JP2022117483A - タンパク質のゲル化物の製造方法 - Google Patents
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Abstract
【課題】本発明の課題は、タンパク質のゲル化物を短時間で製造する方法を提供することにある。【解決手段】工程（１）を経てタンパク質（Ａ）のゲル化物を得る前記ゲル化物の製造方法であって、前記タンパク質（Ａ）が、ＶＰＧＶＧ配列（１）、ＧＶＧＶＰ配列（４）、ＧＰＰ配列、ＧＡＰ配列及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（３）のうち少なくとも１つのアミノ酸配列（Ｘ）が２～２００個連続したポリペプチド鎖を有する等、特定のアミノ酸配列を有しており、前記工程（１）において、前記タンパク質（Ａ）、水及び炭素数１～４のアルコールを含有する混合物の温度を０～８０℃とする工程である製造方法。【選択図】なし
Description
本発明は、タンパク質のゲル化物の製造方法に関する。
創傷部の組織を再生する方法として、特定のタンパク質を、患部にてゲル化（水分を含んだ状態で流動性を失った状態に変化）させ、組織再生用材料として用いる方法が知られている。（特許文献１）
しかしながら、特許文献１に記載の方法だとゲル化に時間がかかるため、簡便な方法で、短時間でゲル化させる方法が求められていた。
しかしながら、特許文献１に記載の方法だとゲル化に時間がかかるため、簡便な方法で、短時間でゲル化させる方法が求められていた。
本発明の課題は、タンパク質のゲル化物を短時間で製造する方法を提供することにある。
本発明者らは、上記の課題を解決すべく鋭意検討した結果、本発明に到達した。
即ち本発明は、工程（１）を経てタンパク質（Ａ）のゲル化物を得る前記ゲル化物の製造方法であって、
前記タンパク質（Ａ）が、ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又はポリペプチド鎖（Ｙ’）を有し、
前記タンパク質（Ａ）中の前記ポリペプチド鎖（Ｙ）と前記ポリペプチド鎖（Ｙ’）との合計個数が１～１００個であり、
前記ポリペプチド鎖（Ｙ）が、配列番号１に示されるアミノ酸配列であるＶＰＧＶＧ配列（１）、配列番号４に示されるアミノ酸配列であるＧＶＧＶＰ配列（４）、ＧＰＰ配列、ＧＡＰ配列及び配列番号３に示されるアミノ酸配列であるＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（３）のうち少なくとも１つのアミノ酸配列（Ｘ）が２～２００個連続したポリペプチド鎖であり、
前記ポリペプチド鎖（Ｙ’）が、前記ポリペプチド鎖（Ｙ）中の５％以下のアミノ酸がリシン及び／又はアルギニンで置換されたポリペプチド鎖であり、前記リシン及び前記アルギニンの合計個数が１～１００個であり、
前記タンパク質（Ａ）に含まれる前記アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）を構成するアミノ酸の合計個数が、前記タンパク質（Ａ）の全アミノ酸数を基準として２０～９０％であり、
前記アミノ酸配列（Ｘ’）が、前記アミノ酸配列（Ｘ）中の６０％以下のアミノ酸がリシン及び／又はアルギニンで置換されたアミノ酸配列であり、
前記タンパク質（Ａ）が、配列番号２に示されるアミノ酸配列であるＧＡＧＡＧＳ配列（２）を有し、
前記タンパク質（Ａ）１分子中の、前記ＧＡＧＡＧＳ配列（２）の個数と、前記アミノ酸配列（Ｘ）及び前記アミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数との比（ＧＡＧＡＧＳ配列（２）：アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計）が、１：０．５～１：２０であり、
前記工程（１）が、前記タンパク質（Ａ）、水及び炭素数１～４のアルコールを含有する混合物の温度を０～８０℃とする工程である製造方法である。
即ち本発明は、工程（１）を経てタンパク質（Ａ）のゲル化物を得る前記ゲル化物の製造方法であって、
前記タンパク質（Ａ）が、ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又はポリペプチド鎖（Ｙ’）を有し、
前記タンパク質（Ａ）中の前記ポリペプチド鎖（Ｙ）と前記ポリペプチド鎖（Ｙ’）との合計個数が１～１００個であり、
前記ポリペプチド鎖（Ｙ）が、配列番号１に示されるアミノ酸配列であるＶＰＧＶＧ配列（１）、配列番号４に示されるアミノ酸配列であるＧＶＧＶＰ配列（４）、ＧＰＰ配列、ＧＡＰ配列及び配列番号３に示されるアミノ酸配列であるＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（３）のうち少なくとも１つのアミノ酸配列（Ｘ）が２～２００個連続したポリペプチド鎖であり、
前記ポリペプチド鎖（Ｙ’）が、前記ポリペプチド鎖（Ｙ）中の５％以下のアミノ酸がリシン及び／又はアルギニンで置換されたポリペプチド鎖であり、前記リシン及び前記アルギニンの合計個数が１～１００個であり、
前記タンパク質（Ａ）に含まれる前記アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）を構成するアミノ酸の合計個数が、前記タンパク質（Ａ）の全アミノ酸数を基準として２０～９０％であり、
前記アミノ酸配列（Ｘ’）が、前記アミノ酸配列（Ｘ）中の６０％以下のアミノ酸がリシン及び／又はアルギニンで置換されたアミノ酸配列であり、
前記タンパク質（Ａ）が、配列番号２に示されるアミノ酸配列であるＧＡＧＡＧＳ配列（２）を有し、
前記タンパク質（Ａ）１分子中の、前記ＧＡＧＡＧＳ配列（２）の個数と、前記アミノ酸配列（Ｘ）及び前記アミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数との比（ＧＡＧＡＧＳ配列（２）：アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計）が、１：０．５～１：２０であり、
前記工程（１）が、前記タンパク質（Ａ）、水及び炭素数１～４のアルコールを含有する混合物の温度を０～８０℃とする工程である製造方法である。
本発明の製造方法を用いることで、短時間でタンパク質のゲル化物を製造することができる。
本発明の製造方法は、工程（１）を経てタンパク質（Ａ）のゲル化物を得る前記ゲル化物の製造方法であり、前記工程（１）は、前記タンパク質（Ａ）、水及び炭素数１～４のアルコールを含有する混合物の温度を０～８０℃とする工程である。
前記タンパク質（Ａ）は、ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又はポリペプチド鎖（Ｙ’）を有し、
前記タンパク質（Ａ）中の前記ポリペプチド鎖（Ｙ）と前記ポリペプチド鎖（Ｙ’）との合計個数が１～１００個である。
前記ポリペプチド鎖（Ｙ）は、配列番号１に示されるアミノ酸配列であるＶＰＧＶＧ配列（１）、配列番号４に示されるアミノ酸配列であるＧＶＧＶＰ配列（４）、ＧＰＰ配列、ＧＡＰ配列及び配列番号３に示されるアミノ酸配列であるＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（３）のうち少なくとも１つのアミノ酸配列（Ｘ）が２～２００個連続したポリペプチド鎖である。
前記ポリペプチド鎖（Ｙ’）は、前記ポリペプチド鎖（Ｙ）中の５％以下のアミノ酸がリシン及び／又はアルギニンで置換されたポリペプチド鎖であり、前記リシン及び前記アルギニンの合計個数が１～１００個である。
前記タンパク質（Ａ）に含まれる前記アミノ酸配列（Ｘ）及び前記アミノ酸配列（Ｘ’）を構成するアミノ酸の合計個数が前記タンパク質（Ａ）の全アミノ酸数を基準として２０～９０％であり、前記アミノ酸配列（Ｘ’）は、前記アミノ酸配列（Ｘ）中の６０％以下のアミノ酸がリシン及び／又はアルギニンで置換されたアミノ酸配列である。
前記タンパク質（Ａ）は、ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又はポリペプチド鎖（Ｙ’）を有し、
前記タンパク質（Ａ）中の前記ポリペプチド鎖（Ｙ）と前記ポリペプチド鎖（Ｙ’）との合計個数が１～１００個である。
前記ポリペプチド鎖（Ｙ）は、配列番号１に示されるアミノ酸配列であるＶＰＧＶＧ配列（１）、配列番号４に示されるアミノ酸配列であるＧＶＧＶＰ配列（４）、ＧＰＰ配列、ＧＡＰ配列及び配列番号３に示されるアミノ酸配列であるＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（３）のうち少なくとも１つのアミノ酸配列（Ｘ）が２～２００個連続したポリペプチド鎖である。
前記ポリペプチド鎖（Ｙ’）は、前記ポリペプチド鎖（Ｙ）中の５％以下のアミノ酸がリシン及び／又はアルギニンで置換されたポリペプチド鎖であり、前記リシン及び前記アルギニンの合計個数が１～１００個である。
前記タンパク質（Ａ）に含まれる前記アミノ酸配列（Ｘ）及び前記アミノ酸配列（Ｘ’）を構成するアミノ酸の合計個数が前記タンパク質（Ａ）の全アミノ酸数を基準として２０～９０％であり、前記アミノ酸配列（Ｘ’）は、前記アミノ酸配列（Ｘ）中の６０％以下のアミノ酸がリシン及び／又はアルギニンで置換されたアミノ酸配列である。
本発明において、タンパク質のゲル化とは、タンパク質が水分を含んだ状態で、流動性を失った状態に変化することを指すものとする。
本発明の製造方法におけるタンパク質（Ａ）のゲル化は、以下のメカニズムで進行しているものと推測される。
タンパク質（Ａ）は水素結合により凝集しているが、適切な温度にすることで、水素結合が一旦開裂し、親水性が高いポリペプチド鎖（Ｙ）及びポリペプチド鎖（Ｙ’）が水を構造内部に抱き込んで、再度水素結合を形成することで、ゲル化が進行するものと考えられる。
本発明の製造方法におけるタンパク質（Ａ）のゲル化は、以下のメカニズムで進行しているものと推測される。
タンパク質（Ａ）は水素結合により凝集しているが、適切な温度にすることで、水素結合が一旦開裂し、親水性が高いポリペプチド鎖（Ｙ）及びポリペプチド鎖（Ｙ’）が水を構造内部に抱き込んで、再度水素結合を形成することで、ゲル化が進行するものと考えられる。
前記のタンパク質（Ａ）は、上述の通り、ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又はポリペプチド鎖（Ｙ’）を有する。そのため、タンパク質（Ａ）のゲル化物は、優れた生体親和性を有し、かつ、本発明におけるゲル化物を適用する患部の伸縮に対応可能な適度な弾性を有する。
ポリペプチド鎖（Ｙ）を構成するアミノ酸配列（Ｘ）の種類は１種類であってもよく、２種類以上であってもよい。
アミノ酸配列（Ｘ）としては、生体適合性及びゲル化効率の観点から、ＶＰＧＶＧ配列（１）及びＧＶＧＶＰ配列（４）が好ましい。
ポリペプチド鎖（Ｙ）としては、具体的には、（ＶＰＧＶＧ）ｂ配列、（ＧＶＧＶＰ）ｃ配列及び（ＧＡＨＧＰＡＧＰＫ）ｄ配列等が挙げられる。なお、ｂ～ｄは、それぞれ、アミノ酸配列（Ｘ）の連続する個数であり、２～２００の整数である。
タンパク質（Ａ）１分子中に、ポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有する場合は、ポリペプチド鎖（Ｙ）は同一でも異なっていても良く、（ＶＰＧＶＧ）ｂ配列、（ＧＶＧＶＰ）ｃ配列及び（ＧＡＨＧＰＡＧＰＫ）ｄ配列からなる群から選ばれる１種を有してもよく、２種以上を有しても良い。
また、タンパク質（Ａ）中にポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有する場合は、アミノ酸配列（Ｘ）の連続する個数は、ポリペプチド鎖（Ｙ）ごとに同一でも異なっていてもよい。すなわち、アミノ酸配列（Ｘ）の連続する個数ｂ～ｄが同じポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有してもよく、ｂ～ｄが異なるポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有してもよい。
ポリペプチド鎖（Ｙ）としては、生体適合性及びゲル化効率の観点から、（ＶＰＧＶＧ）ｂ配列及び（ＧＶＧＶＰ）ｃ配列が好ましい。
