JP2022508469A - Ｋｒａｓ ｇ１２ｃ阻害剤 - Google Patents

Abstract

本発明は、以下の式の化合物であって、【化１】TIFF2022508469000203.tif44166式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ａ、Ｂ、およびＹが、本明細書に記載される通りである、化合物、それらの薬学的に許容される塩、ならびに癌の患者を治療するためにこれらの化合物および塩を使用する方法を提供する。

Description

本発明は、新規三環式複素環式化合物およびその薬学的に許容される塩、三環式複素環式化合物および塩を含む薬学的組成物、ならびに肺癌、大腸癌、膵臓癌、膀胱癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵巣癌、胆管癌または食道癌などの癌を治療するための化合物および塩の使用方法に関する。

ＭＡＰＫ／ＥＲＫシグナル伝達経路は、細胞外刺激を核に中継し、それにより細胞増殖、分化、およびアポトーシスを含む多様な細胞応答を調節する。ＫＲａｓタンパク質は、ＭＡＰＫ／ＥＲＫシグナル伝達経路のイニシエーターであり、細胞分裂の誘発に関与するスイッチとして機能する。その非活性状態では、ＫＲａｓは、グアノシン二リン酸（ＧＤＰ）と結合し、効果的に負のシグナルを送信して細胞分裂を抑制する。細胞外シグナルに応答して、ＫＲａｓは、アロステリックに活性化され、ＧＤＰのグアノシン三リン酸（ＧＴＰ）へのヌクレオチド交換を可能にする。そのＧＴＰに結合した活性状態では、ＫＲａｓは、成長因子によって誘発されたシグナル伝達、ならびに他の細胞シグナル伝達受容体の伝播に必要なタンパク質を動員および活性化する。ＫＲａｓ－ＧＴＰによって動員されるタンパク質の例は、ｃ－ＲａｆおよびＰＩ３キナーゼである。ＧＴＰ－ａｓｅとしてのＫＲａｓは、結合したＧＴＰをＧＤＰに変換して戻し、それによってそれ自身を非活性状態に戻し、再びシグナルを伝播して細胞分裂を抑制する。ＫＲａｓ機能獲得変異は、ＧＴＰ結合の程度の増加およびＧＴＰをＧＤＰに変換する能力の減少を示す。その結果、癌性細胞の増殖を促進するＭＡＰＫ／ＥＲＫシグナルが増加する。コドン１２のＫＲａｓのミスセンス変異は、最も一般的な変異であり、ＧＴＰａｓｅ活性を著しく低下させる。

発癌性ＫＲａｓ変異は、ヒトの癌の約３０％で確認されており、複数の下流シグナル伝達経路を活性化することが示されている。ＫＲａｓ変異の有病率にもかかわらず、それは困難な治療標的となっている。（Ｃｏｘ，Ａ．Ｄ．Ｄｒｕｇｇｉｎｇ ｔｈｅ Ｕｎｄｒｕｇｇａｂｌｅ ＲＡＳ：Ｍｉｓｓｉｏｎ Ｐｏｓｓｉｂｌｅ？ Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃ．２０１４，１３，８２８－８５１、Ｐｙｌａｙｅｖａ－Ｇｕｐｔａ，ｙ ｅｔ ａｌ．ＲＡＳ Ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ：Ｗｅａｖｉｎｇ ａ Ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃ Ｗｅｂ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ ２０１１，１１，７６１－７７４）。

ＷＯ２０１５／０５４５７２およびＷＯ２０１６／１６４６７５は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃと結合することができるある特定のキナゾリン誘導体を開示している。ＷＯ２０１６／０４４７７２はまた、そのようなクアンゾリン誘導体を使用する方法を開示している。ＷＯ２０２０／００８１２８２は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ阻害剤を開示している。ＷＯ２０１８／２０６５３９およびＷＯ２０２０／１７８２８２は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ ＲＡＳタンパク質に結合できる特定のヘテロアリール化合物を開示している。

代替の小分子ＫＲａｓ阻害剤を提供する必要性が残っている。特に、癌を治療するのに有用な、より強力で経口送達可能なＫＲａｓ阻害剤を提供する必要性がある。より具体的には、ＫＲａｓ ＧＴＰ活性を特異的に阻害する小分子阻害剤を提供する必要性がある。また、同じまたは低減されたＫＲａｓ阻害活性でより大きな有効性を示す小分子ＫＲａｓ阻害剤を提供する必要性もある。さらに、より良好な薬物動態／薬力学的特性を示すＫＲａｓ阻害剤を提供することが望ましい。また、不都合なもしくは望ましくない効果が低減または最小化された、増加された有効性を示すより強力なＫＲａｓ阻害剤を提供する必要性がある。本発明は、新規のＫＲａｓ阻害剤を提供することにより、これらの必要性のうちの１つ以上に対処する。

本発明は、以下の式Ｉの化合物であって、

式中、
Ａが、－ＯＣＨ_２－、－Ｎ（Ｒ_６）ＣＨ_２、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２－、－Ｎ（Ｒ_６）ＣＨ_２ＣＨ_２－、－ＣＨ_２ＯＣＨ_２－、または－ＣＨ_２Ｎ（Ｒ_６）ＣＨ_２－であり、
Ｂが、－ＣＨ_２－または－Ｃ（Ｏ）－であり、
Ｙが、－Ｃ（ＣＮ）－または－Ｎ－であり、
Ｒ_１が、－ＣＮ、－Ｃ（Ｏ）Ｃ≡ＣＲ_８、または以下の式の基であり

Ｒ_２が、Ｈ、メチル、または－ＣＨ_２ＣＮであり、
Ｒ_３およびＲ_５が、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、－Ｃ_０－３アルキル－シクロプロピル、任意にＲ_１０で１～３回置換されている－Ｃ_１－６アルキル、または任意にＲ_１０で１～３回置換されている－Ｏ－Ｃ_１－６アルキルであり、
Ｒ_４が、Ｈ、ハロゲン、または任意にＲ_１０で１～３回置換されている－Ｃ_１－６アルキルであり、
Ｒ_６が、Ｈまたは任意にＲ_１０で１～３回置換されている－Ｃ_１－６アルキルであり、
Ｒ_７が、Ｈ、ハロゲン、－ＮＲ_１１Ｒ_１２、－ＣＨ_２ＮＲ_１１Ｒ_１２、任意にＲ_１０もしくはＲ_１３で１～３回置換されている－Ｃ_１－６アルキル、－Ｃ_０－３アルキルシクロプロピル、または任意にＲ_１０もしくはＲ_１３で１～３回置換されている－Ｏ－Ｃ_１－６アルキルであり、
Ｒ_８が、Ｈ、任意にＲ_１０で１～３回置換されている－Ｃ_１－４アルキル、または任意にＲ_１０で１～３回置換されている－Ｃ_３－６シクロアルキルであり、
Ｒ_９が、Ｈ、ハロゲン、－ＣＮ、－Ｃ_０－３アルキル－Ｃ_３－６シクロアルキル、または任意にＲ_１０で１～３回置換されている－Ｃ_１－６アルキルであり、
Ｒ_１０が、それぞれが出現ごとに独立して、ハロゲン、酸素、ヒドロキシ、－Ｃ_１－４アルキル、または－Ｏ－Ｃ_１－４アルキルであり、
Ｒ_１１およびＲ_１２が、それぞれ独立して、Ｈ、－Ｃ_１－４アルキル、または－Ｃ_１－４ヘテロアルキルであり、Ｒ_１１およびＲ_１２が、結合してヘテロシクロアルキルを形成してもよく、
Ｒ_１３が、それぞれが出現ごとに独立して、－Ｎ－Ｃ_１－４アルキルである、化合物、あるいはその薬学的に許容される塩を提供する。

本明細書で使用される場合、ハロゲンという用語は、フルオロ（Ｆ）、クロロ（Ｃｌ）、ブロモ（Ｂｒ）、またはヨード（Ｉ）を意味する。本明細書で使用する場合、アルキルという用語は、１～６個の炭素原子の飽和直鎖または分岐鎖の一価炭化水素基、例えば「－Ｃ_１－_６アルキル」を意味する。アルキルの例には、メチル、エチル、プロピル、１－プロピル、イソプロピル、ブチル、ペンチル、およびヘキシルが含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用する場合、ヘテロアルキルという用語は、２～５個の炭素原子および少なくとも１つのヘテロ原子を含有する飽和直鎖または分枝鎖の一価炭化水素基、例えば、「－Ｃ_１－_４ヘテロアルキル」を意味する。本明細書で使用する場合、シクロアルキルという用語は、３～６個の炭素原子を有する飽和一価環状分子、例えば、「－Ｃ_３－６シクロアルキル」を意味する。シクロアルキル基の例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、シクロヘテロアルキルという用語は、２～５個の炭素原子および少なくとも１つのヘテロ原子を有する飽和一価環状分子、例えば、「－Ｃ_３－６シクロヘテロアルキル」を意味する。シクロヘテロアルキル基の例には、ピロリジン、ピペリジン、イミダゾリジン、ピラゾリジン、およびピペラジンが含まれるが、これらに限定されない。

ゼロが示されている場合、例えば、－Ｃ_０－_３アルキル－Ｃ_３－６シクロアルキルの場合、置換基のアルキル成分は存在しないとすることができ、したがって、式ＩのＲ_９が、アルキルを先頭につけないシクロプロピル基である場合、置換基は、Ｒ_９について説明した－Ｃ_０－３アルキル－シクロプロピル置換基によって記載される（すなわち、置換基は－Ｃ_０シクロプロピルである）。

Ｒ_１１およびＲ_１２に関して、化学によりヘテロシクロアルキルを形成することが可能な場合、２つの基は、それらが結合している窒素と結合し得る。前記ヘテロシクロアルキル基の例には、ピペリジン、ピペラジン、およびモルホリンが含まれるが、これらに限定されない。

一実施形態では、本発明は、以下の式Ｉａの化合物であって、

式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ａ、Ｂ、およびＹが、上記で定義された通りである、化合物、またはその薬学的に許容される塩である。

一実施形態では、本発明は、Ａが－ＯＣＨ_２－、－Ｎ（Ｒ_６）ＣＨ_２－、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２－、－Ｎ（Ｒ_６）ＣＨ_２ＣＨ_２－である、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、Ａが－ＯＣＨ_２－もしくは－ＯＣＨ_２ＣＨ_２－である、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。よりさらなる実施形態では、本発明は、Ａが－ＯＣＨ_２ＣＨ_２－である、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらなる実施形態では、本発明は、Ｂが－Ｃ（Ｏ）－である、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらなる実施形態では、本発明は、Ｙが、－Ｃ（ＣＮ）－である、式ＩもしくはＩａの化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらなる実施形態では、本発明は、Ｙが－Ｎ－である、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらなる実施形態では、本発明は、Ｒ_１が、－ＣＮ、－Ｃ（Ｏ）Ｃ≡ＣＲ_８である、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。さらに別の実施形態では、本発明は、Ｒ_１が、以下の式の基である

式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらなる実施形態では、本発明は、Ｒ_２が、Ｈもしくはメチルである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。さらに別の実施形態では、本発明は、Ｒ_２が、Ｈである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらなる実施形態では、本発明は、Ｒ_３が、Ｈ、ハロゲン、メチル、メトキシ、エチル、イソプロピル、もしくはシクロプロピルである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。さらに別の実施形態では、本発明は、Ｒ_３が、ハロゲン（好ましくはＦまたはＣｌ）である、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらなる実施形態では、本発明は、Ｒ_４が、Ｈもしくはハロゲンである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。さらに別の実施形態では、本発明は、Ｒ_４が、ＨもしくはＦである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらなる実施形態では、本発明は、Ｒ_５が、ハロゲン（好ましくはＣｌ）である、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらなる実施形態では、本発明は、Ｒ_６が、ＨもしくはＣＨ_３である式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらなる実施形態において、本発明は、Ｒ_９が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＦ_３、もしくは－ＣＨ_２ＯＨである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。さらに別の実施形態では、本発明は、Ｒ_９が、Ｈである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらなる実施形態では、本発明は、Ｒ_７が、Ｈ、－ＣＨＦ_２、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、もしくは－ＣＨ_２－モルホリンである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。さらに別の実施形態では、本発明は、Ｒ_７が、Ｈである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ｒ_９が、Ｈであり、Ｒ_７が、Ｈ、－ＣＨＦ_２、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、もしくは－ＣＨ_２－モルホリンである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ｒ_９が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＦ_３、もしくは－ＣＨ_２ＯＨであり、Ｒ_７が、Ｈである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ｒ_７およびＲ_９が、両方ともＨである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ｒ_１が－ＣＮ、－Ｃ（Ｏ）Ｃ≡ＣＲ_８であり、Ｒ_８がＨ、メチル、－ＣＨ_２Ｆ、もしくは－ＣＨ_２ＯＨである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ｒ_１が、以下の式の基であり、

Ｒ_７およびＲ_９が、両方ともＨである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ｒ_１が、以下の式の基であり、

Ｒ_７が、ｔｅｒｔ－ブチルであり、およびＲ_９が、－ＣＮである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ａが、－ＯＣＨ_２－、－Ｎ（Ｒ_６）ＣＨ_２－、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２－、－Ｎ（Ｒ_６）ＣＨ_２ＣＨ_２－であり、Ｂが、－Ｃ（Ｏ）－である、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ａが、－ＯＣＨ_２－もしくは－ＯＣＨ_２ＣＨ_２－であり、Ｂが、－Ｃ（Ｏ）－である、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ａが、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２－であり、Ｂが－Ｃ（Ｏ）－である、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ａが、－ＯＣＨ_２－、－Ｎ（Ｒ_６）ＣＨ_２－、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２－、－Ｎ（Ｒ_６）ＣＨ_２ＣＨ_２－であり、Ｂが、Ｃ（Ｏ）であり、Ｒ_２が、Ｈもしくは－ＣＨ_３である、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ａが、－ＯＣＨ_２－もしくは－ＯＣＨ_２ＣＨ_２－であり、Ｂが、－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｒ_２が、Ｈもしくはメチルである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ａが、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２－であり、Ｂが、－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｒ_２が、Ｈもしくはメチルである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ａが、－ＯＣＨ_２－、－Ｎ（Ｒ_６）ＣＨ_２－、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２－、－Ｎ（Ｒ_６）ＣＨ_２ＣＨ_２－であり、Ｂが、－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｒ_２が、Ｈである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ａが、－ＯＣＨ_２－もしくは－ＯＣＨ_２ＣＨ_２－であり、Ｂが、－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｒ_２が、Ｈである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ａが、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２－であり、Ｂが、－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｒ_２が、Ｈである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ａが、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２－であり、Ｒ_２が、Ｈもしくはメチルである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ａが、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２－であり、Ｒ_２が、Ｈである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ｂが、－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｒ_２が、Ｈまたはメチルである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ｂが、－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｒ_２が、Ｈである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ｒ_３およびＲ_５が、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲンもしくはメチルから選択される、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ｒ_３もしくはＲ_５が、ハロゲンである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ｒ_３およびＲ_５が、ハロゲンである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ｒ_３およびＲ_５が、それぞれ独立して、ＦもしくはＣｌから選択される、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ｙが、－Ｃ（ＣＮ）－であり、Ｒ_４が、Ｈもしくはハロゲン（好ましくはＦもしくはＣｌ）である、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ｙが、－Ｎ－であり、Ｒ_４が、Ｈもしくはハロゲン（好ましくはＦもしくはＣｌ）である、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ｙが、－Ｃ（ＣＮ）－であり、Ｒ_３およびＲ_５が、それぞれ独立して、メチルもしくはハロゲンから選択される、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ｙが、－Ｃ（ＣＮ）－であり、Ｒ_３およびＲ_５が、それぞれハロゲン（好ましくはＦもしくはＣｌ）である、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ｙが、－Ｎ－であり、Ｒ_３およびＲ_５が、それぞれ独立して、メチルもしくはハロゲンから選択される、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ｙが、－Ｎ－であり、Ｒ_３およびＲ_５が、それぞれハロゲン（好ましくはＦもしくはＣｌ）である、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ａが－ＯＣＨ_２－、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２－、－Ｎ（Ｒ_６）ＣＨ_２ＣＨ_２－、－ＣＨ_２ＯＣＨ_２－、もしくは－ＣＨ_２Ｎ（Ｒ_６）ＣＨ_２であり、Ｂが、－ＣＨ_２－もしくは－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｙが、－Ｃ（ＣＮ）－もしくは－Ｎ－であり、Ｒ_１が、－ＣＮ、－Ｃ（Ｏ）Ｃ≡ＣＲ_８、もしくは以下の式の基であり

Ｒ_２が、Ｈもしくはメチルであり、Ｒ_３およびＲ_５がそれぞれＨ、Ｆ、Ｃｌもしくはメチルであり、Ｒ_４が、ＨもしくはＦであり、Ｒ_６が、Ｈもしくはメチルであり、Ｒ_７が、Ｈ、－ＣＨＦ_２、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２－モルホリンもしくはｔｅｒｔ－ブチルであり、Ｒ_８が、メチル、－ＣＨ_２Ｆもしくは－ＣＨ_２ＯＨであり、Ｒ_９が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＯＨもしくはＣＮである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

さらに別の実施形態では、本発明は、Ａが－ＯＣＨ_２－もしくは－ＯＣＨ_２ＣＨ_２－であり、Ｂが、－ＣＨ_２－もしくは－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｙが、－Ｃ（ＣＮ）－もしくは－Ｎ－であり、Ｒ_２、Ｒ_７、およびＲ_８が、それぞれＨであり、Ｒ_４が、Ｈもしくはハロゲンであり、Ｒ_３およびＲ_５が、それぞれハロゲンである、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

本発明は、さらに以下の式ＩＩの化合物であって、

式中、Ｒが、

であり、
Ｘが、ＣｌもしくはＦであり、
ｍが、１もしくは２である、化合物。

またはその薬学的に許容される塩を提供する。

本発明はまた、以下の式ＩＩａの化合物であって、

式中、Ｒが、

であり、
Ｘが、ＣｌもしくはＦであり、
ｍが、１もしくは２である、化合物。

またはその薬学的に許容される塩を提供する。

式ＩＩの化合物を説明する別の方法は、以下の式Ｉｂの化合物

またはその薬学的に許容される塩によるものであり、式中、
Ａが、－ＯＣＨ_２－もしくは－ＯＣＨ_２ＣＨ_２－であり、
Ｙが、－Ｃ（ＣＮ）－もしくは－Ｎ－であり、
Ｒ_３が、ＣｌもしくはＦであり、
Ｙが、Ｃ（ＣＮ）である場合、Ｒ_４が、ＨもしくはＦであり、
Ｙが、Ｎである場合、Ｒ_４が、Ｆである。

式ＩＩａの化合物を説明する別の方法は、式Ｉｂによるものであり、式中、Ａが、

である。

本発明はまた、以下の式ＩＩＩ～ＶＩのうちのいずれか１つから選択される化合物、

、またはその薬学的に許容される塩も提供する。

別の形態では、本発明は、以下の式ＩＩＩの化合物

、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

別の形態では、本発明は、以下の式ＩＶの化合物

、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

別の形態では、本発明は、以下の式Ｖの化合物

、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

別の形態では、本発明は、以下の式ＶＩの化合物

、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

本発明はまた、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体、希釈剤、もしくは賦形剤と、を含む、薬学的組成物を提供する。

本発明はまた、癌を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。様々な実施形態では、癌は、肺癌、大腸癌、膵臓癌、膀胱癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵巣癌、胆管癌または食道癌である。好ましい実施形態では、癌は、非小細胞肺癌、膵臓癌、または大腸癌である。さらにより好ましい実施形態では、癌は、非小細胞肺癌である。

さらに別の形態では、本発明はまた、癌を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を含み、その癌は、変異体ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃタンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、癌は、非小細胞肺癌であり、その癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、癌は、大腸癌であり、その癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、癌は、変異体膵臓癌であり、その癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、本発明は、他の起源の癌を有するＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体を治療する方法を含む。

本発明はまた、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ変異を有する癌の患者を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。

本発明はまた、調節を必要とする患者における変異体ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ酵素を調節する方法であって、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することによる、方法を提供する。好ましくは、本方法は、ヒト変異体ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ酵素を阻害することを含む。

本発明はまた、治療を必要とする患者において癌を治療する方法を提供し、患者は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現すると判定された癌を有する。本方法は、有効量の、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む。１つ以上の癌細胞のＧ１２Ｃ変異状態は、当該技術分野で既知のいくつかアッセイにより決定され得る。典型的には、１つ以上の癌細胞を含む１つ以上の生検が得られ、シークエンシングおよび／またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）に供される。循環細胞遊離ＤＮＡはまた、例えば、進行性癌において使用され得る。変異状態（例えば、１つ以上の癌細胞または循環細胞遊離ＤＮＡにおける、Ｇ１２Ｃ変異状態）の決定に使用される配列決定およびＰＣＲ技術の非限定的な例には、直接シークエンシング、次世代シークエンシング、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）、マルチプレックスＰＣＲ、ならびにパイロシークエンシングおよびマルチアナライトプロファイリングが挙げられる。

本発明はまた、療法に使用するための、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する。化合物またはその薬学的に許容される塩は、癌の治療における使用のためのものであり得る。好ましくは、癌は、肺癌、大腸癌、膵臓癌、膀胱癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵巣癌、胆管癌または食道癌である。好ましい実施形態では、癌は、非小細胞肺癌、膵臓癌、または大腸癌である。さらにより好ましい実施形態では、癌は、非小細胞肺癌である。他の実施形態では、癌は、変異体ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃタンパク質を発現する１つ以上の癌細胞を有する。好ましくは、癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体非小細胞肺癌、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体大腸癌、およびＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体膵臓癌から選択される。別の実施形態では、癌は非小細胞肺癌であり、１つ以上の細胞がＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する。別の実施形態では、癌は大腸癌であり、１つ以上の細胞がＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する。別の実施形態では、癌は膵臓癌であり、１つ以上の細胞がＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する。別の実施態様では、患者が、化合物またはその薬学的に許容される塩の投与前に、前記ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有すると判定された癌を有する。

本発明はまた、癌を治療するための薬物の製造における、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。好ましくは、癌は、肺癌、大腸癌、膵臓癌、膀胱癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵巣癌、胆管癌または食道癌である。好ましい実施形態では、癌は、非小細胞肺癌、膵臓癌、または大腸癌である。さらにより好ましい実施形態では、癌は、非小細胞肺癌である。他の実施形態では、癌は、変異体ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃタンパク質を発現する１つ以上の癌細胞を有する。好ましくは、癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体非小細胞肺癌、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体大腸癌、およびＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体膵臓癌から選択される。

本発明はまた、癌を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩と、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＤ４／ＣＤＫ６阻害剤、またはその薬学的に許容される塩、ＥＧＦＲ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩、ＥＲＫ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩白金剤（ｐｌａｔｉｎｕｍ ａｇｅｎｔ）、およびペメトレキセド、またはその薬学的に許容される塩のうちの１つ以上と、を投与することを含み、癌は、変異体ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃタンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。本発明はまた、癌の治療において、ＰＤ－１もしくはＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＤ４／ＣＤＫ６阻害剤、もしくはその薬学的に許容される塩、ＥＧＦＲ阻害剤、もしくはその薬学的に許容される塩、ＥＲＫ阻害剤、もしくはその薬学的に許容される塩白金剤、およびペメトレキセド、もしくはその薬学的に許容される塩のうちの１つ以上と、同時に、別々に、もしくは連続的に組み合わせて使用するための、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。本発明はまた、癌の治療において、同時に、別々に、もしくは連続的に使用するための、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩と、ＰＤ－１もしくはＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＤ４／ＣＤＫ６阻害剤、もしくはその薬学的に許容される塩、ＥＧＦＲ阻害剤、もしくはその薬学的に許容される塩、ＥＲＫ阻害剤、もしくはその薬学的に許容される塩白金剤、およびペメトレキセド、もしくはその薬学的に許容される塩のうちの１つ以上とを含む、組み合わせを提供する。

本発明はまた、癌を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩、およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤を投与することを含む、方法を提供し、その癌は、変異体ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃタンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。本発明はまた、癌の治療における使用のため、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤と同時に、別々に、または連続的に組み合わせて使用するための、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。本発明はまた、癌の治療における、同時、別々、または連続的な使用のための、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩と、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤と、を含む、組み合わせを提供する。一実施形態では、化合物は、式Ｉ～ＶＩの化合物、またはその薬学的に許容される塩である。別の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤はペムブロリズマブである。別の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤はニボルマブである。別の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤はシミプリマブ（ｃｉｍｉｐｌｉｍａｂ）である。別の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤はセンチリマブ（ｓｅｎｔｉｌｉｍａｂ）である。別の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤はアテゾリズマブである。別の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤はアベルマブである。別の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤はデュルバルマブである。別の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤はロダピリマブ（ｌｏｄａｐｉｌｉｍａｂ）である。別の実施形態では、癌は、非小細胞肺癌であり、その癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、癌は、大腸癌であり、その癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、癌は、変異体膵臓癌であり、その癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、本発明は、他の起源の癌を有するＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体を治療する方法を含む。

本発明はまた、癌を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩と、ＣＤＫ４／ＣＤＫ６阻害剤、またはその薬学的に許容される塩とを投与することを含む、方法を提供し、その癌は、変異体ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃタンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。本発明はまた、癌の治療における使用のため、ＣＤＫ４／ＣＤＫ６阻害剤、またはその薬学的に許容される塩との同時、別々、または連続的な組み合わせで使用するための、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供し、その癌は、変異体ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃタンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。本発明はまた、癌の治療における、同時、別々、または連続的な使用のための、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩と、ＣＤＫ４／ＣＤＫ６阻害剤、またはその薬学的に許容される塩と、を含む、組み合わせを提供し、その癌は、変異体ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃタンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、ＣＤＫ４／ＣＤＫ６阻害剤はアベマシクリブである。別の実施形態では、ＣＤＫ４／ＣＤＫ６阻害剤はパルボシクリブである。別の実施形態では、ＣＤＫ４／ＣＤＫ６阻害剤はリボシクリブである。別の実施形態では、癌は、非小細胞肺癌であり、その癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、癌は、大腸癌であり、その癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、癌は、変異体膵臓癌であり、その癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、本発明は、他の起源の癌を有するＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体を治療する方法を含む。

本発明はまた、癌を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩と、ＥＧＦＲ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩とを投与することを含む、方法を提供し、その癌は、変異体ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃタンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。本発明はまた、癌の治療のため、ＥＧＦＲ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩と、同時に、別々に、または連続的に組み合わせて使用するための、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。本発明はまた、癌の治療における、同時、別々、または連続的な使用のための、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩と、ＥＧＦＲ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩と、を含む、組み合わせを提供する。一実施形態では、化合物は、式Ｉ～ＶＩの化合物、またはその薬学的に許容される塩である。別の実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤はエルロチニブである。別の実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤はアファチニブである。別の実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤はゲフィチニブである。別の実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤はセツキシマブである。別の実施形態では、癌は、非小細胞肺癌であり、その癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、癌は、大腸癌であり、その癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、癌は、変異体膵臓癌であり、その癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、本発明は、他の起源の癌を有するＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体を治療する方法を含む。

本発明はまた、癌を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩と、ＥＲＫ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩とを投与することを含む、方法を提供し、その癌は、変異体ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃタンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。本発明はまた、癌の治療のため、ＥＲＫ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩との同時、別々、または連続的な組み合わせで使用するための、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供し、その癌は、変異体ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃタンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。本発明はまた、癌の治療における、同時、別々、または連続的な使用のための、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩と、ＥＲＫ阻害剤、またはその薬学的に許容される塩と、を含む、組み合わせを提供する。一実施形態では、化合物は、式Ｉ～ＶＩの化合物、またはその薬学的に許容される塩である。別の実施形態では、ＥＲＫ阻害剤はＬＹ３２１４９９６である。別の実施形態では、ＥＲＫ阻害剤はＬＴＴ４６２である。別の実施形態では、ＥＲＫ阻害剤はＫＯ－９４７である。別の実施形態では、癌は、非小細胞肺癌であり、その癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、癌は、大腸癌であり、その癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、癌は、変異体膵臓癌であり、その癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、本発明は、他の起源の癌を有するＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体を治療する方法を含む。

