JP2022177340A - 疾患特異的なｃｏｌ３ａ１変異アレルの遺伝子発現を抑制する核酸および血管型エーラス・ダンロス症候群を処置するための医薬組成物 - Google Patents
疾患特異的なｃｏｌ３ａ１変異アレルの遺伝子発現を抑制する核酸および血管型エーラス・ダンロス症候群を処置するための医薬組成物 Download PDFInfo
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Abstract
【課題】コラーゲン３Ａ１の変異に起因する疾患を処置することに用いるための医薬組成物の提供。【解決手段】コラーゲン３Ａ１の変異型をコードする遺伝子と野生型をコードする遺伝子をそれぞれ有する対象において、当該変異型に起因する疾患を処置するための医薬組成物であって、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡから選択される核酸を含み、当該変異型が、特定の塩基配列における７５５番目に対応する塩基のＧからＴへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子であるか、または前記特定の塩基配列における５４７番目に対応する塩基のＧからＡへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子であり、前記核酸が、野生型の発現よりも前記変異型の発現を強く抑制することができる、医薬組成物。【選択図】なし
Description
本発明は、疾患特異的なCOL3A1変異アレルの遺伝子発現を抑制する核酸および血管型エーラス・ダンロス症候群を処置するための医薬組成物に関する。
エーラス・ダンロス症候群（Ｅｈｌｅｒｓ－Ｄａｎｌｏｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ＥＤＳ）は、皮膚、関節、血管など全身的な結合組織の脆弱性に基づく遺伝性疾患である。その原因と症状から、６つの主病型（古典型、関節型、血管型、後側彎型、多発関節弛緩型、皮膚脆弱型）に分類されており、全病型を合わせた推定頻度は約１／５，０００人とされている。ＥＤＳの原因はコラーゲン分子又はコラーゲン成熟過程に関与する酵素の遺伝子変異に基づく。
ＥＤＳの一分類である血管型ＥＤＳ（Ｖａｓｃｕｌａｒ ＴｙｐｅＥＤＳ、またはｖＥＤＳ）（ＭＩＭ １３００５０）は、動脈・消化管・妊娠中の子宮の破裂など突然死をももたらす重篤な合併症をもつ最重症型ＥＤＳであり、遺伝様式は常染色体優性遺伝である。血管型ＥＤＳはＩＩＩ型コラーゲン遺伝子（ＣＯＬ３Ａ１）の変異によりＩＩＩ型コラーゲン分子の異常をきたし発症する。ｖＥＤＳには現在のところ、根本的な治療法はなく対症療法が主となっている。
Leistritz, D. F., Pepin, M. G., Schwarze U., Byers, P. H., Genet. Med. 13: 717-722, 2011.
Pepin, M. G., Schwarze, U., Rice, K. M., Liu, M., Genet. Med. 16: 881-888, 2014.
Frank M, Albuisson J, Ranque B, Golmard L, Mazzella JM, Bal-Theoleyre L, Fauret AL, Mirault T, Denarie N, Mousseaux E, Boutouyrie P, Fiessinger JN, Emmerich J, Messas E, Jeunemaitre X., Eur J Hum Genet. 23:1657-64, 2015.
Muller GA1, Hansen U, Xu Z, Griswold B, Talan MI, McDonnell NB, Briest W., FASEB J. 26:668-77, 2012.
本発明は、疾患特異的なＣＯＬ３Ａ１変異アレルの遺伝子発現を抑制する核酸および血管型エーラス・ダンロス症候群を処置するための医薬組成物を提供する。
本発明によれば、以下の発明が提供され得る。
［１］コラーゲン３Ａ１の変異型をコードする遺伝子と野生型をコードする遺伝子をそれぞれ有する対象において、当該変異型に起因する疾患を処置するための医薬組成物であって、
ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡから選択される核酸を含み、
当該変異型が、配列番号２７に記載の塩基配列における７５５番目に対応する塩基のＧからＴへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子であるか、または配列番号２７に記載の塩基配列における５４７番目に対応する塩基のＧからＡへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子であり、
前記核酸が、野生型の発現よりも前記変異型の発現を強く抑制することができる、
医薬組成物。
［２］対象が、血管型エーラス・ダンロス症候群（ｖＥＤＳ）に罹患した対象である、上記［１］に記載の医薬組成物。
［３］前記変異型が、配列番号２７に記載の塩基配列における７５５番目に対応する塩基のＧからＴへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子である、上記［１］または［２］に記載の医薬組成物。
［４］前記変異型が、配列番号２７に記載の塩基配列における５４７番目に対応する塩基のＧからＡへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子である、上記［１］または［２］に記載の医薬組成物。
［５］ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖の塩基配列がそれぞれ、配列番号１および２、配列番号３および４、並びに配列番号５および６からなる群から選択される塩基配列を有する、上記［３］に記載の医薬組成物。
［６］ｓｉＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖の塩基配列がそれぞれ、配列番号３および４に記載の塩基配列を有する、上記［５］に記載の医薬組成物。
［７］ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖の塩基配列がそれぞれ、配列番号７および８、配列番号９および１０、配列番号１１および１２、配列番号１３および１４、配列番号１５および１６、並びに配列番号１７および１８からなる群から選択される塩基配列を有する、上記［４］に記載の医薬組成物。
［８］ｓｉＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖の塩基配列がそれぞれ、配列番号９および１０に記載の塩基配列であるか、または、配列番号１３および１４に記載の塩基配列である、上記［７］に記載の医薬組成物。
