JP2022512873A - Ｂ型肝炎ウイルス（ｈｂｖ）に対して活性を有する新規尿素６，７－ジヒドロ－４ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン - Google Patents

Abstract

本発明は、概して新規の抗ウイルス薬に関する。具体的には、本発明は、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）によってコードされるタンパク質を阻害することができる、またはＨＢＶ複製サイクルの機能に干渉することができる化合物、そのような化合物を含む組成物、ＨＢＶウイルス複製を阻害する方法、ＨＢＶ感染の治療または予防のための方法、および化合物を製造するためのプロセスおよび中間体に関する。

Description

本発明は、概して、新規抗ウイルス薬に関する。詳細には、本発明は、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）によりコードされたタンパク質を阻害またはＨＢＶ複製サイクルの機能を妨げることができる化合物、かかる化合物を含む組成物、ＨＢＶウイルス複製の阻害方法、ＨＢＶ感染症の治療または予防方法、ならびに該化合物の製造方法に関する。

慢性ＨＢＶ感染症は、世界人口の５％を超える世界の重大な健康問題である（世界的に３５０百万人を超え、米国で１．２５百万人）。予防ＨＢＶワクチンの利用にもかかわらず、慢性ＨＢＶ感染症の負荷は、最善でない治療の選択肢および発展途上世界の大部分における新しい感染症の持続率のせいで未だ対処されていない重大な世界的医療問題であり続けている。現在の治療は治癒を提供せず、２種類の薬剤（インターフェロンαおよびウイルスポリメラーゼのヌクレオシド類似体／阻害剤）のみに限定され；薬剤耐性、低有効性、および耐容性問題はその効果を限定する。

ＨＢＶの低治癒率は、少なくとも部分的に、ウイルス産生の完全抑制が単一抗ウイルス薬で達成するのが困難である事実、ならびに感染肝細胞の核内の共有結合性閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）の存在および持続に起因する。しかしながら、ＨＢＶ ＤＮＡの持続的抑制は、肝疾患進行を遅延し、肝細胞がん（ＨＣＣ）の予防を助ける。

ＨＢＶ感染患者のための現在の治療目標は、血清ＨＢＶ ＤＮＡを低レベルまたは検出できないレベルまで低下させること、ならびに硬変症およびＨＣＣの発症を極めて低減または予防することを対象とする。

ＨＢＶは、ヘパドナウイルスファミリー（ヘパドナウイルス科（Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ））のエンベロープ、部分的二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）ウイルスである。ＨＢＶカプシドタンパク質（ＨＢＶ－ＣＰ）は、ＨＢＶ複製において必要不可欠な役割を果たす。ＨＢＶ－ＣＰの主な生物機能は、プレゲノムＲＮＡをカプシド形成し、細胞質においてカプシドタンパク質二量体の多数の複製物から自然に自己会合する未成熟カプシド粒子を形成する構造タンパク質として働くことである。

ＨＢＶ－ＣＰは、そのＣ末端リン酸化部位の示差的リン酸化により、ウイルスＤＮＡ合成を調節する。ＨＢＶ－ＣＰは、ＨＢＶ－ＣＰのＣ末端領域のアルギニンリッチドメインに位置する核内移行シグナルによって、ウイルス弛緩型環状ゲノムの核移行を促進する可能性がある。

核内では、ウイルスｃｃｃＤＮＡミニ染色体の成分として、ＨＢＶ－ＣＰは、ｃｃｃＤＮＡミニ染色体の機能性における構造的および規則的役割を果たすことができる。ＨＢＶ－ＣＰは、小胞体（ＥＲ）におけるウイルスの大きいエンベロープタンパク質と相互作用し、肝細胞からのインタクトなウイルス粒子の遊離を引き起こす。

ＨＢＶ－ＣＰ関連抗ＨＢＶ化合物は報告されている。例えば、ＡＴ－６１およびＡＴ－１３０と名付けられた化合物を含むフェニルプロペンアミド誘導体（Ｆｅｌｄ Ｊ． ｅｔ ａｌ．Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．２００７，７６，１６８）、ならびにＶａｌｅａｎｔ（国際公開第２００６／０３３９９５号）からのチアゾリジン－４－オンの分類は、プレゲノムＲＮＡ（ｐｇＲＮＡ）パッケージングを阻害することが分かった。

Ｆ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ－Ｌａ Ｒｏｃｈｅ ＡＧは、ＨＢＶ治療のための一連の３－置換テトラヒドロ－ピラゾロ［１，５－ａ］ピラジンを開示した（国際公開第２０１６／１１３２７３号、国際公開第２０１７／１９８７４４号、国際公開第２０１８／０１１１６２号、国際公開第２０１８／０１１１６０号、国際公開第２０１８／０１１１６３号）。

ヘテロアリールジヒドロピリミジン（ＨＡＰ）は、組織培養ベーススクリーニングにおいて発見された（Ｗｅｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．２００２，５４，６９）。これらのＨＡＰ類似体は、合成アロステリックアクチベーターとして働き、ＨＢＶ－ＣＰの分解をもたらす異常カプシド形成を誘発することができる（国際公開第９９／５４３２６号、国際公開第００／５８３０２号、国際公開第０１／４５７１２号、国際公開第０１／６８４０号）。さらなるＨＡＰ類似体が記載されている（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１６，５９（１６），７６５１－７６６６）。

Ｆ．Ｈｏｆｆｍａｎ－Ｌａ ＲｏｃｈｅからのＨＡＰのサブクラスも、ＨＢＶに対する活性を示す（国際公開第２０１４／１８４３２８号、国際公開第２０１５／１３２２７６号、および国際公開第２０１６／１４６５９８号）。Ｓｕｎｓｈｉｎｅ Ｌａｋｅ Ｐｈａｒｍａからの同様なサブクラスも、ＨＢＶに対する活性を示す（国際公開第２０１５／１４４０９３号）。さらなるＨＡＰも、ＨＢＶに対する活性を有し（国際公開第２０１３／１０２６５５号、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１７，２５（３）ｐｐ．１０４２－１０５６）、Ｅｎａｎｔａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓからの同様なサブクラスは同様な活性を示す（国際公開第２０１７／０１１５５２号）。Ｍｅｄｓｈｉｎｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙからのさらなるサブクラスは、同様な活性を示す（国際公開第２０１７／０７６２８６号）。さらなるサブクラス（Ｊａｎｓｓｅｎ Ｐｈａｒｍａ）は、同様な活性を示す（国際公開第２０１３／１０２６５５号）。

ピリダゾン類およびトリアジノン類のサブクラス（Ｆ．Ｈｏｆｆｍａｎ－Ｌａ Ｒｏｃｈｅ）も、ＨＢＶに対する活性を示し（国際公開第２０１６／０２３８７７号）、テトラヒドロピリドピリジン類のサブクラスもＨＢＶに対する活性を示す（国際公開第２０１６／１７７６５５号）。Ｒｏｃｈｅからの三環式４－ピリドン－３－カルボン酸誘導体のサブクラスも同様な抗ＨＢＶ活性を示す（国際公開第２０１７／０１３０４６号）。

Ｎｏｖｉｒａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（現Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｉｎｃ．の一部門）からのスルファモイル－アリールアミドのサブクラスもＨＢＶに対して活性を示す（国際公開第２０１３／００６３９４号、国際公開第２０１３／０９６７４４号、国際公開第２０１４／１６５１２８号、国際公開第２０１４／１８４３６５号、国際公開第２０１５／１０９１３０号、国際公開第２０１６／０８９９９０号、国際公開第２０１６／１０９６８４号、国際公開第２０１６／１０９６８９号、国際公開第２０１７／０５９０５９号）。

チオエーテル－アリールアミドの同様なサブクラス（Ｎｏｖｉｒａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓから）は、ＨＢＶに対する活性を示す（国際公開第２０１６／０８９９９０号）。加えて、アリール－アゼパンのサブクラス（Ｎｏｖｉｒａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓから）は、ＨＢＶに対する活性を示す（国際公開第２０１５／０７３７７４号）。Ｅｎａｎｔａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓからのアリールアミドの同様なサブクラスは、ＨＢＶに対する活性を示す（国際公開第２０１７／０１５４５１号）。

Ｊａｎｓｓｅｎ Ｐｈａｒｍａからのスルファモイル誘導体も、ＨＢＶに対する活性を有することが分かった（国際公開第２０１４／０３３１６７号、国際公開第２０１４／０３３１７０号、国際公開第２０１７００１６５５号、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ，２０１８，６１（１４）６２４７－６２６０）。

Ｊａｎｓｓｅｎ Ｐｈａｒｍａからのグリオキサミド置換ピロールアミド誘導体のサブクラスも、ＨＢＶに対する活性を有することが分かった（国際公開第２０１５／０１１２８１号）。Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓの同様なサブクラスのグリオキサミド置換ピロールアミドもＨＢＶに対する活性を有している（国際公開第２０１８／０３９５３１号）。

Ｅｎａｎｔａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓからのスルファモイル－およびオキサリル－ヘテロビアリールのサブクラスも、ＨＢＶに対する活性を示す（国際公開第２０１６／１６１２６８号、国際公開第２０１６／１８３２６６号、国際公開第２０１７／０１５４５１号、国際公開第２０１７／１３６４０３号および米国特許出願公開第２０１７／０２５３６０９号）。

Ａｓｓｅｍｂｌｙ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓからのアニリン－ピリミジン類のサブクラスも、ＨＢＶに対する活性を示す（国際公開第２０１５／０５７９４５号、国際公開第２０１５／１７２１２８号）。Ａｓｓｅｍｂｌｙ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓからの融合三環類のサブクラス（ジベンゾ－チアゼピノン類、ジベンゾ－ジアゼピノン類、ジベンゾ－オキサゼピノン類）は、ＨＢＶに対する活性を示す（国際公開第２０１５／１３８８９５号、国際公開第２０１７／０４８９５０号）。

一連の環式スルファミドは、Ａｓｓｅｍｂｌｙ ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓによりＨＢＶ－ＣＰ機能のモジュレーターとして記載されている（国際公開第２０１８／１６０８７８号）。

Ａｒｂｕｔｕｓ Ｂｉｏｐｈａｒｍａは、ＨＢＶ治療のための一連のベンゾアミド類を開示した（国際公開第２０１８／０５２９６７号、国際公開第２０１８／１７２８５２号）。

小分子ビスＡＮＳは、分子「楔」として働き、正常なカプシドタンパク質の幾可学的形状およびカプシド形成を妨げることも分かった（Ｚｌｏｔｎｉｃｋ Ａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．２００２，４８４８）。

特に関連性があるのは、密接に関連する化合物（Ｎｏｖｉｒａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）を開示している国際公開第２０１６／１０９６６３号である。

ＨＢＶ直接作用抗ウイルス薬が出会う問題は、有害性、変異原性、選択性の欠如、有効性不良、バイオアベイラビリティ不良、低溶解性および合成の難しさである。したがって、これらのデメリットの少なくとも１つを克服または作用強度の増強もしくは安全性ウインドウの増大などさらなる利点を有し得るＨＢＶの治療、寛解または予防のためのさらなる阻害薬に対する必要性がある。

単剤療法または他のＨＢＶ治療もしくは補助治療との組合せのいずれかとして、ＨＢＶ感染患者へのかかる治療薬の投与は、著しいウイルス負荷低減、予後改善、疾病進行減少および／または血清変換率増強をもたらすだろう。

本明細書では、それを必要とする対象におけるＨＢＶ感染症の治療または予防に有用な化合物、およびその製造に有用な中間体を提供する。本発明の主題は、式Ｉ：

の化合物であり、上記式中、
－Ｒ１は、任意選択でハロゲン、Ｃ１～Ｃ４－アルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ４－ハロアルキルまたはＣ≡Ｎにより１回、２回、または３回置換されている、フェニルまたはピリジルであり；
－Ｒ２は、Ｈまたはメチルであり；
－Ｒ３は、ＨまたはＣ１～Ｃ４－アルキルであり、上記Ｃ１～Ｃ４－アルキルは任意選択で重水素、ハロゲンもしくはＣ≡Ｎで１回、２回、もしくは３回置換されており；
－Ｒ４は、Ｒ４がＲ３と連結するという条件でＣ１～Ｃ２－アルキル、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－Ｏ－Ｃ１～Ｃ４－アルキル、Ｃ１～Ｃ２－ヒドロキシアルキル、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－Ｏ－Ｃ１～Ｃ４－ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－Ｏ－Ｃ３～Ｃ６－シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－Ｓ－Ｃ１～Ｃ４－アルキル、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－ＳＯ₂－Ｃ１～Ｃ４－アルキル、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－Ｃ≡Ｎ、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－Ｃ３～Ｃ７－ヘテロシクロアルキル、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ３～Ｃ７－シクロアルキル）ＮＨ₂、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ１～Ｃ１３－アルキル）ＮＨ₂、Ｃ３～Ｃ７－ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールを含む群から選択され、ここでＣ３～Ｃ７－ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールは、任意選択でハロゲン、ＮＨ₂またはＣ１～Ｃ６－アルキルで１回、２回、または３回置換されており；
－Ｒ３およびＲ４は、任意選択で連結して、５員、６員または７員複素環式環を形成してもよく、上記複素環式環は、非置換またはハロゲン、カルボキシ、ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４－アルコキシ、ＯＣＦ₃、ＯＣＨＦ₂もしくはＣ≡Ｎで１回、２回、もしくは３回置換されており；
－Ｘは、Ｏ、ＣＨ₂、またはＮＲ１１であり；
－ｍは、０、１または２であり；
－Ｒ１１は、ＨまたはＣ１～Ｃ４－アルキルである。

本発明の１つの実施形態では、本発明の主題は、式中、Ｒ１は、任意選択でハロゲン、Ｃ１～Ｃ４－アルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ４－ハロアルキルまたはＣ≡Ｎにより１回、２回、または３回置換されている、フェニルまたはピリジルである、式Ｉの化合物である。

本発明の１つの実施形態では、本発明の主題は、式中、Ｒ２は、Ｈまたはメチルである式Ｉの化合物である。

本発明の１つの実施形態では、本発明の主題は、式中、Ｒ３は、ＨまたはＣ１～Ｃ４－アルキルであり、上記Ｃ１～Ｃ４－アルキルは、任意選択で重水素、ハロゲンまたはＣ≡Ｎで１回、２回、または３回置換されている、式Ｉの化合物である。

本発明の１つの実施形態では、本発明の主題は、式中、Ｒ４は、Ｒ４がＲ３と連結するという条件でＣ１～Ｃ２－アルキル、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－Ｏ－Ｃ１～Ｃ４－アルキル、Ｃ１～Ｃ２－ヒドロキシアルキル、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－Ｏ－Ｃ１～Ｃ４－ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－Ｏ－Ｃ３～Ｃ６－シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－Ｓ－Ｃ１～Ｃ４－アルキル、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－ＳＯ₂－Ｃ１～Ｃ４－アルキル、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－Ｃ≡Ｎ、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－Ｃ３～Ｃ７－ヘテロシクロアルキル、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ３～Ｃ７－シクロアルキル）ＮＨ₂、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ１～Ｃ１３－アルキル）ＮＨ₂、Ｃ３～Ｃ７－ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールを含む群から選択され、ここでＣ３～Ｃ７－ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールは、任意選択でハロゲン、ＮＨ₂またはＣ１～Ｃ６－アルキルで１回、２回、または３回置換されている、式Ｉの化合物である。

本発明の１つの実施形態では、本発明の主題は、式中、Ｒ３およびＲ４は任意選択で連結して、５員、６員または７員ヘテロシクロアルキル環を形成しており、上記ヘテロシクロアルキル環は、非置換またはハロゲン、カルボキシ、ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４－アルコキシ、ＯＣＦ₃、ＯＣＨＦ₂もしくはＣ≡Ｎで１回、２回もしくは３回置換されている、式Ｉの化合物である。

本発明の１つの実施形態では、本発明の主題は、式中、Ｘは、Ｏ、ＣＨ₂またはＮＲ１１である式Ｉの化合物である。

本発明の１つの実施形態では、本発明の主題は、式中、ｍは、０、１または２である、式Ｉの化合物である。

本発明の１つの実施形態では、本発明の主題は、式中、Ｒ１１は、ＨまたはＣ１～Ｃ４－アルキルである、式Ｉの化合物である。

本発明の１つの実施形態は、対象のＨＢＶ感染症の予防または治療で使用するための、本発明に記載の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩である。

本発明の１つの実施形態は、薬学的に許容される担体と共に、本発明に記載の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物である。

本発明の１つの実施形態は、それを必要とする個体におけるＨＢＶ感染症の治療方法であって、本発明に記載の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の治療有効量を該個体に投与することを含む、方法である。

本発明のさらなる実施形態は、それを必要とする対象のＨＢＶ感染症の予防または治療で使用するための、本発明に記載の式ＩＩ：

の化合物またはその薬学的に許容される塩であり、上記式中、
－Ｒ１は、任意選択でハロゲン、Ｃ１～Ｃ４－アルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ４－ハロアルキルまたはＣ≡Ｎにより１回、２回、または３回置換されている、フェニルまたはピリジルであり；
－Ｒ２は、Ｈまたはメチルであり；
－Ｒ３は、非置換または重水素、ハロゲンもしくはＣ≡Ｎで１回、２回、もしくは３回置換されている、Ｃ１～Ｃ４－アルキルであり；
－Ｒ５は、Ｈ、メチル、エチル、イソプロピル、シクロプロピル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、２，２，２－トリフルオロエチル、２，２－ジフルオロエチル、または１，１，１－トリジュウテロメチルである。