本発明はまた、癌を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩と、白金剤と、を投与することを含む、方法を提供し、その癌は、変異体ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃタンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。本発明はまた、癌の治療のため、白金剤、またはその薬学的に許容される塩との同時、別々、または連続的な組み合わせで使用するための、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供し、その癌は、変異体ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃタンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。本発明はまた、癌の治療における、同時、別々、または連続的な使用のための、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩と、白金剤と、を含む、組み合わせを提供する。一実施形態では、化合物は、式Ｉ～ＶＩの化合物、またはその薬学的に許容される塩である。別の実施形態では、白金剤はシスプラチンである。別の実施形態では、白金剤はカルボプラチンである。別の実施形態では、白金剤はオキサリプラチンである。別の実施形態では、癌は、非小細胞肺癌であり、その癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、癌は、大腸癌であり、その癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、癌は、変異体膵臓癌であり、その癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、本発明は、他の起源の癌を有するＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体を治療する方法を含む。

本発明はまた、癌を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩と、ペメトレキセドと、を投与することを含む、方法を提供し、その癌は、変異体ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃタンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。本発明はまた、癌の治療のため、ペメトレキセドとの同時、別々、または連続的な組み合わせで使用するための、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供し、その癌は、変異体ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃタンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。本発明はまた、癌の治療における、同時、別々、または連続的な使用のための、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩と、ペメトレキセドと、を含む、組み合わせを提供し、その癌は、変異体ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃタンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。一実施形態では、化合物は、式Ｉ～ＶＩの化合物、またはその薬学的に許容される塩である。別の実施形態では、癌は、非小細胞肺癌であり、その癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、白金剤もまた患者に投与される。別の実施形態では、白金剤はシスプラチンである。別の実施形態では、白金剤はカルボプラチンである。別の実施形態では、白金剤はオキサリプラチンである。別の実施形態では、癌は、大腸癌であり、その癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、癌は、変異体膵臓癌であり、その癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、本発明は、他の起源の癌を有するＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体を治療する方法を含む。

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される塩」という用語は、臨床的および／または獣医学的使用に許容されると見なされる本発明の化合物の塩を指す。薬学的に許容される塩およびそれらを調製するための一般的な方法論の例は、“Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ”Ｐ．Ｓｔａｈｌ，ｅｔ ａｌ．，２ｎｄ Ｒｅｖｉｓｅｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，２０１１およびＳ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９７７，６６（１），１－１９に見出され得る。

本発明の薬学的組成物は、薬学的に許容される添加剤を使用して調製され得る。薬学的組成物について本明細書で使用される「薬学的に許容される添加剤（複数可）」という用語は、組成物または製剤の他の添加剤と適合性であり、かつ患者に有害ではない１つ以上の担体、希釈剤、および賦形剤を指す。薬学的組成物およびそれらの調製のためのプロセスの例は、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ”，Ｌｏｙｄ，Ｖ．，ｅｔ ａｌ．Ｅｄｓ．，２２^ｎｄ Ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，２０１２に見出され得る。薬学的に許容される担体、希釈剤、および賦形剤の非限定的な例には、生理食塩水、水、デンプン、糖、マンニトール、およびシリカ誘導体、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、およびポリビニルピロリドンなどの結合剤、カオリンおよびベントナイト、ならびにポリエチルグリコールが含まれる。

本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、癌性病変または異常な細胞増殖および／もしくは細胞分裂の進行などの障害または疾患の治療において有効な用量である量を指す。主治医は、当業者として、従来技術の使用によって、および類似の状況下で得られた結果を観察することによって、有効量を容易に決定することができる。治療の１日あたりの投与量は、通常、１日あたりまたは１日２回約１ｍｇ～１日あたりまたは１日２回１０００ｍｇ、より好ましくは１日あたりまたは１日２回１００ｍｇ～１日あたりまたは１日２回９００ｍｇの範囲内である。化合物の有効量または用量を決定する際に考慮される要因には、化合物またはその塩を投与するかどうか；使用される場合、他の薬剤の同時投与、治療される患者の種類；患者の大きさ、年齢、および一般的な健康；障害の関与の程度または病期および／もしくは重症度；個々の患者の応答；投与の様式；投与される調製物の生物学的利用能特性；選択される投与計画；ならびに他の併用薬剤の使用が挙げられる。

治療担当医、獣医師、または医療従事者は、治療を必要とする患者に対して化合物の有効量を決定することができるであろう。好ましい薬学的組成物は、経口投与のための錠剤もしくはカプセル剤、経口投与のための溶液、または注射可能な溶液として製剤化され得る。錠剤、カプセル剤、または溶液は、癌の治療を必要とする患者を治療するのに有効な量で本発明の化合物を含み得る。

本明細書で使用される場合、「治療すること」、「治療する」、または「治療」という用語は、既存の症状、障害、状態の進行または重症度を遅らせるか、低減するか、または逆転させることを含み、これは癌性病変の成長または異常な細胞増殖および／もしくは細胞分裂を特に遅らせることを含み得る。

本明細書で使用される場合、「患者」という用語は、治療を必要とする哺乳動物を指す。好ましくは、患者は、癌、例えば、癌を有するＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体の治療を必要とするヒトである。

特定の略語は次のように定義される：「ＡＣＮ」はアセトニトリルを指し、ＡＩＢＮ」はアゾビスイソブチロニトリルを指し、「Ｂｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ」はＮ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）グリシンを指し、「ＤＣＭ」はジクロロメタンを指し、「ＤＩＥＡ」はＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンを指し、「ＤＭＡＰ」は４－ジメチルアミノピリジンを指し、「ＤＭＥＭ」はダルベッコ改変イーグル培地を指し、「ＤＭＦ」はＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを指し、「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを指し、「ＤＮＡ」はデオキシリボ核酸を指し、「ＤＰＥＰｈｏｓＰｄＣｌ_２」はジクロロビス（ジフェニルホフィノフェニル（ｄｉｐｈｅｎｙｌｐｈｏｐｈｉｎｏｐｈｅｎｙｌ））エーテルパラジウム（ＩＩ）を指し、「ＤＴＴ」はジチオスレイトールを指し、「ＥＤＴＡ」はエチレンジアミン四酢酸を指し、「ＥＧＴＡ」はエチレングリコール－ビス（β－アミノエチルエーテル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸を指し、「ＥＬＩＳＡ」は酵素結合免疫吸着測定法を指し、「ＥＲＫ」は、細胞外シグナル調節キナーゼを指し、「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを指し、「ＥｔＯＨ」はエタノールを指し、「ＦＢＳ」はウシ胎仔血清を指し、「ＧＤＰ」はグアノシン二リン酸を指し、「ＧＴＰ」はグアノシン三リン酸を指し、「ＨＰＬＣ」は高速液体クロマトグラフィーを指し、「ＨＲＰ」は西洋ワサビペルオキシダーゼを指し、「ＩＰＡ」はイソプロピルアルコールを指、「ＩＰＡｍ」はイソプロピルアミンを指し、「ＬＣ－ＥＳ／ＭＳ」は液体クロマトグラフィー－エレクトロスプレー質量分析を指し、「ＬＣ－ＭＳ」は液体クロマトグラフィー質量分析を指し、「ＭＡＰＫ」はマイトジェン活性化プロテインキナーゼを指し、「ＭｅＯＨ」はメタノールを指し、「ＮａＯＭｅ」はナトリウムメトキシドを指し、「ＮＢＳ」はＮ－ブロモスクシンイミドを指し、「ＮＣＳ」はＮ－クロロスクシンイミドを指し、「ＮＭＰ」は１－メチルピロリジン－２－オンを指し、「ＰＣＲ」は、ポリメラーゼ連鎖反応を指し、「ＲＰＭＩ」とは、ロズウェルパーク記念研究所を指し、「ＳＣＸ」は強陽イオン交換を指し、「ＴＥＡ」はトリエチルアミンを指し、「ＴＦＡ」はトリフルオロ酢酸を指し、「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指す。

個々の異性体、エナンチオマー、ジアステレオマー、およびアトロプ異性体は、選択的結晶化技術またはキラルクロマトグラフィーなどの方法により（例えば、Ｊ．Ｊａｃｑｕｅｓ，ｅｔ ａｌ．，“Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ，ａｎｄ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ”，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９８１およびＥ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ ａｎｄ Ｓ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎ，”Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”，Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４を参照されたい）、以下に列挙される化合物の合成の任意の好都合な点で分離または分割され得る。本発明は、アトロプ異性体であり、異なる立体配座で、または異なる回転異性体として存在し得るある特定の化合物を含む。アトロプ異性体は、単結合の周りの制限された回転から生じる異なる立体配座で存在する化合物である。アトロプ異性体は、単一の周りの回転に対するエネルギー障壁が十分に高く、相互変換の速度が、個々の回転異性体を互いに分離するのに十分に遅い場合、別個の化学種として分離され得る。本発明は、本明細書に開示される、または本明細書に開示される化合物を使用して作製することができる異性体、エナンチオマー、ジアステレオマー、およびアトロプ異性体のすべてを企図する。

式Ｉ～ＶＩうちのいずれか１つの化合物は、容易に変換され、薬学的に許容される塩として単離され得る。塩形成は、酸付加塩を形成するための薬学的に許容される酸の添加時に起こり得る。塩はまた、窒素または酸素の脱保護、すなわち、保護基の除去時に同時に形成することができる。塩形成の例、反応、および条件は、Ｇｏｕｌｄ，Ｐ．Ｌ．，“Ｓａｌｔ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｂａｓｉｃ ｄｒｕｇｓ，”Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，３３：２０１－２１７（１９８６）、Ｂａｓｔｉｎ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．“Ｓａｌｔ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｆｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｎｅｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｔｉｔｉｅｓ，”Ｏｒｇａｎｉｃ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，４：４２７－４３５（２０００）、およびＢｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ，”Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，６６：１－１９，（１９７７）に見出され得る。

本発明の化合物またはその塩は、様々な手順によって調製され得、それらのいくつかを以下の調製および実施例に例示する。本発明の化合物または塩を調製するために、記載される経路の各々についての特定の合成ステップを、異なる様式で組み合わせるか、または異なる経路のステップと併せてもよい。以下の調製における各ステップの生成物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィー、濾過、粉砕、および結晶化を含む、従来の方法によって回収することできる。

スキーム１、ステップＡは、ＣＣｌ_４などの適切な溶媒中でＮＢＳおよびＡＩＢＮを使用して化合物（１）を臭素化して化合物（２）を得るることを示す。ステップＢは、ＥｔＯＨや水などの適切な溶媒系で還流させてシアン化カリウムを使用する、化合物（２）の求核置換により化合物（３）を得ることを示す。ステップＣでは、ＤＭＦなどの適切な溶媒中で水素化ナトリウムを使用して化合物（３）にエトキシカルボニルイソチオシアネートを添加し、続いて化合物（４）に環化することを示す。ステップＤでは、還流ＤＭＳＯ中、ＮａＯＨ水溶液で化合物（４）を塩基性脱保護し、続いて、ＴＨＦおよびＤＭＦなどの溶媒系中で、ＤＩＥＡなどの適切な塩基および触媒ＤＭＡＰとともに二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチルを使用して再保護し、化合物（５）を得ることを示す。ステップＥでは、１，４－ジオキサンなどの適切な溶媒中で酢酸カリウムなどの適切な塩基と、酢酸パラジウムおよび１，１’－ビス（ジイソプロピルホスフィノ）フェロセンなどの触媒配位子系を使用して、化合物（５）の臭素とビス（ピナコラート）ジボロンとの反応により、化合物（６）を得ることを示す。当業者は、この反応を可能にするために様々な触媒－配位子の組み合わせを使用できることを認識するであろう。

スキーム２は、化合物（６）を合成するための代替経路を示す。ステップＡは、ＥｔＯＨなどの適切な溶媒中で水素化ホウ素ナトリウムなどの適切な還元剤を使用してベンズアルデヒド（７）を還元して化合物（８）を得ることを示す。ステップＢは、ＤＣＭなどの適切な溶媒中で塩化チオニルを使用して化合物（８）を塩素化して化合物（９）を得ることを示す。ステップＣは、ＤＭＳＯなどの適切な溶媒中でシアン化カリウムを使用して化合物（９）の求核置換により化合物（３）を得ること示す。ステップＤでは、ＤＭＦなどの適切な溶媒中で水素化ナトリウムを使用して化合物（３）にエトキシカルボニルイソチオシアネートを添加し、続いてＬ－プロリンとＣｕＩを使用して環化して化合物（４）を得ることを示す。ステップＥでは、還流ＤＭＳＯ中、ＮａＯＨ水溶液で化合物（４）を塩基性脱保護し、続いて、ＴＨＦなどの溶媒中で、ＤＩＥＡなどの適切な塩基および触媒ＤＭＡＰとともに二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチルを使用して再保護し、化合物（５）を得ることを示す。ステップＦは、１，４－ジオキサンなどの適切な溶媒中で酢酸カリウムなどの適切な塩基と、酢酸パラジウムおよびビス（２－ジフェニルホスフィノフェニル）エーテルなどの触媒配位子系を使用して、化合物（５）の臭素とビス（ピナコラート）ジボロンとの反応により、化合物（６）を得ることを示す。当業者は、この反応を可能にするために様々な触媒－配位子の組み合わせを使用できることを認識するであろう。

スキーム３、ステップＡは、ＭｅＯＨ中での水素化ホウ素ナトリウムによる化合物（１０）アルデヒドの還元と、それに続くＴＨＦなどの溶媒中でのＤＩＥＡなどの適切な塩基とともにメタンスルホン酸無水物を使用するメシル化により化合物（１１）を得ることを示す。化合物（１１）から化合物（１２）への変換に使用される条件は、スキーム１、ステップＢに見られる条件と本質的に類似している。ステップＣでは、ＤＭＦなどの適切な溶媒中でカリウムｔｅｒｔ－ブトキシドを使用して化合物（１２）にエトキシカルボニルイソチオシアネートを添加し、続いて化合物（１３）に環化することを示す。化合物（１３）から化合物（１４）への変換に使用される条件は、スキーム１、ステップＤに見られる条件と本質的に類似している。ステップＥでは、１，４－ジオキサンなどの適切な溶媒中で酢酸カリウムなどの適切な塩基と、酢酸パラジウムおよびＤＰＥＰｈｏｓＰｄＣｌ２などの触媒配位子系を使用して、化合物（１４）の臭素とビス（ネオペンチルグリコラート）ジボロンとの反応により、化合物（１５）を得ることを示す。当業者は、この反応を可能にするために様々な触媒－配位子の組み合わせを使用できることを認識するであろう。

スキーム４、ステップＡは、冷却反応温度を維持しながら、化合物（１６）と５－フルオロ－２－メトキシアニリンの反応からチオ尿素を形成し、その後塩基性脱保護して化合物（１７）を得ることを示す。ステップＢは、臭素を添加後、クロロホルム中での化合物（１７）の環化による化合物（１８）を提供を示す。ステップＣは、不活性雰囲気下で冷反応混合物を維持しながらＢＢｒ_３を添加することによって達成され得る化合物（１８）の脱メチル化により、化合物（１９）を得ることを示す。ステップＤは、１，４－ジオキサンなどの溶媒系中でＴＥＡなどの適切な塩基と触媒ＤＭＡＰを使用して、化合物（１９）を二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチルで保護して、化合物（２０）を得ることを示す。ステップＥに示すように、化合物（２０）をピリジンなどの塩基で処理し、続いてＤＣＭなどの溶媒中でトリフルオロメタンスルホン酸無水物で処理して、化合物（２１）を得る。ステップＦは、１，４－ジオキサンなどの適切な溶媒中で、酢酸カリウムなどの適切な塩基とテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）などの触媒を使用して、化合物（２１）のトリフラートとビス（ピナコラート）ジボロンとの反応により、化合物（２２）を得ることを示す。当業者は、この反応を可能にするために様々な触媒－配位子の組み合わせを使用できることを認識するであろう。

スキーム５は、化合物（２２）を合成するための代替経路を示す。ステップＡは、ＴＨＦなどの溶媒中での化合物（２３）と２－ブロモ－５－フルオロアニリンとの反応からのチオ尿素形成と、それに続く塩基性脱保護により化合物（２４）を得ることを示す。ステップＢは、硫酸などの溶媒中で三臭化ピリジニウムなどの適切な臭素化剤を使用して化合物（２４）を臭素化および環化して、化合物（２５）を得ることを示す。ステップＣは、ＤＣＭなどの溶媒系中でＤＭＡＰなどの適切な塩基を使用して化合物（２５）を二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチルで保護して、化合物（２６）を得ることを示す。ステップＤは、低温でＴＨＦなどの溶媒中で水素化ナトリウムで処理した後、ｎ－ブチルリチウムおよびホウ酸トリイソプロピルを添加することによる、化合物（２６）から化合物（２２）への変換を示す。

スキーム６、ステップＡは、ＤＭＦなどの適切な溶媒中でＮＣＳを用いて化合物（２７）を塩素化して化合物（２８）を得ることを示す。ステップＢは、化合物（２８）のアニリン窒素をヨウ素に変換するザンドマイヤー反応を示し、その条件は当業者によって知られており、化合物（２９）を得る。ステップＣは、化合物（２９）のエステルの、化合物（３０）の酸への塩基性加水分解を示す。

スキーム７、ステップＡ～Ｃは、スキーム６のステップＡ～Ｃに見られる方法と本質的に類似した方法で実施されて、化合物（３２～３４）を得る。

スキーム８、ステップＡは、スキーム６のステップＡの方法と本質的に類似した方法で実施されて、化合物（３６）を得る。ステップＢは、化合物（３６）のアニリン窒素を臭素に変換するザンドマイヤー反応を示し、その条件は当業者によって知られており、化合物（３７）を得る。ステップＣは、スキーム６のステップＣの方法と本質的に類似した方法で実施されて、化合物（３８）を得る。

スキーム９、ステップＡは、スキーム６のステップＡの方法と本質的に類似した方法で実施されて、化合物（４０）を得る。ステップＢは、スキーム８のステップＢの方法と本質的に類似した方法で実施されて、化合物（４１）を得る。

スキーム１０、ステップＡは、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムなどの適切な還元剤を用いたＤＣＭなどの適切な溶媒中の化合物（４２）と、ベンズアルデヒドとの間の還元的アミノ化により、化合物（４３）を得ることを、示す。ステップＢは、ＤＣＭなどの溶媒中のＴＥＡなどの適切な塩基とともにプロピルホスホン酸無水物を使用する、化合物（４３）と、ｂｏｃ保護アミノ酸との間のアミドカップリングにより、化合物（４４）を得ることを示す。ステップＣは、ＤＣＭなどの溶媒中でＴＦＡを使用する化合物（４４）の酸性脱保護および転位して化合物（４５）を得ることを示す。ステップＤは、ＴＨＦなどの溶媒中で水素化アルミニウムリチウムなどの還元剤を使用して化合物（４５）の全体的なアミド還元により、化合物（４６）を得ること示す。ステップＥは、重炭酸ナトリウム水溶液中で二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチルを使用して化合物（４６）を保護して化合物（４７）を得ることを示す。ステップＦは、水素化による化合物（４７）の脱保護により化合物（４８）を得ることを示す。

スキーム１１は、－７８℃でＤＣＭなどの溶媒中で塩化チオニルとイミダゾールを使用して化合物（４９）を環化した後、ＡＣＮ中の過ヨウ素酸ナトリウムと塩化ルテニウム（ＩＩＩ）で処理して化合物（５０－Ｒ）を得ることを示す。Ｓエナンチオマー（５０－Ｓ）は、同じ条件を使用して合成される。

スキーム１２では、ステップＡは、ＤＣＭなどの溶媒中のＮ、Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミドなどの適切なカップリング剤を使用して化合物（５１）とベンジルグリシンエチルエステルとの間にアミドカップリングにより化合物（５２）を得ることを示す。ステップＢは、ＤＣＭなどの溶媒中でＴＦＡなどの酸を使用する化合物（５２）から化合物（５３）への環化を示す。ステップＣは、ＴＨＦなどの溶媒中の水素化アルミニウムリチウムなどの還元剤による化合物（５３）の全体的なアミド還元および脱保護により化合物（５４）を得ることを示す。ステップＤは、ＭｅＯＨなどの溶媒中でＰｄ（ＯＨ）_２などの適切な触媒を使用して、化合物（５４）を化合物（５５）に水素化することを示す。ステップＥは、化合物（５５）の二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル保護およびその後のリン酸による塩形成により化合物（５６）を得ることを示す。

スキーム１３では、化合物（５７）は、スキーム６～９からの安息香酸ならびに市販の安息香酸を表す。ステップＡでは、ＴＨＦなどの溶媒中でＨＡＴＵおよびＤＩＥＡなどの適切な塩基を使用する化合物（５７）と化合物（５８）との間のアミドカップリングにより化合物（５９）を得ることを示す。あるいは、アミドカップリングは、ＴＨＦなどの溶媒中で２－クロロ－４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジンおよび４－メチルモルホリンなどの適切な塩基を使用して実施する。当業者は、アミドカップリングを実施するための様々な条件があることを認識するであろう。ステップＢは、ＤＭＦなどの溶媒中で水素化ナトリウムなどの適切な塩基を使用する、化合物（５９）から化合物（６０）への分子内環化を示す。

スキーム１４、ステップＡは、スキーム１３のステップＡの方法と本質的に類似した方法で実施されて、化合物（６３）を得る。ステップＢは、スキーム１３のステップＢの方法と本質的に類似した方法での化合物（６３）の環化と、それに続くヨウ化メチルによるメチル化からなる。化合物（６４）および（６５）は、このステップの後に回収される。

スキーム１５、ステップＡは、ＴＦＡ中のトリフルオロ酢酸タリウム（ＩＩＩ）での処理によって化合物（６６）を環化後、一酸化炭素雰囲気下で塩化パラジウム（ＩＩ）などの触媒とともに酸化マグネシウム、塩化リチウム、およびＭｅＯＨを、添加して化合物（６７）を得ることを示す。ステップＢは、濃硫酸中の硝酸カリウムを使用して化合物（６７）をニトロ化して、化合物（６８）を得ることを示す。ステップＣでは、ＤＣＭやＴＦＡなどの溶媒系中でＰｔ／Ｃを使用して化合物（６８）のニトロ基を水素化して化合物（６９）を得ることを示す。ステップＤは、化合物（６９）のアニリン窒素を塩素に変換するザンドマイヤー反応を示し、その条件は当業者によって知られており、化合物（７０）を得る。ステップＥは、ＮａＯＨ水溶液などの適切な塩基を加熱とともに使用して化合物（７０）を加水分解して化合物（７１）を得ることを示す。ステップＦでは、ＤＭＦやＴＨＦなどの溶媒系中でＮａＨなどの適切な塩基を使用して化合物（７１）を化合物（５０－Ｒ）でアルキル化して、化合物（７２）を得ることを示す。ステップＧは、ＤＭＦなどの溶媒中でＨＡＴＵおよびＤＩＥＡなどの適切な塩基を使用して、化合物（７２）で分子内アミドカップリングして化合物（７３）を得ることを示す。

スキーム１６、ステップＡは、スキーム６のステップＡの方法と本質的に類似した方法で実施されて、化合物（７５）を得る。ステップＢは、化合物（７５）のアニリン窒素をヨウ素に変換するザンドマイヤー反応を示し、その条件は当業者によって知られており、化合物（７６）を得る。ステップＣ～Ｅは、スキーム１５のステップＥ～Ｇの方法と本質的に類似した方法で実施されて、化合物（７７～７９）を得る。

スキーム１７、ステップＡは、酢酸などの適切な溶媒中でＮＣＳなどの適切な塩素化剤による化合物（８０）を加熱しながら塩素化して、化合物（８１）を得ることを示す。ステップＢは、ＴＨＦなどの溶媒中でトリフェニルホスフィンおよびアゾジカルボン酸ジイソプロピルを使用して、化合物（８１）と（８２）との間の光延反応により化合物（８３）を得ることを示す。ステップＣは、ＤＣＭなどの適切な溶媒中でジイソプロピルアミンおよび１－クロロエチルクロロホルメートを使用して化合物（８３）を脱ベンジル化して、化合物（８４）を得ることを示す。ステップＤは、ＴＨＦおよび水などの溶媒系中で水酸化リチウムなどの適切な塩基を使用して化合物（８４）上のエステルを塩基性加水分解して化合物（８５）を得ることを示す。ステップＥでは、ＤＣＭなどの溶媒中でのＴＥＡなどの適切な塩基とのプロピルホスホン酸無水物を使用する化合物（８５）の分子内アミドカップリングにより、化合物（８６）を得ることを示す。

スキーム１８は、化合物（３７）と化合物（８７）のカップリングとそれに続くＤＭＦなどの溶媒中で炭酸セシウムなどの適切な塩基を加熱しながら使用する環化により、化合物（８８）を得ることを示す。

スキーム１９、ステップＡは、Ｄ_２Ｏ中の重水素化ＥｔＯＨなどの溶媒系中でＫＯＨなどの適切な塩基での処理による、化合物（８９）から化合物（９０）への変換を示す。ステップＢは、ＴＨＦなどの溶媒中での化合物（９０）とマグネシウムとのグリニャール反応を示し、化合物（９１）を得る。ステップＣでは、ＴＨＦのような溶媒中、^１３ＣＯ_２による化合物（９１）のカルボキシル化で化合物（９２）を得ることを示す。ステップＤは、ＤＣＭのような触媒を用いてＤＭＦのような溶媒中で化合物（９２）と塩化オキサリルとを反応されることにより化合物（９３）を得ることを示す。

スキーム２０では、化合物（９４）は、スキーム１３～１８に記載されている三環系コアを表す。ステップＡでは、ＴＨＦ中のボランジメチルスルフィド錯体などの適切な還元剤を使用して化合物（９４）中のアミドを還元して、化合物（９５）を得る。スキーム１～５に記載されているように、化合物（９４）および化合物（９５）は両方とも、１，４－ジオキサンと水などの溶媒系中、リン酸三カリウムなどの適切な塩基とともに、１，１’－ビス（ジ－ｔｅｒｔ－ブチルホスフィノ）フェロセンパラジウムジクロリドなどの適切な触媒を使用して、加熱しながら、ボロネートとの鈴木クロスカップリングを受け、化合物（９６）を得ることができる。あるいは、このカップリングは、加熱しながら、トルエンなどの溶媒中の炭酸セシウムなどの塩基とともに、ＤＰＥＰｈｏｓＰｄＣｌ_２などの適切な触媒を使用して実施することができる。当業者は、このタイプの変換を実行するために利用することができる多くの触媒、塩基、および溶媒の組み合わせがあることを認識するであろう。ステップＣは、ＤＣＭなどの溶媒中でのＴＦＡなどの酸により化合物（９６）を酸性脱保護して、化合物（９７）を得ることを示す。ステップＤは、化合物（９７）とパートナーとの間のカップリングにより式Ｉの化合物を得ることを示す。パートナーは、酸塩化物、カルボン酸、または臭化シアンであり得る。酸塩化物の場合、ＤＣＭなどの溶媒中にＴＥＡやＤＩＥＡなどの適切な塩基が使用される。酸塩化物は、ＥｔＯＡｃ、ＴＨＦ、および水などの二相溶媒系中、塩基として炭酸カリウムとともに使用することもできる。パートナーがカルボン酸である場合、条件には、ＤＭＦなどの溶媒中のＤＩＥＡなどの適切な塩基とのプロピルホスホン酸無水物などの適切なカップリング試薬が含まれる。パートナーが臭化シアンの場合、ＤＣＭなどの溶媒中でＮａＯＨ水溶液などの適切な塩基を使用する。