［９］ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡであって、そのセンス鎖およびアンチセンス鎖がそれぞれ、配列番号７および８、配列番号９および１０、配列番号１１および１２、配列番号１３および１４、配列番号１５および１６、並びに配列番号１７および１８からなる群から選択される塩基配列を有する、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ。
［１０］ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡであって、そのセンス鎖およびアンチセンス鎖がそれぞれ、配列番号７および８、配列番号９および１０、配列番号１１および１２、配列番号１３および１４、配列番号１５および１６、並びに配列番号１７および１８からなる群から選択される塩基配列に対して１～数塩基の追加のミスマッチを有する塩基配列を有する、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ。
［１１］
上記［１０］のｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡであって、そのセンス鎖およびアンチセンス鎖がそれぞれ、配列番号３３および３４、配列番号３５および３６、配列番号３７および３８、配列番号３９および４０、配列番号４１および４２、配列番号４３および４４、配列番号４５および４６、配列番号４７および４８、並びに配列番号４９および５０からなる群から選択される塩基配列を有する、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ。
［１２］コラーゲン３Ａ１の変異型をコードする遺伝子と野生型をコードする遺伝子をそれぞれ有する細胞において変異型の発現を抑制することに用いるための組成物であって、
請求項９に記載のｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡから選択される核酸を含み、
当該変異型が、配列番号２７に記載の塩基配列における５４７番目に対応する塩基のＧからＡへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子である、
組成物。
［１］コラーゲン３Ａ１の変異型をコードする遺伝子と野生型をコードする遺伝子をそれぞれ有する対象において、当該変異型に起因する疾患を処置するための医薬組成物であって、
ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡから選択される核酸を含み、
当該変異型が、配列番号２７に記載の塩基配列における７５５番目に対応する塩基のＧからＴへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子であるか、または配列番号２７に記載の塩基配列における５４７番目に対応する塩基のＧからＡへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子であり、
前記核酸が、野生型の発現よりも前記変異型の発現を強く抑制することができる、
医薬組成物。
［２］対象が、血管型エーラス・ダンロス症候群（ｖＥＤＳ）に罹患した対象である、上記［１］に記載の医薬組成物。
［３］前記変異型が、配列番号２７に記載の塩基配列における７５５番目に対応する塩基のＧからＴへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子である、上記［１］または［２］に記載の医薬組成物。
［４］前記変異型が、配列番号２７に記載の塩基配列における５４７番目に対応する塩基のＧからＡへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子である、上記［１］または［２］に記載の医薬組成物。
［５］ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖の塩基配列がそれぞれ、配列番号１および２、配列番号３および４、並びに配列番号５および６からなる群から選択される塩基配列を有する、上記［３］に記載の医薬組成物。
［６］ｓｉＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖の塩基配列がそれぞれ、配列番号３および４に記載の塩基配列を有する、上記［５］に記載の医薬組成物。
［７］ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖の塩基配列がそれぞれ、配列番号７および８、配列番号９および１０、配列番号１１および１２、配列番号１３および１４、配列番号１５および１６、並びに配列番号１７および１８からなる群から選択される塩基配列を有する、上記［４］に記載の医薬組成物。
［８］ｓｉＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖の塩基配列がそれぞれ、配列番号９および１０に記載の塩基配列であるか、または、配列番号１３および１４に記載の塩基配列である、上記［７］に記載の医薬組成物。
［９］ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡであって、そのセンス鎖およびアンチセンス鎖がそれぞれ、配列番号７および８、配列番号９および１０、配列番号１１および１２、配列番号１３および１４、配列番号１５および１６、並びに配列番号１７および１８からなる群から選択される塩基配列を有する、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ。
［１０］ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡであって、そのセンス鎖およびアンチセンス鎖がそれぞれ、配列番号７および８、配列番号９および１０、配列番号１１および１２、配列番号１３および１４、配列番号１５および１６、並びに配列番号１７および１８からなる群から選択される塩基配列に対して１～数塩基の追加のミスマッチを有する塩基配列を有する、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ。
［１１］
上記［１０］のｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡであって、そのセンス鎖およびアンチセンス鎖がそれぞれ、配列番号３３および３４、配列番号３５および３６、配列番号３７および３８、配列番号３９および４０、配列番号４１および４２、配列番号４３および４４、配列番号４５および４６、配列番号４７および４８、並びに配列番号４９および５０からなる群から選択される塩基配列を有する、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ。
