JP2022185022A - Rsv fタンパク質突然変異体 - Google Patents
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Abstract
Description
本願は、2015年12月23日に出願された米国仮特許出願第62/387,270号および2016年11月11日に出願された米国仮特許出願第62/421、184号に対する優先権を主張する。前述の各出願の内容全体は、参照によって本明細書に組み込まれる。
(1)55位、62位、155位、190位、または290位のSの、I、Y、L、H、またはMでの置換、
(2)54位、58位、189位、219位、または397位のTの、I、Y、L、H、またはMでの置換、
(3)151位のGの、AまたはHでの置換、
(4)147位または298位のAの、I、L、H、またはMでの置換、
(5)164位、187位、192位、207位、220位、296位、300位、または495位のVの、I、Y、Hでの置換、および
(6)106位のRの、Wでの置換
からなる群から選択される間隙充填突然変異を含む。
(1)82位、92位、または487位のEの、D、F、Q、T、S、L、またはHによる置換、
(2)315位、394位、または399位のKの、F、M、R、S、L、I、Q、またはTによる置換、
(3)392位、486位、または489位のDの、H、S、N、T、またはPによる置換、および
(4)106位または339位のRの、F、Q、N、またはWによる置換
からなる群から選択される静電気的突然変異を含む。
(1)T103C、I148C、S190I、およびD486Sの組合せ、
(2)T54H、S55C、L188C、D486Sの組合せ、
(3)T54H、T103C、I148C、S190I、V296I、およびD486Sの組合せ、
(4)T54H、S55C、L142C、L188C、V296I、およびN371Cの組合せ、
(5)S55C、L188C、およびD486Sの組合せ、
(6)T54H、S55C、L188C、およびS190Iの組合せ、
(7)S55C、L188C、S190I、およびD486Sの組合せ、
(8)T54H、S55C、L188C、S190I、およびD486Sの組合せ、
(9)S155C、S190I、S290C、およびD486Sの組合せ、
(10)T54H、S55C、L142C、L188C、V296I、N371C、D486S、E487Q、およびD489Sの組合せ、ならびに
(11)T54H、S155C、S190I、S290C、およびV296Iの組合せ
からなる群から選択される、突然変異体を提供する。
(1)配列番号8のヌクレオチド配列、
(2)配列番号9のヌクレオチド配列、
(3)配列番号10のヌクレオチド配列、
(4)配列番号11のヌクレオチド配列、
(5)配列番号12のヌクレオチド配列、
(6)配列番号13のヌクレオチド配列、
(7)配列番号14のヌクレオチド配列、
(8)配列番号15のヌクレオチド配列、
(9)配列番号16のヌクレオチド配列、
(10)配列番号17のヌクレオチド配列、および
(11)配列番号18のヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、RSV Fタンパク質突然変異体をコードする核酸分子を提供する。
用語「101F」は、配列番号30のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号31のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する、US2006/0159695A1において記載されている抗体を指す。
1)アラニン(A)、セリン(S)、スレオニン(T)、
2)アスパラギン酸(D)、グルタミン酸(E)、
3)アスパラギン(N)、グルタミン(Q)、
4)アルギニン(R)、リジン(K)、
5)イソロイシン(I)、ロイシン(L)、メチオニン(M)、バリン(V)、および
6)フェニルアラニン(F)、チロシン(Y)、トリプトファン(W)。
一部の態様では、本発明は、対応する野生型RSV Fタンパク質のアミノ酸配列に対する、アミノ酸配列において導入された突然変異を呈し、かつ野生型RSV Fタンパク質に対してまたは野生型Fタンパク質を含むウイルスに対して免疫原性である、野生型RSV Fタンパク質の突然変異体を提供する。ある特定の実施形態では、RSV F突然変異体は、ある特定の有利な特徴、例えば、対応する野生型Fタンパク質と比較して増大した免疫原性特性、または、突然変異体の融合前立体構造もしくは突然変異体の融合前三量体立体構造における向上した安定性を有する。さらに他の実施形態では、本開示は、本明細書において記載される1つまたは複数の導入された突然変異を呈し、抗体D25または抗体AM14から選択される融合前特異的抗体に結合する、RSV F突然変異体を提供する。
本開示によって提供されるRSV Fタンパク質突然変異体は、F1ポリペプチドおよびF2ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、突然変異体は、三量化ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、F1ポリペプチドまたはF2ポリペプチドのいずれかは、本明細書において以下に詳述する少なくとも1つの導入された修飾(例えば、アミノ酸置換)を含む。一部の他の実施形態では、F1ポリペプチドおよびF2ポリペプチドのそれぞれは、本明細書において以下に詳述する少なくとも1つの導入された修飾(例えば、アミノ酸置換)を含む。
一部の実施形態では、突然変異体は、2つの個別のポリペプチド鎖、すなわち、F1ポリペプチドおよびF2ポリペプチドを含む、RSV Fタンパク質の成熟形態である。一部の他の実施形態では、F2ポリペプチドは、1つまたは2つのジスルフィド結合によってF1ポリペプチドに連結して、F2-F1ポリペプチドヘテロ二量体を形成する。さらに他の実施形態では、RSV F突然変異体は、F2ポリペプチドがペプチド結合またはペプチドリンカーによってF1ポリペプチドに連結している、一本鎖タンパク質の形態である。2つポリペプチド鎖を共に繋ぐためのあらゆる適切なペプチドリンカーを使用することができる。このようなリンカーの例には、G、GG、GGG、GS、およびSAIGリンカー配列が含まれる。リンカーは、完全長pep27配列またはその断片でもあり得る。
いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるRSV F突然変異体は、三量化ドメインに連結している。一部の実施形態では、三量化ドメインは、3つのF1/F2ヘテロ二量体の三量体の形成を促進する。
本開示によって提供されるRSV F突然変異体は、F1ポリペプチドおよびF2ポリペプチドを含み、ここで、(1)F1ポリペプチドもしくは(2)F2ポリペプチドのいずれか、または(3)F1ポリペプチドおよびF2ポリペプチドの両方は、対応する未変性Fタンパク質のアミノ酸配列に対する1つまたは複数の導入されたアミノ酸突然変異を含む。RSV F突然変異体へのこのようなアミノ酸突然変異の導入によって、増強した免疫原性、向上した安定性、または、突然変異体のある特定の所望の物理的形態もしくは立体構造の形成もしくは向上した安定性などの有利な特性が、突然変異体に付与される。このような導入されたアミノ酸突然変異は、「操作されたジスルフィド結合突然変異」、「間隙充填突然変異」、または「静電気的突然変異」と呼ばれ、本明細書において以下に詳述される。あらゆるさらなる突然変異を含むRSV F突然変異体もまた、突然変異体の免疫原性特性がさらなる突然変異によって不都合な影響を実質的に受けない限り、本発明に包含される。
一部の実施形態では、本開示によって提供されるRSV F突然変異体は、1つまたは複数の操作されたジスルフィド結合突然変異を含む。用語「操作されたジスルフィド結合突然変異」は、野生型RSV Fタンパク質内の一対のアミノ酸残基の、一対のシステイン残基への突然変異を指す。導入されたシステイン残基対によって、導入されたシステイン残基間のジスルフィド結合の形成が可能になり、このジスルフィド結合は、融合前立体構造などのタンパク質の立体構造またはオリゴマー状態を安定化させるために役立つ。突然変異体の融合前立体構造を安定化させるために、システインへの突然変異のための残基対は、融合前立体構造では近接しているが融合後立体構造内では遠位にあるべきである。このような残基は、当技術分野において公知の適切な方法によって、例えば、融合前立体構造におけるRSV Fの結晶構造の目視検査、または、コンピュータ計算によるタンパク質設計ソフトウェア(BioLuminate(商標)[BioLuminate、Schrodinger LLC、New York、2015]、Discovery Studio(商標)[Discovery Studio Modeling Environment、Accelrys、San Diego、2015]、MOE(商標)[Molecular Operating Environment、Chemial Computing Group Inc.、Montreal、2015]、およびRosetta(商標)[Rosetta、University of Washington、Seattle、2015]など)を使用する、より定量的な選択によって、同定することができる。好ましくは、残基対(例えば、ベータ炭素)間の距離は、融合前立体構造では8Å未満であるが、融合後立体構造では20Åより大きい。
他の実施形態では、本開示は、1つまたは複数の間隙充填突然変異を含むRSV F突然変異体を提供する。用語「間隙充填突然変異」は、成熟RSV Fタンパク質の内部間隙を充填することが期待されるアミノ酸による、野生型RSV Fタンパク質のアミノ酸残基の置換を指す。1つの適用では、このような間隙充填突然変異は、RSV Fタンパク質突然変異体の融合前立体構造の安定化に寄与する。RSV Fタンパク質の融合前立体構造内の間隙は、当技術分野において公知の方法によって、例えば、融合前立体構造のRSV Fの結晶構造の目視検査によって、または、コンピュータ計算によるタンパク質設計ソフトウェア(BioLuminate(商標)[BioLuminate、Schrodinger LLC、New York、2015]、Discovery Studio(商標)[Discovery Studio Modeling Environment、Accelrys、San Diego、2015]、MOE(商標)[Molecular Operating Environment、Chemial Computing Group Inc.、Montreal、2015]、およびRosetta(商標)[Rosetta、University of Washington、Seattle、2015]など)を使用することによって、同定することができる。間隙充填突然変異のために置き換えられるアミノ酸には、典型的には、低分子脂肪族アミノ酸(例えば、Gly、Ala、およびVal)または低分子極性アミノ酸(例えば、SerおよびThr)が含まれる。これらにはまた、融合前立体構造では埋没しているが融合後立体構造では溶媒に曝露されるアミノ酸が含まれ得る。置き換えアミノ酸は、高分子脂肪族アミノ酸(Ile、Leu、およびMet)または高分子芳香族アミノ酸(His、Phe、Tyr、およびTrp)であり得る。例えば、いくつかの実施形態では、RSV Fタンパク質突然変異体は、T54H突然変異を含む。
(1)55位、62位、155位、190位、または290位のSの、I、Y、L、H、またはMでの置換、
(2)54位、58位、189位、219位、または397位のTの、I、Y、L、H、またはMでの置換、
(3)151位のGの、AまたはHでの置換、
(4)147位または298位のAの、I、L、H、またはMでの置換、
(5)164位、187位、192位、207位、220位、296位、300位、または495位のVの、I、Y、Hでの置換、および
(6)106位のRの、Wでの置換
からなる群から選択される1つまたは複数の間隙充填突然変異を含む。
さらに他の実施形態では、本開示は、1つまたは複数の静電気的突然変異を含むRSV Fタンパク質突然変異体を提供する。用語「静電気的突然変異」は、フォールディングした構造で互いに近接するタンパク質内の残基間のイオン反発を減少させるかまたはイオン引力を増大させる、野生型RSV Fタンパク質に導入されたアミノ酸突然変異を指す。水素結合はイオン引力の特殊なケースであるため、静電気的突然変異は、このような近接した残基間の水素結合を増大させ得る。一実施例では、静電気的突然変異は、三量体の安定性を向上させるために導入することができる。一部の実施形態では、静電気的突然変異は、その融合前立体構造ではRSV F糖タンパク質に近接しているがその融合後立体構造では近接していない残基間の反発性のイオン相互作用を減少させるため、または引力性のイオン相互作用(水素結合を潜在的に含む)を増大させるために導入される。例えば、融合前立体構造では、RSV F糖タンパク質三量体の1つのプロトマーの酸性側鎖Asp486は三量体の界面に位置し、別のプロトマーの2つの他の酸性側鎖Glu487とAsp489との間で構造的に挟まれる。他方、融合後立体構造では、酸性側鎖Asp486は三量体の表面に位置し、溶媒に曝露される。いくつかの実施形態では、RSV Fタンパク質突然変異体は、RSV F三量体の別のプロトマーの酸性残基Glu487およびAsp489との反発性のイオン相互作用を低減させるかまたは引力性のイオン相互作用を増大させる、静電気的なD486S置換を含む。典型的には、静電気的突然変異の導入によって、RSV Fタンパク質の融合前立体構造または融合前三量体立体構造の融解温度(Tm)が上昇する。
