinal do dito animal é diminuída com relação à permeabilidade da dita barreira gastrointestinal do dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a dita diminuição é uma diminuição de pelo menos cerca de 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 % ou 30 % com relação à permeabilidade da dita barreira gastrointestinal do dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a dita diminuição é uma diminuição de cerca de 0,5-30 %, 0,5-20 %, 0,5-10 %, 0,5-5 %, 0,5-4 %, 0,5-3 %, 0,5-2 %, 0,5-1 %, 1- 30 %, 1-20 %, 1-10 %, 1-5 %, 10-4 %, 1-3 % ou 1-2 % com relação à permeabilidade da dita barreira gastrointestinal do dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

[0078] Em algumas modalidades, a dita disfunção de barreira gastrointestinal é associada a ou causada por uma infecção. Em algumas modalidades, a dita infecção é uma infecção parasítica, bacteriana, fúngica ou viral.

[0079] Em algumas modalidades, a dita infecção é uma infecção parasítica. Em algumas modalidades, a dita infecção parasítica é uma infecção por coccídios. Em algumas modalidades, a dita infecção por coccídios é uma infecção por Eimeria, infecção por Toxoplasma, uma infecção por Cryptosporidium, infecção por Isospora ou uma infecção por Hammondia. Em algumas modalidades, a dita infecção por coccídios é uma infecção por Eimeria. Em algumas modalidades, a dita infecção por Eimeria é uma infecção por E. mivati, E. tenella, E. acervulina, ou E. maxima. Em algumas modalidades,

a dita infecção por coccídios é uma infecção por Toxoplasma. Em algumas modalidades, dita infecção por Toxoplasma é uma infecção por Toxoplasma gondii. Em algumas modalidades, a dita infecção por coccídios é uma infecção por Cryptosporidium. Em algumas modalidades, a dita infecção por Cryptosporidium é uma infecção por Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium muris ou Cryptosporidium hominis. Em algumas modalidades, a dita infecção por coccídios é uma infecção por Isospora. Em algumas modalidades, a dita infecção por Isospora é uma infecção por Isospora canis, Isospora ohioensis, Isospora burrosi ou Isospora felis. Em algumas modalidades, a infecção por coccídios é uma infecção por Hammondia. Em algumas modalidades, a dita infecção por Hammondia infecção é uma infecção por Hammondia spp. Em algumas modalidades, a dita infecção por coccídios é infecção por Eimeria acervuline, Eimeria maxima, Eimeria mitis, Eimeria tenella, Toxoplasma gondii, Hammondia spp. Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium muris, Cryptosporidium hominis, Isospora canis, Isospora ohioensis, Isospora burrosi ou Isospora felis.

[0080] Em algumas modalidades, a dita infecção é uma infecção bacteriana. Em algumas modalidades, a dita infecção bacteriana é uma infecção estafilocócica, infecção por Shigella, infecção por Campylobacter, infecção por Salmonella, infecção por Escherichia ou infecção por Yersinia.

[0081] Em algumas modalidades, em que a dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético é administrada ao dito animal em uma quantidade suficiente para tratar ou prevenir a dita infecção. Em algumas modalidades, a dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético é administrada ao dito animal por pelo menos 1, 7, 10, 14, 30, 45, 60, 90 ou 120 dias. Em algumas modalidades, a dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético é administrada ao dito animal pelo menos uma vez, duas vezes, três, quatro ou cinco vezes ao dia. Em algumas modalidades, a dita administração compreende fornecer a dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético ao dito animal para ingerir à vontade. Em algumas modalidades, o dito animal ingere pelo menos uma porção da dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético em mais que pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 90 ou 120 períodos de vinte e quatro horas.

[0082] Em algumas modalidades, a dita composição nutricional compreende pelo menos 100 ppm, 200 ppm, 300 ppm, 400 ppm, 500 ppm, 600 ppm, 700 ppm, 800 ppm, 900 ppm, 1000 ppm, 1500 ppm ou 2000 ppm da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a dita composição nutricional compreende cerca de 100 ppm, 200 ppm, 300 ppm, 400 ppm, 500 ppm, 600 ppm, 700 ppm, 800 ppm, 900 ppm, 1000 ppm, 1500 ppm ou 2000 ppm da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a dita composição nutricional compreende cerca de 500 ppm da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a dita composição nutricional compreende de cerca de 100 ppm - 2000 ppm, 100 ppm - 1500 ppm, 100 ppm - 1000 ppm, 100 ppm - 900 ppm, 100 ppm - 800 ppm, 100 ppm -

700 ppm, 100 ppm - 600 ppm, 100 ppm - 500 ppm, 100 ppm - 400 ppm, 100 ppm - 300 ppm, 100 ppm - 200 ppm, 200 ppm - 1000 ppm, 200 ppm - 800 ppm, 200 ppm - 700 ppm, 200 ppm - 600 ppm, 200 ppm - 500 ppm, 300 ppm - 1000 ppm, 300 ppm - 700 ppm, 300 ppm - 600 ppm ou 300 ppm - 500 ppm da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a dita composição nutricional compreende de cerca de 300 ppm - 600 ppm da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

[0083] Em algumas modalidades, o animal é uma ave, marisco, ovelha, vaca, gado, búfalo, bisão, porco, gato, cachorro, coelho, bode, porquinho-da-índia, burro, camelo, cavalo, pombo, furão, gerbo, hamster, camundongo, rato, peixe, camarão ou pássaro.

[0084] Em algumas modalidades, o animal é ave. Em algumas modalidades, o animal é uma galinha, peru, pato ou ganso. Em algumas modalidades, a dita galinha é uma galinha para consumo, uma galinha poedeira ou uma galinha reprodutora.

[0085] Em algumas modalidades, o animal é um porco. Em algumas modalidades, o dito porco é um leitão, um porco em crescimento ou um porco de abate.

[0086] Em algumas modalidades, o dito animal é um peixe. Em algumas modalidades, o dito peixe é um salmão, uma tilápia ou um peixe tropical.

[0087] Em algumas modalidades, a dita composição nutricional é uma composição de ração animal. Em algumas modalidades, a dita composição nutricional base é ração animal base.

[0088] Em algumas modalidades, a dita abundância relativa é determinada por LC-MS/MS.

[0089] Em algumas modalidades, a dita abundância relativa de oligossacarídeos em pelo menos 5, 10, 20 ou 30 frações de DP diminui monotonicamente com seu grau de polimerização. Em algumas modalidades, a dita abundância relativa de oligossacarídeos em cada uma das n frações diminui monotonicamente com seu grau de polimerização.

[0090] Em algumas modalidades, n é pelo menos 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100.

[0091] Em algumas modalidades, a dita fração de DP2 compreende menos que 12 %, menos que 11 %, menos que 10 %, menos que 9 %, menos que 8 %, menos que 7 %, menos que 6 %, menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 %, menos que 2 % ou menos que 1 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

[0092] Em algumas modalidades, a dita fração de DP2 compreende de cerca de 5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita fração de DP2 compreende de cerca de 1 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita fração de DP2 compreende de cerca de 0,5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita fração de DP2 compreende de cerca de 2 % a cerca de 12 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

[0093] Em algumas modalidades, a dita fração de DP1 compreende menos que 12 %, menos que 11 %, menos que 10 %, menos que 9 %, menos que 8 %, menos que 7 %, menos que 6 %, menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 %, menos que 2 % ou menos que 1 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita fração de DP1 compreende de cerca de 2 % a cerca de 12 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita fração de DP1 compreende de cerca de 1 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita fração de DP1 compreende de cerca de 0,5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita fração de DP1 compreende de cerca de 5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

[0094] Em algumas modalidades, a dita fração de DP3 compreende menos que 15 %, menos que 12 %, menos que 11 %, menos que 10 %, menos que 9 %, menos que 8 %, menos que 7 %, menos que 6 %, menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 %, menos que 2 % ou menos que 1 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita fração de DP3 compreende de cerca de 2 % a cerca de 12 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita fração de DP3 compreende de cerca de 1 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita fração de DP3 compreende de cerca de 0,5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita fração de DP3 compreende de cerca de 5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

[0095] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende de cerca de 2 % a cerca de 12 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende de cerca de 0,5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende de cerca de 1 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende de cerca de 5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

[0096] Em algumas modalidades, a dita fração de DP2 compreende mais que 0,6 %, mais que 0,8 %, mais que 1,0 %, mais que 1,5 %, mais que 2 %, mais que 3 %, mais que 4 %, mais que 5 %, mais que 6 %, mais que 7 %, mais que 8 %, mais que 9 %, mais que 10 %, mais que 11 % ou mais que 12 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

[0097] Em algumas modalidades, a dita fração de DP1 compreende mais que 0,6 %, mais que 0,8 %, mais que 1,0 %, mais que 1,5 %, mais que 2 %, mais que 3 %, mais que 4 %, mais que 5 %, mais que 6 %, mais que 7 %, mais que 8 %, mais que 9 %, mais que 10 %, mais que 11 % ou mais que 12 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

[0098] Em algumas modalidades, a dita fração de DP3 compreende mais que 0,6 %, mais que 0,8 %, mais que 1,0 %, mais que 1,5 %, mais que 2 %, mais que 3 %, mais que 4 %, mais que 5 %, mais que 6 %, mais que 7 %, mais que 8 %, mais que 9 %, mais que 10 %, mais que 11 % ou mais que 12 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

[0099] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende mais que 0,5 %, mais que 0,6 %, mais que 0,8 %, mais que 1,0 %, mais que 1,5 %, mais que 2 %, mais que 3 %, mais que 4 %, mais que 5 %, mais que 6 %, mais que 7 %, mais que 8 %, mais que 9 %, mais que 10 %, mais que 11 % ou mais que 12 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

[0100] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um teor de fração de DP1 de cerca de 1 % a cerca de 40 % em peso, como determinado por cromatografia líquida.

[0101] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um teor de fração de DP2 de cerca de 1 % a cerca de 35 % em peso, como determinado por cromatografia líquida.

[0102] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um teor de fração de DP3 de cerca de 1 %

a cerca de 30 % em peso, como determinado por cromatografia líquida.

[0103] Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo tem um teor de fração de DP4 de cerca de 0,1 % a cerca de 20 % em peso, como determinado por cromatografia líquida.

[0104] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um teor de fração de DP5 de cerca de 0,1 % a cerca de 15 % em peso, como determinado por cromatografia líquida.

[0105] Em algumas modalidades, uma razão da fração de DP2 para a fração de DP1 é de cerca de 0,02 a cerca de 0,40, como determinado por cromatografia líquida.

[0106] Em algumas modalidades, uma razão do DP3 fração para a fração de DP2 é de cerca de 0,01 a cerca de 0,30, como determinado por cromatografia líquida.

[0107] Em algumas modalidades, um teor agregado das frações de DP1 e DP2 na preparação de oligossacarídeo é menor que 50 %, menor que 40 % ou menor que 30 %, como determinado por cromatografia líquida.

[0108] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende pelo menos 103, pelo menos 104, pelo menos 105, pelo menos 106 ou pelo menos 109 espécies de oligossacarídeos diferentes.

[0109] Em algumas modalidades, dois ou mais oligossacarídeos independentes compreendem subunidades anidras diferentes.

[0110] Em algumas modalidades, cada um dos ditos oligossacarídeos que contêm subunidade anidra compreende uma ou mais subunidades anidras que são produtos de desidratação térmica de monossacarídeos.

[0111] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende uma ou mais subunidades anidras selecionadas a partir de glicose anidra, galactose anidra, manose anidra, alose anidra, altrose anidra, gulose anidra, indose anidra, talose anidra, frutose anidra, ribose anidra, arabinose anidra, ramnose anidra, lixose anidra e xilose anidra.

[0112] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende uma ou mais subunidades de glicose anidra, galactose anidra, manose anidra ou frutose anidra.

[0113] Em algumas modalidades, a dita fração de DP1 compreende subunidades anidras de 1,6-anidro-β-D- glicofuranose ou 1,6-anidro-β-D-glicopiranose. Em algumas modalidades, a dita fração de DP1 compreende tanto subunidades anidras 1,6-anidro-β-D-glicofuranose quanto de 1,6-anidro-β-D-glicopiranose.

[0114] Em algumas modalidades, a razão da 1,6-anidro-β- D-glicofuranose para a 1,6-anidro-β-D-glicopiranose é de cerca de 10:1 a 1:10, de cerca de 9:1 a cerca de 1:10, de cerca de 8:1 a cerca de 1:10, de cerca de 7:1 a cerca de 1:10, de cerca de 6:1 a cerca de 1:10, de cerca de 5:1 a cerca de 1:10, de cerca de 4:1 a cerca de 1:10, de cerca de 3:1 a cerca de 1:10, de cerca de 2:1 a cerca de 1:10, de cerca de 10:1 a cerca de 1:9, de cerca de 10:1 a cerca de 1:8, de cerca de 10:1 a cerca de 1:7, de cerca de 10:1 a cerca de 1:6, de cerca de 10:1 a cerca de 1:5, de cerca de 10:1 a cerca de 1:4, de cerca de 10:1 a cerca de 1:3, de cerca de 10:1 a cerca de 1:2 ou de cerca de 1:1 a cerca de

3:1 na reparação de oligossacarídeo. Em algumas modalidades, a razão da 1,6-anidro-β-D-glicofuranose para a 1,6-anidro- β-D-glicopiranose é de cerca de 10:1, cerca de 9:1, cerca de 8:1, cerca de 7:1, cerca de 6:1, cerca de 5:1, cerca de 4:1, cerca de 3:1, cerca de 2:1, cerca de 1:1, cerca de 1:2, cerca de 1:3, cerca de 1:4, cerca de 1:5, cerca de 1:6, cerca de 1:7, cerca de 1:8, cerca de 1:9 ou cerca de 1:10 na preparação de oligossacarídeo. Em algumas modalidades, a razão da 1,6- anidro-β-D-glicofuranose para a 1,6-anidro-β-D- glicopiranose é de cerca de 2:1 na preparação de oligossacarídeo.

[0115] Em algumas modalidades, a dita fração de DP2 compreende pelo menos 5 espécies de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra. Em algumas modalidades, a dita fração de DP2 compreende cerca de 5 a 10 espécies de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra.

[0116] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende um ou mais produtos de caramelização de açúcar. Em algumas modalidades, os ditos produtos de caramelização de açúcar são selecionados a partir de um grupo que consiste em: metanol; etanol; furano; metilglioxal; 2-metil furano; acetato de vinila; glicolaldeído; ácido acético; acetol; furfural; 2- furanometanol; 3-furanometanol; 2-hidróxi ciclopent-2-en-1- ona; 5-metil furfural; 2(5H)-furanona; 2 metil ciclopentenolona; levoglicosenona; lactona de hidroxila cíclica; 1,4,3,6-dianidro-α-D-glicopiranose; dianidro glicopiranose; e 5-hidróxi metil furfural (5-hmf).

[0117] Em algumas modalidades, mais que 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 % ou 99 % dos oligossacarídeos que contêm subunidade anidra compreendem uma subunidade anidra de extremidade de cadeia.

[0118] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular ponderal médio de cerca de 300 a cerca de 5000 g/mol, como determinado por cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC). Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular ponderal médio de cerca de 300 a cerca de 2500 g/mol como determinado por HPLC. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular ponderal médio de cerca de 500 a cerca de 2000 g/mol como determinado por HPLC. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular ponderal médio de cerca de 500 a cerca de 1500 g/mol como determinado por HPLC. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular numérico médio de cerca de 300 a cerca de 5000 g/mol como determinado por HPLC. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular numérico médio de cerca de 300 a cerca de 2500 g/mol como determinado por HPLC. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular numérico médio de cerca de 500 a cerca de 2000 g/mol como determinado por HPLC. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular numérico médio de cerca de 500 a cerca de 1500 g/mol como determinado por HPLC.

[0119] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular ponderal médio de cerca de 2000 a cerca de 2800 g/mol. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular numérico médio de cerca de 1000 a cerca de 2000 g/mol.

[0120] A revelação tem como, pelo menos em parte, a constatação de que os oligossacarídeos que compreendem uma ou mais subunidades anidras diminuem a permeabilidade da barreira gastrointestinal. Consequentemente, os recursos revelados, entre outros, métodos para prevenir a disfunção gastrointestinal em um animal que compreende administrar uma preparação de oligossacarídeo descrito no presente documento.

[0121] Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos em pelo menos 5, 10, 20 ou 30 frações de DP da dita preparação de oligossacarídeo diminui monotonicamente com seu grau de polimerização. Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos em cada uma das n frações da dita preparação de oligossacarídeo diminui monotonicamente com seu grau de polimerização. Em algumas modalidades, n é pelo menos 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou

100.

[0122] Em algumas modalidades, pelo menos uma fração da dita preparação de oligossacarídeo compreende menos que 80 %, 70 %, 60 %, 50 %, 40 %, 30 %, 20 %, 19 %, 18 %, 17 %, 16 %, 15 %, 14 %, 13 %, 12 %, 11 %, 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6 %, 5 %, 4 %, 3 % ou 2 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende menos que 80 %, 70 %, 60 %, 50 %, 40 %, 30 %, 20 %, 19 %, 18 %, 17 %, 16 %, 15 %, 14 %, 13 %, 12 %, 11 %, 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6 %, 5 %, 4 %, 3 % ou 2 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em algumas modalidades, cada fração da dita preparação de oligossacarídeo compreende menos que 80 %, 70 %, 60 %, 50 %, 40 %, 30 %, 20 %, 19 %, 18 %, 17 %, 16 %, 15 %, 14 %, 13 %, 12 %, 11 %, 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6 %, 5 %, 4 %, 3 % ou 2 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em algumas modalidades, pelo menos uma fração da dita preparação de oligossacarídeo compreende menos que 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6 %, 5 %, 4 %, 3 % ou 2 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende menos que 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6 %, 5 %, 4 %, 3 % ou 2 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em algumas modalidades, cada fração da dita preparação de oligossacarídeo compreende menos que 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6 %, 5 %, 4 %, 3 % ou 2 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em algumas modalidades, pelo menos uma fração do dito oligossacarídeo compreende mais que 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 %, 10 %, 11 %, 12 %, 13 %, 14 %, 15 %, 16 %, 17 %, 18 %, 19 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 % ou 80 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende mais que 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %,

7 %, 8 %, 9 %, 10 %, 11 %, 12 %, 13 %, 14 %, 15 %, 16 %, 17 %, 18 %, 19 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 % ou 80 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, cada fração da dita preparação de oligossacarídeo compreende mais que 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 %, 10 %, 11 %, 12 %, 13 %, 14 %, 15 %, 16 %, 17 %, 18 %, 19 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 % ou 80 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, pelo menos uma fração da dita preparação de oligossacarídeo compreende mais que 20 %, 21 %, 22 %, 23 %, 24 % ou 25 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende mais que 20 %, 21 %, 22 %, 23 %, 24 % ou 25 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, cada fração da dita preparação de oligossacarídeo compreende mais que 20 %, 21 %, 22 %, 23 %, 24 % ou 25 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, mais que 99 %, 95 %, 90 %, 85 %, 80 %, 75 %, 70 %, 65 %, 60 %, 55 %, 50 %, 45 %, 40 %, 35 % ou 30 % dos oligossacarídeos que contêm subunidade anidra têm apenas uma subunidade anidra.

[0123] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um teor de fração de DP1 de 1 a 40 % por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um teor de fração de DP2 de 1 a 35 % por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um teor de fração de DP3 de 1 a 30 % por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo tem um teor de fração de DP4 de 0,1 a 20 % por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende um teor de fração de DP5 de 0,1 a 15 % por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende a fração de DP2 e a fração de DP1, em que a razão da dita fração de DP2 para a dita fração de DP1 é de 0,02-0,40 por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende uma fração de DP3 e uma fração de DP2, em que a razão da dita fração de DP3 para uma dita fração de DP2 na dita preparação de oligossacarídeo é de 0,01 -0,30 por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende uma fração de DP1 e uma fração de DP2, em que o teor agregado das ditas frações de DP1 e DP2 na dita preparação de oligossacarídeo é menor que 50, 30 ou 10 % por abundância relativa. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende pelo menos 25, 50, 75, 100, 103, 104, 105, 106, 109, 110, 120, 150 ou 200 espécies de oligossacarídeos diferentes.

[0124] Em algumas modalidades, pelo menos dois oligossacarídeos independentes da dita preparação de oligossacarídeo compreendem subunidades anidras diferentes. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende pelo menos uma subunidade anidra que é um produto de desidratação térmica reversível de um monossacarídeo. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende pelo menos uma subunidade de glicose anidra, galactose anidra, manose anidra, alose anidra, altrose anidra, gulose anidra, indose anidra, talose anidra, frutose anidra, ribose anidra, arabinose anidra, ramnose anidra, lixose anidra ou xilose anidra. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende pelo menos uma subunidade de glicose anidra, galactose anidra, manose anidra ou frutose anidra.

[0125] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende pelo menos uma subunidade de 1,6- anidro-β-D-glicofuranose ou 1,6-anidro-β-D-glicopiranose. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende pelo menos uma subunidade de 1,6-anidro-β-D- glicofuranose e pelo menos uma subunidade anidra de 1,6- anidro-β-D-glicopiranose. Em algumas modalidades, uma razão de 1,6-anidro-β-D-glicofuranose para 1,6-anidro-β-D- glicopiranose na dita preparação de oligossacarídeo é de cerca de 10:1 a 1:10, 9:1 a 1:10, 8:1 a 1:10, 7:1 a 1:10, 6:1 a 1:10, 5:1 a 1:10, 4:1 a 1:10, 3:1 a 1:10, 2:1 a 1:10, 10:1 a 1:9, 10:1 a 1:8, 10:1 a 1:7, 10:1 a 1:6, 10:1 a 1:5, 10:1 a 1:4, 10:1 a 1:3, 10:1 a 1:2 ou 1:1 a 3:1. Em algumas modalidades, a razão de 1,6-anidro-β-D-glicofuranose para 1,6-anidro-β-D-glicopiranose na dita preparação de oligossacarídeo é de cerca de 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:8, 1:9 ou 1:10. Em algumas modalidades, a razão de 1,6-anidro- β-D-glicofuranose para 1,6-anidro-β-D-glicopiranose na dita preparação de oligossacarídeo é de cerca de 2:1. Em algumas modalidades, a razão de 1,6-anidro-β-D-glicofuranose para 1,6-anidro-β-D-glicopiranose é de cerca de 10:1 a 1:10, 9:1 a 1:10, 8:1 a 1:10, 7:1 a 1:10, 6:1 a 1:10, 5:1 a 1:10, 4:1 a 1:10, 3:1 a 1:10, 2:1 a 1:10, 10:1 a 1:9, 10:1 a 1:8, 10:1 a 1:7, 10:1 a 1:6, 10:1 a 1:5, 10:1 a 1:4, 10:1 a 1:3, 10:1 a 1:2 ou 1:1 a 3:1 em cada fração. Em algumas modalidades, a razão de 1,6-anidro-β-D-glicofuranose para 1,6-anidro-β- D-glicopiranose é de cerca de 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:8, 1:9 ou 1:10 em cada fração da dita preparação de oligossacarídeo. Em algumas modalidades, a razão de 1,6- anidro-β-D-glicofuranose para 1,6-anidro-β-D-glicopiranose é de cerca de 2:1 em cada fração da dita preparação de oligossacarídeo. Em algumas modalidades, pelo menos 1 %, 5 %, 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % ou 90 % das ditas subunidades anidras na dita preparação de oligossacarídeo são selecionadas a partir de um grupo que consiste em 1,6-anidro-β-D-glicofuranose e 1,6-anidro-β-D- glicopiranose.

[0126] Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende pelo menos uma subunidade anidra que é um produto de caramelização de açúcar. Em algumas modalidades, o dito produto de caramelização de açúcar é selecionado a partir de um grupo que consiste em: metanol; etanol; furano; metilglioxal; 2-metil furano; acetato de vinila; glicolaldeído; ácido acético; acetol; furfural; 2- furanometanol; 3-furanometanol; 2-hidróxi ciclopent-2-en-1- ona; 5-metil furfural; 2(5H)-furanona; 2 metil ciclopentenolona; levoglicosenona; lactona de hidroxila cíclica; 1,4,3,6-dianidro-α-D-glicopiranose; dianidro glicopiranose; e 5-hidróxi metil furfural (5-hmf). Em algumas modalidades, de cerca de 0,1 % a 5 %, 0,1 % a 2 % ou 0,1 % a 1 % das ditas subunidades anidras na dita preparação de oligossacarídeo são produtos de caramelização.

[0127] Em algumas modalidades, pelo menos 30 %, 40 %,

50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 % ou 99 % dos oligossacarídeos que contêm subunidade anidra na dita preparação de oligossacarídeo compreendem uma subunidade anidra de extremidade de cadeia.

[0128] Em algumas modalidades, o peso molecular ponderal médio da dita preparação de oligossacarídeo é de cerca de 300 a 5000 g/mol, 500 a 5000 g/mol, 700 a 5000 g/mol, 500 a 2000 g/mol, 700 a 2000 g/mol, 700 a 1500 g/mol, 300 a 1500 g/mol, 300 a 2000 g/mol, 400 a 1300 g/mol, 400 a 1200 g/mol, 400 a 1100 g/mol, 500 a 1300 g/mol, 500 a 1200 g/mol, 500 a 1100 g/mol, 600 a 1300 g/mol, 600 a 1200 g/mol ou 600 a 1100 g/mol. Em algumas modalidades, o peso molecular numérico médio da dita preparação de oligossacarídeo é de cerca de 300 a 5000 g/mol, 500 a 5000 g/mol, 700 a 5000 g/mol, 500 a 2000 g/mol, 700 a 2000 g/mol, 700 a 1500 g/mol, 300 a 1500 g/mol, 300 a 2000 g/mol, 400 a 1000 g/mol, 400 a 900 g/mol, 400 a 800 g/mol, 500 a 900 g/mol ou 500 a 800 g/mol. Em algumas modalidades, o peso molecular ponderal médio da dita preparação de oligossacarídeo é de cerca de 2000 a 2800 g/mol, 2100 a 2700 g/mol, 2200 a 2600 g/mol, 2300 a 2500 g/mol ou 2320 a 2420 g/mol. Em algumas modalidades, o peso molecular numérico médio da dita preparação de oligossacarídeo é de cerca de 1000 a 2000 g/mol, 1100 a 1900 g/mol, 1200 a 1800 g/mol, 1300 a 1700 g/mol, 1400 a 1600 g/mol ou 1450 a 1550 g/mol.

[0129] Em um aspecto, são fornecidos no presente documento métodos para prevenir a disfunção de barreira gastrointestinal em um animal, que compreende: administrar uma composição nutricional que compreende uma composição nutricional base e uma preparação de oligossacarídeo sintético ao animal, em que a preparação de oligossacarídeo sintético compreende pelo menos n frações de oligossacarídeos, em que cada uma tem um grau distinto de polimerização selecionado a partir de 1 a n (frações de DP1 a DPn), em que n é um número inteiro maior que 2; em que cada fração compreende de 1 % a 90 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa como medido por espectrometria de massa.

[0130] Em algumas modalidades, a permeabilidade da barreira gastrointestinal é menor que a permeabilidade da barreira gastrointestinal de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a disfunção de barreira gastrointestinal é hiperpermeabilidade (intestino gotejante).

[0131] Em algumas modalidades, a permeabilidade da barreira gastrointestinal é pelo menos cerca de 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 % ou 30 % menos que a permeabilidade da barreira gastrointestinal de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a permeabilidade da barreira gastrointestinal é cerca de 0,5-40 %, 0,5-30 %, 0,5-20 %, 0,5-10 %, 0,5-5 %, 0,5-1 %, 1-40 %, 1-30 %, 1-20 %, 1-10 %, 1-5 %, 1-2 %, 5- 40 %, 5-30 %, 5-20 %, 5-10 %, 10-40 %, 10-30 % ou 10-20 % menos que a permeabilidade da barreira gastrointestinal de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético.

[0132] Em algumas modalidades, a diminuição na permeabilidade gastrointestinal é mediada diretamente pela preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a diminuição na permeabilidade gastrointestinal é mediada indiretamente pela preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo é processada in vivo em uma ou mais espécies secundárias. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo sintético é processada por um componente da microbiota gastrointestinal do animal. Em algumas modalidades, o componente é uma bactéria gastrointestinal. Em algumas modalidades, a diminuição na permeabilidade gastrointestinal é mediada diretamente por uma ou mais dentre as espécies secundárias.

[0133] Em algumas modalidades, o animal tem uma probabilidade diminuída de desenvolver uma disfunção de barreira gastrointestinal com relação a um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético.

[0134] Em algumas modalidades, o animal tem um peso corporal superior com relação ao peso corporal de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o animal tem uma eficácia de ração superior com relação à eficácia de ração de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o animal tem uma razão de conversão de ração inferior com relação à razão de conversão de ração de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético.

[0135] Em algumas modalidades, o animal é um peixe (por exemplo, salmão, tilápia, peixe tropical), ave (por exemplo, galinha, peru), marisco (por exemplo, camarão), ovelha, vaca, gado, búfalo, bisão, porco (por exemplo, leitão, porco em crescimento/de abate), gato, cachorro, coelho, bode, porquinho-da-índia, burro, camelo, cavalo, pombo, furão, gerbo, hamster, camundongo, rato, pássaro ou ser humano. Em algumas modalidades, o animal é ave. Em algumas modalidades, o animal é uma galinha (por exemplo, de consumo, poedeira, reprodutora), peru, pato ou ganso. Em algumas modalidades, o animal é um porco (por exemplo, leitão, porco em crescimento/de abate).

[0136] Em algumas modalidades, a composição nutricional é uma composição de ração animal. Em algumas modalidades, a composição nutricional base é ração animal base.

[0137] São fornecidos no presente documento métodos para promover proliferação de célula calciforme em um animal, que compreende: administrar uma composição nutricional que compreende uma composição nutricional base e uma preparação de oligossacarídeo ao animal, em que a preparação de oligossacarídeo sintético compreende pelo menos n frações de oligossacarídeos, em que cada uma tem um grau distinto de polimerização selecionado a partir de 1 a n (frações de DP1 a DPn), em que n é um número inteiro maior que 2; em que cada fração compreende de 1 % a 90 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa como medido por espectrometria de massa.

[0138] Em algumas modalidades, o nível de células calciforme no trato gastrointestinal do animal é maior com relação ao nível de células calciforme no trato gastrointestinal de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o nível de células calciforme no trato gastrointestinal do animal é pelo menos cerca de 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 %, 10 %, 15 % ou 20 % maior que o nível de células calciforme no trato gastrointestinal de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o nível de células calciforme no trato gastrointestinal do animal é cerca de 0,5-20 %, 0,5-15 %, 0,5-10 %, 0,5-5 %, 0,5-1 %, 1-20 %, 1-15 %, 1-10 %, 1-5 %, 1-2 %, 5-20 %, 5-15 % ou 5-10 % maior com relação ao nível de células calciforme em uma composição nutricional que carece do preparações de oligossacarídeo sintético.

[0139] Em algumas modalidades, o aumento no nível de células calciforme é mediada diretamente pela preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o aumento no nível de células calciforme é mediada indiretamente pela preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo é processada in vivo em uma ou mais espécies secundárias. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo sintético é processada por um componente da microbiota gastrointestinal do animal. Em algumas modalidades, o componente é uma bactéria gastrointestinal. Em algumas modalidades, o aumento no número de células calciforme é mediada diretamente por uma ou mais dentre as espécies secundárias.

[0140] Em algumas modalidades, o animal tem um peso corporal superior com relação ao peso corporal de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o animal tem uma eficácia de ração superior com relação à eficácia de ração de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o animal tem uma razão de conversão de ração inferior com relação à razão de conversão de ração de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético.

[0141] Em algumas modalidades, o animal é um peixe (por exemplo, salmão, tilápia, peixe tropical), ave (por exemplo, galinha, peru), marisco (por exemplo, camarão), ovelha, vaca, gado, búfalo, bisão, porco (por exemplo, leitão, porco em crescimento/de abate), gato, cachorro, coelho, bode, porquinho-da-índia, burro, camelo, cavalo, pombo, furão, gerbo, hamster, camundongo, rato, pássaro ou ser humano. Em algumas modalidades, o animal é ave. Em algumas modalidades, o animal é uma galinha (por exemplo, de consumo, poedeira, reprodutora), peru, pato ou ganso. Em algumas modalidades, o animal é um porco (por exemplo, leitão, porco em crescimento/de abate). Em algumas modalidades, o animal é animais de pecuária. Em algumas modalidades, o animal é um animal doméstico.

[0142] Em algumas modalidades, a composição nutricional é uma composição de ração animal. Em algumas modalidades, a composição nutricional base é ração animal base.

[0143] São fornecidos no presente documento métodos para promover produção de muco no trato gastrointestinal de um animal, que compreende: administrar uma composição nutricional que compreende uma composição nutricional base e uma preparação de oligossacarídeo ao animal, em que a preparação de oligossacarídeo sintético compreende pelo menos n frações de oligossacarídeos, em que cada uma tem um grau distinto de polimerização selecionado a partir de 1 a n (frações de DP1 a DPn), em que n é um número inteiro maior que 2; em que cada fração compreende de 1 % a 90 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa como medido por espectrometria de massa.

[0144] Em algumas modalidades, o nível de muco no trato gastrointestinal do animal é maior com relação àquele em um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o nível de muco é pelo menos cerca de 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 %, 10 %, 15 % ou 20 % maior com relação ao nível de muco no trato gastrointestinal de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o nível de muco é pelo menos cerca de 0,5-20 %, 0,5-15 %, 0,5-10 %, 0,5-5 %, 0,5-2 %, 0,5-1 %, 1-20 %, 1-15 %, 1-10 %, 1-5 %, 1- 2 %, 5-20 %, 5-15 % ou 5-10 % maior com relação ao nível de muco no trato gastrointestinal de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético.

[0145] Em algumas modalidades, o método compreende obter uma amostra gastrointestinal do animal. Em algumas modalidades, a amostra é um tecido gastrointestinal (por exemplo, uma biópsia cecal) ou uma amostra fecal. Em algumas modalidades, o método compreende detectar o nível de muco na amostra. Em algumas modalidades, o nível de muco é detectado detectando-se uma proteína componente de muco. Em algumas modalidades, a proteína é mucina.

[0146] Em algumas modalidades, o aumento no nível de muco é mediado diretamente pela preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o aumento no nível de muco é mediado indiretamente pela preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo é processada in vivo em uma ou mais espécies secundárias. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo sintético é processada por um componente da microbiota gastrointestinal do animal. Em algumas modalidades, o componente é uma bactéria gastrointestinal. Em algumas modalidades, o aumento no nível de muco é mediado diretamente por uma ou mais dentre as espécies secundárias.

[0147] Em algumas modalidades, o animal tem um peso corporal superior com relação ao peso corporal de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o animal tem uma eficácia de ração superior com relação à eficácia de ração de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o animal tem uma razão de conversão de ração inferior com relação à razão de conversão de ração de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético.

[0148] Em algumas modalidades, o animal é um peixe (por exemplo, salmão, tilápia, peixe tropical), ave (por exemplo,

galinha, peru), marisco (por exemplo, camarão), ovelha, vaca, gado, búfalo, bisão, porco (por exemplo, leitão, porco em crescimento/de abate), gato, cachorro, coelho, bode, porquinho-da-índia, burro, camelo, cavalo, pombo, furão, gerbo, hamster, camundongo, rato, pássaro ou ser humano. Em algumas modalidades, o animal é ave. Em algumas modalidades, o animal é uma galinha (por exemplo, de consumo, poedeira, reprodutora), peru, pato ou ganso. Em algumas modalidades, o animal é um porco (por exemplo, leitão, porco em crescimento/de abate). Em algumas modalidades, o animal é animais de pecuária. Em algumas modalidades, o animal é um animal doméstico.

[0149] Em algumas modalidades, a composição nutricional é uma composição de ração animal. Em algumas modalidades, a composição nutricional base é ração animal base.

[0150] São fornecidos no presente documento métodos para prevenir uma infecção de um animal, que compreende: administrar uma composição nutricional que compreende uma composição nutricional base e uma preparação de oligossacarídeo sintético ao animal, em que a preparação de oligossacarídeo sintético compreende pelo menos n frações de oligossacarídeos, em que cada uma tem um grau distinto de polimerização selecionado a partir de 1 a n (frações de DP1 a DPn), em que n é um número inteiro maior que 2; em que cada fração compreende de 1 % a 90 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa como medido por espectrometria de massa.

[0151] Em algumas modalidades, o nível de um ou mais tipo de célula imunológica no trato gastrointestinal do animal é maior com relação ao nível no trato gastrointestinal de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético.

[0152] Em algumas modalidades, a célula imunológica é patogênica. Em algumas modalidades, a célula imunológica é um granulócito. Em algumas modalidades, o nível de fagocitose de granulócito no trato gastrointestinal do animal é maior com relação ao nível no trato gastrointestinal de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o nível de células imunológicas ou atividade de célula imunológica é mediado diretamente pela preparação de oligossacarídeo sintético.

[0153] Em algumas modalidades, o nível de células imunológicas ou atividade de célula imunológica é mediado indiretamente pela preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo sintético é processada in vivo em uma ou mais espécies secundárias. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo sintético é processada por um componente da microbiota gastrointestinal do animal. Em algumas modalidades, o componente é uma bactéria gastrointestinal. Em algumas modalidades, o nível de células imunológicas ou atividade de célula imunológica é mediado diretamente por uma ou mais dentre as espécies secundárias.

[0154] Em algumas modalidades, o nível de um ou mais citocinas ou quimiocinas pró-inflatamórias no trato gastrointestinal do animal é maior com relação ao nível no trato gastrointestinal de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o nível de um ou mais citocinas ou quimiocinas anti-inflamatórias no trato gastrointestinal do animal é menor com relação ao nível no trato gastrointestinal de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético.

[0155] Em algumas modalidades, a permeabilidade da barreira gastrointestinal do animal é menor com relação à permeabilidade da barreira gastrointestinal de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético.

[0156] Em algumas modalidades, o nível de muco no trato gastrointestinal do animal é maior com relação ao nível no trato gastrointestinal de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético.

[0157] Em algumas modalidades, o nível de células calciforme no trato gastrointestinal do animal é maior com relação ao nível no trato gastrointestinal de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético.

[0158] Em algumas modalidades, o animal tem um peso corporal superior com relação ao peso corporal de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o animal tem uma eficácia de ração superior com relação à eficácia de ração de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético.

[0159] Em algumas modalidades, o animal tem uma razão de conversão de ração inferior com relação à razão de conversão de ração de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético.

[0160] Em algumas modalidades, o animal é um peixe (por exemplo, salmão, tilápia, peixe tropical), ave (por exemplo, galinha, peru), marisco (por exemplo, camarão), ovelha, vaca, gado, búfalo, bisão, porco (por exemplo, leitão, porco em crescimento/de abate), gato, cachorro, coelho, bode, porquinho-da-índia, burro, camelo, cavalo, pombo, furão, gerbo, hamster, camundongo, rato, pássaro ou ser humano. Em algumas modalidades, o animal é ave. Em algumas modalidades, o animal é uma galinha (por exemplo, de consumo, poedeira, reprodutora), peru, pato ou ganso. Em algumas modalidades, o animal é um porco (por exemplo, leitão, porco em crescimento/de abate). Em algumas modalidades, o animal é animais de pecuária. Em algumas modalidades, o animal é um animal doméstico.

[0161] Em algumas modalidades, a composição nutricional é uma composição de ração animal. Em algumas modalidades, a composição nutricional base é ração animal base.

[0162] Em um aspecto, a revelação tem como, pelo menos em parte, a constatação de que os oligossacarídeos que compreendem uma ou mais subunidades anidras diminuem a permeabilidade da barreira gastrointestinal. Consequentemente, em um aspecto, os recursos revelados, entre outros, métodos de tratamento da disfunção gastrointestinal em um animal que compreende administrar uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento.

[0163] São fornecidos no presente documento métodos para tratar uma disfunção de barreira gastrointestinal em um animal, que compreende: administrar uma composição nutricional que compreende uma composição nutricional base e uma preparação de oligossacarídeo sintético a um animal com uma disfunção de barreira gastrointestinal, em que a preparação de oligossacarídeo sintético compreende pelo menos n frações de oligossacarídeos, em que cada uma tem um grau distinto de polimerização selecionado a partir de 1 a n (frações de DP1 a DPn), em que n é um número inteiro maior que 2; em que cada fração compreende de 1 % a 90 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa como medido por espectrometria de massa.

[0164] Em algumas modalidades, a permeabilidade da barreira gastrointestinal do animal é menor com relação à permeabilidade da barreira gastrointestinal do animal antes da administração da preparação nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0165] Em algumas modalidades, o método compreende a disfunção de barreira gastrointestinal é hiperpermeabilidade (intestino gotejante). Em algumas modalidades, a permeabilidade da barreira gastrointestinal permite a translocação de conteúdos intestinais (por exemplo, partículas de comida, microrganismo, toxinas) do espaço intraluminal à circulação do animal. Em algumas modalidades, a permeabilidade da barreira gastrointestinal é pelo menos cerca de 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 % ou 30 % menos que a permeabilidade da barreira gastrointestinal do animal antes da administração da composição nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a permeabilidade da barreira gastrointestinal é cerca de 0,5- 40 %, 0,5-30 %, 0,5-20 %, 0,5-10 %, 0,5-5 %, 0,5-1 %, 1- 40 %, 1-30 %, 1-20 %, 1-10 %, 1-5 %, 1-2 %, 5-40 %, 5-30 %, 5-20 %, 5-10 %, 10-40 %, 10-30 % ou 10-20 % menos que a permeabilidade da barreira gastrointestinal do animal antes da administração da composição nutricional que compreende preparação de oligossacarídeo sintético.

[0166] Em algumas modalidades, a diminuição na permeabilidade gastrointestinal é mediada diretamente pela preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a diminuição na permeabilidade gastrointestinal é mediada indiretamente pela preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo sintético é processada in vivo em uma ou mais espécies secundárias. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo sintético é processada por um componente da microbiota gastrointestinal do animal. Em algumas modalidades, o componente é uma bactéria gastrointestinal. Em algumas modalidades, a diminuição na permeabilidade gastrointestinal é mediada diretamente por uma ou mais dentre as espécies secundárias.

[0167] Em algumas modalidades, um ou mais sintomas da disfunção de barreira gastrointestinal são melhorados. Em algumas modalidades os um ou mais sintomas é síntese de muco diminuída, síntese de mucina diminuída, secreção de muco diminuída, secreção de mucina diminuída, absorção de nutriente diminuída, inflamação aumentada, resistência diminuída to infecção, proliferação diminuída de células epiteliais intestinais, maturação de células epiteliais intestinais diminuída, má nutrição, ganho de peso diminuído,

razão de conversão de ração aumentada, eficácia de ração diminuída, mortalidade aumentada.

[0168] Em algumas modalidades, o animal tem um peso corporal superior com relação ao peso corporal do animal antes da administração da composição nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o animal tem uma eficácia de ração superior com relação à eficácia de ração do animal antes da administração da composição nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o animal tem uma razão de conversão de ração inferior com relação à razão de conversão de ração do animal antes da administração da composição nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0169] Em algumas modalidades, o animal é um peixe (por exemplo, salmão, tilápia, peixe tropical), ave (por exemplo, galinha, peru), marisco (por exemplo, camarão), ovelha, vaca, gado, búfalo, bisão, porco (por exemplo, leitão, porco em crescimento/de abate), gato, cachorro, coelho, bode, porquinho-da-índia, burro, camelo, cavalo, pombo, furão, gerbo, hamster, camundongo, rato, pássaro ou ser humano. Em algumas modalidades, o animal é ave. Em algumas modalidades, o animal é uma galinha (por exemplo, de consumo, poedeira, reprodutora), peru, pato ou ganso. Em algumas modalidades, o animal é um porco (por exemplo, leitão, porco em crescimento/de abate).

[0170] Em algumas modalidades, a composição nutricional é uma composição de ração animal. Em algumas modalidades, a composição nutricional base é ração animal base.

[0171] São fornecidos no presente documento métodos para tratar uma infecção, que compreende administrar uma composição nutricional que compreende uma composição nutricional base e uma preparação de oligossacarídeo sintético ao animal, em que a preparação de oligossacarídeo sintético compreende pelo menos n frações de oligossacarídeos, em que cada uma tem um grau distinto de polimerização selecionado a partir de 1 a n (frações de DP1 a DPn), em que n é um número inteiro maior que 2; em que cada fração compreende de 1 % a 90 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa como medido por espectrometria de massa.

[0172] Em algumas modalidades, o nível de um ou mais tipo de célula imunológica no trato gastrointestinal do animal é maior com relação ao nível no trato gastrointestinal do animal antes da administração da composição nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0173] Em algumas modalidades, a célula imunológica é patogênica. Em algumas modalidades, a célula imunológica é um granulócito. Em algumas modalidades, o nível de fagocitose de granulócito no trato gastrointestinal do animal é maior com relação ao nível no trato gastrointestinal do animal antes da administração da composição nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o nível de células imunológicas ou atividade de célula imunológica é mediado diretamente pela preparação de oligossacarídeo sintético.

[0174] Em algumas modalidades, o nível de células imunológicas ou atividade de célula imunológica é mediado indiretamente pela preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo sintético é processada in vivo em uma ou mais espécies secundárias. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo sintético é processada por um componente da microbiota gastrointestinal do animal. Em algumas modalidades, o componente é uma bactéria gastrointestinal. Em algumas modalidades, o aumento no nível de muco é mediado diretamente por uma ou mais dentre as espécies secundárias.

[0175] Em algumas modalidades, o nível de um ou mais citocinas ou quimiocinas pró-inflatamórias no trato gastrointestinal do animal é maior com relação ao nível no trato gastrointestinal do animal antes da administração da composição nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o nível de um ou mais citocinas ou quimiocinas anti-inflamatórias no trato gastrointestinal do animal é menor com relação ao nível no trato gastrointestinal do animal antes da administração da composição nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0176] Em algumas modalidades, a permeabilidade da barreira gastrointestinal do animal é menor com relação à permeabilidade da barreira gastrointestinal do animal antes da administração da composição nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o nível de muco no trato gastrointestinal do animal é maior com relação ao nível no trato gastrointestinal do animal antes da administração da composição nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o nível de células calciforme no trato gastrointestinal do animal é maior com relação ao nível no trato gastrointestinal do animal antes da administração da composição nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0177] Em algumas modalidades, o animal tem um peso corporal superior com relação ao peso corporal do animal antes da administração da composição nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o animal tem uma eficácia de ração superior com relação à eficácia de ração do animal antes da administração da composição nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o animal tem uma razão de conversão de ração inferior com relação à razão de conversão de ração do animal antes da administração da composição nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0178] Em algumas modalidades, o animal é um peixe (por exemplo, salmão, tilápia, peixe tropical), ave (por exemplo, galinha, peru), marisco (por exemplo, camarão), ovelha, vaca, gado, búfalo, bisão, porco (por exemplo, leitão, porco em crescimento/de abate), gato, cachorro, coelho, bode, porquinho-da-índia, burro, camelo, cavalo, pombo, furão, gerbo, hamster, camundongo, rato, pássaro ou ser humano. Em algumas modalidades, o animal é ave. Em algumas modalidades, o animal é uma galinha (por exemplo, de consumo, poedeira, reprodutora), peru, pato ou ganso. Em algumas modalidades, o animal é um porco (por exemplo, leitão, porco em crescimento/de abate).

[0179] Em algumas modalidades, a composição nutricional é uma composição de ração animal. Em algumas modalidades, a composição nutricional base é ração animal base.

[0180] São fornecidos no presente documento métodos para melhorar ou induzir uma resposta imunológica, que compreende: administrar uma composição nutricional que compreende uma composição nutricional base e uma preparação de oligossacarídeo sintético ao animal, em que a preparação de oligossacarídeo sintético compreende pelo menos n frações de oligossacarídeos, em que cada uma tem um grau distinto de polimerização selecionado a partir de 1 a n (frações de DP1 a DPn), em que n é um número inteiro maior que 2; em que cada fração compreende de 1 % a 90 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa como medido por espectrometria de massa.

[0181] Em algumas modalidades, o nível de um ou mais tipo de célula imunológica no trato gastrointestinal do animal é maior com relação ao nível no trato gastrointestinal do animal antes da administração da composição nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0182] Em algumas modalidades, o nível de um ou mais tipo de célula imunológica no trato gastrointestinal do animal é maior com relação ao nível no trato gastrointestinal do animal antes da administração da composição nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0183] Em algumas modalidades, a célula imunológica é patogênica. Em algumas modalidades, a célula imunológica é um granulócito. Em algumas modalidades, o nível de fagocitose de granulócito no trato gastrointestinal do animal é maior com relação ao nível no trato gastrointestinal do animal antes da administração da composição nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o nível de células imunológicas ou atividade de célula imunológica é mediado diretamente pela preparação de oligossacarídeo sintético.

[0184] Em algumas modalidades, o nível de células imunológicas ou atividade de célula imunológica é mediado indiretamente pela preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo sintético é processada in vivo em uma ou mais espécies secundárias. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo sintético é processada por um componente da microbiota gastrointestinal do animal. Em algumas modalidades, o componente é uma bactéria gastrointestinal. Em algumas modalidades, o aumento no nível de muco é mediado diretamente por uma ou mais dentre as espécies secundárias.

[0185] Em algumas modalidades, o nível de um ou mais citocinas ou quimiocinas pró-inflatamórias no trato gastrointestinal do animal é maior com relação ao nível no trato gastrointestinal do animal antes da administração da composição nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o nível de um ou mais citocinas ou quimiocinas anti-inflamatórias no trato gastrointestinal do animal é menor com relação ao nível no trato gastrointestinal do animal antes da administração da composição nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0186] Em algumas modalidades, a permeabilidade da barreira gastrointestinal do animal é menor com relação à permeabilidade da barreira gastrointestinal do animal antes da administração da composição nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o nível de muco no trato gastrointestinal do animal é maior com relação ao nível no trato gastrointestinal do animal antes da administração da composição nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o nível de células calciforme no trato gastrointestinal do animal é maior com relação ao nível no trato gastrointestinal do animal antes da administração da composição nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0187] Em algumas modalidades, o animal tem um peso corporal superior com relação ao peso corporal do animal antes da administração da composição nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o animal tem uma eficácia de ração superior com relação à eficácia de ração do animal antes da administração da composição nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o animal tem uma razão de conversão de ração inferior com relação à razão de conversão de ração do animal antes da administração da composição nutricional que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0188] Em algumas modalidades, o animal é um peixe (por exemplo, salmão, tilápia, peixe tropical), ave (por exemplo, galinha, peru), marisco (por exemplo, camarão), ovelha, vaca, gado, búfalo, bisão, porco (por exemplo, leitão, porco em crescimento/de abate), gato, cachorro, coelho, bode, porquinho-da-índia, burro, camelo, cavalo, pombo, furão, gerbo, hamster, camundongo, rato, pássaro ou ser humano. Em algumas modalidades, o animal é ave. Em algumas modalidades, o animal é uma galinha (por exemplo, de consumo, poedeira, reprodutora), peru, pato ou ganso. Em algumas modalidades, o animal é um porco (por exemplo, leitão, porco em crescimento/de abate).

[0189] Os aspectos e as vantagens adicionais da presente revelação se tornarão prontamente evidentes àquele técnico nesse assunto a partir da seguinte descrição detalhada, em que apenas as modalidades ilustrativas da presente revelação são mostradas e descritas. Como será realizado, a presente revelação é capaz de outras e diferentes modalidades e seus vários detalhes são capazes de modificações em vários aspectos óbvios, tudo isso sem se afastar da revelação. Consequentemente, os desenhos e as descrições devem ser considerados como de natureza ilustrativa e não restritiva.

INCORPORAÇÃO POR REFERÊNCIA

[0190] Todas as publicações, patentes e pedidos de patente mencionados neste relatório descritivo são incorporados no presente documento, por referência, na mesma extensão como se cada publicação, patente ou pedido de patente individual tivesse sido especificamente indicado para ser incorporado por referência. Na medida em que as publicações e patentes ou pedidos de patente incorporados a título de referência contradizem a revelação contida no relatório descritivo, o relatório descritivo se destina a substituir e/ou prevalecer sobre qualquer tal material contraditório.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0191] As características inovadoras da invenção são apresentadas com particularidade nas reivindicações anexas. Um melhor entendimento dos recursos e das vantagens da invenção será obtido com referência à seguinte descrição detalhada que define as modalidades ilustrativas, nas quais os princípios da invenção são usados, e ao desenho anexo

(também “figura” e “FIG.”, no presente documento), no qual:

[0192] A FIG. 1 ilustra parte de um espectro de 1H, 13C- HSQC RMN da preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9.7.

[0193] A FIG. 2 ilustra um espectro de MALDI-MS de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9.7 que demonstra a presença de subunidades anidras.

[0194] A FIG. 3 ilustra um espectro de 1D 1H-próton RMN de uma fração de DP1 anidro isolada de um oligossacarídeo do Exemplo 9.

[0195] A FIG. 4 ilustra um espectro de 1D APT 13C-RMN de uma fração de DP1 anidro isolada de um oligossacarídeo do Exemplo 9.

[0196] A FIG. 5 ilustra o cromatograma de GC-MS (plotagens de TIC e XIC (m/z 229)) que mostra os componentes de DP2 e DP2 anidro de preparação de oligossacarídeo 2.9 após a derivatização.

[0197] A FIG. 6 ilustra um espectro de 1H, 13C- HSQC de uma preparação de oligossacarídeo com uma subunidade anidra de caramelização.

[0198] A FIG. 7 ilustra uma parte de um MALDI-MS em comparação com uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9 em diferentes energias laser.

[0199] A FIG. 8A ilustra a detecção de LC-MS/MS da espécie de DP2 anidro em concentração de 1 – 80 g/ml de uma preparação de oligossacarídeo em água. A FIG. 8B ostra uma curva de calibração linear que resulta da detecção por LC- MS/MS da FIG. 8A.

[0200] A FIG. 9 ilustra a quantificação do teor de DP2 anidro de várias composições dietéticas de controle e tratadas.

[0201] A FIG. 10 ilustra um espectro de 2D-1H JRES RMN de uma subunidade anidra que contém amostra de glico- oligossacarídeos.

[0202] A FIG. 11 é um espectro de 1H, 13C-HSQC RMN representativo de uma subunidade anidra que contém amostra de glico-oligossacarídeos com ressonâncias e atribuições relevantes usadas para distribuição de ligação.

[0203] A FIG. 12 ilustra uma sobreposição de espectros de 1H DOSY de três oligossacarídeos que contêm subunidade anidra.

[0204] A FIG. 13 ilustra uma comparação de 1,6-Anidro-ß- D-glicose (DP1-18), 1,6-Anidro-ß-D-celobiose (DP2-18), e uma amostra de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra.

[0205] A FIG. 14 ilustra cromatogramas de massa de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra (topo) e oligossacarídeos que contêm subunidade anidra digeridos (fundo) em monitoramentos de múltiplas reações selecionados (MRM).

[0206] A FIG. 15 mostra um gráfico da abundância relativa versus grau de polimerização (DP) de um oligossacarídeo do Exemplo 9. O gráfico mostra a preparação de oligossacarídeo que tem distribuição de DP monotonicamente decrescente.

[0207] A FIG. 16 mostra um gráfico da abundância relativa versus grau de polimerização de um oligossacarídeo do Exemplo

9. O gráfico mostra a preparação de oligossacarídeo tem distribuição de DP não monotonicamente decrescente.

[0208] A FIG. 17 mostra uma retratação gráfica de uma barreira gastrointestinal saudável e um barreira gastrointestinal com vazamento.

[0209] A FIG. 18 mostra uma retratação gráfica de um aparelho usado para a avaliação de integridade de proteção de intestino saudável.

[0210] A FIG. 19 é um citograma de fluxo que mostra granulócitos com e sem patógenos ingeridos.

[0211] A FIG. 20 é um gráfico que mostra a alteração em vezes de expressão de citocina e quimiocina imunológica e inflamatória em tecido Peyer Patch para genes selecionados com pelo menos um aumento de 1,5 vez na expressão.

[0212] A FIG. 21 mostra uma câmara para avaliação in vitro do efeito direto e indireto de preparações de oligossacarídeo em função de proteção intestinal interrompida devido a um tensionador apical ramnolipídio.

[0213] A FIG. 22 é um gráfico em barras que mostra alteração em vezes na expressão de IL1B, IL4, IL10 e SLC5A10 em pássaros alimentados com dietas que contêm 500 ppm do oligossacarídeo do Exemplo 9.3 (barras sólidas) em comparação com dieta de controle (barras abertas). Os dados mostram expressão genética aumentada associada a imunidade, resposta anti-inflamatória e absorção de nutriente para pássaros alimentados com o oligossacarídeo do Exemplo 9.3.

[0214] A FIG. 23 é um gráfico em barras que mostra a expressão genética relativa de SLC34A2 em grupos de tratamento A-B, como detalhado na Tabela 26. Os dados demonstram que os oligossacarídeos dos Exemplos 9.2 e 9.3 resultam em absorção ileal aprimorada de fósforo como indicado por análise de expressão genética de SLC34A2 aumentada.

[0215] A FIG. 24 é uma imagem microscópica de tecido de íleo de pássaros no Grupo de tratamento B e Grupo de tratamento D (Grupos definidos na Tabela 26). A histologia ileal revela significativamente menos danos de inflamação e comprimento de vilos aprimorado em galinhas de consumo alimentadas com uma dieta que contém oligossacarídeos do Exemplo 9.2.

[0216] A FIG. 25 é um gráfico em barras que mostra a porcentagem de células calciforme nos Grupos de tratamento A, B e D (como definido na Tabela 26). Os dados mostram que oligossacarídeos aumentam as contagens de célula calciforme em galinhas de consumo submetidas a um desafio inflamatório (Grupo B).

[0217] A FIG. 26 é um gráfico em barras que mostra a porcentagem de linfócitos dos pássaros nos Grupos de tratamento A, B, C e D (como definido na Tabela 26). Os dados mostram que galinhas de consumo tratadas com oligossacarídeos selecionados do Exemplo 9 promoveram células Auxiliadoras T aumentadas, medidas como uma porcentagem de linfócitos totais, quando submetidos a um desafio inflamatório agudo.

[0218] A FIG. 27A é uma imagem microscópica de tecido de fígado de galinhas de consumo alimentadas com uma dieta que contém o oligossacarídeo do Exemplo 9.3 com tecido de fígado saudável (esquerda) e tecido que exibe danos inflamatórios (direita). A FIG. 27B mostra um gráfico em barras de pontuação de danos histológicos de amostras de fígado de galinhas de consumo alimentadas nos Grupos de tratamento A, B ou C (como definido na Tabela 26). Os dados mostram que o Grupo de tratamento C (nível de APG oligossacarídeo do Exemplo 9.3) fornece danos de fígado reduzidos. A FIG. 27C mostra o nível de APG em galinhas de consumo nos Grupos de tratamento A, B e C (como definido na Tabela 26). Os dados mostram proteína hepática AGP de fase aguda reduzida quando submetidas a um desafio inflamatório.

[0219] A FIG. 28A é um gráfico em barras que mostra o nível de IgA em amostras sanguíneas da galinha para consumo nos Grupos de tratamento A, B, e D no Dia 21. Os dados mostram que galinhas de consumo no Grupo de tratamento D exibiram uma resposta imunológica acelerada no Dia 21. A FIG. 28B é um gráfico em barras que mostra o nível de IgA em amostras sanguíneas da galinha para consumo nos Grupos de tratamento A, B, e D no Dia 28. Os dados mostram que galinhas de consumo exibiram uma recuperação rápida para a linha de base de Grupo de controle A (Dia 28) quando submetidas a um desafio de inflamação aguda no Dia 14.

[0220] A FIG. 29A é um gráfico em barras que mostra nível de diamina oxidase em amostras sanguíneas da galinha para consumo nos Grupos de tratamento A, B, e D no Dia 21. Os dados mostram que galinhas de consumo exibiram recuperação mais rápida para a linha de base de Grupo de controle A que pássaros não alimentados com o oligossacarídeo quando submetidas a um desafio de inflamação aguda no Dia 14. A FIG. 29B é um gráfico em barras que mostra o nível de em amostras sanguíneas da galinha para consumo nos Grupos de tratamento A, B e D no Dia 28. Os dados mostram que galinhas de consumo exibiram recuperação mais rápida para a linha de base de Grupo de controle A que pássaros não alimentados com o oligossacarídeo quando submetidas a um desafio de inflamação aguda no Dia 14.

[0221] A FIG. 30 ilustra dois oligossacarídeos de DP1 e um oligossacarídeo de DP2 que contêm subunidade anidra.

[0222] A FIG. 31 ilustra uma subunidade anidra que contém oligossacarídeo (celotriosano).

[0223] A FIG. 32A ilustra um espectro de MALDI-MS de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 2 que demonstra a presença de subunidades anidras. A FIG. 32B ilustra um espectro de MALDI-MS de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 2 que demonstra a presença de subunidades anidras.

[0224] A FIG. 33A ilustra a detecção de LC-MS/MS das espécies de DP2 anidro, DP1 anidro e DP2 de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 1. A FIG. 33B ilustra a detecção de LC-MS/MS das espécies de DP2 anidro, DP1 anidro e DP2 de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 1. A FIG. 33C ilustra a detecção de LC-MS/MS das espécies de DP2 anidro, DP1 anidro e DP2 de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 1.

[0225] A FIG. 34A ilustra a detecção de LC-MS/MS das espécies de DP2 anidro, DP1 anidro e DP2 de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 3. A FIG. 34B ilustra a detecção de LC-MS/MS das espécies de DP2 anidro, DP1 anidro e DP2 de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 3. A FIG. 34C ilustra a detecção de LC-MS/MS das espécies de DP2 anidro, DP1 anidro e DP2 de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 3.

[0226] A FIG. 35A ilustra a detecção por LC-MS/MS das espécies de DP2 anidro, DP1 anidro e DP2 de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 4. A FIG. 35B ilustra a detecção por LC-MS/MS das espécies de DP2 anidro, DP1 anidro e DP2 de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 4. A FIG. 35C ilustra a detecção por LC-MS/MS das espécies de DP2 anidro, DP1 anidro e DP2 de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 4.

[0227] A FIG. 36A ilustra a detecção por LC-MS/MS das espécies de DP2 anidro, DP1 anidro e DP2 de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 7. A FIG. 36B ilustra a detecção por LC-MS/MS das espécies de DP2 anidro, DP1 anidro e DP2 de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 7. A FIG. 36C ilustra a detecção por LC-MS/MS das espécies de DP2 anidro, DP1 anidro e DP2 de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 7.

[0228] A FIG. 37A ilustra a detecção de espectro de GC- MS das frações de DP1, DP1 de anidrido, DP2 e DP2 de anidrido de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 1. A FIG. 37B ilustra uma ampliação das frações de DP2 e DP 2 anidro, como mostrado na FIG. 37A.

[0229] A FIG. 38A ilustra a detecção de espectro de GC- MS das frações de DP1, DP1 de anidrido, DP2 e DP2 de anidrido de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 3. A FIG. 38B ilustra uma ampliação das frações de DP2 e DP 2 anidro, como mostrado na FIG. 38A.

[0230] A FIG. 39A ilustra a detecção de espectro de GC- MS das frações de DP1, DP1 de anidrido, DP2 e DP2 de anidrido de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 4. A FIG. 39B ilustra uma ampliação das frações de DP2 e DP 2 anidro, como mostrado na FIG. 39A.

[0231] A FIG. 40A ilustra a detecção de espectro de GC- MS das frações de DP1, DP1 de anidrido, DP2 e DP2 de anidrido de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 7. A FIG. 40B ilustra uma ampliação das frações de DP2 e DP 2 anidro, como mostrado na FIG. 40A.

[0232] A FIG. 41 ilustra o efeito de temperatura de reação, teor de água e tempo de reação no teor de oligossacarídeos de DP2 que contêm subunidade anidra nas preparações de oligossacarídeo, em comparação com uma preparação de oligossacarídeo, de acordo com o Exemplo 2.

[0233] A FIG. 42 ilustra as atribuições de RMN de 1,6- anidro-beta-D-glicofuranose e 1,6-anidro-beta-D- glicopiranose.

[0234] A FIG. 43 ilustra espectros de MALDI-MS em comparação com a preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9 em energias de laser diferentes.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0235] A descrição e os exemplos a seguir ilustram as modalidades da presente revelação em detalhes. Deve ser entendido que a presente revelação não se limita às modalidades particulares descritas no presente documento e, como tal, pode variar. Os técnicos no assunto reconhecerão que há diversas modalidades e modificações da presente revelação, que são abrangidas em seu escopo.

[0236] Todos os termos destinam-se ao entendimento como seriam entendidos por um técnico no assunto. Salvo se definido de outro modo, todos os termos técnicos e/ou científicos usados no presente documento têm os mesmos significados daqueles comumente compreendidos por uma pessoa de habilidade comum na técnica à qual a invenção pertence.

[0237] Os cabeçalhos de seção usados no presente documento são para propósitos organizacionais apenas e não devem ser interpretados como limitantes da matéria descrita.

[0238] Embora diversos recursos da presente revelação possam ser descritos no contexto de uma única modalidade, os recursos também podem ser fornecidos separadamente ou em qualquer combinação adequada. Por outro lado, embora a presente revelação possa ser descrita no presente documento no contexto de modalidades separadas a título de clareza, a presente revelação também pode ser implementada em uma única modalidade.

[0239] As seguintes definições complementam aquelas na técnica e são direcionadas ao pedido atual e não devem ser atribuídas a qualquer caso relacionado ou não relacionado, por exemplo, a qualquer pedido ou patente do mesmo requerente. Embora quaisquer métodos e materiais similares ou equivalentes àqueles descritos no presente documento possam ser usados na prática para testagem da presente revelação, os materiais e métodos preferenciais são descritos no presente documento. Consequentemente, a terminologia usada no presente documento tem por finalidade descrever apenas modalidades particulares e não pretende ser limitativa. I. Definições

[0240] A terminologia usada no presente documento é para o propósito de descrever casos particulares apenas e não pretende ser limitante. Como usado no presente documento, as formas singulares “um”, “uma”, “o” e "a" pretendem incluir também as formas plurais, salvo se o contexto indicar claramente de outro modo. Adicionalmente, na medida em que os termos “que inclui”, “inclui”, “que tem”, “tem”, “com”, ou variantes dos mesmos são usados na descrição detalhada e/ou nas reivindicações, tais termos pretendem ser inclusivos de uma maneira similar ao termo “que compreende”.

[0241] Deve-se entender que os termos como “compreende”, “compreendido”, “que compreende,” e similares têm o significado atribuído aos mesmos na lei de Patente dos EUA;

isto é, os mesmos significam “inclui”, “incluído”, “que inclui” e similares e são destinados a serem inclusivos ou abertos e não excluem elementos não citados ou etapas de método adicionais; e tais termos como “que consiste essencialmente em” e “consiste essencialmente em” têm o significando atribuído aos mesmos na lei de Patente dos EUA; isto é, os mesmos permitem elementos não explicitamente listados, mas exclui elementos que são constatados na técnica anterior ou que afetam uma característica básica ou inovadora da invenção.

[0242] O termo “e/ou” como usado em uma frase como “A e/ou B” no presente documento se destina a incluir tanto A quanto B; A ou B; A (sozinho); e B (sozinho). De modo semelhante, o termo “e/ou”, como usado em uma frase como “A, B e/ou C” se destina a abranger cada uma das seguintes modalidades: A, B e C; A, B ou C; A ou B; A ou C; B ou C; A e B; A e C; B e C; A (sozinho); B (sozinho); e C (sozinho).

[0243] Quando faixas são usadas no presente documento para as propriedades físicas, como peso molecular, ou propriedades químicas, como fórmulas químicas, todas as combinações e subcombinações de faixas e modalidades específicas nas mesmas pretendem ser incluídas. O termo “cerca de”, quando se refere a um número ou uma faixa numérica significa que o número ou faixa numérica referida é uma aproximação dentro da variabilidade experimental (ou dentro do erro experimental estatístico), e assim o número ou faixa numérica, em alguns casos, variará entre 1 % e 15 % do número ou faixa numérica indicada. Em algumas modalidades, o termo “cerca de” significa em 15 %, 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 %, 0,5 %, 0,1 % ou 0,05 % de um determinado valor ou faixa.