調製例および実施例
次の調製および実施例は、本発明をさらに示し、本発明の化合物の典型的な合成を表すが、いかなる方法においても本発明の範囲を制限すると解釈されるべきではない。試薬および出発物質は、容易に入手可能であるか、または既知の手順によって、もしくは当業者によって行われ得る様々な改変を用いることによってのいずれかで容易に合成され得る。

化合物は、Ａｇｉｌｅｎｔ ＨＰ１１００液体クロマトグラフィーシステムで実行される液体クロマトグラフ－エレクトロスプレー質量分析（ＬＣ－ＥＳ／ＭＳ）によって特徴付けられ得る。エレクトロスプレー質量分析測定（ポジティブおよび／またはネガティブモードで取り込み）は、ＨＰ１１００ ＨＰＬＣにインターフェース接続されたＭａｓｓ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ四重極質量分析計で行う。ＬＣ－ＭＳ条件（低ｐＨ）：カラム：ＰＨＥＮＯＭＥＮＥＸ（登録商標）ＧＥＭＩＮＩ（登録商標）ＮＸ Ｃ－１８ ２．１×５０ｍｍ ３．０μｍ、勾配：５～１００％のＢで３分、次に１００％のＢで０．７５分 カラム温度：５０℃＋／－１０℃、流量：１．２ｍＬ／分、溶媒Ａ：０．１％ＨＣＯＯＨ含有脱イオン水、溶媒Ｂ：０．１％ギ酸含有ＡＣＮ、波長２１４ｎｍ。代替ＬＣ－ＭＳ条件（高ｐＨ）：カラム：ＷＡＴＥＲＳ（商標）ＸＴＥＲＲＡ（登録商標）ＭＳ Ｃ－１８カラム２．１×５０ｍｍ、３．５ｍ、勾配：５％の溶媒Ａで０．２５分、５％～１００％の勾配の溶媒Ｂで３分、および１００％の溶媒Ｂで０．５分、または１０％～１００％の溶媒Ｂで３分、および１００％の溶媒Ｂで０．７５分、カラム温度：５０℃＋／－１０℃、流量：１．２ｍＬ／分、溶媒Ａ：１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３ｐＨ９、溶媒Ｂ：ＡＣＮ、波長：２１４ｎｍ。

分取逆相クロマトグラフィーは、Ｍａｓｓ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ質量分析計およびＬｅａｐ自動試料採取装置／分画収集装置を備えたＡｇｉｌｅｎｔ１２００ＬＣ－ＥＳ／ＭＳで実施される。高ｐＨ方法は、７５×３０ｍｍのＰＨＥＮＯＭＥＮＥＸ（登録商標）ＧＥＭＩＮＩ（登録商標）－ＮＸ、１０×２０ｍｍのガードを備えた５μｍ粒径カラムで実行される。８５ｍＬ／分の流量。溶離液は、ＡＣＮ中１０ｍＭ重炭酸アンモニウム（ｐＨ１０）である。

調製物１
１，３－ジブロモ－２－（ブロモメチル）ベンゼン

四塩化炭素（５００ｍＬ）中の２，６－ジブロモトルエン（５０．０ｇ、１９４ｍｍｏｌ）の溶液にＮＢＳ（３５．０ｇ、１９５ｍｍｏｌ）を加える。混合物を８０℃に加熱し、次に、ＡＩＢＮ（３．２０ｇ、１９．１ｍｍｏｌ）を加える。混合物を１６時間還流する。この後、反応物を周囲温度まで冷却し、濾過する。濾液をＥｔＯＡｃで希釈し、水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄する。有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。得られた残留物を高真空下で乾燥させて、表題化合物を得る（６７．５ｇ、８４％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）ｄ ７．５８（２Ｈ，ｄ），７．０４（１Ｈ，ｔ），４．８６ （２Ｈ，ｓ）。

調製物２
（２，６－ジブロモフェニル）メタノール

水素化ホウ素ナトリウム（７．８３ｇ、２０７ｍｍｏｌ）を１０分間隔で３回に分けて、ＥｔＯＨ（１．４Ｌ）中の２，６－ジブロモベンズアルデヒド（１４８．７ｇ、５５２．３ｍｍｏｌ）の０℃撹拌溶液に加える。最後の添加後、混合物を３０分間撹拌してから、飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（６００ｍＬ）で注意深くクエンチする。ＤＣＭ（１．７５Ｌ）と水（２００ｍＬ）を加え、層を分離する。水層をＤＣＭでさらに抽出する。合わせた有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、シリカのパッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃ（２×５００ｍＬ）ですすぐ。濾液を真空で濃縮し、トルエンに取り、再び真空で濃縮して、表題化合物を白色の固体として得る（１４８．７ｇ、９９％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６）ｄ ７．６６（２Ｈ，ｄ），７．１７（１Ｈ，ｔ），５．２０（１Ｈ，ｔ），４．７４（２Ｈ，ｄ）。

調製物３
１，３－ジブロモ－２－（クロロメチル）ベンゼン

ＤＭＦ（０．５ｍＬ）で処理したＤＣＭ（１．５Ｌ）中の（２，６－ジブロモフェニル）メタノール（１９９．３ｇ、７４９．４ｍｍｏｌ）の０℃溶液に、塩化チオニル（１６０ｍＬ、２１９６ｍｍｏｌ）を１時間かけて滴下して加える。この後、混合物を周囲温度まで加温し、その後一晩５０℃に加熱する。熱を取り除き、反応物を０℃に冷却してから、水（５００ｍＬ）で注意深くクエンチする。混合物をＤＣＭで希釈し、層を分離する。有機物を飽和塩化ナトリウム水溶液、水、そして再び飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄する。有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、表題生成物を白色の固体として得る（２０６．９８ｇ、９５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６）ｄ ７．７５（２Ｈ，ｄ），７．２６（１Ｈ，ｔ），４．９５（２Ｈ，ｓ）。

調製物４
２－（２，６－ジブロモフェニル）アセトニトリル

ＥｔＯＨ（３５０ｍＬ）および水（９０ｍＬ）中の１，３－ジブロモ－２－（ブロモメチル）ベンゼン（５７．０ｇ、１３７ｍｍｏｌ）およびシアン化カリウム（２８．０ｇ、４１７ｍｍｏｌ）の混合物を５時間還流する。次に、混合物を周囲温度に冷却し、真空で濃縮する。残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄する。水相をＥｔＯＡｃで抽出する。合わせた有機抽出物を水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。得られた残留物を、１０～１００％ＤＣＭ／ヘキサンで溶出する、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、表題化合物を得る（３４．５ｇ、８７％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）ｄ ７．６２（２Ｈ，ｄ），７．１２（１Ｈ，ｔ），４．１４（２Ｈ，ｓ）。

代替調製物４
シアン化カリウム（１４２．２ｇ、２１８３．５ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（６００ｍＬ）中の１，３－ジブロモ－２－（クロロメチル）ベンゼン（２０６．９８ｇ、７２７．８３ｍｍｏｌ）の溶液に加え、周囲温度で２日間撹拌する。この後、混合物を氷水に注ぎ、２時間撹拌すると、白色の沈殿物が形成される。沈殿物を濾過し、水で３回洗浄してから、真空オーブンで乾燥させる。得られた固体を、１０～７０％のＤＣＭ／ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題化合物を白色の固体として得る（１８９．２３ｇ、９４％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６）ｄ ７．７８（２Ｈ，ｄ），７．２８（１Ｈ，ｔ），４．２２（２Ｈ，ｓ）。

調製物５
エチルＮ－（４－ブロモ－３－シアノ－ベンゾチオフェン－２－イル）カルバメート

ＤＭＦ（２００ｍＬ）中の２－（２，６－ジブロモフェニル）アセトニトリル（２０．０ｇ、７１．３ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却する。水素化ナトリウム（パラフィン油中６０質量％）（２．８５ｇ、７１．３ｍｍｏｌ）を少しずつ加える。添加後、混合物を０℃で１０分間撹拌し、次にエトキシカルボニルイソチオシアネート（８．６０ｍＬ、７１．４ｍｍｏｌ）を０～５℃で滴下して加える。添加後、混合物を周囲温度で１時間撹拌し、次に１００℃で４時間加熱する。この後、溶媒を真空で蒸発させる。残留物を、ＥｔＯＡｃと飽和重炭酸ナトリウム溶液の混合物中で撹拌する。得られた沈殿物を濾過により収集し、水で洗浄し、６０～６５℃の真空オーブンで一晩乾燥させて、表題化合物を得る（１０．５ｇ、４５％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）３２２．８／３２４．８［Ｍ－Ｈ］^－。

代替調製物５
水素化ナトリウム（パラフィン油中６０質量％）（２４．８５ｇ、６２１．３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５００ｍＬ）に懸濁し、０℃に冷却する。冷懸濁液に、ＤＭＦ（６００ｍＬ）中の２－（２，６－ジブロモフェニル）アセトニトリル（１６９．１４ｇ、６１５．１９ｍｍｏｌ）の溶液を、温度が７℃を超えて上昇しないように、１時間かけて滴下して加える。３０分後、エトキシカルボニルイソチオシアネート（７７．８１ｍＬ、６４６．０ｍｍｏｌ）を、依然として０℃で３０分かけて加える。混合物を０℃で１０分間撹拌してから、氷浴から取り出し、さらに２０分間撹拌する。この後、Ｌ－プロリン（１４．１６ｇ、１２３．０ｍｍｏｌ）およびヨウ化第一銅（１１．７１ｇ、６１．４９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を６５℃に４．５時間加熱する。混合物を、ＥｔＯＡｃ（１．６Ｌ）で希釈した０．５Ｍ水性ＥＤＴＡ（４Ｌ）で処理し、一晩激しく撹拌する。この後、得られた濁ったスラリーを濾過し、収集した固体を水およびＥｔＯＡｃで洗浄する。固体を真空中で１．５時間吸引乾燥させ、次に真空オーブンでさらに２時間乾燥させて、表題化合物を白色の固体として得る（１８７．２４ｇ、７７％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６）ｄ １１．７６（１Ｈ，ｓ），８．０１（１Ｈ，ｄ），７．６５（１Ｈ，ｄ），７．２７（１Ｈ，ｔ），４．９０（２Ｈ，ｑ），１．３１（３Ｈ，ｔ）。

調製物６
２－アミノ－４－ブロモ－ベンゾチオフェン－３－カルボニトリル

５Ｎ ＮａＯＨ（７６５ｍＬ、３８２５ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（４８０ｍＬ）中のエチル（Ｎ－（４－ブロモ－３－シアノ－ベンゾチオフェン－２－イル）カルバメート１５５ｇ、４７６．６ｍｍｏｌ）の溶液に加える。混合物を一晩１２５℃に加熱する。この後、熱を取り除き、反応物を氷水（４．２Ｌ）に注ぎ、１０分間激しく撹拌する。沈殿物が形成され、これを濾過し、水で洗浄し、真空オーブンで２日間乾燥させて、表題生成物を黄色の固体として得る（７３．６ｇ、６１％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６）ｄ７．９６（２Ｈ，ｓ），７．７０（１Ｈ，ｄ），７．４６（１Ｈ，ｄ），７．０２（１Ｈ，ｔ）。

調製物７
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－（４－ブロモ－３－シアノ－ベンゾチオフェン－２－イル）カルバメート

２－アミノ－４－ブロモ－ベンゾチオフェン－３－カルボニトリル（２０ｇ、７９．２ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（２１ｍＬ、１２０ｍｍｏｌ）、およびＤＭＡＰ（８００ｍｇ、６．５５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２７０ｍＬ）およびＤＭＦ（４０ｍＬ）溶液を二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（１９．６ｇ、８７．１ｍｍｏｌ）で処理する。混合物を窒素下、周囲温度で１８時間撹拌する。反応混合物を水、重炭酸ナトリウム溶液、およびＥｔＯＡｃで希釈し、次に１０分間撹拌する。得られた沈殿物を濾過により収集し、冷ＥｔＯＡｃで洗浄し、６０℃の真空オーブンで一晩乾燥させて、表題化合物をベージュ色の固体として得る（１０．８ｇ、３８．６％）。濾液をさらにＥｔＯＡｃで２回抽出する。合わせた有機抽出物を水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。得られた残留物を、２０～１００％のＤＣＭ／ヘキサンで溶出する、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、追加の化合物（１２．５ｇ、４５％）を得て、総収量２３．３ｇ（８３％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）３５１／３５３［Ｍ－Ｈ］^－。

代替調製物７
ＤＩＥＡ（７７ｍＬ、４４１ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（２ｇ、１６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２Ｌ）中の２－アミノ－４－ブロモ－ベンゾチオフェン－３－カルボニトリル（７４．５ｇ、２９４ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、続いて二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（７３．１ｇ、３２５ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を室温で一晩撹拌する。この後、混合物を水、ＥｔＯＡｃ、および飽和重炭酸ナトリウム水溶液で希釈し、次にこれを濾過してオフホワイトの固体を得る。この固体を水およびＥｔＯＡｃで洗浄し、次に一晩乾燥させて、表題生成物を得る（３２ｇ、３１％）。次に、濾液層を分離し、水性物をＥｔＯＡｃで２回抽出する。合わせた有機物を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。得られた残留物をＤＣＭ（２６０ｍＬ）に取り、超音波処理し、ヘキサン（２７５ｍＬ）でさらに希釈し、超音波処理し、粉砕し、濾過して、追加の表題生成物（６０．５ｇ、５８％）および合計収量９２．５ｇ（８９％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）３５１／３５３［Ｍ－Ｈ］^－。

調製物８
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［３－シアノ－４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ベンゾチオフェン－２－イル］カルバメート

１，４－ジオキサン（１５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチルＮ－（４－ブロモ－３－シアノ－ベンゾチオフェン－２－イル）カルバメート（１０．９０ｇ、３０．７ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（２３．５０ｇ、９２．５４ｍｍｏｌ）、および酢酸カリウム（９．０５ｇ、９２．２ｍｍｏｌ）の溶液に、５０℃で３０分間窒素をスパージする。フラスコに１，１’－ビス（ジイソプロピルホスフィノ）フェロセン（２．２５ｇ、５．３８ｍｍｏｌ）と酢酸パラジウム（０．７００ｇ、３．１２ｍｍｏｌ）を入れ、窒素下で１００℃に加熱する。２時間後、混合物を周囲温度に冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈し、珪藻土を通して濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄する。濾液をシリカゲル（１５０ｇ）で処理し、濃縮乾固してからカートリッジに装入する。粗生成物を、０～５０％ＤＣＭ／ヘキサンで溶出する、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、表題化合物を得る（９．１５ｇ、６７％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：３９９．２（Ｍ－Ｈ）。

代替的な調製物８
１，４－ジオキサン（５００ｍＬ）を加熱して、窒素を１時間スパージししながら還流させるその後、窒素をスパージし続けながら、温度を８０℃に下げる。この温度で、ｔｅｒｔ－ブチルＮ－（４－ブロモ－３－シアノ－ベンゾチオフェン－２－イル）カルバメート（３２ｇ、９０．５９ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（６０ｇ、２３６ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（２６．６７ｇ、２７１．８ｍｍｏｌ）、最後に酢酸パラジウム（２．０３ｇ、９．０４ｍｍｏｌ）およびビス（２－ジフェニルホスフィノフェニル）エーテル（８．５４ｇ、１５．９ｍｍｏｌ）を加える。混合物を１００℃で３時間加熱する。この後、熱を取り除き、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、珪藻土を通して濾過し、真空中で濃縮する。得られた残留物をＤＣＭに溶解し、２００ｇのシリカで処理し、真空中で濃縮する。このシリカをプレカラムに入れ、材料を、１０～９５％のＤＣＭおよび事前に混合した９５％のＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ溶液で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製する。得られた画分は、相対的純度（ｒｅｌａｔｉｖｅ ｐｕｒｉｔｙ）に基づいて分離される。各セットを別々に真空で濃縮し、ヘプタンで超音波処理し、粉砕し、濾過し、ヘプタンですすぐ。得られた固体を一晩乾燥させ、次に統合して、表題化合物を得る（２３．８６ｇ、６５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６）ｄ １１．３２（１Ｈ，ｓ），８．０２（１Ｈ，ｄ），７．５９（１Ｈ，ｄ），７．３４（１Ｈ，ｔ），１．５３（９Ｈ，ｓ），１．３７（１２Ｈ，ｓ）。

調製物９
６－ブロモ－２，３－ジフルオロベンゼンメタノール

６－ブロモ－２，３－ジフルオロベンズアルデヒド（２０．０ｇ、８８．７ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（２５０ｍＬ）に溶解し、水素化ホウ素ナトリウム（６．７０ｇ、１７７ｍｍｏｌ）を少しずつ加える。発熱反応を周囲温度に冷却した後（約１時間）、反応混合物を飽和塩化アンモニウム溶液に注ぎ、ＤＣＭで３回抽出する。合わせた有機抽出物を水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。残留物を高真空下で一晩乾燥させて、表題化合物を白色の固体として得る（１９．５ｇ、９７％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）ｄ ７．３７（１Ｈ，ｍ），７．０７（１Ｈ，ｍ），４．８８（２Ｈ，ｍ），２．１３（１Ｈ，ｍ）。

調製物１０
（６－ブロモ－２，３－ジフルオロフェニル）メタンスルホン酸メチル

６－ブロモ－２，３－ジフルオロベンゼンメタノール（１９．５ｇ、８５．７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２００ｍＬ）に溶解し、ＤＩＥＡ（１８．０ｍＬ、１０３ｍｍｏｌ）を加える。混合物を０℃に冷却し、次にメタンスルホン酸無水物（１７．１ｇ、９４．２ｍｍｏｌ）で処理する。周囲温度で１８時間撹拌した後、混合物をＥｔＯＡｃ：メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（１：１）で希釈し、冷水で洗浄する。層を分離し、水性物をＥｔＯＡｃ：メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（１：１）で２回抽出する。合わせた有機物を水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムおよび炭酸カリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮して、表題化合物を黄色の油として得る（２６．０ｇ、９９＋％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）ｄ ７．４４（１Ｈ，ｍ），７．１８（１Ｈ，ｍ），５．４３（２Ｈ，ｄ），３．１２（３Ｈ，ｓ）。

調製物１１
２－（６－ブロモ－２，３－ジフルオロ－フェニル）アセトニトリル

ＥｔＯＨ（２００ｍＬ）および水（４０．０ｍＬ）中の（６－ブロモ－２，３－ジフルオロフェニル）メタンスルホン酸メチル（２６．０ｇ、８２．０ｍｍｏｌ）およびシアン化カリウム（６．０６ｇ、９０．３ｍｍｏｌ）の混合物を３０分間還流し、その後、周囲温度に冷却する。溶媒を真空で除去し、残留物をＤＣＭに懸濁する。混合物を水、飽和重炭酸ナトリウム溶液、および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄する。有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。粗生成物を、１０～１００％ＤＣＭ／ヘキサンで溶出するシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題化合物（１７．９ｇ、９４％）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）ｄ ７．４４（１Ｈ，ｍ），７．１５（１Ｈ，ｍ），３．９１（２Ｈ，ｄ）。

調製１２
エチルＮ－（４－ブロモ－３－シアノ－７－フルオロ－ベンゾチオフェン－２－イル）カルバメート

ＤＭＦ（２００ｍＬ）中の２－（６－ブロモ－２，３－ジフルオロ－フェニル）アセトニトリル（１７．９ｇ、７７．２ｍｍｏｌ）の溶液を氷浴で冷却し、次にカリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（９．３０ｇ、８１．２ｍｍｏｌ）で少しずつ処理する。添加後、混合物を１０分間撹拌し（反応物は深赤色に変わる）、エトキシカルボニルイソチオシアネート（９．８０ｍＬ、８１．４ｍｍｏｌ）を滴下して加える。反応混合物を周囲温度で１時間撹拌し、次に１００℃で３０分間加熱する。次に、混合物を氷浴で１０分間冷却し、水（５００ｍＬ）を撹拌しながらゆっくりと加える。得られた沈殿物を濾過により収集し、水およびヘキサンですすぎ、風乾する。固体をさらに６０℃の真空オーブンで一晩乾燥させて、表題化合物を得る（２４．５ｇ、８４％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）３４０．８／３４２．８［Ｍ－Ｈ］^－。

調製物１３
２－アミノ－４－ブロモ－７－フルオロ－ベンゾチオフェン－３－カルボニトリル

エチルＮ－（４－ブロモ－３－シアノ－７－フルオロ－ベンゾチオフェン－２－イル）カルバメート（２４．５ｇ、７１．４ｍｍｏｌ）、ＤＭＳＯ（１００ｍＬ）、および５Ｎ ＮａＯＨ（８０．０ｍＬ、４００ｍｍｏｌ）の混合物を４時間還流する。混合物を周囲温度に冷却し、激しく撹拌しながら冷水で処理する。得られた沈殿物を濾過により回収し、水で洗浄し、６５℃の真空オーブンで一晩乾燥させて、表題化合物（１５．５ｇ、８０％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）２６８．８／２７０．８［Ｍ－Ｈ］^－。

調製物１４
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－（４－ブロモ－３－シアノ－７－フルオロ－ベンゾチオフェン－２－イル）カルバメート

表題化合物を、調製物７と本質的に類似した方法で２－アミノ－４－ブロモ－７－フルオロ－ベンゾチオフェン－３－カルボニトリルから調製する。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）３１４．８／３１６．８［Ｍ－ｔ－Ｂｕ＋Ｈ］^＋。

調製物１５
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［３－シアノ－４－（５，５－ジメチル－１，３，２－ジオキサボリナン－２－イル）－７－フルオロ－ベンゾチオフェン－２－イル］カルバメート

ｔｅｒｔ－ブチルＮ－（４－ブロモ－３－シアノ－７－フルオロ－ベンゾチオフェン－２－イル）カルバメート（１６．０ｇ、４１．４ｍｍｏｌ）およびビス（ネオペンチルグリコラト）ジボロン（３７．０ｇ、１５７ｍｍｏｌ）を窒素下、１，４－ジオキサン（３００ｍＬ）に溶解する。酢酸カリウム（１２．２ｇ、１２４ｍｍｏｌ）を加え、混合物に窒素を５０℃で１時間スパージする。ＤＰＥＰｈｏｓＰｄＣｌ２（３．０ｇ、４．２ｍｍｏｌ）を加え、フラスコを９５℃で１時間加熱する。次に、混合物を周囲温度に冷却し、真空中で約１００ｍＬに濃縮し、ヘプタン（２００ｍＬ）で希釈し、１０分間撹拌し、次いで、珪藻土を通して濾過し、ヘプタンおよびヘプタン：メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（１：１）ですすぐ。濾液を濃縮し、最小のＤＣＭに溶解し、シリカゲルのパッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃ：ヘプタン（１：１）ですすぐ。濾液を飽和塩化アンモニウム溶液および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄する。有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。残留物を、５～５０％（ＤＣＭ中２０％アセトン）／ヘキサンで溶出するシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物（１３．０ｇ、７８％）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６）ｄ １１．６（１Ｈ，ｓ），７．６１（１Ｈ，ｍ），７．２０（１Ｈ，ｍ），３．７８（４Ｈ，ｓ），１．５４（９Ｈ，ｓ），１．０３（６Ｈ，ｓ）。

調製例１６
（５－フルオロ－２－メトキシ－フェニル）チオ尿素

イソチオシアン酸ベンゾイル（１１０ｇ、６７１ｍｍｏｌ）とＴＨＦ（８７５ｍＬ）を合わせ、窒素下で５℃に冷却する。内部反応温度を１０℃未満に維持しながら、５－フルオロ－２－メトキシアニリン（８３．２ｍＬ、７０５ｍｍｏｌ）を滴下して加える。混合物を周囲温度に温め、３０分間撹拌する。５Ｎ ＮａＯＨ（１６１ｍＬ、８０５ｍｍｏｌ）および水（２００ｍＬ）を加え、混合物を３．５時間加熱還流する。この後、水（５００ｍＬ）および酢酸イソプロピル（８００ｍＬ）を加え、混合物を周囲温度に冷却する。濃縮ＨＣｌ水溶液を添加して、ｐＨを約９～１０に調整する。層を分離する。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。残留物にＥｔＯＡｃ（３６０ｍＬ）およびヘキサン（８４０ｍＬ）を加え、混合物を５分間還流する。この後、混合物を－２０℃に冷却し、一晩放置する。得られた固体を、濾別し、収集した固体を冷ヘキサンで洗浄して、表題化合物を無色の固体として得る（１１８ｇ、８８％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：２０１（Ｍ＋Ｈ）。

調製物１７
７－フルオロ－４－メトキシ－１，３－ベンゾチアゾール－２－アミン臭化水素酸塩

（５－フルオロ－２－メトキシ－フェニル）チオ尿素（１１８ｇ、５７１ｍｍｏｌ）とＣＨＣｌ_３（２Ｌ）の溶液を、窒素下で５℃に冷却する。内部反応温度を７℃未満に維持しながら、臭素（３０．１ｍＬ、５８２ｍｍｏｌ）を滴下して加える。混合物を０℃で３０分間撹拌した後、還流で２．２５時間加熱する。この後、混合物を－２０℃に冷却し、一晩放置する。得られた固体を、濾別し、冷ヘキサンで洗浄して、表題化合物を黄色の固体として得る（１４１ｇ、８９％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：１９９（Ｍ＋Ｈ）。

調製例１８
２－アミノ－７－フルオロ－１，３－ベンゾチアゾール－４－オール臭化水素酸塩

ＢＢｒ_３（１５０ｍＬ、１５８９ｍｍｏｌ）を、カニューレを介して、窒素下、０℃でＤＣＭ（１．５Ｌ）に加える。７－フルオロ－４－メトキシ－１，３－ベンゾチアゾール－２－アミン臭化水素酸塩（１４１ｇ、５０６ｍｍｏｌ）を１５分かけて少しずつ加え、反応混合物を周囲温度までゆっくりと温め一晩撹拌する。混合物を０℃に冷却し、内部温度を１０℃未満に維持しながら、ＭｅＯＨで注意深くクエンチする。クエンチしている間、ガス産物を冷５Ｎ ＮａＯＨにバブリングする。得られた固体を、濾過し、冷ＤＣＭで洗浄して、表題化合物を無色の固体として得る（１１７ｇ、８７％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：１８５（Ｍ＋Ｈ）。

調製例１９
ｔｅｒｔ－ブチル（７－フルオロ－４－ヒドロキシ－１，３－ベンゾチアゾール－２－イル）カルバメート

１，４－ジオキサン（１．５Ｌ）中の２－アミノ－７－フルオロ－１，３－ベンゾチアゾール－４－オール臭化水素酸塩（１１７ｇ、４４１ｍｍｏｌ）を１０℃に冷却する。内部反応温度を１５℃未満に維持しながらＴＥＡ（１２９ｍＬ、９２６ｍｍｏｌ）を加える。ＤＭＡＰ（２．７ｇ、２２ｍｍｏｌ）および二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（２２８ｇ、１０１４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物をゆっくりと周囲温度に温め、２日間撹拌する。混合物を水、ＥｔＯＡｃ、および飽和塩化ナトリウム水溶液で希釈し、層を分離する。有機層を真空中で濃縮する。ＭｅＯＨ（９００ｍＬ）およびＮａＯＭｅ（ＭｅＯＨ中５Ｍ、１３２ｍＬ）を加え、混合物を周囲温度で一晩撹拌する。追加のＮａＯＭｅ（ＭｅＯＨ中５Ｍ、１０ｍＬ）を加え、混合物を周囲温度で３時間撹拌してから、真空で濃縮する。水およびＥｔＯＡｃを加え、層を分離する。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、固体が形成されるまで真空中で濃縮する。ヘキサンを加え、得られた固体を濾過し、ヘキサンで洗浄して、表題化合物を淡褐色の固体として得る（９７．２ｇ、７８％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：２８３（Ｍ－Ｈ）。

調製例２０
２－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］－７－フルオロ－１，３－ベンゾチアゾール－４－イルトリフルオロメタンスルホネート

