JP2024002985A - 膜貫通型セリンプロテアーゼ６（ｔｍｐｒｓｓ６）発現を阻害するための組成物および方法 - Google Patents

膜貫通型セリンプロテアーゼ６（ｔｍｐｒｓｓ６）発現を阻害するための組成物および方法 Download PDF

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Abstract

【課題】本発明が解決しようとする課題は、鉄過剰と関連する障害の効果的な治療のための方法を提供することである。【解決手段】本発明は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を阻害するオリゴヌクレオチドに関する。本発明は、また、同オリゴヌクレオチドを含む組成物およびその使用、特に、ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、および／または状態を治療することにも関する。【選択図】なし

Description

本発明は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を阻害するオリゴヌクレオチドに関する。また、同オリゴヌクレオチドを含む組成物およびその使用、特に、ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、および／または状態を治療することに関する使用にも関する。
鉄は、あらゆる生物の生物学的に必要不可欠な成分である微量栄養素である。これは、適切な赤血球生成機能、酸化代謝、細胞免疫応答、および多数の他の細胞プロセスに必要とされる。その遊離形態では、鉄は、酸化還元反応に関与し、フリーラジカルの形成、すなわち、臓器損傷につながり得る酸化ストレスにつながる。生物は、細胞膜および生体液を通して遊離鉄を輸送し、非毒性かつ容易に動員可能な形態でそれを貯蔵して鉄毒性を回避するためのタンパク質系を発達させてきた。人体では、鉄は主に、ヘム化合物、ヘム酵素、または非ヘム化合物としてタンパク質に結合した複雑な形態で存在する。鉄吸収は、二価金属輸送１によって腸細胞によって起こり、十二指腸および空腸上部で行われる。次いで、鉄は、十二指腸粘膜にわたって血液中に移送され、そこでトランスフェリンによって赤血球生成のために細胞または骨髄に輸送される。鉄は、いくつかの多様な細胞機能に必要とされるため、鉄の取り込み、輸送、貯蔵、および利用の間の一定のバランスが、鉄の恒常性を維持するために必要とされる。ＨＡＭＰ遺伝子によってコードされる循環ペプチドホルモンであるヘプシジンは、鉄の恒常性の維持に重要な役割を果たす肝臓によって分泌される。ヘプシジン発現は、鉄摂取量の変動によって直接調節され、その抑制は、生物学的に利用可能な血清鉄レベルの増加につながる。ヘプシジンは、食物から鉄を吸収する十二指腸の腸細胞の細胞膜に局在する主要な鉄輸出物質であるフェロポルチンと、老化赤血球から鉄を再循環させるマクロファージとのその直接結合によって、血漿内への鉄流束を阻止する。フェロポルチンへのヘプシジン結合は、その内部化および後続のリソソーム分解を誘発し、それによって、循環系への鉄の輸出を阻止する。肝ヘプシジン発現は、３つの独立した経路によって調節され、炎症（炎症性サイトカイン）および高い血清鉄レベルがヘプシジンの上方調節をもたらす一方で、赤血球生成の上昇によって下方調節され、赤血球産生のための高い鉄需要を促進する。言い換えれば、ヘプシジンレベルが高いときに、血清鉄レベルが減少し、貧血をもたらし得る。ヘプシジンレベルが低いとき、ヘモクロマトーシスなどの病状では、鉄レベルが上昇し、過負荷が起こり得る。
病理学的状況では、ヘプシジンの長期の抑制はしばしば、血漿鉄感知シグナル伝達経路における機能喪失の結果としてのその発現機能不全（例えば、遺伝性ヘモクロマトーシス）により、一次鉄過剰につながる。赤血球生成が亢進するが機能不全となる状況（例えば、ベータサラセミア）では、ヘプシジンが下方調節され、二次鉄過剰をもたらす。一次および二次鉄過剰の病態生理学的結果は、一般的であり、疾患進行時に損傷を引き起こす器官内の蓄積である、遊離血漿鉄の蓄積をもたらす。
ＴＭＰＲＳＳ６（膜貫通型プロテアーゼ、セリン６）は、ＩＩ型セリンプロテアーゼをコードし、主に肝臓で発現される。ＴＭＰＲＳＳ６は、鉄欠乏によって誘発される膜貫通型シグナル伝達経路に関与し、ヘプシジンをコードする遺伝子であるＨＡＭＰ活性化の多様な経路を抑制する。
研究は、ヘプシジンの上方調節が異常な赤血球生成を改善し、ベータサラセミア媒介物および遺伝性ヘモクロマトーシスのマウスモデルで鉄過剰を予防または制限することを示している（［非特許文献１］、［非特許文献２］、［非特許文献３］、［非特許文献４］、［非特許文献５］）。ＨＦＥ関連遺伝性ヘモクロマトーシスは、遺伝性鉄過剰症の最も一般的な種類であり、北ヨーロッパの人口でｐ．Ｃ２８２Ｙ変異の有病率が高い（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ ａｎｄ Ｋｏｗｄｌｅｙ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００９）。肝臓内のヘプシジン産生障害は、ＨＦＥ関連ヘモクロマトーシスにおける鉄過剰につながると考えられる。この状況での鉄過剰は、しばしば、肝硬変および糖尿病などの合併症、ならびに他の罹患臓器の不全につながる。
ヘプシジン発現の抑制におけるその役割と一致して、ＴＭＰＲＳＳ６の変異は、鉄剤不応性鉄欠乏性貧血などの障害をもたらす。ヘプシジン発現は、ＴＭＰＲＳＳ６－／－マウスでは著しく上昇し、Ｈｆｅ－／－マウスにおけるＴＭＰＲＳＳ６の低減は、鉄過剰表現型を改善し得る（［非特許文献６］、［非特許文献７］、［非特許文献８］）。
そのような証拠は、鉄過剰と関連する疾患の治療においてＴＭＰＲＳＳ６を標的化するための役割を示唆している。そのような疾患に対する現在の治療選択肢は限定されている。したがって、現在、鉄過剰と関連する障害の効果的な治療のための方法が必要とされており、本発明は、この必要性に対処する。
Ｇａｒｄｅｎｇｈｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，２０１０ Ｇｕｏ ｅｔ ａｌ，．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，２０１３ Ｓｃｈｍｉｄｔ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ ２０１３ Ｃａｓｕ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ ２０１６ Ｒａｍｏｓ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ ２０１２ Ｄｕ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００８ Ｆｏｌｇｕｅｒａｓ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ ２００８ Ｆｉｎｂｅｒｇ ＫＥ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０１１
本開示は、部分的に、インビトロおよびインビボでＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）の発見に基づく。ＴＭＰＲＳＳ６の異常な発現は、ヘプシジン発現および血清鉄レベルの変化と関連することが示されている。本明細書で実証されるように、血清鉄および血清鉄飽和度は、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの投与後にインビボで低減される。理論によって拘束されるものではないが、ＴＭＰＲＳＳ６の阻害は、ヘプシジン発現を増加させ、その後、血清鉄レベルを低減させて鉄過剰を予防する。したがって、理論によって拘束されることを所望するものではないが、ＴＭＰＲＳＳ６を標的化するオリゴヌクレオチドは、ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患または障害を治療するために有用である。
したがって、いくつかの態様では、本開示は、膜貫通型セリンプロテアーゼ６（ＴＭＰＲＳＳ６）発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供し、オリゴヌクレオチドは、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、センス鎖およびアンチセンス鎖は、二本鎖領域を形成し、アンチセンス鎖は、配列番号６６１～８５２のうちのいずれか１つのＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と相補性の領域を含み、相補性の領域は、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである。
いくつかの実施形態では、センス鎖は、１５～５０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖は、１８～３６個のヌクレオチドの長さである。
いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、１５～３０個のヌクレオチドの長さである。
いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２２個のヌクレオチドの長さであり、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、少なくとも１９個のヌクレオチドの長さ、任意選択で、少なくとも２０個のヌクレオチドの長さの二本鎖領域を形成する。いくつかの実施形態では、相補性の領域は、少なくとも１９個の連続するヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、相補性の領域は、少なくとも２０個の連続するヌクレオチドの長さである。
いくつかの態様では、本開示は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するための二本鎖ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供し、オリゴヌクレオチドは、
（ｉ）１９～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖であって、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と相補性の領域を含むヌクレオチド配列を含み、相補性の領域が、配列番号１～１９２から選択される、アンチセンス鎖と、
（ｉｉ）アンチセンス鎖と相補性の領域を含む、１９～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と、を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、アンチセンス鎖の３’末端に１～４個のヌクレオチドのオーバーハングを有する非対称性二本鎖領域を形成する、別個の鎖である。
いくつかの態様では、本開示は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するための二本鎖ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供し、オリゴヌクレオチドは、
（ｉ）１９～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖であって、アンチセンス鎖が、配列番号１～１９２から選択されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と相補的である、アンチセンス鎖と、
（ｉｉ）アンチセンス鎖と相補性の領域を含む、１９～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と、を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、アンチセンス鎖の３’末端に１～４個のヌクレオチドのオーバーハングを有する非対称性二本鎖領域を形成する、別個の鎖である。
いくつかの実施形態では、センス鎖の３’末端は、Ｓ１－Ｌｐ－Ｓ２として示されるステム－ループを含み、Ｓ１は、Ｓ２と相補的であり、Ｌｐは、Ｓ１とＳ２との間で３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成する。いくつかの実施形態では、Ｌｐは、トリループまたはテトラループである。いくつかの実施形態では、Ｌｐは、テトラループである。いくつかの実施形態では、テトラループは、配列５’－ＧＡＡＡ－３’を含む。いくつかの実施形態では、Ｓ１およびＳ２は、１～１０個のヌクレオチドの長さであり、同じ長さを有する。いくつかの実施形態では、Ｓ１およびＳ２は、１個のヌクレオチド、２個のヌクレオチド、３個のヌクレオチド、４個のヌクレオチド、５個のヌクレオチド、６個のヌクレオチド、７個のヌクレオチド、８個のヌクレオチド、９個のヌクレオチド、または１０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、Ｓ１およびＳ２は、６個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、ステム－ループは、配列５’－ＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ－３’（配列番号８５６）を含む。
いくつかの実施形態では、センス鎖は、センス鎖の３’末端の近位に、Ｓ１－Ｌｐ－Ｓ２として示されるステム－ループを含み、Ｓ１は、Ｓ２と相補的であり、Ｌｐは、Ｓ１とＳ２との間で３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成する。いくつかの実施形態では、Ｌｐは、トリループまたはテトラループである。いくつかの実施形態では、Ｌｐは、テトラループである。いくつかの実施形態では、テトラループは、配列５’－ＧＡＡＡ－３’を含む。いくつかの実施形態では、Ｓ１およびＳ２は、１～１０個のヌクレオチドの長さであり、同じ長さを有する。いくつかの実施形態では、Ｓ１およびＳ２は、１個のヌクレオチド、２個のヌクレオチド、３個のヌクレオチド、４個のヌクレオチド、５個のヌクレオチド、６個のヌクレオチド、７個のヌクレオチド、８個のヌクレオチド、９個のヌクレオチド、または１０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、Ｓ１およびＳ２は、６個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、ステム－ループは、配列５’－ＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ－３’（配列番号８５６）を含む。
いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、１個以上のヌクレオチドの長さの３’オーバーハング配列を含む。いくつかの実施形態では、オーバーハングは、プリンヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、３’オーバーハング配列は、２個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、３’オーバーハングは、ＡＡ、ＧＧ、ＡＧ、およびＧＡから選択される。いくつかの実施形態では、オーバーハングは、ＧＧまたはＡＡである。いくつかの実施形態では、オーバーハングは、ＧＧである。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１個の修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、２’－修飾を含む。いくつかの実施形態では、２’－修飾は、２’－アミノエチル、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル、および２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸から選択される修飾である。いくつかの実施形態では、修飾は、２’－フルオロおよび２’－Ｏ－メチルから選択される２’－修飾である。いくつかの実施形態では、センス鎖のヌクレオチドの約１０～１５％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、または１５％は、２’－フルオロ修飾を含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖のヌクレオチドの約２５～３５％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、または３５％は、２’－フルオロ修飾を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのヌクレオチドの約２５～３５％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、または３５％は、２’－フルオロ修飾を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、５’から３’まで１位～３６位を有する３６個のヌクレオチドを含み、８位～１１位は、２’－フルオロ修飾を含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、５’から３’まで１位～２２位を有する２２個のヌクレオチドを含み、２位、３位、４位、５位、７位、１０位、および１４位は、２’－フルオロ修飾を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合である。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、（ｉ）１位と２位との間、および２位と３位との間、または（ｉｉ）１位と２位との間、２位と３位との間、および３位と４位との間に、ホスホロチオエート結合を含み、位置は、５’から３’まで１～４と番号付けされる。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２２個のヌクレオチドの長さであり、アンチセンス鎖は、２０位と２１位との間、および２１位と２２位との間に、ホスホロチオエート結合を含み、位置は、５’から３’まで１～２２に番号付けされる。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２２個のヌクレオチドの長さであり、アンチセンス鎖は、１位と２位との間、２位と３位との間、３位と４位との間、２０位と２１位との間、および２１位と２２位との間に、ホスホロチオエート結合を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、１位と２位との間にホスホロチオエート結合を含み、位置は、５’から３’まで番号付けされる。
いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素は、リン酸類似体を含む。いくつかの実施形態では、リン酸類似体は、オキシメチルホスホネート、ビニルホスホネート、またはマロニルホスホネートであり、任意選択で、リン酸類似体は、４’－メトキシホスホネートを含む４’－リン酸類似体である。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの少なくとも１個のヌクレオチドは、１個以上の標的化リガンドとコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、各標的化リガンドは、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、またはポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ステムループは、ステムループの１個以上のヌクレオチドとコンジュゲートされた１個以上の標的化リガンドを含む。いくつかの実施形態では、１個以上の標的化リガンドは、ループの１個以上のヌクレオチドとコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、ループは、５’から３’まで１～４と番号付けされた４個のヌクレオチドを含み、２位、３位、および４位のヌクレオチドは、各々、１個以上の標的化リガンドを含み、標的化リガンドは、同じであるか、または異なる。いくつかの実施形態では、各標的化リガンドは、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分を含む。いくつかの実施形態では、ＧａｌＮＡｃ部分は、一価ＧａｌＮＡｃ部分、二価ＧａｌＮＡｃ部分、三価ＧａｌＮＡｃ部分、または四価ＧａｌＮＡｃ部分である。いくつかの実施形態では、ステム－ループのＬｐの最大４個のヌクレオチドは、各々、一価ＧａｌＮＡｃ部分とコンジュゲートされている。
いくつかの実施形態では、相補性の領域は、ｍＲＮＡ標的配列と完全に相補的である。いくつかの実施形態では、相補性の領域は、ｍＲＮＡ標的配列と部分的に相補的である。いくつかの実施形態では、相補性の領域は、ｍＲＮＡ標的配列に対して４個以下のミスマッチを含む。
いくつかの実施形態では、相補性の領域は、アンチセンス鎖のヌクレオチド２位～８位でＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と完全に相補的であり、ヌクレオチド位置は、５’から３’まで番号付けされる。いくつかの実施形態では、相補性の領域は、アンチセンス鎖のヌクレオチド２位～１１位でＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と完全に相補的であり、ヌクレオチド位置は、５’から３’まで番号付けされる。
いくつかの実施形態では、センス鎖は、配列番号５７９～５８０、５８５～５８７、５９０、および５９５～５９７のうちのいずれか１つのヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号６００～６０１、６０６～６０８、６１１、および６１６～６１８のうちのいずれか１つのヌクレオチド配列を含む。
いくつかの実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９５および６１６、
ｄ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｅ）それぞれ、配列番号５９６および６１７、
ｆ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、
ｇ）それぞれ、配列番号５８５および６０６、
ｈ）それぞれ、配列番号５８６および６０７、ならびに
ｉ）それぞれ、配列番号５８７および６０８から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
いくつかの実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｄ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、ならびに
ｅ）それぞれ、配列番号５８６および６０７から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
いくつかの実施形態では、センス鎖は、配列番号５７９に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６００に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、配列番号５８０に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６０１に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、配列番号５９０に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６１１に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、配列番号５９７に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６１８に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、配列番号５８６に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６０７に示されるヌクレオチド配列を含む。
いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２２個のヌクレオチドの長さである。
いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号６００～６０１、６０６～６０８、６１１、および６１６～６１８から選択されるヌクレオチド配列を含む。
いくつかの実施形態では、センス鎖は、３６個のヌクレオチドの長さである。
いくつかの実施形態では、センス鎖は、配列番号５７９～５８０、５８５～５８７、５９０、および５９５～５９７から選択されるヌクレオチド配列を含む。
いくつかの実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号６２１および６４２、
ｂ）それぞれ、配列番号６２２および６４３、
ｃ）それぞれ、配列番号６３７および６５８、
ｄ）それぞれ、配列番号６３２および６５３、
ｅ）それぞれ、配列番号６３８および６５９、
ｆ）それぞれ、配列番号６３９および６６０、
ｇ）それぞれ、配列番号６２７および６４８、
ｈ）それぞれ、配列番号６２８および６４９、ならびに
ｉ）それぞれ、配列番号６２９および６５０から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
いくつかの実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号６２１および６４２、
ｂ）それぞれ、配列番号６２２および６４３、
ｃ）それぞれ、配列番号６３２および６５３、
ｄ）それぞれ、配列番号６３９および６６０、ならびに
ｅ）それぞれ、配列番号６２８および６４９から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
いくつかの実施形態では、センス鎖は、配列番号６２１に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６４２に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、配列番号６２２に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６４３に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、配列番号６３２に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６５３に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、配列番号６３９に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６６０に示されるヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、配列番号６２８に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６４９に示されるヌクレオチド配列を含む。
いくつかの態様では、本開示は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供し、オリゴヌクレオチドは、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、センス鎖は、５’－［ｍＧｓ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｆＣ］［ｆＵ］［ｆＣ］［ｆＵ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＧ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］－３’（配列番号６２１）の配列および修飾の全てを含み、アンチセンス鎖は、５’［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵｓ］［ｆＧｓ］［ｆＡｓ］［ｆＡ］［ｆＡ］［ｍＵ］［ｆＡ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｆＡ］［ｍＧ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｆＵ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＣｓ］［ｍＧｓ］［ｍＧ］－３’（配列番号６４２）の配列および修飾の全てを含み、ｍＣ、ｍＡ、ｍＧ、ｍＵ＝２’－ＯＭｅリボヌクレオシドであり、ｆＡ、ｆＣ、ｆＧ、ｆＵ＝２’－Ｆリボヌクレオシドであり、ｓ＝ホスホロチオエートであり、ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ＝以下の式である。
いくつかの態様では、本開示は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供し、オリゴヌクレオチドは、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、センス鎖は、５’［ｍＧｓ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＣ］［ｆＵ］［ｆＧ］［ｆＧ］［ｆＵ］［ｍＡ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＧ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］－３’（配列番号６２２）の配列および修飾の全てを含み、アンチセンス鎖は、５’［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵｓ］［ｆＵｓ］［ｆＡｓ］［ｆＧ］［ｆＧ］［ｍＡ］［ｆＡ］［ｍＡ］［ｍＵ］［ｆＡ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｆＧ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣｓ］［ｍＧｓ］［ｍＧ］－３’（配列番号６４３）の配列および修飾の全てを含み、ｍＣ、ｍＡ、ｍＧ、ｍＵ＝２’－ＯＭｅリボヌクレオシドであり、ｆＡ、ｆＣ、ｆＧ、ｆＵ＝２’－Ｆリボヌクレオシドであり、ｓ＝ホスホロチオエートであり、ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ＝以下の式である。
いくつかの態様では、本開示は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供し、オリゴヌクレオチドは、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、センス鎖は、５’－［ｍＣｓ］［ｍＵ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｆＧ］［ｆＣ］［ｆＵ］［ｆＵ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＧ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］－３’（配列番号６３２）の配列および修飾の全てを含み、アンチセンス鎖は、５’［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵｓ］［ｆＡｓ］［ｆＣｓ］［ｆＣ］［ｆＡ］［ｍＧ］［ｆＡ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｆＡ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｆＡ］
［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＡ］［ｍＧｓ］［ｍＧｓ］［ｍＧ］－３’（配列番号６５３）の配列および修飾の全てを含み、ｍＣ、ｍＡ、ｍＧ、ｍＵ＝２’－ＯＭｅリボヌクレオシドであり、ｆＡ、ｆＣ、ｆＧ、ｆＵ＝２’－Ｆリボヌクレオシドであり、ｓ＝ホスホロチオエートであり、ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ＝以下の式である。
いくつかの態様では、本開示は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供し、オリゴヌクレオチドは、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、センス鎖は、５’－［ｍＡｓ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＡ］［ｆＡ］［ｆＡ］［ｆＧ］［ｆＡ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＧ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］３’（配列番号６３９）の配列および修飾の全てを含み、アンチセンス鎖は、５’－［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵｓ］［ｆＣｓ］［ｆＡｓ］［ｆＧ］［ｆＣ］［ｍＵ］［ｆＡ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｆＵ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｆＵ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＵｓ］［ｍＧｓ］［ｍＧ］－３’（配列番号６６０）の配列および修飾の全てを含み、ｍＣ、ｍＡ、ｍＧ、ｍＵ＝２’－ＯＭｅリボヌクレオシドであり、ｆＡ、ｆＣ、ｆＧ、ｆＵ＝２’－Ｆリボヌクレオシドであり、ｓ＝ホスホロチオエートであり、ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ＝以下の式である。
いくつかの態様では、本開示は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供し、オリゴヌクレオチドは、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、センス鎖は、５’－［ｍＧｓ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｆＣ］［ｆＵ］［ｆＡ］［ｆＵ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＧ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］３’（配列番号６２８）の配列および修飾の全てを含み、アンチセンス鎖は、５’［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵｓ］［ｆＵｓ］［ｆＡｓ］［ｆＣ］［ｆＡ］［ｍＡ］［ｆＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｆＡ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｆＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＣｓ］［ｍＧｓ］［ｍＧ］－３’（配列番号６４９）の配列および修飾の全てを含み、ｍＣ、ｍＡ、ｍＧ、ｍＵ＝２’－ＯＭｅリボヌクレオシドであり、ｆＡ、ｆＣ、ｆＧ、ｆＵ＝２’－Ｆリボヌクレオシドであり、ｓ＝ホスホロチオエートであり、ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ＝以下の式である。
いくつかの態様では、本開示は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供し、オリゴヌクレオチドは、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、センス鎖は、配列番号６２１を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６４２を含み、アンチセンス鎖は、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡ転写物と相補性の領域を含み、当該ＲＮＡｉは、図１４Ａに示される構造を有するコンジュゲートの形態である。
いくつかの態様では、本開示は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供し、オリゴヌクレオチドは、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、センス鎖は、配列番号６３２を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６５３を含み、アンチセンス鎖は、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡ転写物と相補性の領域を含み、当該ＲＮＡｉは、図１４Ｂに示される構造を有するコンジュゲートの形態である。
いくつかの態様では、本開示は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供し、オリゴヌクレオチドは、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、センス鎖は、配列番号６３９を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６６０を含み、アンチセンス鎖は、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡ転写物と相補性の領域を含み、当該ＲＮＡｉは、図１４Ｃに示される構造を有するコンジュゲートの形態である。
いくつかの態様では、本開示は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供し、オリゴヌクレオチドは、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、センス鎖は、配列番号６２８を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６４９を含み、アンチセンス鎖は、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡ転写物と相補性の領域を含み、当該ＲＮＡｉは、図１４Ｄに示される構造を有するコンジュゲートの形態である。
いくつかの態様では、本開示は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供し、オリゴヌクレオチドは、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、センス鎖は、配列番号６２１を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６４２を含み、アンチセンス鎖は、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡ転写物と相補性の領域を含み、当該ＲＮＡｉは、図１０Ａ～Ｂに示される構造を有するコンジュゲートの形態である。
いくつかの態様では、本開示は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供し、オリゴヌクレオチドは、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、センス鎖は、配列番号６３２を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６５３を含み、アンチセンス鎖は、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡ転写物と相補性の領域を含み、当該ＲＮＡｉは、図１１Ａ～Ｂに示される構造を有するコンジュゲートの形態である。
いくつかの態様では、本開示は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供し、オリゴヌクレオチドは、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、センス鎖は、配列番号６３９を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６６０を含み、アンチセンス鎖は、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡ転写物と相補性の領域を含み、当該ＲＮＡｉは、図１２Ａ～Ｂに示される構造を有するコンジュゲートの形態である。
いくつかの態様では、本開示は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供し、オリゴヌクレオチドは、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、センス鎖は、配列番号６２８を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６４９を含み、アンチセンス鎖は、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡ転写物と相補性の領域を含み、当該ＲＮＡｉは、図１３Ａ～Ｂに示される構造を有するコンジュゲートの形態である。
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドと、薬学的に許容可能な担体、送達剤、または賦形剤と、を含む、医薬組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態を有する対象を治療するための方法であって、治療有効量の本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物を対象に投与し、それによって、対象を治療することを含む、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、ヘプシジン発現は、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを投与した後に増加する。いくつかの実施形態では、血清中の鉄飽和レベルは、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを投与した後に減少する。いくつかの実施形態では、血清鉄レベルは、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを投与した後に減少する。
いくつかの実施形態では、本開示は、オリゴヌクレオチドを対象に送達する方法であって、本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、細胞、細胞集団、または対象においてＴＭＰＲＳＳ６発現を低減する方法であって、
ｉ．細胞もしくは細胞集団を、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドもしくは本明細書に記載の医薬組成物と接触させること、または
ｉｉ．本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドもしくは本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減することは、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡの量もしくはレベル、マトリプターゼ－２タンパク質の量もしくはレベル、またはその両方を低減することを含む。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減することは、ヘプシジン産生の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減することは、血清鉄レベルの減少をもたらす。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減することは、血清鉄飽和度の減少をもたらす。
いくつかの実施形態では、対象は、ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態を有する。いくつかの実施形態では、ヘプシジン欠乏と関連する疾患、障害、または状態は、ヘモクロマトーシスまたはベータサラセミアである。いくつかの実施形態では、ヘプシジン抑制と関連する疾患、障害、または状態は、真性赤血球増加症である。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、または医薬組成物は、第２の組成物または治療剤と組み合わせて投与される。
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態の治療のための、任意選択で、ヘモクロマトーシス（例えば、遺伝性ヘモクロマトーシス）、真性赤血球増加症、またはベータサラセミアの治療のための医薬の製造における、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物の使用を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態の治療に使用するための、または使用するために適合可能な、任意選択で、ヘモクロマトーシス（例えば、遺伝性ヘモクロマトーシス）、真性赤血球増加症、またはベータサラセミアの治療のための、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態を有する対象に投与するための、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドと、任意選択の薬学的に許容可能な担体と、指示を含む添付文書と、を含む、キットを提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載の、使用するための、または使用するために適合可能なＲＮＡｉオリゴヌクレオチドもしくは医薬組成物、またはキットを提供し、ヘプシジン欠乏または抑制と関連する疾患、障害、または状態は、ヘモクロマトーシス（例えば、遺伝性ヘモクロマトーシス）、真性赤血球増加症、またはベータサラセミアである。
図１Ａおよび１Ｂは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチドを用いた治療後のヒトＴＭＰＲＳＳ６を外因的に発現するマウスの肝臓に残存するヒトＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡの割合（％）を示すグラフを提供する。ＣＤ－１マウスに、ＰＢＳ中に製剤化された１ｍｇ／ｋｇまたは２ｍｇ／ｋｇの指示されたＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチドを皮下投与した。投与後４日目に、マウスにヒトＴＭＰＲＳＳ６をコードするＤＮＡプラスミドを流体力学的に注射（ＨＤＩ）した。ヒトＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡのレベルが、３’ｑＰＣＲアッセイ（図１Ａ）および５’ｑＰＣＲアッセイ（図１Ｂ）を使用して、１８時間後に採取された肝臓から決定された。Ｈｓ／Ｍｆ＝構築物は、ヒトおよびサルＴＭＰＲＳＳ６特異的であり、Ｈｓ－Ｍｆ－Ｍｍ＝構築物は、ヒト、サル、およびマウスＴＭＰＲＳＳ６特異的である。 図２は、図１Ａ～１Ｂのマウスの肝臓に残存するマウスＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡの割合（％）を示すグラフを提供する。 図３Ａ～３Ｄは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチド－０４１６（図３Ａ）、－０６５１（図３Ｂ）、－０８３１（図３Ｃ）、および－１５４６（図３Ｄ）の修飾パターンを示す概略図を提供する。センス鎖は、３６ヌクレオチド鎖のヌクレオチド２７～３０のテトラループ構造を含む。アンチセンス鎖は、相補的であり、２ヌクレオチドオーバーハングを含む。 図４Ａ～４Ｆは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチドを用いた治療後のＮＨＰ（非ヒト霊長類）の肝臓に残存する内因性サルＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡの割合（％）を示すグラフを提供する。カニクイザルに、０、２８、５６、８４、および１１２日目にＰＢＳ中に製剤化された１ｍｇ／ｋｇまたは４ｍｇ／ｋｇの指示されたＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチドを皮下投与した。肝臓試料が、－７日目（投与の１週間前）（図４Ａ）、２８日目（図４Ｂ）、５６日目（図４Ｃ）、８４日目（図４Ｄ）、１１２日目（図４Ｅ）、および１６８日目（図４Ｆ）に採取され、サルＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡのレベルが、ＰＢＳ処置動物に対してｑＰＣＲアッセイを使用して決定された。 図５Ａ～５Ｆは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチドを用いた治療後のＮＨＰ（非ヒト霊長類）の肝臓に残存するサル内因性ヘプシジンｍＲＮＡの割合（％）を示すグラフを提供する。カニクイザルに、０、２８、５６、８４、および１１２日目にＰＢＳ中に製剤化された１ｍｇ／ｋｇまたは４ｍｇ／ｋｇの指示されたＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチドを皮下投与した。肝臓試料が、－７日目（投与の１週間前）（図５Ａ）、２８日目（図５Ｂ）、５６日目（図５Ｃ）、８４日目（図５Ｄ）、１１２日目（図５Ｅ）、および１６８日目（図５Ｆ）に採取され、サルヘプシジンｍＲＮＡのレベルが、ＰＢＳ処置動物に対してｑＰＣＲアッセイを使用して決定された。 図６Ａ～６Ｆは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチドを用いた治療後のサルにおける血清鉄レベルを示すグラフを提供する。カニクイザルに、０、２８、５６、８４、および１１２日目にＰＢＳ中に製剤化された１ｍｋ／ｋｇまたは４ｍｇ／ｋｇの指示されたＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチドを皮下投与した。血清試料が、－７日目（投与の１週間前）（図６Ａ）、２８日目（図６Ｂ）、５６日目（図６Ｃ）、８４日目（図６Ｄ）、１１２日目（図６Ｅ）、および１６８日目（図６Ｆ）に採取され、血清鉄レベルのレベルが決定された。 図７Ａ～７Ｂは、それぞれ、１ｍｇ／ｋｇおよび４ｍｇ／ｋｇの用量についてＰＢＳ対照処置動物に対して図６Ａ～６Ｆで測定された血清鉄レベルを示すグラフを提供する。 図８Ａ～８Ｆは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチドを用いた治療後のサルにおける血清鉄飽和レベルを示すグラフを提供する。カニクイザルに、０、２８、５６、８４、および１１２日目にＰＢＳ中に製剤化された１ｍｋ／ｋｇまたは４ｍｇ／ｋｇの指示されたＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチドを皮下投与した。血清試料が、－７日目（投与の１週間前）（図８Ａ）、２８日目（図８Ｂ）、５６日目（図８Ｃ）、８４日目（図８Ｄ）、１１２日目（図８Ｅ）、および１６８日目（図８Ｆ）に採取され、血清鉄飽和度が決定された。 図９Ａ～９Ｂは、それぞれ、１ｍｇ／ｋｇおよび４ｍｇ／ｋｇの用量についてＰＢＳ対照処置動物に対して図８Ａ～８Ｆで測定された血清鉄飽和度を示すグラフを提供する。 図１０Ａ～Ｂは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチド－０４１６の化学図面を提供し、ＡおよびＢは、図１０Ａと図１０Ｂとの間の結合を特定する。 図１１Ａ～Ｂは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチド－０６５１の化学図面を提供し、ＡおよびＢは、図１１Ａと図１１Ｂとの間の結合を特定する。 図１２Ａ～Ｂは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチド－０８３１の化学図面を提供し、ＡおよびＢは、図１２Ａと図１２Ｂとの間の結合を特定する。 図１３Ａ～Ｂは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチド－１５４６の化学図面を提供し、ＡおよびＢは、図１３Ａと図１３Ｂの間の結合を特定する。 図１４Ａ～Ｄは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチド－０４１６（図１４Ａ）、－０６５１（図１４Ｂ）、－０８３１（図１４Ｃ）、および－１５４６（図１４Ｄ）の化学式を提供する。