[0244] Como usado no presente documento, o termo “administrar” inclui fornecer uma preparação de oligossacarídeo sintético, uma composição nutricional, um líquido ou uma composição de ração animal descritos no presente documento, a um animal, de modo que o animal possa ingerir a preparação de oligossacarídeo sintético, a composição nutricional, o líquido ou a composição de ração animal. Em tais modalidades, o animal ingere uma porção da preparação de oligossacarídeo sintético, da composição nutricional ou da composição de ração animal. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo sintético, a composição nutricional, o líquido ou a composição de ração animal é fornecida ao dito animal, de modo que o animal possa ingerir a preparação de oligossacarídeo sintético, a composição nutricional, o líquido ou a composição de ração animal à vontade. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo sintético, a composição nutricional, o líquido ou a composição de ração animal é administrada ao dito animal, como uma dieta prescrita. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo sintético, a composição nutricional, o líquido, ou a composição de ração animal é administrada ao dito animal por meio de alimentação manual, por exemplo, uma alimentação por seringa oral, uma alimentação por tubo, etc. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo sintético, a composição nutricional, o líquido, ou a composição de ração animal é administrada ao dito animal oral, por exemplo, à vontade ou manualmente. Em algumas modalidades, o animal ingere uma porção da preparação de oligossacarídeo sintético, da composição nutricional, do líquido ou da composição de ração animal a cada período de 24 horas ou em dias alternados em um período de 24 horas por pelo menos 7 dias, 14 dias, 21 dias, 30 dias, 45 dias, 60 dias, 75 dias, 90 dias ou 120 dias. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo pode ser dissolvida em água ou outro líquido, e o animal ingere uma porção da preparação de oligossacarídeo bebendo-se o líquido. Em algumas modalidades, o oligossacarídeo é fornecido ao animal por meio de sua água potável. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo, composição nutricional, líquido ou composição de ração animal é consumida à vontade.

[0245] Como usado no presente documento o termo “razão de conversão de ração (FCR),” se refere à razão de entrada de massa de ração (por exemplo, consumida pelo animal) para a saída de animal, em que a saída de animal é o produto de animal alvo. Por exemplo, a saída de animal para animais leiteiros é leite, enquanto a saída de animal para animais criados para produção de carne é massa corporal.

[0246] Como usado no presente documento, “eficácia de ração” se refere à razão da saída de animal à entrada de massa de ração (por exemplo, consumida pelo animal), em que a saída de animal é o produto de animal alvo.

[0247] Como usado no presente documento, o termo “subunidade anidra” se refere a um produto de desidratação térmica de um monossacarídeo (ou subunidade de monossacarídeo) ou um produto de caramelização de açúcar. Por exemplo, uma “subunidade anidra” pode ser um monossacarídeo anidro, como glicose anidra. Como outro exemplo, uma “subunidade anidra” pode ser ligada com uma ou mais subunidades de monossacarídeos regulares ou anidros por meio de ligação glicosídica.

[0248] O termo “oligossacarídeo” se refere a um monossacarídeo ou um composto que contém duas ou mais subunidades de monossacarídeo ligadas por ligações glicosídicas. Dessa forma, um oligossacarídeo inclui um monossacarídeo regular; um monossacarídeo anidro; ou um composto que contém duas ou mais subunidades de monossacarídeo, em que uma ou mais subunidades de monossacarídeo são opcionalmente, independentemente substituídas por uma ou mais subunidades anidras. Um oligossacarídeo pode ser funcionalizado. Como usado no presente documento, o termo oligossacarídeo abrange todas as espécies do oligossacarídeo, em que cada uma das subunidades de monossacarídeo no oligossacarídeo é independente e opcionalmente funcionalizada e/ou substituída com sua subunidade de monossacarídeo anidro correspondente.

[0249] Como usado no presente documento, o termo “preparação de oligossacarídeo” se refere a uma preparação que compreende pelo menos um oligossacarídeo.

[0250] Como usado no presente documento, o termo “glico- oligossacarídeo” se refere a uma glicose ou um composto que contém duas ou mais subunidades de monossacarídeo de glicose ligadas por ligações glicosídicas. Dessa forma, um glico- oligossacarídeo inclui uma glicose; uma glicose anidra; ou um composto que contém duas ou mais subunidades de monossacarídeo de glicose ligadas por ligações glicosídicas, em que uma ou mais das ditas subunidades de monossacarídeo de glicose são, cada uma, opcional e independentemente substituídas por uma subunidade de glicose anidra.

[0251] Como usado no presente documento, o termo “galacto-oligossacarídeo” se refere a uma galactose ou um composto que contém duas ou mais subunidades de monossacarídeo de galactose ligadas por ligações glicosídicas. Dessa forma, um galacto-oligossacarídeo inclui uma galactose; uma galactose anidra ou um composto que contém duas ou mais subunidades de galactose de monossacarídeo ligadas por ligações glicosídicas, em que pelo menos uma subunidade de galactoseose de monossacarídeo é opcionalmente substituída com uma subunidade galactose anidra.

[0252] Como usado no presente documento, o termo “preparação de glico-galacto-oligossacarídeo” se refere a uma composição que é produzida a partir de uma reação de condensação de açúcar completa ou incompleta de glicose e galactose. Consequentemente, em algumas modalidades, uma preparação de glico-galactose-oligossacarídeo compreende glico-oligossacarídeos, galacto-oligossacarídeos, compostos que contêm uma ou mais subunidades de monossacarídeo de glicose e uma ou mais subunidades de monossacarídeo de galactose ligadas por ligações glicosídicas, ou uma combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, uma preparação de glico-galactose-oligossacarídeo compreende glico-oligossacarídeos e compostos que contêm uma ou mais subunidades de monossacarídeo de glicose e uma ou mais subunidades de monossacarídeo de galactose ligadas por ligações glicosídicas. Em algumas modalidades, uma preparação de glico-galactose-oligossacarídeo compreende galacto-oligossacarídeos e compostos que contêm uma ou mais subunidades de monossacarídeo de glicose e uma ou mais subunidades de monossacarídeo de galactose ligadas por ligações glicosídicas. Em algumas modalidades, uma preparação de glico-galactose-oligossacarídeo compreende compostos que contêm uma ou mais subunidades de monossacarídeo de glicose e uma ou mais subunidades de monossacarídeo de galactose ligadas por ligações glicosídicas.

[0253] Como usado no presente documento, o termo “unidade de monossacarídeo” e “subunidade de monossacarídeo” são usados intercambiavelmente. Uma “subunidade de monossacarídeo” se refere a um monômero de monossacarídeo em um oligossacarídeo. Para um oligossacarídeo que tem um grau de polimerização de 1, o oligossacarídeo pode ser denominado como uma subunidade de monossacarídeo ou monossacarídeo. Para um oligossacarídeo que tem um grau de polimerização de 2 ou superior, suas subunidades de monossacarídeo são ligadas por meio de ligações glicosídicas.

[0254] Como usado no presente documento, o termo “monossacarídeo regular” se refere a um monossacarídeo que não contém uma subunidade anidra. O termo “dissacarídeo regular” se refere a um dissacarídeo que não contém uma subunidade anidra. Consequentemente, o termo “subunidade regular” se refere a uma subunidade que não é uma subunidade anidra.

[0255] O termo “abundância relativa” ou “abundância”, como usado no presente documento, se refere à abundância de uma espécie em termos de quão comum ou rara é a espécie. Por exemplo, uma fração de DP1 que compreende 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa pode se referir a uma pluralidade de oligossacarídeos de DP1, em que 10 % dos oligossacarídeos de

DP1 são monossacarídeos anidros. A abundância relativa, por exemplo, para uma determinada fração de oligossacarídeos de DP, pode ser determinada por instrumentalizações analíticas adequadas, por exemplo, espectrometria de massa e cromatografia líquida, como LC-MS/MS, GC-MS, HPLC-MS e MALDI-MS. Em algumas modalidades, a abundância relativa é determinada por integração da área sob os picos das cromatografias (por exemplo, LC-MS/MS, GC-MS e HPLC-MS) que correspondem às frações de interesse. Em algumas modalidades, a abundância relativa é determinada pelas intensidades de pico (por exemplo, MALDI-MS). Em algumas modalidades, a abundância relativa é determinada por uma combinação de métodos analíticos, como uma determinação de peso após a separação por cromatografia líquida.

[0256] Como usado no presente documento, o termo um “oligossacarídeo de DPn anidro”, uma “espécie de DPn anidro” ou um “oligossacarídeo que contém subunidade anidra de DPn” se refere a um oligossacarídeo que tem um grau de polimerização de n e compreende uma ou mais subunidades anidras. Dessa forma, uma glicose anidra é um oligossacarídeo que contém subunidade anidra de DP1 e um celotriosano é um oligossacarídeo que contém subunidade anidra de DP3.

[0257] Conforme usado no presente documento, as formas singulares “um”, “uma”, “o” e “a” incluem referências no plural, a menos que o contexto indique claramente o contrário. Desse modo, por exemplo, a referência a “um agente” inclui uma pluralidade de tais agentes, e a referência a “o oligossacarídeo” inclui a referência a um ou mais oligossacarídeos (ou a uma pluralidade de oligossacarídeos) e equivalentes dos mesmos conhecidos pelos técnicos no assunto e outros. II. Preparação de Oligossacarídeo

[0258] São revelados no presente documento preparações de oligossacarídeo adequado para uso em composições nutricionais. Em algumas modalidades, a dita preparação de oligossacarídeo compreende pelo menos n frações de oligossacarídeos, em que cada uma tem um grau distinto de polimerização selecionado a partir de 1 a n (frações de DP1 a DPn), em que n é um número inteiro maior que ou igual a 2. Em algumas modalidades, n é um número inteiro maior que 2. Em algumas modalidades, cada uma dentre as frações 1 a n na preparação de oligossacarídeo compreende de 1 % a 90 % oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa como medido por espectrometria de massa. Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos em cada fração diminui monotonicamente com seu grau de polimerização.

[0259] Em algumas modalidades, n é um número inteiro maior que ou igual a 3. Em algumas modalidades, n é um número inteiro em uma faixa de 1 a 100, como 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40 ou 50. Em algumas modalidades, cada uma das frações de 1 a n na preparação de oligossacarídeo compreende independentemente de 0,1 % a 90 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa, como medido por espectrometria de massa ou por LC- MS/MS ou GC-MS. Em algumas modalidades, cada uma das frações de 1 a n na preparação de oligossacarídeo compreende independentemente de cerca de 0,1 % a cerca de 15 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra. Em algumas modalidades, cada uma das frações de 1 a n na preparação de oligossacarídeo compreende independentemente de cerca de 0,5 % a cerca de 15 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra. Em algumas modalidades, as frações de DP1 e DP2 compreendem, cada uma, independentemente de cerca de 0,1 % a cerca de 15 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa, como medido por espectrometria de massa, como MALDI-MS ou por LC-MS/MS ou GC-MS. Em algumas modalidades, as frações de DP1 e DP2 compreendem, cada uma, independentemente de cerca de 0,5 % a cerca de 15 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra. Em algumas modalidades, as frações de DP1 e DP2 compreendem, cada uma, independentemente de cerca de 0,1 %, 0,2 %, 0,3 %, 0,4 %, 0,5 %, 0,8 %, 1 %, 2 % ou 3 % a cerca de 8 %, 9 %, 10 %, 11 %, 12 %, 13 %, 14 % ou 15 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa, como medido por espectrometria de massa, LC-MS/MS ou GC-MS. Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos em cada fração diminui monotonicamente com seu grau de polimerização.

[0260] Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo é uma preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo sintético se refere a uma pluralidade de oligossacarídeos produzidos por um processo que não exige organismos vivos. Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo sintético se refere a uma pluralidade de oligossacarídeos produzidos por um processo que não exige enzimas. Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo sintético se refere a uma pluralidade de oligossacarídeos produzidos por um processo químico. Em determinadas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo sintético se refere a uma pluralidade de oligossacarídeos produzidos pela condensação de açúcares. A. Utilidade Prebiótica de Oligossacarídeos

[0261] São revelados no presente documento preparações de oligossacarídeo que compreende componentes de açúcar anidro e/ou componentes de produto de desidratação de açúcar que exibem modulação funcional complexa de uma comunidade microbiana, como o microbioma intestinal de animal. As preparações de oligossacarídeo fornecem uma utilidade para regular a utilização de carbono fermentável por microflora e fluxo metabólico direto para espécies benéficas, desse modo, fornecendo um benefício de saúde e nutricional mediado por microbioma.

[0262] Os carboidratos indigestíveis podem atuar como prebióticos fornecendo-se uma fonte de carbono fermentável a uma comunidade microbiana. Por exemplo, as dietas ricas em fibra vegetal solúvel foram identificadas quanto a suas capacidades para nutrir a microflora intestinal. Adicionalmente, prebióticos bifidogênicos suportam o crescimento de bifidobactérias (por exemplo, membros do gênero Bifidobacterium) e prebióticos lactogênicos suportam o crescimento de espécies de Lactobacillus.

[0263] A fibra prebiótica pode ser fermentada para espécies químicas benéficas, como ácidos graxos de cadeia curta (SCFAs). Fibras prebióticas incluem: amidos resistentes; celulose; pectinas, como ramnogalactanos, arabinogalactanoos, arabinanos; hemiceluloses, como arabinoxilanos, xiloglucanos, glucomananos, galactomananos;

xilanos, como oligossacarídeos de espiga de milho; b- glucanos, como b-glucanos de cereal, b-glucanos de levedura, b-glucanos bacterianos; polifructanos, como inulina e levano; e gomas, como alginato. Inulina é uma fibra prebiótica bifidogênica comum.

[0264] Em outros casos, os prebióticos impedindo a habilidade de bactérias patogênicas de se enxertarem e, desse modo, infectar um organismo hospedeiro por meio de mecanismos de antiaderência, como a ligação competitiva de sítios receptores de superfície celular. Determinados galacto- oligossacarídeos fornecem antiaderência eficaz de vários organismos enteropatogênicos, como espécie Escherichia.

[0265] Os prebióticos são tipicamente fornecidos para um animal hospedeiro por incorporação na dieta, mediante o que esses exibem uma resposta dependente de dose (pelo menos até um limite de saturação). Por exemplo, fornecendo-se uma dose superior de um prebiótico bifidogênico, como inulina tende a fornecer um aumento maior na população de espécies Bifidobacterium. As doses superiores de inulina correspondem a produção superior de SCFAs através de fermentação. Isso se deve ao fato de que o prebiótico fornece uma fonte de carbono metabólico e mais carbono se traduz em mais produto fermentado. De modo similar, fornecendo-se uma dose superior de um prebiótico antiaderência fornece uma probabilidade de se ligar competitivamente a sítios receptores de superfície.

[0266] Determinadas espécies de carboidrato que compreendem subunidades monoméricas modificadas podem afetar a maneira na qual os sistemas microbianos utilizam outros carboidratos de outra forma disponíveis para os mesmos como uma fonte de prebiótico. Por exemplo, tal espécie de carboidrato pode ser uma espécie de carboidrato modificado que modula o sistema de utilização de amido bacteriano (SUS), isto é, as proteínas responsáveis pelo reconhecimento de superfície celular, clivagem glicosídica e importação de metabólitos de amido.

[0267] As composições de carboidrato com a capacidade para modulação complexa da microbiota de animais têm utilidade como aditivos de ração que aprimoram a saúde e a nutrição de animal por meio de seus impactos no microbioma de animal. Por exemplo, a modulação de produção de butirato pela microflora intestinal confere benefícios de saúde ao animal promovendo-se uma mucosa intestinal saudável, função de barreira, e por meio de efeitos anti-inflamatórios. A modulação de produção de ácido propiônico afeta a energia metabólica extraída da dieta do animal por meio de gliconeogênese aumentada. As comunidades microbianas relevantes incluem, por exemplo, microbiota ileal, jejunal e cecal e/ou fecal em aves, porcos, cães, gatos, cavalos ou a microbiota ruminante de gado, vacas, ovelhas, etc. Outras comunidades microbianas incluem a microflora dérmica, microflora nasal, etc.

[0268] Ademais, no presente documento, as preparações de oligossacarídeo reveladas são vantajosas devido ao fato de que as mesmas podem ser seletivamente analisadas e quantificadas em uma composição nutricional complexa, como ração animal completa devido à presença de subunidades anidras. É de utilidade comercial ensaiar quanto à presença e/ou concentração de aditivos de ração, como preparações de oligossacarídeo. Tal ensaio pode ser realizado para o propósito de controle de qualidade, para determinar a possibilidade de o aditivo ter sido mesclado consistentemente com a composição nutricional base para fornecer uma composição nutricional final que compreende o aditivo na dose ou nível desejado de inclusão.

[0269] No entanto, as próprias composições nutricionais compreendem uma quantidade e diversidade grandes de estruturas de carboidrato (por exemplo, amido, fibras vegetais e pectinas). É, portanto, particularmente desafiador distinguir quantidades pequenas de aditivos de ração à base de oligossacarídeo do amplo mar de outros carboidratos presentes como base da composição nutricional. Dessa forma, a preparação de oligossacarídeo revelada no presente documento fornece uma forma para se distinguir das outras fontes de carboidratos na composição nutricional através das subunidades anidras. B. Distribuição de Grau de Polimerização (DP)

[0270] Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende pelo menos n frações de oligossacarídeos, em que cada uma tem um grau distinto de polimerização selecionado a partir de 1 a n (frações de DP1 a DPn). Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende n frações de oligossacarídeos, cada uma tem um grau distinto de polimerização selecionado a partir de 1 a n (frações de DP1 a DPn). Por exemplo, em algumas modalidades, a fração de DP1 compreende um ou mais monossacarídeos e/ou um ou mais monossacarídeos anidros. Como outro exemplo, em algumas modalidades, a fração de DP1 compreende glicose, galactose, frutose, 1,6-anidro-β-D- glicofuranose, 1,6-anidro-β-D-glicopiranose ou qualquer combinação dos mesmos. Como ainda outro exemplo, em algumas modalidades, a fração de DP2 compreende um ou mais regular dissacarídeos e um ou mais dissacarídeos que contêm subunidades anidra. Em algumas modalidades, a fração de DP2 compreende lactose.

[0271] Em algumas modalidades, n é pelo menos 2, pelo menos 3, pelo menos 5, pelo menos 6, pelo menos 7, pelo menos 8, pelo menos 9, pelo menos 10, pelo menos 11, pelo menos 12, pelo menos 13, pelo menos 14, pelo menos 15, pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, pelo menos 23, pelo menos 24, pelo menos 25, pelo menos 26, pelo menos 27, pelo menos 28, pelo menos 29, pelo menos 30, pelo menos 31, pelo menos 32, pelo menos 33, pelo menos 34, pelo menos 35, pelo menos 36, pelo menos 37, pelo menos 38, pelo menos 39, pelo menos 40, pelo menos 41, pelo menos 42, pelo menos 43, pelo menos 44, pelo menos 45, pelo menos 46, pelo menos 47, pelo menos 48, pelo menos 49, pelo menos 50, pelo menos 51, pelo menos 52, pelo menos 53, pelo menos 54, pelo menos 55, pelo menos 56, pelo menos 57, pelo menos 58, pelo menos 59, pelo menos 60, pelo menos 61, pelo menos 62, pelo menos 63, pelo menos 64, pelo menos 65, pelo menos 66, pelo menos 67, pelo menos 68, pelo menos 69, pelo menos 70, pelo menos 71, pelo menos 72, pelo menos 73, pelo menos 74, pelo menos 75, pelo menos 76, pelo menos 77, pelo menos 78, pelo menos 79, pelo menos 80, pelo menos 81, pelo menos 82, pelo menos 83, pelo menos 84, pelo menos 85, pelo menos 86, pelo menos 87, pelo menos 88, pelo menos 89, pelo menos 90, pelo menos 91, pelo menos 92, pelo menos 93, pelo menos 94, pelo menos 95, pelo menos 96, pelo menos 97, pelo menos 98, pelo menos 99 ou pelo menos

100. Em algumas modalidades, n é 2, 3, 5, 6, 7, 8, 9, 10,

11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou

100. Em algumas modalidades, n é menor que 10, menos que 11, menor que 12, menor que 13, menor que 14, menor que 15, menor que 16, menor que 17, menor que 18, menor que 19, menor que 20, menor que 21, menor que 22, menor que 23, menor que 24, menor que 25, menor que 26, menor que 27, menor que 28, menor que 29, menor que 30, menor que 31, menor que 32, menor que 33, menor que 34, menor que 35, menor que 36, menor que 37, menor que 38, menor que 39, menor que 40, menor que 41, menor que 42, menor que 43, menor que 44, menor que 45, menor que 46, menor que 47, menor que 48, menor que 49, menor que 50, menor que 51, menor que 52, menor que 53, menor que 54, menor que 55, menor que 56, menor que 57, menor que 58, menor que 59, menor que 60, menor que 61, menor que 62, menor que 63, menor que 64, menor que 65, menor que 66, menor que 67, menor que 68, menor que 69, menor que 70, menor que 71, menor que 72, menor que 73, menor que 74, menor que 75, menor que 76, menor que 77, menor que 78, menor que 79, menor que 80, menor que 81, menor que 82, menor que 83, menor que 84, menor que 85, menor que 86, menor que 87, menor que 88, menor que 89, menor que 90, menor que 91, menor que 92, menor que 93, menor que 94, menor que 95, menor que 96, menor que 97, menor que 98, menor que 99 ou menor que 100. Em algumas modalidades, n é de 2 a 100, de 5 a 90, de 10 a 90, de 10 a 80, de 10 a 70, de 10 a 60, de 10 a 50, de 10 a 40, de 10 a 30, de 15 a

60, de 15 a 50, de 15 a 45, de 15 a 40, de 15 a 35 ou de 15 a 30.

[0272] Uma distribuição do grau de polimerização da preparação de oligossacarídeo pode ser determinada por qualquer método e instrumentação analítica adequada, incluindo, porém sem limitação, método de grupo final, pressão osmótica (osmometria), ultracentrifugação, medições de viscosidade, método de dispersão de luz, cromatografia por exclusão de tamanho (SEC), SEC-MALLS, fracionamento de fluxo de campo (FFF), fracionamento de fluxo de campo de fluxo assimétrico (A4F), cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), e espectrometria de massa (MS). Por exemplo, a distribuição do grau de polimerização pode ser determinada e/ou detectada por espectrometria de massa, como dessorção/ionização de laser assistida por matriz (MALDI)- MS, cromatografia líquida (LC)-MS, ou cromatografia gasosa (GC)-MS. Para outro exemplo, a distribuição do grau de polimerização pode ser determinada e/ou detectada por SEC, como cromatografia por permeação de gel (GPC). Como ainda outro exemplo, a distribuição do grau de polimerização pode ser determinada e/ou detectada por HPLC, FFF ou A4F. Em algumas modalidades, a distribuição do grau de polimerização é determinada e/ou detectada por MALDI-MS. Em algumas modalidades, a distribuição do grau de polimerização é determinada e/ou detectada por GC-MS ou LC-MS. Em algumas modalidades, a distribuição do grau de polimerização é determinada e/ou detectada por SEC. Em algumas modalidades, a distribuição do grau de polimerização é determinada e/ou detectada por HPLC. Em algumas modalidades, a distribuição do grau de polimerização é determinada e/ou detectada por uma combinação de instrumentalizações analíticas, como MALDI-MS e SEC. Em algumas modalidades, o grau de polimerização da preparação de oligossacarídeo pode ser determinado com base em seu peso molecular e distribuição de peso molecular. Por exemplo, a FIG. 2 mostra um espectro de MALDI-MS que ilustra os graus de polimerizações de várias frações e a presença de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra (os picos de deslocamento de MW de - 18 g/mol) em todas as frações observadas.

[0273] Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos em uma maioria das frações diminui monotonicamente com seu grau de polimerização. Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos menor que 6, menor que 5, menor que 4, menor que 3, ou menor que 2 frações da preparação de oligossacarídeo não diminui monotonicamente com seu grau de polimerização.

[0274] Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos em pelo menos 5, pelo menos 10, pelo menos 15, pelo menos 20, pelo menos 25, pelo menos 30, pelo menos 35, pelo menos 40, pelo menos 45 ou pelo menos 50 frações de DP diminui monotonicamente com seu grau de polimerização. Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos em pelo menos 5, pelo menos 10, pelo menos 15, pelo menos 20, pelo menos 25, pelo menos 30, pelo menos 35, pelo menos 40, pelo menos 45 ou pelo menos 50 frações de DP consecutivas diminui monotonicamente com seu grau de polimerização. Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos em pelo menos 5, pelo menos 10, pelo menos 20 ou pelo menos 30 frações de DP diminui monotonicamente com seu grau de polimerização. Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos em pelo menos 5, pelo menos 10, pelo menos 20 ou pelo menos 30 frações de DP consecutivas diminui monotonicamente com seu grau de polimerização.

[0275] Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos em cada uma das n frações diminui monotonicamente com seu grau de polimerização. Por exemplo, a FIG. 15 fornece um exemplo de uma distribuição de DP em que a abundância relativa de oligossacarídeos em cada uma das n frações diminui monotonicamente com seu DP. Por exemplo, em algumas modalidades, apenas a abundância relativa de oligossacarídeos na fração de DP3 não diminui monotonicamente com seu grau de polimerização, isto é, a abundância relativa de oligossacarídeos na fração de DP3 é menor que a abundância relativa de oligossacarídeos na fração de DP4. Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos na fração de DP2 é menor que a abundância relativa de oligossacarídeos na fração de DP3. Por exemplo, a FIG. 16 ilustra um grau de polimerização distribuição em que a abundância relativa de oligossacarídeos na fração de DP2 não diminui monotonicamente com seu grau de polimerização.

[0276] Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento tem um teor de fração de DP1 de cerca de 1 % a cerca de 50 %, de cerca de 1 % a cerca de 40 %, de cerca de 1 % a cerca de 35 %, de cerca de 1 % a cerca de 30 %, de cerca de 1 % a cerca de 25 %, de cerca de 1 % a cerca de 20 %, de cerca de 1 % a cerca de 15 %, de cerca de 5 % a cerca de 50 %, de cerca de 5 % a cerca de 40 %, de cerca de 5 % a cerca de 35 %, de cerca de 5 % a cerca de 30 %, de cerca de 5 % a cerca de 25 %, de cerca de 5 % a cerca de 20 %, de cerca de 5 % a cerca de 15 %, de cerca de 10 % a cerca de 50 %, de cerca de 10 % a cerca de 40 %, de cerca de 10 % a cerca de 35 %, de cerca de 10 % a cerca de 30 %, de cerca de 10 % a cerca de 25 %, de cerca de 10 % a cerca de 20 % ou de cerca de 10 % a cerca de 15 % em peso ou por abundância relativa. Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo tem um teor de fração de DP1 de cerca de 10 % a cerca de 35 %, de cerca de 10 % a cerca de 20 % ou de cerca de 10 % a cerca de 15 % em peso ou por abundância relativa. Em algumas modalidades, o teor da fração de DP1 é determinado por MALDI- MS. Em algumas modalidades, o teor da fração de DP1 é determinado por HPLC. Em algumas modalidades, o teor da fração de DP1 é determinado por LC-MS/MS ou GC-MS.

[0277] Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento tem um teor de fração de DP2 de cerca de 1 % a cerca de 35 %, de cerca de 1 % a cerca de 30 %, de cerca de 1 % a cerca de 25 %, de cerca de 1 % a cerca de 20 %, de cerca de 1 % a cerca de 15 %, de cerca de 1 % a cerca de 10 %, de cerca de 5 % a cerca de 30 %, de cerca de 5 % a cerca de 25 %, de cerca de 5 % a cerca de 20 %, de cerca de 5 % a cerca de 15 % ou de cerca de 5 % a cerca de 10 % em peso ou por abundância relativa. Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo tem um teor de fração de DP2 de cerca de 5 % a cerca de 25 %, de cerca de 5 % a cerca de 20 %, de cerca de 5 % a cerca de 15 % ou de cerca de 5 % a cerca de 10 % em peso ou por abundância relativa. Em algumas modalidades, o teor da fração de DP2 é determinado por MALDI-MS. Em algumas modalidades, o teor da fração de DP2 é determinado por HPLC. Em algumas modalidades, o teor da fração de DP2 é determinado por LC-MS/MS ou GC-MS.

[0278] Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento tem um teor de fração de DP3 de cerca de 1 % a cerca de 30 %, de cerca de 1 % a cerca de 25 %, de cerca de 1 % a cerca de 20 %, de cerca de 1 % a cerca de 15 %, de cerca de 1 % a cerca de 10 %, de cerca de 5 % a cerca de 30 %, de cerca de 5 % a cerca de 25 %, de cerca de 5 % a cerca de 20 %, de cerca de 5 % a cerca de 15 % ou de cerca de 5 % a cerca de 10 % em peso ou por abundância relativa. Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo tem um teor de fração de DP3 de cerca de 1 % a cerca de 15 %, de cerca de 1 % a cerca de 10 %, de cerca de 5 % a cerca de 15 % ou de cerca de 5 % a cerca de 10 % em peso ou por abundância relativa. Em algumas modalidades, o teor da fração de DP3 é determinado por MALDI- MS. Em algumas modalidades, o teor da fração de DP3 é determinado por HPLC. Em algumas modalidades, o teor da fração de DP3 é determinado por LC-MS/MS ou GC-MS.

[0279] Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento tem um teor de fração de DP4 de cerca de 0,1 % a cerca de 20 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 15 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 10 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 5 %, de cerca de 1 % a cerca de 20 %, de cerca de 1 % a cerca de 15 %, de cerca de 1 % a cerca de 10 % ou de cerca de 1 % a cerca de 5 % em peso ou por abundância relativa. Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo tem um teor de fração de DP4 de cerca de 1 % a cerca de 15 %, de cerca de 1 % a cerca de

10 % ou de cerca de 1 % a cerca de 5 % em peso ou por abundância relativa. Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento tem um teor de fração de DP5 de cerca de 0,1 % a cerca de 15 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 10 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 5 %, de cerca de 1 % a cerca de 15 %, de cerca de 1 % a cerca de 10 % ou de cerca de 1 % a cerca de 5 % em peso ou por abundância relativa. Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo tem um teor de fração de DP5 de cerca de 1 % a cerca de 10 % ou de cerca de 1 % a cerca de 5 % em peso ou por abundância relativa. Em algumas modalidades, o teor da fração de DP4 e/ou DP5 é determinado por MALDI-MS. Em algumas modalidades, o teor da fração de DP4 e/ou DP5 é determinado por HPLC. Em algumas modalidades, o teor da fração de DP4 e/ou DP5 é determinado por LC-MS/MS ou GC-MS.

[0280] Em algumas modalidades, a razão de fração de DP2 para a fração de DP1 na preparação de oligossacarídeo é de cerca de 0,01 a cerca de 0,8, de cerca de 0,02 a cerca de 0,7, de cerca de 0,02 a cerca de 0,6, de cerca de 0,02 a cerca de 0,5, de cerca de 0,02 a cerca de 0,4, de cerca de 0,02 a cerca de 0,3, de cerca de 0,02 a cerca de 0,2, de cerca de 0,1 a cerca de 0,6, de cerca de 0,1 a cerca de 0,5, de cerca de 0,1 a cerca de 0,4 ou de cerca de 0,1 a cerca de 0,3 por seu peso ou abundância relativa. Em algumas modalidades, a razão de fração de DP2 para fração de DP1 na preparação de oligossacarídeo é de cerca de 0,02 a cerca de 0,4 por seu peso ou abundância relativa.

[0281] Em algumas modalidades, a razão de fração de DP3 para fração de DP2 na preparação de oligossacarídeo é de cerca de 0,01 a cerca de 0,7, de cerca de 0,01 a cerca de

0,6, de cerca de 0,01 a cerca de 0,5, de cerca de 0,01 a cerca de 0,4, de cerca de 0,01 a cerca de 0,3 ou de cerca de 0,01 a cerca de 0,2 por seu peso ou abundância relativa. Em algumas modalidades, a razão de fração de DP3 para fração de DP2 na preparação de oligossacarídeo é de cerca de 0,01 a cerca de 0,3 por seu peso ou abundância relativa.

[0282] Em algumas modalidades, o teor agregado de frações de DP1 e DP2 na preparação de oligossacarídeo é menor que 70 %, menor que 60 %, menor que 50 %, menor que 40 %, menor que 30 %, menor que 20 % ou menor que 10 % em peso ou por abundância relativa. Em algumas modalidades, o teor agregado de frações de DP1 e DP2 na preparação de oligossacarídeo é menor que 50 %, menor que 30 % ou menor que 10 % em peso ou por abundância relativa.

[0283] Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento tem um valor de DP médio em uma faixa de 2 a 10. Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo tem um valor de DP médio de cerca de 2 a cerca de 8, de cerca de 2 a cerca de 5 ou de cerca de 2 a cerca de 4. Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo tem um valor de DP médio de cerca de 3,5. O valor de DP médio pode ser determinado por SEC ou por análise elementar. C. Nível de Subunidade anidra

[0284] Em algumas modalidades, cada uma das n frações de oligossacarídeos compreende independentemente um nível de subunidade anidra. Por exemplo, em algumas modalidades, a fração de DP1 compreende 10 % oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa, e a fração de DP2 compreende 15 % oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Como outro exemplo, em algumas modalidades, cada fração de DP1, DP2 e DP3 compreende 5 %, 10 %, e 2 % oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa, respectivamente. Em outras modalidades, duas ou mais frações de oligossacarídeos podem compreender nível similar de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra. Por exemplo, em algumas modalidades, as frações de DP1 e DP3 compreendem, cada uma, cerca de 5 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

[0285] Em algumas modalidades, cada uma das 1 a n frações em uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende independentemente cerca de 0,1 % a 15 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa como medido por espectrometria de massa, LC-MS/MS ou GC-MS. Em algumas modalidades, cada uma das 1 a n frações na preparação de oligossacarídeo compreende independentemente cerca de 0,5 % a 15 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa como medido por espectrometria de massa, LC-MS/MS ou GC-MS. Em algumas modalidades, LC-MS/MS é usada para determinar a abundância relativa para oligossacarídeos nas frações de DP1, DP2 e/ou DP3. Em algumas modalidades, GC-MS é usada para determinar a abundância relativa para oligossacarídeos nas frações de DP1, DP2 e/ou DP3. Em algumas modalidades, MALDI-MS é usada para determinar a abundância relativa para oligossacarídeos na fração de DP4, ou em uma fração de DP superior. Em algumas modalidades, a abundância relativa de uma determinada fração é determinada integrando-se a área sob os picos do cromatograma de LC-MS/MS que são designados como correspondentes a tal fração. Em algumas modalidades, a abundância relativa de uma determinada fração é determinada integrando-se a área sob os picos do cromatograma de GC-MS que são designados como correspondentes a tal fração.

[0286] O nível de subunidades anidras pode ser determinado por quaisquer métodos analíticos adequados, como espectroscopia de ressonância magnética nuclear (RMN), espectrometria de massa, HPLC, FFF, A4F ou qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, o nível de subunidades anidras é determinado, pelo menos em parte, por espectrometria de massa, como MALDI-MS. Em algumas modalidades, o nível de subunidades anidras é determinado, pelo menos em parte, por RMN. Em algumas modalidades, o nível de subunidades anidras que contém oligossacarídeos é determinado, pelo menos em parte, por HPLC. Em algumas modalidades, o nível de subunidades anidras que contém oligossacarídeos é determinado por MALDI-MS, como ilustrado pelos picos de deslocamento de MW de -18 g/mol na FIG. 2. Em algumas modalidades, a presença e o tipo de espécies de subunidades anidras podem ser determinados e/ou detectados por RMN, como ilustrado pelo Exemplo 11, FIG. 3 e FIG. 4. Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra é determinada por MALDI-MS. Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra é determinada por LC-MS/MS, como ilustrado nas FIGs. 33A-33C, 34A-34C, 35A-35C e 36A-36C. Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra é determinada por GC-MS, como ilustrado nas FIGs. 37A-37B, 38A-38B, 39A-39B e 40A-40B.

[0287] Em algumas modalidades, pelo menos uma fração de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende menos que 80 %, menos que 70 %, menos que 60 %, menos que 50 %, menos que 40 %, menos que 30 %, menos que 20 %, menos que 19 %, menos que 18 %, menos que 17 %, menos que 16 %, menos que 15 %, menos que 14 %, menos que 13 %, menos que 12 %, menos que 11 %, menos que 10 %, menos que 9 %, menos que 8 %, menos que 7 %, menos que 6 %, menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 %, menos que 2 % ou menos que 1 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em algumas modalidades, pelo menos uma fração de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende menos que 10 %, menos que 9 %, menos que 8 %, menos que 7 %, menos que 6 %, menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 % ou menos que 2 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em outras modalidades, pelo menos uma fração de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende mais que 0,5 %, mais que 0,8 %, mais que 1 %, mais que 2 %, mais que 3 %, mais que 4 %, mais que 5 %, mais que 6 %, mais que 7 %, mais que 8 %, mais que 9 %, mais que 10 %, mais que 11 %, mais que 12 %, mais que 13 %, mais que 14 %, mais que 15 %, mais que 16 %, mais que 17 %, mais que 18 %, mais que 19 %, mais que 20 %, mais que 30 %, mais que 40 %, mais que 50 %, mais que 60 %, mais que 70 % ou mais que 80 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em outras modalidades, pelo menos uma fração de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende mais que 20 %, mais que 21 %, mais que 22 %, mais que 23 %,

mais que 24 %, mais que 25 %, mais que 26 %, mais que 27 %, mais que 28 %, mais que 29 % ou mais que 30 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em algumas modalidades, pelo menos uma fração (como DP1, DP2 e/ou DP3) da preparação de oligossacarídeo compreende cerca de 0,1 %, cerca de 0,2 %, cerca de 0,3 %, cerca de 0,4 %, cerca de 0,5 %, cerca de 0,6 %, cerca de 0,7 %, cerca de 0,8 %, cerca de 0,9 %, cerca de 1 %, cerca de 2 %, cerca de 3 %, cerca de 4 %, cerca de 5 %, cerca de 6 %, cerca de 7 %, cerca de 8 %, cerca de 9 %, cerca de 10 %, cerca de 11 %, cerca de 12 %, cerca de 13 %, cerca de 14 %, cerca de 15 %, cerca de 16 %, cerca de 17 %, cerca de 18 %, cerca de 19 %, cerca de 20 %, cerca de 21 %, cerca de 22 %, cerca de 23 %, cerca de 24 %, cerca de 25 % ou cerca de 30 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em algumas modalidades, pelo menos uma fração (como DP1, DP2 e/ou DP3) da preparação de oligossacarídeo compreende cerca de 0,1 %, cerca de 0,2 %, cerca de 0,3 %, cerca de 0,4 %, cerca de 0,5 %, cerca de 0,6 %, cerca de 0,7 %, cerca de 0,8 %, cerca de 0,9 %, cerca de 1 %, cerca de 1,5 %, cerca de 2 %, cerca de 3 %, cerca de 4 %, cerca de 5 %, cerca de 6 %, cerca de 7 %, cerca de 8 %, cerca de 9 % ou cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em algumas modalidades, pelo menos uma fração (como DP1, DP2 e/ou DP3) da preparação de oligossacarídeo compreende de cerca de 0,1 % a cerca de 90 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 90 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 80 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 70 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 60 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 50 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 40 %, de cerca de 0,5 %

a cerca de 30 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 20 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 10 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 9 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 8 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 7 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 6 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 5 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 4 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 3 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 2 %, de cerca de 1 % a cerca de 10 %,de cerca de 2 % a cerca de 9 %, de cerca de 2 % a cerca de 8 %, de cerca de 2 % a cerca de 7 %, de cerca de 2 % a cerca de 6 %, de cerca de 2 % a cerca de 5 %, de cerca de 2 % a cerca de 4 %, de cerca de 2 % a cerca de 3 % ou de cerca de 5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, as frações de DP1 e DP2 da preparação de oligossacarídeo compreendem, cada uma, independentemente oligossacarídeos que contêm subunidade anidra em uma faixa de cerca de 0,1 %, 0,5 %, 0,6 %, 0,7 %, 0,8 %, 0,9 %, 1 %, 1,1 %, 1,2 %, 1,3 %, 1,4 % ou 1,5 % a cerca de 8 %, 9 %, 10 %, 11 %, 12 % ou 15 % por abundância relativa como medido por espectrometria de massa, LC-MS/MS, ou GC-MS. Em algumas modalidades, as frações de DP1 e DP2 compreendem, cada uma, independentemente de cerca de 0,5 % a cerca de 15 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa, como medido por espectrometria de massa ou por LC-MS/MS ou GC-MS.

[0288] Em algumas modalidades, cada fração de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende menos que 80 %, menos que 70 %, menos que 60 %, menos que 50 %, menos que 40 %, menos que 30 %, menos que 20 %, menos que 19 %, menos que 18 %, menos que 17 %, menos que 16 %, menos que 15 %, menos que 14 %, menos que 13 %,

menos que 12 %, menos que 11 %, menos que 10 %, menos que 9 %, menos que 8 %, menos que 7 %, menos que 6 %, menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 % ou menos que 2 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em algumas modalidades, cada fração de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende menos que 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6 %, 5 %, 4 %, 3 % ou 2 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em outras modalidades, cada fração de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende mais que 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 %, 10 %, 11 %, 12 %, 13 %, 14 %, 15 %, 16 %, 17 %, 18 %, 19 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 % ou 80 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em outras modalidades, cada fração de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende mais que 20 %, 21 %, 22 %, 23 %, 24 %, 25 %, 26 %, 27 %, 28 %, 29 % ou 30 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em algumas modalidades, cada fração de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende cerca de 0,1 %, cerca de 0,2 %, cerca de 0,3 %, cerca de 0,4 %, cerca de 0,5 %, cerca de 0,6 %, cerca de 0,7 %, cerca de 0,8 %, cerca de 0,9 %, cerca de 1 %, cerca de 2 %, cerca de 3 %, cerca de 4 %, cerca de 5 %, cerca de 6 %, cerca de 7 %, cerca de 8 %, cerca de 9 %, cerca de 10 %, cerca de 11 %, cerca de 12 %, cerca de 13 %, cerca de 14 %, cerca de 15 %, cerca de 16 %, cerca de 17 %, cerca de 18 %, cerca de 19 %, cerca de 20 %, cerca de 21 %, cerca de 22 %, cerca de 23 %, cerca de 24 %, cerca de 25 % ou cerca de 30 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, cada fração de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende cerca de 0,1 %, cerca de 0,2 %, cerca de 0,3 %, cerca de 0,4 %, cerca de 0,5 %, cerca de 0,6 %, cerca de 0,7 %, cerca de 0,8 %, cerca de 0,9 %, cerca de 1 %, cerca de 2 %, cerca de 3 %, cerca de 4 %, cerca de 5 %, cerca de 6 %, cerca de 7 %, cerca de 8 %, cerca de 9 % ou cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, cada fração de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende de cerca de 0,1 % a cerca de 90 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 15 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 90 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 80 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 70 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 60 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 50 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 40 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 30 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 20 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 10 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 9 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 8 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 7 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 6 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 5 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 4 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 3 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 2 %, de cerca de 2 % a cerca de 9 %, de cerca de 2 % a cerca de 8 %, de cerca de 2 % a cerca de 7 %, de cerca de 2 % a cerca de 6 %, de cerca de 2 % a cerca de 5 %, de cerca de 2 % a cerca de 4 %, de cerca de 2 % a cerca de 3 % ou de cerca de 5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

[0289] Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende menos que 80 %, menos que 70 %, menos que 60 %, menos que 50 %, menos que 40 %, menos que 30 %, menos que 20 %, menos que 19 %, menos que 18 %, menos que 17 %, menos que 16 %, menos que 15 %, menos que 14 %, menos que 13 %, menos que 12 %, menos que 11 %, menos que 10 %, menos que 9 %, menos que 8 %, menos que 7 %, menos que 6 %, menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 %, menos que 2 % ou menos que 1 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende menos que 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6 %, 5 %, 4 %, 3 % ou 2 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em outras modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende mais que 0,5 %, mais que 0,8 %, mais que 1 %, mais que 2 %, mais que 3 %, mais que 4 %, mais que 5 %, mais que 6 %, mais que 7 %, mais que 8 %, mais que 9 %, mais que 10 %, mais que 11 %, mais que 12 %, mais que 13 %, mais que 14 %, mais que 15 %, mais que 16 %, mais que 17 %, mais que 18 %, mais que 19 %, mais que 20 %, mais que 30 %, mais que 40 %, mais que 50 %, mais que 60 %, mais que 70 % ou mais que 80 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em outras modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende mais que 20 %, 21 %, 22 %, 23 %, 24 %, 25 %, 26 %, 27 %, 28 %, 29 % ou 30 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende cerca de 0,1 %, cerca de 0,2 %, cerca de 0,3 %, cerca de 0,4 %, cerca de 0,5 %, cerca de 0,6 %, cerca de 0,7 %, cerca de 0,8 %, cerca de 0,9 %, cerca de 1 %, cerca de 2 %, cerca de 3 %, cerca de 4 %, cerca de

5 %, cerca de 6 %, cerca de 7 %, cerca de 8 %, cerca de 9 %, cerca de 10 %, cerca de 11 %, cerca de 12 %, cerca de 13 %, cerca de 14 %, cerca de 15 %, cerca de 16 %, cerca de 17 %, cerca de 18 %, cerca de 19 %, cerca de 20 %, cerca de 21 %, cerca de 22 %, cerca de 23 %, cerca de 24 %, cerca de 25 % ou cerca de 30 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende cerca de 0,1 %, cerca de 0,2 %, cerca de 0,3 %, cerca de 0,4 %, cerca de 0,5 %, cerca de 0,6 %, cerca de 0,7 %, cerca de 0,8 %, cerca de 0,9 %, cerca de 1 %, cerca de 2 %, cerca de 3 %, cerca de 4 %, cerca de 5 %, cerca de 6 %, cerca de 7 %, cerca de 8 %, cerca de 9 % ou cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende de cerca de 0,1 % a cerca de 90 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 15 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 90 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 80 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 70 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 60 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 50 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 40 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 30 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 20 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 10 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 9 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 8 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 7 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 6 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 5 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 4 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 3 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 2 %, de cerca de 2 % a cerca de 9 %, de cerca de 2 % a cerca de 8 %, de cerca de 2 % a cerca de 7 %, de cerca de 2 % a cerca de 6 %, de cerca de 2 % a cerca de 5 %, de cerca de 2 % a cerca de 4 %, de cerca de 2 % a cerca de 3 % ou de cerca de 5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

[0290] Em algumas modalidades, a fração de DP1 de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende menos que 30 %, menos que 20 %, menos que 19 %, menos que 18 %, menos que 17 %, menos que 16 %, menos que 15 %, menos que 14 %, menos que 13 %, menos que 12 %, menos que 11 %, menos que 10 %, menos que 9 %, menos que 8 %, menos que 7 %, menos que 6 %, menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 %, menos que 2 % ou menos que 1 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a fração de DP1 de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende mais que 0,1 %, mais que 0,5 %, mais que 0,8 %, mais que 1 %, mais que 1,5 %, mais que 2 %, mais que 3 %, mais que 4 %, mais que 5 %, mais que 6 %, mais que 7 %, mais que 8 %, mais que 9 %, mais que 10 %, mais que 11 %, mais que 12 %, mais que 13 %, mais que 14 % ou mais que 15 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a fração de DP1 de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende cerca de 0,5 %, cerca de 1 %, cerca de 2 %, cerca de 3 %, cerca de 4 %, cerca de 5 %, cerca de 6 %, cerca de 7 %, cerca de 8 %, cerca de 9 %, cerca de 10 %, cerca de 11 %, cerca de 12 %, cerca de 13 %, cerca de 14 %, cerca de 15 %, cerca de 16 %, cerca de 17 %, cerca de 18 %, cerca de 19 % ou cerca de 20 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a fração de DP1 de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende de cerca de 0,1 % a cerca de 15 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 20 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 20 %, de 0,5 % a cerca de 10 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 15 %, de cerca de 1 % a cerca de 20 %, de cerca de 1 % a cerca de 15 %, de cerca de 1 % a cerca de 10 %, de cerca de 2 % a cerca de 14 %, de cerca de 3 % a cerca de 13 %, de cerca de 4 % a cerca de 12 %, de cerca de 5 % a cerca de 11 %, de cerca de 5 % a cerca de 10 %, de cerca de 6 % a cerca de 9 % ou de cerca de 7 % a cerca de 8 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa, ou quaisquer faixas entre essas. Em algumas modalidades, a fração de DP1 de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende de cerca de 0,5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra é determinada por espectrometria de massa, como MALDI-MS. Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra é determinada por LC-MS/MS. Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra é determinada por GC-MS.

[0291] Em algumas modalidades, a fração de DP2 de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende menos que 30 %, menos que 20 %, menos que 19 %, menos que 18 %, menos que 17 %, menos que 16 %, menos que 15 %, menos que 14 %, menos que 13 %, menos que 12 %, menos que 11 %, menos que 10 %, menos que 9 %, menos que 8 %, menos que 7 %, menos que 6 %, menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 %, menos que 2 % ou menos que 1 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em algumas modalidades, a fração de DP2 de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende mais que 0,1 %, mais que 0,5 %, mais que 0,8 %, mais que 1 %, mais que 1,5 %, mais que 2 %, mais que 3 %, mais que 4 %, mais que 5 %, mais que 6 %, mais que 7 %, mais que 8 %, mais que 9 %, mais que 10 %, mais que 11 %, mais que 12 %, mais que 13 %, mais que 14 % ou mais que 15 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em algumas modalidades, a fração de DP2 de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende cerca de 0,5 %, cerca de 1 %, cerca de 2 %, cerca de 3 %, cerca de 4 %, cerca de 5 %, cerca de 6 %, cerca de 7 %, cerca de 8 %, cerca de 9 %, cerca de 10 %, cerca de 11 %, cerca de 12 %, cerca de 13 %, cerca de 14 %, cerca de 15 %, cerca de 16 %, cerca de 17 %, cerca de 18 %, cerca de 19 % ou cerca de 20 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em algumas modalidades, a fração de DP2 de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende de cerca de 0,1 % a cerca de 15 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 20 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 20 %, de 0,5 % a cerca de 10 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 15 %, de cerca de 1 % a cerca de 20 %, de cerca de 1 % a cerca de 15 %, de cerca de 1 % a cerca de 10 %, de cerca de 2 % a cerca de 14 %, de cerca de 3 % a cerca de 13 %, de cerca de 4 % a cerca de 12 %, de cerca de 5 % a cerca de 11 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 10 %, de cerca de 6 % a cerca de 9 % ou de cerca de 7 % a cerca de 8 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa, ou quaisquer faixas entre essas. Em algumas modalidades, a fração de DP2 de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende de cerca de 5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra é determinada por espectrometria de massa, como MALDI-MS. Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra é determinada por LC-MS/MS. Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra é determinada por GC-MS.

[0292] Em algumas modalidades, a fração de DP3 de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende menos que 30 %, menos que 20 %, menos que 19 %, menos que 18 %, menos que 17 %, menos que 16 %, menos que 15 %, menos que 14 %, menos que 13 %, menos que 12 %, menos que 11 %, menos que 10 %, menos que 9 %, menos que 8 %, menos que 7 %, menos que 6 %, menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 %, menos que 2 % ou menos que 1 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a fração de DP3 de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende mais que 0,1 %, mais que 0,5 %, mais que 0,8 %, mais que 1 %, mais que 1,5 %, mais que 2 %, mais que 3 %, mais que 4 %, mais que 5 %, mais que 6 %, mais que 7 %, mais que 8 %, mais que 9 %, mais que 10 %, mais que 11 %, mais que 12 %, mais que 13 %, mais que 14 % ou mais que 15 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa. Em algumas modalidades, a fração de DP3 de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende cerca de 0,5 %, cerca de 1 %, cerca de 2 %, cerca de 3 %, cerca de 4 %, cerca de 5 %, cerca de 6 %, cerca de 7 %, cerca de 8 %, cerca de 9 %, cerca de 10 %, cerca de 11 %, cerca de 12 %, cerca de 13 %, cerca de 14 %, cerca de 15 %, cerca de 16 %, cerca de 17 %, cerca de 18 %, cerca de 19 % ou cerca de 20 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em algumas modalidades, a fração de DP3 de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende de cerca de 0,1 % a cerca de 15 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 20 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 20 %, de 0,5 % a cerca de 10 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 15 %, de cerca de 1 % a cerca de 20 %, de cerca de 1 % a cerca de 15 %, de cerca de 1 % a cerca de 10 %, de cerca de 2 % a cerca de 14 %, de cerca de 3 % a cerca de 13 %, de cerca de 4 % a cerca de 12 %, de cerca de 5 % a cerca de 11 %, de cerca de 5 % a cerca de 10 %, de cerca de 6 % a cerca de 9 % ou de cerca de 7 % a cerca de 8 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa, ou quaisquer faixas entre essas.

Em algumas modalidades, a fração de DP3 de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende de cerca de 0,5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra é determinada por espectrometria de massa, como MALDI-MS.

Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra é determinada por LC-MS/MS.

Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra é determinada por GC-MS.

[0293] Em algumas modalidades, um oligossacarídeo que contém subunidade anidra compreende uma ou mais subunidades anidras. Por exemplo, um oligossacarídeo que contém subunidade anidra de DP1 compreende uma subunidade anidra. Em algumas modalidades, um oligossacarídeo que contém subunidade anidra de DPn pode compreender de 1 a n subunidades anidras. Por exemplo, em algumas modalidades, um oligossacarídeo que contém subunidade anidra de DP2 compreende uma ou duas subunidades anidras. Em algumas modalidades, cada oligossacarídeo na preparação de oligossacarídeo compreende independentemente zero, uma ou duas subunidades anidras. Em algumas modalidades, mais que 99 %, 95 %, 90 %, 85 %, 80 %, 75 %, 70 %, 65 %, 60 %, 55 %, 50 %, 45 %, 40 %, 35 % ou 30 % dos oligossacarídeos que contêm subunidade anidra têm apenas uma subunidade anidra. Em algumas modalidades, mais que 99 %, 95 %, 90 %, 85 % ou 80 % dos oligossacarídeos que contêm subunidade anidra têm apenas uma subunidade anidra.

[0294] Em algumas modalidades, um ou mais oligossacarídeos na preparação de oligossacarídeo ou em cada fração da preparação de oligossacarídeo compreendem 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 subunidades anidras cada um ligado por meio de uma ligação glicosídica, em que as ligações glicosídicas que ligam cada subunidade anidra são independentemente escolhidas. Em algumas modalidades, um ou mais oligossacarídeos na preparação de oligossacarídeo ou em cada fração da preparação de oligossacarídeo compreendem 1, 2 ou 3 subunidades anidras cada uma ligada por meio de uma ligação glicosídica, em que a ligação glicosídica que liga cada subunidade anidra é independentemente escolhida. Em algumas modalidades, mais que 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 % ou 99 % de oligossacarídeos na preparação de oligossacarídeo ou em cada fração compreendem 1, 2 ou 3 subunidades anidras cada uma ligada por meio de uma ligação glicosídica, em que a ligação glicosídica que liga cada subunidade anidra é independentemente escolhida. Em algumas modalidades, um ou mais oligossacarídeos na preparação de oligossacarídeo ou em cada fração compreendem 1 subunidade anidra ligados por meio de uma ligação glicosídica. Em algumas modalidades, mais que 50 %, mais que 60 %, mais que 70 %, mais que 80 %, mais que 90 % ou mais que 99 % de oligossacarídeos na preparação de oligossacarídeo ou em cada fração compreendem 1 subunidade anidra ligada por meio de uma ligação glicosídica. D. Espécies de Subunidade anidra

[0295] Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende espécies diferentes de subunidades anidras. Em algumas modalidades, oligossacarídeos exemplificativos que contêm subunidade anidra são ilustrados na FIG. 42, FIG. 30 e FIG. 31. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende uma ou mais subunidades anidras que são produtos de desidratação térmica de monossacarídeos, isto é, subunidades de monossacarídeo anidro. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende uma ou mais subunidades anidras que são produtos de desidratação térmica reversível de monossacarídeos.

[0296] Deve-se entender que um monossacarídeo anidro (ou uma subunidade de monossacarídeo anidro) se refere a uma ou mais espécies dos produtos de desidratação térmica do monossacarídeo. Por exemplo, em algumas modalidades, uma glicose anidra se refere a 1,6-anidro-β-D-glicopiranose (levoglicosano) ou 1,6-anidro-β-D-glicofuranose. Em algumas modalidades, uma pluralidade de glicose anidra se refere a uma pluralidade de 1,6-anidro-β-D-glicopiranose (levoglicosano), uma pluralidade de 1,6-anidro-β-D- glicofuranose, uma pluralidade de outros produtos de desidratação térmica de glicose ou qualquer combinação dos mesmos. De modo similar, em algumas modalidades, uma pluralidade de galactose anidra se refere a uma pluralidade de quaisquer produtos de desidratação térmica de galactose ou qualquer combinação dos mesmos.

[0297] Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo, como descrito no presente documento, compreende uma ou mais glicose anidra, galactose anidra, manose anidra, alose anidra, altrose anidra, gulose anidra, indose anidra, talose anidra, frutose anidra, ribose anidra, arabinose anidra, ramnose anidra, lixose anidra, xilose anidra ou qualquer combinação dessas subunidades. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende uma ou mais subunidades de glicose anidra, galactose anidra, manose anidra ou frutose anidra. Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo, como descrito no presente documento, compreende uma ou mais de: 1,6-anidro-3-O-β-D- glicopiranosil-β-D-glicopiranose, 1,6-anidro-3-O-α-D- glicopiranosil-β-D-glicopiranose, 1,6-anidro-2-O-β-D- glicopiranosil-β-D-glicopiranose, 1,6-anidro-2-O-α-D- glicopiranosil-β-D-glicopiranose, 1,6-anidro-β-D-celobiose (celobiose), 1,6-anidro-β-D-celotriose (celotriosano), 1,6-

anidro-β-D-celotetraose (celotetraosano), 1,6-anidro-β-D- celopentaose (celopentaosano), e 1,6-anidro-β-D-maltose (maltosano).

[0298] Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende uma ou mais subunidades de 1,6- anidro-β-D-glicofuranose. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende uma ou mais subunidades de 1,6-anidro-β-D-glicopiranose (levoglicosano). Por exemplo, a FIG. 42 ilustra dois oligossacarídeos de DP1 que contêm subunidade anidra (levoglicosano e 1,6-anidro-β-D-glicofuranose) e um oligossacarídeo que contém subunidade anidra de DP2 (celobiose anidra).

[0299] A presença e o nível de uma espécie de subunidade anidra podem variar com base nos açúcares de ração usados para fabricar o oligossacarídeo. Por exemplo, em algumas modalidades, glico-oligossacarídeos compreendem subunidades de glicose anidra, galacto-oligossacarídeos compreendem subunidades de galactose anidra, e glico-galacto- oligossacarídeos compreende, subunidades de glicose anidra e de galactose anidra.

[0300] Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende tanto subunidades anidras 1,6- anidro-β-D-glicofuranose quanto 1,6-anidro-β-D- glicopiranose. Em algumas modalidades, pelo menos 0,1 %, 1 %, 5 %, 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 % ou 99 % de subunidades anidras são selecionadas a partir de um grupo que consiste em 1,6-anidro-β-D-glicofuranose e 1,6-anidro-β-D-glicopiranose. Em algumas modalidades, pelo menos 1 %, 5 %, 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %,

80 % ou 90 % de subunidades anidras são 1,6-anidro-β-D- glicofuranose. Em algumas modalidades, pelo menos 1 %, 5 %, 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 % ou 60 % de subunidades anidras são 1,6-anidro-β-D-glicopiranose.

[0301] Em algumas modalidades, a razão de 1,6-anidro-β- D-glicofuranose para 1,6-anidro-β-D-glicopiranose é de cerca de 10:1 a 1:10, 9:1 a 1:10, 8:1 a 1:10, 7:1 a 1:10, 6:1 a 1:10, 5:1 a 1:10, 4:1 a 1:10, 3:1 a 1:10, 2:1 a 1:10, 10:1 a 1:9, 10:1 a 1:8, 10:1 a 1:7, 10:1 a 1:6, 10:1 a 1:5, 10:1 a 1:4, 10:1 a 1:3, 10:1 a 1:2, ou 1:1 a 3:1 na preparação. Em algumas modalidades, a razão de 1,6-anidro-β-D- glicofuranose para 1,6-anidro-β-D-glicopiranose é de cerca de 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:8, 1:9, ou 1:10 na preparação. Em algumas modalidades, a razão de 1,6-anidro- β-D-glicofuranose para 1,6-anidro-β-D-glicopiranose é de cerca de 2:1 na preparação.

[0302] Em algumas modalidades, a razão de 1,6-anidro-β- D-glicofuranose para 1,6-anidro-β-D-glicopiranose é de cerca de 10:1 a 1:10, 9:1 a 1:10, 8:1 a 1:10, 7:1 a 1:10, 6:1 a 1:10, 5:1 a 1:10, 4:1 a 1:10, 3:1 a 1:10, 2:1 a 1:10, 10:1 a 1:9, 10:1 a 1:8, 10:1 a 1:7, 10:1 a 1:6, 10:1 a 1:5, 10:1 a 1:4, 10:1 a 1:3, 10:1 a 1:2 ou 1:1 a 3:1 em cada fração. Em algumas modalidades, a razão de 1,6-anidro-β-D- glicofuranose para 1,6-anidro-β-D-glicopiranose é de cerca de 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:8, 1:9 ou 1:10 em cada fração. Em algumas modalidades, a razão de 1,6-anidro-β-D- glicofuranose para 1,6-anidro-β-D-glicopiranose é de cerca de 2:1 em cada fração.

[0303] Em algumas modalidades, a razão de 1,6-anidro-β- D-glicofuranose para 1,6-anidro-β-D-glicopiranose é de cerca de 10:1 a 1:10, 9:1 a 1:10, 8:1 a 1:10, 7:1 a 1:10, 6:1 a 1:10, 5:1 a 1:10, 4:1 a 1:10, 3:1 a 1:10, 2:1 a 1:10, 10:1 a 1:9, 10:1 a 1:8, 10:1 a 1:7, 10:1 a 1:6, 10:1 a 1:5, 10:1 a 1:4, 10:1 a 1:3, 10:1 a 1:2, ou 1:1 a 3:1 em pelo menos uma fração. Em algumas modalidades, a razão de 1,6-anidro- β-D-glicofuranose para 1,6-anidro-β-D-glicopiranose é de cerca de 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:8, 1:9, ou 1:10 em pelo menos uma fração. Em algumas modalidades, a razão de 1,6- anidro-β-D-glicofuranose para 1,6-anidro-β-D-glicopiranose é de cerca de 2:1 em pelo menos uma fração.

[0304] Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende oligossacarídeos de DP2 que contêm subunidade anidra. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende lactose anidra, sacarose anidra, celobiose anidra, ou uma combinação dos mesmos. Em alguma modalidade, a preparação de oligossacarídeo compreende de cerca de 2 a 20, 2 a 15, 5 a 20, 5 a 15, ou 5 a 10 espécies de oligossacarídeos de DP2 que contêm subunidade anidra. Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento não compreende celobiose ou não compreende um nível detectável de celobiose.

[0305] Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende uma ou mais subunidades anidras que são produtos de caramelização de açúcar. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende uma ou mais subunidades anidras são produtos de caramelização de açúcar selecionados a partir do grupo que consiste em: metanol; etanol; furano; metilglioxal; 2-metil furano; acetato de vinila; glicolaldeído; ácido acético; acetol; furfural; 2- furanometanol; 3-furanometanol; 2-hidróxi ciclopent-2-en-1- ona; 5-metil furfural; 2(5H)-furanona; 2 metil ciclopentenolona; levoglicosenona; lactona de hidroxila cíclica; 1,4,3,6-dianidro-α-D-glicopiranose; dianidro glicopiranose; e 5-hidróxi metil furfural (5-hmf). Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende subunidades anidras de 5-hmf.

[0306] Em algumas modalidades, na preparação de oligossacarídeo ou em pelo menos uma das frações de DP, as subunidades anidras que são produtos de caramelização são menos abundantes que as subunidades anidras que são produtos de desidratação térmica de um monossacarídeo. Em algumas modalidades, na preparação de oligossacarídeo ou em pelo menos uma das frações, as subunidades anidras que são produtos de caramelização são mais abundantes que as subunidades anidras que são produtos de desidratação térmica de um monossacarídeo. Em algumas modalidades, na preparação de oligossacarídeo ou em pelo menos uma das frações, subunidades anidras que são produtos de caramelização e subunidades anidras que são produtos de desidratação térmica de um monossacarídeo têm abundância similar.

[0307] Em algumas modalidades, de cerca de 0,01 % a cerca de 50 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 40 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 30 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 20 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 10 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 5 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 4 %, de cerca de

0,01 % a cerca de 3 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 2 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 1 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 0,5 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 50 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 40 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 30 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 20 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 10 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 5 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 4 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 3 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 2 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 1 % ou de cerca de 0,1 % a cerca de 0,5 % das subunidades anidras em uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento são produtos de caramelização. Em algumas modalidades, de cerca de 0,1 % a cerca de 5 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 2 % ou de cerca de 0,1 % a cerca de 1 % das subunidades anidras na preparação de oligossacarídeo são produtos de caramelização. Em algumas modalidades, menos que 50 %, menos que 40 %, menos que 30 %, menos que 25 %, menos que 20 %, menos que 15 %, menos que 14 %, menos que 13 %, menos que 12 %, menos que 11 %, menos que 10 %, menos que 9 %, menos que 8 %, menos que 7 %, menos que 6 %, menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 %, menos que 2 % ou menos que 1 % das subunidades anidras na preparação de oligossacarídeo são produtos de caramelização.

[0308] Em algumas modalidades, de cerca de 0,01 % a cerca de 50 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 40 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 30 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 20 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 10 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 5 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 4 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 3 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 2 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 1 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 0,5 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 50 %, de cerca de

0,1 % a cerca de 40 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 30 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 20 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 10 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 5 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 4 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 3 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 2 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 1 % ou de cerca de 0,1 % a cerca de 0,5 % das subunidades anidras em pelo menos uma fração (por exemplo, DP1, DP2 e/ou DP3) de uma preparação descrita no presente documento são produtos de caramelização. Em algumas modalidades, de cerca de 0,1 % a cerca de 5 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 2 % ou de cerca de 0,1 % a cerca de 1 % das subunidades anidras em pelo menos uma fração (por exemplo, DP1, DP2 e/ou DP3) da preparação são produtos de caramelização. Em algumas modalidades, menos que 50 %, 40 %, 30 %, 25 %, 20 %, 15 %, 14 %, 13 %, 12 %, 11 %, 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 % ou 1 % das subunidades anidras em pelo menos uma fração da preparação são produtos de caramelização. Em algumas modalidades, menos que 20 %, menos que 15 %, menos que 14 %, menos que 13 %, menos que 12 %, menos que 11 %, menos que 10 %, menos que 9 %, menos que 8 %, menos que 7 %, menos que 6 %, menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 %, menos que 2 % ou menos que 1 % das subunidades anidras nas frações de DP1, DP2 e/ou DP3 de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento são produtos de caramelização.

[0309] Em algumas modalidades, de cerca de 0,01 % a cerca de 50 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 40 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 30 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 20 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 10 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 5 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 4 %, de cerca de

0,01 % a cerca de 3 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 2 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 1 %, de cerca de 0,01 % a cerca de 0,5 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 50 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 40 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 30 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 20 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 10 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 5 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 4 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 3 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 2 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 1 % ou de cerca de 0,1 % a cerca de 0,5 % das subunidades anidras em cada fração de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento são produtos de caramelização. Em algumas modalidades, de cerca de 0,1 % a cerca de 5 %, de cerca de 0,1 % a cerca de 2 % ou de cerca de 0,1 % a cerca de 1 % das subunidades anidras em cada fração da preparação são produtos de caramelização. Em algumas modalidades, menos que 50 %, menos que 40 %, menos que 30 %, menos que 20 %, menos que 25 %, menos que 20 %, menos que 15 %, menos que 14 %, menos que 13 %, menos que 12 %, menos que 11 %, menos que 10 %, menos que 9 %, menos que 8 %, menos que 7 %, menos que 6 %, menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 %, menos que 2 % ou menos que 1 % das subunidades anidras em cada fração da preparação são produtos de caramelização.