ｔｅｒｔ－ブチル（７－フルオロ－４－ヒドロキシ－１，３－ベンゾチアゾール－２－イル）カルバメート（１１６ｇ、４０７ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（１．４Ｌ）、およびピリジン（６６ｍＬ、８１４ｍｍｏｌ）を合わせて窒素下で５℃に冷却する。内部反応温度を１０℃未満に維持しながら、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（８３ｍＬ、４８８ｍｍｏｌ）を滴下して加える。混合物を水で希釈し、層を分離する。有機層を１０％クエン酸水溶液で洗浄する。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。得られた残留物を、Ａ中２５～２８％Ｂの勾配（Ａ：ヘキサン、Ｂ：ＥｔＯＡｃ中の２５％ＤＣＭ）で溶出する、順相クロマトグラフィーで精製し、表題化合物を黄色の固体（１２３ｇ、７３％）として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：４１５（Ｍ－Ｈ）。

調製例２１
Ｎ－［（２－ブロモ－５－フルオロ－フェニル）カルバモチオイル］ベンズアミド

ＴＨＦ（４００ｍＬ）中の２－ブロモ－５－フルオロアニリン（２５０ｇ、１２８９．４ｍｍｏｌ）の溶液を、オーバーヘッドメカニカルスターラーで撹拌する。ＴＨＦ（８００ｍＬ）中のベンゾイルイソチオシアネート（１３０ｇ、７８０．６ｍｍｏｌ）を、添加漏斗を使用して３０分にわたって添加する。添加中、水浴を使用して内部温度を３０℃未満に保つ。１．５時間後、反応混合物を水（３Ｌ）を含む３つの４リットルフラスコに均等に注ぐ。得られた固体を、焼結ガラス漏斗を通して真空濾過した。固体を脱イオン水（８Ｌ）ですすぎ、真空下で風乾して、表題化合物を黄褐色の固体として得た（４５６ｇ、９９＋％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）３５３／３５５［Ｍ－Ｈ］^－。

調製例２２
（２－ブロモ－５－フルオロ－フェニル）チオ尿素

Ｎ－［（２－ブロモ－５－フルオロ－フェニル）カルバモチオイル］ベンズアミド（１６００ｇ、４．５３ｍｏｌ）、ＴＨＦ（６Ｌ）、およびＭｅＯＨ（１．６Ｌ）の懸濁液に、５Ｎ ＮａＯＨ（１Ｌ）水溶液を加える。周囲温度で１８時間撹拌した後、反応混合物を珪藻土のパッドを通して濾過して、黒色の粒子を除去する。パッドをＴＨＦ／ＭｅＯＨで、次に１００％ＭｅＯＨですすいだ。溶媒を真空で除去して、黄褐色の固体を得る。氷水（４Ｌ）を固体に加え、オーバーヘッドスターラーを使用して、５Ｎ ＨＣｌ（約３００ｍＬ）を１００ｍＬずつ加え、ｐＨを７に調整する。追加の氷水を加え、混合物を約１時間撹拌する。水（４Ｌ）を加え、懸濁液を真空下で大きな焼結ガラス漏斗を通して濾過する。固体を脱イオン水ですすぎ、ほとんどの水を除去した後、固体をヘキサン（８Ｌ）ですすぎ、風乾する。固体を５０℃の真空オーブンに２４時間入れて、表題化合物をオフホワイトの固体として得る（１０３５ｇ、９２％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）２４９／２５１［Ｍ－Ｈ］^－。

調製例２３
４－ブロモ－７－フルオロ－１，３－ベンゾチアゾール－２－アミン

氷／塩化ナトリウム浴で冷却した硫酸（３５０ｍＬ）を、オーバーヘッドメカニカルスターラーで撹拌する。（２－ブロモ－５－フルオロ－フェニル）チオ尿素（１３０．５ｇ、５２３．９ｍｍｏｌ）を５分間かけて少しずつ加える。１０分後、内部温度が約１℃に達した。窒素下で、ピリジニウムトリブロミド（１８５ｇ、５４９．５３ｍｍｏｌ）を、内部温度を５℃未満に維持しながら、約１５分間にわたって８回に分けて添加する。発生した蒸気は、氷で冷却されたＮａＯＨトラップにバブリングされる。約０℃で７５分間撹拌した後、反応物を周囲温度に温める。次に、反応物を初期内部温度５０℃に加熱し、次に徐々に５９℃に加熱する。１．５時間後、反応物を周囲温度に冷却する。反応混合物を氷を含む大きなフラスコに注ぐ。１８．９Ｎ ＮａＯＨ（６２０ｍＬ）を使用してｐＨを約７に注意深く調整する。固体を焼結ガラス漏斗を通して濾過し、濾液のｐＨが脱イオン水のｐＨと一致するまで脱イオン水ですすいだ。固体を風乾し、次に約５０℃の真空オーブンに２４時間入れて、表題化合物を黄褐色の固体として得る（１２９．３ｇ、９９＋％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）２４７／２４９［Ｍ＋Ｈ］^＋。

調製例２４
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－（４－ブロモ－７－フルオロ－１，３－ベンゾチアゾール－２－イル）カルバメート

ＤＣＭ（１５００ｍＬ）中の４－ブロモ－７－フルオロ－１，３－ベンゾチアゾール－２－アミン（３７０．６ｇ、１５００ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（３６．６ｇ、３００ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液に、ガス発生を制御するような速度で添加漏斗を介してＤＣＭ（１５０ｍｌ）に溶解した二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（３８８ｇ、１７２４ｍｍｏｌ）を少しずつ加える。反応混合物を周囲温度で１時間撹拌し、次に二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（５．０ｇ、２３ｍｍｏｌ）の追加部分を加える。反応混合物を周囲温度で３０分間撹拌し、次に１０％クエン酸水溶液（８００ｍＬ）を加え、層を分離する。水層をＤＣＭで２回抽出し、合わせた有機抽出物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液で１回洗浄する。有機層を真空で濃縮し、残留物にＤＣＭ（２００ｍＬ）およびヘキサン（１８００ｍＬ）を加える。得られたスラリーをろ過し、風乾し、回収した固体を取っておく。濾液を真空中で濃縮し、残留物にＭｅＯＨ（５００ｍＬ）およびナトリウムメトキシド（２０ｍＬ、ＭｅＯＨ中５Ｎ、１００ｍｍｏｌ）を加える。混合物を４５℃で真空中で濃縮する。残留物に、ＭｅＯＨ（５００ｍＬ）および５Ｎ ＮａＯＨ（１００ｍＬ、５００ｍｍｏｌ）を加える。混合物を４５℃で真空中で濃縮する。残留物に水とＤＣＭを加え、層を分離する。水層をＤＣＭで１回抽出する。有機物を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。残留物に１００ｍＬのＤＣＭおよび９００ｍＬのヘキサンを加え、得られた固体をスラリー化し、濾過し、風乾し、最初に得られた固体と合わせて、表題化合物をオフホワイトの固体として得る（４８９．５５ｇ、９４％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）２９０．８／２９２．８［Ｍ－ｔ－Ｂｕ＋Ｈ］^＋。

調製例２５
［２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－７－フルオロ－１，３－ベンゾチアゾール－４－イル］ボロン酸

２－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］－７－フルオロ－１，３－ベンゾチアゾール－４－イルトリフルオロメタンスルホネート（２０．０ｇ、４８．１ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（１４．２ｇ、１４４ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラート）ジボロン（９７．７ｇ、３８５ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（５．５５ｇ、４．８ｍｍｏｌ）および１，４－ジオキサン（２４０ｍＬ）を合わせ、窒素を１０分間スパージする。混合物を８０℃で一晩加熱した後、周囲温度に冷却し、水およびＥｔＯＡｃで希釈する。層を分離する。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。アセトン（５００ｍＬ）、水（５００ｍＬ）、および酢酸アンモニウム（１１２ｇ、１４４３ｍｍｏｌ）を加える。これに続いて、内部反応温度を１８～２３℃に維持しながら、ＮａＩＯ_４（３０９ｇ、１４４３ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を周囲温度で一晩激しく撹拌する。この後、ＥｔＯＡｃを加える。混合物を３０分間撹拌し、珪藻土を通して濾過し、層を分離する。有機層を真空中で濃縮する。水層を飽和塩化ナトリウム水溶液で希釈し、ＥｔＯＡｃで２回抽出する。これらの有機抽出物を、以前に濃縮された有機層と合わせる。合わせた抽出物を、水、飽和塩化ナトリウム水溶液、水、および飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄する。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。残留物を少量のＤＣＭを含むヘキサン中にスラリー化する。得られた固体を濾過し、ヘキサンで洗浄して、表題化合物を黄褐色の固体として得る（１３．４ｇ、８９％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：３１３（Ｍ＋Ｈ）。

代替的調製２５
－１７℃の内部温度で、ＴＨＦ（２０００ｍＬ）中の水素化ナトリウム（パラフィン油中６０％）（３４．６ｇ、８６５ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＴＨＦ（５００ｍＬ）に溶解したｔｅｒｔ－ブチルＮ－（４－ブロモ－７－フルオロ－１，３－ベンゾチアゾール－２－イル）カルバメート（２５０．１８ｇ、７２０．６ｍｍｏｌ）の溶液を、添加の間に内部温度を－１０℃～－１５℃に維持しながら、１５分かけて加える。添加後、混合物を－１０℃～－１５℃で１５分間撹拌しその時点でガスの発生が止まった。反応混合物を－６５℃の内部温度に冷却し、次に、ｎ－ブチルリチウム（３５０ｍＬ、ヘキサン中２．５Ｍ、８７５ｍｍｏｌ）を、内部温度を－６０℃～－６５℃に維持するような速度で３０分かけて添加漏斗を介して滴下して加える。添加後、反応混合物をこの温度で２０分間撹拌し、次にホウ酸トリイソプロピル（４１６ｍｌ、１８００ｍｍｏｌ）を、内部温度を－６０℃未満に維持しながら１５分かけて滴下して加える。反応混合物を５時間４５分かけて０℃の内部温度までゆっくりと温め、次に飽和塩化アンモニウム水溶液（４００ｍＬ）を注意深く加えてガスの発生を制御する。混合物に水（４００ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）を加え、層を分離する。水層に十分な１Ｎ ＨＣｌ水溶液を加えてｐＨを３～４にし、次に水層をＥｔＯＡｃで２回抽出する。合わせた有機抽出物を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。残留物にｎ－ヘプタン（５００ｍＬ）を加え、混合物を５５℃で真空中で濃縮する。残留物にｎ－ヘプタンの追加部分（５００ｍＬ）を加え、混合物を５５℃で真空中で濃縮する。固体残留物に２００ｍＬのＤＣＭおよび１８００ｍＬのヘキサンを加え、混合物をスラリー化する。固体を濾過し、ヘキサンで洗浄し、風乾して、表題化合物をオフホワイトの固体として得る（２１７．２ｇ、９４％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：３１３（Ｍ＋Ｈ）。

調製例２６
４－アミノ－３，５－ジクロロ－２－フルオロ－安息香酸メチル

４－アミノ－２－フルオロ安息香酸メチル（２７．０ｇ、１６０ｍｍｏｌ）およびＮＣＳ（４６．３ｇ、３３６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３００ｍＬ）に溶解し、８０℃で加熱する。４０分後、反応混合物を氷水に注ぎ、ＥｔＯＡｃで２回抽出する。合わせた有機抽出物を５Ｎ ＮａＯＨで１回、０．２Ｎ ＬｉＣｌ水溶液で２回洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、表題化合物を得る（３７．０ｇ、９７％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^３５Ｃｌ／^３７Ｃｌ）２３８／２４０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

調製例２９
３，５－ジクロロ－２－フルオロ－４－ヨード－安息香酸

ヨウ化第一銅（１０．０ｇ、５１．５ｍｍｏｌ）、ＡＣＮ（１２８ｍＬ）および亜硝酸ｔｅｒｔ－ブチル（１３．６ｍＬ、１０３ｍｍｏｌ）を合わせ、混合物を５０℃で３０分間加熱し、次に混合物に４－アミノ－３，５－ジクロロ－２－フルオロ－安息香酸メチル（６．１１ｇ、２５．７ｍｍｏｌ）を加える。ガスの発生が認められる。５０℃で１時間４０分の後、溶媒を真空で除去する。水、ＥｔＯＡｃ、および１Ｎ ＨＣｌ水溶液を加える。水層をＥｔＯＡｃで２回抽出する。合わせた有機抽出物を亜硫酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。粗混合物を、ヘキサン中の３～５％ＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。最もきれいな画分を合わせ、真空中で濃縮して、メチルエステル中間体を得る（５．８５ｇ、６５％）。

３，５－ジクロロ－２－フルオロ－４－ヨード－安息香酸メチル（５．８５ｇ、１６．８ｍｍｏｌ）にＭｅＯＨ（１７０ｍＬ）および１Ｎ ＮａＯＨ水溶液（１７ｍＬ）を加える。周囲温度で４０分以上撹拌する過程で、材料を完全に溶解させる。ＭｅＯＨを真空中で除去する。残留物にＥｔＯＡｃおよび１Ｎ ＨＣｌ水溶液を加える。水層をＥｔＯＡｃで２回抽出し、合わせた有機抽出物を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮し表題化合物を得る（５．５６ｇ、９９％）：^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）ｄ８．０６３－８．０８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．３４Ｈｚ）。

調製物３０
５－クロロ－２－フルオロ－４－ヨード－３－メチル－安息香酸メチル

ＡＣＮ（１００ｍＬ）中の４－アミノ－５－クロロ－２－フルオロ－３－メチル－安息香酸メチル（１４．８ｇ、６８．０ｍｍｏｌ）を、ヨウ化第一銅（１５．７ｇ、８２．４ｍｍｏｌ）、ＡＣＮ（１００ｍＬ）および亜硝酸ｔｅｒｔ－ブチル（１２．３ｍＬ、１０３ｍｍｏｌ）の撹拌混合物に加える。反応物をＮ_２下、４０℃で１８時間撹拌する。混合物を真空中で元の体積の半分に濃縮し、ＥｔＯＡｃで希釈し、珪藻土を通して２回濾過する。集めた濾液を真空中で濃縮する。粗混合物を、ヘキサン中のＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。最もきれいな画分を合わせ、真空中で濃縮して、表題化合物（２２．４６ｇ、５２．８％）を得る。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）ｄ ７．９１（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），２．５３（ｄ，Ｊ＝３．１Ｈｚ，３Ｈ）。

調製物３１
４－アミノ－３－クロロ－２，５－ジフルオロ安息香酸メチル

ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の４－アミノ－２，５－ジフルオロ安息香酸メチル（２５ｇ、１２７ｍｍｏｌ）の溶液に、周囲温度でＮＣＳ（１９．９ｇ、１４６ｍｍｏｌ）を加え、次いで混合物を４５℃で１８時間加熱する。反応混合物を水（１．５Ｌ）とジエチルエーテル（１．２Ｌ）の混合物に注ぎ、層を分離する。水層をジエチルエチル（１Ｌ）で抽出する。合わせた有機抽出物を、冷１Ｎ ＮａＯＨ水溶液、水、および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄する。有機物を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。残留物を、１０～３０％（ＤＣＭ中の７５％ＥｔＯＡｃ）／ヘキサンで溶出する、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、表題化合物を得る（２４．５ｇ、８７％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：２２２．２（Ｍ＋Ｈ）。

調製物３２
４－ブロモ－３－クロロ－２，５－ジフルオロ安息香酸メチル

ＡＣＮ（１００ｍＬ）中の臭化第二銅（６．２ｇ、２８ｍｍｏｌ）と亜硝酸ｔｅｒｔ－ブチル（２０ｍＬ、１６８ｍｍｏｌ）の冷混合物に、ＡＣＮ（１００ｍＬ）中の４－アミノ－３－クロロ－２，５－ジフルオロ安息香酸メチル（２４．５ｇ、１１１ｍｍｏｌ）を加える。緑色の混合物を１８時間かけて周囲温度まで温める。次に、反応混合物をＡＣＮで希釈し、珪藻土のパッドを通して濾過し、ＤＣＭですすぐ。濾液を濃縮し、ＤＣＭで希釈し、珪藻土で再度濾過し、ＤＣＭですすぐ。濾液を水、飽和塩化アンモニウム溶液（２Ｘ）、飽和塩化ナトリウム水溶液（２Ｘ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。残留物を、０～５０％（ＤＣＭ中１０％ＥｔＯＡｃ）／ヘキサンで溶出する、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物を得る（２３．５ｇ、７０％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）ｄ ７．６８（１Ｈ，ｍ），３．９９（３Ｈ，ｓ）。

調製例３４
４－ブロモ－３－クロロ－２，５－ジフルオロ安息香酸

ＴＨＦ（１００ｍＬ）中の４－ブロモ－３－クロロ－２，５－ジフルオロ－安息香酸メチル（１０．８ｇ、３７．８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）を加える。均一な溶液を氷浴で冷却し、２Ｎ ＮａＯＨ（６０ｍＬ、１２０ｍｍｏｌ）を滴下して加える。添加後、混合物を周囲温度で３０分間撹拌する。有機溶媒を真空中で濃縮する。水性物を氷冷し、５Ｎ ＨＣｌ（２４ｍＬ）でｐＨを約２．０に調整する。水性物をＥｔＯＡｃ（３Ｘ）で抽出する。合わせた有機抽出物を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。得られた残留物をさらに６０℃の真空オーブンで一晩乾燥させて、表題化合物を得る（１０．３ｇ、９９％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ６）ｄ ７．８１（ｄｄ，Ｊ＝６．０，８．６Ｈｚ，１Ｈ）．

調製例３６
４－ブロモ－３－クロロ－５－フルオロ－２－ヒドロキシ－安息香酸メチル

酢酸（７０ｍＬ）中の４－ブロモ－５－フルオロ－２－ヒドロキシ－安息香酸メチル（９ｇ、３４．３ｍｍｏｌ）の溶液にＮＣＳ（１４ｇ、１０４．８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５５℃に加熱する。１８時間後、追加のＮＣＳ（５．５ｇ、３７．７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５５℃で２４時間撹拌する。次に、反応物を周囲温度に冷却し、過剰の酢酸を真空中で除去する。残留物を、１００％ＤＣＭで溶出する、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題化合物を固体として得る（７．１ｇ、７３％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）２８１／２８３［Ｍ－Ｈ］^－。

調製例３７
ｔｅｒｔ－ブチル（３ａＲ）－１，１－ジオキソ－３ａ，４，６，７－テトラヒドロ－３Ｈ－オキサチアゾロ［３，４－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート

ＤＣＭ（１８１ｍＬ）中の０℃のイミダゾール（２４．９ｇ、３６２ｍｍｏｌ）の懸濁液に、塩化チオニル（８．０ｍＬ、１１０ｍｍｏｌ）を滴下して加える。混合物を０℃で５分間および周囲温度で１時間撹拌する。混合物を－７８℃に冷却し、ＤＣＭ（１８１ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（３Ｒ）－３－（ヒドロキシメチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（８．００ｇ、３６．２ｍｍｏｌ）の溶液を４５分かけて滴下して加える。混合物を周囲温度に温め、２．５日間撹拌する。反応を飽和塩化アンモニウム水溶液でクエンチし、水とＤＣＭで希釈する。層を分離し、水層をＤＣＭで２回抽出する。合わせた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、琥珀色のシロップを得る。０℃のアセトニトリル（２８２ｍＬ）中のシロップの溶液に、水（９２ｍＬ）中の過ヨウ素酸ナトリウム（１０．２ｇ、４７．６ｍｍｏｌ）の溶液を加える。塩化ルテニウム（ＩＩＩ）（７６ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を加える。得られた懸濁液を０℃で５分間および周囲温度で５時間撹拌する。反応を飽和塩化アンモニウム水溶液でクエンチし、水およびＥｔＯＡｃで希釈する。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃで２回抽出する。合わせた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾紙で濾過し、次にシリカゲルのショートプラグで濾過する。濾液を真空中で濃縮する。残留物にＤＣＭを加え、混合物を真空中で濃縮し、真空下に一晩置いて、表題化合物を黄褐色の固体として得る（９．３９ｇ、９３％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）ｄ ４．６３（１Ｈ，ｄｄ），４．２３（１Ｈ，ｔ），４．２３（１Ｈ，ｂｒ ｓ），４．０７（１Ｈ，ｂｒ ｓ），３．６４（１Ｈ，ｍ），３．４５（１Ｈ，ｄ），３．１３（１Ｈ，ｍ），２．９６（２Ｈ，ｔｄ），１．４７（９Ｈ，ｓ）。

調製物３９
５－ブロモ－４－メチル－３Ｈ－イソベンゾフラン－１－オン

ＴＦＡ（７５ｍＬ）中の（３－ブロモ－２－メチルフェニル）メタノール（１５．０ｇ、７３．１ｍｍｏｌ）の懸濁液に、トリフルオロ酢酸タリウム（ＩＩＩ）（４１．８ｇ ７３．１ｍｍｏｌ）を加える。追加のＴＦＡ（２５ｍＬ）を使用して、トリフルオロ酢酸タリウム（ＩＩＩ）を反応容器に洗い流す。混合物を窒素下、周囲温度で一晩撹拌し、真空中で濃縮し、真空下で乾燥させて、淡褐色の固体を得る。固体を窒素下に置き、酸化マグネシウム（６．０１ｇ、１４９ｍｍｏｌ）、塩化リチウム（６．３２ｇ、１４９ｍｍｏｌ）、およびＭｅＯＨ（３００ｍＬ）と合わせる。塩化パラジウム（ＩＩ）（１．３２ｇ、７．３８ｍｍｏｌ）を加える。混合物を一酸化炭素で５回パージし、一酸化炭素雰囲気下（バルーン圧）に置く。混合物を周囲温度で２時間撹拌し、塩化パラジウム（ＩＩ）（２６２ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）および酸化マグネシウム（１．１８ｇ、２９．２ｍｍｏｌ）を加える。混合物を一酸化炭素で３回パージし、一酸化炭素雰囲気下（バルーン圧）に置く。混合物を周囲温度で３０分間撹拌し、塩化パラジウム（ＩＩ）（２６２ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）および酸化マグネシウム（１．１８ｇ、２９．２ｍｍｏｌ）を加える。混合物を一酸化炭素で４回パージし、一酸化炭素雰囲気下（バルーン圧）に置く。混合物を周囲温度で１．５時間撹拌し、塩化パラジウム（ＩＩ）（３２７ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）および酸化マグネシウム（１．７７ｇ、４３．９ｍｍｏｌ）を加える。混合物を一酸化炭素でパージし、一酸化炭素雰囲気下（バルーン圧）に置く。混合物を周囲温度で１．５時間撹拌し、珪藻土を通して濾過し、ＥｔＯＡｃで珪藻土を通して洗浄する。濾液を真空中で濃縮して残留物を得る。粗生成物を、０～３０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。生成物を含む画分を真空中で濃縮して、表題化合物を白色の固体として得る（１４．４８ｇ、７０％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）２２７．０／２２９．０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

調製物４０
５－ブロモ－４－メチル－６－ニトロ－３Ｈ－イソベンゾフラン－１－オン

濃硫酸（１６０ｍＬ）中の５－ブロモ－４－メチル－３Ｈ－イソベンゾフラン－１－オン（１４．４ｇ、５０．７ｍｍｏｌ、純度８０％）の溶液を－５℃に冷却して硝酸カリウム（９．６２ｇ、９５．２ｍｍｏｌ）を加える。混合物を窒素下で２．５時間撹拌し、撹拌しながら氷（７５０ｇ）を加える。混合物をＥｔＯＡｃで３回抽出する。合わせた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。粗物質を、１０～７０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。生成物を含む画分を真空で濃縮して、表題化合物をオフホワイトからイエロー／オレンジの固体として得る（１１．９８ｇ、８７％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）２８９．０／２９１．０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

調製物４１
６－アミノ－５－ブロモ－４－メチル－３Ｈ－イソベンゾフラン－１－オン

圧力フラスコに、５－ブロモ－４－メチル－６－ニトロ－３Ｈ－イソベンゾフラン－１－オン（１１．９８ｇ、４４．０４ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（１０００ｍＬ）、ＴＦＡ（３００ｍＬ、４ｍｏｌ）、および白金（炭素上５％、硫化、３．００ｇ、０．７６９ｍｍｏｌ）を加える。混合物を水素でパージし、１．２５時間４５ＰＳＩに加圧する。反応混合物を珪藻土を通して濾過し、ＤＣＭを通して洗浄する。濾液を真空中で濃縮して残留物を得る。残留物を真空下で乾燥させ、１０～６０％ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。生成物を含む画分を真空中で濃縮して、表題化合物を桃色の固体として得る（９．８６ｇ、９６％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）２４２．０／２４４．０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

調製物４２
５－アミノ－４，６－ジクロロ－３Ｈ－イソベンゾフラン－１－オン

周囲温度のＤＭＦ（１００ｍＬ）中の５－アミノ－３Ｈ－イソベンゾフラン－１－オン（１０．４４ｇ、６８．６０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮＣＳ（２０．５６ｇ、１５０．９ｍｍｏｌ）を加える。混合物を５０℃で２．５時間および周囲温度で一晩撹拌する。混合物を水（１Ｌ）に注ぎ、沈殿物をフィルターフリットで濾別し、水で２回、次にジエチルエーテルで洗浄し、フリットを通して空気を吸引することにより乾燥させる。沈殿物をＥｔＯＡｃに取り、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、表題化合物を黄橙色の固体として得る（１４．２７ｇ、９３％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^３５Ｃｌ／^３７Ｃｌ）２１８．２／２２０．０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

調製物４３
４，６－ジクロロ－５－ヨード－３Ｈ－イソベンゾフラン－１－オン

－１５℃のアセトニトリル（２３７ｍＬ）中の５－アミノ－４，６－ジクロロ－３Ｈ－イソベンゾフラン－１－オン（８．００ｇ、３５．６ｍｍｏｌ）の懸濁液に濃硫酸（６．５ｍＬ、１２０ｍｍｏｌ）を滴下して加える。水（３６ｍＬ）中の亜硝酸ナトリウム（４．９６ｇ、７１．２ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくりと加える。混合物を０℃で３０分間撹拌する。水（３６ｍＬ）中のヨウ化カリウム（２３．６ｇ、１４２ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加える。混合物を０℃で１５分間および周囲温度で３０分間撹拌する。混合物を飽和亜硫酸ナトリウム水溶液で希釈し、真空下で部分的に濃縮して、ほとんどのアセトニトリルを除去する。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、層を分離する。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。粗物質を、０～２５％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。不純な生成物を含む画分を真空で濃縮し、１００％ＤＣＭで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによってさらに精製する。両方のクロマトグラフィー精製からの純粋な生成物含有画分を合わせ、真空中で濃縮し、真空下に一晩置いて、表題化合物を淡黄色の固体として得る（６．６２ｇ、５１％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）ｄ ７．８９（１Ｈ，ｓ），５．２５（２Ｈ，ｓ）。

調製物４４
５－ブロモ－６－クロロ－４－メチル－３Ｈ－イソベンゾフラン－１－オン

冷水浴中のアセトニトリル（１５０ｍＬ）中の塩化第二銅（５．８５ｇ、４３．５ｍｍｏｌ）の懸濁液に、５分かけて亜硝酸ｔｅｒｔ－ブチル（１２．９ｍＬ、１０８ｍｍｏｌ）を加える。混合物を１０分間撹拌し、冷水浴を取り除く。混合物を窒素下でさらに２５分間撹拌する。アセトニトリル（５５０ｍＬ）中の６－アミノ－５－ブロモ－４－メチル－３Ｈ－イソベンゾフラン－１－オン（８．７３ｇ、３６．１ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加え、混合物を窒素下で１．５時間撹拌する。混合物を真空中で部分的に濃縮して、容量を約２７５ｍＬに減らす。混合物を飽和塩化ナトリウム水溶液（３００ｍＬ）および１Ｍ ＨＣｌ（５００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃで２回抽出する。合わせた有機層を飽和重炭酸ナトリウム水溶液で２回洗浄し、飽和塩化ナトリウム水溶液で２回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。粗物質を、５～３０％のＥｔＯＡｃ／ＤＣＭで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。生成物を含む画分を真空中で濃縮して、表題化合物を淡黄色の固体として得る（９．０３ｇ、９６％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）２７８．０／２８０．０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