膜貫通型セリンプロテアーゼ６（ＴＭＰＲＳＳ６）は、細胞の表面上に位置するＩＩ型膜貫通型セリンプロテイナーゼ、マトリプターゼ－２をコードする。マトリプターゼ－２タンパク質は、ヘプシジンを調節することによって鉄の恒常性で機能する。
いくつかの態様によれば、本開示は、肝臓におけるＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、ヘプシジン欠乏または抑制に関連する疾患を治療するように設計されている。いくつかの点において、本開示は、具体的な細胞（例えば、肝臓の細胞）または器官（例えば、肝臓）におけるＴＭＰＲＳＳ６発現を低減することによって、ヘプシジン欠乏または抑制と関連する疾患を治療する方法を提供する。
ＴＭＰＲＳＳ６発現のオリゴヌクレオチド阻害剤
ＴＭＰＲＳＳ６標的配列
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡを含む標的配列に標的化される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ配列内の標的配列に標的化される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ配列内の標的配列に対応する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド、またはその一部、断片、もしくは鎖（例えば、二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖またはガイド鎖）は、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡを含む標的配列に結合またはアニールし、それによって、ＴＭＰＲＳＳ６発現を阻害する。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、インビボでＴＭＰＲＳＳ６発現を阻害する目的でＴＭＰＲＳＳ６標的配列に標的化される。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６標的配列に標的化されたオリゴヌクレオチドによるＴＭＰＲＳＳ６発現の阻害の量または程度は、オリゴヌクレオチドの効力と相関する。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６標的配列に標的化されたオリゴヌクレオチドによるＴＭＰＲＳＳ６発現の阻害の量または程度は、オリゴヌクレオチドで治療されたヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態を有する対象または患者における治療効果の量または程度と相関する。
複数の異なる種（例えば、ヒト、カニクイザル、マウス、およびラット、例えば、実施例２を参照されたい）のｍＲＮＡを含む、ＴＭＰＲＳＳ６をコードするｍＲＮＡのヌクレオチド配列の検査を通して、かつインビトロおよびインビボ試験の結果として（例えば、実施例２～５を参照されたい）、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡの特定のヌクレオチド配列が、他のものよりもオリゴヌクレオチドに基づく阻害を受けやすく、したがって、本明細書のオリゴヌクレオチドの標的配列として有用であることが発見されている。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６標的配列は、配列番号６６１～８５２のうちのいずれか１つの配列を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６標的配列は、配列番号８４４、８４１、８１８、７９４、もしくは７６２に示される配列を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６標的配列は、配列番号８４４に示される配列を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６標的配列は、配列番号８４１に示される配列を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６標的配列は、配列番号８１８に示される配列を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６標的配列は、配列番号７９４に示される配列を含むか、またはそれから成る。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６標的配列は、配列番号７６２に示される配列を含むか、またはそれから成る。
ＴＭＰＲＳＳ６標的化配列
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、細胞内のＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡを標的化し、ＴＭＰＲＳＳ６発現を阻害および／または低減する目的で、（例えば、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡの標的配列内に）ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡと相補性の領域を有する。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、相補的な（ワトソン・クリック）塩基対合によってＴＭＰＲＳＳ６標的配列に結合またはアニールする相補性の領域を有するＴＭＰＲＳＳ６標的化配列（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖またはガイド鎖）を含む。標的化配列または相補性の領域は、概して、ＴＭＰＲＳＳ６発現を阻害および／または低減する目的で、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡへのオリゴヌクレオチド（またはその鎖）の結合またはアニーリングを可能にするための好適な長さおよび塩基含有量である。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、少なくとも約１２個、少なくとも約１３個、少なくとも約１４個、少なくとも約１５個、少なくとも約１６個、少なくとも約１７個、少なくとも約１８個、少なくとも約１９個、少なくとも約２０個、少なくとも約２１個、少なくとも約２２個、少なくとも約２３個、少なくとも約２４個、少なくとも約２５個、少なくとも約２６個、少なくとも約２７個、少なくとも約２８個、少なくとも約２９個、または少なくとも約３０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、約１２～約３０個（例えば、１２～３０個、１２～２２個、１５～２５個、１７～２１個、１８～２７個、１９～２７個、または１５～３０個）のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、約１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、１８個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、１９個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、２０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、２１個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、２２個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、２３個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、２４個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号６６１～８５２のうちのいずれか１つの配列と相補的な標的化配列または相補性の領域を含み、標的化配列または相補性の領域は、１８個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号６６１～８５２のうちのいずれか１つの配列と相補的な標的化配列または相補性の領域を含み、標的化配列または相補性の領域は、１９個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１９３～３８４のうちのいずれか１つの配列と相補的な標的化配列または相補性の領域を含み、標的化配列または相補性の領域は、２０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１９３～３８４のうちのいずれか１つの配列と相補的な標的化配列または相補性の領域を含み、標的化配列または相補性の領域は、２１個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１９３～３８４のうちのいずれか１つの配列と相補的な標的化配列または相補性の領域を含み、標的化配列または相補性の領域は、２２個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１９３～３８４のうちのいずれか１つの配列と相補的な標的化配列または相補性の領域を含み、標的化配列または相補性の領域は、２３個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１９３～３８４のうちのいずれか１つの配列と相補的な標的化配列または相補性の領域を含み、標的化配列または相補性の領域は、２４個のヌクレオチドの長さである。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、ＴＭＰＲＳＳ６標的配列と完全に相補的である標的化配列または相補性の領域（例えば、二本鎖オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖またはガイド鎖）を含む。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、ＴＭＰＲＳＳ６標的配列と部分的に相補的である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＴＭＰＲＳＳ６標的配列と完全に相補的である標的化配列または相補性の領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＴＭＰＲＳＳ６標的配列と部分的に相補的である標的化配列または相補性の領域を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号６６１～８５２のうちのいずれか１つの配列と完全に相補的である標的化配列または相補性の領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号８４４、８４１、８１８、７９４、および７６２に示される配列と完全に相補的である標的化配列または相補性の領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号６６１～８５２のうちのいずれか１つの配列と部分的に相補的である標的化配列または相補性の領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号８４４、８４１、８１８、７９４、および７６２に示される配列と部分的に相補的である標的化配列または相補性の領域を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ内のヌクレオチドの連続する配列と相補的である標的化配列または相補性の領域を含み、ヌクレオチドの連続する配列は、約１２～約３０個のヌクレオチドの長さ（例えば、１２～３０、１２～２８、１２～２６、１２～２４、１２～２０、１２～１８、１２～１６、１４～２２、１６～２０、１８～２０、または１８～１９個のヌクレオチドの長さ）である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ内のヌクレオチドの連続する配列と相補的である標的化配列または相補性の領域を含み、ヌクレオチドの連続する配列は、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ内のヌクレオチドの連続する配列と相補的である標的化配列または相補性の領域を含み、ヌクレオチドの連続する配列は、１９個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ内のヌクレオチドの連続する配列と相補的である標的化配列または相補性の領域を含み、ヌクレオチドの連続する配列は、２０個のヌクレオチドの長さである。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、配列番号６６１～８５２のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続する配列と相補的である標的化配列または相補性の領域を含み、任意選択で、ヌクレオチドの連続する配列は、１９個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号８４４、８４１、８１８、７９４、および７６２のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続する配列と相補的である標的化配列または相補性の領域を含み、ヌクレオチドの連続する配列は、１９個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号３７６、３７３、３５０、３２６、および２９４のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続する配列と相補的である標的化配列または相補性の領域を含み、ヌクレオチドの連続する配列は、２０個のヌクレオチドの長さである。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、対応するＴＭＰＲＳＳ６標的配列と１個以上の塩基対（ｂｐ）ミスマッチを有する標的化配列または相補性の領域を含む。いくつかの実施形態では、標的化配列または相補性の領域は、適切なハイブリダイゼーション条件下でＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡに結合もしくはアニーリングする標的化配列もしくは相補性の領域の能力、および／またはＴＭＰＲＳＳ６発現を阻害するオリゴヌクレオチドの能力が維持されることを条件として、対応するＴＭＰＲＳＳ６標的配列と最大約１個、最大約２個、最大約３個、最大約４個、最大約５個などのミスマッチを有し得る。代替的に、標的化配列または相補性の領域は、適切なハイブリダイゼーション条件下でＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡと結合もしくはアニーリングする標的化配列または相補性の領域の能力、および／またはＴＭＰＲＳＳ６発現を阻害するオリゴヌクレオチドの能力が維持されることを条件として、対応するＴＭＰＲＳＳ６標的配列と１個以下、２個以下、３個以下、４個以下、または５個以下のミスマッチを有し得る。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列と１個のミスマッチを有する標的化配列または相補性の領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列と２個のミスマッチを有する標的化配列または相補性の領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列と３個のミスマッチを有する標的化配列または相補性の領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列と４個のミスマッチを有する標的化配列または相補性の領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列と５個のミスマッチを有する標的化配列または相補性の領域を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列と１個を超えるミスマッチ（例えば、２、３、４、５個、またはそれ以上のミスマッチ）を有する標的化配列または相補性の領域を含み、ミスマッチの少なくとも２個（例えば、全て）は、連続して位置付けられるか（例えば、２、３、４、５個、またはそれ以上のミスマッチが並んでいる）、またはミスマッチは、標的化配列もしくは相補性の領域全体にわたって散在する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、対応する標的配列と１個を超えるミスマッチ（例えば、２、３、４、５個、またはそれ以上のミスマッチ）を有する標的化配列または相補性の領域を含み、ミスマッチの少なくとも２個（例えば、全て）は、連続して位置付けられるか（例えば、２、３、４、５個、またはそれ以上のミスマッチが並んでいる）、または少なくとも１個以上の非ミスマッチ塩基対は、ミスマッチの間に位置するか、もしくはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号６６１～８５２のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続する配列と相補的である標的化配列または相補性の領域を含み、標的化配列または相補性の領域は、対応するＴＭＰＲＳＳ６標的配列と最大約１個、最大約２個、最大約３個、最大約４個、最大約５個などのミスマッチを有し得る。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号６６１～８５２のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続する配列と相補的である標的化配列または相補性の領域を含み、標的化配列または相補性の領域は、対応するＴＭＰＲＳＳ６標的配列と１個以下、２個以下、３個以下、４個以下、または５個以下のミスマッチを有し得る。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号６６１～８５２のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続する配列と相補的である標的化配列または相補性の領域を含み、標的化配列または相補性の領域は、対応するＴＭＰＲＳＳ６標的配列と最大約１個、最大約２個、最大約３個、最大約４個、最大約５個などのミスマッチを有し得る。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号８４４、８４１、８１８、７９４、および７６２のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続する配列と相補的である標的化配列または相補性の領域を含み、標的化配列または相補性の領域は、対応するＴＭＰＲＳＳ６標的配列と１個以下、２個以下、３個以下、４個以下、または５個以下のミスマッチを有し得る。
オリゴヌクレオチドの種類
ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、ｍｉＲＮＡなどを含むがこれらに限定されない、様々なオリゴヌクレオチドの種類および／または構造が、本明細書の方法においてＴＭＰＲＳＳ６を標的化するために有用である。本明細書または他の場所に記載されるオリゴヌクレオチドの種類のうちのいずれかが、ＴＭＰＲＳＳ６発現を阻害する目的で本明細書のＴＭＰＲＳＳ６標的化配列を組み込むためのフレームワークとして使用するために企図される。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、ダイサー介入の上流または下流でＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路に関与することによってＴＭＰＲＳＳ６発現を阻害する。例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、各鎖が１～５個のヌクレオチドの少なくとも１個の３’オーバーハングを有する約１９～２５個のヌクレオチドのサイズを有するように開発されている（例えば、米国特許第８，３７２，９６８号を参照されたい）。ダイサーによって処理されて活性ＲＮＡｉ産物を生成する、より長いオリゴヌクレオチドも開発されている（例えば、米国特許第８，８８３，９９６号を参照されたい）。さらなる研究により、少なくとも１個の鎖の少なくとも１個の末端が、二本鎖標的化領域を超えて伸長され、鎖のうちの一方が熱力学的に安定化するテトラループ構造を含む構造を含む、伸長ｄｓＲＮＡが産生された（例えば、米国特許第８，５１３，２０７号および同第８，９２７，７０５号、ならびに国際特許出願公開第２０１０／０３３２２５号を参照されたい）。そのような構造は、（分子の片側または両側に）一本鎖（ｓｓ）伸長ならびに二本鎖（ｄｓ）伸長を含み得る。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、ダイサーの介入（例えば、ダイサー切断）の下流でＲＮＡｉ経路に関与する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、ダイサー基質である。いくつかの実施形態では、内因性ダイサープロセシング時に、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減することが可能な１９～２３個のヌクレオチドの長さの二本鎖核酸が産生される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、アンチセンス鎖の３’末端に（例えば、１、２、または３個のヌクレオチドの長さの）オーバーハングを有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド（例えば、ｓｉＲＮＡ）は、標的ＲＮＡに対してアンチセンスである２１個のヌクレオチドのガイド鎖と、相補的なパッセンジャー鎖と、を含み、両方の鎖がアニールして、１９ｂｐの二本鎖、およびいずれか一方または両方の３’末端に２個のヌクレオチドのオーバーハングを形成する。２３個のヌクレオチドのガイド鎖および２１個のヌクレオチドのパッセンジャー鎖を有するオリゴヌクレオチドを含む、より長いオリゴヌクレオチド設計も利用可能であり、分子の右側に平滑末端（パッセンジャー鎖の３’末端／ガイド鎖の５’末端）、分子の左側に２個のヌクレオチドの３’－ガイド鎖オーバーハング（パッセンジャー鎖の５’末端／ガイド鎖の３’末端）が存在する。そのような分子には、２１ｂｐの二本鎖領域が存在する。例えば、米国特許第９，０１２，１３８号、同第９，０１２，６２１号、および同第９，１９３，７５３号を参照されたい。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、両方が約１７～３６個（例えば、１７～３６、２０～２５、または２１～２３個）のヌクレオチドの長さの範囲であるセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、１９～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖と、１９～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と、を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、アンチセンス鎖の３’末端に１～４個のヌクレオチドのオーバーハングを有する非対称性二本鎖領域を形成する、別個の鎖である。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、両方が約１９～２２個のヌクレオチドの長さの範囲であるセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、等しい長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、センス鎖もしくはアンチセンス鎖のいずれか、またはセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方に３’オーバーハングが存在するように、センス鎖およびアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、両方が約２１～２３個のヌクレオチドの長さの範囲であるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有するオリゴヌクレオチドについて、センス鎖、アンチセンス鎖、またはセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方での３’オーバーハングは、１または２個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２２個のヌクレオチドのガイド鎖および２０個のヌクレオチドのパッセンジャー鎖を有し、分子の右側に平滑末端（パッセンジャー鎖の３’末端／ガイド鎖の５’末端）、分子の左側に２個のヌクレオチドの３’－ガイド鎖オーバーハング（パッセンジャー鎖の５’末端／ガイド鎖の３’末端）が存在する。そのような分子には、２０ｂｐの二本鎖領域が存在する。
本明細書の組成物および方法とともに使用するための他のオリゴヌクレオチド設計には、１６－ｍｅｒ ｓｉＲＮＡ（例えば、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ（ｅｄ．），ＲＯＹＡＬ ＳＯＣＩＥＴＹ ＯＦ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ，２００６を参照されたい）、ｓｈＲＮＡ（例えば、１９ｂｐまたはそれより短いステムを有する；例えば、Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．６２９：１４１－１５８を参照されたい）、平滑ｓｉＲＮＡ（例えば、１９ｂｐの長さである；例えば、Ｋｒａｙｎａｃｋ ＆ Ｂａｋｅｒ（２００６）ＲＮＡ １２：１６３－１７６を参照されたい）、非対称性ｓｉＲＮＡ（ａｉＲＮＡ；例えば、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２６：１３７９－８２を参照されたい）、非対称性の短い二本鎖ｓｉＲＮＡ（例えば、Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７：７２５－３２を参照されたい）、フォークｓｉＲＮＡ（例えば、Ｈｏｈｊｏｈ（２００４）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．５５７：１９３－９８を参照されたい）、ｓｓ ｓｉＲＮＡ（Ｅｌｓｎｅｒ（２０１２）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３０：１０６３）、ダンベル型環状ｓｉＲＮＡ（例えば、Ａｂｅ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２９：１５１０８－０９を参照されたい）、および低分子内部セグメント化干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ；例えば、Ｂｒａｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ（２００７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３５：５８８６－９７を参照されたい）が含まれる。ＴＭＰＲＳＳ６の発現を低減または阻害するためにいくつかの実施形態で使用され得るオリゴヌクレオチド構造のさらなる非限定的な例は、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、およびショートｓｉＲＮＡである（例えば、Ｈａｍｉｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００２）ＥＭＢＯ Ｊ．２１：４６７１－７９を参照されたく、また、米国特許出願公開第２００９／００９９１１５号も参照されたい）。
依然として、いくつかの実施形態では、本明細書のＴＭＰＲＳＳ６発現を低減または阻害するためのオリゴヌクレオチドは、一本鎖（ｓｓ）である。そのような構造には、一本鎖ＲＮＡｉ分子が含まれるが、これに限定されない。近年の取り組みにより、ｓｓ ＲＮＡｉ分子の活性が実証されている（例えば、Ｍａｔｓｕｉ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２４：９４６－５５を参照されたい）。しかしながら、いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）である。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、５’から３’方向に記載されるときに、特定の核酸の標的化されたセグメントの逆相補体を含み、細胞内でその標的ＲＮＡのＲＮａｓｅＨ媒介切断を誘導するように（例えば、ギャップマーとして）、または細胞内で標的ｍＲＮＡの翻訳を阻害するように（例えばミックスマーとして）好適に修飾される、核酸塩基配列を有する一本鎖オリゴヌクレオチドである。本明細書で使用するためのＡＳＯは、例えば、米国特許第９，５６７，５８７号に示されているものを含む、当技術分野で公知の任意の好適な様式で修飾され得る（例えば、長さ、核酸塩基（ピリミジン、プリン）の糖部分、および核酸塩基の複素環部分の改変を含む）。さらに、ＡＳＯは、特定の標的遺伝子の発現を低減させるために数十年間使用されてきた（例えば、Ｂｅｎｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５７：８１－１０５を参照されたい）。
いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡと相補性の領域を共有する。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＮＭ＿００１２８９０００．２として特定されるヒトＴＭＰＲＳＳ６遺伝子の様々な領域を標的化する。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１５～５０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１５～２５個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２２個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号６６１～８５２のうちのいずれか１つと相補的である。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１９個の連続するヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも２０個の連続するヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的配列から１、２、または３個のヌクレオチドが異なる。
二本鎖オリゴヌクレオチド
いくつかの態様では、本開示は、センス鎖（本明細書ではパッセンジャー鎖とも呼ばれる）およびアンチセンス鎖（本明細書ではガイド鎖とも呼ばれる）を含む、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡを標的化し、（例えば、ＲＮＡｉ経路を介して）ＴＭＰＲＳＳ６発現を阻害するための二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、別個の鎖であり、共有結合していない。いくつかの実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、共有結合している。いくつかの実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、二本鎖領域を形成し、センス鎖およびアンチセンス鎖、またはその一部分は、相補的な様式で（例えば、ワトソン・クリック塩基対合によって）互いに結合する。
いくつかの実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖の第１の領域（Ｒ１）は、第１の二本鎖（Ｄ１）を形成する。いくつかの実施形態では、Ｄ１は、少なくとも約１５個（例えば、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、または少なくとも２１個）のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、Ｄ１は、約１２～３０個のヌクレオチドの長さ（例えば、１２～３０、１２～２７、１５～２２、１８～２２、１８～２５、１８～２７、１８～３０、または２１～３０個のヌクレオチドの長さ）の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｄ１は、少なくとも１２個のヌクレオチドの長さ（例えば、少なくとも１２、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、または少なくとも３０個のヌクレオチドの長さ）である。いくつかの実施形態では、Ｄ１は、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、Ｄ１は、２０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＤ１は、センス鎖および／またはアンチセンス鎖の全長に及ばない。いくつかの実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＤ１は、センス鎖もしくはアンチセンス鎖のいずれか一方または両方の全長に及ぶ。特定の実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＤ１は、センス鎖およびアンチセンス鎖の両方の全長に及ぶ。
いくつかの実施形態では、センス鎖は、第２の領域（Ｒ２）を有し、Ｒ２は、第１のサブ領域（Ｓ１）と、テトラループ（ｔｅｔｒａＬｐ）またはトリループ（ｔｒｉＬｐ）などのループ（Ｌｐ）と、第２のサブ領域（Ｓ２）と、を含み、Ｌｐは、Ｓ１とＳ２との間に位置し、Ｓ１およびＳ２は、第２の二本鎖（Ｄ２）を形成する。Ｄ２は、様々な長さを有し得る。いくつかの実施形態では、Ｄ２は、約１～６ｂｐの長さである。いくつかの実施形態では、Ｄ２は、２～６、３～６、４～６、５～６、１～５、２～５、３～５、または４～５ｂｐの長さである。いくつかの実施形態では、Ｄ２は、１、２、３、４、５、または６ｂｐの長さである。いくつかの実施形態では、Ｄ２は、６ｂｐの長さである。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、配列番号１９３～３８４のうちのいずれか１つの配列を含むセンス鎖と、配列番号３８５～５７６のうちのいずれか１つの配列を含むアンチセンス鎖と、を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、配列番号６６１～８５２のうちのいずれか１つの配列を含むセンス鎖と、配列番号１～１９２のうちのいずれか１つの配列を含むアンチセンス鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、配列番号５７７～５９７のうちのいずれか１つの配列を含むセンス鎖と、配列番号５９８～６１８のうちのいずれか１つの配列を含むアンチセンス鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９５および６１６、
ｄ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｅ）それぞれ、配列番号５９６および６１７、
ｆ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、
ｇ）それぞれ、配列番号５８５および６０６、
ｈ）それぞれ、配列番号５８６および６０７、ならびに
ｉ）それぞれ、配列番号５８７および６０８から選択されるヌクレオチド配列を含む、センス鎖およびアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｄ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、ならびに
ｅ）それぞれ、配列番号５８６および６０７から選択されるヌクレオチド配列を含む、センス鎖およびアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、センス鎖は、配列番号５７９の配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６００の配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、配列番号５８０の配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６０１の配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、配列番号５９０の配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６１１の配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、配列番号５９７の配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６１８の配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、配列番号５８６の配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号６０７の配列を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）または他の核酸の構造を説明する際に、配列表に提示される配列が参照され得ることを理解されたい。そのような実施形態では、実際のオリゴヌクレオチドまたは他の核酸は、指定された配列と本質的に同じまたは類似する相補的特性を保持しながら、指定された配列と比較すると、１個以上の代替ヌクレオチド（例えば、ＤＮＡヌクレオチドのＲＮＡ対応物またはＲＮＡヌクレオチドのＤＮＡ対応物）、および／または１個以上の修飾ヌクレオチド、および／または１個以上の修飾ヌクレオチド間結合、および／または１個以上の他の修飾を有し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、ダイサー酵素によって作用されると成熟ＲＩＳＣに組み込まれるアンチセンス鎖をもたらす。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、２５個のヌクレオチドのセンス鎖と、２７個のヌクレオチドのアンチセンス鎖と、を含み、ダイサー酵素によって作用されると、成熟ＲＩＳＣに組み込まれるアンチセンス鎖をもたらす。いくつかの実施形態では、２５個のヌクレオチドのセンス鎖は、配列番号１９３～３８４から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、２７個のヌクレオチドのアンチセンス鎖は、配列番号３８５～５７６から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖は、２７個のヌクレオチドよりも長い（例えば、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０個のヌクレオチド）。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖は、２５個のヌクレオチドよりも長い（例えば、２６、２７、２８、２９、または３０個のヌクレオチド）。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖は、配列番号５７７～５９７から選択されるヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチド配列は、２７個のヌクレオチドよりも長い（例えば、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０個のヌクレオチド）。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖は、配列番号５７７～５９７から選択されるヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチド配列は、２５個のヌクレオチドよりも長い（例えば、２６、２７、２８、２９、または３０個のヌクレオチド）。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、他の５’末端と比較して熱力学的に低い安定性である１個の５’末端を有する。いくつかの実施形態では、センス鎖の３’末端に平滑末端を含み、アンチセンス鎖の３’末端に３’オーバーハングを含む非対称性オリゴヌクレオチドが提供される。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖上の３’オーバーハングは、約１～８個のヌクレオチドの長さ（例えば、１、２、３、４、５、６、７、または８個のヌクレオチドの長さ）である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、アンチセンス（ガイド）鎖の３’末端に２個（２）のヌクレオチドを含むオーバーハングを有する。しかしながら、他のオーバーハングも可能である。いくつかの実施形態では、オーバーハングは、１～６個のヌクレオチド、任意選択で、１～５、１～４、１～３、１～２、２～６、２～５、２～４、２～３、３～６、３～５、３～４、４～６、４～５、５～６個のヌクレオチド、または１、２、３、４、５、もしくは６個のヌクレオチドの長さを含む、３’オーバーハングである。しかしながら、いくつかの実施形態では、オーバーハングは、１～６個のヌクレオチド、任意選択で、１～５、１～４、１～３、１～２、２～６、２～５、２～４、２～３、３～６、３～５、３～４、４～６、４～５、５～６個のヌクレオチド、または１、２、３、４、５、もしくは６個のヌクレオチドの長さを含む、５’オーバーハングである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号６６１～８５２のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続する配列と相補的である標的化配列または相補性の領域と、１～６個のヌクレオチドの長さを含む５’オーバーハングと、を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号５７７～５９７から選択されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖を含み、オリゴヌクレオチドは、１～６個のヌクレオチドの長さを含む５’オーバーハングを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号５９８～６１８から選択されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖を含み、オリゴヌクレオチドは、１～６個のヌクレオチドの長さを含む５’オーバーハングを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号５７７～５９７から選択されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号５９８～６１８から選択されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖と、を含み、オリゴヌクレオチドは、１～６個のヌクレオチドの長さを含む５’オーバーハングを含む。
いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端上の２個（２）の末端ヌクレオチドが修飾される。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端上の２個（２）の末端ヌクレオチドは、標的ｍＲＮＡ（例えば、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ）と相補的である。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端上の２個（２）の末端ヌクレオチドは、標的ｍＲＮＡと相補的ではない。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端上の２個（２）の末端ヌクレオチドは、不対である。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖の３’末端上の２個（２）の末端ヌクレオチドは、不対グアニン（例えば、５’－ＧＧ－３’）を含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖の３’末端上の２個（２）の末端ヌクレオチドは、標的ｍＲＮＡと相補的ではない。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの各３’末端上の２個（２）の末端ヌクレオチドは、グアニン（ＧＧ）である。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドの各３’末端上の２個（２）の末端ＧＧヌクレオチドの一方または両方は、標的ｍＲＮＡと相補的ではない。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号６６１～８５２のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続する配列と相補的である標的化配列または相補性の領域を含み、本明細書のオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖の３’末端上の２個（２）の末端ヌクレオチドは、不対ＧＧを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１～１９２から選択されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖を含み、オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖の３’末端上の２個（２）の末端ヌクレオチドは、不対ＧＧを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号５７７～５９７から選択されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号５９８～６１８から選択されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖と、を含み、オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖の３’末端上の２個（２）の末端ヌクレオチドは、不対ＧＧを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を含むセンス鎖とアンチセンス鎖との間に１個以上（例えば、１、２、３、４、または５個）のミスマッチが存在する。センス鎖とアンチセンス鎖との間に１個を超えるミスマッチが存在する場合、それらは連続して位置付けられる（例えば、２、３個、またはそれ以上が並んでいる）か、または相補性の領域全体にわたって散在し得る。いくつかの実施形態では、センス鎖の３’末端は、１個以上のミスマッチを含む。いくつかの実施形態では、２個（２）のミスマッチは、センス鎖の３’末端に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドのセンス鎖の３’末端でのセグメントの塩基ミスマッチ、または不安定化は、オリゴヌクレオチドの効力を改善するか、または増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドのセンス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９５および６１６、
ｄ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｅ）それぞれ、配列番号５９６および６１７、
ｆ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、
ｇ）それぞれ、配列番号５８５および６０６、
ｈ）それぞれ、配列番号５８６および６０７、ならびに
ｉ）それぞれ、配列番号５８７および６０８から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
センス鎖とアンチセンス鎖との間に１個以上（例えば、１、２、３、４、または５個）のミスマッチが存在する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｄ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、ならびに
ｅ）それぞれ、配列番号５８６および６０７から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含む、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
センス鎖とアンチセンス鎖との間に１個以上（例えば、１、２、３、４、または５個）のミスマッチが存在する。
アンチセンス鎖
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）のアンチセンス鎖は、「ガイド鎖」と呼ばれる。例えば、アンチセンス鎖は、ＲＮＡ誘導型サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に関与し、Ａｇｏ２などのアルゴノートタンパク質と結合するか、または１個以上の類似因子に関与もしくは結合し、アンチセンス鎖がガイド鎖と呼ばれるとおり、標的遺伝子のサイレンシングを指示する。いくつかの実施形態では、ガイド鎖と相補的な領域を含むセンス鎖は、本明細書では「パッセンジャー鎖」と呼ばれる。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、最大約５０個のヌクレオチドの長さ（例えば、最大５０、最大４０、最大３５、最大３０、最大２７、最大２５、最大２１、最大１９、最大１７、または最大１２個のヌクレオチドの長さ）のアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも約１２個のヌクレオチドの長さ（例えば、少なくとも１２、少なくとも１５、少なくとも１９、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２５、少なくとも２７、少なくとも３０、少なくとも３５、または少なくとも３８個のヌクレオチドの長さ）のアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、約１２～約４０個（例えば、１２～４０、１２～３６、１２～３２、１２～２８、１５～４０、１５～３６、１５～３２、１５～２８、１７～２２、１７～２５、１９～２７、１９～３０、２０～４０、２２～４０、２５～４０、または３２～４０個）のヌクレオチドの長さの範囲のアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１５～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのうちのいずれか１つのアンチセンス鎖は、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、または４０個のヌクレオチドの長さのものである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２２個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６を標的化するための本明細書に開示されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、配列番号３８５～５７６のうちのいずれか１つに示される配列を含むか、またはそれから成るアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、配列番号３８５～５７６のうちのいずれか１つに示される配列の少なくとも約１２個（例えば、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、または少なくとも２３個）の連続するヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６を標的化するための本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、配列番号５９８～６１８のうちのいずれか１つに示される配列を含むか、またはそれから成るアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、配列番号５９８～６１８のうちのいずれか１つに示される配列の少なくとも約１２個（例えば、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、または少なくとも２３個）の連続するヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６を標的化するための本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、配列番号５９８～６１８のうちのいずれか１つに示される配列を含むか、またはそれから成るアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、配列番号６００、６０１、６１１、６１８、および６０７のうちのいずれか１つに示される配列の少なくとも約１２個（例えば、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、または少なくとも２３個）の連続するヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６を標的化するための本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、配列番号６００、６０１、６１１、６１８、および６０７のうちのいずれか１つに示される配列を含むか、またはそれから成るアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、配列番号１～１９２から選択されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、配列番号１８４、１８１、１５８、１３４，および１０２から選択されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖を含む。
