JP2024515344A - 補体成分３の発現を阻害するための組成物及び方法 - Google Patents

補体成分３の発現を阻害するための組成物及び方法 Download PDF

Info

Publication number
JP2024515344A
JP2024515344A JP2023564255A JP2023564255A JP2024515344A JP 2024515344 A JP2024515344 A JP 2024515344A JP 2023564255 A JP2023564255 A JP 2023564255A JP 2023564255 A JP2023564255 A JP 2023564255A JP 2024515344 A JP2024515344 A JP 2024515344A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
pharma
acceptable salt
oligonucleotide
nucleotides
ceutically acceptable
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2023564255A
Other languages
English (en)
Inventor
メリッサ ラサロ，
スーザン ファース マックナイト，
ヘンリク ティー． ドゥデク，
ジヘ パク，
ボブ デール ブラウン，
チェンジュン ライ，
スンクォン キム，
Original Assignee
アストラゼネカ アイルランド リミテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by アストラゼネカ アイルランド リミテッド filed Critical アストラゼネカ アイルランド リミテッド
Publication of JP2024515344A publication Critical patent/JP2024515344A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/322—2'-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/344—Position-specific modifications, e.g. on every purine, at the 3'-end
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
    • C12N2310/3521—Methyl
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/353—Nature of the modification linked to the nucleic acid via an atom other than carbon
    • C12N2310/3533—Halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/50—Physical structure
    • C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
    • C12N2310/531—Stem-loop; Hairpin

Abstract

本明細書には、補体成分３（Ｃ３）ｍＲＮＡをターゲティングするためのセンス及びアンチセンス鎖を含むオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）が記載される。ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを用いて、細胞におけるＣ３発現、レベル、及び／又は活性を阻害することができる。また、補体経路活性化又は調節不全により媒介される疾患、障害、若しくは状態の予防又は治療の目的でオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を使用する方法も記載される。