(1)82位、92位、または487位のEの、D、F、Q、T、S、L、またはHによる置換、
(2)315位、394位、または399位のKの、F、M、R、S、L、I、Q、またはTによる置換、
(3)392位、486位、または489位のDの、H、S、N、T、またはPによる置換、および
(4)106位または339位のRの、F、Q、N、またはWによる置換
からなる群から選択される少なくとも1つの静電気的突然変異を含む。
別の態様では、本開示は、それぞれ本明細書において上記に記載した、操作されたジスルフィド結合突然変異、間隙充填突然変異、および静電気的突然変異から選択される2つ以上の異なるタイプの突然変異の組合せを含む、RSV Fタンパク質突然変異体を提供する。
(1)T103C、I148C、S190I、およびD486Sの組合せ、
(2)T54H、S55C、L188C、D486Sの組合せ、
(3)T54H、T103C、I148C、S190I、V296I、およびD486Sの組合せ、
(4)T54H、S55C、L142C、L188C、V296I、およびN371Cの組合せ、
(5)S55C、L188C、およびD486Sの組合せ、
(6)T54H、S55C、L188C、およびS190Iの組合せ、
(7)S55C、L188C、S190I、およびD486Sの組合せ、
(8)T54H、S55C、L188C、S190I、およびD486Sの組合せ、
(9)S155C、S190I、S290C、およびD486Sの組合せ、
(10)T54H、S55C、L142C、L188C、V296I、N371C、D486S、E487Q、およびD489Sの組合せ、ならびに
(11)T54H、S155C、S190I、S290C、およびV296Iの組合せ
からなる群から選択される突然変異の組合せを含むRSV F突然変異体を提供する。
(1)配列番号41のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号42のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(2)配列番号41のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号42のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(3)配列番号43のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号44のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(4)配列番号43のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号44のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(5)配列番号45のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号46のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(6)配列番号45のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号46のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(7)配列番号47のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号48のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(8)配列番号47のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号48のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(9)配列番号49のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号50のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(10)配列番号49のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号50のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(11)配列番号279のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号280のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(12)配列番号279のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号280のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(13)配列番号281のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号282のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(14)配列番号281のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号282のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(15)配列番号283のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号284のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(16)配列番号283のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号284のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(17)配列番号285のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号286のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(18)配列番号285のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号286のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(19)配列番号287のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号288のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(20)配列番号287のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号288のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(21)配列番号289のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号290のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、ならびに
(22)配列番号289のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号290のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド
からなる群から選択されるF1ポリペプチドおよびF2ポリペプチドを含む、RSV F突然変異体を提供する。
(1)配列番号51のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号52のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(2)配列番号51のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号52のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(3)配列番号53のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号54のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(4)配列番号53のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号54のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(5)配列番号55のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号56のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(6)配列番号55のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号56のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(7)配列番号57のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号58のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(8)配列番号57のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号58のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(9)配列番号59のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号60のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(10)配列番号59のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号60のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(11)配列番号291のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号292のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(12)配列番号291のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号292のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(13)配列番号293のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号294のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(14)配列番号293のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号294のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(15)配列番号295のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号296のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(16)配列番号295のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号296のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(17)配列番号297のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号298のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(18)配列番号297のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号298のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(19)配列番号299のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号300のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(20)配列番号299のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号300のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(21)配列番号301のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号302のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、ならびに