[0310] Em algumas modalidades, cada um dos oligossacarídeos em uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento independente e opcionalmente compreende uma subunidade anidra. Em algumas modalidades, dois ou mais oligossacarídeos independentes compreendem as mesmas subunidades anidras ou subunidades anidras diferentes. Em algumas modalidades, dois ou mais oligossacarídeos independentes compreendem subunidades anidras diferentes. Por exemplo, em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende um oligossacarídeo que contém subunidade anidra de DP1 que compreende uma 1,6- anidro-β-D-glicopiranose e um oligossacarídeo que contém subunidade anidra de DP2 que compreende uma subunidade de 1,6-anidro-β-D-glicofuranose. Em algumas modalidades, um ou mais oligossacarídeos na preparação de oligossacarídeo compreendem duas ou mais das mesmas subunidades anidras ou subunidades anidras diferentes.

[0311] Em algumas modalidades, em qualquer fração da preparação de oligossacarídeo que tem um grau de polimerização igual ou maior que 2 (isto é, frações de DP2 a DPn), uma subunidade anidra pode ser ligada a uma ou mais subunidades regulares ou anidras. Em algumas modalidades, nas frações de DP2 a DPn, pelo menos uma subunidade anidra é ligada a uma, duas ou três outras subunidades regulares ou anidras. Em algumas modalidades, nas frações de DP2 a DPn, pelo menos uma subunidade anidra é ligada a uma ou duas subunidades regulares. Em algumas modalidades, nas frações de DP2 a DPn, pelo menos uma subunidade anidra é ligada a uma subunidade regular. Em algumas modalidades, em qualquer uma das frações de DP2 a DPn, mais que 99 %, 90 %, 80 %, 70 %, 60 %, 50 %, 40 % ou 30 % de subunidades anidras são ligadas a uma subunidade regular. Em algumas modalidades, em cada uma das frações de DP2 a DPn, mais que 99 %, 90 %, 80 %, 70 %, 60 %, 50 %, 40 % ou 30 % de subunidades anidras são ligadas a uma subunidade regular.

[0312] Em algumas modalidades, em qualquer fração da preparação de oligossacarídeo que tem um grau de polimerização igual ou maior que 2 (isto é, frações de DP2 a DPn), uma subunidade anidra pode ser localizada em uma extremidade de cadeia de um oligossacarídeo. Em algumas modalidades, em qualquer fração da preparação de oligossacarídeo que tem um grau de polimerização igual ou maior que 3 (isto é, frações de DP3 a DPn), uma subunidade anidra pode ser localizada em uma posição que não é uma extremidade de cadeia de um oligossacarídeo. Em algumas modalidades, nas frações de DP2 a DPn, pelo menos uma das subunidades anidras está localizada na extremidade de cadeia de um oligossacarídeo. Em algumas modalidades, mais que 99 %, 95 %, 90 %, 85 %, 80 %, 75 %, 70 %, 65 %, 60 %, 55 %, 50 %, 45 %, 40 %, 35 % ou 30 % das subunidades anidras nas frações de DP2 a DPn estão localizadas na extremidade de cadeia dos oligossacarídeos. Em algumas modalidades, mais que 95 %, 90 %, 80 %, 70 %, 60 %, 50 %, 40 %, 30 %, 20 % ou 10 % das subunidades anidras na preparação de oligossacarídeo estão localizadas na extremidade de cadeia dos oligossacarídeos. Em algumas modalidades, mais que 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 % ou 99 % dos oligossacarídeos que contêm subunidade anidra compreendem uma subunidade anidra de extremidade de cadeia. Em algumas modalidades, mais que 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % dos oligossacarídeos que contêm subunidade anidra compreendem a subunidade anidra de extremidade de cadeia. E. Ligações Glicosídicas

[0313] Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende uma variedade de ligações glicosídicas. O tipo e a distribuição das ligações glicosídicas podem depender da fonte e do método de fabricação da preparação de oligossacarídeo. Em algumas modalidades, o tipo e a distribuição de várias ligações glicosídicas podem ser determinados e/ou detectados por quaisquer métodos adequados conhecidos na técnica, como RMN. Por exemplo, em algumas modalidades, as ligações glicosídicas são determinadas e/ou detectadas por 1H RMN, 13C RMN, 2D RMN, como 2D JRES, HSQC, HMBC, DOSY, COSY, ECOSY, TOCSY, NOESY, ou ROESY ou qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, as ligações glicosídicas são determinadas e/ou detectadas, pelo menos em parte, por 1H RMN. Em algumas modalidades, as ligações glicosídicas são determinadas e/ou detectadas, pelo menos em parte, por 13C RMN. Em algumas modalidades, as ligações glicosídicas são determinadas e/ou detectadas, pelo menos em parte, por 2D 1H, 13C-HSQC RMN.

[0314] Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende uma ou mais ligações glicosídicas α-(1,2), ligações glicosídicas α-(1,3), ligações glicosídicas α-(1,4), ligações glicosídicas α-(1,6), ligações glicosídicas β- (1,2), ligações glicosídicas β-(1,3), ligações glicosídicas β-(1,4), ligações glicosídicas β-(1,6), ligações glicosídicas α-(1,1)-α, ligações glicosídicas α-(1,1)-β, ligações glicosídicas β-(1,1)-β ou qualquer combinação dos mesmos.

[0315] Em algumas modalidades, as preparações de oligossacarídeo têm uma distribuição do tipo ligação glicosídica de cerca de 0 a cerca de 60 % em mol, de cerca de 5 % a cerca de 55 % em mol, de cerca de 5 % a cerca de 50 % em mol, de cerca de 5 % a cerca de 45 % em mol, de cerca de 5 % a cerca de 40 % em mol, de cerca de 5 % a cerca de 35 % em mol, de cerca de 5 % a cerca de 30 % em mol, de cerca de 5 % a cerca de 25 % em mol, de cerca de 10 % a cerca de 60 % em mol, de cerca de 10 % a cerca de 55 % em mol, de cerca de 10 % a cerca de 50 % em mol, de cerca de 10 % a cerca de 45 % em mol, de cerca de 10 % a cerca de 40 % em mol, de cerca de 10 % a cerca de 35 mol%, de cerca de 15 % a cerca de 60 mol%, de cerca de 15 % a cerca de 55 % em mol, de cerca de 15 % a cerca de 50 % em mol, de cerca de 15 % a cerca de 45 % em mol, de cerca de 15 % a cerca de 40 % em mol, de cerca de 15 % a cerca de 35 % em mol, de cerca de 20 % a cerca de 60 % em mol, de cerca de 20 % a cerca de 55 % em mol, de cerca de 20 % a cerca de 50 % em mol, de cerca de 20 % a cerca de 45 % em mol, de cerca de 20 % a cerca de 40 % em mol, de cerca de 20 % a cerca de 35 % em mol, de cerca de 25 % a cerca de 60 % em mol, de cerca de 25 % a cerca de 55 % em mol, de cerca de 25 % a cerca de 50 % em mol, de cerca de 25 % a cerca de 45 % em mol, de cerca de 25 % a cerca de 40 % em mol ou de cerca de 25 % a cerca de 35 % em mol de ligações glicosídicas α-(1,6).

[0316] Em algumas modalidades, as preparações de oligossacarídeo têm uma distribuição do tipo ligação glicosídica de cerca de 0 a cerca de 50 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 40 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 35 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 30 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 25 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 20 % em mol, de cerca de 5 % a cerca de 40 % em mol, de cerca de 5 % a cerca de 35 % em mol, de cerca de 5 % a cerca de 30 % em mol, de cerca de 5 % a cerca de 25 % em mol, de cerca de 5 % a cerca de 20 % em mol, de cerca de 10 % a cerca de 40 % em mol, de cerca de 10 % a cerca de 35 % em mol, de cerca de 10 % a cerca de 20 % em mol, de cerca de 15 % a cerca de 40 % em mol, de cerca de 15 % a cerca de 35 % em mol, de cerca de 15 % a cerca de 30 % em mol, de cerca de 15 % a cerca de 25 % em mol ou de cerca de 15 % a cerca de 20 % em mol de ligações glicosídicas α-(1,3).

[0317] Em algumas modalidades, as preparações de oligossacarídeo têm uma distribuição do tipo ligação glicosídica de cerca de 0 a cerca de 40 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 35 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 30 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 25 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 20 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 15 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 10 % em mol, de cerca de 2 % a cerca de 30 % em mol, de cerca de 2 % a cerca de 25 % em mol, de cerca de 2 % a cerca de 20 % em mol, de cerca de 2 % a cerca de 15 % em mol, de cerca de 2 % a cerca de 10 % em mol, de cerca de 3 % a cerca de 30 % em mol, de cerca de 3 % a cerca de 25 % em mol, de cerca de 3 % a cerca de 20 % em mol, de cerca de 3 % a cerca de 15 % em mol, de cerca de 3 % a cerca de 10 % em mol, de cerca de 5 % a cerca de 30 % em mol, de cerca de 5 % a cerca de 25 % em mol, de cerca de 5 % a cerca de 20 % em mol, de cerca de 5 % a cerca de 15 % em mol ou de cerca de 5 % a cerca de 10 % em mol de ligações glicosídicas α-(1,2).

[0318] Em algumas modalidades, as preparações de oligossacarídeo têm uma distribuição do tipo ligação glicosídica de cerca de 0 a cerca de 40 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 30 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 25 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 20 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 15 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 10 % em mol ou de cerca de 0 a cerca de 5 % em mol de ligações glicosídicas α-(1,4). Em algumas modalidades, as preparações de oligossacarídeo têm uma distribuição do tipo ligação glicosídica menor que 40 % em mol, menos que 30 % em mol, menos que 20 % em mol, menos que 15 % em mol, menos que 10 % em mol, menos que 9 % em mol, menos que 8 % em mol, menos que 7 % em mol, menos que 6 % em mol, menos que 5 % em mol, menos que 4 % em mol, menos que 3 % em mol ou menos que 2 % em mol de ligações glicosídicas α-(1,4).

[0319] Em algumas modalidades, as preparações de oligossacarídeo têm uma distribuição do tipo ligação glicosídica de cerca de 0 a cerca de 40 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 35 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 30 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 25 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 20 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 15 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 10 % em mol, de cerca de 2 % a cerca de 30 % em mol, de cerca de 2 % a cerca de 25 % em mol, de cerca de 2 % a cerca de 20 % em mol, de cerca de 2 % a cerca de 15 % em mol, de cerca de 2 % a cerca de 10 % em mol, de cerca de 5 % a cerca de 30 % em mol, de cerca de 5 % a cerca de 25 % em mol, de cerca de 5 % a cerca de 20 % em mol, de cerca de 5 % a cerca de 15 % em mol, de cerca de 5 % a cerca de 10 % em mol, de cerca de 8 % a cerca de 30 % em mol, de cerca de 8 % a cerca de 25 % em mol, de cerca de 8 % a cerca de 20 % em mol, de cerca de 8 % a cerca de 15 % em mol ou de cerca de 10 % a cerca de 15 % em mol de ligações glicosídicas β-(1,6).

[0320] Em algumas modalidades, as preparações de oligossacarídeo têm uma distribuição do tipo ligação glicosídica de cerca de 0 a cerca de 40 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 35 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 30 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 25 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 20 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 15 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 10 % em mol, de cerca de 2 % a cerca de 30 % em mol, de cerca de 2 % a cerca de 25 % em mol, de cerca de 2 % a cerca de 20 % em mol, de cerca de 2 % a cerca de 15 % em mol, de cerca de 2 % a cerca de 10 % em mol, de cerca de 3 % a cerca de 30 % em mol, de cerca de 3 % a cerca de 25 % em mol, de cerca de 3 % a cerca de 20 % em mol, de cerca de 3 % a cerca de 15 % em mol, de cerca de 3 % a cerca de 10 % em mol, de cerca de 5 % a cerca de 30 % em mol, de cerca de 5 % a cerca de 25 % em mol, de cerca de 5 % a cerca de 20 % em mol, de cerca de 5 % a cerca de 15 % em mol ou de cerca de 5 % a cerca de 10 % em mol de ligações glicosídicas β-(1,4).

[0321] Em algumas modalidades, as preparações de oligossacarídeo têm uma distribuição do tipo ligação glicosídica de cerca de 0 a cerca de 40 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 30 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 25 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 20 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 15 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 10 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 5 % em mol, de cerca de 1 % a cerca de 20 % em mol, de cerca de 1 % a cerca de 15 % em mol, de cerca de 1 % a cerca de 10 % em mol, de cerca de 1 % a cerca de 5 % em mol, de cerca de 2 % a cerca de 20 % em mol, de cerca de 2 % a cerca de 15 % em mol, de cerca de 2 % a cerca de 10 % em mol ou de cerca de 2 % a cerca de 5 % em mol de ligações glicosídicas β-(1,2). Em algumas modalidades, as preparações de oligossacarídeo têm uma distribuição do tipo ligação glicosídica menor que 40 % em mol, menos que 30 % em mol, menos que 20 % em mol, menos que 15 % em mol, menos que 10 % em mol, menos que 9 % em mol, menos que 8 % em mol, menos que 7 % em mol, menos que 6 % em mol, menos que 5 % em mol, menos que 4 % em mol, menos que 3 % em mol ou menos que 2 % em mol de ligações glicosídicas β-(1,2).

[0322] Em algumas modalidades, as preparações de oligossacarídeo têm uma distribuição do tipo ligação glicosídica de cerca de 0 a cerca de 40 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 30 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 25 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 20 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 15 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 10 % em mol, de cerca de 0 a cerca de 5 % em mol, de cerca de 1 % a cerca de 20 % em mol, de cerca de 1 % a cerca de 15 % em mol, de cerca de 1 % a cerca de 10 % em mol, de cerca de 1 % a cerca de 5 % em mol, de cerca de 2 % a cerca de 20 % em mol, de cerca de 2 % a cerca de 15 % em mol, de cerca de 2 % a cerca de 10 % em mol ou de cerca de 2 % a cerca de 5 % em mol de ligações glicosídicas β-(1,3). Em algumas modalidades, as preparações de oligossacarídeo têm uma distribuição do tipo ligação glicosídica menor que 40 % em mol, menos que 30 % em mol, menos que 20 % em mol, menos que 15 % em mol, menos que 10 % em mol, menos que 9 % em mol, menos que 8 % em mol, menos que 7 % em mol, menos que 6 % em mol, menos que 5 % em mol, menos que 4 % em mol, menos que 3 % em mol ou menos que 2 % em mol de ligações glicosídicas β-(1,3).

[0323] Em algumas modalidades, as preparações de oligossacarídeo têm uma distribuição do tipo ligação glicosídica que é diferente de uma distribuição do tipo ligação glicosídica de non-preparações de oligossacarídeo sintético. Por exemplo, em algumas modalidades, as preparações de oligossacarídeo têm uma distribuição do tipo ligação glicosídica que é diferente daquela das composições nutricionais base. Em algumas modalidades, as composições nutricionais base compreendem uma fonte de carboidrato natural, como amido e fibras vegetais. Algumas das fontes de carboidrato naturais tem uma alta porcentagem de ligações glicosídicas α-(1,4), α-(1,6) e/ou β-(1,6). Consequentemente, em algumas modalidades, as preparações de oligossacarídeo têm uma porcentagem inferior de ligações glicosídicas α-(1,4) que a composição nutricional base. Em algumas modalidades, as preparações de oligossacarídeo têm uma porcentagem inferior de ligações glicosídicas α-(1,6) que a composição nutricional base. Em outras modalidades, as preparações de oligossacarídeo têm uma porcentagem superior de ligações glicosídicas α-(1,6) que a composição nutricional base. Em algumas modalidades, as preparações de oligossacarídeo têm uma porcentagem inferior de ligações glicosídicas β-(1,6) que a composição nutricional base. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende ligações glicosídicas que não são digestíveis ou hidrolisáveis por enzimas.

[0324] Especificamente, em algumas modalidades, as ligações glicosídicas α-(1,2), α-(1,3), α-(1,4), α-(1,6), β- (1,2), β-(1,3), β-(1,4) e/ou β-(1,6) na distribuição do tipo ligação glicosídica de preparações de oligossacarídeo descritas no presente documento é pelo menos 50 % em mol, pelo menos 40 % em mol, pelo menos 30 % em mol, pelo menos 20 % em mol, pelo menos 15 % em mol, pelo menos 10 % em mol,

pelo menos 5 % em mol, pelo menos 2 % em mol ou pelo menos 1 % em mol menor que aquela da composição nutricional base. Em algumas modalidades, as ligações glicosídicas α-(1,2), α- (1,3), α-(1,4), α-(1,6), β-(1,2), β-(1,3), β-(1,4) e/ou β- (1,6) na distribuição do tipo ligação glicosídica das preparações de oligossacarídeo é pelo menos 50 % em mol, pelo menos 40 % em mol, pelo menos 30 % em mol, pelo menos 20 % em mol, pelo menos 15 % em mol, pelo menos 10 % em mol, pelo menos 5 % em mol, pelo menos 2 % em mol ou pelo menos 1 % em mol maior que aquela da composição nutricional base.

[0325] Deve-se entendido por um técnico no assunto que determinados tipos de ligações glicosídicas podem não ser aplicáveis a oligossacarídeos que compreendem determinado tipo de monossacarídeos. Por exemplo, em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende ligações glicosídicas α-(1,2) e ligações glicosídicas α- (1,6). Em outras modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende ligações glicosídicas α-(1,2) e ligações glicosídicas β-(1,3). Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende ligações glicosídicas α-(1,2), ligações glicosídicas α-(1,3) e ligações glicosídicas β-(1,6). Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende ligações glicosídicas α-(1,2), ligações glicosídicas α-(1,3), ligações glicosídicas α-(1,4), ligações glicosídicas α- (1,6), ligações glicosídicas β-(1,2), ligações glicosídicas β-(1,3), ligações glicosídicas β-(1,4) e ligações glicosídicas β-(1,6). F. Peso Molecular

[0326] O peso molecular e a distribuição de peso molecular da preparação de oligossacarídeo podem ser determinados por quaisquer meios e instrumentação analíticos adequados, como método de grupo final, pressão osmótica (osmometria), ultracentrifugação, medições de viscosidade, método de dispersão de luz, SEC, SEC-MALLS, FFF, A4F, HPLC e espectrometria de massa. Em algumas modalidades, o peso molecular e a distribuição de peso molecular são determinadas por espectrometria de massa, como MALDI-MS, LC-MS, ou GC-MS. Em algumas modalidades, o peso molecular e a distribuição de peso molecular são determinados por cromatografia por exclusão de tamanho (SEC), como cromatografia por permeação de gel (GPC). Em outras modalidades, o peso molecular e a distribuição de peso molecular são determinados por HPLC. Em algumas modalidades, o peso molecular e a distribuição de peso molecular são determinados por MALDI-MS.

[0327] Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento tem um peso molecular ponderal médio de cerca de 100 a cerca de 10000 g/mol, de cerca de 200 a cerca de 8000 g/mol, de cerca de 300 a cerca de 5000 g/mol, de cerca de 500 a cerca de 5000 g/mol, de cerca de 700 a cerca de 5000 g/mol, de cerca de 900 a cerca de 5000 g/mol, de cerca de 1100 a cerca de 5000 g/mol, de cerca de 1300 a cerca de 5000 g/mol, de cerca de 1500 a cerca de 5000 g/mol, de cerca de 1700 a cerca de 5000 g/mol, de cerca de 300 a cerca de 4500 g/mol, de cerca de 500 a cerca de 4500 g/mol, de cerca de 700 a cerca de 4500 g/mol, de cerca de 900 a cerca de 4500 g/mol, de cerca de 1100 a cerca de 4500 g/mol, de cerca de 1300 a cerca de 4500 g/mol, de cerca de 1500 a cerca de 4500 g/mol, de cerca de 1700 a cerca de 4500 g/mol, de cerca de 1900 a cerca de

4500 g/mol, de cerca de 300 a cerca de 4000 g/mol, de cerca de 500 a cerca de 4000 g/mol, de cerca de 700 a cerca de 4000 g/mol, de cerca de 900 a cerca de 4000 g/mol, de cerca de 1100 a cerca de 4000 g/mol, de cerca de 1300 a cerca de 4000 g/mol, de cerca de 1500 a cerca de 4000 g/mol, de cerca de 1700 a cerca de 4000 g/mol, de cerca de 1900 a cerca de 4000 g/mol, de cerca de 300 a cerca de 3000 g/mol, de cerca de 500 a cerca de 3000 g/mol, de cerca de 700 a cerca de 3000 g/mol, de cerca de 900 a cerca de 3000 g/mol, de cerca de 1100 a cerca de 3000 g/mol, de cerca de 1300 a cerca de 3000 g/mol, de cerca de 1500 a cerca de 3000 g/mol, de cerca de 1700 a cerca de 3000 g/mol, de cerca de 1900 a cerca de 3000 g/mol, de cerca de 2100 a cerca de 3000 g/mol, de cerca de 300 a cerca de 2500 g/mol, de cerca de 500 a cerca de 2500 g/mol, de cerca de 700 a cerca de 2500 g/mol, de cerca de 900 a cerca de 2500 g/mol, de cerca de 1100 a cerca de 2500 g/mol, de cerca de 1300 a cerca de 2500 g/mol, de cerca de 1500 a cerca de 2500 g/mol, de cerca de 1700 a cerca de 2500 g/mol, de cerca de 1900 a cerca de 2500 g/mol, de cerca de 2100 a cerca de 2500 g/mol, de cerca de 300 a cerca de 1500 g/mol, de cerca de 500 a cerca de 1500 g/mol, de cerca de 700 a cerca de 1500 g/mol, de cerca de 900 a cerca de 1500 g/mol, de cerca de 1100 a cerca de 1500 g/mol, de cerca de 1300 a cerca de 1500 g/mol, de cerca de 2000 a cerca de 2800 g/mol, de cerca de 2100 a cerca de 2700 g/mol, de cerca de 2200 a cerca de 2600 g/mol, de cerca de 2300 a cerca de 2500 g/mol ou de cerca de 2320 a cerca de 2420 g/mol.

Em algumas modalidades, o peso molecular ponderal médio da preparação de oligossacarídeo é de cerca de 2000 a cerca de 2800 g/mol, de cerca de 2100 a cerca de 2700 g/mol, de cerca de 2200 a cerca de 2600 g/mol, de cerca de 2300 a cerca de 2500 g/mol ou de cerca de 2320 a cerca de 2420 g/mol. Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular ponderal médio em uma faixa de pelo menos 500 g/mol, 750 g/mol, 1000 g/mol, ou 1500 g/mol a quase 1750 g/mol, 2000 g/mol, 2250 g/mol, 2500 g/mol ou 3000 g/mol. Em algumas modalidades, o peso molecular ponderal médio de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento é determinado por HPLC de acordo com o Exemplo 9.

[0328] Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento tem um peso molecular numérico médio de cerca de 100 a cerca de 10000 g/mol, de cerca de 200 a cerca de 8000 g/mol, de cerca de 300 a cerca de 5000 g/mol, de cerca de 500 a cerca de 5000 g/mol, de cerca de 700 a cerca de 5000 g/mol, de cerca de 900 a cerca de 5000 g/mol, de cerca de 1100 a cerca de 5000 g/mol, de cerca de 1300 a cerca de 5000 g/mol, de cerca de 1500 a cerca de 5000 g/mol, de cerca de 1700 a cerca de 5000 g/mol, de cerca de 300 a cerca de 4500 g/mol, de cerca de 500 a cerca de 4500 g/mol, de cerca de 700 a cerca de 4500 g/mol, de cerca de 900 a cerca de 4500 g/mol, de cerca de 1100 a cerca de 4500 g/mol, de cerca de 1300 a cerca de 4500 g/mol, de cerca de 1500 a cerca de 4500 g/mol, de cerca de 1700 a cerca de 4500 g/mol, de cerca de 1900 a cerca de 4500 g/mol, de cerca de 300 a cerca de 4000 g/mol, de cerca de 500 a cerca de 4000 g/mol, de cerca de 700 a cerca de 4000 g/mol, de cerca de 900 a cerca de 4000 g/mol, de cerca de 1100 a cerca de 4000 g/mol, de cerca de 1300 a cerca de 4000 g/mol, de cerca de 1500 a cerca de 4000 g/mol, de cerca de 1700 a cerca de 4000 g/mol, de cerca de 1900 a cerca de 4000 g/mol, de cerca de 300 a cerca de 3000 g/mol, de cerca de 500 a cerca de 3000 g/mol, de cerca de 700 a cerca de 3000 g/mol, de cerca de 900 a cerca de 3000 g/mol, de cerca de 1100 a cerca de 3000 g/mol, de cerca de 1300 a cerca de 3000 g/mol, de cerca de 1500 a cerca de 3000 g/mol, de cerca de 1700 a cerca de 3000 g/mol, de cerca de 1900 a cerca de 3000 g/mol, de cerca de 2100 a cerca de 3000 g/mol, de cerca de 300 a cerca de 2500 g/mol, de cerca de 500 a cerca de 2500 g/mol, de cerca de 700 a cerca de 2500 g/mol, de cerca de 900 a cerca de 2500 g/mol, de cerca de 1100 a cerca de 2500 g/mol, de cerca de 1300 a cerca de 2500 g/mol, de cerca de 1500 a cerca de 2500 g/mol, de cerca de 1700 a cerca de 2500 g/mol, de cerca de 1900 a cerca de 2500 g/mol, de cerca de 2100 a cerca de 2500 g/mol, de cerca de 300 a cerca de 2000 g/mol, de cerca de 500 a cerca de 300 a 2000 g/mol, de cerca de 700 a cerca de 2000 g/mol, de cerca de 900 a cerca de 2000 g/mol, de cerca de 1100 a cerca de 2000 g/mol, de cerca de 300 a cerca de 1500 g/mol, de cerca de 500 a cerca de 1500 g/mol, de cerca de 700 a cerca de 1500 g/mol, de cerca de 900 a cerca de 1500 g/mol, de cerca de 1100 a cerca de 1500 g/mol, de cerca de 1300 a cerca de 1500 g/mol, de cerca de 1000 a cerca de 2000 g/mol, de cerca de 1100 a cerca de 1900 g/mol, de cerca de 1200 a cerca de 1800 g/mol, de cerca de 1300 a cerca de 1700 g/mol, de cerca de 1400 a cerca de 1600 g/mol ou de cerca de 1450 a cerca de 1550 g/mol.

Em algumas modalidades, o peso molecular numérico médio da preparação de oligossacarídeo é de cerca de 1000 a cerca de 2000 g/mol, de cerca de 1100 a cerca de 1900 g/mol, de cerca de 1200 a cerca de 1800 g/mol, de cerca de 1300 a cerca de

1700 g/mol, 1400 a 1600 g/mol ou 1450-1550 g/mol. Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular numérico médio em uma faixa de pelo menos 500 g/mol, 750 g/mol, 1000 g/mol, ou 1500 g/mol a quase 1750 g/mol, 2000 g/mol, 2250 g/mol, 2500 g/mol ou 3000 g/mol. Em algumas modalidades, o peso molecular numérico médio de uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento é determinado por HPLC, de acordo com o Exemplo 9. G. Tipos de Oligossacarídeos

[0329] A espécie de oligossacarídeos presente em uma preparação de oligossacarídeo pode depender do tipo dos um ou mais açúcares de ração. Por exemplo, em algumas modalidades, as preparações de oligossacarídeo compreendem um glico-oligossacarídeo quando os açúcares de ração compreendem glicose. Por exemplo, em algumas modalidades, as preparações de oligossacarídeo compreendem um galacto- oligossacarídeo quando os açúcares de ração compreendem galactose. Para outro exemplo, em algumas modalidades, as preparações de oligossacarídeo compreendem glico-galacto- oligossacarídeos quando os açúcares de ração compreendem galactose e glicose.

[0330] Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende uma ou mais espécies de subunidades de monossacarídeo. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende oligossacarídeos com 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ou mais espécies diferentes de subunidades de monossacarídeos.

[0331] Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende oligossacarídeos com 1, 2, 3 ou 4 espécies diferentes de subunidades de monossacarídeos. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende oligossacarídeos com 1, 2 ou 3 espécies diferentes de subunidades de monossacarídeos. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende oligossacarídeos com 3 espécies diferentes de subunidades de monossacarídeos. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende oligossacarídeos com 2 espécies diferentes de subunidades de monossacarídeos. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende uma espécie de subunidades de monossacarídeos.

[0332] Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende espécies diferentes de oligossacarídeos que, em cada molécula de oligossacarídeo, compreende independentemente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 espécies diferentes de subunidades de monossacarídeos. Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende 102, 103, 104, 105 ou mais espécies diferentes de oligossacarídeos. Em algumas modalidades, alguns dos oligossacarídeos na preparação compreendem uma espécie de subunidades de monossacarídeo e alguns outros oligossacarídeos na mesma preparação compreendem duas ou mais espécies de subunidades de monossacarídeos. Por exemplo, em algumas modalidades, quando os açúcares de ração são glicose e galactose, a preparação de oligossacarídeo pode compreender oligossacarídeos que compreendem apenas subunidades de glicose, oligossacarídeos que compreendem apenas subunidades de galactose, oligossacarídeos que compreendem tanto subunidades de glicose quanto galactose em várias razões ou qualquer combinação dos mesmos.

[0333] Em algumas modalidades, qualquer uma ou todas dentre as n frações da preparação de oligossacarídeo compreendem espécies diferentes de subunidades de oligossacarídeos, em que cada oligossacarídeo compreende independentemente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 espécies diferentes de subunidades de monossacarídeos. Em algumas modalidades, alguns dos oligossacarídeos em uma fração da preparação compreendem uma espécie de subunidades de monossacarídeo e alguns outros oligossacarídeos na mesma fração da preparação compreendem duas ou mais espécies de subunidades de monossacarídeos.

[0334] Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende uma ou mais subunidades de monossacarídeo selecionadas a partir de um grupo que consiste em: triose, tetrose, pentose, hexose, heptose e qualquer combinação dos mesmos, em que cada uma das ditas subunidades de triose, tetrose, pentose, hexose ou heptose é independente e opcionalmente funcionalizada e/ou substituída com uma de suas subunidades anidras correspondentes. Em algumas modalidades, a subunidade anidra correspondente é um produto de desidratação térmica da subunidade de monossacarídeo. Em algumas modalidades, a subunidade anidra correspondente é um produto de caramelização da subunidade de monossacarídeo.

[0335] Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende subunidades de pentose, subunidades de hexose ou qualquer combinação das mesmas, em que cada uma das ditas subunidades de pentose ou hexose é independente e opcionalmente funcionalizada e/ou substituída com uma de suas subunidades anidras correspondentes. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende subunidades de hexose, em que cada uma das ditas subunidades de hexose é independente e opcionalmente substituída com uma de suas subunidades anidras correspondentes.

[0336] Como usado no presente documento, uma tetrose se refere a um monossacarídeo com quatro átomos de carbono, como eritrose, treose e eritrulose. Como usado no presente documento, uma pentose se refere a um monossacarídeo com cinco átomos de carbono, como arabinose, lixose, ribose e xilose. Como usado no presente documento, uma hexose se refere a um monossacarídeo com seis átomos de carbono, como alose, altrose, glicose, manose, gulose, idose, galactose, talose, psicose, frutose, sorbose e tagatose. Como usado no presente documento, uma heptose se refere a um monossacarídeo com sete átomos de carbono, como sedo-heptulose e mano- heptulose.

[0337] Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende subunidade de glicose, em que pelo menos uma glicose subunidade é opcionalmente substituída com uma subunidade de glicose anidra. Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende subunidade de galactose, em que pelo menos uma subunidade de galactose é opcionalmente substituída com subunidade de galactose anidra. Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende subunidades de galactose e glicose, em que pelo menos uma subunidade de galactose ou pelo menos uma subunidade de glicose é opcionalmente substituída com uma de suas subunidades anidras correspondentes. Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende frutose e subunidades de glicose, em que pelo menos uma subunidade de frutose ou pelo menos uma subunidade de glicose é opcionalmente substituída com uma de suas subunidades anidras correspondentes. Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende subunidade de manose e glicose, em que pelo menos uma subunidade de manose ou pelo menos uma subunidade de glicose é opcionalmente substituída com uma de suas subunidades anidras correspondentes.

[0338] Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende uma preparação de glico-galactose-oligossacarídeo, uma preparação de glico-oligossacarídeo, uma preparação de galacto-oligossacarídeo, uma preparação de fruto- oligossacarídeo, uma preparação de mano-oligossacarídeo, uma preparação de arabino-oligossacarídeo, uma preparação de xilo-oligossacarídeo, uma preparação de glico-fruto- oligossacarídeo, uma preparação de glico-mano- oligossacarídeo, uma preparação de glico-arabino- oligossacarídeo, uma preparação de glico-xilo- oligossacarídeo, uma preparação de galacto-fruto- oligossacarídeo, uma preparação de galacto-mano- oligossacarídeo, uma preparação de galacto-arabino- oligossacarídeo, uma preparação de galacto-xilo- oligossacarídeo, uma preparação de fruto-mano- oligossacarídeo, uma preparação de fruto-arabino-

oligossacarídeo, uma preparação de fruto-xilo- oligossacarídeo, uma preparação de mano-arabino- oligossacarídeo, uma preparação de mano-xilo- oligossacarídeo, uma preparação de arabino-xilo- oligossacarídeo, uma preparação de galacto-arabino-xilo- oligossacarídeo, uma preparação de fruto-galacto-xilo- oligossacarídeo, uma preparação de arabino-fruto-mano-xilo- oligossacarídeo, uma preparação de glico-fruto-galacto- arabino-oligossacarídeo, uma preparação de fruto-glico- arabino-mano-xilo-oligossacarídeo, uma preparação de glico- galacto-fruto-mano-arabinoxilo-oligossacarídeo ou quaisquer combinações dos mesmos; em que cada uma das subunidades de monossacarídeo na preparação é independente e opcionalmente funcionalizada e/ou substituída com uma de suas subunidades anidras correspondentes.

[0339] Em determinadas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende mais que 99 % de subunidades de glicose em peso. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende apenas subunidades de glicose.

[0340] Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende cerca de 45 % a 55 % de subunidades de glicose e cerca de 55 % a 45 % de subunidades de galactose em peso. Em algumas modalidades específicas, a preparação de oligossacarídeo compreende cerca de 50 % de subunidades de glicose e 50 % de galactose em peso.

[0341] Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende cerca de 80 % a 95 % de subunidades de glicose e cerca de

20 % a 5 % de subunidades de manose em peso. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende cerca de 85 % a 90 % de subunidades de glicose e cerca de 15 % a 10 % de subunidades de manose em peso.

[0342] Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende cerca de 80 % a 95 % de subunidades de glicose e cerca de 20 % a 5 % de subunidades de galactose em peso. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende cerca de 85 % a 90 % de subunidades de glicose e cerca de 15 % a 10 % de subunidades de galactose em peso.

[0343] Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende cerca de 80 % a 95 % de subunidades de glicose, 0 % a 8 % de subunidades de galactose, e 5 % a 20 % de subunidades de manose em peso. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende cerca de 80 % a 90 % de subunidades de glicose, 1 % a 5 % de subunidades de galactose, e 10 % a 15 % de subunidades de manose em peso.

[0344] Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende de cerca de 1 % em peso a cerca de 100 % em peso, de cerca de 50 % em peso a cerca de 100 % em peso, de cerca de 80 % em peso a cerca de 98 % em peso, ou de cerca de 85 % em peso a cerca de 95 % em peso de subunidades de glicose, ou quaisquer faixas entre essas. Em algumas modalidades, subunidades de galactose estão presentes em uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento em uma quantidade de cerca de 0 % em peso a cerca de 90 % em peso, de cerca de 1 % em peso a cerca de 50 % em peso, de cerca de

2 % em peso a cerca de 20 % em peso ou de cerca de 5 % em peso a cerca de 15 % em peso, ou quaisquer faixas entre essas. Em algumas modalidades, subunidades de manose estão presentes em uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento em uma quantidade de cerca de 0 % em peso a cerca de 90 % em peso, de cerca de 1 % em peso a cerca de 50 % em peso, de cerca de 2 % em peso a cerca de 20 % em peso ou de cerca de 5 % em peso a cerca de 15 % em peso, ou quaisquer faixas entre essas.

[0345] Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento tem a composição de subunidades de monossacarídeo, como mostrado na Tabela 29. Tabela 29. Composições Exemplificativas de Preparações de Oligossacarídeo Subunidades Subunidades Subunidades Subunidades de Composição de glicose de manose e de frutose galactose e de Oligo e glicose manose e frutose galactose nº anidra (% anidra (% anidra (% anidra (% em peso) em peso) em peso) em peso) 1 87,5 12,5 0 0 2 100 0 0 0 3 85 2,5 12,5 0 4 87,5 0 12,5 0 5 50 50 0 0 6 75 0 25 0 7 9 6 0 0 8 90 0 10 0 9 95 5 0 0 10 97,5 2,5 0 0

Subunidades Subunidades Subunidades Subunidades de Composição de glicose de manose e de frutose galactose e de Oligo e glicose manose e frutose galactose nº anidra (% anidra (% anidra (% anidra (% em peso) em peso) em peso) em peso) 11 85 5 10 0 12 85 1,5 13,5 0 13 80 10 10 0 14 85 0 15 0 15 85 15 0 0 16 87,5 0 0 12,5 H. Forma em D vs. Forma em L

[0346] Em algumas modalidades, pelo menos uma subunidade de monossacarídeo em um oligossacarídeo está na forma em L. Em algumas modalidades, pelo menos uma subunidade de monossacarídeos em um oligossacarídeo está na forma em D. Em algumas modalidades, as subunidades de monossacarídeo em uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento estão em suas formas naturalmente abundantes, por exemplo, D-glicose, D-xilose e L-arabinose.

[0347] Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende uma mistura de formas em L e D de subunidades de monossacarídeo. Em algumas modalidades, a razão de subunidades de monossacarídeo na forma em L para D ou na forma em D para L é de cerca de 1:1, cerca de 1:2, cerca de 1:3, cerca de 1:4, cerca de 1:5, cerca de 1:6, cerca de 1:7, cerca de 1:8, cerca de 1:9, cerca de 1:10, cerca de 1:12, cerca de 1:14, cerca de 1:16, cerca de 1:18, cerca de 1:20,

cerca de 1:25, cerca de 1:30, cerca de 1:35, cerca de 1:40, cerca de 1:45, cerca de 1:50, cerca de 1:55, cerca de 1:60, cerca de 1:65, cerca de 1:70, cerca de 1:75, cerca de 1:80, cerca de 1:85, cerca de 1:90, cerca de 1:100 ou cerca de 1:150. I. Oligossacarídeos Funcionalizados

[0348] Em algumas modalidades, um ou mais oligossacarídeos na preparação são independentemente funcionalizados. Os oligossacarídeos funcionalizados podem ser produzidos por, por exemplo, combinação de um ou mais açúcares com um ou mais compostos de funcionalização na presença de um catalisador. Os métodos para produzir oligossacarídeos funcionalizados são descritos nos documentos nº WO 2012/118767, WO 2014/031956, e WO/2016/122887, que são incorporados ao presente documento a título de referência em suas totalidades e para suas revelações.

[0349] Em algumas modalidades, o composto de funcionalização compreende um ou mais grupos ácidos (por exemplo, -COOH), grupos hidroxila, ou grupos que contêm N (por exemplo, –CN, -NO2, e -N(Ra)2, em que Ra é grupos hidrogênio, alquila, alquenila, alquinila, haloalquila, heteroalquila, cicloalquila, arila, heterocicloalquila, ou heteroarila), grupos que contêm S (por exemplo, tiol e sulfatos), haletos (por exemplo, -Cl), grupos que contêm P (por exemplo, fosfato) ou qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, o composto de funcionalização é ligado a pelo menos uma subunidade de monossacarídeo por meio de uma ligação de éter, éster, oxigênio-enxofre, amina ou oxigênio-fósforo. Em algumas modalidades, um ou mais compostos de funcionalização são ligados a uma subunidade de monossacarídeo por meio de uma ligação simples. Em algumas modalidades, pelo menos um composto de funcionalização é ligado a um ou dois oligossacarídeos por meio de duas ou mais ligações.

[0350] Deve-se entender que para cada oligossacarídeo na preparação de oligossacarídeo, cada uma das modalidades descritas é independente e pode ser combinada como se cada uma e toda a combinação fosse listada separadamente; desse modo, qualquer combinação das modalidades é abrangida pela presente revelação. Por exemplo, as várias modalidades podem ser agrupadas em diversas categorias que incluem, porém sem limitação, (i) a presença ou ausência de subunidade anidra; (ii) o número e o nível de subunidade anidra, (iii) o tipo de espécies de subunidade anidra, (iv) a localização de subunidade anidra, (v) o grau de polimerização, (vi) o peso molecular, (vii) a presença ou ausência de quaisquer grupos funcionais, (viii) o tipo do oligossacarídeo, (ix) o tipo de ligação glicosídica, e (x) a forma em L versus a forma em D. Consequentemente, a preparação de oligossacarídeo descrita compreende uma pluralidade de oligossacarídeos de espécies diferentes. Em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento compreende pelo menos 10, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109 ou 1010 espécies de oligossacarídeos diferentes. Em algumas modalidades, a preparação compreende pelo menos 103, 104, 105, 106 ou 109 espécies de oligossacarídeo diferentes. Em algumas modalidades, a preparação compreende pelo menos 103 espécies de oligossacarídeo diferentes. III. Métodos de Fabricação de Preparações de Oligossacarídeo

[0351] Em um aspecto, são fornecidos no presente documento métodos para fabricar preparações de oligossacarídeo.

Em algumas modalidades, são fornecidos no presente documento métodos para fabricar preparações de oligossacarídeo adequadas para o uso em a composição nutricional, como uma composição de ração animal, ou que é alimentada diretamente a um animal.

Em um aspecto, são fornecidos no presente documento métodos para fabricar uma preparação de oligossacarídeo que compreendem aquecer uma composição aquosa que compreende um ou mais açúcares de ração e um catalisador a uma temperatura e por um tempo suficiente para induzir a polimerização, em que o catalisador é selecionado a partir do grupo que consiste em: ácido (+)- canfor-10-sulfônico; ácido 2-piridinossulfônico; ácido 3- piridinossulfônico; hidrato de ácido 8-hidroxi-5- quinolinassulfônico; ácido α-hidroxi-2- piridinametanossulfônico; ácido (β)-canfor-10-sulfônico; ácido butilfosfônico; ácido difenilfosfínico; ácido hexilfosfônico; ácido metilfosfônico; ácido fenilfosfínico; ácido fenilfosfônico; ácido terc-bultifosfônico; SS)-VAPOL hidrogenofosfato; ácido 6-quinolinassulfônico, 3-(1- piridinio)-1-propanossulfonato; ácido 2-(2- piridinil)etanossulfônico; hidrato de sal monossódico de ácido 3-(2-piridil)-5,6-difenil-1,2,4-triazina-p,p'- dissulfônico; 1,1'-binaftil-2,2'-di-il-hidrogenofosfato; ácido bis(4-metoxifenil)fosfínico; ácido fenil(3,5- xilil)fosfônico; mono-hidrato de ácido L-cisteico; poli(ácido sulfônico estireno -co- divinilbenzeno); lisina; Ácido etanodissulfônico; Ácido etanossulfônico; Ácido isetiônico; Ácido homocisteico; HEPBS (ácido N-(2-

hidroxietil)piperazina-N'-(4-butanossulfônico)); HEPES (ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinaetanossulfônico); Ácido 2-hidroxi-3-morfolinopropanossulfônico; Ácido 2-(N- morfolino)etanossulfônico; Ácido metanossulfônico; Metaniazida; Ácido naftaleno-1-sulfônico; Ácido naftaleno- 2-sulfônico; Ácido perfluorobutanossulfônico; 6- Sulfoquinovose; Ácido tríflico; Ácido 2- aminoetanossulfônico; Ácido benzoico; Ácido cloroacético; Ácido trifluoroacético; Ácido caproico; Ácido enântico; Ácido caprílico; Ácido pelargônico; Ácido láurico; Ácido palmítico; Ácido esteárico; Ácido araquidônico; Ácido aspártico; Ácido glutâmico; Serina; Treonina; Glutamina; Cisteína; Glicina; Prolina; Alanina; Valina; Isoleucina; Leucina; Metionina; Fenilalanina; Tirosina; Triptofano, e em que a preparação de oligossacarídeo compreende pelo menos n frações de oligossacarídeos, em que cada uma tem um grau distinto de polimerização selecionado a partir de 1 (fração de DP1) a n (fração de DPn), em que n é um número inteiro maior que 2.

[0352] Em algumas modalidades, n é um número inteiro maior que ou igual a 3. Em algumas modalidades, n é um número inteiro em uma faixa de 1 a 100, como 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40 ou 50. Em algumas modalidades, a polimerização dos açúcares de ração é alcançada por uma polimerização de crescimento em etapas. Em algumas modalidades, a polimerização dos açúcares de ração é alcançada pela policondensação. A. Açúcar de Ração

[0353] Em algumas modalidades, um método de fabricação de preparações de oligossacarídeo descrito no presente documento compreende aquecer um ou mais tipos de açúcares de ração. Em algumas modalidades, os um ou mais tipos de açúcares de ração compreendem monossacarídeos, dissacarídeos, trissacarídeos, tetrassacarídeos, ou quaisquer misturas dos mesmos.

[0354] Em algumas modalidades, os um ou mais açúcares de ração compreendem glicose. Em algumas modalidades, os um ou mais açúcares de ração compreendem glicose e galactose. Em algumas modalidades, os um ou mais açúcares de ração compreendem glicose, xilose e galactose. Em algumas modalidades, os um ou mais açúcares de ração compreendem glicose e manose. Em algumas modalidades, os um ou mais açúcares de ração compreendem glicose e frutose. Em algumas modalidades, os um ou mais açúcares de ração compreendem glicose, frutose e galactose. Em algumas modalidades, os um ou mais açúcares de ração compreendem glicose, galactose e manose.

[0355] Em algumas modalidades, os um ou mais açúcares de ração compreendem dissacarídeos, como lactose, sacarose e celobiose. Em algumas modalidades, os um ou mais açúcares de ração compreendem trissacarídeos, como maltotriose ou rafinose. Em determinadas modalidades, os um ou mais açúcares de ração compreendem glicose, manose, galactose, xilose, malto-dextrina, arabinose ou galactose, ou quaisquer combinações dos mesmos. Em determinadas modalidades, os um ou mais açúcares de ração compreendem xarope de açúcar, como xarope de milho. Em algumas modalidades, os um ou mais açúcares de ração compreendem glicose e lactose. Em algumas modalidades, os um ou mais açúcares de ração compreendem glicose e sacarose.

[0356] Em algumas modalidades, o tipo de açúcares de ração pode impactar as preparações de oligossacarídeo fabricadas resultantes. Por exemplo, em algumas variações em que os um ou mais açúcares de ração são todos glicose, as preparações de oligossacarídeo resultantes compreendem preparações de glico-oligossacarídeos. Em outras modalidades, em que os um ou mais açúcares de ração são todos manose, as preparações de oligossacarídeo resultantes compreendem preparações de mano-oligossacarídeo. Em algumas modalidades, em que os um ou mais açúcares de ração compreendem glicose e galactose, as preparações de oligossacarídeo resultantes compreendem preparações de glico-galacto-oligossacarídeo. Em ainda outras modalidades, em que os um ou mais açúcares de ração compreendem xilose, glicose e galactose, as preparações de oligossacarídeo resultantes compreendem preparações de glico-galacto-xilo-oligossacarídeo.

[0357] Em algumas modalidades, cada um dos um ou mais açúcares de ração pode estar independentemente em sua forma de desidrato ou hidrato. Em algumas modalidades, os um ou mais açúcares de ração compreendem glicose, galactose, frutose, manose ou qualquer combinação dos mesmos, e em que cada um dentre a glicose, galactose, frutose ou manose está independentemente em sua forma de mono-hidrato ou desidrato. Em algumas modalidades, os um ou mais açúcares de ração compreendem um mono-hidrato de monossacarídeo, como mono- hidrato de glicose. Em algumas modalidades, os um ou mais açúcares de ração compreendem um di-hidrato de sacarídeo, como di-hidrato de trealose. Em algumas modalidades, os um ou mais açúcares de ração compreendem pelo menos um açúcar em sua forma de desidrato e pelo menos um açúcar em sua forma de hidrato.

[0358] Em algumas modalidades, os um ou mais açúcares de ração podem ser fornecidos como uma solução de açúcar, na qual os açúcares são combinados com água e alimentados para o reator. Em algumas modalidades, os açúcares podem ser alimentados para o reator em uma forma sólida e combinados com água no reator. Em algumas modalidades, os um ou mais açúcares de ração são combinados e misturados antes da adição de água. Em outras modalidades, os um ou mais açúcares de ração são combinados em água e misturados após isso.

[0359] Em algumas modalidades, o método compreende combinar dois ou mais açúcares de ração com o catalisador para produzir uma preparação de oligossacarídeo. Em algumas modalidades, os dois ou mais açúcares de ração compreendem glicose, galactose, frutose, manose, lactose ou qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, o método compreende combinar uma mistura de açúcares (por exemplo, monossacarídeos, dissacarídeos e/ou trissacarídeos) com o catalisador para produzir uma preparação de oligossacarídeo. Em outras modalidades, o método compreende combinar a mistura de açúcares e álcoois de açúcar com o catalisador para produzir uma preparação de oligossacarídeo.

[0360] Em algumas modalidades, os um ou mais açúcares de ração compreendem açúcares funcionalizados ou modificados. Os açúcares funcionalizados ou modificados podem compreender açúcares amino, ácidos de açúcar, álcoois de açúcar, amidas de açúcar, éteres de açúcar ou qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, açúcares amino se referem a moléculas de açúcar nas quais um grupo hidroxila é substituído com um grupo amina. Os açúcares amino exemplificativos incluem, porém sem limitação, N-Acetil-d- glicosamina, manosamina, ácido neuramínico, ácido murâmico, N-acetil-neuramina, N-acetil-murâmico, N-acetil- galactosamina, N-acetil-manosa, N-glicolilneuramínico, acarviosina, D-glicosamina e D-galactosamina.

[0361] Nas modalidades, ácidos de açúcar se referem a açúcares com um grupo carboxila. Ácidos exemplificativos de açúcar incluem, porém sem limitação, ácidos aldônicos (como ácido glicérico, ácido xilônico, ácido glicônico e ácido ascórbico), ácidos ulossônicos (como ácido neuramínico e ácidos cetodesoxioctulossônico), ácidos urônicos (como ácido glicurônico, ácido galacturônico, e ácidos idurônico), e ácidos aldáricos (como ácido tartárico, ácido múcico e ácido sacárico).

[0362] Em algumas modalidades, álcoois de açúcar se referem a polióis derivados de açúcar. Alcoóis exemplificativos de açúcar incluem, porém sem limitação, etileno glicol, arabitol, glicerol, eritritol, treitol, xilitol, ribitol, manitol, sorbitol, galactitol, fucitol, iditol, inositol e volemitol.

[0363] Em algumas modalidades, amidas de açúcar se referem a moléculas de açúcar que contêm um grupo -C(=O)-N- . Nas modalidades, éteres de açúcar se referem a moléculas de açúcar que contêm uma ligação de éter, como glicosídeos.

[0364] Em algumas modalidades, os açúcares funcionalizados ou modificados compreendem glicosamina, N- acetilglicosamina, ácido glicurônico, ácido galacturônico, glucitol, xilitol, manitol, sorbitol. Em algumas modalidades, os um ou mais açúcares de ração compreendem desoxiaçúcares, como fucose, ramnose, desoxirribose ou fuculose.

[0365] Em algumas modalidades, um método de fabricação de preparação de oligossacarídeo descrito no presente documento é realizado em escala de gramas. Em algumas modalidades, um método de fabricação de preparação de oligossacarídeo descrito no presente documento é realizado em escala de quilogramas ou superior. Consequentemente, em algumas modalidades, o método compreende aquecer uma composição aquosa que compreende um ou mais açúcares de ração em uma quantidade maior que 0,5, maior que 1, maior que 2, maior que 3, maior que 4, maior que 5, maior que 6, maior que 7, maior que 9, maior que 10, maior que 100 ou maior que 1000 kg. Em algumas modalidades, o método compreende aquecer uma composição aquosa que compreende um ou mais açúcares de ração em uma quantidade de não maior que 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 100, 1000 ou 1500 kg. Em algumas modalidades, o método compreende aquecer uma composição aquosa que compreende um ou mais açúcares de ração em uma quantidade maior que 1 kg. B. Catalisadores

[0366] Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento compreende um ou mais ácidos. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento compreende ácido mineral, ácido carboxílico; amino ácido; ácido sulfônico; ácido borônico; ácido fosfônico; ácido fosfínico; ácido sulfúrico; ácido fosfórico; poli(sulfato- co-divinilbenzeno de ácido sulfônico de estireno-co- vinilbenzil-imidazólio); poli(ácido sulfônico estireno-co- vivinilbenzeno); ácido (+)-canfor-10-sulfônico; ácido 2- piridinossulfônico; ácido 3-piridinossulfônico; hidrato de ácido 8-hidroxi-5-quinolinassulfônico; ácido α-hidroxi-2- piridinametanossulfônico; ácido (β)-canfor-10-sulfônico; ácido butilfosfônico; ácido difenilfosfínico; ácido hexilfosfônico; ácido metilfosfônico; ácido fenilfosfínico; ácido fenilfosfônico; ácido terc-bultifosfônico; SS)-VAPOL hidrogenofosfato; ácido 6-quinolinassulfônico; 3-(1- piridinio)-1-propanossulfonato; ácido 2-(2- piridinil)etanossulfônico; hidrato de sal monossódico de ácido 3-(2-piridil)-5,6-difenil-1,2,4-triazina-p,p'- dissulfônico; 1,1'-binaftil-2,2'-di-il-hidrogenofosfato; ácido bis(4-metoxifenil)fosfínico; ácido fenil(3,5- xilil)fosfônico; mono-hidrato de ácido L-cisteico; ácido acético; ácido propiônico; ácido butanoico; ácido glutâmico; lisina; Ácido etanodissulfônico; Ácido etanossulfônico; Ácido isetiônico; Ácido homocisteico; HEPBS (ácido N-(2- hidroxietil)piperazina-N'-(4-butanossulfônico)); HEPES (ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinaetanossulfônico); Ácido 2-hidroxi-3-morfolinopropanossulfônico; Ácido 2-(N- morfolino)etanossulfônico; Ácido metanossulfônico; Metaniazida; Ácido naftaleno-1-sulfônico; Ácido naftaleno- 2-sulfônico; Ácido perfluorobutanossulfônico; 6- Sulfoquinovose; Ácido tríflico; Ácido 2- aminoetanossulfônico; Ácido benzoico; Ácido cloroacético; Ácido trifluoroacético; Ácido caproico; Ácido enântico; Ácido caprílico; Ácido pelargônico; Ácido láurico; Ácido palmítico; Ácido esteárico; Ácido araquidônico; Ácido aspártico; Ácido glutâmico; Serina; Treonina; Glutamina; Cisteína; Glicina; Prolina; Alanina; Valina; Isoleucina; Leucina; Metionina; Fenilalanina; Tirosina; Triptofano; ácido polimérico; Ácido sustentado por carbono; ou qualquer combinação dos mesmos.

[0367] Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento compreende: ácido (+)-canfor-10- sulfônico; ácido 2-piridinossulfônico; ácido 3- piridinossulfônico; hidrato de ácido 8-hidroxi-5- quinolinassulfônico; ácido α-hidroxi-2- piridinametanossulfônico; ácido (β)-canfor-10-sulfônico; ácido butilfosfônico; ácido difenilfosfínico; ácido hexilfosfônico; ácido metilfosfônico; ácido fenilfosfínico; ácido fenilfosfônico; ácido terc-bultifosfônico; SS)-VAPOL hidrogenofosfato; ácido 6-quinolinassulfônico, 3-(1- piridinio)-1-propanossulfonato; ácido 2-(2- piridinil)etanossulfônico; hidrato de sal monossódico de ácido 3-(2-piridil)-5,6-difenil-1,2,4-triazina-p,p'- dissulfônico; 1,1'-binaftil-2,2'-di-il-hidrogenofosfato; ácido bis(4-metoxifenil)fosfínico; ácido fenil(3,5- xilil)fosfônico; mono-hidrato de ácido L-cisteico; poli(ácido sulfônico estireno -co- divinilbenzeno); lisina; Ácido etanodissulfônico; Ácido etanossulfônico; Ácido isetiônico; Ácido homocisteico; HEPBS (ácido N-(2- hidroxietil)piperazina-N'-(4-butanossulfônico)); HEPES (ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinaetanossulfônico); Ácido 2-hidroxi-3-morfolinopropanossulfônico; Ácido 2-(N- morfolino)etanossulfônico; Ácido metanossulfônico; Metaniazida; Ácido naftaleno-1-sulfônico; Ácido naftaleno- 2-sulfônico; Ácido perfluorobutanossulfônico; 6- Sulfoquinovose; Ácido tríflico; Ácido 2- aminoetanossulfônico; Ácido benzoico; Ácido cloroacético; Ácido trifluoroacético; Ácido caproico; Ácido enântico; Ácido caprílico; Ácido pelargônico; Ácido láurico; Ácido palmítico; Ácido esteárico; Ácido araquidônico; Ácido aspártico; Ácido glutâmico; Serina; Treonina; Glutamina; Cisteína; Glicina; Prolina; Alanina; Valina; Isoleucina; Leucina; Metionina; Fenilalanina; Tirosina; Triptofano; ou qualquer combinação dos mesmos.

[0368] Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é ácido (+)-canfor-10-sulfônico. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é ácido 2-piridinossulfônico. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é ácido 3-piridinossulfônico. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é hidrato de ácido 8-hidroxi-5-quinolinassulfônico. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é ácido α-hidroxi-2-piridinametanossulfônico. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é ácido (β)-canfor-10-sulfônico. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é ácido butilfosfônico. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é ácido difenilfosfínico. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é ácido hexilfosfônico. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é ácido metilfosfônico. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é ácido fenilfosfínico. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é ácido fenilfosfônico. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é ácido terc- bultifosfônico. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é SS)-VAPOL hidrogenofosfato. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é ácido 6- quinolinassulfônico. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é 3-(1-piridinio)-1- propanossulfonato. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é ácido 2-(2- piridinil)etanossulfônico. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é hidrato de sal monossódico de ácido 3-(2-piridil)-5,6-difenil-1,2,4- triazina-p,p'-dissulfônico. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é 1,1'-binaftil- 2,2'-di-il-hidrogenofosfato. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é ácido bis(4- metoxifenil)fosfínico. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é ácido fenil(3,5- xilil)fosfônico. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é mono-hidrato de ácido L- cisteico. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é poli(ácido sulfônico estireno-co- divinilbenzeno). Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é lisina.

[0369] Em algumas modalidades, o catalisador é Ácido etanodissulfônico. Em algumas modalidades, o catalisador é Ácido etanossulfônico. Em algumas modalidades, o catalisador é Ácido isetiônico. Em algumas modalidades, o catalisador é Ácido homocisteico. Em algumas modalidades, o catalisador é HEPBS (ácido N-(2-hidroxietil)piperazina-N'-(4- butanossulfônico)). Em algumas modalidades, o catalisador é HEPES (ácido 4-(2-hidroxietil)-1- piperazinaetanossulfônico). Em algumas modalidades, o catalisador é Ácido 2-hidroxi-3-morfolinopropanossulfônico.

Em algumas modalidades, o catalisador é ácido 2-(N- morfolino) etanossulfônico.

Em algumas modalidades, o catalisador é Ácido metanossulfônico.

Nas modalidades, o catalisador é Ácido naftaleno-1-sulfônico.

Em algumas modalidades, o catalisador é Metaniazida.

Em algumas modalidades, o catalisador é Ácido naftaleno-2-sulfônico.

Em algumas modalidades, o catalisador é Ácido perfluorobutanossulfônico.

Em algumas modalidades, o catalisador é 6-sulfoquinovose.

Em algumas modalidades, o catalisador é Ácido triflico.

Em algumas modalidades, o catalisador é ácido 2-aminoetanossulfônico.

Em algumas modalidades, o catalisador é Ácido benzoico.

Em algumas modalidades, o catalisador é Ácido cloroacético.

Em algumas modalidades, o catalisador é Ácido trifluoroacético.

Em algumas modalidades, o catalisador é Ácido caproico.

Em algumas modalidades, o catalisador é Ácido enântico.

Em algumas modalidades, o catalisador é Ácido caprílico.

Em algumas modalidades, o catalisador é Ácido pelargônico.

Em algumas modalidades, o catalisador é Ácido láurico.

Em algumas modalidades, o catalisador é Ácido palmítico.

Em algumas modalidades, o catalisador é Ácido esteárico.

Em algumas modalidades, o catalisador é Ácido araquídico.

Em algumas modalidades, o catalisador é Ácido aspártico.

Em algumas modalidades, o catalisador é Ácido glutâmico.

Em algumas modalidades, o catalisador é Serina.

Em algumas modalidades, o catalisador é Treonina.

Em algumas modalidades, o catalisador é Glutamina.

Em algumas modalidades, o catalisador é Cisteína.

Em algumas modalidades, o catalisador é Glicina.

Em algumas modalidades, o catalisador é Prolina. Em algumas modalidades, o catalisador é Alanina. Em algumas modalidades, o catalisador é Valina. Em algumas modalidades, o catalisador é Isoleucina. Em algumas modalidades, o catalisador é Leucina. Em algumas modalidades, o catalisador é Metionina. Em algumas modalidades, o catalisador é Fenilalanina. Em algumas modalidades, o catalisador é Tirosina. Em algumas modalidades, o catalisador é Triptofano.

[0370] Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é um catalisador polimérico ou um catalisador que suporta carbono revelado no documento nº WO 2016122887, que é incorporado ao presente documento a título de referência em sua totalidade e para sua revelação.

[0371] Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento está presente em uma quantidade de cerca de 0,01 % a cerca de 5 %, de cerca de 0,02 % a cerca de 4 %, de cerca de 0,03 % a cerca de 3 % ou de cerca de 0,05 % a cerca de 2 % dos um ou mais açúcares de ração em peso seco. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento está presente em uma quantidade de cerca de 1 % a 2 % dos um ou mais açúcares de ração em peso seco. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento está presente em uma quantidade de cerca de 0,5 %, cerca de 0,6 %, cerca de 0,7 %, cerca de 0,8 %, cerca de 0,9 %, cerca de 1,0 %, cerca de 1,1 %, cerca de 1,2 %, cerca de 1,3 %, cerca de 1,4 %, cerca de 1,5 %, cerca de 1,6 %, cerca de 1,7 %, cerca de 1,8 %, cerca de 1,9 %, cerca de 2,0 %, cerca de 2,1 %, cerca de 2,2 %, cerca de 2,3 %, cerca de 2,4 %, cerca de 2,5 %, cerca de 2,6 %, cerca de 2,7 %, cerca de

2,8 %, cerca de 2,9 % ou cerca de 3,0 % dos um ou mais açúcares de ração em peso seco.

[0372] Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento está presente em uma quantidade de cerca de 0,01 % a cerca de 5 %, de cerca de 0,02 % a cerca de 4 %, de cerca de 0,03 % a cerca de 3 % ou de cerca de 0,05 % a cerca de 2 % da composição aquosa em peso seco. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento está presente em uma quantidade de cerca de 1 % a 2 % da composição aquosa em peso seco. Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento está presente em uma quantidade de cerca de 0,8 %, cerca de 0,9 %, cerca de 1,0 %, cerca de 1,1 %, cerca de 1,2 %, cerca de 1,3 %, cerca de 1,4 %, cerca de 1,5 %, cerca de 1,6 %, cerca de 1,7 %, cerca de 1,8 %, cerca de 1,9 %, cerca de 2,0 %, cerca de 2,1 %, cerca de 2,2 %, cerca de 2,3 %, cerca de 2,4 %, cerca de 2,5 %, cerca de 2,6 %, cerca de 2,7 %, cerca de 2,8 %, cerca de 2,9 % ou cerca de 3,0 % da composição aquosa em peso seco.

[0373] Em algumas modalidades, o catalisador fornecido no presente documento é uma combinação de dois ou mais catalisadores diferentes. Em algumas modalidades, o catalisador compreende um catalisador reciclável, como resinas e catalisadores poliméricos e um catalisador não reciclável. Em algumas modalidades, em que o catalisador compreende pelo menos dois catalisadores diferentes, cada um dos catalisadores está presente em uma quantidade fornecida no presente documento. Em outras modalidades, em que o catalisador compreende pelo menos dois catalisadores diferentes, os pelo menos dois catalisadores diferentes estão presentes em agregado em uma quantidade fornecida no presente documento.

[0374] Em algumas modalidades, o catalisador é adicionado à composição aquosa em uma forma seca. Em outras modalidades, o catalisador é adicionado na composição aquosa em uma forma úmida, como em uma solução aquosa. Em alguma modalidade, o catalisador é combinado com os um ou mais açúcares de ração antes da adição de água. Em outras modalidades, o catalisador é dissolvido em água antes de sua combinação com os um ou mais açúcares de ração. Em algumas modalidades, o método fornecido no presente documento compreende produzir uma composição aquosa combinando-se os um ou mais açúcares de ração na forma de desidrato e o catalisador em uma forma úmida (por exemplo, como uma solução aquosa). C. Adição de Água

[0375] Em algumas modalidades, os métodos para fabricar as preparações de oligossacarídeo compreendem adicionar água para formar a composição aquosa. Em algumas modalidades, toda ou parte da água na composição aquosa é adicionada como água livre. Em outras modalidades, toda a água na composição aquosa é adicionada como água ligada, por exemplo, em mono ou di-hidrato de sacarídeo. Em algumas modalidades, toda a água na composição aquosa é adicionada como água ligada em mono-hidrato de monossacarídeo, como mono-hidrato de glicose. Em determinadas modalidades, toda ou parte da água na composição aquosa é adicionada com o catalisador, isto é, por meio de uma solução de catalisador. D. Teor de Água

[0376] Como os métodos de fabricação das preparações de oligossacarídeo prosseguiram, a água pode ser produzida através de reação. Por exemplo, em algumas modalidades, a água é produzida (i) com a formação de uma ligação glicosídica, (ii) com a formação de uma subunidade anidra, ou (iii) através de outros mecanismos ou fontes. Como as reações de condensação e desidratação de açúcar envolvem água, em algumas modalidades, o teor de água influencia a composição da preparação de oligossacarídeo.

[0377] Ademais, em algumas modalidades, o teor de água influência a viscosidade da composição aquosa, que, por sua vez, pode afetar a eficácia de mistura da composição aquosa. Por exemplo, em algumas modalidades, uma composição aquosa excessivamente viscosa pode resultar em uma distribuição de catalisador heterogênea indesejável na composição aquosa. Além disso, em algumas modalidades, teor de água muito baixo pode resultar na solidificação da composição aquosa, que impede a mistura eficaz. Por outro lado, em algumas outras modalidades, o teor de água excessivamente alto pode impedir a reação de condensação de açúcar e diminuir o nível das subunidades anidras. Consequentemente, a presente revelação descreve o teor de água adequado para a fabricação de preparações de oligossacarídeo.

[0378] Em algumas modalidades, um método de fabricação de preparação de oligossacarídeo descrito no presente documento compreende formar e/ou aquecer uma composição aquosa. Em algumas modalidades, a composição aquosa compreende de cerca de 0 % a cerca de 80 %, de cerca de 0 % a cerca de 70 %, de cerca de 0 % a cerca de 60 %, de cerca de 0 % a cerca de 50 %, de cerca de 0 % a cerca de 40 %, de cerca de 0 % a cerca de 35 %, de cerca de 0 % a cerca de 30 %, de cerca de 0 % a cerca de 25 %, de cerca de 0 % a cerca de 20 %, de cerca de 0 % a cerca de 19 %, de cerca de 0 % a cerca de 18 %, de cerca de 0 % a cerca de 17 %, de cerca de 0 % a cerca de 16 %, de cerca de 0 % a cerca de 15 %, de cerca de 0 % a cerca de 14 %, de cerca de 0 % a cerca de 13 %, de cerca de 0 % a cerca de 12 %, de cerca de 0 % a cerca de 11 %, de cerca de 0 % a cerca de 10 %, de cerca de 0 % a cerca de 9 %, de cerca de 0 % a cerca de 8 %, de cerca de 0 % a cerca de 7 %, de cerca de 0 % a cerca de 6 %, de cerca de 0 % a cerca de 5 %, de cerca de 0 % a cerca de 4 %, de cerca de 0 % a cerca de 3 %, de cerca de 0 % a cerca de 2 % ou de cerca de 0 % a cerca de 1 % de água em peso total.