１つの実施形態では、本発明の主題は、式中、Ｒ１は、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ４－アルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ４－ハロアルキルまたはＣ≡Ｎにより１回、２回、または３回置換されていてもよい、フェニルまたはピリジルである、式ＩＩに記載の化合物である。

１つの実施形態では、本発明の主題は、式中、Ｒ２は、Ｈまたはメチルである、式ＩＩに記載の化合物である。

１つの実施形態では、本発明の主題は、式中、Ｒ３は、非置換または重水素、ハロゲンもしくはＣ≡Ｎで１回、２回、もしくは３回置換されている、Ｃ１～Ｃ４－アルキルである、式ＩＩに記載の化合物である。

１つの実施形態では、本発明の主題は、式中、Ｒ５は、Ｈ、メチル、エチル、イソプロピル、シクロプロピル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、２，２，２－トリフルオロエチル、２，２－ジフルオロエチル、または１，１，１－トリジュウテロメチルである、式ＩＩに記載の化合物である。

本発明の１つの実施形態は、対象のＨＢＶ感染症の予防または治療で使用するための、本発明に記載の式ＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩である。

本発明の１つの実施形態は、薬学的に許容される担体と共に、本発明に記載の式ＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物である。

本発明の１つの実施形態は、それを必要とする個体におけるＨＢＶ感染症の治療方法であって、本発明に記載の式ＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩の治療有効量を該個体に投与することを含む、方法である。

本発明のさらなる実施形態は、それを必要とする対象のＨＢＶ感染症の予防または治療で使用するための、本発明に記載の式ＩＩＩ：

の化合物またはその薬学的に許容される塩であり、上記式中、
－Ｒ１は、任意選択でハロゲン、Ｃ１～Ｃ４－アルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ４－ハロアルキルまたはＣ≡Ｎにより１回、２回、または３回置換されている、フェニルまたはピリジルであり；
－Ｒ２は、Ｈまたはメチルであり；
－Ｒ３は、非置換または重水素、ハロゲンもしくはＣ≡Ｎで１回、２回、もしくは３回置換されている、Ｃ１～Ｃ４－アルキルであり；
－Ｒ６は、任意選択でハロゲン、ＮＨ₂またはＣ１～Ｃ４－アルキルで１回、２回、または３回置換されている、Ｃ３～Ｃ７－ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールである。

１つの実施形態では、本発明の主題は、式中、Ｒ１は、任意選択でハロゲン、Ｃ１～Ｃ４－アルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ４－ハロアルキルまたはＣ≡Ｎにより１回、２回、または３回置換されている、フェニルまたはピリジルである、式ＩＩＩに記載の化合物である。

１つの実施形態では、本発明の主題は、式中、Ｒ２は、Ｈまたはメチルである、式ＩＩＩに記載の化合物である。

１つの実施形態では、本発明の主題は、式中、Ｒ３は、非置換または重水素、ハロゲンもしくはＣ≡Ｎで１回、２回、もしくは３回置換されている、Ｃ１～Ｃ４－アルキルである、式ＩＩＩに記載の化合物である。

１つの実施形態では、本発明の主題は、式中、Ｒ６は、任意選択でハロゲン、ＮＨ₂またはＣ１～Ｃ４－アルキルで１回、２回、または３回置換されている、Ｃ３～Ｃ７－ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールである、式ＩＩＩに記載の化合物である。

本発明の１つの実施形態は、対象のＨＢＶ感染症の予防または治療で使用するための、本発明に記載の式ＩＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩である。

本発明の１つの実施形態は、薬学的に許容される担体と共に、本発明に記載の式ＩＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物である。

本発明の１つの実施形態は、それを必要とする個体におけるＨＢＶ感染症の治療方法であって、本発明に記載の式ＩＩＩの化合物またはその薬学的に許容される塩の治療有効量を該個体に投与することを含む、方法である。

本発明のさらなる実施形態は、それを必要とする対象のＨＢＶ感染症の予防または治療で使用するための、本発明に記載の式ＩＶ：

の化合物またはその薬学的に許容される塩であり、上記式中、
－Ｒ１は、任意選択でハロゲン、Ｃ１～Ｃ４－アルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ４－ハロアルキルまたはＣ≡Ｎにより１回、２回、または３回置換されている、フェニルまたはピリジルであり；
－Ｒ２は、Ｈまたはメチルであり；
－ｎは、１、２または３であり；
－Ｒ７、Ｒ８、Ｒ１２およびＲ１３は、Ｈ、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４－アルコキシ、ＯＣＨＦ₂、ＯＣＦ₃およびＣ≡Ｎを含む群から各々独立して選択される。

１つの実施形態では、本発明の主題は、式中、Ｒ１は、任意選択でハロゲン、Ｃ１～Ｃ４－アルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ４－ハロアルキルまたはＣ≡Ｎにより１回、２回、または３回置換されている、フェニルまたはピリジルである、式ＩＶに記載の化合物である。

１つの実施形態では、本発明の主題は、式中、Ｒ２は、Ｈまたはメチルである、式ＩＶに記載の化合物である。

１つの実施形態では、本発明の主題は、式中、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ１２およびＲ１３は、Ｈ、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４－アルコキシ、ＯＣＨＦ₂、ＯＣＦ₃およびＣ≡Ｎを含む群から各々独立して選択される、式ＩＶに記載の化合物である。

１つの実施形態では、本発明の主題は、式中、ｎは、１、２または３である、式ＩＶに記載の化合物である。

本発明の１つの実施形態は、対象のＨＢＶ感染症の予防または治療で使用するための、本発明に記載の式ＩＶの化合物またはその薬学的に許容される塩である。

本発明の１つの実施形態は、薬学的に許容される担体と共に、本発明に記載の式ＩＶの化合物またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物である。

本発明の１つの実施形態は、それを必要とする個体におけるＨＢＶ感染症の治療方法であって、本発明に記載の式ＩＶの化合物またはその薬学的に許容される塩の治療有効量を該個体に投与することを含む、方法である。

本発明のさらなる実施形態は、それを必要とする対象のＨＢＶ感染症の予防または治療で使用するための、本発明に記載の式Ｖ：

の化合物またはその薬学的に許容される塩であり、上記式中、
－Ｒ１は任意選択で、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ４－アルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ４－ハロアルキルまたはＣ≡Ｎ Ｃ３～Ｃ６－シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ４－ハロアルキルまたはＣ≡Ｎにより１回、２回、または３回置換されている、フェニルまたはピリジルであり；
－Ｒ２は、Ｈまたはメチルであり；
－Ｒ３は、非置換または重水素、ハロゲンもしくはＣ≡Ｎで１回、２回、もしくは３回置換されている、Ｃ１～Ｃ４－アルキルであり；
－Ｒ９およびＲ１０は、ＨおよびＣ１～Ｃ６－アルキルから各々独立して選択され；
－Ｒ９およびＲ１０は任意選択で連結して、Ｃ３～Ｃ７－シクロアルキル環を形成している。

１つの実施形態では、本発明の主題は、式中、Ｒ１は、任意選択でハロゲン、Ｃ１～Ｃ４－アルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ４－ハロアルキルまたはＣ≡Ｎにより１回、２回、または３回置換されている、フェニルまたはピリジルである、式Ｖに記載の化合物である。

１つの実施形態では、本発明の主題は、式中、Ｒ２は、Ｈまたはメチルである、式Ｖに記載の化合物である。

１つの実施形態では、本発明の主題は、式中、Ｒ３は、非置換または重水素、ハロゲンもしくはＣ≡Ｎで１回、２回、もしくは３回置換されている、Ｃ１～Ｃ４－アルキルである、式Ｖに記載の化合物である。

１つの実施形態では、本発明の主題は、式中、Ｒ９およびＲ１０は、ＨおよびＣ１～Ｃ６－アルキルから独立して選択される、式Ｖに記載の化合物である。

１つの実施形態では、本発明の主題は、式中、Ｒ９およびＲ１０は任意選択で連結して、Ｃ３～Ｃ７－シクロアルキル環を形成している、式Ｖに記載の化合物である。

本発明の１つの実施形態は、それを必要とする対象のＨＢＶ感染症の予防または治療で使用するための、本発明に記載の式Ｖの化合物またはその薬学的に許容される塩である。

本発明の１つの実施形態は、薬学的に許容される担体と共に、本発明に記載の式Ｖの化合物またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物である。

本発明の１つの実施形態は、それを必要とする個体におけるＨＢＶ感染症の治療方法であって、本発明に記載の式Ｖの化合物またはその薬学的に許容される塩の治療有効量を該個体に投与することを含む、方法である。

いくつかの実施形態では、本発明の化合物の投与量は、約１ｍｇ～約２，５００ｍｇである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている組成物において使用される本発明の化合物の投与量は、約１０，０００ｍｇ未満、または約８，０００ｍｇ未満、または約６，０００ｍｇ未満、または約５，０００ｍｇ未満、または約３，０００ｍｇ未満、または約２，０００ｍｇ未満、または約１，０００ｍｇ未満、または約５００ｍｇ未満、または約２００ｍｇ未満、または約５０ｍｇ未満である。同様に、いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている第二化合物（すなわち、ＨＢＶ治療のための別の薬剤）は、約１，０００ｍｇ未満、または約８００ｍｇ未満、または約６００ｍｇ未満、または約５００ｍｇ未満、または約４００ｍｇ未満、または約３００ｍｇ未満、または約２００ｍｇ未満、または約１００ｍｇ未満、または約５０ｍｇ未満、または約４０ｍｇ未満、または約３０ｍｇ未満、または約２５ｍｇ未満、または約２０ｍｇ未満、または約１５ｍｇ未満、または約１０ｍｇ未満、または約５ｍｇ未満、または約２ｍｇ未満、または約１ｍｇ未満、または約０．５ｍｇ未満、ならびにそのいずれかおよび全ての増分全体または部分的増分である。全ての前述の投与量は、患者当たりの一日の投与量を表す。

概して、一日の抗ウイルス効果量は、約０．０１～約５０ｍｇ／体重ｋｇ、または約０．０１～約３０ｍｇ／体重ｋｇであろうと考えられる。おそらく、１日を通して適切な間隔をおいて２回、３回、４回以上のサブ用量として必要な投与量を投与することが適切であるかもしれない。上記サブ用量を、例えば、単位剤形当たり、約１～約５００ｍｇ、または約１～約３００ｍｇ、または約１～約１００ｍｇ、または約２～約５０ｍｇの有効成分を含む単位剤形として製剤してよい。

本発明の化合物は、その構造に依存して、塩、溶媒和物または水和物として存在し得る。したがって、本発明は、塩、溶媒和物または水和物およびそのそれぞれの混合物も包含する。

本発明の化合物は、その構造に依存して、互変異性体または立体異性体（鏡像異性体、ジアステレオマー）で存在し得る。したがって、本発明は、互変異性体、鏡像異性体またはジアステレオマーおよびそのそれぞれの混合物も包含する。立体異性体的に均一な成分を、かかる鏡像異性体および／またはアステレオマーの混合物から公知の方法で単離することができる。

定義
本発明を説明するために使用される様々な用語の定義を下記に示す。これらの定義は、個別あるいはより大きな群の一部として特定の場合に別段に限定されない限り、本明細書およびクレームの全体を通して使用される用語に適用する。

特に定義されない限り、本明細書で使用される図部手の技術用語および科学用語は、概して、本発明が属する技術分野の当業者により共通に理解されるのと同じ意味を有する。概して、本明細書で使用される命名法および細胞培養、分子遺伝学、有機化学およびペプチド化学における実験手順は、周知のものであり、当技術分野において通常に使用される。

本明細書で使用されるとき、冠詞「ａ」および「ａｎ」は、冠詞の客語の１つまたは１つより多く（すなわち、少なくとも１つ）を表す。一例として、「ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ（要素）」は、１つの要素または１つより多い要素を意味する。さらに、用語「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（含む）」、ならびに「ｉｎｃｌｕｄｅ（含む）」、「ｉｎｃｌｕｄｅｓ（含む）」および「ｉｎｃｌｕｄｅｄ（含まれた）」などの他の形式の使用は限定されない。

本明細書で使用されるとき、用語「カプシドアセンブリモジュレーター」は、正常カプシドの会合（例えば、成熟中）もしくは正常カプシドの脱会合（例えば、感染中）を破壊もしくは促進もしくは阻害もしくは妨害もしくは遅延もしくは低減もしくは変更またはカプシドの安定性を撹乱させて、それにより、異常なカプシドの形態もしくは異常なカプシドの機能を誘発する化合物を表す。１つの実施形態では、カプシドアセンブリモジュレーターは、カプシド会合または脱会合を促進し、それにより、異常なカプシド形態を誘発する。別の実施形態では、カプシドアセンブリモジュレーターは、主要カプシドアセンブリタンパク質（ＨＢＶ－ＣＰ）と相互作用（例えば、活性部位において結合、アロステリック部位において結合またはフォールディングを変更および／もしくは妨害など）し、それにより、カプシド会合もしくは脱会合を撹乱する。さらに別の実施形態では、カプシドアセンブリモジュレーターは、ＨＢＶ－ＣＰの構造または機能（例えば、ＨＢＶ－ＣＰが会合、脱会合、基質と結合、適切な高次構造へフォールドする能力またはウイルス感染を減弱するおよび／またはウイルスに対して致命的である同様の能力）の撹乱を引き起こす。

本明細書で使用されるとき、用語「ｔｒｅａｔｍｅｎｔ（治療）」または「ｔｒｅａｔｉｎｇ（治療すること）」は、ＨＢＶ感染症、ＨＢＶ感染症の症状またはＨＢＶ感染症に罹る可能性を治癒（ｃｕｒｅ）、治癒（ｈｅａｌ）、緩和、解放、変更、治療、寛解、改善または影響する目的で、治療薬、すなわち、本発明の化合物（単独または別の医薬品と組み合わせて）を患者に適用または投与すること、または治療薬をＨＢＶ感染症、ＨＢＶ感染症の症状に罹患している、もしくはＨＢＶ感染症に罹る可能性がある患者由来の単離組織もしくは細胞株（例えば、診断または生体外適用のため）に治療薬を適用もしくは投与することと定義される。かかる治療は、薬理ゲノミクス分野から得られる知見に基づいて特別に目的に合わせたり、変更したりしてよい。

本明細書で使用されるとき、用語「ｐｒｅｖｅｎｔ（予防する）」または「ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ（予防）」は、何も起こらなかった場合、障害にも疾病にも罹らない、または障害もしくは疾病に既に罹っている場合、さらに障害にも疾病にも罹らないことを意味する。障害または疾病に関連する症状のいくつかまたは全てを予防する能力とも考えられる。

本明細書で使用されるとき、用語「患者」、「個体」または「対象」は、ヒトまたは非ヒト哺乳類を表す。非ヒト哺乳類としては、例えば、ヒツジ、ウシ、ブタ、ネコ、およびマウス哺乳類などの家畜およびペットが挙げられる。好ましくは、患者、対象、または個体は、ヒトである。

本明細書で使用されるとき、用語「有効量」、「薬剤的有効量」、および「治療有効量」は、無毒であるが、所望の生物学的結果を得るのに充分な薬剤量を表す。この結果は、疾病の徴候、症状、もしくは原因の低減および／もしくは緩和、または生物システムの他の所望の変更であってよい。いずれかの個体の症例における適切な治療用の量を、日常実験を使用して当業者によって決定してよい。

本明細書で使用されるとき、用語「薬学的に許容される」は、化合物の生物活性または特性を抑制せず、比較的無毒性である担体または希釈剤などの物質を表し、すなわち、該物質を、望ましくない生物学的作用を引き起こさず、それに含まれる組成物の成分のいずれかと有害に相互作用しないで個体に投与することができる。

本明細書で使用されるとき、用語「薬学的に許容される塩」は、親化合物が存在する酸または塩基部分がその塩形態へ転換することによって修飾される本開示の化合物の誘導体を表す。薬学的に許容される塩の例としては、アミンなどの塩基性残基の鉱酸塩または有機酸塩；カルボン酸などの酸性残基のアルカリ塩または有機塩；および同様のものが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の薬学的に許容される塩としては、例えば、無毒性無機酸または有機酸から生成された親化合物の従来の無毒性塩が挙げられる。本発明の薬学的に許容される塩を、従来の化学的方法による塩基性または酸性部分を含有する親化合物から合成することができる。概して、水もしくは有機溶媒または２つの混合物；エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、もしくはアセトニトリルのような一般的に非水性の媒体が好ましい；中において、これらの化合物の遊離酸または遊離塩基の形態と、適切な塩基または酸の化学量論量とを反応させることによって、かかる塩を製造することができる。適切な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １７^th ｅｄ．Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５ ｐ．１４１８およびＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２（１９７７）において見ることができ、これらの参考文献の各々はその全文を参照することによって本明細書に組み入れられる。