(22)配列番号301のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号302のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド
からなる群から選択されるF1ポリペプチドおよびF2ポリペプチドを含む、RSV F突然変異体を提供する。
(1)配列番号61のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号62のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(2)配列番号61のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号62のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(3)配列番号63のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号64のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(4)配列番号63のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号64のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(5)配列番号65のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号66のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(6)配列番号65のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号66のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(7)配列番号67のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号68のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(8)配列番号67のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号68のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(9)配列番号69のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号70のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(10)配列番号69のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号70のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(11)配列番号303のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号304のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(12)配列番号303のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号304のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(13)配列番号305のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号306のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(14)配列番号305のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号306のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(15)配列番号307のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号308のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(16)配列番号307のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号308のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(17)配列番号309のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号310のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(18)配列番号309のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号310のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(19)配列番号311のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号312のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(20)配列番号311のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号312のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(21)配列番号313のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号314のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、ならびに
(22)配列番号313のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号314のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド
からなる群から選択されるF1ポリペプチドおよびF2ポリペプチドを含む、RSV F突然変異体を提供する。
(1)配列番号71のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号72のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(2)配列番号71のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号72のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(3)配列番号73のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号74のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(4)配列番号73のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号74のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(5)配列番号75のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号76のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(6)配列番号75のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号76のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(7)配列番号77のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号78のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(8)配列番号77のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号78のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(9)配列番号79のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号80のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(10)配列番号79のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号80のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(11)配列番号315のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号316のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(12)配列番号315のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号316のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(13)配列番号317のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号318のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(14)配列番号317のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号318のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(15)配列番号319のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号320のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(16)配列番号319のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号320のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(17)配列番号321のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号322のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(18)配列番号321のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号322のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(19)配列番号323のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号324のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(20)配列番号323のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号324のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(21)配列番号325のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号326のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、ならびに
(22)配列番号325のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号326のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド
からなる群から選択されるF1ポリペプチドおよびF2ポリペプチドを含む、RSV F突然変異体を提供する。
別の態様では、本発明は、本明細書において上記に記載したRSV Fタンパク質突然変異体をコードする核酸分子を提供する。これらの核酸分子には、DNA配列、cDNA配列、およびRNA配列が含まれる。RSV F突然変異体のF2ポリペプチドのみまたはF1ポリペプチドのみをコードする核酸分子もまた、本発明に包含される。核酸分子は、発現ベクターなどのベクター内に組み込むことができる。
(1)少なくとも1つの操作されたジスルフィド突然変異を含む突然変異体、
(2)少なくとも1つの間隙充填突然変異を含む突然変異体、
(3)少なくとも1つの静電気的突然変異を含む突然変異体、
(4)少なくとも1つの操作されたジスルフィド突然変異および少なくとも1つの間隙充填突然変異を含む突然変異体、
(5)少なくとも1つの操作されたジスルフィド突然変異および少なくとも1つの静電気的突然変異を含む突然変異体、
(6)少なくとも1つの間隙充填突然変異および少なくとも1つの静電気的突然変異を含む突然変異体、ならびに