Em algumas modalidades, a composição aquosa compreende de cerca de 1 % a cerca de 20 %, de cerca de 1 % a cerca de 18 %, de cerca de 1 % a cerca de 16 %, de cerca de 1 % a cerca de 14 %, de cerca de 1 % a cerca de 12 %, de cerca de 1 % a cerca de 10 %, de cerca de 1 % a cerca de 8 %, de cerca de 1 % a cerca de 6 % ou de cerca de 1 % a cerca de 4 % de água em peso total.

Em algumas modalidades, a composição aquosa compreende de cerca de 3 % a cerca de 16 %, de cerca de 3 % a cerca de 14 %, de cerca de 3 % a cerca de 12 %, de cerca de 3 % a cerca de 10 %, de cerca de 3 % a cerca de 8 %, de cerca de 3 % a cerca de 6 %, de cerca de 5 % a cerca de 16 %, de cerca de 5 % a cerca de 14 %, de cerca de 5 % a cerca de 12 %, de cerca de 5 % a cerca de 10 %, de cerca de 7 % a cerca de 16 %, de cerca de 7 % a cerca de 14 %, de cerca de 7 % a cerca de 12 %, de cerca de 7 % a cerca de 10 % ou de cerca de 8 % a cerca de 10 % de água em peso total.

Em algumas modalidades, a composição aquosa compreende cerca de 1 %, cerca de 2 %, cerca de 3 %, cerca de 4 %, cerca de 5 %, cerca de 6 %, cerca de 7 %, cerca de 8 %, cerca de 9 %, cerca de 10 %, cerca de 11 %, cerca de 12 %, cerca de 13 %, cerca de 14 % ou cerca de 15 % de água em peso total. Em algumas modalidades, a composição aquosa compreende cerca de 9 % de água em peso total. Deve-se entender, no entanto, que a quantidade de água na composição aquosa pode ser ajustada com base nas condições de reação e no catalisador específico usado. Em algumas modalidades, o teor de água na composição aquosa, como revelado acima, é medido no início da reação, por exemplo, antes de aquecer os açúcares de ração. Em algumas modalidades, o teor de água na composição aquosa, como revelado acima, é medido ao fim da polimerização ou reação de condensação. Em algumas modalidades, o teor de água na composição aquosa, como revelado acima, é medido como um teor de água médio do início da reação e ao fim da reação.

[0379] Em determinadas modalidades, um método descrito no presente documento pode compreender adicionalmente monitorar o teor de água presente na composição aquosa e/ou na razão de água para açúcares ou catalisador ao longo de um período de tempo. Em algumas modalidades, o método compreende adicionalmente remover pelo menos uma porção de água na composição aquosa, por exemplo, por destilação. Qualquer método conhecido na técnica pode ser usado para remover a água da composição aquosa, incluindo, por exemplo, por filtração a vácuo, destilação a vácuo, aquecimento, vapor, ar quente e/ou evaporação.

[0380] Em algumas modalidades, as preparações de oligossacarídeo descritas no presente documento são higroscópicas. Desse modo, em algumas modalidades, a higroscopicidade dos açúcares de ração e dos oligossacarídeos formados na polimerização pode afetar a taxa pela qual a água pode ser removida da composição aquosa.

[0381] Em algumas modalidades, um método descrito no presente documento compreende remover pelo menos uma porção de água na composição aquosa, de modo que o teor de água na composição aquosa seja de cerca de 1 % a cerca de 20 %, de cerca de 1 % a cerca de 18 %, de cerca de 1 % a cerca de 16 %, de cerca de 1 % a cerca de 14 %, de cerca de 1 % a cerca de 12 %, de cerca de 1 % a cerca de 10 %, de cerca de 1 % a cerca de 8 %, de cerca de 2 % a cerca de 16 %, de cerca de 2 % a cerca de 14 %, de cerca de 2 % a cerca de 12 %, de cerca de 2 % a cerca de 10 %, de cerca de 2 % a cerca de 8 %, de cerca de 2 % a cerca de 6 %, de cerca de 4 % a cerca de 16 %, de cerca de 4 % a cerca de 14 %, de cerca de 4 % a cerca de 12 %, de cerca de 4 % a cerca de 10 %, de cerca de 4 % a cerca de 8 %, de cerca de 6 % a cerca de 16 %, de cerca de 6 % a cerca de 12 %, de cerca de 6 % a cerca de 10 % ou de cerca de 6 % a cerca de 8 % em peso total. Em algumas modalidades, o método compreende remover pelo menos uma porção de água na composição aquosa, de modo que o teor de água na composição aquosa seja de cerca de 2 % a cerca de 10 %, de cerca de 2 % a cerca de 8 % ou de cerca de 4 % a cerca de 8 % em peso total. Em algumas modalidades, o método compreende remover pelo menos uma porção de água na composição aquosa, de modo que o teor de água na composição aquosa seja de cerca de 2 %, cerca de 3 %, cerca de 4 %, cerca de 5 %, cerca de 6 %, cerca de 7 %, cerca de 8 %, cerca de 9 % ou cerca de 10 % em peso total. Em algumas modalidades, o método compreende remover pelo menos uma porção de água na composição aquosa, de modo que o teor de água na composição aquosa seja de cerca de 4 % a cerca de 8 % em peso total. Em algumas modalidades, o método compreende remover pelo menos uma porção de água na composição aquosa, de modo que, ao fim da polimerização e/ou reação de condensação, o teor de água na composição aquosa seja um teor de água como revelado acima. Em algumas modalidades, o método compreende remover pelo menos uma porção de água na composição aquosa, de modo que, no início da polimerização e/ou reação de condensação, o teor de água na composição aquosa seja um teor de água como revelado acima. Em algumas modalidades, o método compreende remover pelo menos uma porção de água na composição aquosa de modo que o teor de água médio na composição aquosa no início e no fim da polimerização e/ou reação de condensação esteja em uma faixa como revelado acima. Em algumas modalidades, o método compreende remover pelo menos uma porção de água na composição aquosa de modo que, através da polimerização e/ou reação de condensação, o teor de água na composição aquosa permaneça em uma faixa como revelado acima.

[0382] Em algumas modalidades, um método descrito no presente documento compreende adicionar pelo menos uma porção de água na composição aquosa, de modo que o teor de água na composição aquosa seja de cerca de 1 % a cerca de 20 %, de cerca de 1 % a cerca de 18 %, de cerca de 1 % a cerca de 16 %, de cerca de 1 % a cerca de 14 %, de cerca de 1 % a cerca de 12 %, de cerca de 1 % a cerca de 10 %, de cerca de 1 % a cerca de 8 %, de cerca de 2 % a cerca de 16 %, de cerca de 2 % a cerca de 14 %, de cerca de 2 % a cerca de 12 %, de cerca de 2 % a cerca de 10 %, de cerca de 2 % a cerca de 8 %, de cerca de 2 % a cerca de 6 %, de cerca de

4 % a cerca de 16 %, de cerca de 4 % a cerca de 14 %, de cerca de 4 % a cerca de 12 %, de cerca de 4 % a cerca de 10 %, de cerca de 4 % a cerca de 8 %, de cerca de 6 % a cerca de 16 %, de cerca de 6 % a cerca de 12 %, de cerca de 6 % a cerca de 10 % ou de cerca de 6 % a cerca de 8 % em peso total.

Em algumas modalidades, o método compreende adicionar pelo menos uma porção de água na composição aquosa, de modo que o teor de água na composição aquosa seja de cerca de 2 % a cerca de 10 %, de cerca de 2 % a cerca de 8 % ou de cerca de 4 % a cerca de 8 % em peso total.

Em algumas modalidades, o método compreende adicionar pelo menos uma porção de água na composição aquosa, de modo que o teor de água na composição aquosa seja de cerca de 2 %, cerca de 3 %, cerca de 4 %, cerca de 5 %, cerca de 6 %, cerca de 7 %, cerca de 8 %, cerca de 9 % ou cerca de 10 % em peso total.

Em algumas modalidades, o método compreende adicionar pelo menos uma porção de água na composição aquosa, de modo que o teor de água na composição aquosa seja de cerca de 4 % a cerca de 8 % em peso total.

Em algumas modalidades, o método compreende adicionar pelo menos uma porção de água na composição aquosa de modo que, no fim da polimerização e/ou reação de condensação, o teor de água na composição aquosa seja um teor de água como revelado acima.

Em algumas modalidades, o método compreende adicionar pelo menos uma porção de água na composição aquosa de modo que, no início da polimerização e/ou reação de condensação, o teor de água na composição aquosa seja um teor de água como revelado acima.

Em algumas modalidades, o método compreende adicionar pelo menos uma porção de água na composição aquosa de modo que, o teor de água médio na composição aquosa no início e no fim da polimerização e/ou reação de condensação esteja em uma faixa como revelado acima. Em algumas modalidades, o método compreende adicionar pelo menos uma porção de água na composição aquosa de modo que, através da polimerização e/ou reação de condensação, o teor de água na composição aquosa permanece em uma faixa como revelado acima.

[0383] Em algumas modalidades, os graus de polimerização dos oligossacarídeos e/ou a quantidade e o tipo das subunidades anidras na preparação de oligossacarídeo pode ser regulado ajustando-se ou controlando-se o teor de água presente na composição aquosa através do processo de fabricação. Por exemplo, em algumas modalidades, os graus de polimerização dos oligossacarídeos e a quantidade das subunidades anidras são aumentados diminuindo-se o teor de água.

[0384] Consequentemente, em algumas modalidades, um método descrito no presente documento compreende controle em processo (IPC) do teor de água, que pode compreender monitorar o teor de água, manter o teor de água, aumentar o teor de água, diminuir o teor de água ou qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, um processo de IPC compreende manter o teor de água enquanto a composição aquosa é aquecida a uma temperatura descrita no presente documento. Em algumas modalidades, o método compreende manter o teor de água por um tempo suficiente para induzir a polimerização. Em algumas modalidades, o método compreende manter o teor de água em uma faixa revelada adicionando-se água ou removendo- se água da composição aquosa, ou ambos. Em algumas modalidades, o método compreende manter o teor de água em uma faixa revelada por destilação. Em algumas modalidades,

o método compreende manter o teor de água em uma faixa revelada por destilação a vácuo. Em algumas modalidades, o método compreende manter o teor de água em uma faixa revelada por destilação sob pressão atmosférica.

[0385] Em algumas modalidades, o teor de água da composição aquosa é mantido em uma faixa de cerca de 1 % a cerca de 20 %, de cerca de 1 % a cerca de 18 %, de cerca de 1 % a cerca de 16 %, de cerca de 1 % a cerca de 14 %, de cerca de 1 % a cerca de 12 %, de cerca de 1 % a cerca de 10 %, de cerca de 1 % a cerca de 8 %, de cerca de 2 % a cerca de 16 %, de cerca de 2 % a cerca de 14 %, de cerca de 2 % a cerca de 12 %, de cerca de 2 % a cerca de 10 %, de cerca de 2 % a cerca de 8 %, de cerca de 2 % a cerca de 6 %, de cerca de 4 % a cerca de 16 %, de cerca de 4 % a cerca de 14 %, de cerca de 4 % a cerca de 12 %, de cerca de 4 % a cerca de 10 %, de cerca de 4 % a cerca de 8 %, de cerca de 6 % a cerca de 16 %, de cerca de 6 % a cerca de 12 %, de cerca de 6 % a cerca de 10 % ou de cerca de 6 % a cerca de 8 % em peso total. Em algumas modalidades, o teor de água da composição aquosa é mantido em uma faixa de cerca de 2 % a cerca de 10 %, de cerca de 2 % a cerca de 8 % ou de cerca de 4 % a cerca de 8 % em peso total. Em algumas modalidades, o teor de água da composição aquosa é mantido em uma faixa de cerca de 2 % a cerca de 8 % em peso total.

[0386] O teor de água da composição aquosa pode ser determinado por uma variedade de métodos e instrumentos analíticos. Em algumas modalidades, o teor de água é determinado por um método de evaporação (por exemplo, perda em técnica de secagem), um método de destilação, ou um método de reação química (por exemplo, titulação de Karl Fischer).

Em algumas modalidades, o teor de água é determinado por um instrumento analítico, como um analisador de umidade. Em algumas modalidades, o teor de água é determinado por titulação de Karl Fischer.

[0387] Em algumas modalidades, o teor de água da composição aquosa é medido durante a reação e é usado para implantar o controle em processo (IPC) do teor de água. Em determinadas modalidades, o teor de água da reação é medido por titulação de Karl-Fisher, espectroscopia de IR, espectroscopia de NIR, condutividade, viscosidade, densidade, torque de mistura ou energia de mistura. Em algumas modalidades, a medição do teor de água da reação é usada para controlar um aparelho que ativamente ajusta o teor de água da reação, como uma bomba de adição de água ou válvula de fluxo.

[0388] Sem estar ligado por teoria, acredita-se que o teor de água durante a polimerização de açúcar e/ou reação de condensação pode afetar o nível das subunidades anidras em uma preparação de oligossacarídeo descrita no presente documento. Por exemplo, como ilustrado na FIG. 30, em algumas modalidades, um teor de água superior se correlaciona com um nível de subunidades anidras inferior. Em algumas modalidades, uma temperatura de reação inferior pode se correlacionar com um nível inferior de teor de subunidades anidras. E. Temperatura

[0389] Em algumas modalidades, os graus de polimerização dos oligossacarídeos e/ou a quantidade e o tipo das subunidades anidras na preparação de oligossacarídeo podem ser regulados ajustando-se a temperatura, para a qual a composição aquosa é aquecida. Em algumas modalidades, um método descrito no presente documento para fabricar uma preparação de oligossacarídeo compreende aquecer a composição aquosa a uma temperatura de cerca de 80 oC a cerca de 250 oC, de cerca de 90oC a cerca de 200 oC, de cerca de 100 oC a cerca de 200 oC, de cerca de 100 oC a cerca de 180 oC, de cerca de 110 oC a cerca de 170 oC, de cerca de 120 oC a cerca de 160 oC, de cerca de 130 oC a cerca de 150 oC ou de cerca de 135 oC a cerca de 145 oC. Em algumas modalidades, o método de fabricação de uma preparação de oligossacarídeo compreende aquecer a composição aquosa a uma temperatura de cerca de 100 oC a cerca de 200 oC, de cerca de 100 oC a cerca de 180 oC, de cerca de 110 oC a cerca de 170 oC, de cerca de 120 oC a cerca de 160 oC, de cerca de 130 oC a cerca de 150 oC ou de cerca de 135 oC a cerca de 145 oC. Em algumas modalidades, o método de fabricação de uma preparação de oligossacarídeo compreende aquecer a composição aquosa a uma temperatura de cerca de 135 oC a cerca de 145 oC. Em outras modalidades, o método de fabricação de uma preparação de oligossacarídeo compreende aquecer a composição aquosa a uma temperatura de cerca de 125 oC a cerca de 135 oC. F. Tempo de Reação

[0390] Em algumas modalidades, um método descrito no presente documento para fabricar uma preparação de oligossacarídeo compreende aquecer a composição aquosa por um tempo suficiente. Em algumas modalidades, os graus de polimerização dos oligossacarídeos fabricados de acordo com os métodos descritos no presente documento podem ser regulados pelo tempo de reação.

[0391] Em algumas modalidades, o tempo suficiente é prescrito por diversas horas. Por exemplo, em algumas modalidades, o tempo suficiente é de pelo menos 30 minutos, pelo menos 1 hora, pelo menos 2 horas, pelo menos 3 horas, pelo menos 4 horas, pelo menos 5 horas, pelo menos 6 horas, pelo menos 7 horas, pelo menos 8 horas, pelo menos 9 horas ou pelo menos 10 horas. Em algumas modalidades, o tempo suficiente é de cerca de 1 a cerca de 24 horas, de cerca de 1 a cerca de 16 horas, de cerca de 1 a cerca de 8 horas, de cerca de 1 a cerca de 4 horas, de cerca de 1 a cerca de 3 horas, de cerca de 1 a cerca de 2 horas, de cerca de 2 a cerca de 12 horas, de cerca de 2 a cerca de 10 horas, de cerca de 2 a cerca de 8 horas, de cerca de 2 a cerca de 6 horas, de cerca de 2 a cerca de 4 horas, de cerca de 3 a cerca de 8 horas, de cerca de 3 a cerca de 6 horas, de cerca de 3 a cerca de 5 horas ou de cerca de 3 a cerca de 4 horas.

[0392] Em algumas modalidades, o tempo suficiente é determinado medindo-se uma ou mais propriedades químicas ou físicas de uma preparação de oligossacarídeo, por exemplo, teor de água, viscosidade, peso molecular, teor de subunidade anidra e/ou a distribuição de graus de polimerização.

[0393] Em algumas modalidades, o peso molecular da preparação de oligossacarídeo é monitorado durante a polimerização. Em algumas modalidades, o método compreende aquecer a composição aquosa por um tempo suficiente para a composição aquosa alcançar um peso molecular numérico médio ou peso molecular ponderal médio, como descrito no presente documento. Em determinadas modalidades, o método compreende aquecer a composição aquosa por um tempo suficiente para a composição aquosa alcançar um peso molecular numérico médio em uma faixa de cerca de 300 a cerca de 5000 g/mol, de cerca de 500 a cerca de 5000 g/mol, de cerca de 700 a cerca de 5000 g/mol, de cerca de 500 a cerca de 2000 g/mol, de cerca de 700 a cerca de 2000 g/mol, de cerca de 700 a cerca de 1500 g/mol, de cerca de 300 a cerca de 1500 g/mol, de cerca de 300 a cerca de 2000 g/mol, de cerca de 400 a cerca de 1000 g/mol, de cerca de 400 a cerca de 900 g/mol, de cerca de 400 a cerca de 800 g/mol, de cerca de 500 a cerca de 900 g/mol ou de cerca de 500 a cerca de 800 g/mol.

Em determinadas modalidades, o método compreende aquecer a composição aquosa por um tempo suficiente para a composição aquosa alcançar um peso molecular numérico médio de cerca de 500 a cerca de 2000 g/mol.

Em determinadas modalidades, o método compreende aquecer a composição aquosa por um tempo suficiente para a composição aquosa alcançar um peso molecular ponderal médio em uma faixa de cerca de 300 a cerca de 5000 g/mol, de cerca de 500 a cerca de 5000 g/mol, de cerca de 700 a cerca de 5000 g/mol, de cerca de 500 a cerca de 2000 g/mol, de cerca de 700 a cerca de 2000 g/mol, de cerca de 700 a cerca de 1500 g/mol, de cerca de 300 a cerca de 1500 g/mol, de cerca de 300 a cerca de 2000 g/mol, de cerca de 400 a cerca de 1300 g/mol, de cerca de 400 a cerca de 1200 g/mol, de cerca de 400 a cerca de 1100 g/mol, de cerca de 500 a cerca de 1300 g/mol, de cerca de 500 a cerca de 1200 g/mol, de cerca de 500 a cerca de 1100 g/mol, de cerca de 600 a cerca de 1300 g/mol, de cerca de 600 a cerca de 1200 g/mol ou de cerca de 600 a cerca de 1100 g/mol.

Em determinadas modalidades, o método compreende aquecer a composição aquosa por um tempo suficiente para a composição aquosa alcançar um peso molecular ponderal médio de cerca de 700 a cerca de 3000 g/mol.

[0394] Em algumas modalidades, o tempo suficiente é o tempo exigido para a composição aquosa alcançar reação equilíbrio na respectiva temperatura de reação. Consequentemente, em algumas modalidades, o método compreende aquecer a composição aquosa por um tempo suficiente para a composição aquosa alcançar o equilíbrio. Por exemplo, em algumas modalidades, o equilíbrio é determinado medindo-se o peso molecular, a viscosidade ou a distribuição de DP da composição aquosa.

[0395] Em determinadas modalidades, o equilíbrio é determinado medindo-se o peso molecular numérico médio ou ponderal médio da composição aquosa. Em algumas modalidades, o equilíbrio é determinado pelo peso molecular numérico ou ponderal médio da composição aquosa que permanece essencialmente inalterada ao longo do tempo. Em algumas modalidades, o equilíbrio é determinado por uma alteração do peso molecular numérico ou ponderal médio da composição aquosa que é menor que determinada porcentagem ao longo de um período de tempo. Em algumas modalidades, o peso molecular da composição aquosa é medido por HPLC ou SEC.

[0396] Em algumas modalidades, o equilíbrio é determinado por uma alteração do peso molecular numérico ou ponderal médio da composição aquosa menor que 25 %, menor que 20 %, menor que 15 %, menor que 10 % ou menor que 5 % ao longo de um período de tempo. Em algumas modalidades, o equilíbrio é determinado por uma alteração do peso molecular numérico ou ponderal médio da composição aquosa ao longo de um período de 3 horas, 2 horas, 1 hora, 30 minutos, 20 minutos ou 10 minutos. Em algumas modalidades, o equilíbrio é determinado por uma alteração do peso molecular ponderal médio da composição aquosa menor que 15 % ao longo do período de 1 hora.

[0397] Em determinadas modalidades, o equilíbrio é determinado medindo-se a viscosidade da composição aquosa. Em algumas modalidades, o equilíbrio é determinado pela viscosidade da composição aquosa que permanece essencialmente inalterada ao longo do tempo. Em algumas modalidades, o equilíbrio é determinado por uma alteração da viscosidade da composição aquosa que é menor que determinada porcentagem ao longo de um período de tempo. Em algumas modalidades, a viscosidade da composição aquosa é medida por um viscômetro ou reômetro.

[0398] Em algumas modalidades, o equilíbrio é determinado por uma alteração da viscosidade da composição aquosa menor que 25 %, menor que 20 %, menor que 15 %, menor que 10 % ou menor que 5 % ao longo de um período de tempo. Em algumas modalidades, o equilíbrio é determinado por uma alteração da viscosidade da composição aquosa ao longo de um período de 3 horas, 2 horas, 1 hora, 30 minutos, 20 minutos, ou 10 minutos. Em algumas modalidades, o equilíbrio é determinado por uma alteração da viscosidade da composição aquosa menor que 15 % ao longo do período de 1 hora.

[0399] Em determinadas modalidades, o equilíbrio é determinado medindo-se a distribuição de DP da composição aquosa. Em algumas modalidades, o equilíbrio é determinado pela distribuição de DP da composição aquosa que permanece essencialmente inalterada ao longo do tempo. Em algumas modalidades, uma alteração da distribuição de DP da composição aquosa é determinada calculando-se uma série de [ ][H2 O] Km, em que 𝐾𝑚 = [ , em que [H2O] representa a 1 ][ 1]

concentração molar de água (mol/l), e [DP1], [DPm-1] e [DPm] representam as concentrações molares de oligossacarídeos (mol/l) na fração de DP1, DPm-1 e DPm, respectivamente. Por exemplo, K2 é igual [DP2][H2O]/[DP1][DP1] de acordo com a fórmula acima. Em algumas modalidades, m é um número inteiro maior que 1 e menor que n. Em algumas modalidades, m é um número inteiro maior que 1 e menor que ou igual a n. Em algumas modalidades, m é igual a n. Em algumas modalidades, m é 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10.

[0400] Em algumas modalidades, as concentrações dos oligossacarídeos nas frações de DP1, DPm-1 e DPm são determinadas por SEC, HPLC, FFF, A4F, espectrometria de massa, ou qualquer outro método adequado. Em algumas modalidades, as concentrações dos oligossacarídeos nas frações de DP1, DPm-1 e DPm são determinadas por SEC, como GPC. Em algumas modalidades, as concentrações dos oligossacarídeos nas frações de DP1, DPm-1 e DPm são determinadas por espectrometria de massa, como GC-MS, LC- MS/MS, e MALDI-MS. Em algumas modalidades, as concentrações dos oligossacarídeos nas frações de DP1, DPm-1 e DPm são determinadas por HPLC. Em algumas modalidades, a concentração de água é determinada por um método de evaporação (por exemplo, perda na técnica de secagem), um método de destilação, ou por um método de reação química (por exemplo, titulação de Karl Fischer). Em algumas modalidades, a concentração de água é determinada por qualquer instrumento analítico adequado, como um analisador de umidade.

[0401] Em algumas modalidades, o método compreende calcular uma série de pelo menos 3, pelo menos 4, pelo menos

5, pelo menos 6, pelo menos 7, pelo menos 8, pelo menos 9, pelo menos 10, pelo menos 15, pelo menos 20, pelo menos 30, pelo menos 40 ou pelo menos 50 números de Km. Em algumas modalidades, o método compreende calcular uma série de pelo menos 3, pelo menos 4, pelo menos 5, pelo menos 6, pelo menos 7, pelo menos 8, pelo menos 9, pelo menos 10 ou pelo menos 15 números de Km. Em algumas modalidades, o método compreende calcular cerca de 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou 15 números de Km. Em algumas modalidades, o método compreende calcular K2 a K4, K2 a K5, K2 a K6, K2 a K7, K2 a K8, K2 a K9, K2 a K10, K2 a K11, K2 a K12, K2 a K13, K2 a K14, K2 a K15, K3 a K5, K3 a K6, K3 a K7, K3 a K8, K3 a K9, K3 a K10, K3 a K11, K3 a K12, K3 a K13, K3 a K14, ou K3 a K15. Em determinadas modalidades, o método compreende calcular K2 a K4 ou K3 a K5.

[0402] Em algumas modalidades, o valor de Km depende da temperatura, concentração de água e/ou da quantidade e tipo dos açúcares de ração. Em algumas modalidades, Km é de cerca de 0,1 a cerca de 100, de cerca de 0,1 a cerca de 90, de cerca de 0,1 a cerca de 80, de cerca de 0,1 a cerca de 70, de cerca de 0,1 a cerca de 60, de cerca de 0,1 a cerca de 50, de cerca de 0,1 a cerca de 40, de cerca de 0,1 a cerca de 30, de cerca de 0,1 a cerca de 25, de cerca de 0,1 a cerca de 20 ou de cerca de 0,1 a cerca de 15. Em algumas modalidades, Km é de cerca de 1 a cerca de 100, de cerca de 1 a cerca de 90, de cerca de 1 a cerca de 80, de cerca de 1 a cerca de 70, de cerca de 1 a cerca de 60, de cerca de 1 a cerca de 50, de cerca de 1 a cerca de 40, de cerca de 1 a cerca de 30, de cerca de 1 a cerca de 25, de cerca de 1 a cerca de 20, de cerca de 1 a cerca de 15, de cerca de 1 a cerca de 10, de cerca de 5 a cerca de 50, de cerca de 5 a cerca de 40, de cerca de 5 a cerca de 30, de cerca de 5 a cerca de 20, de cerca de 5 a cerca de 15 ou de cerca de 5 a cerca de 10. Em algumas modalidades específicas, Km é de cerca de 1 a cerca de 15 ou de cerca de 5 a cerca de 15.

[0403] Em algumas modalidades, uma média, um desvio padrão e/ou um desvio padrão relativo são determinados pela série de Km calculados. Como usado no presente documento, um desvio padrão relativo é expresso em porcentagem, e é obtido multiplicando-se o desvio padrão por 100 e dividindo-se esse produto pela média.

[0404] Em algumas modalidades, o equilíbrio é determinado pelo desvio padrão relativo da série de Km menor que 30 %, menor que 25 %, menor que 20 %, menor que 15 %, menor que 10 %, menor que 9 %, menor que 8 %, menor que 7 %, menor que 6 %, menor que 5 %, menor que 4 %, menor que 3 %, menor que 2 % ou menor que 1 %. Em algumas modalidades, o equilíbrio é determinado pelo desvio padrão relativo da série de Km menor que 15 %, menor que 10 % ou menor que 5 %. G. Etapas de Pós-Reação

[0405] Em algumas modalidades, um método de fabricação de preparações de oligossacarídeo descrito no presente documento compreende adicionalmente uma ou mais etapas de processo adicionais após aquecer a composição aquosa a uma temperatura e por um tempo suficiente. Em algumas modalidades, as etapas de processo adicionais compreendem, por exemplo, separação (como separação cromatográfica), diluição, concentração, secagem, filtração, desmineralização, extração, descolorização ou qualquer combinação dos mesmos. Por exemplo, em algumas modalidades,

o método compreende uma etapa de diluição e uma etapa de descolorização. Em algumas modalidades, o método compreende uma etapa de filtração e uma etapa de secagem.

[0406] Em algumas modalidades, o método compreende uma etapa de diluição, em que a água é adicionada na preparação de oligossacarídeo para compor um xarope de preparação de oligossacarídeo. Em algumas modalidades, a concentração de preparação de oligossacarídeo no xarope é de cerca de 5 % a cerca de 80 %, de cerca de 10 % a cerca de 70 %, de cerca de 10 % a cerca de 60 %, de cerca de 10 % a cerca de 50 %, de cerca de 10 % a cerca de 40 %, de cerca de 10 % a cerca de 30 % ou de cerca de 15 % a cerca de 25 %. Em outras modalidades, o método não compreende uma etapa de diluição, mas em vez disso, permite-se que a preparação de oligossacarídeo se solidifique. Em algumas modalidades, o método compreende uma etapa de filtração. Em algumas modalidades, o método compreende reciclar o catalisador por filtração.

[0407] Em algumas modalidades, o método descrito no presente documento compreende adicionalmente uma etapa de descolorização. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo pode passar por uma etapa de descolorização com o uso de qualquer método conhecido na técnica, que inclui, por exemplo, tratamento com um absorvente, carbono ativado, cromatografia (por exemplo, com o uso de resina de troca de íons), hidrogenação e/ou filtração (por exemplo, microfiltração).

[0408] Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo está em contato com um material para remover sais, minerais e/ou outras espécies iônicas. Em determinadas modalidades, a preparação de oligossacarídeo é fluida através de um par de colunas de troca aniônica/catiônica. Em uma modalidade, a coluna de troca aniônica contém uma resina de troca de base fraca em uma forma de hidróxido e a coluna de troca catiônica contém uma resina de troca de ácido forte em uma forma protonatada.

[0409] Em algumas modalidades, o método compreende uma etapa de concentração. Em algumas modalidades, a etapa de concentração produz uma preparação de oligossacarídeo com concentração aumentada. Por exemplo, em algumas modalidades, uma etapa de concentração compreende evaporação (por exemplo, evaporação a vácuo), secagem (por exemplo, secagem por congelamento e secagem por spray) ou qualquer combinação dos mesmos.

[0410] Em algumas modalidades, o método compreende uma etapa de isolamento, em que pelo menos uma porção da preparação de oligossacarídeo é separada. Em algumas modalidades, a etapa de isolamento compreende cristalização, precipitação, filtração (por exemplo, filtração a vácuo), e centrifugação ou qualquer combinação dos mesmos.

[0411] Em algumas modalidades, o método compreende uma etapa de separação. Em algumas modalidades, a etapa de separação compreende separar pelo menos uma porção da preparação de oligossacarídeo de pelo menos uma porção de o catalisador, de pelo menos uma porção dos açúcares de ração não reagidos, ou de ambas. Em algumas modalidades, a etapa de separação compreende filtração, cromatografia, solubilidade diferencial, precipitação, extração ou centrifugação. H. Reatores

[0412] Os métodos descritos no presente documento podem compreender o uso de um ou mais reatores adequados para condensação de açúcar, considerando a temperatura de reação, pH, pressão e outros fatores. Em algumas modalidades, os um ou mais reatores adequados compreendem um reator agitado por batelada descontínua, um reator agitado por batelada, um reator agitado por fluxo contínuo, um reator de coluna de pistão contínuo, um reator de atrito ou um reator com agitação induzida por um campo eletromagnético. Em algumas modalidades, os um ou mais reatores adequados compreendem um reator descrito em Ryu, S. K., e Lee, J. M., Bioconversion of waste cellulose by using an attrition bioreactor, Biotechnol. Bioeng. 25: 53-65 (1983); Gusakov, A. V., e Sinitsyn, A. P., Kinetics of the enzymatic hidrolysis of cellulose: 1. A mathematical model for a batch reactor process, Enz. Microb. TechnoL, 7: 346-352 (1985); Gusakov, A. V., Sinitsyn, A. P., Davydkin, I. Y., Davydkin, V. Y., Protas, O. V., Enhancement of enzymatic cellulose hydrolysis using a novel type of bioreactor with intensive stirring induced by electromagnetic field, Appl. Biochem. Biotechnol., 56: 141-153 (1996); ou Fernanda de Castilhos Corazza, Flavio Faria de Moraes, Gisella Maria Zanin e Ivo Neitzel, Optimal control in fed-batch reactor for the cellobiose hydrolysis, Acta Scientiarum. Technology, 25: 33- 38 (2003).

[0413] Em algumas modalidades, os um ou mais reatores adequados compreendem reatores de leito fluidizado, de manta de fluxo ascendente, imobilizados ou do tipo extrusora para hidrólise e/ou fermentação. Em algumas modalidades, os um ou mais reatores adequados compreendem um reator aberto, um reator fechado ou ambos. Em algumas modalidades, em que o método compreende um processo contínuo, os um ou mais reatores adequados podem incluir um misturador contínuo, como um misturador sem-fim. I. Processo

[0414] Em algumas modalidades, um método de fabricação de preparações de oligossacarídeo descrito no presente documento compreende um processo de batelada, um processo contínuo, ou ambos. Em algumas modalidades, o método de fabricação da preparação de oligossacarídeo compreende um processo de batelada. Por exemplo, em algumas modalidades do processo de batelada, a fabricação de bateladas subsequentes da preparação de oligossacarídeo não começa até a conclusão da batelada atual. Em algumas modalidades, durante o processo de batelada, toda ou uma quantidade substancial de preparação de oligossacarídeo é removida do reator. Em algumas modalidades, durante o processo de batelada, todos os açúcares de ração e o catalisador são combinados em um reator antes da composição aquosa ser aquecida à temperatura descrita ou antes da polimerização ser induzida. Em algumas modalidades, durante o processo de batelada, os açúcares de ração são adicionados antes, após ou simultaneamente com a adição do catalisador.

[0415] Em algumas modalidades, o processo de batelada é um processo de batelada descontínua, em que todos os açúcares de ração não são adicionados ao reator ao mesmo tempo. Em algumas modalidades do processo de batelada descontínua, pelo menos uma porção dos açúcares de ração é adicionada ao reator durante a polimerização ou após a composição aquosa ser aquecida à temperatura descrita. Em algumas modalidades do processo de batelada descontínua, pelo menos 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 % ou 60 % em peso dos açúcares de ração são adicionados ao reator durante a polimerização ou após a composição aquosa ser aquecida à temperatura descrita.

[0416] Em algumas modalidades, o método de fabricação da preparação de oligossacarídeo compreende um processo contínuo. Por exemplo, em algumas modalidades do processo contínuo, os conteúdos do reator fluem continuamente através do reator. Em algumas modalidades, a combinação dos açúcares de ração com o catalisador e a remoção de pelo menos uma porção da preparação de oligossacarídeo são realizados simultaneamente.

[0417] Em algumas modalidades, o método de fabricação da preparação de oligossacarídeo compreende um processo de pote único ou múltiplos potes. Por exemplo, em algumas modalidades do processo de pote único, a polimerização é realizada em um reator simples. Como outro exemplo, em algumas modalidades do processo de múltiplos potes, a polimerização é realizada em mais que um reator. Em algumas modalidades do processo de múltiplos potes, o método compreende 2, 3 ou mais reatores. Em algumas modalidades do processo de múltiplos potes, o método compreende uma etapa de combinação, em que os produtos de polimerização de dois ou mais reatores são combinados. IV. Composições Nutricionais que Compreendem Preparações de Oligossacarídeo

[0418] São fornecidos no presente documento composições nutricionais que compreendem uma preparação de oligossacarídeo. Em determinadas modalidades, são fornecidos no presente documento composições nutricionais que compreendem uma preparação de oligossacarídeo descrita, em que a presença e/ou concentração da preparação de oligossacarídeo nas composições nutricionais pode ser seletivamente determinada e/ou detectada. As preparações de oligossacarídeo, que exibem a modulação funcional complexa de uma comunidade microbiana, podem ser componentes importantes de composições nutricionais. Desse modo, a presença e/ou concentração de uma preparação de oligossacarídeo nas composições nutricionais pode ser um dos fatores que devem ser medidos no controle de qualidade e processo de fabricação das composições nutricionais. Consequentemente, as composições nutricionais fornecidas são vantajosas em termos de controle de qualidade e propósitos de fabricação, como a presença e/ou concentração da preparação de oligossacarídeo pode ser seletivamente determinada e/ou detectada. Por exemplo, em algumas modalidades, a presença e concentração da preparação de oligossacarídeo pode ser determinada e/ou detectada medindo- se um sinal associado aos oligossacarídeos que contêm subunidade anidra.

[0419] Em algumas modalidades, a composição nutricional é uma composição de ração animal. Em algumas modalidades, a composição nutricional compreende uma composição nutricional base. A. Composições Nutricionais Base

[0420] Em algumas modalidades, a composição nutricional base compreende uma fonte de carboidrato que é diferente da preparação de oligossacarídeo. Por exemplo, em algumas modalidades, a composição nutricional base compreende uma fonte de carboidrato de ocorrência natural, como amido e fibras vegetais. Em algumas modalidades, a composição nutricional base compreende amido. Em algumas modalidades, a composição nutricional base compreende fibras vegetais.

[0421] Em algumas modalidades, a composição nutricional base compreende uma ou mais fontes de carboidrato que são derivadas de: sementes, raízes, tubérculos, milho, tapioca, araruta, trigo, arroz, batatas, batata doce, sagu, feijões (por exemplo, favas, lentilhas, feijões mungo, ervilhas, e grão-de-bico), maís, mandioca, ou outros alimentos ricos em amido (por exemplo, bolotas, araruta, mandioquinha, bananas, cevada, fruta-pão, trigo sarraceno, cana, colocásia, katakuri, cudzu, malanga, painço, aveia, oca, araruta polinésia, sorgo, centeio, taro, castanhas, castanhas d’água e inhames).

[0422] Em algumas modalidades, a composição nutricional base compreende uma ou mais fontes de carboidrato que são derivadas de: legumes (por exemplo, ervilhas, soja, tremoços, feijões verdes e outros feijões), aveias, centeio, chia, cevada, frutas (por exemplo, figos, abacates, ameixas, ameixas secas, bagas, bananas, casca de maçã, marmelos e pêras), vegetais (por exemplo, brócolis, cenoura, couve- flor, abobrinha, aipo, nopal, e alcachofras-de-Jerusalém), tubérculos em raiz, vegetais em raiz (por exemplo, batatas doce e cebolas), cascas de semente psílio, sementes (por exemplo, sementes de linho), nozes (por exemplo, amêndoas), alimentos de grão inteiro, trigo, farelo de milho, lignanos ou qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, a composição nutricional base compreende uma ou mais fibras vegetais derivadas de farelo de trigo, polpa de beterraba, sementes de algodão difusas, cascas de soja ou qualquer combinação dos mesmos.

[0423] Em algumas modalidades, a composição nutricional base compreende menos que 500 ppm, menos que 400 ppm, menos que 300 ppm, menos que 200 ppm, menos que 100 ppm, menos que 50 ppm, menos que 10 ppm, menos que 5 ppm ou menos que 1 ppm subunidades anidras ou oligossacarídeos que contêm subunidade anidra. Em algumas modalidades, a composição nutricional base compreende menos que 50 ppm, menos que 10 ppm, menos que 5 ppm ou menos que 1 ppm subunidades anidras ou oligossacarídeos que contêm subunidade anidra. Em algumas modalidades, a composição nutricional base é essencialmente livre de subunidades anidras.

[0424] Em algumas modalidades, a composição nutricional base carece de um nível detectável de subunidades anidras. Dependendo dos métodos de detecção ou determinação, um nível de subunidade anidra abaixo de um determinado limiar pode ser indetectável. Por exemplo, em algumas modalidades, um nível detectável de subunidade anidra pode se referir a pelo menos 1000 ppm, pelo menos 500 ppm, pelo menos 400 ppm, pelo menos 300 ppm, pelo menos 200 ppm, pelo menos 100 ppm, pelo menos 50 ppm, pelo menos 10 ppm, pelo menos 5 ppm ou pelo menos 1 ppm de subunidade anidra ou oligossacarídeos que contêm subunidade anidra na composição nutricional base.

[0425] Em algumas modalidades, a composição nutricional base compreende uma pluralidade de oligossacarídeos. Em algumas modalidades, a composição nutricional base compreende uma distribuição de tipo de ligação glicosídica que é diferente da preparação de oligossacarídeo. Por exemplo, em algumas modalidades, a composição nutricional base compreende uma porcentagem superior de ligações glicosídicas α-(1,4) à preparação de oligossacarídeo. Em algumas modalidades, as ligações glicosídicas, como as ligações glicosídicas α-(1,4) nas composições nutricionais base são digestíveis por uma ou mais enzimas. Em algumas modalidades, as ligações glicosídicas na composição nutricional base são mais prontamente digestíveis e/ou hidrolisáveis que as ligações glicosídicas na preparação de oligossacarídeo.

[0426] Em algumas modalidades, o nível de ligação glicosídica α-(1,2), ligação glicosídica α-(1,3), ligação glicosídica α-(1,6), ligação glicosídica β-(1,2), ligação glicosídica β-(1,3), ligação glicosídica β-(1,4), ou ligação glicosídica β-(1,6) na composição nutricional base é pelo menos 2 %, pelo menos 3 %, pelo menos 4 %, pelo menos 5 %, pelo menos 6 %, pelo menos 7 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, pelo menos 11 %, pelo menos 12 %, pelo menos 13 %, pelo menos 14 % ou pelo menos 15 % menor que o nível da respectiva ligação glicosídica na preparação de oligossacarídeo. Em algumas modalidades, o nível de ligação glicosídica α-(1,2), ligação glicosídica α-(1,3), ligação glicosídica α-(1,6), ligação glicosídica β-(1,2), ligação glicosídica β-(1,3), ligação glicosídica β-(1,4), ou ligação glicosídica β-(1,6) na composição nutricional base é pelo menos 10 % menor que o nível da respectiva ligação glicosídica na preparação de oligossacarídeo.

[0427] Em algumas modalidades, o nível de ligação glicosídica α-(1,4) na composição nutricional base é pelo menos 50 %, pelo menos 40 %, pelo menos 35 %, pelo menos 30 %, pelo menos 25 %, pelo menos 20 %, pelo menos 15 %, pelo menos 10 %, pelo menos 5 % ou pelo menos 2 % maior que o nível de ligação glicosídica α-(1,4) na preparação de oligossacarídeo. Em algumas modalidades, o nível de ligação glicosídica α-(1,4) na composição nutricional base é pelo menos 10 % maior que o nível de ligação glicosídica α-(1,4) na preparação de oligossacarídeo. B. Composição de Ração de Animal

[0428] Dependendo do tipo e da idade de um animal, uma composição nutricional pode compreender a preparação de oligossacarídeo e a composição nutricional base em razão diferente. Por exemplo, a preparação de oligossacarídeo pode ser combinada com a composição nutricional base em várias razões adequadas para o tipo e a idade de um animal. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo está presente na composição nutricional a uma concentração de cerca de 1 a cerca de 10000 ppm, de cerca de 1 a cerca de 5000 ppm, de cerca de 1 a cerca de 3000 ppm, de cerca de 1 a cerca de 2000 ppm, de cerca de 1 a cerca de 1500 ppm, de cerca de 1 a cerca de 1000 ppm, de cerca de 1 a cerca de 500 ppm, de cerca de 1 a cerca de 250 ppm, de cerca de 1 a cerca de 100 ppm, de cerca de 10 a cerca de 5000 ppm, de cerca de 10 a cerca de 3000 ppm, de cerca de 10 a cerca de 2000 ppm, de cerca de 10 a cerca de 1500 ppm, de cerca de 10 a cerca de 1000 ppm, de cerca de 10 a cerca de 500 ppm, de cerca de 10 a cerca de 250 ppm, de cerca de 10 a cerca de 100 ppm, de cerca de 50 a cerca de 5000 ppm, de cerca de 50 a cerca de 3000 ppm, de cerca de 50 a cerca de 2000 ppm, de cerca de 50 a cerca de 1500 ppm, de cerca de 50 a cerca de 1000 ppm, de cerca de 50 a cerca de 500 ppm, de cerca de 50 a cerca de 250 ppm, de cerca de 50 a cerca de 100 ppm, de cerca de 100 a cerca de 5000 ppm, de cerca de 100 a cerca de 3000 ppm, de cerca de 100 a cerca de 2000 ppm, de cerca de

100 a cerca de 1500 ppm, de cerca de 100 a cerca de 1000 ppm, de cerca de 100 a cerca de 500 ppm, de cerca de 100 a cerca de 400 ppm, de cerca de 100 a cerca de 300 ppm, de cerca de 100 a cerca de 200 ppm, de cerca de 200 a cerca de 5000 ppm, de cerca de 200 a cerca de 3000 ppm, de cerca de 200 a cerca de 2500 ppm, de cerca de 200 a cerca de 2000 ppm, de cerca de 200 a cerca de 1500 ppm, de cerca de 200 a cerca de 1000 ppm, de cerca de 200 a cerca de 500 ppm, de cerca de 500 a cerca de 5000 ppm, de cerca de 500 a cerca de 3000 ppm, de cerca de 500 a cerca de 2500 ppm, de cerca de 500 a cerca de 2000 ppm, de cerca de 500 a cerca de 1500 ppm ou de cerca de 500 a cerca de 1000 ppm. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo está presente na composição nutricional a uma concentração de cerca de 1 a cerca de 5000 ppm, de cerca de 1 a cerca de 1000 ppm, de cerca de 1 a cerca de 500 ppm, de cerca de 10 a cerca de 5000 ppm, de cerca de 10 a cerca de 2000 ppm, de cerca de 10 a cerca de 1000 ppm, de cerca de 10 a cerca de 500 ppm, de cerca de 10 a cerca de 250 ppm, de cerca de 10 a cerca de 100 ppm, de cerca de 50 a cerca de 5000 ppm, de cerca de 50 a cerca de 2000 ppm, de cerca de 50 a cerca de 1000 ppm, de cerca de 50 a cerca de 500 ppm, de cerca de 50 a cerca de 250 ppm ou de cerca de 50 a cerca de 100 ppm. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo está presente na composição nutricional a uma concentração de cerca de 1 a cerca de 5000 ppm, de cerca de 10 a cerca de 1000 ppm, de cerca de 10 a cerca de 500 ppm ou de cerca de 50 a cerca de 500 ppm.

[0429] Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo está presente na composição nutricional a uma concentração maior que 10 ppm, maior que 50 ppm, maior que 100 ppm, maior que 200 ppm, maior que 300 ppm, maior que 400 ppm, maior que 500 ppm, maior que 600 ppm, maior que 1000 ppm ou maior que 2000 ppm. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo está presente na composição nutricional a uma concentração maior que 10 ppm, maior que 50 ppm, maior que 100 ppm, maior que 200 ppm ou maior que 500 ppm.

[0430] Em algumas modalidades, dependendo do tipo e da idade de um animal, a composição nutricional pode compreender adicionalmente proteínas, minerais (como cobre, cálcio e zinco), sais, aminoácidos essenciais, vitaminas e/ou antibióticos.

[0431] Também é fornecido no presente documento um método para administrar uma composição nutricional que compreende uma composição nutricional base e a preparação de oligossacarídeo revelada a um animal. Em algumas modalidades, o animal é selecionado a partir de gado (por exemplo, bovinos para carne e vacas leiteiras), suínos, animal aquático e ave. Em algumas modalidades, o animal é suíno, como porcas, leitões e cerdos. Em outras modalidades, o animal é ave, como frango, pato, peru, ganso, codorna e galinha. Nas modalidades, a ave é uma ave para consumo, uma ave procriadora ou uma ave poedeira. Em algumas modalidades, o animal é um animal aquático, como salmão, bagre, robalo, enguia, tilápia, linguado, camarão e caranguejo. Em algumas modalidades, a composição nutricional é administrada a um animal em uma forma seca, uma forma líquida, uma pasta ou uma combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, a forma de administração, a taxa de alimentação, e o cronograma de alimentação pode variar dependendo do tipo e da idade do animal. C. Métodos para Produzir Composições Naturais

[0432] São fornecidos no presente documento métodos para fabricar uma composição nutricional que compreende: combinar uma preparação de oligossacarídeo com uma composição nutricional base. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende oligossacarídeos que contêm subunidade anidra. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo compreende uma distribuição de tipo de ligação glicosídica que é diferente daquela da composição nutricional base.

[0433] Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo é uma preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo sintético compreende pelo menos n frações de oligossacarídeos, em que cada uma tem um grau distinto de polimerização selecionado a partir de 1 a n (frações de DP1 a DPn). Em algumas modalidades, n é um número inteiro maior que ou igual a 2. Em algumas modalidades, n é um número inteiro maior que 2. Em algumas modalidades, n é um número inteiro maior que ou igual a 3. Em algumas modalidades, n é um número inteiro em uma faixa de 1 a 100, como 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40 ou 50. Em algumas modalidades, cada uma dentre a fração de DP1 a DPn compreende de 0,1 % a 90 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa, como medido por espectrometria de massa. Em algumas modalidades, as frações de DP1 e DP2 da preparação de oligossacarídeo compreendem, cada uma, independentemente cerca de 0,1 % a cerca de 15 %

ou de cerca de 0,5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa, como medido por espectrometria de massa. Em algumas modalidades, as frações de DP1 e DP2 da preparação de oligossacarídeo compreendem, cada uma, independentemente oligossacarídeos que contêm subunidade anidra em uma faixa de cerca de 0,1 %, 0,5 %, 0,6 %, 0,7 %, 0,8 %, 0,9 %, 1 %, 1,1 %, 1,2 %, 1,3 %, 1,4 % ou 1,5 % a cerca de 8 %, 9 %, 10 %, 11 %, 12 %, 15 % ou 20 % por abundância relativa como medido por espectrometria de massa. Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos em cada uma das n frações diminui monotonicamente com seu grau de polimerização. Em algumas modalidades, a abundância relativa de oligossacarídeos em pelo menos 5, 10, 20 ou 30 frações de DP diminui monotonicamente com seu grau de polimerização.

[0434] Em algumas modalidades, o método de fabricação de uma composição nutricional compreende misturar a preparação de oligossacarídeo com a composição nutricional base. Por exemplo, em algumas modalidades, a mistura pode ser realizada por um mesclador e/ou misturador industrial, como mesclador em tambor, mesclador de cone duplo, mesclador de fita, mesclador do tipo V, misturador por cisalhamento e misturador de pedal.

[0435] Em algumas modalidades, o método de fabricação de uma composição nutricional compreende adicionalmente uma etapa de controle de qualidade descrita no presente documento. Em algumas modalidades, a etapa de controle de qualidade descrita no presente documento compreende determinar um nível de um sinal em uma amostra da composição nutricional e calcular uma concentração da preparação de oligossacarídeo na composição nutricional com base no nível do sinal. Em algumas modalidades, a etapa de controle de qualidade descrita no presente documento compreende detectar um sinal em uma amostra da composição nutricional através de instrumentação analítica, e aceitar ou rejeitar uma batelada da composição nutricional com base na presença ou ausência do sinal. Em algumas modalidades, a etapa de controle de qualidade descrita no presente documento compreende detectar, através de instrumentação analítica, a presença ou ausência de um primeiro sinal em uma primeira amostra da composição nutricional, e um segundo sinal em uma segunda amostra da composição nutricional, e comparar o primeiro sinal e o segundo sinal. Em algumas modalidades, o sinal, o primeiro sinal e/ou o segundo sinal é/são (i) indicativo(s) de um ou mais oligossacarídeos que contêm subunidade anidra, (ii) associados a uma distribuição de grau de polimerização (DP) de oligossacarídeos, ou (iii) associados a ligação glicosídica α-(1,2), ligação glicosídica α-(1,3), ligação glicosídica α-(1,6), ligação glicosídica β-(1,2), ligação glicosídica β-(1,3), ligação glicosídica β-(1,4), ou ligação glicosídica β-(1,6) de oligossacarídeos.

[0436] Adicionalmente, em algumas modalidades, o método de fabricação de uma composição nutricional compreende, após realizar a etapa de controle de qualidade, misturar adicionalmente a preparação de oligossacarídeo com a composição nutricional base, ajustar o nível da preparação de oligossacarídeo ou uma combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, ajustar o nível da preparação de oligossacarídeo compreende adicionar preparação de oligossacarídeo adicional na composição nutricional ou remover uma porção da preparação de oligossacarídeo da composição nutricional. Em algumas modalidades, ajustar o nível da preparação de oligossacarídeo compreende adicionar composição nutricional base adicional na composição nutricional ou remover uma porção da composição nutricional base da composição nutricional. Em algumas modalidades particulares, ajustar o nível da preparação de oligossacarídeo compreende adicionar a preparação de oligossacarídeo adicional na composição nutricional. D. Pré-mistura de ração animal

[0437] Em algumas modalidades, a composição nutricional compreende uma pré-mistura de ração animal que compreende uma preparação de oligossacarídeo descrita.

[0438] Em algumas modalidades, a pré-mistura de ração animal compreende um material carreador, que pode ser combinado com a preparação de oligossacarídeo para produzir a pré-mistura de ração animal. Em algumas modalidades, o material carreador pode ser qualquer material na forma seca ou líquida que é adequada para ser combinada com a preparação de oligossacarídeo na composição nutricional. Em algumas modalidades, o material carreador compreende grãos de destilador secos, argila, vermiculite, terra diatomácea, cascas, como cascas de arroz moído e cascas de aveia moída, sílica, como gel de sílica de grau alimentar e sílica pirogenada de grau de ração, milho, como ração com glúten de milho, alimento de glúten de milho, e milho moído, ou quaisquer combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, o material carreador é milho moído. Em outras modalidades, o material carreador é cascas de arroz moído ou cascas de aveia moída.

[0439] Em algumas modalidades, a pré-mistura de ração animal é produzida combinando-se um material carreador com a preparação de oligossacarídeo, ambos em uma forma seca. Em algumas modalidades, a pré-mistura de ração animal é produzida combinando-se um material carreador com a preparação de oligossacarídeo; um dos dois está em uma forma seca. Em algumas modalidades, a pré-mistura de ração animal é produzida combinando-se um material carreador com a preparação de oligossacarídeo, ambos em uma forma líquida. Por exemplo, em algumas modalidades, uma preparação de oligossacarídeo em uma forma líquida se refere ao oligossacarídeo em uma solução, por exemplo, uma solução aquosa dos oligossacarídeos, como xarope.

[0440] Em algumas modalidades, a pré-mistura de ração animal é produzida combinando-se um material carreador com um xarope que compreende a preparação de oligossacarídeo. Em algumas modalidades, a concentração da preparação de oligossacarídeo no xarope é pelo menos 40 %, pelo menos 45 %, pelo menos 50 %, pelo menos 55 %, pelo menos 60 %, pelo menos 65 %, pelo menos 70 %, pelo menos 75 % ou pelo menos 80 % em peso. Em algumas modalidades, a concentração da preparação de oligossacarídeo no xarope é cerca de 40 % a 80 %, 50 % a 75 % ou 60 % a 70 % em peso.

[0441] Em algumas modalidades, a pré-mistura de ração animal é em um pó (por exemplo, pó fluxível), um granizado, uma pasta aquosa, uma forma de péletes ou uma forma líquida. Em algumas modalidades, a pré-mistura de ração animal tem um teor de umidade de menos que 40 %, 30 %, 20 %, 15 %, 10 % ou 5 % em peso. Em algumas modalidades, a pré-mistura de ração animal tem um teor de umidade de menos que 10 % ou 5 % em peso. Em algumas modalidades, a pré-mistura de ração animal tem um teor de umidade de mais que 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 % ou 30 % em peso. Em modalidades adicionais, o teor de umidade do pré-mistura de ração animal é ajustado para qualquer uma das faixas descritas. Por exemplo, em algumas modalidades, a pré-mistura de ração animal é seca para aumentar seu teor de umidade a uma faixa descrita.

[0442] Em algumas modalidades, dependendo de uma aplicação específica, a pré-mistura de ração animal compreende vários níveis da preparação de oligossacarídeo. Em algumas modalidades, a pré-mistura de ração animal compreende pelo menos 1 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 % ou 99 % a preparação de oligossacarídeo em peso seco. Em algumas modalidades, a pré-mistura de ração animal compreende no máximo 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 % ou 99 % a preparação de oligossacarídeo em peso seco.

[0443] Em algumas modalidades, a pré-mistura de ração animal ou o material carreador compreende adicionalmente outra nutrição de animal, como minerais, gorduras e proteínas. Em algumas modalidades, o material carreador ou a pré-mistura de ração animal compreende cobre, zinco ou ambos. Em algumas modalidades, o material carreador ou a pré-mistura de ração animal compreende um ionóforo ou outro coccidiostático. Em algumas modalidades, o material carreador ou a pré-mistura de ração animal compreende um antibiótico. Em algumas modalidades, o material carreador compreende uma fonte de carboidrato. Em algumas modalidades, a fonte de carboidrato no material carreador não compreende subunidades anidras. Em algumas modalidades, a fonte de carboidrato no material carreador compreende uma distribuição de tipo de ligação glicosídica que é diferente da distribuição de tipo de ligação glicosídica da preparação de oligossacarídeo.

[0444] Consequentemente, em algumas modalidades, o método de fabricação de uma composição nutricional compreende combinar a pré-mistura de ração animal com a composição nutricional base. V. Métodos para Fornecer Preparações de Oligossacarídeo para Animais

[0445] Em algumas modalidades, os métodos descritos no presente documento incluem fornecer preparações de oligossacarídeo para animais. Em determinadas variações, animais são tratados sendo alimentados ou fornecidos com uma preparação de oligossacarídeo. Em algumas modalidades, os animais são fornecidos com uma preparação de oligossacarídeo a uma dose específica desejada. Uma dose específica pode ser quantificada, por exemplo, como a massa de preparação de oligossacarídeo consumida pelo animal por unidade de tempo (por exemplo, gramas por dia), ou como uma massa de preparação de oligossacarídeo consumida pelo animal por unidade de tempo por unidade de massa corporal de animal (por exemplo, mg de oligossacarídeo por kg de massa corporal por dia). Em determinadas modalidades, a dose específica de uma preparação de oligossacarídeo é 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 225, 250, 275, 300, 350, 400, 450, 500, 1000, 1500, 2000, 3000, 4000, 5000 ou 10000 mg/kg/dia. Em algumas modalidades, a massa da preparação de oligossacarídeo é medida como o teor de DP1+ em uma base de sólidos secos. Em algumas modalidades, a massa da preparação de oligossacarídeo é medida como o teor de DP2+ em uma base de sólidos secos.

[0446] Em algumas modalidades, animais são fornecidos com preparações de oligossacarídeo por administração oral por meio de composições nutricionais. Em algumas modalidades, a composição nutricional é formulada para conter uma preparação de oligossacarídeo a uma concentração ou nível fixo de inclusão. A concentração ou nível de oligossacarídeo de inclusão na composição nutricional pode ser quantificado, por exemplo, pela fração de massa da preparação de oligossacarídeo por massa total da ração ou composição nutricional final. Em algumas modalidades, a concentração ou o nível de inclusão é medido em partes por milhão (ppm) de oligossacarídeo em uma base de sólidos secos por final composição nutricional em uma base como é. Em algumas modalidades, a concentração da preparação de oligossacarídeo é medida como a fração de massa de espécies de DP1+ em uma base de sólidos secos. Em algumas modalidades, a concentração da preparação de oligossacarídeo é medida como a fração de massa de espécies de DP2+ em uma base de sólidos secos.

[0447] Um elemento versado na técnica conheceria vários métodos e técnicas para determinar a concentração da preparação de oligossacarídeo na composição nutricional ou ração final para obter uma dose específica desejada. Por exemplo, a ingestão de ração diária média como uma função de idade é estabelecida para espécies diferentes de galinhas de consumo e pode ser usada por um nutricionista ou veterinário para determinar um nível desejado de inclusão na ração final.

[0448] Em algumas modalidades, animais são fornecidos com preparações de oligossacarídeo por administração oral por meio de líquidos consumidos. Em algumas modalidades, as preparações de oligossacarídeo são fornecidas por meio de água potável. Em algumas modalidades, a concentração da preparação de oligossacarídeo na água potável é selecionada para fornecer uma dose específica desejada de preparação de oligossacarídeo ao animal. VI. Disfunção de barreira gastrointestinal

[0449] Em algumas modalidades, os métodos descritos no presente documento incluem prevenir ou tratar a disfunção de uma barreira gastrointestinal de um animal. As proteções gastrointestinais de animais compreendem uma camada de muco e uma camada de células intestinais epiteliais (incluindo, por exemplo, células calciforme). O epitélio intestinal atua como uma proteção para prevenir a passagem de entidades intraluminais prejudiciais, incluindo antígenos estranhos, microrganismos e suas toxinas, e outro conteúdo intestinal (por exemplo, partículas de comida). O epitélio intestinal também atua como um filtro seletivo que permite a translocação de nutrientes dietéticos essenciais, eletrólitos e água do lúmen intestinal na circulação.

[0450] O epitélio gastrointestinal medeia permeabilidade seletiva por meio de duas vias principais: transepitelial/transcelular e paracelular. A permeabilidade transcelular é, de modo geral, associada a transporte de soluto através das células epiteliais e predominantemente regulada por transportadores seletivos para aminoácidos, eletrólitos, ácidos graxos de cadeia pequena e açúcares. A permeabilidade paracelular é associada a transporte no espaço entre células epiteliais, e é regulada por complexos intercelulares localizados na junção de membrana apical lateral e ao longo da membrana lateral. O contato entre células epiteliais intestinais inclui três componentes principais: desmossomos, junções aderentes e junções rígidas.

[0451] A permeabilidade do proteções gastrointestinais é regulada por múltiplos fatores, incluindo, por exemplo, fatores exógenos, apoptose epitelial, citocinas, células imunológicas e o microbioma gastrointestinal. As bactérias do microbioma e patógenos entéricos podem interromper a proteção intestinal diretamente por ligação a moléculas de superfície celular e induzir alterações em expressão de proteína de junção rígida. As bactérias do microbioma e patógenos entéricos também podem gerar toxinas e proteases, que podem promover danos celulares e apoptose, alterar transporte de íons epiteliais e interromper junções rígidas e o citoesqueleto.

[0452] A disfunção da barreira gastrointestinal permite a translocação de conteúdos intestinais na circulação, incluindo, por exemplo, patógenos e toxinas, que podem afetar negativamente a saúde do animal e causar doença. A inflamação e/ou os danos às células epiteliais também podem reduzir a habilidade do animal para absorver nutrientes. Os animais com uma barreira gastrointestinal comprometida, portanto, exibem resultados de nutrição e saúde insatisfatórios, que resultam em ganho de peso reduzido, perda de peso, eficácia de ração reduzida, rendimento de carne reduzido, razão de conversão de ração aumentada, qualidade de carne inferior e mortalidade superior. A, Métodos para prevenir a disfunção de barreira gastrointestinal

[0453] Em algumas modalidades, os métodos descritos no presente documento incluem métodos para prevenir a disfunção de uma barreira gastrointestinal em um animal. Em algumas modalidades, a disfunção da barreira gastrointestinal é um aumento na permeabilidade da barreira gastrointestinal acima daquele de um estado saudável, que permite a translocação de conteúdos intestinais, incluindo, por exemplo, alimentos parcialmente digeridos, patógenos e toxinas, na circulação. Em algumas modalidades, a disfunção de barreira gastrointestinal é hiperpermeabilidade da barreira gastrointestinal. A hiperpermeabilidade também é conhecida na técnica como “intestino gotejante”. Como descrito acima, o intestino gotejante pode permitir que toxinas, bactérias e partículas de comida penetrem no revestimento do trato gastrointestinal e entrem na corrente sanguínea do corpo. O intestino gotejante pode se referir a uma condição aguda ou crônica. O intestino gotejante pode resultar em infecção, sepse, ou um revestimento de intestino danificado.

[0454] Os sintomas de um intestino gotejante pode incluir, porém sem limitação, síntese de muco diminuída, síntese de mucina diminuída, secreção de muco diminuída, secreção de mucina diminuída, absorção de nutriente diminuída, inflamação aumentada, resistência diminuída a infecção, proliferação diminuída de células epiteliais intestinais, maturação de células epiteliais intestinais diminuída, má nutrição, ganho de peso diminuído, razão de conversão de ração aumentada, eficácia de ração diminuída, mortalidade aumentada. Em algumas modalidades, os métodos descritos no presente documento previnem um ou mais sintomas de uma disfunção de barreira gastrointestinal, como um sintoma de intestino gotejante.

[0455] Em algumas modalidades, a disfunção é prevenida diminuindo-se a permeabilidade da barreira gastrointestinal no animal. Em algumas modalidades, a permeabilidade da barreira gastrointestinal é cerca de 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 % ou 50 % menos que a permeabilidade da barreira gastrointestinal do dito animal antes da administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a permeabilidade da barreira gastrointestinal é cerca de 0,5- 40 %, 0,5-30 %, 0,5-20 %, 0,5-10 %, 0,5-5 %, 0,5-4 %, 0,5- 3 %, 0,5-3 %, 0,5-2 %, 0,5-1 %, 1-40 %, 1-30 %, 1-20 %, 1- 10 %, 1-5 %, 1-4 %, 1-3 %, 1-2 %, 5-40 %, 5-30 %, 5-20 %, 5- 10 %, 10-40 %, 10-30 % ou 10-20 % menos que a permeabilidade da barreira gastrointestinal do dito animal antes da administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

[0456] Em algumas modalidades, a disfunção é prevenida diminuindo-se a permeabilidade da barreira gastrointestinal no animal. Em algumas modalidades, a permeabilidade da barreira gastrointestinal é cerca de 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 % ou 50 % menos que a permeabilidade da barreira gastrointestinal de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a permeabilidade da barreira gastrointestinal é cerca de 0,5-40 %, 0,5-30 %, 0,5-20 %, 0,5-10 %, 0,5-5 %, 0,5-4 %, 0,5-3 %, 0,5-3 %, 0,5-2 %, 0,5- 1 %, 1-40 %, 1-30 %, 1-20 %, 1-10 %, 1-5 %, 1-4 %, 1-3 %, 1-

2 %, 5-40 %, 5-30 %, 5-20 %, 5-10 %, 10-40 %, 10-30 % ou 10- 20 % menos que a permeabilidade da barreira gastrointestinal de um animal administrado com uma composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético. B. Métodos de tratamento da disfunção de barreira gastrointestinal

[0457] Em algumas modalidades, os métodos descritos no presente documento incluem métodos de tratamento de disfunção da barreira gastrointestinal em um animal. Em algumas modalidades, a disfunção da barreira gastrointestinal é um aumento na permeabilidade da barreira gastrointestinal acima daquele de um estado saudável, que permite a translocação de conteúdos intestinais, incluindo, por exemplo, alimentos parcialmente digeridos, patógenos e toxinas, na circulação.

[0458] Em algumas modalidades, a disfunção de barreira gastrointestinal é hiperpermeabilidade da barreira gastrointestinal. A hiperpermeabilidade também é conhecida na técnica como “intestino gotejante”. Como descrito acima, o intestino gotejante pode permitir que toxinas, bactérias e partículas de comida penetrem no revestimento do trato gastrointestinal e entrem na corrente sanguínea do corpo. O intestino gotejante pode se referir a uma condição aguda ou crônica. O intestino gotejante pode resultar em infecção, sepse, ou um revestimento de intestino danificado.

[0459] Os sintomas de um intestino gotejante pode incluir, porém sem limitação, síntese de muco diminuída, síntese de mucina diminuída, secreção de muco diminuída, secreção de mucina diminuída, absorção de nutriente diminuída, inflamação aumentada, resistência diminuída a infecção, proliferação diminuída de células epiteliais intestinais, maturação de células epiteliais intestinais diminuída, má nutrição, ganho de peso diminuído, razão de conversão de ração aumentada, eficácia de ração diminuída, mortalidade aumentada. Em algumas modalidades, um ou mais dos sintomas de intestino gotejante são melhorados.