本明細書で使用されるとき、用語「組成物」または「医薬組成物」は、本発明内で有用な少なくとも１つの化合物と薬学的に許容される担体との混合物を表す。医薬組成物は、化合物の患者または対象への投与を容易にする。化合物投与の多くの技術が当該技術分野に存在し、静脈内、経口、エアロゾル、直腸、非経口、眼内、肺内および局所投与が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で使用されるとき、用語「薬学的に許容される担体」は、液体または固体フィラー、安定剤、分散剤、懸濁剤、希釈剤、賦形剤、増粘剤、その目的機能を行うように本発明内で有用な化合物を患者内もしくは患者へ運搬または輸送することに関連する溶媒またはカプセル化物質などの、薬学的に許容される物質、組成物または担体を意味する。通常、１つの臓器または身体の部分から、別の臓器または身体の部分へ、かかる構築物を運搬または輸送する。各担体は、本発明内で使用される化合物を含む製剤の他の成分と混合可能であり、患者に対して有害でないという意味で「許容され（ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ）」なければならない。薬学的に許容される担体の役割をし得る物質のいくつかの例としては：ラクトース、グルコースおよびショ糖などの糖類；トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプンなどのデンプン類；カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロースなどのセルロースおよびその誘導体；トラガント末；麦芽、ゼラチン、タルク；カカオ脂および坐薬用ワックスなどの賦形剤；ピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびダイズ油などの油類；プロピレングリコールなどのグリコール類；グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールなどのポリオール類；オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル類；寒天；水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；界面活性剤；アルギニン酸；発熱性物質除去水；等張性食塩水；リンゲル液；エチルアルコール；リン酸バッファーならびに医薬製剤に使用される他の無毒性適合性物質が挙げられる。

本明細書で使用されるとき、「薬学的に許容される担体」は、いずれかおよび全てのコーティング、抗菌および抗真菌薬ならびに吸収遅延剤ならびに本発明内で有用な化合物の活性に適合し、患者に対して生理的に許容可能である同様のものも挙げられる。補足活性化合物を組成物中に混合してもよい。「薬学的に許容される担体」としては、本発明内で有用な化合物の薬学的に許容される塩をさらに挙げることができる。本発明の実施において使用される医薬組成物中に含有させてよい他の追加成分は当技術分野で公知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｇｅｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５）に記載されており、該参考文献は参照することにより本明細書に組み入れられる。

本明細書で使用されるとき、用語「ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ（置換された）」は、原子または原子の基が別の基と結合した置換基として水素を置換していることを意味する。

本明細書で使用されるとき、用語「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」は、選択肢「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ（から成る）」も包含する。

本明細書で使用されるとき、用語「アルキル」は、それ自体または別の置換基の一部として、特に明記されない限り、指定された炭素原子数（すなわち、Ｃ１～Ｃ６－アルキルは１～６個の炭素原子を意味する）を有する直鎖または分岐鎖炭化水素を意味し、直鎖および分岐鎖を含む。例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル、ネオペンチル、およびヘキシルが挙げられる。加えて、用語「アルキル」は、それ自体または別の置換基の一部として、Ｃ３～Ｃ５炭素環で置換されたＣ１～Ｃ３直鎖炭化水素も意味し得る。例としては、（シクロプロピル）メチル、（シクロブチル）メチルおよび（シクロペンチル）メチルが挙げられる。誤解を避けるために、２つのアルキル部分が基中に存在する場合、アルキル部分は同じでも異なっていてもよい。

本明細書で使用されるとき、用語「アルケニル」は、少なくとも２つの炭素原子および少なくとも１つのＥまたはＺ立体化学のいずれかの炭素－炭素二重結合を含む炭化水素部分から誘導される一価基を意味する。二重結合は、別の基との結合点であってもよく、なくてもよい。アルケニル基（例えば、Ｃ２～Ｃ８－アルケニル）としては、例えば、エテニル、プロペニル、プロパ－１－エン－２－イル、ブテニル、メチル－２－ブテン－１－イル、ヘプテニルおよびオクテニルが挙げられるが、これらに限定されない。誤解を避けるために、２つのアルケニル部分が基中に存在する場合、アルキル部分は同じでも異なっていてもよい。

本明細書で使用されるとき、Ｃ２～Ｃ６－アルキニル基または部分は、２～６個の炭素原子を含む直鎖または分岐鎖アルキニル基または部分、例えば、２～４個の炭素原子を含むＣ２～Ｃ４アルキニル基または部分である。例示的アルキニル基としては、－Ｃ≡ＣＨまたは－ＣＨ₂－Ｃ≡Ｃ、ならびに１－および２－ブチニル、２－ペンチニル、３－ペンチニル、４－ペンチニル、２－ヘキシニル、３－ヘキシニル、４－ヘキシニルおよび５－ヘキシニルが挙げられる。誤解を避けるために、２つのアルキニル部分が基中に存在する場合、２つのアルキニル部分は同じでも異なっていてもよい。

本明細書で使用されるとき、用語「ハロ」または「ハロゲン」は、単独または別の置換基の一部として、特に明記されない限り、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素原子、好ましくはフッ素、塩素、または臭素、より好ましくはフッ素または塩素を意味する。誤解を避けるために、２つのハロ部分が基中に存在する場合、２つのハロ部分は同じでも異なっていてもよい。

本明細書で使用されるとき、通常、Ｃ１～Ｃ６－アルコキシ基またはＣ２～Ｃ６－アルケニルオキシ基は、それぞれ、酸素原子と結合している上記Ｃ１～Ｃ６－アルキル（例えば、Ｃ１～Ｃ４アルキル）基または上記Ｃ２～Ｃ６－アルケニル基（例えば、Ｃ２～Ｃ４アルケニル）基である。

本明細書で使用されるとき、単独または他の用語と組み合わせて使用される用語「アリール」は、特に明記されない限り、１つ以上の環（典型的には１つ、２つまたは３つの環）を含む炭素環式芳香族構造を意味し、かかる環はビフェニルのようにペンダント方式で結合してもよく、ナフタレンのように縮合していてもよい。アリール基の例としては、フェニル、アントラシル、およびナフチルが挙げられる。好ましい例は、フェニル（例えば、Ｃ６－アリール）およびビフェニル（例えば、Ｃ１２－アリール）である。いくつかの実施形態では、アリール基は、６～１６個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態では、アリール基は、６～１２個の炭素原子（例えば、Ｃ６～Ｃ１２－アリール）を有する。いくつかの実施形態では、アリール基は、６個の炭素原子（例えば、Ｃ６－アリール）を有する。

本明細書で使用されるとき、用語「ヘテロアリール」および「複素環式芳香族」は、１つ以上の環（通常、１つ、２つまたは３つの環）を含む芳香族性を有する複素環を表す。ヘテロアリール置換基を炭素原子数によって定義してもよく、例えば、Ｃ１～Ｃ９－ヘテロアリールはヘテロ原子数を含まないヘテロアリール基中に含まれる炭素原子数を示す。例えば、Ｃ１～Ｃ９－ヘテロアリールは、さらに１～４個のヘテロ原子を含むだろう。多環式ヘテロアリールは、部分的に飽和している１つ以上の環を含んでよい。ヘテロアリールの非限定的例としては：

が挙げられる。

さらなるヘテロアリール基の非限定的例としては、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル（例えば、２－および４－ピリミジニルを含む）、ピリダジニル、チエニル、フリル、ピロリル（例えば、２－ピロリルを含む）、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、ピラゾリル（例えば、３－および５－ピラゾリルを含む）、イソチアゾリル、１，２，３－トリアゾリル、ｌ，２，４－トリアゾリル、１，３，４－トリアゾリル、テトラゾリル、１，２，３－チアジアゾリル、１，２，３－オキサジアゾリル，１，３，４－チアジアゾリルおよび１，３，４－オキサジアゾリルが挙げられる。多環式ヘテロ環およびヘテロアリールの非限定的例としては、インドリル（３－、４－、５－、６－および７－インドリルを含む）、インドリニル、キノリル、テトラヒドロキノリル、イソキノリル（例えば、１－および５－イソキノリルを含む），１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリル、シンノリニル、キノキサリニル（例えば、２－および５－キノキサリニルを含む）、キナゾリニル、フタラジニル、１，８－ナフチリジニル、１，４－ベンゾジオキサニル、クマリン、ジヒドロクマリン、１，５－ナフチリジニル、ベンゾフリル（例えば、３－、４－、５－、６－、および７－ベンゾフリルを含む）、２，３－ジヒドロベンゾフリル、１，２－ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾチエニル（例えば、３－、４－、５－、６－，および７－ベンゾチエニルを含む）、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル（例えば、２－ベンゾチアゾリルおよび５－ベンゾチアゾリルを含む）、プリニル、ベンゾイミダゾリル（例えば、２－ベンゾイミダゾリルを含む）、ベンゾトリアゾリル、チオキサンチニル、カルバゾリル、カルボリニル、アクリジニル、ピロリジジニルおよびキノリジジニルが挙げられる。

本明細書で使用されるとき、用語「ハロアルキル」は、通常、１個以上の炭素原子が上記１個以上の上記ハロ原子で置換されている、それぞれ、上記アルキル、アルケニル、アルコキシまたはアルケノキシ基である。ハロアルキルは、モノハロアルキル、ジハロアルキル、およびポリハロアルキルラジカルを包含する。用語「ハロアルキル」としては、フルオロメチル、１－フルオロエチル、ジフルオロメチル、２，２－ジフルオロエチル、２，２，２－トリフルオロエチル、トリフルオロメチル、クロロメチル、ジクロロメチル、トリクロロメチル、ペンタフルオロエチル、ジフルオロメトキシ、およびトリフルオロメトキシが挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で使用されるとき、Ｃ１～Ｃ６－ヒドロキシアルキル基は、１つ以上のヒドロキシ基で置換されている上記Ｃ１～Ｃ６アルキル基である。通常、１つ、２つまたは３つのヒドロキシル基で置換されている。好ましくは、１つのヒドロキシ基で置換されている。

本明細書で使用されるとき、Ｃ１～Ｃ６－アミノアルキル基は、１つ以上のアミノ基で置換されている上記Ｃ１～Ｃ６アルキル基である。通常、１つ、２つまたは３つのアミノ基で置換されている。好ましくは、１つのアミノ基で置換されている。

本明細書で使用されるとき、Ｃ１～Ｃ４－カルボキシアルキル基は、カルボキシル基で置換されている上記Ｃ１～Ｃ４アルキル基である。

本明細書で使用されるとき、Ｃ１～Ｃ４－カルボキサミドアルキル基は、置換または非置換カルボキサミド基で置換されている上記Ｃ１～Ｃ４アルキル基である。

本明細書で使用されるとき、Ｃ１～Ｃ４－アシルスルホンアミド－アルキル基は、一般式Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＳＯ₂ＣＨ₃またはＣ（＝Ｏ）ＮＨＳＯ₂－ｃ－Ｐｒのアシルスルホンアミド基で置換されている上記Ｃ１～Ｃ４アルキル基である。

本明細書で使用されるとき、用語「シクロアルキル」は、環を形成する原子（すなわち、骨格原子）の各々が炭素原子である単環式または多環式非芳香族基を表す。１つの実施形態では、シクロアルキル基は、飽和または部分飽和である。別の実施形態では、シクロアルキル基は、芳香族環と縮合している。シクロアルキル基としては、３～１０環原子を有する基（Ｃ３～Ｃ１０－シクロアルキル）、３～８環原子を有する基（Ｃ３～Ｃ８－シクロアルキル）、３～７環原子を有する基（Ｃ３～Ｃ７－シクロアルキル）および３～６環原子を有する基（Ｃ３～Ｃ６－シクロアルキル）が挙げられる。シクロアルキル基の例証的例としては、以下の部分：

が挙げられるが、これらに限定されない。

単環式シクロアルキルとしては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、およびシクロオクチルが挙げられるが、これらに限定されない。二環式シクロアルキルとしては、テトラヒドロナフチル、インダニル、およびテトラヒドロペンタレンが挙げられるが、これらに限定されない。多環式シクロアルキルとしては、アダマンチンおよびノルボルナンが挙げられる。用語シクロアルキルは、「不飽和非芳香族カルボシクリル」または「非芳香族不飽和カルボシクリル」基を含み、これらの両方は、少なくとも１つの炭素－炭素二重結合または炭素－炭素三重結合を含む本明細書で定義されている非芳香族炭素環を表す。

本明細書で使用されるとき、用語「ヘテロシクロアルキル」および「ヘテロシクリル」は、各々酸素、硫黄および窒素から選択される１～４個の環ヘテロ原子を含む１つ以上の環（通常、１つ、２つまたは３つの環）を含むヘテロ脂環式基を表す。１つの実施形態では、各ヘテロシクリル基は、その環構造中に３～１０個の原子を有するが、但し、上記基の環は２個の隣接する酸素原子も硫黄原子も含まない。１つの実施形態では、各ヘテロシクリル基は、その環構造中に３～１０個の原子を有する縮合二環式環構造を有するが、但し、上記基の環は２個の隣接する酸素原子も硫黄原子も含まない。１つの実施形態では、各ヘテロシクリル基は、その環構造中に３～１０個の原子を有する架橋二環式環構造を有するが、但し、上記基の環は２個の隣接する酸素原子も硫黄原子も含まない。１つの実施形態では、各ヘテロシクリル基は、その環構造中に３～１０個の原子を有するスピロ二環式環構造を有するが、但し、上記基の環は２個の隣接する酸素原子も硫黄原子も含まない。ヘテロシクリル置換基を炭素原子数によって代わりに定義してもよく、例えば、Ｃ２～Ｃ８－ヘテロシクリルはヘテロ原子数を含まないヘテロシクリル基中に含まれる炭素原子数を示す。例えば、Ｃ２～Ｃ８－ヘテロシクリルは、さらに１～４個のヘテロ原子を含むだろう。別の実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は、芳香族環と縮合している。別の実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は、ヘテロアリール環と縮合している。１つの実施形態では、窒素および硫黄ヘテロ原子は酸化されていてもよく、窒素原子は四級化されていてもよい。複素環式構造は、特に明記されない限り、安定構造を提供するいずれかのヘテロ原子または炭素原子と結合してよい。３員ヘテロシクリル基の例としては、アジリジンが挙げられるが、これに限定されない。４員ヘテロシクリル基の例としては、アゼチジンおよびβ－ラクタムが挙げられるが、これらに限定されない。５員ヘテロシクリル基の例としては、ピロリジン、オキサゾリジンおよびチアゾリジンジオンが挙げられるが、これらに限定されない。６員ヘテロシクリル基の例としては、ピペリジン、モルホリン、ピペラジン、Ｎ－アシルピペラジンおよびＮ－アセチルモルホリンが挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロシクリル基の他の非限定的例は、

である。

ヘテロ環の例としては、アジリジン、オキシラン、チイラン、アゼチジン、オキセタン、チエタン、ピロリジン、ピロリン、ピラゾリジン、イミダゾリン、ジオキソラン、スルホラン、２，３－ジヒドロフラン、２，５－ジヒドロフラン、テトラヒドロフラン、チオファン、ピペリジン、１，２，３，６－テトラヒドロピリジン、１，４－ジヒドロピリジン、ピペラジン、モルホリン、チオモルホリン，ピラン、２，３－ジヒドロピラン、テトラヒドロピラン、１，４－ジオキサン、１，３－ジオキサン、１，３－ジオキソラン、ホモピペラジン、ホモピペリジン、１，３－ジオキセパン、４，７－ジヒドロ－ｌ，３－ジオキセピン、およびヘキサメチレンオキシドなどの単環式基が挙げられる。

本明細書で使用されるとき、用語「芳香族」は、１つ以上の多価不飽和環および芳香族性を有する、すなわち、（４ｎ＋２）非局在化π（パイ）電子（ｎは整数である）を有する炭素環または複素環を表す。

本明細書で使用されるとき、単独または他の用語と組み合わせて使用される用語「アシル」は、特に明記されない限り、カルボニル基を介して結合しているアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール基を意味する。

本明細書で使用されるとき、単独または他の用語と組み合わせて使用される用語「カルバモイル」および「置換カルバモイル」は、特に明記されない限り、水素、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールにより任意選択で一置換または二置換されているアミノ基と結合しているカルボニル基を意味する。いくつかの実施形態では、窒素置換基を連結して上記定義されているヘテロシクリル環を形成するだろう。

本明細書で使用されるとき、用語「カルボキシ」は、それ自体または別の置換基の一部として、特に明記されない限り、式Ｃ（＝Ｏ）ＯＨの基を意味する。

本明細書で使用されるとき、用語「カルボキシルエステル」は、それ自体または別の置換基の一部として、特に明記されない限り、式Ｃ（＝Ｏ）ＯＸ（式中、ＸはＣ１～Ｃ６－アルキル、Ｃ３～Ｃ７－シクロアルキル、およびアリールから成る群から選択される）の基を意味する。

本明細書で使用されるとき、用語「プロドラッグ」は、いったん投与されたならば、インビボで式Ｉまたは式ＩＩまたは式ＩＩＩまたは式ＩＶまたは式Ｖの活性代謝物に代謝される形態で投与される式Ｉまたは式ＩＩまたは式ＩＩＩまたは式ＩＶまたは式Ｖの化合物の誘導体を表す。