［１２］コラーゲン３Ａ１の変異型をコードする遺伝子と野生型をコードする遺伝子をそれぞれ有する細胞において変異型の発現を抑制することに用いるための組成物であって、
請求項９に記載のｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡから選択される核酸を含み、
当該変異型が、配列番号２７に記載の塩基配列における５４７番目に対応する塩基のＧからＡへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子である、
組成物。
本明細書では、「対象」は、哺乳動物であり、特にヒトであり得る。
本明細書では、「処置」は、治療的処置および予防的処置を意味する。本明細書では、「治療」とは、疾患若しくは障害の治療、治癒、防止若しくは、寛解の改善、または、疾患若しくは障害の進行速度の低減を意味する。本明細書では、「予防」とは、疾患もしくは病態の発症の可能性を低下させる、または疾患もしくは病態の発症を遅らせることを意味する。
本明細書では、「疾患」とは、治療が有益な症状を意味する。
本明細書では、「治療上有効量」とは、疾患や状態を処置（予防または治療）するために有効な薬剤の量を意味する。治療上有効量の薬剤は、疾患または状態の症状の悪化速度を低下させること、前記症状の悪化を止めること、前記症状を改善すること、前記症状を治癒すること、または前記症状の発症または発展を抑制することが可能である。
本明細書では、「コラーゲン３Ａ１」は、III型コラーゲンα－１またはＣＯＬ３Ａ１とも呼ばれ、３つのα－１（III）鎖を含む繊維形成性のコラーゲンである。コラーゲン３Ａ１は、初期胚および胚発生にわたって発現している。成体においては、コラーゲン３Ａ１は、内部臓器や皮膚の細胞外マトリックスの主要構成要素である。ヒトコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子は、例えば、ＮＣＢＩ参照番号：ＮＭ＿００００９０．３で登録された塩基配列が挙げられ、例えば、配列番号２７に記載の塩基配列に対応する塩基配列を有し得る。ヒトコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子は、例えば、配列番号２７に記載の塩基配列を有し得る。
本明細書では、「血管型エーラス・ダンロス症候群（ｖＥＤＳ）」は、皮膚、関節、および血管などの全身的な結合組織の脆弱性に基づく遺伝性疾患である。症状としては、皮膚の脆弱性（容易に裂ける、萎縮性瘢痕を来す）、関節の脆弱性（柔軟、脱臼しやすい）、血管の脆弱性（内出血しやすい）、心臓弁の逸脱・逆流、上行大動脈拡張を呈する。血管型ＥＤＳにおいては、動脈解離・瘤・破裂、腸管破裂、子宮破裂といった重篤な合併症を呈するとともに、小関節の弛緩、特徴的顔貌、皮下静脈の透見などの身体的特徴がある。ｖＥＤＳの原因は、大多数は、コラーゲン３Ａ１の遺伝子変異であるとされる。特に、ｖＥＤＳの原因として、コラーゲン３Ａ１の塩基配列の置換（配列番号２７に記載の塩基配列において５４７番目のＧに対応する塩基のＡへの置換、および７５５番目のＧに対応する塩基のＴへの置換）が挙げられる。ｖＥＤＳは、片側アレルの変異のみで発症する。
本明細書では、「ｓｉＲＮＡ」とは、遺伝子のノックダウンに用いられる核酸分子であり、１９～２５ｍｅｒ程度の長さの二本鎖ＲＮＡを含む核酸分子である。標的ｍＲＮＡの塩基配列と相補的に設計されたｓｉＲＮＡは、当該ｍＲＮＡに結合し、ｍＲＮＡを分解することによってｍＲＮＡからのタンパク質の翻訳を阻害することができる。ｓｉＲＮＡに用いられるＲＮＡは、天然のＲＮＡに加えて、安定化した核酸アナログ（例えば、ＡｍＮＡ、２’，４’架橋核酸（ロックド核酸）などの架橋型人工核酸、並びにＲＮＡのリボースの２’位がメトキシ基で修飾された２’－ＯＭｅ体、メトキシエチルで修飾された２’－ＭＯＥ体およびフルオロ基で修飾された２’－Ｆ体、リン酸ジエステル結合に代えてホスホロチオアート結合を有する核酸）またはＤＮＡを含む核酸（例えば、ギャップマーおよびミックスマー）が用いられ得る。当業者であれば、これらの安定化した核酸アナログやＤＮＡを用いてｓｉＲＮＡを適宜設計することができる。
本明細書では、「ｓｈＲＮＡ」とは、ヘアピン構造を有する二本鎖ＲＮＡを含む核酸分子である。ｓｈＲＮＡのヘアピン構造は、細胞内で切断され、ｓｉＲＮＡに変換され、これによって標的遺伝子をサイレンシングすることができる。ヘアピン構造は、当業者であれば適宜設計することができる。
血管型エーラス・ダンロス症候群（ｖＥＤＳ）において、コラーゲン３Ａ１の変異は、優性変異である。すなわち、コラーゲン３Ａ１は、三量体を形成して機能し、そのうち１つが変異することでコラーゲン３Ａ１の機能を阻害する。これに対して、コラーゲン３Ａ１の変異型の発現を野生型と比較して減少させる処置は、機能的なコラーゲン３Ａ１の三量体の割合を増加させることができ、これにより、ｖＥＤＳを処置できると期待される。
本発明者らは、コラーゲン３Ａ１の変異型の発現を野生型と比較して減少させる処置に用いることができる方法を見出した。
本発明のある態様では、
コラーゲン３Ａ１の変異型をコードする遺伝子と野生型をコードする遺伝子をそれぞれ有する対象において、当該変異型に起因する疾患を処置するための医薬組成物であって、
ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡから選択される核酸を含み、
当該変異型が、配列番号２７に記載の塩基配列における７５５番目に対応する塩基のＧからＴへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子（例えば、配列番号２９に記載の塩基配列）であるか、または配列番号２７に記載の塩基配列における５４７番目に対応する塩基のＧからＡへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子（例えば、配列番号３１に記載の塩基配列）であり、
前記核酸が、野生型の発現よりも前記変異型の発現を強く抑制することができる、
医薬組成物
が提供される。この態様において、対象は、血管型エーラス・ダンロス症候群（ｖＥＤＳ）に罹患した対象であり得る。この態様では、変異型は、好ましくは、前記変異型が、配列番号２７に記載の塩基配列における７５５番目に対応する塩基のＧからＴへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子であり得る。この態様ではまた、変異型は、好ましくは、配列番号２７に記載の塩基配列における５４７番目に対応する塩基のＧからＡへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子であり得る。