(7)少なくとも1つの操作されたジスルフィド突然変異、ならびに少なくとも1つの静電気的突然変異、少なくとも1つの間隙充填突然変異、および少なくとも1つの静電気的突然変異を含む突然変異体
からなる群から選択される突然変異体をコードする。
(1)置換103C、148C、190I、および486Sの組合せを含む突然変異体、
(2)置換54H、55C、188C、および486Sの組合せを含む突然変異体、
(3)置換54H、103C、148C、190I、296I、および486Sの組合せを含む突然変異体、
(4)置換54H、55C、142C、188C、296I、および371Cの組合せを含む突然変異体、
(5)アミノ酸置換55C、188C、および486Sの組合せを含む突然変異体、
(6)アミノ酸置換54H、55C、188C、および190Iの組合せを含む突然変異体、
(7)アミノ酸置換55C、188C、190I、および486Sの組合せを含む突然変異体、
(8)アミノ酸置換54H、55C、188C、190I、および486Sの組合せを含む突然変異体、
(9)アミノ酸置換155C、190I、290C、および486Sの組合せを含む突然変異体、
(10)アミノ酸置換54H、55C、142C、188C、296I、371C、486S、487Q、および489Sの組合せを含む突然変異体、ならびに
(11)アミノ酸置換54H、155C、190I、290C、および296Iの組合せを含む突然変異体
からなる群から選択される突然変異体をコードする核酸分子を提供する。
(1)配列番号41のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号42のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(2)配列番号41のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号42のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(3)配列番号43のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号44のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(4)配列番号43のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号44のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(5)配列番号45のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号46のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(6)配列番号45のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号46のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(7)配列番号47のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号48のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(8)配列番号47のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号48のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(9)配列番号49のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号50のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(10)配列番号49のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号50のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(11)配列番号279のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号280のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(12)配列番号279のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号280のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(13)配列番号281のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号282のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(14)配列番号281のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号282のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(15)配列番号283のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号284のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(16)配列番号283のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号284のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(17)配列番号285のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号286のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(18)配列番号285のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号286のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(19)配列番号287のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号288のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(20)配列番号287のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号288のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(21)配列番号289のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号290のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、ならびに
(22)配列番号289のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号290のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド
からなる群から選択されるF1ポリペプチドおよびF2ポリペプチドを含む、RSV F突然変異体をコードする。
(1)配列番号51のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号52のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(2)配列番号51のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号52のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(3)配列番号53のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号54のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(4)配列番号53のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号54のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(5)配列番号55のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号56のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(6)配列番号55のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号56のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(7)配列番号57のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号58のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(8)配列番号57のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号58のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(9)配列番号59のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号60のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(10)配列番号59のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号60のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(11)配列番号291のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号292のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(12)配列番号291のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号292のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(13)配列番号293のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号294のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(14)配列番号293のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号294のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(15)配列番号295のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号296のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(16)配列番号295のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号296のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(17)配列番号297のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号298のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(18)配列番号297のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号298のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(19)配列番号299のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号300のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(20)配列番号299のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号300のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(21)配列番号301のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号302のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、ならびに
(22)配列番号301のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号302のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド
からなる群から選択されるF1ポリペプチドおよびF2ポリペプチドを含む、RSV F突然変異体をコードする。
(1)配列番号61のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号62のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(2)配列番号61のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号62のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(3)配列番号63のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号64のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(4)配列番号63のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号64のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(5)配列番号65のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号66のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(6)配列番号65のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号66のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(7)配列番号67のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号68のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(8)配列番号67のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号68のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(9)配列番号69のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号70のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(10)配列番号69のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号70のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(11)配列番号303のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号304のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(12)配列番号303のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号304のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(13)配列番号305のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号306のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(14)配列番号305のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号306のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(15)配列番号307のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号308のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(16)配列番号307のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号308のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(17)配列番号309のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号310のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(18)配列番号309のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号310のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(19)配列番号311のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号312のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(20)配列番号311のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号312のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(21)配列番号313のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号314のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、ならびに
(22)配列番号313のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号314のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド
からなる群から選択されるF1ポリペプチドおよびF2ポリペプチドを含む、RSV F突然変異体をコードする。
(1)配列番号71のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号72のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(2)配列番号71のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号72のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(3)配列番号73のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号74のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(4)配列番号73のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号74のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(5)配列番号75のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号76のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(6)配列番号75のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号76のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(7)配列番号77のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号78のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(8)配列番号77のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号78のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(9)配列番号79のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号80のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(10)配列番号79のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号80のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(11)配列番号315のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号316のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(12)配列番号315のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号316のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(13)配列番号317のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号318のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(14)配列番号317のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号318のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(15)配列番号319のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号320のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(16)配列番号319のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号320のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(17)配列番号321のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号322のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(18)配列番号321のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号322のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(19)配列番号323のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号324のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(20)配列番号323のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号324のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(21)配列番号325のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号326のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、ならびに
(22)配列番号325のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号326のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド
からなる群から選択されるF1ポリペプチドおよびF2ポリペプチドを含む、RSV F突然変異体をコードする。
(1)配列番号19のアミノ酸26~513を含む突然変異体、
(2)配列番号20のアミノ酸26~513を含む突然変異体、および
(3)配列番号21のアミノ酸26~513を含む突然変異体
からなる群から選択される突然変異体をコードする核酸分子を提供する。
(1)配列番号8のヌクレオチド76~1539を含むヌクレオチド配列、
(2)配列番号9のヌクレオチド76~1539を含むヌクレオチド配列、
(3)配列番号10のヌクレオチド76~1539を含むヌクレオチド配列、
(4)配列番号11のヌクレオチド76~1539を含むヌクレオチド配列、
(5)配列番号12のヌクレオチド76~1539を含むヌクレオチド配列、
(6)配列番号13のヌクレオチド76~1539を含むヌクレオチド配列、
(7)配列番号14のヌクレオチド76~1539を含むヌクレオチド配列、
(8)配列番号15のヌクレオチド76~1539を含むヌクレオチド配列、
(9)配列番号16のヌクレオチド76~1539を含むヌクレオチド配列、
(10)配列番号17のヌクレオチド76~1539を含むヌクレオチド配列、および
(11)配列番号18のヌクレオチド76~1539を含むヌクレオチド配列