プロドラッグの様々な形態は、当技術分野において公知である。かかるプロドラッグの例については：Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｈ． Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５） ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ． ４２， ｐ． ３０９－３９６，ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｋ． Ｗｉｄｄｅｒ，ｅｔ ａｌ． （Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８５）； Ａ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｋｒｏｇｓｇａａｒｄ－Ｌａｒｓｅｎ ａｎｄ Ｈ． Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ｃｈａｐｔｅｒ ５ “Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ” ｂｙ Ｈ． Ｂｕｎｄｇａａｒｄ ｐ． １ｌ３－１９１ （１９９１）； Ｈ． Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ８， １－３８ （１９９２）； Ｈ． Ｂｕｎｄｇａａｒｄ， ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，７７， ２８５ （１９８８）； および Ｎ． Ｋａｋｅｙａ， ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｅｍ． Ｐｈａｒｍ． Ｂｕｌｌ．，３２，６９２ （１９８４）参照。

プロドラッグの例としては、式Ｉまたは式ＩＩまたは式ＩＩＩまたは式ＩＶまたは式Ｖの化合物の切断可能なエステルが挙げられる。カルボキシ基を含む本発明の化合物のインビボ切断可能なエステルは、例えば、ヒトまたは動物内において切断されて親酸を生成する薬学的に許容されるエステルである。カルボキシに適切な薬学的に許容されるエステルとしては、Ｃ１～Ｃ６アルキルエステル、例えば、メチルまたはエチルエステル；Ｃ１～Ｃ６アルコキシメチルエステル、例えば、メトキシメチルエステル；Ｃ１～Ｃ６アシルオキシメチルエステル；フタリジルエステル；Ｃ３～Ｃ８シクロアルコキシカルボニルオキシＣ１～Ｃ６アルキルエステル、例えば、１－シクロヘキシルカルボニルオキシエチル；１－３－ジオキソラン－２－イルメチルエステル、例えば、５－メチル－１，３－ジオキソラン－２－イルメチル；Ｃ１～Ｃ６アルコキシカルボニルオキシエチルエステル、例えば、１－メトキシカルボニルオキシエチル；アミノカルボニルメチルエステルおよびそのモノ－もしくはジ－Ｎ－（Ｃ１～Ｃ６－アルキル）変種、例えば、Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノカルボニルメチルエステルおよびＮ－エチルアミノカルボニルメチルエステルが挙げられ、本発明の化合物中のいずれかのカルボキシ基において生成してよい。

ヒドロキシ基を含む本発明の化合物のインビボ切断可能なエステルは、例えば、ヒトまたは動物内において切断されて親ヒドロキシ基を生成する薬学的に許容されるエステルである。ヒドロキシに適切な薬学的に許容されるエステルとしては、Ｃ１～Ｃ６－アシルエステル、例えば、アセチルエステル；ならびにフェニル基がアミノメチルまたはＮ置換モノ－もしくはジ－Ｃ１～Ｃ６アルキルアミノメチルで置換されていてもよいベンゾイルエステル、例えば、４－アミノメチルベンゾイルエステルおよび４－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノメチルベンゾイルエステルが挙げられる。

本発明の好ましいプロドラッグとしては、アセチルオキシおよびカルボネート誘導体が挙げられる。例えば、式Ｉまたは式ＩＩまたは式ＩＩＩまたは式ＩＶまたは式Ｖの化合物のヒドロキシ基は、－Ｏ－ＣＯＲⁱまたは－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＯＲⁱ（式中、Ｒⁱは非置換または置換Ｃ１～Ｃ４アルキルである）としてプロドラッグ中に存在することができる。アルキル基上の置換基は、上記定義の通りである。好ましくは、Ｒⁱ中のアルキル基は非置換であり、好ましくはメチル、エチル、イソプロピルまたはシクロプロピルである。

本発明の他の好ましいプロドラッグとしては、アミノ酸誘導体が挙げられる。適切なアミノ酸としては、これらのＣ（Ｏ）ＯＨ基を介して式Ｉまたは式ＩＩまたは式ＩＩＩまたは式ＩＶまたは式Ｖの化合物と結合したα－アミノ酸が挙げられる。かかるプロドラッグは、インビボで切断して、ヒドロキシ基を有する式Ｉまたは式ＩＩまたは式ＩＩＩまたは式ＩＶまたは式Ｖの化合物を生成する。したがって、好ましくは、かかるアミノ酸基は、ヒドロキシ基が最終的に必要とされる式Ｉまたは式ＩＩまたは式ＩＩＩまたは式ＩＶまたは式Ｖの位置に使用される。したがって、本発明のこの実施形態の例示的プロドラッグは、式－ＯＣ（Ｏ）－ＣＨ（ＮＨ₂）Ｒⁱⁱ（式中、Ｒⁱⁱはアミノ酸側鎖である）の基を有する式Ｉまたは式ＩＩまたは式ＩＩＩまたは式ＩＶまたは式Ｖの化合物である。好ましいアミノ酸としては、グリシン、アラニン、バリンおよびセリンが挙げられる。アミノ酸を官能化することもでき、例えば、アミノ基をアルキル化することができる。適切な官能化アミノ酸は、Ｎ，Ｎ－ジメチルグリシンである。好ましくは、アミノ酸は、バリンである。

本発明の他の好ましいプロドラッグとしては、ホスホロアミデート誘導体が挙げられる。ホスホロアミデートプロドラッグの様々な形態は、当技術分野において公知である。かかるプロドラッグの例については、Ｓｅｒｐｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｔｏｃ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍ．２０１３，Ｃｈａｐｔｅｒ １５，Ｕｎｉｔ １５．５およびＭｅｈｅｌｌｏｕ ｅｔ ａｌ．，ＣｈｅｍＭｅｄＣｈｅｍ，２００９，４ ｐｐ．１７７９－１７９１参照。適切なホスホロアミデートとしては、これらの－ＯＨ基を介して式Ｉの化合物と結合した（フェノキシ）－α－アミノ酸が挙げられる。かかるプロドラッグは、インビボで切断して、ヒドロキシ基を有する式Ｉまたは式ＩＩまたは式ＩＩＩまたは式ＩＶまたは式Ｖの化合物を生成する。したがって、好ましくは、かかるホスホロアミデート基は、ヒドロキシ基が最終的に必要とされる式Ｉの位置に使用される。したがって、本発明のこの実施形態の例示的プロドラッグは、式－ＯＰ（Ｏ）（ＯＲⁱⁱⁱ）Ｒ^ivの基を有する式Ｉまたは式ＩＩまたは式ＩＩＩまたは式ＩＶまたは式Ｖの化合物であって、上記式中、Ｒⁱⁱⁱはアルキル、シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、Ｒ^ivは、式－ＮＨ－ＣＨ（Ｒ^v）Ｃ（Ｏ）ＯＲ^vi（式中、Ｒ^vはアミノ酸側鎖であり、Ｒ^viはアルキル、シクロアルキル、アリールまたはヘテロシクリルである）の基である。好ましいアミノ酸としては、グリシン、アラニン、バリンおよびセリンが挙げられる。好ましくは、アミノ酸は、アラニンである。Ｒ^vは、好ましくはアルキルであり、最も好ましくはイソプロピルである。

本発明の主題はまた、一般化され多形体であっても、以下に具体的に言及される形態であっても、式Ｉまたは式ＩＩまたは式ＩＩＩまたは式ＩＶまたは式Ｖの化合物のプロドラッグである。

本発明の主題は、本発明の化合物の製造方法である。したがって、本発明の主題は、式ＶＩの化合物と式ＶＩＩの化合物との反応による、本発明に記載の式Ｉの化合物の製造方法である。

式中、Ｒ１は上記定義の通りである。

式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｘ、およびｍは、上記定義の通りである。

以下の実施例を参照して、本発明を説明する。これらの実施例は、例証する目的だけで提供し、本発明はこれらの実施例に限定されないが、本明細書に提供されている教示の結果として明白である全ての変化形をむしろ包含する。

ＨＢＶコアタンパク質モジュレーターを、いくつかの方法で製造することができる。スキーム１～３は、この応用の目的のためこれらの製造に使用される主要経路を図示する。当業者にとって、これらの中間体の製造および実施例を達成するだろう他の方法があることは明白であろう。

スキーム１に記載されているＮ保護ピラゾール化合物１（これに限定されないがＳＥＭとして引き抜かれる）を、工程１において、例えば、ＨＡＴＵを用いて、文献（Ａ．Ｅｌ－Ｆａｈａｍ，Ｆ．Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．２０１１，１１１， ６５５７－６６０２）において公知の方法を用いて、アミンとカップリングして一般構造物２を有する化合物を得る。スキーム１における化合物２の窒素保護基は、工程２において脱保護され（国際公開第２００４／０１４３７４号、Ａ．Ｉｓｉｄｒｏ－Ｌｌｏｂｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，２００９，１０９，２４５５－２５０４）、例えば、ＨＣｌを用いて、これに限定されないがＢｏｃおよびＳＥＭとして引き抜かれ、一般構造物３のアミンを得る。文献（Ｐｅａｒｓｏｎ，Ａ．Ｊ．；Ｒｏｕｓｈ，Ｗ．Ｒ．；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ）において周知の方法を用いて工程３におけるウレアを製造する、例えば、フェニルイソシアネートを用いて式Ｉの化合物を得る。

スキーム２に記載されている化合物１は、工程１において、文献（Ｐｅａｒｓｏｎ， Ａ． Ｊ．； Ｒｏｕｓｈ， Ｗ． Ｒ．； Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ）における周知の方法で、例えば、フェニルイソシアネートを含む一般構造２のウレアに転位する。化合物２のエステル基（これに限定されないが、メチルエステルとして引き抜かれる）は、工程２において、例えば、ＬｉＯＨを用いて文献（国際公開第２０１５／０１３３４２８号）の公知の方法を使用して加水分解して、一般構造３のカルボン酸を得る。例えば、ＨＡＴＵを用いて、文献（Ａ．Ｅｌ－Ｆａｈａｍ，Ｆ．Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．２０１１，１１１， ６５５７－６６０２）において公知の方法を用いた、工程３におけるアミドカップリングにより、式Ｉの化合物を得る。

スキーム３に記載されている化合物１を、工程１において、例えば、ＨＡＴＵを用いて、文献（Ａ．Ｅｌ－Ｆａｈａｍ，Ｆ．Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．２０１１，１１１， ６５５７－６６０２）において公知の方法を用いて、アミンとカップリングして一般構造物２を有する化合物を得る。スキーム1における化合物2の窒素保護基は、工程２において脱保護され（国際公開第２０１６／１０９６６３号、Ａ．Ｉｓｉｄｒｏ－Ｌｌｏｂｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，２００９，１０９，２４５５－２５０４）、例えば、ＨＣｌを用いて、これに限定されないがＢｏｃとして引き抜かれ、一般構造物3のアミンを得る。文献（Ｐｅａｒｓｏｎ，Ａ．Ｊ．；Ｒｏｕｓｈ，Ｗ．Ｒ．；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ）において周知の方法を用いて工程３におけるウレアを製造する、例えば、フェニルイソシアネートを用いて式Ｉの化合物を得る。

次の略語を使用する：
Ａ － ＤＮＡ 核酸塩基アデニン
ＡＣＮ － アセトニトリル
Ａｒ － アルゴン
ＢＯＤＩＰＹ－ＦＬ － ４，４－ジフルオロ－５，７－ジメチル－４－ボラ－３ａ，４ａ－ジアザ－ｓ－インダセン－３－プロピオン酸 （蛍光色素）
Ｂｏｃ － ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル
ＢｎＯＨ － ベンジルアルコール
ｎ－ＢｕＬｉ － ｎ－ブチルリチウム
ｔ－ＢｕＬｉ － ｔ－ブチルリチウム
Ｃ － ＤＮＡ 核酸塩基シトシン
ＣＣ₅₀ － ５０％細胞毒性濃度
ＣＯ₂ － 二酸化炭素
ＣｕＣＮ － シアン化銅（Ｉ）
ＤＣＥ － ジクロロエタン
ＤＣＭ － ジクロロメタン
デス－マーチンペルヨージナン － １，１，１－トリアセトキシ－１，１－ジヒドロ－１，２－ベンゾヨードキソール－３（１Ｈ）－オン
ＤＩＰＥＡ － ジイソプロピルエチルアミン
ＤＩＰＥ － ジイソプロピルエーテル
ＤＭＡＰ － ４－ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ － Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＤＭＰ － デス－マーチンペルヨージナン
ＤＭＳＯ － ジメチルスルホキシド
ＤＮＡ － デオキシリボ核酸
ＤＰＰＡ － ジフェニルホスホリルアジド
ＤＴＴ － ジチオスレイトール
Ｅｃ₅₀ － ５０％効果濃度
ＥＤＣＩ － Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ′－エチルカルボジイミド塩酸塩
Ｅｔ₂Ｏ － ジエチルエーテル
ＥｔＯＡｃ － 酢酸エチル
ＥｔＯＨ － エタノール
ＦＬ － － フルオレセイン標識化５’末端
ＮＥｔ₃ － トリエチルアミン
ＥＬＳ － 蒸発光散乱
ｇ － グラム
Ｇ － ＤＮＡ 核酸塩基グアニン
ＨＢＶ － Ｂ型肝炎ウイルス
ＨＡＴＵ － ヘキサフルオロリン酸２－（１Ｈ－７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウム
ＨＣｌ － 塩酸
ＨＥＰＥＳ － ４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸
ＨＯＡｔ － １－ヒドロキシ－７－アザベンゾトリアゾール
ＨＯＢｔ － １－ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＰＬＣ － 高速液体クロマトグラフィー
ＩＣ₅₀ － ５０％阻害濃度
ＬＣ６４０－ －蛍光色素ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ（登録商標） Ｒｅｄ ６４０を用いた３’末端修飾
ＬＣ／ＭＳ － 液体クロマトグラフィー／質量分析
ＬｉＡｌＨ₄ － 水素化アルミニウムリチウム
ＬｉＯＨ － 水酸化リチウム
ＭｅＯＨ － メタノール
ＭｅＣＮ － アセトニトリル
ＭｇＳＯ₄ － 硫酸マグネシウム
ｍｇ － ミリグラム
ｍｉｎ － 分
ｍｏｌ － モル
ｍｍｏｌ － ミリモル
ｍＬ － ミリリットル
ＭＴＢＥ － メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル
Ｎ₂ － 窒素
Ｎａ₂ＣＯ₃ － 炭酸ナトリウム
ＮａＨＣＯ₃ － 炭酸水素ナトリウム
Ｎａ₂ＳＯ₄ － 硫酸ナトリウム
ＮｄｅＩ － ＣＡ＾ＴＡＴＧ部位を認識する制限酵素
ＮＥｔ₃ － トリエチルアミン
ＮａＨ － 水素化ナトリウム
ＮａＯＨ － 水酸化ナトリウム
ＮＨ₃ － アンモニア
ＮＨ₄Ｃｌ － 塩化アンモニウム
ＮＭＲ － 核磁気共鳴
ＰＡＧＥ － ポリアクリルアミドゲル電気泳動
ＰＣＲ － ポリメラーゼ連鎖反応
ｑＰＣＲ － 定量的ＰＣＲ
Ｐｄ／Ｃ － パラジウム炭素
－ＰＨ －３’末端リン酸修飾
ｐＴＳＡ － ４－トルエンスルホン酸
Ｒｔ － 保持時間
ｒ．ｔ．－ 室温
ｓａｔ．－ 飽和水溶液
ＳＤＳ － ドデシル硫酸ナトリウム
ＳＥＭ － ［２－（トリメチルシリル）エトキシ］メチル
ＳＩ － 選択指数（＝ＣＣ₅₀／ＥＣ₅₀）
ＳＴＡＢ － トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム
Ｔ － ＤＮＡ 核酸塩基チミン
ＴＢＡＦ －フッ化テトラブチルアンモニウム
ＴＦＡ － トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ － テトラヒドロフラン
ＴＬＣ － 薄層クロマトグラフィー
Ｔｒｉｓ － トリス（ヒドロキシメチル）－アミノメタン
ＸｈｏＩ － Ｃ＾ＴＣＧＡＧ部位を認識する制限酵素

化合物同定－ＮＭＲ
いくつかの化合物について、プロトン用に４００ＭＨｚおよび炭素用に１００ＭＨｚで運転して５ｍｍ逆三重共鳴プローブヘッドを装備したＢｒｕｋｅｒ ＤＰＸ４００分光計を用いて、ＮＭＲスペクトルを記録した。重水素化溶媒は、クロロホルム－ｄ（重水素化クロロホルム、ＣＤＣｌ₃）またはｄ６－ＤＭＳＯ（重水素化ＤＭＳＯ、ｄ６－ジメチルスルホキシド）であった。化学シフトは、内部標準として使用したテトラメチルシラン（ＴＭＳ）に対する百万分率（ｐｐｍ）で報告している。