コラーゲン３Ａ１の変異型をコードする遺伝子と野生型をコードする遺伝子をそれぞれ有する対象において、当該変異型に起因する疾患を処置するための医薬組成物であって、
ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡから選択される核酸を含み、
当該変異型が、配列番号２７に記載の塩基配列における７５５番目に対応する塩基のＧからＴへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子（例えば、配列番号２９に記載の塩基配列）であるか、または配列番号２７に記載の塩基配列における５４７番目に対応する塩基のＧからＡへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子（例えば、配列番号３１に記載の塩基配列）であり、
前記核酸が、野生型の発現よりも前記変異型の発現を強く抑制することができる、
医薬組成物
が提供される。この態様において、対象は、血管型エーラス・ダンロス症候群（ｖＥＤＳ）に罹患した対象であり得る。この態様では、変異型は、好ましくは、前記変異型が、配列番号２７に記載の塩基配列における７５５番目に対応する塩基のＧからＴへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子であり得る。この態様ではまた、変異型は、好ましくは、配列番号２７に記載の塩基配列における５４７番目に対応する塩基のＧからＡへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子であり得る。
本発明のある態様では、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖の塩基配列がそれぞれ、配列番号１および２、配列番号３および４、並びに配列番号５および６からなる群から選択される塩基配列を有し得る。
本発明のある態様では、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖の塩基配列がそれぞれ、配列番号７および８、配列番号９および１０、配列番号１１および１２、配列番号１３および１４、配列番号１５および１６、並びに配列番号１７および１８からなる群から選択される塩基配列を有し得る。
本発明のある態様では、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖の塩基配列がそれぞれ、配列番号７および８、配列番号９および１０、配列番号１１および１２、配列番号１３および１４、配列番号１５および１６、並びに配列番号１７および１８からなる群から選択される塩基配列に対して１～数塩基（例えば、１つ、２つ、および３つ）の追加のミスマッチを有する塩基配列を有し得る。この態様では、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡは、コラーゲン３Ａ１の野生型をコードする遺伝子よりも、配列番号２７に記載の塩基配列における５４７番目に対応する塩基のＧからＡへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子を強くサイレンシングする。
本発明のある態様では、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖の塩基配列がそれぞれ、配列番号３３および３４、配列番号３５および３６、配列番号３７および３８、配列番号３９および４０、配列番号４１および４２、配列番号４３および４４、配列番号４５および４６、配列番号４７および４８、並びに配列番号４９および５０からなる群から選択される塩基配列を有し得る。
ｓｈＲＮＡは、センス鎖およびアンチセンス鎖の塩基配列をリンカーループで連結して得られ得る。
本発明によれば、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡであって、そのセンス鎖およびアンチセンス鎖がそれぞれ、配列番号７および８、配列番号９および１０、配列番号１１および１２、配列番号１３および１４、配列番号１５および１６、並びに配列番号１７および１８からなる群から選択される塩基配列を有する、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡが提供される。これらのｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡは、医薬組成物に含まれていてもよい。
本発明によればまた、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡであって、そのセンス鎖およびアンチセンス鎖がそれぞれ、配列番号７および８、配列番号９および１０、配列番号１１および１２、配列番号１３および１４、配列番号１５および１６、並びに配列番号１７および１８からなる群から選択される塩基配列に対して１～数塩基（例えば、１つ、２つ、および３つ）の追加のミスマッチを有する塩基配列を有するｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡは、医薬組成物に含まれていてもよい。
本発明によればまた、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡであって、そのセンス鎖およびアンチセンス鎖がそれぞれ、配列番号３３および３４、配列番号３５および３６、配列番号３７および３８、配列番号３９および４０、配列番号４１および４２、配列番号４３および４４、配列番号４５および４６、配列番号４７および４８、並びに配列番号４９および５０からなる群から選択される塩基配列を有するｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡは、医薬組成物に含まれていてもよい。
本発明のある態様では、変異型の発現が野生型の発現よりも大きく低下し得る。好ましい態様では、変異型の発現は、処置前と比較して７０％以下、６０％以下、５０％以下、４０％以下、３０％以下、または２０％以下に低下し得る。ここで、低下率とは処置前と比較したときの処置後の低下の割合を意味する。一方で、野生型の発現は、処置前と比較して、７０％以下、６０％以下、５０％以下、４０％以下、３０％以下、または２０％以下に低下し得るが、変異型の発現の低下率の６０％以下、５０％以下、４０％以下、３０％以下、または２０％以下の低下率であり得る。
遺伝子発現の低下率は、ノーザンブロット、および定量的ＲＴ－ＰＣＲなどの当業者に周知の遺伝子発現量の分析方法によって決定することができる。