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、RSV Fタンパク質突然変異体をコードする核酸分子、またはその縮重変異体を提供する。
別の態様では、本発明は、(1)本開示において記載されるRSV Fタンパク質突然変異体、または(2)このようなRSV Fタンパク質突然変異体をコードする核酸分子もしくはベクター、を含む組成物を提供する。
(1)配列番号41のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号42のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(2)配列番号41のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号42のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(3)配列番号43のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号44のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(4)配列番号43のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号44のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(5)配列番号45のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号46のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(6)配列番号45のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号46のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(7)配列番号47のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号48のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(8)配列番号47のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号48のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(9)配列番号49のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号50のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(10)配列番号49のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号50のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(11)配列番号279のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号280のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(12)配列番号279のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号280のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(13)配列番号281のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号282のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(14)配列番号281のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号282のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(15)配列番号283のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号284のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(16)配列番号283のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号284のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(17)配列番号285のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号286のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(18)配列番号285のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号286のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(19)配列番号287のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号288のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(20)配列番号287のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号288のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(21)配列番号289のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号290のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、ならびに
(22)配列番号289のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号290のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド
からなる群から選択されるF1ポリペプチドおよびF2ポリペプチドを含む、RSV F突然変異体を含む。
(1)配列番号51のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号52のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(2)配列番号51のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号52のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(3)配列番号53のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号54のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(4)配列番号53のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号54のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(5)配列番号55のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号56のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(6)配列番号55のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号56のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(7)配列番号57のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号58のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(8)配列番号57のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号58のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(9)配列番号59のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号60のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(10)配列番号59のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号60のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(11)配列番号291のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号292のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(12)配列番号291のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号292のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(13)配列番号293のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号294のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(14)配列番号293のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号294のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(15)配列番号295のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号296のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(16)配列番号295のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号296のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(17)配列番号297のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号298のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(18)配列番号297のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号298のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(19)配列番号299のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号300のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(20)配列番号299のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号300のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(21)配列番号301のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号302のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、ならびに
(22)配列番号301のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号302のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド
からなる群から選択されるF1ポリペプチドおよびF2ポリペプチドを含む、RSV F突然変異体を含む。