センス鎖
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡを標的化し、ＴＭＰＲＳＳ６発現を阻害するための本明細書に開示されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、配列番号６６１～８５２のうちのいずれか１つに示されるセンス鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡを標的化し、ＴＭＰＲＳＳ６発現を阻害するための本明細書に開示されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、配列番号１９３～３８４のうちのいずれか１つに示されるセンス鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、配列番号１９３～３８４のうちのいずれか１つに示される配列の少なくとも約１２個（例えば、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、または少なくとも２３個）の連続するヌクレオチドから構成されるセンス鎖を有する。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、配列番号６６１～８５２のうちのいずれか１つに示される配列の少なくとも約１２個（例えば、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、または少なくとも１９個）の連続するヌクレオチドから構成されるセンス鎖を有する。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡを標的化し、ＴＭＰＲＳＳ６発現を阻害するための本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、配列番号５７７～５９７のうちのいずれか１つに示されるセンス鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、配列番号５７７～５９７のうちのいずれか１つに示される配列の少なくとも約１２個（例えば、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、または少なくとも２３個）の連続するヌクレオチドから構成されるセンス鎖を有する。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡを標的化し、ＴＭＰＲＳＳ６発現を阻害するための本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、配列番号５７９、５８０、５９０、５９７、および５８６のうちのいずれか１つに示されるセンス鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、配列番号５７９、５８０、５９０、５９７、および５８６のうちのいずれか１つに示される配列の少なくとも約１２個（例えば、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、または少なくとも２３個）の連続するヌクレオチドを含むセンス鎖を有する。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡを標的化し、ＴＭＰＲＳＳ６発現を阻害するための本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、配列番号８４４、８４１、８１８、７９４、および７６２のうちのいずれか１つに示されるセンス鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、配列番号８４４、８４１、８１８、７９４、および７６２のうちのいずれか１つに示される配列の少なくとも約１２個（例えば、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、または少なくとも１９個）の連続するヌクレオチドを含むセンス鎖を有する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、最大約５０個のヌクレオチドの長さ（例えば、最大５０、最大４０、最大３６、最大３０、最大２７、最大２５、最大２１、最大１９、最大１７、または最大１２個のヌクレオチドの長さ）のセンス鎖（またはパッセンジャー鎖）を含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、少なくとも約１２個のヌクレオチドの長さ（例えば、少なくとも１２、少なくとも１５、少なくとも１９、少なくとも２１、少なくとも２５、少なくとも２７、少なくとも３０、少なくとも３６、または少なくとも３８個のヌクレオチドの長さ）のセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、約１２～約５０個（例えば、１２～５０、１２～４０、１２～３６、１２～３２、１２～２８、１５～４０、１５～３６、１５～３２、１５～２８、１７～２１、１７～２５、１９～２７、１９～３０、２０～４０、２２～４０、２５～４０、または３２～４０個）のヌクレオチドの長さの範囲のセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、１５～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、１８～３６個のヌクレオチドの長さのセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、３６個のヌクレオチドの長さのセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、センス鎖の３’末端の近位にステム－ループ構造を含むセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、センス鎖の第１の領域（Ｒ１）の３’末端にステム－ループ構造を含むセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステム－ループは、鎖内塩基対合によって形成される。いくつかの実施形態では、センス鎖は、その５’末端の近位にステム－ループ構造を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、第１の領域（Ｒ１）の５’末端にステム－ループ構造を含む。いくつかの実施形態では、ステム－ループのステムは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、または１４個のヌクレオチドの長さの二本鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステム－ループのステムは、２個のヌクレオチドの長さの二本鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステム－ループのステムは、３個のヌクレオチドの長さの二本鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステム－ループのステムは、４個のヌクレオチドの長さの二本鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステム－ループのステムは、５個のヌクレオチドの長さの二本鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステム－ループのステムは、６個のヌクレオチドの長さの二本鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステム－ループのステムは、７個のヌクレオチドの長さの二本鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステム－ループのステムは、８個のヌクレオチドの長さの二本鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステム－ループのステムは、９個のヌクレオチドの長さの二本鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステム－ループのステムは、１０個のヌクレオチドの長さの二本鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステム－ループのステムは、１１個のヌクレオチドの長さの二本鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステム－ループのステムは、１２個のヌクレオチドの長さの二本鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステム－ループのステムは、１３個のヌクレオチドの長さの二本鎖を含む。いくつかの実施形態では、ステム－ループのステムは、１４個のヌクレオチドの長さの二本鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ステム－ループは、分解（例えば、酵素分解）に対するオリゴヌクレオチド保護を提供し、標的細胞、組織、もしくは器官（例えば、肝臓）への標的化および／または送達を促進または改善するか、もしくはその両方である。例えば、いくつかの実施形態では、ステム－ループのループは、標的ｍＲＮＡ（例えば、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ）への標的化、標的遺伝子発現（例えば、ＴＭＰＲＳＳ６発現）の阻害、および／または標的細胞、組織、もしくは器官（例えば、肝臓）への送達、取り込み、および／または浸透、もしくはそれらの組み合わせを促進、改善、または増加させる１個以上の修飾を含むヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ステム－ループ自体またはステム－ループへの修飾は、オリゴヌクレオチドの本質的な遺伝子発現阻害活性に影響を与えないか、または実質的に影響を与えないが、安定性（例えば、分解に対する保護を提供する）、および／または標的細胞、組織、もしくは器官（例えば、肝臓）へのオリゴヌクレオチドの送達、取り込み、および／または浸透を促進、改善、または増加させる。特定の実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、センス鎖を含み、これは、（例えば、その３’末端に、その３’末端の近位に、および／またはセンス鎖の第１の領域（Ｒ１）の３’末端に）Ｓ１が、Ｓ２と相補的であり、Ｌｐが、Ｓ１とＳ２との間で最大約１０個のヌクレオチドの長さ（例えば、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のヌクレオチドの長さ）の結合ヌクレオチドの一本鎖ループを形成する、Ｓ１－Ｌｐ－Ｓ２として示されるステム－ループを含む。いくつかの実施形態では、ループ（Ｌｐ）は、３個のヌクレオチドの長さである（本明細書ではトリループと呼ばれる）。いくつかの実施形態では、ループ（Ｌｐ）は、４個のヌクレオチドの長さである（本明細書ではテトラループと呼ばれる）。いくつかの実施形態では、ループ（Ｌｐ）は、５個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、ループ（Ｌｐ）は、６個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、ループ（Ｌｐ）は、７個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、ループ（Ｌｐ）は、８個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、ループ（Ｌｐ）は、９個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、ループ（Ｌｐ）は、１０個のヌクレオチドの長さである。
いくつかの実施形態では、テトラループは、配列５’－ＧＡＡＡ－３’を含む。いくつかの実施形態では、ステムループは、配列５’－ＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ－３’（配列番号８５６）を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、配列番号６６１～８５２のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続する配列と相補的である標的化配列または相補性の領域を含み、オリゴヌクレオチドは、センス鎖を含み、これは、（例えば、その３’末端に、その３’末端の近位に、および／またはセンス鎖の第１の領域（Ｒ１）の３’末端に）Ｓ１が、Ｓ２と相補的であり、Ｌｐが、Ｓ１とＳ２との間で最大約１０個のヌクレオチドの長さ（例えば、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のヌクレオチドの長さ）の一本鎖ループを形成する、Ｓ１－Ｌｐ－Ｓ２として示されるステム－ループを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号６６１～８５２のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続する配列と相補的である標的化配列または相補性の領域を含み、オリゴヌクレオチドは、センス鎖を含み、これは、（例えば、その３’末端に、その３’末端の近位に、および／またはセンス鎖の第１の領域（Ｒ１）の３’末端に）Ｓ１が、Ｓ２と相補的であり、Ｌｐが、Ｓ１とＳ２との間で４個のヌクレオチドの長さの一本鎖ループを形成する、Ｓ１－Ｌｐ－Ｓ２として示されるステム－ループを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の構造Ｓ１－Ｌｐ－Ｓ２を有するステム－ループのループ（Ｌｐ）は、トリループ（ｔｒｉＬｐ）である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号６６１～８５２のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続する配列と相補的である標的化配列または相補性の領域と、トリループと、を含む。いくつかの実施形態では、トリループは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、リガンド（例えば、送達リガンド）、およびそれらの組み合わせを含む。
いくつかの実施形態では、上記に記載される構造Ｓ１－Ｌｐ－Ｓ２を有するステム－ループのループ（Ｌｐ）は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第１０，１３１，９１２号に記載されるテトラループ（ｔｅｔｒａＬｐ）である。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、配列番号６６１～８５２のうちのいずれか１つのヌクレオチドの連続する配列と相補的である標的化配列または相補性の領域と、テトラループと、を含む。いくつかの実施形態では、テトラループは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、リガンド（例えば、送達リガンド）、およびそれらの組み合わせを含む。
二本鎖の長さ
いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二本鎖は、少なくとも１２個（例えば、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、または少なくとも２１個）のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二本鎖は、１２～３０個のヌクレオチドの長さ（例えば、１２～３０、１２～２７、１２～２２、１５～２５、１８～３０、１８～２２、１８～２５、１８～２７、１８～３０、１９～３０、または２１～３０個のヌクレオチドの長さ）の範囲である。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二本鎖は、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２９、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二本鎖は、少なくとも１２個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二本鎖は、少なくとも１３個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二本鎖は、少なくとも１４個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二本鎖は、少なくとも１５個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二本鎖は、少なくとも１６個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二本鎖は、少なくとも１７個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二本鎖は、少なくとも１８個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二本鎖は、少なくとも１９個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二本鎖は、少なくとも２０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二本鎖は、少なくとも２１個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二本鎖は、少なくとも２２個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二本鎖は、少なくとも２３個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二本鎖は、少なくとも２４個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二本鎖は、少なくとも２５個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二本鎖は、少なくとも２６個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二本鎖は、少なくとも２７個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二本鎖は、少なくとも２８個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二本鎖は、少なくとも２９個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二本鎖は、少なくとも３０個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二本鎖は、センス鎖および／またはアンチセンス鎖の全長に及ばない。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間の二本鎖は、センス鎖またはアンチセンス鎖のいずれかの全長に及ぶ。いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間の二本鎖は、センス鎖およびアンチセンス鎖の両方の全長に及ぶ。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９５および６１６、
ｄ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｅ）それぞれ、配列番号５９６および６１７、
ｆ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、
ｇ）それぞれ、配列番号５８５および６０６、
ｈ）それぞれ、配列番号５８６および６０７、ならびに
ｉ）それぞれ、配列番号５８７および６０８から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二本鎖は、１２～３０個のヌクレオチドの長さ（例えば、１２～３０、１２～２７、１２～２２、１５～２５、１８～３０、１８～２２、１８～２５、１８～２７、１８～３０、１９～３０、または２１～３０個のヌクレオチドの長さ）の範囲である。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｄ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、ならびに
ｅ）それぞれ、配列番号５８６および６０７から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含む、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二本鎖は、１２～３０個のヌクレオチドの長さ（例えば、１２～３０、１２～２７、１２～２２、１５～２５、１８～３０、１８～２２、１８～２５、１８～２７、１８～３０、１９～３０、または２１～３０個のヌクレオチドの長さ）の範囲である。
オリゴヌクレオチド末端
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、いずれかまたは両方の鎖の末端は、平滑末端を含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、センス鎖およびアンチセンス鎖は、アンチセンス鎖の３’末端にオーバーハングを有する非対称性二本鎖領域を形成する、別個の鎖である。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、いずれかまたは両方の鎖の末端は、１個以上のヌクレオチドを含むオーバーハングを含む。いくつかの実施形態では、オーバーハングを含む１個以上のヌクレオチドは、不対ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、センス鎖の３’末端およびアンチセンス鎖の５’末端は、平滑末端を含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、センス鎖の５’末端およびアンチセンス鎖の３’末端は、平滑末端を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、いずれかまたは両方の鎖の３’末端は、１個以上のヌクレオチドを含む３’オーバーハングを含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、１個以上のヌクレオチドを含む３’オーバーハングを含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、１個以上のヌクレオチドを含む３’オーバーハングを含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、センス鎖およびアンチセンス鎖の両方は、１個以上のヌクレオチドを含む３’オーバーハングを含む。
いくつかの実施形態では、３’オーバーハングは、約１（１）～２０（２０）個のヌクレオチドの長さ（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または約２０個のヌクレオチドの長さ）である。いくつかの実施形態では、３’オーバーハングは、約１（１）～１９（１９）、１（１）～１８（１８）、１（１）～１７（１７）、１（１）～１６（１６）、１（１）～１５（１５）、１（１）～１４（１４）、１（１）～１３（１３）、１（１）～１２（１２）、１（１）～１１（１１）、１（１）～１０（１０）、１（１）～９（９）、１（１）～８（８）、１（１）～７（７）、１（１）～６（６）、１（１）～５（５）、１（１）～４（４）、１（１）～３（３）、または約１（１）～２（２）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、３’オーバーハングは、（１）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、３’オーバーハングは、２（２）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、３’オーバーハングは、３（３）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、３’オーバーハングは、４（４）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、３’オーバーハングは、５（５）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、３’オーバーハングは、６（６）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、３’オーバーハングは、７（７）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、３’オーバーハングは、８（８）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、３’オーバーハングは、９（９）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、３’オーバーハングは、１０（１０）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、３’オーバーハングは、１１（１１）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、３’オーバーハングは、１２（１２）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、３’オーバーハングは、１３（１３）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、３’オーバーハングは、１４（１４）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、３’オーバーハングは、１５（１５）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、３’オーバーハングは、１６（１６）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、３’オーバーハングは、１７（１７）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、３’オーバーハングは、１８（１８）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、３’オーバーハングは、１９（１９）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、３’オーバーハングは、２０（２０）個のヌクレオチドの長さである。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、オリゴヌクレオチドのセンス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９５および６１６、
ｄ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｅ）それぞれ、配列番号５９６および６１７、
ｆ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、
ｇ）それぞれ、配列番号５８５および６０６、
ｈ）それぞれ、配列番号５８６および６０７、ならびに
ｉ）それぞれ、配列番号５８７および６０８から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
アンチセンス鎖は、約１（１）～２０（２０）個のヌクレオチドの長さ（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または約２０個のヌクレオチドの長さ）の３’オーバーハングを含み、任意選択で、３’オーバーハングは、２（２）個のヌクレオチドの長さである。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、オリゴヌクレオチドのセンス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｄ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、ならびに
ｅ）それぞれ、配列番号５８６および６０７から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
アンチセンス鎖は、約１（１）～２０（２０）個のヌクレオチドの長さ（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または約２０個のヌクレオチドの長さ）の３’オーバーハングを含み、任意選択で、３’オーバーハングは、２（２）個のヌクレオチドの長さである。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、いずれかまたは両方の鎖の５’末端は、１個以上のヌクレオチドを含む５’オーバーハングを含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、１個以上のヌクレオチドを含む５’オーバーハングを含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、１個以上のヌクレオチドを含む５’オーバーハングを含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、センス鎖およびアンチセンス鎖の両方は、１個以上のヌクレオチドを含む５’オーバーハングを含む。
いくつかの実施形態では、５’オーバーハングは、約１（１）～２０（２０）個のヌクレオチドの長さ（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または約２０個のヌクレオチドの長さ）である。いくつかの実施形態では、５’オーバーハングは、約１（１）～１９（１９）、１（１）～１８（１８）、１（１）～１７（１７）、１（１）～１６（１６）、１（１）～１５（１５）、１（１）～１４（１４）、１（１）～１３（１３）、１（１）～１２（１２）、１（１）～１１（１１）、１（１）～１０（１０）、１（１）～９（９）、１（１）～８（８）、１（１）～７（７）、１（１）～６（６）、１（１）～５（５）、１（１）～４（４）、１（１）～３（３）、または約１（１）～２（２）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、５’オーバーハングは、（１）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、５’オーバーハングは、２（２）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、５’オーバーハングは、３（３）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、５’オーバーハングは、４（４）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、５’オーバーハングは、５（５）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、５’オーバーハングは、６（６）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、５’オーバーハングは、７（７）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、５’オーバーハングは、８（８）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、５’オーバーハングは、９（９）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、５’オーバーハングは、１０（１０）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、５’オーバーハングは、１１（１１）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、５’オーバーハングは、１２（１２）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、５’オーバーハングは、１３（１３）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、５’オーバーハングは、１４（１４）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、５’オーバーハングは、１５（１５）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、５’オーバーハングは、１６（１６）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、５’オーバーハングは、１７（１７）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、５’オーバーハングは、１８（１８）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、５’オーバーハングは、１９（１９）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、５’オーバーハングは、２０（２０）個のヌクレオチドの長さである。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、オリゴヌクレオチドのセンス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９５および６１６、
ｄ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｅ）それぞれ、配列番号５９６および６１７、
ｆ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、
ｇ）それぞれ、配列番号５８５および６０６、
ｈ）それぞれ、配列番号５８６および６０７、ならびに
ｉ）それぞれ、配列番号５８７および６０８から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
アンチセンス鎖は、約１（１）～２０（２０）個のヌクレオチドの長さ（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または約２０個のヌクレオチドの長さ）の５’オーバーハングを含み、任意選択で、５’オーバーハングは、２（２）個のヌクレオチドの長さである。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、オリゴヌクレオチドのセンス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｄ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、ならびに
ｅ）それぞれ、配列番号５８６および６０７から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
アンチセンス鎖は、約１（１）～２０（２０）個のヌクレオチドの長さ（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または約２０個のヌクレオチドの長さ）の５’オーバーハングを含み、任意選択で、５’オーバーハングは、２（２）個のヌクレオチドの長さである。
いくつかの実施形態では、センスおよび／もしくはアンチセンス鎖の３’末端または５’末端を含む１個以上の（例えば、２、３、４、５個、またはそれ以上）のヌクレオチドは、修飾される。例えば、いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端の１または２個の末端ヌクレオチドは、修飾される。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端の最後のヌクレオチドは、それが２’修飾を含むか、またはそれが２’－Ｏ－メトキシエチルを含むように修飾される。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端の最後の１または２個の末端ヌクレオチドは、標的と相補的である。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端の最後の１または２個のヌクレオチドは、標的と相補的ではない。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、センス鎖の３’末端は、本明細書に記載のステップループを含み、アンチセンス鎖の３’末端は、本明細書に記載の３’オーバーハングを含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、本明細書に記載のニックの入ったテトラループ構造を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、センス鎖の３’末端は、ステム－ループを含み、ループは、本明細書に記載のテトラループであり、アンチセンス鎖の３’末端は、本明細書に記載の３’オーバーハングを含む。いくつかの実施形態では、３’オーバーハングは、２（２）個のヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、３’オーバーハングを含む２（２）個のヌクレオチドは、両方ともグアニン（Ｇ）核酸塩基を含む。アンチセンス鎖の３’オーバーハングを含むヌクレオチドの一方または両方は、標的ｍＲＮＡと相補的ではない場合がある。典型的には、アンチセンス鎖の３’オーバーハングを含むヌクレオチドの一方または両方は、標的ｍＲＮＡと相補的ではない。
オリゴヌクレオチド修飾
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、修飾を含む。オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、特異性、安定性、送達、バイオアベイラビリティ、ヌクレアーゼ分解からの耐性、免疫原性、塩基対合特性、ＲＮＡ分布および細胞取り込み、ならびに治療もしくは研究用途と関連する他の特徴を改善または制御するために、様々な方法で修飾され得る。
いくつかの実施形態では、修飾は、修飾糖である。いくつかの実施形態では、修飾は、５’末端リン酸基である。いくつかの実施形態では、修飾は、修飾ヌクレオチド間結合である。いくつかの実施形態では、修飾は、修飾塩基である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、本明細書に記載の修飾のうちのいずれか１つまたはそれらの任意の組み合わせを含むことができる。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、少なくとも１個の修飾糖、５’末端リン酸基、少なくとも１個の修飾ヌクレオチド間結合、および少なくとも１個の修飾塩基を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９５および６１６、
ｄ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｅ）それぞれ、配列番号５９６および６１７、
ｆ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、
ｇ）それぞれ、配列番号５８５および６０６、
ｈ）それぞれ、配列番号５８６および６０７、ならびに
ｉ）それぞれ、配列番号５８７および６０８から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、少なくとも１個の修飾糖、５’末端リン酸基、少なくとも１個の修飾ヌクレオチド間結合、および少なくとも１個の修飾塩基を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｄ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、ならびに
ｅ）それぞれ、配列番号５８６および６０７から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、少なくとも１個の修飾糖、５’末端リン酸基、少なくとも１個の修飾ヌクレオチド間結合、および少なくとも１個の修飾塩基を含む。
オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）での修飾の数、およびそれらのヌクレオチド修飾の位置は、オリゴヌクレオチドの特性に影響を与え得る。例えば、オリゴヌクレオチドは、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）または同様の担体とそれらをコンジュゲートさせるか、またはそれらを取り囲むことによってインビボで送達され得る。しかしながら、オリゴヌクレオチドがＬＮＰまたは同様の担体によって保護されていない場合、ヌクレオチドのうちの少なくともいくつかが修飾されることが有利であり得る。したがって、いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの全てまたは実質的に全てのヌクレオチドが修飾される。いくつかの実施形態では、半分を超えるヌクレオチドが修飾される。いくつかの実施形態では、半分未満のヌクレオチドが修飾される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドを含む全てのヌクレオチドの糖部分は、２’位で修飾される。修飾は、可逆的または不可逆的であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、所望の特徴（例えば、酵素分解からの保護、インビボ投与後に所望の細胞を標的化する能力、および／または熱力学的安定性）を引き起こすのに十分な数および種類の修飾ヌクレオチドを有する。
糖修飾
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、修飾糖を含む。いくつかの実施形態では、修飾糖（本明細書では糖類似体とも呼ばれる）は、例えば、糖の２’、３’、４’、および／または５’炭素位置で１個以上の修飾が生じる、修飾デオキシリボースまたはリボース部分を含む。いくつかの実施形態では、修飾糖は、ロックド核酸（「ＬＮＡ」、例えば、Ｋｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｔｅｔｒａｈｅｄｏｎ ５４：３６０７－３０を参照されたい）、非ロックド核酸（「ＵＮＡ」、例えば、Ｓｎｅａｄ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ－Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ ２：ｅ１０３を参照されたい）、および架橋核酸（「ＢＮＡ」、例えば、Ｉｍａｎｉｓｈｉ ＆ Ｏｂｉｋａ（２００２）Ｃｈｅｍ Ｃｏｍｍｕｎ．（Ｃａｍｂ）２１：１６５３－５９を参照されたい）に存在するものなどの非天然の代替炭素構造も含み得る。
いくつかの実施形態では、糖におけるヌクレオチド修飾は、２’修飾を含む。いくつかの実施形態では、２’－修飾は、２’－Ｏ－プロパルギル、２’－Ｏ－プロピルアミン、２’－アミノ、２’－エチル、２’－フルオロ（２’－Ｆ）、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－［２－（メチルアミノ）－２－オキソエチル］（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、または２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸（２’－ＦＡＮＡ）を含み得る。いくつかの実施形態では、修飾は、２’－Ｆ、２’－ＯＭｅまたは２’－ＭＯＥである。いくつかの実施形態では、糖における修飾は、糖環の１個以上の炭素の修飾を含み得る、糖環の修飾を含む。例えば、ヌクレオチドの糖の修飾は、糖の１’－炭素もしくは４’－炭素に結合した糖の２’－酸素、またはエチレンもしくはメチレン架橋を介して１’－炭素もしくは４’－炭素に結合した２’－酸素を含み得る。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、２’炭素から３’炭素への結合を欠く非環式糖を有する。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、例えば、糖の４’位にチオール基を有する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、少なくとも約１個の修飾ヌクレオチド（例えば、少なくとも１、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０個、またはそれ以上）を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖は、少なくとも約１個の修飾ヌクレオチド（例えば、少なくとも１、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５個、またはそれ以上）を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖は、少なくとも約１個の修飾ヌクレオチド（例えば、少なくとも１、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０個、またはそれ以上）を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖の全てのヌクレオチドが修飾される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖の全てのヌクレオチドが修飾される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの全てのヌクレオチド（すなわち、センス鎖およびアンチセンス鎖の両方）が修飾される。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、２’－修飾（例えば、２’－Ｆまたは２’－ＯＭｅ、２’－ＭＯＥ、および２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸）を含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、異なる修飾パターンを有するオリゴヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、実施例および配列表に示される修飾パターンを有するセンス鎖と、実施例および配列表に示される修飾パターンを有するアンチセンス鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、２’－Ｆで修飾されたヌクレオチドを有するアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、２’－Ｆおよび２’－ＯＭｅで修飾されたヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｆで修飾されたヌクレオチドを有するセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｆおよび２’－ＯＭｅで修飾されたヌクレオチドを含むセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、センス鎖のヌクレオチドの約１０～１５％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、または１５％が２’－フルオロ修飾を含む、センス鎖を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖のヌクレオチドの約１１％が、２’－フルオロ修飾を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、アンチセンス鎖のヌクレオチドの約２５～３５％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、または３５％が２’－フルオロ修飾を含む、アンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖のヌクレオチドの約３２％が、２－フルオロ修飾を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２’－フルオロ修飾を含む、そのヌクレオチドの約１５～２５％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、または２５％を有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド中のヌクレオチドの約１９％が、２’－フルオロ修飾を含む。
本明細書で使用される場合、センス鎖およびアンチセンス鎖のオリゴヌクレオチドの番号付けは、それぞれ、５’末端において「１位」で始まる。
いくつかの実施形態では、センス鎖の８位、９位、１０位、または１１位のうちの１個以上が、２’－Ｆ基で修飾される。いくつかの実施形態では、センス鎖の３位、８位、９位、１０位、１２位、１３位、および１７位のうちの１個以上が、２’－Ｆ基で修飾される。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の２位、３位、４位、５位、７位、１０位、および１４位のうちの１個以上が、２’－Ｆ基で修飾される。いくつかの実施形態では、２位、３位、４位、５位、７位、８位、１０位、１４位、１６位、および１９位のうちの１個以上が、２’－Ｆ基で修飾される。いくつかの実施形態では、センス鎖における１位～７位および１２位～２０位のヌクレオチドの各々での糖部分が、２’－ＯＭｅで修飾される。いくつかの実施形態では、センス鎖における１位～７位、１２位～２７位、および３１位～３６位のヌクレオチドの各々での糖部分が、２’－ＯＭｅで修飾される。いくつかの実施形態では、センス鎖における６位、９位、１１位～１３位、１５位、１７位、１８位、および２０～２２位のヌクレオチドの各々での糖部分が、２’－ＯＭｅで修飾される。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９５および６１６、
ｄ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｅ）それぞれ、配列番号５９６および６１７、
ｆ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、
ｇ）それぞれ、配列番号５８５および６０６、
ｈ）それぞれ、配列番号５８６および６０７、ならびに
ｉ）それぞれ、配列番号５８７および６０８から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
センス鎖の８位、９位、１０位、または１１位のうちの１個以上が、２’－Ｆ基で修飾される。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｄ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、ならびに