Description

配列表
本出願は、電子フォーマットの配列表と一緒に出願されている。配列表は、２０２１年４月２０日に作成された５０６９４－０９３ＷＯ３＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿４＿１８＿２２＿ＳＴ２５＿ＦＩＮＡＬという題名のファイルとして提供され、サイズは、７７，８２７バイトである。配列表の電子フォーマットの情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
補体系は、免疫複合体のクリアランス、並びに感染因子、外来抗原、ウイルス感染細胞、及び腫瘍細胞に対する免疫応答において中心的な役割を果たす。補体は、自然免疫系の一部を形成する５０を超えるタンパク質の群から成る。補体系は、微生物感染から身体を防御する態勢を整え、組織の止血を維持するように機能する。補体は、厳重に制御された酵素カスケードであり、これは、次の３つの経路のうちの１つにより活性化することができる：抗体複合体が活性化をトリガーする古典的経路、「ティックオーバー（ｔｉｃｋｏｖｅｒ）」と呼ばれるプロセスによって低レベルで構成的に活性化され、且つ細菌性病原体若しくは損傷組織表面によって増幅され得る代替経路、又は特定の細菌、真菌、ウイルスなどの特定の微生物に存在するマンノース残基によって開始されるレクチン経路。補体経路の無制御の活性化又は不十分な調節は、全身性炎症、細胞傷害、及び組織損傷を招く恐れがある。このように、補体経路は、多くの多様な疾患の病因に関与している。補体経路活性の阻害又は調節は、有望な治療戦略として認識されている。これらの疾患に利用可能な治療選択肢の数は限られている。従って、補体経路の活性化又は調節不全に関連する疾患を治療するための革新的な戦略を開発することは、重要なアンメットニーズである。
どの補体経路がプロセスを開始するかにかかわらず、補体活性化はカスケード内の補体成分３（Ｃ３）に集中する。Ｃ３タンパク質は、補体の活性化、病原体、免疫複合体及び損傷細胞のオプソニン化及び除去、並びに体液性免疫及びＴ細胞適応免疫応答の調節など、いくつかの重要な生物学的プロセスを推進する上で中心的役割を果たす。
Ｃ３は、補体経路カスケードの開始を助ける補体系に不可欠なタンパク質である。古典的経路、代替経路、又はレクチン経路を介したＣ３活性化は、Ｃ３の切断を引き起こして、分解産物Ｃ３ａ及びＣ３ｂをもたらす。Ｃ３ａは、好中球、好酸球、及び肥満細胞に対する強力なアナフィラトキシン及び化学誘引物質である。Ｃ３ｂは、代替経路におけるＣ３コンバターゼの形成に参加し、Ｃ５コンバターゼは、３つの補体経路の全てに関与し、これが、補体カスケードを推進して、下流の末端補体のさらなる活性化に導く。Ｃ５切断によって、強力な走化性駆動因子及びアナフィラトキシンでもあるＣ５ａと、補体タンパク質Ｃ６、７、８、及び９と急速にアセンブリングして、病原体又は組織表面に孔形成複合体Ｃ５ｂ－９を構築するＣ５ｂの形成をもたらす。その結果、Ｃ３は、補体経路の活性化又は調節不全に関連する疾患を治療するための方法として、補体経路を選択的に阻害するための阻害又はサイレンシングの理想的な標的となり得る。
本明細書には、補体経路活性化において役割を果たすことがわかっている補体成分（Ｃ３）をターゲティングするオリゴヌクレオチド（例えば、センス及びアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドなどのＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）が記載される。ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩（例えば、そのナトリウム塩）を使用して、補体経路活性化又は調節不全に関連する疾患を有する患者を治療することができる。
一態様において、本開示は、センス鎖及びアンチセンス鎖を含む補体成分３（Ｃ３）発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩を提供し、ここで、センス鎖とアンチセンス鎖は、二重らせん領域を形成する。アンチセンス鎖は、配列番号１３又は１４のＣ３ ｍＲＮＡ標的配列に対して相補性の領域を含み、相補性の領域は、少なくとも１５の連続したヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、センス鎖は、１５～５０ヌクレオチド長（例えば、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９及び５０ヌクレオチド長）である。一部の実施形態では、センス鎖は、１８～３６ヌクレオチド長（例えば、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、及び３６ヌクレオチド長）である。一部の実施形態では、アンチセンス鎖は、１５～３０ヌクレオチド長（例えば、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、及び３０ヌクレオチド長）である。一部の実施形態では、アンチセンス鎖は、２２ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖とセンス鎖は、少なくとも１９ヌクレオチド長、任意選択で、少なくとも２０ヌクレオチド長の二重らせん領域を形成する。一部の実施形態では、センス鎖は、３６ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖とセンス鎖は、少なくとも１９ヌクレオチド長、任意選択で少なくとも２０ヌクレオチド長の二重らせん領域を形成する。一部の実施形態では、相補性の領域は、少なくとも１９の連続したヌクレオチドの長さ、任意選択で少なくとも２０ヌクレオチド長である。
一部の実施形態では、センス鎖の３’末端は、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として記載されるステムループを含み、この場合、Ｓ１は、Ｓ２と相補的であり、Ｌは、Ｓ１とＳ２との間に３～５ヌクレオチド長のループを形成する。一部の実施形態では、Ｌは、トリループ又はテトラループである。一部の実施形態では、Ｌは、テトラループである。一部の実施形態では、テトラループは、配列番号８の核酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｓ１及びＳ２は、長さが１～１０ヌクレオチドであり、この場合、任意選択で、Ｓ１及びＳ２は、同じ長さを有する。一部の実施形態では、Ｓ１及びＳ２は、１ヌクレオチド、２ヌクレオチド、３ヌクレオチド、４ヌクレオチド、５ヌクレオチド、６ヌクレオチド、７ヌクレオチド、８ヌクレオチド、９ヌクレオチド、又は１０ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、Ｓ１及びＳ２は、６ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、ステムループ領域は、配列番号７に対して少なくとも８５％の同一性を有する核酸配列を含む。一部の実施形態では、ステムループ領域は、配列番号７に対して少なくとも９５％の同一性（例えば、配列番号に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、及び１００％の同一性）を有する核酸配列を含む。一部の実施形態では、ステムループ領域は、配列番号７を含む。一部の実施形態では、ステムループは、配列番号７に対して最大１、２、若しくは３つの置換、挿入、又は欠失を有する核酸を含む。
一部の実施形態では、アンチセンス鎖は、１ヌクレオチド長以上の３’オーバーハング配列を含む。一部の実施形態では、アンチセンス鎖は、少なくとも２つの連結されたヌクレオチドの３’オーバーハングを含む。一部の実施形態では、３’オーバーハング配列は、２ヌクレオチド長であり、この場合、任意選択で、３’オーバーハング配列はＧＧである。
一部の実施形態では、センス鎖は、配列番号１又は配列番号４のヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号３又は配列番号６のヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、（ａ）それぞれ、配列番号１及び３、並びに（ｂ）それぞれ、配列番号４及び６からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、センス鎖は、配列番号１に記載されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号３に記載されるヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、センス鎖は、配列番号４に記載されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６に記載されるヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、化合物Ａに示されるように、センス鎖は、配列番号３７に記載されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号３８に記載されるヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、化合物Ｂに示されるように、センス鎖は、配列番号３９に記載されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号４０に記載のヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、化合物Ｃに示されるように、センス鎖は、配列番号４１に記載されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号４２に記載されるヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、化合物Ｄに示されるように、センス鎖は、配列番号４３に記載されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号４４に記載のヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、化合物Ｅに示されるように、センス鎖は、配列番号４５に記載されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号４６に記載されるヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、化合物Ｆに示されるように、センス鎖は、配列番号４７に記載されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号４８に記載されるヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、化合物Ｇに示されるように、センス鎖は、配列番号４９に記載されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号５０に記載されるヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、化合物Ｈに示されるように、センス鎖は、配列番号５１に記載されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号５２に記載されるヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、化合物Ｉに示されるように、センス鎖は、配列番号５３に記載されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号５４に記載されるヌクレオチド配列を含む。
本明細書には、センス鎖及びアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩が提供され、ここで、センス鎖は、配列番号１又は配列番号４のいずれかに対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％）の配列同一性を有する核酸配列を有し、アンチセンス鎖は、配列番号３又は配列番号６のいずれかに対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％）の配列同一性を有する核酸配列を有する。一部の実施形態では、センス鎖は、配列番号１又は配列番号４のいずれかに対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９６％、９７％、９８％、若しくは９９％）の配列同一性を有し、アンチセンス鎖は、配列番号３又は配列番号６の少なくとも１つに対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９６％、９７％、９８％、若しくは９９％）の配列同一性を有する。一部の実施形態では、センス鎖は、配列番号１又は４の核酸配列を有し、アンチセンス鎖は、配列番号３又は配列番号６の核酸配列を有する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩は、配列番号４及び配列番号６を含む。他の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩は、配列番号１及び配列番号３を含む。
一部の実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号３又は配列番号６のいずれかに対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）の配列同一性を有する。
一実施形態において、センス鎖は、アンチセンス鎖に対して相補的ではないステムループ領域と、アンチセンス鎖に対して実質的に相補的である二重らせん領域を含む。別の実施形態では、二重らせん領域は、２０～２２ヌクレオシドの長さを含む。
他の実施形態では、ステムループ領域は、配列番号７に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、及び９９％）の同一性を有する核酸配列を含む。一部の実施形態では、ステムループ領域は、配列番号７に対して少なくとも９５％（例えば、少なくとも９６％、９７％、９８％、及び９９％）の同一性を有する。一部の実施形態では、ステムループ領域は、配列番号７を含む。
一部の実施形態では、アンチセンス鎖の５’ヌクレオチドの糖の４’－炭素は、リン酸類似体を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩は、アンチセンス鎖の５’末端の１位にウリジンを含む。一部の実施形態では、ウリジンは、リン酸類似体を含む。一部の実施形態では、リン酸塩類似体は、４’－Ｏ－モノメチルホスホネートである。一部の実施形態では、リン酸塩類似体を含むウリジンは、以下の構造：
を含む。
一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つ（例えば、少なくとも２、５、１０、１５、２０、３０、及び４０）の修飾ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２０～５０の修飾ヌクレオチド（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、及び５０の修飾オリゴヌクレオチド）を含む。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２０～４０（例えば、２５～４０、３０～４０、３５～４０、３０～３５、２５～３５、２０～２５、２１～３０、及び３１～４０）の修飾ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドのヌクレオチドの全てが修飾される。一部の実施形態では、少なくとも１つ（例えば、少なくとも２、５、１０、１５、２０、３０、及び４０）の修飾ヌクレオチドが、２’－修飾を含む。一部の実施形態では、２’－修飾は、２’－フルオロ又は２’－Ｏ－メチルであり、この場合、任意選択で、２’－フルオロ修飾は、２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドであり、及び／又は、２’－Ｏ－メチル修飾は、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドである。
一実施形態において、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩は、４０～５０（例えば、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、及び５０）の２’－Ｏ－メチル修飾を含み、この場合、任意選択で、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩は、４０～５０（例えば、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、及び５０）の２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドを含む。一実施形態において、センス鎖のヌクレオチド１～７、１１～２７、及び３１～３６のうちの少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ、少なくとも５つ、少なくとも１０、少なくとも２０、及び少なくとも３０）、並びにアンチセンス鎖のヌクレオチド１、６、８、９、１１～１３、及び１５～２２の１つ以上又は全部が、２’－Ｏ－メチル、例えば２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドで修飾されている。一実施形態では、センス鎖のヌクレオチド１～７、１１～２７、及び３１～３６のうちの１０～３０（例えば、１２～２８、１２～２４、１２～２０、１２～１６、１６～３０、２０～３０、及び２４～３０）、並びにアンチセンス鎖のヌクレオチド１、６、８、９、１１～１３、及び１５～２２のうちの１つ以上又は全部が、２’－Ｏ－メチル、例えば２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドで修飾されている。一実施形態では、センス鎖のヌクレオチド１～７、１２～２７、及び３１～３６の全部、並びにアンチセンス鎖のヌクレオチド１、６、８、９、１１～１３、及び１５～２２のうちの１つ以上又は全部が、２’－Ｏ－メチル、例えば２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドで修飾されている。一部の実施形態では、センス鎖のヌクレオチド１、２、４～７、１１、１４～１６、１８～２７、及び３１～３６の全部、並びにアンチセンス鎖のヌクレオチド１、６、９、１１、１３、１５、１７、１８、及び２０～２２のうちの１つ以上又は全部が、２’－Ｏ－メチル、例えば２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドで修飾されている。
別の実施形態において、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩は、５～１５（例えば、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４及び１５）の２’－フルオロ修飾、例えば２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、センス鎖のヌクレオチド３、８、９、１０、１１、１２、１３、及び１７のうちの少なくとも１つ（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、又は７つ）、並びにアンチセンス鎖のヌクレオチド２、３、４、５、７、８、１０、１２、１４、１６、及び１９のうちの１つ以上又は全部が、２’－フルオロ、例えば２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドで修飾される。別の実施形態では、センス鎖のヌクレオチド３、８、９、１０、１１、１２、１３、及び１７のうちの２～４つ、並びにアンチセンス鎖のヌクレオチド２、３、４、５、７、８、１０、１２、１４、１６、及び１９のうちの１つ以上又は全部が、２’－フルオロ、例えば２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドで修飾される。別の実施形態では、センス鎖のヌクレオチド８、９、１０、及び１１の全部、並びにアンチセンス鎖のヌクレオチド２、３、４、５、７、１０及び１４の１つ以上又は全部が、２’－フルオロ、例えば２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドで修飾される。
一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩は、少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ、少なくとも５つ、少なくとも１０、少なくとも２０、及び少なくとも３０）の修飾されたヌクレオチド間結合を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つの修飾されたヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合である。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩は、センス鎖のヌクレオチド１と２の間、並びにアンチセンス鎖のヌクレオチド１と２、２と３、２０と２１、及び２１と２２の間にホスホロチオエート結合を有する。
一実施形態において、センス鎖とアンチセンス鎖との間にヌクレオチド間結合は存在しない。
一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオチドは、１つ以上のターゲティングリガンドと共役している。一部の実施形態では、各ターゲティングリガンドは、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ポリペプチド、又は脂質を含む。一部の実施形態では、各ターゲティングリガンドは、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分を含む。一部の実施形態では、ＧａｌＮＡｃ部分は、一価ＧａｌＮＡｃ部分、二価ＧａｌＮＡｃ部分、三価ＧａｌＮＡｃ部分又は四価ＧａｌＮＡｃ部分である。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩は、センス鎖と共役した１～５個の２’－Ｏ－Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分を含む。一部の実施形態では、ステムループのＬの最大４ヌクレオチドは、一価ＧａｌＮＡｃ部分と共役される。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩は、センス鎖と共役した１～５つ（例えば、２、３、４、及び５つ）のＧａｌＮＡｃ部分を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つ（例えば、少なくとも２つ、又は少なくとも３つ）のＧａｌＮＡｃ部分は、センス鎖（配列番号８）のループ領域と共役される。一部の実施形態では、センス鎖のヌクレオチド２８～３０位におけるヌクレオチドの１つ以上が、一価ＧａｌＮＡｃ部分と共役される。一部の実施形態では、センス鎖の２８～３０位のヌクレオチドの各々が、一価ＧａｌＮＡｃ部分と共役される。
一部の実施形態では、センス鎖の２８～３０位のヌクレオチドは、以下の構造：
を含み、Ｚは、結合、クリックケミストリーハンドル、又は長さが１～２０（両端の値を含む）の連続した共有結合原子のリンカーを表し、これは、置換及び非置換アルキレン、置換及び非置換アルケニレン、置換及び非置換アルキニレン、置換及び非置換ヘテロアルキレン、置換及び非置換ヘテロアルケニレン、置換及び非置換ヘテロアルキニレン、並びにこれらの組合せからなる群から選択され；Ｘは、Ｏ、Ｓ、又はＮである。一部の実施形態では、Ｚは、アセタールリンカーである。一部の実施形態では、Ｘは、Ｏである。一部の実施形態では、センス鎖の２８～３０位のヌクレオチドは、以下の構造を含む：
一部の実施形態では、センス鎖の２８～３０位のヌクレオチドは、以下の構造：
を含む。
一実施形態において、アンチセンス鎖は、１３～２７（例えば、１３～２５、１３～２２、１３～２０、１３～１８、１３～１５、１５～２７、１８～２７、２０～２７、２２～２７、及び２５～２７）ヌクレオチド長である。一実施形態において、アンチセンス鎖は、２２ヌクレオチド長である。
別の実施形態において、センス鎖は、２０～５０（例えば、２２～５０、２５～５０、３０～５０、３５～５０、４０～５０、４５～５０、２０～４５、２０～４０、２０～３５、２０～３０、２０～２５、２０～２２）ヌクレオチド長である。一実施形態において、センス鎖は、３０～４０（例えば、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、及び４０）ヌクレオチド長である。
一部の実施形態では、センス鎖は、アンチセンス鎖と二重らせんを形成する。一部の実施形態では、二重らせん構造は、センス鎖の全部又は一部とアンチセンス鎖の全部又は一部の間に二重らせんを含む。一部の実施形態では、相補性の領域は、２０～３０（例えば、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９及び３０）ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、アンチセンス鎖及び／又はセンス鎖は、少なくとも２個（例えば、少なくとも３個、少なくとも４個、又は少なくとも５個）の連結されたヌクレオチドの３’オーバーハングを含む。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩は、二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）である。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩は、一本鎖リボ核酸である。
一部の実施形態では、ＲＮＡオリゴヌクレオチドは、薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、薬学的に許容される塩は、ナトリウム塩である。
別の態様において、本開示は、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのいずれか、又はその薬学的に許容される塩）のいずれか１つと、薬学的に許容される担体、賦形剤、又は希釈剤を含む医薬組成物を提供する。
別の態様では、本開示は、本明細書に記載されるＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩のいずれか１つの少なくとも一方の鎖をコードするベクターを提供する。
別の態様では、本開示は、配列番号３３～３６のいずれか１つのＤＮＡ配列を有する本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩の少なくとも一方の鎖をコードするベクターを提供する。
別の態様では、本開示は、本明細書に記載のベクター若しくは本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩のいずれか１つを含む細胞を提供する。
別の態様では、本開示は、本明細書に記載のベクター又は本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのいずれか、又はその薬学的に許容される塩）のいずれかを含む細胞を提供する。
別の態様において、本開示は、補体経路活性化又は調節不全により媒介される疾患を治療する方法を提供し、これは、対象の細胞を、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）、本明細書に記載の医薬組成物、本明細書に記載のベクター、又は本明細書に記載の細胞のうちのいずれかと接触させることを含む。一部の実施形態では、上記細胞は、Ｃ３のｍＲＮＡ転写産物の分解を達成するのに十分な時間をかけて接触させる。一部の実施形態では、細胞におけるＣ３の発現が低減される。一部の実施形態では、細胞におけるＣ３の転写が低減される。一部の実施形態では、細胞内のＣ３のレベル及び／又は活性が低下する。一部の実施形態では、Ｃ３のレベル及び／又は活性は、本明細書に記載されるＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、医薬組成物、ベクター、又は細胞のいずれか１つを投与されていない対象の細胞中のＣ３のレベル及び／又は活性と比較して、１０％～１００％低下（例えば、１０％～９０％、１０％～８０％、１０％～７０％、１０％～６０％、１０％～５０％、１０％～４０％、１０％～３０％、１０％～２０％、２０％～１００％、３０％～１００％、４０％～１００％、５０％～１００％、６０％～１００％、７０％～１００％、８０％～１００％、及び９０％～１００％低下）する。一部の実施形態では、Ｃ３のレベル及び／又は活性は、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、医薬組成物、ベクター、又は細胞のいずれか１つを投与されていない対象の細胞中のＣ３のレベル及び／又は活性と比較して、５０％～９９％（例えば、５０％～９０％、５０％～８０％、５０％～７０％、５０％～６０％、６０％～９９％、７０％～９９％、８０％～９９％、及び９０％～９９％）低下する。一部の実施形態では、対象は哺乳動物である。一部の実施形態では、対象はヒトである。
別の態様において、本開示は、細胞、細胞の集団、又は対象におけるＣ３発現を低減するための方法であって、この方法は、ｉ）細胞若しくは細胞集団を本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、医薬組成物、又はベクターのいずれか１つと接触させるステップ；或いはｉｉ）本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、医薬組成物、又はベクターのいずれか１つを対象に投与するステップを含む。一部の実施形態では、Ｃ３発現を低減することは、Ｃ３ ｍＲＮＡの量若しくはレベル、Ｃ３タンパク質の量若しくはレベル、又はその両方を低下させることを含む。一部の実施形態では、Ｃ３ ｍＲＮＡのレベル、Ｃ３タンパク質のレベル、又はその両方が、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、医薬組成物、ベクター、又は細胞のいずれか１つを投与されていない対象の細胞中のＣ３ ｍＲＮＡのレベル、Ｃ３タンパク質のレベル、又はその両方と比較して、１０％～１００％低下（例えば、１０％～９０％、１０％～８０％、１０％～７０％、１０％～６０％、１０％～５０％、１０％～４０％、１０％～３０％、１０％～２０％、２０％～１００％、３０％～１００％、４０％～１００％、５０％～１００％、６０％～１００％、７０％～１００％、８０％～１００％、及び９０％～１００％低下）する。
一部の実施形態では、Ｃ３ ｍＲＮＡのレベル、Ｃ３タンパク質のレベル、又はその両方が、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、医薬組成物、ベクター、又は細胞のいずれか１つを投与されていない対象の細胞中のＣ３ ｍＲＮＡのレベル、Ｃ３タンパク質のレベル、又はその両方と比較して、５０％～９９％（例えば、５０％～９０％、５０％～８０％、５０％～７０％、５０％～６０％、６０％～９９％、７０％～９９％、８０％～９９％、及び９０％～９９％）低下する。
一部の実施形態では、対象は、補体経路活性化若しくは調節不全（例えば、代替補体経路、古典的補体経路、及び／若しくはレクチン経路の調節不全）によって媒介されるか、又はそれに関連する疾患を有するものとして識別される。一部の実施形態では、補体経路活性化若しくは調節不全により媒介されるか、又はそれに関連する疾患は、以下の通りである：発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、ＩｇＡ腎症、ループス腎炎、Ｃ３糸球体症（Ｃ３Ｇ）、皮膚筋炎／自己免疫性筋炎、全身性硬化症、脱髄性多発ニューロパチー、天疱瘡、膜性腎症、限局性分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、水疱性類天疱瘡、後発性表皮水疱症（ＥＢＡ）、粘液膜類天疱瘡、ＡＮＣＡ血管炎、低補体血症性蕁麻疹性血管炎、免疫複合体小血管炎、皮膚小血管炎、自己免疫性壊死性ミオパチー、腎臓、肝臓、心臓若しくは肺移植拒絶反応などの移植臓器の拒絶反応、例えば、慢性ＡＭＲ（ｃＡＭＲ）などの抗体関連型拒絶反応（ＡＭＲ）、抗リン脂質（ａＰＬ）抗体症候群、糸球体腎炎、喘息、密沈着性疾患（ＤＤＤ）、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ（ＲＡ）、重症難治性ＲＡ、フェルティ症候群、多発性硬化症（ＭＳ）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、脊髄損傷、虚血再灌流障害、子癇前症、急性腎障害における臓器移植後機能障害（ＤＧＦ－ＡＫＩ）、心肺バイパス関連急性腎障害、低酸素性虚血性脳症、透析誘発血栓症、高安動脈炎、再発性多発性軟骨炎、急性／予防的移植片対宿主病、慢性移植片対宿主病、ベータサラセミア、幹細胞移植関連血栓性微小血管症、胆道閉鎖症、炎症性肝疾患、ベーチェット病、虚血性脳卒中、脳内出血、強皮症、強皮症腎クリーゼ、強皮症関連間質性肺疾患（ＳＳｃ－ＩＬＤ）、鎌状赤血球症、常染色体優性多発性嚢胞腎（ＡＤＰＫＤ）、化学療法誘発性末梢神経障害（ＣＩＰＮ）、糖尿病性ニューロパチー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、地図状萎縮症、肺動脈性高血圧症、難治性重症喘息、慢性閉塞性肺疾患、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、慢性肺同種移植機能障害、嚢胞性線維症における肺病状態、化膿性汗腺炎、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＳＨ）、強直性脊椎炎、造血幹細胞移植関連血栓性細小血管症（ＨＳＣＴ－ＴＭＡ）（予防）、冠動脈疾患、アテローム性動脈硬化症、骨粗鬆症（予防）、変形性関節症、ハイリスクドルーゼン、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、間質性膀胱炎、透析誘発性補体活性化、壊疽性膿皮症、慢性心不全、自己免疫性心筋炎、鼻ポリープ症、急性及び慢性膵炎、アテローム性動脈硬化症、好酸球性食道炎、好酸球性肉芽腫症、好酸球増多症候群、創傷治癒、及び血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）。一部の実施形態では、対象は、慢性ＡＭＲなどの抗体関連型拒絶反応（ＡＭＲ）を有するものとして識別される。
一部の実施形態では、本開示は、慢性ＡＭＲ（ｃＡＭＲ）などの抗体関連型拒絶反応（ＡＭＲ）を治療する方法を提供し、これは、本明細書に記載されるＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、医薬組成物、ベクター、又は細胞のいずれか１つと対象の細胞を接触させることを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、医薬組成物、ベクター、又は細胞のいずれか１つは、それを必要とする対象における慢性ＡＭＲ（ｃＡＭＲ）などの抗体関連型拒絶反応（ＡＭＲ）の予防又は治療での使用を目的とする。
一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、医薬組成物、ベクター、又は細胞は、毎日、毎週、毎月、又は毎年の投与のために製剤化される。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、医薬組成物、ベクター、又は細胞は、静脈内、皮下、筋肉内、経口、鼻腔内、舌下、髄腔内、及び皮内投与のために製剤化される。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、医薬組成物、ベクター、又は細胞は、皮下投与のために製剤化される。
一実施形態において、オリゴヌクレオチド（例えば、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩）、又はその組成物は、毎日、毎週、毎月、又は毎年の投与のために製剤化される。一実施形態において、オリゴヌクレオチドは、皮下、静脈内、筋肉内、経口、鼻、舌下、髄腔内、及び皮内投与のために製剤化される。一実施形態では、オリゴヌクレオチドは、皮下投与のために製剤化される。一実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１５０ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ～１２５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～７５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～２５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ～１５０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ～１５０ｍｇ／ｋｇ、及び５０ｍｇ／ｋｇ～１５０ｍｇ／ｋｇ）の用量での投与のために製剤化される。一実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約０．５ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．５ｍｇ／ｋｇ～１３ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ～１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ、及び１０ｍｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ）の用量での投与のために製剤化される。
一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１種以上の別の治療薬と組み合わせた投与のために製剤化される。
別の態様において、本開示は、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩）、本明細書に記載の医薬組成物、本明細書に記載のベクター、又は本明細書に記載の細胞を含むキットを提供する。
別の態様において、本開示は、補体経路の活性化若しくは調節不全（例えば、代替、古典的、及び／又はレクチン経路の活性化若しくは調節不全）によって媒介されるか、若しくはそれに関連する疾患の予防又は治療に使用するための本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩）、本明細書に記載の医薬組成物、本明細書に記載のベクター、又は記載の細胞を提供する。
別の態様において、本開示は、本明細書に記載されるように、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩）、医薬組成物、組成物、ベクター、又は細胞を提供し、ここで、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、医薬組成物、組成物、ベクター、又は細胞は、投与されるか、又は皮下投与用に製剤化される。
化合物Ａのアンチセンス鎖の化学構造を示す。 化合物Ａのセンス鎖の化学構造を示す。 化合物ＡのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの化学構造を示す。 化合物ＡのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの化学構造を示す。 化合物Ａのセンス鎖及びアンチセンス鎖の核酸配列を示す。 化合物Ａの二本鎖オリゴヌクレオチドの概略図を示す。 化合物Ｂのセンス鎖及びアンチセンス鎖の化学構造を示す。 化合物Ｂのセンス鎖及びアンチセンス鎖の化学構造を示す。 化合物Ｂのセンス鎖及びアンチセンス鎖の核酸配列を示す。 （図３Ａ）ＨｅｐＧ２細胞で完了したインビトロスクリーンの結果を示すグラフであり、これは、１ｎＭの量の様々なオリゴヌクレオチドで細胞を処理した後に残留するＣ３ｍ ＲＮＡのパーセントを測定する。 （図３Ｂ）ＨｅｐＧ２細胞で完了したインビトロスクリーンの結果を示すグラフであり、０．１ｎＭ、及び１ｎＭの量の様々なオリゴヌクレオチドで細胞を処理した後に残留するＣ３ ｍＲＮＡのパーセントを測定する。 （図４Ａ）化合物Ａ～ＩのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの概略図である。 （図４Ｂ）流体力学的注射後にヒトＣ３ ｃＤＮＡを発現するＣＤ－１マウスにおける化合物Ａ、Ｂ、及びＣのインビボスクリーンの結果を示すグラフである。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）対照群と比較した、１ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ、Ｂ、及びＣの単回皮下用量の投与から４日後の肝臓中のヒトＣ３ ｍＲＮＡのパーセントのＲＴ－ｑＰＣＲ測定。 （図４Ｃ）流体力学的注射後にヒトＣ３ ｃＤＮＡを発現するＣＤ－１マウスにおける化合物Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、及びＩのインビボスクリーンの結果を示すグラフである。ＰＢＳ対照群と比較した、０．５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、及びＩの単回皮下用量の投与から４日後の肝臓中のヒトＣ３ ｍＲＮＡのパーセントのＲＴ－ｑＰＣＲ測定。 対照として投与されたＰＢＳと比較して、投与前、４ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ、化合物Ｂ、又は化合物Ｃ～Ｉのいずれか１つの単回用量による処置から２８日及び５６日後のカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）の肝臓中のＣ３ ｍＲＮＡのパーセントの測定を示すグラフである。 （図６Ａ）対照として投与されたＰＢＳと比較して、０、２８、５６、及び８４日目に１ｍｇ／ｋｇ若しくは２ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ又は化合物Ｂで処置した後のカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）の肝臓中のＣ３ ｍＲＮＡのパーセントの測定を示すグラフである。 （図６Ｂ）対照として投与されたＰＢＳと比較して、１ｍｇ／ｋｇ若しくは２ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ又は化合物Ｂで処置した後のカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）の血清中のＣ３のパーセントの測定を示すグラフである。 ２ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ又は化合物Ｂの単回用量投与から２８日後のカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）の肝臓中にＣ３ ｍＲＮＡとして測定された化合物Ａ及び化合物Ｂの概算ＥＤ５０を示すグラフである。 ＷＩＥＳＬＡＢ（登録商標）ＥＬＩＳＡベースの機能アッセイによって測定された、０、２８、５６及び８４日目に２ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ又は化合物Ｂで処置した後のカニクイザルの血清中の補体活性のパーセント（ＡＰ）を示すグラフである。ＰＢＳは、対照群と同じ複数回投与レジメンで投与した。 ウサギ赤血球溶血法により測定される通り、０、２８、５６及び８４日目に１ｍｇ／ｋｇ又は２ｍｇ／ｋｇの化合物Ａで処置した後のカニクイザルの血清からの溶解のパーセントを示すグラフである。ＰＢＳは、対照群と同じ複数回投与レジメンで投与した。 （図１０Ａ）対照として投与されたＰＢＳと比較して、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、及び６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの単回皮下用量の投与後のＣＤ－１マウスの肝臓中のＣ３ ｍＲＮＡ（％）のＲＴ－ｑＰＣＲ測定を示すグラフである。肝臓ノックダウンのレベルを７０日間追跡し、測定のために各時点で５匹のマウスを犠牲にした。 （図１０Ｂ）対照として投与されたＰＢＳと比較して、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、及び６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの単回皮下用量を投与された後の７０日間にわたるＣＤ－１マウスの血清中のＣ３循環タンパク質（％）のＥＬＩＳＡアッセイ測定を示すグラフである。 ６７２時間にわたって６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの単回皮下用量を投与されたＣＤ－１マウスの血漿、肝臓、腎臓、及び脾臓組織におけるｓｉＲＮＡ曝露量のステムループ－ｑＰＣＲ測定を示すグラフである。測定のために各時点で５匹のマウスを屠殺した。 （図１２Ａ）対照として投与されたＰＢＳと比較して、０、１４、２８、及び４２日目に１ｍｇ／ｋｇ又は６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの４回用量を投与後７０日の期間にわたるＣＤ－１マウスの肝臓中のＣ３ ｍＲＮＡのパーセントのＲＴ－ｑＰＣＲ測定を示すグラフである。 （図１２Ｂ）０、１４、２８、及び４２日目に１ｍｇ／ｋｇ又は６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの４回用量を投与後７０日の期間にわたるＣＤ－１マウスにおけるＣ３血清タンパク質のＥＬＩＳＡアッセイ測定を示すグラフである。Ｃ３レベルは、ＰＢＳ対照群から測定されたＣ３血清レベルに対するパーセンテージとして計算された（ｎ＝５／時点）。 （図１３Ａ）０、１４、２８、及び４２日目に１ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの４回用量を投与したＣＤ－１マウスの肝臓組織中の化合物Ｊの濃度のステムループ－ｑＰＣＲ測定を示すグラフである。 （図１３Ｂ）０、１４、２８、及び４２日目に１ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの４回用量を投与したＣＤ－１マウスの血漿中の化合物Ｊの濃度のステムループ－ｑＰＣＲ測定を示すグラフである。 対照としてナイーブＣ５７ＢＬ／６マウス及び同齢のＰＢＳ処置ＮＺＢ／Ｗ Ｆ１と比較して、２１～３７週齢の１８週間、０．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、又は６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊで毎月処置されたＮＺＢ／Ｗ Ｆ１マウスの腎臓における糸球体補体沈着をモニターするための、Ｃ３及びプロパージンへの蛍光タグのインサイチュハイブリダイゼーションを示す一組の画像である。 （図１５Ａ）２１週齢で０．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、又は６ｍｇ／ｋｇの皮下用量の化合物Ｊを毎月受け、２９週齢で終了した後のＮＺＢ／Ｗ Ｆ１マウスの肝臓中のＣ３ ｍＲＮＡのパーセンテージを示すグラフである（ｎ＝１０／時点）。 （図１５Ｂ）２１週齢で０．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、又は６ｍｇ／ｋｇの皮下用量の化合物Ｊを毎月受け、２９週齢で終了した後のＮＺＢ／Ｗ Ｆ１マウスのＣ３血清タンパク質のパーセンテージを示すグラフである（ｎ＝１０／時点）。 （図１６Ａ）２１週齢から０．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、又は６ｍｇ／ｋｇ皮下用量の化合物Ｊを皮下投与された２９週齢のＮＺＢ／Ｗ Ｆ１マウスにおいて、ＩｇＧキャプチャーによる循環免疫複合体を測定する、４５０ｎｍで測定された吸光度を示すグラフである。 （図１６Ｂ）２１週齢から０．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、又は６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊを毎月投与された３７週齢のＮＺＢ／Ｗ Ｆ１マウスにおいて、Ｃ１ｑキャプチャーによる循環免疫複合体を測定する４５０ｎｍで測定された吸光度を示すグラフである。 ＰＢＳ対照群と比較して、８～１６週齢から２週間毎に６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの皮下用量で処置されたＭＲＬ／Ｉｐｒマウスの糸球体への補体沈着をモニターするための、Ｃ３及びプロパージンへの蛍光タグのインサイチュハイブリダイゼーションを示す一連の画像である。 ＰＢＳ対照群と比較して、４～８ヶ月齢から４ヶ月間、０．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ又は６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊで毎月処置されたＣＦＨ－／－マウスの腎臓中の糸球体補体沈着をモニターするための、Ｃ３及びプロパージンへの蛍光タグのインサイチュハイブリダイゼーションを示す一連の画像である。腎臓を採取し、最後の投与から４週間後に画像化した。 対照群としてＰＢＳを投与されたＣＦＨ－／－マウスと比較して、４～８ヶ月齢から４ヶ月間、０．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ又は６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊで毎月処置されたＣＦＨ－／－マウスの肝臓中のＣ３ ｍＲＮＡのパーセントのＲＴ－ｑＰＣＲ測定を示すグラフである。 （図２０Ａ）０日目に関節炎を誘発し、３日目にＬＰＳブースター、続いて、－７、０及び７日目に１ｍｇ／ｋｇ又は６ｍｇ／ｋｇ用量の化合物Ｊの３回用量で予防的に処置したコラーゲン抗体誘発関節炎モデルからの後肢の臨床スコアを示すグラフである。ＰＢＳ処置ＣＡＩＡ動物を対照群として用いた。 （図２０Ｂ）０日目に関節炎を誘発し、３日目にＬＰＳブースター投与、続いて、疾患誘発後５日目に１ｍｇ／ｋｇ又は６ｍｇ／ｋｇ用量の化合物Ｊの単回投与で治療的に処置されたコラーゲン抗体誘発関節炎モデルからの後肢の臨床スコアを示すグラフである。ＰＢＳ処置ＣＡＩＡ動物を対照群として用いた。 （図２１Ａ）０日目に投与されたコラーゲン抗体及び３日目のＬＰＳブースターによって関節炎が誘発され、続いて、－７、０及び７日目に６ｍｇ／ｋｇ用量の化合物Ｊの３回用量で予防的に処置された、ＣＡＩＡマウスモデルの１１日目の後肢炎症の一連の画像である。ＰＢＳ処置ＣＡＩＡ動物を対照群として用いた。 （図２１Ｂ）０日目に投与されたコラーゲン抗体及び３日目のＬＰＳブースターによって関節炎が誘発され、続いて、疾患誘発後５日目に単回６ｍｇ／ｋｇ用量の化合物Ｊで治療的に処置されたＣＡＩＡマウスモデルの１３日目の後肢足炎症の一連の画像である。ＰＢＳ処置ＣＡＩＡ動物を対照群として用いた。 （図２２Ａ）－７、０及び７日目に化合物Ｊの６ｍｇ／ｋｇ用量の３回用量による予防的処置後の後肢への単核細胞浸潤の減少を実証するＨ＆Ｅ染色の一連の画像である。ナイーブ及びＰＢＳ処置ＣＡＩＡ動物をそれぞれ炎症の陰性対照及び陽性対照として使用した。 （図２２Ｂ）疾患誘発の５日後にＣＡＩＡ誘発関節炎マウスモデルにおいて、単回６ｍｇ／ｋｇ用量の化合物Ｊによる治療的処置後の後肢への単核細胞浸潤の減少を実証するＨ＆Ｅ染色の一連の画像である。ナイーブ及びＰＢＳ処置ＣＡＩＡ動物をそれぞれ炎症の陰性対照及び陽性対照として使用した。 －７、０及び７日目に６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの３回用量で動物を予防的に処置した後のＣＡＩＡ誘発関節炎モデルの膝関節において、軟骨びらん及びパンヌス形成の予防を実証するサフラニンＯ染色、並びに単核細胞浸潤の減少を実証するＨ＆Ｅ染色の一連の画像である。ナイーブ及びＰＢＳ処置ＣＡＩＡ動物をそれぞれ陰性対照及び陽性対照として使用した。 （図２４Ａ）疾患誘導後５日目に６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの単回用量で動物を治療的に処置した後のＣＡＩＡ誘発関節炎モデルの膝関節における単核細胞浸潤の減少を実証するＨ＆Ｅ染色の一連の画像である。ナイーブ及びＰＢＳ処置ＣＡＩＡ動物をそれぞれ陰性対照及び陽性対照として使用した。 （図２４Ｂ）疾患誘発後５日目に６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの単回用量で動物を治療的に処置した後のＣＡＩＡ誘発関節炎モデルの膝関節における軟骨びらん及びパンヌス形成の予防を実証するサフラニンＯ染色の一連の画像である。ナイーブ及びＰＢＳ処置ＣＡＩＡ動物を、それぞれ陰性対照及び陽性対照として使用した。 疾患誘導後５日目に６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの単回用量による治療的処置後の免疫細胞浸潤の減少を実証する、ＣＡＩＡ誘発関節炎動物の後肢のリンパ球（ＣＤ４５＋）染色の一連の画像である。ナイーブ及びＰＢＳ処置ＣＡＩＡ動物をそれぞれ陰性対照及び陽性対照として使用した。 疾患誘発後５日目に６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの単回用量による治療的処置後の免疫細胞浸潤の減少を実証する、ＣＡＩＡ誘発関節炎動物の後肢の好中球及びマクロファージ（ＣＤ１１ｂ＋）染色の一連の画像である。ナイーブ及びＰＢＳ処置ＣＡＩＡ動物を、それぞれ陰性対照及び陽性対照として使用した。 疾患誘導後５日目に６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの単回用量による治療的処置後の免疫細胞浸潤の減少を実証する、ＣＡＩＡ誘発関節炎動物の後肢のマクロファージ（Ｆ４／８０＋）染色の一連の画像である。ナイーブ及びＰＢＳ処置ＣＡＩＡ動物を、それぞれ陰性対照及び陽性対照として使用した。 疾患誘発後５日目に化合物Ｊの単回６ｍｇ／ｋｇ用量による治療的処置後のＣＡＩＡ誘発動物の後肢への局所補体発現及びＣＤ４５＋細胞（緑色－リンパ球）浸潤をモニターするためのＣ３ ｍＲＮＡ（赤色）への蛍光タグのインサイチュハイブリダイゼーションの一連の画像である。 ０日目に疾患が誘発され、０日目及び１日目に２用量の百日咳毒素を受け、続いて、疾患誘導後７日目から開始した６ｍｇ／ｋｇ用量の化合物Ｊの５回の週間用量で治療的に処置されたＭＯＧ誘発実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）マウスを用いた２つの実験からの平均臨床スコアを示すグラフである。ＰＢＳ処置ＥＡＥ動物を疾患陽性対照として使用し、Ｃ３欠損（Ｃ３－／－）をＣ３発現の陰性対照として使用した。 ナイーブＰＢＳ処置ＥＡＥマウス（疾患対照）、及びＣ３欠損マウスＭＯＧ誘発ＥＡＥと比較して、６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの５回の週間用量を受けた後のＭＯＧ誘発ＥＡＥマウスのルクソールファストブルー脊髄染色の代表的な一連の画像である。 （図３１Ａ）ナイーブＰＢＳ処置ＥＡＥマウス（陽性対照）、ナイーブＣ３欠損マウス（Ｃ３－／－）及びＣ３欠損マウスＭＯＧ誘発ＥＡＥ（陰性対照）と比較して、６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの５回の週間用量を受けた後のＭＯＧ誘発ＥＡＥマウスにおける肝臓Ｃ３ ｍＲＮＡの量を示すグラフである。 （図３１Ｂ）ナイーブＰＢＳ処置ＥＡＥマウス（疾患陽性対照）、ナイーブＣ３欠損マウス（Ｃ３－／－）及びＣ３欠損マウスＭＯＧ誘発ＥＡＥ（Ｃ３発現陰性対照）と比較して、６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊの５回の週間用量を受けた後のＭＯＧ誘発ＥＡＥマウスにおける血清Ｃ３の量を示すグラフである。 （図３２Ａ）３ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの単回ＩＶ又はＳＣ用量の投与後のカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）の血漿中の時間（時間）に対する化合物Ａの平均濃度を示すグラフである。 （図３２Ｂ）３ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの単回ＩＶ又はＳＣ用量の投与後のカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）の肝臓中の時間（時間）に対する化合物Ａの平均濃度を示すグラフである。 生理食塩水（対照）と比較して、ＳＣ又はＩＶ注射による３ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの単回投与後のカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）の肝臓中のＣ３ ｍＲＮＡ発現の平均パーセント（±ＳＤ）を示すグラフである。 生理食塩水（対照）と比較して、３ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの単回ＩＶ又はＳＣ用量を投与後のカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）の血清中のＣ３タンパク質の平均発現（±ＳＤ）を示すグラフである。 生理食塩水（対照）と比較して、３ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの単回ＩＶ又はＳＣ用量を投与後のカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）における補体Ｃ３古典経路活性を示すグラフである。 生理食塩水（対照）と比較して、３ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの単回ＩＶ又はＳＣ用量を投与後のカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）における補体Ｃ３レクチン経路活性を示すグラフである。 生理食塩水（対照）と比較して、３ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの単回ＩＶ又はＳＣ用量を投与後のカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）における補体Ｃ３代替経路活性を示すグラフである。
定義
本明細書で使用される場合、用語「約」及び「およそ」は、列挙された値の±１０％であり、任意選択で、列挙された値の±５％、又はより任意に、列挙された値の±２％である量を指す。
本明細書で使用される場合、「投与する（こと）」及び「投与」は、医薬製剤を対象に提供する任意の方法を指す。本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、当業者に公知の任意の方法によって投与され得る。オリゴヌクレオチドを投与するための好適な方法としては、例えば、経口、注射（例えば、静脈内、腹腔内、筋肉内、硝子体内、及び皮下）、点滴製剤などを挙げることができる。オリゴヌクレオチドを投与する方法は、皮下投与を含み得る。本明細書に記載のように調製されたオリゴヌクレオチドは、当技術分野で公知のように、治療しようとする障害並びに対象の年齢、状態、及び体重に応じて、多様な形態で投与され得る。製剤は、予防的に投与することができ；即ち、疾患又は状態を発症する可能性を低減するために投与される。
本明細書で使用される場合、「Ｃ３のレベル及び／又は活性を低減する薬剤」は、細胞又は対象における、例えば、対象の細胞若しくは血清中のＣ３のレベル又は発現を低減するために使用することができる（例えば、投与される）本明細書に開示される任意のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を指す。「Ｃ３のレベルを低下させる」、「Ｃ３の発現を低減する」、及び「Ｃ３の転写を低減する」とは、例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド（本明細書に記載されるものなど）を細胞又は対象に投与することによって、細胞又は対象におけるＣ３ ｍＲＮＡ及び／若しくはＣ３タンパク質のレベルを低下させる、発現を低減する、又は転写を低減することを意味する。Ｃ３ ｍＲＮＡ及び／又はＣ３タンパク質のレベルは、当技術分野で公知の任意の方法を用いて（例えば、細胞若しくは対象におけるＣ３ ｍＲＮＡのレベル又はＣ３タンパク質のレベルを測定することにより）測定され得る。減少は、治療前と比較して、又は未処置の対象（例えば、補体活性化若しくは調節不全（例えば、Ｃ３の活性化若しくは調節不全）に関する疾患若しくは障害を有する対象）におけるＣ３ ｍＲＮＡ又はＣ３タンパク質のレベルと比較して、或いは対照対象（例えば、健康な対象（例えば、補体活性化若しくは調節不全（例えば、Ｃ３の活性化若しくは調節不全）に関連する疾患又は障害を有しない対象）と比較して、約５％以上（例えば、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは約１００％）のＣ３ ｍＲＮＡ及び／又はＣ３タンパク質のレベル、発現、転写の低下であり得る。Ｃ３は、任意のＣ３（例えば、マウスＣ３、ラットＣ３、サルＣ３、又はヒトＣ３）、並びにＣ３の変異体又は突然変異体であり得る。従って、Ｃ３は、遺伝子操作された細胞、細胞群、又は生物に関連して、野生型Ｃ３、変異型Ｃ３、又はトランスジェニックＣ３であり得る。「Ｃ３の活性を低減する」ことはまた、Ｃ３に関連する活性のレベルを低下させる（例えば、補体経路活性化又は調節不全により媒介される疾患に関連する補体経路の活性化を低減することによって）ことを意味する。Ｃ３の活性は、約５％以上（例えば、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は約１００％）低減し得る。Ｃ３の活性レベルは、当技術分野で公知の任意の方法を用いて測定することができる。低減は、少なくとも約５％以上（例えば、本明細書に開示されるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドで処置されていない細胞又は対象に対して、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは約１００％以上）のＣ３ ｍＲＮＡ及び／又はＣ３タンパク質のレベル、発現、又は転写の減少であり得る。Ｃ３ ｍＲＮＡ及び／又はＣ３タンパク質のレベル、発現、又は転写の上記減少は、少なくとも１日以上の期間（例えば、少なくとも２日、３日、４日、５日、１０日、１５日、２０日、３０日、４０日、５０日、６０日、７０日、８０日、９０日、１００日、１１０日、１２０日、又はそれ以上）にわたり得る。低減は、治療対象（例えば、ヒト対象）の血液中のＣ３タンパク質の量が少なくとも７５～１７５ｍｇ／ｄＬ（例えば、７５～１００ｍｇ／ｄＬ、７５～１２５ｍｇ／Ｌ、７５～１５０ｍｇ／ｄＬ、１５０ｍｇ／ｄＬ～１７５ｍｇ／ｄＬ、１２５～１７５ｍｇ／ｄＬ、及び１００～１７５ｍｇ／ｄＬ）の減少であり得る。
「代替ヌクレオシド」又は「代替ヌクレオチド」という用語は、本明細書に記載のものなどの代替糖又は代替核酸塩基を有するヌクレオシドを指す。代替ヌクレオシドは、プリン又はピリミジンを修飾プリン又はピリミジン、例えば置換プリン又は置換ピリミジン、例えば、イソシトシン、プソイドイソシトシン、５－メチルシトシン、５－チオゾロ－シトシン、５－プロピニル－シトシン、５－プロピニル－ウリジン、５－ブロモウリジン、５－チアゾロ－ウリジン、２－チオ－ウリジン、プソイドウリジン、１－メチルプソイドウリジン、５－メトキシウリジン、２’－チオ－チミン、イノシン、ジアミノプリン、６－アミノプリン、２－アミノプリン、２，６－ジアミノプリン、及び２－クロロ－６－アミノプリンから選択される「代替核酸塩基」に変化させることによって、核酸塩基部分が修飾されたヌクレオシドを含み得る。代替ヌクレオシドはまた、糖部分が修飾されているヌクレオシド；例えば、２’－Ｏ－メチルアデノシン、２’－Ｏ－メチルグアノシン、２’－Ｏ－メチルシトシン、２’－Ｏ－メチルウリジン、２－フルオロ－デオキシアデノシン、２－フルオロ－デオキシグアノシン、２－フルオロ－デオキシシチジン、２－フルオロ－デオキシウリジンも含み得る。