化合物同定－ＨＰＬＣ／ＭＳ
いくつかの化合物について、次の分析方法を用いて、ＬＣ－ＭＳスペクトルを記録した。

方法Ａ
カラム－逆相Ｗａｔｅｒｓ Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｃ１８（５０×２．１ｍｍ、３．５ミクロン）
流量－０．８ｍＬ／分、２５℃
溶離液Ａ－９５％アセトニトリル＋５％ １０ｍＭ炭酸アンモニウム水溶液（ｐＨ９）
溶離液Ｂ－１０ｍＭ炭酸アンモニウム水溶液（ｐＨ９）
直線勾配 ｔ＝０分 ５％Ａ、 ｔ＝３．５分 ９８％Ａ、 ｔ＝６分 ９８％Ａ
方法Ａ２
カラム－逆相Ｗａｔｅｒｓ Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｃ１８（５０×２．１ｍｍ、３．５ミクロン）
流量－０．８ｍＬ／分、２５℃
溶離液Ａ－９５％アセトニトリル＋５％ １０ｍＭ炭酸アンモニウム水溶液（ｐＨ９）
溶離液Ｂ－１０ｍＭ炭酸アンモニウム水溶液（ｐＨ９）
直線勾配 ｔ＝０分 ５％Ａ、 ｔ＝４．５分 ９８％Ａ、 ｔ＝６分 ９８％Ａ
方法Ｂ
カラム－逆相Ｗａｔｅｒｓ Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｃ１８（５０×２．１ｍｍ、３．５ミクロン）
流量－０．８ｍＬ／分、３５℃
溶離液Ａ－アセトニトリル中の０．１％ギ酸溶液
溶離液Ｂ－０．１％ギ酸水溶液
直線勾配 ｔ＝０分 ５％Ａ、 ｔ＝３．５分 ９８％Ａ、 ｔ＝６分 ９８％Ａ
方法Ｂ２
カラム－逆相Ｗａｔｅｒｓ Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｃ１８（５０×２．１ｍｍ、３．５ミクロン）
流量－０．８ｍＬ／分、４０℃
溶離液Ａ－アセトニトリル中の０．１％ギ酸溶液
溶離液Ｂ－０．１％ギ酸水溶液
直線勾配 ｔ＝０分 ５％Ａ、 ｔ＝４．５分 ９８％Ａ、 ｔ＝６分 ９８％Ａ
方法Ｃ
カラム－逆相Ｗａｔｅｒｓ Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｃ１８（５０×２．１ｍｍ、３．５ミクロン）
流量－１ｍＬ／分、３５℃
溶離液Ａ－アセトニトリル中の０．１％ギ酸溶液
溶離液Ｂ－０．１％ギ酸水溶液
直線勾配 ｔ＝０分 ５％Ａ、 ｔ＝１．６分 ９８％Ａ、 ｔ＝３分 ９８％Ａ
方法Ｄ
カラム－Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ ＮＸ Ｃ１８（５０×２．０ｍｍ、３．０ミクロン）
流量－０．８ｍＬ／分、３５℃
溶離液Ａ－９５％アセトニトリル＋５％ １０ｍＭ重炭酸アンモニウム水溶液
溶離液Ｂ－１０ｍＭ重炭酸アンモニウム水溶液 ｐＨ＝９．０
直線勾配 ｔ＝０分 ５％Ａ、 ｔ＝３．５分 ９８％Ａ、 ｔ＝６分 ９８％Ａ
方法Ｅ
カラム－Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ ＮＸ Ｃ１８（５０×２．０ｍｍ、３．０ミクロン）
流量－０．８ｍＬ／分、２５℃
溶離液Ａ－９５％アセトニトリル＋５％ １０ｍＭ重炭酸アンモニウム水溶液
溶離液Ｂ－１０ｍＭ重炭酸アンモニウム水溶液（ｐＨ９）
直線勾配 ｔ＝０分 ５％Ａ、 ｔ＝３．５分 ３０％Ａ、 ｔ＝７分 ９８％Ａ、 ｔ＝１０分 ９８％Ａ
方法Ｆ
カラム－Ｗａｔｅｒｓ ＸＳｅｌｅｃｔ ＨＳＳ Ｃ１８（１５０×４．６ｍｍ、３．５ミクロン）
流量－１．０ｍＬ／分、２５℃
溶離液Ａ－アセトニトリル中の０．１％ＴＦＡ溶液
溶離液Ｂ－０．１％ＴＦＡの水溶液
直線勾配 ｔ＝０分 ２％Ａ、 ｔ＝１分 ２％Ａ、 ｔ＝１５分 ６０％Ａ、 ｔ＝２０分 ６０％Ａ
方法Ｇ
カラム－Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ－Ｃ１８ １．８μｍ ４．６×１５ｍｍ Ｒａｐｉｄ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎカートリッジ（ＰＮ８２１９７５－９３２）
流量－３ｍＬ／分
溶離液Ａ－アセトニトリル中の０．１％ギ酸溶液
溶離液Ｂ－０．１％ギ酸水溶液
直線勾配 ｔ＝０分 ０％Ａ、 ｔ＝１．８分 １００％Ａ
方法Ｈ
カラム－Ｗａｔｅｒｓ Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｃ１８（５０×２．１ｍｍ、２．５ミクロン）
流量－０．６ｍＬ／分
溶離液Ａ－アセトニトリル中の０．１％ギ酸溶液
溶離液Ｂ－０．１％ギ酸水溶液
直線勾配 ｔ＝０分 ５％Ａ、 ｔ＝２．０分 ９８％Ａ、 ｔ＝２．７分 ９８％Ａ
方法Ｊ
カラム－逆相Ｗａｔｅｒｓ Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｃ１８（５０×２．１ｍｍ、２．５ミクロン）
流量－０．６ｍＬ／分
溶離液Ａ－１００％アセトニトリル
溶離液Ｂ－１０ｍＭ重炭酸アンモニウム水溶液（ｐＨ７．９）
直線勾配 ｔ＝０分 ５％Ａ、 ｔ＝２．０分 ９８％Ａ、 ｔ＝２．７分 ９８％Ａ

６，６－ジフルオロ－４－アザスピロ［２．４］ヘプタンの製造

工程Ａ：トルエン（３０００ｍＬ）中の無水コハク酸（１００ｇ、１０００ｍｍｏｌ）の溶液に、ベンジルアミン（１０７ｇ、１０００ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を室温で２４時間撹拌し、次いで、ディーン・スターク装置を用いて１６時間加熱還流した。次いで、混合物を減圧下で濃縮して、１－ベンジルピロリジン－２，５－ジオン（１７０ｇ、９００ｍｍｏｌ、収率９０％）を得た。

工程Ｂ：アルゴン雰囲気下の無水ＴＨＦ（２０００ｍＬ）中の１－ベンジルピロリジン－２，５－ジオン（１１４ｇ、６００ｍｍｏｌ）およびＴｉ（Ｏｉ－Ｐｒ）₄（１７０．５ｇ、６００ｍｍｏｌ）の冷却（０℃）混合物に、ＴＨＦ中の臭化エチルマグネシウムの３．４Ｍ溶液（１２００ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を室温まで温め、４時間撹拌した。次いで、ＢＦ₃・Ｅｔ₂Ｏ（１７０ｇ、１２００ｍｍｏｌ）を滴下し、溶液を６時間撹拌した。混合物を冷却（０℃）し、３Ｎ塩酸（５００ｍＬ）を添加した。混合物をＥｔ₂Ｏで２回抽出し、合わせた有機抽出物を塩水で洗浄し、乾燥し、減圧下で濃縮して、４－ベンジル－４－アザスピロ［２．４］ヘプタン－５－オン（３０．２ｇ、１５０ｍｍｏｌ、収率２５％）を得た。

工程Ｃ：アルゴン下の無水ＴＨＦ（１０００ｍＬ）中の４－ベンジル－４－アザスピロ［２．４］ヘプタン－５－オン（３４．２ｇ、１７０ｍｍｏｌ）の冷却（－７８℃）溶液に、ＴＨＦ中のＬｉＨＭＤＳ（１．１Ｍ溶液、２４０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１時間撹拌し、次いで、ＴＨＦ（２００ｍＬ）中のＮ－フルオロベンゼンスルホンイミド（７５．７ｇ、２４０ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。混合物を室温まで温め、６時間撹拌した。次いで、混合物を再冷却（－７８℃）し、ＴＨＦ中のＬｉＨＭＤＳ（１．１ＭのＴＨＦ溶液、２４０ｍｍｏｌ）を添加した。

溶液を１時間撹拌し、次いで、ＴＨＦ（２００ｍＬ）中のＮ－フルオロベンゼンスルホンイミド（７５．７ｇ、２４０ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。混合物を室温まで温め、６時間撹拌した。混合物をＮＨ₄Ｃｌの飽和溶液（３００ｍＬ）に注ぎ、Ｅｔ₂Ｏで２回抽出した。合わせた有機抽出物を、塩水で洗浄し、減圧下で濃縮した。生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、４－ベンジル－６，６－ジフルオロ－４－アザスピロ［２．４］ヘプタン－５－オン（１８ｇ、７５．９ｍｍｏｌ、収率４５％）を得た。

工程Ｄ：ＴＨＦ（２００ｍＬ）中のＢＨ₃・Ｍｅ₂Ｓ（３．４２ｇ、４５ｍｍｏｌ）の温（４０℃）溶液に、４－ベンジル－６，６－ジフルオロ－４－アザスピロ［２．４］ヘプタン－５－オン（１１．９ｇ、５０ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を４０℃で２４時間撹拌し、次いで、室温まで冷却した。水（５０ｍＬ）を滴下し、混合物をＥｔ₂Ｏ（２×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を塩水で洗浄し、ジオキサン（５０ｍＬ）中のＨＣｌの１０％溶液で希釈し、減圧下で蒸発させて、４－ベンジル－６，６－ジフルオロ－４－アザスピロ［２．４］ヘプタン（３ｇ、１３．４ｍｍｏｌ、収率２７％）を得た。

工程Ｅ：メタノール（５００ｍＬ）中の４－ベンジル－６，６－ジフルオロ－４－アザスピロ［２．４］ヘプタン（２．６８ｇ、１２ｍｍｏｌ）およびメタノール（５００ｍＬ）中の水酸化パラジウム（０．５ｇ）を、Ｈ₂雰囲気下、室温で２４時間撹拌した。混合物をろ過し、次いで、減圧下で濃縮して、６，６－ジフルオロ－４－アザスピロ［２．４］ヘプタン（０．８ｇ、６．０１ｍｍｏｌ、収率５０％）を得た。

７，７－ジフルオロ－４－アザスピロ［２．４］ヘプタンの製造

工程Ａ：ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の１－ベンジルピロリジン－２，３－ジオン（８ｇ、４２．３ｍｍｏｌ）の冷却（０℃）溶液に、ＤＡＳＴ（２０．４ｇ、１２７ｍｍｏｌ）を３０分かけて滴下した。混合物を室温で一夜撹拌し、次いで、飽和ＮａＨＣＯ₃の滴下によりクエンチした。有機層を分離し、水性分画をＤＣＭ（２×５０ｍＬ）で２回抽出した。合わせた有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、減圧下で濃縮して、１－ベンジル－３，３－ジフルオロピロリジン－２－オン（２６．０ｍｍｏｌ、収率６１％）を得て、これをさらに精製することなく次工程で使用した。

工程Ｂ：ＴＨＦ（３００ｍＬ）中の粗１－ベンジル－３，３－ジフルオロピロリジン－２－オン（５．５ｇ、２６ｍｍｏｌ）およびＴｉ（Ｏｉ－Ｐｒ）₄（２３．４ｍＬ、７８ｍｍｏｌ）の溶液に、２－ＭｅＴＨＦ中のＥｔＭｇＢｒの３．４Ｍ溶液（４５．８ｍＬ、１５６ｍｍｏｌ）を、アルゴン雰囲気下で滴下した。１２時間撹拌後、水（１０ｍＬ）を添加して白色沈殿物を得た。沈殿物を、ＭＴＢＥ（３×５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機分画を、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥し、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン－ＥｔＯＡｃ ９：１）により精製して、４－ベンジル－７，７－ジフルオロ－４－アザスピロ［２．４］ヘプタン（１．３ｇ、５．８２ｍｍｏｌ、収率２２％）を淡黄色油状物として得た。

工程Ｃ：４－ベンジル－７，７－ジフルオロ－４－アザスピロ［２．４］ヘプタン（０．５５ｇ、２．４６ｍｍｏｌ）を、ＣＨＣｌ₃（１ｍＬ）の溶液中に溶解し、ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）およびＰｄ／Ｃ（０．２ｇ、１０％）を添加した。混合物をＨ₂雰囲気下で５時間撹拌し、次いで、ろ過した。ろ液を濃縮して、７，７－ジフルオロ－４－アザスピロ［２．４］ヘプタン（０．１６４ｇ、１．２３ｍｍｏｌ、収率５０％）を得た。

１－［（ジフルオロメトキシ）メチル］－Ｎ－メチルシクロプロパン－１－アミンの合成

工程Ａ：Ｎ₂下の無水ＴＨＦ（５ｍｌ）中の１－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）シクロプロパン－１－カルボン酸メチル（１．０５ｇ、４．５８ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化ホウ素リチウム（１．２５９ｍｌ、４ＭのＴＨＦ溶液、５．０４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で４日間撹拌した。硫酸ナトリウムおよび水を添加し、混合物を硫酸ナトリウムパッドによりろ過して、これをジクロロメタンでリンスした。ろ液を濃縮して、（１－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル）（メチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチルを白色固体（０．９０４ｇ、収率９５％）として得た。

工程Ｂ：ジクロロメタン（０．５ｍｌ）中の（１－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル）（メチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（０．１００ｇ、０．４９７ｍｍｏｌ）および（ブロモジフルオロメチル）トリメチルシラン（０．１５５ｍｌ、０．９９４ｍｍｏｌ）の溶液に、酢酸カリウム（０．１９５ｇ、１．９８７ｍｍｏｌ）水（０．５ｍｌ）溶液の１滴を添加した。混合物を４０時間撹拌した。混合物をジクロロメタンおよび水で希釈し、有機層を分離して、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン中の２０％酢酸エチル）により精製して、Ｎ－｛１－［（ジフルオロメトキシ）メチル］シクロプロピル｝－Ｎ－メチルカルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチルを無色油状物（０．０５８ｇ、収率４６％）として得た。

工程Ｃ：（１－（（ジフルオロメトキシ）メチル）シクロプロピル）（メチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ－ブチル（０．０５８ｇ、０．２３１ｍｍｏｌ）に、ジオキサン中のＨＣＬ（４Ｍ溶液、２ｍｌ、８．００ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で３０分間撹拌し、次いで、濃縮して、所望の生成物を得て、これをさらに精製することなく使用した。
ＬＣ－ＭＳ： ｍ／ｚ １５２．２（Ｍ＋Ｈ）⁺

－［（ｔｅｒｔ－ブトキシ）カルボニル］－１－［２－（トリメチルシリル）エトキシ］メチル－１Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－３－カルボン酸の合成

工程１：ＬｉＨＭＤＳ（８．４ｇ、５０．２１ｍｍｏｌ、５０．２１ｍＬ）を、無水ジエチルエーテル（５０ｍＬ）に溶解し、－７８℃（ドライアイス／アセトン）まで冷却した。得られた混合物に、無水ジエチルエーテル／無水ＴＨＦ ３：１（６０ｍＬ）中の４－オキソピペリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（１０．０ｇ、５０．２１ｍｍｏｌ）の溶液を分割添加した。得られた混合物を３０分間撹拌し、次いで、無水ジエチルエーテル（２０ｍＬ）中のシュウ酸ジエチル（７．３４ｇ、５０．２１ｍｍｏｌ、６．８２ｍＬ）の溶液を、１０分間かけて滴下した。反応混合物を、－７８℃で１５分間撹拌し、次いで、室温まで温めて、２０℃で一夜撹拌した。混合物を１Ｍ ＫＨＳＯ₄（２００ｍＬ）に注ぎ、層を分離した。水相を、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を分離し、水で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥し、ろ過し、濃縮して、３－（２－エトキシ－２－オキソアセチル）－４－オキソピペリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（１４．１ｇ、４７．１１ｍｍｏｌ、収率９３．８％）粗生成物を橙色油状物として得て、これをさらに精製することなく次工程で使用した。

¹Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ（ｐｐｍ）１．３７（ｔ，３Ｈ），１．４６（ｍ，９Ｈ），２．５７（ｓ，２Ｈ），３．６３（ｍ，２Ｈ），４．３５（ｑ，２Ｈ），４．４３（ｓ，２Ｈ），１５．３１（ｓ，１Ｈ）。
ＧＣＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］⁺ ｍ／ｚ：計算値２９９．１；実測値３００．１；Ｒｔ＝７．５３分。

工程２：無水ＥｔＯＨ（１５０ｍＬ）中の３－（２－エトキシ－２－オキソアセチル）－４－オキソピペリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（１４．１１ｇ、４７．１４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、酢酸（４．５３ｇ、７５．４３ｍｍｏｌ、４．３６ｍｌ）、次いでヒドラジン水和物（２．３６ｇ、４７．１４ｍｍｏｌ、３．９３ｍｌ）を分割添加した。得られた混合物を４５℃で５時間撹拌し、次いで、溶媒を真空で除去し、残渣をＮａＨＣＯ₃飽和水溶液で希釈し、生成物をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮して、１Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－３，５－ジカルボン酸５－ｔｅｒｔ－ブチル３－エチル（１１．２ｇ、３７．９２ｍｍｏｌ、収率８０．４％）を黄色泡状物として得た。

¹Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ（ｐｐｍ）１．３８（ｔ，３Ｈ），１．４９（ｍ，９Ｈ），２．８２（ｓ，２Ｈ），３．７１（ｍ，２Ｈ），４．３８（ｑ，２Ｈ），４．６４（ｍ，２Ｈ），１１．５６（ｍ，１Ｈ）。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：［Ｍ＋Ｈ］⁺ ｍ／ｚ：計算値２９５．１；実測値２９６．２；Ｒｔ＝１．２１分。