タンパク質（Ａ）１分子中に、ポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有する場合は、ポリペプチド鎖（Ｙ）は同一でも異なっていても良く、（ＶＰＧＶＧ）ｂ配列、（ＧＶＧＶＰ）ｃ配列及び（ＧＡＨＧＰＡＧＰＫ）ｄ配列からなる群から選ばれる１種を有してもよく、２種以上を有しても良い。
また、タンパク質（Ａ）中にポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有する場合は、アミノ酸配列（Ｘ）の連続する個数は、ポリペプチド鎖（Ｙ）ごとに同一でも異なっていてもよい。すなわち、アミノ酸配列（Ｘ）の連続する個数ｂ～ｄが同じポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有してもよく、ｂ～ｄが異なるポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有してもよい。
ポリペプチド鎖（Ｙ）としては、生体適合性及びゲル化効率の観点から、（ＶＰＧＶＧ）ｂ配列及び（ＧＶＧＶＰ）ｃ配列が好ましい。
ポリペプチド鎖（Ｙ）は、アミノ酸配列（Ｘ）が２～２００個連続した（上記ｂ～ｄが２～２００）ポリペプチド鎖であるが、水溶性、生体適合性、ゲル化効率の観点から、アミノ酸配列（Ｘ）が連続する個数は２～１００個（上記ｂ～ｄが２～１００）が好ましく、更に好ましくは２～５０個（上記ｂ～ｄが２～５０）、特に好ましくは２～４０個（ｂ～ｄが２～４０）である。
ポリペプチド鎖（Ｙ’）は、ポリペプチド鎖（Ｙ）中の５％以下のアミノ酸がリシン及び／又はアルギニンで置換されたポリペプチド鎖であり、置換されたリシン及びアルギニンの合計個数が１～１００個である。
ポリペプチド鎖（Ｙ’）であるかどうかは、タンパク質（Ａ）の配列中の全てのリシン（Ｋ）及びアルギニン（Ｒ）を、他のアミノ酸［グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、プロリン（Ｐ）又はヒスチジン（Ｈ）］に置きかえたときに、ポリペプチド鎖（Ｙ）となるかによって判断する。
ポリペプチド鎖（Ｙ’）において、置換されたリシン及び／又はアルギニンの割合は、水溶性、生体適合性、ゲル化効率の観点から、０．０６％～５％であることが好ましく、０．５～５％が更に好ましく、特に好ましくは１～５％である。
また、ポリペプチド鎖（Ｙ’）は、アミノ酸配列（Ｘ）中の６０％以下のアミノ酸がリシン及び／又はアルギニンで置換されたアミノ酸配列（Ｘ’）を含んでいてもよい。
更に、ポリペプチド鎖（Ｙ’）を構成するアミノ酸配列（Ｘ）及び／又はアミノ酸配列（Ｘ’）の種類は、それぞれ１種類であってもよく、２種類以上であってもよい。
更に、ポリペプチド鎖（Ｙ’）を構成するアミノ酸配列（Ｘ）及び／又はアミノ酸配列（Ｘ’）の種類は、それぞれ１種類であってもよく、２種類以上であってもよい。
アミノ酸配列（Ｘ’）として、具体的には、配列番号７に示されるアミノ酸配列であるＧＫＧＶＰ配列（７）、配列番号８に示されるアミノ酸配列であるＧＫＧＫＰ配列（８）、配列番号９に示されるアミノ酸配列であるＧＫＧＲＰ配列（９）及び配列番号１０に示されるアミノ酸配列であるＧＲＧＲＰ配列（１０）等が挙げられる。
アミノ酸配列（Ｘ’）は、生体適合性及びゲル化効率の観点から、ＧＫＧＶＰ配列（７）、ＧＫＧＫＰ配列（８）及びＧＲＧＲＰ配列（１０）からなる群から選ばれる少なくとも１種の配列が好ましく、更に好ましくはＧＫＧＶＰ配列（７）及びＧＫＧＫＰ配列（８）である。
アミノ酸配列（Ｘ’）は、生体適合性及びゲル化効率の観点から、ＧＫＧＶＰ配列（７）、ＧＫＧＫＰ配列（８）及びＧＲＧＲＰ配列（１０）からなる群から選ばれる少なくとも１種の配列が好ましく、更に好ましくはＧＫＧＶＰ配列（７）及びＧＫＧＫＰ配列（８）である。
タンパク質（Ａ）１分子中のポリペプチド鎖（Ｙ）とポリペプチド鎖（Ｙ’）との合計個数は、１～１００個である。また、これらの合計個数は、１～８０個であることが好ましく、１～６０個であることがより好ましい。
タンパク質（Ａ）１分子中のポリペプチド鎖（Ｙ）とポリペプチド鎖（Ｙ’）との合計個数が上記範囲であると、水への溶解性、生体適合性及びゲル化効率の観点で好ましい。
タンパク質（Ａ）１分子中のポリペプチド鎖（Ｙ）とポリペプチド鎖（Ｙ’）との合計個数が上記範囲であると、水への溶解性、生体適合性及びゲル化効率の観点で好ましい。
なお、タンパク質（Ａ）中に、アミノ酸配列（Ｘ）の種類及び／又は連続する個数が異なるポリペプチド鎖（Ｙ）を有している場合は、それぞれを１個として数え、ポリペプチド鎖（Ｙ）の個数はその合計である。ポリペプチド鎖（Ｙ’）についても同様である。
本発明のゲル化物の製造方法において、タンパク質（Ａ）に含まれるアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）を構成するアミノ酸の合計個数がタンパク質（Ａ）の全アミノ酸数を基準として２０～９０％である。
上記の割合が、２０％未満の場合は、後に詳述するゲル化性能が悪化し、９０％を超えると水溶性が悪化する。
上記の割合は、水への溶解性、生体適合性及びゲル化効率の観点から、２５～９０％が好ましく、５２．５～９０％が好ましく、更に好ましくは５５～９０％である。
上記の割合は、プロテインシークエンサーによって求めることができる。具体的には、下記の測定法により求めることができる。
＜タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対するアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）を構成するアミノ酸の合計個数の割合の測定法＞
特定のアミノ酸残基で切断出来る切断方法から２種類以上を用いて、タンパク質（Ａ）を３０残基以下程度まで分解する。その後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて分離した後、プロテインシークエンサーにてアミノ酸配列を読み取る。得られたアミノ酸配列からペプチドマッピングして、タンパク質（Ａ）の全配列を決定する。その後、以下記載の測定式にてタンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対する全てのアミノ酸配列（Ｘ）中のアミノ酸数及び全てのアミノ酸配列（Ｘ’）中のアミノ酸数の合計個数の割合を算出する。
タンパク質（Ａ）を構成する全てのアミノ酸配列（Ｘ）中のアミノ酸数及びタンパク質（Ａ）を構成する全てのアミノ酸配列（Ｘ’）中のアミノ酸数の合計数の割合（％）＝［｛アミノ酸配列（Ｘ）の数｝×｛アミノ酸配列（Ｘ）中のアミノ酸数｝＋｛アミノ酸配列（Ｘ’）の数｝×｛アミノ酸（Ｘ’）中のアミノ酸数｝］／｛タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数｝×１００
上記の割合が、２０％未満の場合は、後に詳述するゲル化性能が悪化し、９０％を超えると水溶性が悪化する。
上記の割合は、水への溶解性、生体適合性及びゲル化効率の観点から、２５～９０％が好ましく、５２．５～９０％が好ましく、更に好ましくは５５～９０％である。
上記の割合は、プロテインシークエンサーによって求めることができる。具体的には、下記の測定法により求めることができる。
＜タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対するアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）を構成するアミノ酸の合計個数の割合の測定法＞
特定のアミノ酸残基で切断出来る切断方法から２種類以上を用いて、タンパク質（Ａ）を３０残基以下程度まで分解する。その後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて分離した後、プロテインシークエンサーにてアミノ酸配列を読み取る。得られたアミノ酸配列からペプチドマッピングして、タンパク質（Ａ）の全配列を決定する。その後、以下記載の測定式にてタンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対する全てのアミノ酸配列（Ｘ）中のアミノ酸数及び全てのアミノ酸配列（Ｘ’）中のアミノ酸数の合計個数の割合を算出する。
タンパク質（Ａ）を構成する全てのアミノ酸配列（Ｘ）中のアミノ酸数及びタンパク質（Ａ）を構成する全てのアミノ酸配列（Ｘ’）中のアミノ酸数の合計数の割合（％）＝［｛アミノ酸配列（Ｘ）の数｝×｛アミノ酸配列（Ｘ）中のアミノ酸数｝＋｛アミノ酸配列（Ｘ’）の数｝×｛アミノ酸（Ｘ’）中のアミノ酸数｝］／｛タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数｝×１００
タンパク質（Ａ）は、配列番号２に示されるアミノ酸配列であるＧＡＧＡＧＳ配列（２）を有する。
タンパク質（Ａ）が、ＧＡＧＡＧＳ配列（２）が連続したポリペプチド鎖（Ｓ）を有する場合、生体適合性及びゲル化効率の観点から、ポリペプチド鎖（Ｓ）は、ＧＡＧＡＧＳ配列（２）が２～２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）であることが好ましい。
ポリペプチド鎖（Ｓ１）において、ＧＡＧＡＧＳ配列（２）が連続する個数は、ゲル化物の生体親和性の観点から、２～５０個が好ましく、２～４０個が更に好ましく、特に好ましくは２～３０個であり、最も好ましくは２～１０個である。
タンパク質（Ａ）が、ＧＡＧＡＧＳ配列（２）が連続したポリペプチド鎖（Ｓ）を有する場合、生体適合性及びゲル化効率の観点から、ポリペプチド鎖（Ｓ）は、ＧＡＧＡＧＳ配列（２）が２～２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）であることが好ましい。
ポリペプチド鎖（Ｓ１）において、ＧＡＧＡＧＳ配列（２）が連続する個数は、ゲル化物の生体親和性の観点から、２～５０個が好ましく、２～４０個が更に好ましく、特に好ましくは２～３０個であり、最も好ましくは２～１０個である。
タンパク質（Ａ）において、タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対する全てのＧＡＧＡＧＳ配列（２）中のアミノ酸数の割合［｛タンパク質（Ａ）中のＧＡＧＡＧＳ配列（２）の数×６｝／｛タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数｝×１００］は、生体適合性及びゲル化効率の観点から、５～７０％が好ましく、更に好ましくは５～５０％であり、特に好ましくは５～４５％である。
タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対する全てのＧＡＧＡＧＳ配列（２）中のアミノ酸数の割合は、プロテインシークエンサーによって求めることができる。具体的には、下記の測定法により求める。
タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対する全てのＧＡＧＡＧＳ配列（２）中のアミノ酸数の割合は、プロテインシークエンサーによって求めることができる。具体的には、下記の測定法により求める。
＜タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対する全てのＧＡＧＡＧＳ配列（２）中のアミノ酸数の割合＞
特定のアミノ酸残基で切断出来る切断方法の２種類以上を用いて、タンパク質（Ａ）を３０残基以下程度まで分解する。その後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて分離した後、プロテインシークエンサーにてアミノ酸配列を読み取る。得られたアミノ酸配列からペプチドマッピングして、タンパク質（Ａ）の全配列を決定する。その後、以下記載の測定式にてタンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対する全てのＧＡＧＡＧＳ配列（２）中のアミノ酸数の割合を算出する。
タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対する全てのＧＡＧＡＧＳ配列（２）中のアミノ酸数の割合（％）＝［｛ＧＡＧＡＧＳ配列（２）の数×６｝／｛タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸の数｝］×１００
特定のアミノ酸残基で切断出来る切断方法の２種類以上を用いて、タンパク質（Ａ）を３０残基以下程度まで分解する。その後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて分離した後、プロテインシークエンサーにてアミノ酸配列を読み取る。得られたアミノ酸配列からペプチドマッピングして、タンパク質（Ａ）の全配列を決定する。その後、以下記載の測定式にてタンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対する全てのＧＡＧＡＧＳ配列（２）中のアミノ酸数の割合を算出する。
タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対する全てのＧＡＧＡＧＳ配列（２）中のアミノ酸数の割合（％）＝［｛ＧＡＧＡＧＳ配列（２）の数×６｝／｛タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸の数｝］×１００
タンパク質（Ａ）が、ポリペプチド鎖（Ｙ）、ポリペプチド鎖（Ｙ’）、ＧＡＧＡＧＳ配列（２）及びポリペプチド鎖（Ｓ）からなる群より選ばれる少なくとも１種のポリペプチド鎖を合計２個以上有する場合は、これらの間に、介在アミノ酸配列（Ｚ）を有していてもいい。介在アミノ酸配列（Ｚ）は、アミノ酸が１個又は２個以上結合したペプチド配列であって、ＧＡＧＡＧＳ配列（２）、アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）ではないペプチド配列である。介在アミノ酸配列（Ｚ）を構成するアミノ酸の数は、生体適合性及びゲル化効率の観点から、１～３０個が好ましく、更に好ましくは１～１５個、特に好ましくは１～１０個である。介在アミノ酸配列（Ｚ）として、具体的には、配列番号１１に示されるアミノ酸配列であるＶＡＡＧＹ配列（１１）、配列番号１２に示されるアミノ酸配列であるＧＡＡＧＹ配列（１２）及びＬＧＰ配列等が挙げられる。
タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対する全ての介在アミノ酸配列（Ｚ）中のアミノ酸数の割合［Σ｛（介在アミノ酸配列（Ｚ）中のアミノ酸の数）×（介在アミノ酸配列（Ｚ）の数）｝／｛タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数｝×１００］は、生体適合性及びゲル化効率の観点から、０～２５％が好ましく、更に好ましくは０～２２．５％であり、特に好ましくは０．０１～１５％である。
タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対する全ての介在アミノ酸配列（Ｚ）中のアミノ酸数の割合［Σ｛（介在アミノ酸配列（Ｚ）中のアミノ酸の数）×（介在アミノ酸配列（Ｚ）の数）｝／｛タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数｝×１００］は、生体適合性及びゲル化効率の観点から、０～２５％が好ましく、更に好ましくは０～２２．５％であり、特に好ましくは０．０１～１５％である。
タンパク質（Ａ）は、生体適合性及びゲル化効率の観点から、ＧＡＧＡＧＳ配列（２）、アミノ酸配列（Ｘ）、アミノ酸配列（Ｘ’）及び介在アミノ酸配列（Ｚ）以外にも、末端に末端アミノ酸配列（Ｔ）を有していてもよい。なお、末端アミノ酸配列（Ｔ）は、タンパク質（Ａ）の片末端にあってもよく、両末端にあってもよい。
なお、末端アミノ酸配列（Ｔ）には、後述の精製タグは含まれない。
タンパク質（Ａ）の末端の構造としては、ポリペプチド鎖（Ｙ）に末端アミノ酸配列（Ｔ）が結合した構造であることが好ましい。末端アミノ酸配列（Ｔ）は、アミノ酸が１個又は２個以上結合したペプチド配列であって、ＧＡＧＡＧＳ配列（２）、アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）ではないペプチド配列である。末端アミノ酸配列（Ｔ）を構成するアミノ酸の数は、生体適合性及びゲル化効率の観点から、１～１００個が好ましく、更に好ましくは１～５０個、特に好ましくは１～４０個である。末端アミノ酸配列（Ｔ）として、具体的には、配列番号１３に示されるアミノ酸配列であるＭＤＰＶＶＬＱＲＲＤＷＥＮＰＧＶＴＱＬＮＲＬＡＡＨＰＰＦＡＳＤＰＭ配列（１３）等が挙げられる。
なお、末端アミノ酸配列（Ｔ）には、後述の精製タグは含まれない。
タンパク質（Ａ）の末端の構造としては、ポリペプチド鎖（Ｙ）に末端アミノ酸配列（Ｔ）が結合した構造であることが好ましい。末端アミノ酸配列（Ｔ）は、アミノ酸が１個又は２個以上結合したペプチド配列であって、ＧＡＧＡＧＳ配列（２）、アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）ではないペプチド配列である。末端アミノ酸配列（Ｔ）を構成するアミノ酸の数は、生体適合性及びゲル化効率の観点から、１～１００個が好ましく、更に好ましくは１～５０個、特に好ましくは１～４０個である。末端アミノ酸配列（Ｔ）として、具体的には、配列番号１３に示されるアミノ酸配列であるＭＤＰＶＶＬＱＲＲＤＷＥＮＰＧＶＴＱＬＮＲＬＡＡＨＰＰＦＡＳＤＰＭ配列（１３）等が挙げられる。
タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対する末端アミノ酸配列（Ｔ）のアミノ酸数の割合は、生体適合性及びゲル化効率の観点から、０～２５％が好ましく、更に好ましくは０～２２．５％であり、特に好ましくは０．０１～１５％である。
タンパク質（Ａ）は、後述の通り、生物工学的手法により細菌を用いて製造することがある。このような場合、発現させたタンパク質（Ａ）の精製又は検出を容易にするために、タンパク質（Ａ）は末端アミノ酸配列（Ｔ）の他に、Ｎ又はＣ末端に特殊なアミノ酸配列を有するタンパク質又はペプチド（以下これらを「精製タグ」と称する）を有してもいい。精製タグとしては、アフィニティー精製用のタグが利用される。そのような精製タグとしては、ポリヒスチジンからなる６×Ｈｉｓタグ、Ｖ５タグ、Ｘｐｒｅｓｓタグ、ＡＵ１タグ、Ｔ７タグ、ＶＳＶ－Ｇタグ、ＤＤＤＤＫタグ、Ｓタグ、ＣｒｕｚＴａｇ０９ＴＭ、ＣｒｕｚＴａｇ２２ＴＭ、ＣｒｕｚＴａｇ４１ＴＭ、Ｇｌｕ－Ｇｌｕタグ、Ｈａ．１１タグ及びＫＴ３タグ等がある。
以下に、各精製タグ（ｉ）とそのタグを認識結合するリガンド（ｉｉ）との組み合わせの一例を示す。
（ｉ－１）グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＴＳ） （ｉｉ－１）グルタチオン
（ｉ－２）マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ） （ｉｉ－２）アミロース
（ｉ－３）ＨＱタグ （ｉｉ－３）ニッケル
（ｉ－４）Ｍｙｃタグ （ｉｉ－４）抗Ｍｙｃ抗体
（ｉ－５）ＨＡタグ （ｉｉ－５）抗ＨＡ抗体
（ｉ－６）ＦＬＡＧタグ （ｉｉ－６）抗ＦＬＡＧ抗体
（ｉ－７）６×Ｈｉｓタグ （ｉｉ－７）ニッケル又はコバルト
前記精製タグ配列の導入方法としては、発現用ベクターにおけるタンパク質（Ａ）をコードする核酸の５’又は３’末端に精製タグをコードする核酸を挿入する方法や市販の精製タグ導入用ベクターを使用する方法等が挙げられる。
以下に、各精製タグ（ｉ）とそのタグを認識結合するリガンド（ｉｉ）との組み合わせの一例を示す。
（ｉ－１）グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＴＳ） （ｉｉ－１）グルタチオン
（ｉ－２）マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ） （ｉｉ－２）アミロース
（ｉ－３）ＨＱタグ （ｉｉ－３）ニッケル
（ｉ－４）Ｍｙｃタグ （ｉｉ－４）抗Ｍｙｃ抗体
（ｉ－５）ＨＡタグ （ｉｉ－５）抗ＨＡ抗体
（ｉ－６）ＦＬＡＧタグ （ｉｉ－６）抗ＦＬＡＧ抗体
（ｉ－７）６×Ｈｉｓタグ （ｉｉ－７）ニッケル又はコバルト
前記精製タグ配列の導入方法としては、発現用ベクターにおけるタンパク質（Ａ）をコードする核酸の５’又は３’末端に精製タグをコードする核酸を挿入する方法や市販の精製タグ導入用ベクターを使用する方法等が挙げられる。
タンパク質（Ａ）において、タンパク質（Ａ）を構成する全ての介在アミノ酸配列（Ｚ）中のアミノ酸数、タンパク質（Ａ）を構成する全ての末端アミノ酸配列（Ｔ）中のアミノ酸数及び精製タグのアミノ酸数の合計数の割合は、生体適合性及びゲル化効率の観点から、タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数を基準として、０～２５％が好ましく、更に好ましくは０～２２．５％であり、特に好ましくは０．０１～１５％である。
タンパク質（Ａ）において、ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又はポリペプチド鎖（Ｙ’）、ＧＡＧＡＧＳ配列（２）並びにポリペプチド鎖（Ｓ）を含む場合、生体適合性及びゲル化効率の観点から、ポリペプチド鎖（Ｙ）又はポリペプチド鎖（Ｙ’）と、ＧＡＧＡＧＳ配列（２）又はポリペプチド鎖（Ｓ）とが交互に化学結合していることが好ましい。
ＧＡＧＡＧＳ配列（２）の個数と、アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数との比（ＧＡＧＡＧＳ配列（２）：アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計）は、生体適合性及びゲル化効率の観点から、１：０．５～１：２０である。
また、ゲル化効率を更に向上させる観点から、１：１．５～１：２０が好ましく、１：２～１：２０が更に好ましく、１：２～１：１５が特に好ましい。
また、ゲル化効率を更に向上させる観点から、１：１．５～１：２０が好ましく、１：２～１：２０が更に好ましく、１：２～１：１５が特に好ましい。
好ましいタンパク質（Ａ）の一部を以下に例示する。
（Ａ１）：アミノ酸配列（Ｘ）がＧＶＧＶＰ配列（４）であるタンパク質
（Ａ１１）：ＧＶＧＶＰ配列（４）が２～２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ１）中の１個のアミノ酸がリシン（Ｋ）で置換されたポリペプチド鎖（Ｙ’１）を有するタンパク質
（Ａ１１１）ポリペプチド鎖（Ｙ’１）とＧＡＧＡＧＳ配列（２）が２～２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）とを有するタンパク質
（Ａ１１１－１）：ＧＶＧＶＰ配列（４）が８個連続した配列番号１４に示されるアミノ酸配列である（ＧＶＧＶＰ）８配列（１４）のポリペプチド鎖（Ｙ１１）の１個のアミノ酸がリシン（Ｋ）で置換された配列番号６に示されるアミノ酸配列である（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）３配列（６）であるポリペプチド鎖（Ｙ’１１）と、ＧＡＧＡＧＳ配列（２）が２～２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）とを有するタンパク質
（Ａ１１１－１－１）：ＧＡＧＡＧＳ配列（２）が４個連続した配列番号５に示されるアミノ酸配列である（ＧＡＧＡＧＳ）４配列（５）であるポリペプチド鎖（Ｓ１－１）と（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）３配列（６）とを有するタンパク質
具体的には、下記タンパク質が含まれる。
（ｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）４配列（５）を１２個及び（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）３配列（６）を１３個有し、これらが交互に化学結合してなるものに、配列番号１５に示されるアミノ酸配列である（ＧＡＧＡＧＳ）２配列（１５）が化学結合した分子質量が約８０ｋＤａの配列番号１６に示されるアミノ酸配列である配列（１６）のタンパク質（ＳＥＬＰ８Ｋ）
（ｉｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）４配列（５）及び（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）３配列（６）をそれぞれ４個有し、これらが交互に化学結合してなる分子質量が約３０ｋＤａの配列番号２７に示されるアミノ酸配列である配列（２７）のタンパク質（ＳＥＬＰ８Ｋ４）
（Ａ１１１－１－２）：ＧＡＧＡＧＳ配列（２）が２個連続した配列番号１５に示されるアミノ酸配列である（ＧＡＧＡＧＳ）２配列（１５）であるポリペプチド鎖（Ｓ１－２）と（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）３配列（６）とを有するタンパク質
具体的には、下記タンパク質が含まれる。
（ｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）２配列（１５）及び（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）３配列（６）をそれぞれ１７個有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有する分子質量が約８２ｋＤａの配列番号１７に示されるアミノ酸配列である配列（１７）のタンパク質（ＳＥＬＰ０Ｋ）
（Ａ１）：アミノ酸配列（Ｘ）がＧＶＧＶＰ配列（４）であるタンパク質
（Ａ１１）：ＧＶＧＶＰ配列（４）が２～２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ１）中の１個のアミノ酸がリシン（Ｋ）で置換されたポリペプチド鎖（Ｙ’１）を有するタンパク質
（Ａ１１１）ポリペプチド鎖（Ｙ’１）とＧＡＧＡＧＳ配列（２）が２～２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）とを有するタンパク質
（Ａ１１１－１）：ＧＶＧＶＰ配列（４）が８個連続した配列番号１４に示されるアミノ酸配列である（ＧＶＧＶＰ）８配列（１４）のポリペプチド鎖（Ｙ１１）の１個のアミノ酸がリシン（Ｋ）で置換された配列番号６に示されるアミノ酸配列である（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）３配列（６）であるポリペプチド鎖（Ｙ’１１）と、ＧＡＧＡＧＳ配列（２）が２～２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）とを有するタンパク質
（Ａ１１１－１－１）：ＧＡＧＡＧＳ配列（２）が４個連続した配列番号５に示されるアミノ酸配列である（ＧＡＧＡＧＳ）４配列（５）であるポリペプチド鎖（Ｓ１－１）と（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）３配列（６）とを有するタンパク質
具体的には、下記タンパク質が含まれる。
（ｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）４配列（５）を１２個及び（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）３配列（６）を１３個有し、これらが交互に化学結合してなるものに、配列番号１５に示されるアミノ酸配列である（ＧＡＧＡＧＳ）２配列（１５）が化学結合した分子質量が約８０ｋＤａの配列番号１６に示されるアミノ酸配列である配列（１６）のタンパク質（ＳＥＬＰ８Ｋ）
（ｉｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）４配列（５）及び（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）３配列（６）をそれぞれ４個有し、これらが交互に化学結合してなる分子質量が約３０ｋＤａの配列番号２７に示されるアミノ酸配列である配列（２７）のタンパク質（ＳＥＬＰ８Ｋ４）
（Ａ１１１－１－２）：ＧＡＧＡＧＳ配列（２）が２個連続した配列番号１５に示されるアミノ酸配列である（ＧＡＧＡＧＳ）２配列（１５）であるポリペプチド鎖（Ｓ１－２）と（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）３配列（６）とを有するタンパク質
具体的には、下記タンパク質が含まれる。
（ｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）２配列（１５）及び（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）３配列（６）をそれぞれ１７個有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有する分子質量が約８２ｋＤａの配列番号１７に示されるアミノ酸配列である配列（１７）のタンパク質（ＳＥＬＰ０Ｋ）
（Ａ１１１－２）：ＧＶＧＶＰ配列（４）が１２個連続したポリペプチド鎖の１個のアミノ酸がリシン（Ｋ）で置換された配列番号１８に示されるアミノ酸配列である（ＧＶＧＶＰ）６ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）５配列（１８）（Ｙ’１２）と、ＧＡＧＡＧＳ配列（２）が２～２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）を有するタンパク質
（Ａ１１１－２－１）：ＧＡＧＡＧＳ配列（２）が４個連続した配列番号１９に示されるアミノ酸配列である（ＧＡＧＡＧＳ）４配列（１９）と（ＧＶＧＶＰ）６ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）５配列（１８）とを有するタンパク質
具体的には、下記タンパク質が含まれる。
（ｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）４配列（１９）を１２個及び（ＧＶＧＶＰ）６ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）５配列（１８）を１３個有し、これらが交互に化学結合してなるものに、（ＧＡＧＡＧＳ）２配列（１５）が化学結合した分子質量が約１０５ｋＤａの配列番号２０に示されるアミノ酸配列である配列（２０）のタンパク質
（Ａ１１１－２－１）：ＧＡＧＡＧＳ配列（２）が４個連続した配列番号１９に示されるアミノ酸配列である（ＧＡＧＡＧＳ）４配列（１９）と（ＧＶＧＶＰ）６ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）５配列（１８）とを有するタンパク質
具体的には、下記タンパク質が含まれる。
（ｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）４配列（１９）を１２個及び（ＧＶＧＶＰ）６ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）５配列（１８）を１３個有し、これらが交互に化学結合してなるものに、（ＧＡＧＡＧＳ）２配列（１５）が化学結合した分子質量が約１０５ｋＤａの配列番号２０に示されるアミノ酸配列である配列（２０）のタンパク質
（Ａ２）：アミノ酸配列（Ｘ）がＶＰＧＶＧ配列（１）であるタンパク質
（Ａ２１）：ＶＰＧＶＧ配列（１）が２～２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ２）とＧＡＧＡＧＳ配列（２）とを有するタンパク質
具体的には、下記タンパク質が含まれる。
（ｉ）ＧＡＧＡＧＳ配列（２）、配列番号２４に示されるアミノ酸配列である（ＶＰＧＶＧ）４配列（２４）及び配列番号２５に示されるアミノ酸配列である（ＶＰＧＶＧ）８配列（２５）をそれぞれ４０個有し、これらが（ＶＰＧＶＧ）４配列（２４）、ＧＡＧＡＧＳ配列（２）、（ＶＰＧＶＧ）８配列（２５）の順に結合したブロックが４０個化学結合してなる構造を有する分子質量約２００ｋＤａの配列番号２６に示されるアミノ酸配列である配列（２６）のタンパク質（ＥＬＰ１．１）
（Ａ２１）：ＶＰＧＶＧ配列（１）が２～２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ２）とＧＡＧＡＧＳ配列（２）とを有するタンパク質
具体的には、下記タンパク質が含まれる。
（ｉ）ＧＡＧＡＧＳ配列（２）、配列番号２４に示されるアミノ酸配列である（ＶＰＧＶＧ）４配列（２４）及び配列番号２５に示されるアミノ酸配列である（ＶＰＧＶＧ）８配列（２５）をそれぞれ４０個有し、これらが（ＶＰＧＶＧ）４配列（２４）、ＧＡＧＡＧＳ配列（２）、（ＶＰＧＶＧ）８配列（２５）の順に結合したブロックが４０個化学結合してなる構造を有する分子質量約２００ｋＤａの配列番号２６に示されるアミノ酸配列である配列（２６）のタンパク質（ＥＬＰ１．１）
（Ａ３）：ＧＶＧＶＰ配列（４）が２～２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ１）とＧＡＧＡＧＳ配列（２）が２～２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）とを有するタンパク質
具体的には、下記タンパク質が含まれる。
（ｉ）配列番号２１に示されるアミノ酸配列である（ＧＡＧＡＧＳ）８配列（２１）及び配列番号２２に示されるアミノ酸配列である（ＧＶＧＶＰ）４０配列（２２）をそれぞれ５個有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有する分子質量が約１１０ｋＤａの配列番号２３に示されるアミノ酸配列である配列（２３）のタンパク質（ＳＥＬＰ６．１）
（ｉｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）４配列（５）、及び、ＧＶＧＶＰ配列（４）が２個連続した配列を、それぞれ１５個有する分子量が４０ｋＤａの配列番号２９に示されるアミノ酸配列である配列（２９）のタンパク質（ＳＥＬＰ３．１）
（ｉｉｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）８配列（２１）及び（ＧＶＧＶＰ）８配列（１４）をそれぞれ１２個有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有する分子質量が約９０ｋＤａの配列（２８）のタンパク質（ＳＥＬＰ３）
具体的には、下記タンパク質が含まれる。
（ｉ）配列番号２１に示されるアミノ酸配列である（ＧＡＧＡＧＳ）８配列（２１）及び配列番号２２に示されるアミノ酸配列である（ＧＶＧＶＰ）４０配列（２２）をそれぞれ５個有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有する分子質量が約１１０ｋＤａの配列番号２３に示されるアミノ酸配列である配列（２３）のタンパク質（ＳＥＬＰ６．１）
（ｉｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）４配列（５）、及び、ＧＶＧＶＰ配列（４）が２個連続した配列を、それぞれ１５個有する分子量が４０ｋＤａの配列番号２９に示されるアミノ酸配列である配列（２９）のタンパク質（ＳＥＬＰ３．１）
（ｉｉｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）８配列（２１）及び（ＧＶＧＶＰ）８配列（１４）をそれぞれ１２個有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有する分子質量が約９０ｋＤａの配列（２８）のタンパク質（ＳＥＬＰ３）