代替ウラシルを有する例示的な核酸塩基を以下に挙げる：プソイドウリジン（ψ）、ピリジン－４－オンリボヌクレオシド、５－アザ－ウリジン、６－アザ－ウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオ－ウリジン（ｓ２Ｕ）、４－チオ－ウリジン（ｓ４Ｕ）、４－チオ－プソイドウリジン、２－チオ－プソイドウリジン、５－ヒドロキシ－ウリジン（ｈｏ５Ｕ）、５－アミノアリル－ウリジン、５－ハロ－ウリジン（例えば、５－ヨード－ウリジン又は５－ブロモ－ウリジン）、３－メチル－ウリジン（ｍ３Ｕ）、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、ウリジン５－オキシ酢酸（ｃｍｏ５Ｕ）、ウリジン５－オキシ酢酸メチルエステル（ｍｃｍｏ５Ｕ）、５－カルボキシメチル－ウリジン（ｃｍ５Ｕ）、１－カルボキシメチル－プソイドウリジン、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジン（ｃｈｍ５Ｕ）、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジンメチルエステル（ｍｃｈｍ５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－ウリジン（ｍｃｍ５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－２－チオ－ウリジン（ｍｃｍ５ｓ２Ｕ）、５－アミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－ウリジン（ｍｎｍ５Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－セレノ－ウリジン（ｍｎｍ５ｓｅ２Ｕ）、５－カルバモイルメチル－ウリジン（ｎｃｍ５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｃｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－プロピニル－ウリジン、１－プロピニル－プソイドウリジン、５－タウリノメチル－ウリジン（τｍ５Ｕ）、１－タウリノメチル－プソイドウリジン、５－タウリノメチル－２－チオ－ウリジン（τｍ５ｓ２Ｕ）、１－タウリノメチル－４－チオ－プソイドウリジン、５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ、即ち、核酸塩基デオキシチミンを有する）、１－メチル－プソイドウリジン（ｍ１ψ）、５－メチル－２－チオ－ウリジン（ｍ５ｓ２Ｕ）、１－メチル－４－チオ－プソイドウリジン（ｍ１Ｓ４ψ）、４－チオ－１－メチルプソイドウリジン、３－メチル－プソイドウリジン（ｍ３ψ）、２－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、１－メチル－１－デアザ－プソイドウリジン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－プソイドウリジン、ジヒドロウリジン（Ｄ）、ジヒドロプソイドウリジン、５，６－ジヒドロウリジン、５－メチル－ジヒドロウリジン（ｍ５Ｄ）、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－ジヒドロプソイドウリジン、２－メトキシ－ウリジン、２－メトキシ－４－チオウリジン、４－メトキシ－プソイドウリジン、４－メトキシ－２－チオ－プソイドウリジン、Ｎ１－メチル－プソイドウリジン、３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウリジン（ａｃｐ３Ｕ）、１－メチル－３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）プソイドウリジン（ａｃｐ３ψ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）ウリジン（ｉｎｍ５Ｕ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）－２－チオ－ウリジン（ｉｎｍ５ｓ２Ｕ）、α－チオウリジン、２’－Ｏ－メチルウリジン（Ｕｍ）、５，２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン（ｍ５Ｕｍ）、２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ψｍ）、２－チオ－２’－Ｏ－メチルウリジン（ｓ２Ｕｍ）、５－メトキシカルボニルメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｍｃｍ５Ｕｍ）、５－カルバモイルメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｎｃｍ５Ｕｍ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕｍ）、３，２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン（ｍ３Ｕｍ）、及び５－（イソペンテニルアミノメチル）－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｉｎｍ５Ｕｍ）、１－チオ－ウリジン、デオキシチミジン、２’‐Ｆ‐アラ－ウリジン、２’‐Ｆ－ウリジン、２’‐ＯＨ‐アラ－ウリジン、５－（２－カルボメトキシビニル）ウリジン、及び５－［３－（１‐Ｅ－プロペニルアミノ）ウリジン。
代替シトシンを有する例示的な核酸塩基を以下に挙げる：５－アザ－シチジン、６－アザ－シチジン、プソイドイソシチジン、３－メチル－シチジン（ｍ３Ｃ）、Ｎ４－アセチルシチジン（ａｃ４Ｃ）、５－ホルミル－シチジン（ｆ５Ｃ）、Ｎ４－メチル－シチジン（ｍ４Ｃ）、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）、５－ハロ－シチジン（例えば、５－ヨード－シチジン）、５－ヒドロキシメチル－シチジン（ｈｍ５Ｃ）、１－メチル－プソイドイソシチジン、ピロロ－シチジン、ピロロ－プソイドイソシチジン、２－チオ－シチジン（ｓ２Ｃ）、２－チオ－５－メチル－シチジン、４－チオ－プソイドイソシチジン、４－チオ－１－メチル－プソイドイソシチジン、４－チオ－１－メチル－１－デアザ－プソイドイソシチジン、１－メチル－１－デアザ－プソイドイソシチジン、ゼブラリン、５－アザ－ゼブラリン、５－メチル－ゼブラリン、５－アザ－２－チオ－ゼブラリン、２－チオ－ゼブラリン、２－メトキシ－シチジン、２－メトキシ－５－メチル－シチジン、４－メトキシ－プソイドイソシチジン、４－メトキシ－１－メチル－プソイドイソシチジン、リシジン（ｋ２Ｃ）、α－チオ－シチジン、２’－Ｏ－メチル－シチジン（Ｃｍ）、５，２’－Ｏ－ジメチル－シチジン（ｍ５Ｃｍ）、Ｎ４－アセチル－２’－Ｏ－メチル－シチジン（ａｃ４Ｃｍ）、Ｎ４，２’－Ｏ－ジメチル－シチジン（ｍ４Ｃｍ）、５－ホルミル－２’－Ｏ－メチル－シチジン（ｆ５Ｃｍ）、Ｎ４，Ｎ４，２’－Ｏ－トリメチル－シチジン（ｍ４ ２ｃｍ）、１－チオ－シチジン、２’－Ｆ－アラ－シチジン、２’－Ｆ－シチジン、及び２’－ＯＨ－アラ－シチジン。
代替アデニンを有する例示的な核酸塩基を以下に挙げる：２－アミノ－プリン、２，６－ジアミノプリン、２－アミノ－６－ハロ－プリン（例えば、２－アミノ－６－クロロ－プリン）、６－ハロ－プリン（例えば、６－クロロ－プリン）、２－アミノ－６－メチル－プリン、８－アジド－アデノシン、７－デアザ－アデニン、７－デアザ－８－アザ－アデニン、７－デアザ－２－アミノ－プリン、７－デアザ－８－アザ－２－アミノ－プリン、７－デアザ－２，６－ジアミノプリン、７－デアザ－８－アザ－２，６－ジアミノプリン、１－メチル－アデノシン（ｍ１Ａ）、２－メチル－アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍｓ２ｍ６Ａ）、Ｎ６－イソペンテニル－アデノシン（ｉ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニル－アデノシン（ｍｓ２ｉ６Ａ）、Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｉｏ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｍｓ２ｉｏ６Ａ）、Ｎ６－グリシニルカルバモイル－アデノシン（ｇ６Ａ）、Ｎ６－トレオニルカルバモイル－アデノシン（ｔ６Ａ）、Ｎ６－メチル－Ｎ６－トレオニルカルバモイル－アデノシン（ｍ６ｔ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－トレオニルカルバモイル－アデノシン（ｍｓ２ｇ６Ａ）、Ｎ６，Ｎ６－ジメチルアデノシン（ｍ６ ２Ａ）、Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイル－アデノシン（ｈｎ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイル－アデノシン（ｍｓ２ｈｎ６Ａ）、Ｎ６－アセチル－アデノシン（ａｃ６Ａ）、７－メチル－アデニン、２－メチルチオ－アデニン、２－メトキシ－アデニン、α－チオ－アデノシン、２’－Ｏ－メチル－アデノシン（Ａｍ）、Ｎ６，２’－Ｏ－ジメチルアデノシン（ｍ６Ａｍ）、Ｎ６，Ｎ６，２’－Ｏ－トリメチルアデノシン（ｍ６ ２Ａｍ）、１，２’－Ｏ－ジメチルアデノシン（ｍ１Ａｍ）、２’－Ｏ－リボシルアデノシン（リン酸）（Ａｒ（ｐ））、２－アミノ－Ｎ６－メチル－プリン、１－チオ－アデノシン、８－アジド－アデノシン、２’－Ｆ－アラ－アデノシン、２’－Ｆ－アデノシン、２’－ＯＨ－アラ－アデノシン、及びＮ６－（１９－アミノ－ペンタオキサノナデシル）－アデノシン。
代替グアニンを有する例示的な核酸塩基を以下に挙げる：イノシン（Ｉ）、１－メチル－イノシン（ｍ１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、４－デメチル－ワイオシン（ｉｍＧ－１４）、イソワイオシン（ｉｍＧ２）、ワイブトシン（ｙＷ）、ペルオキシワイブトシン（ｏ２ｙＷ）、ヒドロキシワイブトシン（ＯｈｙＷ）、不十分修飾ヒドロキシワイブトシン（ＯｈｙＷ＊）、７－デアザ－グアノシン、キューオシン（Ｑ）、エポキシキューオシン（ｏＱ）、ガラクトシル－キューオシン（ｇａｌＱ）、マンノシル－キューオシン（ｍａｎＱ）、７－シアノ－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７－アミノメチル－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ１）、アルカエオシン（Ｇ＋）、７－デアザ－８－アザ－グアノシン、６－チオ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－８－アザ－グアノシン、７－メチル－グアノシン（ｍ７Ｇ）、６－チオ－７－メチルグアノシン、７－メチル－イノシン、６－メトキシ－グアノシン、１－メチル－グアノシン（ｍ１Ｇ）、Ｎ２－メチル－グアノシン（ｍ２Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－グアノシン（ｍ２ ２Ｇ）、Ｎ２，７－ジメチル－グアノシン（ｍ２，７Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２，７－ジメチル－グアノシン（ｍ２，２，７Ｇ）、８－オキソ－グアノシン、７－メチル－８－オキソ－グアノシン、１－メチル－６－チオ－グアノシン、Ｎ２－メチル－６－チオ－グアノシン、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－６－チオ－グアノシン、α－チオ－グアノシン、２’－Ｏ－メチル－グアノシン（Ｇｍ）、Ｎ２－メチル－２’－Ｏ－メチルグアノシン（ｍ２Ｇｍ）、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ２ ２Ｇｍ）、１－メチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ１Ｇｍ）、Ｎ２，７－ジメチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ２，７Ｇｍ）、２’－Ｏ－メチル－イノシン（Ｉｍ）、１，２’－Ｏ－ジメチル－イノシン（ｍ１Ｉｍ）、２’－Ｏ－リボシルグアノシン（リン酸）（Ｇｒ（ｐ））、１－チオ－グアノシン、Ｏ６－メチル－グアノシン、２’－Ｆ－アラ－グアノシン、及び２’－Ｆ－グアノシン。
核酸塩基部分は、対応する核酸塩基各々の文字コード、例えば、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ、又はＵにより表示される場合もあり、そうした場合、各文字は、任意選択で、同等の機能の代替核酸塩基を含み得る。
本明細書において使用される用語「アンチセンス」は、内因性遺伝子（例えば、Ｃ３）の発現を妨害するように、遺伝子、一次転写産物、又はプロセシング済みｍＲＮＡ（例えば、Ｃ３の配列（例えば、配列番号１２））の全部又は一部に対して十分に相補的であるオリゴヌクレオチドを指す。
用語「アンチセンス鎖」及び「ガイド鎖」は、標的配列に実質的に相補的である領域、例えば、Ｃ３ ｍＲＮＡ（例えば、配列番号１２）を含むＲＮＡｉオリゴヌクレオチド（例えば、ｄｓＲＮＡ）の鎖を指す。
数又は一連の数の前にある「少なくとも」という用語は、文脈から明らかなように、用語「少なくとも」に隣接する数、及び論理的に包含され得る全ての後続の数又は整数を含むと理解される。例えば、核酸分子中のヌクレオチドの数は整数でなければならない。例えば、「２１ヌクレオチド核酸分子の少なくとも１０ヌクレオチド」は、１０～２１ヌクレオチドの範囲、例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、又は２１ヌクレオチドが、示された特性を有することを意味する。「少なくとも」が一連の数又は範囲の前に存在する場合、「少なくとも」は、系列又は範囲内の数の各々を変更できることが理解される。
本明細書で使用される場合、用語「減弱する」とは、低減するか又は事実上停止することを意味する。非限定的な例として、本明細書に提供される処置の１つ以上は、対象における補体経路活性化又は調節不全（例えば、Ｃ３活性化又は調節不全）によって媒介される疾患の発症又は進行を抑制するか、又は事実上停止し得る。この減弱は、例えば、補体経路活性化又は調節不全に関連する疾患の１つ以上の態様（例えば、症状、組織特性、及び細胞性、炎症性若しくは免疫学的活性など）、例えば、本明細書に開示される補体経路活性化又は調節不全に関連する疾患のうちの１つ以上の低減によって例示され得る。
用語「ｃＤＮＡ」は、ｍＲＮＡ配列のＤＮＡ同等物である（即ち、チミジンで置換されたウリジンを有する）核酸配列を指す。一般に、当業者は、ウリジンがチミジンとして読み取られることを除いて、ｃＤＮＡ配列はｍＲＮＡ配列と同じであることを理解することから、ｃＤＮＡ及びｍＲＮＡという用語は、特定の遺伝子（例えば、Ｃ３遺伝子）に関して互換可能に使用され得る。
本明細書において、「Ｃ３」及び「相補的成分３」という用語は、相補的成分３をコードするタンパク質又は遺伝子を指す。「Ｃ３」という用語は、野生型Ｃ３タンパク質の天然変異体、例えば、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００００５５．２又は配列番号１１に記載されている野生型ヒトＣ３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％以上の同一性）を有するタンパク質などの野生型Ｃ３タンパク質の天然変異体を指す。用語「Ｃ３」はまた、野生型Ｃ３ポリヌクレオチドの天然変異体、例えば、ＮＣＢＩ参照番号ＮＭ＿００００６４．４又は配列番号１２に記載されている野生型ヒトＣ３の核酸配列に対して少なくとも８５％の同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％以上の同一性）を有するポリヌクレオチドも指す。
本明細書で使用される場合、「併用療法」又は「と組み合わせて投与される」とは、２つ（若しくはそれ以上）の異なる薬剤又は治療が、特定の疾患又は状態に対する定義された治療レジメンの一部として対象に投与されることを意味する。治療レジメンは、対象に対する個別の薬剤の効果が重複するように、各薬剤の用量及び投与の周期性を規定する。一部の実施形態では、２種以上の薬剤の送達は同時又は同時並行であり、薬剤は共製剤化してもよい。一部の実施形態では、２種以上の薬剤は、共製剤化されず、処方されたレジメンの一部として逐次的に投与される。一部の実施形態では、組み合わせた２種以上の薬剤又は治療の投与は、障害に関連する症状又は他のパラメータの低減が、一方の薬剤若しくは治療が単独で又は他方の非存在下で観察されるであろうものよりも大きくなるようにする。２つの治療の効果は、部分的に相加的、完全に相加的、又は相加的よりも大きい（例えば、相乗的）ものであり得る。各治療薬の逐次的又は実質的な同時投与は、任意の適切な経路により影響され得るが、そうしたものとして、限定はされないが、経口経路、静脈内経路、筋肉内経路、及び粘膜組織を介した直接吸収が挙げられる。治療薬は、同じ経路によって、又は異なる経路によって投与することができる。例えば、組合せの第１の治療薬は静脈内注射によって投与されてもよく、組合せの第２の治療薬は経口投与されてもよい。
本明細書で使用される場合、「補体経路活性化又は調節不全」という用語は、古典的経路、代替経路、及びレクチン経路を含む補体経路が、病原体に対する宿主防御を賦与し、免疫複合体及び損傷細胞を排除する能力、並びに免疫調節の能力における何らかの異常を指す。補体経路の活性化又は調節不全は、体液相及び細胞表面で発生する可能性があり、過剰な補体活性化又は不十分な調節を招く恐れがあり、どちらも組織損傷を引き起こし得る。
本明細書で使用される場合、「相補的」とは、当業者によって理解されるように、第２のヌクレオチド又はヌクレオシド配列に関連して第１のヌクレオチド又はヌクレオシド配列を表現するために使用されるとき、第１のヌクレオチド又はヌクレオシド配列を含むオリゴヌクレオチドが、特定の条件下で第２のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドとハイブリダイズし、二重らせん構造を形成する能力を指す。そのような条件は、例えば、ストリンジェントな条件であってもよく、この場合、ストリンジェントな条件は、以下を含み得る：１２～１６時間にわたり、４００ｍＭ ＮａＣｌ、４０ｍＭ ＰＩＰＥ ｐＨ ６．４、１ｍＭ ＥＤＴＡ、５０℃、又は７０℃、続いて洗浄（例えば、“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）。他の条件、例えば、生物の内部で遭遇する可能性のあるような生理学的に関連する条件を適用することができる。当業者は、ハイブリダイズしたヌクレオチド又はヌクレオシドの最終的な適用に従って、２つの配列の相補性の試験に最も適した一連の条件を決定することができるであろう。また、本明細書で使用される「相補的」配列は、ハイブリダイズする能力に関する上記の要件が満たされる限り、非ワトソン・クリック塩基対並びに／又は非天然及び代替ヌクレオチド若しくはヌクレオシドから形成される塩基対を含むこともできるし、或いはそれらから完全に形成され得る。このような非ワトソン・クリック塩基対として、限定はされないが、Ｇ：Ｕゆらぎ（Ｗｏｂｂｌｅ）又はフーグステン型（Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ）塩基対が挙げられる。本明細書に記載されるように、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）内、又はオリゴヌクレオチドと標的配列との間の相補的配列は、一方若しくは両方のヌクレオチド又はヌクレオシド配列の全長にわたって第１のヌクレオチド又はヌクレオシド配列を含むオリゴヌクレオチドと第２のヌクレオチド又はヌクレオシド配列を含むオリゴヌクレオチドとの塩基対を含む。このような配列は、本明細書において互いに「完全に相補的」と呼ぶことができる。第１の配列が、第２の配列に関して「実質的に相補的」と称される場合、最大３０塩基対の二重らせんのためのハイブリダイゼーション時に、それらの最終的な適用（例えば、ＲＩＳＣ経路を介した発現の低減）に最も関連する条件下でハイブリダイズする能力を保持しながら、これら２つの配列は完全に相補的であるか、又は両者は１つ以上、但し一般に５、４、３、又は２つ以下のミスマッチ塩基対を形成することができる。「実質的に相補的」はまた、目的のｍＲＮＡの連続部分（例えば、Ｃ３をコードするｍＲＮＡ）に対して実質的に相補的であるオリゴヌクレオチドを指す場合もある。例えば、オリゴヌクレオチドは、配列がＣ３をコードするｍＲＮＡの非中断部分に対して実質的に相補的である場合、Ｃ３ ｍＲＮＡの少なくとも一部に対して相補的である。しかし、２つのオリゴヌクレオチドが、ハイブリダイゼーション時に１つ以上の一本鎖オーバーハングを形成するように設計されている場合、そのようなオーバーハングは、相補性の決定に関してミスマッチとみなされないものとする。例えば、２２連結ヌクレオシド長の１つのオリゴヌクレオチドと、２０ヌクレオシド長の別のオリゴヌクレオチドとを含むオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、異なる長さを有する場合であっても、本明細書に記載される目的のために「完全に相補的」と呼ぶことができる。
本明細書で使用される場合、「相補的オリゴヌクレオチド」は、標準的なワトソン・クリック相補性ルールに従って塩基対形成が可能なものである。具体的には、プリンはピリミジンと塩基対を形成して、シトシンと対合したグアニン（Ｇ：Ｃ）、並びにＤＮＡの場合にはチミンと対合したアデニン（Ａ：Ｔ）、またＲＮＡの場合には、ウラシルと対合したアデニン（Ａ：Ｕ）の組合せを形成する。２つのオリゴヌクレオチドは、たとえそれらが互いに完全に相補的でなくても、各々が他方に対して実質的に相補的である少なくとも１つの領域を有する限り、互いにハイブリダイズし得ることが理解される。
本明細書で使用される語句「細胞をオリゴヌクレオチドと接触させる（こと）」は、オリゴヌクレオチド、例えば、一本鎖オリゴヌクレオチド又は二本鎖オリゴヌクレオチド（例えば、二重らせんを形成する一本鎖ＲＮＡ又は二本鎖ＲＮＡ）と細胞を、当技術分野で公知の方法によって接触させることを含む。細胞をオリゴヌクレオチドと接触させることは、インビトロで細胞をオリゴヌクレオチドと接触させること、又はインビボで細胞をオリゴヌクレオチドと接触させることを含む。接触は、直接又は間接的のいずれで実施してもよい。このように、例えば、オリゴヌクレオチドは、本方法を実施する個体によって細胞との物理的接触をさせてもよいし、或いは、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、それがその後細胞と接触することを可能にするか、又は引き起こすことになる状況に置かれてもよい。インビトロで細胞を接触させることは、例えば、細胞をオリゴヌクレオチドと一緒にインキュベートすることにより行うことができる。インビボで細胞を接触させることは、例えば、オリゴヌクレオチドを細胞が位置する組織又はその付近に注入することによって、又は接触させようとする細胞が位置する組織に、薬剤が後に到達するように、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを別の領域、例えば、血流若しくは皮下空間に注入することによって行うことができる。例えば、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドを目的の部位に向けるリガンドを含み、且つ／若しくはリガンドと連結されてもよいし、又はオリゴヌクレオチドを目的の部位に送達するベクター（例えば、ウイルスベクター）に組み込んでもよい。インビトロ及びインビボでの接触方法の組合せも可能である。例えば、細胞をインビトロでオリゴヌクレオチドと接触させた後、該細胞を対象に移植することもできる。
「連続した核酸塩基領域」という用語は、標的核酸に相補的なオリゴヌクレオチドの領域（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖）を指す。この用語は、本明細書において、用語「連続的ヌクレオチド配列」又は「連続的ヌクレオチド塩基配列」と互換可能に使用され得る。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドのヌクレオチドの全部が、連続したヌクレオチド又はヌクレオシド領域に存在する。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、連続したヌクレオチド領域を含み、任意選択で、さらに別の１つ若しくは複数のヌクレオチド又は１つ若しくは複数のヌクレオシドを含み得る。ヌクレオチドリンカー領域は、標的核酸に対して相補的であってもよいし、又は相補的でなくてもよい。連続したヌクレオチド領域のヌクレオチド間に存在するヌクレオシド間結合には、ホスホロチオエート間ヌクレオシド結合が含まれ得る。加えて、連続したヌクレオチド領域は、１つ以上の糖修飾ヌクレオシドを含み得る。
本明細書で使用される場合、用語「デオキシリボヌクレオチド」は、リボヌクレオチドと比較してそのペントース糖の２’位にヒドロキシルの代わりに水素を有するヌクレオチドを指す。修飾デオキシリボヌクレオチドは、２’位以外の原子の１つ以上の修飾又は置換を有するデオキシリボヌクレオチドであり、糖、リン酸基又は塩基の修飾又は置換を含む。
本明細書で使用される場合、用語「疾患」は、身体機能、系統、又は器官の中断、停止、又は障害を指す。対象となる疾患又は障害には、本明細書に記載の治療方法などによってＣ３を標的とする、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、本明細書に記載のように二重らせんを形成する一本鎖又は二本鎖ＲＮＡ構築物）による治療から利益を得ることになるものが含まれる。本明細書に記載の組成物及び方法を用いて治療することができる補体経路活性化若しくは調節不全により媒介されるか、又はそれに関連する疾患若しくは障害の非限定的な例として、例えば、以下のものが挙げられる：皮膚障害、神経学的障害、腎臓学的障害、アキュートケア、リウマチ性障害、肺障害、皮膚科学的障害、血液学的障害、及び眼科障害、例えば発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、ＩｇＡ腎症、ループス腎炎、Ｃ３糸球体症（Ｃ３Ｇ）、皮膚筋炎／自己免疫性筋炎、全身性硬化症、脱髄性多発ニューロパチー、天疱瘡、膜性腎症、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、水疱性類天疱瘡、後発性表皮水疱症（ＥＢＡ）、粘液膜類天疱瘡、ＡＮＣＡ血管炎、低補体蕁麻疹様血管炎、免疫複合体小血管炎、皮膚小血管炎、自己免疫性壊死性ミオパチー、腎臓、肝臓、心臓若しくは肺移植拒絶反応などの移植臓器の拒絶反応、例えば、慢性ＡＭＲ（ｃＡＭＲ）などの抗体関連型拒絶反応（ＡＭＲ）、抗リン脂質（ａＰＬ）抗体症候群、糸球体腎炎、喘息、密沈着性疾患（ＤＤＤ）、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ（ＲＡ）、重症難治性ＲＡ、フェルティ症候群、多発性硬化症（ＭＳ）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、脊髄損傷、虚血再灌流障害、子癇前症、急性腎障害における臓器移植後機能障害（ＤＧＦ－ＡＫＩ）、心肺バイパス関連急性腎障害、低酸素性虚血性脳症、透析誘発血栓症、高安動脈炎、再発性多発性軟骨炎、急性／予防的移植片対宿主病、慢性移植片対宿主病、ベータサラセミア、幹細胞移植関連血栓性微小血管症、胆道閉鎖症、炎症性肝疾患、ベーチェット病、虚血性脳卒中、脳内出血、強皮症、強皮症腎クリーゼ、強皮症関連間質性肺疾患（ＳＳｃ－ＩＬＤ）、鎌状赤血球症、常染色体優性多発性嚢胞腎（ＡＤＰＫＤ）、化学療法誘発性末梢神経障害（ＣＩＰＮ）、糖尿病性ニューロパチー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、地図状萎縮症、肺動脈性高血圧症、難治性重症喘息、慢性閉塞性肺疾患、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、慢性肺同種移植機能障害、嚢胞性線維症における肺病状態、化膿性汗腺炎、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＳＨ）、強直性脊椎炎、造血幹細胞移植関連血栓性細小血管症（ＨＳＣＴ－ＴＭＡ）（予防）、冠動脈疾患、アテローム性動脈硬化症、骨粗鬆症（予防）、変形性関節症、ハイリスクドルーゼン、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、間質性膀胱炎、透析誘発性補体活性化、壊疽性膿皮症、慢性心不全、自己免疫性心筋炎、鼻ポリープ症、急性及び慢性膵炎、アテローム性動脈硬化症、好酸球性食道炎、好酸球性肉芽腫症、好酸球増多症候群、創傷治癒、及び血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）。
本明細書で使用される場合、用語「二重らせん」は、核酸（例えば、オリゴヌクレオチド）に関して、２つのヌクレオチドの逆平行配列の相補的な塩基対形成によって形成される構造を指す。
本明細書で使用される場合、（例えば、細胞又は対象における）Ｃ３のレベル及び／又は活性を低減する薬剤（例えば、本明細書に記載されるＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）の「有効量」、「治療有効量」、及び「十分な量」という用語は、ヒトなどの対象に投与した場合に、臨床結果を含め、有益な又は所望の結果をもたらすのに十分な量を指し、そのため、「有効量」又はその同義語は、それが適用されている状況に応じて変動する。例えば、補体経路の活性化又は調節不全に関連する疾患を治療する状況では、Ｃ３のレベル及び／又は活性を低減する薬剤の投与なしで得られる応答と比較して、治療応答を達成するのに十分なＣ３のレベル及び／又は活性を低減する薬剤の量である。そのような量に相当する本明細書に記載のＣ３のレベル及び／又は活性を低減する所与の薬剤の量は、所与の薬剤、医薬製剤、投与経路、疾患若しくは障害のタイプ、対象のアイデンティティ（例えば、年齢、性別、及び／若しくは体重）又は治療対象の宿主など、様々な容易に応じて変動し得るが、それでも、当業者によって常用的に決定することができる。また、本明細書で使用する場合、本開示のＣ３のレベル及び／又は活性を低減する薬剤の「治療有効量」は、対照と比較して、対象に有益な又は所望の結果をもたらす量である。本明細書で定義されるように、本開示のＣ３のレベル及び／又は活性を低減する薬剤の治療有効量は、当業者により当技術分野で公知の常用的な方法によって容易に決定され得る。投与計画は、最適な治療応答を提供するように調節され得る。
本明細書で使用される場合、用語「賦形剤」は、例えば、所望の粘稠度又は安定化効果を賦与するか、又はそれに寄与するように、組成物に含有させることができる非治療薬を指す。
「Ｇ」、「Ｃ」、「Ａ」、「Ｔ」及び「Ｕ」は各々、一般に、グアニン、シトシン、アデニン、チミジン、及びウラシルを塩基としてそれぞれ含むヌクレオチドを表すが、リボース及びデオキシリボース以外にも代替糖部分を含み得る。また、「ヌクレオチド」という用語は、以下でさらに詳述するような代替ヌクレオチド、又は代用置換部分を指す場合があることも理解される。当業者は、グアニン、シトシン、アデニン、及びウラシルが、そのような置換部分を担持するヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドの塩基対形成特性を実質的に改変することなく、他の部分によって置換され得ることを十分に認識している。例えば、限定するものではないが、イノシンをその塩基として含むヌクレオチドは、アデニン、シトシン、又はウラシルを含むヌクレオチドと塩基対を形成することができる。従って、ウラシル、グアニン、又はアデニンを含むヌクレオチドは、本開示で特に取り上げるオリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列において、例えばイノシンを含むヌクレオチドによって置換され得る。別の例では、オリゴヌクレオチド中いずれかのアデニン及びシトシンをグアニン及びウラシルでそれぞれ置換して、標的ｍＲＮＡと対合するＧ－Ｕゆらぎ塩基対を形成することができる。このような置換部分を含む配列は、本開示で特に取り上げる組成物及び方法に好適である。
本明細書で使用される場合、用語「阻害剤」は、タンパク質（例えばＣ３）のレベル及び／又は活性を低減する任意の薬剤を指す。阻害剤の非限定的な例には、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、例えば、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、又はｓｈＲＮＡ）が含まれる。本明細書で使用される用語「低減」は、「サイレンシング」、「下方制御」、「抑制」、及び他の同様の用語と互換可能に使用され、５％以上（例えば、１０％、１５％、２５％、３５％、５０％、７５％、及び１００％）の任意のレベルの低下を含む。健康なヒトの血清中に認められるＣ３タンパク質の典型的なレベルは、約７５～１７５ｍｇ／ｄＬ（例えば、７５～１００ｍｇ／ｄＬ、７５～１２５ｍｇ／Ｌ、７５～１５０ｍｇ／ｄＬ、１５０ｍｇ／ｄＬ～１７５ｍｇ／ｄＬ、１２５～１７５ｍｇ／ｄＬ、及び１００～１７５ｍｇ／ｄＬ）である。
「レベル」とは、任意選択で基準と比較した、タンパク質、又はタンパク質をコードするｍＲＮＡ（例えば、Ｃ３）のレベル若しくは活性を意味する。基準は、本明細書で定義されるように、任意の有用な標準であってよい。タンパク質の「減少したレベル」又は「増加したレベル」とは、それぞれ、基準と比較して、タンパク質レベルの減少又は増加（例えば、基準と比較して、例えば、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１５０％、約２００％、約３００％、約４００％、約５００％、又はそれ以上の減少又は増加；例えば、基準と比較して、約１０％、約１５％、約２０％、約５０％、約７５％、約１００％、又は約２００％を超える減少又は増加；例えば、基準と比較して、約０．０１倍、約０．０２倍、約０．１倍、約０．３倍、約０．５倍、約０．８倍、若しくはそれ以下に満たない減少又は増加；例えば、基準と比較して、約１．２倍、約１．４倍、約１．５倍、約１．８倍、約２．０倍、約３．０倍、約３．５倍、約４．５倍、約５．０倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約３０倍、約４０倍、約５０倍、約１００倍、約１０００倍、若しくはそれ以上を超える減少又は増加）を意味する。タンパク質又はｍＲＮＡのレベルは、サンプル中の総タンパク質又はｍＲＮＡに対する質量／体積（例：ｇ／ｄＬ、ｍｇ／ｍＬ、μｇ／ｍＬ、ｎｇ／ｍＬ）又はパーセンテージで表すことができる。
本明細書で使用される場合、用語「ループ」は、互いに十分に相補的である核酸の２つの逆平行領域によってフランキングされた核酸（例えば、オリゴヌクレオチド）の不対領域を指し、適切なハイブリダイゼーション条件下（例えば、リン酸緩衝液中又は細胞内）で、不対領域とフランキングする２つの逆平行領域は、ハイブリダイズして二重らせん（「ステム」と呼ばれる）を形成する。
本明細書で使用される場合、「修飾ヌクレオチド間結合」という用語は、ホスホジエステル結合を含む基準ヌクレオチド間結合と比較して、１つ以上の化学修飾を有するヌクレオチド間結合を指す。一部の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、非天然に存在する連結である。典型的には、修飾ヌクレオチド間結合は、修飾ヌクレオチド間結合が存在する核酸に１つ以上の望ましい特性を付与する。例えば、修飾ヌクレオチドは、熱安定性、分解に対する耐性、ヌクレアーゼ耐性、溶解性、バイオアベイラビリティ、生物活性、免疫原性の低下などを改善し得る。
本明細書で使用される場合、「修飾ヌクレオチド」という用語は、以下：アデニンリボヌクレオチド、グアニンリボヌクレオチド、シトシンリボヌクレオチド、ウラシルリボヌクレオチド、アデニンデオキシリボヌクレオチド、グアニンデオキシリボヌクレオチド、シトシンデオキシリボヌクレオチド及びチミジンデオキシリボヌクレオチドから選択される対応する基準ヌクレオチドと比較して、１つ以上の化学修飾を有するヌクレオチドを指す。一部の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、非天然に存在するヌクレオチドである。一部の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、その糖、核酸塩基及び／又はリン酸基において１つ以上の化学修飾を有する。一部の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、対応する参照ヌクレオチドと共役された１つ以上の化学部分を有する。典型的には、修飾ヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドが存在する核酸に１つ以上の望ましい特性を付与する。例えば、修飾ヌクレオチドは、熱安定性、分解に対する耐性、ヌクレアーゼ耐性、溶解性、バイオアベイラビリティ、生物活性、免疫原性の低下などを改善し得る。
「ニックテトラループ構造」とは、個別のセンス（パッセンジャー）鎖及びアンチセンス（ガイド）鎖の存在を特徴とするＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの構造であり、ここで、センス鎖は、アンチセンス鎖との相補性の領域を有し、且つ、両鎖の少なくとも一方、一般にセンス鎖が、少なくとも一方の鎖内に形成された隣接するステム領域を安定化するように構成されたテトラループを有する。ニックテトラループ構造は、センス鎖及びアンチセンス鎖のヌクレオチドに単一の切断を生じさせ、それによって、両鎖が共有結合により当該部位で連結されないようにする。
用語「核酸塩基」及び「塩基」は、核酸ハイブリダイゼーション時に水素結合を形成するヌクレオシド及びヌクレオチド中に存在するプリン（例えば、アデニン及びグアニン）並びにピリミジン（例えば、ウラシル、チミン、及びシトシン）部分を含む。本開示に関連して、核酸塩基という用語は、天然に存在する核酸塩基とは異なり得るが、核酸ハイブリダイゼーション中に機能性である代替核酸塩基も包含する。これに関連して、「核酸塩基」は、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、キサンチン、及びヒポキサンチンなどの天然に存在する核酸塩基、並びに代替核酸塩基の両方を指す。このような変異体は、例えば、Ｈｉｒａｏ ｅｔ ａｌ．（Ａｃｃｏｕｎｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｖｏｌ．４５：ｐａｇｅ ２０５５，２０１２）及びＢｅｒｇｓｔｒｏｍ（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｓｕｐｐｌ．３７ １．４．１，２００９）に記載されている。
用語「ヌクレオシド」は、核酸塩基と糖部分の単量体単位又は核酸塩基と糖部分を有するオリゴヌクレオチドを指す。ヌクレオシドは、天然に存在するもの、並びに本明細書に記載されるものなどの代替ヌクレオシドを含み得る。ヌクレオシドの核酸塩基は、天然に存在する核酸塩基又は代替核酸塩基であり得る。同様に、ヌクレオシドの糖部分は、天然に存在する糖又は代替糖であり得る。
本明細書において使用される「ヌクレオチド」とは、ヌクレオシド及びヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドの単量体単位を指す。ヌクレオシド間結合は、リン酸結合を含んでも含まなくてもよい。同様に、「連結されたヌクレオシド」は、リン酸結合によって連結されていてもいなくてもよい。多くの「代替ヌクレオシド間結合」は、当技術分野で公知であり、限定はされないが、リン酸、ホスホロチオエート、及びボロノリン酸結合を含む。代替ヌクレオシドは、二環式ヌクレオシド（ＢＮＡ）（例えば、ロックヌクレオシド（ＬＮＡ）及び拘束エチル（ｃＥｔ）ヌクレオシド）、ペプチドヌクレオシド（ＰＮＡ）、ホスホトリエステル、ホスホロチオネート、ホスホロアミデート、及び本明細書に記載のものを含む天然ヌクレオシドのリン酸骨格の他の変異体を含む。
本明細書で使用される場合、用語「オリゴヌクレオチド」は、短い核酸、例えば、１００ヌクレオチド長未満の核酸を指す。オリゴヌクレオチドは、一本鎖又は二本鎖のいずれであってもよい。オリゴヌクレオチドは、二重らせん領域を有する、又は有さない場合がある。非限定的な一組の例として、オリゴヌクレオチドは、限定はされないが、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ダイサー基質干渉ＲＮＡ（ｄｓｉＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド、短いｓｉＲＮＡ、又は一本鎖ｓｉＲＮＡであり得る。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドである。
本明細書で使用される場合、用語「オーバーハング」は、１本の鎖又は領域と共に二重らせんを形成する相補鎖の末端を超えて延びる１本の鎖又は領域から生じる末端非塩基対合ヌクレオチドを指す。一部の実施形態では、オーバーハングは、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）の５’末端又は３’末端の二重らせん領域から延びる１つ以上の不対ヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、オーバーハングは、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）のアンチセンス鎖又はセンス鎖上の３’若しくは５’オーバーハングである。
本明細書で使用される場合、「それを必要とする患者」又は「それを必要とする対象」という用語は、疾患又は障害、例えば、補体調節不全により媒介される疾患（例えば、Ｃ３に関連する調節不全、補体経路（例えば、代替、古典的、及び／又はレクチン経路）の１つ若しくは全部の調節不全など）の治療の必要性に基づく対象の識別を指す。対象は、例えば、疾患又は障害（例えば、本明細書に開示される補体経路活性化若しくは調節不全に関連する疾患又は障害）の治療の必要性を有するものとして、例えば、当業者（例えば、医師）による早期診断に基づいて識別することができる。
基準オリゴヌクレオチド又はポリペプチド配列に対する「配列同一性パーセント（％）」は、該当配列をアラインメントし、必要に応じてギャップを導入することにより、配列同一性の最大パーセントを達成した後、基準オリゴヌクレオチド又はポリペプチド配列中の核酸若しくはアミノ酸と同一である候補配列中の核酸若しくはアミノ酸のパーセンテージとして定義される。核酸又はアミノ酸配列同一性パーセントを決定することを目的とするアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、又はメガライン（Ｍｅｇａｌｉｇｎ）ソフトウェアなどの一般に利用可能なコンピュータソフトウェアを用いて、当業者の能力の範囲内の様々な方法で達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含め、配列をアラインメントするための適切なパラメータを決定することができる。例えば、配列同一性パーセント（％）値は、配列比較コンピュータプログラムＢＬＡＳＴを用いて生成され得る。例示として、所与の核酸又はアミノ酸配列、Ｂに対する、それとの、若しくはそれに対しての所与の核酸又はアミノ酸配列、Ａの配列同一性パーセント（或いは、所与の核酸又はアミノ酸配列、Ｂに対する、それとの、若しくはそれに対しての特定の同一性パーセントを有する所与の核酸又はアミノ酸配列、Ａと表現することもできる）は次のように計算される：
（分数Ｘ／Ｙ）×１００
（式中、Ｘは、配列アラインメントプログラム（ＢＬＡＳＴなど）により、そのプログラムのＡとＢのアラインメントにおいて同一のマッチとして評点されるヌクレオチド又はアミノ酸の数であり、Ｙは、Ｂの核酸の総数である。核酸又はアミノ酸配列Ａの長さが、核酸又はアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡの配列同一性パーセントは、Ａに対するＢの配列同一性パーセントと等しくならないことは理解されるであろう。
本明細書において使用される「薬学的に許容される賦形剤」とは、本明細書に記載の化合物以外の任意の成分（例えば、活性化合物を懸濁又は溶解することができるビヒクル）を指し、患者において実質的に無毒性且つ非炎症性であるという特性を有する。賦形剤は、例えば、以下：付着防止剤、抗酸化剤、結合剤、コーティング剤、圧縮助剤、崩壊剤、染色剤（着色剤）、皮膚軟化剤、乳化剤、充填剤（希釈剤）、皮膜形成剤又はコーティング剤、香味料、香料、流動化剤（流動促進剤）、滑沢剤、防腐剤、印刷用インク、吸着剤、懸濁剤又は分散剤、甘味料、及び水和水が挙げられる。例示的な賦形剤としては、限定はされないが、以下：ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム（二塩基性）、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、架橋ポリビニルピロリドン、クエン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メチルパラベン、微結晶セルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポビドン、アルファ化デンプン、プロピルパラベン、パルミチン酸レチニル、セラック、二酸化ケイ素、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クエン酸ナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ソルビトール、デンプン（トウモロコシ）、ステアリン酸、スクロース、タルク、二酸化チタン、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、及びキシリトールが挙げられる。
本明細書で使用される場合、用語「薬学的に許容される塩」は、本明細書に記載される化合物のいずれかの化合物の任意の薬学的に許容される塩を意味する。例えば、本明細書に記載の化合物のいずれかの薬学的に許容される塩には、健全な医学的判断の範囲内であり、過度の毒性、刺激、アレルギー反応なしにヒト及び動物の組織と接触して使用するのに適しており、適正な利益／リスク比に見合ったものが含まれる。薬学的に許容される塩は、当該技術分野において周知である。例えば、薬学的に許容される塩は、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ６６：１－１９，１９７７及びＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ，（Ｅｄｓ．Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ），Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，２００８に記載されている。塩は、遊離塩基基を適切な有機酸と反応させることによって、本明細書に記載される化合物の最終単離及び精製中に、又は個別に、インサイチュで調製することができる。本明細書に記載の化合物は、薬学的に許容される塩として調製することができるようにイオン化可能な基を有し得る。これらの塩は、無機酸又は有機酸を含む酸付加塩であってもよく、又は該塩は、本明細書に記載される化合物の酸性形態の場合には、無機又は有機塩基から調製され得る。往々にして、化合物は、薬学的に許容される酸又は塩基の付加生成物として調製される薬学的に許容される塩として調製又は使用される。適切な薬学的に許容される酸及び塩基並びに適切な塩の調製方法は、当技術分野において周知である。塩は、無機及び有機の酸及び塩基を含む薬学的に許容される非毒性の酸及び塩基から調製され得る。代表的な酸付加塩としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、硫酸水素塩、ホウ酸塩、酪酸塩、カンフォレート、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオネート、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ラクトビオネート、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３－フェニルプロピオネート、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩等が挙げられる。代表的なアルカリ又はアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、及びマグネシウム、さらには無毒性アンモニウム、第四級アンモニウム、並びにアミンカチオン、例えば、限定はされないが、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、及びエチルアミンが挙げられる。
本明細書において使用される用語「医薬組成物」は、本明細書に記載される化合物（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を含有する組成物を指し、これは、薬学的に許容される賦形剤と一緒に製剤化され、哺乳動物における疾患の治療のための治療レジメンの一部として政府の規制機関の承認を得て任意選択で製造又は販売される。医薬組成物は、例えば、皮下投与用、静脈内投与用（例えば、粒子状塞栓を含まない滅菌溶液として、及び静脈内使用に適した溶媒系中）；髄腔内注射用；脳室内注射用；実質内注射用；単位剤形（例えば、錠剤、カプセル、カプレット、ゲルキャップ、又はシロップ）での経口投与用；局所投与用（例えば、クリーム、ゲル、ローション、若しくは軟膏として；又は任意の他の薬学的に許容される製剤として製剤化することができる。
本明細書で使用される場合、用語「リン酸類似体」は、リン酸基の静電的及び／又は立体的性質を模倣する化学的部分を指す。一部の実施形態では、リン酸類似体は、往々にして酵素的除去を被りやすい５’－リン酸の代わりに、オリゴヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドに位置する。一部の実施形態では、５’リン酸類似体は、ホスファターゼ耐性結合を含有する。リン酸類似体の例としては、５’ホスホネート、例えば、５’メチレンホスホネート（５’－ＭＰ）及び５’－（Ｅ）－ビニルホスホネート（５’－ＶＰ）が挙げられる。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、５’末端ヌクレオチドにおいて、糖の４’－炭素位置にリン酸類似体（「４’－リン酸類似体」と呼ばれる）を有する。４’－リン酸類似体の一例は、オキシメチル基の酸素原子が、糖部分（例えば、その４’－炭素で）結合しているオキシメチルホスホネート、又はその類似体である。例えば、米国特許出願公開第２０１９／０１７７７２９号明細書を参照されたい（リン酸類似体に関する各々の内容は参照により本明細書に組み込まれる）。オリゴヌクレオチドの５’末端に関して、他の修飾が開発されている（例えば、国際公開第２０１１／１３３８７１号パンフレット；米国特許第８，９２７，５１３号明細書；及びＰｒａｋａｓｈ ｅｔ ａｌ．（２０１５），Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，４３（６）：２９９３－３０１１を参照されたい；尚、リン酸類似体に関する各々の内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。
本明細書において使用される用語「プローブ」は、特定の配列に選択的に結合することができる任意の分子、例えば、ｍＲＮＡなどの核酸分子を指す。プローブは、当技術の公知で、しかも通常の方法を用いて合成することもできるし、又は適切な生物学的調製物から誘導することができる。プローブは、標識されるように特別に設計されていてもよい。プローブとして利用することができる分子の例には、ＲＮＡ、ＤＮＡ、タンパク質、抗体、及び有機分子が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、遺伝子の「発現低減」という用語は、適切な基準細胞若しくは対象と比較して、遺伝子によってコードされるＲＮＡ転写物又はタンパク質の量の減少、及び／又は細胞若しくは対象における遺伝子の活性の量の減少を指す。例えば、細胞をＲＮＡｉオリゴヌクレオチド（例えば、Ｃ３ ｍＲＮＡ配列に相補的なアンチセンス鎖を有するもの）で処置する行為は、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドで処置されていない細胞と比較して、ＲＮＡ転写物、タンパク質及び／又は活性（例えば、Ｃ３遺伝子によってコードされる）の量の減少をもたらし得る。同様に、本明細書で使用される「発現を低減する」とは、遺伝子（例えば、Ｃ３）の発現低下をもたらす行為を指す。発現の低減は、本明細書に記載されるように、Ｃ３の血清濃度の減少によって評価することができる（例：例えば、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドと接触していない細胞に対して）。或いは、発現の減少は、例えば、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドと接触させていない細胞と比較して、Ｃ３ ｍＲＮＡの転写及び／又は翻訳のレベルの低下（例えば、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、５５％、若しくは６０％以上の減少、例えば、１％～６０％以上の範囲の減少）により評価することができる。
「基準」とは、タンパク質又はｍＲＮＡのレベル若しくは活性を比較するために使用される任意の有用な基準を意味する。基準は、比較の目的で使用される任意のサンプル、標準、標準曲線、又はレベルであり得る。基準は、通常の基準サンプル又は参照標準若しくはレベルであってよい。「基準サンプル」は、例えば、対照、例えば、「正常な対照」などの所定の陰性対照値、又は同じ対象から採取された以前のサンプル；正常細胞又は正常組織など、正常な健康な対象からのサンプル；疾患を有していない対象からのサンプル（例えば、細胞若しくは組織）；疾患を有すると診断されているが、本明細書に記載の化合物でまだ治療を受けていない対象からのサンプル；本明細書に記載の化合物によって治療された対象からのサンプル；又は既知の正常濃度の精製済みオリゴヌクレオチド若しくはタンパク質（例えば、本明細書に記載されるいずれか）のサンプルであってよい。「参照標準又はレベル」とは、参照サンプルから得られた値又は数値を意味する。「正常対照値」とは、非疾患状態を示す予め決定された値であり、例えば、健康な対照対象において予測される値である。典型的に、正常な対照値は、範囲（「ＸとＹの間」）、高い閾値（「Ｘ以下」）、又は低い閾値（「Ｘ以上」）として表される。特定のバイオマーカーについての正常対照値内の測定値を有する対象は、典型的には、そのバイオマーカーについて「正常範囲内」であるとみなされる。正常な参照標準又はレベルは、疾患又は障害（例えば、補体経路の活性化若しくは調節不全に関連する疾患又は障害）を有していない正常な対象；本明細書に記載の化合物で治療を受けた対象から得られた値又は数値であり得る。好ましい実施形態において、基準サンプル、標準、又はレベルは、以下の基準：年齢、体重、性別、疾患ステージ、及び健康状態全般のうちの少なくとも１つによって対象サンプルに合致させる。精製されたオリゴヌクレオチド又はタンパク質のレベル、例えば、本明細書に記載される任意の、正常な基準範囲内の標準曲線も、基準として使用することができる。
本明細書で使用される場合、「相補性の領域」という用語は、遺伝子、一次転写産物、配列（例えば、標的配列、例えば、Ｃ３ヌクレオチド配列）、又は内因性遺伝子の発現を妨害するようにプロセシングされたｍＲＮＡ（例えば、Ｃ３）の全部若しくは一部に実質的に相補的であるオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖上の領域を指す。相補性の領域が標的配列に対して完全に相補的ではない場合、ミスマッチは分子の内部領域若しくは末端領域に存在し得る。一般に、最も許容されるミスマッチは、末端領域、例えば、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）の５’末端及び／又は３’末端の５、４、３、若しくは２ヌクレオチド以内にある。
本明細書で使用される場合、「リボヌクレオチド」という用語は、そのペントース糖としてリボースを有するヌクレオチドを指し、これは、その２’位にヒドロキシル基を含有する。修飾リボヌクレオチドは、２’位以外の原子の１つ以上の修飾又は置換を有するリボヌクレオチドであり、リボース、リン酸基又は塩基の修飾又は置換を含む。
本明細書で使用される場合、「ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド」という用語は、（ａ）センス鎖（パッセンジャー）とアンチセンス鎖（ガイド）を有する二本鎖オリゴヌクレオチド（ここで、アンチセンス鎖又はアンチセンス鎖の一部が、標的ｍＲＮＡの切断に際してアルゴノート２（Ａｇｏ２）エンドヌクレアーゼにより使用される）又は（ｂ）単一アンチセンス鎖を有する一本鎖オリゴヌクレオチド（ここで、上記アンチセンス鎖（又は上記アンチセンス鎖の一部）が、標的ｍＲＮＡの切断に際し、Ａｇｏ２エンドヌクレアーゼにより使用される）のいずれかを指す。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、ステムループなどのループ領域を含み、これは、該用語が本明細書で定義される通りのヌクレオシドを含む。ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、例えば、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡを含み、これらは、ＲＮＡ誘導性サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）経路を介してＲＮＡ転写物の標的切断を媒介する。ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）として知られるプロセスによってｍＲＮＡの配列特異的分解を指令する。ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、細胞、例えば、哺乳動物対象などの対象内の細胞におけるＣ３の発現を低減する。一般に、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのヌクレオシドの大部分はリボヌクレオシドであるが、本明細書に詳細に記載されるように、各鎖又は両方の鎖は、１つ以上の非リボヌクレオシド、例えば、デオキシリボヌクレオシド及び／又は代替ヌクレオシドも含み得る。ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、実質的に二重らせん形態である。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの二重らせん領域の相補的な塩基対形成は、共有結合的に個別の核酸鎖のヌクレオチドの逆平行配列間で形成される。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの二重らせん領域の相補的な塩基対形成は、共有結合で連結された核酸鎖のヌクレオチドの逆平行配列間で形成される。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの二重らせん領域の相補的塩基対は、折り畳まれた単一の核酸鎖から形成されて（例えば、ヘアピンを介して）、一緒に塩基対合するヌクレオチドの相補的な逆平行配列を提供する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、互いに完全に二重らせん化される２つの共有結合的に個別の核酸鎖を含む。しかし、一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、部分的に二重らせん化され、例えば、一方又は両方の末端にオーバーハングを有する２つの共有結合的に個別の核酸鎖を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、部分的に相補的であるヌクレオチドの逆平行配列を含み、従って、１つ以上のミスマッチを有する可能性があり、これは、内部ミスマッチ又は末端ミスマッチを含み得る。
本明細書において使用される用語「センス鎖」及び「パッセンジャー鎖」は、アンチセンス鎖の領域に実質的に相補的である領域を含むＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの鎖を指す。アンチセンス鎖の領域に相補的であるセンス鎖の領域は、標的遺伝子（例えば、Ｃ３遺伝子）の一部と少なくとも８５％（例えば、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、及び１００％）同一である。例えば、センス鎖は、配列番号１２の一部と、例えば、少なくとも１０～３６ヌクレオチドにわたって、例えば、１０～３１ヌクレオチド、１０～２６ヌクレオチド、１０～２０ヌクレオチド、又は１０～１５ヌクレオチドにわたって、少なくとも８５％同一である領域を有し得る。
「低分子干渉ＲＮＡ」としても知られる「ｓｉＲＮＡ」及び「短い干渉ＲＮＡ」という用語は、約１０～５０ヌクレオチド長のＲＮＡ剤、任意選択でＲＮＡｉ剤を指し、これらの鎖は、例えば、１、２又は３つの突出した連結ヌクレオシドを含む突出末端を有し、これは、ＲＮＡ干渉を指令又は媒介することができる。天然に存在するｓｉＲＮＡは、細胞のＲＮＡｉ機構（例えば、ダイサー又はそのホモログ）によって、より長いｄｓＲＮＡ分子（例えば、＞２５連結ヌクレオシド長）から産生される。
本明細書で使用される場合、用語「鎖」は、ヌクレオチド間結合（例えば、ホスホジエステル結合、ホスホロチオエート結合）を介して互いに連結されたヌクレオチドの単一の連続した配列を指す。一部の実施形態では、鎖は、２つの自由端、例えば、５’末端及び３’末端を有する。
本明細書で使用される場合、用語「対象」は、例えば、実験、診断、予防、及び／又は治療目的のために、本開示に従う組成物を投与することができる任意の生物を指す。典型的な対象は、任意の動物（例えば、哺乳動物、例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類、及びヒト）を含む。対象は、治療を求めているか、若しくは治療が必要であるか、治療を必要としている、治療を受けている、将来治療を受ける予定であるか、又は特定の疾患若しくは状態について訓練を受けた専門家によって看護を受けているヒト又は動物であり得る。
「糖」又は「糖部分」は、フラノース環を有する天然由来の糖を含む。糖は、ヌクレオシドのフラノース環を置換することができる構造として定義される「代替糖」も含む。特定の実施形態において、代替糖は、非フラノース（又は４’－置換フラノース）環若しくは環系又は開放系である。このような構造は、６員環などの天然のフラノース環に対する単純な変化を含み、又はペプチド核酸に使用される非環系の場合のように、より複雑であってもよい。代替糖はまた、フラノース環が別の環系、例えば、モルホリノ又はヘキシトール環系で置換されている糖代替品も含み得る。モチーフを有するオリゴヌクレオチドの調製に有用な糖部分として、限定はされないが、β－Ｄ－リボース、β－Ｄ－２’－デオキシリボース、置換糖（例えば２’、５’及びビス置換糖）、４’－Ｓ－糖（例えば４’－Ｓ－リボース、４’－Ｓ－２’－デオキシリボース及び４’－Ｓ－２’置換リボース）、二環式代替糖（例えば、２’－Ｏ－ＣＨ２－４’又は２’－Ｏ－（ＣＨ２）２－４’架橋リボース由来二環糖）及び糖代替品（例えば、リボース環が、モルホリノ又はヘキシトール環系で置換されている場合など）が挙げられる。各位置で使用される複素環式塩基及びヌクレオシド間結合のタイプは様々であり、モチーフを決定する要因ではない。代替糖部分を有するほとんどのヌクレオシドにおいて、複素環式核酸塩基は、概して、ハイブリダイゼーションを可能にするように維持される。
本明細書で使用される場合、「ステムループ」という用語は、一方が５’から３’方向に読み取られ、他方が３’から５’方向に読み取られるとき、２つの領域が相補的なヌクレオチド配列を有すると共に、上記２つの領域間のヌクレオチドが不対ループを形成する、オリゴヌクレオチドの領域を指す。ステムループ領域は、ヘアピン又はヘアピンループと呼ばれることもある。
本明細書で使用される場合、「鎖」という用語は、連結されたヌクレオシドの鎖を含むオリゴヌクレオチドを指す。「核酸塩基配列を含む鎖」とは、標準的な核酸塩基命名法を用いて称される配列により表される連結ヌクレオシドの鎖を含むオリゴヌクレオチドを指す。
本明細書で使用される場合、「合成」という用語は、人工的に合成された（例えば、機械（例えば、固体核酸合成装置）を用いて）又はそれ以外では、通常、分子を産生する天然源（例えば、細胞若しくは生物）に由来しない核酸又は他の分子を指す。
本明細書で使用される場合、「標的」又は「ターゲティング」という用語は、Ｃ３遺伝子又はＣ３遺伝子産物をコードするＣ３ ｍＲＮＡに特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドを指す。例えば、当業者に公知の（例えば、アンチセンス及びＲＮＡ干渉分野において）方法によって、前記遺伝子又は前記ｍＲＮＡを（例えば、該遺伝子又はｍＲＮＡによってコードされるタンパク質のレベルを低下させることにより）阻害することができるオリゴヌクレオチドを指す。
本明細書で使用される場合、「ターゲティングリガンド」という用語は、目的の組織又は細胞の同族分子（例えば、受容体）に選択的に結合し、且つ、他の物質を目的の組織又は細胞にターゲティングさせる目的で別の物質と共役可能な分子（例えば、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ポリペプチド若しくは脂質）を指す。例えば、いくつかの実施形態では、ターゲティングリガンドは、オリゴヌクレオチドを目的の特定の組織又は細胞にターゲティングさせる目的で、オリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドを含むベクター（例えば、ウイルスベクター）と共役させることができる。一部の実施形態では、ターゲティングリガンドは、細胞表面受容体に選択的に結合する。従って、いくつかの実施形態では、ターゲティングリガンドをオリゴヌクレオチド又はベクターと共役させると、細胞の表面に発現される受容体への選択的結合及びオリゴヌクレオチド、ターゲティングリガンド及び受容体を含む複合体の細胞によるエンドソーム内在化によって、特定の細胞内へのオリゴヌクレオチドの送達が容易になる。一部の実施形態では、ターゲティングリガンドは、オリゴヌクレオチドが細胞内のターゲティングリガンドから放出されるように、細胞内在化の後又は最中に切断されるリンカーを介してオリゴヌクレオチドにコンジュゲートされる。