工程３：アルゴン下の無水ＴＨＦ（２５０ｍＬ）中の水素化ナトリウム（１．８２ｇ、０．０４５ｍｏｌ、鉱油中の１０％分散液）の冷却（０℃）懸濁液に、無水ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の１Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－３，５－ジカルボン酸５－ｔｅｒｔ－ブチル３－エチル（１１．２ｇ、３７．９２ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。得られた混合物を０℃で３０分間撹拌し、次いで、［２－（クロロメトキシ）エチル］トリメチルシラン（７．５９ｇ、４５．５１ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を０℃で３０分間撹拌した。得られた混合物を室温まで温め、水（２５０ｍＬ）に注いだ。生成物を、ＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥し、真空で濃縮して、粗１－［２－（トリメチルシリル）エトキシ］メチル－１Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－３，５－ジカルボン酸５－ｔｅｒｔ－ブチル３－エチル（１５．３ｇ、３５．９５ｍｍｏｌ、収率９４．８％）を黄色油状物として得て、これをさらに精製することなく次工程で使用した。

¹Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ（ｐｐｍ）０．０３（ｍ，１１Ｈ），０．８８（ｍ，２Ｈ），１．３９（ｔ，３Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ），２．７８（ｍ，２Ｈ），３．５７（ｍ，２Ｈ），４．４１（ｑ，２Ｈ），４．６３（ｍ，２Ｈ），５．４４（ｓ，２Ｈ）。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：［Ｍ＋Ｈ］⁺ ｍ／ｚ：計算値４２５．２；実測値４２６．２；Ｒｔ＝１．６８分。

工程４：１－［２－（トリメチルシリル）エトキシ］メチル－１Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－３，５－ジカルボン酸５－ｔｅｒｔ－ブチル３－エチル（１５．３ｇ、３５．９５ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１００ｍＬ）／水（５０ｍＬ）の混合物に溶解し、水酸化リチウム一水和物（５．２８ｇ、１２５．８２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を５０℃で３時間撹拌した。反応混合物を真空で濃縮し、残渣をＫＨＳＯ₄飽和水溶液でｐＨ４～５まで注意深く酸性化し、生成物をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出した。有機相を分離し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥し、ろ過し、濃縮した。残渣をヘキサンで粉砕し、生成された沈殿物をろ過により集め、乾燥して、５－［（ｔｅｒｔ－ブトキシ）カルボニル］－１－［２－（トリメチルシリル）エトキシ］メチル－１Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－３－カルボン酸（７．５ｇ、１８．８７ｍｍｏｌ、収率５２．５％）を黄色固体として得た。

¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ（ｐｐｍ）０．０５（ｓ，９Ｈ），０．８６（ｍ，２Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ），２．７７（ｍ，２Ｈ），３．５５（ｍ，２Ｈ），３．７１（ｓ，２Ｈ），４．６２（ｓ，２Ｈ），５．４３（ｓ，２Ｈ）。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：［Ｍ＋Ｈ］⁺ ｍ／ｚ：計算値３９７．２；実測値３９８．２；Ｒｔ＝１．４２分。

３－７－オキサ－４－アザスピロ［２．６］ノナン－４－カルボニル－１－［２－（トリメチルシリル）エトキシ］－メチル－１Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－５－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルの合成

無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中の５－［（ｔｅｒｔ－ブトキシ）カルボニル］－１－［２－（トリメチルシリル）エトキシ］メチル－１Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピラジン－３－カルボン酸（７２８．８５ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＡＴＵ（６９７．１１ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を３０分間撹拌し、次いで、７－オキサ－４－アザスピロ［２．６］ノナン塩酸塩（３００．０ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（７４２．０９ｍｇ、７．３３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、室温で一夜撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）により分配した。有機相を水（２×２０ｍＬ）、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣をＨＰＬＣにより精製して、３－７－オキサ－４－アザスピロ［２．６］ノナン－４－カルボニル－１－［２－（トリメチルシリル）エトキシ］メチル－１Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－５－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（４５１．７ｍｇ、８９１．４４μｍｏｌ、収率４８．６％）を褐色油状物として得た。

¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ（ｐｐｍ）０．０１（ｓ，８Ｈ），０．８５（ｍ，６Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ），１．５８（ｓ，１Ｈ），１．９３（ｍ，２．Ｈ），２．７２（ｓ，２Ｈ），３．５８（ｍ，２Ｈ），３．８９（ｍ，８Ｈ），４．６１（ｍ，２Ｈ），５．３５（ｍ，２Ｈ）。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：［Ｍ＋Ｈ］⁺ ｍ／ｚ：計算値５０６．３；実測値５０７．４；Ｒｔ＝４．４７分。

３－８－オキサ－４－アザスピロ［２．６］ノナン－４－カルボニル－１－［２－（トリメチルシリル）エトキシ］メチル－１Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－５－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（００３０－１１）の合成

無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中の５－［（ｔｅｒｔ－ブトキシ）カルボニル］－１－［２－（トリメチルシリル）エトキシ］メチル－１Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピラジン－３－カルボン酸（７２８．８５ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＡＴＵ（６９７．１１ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を３０分間撹拌し、次いで、８－オキサ－４－アザスピロ［２．６］ノナン塩酸塩（３００．０ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（７４２．０９ｍｇ、７．３３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、室温で一夜撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）により分配した。有機相を水（２×２０ｍＬ）、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣をＨＰＬＣにより精製して、３-８－オキサ－４－アザスピロ［２．６］ノナン－４－カルボニル－１－［２－（トリメチルシリル）エトキシ］メチル－１Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－５－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（３１７．８ｍｇ、６２７．１８μｍｏｌ、収率３４．２％）を褐色油状物として得た。

¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ（ｐｐｍ）０．０５（ｓ，８Ｈ），０．８（ｍ，６Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ），２．０８（ｍ，２Ｈ），２．７３（ｓ，２Ｈ），３．５９（ｍ，２Ｈ），３．９０（ｍ，８Ｈ），４．５５（ｍ，２Ｈ），５．３１（ｓ，２Ｈ）。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：［Ｍ＋Ｈ］⁺ ｍ／ｚ：計算値５０６．３；実測値５０７．２；Ｒｔ＝４．８２分。

３－７－ヒドロキシ－４－アザスピロ［２．５］オクタン－４－カルボニル－１－［２－（トリメチルシリル）エトキシ］メチル－１Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－５－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（００３０－１４）の合成

無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中の５－［（ｔｅｒｔ－ブトキシ）カルボニル］－１－［２－（トリメチルシリル）エトキシ］メチル－１Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピラジン－３－カルボン酸（７２８．８５ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＡＴＵ（６９７．１１ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を３０分間撹拌し、次いで、４－アザスピロ［２．５］オクタン－７－オール塩酸塩（３００．０ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（７４２．０９ｍｇ、７．３３ｍｍｏｌ、１．０２ｍＬ）を添加した。反応混合物を、室温で一夜撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）により分配した。有機相を水（２×２０ｍＬ）、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣をＨＰＬＣにより精製して、３－７－ヒドロキシ－４－アザスピロ［２．５］オクタン－４－カルボニル－１－［２－（トリメチルシリル）エトキシ］メチル－１Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－５－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（４２２．０ｍｇ、８３２．８２μｍｏｌ、収率４５．４％）を褐色固体として得た。

¹Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）０．０１（ｓ，９Ｈ），０．５（ｍ，２Ｈ），０．８５（ｍ，３Ｈ），１．１２（ｍ，２Ｈ），１．４８（ｓ，１０Ｈ），２．７３（ｍ，２Ｈ），３．７２（ｍ，６Ｈ），４．６８（ｍ，４Ｈ），５．３２（ｍ，２Ｈ）。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：［Ｍ＋Ｈ］⁺ ｍ／ｚ：計算値５０６．３；実測値５０７．４；Ｒｔ＝３．９８分。

以下の例は、本発明のいくつかの具体的な化合物の製造および特性を例証する。

実施例１
Ｎ５－（３－クロロ－４－フルオロフェニル）－Ｎ３－｛１－［（ジフルオロメトキシ）メチル］シクロプロピル｝－Ｎ３－メチル－１Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－３，５－ジカルボキサミド

Ｒｔ（方法Ｂ）３．２３６分、ｍ／ｚ ４７２［Ｍ＋Ｈ］^+
1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．９５（ｓ，１Ｈ），８．８５（ｓ，１Ｈ），７．７３（ｄｄ，Ｊ＝６．９，２．６ Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｄｄｄ，Ｊ＝９．１，４．４，２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｔ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），６．７０（ｔ，Ｊ＝７５．８Ｈｚ，１Ｈ），４．６２～４．４８（ｍ，２Ｈ），４．０８～３．４５（ｍ，３Ｈ），３．４２～３．３４（ｍ，２Ｈ），３．０２（ｓ，２Ｈ），２．７９～２．６９（ｍ，２Ｈ），１．０１～０．５９（ｍ，４Ｈ）。

実施例２
Ｎ５－（３－クロロ－４－フルオロフェニル）－Ｎ３－［１－（メトキシメチル）シクロプロピル］－Ｎ３－メチル－１Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－３，５－ジカルボキサミド

Ｒｔ（方法Ａ）３．１６分、ｍ／ｚ ４３６／４３８［Ｍ＋Ｈ］^+
1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １３．０５～１２．７９（ｍ，１Ｈ），９．００～８．７５（ｍ，１Ｈ），７．７３（ｄｄ，Ｊ＝６．９，２．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４８～７．３５（ｍ，１Ｈ），７．２８（ｔ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５４（ｄ，Ｊ＝２３．５Ｈｚ，２Ｈ），４．４５～３．４４（ｍ，４Ｈ），３．４３～３．２２（ｍ，４Ｈ），３．０２（ｓ，２Ｈ），２．７３（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），１．０３～０．３５（ｍ，４Ｈ）。

実施例３
Ｎ５－（３－クロロ－４－フルオロフェニル）－Ｎ３－［１－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］－Ｎ３－メチル－１Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－３，５－ジカルボキサミド

Ｒｔ（方法Ａ）３．０１分、ｍ／ｚ ４２２／４２４［Ｍ＋Ｈ］^+
1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １３．９０～１２．１６（ｍ，１Ｈ），９．００～８．７４（ｍ，１Ｈ），７．７３（ｄｄ，Ｊ＝６．９，２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．４５～７．３８（ｍ，１Ｈ），７．３２～７．２５（ｍ，１Ｈ），４．８５～４．４５（ｍ，３Ｈ），４．０２～３．４７（ｍ，４Ｈ），３．０５～２．９８（ｍ，２Ｈ），２．７７～２．７０（ｍ，２Ｈ），０．９２～０．４４（ｍ，４Ｈ）、１つのシグナル（１Ｈ）は、水シグナルと一致する。

実施例４
Ｎ５－（３－シアノ－４－フルオロフェニル）－Ｎ３－［１－（メトキシメチル）シクロプロピル］－Ｎ３－メチル－１Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－３，５－ジカルボキサミド

Ｒｔ（方法Ａ）２．９分、ｍ／ｚ ４２７［Ｍ＋Ｈ］^+
1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １３．１１～１２．７９（ｍ，１Ｈ），９．１９～８．８６（ｍ，１Ｈ），７．９６～７．９０（ｍ，１Ｈ），７．８３～７．７５（ｍ，１Ｈ），７．４２（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），４．６６～４．４４（ｍ，２Ｈ），３．８０～３．４４（ｍ，３Ｈ），３．２９～３．２２（ｍ，５Ｈ），３．０７～２．９１（ｍ，２Ｈ），２．７８～２．６９（ｍ，２Ｈ），０．８９～０．５９（ｍ，４Ｈ）。

実施例５
Ｎ５－（３－クロロ－４－フルオロフェニル）－Ｎ３－メチル－Ｎ３－｛１－［（プロパン－２－イルオキシ）メチル］シクロプロピル｝－１Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－３，５－ジカルボキサミド

Ｒｔ（方法Ｂ）３．２８分、ｍ／ｚ ４６４［Ｍ＋Ｈ］^+
1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．８７（ｓ，１Ｈ），８．８５（ｓ，１Ｈ），７．７３（ｄｄ，Ｊ＝６．９，２．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｄｄｄ，Ｊ＝９．１，４．３，２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｔ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５４（ｍ，２Ｈ），３．６９（ｍ，２Ｈ），３．５６（ｍ，２Ｈ），３．０３（ｍ，２Ｈ），２．７３（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），１．０８（ｍ，６Ｈ），０．９４～０．４４（ｍ，４Ｈ）。

実施例６
Ｎ５－（３－クロロ－４－フルオロフェニル）－Ｎ３－［１－（エトキシメチル）シクロプロピル］－Ｎ３－メチル－１Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－３，５－ジカルボキサミド

Ｒｔ（方法Ｂ）３．１８分、ｍ／ｚ ４５０［Ｍ＋Ｈ］^+
1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．９０（ｍ，１Ｈ），８．８５（ｍ，１Ｈ），７．７３（ｄｄ，Ｊ＝６．９，２．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｄｄｄ，Ｊ＝９．１，４．３，２．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｔ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５４（ｍ，２Ｈ），３．６９（ｍ，２Ｈ），３．５５（ｍ，１Ｈ），３．４５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．０３（ｍ，２Ｈ），２．７３（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），１．１１（ｍ，３Ｈ），０．９６～０．５０（ｍ，４Ｈ）。

実施例７
Ｎ－（３－クロロ－４－フルオロフェニル）－３－｛６，６－ジフルオロ－４－アザスピロ［２．４］ヘプタン－４－カルボニル｝－２Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－５－カルボキサミド

Ｒｔ（方法Ａ）３．４８分、ｍ／ｚ ４５４／４５６［Ｍ＋Ｈ］^+
1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．９４（ｓ，１Ｈ），８．８８（ｓ，１Ｈ），７．７２ ｍ，１Ｈ），７．４１（ｍ，１Ｈ），７．２８（ｔ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５６（ｍ，２Ｈ），４．４７（ｔ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ，２Ｈ），３．６８（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ），２．７４（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ），２．４７（ｍ，２Ｈ），１．９６（ｍ，２Ｈ），０．６６（ｍ，２Ｈ）。

実施例８
Ｎ－（３－クロロ－４－フルオロフェニル）－３－｛６，６－ジフルオロ－４－アザスピロ［２．４］ヘプタン－４－カルボニル｝－６－メチル－２Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－５－カルボキサミド

Ｒｔ（方法Ｈ）１．６分、ｍ／ｚ ４６８／４７０［Ｍ＋Ｈ］^+
1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １３．２４～１２．９４（ｍ，１Ｈ），８．８４（ｓ，１Ｈ），７．７１（ｄｄ，Ｊ＝６．９，２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．４３～７．３６（ｍ，１Ｈ），７．２８（ｔ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），４．９６（ｄ，Ｊ＝１６．７Ｈｚ，１Ｈ），４．８７～４．７７（ｍ，１Ｈ），４．５８～４．３８（ｍ，２Ｈ），４．０９（ｄ，Ｊ＝１６．７Ｈｚ，１Ｈ），２．９６～２．８７（ｍ，１Ｈ），２．６３～２．４３（ｍ，３Ｈ），２．０４～１．８８（ｍ，２Ｈ），１．０６（ｄ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，３Ｈ），０．７１～０．５９（ｍ，２Ｈ）。

実施例９
Ｎ－（３－クロロ－４－フルオロフェニル）－３－｛６，６－ジフルオロ－４－アザスピロ［２．４］ヘプタン－４－カルボニル｝－６－メチル－２Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－５－カルボキサミド

Ｒｔ（方法Ｈ）１．６分、ｍ／ｚ ４６８／４７０［Ｍ＋Ｈ］^+
1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １３．２４～１２．９４（ｍ，１Ｈ），８．８４（ｓ，１Ｈ），７．７１（ｄｄ，Ｊ＝６．９，２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．４３～７．３６（ｍ，１Ｈ），７．２８（ｔ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），４．９６（ｄ，Ｊ＝１６．７Ｈｚ，１Ｈ），４．８７～４．７７（ｍ，１Ｈ），４．５８～４．３８（ｍ，２Ｈ），４．０９（ｄ，Ｊ＝１６．７Ｈｚ，１Ｈ），２．９６～２．８７（ｍ，１Ｈ），２．６３～２．４３（ｍ，３Ｈ），２．０４～１．８８（ｍ，２Ｈ），１．０６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），０．７１～０．５９（ｍ，２Ｈ）。

実施例１０
１－アミノシクロプロパン－１－カルボン酸（１－｛Ｎ－メチル５－［（３－クロロ－４－フルオロフェニル）カルバモイル］－２Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－３－アミド｝シクロプロピル）メチル

工程１：無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中の５－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－３－カルボン酸（４２２ｍｇ、１．５７９ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（６００ｍｇ、１．５７８ｍｍｏｌ）の溶液を、１０分間撹拌した。次いで、無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中の［１－（メチルアミノ）シクロプロピル］メタノール塩酸塩（０．２３９ｇ、１．７３ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ₃（５２０μＬ、３．７４ｍｍｏｌ）の懸濁液を添加した。１時間後、追加の無水ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中の５－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－３－カルボン酸（８４ｍｇ、０．３１４ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１２０ｍｇ、０．３１６ｍｍｏｌ）（１０分間予備撹拌）を添加した。一夜撹拌後、追加の無水ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中の５－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４，５，６，７－テトラヒドロ－２Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－３－カルボン酸（８４ｍｇ、０．３１４ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１２０ｍｇ、０．３１６ｍｍｏｌ）の３番目の小分け（再び、１０分間予備撹拌）を添加した。溶液をさらに１時間撹拌し、次いで、重炭酸ナトリウム飽和水溶液（２５ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）により分配した。水相を、ＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、クロマトグラフィーにより精製して、３－｛［１－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］（メチル）カルバモイル｝－２Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－５－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルを白色固体（０．２７０ｇ、収率４９％）として得た。