ｅ）それぞれ、配列番号５８６および６０７から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
センス鎖の８位、９位、１０位、または１１位のうちの１個以上が、２’－Ｆ基で修飾される。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｆで修飾されたアンチセンス鎖の２位、５位、および１４位のヌクレオチドの各々の糖部分と、２’－Ｏ－プロパルギル、２’－Ｏ－プロピルアミン、２’－アミノ、２’－エチル、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－［２－（メチルアミノ）－２－オキソエチル］（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、および２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸（２’－ＦＡＮＡ）から成る群から選択される修飾で修飾されたアンチセンス鎖の残りのヌクレオチドの各々の糖部分とを有する、アンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｆで修飾されたアンチセンス鎖の１位、２位、５位、および１４位のヌクレオチドの各々の糖部分と、２’－Ｏ－プロパルギル、２’－Ｏ－プロピルアミン、２’－アミノ、２’－エチル、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－［２－（メチルアミノ）－２－オキソエチル］（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、および２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸（２’－ＦＡＮＡ）から成る群から選択される修飾で修飾されたアンチセンス鎖の残りのヌクレオチドの各々の糖部分とを有する、アンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｆで修飾されたアンチセンス鎖の２位、４位、５位、および１４位のヌクレオチドの各々の糖部分と、２’－Ｏ－プロパルギル、２’－Ｏ－プロピルアミン、２’－アミノ、２’－エチル、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－［２－（メチルアミノ）－２－オキソエチル］（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、および２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸（２’－ＦＡＮＡ）から成る群から選択される修飾で修飾されたアンチセンス鎖の残りのヌクレオチドの各々の糖部分とを有する、アンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｆで修飾されたアンチセンス鎖の１位、２位、３位、５位、７位、および１４位のヌクレオチドの各々の糖部分と、２’－Ｏ－プロパルギル、２’－Ｏ－プロピルアミン、２’－アミノ、２’－エチル、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－［２－（メチルアミノ）－２－オキソエチル］（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、および２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸（２’－ＦＡＮＡ）から成る群から選択される修飾で修飾されたアンチセンス鎖の残りのヌクレオチドの各々の糖部分とを有する、アンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｆで修飾されたアンチセンス鎖の２位、３位、４位、５位、７位、および１４位のヌクレオチドの各々の糖部分と、２’－Ｏ－プロパルギル、２’－Ｏ－プロピルアミン、２’－アミノ、２’－エチル、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－［２－（メチルアミノ）－２－オキソエチル］（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、および２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸（２’－ＦＡＮＡ）から成る群から選択される修飾で修飾されたアンチセンス鎖の残りのヌクレオチドの各々の糖部分とを有する、アンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｆで修飾されたアンチセンス鎖の１位、２位、３位、５位、１０位、および１４位のヌクレオチドの各々の糖部分と、２’－Ｏ－プロパルギル、２’－Ｏ－プロピルアミン、２’－アミノ、２’－エチル、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－［２－（メチルアミノ）－２－オキソエチル］（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、および２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸（２’－ＦＡＮＡ）から成る群から選択される修飾で修飾されたアンチセンス鎖の残りのヌクレオチドの各々の糖部分とを有する、アンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｆで修飾されたアンチセンス鎖の２位、３位、４位、５位、１０位、および１４位のヌクレオチドの各々の糖部分と、２’－Ｏ－プロパルギル、２’－Ｏ－プロピルアミン、２’－アミノ、２’－エチル、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－［２－（メチルアミノ）－２－オキソエチル］（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、および２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸（２’－ＦＡＮＡ）から成る群から選択される修飾で修飾されたアンチセンス鎖の残りのヌクレオチドの各々の糖部分とを有する、アンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｆで修飾されたアンチセンス鎖の２位、３位、５位、７位、１０位、および１４位のヌクレオチドの各々の糖部分と、２’－Ｏ－プロパルギル、２’－Ｏ－プロピルアミン、２’－アミノ、２’－エチル、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－［２－（メチルアミノ）－２－オキソエチル］（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、および２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸（２’－ＦＡＮＡ）から成る群から選択される修飾で修飾されたアンチセンス鎖の残りのヌクレオチドの各々の糖部分とを有する、アンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｆで修飾されたアンチセンス鎖の２位、３位、４位、５位、７位、１０位、および１４位のヌクレオチドの各々の糖部分と、２’－Ｏ－プロパルギル、２’－Ｏ－プロピルアミン、２’－アミノ、２’－エチル、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－［２－（メチルアミノ）－２－オキソエチル］（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、および２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸（２’－ＦＡＮＡ）から成る群から選択される修飾で修飾されたアンチセンス鎖の残りのヌクレオチドの各々の糖部分と、を有する、アンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｆで修飾されたアンチセンス鎖の２位、３位、４位、５位、７位、８位、１０位、１４位、１６位、および１９位のヌクレオチドの各々の糖部分と、２’－Ｏ－プロパルギル、２’－Ｏ－プロピルアミン、２’－アミノ、２’－エチル、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－［２－（メチルアミノ）－２－オキソエチル］（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、および２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸（２’－ＦＡＮＡ）から成る群から選択される修飾で修飾されたアンチセンス鎖の残りのヌクレオチドの各々の糖部分と、を有する、アンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｆで修飾された１位、２位、３位、４位、５位、６位、７位、８位、９位、１０位、１１位、１２位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位、または２２位の糖部分を有するアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－ＯＭｅで修飾された１位、２位、３位、４位、５位、６位、７位、８位、９位、１０位、１１位、１２位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位、または２２位の糖部分を有するアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｏ－プロパルギル、２’－Ｏ－プロピルアミン、２’－アミノ、２’－エチル、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－［２－（メチルアミノ）－２－オキソエチル］（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、および２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸（２’－ＦＡＮＡ）から成る群から選択される修飾で修飾された１位、２位、３位、４位、５位、６位、７位、８位、９位、１０位、１１位、１２位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位、または２２位の糖部分を有するアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－フルオロ（２’－Ｆ）、２’－Ｏ－プロパルギル、２’－Ｏ－プロピルアミン、２’－アミノ、２’－エチル、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－［２－（メチルアミノ）－２－オキソエチル］（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、および２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸（２’－ＦＡＮＡ）から成る群から選択される修飾で修飾された１位、２位、３位、４位、５位、６位、７位、８位、９位、１０位、１１位、１２位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位、または２２位の糖部分を有するアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｆで修飾された８位～１１位の糖部分を有するセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｆで修飾された３位、８位、９位、１０位、１２位、１３位、および１７位の糖部分を有するセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、２’ＯＭｅで修飾された１位～７位および１２位～１７位または１２位～２０位の糖部分を有するセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、２’ＯＭｅで修飾された１位～７位、１２位～２７位、および３１位～３６位の糖部分を有するセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｏ－プロパルギル、２’－Ｏ－プロピルアミン、２’－アミノ、２’－エチル、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－［２－（メチルアミノ）－２－オキソエチル］（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、および２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸（２’－ＦＡＮＡ）から成る群から選択される修飾で修飾されたセンス鎖の１位～７位および１２位～１７位または１２位～２０位のヌクレオチドの各々の糖部分を有するセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、２’ＯＭｅで修飾された１位～２位、４位～７位、１１位、１４位～１６位、および１８位～２０位の糖部分を有するセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｏ－プロパルギル、２’－Ｏ－プロピルアミン、２’－アミノ、２’－エチル、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－［２－（メチルアミノ）－２－オキソエチル］（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、および２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸（２’－ＦＡＮＡ）から成る群から選択される修飾で修飾されたセンス鎖の１位～２位、４位～７位、１１位、１４位～１６位、および１８位～２０位のヌクレオチドの各々の糖部分を有するセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｆで修飾された１位、２位、３位、４位、５位、６位、７位、８位、９位、１０位、１１位、１２位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位、２２位、２３位、２４位、２５位、２６位、２７位、２８位、２９位、３０位、３１位、３２位、３３位、３４位、３５位、または３６位の糖部分を有するセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－ＯＭｅで修飾された１位、２位、３位、４位、５位、６位、７位、８位、９位、１０位、１１位、１２位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位、２２位、２３位、２４位、２５位、２６位、２７位、２８位、２９位、３０位、３１位、３２位、３３位、３４位、３５位、または３６位の糖部分を有するセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－Ｏ－プロパルギル、２’－Ｏ－プロピルアミン、２’－アミノ、２’－エチル、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－［２－（メチルアミノ）－２－オキソエチル］（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、および２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸（２’－ＦＡＮＡ）から成る群から選択される修飾で修飾された１位、２位、３位、４位、５位、６位、７位、８位、９位、１０位、１１位、１２位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位、２２位、２３位、２４位、２５位、２６位、２７位、２８位、２９位、３０位、３１位、３２位、３３位、３４位、３５位、または３６位の糖部分を有するセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、２’－フルオロ（２’－Ｆ）、２’－Ｏ－プロパルギル、２’－Ｏ－プロピルアミン、２’－アミノ、２’－エチル、２’－アミノエチル（ＥＡ）、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－［２－（メチルアミノ）－２－オキソエチル］（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、および２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸（２’－ＦＡＮＡ）から成る群から選択される修飾で修飾された１位、２位、３位、４位、５位、６位、７位、８位、９位、１０位、１１位、１２位、１３位、１４位、１５位、１６位、１７位、１８位、１９位、２０位、２１位、２２位、２３位、２４位、２５位、２６位、２７位、２８位、２９位、３０位、３１位、３２位、３３位、３４位、３５位、または３６位の糖部分を有するセンス鎖を含む。
５’末端リン酸
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、５’末端リン酸を含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの５’末端リン酸基は、Ａｇｏ２との相互作用を増強する。しかしながら、５’－リン酸基を含むオリゴヌクレオチドは、ホスファターゼまたは他の酵素を介した分解の影響を受けやすい場合があり、それにより、インビボでそれらの性能および／またはバイオアベイラビリティが制限され得る。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、そのような分解に耐性のある５’リン酸の類似体を含む。いくつかの実施形態では、リン酸類似体は、オキシメチルホスホネート、ビニルホスホネート、もしくはマロニルホスホネート、またはそれらの組み合わせである。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチド鎖の５’末端は、天然の５’リン酸基の静電特性および立体特性を模倣する化学的部分（「リン酸模倣物」）に付着している。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９５および６１６、
ｄ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｅ）それぞれ、配列番号５９６および６１７、
ｆ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、
ｇ）それぞれ、配列番号５８５および６０６、
ｈ）それぞれ、配列番号５８６および６０７、ならびに
ｉ）それぞれ、配列番号５８７および６０８から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、５’末端リン酸、任意選択で、５’末端リン酸類似体を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｄ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、ならびに
ｅ）それぞれ、配列番号５８６および６０７から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、５’末端リン酸、任意選択で、５’末端リン酸類似体を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、糖の４’炭素位置にリン酸類似体を有する（「４’リン酸類似体」と呼ばれる）。例えば、国際特許出願公開第２０１８／０４５３１７号を参照されたい。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、５’末端ヌクレオチドに４’リン酸類似体を含む。いくつかの実施形態では、リン酸類似体は、オキシメチル基の酸素原子が（例えば、その４’炭素における）糖部分またはその類似体と結合している、オキシメチルホスホネートである。他の実施形態では、４’－リン酸類似体は、チオメチル基の硫黄原子またはアミノメチル基の窒素原子が糖部分またはその類似体の４’－炭素と結合している、チオメチルホスホネートまたはアミノメチルホスホネートである。特定の実施形態では、４’－リン酸類似体は、オキシメチルホスホネートである。いくつかの実施形態では、オキシメチルホスホネートは、Ｒが、独立して、Ｈ、ＣＨ３、アルキル基、ＣＨ２ＣＨ２ＣＮ、ＣＨ２ＯＣＯＣ（ＣＨ３）３、ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２Ｓｉ（ＣＨ３）３、または保護基から選択される、式－Ｏ－ＣＨ２－ＰＯ（ＯＨ）２、－Ｏ－ＣＨ２－ＰＯ（ＯＲ）２、または－Ｏ－ＣＨ２－ＰＯ（ＯＨ）（Ｒ）によって表される。特定の実施形態では、アルキル基は、ＣＨ２ＣＨ３である。より典型的には、Ｒは、独立して、Ｈ、ＣＨ３、またはＣＨ２ＣＨ３から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒは、ＣＨ３である。いくつかの実施形態では、４’－リン酸類似体は、４’－オキシメチルホスホネートである。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、５’末端ヌクレオチドに４’－リン酸類似体を含むアンチセンス鎖を含み、５’末端ヌクレオチドは、以下の構造を含む。
４’－Ｏ－モノメチルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジンホスホロチオエート［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵｓ］
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、５’末端ヌクレオチドに４’－リン酸類似体を含むアンチセンス鎖を含み、５’末端ヌクレオチドは、以下の構造を含む。
４’－Ｏ－モノメチルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジン［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵ］。
化学式１ａは、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合が提供される場合、４’－Ｏ－モノメチルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジンホスホロチオエート［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵｓ］と呼ばれ得る。
修飾ヌクレオチド間結合
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、修飾ヌクレオチド間結合を含む。いくつかの実施形態では、リン酸修飾または置換が、少なくとも約１個（例えば、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、または少なくとも５個）の修飾ヌクレオチド間結合を含むオリゴヌクレオチドをもたらす。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのうちのいずれか１つは、約１～約１０個（例えば、１～１０、２～８、４～６、３～１０、５～１０、１～５、１～３、または１～２個）の修飾ヌクレオチド間結合を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのうちのいずれか１つは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の修飾ヌクレオチド間結合を含む。
修飾ヌクレオチド間結合は、ホスホロジチオエート結合、ホスホロチオエート結合、ホスホトリエステル結合、チオノアルキルホスホネート結合、チオンアルキルホスホトリエステル結合、ホスホルアミダイト結合、ホスホネート結合またはボラノホスフェート結合であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのうちのいずれか１つの少なくとも１個の修飾ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合である。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、センス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の２位と３位、アンチセンス鎖の３位と４位、アンチセンス鎖の２０位と２１位、およびアンチセンス鎖の２１位と２２位のうちの１個以上との間にホスホロチオエート結合を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、センス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の１位と２位、アンチセンス鎖の２位と３位、アンチセンス鎖の２０位と２１位、およびアンチセンス鎖の２１位と２２位の各々の間にホスホロチオエート結合を有する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９５および６１６、
ｄ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｅ）それぞれ、配列番号５９６および６１７、
ｆ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、
ｇ）それぞれ、配列番号５８５および６０６、
ｈ）それぞれ、配列番号５８６および６０７、ならびに
ｉ）それぞれ、配列番号５８７および６０８から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、修飾ヌクレオチド間結合を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｄ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、ならびに
ｅ）それぞれ、配列番号５８６および６０７から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、修飾ヌクレオチド間結合を含む。
塩基修飾
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、１個以上の修飾核酸塩基を含む。いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基（本明細書では塩基類似体とも呼ばれる）は、ヌクレオチド糖部分の１’位に結合される。特定の実施形態では、修飾核酸塩基は、窒素含有塩基である。いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、窒素原子を含まない。例えば、米国特許出願公開第２００８／０２７４４６２号を参照されたい。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、ユニバーサル塩基を含む。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、核酸塩基を含まない（脱塩基）。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖およびアンチセンス鎖は、ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９５および６１６、
ｄ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｅ）それぞれ、配列番号５９６および６１７、
ｆ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、
ｇ）それぞれ、配列番号５８５および６０６、
ｈ）それぞれ、配列番号５８６および６０７、ならびに
ｉ）それぞれ、配列番号５８７および６０８から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、１個以上の修飾核酸塩基を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｄ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、ならびに
ｅ）それぞれ、配列番号５８６および６０７から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、１個以上の修飾核酸塩基を含む。
いくつかの実施形態では、ユニバーサル塩基は、修飾ヌクレオチド中のヌクレオチド糖部分の１’位、またはヌクレオチド糖部分置換中の同等の位置に位置する複素環部分であり、二本鎖で存在する場合、二本鎖の構造を実質的に改変することなく、１個を超える種類の塩基の反対側に位置付けることができる。いくつかの実施形態では、標的核酸（例えば、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ）と完全に相補的である参照一本鎖核酸（例えば、オリゴヌクレオチド）と比較して、ユニバーサル塩基を含む一本鎖核酸は、相補的な核酸で形成される二本鎖よりも低いＴｍを有する標的核酸と二本鎖を形成する。いくつかの実施形態では、ユニバーサル塩基が塩基で置換されて、単一のミスマッチを生成する、参照一本鎖核酸と比較すると、ユニバーサル塩基を含む一本鎖核酸は、ミスマッチ塩基を含む核酸で形成される二本鎖よりも高いＴｍを有する標的核酸と二本鎖を形成する。
ユニバーサル結合ヌクレオチドの非限定的な例には、イノシン、１－β－Ｄ－リボフラノシル－５－ニトロインドール、および／または１－β－Ｄ－リボフラノシル－３－ニトロピロールが含まれるが、これらに限定されない（例えば、米国特許出願公開第２００７／０２５４３６２号、Ｖａｎ Ａｅｒｓｃｈｏｔ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２３：４３６３－４３７０、Ｌｏａｋｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２３：２３６１－６６、およびＬｏａｋｅｓ ＆ Ｂｒｏｗｎ（１９９４）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２２：４０３９－４３を参照されたい）。
標的化リガンド
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を、１個以上の細胞もしくは細胞型、組織、器官、または解剖学的領域もしくは区画に標的化することが望ましい。そのような方略は、治療される生物への望ましくない効果を回避すること、および／またはオリゴヌクレオチドもしくはその効果（例えば、ＴＭＰＲＳＳ６発現の阻害または低減）から利益を受けないであろう細胞、組織、器官、または解剖学的領域もしくは区画へのオリゴヌクレオチドの過度の損失を回避することに役立ち得る。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、特定の細胞もしくは細胞型、組織、器官、または解剖学的領域もしくは区画への標的化および／または送達を容易にするために（例えば、肝臓へのオリゴヌクレオチドの送達を容易にするために）修飾される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１個以上の標的化リガンドとコンジュゲートされた少なくとも１個のヌクレオチド（例えば、１、２、３、４、５、６個、またはそれ以上のヌクレオチド）を含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９５および６１６、
ｄ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｅ）それぞれ、配列番号５９６および６１７、
ｆ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、
ｇ）それぞれ、配列番号５８５および６０６、
ｈ）それぞれ、配列番号５８６および６０７、ならびに
ｉ）それぞれ、配列番号５８７および６０８から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、少なくとも１個のヌクレオチドとコンジュゲートされた標的化リガンドを含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｄ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、ならびに
ｅ）それぞれ、配列番号５８６および６０７から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、少なくとも１個のヌクレオチドとコンジュゲートされた標的化リガンドを含む。
いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、もしくはタンパク質の一部分（例えば、抗体または抗体断片）、または脂質を含む。特定の実施形態では、標的化リガンドは、少なくとも１個のＧａｌＮＡｃ部分を含む炭水化物である。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）の１個以上（例えば、１、２、３、４、５、または６個）のヌクレオチドは、各々、別個の標的化リガンド（例えば、ＧａｌＮＡｃ部分）とコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの２～４個のヌクレオチドは、各々、別個の標的化リガンドとコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、標的化リガンドが歯ブラシの毛に似ており、オリゴヌクレオチドが歯ブラシに似ているように、標的化リガンドは、センス鎖またはアンチセンス鎖のいずれかの末端で２～４個のヌクレオチドとコンジュゲートされる（例えば、標的化リガンドは、センス鎖またはアンチセンス鎖の５’または３’末端での２～４個のヌクレオチドのオーバーハングまたは伸長部とコンジュゲートされる）。例えば、オリゴヌクレオチドは、センス鎖の５’末端または３’末端のいずれかにステム－ループを含み得、ステムのループの１、２、３、または４個のヌクレオチドは、個別に標的化リガンドとコンジュゲートされ得る。いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、センス鎖の３’末端にステム－ループを含み、ステム－ループのループは、トリループまたはテトラループを含み、それぞれ、トリループまたはテトラループを含む３または４個のヌクレオチドは、標的化リガンドと個別にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、センス鎖の３’末端にステム－ループを含み、ステム－ループのループは、テトラループを含み、テトラループの３個のヌクレオチドは、標的化リガンドと個別にコンジュゲートされる。
ＧａｌＮＡｃは、アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）の高親和性炭水化物リガンドであり、これは主に肝細胞の表面上に発現し、末端ガラクトースまたはＧａｌＮＡｃ残基（アシアロ糖タンパク質）を含む循環糖タンパク質の結合、内在化、およびその後の除去に主要な役割を果たしている。本開示のオリゴヌクレオチドとのＧａｌＮＡｃ部分のコンジュゲーション（間接的または直接的のいずれか）を使用して、これらのオリゴヌクレオチドを細胞上に発現するＡＳＧＰＲに対して標的化することができる。いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、少なくとも１個以上のＧａｌＮＡｃ部分とコンジュゲートされ、ＧａｌＮＡｃ部分は、オリゴヌクレオチドを、ヒト肝細胞（例えば、ヒト肝細胞）上に発現するＡＳＧＰＲに対して標的化する。いくつかの実施形態では、ＧａｌＮＡｃ部分は、オリゴヌクレオチドを肝臓に対して標的化する。
いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、一価ＧａｌＮＡｃ部分と直接的または間接的にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１個を超える一価ＧａｌＮＡｃと直接的または間接的にコンジュゲートされる（すなわち、２、３、または４個の一価ＧａｌＮＡｃ部分とコンジュゲートされ、典型的には、３または４個の一価ＧａｌＮＡｃ部分とコンジュゲートされる）。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１個以上の二価ＧａｌＮＡｃ、三価ＧａｌＮＡｃ、または四価ＧａｌＮＡｃ部分とコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、二価、三価、または四価ＧａｌＮＡｃ部分は、分岐リンカーを介してオリゴヌクレオチドとコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、一価ＧａｌＮＡｃ部分は、第１のヌクレオチドとコンジュゲートされ、二価、三価、または四価ＧａｌＮＡｃ部分は、分枝リンカーを介して第２のヌクレオチドとコンジュゲートされる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）の１（１）個以上（例えば、１、２、３、４、５、または６個）のヌクレオチドは、各々、ＧａｌＮＡｃ部分とコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、テトラループの２（２）～４（４）個のヌクレオチドは、各々、別個のＧａｌＮＡｃ部分とコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、トリループの１（１）～３（３）個のヌクレオチドは、各々、別個のＧａｌＮＡｃ部分とコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＧａｌＮＡｃ部分が歯ブラシの毛に似ており、オリゴヌクレオチドが歯ブラシに似ているように、標的化リガンドは、センス鎖またはアンチセンス鎖のいずれかの末端で２（２）～４（４）個のヌクレオチドとコンジュゲートされる（例えば、リガンドは、センス鎖またはアンチセンス鎖の５’または３’末端での２（２）～４（４）個のヌクレオチドのオーバーハングまたは伸長部とコンジュゲートされる）。いくつかの実施形態では、ＧａｌＮＡｃ部分は、センス鎖のヌクレオチドとコンジュゲートされる。例えば、３（３）または４（４）個のＧａｌＮＡｃ部分は、センス鎖のテトラループ内のヌクレオチドとコンジュゲートされ得、各ＧａｌＮＡｃ部分は、１（１）個のヌクレオチドとコンジュゲートされる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、テトラループを含み、テトラループ（ｔｅｔｒａＬｐ）は、アデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）ヌクレオチドの任意の組み合わせである。いくつかの実施形態では、テトラループ（ｔｅｔｒａＬｐ）は、化学式２（Ｘ＝ヘテロ原子）で以下に示されるように、本明細書に記載の任意のリンカーを介してテトラループのいずれか１個以上のグアニン（Ｇ）ヌクレオチドに付着している一価ＧａｌＮＡｃ部分を含む。
オリゴヌクレオチドに含まれる場合、化学式２は、隣接ヌクレオチドに共有結合され得ることが理解される。いくつかの実施形態では、テトラループ（ｔｅｔｒａＬｐ）は、化学式２ａ（Ｘ＝ヘテロ原子）で以下に示されるように、本明細書に記載の任意のリンカーを介してテトラループのいずれか１個以上のグアニン（Ｇ）ヌクレオチドに付着している一価ＧａｌＮＡｃ部分を含む。
いくつかの実施形態では、テトラループ（ｔｅｔｒａＬｐ）は、化学式３（Ｘ＝ヘテロ原子）で以下に示されるように、本明細書に記載の任意のリンカーを介してテトラループのいずれか１個以上のアデニン（Ａ）ヌクレオチドに付着している一価ＧａｌＮＡｃ部分を有する。
オリゴヌクレオチドに含まれる場合、化学式３は、隣接ヌクレオチドに共有結合され得ることが理解される。いくつかの実施形態では、テトラループ（ｔｅｔｒａＬｐ）は、化学式３ａ（Ｘ＝ヘテロ原子）で以下に示されるように、本明細書に記載の任意のリンカーを介してテトラループのいずれか１個以上のアデニン（Ａ）ヌクレオチドに付着している一価ＧａｌＮＡｃ部分を有する。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、以下（化学式４）に示されるように、［ａｄｅｍＧ－ＧａｌＮＡｃ］または２’－アミノジエトキシメタノール－グアニン－ＧａｌＮＡｃと呼ばれるグアニン（Ｇ）ヌクレオチドに付着している一価ＧａｌＮＡｃ部分を含む。
オリゴヌクレオチドに含まれる場合、化学式４は、例えば、以下の化学式４ａに示されるものなどの隣接ヌクレオチドに結合され得ることが理解される。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、以下（化学式５）に示されるように、［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］または２’－アミノジエトキシメタノール－アデニン－ＧａｌＮＡｃと呼ばれる、アデニンヌクレオチドに付着している一価ＧａｌＮＡｃ部分を含む。
オリゴヌクレオチドに含まれる場合、化学式５は、例えば、以下の化学式５ａに示されるものなどの隣接ヌクレオチドに結合され得ることが理解される。
そのようなコンジュゲーションの例は、５’から３’までヌクレオチド配列ＧＡＡＡ（Ｌ＝リンカー、Ｘ＝ヘテロ原子）を含むループについて以下に示される（化学式６）。そのようなループは、例えば、本明細書に提供されるセンス鎖の２７位～３０位に存在し得る。化学式では、
は、オリゴヌクレオチド鎖への付着点を記述するために使用される（化学式６）。
そのようなコンジュゲーションの例は、５’から３’までヌクレオチド配列ＧＡＡＡ（Ｌ＝リンカー、Ｘ＝ヘテロ原子）を含むループについて以下に示される（化学式６ａ）。そのようなループは、例えば、本明細書に提供されるセンス鎖の２７位～３０位に存在し得る。化学式では、
は、オリゴヌクレオチド鎖への付着点を記述するために使用される。
適切な方法または化学（例えば、クリックケミストリ）を使用して、標的化リガンドをヌクレオチドと結合することができる。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、クリックリンカーを使用して、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を含むヌクレオチドとコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、アセタール系リンカーを使用して、標的化リガンドを本明細書に記載のオリゴヌクレオチドのうちのいずれか１つのヌクレオチドとコンジュゲートする。アセタール系リンカーは、例えば、国際特許出願公開第２０１６／１００４０１号に開示されている。いくつかの実施形態では、リンカーは、不安定リンカーである。しかしながら、他の実施形態では、リンカーは、安定している。ＧａｌＮＡｃ部分がアセタールリンカーを使用してループのヌクレオチドに付着している、５’から３’までヌクレオチドＧＡＡＡを含むループについて例が以下に示される（化学式７および化学式８）。そのようなループは、例えば、センス鎖のうちのいずれか１つの２７位～３０位に存在し得る。化学式では、
は、オリゴヌクレオチド鎖への付着点である（化学式７および化学式８）。
、
または
ＧａｌＮＡｃ部分がアセタールリンカーを使用してループのヌクレオチドに付着している、５’から３’までヌクレオチドＧＡＡＡを含むループについて例が以下に示される（化学式７ａおよび化学式８ａ）。そのようなループは、例えば、センス鎖のうちのいずれか１つの２７位～３０位に存在し得る。化学式では、
は、オリゴヌクレオチド鎖への付着点である（化学式７ａおよび化学式８ａ）。
、
または
上述のように、様々な適切な方法または化学合成技術（例えば、クリックケミストリ）を使用して、標的化リガンドをヌクレオチドと結合することができる。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、クリックリンカーを使用してヌクレオチドとコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、アセタール系リンカーを使用して、標的化リガンドを本明細書に記載のオリゴヌクレオチドのうちのいずれか１つのヌクレオチドとコンジュゲートする。アセタール系リンカーは、例えば、国際特許出願公開第２０１６／１００４０１号に開示されている。いくつかの実施形態では、リンカーは、不安定リンカーである。しかしながら、他の実施形態では、リンカーは、安定リンカーである。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、それとコンジュゲートされたＧａｌＮＡｃを有していない。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９５および６１６、
ｄ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｅ）それぞれ、配列番号５９６および６１７、
ｆ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、
ｇ）それぞれ、配列番号５８５および６０６、
ｈ）それぞれ、配列番号５８６および６０７、ならびに
ｉ）それぞれ、配列番号５８７および６０８から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、ヌクレオチドとコンジュゲートされた少なくとも１つのＧａｌＮＡｃ部分を含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドのセンス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｄ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、ならびに
ｅ）それぞれ、配列番号５８６および６０７から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
オリゴヌクレオチドは、ヌクレオチドとコンジュゲートされた少なくとも１つのＧａｌＮＡｃ部分を含む。
ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するための例示的なオリゴヌクレオチド
いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、センス鎖およびアンチセンス鎖を含む全てのヌクレオチドは、修飾されており、アンチセンス鎖は、配列番号６６１～８５２のうちのいずれか１つのＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と相補性の領域を含み、相補性の領域は、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の５’末端ヌクレオチドは、本明細書に記載されるように、４’－Ｏ－モノメチルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジン［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵ］を含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の５’末端ヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合を含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、１個以上の２’－フルオロ（２’－Ｆ）および２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）修飾ヌクレオチド、ならびに少なくとも１個のホスホロチオエート結合を含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、４（４）個のホスホロチオエート結合を含み、センス鎖は、１（１）個のホスホロチオエート結合を含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、５（５）個のホスホロチオエート結合を含み、センス鎖は、１（１）個のホスホロチオエート結合を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、配列番号１９３～３８４のうちのいずれか１つの配列を有するセンス鎖と、配列番号３８５～５７６から選択される相補的な配列を含むアンチセンス鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、配列番号５７７～５９７のうちのいずれか１つの配列を有するセンス鎖と、配列番号５９８～６１８から選択される相補的な配列を含むアンチセンス鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、配列番号６１９～６３９のうちのいずれか１つの配列を有するセンス鎖と、配列番号６４０～６６０から選択される相補的な配列を含むアンチセンス鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するための本明細書で提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、およびＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、
８位～１１位の２’－Ｆ修飾ヌクレオチド、１位～７位、１２位～２７位、および３１位～３６位の２’－ＯＭｅ修飾ヌクレオチド、２８位、２９位、および３０位のＧａｌＮＡｃコンジュゲートヌクレオチド、ならびに１位と２位との間のホスホロチオエート結合を含む、３６個のヌクレオチドのセンス鎖と、
２位、３位、４位、５位、７位、１０位、および１４位の２’－Ｆ修飾ヌクレオチド、１位、６位、８位、９位、１１位～１３位、および１５位～２２位の２’－ＯＭｅ、１位と２位、２位と３位、３位と４位、２０位と２１位、および２１位と２２位との間のホスホロチオエート結合、ならびに４’－リン酸類似体を含む１位での５’－末端ヌクレオチドを含む、２２個のヌクレオチドのアンチセンス鎖と、を含み、任意選択で、５’末端ヌクレオチドは、４’－Ｏ－モノメチルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジン［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵ］を含み、アンチセンス鎖の１位～２０位は、センス鎖の１位～２０位と二本鎖領域を形成し、センス鎖の２１位～３６位は、ステム－ループを形成し、２７位～３０位は、ステム－ループのループを形成し、任意選択で、２７位～３０位は、テトラループを含み、アンチセンス鎖の２１位および２２位は、オーバーハングを含み、センス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９５および６１６、
ｄ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｅ）それぞれ、配列番号５９６および６１７、
ｆ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、
ｇ）それぞれ、配列番号５８５および６０６、
ｈ）それぞれ、配列番号５８６および６０７、ならびに
ｉ）それぞれ、配列番号５８７および６０８から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチド（例えば、およびＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、
８位～１１位の２’－Ｆ修飾ヌクレオチド、１位～７位、１２位～２７位、および３１位～３６位の２’－ＯＭｅ修飾ヌクレオチド、２８位、２９位、および３０位のＧａｌＮＡｃコンジュゲートヌクレオチド、ならびに１位と２位との間のホスホロチオエート結合を含む、３６個のヌクレオチドのセンス鎖と、
２位、３位、４位、５位、７位、１０位、および１４位の２’－Ｆ修飾ヌクレオチド、１位、６位、８位、９位、１１位～１３位、および１５位～２２位の２’－ＯＭｅ、１位と２位、２位と３位、３位と４位、２０位と２１位、および２１位と２２位との間のホスホロチオエート結合、ならびに４’－リン酸類似体を含む１位での５’－末端ヌクレオチドを含む、２２個のヌクレオチドのアンチセンス鎖と、を含み、任意選択で、５’末端ヌクレオチドは、４’－Ｏ－モノメチルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジン［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵ］を含み、アンチセンス鎖の１位～２０位は、センス鎖の１位～２０位と二本鎖領域を形成し、センス鎖の２１位～３６位は、ステム－ループを形成し、２７位～３０位は、ステム－ループのループを形成し、任意選択で、２７位～３０位は、テトラループを含み、アンチセンス鎖の２１位および２２位は、オーバーハングを含み、センス鎖およびアンチセンス鎖は、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｄ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、ならびに