本明細書で使用される場合、用語「テトラループ」は、ヌクレオチドのフランキング配列のハイブリダイゼーションにより形成される隣接する二重らせんの安定性を高めるループを指す。安定性の増加は、無作為に選択されたヌクレオチド配列から成る同等長さの１組のループから平均して予想される隣接ステム二重らせんの融解温度（Ｔｍ）よりも高い隣接ステム二重らせんのＴｍの増加として検出可能である。例えば、テトラループは、１０ｍＭ ＮａＨＰＯ４において、少なくとも５０℃、少なくとも５５℃、少なくとも５６℃、少なくとも５８℃、少なくとも６０℃、少なくとも６５℃又は少なくとも７５℃の融解温度を、長さが少なくとも２塩基対の二重らせんを含むヘアピンに付与することができる。一部の実施形態では、テトラループは、スタッキング相互作用によって隣接するステム二重らせん中の塩基対を安定化し得る。さらに、テトラループ中のヌクレオチド間の相互作用として、限定はされないが、非ワトソン・クリック塩基対形成、スタッキング相互作用、水素結合、及び接触相互作用が挙げられる（Ｃｈｅｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ １９９０ Ａｕｇ．１６；３４６（６２８５）：６８０－２；Ｈｅｕｓ ａｎｄ Ｐａｒｄｉ，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９１ Ｊｕｌ．１２；２５３（５０１６）：１９１－４）。一部の実施形態では、テトラループは、３～６ヌクレオチドを含むか、又はそれらから構成され、典型的には、４～５ヌクレオチドである。特定の実施形態では、テトラループは、３つ、４つ、５つ、若しくは６つのヌクレオチドを含むか、又はそれらから構成されるが、これらは修飾されていても、されていなくてもよい（例えば、ターゲティング部分と共役していてもいなくてもよい）。一実施形態において、テトラループは、４つのヌクレオチドからなる。任意のヌクレオチドをテトラループに使用してもよく、そのようなヌクレオチドの標準的なＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ記号は、Ｃｏｒｎｉｓｈ－Ｂｏｗｄｅｎ（１９８５）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１３：３０２１－３０３０に記載されているように使用してもよい。例えば、文字「Ｎ」は、任意の塩基がその位置にあり得ることを意味するために使用され得、文字「Ｒ」は、Ａ（アデニン）又はＧ（グアニン）がその位置にあり得ることを示すために使用され得、「Ｂ」は、Ｃ（シトシン）、Ｇ（グアニン）、又はＴ（チミン）がその位置にあり得ることを示すために使用され得る。テトラループの例には、テトラループのＵＮＣＧファミリー（例えば、ＵＵＣＧ）、テトラループのＧＮＲＡファミリー（例えば、ＧＡＡＡ）、及びＣＵＵＧテトラループが含まれる。（Ｗｏｅｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．１９９０ Ｎｏｖｅｍｂｅｒ；８７（２１）：８４６７－７１；Ａｎｔａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９１ Ｎｏｖ．１１；１９（２１）：５９０１－５）。ＤＮＡテトラループの例には、テトラループのｄ（ＧＮＮＡ）ファミリー（例えば、ｄ（ＧＴＴＡ）、テトラループのｄ（ＧＮＲＡ））ファミリー、テトラループのｄ（ＧＮＡＢ）ファミリー、テトラループのｄ（ＣＮＮＧ）ファミリー、及びテトラループのｄ（ＴＮＣＧ）ファミリー（例えば、ｄ（ＴＴＣＧ））が含まれる。例えば、以下を参照されたい：Ｎａｋａｎｏ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４１（４８），１４２８１－１４２９２，２００２．ＳＨＩＮＪＩ ｅｔ ａｌ．Ｎｉｐｐｏｎ Ｋａｇａｋｋａｉ Ｋｏｅｎ Ｙｏｋｏｓｈｕ ＶＯＬ．７８ｔｈ；ＮＯ．２；ｐｇ．７３１（２０００）（それらの関連する開示のために参照により本明細書に組み込まれる）。一部の実施形態では、テトラループは、ニックテトラループ構造内に含まれる。
「治療有効量」又は「予防有効量」とは、所望の局所又は全身効果（例えば、補体経路活性化又は調節不全に起因する疾患の１つ以上の症状の治療）を生み出す量（単回又は複数回用量のいずれかで投与される）の開示のオリゴヌクレオチド組成物（例えば、ｄｓＲＮＡなどのＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を指す。本開示の方法に使用されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、そのような治療に適用可能な適正な利益／リスク比を生み出すのに十分な量で投与され得る。
本明細書で使用される場合、用語「治療する」は、既存の状態（例えば、疾患、障害）に関して対象の健康及び／若しくはウェルビーイングを改善する目的で、又は状態の発生の可能性を予防又は低減する目的で、例えば、対象への治療薬（例えば、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド）の投与による、それを必要とする対象に医療を提供する行為を指す。一部の実施形態では、治療は、対象が経験する状態（例えば、疾患、障害）の少なくとも１つの徴候、症状、若しくは寄与因子の頻度又は重症度を低減することを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の核酸又はオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を用いて、補体経路の障害の細胞的及び臨床的症状、例えば、本明細書に開示される補体経路活性化又は調節不全に関連する疾患のうちの１つ以上を制御する。
詳細な説明
本明細書には、補体経路活性化に特定の役割を果たすことが知られている補体成分（Ｃ３）をターゲティングするオリゴヌクレオチド、例えば、センス鎖及びアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドを含むＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、並びにその薬学的に許容される塩が記載される。オリゴヌクレオチドを投与して、細胞内のＣ３のレベル及び／又は活性を低下させることができる（例えば、肝細胞によって）。例えば、オリゴヌクレオチドは、インビボで投与することができ、細胞によって（例えば、肝細胞；例えば、シアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）に結合することによって）内在化され得る。細胞の内在化の後、オリゴヌクレオチドはＲＮＡ誘導性サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に結合されて、Ｃ３ ｍＲＮＡをターゲティングし、それによってＣ３ ｍＲＮＡの分解を開始し、その翻訳を阻止することができる。
補体調節不全により媒介される疾患は、多くの場合、補体の過活動の結果である。本明細書には、Ｃ３の発現レベルを低下させる本明細書に記載のオリゴヌクレオチドの投与によって、補体経路活性化又は調節不全により媒介されるか、若しくはそれに関連する疾患を治療するための方法が記載される。本明細書に記載のオリゴヌクレオチド及び組成物によって治療することができる、補体経路活性化又は調節不全により媒介されるか、若しくはそれに関連する障害の例としては、例えば、以下のものが挙げられる：皮膚障害、神経障害、腎臓障害、急性期ケア、リウマチ性障害、肺障害、皮膚科学的障害、血液学的障害、及び眼科障害、例えば、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、ＩｇＡ腎症、ループス腎炎、Ｃ３糸球体症（Ｃ３Ｇ）、皮膚筋炎／自己免疫性筋炎、全身性硬化症、脱髄性多発ニューロパチー、天疱瘡、膜性腎症、限局性分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、水疱性類天疱瘡、後発性表皮水疱症（ＥＢＡ）、粘液膜類天疱瘡、ＡＮＣＡ血管炎、低補体血症性蕁麻疹性血管炎、免疫複合体小血管炎、皮膚小血管炎、自己免疫性壊死性ミオパチー、腎臓、肝臓、心臓若しくは肺移植拒絶反応などの移植臓器の拒絶反応、例えば、慢性ＡＭＲ（ｃＡＭＲ）などの抗体関連型拒絶反応（ＡＭＲ）、抗リン脂質（ａＰＬ）抗体症候群、糸球体腎炎、喘息、密沈着性疾患（ＤＤＤ）、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ（ＲＡ）、重症難治性ＲＡ、フェルティ症候群、多発性硬化症（ＭＳ）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、脊髄損傷、虚血再灌流障害、子癇前症、急性腎障害における臓器移植後機能障害（ＤＧＦ－ＡＫＩ）、心肺バイパス関連急性腎障害、低酸素性虚血性脳症、透析誘発血栓症、高安動脈炎、再発性多発性軟骨炎、急性／予防的移植片対宿主病、慢性移植片対宿主病、ベータサラセミア、幹細胞移植関連血栓性微小血管症、胆道閉鎖症、炎症性肝疾患、ベーチェット病、虚血性脳卒中、脳内出血、強皮症、強皮症腎クリーゼ、強皮症関連間質性肺疾患（ＳＳｃ－ＩＬＤ）、鎌状赤血球症、常染色体優性多発性嚢胞腎（ＡＤＰＫＤ）、化学療法誘発性末梢神経障害（ＣＩＰＮ）、糖尿病性ニューロパチー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、地図状萎縮症、肺動脈性高血圧症、難治性重症喘息、慢性閉塞性肺疾患、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、慢性肺同種移植機能障害、嚢胞性線維症における肺病状態、化膿性汗腺炎、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＳＨ）、強直性脊椎炎、造血幹細胞移植関連血栓性細小血管症（ＨＳＣＴ－ＴＭＡ）（予防）、冠動脈疾患、アテローム性動脈硬化症、骨粗鬆症（予防）、変形性関節症、ハイリスクドルーゼン、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、間質性膀胱炎、透析誘発性補体活性化、壊疽性膿皮症、慢性心不全、自己免疫性心筋炎、鼻ポリープ症、急性及び慢性膵炎、アテローム性動脈硬化症、好酸球性食道炎、好酸球性肉芽腫症、好酸球増多症候群、創傷治癒、及び血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）。
本明細書に記載される組成物及び方法は、センス鎖及びアンチセンス鎖を含むオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を特徴とし、これは、Ｃ３遺伝子の領域に対して実質的な配列同一性を有する。
オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を用いて、例えば、それを必要とする対象（例えば、ヒト）の細胞などの細胞（例えば、肝細胞）中のＣ３のレベル及び／又は活性を低下させることにより、補体経路活性を調節することができる。全体的な設計は、補体経路のＣ３をターゲティングし、代替経路、古典経路、及びレクチン経路の他の経路の活性化（保護）をインタクトなまま残す。従って、本開示は、補体経路活性化又は調節不全により媒介される疾患若しくは障害、例えばＣ３の活性化若しくは調節不全により媒介される疾患若しくは障害を治療するための組成物及び方法を特徴とする。
補体成分３標的配列
治療利益を達成するために使用することができるＣ３発現のオリゴヌクレオチドベースの阻害剤が、本明細書に提供される。Ｃ３ ｍＲＮＡの検査（例えば、実施例３を参照）、並びにインビトロ及びインビボ試験から、Ｃ３ ｍＲＮＡの配列は、オリゴヌクレオチドベースの阻害を受けやすいため、ターゲティング配列として有用であることが見出された。例えば、Ｃ３標的配列は、参照配列ＮＭ＿０．００００６４．４（配列番号１２）を有するホモサピエンス（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）補体Ｃ３のヌクレオチド４１２１～４１４１及び７８０～７９８にそれぞれ対応する配列番号１３又は１４のいずれかに記載の配列を含み得るか、又はそれらから構成されてもよい。これらのＣ３配列は、それぞれ化合物Ａ及び化合物Ｂの標的配列、並びにそれらに対して最大８５％の配列同一性を有する本明細書に記載のそれらの変異体であり得る。化合物Ａ及びＢ（並びに本明細書に記載されるそれらの変異体）はまた、それぞれ参照配列ＸＭ＿０１５１２２６３６．２及びＸＭ＿００５５８７７１９．２を有するアカゲザル（Ｒｈｅｓｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）及びカニクイザル（Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅｓ）補体Ｃ３も有効にターゲティングし得る。さらに、Ｃ３標的配列は、化合物Ｊ（例えば、配列番号１５のセンス配列と配列番号１６のアンチセンス配列を有するＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）の標的となり得る、参照配列ＮＭ＿００９７７８．３（配列番号３２）を有するハツカネズミ（ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ）補体Ｃ３のヌクレオチド２９０３～２９２２に対応する配列番号３１のいずれかに記載される配列を含み得るか、又はそれらから構成され得る。化合物Ｊはまた、参照配列ＮＭ＿０１６９９４．２を有するドブネズミ（Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）補体Ｃ３もターゲティングし得る。Ｃ３ ｍＲＮＡのこれらの領域は、Ｃ３ ｍＲＮＡ発現及びその後のＣ３タンパク質発現を阻害する目的で、本明細書に記載されるｄｓＲＮＡ剤などのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを用いてターゲティングすることができる。
一部の実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）剤のアンチセンス鎖は、細胞内のｍＲＮＡをターゲティングして、その発現を阻害する目的で、Ｃ３ ｍＲＮＡに対して相補性の領域を有するように（例えば、Ｃ３ ｍＲＮＡの標的配列内に）設計することができる。相補性の領域は、一般に、その転写を阻害する目的でＣ３ ｍＲＮＡに対するオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）又はその鎖のアニーリングを促進するのに適切な長さ及び塩基含有量を有するものである。相補性の領域は、少なくとも１１、例えば、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９又は少なくとも２０ヌクレオチド長であり得る。例えば、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、１２～３０（例えば、１２～３０、１２～２２、１５～２５、１７～２１、１８～２７、１９～２７、又は１５～３０）ヌクレオチド長の範囲にあるＣ３ ｍＲＮＡに対する相補性の領域を有し得る。従って、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０ヌクレオチド長であるＣ３に対する相補性の領域を有し得る。一部の例において、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、１９ヌクレオチド長のＣ３ ｍＲＮＡに対して相補性の領域を有し得る。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの相補性の領域（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖）は、２０ヌクレオチド長である配列番号１２に記載の配列のヌクレオチドの連続した配列に相補的であってもよい。
特定の例において、本開示のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、配列番号１２に記載される配列に対して少なくとも部分的に相補的な相補性の領域を（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖上に）含み得る。例えば、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、配列番号１２に記載される配列に対して完全に相補的な相補性の領域を（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖上に）含み得る。（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖上の）オリゴヌクレオチドの相補性の領域は、配列番号１２に記載される配列のヌクレオチドの連続配列に対して相補的であってよく、上記配列は、１２～２０ヌクレオチド（例えば、１２～２０、１２～１８、１２～１６、１２～１４、１４～２０、１４～１８、１４～１６、１６～２０、１６～１８、又は１８～２０）長の範囲である。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドの相補性の領域（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖上の）は、１９ヌクレオチド長である配列番号１２に記載の配列の連続したヌクレオチドの配列に対して相補的であり得る。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの相補性の領域（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖）は、２０ヌクレオチド長である配列番号１２に記載の配列の連続したヌクレオチドの配列に相補的であり得る。
配列番号１２に記載の配列の連続したヌクレオチドに相補的であるオリゴヌクレオチドの相補性の領域は、アンチセンス鎖の全長の一部に及び得る。例えば、配列番号１２に記載される配列の連続したヌクレオチドに相補的であるオリゴヌクレオチドの相補性の領域は、アンチセンス鎖の全長の少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、及び少なくとも９９％）に及び得る。特定の実施形態では、配列番号１２に記載される連続したヌクレオチドに相補的であるオリゴヌクレオチドの相補性の領域は、アンチセンス鎖の全長に及び得る。
Ｃ３ ｍＲＮＡに対する相補性の領域は、Ｃ３ ｍＲＮＡの対応する配列と比較して１つ以上のミスマッチを有し得る。例えば、オリゴヌクレオチド上の相補性の領域（例えば、２０～５０ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチド、例えば、２０～２５ヌクレオチド長（例えば、２２ヌクレオチド長）のオリゴヌクレオチドは、適切なハイブリダイゼーション条件下で、Ｃ３ ｍＲＮＡと相補的な塩基対を形成する能力を維持する限り、最大１つ、最大２つ、最大３つ、最大４つ、又は最大５つのミスマッチを有し得る。或いは、オリゴヌクレオチド上の相補性の領域は、適切なハイブリダイゼーション条件下でＣ３ ｍＲＮＡと相補的な塩基対を形成する能力を維持する限り、１以下、２以下、３以下、４以下、又は５以下のミスマッチを有し得る。相補性領域に複数のミスマッチがある場合、オリゴヌクレオチドが適切なハイブリダイゼーション条件下でＣ３ ｍＲＮＡと相補的な塩基対を形成する能力を維持する限り、ミスマッチは連続して（例えば、２、３、４、又は５つ連続して）配置されるか、又は相補性の領域全体に散在し得る。例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、配列番号４の配列を有するセンスオリゴヌクレオチドと、配列番号１２の対応するＣ３配列に対して最大１、２、３、４、若しくは５つのミスマッチを有するその変異体、又は配列番号６の対応するアンチセンス配列と、配列番号４の配列に対して１、２、３、４、若しくは５個のミスマッチを有するその変異体を含み得る。
オリゴヌクレオチドの種類
本開示の方法において、Ｃ３をターゲティングするのに有用なオリゴヌクレオチドの様々な構造があり、ＲＮＡｉ、アンチセンスｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡなどが挙げられる。本明細書又は他の箇所に記載される構造のいずれかは、本明細書に記載される配列（例えば、配列番号１３又は１４のものなど、Ｃ３のホットスポット配列）を組み込むか、又はターゲティングするためのフレームワークとして使用され得る。
オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）である、本明細書に記載の組成物は、Ｃ３ ｍＲＮＡ（例えば、配列番号１２）をターゲティングする阻害性構築物（例えば、それをコードする核酸ベクター）をコードする。Ｃ３発現の発現を低減するためのオリゴヌクレオチドは、ダイサー関与の上流又は下流でＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路に参加することができる。例えば、長さが１９～２５ヌクレオチドで、１～５ヌクレオチドの３’オーバーハングを有するセンス又はアンチセンス鎖の少なくとも１つを含むオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）が開発されている（例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，３７２，９６８号明細書を参照されたい）。ダイサーによりプロセシングされて、活性ＲＮＡｉ産物を産生する、より長いオリゴヌクレオチドも開発されている（例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，８８３，９９６号明細書を参照されたい）。さらに、伸長オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）も生成されており、この場合、アンチセンス鎖及びセンス鎖のいずれか一方又は両方の５’末端若しくは３’末端のいずれか一方又は両方が、センス鎖又はアンチセンス鎖のいずれかが熱力学的安定化テトラループ構造を含むように、二重らせんターゲティング領域を超えて伸長されている（例えば、これらのオリゴヌクレオチドの開示について本明細書に参照として組み込まれる米国特許第８，５１３，２０７号明細書及び同第８，９２７，７０５号明細書、並びに国際公開第２０１００３３２２５号パンフレットを参照）。そうした構造は、分子の５’及び３’末端の一方又は両方における一本鎖伸長、並びにＲＮＡｉ伸長を含み得る。
これに加え、又は代わり、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、ダイサー関与の下流、つまり、ダイサーによる切断後に、ＲＮＡ干渉経路に参加するように設計され得る。このようなオリゴヌクレオチドは、センス鎖の３’末端に１、２、又は３ヌクレオチドを含むオーバーハングを有し得る。こうしたオリゴヌクレオチド、例えば、ｓｉＲＮＡは、標的ＲＮＡに対するアンチセンスである２２ヌクレオチドガイド鎖（例えば、配列番号１３及び１４）並びに相補的パッセンジャー鎖を含み得、そこでは、両方の鎖がアニーリングして、２０ｂｐの二重らせんと、一方又は両方の３’末端に２ヌクレオチドのオーバーハングを形成する。２３ヌクレオチドのガイド鎖及び２１ヌクレオチドのパッセンジャー鎖を有するオリゴヌクレオチドを含む、より長いオリゴヌクレオチド設計も利用可能であり、この場合、パッセンジャー鎖の３’末端とガイド鎖の５’末端に平滑末端があり、また、パッセンジャー鎖の５’末端及びガイド鎖の３’末端の分子の左側に２ヌクレオチドの３’ガイド鎖オーバーハングがある。このような分子には、２１塩基対の二重らせん領域が存在する（より長いオリゴヌクレオチドに関するそれらの開示について本明細書に参照として組み込まれる、米国特許第９，０１２，１３８号明細書、同第９，０１２，６２１号明細書、及び同第９，１９３，７５３号明細書を参照のされたい）。
本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、いずれも１７～２６（例えば、１７～２６、２０～２５、又は２１～２３）ヌクレオチド長であるセンス及びアンチセンス鎖を含み得る。例えば、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、いずれも１９～２２ヌクレオチド長であるセンス及びアンチセンス鎖を含み得る。センス鎖及びアンチセンス鎖はまた、長さが同じであってもよい。或いは、オリゴヌクレオチドは、センス若しくはアンチセンス鎖のいずれか、又はセンス及びアンチセンス鎖の両方に３’－オーバーハングが存在するような、センス及びアンチセンス鎖を含んでもよい。例えば、センス鎖、アンチセンス鎖、又はセンス及びアンチセンス鎖の両方の３’オーバーハングは、１又は２ヌクレオチド長であり得る。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２２ヌクレオチドのアンチセンス鎖と２０ヌクレオチドのセンス鎖を有し、この場合、分子の「右側」（即ち、パッセンジャー鎖の３’末端及びガイド鎖の５’末端）に平滑末端があり、且つ、分子の「左側」（即ち、パッセンジャー鎖の５’端及びガイド鎖の３’端）に２ヌクレオチド３’－ガイド鎖オーバーハングがある。こうした分子には、例えば、２０塩基対の二重らせん領域が存在し得る。
本明細書に開示される組成物及び方法と共に使用するための他のオリゴヌクレオチド設計としては、以下のものが挙げられる：例えば、１６－ｍｅｒ ｓｉＲＮＡ（例えば、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ（ｅｄ．），Ｒｏｙａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００６を参照）、ｓｈＲＮＡ（例えば、１９ｂｐ以下のステムを有する；例えば、Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０１０；６２９：１４１－１５８を参照）、平滑末端（ｂｌｕｎｔ）ｓｉＲＮＡ（例えば、１９ｂｐ長の；例えば、Ｋｒａｙｎａｃｋ ａｎｄ Ｂａｋｅｒ，ＲＮＡ Ｖｏｌ．１２，ｐ１６３－１７６（２００６）を参照）、非対称ｓｉＲＮＡ（ａｉＲＮＡ；例えば、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２６，１３７９－１３８２（２００８）を参照）、非対称の短い二重らせんｓｉＲＮＡ（例えば、Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２００９ Ａｐｒ；１７（４）：７２５－３２を参照）、フォークｓｉＲＮＡ（例えば、Ｈｏｈｊｏｈ，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ ５５７，ｉｓｓｕｅ １－３；Ｊａｎ ２００４，ｐ １９３－１９８）、一本鎖ｓｉＲＮＡ（Ｅｌｓｎｅｒ；Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３０，１０６３（２０１２））、ダンベル型環状ｓｉＲＮＡ（例えば、Ａｂｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ １２９：１５１０８－１５１０９（２００７）を参照）、並びに内部セグメント化低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ；例えば、Ｂｒａｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２００７ Ｓｅｐ；３５（１７）：５８８６－５８９７を参照）。前述の参考文献の各々は、その中の関連する開示についてその全体が参照により組み込まれる。Ｃ３の発現を低減又は阻害するために一部の実施形態で使用され得るオリゴヌクレオチド構造のさらなる非限定的な例は、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、及び低分子ｓｉＲＮＡである（Ｈａｍｉｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｍｂｏ Ｊ．，２００２，２１（１７）：４６７１－４６７９参照；また、米国特許出願公開第２００９／００９９１１５号明細書も参照されたい）。
オリゴヌクレオチド
ＲＮＡｉ経路を介してＣ３発現をターゲティングするためのオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、一般に、互いに二重らせんを形成するセンス鎖及びアンチセンス鎖を有する。オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、一本鎖又は二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）であってもよい。さらに、センス鎖及びアンチセンス鎖は、共有結合で連結されていなくてもよく；例えば、オリゴヌクレオチドは、センス鎖とアンチセンス鎖との間に切れ目（ニック）があってもよい。オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、薬学的に許容される塩の形態であってもよい。例えば、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、ナトリウム塩の形態であってもよい。
前述のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）配列は、細胞内で合成され得るＲＮＡ配列として表されるが；これらの配列は、本開示のベクターに組み込むことができる対応するＤＮＡ（例えば、ｃＤＮＡ）として表すこともできる。当業者は、ｃＤＮＡ配列が、チミジンによるウリジンの置換を除いて、ｍＲＮＡ配列と同等であり、本明細書において同じ目的、即ち、Ｃ３ ｍＲＮＡの発現を阻害するためのアンチセンスオリゴヌクレオチドの生成に使用することができることを理解するであろう。ＤＮＡの場合、アンチセンス核酸を含むポリヌクレオチドは、ＤＮＡ配列である。ＤＮＡ配列は、化合物Ａ又は化合物Ｂのアンチセンス鎖に対応するものであってもよく、それぞれ配列番号３４若しくは配列番号３５のポリヌクレオチド配列を有してもよいし、又はそれらに対して少なくとも８５％以上の配列同一性を有するものであってもよい。ＤＮＡ配列は、化合物Ａ又は化合物Ｂのセンス鎖に対応してもよく、それぞれ配列番号３３若しくは配列番号３５のポリヌクレオチド配列を有してもよいし、又はそれらに対して少なくとも８５％以上の配列同一性を有するものであってもよい。ＲＮＡベクターの場合、導入遺伝子カセットは、本明細書に記載されるアンチセンスＤＮＡ配列のＲＮＡ同等物を組み込む。
特定の実施形態では、センス鎖は、配列番号４又は配列番号５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含み得る。例えば、センス鎖は、化合物Ｂの場合と同様に、配列番号４のオリゴヌクレオチド配列を含んでもよい。他の実施形態では、センス鎖は、配列番号１又は配列番号２に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含み得る。例えば、センス鎖は、化合物Ａの場合と同様に、配列番号１のオリゴヌクレオチド配列を含み得る。
一部の実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号６に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含み得る。他の実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号３に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有する。例えば、アンチセンス鎖は、化合物Ｂの場合のように、配列番号６のオリゴヌクレオチド配列を含んでもよく、及び／又はアンチセンス鎖は、化合物Ａの場合のように、配列番号３のオリゴヌクレオチド配列を含み得る。
さらに、センス鎖は、配列番号４又は配列番号５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含んでもよく、アンチセンス鎖は、配列番号６に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有する。オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、化合物Ｂについて図２Ｂに示すように、配列番号４又は配列番号５のオリゴヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号６のオリゴヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖とを含んでいてもよい。
加えて、センス鎖は、配列番号１又は配列番号２に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含んでもよく、アンチセンス鎖は、配列番号３に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有する。さらに、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、化合物Ａについて図１Ｄ及び図１Ｅに示すように、配列番号１又は配列番号２のオリゴヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号３のオリゴヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖とを含んでいてもよい。本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、配列番号１、２、４、及び５のいずれかに記載される配列を有するセンス鎖と、配列番号３及び６から選択される相補配列を含むアンチセンス鎖とを含み得る。
さらに、センス鎖は、配列番号３７のオリゴヌクレオチド配列を含んでもよく、アンチセンス鎖は、以下に示すような配列番号３８のオリゴヌクレオチド配列を含んでもよい。
センス鎖（配列番号３７）：
５’ｍＡ－Ｓ－ｍＵ－ｍＣ－ｍＡ－ｍＡ－ｍＣ－ｍＵ－ｆＣ－ｆＡ－ｆＣ－ｆＣ－ｍＵ－ｍＧ－ｍＵ－ｍＡ－ｍＡ－ｍＵ－ｍＡ－ｍＡ－ｍＡ－ｍＧ－ｍＣ－ｍＡ－ｍＧ－ｍＣ－ｍＣ－ｍＧ－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］－ｍＧ－ｍＧ－ｍＣ－ｍＵ－ｍＧ－ｍＣ ３’
とハイブリダイズした：
アンチセンス鎖（配列番号３８）：
５’［ＭｅＰｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ－４Ｏ－ｍＵ］－Ｓ－ｆＵ－Ｓ－ｆＵ－ｆＡ－ｆＵ－ｍＵ－ｆＡ－ｍＣ－ｍＡ－ｆＧ－ｍＧ－ｍＵ－ｍＧ－ｆＡ－ｍＧ－ｍＵ－ｍＵ－ｍＧ－ｍＡ－ｍＵ－Ｓ－ｍＧ－Ｓ－ｍＧ ３’
（ｍＸは、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオチドであり、ｆＸは、２’－フルオロ－デオキシリボヌクレオチドであり、［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］は、２’－Ｏ－ＧａｌＮＡｃ修飾アデノシンであり、［Ｍｅｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ－４Ｏ－ｍＵ］は、４’－Ｏ－モノメチルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジンであり、「－」は、ホスホジエステル結合を示し、「－Ｓ－」は、図１Ｅに示すように、ホスホロチオエート結合を示す。一部の実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号３８の薬学的に許容される塩（例えば、ナトリウム塩）であり得る。一部の実施形態では、センス鎖は、配列番号３７の薬学的に許容される塩（例えば、ナトリウム塩）であり得る。
さらに、センス鎖は、配列番号１に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含んでもよく、アンチセンス鎖は、配列番号３に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含んでもよい。例えば、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、化合物Ａについて示されるように、配列番号１のオリゴヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号３のオリゴヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖とを含んでもよい。センス鎖は、配列番号４に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含んでもよく、アンチセンス鎖は、配列番号６に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含んでもよい。例えば、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、化合物Ｂについて示されるように、配列番号４のオリゴヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号６のオリゴヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖とを含んでもよい。センス鎖は、配列番号１７に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含んでもよく、アンチセンス鎖は、配列番号１８に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含んでもよい。例えば、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、化合物Ｃについて示されるように、配列番号１７のオリゴヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号１８のオリゴヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖とを含んでもよい。センス鎖は、配列番号１９に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含んでもよく、アンチセンス鎖は、配列番号２０に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含んでもよい。例えば、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、化合物Ｄについて示されるように、配列番号１９のオリゴヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号２０のオリゴヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖とを含んでもよい。センス鎖は、配列番号２１に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含んでもよく、アンチセンス鎖は、配列番号２２に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含んでもよい。例えば、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、化合物Ｅについて示されるように、配列番号２１のオリゴヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号２２のオリゴヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖とを含んでもよい。センス鎖は、配列番号２３に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含んでもよく、アンチセンス鎖は、配列番号２４に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含んでもよい。例えば、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、化合物Ｆについて示されるように、配列番号２３のオリゴヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号２４のオリゴヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖とを含んでもよい。センス鎖は、配列番号２５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含んでもよく、アンチセンス鎖は、配列番号２６に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含んでもよい。例えば、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、化合物Ｇについて示されるように、配列番号２５のオリゴヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号２６のオリゴヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖とを含んでもよい。センス鎖は、配列番号２７に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含んでもよく、アンチセンス鎖は、配列番号２８に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含んでもよい。例えば、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、化合物Ｈについて示されるように、配列番号２７のオリゴヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号２８のオリゴヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖とを含んでもよい。センス鎖は、配列番号２９に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含んでもよく、アンチセンス鎖は、配列番号３０に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含んでもよい。例えば、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、化合物Ｉについて示されるように、配列番号２９のオリゴヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号３０のオリゴヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖とを含んでもよい。センス鎖は、配列番号１５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）の配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含んでもよく、アンチセンス鎖は、配列番号１６に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８７％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、及び少なくとも９９％）配列同一性を有するオリゴヌクレオチド配列を含んでもよい。例えば、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、化合物Ｊについて示すように、配列番号１５のオリゴヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号１６のオリゴヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖とを含んでもよい。センス鎖及びアンチセンス鎖ペアの例については、表１を参照されたい。
オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、センス鎖とアンチセンス鎖との間に二重らせん領域を含む。センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重らせんは、１０～３０ヌクレオチド長（例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、及び３０ヌクレオチド長）であり得る。従って、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重らせんは、１５～２５ヌクレオチド長（例えば、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、及び２５ヌクレオチド長）であってよい。一部の実施形態では、二重らせん領域は、２０ヌクレオチド長であり得る。
アンチセンス鎖と二重らせんを形成するセンス鎖上の領域は、配列番号２及び５のいずれかのオリゴヌクレオチド配列と少なくとも８５％同一（例えば、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上）であるヌクレオチド配列を有し得る。例えば、アンチセンス鎖と二重らせんを形成するセンス鎖上の領域は、配列番号２及び５のいずれかのオリゴヌクレオチド配列を有し得る。
さらに、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重らせんは、センス鎖及び／又はアンチセンス鎖の全長に及んでいなくてもよい。
オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、２２ヌクレオチドより長いセンス鎖（例えば、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９又は４０ヌクレオチド長）、例えば３６ヌクレオチドセンス鎖と、１８～３６ヌクレオチド長のアンチセンス鎖、例えば、２２ヌクレオチドアンチセンス鎖とを含み得る。オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、ダイサー酵素により作用されると、その結果、成熟ＲＩＳＣに組み込まれたアンチセンス鎖が得られるような長さを有する。
本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、一方の５’末端が他方の５’末端と比較して熱力学的に安定性が低いものを有し得る。本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、センス鎖の３’末端における平滑末端と、アンチセンス鎖の３’末端におけるオーバーハングを含む非対称オリゴヌクレオチドであり得る。アンチセンス鎖上の３’オーバーハングは、１～８ヌクレオチド長（例えば、１、２、３、４、５、６、７又は８ヌクレオチド長）であり得る。例えば、アンチセンス鎖上の３’オーバーハングは、２ヌクレオチド長であってもよい。典型的には、ＲＮＡｉのためのオリゴヌクレオチドは、アンチセンス、ガイド、鎖の３’末端に２ヌクレオチドオーバーハングを有する；しかし、他のオーバーハングも可能である。他の実施形態では、３’オーバーハングは、１～６ヌクレオチド、任意選択で、１～５、１～４、１～３、１～２、２～６、２～５、２～４、２～３、３～６、３～５、３～４、４～６、４～５、３～５、５～６ヌクレオチド、又は１、２、３、４、５、若しくは６ヌクレオチドの長さを有し得る。いくつかの例では、オリゴヌクレオチドは、５’末端にオーバーハングを有し得る。オーバーハングは、１～６ヌクレオチド、任意選択で１～５、１～４、１～３、１～２、２～６、２～５、２～４、２～３、３～６、３～５、３～４、４～６、４～６、４～５、３～４、４～６、４～５、５～６ヌクレオチド、又は１、２、３、４、５若しくは６ヌクレオチドの長さを含む５’オーバーハングであってもよい。
アンチセンス鎖の３’末端にある２つの末端ヌクレオチドを修飾してもよい。特定の実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端にある２つの末端ヌクレオチドは、標的Ｃ３ ｍＲＮＡと相補的であり得る。或いは、アンチセンス鎖の３’末端にある２つの末端ヌクレオチドは、標的Ｃ３ ｍＲＮＡと相補的でなくてもよい。一部の実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端にある２つの末端ヌクレオチドは、ＧＧであり得る。典型的には、オリゴヌクレオチドの各３’末端にある２つの末端ＧＧヌクレオチドの一方又は両方は、標的と相補的ではない。
センス鎖とアンチセンス鎖との間には、相補性に１つ以上（例えば、１、２、３、４、５）のミスマッチが存在し得る。センス鎖とアンチセンス鎖との間に２つ以上のミスマッチがある場合、それらは連続して（例えば、連続して２つ、３つ若しくはそれ以上）位置するか、又は相補性の領域全体に散在し得る。例えば、センス鎖の３’末端は、１つ以上のミスマッチを含み得る。従って、２つのミスマッチがセンス鎖の３’末端に組み込まれ得る。オリゴヌクレオチドのセンス鎖の３’末端におけるセグメントの塩基ミスマッチ又は不安定化は、恐らくダイサーによるプロセシングの促進によって、ＲＮＡｉ中の合成二重らせんの効力を改善する可能性がある。
一部の実施形態では、配列表に提示される配列は、オリゴヌクレオチド又は他の核酸の構造を表す上で参照され得ることを理解すべきである。そのような実施形態において、実際のオリゴヌクレオチド又は他の核酸は、１つ以上の代替ヌクレオチド（例えば、ＤＮＡヌクレオチドのＲＮＡ対応物若しくはＲＮＡヌクレオチドのＤＮＡ対応物）並びに／或いは指定配列と本質的に同じ又は類似の相補的特性を保持しながら、指定配列と比較して、１つ以上の修飾ヌクレオチド及び／又は１つ以上の修飾ヌクレオチド間結合及び／又は１つ以上の他の修飾を有し得る。
アンチセンス鎖
オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖は、ガイド鎖と呼ばれることもある。例えば、アンチセンス鎖が、ＲＮＡ誘導性サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に関与して、アルゴノートタンパク質に結合するか、又は１つ以上の類似因子に関与若しくは結合して、標的遺伝子の直接サイレンシングを指令することができれば、それは、ガイド鎖と称され得る。
特定の実施形態では、アンチセンス鎖は、センス鎖よりもヌクレオチド長が少ない。いくつかの例では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、１０～４０ヌクレオチド（例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、及び４０ヌクレオチド）長を含むアンチセンス鎖を有し得る。従って、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、１５～３０ヌクレオチド（例えば、１５、１６、１７、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、及び３０ヌクレオチド）長を含むアンチセンス鎖を有し得る。例えば、アンチセンス鎖は、２０～２５ヌクレオチド（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、及び２５ヌクレオチド）長を含み得る。特定の実施形態では、アンチセンス鎖は、２２ヌクレオチド長であり得る。
本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、配列番号１２の配列に相補的である長さの１２～２２ヌクレオチド（例えば、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、及び２２ヌクレオチド）の間の連続配列を含むアンチセンス鎖を含み得る。例えば、オリゴヌクレオチドは、配列番号１２の配列に相補的である長さの１５～２１ヌクレオチド（例えば、１５、１６、１７、１８、１９、２０、及び２１ヌクレオチド）の連続配列を含むアンチセンス鎖を含み得る。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１２の配列に相補的である１９ヌクレオチド長の連続配列を有するアンチセンス鎖を含み得る。
本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、配列番号３又は６のいずれかの配列を有するアンチセンス鎖を含み得る。一部の実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、図２Ｂに示される化合物Ｂのように、配列番号６のアミノ酸配列を有するアンチセンス鎖を含み得る。一部の実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号６の薬学的に許容される塩（例えば、ナトリウム塩）であり得る。配列番号６は、図１Ｂに示すような化学構造を有していてもよい。或いは、アンチセンス鎖は、図１Ｄ及び図１Ｅに示される化合物Ａのように、配列番号３の配列を有していてもよい。一部の実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号３の薬学的に許容される塩（例えば、ナトリウム塩）であり得る。
加えて、アンチセンス鎖の５’末端の第１位はウリジンであり得る。ウリジンは、リン酸類似体を含んでもよい；例えば、ウリジンは、４’－Ｏ－モノメチルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジンであってもよい。
センス鎖
オリゴヌクレオチドのセンス鎖は、パッセンジャー鎖と呼ばれることもある。特定の実施形態では、パッセンジャー鎖は、ガイド鎖よりも長さでヌクレオチド数が多い。いくつかの例では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、１０～４５ヌクレオチド（例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、及び４５ヌクレオチド）長を含むセンス鎖を有し得る。従って、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、２０～５０ヌクレオチド（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、及び５０ヌクレオチド）長を含むセンス鎖を有し得る。特定の実施形態では、センス鎖は、２０ヌクレオチド長であり得る。他の実施形態では、センス鎖は、３６ヌクレオチド長であり得る。
オリゴヌクレオチドは、配列番号１２の配列に対して７～３６ヌクレオチド（例えば、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、及び３６ヌクレオチド）長の連続配列を含むセンス鎖を有し得る。従って、センス鎖は、配列番号１２の１０～３０ヌクレオチド（例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、及び３０ヌクレオチド）長の連続配列を含み得る。一部の実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、配列番号１２の配列に対して連続したヌクレオチドの配列を含むセンス鎖を含んでもよく、これは、１９ヌクレオチド長である。
センス鎖は、その３’末端にステムループを含み得る。一部の実施形態では、センス鎖は、その５’末端にステムループを含む。ステムループを含むセンス鎖は、１０～５０ヌクレオチド長（例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、及び５０ヌクレオチド長）であってよい。従って、ステムループを含むセンス鎖は、２０～４０ヌクレオチド長（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、及び４０ヌクレオチド長）であり得る。例えば、ステムループを含むセンス鎖は、３６ヌクレオチド長であり得る。
さらに、センス鎖上のステムループ領域は、それ自体と二重らせん領域を形成し得る。ステムループに含まれる二重らせん領域は、長さが１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又は１４ヌクレオチド長であり得る。例えば、ステムループに含まれる二重らせん領域は、６ヌクレオチド長であってもよい。ステムループは、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドに分解（酵素分解など）に対する保護を賦与することができ、標的細胞への送達のためのターゲティング特性を促進し得る。例えば、ループは、オリゴヌクレオチドの遺伝子発現阻害活性に実質的に影響を与えることなく改変を行うことができる付加ヌクレオチドを提供し得る。特定の実施形態において、センス鎖が（例えば、その３’末端で）Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として記載されるステムループを含む、オリゴヌクレオチドが本明細書に提供され、ここで、Ｓ１は、Ｓ２に対して相補的であり、Ｌは、Ｓ１とＳ２の間の最大１０ヌクレオチド長（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０ヌクレオチド長）のループを形成する。従って、Ｓ１とＳ２の間のループは、本明細書に記載されるように、４ヌクレオチド長であり、テトラループを形成し得る。一部の実施形態では、Ｓ１領域は、６ヌクレオチド長であり、Ｓ２領域は、６ヌクレオチド長であり、Ｌ領域は、４ヌクレオチドテトラループである。
オリゴヌクレオチドのセンス鎖（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、ステムループ領域と、アンチセンス鎖との二重らせんを形成する領域を含み得る。ステムループ領域は、配列番号７のオリゴヌクレオチド配列と少なくとも８５％（例えば、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）同一であるヌクレオチド配列を含み得る。一部の実施形態では、ステムループ領域は、配列番号７のオリゴヌクレオチド配列を有する。
ステムループのループ（Ｌ）は、テトラループであってもよい（例えば、ニックテトラループ構造内）。ステムループのループは、配列番号８の塩基配列を有していてもよい。テトラループは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、及びこれらの組合せを含み得る。典型的には、ステムループのループは、４～５ヌクレオチドを有する。しかし、一部の実施形態では、ステムループのループは、３～６ヌクレオチドを含み得る。例えば、ステムループのループは、３、４、５、又は６ヌクレオチドを含み得る。ステムループのループは、グアノシンとアデノシン核酸残基の組合せを含んでもよい。
本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、配列番号１、２、４、及び５のいずれか１つのポリヌクレオチド配列を有するセンス鎖配列を含み得る。センス鎖は、図２Ｂに示される化合物Ｂのように、配列番号４の配列を有していてもよい。配列番号４は、図１Ａに示すような化学構造を有し得る。一部の実施形態では、センス鎖は、配列番号４の薬学的に許容される塩（例えば、ナトリウム塩）であってもよい。或いは、センス鎖は、図１Ｄ及び図１Ｅに示される化合物Ａのように、配列番号１の塩基配列を有していてもよい。一部の実施形態では、センス鎖は、配列番号１の薬学的に許容される塩（例えば、ナトリウム塩）であり得る。
オリゴヌクレオチド修飾
オリゴヌクレオチドは、特異性、安定性、送達、バイオアベイラビリティ、ヌクレアーゼ分解からの耐性、免疫原性、塩基対形成特性、ＲＮＡ分布及び細胞取込み並びに治療若しくは研究用途に関連する他の特徴を改善又は制御するために、様々な方法で修飾され得る（Ｂｒａｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２００９，３７，２８６７－２８８１；Ｂｒａｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，３（２０１２）：１－２２）。従って、一部の実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドは、１つ以上の適切な修飾を含み得る。修飾ヌクレオチドは、その塩基又は核酸塩基、糖（例えば、リボース、デオキシリボース）、又はリン酸基に修飾を有し得る。
オリゴヌクレオチド上の修飾の数及びそれらのヌクレオチド修飾の位置は、オリゴヌクレオチドの特性に影響を及ぼし得る。例えば、オリゴヌクレオチドは、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）若しくは類似の担体にそれらを共役させるか、又はそれらを包含することによって、インビボで送達され得る。しかし、オリゴヌクレオチドが、ＬＮＰ又は類似の担体によって保護されていないとき、ヌクレオチドの少なくとも一部が修飾されることが有利である場合もある。従って、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドのいずれかの特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドのヌクレオチドの全部、又は実質的に全部が修飾される。特定の実施形態では、ヌクレオチドの半分超が修飾される。他の実施形態では、ヌクレオチドの半分未満が修飾される。通常、直接（ｎａｋｅｄ）送達の場合、全ての糖が２’位で修飾される。これらの修飾は、可逆的又は不可逆的であり得る。本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、所望の特性（例えば、酵素分解からの保護、インビボ投与後に所望の細胞をターゲティングする能力、及び／又は熱力学的安定性）をもたらすのに十分な数及びタイプの修飾ヌクレオチドを有し得る。
糖修飾
本明細書では糖類似体とも呼ばれる修飾糖は、修飾されたデオキシリボース又はリボース部分を含み、この場合、糖の２’、３’、４’、及び／又は５’炭素位置に１つ以上の修飾が存在する。修飾糖はまた、ロック核酸（「ＬＮＡ」）（Ｋｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９９８），Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ５４，３６０７－３６３０を参照）、アンロック核酸（「ＵＮＡ」）（Ｓｎｅａｄ ｅｔ ａｌ．（２０１３），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ－Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ，２，ｅ１０３を参照）、及び架橋核酸（「ＢＮＡ」）（Ｉｍａｎｉｓｈｉ ａｎｄ Ｏｂｉｋａ（２００２），Ｔｈｅ Ｒｏｙａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１６５３－１６５９を参照）に存在するものなどの非天然代替炭素構造を含み得る。Ｋｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｎｅａｄ ｅｔ ａｌ．，及びＩｍａｎｉｓｈｉ及びＯｂｉｋａは、糖修飾に関するそれらの開示について本明細書に参照として組み込まれる。
糖でのヌクレオチド修飾は、２’－修飾を含み得る。２’－修飾は、２’－アミノエチル、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル、及び２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸であり得る。典型的には、修飾は、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、又は２’－Ｏ－メトキシエチルである。一部の実施形態では、修飾は、２’－フルオロ及び／又は２’－Ｏ－メチルである。一部の実施形態では、２’－フルオロ修飾は、２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドであり、且つ／又は２’－Ｏ－メチル修飾は、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドである。糖における修飾は、糖環の修飾を含んでもよく、糖環の１つ以上の炭素の修飾を有してもよい。例えば、ヌクレオチドの糖の修飾は、糖の１’－炭素若しくは４’－炭素に連結された糖の２’－酸素、又はエチレン若しくはメチレン架橋を介して１’－炭素若しくは４’－炭素に連結された２’－酸素を含み得る。特定の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、２’－炭素－３’－炭素結合がない非環状糖を有してもよい。一部の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、チオール基を、例えば、糖の４’位に有し得る。
本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド（例えば、少なくとも１つ、少なくとも５つ、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、又はそれ以上）を含み得る。例えば、オリゴヌクレオチドのセンス鎖は、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド（例えば、少なくとも１つ、少なくとも５つ、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、又はそれ以上）を含み得る。また、例えば、オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖は、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド（例えば、少なくとも１つ、少なくとも５つ、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、又はそれ以上）を含み得る。
特定の実施形態において、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、２０～５０（例えば、２０～３０、２４～３０、２８～３０、３０～４０、３４～４０、３８～４４、４４～５０、及び４８～５０）の修飾ヌクレオチドを含有し得る。
オリゴヌクレオチドのセンス鎖の全てのヌクレオチドが修飾されてもよい。さらに、オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖の全てのヌクレオチドが修飾されてもよい。一部の実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方を含むオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）のヌクレオチドが全て修飾される。修飾ヌクレオチドは、２’－修飾（例えば、２’－フルオロ又は２’－Ｏ－メチル）であってもよい。ヌクレオチドに対する２’－修飾は、２’－フルオロ及び／又は２’－Ｏ－メチルであってもよく、任意選択で、２’－フルオロ修飾は、２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドであり、且つ／又は２’－Ｏ－メチル修飾は、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドである。