調製物４５
４－ブロモ－５－クロロ－２－（ヒドロキシメチル）－３－メチル－安息香酸ナトリウム

撹拌棒を備えたスクリュートップバイアルに、５－ブロモ－６－クロロ－４－メチル－３Ｈ－イソベンゾフラン－１－オン（２．４５９ｇ、８．５５７ｍｍｏｌ）および１Ｍ ＮａＯＨ（９．４ｍＬ、９．４ｍｍｏｌ）を加える。バイアルに蓋をして、１００℃で２時間加熱する。反応混合物を周囲温度に冷却し、１Ｌフラスコに移す。トルエン（１００ｍＬ）を加え、混合物を真空中で濃縮し、真空下に３日間置いて、表題化合物を黄褐色の固体（２．８１ｇ、９９＋％）として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）２７６．８／２７８．８［Ｍ－Ｈ］^－。

調製物４７
ベンジル（３Ｓ）－４－［ベンジル－（２－エトキシ－２－オキソ－エチル）アミノ］－３－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－４－オキソ－ブタノエート

Ｂｏｃ－Ｌ－アスパラギン酸４－ベンジルエステル（１１４ｇ、３５２．６ｍｍｏｌ）を反応容器に加える。ＤＣＭ（９５０ｍＬ）とＮ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド（７４．５ｇ、３６１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１０～２０℃に冷却する。ベンジルグリシンエチルエステル（６８．２ｇ、３５３ｍｍｏｌ）を滴下して加え、温度を２０℃未満に保つ。混合物を１０～２０℃で１７時間撹拌し、次に濾過し、真空中で濃縮する。ＭＴＢＥ（２３０ｍＬ）を加え、混合物を０．５時間撹拌する。混合物を濾過し、真空で濃縮して、表題化合物を油として得る（１７４．４ｇ、９９％）。

調製物４８
ベンジル２－［（２Ｓ）－４－ベンジル－３，６－ジオキソ－ピペラジン－２－イル］アセテート

ベンジル（３Ｓ）－４－［ベンジル－（２－エトキシ－２－オキソ－エチル）アミノ］－３－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－４－オキソ－ブタノエート（１７４．４ｇ、３４９．８ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（５００ｍＬ）およびＴＦＡ（２３０ｍＬ）とともに反応容器に加える。混合物を１５～２０℃で１６時間撹拌し、次に真空中で濃縮乾固する。残留物をイソプロパノール（５００ｍＬ）に溶解し、８０℃で１時間加熱しする。混合物を真空中で濃縮し、次に水（２３０ｍＬ）で希釈する。混合物を水中の１５％ＮａＯＨでｐＨ８～９に中和する（１０９ｇの１５％ＮａＯＨ水溶液を使用する）。混合物を濾過し、水（２×１００ｍＬ）ですすぐ。固体を真空下、５０～５５℃で２日間乾燥させて、表題化合物を固体として得る（９５．９ｇ、７８％）。^１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３）δ ７．４４－７．２９（ｍ，８Ｈ），７．３２－７．２３（ｍ，２Ｈ），６．９１（ｂｒ ｓ，１Ｈ），５．１８（ｄ，Ｊ ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），５．１４（ｄ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ，１Ｈ），４．６４（ｄ，Ｊ＝１４．５Ｈｚ，１Ｈ），４．５４（ｄ，Ｊ＝１４．５Ｈｚ，１Ｈ），４．４４（ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），３．８８（ｄ，Ｊ＝１７．７Ｈｚ，１Ｈ），３．８２（ｄ，Ｊ＝１７．７Ｈｚ，１Ｈ），３．１５（ｄｄ，Ｊ＝１７．５，３．４ Ｈｚ，１Ｈ），２．９３（ｄｄ，Ｊ＝１７．５，８．３Ｈｚ，１Ｈ）。

調製物４９
２－［（２Ｓ）－４－ベンジルピペラジン－２－イル］エタノール

水素化アルミニウムリチウム（１３ｇ、３４２．５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２００ｍＬ）とともに反応容器に加える。混合物を－５℃～０℃まで冷却する。ベンジル２－［（２Ｓ）－４－ベンジル－３，６－ジオキソ－ピペラジン－２－イル］アセテート（５０ｇ、１４１．９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（４００ｍＬ）とともに第２の容器に加える。ベンジル２－［（２Ｓ）－４－ベンジル－３，６－ジオキソ－ピペラジン－２－イル］アセテートの溶液を水素化アルミニウムリチウム溶液にゆっくりと加え、温度を－５℃～０℃の間に保つ。反応混合物を６０～６５℃に加熱し、２時間撹拌する。混合物を２０～３０℃に冷却し、１６時間撹拌する。水（１３ｇ）を加え、次に水中の４％ＮａＯＨ（５２ｇ）を加える。混合物を１時間撹拌し、濾過し、真空中で濃縮する。酢酸イソプロピル（２００ｍＬ）および２Ｍ ＨＣｌ（１５０ｇ）を加える。層を分離し、水層を酢酸イソプロピル（１００ｍＬ）で再度洗浄する。水層をＮａＯＨでｐＨ１１～１２に調整し、ＤＣＭ（１５０ｍＬ）を加える。層を分離し、有機層を水（１００ｍＬ）で洗浄する。層を分離し、有機層を真空中で濃縮して、表題化合物を固体として得る（２０．１ｇ、６４％）。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ ７．４４－７．２０（ｍ，５Ｈ），３．８１（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．５０（ｓ，２Ｈ），３．０８－２．９３（ｍ，２Ｈ），２．９３－２．８２（ｍ，１Ｈ），２．７６（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，２Ｈ），２．０２（ｔｄ，Ｊ＝１１．１，３．３Ｈｚ，１Ｈ），１．８５（ｔ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，１Ｈ），１．６７－１．５２（ｍ，２Ｈ）。

調製物５０
２－［（２Ｓ）－ピペラジン－２－イル］エタノール

２－［（２Ｓ）－４－ベンジルピペラジン－２－イル］エタノール（２０ｇ、９１ｍｍｏｌ）をＨ_２－フラッシュした反応容器に添加する。ＭｅＯＨ（２００ｍＬ）を加え、Ｐｄ（ＯＨ）_２（２ｇ）を加える。混合物をＨ_２でフラッシュし、次いで、４５ｐｓｉのＨ_２に加圧する。混合物を５０℃に加熱し、４４時間撹拌する。反応混合物を濾過し、真空中で濃縮して、表題化合物を油として得る（１２．７ｇ、９９＋％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ ３．８４－３．６５（ｍ，２Ｈ），３．４４（ｓ，１Ｈ），２．９９－２．８３（ｍ，４Ｈ），２．７８（ｔｄ，Ｊ＝１１．６，２．５Ｈｚ，１Ｈ），２．６８（ｔｄ，Ｊ＝１１．４，２．８Ｈｚ，１Ｈ），２．５４－２．４２（ｍ，１Ｈ），１．６５－１．４３（ｍ，２Ｈ）。

調製物５１
ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ）－３－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－カルボキシレート、リン酸

２－［（２Ｓ）－ピペラジン－２－イル］エタノール（９．２ｇ、７０．４ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（８３ｍＬ）および水（９ｍＬ）とともに反応容器に加える。混合物を１５℃で０．５時間撹拌する。二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（１５．４ｇ、７０．６ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（９２ｍＬ）とともに第２の容器に加える。二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル溶液を２－［（２Ｓ）－ピペラジン－２－イル］エタノール溶液に温度を１５℃未満に保ちながら、０．５時間かけて加える。混合物を１５℃で２時間撹拌する。リン酸（８５％強度、８．１１ｇ、７０．４ｍｍｏｌ）とＥｔＯＨを別の容器で混ぜ合わせ、リン酸溶液を３０分かけて反応混合物に加える。混合物を１５℃で２０分間撹拌し、次に３時間かけて－５℃まで冷却する。混合物を－５℃で１時間撹拌し、濾過し、ＥｔＯＨで洗浄し、次に５０℃で４時間乾燥して、表題化合物を固体として得る（５．８２ｇ、２５％）。^１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ）δ ４．１１－４．０３（ｍ，１Ｈ），４．００（ｂｒ ｓ，１Ｈ），３．７５－３．６２（ｍ，２Ｈ），３．４３－３．３０（ｍ，２Ｈ），３．３０－３．１８（ｍ，１Ｈ），３．１７－２．９５（ｍ，２Ｈ），１．８６－１．７８（ｍ，２Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ）。

調製物５２
（３Ｓ）－３－（ベンジルアミノ）テトラヒドロフラン－２－オン

ＤＣＭ（２５００ｍＬ）中のＬ－ホモセリンラクトン塩酸塩（１００ｇ、７２６．９３ｍｍｏｌ、４Å粉末モレキュラーシーブ（１７８ｇ）、およびベンズアルデヒド（５７ｍＬ、５６１．３ｍｍｏｌ）懸濁液を、窒素下、３５℃で一晩撹拌する。この後、加熱を取り除き、混合物を２０℃に冷却する。トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（２０８ｇ、９８１．４１ｍｍｏｌ）を混合物に加え、２０分後に周囲温度まで温め、２時間撹拌する。この後、混合物を－１０℃に冷却し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（４００ｍＬ）で注意深くクエンチする。飽和重炭酸ナトリウム水溶液と固体重炭酸ナトリウムでｐＨを８に調整する。混合物を珪藻土のパッドを通して濾過し、ＤＣＭを通してすすぐ。層を分離し、ＤＣＭ（１Ｌ）で水性物をさらに抽出する。合わせた有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、表題化合物を透明な油として得る（８７ｇ、６６．５％、８１質量％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：１９２．２（Ｍ＋Ｈ）。さらなる分析作業のために、表題化合物の試料（１ｇ）を、１０～５０％ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、４２２ｍｇの精製された表題化合物を得る。この材料はＣｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＩＣ、４．６×１５０ｍｍ、１０％ＩＰＡ（０．２％ＩＰＡＭ）／ＣＯ_２、５ｍＬ／分、２２５ｎｍを使用して分析され、＞９８％ｅ．ｅ．を示す。

調製物５３
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－［ベンジル－［（３Ｓ）－２－オキソテトラヒドロフラン－３－イル］アミノ］－２－オキソ－エチル］カルバメート

ＤＣＭ（７００ｍＬ）中の（３Ｓ）－３－（ベンジルアミノ）テトラヒドロフラン－２－オン（８６ｇ、３６４．２７ｍｍｏｌ、８１質量％）、ｂｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ（９７ｇ、５５３．７１ｍｍｏｌ）、およびＴＥＡ（１０３ｍＬ、７３９ｍｍｏｌ）の混合物を、約５℃に冷却する。プロピルホスホン酸無水物（ＥｔＯＡｃ中５０質量％）（４３０ｍＬ、７３７ｍｍｏｌ）を、内部温度を約１０℃に保ちながら、混合物に１時間かけて滴下して加える。添加後、混合物を周囲温度まで温める。７時間後、混合物を１０℃に冷却し、追加のｂｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ（３．１ｇ、１８ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（５ｍＬ、３５．９ｍｍｏｌ）、およびプロピルホスホン酸無水物（ＥｔＯＡｃ中５０質量％）（２２ｍＬ、３７．７ｍｍｏｌ）を加える。混合物を周囲温度に温め、一晩撹拌する。この後、混合物を８℃に冷却し、追加のｂｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ（９．６ｇ、５５ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（１０ｍＬ、７１．７ｍｍｏｌ）、およびプロピルホスホン酸無水物（ＥｔＯＡｃ中５０質量％）（４２ｍＬ、７１．９ｍｍｏｌ）を加える。混合物を周囲温度に温め、約７時間撹拌する。この後、混合物を氷上に注ぎ、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１Ｌ）で注意深くクエンチする。固体重炭酸ナトリウムでｐＨを８に調整し、層を分離する。水性物をＤＣＭでさらに２回抽出する。合わせた有機物を飽和塩化ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）で洗浄する。有機層を、珪藻土と硫酸ナトリウムのパッドを通して濾過する。有機物を真空中で１Ｌの容量まで濃縮し、飽和塩化ナトリウム水溶液で２回洗浄する。有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、さらなる精製なしに使用される表題化合物（１９４ｇ、５３．５％、３５質量％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：２４９．０（Ｍ－ｔ－Ｂｕ＋Ｈ）

調製物５６
（６Ｓ）－１－ベンジル－６－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－２，５－ジオン

ＴＦＡ（１００ｍＬ、１３１０ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（５００ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－［ベンジル－［（３Ｓ）－２－オキソテトラヒドロフラン－３－イル］アミノ］－２－オキソ－エチル］カルバメート（１９４ｇ、１９４．９ｍｍｏｌ、３５質量％）の混合物に加える。混合物を室温で一晩撹拌する。この後、追加のＴＦＡ（５０ｍＬ、６５３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を周囲温度で撹拌する。２時間後、追加のＴＦＡ（５０ｍＬ、６５３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を周囲温度で一晩撹拌する。この後、混合物を真空中で濃縮する。得られた残留物を水（６００ｍＬ）で希釈し、ジエチルエーテルで２回洗浄する。１Ｎ ＮａＯＨ水溶液でｐＨを７に調整し、さらに５Ｎ ＮａＯＨ水溶液でｐＨ１２に調整する。ＭｅＯＨ（約１０ｍＬ）を加え、混合物を周囲温度で撹拌する。追加の５Ｎ ＮａＯＨ水溶液を５分間隔で混合物に加え、ｐＨを１２に再調整する。全体として、混合物をｐＨ１２で３５分間撹拌する。この後、１０％ＨＣｌ水溶液でｐＨを８に調整し、ＤＣＭ（５×１Ｌ）で抽出する。次に、水性物のｐＨを１０％ＨＣｌ水溶液で５に調整し、再びＤＣＭ（１Ｌ）で抽出する。合わせた有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、表題化合物を淡褐色の固体として得る（１７ｇ、３３．４％）。水性物の追加の抽出を、ＬＣ／ＭＳに従って表題の生成物が水性物から除去されるまで、２５％ＩＰＡ／クロロホルムとＤＣＭを交互に使用して実行する。合わせた有機物にＩＰＡ（１５０ｍＬ）を加える。有機物を飽和塩化ナトリウム水溶液で２回洗浄し、硫酸ナトリウムおよび硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、追加の表題化合物（１７．２ｇ、３５．５％）を得て、全体の収量を３４．２ｇ（６８．９％）にする。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：２４９．０（Ｍ＋Ｈ）

調製物５９
２－［（２Ｓ）－１－ベンジルピペラジン－２－イル］エタノール

ＴＨＦ中の２Ｍ水素化アルミニウムリチウム（１３１ｍＬ、２６２ｍｍｏｌ）の４５℃の溶液に、ＴＨＦ（２００ｍＬ）中の（６Ｓ）－１－ベンジル－６－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－２，５－ジオン（３４ｇ、１３１．５ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加える。添加後、混合物を６０℃まで加熱する。約３．５時間後、追加のＴＨＦ中の２Ｍ水素化アルミニウムリチウム（３３ｍＬ、６６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を６０℃で撹拌する。１時間後、追加のＴＨＦ中の２Ｍ水素化アルミニウムリチウム（１３１ｍＬ、２６２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を６０℃で一晩撹拌する。この後、ＴＨＦ中の２Ｍ水素化アルミニウムリチウム（６ｍＬ、１２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を６０℃で撹拌する。４時間後、ＴＨＦ中の２Ｍ水素化アルミニウムリチウム（６ｍＬ、１２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を６０℃で２時間撹拌する。熱を取り除き、混合物を１０℃に冷却する。水（１６ｍＬ）を滴下して加え、続いて３．７５Ｍ ＮａＯＨ水溶液（１６ｍＬ）、次にＴＨＦ（３００ｍＬ）を滴下で加える。水（４８ｍＬ）を加え、得られた混合物を周囲温度で一晩撹拌する。この後、混合物を珪藻土のパッドを通して濾過し、ＥｔＯＡｃを通してすすいだ。濾液を真空中で濃縮して、表題化合物（２８．８ｇ、６７．６％、６８質量％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：２２１．０（Ｍ＋Ｈ）

調製物６２
ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ）－４－ベンジル－３－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－カルボキシレート

水（５００ｍＬ）中の重炭酸ナトリウム（８０ｇ、９５２ｍｍｏｌ）を、１，４－ジオキサン（５００ｍＬ）中の２－［（２Ｓ）－１－ベンジルピペラジン－２－イル］エタノール（２８ｇ、８６．４３ｍｍｏｌ）に周囲温度で加える。二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（２６．６ｇ、１２２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を周囲温度で２０分間撹拌する。この後、氷（４００ｍＬ）、水（２００ｍＬ）、およびＥｔＯＡｃ（１Ｌ）を加え、層を分離する。水性物をもう一度ＥｔＯＡｃ（１Ｌ）で抽出する。合わせた有機物を水（２５０ｍＬ）および飽和塩化ナトリウム水溶液（２５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。得られた油を、１０～７０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、表題化合物（２０．７９ｇ、７４％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：３２１．２（Ｍ＋Ｈ）この物質はＣｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＩＣ、４．６×１５０ｍｍ、１５％ＩＰＡ（０．２％ＩＰＡＭ）／ＣＯ_２、５ｍＬ／分、２２５ｎｍを使用して分析され、９６％ｅ．ｅ．を示す。

調製物６５
ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ）－３－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－カルボキシレート

炭素上の２０％Ｐｄ（ＯＨ）_２（２４．３９ｇ、１７６．４ｍｍｏｌ）を、窒素でパージされた容器に加える。ＥｔＯＨ（６２０ｍＬ）を容器に加え、続いてｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ）－４－ベンジル－３－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（６１．９３ｇ、１９３．３ｍｍｏｌ）およびＥｔＯＨ（６２０ｍＬ）を加える。容器を密閉し、窒素でパージし、水素でパージし、水素下で加圧する（６０ｐｓｉ）。容器を周囲温度で１５時間Ｐａｒｒシェーカーに設置する。この後、反応混合物を濾過し、真空中で濃縮して、表題化合物（４２．７４ｇ、９８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ２３１．０：（Ｍ＋Ｈ）。

調製物６８
ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ）－４－（３，５－ジクロロ－２－フルオロ－４－ヨード－ベンゾイル）－３－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－カルボキシレート

３，５－ジクロロ－２－フルオロ－４－ヨード－安息香酸（０．８０ｇ、２．４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２２ｍＬ）中のＤＩＥＡ（２ｍＬ、１１．５ｍｍｏｌ）に加え、続いてＨＡＴＵ（０．８４ｇ、２．２ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌する。次に、ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ）－３－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（０．５０ｇ、２．２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を一晩還流する。この後、５Ｎ ＮａＯＨを加え、反応物を１時間撹拌する。ＥｔＯＡｃおよび水を加える。水層をＥｔＯＡｃで２回抽出する。合わせた有機抽出物を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。粗混合物を、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン（３０：７０）で溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（０．８５８ｇ、７２％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^３５Ｃｌ／^３７Ｃｌ）４９１／４９３［Ｍ－ｔ－Ｂｕ＋Ｈ］^＋。

調製物８５
ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ）－４－（４－ブロモ－３－クロロ－２，５－ジフルオロ－ベンゾイル）－３－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－カルボキシレート

ＴＨＦ（２００ｍＬ）中の４－ブロモ－３－クロロ－２，５－ジフルオロ－安息香酸（１０．２ｇ、３７．６ｍｍｏｌ）および４－メチルモルホリン（７．５０ｍＬ、６８．０ｍｍｏｌ）の溶液を、氷浴中で０℃に冷却し、２－クロロ－４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン（９．１０ｇ、５０．８ｍｍｏｌ）で処理する。混合物を氷浴中で３０分間撹拌し、次にｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ）－３－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（ＴＨＦ中０．９３Ｍ、４０．０ｍＬ、３７．２ｍｍｏｌ）を滴下漏斗により滴下して加える。０℃で１時間後、５Ｎ ＮａＯＨ（３５．０ｍＬ、１８０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を周囲温度で３０分間撹拌する。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム溶液で処理し、１５分間撹拌する。有機相を分離し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。残留物を、０～９０％（ＤＣＭ中の２０％アセトン）／ヘキサンで溶出するシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（１６．０ｇ、８８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）４２７／４２９［Ｍ－ｔ－Ｂｕ＋Ｈ］^＋。

調製物８７
ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ）－４－（２－アミノ－４－ブロモ－５－クロロ－ベンゾイル）－３－［２－（ｐ－トリルスルホニルオキシ）エチル］ピペラジン－１－カルボキシレート

ＤＣＭ（２５ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ）－４－（２－アミノ－４－ブロモ－５－クロロ－ベンゾイル）－３－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（１ｇ、２．１６ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（１ｍＬ、７．１４ｍｍｏｌ）の０℃溶液に、ＤＭＡＰ（４５ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）およびｐ－トルエンスルホニルクロリド（４６９ｍｇ、２．３９ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を０℃で１５分間撹拌してから、周囲温度に温める。追加のｐ－トルエンスルホニルクロリド（１２２ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）を３時間後に加える。１時間後、反応物をＤＣＭで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄する。有機物を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空中で濃縮する。得られた残留物を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、表題化合物を得る（４７３ｍｇ、３５％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）６１６．０／６１８．０［Ｍ＋Ｈ］^＋

調製物８８
４－ブロモ－２－［［（２Ｒ）－４－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルピペラジン－２－イル］メトキシメチル］－５－クロロ－３－メチル－安息香酸塩酸塩

２５０ｍＬフラスコ中の４－ブロモ－５－クロロ－２－（ヒドロキシメチル）－３－メチル－安息香酸ナトリウム（２．０５ｇ、６．３９ｍｍｏｌ）にトルエン（５０ｍＬ）を加え、混合物を真空中で濃縮する。残留物をＤＭＦ（２１ｍＬ）およびＴＨＦ（１１ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却する。水素化ナトリウム（パラフィン油中６０質量％）（５１１ｍｇ、１２．８ｍｍｏｌ）を加える。添加後、混合物を０℃で１０分間撹拌する。第２のフラスコ中のｔｅｒｔ－ブチル（３ａＲ）－１，１－ジオキソ－３ａ，４，６，７－テトラヒドロ－３Ｈ－オキサチアゾロ［３，４－ａ］ピラジン－５－カルボキシレート（１．９６ｇ、７．０４ｍｍｏｌ）にトルエン（２０ｍＬ）を加え、混合物を真空下で濃縮する。残留物をＴＨＦ（１１ｍＬ）に溶解し、０℃で最初のフラスコの内容物に滴下して加える。混合物を周囲温度に温め、１．５時間撹拌する。５Ｍ ＨＣｌ（７ｍＬ）をゆっくりと加え、混合物を周囲温度で５分間撹拌し、次に飽和重炭酸ナトリウム水溶液でクエンチする。５Ｍ ＨＣｌをゆっくりと加えることによりｐＨをｐＨ２に下げ、混合物をＥｔＯＡｃで希釈する。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃで３回抽出する。合わせた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。残留物をＴＨＦ（４０ｍＬ）に溶解し、５Ｍ ＨＣｌ（６ｍＬ）を加える。混合物を周囲温度で２０分間撹拌する。混合物を飽和塩化ナトリウム水溶液およびＥｔＯＡｃで希釈し、層を分離する。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮し、真空下に２時間置いて、表題化合物を黄褐色の固体として得る（４．２７ｇ、７３％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）４７７．２／４７９．２［Ｍ＋Ｈ］^＋。

調製物９１
ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ）－４－ベンジル－３－［２－（３－ブロモ－２－クロロ－４－フルオロ－６－メトキシカルボニル－フェノキシ）エチル］ピペラジン－１－カルボキシレート

ＴＨＦ（約５０ｍＬ）中の４－ブロモ－３－クロロ－５－フルオロ－２－ヒドロキシ－安息香酸メチル（３．０ｇ、１１．０ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（４．１９ｇ、１６．０ｍｍｏｌ）、およびｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ）－４－ベンジル－３－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（１２ｍＬ、ＴＨＦ中１．０３９Ｍ）の溶液を０℃に１０分間冷却する。アゾジカルボン酸ジイソプロピル（３．１ｍＬ、１６ｍｍｏｌ）を滴下して加え、混合物を周囲温度まで温める。アルコール出発物質が消費された後、氷を加え、反応物をＥｔＯＡｃで希釈する。混合物を飽和塩化ナトリウム水溶液で２回洗浄し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して琥珀色の油にする。残留物を、０～１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（６．２ｇ、９９＋％）を得る。２５～５０％（１：１のＥｔＯＡｃ：ＤＣＭ）／ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより、純度約９５％の分析試料が得られ、表題化合物を無色の油として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）５８５／５８７［Ｍ＋Ｈ］^＋。

調製物９２
ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ）－３－［２－（３－ブロモ－２－クロロ－４－フルオロ－６－メトキシカルボニル－フェノキシ）エチル］ピペラジン－１－カルボキシレート

ＤＣＭ（７５ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ）－４－ベンジル－３－［２－（３－ブロモ－２－クロロ－４－フルオロ－６－メトキシカルボニル－フェノキシ）エチル］ピペラジン－１－カルボキシレート（７．０ｇ、１１．３５ｍｍｏｌ）にＮ，Ｎ－ジイソプロピルアミン（５．９４ｍＬ、３４．１ｍｍｏｌ）を加える。溶液を氷浴で冷却し、１－クロロエチルクロロホルメート（３．７ｍＬ、３４ｍｍｏｌ）を滴下して加える。添加後、氷浴を取り除き、反応物を周囲温度で１８時間撹拌する。追加の１－クロロエチルクロロホルメート（２ｍＬ、１７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルアミン（３ｍＬ、１７ｍｍｏｌ）を周囲温度で滴下して加え、７時間後、さらに１－クロロエチルクロロホルメート（０．６０ｍＬ、５．６７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルアミン（１ｍＬ、５．６７ｍｍｏｌ）を加えて、残りの出発物質を消費する。反応混合物を真空中で濃縮する。残留物にトルエンを加え、混合物を濃縮する（２回繰り返す）。得られた半固体をＭｅＯＨ（１００ｍＬ）で希釈し、生成物の形成が完了するまで周囲温度で撹拌する。溶媒を真空中で除去して、琥珀色の残留物を得る。残留物を、０－１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を固体として得る（５．１１ｇ、９１％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）４９５／４９７［Ｍ＋Ｈ］^＋。

調製物９３
４－ブロモ－２－［２－［（２Ｓ）－４－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルピペラジン－２－イル］エトキシ］－３－クロロ－５－フルオロ－安息香酸

ＴＨＦ（１００ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ）－３－［２－（３－ブロモ－２－クロロ－４－フルオロ－６－メトキシカルボニル－フェノキシ）エチル］ピペラジン－１－カルボキシレート（５ｇ、１０．０８ｍｍｏｌ）およびＭｅＯＨ（１２ｍＬ）の溶液を氷浴で冷却する。水酸化リチウム（６．５ｍＬ、６．２５Ｍ）の水溶液と脱イオン水（１０ｍＬ）を加える。氷浴を取り除き、混合物を周囲温度で撹拌する。３時間後、氷を反応混合物に加え、ｐＨを１０％クエン酸（１２ｍＬ）で５～６の間に調整する。飽和塩化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）を加え、混合物をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）で希釈し、層を分離する。水層を再度ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、表題化合物を固体として得る（４．８３ｇ、９８％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）４８１／４８３［Ｍ＋Ｈ］^＋。

調製物９４
ｔｅｒｔ－ブチル（１３ａＳ）－８，１０－ジクロロ－９－ヨード－６－オキソ－１，３，４，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾオキサゾシン－２－カルボキシレート

ＤＭＦ（１００ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ）－４－（３，５－ジクロロ－２－フルオロ－４－ヨード－ベンゾイル）－３－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（４．４３８ｇ、８．１１０ｍｍｏｌ）を０℃に冷却し、次に溶液に固体水素化ナトリウム（パラフィン油中６０質量％）（０．８１ｇ、２０ｍｍｏｌ）を加える。０℃で１時間後、反応混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液でクエンチする。水とＥｔＯＡｃを加える。水層をＥｔＯＡｃで２回抽出する。合わせた有機抽出物を０．２Ｍ塩化リチウム水溶液で２回洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。粗混合物を、３０～５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物（３．３９４ｇ、７９％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^３５Ｃｌ／^３７Ｃｌ）４７１／４７３［Ｍ－ｔ－Ｂｕ＋Ｈ］^＋。