工程２：無水ＤＭＦ（８ｍＬ）中の３－｛［１－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］（メチル）カルバモイル｝－２Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－５－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（０．１０３ｇ、０．２９ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（２５０μＬ、１．４３５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、３－クロロ－４－フルオロフェニルイソシアネート（３３μＬ、０．２６５ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を室温で２時間撹拌し、次いで、ＮａＨＣＯ₃飽和水溶液（３０ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）により分配した。層を分離し、水相をろ過し、ＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）で２回抽出した。合わせた有機相を塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０～６％ＭｅＯＨ）により精製して、Ｎ５－（３－クロロ－４－フルオロフェニル）－Ｎ３－［１－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］－Ｎ３－メチル－２Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－３，５－ジカルボキサミドを白色固体（０．１３９ｇ、収率５７％）として得た。

工程３：１－（Ｂｏｃ－アミノ）シクロプロパンカルボン酸（３０．２ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド（２３．４ｍｇ、０．１１３ｍｍｏｌ）の冷却（０℃）溶液を１０分間撹拌し、次いで、無水ＴＨＦ（１２ｍｌ）中のＮ５－（３－クロロ－４－フルオロフェニル）－Ｎ３－［１－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］－Ｎ３－メチル－２，４，６，７－テトラヒドロ－５Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－３，５－ジカルボキサミド（３５ｍｇ、０．０８３ｍｍｏｌ）の懸濁液を添加し、次いで、４，４－（ジメチルアミノ）ピリジン（１．０１４ｍｇ、８．３０μｍｏｌ）を添加した。混合物を２時間撹拌し、室温まで温めた。２４時間後、追加の無水ＴＨＦ（２ｍＬ）中の１－（Ｂｏｃ－アミノ）シクロプロパンカルボン酸（１５．６ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド（２１．０ｍｇ、０．１０２ｍｍｏｌ）（２０分間予備撹拌）を添加した。混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃに懸濁し、ろ過した。ろ液を濃縮し、ＤＣＭに溶解し、水（２０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ₃飽和水溶液（２０ｍＬ）および塩水（２０ｍＬ）で逐次洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。 残渣をＤＣＭ（３ｍＬ）に溶解し、次いで、１，４－ジオキサン中の４Ｍ塩酸（０．３１０ｍＬ、１．２４０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で３時間撹拌し、次いで、濃縮し、トルエンと共沸蒸発させ、クロマトグラフィーにより精製して、１－アミノシクロプロパン－１－カルボン酸（１－｛Ｎ－メチル５－［（３－クロロ－４－フルオロフェニル）カルバモイル］－２Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－３－アミド｝シクロプロピル）メチルを白色固体（１２．４ｍｇ、収率２８％）として得た。

Ｒｔ（方法Ｂ）２．４５分、ｍ／ｚ ５０５［Ｍ＋Ｈ］^+
1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．９５（ｓ，１Ｈ），８．８６（ｓ，１Ｈ），７．７７～７．６８（ｍ，１Ｈ），７．４７～７．３７（ｍ，１Ｈ），７．２８（ｔ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），４．６５～４．４５（ｍ，２Ｈ），４．２９～４．０６（ｍ，１Ｈ），４．００～３．６３（ｍ，２Ｈ），３．５５（ｓ，１Ｈ），３．２９～３．２７（ｍ，３Ｈ），３．０６～２．９８（ｍ，１Ｈ），２．８１～２．７０（ｍ，２Ｈ），２．３０～２．１５（ｍ，１Ｈ），１．２２～１．０６（ｍ，２Ｈ），１．００～０．５８（ｍ，６Ｈ）。

実施例１１
Ｎ－（３－クロロ－４－フルオロフェニル）－３－｛８－オキサ－４－アザスピロ［２．６］ノナン－４－カルボニル｝－２Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－５－カルボキサミド

Ｒｔ（方法Ｂ２）３．２４分、ｍ／ｚ ４４８／４５０［Ｍ＋Ｈ］^+
1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １３．６３～１１．９６（ｍ，１Ｈ），９．１８～８．５７（ｍ，１Ｈ），７．７３（ｄｄ，Ｊ＝６．９，２．６ Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｄｄｄ，Ｊ＝９．０，４．４，２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｔ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），４．６４～４．４６（ｍ，２Ｈ），４．０７～３．４８（ｍ，８Ｈ），２．７４（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ），２．０４～１．７７（ｍ，２Ｈ），０．９８～０．６３（ｍ，４Ｈ）。

実施例１２
Ｎ－（３－クロロ－４－フルオロフェニル）－３－｛７－ヒドロキシ－４－アザスピロ［２．５］オクタン－４－カルボニル｝－２Ｈ，４Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジン－５－カルボキサミド

Ｒｔ（方法Ｂ２）３．０１分、ｍ／ｚ ４４８／４５０［Ｍ＋Ｈ］^+
1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １２．９２（ｓ，１Ｈ），８．８６（ｓ，１Ｈ），７．７３（ｄｄ，Ｊ＝６．９，２．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｄｄｄ，Ｊ＝９．１，４．４，２．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｔ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），４．９１～４．２８（ｍ，４Ｈ），３．９２～３．４９（ｍ，３Ｈ），２．７３（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ），１．９５～１．６６（ｍ，２Ｈ），１．４６～１．０８（ｍ，２Ｈ），１．０７～０．３６（ｍ，４Ｈ）。１つのシグナル（１Ｈ）は、水シグナルと一致する。

本発明の選択された化合物をカプシド会合およびＨＢＶ複製アッセイにおいて、下記に記載されているように評価し、これらの活性化合物の代表群を表１に示す。

生化学カプシドアセンブリアッセイ
アセンブリエフェクター活性のスクリーニングを、Ｚｌｏｔｎｉｃｋ ｅｔ ａｌ．（２００７）により公開された蛍光消光アッセイに基づいて行った。１５０位の固有のシステイン残基と融合されたＮ末端アセンブリドメインの１４９アミノ酸を含むＣ末端切断コアタンパク質は、ｐＥＴ発現システム（Ｍｅｒｋ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、独国ダルムシュタット）を用いてＥ．Ｃｏｌｉ内で発現された。コア二量体タンパク質の精製を、一連のサイズ排除クロマトグラフィー工程を用いて行った。要するに、ＮｄｅＩ／ＸｈｏＩを発現プラスミドｐＥＴ２１ｂにクローン化されたコアタンパク質のコード配列を発現する１Ｌ ＢＬ２１（ＤＥ３）Ｒｏｓｅｔｔａ２培養液からの細胞ペレットを、氷上で１時間、天然溶解バッファー（ｎａｔｉｖｅ ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）（Ｑｐｒｏｔｅｏｍｅ Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｒｅｐ Ｋｉｔ；Ｑｉａｇｅｎ、独国ヒルデン）で処理した。遠心分離工程後、上澄み液を、氷上で２時間撹拌しながら、２３ｇ／ｍｌの固形硫酸アンモニウムで沈殿させた。さらに遠心分離後、得られたペレットをバッファーＡ（１００ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．５；１００ｍＭ ＮａＣｌ；２ｍＭ ＤＴＴ）に溶解し、その後、バッファーＡ平衡ＣａｐｔｏＣｏｒｅ７００カラム（ＧＥ ＨｅａｌｔｈＣａｒｅ、独国フランクフルト）にロードした。会合ＨＢＶカプシドを含むカラムフロースルーをバッファーＮ（５０ｍＭ ＮａＨＣＯ₃ ｐＨ９．６；５ｍＭ ＤＴＴ）に対して透析を行った後、尿素を２Ｍの最終濃度に添加して、氷上１．５時間、カプシドをコア二量体に解離した。次いで、タンパク質様液を、１Ｌ Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ３００カラムにロードした。バッファーＮで溶離後、分画を含むコア二量体を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥにより同定し、その後、プールして、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ ７．５；５ｍＭ ＤＴＴに対して透析を行った。精製されたコア二量体の会合能力を向上するため、５Ｍ ＮａＣｌの添加と共に始まり、上記サイズ排除クロマトグラフィーを含む会合および脱会合の第二回目を行った。最後のクロマトグラフィー工程から、分画を含むコア二量体をプールし、１．５～２．０ｍｇ／ｍｌの濃度の一定分量で－８０℃において貯蔵した。

標識化直前に、コアタンパク質を、２０ｍＭの最終濃度に新たに調製されたＤＴＴの添加によって還元した。氷上で４０分のインキュベーション後、保存用バッファーおよびＤＴＴをＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５カラム（ＧＥ ＨｅａｌｔｈＣａｒｅ、独国フランクフルト）および５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５を用いて除去した。標識化のため、１．６ｍｇ／ｍｌコアタンパク質を、１ｍＭの最終濃度のＢＯＤＩＰＹ－ＦＬマレイミド（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、独国カールスルーエ）と共に４℃において暗所で一夜インキュベートした。標識化後、遊離染料を、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５カラムを用いて、さらなる脱塩工程によって除去した。標識化コア二量体を、４℃において一定分量で貯蔵した。二量体状態では、標識化コアタンパク質の蛍光シグナルは高く、コア二量体が高分子カプシド構造へ会合する間に消光する。５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．５および１．０～２．０μＭ標識化コアタンパク質を用いて、１０μｌの総アッセイ体積でブラック３８４ウェルマイクロタイタープレートにおいて、スクリーニングアッセイを行った。各スクリーニング化合物を、１００μＭ、３１．６μＭまたは１０μＭの最終濃度において始まる０．５ログ単位段階希釈を用いて８つの異なる濃度で添加した。いずれの場合も、マイクロタイタープレート全体にわたるＤＭＳＯ濃度は０．５％であった。会合反応は、最大消光シグナルの約２５％まで会合過程を誘発する３００μＭの最終濃度までＮａＣｌを注入することによって開始した。反応開始６分後、Ｃｌａｒｉｏｓｔａｒプレートリーダー（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ、独国オルテンベルク）を用いて、４７７ｎｍで励起して５２５ｎｍの発光の蛍光シグナルを測定した。１００％および０％会合として、２．５Ｍおよび０Ｍ ＮａＣｌを含むコントロールＨＥＰＥＳバッファーを使用した。三重反復で３回実験を行った。Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ６ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、米国ラホヤ）を用いて、ＥＣ₅₀値を非線形回帰分析によって算出した。

ＨｅｐＡＤ３８細胞の上澄み液からのＨＢＶ ＤＮＡの決定
高レベルのＨＢＶウイルス粒子を分泌することが記載されている（Ｌａｄｎｅｒ ｅｔ ａｌ．、１９９７）安定トランスフェクトされた細胞株ＨｅｐＡＤ３８において、抗ＨＢＶ活性を分析した。要するに、ＨｅｐＡＤ３８細胞を、２００μｌ維持培地中、３７℃、５％ＣＯ₂および９５％湿度において培養し、該維持培地は５０μｇ／ｍｌペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ、独国カールスルーエ）、２ｍＭ Ｌ－グルタミン（ＰＡＮ Ｂｉｏｔｅｃｈ、独国アイデンバッハ）、４００μｇ／ｍｌ Ｇ４１８（ＡｐｐｌｉＣｈｅｍ、独国ダルムシュタット）および０．３μｇ／ｍｌテトラサイクリンを補足したダルベッコ変法イーグル培地／栄養混合物Ｆ－１２（Ｇｉｂｃｏ、独国カールスルーエ）、１０％ウシ胎仔血清（ＰＡＮ Ｂｉｏｔｅｃｈ、独国アイデンバッハ）であった。細胞を１：５比で週１回継代培養したが、通常１０回より多くは継代しなかった。アッセイのため、維持培地において、テトラサイクリンなしで、６０，０００細胞を９６ウェルプレートの各ウェルに播種し、試験化合物の半ログ段階希釈で治療した。辺縁効果を最小にするため、プレートの外側３６ウェルを使用しなかったが、アッセイ培地で充填した。各アッセイプレート上、ウイルスコントロール（未治療ＨｅｐＡＤ３８細胞）の６ウェルおよび細胞コントロール（０．３μｇ／ｍｌテトラサイクリンで治療されたＨｅｐＡＤ３８細胞）の６ウェルを、それぞれ、割り当てた。加えて、スクリーニング化合物の代わりにＢＡＹ４１－４１０９、エンテカビル、およびラミブジンなどの参照阻害剤を含む１つのプレートセットを、各実験において調製した。概して、三重反復で３回実験を行った。６日目、１００μｌのろ過された細胞培養上澄み液からのＨＢＶ ＤＮＡ（ＡｃｒｏＰｒｅｐ Ａｄｖａｎｃｅ ９６Ｆｉｌｔｅｒ Ｐｌａｔｅ、０．４５μＭ Ｓｕｐｏｒメンブレン、ＰＡＬＬ ＧｍｂＨ、独国ドライアイヒ）を、製造者説明書に従ってＭａｇＮＡ Ｐｕｒｅ９６ ＤＮＡおよびＶｉｒａｌ ＮＡ小容量キット（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、独国マンハイム）を用いてＭａｇＮａ Ｐｕｒｅ ＬＣ装置で自動的に精製した。ＨＢＶ ＤＮＡの相対複製数から、ＥＣ₅₀値を算出した。要するに、ＨＢＶ ＤＮＡを含む１００μｌの溶出物の５μｌを、１μＭアンチセンスプライマーｔｇｃａｇａｇｇｔｇａａｇｃｇａａｇｔｇｃａｃａ、０．５μＭセンスプライマーｇａｃｇｔｃｃｔｔｔｇｔｔｔａｃｇｔｃｃｃｇｔｃ、０．３μＭハイブリダイゼーションプローブａｃｇｇｇｇｃｇｃａｃｃｔｃｔｃｔｔｔａｃｇｃｇｇ－ＦＬおよび１２．５μｌの最終体積までのＬＣ６４０－ｃｔｃｃｃｃｇｔｃｔｇｔｇｃｃｔｔｃｔｃａｔｃｔｇｃ－ＰＨ（ＴＩＢＭｏｌＢｉｏｌ、独国ベルリン）と共にＰＣＲ ＬＣ４８０プローブマスターキット（Ｒｏｃｈｅ）に付した。下記のプロトコールを用いて、Ｌｉｇｈｔ Ｃｙｃｌｅｒ４８０レアルタイムシステム（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、独国マンハイム）で、ＰＣＲを行った：９５℃で１分間のプレインキュベーション、増幅：４０サイクル×（９５℃で１０秒、６０℃で５０秒、７０℃で１秒）、４０℃で１０秒間の冷却。ｐＣＨ－９／３０９１のＨＢＶプラスミドＤＮＡ（Ｎａｓｓａｌ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｃｅｌｌ ６３：１３５７－１３６３）およびＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ４８０ＳＷ１．５ソフトウェア（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、独国マンハイム）を用いて、既知標準品に対してウイルス負荷を定量化し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ６（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、米国ラホヤ）を用いた非線形回帰分析を使用して、ＥＣ₅₀値を算出した。

細胞生存率アッセイ
ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ生存率アッセイを使用して、ＨＢＶゲノムの発現を遮断する０．３μｇ／ｍｌテトラサイクリンの存在下、ＨｅｐＡＤ３８細胞において細胞毒性を評価した。アッセイ条件およびプレートレイアウトは抗ＨＢＶアッセイと同様であったが、他のコントロールを使用した。各アッセイプレートにおいて、未治療ＨｅｐＡＤ３８細胞を含む６ウェルを１００％生存率コントロールとして使用し、アッセイ培地のみが充填された６ウェルを０％生存率コントロールとして使用した。加えて、６０μＭ最終アッセイ濃度において始まるシクロヘキシミドのゲノム濃度系列を、各実験におけるポジティブコントロールとして使用した。６日のインキュベーション期間後、Ａｌａｍａｒ Ｂｌｕｅ Ｐｒｅｓｔｏ細胞生存率試薬（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、独国ドライアイヒ）を、アッセイプレートの各ウェルに１／１１希釈で添加した。３７℃で３０～４５分間のインキュベーション後、生細胞数に比例する蛍光シグナルを、それぞれ、励起フィルター５５０ｎｍおよび発光フィルター５９５ｎｍを有するＴｅｃａｎ Ｓｐｅｃｔｒａｆｌｕｏｒ Ｐｌｕｓプレートリーダーを用いて読み取った。未治療コントロール（１００％生存率）およびアッセイ培地（０％生存率）のパーセンテージにデータを正規化した後、非線形回帰分析およびＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ６．０（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、米国ラホヤ）を用いて、ＣＣ₅₀値を算出した。平均ＥＣ₅₀値およびＣＣ₅₀値を使用して、各試験化合物の選択性指数（ＳＩ＝ＣＣ₅₀／ＥＣ₅₀）を算出した。