前記のタンパク質（Ａ）は、前記のタンパク質（Ａ１１１）［好ましいのは配列（１６）のタンパク質（ＳＥＬＰ８Ｋ）、配列（１７）のタンパク質（ＳＥＬＰ０Ｋ）、配列（２０）のタンパク質、配列（２７）のタンパク質（ＳＥＬＰ８Ｋ４）］、前記のタンパク質（Ａ２１）［好ましいのは配列（２６）のタンパク質（ＥＬＰ１．１）］、及び、前記のタンパク質（Ａ３）［好ましいのは配列（２３）のタンパク質（ＳＥＬＰ６．１）、配列（２９）のタンパク質（ＳＥＬＰ３．１）、配列（２８）のタンパク質（ＳＥＬＰ３）］からなる群から選ばれる少なくとも１種のタンパク質であることが好ましく、配列（１６）のタンパク質（ＳＥＬＰ８Ｋ）、配列（１７）のタンパク質（ＳＥＬＰ０Ｋ）、配列（２６）のタンパク質（ＥＬＰ１．１）、配列（２３）のタンパク質（ＳＥＬＰ６．１）、配列（２９）のタンパク質（ＳＥＬＰ３．１）及び配列（２８）のタンパク質（ＳＥＬＰ３）からなる群から選ばれる少なくとも１種のタンパク質であることが更に好ましい。
また、タンパク質（Ａ）は、配列（１６）のタンパク質（ＳＥＬＰ８Ｋ）、配列（１７）のタンパク質（ＳＥＬＰ０Ｋ）、配列（２０）のタンパク質、配列（２７）のタンパク質（ＳＥＬＰ８Ｋ４）、配列（２６）のタンパク質（ＥＬＰ１．１）、配列（２３）のタンパク質（ＳＥＬＰ６．１）、配列（２９）のタンパク質（ＳＥＬＰ３．１）又は配列（２８）のタンパク質（ＳＥＬＰ３）のアミノ酸配列と相同性が７０％以上であるアミノ酸配列を有するタンパク質であっても良い。
また、この相同性は、８０％以上であることが好ましく、９０％以上であることがより好ましい。
また、タンパク質（Ａ）は、配列（１６）のタンパク質（ＳＥＬＰ８Ｋ）、配列（１７）のタンパク質（ＳＥＬＰ０Ｋ）、配列（２０）のタンパク質、配列（２７）のタンパク質（ＳＥＬＰ８Ｋ４）、配列（２６）のタンパク質（ＥＬＰ１．１）、配列（２３）のタンパク質（ＳＥＬＰ６．１）、配列（２９）のタンパク質（ＳＥＬＰ３．１）又は配列（２８）のタンパク質（ＳＥＬＰ３）のアミノ酸配列と相同性が７０％以上であるアミノ酸配列を有するタンパク質であっても良い。
また、この相同性は、８０％以上であることが好ましく、９０％以上であることがより好ましい。
本発明におけるタンパク質（Ａ）は、円二色性スペクトル法により求められるタンパク質（Ａ）中のβターン構造とランダムコイル構造との合計割合が、水溶性及びゲル化効率の観点から、６０～８５％であることが好ましく、更に好ましくは６５～８０％であり、特に好ましくは７０～７５％である。
タンパク質の配列が同じでも、タンパク質の作製方法、タンパク質の精製方法、タンパク質を溶解させる溶媒のｐＨ及び溶媒の極性等により、タンパク質中のβターン構造とランダムコイル構造との合計割合は異なる。
タンパク質の配列が同じでも、タンパク質の作製方法、タンパク質の精製方法、タンパク質を溶解させる溶媒のｐＨ及び溶媒の極性等により、タンパク質中のβターン構造とランダムコイル構造との合計割合は異なる。
上記割合を制御する方法としては特に限定されないが、以下の方法により増加又は低下させることができる。
上記割合を増加させる場合には、例えば、タンパク質（Ａ）を例えば、単独のタンパク質（Ａ）を過剰量の緩衝液で希釈してからリフォールディングさせる希釈リフォールディング法（大希釈法）が挙げられる。
また、上記割合を低下させる場合には、例えば、タンパク質（Ａ）を変性剤や熱等により変性させる方法が挙げられる。
タンパク質（Ａ）中のβターン構造とランダムコイル構造との合計割合は、下記測定法によって求める。
上記割合を増加させる場合には、例えば、タンパク質（Ａ）を例えば、単独のタンパク質（Ａ）を過剰量の緩衝液で希釈してからリフォールディングさせる希釈リフォールディング法（大希釈法）が挙げられる。
また、上記割合を低下させる場合には、例えば、タンパク質（Ａ）を変性剤や熱等により変性させる方法が挙げられる。
タンパク質（Ａ）中のβターン構造とランダムコイル構造との合計割合は、下記測定法によって求める。
＜タンパク質（Ａ）中のβターン構造とランダムコイル構造との合計の割合の測定方法＞
タンパク質を０．３ｍｇ／ｍｌとなるように脱イオン水（４℃）に溶解し、タンパク質の水溶液を作製する。作製したタンパク質の水溶液を円二色性スペクトル測定器（日本分光株式会社製、「Ｊ－８２０」）にて測定し（測定温度：４℃）、二次構造解析プログラム（ＪＷＳＳＥ型：日本分光株式会社製）にてβターン構造の割合とランダムコイル構造の割合とを算出し、これらの合計をβターン構造とランダムコイル構造との合計の割合とする。
タンパク質を０．３ｍｇ／ｍｌとなるように脱イオン水（４℃）に溶解し、タンパク質の水溶液を作製する。作製したタンパク質の水溶液を円二色性スペクトル測定器（日本分光株式会社製、「Ｊ－８２０」）にて測定し（測定温度：４℃）、二次構造解析プログラム（ＪＷＳＳＥ型：日本分光株式会社製）にてβターン構造の割合とランダムコイル構造の割合とを算出し、これらの合計をβターン構造とランダムコイル構造との合計の割合とする。
タンパク質（Ａ）のＳＤＳ－ＰＡＧＥ（ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動）法による分子質量は、生体適合性及びゲル化効率の観点から、１５～２００ｋＤａが好ましく、更に好ましくは３０～１５０ｋＤａであり、特に好ましくは７０～１２０ｋＤａである。
本発明において、タンパク質（Ａ）の疎水性度は、水溶性、生体適合性及びゲル化効率の観点から、０．２～１．２であることが好ましく、更に好ましくは０．４～１．０であり、特に好ましくは０．４２～０．８０である。
タンパク質（Ａ）の疎水性度は、タンパク質（Ａ）分子の疎水性の度合いを示すものであり、タンパク質（Ａ）分子を構成するそれぞれのアミノ酸残基の数（Ｍα）、それぞれのアミノ酸の疎水性度（Ｎα）及びタンパク質（Ａ）１分子中のアミノ酸残基の総数（ＭＴ）を、下記数式に当てはめることにより算出することができる。なお、それぞれのアミノ酸の疎水性度は、非特許文献（アルバート・Ｌ．レーニンジャー、デビット・Ｌ．ネルソン、レ－ニンジャ－の新生化学 上、廣川書店、２０１０年９月、ｐ．３４６－３４７）に記載されている下記の数値を用いる。
疎水性度＝Σ（Ｍα×Ｎα）／（ＭＴ）
Ｍα：人工タンパク質（Ａ）１分子中のそれぞれのアミノ酸残基の数
Ｎα：各アミノ酸の疎水性度
ＭＴ：人工タンパク質（Ａ）１分子中のアミノ酸残基の総数
Ａ（アラニン）：１．８
Ｒ（アルギニン）：－４．５
Ｎ（アスパラギン）：－３．５
Ｄ（アスパラギン酸）：－３．５
Ｃ（システイン）：２．５
Ｑ（グルタミン）：－３．５
Ｅ（グルタミン酸）：－３．５
Ｇ（グリシン）：－０．４
Ｈ（ヒスチジン）：－３．２
Ｉ（イソロイシン）：４．５
Ｌ（ロイシン）：３．８
Ｋ（リシン）：－３．９
Ｍ（メチオニン）：１．９
Ｆ（フェニルアラニン）：２．８
Ｐ（プロリン）：－１．６
Ｓ（セリン）：－０．８
Ｔ（トレオニン）：－０．７
Ｗ（トリプトファン）：－０．９
Ｙ（チロシン）：－１．３
Ｖ（バリン）：４．２
例えば、人工タンパク質（Ａ）が（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）３配列（６）である場合、人工タンパク質（Ａ）の疎水性度＝｛１６（Ｇの数）×（－０．４）＋１５（Ｖの数）×４．２＋８（Ｐの数）×（－１．６）＋１（Ｋの数）×（－３．９）｝／４０（アミノ酸残基の総数）＝１．０である。
タンパク質（Ａ）の疎水性度は、タンパク質（Ａ）分子の疎水性の度合いを示すものであり、タンパク質（Ａ）分子を構成するそれぞれのアミノ酸残基の数（Ｍα）、それぞれのアミノ酸の疎水性度（Ｎα）及びタンパク質（Ａ）１分子中のアミノ酸残基の総数（ＭＴ）を、下記数式に当てはめることにより算出することができる。なお、それぞれのアミノ酸の疎水性度は、非特許文献（アルバート・Ｌ．レーニンジャー、デビット・Ｌ．ネルソン、レ－ニンジャ－の新生化学 上、廣川書店、２０１０年９月、ｐ．３４６－３４７）に記載されている下記の数値を用いる。
疎水性度＝Σ（Ｍα×Ｎα）／（ＭＴ）
Ｍα：人工タンパク質（Ａ）１分子中のそれぞれのアミノ酸残基の数
Ｎα：各アミノ酸の疎水性度
ＭＴ：人工タンパク質（Ａ）１分子中のアミノ酸残基の総数
Ａ（アラニン）：１．８
Ｒ（アルギニン）：－４．５
Ｎ（アスパラギン）：－３．５
Ｄ（アスパラギン酸）：－３．５
Ｃ（システイン）：２．５
Ｑ（グルタミン）：－３．５
Ｅ（グルタミン酸）：－３．５
Ｇ（グリシン）：－０．４
Ｈ（ヒスチジン）：－３．２
Ｉ（イソロイシン）：４．５
Ｌ（ロイシン）：３．８
Ｋ（リシン）：－３．９
Ｍ（メチオニン）：１．９
Ｆ（フェニルアラニン）：２．８
Ｐ（プロリン）：－１．６
Ｓ（セリン）：－０．８
Ｔ（トレオニン）：－０．７
Ｗ（トリプトファン）：－０．９
Ｙ（チロシン）：－１．３
Ｖ（バリン）：４．２
例えば、人工タンパク質（Ａ）が（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）３配列（６）である場合、人工タンパク質（Ａ）の疎水性度＝｛１６（Ｇの数）×（－０．４）＋１５（Ｖの数）×４．２＋８（Ｐの数）×（－１．６）＋１（Ｋの数）×（－３．９）｝／４０（アミノ酸残基の総数）＝１．０である。
本発明のゲル化物は、上記のようなアミノ酸配列からなるタンパク質（Ａ）に由来することから、生体内の酵素により分解されるため、生分解性に優れている。
本発明において、タンパク質（Ａ）は、天然物からの抽出、有機合成法（酵素法、固相合成法及び液相合成法等）及び遺伝子組み換え法等によって得られる。有機合成法に関しては、「生化学実験講座１、タンパク質の化学ＩＶ（１９８１年７月１日、日本生化学会編、株式会社東京化学同人発行）」に記載されている方法、及び、「続生化学実験講座２、タンパク質の化学（下）（昭和６２年５月２０日、日本生化学会編、株式会社東京化学同人発行）」に記載されている方法等が適用できる。遺伝子組み換え法に関しては、特許第３３３８４４１号公報に記載されている方法等が適用できる。天然物からの抽出、有機合成法及び遺伝子組み換え法はともに、タンパク質（Ａ）を得られるが、アミノ酸配列を簡便に変更でき、安価に大量生産できるという観点等から、遺伝子組み換え法が好ましい。
本発明のタンパク質（Ａ）の製造方法は、前記の通り、工程（１）を経てタンパク質（Ａ）のゲル化物を得る製造方法である。
前記の工程（１）は、前記のタンパク質（Ａ）、水及び炭素数１～４のアルコールを含有する混合物の温度を０～８０℃とする工程である。
炭素数１～４のアルコールとしては、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、１－ブタノール、２－ブタノール及びｔｅｒｔ－ブチルアルコール等が挙げられる。
０℃未満であると、ゲル化速度が遅くなる傾向があり、８０℃を超えるとタンパク質の機能が低下するおそれがある。
上記の工程において、混合物の温度は、タンパク質の熱安定性及びハンドリング性の観点から、１～８０℃が好ましく、更に好ましくは１～６０℃、特に好ましくは２５～５０℃、最も好ましくは３０～４０℃である。
前記の工程（１）において、前記のタンパク質（Ａ）、水及び炭素数１～４のアルコールの混合物を得る際、混合の順番は任意であるが、前記のタンパク質（Ａ）を水に溶解させた後、前記の炭素数１～４のアルコールを混合して、混合物を得ることが好ましい。
前記の工程（１）は断続的に行っても良く、工程（１）と工程（１）との間に、水及び炭素数１～４のアルコールを含有する混合物の温度を０℃未満又は８０℃超とする工程（２）を実施しても良い。
前記の工程（１）は、前記のタンパク質（Ａ）、水及び炭素数１～４のアルコールを含有する混合物の温度を０～８０℃とする工程である。
炭素数１～４のアルコールとしては、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、１－ブタノール、２－ブタノール及びｔｅｒｔ－ブチルアルコール等が挙げられる。
０℃未満であると、ゲル化速度が遅くなる傾向があり、８０℃を超えるとタンパク質の機能が低下するおそれがある。
上記の工程において、混合物の温度は、タンパク質の熱安定性及びハンドリング性の観点から、１～８０℃が好ましく、更に好ましくは１～６０℃、特に好ましくは２５～５０℃、最も好ましくは３０～４０℃である。
前記の工程（１）において、前記のタンパク質（Ａ）、水及び炭素数１～４のアルコールの混合物を得る際、混合の順番は任意であるが、前記のタンパク質（Ａ）を水に溶解させた後、前記の炭素数１～４のアルコールを混合して、混合物を得ることが好ましい。