本発明の医薬組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含んでいてもよい。賦形剤としては、特に限定されないが例えば、希釈剤、緩衝剤、塩、溶媒（水など）、等張化剤、保存剤、および製造補助剤（例えば、潤滑剤、タルク、マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、またはステアリン酸）が挙げられる。
本発明の医薬組成物は、ミセルやリポソームなどの小胞に内包されていてもよい。ミセルやリポソームは、ポリカチオン性ポリマーやカチオン性脂質を構成成分として有するものであり得る。ミセルやリポソームは、標的細胞、組織、又は臓器への標的指向性を付与する、標的化分子（例えば、標的細胞、組織、又は臓器の細胞外に発現する分子に結合する分子）で外表面が修飾されていてもよい。当業者であれば、公知のドラッグデリバリーシステムを用いて、標的細胞、組織、又は臓器へのミセルやリポソームの標的指向性を向上させることができる。
本発明の医薬組成物は、腹腔内投与、静脈内投与、皮下投与、または筋肉内投与などの適切な投与経路から投与され得る。本発明の医薬組成物は、ある態様では局所投与され得る。
本発明の医薬組成物は、ミセルやリポソームなどの小胞に内包されていてもよい。ミセルやリポソームは、ポリカチオン性ポリマーやカチオン性脂質を構成成分として有するものであり得る。ミセルやリポソームは、標的細胞、組織、又は臓器への標的指向性を付与する、標的化分子（例えば、標的細胞、組織、又は臓器の細胞外に発現する分子に結合する分子）で外表面が修飾されていてもよい。当業者であれば、公知のドラッグデリバリーシステムを用いて、標的細胞、組織、又は臓器へのミセルやリポソームの標的指向性を向上させることができる。
本発明の医薬組成物は、腹腔内投与、静脈内投与、皮下投与、または筋肉内投与などの適切な投与経路から投与され得る。本発明の医薬組成物は、ある態様では局所投与され得る。
本発明によれば、
コラーゲン３Ａ１の変異型をコードする遺伝子と野生型をコードする遺伝子をそれぞれ有する対象において、当該変異型に起因する疾患を処置する方法であって、
当該対象に治療上有効量のｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡから選択される核酸を投与することを含み、
当該変異型が、配列番号２７に記載の塩基配列 における７５５番目に対応する塩基のＧからＴへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子であるか、または配列番号２７に記載の塩基配列における５４７番目に対応する塩基のＧからＡへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子であり、
前記核酸が、野生型の発現よりも前記変異型の発現を強く抑制することができる、方法が提供される。
コラーゲン３Ａ１の変異型をコードする遺伝子と野生型をコードする遺伝子をそれぞれ有する対象において、当該変異型に起因する疾患を処置する方法であって、
当該対象に治療上有効量のｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡから選択される核酸を投与することを含み、
当該変異型が、配列番号２７に記載の塩基配列 における７５５番目に対応する塩基のＧからＴへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子であるか、または配列番号２７に記載の塩基配列における５４７番目に対応する塩基のＧからＡへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子であり、
前記核酸が、野生型の発現よりも前記変異型の発現を強く抑制することができる、方法が提供される。
本発明によれば、
コラーゲン３Ａ１の変異型をコードする遺伝子と野生型をコードする遺伝子をそれぞれ有する対象において、当該変異型に起因する疾患を処置するための医薬の製造における、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡから選択される核酸の使用であって、
当該変異型が、配列番号２７に記載の塩基配列における７５５番目に対応する塩基のＧからＴへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子であるか、または配列番号２７に記載の塩基配列における５４７番目に対応する塩基のＧからＡへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子であり、
前記核酸が、野生型の発現よりも前記変異型の発現を強く抑制することができる、使用
が提供される。
コラーゲン３Ａ１の変異型をコードする遺伝子と野生型をコードする遺伝子をそれぞれ有する対象において、当該変異型に起因する疾患を処置するための医薬の製造における、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡから選択される核酸の使用であって、
当該変異型が、配列番号２７に記載の塩基配列における７５５番目に対応する塩基のＧからＴへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子であるか、または配列番号２７に記載の塩基配列における５４７番目に対応する塩基のＧからＡへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子であり、
前記核酸が、野生型の発現よりも前記変異型の発現を強く抑制することができる、使用
が提供される。
実施例１：変異Ｃｏｌ３Ａ１遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡのデザイン
血管型エーラス・ダンロス症候群（ｖＥＤＳ）の原因となる２種類のヒト変異Ｃｏｌ３Ａ１遺伝子（ＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ番号：ＮＭ＿００００９０）を標的とする以下のｓｉＲＮＡをデザインした（表１）。
血管型エーラス・ダンロス症候群（ｖＥＤＳ）の原因となる２種類のヒト変異Ｃｏｌ３Ａ１遺伝子（ＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ番号：ＮＭ＿００００９０）を標的とする以下のｓｉＲＮＡをデザインした（表１）。
標的とした変異Ｃｏｌ３Ａ１アレルは、開始コドンより７５５番目のＧがＡに変異し、結果としてＣＯＬ３Ａ１蛋白質の２５２番目のＧｌｙがＶａｌに変異したもの（ｃ．７５５Ｇ＞Ｔ； ｐＧ２５２Ｖ）、及び開始コドンより５４７番目のＧがＡに変異し、結果としてＣＯＬ３Ａ１蛋白質の１８３番目のＧｌｙがＳｅｒに変異したもの（ｃ．５４７Ｇ＞Ａ； ｐＧ１８３Ｓ）の２種類である。