[0460] Em algumas modalidades, a disfunção é prevenida diminuindo-se a permeabilidade da barreira gastrointestinal no animal. Em algumas modalidades, a permeabilidade da barreira gastrointestinal é cerca de 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 % ou 50 % menos que a permeabilidade da barreira gastrointestinal do dito animal antes da administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a permeabilidade da barreira gastrointestinal é cerca de 0,5- 40 %, 0,5-30 %, 0,5-20 %, 0,5-10 %, 0,5-5 %, 0,5-4 %, 0,5- 3 %, 0,5-3 %, 0,5-2 %, 0,5-1 %, 1-40 %, 1-30 %, 1-20 %, 1- 10 %, 1-5 %, 1-4 %, 1-3 %, 1-2 %, 5-40 %, 5-30 %, 5-20 %, 5- 10 %, 10-40 %, 10-30 % ou 10-20 % menos que a permeabilidade da barreira gastrointestinal do dito animal antes da administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

[0461] Em algumas modalidades, a disfunção é tratada diminuindo-se a permeabilidade da barreira gastrointestinal no animal. Em algumas modalidades, a permeabilidade da barreira gastrointestinal é cerca de 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 % ou 30 % menos que a permeabilidade da barreira gastrointestinal do animal antes da administração da composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a permeabilidade da barreira gastrointestinal é cerca de 0,5-40 %, 0,5-30 %, 0,5-20 %, 0,5-10 %, 0,5-5 %, 0,5-1 %, 1-40 %, 1-30 %, 1-20 %, 1-10 %, 1-5 %, 1-2 %, 5- 40 %, 5-30 %, 5-20 %, 5-10 %, 10-40 %, 10-30 % ou 10-20 % menos que a permeabilidade da barreira gastrointestinal do animal antes da administração da composição nutricional que carece da preparação de oligossacarídeo sintético. C. Métodos de Detecção de Permeabilidade de Proteção Gastrointestinal e Absorção de Nutriente

[0462] A permeabilidade de barreira gastrointestinal pode ser demonstrada por métodos conhecidos na técnica, como um teste de lactulose-manitol, em que o animal recebe uma solução que contém manitol e lactulose e a urina é coletada por seis horas e testada. A lactulose (um dissacarídeo) e Manitol (um monossacarídeo) são duas moléculas de açúcar não metabolizadas e solúveis em água. O manitol é facilmente absorvido, em que penetra passivamente nas células, enquanto a Lactulose, com um peso molecular e tamanho maiores, é apenas parcialmente absorvido por uma barreira gastrointestinal saudável. Se os níveis de manitol e lactulose na amostra de urina coletada forem altos isso é indicativo de que a permeabilidade do trato gastrointestinal está muito alta. Os níveis baixos de ambas as moléculas indicam a absorção insatisfatória de nutrientes. Os níveis altos de manitol e os níveis baixos de lactulose indicam que o animal tem função de barreira gastrointestinal normal.

[0463] A permeabilidade de barreira gastrointestinal também pode ser avaliada com o uso de uma análise de fezes digestivas, que inclui o teste de material fecal para função digestiva, a extensão na qual os lipídeos, proteínas,

carboidratos e outros nutrientes são absorvidos no intestino delgado e cólon, bem como para a presença de candida ou outras infecções bacterianas, disbiose (desequilíbrio em bactérias intestinais), infecção parasítica e outros indicadores de disfunção digestiva. Os aprimoramentos em função de intestino causados pela administração das preparações de oligossacarídeo sintético descritas no presente documento também podem ser medidos por diarreia diminuída, uma diminuição em um ou mais sintomas de intestino gotejante, fezes sólidas aumentadas, produção aumentada de 5-hidroxi-triptofano e 5-hidroxitriptamina e 2-metil-5- hidroxitriptamina, e outros precursores neurotransmissores que podem ser feitos por populações bacterianas (precursores de serotonina). As avaliações de permeabilidade de barreira gastrointestinal também podem ser feitas com o uso de marcadores fluorescentes (por exemplo, como descrito em Droshow et al., “Measurement of gut permeability using fluorescent tracer agent technology”, Scientific Reports, 7:108888 (2017)). Outros métodos incluem, por exemplo, aqueles revelados em Wang et al., “Methods to determine intestinal permeability and bacterial translocation during liver disease” J Immunol Methods, 421:44-53 (2015); Galipeau et al., Neurogastroenterology and Motility, 28:7 (2016); e descritos nos Exemplos no presente documento. A permeabilidade gastrointestinal também pode ser testada com o uso de uma variedade de açúcares não digeríveis, dextranos marcados, e radioisótopos conhecidos na técnica.

[0464] A permeabilidade de barreira gastrointestinal também pode ser avaliada por análise histológica de uma amostra de tecido ou amostra celular da dita barreira gastrointestinal. Em algumas modalidades uma ou mais manchas ou marcações são usadas em tal análise que são conhecidas na técnica. Essas incluem por exemplo, colorização de H&E, colorização imunofluorescente, o uso de anticorpos imunofluorescentes ou outros agentes de alvejamento. Os métodos microscópicos incluem todos aqueles conhecidos na técnica, por exemplo, microscópio de luz, microscópio confocal, microscópio de elétron, etc. Em algumas modalidades, os métodos descritos no presente documento compreendem avaliar a morfologia de mucosa da dita barreira gastrointestinal. Em algumas modalidades, a dita avaliação compreende determinar o comprimento de vilosidade, comprimento de cripta, um nível de infiltração celular inflamatória ou qualquer combinação dos mesmos.

[0465] Métodos similares àqueles descritos acima podem ser usados para avaliar a habilidade do trato gastrointestinal para absorver nutrientes. Por exemplo, o nível de macro ou micronutrientes específicos pode ser avaliado em uma amostra de fezes, por exemplo, gordura. As amostras de transpiração podem ser analisadas para detectar o nível de enzimas que são necessárias para direcionar adequadamente os nutrientes. Um teste de respiração de hidrogênio lactose pode ser usado para determinar quanto hidrogênio está na respiração do animal após uma solução de açúcar de leite (por exemplo, lactose). As biópsias podem ser tomadas a partir de uma barreira gastrointestinal a fim de avaliar a absorção de nutriente. Diversos testes para medir a habilidade do trato gastrointestinal para absorver nutrientes são conhecidos na técnica e incorporados ao presente documento.

[0466] Em algumas modalidades, o nível de pelo menos um (por exemplo, pelo menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) transportador de nutriente expresso por uma barreira gastrointestinal são analisados para determinar a habilidade da barreira gastrointestinal para absorver nutrientes, de modo geral, ou um macro ou micronutriente específico. Os métodos de tal análise são conhecidos na técnica e incorporados a título de referência ao presente documento. Os transportadores incluem, porém sem limitação, proteínas ou proteínas expressas por SI (sacarase-isomaltase), SLC5A10, SLC34A1, SLC2A2, SLC34A2, SLC23A1, SLC23A2, SLC5A8, SLC16A3, SLC4, SLC4A9, SLC4A2, SLC4A3, NPC1L1, C6orf58, DDC, MCT1, MCT4, NaS1, DTDST, PAT1, DRA, CLD, SAT1, SUT2, SGLT1, GLUT2, B0AT1, ATB0+, SIT1, TAUT, EAAC1, ASCT2, SN1, SN2, PEPT1, SNAT2, GLYT1, y+LAT1, y+LAT2, CD36, LFABP, NPC1L1, ABCG5, ABCG8, SVCT1, SVCT2, SMVT, GIF, AMN, CUBL, MRP1, FOLT, PCFT, FOLR1, OAT10, RFVT1, RFVT2, THTR1, THTR2, VDR, DCYTB, DMT1, HCP1, FPN1, HEPH, HAMP, ZIP4, ZIP11, ZIP8, ZIP14A, ZIP14B, ZnT1, ZnT2, CTR1, SLC3A1, SLC1A4, ALPI, C17orf78, MUC17, DEFA5, RBP2, DEFA6, MLN, MEP1B, LCT, TM4SF20, ou FABP6.

[0467] A permeabilidade de barreira gastrointestinal pode ser avaliada com o uso de uma variedade de amostras, por exemplo, como descrito no presente documento. Por exemplo, as ditas amostras incluem, porém sem limitação, uma amostra de tecido de uma barreira gastrointestinal, uma biópsia de barreira gastrointestinal, uma amostra celular de barreira gastrointestinal, um sangue amostra, um soro amostra, uma amostra de urina, uma amostra fecal, um cecal (por exemplo, teores cecais), uma amostra de transpiração, ou uma amostra de saliva.

[0468] As proteções gastrointestinais incluem qualquer proteção do trato gastrointestinal, por exemplo, íleo, ceco, intestino delgado, cólon, estômago, duodeno, jejuno. D. Proliferação de Célula Calciforme e Produção de Muco

[0469] Em algumas modalidades, os métodos descritos no presente documento, incluem aumentar a proliferação de célula calciforme no trato gastrointestinal do animal. As células calciforme são células epiteliais colunares simples que fazem parte do revestimento epitelial da barreira gastrointestinal. As células calciforme secretam muco, que contém glicoproteínas grandes chamadas mucinas. A camada de muco da barreira gastrointestinal atua para proteger as células epiteliais e prevenir a ruptura das células epiteliais por microrganismos, toxinas, etc.

[0470] Os ensaios padrão conhecidos pelo elemento versado na técnica podem ser usados para avaliar proliferação de célula calciforme. Por exemplo, ensaios in vitro ensaios, como descrito no Exemplos no presente documento, podem ser usados. Uma variedade de marcadores moleculares ou bioquímicos também pode ser usada para avaliar a proliferação de célula calciforme, incluindo, porém sem limitação, a característica de expressão de gene ou expressão de proteína de células calciforme, por exemplo, mucinas. Determinados genes de mucina, por exemplo, MUC5B, são expressos no trato gastrointestinal, e têm um gene produto altamente representado em muco. Portanto, a expressão de genes de mucina fornece um marcador adequado para determinar a produção de muco.

[0471] A expressão de gene de mucina pode ser avaliada por tecnologia convencional como análise northern blot, reação de cadeia de polimerase (PCR), exame do promotor de gene de mucina, ou análise in situ. Alternativamente, as proteínas de mucina são avaliadas por metodologia convencional, como análise western blot, ELISA, imunoquímica e similares, com o uso de anticorpos detectavelmente marcados. Os critérios morfológicos também podem ser usados para determinar a presença ou ausência de células calciforme na cultura; como colorização para mucinas com o uso de colorização de azul Alcian/PAS (Lou et al. (1998) Am. J. Respir. Crit. Care Med. 157:1927-1934). Os anticorpos para mucinas podem ser examinados com o uso de ensaios ELISA.

[0472] Os ensaios in vivo também podem ser usados para avaliar a proliferação de célula calciforme em animais. O tecido gastrointestinal de um animal pode ser avaliado quanto a abundância de célula calciforme. As amostras de tecido gastrointestinal de animais também podem ser avaliadas quanto os mesmos marcadores moleculares e bioquímicos descritos para os ensaios in vitro acima. E. Suscetibilidade a infecção

[0473] Em algumas modalidades, os métodos descritos no presente documento, incluem diminuir a suscetibilidade de um animal a uma infecção. Os métodos também incluem prevenir uma infecção em um animal ou uma população de animais. Como descrito acima, a disfunção de barreira gastrointestinal que resulta em um aumento na permeabilidade de barreira gastrointestinal permite a translocação de microrganismos patogênicos do espaço intraluminal à circulação. Os métodos descritos no presente documento previnem a infecção em um animal diminuindo-se a permeabilidade de barreira gastrointestinal.

Os métodos descritos no presente documento também diminuem a suscetibilidade de um animal a infecção diminuindo-se a permeabilidade de barreira gastrointestinal.

A infecção pode ser um resultado de qualquer microrganismo patogênico presente no lúmen do trato gastrointestinal.

O patógeno pode acessar o trato gastrointestinal através de alimento contaminado.

Em algumas modalidades, o patógeno é um microrganismo.

Em algumas modalidades, o patógeno é uma bactéria, vírus, parasita ou fungo.

Em algumas modalidades o patógeno é do filo Proteobacteria.

Em algumas modalidades, o patógeno é uma bactéria e é classificado como os gêneros Helicobacter, Escherichia, Salmonella, Vibrio ou Yersinia.

Em algumas modalidades, o patógeno é uma bactéria e é classificado como os gêneros Treponema, Streptococcus, Staphylococcus, Shigella, Rickettsia, Orientia, Pseudomonas, Neisseria, Mycoplasma, Mycobacterium, Listeria, Leptospira, Legionella, Klebsiella, Haemophilus, Francisella, Ehrlichia, Enterococcus, Coxiella, Corynebacterium, Clostridium, Chlamydia, Chlamydophila, Campylobacter, Burkholderia, Brucella, Borrelia, Bordetella, Bifidobacterium e Bacillus.

Espécies bacterianas incluem, porém sem limitação, Helicobacter pullorum, Proteobacteria johnsonii, Escherichia coli, Campylobacter jejuni, e Lactobacillus crispatus.

Em algumas modalidades, o patógeno é Aeromonas hydrophila, Campylobacter fetus, Plesiomonas shigelloides, Bacillus cereus, Campylobacter jejuni, Clostridium botulinum, Clostridium difficile, Clostridium perfringens, enteroaggregative Escherichia coli, enterohemorrhagic Escherichia coli, enteroinvasive Escherichia coli, enterotoxigenic Escherichia coli, Helicobacter pylori,

Klebsiellia pneumonia, Lysteria monocytogenes, Plesiomonas shigelloides, Salmonella spp., Salmonella typhi, Salmonella paratyphi, Shigella spp., Staphylococcus spp., Staphylococcus aureus, vancomycin-resistant enterococcus spp., Vibrio spp., Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus, Vibrio vulnificus e Yersinia enterocolitica. Em algumas modalidades, o patógeno é resistente a fármaco simples e múltiplos fármacos. A infecção de um animal com um ou mais patógenos pode ser avaliada por métodos padrão conhecidos pelo elemento versado na técnica.

[0474] Em algumas modalidades, o patógeno é um parasita. Em algumas modalidades, o dito parasita é um parasita de Eimeria. Em algumas modalidades, o dito parasita é Eimeria acervuline, Eimeria maxima, Eimeria mitis, Eimeria tenella, Toxoplasma gondii, Hammondia spp. Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium muris, Cryptosporidium hominis, Isospora canis, Isospora ohioensis, Isospora burrosi, Isospora felis. Em algumas modalidades, o dito patógeno é um protozoário coccídio. Em algumas modalidades, o dito protozoário coccídio é Eimeria acervuline, Eimeria maxima, Eimeria mitis, Eimeria tenella, Toxoplasma gondii, Hammondia spp. Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium muris, Cryptosporidium hominis, Isospora canis, Isospora ohioensis, Isospora burrosi, ou Isospora felis.

[0475] Em algumas modalidades, o nível de pelo menos uma citocina ou quimiocina pró-inflamatória no trato gastrointestinal do animal é aumentado. Citocinas e quimiocinas exemplificativas incluem, porém sem limitação, fatores de necrose tumoral (TNF) como TNF-α e TNF-β, moléculas da superfamília de TNF como FasL, CD27L, CD30L,

CD40L, Ox40L, 4-1BBL, TRAIL, TWEAK, e Apo3L, interleucina-1 (IL-1) incluindo IL-1α e IL-1β, IL-2, interferon-γ (IFN-γ), IFN-α/β, IL-6, IL-8, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-21, LIF, CCL5, GROα, MCP-1, MIP-1α, MIP-1β, RANTES, fator de estímulo de colônia de macrófago (MCSF), fator de estímulo de colônia de macrófago e granulócito (GM-CSF), CXCL2, CCL2, linfotactina, fractalquina, ou GRO/KC, entre outros.

[0476] Em algumas modalidades, o nível de pelo menos uma citocina anti-inflamatória ou quimiocina no trato gastrointestinal do animal é diminuído. Citocinas e quimiocinas anti-inflamatórias exemplificativas incluem, porém sem limitação, antagonista receptor de interleucina (IL)-1, IL-4, IL-6, IL-10, IL-11, IL-13 e TGFβ.

[0477] Em algumas modalidades, o nível de pelo menos uma célula imunológica é aumentado no trato gastrointestinal do animal. Em outras modalidades, o nível de pelo menos uma célula imunológica é aumentado no sistema linfático do animal. Em algumas modalidades, a célula imunológica é uma célula imunológica inata. Em algumas modalidades, a célula imunológica é uma célula imunológica adaptativa. Células imunológicas exemplificativas incluem, porém sem limitação, célula T, células B, células exterminadoras naturais, macrófagos, células dendríticas, granulócitos (incluindo, por exemplo, basófilos, eosinófilos e neutrófilos), mastócitos e monócitos. Em algumas modalidades, a célula imunológica é uma célula fagocítica. As células imunológicas fagocíticas incluem, porém sem limitação, neutrófilos, monócitos, macrófagos, mastócitos e células dendríticas. Em algumas modalidades, a atividade fagocítica da célula imunológica é aumentada. Em determinadas modalidades, a diferenciação de célula imunológica ocorre em adesivos de Peyer. F. Amostras Gastrointestinal

[0478] Em determinadas modalidades, os métodos descritos no presente documento incluem detectar uma propriedade (incluindo, por exemplo, o nível de muco, o nível de uma célula imunológica, o nível de uma citocina, o nível de um quimiocina, etc.) no trato gastrointestinal de um animal. Em determinadas modalidades, a propriedade é detectada ou quantificada em uma amostra gastrointestinal de um animal. As amostras gastrointestinais podem ser obtidas a partir de um animal em qualquer forma padrão que reflete os teores metabólicos do trato gastrointestinal do animal. As amostras gastrointestinais incluem amostras de tecido gastrointestinal obtidas, por exemplo, por biópsia endoscópica. Os tecidos gastrointestinais incluem, por exemplo, tecido oral, esófago, estômago, intestino, íleo, ceco, cólon ou reto. As amostras também incluem fezes, saliva, urina e ascites gastrointestinais. Os métodos para obter amostras gastrointestinais são padrão e conhecidos pelo elemento versado na técnica. Em algumas modalidades a dita amostra é uma amostra sanguínea ou sérica.

[0479] Em algumas modalidades, a amostra é uma única amostra de um único animal. Em algumas modalidades, a amostra é uma combinação de múltiplas amostras de um único animal. Em algumas modalidades, células ou proteínas são purificadas a partir da amostra antes da análise. Em algumas modalidades, células ou proteínas de uma única amostra são purificadas. Em algumas modalidades, células ou proteínas de múltiplas amostras de um único animal são purificadas e subsequentemente combinadas antes da análise.

VII. Métodos para Melhorar Desempenho de Animal A. Razão de Conversão de Ração

[0480] Em algumas modalidades, os métodos descritos no presente documento incluem reduzir a razão de conversão de ração de um animal. Em algumas modalidades, um animal administrado com uma preparação de oligossacarídeo sintético, uma composição nutricional, uma pré-mistura de ração animal, ou uma composição de ração animal, como descrito no presente documento, tem uma razão de conversão de ração inferior em comparação com um animal fornecido com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético. Como usado no presente documento o termo “razão de conversão de ração (FCR),” se refere à razão de entrada de massa de ração (por exemplo, consumida pelo animal) para a saída de animal, em que a saída de animal é o produto de animal alvo. Por exemplo, a saída de animal para animais leiteiros é leite, enquanto a saída de animal para animais criados para produção de carne é massa corporal.

[0481] Em algumas modalidades, o animal é criado para consumo, e a saída de animal alvo é massa corporal. Desse modo, em algumas modalidades, a FCR se refere à razão do peso de ração consumida em comparação com o peso corporal final do animal antes do processamento. Em algumas modalidades, a FCR se refere à razão do peso de ração consumida em comparação com o ganho de peso corporal final do animal antes do processamento. Deve-se entender que FCR pode ser medida para um animal ou população de animais ao longo de diferentes períodos de tempo. Por exemplo, em algumas modalidades, a FCR é uma FCR ao longo do tempo de vida inteiro do animal. Em outras modalidades, a FCR é uma FCR diária, ou uma FCR semanal, ou uma FCR acumulativa medida até um momento particular no tempo (por exemplo, um dia em particular).

[0482] Um elemento versado na técnica reconhecerá que a FCR mínima de desempenho alvo (FCR ideal) pode ser diferente para diferentes tipos de animais e pode ser diferente para diferentes raças de um tipo animal (por exemplo, diferentes raças de galinhas de consumo, ou diferentes raças de suíno). A FCR mínima de desempenho alvo também pode ser diferente dependendo da idade do animal (por exemplo, galinhas ou suínos em uma fase em crescimento em comparação com uma fase de abate), ou do sexo do animal. Deve ser evidente que a FCR ideal pode ser diferente dependendo de qualquer combinação desses fatores.

[0483] O desempenho mínimo alvo se refere, de modo geral, à eficácia de ração mais baixa observada para um determinado animal e raça sob condições de crescimento ideais, saúde de animal ideal, e nutrição dietética ideal. É bem conhecido por um elemento versado na técnica que sob condições de crescimento comuns, um animal pode não obter a FCR mínima de desempenho alvo. Um animal pode não obter sua FCR mínima de desempenho alvo devido a uma variedade de influências de saúde, nutrição, ambiental e/ou de comunidade. Um animal pode não obter sua FCR mínima de desempenho alvo quando criado em um ambiente desafiador, que pode incluir, por exemplo, tensões patogênicas ambientais, temperatura ambiental excessiva (tensão de calor), umidade ambiental excessiva, aglomeração, ou outros efeitos de interação social, como dificuldade em acessar a ração ou água potável.

Em algumas modalidades, um animal pode não obter sua FCR mínima de desempenho alvo devido a doença ou tensões patogênicas ambientais. Em outras modalidades, um animal pode não obter sua FCR mínima de desempenho alvo devido a temperatura ambiental excessiva (tensão de calor), ou umidade ambiental excessiva. Em ainda outras modalidades, um animal pode não obter sua FCR mínima de desempenho alvo devido a aglomeração, ou outros efeitos de interação social, como dificuldade em acessar a ração ou água potável.

[0484] Em algumas modalidades, um animal fornecido com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético descrita no presente documento tem uma FCR que é pelo menos 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 % ou 10 % maior que a FCR mínima de desempenho alvo. Em determinadas modalidades, um animal fornecido com uma dieta que não inclui uma preparação de oligossacarídeo sintético descrita no presente documento tem uma FCR que é 1 % a 10 % maior que o desempenho mínimo alvo, 2 % a 10 % maior que o desempenho mínimo alvo, ou 5 % a 10 % maior que o desempenho mínimo alvo.

[0485] Em algumas modalidades, um animal fornecido com uma composição nutricional que compreende uma preparação de oligossacarídeo sintético, uma composição nutricional, uma pré-mistura de ração animal, ou uma composição de ração animal, como descrito no presente documento tem uma FCR que está mais próximo ao desempenho mínimo alvo em comparação com um animal fornecido com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético. Em particular modalidades, o animal fornecido com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-

mistura de ração animal, ou composição de ração animal, como descrito no presente documento tem uma FCR que é entre 0 a 10 % maior que o desempenho mínimo alvo, entre 0 a 5 % maior que o desempenho mínimo alvo, ou entre 0 a 2 % maior que o desempenho mínimo alvo.

[0486] Em algumas modalidades, um animal fornecido com uma preparação de oligossacarídeo sintético, uma composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal, como descrito no presente documento tem uma razão de conversão de ração inferior em comparação com um animal fornecido com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético. Por exemplo, em determinadas modalidades, o animal fornecido com uma dieta que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético consume menos ração, mas tem a mesma saída de animal em comparação com um animal fornecido com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético. Em outras modalidades, o animal fornecido com uma dieta que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético consume a mesma quantidade de ração, mas tem uma saída de animal superior em comparação com um animal fornecido com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético. Em ainda outras modalidades, o animal fornecido com uma dieta que compreende a preparação de oligossacarídeo sintético consume menos ração e tem uma saída de animal superior em comparação com um animal fornecido com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0487] Em algumas modalidades, a FCR de um animal fornecido com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal, como é descrito no presente documento, reduziu pelo menos 1 %, pelo menos 2 %, pelo menos 4 %, pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 10 %, pelo menos 12 %, entre 1 a 10 %, entre 4 a 10 %, entre 1 a 8 %, entre 4 a 8 %, entre 1 a 6 % ou entre 4 a 6 % em comparação com um animal fornecido com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, o animal é ave. Em determinadas modalidades, a FCR da ave é reduzida ao longo de 0 a 14 dias de idade, ao longo de 15 a 28 dias de idade, ao longo de 29 a 35 dias de idade, ao longo de 35 dias, ao longo de 42 dias, ao longo de 6 semanas, ao longo de 6,5 semanas, ao longo de 0 a 35 dias de idade, ao longo de 0 a 42 dias de idade, ao longo de 0 a 6 semanas de idade, ao longo de 0 a 6,5 semanas de idade, ao longo de 15 a 35 dias de idade, ao longo de 36 a 42 dias de idade, ao longo de 15 a 39 dias de idade, ou ao longo de 40 a 46 dias de idade.

[0488] Em uma modalidade, a FCR ao longo de 35 dias para ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal, como é descrito no presente documento, reduzida em entre 4 a 6 % em comparação com a ave fornecida com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético. Por exemplo, em uma determinada modalidade, a FCR ao longo de 35 dias para ave fornecida com uma composição nutricional que descreve uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal, como é descrito no presente documento, 1,53, a FCR ao longo de 35 dias para ave fornecida com uma dieta sem a preparação de oligossacarídeo sintético é 1,61, e a FCR da ave fornecida com a composição nutricional que compreende uma preparação de oligossacarídeo, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal é reduzida cerca de 5 % em comparação com a ave fornecida com uma dieta sem a preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, a FCR ao longo de 42 dias, ao longo de 6 semanas, ou ao longo de 6,5 semanas dias para ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal, como é descrito no presente documento, reduzida em entre 4 a 6 % em comparação com a ave fornecida com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0489] Em algumas modalidades, uma população animal fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, preparação nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal, como descrito no presente documento, tem uma FCR inferior em comparação com uma população animal fornecida com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético, em que a FCR é corrigida para mortalidade na população animal.

[0490] Em determinadas modalidades, um animal fornecido com uma preparação de oligossacarídeo sintético, pré-mistura de ração animal ou composição de ração animal tem uma FCR menor que um animal fornecido com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético, mas que inclui um ou mais antibióticos, um ou mais ionóforos, fibra de milho solúvel, amido de trigo modificado, ou manano de levedura, ou quaisquer combinações dos mesmos.

[0491] É conhecido por um elemento versado na técnica, quando estiver determinando FCR, a FCR pode ser ajustada para mortalidade para reduzir o ruído devido a estatística de número pequeno. Os métodos para ajustar FCR para mortalidade são bem conhecidos por um elemento versado na técnica.

[0492] Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriormente mencionadas, a ave é uma ave individual, enquanto em outras modalidades a ave é uma população de aves.

[0493] Em algumas modalidades, o animal é ave, e a composição de ração animal é ração de ave, em que a preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional de ave, pré-mistura de ração de ave ou composição de ração de ração de ave reduz a razão de conversão de ração (FCR) em até cerca de 10 % ou cerca de 5 % ou entre 1 % e 10 %, entre 2 % e 10 %, entre 3 % e 10 %, entre 4 % e 10 %, entre 5 % e 10 %, entre 2 % e 5 %, entre 2 % e 6 %, entre 2 % e 7 %, entre 2 % e 8 %, entre 2 % e 9 % ou entre 1 % e 5 %, quando alimentados para ave em comparação com a ave alimentada com uma composição de ração sem a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0494] Em determinadas modalidades, a ave sofre de uma doença ou um transtorno, ou é criada em um ambiente desafiador, em que a preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional de ave, pré-mistura de ração de ave, ou composição de ração de ração de ave reduz a razão de conversão de ração (FCR) em até cerca de 30 %, cerca de 25 %, cerca de 20 %, cerca de 15 %, cerca de 10 % ou cerca de 5 % ou entre 1 % e 30 %, entre 5 % e 30 %, entre

10 % e 30 %, entre 5 % e 20 %, entre 10 % e 20 %, entre 1 % e 20 %, entre 1 % e 15 %, entre 1 % e 10 %, entre 2 % e 10 %, entre 3 % e 10 %, entre 4 % e 10 %, entre 5 % e 10 %, entre 2 % e 5 %, entre 2 % e 6 %, entre 2 % e 7 %, entre 2 % e 8 %, entre 2 % e 9 % ou entre 1 % e 5 %, quando alimentado para a ave em comparação com a ave alimentada com uma composição de ração sem a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0495] Em algumas modalidades, o animal é suíno, e a composição de ração animal é ração de suíno, em que a preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional de suíno, pré-mistura de ração de suíno, ou composição de ração de suíno reduz a razão de conversão de ração (FCR) em até cerca de 15 %, cerca de 10 % ou cerca de 5 % ou entre 1 % e 15 %, entre 2 % e 15 %, entre 3 % e 15 %, entre 4 % e 15 %, entre 5 % e 15 %, entre 10 % e 15 %, entre 1 % e 10 %, entre 2 % e 10 %, entre 3 % e 10 %, entre 4 % e 10 %, entre 5 % e 10 %, entre 2 % e 5 %, entre 2 % e 6 %, entre 2 % e 7 %, entre 2 % e 8 %, entre 2 % e 9 % ou entre 1 % e 5 %, quando alimentada para o suíno em comparação com suíno alimentado com uma composição de ração sem a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0496] Em determinadas modalidades, o suíno sofre de uma doença ou um transtorno, ou é criado em um ambiente desafiador, em que a preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional de suíno, pré-mistura de ração de suíno, ou composição de ração de suíno reduz a razão de conversão de ração (FCR) em até cerca de 40 %, cerca de 35 % cerca de 30 %, cerca de 25 %, cerca de 20 %, cerca de 15 %, cerca de 10 % ou cerca de 5 % ou entre 1 % e 40 %,

entre 5 % e 40 %, entre 10 % e 40 %, entre 15 % e 40 %, entre 20 % e 40 %, entre 25 % e 40 %, entre 30 % e 40 %, entre 1 % e 30 %, entre 5 % e 30 %, entre 10 % e 30 %, entre 5 % e 20 %, entre 10 % e 20 %, entre 1 % e 20 %, entre 1 % e 15 %, entre 1 % e 10 %, entre 2 % e 10 %, entre 3 % e 10 %, entre 4 % e 10 %, entre 5 % e 10 %, entre 2 % e 5 %, entre 2 % e 6 %, entre 2 % e 7 %, entre 2 % e 8 %, entre 2 % e 9 % ou entre 1 % e 5 %, quando alimentada para o suíno em comparação com suíno alimentado com uma composição de ração sem a preparação de oligossacarídeo sintético. B. Peso Corporal

[0497] Em algumas modalidades, um animal sujeito que é alimentado com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal descrita no presente documento pode sofrer um aumento no ganho de peso, em comparação com um animal de controle que não é alimentado com a preparação de oligossacarídeo, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal. Em determinadas modalidades, tanto o animal sujeito quanto o animal de controle consumem a mesma quantidade de ração com base em peso, mas o animal sujeito fornecido com a preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré- mistura de ração animal ou composição de ração animal experimenta um aumento no ganho de peso em comparação com o animal de controle que é alimentado com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0498] O ganho de peso de um animal pode ser determinado por quaisquer métodos adequados conhecidos na técnica. Por exemplo, para determinar o ganho de peso de um animal que é submetido a um regime de alimentação da preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré- mistura de ração animal ou composição de ração animal, um elemento versado na técnica pode medir a massa de um animal antes do regime de alimentação, medir a massa do animal após o animal ser alimentado com a preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal ou composição de ração animal, e determinar a diferença entre essas duas medições.

[0499] Em algumas modalidades, o ganho de peso pode ser um ganho de peso diário médio (também denominado ganho diário médio (ADG)), um ganho de peso semanal médio (AWG), ou um ganho de peso corporal final (BWG). C. Ganho de Peso Diário Médio

[0500] Em algumas modalidades, fornecer um animal com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal ou composição de ração animal resulta em um ganho de peso diário médio maior que um animal fornecido com ração sem a preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, fornecer uma população animal com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal resulta em um ganho de peso diário médio maior que uma população animal fornecida com ração sem a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0501] Em uma modalidade, o ganho de peso diário médio para um animal é o peso obtido a cada dia por um animal individual, medido ao longo de um determinado período de tempo. Em algumas modalidades, o ganho de peso diário médio para uma população animal é o ganho de peso diário médio para cada animal individual, medido ao longo da população; em que o ganho de peso diário médio é o peso obtido a cada dia pelo animal individual, medido ao longo de um determinado período de tempo. Em ainda outras modalidades, o ganho de peso diário médio para uma população animal é o peso total obtido pela população a cada dia, divido pelo número de animais individuais na população, medido ao longo de um determinado período de tempo. Deve-se entender que o ganho de peso diário ou ganho de peso diário médio pode ser adicionalmente medido, por exemplo, para fornecer um ganho de peso diário médio ao longo das populações de animais.

[0502] Em determinadas modalidades, o animal é ave, e a ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal ou composição de ração animal tem um ganho de peso diário médio de pelo menos 20 gramas por dia, pelo menos 30 gramas por dia, pelo menos 40 gramas por dia, pelo menos 50 gramas por dia, pelo menos 60 gramas por dia, pelo menos 70 gramas por dia, pelo menos 80 gramas por dia, pelo menos 90 gramas por dia, entre 20 a 100 gramas por dia, entre 20 a 80 gramas por dia, entre 30 a 50 gramas por dia, entre 40 a 60 gramas por dia, entre 50 a 70 gramas por dia, ou entre 70 a 90 gramas por dia. Em uma modalidade, o animal é ave, e a ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal ou composição de ração animal tem um ganho de peso diário médio de pelo menos 50 gramas por dia. Em determinadas modalidades, a ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré- mistura de ração animal ou composição de ração animal tem um ganho de peso diário médio de pelo menos 1 %, pelo menos 2 %, pelo menos 3 %, pelo menos 4 %, pelo menos 5 %, pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, pelo menos 11 %, pelo menos 12 %, entre 1 a 10 %, entre 2 a 8 % ou entre 3 a 5 % maior que o ganho de peso diário médio de ave fornecida com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0503] Em determinadas modalidades, o animal é ave, e a ave é entre 0 a 14 dias de idade, e o ganho de peso diário médio é pelo menos 30 gramas, pelo menos 40 gramas, ou pelo menos 50 gramas por dia.

[0504] Em outras modalidades, o animal é ave, a ave é entre 14 a 28 dias de idade, e o ganho de peso diário médio é pelo menos 70 gramas, pelo menos 80 gramas, ou pelo menos 90 gramas por dia.

[0505] Em ainda outras modalidades, o animal é ave, a ave tem entre 29 a 35 dias de idade, e o ganho de peso diário médio é pelo menos 50 gramas, pelo menos 60 gramas, ou pelo menos 70 gramas por dia.

[0506] Em algumas modalidades que podem ser combinadas com o anteriormente mencionado, o animal é ave, e a composição de ração animal é ração de ave, em que a preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional de ave, pré-mistura de ração de ave ou composição de ração de ave aumenta o ganho diário médio na ave em até cerca de 10 % ou cerca de 5 % ou entre 1 % e 10 %, entre 2 % e 10 %, entre 3 % e 10 %, entre 4 % e 10 %, entre 5 % e 10 %, entre 2 % e 5 %, entre 2 % e 6 %, entre 2 % e 7 %, entre 2 % e 8 %, entre 2 % e 9 % ou entre 1 % e 5 %, quando alimentado para a ave em comparação com a ave alimentada com uma composição de ração sem a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0507] Em determinadas modalidades, a ave sofre de uma doença ou um transtorno, ou é criada em um ambiente desafiador, em que a preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional de ave, pré-mistura de ração de ave, ou composição de ração de ave aumenta o ganho diário médio na ave em até cerca de 30 %, cerca de 25 %, cerca de 20 %, cerca de 15 %, cerca de 10 % ou cerca de 5 % ou entre 1 % e 30 %, entre 5 % e 30 %, entre 10 % e 30 %, entre 5 % e 20 %, entre 10 % e 20 %, entre 1 % e 20 %, entre 1 % e 15 %, entre 1 % e 10 %, entre 2 % e 10 %, entre 3 % e 10 %, entre 4 % e 10 %, entre 5 % e 10 %, entre 2 % e 5 %, entre 2 % e 6 %, entre 2 % e 7 %, entre 2 % e 8 %, entre 2 % e 9 % ou entre 1 % e 5 %, quando alimentado para a ave em comparação com a ave alimentada com uma composição de ração sem a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0508] Em algumas modalidades que podem ser combinadas com o anteriormente mencionado, o animal é suíno e a composição de ração animal é ração de suíno, em que a preparação de oligossacarídeo sintético, preparação nutricional de suíno, pré-mistura de ração de suíno, ou composição de ração de suíno aumenta o ganho diário médio no suíno em até cerca de 15 %, cerca de 10 % ou cerca de 5 % ou entre 1 % e 15 %, entre 2 % e 15 %, entre 3 % e 15 %, entre 4 % e 15 %, entre 5 % e 15 %, entre 10 % e 15 %, entre 1 % e 10 %, entre 2 % e 10 %, entre 3 % e 10 %, entre 4 % e 10 %, entre 5 % e 10 %, entre 2 % e 5 %, entre 2 % e 6 %, entre 2 % e 7 %, entre 2 % e 8 %, entre 2 % e 9 % ou entre 1 % e 5 %, quando alimentada para o suíno em comparação com suíno alimentado com uma composição de ração sem a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0509] Em determinadas modalidades, o suíno sofre de uma doença ou um transtorno, ou é criado em um ambiente desafiador, em que a preparação de oligossacarídeo, composição nutricional de suíno, pré-mistura de ração de suíno, ou composição de ração de suíno aumenta o ganho diário médio no suíno em até cerca de 40 %, cerca de 35 % cerca de 30 %, cerca de 25 %, cerca de 20 %, cerca de 15 %, cerca de 10 % ou cerca de 5 % ou entre 1 % e 40 %, entre 5 % e 40 %, entre 10 % e 40 %, entre 15 % e 40 %, entre 20 % e 40 %, entre 25 % e 40 %, entre 30 % e 40 %, entre 1 % e 30 %, entre 5 % e 30 %, entre 10 % e 30 %, entre 5 % e 20 %, entre 10 % e 20 %, entre 1 % e 20 %, entre 1 % e 15 %, entre 1 % e 10 %, entre 2 % e 10 %, entre 3 % e 10 %, entre 4 % e 10 %, entre 5 % e 10 %, entre 2 % e 5 %, entre 2 % e 6 %, entre 2 % e 7 %, entre 2 % e 8 %, entre 2 % e 9 % ou entre 1 % e 5 %, quando alimentada para o suíno em comparação com suíno alimentado com uma composição de ração sem a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0510] Em determinadas modalidades, o animal é suíno, e o suíno fornecido com uma preparação de oligossacarídeo sintético, preparação nutricional de suíno, pré-mistura de ração de suíno, ou composição de ração de suíno tem um ganho de peso diário médio de pelo menos 1 %, pelo menos 2 %, pelo menos 3 %, pelo menos 4 %, pelo menos 5 %, pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, pelo menos 11 %, pelo menos 12 %, entre 1 a 10 %, entre 2 a 8 % ou entre 3 a 5 % maior que o ganho de peso diário médio de suíno fornecido com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético. D. Ganho de Peso Semanal Médio

[0511] Em algumas modalidades, fornecer um animal com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal resulta em um ganho de peso semanal médio maior que um animal fornecido com ração sem a preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, fornecer uma população animal com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal resulta em um ganho de peso semanal médio maior que uma população animal fornecida com ração sem a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0512] Em uma modalidade, o ganho de peso semanal médio para um animal é o peso obtido a cada semana por um animal individual, medido ao longo de um determinado período de tempo. Em algumas modalidades, o ganho de peso semanal médio para uma população animal é o ganho de peso semanal médio para cada animal individual, medido ao longo da população; em que o ganho de peso semanal médio é o peso obtido a cada semana pelo animal individual, medido ao longo de um determinado período de tempo. Em ainda outras modalidades, o ganho de peso semanal médio para uma população animal é o peso total obtido pela população cada semana, dividido pelo número de animais individuais na população, medido ao longo de um determinado período de tempo. Deve-se entender que o ganho de peso semanal médio pode ser adicionalmente medido, por exemplo, para fornecer um ganho de peso semanal médio ao longo das populações de animais.

[0513] Em determinadas modalidades, o animal é ave, e a ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal tem um ganho de peso semanal médio de pelo menos 100 gramas por semana, pelo menos 200 gramas por semana, pelo menos 300 gramas por semana, pelo menos 400 gramas por semana, pelo menos 500 gramas por semana, pelo menos 600 gramas por semana, pelo menos 700 gramas por semana, pelo menos 800 gramas por semana, entre 100 a 800 gramas por semana, entre 100 a 400 gramas por semana, entre 300 a 600 gramas por semana, entre 500 a 800 gramas por semana, ou entre 350 a 550 gramas por semana. Em uma modalidade, a ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré- mistura de ração animal, ou composição de ração animal tem um ganho de peso semanal médio de pelo menos 400 gramas por semana. Em determinadas modalidades, a ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal tem um ganho de peso semanal médio de pelo menos 1 %, pelo menos 2 %, pelo menos 3 %, pelo menos 4 %, pelo menos 5 %, pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, pelo menos 11 %, pelo menos 12 %, entre 1 a 10 %, entre 2 a 8 % ou entre 3 a 5 % maior que o ganho de peso semanal médio de ave fornecida com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo.

[0514] Em determinadas modalidades, o animal é suíno, e o suíno fornecido com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional de suíno, pré-mistura de ração de suíno, ou composição de ração de suíno tem um ganho de peso semanal médio de pelo menos 1 %, pelo menos 2 %,

pelo menos 3 %, pelo menos 4 %, pelo menos 5 %, pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, pelo menos 11 %, pelo menos 12 %, entre 1 a 10 %, entre 2 a 8 % ou entre 3 a 5 % maior que o ganho de peso semanal médio de suíno fornecido com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético. E. Ganho de Peso Corporal Final

[0515] Em algumas modalidades, fornecer um animal com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal resulta em um ganho de peso corporal final maior que um animal fornecido com ração sem a preparação de oligossacarídeo sintético. Em algumas modalidades, fornecer uma população animal com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal resulta em um ganho de peso corporal final médio maior que uma população animal fornecida com ração sem a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0516] Em algumas modalidades, fornecer um animal ou população animal com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, ração animal pré-mistura, ou composição de ração animal resulta em um ganho de peso corporal final ou ganho de peso corporal final médio que está mais próximo ao desempenho máximo alvo que um animal ou população animal que é fornecida com ração sem a preparação de oligossacarídeo sintético. O desempenho máximo alvo se refere, de modo geral, ao ganho de peso corporal prático mais alto observado para um determinado tipo de animal e raça sob condições de crescimento ideais, saúde de animal ideal e nutrição dietética ideal.

[0517] Em uma modalidade, o ganho de peso corporal final é a quantidade de peso que um animal individual ganha ao longo de um período de tempo. Por exemplo, em uma modalidade, o ganho de peso corporal total é a quantidade de peso que um animal individual ganha a partir de 0 dia de idade até o peso final tomado antes do processamento do animal, ou o peso final tomado no dia de processamento do animal. Por exemplo, em uma modalidade, ganho de peso corporal total do dia 0 a 28 para um animal é a quantidade de peso que um animal individual ganha a partir de 0 dias de idade até 28 dias de idade.

[0518] Em outra modalidade, o ganho de peso corporal total médio é a quantidade de peso que um animal individual ganha ao longo de um período de tempo, medido ao longo de uma população animal. Por exemplo, em uma modalidade, o ganho de peso corporal total médio é a quantidade de peso que um animal individual ganha a partir de 0 dias de idade até o peso final tomado antes do processamento do animal, ou o peso final tomado no dia de processamento do animal, medido ao longo da população animal. Em ainda outra modalidade, o ganho de peso corporal total médio é a quantidade de peso que uma população animal ganha ao longo de um período de tempo, dividido pelo número de animais individuais na população. Por exemplo, em uma modalidade, o ganho de peso corporal total médio é a quantidade de peso que uma população animal ganha a partir de 0 dias de idade até o peso final tomado antes do processamento da população animal, ou o peso final tomado no dia de processamento do animal, divido pelo número de animais individuais na população.

[0519] Deve-se entender que os valores para ganho de peso corporal total e ganho de peso corporal total médio podem ser adicionalmente medidos. Por exemplo, o ganho de peso corporal total médio para diferentes populações do mesmo tipo de animal pode ser medido para obter um ganho de peso corporal total médio ao longo das populações.

[0520] Em determinadas modalidades, o animal é ave, e a ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal tem um ganho de peso corporal final de pelo menos 3 kg, pelo menos 2,5 kg, pelo menos 2 kg, pelo menos 1,5 kg, pelo menos 1 kg, entre 1 a 3 kg ou entre 1,5 a 2,5 kg. Em uma modalidade, a ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal tem um ganho de peso corporal final de pelo menos 2 kg. Em determinadas modalidades, a ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal tem um ganho de peso corporal final de pelo menos 1 %, pelo menos 2 %, pelo menos 3 %, pelo menos 4 %, pelo menos 5 %, pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, pelo menos 11 %, pelo menos 12 %, entre 1 a 10 %, entre 2 a 8 % ou entre 3 a 5 % maior que o ganho de peso corporal final de ave fornecida com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético. Em determinadas modalidades, a ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal tem um ganho de peso corporal final de pelo menos 0,01 kg, pelo menos 0,02 kg, pelo menos 0,03 kg, pelo menos 0,04 kg, pelo menos

0,05 kg, pelo menos 0,06 kg, pelo menos 0,07 kg, pelo menos 0,08 kg, pelo menos 0,09 kg, pelo menos 0,1 kg, entre 0,01 a 0,1 kg, entre 0,03 a 0,07 kg ou entre 0,04 a 0,06 kg maior que o ganho de peso corporal final de ave fornecida com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0521] Em determinadas modalidades, o animal é ave, e a ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal tem um ganho de peso corporal final médio de pelo menos 3 kg, pelo menos 2,5 kg, pelo menos 2 kg, pelo menos 1,5 kg, pelo menos 1 kg, entre 1 a 3 kg ou entre 1,5 a 2,5 kg. Em uma modalidade, a ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal tem um ganho de peso corporal final médio de pelo menos 2 kg. Em determinadas modalidades, a ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal tem um ganho de peso corporal final médio de pelo menos 1 %, pelo menos 2 %, pelo menos 3 %, pelo menos 4 %, pelo menos 5 %, pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, pelo menos 11 %, pelo menos 12 %, entre 1 a 10 %, entre 2 a 8 % ou entre 3 a 5 % maior que o ganho de peso corporal final médio de ave fornecida com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético. Em determinadas modalidades, a ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal tem um ganho de peso corporal final médio de pelo menos 0,01 kg, pelo menos 0,02 kg, pelo menos 0,03 kg, pelo menos 0,04 kg, pelo menos 0,05 kg, pelo menos 0,06 kg, pelo menos 0,07 kg, pelo menos 0,08 kg, pelo menos 0,09 kg, pelo menos 0,1 kg, entre 0,01 a 0,1 kg, entre 0,03 a 0,07 kg ou entre 0,04 a 0,06 kg maior que o ganho de peso corporal final médio de ave fornecida com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0522] Em algumas modalidades, o animal é ave, e a ave tem entre 0 a 14 dias de idade, entre 15 a 28 dias de idade, entre 29 a 35 dias de idade, entre 0 a 42 dias de idade, entre 0 a 6 semanas de idade, ou entre 0 a 6,5 semanas de idade. Em algumas modalidades, a fase inicial é de 0 a 14 dias de idade, a fase em crescimento é de 15 a 28 dias de idade, e a fase de abate é de 29 a 35 dias de idade. Em outras modalidades, a fase inicial é 0 a 14 dias de idade, a fase em crescimento é de 15 a 35 dias de idade, e a fase de abate é de 36 a 42 dias de idade. Em ainda outras modalidades, a fase inicial é de 0 a 14 dias de idade, a fase em crescimento é de 15 a 39 dias de idade, e a fase de abate é de 40 a 46 dias de idade. Deve-se entender que o comprimento da fase inicial, fase em crescimento, e fase de abate para ave podem ser alteradas dependendo do uso destinado da ave, ou do produto de ave. Por exemplo, em algumas modalidades o comprimento da fase inicial, fase em crescimento e fase de abate pode ser diferente se o uso destinado da ave é como uma galinha para consumo, em comparação com o processamento para carne de galinha de bandeja.

[0523] Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriormente mencionadas, a ave é uma ave individual, enquanto em outras modalidades a ave é uma população de aves.

[0524] Em determinadas modalidades, o suíno fornecido com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional de suíno, pré-mistura de ração de suíno, ou composição de ração de suíno tem um ganho de peso corporal final de pelo menos 1 %, pelo menos 2 %, pelo menos 3 %, pelo menos 4 %, pelo menos 5 %, pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, pelo menos 11 %, pelo menos 12 %, entre 1 a 10 %, entre 2 a 8 % ou entre 3 a 5 % maior que o ganho de peso corporal final de suíno fornecido com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0525] Em determinadas modalidades, o suíno fornecido com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional de suíno, pré-mistura de ração de suíno, ou composição de ração de suíno tem um ganho de peso corporal final médio de pelo menos 1 %, pelo menos 2 %, pelo menos 3 %, pelo menos 4 %, pelo menos 5 %, pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, pelo menos 11 %, pelo menos 12 %, entre 1 a 10 %, entre 2 a 8 % ou entre 3 a 5 % maior que o ganho de peso corporal final médio de suíno fornecido com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0526] Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriormente mencionadas, o suíno é um suíno individual, enquanto em outras modalidades o suíno é uma população de suínos. F. Rendimento de Produto de Animal

[0527] Em determinadas modalidades, fornecer um animal com preparações de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal ou composição de ração animal, como descrito no presente documento resulta em um rendimento aumentado de produto de animal, em comparação com um animal fornecido com ração que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

Em algumas modalidades, o animal fornecido com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal rende pelo menos 1 %, pelo menos 2 %, pelo menos 3 %, pelo menos 4 %, pelo menos 5 %, pelo menos 6 %, pelo menos 7 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, entre 1 a 10 %, entre 4 a 10 %, entre 6 a 10 % ou entre 2 a 8 % mais produto de animal em comparação com um animal fornecido com ração que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

Por exemplo, em algumas modalidades, o produto de animal é a carne do animal, e um animal fornecido com uma preparação de oligossacarídeo sintético, como descrito no presente documento, rende uma quantidade maior de carne em comparação com um animal que não é fornecido com a preparação de oligossacarídeo.

Em algumas modalidades, fornecer uma população animal a preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal resulta em um rendimento médio aumentado de produto de animal, em comparação com uma população animal fornecida com ração que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

Em algumas modalidades, o rendimento de produto de animal médio é a quantidade de produto de animal rendida a partir de cada animal individual,

medido ao longo da população animal.

[0528] Em algumas modalidades, o produto de animal é a carne de um animal (por exemplo, que pode ser vendida para consumidores, processado para produzir um produto alimentício ou consumido por um ser humano). Em determinadas modalidades, o animal é ave, e o produto de animal é uma carcaça eviscerada de ave, carne de perna de uma carcaça eviscerada de ave, carne de peito de uma carcaça eviscerada de ave, carne de coxa de uma carcaça eviscerada de ave, gordura de uma carcaça eviscerada de ave, carne de peito de uma carcaça desossada de ave, ou carne de perna de uma carcaça desossada de ave. Em outras modalidades, o animal é ave, e o produto de animal é carne branca, filés de carne de peito, e tenders de carne de peito. Em outra modalidade, o animal é ave e o produto são carne de galinha de bandeja. Em ainda outra modalidade, o animal é ave e o produto é pássaro inteiro sem vísceras (WOG).

[0529] Em algumas modalidades, o rendimento de produto de animal é o rendimento obtido de um animal individual. Em algumas modalidades, o rendimento médio de produto de animal é o rendimento obtido a partir de cada animal individual em uma população animal, medido ao longo da população. Em ainda outra modalidade, o rendimento médio de produto de animal é o rendimento total de produto de animal produzido de uma população animal, dividido pelo número de animais individuais na população animal.

[0530] Em algumas modalidades, o animal é ave, o rendimento de carne de perna de uma carcaça eviscerada de ave é pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 10 %, pelo menos 12 %, entre 6 a 12 %, entre 8 a 12 %, entre 10 a 18 %,

entre 12 a 16 % ou entre 12 a 14 % de peso vivo para ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal ou composição de ração animal. Em determinadas modalidades, o rendimento de carne de perna de uma carcaça eviscerada de ave da ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal, como é descrito no presente documento, pelo menos 1 %, pelo menos 2 %, pelo menos 3 %, pelo menos 4 %, pelo menos 5 %, pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, pelo menos 11 %, pelo menos 12 %, entre 1 a 10 %, entre 2 a 8 % ou entre 3 a 5 % maior que para ave fornecida com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0531] Em algumas modalidades, o animal é ave, e o rendimento médio de carne de perna de uma carcaça eviscerada de ave é pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 10 %, pelo menos 12 %, entre 6 a 12 %, entre 8 a 12 %, entre 10 a 18 %, entre 12 a 16 % ou entre 12 a 14 % de peso vivo para ave fornecida com preparações de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal. Em determinadas modalidades, o rendimento médio de carne de perna de uma carcaça eviscerada de ave da ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal, como é descrito no presente documento, pelo menos 1 %, pelo menos 2 %, pelo menos 3 %, pelo menos 4 %, pelo menos 5 %, pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, pelo menos 11 %, pelo menos 12 %, entre 1 a 10 %, entre 2 a 8 % ou entre

3 a 5 % maior que para ave fornecida com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0532] Em algumas modalidades, o animal é ave, e o rendimento de carne de peito de uma carcaça eviscerada de ave é pelo menos 10 %, pelo menos 12 %, pelo menos 15 %, pelo menos 16 %, pelo menos 18 %, pelo menos 20 %, pelo menos 22 %, pelo menos 24 %, pelo menos 28 %, entre 10 a 18 %, entre 12 a 16 %, entre 18 a 29 %, entre 20 a 27 % ou entre 20 a 25 % de peso vivo para ave fornecida com preparações de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré- mistura de ração animal, ou composição de ração animal. Em determinadas modalidades, o rendimento de carne de peito de uma carcaça eviscerada de ave da ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal, como é descrito no presente documento, pelo menos 1 %, pelo menos 2 %, pelo menos 3 %, pelo menos 4 %, pelo menos 5 %, pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, pelo menos 11 %, pelo menos 12 %, entre 1 a 10 %, entre 2 a 8 % ou entre 3 a 5 % maior que para ave fornecida com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0533] Em algumas modalidades, o animal é ave, e o rendimento médio de carne de peito de uma carcaça eviscerada de ave é pelo menos 10 %, pelo menos 12 %, pelo menos 15 %, pelo menos 16 %, pelo menos 18 %, pelo menos 20 %, pelo menos 22 %, pelo menos 24 %, pelo menos 28 %, entre 10 a 18 %, entre 12 a 16 %, entre 18 a 29 %, entre 20 a 27 % ou entre 20 a 25 % de peso vivo para ave fornecida com preparações de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-

mistura de ração animal, ou composição de ração animal. Em determinadas modalidades, o rendimento médio de carne de peito de uma carcaça eviscerada de ave da ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal, como é descrito no presente documento, pelo menos 1 %, pelo menos 2 %, pelo menos 3 %, pelo menos 4 %, pelo menos 5 %, pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, pelo menos 11 %, pelo menos 12 %, entre 1 a 10 %, entre 2 a 8 % ou entre 3 a 5 % maior que para ave fornecida com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0534] Em algumas modalidades, o animal é ave, e o rendimento de carne de coxa de uma carcaça eviscerada de ave é pelo menos 5 %, pelo menos 7 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, pelo menos 11 %, pelo menos 12 %, entre 5 a 14 %, entre 7 a 10 %, entre 7 a 15 %, entre 9 a 13 % ou entre 9 a 11 % de peso vivo para ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal. Em determinadas modalidades, o rendimento de carne de coxa de uma carcaça eviscerada de ave da ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal, como é descrito no presente documento, pelo menos 1 %, pelo menos 2 %, pelo menos 3 %, pelo menos 4 %, pelo menos 5 %, pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, pelo menos 11 %, pelo menos 12 %, entre 1 a 10 %, entre 2 a 8 % ou entre 3 a 5 % maior que para ave fornecida com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0535] Em algumas modalidades, o animal é ave, e o rendimento médio de carne de coxa de uma carcaça eviscerada de ave é pelo menos 5 %, pelo menos 7 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, pelo menos 11 %, pelo menos 12 %, entre 5 a 14 %, entre 7 a 10 %, entre 7 a 15 %, entre 9 a 13 % ou entre 9 a 11 % de peso vivo para ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal. Em determinadas modalidades, o rendimento médio de carne de coxa de uma carcaça eviscerada de ave da ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal, como é descrito no presente documento, pelo menos 1 %, pelo menos 2 %, pelo menos 3 %, pelo menos 4 %, pelo menos 5 %, pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, pelo menos 11 %, pelo menos 12 %, entre 1 a 10 %, entre 2 a 8 % ou entre 3 a 5 % maior que para ave fornecida com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0536] Em algumas modalidades, o animal é ave, e o rendimento de carne de peito de uma carcaça desossada de ave é pelo menos 14 %, pelo menos 16 %, pelo menos 18 %, pelo menos 20 %, pelo menos 22 %, pelo menos 24 %, entre 14 a 16 %, entre 18 a 30 %, entre 20 a 28 % ou entre 20 a 26 % de peso vivo para ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré- mistura de ração animal, ou composição de ração animal. Em determinadas modalidades, o rendimento de carne de peito de uma carcaça desossada de ave da ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal, como é descrito no presente documento, pelo menos 1 %, pelo menos 2 %, pelo menos 3 %, pelo menos 4 %, pelo menos 5 %, pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, pelo menos 11 %, pelo menos 12 %, entre 1 a 10 %, entre 2 a 8 % ou entre 3 a 5 % maior que para ave fornecida com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0537] Em algumas modalidades, o animal é ave, e o rendimento médio de carne de peito de uma carcaça desossada de ave é pelo menos 14 %, pelo menos 16 %, pelo menos 18 %, pelo menos 20 %, pelo menos 22 %, pelo menos 24 %, entre 14 a 16 %, entre 18 a 30 %, entre 20 a 28 % ou entre 20 a 26 % de peso vivo para ave fornecida com preparações de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré- mistura de ração animal, ou composição de ração animal. Em determinadas modalidades, o rendimento médio de carne de peito de uma carcaça desossada de ave da ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal, como é descrito no presente documento, pelo menos 1 %, pelo menos 2 %, pelo menos 3 %, pelo menos 4 %, pelo menos 5 %, pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, pelo menos 11 %, pelo menos 12 %, entre 1 a 10 %, entre 2 a 8 % ou entre 3 a 5 % maior que para ave fornecida com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0538] Em algumas modalidades, o animal é ave, e o rendimento de carne de perna de uma carcaça desossada de ave é pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 10 %, pelo menos

12 %, pelo menos 14 %, pelo menos 16 %, pelo menos 18 %, entre 6 a 18 %, entre 8 a 16 %, entre 12 a 21 %, entre 14 a 19 % ou entre 14 a 17 % de peso vivo para ave fornecida com preparações de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal. Em determinadas modalidades, o rendimento de carne de perna de uma carcaça desossada de ave da ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal, como é descrito no presente documento, pelo menos 1 %, pelo menos 2 %, pelo menos 3 %, pelo menos 4 %, pelo menos 5 %, pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, pelo menos 11 %, pelo menos 12 %, entre 1 a 10 %, entre 2 a 8 % ou entre 3 a 5 % maior que para ave fornecida com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0539] Em algumas modalidades, o animal é ave, e o rendimento médio de carne de perna de uma carcaça desossada de ave é pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 10 %, pelo menos 12 %, pelo menos 14 %, pelo menos 16 %, pelo menos 18 %, entre 6 a 18 %, entre 8 a 16 %, entre 12 a 21 %, entre 14 a 19 % ou entre 14 a 17 % de peso vivo para ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal. Em determinadas modalidades, o rendimento médio de carne de perna de uma carcaça desossada de ave da ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo, pré- mistura de ração animal, ou composição de ração animal, como é descrito no presente documento, pelo menos 1 %, pelo menos 2 %, pelo menos 3 %, pelo menos 4 %, pelo menos 5 %, pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, pelo menos 11 %, pelo menos 12 %, entre 1 a 10 %, entre 2 a 8 % ou entre 3 a 5 % maior que para ave fornecida com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0540] Em algumas modalidades, o animal é ave, e o rendimento de gordura de uma carcaça eviscerada de ave é pelo menos 0,1 %, pelo menos 0,2 %, pelo menos 0,3 %, pelo menos 0,4 %, pelo menos 0,5 %, pelo menos 0,6 %, pelo menos 0,7 %, pelo menos 0,8 %, pelo menos 0,9 %, pelo menos 1 %, pelo menos 1,2 %, pelo menos 1,4 %, pelo menos 1,6 %, entre 0,1 a 2 %, entre 0,2 a 1 %, entre 0,5 a 2 % ou entre 0,3 a 0,7 % de peso vivo para ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré- mistura de ração animal, ou composição de ração animal. Em determinadas modalidades, o rendimento de gordura de uma carcaça eviscerada de ave da ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré- mistura de ração animal, ou composição de ração animal, como é descrito no presente documento, pelo menos 1 %, pelo menos 2 %, pelo menos 3 %, pelo menos 4 %, pelo menos 5 %, pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, pelo menos 11 %, pelo menos 12 %, entre 1 a 10 %, entre 2 a 8 % ou entre 3 a 5 % maior que para ave fornecida com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0541] Em algumas modalidades, o animal é ave, e o rendimento médio de gordura de uma carcaça eviscerada de ave é pelo menos 0,1 %, pelo menos 0,2 %, pelo menos 0,3 %, pelo menos 0,4 %, pelo menos 0,5 %, pelo menos 0,6 %, pelo menos

0,7 %, pelo menos 0,8 %, pelo menos 0,9 %, pelo menos 1 %, pelo menos 1,2 %, pelo menos 1,4 %, pelo menos 1,6 %, entre 0,1 a 2 %, entre 0,2 a 1 %, entre 0,5 a 2 % ou entre 0,3 a 0,7 % de peso vivo para ave fornecida com preparações de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré- mistura de ração animal, ou composição de ração animal. Em determinadas modalidades, o rendimento médio de gordura de uma carcaça eviscerada de ave da ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal, como é descrito no presente documento, pelo menos 1 %, pelo menos 2 %, pelo menos 3 %, pelo menos 4 %, pelo menos 5 %, pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, pelo menos 11 %, pelo menos 12 %, entre 1 a 10 %, entre 2 a 8 % ou entre 3 a 5 % maior que para ave fornecida com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0542] Em algumas modalidades, o animal é ave, e o rendimento de uma carcaça eviscerada de ave é pelo menos 50 %, pelo menos 55 %, pelo menos 60 %, pelo menos 65 %, pelo menos 70 %, pelo menos 75 %, pelo menos 80 %, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, entre 50 a 95 %, entre 60 a 85 % ou entre 65 a 75 % de peso vivo para ave fornecida com preparações de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal. Em determinadas modalidades, o rendimento de uma carcaça eviscerada de ave da ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal, como é descrito no presente documento, pelo menos 1 %, pelo menos 2 %, pelo menos 3 %, pelo menos 4 %, pelo menos 5 %, pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, pelo menos 11 %, pelo menos 12 %, entre 1 a 10 %, entre 2 a 8 % ou entre 3 a 5 % maior que para ave fornecida com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0543] Em algumas modalidades, o animal é ave, e o rendimento médio de uma carcaça eviscerada de ave é pelo menos 50 %, pelo menos 55 %, pelo menos 60 %, pelo menos 65 %, pelo menos 70 %, pelo menos 75 %, pelo menos 80 %, pelo menos 85 %, pelo menos 90 %, entre 50 a 95 %, entre 60 a 85 % ou entre 65 a 75 % de peso vivo para ave fornecida com preparações de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal. Em determinadas modalidades, o rendimento médio de uma carcaça eviscerada de ave da ave fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal, como é descrito no presente documento, pelo menos 1 %, pelo menos 2 %, pelo menos 3 %, pelo menos 4 %, pelo menos 5 %, pelo menos 6 %, pelo menos 8 %, pelo menos 9 %, pelo menos 10 %, pelo menos 11 %, pelo menos 12 %, entre 1 a 10 %, entre 2 a 8 % ou entre 3 a 5 % maior que para ave fornecida com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0544] Métodos para desossar uma carcaça de ave são bem conhecidos por um elemento versado na técnica de ave processamento. Deve-se entender que a carne rendida a partir da ave pode ser medida, por exemplo, como a razão da massa de carne recuperada ao peso final do pássaro antes do processamento. Em algumas modalidades, o animal é ave, e a ave tem pelo menos 35 dias de idade, pelo menos 42 dias de idade, pelo menos 6 semanas de idade, pelo menos 6,5 semanas de idade antes da ave ser processada para produzir uma carcaça eviscerada de ave, carcaça desossada de ave, carne branca, filés de carne de peito, e tenders de carne de peito, carne de galinha de bandeja, pássaro inteiro sem vísceras (WOG), ou carne, como descrito acima de.

[0545] Em outras modalidades, o animal é ave, e o produto de animal é ovos. Em algumas modalidades, o animal é suíno, e o produto de suíno é a carne de suíno (por exemplo, que pode ser vendida para consumidores, processada para produzir um produto alimentício ou consumida por um ser humano). Em algumas modalidades, o rendimento de produto de suíno é o rendimento obtido de um suíno individual. Em algumas modalidades, o rendimento médio de produto de suíno é o rendimento obtido de cada suíno individual em uma população de suínos, medido ao longo da população. Em ainda outra modalidade, o rendimento médio de produto de suíno é o rendimento total de produto de suíno rendido a partir da população de suínos, dividido pelo número de suíno individual na população de suínos.

[0546] Em determinadas modalidades, um animal ou população animal fornecida com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré- mistura de ração animal, ou composição de ração animal tem um ganho de peso diário médio superior, ganho de peso semanal médio superior, ganho de peso corporal final superior, ganho de peso corporal final superior médio, ou rendimento médio aumentado de produto de animal, ou quaisquer combinações dos mesmos, a um animal ou população animal fornecida com uma dieta que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético, mas que inclui um ou mais antibióticos, um ou mais ionóforos, fibra de milho solúvel, amido de trigo modificado, ou manano de levedura, ou quaisquer combinações dos mesmos.

[0547] Um elemento versado na técnica reconheceria que o ganho de peso teórico máximo pode ser diferente para diferentes tipos de animais e pode ser diferente para diferentes raças do mesmo tipo de animal (por exemplo, diferentes tipos de galinhas de consumo, ou diferentes tipos de suíno).

[0548] Um elemento versado na técnica reconheceria que o ganho de peso teórico máximo pode ser diferente para diferentes tipos de animais e pode ser diferente para diferentes raças do mesmo tipo de animal (por exemplo, diferentes tipos de galinhas de consumo, ou diferentes tipos de suíno).

[0549] Em algumas modalidades, o animal é ave. Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriormente mencionadas, a ave é uma ave individual, enquanto em outras modalidades a ave é uma população de aves. Em outras modalidades, o animal é suíno. Em algumas modalidades que podem ser combinadas com qualquer uma das modalidades anteriormente mencionadas, o suíno é um suíno individual, enquanto em outras modalidades o suíno é uma população de suínos. G. Ingestão de Ração

[0550] Em determinadas modalidades, fornecer um animal com uma preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, ração animal pré-mistura, ou composição de ração animal, como descrito no presente documento resulta em uma ingestão de ração diária média aumentada, em comparação com um animal fornecido com ração que não inclui a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0551] A ingestão de ração diária média (ADFI) se refere à massa média de ração consumida por um animal ao longo de um período específico de tempo. Em determinadas modalidades, o ingestão de ração diária média é medida dispensando-se uma massa conhecida de ração a um grupo de um número fixo de animais, permitindo que Os animais no grupo consumam a ração dispensada livremente (ad libidum) por um número específico de dias, ponderando-se a massa de ração não consumida no fim do período, e calculando-se a ingestão de ração diária média (ADFI) como a diferença entre a massa de ração dispensada menos o massa de ração residual, dividido pelo número de animais no grupo, e dividido pelo número de dias no período. Em outras modalidades, a ingestão de ração diária média pode ser corrigida para quaisquer animais que morrem ou são abatidos do grupo, com o uso de métodos que são conhecidos por um elemento versado na técnica.