前記の工程（１）は断続的に行っても良く、工程（１）と工程（１）との間に、水及び炭素数１～４のアルコールを含有する混合物の温度を０℃未満又は８０℃超とする工程（２）を実施しても良い。
本発明の製造方法において、工程（１）の時間（混合物を０～８０℃にする時間の合計）は、０～１８０分であることが好ましい。なお、工程（１）の時間が０分であることは、０．５分（３０秒）未満であることを意味する。また、工程（１）の時間が０分であることは、タンパク質（Ａ）、水及び炭素数１～４のアルコールを混合して、０～８０℃の混合物とした瞬間に、タンパク質（Ａ）がゲル化する態様を含む。
また、工程（１）を複数回実施する場合、工程（１）の時間の合計は、０～１８０分であることが好ましい。
また、前記の工程（２）の時間の合計は、０～６０分であることが好ましく、更に好ましくは０～３０分であり、特に好ましくは０分である。
また、工程（１）を複数回実施する場合、工程（１）の時間の合計は、０～１８０分であることが好ましい。
また、前記の工程（２）の時間の合計は、０～６０分であることが好ましく、更に好ましくは０～３０分であり、特に好ましくは０分である。
本発明の工程（１）は、ゲル化した時点（流動性を失った時点）で終了したとみなしてもよい。
また、本発明における工程（１）の終了に伴い、本発明の製造方法も終了した後に、ゲル化物を８０℃以下（好ましくは－８０～４０℃）で保存しても良い。
また、本発明における工程（１）の終了に伴い、本発明の製造方法も終了した後に、ゲル化物を８０℃以下（好ましくは－８０～４０℃）で保存しても良い。
前記の混合物は、タンパク質（Ａ）、水及び炭素数１～４のアルコール以外に、無機塩及びリン酸（塩）を含んでいても良い。
前記の無機塩として、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、硫酸カルシウム、硫酸マグネシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素カルシウム及び炭酸水素マグネシウム等が挙げられる。なお、本願においてリン酸（塩）は無機塩に含まないものとする。
本願において、リン酸（塩）は、リン酸及び／又はリン酸塩を意味する。
リン酸（塩）としては、リン酸及びリン酸塩が挙げられる。
塩としては、アルカリ金属塩及びアルカリ土類金属塩が挙げられ、具体的には、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩及びマグネシウム塩等が挙げられる。
前記の無機塩として、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、硫酸カルシウム、硫酸マグネシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素カルシウム及び炭酸水素マグネシウム等が挙げられる。なお、本願においてリン酸（塩）は無機塩に含まないものとする。
本願において、リン酸（塩）は、リン酸及び／又はリン酸塩を意味する。
リン酸（塩）としては、リン酸及びリン酸塩が挙げられる。
塩としては、アルカリ金属塩及びアルカリ土類金属塩が挙げられ、具体的には、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩及びマグネシウム塩等が挙げられる。
前記の混合物が含有するタンパク質（Ａ）の重量割合は、生体適合性及びゲル化効率の観点から、混合物の重量を基準として５～４５重量％であることが好ましく、５～４２重量％であることが更に好ましい。
前記の混合物が含有する炭素数１～４のアルコールの重量割合は、生体適合性及びゲル化効率の観点から、混合物の重量を基準として０．１～５５重量％であることが好ましく、０．５～５３重量％であることが更に好ましい。
前記の混合物が含有する水の重量割合は、ゲル化効率の観点から、混合物の重量を基準として１～９０重量％であることが好ましく、５～９０重量％であることが更に好ましい。
前記の混合物が含有する炭素数１～４のアルコールの重量割合は、生体適合性及びゲル化効率の観点から、混合物の重量を基準として０．１～５５重量％であることが好ましく、０．５～５３重量％であることが更に好ましい。
前記の混合物が含有する水の重量割合は、ゲル化効率の観点から、混合物の重量を基準として１～９０重量％であることが好ましく、５～９０重量％であることが更に好ましい。
本発明で得られるゲル化物は、組織再生用材料として用いることができるため、有用である。
本発明で得られるゲル化物を患部に適用する方法としては、前記のタンパク質（Ａ）、水及び炭素数１～４のアルコールを含有する混合物を患部に注入し［国際公開第２０１２／１１１４３８号におけるタンパク質（Ａ）水溶液の患部への注入と同様の手法で注入］、混合物の温度を患部における体温にすることで、前記の工程（１）を患部において実施しゲル化物を患部で生成させる方法、及び、体外で前記の工程（１）を実施して得たゲル化物を患部に適用する方法等が挙げられる。
本発明で得られるゲル化物を患部に適用する方法としては、前記のタンパク質（Ａ）、水及び炭素数１～４のアルコールを含有する混合物を患部に注入し［国際公開第２０１２／１１１４３８号におけるタンパク質（Ａ）水溶液の患部への注入と同様の手法で注入］、混合物の温度を患部における体温にすることで、前記の工程（１）を患部において実施しゲル化物を患部で生成させる方法、及び、体外で前記の工程（１）を実施して得たゲル化物を患部に適用する方法等が挙げられる。
以下本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
尚、以下において部は重量部を表す。
尚、以下において部は重量部を表す。
＜製造例１：タンパク質（Ａ）の製造＞
［ＳＥＬＰ８Ｋの作製］
○ＳＥＬＰ８Ｋ生産株の作製
特許第４０８８３４１号公報の実施例記載の方法に準じて、ＳＥＬＰ８ＫをコードしたプラスミドｐＰＴＳ０３４５を作製した。
作製したプラスミドを大腸菌にトランスフォーメーションし、ＳＥＬＰ８Ｋ生産株を得た。以下、このＳＥＬＰ８Ｋ生産株を用いて、ポリペプチド（Ａ）の一種である（ＧＡＧＡＧＳ）４配列（５）を１２個及び（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）３配列（６）を１３個有し、これらが交互に化学結合した構造を有する分子質量が約８０ｋＤａの配列（１６）のポリペプチドであるＳＥＬＰ８Ｋ（ポリペプチド（Ａ１））を生産する方法を示す。
［ＳＥＬＰ８Ｋの作製］
○ＳＥＬＰ８Ｋ生産株の作製
特許第４０８８３４１号公報の実施例記載の方法に準じて、ＳＥＬＰ８ＫをコードしたプラスミドｐＰＴＳ０３４５を作製した。
作製したプラスミドを大腸菌にトランスフォーメーションし、ＳＥＬＰ８Ｋ生産株を得た。以下、このＳＥＬＰ８Ｋ生産株を用いて、ポリペプチド（Ａ）の一種である（ＧＡＧＡＧＳ）４配列（５）を１２個及び（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）３配列（６）を１３個有し、これらが交互に化学結合した構造を有する分子質量が約８０ｋＤａの配列（１６）のポリペプチドであるＳＥＬＰ８Ｋ（ポリペプチド（Ａ１））を生産する方法を示す。
○ＳＥＬＰ８Ｋ生産株の培養
３０℃で生育させたＳＥＬＰ８Ｋ生産株の一夜培養液を使用して、２５０ｍｌフラスコ中のＬＢ培地５０ｍｌに接種した。該ＬＢ培地に、カナマイシンを最終濃度５０μｇ／ｍｌとなるように加え培養液とし、該培養液を３０℃で攪拌しながら（２００ｒｐｍ）インキュベートした。培養液の濁度がＯＤ６００＝０．８（吸光度計ＵＶ１７００：島津製作所製を使用）となった時に、該培養液４０ｍｌを、４２℃に温められた別のフラスコに移し、４２℃で約２時間培養した。その後、培養した培養液を氷上で冷却し、培養液の濁度ＯＤ６００を測定し、遠心分離にて大腸菌を集菌した。
３０℃で生育させたＳＥＬＰ８Ｋ生産株の一夜培養液を使用して、２５０ｍｌフラスコ中のＬＢ培地５０ｍｌに接種した。該ＬＢ培地に、カナマイシンを最終濃度５０μｇ／ｍｌとなるように加え培養液とし、該培養液を３０℃で攪拌しながら（２００ｒｐｍ）インキュベートした。培養液の濁度がＯＤ６００＝０．８（吸光度計ＵＶ１７００：島津製作所製を使用）となった時に、該培養液４０ｍｌを、４２℃に温められた別のフラスコに移し、４２℃で約２時間培養した。その後、培養した培養液を氷上で冷却し、培養液の濁度ＯＤ６００を測定し、遠心分離にて大腸菌を集菌した。
○ＳＥＬＰ８Ｋの精製
集菌した大腸菌を用い、下記工程１：菌体溶解、工程２：遠心分離による不溶性細片の除去、工程３：硫安沈殿、工程４：限外濾過、工程５：陰イオン交換クロマトグラフィー、工程６：限外濾過、工程７：凍結乾燥により大腸菌バイオマスからタンパク質を精製した。このようにして、分子質量が約８０ｋＤａの精製したＳＥＬＰ８Ｋ（ポリペプチド（Ａ１））を得た。
集菌した大腸菌を用い、下記工程１：菌体溶解、工程２：遠心分離による不溶性細片の除去、工程３：硫安沈殿、工程４：限外濾過、工程５：陰イオン交換クロマトグラフィー、工程６：限外濾過、工程７：凍結乾燥により大腸菌バイオマスからタンパク質を精製した。このようにして、分子質量が約８０ｋＤａの精製したＳＥＬＰ８Ｋ（ポリペプチド（Ａ１））を得た。
工程１：菌体溶解
集菌した大腸菌１００ｇに対して、脱イオン水２００ｇを加えて、高圧ホモジナイザー（５５ＭＰａ）にて菌体溶解し、溶解した菌体を含む菌体溶解液を得た。その後、菌体溶解液を氷酢酸にてｐＨ４．０に調整した。
集菌した大腸菌１００ｇに対して、脱イオン水２００ｇを加えて、高圧ホモジナイザー（５５ＭＰａ）にて菌体溶解し、溶解した菌体を含む菌体溶解液を得た。その後、菌体溶解液を氷酢酸にてｐＨ４．０に調整した。
工程２：遠心分離による不溶性細片の除去
さらに菌体溶解液を遠心分離（６３００ｒｐｍ、４℃、３０分間）して、上清を回収した。
さらに菌体溶解液を遠心分離（６３００ｒｐｍ、４℃、３０分間）して、上清を回収した。
工程３：硫安沈殿
工程２で回収した上清に硫安濃度が２５重量％となるように飽和硫安溶液を投入した。その後、８～１２時間静置した後、遠心分離にて沈殿物を回収した。回収した沈殿物を脱イオン水に溶解した。次に、溶解した液に対して、硫安濃度が２５重量％となるように飽和硫安溶液を投入した。その後、８～１２時間静置した後、遠心分離にて沈殿物を回収した。回収した沈殿物を脱イオン水に溶解し、溶液を得た。
工程２で回収した上清に硫安濃度が２５重量％となるように飽和硫安溶液を投入した。その後、８～１２時間静置した後、遠心分離にて沈殿物を回収した。回収した沈殿物を脱イオン水に溶解した。次に、溶解した液に対して、硫安濃度が２５重量％となるように飽和硫安溶液を投入した。その後、８～１２時間静置した後、遠心分離にて沈殿物を回収した。回収した沈殿物を脱イオン水に溶解し、溶液を得た。
工程４：限外濾過
工程３で得た溶液を分子質量３０，０００カットの限外濾過装置（ホロファイバー：ＧＥヘルスケア製）に供した。工程３で得た溶液に対して、２０倍量の脱イオン水を用いて、限外濾過を実施し、限外濾過後のポリペプチド溶液を得た。
工程３で得た溶液を分子質量３０，０００カットの限外濾過装置（ホロファイバー：ＧＥヘルスケア製）に供した。工程３で得た溶液に対して、２０倍量の脱イオン水を用いて、限外濾過を実施し、限外濾過後のポリペプチド溶液を得た。
工程５：陰イオン交換クロマトグラフィー
ポリペプチドの濃度が２０ｇ／Ｌとなるように限外濾過後のポリペプチド溶液を、１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液に加え、その後、陰イオン交換カラムＨｉＰｒｅｐＳＰ ＸＬ１６／１０（ＧＥヘルスケア社製）をセットしたＡＫＴＡＰｒｉｍｅ（アマシャム社製）に供した。溶出液として５００ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液を用いて、溶出画分を回収した。
ポリペプチドの濃度が２０ｇ／Ｌとなるように限外濾過後のポリペプチド溶液を、１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液に加え、その後、陰イオン交換カラムＨｉＰｒｅｐＳＰ ＸＬ１６／１０（ＧＥヘルスケア社製）をセットしたＡＫＴＡＰｒｉｍｅ（アマシャム社製）に供した。溶出液として５００ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液を用いて、溶出画分を回収した。