ｓｉＲＮＡは配列中に変異箇所を含む形で設計し、アンチセンス側は変異アレルと完全相補配列とし、センス側がその配列と完全相補するようにした。末端オーバーハングはｄＴｄＴとして２１ｍｅｒ（１９ｍｅｒの２本鎖＋オーバーハング２残基）のｓｉＲＮＡとした。合成はジーンデザイン社で行った。
実施例２：変異Ｃｏｌ３Ａ１遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡを評価するルシフェラーゼレポータープラスミドの作製
実施例１で設計、合成したｓｉＲＮＡをルシフェラーゼレポーター系で評価するためのプラスミドを以下の通りに作製した。
ＣＭＶプロモーターの下流にＮａｎｏＬｕｃ（Ｎｌｕｃ）レポーター遺伝子をコードするプラスミド、ｐＮＦＬ１－Ｎ［ＣＭＶ／Ｈｙｇｒｏ］（プロメガ社）のＮ－Ｌｕｃの下流に位置する制限酵素サイトＸｈｏＩ、及びＮｏｔＩで切断し、そこに６０塩基対からなる合成ＤＮＡを挿入した。合成ＤＮＡはヒトＣｏｌ３Ａ１配列に由来し、中央部に変異残基が位置するように設計した。変異ｃ．７５５Ｇ＞Ｔに対し、配列番号１９、２０を用いて野生型ｐＮＬＦ１－Ｎ－７５５Ｇを、配列番号２１、２２を用いて変異型ｐＮＬＦ１－Ｎ－７５５Ｔをそれぞれ作製した。同様に変異ｃ．５４７Ｇ＞Ａに対し、配列番号２３、２４を用いて野生型ｐＮＬＦ１－Ｎ－５４７Ｇを、配列番号２５、２６を用いて変異型ｐＮＬＦ１－Ｎ－５４７Ａをそれぞれ作製した（表２）。
実施例１で設計、合成したｓｉＲＮＡをルシフェラーゼレポーター系で評価するためのプラスミドを以下の通りに作製した。
ＣＭＶプロモーターの下流にＮａｎｏＬｕｃ（Ｎｌｕｃ）レポーター遺伝子をコードするプラスミド、ｐＮＦＬ１－Ｎ［ＣＭＶ／Ｈｙｇｒｏ］（プロメガ社）のＮ－Ｌｕｃの下流に位置する制限酵素サイトＸｈｏＩ、及びＮｏｔＩで切断し、そこに６０塩基対からなる合成ＤＮＡを挿入した。合成ＤＮＡはヒトＣｏｌ３Ａ１配列に由来し、中央部に変異残基が位置するように設計した。変異ｃ．７５５Ｇ＞Ｔに対し、配列番号１９、２０を用いて野生型ｐＮＬＦ１－Ｎ－７５５Ｇを、配列番号２１、２２を用いて変異型ｐＮＬＦ１－Ｎ－７５５Ｔをそれぞれ作製した。同様に変異ｃ．５４７Ｇ＞Ａに対し、配列番号２３、２４を用いて野生型ｐＮＬＦ１－Ｎ－５４７Ｇを、配列番号２５、２６を用いて変異型ｐＮＬＦ１－Ｎ－５４７Ａをそれぞれ作製した（表２）。
実施例３：変異Ｃｏｌ３Ａ１遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡのレポーターアッセイによる評価
実施例１で設計、合成したＣｏｌ３Ａ１変異特異的ｓｉＲＮＡ候補を実施例２で作製したルシフェラーゼレポーター系を用いて評価した。細胞はＨｅＬａ細胞及びＨＥＫ２９３細胞を用いた（どちらも理研ＢＲＣより入手）。
ＨｅＬａ細胞及びＨＥＫ２９３細胞はＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ、Ｍ２２７９）＋１０％ＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ）＋２ｍＭ Ｌ－Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ（FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation）＋１％ ＮＥＡＡ（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）で培養した。９６穴プレートに８×１０3／ｗｅｌｌ個（ＨｅＬａ）、２×１０4／ｗｅｌｌ個（ＨＥＫ２９３）の細胞を播種した。翌日、レポータープラスミド（実施例２で作製したうちの１種） ２０ｐｇ／ｗｅｌｌと、Ｆｌｕｃをコードする内部コントロールベクターｐＧＬ４．５４ １．２ｎｇ／ｗｅｌｌ（ＨｅＬａ実験１及び２）、０．２ｎｇ／ｗｅｌｌ（ＨＥＫ２９３実験３）またはｐＧＬ４．５３ ０．２ｎｇ／ｗｅｌｌ（実験４及び５）、及び終濃度１００ｎＭ（実験１）、１－１００ｎＭ（実験２及び３）、０．０１－１０ｎＭ（実験４及び５）のｓｉＲＮＡを、トランスフェクション試薬（Ｌｉｐｏｆｅｃｔｏａｍｉｎｅ２０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）０．１μＬ／Ｗｅｌｌ を用いて、導入した。
実施例１で設計、合成したＣｏｌ３Ａ１変異特異的ｓｉＲＮＡ候補を実施例２で作製したルシフェラーゼレポーター系を用いて評価した。細胞はＨｅＬａ細胞及びＨＥＫ２９３細胞を用いた（どちらも理研ＢＲＣより入手）。
ＨｅＬａ細胞及びＨＥＫ２９３細胞はＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ、Ｍ２２７９）＋１０％ＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ）＋２ｍＭ Ｌ－Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ（FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation）＋１％ ＮＥＡＡ（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）で培養した。９６穴プレートに８×１０3／ｗｅｌｌ個（ＨｅＬａ）、２×１０4／ｗｅｌｌ個（ＨＥＫ２９３）の細胞を播種した。翌日、レポータープラスミド（実施例２で作製したうちの１種） ２０ｐｇ／ｗｅｌｌと、Ｆｌｕｃをコードする内部コントロールベクターｐＧＬ４．５４ １．２ｎｇ／ｗｅｌｌ（ＨｅＬａ実験１及び２）、０．２ｎｇ／ｗｅｌｌ（ＨＥＫ２９３実験３）またはｐＧＬ４．５３ ０．２ｎｇ／ｗｅｌｌ（実験４及び５）、及び終濃度１００ｎＭ（実験１）、１－１００ｎＭ（実験２及び３）、０．０１－１０ｎＭ（実験４及び５）のｓｉＲＮＡを、トランスフェクション試薬（Ｌｉｐｏｆｅｃｔｏａｍｉｎｅ２０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）０．１μＬ／Ｗｅｌｌ を用いて、導入した。
２４時間後、ルシフェラーゼ活性をＮａｎｏ－ＧｌｏR Ｄｕａｌ－ＬｕｃｉｆｅｒａｓｅR Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いてプレートリーダー（ＴＥＣＡＮ社 Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ１０００ ＰＲＯ）で測定した。
Ｎｌｕｃの値を内部標準のＦｌｕｃを用いて補正した。コントロール（ベクターのみ）のサンプルとの比で各ｓｉＲＮＡの抑制活性を示した。実験１～５の結果をそれぞれ、図１～５に示す。全ての実験は３連で行い、データは平均値±ＳＥＭで示した。
以上の結果より、ｓｉＲＮＡ ７５５Ｔ－６、７５５Ｔ－８、７５５Ｔ－１０はＣｏｌ３Ａ１ ｃ．７５５Ｇ＞Ｔ変異選択的ｓｉＲＮＡであり、ｓｉＲＮＡ ５４７Ａ－５、５４７Ａ－６、５４７Ａ－７、５４７Ａ－８、５４７Ａ－１１、５４７Ａ－１５はＣｏｌ３Ａ１ ｃ．５４７Ｇ＞Ａ変異選択的ｓｉＲＮＡであることが示された。