[0552] Em algumas modalidades, o animal é ave, e a composição de ração animal é ração de ave, em que a preparação de oligossacarídeo sintético, pré-mistura de ração de ave, ou composição de ração de ração de ave aumenta a ingestão de ração diária média em até cerca de 10 % ou cerca de 5 % ou entre 1 % e 10 %, entre 2 % e 10 %, entre 3 % e 10 %, entre 4 % e 10 %, entre 5 % e 10 %, entre 2 % e 5 %, entre 2 % e 6 %, entre 2 % e 7 %, entre 2 % e 8 %, entre 2 % e 9 % ou entre 1 % e 5 %, quando alimentado para a ave em comparação com a ave alimentada com uma composição de ração sem a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0553] Em determinadas modalidades, a ave sofre de uma doença ou é criado em um ambiente desafiador, em que a preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional de ave, pré-mistura de ração de ave, ou composição de ração de ave aumenta a ingestão de ração diária média em até cerca de 30 %, cerca de 25 %, cerca de 20 %, cerca de 15 %, cerca de 10 % ou cerca de 5 % ou entre 1 % e 30 %, entre 5 % e 30 %, entre 10 % e 30 %, entre 5 % e 20 %, entre 10 % e 20 %, entre 1 % e 20 %, entre 1 % e 15 %, entre 1 % e 10 %, entre 2 % e 10 %, entre 3 % e 10 %, entre 4 % e 10 %, entre 5 % e 10 %, entre 2 % e 5 %, entre 2 % e 6 %, entre 2 % e 7 %, entre 2 % e 8 %, entre 2 % e 9 % ou entre 1 % e 5 %, quando alimentado para a ave em comparação com a ave alimentada com uma composição de ração sem a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0554] Em algumas modalidades que podem ser combinadas com o anteriormente mencionado, o animal é suíno, e a composição de ração animal é ração de suíno, em que a preparação de oligossacarídeo, composição nutricional de suíno, pré-mistura de ração de suíno, ou composição de ração de suíno aumenta a ingestão de ração diária média em até cerca de 15 %, cerca de 10 % ou cerca de 5 % ou entre 1 % e 15 %, entre 2 % e 15 %, entre 3 % e 15 %, entre 4 % e 15 %, entre 5 % e 15 %, entre 10 % e 15 %, entre 1 % e 10 %, entre 2 % e 10 %, entre 3 % e 10 %, entre 4 % e 10 %, entre 5 % e 10 %, entre 2 % e 5 %, entre 2 % e 6 %, entre 2 % e 7 %, entre 2 % e 8 %, entre 2 % e 9 % ou entre 1 % e 5 %, quando alimentada para o suíno em comparação com suíno alimentado com uma composição de ração sem a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0555] Em determinadas modalidades, o suíno sofre de uma doença ou é criado em um ambiente desafiador, em que a preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional de suíno, pré-mistura de ração de suíno, ou composição de ração de suíno aumenta a ingestão de ração diária média em até cerca de 40 %, cerca de 35 % cerca de 30 %, cerca de 25 %, cerca de 20 %, cerca de 15 %, cerca de 10 % ou cerca de 5 % ou entre 1 % e 40 %, entre 5 % e 40 %, entre 10 % e 40 %, entre 15 % e 40 %, entre 20 % e 40 %, entre 25 % e 40 %, entre 30 % e 40 %, entre 1 % e 30 %, entre 5 % e 30 %, entre 10 % e 30 %, entre 5 % e 20 %, entre 10 % e 20 %, entre 1 % e 20 %, entre 1 % e 15 %, entre 1 % e 10 %, entre 2 % e 10 %, entre 3 % e 10 %, entre 4 % e 10 %, entre 5 % e 10 %, entre 2 % e 5 %, entre 2 % e 6 %, entre 2 % e 7 %, entre 2 % e 8 %, entre 2 % e 9 % ou entre 1 % e 5 %, quando alimentada para o suíno em comparação com suíno alimentado com uma composição de ração sem a preparação de oligossacarídeo sintético.

[0556] Os métodos para melhorar crescimento de um animal ou população animal descritos no presente documento incluem fornecer uma preparação de oligossacarídeo, pré-mistura de ração animal, ou ração animal ao animal ou população animal. A preparação de oligossacarídeo, pré-mistura de ração animal, ou ração animal podem ser fornecidas em qualquer forma adequada, para qualquer tipo adequado de animal, com o uso de qualquer cronograma de alimentação adequado para melhorar o crescimento do animal ou população animal. H. Qualidade de Produto de Animal

[0557] Em algumas modalidades, um produto de animal, como carne de animal, tem qualidade aprimorada.

Os produtos de animal descritos no presente documento, incluem produtos sem carne, como leite e ovos.

As qualidades de carne de animal incluem, por exemplo, cor, integridade, textura, sabor, sensação na boca, aroma e maciez.

É evidente para o elemento versado na técnica que as qualidades de carne de animal dependerão do tipo de animal.

Os ensaios padrão conhecidos pelo elemento versado na técnica podem ser usados para avaliar as qualidades de carne de animal, incluindo, por exemplo, cor, sabor, maciez e aroma.

A carne de animal descrita no presente documento pode ser avaliada com o uso de relatores humanos treinados.

As avaliações podem envolver visualização, sensação, mastigação e degustação do produto para julgar a aparência do produto, cor, integridade, textura, sabor, e sensação na boca, etc.

Os relatores podem ser servidos com amostras sob luz vermelha ou sob luz branca.

As amostras podem ser atribuídas com números de três dígitos aleatórios e giradas em posição de cédula para evitar inclinação.

Os julgamentos sensoriais podem ser escalonados para “aceitação” ou “probabilidade” ou uso de terminologia especial.

Por exemplo, escalas com letras (A para excelente, B para bom, C para insatisfatório) ou escalas de números podem ser usadas (1=não gostou, 2=aceitável, 3=bom; 4=muito bom; 5=excelente). Uma escala pode ser usada para taxar a aceitabilidade ou a qualidade geral da carne de animal ou atributos de qualidade específicos, como textura e sabor.

Os relatores podem ser encorajados a enxaguar suas bocas com água entre as amostras, e recebem a oportunidade de comentar sobre cada amostra.

VIII. Animais

[0558] A preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal ou a composição de ração animal podem ser fornecidas para qualquer animal adequado. Em algumas modalidades, o animal é monogástrico. Entende-se, de modo geral, que um animal monogástrico tem um estômago de câmara simples. Em outras modalidades, o animal é um ruminante. Entende-se, de modo geral, que um ruminante tem um estômago de múltiplas câmaras. Em algumas modalidades, o animal é um ruminante na fase pré- ruminante. Exemplos de tais ruminantes na fase pré-ruminante incluem bezerros.

[0559] Em algumas modalidades, o animal é animais de pecuária. Em algumas modalidades, o animal é um animal doméstico. Em algumas modalidades, o animal é um peixe (por exemplo, salmão, tilápia, peixe tropical), ave (por exemplo, galinha, peru), marisco (por exemplo, camarão), ovelha, vaca, gado, búfalo, bisão, porco (por exemplo, leitão, porco em crescimento/de abate), gato, cachorro, coelho, bode, porquinho-da-índia, burro, camelo, cavalo, pombo, furão, gerbo, hamster, camundongo, rato, pássaro ou ser humano.

[0560] Em algumas modalidades, o animal é ave. Exemplos de ave incluem galinha, pato, peru, ganso, codorna, ou galinha Cornish game. Em uma variação, o animal é uma galinha. Em algumas modalidades, a ave é uma galinha poedeira, uma galinha para consumo ou um peru. Em outras modalidades, o animal é um mamífero, que inclui, por exemplo, uma vaca, um porco, um bode, um ovelha, um cervo, um bisão, um coelho, uma alpaca, uma lhama, uma mula, um cavalo, uma rena, um búfalo d'água, um iaque, um porquinho-da-índia, um rato, um camundongo, uma alpaca, um cachorro, um gato ou um ser humano. Em uma variação, o animal é uma vaca. Em outra variação, o animal é um porco. A composição de ração animal também pode ser usada em aquacultura. Em algumas modalidades, o animal é um animal aquático. Exemplos de animais aquáticos podem incluir uma truta, um salmão, um robalo, uma tilápia, um camarão, uma ostra, um mexilhão, uma amêijoa, uma lagosta ou um lagostim. Em uma variação, o animal é um peixe. IX. Administração

[0561] Em algumas modalidades, a administração compreende fornecer uma preparação de oligossacarídeo sintético, uma composição nutricional, ou uma composição de ração animal descrita no presente documento, a um animal, de modo que o animal possa ingerir a preparação de oligossacarídeo sintético, a composição nutricional ou a composição de ração animal à vontade. Em tais modalidades, o animal ingere uma porção da preparação de oligossacarídeo sintético, da composição nutricional ou da composição de ração animal.

[0562] A preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal ou composição de ração animal pode ser fornecida ao animal em qualquer cronograma adequado. Em algumas modalidades, o animal é fornecido com a preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal em uma base diária, em uma base semanal, em uma base mensal, em uma base de dias alternados, por pelo menos três dias de todas as semanas, ou por pelo menos sete dias todos os meses. Em algumas modalidades, o animal é fornecido com a preparação de oligossacarídeo, pré-mistura de ração animal, ou composição de ração animal durante determinadas fases de dieta.

[0563] Por exemplo, alguns animais são fornecidos com uma dieta inicial entre 0 a 14 dias de idade. Em outras modalidades, um animal é fornecido com uma dieta de crescimento entre 15 a 28 dias de idade, entre 15 a 35 dias de idade, ou entre 15 a 39 dias de idade. Em ainda outras modalidades, um animal é fornecido com uma dieta de abate entre 29 a 35 dias de idade, entre 36 a 42 dias de idade, ou entre 40 a 46 dias de idade.

[0564] Em determinadas modalidades, a preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré- mistura de ração animal, ou composição de ração animal é fornecido com ao animal durante a fase de dieta inicial, a fase de dieta de crescimento, ou a fase de dieta de abate, ou quaisquer combinações dos mesmos.

[0565] Em determinadas modalidades, o animal é ave, e a ave é fornecida com uma dieta inicial entre 0 a 15 dias de idade, uma dieta de crescimento entre 16 a 28 dias de idade, e uma dieta de abate entre 29 a 35 dias de idade. Em outras modalidades, o animal é ave, e a ave é fornecida com uma dieta inicial entre 0 a 14 dias de idade, uma dieta de crescimento entre 15 a 35 dias de idade, e uma dieta de abate entre 36 a 42 dias de idade. Em ainda outras modalidades, o animal é ave, e a ave é fornecida com uma dieta inicial entre 0 a 14 dias de idade, uma dieta de crescimento entre 15 a 39 dias de idade, e uma dieta de abate entre 20 a 46 dias de idade.

[0566] Em algumas modalidades, a preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré- mistura de ração animal, ou composição de ração animal é fornecida à ave durante a fase de dieta inicial, a fase de dieta de crescimento, ou a fase de dieta de abate, ou quaisquer combinações dos mesmos.

[0567] As preparações de oligossacarídeo descritas no presente documento podem ser alimentadas aos animais individuais ou a uma população animal. Por exemplo, em uma variação em que o animal é ave, as preparações de oligossacarídeo podem ser alimentadas a uma ave individual ou uma população de aves.

[0568] A preparação de oligossacarídeo sintético, composição nutricional, pré-mistura de ração animal ou a composição de ração animal pode ser fornecida a um animal em qualquer forma adequada, incluindo, por exemplo, na forma sólida, na forma líquida, ou uma combinação dos mesmos. Em determinadas modalidades, a preparação de oligossacarídeo ou a composição de ração animal é um líquido, como um xarope ou uma solução. Em outras modalidades, a preparação de oligossacarídeo, pré-mistura de ração animal, ou a composição de ração animal é um sólido, como péletes ou pó. Em ainda outras modalidades, a preparação de oligossacarídeo, pré-mistura de ração animal, ou a composição de ração animal pode ser alimentada ao animal tanto em componentes líquidos quanto sólidos, como em um mosto.

EXEMPLOS EXEMPLO 1 Síntese de uma preparação de glico-galacto-oligossacarídeo

[0569] A síntese de uma preparação de glico-galacto- oligossacarídeo foi realizada em um vaso de reação de três litros com o uso de cargas de catalisador, tempos de reação e temperaturas de reação que foram selecionadas para permitir a produção adequada na escala de kg.

[0570] O mono-hidrato de D-glicose (825,16 g), mono- hidrato de D-lactose (263,48 g) e ácido 2-piridinossulfônico (1,0079 g, Sigma-Aldrich, St. Louis, EUA) foram adicionados a um frasco de fundo redondo com três gargalos de três litros com a junta de vidro esmerilhado de centro 29/42 e duas juntas de vidro esmerilhado lateral 24/40. Uma lâmina de agitação de Teflon de 133 mm foi fixada a um eixo de agitação de vidro com o uso de fita de PTFE. A haste de agitação foi fixada através do ponto de centro com o uso de um adaptador de rolamento Teflon e fixada a um misturador mecânico de alto torque suspenso por meio de acoplador flexível. O frasco foi fixado dentro de uma manta de aquecimento elétrico hemisférica operada por uma unidade de controle de temperatura por meio de um termopar de cânula do tipo J inserido através de um septo de borracha em uma das portas laterais. A ponta do termopar foi ajustada para estar disposta no interior da mistura de reação com diversos mm de folga acima do elemento de mistura. Uma sonda de temperatura secundária conectada a um monitor de temperatura auxiliar também foi inserida e presa pelos mesmos meios. A segunda porta lateral do frasco foi equipada com um condensador de refluxo resfriado por uma mistura de água-glicol mantida abaixo de 4 °C por um resfriador de banho de recirculação.

[0571] A mistura de reação foi gradualmente aquecida a 130 °C com mistura contínua com uma taxa de agitação de 80- 100 rpm. Quando a mistura de reação alcançou 120 °C, o condensador de refluxo foi reposicionado em uma configuração de destilação, com a destilação coletada em um frasco de fundo redondo de 250 ml colocado em um banho de gelo. A mistura foi mantida a 130 °C com mistura contínua por 6 horas, após isso, a caixa de termopar foi desligada. O aparelho de destilação foi removido e 390 g de água destilada a 60 °C foram gradualmente adicionados ao frasco de três gargalos. Permitiu-se que a mistura resultante fosse agitada a 40 RPM por 10 horas. Aproximadamente 1250 g de um material amarelo âmbar viscoso foram coletados e medidos por índice de refração para ter uma concentração de 71,6 Brix.

[0572] O teor de água final do produto de reator foi medido por titulação de Karl Fisher para uma alíquota representativa dos teores de reator extraídos no fim da reação. A uma temperatura de reação de 130 °C, o teor de água do produto de reação foi determinado como 5,8 % em peso água em uma base como é. EXEMPLO 2 Síntese de uma preparação de glico-oligossacarídeo

[0573] A síntese de uma preparação de glico- oligossacarídeo foi realizada em um vaso de reação de três litros com o uso de cargas de catalisador, tempos de reação e temperaturas de reação que foram selecionadas para permitir a produção adequada na escala de kg.

[0574] O mono-hidrato de D-glicose (1150 g) foi adicionado a um frasco de fundo redondo com três gargalos de três litros com uma junta de vidro esmerilhado de centro 29/42 e duas juntas de vidro esmerilhado laterais 24/40. Uma lâmina de agitação de Teflon de 133 mm foi fixada a um eixo de agitação de vidro com o uso de fita de PTFE. A haste de agitação foi presa através da porta central do frasco com o uso de um adaptador de rolamento Teflon e fixada a um misturador mecânico de alto torque suspenso por meio de acoplamento flexível. O frasco foi fixado dentro de uma manta de aquecimento elétrico hemisférica operada por uma unidade de controle de temperatura por meio de um termopar de cânula do tipo J inserido através de um septo de borracha em uma das portas laterais. A ponta do termopar foi ajustada para estar disposta no interior da mistura de reação com diversos mm de folga acima do elemento de mistura. Uma sonda de temperatura secundária conectada a um monitor de temperatura auxiliar também foi inserida e presa pelos mesmos meios. A segunda porta lateral do frasco foi equipada com um condensador de refluxo resfriado por uma mistura de água- glicol mantida abaixo de 4 C por um resfriador de banho de recirculação.

[0575] A mistura de reação foi gradualmente aquecida a 130 °C com mistura contínua com uma taxa de agitação de 80- 100 rpm. Quando a temperatura de reação aumentou para entre 120 °C e 130 °C, o ácido (+)-Canfor-10-sulfônico (1,16 g, Sigma-Aldrich, St. Louis) foi adicionado ao frasco de três gargalos e o aparelho foi alterado de uma configuração de condensador de refluxo para uma configuração de destilação com um frasco de coleta de fundo redondo colocado em um banho de gelo. Essa configuração foi mantida por 1 hora e meia, após isso, a caixa de termopar foi desligada, o aparelho de destilação foi removido, e 390 g de água destilada a 23 graus C foram gradualmente adicionados ao frasco de três gargalos. Permitiu-se que a mistura resultante fosse agitada a 40 rpm por 10 horas até o momento da coleta. Aproximadamente 1300 g de um material âmbar escuro viscoso foram coletados e medidos para ter uma concentração de 72,6 brix.

EXEMPLO 3 Síntese de uma preparação de glico-galacto-mano- oligossacarídeo

[0576] A síntese de uma preparação de glico-galacto-mano- oligossacarídeo foi realizada em um vaso de reação de três litros com o uso de cargas de catalisador, tempos de reação e temperaturas de reação que foram selecionadas para permitir a produção adequada na escala de kg.

[0577] O glico-galacto-mano-oligossacarídeo foi preparado como dois componentes separados sintetizados em vasos de reação separados que foram independentemente coletados. Cada síntese usou reagentes de partida diferentes, mas seguiram o mesmo procedimento e métodos para conclusão. O glico-galacto-mano-oligossacarídeo final foi um xarope homogêneo formado a partir da mistura de ambos os produtos de síntese.

[0578] Para a síntese do primeiro componente, 990,54 g de mono-hidrato de glicose, 105,58 g de mono-hidrato de lactose e 1,00 g de ácido 2-piridinossulfônico foram adicionados a um frasco de fundo redondo com três gargalos de três litros com uma junta esmerilhada de centro 29/42 flanqueada por duas juntas esmerilhadas 24/40. Uma lâmina de agitação de Teflon de 133 mm foi fixada a um eixo de agitação de vidro de 440 mm com o uso de fita de PTFE. A haste de agitação foi fixada através do ponto de centro com o uso de um adaptador de rolamento Teflon e fixada a um misturador mecânico de alto torque suspenso por meio de acoplador flexível. O frasco foi colocado no interior de uma manta de aquecimento elétrico hemisférica operada por uma unidade de controle de temperatura por meio de um termopar de cânula do tipo J inserido através de um septo de borracha em uma das portas laterais. A ponta do termopar foi ajustada para estar disposta no interior da mistura de reação com diversos mm de folga acima do elemento de mistura. Uma sonda de temperatura secundária conectada a um monitor de temperatura auxiliar também foi inserida e presa pelos mesmos meios. A segunda porta lateral do frasco foi equipada com um condensador de refluxo resfriado por uma mistura de água-glicol mantida abaixo de 4 °C por um resfriador de banho de recirculação.

[0579] A mistura de reação foi gradualmente aquecida a 130 °C com mistura contínua com uma taxa de agitação de 80- 100 rpm. Uma vez que uma leitura de caixa de controle de temperatura entre 120 C e 130 °C foi observada, o aparelho foi trocado de uma configuração de condensador de refluxo para uma configuração de destilação com um frasco de coleta de fundo redondo colocado em um banho de gelo. Essa configuração foi mantida por aproximadamente 6 horas e 10 minutos, após isso, a manta de aquecimento foi desligada, o aparelho de destilação foi removido, e 390 g de água destilada a 60 °C foram gradualmente adicionados ao frasco de três gargalos. Permitiu-se que a mistura resultante fosse agitada a 40 rpm por 10 horas até o momento da coleta. Aproximadamente 1250 g de um material amarelo âmbar viscoso foram coletados e medidos por índice de refração para ter uma concentração de 73,1 Brix.

[0580] Para síntese do segundo componente, 825,04 g de mono-hidrato de glicose, 251,16 g de manose pura de madeira, 25,10 g de água destilada, e 1,00 g de ácido 2- piridinossulfônico foram adicionados a um frasco de fundo redondo com três gargalos de três litros com uma junta esmerilhada de centro 29/42 flanqueada por duas juntas esmerilhadas 24/40. O restante da síntese do segundo componente seguiu o mesmo procedimento e métodos que aqueles do primeiro, até o momento da coleta. Aproximadamente 1250 g de um material âmbar escuro viscoso foram coletados e medidos para ter uma concentração de 72,3 brix.

[0581] A totalidade do primeiro e do segundo componentes foi transferida para um recipiente de HDPE adequadamente dimensionado e completamente misturada à mão até se tornar homogênea. A mistura de xarope final foi aproximadamente de 2,5 kg, com cor de âmbar escuro, viscosa e foi medida para ter uma concentração de aproximadamente 72 brix. EXEMPLO 4 Síntese de uma preparação de glico-mano-oligossacarídeo

[0582] A síntese de uma preparação de glico- oligossacarídeo foi realizada em um vaso de reação de três litros com o uso de cargas de catalisador, tempos de reação e temperaturas de reação que foram selecionadas para permitir a produção adequada na escala de kg.

[0583] O glico-mano-oligossacarídeo foi preparado como dois componentes separados sintetizados em vasos de reação separados que foram independentemente coletados. Cada síntese usou reagentes de partida diferentes, mas seguiram o mesmo procedimento e métodos para conclusão. O glico-mano- oligossacarídeo final foi um xarope homogêneo formado a partir da mistura de ambos os produtos de síntese.

[0584] Para a síntese do primeiro componente, 1264,80 g de mono-hidrato de glicose foram adicionados a um frasco de fundo redondo com três gargalos de três litros com uma junta esmerilhada de centro 29/42 flanqueada por duas juntas esmerilhadas 24/40. Uma lâmina de agitação de Teflon de 133 mm foi fixada a um eixo de agitação de vidro de 440 mm com o uso de fita de PTFE. A haste de agitação foi fixada através do ponto de centro com o uso de um adaptador de rolamento Teflon e fixada a um misturador mecânico de alto torque suspenso por meio de acoplador flexível. O frasco foi colocado no interior de uma manta de aquecimento elétrico hemisférica operada por uma unidade de controle de temperatura por meio de um termopar de cânula do tipo J inserido através de um septo de borracha em uma das portas laterais. A ponta do termopar foi ajustada para estar disposta no interior da mistura de reação com diversos mm de folga acima do elemento de mistura. Uma sonda de temperatura secundária conectada a um monitor de temperatura auxiliar também foi inserida e presa pelos mesmos meios. A segunda porta lateral do frasco foi equipada com um condensador de refluxo resfriado por uma mistura de água-glicol mantida abaixo de 4 °C por um resfriador de banho de recirculação.

[0585] A mistura de reação foi gradualmente aquecida a 130 °C com mistura contínua com uma taxa de agitação de 80- 100 rpm. Uma vez que uma leitura de caixa de controle de temperatura entre 120 °C e 130 °C foi observada, 1,15 g de ácido (+)-canfor-10-sulfônico foi adicionado ao frasco de três gargalos e o aparelho foi trocado de uma configuração de condensador de refluxo para uma configuração de destilação com um frasco de coleta de fundo redondo colocado em um banho de gelo. Essa configuração foi mantida por aproximadamente 1 hora, após isso, a caixa de termopar foi desligada, o aparelho de destilação foi removido, e 390 g de água destilada a 23 °C foram gradualmente adicionados ao frasco de três gargalos. Permitiu-se que a mistura resultante fosse agitada a 40 rpm por 10 horas até o momento da coleta. Aproximadamente 1350 g de um material âmbar claro viscoso foram coletados e medidos para ter uma concentração de 71,8 brix.

[0586] Para síntese do segundo componente, 949,00 g de mono-hidrato de glicose, 288,00 g de manose pura de madeira, 27,94 g de água destilada, e 1,15 g de ácido 2- piridinossulfônico foram adicionados a um frasco de fundo redondo com três gargalos de três litros com uma junta esmerilhada de centro 29/42 flanqueada por duas juntas esmerilhadas 24/40. O restante da síntese do segundo componente seguiu o mesmo procedimento e métodos que aqueles do primeiro até o momento da coleta, exceto pelo fato de que o ácido (+)-canfor-10-sulfônico não foi adicionado enquanto o condensador de refluxo foi alterado para uma configuração de destilação e a configuração resultante foi mantida por aproximadamente 6 horas. Aproximadamente 1350 g de um material âmbar escuro viscoso foram coletados e medidos para ter uma concentração de 72,0 brix.

[0587] A totalidade do primeiro e do segundo componentes foi transferida para um recipiente de HDPE adequadamente dimensionado e completamente misturada à mão até se tornar homogênea. A mistura de xarope final foi aproximadamente de 2,7 kg, com cor de âmbar escuro, viscosa e foi medida por índice de refração para ter uma concentração de aproximadamente 72 Brix. EXEMPLO 5 Síntese de uma preparação de glico-mano-oligossacarídeo

[0588] A produção em escala de quilograma da preparação de oligossacarídeo foi realizada em um vaso de reação de três litros com o uso de cargas de catalisador, em que se constatou que os tempos de reação e as temperaturas de reação são adequados para a produção na escala de 1 kg.

[0589] O glico-mano-oligossacarídeo foi preparado como dois componentes separados sintetizados em vasos de reação separados que foram independentemente coletados. Cada síntese usou reagentes de partida diferentes, mas seguiram o mesmo procedimento e métodos para conclusão. O glico-mano- oligossacarídeo final foi um xarope homogêneo formado a partir da mistura de ambos os produtos de síntese.

[0590] Para a síntese do primeiro componente, 1261,00 g de mono-hidrato de glicose e 1,15 g de ácido 2- piridinossulfônico foram adicionados a um frasco de fundo redondo com três gargalos de três litros com uma junta esmerilhada de centro 29/42 flanqueada por duas juntas esmerilhadas 24/40. Uma lâmina de agitação de Teflon de 133 mm foi fixada a um eixo de agitação de vidro de 440 mm com o uso de fita de PTFE. A haste de agitação foi fixada através do ponto de centro com o uso de um adaptador de rolamento Teflon e fixada a um misturador mecânico de alto torque suspenso por meio de acoplador flexível. O frasco foi fixado dentro de uma manta de aquecimento elétrico hemisférica operada por uma unidade de controle de temperatura por meio de um termopar de cânula do tipo J inserido através de um septo de borracha em uma das portas laterais. A ponta do termopar foi ajustada para estar disposta no interior da mistura de reação com diversos mm de folga acima do elemento de mistura. Uma sonda de temperatura secundária conectada a um monitor de temperatura auxiliar também foi inserida e presa pelos mesmos meios. A segunda porta lateral do frasco foi equipada com um condensador de refluxo resfriado por uma mistura de água-glicol mantida abaixo de 4 °C por um resfriador de banho de recirculação.

[0591] A mistura de reação foi gradualmente aquecida a 130 °C com mistura contínua com uma taxa de agitação de 80- 100 rpm. Uma vez que uma leitura de caixa de controle de temperatura entre 120 °C e 130 °C foi observada, o aparelho foi trocado de uma configuração de condensador de refluxo para uma configuração de destilação com um frasco de coleta de fundo redondo colocado em um banho de gelo. Essa configuração foi mantida por aproximadamente 6 horas, após isso, a caixa de termopar foi desligada, o aparelho de destilação foi removido, e 390 g de água destilada a 23 °C foram gradualmente adicionados ao frasco de três gargalos. Permitiu-se que a mistura resultante fosse agitada a 40 rpm por 10 horas até o momento da coleta. Aproximadamente 1250 g de um material âmbar claro viscoso foram coletados e medidos para ter uma concentração de 73,5 brix.

[0592] Para síntese do segundo componente, 949,00 g de mono-hidrato de glicose, 288,00 g de manose pura de madeira, 28,94 g de água destilada, e 1,15 g de ácido 2- piridinossulfônico foram adicionados a um frasco de fundo redondo com três gargalos de três litros com uma junta esmerilhada de centro 29/42 flanqueada por duas juntas esmerilhadas 24/40. O restante da síntese do segundo componente seguiu o mesmo procedimento e métodos que aqueles do primeiro até o momento da coleta. Aproximadamente 1250 g de um material âmbar escuro viscoso foram coletados e medidos para ter uma concentração de 73,3 brix.

[0593] A totalidade do primeiro e do segundo componentes foi transferida para um recipiente de HDPE adequadamente dimensionado e completamente misturada à mão até se tornar homogênea. A mistura de xarope final foi aproximadamente de 2,5 kg, com cor de âmbar escuro, viscosa e foi medida para ter uma concentração de aproximadamente 73 brix. EXEMPLO 6 Síntese de uma preparação de glico-galacto-oligossacarídeo

[0594] A produção em escala de quilograma da preparação de oligossacarídeo foi realizada em um vaso de reação de três litros com o uso de cargas de catalisador, em que se constatou que os tempos de reação e as temperaturas de reação são adequados para a produção na escala de 1 kg.

[0595] Um frasco de três gargalos de 3 l foi equipado com um misturador suspenso conectado por meio de um eixo de agitação de vidro de 10 mm de diâmetro a um elemento de mistura em formato de meia lua de 14 cm. O elemento de mistura foi posicionado com aproximadamente 5 mm de folga das paredes do frasco. O frasco foi aquecido por meio de uma manta de aquecimento elétrico hemisférica energizada por uma unidade de controle de temperatura conectada a uma sonda de termopar do tipo cânula inserida no frasco de reação. A sonda de termopar foi colocada para fornecer 5 – 10 mm de folga acima do elemento de mistura. O frasco foi carregado com 576 gramas de mono-hidrato de dextrose de grau alimentar e 577 gramas de mono-hidrato de D-galactose de grau alimentar e aquecido a aproximadamente 115 °C para obter um xarope de açúcar fusionado. Uma vez que o xarope foi obtido, o frasco foi encaixado com a condensador de refluxo revestido resfriado a 4 °C circulando-se glicol/água resfriada e a temperatura. 31 gramas de Dowex Marathon C (teor de umidade de 0,48 g de H2O/g de resina) foram adicionados à mistura para formar uma suspensão agitada. O condensador foi reposicionado na configuração de destilação e a suspensão foi aquecida a 145 °C.

[0596] Uma taxa de mistura de aproximadamente 80 RPM e uma temperatura de 145 °C foram mantidas por 3,8 horas, após isso, o ponto de estabelecimento na unidade de controle de temperatura foi reduzido para 80 °C e 119 ml de água deionizada a 60 °C foram gradualmente adicionados ao frasco para obter um xarope âmbar escuro que contém resina Dowex residual. A suspensão resultante foi adicionalmente diluída a 60 Brix, resfriada à temperatura ambiente e filtrada a vácuo através de um filtro de 0,45 mícron para remover a resina. Obteve-se 1200 gramas de xarope de âmbar claro a concentração de 60 Brix. EXEMPLO 7 Síntese de uma preparação de glico-oligossacarídeo

[0597] A produção em escala de quilograma da preparação de oligossacarídeo foi realizada em um vaso de reação de três litros com o uso de cargas de catalisador, em que se constatou que os tempos de reação e as temperaturas de reação são adequados para a produção na escala de 1 kg.

[0598] Um frasco de três gargalos de 3 l foi equipado com um misturador suspenso conectado por meio de um eixo de agitação de vidro de 10 mm de diâmetro a um elemento de mistura em formato de meia lua de 14 cm. O elemento de mistura foi posicionado com aproximadamente 5 mm de folga das paredes do frasco. O frasco foi aquecido por meio de uma manta de aquecimento elétrico hemisférica energizada por uma unidade de controle de temperatura conectada a uma sonda de termopar do tipo cânula inserida no frasco de reação. A sonda de termopar foi colocada para fornecer 5 – 10 mm de folga acima do elemento de mistura. O frasco foi gradualmente carregado com 1148 gramas de mono-hidrato de dextrose de grau alimentar e aquecido a aproximadamente 115 °C para obter um xarope de açúcar fusionado. Uma vez que o xarope foi obtido, o frasco foi encaixado com um condensador de destilação revestido resfriado a 4 °C circulando-se glicol/água resfriada. A temperatura de reação foi gradualmente aumentada a 145 °C. Uma vez que a temperatura foi obtida e estabilizada, 31 gramas de Dowex Marathon C (teor de umidade de 0,48 g de H2O/g de resina) foram adicionados à mistura e uma taxa de mistura de aproximadamente 80 RPM e uma temperatura de 145 °C foram mantidas por 3,8 horas.

[0599] Após 3,8 horas, o ponto de estabelecimento na unidade de controle de temperatura foi reduzido para 80 °C e 119 ml de água deionizada a 60 °C foram gradualmente adicionados ao frasco para obter um xarope âmbar escuro que contém resina Dowex residual. A suspensão resultante foi adicionalmente diluída a 60 Brix, resfriada à temperatura ambiente e filtrada a vácuo através de um filtro de 0,45 mícron para remover a resina. Obteve-se 1113 gramas de xarope de glico-oligossacarídeo âmbar escuro a concentração de 60 Brix. EXEMPLO 8 Síntese de Pote Único de Preparações de Oligossacarídeo

[0600] Demonstrou-se uma síntese de pote único (componente único) do oligossacarídeo do Exemplo 3 em escala de 300 gramas em um vaso de reação de um litro com o uso de cargas de catalisador, em que se constatou que os tempos de reação e as temperaturas de reação são adequados para a reação de pote único.

[0601] Adicionou-se 30 g de mono-hidrato de D-glicose de grau alimentar do milho, 37,50 g de D-manose de grau alimentar da madeira, 15,60 g de mono-hidrato de D-lactose de grau alimentar, 3,96 g de água destilada e 0,270 g de ácido 2-piridinossulfônico (Sigma-Aldrich, St. Louis) a um frasco de fundo redondo com três gargalos de um litro com uma junta esmerilhada de centro 29/42 flanqueada por duas juntas esmerilhadas 24/40. Uma lâmina de agitação de Teflon foi fixada a um eixo de agitação de vidro de 220 mm com o uso de fita de PTFE. A haste de agitação foi fixada através do ponto de centro com o uso de um adaptador de rolamento Teflon e fixada a um misturador mecânico de alto torque suspenso por meio de acoplador flexível. O frasco foi fixado dentro de uma manta de aquecimento elétrico hemisférica operada por uma unidade de controle de temperatura por meio de um termopar de cânula do tipo J inserido através de um septo de borracha em uma das portas laterais. A ponta do termopar foi ajustada para estar disposta no interior da mistura de reação com diversos mm de folga acima do elemento de mistura. Uma sonda de temperatura secundária conectada a um monitor de temperatura auxiliar também foi inserida e presa pelos mesmos meios. A segunda porta lateral do frasco foi equipada com um condensador de refluxo resfriado por uma mistura de água-glicol mantida abaixo de 4 °C por um resfriador de banho de recirculação.

[0602] A mistura de reação foi gradualmente aquecida a

130 °C com mistura contínua com uma taxa de agitação de 80- 100 rpm. Uma vez que uma leitura de caixa de controle de temperatura entre 120 °C e 130 °C foi observada, o aparelho foi trocado de uma configuração de condensador de refluxo para uma configuração de destilação com um frasco de coleta de fundo redondo colocado em um banho de gelo. A mistura foi mantida a 130 °C com agitação contínua por aproximadamente 5 horas e 40 minutos, após isso, a manta de aquecimento e o aparelho de destilação foram removidos. Aproximadamente 40 g de 23 °C de água destilada foram gradualmente adicionados no frasco de três gargalos. Permitiu-se que a mistura resultante fosse agitada a 40 rpm por 10 horas até o momento da coleta. Aproximadamente 389 g de um material âmbar escuro viscoso foram coletados e medidos para ter uma concentração de 67,0 brix. A consistência com a preparação de oligossacarídeo do Exemplo 3 foi confirmada por cromatografia por SEC e espectroscopia por 2D HSQC RMN. EXEMPLO 9 Caracterização de Preparações de Oligossacarídeo

[0603] Os métodos e procedimentos dos Exemplos 1 – 8 foram usados para preparar réplicas de bateladas e mesclas dos oligossacarídeos dos Exemplos 1 – 7. Na preparação das várias bateladas dos Exemplos 9.1-9.7, tanto variantes de múltiplos potes (múltiplos componentes) quanto de pote único dos respectivos esquemas sintéticos foram empregues. Os materiais resultantes foram analisados por Cromatografia por Exclusão de Tamanho de HPLC (SEC) para caracterizar a distribuição de peso molecular, análise por LC-MS/MS para quantificar o teor de açúcar anidro de DP2 e 2D 1H, 13C-HSQC RMN para marcar a estrutura molecular das preparações de oligossacarídeo correspondentes. Os materiais foram preparados como a seguir:

[0604] Exemplo 9.1: onze bateladas da preparação de oligossacarídeo do Exemplo 1 foram preparadas e mescladas em quatro lotes separados para produzir oligossacarídeo 9.1.

[0605] Exemplo 9.2: sete bateladas da preparação de oligossacarídeo do Exemplo 2 foram preparadas e mescladas em dois lotes separados para produzir oligossacarídeo 9.2.

[0606] Exemplo 9.3: doze bateladas da preparação de oligossacarídeo do Exemplo 3 foram preparadas e mescladas em cinco lotes separados para produzir oligossacarídeo 9.3.

[0607] Exemplo 9.4: quatro bateladas da preparação de oligossacarídeo do Exemplo 4 foram preparadas e mescladas em um lote simples para produzir oligossacarídeo 9.4.

[0608] Exemplo 9.5: quatro bateladas da preparação de oligossacarídeo do Exemplo 5 foram preparadas e mescladas em um lote simples para produzir oligossacarídeo 9.5.

[0609] Exemplo 9.6: quatro bateladas da preparação de oligossacarídeo do Exemplo 6 foram preparadas e mescladas em um lote simples para produzir oligossacarídeo 9.6.

[0610] Exemplo 9.7: duas bateladas da preparação de oligossacarídeo do Exemplo 7 foram preparadas e mescladas em um lote simples para produzir oligossacarídeo 9.7.

[0611] Ademais, as variantes estruturais de preparações de oligossacarídeo dos Exemplos 1–7 foram sintetizadas em escala de 300 gramas com o uso dos métodos dos Exemplos 1– 7, mas variando-se as composições de açúcar de partida, o ácido, a carga de ácido, o tempo e a temperatura de reação. As preparações de oligossacarídeos foram sintetizadas como a seguir:

[0612] Exemplo 9.8: 300 gramas de sacarose, 3 gramas de ácido fosfórico e 27 gramas de água foram reagidos a 125 °C por cerca de uma hora para obter um xarope de oligossacarídeo marrom escuro que foi, então, diluído a 60 Brix com água destilada.

[0613] Exemplo 9.9: 270 gramas de glicose, 30 gramas de sacarose, 0,3 gramas de ácido fenilfosfônico e 27 gramas de água foram reagidos a 130 °C por entre uma a quatro horas para obter um xarope de oligossacarídeo marrom escuro que foi, então, diluído a 60 Brix com água destilada.

[0614] Exemplo 9.10: 225 gramas de glicose, 75 gramas de lactose, 3 gramas de ácido butilfosfônico e 27 gramas de água foram reagidos a 130 °C por entre uma a quatro horas para obter um xarope de oligossacarídeo âmbar escuro que foi, então, diluído a 60 Brix com água destilada.

[0615] Exemplo 9.11: 225 gramas de glicose, 75 gramas de lactose, 3 gramas de ácido fenilfosfônico e 27 gramas de água foram reagidos a 130 °C por entre uma a cinco horas para obter um xarope de oligossacarídeo âmbar escuro que foi, então, diluído a 60 Brix com água destilada.

[0616] Exemplo 9.12: 270 gramas de glicose, 30 gramas de lactose, 3 gramas de ácido fenilfosfínico e 27 gramas de água foram reagidos a 130 °C por entre três a cinco horas para obter um xarope de oligossacarídeo marrom escuro que foi, então, diluído a 60 Brix com água destilada.

[0617] Exemplo 9.13: 300 gramas de glicose, 3 gramas de ácido fenilfosfínico, e 27 gramas de água foram reagidos a 130 °C por uma a três horas para obter um xarope de oligossacarídeo âmbar escuro que foi, então, diluído a 60 Brix com água destilada.

[0618] Exemplo 9.14: 300 gramas de glicose, 2 gramas de ácido propiônico, e 27 gramas de água foram reagidos a 130 °C por uma a quatro horas para obter um xarope de oligossacarídeo âmbar que foi, então, diluído a 60 Brix com água destilada.

[0619] Exemplo 9.15: 300 gramas de glicose, 0,15 grama de hidrato de ácido 8-hidroxi-5-quinolinassulfônico, e 27 gramas de água foram reagidos a 130 °C por duas a quatro horas para obter um xarope de oligossacarídeo âmbar que foi, então, diluído a 60 Brix com água destilada.

[0620] Nas reações acima, todas as massas se referem às massas de componente puro, e a massa total de água reagente foi inclusiva de qualquer água transportada fornecida pelo teor de umidade e/ou água de hidratação dos açúcares reagentes.

[0621] Exemplo 9.16: 10 gramas de glicose, 0,01 grama de hidrato de ácido 8-hidroxi-5-quinolinassulfônico, e 1 gramas de água foram reagidos a 130 °C para obter um xarope de oligossacarídeo âmbar que foi, então, diluído a 60 Brix com água destilada.

[0622] Exemplo 9.17: Aproximadamente 8 gramas de glicose, aproximadamente 2 gramas de lactose, 0,01 gramas de ácido 2- piridinossulfônico e 1 grama de água foram reagidos a 130 °C para obter um xarope de oligossacarídeo âmbar que foi, então, diluído a 60 Brix com água destilada.

[0623] Caracterização de Preparações de Oligossacarídeo:

[0624] Os materiais resultantes foram analisados por Cromatografia por Exclusão de Tamanho de HPLC (SEC) para caracterizar a distribuição de peso molecular, análise por LC-MS/MS para quantificar o teor de açúcar anidro de DP2 e

2D 1H, 13C-HSQC RMN para marcar a estrutura molecular das preparações de oligossacarídeo correspondentes.

[0625] Peso Molecular Polimérico determinado por HPLC:

[0626] O peso molecular numérico médio (MWn) e peso molecular ponderal médio (MWw) das preparações de oligossacarídeo dos Exemplos 9.1 – 9.7 foram determinados por HPLC. A análise de SEC foi realizada em um HPLC série 1100 Agilent com detecção de índice de refração com o uso de uma coluna PL aquagel-OH 20 Agilent a 40 °C com água destilada a 0,45 ml/min, com a fase móvel. O tempo de retenção para calibragem de MW foi realizada com o uso de soluções padrão com peso molecular e métodos padrão conhecidos a partir da técnica foram usados para determinar as várias propriedades de distribuição do cromatograma por SEC. Os MWn e MWw de preparações de oligossacarídeo com múltiplos lotes são mostrados abaixo na Tabela 1. Tabela 1. MWn e MWw de Preparações de Oligossacarídeo Preparação de MWn (g/mol) MWw (g/mol) Oligossacarídeo

9.1 719 ± 11 1.063 ± 23

9.2 808 ± 30 1.336 ± 122

9.3 757 ± 15 1.186 ± 49

9.4 761 1.196

9.5 755 1.177

9.6 505 709 9,7 762 ± 12 1.154 ± 14

[0627] Análise de Teor de DP2 Anidro por GC-MS:

[0628] O teor de DP2 anidro das preparações de oligossacarídeo foi determinado por LC-MS/MS com o uso de uma coluna de Capcell Pak NH2 (Shiseido; 250x4. 6 mm, 5 µm) a uma taxa de fluxo de 1 ml/min sob condições isocráticas de água/acetonitrila 35/65. Antes da MS, o fluxo foi dividido 1:4 e um fluxo composto de 50 µl de 0,05 % de NH4OH foi adicionado para melhorar a ionização. Para detecção por MS, a sonda de ESI foi usada em modo negativo e o método de MRM permitiu a análise alvejada.

[0629] Os teores de DP2 anidro das preparações de oligossacarídeo foram primeiro determinados com relação àqueles da preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9.7, como uma composição de referência. O teor de DP2 anidro absoluto da preparação de oligossacarídeo de referência do Exemplo 9.7 foi, então, determinado por HPLC-MS/MS como de cerca de 10 % e os teores de DP2 anidro das preparações de oligossacarídeo dos Exemplos 9.1 a 9.6 foram, então, obtidos por cálculo. Os teores de DP2 relativos e absolutos foram determinados, como descrito na Tabela 2. Tabela 2. Teor de DP2 anidro para preparações de oligossacarídeo com múltiplos lotes % de Teor de DP2 Anidro Preparação de Teor de DP2 Anidro (g de Relativo com Oligossacarídeo AHDP2/g total de DP2) Relação ao Ex

9.7

9.1 53 % 5,3 %

9.2 14 % 1,4 %

9.3 57 % 5,7 %

9.4 53 % 5,3 %

9.5 33 % 3,3 %

9.6 50 % 5,0 %

% de Teor de DP2 Anidro Preparação de Teor de DP2 Anidro (g de Relativo com Oligossacarídeo AHDP2/g total de DP2) Relação ao Ex

9.7

9.7 100 % 10,0 %

[0630] Impressão Molecular por 2D 1H, 13C-HSQC NMR:

[0631] As estruturas moleculares das preparações de oligossacarídeo do Exemplo 9 foram caracterizadas por espectroscopia por 2D 1H, 13C-HSQC RMN. As amostras foram preparadas por secagem de 125 mg (base de sólidos secos) da preparação de oligossacarídeo a 40 °C e dissolvidas novamente em D2O que contém 0,1 % de acetona. Os espectros de RMN foram adquiridos a 300 K em um espectrômetro de RMN Bruker Avance que opera em uma frequência de próton de 400 MHz ou em um espectrômetro de RMN Bruker Avance III que opera em uma frequência de próton de 600 MHz equipado com uma sonda de TCI de 5 mm criogenicamente resfriada. A FIG. 1 fornece um espectro de 2D 1H,13C HSQC RMN ilustrativo da preparação de oligossacarídeo de preparação de oligossacarídeo 9.7.

[0632] A região anomérica do espectro de 1H, 13C-HSQC, F2 (δ1H) = 4,2 – 6,0 ppm e F1(δ13C) = 90 – 120 ppm, foi usada para marcar a distribuição de ligação das preparações de oligossacarídeo. Cada pico na região anomérica foi integrado e sua abundância relativa foi determinada com relação àquela da região anomérica total. A impressão de 2D 1H, 13C HSQC foi realizada nos quatro lotes da preparação de oligossacarídeo

9.1. Tabela 3. Abundâncias Relativas de Picos F2 e F1 de

Preparação de Oligossacarídeo 9.1 F2 (ppm) F1 (ppm) AUC (Média ± SEM) 5,43 92.42 0,4 % ± 0,3 % 5,44 102.07 0,4 % ± 0,1 % 5,43 90,05 0,5 % ± 0,2 % 5,40 100,22 1,6 % ± 0,4 % 5,37 98,33 0,7 % ± 0,4 % 5,35 99,70 2,7 % ± 0,6 % 5,33 96,53 0,3 % ± 0,2 % 5,24 100,86 0,5 % ± 0,2 % 5,22 92,71 20,2 % ± 3,9 % 5,21 102,45 0,5 % ± 0,4 % 5,18 93,86 0,9 % ± 0,4 % 5,17 96,01 0,4 % ± 0,1 % 5,09 96,88 0,6 % ± 0,3 % 5,03 108,49 0,4 % ± 0,2 % 5,02 109,16 0,4 % ± 0,4 % 4,98 99,19 0,6 % ± 0,3 % 4,95 98,51 30,6 % ± 4,1 % 4,86 98,53 0,7 % ± 0,5 % 4,79 96,84 0,6 % ± 0,3 % 4,71 103,48 2,5 % ± 0,7 % 4,64 103,56 0,8 % ± 0,4 % 4,63 102,49 0,7 % ± 0,5 % 4,62 104.56 1,4 % ± 0,4 % 4,57 97,07 1,6 % ± 0,3 % 4,50 103,30 25,9 % ± 2,2 % 4,45 103,56 2,4 % ± 1,3 %

EXEMPLO 10 Determinação das Subunidades de Açúcar Anidro de Preparações de Oligossacarídeo

[0633] A abundância relativa de subunidades de açúcar anidro nas preparações de oligossacarídeo do Exemplo 9 foi determinada por MALDI-MS em um instrumento Bruker Ultraflex. As amostras foram dissolvidas em água a uma concentração de 10 mg/ml, a partir do que 5 µl foram misturados com solução de matriz (30 mg/ml de DHB em 80 % de etanol e água em uma razão de 1:10). As placas foram preparadas aplicando-se 1 µl da solução de analito para a placa alvo e seca em ar ambiente. Em alguns casos, as amostras foram recristalizadas aplicando-se 1 µl de etanol antes da análise por MS.

[0634] A FIG. 2 fornece um espectro de MALDI ilustrativo de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9. As subunidades de açúcar anidro são claramente observadas como picos de deslocamento alterados por -18 g/mol relativos a seu respectivo parente de DP principal. Os picos de deslocamento são observados em todos os valores de DP, que indica que as subunidades de açúcar anidro são detectadas em todos os tamanhos de oligossacarídeo. A intensidade relativa do pico de subunidade anidra foi determinada como de cerca de 10 % da intensidade de pico total para cada DP, a partir do que a abundância relativa de subunidade anidra total foi determinada como cerca de 10 %. A FIG. 32A e a FIG. 32B ilustram espectros de MALDI de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 2. As subunidades de açúcar anidro são observadas em todo o nível de DP com uma intensidade relativa na faixa de 5-10 %. EXEMPLO 11

Caracterização das Subunidades Anidras de Preparações de Oligossacarídeo

[0635] As subunidades de açúcar anidro das preparações de oligossacarídeo do Exemplo 9 foram caracterizadas com o uso de uma combinação de métodos de LC-MS, GC-MS, LC-MS/MS e RMN.

[0636] Caracterização de Componentes de DP1 Anidro:

[0637] O componente de DP1 anidro de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9 foi isolado por cromatografia líquida preparativa. O componente de DP1 anidro isolado foi preparado por RMN dissolvendo-se o mesmo em 0,75 ml de D2O. A FIG. 3 fornece um espectro de 1D 1H-RMN ilustrativo de uma fração de DP1 anidra isolada a partir de um oligossacarídeo do Exemplo 9 e a FIG. 4 fornece um espectro de APT 13C-RMN ilustrativo da mesma fração de DP1 anidra isolada.

[0638] Usando-se as seguintes atribuições de pico na Tabela 4, a razão de 1,6-anidro-beta-D-glicofuranose para 1,6-Anidro-beta-D-glicopiranose foi determinada por RMN como 2:1. Tabela 4. Atribuições de Pico de RMN 1,6-anidro-beta-D- 1,6-Anidro-beta-D- glicofuranose glicopiranose # 1H (ppm) 13C (ppm) 1H (ppm) 13C (ppm) 1 5,33 101,9 5,01 104,4 2 3,40 70,6 4,37 79,8 3 3,56 (ov)a 73,0 4,27 78,3 4 3,56 (ov)a 71,3 4,38 80,6

1,6-anidro-beta-D- 1,6-Anidro-beta-D- glicofuranose glicopiranose 5 4,50 76,7 3,74 64,1 6 3,97, 3,64 65,7 4,14, 3,72 66,7 um Ov indica sinal sobreposto

[0639] Caracterização dos Componentes de DP2 Anidros

[0640] As subunidades de açúcar anidro das preparações de oligossacarídeo do Exemplo 9 foram caracterizadas com o uso de uma combinação de métodos de LC-MS, GC-MS, LC-MS/MS e RMN. Os teores de DP2 anidro das preparações de oligossacarídeo do Exemplo 9 foram determinados por GC-MS e análise por LC-MS/MS. A cromatografia gasosa foi realizada com o uso de uma coluna de sílica fusionada de 30m x 0,25 mm que contém fase estacionária de HP-5MS, com Hélio de pressão constante de 148,71 kPa (21,57 psi) como o gás carreador. As alíquotas foram pré-derivatizadas por acetilação dissolvendo-se 20 mg de amostra em 0,5 ml de piridina com 0,5 ml de anidrido acético por 30 minutos a 60 °C. 1 ul de amostras foi injetado a 300 °C com um programa de temperatura de forno que começa a 70 °C e se eleva a 10 °C por minuto a 315 °C. A detecção foi realizada em um Agilent 5975C MSD com uma energia de elétron de 70 eV.

[0641] A FIG. 5 ilustra um aumento do cromatograma de GC- MS para a preparação de oligossacarídeo 9.7. As plotagens de TIC e XIC (m/z 229) demonstram que os componentes de DP2 e DP2 anidro são claramente ressolvidos. As FIGs. 37A-37B, 38A-38B, 39A-39B, e 40A-40B ilustram a presença das frações de DP1, DP1 anidro, DP2 e DP2 anidro como detectadas por GC- MS em uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 1, Exemplo

3, Exemplo 4 e Exemplo 7, respectivamente. Como mostrado nas FIGs. 37A-37B, 38A-38B, 39A-39B e 40A-40B, as frações de DP1 e DP1 anidro têm um tempo de retenção de cerca de 12-17 minutos, e frações de DP2 e DP2 anidro têm um tempo de retenção de cerca de 22-25 minutos.

[0642] A FIG. 43 ilustra espectros de MALDI-MS em comparação com a preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9 em energias de laser diferentes. A abundância relativa de sinais foi quase inalterada, que demonstra que nenhuma perda de água é introduzida pela ionização a laser. Dessa forma, fornecendo-se a presença de subunidades de açúcar anidro na preparação de oligossacarídeo. EXEMPLO 12 Observação de Subunidades de Caramelização em uma Preparação de Oligossacarídeo

[0643] Uma preparação de oligossacarídeo que compreende uma subunidade de caramelização de 5-hidroximetilfurfural foi demonstrada por uma análise de combinação de HPLC e 2D 1H,13C HSQC RMN. Uma alíquota de 50 mg de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9 foi dissolvida em 0,8 ml D2O. O espectro de 2D 1H, 13C HSQC resultante foi analisado quanto à presença de uma ligação glicosídica entre 5-hmf e o carbono anomérico de glicose, com as seguintes atribuições de pico: 1H RMN: = 9,39 ppm (CHO,m), 7,44 ppm (Ar-H,m), 6,68 ppm (Ar-H, m), 4,60 ppm (CH2,m); e 13C RMN: 180,0, 150,6, 126,2, 112,7, 159,9, 64,5. A ausência de 5-hmf livre foi confirmada por HPLC com o uso de um sistema de HPLC Agilent 1100 equipado com um Bio-Rad Aminex 87H de 3000 mm com o uso de 25 mM de ácido sulfúrico aquoso a 0,65 ml/min de eluição isocrática e detecção de UV. 5-hmf foi quantificado contra uma amostra autêntica. Nenhum pico de 5-hmf foi observado na preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9, mas foi observado após hidrólise ácida de baixa temperatura da preparação de oligossacarídeo sob condições não esperadas para produzir 5- hmf livre no hidrolisado. A FIG. 6 fornece um espectro de 2D 1H, 13C- HSQC RMN ilustrativo de uma preparação de oligossacarídeo que incorpora uma subunidade de caramelização. EXEMPLO 13 Exemplo Comparativo

[0644] Um dextrano de 5 kDa comercial foi analisado por MALDI-MS quanto a presença de subunidades de açúcar anidro. A FIG. 7 mostra a presença clara do pico de deslocamento alterado de –18 g/mol do pico de DP principal (aduto de Na+ a 851,268 g/mol). Por outro lado, constatou-se que a amostra de dextrano foi essencialmente livre de subunidades de açúcar anidro. EXEMPLO 14 Quantificação do Componente de DP Anidro por LC-MS/MS

[0645] A fração de DP2 de preparações de oligossacarídeo foi isolada por cromatografia líquida. As amostras são dissolvidas em água e separadas com o uso de uma coluna Capcell Pak NH2 (Shiseido; 250x4. 6 mm, 5 µm) a uma taxa de fluxo de 1 ml/min sob condições isocráticas de água/acetonitrila 35/65. Em alguns casos, após a separação cromatográfica, 50 µl de NH4OH a 0,05 % foram adicionados para melhorar a ionização. O teor de DP2 anidro foi determinado por detecção por MS/MS. Para detecção por MS, a sonda de ESI foi usada em modo negativo e o método de MRM permitiu a análise alvejada. A FIG. 8A ilustra a detecção de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9 ao longo de uma faixa de concentração de 1 – 80 g / ml em água, com uma curva de calibragem linear (mostrada na FIG. 8B) a partir da área sob o cromatograma de LC-MS/MS para concentração.

[0646] As FIGs. 33A-33C, 34A-34C, 35A-35C, e 36A-36C ilustra a presença das espécies DP2 anidro, DP1 anidro e DP2 detectadas por LC-MS/MS em uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 1, Exemplo 3, Exemplo 4 e Exemplo 7, respectivamente. EXEMPLO 15 Preparação de Ração que Compreende Preparações de Oligossacarídeo

[0647] As dietas de aves e suínos foram preparadas para demonstrar a incorporação de preparações de oligossacarídeo na dieta. As rações de controle exibem uma variedade de composições de ingrediente e rações tratadas correspondentes obtidas aumentando-se as respectivas rações de controle com as preparações de oligossacarídeo do Exemplo 9 foram preparadas como a seguir:

[0648] Ração Exemplificativa 15.1: A Ração de Controle

15.1 (CTR) foi preparada com o uso de 62 % de farinha de milho e 32 % de farinha de soja. A Ração Tratada 15.1 (TRT) foi preparada aumentando-se a ração de controle 15.1 (CTR) com 500 mg/kg de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo

9. Para a dieta tratada, a preparação de oligossacarídeo foi fornecida em uma forma em pó secando-se o oligossacarídeo em cascas de arroz moídas como um carreador e adicionando-se o pó ao misturador com o uso de uma balança de microingredientes antes da peletização.

[0649] Ração Exemplificativa 15.2: A Ração de Controle

15.2 (CTR) foi preparada com o uso de 62 % de farinha de milho, 3 % de concentrado de soja e 26 % de farinha de soja. A Ração Tratada 15.2 (TRT) foi preparada aumentando-se a ração de controle 15.2 (CTR) com 500 mg/kg de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9. Para a dieta tratada, a preparação de oligossacarídeo foi fornecida em uma forma em pó secando-se o oligossacarídeo em cascas de arroz moídas como um carreador e adicionando-se o pó ao misturador com o uso de uma balança de microingredientes antes da peletização.

[0650] Ração Exemplificativa 15.3: A Ração de Controle

15.3 (CTR) foi preparada com o uso de 52 % de farinha de milho, 6 % milho amido, 5 % de concentrado de soja, 26 % de farinha de soja e um microdetector de óxido de titânio. A Ração Tratada 15.3 (TRT) foi preparada aumentando-se a ração de controle 15.3 (CTR) com 500 mg/kg de uma preparação de oligossacarídeo. Para a dieta tratada, a preparação de oligossacarídeo foi fornecida em uma forma em pó secando-se o oligossacarídeo em cascas de arroz moídas como um carreador e adicionando-se o pó ao misturador com o uso de uma balança de microingredientes antes da peletização.

[0651] Ração Exemplificativa 15.4: A Ração de Controle

15.4 (CTR) foi preparada com o uso de 55 % de farinha de milho e 39 % de farinha de soja. A Ração Tratada 15.4 (TRT) foi preparada aumentando-se a ração de controle 15.4 (CTR) com 1000 mg/kg de uma preparação de oligossacarídeo. Para a dieta tratada, a preparação de oligossacarídeo foi fornecida em uma forma em pó secando-se o oligossacarídeo em cascas de arroz moídas como um carreador e adicionando-se o pó ao misturador com o uso de uma balança de microingredientes antes da peletização.

[0652] Ração Exemplificativa 15.5: A Ração de Controle

15.5 (CTR) foi preparada com o uso de 62 % de farinha de milho, 3 % de concentrado de soja e 26 % de farinha de soja. A Ração Tratada 15.5 (TRT) foi preparada aumentando-se a ração de controle 15.5 (CTR) com 500 mg/kg de uma preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9. Para a dieta tratada, a preparação de oligossacarídeo foi fornecida em uma forma em pó e adicionou-se o pó ao misturador com o uso de uma balança de microingrediente antes da peletização.

[0653] Ração Exemplificativa 15.6: A Ração de Controle

15.6 (CTR) foi uma ração comercial de aves iniciadora de milho e soja dos EUA. A Ração Tratada 15.6 (TRT) foi uma ação comercial de aves iniciadora de milho e soja dos E.U.A. que contém 500 ppm de uma preparação de oligossacarídeo. Para a dieta tratada, a preparação de oligossacarídeo foi fornecida em uma forma em pó e adicionou-se o pó ao misturador com o uso de uma balança de microingrediente antes da peletização.

[0654] Ração Exemplificativa 15.7: A Ração de Controle

15.7 (CTR) foi uma ração de aves de milho e soja de pesquisa com a seguinte composição de dieta: 62,39 % de farinha de milho, 31,80 % de farinha de soja, 0,15 % de carbonato de cálcio, 2,2 % de fosfato bicálcico, 0,15 % de cloreto de sódio, 0,15 % de DL-Metionina, 0,10 % de L-Lisina, 2,00 % de Óleo de Soja, 1,00 % de pré-mistura de vitamina mineral e 0,06 % de coccidiostático. A Ração Tratada 15.7 (TRT) foi obtida complementando-se a ração de controle 15.7 (CTR) com 1000 ppm da preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9.1. Para a dieta tratada, a preparação de oligossacarídeo foi fornecida como xarope a 60 % em água e foi aplicada aspergindo-se o xarope na ração após a peletização.

[0655] Ração Exemplificativa 15.8: A Ração de Controle

15.8 (CTR) foi uma ração de aves de milho e soja de pesquisa com a seguinte composição: 48,45 % de farinha de trigo, 32,00 % de farinha de soja, 12 % de centeio, 0,20 % de carbonato de cálcio, 2,00 % de fosfato bicálcico, 0,20 % de cloreto de sódio, 0,15 % de DL-metionina, 4,00 % de óleo de soja, 1,00 % de pré-mistura de vitamina mineral. A Ração Tratada 15.7 (TRT) foi obtida complementando-se a ração de controle 15.7 (CTR) com 1000 ppm da preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9.3. Para a dieta tratada, a preparação de oligossacarídeo foi fornecida como xarope a 60 % em água e foi aplicada aspergindo-se o xarope na ração após a peletização.

[0656] Como seria entendido por um técnico no assunto, os

15.1 – 15.6 também contiveram níveis de padrão industrial de gordura, vitaminas, minerais, aminoácidos, outros micronutrientes e enzimas de alimentos. Em alguns casos, as rações contiveram um cocciodiostático, mas foram isentas em todos os casos de promotores de crescimento de antibiótico. As rações foram fornecidas como dieta de alimentos amassados, peletizados ou triturados, de acordo com práticas padrão. EXEMPLO 16 Extração de Amostras de Ração

[0657] As dietas preparadas de acordo com os procedimentos do Exemplo 15 foram processadas por extração. As amostras de ração foram esmerilhadas com um moinho. Cinco gramas da ração esmerilhada resultante foram pesados em um frasco volumétrico de 50 ml e adicionou-se água quente (aproximadamente 80 °C). Após a agitação, a mistura foi incubada em um banho de água ultrassônica a 80 °C por 30 minutos. Após o resfriamento, a solução foi centrifugada por 20 min a 3000 xg e o tensoativo foi filtrado através de um filtro de 1,2 µm seguido por um filtro de 0,45 µm (e em alguns casos por um filtro de 0,22 µm). As soluções filtradas resultantes foram evaporadas até secar com um evaporador giratório.

[0658] Em alguns casos, a extração foi realizada com o uso de 50 % em peso de etanol em água como um solvente de extração alternativo. Em alguns casos, a etapa de filtração foi realizada com o uso de um filtro de membrana de corte de peso molecular de 5000 Dalton. EXEMPLO 17 Processamento Enzimático de Extratos de Ração

[0659] Os extratos de ração do Exemplo 16 foram submetidos a uma ou mais etapas de hidrólise enzimática para digerir oligossacarídeos naturalmente presentes na ração. Uma mistura de α-Amilase e amiloglicosidases foi usada para digerir ligações de α(1,4) de glico-oligossacarídeos e amido. Invertase e α-galactosidase foram usadas para remover sacarose, rafinose, e outros sacarídeos de fibra comum.

[0660] As soluções de enzima foram preparadas como a seguir: Amiloglicosidase (A. niger) 36000 U/g de solução a 800 U/ml em tampão de acetato de amônio (acetato de amônio de 0,2 M pH 5 que contém 0,5 mM de MgCl2 e 200 mM CaCl2), α- Amilase (Pâncreas de Porcino) 100000 U/g Megazyme: solução a 800 U/ml em acetato de amônio, Invertase da levedura de Backer (S. cerevisiae) 300U/mg Sigma: solução a 600 U/ml em tampão de acetato de amônio, α-Galactosidase Megazyme A. niger de 1000 U/ml.

[0661] Os extratos de ração secos do Exemplo 16 foram ressuspensos em 10 ml de tampão de acetato de amônio.

Adicionou-se 50 µl de α-amilase (4 U/ml final), 50 µl de amiloglicosidase (4 U/ml final), 50 µl de invertase (3 U/ml final). Adicionou-se opcionalmente 20 µl de α-galactosidase (2U /ml final). A solução foi incubada por 4 horas a 60 °C.

O extrato digerido foi, então, filtrado através de um filtro de ultrafiltração (Vivaspin Turbo 4, 5000 MWCO, Sartorius) antes de ser evaporado até secar em um sistema de evaporação de nitrogênio.

Em variações da digestão enzimática, uma ou mais das enzimas acima foram usadas em combinações e o período de digestão foi variado entre 4 horas a digestão durante a noite.

As concentrações enzimáticas foram variadas até duas vezes as cargas acima, e o procedimento de digestão enzimática completo foi repetido múltiplas vezes em sequência na mesma ração.

Tabela 5. Lista de Amostras de Ração para Extração e Digestão Matriz Solvente de Filtração Digestão de extração enzima 1 Ração bruta Água 0,22 µM _ 2 1000 mg/kg de Água 0,22 µM _ Ração de Oligômeros Anidros 3 Ração Bruta etanol/água 0,22 µM _ 50/50 4 1000 mg/kg de etanol/água 0,22 µM _ Ração de 50/50 Oligômeros Anidros

Matriz Solvente de Filtração Digestão de extração enzima 5 Oligômeros Água 0,22 µM a + b (4h Anidros 60 °C) 6 Ração bruta Água 0,22 µM a + b (4h 60 °C) 7 1000 mg/kg de Água 0,22 µM a + b (4h Ração de 60 °C) Oligômeros Anidros 10 Ração bruta etanol/água 0,22 µM _ 50/50 11 1000 mg/kg de etanol/água 0,22 µM _ Ração de 50/50 Oligômeros Anidros 12 1000 mg/kg de Água 0,45 µM a + b (4h Ração de 60 °C) Oligômeros Anidros 13 1000 mg/kg de Água 0,22 µM a + b (4h Ração de 60 °C) Oligômeros Anidros 14 Ração de Água 0,45 µM a + b (4h partida bruta A 60 °C) 15 2000 mg/kg de Água 0,45 µM a + b (4h Ração de 60 °C) partida de

Matriz Solvente de Filtração Digestão de extração enzima Oligômeros Anidros B 16 Ração bruta Água 0,45 µM a + b + c (4h 60 °C) 17 1000 mg/kg de Água 0,45 µM a + b + c Ração de (4h 60 °C) Oligômeros Anidros 18 Espelta com Água 0,45 µM _ arroz/ Oligômeros Anidros 19 Espelta com etanol/água 0,45 µM _ arroz/ 50/50 Oligômeros Anidros 20 Ração bruta Água 0,45 µM a + b + c (4h 60 °C) 21 1000 mg/kg de Água 0,45 µM a + b + c Ração de (4h 60 °C) Oligômeros Anidros 22 Ração de Água 0,45 µM produtor C (bruta) 23 Ração de Água 0,45 µM produtor D

Matriz Solvente de Filtração Digestão de extração enzima (2000 mg/kg de Oligômeros Anidros) 24 Ração de pré- Água 0,45 µM partida A (bruta) 25 Ração de pré- Água 0,45 µM partida D (1000 mg/kg de Oligômeros Anidros) 26 Ração de Água 0,45 µM a + b + c + produtor C d (4h (bruta) 60 °C) 27 Ração de Água 0,45 µM a + b + c + produtor D d (4h (2000 mg/kg de 60 °C) Oligômeros Anidros) 28 Ração de pré- Água 0,45 µM a + b + c + partida A d (4h (bruta) 60 °C) 29 Ração de pré- Água 0,45 µM a + b + c + partida D d (4h (1000 mg/kg de 60 °C) Oligômeros Anidros)

Matriz Solvente de Filtração Digestão de extração enzima 30 Maís Água 0,45 µM _ 31 Trigo Água 0,45 µM _ 32 Soja Água 0,45 µM _ 33 Maís Água 0,45 µM a + b + c + d (4h 60 °C) 34 Trigo Água 0,45 µM a + b + c + d (4h 60 °C) 35 Soja Água 0,45 µM a + b + c + d (4h 60 °C) 41 Ração Bruta Água 0,45 µM 42 1000 mg/kg de Água 0,45 µM Ração de Oligômeros Anidros 43 Ração bruta Água ultra 5000 a + b + c MWCO X2 (durante a noite 60 °C) 44 1000 mg/kg de Água ultra 5000 a + b + c Ração de MWCO X2 (durante Oligômeros a noite Anidros 60 °C) Oligômeros Anidros se refere a oligossacarídeos que contêm subunidade anidra.