本開示は、異なる修飾パターンを有するオリゴヌクレオチドを提供する。センス鎖及びアンチセンス鎖を含むオリゴヌクレオチドは、４０～５０（例えば、４１、２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、及び４９）の２’－Ｏ－メチル修飾を含み得る。修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１又は４のいずれかのヌクレオチド配列を有するセンス鎖と、配列番号３又は６のいずれかのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖とを含み得る（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、配列番号４のセンス鎖と配列番号６のアンチセンス鎖とを有してもよいし、又はＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、配列番号１のセンス鎖と配列番号３のアンチセンス鎖を有してもよい）。一部の実施形態では、これらのオリゴヌクレオチドについて、センス鎖の１、２、３、４、５、６、７、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、３１、３２、３３、３４、３５、及び３６位のうちの１つ以上、及び／又はアンチセンス鎖の１、６、８、９、１１、１２、１３、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、及び２２位のうちの１つ以上が、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドで修飾されている。一部の実施形態では、センス鎖の１、２、３、４、５、６、７、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、３１、３２、３３、３４、３５、及び３６位の全て、並びにアンチセンス鎖の１、６、８、９、１１、１２、１３、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、及び２２位の全てが、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドで修飾されている。他の実施形態では、センス鎖の１、２、４、５、６、７、１１、１４、１５、１６、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、３１、３２、３３、３４、３５、及び３６位のうちの１つ以上、並びに／又はアンチセンス鎖の１、６、９、１１、１３、１５、１７、１８、２０、２１、及び２２位のうちの１つ以上が、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドで修飾されている。特定の実施形態では、センス鎖の１、２、４、５、６、７、１１、１４、１５、１６、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、３１、３２、３３、３４、３５、及び３６位の全て、及び／又はアンチセンス鎖の１、６、９、１１、１３、１５、１７、１８、２０、２１、及び２２位の全てが、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドで修飾されている。
センス鎖及びアンチセンス鎖を含むオリゴヌクレオチドは、５～１５（例えば、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、及び１４）の２’－フルオロ修飾を有し得る。これらのオリゴヌクレオチドの場合、センス鎖の８、９、１０、１１、１２、１３、及び１７位のうちの１つ以上、並びに／又はアンチセンス鎖の２、３、４、５、７、１０、１４、１６、及び１９位のうちの１つ以上が、２’－フルオロ修飾ヌクレオシドで修飾されてもよい。例えば、センス鎖の８、９、１０、及び１１位の全て、並びに／又はアンチセンス鎖の２、３、４、５、７、１０、及び１４位の全てが、２’－フルオロ修飾ヌクレオシドで修飾されてもよい。他の実施形態では、センス鎖の３、８、１０、１２、１３、及び１７位のうちの１つ以上、並びに／又はアンチセンス鎖の２、３、４、５、７、８、１０、１２、１４、１６、及び１９位のうちの１つ以上が修飾されてもよい。別の例では、センス鎖の３、８、９、１０、１２、１３、及び１７位の全て、並びに／又はアンチセンス鎖の２、３、４、５、７、８、１０、１２、１４、１６、及び１９位の全てが、２’－フルオロ修飾ヌクレオシドで修飾されてもよい。
配列番号１の配列を有するセンス鎖、及び配列番号３の配列を有するアンチセンス鎖を含むオリゴヌクレオチドの場合、センス鎖の１～７位、１２～２７、及び３１～３６位のうちの１つ以上、並びに／又はアンチセンス鎖の１、６、８、９、１１～１３、及び１５～２２位のうちの１つ以上が、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオシドで修飾されてもよい。さらに、センス鎖の１～７、１２～２７、及び３１～３６位の全て、並びに／又はアンチセンス鎖の１、６、８、９、１１～１３、及び１５～２２位のうちの１つ以上が、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオシドで修飾されてもよい。配列番号１の配列を有するセンス鎖と、配列番号３の配列を有するアンチセンス鎖を有するオリゴヌクレオチドの場合、センス鎖の８～１１位の１つ以上、並びにアンチセンス鎖の２、３、４、５、７、１０、及び１４位のうちの１つ以上が、２’－フルオロ修飾ヌクレオシドで修飾されてもよい。従って、センス鎖の８～１１位の全て、及びアンチセンス鎖の２、３、４、５、７、１０、及び１４位の全てが、２’－フルオロ修飾ヌクレオシドで修飾されていてもよい。
例えば、配列番号１の配列を有するセンス鎖と、配列番号３の配列を有するアンチセンス鎖を有するオリゴヌクレオチドの場合、センス鎖の１～７、１２～２７、及び３１～３６位の全て、並びに／又はアンチセンス鎖の１、６、８、９、１１～１３、及び１５～２２位のうちの１つ以上が、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオシドで修飾されていてもよく；センス鎖の８～１１位の全て、並びにアンチセンス鎖の２、３、４、５、７、１０、及び１４位の全てが２’－フルオロで修飾されてもよく、センス鎖の化学構造は図１Ａに、アンチセンス鎖は図１Ｂに示され、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、図１Ｃ－１及び図１Ｃ－２に示される。
配列番号４の配列を有するセンス鎖と、配列番号６の配列を有するアンチセンス鎖を含むオリゴヌクレオチドの場合、センス鎖の１、２、４、５、６、７、１１、１４、１５、１６、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、３１、３２、３３、３４、３５、及び３６位のうちの１つ以上、並びに／又はアンチセンス鎖の１、６、９、１１、１３、１５、１７、１８、２０、２１、及び２２位のうちの１つ以上は、２’－Ｏ－メチルで修飾されてもよい。一部の実施形態では、センス鎖の１、２、４、５、６、７、１１、１４、１５、１６、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、３１、３２、３３、３４、３５、及び３６位の全て、並びにアンチセンス鎖の１、６、９、１１、１３、１５、１７、１８、２０、２１、及び２２位の全てが、２’－Ｏ－メチルで修飾され得る。さらに、配列番号４の配列を有するセンス鎖と、配列番号６の配列を有するアンチセンス鎖を有するオリゴヌクレオチドの場合、センス鎖の３、８、９、１０、１２、１３、１７位のうちの１つ以上、並びに／又はアンチセンス鎖の２、３、４、５、７、８、１０、１２、１４、１６、及び１９のうちの１つ以上は、２’－フルオロで修飾されていてもよい。一部の実施形態では、センス鎖の３、８、９、１０、１２、１３、及び１７位の全て、並びにアンチセンス鎖の２、３、４、５、７、８、１０、１２、１４、１６、及び１９位の全てが、２’－フルオロで修飾される。例えば、配列番号４の配列を含むセンス鎖と配列番号６の配列を有するアンチセンス鎖を有するオリゴヌクレオチドの場合、センス鎖の１、２、４、５、６、７、１１、１４、１５、１６、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、３１、３２、３３、３４、３５、及び３６位の全て、並びにアンチセンス鎖の１、６、９、１１、１３、１５、１７、１８、２０、２１、及び２２位の全てが、２’－Ｏ－メチルで修飾されていてもよく；センス鎖の３、８、９、１０、１２、１３、及び１７位の全て、並びにアンチセンス鎖の２、３、４、５、７、８、１０、１２、１４、１６、及び１９位の全てが、２’－フルオロで修飾されてもよい；センス鎖及びアンチセンス鎖の化学構造を図２Ａ－１及び図２Ａ－２に示す。
一部の実施形態では、末端３’末端基（例えば、３’－ヒドロキシル）は、リン酸基又は他の基で修飾されてもよく、これは、例えば、リンカー、アダプター、若しくは標識を結合するために、又はオリゴヌクレオチドを別の核酸に直接ライゲーションするために使用することができる。
５’末端リン酸塩
オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）の５’末端リン酸基は、アルゴノート２との相互作用を増強し得る。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、アンチセンス鎖の５’末端の第１位にウリジンを含む。しかし、５’－リン酸基を有するオリゴヌクレオチドは、ホスファターゼ又は他の酵素による分解を受けやすく、インビボでのバイオアベイラビリティを制限する可能性がある。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、そのような分解に対して耐性である５’リン酸塩の類似体を含む。そのため、アンチセンス鎖の５’末端のウリジンは、リン酸類似体を含み得る。リン酸類似体は、オキシメチルホスホネート、ビニルホスホネート、又はマロニルホスホネートであってよい。さらに、オリゴヌクレオチド鎖の５’末端は、天然５’－リン酸基の静電的性質及び立体特性を模倣する化学部分（「リン酸模倣物」）に結合し得る（Ｐｒａｋａｓｈ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０１５ Ｍａｒ ３１；４３（６）：２９９３－３０１１を参照のこと；尚、リン酸類似体に関するその内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。５’末端に結合することができる多くのリン酸模倣体が開発されている（米国特許第８，９２７，５１３号明細書を参照のこと；尚、リン酸塩類似体に関するその内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。オリゴヌクレオチドの５’末端について他の修飾が開発されている（国際公開第２０１１／１３３８７１号パンフレットを参照のこと；リン酸類似体に関するその内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。特定の実施形態では、ヒドロキシル基は、オリゴヌクレオチドの５’末端に結合していてもよい。
オリゴヌクレオチドは、糖の４’－炭素位置にリン酸類似体を有してもよく、これは、「４’－リン酸類似体」と呼ばれる。例えば、国際公開第２０１８／０４５３１７号パンフレット（尚、リン酸塩類似体に関するその内容は、参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、５’末端ヌクレオチドに４’－リン酸類似体を含み得る。一部の実施形態では、リン酸塩類似体は、オキシメチル基の酸素原子が糖部分に（例えば、その４’－炭素で）結合しているオキシメチルホスホネート、又はその類似体である。他の実施形態において、４’－リン酸類似体は、チオメチルホスホネート又はアミノメチルホスホネートであり、チオメチル基の硫黄原子又はアミノメチル基の窒素原子が糖部分又はその類似体の４’－炭素に結合している。特定の実施形態において、４’－リン酸類似体は、オキシメチルホスホネートである。一部の実施形態では、オキシメチルホスホネートは、式－Ｏ－ＣＨ２－ＰＯ（ＯＨ）２又は－Ｏ－ＣＨ２－ＰＯ（ＯＲ）２によって表され、ここで、Ｒは、Ｈ、ＣＨ３、アルキル基、ＣＨ２ＣＨ２ＣＮ、ＣＨ２ＯＣＯＣ（ＣＨ３）３、ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２Ｓｉ（ＣＨ３）３、又は保護基から独立して選択される。特定の実施形態において、アルキル基は、ＣＨ２ＣＨ３である。より典型的には、Ｒは、Ｈ、ＣＨ３、又はＣＨ２ＣＨ３から独立して選択される。一部の実施形態では、Ｒは、ＣＨ３である。一部の実施形態では、４’－リン酸類似体は、５’－メトキシホスファネート－４’－オキシである。一部の実施形態では、４’－リン酸類似体は、４’－（メチルメトキシホスホネート）である。一部の実施形態では、リン酸類似体は、４’－Ｏ－モノメチルホスホネート類似体である。
一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドに結合したリン酸塩類似体は、メトキシホスホネート（ＭＯＰ）である。オリゴヌクレオチドに結合したリン酸類似体は、５’モノメチル保護ＭＯＰであってもよい。一部の実施形態では、例えば、アンチセンス鎖の第１位に、リン酸類似体を含む以下のウリジンヌクレオチド：
を使用してもよく、その修飾ヌクレオチドは、［ＭｅＰｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ－４Ｏ－ｍＵ］又は５’－メトキシ，ホスホネート－４’オキシ－２’－Ｏ－メチルウリジンと呼ばれる。５’－メトキシ，ホスホネート－４’オキシ－２’－Ｏ－メチルウリジンは、アンチセンス鎖の５’末端側の最初のヌクレオチドであってもよい。例えば、配列番号３又は６のいずれかの５’末端側の第１ヌクレオチドは、５’－メトキシ，ホスホネート－４’オキシ－２’－Ｏ－メチルウリジンであり得る。
修飾ヌクレオシド間結合
オリゴヌクレオチドにおけるリン酸修飾又は置換は、少なくとも１つ（例えば、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも５つ、又は少なくとも６つ）の修飾ヌクレオチド間結合を含むオリゴヌクレオチドをもたらし得る。本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つは、１～１０（例えば、１～１０、２～８、４～６、３～１０、５～１０、１～５、１～３又は１～２）の修飾ヌクレオチド間結合を含み得る。例えば、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個の修飾ヌクレオチド間結合を含み得る。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、５つの修飾ヌクレオチド間結合を含み得る。例えば、オリゴヌクレオチドのセンス鎖は、１つの修飾ヌクレオチド間結合を含んでもよく、アンチセンス鎖は、４つの修飾ヌクレオチド間結合を含んでもよい。
修飾ヌクレオチド間結合は、ホスホロジチオエート結合、ホスホロチオエート結合、ホスホトリエステル結合、チオノアルキルホスホネート結合、チオンアルキルホスホトリエステル結合、ホスホロアミダイト結合、ホスホン酸結合又はボラノリン酸結合であってよい。本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つの修飾ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合であってもよい。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの全ての修飾ヌクレオチド間結合が、ホスホロチオエート結合であり得る。
本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、センス鎖の１及び２位、アンチセンス鎖の１及び２位、アンチセンス鎖の２及び３位、アンチセンス鎖の２０及び２１位、並びにアンチセンス鎖の２１及び２２位のうちの１つ以上の間にホスホロチオエート結合を有し得る。例えば、オリゴヌクレオチドのセンス鎖は、センス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の２位と３位、アンチセンス鎖の２０位と２１位、並びにアンチセンス鎖の２１位と２２位の間にホスホロチオエート結合を有していてもよい。従って、配列番号１又は４の配列を有するセンス鎖は、１位と２位の間にホスホロチオエート結合を有してもよく、配列番号３又は６の配列を有するアンチセンス鎖は、１位と２位、２位と３位、２０位と２１位、及び２１位と２２位の間にホスホロチオエート結合を有してもよい。
塩基修飾
本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾核酸塩基を有し得る。本明細書において塩基類似体とも呼ばれる修飾核酸塩基は、ヌクレオチド糖部分の１’位に連結されていてもよい。修飾核酸塩基は、窒素塩基であってもよい。特定の実施形態では、修飾核酸塩基は、窒素原子を含有してもよい。例えば、米国公開特許出願第２００８／０２７４４６２号明細書を参照されたい（尚、修飾核酸塩基に関するその内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。修飾ヌクレオチドはまた、ユニバーサル塩基も含み得る。しかし、特定の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、核酸塩基（例えば、非塩基性）を含有しない場合もある。
一部の実施形態では、ユニバーサル塩基は、修飾ヌクレオチド中のヌクレオチド糖部分の１’位、又はヌクレオチド糖部分置換物における同等位置に位置する複素環部分であり、これは、二重らせん中に存在する場合、二重らせんの構造を実質的に変化させることなく、２種以上の塩基と向かい合って位置し得る。一部の実施形態では、標的核酸に対して完全に相補的である参照一本鎖核酸（例えば、オリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチド）と比較して、ユニバーサル塩基を含む一本鎖核酸は、相補的核酸と一緒に形成された二重らせんより低いＴｍを有する標的核酸と二重らせんを形成する。しかし、一部の実施形態では、ユニバーサル塩基が１塩基で置換されて、単一のミスマッチを生成する参照一本鎖核酸と比較して、ユニバーサル塩基を含む一本鎖核酸は、ミスマッチ塩基を含む核酸と一緒に形成された二重らせんよりも高いＴｍを有する標的核酸と二重らせんを形成する。ユニバーサル結合ヌクレオチドの非限定的な例としては、イノシン、１－β－Ｄ－リボフラノシル－５－ニトロインドール、及び／又は１－β－Ｄ－リボフラノシル－３－ニトロピロールが挙げられる（以下を参照：米国特許出願公開第２００７／０２５４３６２号明細書；Ｖａｎ Ａｅｒｓｃｈｏｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９５ Ｎｏｖ １１；２３（２１）：４３６３－７０；Ｌｏａｋｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９５ Ｊｕｌ １１；２３（１３）：２３６１－６；Ｌｏａｋｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９４ Ｏｃｔ １１；２２（２０）：４０３９－４３。上記文献の各々は、塩基修飾に関するその開示について、本明細書に参照として組み込まれる）。
可逆的修飾
標的細胞に到達する前に、オリゴヌクレオチドをインビボ環境から保護するため特定の修飾を実施することはできるが、そうした修飾は、標的細胞のサイトゾルに到達すると、オリゴヌクレオチドの効力又は活性を低下させる可能性がある。分子が細胞の外側で望ましい特性を保持するように、可逆的修飾を実施することができ、それらは、後に、細胞のサイトゾル環境に進入すると除去される。可逆的修飾は、例えば、細胞内酵素の作用により、又は細胞内部の化学的条件により（例えば、細胞内グルタチオンによる還元を介して）除去することができる。
可逆的に修飾されたヌクレオチドは、グルタチオン感受性部分を含み得る。典型的には、核酸分子は、環状ジスルフィド部分で化学修飾されて、ヌクレオチド間二リン酸結合によって生成された負電荷をマスクすると共に、細胞の取込み及びヌクレアーゼ耐性を改善することができる。以下を参照：Ｔｒａｖｅｒｓａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．（「Ｔｒａｖｅｒｓａ」）に初め譲渡された米国特許出願公開第２０１１／０２９４８６９号明細書、Ｓｏｌｓｔｉｃｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｌｔｄ．（「Ｓｏｌｓｔｉｃｅ」）に譲渡されたＰＣＴ公開番号：国際公開第２０１５／１８８１９７号パンフレット、Ｍｅａｄｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１４，３２：１２５６－１２６３（「Ｍｅａｄｅ」）、Ｍｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ ＆ Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐに譲渡されたＰＣＴ公開番号：国際公開第２０１４／０８８９２０号パンフレット（これらの各々は、上記のような修飾の開示について参照により組み込まれる）。ヌクレオチド間二リン酸結合の可逆的修飾は、サイトゾル（例えば、グルタチオン）の還元環境により細胞内で切断されるように設計される。以前の例には、細胞内で切断可能であると報告された中和ホスホトリエステル修飾が含まれる（Ｄｅｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００３，１２５：９４０－９５０を参照されたい）。
このような可逆的修飾は、オリゴヌクレオチドが、ヌクレアーゼ及び他の過酷な環境条件（例えば、ｐＨ）に曝露されるインビボ投与（例えば、血液及び／又は細胞のリソソーム／エンドソーム区画の通過）中の保護を可能にする。グルタチオンのレベルが細胞外空間と比較して高い細胞のサイトゾルに放出されると、修飾が逆転し、その結果、切断されたオリゴヌクレオチドが得られる。可逆的なグルタチオン感受性部分を使用すると、不可逆的化学修飾を用いて利用可能な選択肢と比較して、目的のオリゴヌクレオチドに、立体的により大きな化学基を導入することが可能である。これは、これらのより大きな化学基がサイトゾル中で除去されることから、細胞のサイトゾル内のオリゴヌクレオチドの生物学的活性を妨害しないと考えられるためである。その結果、これらのより大きな化学基は、ヌクレアーゼ耐性、親油性、電荷、熱安定性、特異性、免疫原性の低下など、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドに様々な利点を与えるように操作することができる。グルタチオン感受性部分の構造は、その放出の速度論を改変するように操作することができる。
一部の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、ヌクレオチドの糖に結合する。一部の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、修飾ヌクレオチドの糖の２’炭素に結合する。一部の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、例えば、修飾ヌクレオチドがオリゴヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドである場合、糖の５’－炭素に位置する。一部の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、例えば、修飾ヌクレオチドがオリゴヌクレオチドの３’末端ヌクレオチドである場合、糖の３’－炭素側に位置する。一部の実施形態では、グルタチオン感受性部分は、スルホニル基を含む。例えば、米国特許出願公開第２０１９／０１７７３５５号明細書を参照されたい（その内容は、その関連する開示に関して参照により本明細書に組み込まれる）。
ターゲティングリガンド
本開示のオリゴヌクレオチドを１つ以上の細胞又は１つ以上の器官（例えば、肝臓の細胞）にターゲティングさせるのが望ましい場合がある。そのような戦略は、他の器官における望ましくない作用を回避するのに役立ち得るか、又はオリゴヌクレオチドに利益をもたらさない細胞、組織若しくは器官に対するオリゴヌクレオチドの過度の喪失を回避し得る。従って、一部の実施形態では、特定の組織、細胞、又は器官のターゲティングを促進するように、例えば、肝臓へのオリゴヌクレオチドの送達を促進するように、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドを修飾することができる。特定の実施形態では、本明細書で開示されるオリゴヌクレオチドは、肝臓の肝細胞へのオリゴヌクレオチドの送達を促進するように修飾することができる。オリゴヌクレオチドは、１つ以上のターゲティングリガンドと共役させたヌクレオチドを含み得る。
ターゲティングリガンドは、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、又はタンパク質の一部（例えば、抗体若しくは抗体フラグメント）又は脂質を含み得る。一部の実施形態では、ターゲティングリガンドは、アプタマーである。例えば、ターゲティングリガンドは、腫瘍血管系若しくはグリオーマ細胞をターゲティングするために使用されるＲＧＤペプチド、腫瘍血管系若しくは間質をターゲティングするＣＲＥＫＡペプチド、トランスフェリン、ラクトフェリン、又はＣＮＳ血管系に発現されるトランスフェリン受容体を標的とするアプタマー、又はグリオーマ細胞上のＥＧＦＲをターゲティングする抗ＥＧＦＲ抗体であり得る。一部の実施形態では、ターゲティングリガンドは、１つ以上のＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分である。
オリゴヌクレオチドの１つ以上（例えば、１、２、３、４、５又は６つ）のヌクレオチドは、各々個別のターゲティングリガンドと共役され得る。いくつかの事例では、オリゴヌクレオチドの２～４ヌクレオチドは、各々個別のターゲティングリガンドと共役される。ターゲティングリガンドは、ターゲティングリガンドが、歯ブラシの剛毛に類似し、またオリゴヌクレオチドが歯ブラシに類似するように、センス鎖又はアンチセンス鎖のいずれかの末端で２～４ヌクレオチドと共役されてもよい（例えば、リガンドは、センス又はアンチセンス鎖の５’若しくは３’末端の２～４ヌクレオチドオーバーハング又は伸長部と共役される）。例えば、オリゴヌクレオチドは、センス鎖の５’又は３’末端のいずれかにステムループを含んでもよく、ステムのループの１、２、３、又は４ヌクレオチドは、ターゲティングリガンドに個別と共役されてもよい。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、センス鎖の３’末端側にステムループを含み、ステムのループの３ヌクレオチドは、ターゲティングリガンドと個別に共役されている。
一部の実施形態では、対象の肝臓の肝細胞に対するＣ３の発現を低減するオリゴヌクレオチドをターゲティングすることが望ましい。この目的のために、任意の適切な肝細胞ターゲティング部分を使用することができる。
ＧａｌＮＡｃは、主に肝細胞細胞のシヌソイド表面に発現するアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）の高親和性リガンドであり、末端ガラクトース又はＮ－アセチルガラクトサミン残基を含む循環糖タンパク質（アシアロ糖タンパク質）の結合、内在化、及びその後のクリアランスに主要な役割を果たす。本開示のオリゴヌクレオチドへのＧａｌＮＡｃ部分の間接的又は直接的な共役を使用して、これらのオリゴヌクレオチドを上記肝細胞細胞で発現されるＡＳＧＰＲにターゲティングさせることができる。
例えば、本開示のオリゴヌクレオチドは、一価ＧａｌＮＡｃと直接的又は間接的に共役させることができる。オリゴヌクレオチドは、２つ以上（例えば、２、３、４、若しくはそれ以上の）一価ＧａｌＮＡｃと直接的又は間接的に共役させてもよく、典型的には、３若しくは４つの一価ＧａｌＮＡｃ部分と共役される。ＧａｌＮＡｃ部分は、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドのループ領域内に存在し得る。ＧａｌＮＡｃ部分を使用して、肝細胞上のＡＳＧＰＲに対する開示のオリゴヌクレオチドをターゲティングすることができ；その時点で、ＧａｌＮＡｃ結合オリゴヌクレオチドは内在化され、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と呼ばれる細胞内ＲＮＡｉ機構に組み込まれ得る。この複合体内のＲＩＳＣアルゴノート－２（Ａｒｇｏ－２）タンパク質は、オリゴヌクレオチド二重らせんのアンチセンス鎖をその相補的なＣ３ ｍＲＮＡにターゲティングさせ、その分解を開始し、このようにして、標的の翻訳を阻止する。
一部の実施形態では、ステムループのループ（Ｌ）の２～４ヌクレオチドは、各々個別のＧａｌＮＡｃ部分と共役されている。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドのステムのループの３つのヌクレオチドは、３つの個別の一価ＧａｌＮＡｃ部分と直接的又は間接的に共役され得る。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つ以上の二価ＧａｌＮＡｃ、三価ＧａｌＮＡｃ、又は四価ＧａｌＮＡｃ部分と共役される。
本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、以下に描かれるように、グアニン核酸塩基に結合した一価ＧａｌＮＡｃを含んでもよく、これは、［ａｄｅｍＧ－ＧａｌＮＡｃ］又は２’－アミノジエトキシメタノール－グアニン－ＧａｌＮＡｃと呼ばれる：
さらに、又は代替的に、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、以下に描かれるように、アデニン核酸塩基に結合した一価ＧａｌＮＡｃを含んでもよく、これは、［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］又は２’－アミノジエトキシメタノール－アデニン－ＧａｌＮＡｃと呼ばれる。
このような結合の一例を、５’から３’に、ヌクレオチド配列ＧＡＡＡ（配列番号８）を含むループ（Ｌ＝リンカー、Ｘ＝ヘテロ原子）について以下に示し、ステム付着点が示される。このようなループは、例えば、図１Ａに示す分子のヌクレオチド位置２７～３０に存在し得る。化学式中、
は、オリゴヌクレオチド鎖との付着点である。
適切な方法又は化学（例えば、クリックケミストリー）を使用して、ターゲティングリガンドをヌクレオチドに連結させることができる。ターゲティングリガンドは、クリックリンカーを用いてヌクレオチドと共役させることができる。さらに、アセタールベースのリンカーを使用して、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つのヌクレオチドにターゲティングリガンドをコンジュゲートさせてもよい。アセタール系リンカーは、例えば、２０１６年６月２３日に公開された国際特許出願公開番号：国際公開第２０１６／１００４０１Ａ１号パンフレットに開示されており、そのようなリンカーに関する内容は、参照により本明細書に組み込まれる。リンカーは不安定リンカーであってもよい。しかし、他の実施形態では、リンカーは安定（非不安定）である。
５’から３’にヌクレオチドＧＡＡＡ（配列番号８）を含むテトラループについて、以下に一例を示すが、ここで、４つの（４）ＧａｌＮＡｃ部分が、アセタールリンカーを用いてループのヌクレオチドに結合されている。このようなループは、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチド中に存在し得る（例えば、配列番号１及び４の配列を有するオリゴヌクレオチドの２７～３０位を参照）。化学式中、
はオリゴヌクレオチド鎖への付着点である。
一部の実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、テトラループを有するセンス鎖を含み、ここで、３つの（３）ＧａｌＮＡｃ部分が、テトラループを含むヌクレオチドと共役され、且つ、各ＧａｌＮＡｃ部分は、１つの（１）ヌクレオチドと共役される。一部の実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、ＧａｌＮＡｃ共役ヌクレオチドを含むテトラループを有するセンス鎖を含み、ここで、テトラループは下記構造：
を含み、
式中：
Ｚは、長さが１～２０（両端の値を含む）の連続した共有結合原子の結合、クリックケミストリーハンドル、又はリンカーを表し、これは、置換及び非置換のアルキレン、置換及び非置換のアルケニレン、置換及び非置換のアルキニレン、置換及び非置換のヘテロアルキレン、置換及び非置換のヘテロアルケニレン、置換及び非置換のヘテロアルキニレン、並びにこれらの組合せからなる群から選択され；
Ｘは、Ｏ、Ｓ、若しくはＮである。
別の実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、ヌクレオチドに結合した３つの（３）ＧａｌＮＡｃ部分を含むテトラループを有するセンス鎖を含み、ここで、テトラループは、下記構造：
を含む。
一部の実施形態では、ターゲティングリガンド（例えば、ＧａｌＮＡｃ部分）とオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）との間に二重らせん伸長部（例えば、長さ最大３、４、５、又は６塩基対）が賦与される。一部の実施形態では、ターゲティングリガンド（例えば、ＧａｌＮＡｃ部分）とオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）との間の二重らせん伸長部は、長さが６塩基対である。
製剤
オリゴヌクレオチドの使用を容易にするために様々な製剤が開発されている。例えば、オリゴヌクレオチドは、分解を最小限に抑え、送達及び／又は取込みを容易にし、又は製剤中のオリゴヌクレオチドに別の有益な特性を賦与する製剤を使用して、対象又は細胞環境に送達することができる。一部の実施形態では、Ｃ３の発現を低減するためのオリゴヌクレオチド（例えば、一本鎖又は二本鎖オリゴヌクレオチド）を含む組成物が本明細書に提供される。このような組成物は、対象に投与されると、標的細胞の隣接環境中又は全身のいずれかに、十分な部分のオリゴヌクレオチドが細胞に進入して、Ｃ３発現を低減するように、好適に製剤化することができる。本明細書に開示されるように、種々の好適なオリゴヌクレオチド製剤のどれを使用しても、Ｃ３の低減を目的とするオリゴヌクレオチドを送達することができる。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド、医薬組成物、ベクター、又は細胞は、リン酸緩衝生理食塩水、リポソーム、ミセル構造、ベクター、及びカプシドなどの緩衝溶液中に製剤化される。
本明細書に開示される製剤は、賦形剤を含み得る。賦形剤は、活性成分の安定性の改善、吸収性の改善、溶解性の改善、及び／又は治療効果増強を組成物に付与し得る。賦形剤は、緩衝剤（例えば、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、トリス塩基、若しくは水酸化ナトリウム）又はビヒクル（例えば、緩衝溶液、ワセリン、ジメチルスルホキシド、又は鉱油）であり得る。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、その貯蔵寿命を延長するために凍結乾燥され、次に、使用前に溶液することができる（例えば、対象への投与）。従って、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドのいずれか１つを含む組成物中の賦形剤は、凍結保護剤（例えば、マンニトール、ラクトース、ポリエチレングリコール、若しくはポリビニルピロリドン）、又は崩壊温度調整剤（例えば、デキストラン、フィコール、又はゼラチン）である。
オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、その意図する投与経路と適合性であるように製剤化され得る。投与経路の例としては、非経口、例えば、皮下、静脈内、皮内、経口（例えば、吸入）、経皮（局所）、経粘膜、及び直腸投与（例えば、皮下投与）が挙げられる。
注射用途に適した医薬組成物には、滅菌水溶液（水溶性の場合）又は分散液、及び滅菌注射液又は分散液の即時調製のための滅菌粉末が含まれる。静脈内投与の場合、好適な担体としては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）、又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体プロピレングリコールなど）を含む溶媒若しくは分散媒、及びこれらの好適な混合物であり得る。多くの場合、等張化剤、例えば、糖、マンニトール及びソルビトールなどのポリアルコール、並びに塩化ナトリウムを組成物中に含有させることは任意である。滅菌注射液は、必要に応じて、選択された溶媒中に必要量のオリゴヌクレオチドを、上に列挙した成分の１つ又は組合せと一緒に含有させた後、濾過滅菌することによって調製することができる。
一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、滅菌水（又は注射用水（ＷＦＩ））を含む。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、ＰＢＳを含む。
一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、防腐剤非含有の、ＷＦＩ中の無菌溶液を含む。一部の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、約７．２（例えば、ｐＨ７．２）である。一部の実施形態では、０．１Ｎ ＮａＯＨ又は０．１Ｎ ＨＣｌは、必要に応じて滴定して、溶液のｐＨを目標７．２に調節してもよい。一部の実施形態では、医薬組成物中のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの遊離酸形態の濃度は、約１６０ｍｇ／ｍＬ（例えば、１６０ｍｇ／ｍＬ）である。ＷＦＩを用いて、一部の実施形態では、遊離酸形態としての総濃度を約１６０ｍｇ／ｍＬにすることができる。一部の実施形態では、目標充填容積は、２ｍＬガラスバイアル中に約１．３ｍＬである。一部の実施形態では、溶液は、その投与経路として皮下に患者に投与さられることが予想される。
一部の実施形態では、組成物は、少なくとも約０．１％の治療薬（例えば、Ｃ３発現を低減するためのオリゴヌクレオチド）又はそれ以上を含有し得るが、有効成分のパーセンテージは、組成物全体の重量又は体積の約１％～約８０％以上であり得る。溶解度、バイオアベイラビリティ、生物学的半減期、投与経路、製品貯蔵寿命、並びに他の薬理学的考慮事項などの要因は、そのような医薬製剤を調製する当業者によって考慮され、そのため、様々な投薬量及び治療レジメンが望ましくなり得る。
多くの実施形態が本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれかの肝臓標的送達に向けられるが、他の組織のターゲティングも企図される。
医薬品用途
本明細書には、細胞又は対象におけるＣ３の発現を低減する目的で本明細書に開示されるいずれか１つのオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を有効量で細胞又は対象に送達するための方法が開示される。
本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、任意の適切な核酸送達方法を用いて、補体経路活性化又は調節不全（例えば、Ｃ３の活性化又は調節不全）によって媒介される疾患若しくは障害を有する対象の細胞に導入することができる。例えば、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドを含有する溶液の注入、オリゴヌクレオチドで被覆された粒子によるボンバードメント、オリゴヌクレオチドを含む溶液への細胞若しくは生物の曝露、又はオリゴヌクレオチドの存在下での細胞膜のエレクトロポレーションによって細胞に送達され得る。
カチオン性脂質を用いたオリゴヌクレオチドの製剤化を使用して、細胞へのオリゴヌクレオチドのトランスフェクションを容易にすることができる。例えば、カチオン性脂質、例えば、リポフェクチン、カチオン性グリセロール誘導体、及びポリカチオン性分子（例えば、ポリリジン）を使用することができる。適切な脂質としては、オリゴフェクタミン、リポフェクタミン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ））、ＮＣ３８８（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｕｌｄｅｒ，Ｃｏｌｏ．）、又はＦｕＧｅｎｅ ６（Ｒｏｃｈｅ）があり、これらは全て、製造者の指示に従って使用することもできる。
従って、一部の実施形態では、製剤は、脂質ナノ粒子を含む。一部の実施形態では、賦形剤は、リポソーム、脂質、脂質複合体、マイクロスフェア、微粒子、ナノスフェア若しくはナノ粒子を含むか、或いはそうでなければ、それを必要とする対象の細胞、組織、器官、若しくは身体への投与のために製剤化され得る（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴＨＥ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＰＲＡＣＴＩＣＥ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＹ，２２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，２０１３を参照）。
本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドの有効な細胞内濃度は、オリゴヌクレオチドをコードするポリヌクレオチドの安定な発現を介して（例えば、哺乳動物細胞の核若しくはミトコンドリアゲノムへの組込みによって）、又はポリヌクレオチド（例えば、オリゴヌクレオチドをコードするプラスミド若しくは他のベクター（例えば、ウイルスベクター））と接触させた細胞での一過性発現によっても達成され得る。発現ベクターの例は、例えば、国際公開第１９９４／０１１０２６号パンフレットに開示されており、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の組成物及び方法において使用するための発現ベクターは、Ｃ３発現を低減するオリゴヌクレオチド配列、並びに、例えば、これらの薬剤の発現及び／又は哺乳動物細胞のゲノムへのこれらのポリヌクレオチド配列の組込みに使用される追加の配列要素を含有する。発現ベクターは、ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、又はアデノ随伴ウイルスベクターであってもよい。
オリゴヌクレオチドを細胞に送達するための他の方法、例えば、脂質媒介担体輸送、化学物質媒介輸送、リン酸カルシウムなどのカチオン性リポソームトランスフェクション、及びオリゴヌクレオチドを含むベクターも使用することができる。本明細書に記載のオリゴヌクレオチドの送達に使用されるベクターは、ウイルスベクター、例えば、レトロウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）、アデノウイルスベクター（例えば、Ａｄ５、Ａｄ２６、Ａｄ３４、Ａｄ３５、及びＡｄ４８）、並びにアデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ）（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、及びＡＡＶ１０）であり得る。
いくつかの例では、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、細胞内でオリゴヌクレオチド（例えば、そのセンス鎖及びアンチセンス鎖）を発現するように操作された導入遺伝子の形態で送達され得る。導入遺伝子は、前述のように、ベクター、例えば、ウイルスベクター（例えば、アデノウイルス、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、アデノ随伴ウイルス、若しくは単純ヘルペスウイルス）、又は非ウイルスベクター（例えば、プラスミド又は合成ｍＲＮＡ）を用いて送達され得る。一部の実施形態では、導入遺伝子は、対象に直接、例えば、作用源又はその付近（例えば、肝臓内若しくはその付近）又は血流内に注射することができる。
Ｃ３阻害
投与時に、本開示のオリゴヌクレオチドは、Ｃ３ ｍＲＮＡに結合して、その発現を阻害することができる。Ｃ３遺伝子の発現の阻害は、第１の細胞若しくは細胞群と実質的に同一であるが、同様に処置されていない第２の細胞若しくは細胞群（オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）で処置されていないか、又は目的の遺伝子にターゲティングさせたオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）で処置されていない対照細胞）と比較して、Ｃ３遺伝子が転写されており、Ｃ３遺伝子の発現が阻害されるように処置された（例えば、細胞を本開示のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）と接触させるか、又は上記細胞が存在する、若しくは存在した対象に本開示のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を投与することにより）第１の細胞若しくは細胞群（このような細胞は、例えば、対象由来の（例えば、対象から得られた）サンプル中に存在し得る）により発現されるｍＲＮＡの量の減少によって明らかにされ得る。標的ｍＲＮＡのレベルは、ＲＴ－ｑＰＣＲなどの当業者に周知の技術を用いて測定することができる。阻害の程度は、下記の式で表すことができる：
Ｃ３遺伝子の発現レベルの変化は、Ｃ３遺伝子発現と機能的に関連するパラメータ、例えば、Ｃ３タンパク質発現、Ｃ３タンパク質活性、又はＣ３シグナル伝達経路の低減に関して評価することができる。Ｃ３遺伝子サイレンシングは、発現構築物からの内因性又は異種のいずれかのＣ３を発現する任意の細胞において、及び当技術分野で公知の任意のアッセイによって決定され得る。
Ｃ３ ｍＲＮＡの阻害の結果は、細胞又は対象の１つ以上の特性を評価するための適切なアッセイによって、又はＣ３発現を示す分子（例えば、ＲＮＡ、タンパク質）を評価する生化学的技法によって確認することができる。本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドがＣ３の発現レベルを低下させる程度は、発現レベルを適切な対照（例えば、オリゴヌクレオチドが送達されていないか、又は陰性対照が送達された細胞若しくは細胞集団におけるＣ３ ｍＲＮＡ発現のレベル）と比較することによって評価される。Ｃ３ ｍＲＮＡ発現の適切な対照レベルは、対象レベルを毎回測定する必要がないように、所定のレベル又は値であってもよい。所定のレベル又は値は、中央値又は平均値などの単一のカットオフ値を含む様々な形態をとることができる。例えば、所定のレベル又は値は、Ｃ３タンパク質の７５～１７５ｍｇ／ｄＬのレベル又はその程度であってもよく、これは、健康な対象の血清中に典型的に見出されるＣ３タンパク質のレベルに対応する。
サンプル中のＣ３ ｍＲＮＡの発現レベルは、例えば、転写されたポリヌクレオチド又はその一部、例えば、ｍＲＮＡを検出することによって決定することができる。ＲＮＡは、例えば、酸性フェノール／グアニジンイソチオシアネート抽出（ＲＮＡＺＯＬ（商標）Ｂ；Ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）、ＲＮＥＡＳＹ（商標）ＲＮＡ調製キット（Ｑｉａｇｅｎ）又はＰＡＸＧＥＮＥ（商標）（ＰｒｅＡｎａｌｙｔｉｘ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）の使用を含むＲＮＡ抽出技術を用いて細胞から抽出することができ。サンプル中のＣ３ ｍＲＮＡは、リアルタイムＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）を用いて測定することもできる。例えば、ＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒ ＩＩ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いてＱＩＡｚｏ Ｌｙｓｉｓ試薬で組織サンプルをホモジナイズした後、製造業者の指示に従い、ＭＡＧＭＡＸ（登録商標）Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて精製することによって、ＲＮＡを抽出することができる。次に、大容量ｃＤＮＡ逆転写キット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて、ｃＤＮＡを調製することができる。Ｃ３及びハウスキープコントロール用の特定のプライマー及びプローブをＣＦＸ３８４リアルタイムＰＣＲ検出システム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）でのＰＣＲに使用し、ＢｉｏＲａｄ ＣＦＸ Ｍａｅｓｔｒｏソフトウェアを使用してＣｔ値を推定し；発現レベルをＥＸＣＥＬ（登録商標）で計算して、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ）にプロットした。ＲＴ－ＰＣＲ使用したプライマーを表２に記載する。
リボ核酸ハイブリダイゼーションを使用する典型的なアッセイフォーマットには、核ランオン（ｎｕｃｌｅａｒ ｒｕｎ－ｏｎ）アッセイ、ＲＴ－ＰＣＲ、ＲＮａｓｅ保護アッセイ、ノーザンブロッティング、インサイチュハイブリダイゼーション、及びマイクロアレイ分析が含まれる。循環ｍＲＮＡは、ＰＣＴ公開：国際公開第２０１２／１７７９０６号パンフレットに記載の方法を用いて検出することができ、その全内容は参照により本明細書に組み込まれる。目的の遺伝子の発現レベルは、核酸プローブを用いて決定することもできる。
単離されたｍＲＮＡは、ハイブリダイゼーション又は増幅アッセイに使用することができ、そうしたアッセイとして、限定はされないが、ノーザン又はサザン分析、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）分析、及びプローブアレイが挙げられる。ｍＲＮＡレベルを決定するための一方法は、目的の遺伝子のｍＲＮＡにハイブリダイズすることができる核酸分子（プローブ）と、単離ｍＲＮＡを接触させることを含む。例えば、単離ｍＲＮＡをアガロースゲル上で泳動させ、ｍＲＮＡをゲルからニトロセルロースなどの膜に転写することによって、ｍＲＮＡを固体表面に固定化し、プローブと接触させることができる。プローブは、固体表面に固定化してもよく、例えば、ＡＦＦＹＭＥＴＲＩＸ（登録商標）ＧＥＮＥＣＨＩＰ（登録商標）アレイ内でｍＲＮＡをプローブと接触させる。当技術分野において公知のｍＲＮＡ検出方法は、目的の遺伝子のｍＲＮＡのレベルを決定する際の使用に適合させることができる。
サンプル中の目的の遺伝子の発現レベルを決定するための代替方法は、例えば、ＲＴ－ＰＣＲ（Ｍｕｌｌｉｓ，１９８７、米国特許第４，６８３，２０２号明細書）、リガーゼ連鎖反応（Ｂａｒａｎｙ（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１８９－１９３）、自己持続配列複製（Ｇｕａｔｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：１８７４－１８７８）、転写増幅システム（Ｋｗｏｈ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ８６：１１７３－１１７７）、Ｑβレプリカーゼ（Ｌｉｚａｒｄｉ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６：１１９７）、ローリングサークル複製（Ｌｉｚａｒｄｉ ｅｔ ａｌ．、米国特許第５，８５４，０３３号明細書）又は任意の他の核酸増幅法によるサンプル中の例えばｍＲＮＡの核酸増幅及び／若しくは逆転写酵素（ｃＤＮＡを調製するため）のプロセス、続いて、当技術分野で公知の技術を用いた増幅分子の検出を含む。これらの検出スキームは、そのような分子が非常に少数で存在する場合の核酸分子の検出に特に有用である。本開示のいくつかの態様では、目的の遺伝子（例えば、Ｃ３）の発現レベルは、定量的蛍光ＲＴ－ＰＣＲ（即ち、ＴＡＱＭＡＮ（商標）Ｓｙｓｔｅｍ）又はＤＵＡＬ－ＧＬＯ（登録商標）ルシフェラーゼアッセイにより決定される。
目的の遺伝子のｍＲＮＡの発現レベルは、メンブレンブロット（ノーザン、サザン、ドットなどのハイブリダイゼーション分析で使用されるようなもの）、或いはマイクロウェル、サンプルチューブ、ゲル、ビーズ、又はファイバー（若しくは結合した核酸を含む任意の固体支持体）を用いてモニターすることができる。参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，７７０，７２２号明細書；同第５，８７４，２１９号明細書；同第５，７４４，３０５号明細書；同第５，６７７，１９５号明細書；同第５，４４５，９３４号明細書を参照されたい。遺伝子発現レベルの決定には、溶液中の核酸プローブを使用することも含まれ得る。
前述のアッセイを用いて、Ｃ３ ｍＲＮＡ量の減少に基づいた本明細書に記載のオリゴヌクレオチドによる治療の有効性について決定を下すことができる。Ｃ３ ｍＲＮＡのレベルの低下は、Ｃ３ ｍＲＮＡの適切な対照レベル又は治療前の対象におけるＣ３のレベルと比較して、１％以下、５％以下、１０％以下、１５％以下、２０％以下、２５％以下、３０％以下、３５％以下、４０％以下、４５％以下、５０％以下、５５％以下、６０％以下、７０％以下、８０％以下、若しくは９０％以下の減少であり得る。適切な対照レベルは、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドと接触されていない細胞又は細胞集団におけるＣ３ ｍＲＮＡ発現のレベルであってよい。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法による細胞へのオリゴヌクレオチドの送達の効果は、有限の期間後に評価される。例えば、Ｃ３ ｍＲＮＡのレベルは、細胞内へのオリゴヌクレオチドの導入後少なくとも８時間、１２時間、１８時間、２４時間；又は少なくとも３、４、５、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、若しくは８０日間細胞内で分析され得る。
さらに、Ｃ３遺伝子の阻害は、細胞又は細胞群によって発現されるＣ３タンパク質のレベル（例えば、対象に由来するサンプルにおいて発現されるタンパク質のレベル）の低下によって現れ得るＣ３タンパク質発現の阻害をもたらすことができる。上に説明したように、ｍＲＮＡ抑制の評価のために、処置された細胞又は細胞群におけるタンパク質発現レベルの阻害も同様に、対照細胞又は細胞群におけるタンパク質レベルのパーセンテージとして表され得る。
Ｃ３タンパク質発現の阻害の結果は、細胞又は対象の１つ以上の特性を評価するための適切なアッセイによって、又はＣ３タンパク質発現を示す分子を評価する生化学的手法によって確認することができる。本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドがＣ３タンパク質の発現レベルを低下させる程度は、発現レベルを適切な対照（例えば、オリゴヌクレオチドが送達されていないか、又は陰性対照が送達された細胞若しくは細胞集団におけるＣ３タンパク質発現のレベル）と比較することによって評価される。Ｃ３タンパク質発現の適切な対照レベルは、毎回対照レベルを測定する必要がないように、所定のレベル又は値、例えば、正常範囲と判定されるＣ３タンパク質の量、例えば、血清中７５～１７５ｍｇ／ｄＬであってもよい。所定のレベル又は値は、中央値又は平均値などの単一のカットオフ値を含む様々な形態をとることができる。
Ｃ３遺伝子の発現によって産生されるＣ３タンパク質のレベルは、タンパク質レベルの測定のために当技術分野で公知の任意の方法を用いて決定され得る。このような方法としては、例えば、電気泳動、キャピラリー電気泳動、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、高拡散（ｈｙｐｅｒｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）クロマトグラフィー、流体又はゲル沈殿素反応、吸収分光法、比色アッセイ、分光光度測定アッセイ、フローサイトメトリー、免疫拡散法（単一又は二重）、免疫電気泳動法、ウェスタンブロッティング、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫蛍光アッセイ、電気化学発光アッセイなどが挙げられる。こうしたアッセイは、目的の遺伝子によって産生されるタンパク質の存在又は複製を示すタンパク質の検出にも使用することができる。さらに、上記のアッセイを使用して、タンパク質機能の回復又は変化をもたらす目的のｍＲＮＡ配列の変化を報告することもでき、それによって、対象に治療効果及び利益を提供し、対象の障害を治療し、並びに／又は対象の障害の症状を軽減する。
前述のアッセイを用いて、Ｃ３タンパク質の量の減少に基づいた本明細書に記載のオリゴヌクレオチドによる治療の有効性について決定を下すことができる。Ｃ３タンパク質のレベルの低下は、Ｃ３の適切な対照レベル（例えば、約７５～１７５ｍｇ／ｇＬ）と比較して、１％以下、５％以下、１０％以下、１５％以下、２０％以下、２５％以下、３０％以下、３５％以下、４０％以下、４５％以下、５０％以下、５５％以下、６０％以下、７０％以下、８０％以下、若しくは９０％以下までの減少であり得る。適切な対照レベルは、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドと接触されていない細胞又は細胞集団におけるＣ３３発現のレベルであってよい。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法による細胞へのオリゴヌクレオチドの送達の効果は、有限の期間後に評価される。例えば、Ｃ３のレベルは、細胞内で少なくとも８時間、１２時間、１８時間、２４時間；又はオリゴヌクレオチドの細胞への導入後少なくとも１、２、３、４、５、６、７、若しくは１４日間分析され得る。Ｃ３のレベルは、対象の再治療が必要か否かを評価するために決定され得る。例えば、Ｃ３のレベルが治療前レベル（又は、治療前レベルの少なくとも約２０％以上（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又はそれ以上）であるレベル）まで上昇する場合、対象は再治療を必要とすると考えられる。
さらに、本明細書に記載の方法を用いたＣ３遺伝子の阻害は、補体経路活性化又は調節不全により媒介される疾患を有すると識別された対象の細胞におけるＣ３ｍＲＮＡの転写の低減をもたらし得る。本明細書に提供される方法は、任意の適切な細胞型（例えば、肝細胞など、Ｃ３を発現する細胞）において有用である。一部の実施形態では、細胞は、細胞がその天然の表現型特性を実質的に維持するように、対象から得られた初代細胞であり、これは、限定数の継代を経ていてもよい。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドが送達される細胞は、エクスビボ又はインビトロである（即ち、培養中の細胞、又は細胞が存在する生物に送達され得る）。具体的な実施形態では、肝細胞おけるＣ３の発現だけを低減する目的で、有効量の本明細書に開示のオリゴヌクレオチドを細胞に送達する方法が提供される。
本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドの有効量は、補体経路活性化又は調節不全により媒介される疾患若しくは障害、例えば、本明細書に記載の疾患若しくは障害のうちの１つの症状の軽減をもたらすオリゴヌクレオチドの量として決定され得る。補体経路活性化又は調節不全により媒介される疾患若しくは障害の症状の軽減は、例えば、当業者に公知の臨床評価を用いて決定される通り、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は１００％の軽減であり得る。補体経路活性化又は調節不全により媒介される疾患若しくは障害の症状の軽減の量を用いて、対象が本明細書に記載のオリゴヌクレオチド、医薬組成物、ベクター、又は細胞で再び治療する必要があるか否かを決定することができる。補体経路活性化又は調節不全により媒介される疾患の軽減を決定するためのアッセイの例には、循環Ｃ３タンパク質の測定及び／又は定量、機能アッセイ（例えば、ＷＥＩＳＬＡＢ（登録商標）アッセイ及び溶血アッセイ）が含まれるが、これらに限定されない。Ｃ３（又はＣ３切断産物）沈着の定量は、ＩＨＣ又は免疫蛍光を介して特定の疾患バイオマーカーを介して行うことができる。
さらに、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方を二重らせんポリペプチドとして含む本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、任意の適切な核酸送達を用いて対象の細胞に導入することができる。二重らせんオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドを含有する溶液の注入、オリゴヌクレオチドで被覆された粒子によるボンバードメント、オリゴヌクレオチドを含む溶液への細胞若しくは生物の曝露、又はオリゴヌクレオチドの存在下での細胞膜のエレクトロポレーションによって細胞に送達され得る。二重らせんオリゴヌクレオチドはまた、脂質媒介担体輸送、化学物質媒介輸送、リン酸カルシウムなどのカチオン性リポソームトランスフェクション、及び一本鎖オリゴヌクレオチドの核酸をコードするベクターを用いて細胞に送達してもよい。二重らせんオリゴヌクレオチドの送達に使用されるベクターは、ウイルスベクター、例えば、レトロウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）、アデノウイルスベクター（例えば、Ａｄ５、Ａｄ２６、Ａｄ３４、Ａｄ３５、及びＡｄ４８）、並びにアデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ）（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、及びＡＡＶ９）であり得る。
治療方法
また、本明細書に記載の組成物（例えば、オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチドをコードするベクター、ベクターを含む細胞、医薬組成物）の投与による、対象における、例えば、本明細書に開示される補体経路活性化又は調節不全に関連する疾患の１つ以上を含む補体経路活性化又は調節不全により媒介される疾患の治療のための方法が本明細書に開示される。この方法は、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの薬学的に許容される塩（例えば、ナトリウム塩）の投与による、対象における補体経路活性化又は調節不全により媒介される疾患の治療を含み得る。本明細書に記載される方法は、典型的には、オリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩の有効量、即ち、望ましい治療結果（例えば、Ｃ３発現のノックダウン）を生じ得る量である。治療上許容される量は、補体経路活性化又は調節不全（例えば、Ｃ３の活性化又は調節不全）によって媒介される疾患若しくは障害を治療することができる量であってよい。任意の１対象に対する適切な投与量は、対象のサイズ、身体表面積、年齢、投与される具体的な組成物、組成物中の有効成分、投与の時間及び経路、健康状態全般、並びに同時に投与される他の薬剤を含め、特定の要因に左右され得る。こうした治療薬を用いて、例えば、補体経路活性化又は調節不全により媒介される任意のタイプの疾患若しくは障害を緩徐にする、停止する、又は予防することができ、これらは予防的又は治療的に投与され得る。予防薬の投与は、疾患若しくは障害を予防するか、又はその進行を遅らせるように、補体経路の活性化又は調節不全により媒介される疾患若しくは障害に特徴的な症状の検出又は発現の前に実施してもよい。補体経路活性化又は調節不全により媒介される疾患のリスクがある対象は、例えば、当技術分野で公知の診断又は予後アッセイの１つ又は組合せによって識別することができる。
本明細書で開示される組成物は、任意の標準的な方法を用いて対象に投与され得る。例えば、本明細書で開示される組成物のいずれか１つは、経腸的に（例えば、経口的に、胃栄養チューブにより、十二指腸栄養チューブにより、胃瘻を介して、若しくは直腸内に）、非経口的に（例えば、皮下注射、静脈内注射若しくは注入、動脈内注射若しくは注入、骨内注入、筋肉内注射、脳内注射、脳室内注射、髄腔内）、局所的に（例えば、経皮的、吸入、点眼剤により、若しくは粘膜を介して）、又は標的器官（例えば、対象の肝臓）への直接注射により投与され得る。典型的には、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、静脈内又は皮下に投与される。任意の所与の場合における投与に最も適した経路は、投与される特定の組成物、対象、治療しようとする補体経路活性化又は調節不全により媒介される特定の疾患若しくは障害、医薬製剤化方法、投与方法（例えば、投与時間及び投与経路）、対象の年齢、体重、性別、治療しようとする疾患の重症度、対象の食事、及び対象の排泄速度に左右され得る。
補体経路活性化又は調節不全により媒介される疾患若しくは障害に罹患している対象に、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドを、例えば、毎年（例えば、１２ヶ月に１回）、半年毎（例えば、６ヶ月に１回）、四半期毎（例えば、３ヶ月に１回）、隔月（例えば、２ヶ月に１回）、毎月、又は毎週投与することができる。他の事例では、オリゴヌクレオチドは、１、２、又は３週間毎に投与され得る。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは毎日投与され得る。
補体経路活性化又は調節不全によって媒介される疾患の治療対象となる対象は、ヒト若しくは非ヒト霊長類又は別の哺乳動物対象（例えば、ヒト）であり得る。本明細書に記載のオリゴヌクレオチドで治療され得る他の例示的な対象としては、イヌ及びネコなどの飼いならされた動物；ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、及びニワトリなどの家畜；並びにマウス、ラット、モルモット、及びハムスターなどの動物が挙げられる。
投与量
本開示の組成物（例えば、本明細書に記載されるようなＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩を含む組成物）の投与量は、化合物の薬力学的特性、投与様式、レシピエントの年齢、健康状態、及び体重、症状の性質及び程度、治療の頻度及び／又は同時治療の種類（ある場合）、並びに治療対象の化合物のクリアランス速度などの多くの要因に応じて変動し得る。当業者は、上記の要因に基づいて適切な投与量を決定することができる。