正常のＣＯＬ３Ａ１蛋白質はホモ三量体を形成して機能する。機能を失った変異ＣＯＬ３Ａ１蛋白質が一つでも混じると、その複合体は機能を失うと考えられている。従って、片方のアレルにミスセンス変異が生じ、そこから機能を失ったＣＯＬ３Ａ１が発現すると、正常のＣＯＬ３Ａ１三量体の割合は１／２×１／２×１／２＝１／８に減弱すると考えられる。
一方、片方のアレルが欠失したハプロ不全型（ヌル変異）ＣＯＬ３Ａ１では、変異ＣＯＬ３Ａ１蛋白質が発現しないため、正常の１／２のＣＯＬ３Ａ１三量体が発現する。これらは全体の約５％を占めるが、ハプロ不全型を示す患者の予後は良好で軽症、期待寿命も健常人と変わらないという結果が出ている（非特許文献２）。
ミスセンス変異はＣＯＬ３Ａ１変異の７０％と大多数を占めるが、これらは上記の通りドミナントネガティブ変異のため、本発明でミスセンス変異を特異的にサイレンシングするすることは理論上有益であると考えられる。すなわち、正常型コラーゲン３Ａ１に対して変異型コラーゲン３Ａ１の発現量が半分になると、正常のＣＯＬ３Ａ１三量体の割合は、理論上約３０％にまで回復し、正常のＣＯＬ３Ａ１三量体の割合が処置しない場合の約２．４倍に向上する。従って、変異型アレル特異的にＣＯＬ３Ａ１遺伝子を抑制することができれば、有効な正常ＣＯＬ３Ａ１三量体は増加し、ミスセンス型をハプロ不全型に変換できると考えられ、本発明の変異型アレル特異的にＣＯＬ３Ａ１遺伝子を抑制する医薬組成物は、ＥＤＳの各種症状は改善すると期待される。
実施例４：変異Ｃｏｌ３Ａ１遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡのデザイン（その２）
実施例３でｃ．５４７Ｇ＞Ａに対して特に強い活性を示した２種のｓｉＲＮＡ、５４７Ａ－６（配列番号９及び１０）と５４７Ａ－８（配列番号１３及び１４）に関して、さらに変異型選択的抑制を増すために、追加で１か所の変異を入れたｓｉＲＮＡをそれぞれデザインした（表３）。合成はサーモフィッシャーサイエンティフィック社で行った。
実施例３でｃ．５４７Ｇ＞Ａに対して特に強い活性を示した２種のｓｉＲＮＡ、５４７Ａ－６（配列番号９及び１０）と５４７Ａ－８（配列番号１３及び１４）に関して、さらに変異型選択的抑制を増すために、追加で１か所の変異を入れたｓｉＲＮＡをそれぞれデザインした（表３）。合成はサーモフィッシャーサイエンティフィック社で行った。
実施例５：変異Ｃｏｌ３Ａ１遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡのレポーターアッセイによる評価（その２）
実施例４で設計、合成したＣｏｌ３Ａ１変異特異的ｓｉＲＮＡ候補を実施例２で作製したルシフェラーゼレポーター系を用いて評価した。細胞はＨｅＬａ細胞及びＨＥＫ２９３細胞を用いた（どちらも理研ＢＲＣより入手）。
ＨｅＬａ細胞は、１０％ＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ）、２ｍＭ Ｌ－Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ（ＦＵＪＩＦＩＬＭ Ｗａｋｏ Ｐｕｒｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、および１％ ＮＥＡＡ（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）を含むＭＥＭ培地（Ｓｉｇｍａ、Ｍ２２７９）で培養した。９６穴プレートに８×１０3／ｗｅｌｌ個の細胞を播種した。翌日、レポータープラスミド（実施例２で作製したうちの１種） ２０ｐｇ／ｗｅｌｌと、Ｆｌｕｃをコードする内部コントロールベクターｐＧＬ４．５３ ０．２ｎｇ／ｗｅｌｌ、及び終濃度１ｎＭのｓｉＲＮＡを、トランスフェクション試薬（Ｌｉｐｏｆｅｃｔｏａｍｉｎｅ２０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）０．１μＬ／Ｗｅｌｌ を用いて、導入した。
２４時間後、ルシフェラーゼ活性をＮａｎｏ－ＧｌｏR Ｄｕａｌ－ＬｕｃｉｆｅｒａｓｅR Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いてプレートリーダー（ＴＥＣＡＮ社 Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ１０００ ＰＲＯ）で測定した。
Ｎｌｕｃの値を内部標準のＦｌｕｃを用いて補正した。コントロール（ベクターのみ）のサンプルとの比で各ｓｉＲＮＡの抑制活性を示した。結果を図６及び７に示す。全ての実験は３連で行い、データは平均値±ＳＥＭで示した。
実施例４で設計、合成したＣｏｌ３Ａ１変異特異的ｓｉＲＮＡ候補を実施例２で作製したルシフェラーゼレポーター系を用いて評価した。細胞はＨｅＬａ細胞及びＨＥＫ２９３細胞を用いた（どちらも理研ＢＲＣより入手）。
ＨｅＬａ細胞は、１０％ＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ）、２ｍＭ Ｌ－Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ（ＦＵＪＩＦＩＬＭ Ｗａｋｏ Ｐｕｒｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、および１％ ＮＥＡＡ（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）を含むＭＥＭ培地（Ｓｉｇｍａ、Ｍ２２７９）で培養した。９６穴プレートに８×１０3／ｗｅｌｌ個の細胞を播種した。翌日、レポータープラスミド（実施例２で作製したうちの１種） ２０ｐｇ／ｗｅｌｌと、Ｆｌｕｃをコードする内部コントロールベクターｐＧＬ４．５３ ０．２ｎｇ／ｗｅｌｌ、及び終濃度１ｎＭのｓｉＲＮＡを、トランスフェクション試薬（Ｌｉｐｏｆｅｃｔｏａｍｉｎｅ２０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）０．１μＬ／Ｗｅｌｌ を用いて、導入した。
２４時間後、ルシフェラーゼ活性をＮａｎｏ－ＧｌｏR Ｄｕａｌ－ＬｕｃｉｆｅｒａｓｅR Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いてプレートリーダー（ＴＥＣＡＮ社 Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ１０００ ＰＲＯ）で測定した。
Ｎｌｕｃの値を内部標準のＦｌｕｃを用いて補正した。コントロール（ベクターのみ）のサンプルとの比で各ｓｉＲＮＡの抑制活性を示した。結果を図６及び７に示す。全ての実験は３連で行い、データは平均値±ＳＥＭで示した。