Rações brutas se refere a composições nutricionais sem oligômeros anidros adicionados. Enzima a = Amiloglicosidase (A. niger) 36000 U/g Megazyme Enzima b = α-Amilase (Pâncreas de Porcino) 100000 U/g Megazyme Enzima c = Invertase de levedura de Baker (S. cerevisiae) 300 U/mg Sigma Enzima d = α-Galactosidase de A. niger 620 U/mg Megazyme EXEMPLO 18 Detecção de Preparações de Oligossacarídeo em Ração

[0662] As dietas de Controle e Tratadas, de acordo com Exemplo 15, foram ensaiadas para detectar a ausência ou presença de preparações de oligossacarídeo. Após a produção da dieta, amostras de 1 kg foram removidas da ração final. O teor de sólidos extraíveis da ração foi obtido por extração de água com o uso do procedimento do Exemplo 16. Os extratos resultantes foram analisados quanto à presença de espécies de DP anidro por LC-MS/MS, de acordo com o procedimento do Exemplo 14.

[0663] A FIG. 9 mostra a ausência de espécies de DP2 anidro nas rações de controle dos Exemplos 15.1(CTR) –

15.6(CTR) versus a presença de espécies de DP2 anidro nas rações tratadas dos Exemplos 15.1(TRT) – 15.6(TRT). A integração dos cromatogramas de LC-MS/MS resultantes foi usada para determinar a presença das preparações de oligossacarídeo do Exemplo 9 na ração final. Especificamente, as rações foram determinadas para conter a respectiva preparação de oligossacarídeo se a área sob o pico de DP2 anidro excedeu o limite de detecção (ou qualquer outro limiar adequado estabelecido no método). EXEMPLO 19

Quantificação de Preparações de Oligossacarídeo em Ração

[0664] As dietas de Controle e Tratadas, de acordo com Exemplo 15, foram ensaiadas para determinar a concentração de preparações de oligossacarídeo na ração final. Após a produção da dieta, amostras de 1 kg foram removidas da ração final. O teor de sólidos extraíveis da ração foi obtido por extração de água com o uso do procedimento do Exemplo 16. Os extratos resultantes foram analisados quanto à presença de espécies de DP anidro por LC-MS/MS, de acordo com o procedimento do Exemplo 14, e a área do pico de DP2 anidro foi comparada a uma curva de calibragem padrão para determinar a concentração da preparação de oligossacarídeo na ração (Tabela 6). Tabela 6. Concentração de Preparações de Oligossacarídeo em Ração Teor de Teor de Oligossacarídeo Oligossacarídeo Alimentação (ppm) em Ração de (ppm) em Ração Controle Tratada Exemplo 15,1 Não detectado 1642 Exemplo 15,2 Não detectado 953 Exemplo 15,3 Não detectado 1912 Exemplo 15,4 Não detectado 549 Exemplo 15,5 Não detectado 406 Exemplo 15,6 Traço 401 EXEMPLO 20 Caracterização de RMN de Glico-oligossacarídeos de subunidade anidra

[0665] As preparações de glico-oligossacarídeo que compreendem subunidades anidras foram caracterizadas por i) o grau de polimerização e ii) a distribuição de ligação glicosídica das unidades de glicose.

[0666] As abundâncias molares relativas de ligações α(1,1)α, α(1,1)β, β(1,1)β, α(1,2), β(1,2), α(1,3), β(1,3), α(1,4),β(1,4), α(1,6) e β(1,6) foram identificadas por espectroscopia de RMN. Os deslocamentos químicos de 1H RMN para os prótons anoméricos foram determinados como a seguir: a região d = 4,5 – 5,5 ppm foi considerada, com as ressonâncias de C-2 a C-6 agrupados covalentemente ligados a ~d 3,2 e 3,9 ppm. Devido ao acoplamento com o átomo de H em C-2, o próton anomérico aparece dobrado e a posição axial aparece em campo maior que a posição equatorial. A conformação de açúcar foi elucidada do constante de acoplamento de prótons vizinhos: equatorial-equatorial, equatorial-axial (constantes de acoplamento pequenas) ou axial-axial (constantes de acoplamento grandes).

[0667] A elucidação de ligações glicosídicas foi realizada por 13C RMN. Os carbonos primários, secundário, terciário e quaternários foram distinguidos por desacoplamento sem ressonância de prótons ou transferência de polarização. Os carbonos fixados a grupos metóxi ressonam em um campo menor que os átomos de carbono correspondentes com grupos hidróxi livres e átomos de carbono de anel com grupos hidróxi axiais absorvendo, de modo geral, em campo maior que os carbonos correspondentes com grupos hidróxi equatoriais. Desse modo, seguindo essas orientações, e comparando-se com deslocamentos químicos relatados para ambos os 1H e 13C de açúcares análogos na literatura, a maior parte dos sinais foi atribuída.

[0668] Para a determinação da distribuição de ligação, foram usados J-RES e 1H, 13C-HSQC. Para algumas amostras, o método de HSQC mostrou um desempenho superior. Para cada análise, aproximadamente 50 mg de produto seco por congelamento foram dissolvidas em D2O e transferidas para um tubo de RMN de 5 mm. Qualquer catalisador residual ou sólidos foram removidos por filtração. Os experimentos de RMN foram realizados em um espectrômetro de RMN Bruker Avance III que opera a 600 MHz de prótons correspondentes a 150 MHz de frequência de Larmor de carbono. O instrumento foi equipado com uma sonda de TCI de 5 mm criogenicamente resfriada. Todos os experimentos foram realizados a 298 K. Os espectros de 1H RMN foram registrados e calibrados em água deuterada (4,75 ppm). Os espectros de 13C RMN são calibrados com acetona (30,9 ppm). Os dados foram adquiridos com o uso de TopSpin 3.5 e processados com execução de ACD/Labs em um computador pessoal.

[0669] A FIG. 10 fornece um espectro de 2D-1H JRES RMN representativos de uma subunidade anidra que contém amostra de glico-oligossacarídeo com pré-saturação de solvente. As atribuições do diferentes ligações glicosídicas foram realizadas de acordo com Tabela 7. Tabela 7. Abundância Molar Relativa para Ligações Glicosídicas em uma Amostra de Glico-oligossacarídeos que Contêm Subunidade anidra (Método de 2D-1H JRES RMN) Ligação Abundância Molar Abundância Molar Relativa Testada Relativa Testada no Lab I no Lab II α(1,2) 10,1 % 9,2 % α(1,4) 2,0 % 17,0 %

Ligação Abundância Molar Abundância Molar Relativa Testada Relativa Testada no Lab I no Lab II α(1,3) 4,5 % 1,3 % α(1,6) 28,9 % 33,6 % β(1,2) 5,7 % 6,5 % β(1,3) 13,3 % 6,3 % β(1,4) 17,9 % 10,7 % β(1,6) 18,9 % 14,5 %

[0670] Como mostrado na Tabela 7, para algumas amostras, observou-se discrepâncias entre experimentos realizados por diferentes laboratórios com o uso de diferentes instrumentos para a análise de 2D-1H JRES RMN.

[0671] A FIG. 11 fornece um espectro de 1H, 13C-HSQC RMN representativo de uma subunidade anidra que contém amostra de glico-oligossacarídeos com ressonâncias e atribuições relevantes usadas para distribuição de ligação. Por outro lado, constatou-se que a determinação por 1H, 13C- HSQC RMN foi consistente entre dois diferentes laboratórios e instrumentos, como mostrado na Tabela 8. Tabela 8. Abundância Molar Relativa para Ligações Glicosídicas em Quatro Amostras de Glico-oligossacarídeos que Contêm Subunidades anidras (Método de 1H, 13C- HSQC RMN) Ligação Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3 Amostra 4 Lab I Lab II Lab I Lab II Lab I Lab II Lab I Lab

II α(1,2) 9,2 % 9,2 % 9,0 % 9,5 % 9,1 % 9,9 % 9,1 % - α(1,4) 1,4 % 1,3 % 1,2 % 1,3 % 1,3 % 1,3 % 0,0 % - α(1,3) 17,7 % 17,0 % 17 % 17,7 % 17,5 % 16,7 % 21,9 % -

Ligação Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3 Amostra 4 Lab I Lab II Lab I Lab II Lab I Lab II Lab I Lab

II α(1,6) 33,9 % 33,6 % 33,6 % 30,9 % 36,0 % 31,6 % 34,4 % - β(1,2) 5,7 % 6,5 % 5,7 % 7,6 % 5,2 % 7,6 % 5,2 % - β(1,3) 4,1 % 6,3 % 4,2 % 6,2 % 4,4 % 6,1 % 5,6 % - β(1,4) 8,5 % 10,7 % 8,9 % 10,7 % 7,6 % 10,7 % 8,3 % - β(1,6) 12,3 % 14,5 % 12,6 % 11,6 % 11,7 % 11,6 % 11,0 % -

[0672] A Espectroscopia de RMN de Difusão Ordenada (DOSY) foi realizada para separar os sinais de RMN de espécies diferentes de acordo com o coeficiente de difusão e, desse modo, MW. Os sinais na parte superior dos espectros de DOSY na FIG. 12 correspondem a espécies de alto DP, enquanto espécies de DPs inferiores aparecem abaixo. A FIG. 12 ilustra uma sobreposição de espectros de 1H DOSY dos três oligossacarídeos que contêm subunidade anidra na Tabela 8. EXEMPLO 21 Isolamento Semipreparatório de Frações de DP1 e DP2

[0673] O isolamento preparatório da fração de DP1 foi realizado por HPLC preparatória com o uso de uma coluna de 19 x 150 mm de Waters BEH Amide. Como água de fase móvel foi usada como solvente A e Acetonitrila como solvente B, cada um com 0,1 % de amônia. O gradiente aplicado é mostrado na tabela 9. A fração de DP1 coletada de 8 separações foi agrupada, seca e solubilizada novamente em 0,75 ml D2O para análise de RMN, como descrito anteriormente.

[0674] Para a caracterização da fração de DP2 uma purificação de 2 etapas foi realizada. A primeira etapa foi realizada em um sistema de cromatografia em flash, com o uso de um ELSD (Detector de dispersão de luz evaporativo). 2 ml

(2,65 g) de uma preparação de oligossacarídeo foram diluídos com 1 ml de DMSO, 0,5 ml de água e 0,5 ml de Acetonitrila. A solução foi misturada e sonicada por 15 min. 1 ml da solução foi injetado em uma coluna YMC DispoPackAT, NH2, esférica, de 25 µm, 120 g foi usado. A preparação de oligossacarídeo foi separada executando-se um método de gradiente isocrático com 75 % de Acetonitrila em água a 40 ml/min. A fração que contém DP2 foi seca com nitrogênio e solubilizada novamente em DMSO/água (80:20, v/v).

[0675] Para a 2o etapa de purificação um sistema de UPLC analítico com uma coluna YMC NH2 de 4,6x250 mm (5 µm) a 40° foi usada. A fração de DP2 foi purificada com um gradiente isocrático (Tabela 10) e uma taxa de fluxo de 1 ml/min. Um derramamento de pós-coluna de 1:5 foi usado a fim de ativar a coleta por ELSD. A fração de DP2 de 12 execuções cromatográficas foi agrupada, a Acetonitrila removida por nitrogênio aquecido e a água residual foi removida por secagem por congelamento. A fração seca foi solubilizada novamente para análise de LC-MS/MS e RMN subsequente. Tabela 9. Método de Gradiente Tempo Taxa de fluxo Solvente Solvente (min) (ml/min) A B 0 25 10 90 2,5 25 10 90 23 25 25 75 23,1 25 10 90 47 25 10 90 Tabela 10. Método Isocrático

Tempo (min) Taxa de fluxo (ml/min) Água (%) ACN (%) 0 1 25 75 15 1 25 75 EXEMPLO 22 Síntese de Preparações de Oligossacarídeo com Distribuição de DP Monotonicamente Decrescente

[0676] Adicionou-se 330 gramas de mono-hidrato de D- glicose e 0,3 gramas de ácido (+)-Canfor-10-sulfônico a um frasco de três gargalos de um litro com mistura mecânica suspensa fornecida por misturador mecânico de alto torque através de um acoplamento flexível. O frasco foi preso dentro de uma manta de aquecimento elétrico hemisférica operada por uma unidade de controle de temperatura por meio de um termopar de cânula inserido na mistura de reação. A ponta do termopar foi ajustada para estar disposta no interior da mistura de reação com diversos mm de folga acima do elemento de mistura. O frasco foi equipado com a condensador de refluxo resfriado por uma mistura de água-glicol mantida abaixo de 4 ºC por um resfriador de banho de recirculação.

[0677] A mistura de reação foi gradualmente aquecida a 130 °C com mistura contínua com uma taxa de agitação de 80- 100 rpm. Quando a temperatura de reação foi aumentada para entre 120 ºC e 130 °C, o aparelho foi alterado de uma configuração de condensador de refluxo para uma configuração de destilação com um frasco receptor de fundo redondo colocado em um banho de gelo. A reação foi mantida a 130 °C com mistura a 120 RPM por sessenta minutos e a massa de condensado coletada no frasco receptor foi registrada como uma função de tempo em intervalos de 10 minutos. A reação foi extinguida adicionando-se água destilada e removendo-se o calor. Após a mistura de produto ter resfriado à temperatura ambiente, uma alíquota do xarope de produto foi diluída a cerca de 1 Brix, como determinado pelo índice de refração. A alíquota diluída foi microfiltrada com o uso de um filtro de seringa de 0,2 mícron e analisada por cromatografia por exclusão de tamanho de HPLC (SEC). A análise de SEC foi realizada em um HPLC série 1100 Agilent com detecção de índice de refração com o uso de uma coluna PL aquagel-OH 20 Agilent a 40 °C com água destilada a 0,45 ml/min, com a fase móvel. O tempo de retenção para calibragem de MW foi realizado com o uso de soluções padrão com peso molecular conhecido. A constante de equilíbrio de DP foi determinada como K = 3,3 e constatou-se que a distribuição de DP diminuiu monotonicamente. As FIG. 15 e FIG. 16 mostram o formato da distribuição de DP de diferentes preparações de oligossacarídeo do Exemplo 9, como determinado por HPLC-SEC. EXEMPLO 23 Síntese de uma Preparação de Oligossacarídeo com uma Distribuição de DP não Monotônica

[0678] Adicionou-se 330 gramas de mono-hidrato de D- glicose e 0,3 gramas de ácido (+)-Canfor-10-sulfônico a um frasco de três gargalos de um litro com mistura mecânica suspensa fornecida por misturador mecânico de alto torque através de um acoplamento flexível. O frasco foi preso dentro de uma manta de aquecimento elétrico hemisférica operada por uma unidade de controle de temperatura por meio de um termopar de cânula inserido na mistura de reação. A ponta do termopar foi ajustada para estar disposta no interior da mistura de reação com diversos mm de folga acima do elemento de mistura. O frasco foi equipado com a condensador de refluxo resfriado por uma mistura de água-glicol mantida abaixo de 4 ºC por um resfriador de banho de recirculação.

[0679] A mistura de reação foi gradualmente aquecida a 135 °C com mistura contínua com uma taxa de agitação de 80- 100 rpm. Quando a temperatura de reação foi aumentada para 130 °C, o aparelho foi alterado de uma configuração de condensador de refluxo para uma configuração de destilação com um frasco receptor de fundo redondo colocado em um banho de gelo. A reação foi mantida a 135 °C com mistura a 120 RPM por trinta e cinco minutos. A reação foi extinguida adicionando-se água destilada e removendo-se o calor. Após a mistura de produto ter resfriado à temperatura ambiente, uma alíquota do xarope de produto foi diluída a cerca de 1 Brix, como determinado pelo índice de refração. A alíquota diluída foi microfiltrada com o uso de um filtro de seringa de 0,2 mícron e analisada por cromatografia por exclusão de tamanho de HPLC (SEC). A análise de SEC foi realizada em um HPLC série 1100 Agilent com detecção de índice de refração com o uso de uma coluna PL aquagel-OH 20 Agilent a 40 °C com água destilada a 0,45 ml/min, com a fase móvel. O tempo de retenção para calibragem de MW foi realizado com o uso de soluções padrão com peso molecular conhecido. Constatou-se que a distribuição de DP é não monotonicamente decrescente. A FIG. 16 ilustra que o teor de DP3 é maior que o teor de DP2 e que os teores de DP4 e DP5 são essencialmente iguais. EXEMPLO 24 Síntese de Batelada Descontínua de Preparações de Oligossacarídeo

[0680] Adicionou-se 330 gramas de mono-hidrato de D- glicose e 0,3 gramas de ácido 2-Piridinossulfônico a um frasco de três gargalos de um litro com mistura mecânica suspensa fornecida por misturador mecânico de alto torque através de um acoplamento flexível. O frasco foi preso dentro de uma manta de aquecimento elétrico hemisférica operada por uma unidade de controle de temperatura por meio de um termopar de cânula inserido na mistura de reação. A ponta do termopar foi ajustada para estar disposta no interior da mistura de reação com diversos mm de folga acima do elemento de mistura. O frasco foi equipado com a condensador de refluxo resfriado por uma mistura de água-glicol mantida abaixo de 4 ºC por um resfriador de banho de recirculação.

[0681] A mistura de reação foi gradualmente aquecida a 130 °C com mistura contínua com uma taxa de agitação de 80- 100 rpm. Quando a temperatura de reação foi aumentada para entre 120 ºC e 130 °C, o aparelho foi alterado de uma configuração de condensador de refluxo para uma configuração de destilação com um frasco receptor de fundo redondo colocado em um banho de gelo. A reação foi mantida a 130 °C com 120 RPM e a massa de condensado coletada no frasco receptor foi registrada como uma função de tempo em intervalos de 20 minutos. Após 210 minutos, adicionou-se 110 gramas adicionais de mono-hidrato de D-glicose à reação. Após 420 minutos, a reação foi extinguida adicionando-se água destilada e removendo-se o calor. Após a mistura de produto ter resfriado à temperatura ambiente, uma alíquota do xarope de produto foi diluída a cerca de 1 Brix, como determinado pelo índice de refração. A alíquota diluída foi microfiltrada com o uso de um filtro de seringa de 0,2 mícron e analisada por cromatografia por exclusão de tamanho de HPLC (SEC). A análise de SEC foi realizada em um HPLC série 1100 Agilent com detecção de índice de refração com o uso de uma coluna PL aquagel-OH 20 Agilent a 40 °C com água destilada a 0,45 ml/min, com a fase móvel. O tempo de retenção para calibragem de MW foi realizado com o uso de soluções padrão com peso molecular conhecido. A constante de equilíbrio de DP foi determinada como K = 0,8 e constatou- se que a distribuição de DP diminuiu monotonicamente. EXEMPLO 25 Desempenho de Crescimento de Frangos para Consumo Comerciais alimentados com Preparações de Oligossacarídeo

[0682] Os frangos para consumo foram criados com as dietas do Exemplo 15.6 para determinar o efeito da preparação de oligossacarídeo no desempenho de crescimento dos animais. Especificamente, rações de aves de farinha de milho e soja comerciais que contêm grãos de destilação secos com produtos solúveis (DDGS), um coccidiostático e uma mescla de micronutriente padrão, foram fabricados de acordo com práticas industriais e um programa de alimentação de três fases. Por análise aproximada, as composições de ração foram determinadas como mostrado na Tabela 11. Tabela 11. Composições de Ração Componente Partida Produtor Remoção Método Umidade 13,0 % 13,0 % 12,9 % AOAC 930,15 (forno estabelecido) Proteína Bruta (CP) 24,1 % 21,5 % 19,6 % AOAC 992,15; AOAC 990,03 Gordura (EE) 3,2 % 3,8 % 3,9 % AOAC 920,39 (extração de éter) Fibra Bruta (CF) 2,7 % 2,4 % 2,4 % AOAC 962,09 (hidrólise) Cinzas (AR) 5,2 % 4,3 % 4,3 % AOAC 942,05 (forno de mufla) NFE, por diferença 51,9 % 55,1 % 56,9 % Calculada: 1-CP-EE-CF-AR Total 100,0 % 100,0 % 100,0 %

[0683] As dietas de controle (CTR) e tratadas (TRT) foram preparadas para cada fase, como descrito no Exemplo 15.6, em que as dietas tratadas foram preparadas aumentando-se a dieta de controle com 0,453 gramas (uma libra) por tonelada curta tratada com o uso da preparação de oligossacarídeo do Exemplo

9.7. No total, cerca de 50 toneladas curtas de cada dieta foram fabricadas.

[0684] Os pintinhos Hubbard M99 × Cobb 500 de Dia de Eclosão foram obtidos a partir de um incubadora de aves comercial e colocados aleatoriamente em currais de 10,91 m x 12,19 m (36 pés × 40 pés) construídos em um alojamento de aves ventilado por túnel e com chão de terra. Aproximadamente 30000 pássaros foram colocados no total, com um número igual de pássaros em cada curral. O leito de alojamento consistiu em maca embutida aplicada com serragens frescas. Um ambiente comercial padrão e um programa de iluminação foram empregados. Os animais e as instalações de alojamento foram inspecionados diariamente, incluindo o estado de saúde geral, consumo de ração, fornecimento de água e temperatura da instalação. Quaisquer mortalidades foram registradas diariamente.

[0685] Os pássaros em currais de número ímpar foram alimentados com a dieta tratada (isto é, que contém o aditivo de ração a inclusão de 0,97 kg/t (2 lbs/t)), e pássaros nos currais de número par receberam a dieta de controle. Todas as dietas foram fornecidas ad libitum por meio de alimentadores automáticos em cada curral, e em bandejas alimentadoras a partir do dia um até o dia 7. A água foi fornecida ad libitum a partir de uma linha de consumo com bico.

[0686] A fase de partida ocorreu do dia 0 a dia 13, a fase de produção do dia 14 a dia 27, e a fase de remoção do dia 28 até o fim do estudo, dia 31. Os pesos de pássaros por curral foram registrados nos dias 0 e 31. A massa total de ração consumida foi registrada para cada curral. O ganho de peso e FCR foram, então, determinados para cada curral, de acordo com práticas industriais padrão.

[0687] No dia 31, seis pássaros machos foram aleatoriamente selecionados a partir de cada curral para amostragem sanguínea e cecal. O peso vivo de cada pássaro amostrado foi registrado. Uma amostra sanguínea foi coletada por meio de punção de asa em tubos vacutainer e o congelamento após a coagulação e separação de soro. Cada pássaro amostrado foi, então, eutanasiado por meio de deslocamento cervical seguido por extração da ceca com o uso de métodos veterinários padrão. Após a dissecação, os conteúdos cecais foram transferidos para tubos cônicos de 15 ml, o peso dos conteúdos cecais foi registrado, e conteúdos foram congelados por flash a -80 °C.

[0688] A partir dos pesos dos pássaros amostrados, o grupo de tratamento exibiu um aumento de 11 pontos em peso corporal, significativo em P < 0,05 (por ANOVA). EXEMPLO 26 Sequenciamento do tipo shotgun de microbiota cecal de ave

[0689] As abundâncias relativas de taxa identificada foram determinadas para um total de 96 pássaros amostrados obtido a partir do estudo do Exemplo 25. Para cada amostra de microbiota obtida no Exemplo 25, os teores cecais foram descongelados e o DNA foi extraído com o uso de métodos padrão. o DNA extraído foi analisado em um instrumento

Illumina HiSeq-X, com 2x150 bp de leituras. As análises padrão foram realizadas para processar os dados de sequenciamento bruto, incluindo: aparagem (adaptador, BBDuk), Filtragem por entropia (k=5, janela=20, min=50, BBDuk), Filtragem por qualidade (Q20 médio, BBDuk), filtragem por Gallus (Bowtie2). As atribuições taxonômicas foram feitas contra o banco de dados MetaPhlAn2 (db_v20). EXEMPLO 27 Conversão Microbiana de Ração não Digerida e Preparações de Oligossacarídeo

[0690] O efeito de preparações de oligossacarídeo no perfil de metabólitos produzidos por fermentação microbiana de ração não digerida foi avaliado ex vivo na microbiota cecal de ave obtida a partir dos pássaros amostrados do Exemplo 25.

[0691] As alíquotas das preparações de oligossacarídeo a serem testadas foram diluídas a 20 % em peso de oligossacarídeo em água, microfiltradas através de um filtro de seringa PES de 0,22 mícron, e desgaseificadas sob condições anaeróbicas. Uma digestão de ração de ave (digestão cecal simulada) foi preparada e simultaneamente esterilizada por suspensão de uma amostra de 10 g de uma ração de galinhas de consumo de milho e soja comercial em 50 ml de água e, então, submetida a dois ciclos de autoclivagem a 120 °C por 5 minutos seguido por extração aquosa e ressuspensão. A digestão de ração resultante foi desgaseificada sob condições anaeróbicas.

[0692] As amostras cecais extraídas foram descongeladas sob condições anaeróbicas e usadas para preparar uma suspensão de 20 % em p/v em pH 7,4 de solução salina tamponada com fosfato (PBS) que contém glicerol a 15 %. A pasta aquosa cecal resultante foi analisada para confirmar que sua composição filogenética representou proximamente aquela do microbiota originalmente amostrada (sequenciada no Exemplo 24). A pasta aquosa cecal foi avaliada por análise de rRNA de 16S (16Sv4 PCR / Illumina MiSeq sequenciamento a 2s250 bp) de acordo com uma tubulação de rRNA de 16S padrão (USEARCH e SILVA(v4) DB) com um corte de rareficação de 12230 leituras por amostra. Por abundância de filo, a pasta aquosa cecal foi determinada por compreender aproximadamente 70 % de Firmicutes, 20 % de Bacteroidetes, 7 % de Tenericutes, e o restante como Proteobacteria, Cyanobacteria, Actinobacteria e Verrucomicrobia.

[0693] Trabalhando sob condições anaeróbicas, uma alíquota da suspensão foi centrifugada a 2000 xg, o tensoativo foi removido por pipeta, e o pélete foi ressuspenso para formar um pasta aquosa cecal a 1 % em p/v em um meio de crescimento mínimo de uma mistura aquosa estéril de: 900 mg/l de cloreto de sódio, 26 mg/l de di- hidrato de cloreto de cálcio, 20 mg/l de hexa-hidrato de cloreto de magnésio, 10 mg/l de tetra-hidrato de cloreto de manganês, 40 mg/l de sulfato de amônio, 4 mg/l de hepta- hidrato de sulfato de ferro, 1 mg/l de hexa-hidrato de cloreto de cobalto, 300 mg/l de fosfato de potássio dibásico, 1,5 g/l de fosfato de sódio dibásico, 5 g/l de bicarbonato de sódio, 0,125 mg/l de biotina, 1 mg/l de piridoxina, 1 m/l de pantotenato, 75 mg/l de histidina, 75 mg/l de glicina, 75 mg/l de triptofano, 150 mg/l de arginina, 150 mg/l de metionina, 150 mg/l de treonina, 225 mg/l de valina, 225 mg/l de isoleucina, 300 mg/l de leucina, 400 mg/l de cisteína, e 450 mg/l de prolina.

[0694] Para cada preparação de oligossacarídeo no Exemplo 9, um 25 ul alíquota do 20 % em peso solução de oligossacarídeo, um 225 ul alíquota da digestão de ração e 250 ul da pasta aquosa cecal a 1 % foi carregado em triplicata nos poços de uma placa de microtitulação de poço fundo de 96 poços (por exemplo, placas Costar 3958). Cada placa conteve um conjunto de poços vazios, preparados combinando-se 25 ul de água, 225 ul de digestão de ração, e 250 ul da pasta aquosa cecal a 1 %. A placa carregada foi, então, incubada a 37 °C por 45 horas sob condições anaeróbicas. Após a incubação, os conteúdos dos poços foram removidos por tubos Eppendorf de 1,5 ml, microcentrifugados a 2000 xg por um mínimo de 5 minutos, e os tensoativos resultantes foram coletados EXEMPLO 28 Estímulo de proliferação de Célula Calciforme por Preparações de Oligossacarídeo

[0695] A proliferação de célula calciforme na presença de preparações de oligossacarídeo do Exemplo 9 foi avaliada in vitro. Os poços em uma placa Falcon de 96 poços foram semeados com 200 ul de meio de crescimento e 40000 células calciforme e cultivados por três dias. As preparações de oligossacarídeo do Exemplo 9 foram testadas em réplicas (n = 6 poços por oligo) a uma concentração de 0,1 mg/ml versus um controle (meio de crescimento apenas). As células foram diferenciadas por quatro dias, com uma alteração completa dos meios de crescimento após dois dias. As placas foram, então, lavadas com solução salina tamponada com fosfato (PBS) e fixadas por tratamento das células com 4 % de paraformaldeído (Cellomics #28906, diluído a 1:4 com PBS) por 30 minutos. As placas foram, então, lavadas duas vezes com PBS e colorizadas com colorização de mucina de Azul Alcian (Abcam ab150662 pH 2,5). A colorização foi realizada incubando-se células em solução de ácido acético por 3 minutos, seguido por incubação de células em solução de Azul Alcian por 30 minutos a temperatura ambiente, e, então, lavagem por 2 minutos com água e dois enxagues finais com água destilada.

[0696] Os núcleos foram quantificados por colorização de Hoechst e microscopia automatizada (10x de objetivo, 49 campos) com um tamanho de campo de 641x641 mícrons. A 0,1 mg/ml, as várias preparações de oligossacarídeo produzidas entre cerca de um 1 % a cerca de um 5 % de aumento na proliferação de célula calciforme (Tabela 12). Tabela 12. Contagem de Célula Calciforme Preparação de Aumento de contagem de Valor P Oligossacarídeo célula vs controle Ex. 9.1 3,2 % 0,003 *** Ex. 9.3 2,3 % 0,007 *** Ex. 9.4 3,1 % 0,002 *** Ex. 9.5 3,6 % 0,001 *** Ex. 9.6 2,7 % 0,007 *** Ex. 9.7 1,2 % 0,115 Ex. 9,16 3,5 % 0,001 *** Ex. 9,17 4,9 % 0,001 *** EXEMPLO 29 Estímulo de Produção de Muco por Preparações de Oligossacarídeo

[0697] O efeito de preparações de oligossacarídeo na produção de muco por células calciforme foi avaliado in vitro. Os poços em uma placa Falcon de 96 poços foram semeados com 200 ul de meio de crescimento e 40000 células calciforme e cultivados por três dias. As preparações de oligossacarídeo foram testadas em réplicas (n = 6 poços por oligo) aumentando-se o meio de crescimento celular com os tensoativos obtidos por fermentação ex vivo das preparações de oligossacarídeo no Exemplo 27. Para cada preparação de oligossacarídeo, o tensoativo correspondente do Exemplo 27 foi diluído a 1:20 com meio de cultura e microfiltrado. O control foi fornecido por uma diluição de 1:20 do meio de fermentação. As células foram diferenciadas por quatro dias, com uma alteração completa dos meios de crescimento após dois dias. As placas foram, então, lavadas com solução salina tamponada com fosfato (PBS) e fixadas por tratamento das células com 4 % de paraformaldeído (Cellomics #28906, diluído a 1:4 com PBS) por 30 minutos. As placas foram, então, lavadas duas vezes com PBS e colorizadas com colorização de mucina de Azul Alcian (Abcam ab150662 pH 2,5). A colorização foi realizada incubando-se células em solução de ácido acético por 3 minutos, seguido por incubação de células em solução de Azul Alcian por 30 minutos a temperatura ambiente, e, então, lavagem por 2 minutos com água e dois enxagues finais com água destilada. Os núcleos foram quantificados por colorização de Hoechst e microscopia automatizada (10x de objetivo, 49 campos) com um tamanho de campo de 641x641 mícrons.

[0698] A produção de mucina foi quantificada por absorbância a 600 nm em um leitor de placa Spectramax. Para contabilizar quanto a diferenças em contagens celulares entre poços, a absorbância foi normalizada a OD600 por 100000 células. Um efeito claro e estatisticamente significativo na produção de célula calciforme de muco foi observado como mostrado na Tabela 13. Tabela 13. Produção de Muco Preparação de Aumento na Produção Erro padrão da Valor P Oligossacarídeo de Muco média (SEM) Ex. 9.2 7,9 % 0,2 % 7,21E-05 *** Ex. 9.1 11,1 % 0,4 % 2,4E-05 *** Ex. 9.6 9,1 % 0,3 % 0,00013 *** Ex. 9.4 -0,8 % 0,0 % 0,561442 Ex. 9.7 9,7 % 0,4 % 0,000192 *** Ex. 9,17 9,0 % 0,4 % 0,00112 *** Ex. 9.5 9,1 % 0,3 % 2,34E-05 *** Ex. 9.3 -4,1 % 0,1 % 0,002309 *** EXEMPLO 30 Estímulo de Integridade de Proteção de Intestino Saudável

[0699] O efeito de preparações de oligossacarídeo na função de proteção intestinal saudável foi avaliado in vitro. As células Caco-2 foram cocultivadas com células calciforme em uma membrana semipermeável, diferenciadas, e, então, tratadas com o microbioma tensoativos do Exemplo 27 obtido com o uso da microbiota cecal amostrada do Exemplo 25. A alteração na resistência elétrica transendotelial (TEER) foi medida com relação ao controle. Especificamente, células Caco-2 e células calciforme foram semeadas em um inserto semipermeável e colocadas em uma câmara que contém um meio de crescimento adequado, como ilustrado na FIG. 18. As células foram cultivadas por 13 dias para obter uma monocamada diferenciada que exibe junções rígidas,

confirmada realizando-se uma medição de TEER de linha de base.

[0700] Múltiplas preparações de oligossacarídeo do Exemplo 9 foram analisadas com n = 6 de réplicas. Para cada preparação de oligossacarídeo, o tensoativo correspondente do Exemplo 27 foi diluído a 1:20 com meio de crescimento, microfiltrado através de um filtro de 0,2 mícron, e aplicado à lateral apical da câmara. O controle foi fornecido aplicando-se uma diluição de 1:20 do meio de crescimento. Após 24 horas, a uma medição de TEER foi realizada para cada preparação de oligossacarídeo. Para cada um, a alteração em TEER após o tratamento versus antes do tratamento foi determinada. A alteração em TEER para o controle foi normalizada a 100 %.

[0701] Os aprimoramentos estatisticamente significativos na função de proteção intestinal saudável, como medido por TEER, foram observados para determinadas preparações de oligossacarídeo. O aprimoramento em TEER para as várias preparações de oligossacarídeo variou de cerca de 0 % a cerca de 15 %, com relação ao controle. Em particular, a preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9.2 forneceu um aumento de 14 % em TEER com relação ao controle. Os resultados são mostrados na Tabela 14. Tabela 14. Aumento em TEER vs Controle para Synthetic Preparações de Oligossacarídeo Preparação de Aumento em TEER vs Oligossacarídeo Controle Ex. 9.1 8 % ± 2 % Ex. 9.2 14 % ± 1 % Ex. 9.3 2 % ± 1 %

Preparação de Aumento em TEER vs Oligossacarídeo Controle Ex. 9.4 9 % ± 2 % Ex. 9.6 15 % ± 1 % Ex. 9.7 2 % ± 1 % EXEMPLO 31 Estímulo de Função Imunológica Não Específica

[0702] O efeito de preparações de oligossacarídeo e, fagocitose não específica foi determinado in vitro. Os granulócitos de leitão foram analisados por citometria de fluxo para ingestão de células E. coli osonizadas na presença da preparação de oligossacarídeo de Ex. 9.3 em duas concentrações diferentes, 1 mg/ml e 2 mg/ml. O número de granulócitos com patógenos ingeridos foi comparado ao número de granulócitos que não ingeriram o patógeno para determinar o índice de fagocitose.

[0703] Na presença de 1 mg/ml da preparação de oligossacarídeo Ex. 9.3, o índice de fagocitose foi determinado como 82, enquanto a uma concentração de 2 mg/ml o índice de fagocitose foi determinado como 106, refletindo um aumento de 29 % na ingestão do patógeno. A FIG. 19 fornece um citograma de fluxo exemplificativo que ilustra a identificação de granulócitos com e sem patógenos ingeridos.

[0704] O efeito de preparações de oligossacarídeo na resposta imunológica e inflamatória foi determinado in vivo para galinhas de consumo submetidas a patógenos comuns.

[0705] Os pássaros foram alimentados nos Grupos de tratamento com o uso de dois tipos de dieta de fundo, como descrito na Tabela 15. As dietas que compreendem as preparações de oligossacarídeo foram fornecidas nos Grupos de Tratamento descritos na Tabela 16. Tabela 15. Tipos de Dieta de Fundo Ingrediente Tipo 1 (% em Tipo 2 (% em peso) peso) Milho 62,39 - Farinha de Soja 31,80 32,00 Trigo - 48,45 Centeio - 12 Carbonato de cálcio 0,15 0,20 Fosfato de bicálcio 2,2 2,00 NaCl 0,15 0,20 DL-Metionina 0,15 0,15 L-Lisina 0,10 - Óleo de soja 2,00 4,00 Pré-mistura de Vitamina e 1,00 1,00 Mineral Cocidiostato 0,06 -

Tabela 16. Grupos de Tratamento Grupo de Dieta de Fundo Preparação de Dose Tratamento Oligossacarídeo (ppm) Controle 1 Tipo 1 Nenhuma Controle 2 Tipo 2 Nenhuma Tratamento 1 Tipo 2 Exemplo 9.17 1000 Tratamento 2 Tipo 2 Exemplo 9.6 1000 Tratamento 3 Tipo 2 Exemplo 9.1 1000 Tratamento 4 Tipo 2 Exemplo 9.4 1000 Tratamento 5 Tipo 2 Exemplo 9.8 1000

Grupo de Dieta de Fundo Preparação de Dose Tratamento Oligossacarídeo (ppm) Tratamento 6 Tipo 2 Exemplo 9.3 1000

[0706] Frangos de consumo Cobb 500 de um dia de idade foram fornecidos por um incubatório comercial. No dia de chegada (dia 8), as galinhas foram colocadas em grupos de 50 para um período de 8 dias. Durante o período, os animais foram alimentados com a dieta de controle. No dia 0, os animais foram divididos por peso em grupos de 8 pássaros cada e uma dose de 10x de Paracox-5 (Saúde Animal MSD) atenuou a vacina de coccidiose oral (mistura de E. acervulina, E. maxima, E. mitis e E. tenella) foi administrada por gavagem individual para todos os pássaros no Tipo 2 de Dieta. Cada grupo foi, então, colocado em uma gaiola em bateria e alocado aleatoriamente nos grupos de tratamento, cada um com duas réplicas por grupo.

[0707] Os animais foram alojados em uma sala ambientalmente controlada com a temperatura adaptada para a idade dos pássaros. A água e todas as dietas foram fornecidas ad libitum. Nos dias 7 e 14, os pássaros de cada réplica foram aleatoriamente selecionados e eutanasiados. Os pássaros amostrados foram imediatamente dissecados. As práticas padrão foram usadas para obter amostras de digestão ileal, digestão cecal, tecido ileal, e tecido de adesivo de Peyer. As amostras de tecido foram analisadas por arranjo de PCR para expressão de gene correspondente a citocinas e quimiocinas de sistema de inflamação e imunológico.

[0708] A expressão de adesivo de Peyr de Dia 7 de IL12β, IL18, IFNɣ, IL10, IL22, IL1β, IL21 e IL6 para pássaros no grupo de tratamento de Controle 2 (Tipo 2 de Dieta) aumentou em pelo menos 1,5 vez àquela de pássaros no grupo de tratamento de Controle 1 (Tipo 1 de Dieta), como ilustrado na FIG. 20. A expressão ileal de IL12β, IFNɣ, IL17α, IL16, IL21, IL8L1 e TNFSF13β também foi aumentada em pelo menos 1,5 vez no grupo de tratamento de Controle 2. Os dados de expressão de citocina e quimiocina foram indicativos de uma resposta inflamatória e imunológica para pássaros no Tipo 2 de Dieta expostos ao patógenos de Eimeria.

[0709] Uma resposta imunológica aprimorada foi observada para pássaros nos Grupos de Tratamento 3 e 6, que foram alimentados com as preparações de oligossacarídeo dos Exemplos 9.1 e 9.3, respectivamente. A partir de dados de expressão de citocina e quimiocina, a atividade de sistema imunológico adaptativo aumentada correspondente a células auxiliadores T do tipo 2, bem como estímulo de granulócito e célula tronco foram observados no dia 7. Os dados de expressão foram consistentes com diferenciação aumentada de células tronco hematopoiéticas multiponentes em células progenitoras mieloides, proliferação de granulócito aumentada e ativação geral de células T, células B e mastócitos.

[0710] No dia 14, os dados de expressão de interleucina foram indicativos de regulação de sistema imunológico e trajetórias anti-inflamatórias, incluindo a sinalização de IL9 de células T regulatórias e atividade de mioquina anti- inflamatória IL6. Os dados de expressão foram sugestivos de uma resposta imunológica adaptativa aumentada para os patógenos associados a Tipo 2 de Dieta seguido por um retorno mais rápido para homeostase em comparação com aquele de pássaros no Grupo de Controle 2, que foram expostos ao desafio patogênico, mas não forneceram preparações de oligossacarídeo. EXEMPLO 32 Restauração de Integridade de Proteção de Intestino Desafiada

[0711] Múltiplas preparações de oligossacarídeo do Exemplo 9 foram analisadas com n = 6 de réplicas. Para cada preparação de oligossacarídeo, o tensoativo correspondente do Exemplo 27 foi diluído a 1:20 com meio de crescimento, microfiltrado através de um filtro de 0,2 mícron, e aplicado à lateral apical da câmara. O controle foi fornecido aplicando-se uma diluição de 1:20 do meio de crescimento. Após 24 horas, uma medição de TEER foi realizada para cada preparação de oligossacarídeo. Para cada um, a alteração em TEER após o tratamento versus antes do tratamento foi determinada. A alteração em TEER para o controle foi normalizada a 100 %.

[0712] O efeito de oligossacarídeos em uma função de proteção intestinal com vazamento foi avaliado in vitro. Tanto o efeito direto das próprias preparações de oligossacarídeo quanto o efeito indireto dos produtos de microbioma obtidos a partir das preparações de oligossacarídeo foram avaliados. As células Caco-2 e células calciforme foram semeadas em um inserto semipermeável e inseridas em uma câmara que contém um meio de crescimento adequado e tratadas com as várias preparações de oligossacarídeo do Exemplo 2 ou os tensoativos correspondentes do Exemplo 3. A integridade de proteção foi avaliada com o uso de resistência elétrica transendotelial e medindo-se a permeabilidade de um corante fluorescente.

[0713] As células Caco-2 e células calciforme foram semeadas em um inserto semipermeável e colocadas em uma câmara que contém um meio de crescimento adequado, como ilustrado na FIG. 21. As preparações de oligossacarídeo, um controle negativo que compreende apenas meio, e um controle positivo que compreende apenas meio foram avaliadas com n = 6 réplicas. Para cada uma, as células foram cultivadas por 13 dias para obter uma monocamada diferenciada. As células foram lavadas e uma medição de TEER foi realizada para estabelecer a leitura de linha de base. O controle foi normalizado a 100 %.

[0714] Múltiplas preparações de oligossacarídeo do Exemplo 9 foram analisadas com n = 6 de réplicas. Para cada preparação de oligossacarídeo testada, o xarope correspondente do Exemplo 9 foi diluído a 5 % com água destilada, adicionalmente diluído a 1:20 com água destilada, microfiltrado através um filtro de 0,2 mícron, e aplicado ao apical lateral da câmara. Para avaliar o efeito indireto para cada preparação de oligossacarídeo testada, o tensoativo correspondente do Exemplo 25 foi diluído a 1:20 com água destilada, microfiltrado através de um filtro de 0,2 mícron, e aplicado ao apical lateral da câmara. O controle foi fornecido aplicando-se uma diluição de 1:20 do meio de crescimento.

[0715] Após a leitura de TEER de linha de base, um tensionador apical ramnolipídio foi aplicado à câmara apical para cada uma das preparações de oligossacarídeo e o controle positivo. O corante fluorescente Amarelo Lúcifer foi aplicado à câmara apical para cada uma das preparações de oligossacarídeo, o controle positivo e o controle negativo. Após três horas na presença do tensionador apical e corante Amarelo Lúcifer, uma segunda medição de TEER foi realizada para avaliar o impacto do tensionador na integridade de proteção. A permeabilidade de proteção foi avaliada medindo- se a extensão da permeação de Amarelo Lúcifer do lado apical ao lado basolateral da camada e membrana celular.

[0716] Os aprimoramentos estatisticamente significativos na função de proteção intestinal interrompida, como medido por TEER e permeabilidade de corante, foram observados para determinadas preparações de oligossacarídeo. O aprimoramento em TEER para as várias preparações de oligossacarídeo variou de cerca de 0 % a cerca de 30 %, com relação ao controle. Os efeitos tanto direto quanto indireto das preparações de oligossacarídeo foram observados.

[0717] Em particular, a preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9.3 forneceu uma redução direta significativa em permeabilidade de corante com relação ao controle enquanto o oligossacarídeo do Exemplo 9.2 forneceu uma redução indireta significativa em permeabilidade de corante com relação a controle. O oligossacarídeo do Exemplo 9.7 não forneceu uma redução direta ou indireta em permeabilidade de corante e a aplicação direta do oligossacarídeo do Exemplo

9.6 exacerbou a interrupção de função de proteção devido ao tensionador apical. Exemplo 33 Metanálise de Estudos de Desempenho de Crescimento Vivo em Galinhas de Consumo

[0718] O efeito de preparações de oligossacarídeo no desempenho de crescimento vivo de galinhas de consumo comerciais foi avaliado in vivo através de uma série de estudos independentes conduzidos ao longo de uma variedade de regiões, tempos do ano, tipos de dieta de fundo, genética de pássaro, e práticas de gerenciamento, incluindo programas de manuseio e controle de coccidiose. Em cada estudo, os pássaros foram alocados em grupos de tratamento, incluindo um grupo de controle e um ou mais grupos tratados. O grupo de controle foi alimentado apenas com a dieta de fundo. Os grupos tratados foram alimentados com a dieta de fundo suplementada com uma dose específica das preparações de oligossacarídeo do Exemplo 9. Nos estudos selecionados, um aditivo de ração comercial usado na indústria avícola foi incluído como um exemplo comparativo.

[0719] Para cada estudo, os pássaros foram alojados em currais situados em um alojamento de galinha de consumo típico com um número específico (Hd/Rep) de pássaros em cada curral. As réplicas estatísticas foram implantadas atribuindo-se aleatoriamente os currais a grupos de tratamento, com um número específico (Reps/Trt) de réplicas por tratamento. A Tabela 17 resume os detalhes de protocolo para cada estudo incluído na análise. Tabela 17. Detalhes de Protocolo para cada estudo

[0720] Os resultados de estudo incluíram peso de pássaro (BW), ingestão de ração (FI), razão de conversão de ração (FCR), percentagem de mortalidade (por cabeça), e peso em mortalidade. O curral foi a unidade estatística. Quando possível, o bloqueio espacial foi implantado, e os grupos de tratamento foram atribuídos aleatoriamente aos blocos.

[0721] Dietas de Fundo:

[0722] Os pássaros foram alimentados com em fases de dieta de acordo com práticas industriais locais para um comprimento de estudo total entre 35 e 49 dias. As dietas de fase iniciadora foram tipicamente fornecidas como migalhas de colocação de pássaro através do dia 15 de estudo. Todas as dietas foram livres de promotores de crescimento antibióticos. As construções de dieta de controle iniciadora são descritas na Tabela 18 (NA = dados não disponíveis a partir do website).

Tabela 18. Construções de dieta de controle iniciadora

[0723] As dietas de fase de crescimento foram fornecidas como péletes a partir do dia 16 ao dia 24. As construções de dieta de controle de crescimento são detalhadas na Tabela 19 (NA = dados não disponíveis a partir do website). Tabela 19. Construções de dieta de controle de fase de crescimento

[0724] As dietas de fase de abate foram fornecidas como péletes a partir do dia 16 ao dia 24. As construções de dieta de controle de abate são detalhadas na Tabela 20 (NA = dados não disponíveis a partir do website). Tabela 20. Construções de dieta de controle de fase de abate

[0725] Grupos de Tratamento:

[0726] Para cada estudo, os grupos de tratamento foram projetados para comparar o efeito de preparações de oligossacarídeo versus a dieta de controle. Para os estudos selecionados, os grupos de tratamento foram projetados para avaliar a curva de resposta à dose para preparações de oligossacarídeo. As dietas tratadas foram obtidas por mesclagem de uma quantidade suficiente da preparação de oligossacarídeo correspondente do Exemplo 9, de modo que o teor de oligossacarídeo final alcançasse a dose específica (unidades de ppm em uma base de sólidos secos). Nos estudos selecionados, um exemplo comparativo (Comp. Ex 36) foi fornecido por um produto de levedura inteira comercial (Diamond V XPC Original). Os tratamentos foram alocados de acordo com a Tabela 21. Tabela 21. Alocações de grupo de tratamento

[0727] O equipamento padrão e os métodos conhecidos na técnica foram usados para preparar tanto as dietas de fundo quanto tratadas. Para as dietas tratadas, as preparações de oligossacarídeo e produtos comparativos foram formulados sobre a dieta de fundo e adicionados à pré-peletização de misturador. A inclusão de oligossacarídeo foi confirmada por ensaio com alimentação.

[0728] Fase de Crescimento Livre e Amostragem:

[0729] A ração e a água foram fornecidas ad libitum. Os programas de iluminação e temperatura comerciais foram implantados em cada estudo de acordo com práticas industriais locais para a região correspondente. Os currais foram inspecionados diariamente e a contagem e o peso de quaisquer mortalidades foi registrado no registro de estudo. Nenhuma intervenção veterinária foi exigida.

[0730] Para cada fase de dieta, o ganho de peso de curral total, o número de início e fim de pássaros, e o consumo de ração total foram medidos para cada curral. Para cada curral, o peso de pássaro médio (BW) foi calculado dividindo-se o peso de curral total pelo número de pássaros no curral no momento da pesagem. Para cada curral, a razão de conversão de ração (FCR) foi calculada dividindo-se a ingestão de ração total ao longo de um intervalo pelo ganho de peso total do curral correspondente. FCRs foram ajustadas para mortalidades (FCRma) adicionando-se novamente o peso total de mortalidades durante o período. Para contabilizar quanto as diferenças em peso de curral, FCRma foi corrigida para um peso corporal comum para obter a FCR corrigida (cFCR) para cada curral com o uso de métodos conhecidos na técnica. O fator de correção foi determinado para várias genéticas de pássaro com o uso de objetivos de desempenho de BW e FCR publicados, como uma função de crescimento dia para a genética correspondente.

[0731] Nos estudos selecionados, um pássaro de cada curral foi selecionado aleatoriamente para amostragem no dia 15 e/ou no dia de estudo final. Para cada pássaro amostrado, 5 ml de sangue foram extraídos de uma veia de asa em vacutaineres de soro. Após a coagulação, o soro foi recuperado por centrifugação, removido e congelado em gelo seco para processamento posterior. Cada pássaro amostrado foi, então, eutanasiado de acordo com procedimentos éticos locais e dissecado. Os conteúdos cecais foram removidos para tubos cônicos de 5 ml e imediatamente congelados por flash para sequenciamento de genoma inteiro de microbioma e metabolômica cecal. Uma ressecção pequena de tecido ileal foi tomada, tratada para desativar RNA e congelada para análise de expressão de gene posterior. Exemplo 34 Metanálise de Estudo

[0732] Uma metanálise estatística dos estudos in vivo do Exemplo 36 foi realizada para avaliar o impacto de aditivos de ração de oligossacarídeo e produtos comparativos em desempenho de pássaro versus pássaros alimentados com dietas de controle. A análise empregou um modelo linear misto com o grupo de tratamento como o efeito fixo e efeitos aleatórios para estudo agrupado com bloqueio. A análise estatística foi realizada em versão R 3.4.4 (15/03/2018). Os resultados foram avaliados por médias de quadrados mínimos, com significância estatística a P < 0,05. As comparações em pares foram realizadas de acordo com o método de Tukey e atribuídas com marcações alfabéticas: a, b, c, d,…. Os tratamentos sem letra comum em suas marcações de agrupamento de Tukey diferiram significativamente sob comparação em pares a P < 0,05.

[0733] Razão de Conversão de Ração:

[0734] Os efeitos de estudo para cFCR foram significantes a P < 0,05. Os tratamentos de oligossacarídeo forneceram pelo menos 2,7 pts de aprimoramento em cFCR a 500 ppm de inclusão ao longo da dieta de controle, versus o exemplo comparativo, que forneceu um aprimoramento de 2,2 pts em cFCR a 1250 ppm de inclusão. O oligossacarídeo do Exemplo

9.4 forneceu um aprimoramento de 6,4 pts em cFCR a 500 ppm de inclusão. Os resultados da metanálise para cFCR são apresentados na Tabela 22. Tabela 22. Metanálise para cFCR Grupo de cFCR Agrupamento Δ cFCR (pts vs Tratamento (lsmean) SE df de Tukey controle) Controle 1,6511 0,043 14 d Ex. 9.2 (500 ppm) 1,6019 0,044 14 a -4,9 Ex. 9.3 (500 ppm) 1,6106 0,044 14 abc -4,1 Ex. 9.4 (500 ppm) 1,5876 0,044 14 a -6,4 Ex. 9.5 (500 ppm) 1,5948 0,044 14 ab -5,6 Ex. 9.7 (500 ppm) 1,6246 0,043 14 bc -2,7 Comp. Ex. 36 (1250 ppm) 1,6293 0,044 14 c -2,2

[0735] Os grupos de tratamento de oligossacarídeo exibiram uma consistência superior de efeito versus o exemplo comparativo, Comp. Ex. 36. Para cada oligossacarídeo incluído em múltiplos estudos, a consistência de seu efeito em cFCR foi avaliada determinando-se a fração de estudos na qual um determinado valor de aprimoramento de cFCR versus controle foi observado. Por exemplo, o oligossacarídeo do Exemplo 9.2 a 500 ppm de inclusão forneceu pelo menos um benefício de cFCR de 3 pt em 80 % dos estudos, pelo menos um benefício de cFCR de 4 pt em 60 % dos estudos, pelo menos um benefício de cFCR de 5 pt em 40 % dos estudos, e pelo menos um benefício de cFCR de 6 pt em 40 % dos estudos. O exemplo comparativo a 1250 ppm de inclusão forneceu um benefício de cFCR de 3 pt em apenas 25 % dos estudos e não forneceu um benefício de cFCR de 4 pt ou superior em qualquer um dos estudos. Tabela 23. Consistência de efeito de grupo de tratamento em cFCR Grupo de Benefício Benefício Benefício Benefício Benefício Benefício Tratamento de 1 pt de 2 pt de 3 pt de 4 pt de 5 pt de 6 pt Ex. 9.2 (500 ppm) 100 % 80 % 80 % 60 % 40 % 40 % Ex. 9.3 (500 ppm) 100 % 83 % 67 % 67 % 50 % 33 % Ex. 9.7 (500 ppm) 85 % 85 % 38 % 23 % 15 % 0 % Comp. Ex. 36 (1250 ppm) 100 % 100 % 25 % 0 % 0 % 0 %

[0736] Foi observada uma resposta de dose clara entre cFCR e a taxa de inclusão de oligossacarídeos na dieta. Para o oligossacarídeo de Ex. 9.2, um benefício de cFCR de 2,4 pt foi observado a 100 ppm de inclusão (P>0,05), um benefício de cFCR de 3,7 pt foi observado a 250 ppm de inclusão (P < 0,05), um benefício de cFCR de 6,4 pt foi observado a 1000 ppm de inclusão (P < 0,05).

[0737] Peso de Pássaro:

[0738] Os efeitos de estudo para BW foram significantes a P < 0,05. Os tratamentos de oligossacarídeo forneceram pelo menos 48,9 gramas de peso corporal aumentado ao longo da dieta de controle a 500 ppm de inclusão, versus o exemplo comparativo que forneceu 39,6 gramas de peso corporal aumentado a 1250 ppm de inclusão. O oligossacarídeo do

Exemplo 9.5 forneceu 81,8 gramas de BW aumentada versus controle a 500 ppm de inclusão. Os resultados da metanálise para peso de pássaro são apresentadas na Tabela 24. Tabela 24. Metanálise para Peso de Pássaro Grupo de BW Agrupamento de Δ BW (g vs Tratamento (lsmean) SE df Tukey controle) Controle 2.755 113 14 a 0 Ex. 9.2 (500 ppm) 2.817 113 14 b 62,6 Ex. 9.3 (500 ppm) 2.807 113 14 b 52,6 Ex. 9.4 (500 ppm) 2.838 114 14 b 83,3 Ex. 9.5 (500 ppm) 2.837 114 14 b 81,8 Ex. 9.7 (500 ppm) 2.804 113 14 b 48,9 Ex. Comp. 36 (1250 ppm) 2.794 113 14 b 39,6

[0739] Uniformidade de bando:

[0740] Os pássaros alimentados com preparações de oligossacarídeo a 500 ppm de inclusão exibiram uniformidade de bando aprimorada versus pássaros alimentados com a dieta de controle. Para cada grupo de tratamento, a uniformidade de bando foi avaliada calculando-se a fração de pesos de pássaro que cariam em uma faixa de ±5 % em torno do peso de pássaro médio para seu estudo correspondente. Medido ao longo de todos os estudos 36.1 – 36.15, 81,7 % de pássaros alimentados com a dieta de controle caíram em ±5 % do peso de pássaro médio enquanto 91,3 % de pássaros alimentados com dietas tratados com o oligossacarídeo de Ex. 9.2 caíram em

±5 % do peso de pássaro médio. O efeito de uniformidade foi significante a P < 0,01 como medido pelo teste não paramétrico de Ansari-Bradley. Exemplo 35 Inflamação Reduzida e Absorção de Nutriente Aprimorada em Galinhas de consumo Alimentadas com Oligossacarídeos

[0741] Os efeitos de oligossacarídeos em resposta inflamatória e absorção de nutriente foram avaliados in vivo em galinhas de consumo comerciais. Os frangos de corte machos de um dia de idade (Cobb 500) foram obtidos a partir de um incubatório comercial (Joseph Grelier S.A., Elevage avicole de la Bohadière, F-49290 Saint-Laurent de la Plaine, França).

[0742] Tratamentos e Dietas:

[0743] Os pássaros foram alimentados com dietas de farinha de milho/soja comercial padrão contendo DDGS, mas livres de promotores de crescimento antibióticos e coccidiostáticos. As dietas foram alimentadas em duas fases de dieta: As dietas de Fase Inicial foram alimentadas a partir do dia 1 a 22 e foram formuladas para fornecer 210 g/kg de proteína bruta e 12,5 MJ/kg de ME. As dietas de Fase de Crescimento foram alimentadas a partir do dia 23 a 36 e foram formuladas para fornecer 190 g/kg de proteína bruta e 12,9 MJ/kg de ME. Todas as dietas foram suplementadas com enzimas de reação de fitase (Ronozyme HiPhos) a uma dose padrão de 100 mg por kg de ração.

[0744] No dia da chegada (dia 1), os pássaros foram colocados em currais de plataforma com 18 pássaros por curral e macas fornecidas por serragem. Os currais foram alocados aleatoriamente a um de quatro grupos de tratamento com 12 réplicas por tratamento. O grupo de controle foi alimentado com dietas que não contêm oligossacarídeos adicionados, enquanto os grupos tratados foram alimentados com dietas obtidas adicionando-se oligossacarídeos na dieta de controle. Os grupos de tratamento diferentes são apresentados na Tabela 25. Tabela 25. Construções de grupo de tratamento Grupo de Tratamento de Tratamento Oligossacarídeo A (Controle) nenhum B Exemplo 9.1 (500 ppm) C Exemplo 9.3 (500 ppm) D Exemplo 9.7 (500 ppm)

[0745] Crescimento e Amostragem:

[0746] Os pássaros foram alojados em uma sala ambientalmente controlada com temperatura e iluminação adaptada para a idade dos pássaros. Durante os primeiros vários dias do estudo, uma lâmpada de aquecimento elétrico de infravermelho foi colocada em cada curral. A ração e a água foram fornecidas ad libitum, com ração fornecida como péletes de migalhas pelos primeiros dez dias do estudo e como ração peletizada pelo restante do crescimento. Os pesos de currais e ingestão de ração foram registrados nos dias 1, 22 e 26. As mortalidades foram registradas diariamente.

[0747] No dia 36, um pássaro foi selecionado aleatoriamente a partir de cada curral, eutanasiado e dissecado. Os teores ileais e teores cecais foram coletados e imediatamente congelados para análise. Um quadrado de aproximadamente 1 cm de tecido ileal coletado cerca de 10 cm abaixo do início do jejuno e foi tratado para preservar o

RNA e o material genético para análise de expressão de gene.

[0748] Análise de Expressão de Gene:

[0749] O tecido ileal foi analisado com o uso de um arranjo de saúde de intestino para quantificar os níveis de expressão para 18 genes associados a resposta inflamatória e imunidade, 5 genes associados a integridade de intestino, e 4 genes associados a absorção de nutriente. Os níveis de expressão de gene foram comparados entre pássaros alimentados com dietas que contém oligossacarídeos versus aqueles alimentados com a dieta de controle. Os efeitos estatisticamente significativos foram observados para quatro genes em pássaros alimentados com dietas que contém 500 ppm do oligossacarídeo do Exemplo 9.3 como ilustrado na FIG. 22. Um aumento de 1,5 vez a duas vezes na expressão de gene de imunidade e anti-inflamatório IL1B, IL4, IL10 foi observado. Um aumento de duas vezes no gene transportador de carboidrato SLC5A10 foi observado. Esses dados indicam a inflamação ileal reduzida e a absorção de nutriente aprimorada para pássaros alimentados com o oligossacarídeo do Exemplo 9.3 versus pássaros alimentados com a dieta de controle. Por outro lado, pássaros alimentados com dietas que contém o oligossacarídeo do Exemplo 9.1 exibiram um aumento na expressão de genes IFNG e IL17B, que são associados a uma resposta pró- inflamatória. Exemplo 36 Efeito de Oligossacarídeos em Pássaros Submetidos a um Desafio de Inflamação

[0750] Os efeitos de oligossacarídeos em resposta imunológica local e sistêmica, resposta de inflamação, saúde de órgão, e morfologia de intestino foram avaliados in vivo em galinhas de consumo.

[0751] Tratamentos, Dietas e Desafio Inflamatório

[0752] Pássaros machos com um dia de vida (Cobb 500) foram alocados em gaiolas de bateria com dez pássaros por gaiola. Para os primeiros oito dias do estudo, todos os pássaros foram alimentados com a mesma dieta de controle que compreende uma dieta de ave de milho e soja convencional suplementada com fitase (Ronozyme HiPhos) a uma dose padrão de 100 mg por kg de ração, mas livre de promotores de crescimento antibióticos e coccidiostáticos.

[0753] Começando no dia 9, as gaiolas foram atribuídas a um dentre quatro grupos de tratamento com duas gaiolas por grupo de tratamento. Os detalhes de cada grupo de tratamento são apresentados na Tabela 26. Tabela 26. Construções de grupo de tratamento Dieta Grupo de Dieta (dias Desafio Tratamento de (dias 1 Tratamento 9 – 28) Inflamatório Oligossacarídeo – 8) A (Controle) Controle Controle Nenhuma nenhum cocci-vac B (Desafio) Controle Desafiado nenhum (10x) C (Tratado cocci-vac Exemplo 9.3 Controle Desafiado 1) (10x) (500 ppm) D (Tratado cocci-vac Exemplo 9.2 Controle Desafiado 2) (10x) (500 ppm)

[0754] O tratamento A (o Grupo de Controle) continuou a receber a mesma dieta, como foi alimentado ao longo do dia

8. O tratamento B (o Grupo Desafiado) foi alimentado com a dieta de controle suplementada com 1 % de proteína de batata para induzir uma tensão dietética leve no trato digestivo. O tratamento C foi alimentado com a dieta desafiada suplementada com 500 ppm do oligossacarídeo do Exemplo 9.3. O tratamento D foi alimentado com a dieta desafiada suplementada com 500 ppm do oligossacarídeo do Exemplo 9.2.

[0755] Os pássaros foram alojados em uma sala ambientalmente controlada com ração e água fornecidas ad libitum. No dia 14, todos os pássaros nos Grupos de Tratamento B, C e D receberam uma dose de 10x de uma vacina de coccidiose (Paracox®-5, Saúde Animal MSD) para induzir uma resposta inflamatória de intestino por exposição a oocistos esporulados de Eimeria acervulina, E. maxima, E. mitis e E. tenella atenuados.

[0756] Amostragem Biológica:

[0757] Em cada um dos dias 21 e 28, uma gaiola de cada grupo de tratamento foi removida. Os pássaros de cada gaiola foram eutanasiados e dissecados para amostragem e análise biológica. O tecido ileal e os adesivos de Peyer foram coletados e processados para expressão de gene e análise histológica. As amostras sanguíneas foram extraídas para analisar a resposta imunológica local por meio de fenotipagem de linfócito (adesivos de Peyer) e a resposta imunológica e de inflamação sistêmica por meio de medições de imunoglobulina (IgA) e glicoproteína alfa (uma proteína de resposta hepática de fase aguda). O sangue também foi analisado quanto a níveis de diamina oxidase (DAO) e o tecido de fígado foi coletado para histologia.

[0758] Realizando-se a análise tanto em uma quanto duas semanas após a administração da inflamação o desafio forneceu uma avaliação de efeito de oligossacarídeos tanto na magnitude quanto na dependência de tempo da resposta imunológica e inflamatória do animal.

[0759] Absorção Ileal de Nutriente

[0760] A análise ileal de expressão de gene revelou que o desafio de inflamação do Tratamento B significativamente degradou a absorção ileal de nutrientes de carboidrato, proteína e fósforo. Entre uma diminuição de duas a três vezes observou-se na expressão de genes de transporte SI, SLC34A2 e SCL15A1 para o grupo desafiado do Tratamento B versus o grupo de controle do Tratamento A no Dia 21.

[0761] Por outro lado, os grupos de tratamento C e D, que contêm os oligossacarídeos dos Exemplos 9.3 e 9.2, respectivamente, exibiram menos que metade da redução em absorção ileal. No Dia 28, a absorção de fósforo indicada por expressão de SLC34A2 para os tratamentos C e D foram estatisticamente similares ao controle e aprimoram, como mostrado na FIG. 23.

[0762] Qualidade de Vilos Ileais e Contagens de Célula Calciforme

[0763] As imagens de tecido ileal amostradas a partir de pássaros no Grupo de tratamento D versus aquelas no Grupo de tratamento B são retratadas na FIG. 24. Os pássaros no Grupo de tratamento D exibiram comprimento de vilos significativamente aumentado e menos danos inflamatórios, como revelado por histologia ileal. Portanto, os pássaros alimentados com determinados oligossacarídeos do Exemplo 9 exibiram uma resistência aprimorada a danos de tecido ileal que resulta do desafio inflamatório agudo em comparação com pássaros não alimentados com os oligossacarídeos do Exemplo

9.