表１：生化学および抗ウイルス活性
表１では、「＋＋＋」は、ＥＣ₅₀＜１μＭを表し；「＋＋」は、１μＭ＜ＥＣ₅₀＜１０μＭを表し；「＋」は、ＥＣ₅₀＜１００μＭを表す（細胞活性アッセイ）。
表１では、「Ａ」は、ＩＣ₅₀＜５μＭを表し；「Ｂ」は、５μＭ＜ＩＣ₅₀＜１０μＭを表し；「Ｃ」は、ＩＣ₅₀＜１００μＭを表す（アセンブリアッセイ活性）。

インビボ有効性モデル
抗ウイルス薬のＨＢＶ研究および前臨床試験は、ウイルスの狭い種および組織親和性、入手可能な感染症モデルの不足ならびにＨＢＶ感染症に完全に罹り易い唯一の動物であるチンパンジーの使用により課せられる制限によって限定される。代替の動物モデルは、ＨＢＶ関連ヘパドナウイルスの使用に基づき、様々な抗ウイルス化合物は、ウッドチャック肝炎ウイルス（ＷＨＶ）感染マーモットまたはアヒルＢ型肝炎ウイルス（ＤＨＢＶ）感染アヒルまたはウーリーモンキーＨＢＶ（ＷＭ－ＨＢＶ）感染ツパイア属において試験されてきた（Ｄａｎｄｒｉ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｂｅｓｔ Ｐｒａｃｔ Ｒｅｓ Ｃｌｉｎ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ ３１，２７３－２７９の概要）。しかしながら、代替のウイルスの使用は、いくつかの制限を有する。例えば、最も遠い関連のＤＨＢＶ間の配列相同性があり、ＨＢＶはほんの約４０％でしかなく、これは、ＨＡＰファミリーのコアタンパク質アセンブリモディファイヤーがＤＨＢＶおよびＷＨＶに対して不活性と思われるが、ＨＢＶを効果的に抑制したからである（Ｃａｍｐａｇｎａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８７，６９３１－６９４２）。マウスはＨＢＶを許容しないが、主な努力は、ヒトＨＢＶに対してトランスジェニックマウス（ＨＢＶ ｔｇマウス）の生成、マウスのＨＢＶゲノムの水圧注入（ＨＤＩ）またはヒト化肝臓および／もしくはヒト化免疫系を有するマウスの生成などのＨＢＶ複製および感染症のマウスモデルの開発、ならびに免疫コンピテントマウスへのＨＢＶゲノムを含むアデノウイルス（Ａｄ－ＨＢＶ）またはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ－ＨＢＶ）に基づくウイルスベクターの静脈内注射に集中してきた（Ｄａｎｄｒｉ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｂｅｓｔ Ｐｒａｃｔ Ｒｅｓ Ｃｌｉｎ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ ３１，２７３－２７９の概要）。完全ＨＢＶゲノムに対してトランスジェニックマウスを使用して、マウス肝細胞の感染性ＨＢＶウイルスを産生する能力を実証することができた（Ｇｕｉｄｏｔｔｉ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６９：６１５８－６１６９）。トランスジェニックマウスはウイルスタンパク質に対して免疫寛容であり、ＨＢＶ産生マウスにおいて肝損傷は観察されておらず、これらの試験は、ＨＢＶそれ自体は細胞傷害性ではない。ポリメラーゼ阻害薬およびコアタンパク質アセンブリモディファイヤーなどのいくつかの抗ＨＢＶ薬の有効性を試験するために、ＨＢＶトランスジェニックマウスを使用し（Ｗｅｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５４ ６９‐７８；Ｊｕｌａｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ａｎｔｉｖｉｒ．Ｒｅｓ．，５９：１５５－１６１）、したがって、ＨＢＶトランスジェニックマウスは多くのタイプの前臨床抗ウイルスインビボ試験に充分適している。

Ｐａｕｌｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１５に記載されているように、２９１６／２９１７位にフレームシフト変異（ＧＣ）を有するＰＬＯＳｏｎｅ，１０：ｅ０１４４３８３ ＨＢＶトランスジェニックマウス（Ｔｇ［ＨＢＶ１．３ ｆｓＸ－３’５’］）を使用して、インビボでのコアタンパク質アセンブリモディファイヤーの抗ウイルス活性を実証することができる。要するに、ＨＢＶトランスジェニックマウスを、実験前のｑＰＣＲによって血清中のＨＢＶ特異的ＤＮＡについてチェックした（セクション“Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ＨＢＶ ＤＮＡ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｓ ｏｆ ＨｅｐＡＤ３８ ｃｅｌｌｓ”参照）。各治療群は、血清ｍｌ当たり１０⁷～１０⁸ウイルス粒子の力価を有する約１０週齢の５匹の雄および５匹の雌動物から成った。化合物を、２％ＤＭＳＯ／９８％チロース（０．５％メチルセルロース／９９．５％ＰＢＳ）または５０％ＰＥＧ４００などの適切な媒体中の懸濁液として製剤し、１０日間に１日１～３回、動物に経口投与した。媒体はネガティブコントロールとなるが、適切な媒体中の１μｇ／ｋｇエンテカビルはポジティブコントロールであった。イソフルラン気化器を使用して眼球後血液サンプリングによって血液を得た。最後の治療６時間後の末端心臓穿刺、血液または臓器を集めるため、マウスをイソフルランで麻酔し、その後、ＣＯ₂暴露により屠殺した。眼球後（１００～１５０μｌ）および心臓穿刺（４００～５００μｌ）血液サンプルを、それぞれ、Ｍｉｃｒｏｖｅｔｔｅ ３００ ＬＨまたはＭｉｃｒｏｖｅｔｔｅ ５００ ＬＨに集め、遠心分離（１０分、２０００ｇ、４℃）により血漿を分離した。肝組織を取り出し、液体Ｎ₂に急速凍結した。全サンプルを、さらに使用するまで、－８０℃で貯蔵した。ウイルスＤＮＡを、５０μｌ血漿または２５ｍｇ肝組織から抽出し、製造者説明書に従って、ＤＮｅａｓｙ ９６ Ｂｌｏｏｄ ＆ Ｔｉｓｓｕｅ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ、独国ヒルデン）を使用して５０μｌのＡＥバッファー（血漿）またはＤＮｅａｓｙ Ｔｉｓｓｕｅ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ、独国ヒルデン）を使用して３２０μｌ ＡＥバッファー（肝組織）に溶出した。溶出ウイルスＤＮＡを、製造者説明書に従って、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ ４８０ Ｐｒｏｂｅｓ Ｍａｓｔｅｒ ＰＣＲ Ｋｉｔ（Ｒｏｃｈｅ、独国マンハイム）を使用してｑＰＣＲに付して、ＨＢＶ複製数を決定した。使用されたＨＢＶ特異的プライマーとしては、フォワードプライマー５’－ＣＴＧ ＴＡＣ ＣＡＡ ＡＣＣ ＴＴＣ ＧＧＡ ＣＧＧ－３’、リバースプライマー５’－ＡＧＧ ＡＧＡ ＡＡＣ ＧＧＧ ＣＴＧ ＡＧＧ Ｃ－３’およびＦＡＭ標識化プローブＦＡＭ－ＣＣＡ ＴＣＡ ＴＣＣ ＴＧＧ ＧＣＴ ＴＴＣ ＧＧＡ ＡＡＡ ＴＴ－ＢＢＱであった。２０μｌの総体積を有する１つのＰＣＲ反応サンプルは、５μｌのＤＮＡ溶出物および１５μｌのマスター混合物（フォワードプライマーの０．３μＭ、リバースプライマーの０．３μＭ、ＦＡＭ標識化プローブの０．１５μＭを含む）を含んでいた。下記のプロトコールを用いて、Ｒｏｃｈｅ ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ１４８０でｑＰＣＲを行った：９５℃で１分間プレインキュベーション、増幅：（９５℃で１０秒、６０℃で５０秒、７０℃で１秒）×４５サイクル、４０℃で１０秒間冷却。上記のように、標準曲線を作成した。全サンプルを二重反復で試験した。アッセイの検出限界は、約５０ＨＢＶ ＤＮＡ複製物である（２５０～２．５×１０⁷複製物数の範囲の標準物を使用して）。ＨＢＶ ＤＮＡ複製物／１０μｌ血漿またはＨＢＶ ＤＮＡ複製物／１００ｎｇ総肝臓ＤＮＡ（ネガティブコントロールに正規化）として結果を表す。

複数の試験において、トランスジェニックマウスがインビボでの新規化学成分の抗ウイルス活性を証明する適切なモデルであるだけでなく、マウスのＨＢＶゲノムの水圧注入の使用ならびにＨＢＶ陽性患者血清で感染された免疫不全ヒト肝臓キメラマウスの使用は、ＨＢＶを標的とする薬物をプロファイルするために使用することも多いことが分かった（Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｈｅｐａｔ．Ｍｏｎ．１６：ｅ３４４２０；Ｑｉｕ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５９：７６５１－７６６６；Ｌｕｔｇｅｈｅｔｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１４０：２０７４－２０８３）。加えて、慢性ＨＢＶ感染症は、ＨＢＶゲノムを含むアデノウイルス（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １４２：１４４７－１４５０）またはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターの低用量を接種することによって免疫コンピテントマウスにおいて首尾良く確証された（Ｄｉｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．８７：５５５４－５５６３）。このモデルを使用して、新規抗ＨＢＶ薬剤のインビボ抗ウイルス活性を実証することができた。

Claims (11)

1. 式Ｉ：
   

   

   の化合物であって、前記式中、
   －Ｒ１は、任意選択でハロゲン、Ｃ１～Ｃ４－アルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ４－ハロアルキルまたはＣ≡Ｎにより１回、２回、または３回置換されている、フェニルまたはピリジルであり；
   －Ｒ２は、Ｈまたはメチルであり；
   －Ｒ３は、ＨまたはＣ１～Ｃ４－アルキルであり、ここで前記Ｃ１～Ｃ４－アルキルは任意選択で重水素、ハロゲンもしくはＣ≡Ｎで１回、２回、もしくは３回置換されており；
   －Ｒ４は、Ｒ４がＲ３と連結するという条件でＣ１～Ｃ２－アルキル、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－Ｏ－Ｃ１～Ｃ４－アルキル、Ｃ１～Ｃ２－ヒドロキシアルキル、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－Ｏ－Ｃ１～Ｃ４－ハロアルキル、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－Ｏ－Ｃ３～Ｃ６－シクロアルキル，Ｃ１～Ｃ２－アルキル－Ｓ－Ｃ１～Ｃ４－アルキル、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－ＳＯ₂－Ｃ１～Ｃ４－アルキル、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－Ｃ≡Ｎ、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－Ｃ３～Ｃ７－ヘテロシクロアルキル、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ３～Ｃ７－シクロアルキル）ＮＨ₂、Ｃ１～Ｃ２－アルキル－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ１～Ｃ１３－アルキル）ＮＨ₂、Ｃ３～Ｃ７－ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールを含む群から選択され、ここでＣ３～Ｃ７－ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールは、任意選択でハロゲン、ＮＨ₂またはＣ１～Ｃ６－アルキルで１回、２回、または３回置換されており、Ｒ３およびＲ４は任意選択で連結して、５員、６員または７員ヘテロシクロアルキル環を形成しており、前記ヘテロシクロアルキル環は、非置換またはハロゲン、カルボキシ、ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４－アルコキシ、ＯＣＦ₃、ＯＣＨＦ₂もしくはＣ≡Ｎで１回、２回、もしくは３回置換されており；
   －Ｘは、Ｏ、ＣＨ₂、またはＮＲ１１であり；
   －ｍは、０、１または２であり；
   －Ｒ１１は、ＨまたはＣ１～Ｃ４－アルキルである、
   式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容される塩、または式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容される塩の溶媒和物もしくは水和物、または式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物もしくは水和物のプロドラッグ。
2. アリールはＣ６－アリールであり、および／またはヘテロアリールはＣ１～Ｃ９－ヘテロアリールであり、ヘテロアリールおよびヘテロシクロアルキルはＮ、ＯおよびＳから各々独立して選択される１～４個のヘテロ原子を有する、請求項１に記載の式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容される塩、または式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容される塩の溶媒和物もしくは水和物、または式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物もしくは水和物のプロドラッグ。
3. 前記プロドラッグは、エステル類、カーボネート類、アセチルオキシ誘導体、アミノ酸誘導体およびホスホロアミデート誘導体を含む群から選択される、請求項１または２に記載の式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容される塩、または式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容される塩の溶媒和物もしくは水和物、または式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物もしくは水和物のプロドラッグ。
4. 式ＩＩ：
   

   

   の化合物であって、前記式中、
   －Ｒ１は、任意選択でハロゲン、Ｃ１～Ｃ４－アルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ４－ハロアルキルまたはＣ≡Ｎにより１回、２回、または３回置換されている、フェニルまたはピリジルであり；
   －Ｒ２は、Ｈまたはメチルであり；
   －Ｒ３は、非置換または重水素、ハロゲンもしくはＣ≡Ｎで１回、２回、もしくは３回置換されている、Ｃ１～Ｃ４－アルキルであり；
   －Ｒ５は、Ｈ、メチル、エチル、イソプロピル、シクロプロピル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、２，２，２－トリフルオロエチル、２，２－ジフルオロエチル、または１，１，１－トリジュウテロメチルである、
   式ＩＩの化合物である、請求項１～３のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容される塩、または式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容される塩の溶媒和物もしくは水和物、または式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物もしくは水和物のプロドラッグ。
5. 式ＩＩＩ：
   

   

   の化合物であって、前記式中、
   －Ｒ１は、任意選択でハロゲン、Ｃ１～Ｃ４－アルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ４－ハロアルキルまたはＣ≡Ｎにより１回、２回、または３回置換されている、フェニルまたはピリジルであり；
   －Ｒ２は、Ｈまたはメチルであり；
   －Ｒ３は、非置換または重水素、ハロゲンもしくはＣ≡Ｎで１回、２回、もしくは３回置換されている、Ｃ１～Ｃ４－アルキルであり；
   －Ｒ６は、任意選択でハロゲン、ＮＨ₂またはＣ１～Ｃ４－アルキルで１回、２回、または３回置換されている、Ｃ３～Ｃ７－ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールである、
   式ＩＩＩの化合物である、請求項１～３のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容される塩、または式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容される塩の溶媒和物もしくは水和物、または式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物もしくは水和物のプロドラッグ。
6. 式ＩＶ：
   

   

   の化合物であって、前記式中、
   －Ｒ１は、任意選択でハロゲン、Ｃ１～Ｃ４－アルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ４－ハロアルキルまたはＣ≡Ｎにより１回、２回、または３回置換されている、フェニルまたはピリジルであり；
   －Ｒ２は、Ｈまたはメチルであり；
   －ｎは、１、２または３であり；
   －Ｒ７、Ｒ８、Ｒ１２およびＲ１３は、Ｈ、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１～Ｃ４－アルコキシ、ＯＣＨＦ₂、ＯＣＦ₃およびＣ≡Ｎを含む群から各々独立して選択される、
   式ＩＶの化合物である、請求項１～３のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容される塩、または式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容される塩の溶媒和物もしくは水和物、または式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物もしくは水和物のプロドラッグ。
7. 式Ｖ：
   

   

   の化合物であって、前記式中、
   －Ｒ１は、任意選択でハロゲン、Ｃ１～Ｃ４－アルキル、Ｃ３～Ｃ６－シクロアルキル、Ｃ１～Ｃ４－ハロアルキルまたはＣ≡Ｎにより１回、２回、または３回置換されている、フェニルまたはピリジルであり；
   －Ｒ２は、Ｈまたはメチルであり；
   －Ｒ３は、非置換または重水素、ハロゲンもしくはＣ≡Ｎで１回、２回、もしくは３回置換されている、Ｃ１～Ｃ４－アルキルであり；
   －Ｒ９およびＲ１０は、ＨおよびＣ１～Ｃ６－アルキルから各々独立して選択され；
   －Ｒ９およびＲ１０は任意選択で連結して、Ｃ３～Ｃ７－シクロアルキル環を形成している、
   式Ｖの化合物である、請求項１～３のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容される塩、または式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容される塩の溶媒和物もしくは水和物、または式Ｉの化合物もしくはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物もしくは水和物のプロドラッグ。
8. 対象におけるＨＢＶ感染症の予防または治療に使用するための、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物もしくはその薬学的に許容される塩、または前記化合物もしくはその薬学的に許容される塩の溶媒和物もしくは水和物、または前記化合物もしくはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物もしくは水和物のプロドラッグ。
9. 請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物もしくはその薬学的に許容される塩、または前記化合物もしくはその薬学的に許容される塩の溶媒和物もしくは水和物、または前記化合物もしくはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物もしくは水和物のプロドラッグと、薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
10. それを必要とする個体におけるＨＢＶ感染症の治療方法であって、前記方法は、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物もしくはその薬学的に許容される塩、または前記化合物もしくはその薬学的に許容される塩の溶媒和物もしくは水和物、または前記化合物もしくはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物もしくは水和物のプロドラッグの治療有効量を前記個体に投与することを含む、方法。
11. 式ＶＩ：
    

    

    （式中、Ｒ１は請求項１で定義されている通りである）の化合物と式ＶＩＩ：
    

    

    （式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｘおよびｍは、請求項１～３のいずれか一項で定義されている通りである）の化合物との反応による、請求項１～３のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物の製造方法。