工程６：限外濾過
工程５で得た溶出画分を上記「４：限外濾過」と同様にして処理し、限外濾過後のポリペプチド溶液を得た。
工程５で得た溶出画分を上記「４：限外濾過」と同様にして処理し、限外濾過後のポリペプチド溶液を得た。
工程７：凍結乾燥
ポリペプチド濃度が３ｇ／Ｌとなるように、工程６で得たポリペプチド溶液を脱イオン水で希釈し、水位が１０ｍｍ以下となるようにステンレス製のバットに入れた。その後、凍結乾燥機（日本テクノサービス社製）に入れて、－３０℃、２４時間かけて凍結させた。凍結後、真空度が５Ｐａ以下、－３０℃で、１１０時間かけて１次乾燥、真空度が５Ｐａ以下、３０℃で、４８時間かけて２次乾燥させ、ＳＥＬＰ８Ｋ（タンパク質（Ａ－１）、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法による分子質量：８０ｋＤａ）を得た。
ポリペプチド濃度が３ｇ／Ｌとなるように、工程６で得たポリペプチド溶液を脱イオン水で希釈し、水位が１０ｍｍ以下となるようにステンレス製のバットに入れた。その後、凍結乾燥機（日本テクノサービス社製）に入れて、－３０℃、２４時間かけて凍結させた。凍結後、真空度が５Ｐａ以下、－３０℃で、１１０時間かけて１次乾燥、真空度が５Ｐａ以下、３０℃で、４８時間かけて２次乾燥させ、ＳＥＬＰ８Ｋ（タンパク質（Ａ－１）、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法による分子質量：８０ｋＤａ）を得た。
○ＳＥＬＰ８Ｋ（Ａ－１）の同定
製造例Ａ－１に係るタンパク質（Ａ）を下記の手順で同定した。
ラビット抗ＳＥＬＰ８Ｋ抗体及びＣ末端配列の６×Ｈｉｓタグに対するラビット抗６×Ｈｉｓ抗体（Ｒｏｌａｎｄ社製）を用いたウエスタンブロット法により分析した。ウエスタンブロット法の手順は下記の通りとした。見かけ分子質量８０ｋＤａの位置に、各抗体に抗体反応性を示すバンドが見られた。
また、アミノ酸分析システム（Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ島津製作所製）を用いたアミノ酸組成分析より得られた製造例Ａ１に係るタンパク質（Ａ）のアミノ酸の組成比率（実測値）と、合成遺伝子配列から推測されるＳＥＬＰ８Ｋのアミノ酸の組成比率（理論値）を表１に示す。
これらから、製造例１に係るタンパク質（Ａ）はＧＶＧＶＰ配列（４）が８個連続したポリペプチド鎖（Ｙ）中のバリン（Ｖ）のうち１個がリシン（Ｋ）に置換された（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）３配列（６）のポリペプチド鎖（Ｙ’２）を１３個及びＧＡＧＡＧＳ配列（２）が４個連続した（ＧＡＧＡＧＳ）４配列（５）のポリペプチド鎖（Ｓ１－１）を１２個有し、これらが交互に化学結合してなる配列（１６）を有するタンパク質（ＳＥＬＰ８Ｋ）であることを確認した。
なお、タンパク質（Ａ－１）に含まれる前記のアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）を構成するアミノ酸の合計個数は、タンパク質（Ａ－１）の全アミノ酸数を基準として５２．９％であった。
また、前記タンパク質（Ａ－１）１分子中の、前記ＧＡＧＡＧＳ配列（２）の個数と、前記アミノ酸配列（Ｘ）及び前記アミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数との比（ＧＡＧＡＧＳ配列（２）：アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計）は、１：２．１であった。
製造例Ａ－１に係るタンパク質（Ａ）を下記の手順で同定した。
ラビット抗ＳＥＬＰ８Ｋ抗体及びＣ末端配列の６×Ｈｉｓタグに対するラビット抗６×Ｈｉｓ抗体（Ｒｏｌａｎｄ社製）を用いたウエスタンブロット法により分析した。ウエスタンブロット法の手順は下記の通りとした。見かけ分子質量８０ｋＤａの位置に、各抗体に抗体反応性を示すバンドが見られた。
また、アミノ酸分析システム（Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ島津製作所製）を用いたアミノ酸組成分析より得られた製造例Ａ１に係るタンパク質（Ａ）のアミノ酸の組成比率（実測値）と、合成遺伝子配列から推測されるＳＥＬＰ８Ｋのアミノ酸の組成比率（理論値）を表１に示す。
これらから、製造例１に係るタンパク質（Ａ）はＧＶＧＶＰ配列（４）が８個連続したポリペプチド鎖（Ｙ）中のバリン（Ｖ）のうち１個がリシン（Ｋ）に置換された（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）３配列（６）のポリペプチド鎖（Ｙ’２）を１３個及びＧＡＧＡＧＳ配列（２）が４個連続した（ＧＡＧＡＧＳ）４配列（５）のポリペプチド鎖（Ｓ１－１）を１２個有し、これらが交互に化学結合してなる配列（１６）を有するタンパク質（ＳＥＬＰ８Ｋ）であることを確認した。
なお、タンパク質（Ａ－１）に含まれる前記のアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）を構成するアミノ酸の合計個数は、タンパク質（Ａ－１）の全アミノ酸数を基準として５２．９％であった。
また、前記タンパク質（Ａ－１）１分子中の、前記ＧＡＧＡＧＳ配列（２）の個数と、前記アミノ酸配列（Ｘ）及び前記アミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数との比（ＧＡＧＡＧＳ配列（２）：アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計）は、１：２．１であった。
＜ウエスタンブロット法＞
ウエスタンブロット用サンプル２０μＬに３×ＳＤＳ処理バッファ［１５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ（ｐＨ６．８）、３００ｍＭ ジチオスレイトール、６重量％ ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、０．３重量％ ブロモフェノールブルー、及び３０重量％ グリセロールを含む］１０μＬを添加して９５℃で５分間加温し、泳動用試料を調製した。この泳動用試料１５μＬを用いてＳＤＳ－ＰＡＧＥを行った。泳動後のゲルをフッ化ポリビニリデンメンブレンにトランスファー（以下、「メンブレン」と略記）し、これをブロッキングバッファ［２０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．６）、１３７ｍＭ ＮａＣｌ、０．１重量％ Ｔｗｅｅｎ２０、及び５重量％ スキムミルクを含む］に浸漬して１時間室温で振蕩することによりメンブレンのブロッキング処理を行った。ブロッキング処理後、メンブレンをＴＢＳ－Ｔ［２０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．６）、１３７ｍＭ ＮａＣｌ、及び０．１重量％ Ｔｗｅｅｎ２０を含む］で２分間洗浄した。次に、メンブレンを一次抗体溶液（一次抗体：抗ＳＥＬＰ８Ｋ抗体及び抗Ｈｉｓ－ｔａｇ抗体（Ｒｏｃｋｌａｎｄ社製）をＴＢＳ－Ｔで５００分の１に希釈した溶液）に浸漬し、４℃で一晩静置して抗体反応を行った。反応後、このメンブレンをＴＢＳ－Ｔで５分間、４回洗浄した後、一次抗体に結合可能であり且つ標識酵素として西洋ワサビペルオキシダーゼを結合させた二次抗体の溶液（二次抗体：ＥＣＬ ａｎｔｉ－ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ ＨＲＰ ｌｉｎｋｅｄ Ｆ（ａｂ’）２ ｆｒａｇｍｅｎｔ（ＧＥヘルスケア社製）をＴＢＳ－Ｔで２０００分の１に希釈した溶液）にメンブレンを浸漬し、３０分間室温で静置して抗体反応を行った。反応後、メンブレンをＴＢＳ－Ｔで５分間、４回洗浄した後、ＥＣＬ－Ａｄｖａｎｃｅ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＧＥヘルスケア社製）により酵素反応を行った。ルミノメーターＦｏｒＥＣＬ（ＧＥヘルスケア社製）を用いて、高感度インスタント黒白フィルム（富士フイルム株式会社製）に感光させ、バンドを可視化した。
ウエスタンブロット用サンプル２０μＬに３×ＳＤＳ処理バッファ［１５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ（ｐＨ６．８）、３００ｍＭ ジチオスレイトール、６重量％ ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、０．３重量％ ブロモフェノールブルー、及び３０重量％ グリセロールを含む］１０μＬを添加して９５℃で５分間加温し、泳動用試料を調製した。この泳動用試料１５μＬを用いてＳＤＳ－ＰＡＧＥを行った。泳動後のゲルをフッ化ポリビニリデンメンブレンにトランスファー（以下、「メンブレン」と略記）し、これをブロッキングバッファ［２０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．６）、１３７ｍＭ ＮａＣｌ、０．１重量％ Ｔｗｅｅｎ２０、及び５重量％ スキムミルクを含む］に浸漬して１時間室温で振蕩することによりメンブレンのブロッキング処理を行った。ブロッキング処理後、メンブレンをＴＢＳ－Ｔ［２０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．６）、１３７ｍＭ ＮａＣｌ、及び０．１重量％ Ｔｗｅｅｎ２０を含む］で２分間洗浄した。次に、メンブレンを一次抗体溶液（一次抗体：抗ＳＥＬＰ８Ｋ抗体及び抗Ｈｉｓ－ｔａｇ抗体（Ｒｏｃｋｌａｎｄ社製）をＴＢＳ－Ｔで５００分の１に希釈した溶液）に浸漬し、４℃で一晩静置して抗体反応を行った。反応後、このメンブレンをＴＢＳ－Ｔで５分間、４回洗浄した後、一次抗体に結合可能であり且つ標識酵素として西洋ワサビペルオキシダーゼを結合させた二次抗体の溶液（二次抗体：ＥＣＬ ａｎｔｉ－ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ ＨＲＰ ｌｉｎｋｅｄ Ｆ（ａｂ’）２ ｆｒａｇｍｅｎｔ（ＧＥヘルスケア社製）をＴＢＳ－Ｔで２０００分の１に希釈した溶液）にメンブレンを浸漬し、３０分間室温で静置して抗体反応を行った。反応後、メンブレンをＴＢＳ－Ｔで５分間、４回洗浄した後、ＥＣＬ－Ａｄｖａｎｃｅ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＧＥヘルスケア社製）により酵素反応を行った。ルミノメーターＦｏｒＥＣＬ（ＧＥヘルスケア社製）を用いて、高感度インスタント黒白フィルム（富士フイルム株式会社製）に感光させ、バンドを可視化した。
＜製造例２＞
製造例１の「タンパク質（Ａ）の製造」において、「ＳＥＬＰ８Ｋをコードしたプラスミド」に代えて「ＳＥＬＰ０Ｋをコードしたプラスミド」とする以外は同様にして、配列番号（１７）の人工タンパク質（Ａ）であるＳＥＬＰ０Ｋポリマー（Ａ－２）［ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法による分子質量：８２ｋＤａ］を得た。
なお、タンパク質（Ａ－２）に含まれる前記のアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）を構成するアミノ酸の合計個数は、タンパク質（Ａ－２）の全アミノ酸数を基準として６５．４％であった。
また、前記タンパク質（Ａ－２）１分子中の、前記ＧＡＧＡＧＳ配列（２）の個数と、前記アミノ酸配列（Ｘ）及び前記アミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数との比（ＧＡＧＡＧＳ配列（２）：アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計）は、１：４であった。