(1)配列番号61のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号62のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(2)配列番号61のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号62のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(3)配列番号63のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号64のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(4)配列番号63のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号64のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(5)配列番号65のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号66のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(6)配列番号65のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号66のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(7)配列番号67のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号68のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(8)配列番号67のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号68のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(9)配列番号69のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号70のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(10)配列番号69のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号70のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(11)配列番号303のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号304のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(12)配列番号303のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号304のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(13)配列番号305のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号306のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(14)配列番号305のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号306のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(15)配列番号307のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号308のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(16)配列番号307のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号308のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(17)配列番号309のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号310のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(18)配列番号309のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号310のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(19)配列番号311のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号312のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(20)配列番号311のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号312のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(21)配列番号313のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号314のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、ならびに
(22)配列番号313のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号314のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド
からなる群から選択されるF1ポリペプチドおよびF2ポリペプチドを含む、RSV F突然変異体を含む。
(1)配列番号71のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号72のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(2)配列番号71のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号72のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(3)配列番号73のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号74のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(4)配列番号73のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号74のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(5)配列番号75のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号76のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(6)配列番号75のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号76のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(7)配列番号77のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号78のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(8)配列番号77のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号78のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(9)配列番号79のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号80のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(10)配列番号79のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号80のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(11)配列番号315のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号316のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(12)配列番号315のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号316のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(13)配列番号317のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号318のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(14)配列番号317のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号318のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(15)配列番号319のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号320のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(16)配列番号319のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号320のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(17)配列番号321のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号322のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(18)配列番号321のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号322のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(19)配列番号323のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号324のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(20)配列番号323のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号324のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、
(21)配列番号325のアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号326のアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド、ならびに
(22)配列番号325のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF2ポリペプチド、および配列番号326のアミノ酸配列に少なくとも97%、98%、または99%同一なアミノ酸配列を含むF1ポリペプチド
からなる群から選択されるF1ポリペプチドおよびF2ポリペプチドを含む、RSV F突然変異体を含む。
(1)アミノ酸置換103C、148C、190I、および486Sの組合せ、
(2)アミノ酸置換54H、55C、188C、および486Sの組合せ、
(3)アミノ酸置換54H、103C、148C、190I、296I、および486Sの組合せ、
(4)アミノ酸置換54H、55C、142C、188C、296I、および371Cの組合せ、
(5)アミノ酸置換55C、188C、および486Sの組合せ、
(6)アミノ酸置換54H、55C、188C、および190Iの組合せ、
(7)アミノ酸置換55C、188C、190I、および486Sの組合せ、
(8)アミノ酸置換54H、55C、188C、190I、および486Sの組合せ、
(9)アミノ酸置換155C、190I、290C、および486Sの組合せ、
(10)アミノ酸置換54H、55C、142C、188C、296I、371C、486S、487Q、および489Sの組合せ、ならびに
(11)アミノ酸置換54H、155C、190I、290C、および296Iの組合せ
からなる群から選択されるアミノ酸置換の同一の組合せを含む。
本開示はまた、RSV Fタンパク質突然変異体、RSV Fタンパク質突然変異体をコードする核酸、またはRSV Fタンパク質突然変異体を発現させるためのベクター、またはRSV Fタンパク質突然変異体もしくは核酸を含む組成物の使用に関する。
本発明を、以下の例示的な実施例によってさらに説明する。実施例は本発明を決して限定するものではない。実施例は本発明を明らかにするためだけのものである。
RSV Fタンパク質突然変異体の設計および調製
1A:フォールドンドメインを有するRSV F突然変異体