[0764] Um aumento significativo (P < 0,05) em contagem de célula calciforme ileal foi observado no Grupo D em comparação com os pássaros desafiados no Grupo B (FIG. 25). As células calciforme são responsáveis pela produção de mucina entre outras funções-chave do íleo. Portanto, os pássaros alimentados com determinados oligossacarídeos do Exemplo 9 exibiram habilidade aprimorada para manter função ileal saudável que resulta do desafio inflamatório agudo em comparação com os pássaros não alimentados com os oligossacarídeos do Exemplo 9.

[0765] Diferenciação de Célula T:

[0766] Como ilustrado na FIG. 26, os pássaros nos Grupos de Tratamento C e D exibiram proliferação de célula Auxiliadora T aumentada em comparação com aqueles no Grupo B desafiado. Os pássaros no Grupo D exibiram um nível de células Auxiliadoras T, medido como uma porcentagem de total de linfócitos de adesivo de Peyer, que foram estatisticamente indistinguíveis de pássaros não desafiados no Grupo A. Ademais, os pássaros do Grupo C e D exibiram uma porcentagem de linfócitos diferenciados inferior como células citotóxicas T quando comparados aos pássaros no Grupo B desafiado.

[0767] Histologia de Fígado e Proteínas Hepáticas de Fase Aguda:

[0768] A histologia de fígado e a análise sanguínea indicaram que os pássaros no Grupo de Tratamento C exibiram danos inflamatórios reduzidos em comparação com aqueles no Grupo B, indicando que o oligossacarídeo do Exemplo 9.3 ofereceu proteção contra danos ao fígado (FIG. 27A). A pontuação de histologia foi realizada como ilustrado na FIG. 27B. Os pássaros no Grupo C exibiram cerca de um aumento inferior de 50 % em danos ao fígado como aqueles no Grupo B,

com relação ao Grupo de controle A desafiado. Os pássaros no Grupo B exibiram um aumento significativo em circulação da glicoproteína alfa hepática de fase aguda (AGP) (FIG. 27C). No dia 28 do estudo, os pássaros alimentados com o oligossacarídeo do Exemplo 9.3 exibiram níveis de AGP sanguíneo que foram estatisticamente indistinguíveis dos pássaros de controle não desafiados no Grupo A.

[0769] Imunoglobulina de Recuperação Melhorada e Níveis de Diamina Oxidase:

[0770] Os níveis séricos de imunoglobulina A (IgA) foram medidos para observar o efeito de preparações de oligossacarídeo na resposta imunológica e a velocidade de recuperação de pássaros submetidos ao desafio inflamatório. IgA é um anticorpo envolvido na função imunológica e resposta inflamatória, particularmente de membranas. No dia 21, uma semana após a administração do desafio de inflamação, os pássaros no Grupo B exibiram um aumento de concentração de IgA sérica de cerca de 2,25 mg/ml versus cerca de 1,85 mg/ml para os pássaros de controle não desafiados no Grupo A. Por outro lado, pássaros no Grupo D, alimentados com a preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9.2, exibiram uma resposta de IgA aumentada de cerca de 4,4 mg/ml. No dia 28, duas semanas após a administração do desafio de inflamação, os pássaros no Grupo B exibiram uma concentração de IgA sérica de cerca de 4,35 mg/ml, enquanto os pássaros no Grupo D exibiram uma concentração de IgA sérica que diminuiu para cerca de 2,1 mg/ml. Concluiu-se que os pássaros alimentados com a preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9.2 exibiram uma resposta imunológica mais rápida a e uma recuperação rápida do desafio inflamatório. Os níveis de IgA sérico subiram mais rápido e diminuíram de volta para o nível de controle de linha de base de Grupo A mais rapidamente que os pássaros desafiados no Grupo B, que não foram alimentados com uma preparação de oligossacarídeo.

[0771] Os níveis séricos de diamina oxidase (DAO) foram medidos para observar o efeito de preparações de oligossacarídeo na resposta inflamatória e a velocidade de recuperação de pássaros submetidos ao desafio inflamatório. DAO envolvido em regulação de histamina e trajetórias de inflamação. No dia 21, uma semana após a administração do desafio de inflamação, os pássaros nos Grupos B e D exibiram cerca de um 25 % - 30 % redução em concentrações de DAO sérico com relação a uma concentração de cerca de 28,5 microgramas/ml para os pássaros de controle não desafiados no Grupo A. A diminuição na concentração de DAO para os pássaros de Grupo D alimentados com o oligossacarídeo do Exemplo 9.2 foi numericamente maior que aquela no Grupo B, que não foram alimentados com uma preparação de oligossacarídeo. No dia 28, duas semanas após a administração do desafio inflamatório, dentro do erro experimental, os pássaros no Grupo D exibiram um retorno à concentração de DAO de linha de base, como observado nos pássaros não desafiados de Grupo A. Concluiu-se que os pássaros alimentados com a preparação de oligossacarídeo do Exemplo

9.2 exibiram uma resposta inflamatória similar e uma recuperação rápida para homeostase em comparação com os pássaros não alimentados com um oligossacarídeo. Exemplo 37 Análise de Expressão de Gene de Microarranjo

[0772] A expressão de gene ileal de todos os genes conhecidos no íleo de galinhas de consumo foi realizada por análise de microarranjo. O tecido ileal das galinhas de consumo do Exemplo 36.4 foi analisado para determinar o efeito de preparações de oligossacarídeo e as doses em expressão de gene ileal versus aquela de pássaros de controle, que não foram alimentados com uma preparação de oligossacarídeo. As amostras de tecido foram obtidas de acordo com os métodos dos Exemplos 33 e 36.

[0773] Para preparar para análise de microarranjo, as amostras de RNA foram amplificadas e marcadas em uma reação com base em T7 RNA polimerase. O Kit de Marcação de Amp Rápido de Baixa Entrada Agilent, One-Color foi usado para gerar cRNA fluorescente (RNA complementar) com um RNA de entrada de amostra de 100 ng de RNA total para processamento de uma cor. O método empregou Mescla de T7 RNA Polimerase, que simultaneamente amplificou o material-alvo e incorporou Cianino 3-CTP. A amplificação foi tipicamente de pelo menos 100 vezes de RNA total a cRNA.

[0774] O cDNA de fita dupla foi gerado por transcrição reversa, é realizado na presença de ribonucleotídeos marcados, produzindo quantidades em micrograma de RNA marcado para hibridização de arranjo. O cRNA marcado foi hibridizado em lâminas de microarranjo durante a noite a uma concentração de 1,65 µg por amostra. Após hibridização (pelo menos 17 horas) as lâminas são lavadas e submetidas a varredura em um Digitalizador de Microarranjo Agilent SureScan. Os dados foram analisados com o uso de Partek Genomics suite. O agrupamento mecanicista e ontológico foi realizado como apresentado na Tabela 27.

[0775] Tabela 27. Agrupamento mecanicista e ontológico

Modo de Ação Associações de Gene Integridade de CLDN1, CLDN2, CLDN3, CLDN5, ZO1, Intestino ZO2, MUC2, FOXP1, MUC, OCLN, TFF2, TJP1 Inflamação/imunidade ALPI, C5, CCL1, CCL20, CRP, CSF1, CSF2, FASLG, GATA3, IFNG, IL10, IL12A, IL16, IL17A, IL17B, IL18, IL1B, IL2, IL21, IL22, IL3, IL4, IL4, IL5, IL6, IL8L1, LYZ, NoD1, NoS2, TBX21, TGFB2, TLR21, TLR4, TNFSF10, TNFSF13B Absorção de Nutriente SCL15A1, SI, SLC34A2, SLC5A10, MGAM, SLC6A19, SLC6A14, SLC7A9, SLC6A20, SLC6A6, SLC1A1, SLC1A5, SLC38A3, SLC36A1, SLC3A1, SLC38A5

[0776] Ademais, uma análise não alvejada foi realizada com o uso de uma abordagem de múltiplas etapas, como a seguir. Os dez genes anotados com a maior alteração em vezes observados entre animais alimentados com o oligossacarídeo com relação ao grupo de controle foram identificados. Os dez genes anotados com a menor alteração em vezes observados entre animais alimentados com o oligossacarídeo com relação ao grupo de controle também foram identificados. Por fim, os dez genes anotados com a maior confiabilidade estatística para diferenças entre animais alimentados com o oligossacarídeo versus o grupo de controle foram analisados. Uma análise de trajetória foi realizada contra trajetórias de KEGG gallus gallus com o uso de software de análise de expressão de gene e genômica (Partek, St. Louis).

Exemplo 38 Método de Promoção de Recuperação de Coccidiose

[0777] A coccidiose é uma doença parasítica do trato intestinal de animais causada pela exposição a protozoário coccídio, incluindo, por exemplo, Eimeria acervuline, Eimeria maxima, Eimeria mitis, Eimeria tenella, Toxoplasma gondii, Hammondia spp. Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium muris, Cryptosporidium hominis, Isospora canis, Isospora ohioensis, Isospora burrosi, Isospora felis, e outros.

[0778] As galinhas de consumo do Exemplo 36 foram expostas aos seguintes níveis de oocistos esporulados derivados de linhagens precoces de coccídea: 5000 – 6000 oocistos de Eimeria acervuline HP, 2000 – 2300 oocistos de Eimeria maxima CP, 1000 – 1300 oocistos de Eimeria maxima MFP, 10000 – 13000 oocistos de Eimeria mitis HP, e 5000 – 6500 oocistos de Eimeria tenella HP. Os pássaros expostos exibiram uma resposta inflamatória forte, como observado por IgA sérica, DAO sérica, histologia de fígado, e histologia de lúmen de intestino do Exemplo 36.

[0779] Os pássaros no Grupo D do Exemplo 36, que foram alimentados com 500 ppm da preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9.2 exibiram danos ao intestino e ao fígado significativamente reduzidos e uma recuperação rápida para homeostase em comparação com pássaros não tratados. Os pássaros alimentados com tratamentos de oligossacarídeo também exibiram absorção de nutriente aprimorada e diferenciação de célula T aprimorada em comparação com os pássaros desafiados não tratados de Grupo B. Exemplo 39

Método para Aprimorar a Tolerância a Vacinas de Coccidiose

[0780] Os pássaros do Exemplo 35 exibiram danos ao fígado reduzidos, histologia de intestino aprimorada, absorção de nutriente aprimorada, e uma recuperação inflamatória mais rápida quando expostos a uma dose de 10x de uma vacina de coccidiose comercial usada na indústria avícola. EXEMPLO 40 Réplica em Escalonamento Ascendente de Bateladas para Fabricação

[0781] A escala de produção de preparações de oligossacarídeo foi aumentada para aquela de um reator de tanque agitado suspenso de 720 l. Doze reações de batelada com o uso de um procedimento de escalonamento ascendente derivadas daquelas do Exemplo 9.2 foram realizadas na escala de 720 l. As preparações de oligossacarídeo resultantes foram caracterizadas contra critérios de aceitação de QC predeterminados para realizar qualificação de batelada e para avaliar a estabilidade de processo.

[0782] Para as doze bateladas, as condições de processo, como temperatura, tempo de reação, e pressão de reação foram variadas intencionalmente em uma faixa em torno das condições nominais do Exemplo 9.2 para avaliar as sensibilidades do produto resultante para variações razoáveis nas condições de processo que poderia ser esperado em um ambiente de fabricação típico. Para bateladas selecionadas, uma sonda de viscosidade in situ foi usada para monitorar a dependência de tempo da viscosidade dos conteúdos de reator. Em determinadas bateladas, o tempo de interrupção de reação empregou um controle em processo (IPC) com base na medição de viscosidade contínua. As quantidades de material,

incluindo as quantidades dispensadas de reagentes, água de destilação e condensado evoluído, foram medidas por massa por meio de células de carga no reator e tanques auxiliares ou fluxo volumétrico e tempo.

[0783] O teor de água final do produto de reator foi medido por titulação de Karl Fisher para uma alíquota representativa dos teores de reator extraídos no fim da reação, isto é, antes da neutralização e diluição de pH. A uma temperatura de reação de 120 °C, o teor de água do produto de reação foi determinado como 8 e 9 % em peso de água em uma base como é. A uma temperatura de reação de 130 °C, o teor de água do produto de reação foi determinado como entre 5 e 7 % em peso água em uma base como é.

[0784] A aparência do xarope de oligossacarídeo resultante de todas as bateladas foi determinada por inspeção visual como um xarope caramelo. O teor total de sólidos dissolvidos foi determinado por titulação de Karl-Fisher, o teor de monômero residual, MWn e MWw foram determinados por cromatografia HPLC/GPC, o pH foi determinado por medidor de pH calibrado e o teor de DP2 anidro foi determinado por LC- MS/MS. Como mostrado na Tabela 28, os seguintes dados de caracterização de batelada foram obtidos (N/R = “dados não relatados”): Tabela 28. Caracterização de Preparações de Oligossacarídeo % em % em Teor de DP2 peso peso Anidro (g de DP2 de Catalisador de anidro/g total Batelada DS pH Residual DP1 MWn MWw de DP2) 27,1 66,4 N/D N/R 17,5 777 1218 0,84 % 27,2 68,8 3,3 N/R 17,9 735 1091 0,91 %

% em % em Teor de DP2 peso peso Anidro (g de DP2 de Catalisador de anidro/g total Batelada DS pH Residual DP1 MWn MWw de DP2) 27,3 69,4 3,1 0,095 14,8 807 1276 N/R 27,4 71,0 N/D 0,068 15,5 793 1241 1,04 % 27,5 70,9 3,2 0,057 15,8 777 1196 1,15 % 27,6 70,9 3,3 N/R 16,3 773 1170 N/R 27,7 70,7 3,0 N/R 15,7 783 1226 1,13 % 27,8 70,5 3,9 N/R 16,1 785 1182 1,09 % 27,9 71,1 4,1 N/R 17,1 761 1169 1,09 % 27,10 70,4 4,1 N/R 16,3 778 1193 1,15 % 27,11 70,5 4,7 N/R 18,6 696 995 1,33 % 27,12 70,9 3,9 N/R 16,7 769 1194 1,12 % Exemplo 41 Ajuste de pH de uma Preparação de Oligossacarídeo

[0785] O pH da preparação de oligossacarídeo do Exemplo

9.2 a 50 % em peso de teor de sólidos foi determinado em triplicata diluindo-se 5,00 ± 0,05 grama de alíquotas da preparação de oligossacarídeo com 1,80 ± 0,02 ml de água deionizada e misturando-se por agitação vigorosa para obter uma concentração uniforme. O pH de cada alíquota foi medido com um medidor de pH calibrado (VWR, Symphony B30PCI) para obter uma leitura média de 2,4 unidades de pH.

[0786] Adicionou-se a 1,2 kg da preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9.2 6,53 ml de 1,0 de solução de hidróxido de sódio aquoso molar. A mistura resultante foi misturada vigorosamente para obter um xarope com pH ajustado uniforme. O pH do xarope ajustado resultante a 50 % em peso de teor de sólidos foi, então, determinado em triplicata, como descrito acima para obter uma média de 4,1 unidades de pH.

[0787] O procedimento de ajuste de pH foi repetido para síntese de batelada em réplica em várias escalas, mas com determinadas variações no procedimento pelo qual a base foi fornecida para a composição de oligossacarídeo de produto. Para uma batelada, o ajuste de pH foi realizado como a etapa final da reação, antes da diluição de reação água. Em outra batelada, o ajuste de pH foi realizado simultaneamente com a etapa de diluição primeiro dissolvendo-se a quantidade exigida de base na água de diluição; a base e a água de diluição foram, portanto, adicionadas juntamente para extinguir a reação de uma etapa simples para produzir um xarope final no pH desejado. Em outra batelada, a base foi fornecida como pélete de hidróxido de sódio grau alimentar. Em outra batelada, 10 ppm de uma emulsão de silicone de grau alimentar (Dow Xiameter AFE-0100) foram adicionados à reação antes da diluição e do ajuste de pH. Exemplo 42 Preparação de uma Formulação de Pó Vítreo de Preparações de Oligossacarídeo

[0788] Aproximadamente 50 gramas da preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9.1 foram dispensadas em uma bandeja de secagem e colocadas em um aquecedor por convecção de ar forçado a 60 oC para produzir um vidro frágil com cor de caramelo. O vidro foi removido da bandeja de secagem e esmerilhado com um moinho giratório de cisalhamento para render um pó fluidizável colorido laranja claro. O tamanho de partícula do pó foi determinado por peneiramento para estar entre 100 e 2000 mícrons, com 90 % da massa abaixo de 1350 mícrons. A densidade verdadeira do pó esmerilhado bruto foi determinado por Helium Pyncnometry como 1,3063 g/ml. O pó resultante foi observado como fluidificável.

[0789] O procedimento de formulação foi repetido com o uso de um moinho de martelos para obter um pó fino com 90 % da massa do pó que exibe um tamanho de partícula abaixo de 196 mícrons. A densidade verdadeira do pó esmerilhado fino foi determinado como 1,5263 g/ml. O pó resultante não foi estável nem fluidificável.

[0790] As medições de DSC foram realizadas nos pós com o uso de dois programas de circulação de temperatura. No primeiro programa, a temperatura foi elevada a 160 °C de 0 °C a uma taxa de 5 °C/min, então, recozida de volta para 0 °C a uma taxa de -5 °C/min, seguido por um aquecimento final de volta para 160 °C. No segundo programa, a temperatura foi elevada a 50 °C de -50 °C a uma taxa de 5 °C/min, recozida a -60 °C a uma taxa de -5 °C/min e, então, aquecida a 60 °C a uma taxa de 5 °C/min. Observou-se que o pó exibe uma temperatura de transição vítrea de entre 20 e 40 oC, dependendo do teor de água residual do sólido entre umidade de 5 e 10 % em peso.

[0791] O processo de formulação de moagem foi repetido para cada uma das preparações de oligossacarídeo do Exemplo

9.2, Exemplo 9.3, Exemplo 9.4 e Exemplo 9.5. Os pós foram prontamente dissolvidos novamente em água e misturas de álcool-água, mas foram insolúveis em acetona, metanol e etanol anidro. Exemplo 43

Preparação de uma Formulação de Pó Carregado por Carreador

[0792] As massas iguais de um xarope aquoso a 70 % em peso da preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9.2 e terra diatomácea foram combinadas à temperatura ambiente para render um pó estável e fluidificável. O pó resultante compreendeu cerca de 35 % em peso de oligossacarídeo adsorvido (base de sólidos secos) e cerca de 50 % em peso de carreador. A distribuição de tamanho de partícula do pó foi medida por peneiragem. 10 % em peso do pó exibiram um tamanho de partícula abaixo de 290 micrômetros, 50 % em peso do pó exibiram um tamanho de partícula abaixo de 511 micrômetros, e 90 % em peso do pó exibiram um tamanho de partícula abaixo de 886 micrômetros. O pó foi estável para segregação e coesão, como determinado com o uso de testes de ventilação e compressibilidade padrão. A densidade verdadeira do pó resultante foi medida por Helium pyncnometry como 1,8541 g/ml.

[0793] A formulação de carga de carreador foi repetida com o uso de sílica de grau alimentar para render um pó estável e fluidificável com uma carga de pelo menos 50 % em peso de preparação de oligossacarídeo (base de sólidos secos) com relação ao pó final. A densidade verdadeira do pó resultante foi medida como 1,5562 g/ml. Exemplo 44 Preparação de uma Forma Sólida Extrudada

[0794] Um produto extrudado sólido foi preparada mesclando-se 20 % da preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9.2 com semolina e formulou a mistura através de uma extrusora de corante de rosca dupla revestida para formar um pó fluidificável com um tamanho de partícula entre 0,2 mm e

3,0 mm, com 90 % da massa abaixo de 2 mm de tamanho de partícula. Observou-se que o pó resultante é de fluxo contínuo e estável. Exemplo 45 Preparação de Formulações de Pó Estáveis

[0795] As formulações sólidas, incluindo aquelas dos Exemplos 42 – 44, foram avaliadas para determinar suas estabilidades e higroscopicidades. Observou-se que os pós dos Exemplos 43 e 44 foram estáveis a segregação e aglomeração, enquanto observou-se que o pó esmerilhado bruto do Exemplo 42 foi instável com relação a segregação.

[0796] As amostras de cada formulação em pó a ser testada foram colocadas em uma câmara climatizada vedada a 50 % de umidade relativa e 65 % de umidade relativa por até duas semanas de exposição a 25 °C. Dentre as formas testadas, diversas exibiram pouco ou nenhum ganho de massa mediante a exposição a umidade e permaneceram fluidificáveis após o período de exposição de duas semanas. Constatou-se que o pó esmerilhado fino do Exemplo 43 é instável com exposição a umidade. Exemplo 46 Determinação de Catalisador Residual em Preparações de Oligossacarídeo

[0797] O teor de catalisador ácido residual de preparações de oligossacarídeos foi determinado por Cromatografia por Íons. Entre 80 e 100 miligramas de uma formulação em pó da preparação de oligossacarídeo (obtida, por exemplo, como descrito no Exemplo 42) foram dissolvidos em exatamente 1,00 mililitro e centrifugados para remover particulados, se necessário. A solução resultante foi analisada por cromatografia por íon a 30 oC com o uso de um Sistema Thermo Dionex ICS-3000 equipado com detecção de condutividade, uma coluna de Ion Pac AS19A de 4x250 mm, uma pré-coluna Ion Pac AS19G 50 de 4x50 mm e uma coluna de aprisionamento de ânion CR-ATC continuamente regenerada com o uso de KOH em água como o eluente. A eluição foi conduzida a 10 mM de KOH pelos primeiros dez minutos após a injeção seguido por uma eluição de gradiente linearmente crescente para 55 mM de KOH a 25 minutos, então, decrescente para 10 mM de KOH a 26 minutos, e o restante a 10 mM de KOH até o fim do programa.

[0798] Para a preparação de oligossacarídeo do Exemplo

9.2, a concentração de catalisador residual foi determinada por referência a uma curva de calibragem padrão gerado com o uso de uma amostra autêntica de ácido (+)-canfor-10- sulfônico. Uma batelada representativa da preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9.2 foi analisada e a concentração de catalisador residual foi determinada como 0,62 mg por grama de 70 % em peso de xarope. Exemplo 47 Qualificação da Concentração de Catalisador Residual para Aceitação de Batelada

[0799] A determinação de catalisador residual do Exemplo 46 foi comparada a um critério de aceitação de batelada para determinar a adequabilidade da batelada para uso adicional. O limite de aceitação para a concentração de catalisador residual na preparação de oligossacarídeo de produto foi preestabelecido como < 1,0 mg por grama xarope de produto. O valor medido do catalisador residual foi de 0,62 mg por grama de xarope de produto. Portanto, o critério de aceitação foi cumprido para a batelada testada e a batelada foi aceita para uso adicional. Exemplo 48 Formulação de um Produto de Xarope

[0800] A preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9.7 teve pH ajustado a um pH de 4,2 com hidróxido de sódio de grau alimentar, de acordo com o procedimento do Exemplo 41. O xarope resultante foi empacotado em um garrafão de 20 litros com uma tampa resistente à violação. Imediatamente após a vedação do recipiente, a amostra de 500 gramas foi coletada e submetida a teste de qualidade. O teor de sólidos total do xarope foi confirmado como maior que 70 % em peso, pelos métodos de FCC ANEXO X: Carboidratos (Amidos, Açúcares e Substâncias Relacionadas): SÓLIDOS TOTAIS. O teor de açúcar decrescente foi confirmado como menor que 50 %, como D- glicose com base em peso seco, de acordo com o método do FCC ANEXO X: Carboidratos (Amidos, Açúcares e Substâncias Relacionadas): ENSAIO DE AÇÚCARES DESCRESCENTES. Confirmou- se que cinzas sulfatadas foram menos que 1 % com base em peso seco com o uso do método de FCC ANEXO II: Testes e Determinações Físicas: C. OUTROS: RESÍDUO EM IGNIÇÃO (Cinzas Sulfatadas) Método II (para Líquidos). Confirmou-se que o teor de dióxido de enxofre teor foi abaixo de 40 mg/kg com o uso de um método de Monier Williams otimizado. Confirmou- se que o teor de cobre foi abaixo de 1 mg/kg com o uso de o método de Método Oficial Internacional AOAC 2013.06. Confirmou-se que a contagem de placa aeróbica total foi abaixo de 1000 cfu/g com o uso dos métodos de CMMEF Capítulo

7. Confirmou-se que a levedura e o bolor total foram abaixo de 100 cfu/g com o uso do método de Método Internacional

Aprovado AACC 42-50. Confirmou-se que os coliformes foram abaixo de 10 MPN/g com o uso do método do FDA BAM Capítulo

4. Confirmou-se que E. coli foi abaixo de 3 MPN/g com o uso do método de FDA BAM Capítulo 4. Confirmou-se que a salmonela não foi detectada por uma amostra de 25 gramas, de acordo com o método de FDA BAM Capítulo 5. Confirmou-se que Staphylococcus aureus foi abaixo de 10 cfu/g com o uso do método de FDA BAM Capítulo 12. Confirmou-se por inspeção visual que a cor foi caramelo. O recipiente foi vedado, o restante da amostra de retenção foi congelado e armazenado para referência futura, e um certificado de análise foi emitido para o lote resultante. Exemplo 49 Preparação de Água Potável Tratada

[0801] A água potável que contém 250 ppm da preparação de oligossacarídeo do Exemplo 9.7 foi preparada como a seguir. Adicionou-se 37 ml do xarope de oligossacarídeo do Exemplo 41 e 40 gramas de sorbato de potássio gradualmente a 189,27 litros (50 galões) de água de torneira potável em um tambor blue-poly de 208,19 litros (55 galões). A solução foi misturada manualmente com o uso de um pedal por 10 minutos à temperatura ambiente.

[0802] O método foi repetido sem a incorporação de sorbato de potássio.

[0803] Embora modalidades preferenciais da presente invenção tenham sido mostradas e descritas no presente documento, será óbvio para aqueles técnicos no assunto que tais modalidades são fornecidas apenas por meio de exemplo. Não se deseja que a invenção seja limitada pelos exemplos específicos fornecidos no relatório descritivo. Embora a invenção tenha sido descrita com referência ao relatório descritivo anteriormente mencionado, as descrições e ilustrações das modalidades no presente documento não se destinam a serem interpretadas em um sentido limitante.

Diversas variações, alterações e substituições ocorrerão agora para aqueles técnicos no assunto sem se afastar da invenção.

Adicionalmente, deve-se entender que todos os aspectos da invenção não são limitados às representações, configurações ou proporções relativas específicas estabelecidas no presente documento que dependem de uma variedade de condições e variáveis.

Deve ser entendido que várias alternativas às modalidades da invenção descritas no presente documento podem ser empregadas na prática da invenção.

Portanto, contempla-se que a invenção também deva abranger quaisquer alternativas, modificações, variações ou equivalentes.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Método de tratamento ou prevenção de uma disfunção de barreira gastrointestinal em um animal em necessidade do mesmo, sendo o método caracterizado por compreender: administrar uma composição nutricional que compreende uma composição nutricional base e uma preparação de oligossacarídeo sintético ao dito animal, pelo menos n frações de oligossacarídeos, em que cada uma tem um grau distinto de polimerização selecionado a partir de 1 a n (frações de DP1 a DPn), em que n é um número inteiro maior que 3; e em que cada uma dentre a fração de DP1 e DP2 compreende independentemente de cerca de 0,5 % a cerca de 15 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa, como determinado por espectrometria de massa, para, portanto, tratar ou prevenir a dita disfunção de barreira gastrointestinal.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a permeabilidade de uma barreira gastrointestinal do dito animal é diminuída com relação à permeabilidade da dita barreira gastrointestinal do dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

3. Método, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que a dita diminuição é uma diminuição de pelo menos cerca de 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 % ou 30 % com relação à dita permeabilidade da dita barreira gastrointestinal do dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

4. Método, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que a dita diminuição é uma diminuição de cerca de 0,5-30 %, 0,5-20 %, 0,5-10 %, 0,5- 5 %, 0,5-4 %, 0,5-3 %, 0,5-2 %, 0,5-1 %, 1-30 %, 1-20 %, 1- 10 %, 1-5 %, 10-4 %, 1-3 % ou 1-2 % com relação à dita permeabilidade da dita barreira gastrointestinal do dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2-4, caracterizado pelo fato de que a dita diminuição é uma diminuição maior em comparação com uma diminuição em permeabilidade de uma barreira gastrointestinal de um animal de controle comparável ao que se administrou uma composição nutricional que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

6. Método, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a dita diminuição é uma diminuição pelo menos cerca de 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 % ou 60 % maior em comparação com uma diminuição em permeabilidade de uma barreira gastrointestinal de um animal de controle comparável ao que se administrou uma composição nutricional que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

7. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a permeabilidade de uma barreira gastrointestinal do dito animal é diminuída com relação à permeabilidade da dita barreira gastrointestinal do dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

8. Método, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a dita diminuição é uma diminuição de pelo menos cerca de 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 % ou 30 % com relação à permeabilidade da dita barreira gastrointestinal do dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

9. Método, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a dita diminuição é uma diminuição de cerca de 0,5-30 %, 0,5-20 %, 0,5-10 %, 0,5- 5 %, 0,5-4 %, 0,5-3 %, 0,5-2 %, 0,5-1 %, 1-30 %, 1-20 %, 1- 10 %, 1-5 %, 10-4 %, 1-3 % ou 1-2 % com relação à permeabilidade da dita barreira gastrointestinal do dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2-9, caracterizado pelo fato de que a dita permeabilidade da dita barreira gastrointestinal é determinada a partir de uma amostra da dita barreira gastrointestinal do dito animal.

11. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a dita permeabilidade é medida por análise histológica, colorização ou qualquer combinação dos mesmos.

12. Método, de acordo com a reivindicação 10 ou 11, caracterizado por compreender adicionalmente avaliar a morfologia de mucosa da dita barreira gastrointestinal.

13. Método, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que a dita avaliação compreende determinar comprimento de vilosidade, comprimento de cripta,

um nível de infiltração celular inflamatória ou qualquer combinação dos mesmos.

14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2-9, caracterizado pelo fato de que a dita permeabilidade da dita barreira gastrointestinal é determinada a partir de uma amostra sanguínea, fecal ou urinária do dito animal.

15. Método, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a dita permeabilidade é medida determinando-se um nível de um marcador administrado oralmente ao dito animal na dita amostra.

16. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o dito marcador é um açúcar não digerível, um polietileno glicol (PEG), um dextrano fluorescentemente marcado ou um radioisótopo.

17. Método, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a dita permeabilidade é medida determinando-se um nível de pelo menos uma espécie microbiana na dita amostra sanguínea, fecal ou urinária.

18. Método, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a dita permeabilidade é medida determinando-se um nível de um anticorpo que se liga a pelo menos uma espécie microbiana na dita amostra.

19. Método, de acordo com a reivindicação 17 ou 18, caracterizado pelo fato de que a dita pelo menos uma espécie microbiana está presente no trato gastrointestinal do dito animal.

20. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2-19, caracterizado pelo fato de que a dita diminuição em permeabilidade da dita barreira gastrointestinal é diretamente mediada pela dita preparação de oligossacarídeo sintético.

21. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2-19, caracterizado pelo fato de que a dita permeabilidade diminuída da dita barreira gastrointestinal é mediada indiretamente pela dita preparação de oligossacarídeo sintético.

22. Método, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo sintético é processada in vivo em pelo menos uma espécie secundária.

23. Método, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo sintético é processada in vivo por um componente do microbioma gastrointestinal do dito animal.

24. Método, de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo sintético é processada in vivo por uma bactéria presente no trato gastrointestinal do dito animal.

25. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 22-24, caracterizado pelo fato de que a dita diminuição na permeabilidade gastrointestinal é mediada diretamente pela dita pelo menos uma espécie secundária.

26. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita disfunção de barreira gastrointestinal é uma barreira gastrointestinal hiperpermeável.

27. Método, de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que a dita barreira gastrointestinal hiperpermeável permite a translocação de conteúdos intestinais de um espaço intraluminal em circulação do animal.

28. Método, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que os ditos conteúdos intestinais compreendem partículas de comida, microrganismos, toxinas, ou qualquer combinação dos mesmos.

29. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que pelo menos um sintoma associado à dita disfunção de barreira gastrointestinal é melhorado ou prevenido.

30. Método, de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que o dito pelo menos um sintoma é síntese de muco diminuída, síntese de mucina diminuída, secreção de muco diminuída, secreção de mucina diminuída, absorção de nutriente diminuída, inflamação aumentada, resistência diminuída à infecção, proliferação diminuída de células epiteliais intestinais, maturação de células epiteliais intestinais diminuída, células imunológicas aumentadas em trato gastrointestinal, nível aumentado de citocinas ou quimiocinas pró-inflamatórias no sangue ou trato gastrointestinal, síndrome do intestino irritável, síndrome do intestino inflamatório, inflamação retal, infecção por sistema, inflamação de sistema, má -nutrição, ganho de peso diminuído, perda de peso, razão de conversão de ração aumentada, eficácia de ração diminuída, perda de cabelo, inconsistência fecal ou diarreia, com relação a um animal de controle comparável que carece da dita disfunção de barreira gastrointestinal.

31. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o dito animal tem uma infecção.

32. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações, caracterizado pelo fato de que a dita disfunção de barreira gastrointestinal é associada a ou causada por uma infecção.

33. Método, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que a dita infecção é uma infecção parasítica, bacteriana, fúngica ou viral.

34. Método, de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pelo fato de que a dita infecção é uma infecção parasítica.

35. Método, de acordo com a reivindicação 34, caracterizado pelo fato de que a dita infecção parasítica é uma infecção por coccídios.

36. Método, de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pelo fato de que a dita infecção por coccídios é uma infecção por Eimeria, infecção por Toxoplasma, uma infecção por Cryptosporidium, infecção por Isospora ou uma infecção por Hammondia.

37. Método, de acordo com a reivindicação 36, caracterizado pelo fato de que a dita infecção por coccídios é uma infecção por Eimeria.

38. Método, de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pelo fato de que a dita infecção por Eimeria é uma infecção por E. mivati, E. tenella, E. acervulina ou E. maxima.

39. Método, de acordo com a reivindicação 36, caracterizado pelo fato de que a dita infecção por coccídios é uma infecção por Toxoplasma.

40. Método, de acordo com a reivindicação 39,

caracterizado pelo fato de que a dita infecção por Toxoplasma é Toxoplasma gondii.

41. Método, de acordo com a reivindicação 36, caracterizado pelo fato de que a dita infecção por coccídios é uma infecção por Cryptosporidium.

42. Método, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo fato de que a dita infecção por Cryptosporidium é uma infecção por Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium muris ou Cryptosporidium hominis.

43. Método, de acordo com a reivindicação 36, caracterizado pelo fato de que a dita infecção por coccídios é uma infecção por Isospora.

44. Método, de acordo com a reivindicação 43, caracterizado pelo fato de que a dita infecção por Isospora é uma infecção por Isospora canis, Isospora ohioensis, Isospora burrosi, ou Isospora felis.

45. Método, de acordo com a reivindicação 36, caracterizado pelo fato de que a dita infecção por coccídios é uma infecção por Hammondia.

46. Método, de acordo com a reivindicação 45, caracterizado pelo fato de que a dita infecção por Hammondia é uma infecção por Hammondia spp.

47. Método, de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pelo fato de que a dita infecção por coccídios é infecção por Eimeria acervuline, Eimeria maxima, Eimeria mitis, Eimeria tenella, Toxoplasma gondii, Hammondia spp. Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium muris, Cryptosporidium hominis, Isospora canis, Isospora ohioensis, Isospora burrosi ou Isospora felis.

48. Método, de acordo com a reivindicação 34,

caracterizado pelo fato de que a dita infecção é uma infecção bacteriana.

49. Método, de acordo com a reivindicação 48, caracterizado pelo fato de que a dita infecção bacteriana é uma infecção estafilocócica, infecção por Shigella, infecção por Campylobacter, infecção por Salmonella, infecção por Escherichia ou infecção por Yersinia.

50. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 31-49, caracterizado pelo fato de que a dita infecção causa um aumento em inflamação de trato gastrointestinal, uma diminuição no número de células calciformes no trato gastrointestinal do dito animal, uma diminuição em secreção de muco no trato gastrointestinal do dito animal, uma diminuição no comprimento de vilos de uma barreira gastrointestinal do dito animal, dano aos vilos de uma barreira gastrointestinal do dito animal, um nível aumentado de células imunológicas no trato gastrointestinal do dito animal, um nível aumentado de células T CD8+ no trato gastrointestinal do dito animal, um aumento no nível de proteína hepática APG (glicoproteína alfa), um aumento em um nível de anticorpos circulantes, um aumento em um nível de anticorpos de IgA circulantes, ou uma diminuição em um nível de diamina oxidase circulante, ou qualquer combinação dos mesmos, com relação a um animal comparável sem a dita infecção.

51. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o dito animal tem inflamação diminuída de uma barreira gastrointestinal com relação a inflamação da dita barreira gastrointestinal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

52. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o dito animal tem inflamação diminuída de uma barreira gastrointestinal com relação a inflamação da dita barreira gastrointestinal de um animal de controle comparável ao que se administrou uma composição nutricional que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

53. Método, de acordo com a reivindicação 51 ou 52, caracterizado pelo fato de que a dita inflamação é medida por um aumento em um nível de pelo menos uma citocina anti- inflamatória.

54. Método, de acordo com a reivindicação 53, caracterizado pelo fato de que a dita citocina anti- inflamatória é IL1B, IL4, IL10, IL-6, IL-11, IL-13, IL1RA ou TGF-β.

55. Método, de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que a dita citocina anti- inflamatória é IL1B, IL4 ou IL10.

56. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o dito animal exibe uma diminuição em células T CD8+, um aumento em células T CD4+, um aumento em um nível de diamina oxidase circulante, ou uma diminuição em níveis de anticorpo de circulação (por exemplo, IgA), com relação ao dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

57. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o dito animal exibe uma diminuição em células T CD8+, um aumento em células T CD4+, um aumento em um nível de diamina oxidase circulante, ou uma diminuição em níveis de anticorpo de circulação (por exemplo, IgA), com relação a um animal de controle comparável administrado uma composição nutricional que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

58. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o dito animal exibe absorção de nutriente aumentada por meio de uma barreira gastrointestinal com relação à dita barreira gastrointestinal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

59. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o dito animal exibe absorção de nutriente aumentada por meio de uma barreira gastrointestinal com relação a uma barreira gastrointestinal de um animal de controle comparável ao que se administrou uma composição nutricional que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

60. Método, de acordo com a reivindicação 58 ou 59, caracterizado pelo fato de que a dita absorção de nutriente é medida por um aumento em um nível de pelo menos uma proteína gastrointestinal associada a absorção de nutriente.

61. Método, de acordo com a reivindicação 60, caracterizado pelo fato de que a dita proteína é SI (sacarase-isomaltase), SLC5A10, SLC34A1, SLC2A2, SLC34A2, SLC23A1, SLC23A2, SLC5A8, SLC16A3, SLC4, SLC4A9, SLC4A2, SLC4A3, NPC1L1, C6orf58, DDC, MCT1, MCT4, NaS1, DTDST, PAT1, DRA, CLD, SAT1, SUT2, SGLT1, GLUT2, B0AT1, ATB0+, SIT1, TAUT, EAAC1, ASCT2, SN1, SN2, PEPT1, SNAT2, GLYT1, y+LAT1, y+LAT2, CD36, LFABP, NPC1L1, ABCG5, ABCG8, SVCT1, SVCT2, SMVT, GIF,

AMN, CUBL, MRP1, FOLT, PCFT, FOLR1, OAT10, RFVT1, RFVT2, THTR1, THTR2, VDR, DCYTB, DMT1, HCP1, FPN1, HEPH, HAMP, ZIP4, ZIP11, ZIP8, ZIP14A, ZIP14B, ZnT1, ZnT2, CTR1, SLC3A1, SLC1A4, ALPI, C17orf78, MUC17, DEFA5, RBP2, DEFA6, MLN, MEP1B, LCT, TM4SF20 ou FABP6.

62. Método, de acordo com a reivindicação 61, caracterizado pelo fato de que a dita proteína é SI, SLC5A10 ou SLC34A1.

63. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o dito animal tem um peso corporal aumentada com relação a um peso corporal do dito animal antes da administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

64. Método, de acordo com a reivindicação 63, caracterizado pelo fato de que o dito peso corporal do dito animal é pelo menos 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 % ou 10 % aumentada com relação ao dito peso corporal do dito animal antes da administração da dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético.

65. Método, de acordo com a reivindicação 63, caracterizado pelo fato de que o dito peso corporal do dito animal é de cerca de 1-40 %, 1-30 %, 1-20 %, 1-10 %, 1-5 %, 1-4 %, 1-3 % ou 1-2 %, aumentou com relação ao dito peso corporal do dito animal antes da administração da dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético.

66. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 63-65, caracterizado pelo fato de que o dito aumento no peso corporal é um aumento maior em relação a um aumento no peso corporal em um animal de controle comparável ao que se administrou uma composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

67. Método, de acordo com a reivindicação 66, caracterizado pelo fato de que o dito aumento no peso corporal é um aumento pelo menos 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 % ou 10 % maior em relação a um aumento no peso corporal em um animal de controle comparável ao que se administrou uma composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

68. Método, de acordo com a reivindicação 66, caracterizado pelo fato de que o dito aumento no peso corporal é um aumento cerca de 1-40 %, 1-30 %, 1-20 %, 1- 10 %, 1-5 %, 1-4 %, 1-3 % ou 1-2 % maior em relação a um aumento no peso corporal em um animal de controle comparável ao que se administrou uma composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

69. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o dito animal tem uma eficácia de ração aumentada com relação a uma eficácia de ração do dito animal antes da administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

70. Método, de acordo com a reivindicação 69, caracterizado pelo fato de que a dita eficácia de ração do dito animal é pelo menos 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 % ou 10 % aumentada com relação à dita eficácia de ração do dito animal antes da administração da dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético.

71. Método, de acordo com a reivindicação 69,

caracterizado pelo fato de que a dita eficácia de ração do dito animal é cerca de 1-40 %, 1-35 %, 1-30 %, 1-25 %, 1- 20 %, 1-15 %, 1-10 %, 1-5 %, 1-4 %, 1-3 % ou 1-2 % aumentada com relação ao dito peso corporal do dito animal antes da administração da dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético.

72. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 69-71, caracterizado pelo fato de que o dito aumento na eficácia de ração é um aumento maior em relação a um animal de controle comparável ao que se administrou uma composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

73. Método, de acordo com a reivindicação 72, caracterizado pelo fato de que o dito aumento na eficácia de ração é um aumento pelo menos 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 % ou 10 % maior em relação ao dito aumento na eficácia de ração no dito animal de controle comparável administrado com a dita composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

74. Método, de acordo com a reivindicação 72, caracterizado pelo fato de que o dito aumento na eficácia de ração é um aumento cerca de 1-40 %, 1-30 %, 1-20 %, 1-10 %, 1-5 %, 1-4 %, 1-3 % ou 1-2 % maior em relação ao dito aumento na eficácia de ração no dito animal de controle comparável administrado com a dita composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

75. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o dito animal tem uma razão de conversão de ração diminuída (FCR) com relação a uma FCR do dito animal antes da administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

76. Método, de acordo com a reivindicação 75, caracterizado pelo fato de que a dita razão de conversão de ração do dito animal é pelo menos 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 % ou 10 % diminuída com relação à razão de conversão de ração do dito animal antes da administração da dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético.

77. Método, de acordo com a reivindicação 75, caracterizado pelo fato de que a dita razão de conversão de ração (FCR) do dito animal é de cerca de 1-40 %, 1-35 %, 1- 30 %, 1-25 %, 1-20 %, 1-15 %, 1-10 %, 1-5 %, 1-4 %, 1-3 % ou 1-2 %, diminuída com relação ao dito peso corporal do dito animal antes da administração da dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético.

78. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75-77, caracterizado pelo fato de que o dito animal tem a dita diminuição na razão de conversão de ração que é uma diminuição menor com relação a um animal de controle comparável ao que se administrou uma composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

79. Método, de acordo com a reivindicação 78, caracterizado pelo fato de que a dita diminuição na razão de conversão de ração é pelo menos uma diminuição 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 % ou 10 % maior com relação à dita diminuição na razão de conversão de ração no dito animal de controle comparável administrado com a dita composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

80. Método, de acordo com a reivindicação 78, caracterizado pelo fato de que a dita diminuição na razão de conversão de ração é uma diminuição de cerca de 1-40 %, 1- 30 %, 1-20 %, 1-10 %, 1-5 %, 1-4 %, 1-3 % ou 1-2 % maior com relação à dita diminuição na razão de conversão de ração no dito animal de controle comparável administrado com a dita composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

81. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que uma expectativa de vida ou taxa de sobrevivência do dito animal é aumentada com relação a um animal de controle comparável que foi administrado com uma composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

82. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético é administrada ao dito animal em uma quantidade suficiente para tratar ou prevenir a dita disfunção de barreira gastrointestinal.

83. Método de tratamento ou prevenção de uma infecção em um animal em necessidade do mesmo, sendo o método caracterizado por compreender administrar uma composição nutricional que compreende uma composição nutricional base e uma preparação de oligossacarídeo sintético ao dito animal, pelo menos n frações de oligossacarídeos, em que cada uma tem um grau distinto de polimerização selecionado a partir de 1 a n (frações de DP1 a DPn), em que n é um número inteiro maior que 3; e em que cada uma dentre a fração de DP1 e DP2 compreende independentemente de cerca de 0,5 % a cerca de 15 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa, como determinado por espectrometria de massa; para, portanto, tratar ou prevenir a dita infecção.

84. Método, de acordo com a reivindicação 83, caracterizado pelo fato de que um nível de pelo menos uma célula imunológica em uma amostra do dito animal é aumentado com relação a um nível da dita pelo menos uma célula imunológica em uma amostra do dito animal antes da administração da dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético.

85. Método, de acordo com a reivindicação 84, caracterizado pelo fato de que o dito aumento é pelo menos 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 % ou 10 % aumentada com relação ao dito nível da dita pelo menos uma célula imunológica antes da administração da dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético.

86. Método, de acordo com a reivindicação 84, caracterizado pelo fato de que o dito aumento de cerca de 1- 40 %, 1-35 %, 1-30 %, 1-25 %, 1-20 %, 1-15 %, 1-10 %, 1-5 %, 1-4 %, 1-3 % ou 1-2 %, aumentou com relação ao dito nível da dita pelo menos uma célula imunológica antes da administração da dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético.

87. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 83-86, caracterizado pelo fato de que um nível de pelo menos uma célula imunológica em uma amostra do dito animal é aumentado com relação a um nível da dita pelo menos uma célula imunológica em uma amostra de um animal de controle comparável que foi administrada uma composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

88. Método, de acordo com a reivindicação 87, caracterizado pelo fato de que o dito aumento é pelo menos 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 % ou 10 % aumentada com relação ao dito nível da dita pelo menos uma célula imunológica na dita amostra do dito animal de controle comparável que foi administrada uma composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

89. Método, de acordo com a reivindicação 87, caracterizado pelo fato de que o dito aumento de cerca de 1- 40 %, 1-35 %, 1-30 %, 1-25 %, 1-20 %, 1-15 %, 1-10 %, 1-5 %, 1-4 %, 1-3 % ou 1-2 %, aumentou com relação ao dito nível da dita pelo menos uma célula imunológica na dita amostra do dito animal de controle comparável que foi administrada uma composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

90. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 83-89, caracterizado pelo fato de que a dita pelo menos uma célula imunológica é um neutrófilo, eosinófilo, basófilo, mastócito, célula T, célula B, macrófago, monócito, granulócito ou célula dendrítica.

91. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 83-89, caracterizado pelo fato de que a dita célula imunológica é uma célula fagocítica.

92. Método, de acordo com a reivindicação 91, caracterizado pelo fato de que as ditas células fagocíticas é um neutrófilo, eosinófilo, basófilo, mastócito, macrófago, monócito ou célula dendrítica.

93. Método, de acordo com a reivindicação 90, caracterizado pelo fato de que a dita célula imunológica é uma célula T.

94. Método, de acordo com a reivindicação 90, caracterizado pelo fato de que a célula imunológica é um granulócito.

95. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 83-94, caracterizado pelo fato de que um nível de pelo menos uma citocina pró-inflamatória em uma amostra do dito animal é aumentado com relação a um nível da dita pelo menos uma citocina pró-inflamatória em uma amostra do dito animal antes da administração da dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético.

96. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 83-95, caracterizado pelo fato de que um nível de pelo menos uma citocina pró-inflamatória em uma amostra do dito animal é aumentado com relação a um nível da dita pelo menos uma citocina pró-inflamatória em uma amostra de um animal de controle comparável que foi administrada uma composição nutricional comparável que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

97. Método, de acordo com a reivindicação 95 ou 96, caracterizado pelo fato de que a dita pelo menos uma citocina pró-inflamatória é IL1, IL-12, IL18, TNFA, IFNG, GM-CSF, IL-

1β, IL6, RANTES, MCP1, IL8, MIP-1α, MIP-1β, linfotactina, fractalquina ou GRO/KC.

98. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 83-97, caracterizado pelo fato de que a permeabilidade de uma barreira gastrointestinal do dito animal é diminuída com relação à permeabilidade da dita barreira gastrointestinal do dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

99. Método, de acordo com a reivindicação 98, caracterizado pelo fato de que a dita diminuição é pelo menos cerca de 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 % ou 30 % de diminuição com relação à dita permeabilidade da dita barreira gastrointestinal do dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético; ou a dita diminuição é uma diminuição de cerca de 0,5-30 %, 0,5-20 %, 0,5-10 %, 0,5-5 %, 0,5-4 %, 0,5-3 %, 0,5-2 %, 0,5-1 %, 1-30 %, 1-20 %, 1-10 %, 1-5 %, 10-4 %, 1- 3 % ou 1-2 % com relação à dita permeabilidade da dita barreira gastrointestinal do dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

100. Método, de acordo com a reivindicação 98 ou 99, caracterizado pelo fato de que a dita diminuição é uma diminuição maior em comparação com uma diminuição em permeabilidade de uma barreira gastrointestinal de um animal de controle comparável ao que se administrou uma composição nutricional que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

101. Método, de acordo com a reivindicação 100,

caracterizado pelo fato de que a dita diminuição é uma diminuição pelo menos cerca de 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 % ou 60 % maior em comparação com uma diminuição em permeabilidade de uma barreira gastrointestinal de um animal de controle comparável ao que se administrou uma composição nutricional que carece da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

102. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 83-101, caracterizado pelo fato de que a permeabilidade de uma barreira gastrointestinal do dito animal é diminuída com relação à permeabilidade da dita barreira gastrointestinal do dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

103. Método, de acordo com a reivindicação 102, caracterizado pelo fato de que a dita diminuição é uma diminuição de pelo menos cerca de 0,5 %, 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 % ou 30 % com relação à permeabilidade da dita barreira gastrointestinal do dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

104. Método, de acordo com a reivindicação 102, caracterizado pelo fato de que a dita diminuição é uma diminuição de cerca de 0,5-30 %, 0,5-20 %, 0,5-10 %, 0,5- 5 %, 0,5-4 %, 0,5-3 %, 0,5-2 %, 0,5-1 %, 1-30 %, 1-20 %, 1- 10 %, 1-5 %, 10-4 %, 1-3 % ou 1-2 % com relação à permeabilidade da dita barreira gastrointestinal do dito animal antes da dita administração da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

105. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações, caracterizado pelo fato de que a dita disfunção de barreira gastrointestinal é associada a ou causada por uma infecção.

106. Método, de acordo com a reivindicação 105, caracterizado pelo fato de que a dita infecção é uma infecção parasítica, bacteriana, fúngica ou viral.

107. Método, de acordo com a reivindicação 106, caracterizado pelo fato de que a dita infecção é uma infecção parasítica.

108. Método, de acordo com a reivindicação 107, caracterizado pelo fato de que a dita infecção parasítica é uma infecção por coccídios.

109. Método, de acordo com a reivindicação 108, caracterizado pelo fato de que a dita infecção por coccídios é uma infecção por Eimeria, infecção por Toxoplasma, uma infecção por Cryptosporidium, infecção por Isospora ou uma infecção por Hammondia.

110. Método, de acordo com a reivindicação 109, caracterizado pelo fato de que a dita infecção por coccídios é uma infecção por Eimeria.

111. Método, de acordo com a reivindicação 110, caracterizado pelo fato de que a dita infecção por Eimeria é uma infecção por E. mivati, E. tenella, E. acervulina ou E. maxima.

112. Método, de acordo com a reivindicação 109, caracterizado pelo fato de que a dita infecção por coccídios é uma infecção por Toxoplasma.

113. Método, de acordo com a reivindicação 112, caracterizado pelo fato de que a dita infecção por Toxoplasma é Toxoplasma gondii.

114. Método, de acordo com a reivindicação 109, caracterizado pelo fato de que a dita infecção por coccídios é uma infecção por Cryptosporidium.

115. Método, de acordo com a reivindicação 114, caracterizado pelo fato de que a dita infecção por Cryptosporidium é uma infecção por Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium muris ou Cryptosporidium hominis.

116. Método, de acordo com a reivindicação 109, caracterizado pelo fato de que a dita infecção por coccídios é uma infecção por Isospora.

117. Método, de acordo com a reivindicação 116, caracterizado pelo fato de que a dita infecção por Isospora é uma infecção por Isospora canis, Isospora ohioensis, Isospora burrosi, ou Isospora felis.

118. Método, de acordo com a reivindicação 109, caracterizado pelo fato de que a dita infecção por coccídios é uma infecção por Hammondia.

119. Método, de acordo com a reivindicação 118, caracterizado pelo fato de que a dita infecção por Hammondia é uma infecção por Hammondia spp.

120. Método, de acordo com a reivindicação 108, caracterizado pelo fato de que a dita infecção por coccídios é infecção por Eimeria acervuline, Eimeria maxima, Eimeria mitis, Eimeria tenella, Toxoplasma gondii, Hammondia spp. Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium muris, Cryptosporidium hominis, Isospora canis, Isospora ohioensis, Isospora burrosi ou Isospora felis.

121. Método, de acordo com a reivindicação 106, caracterizado pelo fato de que a dita infecção é uma infecção bacteriana.

122. Método, de acordo com a reivindicação 121, caracterizado pelo fato de que a dita infecção bacteriana é uma infecção estafilocócica, infecção por Shigella, infecção por Campylobacter, infecção por Salmonella, infecção por Escherichia ou infecção por Yersinia.

123. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 83-122, caracterizado pelo fato de que a dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético é administrada ao dito animal em uma quantidade suficiente para tratar ou prevenir a dita infecção.

124. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético é administrada ao dito animal por pelo menos 1, 7, 10, 14, 30, 45, 60, 90 ou 120 dias.

125. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético é administrada ao dito animal pelo menos uma vez, duas vezes, três, quatro ou cinco vezes ao dia.

126. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita administração compreende fornecer a dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético ao dito animal para ingerir à vontade.

127. Método, de acordo com a reivindicação 126, caracterizado pelo fato de que o dito animal ingere pelo menos uma porção da dita composição nutricional que compreende a dita preparação de oligossacarídeo sintético em mais que pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 90 ou 120 períodos de vinte e quatro horas.

128. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita composição nutricional compreende pelo menos 100 ppm, 200 ppm, 300 ppm, 400 ppm, 500 ppm, 600 ppm, 700 ppm, 800 ppm, 900 ppm, 1000 ppm, 1500 ppm ou 2000 ppm da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

129. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita composição nutricional compreende cerca de 100 ppm, 200 ppm, 300 ppm, 400 ppm, 500 ppm, 600 ppm, 700 ppm, 800 ppm, 900 ppm, 1000 ppm, 1500 ppm ou 2000 ppm da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

130. Método, de acordo com a reivindicação 129, caracterizado pelo fato de que a dita composição nutricional compreende cerca de 500 ppm da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

131. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita composição nutricional compreende de cerca de 100 ppm - 2000 ppm, 100 ppm - 1500 ppm, 100 ppm - 1000 ppm, 100 ppm - 900 ppm, 100 ppm - 800 ppm, 100 ppm - 700 ppm, 100 ppm - 600 ppm, 100 ppm - 500 ppm, 100 ppm - 400 ppm, 100 ppm - 300 ppm, 100 ppm - 200 ppm, 200 ppm - 1000 ppm, 200 ppm - 800 ppm, 200 ppm - 700 ppm, 200 ppm - 600 ppm, 200 ppm - 500 ppm, 300 ppm - 1000 ppm, 300 ppm - 700 ppm, 300 ppm - 600 ppm ou 300 ppm - 500 ppm da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

132. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita composição nutricional compreende de cerca de 300 ppm - 600 ppm da dita preparação de oligossacarídeo sintético.

133. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o animal é uma ave, marisco, ovelha, vaca, gado, búfalo, bisão, porco, gato, cachorro, coelho, bode, porquinho-da-índia, burro, camelo, cavalo, pombo, furão, gerbo, hamster, camundongo, rato, peixe, camarão ou pássaro.

134. Método, de acordo com a reivindicação 133, caracterizado pelo fato de que o animal é ave.

135. Método, de acordo com a reivindicação 134, caracterizado pelo fato de que o animal é uma galinha, peru, pato ou ganso.

136. Método, de acordo com a reivindicação 135, caracterizado pelo fato de que a dita galinha é uma galinha para consumo, uma galinha poedeira ou uma galinha reprodutora.

137. Método, de acordo com a reivindicação 133, caracterizado pelo fato de que o animal é um porco.

138. Método, de acordo com a reivindicação 137, caracterizado pelo fato de que o dito porco é um leitão, um porco em crescimento ou um porco de abate.

139. Método, de acordo com a reivindicação 133, caracterizado pelo fato de que o dito animal é um peixe.

140. Método, de acordo com a reivindicação 139, caracterizado pelo fato de que o dito peixe é um salmão, uma tilápia ou um peixe tropical.

141. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a composição nutricional é uma composição de ração animal.

142. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a composição nutricional base é ração animal base.

143. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita abundância relativa é determinada por LC-MS/MS.

144. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita abundância relativa de oligossacarídeos em pelo menos 5, 10, 20 ou 30 frações de DP diminui monotonicamente com seu grau de polimerização.

145. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita abundância relativa de oligossacarídeos em cada uma das n frações diminui monotonicamente com seu grau de polimerização.

146. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que n é pelo menos 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100.

147. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita fração de DP2 compreende menos que 12 %, menos que 11 %, menos que 10 %, menos que 9 %, menos que 8 %, menos que 7 %, menos que 6 %, menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 %, menos que 2 % ou menos que 1 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

148. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-147, caracterizado pelo fato de que a dita fração de DP2 compreende de cerca de 5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

149. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-147, caracterizado pelo fato de que a dita fração de DP2 compreende de cerca de 1 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

150. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-147, caracterizado pelo fato de que a dita fração de DP2 compreende de cerca de 0,5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

151. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-147, caracterizado pelo fato de que a dita fração de DP2 compreende de cerca de 2 % a cerca de 12 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

152. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita fração de DP1 compreende menos que 12 %, menos que 11 %, menos que 10 %, menos que 9 %, menos que 8 %, menos que 7 %, menos que 6 %, menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 %,

menos que 2 % ou menos que 1 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

153. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-152, caracterizado pelo fato de que a dita fração de DP1 compreende de cerca de 2 % a cerca de 12 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

154. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-152, caracterizado pelo fato de que a dita fração de DP1 compreende de cerca de 1 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

155. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-152, caracterizado pelo fato de que a dita fração de DP1 compreende de cerca de 0,5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

156. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-152, caracterizado pelo fato de que a dita fração de DP1 compreende de cerca de 5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

157. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita fração de DP3 compreende menos que 15 %, menos que 12 %, menos que 11 %, menos que 10 %, menos que 9 %, menos que 8 %, menos que 7 %, menos que 6 %, menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 %, menos que 2 % ou menos que 1 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

158. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-157, caracterizado pelo fato de que a dita fração de DP3 compreende de cerca de 2 % a cerca de 12 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

159. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-157, caracterizado pelo fato de que a dita fração de DP3 compreende de cerca de 1 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

160. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-157, caracterizado pelo fato de que a dita fração de DP3 compreende de cerca de 0,5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

161. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-157, caracterizado pelo fato de que a dita fração de DP3 compreende de cerca de 5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

162. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo compreende de cerca de 2 % a cerca de 12 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

163. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-162, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo compreende de cerca de 0,5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

164. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-162, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo compreende de cerca de 1 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

165. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-162, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo compreende de cerca de 5 % a cerca de 10 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

166. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita fração de DP2 compreende mais que 0,6 %, mais que 0,8 %, mais que 1,0 %, mais que 1,5 %, mais que 2 %, mais que 3 %, mais que 4 %, mais que 5 %, mais que 6 %, mais que 7 %, mais que 8 %, mais que 9 %, mais que 10 %, mais que 11 % ou mais que 12 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

167. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita fração de DP1 compreende mais que 0,6 %, mais que 0,8 %, mais que 1,0 %, mais que 1,5 %, mais que 2 %, mais que 3 %, mais que 4 %, mais que 5 %, mais que 6 %, mais que 7 %, mais que 8 %, mais que 9 %, mais que 10 %, mais que 11 % ou mais que 12 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

168. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita fração de DP3 compreende mais que 0,6 %, mais que 0,8 %, mais que 1,0 %, mais que 1,5 %, mais que 2 %, mais que 3 %,

mais que 4 %, mais que 5 %, mais que 6 %, mais que 7 %, mais que 8 %, mais que 9 %, mais que 10 %, mais que 11 % ou mais que 12 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

169. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo compreende mais que 0,5 %, 0,6 %, mais que 0,8 %, mais que 1,0 %, mais que 1,5 %, mais que 2 %, mais que 3 %, mais que 4 %, mais que 5 %, mais que 6 %, mais que 7 %, mais que 8 %, mais que 9 %, mais que 10 %, mais que 11 % ou mais que 12 % de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra por abundância relativa.

170. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo tem um teor de fração de DP1 de cerca de 1 % a cerca de 40 % em peso, como determinado por cromatografia líquida.

171. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo tem um teor de fração de DP2 de cerca de 1 % a cerca de 35 % em peso, como determinado por cromatografia líquida.

172. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo tem um teor de fração de DP3 de cerca de 1 % a cerca de 30 % em peso, como determinado por cromatografia líquida.

173. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo tem um teor de fração de

DP4 de cerca de 0,1 % a cerca de 20 % em peso, como determinado por cromatografia líquida.

174. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo tem um teor de fração de DP5 de cerca de 0,1 % a cerca de 15 % em peso, como determinado por cromatografia líquida.

175. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que uma razão da fração de DP2 para a fração de DP1 é de cerca de 0,02 a cerca de 0,40, como determinado por cromatografia líquida.

176. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que uma razão da fração de DP3 fração para a fração de DP2 é de cerca de 0,01 a cerca de 0,30, como determinado por cromatografia líquida.

177. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que um teor de agregado das frações de DP1 e DP2 na preparação de oligossacarídeo é menos que 50 %, menos que 40 % ou menos que 30 %, como determinado por cromatografia líquida.

178. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo compreende pelo menos 103, pelo menos 104, pelo menos 105, pelo menos 106 ou pelo menos 109 espécies de oligossacarídeos diferentes.

179. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que dois ou mais oligossacarídeos independentes compreendem diferente subunidades anidras.

180. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que cada um dos ditos oligossacarídeos que contêm subunidade anidra compreende uma ou mais subunidades anidras que são produtos de desidratação térmica de monossacarídeos.

181. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo compreende uma ou mais subunidades anidras selecionadas a partir de glicose anidra, galactose anidra, manose anidra, alose anidra, altrose anidra, gulose anidra, indose anidra, talose anidra, frutose anidra, ribose anidra, arabinose anidra, ramnose anidra, lixose anidra e xilose anidra.

182. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo compreende uma ou mais subunidades de glicose anidra, galactose anidra, manose anidra ou frutose anidra.

183. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita fração de DP1 compreende 1,6-anidro-β-D-glicofuranose ou 1,6-anidro-β-D-glicopiranose subunidades anidras.

184. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita fração de DP1 compreende tanto subunidades anidras 1,6- anidro-β-D-glicofuranose quanto 1,6-anidro-β-D- glicopiranose.

185. Método, de acordo com a reivindicação 184, caracterizado pelo fato de que a razão da 1,6-anidro-β-D-

glicofuranose para a 1,6-anidro-β-D-glicopiranose é de cerca de 10:1 a 1:10, de cerca de 9:1 a cerca de 1:10, de cerca de 8:1 a cerca de 1:10, de cerca de 7:1 a cerca de 1:10, de cerca de 6:1 a cerca de 1:10, de cerca de 5:1 a cerca de 1:10, de cerca de 4:1 a cerca de 1:10, de cerca de 3:1 a cerca de 1:10, de cerca de 2:1 a cerca de 1:10, de cerca de 10:1 a cerca de 1:9, de cerca de 10:1 a cerca de 1:8, de cerca de 10:1 a cerca de 1:7, de cerca de 10:1 a cerca de 1:6, de cerca de 10:1 a cerca de 1:5, de cerca de 10:1 a cerca de 1:4, de cerca de 10:1 a cerca de 1:3, de cerca de 10:1 a cerca de 1:2 ou de cerca de 1:1 a cerca de 3:1 na reparação de oligossacarídeo.

186. Método, de acordo com a reivindicação 184 ou 185, caracterizado pelo fato de que uma razão da 1,6-anidro-β-D- glicofuranose para a 1,6-anidro-β-D-glicopiranose é de cerca de 10:1, cerca de 9:1, cerca de 8:1, cerca de 7:1, cerca de 6:1, cerca de 5:1, cerca de 4:1, cerca de 3:1, cerca de 2:1, cerca de 1:1, cerca de 1:2, cerca de 1:3, cerca de 1:4, cerca de 1:5, cerca de 1:6, cerca de 1:7, cerca de 1:8, cerca de 1:9 ou cerca de 1:10 na preparação de oligossacarídeo.

187. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 183-186, caracterizado pelo fato de que uma razão da 1,6-anidro-β-D-glicofuranose a 1,6-anidro-β-D- glicopiranose é de cerca de 2:1 na preparação de oligossacarídeo.

188. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita fração de DP2 compreende pelo menos 5 espécies de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra.

189. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita fração de DP2 compreende cerca de 5 a 10 espécies de oligossacarídeos que contêm subunidade anidra.

190. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo compreende um ou mais produtos de caramelização de açúcar.

191. Método, de acordo com a reivindicação 190, caracterizado pelo fato de que os ditos produtos de caramelização de açúcar são selecionados a partir de um grupo que consiste em: metanol; etanol; furano; metilglioxal; 2- metil furano; acetato de vinila; glicolaldeído; ácido acético; acetol; furfural; 2-furanometanol; 3-furanometanol; 2-hidróxi ciclopent-2-en-1-ona; 5-metil furfural; 2(5H)- furanona; 2 metil ciclopentenolona; levoglicosenona; lactona de hidroxila cíclica; 1,4,3,6-dianidro-α-D-glicopiranose; dianidro glicopiranose; e 5-hidróxi metil furfural (5-hmf).

192. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que mais que 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 % ou 99 % dos oligossacarídeos que contêm subunidade anidra compreendem uma subunidade anidra de extremidade de cadeia.

193. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular ponderal médio de cerca de 300 a cerca de 5000 g/mol, como determinado por cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC).

194. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-193, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular ponderal médio de cerca de 300 a cerca de 2500 g/mol, como determinado por HPLC.

195. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-193, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular ponderal médio de cerca de 500 a cerca de 2000 g/mol, como determinado por HPLC.

196. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-193, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular ponderal médio de cerca de 500 a cerca de 1500 g/mol, como determinado por HPLC.

197. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-193, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular numérico médio de cerca de 300 a cerca de 5000 g/mol, como determinado por HPLC.

198. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-193, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular numérico médio de cerca de 300 a cerca de 2500 g/mol, como determinado por HPLC.

199. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-193, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular numérico médio de cerca de 500 a cerca de 2000 g/mol, como determinado por HPLC.

200. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-193, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular numérico médio de cerca de 500 a cerca de 1500 g/mol, como determinado por HPLC.

201. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-193, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular ponderal médio de cerca de 2000 a cerca de 2800 g/mol.

202. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-193, caracterizado pelo fato de que a dita preparação de oligossacarídeo tem um peso molecular numérico médio de cerca de 1000 a cerca de 2000 g/mol.