本開示のオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩は、以下：（ａ）対象の細胞におけるＣ３タンパク質の発現の低減、（ｂ）対象の細胞におけるＣ３の転写の低減、（ｃ）対象の細胞におけるＣ３タンパク質のレベルの低下、（ｄ）対象の細胞におけるＣ３タンパク質の活性の低下；及び／又は（ｅ）補体経路の活性化又は調節不全により媒介される疾患若しくは障害の１つ以上の症状の軽減のうち１つ以上（例えば、２つ以上、３つ以上、４つ以上）をもたらすのに有効な量及び時間で投与され得る。
従って、本開示は、それを必要とする対象において補体経路活性化又は調節不全により媒介される疾患を治療するための方法に関し、この方法は、Ｃ３ ｍＲＮＡに特異的に結合して、対象におけるＣ３タンパク質の発現を阻害する有効量の記載されるオリゴヌクレオチドを投与することを含む。例えば、本開示は、それを必要とする対象における補体経路活性化又は調節不全により媒介される疾患を治療する方法を提供し、これは、治療有効量の本明細書に開示のオリゴヌクレオチド、医薬組成物、ベクター、又は細胞を対象に投与することを含む。
開示された方法及び組成物を使用して治療しようとする補体経路活性化又は調節不全により媒介される疾患は、例えば、本明細書に開示される補体経路活性化又は調節不全に関連する疾患のうちの１つ以上であり得る。
補体経路活性化又は調節不全により媒介される疾患の治療は、本明細書に記載されるようなＣ３ ｍＲＮＡ（例えば、Ｃ３タンパク質の発現）の発現及び／又は翻訳を阻害するオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）の投与によって達成され得る。
開示された組成物は、当業者によって適切であると決定された量で投与することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、臨床反応に応じて、必要であれば調節することができる適切な投与量で最初に投与され得る。
いくつかの事例では、オリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩は、対象の体重の０．０１～１００ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．０１～１ｍｇ／ｋｇ、１～５ｍｇ／ｋｇ、５～２０ｍｇ／ｋｇ、２０～５０ｍｇ／ｋｇ、５０～１００ｍｇ／ｋｇ）の用量で投与される。特定の例では、オリゴヌクレオチドは、対象の体重ｋｇ当たり０．０１ｍｇ～５０ｍｇ（例えば、０．０１～１ｍｇ／ｋｇ、１～５ｍｇ／ｋｇ、５～１０ｍｇ／ｋｇ、１０～２０ｍｇ／ｋｇ、２０～３０ｍｇ／ｋｇ、３０～４０ｍｇ／ｋｇ、４０～５０ｍｇ／ｋｇ）の濃度で投与される。他の例では、オリゴヌクレオチドは、対象の体重ｋｇ当たり０．０１ｍｇ～２０ｍｇ（例えば、０．０１～１ｍｇ／ｋｇ、１～５ｍｇ／ｋｇ、５～１０ｍｇ／ｋｇ、１０～１５ｍｇ／ｋｇ、１５～２０ｍｇ／ｋｇ）の濃度で投与される。他の例では、オリゴヌクレオチドは、対象の体重ｋｇ当たり０．０１ｍｇ～１５ｍｇ（例えば、０．０１～１ｍｇ／ｋｇ、１～２ｍｇ／ｋｇ、２～５ｍｇ／ｋｇ、５～８ｍｇ／ｋｇ、８～１０ｍｇ／ｋｇ、１０～１２ｍｇ／ｋｇ、１２～１５ｍｇ／ｋｇ）の濃度で投与される。他の例では、オリゴヌクレオチドは、対象の体重ｋｇ当たり０．０１ｍｇ～１０ｍｇ（例えば、０．０１～１ｍｆ／ｋｇ、１～２ｍｇ／ｋｇ、２～５ｍｇ／ｋｇ、５～８ｍｇ／ｋｇ、８～１０ｍｇ／ｋｇ）の濃度で投与される。他の例では、オリゴヌクレオチドは、対象の体重ｋｇ当たり０．０１ｍｇ～５ｍｇ（例えば、０．０１～１ｍｇ／ｋｇ、１～２ｍｇ／ｋｇ、２～３ｍｇ／ｋｇ、３～４ｍｇ／ｋｇ、４～５ｍｇ／ｋｇ）の濃度で投与される。他の例では、オリゴヌクレオチドは、対象の体重ｋｇ当たり０．１ｍｇ～２０ｍｇ（０．１～１ｍｇ／ｋｇ、１～５ｍｇ／ｋｇ、５～１０ｍｇ／ｋｇ、１０～１５ｍ／ｋｇ、及び１５～２０ｍ／ｋｇ）の濃度で投与される。他の例では、オリゴヌクレオチドは、対象の体重ｋｇ当たり０．１ｍｇ～１０ｍｇ（例えば、０．１～１ｍｇ／ｋｇ、１～２ｍｇ／ｋｇ、２～５ｍｇ／ｋｇ、５～７ｍｇ／ｋｇ、及び７～１０ｍｇ／ｋｇ）の濃度で投与される。他の例では、オリゴヌクレオチドは、対象の体重ｋｇ当たり０．１ｍｇ～５ｍｇ（例えば、０．１～１ｍｇ／ｋｇ、２～３ｍｇ／ｋｇ、３～４ｍｇ／ｋｇ、及び４～５ｍｇ／ｋｇ）の濃度で投与される。他の事例では、オリゴヌクレオチドは、対象の体重ｋｇ当たり１ｍｇ～５０ｍｇ（例えば、１～１０ｍｇ／ｋｇ、１０～２０ｍｇ／ｋｇ、２０～３０ｍｇ／ｋｇ、３０～４０ｍｇ／ｋｇ、及び４０～５０ｍｇ／ｋｇ）の濃度で投与される。他の例では、オリゴヌクレオチドは、対象の体重ｋｇ当たり１ｍｇ～２０ｍｇ（例えば、１～５ｍｇ／ｋｇ、５～１０ｍｇ／ｋｇ、１０～１５ｍｇ／ｋｇ及び１５～２０ｍｇ／ｋｇ）の濃度で投与される。他の例では、オリゴヌクレオチドは、対象の体重ｋｇ当たり１ｍｇ～１０ｍｇ（例えば、１～２ｍｇ／ｋｇ、２～５ｍｇ／ｋｇ、５～７ｍｇ／ｋｇ、及び７～１０ｍｇ／ｋｇ）の濃度で投与される。他の例では、オリゴヌクレオチドは、対象の体重ｋｇ当たり１ｍｇ～５ｍｇ（例えば、１～２ｍｇ／ｋｇ、２～３ｍｇ／ｋｇ、３～４ｍｇ／ｋｇ、及び４～５ｍｇ／ｋｇ）の濃度で投与される。他の例では、オリゴヌクレオチドは、３０ｍｇ／ｋｇ～３００ｍｇ／ｋｇ（例えば、３０～２００ｍｇ／ｋｇ、３０～１００ｍｇ／ｋｇ、３０～５０ｍｇ／ｋｇ、５０～３００ｍｇ／ｋｇ、１００～３００ｍｇ／ｋｇ、２００～３００ｍｇ／ｋｇ、及び２５０～３００ｍｇ／ｋｇ）の濃度で投与される。
特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対象の体重ｋｇ当たり１０ｍｇ未満（例えば、９ｍｇ／ｋｇ以下、８ｍｇ／ｋｇ以下、７ｍｇ／ｋｇ以下、６ｍｇ／ｋｇ以下、５ｍｇ／ｋｇ以下、４ｍｇ／ｋｇ以下、３ｍｇ／ｋｇ以下、２ｍｇ／ｋｇ以下、１ｍｇ／ｋｇ以下）の用量で投与される。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約１０ｍｇ／ｋｇ以下の用量で投与される。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約９ｍｇ／ｋｇ以下（例えば、８．９ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、及び１ｍｇ／ｋｇ以下）の用量で投与される。他の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約８ｍｇ／ｋｇ以下（例えば、７．９ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、及び１ｍｇ／ｋｇ以下）の用量で投与される。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約７ｍｇ／ｋｇ以下（例えば、６．９ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、及び１ｍｇ／ｋｇ以下）の用量で投与される。別の実施形態では、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、約６ｍｇ／ｋｇ以下（例えば、５．９ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、及び１ｍｇ／ｋｇ以下）の用量で投与される。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約５ｍｇ／ｋｇ以下（例えば、４．９ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、及び１ｍｇ／ｋｇ以下）の用量で投与される。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約４ｍｇ／ｋｇ以下（例えば、３．９ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、及び１ｍｇ／ｋｇ以下）の用量で投与される。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約３ｍｇ／ｋｇ以下（例えば、２．９ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ以下）の用量で投与される。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約２ｍｇ／ｋｇ以下（例えば、１．９ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、及び０．５ｍｇ／ｋｇ以下）の用量で投与される。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約１ｍｇ／ｋｇ以下（例えば、０．９ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、及び０．１ｍｇ／ｋｇ以下）の用量で投与される。
別の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、対象の体重の約０．１～１０ｍｇ／ｋｇ、約０．２～１０ｍｇ／ｋｇ、約０．３～１０ｍｇ／ｋｇ、約０．４～１０ｍｇ／ｋｇ、約０．５～１０ｍｇ／ｋｇ、約１～１０ｍｇ／ｋｇ、約２～１０ｍｇ／ｋｇ、約３～１０ｍｇ／ｋｇ、約４～１０ｍｇ／ｋｇ、約５～１０ｍｇ／ｋｇ、約６～１０ｍｇ／ｋｇ、約７～１０ｍｇ／ｋｇ、約８～１０ｍｇ／ｋｇ、又は約９ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
他の事例において、組成物（例えば、本明細書に記載されるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを含む組成物）の投与量は、予防又は治療に有効な量である。いくつかのケースでは、ウイルスベクター（例えば、ｒＡＡＶベクター）は、対象当たり１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１、１０１２、１０１３、１０１４、又は１０１５ゲノムコピー（ＧＣ）の用量で投与される。一部の実施形態では、ｒＡＡＶは、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１、１０１２、１０１３、又は１０１４ＧＣ／ｋｇ（対象の総重量）の用量で投与される。
任意選択で、開示されたオリゴヌクレオチドは、本明細書に記載されるように、対象への送達に好適な薬学的に許容される組成物の一部として投与され得る。開示される薬剤は、当業者によって容易に決定され得るように、所望の投薬量をもたらし、且つ／又は治療に有益な効果を引き出すのに十分な量で上記組成物中に含まれる。
本明細書に記載される開示組成物は、対象を治療する上で、又は前述したアウトカムのうちの１つ（例えば、対象の疾患の１つ以上の症状の軽減）をもたらすのに十分な量（例えば有効量）で、且つ十分な時間にわたって投与され得る。開示される組成物は、１回又は２回以上投与され得る。開示される組成物は、１日１回、１日２回、１日３回、２日に１回、週１回、週２回、週３回、２週間に１回、月１回、２ヶ月に１回、年２回、又は年１回投与することができる。治療は、離散的（例えば、注射）又は連続的（例えば、インプラント若しくは注入ポンプを介した処置）であり得る。対象は、治療のために用いられる組成物及び投与経路に応じて、開示の組成物の投与後１週間、２週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、又はそれ以上の治療有効性について評価され得る。対象は、離散的な期間（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、若しくは１２ヶ月）又は疾患若しくは状態が緩和されるまで治療を受けてもよいし、或いは治療される疾患若しくは状態の重症度及び性質に応じて、治療は長期にわたり（例えば、対象の生涯にわたって）継続し得る。例えば、治療の初期ラウンド若しくはその後のラウンドがＰＮＨに関連する症状、例えば、倦怠感、虚弱性、息切れ、あざ又は出血しやすさ、再発性感染症、重度の頭痛、血栓、及び出血の制御の困難などのいずれか１つの軽減、或いは対象の細胞若しくは血清中のＣ３ｍＲＮＡのレベル又はＣ３タンパク質レベルの低下を含む治療利益を引き出さない場合、ＰＮＨと診断され、本明細書に開示される組成物で治療される対象に、１種以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又はそれ以上）の追加の治療薬を投与してもよい。
キット
本開示はまた、（ａ）本明細書に記載の細胞又は対象におけるＣ３のレベル及び／若しくは活性を低下させるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）剤、又はその薬学的に許容される塩、並びに、任意選択で、薬学的に許容される担体、賦形剤、若しくは希釈剤を含む医薬組成物を含むキットを特徴とする。キットは、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）をコードするベクター、又は本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えばＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）をコードするベクターを含む細胞を含有し得る。キットはまた、本明細書に記載の方法のいずれかを実施するための説明を含む添付文書も含み得る。一部の実施形態では、キットは、（ａ）本明細書に記載される細胞又は対象におけるＣ３のレベル及び／若しくは活性を低下させるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）剤を含む医薬組成物、（ｂ）追加の治療薬、並びに（ｃ）本明細書に記載の方法のいずれかを実施するための説明を含む添付文書を含む。
以下の実施例は、あくまで例示を目的としており、本開示を何ら限定することは意図されない。
実施例１：ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの調製
オリゴヌクレオチドの合成及び精製
本実施例及び前述の実施例に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを、本明細書に記載の方法を用いて化学的に合成した。概して、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、公知のホスホロアミダイト合成（例えば、以下を参照：Ｈｕｇｈｅｓ ａｎｄ Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ（２０１７）ＣＯＬＤ ＳＰＲＩＮＧ ＨＡＲＢ ＰＥＲＳＰＥＣＴ ＢＩＯＬ．９（１）：ａ０２３８１２；Ｂｅａｕｃａｇｅ Ｓ．Ｌ．，Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ Ｍ．Ｈ．，Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｖ：Ｄｅｏｘｙ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ Ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅｓ－Ａ Ｎｅｗ Ｃｌａｓｓ ｏｆ Ｋｅｙ Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ ｆｏｒ Ｄｅｏｘｙｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ＴＥＴＲＡＨＥＤＲＯＮ ＬＥＴＴ．１９８１；２２：１８５９－１８６２．ｄｏｉ：１０．１０１６／Ｓ００４０－４０３９（０１）９０４６１－７）に加えて、１９－２３ｍｅｒ ｓｉＲＮＡについて記載されているような固相オリゴヌクレオチド合成法（例えば、以下を参照：Ｓｃａｒｉｎｇｅ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１８：５４３３－５４４１及びＵｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０９：７８４５－７８４５；米国特許第５，８０４，６８３号明細書；同第５，８３１，０７１号明細書；同第５，９９８，２０３号明細書；同第６，００８，４００号明細書；同第６，１１１，０８６号明細書；同第６，１１７，６５７号明細書；同第６，３５３，０９８号明細書；同第６，３６２，３２３号明細書；同第６，４３７，１１７号明細書及び同第６，４６９，１５８号明細書）を用いて合成した。
１９ｍｅｒコア配列を有するＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡｉ機構によるプロセシングを可能にするために、２５ｍｅｒセンス鎖及び２７ｍｅｒアンチセンス鎖を有する構築物にフォーマットされた。１９ｍｅｒコア配列は、Ｃ３ ｍＲＮＡの領域に相補的であった。
個々のＲＮＡ鎖を合成し、標準的な方法に従ってＨＰＬＣ精製した（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｃｏｒａｌｖｉｌｌｅ，ＩＡ）。例えば、ＲＮＡオリゴヌクレオチドは、固相ホスホロアミダイト化学を用いて合成し、脱保護した後、標準的な技術（Ｄａｍｈａ ＆ Ｏｌｇｉｖｉｅ（１９９３）ＭＥＴＨＯＤＳ ＭＯＬ．ＢＩＯＬ．２０：８１－１１４；Ｗｉｎｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．（１９９５）ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤ ＲＥＳ．２３：２６７７－２６８４）を用いて、ＮＡＰ－５カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ；Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）で脱塩した。１５分のステップ線形勾配を用いるＡｍｅｒｓｈａｍ Ｓｏｕｒｃｅ １５Ｑカラム（１．０ｃｍ×２５ｃｍ；Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）でのイオン交換高速液体クロマトグラフィー（ＩＥ－ＨＰＣ）を用いて、オリゴマーを精製した。勾配は、９０：１０バッファーＡ：Ｂから５２：４８バッファーＡ：Ｂまで変動し、バッファーＡは、１００ｍＭトリスｐＨ８．５であり、バッファーＢは、１００ｍＭトリスｐＨ８．５、１Ｍ ＮａＣｌであった。サンプルを２６０ｎｍでモニターし、完全長オリゴヌクレオチド種に対応するピークを回収し、プールし、ＮＡＰ－５カラム上で脱塩した後、凍結乾燥した。
各オリゴマーの純度は、Ｂｅｃｋｍａｎ ＰＡＣＥ ５０００（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．；Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，ＣＡ）でのキャピラリー電気泳動装置により決定した。ＣＥキャピラリーは、内径が１００μｍで、ｓｓＤＮＡ １００ＲＧｅｌ（Ｂｅｃｋｍａｎ－Ｃｏｕｌｔｅｒ）を含有する。通常、約０．６ｎｍモルのオリゴヌクレオチドをキャピラリーに注入し、４４４Ｖ／ｃｍの電界で泳動させ、２６０ｎｍのＵＶ吸光度により検出した。変性トリス－ホウ酸－７Ｍ－尿素ランニングバッファーは、Ｂｅｃｋｍａｎ－Ｃｏｕｌｔｅｒから購入した。以下に記載される実験で使用するために、ＣＥによって評価して、少なくとも９０％純粋であったオリゴリボヌクレオチドが得られた。化合物の同一性は、製造者の推奨するプロトコルに従い、ＶＯＹＡＧＥＲ－ＤＥ（商標）ＢＩＯＳＰＥＣＴＲＯＭＥＴＲＹ（商標）Ｗｏｒｋ Ｓｔａｔｉｏｎ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ；Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）でのマトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ）質量分析によって検証された。全てのオリゴマーの相対分子量が得られ、多くの場合、予想される分子量の０．２％以内であった。
二重らせんの調製
１００ｍＭ酢酸カリウム、３０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５からなる二重らせんバッファー中に一本鎖ＲＮＡオリゴマーを再懸濁した（例えば、濃度１００μＭで）。相補的なセンス鎖及びアンチセンス鎖を等モル量で混合して、例えば、５０μＭ二重らせんの最終溶液を得た。サンプルを１００℃に加熱して５’ＲＮＡバッファー（ＩＤＴ）中、使用前に室温まで冷却させた。ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、－２０℃で保存した。一本鎖ＲＮＡオリゴマーは、凍結乾燥又はヌクレアーゼフリー水中、－８０℃で保存した。
実施例２：Ｃ３標的ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの作製
Ｃ３ ｍＲＮＡ標的配列の同定
補体は、厳密に制御された酵素カスケードであり、これは、いくつかの異なる経路によって活性化することができ、そうした経路は、抗体複合体が活性化を引き起こす補体古典的経路（ＣＣＰ）を含む。どの経路がプロセスを開始するかにかかわらず、補体活性化はカスケード内のＣ３に収束する。一旦活性化されると、Ｃ３は切断されてエフェクター分子Ｃ３ａとＣ３ｂを形成し、炎症、組織へのＣ３ｂの沈着、及び末端補体の活性化、並びにさらなる組織損傷を引き起こす。
Ｃ３発現のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド阻害剤を生成するために、コンピュータベースのアルゴリズムを使用して、ＲＮＡｉ経路によるＣ３発現の阻害をアッセイするのに適したＣ３ ｍＲＮＡ標的配列を計算的に同定した。各々がヒトＣ３ ｍＲＮＡの適切なＣ３標的配列に対して相補性の領域を有する３００を超えるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドガイド（アンチセンス）鎖配列（表３を参照されたい）を調製し、Ｃ３発現阻害についてインビトロでアッセイした。これらのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドから、９つのサブセット（表４を参照）をさらなる研究のために選択した。アルゴリズムによって同定された９つのガイド配列のサブセットは、サルＣ３ ｍＲＮＡの対応するＣ３標的配列にも相補的であった（配列番号６７；表３）。ヌクレオチド配列類似性を有する相同性Ｃ３ ｍＲＮＡ標的配列に対して相補性の領域を含むＣ３ ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、相同性Ｃ３ ｍＲＮＡをターゲティングする能力を有すると予測される。
実施例３：インビトロでのＣ３発現を阻害するＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの同定
Ｃ３ ｍＲＮＡを減少させるために実施例１及び２に記載されるように生成されたＲＮＡｉオリゴヌクレオチド（ｄｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチドとしてフォーマット化）の活性を、インビトロ細胞ベースアッセイを用いて測定した。簡単に説明すると、内因性Ｃ３を発現するＨｅｐＧ２ヒト肝細胞に、１ｎＭのＲＮＡｉオリゴヌクレオチド（図３Ａ）又はマルチウェル細胞培養プレートの別々のウェルに示すように、２つの異なる濃度（０．１及び１ｎＭ）の、図３ＡでスクリーニングしたＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのサブセットで、トランスフェクトした（図３Ｂ）。トランスフェクション後２４時間維持した細胞を、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ベースのｑＰＣＲアッセイを用いて、トランスフェクト細胞由来のＣ３ ｍＲＮＡのレベルを測定した。２つのＲＴ－ｑＰＣＲアッセイ、３’アッセイ及び５’アッセイを使用して、それぞれ、ＨＥＸ及びＦＡＭプローブにより測定されたｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド候補のサブセットを、ＲＴ－ｑＰＣＲによって決定されたＣ３ ｍＲＮＡレベルの阻害に基づいて、さらなるインビボ分析のために選択した。
実施例４：ヒトＣ３ ｃＤＮＡを発現するマウス（ＨＤＩマウス）におけるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのスクリーニング
実施例３からのＲＮＡｉオリゴヌクレオチド候補（又は「化合物」）のサブセットを、ヒトＣ３ ｃＤＮＡを発現するマウスにおいてスクリーニングした。ヒトＣ３ ｃＤＮＡを発現するベクターをトランスフェクトしたＣＤ－１マウスに、選択した化合物（化合物Ａ－Ｉ）を０．５又は１ｍｇ／ｋｇの単回皮下用量で投与した。４日後、特異的プローブを用いたＲＴ－ｑＰＣＲによって決定された肝臓ホモジネートからのヒトＣ３ ｍＲＮＡレベルの評価のために動物を犠牲にした。トランスフェクトマウスにおいて少なくとも５０％のノックダウン効力を示した化合物を、カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）での試験のために選択した。９種の化合物（即ち、化合物Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、及びＩ）のサブセットのインビボスクリーニングの結果を図４Ｂ及び４Ｃに示し、それらの対応するセンス鎖及びアンチセンス鎖を表４及び図４Ａに要約する。データは、ＰＢＳ処置マウスと比較して、肝臓に残留するＣ３ ｍＲＮＡのパーセンテージとして表される。
実施例５：カニクイザル（Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ Ｍａｃａｑｕｅ）におけるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのスクリーニング
全ての化合物Ａ～Ｉを、実施例４、表４及び図４Ａに記載されるように、マウススクリーニング中に予め選択し、化合物Ａ～Ｉを４ｍｇ／ｋｇの単回皮下用量で投与した後のＣ３ ｍＲＮＡサイレンシングの持続時間についてカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）（ＮＨＰ）で試験した。試験した全ての動物の肝生検（ｎ＝５／化合物）は、投与前と、注射後２８日目及び５６日目に収集した。図５に示されるように、ＲＴ－ｑＰＣＲによって決定された正規化ベースラインレベル及び同時刻ＰＢＳ対照と比較して、試験されたほとんどの化合物で肝臓Ｃ３ ｍＲＮＡレベルが少なくとも５０％減少した。２つのリード化合物（化合物Ａ及びＢ）は、複数回用量試験での試験のために、単回投与後のカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）の肝臓中のＣ３ ｍＲＮＡのノックダウンレベルに基づいて選択した。
複数回用量ＮＨＰ試験でさらに評価するために、単回用量試験から化合物Ａ及びＢを選択した。カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）に、０日目、２８日目、５６日目、及び８４日目に１ｍｇ／ｋｇ又は２ｍｇ／ｋｇで計４回用量を皮下投与した。ＲＴ－ｑＰＣＲによる肝臓Ｃ３ ｍＲＮＡレベルの評価のために、投与前と、初回処置後２８、５６、及び１１２日目に肝生検を収集した（図６Ａ）。Ｃ３ ＥＬＩＳＡキットによるＣ３タンパク質レベルの評価（図６Ｂ）、ＷＩＥＳＬＡＢ（登録商標）ＡＰアッセイによる補体活性（図８）及びウサギ赤血球の溶血（図９）のために、投与前、初回投与後１、１４、２８、４２、５６、７０、８４、９８及び１１２日目に血清サンプルを収集した。Ｃ３肝臓ｍＲＮＡ、Ｃ３血清タンパク質及び機能アッセイからの対照として、ＰＢＳ処置動物を使用した。化合物Ａ又はＢによるカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）の複数回処置は、それぞれ図６Ａ、６Ｂ、８、及び９に示される通り、肝臓におけるＣ３ ｍＲＮＡサイレンシングの持続的維持、血清中の循環Ｃ３の有意な減少、代替経路補体活性の＞９５％の減少、並びに化合物Ａ及びＢの複数回投与後の溶血アッセイにおけるウサギ赤血球の溶解の完全な阻害をもたらした。
化合物Ａ及びＢの効力は、単回及び複数回投与の両方のＮＨＰ試験について２８日目の結果を組み合わせることによって計算した。化合物Ａ（０．６５ｍｇ／ｋｇ）と化合物Ｂ（０．５５ｍｇ／ｋｇ）のおおよそのＥＤ５０は、両方の化合物について作成された用量反応曲線から算出した（図７）。
実施例６：ＣＤ－１マウスにおけるＣ３発現に関する化合物Ｊの薬物動態及び薬力学的試験
ＣＤ－１マウスを化合物Ｊ（化合物Ａのマウス代用物）で処置して、化合物Ｊ投与の結果としてのマウスにおける肝臓Ｃ３ ｍＲＮＡノックダウンのパーセント及び血清Ｃ３タンパク質レベルを評価した。肝臓Ｃ３ ｍＲＮＡのノックダウンパーセントを、化合物Ｊ投与の結果として、ＲＴ－ｑＰＣＲを用いて測定した。血清中のＣ３の量は、マウスＣ３ ＥＬＩＳＡアッセイを用いて測定した。マウスは、化合物Ｊを０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、又は６ｍｇ／ｋｇの単回皮下用量で受けた。化合物Ｊの単回投与は、肝臓Ｃ３ ｍＲＮＡの用量依存的な肝臓Ｃ３ ｍＲＮＡノックダウンパーセンテージを示し、６ｍｇ／ｋｇ用量（ｎ＝５マウス／時点）を受けた動物からの肝臓では９０％超のＣ３ ｍＲＮＡの減少を示した。ｍＲＮＡノックダウンの最下点は、図１０Ａに示すように、６ｍｇ／Ｋｇ用量から３～１４日であった。ＣＤ－１マウスの血清中のＣ３タンパク質のパーセンテージを試験期間にわたって測定したところ、それも相応に抑制された（図１０Ｂ）。
６ｍｇ／ｋｇの単回皮下用量の化合物Ｊを投与したＣＤ－１マウスの血漿、肝臓、腎臓、及び脾臓組織中の化合物Ｊの量を、上記用量を受けた後６７２時間にわたってステムループｑＰＣＲを用いて測定した（図１１）。薬物動態分析では、化合物Ｊの曝露が最も高いのは肝臓であり、続いて脾臓、腎臓、血漿であることが示された（図１１）。
７０日間にわたって実施された複数回用量試験では、ＲＴ－ｑＰＣＲを用いてＣ３ ｍＲＮＡのパーセントを測定し、血清中のＣ３タンパク質の量をマウスＣ３ ＥＬＩＳＡアッセイにより測定したが、この場合、ＣＤ－１マウスは、図１２Ａ及び１２Ｂにそれぞれ示すように、０、１４、２８、及び４２日目に１ｍｇ／ｋｇ又は６ｍｇ／ｋｇで４用量の化合物Ｊを受けた。このレジメンは、肝臓Ｃ３ ｍＲＮＡ及び血清タンパク質レベルの約７５％及び＞９５％のノックダウンをそれぞれもたらした。初回用量後３、１４、１７、２８、３１、４２、４５、５６、及び７０日目に肝生検及び血清採取を実施した。図１３Ａ及び１３Ｂにそれぞれ示すように、１ｍｇ／ｋｇの４用量後の化合物Ｊの肝臓及び血漿濃度を、ステムループｑＰＣＲ（ＳＬ－ｑＰＣＲ）を用いて肝生検及び血漿サンプルから分析した。ＰＢＳ処置ＣＤ－１マウスを、Ｃ３肝臓ｍＲＮＡ及びＣ３血清タンパク質レベルの両方の対照として使用した。
この複数回用量試験では、化合物Ｊ（化合物Ａのマウス代用物）が肝臓Ｃ３ ｍＲＮＡの用量依存的なノックダウンを示し、これは７０日の期間にわたって持続されたことが明らかにされた。循環Ｃ３タンパク質レベルの低下は、肝臓中に観察されたＣ３ ｍＲＮＡの減少に対応していた。さらに、投与動物からの化合物Ｊの血漿及び肝臓濃度は、隔週投与（１ｍｇ／ｋｇ）の場合、化合物Ｊの蓄積を示さなかった（それぞれ、図１３Ａ及び１３Ｂ）。
実施例７：ＮＺＢ／Ｗ Ｆ１マウス、ループス腎炎モデルにおけるＣ３発現への化合物Ｊの効果
ＮＺＢ／Ｗ Ｆ１ループスマウスモデルを用いて、化合物Ｊを用いた疾患モデルにおいてメカニズムの証明を試験した。ＮＺＢ／Ｗ Ｆ１動物に、２１週齢から開始して４週間毎に０．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、又は６ｍｇ／ｋｇ用量の化合物Ｊを皮下投与した（ｎ＝１０／群）。ＰＢＳ処置動物を陰性対照として使用し、ＣＤ１マウス由来の腎臓を非疾患対照として使用した。３７週齢で、Ｃ３及びプロパージン糸球体沈着を、化合物Ｊ処置及びＰＢＳ対照動物からの腎臓の免疫蛍光イメージングによって評価した（図１４）。２９週齢で、肝臓Ｃ３ ｍＲＮＡのパーセントをＲＴ－ｑＰＣＲを用いて測定し（図１５Ａ）、化合物Ｊの各用量レベルについて、マウスＣ３ ＥＬＩＳＡアッセイを用いて血清中のＣ３タンパク質の量を定量した（図１５Ｂ）。化合物Ｊによる複数回用量の処置後、化合物Ｊで処置した動物から観察されたＣ３及びプロパージン糸球体沈着の用量依存的な減少があった。化合物ＪによるＮＺＢ／Ｗ Ｆ１マウスの複数回用量処置は、肝臓Ｃ３ ｍＲＮＡの用量依存的なノックダウンを示し、これは１６週間にわたって持続された。循環Ｃ３タンパク質レベルの低下（図１５Ａ）は、肝臓中に観察されたＣ３ ｍＲＮＡの減少（図１５Ｂ）に対応した。
血清サンプルを２９週齢及び３７週齢で収集し、それぞれ、化合物Ｊによる処置の８週及び１６週後に、ＥＬＩＳＡアッセイによって循環ＩｇＧ免疫複合体（ＣＩＣ）を測定した（図１６Ａ及び図１６Ｂ）。化合物Ｊによる複数回用量の処置後、ＰＢＳ治療対照群から観察されたＣＩＣレベルと比較して、Ｃ３発現の肝臓ノックダウンによる循環免疫複合体のレベルの増加はなかった。
実施例８：ＭＲＬ／ｌｐｒマウス、ループス腎炎モデルにおけるＣ３発現への化合物Ｊの効果
ＭＲＬ／Ｉｐｒループスマウスモデルを使用し、化合物Ｊで処置した。マウスは６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊを複数回用量で受けた。図１７は、６ｍｇ／ｋｇの複数回用量の化合物Ｊで処置したＭＲＬ／ｌｐｒマウスの腎臓からのＣ３糸球体沈着の減少を示す。プロパージン沈着の減少は、図１７に示すように、８～１６週齢から２週間毎に６ｍｇ／ｋｇの皮下用量の化合物Ｊで処置された動物の腎臓サンプルからも観察される。
実施例９：ｃｆｈ－／－マウス、補体調節不全モデルにおけるＣ３発現への化合物Ｊの効果
補体因子Ｈ欠損マウス（Ｃｆｈ－／－）に４ヶ月齢から８ヶ月齢まで、０．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、又は６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊを月４回用量で投与した。化合物Ｊの最後の投与から４週間後に全ての治療群から腎臓を採取し、免疫蛍光分析を実施して、ＣＦＨ－／－処置動物の糸球体におけるＣ３及びプロパージン沈着の両方を視覚化した。図１８は、化合物Ｊの複数回漸増用量で処置したＣＦＨ－／－マウスの腎臓からのＣ３糸球体沈着の用量依存的減少を示す。プロパージン沈着の減少は、図１８に示すように、１６～３２週齢から４週間毎に化合物Ｊの皮下用量で処置された動物の腎臓サンプルからも観察された。肝臓Ｃ３ ｍＲＮＡのパーセントは、ＲＴ－ｑＰＣＲを用いて測定した（図１９）。処置により腎臓におけるＣ３及びプロパージン沈着を減少させた。加えて、化合物Ｊを用いた処置によって、上記マウス中の血清Ｃ５レベルが正常化した（Ｃ５消費は、このモデルにおける補体調節不全の特徴である）。
実施例１０：ＣＡＩＡ誘発関節炎マウスモデルにおけるＣ３発現への化合物Ｊの効果
関節炎に関連する症状の治療における化合物Ｊの効果を、関節リウマチの単純モデルであるコラーゲン抗体惹起関節炎（ＣＡＩＡ）誘発関節炎マウスモデルを用いて検証した。ＣＡＩＡ誘発関節炎マウスモデルは、０日目にコラーゲン抗体をマウスに投与し、続いて３日目にＬＰＳブースターを投与することによって作製した。化合物Ｊは、予防研究及び治療研究の両方で試験された。動物には、予防研究のために－７日目に３若しくは６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊを投与するか（図２０Ａ）、又は治療研究のために５日目の疾患発症後に投与した（図２０Ｂ）。後肢の炎症を１０日目に視覚的に分析し、予防及び治療研究の両方の結果をそれぞれ図２１Ａ及び２１Ｂに示す。化合物Ｊによる予防的処置は、このモデル特有の特徴である後肢の腫脹を予防した（図２１Ａ）。化合物Ｊによる治療的処置は、ＰＢＳ処置対照動物と比較すると、単回投与後の臨床疾患発現を完全に逆転させた（図２１Ｂ）。
後肢及び膝の生検にヘマトキシリン及びエオジン（Ｈ＆Ｅ）染色を実施し、化合物Ｊを６ｍｇ／ｋｇの単回用量で、予防的に３用量（図２２Ａ）又は治療的に単回用量（それぞれ図２２Ｂ及び２４Ａ）のいずれかで処置したマウスにおける局所単核細胞浸潤の減少を示した。さらに、６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊによる治療的処置の結果としての局所炎症の減少を証明するために、リンパ球（ＣＤ４５陽性細胞）、白血球（ＣＤ１１ｂ陽性細胞）及びマクロファージ（Ｆ４／８０陽性細胞）マーカー染色を、図２５、２６、及び２７にそれぞれ示すように生検サンプルに対して実施した。生検サンプルもサフラニンＯで染色して、ＣＡＩＡ誘発関節炎マウスモデルの膝の軟骨を視覚化した。６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊで処置した動物は、予防的（図２３）又は治療的（図２４Ｂ）に処置した場合、ＰＢＳ処置マウスと比較して、軟骨びらんの顕著な減少を示した。６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊによる処置を受けた、又は受けていないＣＡＩＡ誘発関節炎マウスの局所炎症部位での補体発現を評価するために、Ｃ３及びＣＤ４５ ｍＲＮＡへのインサイチュハイブリダイゼーションを用いた実験を生検サンプルで実施した（これは、図２８に示す）。化合物ＪによるＣ３の肝ノックダウンは、対照群としてのＰＢＳ処置動物と比較して、化合物Ｊによる治療的処置の場合、リンパ球（ＣＤ４５陽性細胞）の浸潤及び局所Ｃ３ ｍＲＮＡ発現を低減した。
実施例１１：多発性硬化症マウスモデルにおけるＣ３発現への化合物Ｊの効果。
神経炎症及び脱髄の免疫介在性メカニズムを調べるために広く使用されているモデルである、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）誘発実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）マウスモデルを、６ｍｇ／ｋｇ用量の化合物Ｊ（ｎ＝２実験）で予防的に処置した。化合物Ｊによる処置後の肝臓Ｃ３ ｍＲＮＡレベル並びに血清中のＣ３タンパク質を、図３１Ａ及び３１Ｂに示すように、それぞれＲＴ－ｑＰＣＲ及びマウスＣ３ ＥＬＩＳＡアッセイを用いて評価した。同様に、化合物Ｊによる処置後に残っているＣ３ ｍＲＮＡのパーセント、並びに６ｍｇ／ｋｇの用量の化合物Ｊで処置した後のＭＯＧ誘発ＥＡＥマウスの血清中のＣ３の量を、ＰＢＳで処置したＣ３欠損マウス及びＭＯＧ誘発ＥＡＥ Ｃ３欠損マウス系統と比較して評価した。化合物ＪによるＣ３の肝臓ノックダウンは、実施した両方の実験において疾患の重症度を低下させた（図２９）。化合物Ｊ処置による肝臓ノックダウンで観察された重症度の低下は、Ｃ３欠損動物における臨床観察（グローバルノックアウト）と同様であった。
腰椎脊髄サンプルも、化合物Ｊで処置したＭＯＧ誘発ＥＡＥマウスから得た。図３０に示すように、髄鞘形成並びに単核細胞浸潤を視覚化するために、Ｈ＆Ｅ染色と共にルクソールファストブルー染色を脊髄サンプルに実施した。図３０に示すように、ルクソールファストブルー脊髄サンプルを、６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊ、ＰＢＳで処置した疾患動物、及びＣ３欠損マウス間で比較した。化合物Ｊで処置したＭＯＧ誘発動物は、ＭＯＤ誘発ＥＡＥ Ｃ３欠損マウスで観察されたレベルと同様の脱髄の減少及び免疫細胞浸潤の予防を示した。
同様の結果は、プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）誘発ＥＡＥモデルでも観察された。Ｃ３ ｓｉＲＮＡ処置により疾患の重症度は低下したが、この動物モデルの特徴である再発を予防するには十分ではなかった。
実施例１２：マウスの吸収、分布、代謝、及び排泄（ＡＤＭＥ）試験
薬物動態及び生体分布試験は、ＰＢＳ（ｎ＝１８）を投与するか、或いは３、１０、若しくは１００ｍｇ／ｋｇの化合物Ａを単回皮下（ＳＣ）注射（ｎ＝３９／コホート）により、又は３ｍｇ／ｋｇを単回静脈内（ＩＶ）注射（ｎ＝３６）で投与した雄ＣＤ－１マウスで実施した。バイオアベイラビリティは、３ｍｇ／ｋｇでのＩＶ及びＳＣ用量後のＡＵＣｌａｓｔの比較に基づき、約１８％であった。しかし、肝臓曝露は、３ｍｇ／ｋｇのＩＶコホート及びＳＣコホート間で類似していた。３ｍｇ／ｋｇ用量群と比較した血漿曝露は、１０ｍｇ／ｋｇ群で概ね用量比例的に増加し、１００ｍｇ／ｋｇ群では用量比例様式を超えて増加した。Ｃｍａｘ及びＡＵＣｌａｓｔに基づく肝臓曝露は、肝臓への分布プロセスの飽和を示す３ｍｇ／ｋｇ用量群と比較して、１０ｍｇ／ｋｇで概ね用量比例的に増加し、１００ｍｇ／ｋｇでは用量比例様式を下回って増加した。肝臓内での排泄半減期は２．１～４日であった。
実施例１３：化合物Ａの血小板活性化
化合物Ａで刺激したヒト全血中の血小板活性化の評価は、血小板活性化を誘導しなかった。全血サンプル（５人の男性及び５人の女性ドナー）をＰＢＳ又は１０、１００、２００、若しくは３００μｇ／ｍＬの化合物Ａで刺激した。
実施例１４：カニクイザル（Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ Ｍｏｎｋｅｙ）における化合物Ａの忍容性
化合物Ａの投与の忍容性は、ナイーブ雄及び雌カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍｏｎｋｅｙ）を対象とした研究で評価した。動物にリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ｎ＝１２）又は化合物ＡのＳＣ用量を０日目（ｎ＝６／コホート）に１．５ｍｇ／ｋｇ（低）若しくは３ｍｇ／ｋｇ（高）の用量レベルで投与し、肝生検を２１日目に実施して肝臓Ｃ３ノックダウンのレベルを決定した。この分析に基づいて、２８、５６、８４日目の投与レベルを３ｍｇ／ｋｇ（低用量の場合）又は６ｍｇ／ｋｇ（高用量の場合）に調節して、それぞれ約７５％及び９０％のＣ３ｍＲＮＡノックダウンを試みた。血液サンプルは、－２１、－７、－３、０、２８、５６及び１１２日目に収集し、合計２８の病原体のウイルス、細菌、及び寄生虫検査を試験前、５６日目、及び剖検時に実施して、血清学及び血液又は糞便ＰＣＲにより潜伏ウイルス及び／又は感染の潜在的な再活性化をモニターした。臨床病理学者による評価のための最終剖検を実施して、感染の潜在的なエビデンスを決定した。血清中の循環Ｃ３タンパク質レベル中間測定も、ＣＢＣ、凝固、臨床化学、尿検査と共に実施した。低用量又は高用量のいずれかの化合物Ａを投与後４９日目までに、約７５又は８０％の肝臓Ｃ３ ｍＲＮＡノックダウンがそれぞれ達成され、循環Ｃ３タンパク質レベルが約８０％低下した。肝臓Ｃ３ ｍＲＮＡ及びＣ３タンパク質レベルのこうした低下は、試験が終了した１１２日目まで評価された全ての時点で持続した。剖検時の肉眼的又は顕微鏡的所見はなく、予定外の死亡もなかった。体重、肝機能検査、血球数、血液化学、及び脂質代謝パラメータは、慢性化合物Ａ処置により影響されず、ＰＢＳを投与されたコホートと比較して、処置されたサルにおける病原性寄生虫、細菌又はウイルス感染の増加のエビデンスはなかった。
実施例１５：ＣＤ－１及びＮＺＢ／Ｗ Ｆ１マウスにおける化合物Ｊの忍容性
化合物Ｊの慢性投与の忍容性をＣＤ－１及びＮＺＢ／Ｗ Ｆ１マウスで評価した。ＣＤ－１マウスに合計４ヶ月のＰＢＳ又は化合物Ｊ（１又は１００ｍｇ／ｋｇ）を投与し、最終投与の１カ月後に犠牲にし、ウイルス又は細菌感染及び組織学的変化のエビデンスについて盲検的に病理学者により評価した。処置に関連する組織病理学的変化又は感染増加は観察されなかった。同様に、ＮＺＢ／Ｗ Ｆ１マウスに、２８週齢から４０週齢まで４週間毎に１若しくは６ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊを投与し、４４週齢で最終屠殺するか、又は２４週齢から３６週齢まで投与し、４０週齢で最終屠殺した。ウイルス、細菌性病原体、寄生虫の集団についての血清学的及びＰＣＲ検査により感染増加のエビデンスは検出されず、処置群について盲検的に獣医病理学者により評価された最終剖検では、処置に関連する変化は見出されなかった。
実施例１６：カニクイザル（Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ Ｍｏｎｋｅｙ）における化合物Ａの安全性薬理学試験
カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍｏｎｋｅｙ）を対象にした皮下安全性薬理学試験で化合物Ａを評価した。４匹の動物にＰＢＳを投与するか、又は化合物Ａの単回投与量を漸増して（３０、１００、３００ｍｇ／ｋｇの用量レベルで）７日毎に１回投与したが、各投与には同じ４匹を使用した。この試験中に、心血管（例えば、ＥＣＧ、血圧、心拍数など）、呼吸（呼吸数）及び神経学的（機能観察総合評価法（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎａｌ ｂａｔｔｅｒｙ））エンドポイントの評価、並びに臨床評価を含む安全性薬理学実施した。どの用量レベルでも心血管又は呼吸への影響は観察されなかった。３０又は１００ｍｇ／ｋｇの化合物Ａでは神経学的影響は観察されなかった。３００ｍｇ／ｋｇでは、投与後４時間及び２４時間に、３匹の動物で軽微から軽度の振戦（肢又は全身）の臨床所見が認められた。３００ｍｇ／ｋｇで観察された神経学的所見は有害であるとみなされた。そのため、無毒性量（ＮＯＡＥＬ）は、１００ｍｇ／ｋｇと判断された。さらに、インビトロ小核アッセイ及びインビトロ細菌復帰突然変異アッセイを含む遺伝毒性評価は、小核の誘導及び変異原性活性についてそれぞれ陰性であった。
実施例１７：カニクイザル（Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ Ｍｏｎｋｅｙ）における化合物ＡのＰＫ／ＰＤ試験
単回投与ＰＫ／ＰＤ試験をカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍｏｎｋｅｙ）で実施した。動物は、０日目にＰＢＳ（対照）のＳＣ用量又は３ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの単回ＳＣ又はＩＶ用量を受けた（群当たりｎ＝５）。血漿、尿、及び組織中の化合物Ａ濃度を評価した。２、３５、７０、１１２、１５８及び２５２日目に肝生検を実施して、肝臓Ｃ３ ｍＲＮＡレベル（主要な薬力学的マーカー）を評価した。循環Ｃ３タンパク質レベル及び補体機能活性は、試験全体を通して評価された追加のＰＤマーカーであった。
蛍光検出を含む認定ハイブリダイゼーションベースの陰イオン交換高速液体クロマトグラフィー（ＡＥＸ－ＨＰＬＣ－ＦＤ）法を用いて、化合物Ａの濃度を血漿、肝臓、及び尿中で測定した。サル肝臓における補体成分３（Ｃ３）ｍＲＮＡ発現の減少を、リアルタイム定量ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ｑＰＣＲ）を用いて測定した。サル血清中のＣ３タンパク質を、ＥＬＩＳＡを用いて測定し、補体機能活性（古典的経路、マンノース結合性レクチン経路（ＭＢＬ）、及び代替経路）をＷＩＥＳＬＡＢ（登録商標）アッセイを用いて測定した。
経時的な化合物Ａの血漿濃度を用いて、個々の動物についてのノンコンパートメントＰＫプロファイルを作成した（群平均は図３２Ａにプロットされている）。ＳＣ投与後の血漿Ｔｍａｘ範囲は１～６時間であり、ＩＶ投与のＴｍａｘは、全ての動物で０．２５時間（最初の時点で収集）であった。化合物Ａの血漿濃度は二相的に減少し、ＩＶ経路と比較してＳＣ経路の分布相は遅かった。二相性減少は、主に肝臓への初期の急速な分布相、それに続くより遅い排泄段階を示している。血漿半減期は、ＳＣ群において５匹中１匹（２．５１時間）について、またＩＶ群の５匹中２匹（平均＝１．２１時間）について報告された。残りの動物の半減期は、終末相速度定数の許容基準が満たされなかったため、報告されなかった。化合物Ａのバイオアベイラビリティは、ＡＵＣｌａｓｔに基づくＩＶ用量と比較して、ＳＣ用量で約２８．５％であった。
経時的な化合物Ａの肝臓濃度を使用して、個々の動物についてのノンコンパートメントＰＫプロファイルを作成した（群平均は図３２Ｂにプロットされている）。ＳＣ群とＩＶ群の両方の５匹全ての動物について肝臓の半減期を計算したところ、それぞれ１３～２０日及び２０～３３日の範囲であった。
採取時間毎に各動物により尿中に排泄された化合物Ａの総量を使用して、排泄された総薬物及び排泄された薬物％を計算した。化合物Ａの平均尿中排泄量は、ＳＣ群及びＩＶ群でそれぞれ４．３％及び４．８％であった。
３ｍｇ／ｋｇの化合物ＡをＳＣ又はＩＶで単回投与した後、２日目（ＳＣのみ）にサルの肝臓におけるＣ３ ｍＲＮＡ発現の低減が観察され、投与後３５日目に最大減少（両方の投与経路で約７０％）に達した（図３３）。経時的なＣ３ ｍＲＮＡ発現の漸進的な回復が観察され、１１４日目までにベースラインレベル付近に戻った。この回復は、両方の投与経路で２５２日目まで維持された。
化合物Ａの単回３ｍｇ／ｋｇＳＣ投与後、血清Ｃ３タンパク質の減少が７日目から７０日目まで観察された（図３４）。血清中の最大平均Ｃ３タンパク質レベルは、投与後２８日目に５４．７％減少し、１６８日目までに投与前のレベルに回復した。対照と比較して、単回３ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量の化合物Ａを投与された動物では、血清Ｃ３タンパク質レベルの低下はなかった。
対照と比較して、ＳＣ群又はＩＶ群のいずれにおいても古典的補体に対する効果はなかった（図３５）。レクチン及び代替経路の機能性は、１４、２８、及び３５日目のＳＣ群において対照と比較して低下した。レクチン経路の機能性は、３日間とも最小限（約１３％）低下したのに対し（図３６）、代替経路の機能性は、１４日目、２８日目、３５日目でそれぞれ８７％、８５％、７３％低下した（図３７）。経路機能性は、レクチン経路では７０日目までにベースラインレベルに戻り、代替経路では１６８日目までにベースラインレベルに戻った。
化合物Ａの単回３ｍｇ／ｋｇＳＣ投与後、最大ｍＲＮＡ減少は、３５日目の７０％、Ｃ３タンパク質の最大減少は、２８日目の５４．７％、代替経路活性の最大減少は、１４日目の≧８７％であった。ｍＲＮＡ発現は、１６８日目までにベースラインレベルに回復し、Ｃ３タンパク質発現は、２８日目までにベースラインに戻り、代替経路機能は、１６８日目までに回復した。
実施例１８：ＣＤ－１マウス及びカニクイザル（Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ Ｍｏｎｋｅｙ）における毒性試験
マウスでの６ヶ月の毒性試験及びカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍｏｎｋｅｙ）での９ヶ月の毒性試験を実施した。これらの試験における用量レベルの範囲は、意図される最大臨床用量の予想曝露に対して少なくとも１０倍の曝露倍数を達成するように選択された。
マウス試験では、ＣＤ－１マウスにおけるＰＢＳ又は化合物Ａ（３０、１００、若しくは３００ｍｇ／ｋｇ）の反復用量（４週間毎；７用量）の潜在的な毒性、及び８週間の回復期間後の所見の可逆性の可能性を評価した。投与コホート当たり１０匹の雄と１０匹の雌マウスが試験の投与期間中に評価され、６匹の雄と６匹の雌が回復期中に維持された。加えて、化合物Ａの毒物動態特性は、サブスタディ（ｎ＝１１１）で決定された。３０、１００、及び３００ｍｇ／ｋｇのレベルで投与された化合物Ａは忍容性が高く、化合物Ａ関連の死亡又は有害な所見はなかった。臨床病理所見には、１７１日目にアラニンアミノトランスフェラーゼがわずかに増加すると共に、トリグリセリドがわずかに減少し、回復期間の終わりに完全又は部分的な可逆性が明らかになった。化合物Ａ関連の非有害な顕微鏡所見は、終末安楽死時に肝臓の微小又は軽度の混合細胞炎症、肝細胞カリオサイト肥大、有糸分裂の増加、及び楕円細胞過形成を含み、回復安楽死時にも微小又は軽度の有糸分裂及び肝細胞カリオサイト肥大が依然として存在した。これらの結果から、ＮＯＡＥＬは３００ｍｇ／ｋｇとみなされ、これは、１６９日目で、雄及び雌でそれぞれ、平均ＡＵＣｌａｓｔ値は７６０，０００及び５４３，０００ｈｒ＊ｎｇ／ｍＬ、平均Ｃｍａｘ値は、１６００００及び９６４００ｎｇ／ｍＬであった。
サル試験では、化合物Ａの反復ＳＣ投与（４週間毎に０、３０、１００、３００ｍｇ／ｋｇ、合計１０用量）の潜在的な毒性、及び８週間の回復期間後のあらゆる効果の可逆性、持続性、又は遅延発生が評価された。４匹の雄及び４匹の雌のサルが主要な投与試験の各用量コホートに含まれ、２匹の雄と２匹の雌が２ヶ月の回復期間に含まれた。加えて、化合物Ａの毒物動態及びＰＤ特性を測定した。カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍｏｎｋｅｙ）への化合物Ａの９ヶ月間の反復ＳＣ投与は、忍容性が十分であった。化合物Ａの反復用量投与は、下記パラメータに試験品関連の変化をもたらさなかった：臨床観察、神経学的検査、眼科検査、体重、定性的食物消費、血液学、臨床化学、尿検査、サイトカイン（即ち、ＭＣＰ－１、ＴＮＦ－α、ＩＬ－８、ＩＬ－１ＲＡ、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１β、及びＩＰ－１）、補体因子Ｂｂ及びＣ３ａ、肉眼病理、又は試験の投与期間中の臓器重量。さらには、この試験中に早期死亡はなく、全ての動物は予定された剖検まで生存した。フィブリノーゲンに関して化合物Ａに関連する非有害な増加は、≧１００ｍｇ／ｋｇ／用量で発生した。≧３０ｍｇ／ｋｇ／用量では、肝臓並びに他の複数の組織に非有害な顕微鏡所見（空胞化／顆粒状マクロファージ）があった。観察された所見に基づいて、ＮＯＡＥＬは、３００ｍｇ／ｋｇ／用量であると決定され、関連ＡＵＣｌａｓｔは１３３００００ｈｒ＊ｎｇ／ｍＬ、Ｃｍａｘは７０９００ｎｇ／ｍＬであった（雄雌の組合せ、２５３日目）。
インビトロ小核アッセイ及びインビトロ細菌復帰突然変異アッセイを含む遺伝毒性評価は、それぞれ、変異原性活性及び小核誘導について陰性であった。
データ全体に基づいて、ＮＯＡＥＬは、３００ｍｇ／ｋｇとみなされる。毎週用量を漸増する試験で認められた神経学的臨床徴候（例えば、振戦）は、毎月投与による９ヶ月のサル毒性試験では認められなかった。
実施例１９：カニクイザル（Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ Ｍｏｎｋｅｙ）、ＡＭＲモデルにおけるＣ３発現への化合物Ｂの効果
腎臓同種移植片を受けている４匹の感作カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍｏｎｋｅｙ）の薬理学試験を実施する。この試験では、動物は合計４ヶ月間にわたって４週間に１回、ＳＣ用量の化合物Ｂを受ける。
実施例２０：ヒトにおける用量設定試験
ファーストインヒューマン（Ｆｉｒｓｔ－ｉｎ－Ｈｕｍａｎ）（ＦＩＨ）臨床試験のために、補体駆動性疾患の患者を対象とした複数回漸増用量（ＭＡＤ）コホートと組み合わせて、健康なボランティアを対象での単回漸増用量（ＳＡＤ）試験を実施する。健康なボランティアと患者は、化合物Ａを投与する前に、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）Ａ型、Ｃ型、Ｗ型、Ｙ型、Ｂ型、肺炎レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、及びインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）Ｂ型に対する予防的ワクチン接種を受ける。
実施例２１：ヒトにおける化合物Ａによる多発性硬化症の治療
多発性硬化症に罹患している対象は、化合物Ａを含有する（例えば、対象の約０．０１ｍｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で）医薬組成物で処置される。対象は、週に約１回の頻度で、例えば、皮下注射によって、約１２ヶ月又はそれ以上の期間（例えば、症状が解消若しくは安定するまで）組成物を投与される。月に約１回、対象の症状及び血清Ｃ３レベルを臨床医が評価して、化合物Ａの有効性を評価する。対象の血清Ｃ３は、血清サンプルを用いて定量し、化合物Ａを投与される前の対象の血清中に見出されるＣ３タンパク質の量若しくは対照量のＣ３タンパク質、又は正常な対象（例えば、無病の対象）からの血清サンプル中に存在するＣ３タンパク質の量と比較することができる。化合物Ａによる処置は、化合物Ａによる処置前の血清中のＣ３タンパク質の量と比較して、血清中のＣ３タンパク質の量が減少した場合、即ち、少なくとも１０％減少した場合に有効であると判定される。加えて、多発性硬化症に関連する対象の症状、例えば、かすみ目、不明瞭な発話、眩暈、打診痛、協調の欠如、及び不安定歩行などを臨床医が評価して、化合物Ａを投与される前に対象が経験していた症状と比較して、及び／又はプラセボ対照対象と比較して、対象が経験している症状のいずれか又は全てに軽減があるか否かを評価することができる。
実施例２２：ヒトにおける化合物Ａによる関節炎の処置
関節炎と診断された対象は、化合物Ａを含有する医薬化合物で処置される（例えば、約１．５ｍｇ／ｋｇの用量で）。対象は、月に約１回の頻度で、例えば、皮下注射によって、約６ヶ月、若しくはそれ以上の期間にわたって（例えば、症状が解消するか、又は安定するまで）組成物を投与される。１ヶ月又は２ヶ月毎に化合物Ａの有効性を評価するために、対象は臨床医によって（例えば、対象の症状及び／又は血清Ｃ３レベルを評価することにより）評価される。対象の血清Ｃ３は、対象からの血清サンプルを用いて定量され、化合物Ａが投与される前の対象の血清中に見出されるＣ３タンパク質の量若しくは対照量のＣ３タンパク質と、若しくは正常な対象（例えば、無病対象）からの血清サンプル中に存在するＣ３タンパク質の量と比較され、且つ／又はプラセボ治療患者からの血清サンプル中に存在するＣ３タンパク質の量と比較される。化合物Ａによる処置は、化合物Ａによる処置前の血清中のＣ３タンパク質の量と比較して、血清中のＣ３タンパク質の量が減少した場合、即ち、少なくとも１０％減少した場合に有効であると判定される。加えて、関節炎に関連する対象の症状、例えば、疼痛、こわばり、腫脹、発赤、及び可動域の減少などを臨床医が評価することにより、化合物Ａを投与される前に対象が経験していた症状と比較して、対象が経験している症状のいずれか又は全てに軽減があるか否かを評価することができる。
実施例２３．Ｃ３評価アッセイ
血漿又は組織中の化合物Ａの評価、ＷＩＥＳＬＡＢ（登録商標）補体機能活性アッセイ、循環Ｃ３の評価、Ｃ３ ｍＲＮＡ発現レベル、及び薬物動態アッセイを含む様々なアッセイを本明細書に記載のように使用して、Ｃ３レベルに対する化合物Ａの効果を特徴付けることができる。
化合物Ａの薬物動態アッセイ
マウス及びサルの血漿中の化合物Ａ又は化合物Ｊの濃度を測定した。血漿サンプル（ブランク、不明、標準、及びＱＣサンプル）を酵素的に処理した後、化合物Ａ又は化合物Ｊのアンチセンス鎖に対して配列相補性を有するペプチド核酸（ＰＮＡ）プローブとのハイブリダイゼーションを実施する。蛍光検出器を備えた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にサンプルを注入する。クロマトグラフィー分離は、ＤＮＡＰＡＣ（商標）ＰＡ２００分析カラムを用いたＳｈｉｍａｄｚｕ Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ ｓｙｓｔｅｍｓ上の勾配システムを用いて行った。蛍光検出器で、４３６ｎｍ（Ｅｘ）から４８４ｎｍ（Ｅｍ）のシグナルをモニターした。代謝産物の保持時間を確認するために、個体及び混合物の参照サンプルを調製し、注入した。化合物Ａ及びその予想される代謝産物のピークを首尾よく分離した。サル又はマウス血漿中の化合物Ａ又は化合物Ｊの定量は、それぞれ、線形回帰を用いて行った。このアッセイは、例えば、前述のように実施例６、１２、及び１７で使用された。
ＷＩＥＳＬＡＢ（登録商標）補体機能活性アッセイ（ＣＣＰ、ＣＡＰ、ＣＬＰ）
補体活性化の結果として生じるヒト終末補体複合体（Ｃ５ｂ ９）複合体を検出するために、ネオアンチゲンに特異的な標識抗体を用いて、ＷＩＥＳＬＡＢ（登録商標）補体系スクリーニングアッセイを用いて、補体古典経路（ＣＣＰ）、ＣＡＰ、及び補体レクチン経路活性を評価した。これらのアッセイは、カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍｏｎｋｅｙ）Ｃ５ｂ－９を検出することもできる。生成されたネオアンチゲンの量は、個別の経路の機能的活性のレベルに比例した。アッセイのマイクロタイターストリップのウェルを、古典的、若しくは代替的、又はレクチン経路の特異的活性化剤でコーティングした。サル血清サンプルは、それぞれの経路のみが活性化されたことを確実にする遮断薬を含む希釈液で希釈した。ウェルを洗浄し、発現したネオアンチゲンに対する特異的アルカリホスファターゼ標識抗体を用いて、Ｃ５ｂ－９を検出した。補体活性化の量は、４０５ｎｍの吸光度により測定した発色強度と相関した。試験キットで提供された陽性対照の値は、１００％補体活性化として定義された。全ての測定値は、補体活性のパーセント（％）として表され、以下のように決定された：
［（サンプル－陰性対照）／（陽性対照－陰性対照）］＊１００
このアッセイは、例えば、上記の実施例１７に使用された。
循環Ｃ３タンパク質レベル
カニクイザル循環Ｃ３タンパク質レベルの評価は、ヒト血清中の補体Ｃ３濃度の定量測定用に設計されたヒト補体Ｃ３酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）キット（ｃａｔ＃Ａｂ１０８８２３，Ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を用いて評価した。サルＣ３との交差反応性があるため、このキットは、カニクイザル血清サンプル中の循環Ｃ３タンパク質の測定にも使用した。補体Ｃ３特異的抗体を９６ウェルプレート上にプレコートし、遮断した。標準物質又は試験サンプルをウェルに添加した後、補体Ｃ３特異的ビオチン化検出抗体を添加し、続いて、洗浄バッファーで洗浄した。ストレプトアビジン－ペルオキシダーゼコンジュゲートを添加し、未結合コンジュゲートを洗浄バッファーで除去した。テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を使用して、ストレプトアビジン－ペルオキシダーゼ酵素反応を視覚化した。ＴＭＢをストレプトアビジン－ペルオキシダーゼで酸化し、酸性停止液を添加した後に黄色に変化する青色の生成物を生成した。黄色の着色の密度は、プレートに捕捉された補体Ｃ３の量に正比例した。サンプルの逆算濃度は、較正標準によって生成された曲線当てはめ回帰プログラムによって決定した。このアッセイは、例えば、上記の実施例１４及び１７に使用された。
Ｃ３ ｍＲＮＡ発現レベル
Ｃ３ ｍＲＮＡ発現の評価は、マルチプレックス相対定量リアルタイム逆転写酵素ＰＣＲアッセイを用いてカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍｏｎｋｅｙ）肝臓サンプル中で決定した。凍結肝臓組織からｍＲＮＡを単離した後、ｍＲＮＡ定量及び相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）への転写を行った。ｃＤＮＡをｑＰＣＲ反応のテンプレートとして使用して、ペプチジル－プロリルｃｉｓ－ｔｒａｎｓイソメラーゼＢ（ＰＰＩＢ）に対する正規化によりＣ３ ｍＲＮＡレベルを測定した。処置群におけるＣ３ ｍＲＮＡの程度は、未処置群又は投与前群に対する発現のパーセント（ＰＰＩＢ ｍＲＮＡレベルに正規化）として算出され、ここで、対照群におけるＣ３ ｍＲＮＡ発現は１００％に設定される。
薬物動態アッセイ
ヒト血漿中の化合物Ａの濃度は、ＨＰＬＣ－ＦＤ分析法を用いて測定される。血漿サンプル（ブランク、不明、標準、及び品質管理［ＱＣ］サンプル）をプロテイナーゼＫで酵素処理した後、化合物Ａのアンチセンス鎖に配列相補性を有したＰＮＡプローブとのハイブリダイゼーションを実施した。蛍光検出器を備えたＨＰＬＣに、サンプルを注入する。クロマトグラフィー分離は、ＤＮＡＰＡＣ（商標）ＰＡ２００分析カラムを用いたＳｈｉｍａｄｚｕ Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ ｓｙｓｔｅｍｓ上の勾配システムを用いて実施する。蛍光検出器で、４３６ｎｍ（Ｅｘ）から４８４ｎｍ（Ｅｍ）のシグナルをモニターする。化合物Ａの潜在的代謝物の保持時間に基づいて、ＬＣ勾配条件を調節し、決定する。代謝産物の保持時間を評価するために、個体及び混合物の参照サンプルを調製し、注入する。化合物Ａ及び代謝産物のピークを分離する。ヒト血漿中の化合物Ａの定量は、それぞれ、線形回帰を用いて実施する。
抗薬物抗体アッセイ
ヒト血清中の化合物Ａに対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）アッセイは開発中であり、電気化学発光（ＥＣＬ）ブリッジングアッセイを使用して実施される予定である。陽性対照（ＰＣ）は、キーホールリンペット（ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ）ヘモシアニン（ＫＬＨ）共役化合物Ａと、修飾化合物Ａ配列に対応する様々な長さのＫＬＨ共役オリゴヌクレオチドとからなる免疫原性カクテルに対して免疫されたウサギから作製される。ＰＣ、陰性対照（ＮＣ）、及び試験サンプルは、周囲室温で酸解離ステップに付され、次いで、ＴＲＩＳ、ビオチン－化合物Ａ、及びルテニウム標識化合物Ａを含むプレートに添加されて、サンプル中に存在する標識化合物Ａと化合物Ａ抗体との間に架橋複合体の形成を可能にする。インキュベーション後、ＮＣ、ＰＣ、及び試験サンプルをストレプトアビジン被覆プレートに移し、暗所で１時間インキュベートし、その間に薬物がプレートに結合して、ＡＤＡ架橋複合体を捕捉する。次に、プレートを洗浄し、メソスケールディスカバリー（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）（登録商標）（ＭＳＤ（登録商標））リードバッファーを追加して、サンプル中に存在するＡＤＡの量に正比例するＥＣＬ信号を生成する。ＡＤＡアッセイは、臨床サンプルの評価前に検証される。
他の実施形態
本明細書で言及された全ての刊行物、特許、及び特許出願は、各々の独立した刊行物又は特許出願が参照により組み込まれることが具体的且つ個別に示された場合と同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。特定の実施形態が本明細書に記載されているが、当業者は、本明細書に記載される原則に概ね従う変形、使用又は改変を含め、並びに当技術分野において周知の実施又は慣例的実施の範囲内にある、本開示からのそのような逸脱を含め、さらなる修正及び実施形態が包含されると共に、記載される以上の本質的な特徴に適用され得ること、並びに以下の特許請求の範囲に記載されることを理解するであろう。