ｅ）それぞれ、配列番号５８６および６０７から選択されるヌクレオチド配列を含む、センス鎖およびアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号５７９に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号６００に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖と、を含む。いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号５８０に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号６０１に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖と、を含む。いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号５９０に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号６１１に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖と、を含む。いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号５９７に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号６１８に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖と、を含む。いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号５８６に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号６０７に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、（ｉ）１９～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖であって、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ的配列と相補性の領域を含むヌクレオチド配列を含み、相補性の領域が、配列番号１８４に示される、アンチセンス鎖と、（ｉｉ）アンチセンス鎖と相補性の領域を含む、１９～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と、を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、アンチセンス鎖の３’末端に１～４個のヌクレオチドのオーバーハングを有する非対称二本鎖領域を形成する、別個の鎖である。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、（ｉ）１９～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖であって、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ的配列と相補性の領域を含むヌクレオチド配列を含み、相補性の領域が、配列番号１８１に示される、アンチセンス鎖と、（ｉｉ）アンチセンス鎖と相補性の領域を含む、１９～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と、を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、アンチセンス鎖の３’末端に１～４個のヌクレオチドのオーバーハングを有する非対称二本鎖領域を形成する、別個の鎖である。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、（ｉ）１９～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖であって、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ的配列と相補性の領域を含むヌクレオチド配列を含み、相補性の領域が、配列番号１５８に示される、アンチセンス鎖と、（ｉｉ）アンチセンス鎖と相補性の領域を含む、１９～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と、を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、アンチセンス鎖の３’末端に１～４個のヌクレオチドのオーバーハングを有する非対称二本鎖領域を形成する、別個の鎖である。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、（ｉ）１９～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖であって、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ的配列と相補性の領域を含むヌクレオチド配列を含み、相補性の領域が、配列番号１３４に示される、アンチセンス鎖と、（ｉｉ）アンチセンス鎖と相補性の領域を含む、１９～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と、を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、アンチセンス鎖の３’末端に１～４個のヌクレオチドのオーバーハングを有する非対称二本鎖領域を形成する、別個の鎖である。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、（ｉ）１９～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖であって、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ的配列と相補性の領域を含むヌクレオチド配列を含み、相補性の領域が、配列番号１０２に示される、アンチセンス鎖と、（ｉｉ）アンチセンス鎖と相補性の領域を含む、１９～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と、を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、アンチセンス鎖の３’末端に１～４個のヌクレオチドのオーバーハングを有する非対称二本鎖領域を形成する、別個の鎖である。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、（ｉ）１９～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖であって、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と相補性の領域を含むヌクレオチド配列を含み、相補性の領域が、配列番号１８４に示される、アンチセンス鎖と、（ｉｉ）アンチセンス鎖と相補性の領域および３’末端でのステム－ループを含む、１９～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖であって、ステム－ループが、Ｓ１－Ｌｐ－Ｓ２として示され、Ｓ１が、Ｓ２と相補的であり、Ｌｐが、Ｓ１とＳ２との間で３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成する、センス鎖と、を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、アンチセンス鎖の３’末端に１～４個のヌクレオチドのオーバーハングを有する非対称二本鎖領域を形成する、別個の鎖である。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、（ｉ）１９～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖であって、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と相補性の領域を含むヌクレオチド配列を含み、相補性の領域が、配列番号１８１に示される、アンチセンス鎖と、（ｉｉ）アンチセンス鎖と相補性の領域および３’末端でのステム－ループを含む、１９～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖であって、ステム－ループが、Ｓ１－Ｌｐ－Ｓ２として示され、Ｓ１が、Ｓ２と相補的であり、Ｌｐが、Ｓ１とＳ２との間で３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成する、センス鎖と、を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、アンチセンス鎖の３’末端に１～４個のヌクレオチドのオーバーハングを有する非対称二本鎖領域を形成する、別個の鎖である。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、（ｉ）１９～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖であって、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と相補性の領域を含むヌクレオチド配列を含み、相補性の領域が、配列番号１５８に示される、アンチセンス鎖と、（ｉｉ）アンチセンス鎖と相補性の領域および３’末端でのステム－ループを含む、１９～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖であって、ステム－ループが、Ｓ１－Ｌｐ－Ｓ２として示され、Ｓ１が、Ｓ２と相補的であり、Ｌｐが、Ｓ１とＳ２との間で３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成する、センス鎖と、を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、アンチセンス鎖の３’末端に１～４個のヌクレオチドのオーバーハングを有する非対称二本鎖領域を形成する、別個の鎖である。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、（ｉ）１９～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖であって、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と相補性の領域を含むヌクレオチド配列を含み、相補性の領域が、配列番号１３４に示される、アンチセンス鎖と、（ｉｉ）アンチセンス鎖と相補性の領域および３’末端でのステム－ループを含む、１９～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖であって、ステム－ループが、Ｓ１－Ｌｐ－Ｓ２として示され、Ｓ１が、Ｓ２と相補的であり、Ｌｐが、Ｓ１とＳ２との間で３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成する、センス鎖と、を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、アンチセンス鎖の３’末端に１～４個のヌクレオチドのオーバーハングを有する非対称二本鎖領域を形成する、別個の鎖である。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、（ｉ）１９～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖であって、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と相補性の領域を含むヌクレオチド配列を含み、相補性の領域が、配列番号１０２に示される、アンチセンス鎖と、（ｉｉ）アンチセンス鎖と相補性の領域および３’末端でのステム－ループを含む、１９～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖であって、ステム－ループが、Ｓ１－Ｌｐ－Ｓ２として示され、Ｓ１が、Ｓ２と相補的であり、Ｌｐが、Ｓ１とＳ２との間で３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成する、センス鎖と、を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、アンチセンス鎖の３’末端に１～４個のヌクレオチドのオーバーハングを有する非対称二本鎖領域を形成する、別個の鎖である。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、（ｉ）１９～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖であって、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と相補性の領域を含むヌクレオチド配列を含み、相補性の領域が、配列番号１８４に示される、アンチセンス鎖と、（ｉｉ）アンチセンス鎖と相補性の領域を含む、１９～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖であって、アンチセンス鎖と相補性の領域が、配列番号８４４に示される、センス鎖と、を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、アンチセンス鎖の３’末端に１～４個のヌクレオチドのオーバーハングを有する非対称二本鎖領域を形成する、別個の鎖である。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、（ｉ）１９～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖であって、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と相補性の領域を含むヌクレオチド配列を含み、相補性の領域が、配列番号１８１に示される、アンチセンス鎖と、（ｉｉ）アンチセンス鎖と相補性の領域を含む、１９～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖であって、アンチセンス鎖と相補性の領域が、配列番号８４１に示される、センス鎖と、を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、アンチセンス鎖の３’末端に１～４個のヌクレオチドのオーバーハングを有する非対称二本鎖領域を形成する、別個の鎖である。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、（ｉ）１９～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖であって、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と相補性の領域を含むヌクレオチド配列を含み、相補性の領域が、配列番号１５８に示される、アンチセンス鎖と、（ｉｉ）アンチセンス鎖と相補性の領域を含む、１９～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖であって、アンチセンス鎖と相補性の領域が、配列番号８１８に示される、センス鎖と、を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、アンチセンス鎖の３’末端に１～４個のヌクレオチドのオーバーハングを有する非対称二本鎖領域を形成する、別個の鎖である。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、（ｉ）１９～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖であって、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と相補性の領域を含むヌクレオチド配列を含み、相補性の領域が、配列番号１３４に示される、アンチセンス鎖と、（ｉｉ）アンチセンス鎖と相補性の領域を含む、１９～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖であって、アンチセンス鎖と相補性の領域が、配列番号７９４に示される、センス鎖と、を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、アンチセンス鎖の３’末端に１～４個のヌクレオチドのオーバーハングを有する非対称二本鎖領域を形成する、別個の鎖である。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、（ｉ）１９～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖であって、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と相補性の領域を含むヌクレオチド配列を含み、相補性の領域が、配列番号１０２に示される、アンチセンス鎖と、（ｉｉ）アンチセンス鎖と相補性の領域を含む、１９～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖であって、アンチセンス鎖と相補性の領域が、配列番号７６２に示される、センス鎖と、を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、アンチセンス鎖の３’末端に１～４個のヌクレオチドのオーバーハングを有する非対称二本鎖領域を形成する、別個の鎖である。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、（ｉ）１９～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖であって、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と相補性の領域を含むヌクレオチド配列を含み、相補性の領域が、配列番号１８４に示される、アンチセンス鎖と、（ｉｉ）アンチセンス鎖と相補性の領域および３’末端でのステム－ループを含む、１９～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖であって、アンチセンス鎖と相補性の領域が、配列番号８４４に示され、ステム－ループが、Ｓ１－Ｌｐ－Ｓ２として示され、Ｓ１が、Ｓ２と相補的であり、Ｌｐが、Ｓ１とＳ２との間で３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成する、センス鎖と、を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、アンチセンス鎖の３’末端に１～４個のヌクレオチドのオーバーハングを有する非対称二本鎖領域を形成する、別個の鎖である。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、（ｉ）１９～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖であって、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と相補性の領域を含むヌクレオチド配列を含み、相補性の領域が、配列番号１８１に示される、アンチセンス鎖と、（ｉｉ）アンチセンス鎖と相補性の領域および３’末端でのステム－ループを含む、１９～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖であって、アンチセンス鎖と相補性の領域が、配列番号８４１に示され、ステム－ループが、Ｓ１－Ｌｐ－Ｓ２として示され、Ｓ１が、Ｓ２と相補的であり、Ｌｐが、Ｓ１とＳ２との間で３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成する、センス鎖と、を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、アンチセンス鎖の３’末端に１～４個のヌクレオチドのオーバーハングを有する非対称二本鎖領域を形成する、別個の鎖である。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、（ｉ）１９～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖であって、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と相補性の領域を含むヌクレオチド配列を含み、相補性の領域が、配列番号１５８に示される、アンチセンス鎖と、（ｉｉ）アンチセンス鎖と相補性の領域および３’末端でのステム－ループを含む、１９～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖であって、アンチセンス鎖と相補性の領域が、配列番号８１８に示され、ステム－ループが、Ｓ１－Ｌｐ－Ｓ２として示され、Ｓ１が、Ｓ２と相補的であり、Ｌｐが、Ｓ１とＳ２との間で３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成する、センス鎖と、を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、アンチセンス鎖の３’末端に１～４個のヌクレオチドのオーバーハングを有する非対称二本鎖領域を形成する、別個の鎖である。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、（ｉ）１９～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖であって、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と相補性の領域を含むヌクレオチド配列を含み、相補性の領域が、配列番号１３４に示される、アンチセンス鎖と、（ｉｉ）アンチセンス鎖と相補性の領域および３’末端でのステム－ループを含む、１９～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖であって、アンチセンス鎖と相補性の領域が、配列番号７９４に示され、ステム－ループが、Ｓ１－Ｌｐ－Ｓ２として示され、Ｓ１が、Ｓ２と相補的であり、Ｌｐが、Ｓ１とＳ２との間で３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成する、センス鎖と、を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、アンチセンス鎖の３’末端に１～４個のヌクレオチドのオーバーハングを有する非対称二本鎖領域を形成する、別個の鎖である。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、（ｉ）１９～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖であって、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と相補性の領域を含むヌクレオチド配列を含み、相補性の領域が、配列番号１０２に示される、アンチセンス鎖と、（ｉｉ）アンチセンス鎖と相補性の領域および３’末端でのステム－ループを含む、１９～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖であって、アンチセンス鎖と相補性の領域が、配列番号７６２に示され、ステム－ループが、Ｓ１－Ｌｐ－Ｓ２として示され、Ｓ１が、Ｓ２と相補的であり、Ｌｐが、Ｓ１とＳ２との間で３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成する、センス鎖と、を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、アンチセンス鎖の３’末端に１～４個のヌクレオチドのオーバーハングを有する非対称二本鎖領域を形成する、別個の鎖である。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を提供し、オリゴヌクレオチドは、以下のようなセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
センス鎖：５’－ｍＸ－Ｓ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－［ａｄｅｍＸ－ＧａｌＮＡｃ］－［ａｄｅｍＸ－ＧａｌＮＡｃ］－［ａｄｅｍＸ－ＧａｌＮＡｃ］－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－３’
これは、以下にハイブリダイズする：
アンチセンス鎖：５’－［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＸ］－Ｓ－ｆＸ－Ｓ－ｆＸ－Ｓ－ｆＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｆＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－ｍＸ－Ｓ－ｍＸ－Ｓ－ｍＸ－３’
（式中、ｍＸ＝２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、
ｆＸ＝２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、
－Ｓ－＝ホスホロチオエート結合、
－＝ホスホジエステル結合、
［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＸ］＝４’－Ｏ－モノメチルホスホネート－２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、
ａｄｅｍＸ－ＧａｌＮＡｃ＝ヌクレオチドに付着しているＧａｌＮＡｃである）。
いくつかの態様では、本開示は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供し、オリゴヌクレオチドは、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、センス鎖は、５’－［ｍＧｓ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｆＣ］［ｆＵ］［ｆＣ］［ｆＵ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＧ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］－３’（配列番号６２１）の配列および修飾の全てを含み、アンチセンス鎖は、５’［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵｓ］［ｆＧｓ］［ｆＡｓ］［ｆＡ］［ｆＡ］［ｍＵ］［ｆＡ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｆＡ］［ｍＧ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｆＵ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＣｓ］［ｍＧｓ］［ｍＧ］－３’（配列番号６４２）の配列および修飾の全てを含み、ｍＣ、ｍＡ、ｍＧ、ｍＵ＝２’－ＯＭｅリボヌクレオシドであり、ｆＡ、ｆＣ、ｆＧ、ｆＵ＝２’－Ｆリボヌクレオシドであり、ｓ＝ホスホロチオエートであり、ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ＝ＧａｌＮＡｃ修飾アデニンヌクレオチドである。
いくつかの態様では、本開示は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供し、オリゴヌクレオチドは、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、センス鎖は、５’［ｍＧｓ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＣ］［ｆＵ］［ｆＧ］［ｆＧ］［ｆＵ］［ｍＡ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＧ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］－３’（配列番号６２２）の配列および修飾の全てを含み、アンチセンス鎖は、５’［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵｓ］［ｆＵｓ］［ｆＡｓ］［ｆＧ］［ｆＧ］［ｍＡ］［ｆＡ］［ｍＡ］［ｍＵ］［ｆＡ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｆＧ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣｓ］［ｍＧｓ］［ｍＧ］－３’（配列番号６４３）の配列および修飾の全てを含み、ｍＣ、ｍＡ、ｍＧ、ｍＵ＝２’－ＯＭｅリボヌクレオシドであり、ｆＡ、ｆＣ、ｆＧ、ｆＵ＝２’－Ｆリボヌクレオシドであり、ｓ＝ホスホロチオエートであり、ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ＝ＧａｌＮＡｃ修飾アデニンヌクレオチドである。
いくつかの態様では、本開示は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供し、オリゴヌクレオチドは、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、センス鎖は、５’－［ｍＣｓ］［ｍＵ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｆＧ］［ｆＣ］［ｆＵ］［ｆＵ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＧ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］－３’（配列番号６３２）の配列および修飾の全てを含み、アンチセンス鎖は、５’［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵｓ］［ｆＡｓ］［ｆＣｓ］［ｆＣ］［ｆＡ］［ｍＧ］［ｆＡ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｆＡ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｆＡ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＡ］［ｍＧｓ］［ｍＧｓ］［ｍＧ］－３’（配列番号６５３）の配列および修飾の全てを含み、ｍＣ、ｍＡ、ｍＧ、ｍＵ＝２’－ＯＭｅリボヌクレオシドであり、ｆＡ、ｆＣ、ｆＧ、ｆＵ＝２’－Ｆリボヌクレオシドであり、ｓ＝ホスホロチオエートであり、ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ＝ＧａｌＮＡｃ修飾アデニンヌクレオチドである。
いくつかの態様では、本開示は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供し、オリゴヌクレオチドは、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、センス鎖は、５’－［ｍＡｓ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＡ］［ｆＡ］［ｆＡ］［ｆＧ］［ｆＡ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＧ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］３’（配列番号６３９）の配列および修飾の全てを含み、アンチセンス鎖は、５’－［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵｓ］［ｆＣｓ］［ｆＡｓ］［ｆＧ］［ｆＣ］［ｍＵ］［ｆＡ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｆＵ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｆＵ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＵｓ］［ｍＧｓ］［ｍＧ］－３’（配列番号６６０）の配列および修飾の全てを含み、ｍＣ、ｍＡ、ｍＧ、ｍＵ＝２’－ＯＭｅリボヌクレオシドであり、ｆＡ、ｆＣ、ｆＧ、ｆＵ＝２’－Ｆリボヌクレオシドであり、ｓ＝ホスホロチオエートであり、ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ＝ＧａｌＮＡｃ修飾アデニンヌクレオチドである。
いくつかの態様では、本開示は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを提供し、オリゴヌクレオチドは、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、センス鎖は、５’－［ｍＧｓ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｆＣ］［ｆＵ］［ｆＡ］［ｆＵ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＧ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］３’（配列番号６２８）の配列および修飾の全てを含み、アンチセンス鎖は、５’［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵｓ］［ｆＵｓ］［ｆＡｓ］［ｆＣ］［ｆＡ］［ｍＡ］［ｆＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｆＡ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｆＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＣｓ］［ｍＧｓ］［ｍＧ］－３’（配列番号６４９）の配列および修飾の全てを含み、ｍＣ、ｍＡ、ｍＧ、ｍＵ＝２’－ＯＭｅリボヌクレオシドであり、ｆＡ、ｆＣ、ｆＧ、ｆＵ＝２’－Ｆリボヌクレオシドであり、ｓ＝ホスホロチオエートであり、ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ＝ＧａｌＮＡｃ修飾アデニンヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を提供し、オリゴヌクレオチドは、
ａ）それぞれ、配列番号６２１および６４２、
ｂ）それぞれ、配列番号６２２および６４３、
ｃ）それぞれ、配列番号６３７および６５８、
ｄ）それぞれ、配列番号６３２および６５３、
ｅ）それぞれ、配列番号６３８および６５９、
ｆ）それぞれ、配列番号６３９および６６０、
ｇ）それぞれ、配列番号６２７および６４８、
ｈ）それぞれ、配列番号６２８および６４９、ならびに
ｉ）それぞれ、配列番号６２９および６５０から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含む、センス鎖およびアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号６２１に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号６４２に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖と、を含む。いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号６２２に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号６４３に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖と、を含む。いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号６３２に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号６５３に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖と、を含む。いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号６３９に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号６６０に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖と、を含む。いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号６２８に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号６４９に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号６２１に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号６４２に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖と、を含み、アンチセンス鎖は、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡ転写物と相補性の領域を含み、当該ＲＮＡｉは、図１４Ａに示される構造を有するコンジュゲートの形態である。
いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号６２１に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号６４２に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖と、を含み、アンチセンス鎖は、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡ転写物と相補性の領域を含み、当該ＲＮＡｉは、図１０Ａ～Ｂに示される構造を有するコンジュゲートの形態である。
いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号６３２に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号６５３に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖と、を含み、アンチセンス鎖は、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡ転写物と相補性の領域を含み、当該ＲＮＡｉは、図１４Ｂに示される構造を有するコンジュゲートの形態である。
いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号６３２に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号６５３に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖と、を含み、アンチセンス鎖は、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡ転写物と相補性の領域を含み、当該ＲＮＡｉは、図１１Ａ～Ｂに示される構造を有するコンジュゲートの形態である。
いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号６３９に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号６６０に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖と、を含み、アンチセンス鎖は、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡ転写物と相補性の領域を含み、当該ＲＮＡｉは、図１４Ｃに示される構造を有するコンジュゲートの形態である。
いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号６３９に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号６６０に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖と、を含み、アンチセンス鎖は、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡ転写物と相補性の領域を含み、当該ＲＮＡｉは、図１２Ａ～Ｂに示される構造を有するコンジュゲートの形態である。
いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号６２８に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号６４９に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖と、を含み、アンチセンス鎖は、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡ転写物と相補性の領域を含み、当該ＲＮＡｉは、図１４Ｄに示される構造を有するコンジュゲートの形態である。
いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＴＭＰＲＳＳ６標的化オリゴヌクレオチドは、配列番号６２８に示されるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号６４９に示されるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖と、を含み、アンチセンス鎖は、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡ転写物と相補性の領域を含み、当該ＲＮＡｉは、図１３Ａ～Ｂに示される構造を有するコンジュゲートの形態である。
製剤
様々な製剤（例えば、薬学的製剤）がオリゴヌクレオチドの使用のために開発されてきた。例えば、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、分解を最小限にするか、送達および／もしくは取り込みを促進するか、または製剤中のオリゴヌクレオチドに別の有益な特性を提供する製剤を使用して、対象または細胞環境に送達することができる。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６の発現を低減するオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を含む組成物が本明細書で提供される。そのような組成物は、標的細胞の直近の環境内または全身的のいずれかで対象に投与されると、オリゴヌクレオチドの十分な部分が細胞に入り、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するように、好適に製剤化され得る。任意の様々な適切なオリゴヌクレオチド製剤が、本明細書に開示されるＴＭＰＲＳＳ６の低減のためのオリゴヌクレオチドを送達するために使用され得る。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝液、リポソーム、ミセル構造、およびカプシド中に製剤化される。本明細書に記載のオリゴヌクレオチドはいずれも、核酸としてだけでなく、薬学的に許容可能な塩の形態で提供されてもよい。
カチオン性脂質を含むオリゴヌクレオチドの製剤を使用して、オリゴヌクレオチドの細胞へのトランスフェクションを容易にすることができる。例えば、リポフェクチン、カチオン性グリセロール誘導体、およびポリカチオン性分子（例えば、ポリリジン）などのカチオン性脂質を使用することができる。好適な脂質には、オリゴフェクタミン、リポフェクタミン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＮＣ３８８（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、Ｂｏｕｌｄｅｒ，Ｃｏｌｏ．）、またはＦｕＧｅｎｅ ６（Ｒｏｃｈｅ）が含まれ、これらは全て、製造業者の指示に従って使用することができる。
したがって、いくつかの実施形態では、製剤は、脂質ナノ粒子を含む。いくつかの実施形態では、賦形剤は、リポソーム、脂質、脂質複合体、マイクロスフェア、マイクロ粒子、ナノスフェア、もしくはナノ粒子を含むか、またはそれを必要とする対象の細胞、組織、器官、もしくは身体への投与のために別様に製剤化されてもよい（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴＨＥ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＰＲＡＣＴＩＣＥ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＹ，２２版，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，２０１３を参照されたい）。
いくつかの実施形態では、本明細書の製剤は、賦形剤を含む。いくつかの実施形態では、賦形剤は、活性成分の改善された安定性、改善された吸収、改善された溶解度、および／または治療的増強を組成物に付与する。いくつかの実施形態では、賦形剤は、緩衝剤（例えば、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、トリス塩基、もしくは水酸化ナトリウム）またはビヒクル（例えば、緩衝溶液、ワセリン、ジメチルスルホキシド、もしくは鉱油）である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、その保存寿命を延長するために凍結乾燥され、その後、使用（例えば、対象への投与）前に溶液にされる。したがって、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドのうちのいずれか１つを含む組成物中の賦形剤は、凍結保護剤（例えば、マンニトール、ラクトース、ポリエチレングリコール、もしくは節剤（例えば、デキストラン、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）、もしくはゼラチン）であり得る。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、その意図された投与経路に適合するように製剤化される。投与経路の例には、非経口（例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮内、皮下）、経口（例えば、吸入）、経皮（例えば、局所）、経粘膜、および直腸投与が含まれる。
注射用の使用に好適な医薬組成物には、滅菌水溶液（水溶性である場合）または分散体、および滅菌注射用溶液または分散体の即時調製のための滅菌粉末が含まれる。静脈内投与の場合、好適な担体には、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）、またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が含まれる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの好適な混合物を含む、溶媒または分散媒であり得る。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖類、ポリアルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウムを含むことが好ましいであろう。滅菌注射用溶液は、必要に応じて、上に列挙した成分の１個または組み合わせを含む選択された溶媒に必要な量のオリゴヌクレオチドを組み込み、続いて、濾過滅菌することによって調製することができる。
いくつかの実施形態では、組成物は、少なくとも約０．１％の治療剤（例えば、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）またはそれ以上を含み得るが、活性成分の割合は、全組成物の重量または体積の約１％～約８０％以上であり得る。溶解度、バイオアベイラビリティ、生物学的半減期、投与経路、製品保存寿命などの要因、および他の薬理学的考慮事項は、かかる薬学的製剤を調製する当業者によって企図され、したがって、様々な投与量および治療レジメンが望ましい場合がある。
使用方法
ＴＭＰＲＳＳ６発現の低減
いくつかの実施形態では、本開示は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するために、有効量の本明細書で提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を細胞もしくは細胞集団に接触させるか、または送達する方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現の低減は、細胞内のＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ、マトリプターゼ－２タンパク質、またはマトリプターゼ－２活性の量もしくはレベルの低減を測定することによって決定される。これらの方法は、本明細書に記載され、当業者に公知であるものを含む。