この実施例は、フィブリチンフォールドン三量化ドメインおよび導入されたアミノ酸突然変異、例えば、操作されたジスルフィド結合突然変異、間隙充填突然変異、静電気的突然変異、またはそれらの組合せを含む、様々なRSV Fタンパク質突然変異体の設計および調製を説明する。pXCS501、pXCS601などの固有の識別子によってそれぞれが同定されている例示的なRSV F突然変異体を、表1~6に示す。これらの突然変異体のそれぞれは、配列番号3で示されるアミノ酸配列に基づいて設計および調製され、これもまた図1で説明する。配列番号3の配列のアミノ酸残基1~513は、配列番号3の配列におけるP102A、I379V、およびM447Vという3つの天然の置換を除いて、配列番号1で示される未変性RSV A2のF0前駆体ポリペプチドのアミノ酸残基1~513に同一である。したがって、これらの例示的なF突然変異体のアミノ酸配列は、表1~6で列挙される各突然変異体について記載される導入されたアミノ酸突然変異を除いて同一である。これらのRSV Fタンパク質突然変異体のそれぞれは、2つの個別のポリペプチド鎖を含む。一方のポリペプチド鎖であるF2ポリペプチドは、記載される導入された突然変異を除いて、配列番号3のアミノ酸26~109を含む。他方のポリペプチド鎖は、SAIGリンカー(残基514~517)を介してフォールドン三量化ドメイン(残基518~544)に連結したF1ポリペプチド(残基137~513)を含む。配列番号3のシグナルペプチド(残基1~25)およびpep27(残基110~136)を、発現プロセスの間にF0前駆体から切断した。これらの例示的なRSV F突然変異体の発現および精製のためのプロセスを、実施例2および3で記載する。
フォールドンドメインを欠くRSV F突然変異体、pXCS899を、配列番号3のF0前駆体配列のアミノ酸514~544が欠失していることを除いて、上記の実施例1Aで記載したものと同一の方法で調製した。pXCS899の前駆体ポリペプチドのアミノ酸配列を、配列番号271で示す。
RSV F突然変異体発現ベクターの構築
天然の置換P102A、I379V、およびM447Vを有する、配列番号1で示される未変性RSV A2 F0ポリペプチドをコードする核酸分子を、標準的な分子生物学技術を使用して突然変異させて、所望の導入されたアミノ酸突然変異を有するRSV F突然変異体の前駆体ポリペプチドをコードした。前駆体ポリペプチドの構造および構成成分を図1および配列番号3に示す。前駆体ポリペプチドは、シグナルペプチド(残基1~25)、F2ポリペプチド(残基26~109)、pep27ポリペプチド(残基110~136)、F1ポリペプチド(残基137~513)、T4フィブリチンフォールドン(残基518~544)、トロンビン認識配列(547~552)、精製タグ(HISタグ(残基553~558))、StrepタグII(残基561~568)、およびリンカー配列(残基514~517、545、546、559、および560)を含む。
RSV Fタンパク質突然変異体の発現および精製
RSV Fタンパク質突然変異体の評価のためのタンパク質を、実施例2で記載したように組み立ておよび調製されたDNA構築物の、Expi293F細胞(ThermoFisher、Waltham、MA)への一過性トランスフェクションによって生産した。一過性トランスフェクションは、製造業者のプロトコールに従って行った。
RSV Fタンパク質突然変異体の安定性
設計されたRSV Fタンパク質突然変異体の安定性を、ストレス試験および保存安定性実験によって評価した。熱ストレス試験の間、設計された突然変異体の粗培養上清を1時間、50℃または60℃でインキュベートし、ELISAアッセイにおいて、融合前特異的なモノクローナル抗体D25および融合前三量体特異的抗体AM14で調べた。ストレスを受けた試料および無ストレス試料の抗体反応性の比率を、ストレス耐性パラメータとして規定する。突然変異体の安定性が高いほど、ストレス耐性が高いと予想される。保存安定性アッセイの間、4℃での保存の1週間後の粗培養上清における融合前抗体の反応性を、新鮮な培養上清の反応性と比較した。活性比率を、突然変異体の保存安定性として規定する。
モノクローナル抗体のパネルで評価された、RSV Fタンパク質突然変異体の立体構造完全性。
この研究の目的は、融合前三量体立体構造を含むRSV-F融合前立体構造および会合の構造的完全性を維持するRSV Fタンパク質突然変異体を同定することであった。各突然変異体を、2つの部位Φ特異的および融合前特異的mAb(AM22およびD25)、同様に融合前特異的である、部位IIに近いエピトープに結合する1つのmAb(MPE8)、融合前Fおよび融合後Fの両方に結合する1つの部位II特異的mAb(パリビズマブ、Synagis(登録商標))、1つの融合前三量体特異的mAb(AM14)、ならびに融合前Fおよび融合後Fの両方に結合する部位IV特異的抗体(101F)を含む参照mAbのパネルに対して試験した。融合前立体構造で維持されたRSV Fタンパク質突然変異体は、試験した参照抗体の全てに結合すると予想された。
選択された融合前RSV F突然変異体の分子量およびサイズ分布の分析。
安定化した融合前F突然変異体をSDS-PAGEによって分析し、その後、RSV F特異的なモノクローナル抗体L4を用いるウェスタンブロットによって分析した[Walsh EE、Cote PT、Fernie BFら Analysis of the Respiratory Syncytial Virus Fusion Protein Using Monoclonal and Polyclonal Antibodies.J.Gen.Virol.76:505~513、1986.]。図2Aは、代表的な突然変異体pXCS847、pXCS851、およびpXCS852、ならびにDS-Cav1のSDS-PAGE移動性プロファイルを示す。全ての場合で、単量体RSV F突然変異体について予想される55から60kDaの間の見かけの分子量を有する主要なバンドが、非還元条件下で存在した。DS-Cav1と突然変異体pXCS847、pXCS851、pXCS852との間で観察された移動性におけるわずかな変化は、個々のジスルフィド結合の性質、ならびに、その結果としての、非フォールディング状態のタンパク質の全体的なコンパクトさ、およびSDSへのアクセス可能性に対する影響に起因し得る。
設計されたRSV Fタンパク質突然変異体の二次構造および三次構造の完全性を特徴付けするための円二色性分光法。
遠および近UV CDスペクトルの両方を、ペルチェ式6ポジション温度制御型セルホルダーを備えたJasco J-810自動記録分光偏光計で記録した。遠UV CDスペクトルを、1mmの長方形石英セル内で、1×PBS中、pH7.4で0.10~0.12mg/mlのタンパク質濃度で、200から260nmの間で0.1nmごとに100nm/分で、3nmのバンド幅で記録した。各試料について5つのスペクトルを回収し、平均した。近UV CDスペクトルを、1cmの長方形石英セル内で、1×PBS中、pH7.4で0.4~0.5mg/mlのタンパク質濃度で、250から320nmの間で0.1nmごとに100nm/分で、3nmのバンド幅で記録した。各試料についても5つのスペクトルを回収し、平均した。データを、緩衝液ベースラインの寄与について補正し、確立された関係性を使用して、平均残基楕円率(遠UV CD)またはモル楕円率(近UV CD)のいずれかに対して正規化した。
設計されたRSV Fタンパク質突然変異体の構造的安定性
精製RSV Fタンパク質突然変異体の構造的安定性を、示差走査熱量測定(DSC)を使用して特徴付けした。DSC実験を、VP-DSCマイクロカロリメータ(MicroCal、Northampton、MA)で行った。タンパク質濃度を分光測光法によって決定し、光散乱の寄与について補正した。1×PBS中、pH7.4の0.2~0.5mg/mLのタンパク質試料(1.0~2.4マイクロモル濃度の三量体濃度)を、10℃から80℃で90℃/時間、8秒の応答時間および5分のプレスキャン平衡で、スキャンした。サーモグラムで見られた遷移数に応じて、熱容量プロファイルを、DSCの製造業者によって提供されているOrigin 7.0ソフトウェアを使用して、2または3状態アンフォールディングモデルにフィッティングさせた。第1の観察可能な遷移の融解温度を、各突然変異体の融解温度とする。
融合前三量体立体構造の喪失のメカニズム。
融合前立体構造の喪失をもたらす特異的な構造的経路を特徴付けするために、本発明者らは、精製DS-Cav1を熱ストレス試験にかけた。精製糖タンパク質(1×PBS中、pH7.4で0.5mg/ml)を50℃および60℃で30、60、および120分インキュベートした。融合前特異的mAbであるD25および融合前三量体特異的mAbであるAM14の、ストレスを受けたタンパク質への結合を、実施例4に記載したELISA実験を介して評価した。タンパク質の構造的完全性を、実施例7および8でそれぞれ記載したCDおよびDSCを介して特徴付けした。結果を図4~6に示す。
融合前立体構造で安定化したRSV Fタンパク質突然変異体は、マウスにおいて中和抗体応答を誘起する。
メスBalb/cマウスを、アジュバントとして用量当たり0.1mgのリン酸アルミニウムを伴ってまたは伴わずに、0.025μgまたは0.25μgのDS-Cav1、野生型F、F突然変異体pXCS852、pXCS855、pXCS830、pXCS853、pXCS780、pXCS898、pXCS851、pXCS874、pXCS881、pXCS738、またはpXCS847のいずれかで免疫化した。免疫化は、筋肉内に、0週目および3週目に行った(表11)。投与前(0週目)および投与後2(PD2、5週目)の血清を、[Eyles JE、Johnson JE、Megati Sら Nonreplicating vaccines can protect african green monkeys from the Memphis 37 strain of respiratory syncytial virus.J Inf Dis.208(2):319~29、2013.]の記載をわずかに修正して、RSVサブファミリーA中和アッセイで評価した。簡潔に述べると、中和抗体力価を、感染単位を50%低減させる血清希釈係数として決定した。結果を、1群あたり10頭のマウスから得た幾何平均力価として報告する。ウイルス中和が検出不可能である血清を、力価20に割り当てた。50%幾何平均力価の倍増を、各群内の、免疫化前の力価に対する投与後2(PD2)の力価の比率として報告する。
HRB領域における導入されたシステイン突然変異を含むRSV F突然変異体
11A.HRB領域における導入された突然変異を含むRSV F突然変異体の調製
HRB領域(F0ポリペプチドのおよそアミノ酸476~524)における導入されたシステイン突然変異を含む代表的なRSV F突然変異体を表14に示し、この表中で、各突然変異体内のこの領域における具体的な突然変異が示されている。HRB領域内の突然変異に加えて、これらの突然変異体の各々はまた、導入された突然変異S55C、L188C、T54H、およびD486Sも含む。これらの突然変異体は、実施例1~3に記載した方法に類似の方法によって調製した。簡潔に述べると、545アミノ酸からなる前駆体ポリペプチドを、(1)残基104から144の間の41アミノ酸が欠失していることを除いて配列番号1の配列のアミノ酸1~529、(2)HRB領域の外側の導入された突然変異(S55C、L188C、T54H、およびD486S)、(3)トロンビンプロテアーゼ認識配列、(4)フォールドンドメイン、(5)HISタグ、(6)Streptag II、(7)リンカー配列、ならびに(8)記載した導入されたシステイン突然変異、を含む各突然変異体について調製した。アミノ酸1~25を含むシグナルペプチドを、発現プロセスの間に前駆体から切断した。フォールドンドメインもまた突然変異体から切断し、これは、発現プロセスの後に、500ug/mlのウシアルファ-トロンビン(HTI)で一晩、室温で消化することによって達成した。
表14で示したRSV F突然変異体の安定性を、実施例8および実施例4で記載した方法に従って評価した。結果をそれぞれ表15および16に提示する。
配列番号1.未変性RSV A2の完全長F0のアミノ酸配列(GenBank GI:138251、Swiss Prot P03420)
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[関連する特徴(アミノ酸残基座標):シグナル配列(最終産物には存在しない):1~25、pep27(最終産物には存在しない):110~136、F1:137~513、F2:26~109、フォールドン:518~544、トロンビン認識配列:547~552、Hisタグ:553~558、Streptag II:561~568、リンカー配列:514~517、545~546、559~560、P102A(天然の置換)、I379V(天然の置換)、M447V(天然の置換)、T54H(導入された突然変異)、S155C(導入された突然変異)、S190I(導入された突然変異)、S290C(導入された突然変異)、V296I(導入された突然変異)]
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Claims (5)
- F1ポリペプチドおよびF2ポリペプチドを含み、野生型RSV Fタンパク質のアミノ酸配列に対する少なくとも1つのアミノ酸突然変異を含む、野生型RSV Fタンパク質の突然変異体であって、前記アミノ酸突然変異が、55Cおよび188C、103Cおよび148C、142Cおよび371C、190Iならびに486Sからなる群から選択され、前記野生型RSV Fタンパク質の突然変異体が、野生型RSV Fタンパク質に対してまたは野生型Fタンパク質を含むウイルスに対して免疫原性である、突然変異体。
- アミノ酸突然変異が、103Cおよび148C、190Iならびに486Sである、請求項1に記載の突然変異体。
- (i)請求項1または2に記載のRSV Fタンパク質突然変異体、および(ii)薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物。
- ワクチンである、請求項3に記載の医薬組成物。
- 有効量の請求項4に記載のワクチンを含む、ヒトにおけるRSV感染の低減剤。
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