Claims (93)

  1. 補体成分３（Ｃ３）発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩であって、前記オリゴヌクレオチドは、センス鎖及びアンチセンス鎖を含み、ここで、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖は、二重らせん領域を形成し、前記アンチセンス鎖は、配列番号１３又は１４のＣ３ ｍＲＮＡ標的配列に対して相補性の領域を含み、前記相補性の領域は、少なくとも１５の連続したヌクレオチド長である、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  2. 前記センス鎖が、１５～５０ヌクレオチド長である、請求項１に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  3. 前記センス鎖が、１８～３６ヌクレオチド長である、請求項１又は２に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  4. 前記アンチセンス鎖が、１５～３０ヌクレオチド長である、請求項１～３のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  5. 前記アンチセンス鎖が、２２ヌクレオチド長であり、前記アンチセンス鎖と前記センス鎖は、少なくとも１９ヌクレオチド長、任意選択で、少なくとも２０ヌクレオチド長の二重らせん領域を形成する、請求項１～４のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  6. 前記センス鎖が、３６ヌクレオチド長であり、前記アンチセンス鎖と前記センス鎖が、少なくとも１９ヌクレオチド長、任意選択で少なくとも２０ヌクレオチド長の二重らせん領域を形成する、請求項１～５のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  7. 前記相補性の領域が、少なくとも１９の連続したヌクレオチド長、任意選択で少なくとも２０ヌクレオチド長である、請求項１～６のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  8. 前記センス鎖の３’末端が、Ｓ１－Ｌ－Ｓ２として記載されるステムループを含み、この場合、Ｓ１は、Ｓ２と相補的であり、Ｌは、Ｓ１とＳ２との間に３～５ヌクレオチド長のループを形成する、請求項１～７のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  9. Ｌが、トリループ又はテトラループである、請求項８に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  10. Ｌが、テトラループである、請求項９に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  11. 前記テトラループが、配列番号８の核酸配列を含む、請求項１０に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  12. 前記Ｓ１及びＳ２が、１～１０ヌクレオチド長であり、この場合、任意選択で、Ｓ１及びＳ２は、同じ長さを有する、請求項８～１１のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  13. Ｓ１及びＳ２が、１ヌクレオチド、２ヌクレオチド、３ヌクレオチド、４ヌクレオチド、５ヌクレオチド、６ヌクレオチド、７ヌクレオチド、８ヌクレオチド、９ヌクレオチド、又は１０ヌクレオチド長である、請求項１２に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  14. Ｓ１及びＳ２が、６ヌクレオチド長である、請求項１３に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  15. 前記ステムループ領域が、配列番号７に対して少なくとも８５％の同一性を有する核酸配列を含む、請求項８～１４のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  16. 前記ステムループ領域が、配列番号７に対して少なくとも９５％の同一性を有する核酸配列を含む、請求項１５に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  17. 前記ステムループ領域が、配列番号７を含む、請求項１６に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  18. 前記ステムループが、配列番号７に対して最大１、２、若しくは３つの置換、挿入、又は欠失を有する核酸を含む、請求項８～１６のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  19. 前記アンチセンス鎖が、１ヌクレオチド長以上の３’オーバーハング配列を含む、請求項１～１７のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  20. 前記アンチセンス鎖が、少なくとも２つのヌクレオチドの連結された３’オーバーハングを含む、請求項１９に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  21. 前記３’オーバーハング配列が、２ヌクレオチド長であり、この場合、任意選択で、３’オーバーハング配列はＧＧである、請求項２０に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  22. 前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む、請求項１～２１のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  23. 前記オリゴヌクレオチドが、２０～５０の修飾ヌクレオチドを含む、請求項２２に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  24. 前記オリゴヌクレオチドの全部が修飾されている、請求項２２又は２３に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  25. 前記修飾ヌクレオチドが、２’－修飾を含む、請求項２２～２４のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  26. 前記２’－修飾が、２’－アミノエチル、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル、及び２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸から選択される修飾である、請求項２５に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  27. 前記２’－修飾が、２’－フルオロ又は２’－Ｏ－メチルであり、この場合、任意選択で、前記２’－フルオロ修飾は、２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドであり、及び／又は、前記２’－Ｏ－メチル修飾は、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドである、請求項２６に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  28. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、４０～５０の２’－Ｏ－メチル修飾を含み、任意選択で、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、４０～５０の２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドを含む、請求項２７に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  29. 前記センス鎖のヌクレオチド１～７、１１～２７、及び３１～３６の少なくとも１つと、前記アンチセンス鎖のヌクレオチド１、６、８、９、１１～１３、及び１５～２２の１つ以上、又は全てが、２’－Ｏ－メチル、例えば、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドで修飾されている、請求項２８に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  30. 前記センス鎖のヌクレオチド１～７、１１～２７、及び３１～３６のうちの１０～３０と、前記アンチセンス鎖のヌクレオチド１、６、８、９、１１～１３、及び１５～２２の１つ以上、又は全てが、２’－Ｏ－メチル、例えば、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドで修飾されている、請求項２９に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  31. 前記センス鎖のヌクレオチド１～７、１２～２７、及び３１～３６の全てと、前記アンチセンス鎖のヌクレオチド１、６、８、９、１１～１３、及び１５～２２の１つ以上、又は全てが、２’－Ｏ－メチル、例えば、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドで修飾されている、請求項２９に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  32. 前記センス鎖のヌクレオチド１、２、４～７、１１、１４～１６、１８～２７、及び３１～３６の全てと、前記アンチセンス鎖のヌクレオチド１、６、９、１１、１３、１５、１７、１８、及び２０～２２の１つ以上、又は全てが、２’－Ｏ－メチル、例えば、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシドで修飾されている、請求項２９に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  33. 前記オリゴヌクレオチドが、５～１５の２’－フルオロ修飾、例えば、２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドによる修飾を含む、請求項２８～３２のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  34. 前記センス鎖のヌクレオチド３、８、９、１０、１１、１２、１３、及び１７のうちの少なくとも１つと、前記アンチセンス鎖のヌクレオチド２、３、４、５、７、８、１０、１２、１４、１６、及び１９のうちの１つ以上、又は全てが、２’－フルオロ、例えば、２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドで修飾されている、請求項２８に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  35. 前記センス鎖のヌクレオチド３、８、９、１０、１１、１２、１３、及び１７のうちの２～４つと、前記アンチセンス鎖のヌクレオチド２、３、４、５、７、８、１０、１２、１４、１６、及び１９のうちの１つ以上、又は全てが、２’－フルオロ、例えば、２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドで修飾されている、請求項３４に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  36. 前記センス鎖のヌクレオチド８、９、１０、及び１１の全てと、前記アンチセンス鎖のヌクレオチド２、３、４、５、７、１０、及び１４のうちの１つ以上、又は全てが、２’－フルオロ、例えば、２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドで修飾されている、請求項３４に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  37. 前記センス鎖のヌクレオチド３、８～１０、１２、１３、及び１７の全てと、前記アンチセンス鎖のヌクレオチド２～５、７、８、１０、１２、１４、１６、及び１９のうちの１つ以上、又は全てが、２’－フルオロ、例えば、２’－フルオロデオキシリボヌクレオシドで修飾されている、請求項３４に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  38. 前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合を含む、請求項１～３７のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  39. 少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合が、ホスホロチオエート結合である、請求項３８に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  40. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、前記センス鎖のヌクレオチド１と２、並びにアンチセンス鎖のヌクレオチド１と２、２と３、２０と２１、及び２１と２２の間にホスホロチオエート結合を有する、請求項３９に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  41. 前記センス鎖と前記アンチセンス鎖の間に、ヌクレオチド間結合がない、請求項１～４０のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  42. 前記アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素が、リン酸塩類似体を含む、請求項１～４１のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  43. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、前記アンチセンス鎖の５’末端にウリジンを含む、請求項１～４１のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  44. 前記ウリジンが、リン酸塩類似体を含む、請求項４３に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  45. 前記リン酸塩類似体が、４’－Ｏ－モノメチルホスホネートである、請求項４２～４４のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  46. 前記リン酸塩類似体を含む前記ウリジンが、以下の構造：
    を含む、請求項４４に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  47. 前記オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオチドが、１つ以上のターゲティングリガンドと共役している、請求項１～４６のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  48. 各ターゲティングリガンドが、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ポリペプチド、又は脂質を含む、請求項４７に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  49. 各ターゲティングリガンドが、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分を含む、請求項４７又は４８に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  50. 前記ＧａｌＮＡｃ部分が、一価ＧａｌＮＡｃ部分、二価ＧａｌＮＡｃ部分、三価ＧａｌＮＡｃ部分又は四価ＧａｌＮＡｃ部分である、請求項４９に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  51. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、前記センス鎖と共役した１～５つの２’－Ｏ－Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分を含む、請求項８～５０のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  52. 前記ステムループのＬの最大４ヌクレオチドが、一価ＧａｌＮＡｃ部分と共役されている、請求項５１に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  53. 前記センス鎖のヌクレオチド２８～３０位におけるヌクレオチドの１つ以上が、一価ＧａｌＮＡｃ部分と共役されている、請求項５２に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  54. 前記センス鎖の２８～３０位のヌクレオチドの各々が、一価ＧａｌＮＡｃ部分と共役されている、請求項５３に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  55. 前記センス鎖の２８～３０位のヌクレオチドが、以下の構造：
    を含み、
    Ｚは、結合、クリックケミストリーハンドル、又は長さが１～２０（両端の値を含む）の連続した共有結合原子のリンカーを表し、これは、置換及び非置換アルキレン、置換及び非置換アルケニレン、置換及び非置換アルキニレン、置換及び非置換ヘテロアルキレン、置換及び非置換ヘテロアルケニレン、置換及び非置換ヘテロアルキニレン、並びにこれらの組合せからなる群から選択され；
    Ｘは、Ｏ、Ｓ、又はＮである、請求項５４に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  56. Ｚが、アセタールリンカーである、請求項５５に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  57. Ｘが、Ｏである、請求項５５又は５６のいずれかに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  58. 前記センス鎖の２８～３０位のヌクレオチドが、以下の構造：
    を含む、請求項５４に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  59. 前記センス鎖が、配列番号１又は配列番号４のヌクレオチド配列を含む、請求項１～５８のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  60. 前記アンチセンス鎖が、配列番号３又は配列番号６のヌクレオチド配列を含む、請求項１～５９のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  61. 前記センス鎖及びアンチセンス鎖が、以下：
    （ａ）それぞれ、配列番号１及び３、並びに
    （ｂ）それぞれ、配列番号４及び６
    からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項１～６０のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  62. 前記センス鎖が、配列番号１に記載のヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が、配列番号３に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項１～６０のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  63. 前記センス鎖が、配列番号４に記載のヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が、配列番号６に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項１～６０のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  64. 前記センス鎖が、配列番号３７に記載のヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が、配列番号３８に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項１～６１のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  65. 前記センス鎖が、配列番号３９に記載のヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が、配列番号４０に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項１～６１のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩。
  66. 請求項１～６５のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又はその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される担体、賦形剤、又は希釈剤とを含む医薬組成物。
  67. 補体経路活性化又は調節不全により媒介される疾患を治療する方法であって、対象の細胞を、請求項１～６５のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド若しくは請求項６６に記載の医薬組成物、又はその薬学的に許容される塩と接触させることを含む方法。
  68. Ｃ３のｍＲＮＡ転写産物の分解を達成するのに十分な時間をかけて、前記細胞を接触させる、請求項６７に記載の方法。
  69. 前記細胞におけるＣ３の発現が低減される、請求項６７又は６８に記載の方法。
  70. 前記細胞におけるＣ３の転写が低減される、請求項６７又は６８に記載の方法。
  71. 前記細胞におけるＣ３のレベル及び／又は活性が低下する、請求項６７に記載の方法。
  72. Ｃ３のレベル及び／又は活性が、請求項１～６５のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、又は請求項６６に記載の医薬組成物を投与されていない対象の細胞中のＣ３のレベル及び／又は活性と比較して、１０％～１００％低下する、請求項６７に記載の方法。
  73. Ｃ３のレベル及び／又は活性が、請求項１～６５のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項６６に記載の医薬組成物を投与されていない対象の細胞中のＣ３のレベル及び／又は活性と比較して、５０％～９９％低下する、請求項７２に記載の方法。
  74. 前記対象が、哺乳動物である、請求項６７～７３のいずれか１項に記載の方法。
  75. 前記対象が、ヒトである、請求項７４に記載の方法。
  76. 前記対象が、補体経路活性化又は調節不全により媒介される疾患、障害、若しくは状態を有するものとして識別される、請求項６７～７５のいずれか１項に記載の方法。
  77. 補体経路活性化又は調節不全により媒介される前記疾患が、以下：発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、ＩｇＡ腎症、ループス腎炎、Ｃ３糸球体症（Ｃ３Ｇ）、皮膚筋炎／自己免疫性筋炎、全身性硬化症、脱髄性多発ニューロパチー、天疱瘡、膜性腎症、限局性分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、水疱性類天疱瘡、後発性表皮水疱症（ＥＢＡ）、粘液膜類天疱瘡、ＡＮＣＡ血管炎、低補体血症性蕁麻疹性血管炎、免疫複合体小血管炎、皮膚小血管炎、自己免疫性壊死性ミオパチー、腎臓、肝臓、心臓若しくは肺移植拒絶反応などの移植臓器の拒絶反応、例えば、慢性ＡＭＲ（ｃＡＭＲ）などの抗体関連型拒絶反応（ＡＭＲ）、抗リン脂質（ａＰＬ）抗体症候群、糸球体腎炎、喘息、密沈着性疾患（ＤＤＤ）、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ（ＲＡ）、重症難治性ＲＡ、フェルティ症候群、多発性硬化症（ＭＳ）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、脊髄損傷、虚血再灌流障害、子癇前症、急性腎障害における臓器移植後機能障害（ＤＧＦ－ＡＫＩ）、心肺バイパス関連急性腎障害、低酸素性虚血性脳症、透析誘発血栓症、高安動脈炎、再発性多発性軟骨炎、急性／予防的移植片対宿主病、慢性移植片対宿主病、ベータサラセミア、幹細胞移植関連血栓性微小血管症、胆道閉鎖症、炎症性肝疾患、ベーチェット病、虚血性脳卒中、脳内出血、強皮症、強皮症腎クリーゼ、強皮症関連間質性肺疾患（ＳＳｃ－ＩＬＤ）、鎌状赤血球症、常染色体優性多発性嚢胞腎（ＡＤＰＫＤ）、化学療法誘発性末梢神経障害（ＣＩＰＮ）、糖尿病性ニューロパチー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、地図状萎縮症、肺動脈性高血圧症、難治性重症喘息、慢性閉塞性肺疾患、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、慢性肺同種移植機能障害、嚢胞性線維症における肺病状態、化膿性汗腺炎、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＳＨ）、強直性脊椎炎、造血幹細胞移植関連血栓性細小血管症（ＨＳＣＴ－ＴＭＡ）（予防）、冠動脈疾患、アテローム性動脈硬化症、骨粗鬆症（予防）、変形性関節症、ハイリスクドルーゼン、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、間質性膀胱炎、透析誘発性補体活性化、壊疽性膿皮症、慢性心不全、自己免疫性心筋炎、鼻ポリープ症、急性及び慢性膵炎、アテローム性動脈硬化症、好酸球性食道炎、好酸球性肉芽腫症、好酸球増多症候群、創傷治癒、及び血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）である、請求項６７～７６のいずれか１項に記載の方法。
  78. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、又は医薬組成物が、毎日、毎週、毎月、又は毎年の投与のために製剤化される、請求項６７～７７のいずれか１項に記載の方法。
  79. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、又は医薬組成物が、静脈内、皮下、筋肉内、経口、鼻腔内、舌下、髄腔内、及び皮内投与のために製剤化される、請求項６７～７８のいずれか１項に記載の方法。
  80. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、又は医薬組成物が、皮下投与のために製剤化される、請求項７９に記載の方法。
  81. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、又は医薬組成物が、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１５０ｍｇ／ｋｇの用量での投与のために製剤化される、請求項６７～８０のいずれか１項に記載の方法。
  82. 細胞、細胞の集団、又は対象におけるＣ３発現を低減するための方法であって、前記方法は、以下：
    ｉ）前記細胞若しくは前記細胞の集団を、請求項１～６５のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項６６に記載の医薬組成物と接触させるステップ；或いは
    ｉｉ）請求項１～６５のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項６６に記載の医薬組成物を前記対象に投与するステップを含む、方法。
  83. Ｃ３発現を低減することは、Ｃ３ ｍＲＮＡの量若しくはレベル、Ｃ３タンパク質の量若しくはレベル、又はその両方を低下させることを含む、請求項８２に記載の方法。
  84. 前記Ｃ３ ｍＲＮＡのレベル、Ｃ３タンパク質のレベル、又はその両方が、請求項１～６５のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項６６に記載の医薬組成物を投与されていない対象の細胞中の前記Ｃ３ ｍＲＮＡのレベル、Ｃ３タンパク質のレベル、又はその両方と比較して、１０％～１００％低下する、請求項８３に記載の方法。
  85. 前記Ｃ３ ｍＲＮＡのレベル、Ｃ３タンパク質のレベル、又はその両方が、請求項１～６５のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項６６に記載の医薬組成物を投与されていない対象の細胞中の前記Ｃ３ ｍＲＮＡのレベル、Ｃ３タンパク質のレベル、又はその両方と比較して、５０％～９９％低下する、請求項８３又は８４に記載の方法。
  86. 前記対象が、補体経路活性化又は調節不全により媒介される疾患、障害、若しくは状態を有する、請求項８２～８５のいずれか１項に記載の方法。
  87. 補体経路活性化又は調節不全により媒介される前記疾患、障害、若しくは状態が、以下：発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、ＩｇＡ腎症、ループス腎炎、Ｃ３糸球体症（Ｃ３Ｇ）、皮膚筋炎／自己免疫性筋炎、全身性硬化症、脱髄性多発ニューロパチー、天疱瘡、膜性腎症、限局性分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、水疱性類天疱瘡、後発性表皮水疱症（ＥＢＡ）、粘液膜類天疱瘡、ＡＮＣＡ血管炎、低補体血症性蕁麻疹性血管炎、免疫複合体小血管炎、皮膚小血管炎、自己免疫性壊死性ミオパチー、腎臓、肝臓、心臓若しくは肺移植拒絶反応などの移植臓器の拒絶反応、例えば、慢性ＡＭＲ（ｃＡＭＲ）などの抗体関連型拒絶反応（ＡＭＲ）、抗リン脂質（ａＰＬ）抗体症候群、糸球体腎炎、喘息、密沈着性疾患（ＤＤＤ）、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ（ＲＡ）、重症難治性ＲＡ、フェルティ症候群、多発性硬化症（ＭＳ）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、脊髄損傷、虚血再灌流障害、子癇前症、急性腎障害における臓器移植後機能障害（ＤＧＦ－ＡＫＩ）、心肺バイパス関連急性腎障害、低酸素性虚血性脳症、透析誘発血栓症、高安動脈炎、再発性多発性軟骨炎、急性／予防的移植片対宿主病、慢性移植片対宿主病、ベータサラセミア、幹細胞移植関連血栓性微小血管症、胆道閉鎖症、炎症性肝疾患、ベーチェット病、虚血性脳卒中、脳内出血、強皮症、強皮症腎クリーゼ、強皮症関連間質性肺疾患（ＳＳｃ－ＩＬＤ）、鎌状赤血球症、常染色体優性多発性嚢胞腎（ＡＤＰＫＤ）、化学療法誘発性末梢神経障害（ＣＩＰＮ）、糖尿病性ニューロパチー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、地図状萎縮症、肺動脈性高血圧症、難治性重症喘息、慢性閉塞性肺疾患、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、慢性肺同種移植機能障害、嚢胞性線維症における肺病状態、化膿性汗腺炎、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＳＨ）、強直性脊椎炎、造血幹細胞移植関連血栓性細小血管症（ＨＳＣＴ－ＴＭＡ）（予防）、冠動脈疾患、アテローム性動脈硬化症、骨粗鬆症（予防）、変形性関節症、ハイリスクドルーゼン、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、間質性膀胱炎、透析誘発性補体活性化、壊疽性膿皮症、慢性心不全、自己免疫性心筋炎、鼻ポリープ症、急性及び慢性膵炎、アテローム性動脈硬化症、好酸球性食道炎、好酸球性肉芽腫症、好酸球増多症候群、創傷治癒、及び血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）からなる群から選択される、請求項８６に記載の方法。
  88. 請求項１～６６のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項６６に記載の医薬組成物を含むキット。
  89. それを必要とする対象における補体経路活性化又は調節不全によって媒介される疾患、障害、若しくは状態の予防又は治療に使用するための請求項１～６５のいずれか１項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、又は請求項６６に記載の医薬組成物。
  90. それを必要とする対象における、以下：発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、ＩｇＡ腎症、ループス腎炎、Ｃ３糸球体症（Ｃ３Ｇ）、皮膚筋炎／自己免疫性筋炎、全身性硬化症、脱髄性多発ニューロパチー、天疱瘡、膜性腎症、限局性分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、水疱性類天疱瘡、後発性表皮水疱症（ＥＢＡ）、粘液膜類天疱瘡、ＡＮＣＡ血管炎、低補体血症性蕁麻疹性血管炎、免疫複合体小血管炎、皮膚小血管炎、自己免疫性壊死性ミオパチー、腎臓、肝臓、心臓若しくは肺移植拒絶反応などの移植臓器の拒絶反応、例えば、抗体関連型拒絶反応（ＡＭＲ）、抗リン脂質（ａＰＬ）抗体症候群、糸球体腎炎、喘息、密沈着性疾患（ＤＤＤ）、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ（ＲＡ）、重症難治性ＲＡ、フェルティ症候群、多発性硬化症（ＭＳ）、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、脊髄損傷、虚血再灌流障害、子癇前症、急性腎障害における臓器移植後機能障害（ＤＧＦ－ＡＫＩ）、心肺バイパス関連急性腎障害、低酸素性虚血性脳症、透析誘発血栓症、高安動脈炎、再発性多発性軟骨炎、急性／予防的移植片対宿主病、慢性移植片対宿主病、ベータサラセミア、幹細胞移植関連血栓性微小血管症、胆道閉鎖症、炎症性肝疾患、ベーチェット病、虚血性脳卒中、脳内出血、強皮症、強皮症腎クリーゼ、強皮症関連間質性肺疾患（ＳＳｃ－ＩＬＤ）、鎌状赤血球症、常染色体優性多発性嚢胞腎（ＡＤＰＫＤ）、化学療法誘発性末梢神経障害（ＣＩＰＮ）、糖尿病性ニューロパチー、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、地図状萎縮症、肺動脈性高血圧症、難治性重症喘息、慢性閉塞性肺疾患、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、慢性肺同種移植機能障害、嚢胞性線維症における肺病状態、化膿性汗腺炎、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＳＨ）、強直性脊椎炎、造血幹細胞移植関連血栓性細小血管症（ＨＳＣＴ－ＴＭＡ）（予防）、冠動脈疾患、アテローム性動脈硬化症、骨粗鬆症（予防）、変形性関節症、ハイリスクドルーゼン、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、間質性膀胱炎、透析誘発性補体活性化、壊疽性膿皮症、慢性心不全、自己免疫性心筋炎、鼻ポリープ症、急性及び慢性膵炎、アテローム性動脈硬化症、好酸球性食道炎、好酸球性肉芽腫症、好酸球増多症候群、創傷治癒、及び血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）の予防又は治療に使用するための請求項８９に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、又は医薬組成物。
  91. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、又は医薬組成物が皮下投与される、請求項８９又は９０に記載の使用のためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、若しくはその薬学的に許容される塩、又は医薬組成物。
  92. 前記ＲＮＡオリゴヌクレオチドが、薬学的に許容される塩を含む、請求項１～６６のいずれか１項に記載のＲＮＡオリゴヌクレオチド。
  93. 前記薬学的に許容される塩が、ナトリウム塩である、請求項９２に記載のＲＮＡオリゴヌクレオチド。
JP2023564255A 2021-04-20 2022-04-20 補体成分３の発現を阻害するための組成物及び方法 Pending JP2024515344A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202163177254P 2021-04-20 2021-04-20
US63/177,254 2021-04-20
PCT/US2022/025648 WO2022226127A1 (en) 2021-04-20 2022-04-20 Compositions and methods for inhibiting complement component 3 expression