図６及び７に示されるように、表３に記載のいずれのｓｉＲＮＡを用いた場合にも、野生型Ｃｏｌ３Ａ１遺伝子の発現に対するサイレンシングが弱まり、かつ、変異型Ｃｏｌ３Ａ１遺伝子の発現をより強くサイレンシングした。
配列表についての補足事項
配列番号２７：ヒトコラーゲン３Ａ１遺伝子およびアミノ酸配列
配列番号２８：ヒトコラーゲン３Ａ１のアミノ酸配列
配列番号２９：ヒトコラーゲン３Ａ１のｃ．５４７Ｇ＞Ａ変異体の遺伝子およびアミノ酸配列
配列番号３０：ヒトコラーゲン３Ａ１のｃ．５４７Ｇ＞Ａ変異体のアミノ酸配列
配列番号３１：ヒトコラーゲン３Ａ１のｃ．７５５Ｇ＞Ｔ変異体の遺伝子およびアミノ酸配列
配列番号３２：ヒトコラーゲン３Ａ１のｃ．７５５Ｇ＞Ｔ変異体のアミノ酸配列
配列番号２７：ヒトコラーゲン３Ａ１遺伝子およびアミノ酸配列
配列番号２８：ヒトコラーゲン３Ａ１のアミノ酸配列
配列番号２９：ヒトコラーゲン３Ａ１のｃ．５４７Ｇ＞Ａ変異体の遺伝子およびアミノ酸配列
配列番号３０：ヒトコラーゲン３Ａ１のｃ．５４７Ｇ＞Ａ変異体のアミノ酸配列
配列番号３１：ヒトコラーゲン３Ａ１のｃ．７５５Ｇ＞Ｔ変異体の遺伝子およびアミノ酸配列
配列番号３２：ヒトコラーゲン３Ａ１のｃ．７５５Ｇ＞Ｔ変異体のアミノ酸配列
Claims (12)
- コラーゲン３Ａ１の変異型をコードする遺伝子と野生型をコードする遺伝子をそれぞれ有する対象において、当該変異型に起因する疾患を処置するための医薬組成物であって、
ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡから選択される核酸を含み、
当該変異型が、配列番号２７に記載の塩基配列における７５５番目に対応する塩基のＧからＴへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子であるか、または配列番号２７に記載の塩基配列における５４７番目に対応する塩基のＧからＡへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子であり、
前記核酸が、野生型の発現よりも前記変異型の発現を強く抑制することができる、
医薬組成物。 - 対象が、血管型エーラス・ダンロス症候群（ｖＥＤＳ）に罹患した対象である、請求項１に記載の医薬組成物。
- 前記変異型が、配列番号２７に記載の塩基配列における７５５番目に対応する塩基のＧからＴへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子である、請求項１または２に記載の医薬組成物。
- 前記変異型が、配列番号２７に記載の塩基配列における５４７番目に対応する塩基のＧからＡへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子である、請求項１または２に記載の医薬組成物。
- ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖の塩基配列がそれぞれ、配列番号１および２、配列番号３および４、並びに配列番号５および６からなる群から選択される塩基配列を有する、請求項３に記載の医薬組成物。
- ｓｉＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖の塩基配列がそれぞれ、配列番号３および４に記載の塩基配列を有する、請求項５に記載の医薬組成物。
- ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖の塩基配列がそれぞれ、配列番号７および８、配列番号９および１０、配列番号１１および１２、配列番号１３および１４、配列番号１５および１６、並びに配列番号１７および１８からなる群から選択される塩基配列を有する、請求項４に記載の医薬組成物。
- ｓｉＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖の塩基配列がそれぞれ、配列番号９および１０に記載の塩基配列であるか、または、配列番号１３および１４に記載の塩基配列である、請求項７に記載の医薬組成物。
- ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡであって、そのセンス鎖およびアンチセンス鎖がそれぞれ、配列番号７および８、配列番号９および１０、配列番号１１および１２、配列番号１３および１４、配列番号１５および１６、並びに配列番号１７および１８からなる群から選択される塩基配列を有する、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ。
- ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡであって、そのセンス鎖およびアンチセンス鎖がそれぞれ、配列番号７および８、配列番号９および１０、配列番号１１および１２、配列番号１３および１４、配列番号１５および１６、並びに配列番号１７および１８からなる群から選択される塩基配列に対して１～数塩基の追加のミスマッチを有する塩基配列を有する、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ。
- 請求項１０のｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡであって、そのセンス鎖およびアンチセンス鎖がそれぞれ、配列番号３３および３４、配列番号３５および３６、配列番号３７および３８、配列番号３９および４０、配列番号４１および４２、配列番号４３および４４、配列番号４５および４６、配列番号４７および４８、並びに配列番号４９および５０からなる群から選択される塩基配列を有する、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ。
- コラーゲン３Ａ１の変異型をコードする遺伝子と野生型をコードする遺伝子をそれぞれ有する細胞において変異型の発現を抑制することに用いるための組成物であって、
請求項９に記載のｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡから選択される核酸を含み、
当該変異型が、配列番号２７に記載の塩基配列における５４７番目に対応する塩基のＧからＡへの置換を有するコラーゲン３Ａ１をコードする遺伝子である、
組成物。
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| PCT/JP2020/040786 WO2021085592A1 (ja) | 2019-10-31 | 2020-10-30 | 疾患特異的なｃｏｌ３ａ１変異アレルの遺伝子発現を抑制する核酸および血管型エーラス・ダンロス症候群を処置するための医薬組成物 |
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