調製物１１３
ｔｅｒｔ－ブチル（１３ａＳ）－９－ブロモ－８－クロロ－１１－メチル－６－オキソ－１，３，４，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾジアゾシン－２－カルボキシレートおよびｔｅｒｔ－ブチル（１３ａＳ）－９－ブロモ－８－クロロ－６－オキソ－３，４，１１，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾジアゾシン－２－カルボキシレート

ＤＭＦ（１５ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ）－４－（２－アミノ－４－ブロモ－５－クロロ－ベンゾイル）－３－［２－（ｐ－トリルスルホニルオキシ）エチル］ピペラジン－１－カルボキシレート（４７３ｍｇ、０．７６７ｍｍｏｌ）を０℃に冷却し、次にその溶液に固体水素化ナトリウム（パラフィン油中６０質量％）（４９ｍｇ、１．２２５ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を０℃で２時間撹拌してから周囲温度に温め、さらに２時間撹拌する。この後、反応混合物を－７８℃に冷却し、ヨウ化メチル（５０μＬ、０．８０３ｍｍｏｌ）を加える。３０分後、反応混合物を０℃に温め、１８時間撹拌し、周囲温度に温める。混合物を冷却して０℃に戻し、追加のヨウ化メチル（５０μＬ、０．８０３ｍｍｏｌ）を加える。１時間後、追加のメチル化は観察されず、反応混合物を周囲温度に温め、トリエチルアミン（１００μＬ、０．７１７ｍｍｏｌ）を加える。さらに１時間後、反応混合物を水でクエンチし、飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液およびＥｔＯＡｃで希釈する。層を分離し水層をＥｔＯＡｃで２回抽出する。合わせた有機物を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で濃縮する。得られた固体をＡＣＮで粉砕し、さらに精製することなく真空下で乾燥させて、表題化合物の混合物（３：２ ＮＨ対ＮＭｅ、３４５ｍｇ、９９＋％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）４４４．０／４４６．０［Ｍ＋Ｈ］^＋および４５８．０／４６０．０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

調製物１１４
ｔｅｒｔ－ブチル（１３ａＲ）－９－ブロモ－８－クロロ－１０－メチル－６－オキソ－１，３，４，１１，１３，１３ａ－ヘキサヒドロピラジノ［２，１－ｄ］［２，５］ベンゾオキサゾシン－２－カルボキシレート

ＤＭＦ（３．７ｍＬ）中の４－ブロモ－２－［［（２Ｒ）－４－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルピペラジン－２－イル］メトキシメチル］－５－クロロ－３－メチル－安息香酸塩酸塩（５００ｍｇ、０．７４９ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（０．３９ｍＬ、２．２ｍｍｏｌ）を、０℃でＤＭＦ（３．７ｍＬ）中のＨＡＴＵ（５８１ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して加える。混合物を０℃で１時間および周囲温度で３０分間撹拌する。別のフラスコに、ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の４－ブロモ－２－［［（２Ｒ）－４－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルピペラジン－２－イル］メトキシメチル］－５－クロロ－３－メチル－安息香酸塩酸塩（２．６２ｇ、３．９２ｍｍｏｌ、７７％純度）およびＤＩＥＡ（２．１ｍＬ、１２ｍｍｏｌ）を、０℃でＤＭＦ（２０ｍＬ）中のＨＡＴＵ（３．０４ｇ、７．８４ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して加える。混合物を０℃で１時間および周囲温度で３０分間撹拌する。２つの反応混合物を合わせ、ＥｔＯＡｃで希釈し、０．５Ｍ ＨＣｌ、水、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄する。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。粗物質を、０～６５％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。純粋な画分を真空中で濃縮する。残留物にＤＣＭを加え、混合物を真空中で濃縮し、真空下に３時間置いて、表題化合物を白色の固体として得る（１．９５ｇ、８６％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）４５９／４６１［Ｍ＋Ｈ］^＋。

調製物１１７
ｔｅｒｔ－ブチル（１３ａＳ）－９－ブロモ－１０－クロロ－８－フルオロ－６－オキソ－１，３，４，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾオキサゾシン－２－カルボキシレート

氷浴で冷却したＤＣＭ（５０ｍＬ）中の４－ブロモ－２－［２－［（２Ｓ）－４－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルピペラジン－２－イル］エトキシ］－３－クロロ－５－フルオロ安息香酸（４．８ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液にＴＥＡ（２．８ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を加える。プロピルホスホン酸無水物（１１ｍＬ、１８．８ｍｍｏｌ、ＥｔＯＡｃ中５０質量％）を滴下して加える。添加後、混合物を１０分間撹拌する。ＤＣＭ（２５０ｍＬ）と飽和塩化アンモニウム溶液（１００ｍＬ）を加える。水層を除去し、ＤＣＭ（１００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過する。濾液を活性炭（３．５ｇ）で処理し、１０分間撹拌する。混合物を珪藻土のパッドを通して濾過し、真空中で濃縮して油にする。クロロホルムを加え、真空で濃縮して（２回繰り返す）、表題化合物を固体として得る（４．６４ｇ、９９％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）４０７／４０９［Ｍ－ｔ－Ｂｕ＋Ｈ］^＋。

調製物１１８
ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｒ、１３ａＳ）－９－ブロモ－１０－クロロ－８－フルオロ－３－メチル－６－オキソ－１，３，４，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾオキサゾシン－２－カルボキシレート

ＤＭＦ（１７．５ｍＬ）中の４－ブロモ－３－クロロ－２，５－ジフルオロ安息香酸メチル（１．００ｇ、３．５０ｍｍｏｌ）とｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ、５Ｓ）－５－（２－ヒドロキシエチル）－２－メチル－ピペラジン－１－カルボキシレート（１．０７ｇ、４．３８ｍｍｏｌ）の溶液を氷浴で冷却する。炭酸セシウム（２．３１ｇ、７．０１ｍｍｏｌ）を加える。反応物を一晩ゆっくりと周囲温度まで温める。１８時間後、反応物を８０℃に２４時間加熱する。室温まで冷却した後、半飽和塩化ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）を加え、混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、層を分離する。水層をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）でさらに２回抽出し、合わせた有機物を水（２×５０ｍＬ）、飽和塩化ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）で洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。粗物質を、０～１００％ＭＴＢＥ／ヘキサンで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、表題化合物を固体として得る（６９０ｍｇ、４１％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^７９Ｂｒ／^８１Ｂｒ）４７６．０／４７８．０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

調製物１１９
ｔｅｒｔ－ブチル（１３ａＳ）－８，１０－ジクロロ－９－ヨード－３，４，６，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾオキサゾシン－２－カルボキシレート

ＴＨＦ中の１Ｍボランジメチルスルフィド錯体（２ｍＬ、２ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（２０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（１３ａＳ）－８，１０－ジクロロ－９－ヨード－６－オキソ－１，３，４，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾオキサゾシン－２－カルボキシレート（１．０ｇ、１．９ｍｍｏｌ）の撹拌混合物に加え、加熱して１８時間還流する。この後、ＴＨＦ中の追加の１Ｍボランジメチルスルフィド錯体（２ｍＬ、２ｍｍｏｌ）を混合物に添加し、さらに５時間還流で撹拌する。混合物を周囲温度に冷却し、ＭｅＯＨで注意深くクエンチし、真空中で濃縮する。残留物を、３０～７０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出する、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題化合物（９００ｍｇ、９０％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^３５Ｃｌ／^３７Ｃｌ）５１２．８／５１４．８［Ｍ＋Ｈ］^＋－。

調製物１３２
ｔｅｒｔ－ブチル（１３ａＳ）－９－［２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－７－フルオロ－１，３－ベンゾチアゾール－４－イル］－８，１０－ジクロロ－６－オキソ－１，３，４，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾオキサゾシン－２－カルボキシレート

撹拌棒を備えたスクリュートップの密閉可能なチューブに、ｔｅｒｔ－ブチル（１３ａＳ）－８，１０－ジクロロ－９－ヨード－６－オキソ－１，３，４，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾオキサゾシン－２－カルボキシレート（７５０ｍｇ、１．４２３ｍｍｏｌ）、［２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－７－フルオロ－１，３－ベンゾチアゾール－４－イル］ボロン酸（６５０ｍｇ、２．０８３ｍｍｏｌ）、リン酸三カリウム（４５０ｍｇ、２．１２ｍｍｏｌ）、および１，１’－ビス（ジ－ｔｅｒｔ－ブチルホスフィノ）フェロセンパラジウムジクロリド（１００ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を加える。あらかじめ混合して脱気した１，４－ジオキサン（１５ｍＬ）と水（５ｍＬ）を加え、混合物を窒素で２０分間パージする。チューブに蓋をして、８０℃で１時間加熱する。次に、反応混合物の内容物を、水、飽和塩化ナトリウム水溶液、およびＥｔＯＡｃに注ぐ。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃで１回抽出する。合わせた有機抽出物を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。粗物質を、３０～７０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、表題化合物を得る（７２４ｍｇ、７６％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^３５Ｃｌ／^３７Ｃｌ）６６７／６６９［Ｍ＋Ｈ］^＋。アトロプ異性体の比率４５：５５（ＬＣ）。

調製物１６７
ｔｅｒｔ－ブチル（１３ａＳ）－９－［２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－３－シアノ－ベンゾチオフェン－４－イル］－１０－クロロ－８－フルオロ－６－オキソ－１，３，４，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾオキサゾシン－２－カルボキシレート

密閉フラスコに、トルエン（３００ｍＬ）、ｔｅｒｔ－ブチル（１３ａＳ）－９－ブロモ－１０－クロロ－８－フルオロ－６－オキソ－１，３，４，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾオキサゾシン－２－カルボキシレート（６．２０ｇ、１１．０ｍｍｏｌ）、およびｔｅｒｔ－ブチルＮ－［３－シアノ－４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ベンゾチオフェン－２－イル］カルバメート（６．２０ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）を加える。混合物に窒素を３０分間スパージし、次にＤＰＥＰｈｏｓＰｄＣｌ_２（１．２０ｇ、１．６８ｍｍｏｌ）を加え、続いて炭酸セシウム（９．００ｇ、２７．６ｍｍｏｌ）を加える。フラスコを密閉し、１０５℃で６時間撹拌する。混合物を周囲温度に冷却し、珪藻土を通して濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄し、濾液を真空中で濃縮する。残留物を、０－３０％アセトン／ヘキサンで溶出する、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製する。所望のジアステレオマーは、望ましくないものの後に溶出されて、表題化合物（主要、３．５０ｇ、４９％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^３５Ｃｌ／^３７Ｃｌ）６５７．０／６５９．０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

調製物１７５
（１３ａＳ）－９－（２－アミノ－７－フルオロ－１，３－ベンゾチアゾール－４－イル）－８，１０－ジクロロ－２，３，４，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾオキサゾシン－６－オン

ｔｅｒｔ－ブチル（１３ａＳ）－９－［２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－７－フルオロ－１，３－ベンゾチアゾール－４－イル］－８，１０－ジクロロ－６－オキソ－１，３，４，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾオキサゾシン－２－カルボキシレート（７２４ｍｇ、１．０８４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（４ｍＬ）およびＴＦＡ（２ｍＬ、２６．４５ｍｍｏｌ）に溶解し、周囲温度で撹拌する。６時間後、混合物を真空中で濃縮する。粗生成物をＳＣＸカラムに装入し、ＭｅＯＨで洗浄し、ＭｅＯＨ中の７Ｎ ＮＨ_３で溶出する。濾液を真空中で濃縮して、表題化合物（５００ｍｇ、９８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^３５Ｃｌ／^３７Ｃｌ）４６７／４６９［Ｍ＋Ｈ］^＋。

調製物１８７
４－［（１３ａＳ）－１０－クロロ－８－フルオロ－６－オキソ－２，３，４，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾオキサゾシン－９－イル］－２－アミノ－ベンゾチオフェン－３－カルボニトリル

ＤＣＭ（１０．０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（１３ａＳ）－９－［２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－３－シアノ－ベンゾチオフェン－４－イル］－１０－クロロ－８－フルオロ－６－オキソ－１，３，４，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾオキサゾシン－２－カルボキシレート（２．６４ｇ、４．０２ｍｍｏｌ）の懸濁液に、０℃でＴＦＡ（１０ｍＬ）を滴下して加える。混合物を周囲温度で１時間撹拌する。混合物を真空で濃縮し、ＥｔＯＡｃに溶解し、再び真空で濃縮する。この手順をもう一度繰り返す。得られた残留物を、最初に０～８０％（ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）／ＤＣＭで溶出し、次に０～１００％［ＤＣＭ中１０％（ＭｅＯＨ中の７Ｎ ＮＨ_３）］／ＤＣＭで溶出する、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、表題化合物を得る（１．５８ｇ、８６％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^３５Ｃｌ／^３７Ｃｌ）４５７．０／４５９．０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

調製物２１９
４－［（１３ａＳ）－１０－クロロ－２－（２－シアノアセチル）－８－フルオロ－６－オキソ－１，３，４，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾオキサゾシン－９－イル］－２－アミノ－７－フルオロ－ベンゾチオフェン－３－カルボニトリル

シアノ酢酸（１３８ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（２２２ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（０．５ｍＬ、３ｍｍｏｌ）、および１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（３０６ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の４－［（１３ａＳ）－１０－クロロ－８－フルオロ－６－オキソ－２，３，４，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾオキサゾシン－９－イル］－２－アミノ－７－フルオロ－ベンゾチオフェン－３－カルボニトリル（５００ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）の懸濁液に加える。反応混合物を周囲温度で１８時間撹拌してから、ＤＣＭで希釈し、飽和塩化アンモニウム水溶液および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄する。有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。残留物をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解し、数滴のＭｅＯＨ、次にヘキサンを加えて生成物を沈殿させる。沈殿物を濾過して、表題化合物を白色の固体として得る（４１０ｍｇ、７２％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^３５Ｃｌ／^３７Ｃｌ）５４２．４／５４４．４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

調製物２２０
１－ブロモ－１，２，２－トリジュウテリオ－エチレン

１，２－ジブロモエタン－ｄ_４（２５．０ｇ、１３０．２８ｍｍｏｌ）を、９５％エタノール－ＯＤ（９５ｍＬ）およびＤ_２Ｏ（５ｍＬ）中の水酸化カリウム（１５．１９ｇ、２４３．６３ｍｍｏｌ）の溶液に３３℃で滴下して加える。混合物を最初に６０℃で１．５時間撹拌し、次に６３℃で１．５時間撹拌して、表題化合物を無色の油として得、これは加熱の過程で反応から連続的に蒸留し、ドライアイス－アセトン浴で冷却した受容フラスコに集めた（７．３ｇ、５０％）。

調製物２２１
２，３，３－トリジュウテリオプロプ－２－エン酸^１３Ｃ

マグネシウム削り状（１．６７ｇ、６９．７１ｍｍｏｌ）、ヨウ素の結晶、および無水ＴＨＦ（２０ｍＬ）をフラスコに入れる。一方、無水ＴＨＦ（３０ｍＬ）中の１－ブロモ－１，２，２－トリジュウテリオ－エチレン（７．３ｇ、６６．３９ｍｍｏｌ）の溶液を調製する。マグネシウムを含む混合物を５０℃に加熱し、臭化ビニル溶液の一部（２ｍＬ）を加える。グリニャール反応が開始され、混合物が還流し始めるまで（６５℃）、混合物を５０℃で加熱する。ＴＨＦ中の残りの臭化ビニル溶液を５５～６５℃で１．５時間かけて滴下して加える。得られた混合物を６５℃で１．５時間加熱して、反応が完了していることを確認する。この新たに調製したＴＨＦ中の（１，２，２－トリジュウテリオビニル）マグネシウムブロミド溶液を室温まで冷却し、すぐに使用する。

二酸化炭素－^１３Ｃガスを無水ＴＨＦ（５０ｍＬ）中に－６５℃で５分間バブリングする。上記の新たに調製したＴＨＦ中の（１，２，２－トリジュウテリオビニル）マグネシウムブロミド（６６．３９ｍｍｏｌ）溶液を滴下して加え、その時点で反応温度は－２０℃に上昇する。混合物を－１０℃に温め、１０分間撹拌する。二酸化炭素－^１３Ｃガスを混合物にさらに２分間バブリングする。混合物を周囲温度に温め、１０分間撹拌する。ハイドロキノン（１０ｍｇ）を加えた後、６Ｍ硫酸（６．５ｍＬ）を滴下で添加し、温度を２０℃未満に保ちながら反応をクエンチさせる。混合物をジエチルエーテル（４００ｍＬ）で希釈し、硫酸ナトリウム（１００ｇ）を加える。混合物を周囲温度で５分間撹拌し、濾過し、真空中、０～５℃で濃縮して、粗生成物（７．５ｇ）を黄色の油として得る。粗生成物をショートパス真空蒸留により精製して、表題化合物を無色の油として得る（１．２ｇ、２４％）。

調製物２２２
２，３，３－トリジュウテリオプロプ－２－エン酸クロリド－^１３Ｃ

塩化オキサリル（０．２４ｍＬ、２．８５ｍｍｏｌ）を、無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の２，３，３－トリジュウテリオプロプ－２－エン酸－^１３Ｃ（０．１８１ｇ、２．３８ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（１滴）の溶液に０℃で添加し、混合物を室温で１時間撹拌する。表題化合物を、溶液として次のステップで直接使用する。

調製物２２３
Ｋｒａｓプローブ
Ｎ－（２－｛２－［２－（｛６－クロロ－８－フルオロ－７－（３－ヒドロキシナフタレン－１－イル）－４－［４－（プロプ－２－エノイル）ピペラジン－１－イル］キナゾリン－２－イル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝エチル）－５－［（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）－２－オキソヘキサヒドロ－１Ｈ－チエノ［３，４－ｄ］１３０エンゾキサゼ－４－イル］ペンタンアミド

ステップＡ：ｔｅｒｔ－ブチル４－（７－ブロモ－２，６－ジクロロ－８－フルオロキナゾリン－４－イル）ピペラジン－１－カルボキシレート（０．５１ｇ、１．１ｍｍｏｌ）とＩＰＡ（５ｍＬ）をマイクロ波容器で混ぜ合わせる。ＤＩＰＥＡ（０．５５ｍＬ、３．３ｍｍｏｌ）および５－［（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）－２－オキソヘキサヒドロ－１Ｈ－チエノ［３，４－ｄ］１３０エンゾキサゼ－４－イル］－Ｎ－［２－［２－（２－アミノエトキシ）エトキシ］エチル］ペンタンアミド（０．４８ｇ、１．３２ｍｍｏｌ）を加え、混合物をマイクロ波反応器内で１２０^℃に６時間加熱する。この後、混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液およびＣＨＣｌ_３中の２５％ＩＰＡで希釈し、層を分離する。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。得られた残留物を、Ａ中５０～１００％Ｂの勾配（Ａ：ヘキサン、Ｂ：ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）で溶出する、順相クロマトグラフィーで精製し、ｔｅｒｔ－ブチル４－｛７－ブロモ－６－クロロ－８－フルオロ－２－［（２－｛２－［２－（｛５－［（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）－２－オキソヘキサヒドロ－１Ｈ－チエノ［３，４－ｄ］１３１エンゾキサゼ－４－イル］ペンタノイル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝エチル）アミノ］キナゾリン－４－イル｝ピペラジン－１－カルボキシレートを黄色の固体として得る（０．６８ｇ、７８％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：８１９（Ｍ＋Ｈ）。

ステップＢ：ｔｅｒｔ－ブチル４－｛７－ブロモ－６－クロロ－８－フルオロ－２－［（２－｛２－［２－（｛５－［（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）－２－オキソヘキサヒドロ－１Ｈ－チエノ［３，４－ｄ］１３１エンゾキサゼ－４－イル］ペンタノイル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝エチル）アミノ］キナゾリン－４－イル｝ピペラジン－１－カルボキシレート（０．３０ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、１，４－ジオキサン（４ｍＬ）、および水（０．７５ｍＬ）を混ぜ合わせる。炭酸カリウム（０．２４ｇ、１．１１ｍｍｏｌ）、４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ナフタレン－２－オール（０．２０ｇ、０．７４ｍｍｏｌ）、およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．０８５ｇ、０．０７４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を窒素下、８５℃で１２時間撹拌する。この後、混合物を周囲温度に冷却し、濾過して固体を除去する。濾液を飽和塩化アンモニウム水溶液およびＥｔＯＡｃで希釈し、層を分離する。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。得られた残留物を、Ａ中９０～１００％Ｂの勾配（Ａ：ヘキサン、Ｂ：ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ）で溶出する、順相クロマトグラフィーで精製し、ｔｅｒｔ－ブチル４－｛６－クロロ－８－フルオロ－７－（３－ヒドロキシナフタレン－１－イル）－２－［（２－｛２－［２－（｛５－［（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）－２－オキソヘキサヒドロ－１Ｈ－チエノ［３，４－ｄ］１３１エンゾキサゼ－４－イル］ペンタノイル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝エチル）アミノ］キナゾリン－４－イル｝ピペラジン－１－カルボキシレートを黄色の固体（０．３１ｇ、９６％）として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：８８１（Ｍ＋Ｈ）。

ステップＣ：ＭｅＯＨ（４ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル４－｛６－クロロ－８－フルオロ－７－（３－ヒドロキシナフタレン－１－イル）－２－［（２－｛２－［２－（｛５－［（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）－２－オキソヘキサヒドロ－１Ｈ－チエノ［３，４－ｄ］１３１エンゾキサゼ－４－イル］ペンタノイル｝アミノ）エトキシ］エトキシ｝エチル）アミノ］キナゾリン－４－イル｝ピペラジン－１－カルボキシレート（０．３１ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却する。ＨＣｌ（ＭｅＯＨ中３Ｍ、６ｍＬ、１７．５ｍｍｏｌ）を加え、混合物を０℃で３０分間撹拌してから、周囲温度に温める。約１８時間後、反応混合物を真空中で濃縮する。残留物をＤＣＭで希釈し、再度真空中で濃縮する。得られた残留物をヘキサンで希釈し、周囲温度で２時間撹拌する。得られた固体を濾過し、真空下で乾燥させて、Ｎ－｛２－［２－（２－｛［６－クロロ－８－フルオロ－７－（３－ヒドロキシナフタレン－１－イル）－４－（ピペラジン－１－イル）キナゾリン－２－イル］アミノ｝エトキシ）エトキシ］エチル｝－５－［（３ａＳ、４Ｓ、６ａＲ）－２－オキソヘキサヒドロ－１Ｈ－チエノ［３，４－ｄ］１３２エンゾキサゼ－４－イル］ペンタンアミド塩化水素酸塩を得る。この塩酸塩（０．１９ｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（２．５ｍＬ）中のＤＩＥＡ（０．１６ｍＬ、０．９２ｍｍｏｌ）と合わせることによって中和する。混合物を－７８℃に冷却し、塩化アクリロイル（ＤＣＭ中０．５Ｍ、０．４ｍＬ、０．２１ｍｍｏｌ）を加える。３０分後、混合物を周囲温度に温める。１時間後、混合物をＭｅＯＨ（１ｍＬ）で希釈し、真空中で濃縮する。得られた残留物を、Ａ中３５～６０％Ｂの勾配（Ａ：５％ＭｅＯＨを含む１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３水溶液；Ｂ：ＡＣＮ）で溶出する、逆相クロマトグラフィーで精製し、表題化合物を白色の固体として得る（０．０２７ｇ、１４％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：８３５（Ｍ＋Ｈ）。

実施例１
（１３ａＳ）－９－（２－アミノ－７－フルオロ－１，３－ベンゾチアゾール－４－イル）－８，１０－ジクロロ－２－プロプ－２－エノイル－１，３，４，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾオキサゾシン－６－オン

（１３ａＳ）－９－（２－アミノ－７－フルオロ－１，３－ベンゾチアゾール－４－イル）－８，１０－ジクロロ－２，３，４，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾオキサゾシン－６－オン（５００ｍｇ、１．０７０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５ｍＬ）およびＴＥＡ（０．７５ｍＬ、５．４ｍｍｏｌ）に溶解する。混合物を－７８℃に冷却し、次に塩化アクリロイル（０．０８５ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を－７８℃で撹拌する。５分後、イソプロピルアルコールを－７８℃で数滴加え、次に混合物を真空中で濃縮し、逆相クロマトグラフィーにかけて、２つのアトロプ異性体の混合物を得る。アトロプ異性体の混合物を、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＩＣ、４．６×１５０ｍｍ、４０％ＥｔＯＨ／ＣＯ_２、５ｍＬ／分、２２５ｎｍを使用して分離する。カラムから離れた２番目の化合物は、活性アトロプ異性体（１６５ｍｇ、５５％）として識別される。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^３５Ｃｌ／^３７Ｃｌ）５２１／５２３［Ｍ＋Ｈ］^＋（＞９８％ｅ．ｅ．）。活性の低いアトロプ異性体（１３３ｍｇ、４４％）が最初にカラムから離れる。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^３５Ｃｌ／^３７Ｃｌ）５２１／５２３［Ｍ＋Ｈ］^＋（＞９８％ｅ．ｅ．）。

実施例３４
４－［（１３ａＳ）－１０－クロロ－８－フルオロ－６－オキソ－２－プロプ－２－エノイル－１，３，４，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾオキサゾシン－９－イル］－２－アミノ－ベンゾチオフェン－３－カルボニトリル

酢酸エチル（３５ｍＬ）、ＴＨＦ（１５ｍＬ）および水（４０ｍＬ）中の４－［（１３ａＳ）－１０－クロロ－８－フルオロ－６－オキソ－２，３，４，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾオキサゾシン－９－イル］－２－アミノ－ベンゾチオフェン－３－カルボニトリル（１．５８ｇ、３．４６ｍｍｏｌ）の懸濁液に炭酸カリウム（１．９０ｇ、１３．７ｍｍｏｌ）を入れる。混合物を急速に撹拌し、０℃に冷却する。ＤＣＭ中の塩化アクリロイル（１３．０ｍＬ、３．２５ｍｍｏｌ、０．２５Ｍ）を滴下漏斗を通して滴下して加える。氷浴中で１０分間撹拌した後、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、分液漏斗に注ぐ。層を分離し水層を再びＥｔＯＡｃで抽出する。合わせた有機抽出物を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。残留物を、最初に０～１００％（ＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ）／ＤＣＭで溶出し、次に０～１００％［ＤＣＭ中の１０％（ＭｅＯＨ中の７Ｎ ＮＨ_３）］／ＤＣＭで溶出する、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、目的の生成物をふわふわした固体として得る。固体をエーテル中で３０分間超音波処理し、濾過し、高真空中で乾燥させて、表題化合物を得る（１．６０ｇ、９１％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^３５Ｃｌ／^３７Ｃｌ）５１１．０／５１３．０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

実施例４６

０℃の氷浴で冷却したＤＭＦ（１ｍＬ）中の（４ａＲ）－８－（２－アミノ－７－フルオロ－１，３－ベンゾチアゾール－４－イル）－７，９－ジクロロ－１，２，３，４，４ａ，５－ヘキサヒドロピラジノ［２，１－ｃ］［１，４］ベンゾオキサゼピン－１１－オン（４６ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）、２－フルオロプロプ－２－エン酸（１１ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（５３μＬ、０．３０ｍｍｏｌ）溶液に、ＥｔＯＡｃ（９１μＬ、０．１５ｍｍｏｌ）中の５０重量％のプロピルホスホン酸無水物溶液を加える。４５分後、反応混合物を真空で濃縮する。粗混合物を、Ａ中２０～８０％Ｂの勾配（Ａ：５％ＭｅＯＨを含む１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３水溶液；Ｂ：ＡＣＮ）で溶出する、逆相クロマトグラフィーで精製し、表題化合物を白色の固体（２５ｍｇ、４７％）として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：５２５（Ｍ＋Ｈ）