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2024515344A true JP2024515344A (ja) 2024-04-09

Family

ID=83723122

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2023564255A Pending JP2024515344A (ja) 2021-04-20 2022-04-20 補体成分３の発現を阻害するための組成物及び方法

Country Status (10)

Country Link
EP (1) EP4326876A1 (ja)
JP (1) JP2024515344A (ja)
KR (1) KR20230173116A (ja)
CN (1) CN117295819A (ja)
AU (1) AU2022261922A1 (ja)
BR (1) BR112023021703A2 (ja)
CA (1) CA3177629A1 (ja)
CO (1) CO2023014681A2 (ja)
IL (1) IL307721A (ja)
WO (1) WO2022226127A1 (ja)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW202400193A (zh) 2022-06-24 2024-01-01 丹麥商諾佛 儂迪克股份有限公司 抑制跨膜絲胺酸蛋白酶６（ｔｍｐｒｓｓ６）表現的組成物及方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2017346486A1 (en) * 2016-10-17 2019-05-23 Apellis Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy for C3 inhibition
EP4048793A1 (en) * 2019-10-22 2022-08-31 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Complement component c3 irna compositions and methods of use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
BR112023021703A2 (pt) 2024-01-30
CN117295819A (zh) 2023-12-26
AU2022261922A1 (en) 2023-10-26
CA3177629A1 (en) 2022-10-27
IL307721A (en) 2023-12-01
KR20230173116A (ko) 2023-12-26
CO2023014681A2 (es) 2024-01-25
EP4326876A1 (en) 2024-02-28
WO2022226127A1 (en) 2022-10-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2022519019A (ja) オリゴヌクレオチド組成物及びその方法
EP3087184B1 (en) Methods and compositions for the specific inhibition of glycolate oxidase (hao1) by double-stranded rna
JP2022078069A (ja) 二本鎖ＲＮＡによるα－１アンチトリプシンの特異的阻害のための方法及び組成物
CA3024624A1 (en) Polynucleotides encoding porphobilinogen deaminase for the treatment of acute intermittent porphyria
TW201938792A (zh) 用於抑制ｐｎｐｌａ３表現之ｒｎａｉ構建體及其使用方法
KR20150004414A (ko) Kras-관련 질환을 치료하기 위한 유기 조성물
TW201143780A (en) Treatment of Colony-stimulating factor 3 (CSF3) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to CSF3
IL300338A (en) Compounds and methods for inhibiting the expression of LPA
JP2024515344A (ja) 補体成分３の発現を阻害するための組成物及び方法
US20220340909A1 (en) Compositions and methods for inhibiting ketohexokinase (khk)
US20230340487A1 (en) Compositions and methods for the treatment of metabolic syndrome
TW202345866A (zh) 用於抑制補體因子ｂ的組成物及方法
JP7463621B2 (ja) ミトコンドリアアミドキシム還元成分１（ｍａｒｃ１）発現を阻害するための組成物および方法
KR102644654B1 (ko) 핵 수용체 서브패밀리 1 그룹 h 구성원 3(nr1h3) 발현을 억제하기 위한 조성물 및 방법
US11952574B2 (en) Compositions and methods for inhibiting transmembrane serine protease 6 (TMPRSS6) expression
TW202300645A (zh) 用於調節ｐｎｐｌａ３表現之組合物及方法
KR20240046843A (ko) 알파-1 항트립신 발현을 억제하기 위한 조성물 및 방법
CN117858949A (zh) 用于抑制粘蛋白5AC(MUC5AC)的表达的RNAi试剂、其组合物及其使用方法
KR20170058979A (ko) 헌팅턴병 일배체형에 대한 대립 유전자-특이적 치료