本明細書で提供される方法は、任意の適切な細胞型に有用である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡを発現する任意の細胞（例えば、肝細胞）である。いくつかの実施形態では、細胞は、対象から取得された初代細胞である。いくつかの実施形態では、初代細胞は、細胞がその天然の表現型特性を実質的に維持するように限られた数の継代を受けている。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドが送達される細胞は、エクスビボまたはインビトロである（すなわち、培養中の細胞または細胞が常在する生物に送達することができる）。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、オリゴヌクレオチドを含む溶液の注射、オリゴヌクレオチドによって覆われた粒子による衝撃、オリゴヌクレオチドを含む溶液への細胞もしくは細胞集団の曝露、またはオリゴヌクレオチドの存在下での細胞膜のエレクトロポレーションを含むがこれらに限定されない、当技術分野で公知の核酸送達方法を使用して、細胞または細胞集団に送達される。脂質媒介担体輸送、化学媒介輸送、およびリン酸カルシウムなどのカチオン性リポソームトランスフェクション、ならびにその他などのオリゴヌクレオチドを細胞に送達するための当技術分野で公知の他の方法が使用され得る。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現の低減は、ＴＭＰＲＳＳ６発現と関連する細胞もしくは細胞集団の１個以上の分子、特性、または特性を評価するアッセイもしくは技術によって、または細胞もしくは細胞集団におけるＴＭＰＲＳＳ６発現を直接的に示す分子（例えば、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡもしくはマトリプターゼ－２タンパク質）を評価するアッセイもしくは技術によって決定される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドがＴＭＰＲＳＳ６発現を低減する程度は、オリゴヌクレオチドと接触させた細胞または細胞集団におけるＴＭＰＲＳＳ６発現を適切な対照（例えば、オリゴヌクレオチドと接触させていない、もしくは対照オリゴヌクレオチドと接触させた適切な細胞または細胞集団）と比較することによって評価される。いくつかの実施形態では、対照細胞または細胞集団におけるＴＭＰＲＳＳ６発現の対照量またはレベルは、アッセイまたは技術が実施される全ての事例において対照量またはレベルを測定する必要がないように、予め決定される。予め決定されるレベルまたは値は、様々な形態を取ることができる。いくつかの実施形態では、予め決定されるレベルまたは値は、中央値または平均値などの単一のカットオフ値であり得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を細胞もしくは細胞集団に接触させるか、または送達することは、オリゴヌクレオチドと接触させていない、もしくは対照オリゴヌクレオチドと接触させた細胞または細胞集団におけるＴＭＰＲＳＳ６発現の低減をもたらす。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現の低減は、ＴＭＰＲＳＳ６発現の対照量またはレベルと比較して、約１％以下、約５％以下、約１０％以下、約１５％以下、約２０％以下、約２５％以下、約３０％以下、約３５％以下、約４０％以下、約４５％以下、約５０％以下、約５５％以下、約６０％以下、約７０％以下、約８０％以下、または約９０％以下である。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現の対照量またはレベルは、本明細書のオリゴヌクレオチドと接触させていない細胞または細胞集団におけるＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡおよび／またはマトリプターゼ－２タンパク質の量またはレベルである。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ発現は、当該技術分野で公知の方法を使用して測定される。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ発現は、ｑＰＣＲによって測定される。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６タンパク質発現は、当該技術分野で公知の方法を使用して測定される。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６タンパク質発現は、ＥＬＩＳＡによって測定される。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６タンパク質発現は、ウェスタンブロットによって測定される。いくつかの実施形態では、本明細書の方法による細胞または細胞集団への本明細書のオリゴヌクレオチドの送達の効果は、任意の有限期間または時間量（例えば、分、時間、日、週、月）の後に評価される。例えば、いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現は、オリゴヌクレオチドを細胞もしくは細胞集団に接触させるか、または送達してから、少なくとも約４時間、約８時間、約１２時間、約１８時間、約２４時間、または少なくとも約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１１日、約１２日、約１３日、約１４日、約２１日、約２８日、約３５日、約４２日、約４９日、約５６日、約６３日、約７０日、約７７日、もしくは約８４日以上後に、細胞または細胞集団において決定される。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現は、オリゴヌクレオチドを細胞もしくは細胞集団と接触させるか、または送達してから、少なくとも約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、もしくは約６ヶ月以上後に、細胞または細胞集団において決定される。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドを含む鎖（例えば、そのセンス鎖およびアンチセンス鎖）を細胞内で発現するように操作された導入遺伝子の形態で送達される。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、本明細書に開示される任意のオリゴヌクレオチドを発現するように操作された導入遺伝子を使用して送達される。導入遺伝子は、ウイルスベクター（例えば、アデノウイルス、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、アデノ随伴ウイルス、もしくは単純ヘルペスウイルス）、または非ウイルスベクター（例えば、プラスミドもしくは合成ｍＲＮＡ）を使用して送達され得る。いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、対象に直接的に注射され得る。
治療方法
本開示は、医薬として使用するための、特に、ヘプシジン欠乏または抑制と関連する疾患、障害、および状態の治療のための方法で使用するための、オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を提供する。本開示はまた、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減することから利益を受け得る対象（例えば、ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態を有するヒト）を治療するために使用するための、または使用するために適合可能なオリゴヌクレオチドも提供する。いくつかの点で、本開示は、ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態を有する対象を治療するために使用するための、または使用するために適合された、オリゴヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６低減を必要とする対象は、鉄蓄積疾患、障害、もしくは状態を有するか、またはそのリスクがある。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物、化合物、および方法が、個体における鉄レベルを低減する際に使用するために提供される。いくつかの実施形態では、鉄蓄積は、対象における疾患、障害、または状態に起因する。いくつかの実施形態では、疾患、障害、および／または状態は、遺伝性ヘモクロマトーシスなどのヘモクロマトーシスである。いくつかの実施形態では、疾患、障害、および／または状態は、β－サラセミアである。いくつかの実施形態では、疾患、障害、および／または状態は、真性赤血球増加症である。本開示はまた、ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態を治療するための医薬もしくは医薬組成物の製造に使用するための、または使用するために適合可能なオリゴヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、使用するための、または使用するために適合可能なオリゴヌクレオチドは、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡを標的化し、（例えば、ＲＮＡｉ経路を介して）ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減させる。いくつかの実施形態では、使用するための、または使用するために適合可能なオリゴヌクレオチドは、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡを標的化し、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ、マトリプターゼ－２タンパク質、および／またはＴＭＰＲＳＳ６活性の量またはレベルを低減する。
本開示はまた、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドを用いて、ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態を有するか、有する疑いがあるか、あるいは発症するリスクがある対象を治療する方法も提供する。いくつかの点で、本開示は、本明細書のオリゴヌクレオチドを使用して、ヘプシジン欠乏もまたは抑制と関連する疾患、障害、もしくは状態の発症もしくは進行を治療または軽減する方法を提供する。他の態様では、本開示は、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドを使用して、ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態を有する対象において１つ以上の治療効果を達成する方法を提供する。本明細書の方法のいくつかの実施形態では、対象は、治療有効量の本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドのうちのいずれか１つ以上を投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、治療は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減することを含む。いくつかの実施形態では、対象は、治療的に処置される。いくつかの実施形態では、対象は、予防的に処置される。
本明細書の方法のいくつかの実施形態では、本明細書の１個以上のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）、または１個以上のオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、ＴＭＰＲＳＳ６発現が対象において低減され、それによって、対象を治療するように、ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡの量またはレベルが、対象において低減される。いくつかの実施形態では、マトリプターゼ－２タンパク質の量またはレベルが、対象において低減される。いくつかの実施形態では、マトリプターゼ－２活性の量またはレベルが、対象において低減される。
本明細書の方法のいくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）、またはオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、１個以上のオリゴヌクレオチド、または医薬組成物の投与前のＴＭＰＲＳＳ６発現と比較すると、ＴＭＰＲＳＳ６発現が、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％超低減されるように、ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現は、オリゴヌクレオチドもしくは複数のオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物を受けていないか、または対照のオリゴヌクレオチドもしくは複数のオリゴヌクレオチド、医薬組成物もしくは治療を受けている対象（例えば、参照または対照対象）におけるＴＭＰＲＳＳ６発現と比較すると、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％超低減される。
本明細書の方法のいくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドもしくは複数のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）、またはオリゴヌクレオチドもしくは複数のオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、オリゴヌクレオチドまたは医薬組成物の投与前のＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡの量またはレベルと比較すると、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡの量またはレベルが、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％超低減されるように、ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡの量またはレベルは、オリゴヌクレオチドもしくは複数のオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物を受けていないか、または対照のオリゴヌクレオチドもしくは複数のオリゴヌクレオチド、医薬組成物もしくは治療を受けている対象（例えば、参照または対照対象）におけるＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡの量またはレベルと比較すると、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％超低減される。
本明細書の方法のいくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドもしくは複数のオリゴヌクレオチド、またはオリゴヌクレオチドもしくは複数のオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、オリゴヌクレオチドまたは医薬組成物の投与前のマトリプターゼ－２の量またはレベルと比較すると、マトリプターゼ－２の量またはレベルが、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％超低減されるように、ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、マトリプターゼ－２タンパク質の量またはレベルは、オリゴヌクレオチドもしくは複数のオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物を受けていないか、または対照オリゴヌクレオチド、複数の対照オリゴヌクレオチド、対照医薬組成物もしくは治療を受けている対象（例えば、参照または対照対象）におけるマトリプターゼ－２タンパク質の量またはレベルと比較すると、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％超低減される。
本明細書の方法のいくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドもしくは複数のオリゴヌクレオチド、またはオリゴヌクレオチドもしくは複数のオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、オリゴヌクレオチドまたは医薬組成物の投与前のＴＭＰＲＳＳ６活性の量またはレベルと比較すると、ＴＭＰＲＳＳ６遺伝子活性／発現の量またはレベルが、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％超低減されるように、ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６活性の量またはレベルは、オリゴヌクレオチドもしくは医薬組成物を受けていないか、または対照オリゴヌクレオチド、医薬組成物または治療を受けている対象（例えば、参照または対照対象）におけるＴＭＰＲＳＳ６活性の量またはレベルと比較すると、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％超低減される。
本明細書の方法のいくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）、またはオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、１個以上のオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物の投与前のヘプシジン産生と比較すると、ヘプシジン産生が、対照において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％超増加するように、ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、ヘプシジン産生は、オリゴヌクレオチドもしくは複数のオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物を受けていないか、または対照オリゴヌクレオチドもしくは複数のオリゴヌクレオチド、医薬組成物もしくは治療を受けている対象（例えば、参照または対照対象）におけるヘプシジン産生と比較すると、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％超増加する。
本明細書の方法のいくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）、またはオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、１個以上のオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物の投与前の血清鉄と比較すると、血清鉄が、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％超低減されるように、ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、血清鉄は、オリゴヌクレオチドもしくは複数のオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物を受けていないか、または対照オリゴヌクレオチドもしくは複数のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または治療を受けている対象（例えば、参照または対照対照）における血清鉄と比較すると、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％超低減される。
本明細書の方法のいくつかの実施形態では、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）、またはオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、１個以上のオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物の投与前の血清鉄飽和度と比較すると、血清鉄飽和度が、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％超低減されるように、ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、血清鉄飽和度は、オリゴヌクレオチドもしくは複数のオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物を受けていないか、または対照オリゴヌクレオチドもしくは複数のオリゴヌクレオチド、医薬組成物または治療を受けている対象（例えば、参照または対照対照）における血清鉄飽和度と比較すると、対象において少なくとも約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または９９％超低減される。
対象または対象からの試料において、ＴＭＰＲＳＳ６発現、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ、マトリプターゼ－２タンパク質、マトリプターゼ－２活性、またはＴＭＰＲＳＳ６発現の調節に関連するか、もしくは調節によって影響を受けるバイオマーカー（例えば、血漿バイオマーカー）の量またはレベルを決定するための好適な方法が、当技術分野で公知である。さらに、本明細書に記載の実施例は、ＴＭＰＲＳＳ６発現を決定するための方法を例示する。
いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ、マトリプターゼ－２タンパク質、マトリプターゼ－２活性、またはＴＭＰＲＳＳ６発現の調節に関連するか、もしくは調節によって影響を受けるバイオマーカーの量もしくはレベル、またはそれらの任意の組み合わせは、対象から取得もしくは単離された細胞（例えば、肝細胞）、細胞集団もしくは細胞群（例えば、オルガノイド）、器官（例えば、肝臓）、血液もしくはその分画（例えば、血漿）、組織（例えば、肝臓組織）、試料（例えば、肝臓生検試料）、または任意の他の適切な生物学的材料において低減される。いくつかの実施形態では、ＴＭＰＲＳＳ６発現、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ、マトリプターゼ－２タンパク質、マトリプターゼ－２活性、またはＴＭＰＲＳＳ６発現の調節に関連するか、もしくは調節によって影響を受けるバイオマーカーの量もしくはレベル、またはそれらの任意の組み合わせは、１つを超える種類の細胞（例えば、肝細胞および１つ以上の他の種類の細胞）、１つを超える細胞群、１つを超える器官（例えば、肝臓および１つ以上の他の器官）、１つを超える血液の分画（例えば、血漿および１つ以上の他の血液分画）、１つを超える種類の組織（例えば、肝臓組織および１つ以上の他の種類の組織）、または１つを超える種類の試料（例えば、肝臓生検試料および１つ以上の他の種類の生検試料）において低減される。
それらの高い特異性のため、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、細胞および組織、または器官の（例えば、肝臓内の）標的遺伝子のｍＲＮＡ（例えば、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ）を特異的に標的化する。疾患の予防において、標的遺伝子は、疾患の開始もしくは維持に必要とされるもの、または疾患に罹患するリスクが高いことに関連するとして特定されたものであり得る。疾患の治療において、オリゴヌクレオチドは、疾患を示すか、もしくは媒介することに関与する細胞、組織、または器官（例えば、肝臓）と接触させることができる。例えば、ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する障害または状態と関連する野生型（すなわち、天然）または変異遺伝子の全てまたは一部と実質的に同一のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）は、肝細胞もしくは他の肝臓細胞などの目的の細胞もしくは組織型と接触させられるか、またはそれらに導入され得る。
ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害または状態の例としては、ヘモクロマトーシス（例えば、遺伝性ヘモクロマトーシス）、ベータサラセミア、真性赤血球増加症、鉄剤不応性鉄欠乏性貧血が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、標的遺伝子は、ヒト標的などの任意の哺乳動物由来の標的遺伝子であり得る。任意の標的遺伝子は、本明細書に記載される方法に従ってサイレンシングされてもよい。
本明細書に記載の方法は、典型的には、有効量の本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）、すなわち、望ましい治療結果を生じるか、または生成する量を対象に投与することを伴う。治療的に許容可能な量は、疾患または障害を治療的に処置する量であり得る。いずれか１つの対象に対する適切な用量は、対象のサイズ、体表面積、年齢、投与される組成物、組成物中の活性成分、投与の時間および経路、一般的な健康状態、ならびに同時投与される他の薬剤を含む、特定の因子に依存するであろう。
いくつかの実施形態では、対象は、本明細書の組成物のうちのいずれか１つ（例えば、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを含む組成物）を、経腸的に（例えば、経口的に、胃栄養管によって、十二指腸栄養管によって、胃瘻造設を介して、または直腸に）、非経口的に（例えば、皮下注射、静脈内注射または注入、動脈内注射または注入、骨内注入、筋肉内注射、脳内注射、脳室内注射、髄腔内）、局所的に（例えば、経皮、吸入、点眼薬を介して、または粘膜を介して）、または標的器官（例えば、対象の肝臓）への直接注射によってのいずれかで投与される。典型的には、本明細書のオリゴヌクレオチドは、静脈内または皮下に投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）、またはオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、単独で、または組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、同時に、連続して（任意の順序で）、または断続的に組み合わせて投与される。例えば、２つのオリゴヌクレオチドは、同時に共投与され得る。代替的に、１つのオリゴヌクレオチドが投与され、続いて任意の期間（例えば、１時間、１日、１週、または１ヶ月）後に、第２のオリゴヌクレオチドが投与され得る。
いくつかの実施形態では、治療される対象は、ヒトもしくは非ヒト霊長類または他の哺乳動物対象である。他の例示的な対象には、イヌおよびネコなどの家畜化動物、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、およびニワトリなどの家畜、ならびにマウス、ラット、モルモット、およびハムスターなどの動物が含まれる。
キット
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）と、使用のための指示と、を含む、キットを提供する。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書のオリゴヌクレオチドと、キットおよび／またはその任意の構成要素の使用のための指示を含む添付文書と、を含む。いくつかの実施形態では、キットは、好適な容器内に、本明細書のオリゴヌクレオチド、１つ以上の対照、ならびに当技術分野で周知の様々な緩衝液、試薬、酵素、および他の標準成分を含む。いくつかの実施形態では、容器は、少なくとも１つのバイアル、ウェル、試験管、フラスコ、ボトル、シリンジ、またはオリゴヌクレオチドが配置される他の容器手段を含み、一部の事例では、適切にアリコートされる。追加の構成要素が提供されるいくつかの実施形態では、キットは、この構成要素が配置される追加の容器を含む。キットはまた、オリゴヌクレオチドおよび任意の他の試薬を商業販売のために厳重に閉じるための手段を含むことができる。そのような容器には、所望のバイアルが保持される射出成形またはブロー成形されたプラスチック容器が含まれ得る。容器および／またはキットは、使用のための指示および／または警告を記載したラベルを含むことができる。
いくつかの実施形態では、キットは、治療を必要とする対象におけるヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、もしくは状態を治療するか、またはその進行を遅延させるためのオリゴヌクレオチドおよび指示を含む、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）および薬学的に許容可能な担体、または医薬組成物を含む。
定義
本明細書で使用される「アンチセンスオリゴヌクレオチド」という用語は、標的ｍＲＮＡの全てまたは一部と相補的な配列、特に、シード配列を有し、それによって、ｍＲＮＡと二本鎖を形成することができる、核酸系分子を包含する。したがって、本明細書で使用される「アンチセンスオリゴヌクレオチド」という用語は、「相補的核酸系阻害剤」または「ガイド鎖」と呼ばれ得る。
本明細書で使用される場合、１つ以上の目的の値に適用される場合の「およそ」または「約」は、記載された参照値に類似する値を指す。特定の実施形態では、「約」は、別段の記載がない限り、または文脈から明らかでない限り、記載された参照値のいずれかの方向（より大きいまたは小さい）で２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれより小さい範囲内にある値の範囲を指す（そのような数が可能な値の１００％を超える場合を除く）。
本明細書で使用される場合、「投与する」、「投与すること」、「投与」などは、薬理学的に有用な方法で（例えば、対象において疾患、障害、または状態を治療するために）対象に物質（例えば、オリゴヌクレオチド）を提供することを指す。
本明細書で使用される場合、「軽減する」、「軽減すること」、「軽減」などは、低減すること、または効果的に停止させることを指す。非限定的な例として、本明細書の治療のうちの１つ以上は、対象における鉄剤不応性鉄欠乏性貧血、ヘモクロマトーシス、もしくはベータサラセミアの発症もしくは進行を低減させるか、または効果的に停止させ得る。この軽減は、例えば、鉄剤不応性鉄欠乏性貧血、ヘモクロマトーシス、もしくはベータサラセミアの１つ以上の態様（例えば、症状、組織特性、および細胞、炎症、免疫学的活性など）における減少、鉄剤不応性鉄欠乏性貧血、ヘモクロマトーシス、もしくはベータサラセミアの１つ以上の態様の検出可能な進行（悪化）が存在しないこと、または対象において鉄剤不応性鉄欠乏性貧血、ヘモクロマトーシス、もしくはベータサラセミアの検出可能な態様が別様に予想され得る場合に存在しないことによって例示され得る。
本明細書で使用される場合、「相補的」は、２つのヌクレオチドが互いに塩基対を形成することを可能にする２つのヌクレオチド間の構造的関係（例えば、２つの対向する核酸上または単一の核酸鎖の対向する領域上）を指す。例えば、対向する核酸のピリミジンヌクレオチドと相補的である１つの核酸のプリンヌクレオチドは、互いに水素結合を形成することによって一緒に塩基対を形成し得る。いくつかの実施形態では、相補的なヌクレオチドは、ワトソン・クリック法または安定な二本鎖の形成を可能にする任意の他の方法で塩基対を形成することができる。いくつかの実施形態では、２つの核酸は、本明細書に記載されるように、互いに相補的であり、相補性の領域を形成する複数のヌクレオチドの領域を有し得る。
本明細書で使用される場合、「デオキシリボヌクレオチド」は、リボヌクレオチドと比較すると、そのペントース糖の２’位でヒドロキシルの代わりに水素を有するヌクレオチドを指す。修飾デオキシリボヌクレオチドは、糖、リン酸基、もしくは塩基中またはそれらの修飾あるいは置換を含む、２’位以外の原子の１つ以上の修飾または置換を有するデオキシリボヌクレオチドである。
本明細書で使用される場合、「二本鎖オリゴヌクレオチド」または「ｄｓオリゴヌクレオチド」は、実質的に二本鎖形態であるオリゴヌクレオチドを指す。いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドの二本鎖領域の相補的な塩基対合は、共有結合的に分離された核酸鎖のヌクレオチドの逆平行配列間で形成される。いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドの二本鎖領域の相補的な塩基対合は、共有結合された核酸鎖のヌクレオチドの逆平行配列間で形成される。いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドの二本鎖領域の相補的な塩基対合は、折り畳まれて（例えば、ヘアピンを介して）、一緒に塩基対合するヌクレオチドの相補的な逆平行配列を提供する単一の核酸鎖から形成される。いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、互いに完全に二本鎖化された２つの共有結合的に分離された核酸鎖を含む。しかしながら、いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、部分的に二本鎖である（例えば、一方または両方の末端にオーバーハングを有する）２つの共有結合的に分離された核酸鎖を含む。いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、部分的に相補的であるヌクレオチドの逆平行配列を含み、したがって、内部ミスマッチまたは末端ミスマッチを含み得る１つ以上のミスマッチを有し得る。
本明細書で使用される場合、核酸（例えば、オリゴヌクレオチド）に関する「二本鎖」は、ヌクレオチドの２つの逆平行配列の相補的塩基対合を通じて形成される構造を指す。
本明細書で使用される場合、「賦形剤」は、例えば、所望の稠度もしくは安定化効果を提供または寄与するために、組成物に含まれ得る治療剤ではないものを指す。
本明細書で使用される場合、「肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ）」または「複数の肝細胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ）」は、肝臓の実質組織の細胞を指す。これらの細胞は、肝臓の質量の約７０％～８５％を構成し、血清アルブミン、ＦＢＮ、および凝固因子のプロトロンビン群（因子３および４を除く）を生産する。肝細胞系統細胞のマーカーには、トランスサイレチン（Ｔｔｒ）、グルタミン合成酵素（Ｇｌｕｌ）、肝細胞核因子１ａ（Ｈｎｆ１ａ）、および肝細胞核因子４ａ（Ｈｎｆ４ａ）が含まれるが、これらに限定されない。成熟肝細胞のマーカーには、シトクロムＰ４５０（Ｃｙｐ３ａ１１）、シトクロムＰ４５０ ３Ａ４（ＣＹＰ３Ａ４）、フマリルアセト酢酸ヒドロラーゼ（Ｆａｈ）、グルコース６－リン酸（Ｇ６ｐ）、アルブミン（Ａｌｂ）、およびＯＣ２－２Ｆ８が含まれるが、これらに限定されない。例えば、Ｈｕｃｈ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｎａｔｕｒｅ ４９４：２４７－５０を参照されたい。
本明細書で使用される「肝毒性物質」は、それ自体が肝臓に対して毒性であるか、または処理されて肝臓に対して毒性である代謝産物を形成することができる化学的化合物、ウイルス、または他の物質を指す。肝毒性物質には、四塩化炭素（ＣＣｌ４）、アセトアミノフェン（パラセタモール）、塩化ビニル、ヒ素、クロロホルム、非ステロイド性抗炎症薬（アスピリンおよびフェニルブタゾンなど）が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「ＴＭＰＲＳＳ６」という用語は、膜貫通型プロテアーゼセリン６を指す。ＴＭＰＲＳＳ６遺伝子は、ヘプシジンとのシグナル伝達経路で機能し、体内の鉄バランスを調節するマトリプターゼ－２タンパク質をコードする。マトリプターゼ－２
本明細書で使用される「不安定なリンカー」は、切断され得る（例えば、酸性ｐＨによって）リンカーを指す。「かなり安定なリンカー」は、容易に切断することができないリンカーを指す。
本明細書で使用される「修飾ヌクレオチド間結合」は、ホスホジエステル結合を含む参照ヌクレオチド間結合と比較すると、１つ以上の化学修飾を有するヌクレオチド間結合を指す。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、天然に存在しない結合である。典型的には、修飾ヌクレオチド間結合は、修飾ヌクレオチド間結合が存在する核酸に１つ以上の望ましい特性を付与する。例えば、修飾ヌクレオチド間結合は、熱安定性、分解に対する耐性、ヌクレアーゼ耐性、溶解度、バイオアベイラビリティ、生物活性、免疫原性の低減などを改善し得る。
本明細書で使用される場合、「修飾ヌクレオチド」は、アデニンリボヌクレオチド、グアニンリボヌクレオチド、シトシンリボヌクレオチド、ウラシルリボヌクレオチド、アデニンデオキシリボヌクレオチド、グアニンデオキシリボヌクレオチド、シトシンデオキシリボヌクレオチド、およびチミジンデオキシリボヌクレオチドから選択される対応する参照ヌクレオチドと比較すると、１つ以上の化学修飾を有するヌクレオチドを指す。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、天然に存在しないヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、その糖、核酸塩基、および／またはリン酸基に１つ以上の化学修飾を有する。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、対応する参照ヌクレオチドとコンジュゲートされた１つ以上の化学部分を有する。典型的には、修飾ヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドが存在する核酸に１つ以上の望ましい特性を付与する。例えば、修飾ヌクレオチドは、熱安定性、分解に対する耐性、ヌクレアーゼ耐性、溶解度、バイオアベイラビリティ、生物活性、免疫原性の低減などを改善し得る。修飾されているオリゴヌクレオチドを指す場合、その中に少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドを指すと理解され得る。完全に修飾されているオリゴヌクレオチドを指す場合、その中の全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであるオリゴヌクレオチドを指すと理解され得る。当該修飾ヌクレオチドは、同じ修飾を含む必要はない。
本明細書で使用される「ニックの入ったテトラループ構造」は、センス鎖がアンチセンス鎖と相補性の領域を有し、鎖のうちの少なくとも１つ、一般にはセンス鎖が、少なくとも１つの鎖内に形成された隣接するステム領域を安定化するように構成されたテトラループを有する、別個のセンス（パッセンジャー）およびアンチセンス（ガイド）鎖によって特徴付けられるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの構造を指す。構造は、センス鎖およびアンチセンス鎖の骨格間の不連続性によって、典型的には、センス鎖およびアンチセンス鎖の隣接するヌクレオチドのペントース糖の不連続性によって、ニックを入れられると言われる。「ニックの入った構造」は、一般に、ループがテトラループであってもそうでななくてもよいときに、この同じ定義で呼ばれ得る（例えば、センス鎖が本明細書に開示されるトリループ、テトラループ、または他のタイプのループを形成するときに、ニックの入った構造を指し得る）。
本明細書で使用される場合、「オリゴヌクレオチド」は、短い核酸（例えば、約１００個未満のヌクレオチドの長さ）を指す。オリゴヌクレオチドは、一本鎖（ｓｓ）または二本鎖（ｄｓ）であり得る。オリゴヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオシド、リボヌクレオシド、またはその両方の組み合わせを含み得る。いくつかの実施形態では、リボヌクレオシドを含む二本鎖オリゴヌクレオチドは、「ｄｓＲＮＡ」と呼ばれる。オリゴヌクレオチドは、二本鎖領域を有していても有していなくてもよい。一連の非限定的な例として、オリゴヌクレオチドは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ダイサー基質干渉ＲＮＡ（ＤｓｉＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド、短鎖ｓｉＲＮＡ、またはｓｓ ｓｉＲＮＡであり得るが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「オーバーハング」は、一方の鎖または領域が二本鎖を形成する相補鎖の末端を越えて延びる一方の鎖または領域から生じる末端非塩基対合ヌクレオチドを指す。いくつかの実施形態では、オーバーハングは、オリゴヌクレオチドの５’末端または３’末端で（もしくはその近位に）二本鎖領域から延びる１つ以上の不対ヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、オーバーハングは、オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖またはセンス鎖上の３’または５’オーバーハングである。
本明細書で使用される場合、特徴は、鎖の３’末端または５’末端「内に」、「上に」、または「において」提供されていると記載され得る。例えば、糖修飾、ヌクレオチド間修飾、ヌクレオチドミスマッチ、およびオーバーハングなどの所与の鎖末端で記載されるヌクレオチド特徴は、定義された鎖末端の近位の（例えば、センス鎖の３’末端における）その鎖のヌクレオチドを指すと理解される。
本明細書で使用される場合、「リン酸類似体」は、リン酸基の静電特性および／または立体特性を模倣する化学部分を指す。いくつかの実施形態では、リン酸類似体は、生物系におけるリン酸基の静電特性および／または立体特性を模倣する。いくつかの実施形態では、リン酸類似体は、５’－リン酸の代わりにオリゴヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドに位置付けられ、これはしばしば酵素除去の影響を受けやすい。いくつかの実施形態では、５’リン酸類似体は、ホスファターゼ耐性結合を含む。リン酸類似体の例には、５’メチレンホスホネート（５’－ＭＰ）および５’－（Ｅ）－ビニルホスホネート（５’－ＶＰ）などの５’ホスホネートが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、糖の４’炭素位置におけるリン酸類似体（「４’リン酸類似体」と呼ばれる）を５’末端ヌクレオチドに有する。４’－リン酸類似体の例は、オキシメチル基の酸素原子が糖部分（例えば、その４’炭素における）またはその類似体と結合している、オキシメチルホスホネートである。例えば、米国特許公開２０１９－０１７７７２９を参照されたい。オリゴヌクレオチドの５’末端に対して他の修飾が開発されている（例えば、国際特許出願第２０１１／１３３８７１号、米国特許第８，９２７，５１３号、およびＰｒａｋａｓｈ ｅｔ ａｌ．（２０１５）ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤＳ ＲＥＳ．４３：２９９３－３０１１を参照されたい）。
本明細書で使用される場合、遺伝子（例えば、ＴＭＰＲＳＳ６）の「低減した発現」は、適切な参照（例えば、参照細胞、細胞集団、試料、または対象）と比較した、細胞、細胞集団、試料、または対象におけるＲＮＡ転写物（例えば、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ）もしくは遺伝子によってコードされるタンパク質の量もしくはレベルの減少、および／または遺伝子の活性の量もしくはレベルの減少を指す。例えば、本明細書のオリゴヌクレオチド（例えば、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡを含むヌクレオチド配列と相補的であるヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖を含むオリゴヌクレオチド）と細胞を接触させる行為は、オリゴヌクレオチドで治療されていない細胞と比較すると、（例えば、ＲＮＡｉ経路によるＴＭＰＲＳＳ６ｍＲＮＡの分解を介した）ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ、マトリプターゼ－２タンパク質、および／または活性の量もしくはレベルの減少をもたらし得る。同様に、本明細書で使用される場合、「発現を低減すること」は、遺伝子（例えば、ＴＭＰＲＳＳ６）の発現の低減をもたらす行為を指す。
本明細書で使用される場合、「ＴＭＰＲＳＳ６発現の低減」は、適切な参照（例えば、参照細胞、細胞集団、試料、または対象）と比較した、細胞、細胞集団、試料、または対象におけるＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ、マトリプターゼ－２タンパク質、および／またはマトリプターゼ－２活性の量もしくはレベルの減少を指す。
本明細書で使用される「相補性の領域」は、ヌクレオチドの逆平行配列と十分に相補的であり、適切なハイブリダイゼーション条件下で（例えば、リン酸緩衝液中、細胞中などで）ヌクレオチドの２つの配列間のハイブリダイゼーションを可能にする核酸（例えば、オリゴヌクレオチド）のヌクレオチド配列を指す。いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、ｍＲＮＡ標的配列と相補性の領域を有する標的化配列を含む。相補性の領域は、所与の長さであり、ヌクレオチド間結合を通して一緒に連続的に結合されたヌクレオチドの数を指す、連続するヌクレオチドの数（例えば、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さ）によって特定され得る。
本明細書で使用される場合、「リボヌクレオチド」は、その２’位にヒドロキシル基を含む、そのペントース糖としてリボースを有するヌクレオチドを指す。修飾リボヌクレオチドは、リボース、リン酸基、もしくは塩基中またはそれらの修飾あるいは置換を含む、２’位以外の原子の１つ以上の修飾または置換を有するリボヌクレオチドである。
本明細書で使用される「ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド」は、（ａ）アンチセンス鎖もしくはアンチセンス鎖の一部が、標的ｍＲＮＡ（例えば、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ）の切断においてアルゴノート２（Ａｇｏ２）エンドヌクレアーゼによって使用される、センス鎖（パッセンジャー）およびアンチセンス鎖（ガイド）を有する二本鎖オリゴヌクレオチド、または（ｂ）アンチセンス鎖（もしくはそのアンチセンス鎖の一部）が、標的ｍＲＮＡ（例えば、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ）の切断においてＡｇｏ２エンドヌクレアーゼによって使用される、単一のアンチセンス鎖を有する一本鎖オリゴヌクレオチドのいずれかを指す。
本明細書で使用される場合、「鎖」は、ヌクレオチド間結合（例えば、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合）を通して一緒に結合されたヌクレオチドの単一の連続する配列を指す。いくつかの実施形態では、鎖は、２つの自由末端（例えば、５’末端および３’末端）を有する。
本明細書で使用される場合、「対象」は、マウス、ウサギ、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）、およびヒトを含む、任意の哺乳動物を意味する。一実施形態では、対象は、ヒトまたはＮＨＰである。さらに、「個体」または「患者」は、「対象」と互換的に使用され得る。
本明細書で使用される場合、「合成」は、人工的に合成される（例えば、機械（例えば、固体核酸合成器）を使用して）か、もしくは通常、分子を産生する天然源（例えば、細胞または生物）に別様に由来しない、核酸または他の分子を指す。
本明細書で使用される場合、「標的化リガンド」は、目的の組織または細胞の同族分子（例えば、受容体）と選択的に結合し、目的の組織または細胞に他の物質を標的化する目的で別の物質とコンジュゲート可能である分子（例えば、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ポリペプチド、または脂質、例えば、ＧａｌＮＡｃ部分など）を指す。例えば、いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、目的の特定の組織または細胞にオリゴヌクレオチドを標的化する目的で、オリゴヌクレオチドとコンジュゲートされ得る。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、細胞表面受容体と選択的に結合する。したがって、いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、オリゴヌクレオチドとコンジュゲートされた場合、細胞の表面上に発現された受容体との選択的な結合、ならびにオリゴヌクレオチド、標的化リガンド、および受容体を含む複合体の細胞によるエンドソーム内在化を通じて、特定の細胞へのオリゴヌクレオチドの送達を促進する。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、オリゴヌクレオチドが細胞内で標的化リガンドから放出されるように、細胞内部移行後または細胞内在化中に切断されるリンカーを介して、オリゴヌクレオチドとコンジュゲートされる。
本明細書で使用される場合、「標的配列」は、一次転写産物のＲＮＡプロセシングの産物であるｍＲＮＡを含む、ＴＭＰＲＳＳ６遺伝子（例えば、配列番号８５３、８５４、および８５５）の転写中に形成されるｍＲＮＡ分子のヌクレオチド配列の連続する部分を指す。いくつかの実施形態では、配列の標的部分は、少なくとも、ＴＭＰＲＳＳ６遺伝子の転写中に形成されるｍＲＮＡ分子のヌクレオチド配列のその部分またはその付近でＲＮＡｉ指向切断の基質として機能するために十分長いであろう。いくつかの実施形態では、標的配列は、ＴＭＰＲＳＳ６遺伝子のタンパク質コード領域内にある。いくつかの実施形態では、標的配列は、ＴＭＰＲＳＳ６遺伝子の３’ＵＴＲ内にある。
本明細書で使用される場合、「標的化配列」は、標的配列と完全または部分的に相補的であるヌクレオチド配列を指す。
本明細書で使用される場合、「ループ」、「トリループ」、または「テトラループ」は、適切なハイブリダイゼーション条件下で（例えば、リン酸緩衝液中で、細胞中で）、不対領域に隣接する２つの逆平行領域がハイブリダイズして二本鎖（「ステム」と呼ばれる）を形成するように、互いに十分に相補的である核酸の２つの逆平行領域に隣接する核酸（例えば、オリゴヌクレオチド）の不対領域を指す。ループは、ヌクレオチドの隣接する配列のハイブリダイゼーションによって形成される隣接する二本鎖の安定性を増加させる。安定性の増加は、ランダムに選択されたヌクレオチドの配列から成る同等の長さのループのセットから、平均的に予想される隣接するステム二本鎖の融解温度（Ｔｍ）よりも高い、隣接するステム二本鎖のＴｍの増加として検出可能である。例えば、ループは、少なくとも２塩基対（ｂｐ）の長さの二本鎖を含むヘアピンに、１０ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４中で少なくとも約５０℃、少なくとも約５５℃、少なくとも約５６℃、少なくとも約５８℃、少なくとも約６０℃、少なくとも約６５℃、または少なくとも約７５℃のＴｍを付与することができる。いくつかの実施形態では、テトラループは、少なくとも２塩基対（ｂｐ）の長さの二本鎖を含むヘアピンに、１０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４中で少なくとも約５０℃、少なくとも約５５℃、少なくとも約５６℃、少なくとも約５８℃、少なくとも約６０℃、少なくとも約６５℃、または少なくとも約７５℃のＴｍを付与することができる。いくつかの実施形態では、ループは、相互作用をスタッキングすることによって、隣接するステム二本鎖のｂｐを安定化し得る。加えて、テトラループ中のヌクレオチド間の相互作用には、非ワトソン・クリック塩基対合、スタッキング相互作用、水素結合、および接触相互作用が含まれるが、これらに限定されない（Ｃｈｅｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ ３４６：６８０－８２、Ｈｅｕｓ ＆ Ｐａｒｄｉ（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５３：１９１－９４）。いくつかの実施形態では、ループは、３～６個のヌクレオチドを含むか、またはそれらから成り、典型的には、４～５個のヌクレオチドである。特定の実施形態では、ループは、修飾されていてもされていなくてもよい（例えば、標的化部分／標的化リガンドとコンジュゲートされていてもいなくてもよい）３、４、５、もしくは６個のヌクレオチドを含むか、またはそれらから成る。一実施形態では、３個のヌクレオチドから成るループは、トリループである。一実施形態では、４個のヌクレオチドから成るループは、テトラループである。任意のヌクレオチドが、テトラループに使用され得、そのようなヌクレオチドの標準的なＩＵＰＡＣ－ＩＵＢシンボルが、Ｃｏｒｎｉｓｈ－Ｂｏｗｄｅｎ（１９８５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１３：３０２１－３０に記載されるように使用され得る。例えば、文字「Ｎ」は、任意の塩基がその位置にあり得ることを意味するために使用され得、文字「Ｒ」は、Ａ（アデニン）またはＧ（グアニン）がその位置にあり得ることを示すために使用され得、「Ｂ」は、Ｃ（シトシン）、Ｇ（グアニン）、またはＴ（チミン）がその位置にあり得ることを示すために使用され得る。テトラループの例には、テトラループの ＵＮＣＧファミリー（例えば、ＵＵＣＧ）、テトラループのＧＮＲＡファミリー（例えば、ＧＡＡＡ）、ＣＵＵＧテトラループが含まれる（Ｗｏｅｓｅ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：８４６７－７１、Ａｎｔａｏ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９：５９０１－０５）。ＤＮＡテトラループの例には、テトラループのｄ（ＧＮＮＡ）ファミリー（例えば、テトラループのｄ（ＧＴＴＡ）、ｄ（ＧＮＲＡ））ファミリー、テトラループのｄ（ＧＮＡＢ）ファミリー、テトラループのｄ（ＣＮＮＧ）ファミリー、およびテトラループのｄ（ＴＮＣＧ）ファミリー（例えば、ｄ（ＴＴＣＧ））が含まれる。例えば、Ｎａｋａｎｏ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．４１：１４２８１－９２、Ｓｈｉｎｊｉ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｎｉｐｐｏｎ Ｋａｇａｋｋａｉ Ｋｏｅｎ Ｙｏｋｏｓｈｕ ７８：７３１を参照されたい。いくつかの実施形態では、テトラループは、ニックの入ったテトラループ構造内に含まれる。
本明細書で使用される場合、「治療する」または「治療すること」は、既存の状態（例えば、疾患、障害）に関して対象の健康および／もしくは福利を改善する、または状態の発生の可能性を予防するか、もしくは減少させる目的で、例えば、対象に治療剤（例えば、本明細書のオリゴヌクレオチド）を投与することによって、治療を必要とする対象にケアを提供する行為を指す。いくつかの実施形態では、治療は、対象が経験する状態（例えば、疾患、障害）の少なくとも１つの徴候、症状、もしくは寄与因子の頻度または重症度を低減することを伴う。
「薬学的に許容可能な」は、物質または組成物が、哺乳類の治療のために化学的および／または毒性学的に好適でなければならないことを示す。
本明細書で使用される場合、記号
は、付着点を記載するために使用される。