実施例５８
４－［（１３ａＳ）－１０－クロロ－８－フルオロ－２－（４－フルオロブト－２－イノイル）－６－オキソ－１，３，４，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾオキサゾシン－９－イル］－２－アミノ－７－フルオロ－ベンゾチオフェン－３－カルボニトリル

ジエチルアミノ硫黄トリフルオリド（０．０３ｍＬ、０．２ｍｍｏｌ）を、注射器を介して、ＤＣＥ（２ｍＬ）中の４－［（１３ａＳ）－１０－クロロ－８－フルオロ－２－（４－ヒドロキシブト－２－イノイル）－６－オキソ－１，３，４，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾオキサゾシン－９－イル］－２－アミノ－７－フルオロ－ベンゾチオフェン－３－カルボニトリル（１２０ｍｇ、０．２１５ｍｍｏｌ）の０℃溶液を含む密封バイアルに滴下して添加する。反応混合物を３０分間撹拌し、次に水および２５％ＩＰＡ／クロロホルム溶液で希釈する。有機物を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。得られた残留物を、０～１００％のＤＣＭ中１０％７Ｍ ＮＨ_３／ＤＣＭで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、さらに逆相クロマトグラフィーにより精製して、表題化合物を白色固体として得る（７ｍｇ、６％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^３５Ｃｌ／^３７Ｃｌ）５５９．４／５６１．４［Ｍ＋Ｈ］^＋。

実施例６０
（１３ａＳ）－９－（２－アミノ－３－シアノ－７－フルオロ－ベンゾチオフェン－４－イル）－１０－クロロ－８－フルオロ－６－オキソ－１，３，４，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾオキサゾシン－２－カルボニトリル

臭化シアン（ＤＣＭ中３Ｍ、０．１５ｍＬ、０．４５ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１ｍＬ）中の４－［（１３ａＳ）－１０－クロロ－８－フルオロ－６－オキソ－２，３，４，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロ－１Ｈ－ピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾオキサゾシン－９－イル］－２－アミノ－７－フルオロ－ベンゾチオフェン－３－カルボニトリル（１００ｍｇ、０．２１１ｍｍｏｌ）および１Ｎ ＮａＯＨ（１ｍＬ）を含むフラスコに加える。混合物を周囲温度で１８時間撹拌し、次に水および２５％ＩＰＡ／クロロホルム溶液で希釈する。有機物を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。得られた残留物を逆相クロマトグラフィーにより、表題化合物を白色の固体として得る（２９ｍｇ、２７％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^３５Ｃｌ／^３７Ｃｌ）５１７．０／５１９．０［Ｍ＋Ｈ］^＋。

実施例６１
４－［（１３ａＳ）－１０－クロロ－２－［（Ｅ）－２－シアノ－４，４－ジメチル－ペント－２－エノイル］－８－フルオロ－６－オキソ－１，３，４，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾオキサゾシン－９－イル］－２－アミノ－７－フルオロ－ベンゾチオフェン－３－カルボニトリル

２０ｍＬのマイクロ波バイアルに４－［（１３ａＳ）－１０－クロロ－２－（２－シアノアセチル）－８－フルオロ－６－オキソ－１，３，４，１２，１３，１３ａ－ヘキサヒドロピラジノ［２，１－ｄ］［１，５］ベンゾオキサゾシン－９－イル］－２－アミノ－７－フルオロ－ベンゾチオフェン－３－カルボニトリル（０．４１０ｇ、０．７５６ｍｍｏｌ）、ＥｔＯＨ（８ｍＬ）、ピペリジン（０．１５ｍＬ、１．５ｍｍｏｌ）およびトリメチルアセトアルデヒド（０．７ｍＬ、６ｍｍｏｌ）を入れ、セプタムキャップで密封する。反応混合物をマイクロ波反応器中で１２０℃で６０分間、さらに１２０℃で９０分間、そして１００℃でさらに１時間加熱してから、真空中で濃縮する。得られた残留物を、０～５０％アセトン：ＤＣＭで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、表題生成物を淡黄色の固体として得る（１１７ｍｇ、２５％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ（^３５Ｃｌ／^３７Ｃｌ）６１０．６／６１２．６［Ｍ＋Ｈ］^＋。

生物学的アッセイ
以下のアッセイは、例示された化合物がＫＲａｓ Ｇ１２Ｃの阻害剤であり、インビトロおよび／またはインビボで特定の腫瘍の増殖を阻害することを示す。

ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃプローブ占有率ＴＲ－ＦＲＥＴアッセイ
このアッセイの目的は、コドン１２でＫＲａｓ Ｇ１２Ｃに結合し、共有結合的に修飾することについてプローブと競合する阻害剤の能力を測定することである。シグナルを、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃユーロピウム標識抗ヒスチジンタグ抗体ＬａｎｔｈａＳｃｒｅｅｎ（Ｅｕ Ａｎｔｉ－Ｈｉｓ抗体）と結合した抗体上のユーロピウムと、ストレプトアビジンおよびビオチン化阻害剤を介したＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ（「ＫＲａｓプローブ」、調製物２２３を参照されたい）と結合した蛍光トレーサー６４７（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（商標））との間の蛍光の時間分解移送によって生成する。

阻害剤を、１００％ＤＭＳＯ中の１０ｍＭストックから用量応答形式で試験する。Ｌａｂｙｃｙｔｅ Ｅｃｈｏ（登録商標）５５５を使用して、希釈し、１０ポイント、２．８倍連続希釈液を含む１ウェルあたり１００ｎＬをアッセイプレートに移す。ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃとともに阻害剤を５分間および６０分間インキュベートした後、アッセイプレートの２つのコピーを調製して効力を測定する。Ｈｉｓタグ付きＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ（２０ｎＭ）を、アッセイ緩衝液（２０ｍＭトリス－ＨＣｌ、ｐＨ７．５、０．０１％ＴＸ－１００、１ｍＭ ＤＴＴ）中のプレートに添加する。５分間または６０分間のインキュベーション後、１μＭ ＫＲａｓプローブを添加し、遊離ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃを１時間共有結合的に修飾させる。これを、Ｅｕ Ａｎｔｉ－Ｈｉｓ抗体およびストレプトアビジンコーティングトレーサー６４７（両方ともＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから）を含む緩衝液中で４倍に希釈し、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ（５ｎＭ）、Ａｎｔｉ－Ｈｉｓ抗体（２ｎＭ）、ＫＲａｓプローブ（３００ｎＭ）、およびストレプトアビジンコーティングトレーサー６４７（５００ｎＭ）を達成する。３０分後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（商標）プレートリーダーで蛍光シグナルを読み取る（３４０ｎＭでの励起、６６５ｎＭでのトレーサー発光（ｅｍ）、および６１５ｎＭでの抗体発光）。最大対照ウェルは、阻害剤を欠乏し、最小対照ウェルは、阻害剤およびＫＲａｓ Ｇ１２Ｃの両方を欠乏する。シグナル比（６６５でのｅｍ／６１５でのｅｍ）を、次の方程式を使用して阻害パーセントに変換する：阻害％＝１００－［（試験化合物シグナル－中央値最小シグナル）／（中央値最大シグナル－中央値最小シグナル）ｘ１００］。ＩＣ_５０は、各阻害剤濃度での阻害パーセントを、Ｇｅｎｅｄａｔａ Ｓｃｒｅｅｎｅｒ（登録商標）を使用して４つのパラメータの非線形ロジスティック方程式に適合させることによって決定する：ｙ＝（Ａ＋（（Ｂ－Ａ）／（１＋（（Ｃ／ｘ）＾Ｄ））））（式中、ｙ＝阻害％、Ａ＝最小漸近線、Ｂ＝最大漸近線、Ｃ＝相対ＩＣ_５０または両方の漸近線の適合範囲内で５０％の阻害を生成する阻害剤濃度、およびＤ＝Ｈｉｌｌ勾配）。

本発明の範囲内の化合物を、このアッセイにおいて実質的に上に記載されるように評価する。このアッセイで評価された本発明の例示された化合物は、コドン１２でＫＲａｓ Ｇ１２Ｃに結合し、共有結合的に修飾するためのプローブと競合することにより、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ阻害剤活性を示す。例えば、このアッセイで評価された実施例１の化合物は、５分および６０分で、ｎ＝４にて、０．０１５μＭ未満のＩＣ_５０を示す。

Ｈ３５８細胞ホスホ－ＥＲＫ ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）
このアッセイの目的は、ヒト肺癌細胞Ｈ３５８（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－５８０７）のＫＲａｓの下流エフェクターであるｐ－ＥＲＫ１／２のリン酸化を阻害する試験化合物の能力を測定することである。簡潔には、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）ＳｕｒｅＦｉｒｅ（登録商標）Ｕｌｔｒａ（商標）ｐ－ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）アッセイは、Ａｌｐｈａ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒカタログ番号ＡＬＳＵ－ＰＥＲＫ－Ａ５０Ｋ）を使用した細胞溶解物におけるホスホ－ＥＲＫ１／２（ＥＲＫ１のＴｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４またはＥＲＫ２のＴｈｒ１８５／Ｔｙｒ１８７でリン酸化される）の定量的検出のためのサンドイッチイムノアッセイである。

Ｈ３５８細胞を、９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ番号３５９６）に、１０％ＦＢＳ（ＧＩＢＣＯカタログ番号：１００８２－１４７）を含む１００μＬ培地（ＲＰＭＩ１６４０、ＧＩＢＣＯカタログ番号２２４００－０７１）に１ウェルあたり４０Ｋ細胞で播種し、３７℃、５％ＣＯ_２で、湿ったトレイで一晩インキュベートする。翌朝、１０μＬの連続的に希釈した（３倍）試験化合物（５０μＭの最高濃度）および１０μＬの対照（最大シグナルウェル：５％ＤＭＳＯおよび最小シグナルウェル：２μＭのＮ－（３－｛３－シクロプロピル－５－［（２－フルオロ－４－ヨードフェニル）アミノ］－６，８－ジメチル－２，４，７－トリオキソ－３，４，６，７－テトラヒドロピリド［４，３－Ｄ］ピリミジン－１（２Ｈ）－イル｝フェニル）アセトアミド（陽性対照としてのトラメチニブ）を、細胞プレートに添加し、３７℃／５％ＣＯ_２で、湿ったトレイで２時間インキュベートする。プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤カクテルを含む溶解緩衝液を、周囲温度で調製する。シンク内の細胞プレートを逆さにし、振盪して、次いでペーパータオルで吸い取ることによって、培養培地を除去する。溶解緩衝液を、細胞プレートに添加し（１ウェルあたり５０μＬ）、プレートを、シェーカーで１０分間、周囲温度でインキュベートする。ｐ－ＥＲＫ検出では、アクセプタービーズを、緩衝液との懸濁液混合物に希釈する。ＳＴＡＲｌｅｔリキッドハンドラーを使用して、５μＬのアクセプタービーズおよび２μＬの細胞溶解物を、単一ステップのチップ内希釈として３８４ウェルアッセイプレートに移す。アッセイプレートをホイルで密封し、周囲温度で２時間インキュベートする。ドナービーズを、緩衝液を含む懸濁液混合物に希釈する。ＳＴＡＲｌｅｔを使用して、５μＬのドナービーズをアッセイプレートに添加し、次いでそれを密封して、ホイルで包む。プレートを周囲温度で２時間暗所でインキュベートする。次いで、アッセイプレートを、発光プログラムを使用してＥｎＶｉｓｉｏｎ（商標）プレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で読み取る。

シグナルを、次の方程式を使用して阻害パーセントに変換する：
阻害％＝１００－［（試験化合物シグナル－中央値最小シグナル）／（中央値最大シグナル－中央値最小シグナル）ｘ１００］。最大シグナルは、阻害剤を含まない対照ウェルである。最小シグナルは、活性を完全に阻害するのに十分な参照阻害剤を含む対照ウェルである。ＩＣ_５０は、各阻害剤濃度での阻害パーセントを、Ｇｅｎｅｄａｔａ Ｓｃｒｅｅｎｅｒ（登録商標）を使用して４つのパラメータの非線形ロジスティック方程式に適合させることによって決定する：ｙ＝（Ａ＋（（Ｂ－Ａ）／（１＋（（Ｃ／ｘ）＾Ｄ））））（式中、ｙ＝阻害％、Ａ＝最小漸近線、Ｂ＝最大漸近線、Ｃ＝相対ＩＣ_５０または両方の漸近線の適合範囲内で５０％の阻害を生成する阻害剤濃度、およびＤ＝Ｈｉｌｌ勾配）。

本発明の範囲内の化合物を、このアッセイにおいて実質的に上に記載されるように評価する。実施例の化合物は、ｐ－ＥＲＫ１／２のリン酸化を阻害する能力を示す。実施例１の化合物は、例えば、このアッセイにおいて０．００１７８μＭ ｎ＝３の相対ＩＣ_５０を示す。このデータは、実施例の化合物が、この細胞アッセイにおいてＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ阻害活性を示すことを示す。

Ｈ３５８細胞活性ＲＡＳ ＧＴＰａｓｅ ＥＬＩＳＡ
このアッセイの目的は、ヒト肺癌細胞Ｈ３５８（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－５８０７）の構成的ＲＡＳ ＧＴＰａｓｅの活性を阻害する試験化合物の能力を測定することである。ＲＡＳ ＧＴＰａｓｅ ＥＬＩＳＡキット（Ａｃｔｉｖｅ Ｍｏｔｉｆカタログ番号５２０９７）は、キットに供給されるＧＳＴ－Ｒａｆ－ＲＢＤタンパク質を捕捉するために、グルタチオンで事前にコーティングされた９６ウェルプレートを含む。細胞抽出物中の活性化ＲＡＳ（ＧＴＰ結合）は、Ｒａｆ－ＲＢＤと特異的に結合する。結合したＲＡＳを、ヒトＫＲａｓを認識する一次抗体で検出する。ＨＲＰと複合体化した二次抗体は、一次抗体を認識し、現像溶液は、化学発光の読み取りを提供する。

Ｈ３５８細胞を、９０μＬ無血清培地（ＲＰＭＩ１６４０、ＧＩＢＣＯ）に８０，０００個の細胞／ウェルで播種し、３７℃／５％ＣＯ_２で一晩インキュベートする。翌朝、１０μＬの連続的に希釈された（３倍）試験化合物（５００μＭの最高濃度）および１０μＬの対照（最大シグナルウェル：５％ＤＭＳＯおよび最小シグナルウェル：５００μＭの１－［４－［６－クロロ－８－フルオロ－７－（３－ヒドロキシ－１－ナフチル）キナゾリン－４－イル］ピペラジン－１－イル］プロプ－２－エン－１－オン、ＷＯ２０１５０５４５７２、阻害剤として）を、細胞プレートに添加し、３７℃／５％ＣＯ_２で、２時間インキュベートする。プロテアーゼ阻害剤カクテルおよびＧＳＴ－Ｒａｆ－ＲＢＤを含む完全溶解／結合緩衝液を調製し、氷上で保存する。細胞プレートのインキュベーションが完了する１時間前に、５０μＬのＧＳＴ－Ｒａｆ－ＲＢＤを、溶解／結合緩衝液に希釈し、緩衝液を、ＥＬＩＳＡアッセイプレートに添加し、それを穏やかに揺動させながら４℃で１時間インキュベートする。２時間後、細胞を１００μＬの氷冷ＰＢＳで洗浄し、１００μＬの溶解／結合緩衝液で溶解する。細胞プレートを周囲温度で１０分間振盪する。次いで、細胞プレートを、周囲温度で、１０分間１５００ｒｐｍで遠心分離する。この時間の間に、１倍の洗浄緩衝液を周囲温度で調製し、次いで、ＧＳＴ－Ｒａｆ－ＲＢＤコーティングアッセイプレートを洗浄（３ｘ１００μＬ）するために使用する。洗浄後、５０μＬの細胞溶解物をＧＳＴ－Ｒａｆ－ＲＢＤでコーティングしたアッセイプレートに添加し、穏やかに振盪しながら周囲温度で１時間インキュベートする。このインキュベーション期間中に、１倍の抗体結合緩衝液を調製し、周囲温度にする。アッセイプレートを、１倍の洗浄緩衝液で３ｘ１００μＬ洗浄し、次いで、５０μＬの一次抗体（１倍の抗体結合緩衝液中１：５００に希釈）を添加する。プレートを周囲温度で１時間インキュベートする。アッセイプレートを、１倍の洗浄緩衝液で３ｘ１００μＬ洗浄し、次いで、５０μＬの二次抗体（１倍の抗体結合緩衝液中１：５０００に希釈）を添加し、周囲温度で１時間インキュベートする。アッセイプレートを、１倍の洗浄緩衝液で４×１００μＬ洗浄し、次いで、５０μＬの化学発光標準溶液を、周囲温度で添加する。次いで、アッセイプレートを、発光プログラムを使用してＥｎＶｉｓｉｏｎ（商標）プレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で読み取る。

シグナルを、次の方程式を使用して阻害パーセントに変換する：
阻害％＝１００－［（試験化合物シグナル－中央値最小シグナル）／（中央値最大シグナル－中央値最小シグナル）ｘ１００］。最大シグナルは、阻害剤を含まない対照ウェルである。最小シグナルは、活性を完全に阻害するのに十分な参照阻害剤を含む対照ウェルである。ＩＣ_５０は、各阻害剤濃度での阻害パーセントを、Ｇｅｎｅｄａｔａ Ｓｃｒｅｅｎｅｒ（登録商標）を使用して４つのパラメータの非線形ロジスティック方程式に適合させることによって決定する：ｙ＝（Ａ＋（（Ｂ－Ａ）／（１＋（（Ｃ／ｘ）＾Ｄ））））（式中、ｙ＝阻害％、Ａ＝最小漸近線、Ｂ＝最大漸近線、Ｃ＝相対ＩＣ_５０または両方の漸近線の適合範囲内で５０％の阻害を生成する阻害剤濃度、およびＤ＝Ｈｉｌｌ勾配）。

本発明の範囲内の化合物を、このアッセイにおいて実質的に上に記載されるように評価する。実施例の化合物は、構成的ＲＡＳ ＧＴＰアーゼ活性を阻害する能力を示す。実施例１の化合物は、例えば、このアッセイにおいて０．００６７２μＭ、ｎ＝４の相対ＩＣ_５０を示す。このデータは、実施例の化合物が、このヒト肺癌細胞培養においてＫＲａｓ－ＧＴＰ阻害活性を示すことを示す。

３Ｄ Ｈ３５８細胞増殖アッセイ
このアッセイの目的は、ヒト肺癌細胞Ｈ３５８（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－５８０７）を使用した３Ｄ増殖アッセイで試験化合物の阻害を評価することである。細胞増殖を反映するシグナルを、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ（登録商標）３Ｄ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｇ９６８３）で検出する。細胞を、１０％熱不活性化ＦＢＳおよび０．１ｍｇ／ｍＬペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ１６４０（ＧＩＢＣＯ（登録商標）で増殖させる。Ｈ３５８細胞を、増殖相で培養し、１ウェルあたり５０００個の細胞を、８０μＬ／ウェルの培養培地を含む黒色ウェルの透明な丸底９６ウェル超低付着表面プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）カタログ４５２０）に播種する。細胞を、湿度チャンバー内で、３７℃で一晩インキュベートする。２０μＬ／ウェルの連続的に希釈された試験化合物をプレートに加え、次に９６時間インキュベートする。プレートを周囲温度にし、等量の周囲温度ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ（登録商標）３Ｄ試薬を加える。プレートを７５０ＲＰＭで１０分間周囲温度で振盪する。シグナルを安定させるために周囲温度で１時間インキュベートした後、発光シグナルをＥｎＶｉｓｉｏｎ（商標）プレートリーダーで測定する。シグナルを、次の方程式を使用して阻害パーセントに変換する：阻害％＝１００－［（試験化合物シグナル－中央値最小シグナル）／（中央値最大シグナル－中央値最小シグナル）ｘ１００］。最大シグナルは、阻害剤を含まない対照ウェルである。最小シグナルは、細胞増殖を完全に阻害するのに十分な参照阻害剤（トラメチニブ）を含む対照ウェルである。ＩＣ_５０は、各阻害剤濃度での阻害パーセントを、Ｇｅｎｅｄａｔａ Ｓｃｒｅｅｎｅｒ（登録商標）を使用して４つのパラメータの非線形ロジスティック方程式に適合させることによって決定する：ｙ＝（Ａ＋（（Ｂ－Ａ）／（１＋（（Ｃ／ｘ）＾Ｄ））））（式中、ｙ＝阻害％、Ａ＝最小漸近線、Ｂ＝最大漸近線、Ｃ＝相対ＩＣ_５０または両方の漸近線の適合範囲内で５０％の阻害を生成する阻害剤濃度、およびＤ＝Ｈｉｌｌ勾配）。

本発明の範囲内の化合物を、このアッセイにおいて実質的に上に記載されるように評価する。実施例１の化合物は、例えば、このアッセイにおいて０．００８３μＭの相対的ＩＣ_５０を示す。このデータは、実施例１の化合物が、Ｈ３５８ヒト肺癌細胞の増殖を阻害することを示す。

ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ（登録商標）細胞増殖アッセイ
このアッセイの目的は、試験化合物で処理した後のＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体腫瘍株の増殖を評価することである。ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃまたは他のＫＲａｓ変異を含む腫瘍細胞株のパネルを収集する（表２５）。全ての細胞株は、ＡＴＣＣまたは示される他のソースからのものである。

典型的には、細胞を、ＲＰＭＩ１６４０または１０％ＦＢＳ（ＧＩＢＣＯ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を補充したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ、ＧＩＢＣＯ）で培養する。上に記載される増殖培地で維持した２Ｄ培養細胞（４ｘ１０^３／ウェル）については、処理の１日前に、９６ウェル組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）カタログ３６０３）に播種する。細胞を、化合物で９６時間処理した後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ（登録商標）（２Ｄの場合はＰｒｏｍｅｇａ＃Ｇ７５７２）を製造者の指示に従って使用しおよびＥｎＶｉｓｉｏｎ（商標）プレートリーダーを使用して生存率を分析する。非線形回帰およびＳ字型の用量応答曲線を使用して、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ４（登録商標）ソフトウェアを用いて半分の最大阻害濃度（ＩＣ_５０）を計算する。

データは、実施例１、３４～３６の化合物が、表２６に列挙されている多くのＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体腫瘍細胞株の増殖を阻害することを示す。

表２５に要約されるように、実施例１、３４～３６の化合物は、２Ｄ培養条件でＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異を有するほとんどの腫瘍細胞で抗増殖活性を示す。ＫＲａｓ Ｇ１２Ｓ変異を有するＡ５４９細胞では、実施例１、３４～３６の化合物はほとんど活性を示さず、実施例１、３４～３６が、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異を有する腫瘍細胞を選択的に阻害することを示唆している。

Ｈ３５８異種移植モデルおよび膵臓癌ＭｉａＰａｃａ－２異種移植モデルにおけるＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ薬力学（ＰＤ）マーカーの阻害
これらのアッセイの目的は、経口投与された試験化合物のインビボ標的阻害を評価することである。ヒト肺癌Ｈ３５８細胞、または膵臓癌ＭｉａＰａｃａ－２細胞を、ヌードマウス異種移植腫瘍モデルに移植する。Ｈ３５８またはＭｉａＰａｃａ－２細胞（１：１のＭａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）ミックス中１０ｘ１０^６個、総体積０．２ｍＬ）を、雌のヌードマウス（Ｈａｒｌａｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の後肢に皮下注射によって移植する。各群で合計３～４匹のマウスが標的関与とＰＤ研究に使用される。腫瘍サイズが約３００ｍｇに達したときに、試験化合物またはビヒクル（０．２ｍＬ中２０％Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）、２５ｍＭリン酸塩、ｐＨ２．０）の経口投与（強制飼養）により処置を開始する。

インビボ標的阻害およびＰＤ分析のために、腫瘍を、ドライアイス上で乳鉢および乳棒によって粉砕し、腫瘍断片を、チューブごとに１つの追加の大きなビーズ（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ（登録商標）１／４”セラミック球ビーズ、カタログ番号６５４０－４１２）含む溶解マトリックスＤチューブ（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ（登録商標）、カタログ番号６９１３－５００）内の、Ｈａｌｔプロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤カクテル（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１８６１２８１）を含む１％Ｔｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ－１００、２５ｍＭトリスｐＨ７．５、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、１ｍＭ ＥＤＴＡ、および１ｍＭ ＥＧＴＡを含有する８００μＬの溶解緩衝液に、添加する。腫瘍断片を、合計２回冷却しながら、１５分間設定４で、Ｔｈｅｒｍｏ Ｂｉｏ１０１（登録商標）ｆａｓｔ ｐｒｅｐ（ＦＰ１２０）で均質化する。溶解物を、４℃で１０分間１４，０００ｒｐｍで回転させて、清澄にする。ＢｉｏＲａｄ Ｄｃ（登録商標）タンパク質アッセイを使用して、溶解物上清でタンパク質の推定を行い、溶解物を、Ｒａｓ ＧＴＰａｓｅ Ｃｈｅｍｉ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（登録商標）（Ａｃｔｉｖｅ Ｍｏｔｉｆ、カタログ番号５２０９７）からの完全な溶解／結合緩衝液で希釈する。活性ＫＲａｓ ＥＬＩＳＡを、次のように行った：グルタチオンでコーティングされたＥＬＩＳＡウェルを、完全な溶解／結合緩衝液で希釈したＲＡＦ１－ＧＳＴとともに、穏やかに撹拌しながら４℃で１時間インキュベートする。ウェルを洗浄緩衝液で３回洗浄し、１００μｇの溶解物を各ウェルに添加し、穏やかに撹拌しながら室温で１時間インキュベートする。ウェルをさらに３回洗浄し、次いで、抗体結合緩衝液で希釈した一次抗体を、各ウェルに添加する。プレートを１時間インキュベートする。ウェルをさらに３回洗浄した後、抗体結合緩衝液で希釈したＨＲＰコンジュゲート二次抗体を各ウェルに添加する。プレートを周囲温度で１時間インキュベートする。ＥＬＩＳＡウェルを４回洗浄し、化学発光試薬を添加後、発光を読み取る。ｐＥＲＫ Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＥＬＩＳＡの場合、０．１％ＳＤＳを含む２５μｇのタンパク質が使用され、ｐＥＲＫ用のＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｗｈｏｌｅ Ｃｅｌｌ Ｌｙｓａｔｅ ＫｉｔはＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙから提供されている。

肺癌Ｈ３８８異種移植マウスモデルにおける用量依存性インビボ標的阻害および薬力学的効果：
このアッセイの目的は、肺癌モデルにおける用量依存的なインビボ標的阻害と薬力学的効果を評価することである。試験化合物を、肺癌Ｈ３５８マウス異種移植モデルに１２．５～１００ｍｇ／ｋｇの用量範囲で投与する。腫瘍試料を、単回投与の８時間後に収集する。腫瘍溶解物を調製し、ｐＥＲＫおよび活性ＫＲａｓの阻害を、上に記載されるように測定する。結果を表２６に提供し、実施例３４の化合物は、８時間で１２．５～１００ｍｇ／ｋｇの単回投与処置後に、ｐＥＲＫおよび活性ＫＲａｓの用量依存的阻害を示す。実施例３５の化合物はまた、１２．５～１００ｍｇ／ｋｇの単回投与処置後に、ｐＥＲＫおよび活性ＫＲａｓの良好な阻害を示す。これらの用量レベルでは、８２．２％～９０．６％のｐＥＲＫ阻害、および７３．４％～９４％の活性ＫＲａｓ阻害が観察される。