発明の実施形態
１．膜貫通型セリンプロテアーゼ６（ＴＭＰＲＳＳ６）発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、センス鎖およびアンチセンス鎖が、二本鎖領域を形成し、アンチセンス鎖が、配列番号６６１～８５２のうちのいずれか１つのＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と相補性の領域を含み、相補性の領域が、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
２．膜貫通型セリンプロテアーゼ６（ＴＭＰＲＳＳ６）発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが、二本鎖領域を形成する、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、アンチセンス鎖が、配列番号６６１～８５２のうちのいずれか１つに示されるＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と相補性の領域を含み、相補性の領域が、少なくとも１５個の連続するヌクレオチドの長さである、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
３．センス鎖が、１５～５０個のヌクレオチドの長さである、実施形態１または２に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
４．センス鎖が、１８～３６個のヌクレオチドの長さである、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
５．アンチセンス鎖が、１５～３０個のヌクレオチドの長さである、実施形態１～４のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
６．アンチセンス鎖が、２２個のヌクレオチドの長さであり、アンチセンス鎖およびセンス鎖が、少なくとも１９個のヌクレオチドの長さ、任意選択で、少なくとも２０個のヌクレオチドの長さの二本鎖領域を形成する、実施形態１～５のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
７．アンチセンス鎖が、２２個のヌクレオチドの長さであり、アンチセンス鎖およびセンス鎖が、少なくとも２０個のヌクレオチドの長さの二本鎖領域を形成する、実施形態１～６のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
８．相補性の領域が、少なくとも１８個の連続するヌクレオチドの長さ、任意選択で、少なくとも１９個のヌクレオチドの長さである、実施形態１～７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
９．相補性の領域が、少なくとも１９個の連続するヌクレオチドの長さである、実施形態１～８のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１０．相補性の領域が、少なくとも１９個の連続するヌクレオチドの長さである、実施形態１～９のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１１．相補性の領域が、少なくとも２０個の連続するヌクレオチドの長さである、実施形態１～１０のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１２．ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するための二本鎖ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが、
（ｉ）１９～３０個のヌクレオチドの長さのアンチセンス鎖であって、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と相補性の領域を含むヌクレオチド配列を含み、相補性の領域が、配列番号１～１９２から選択される、アンチセンス鎖と、
（ｉｉ）アンチセンス鎖と相補性の領域を含む、１９～５０個のヌクレオチドの長さのセンス鎖と、を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖が、アンチセンス鎖の３’末端に１～４個のヌクレオチドのオーバーハングを有する非対称性二本鎖領域を形成する、別個の鎖である、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１３．センス鎖の３’末端が、Ｓ１－Ｌｐ－Ｓ２として示されるステム－ループを含み、Ｓ１が、Ｓ２と相補的であり、Ｌｐが、Ｓ１とＳ２との間で３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成する、実施形態１～１２のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１４．センス鎖が、３’末端の近位にＳ１－Ｌｐ－Ｓ２として示されるステム－ループを含み、Ｓ１が、Ｓ２と相補的であり、Ｌｐが、Ｓ１とＳ２との間で３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成する、実施形態１～１２のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１５．３’末端の近位のセンス鎖が、Ｓ１－Ｌｐ－Ｓ２として示されるステム－ループを含み、Ｓ１が、Ｓ２と相補的であり、Ｌｐが、Ｓ１とＳ２との間で３～５個のヌクレオチドの長さのループを形成する、実施形態１～１２のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１６．Ｌｐが、トリループまたはテトラループである、実施形態１３～１５のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１７．Ｌｐが、テトラループである、実施形態１３～１６のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１８．テトラループが、配列５’－ＧＡＡＡ－３’を含む、実施形態１７に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１９．ループが、配列５’－ＧＡＡＡ－３’を含むテトラループである、実施形態１３～１８のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
２０．Ｓ１およびＳ２が、１個のヌクレオチド、２個のヌクレオチド、３個のヌクレオチド、４個のヌクレオチド、５個のヌクレオチド、６個のヌクレオチド、７個のヌクレオチド、８個のヌクレオチド、９個のヌクレオチド、または１０個のヌクレオチドの長さである、実施形態１３～１９のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
２１．Ｓ１およびＳ２が、各々、１個のヌクレオチド、２個のヌクレオチド、３個のヌクレオチド、４個のヌクレオチド、５個のヌクレオチド、６個のヌクレオチド、７個のヌクレオチド、８個のヌクレオチド、９個のヌクレオチド、または１０個のヌクレオチドの長さである、実施形態１３～１９のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
２２．Ｓ１およびＳ２が、１～１０個のヌクレオチドの長さであり、同じ長さを有する、実施形態１３～２１のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
２３．Ｓ１およびＳ２が、６個のヌクレオチドの長さである、実施形態１３～２２のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
２４．ステム－ループが、配列５’－ＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ－３’（配列番号８５６）を含む、実施形態１３～２３のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
２５．不連続性が、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成され、ニックの入った構造を形成する、実施形態１３～２４のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
２６．不連続性が、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成され、ニックの入ったテトラループ構造を形成する、実施形態１３～２５のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
２７．アンチセンス鎖が、１個以上のヌクレオチドの長さの３’オーバーハング配列を含む、実施形態１～２６のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
２８．オーバーハングが、プリンヌクレオチドを含む、実施形態２７に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
２９．３’オーバーハング配列が、２個のヌクレオチドの長さである、実施形態２７または２８に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
３０．３’オーバーハングが、ＡＡ、ＧＧ、ＡＧ、およびＧＡから選択される、実施形態２７～２９のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
３１．オーバーハングが、ＧＧまたはＡＡである、実施形態３０に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
３２．オーバーハングが、ＧＧである、実施形態３０または３１に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
３３．３’オーバーハングが、５’－ＡＡ－３’、５’－ＧＧ－３’、５’－ＡＧ－３’、および５’－ＧＡ－３’から選択される、実施形態２７～２９のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
３４．オーバーハングが、５’－ＧＧ－３’または５’－ＡＡ－３’である、実施形態３３に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
３５．オーバーハングが、５’－ＧＧ－３’である、実施形態３３または３４に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
３６．オリゴヌクレオチドが、少なくとも１個の修飾ヌクレオチドを含む、実施形態１～３５のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
３７．オリゴヌクレオチドが、完全に修飾されている、実施形態１～３６のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
３８．オリゴヌクレオチドの全てのヌクレオチドが、修飾ヌクレオチドである、実施形態１～３７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
３９．オリゴヌクレオチドが、部分的に修飾されている、実施形態１～３６のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
４０．修飾オリゴヌクレオチドが、標的化リガンドコンジュゲートヌクレオチドを含む、実施形態３６～３９のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
４１．修飾オリゴヌクレオチドが、標的化リガンドコンジュゲートヌクレオチドを含む、実施形態３６～４０のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
４２．オリゴヌクレオチドが、２’－修飾を含む、実施形態３６～４１のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
４３．修飾ヌクレオチドが、２’－修飾を含む、実施形態３６～４２に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
４４．２’－修飾が、２’－アミノエチル、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル、および２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸から選択される修飾である、実施形態４２または４３に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
４５．２’－修飾が、２’－フルオロ（２’－Ｆ）および２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）から選択される、実施形態４２～４４のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
４６．修飾が、２’－フルオロ（２’－Ｆ）および２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）から選択される２’－修飾である、実施形態３６～４５のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
４７．センス鎖のヌクレオチドの約１０～１５％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、または１５％が、２’－フルオロ（２’－Ｆ）修飾を含む、実施形態３６～４６のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
４８．アンチセンス鎖のヌクレオチドの約２５～３５％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、または３５％が、２’－フルオロ（２’－Ｆ）修飾を含む、実施形態３６～４７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
４９．オリゴヌクレオチドのヌクレオチドの約２５～３５％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、または３５％が、２’－フルオロ（２’－Ｆ）修飾を含む、実施形態３６～４８のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
５０．センス鎖が、５’から３’まで１位～３６位を有する３６個のヌクレオチドを含み、８位～１１位が、２’－フルオロ（２’－Ｆ）修飾を含む、実施形態１～４９のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
５１．
センス鎖が、５’から３’まで番号付けされた３６個のヌクレオチドを含み、
センス鎖の８位～１１位の全てが、２’－フルオロ（２’－Ｆ）修飾を含む、実施形態１～５０のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
５２．
センス鎖が、５’から３’まで番号付けされた３６個のヌクレオチドの長さであり、
センス鎖の８位～１１位の全てが、２’－フルオロ（２’－Ｆ）修飾を含む、実施形態１～５１のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
５３．アンチセンス鎖が、５’から３’まで１位～２２位を有する２２個のヌクレオチドを含み、２位、３位、４位、５位、７位、１０位、および１４位が、２’－フルオロ（２’－Ｆ）修飾を含む、実施形態１～５２のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
５４．
アンチセンス鎖が、５’から３’まで番号付けされた２２個のヌクレオチドを含み、
アンチセンス鎖の２位、３位、４位、５位、７位、１０位、および１４位の全てが、２’－フルオロ（２’－Ｆ）修飾を含む、実施形態１～５３のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
５５．
アンチセンス鎖が、５’から３’まで番号付けされた２２個のヌクレオチドの長さであり、
アンチセンス鎖の２位、３位、４位、５位、７位、１０位、および１４位の全てが、２’－フルオロ（２’－Ｆ）修飾を含む、実施形態１～５４のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
５６．センス鎖が、５’から３’まで１位～３６位を有する３６個のヌクレオチドを含み、１位～７位、１２位～２７位、および３１位～３６位が、２’－Ｏ－メチル修飾を含む、実施形態１～５５のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
５７．
センス鎖が、５’から３’まで番号付けされた３６個のヌクレオチドを含み、
センス鎖の１位～７位、１２位～２７位、および３１位～３６位の全てが、２’－Ｏ－メチル修飾を含む、実施形態１～５６のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
５８．
センス鎖が、５’から３’まで番号付けされた３６個のヌクレオチドの長さであり、
センス鎖の１位～７位、１２位～２７位、および３１位～３６位の全てが、２’－Ｏ－メチル修飾を含む、実施形態１～５７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
５９．センス鎖が、５’から３’まで１位～２２位を有する２２個のヌクレオチドを含み、１位、６位、８位、９位、１１位～１３位、および１５位～２２位が、２’－Ｏ－メチル修飾を含む、実施形態１～５８のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
６０．
アンチセンス鎖が、５’から３’まで番号付けされた２２個のヌクレオチドを含み、
アンチセンス鎖の１位、６位、８位、９位、１１～１３位、および１５位～２２位の全てが、２’－Ｏ－メチル修飾を含む、実施形態１～５９のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
６１．
アンチセンス鎖が、５’から３’まで番号付けされた２２個のヌクレオチドの長さであり、
アンチセンス鎖の１位、６位、８位、９位、１１～１３位、および１５位～２２位の全てが、２’－Ｏ－メチル修飾を含む、実施形態１～６０のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
６２．
センス鎖が、３６個のヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖が、２２個のヌクレオチドを含み、鎖の各々のヌクレオチドが、５’から３’まで番号付けされ、
センス鎖の１位～７位、１２位～２７位、および３１～３６位、ならびにアンチセンス鎖の１位、６位、８位、９位、１１位～１３位、および１５位～２２位の全てが、２’－Ｏ－メチル修飾を含み、
センス鎖の８位～１１位、ならびにアンチセンス鎖の２位、３位、４位、５位、７位、１０位、および１４位の全てが、２’－フルオロ修飾を含む、実施形態１～６１のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
６３．オリゴヌクレオチドが、少なくとも１個の修飾ヌクレオチド間結合を含む、実施形態１～６２のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
６４．少なくとも１個の修飾ヌクレオチド間結合が、ホスホロチオエート結合である、実施形態６３に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
６５．オリゴヌクレオチドが、少なくとも１個の修飾ヌクレオチド間結合を含む、実施形態１～６４のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
６６．アンチセンス鎖が、（ｉ）１位と２位との間、および２位と３位との間、または（ｉｉ）１位と２位との間、２位と３位との間、および３位と４位との間に、ホスホロチオエート結合を含み、位置が、５’から３’まで１～４に番号付けされる、実施形態１～６５のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
６７．アンチセンス鎖が、２２個のヌクレオチドの長さであり、アンチセンス鎖が、２０位と２１位との間、および２１位と２２位との間に、ホスホロチオエート結合を含み、位置が、５’から３’まで１～２２に番号付けされる、実施形態１～６６のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
６８．
アンチセンス鎖が、５’から３’まで番号付けされた２２個のヌクレオチドを含み、
ホスホロチオエート結合が、アンチセンス鎖の１位と２位との間、２位と３位との間、３位と４位との間、２０位と２１位との間、および２１位と２２位との間に提供される、実施形態１～６７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
６９．センス鎖が、１位と２位との間にホスホロチオエート結合を含み、位置が、５’から３’まで番号付けされる、実施形態１～６８のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
７０．
アンチセンス鎖が、２２個のヌクレオチドを含み、
鎖の各々のヌクレオチドが、５’から３’まで番号付けされ、
ホスホロチオエート結合が、センス鎖の１位と２位との間、ならびにアンチセンス鎖の１位と２位との間、２位と３位との間、３位と４位との間、２０位と２１位との間、および２１位と２２位との間に提供される、実施形態１～６９のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
７１．アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素が、リン酸類似体を含む、実施形態１～７０のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
７２．リン酸類似体が、オキシメチルホスホネート、ビニルホスホネート、またはマロニルホスホネートであり、任意選択で、リン酸類似体が、４’－オキシメチルホスホネートを含む４’－リン酸類似体である、実施形態７１に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
７３．アンチセンス鎖の５’末端ヌクレオチドが、化学式１ａによる構造（Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵ）を含む、実施形態１～７２のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
７４．オリゴヌクレオチドの少なくとも１個のヌクレオチドが、１個以上の標的化リガンドとコンジュゲートされている、実施形態１～７３のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
７５．各標的化リガンドが、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ポリペプチド、または脂質を含む、実施形態７４に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
７６．ステム－ループが、ステム－ループの１個以上のヌクレオチドとコンジュゲートされている１個以上の標的化リガンドを含む、実施形態１３～７５のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
７７．１個以上の標的化リガンドが、ループの１個以上のヌクレオチドとコンジュゲートされている、実施形態７４～７６のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
７８．ループ（Ｌｐ）が、５’から３’まで１～４に番号付けされた４個のヌクレオチドを含み、２位、３位、および４位のヌクレオチドが、各々、１個以上の標的化リガンドを含み、標的化リガンドが、同じであるか、または異なる、実施形態１３～７７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
７９．各標的化リガンドが、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分を含む、実施形態７４～７８のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
８０．ＧａｌＮＡｃ部分が、一価ＧａｌＮＡｃ部分、二価ＧａｌＮＡｃ部分、三価ＧａｌＮＡｃ部分、または四価ＧａｌＮＡｃ部分である、実施形態７９に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
８１．ＧａｌＮＡｃ部分が、一価ＧａｌＮＡｃ部分である、実施形態７９～８０のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
８２．ステム－ループのＬｐの最大４個のヌクレオチドが、各々、一価ＧａｌＮＡｃ部分とコンジュゲートされている、実施形態１３～８１のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
８３．ループＬｐが、５’から３’まで１～４に番号付けされた４個のヌクレオチドの長さであり、２位、３位、および４位のループＬｐヌクレオチドが、各々、一価Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分にコンジュゲートされている、実施形態１３～８２のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
８４．ループＬｐが、４個のヌクレオチドの長さであり、５’から３’までのループＬｐの第２、第３、および第４のヌクレオチドが、各々、一価Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分とコンジュゲートされている、実施形態１３～８２のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
８５．相補性の領域が、ｍＲＮＡ標的配列と完全に相補的である、実施形態１～８４のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
８６．相補性の領域が、ｍＲＮＡ標的配列と部分的に相補的である、実施形態１～８４のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
８７．相補性の領域が、ｍＲＮＡ標的配列に対して４個以下のミスマッチを含む、実施形態１～８４および８６のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
８８．相補性の領域が、アンチセンス鎖のヌクレオチド２位～８位でＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と完全に相補的であり、ヌクレオチド位置が、５’から３’まで番号付けされる、実施形態１～８７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
８９．相補性の領域が、アンチセンス鎖のヌクレオチド２位～１１位でＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と完全に相補的であり、ヌクレオチド位置が、５’から３’まで番号付けされる、実施形態１～８８のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
９０．ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列が、配列番号８４４に記載されるとおりである、実施形態１～８９のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
９１．アンチセンス鎖が、配列番号１８４に示されるヌクレオチド配列を含み、任意選択で、センス鎖が、配列番号８４４に示されるヌクレオチド配列を含む、実施形態１～９０のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
９２．センス鎖が、配列番号５７９～５８０、５８５～５８７、５９０、および５９５～５９７のうちのいずれか１つのヌクレオチド配列を含む、実施形態１～９１のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
９３．センス鎖が、配列番号５７９～５８０、５８５～５８７、５９０、および５９５～５９７から選択されるヌクレオチド配列を含む、実施形態１～９２のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
９４．アンチセンス鎖が、配列番号６００～６０１、６０６～６０８、６１１、および６１６～６１８のうちのいずれか１つのヌクレオチド配列を含む、実施形態１～９３のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
９５．アンチセンス鎖が、配列番号６００～６０１、６０６～６０８、６１１、および６１６～６１８から選択されるヌクレオチド配列を含む、実施形態１～９４のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
９６．センス鎖およびアンチセンス鎖が、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９５および６１６、
ｄ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｅ）それぞれ、配列番号５９６および６１７、
ｆ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、
ｇ）それぞれ、配列番号５８５および６０６、
ｈ）それぞれ、配列番号５８６および６０７、ならびに
ｉ）それぞれ、配列番号５８７および６０８から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含む、実施形態１～９５のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
９７．センス鎖およびアンチセンス鎖が、
ａ）それぞれ、配列番号５７９および６００、
ｂ）それぞれ、配列番号５８０および６０１、
ｃ）それぞれ、配列番号５９０および６１１、
ｄ）それぞれ、配列番号５９７および６１８、ならびに
ｅ）それぞれ、配列番号５８６および６０７から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含む、実施形態１～９６のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
９８．アンチセンス鎖が、配列番号６００に示されるヌクレオチド配列を含み、任意選択で、センス鎖が、配列番号５７９に示されるヌクレオチド配列を含む、実施形態１～９７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
９９．センス鎖が、配列番号５７９に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖が、配列番号６００に示されるヌクレオチド配列を含む、実施形態１～９８のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１００．センス鎖が、配列番号５８０に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖が、配列番号６０１に示されるヌクレオチド配列を含む、実施形態１～９７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１０１．センス鎖が、配列番号５９０に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖が、配列番号６１１に示されるヌクレオチド配列を含む、実施形態１～９７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１０２．センス鎖が、配列番号５９７に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖が、配列番号６１８に示されるヌクレオチド配列を含む、実施形態１～９７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１０３．センス鎖が、配列番号５８６に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖が、配列番号６０７に示されるヌクレオチド配列を含む、実施形態１～９７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１０４．アンチセンス鎖が、２２個のヌクレオチドの長さである、実施形態１～１０３のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１０５．センス鎖が、３６個のヌクレオチドの長さである、実施形態１～１０４のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１０６．センス鎖およびアンチセンス鎖が、
ａ）それぞれ、配列番号６２１および６４２、
ｂ）それぞれ、配列番号６２２および６４３、
ｃ）それぞれ、配列番号６３７および６５８、
ｄ）それぞれ、配列番号６３２および６５３、
ｅ）それぞれ、配列番号６３８および６５９、
ｆ）それぞれ、配列番号６３９および６６０、
ｇ）それぞれ、配列番号６２７および６４８、
ｈ）それぞれ、配列番号６２８および６４９、ならびに
ｉ）それぞれ、配列番号６２９および６５０から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含む、実施形態１～１０５のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１０７．センス鎖およびアンチセンス鎖が、
ａ）それぞれ、配列番号６２１および６４２、
ｂ）それぞれ、配列番号６２２および６４３、
ｃ）それぞれ、配列番号６３２および６５３、
ｄ）それぞれ、配列番号６３９および６６０、ならびに
ｅ）それぞれ、配列番号６２８および６４９から成る群から選択されるヌクレオチド配列を含む、実施形態１～１０６のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１０８．センス鎖が、配列番号６２１に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖が、配列番号６４２に示されるヌクレオチド配列を含む、実施形態１～１０７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１０９．アンチセンス鎖が、配列番号６４２に示されるヌクレオチド配列を含み、任意選択で、センス鎖が、配列番号６２１に示されるヌクレオチド配列を含む、実施形態１～１０７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１１０．センス鎖が、配列番号６２２に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖が、配列番号６４３に示されるヌクレオチド配列を含む、実施形態１～１０７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１１１．センス鎖が、配列番号６３２に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖が、配列番号６５３に示されるヌクレオチド配列を含む、実施形態１～１０７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１１２．センス鎖が、配列番号６３９に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖が、配列番号６６０に示されるヌクレオチド配列を含む、実施形態１～１０７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１１３．センス鎖が、配列番号６２８に示されるヌクレオチド配列を含み、アンチセンス鎖が、配列番号６４９に示されるヌクレオチド配列を含む、実施形態１～１０７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１１４．膜貫通型セリンプロテアーゼ６（ＴＭＰＲＳＳ６）発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、ヌクレオチドが、二本鎖を形成する、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、
アンチセンス鎖が、２２個のヌクレオチドを含み、配列番号６００に示されるヌクレオチド配列を含み、センス鎖が、３６個のヌクレオチドを含み、配列番号５７９に示されるヌクレオチド配列を含み、鎖の各々のヌクレオチドが、５’から３’まで番号付けされ、
センス鎖の１位～７位、１２位～２７位、および３１位～３６位、ならびにアンチセンス鎖の１位、６位、８位、９位、１１位～１３位、および１５～２２位の全てが、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）修飾を含み、センス鎖の８位～１１位、ならびにアンチセンス鎖の２位、３位、４位、５位、７位、１０位、および１４位の全てが、２’－フルオロ（２’－Ｆ）修飾を含み、
ホスホロチオエート結合が、センス鎖の１位と２位との間、ならびにアンチセンス鎖の１位と２位との間、２位と３位との間、３位と４位との間、２０位と２１位との間、および２１位と２２位との間に提供され、
３’末端の近位のセンス鎖が、Ｓ１－Ｌｐ－Ｓ２として表されるステムループを含み、Ｓ１が、Ｓ２と相補的であり、Ｌｐが、４個のヌクレオチドの長さのループを形成し、ループＬｐの第２、第３、および第４のヌクレオチドが、各々、一価Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分にコンジュゲートされ、
アンチセンス鎖の５’末端ヌクレオチドが、以下の化学式１ａによる構造（Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵ）を含む、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１１５．アンチセンス鎖が、１個以上のプリンヌクレオチドの長さの３’オーバーハングを含み、任意選択で、３’オーバーハングが、５’－ＧＧ－３’である、実施形態１１４に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１１６．一価Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分にコンジュゲートされているループＬｐのヌクレオチドが、各々、下記の化学式５ａによる構造を含む、実施形態１１４または１１５に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１１７．ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、センス鎖が、５’－［ｍＧｓ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｆＣ］［ｆＵ］［ｆＣ］［ｆＵ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＧ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］－３’（配列番号６２１）の配列および修飾の全てを含み、アンチセンス鎖が、５’［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵｓ］［ｆＧｓ］［ｆＡｓ］［ｆＡ］［ｆＡ］［ｍＵ］［ｆＡ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｆＡ］［ｍＧ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｆＵ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＣｓ］［ｍＧｓ］［ｍＧ］－３’（配列番号６４２）の配列および修飾の全てを含み、ｍＣ、ｍＡ、ｍＧ、ｍＵ＝２’－ＯＭｅリボヌクレオシドであり、ｆＡ、ｆＣ、ｆＧ、ｆＵ＝２’－Ｆリボヌクレオシドであり、ｓ＝ホスホロチオエートであり、ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ＝以下の式である、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１１８．ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、
センス鎖が、５’－［ｍＧｓ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｆＣ］［ｆＵ］［ｆＣ］［ｆＵ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＧ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］－３’（配列番号６２１）の配列および修飾の全てを含み、
アンチセンス鎖が、５’－［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵｓ］［ｆＧｓ］［ｆＡｓ］［ｆＡ］［ｆＡ］［ｍＵ］［ｆＡ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｆＡ］［ｍＧ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｆＵ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＣｓ］［ｍＧｓ］［ｍＧ］－３’（配列番号６４２）の配列および修飾の全てを含み、
ｍＣ、ｍＡ、ｍＧ、ｍＵが、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）修飾ヌクレオチドを示し、
ｆＡ、ｆＣ、ｆＧ、ｆＵが、２’－フルオロ（２’－Ｆ）修飾ヌクレオチドを示し、
ｓが、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を示し、
ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃが、以下の化学式５ａによる構造を含む、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１１９．ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、
センス鎖が、５’－［ｍＧｓ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｆＣ］［ｆＵ］［ｆＣ］［ｆＵ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＧ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］－３’（配列番号６２１）の配列および修飾の全てを含み、
アンチセンス鎖が、５’－［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵｓ］［ｆＧｓ］［ｆＡｓ］［ｆＡ］［ｆＡ］［ｍＵ］［ｆＡ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｆＡ］［ｍＧ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｆＵ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＣｓ］［ｍＧｓ］［ｍＧ］－３’（配列番号６４２）の配列および修飾の全てを含み、
ｍＣ、ｍＡ、ｍＧ、ｍＵが、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）修飾ヌクレオチドを示し、
ｆＡ、ｆＣ、ｆＧ、ｆＵが、２’－フルオロ（２’－Ｆ）修飾ヌクレオチドを示し、
ｓが、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を示し、
ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃが、以下の化学式５ａによる構造を含み、
Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵが、以下の化学式１ａによる構造を含む、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１２０．ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、センス鎖が、５’［ｍＧｓ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＣ］［ｆＵ］［ｆＧ］［ｆＧ］［ｆＵ］［ｍＡ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＧ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］－３’（配列番号６２２）の配列および修飾の全てを含み、アンチセンス鎖が、５’［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵｓ］［ｆＵｓ］［ｆＡｓ］［ｆＧ］［ｆＧ］［ｍＡ］［ｆＡ］［ｍＡ］［ｍＵ］［ｆＡ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｆＧ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣｓ］［ｍＧｓ］［ｍＧ］－３’（配列番号６４３）の配列および修飾の全てを含み、ｍＣ、ｍＡ、ｍＧ、ｍＵ＝２’－ＯＭｅリボヌクレオシドであり、ｆＡ、ｆＣ、ｆＧ、ｆＵ＝２’－Ｆリボヌクレオシドであり、ｓ＝ホスホロチオエートであり、ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ＝以下の式である、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１２１．ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、
センス鎖が、５’－［ｍＧｓ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＣ］［ｆＵ］［ｆＧ］［ｆＧ］［ｆＵ］［ｍＡ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＧ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］－３’（配列番号６２２）の配列および修飾の全てを含み、
アンチセンス鎖が、５’－［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵｓ］［ｆＵｓ］［ｆＡｓ］［ｆＧ］［ｆＧ］［ｍＡ］［ｆＡ］［ｍＡ］［ｍＵ］［ｆＡ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｆＧ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣｓ］［ｍＧｓ］［ｍＧ］－３’（配列番号６４３）の配列および修飾の全てを含み、
ｍＣ、ｍＡ、ｍＧ、ｍＵが、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）修飾ヌクレオチドを示し、
ｆＡ、ｆＣ、ｆＧ、ｆＵが、２’－フルオロ（２’－Ｆ）修飾ヌクレオチドを示し、
ｓが、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を示し、
ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃが、以下の化学式５ａによる構造を含む、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１２２．ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、センス鎖が、５’－［ｍＣｓ］［ｍＵ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｆＧ］［ｆＣ］［ｆＵ］［ｆＵ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＧ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］－３’（配列番号６３２）の配列および修飾の全てを含み、アンチセンス鎖が、５’［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵｓ］［ｆＡｓ］［ｆＣｓ］［ｆＣ］［ｆＡ］［ｍＧ］［ｆＡ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｆＡ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｆＡ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＡ］［ｍＧｓ］［ｍＧｓ］［ｍＧ］－３’（配列番号６５３）の配列および修飾の全てを含み、ｍＣ、ｍＡ、ｍＧ、ｍＵ＝２’－ＯＭｅリボヌクレオシドであり、ｆＡ、ｆＣ、ｆＧ、ｆＵ＝２’－Ｆリボヌクレオシドであり、ｓ＝ホスホロチオエートであり、ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ＝以下の式である、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１２３．ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、
センス鎖が、５’－［ｍＣｓ］［ｍＵ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｆＧ］［ｆＣ］［ｆＵ］［ｆＵ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＧ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］－３’（配列番号６３２）の配列および修飾の全てを含み、
アンチセンス鎖が、５’－［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵｓ］［ｆＡｓ］［ｆＣｓ］［ｆＣ］［ｆＡ］［ｍＧ］［ｆＡ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｆＡ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｆＡ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＡ］［ｍＧｓ］［ｍＧｓ］［ｍＧ］－３’（配列番号６５３）の配列および修飾の全てを含み、
ｍＣ、ｍＡ、ｍＧ、ｍＵが、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）修飾ヌクレオチドを示し、
ｆＡ、ｆＣ、ｆＧ、ｆＵが、２’－フルオロ（２’－Ｆ）修飾ヌクレオチドを示し、
ｓが、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を示し、
ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃが、以下の化学式５ａによる構造を含む、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１２４．ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、センス鎖が、５’－［ｍＡｓ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＡ］［ｆＡ］［ｆＡ］［ｆＧ］［ｆＡ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＧ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］３’（配列番号６３９）の配列および修飾の全てを含み、アンチセンス鎖が、５’－［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵｓ］［ｆＣｓ］［ｆＡｓ］［ｆＧ］［ｆＣ］［ｍＵ］［ｆＡ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｆＵ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｆＵ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＵｓ］［ｍＧｓ］［ｍＧ］－３’（配列番号６６０）の配列および修飾の全てを含み、ｍＣ、ｍＡ、ｍＧ、ｍＵ＝２’－Ｏｍｅリボヌクレオシドであり、ｆＡ、ｆＣ、ｆＧ、ｆＵ＝２’－Ｆリボヌクレオシドであり、ｓ＝ホスホロチオエートであり、ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ＝以下の式である、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１２５．ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、
センス鎖が、５’－［ｍＡｓ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＡ］［ｆＡ］［ｆＡ］［ｆＧ］［ｆＡ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＧ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］－３’（配列番号６３９）の配列および修飾の全てを含み、
アンチセンス鎖が、５’－［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵｓ］［ｆＣｓ］［ｆＡｓ］［ｆＧ］［ｆＣ］［ｍＵ］［ｆＡ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｆＵ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｆＵ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＵｓ］［ｍＧｓ］［ｍＧ］－３’（配列番号６６０）の配列および修飾の全てを含み、
ｍＣ、ｍＡ、ｍＧ、ｍＵが、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）修飾ヌクレオチドを示し、
ｆＡ、ｆＣ、ｆＧ、ｆＵが、２’－フルオロ（２’－Ｆ）修飾ヌクレオチドを示し、
ｓが、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を示し、
ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃが、以下の化学式５ａによる構造を含む、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１２６．ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、センス鎖が、５’－［ｍＧｓ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｆＣ］［ｆＵ］［ｆＡ］［ｆＵ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＧ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］３’（配列番号６２８）の配列および修飾の全てを含み、アンチセンス鎖が、５’［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵｓ］［ｆＵｓ］［ｆＡｓ］［ｆＣ］［ｆＡ］［ｍＡ］［ｆＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｆＡ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｆＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＣｓ］［ｍＧｓ］［ｍＧ］－３’（配列番号６４９）の配列および修飾の全てを含み、ｍＣ、ｍＡ、ｍＧ、ｍＵ＝２’－ＯＭｅリボヌクレオシドであり、ｆＡ、ｆＣ、ｆＧ、ｆＵ＝２’－Ｆリボヌクレオシドであり、ｓ＝ホスホロチオエートであり、ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ＝以下の式である、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１２７．ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、オリゴヌクレオチドが、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、
センス鎖が、５’－［ｍＧｓ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｆＣ］［ｆＵ］［ｆＡ］［ｆＵ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＧ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］－３’（配列番号６２８）の配列および修飾の全てを含み、
アンチセンス鎖が、５’－［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵｓ］［ｆＵｓ］［ｆＡｓ］［ｆＣ］［ｆＡ］［ｍＡ］［ｆＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｆＡ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｆＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＣｓ］［ｍＧｓ］［ｍＧ］－３’（配列番号６４９）の配列および修飾の全てを含み、
ｍＣ、ｍＡ、ｍＧ、ｍＵが、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）修飾ヌクレオチドを示し、
ｆＡ、ｆＣ、ｆＧ、ｆＵが、２’－フルオロ（２’－Ｆ）修飾ヌクレオチドを示し、
ｓが、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を示し、
ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃが、以下の化学式５ａによる構造を含む、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１２８．Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵが、以下の化学式１による構造を含む、実施形態１１６～１２７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１２９．Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵが、以下の化学式１ａによる構造を含む、実施形態１１６～１２７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１３０．センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含む、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、センス鎖が、配列番号６２１を含み、アンチセンス鎖が、配列番号６４２を含み、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡ転写物と相補性の領域を含み、オリゴヌクレオチドが、図１０Ａ～Ｂに示される構造を有するコンジュゲートの形態である、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１３１．センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含む、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、センス鎖が、配列番号６２１を含み、アンチセンス鎖が、配列番号６４２を含み、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡ転写物と相補性の領域を含み、オリゴヌクレオチドが、図１４Ａに示される構造を有するコンジュゲートの形態である、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１３２．センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含む、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、センス鎖が、配列番号６３２を含み、アンチセンス鎖が、配列番号６５３を含み、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡ転写物と相補性の領域を含み、オリゴヌクレオチドが、図１１Ａ～Ｂに示される構造を有するコンジュゲートの形態である、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１３３．センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含む、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、センス鎖が、配列番号６３２を含み、アンチセンス鎖が、配列番号６５３を含み、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡ転写物と相補性の領域を含み、オリゴヌクレオチドが、図１４Ｂに示される構造を有するコンジュゲートの形態である、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１３４．センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含む、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、センス鎖が、配列番号６３９を含み、アンチセンス鎖が、配列番号６６０を含み、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡ転写物と相補性の領域を含み、オリゴヌクレオチドが、図１２Ａ～Ｂに示される構造を有するコンジュゲートの形態である、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１３５．センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含む、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、センス鎖が、配列番号６３９を含み、アンチセンス鎖が、配列番号６６０を含み、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡ転写物と相補性の領域を含み、オリゴヌクレオチドが、図１４Ｃに示される構造を有するコンジュゲートの形態である、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１３６．センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含む、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、センス鎖が、配列番号６２８を含み、アンチセンス鎖が、配列番号６４９を含み、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡ転写物と相補性の領域を含み、オリゴヌクレオチドが、図１３Ａ～Ｂに示される構造を有するコンジュゲートの形態である、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１３７．センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含む、ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、センス鎖が、配列番号６２８を含み、アンチセンス鎖が、配列番号６４９を含み、アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡ転写物と相補性の領域を含み、オリゴヌクレオチドが、図１４Ｄに示される構造を有するコンジュゲートの形態である、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
１３８．実施形態１～１３７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドと、薬学的に許容可能な担体、送達剤、または賦形剤と、を含む、医薬組成物。
１３９．ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態を有する対象を治療するための方法であって、治療有効量の実施形態１～１３７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは実施形態１３８に記載の医薬組成物を対象に投与し、それによって、対象を治療することを含む、方法。
１４０．ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを投与した後に、（ｉ）ヘプシジン発現が増加するか、（ｉｉ）血清鉄レベルが減少するか、（ｉｉｉ）血清鉄飽和度が減少するか、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組み合わせである、実施形態１３９に記載の方法。
１４１．オリゴヌクレオチドを対象に送達する方法であって、実施形態１３８に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法。
１４２．細胞、細胞集団、または対象におけるＴＭＰＲＳＳ６発現を低減する方法であって、
ｉ）細胞もしくは細胞集団を、実施形態１～１３７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドもしくは実施形態１３８に記載の医薬組成物と接触させること、または
ｉｉ）実施形態１～１３７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドもしくは実施形態１３８に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法。
１４３．ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減することが、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡの量もしくはレベル、マトリプターゼ－２タンパク質の量もしくはレベル、または両方を低減することを含む、実施形態１４２に記載の方法。
１４４．ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減することが、（ｉ）ヘプシジン産生の増加、（ｉｉ）血清鉄飽和度の減少、（ｉｉｉ）血清鉄の減少、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組み合わせをもたらす、実施形態１４２または１４３に記載の方法。
１４５．対象が、ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態を有する、実施形態１４２～１４４のいずれか１つに記載の方法。
１４６．ヘプシジン欠乏と関連する疾患、障害、または状態が、遺伝性ヘモクロマトーシスなどのヘモクロマトーシスである、実施形態１３９～１４０および１４５のいずれか１つに記載の方法。
１４７．ヘプシジン欠乏と関連する疾患、障害、または状態が、ベータサラセミアである、実施形態１３９～１４０および１４５のいずれか１つに記載の方法。
１４８．ヘプシジン抑制と関連する疾患、障害、または状態が、真性赤血球増加症である、実施形態１３９～１４０および１４５のいずれか１つに記載の方法。
１４９．ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは医薬組成物が、第２の組成物または治療剤と組み合わせて投与される、実施形態１３９～１４８のいずれか１つに記載の方法。
１５０．ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態の治療のための、任意選択で、遺伝性ヘモクロマトーシスなどのヘモクロマトーシス、真性赤血球増加症、またはベータサラセミアの治療のための、医薬の製造における、実施形態１～１３７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは実施形態１３８に記載の医薬組成物の使用。
１５１．医薬として使用するための、実施形態１～１３７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、または実施形態１３８に記載の医薬組成物。
１５２．医薬として使用するための、実施形態１～１３７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、または実施形態１３８に記載の医薬組成物。
１５３．ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態の治療に使用するための、または使用するために適合可能な、任意選択で、遺伝性ヘモクロマトーシスなどのヘモクロマトーシス、真性赤血球増加症、またはベータサラセミアの治療のための、実施形態１～１３７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは実施形態１３８に記載の医薬組成物。
１５４．遺伝性ヘモクロマトーシスなどのヘモクロマトーシスの治療に使用するための、実施形態１～１３７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは実施形態１３８に記載の医薬組成物。
１５５．真性赤血球増加症の治療に使用するための、実施形態１～１３７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは実施形態１３８に記載の医薬組成物。
１５６．ベータサラセミアの治療に使用するための、実施形態１～１３７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは実施形態１３８に記載の医薬組成物。
１５７．遺伝性ヘモクロマトーシスなどのヘモクロマトーシスまたはベータサラセミアの治療に使用するための、実施形態１～１３７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは実施形態１３８に記載の医薬組成物。
１５８．ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態を有する対象に投与するための、実施形態１～１３７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドと、任意選択の薬学的に許容可能な担体と、指示を含む添付文書と、を含む、キット。
１５９．ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態を有する対象に投与するための、実施形態１～１３７のいずれか１つに記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドまたは実施形態１３８に記載の医薬組成物と、指示を含む添付文書と、を含む、キット。
１６０．ヘプシジン欠乏もしくは抑制と関連する疾患、障害、または状態が、遺伝性ヘモクロマトーシスなどのヘモクロマトーシス、真性赤血球増加症、またはベータサラセミアである、実施形態１５０に記載の使用、実施形態１５１～１５７のいずれか１つに記載の使用のための、もしくは使用のために適合可能なＲＮＡｉオリゴヌクレオチドもしくは医薬組成物、または実施形態１５８もしくは１５９に記載のキット。
実施例１：ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの調製
オリゴヌクレオチドの合成および精製
前述の実施例に記載のオリゴヌクレオチド（ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド）を、本明細書に記載の方法を使用して化学的に合成した。概して、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、１９～２３ｍｅｒのｓｉＲＮＡについて記載された固相オリゴヌクレオチド合成法を使用し（例えば、Ｓｃａｒｉｎｇｅ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１８：５４３３－５４４１、およびＵｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０９：７８４５－４５を参照、また、米国特許第５，８０４，６８３号、同第５，８３１，０７１号、同５，９９８，２０３号、同第６，００８，４００号、同第６，１１１，０８６号、同第６，１１７，６５７号、同第６，３５３，０９８号、同第６，３６２，３２３号、同第６，４３７，１１７号、および同第６，４６９，１５８号も参照されたい）、加えて、既知のホスホルアミダイト合成を使用して（例えば、Ｈｕｇｈｅｓ ａｎｄ Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ（２０１７）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ Ｐｅｒｓｐｅｃｔ Ｂｉｏｌ．９（１）：ａ０２３８１２；Ｂｅａｕｃａｇｅ Ｓ．Ｌ．，Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ Ｍ．Ｈ．Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｖ： Ｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ Ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅｓ－Ａ Ｎｅｗ Ｃｌａｓｓ ｏｆ Ｋｅｙ Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ ｆｏｒ Ｄｅｏｘｙｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．（１９８１）；２２：１８５９－６２．ｄｏｉ：１０．１０１６／Ｓ００４０－４０３９（０１）９０４６１－７を参照されたい）合成した。１９ｍｅｒのコア配列を有するｄｓＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、２５ｍｅｒのセンス鎖および２７ｍｅｒのアンチセンス鎖を有する構築物に構成され、ＲＮＡｉ機構によるプロセシングを可能にした。１９ｍｅｒのコア配列は、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡの領域と相補的である。
個々のＲＮＡ鎖を合成し、ＨＰＬＣを標準的な方法（Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｃｏｒａｌｖｉｌｌｅ，ＩＡ）に従って精製した。例えば、ＲＮＡオリゴヌクレオチドは、固相ホスホラミダイト化学を使用して合成し、標準的な技術を使用してＮＡＰ－５カラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ；Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）で脱保護および脱塩した（Ｄａｍｈａ ＆ Ｏｌｇｉｖｉｅ（１９９３）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０：８１－１１４、Ｗｉｎｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２３：２６７７－８４）。オリゴマーを、１５分間のステップ直線勾配を使用して、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｓｏｕｒｃｅ １５Ｑカラム（１．０ｃｍ×２５ｃｍ；Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）でイオン交換高速液体クロマトグラフィー（ＩＥ－ＨＰＬＣ）を使用して精製した。勾配は、９０：１０緩衝液Ａ：Ｂから５２：４８緩衝液Ａ：Ｂまで変化し、緩衝液Ａは、１００ｍＭトリスｐＨ８．５であり、緩衝液Ｂは、１００ｍＭトリスｐＨ８．５、１Ｍ ＮａＣｌである。試料を２６０ｎｍでモニターし、全長オリゴヌクレオチド種に対応するピークを収集し、プールして、ＮＡＰ－５カラム上で脱塩し、凍結乾燥させた。
各オリゴマーの純度を、Ｂｅｃｋｍａｎ ＰＡＣＥ ５０００（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．；Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，ＣＡ）上のキャピラリー電気泳動（ＣＥ）によって決定した。ＣＥキャピラリーは、１００μｍの内径を有し、ｓｓＤＮＡ １００Ｒ Ｇｅｌ（Ｂｅｃｋｍａｎ－Ｃｏｕｌｔｅｒ）を含有する。典型的には、約０．６ｎｍｏｌｅのオリゴヌクレオチドをキャピラリーに注入し、４４４Ｖ／ｃｍの電場で実行し、２６０ｎｍでのＵＶ吸光度によって検出した。変性トリス－ボレート－７Ｍ－尿素ランニング緩衝液を、Ｂｅｃｋｍａｎ－Ｃｏｕｌｔｅｒから購入した。以下に記載する実験で使用するためのＣＥによって評価されるように、少なくとも９０％純粋であるオリゴリボヌクレオチドを取得した。製造元の推奨プロトコルに従って、Ｖｏｙａｇｅｒ ＤＥ（商標）Ｂｉｏｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ Ｗｏｒｋ Ｓｔａｔｉｏｎ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ；Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）でのマトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ）質量分析により、化合物同一性を確認した。全てのオリゴマーの相対分子量を、多くの場合、予想される分子量の０．２％以内で取得した。
二本鎖の調製
一本鎖ＲＮＡオリゴマーを、１００ｍＭの酢酸カリウム、３０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５から成る二本鎖緩衝液中に再懸濁した（例えば、１００μＭ濃度で）。相補的なセンス鎖およびアンチセンス鎖を等モル量で混合して、例えば、５０μＭの二本鎖の最終溶液を得た。試料をＲＮＡ緩衝液（ＩＤＴ）中で１００℃まで５分間加熱し、使用前に室温まで冷却させた。ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを－２０℃で保存した。一本鎖ＲＮＡオリゴマーを、凍結乾燥させて、または－８０℃ヌクレアーゼを含まない水中で保存した。
実施例２：ＴＭＰＲＳＳ６標的化ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの生成
膜貫通型プロテアーゼ、セリン６（ＴＭＰＲＳＳ６）は、細胞表面上で見出されるＩＩ型膜貫通型セリンプロテアーゼである。タンパク質は、ヘプシジンとのシグナル伝達経路で機能し、体内の鉄バランスを調節する。
ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列の特定
ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを生成するために、コンピュータベースのアルゴリズムを使用して、ＲＮＡｉ経路によるＴＭＰＲＳＳ６発現の阻害をアッセイするために好適なＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列をコンピュータで特定した。アルゴリズムは、各々がヒト（Ｈｓ）またはマウス（Ｍｍ）ｍＲＮＡの好適なＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列（例えば、それぞれ、配列番号８５３および８５４、表１）と相補性の領域を有する、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドガイド（アンチセンス）鎖配列を提供した。種にわたる配列保存のため、ヒトＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡについて特定されたＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列のうちのいくつかは、マウス（Ｍｍ）ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ（配列番号８５４、表１）および／またはカニクイザル（Ｍｆ）ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ（配列番号８５５、表１）の対応するＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と相同である。ヌクレオチド配列類似性を有する相同ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と相補性の領域を含む、ＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、相同ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ（例えば、ヒトＴＭＰＲＳＳ６およびサルＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ）を標的化する能力を有すると予測される。
具体的には、実施例１に記載されるように合成されたオリゴヌクレオチドを使用して、３６ｍｅｒのパッセンジャー鎖および２２ｍｅｒのガイド鎖を有するニックの入ったテトラループＧａｌＮＡｃコンジュゲート構造（本明細書では「ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチド」または「ＧａｌＮＡｃ－ＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチド」と呼ばれる）を含む、二本鎖ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを生成した。さらに、パッセンジャー鎖およびガイド鎖を含むヌクレオチド配列は、修飾ヌクレオチドおよびホスホロチオエート結合の明確に異なるパターンを有する。テトラループを含むヌクレオチドのうちの３個は、各々、ＧａｌＮＡｃ部分（ＣＡＳ＃１４１３１－６０－３）とコンジュゲートされた。各鎖の修飾パターンを以下に示す。
センス鎖：５’－［ｍＸｓ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｆＸ］［ｆＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ａｄｅｍＸ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＸ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＸ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］－３’
これが、以下にハイブリダイズする：
アンチセンス鎖：５’－［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＸｓ］［ｆＸｓ］［ｆＸｓ］［ｆＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｆＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸ］［ｍＸｓ］［ｍＸｓ］［ｍＸ］－３’
上記の修飾パターンおよび修飾キーにおける「Ｘ」は、核酸塩基を指すことが理解される。
インビトロ細胞系アッセイ
インビトロ細胞ベースのアッセイを使用して、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチドのＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡを低減する能力を測定した。簡潔に述べると、内因性ヒトＴＭＰＲＳＳ６遺伝子を発現するヒトＨｅｐ３Ｂ細胞を、マルチウェル細胞培養プレートの別個のウェル内の１ｎＭにおけるＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。細胞を、修飾ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６によるトランスフェクション後に２４時間維持し、次いで、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）系ｑＰＣＲアッセイを使用して、トランスフェクトした細胞からの残存するＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡの量を決定した。３’アッセイおよび５’アッセイという２つのｑＰＣＲアッセイを使用して、６－カルボキシ－フルオレセイン（ＦＡＭ）にコンジュゲートされたＰＣＲプローブを使用して測定されたＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡレベルを決定した。これらのアッセイは、以下の表３で特定される。プライマー対を、残存するｍＲＮＡの割合（％）についてアッセイした。
結果は、対照細胞と比較してＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチドトランスフェクト細胞内の低減した量のＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡによって決定される、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡを標的化するように設計されたＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチドが細胞内のＴＭＰＲＳＳ６発現を阻害することを示し、ＧａｌＸＣコンジュゲートオリゴヌクレオチドを含むヌクレオチド配列が、ＴＭＰＲＳＳ６発現を阻害するＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを生成するために有用であることを示した。
実施例３：ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドがインビボでヒトおよびマウスＴＭＰＲＳＳ６発現を阻害する
インビボでＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの能力を評価するために、ＨＤＩマウスモデルを使用した。
表４に示される９個のＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチドを評価した。選択されたオリゴヌクレオチドは、実施例２のスクリーニングでＴＭＰＲＳＳ６発現を阻害するＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを生成するために使用されたヌクレオチド配列に基づいていた。
オリゴヌクレオチドを、マウス肝臓の肝細胞においてヒトＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡを一過性に発現するように操作されたマウスで評価した。簡潔に述べると、６～８週齢のメスのＣＤ－１マウス（ｎ＝５）に、ＰＢＳ中で製剤化された１ｍｇ／ｋｇまたは２ｍｇ／ｋｇの濃度で指示されたＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチドを皮下投与した。マウスの対照群（ｎ＝５）には、ＰＢＳのみを投与した。３日後（７２時間）、ユビキタスサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列の制御下で、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）ヒトＴＭＰＲＳＳ６遺伝子をコードする２５μｇのＤＮＡプラスミド（ｐＣＭＶ６＿ＴＭＰＲＳＳ６含有ＮＭ＿１５３６０９（カタログ番号：ＳＣ３０６６２３、Ｏｒｉｇｅｎｅ））を、マウスに流体力学的に注射（ＨＤＩ）した。ＤＮＡプラスミド導入の１日後、ＨＤＩマウスからの肝臓試料を採取した。これらのＨＤＩマウスに由来する総ＲＮＡをｑＲＴ－ＰＣＲ分析にかけて、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡレベルを決定した。具体的には、ＲＮＡを肝臓組織から抽出し、ｑＰＣＲ（ｎｅｏＲ遺伝子に正規化された）によってヒトおよび内因性マウスＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡレベルを決定した。ヒトＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡに特異的なプライマー対および蛍光標識プローブから成る、５’および３’ＰｒｉｍｅＴｉｍｅ（商標）ｑＰＣＲプローブアッセイ（ＩＤＴ）を使用して、ヒトＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡのレベルを決定した。マウスＴＭＰＲＳＳ６のレベルも同様に測定した。２－ΔΔＣｔ（「デルタ－デルタＣｔ」）法（Ｌｉｖａｋ ａｎｄ Ｓｃｈｍｉｔｔｇｅｎ（２００１）Ｍｅｔｈｏｄｓ ２５：４０２－４０８）を使用して、治療されたマウスからの試料中に残存するヒトおよび内因性マウスＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡの割合を決定した。ＤＮＡプラスミドに含まれるＮｅｏＲ遺伝子を使用して、値をトランスフェクション効率について正規化した。
図１Ａおよび１Ｂ、ならびに表５の５’および３’ｑＰＣＲアッセイに示されるように、各オリゴヌクレオチドは、２ｍｇ／ｋｇでＴＭＰＲＳＳ６発現を少なくとも５０％低減した。ＴＭＰＲＳＳ６－０４１６、－０８３１、および－１５４６は、最も強力なオリゴヌクレオチドであり、より低い１ｍｇ／ｋｇ濃度でＴＭＰＲＳＳ６発現を５０％超低減した。このデータは、ＧａｌＮＡｃ修飾オリゴヌクレオチドがインビボでヒトＴＭＰＲＳＳ６発現の低減に成功したことを実証した。
図２に示されるように、ヒトＴＭＰＲＳＳ６に加えてマウスＴＭＰＲＳＳ６に対する特異性を有する、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドＴＭＰＲＳＳ６－０６５１は、２ｍｇ／ｋｇで内因性マウスＴＭＰＲＳＳ６発現を少なくとも５０％低減した。このデータは、ＧａｌＮＡｃ修飾オリゴヌクレオチドがインビボでマウスＴＭＰＲＳＳ６発現の低減に成功したことを実証した。
実施例４：ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドがインビボでサルＴＭＰＲＳＳ６発現を阻害する
インビボでＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの能力を評価するために、サルモデルを使用した（カニクイザル）。
表６に示され、図３Ａ～３Ｄに示される４つの修飾ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチドを評価した。選択されたオリゴヌクレオチドは、実施例２のスクリーニングおよび実施例３の結果に基づいていた。簡潔に述べると、本明細書では概してサルと呼ばれるカニクイザルに、０、２８、５６、８４、および１１２日目にＰＢＳ中で製剤化された１ｍｇ／ｋｇまたは４ｍｇ／ｋｇの濃度で指示されたＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチドを皮下投与した。サルの対照群（ｎ＝５）には、ＰＢＳのみを投与した。これらのサルに由来する総ＲＮＡをｑＲＴ－ＰＣＲ分析にかけて、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡレベルを決定した。具体的には、ＲＮＡを肝臓組織から抽出し、－７、２８、５６、８４、１１２、および１６８日目に、ｑＰＣＲ（Ｂ２Ｍ遺伝子に正規化された）によってサルＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡレベルを決定した。サルＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡに特異的なプライマー対および蛍光標識プローブから成る、ＰｒｉｍｅＴｉｍｅ（商標）ｑＰＣＲプローブアッセイ（ＩＤＴ）を使用して、サルＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡのレベルを決定した。２－ΔΔＣｔ（「デルタ－デルタＣｔ」）法（Ｌｉｖａｋ ａｎｄ Ｓｃｈｍｉｔｔｇｅｎ（２００１）Ｍｅｔｈｏｄｓ ２５：４０２－４０８）を使用して、治療されたサルからの試料中に残存するサルＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡの割合を決定した。
それぞれ、－７、２８、５６、８４、１１２、および１６８日目の試料の各々に対応する、図４Ａ～４Ｆに示されるように、各オリゴヌクレオチドは、研究の過程の全体を通して（すなわち、１６８日間まで）１ｍｇ／ｋｇおよび４ｍｇ／ｋｇの両方でＴＭＰＲＳＳ６の発現を少なくとも５０％低減した。このデータは、ＧａｌＮＡｃ修飾オリゴヌクレオチドがインビボでサルＴＭＰＲＳＳ６発現の低減に成功したことを実証した。
実施例５：ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６ ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドがインビボで鉄の恒常性を調節する
ＴＭＰＲＳＳ６の機能喪失変異は、ヘプシジン血漿レベルの上昇をもたらし、鉄剤不応性鉄欠乏性貧血を含む重度の障害につながる。ヘプシジンタンパク質は、鉄の恒常性の制御因子であり、鉄の循環への侵入を誘導する。ヘプシジンのレベルが高いとき、血清鉄レベルが減少し、貧血をもたらし得る。ヘプシジンレベルが低いとき、ヘモクロマトーシスなどの病状では、鉄レベルが上昇し、過負荷が起こり得る。ＴＭＰＲＳＳ６は、ヘプシジン発現を抑制することが知られており、したがって、ＴＭＰＲＳＳ６の阻害は、ヘプシジン発現を調節し、血清鉄レベルおよび飽和度を変化させ得る。鉄の恒常性の変化を評価するために、ヘプシジン、血清鉄、および血清鉄飽和度のレベルを、ＴＭＰＲＳＳ６の阻害後に測定した。表６に示され、図３Ａ～３Ｄに示される４つの修飾ＧａｌＮＡｃコンジュゲートＴＭＰＲＳＳ６オリゴヌクレオチドを、実施例４に記載されるようにカニクイザルに投与した。これらのサルに由来する総ＲＮＡをｑＲＴ－ＰＣＲ分析にかけて、ヘプシジンｍＲＮＡレベルを決定した。具体的には、ＲＮＡを肝臓組織から抽出し、－７、２８、５６、８４、１１２、および１６８日目に、ｑＰＣＲ（Ｂ２Ｍ遺伝子に正規化された）によってサルヘプシジンｍＲＮＡレベルを決定した。サルＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡに特異的なプライマー対および蛍光標識プローブから成る、ＰｒｉｍｅＴｉｍｅ（商標）ｑＰＣＲプローブアッセイ（ＩＤＴ）を使用して、サルヘプシジンｍＲＮＡのレベルを決定した。２－ΔΔＣｔ（「デルタ－デルタＣｔ」）法（Ｌｉｖａｋ ａｎｄ Ｓｃｈｍｉｔｔｇｅｎ（２００１）Ｍｅｔｈｏｄｓ ２５：４０２－４０８）を使用して、治療されたサルからの試料中に残存するサルヘプシジンｍＲＮＡの割合を決定した。
それぞれ－７、２８、５６、８４、１１２、および１６８日目の試料の各々に対応する、図５Ａ～５Ｆに示されるように、５６日目（図５Ｃ）までに、ヘプシジンの著しい上方調節が、全てのオリゴヌクレオチドについて観察された。ヘプシジンの上方調節が、残りの研究について１６８日目まで観察された。このデータは、ＴＭＰＲＳＳ６を阻害するためのＧａｌＮＡｃ修飾オリゴヌクレオチドがインビボでヘプシジンの増加の低減に成功することを実証する。
血清鉄および血清鉄飽和度を測定するために、血清を－７、２８、５６、８４、１１２、および１６８日目に動物から採取した。Ｃｏｒｎｅｌｌ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｌａｂで行われた鉄パネル分析を使用して、鉄のレベルを測定した。
図６Ａ～６Ｆおよび図７Ａ～７Ｂに示されるように、血清鉄の用量依存性低減が、２８日目の後、一般的に、１６８日間の研究の全体を通して、各オリゴヌクレオチドについて観察された。同様に、図８Ａ～８Ｆおよび図９Ａ～９Ｂに示されるように、血清鉄飽和度の用量依存性低減が、２８日目の後、一般的に、１６８日間の研究の全体を通して、各オリゴヌクレオチドについて観察された。まとめると、このデータは、ＴＭＰＲＳＳ６を阻害するためのＧａｌＮＡｃ修飾オリゴヌクレオチドがインビボで血清鉄および血清鉄飽和度の低減に成功したことを実証した。その後、遊離鉄を低減することが、遺伝性ヘモクロマトーシス（一次鉄過剰）およびベータサラセミア（二次鉄過剰）のような鉄過剰症を有する患者に有益であり得、真性赤血球増加症で観察される赤血球生成の誤調節および上昇を制限する。
本発明のある特定の特徴が本明細書に例証および記載されているが、ここで、多くの修正、代用、変更、および均等物が当業者に想到されるであろう。したがって、添付の特許請求の範囲が、本発明の真の趣旨の範囲内にあるそのような全ての修正および変更を網羅することを意図していることが理解されるべきである。

Claims (15)

  1. 膜貫通型セリンプロテアーゼ６（ＴＭＰＲＳＳ６）発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドが、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、前記センス鎖および前記アンチセンス鎖が、二本鎖領域を形成し、前記アンチセンス鎖が、配列番号６００に示されるヌクレオチド配列の少なくとも２０個の連続するヌクレオチドを含み、前記アンチセンス鎖が、ＴＭＰＲＳＳ６ ｍＲＮＡ標的配列と相補性の領域を含み、前記相補性の領域が、少なくとも１８個の連続するヌクレオチドである、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
  2. 前記相補性の領域が、少なくとも１９個の連続するヌクレオチドである、請求項１に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
  3. 前記センス鎖が、配列番号８４４に示されるヌクレオチド配列を含み、任意選択で、前記センス鎖が、配列番号５７９に示されるヌクレオチド配列を含む、請求項１または２に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
  4. 前記アンチセンス鎖が、配列番号６００に示される前記ヌクレオチド配列の少なくとも２１個の連続するヌクレオチドを含み、任意選択で、前記アンチセンス鎖が、配列番号６００に示される前記ヌクレオチド配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
  5. 前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含み、任意選択で、前記オリゴヌクレオチドの全てのヌクレオチドが、修飾ヌクレオチドである、請求項１～４のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
  6. 前記センス鎖が、３６個のヌクレオチドを含み、前記アンチセンス鎖が、２２個のヌクレオチドを含み、前記鎖の各々の前記ヌクレオチドが、５’から３’に番号付けされており、
    前記センス鎖の１位～７位、１２位～２７位、および３１位～３６位、ならびに前記アンチセンス鎖の１位、６位、８位、９位、１１位～１３位、および１５位～２２位の全てが、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）修飾を含み、かつ
    前記センス鎖の８位～１１位、ならびに前記アンチセンス鎖の２位、３位、４位、５位、７位、１０位、および１４位の全てが、２’－フルオロ（２’－Ｆ）修飾を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
  7. 前記アンチセンス鎖が、２２個のヌクレオチドを含み、
    前記鎖の各々の前記ヌクレオチドが、５’から３’に番号付けされており、
    ホスホロチオエート結合が、前記センス鎖の１位と２位との間、ならびに前記アンチセンス鎖の１位と２位との間、２位と３位との間、３位と４位との間、２０位と２１位との間、および２１位と２２位との間に提供される、請求項１～６のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
  8. 前記アンチセンス鎖の５’末端ヌクレオチドが、以下の化学式１ａによる構造（Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵ）：
    を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
  9. 前記センス鎖が、３’末端の近位で、Ｓ１－Ｌｐ－Ｓ２として示されるステム－ループを含み、Ｓ１が、Ｓ２と相補的であり、かつＬｐが、Ｓ１とＳ２との間で３～５個のヌクレオチド長のループを形成する、請求項１～８のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
  10. 前記ループＬｐが、４個のヌクレオチド長であり、前記ループＬｐの、５’から３’への方向で第２、第３、および第４のヌクレオチドが、各々、一価Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分とコンジュゲートされている、請求項９に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
  11. 前記アンチセンス鎖が、１つ以上のプリンヌクレオチド長の３’オーバーハングを含み、かつ任意選択で、前記３’オーバーハングが、５’－ＧＧ－３’である、請求項１～１０のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
  12. ＴＭＰＲＳＳ６発現を低減するためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドであって、前記オリゴヌクレオチドが、センス鎖と、アンチセンス鎖と、を含み、
    前記センス鎖が、５’－［ｍＧｓ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｆＣ］［ｆＵ］［ｆＣ］［ｆＵ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＵ］［ｍＡ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＵ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］
    ［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｍＧ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］［ｍＧ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＵ］［ｍＧ］［ｍＣ］－３’（配列番号６２１）の配列および修飾の全てを含み、かつ
    前記アンチセンス鎖が、５’－［Ｍｅホスホネート－４Ｏ－ｍＵｓ］［ｆＧｓ］［ｆＡｓ］［ｆＡ］［ｆＡ］［ｍＵ］［ｆＡ］［ｍＣ］［ｍＣ］［ｆＡ］［ｍＧ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｆＵ］［ｍＡ］［ｍＧ］［ｍＣ］［ｍＡ］［ｍＣ］［ｍＣｓ］［ｍＧｓ］［ｍＧ］－３’（配列番号６４２）の配列および修飾の全てを含み、ｍＣ、ｍＡ、ｍＧ、ｍＵ＝２’－ＯＭｅリボヌクレオシドであり、ｆＡ、ｆＣ、ｆＧ、ｆＵ＝２’Ｆリボヌクレオシドであり、ｓ＝ホスホロチオエートであり、かつａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ＝
    である、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド。
  13. 請求項１～１２のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドと、薬学的に許容可能な担体、送達剤、または賦形剤と、を含む、医薬組成物。
  14. 医薬として使用するための、請求項１～１２のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、または請求項１３に記載の医薬組成物。
  15. 遺伝性ヘモクロマトーシスなどのヘモクロマトーシスまたはベータサラセミアの治療に使用するための、請求項１～１２のいずれか一項に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、または請求項１３に記載の医薬組成物。
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