肺癌Ｈ３８８異種移植マウスモデルにおける時間依存性インビボ標的阻害および薬力学的効果
このアッセイの目的は、肺癌モデルにおける時間依存性のインビボ標的阻害と薬力学的効果を評価することである。実施例３５および３６の化合物もまた、経時的実験において３０ｍｇ／ｋｇで投与される。単回投与後、腫瘍試料を、投与後２、４、８、１２、および２４時間で採取する。腫瘍溶解物を調製し、ｐＥＲＫおよび活性ＫＲａｓの阻害を、上に記載されるように測定する。結果を表２７に提供する。実施例３５の化合物はまた、３０ｍｇ／ｋｇの単回投与処置後に、ｐＥＲＫおよび活性ＫＲａｓの時間依存的阻害を示す。３０ｍｇ／ｋｇでは、８時間で８２．６％のｐＥＲＫ阻害が観察され、２４時間でｐＥＲＫ阻害は６５．２％に減少する。活性ＫＲａｓの場合、８時間で８０．２％の阻害が達成され、活性ＫＲａｓの阻害は２４時間で５４．９％に減少する。実施例３６の化合物はまた、３０ｍｇ／ｋｇの単回投与処置後に、ｐＥＲＫおよび活性ＫＲａｓの時間依存的阻害を示す。３０ｍｇ／ｋｇでは、８時間で８２．６％のｐＥＲＫ阻害が観察され、２４時間でｐＥＲＫ阻害は４８．８％に減少する。活性ＫＲａｓの場合、８時間で８８．５％の阻害が達成され、活性ＫＲａｓの抑制は２４時間で４３．２％に減少する。

膵臓癌ＭｉａＰａｃａ－２異種移植マウスモデルにおけるインビボ標的阻害および薬力学的効果
このアッセイの目的は、膵臓癌モデルにおける、時間に依存するインビボ標的阻害および薬力学的効果を評価することである。実施例３５の化合物は、経時的実験において５、１０または３０ｍｇ／ｋｇで投与される。単回投与後、腫瘍試料を、投与後２、４、８、１２、および２４時間で採取する。腫瘍溶解物を調製し、ｐＥＲＫおよび活性ＫＲａｓの阻害を、上に記載されるように測定する。結果を表２８に提供する。実施例３５の化合物は、５、１０または３０ｍｇ／ｋｇの単回投与処置後、ｐＥＲＫおよび活性ＫＲａｓの用量および時間依存的阻害を示す。５ｍｇ／ｋｇでは、４時間で６３．８％の活性Ｒａｓ阻害と５０．９％のｐＥＲＫ阻害が観察される。１０ｍｇ／ｋｇでは、４時間で８５．５％の活性Ｒａｓ阻害と５８．５％のｐＥＲＫ阻害が観察される。３０ｍｇ／ｋｇでは、４時間で９０．９％の活性Ｒａｓ阻害と５８．７％のｐＥＲＫ阻害が観察され、２４時間で６０．７％の活性Ｒａｓ阻害が維持される。

肺癌Ｈ３５８異種移植マウスモデルにおける抗腫瘍成長活性：
このアッセイの目的は、肺癌Ｈ３５８マウス異種移植モデルにおける試験化合物（実施例３４、３５、および３６）の抗腫瘍活性を決定することである。Ｈ３５８肺腫瘍細胞（１０ｘ１０^６）を、雌のヌードマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の後肢に皮下注射によって移植する。各群で合計４匹のマウスが有効性研究に使用される。腫瘍サイズが約３００ｍｇに達したときに、試験化合物またはビヒクル（０．２ｍＬ体積中２０％Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）、２５ｍＭリン酸塩、ｐＨ２．０）を１日１回または２回、２８日間経口投与（強制飼養）することにより処置を開始する。腫瘍増殖および体重を経時的に監視し、有効性および毒性の兆候を評価する。要約した結果を表２９に提供する。実施例３４化合物について、１日１回の投薬スケジュールで１００ｍｇ／ｋｇで、－６．２８～－３０．９６％の腫瘍増殖の退縮が観察された。実施例３５化合物について、１日２回の投薬スケジュールで３０ｍｇ／ｋｇで、－６７．６８～－７２．１４％の腫瘍退縮が観察された。実施例３６化合物について、１日２回の投薬スケジュールで３０ｍｇ／ｋｇで、－６８．９６％の腫瘍進行が達成された。これらの化合物の研究全体を通して、有意な動物の体重減少は観察されなかった。

他の肺癌モデルならびに大腸癌、膵臓癌、膀胱癌および食道癌のモデルにおける抗腫瘍増殖活性
Ｈ３５８異種移植モデルに加えて、実施例３５の化合物を、肺癌、大腸癌、膵臓癌、膀胱癌および食道癌の他の異種移植または患者由来異種移植（ＰＤＸ）モデルで、異なる用量で試験する。Ｈ１３７３、ＨＣＣ４４、ＭｉａＰａｃａ－２、ＳＷ１４６３、ＫＹＳＥ－４１０およびＵＭ－ＵＣ－３の異種移植モデルの場合、通常１：１のマトリゲルミックス（総体積０．２ｍＬ）中、５～１０×１０^６個の細胞を、ヌードマウスの後肢に皮下注射により移植する。一般的に、各群で合計４匹のマウスが有効性研究に使用される。腫瘍サイズが約２００～３００ｍｇに達したときに、０．２ｍＬの体積で、試験化合物またはビヒクル（２０％Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）、２５ｍＭリン酸塩、ｐＨ２．０）の経口投与（強制飼養）により処置を開始する。腫瘍増殖および体重を経時的に監視し、有効性および毒性の兆候を評価する。ＥＬ３１８７ ＰＤＸモデルの場合、腫瘍断片を含む凍結バイアルを水浴中、３７℃で解凍する。腫瘍断片を５０ｍＬのファルコンチューブに移し、氷冷したＤＭＥＭ培地をゆっくりとチューブに加えて総体積を３５ｍＬにする。次に、腫瘍断片を１３０ｘｇで２分間、４℃で遠心分離し、上清を吸引する。この洗浄ステップを２回繰り返し、腫瘍断片を１０ｍＬ ＤＭＥＭに再懸濁して、無胸腺ヌードＦｏｘｎ１ｎｕマウス（Ｅｎｖｉｇｏ ＲＭＳ，Ｉｎｃ．、インディアナ州マウントコンフォート）に移植する。腫瘍の体積が８００～１０００ｍｍ^３に達したら、動物を屠殺し、無菌技術を使用して腫瘍を採取する。新鮮な腫瘍を１０～１５ｍｍ^３の断片に切断し、冷Ｇｉｂｃｏ冬眠培地に入れる。腫瘍断片を、１０ｇのトロカール針で動物に皮下移植する。腫瘍サイズが２００～３００ｍｍ^３に達したら、動物を化合物処置のために無作為化する。

実施例３５の化合物の抗腫瘍増殖または退縮活性を表３０に要約する。表３１に列挙されているモデルの中で、ＥＬ３１８７は患者由来の異種移植（ＰＤＸ）モデルであり、他のすべては腫瘍異種移植モデルである。表３１に示されるように、実施例３５の化合物は、すべてのモデルにおいて用量依存的な抗腫瘍活性を示し、実施例３５の化合物が、肺癌、大腸癌、膵臓癌、膀胱癌および食道癌を含むＫＲａｓＧ１２Ｃ変異を有する癌に対して活性であることを示唆している。

実施例３５の化合物と他の標的療法とのインビトロ組み合わせ効力
単剤療法に加えて、実施例３５の化合物を、ＣＤＫ４およびＣＤＫ６阻害剤アベマシクリブ、ＥＧＦＲ小分子阻害剤エルロチニブまたはアファチニブ、ＥＧＦＲモノクローナル抗体セツキシマブ、およびＥＲＫ阻害剤ＬＹ３２１４９９６などの他の標的療法との組み合わせ効力について評価する。この研究のための１１の細胞株をＡＴＣＣから入手し、ＡＴＣＣ推奨条件下で増殖する。すべての細胞株にはＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ変異があり、６つの肺癌細胞株（Ｈ３５８、Ｈ１３７３、Ｈ１７９２、Ｈ２０３０、Ｈ２１２２、ＳＷ１５７３、およびＨＣＣ４４）、２つの大腸癌細胞株（ＳＷ８３７およびＳＷ１４６３）、１つの膵臓癌細胞株（ＭｉａＰａｃａ－２）、および１つの食道癌細胞株（ＫＹＳＥ４１０）である。増殖アッセイを、Ｃｅｌｌ ＴｉｔｅｒＧｌｏ（登録商標）を読み取りとして使用する４日間の成長アッセイとして行う。簡潔には、細胞を、９６ウェル細胞培養プレートに播種し、３７℃で一晩接着させる。翌日、細胞を、化合物で、単一処理または組み合わせ処理のいずれかで処理する。最初に、試験化合物をＤＭＳＯ中に連続希釈し、続いて、１％ＤＭＳＯで５倍濃度として培地に希釈し、最後に、培地で細胞に添加し、１倍に希釈する。細胞を、３７℃でさらに４日間インキュベートする。インキュベーション期間の終了時に、Ｃｅｌｌ ＴｉｔｅｒＧｌｏ（登録商標）試薬を混合し、ウェルに添加する。１０分後、発光を、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎ機器によって読み取る。単一および組み合わせ処理用の４パラメータロジスティックスモデルによって生成された絶対ＩＣ_５０値、その後、各組み合わせ処理および細胞株の組み合わせインデックスを生成する。組み合わせＩＣ_５０値を、一緒に添加した場合の各化合物の合計濃度に基づいて調整する。（例：化合物１および化合物２の１：１の濃度比の場合、組み合わせＩＣ_５０は２倍増加する）。組み合わせインデックス（ＣＩ）を、組み合わせ療法の効力が予想される場合の相加的効力と異なる程度を測定し、Ｌｏｅｗｅ定義の相加性に基づく。

式中、
●Ｃ_Ａ，ｙおよびＣ_Ｂ，ｙは、組み合わせて与えられた場合に効果ｙを生み出す治療ＡおよびＢの濃度である。
●ＩＣ_Ａ，ｙおよびＩＣ_Ｂ，ｙは、個別に与えられた場合に効果ｙを生み出すＡおよびＢの濃度である。

場合によっては、推定ＩＣ_５０値がＣＩ計算に使用される場合、計算されたＣＩは増強インデックスと呼ばれる。組み合わせまたは増強インデックスの生物学的解釈は、以下の通りである：組み合わせまたは増強インデックスが＜０．５の場合は相乗的、組み合わせまたは増強インデックスが０．５～２の場合は相加的、組み合わせまたは増強インデックスが＞２の場合は拮抗的である。

表３１に示されるように、実施例３５の化合物とアベマシクリブとの組み合わせは、ＫＲａｓＧ１２Ｃ変異を有する腫瘍細胞の阻害において相加的または相乗的効力を有する。試験した１１の細胞株のうち、５つの細胞株で、組み合わせインデックス（ＣＩ）が０．５～１．２の相加効果が観察され、６つの細胞株で、ＣＩが＜０．５の相乗効果が観察され、実施例３５とアベマシクリブとの組み合わせが、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異を有する癌患者に利益を提供し得ることを示唆している。

表３２に示されるように、実施例３５の化合物とＥＧＦＲ小分子阻害剤エルロチニブまたはアファチニブとの組み合わせは、ＫＲａｓＧ１２Ｃ変異を有する腫瘍細胞を阻害することにおいて相加的または相乗的効果を有する。エルロチニブの組み合わせでは、試験した１１の細胞株の中で、５つの細胞株で、組み合わせまたは増強インデックスが０．５～１．１５の相加効果が観察され、６つの細胞株で、組み合わせまたは増強インデックスが＜０．５の相乗効果が観察される。アファチニブの組み合わせでは、試験した９つの細胞株のうち、４つの細胞株で、ＣＩが０．５～１．１の相加効果が観察され、５つの細胞株で、ＣＩが＜０．５の相乗効果が観察される。これらのデータは、実施例３５とＥＧＦＲ小分子阻害剤との組み合わせが、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異を有する癌患者に利益を提供し得ることを示唆している。

表３３に示されるように、実施例３５の化合物とＥＧＦＲ抗体セツキシマブとの組み合わせは、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異を有する腫瘍細胞を阻害することにおいて相加的または相乗的効力を有する。試験した１１の細胞株のうち、５つの細胞株は、増強インデックス（ＣＩ）が０．５～１．０６の相加効果を有し、６つの細胞株は、増強インデックスが＜０．５の相乗効果を有し、実施例３５とセツキシマブの組み合わせがＫＲａｓＧ１２Ｃ変異を有する癌患者に利益を提供し得ることを示唆している。

表３４に示されるように、実施例３５の化合物とＥＲＫ阻害剤ＬＹ３２１９４４６との組み合わせは、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異を有する腫瘍細胞を阻害することにおいて相加的または相乗的効力を有する。試験した１０の細胞株のうち、５つの細胞株で、ＣＩが０．５～１．２の相加効果が観察され、５つの細胞株で、組み合わせまたは増強インデックスが＜０．５の相乗効果が観察され、実施例３５とＥＲＫ阻害剤との組み合わせが、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異を有する癌患者に利益を提供し得ることを示唆している。

実施例３５の化合物と化学療法とのインビトロ組み合わせ効力
実施例３５の化合物はまた、インビトロで、３つの肺癌細胞株、Ｈ１７９２、Ｈ３５８およびＨ２１２２において、ペメトレキセド、カルボプラチンまたはシスプラチンを含む化学療法と組み合わされる。表３５に示すように、ペメトレキセドの組み合わせでは、ＣＩに基づいて相加効果または相乗効果が観察される。同様の組み合わせ効果は、カルボプラチンとシスプラチンの組み合わせで観察される。

実施例３５と他の標的療法とのインビボ組み合わせ効力
実施例３５の化合物は、ＰＤＸ動物モデルにおいて、ＣＤＫ４／ＣＤＫ６阻害剤アベマシクリブ、ＥＧＦＲ小分子阻害剤エルロチニブまたはアファチニブ、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体セツキシマブ、またはＥＲＫ阻害剤ＬＹ３２１４９９６と組み合わせて評価される。合計６つのインビボ異種移植モデルまたはＰＤＸモデル（４つの肺モデル（Ｈ３５８、Ｈ１３７３、ＬＵ９９、およびＥＬ３１８７ ＰＤＸ）、１つの大腸（ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ）モデル（ＳＷ１４６３）、および１つの膵臓モデル（ＭｉａＰａｃａ－２））が使用される。表３６は、これらすべてのインビボ組み合わせ研究結果の要約である。

実施例３５の化合物とＣＤＫ４／６阻害剤アベマシクリブとの組み合わせを、６つのモデルすべてで研究する。６つのモデルすべてにおいて、この組み合わせは、実施例３５の化合物またはアベマシクリブ単独の場合よりも優れている。４つの肺癌モデルと１つの膵臓癌モデルでは、この組み合わせで相乗効果と有意な腫瘍増殖の退縮が観察される。大腸ＳＷ１４６３モデルでは、実施例３５の化合物またはアベマシクリブ単独のいずれよりも優れた抗腫瘍活性が観察される。

実施例３５の化合物とＥＧＦＲ小分子阻害剤エルロチニブとの組み合わせを、６つのモデルすべてで実施する。６つのモデルすべてにおいて、組み合わせは、実施例３５の化合物またはエルロチニブ単独のいずれよりも優れている。３つの肺癌モデルと１つの膵臓癌モデルでは、この組み合わせで相乗効果と有意な腫瘍増殖の退縮が観察される。大腸癌ＳＷ１４６３モデルおよび肺癌ＬＵ９９モデルでは、組み合わせは、実施例３５の化合物またはエルロチニブ単独のいずれよりも優れている。肺癌Ｈ３５８異種移植モデルにおいて、実施例３の化合物およびＥＧＦＲ小分子阻害剤アファチニブの組み合わせで、いずれかの化合物単独と比較して、相加効果およびより良好な抗腫瘍活性が観察される。

実施例３５およびＥＧＦＲ抗体セツキシマブのインビボ組み合わせ研究を、Ｈ３５８肺癌異種移植モデルおよびＳＷ１４６３大腸癌異種移植モデルで実施する。両方のモデルで、腫瘍増殖の退縮とより良い組み合わせ効力が組み合わせで観察される。組み合わせは、実施例３５化合物またはセツキシマブ単独のいずれよりも優れている。

実施例３５の化合物とＥＲＫ阻害剤（ＥＲＫｉ）ＬＹ３２１４９９６との組み合わせを、６つのモデルすべてで研究する。６つのモデルすべてにおいて、相乗効果または相加効果が組み合わせで観察され、組み合わせは、実施例３５の化合物またはＥＲＫ阻害剤単独のいずれよりも優れている。３つの肺癌モデル（Ｈ３５８、Ｈ１３７３、およびＥＬ３１８７）、１つの膵臓癌モデルおよび１つの大腸モデルでは、有意な腫瘍増殖の退縮が観察される。

免疫療法、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体との組み合わせ効力
マウス同系モデルを使用して、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ阻害および免疫療法の組み合わせの効果を評価する。このモデルでは、マウスの大腸腫瘍細胞株であるＣＴ－２６細胞株でのＣＲＩＳＰＲノックインにより、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｄ変異がＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異に変換する。ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃノックインは、遺伝的および機能的特性によって確認される。操作された細胞株は、ＣＴ－２６－Ｈ４／ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃと名付けられる。これらの細胞を、Ｂａｌｂ／ｃマウスに移植し、腫瘍細胞移植の６日後に化合物処理を開始する。この研究では、実施例３５の化合物を抗ＰＤ－Ｌ１抗体（ＲＭＰ１（ＢｉｏＸｃｅｌｌカタログ番号ＢＥ０１４６））または抗ＰＤ－１抗体（Ｈｏｌｍｇａａｒｄ ＲＢ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ Ｃａｎｃｅｒ ２０１８；６（４７）：１－１５）のいずれかと組み合わされ、投与スケジュールは表３７に記載されている。表３７に示されるように、実施例３５の化合物は、平均８９．４％の腫瘍増殖阻害を伴う有意な単剤活性を示し、３週間の投与の終わりに３０ｍｇ／ｋｇで完全奏功を示さない。抗マウスＰＤ－Ｌ１抗体１７８Ｇ７は３６．１％の腫瘍増殖阻害を示し、完全奏功はなく、抗ＰＤ－１抗体ＲＭＰ１は、投与終了時（２１日目）または５９日目に、７０．７％の腫瘍増殖阻害を示し、１０％（１０のうちの１）の完全奏功を示す。しかしながら、実施例３５の化合物と抗ＰＤ－Ｌ１または抗ＰＤ－１抗体のいずれかとの組み合わせは、著しく良好な抗腫瘍活性を達成する。３週間の投与の終了時、実施例３５の化合物と抗ＰＤ－Ｌ１または抗ＰＤ－１抗体との組み合わせは、それぞれ－３３．９％および－１９．４％の腫瘍退縮、ならびに３０％および４０％の完全奏功を示す。３週間後、化合物処置を中止すると、抗ＰＤ－１群の１匹の動物を除いて、単剤療法群の全ての腫瘍が再増殖し始めた。しかしながら、２つの組み合わせ群の多くの腫瘍は再増殖の兆候を示さない。最後の投与から３８日後（５９日目）、組み合わせ群は４０％および６０％の完全奏効を示し、組み合わせ群の多くの腫瘍が排除されたことを示している。これらの結果は、抗ＰＤ－Ｌ１または抗ＰＤ－１抗体のいずれかと組み合わせた実施例３５の化合物による治療が、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異を有する癌患者にとって有益であり得ることを示唆している。

本発明はまた、癌を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩、およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤を投与することを含む、方法を提供し、その癌は、変異体ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃタンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。本発明はまた、癌の治療における使用のため、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤と同時に、別々に、または連続的に組み合わせて使用するための、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。本発明はまた、癌の治療における、同時、別々、または連続的な使用のための、式Ｉ～ＶＩのうちのいずれか１つによる化合物、またはその薬学的に許容される塩と、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤と、を含む、組み合わせを提供する。一実施形態では、化合物は、式Ｉ～ＶＩの化合物、またはその薬学的に許容される塩である。別の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤はペムブロリズマブである。別の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤はニボルマブである。別の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤はシミプリマブ（ｃｉｍｉｐｌｉｍａｂ）である。別の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤はシンチリマブ（ｓｉｎｔｉｌｉｍａｂ）である。別の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤はアテゾリズマブである。別の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤はアベルマブである。別の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤はデュルバルマブである。別の実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤はロダピリマブ（ｌｏｄａｐｉｌｉｍａｂ）である。別の実施形態では、癌は、非小細胞肺癌であり、その癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、癌は、大腸癌であり、その癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、癌は、変異体膵臓癌であり、その癌は、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有する。別の実施形態では、本発明は、他の起源の癌を有するＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体を治療する方法を含む。

Claims (29)

1. 以下の式の化合物であって、
   

   

   式中、
   Ａが、－ＯＣＨ_２－、－Ｎ（Ｒ_６）ＣＨ_２、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２－、－Ｎ（Ｒ_６）ＣＨ_２ＣＨ_２－、－ＣＨ_２ＯＣＨ_２－、または－ＣＨ_２Ｎ（Ｒ_６）ＣＨ_２－であり、
   Ｂが、－ＣＨ_２－または－Ｃ（Ｏ）－であり、
   Ｙが、－Ｃ（ＣＮ）－または－Ｎ－であり、
   Ｒ_１が、－ＣＮ、－Ｃ（Ｏ）Ｃ≡ＣＲ_８、または以下の式の基であり
   

   

   Ｒ_２が、Ｈ、メチル、または－ＣＨ_２ＣＮであり、
   Ｒ_３およびＲ_５が、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、－Ｃ_０－３アルキル－シクロプロピル、任意にＲ_１０で１～３回置換されている－Ｃ_１－６アルキル、または任意にＲ_１０で１～３回置換されている－Ｏ－Ｃ_１－６アルキルであり、
   Ｒ_４が、Ｈ、ハロゲン、または任意にＲ_１０で１～３回置換されている－Ｃ_１－６アルキルであり、
   Ｒ_６が、Ｈまたは任意にＲ_１０で１～３回置換されている－Ｃ_１－６アルキルであり、
   Ｒ_７が、Ｈ、ハロゲン、－ＮＲ_１１Ｒ_１２、－ＣＨ_２ＮＲ_１１Ｒ_１２、任意にＲ_１０もしくはＲ_１３で１～３回置換されている－Ｃ_１－６アルキル、－Ｃ_０－３アルキルシクロプロピル、または任意にＲ_１０もしくはＲ_１３で１～３回置換されている－Ｏ－Ｃ_１－６アルキルであり、
   Ｒ_８が、Ｈ、任意にＲ_１０で１～３回置換されている－Ｃ_１－４アルキル、または任意にＲ_１０で１～３回置換されている－Ｃ_３－６シクロアルキルであり、
   Ｒ_９が、Ｈ、ハロゲン、－ＣＮ、－Ｃ_０－３アルキル－Ｃ_３－６シクロアルキル、または任意にＲ_１０で１～３回置換されている－Ｃ_１－６アルキルであり、
   Ｒ_１０が、それぞれが出現ごとに独立して、ハロゲン、酸素、ヒドロキシ、－Ｃ_１－４アルキル、または－Ｏ－Ｃ_１－４アルキルであり、
   Ｒ_１１およびＲ_１２が、それぞれ独立して、Ｈ、－Ｃ_１－４アルキル、または－Ｃ_１－４ヘテロアルキルであり、Ｒ_１１およびＲ_１２が、結合してシクロヘテロアルキルを形成してもよく、
   Ｒ_１３が、それぞれが出現ごとに独立して、－Ｎ－Ｃ_１－４アルキルである、
   化合物、あるいはその薬学的に許容される塩。
2. Ａが、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２－である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
3. Ｂが、－Ｃ（Ｏ）－である、請求項１もしくは２に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
4. Ｙが、－Ｃ（ＣＮ）－である、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
5. Ｙが、－Ｎ－である、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
6. Ｒ_１が、以下の式の基であり
   

   

   式中、Ｒ_７が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、メチル、エトキシ、エチル、イソプロピル、もしくはシクロプロピルである、請求項１～５のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
7. Ｒ_１が、以下の式の基であり
   

   

   式中、Ｒ_９が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、－ＣＨＦ_２、－ＣＦ_３、もしくは－ＣＨ_２ＯＨである、請求項１～５のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
8. Ｒ_１が、－ＣＮ、－Ｃ（Ｏ）Ｃ≡ＣＲ_８である、請求項１～５のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
9. Ｒ_２が、Ｈもしくはメチルである、請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
10. Ｒ_３が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、メチル、メトキシ、エチル、イソプロピル、もしくはシクロプロピルである、請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
11. Ｒ_４が、Ｈ、Ｆ、もしくはＣｌである、請求項１～１０のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
12. Ｒ_５が、Ｈ、－ＣＨＦ_２、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２ＯＨ、もしくは－ＣＨ_２ＯＣＨ_３である、請求項１～１１のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
13. 以下の式の請求項１に記載の化合物であって、
    

    

    式中、
    Ａが、－ＯＣＨ_２－もしくは－ＯＣＨ_２ＣＨ_２－であり、
    Ｙが、Ｃ（ＣＮ）もしくはＮであり、
    Ｒ_３が、ＣｌもしくはＦであり、
    Ｙが、Ｃ（ＣＮ）である場合、Ｒ_４が、ＨもしくはＦであり、
    Ｙが、Ｎである場合、Ｒ_４が、Ｆである、化合物、
    またはその薬学的に許容される塩。
14. Ａが、
    

    

    である、請求項１３に記載の化合物。
15. 以下の、
    

    

    から選択される、請求項１に記載の化合物、
    またはその薬学的に許容される塩。
16. 以下の、
    

    

    である、請求項１５に記載の化合物。
17. 請求項１～１６のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
18. 癌の患者を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の請求項１７に記載の薬学的組成物を投与することを含み、前記癌が、肺癌、膵臓癌、子宮頸癌、食道癌、子宮内膜癌、卵巣癌、胆管癌、および大腸癌から選択される、方法。
19. 癌の患者を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の、請求項１～１６のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含み、前記癌が、肺癌、膵臓癌、子宮頸癌、食道癌、子宮内膜癌、卵巣癌、胆管癌、および大腸癌から選択される、方法。
20. 前記癌が、非小細胞肺癌であり、１つ以上の細胞が、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する、請求項１９に記載の方法。
21. 前記癌が、大腸癌であり、１つ以上の細胞が、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する、請求項１９に記載の方法。
22. 前記癌が、膵臓癌であり、１つ以上の細胞が、ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する、請求項１９に記載の方法。
23. 前記患者が、前記化合物またはその薬学的に許容される塩の投与前に、前記ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異体タンパク質を発現する１つ以上の細胞を有すると判定された癌を有する、請求項１９に記載の方法。
24. ＫＲａｓ Ｇ１２Ｃ変異を有する癌の患者を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の、請求項１～１６のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。
25. 前記患者がまた、有効量の、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＤ４／ＣＤＫ６阻害剤、もしくはその薬学的に許容される塩、ＥＧＦＲ阻害剤、もしくはその薬学的に許容される塩、ＥＲＫ阻害剤、もしくはその薬学的に許容される塩白金剤（ｐｌａｔｉｎｕｍ ａｇｅｎｔ）、およびペメトレキセド、もしくはその薬学的に許容される塩のうちの１つ以上も投与される、請求項１９～２４のいずれか一項に記載の方法。
26. 療法において使用するための、請求項１～１６のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
27. 癌の治療において使用するための、請求項１～１６のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
28. 前記癌が、肺癌、膵臓癌、子宮頸癌、食道癌、子宮内膜癌、卵巣癌、胆管癌、および大腸癌から選択される、請求項２７に記載の使用のための化合物、またはその薬学的に許容される塩。
29. 癌の治療において、ＰＤ－１もしくはＰＤ－Ｌ１阻害剤、ＣＤ４／ＣＤＫ６阻害剤、もしくはその薬学的に許容される塩、ＥＧＦＲ阻害剤、もしくはその薬学的に許容される塩、ＥＲＫ阻害剤、もしくはその薬学的に許容される塩白金剤、およびペメトレキセド、もしくはその薬学的に許容される塩のうちの１つ以上と、同時に、別々に、もしくは連続的に組み合わせて使用するための、請求項１～１６のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。