製造例１の「タンパク質（Ａ）の製造」において、「ＳＥＬＰ８Ｋをコードしたプラスミド」に代えて「ＳＥＬＰ０Ｋをコードしたプラスミド」とする以外は同様にして、配列番号（１７）の人工タンパク質（Ａ）であるＳＥＬＰ０Ｋポリマー（Ａ－２）［ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法による分子質量：８２ｋＤａ］を得た。
なお、タンパク質（Ａ－２）に含まれる前記のアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）を構成するアミノ酸の合計個数は、タンパク質（Ａ－２）の全アミノ酸数を基準として６５．４％であった。
また、前記タンパク質（Ａ－２）１分子中の、前記ＧＡＧＡＧＳ配列（２）の個数と、前記アミノ酸配列（Ｘ）及び前記アミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数との比（ＧＡＧＡＧＳ配列（２）：アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計）は、１：４であった。
＜製造例３＞
製造例１の「タンパク質（Ａ）の製造」において、「ＳＥＬＰ８Ｋをコードしたプラスミド」に代えて「ＳＥＬＰ３をコードしたプラスミド」とする以外は同様にして、配列番号（２８）の人工タンパク質（Ａ）であるＳＥＬＰ３ポリマー（Ａ－３）［ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法による分子質量：９０ｋＤａ］を得た。
なお、タンパク質（Ａ－３）に含まれる前記のアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）を構成するアミノ酸の合計個数は、タンパク質（Ａ－３）の全アミノ酸数を基準として４４．１％であった。
また、前記タンパク質（Ａ－３）１分子中の、前記ＧＡＧＡＧＳ配列（２）の個数と、前記アミノ酸配列（Ｘ）及び前記アミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数との比（ＧＡＧＡＧＳ配列（２）：アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計）は、１：１であった。
製造例１の「タンパク質（Ａ）の製造」において、「ＳＥＬＰ８Ｋをコードしたプラスミド」に代えて「ＳＥＬＰ３をコードしたプラスミド」とする以外は同様にして、配列番号（２８）の人工タンパク質（Ａ）であるＳＥＬＰ３ポリマー（Ａ－３）［ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法による分子質量：９０ｋＤａ］を得た。
なお、タンパク質（Ａ－３）に含まれる前記のアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）を構成するアミノ酸の合計個数は、タンパク質（Ａ－３）の全アミノ酸数を基準として４４．１％であった。
また、前記タンパク質（Ａ－３）１分子中の、前記ＧＡＧＡＧＳ配列（２）の個数と、前記アミノ酸配列（Ｘ）及び前記アミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数との比（ＧＡＧＡＧＳ配列（２）：アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計）は、１：１であった。
＜製造例４＞
製造例１の「タンパク質（Ａ）の製造」において、「ＳＥＬＰ８Ｋをコードしたプラスミド」に代えて「ＥＬＰ１．１をコードしたプラスミド」とする以外は同様にして、配列番号（２６）の人工タンパク質（Ａ）であるＥＬＰ１．１ポリマー（Ａ－４）［ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法による分子質量：２００ｋＤａ］を得た。
なお、タンパク質（Ａ－４）に含まれる前記のアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）を構成するアミノ酸の合計個数は、タンパク質（Ａ－４）の全アミノ酸数を基準として８９．１％であった。
また、前記タンパク質（Ａ－４）１分子中の、前記ＧＡＧＡＧＳ配列（２）の個数と、前記アミノ酸配列（Ｘ）及び前記アミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数との比（ＧＡＧＡＧＳ配列（２）：アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計）は、１：１２であった。
製造例１の「タンパク質（Ａ）の製造」において、「ＳＥＬＰ８Ｋをコードしたプラスミド」に代えて「ＥＬＰ１．１をコードしたプラスミド」とする以外は同様にして、配列番号（２６）の人工タンパク質（Ａ）であるＥＬＰ１．１ポリマー（Ａ－４）［ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法による分子質量：２００ｋＤａ］を得た。
なお、タンパク質（Ａ－４）に含まれる前記のアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）を構成するアミノ酸の合計個数は、タンパク質（Ａ－４）の全アミノ酸数を基準として８９．１％であった。
また、前記タンパク質（Ａ－４）１分子中の、前記ＧＡＧＡＧＳ配列（２）の個数と、前記アミノ酸配列（Ｘ）及び前記アミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数との比（ＧＡＧＡＧＳ配列（２）：アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計）は、１：１２であった。
＜製造例５＞
製造例１の「タンパク質（Ａ）の製造」において、「ＳＥＬＰ８Ｋをコードしたプラスミド」に代えて「ＳＥＬＰ６．１をコードしたプラスミド」とする以外は同様にして、配列番号（２３）の人工タンパク質（Ａ）であるＳＥＬＰ６．１ポリマー（Ａ－５）［ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法による分子質量：１１０ｋＤａ］を得た。
なお、タンパク質（Ａ－５）に含まれる前記のアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）を構成するアミノ酸の合計個数は、タンパク質（Ａ－５）の全アミノ酸数を基準として７７．３％であった。
また、前記タンパク質（Ａ－５）１分子中の、前記ＧＡＧＡＧＳ配列（２）の個数と、前記アミノ酸配列（Ｘ）及び前記アミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数との比（ＧＡＧＡＧＳ配列（２）：アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計）は、１：５であった。
製造例１の「タンパク質（Ａ）の製造」において、「ＳＥＬＰ８Ｋをコードしたプラスミド」に代えて「ＳＥＬＰ６．１をコードしたプラスミド」とする以外は同様にして、配列番号（２３）の人工タンパク質（Ａ）であるＳＥＬＰ６．１ポリマー（Ａ－５）［ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法による分子質量：１１０ｋＤａ］を得た。
なお、タンパク質（Ａ－５）に含まれる前記のアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）を構成するアミノ酸の合計個数は、タンパク質（Ａ－５）の全アミノ酸数を基準として７７．３％であった。
また、前記タンパク質（Ａ－５）１分子中の、前記ＧＡＧＡＧＳ配列（２）の個数と、前記アミノ酸配列（Ｘ）及び前記アミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数との比（ＧＡＧＡＧＳ配列（２）：アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計）は、１：５であった。
＜製造例６＞
製造例１の「タンパク質（Ａ）の製造」において、「ＳＥＬＰ８Ｋをコードしたプラスミド」に代えて「ＳＥＬＰ３．１をコードしたプラスミド」とする以外は同様にして、配列番号（２９）の人工タンパク質（Ａ）であるＳＥＬＰ３．１ポリマー（Ａ－６）［ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法による分子質量：４０ｋＤａ］を得た。
なお、タンパク質（Ａ－６）に含まれる前記のアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）を構成するアミノ酸の合計個数は、タンパク質（Ａ－６）の全アミノ酸数を基準として２６．６％であった。
また、前記タンパク質（Ａ－６）１分子中の、前記ＧＡＧＡＧＳ配列（２）の個数と、前記アミノ酸配列（Ｘ）及び前記アミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数との比（ＧＡＧＡＧＳ配列（２）：アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計）は、１：０．５であった。
製造例１の「タンパク質（Ａ）の製造」において、「ＳＥＬＰ８Ｋをコードしたプラスミド」に代えて「ＳＥＬＰ３．１をコードしたプラスミド」とする以外は同様にして、配列番号（２９）の人工タンパク質（Ａ）であるＳＥＬＰ３．１ポリマー（Ａ－６）［ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法による分子質量：４０ｋＤａ］を得た。
なお、タンパク質（Ａ－６）に含まれる前記のアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）を構成するアミノ酸の合計個数は、タンパク質（Ａ－６）の全アミノ酸数を基準として２６．６％であった。
また、前記タンパク質（Ａ－６）１分子中の、前記ＧＡＧＡＧＳ配列（２）の個数と、前記アミノ酸配列（Ｘ）及び前記アミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数との比（ＧＡＧＡＧＳ配列（２）：アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計）は、１：０．５であった。
＜比較製造例１＞
製造例１の「タンパク質（Ａ）の製造」において、「ＳＥＬＰ８Ｋをコードしたプラスミド」に代えて「ＳＬＰ４．１をコードしたプラスミド」とする以外は同様にして、配列番号（３０）の人工タンパク質（Ａ）であるＳＬＰ４．１ポリマー（Ａ’－１）［ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法による分子質量：９３ｋＤａ］を得た。
なお、ＳＬＰ４．１は、ＧＡＧＡＧＳ配列（２）が６個連続した配列、及び、ＧＶＧＶＰ配列（４）が２個連続した配列を、それぞれ２９個有し、これらが交互に化学結合した配列番号３０に示されるアミノ酸配列である配列（３０）のタンパク質である。
なお、タンパク質（Ａ’－１）に含まれる前記のアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）を構成するアミノ酸の合計個数は、タンパク質（Ａ’－１）の全アミノ酸数を基準として２０．７％であった。
また、前記タンパク質（Ａ’－１）１分子中の、前記ＧＡＧＡＧＳ配列（２）の個数と、前記アミノ酸配列（Ｘ）及び前記アミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数との比（ＧＡＧＡＧＳ配列（２）：アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計）は、１：０．３であった。
製造例１の「タンパク質（Ａ）の製造」において、「ＳＥＬＰ８Ｋをコードしたプラスミド」に代えて「ＳＬＰ４．１をコードしたプラスミド」とする以外は同様にして、配列番号（３０）の人工タンパク質（Ａ）であるＳＬＰ４．１ポリマー（Ａ’－１）［ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法による分子質量：９３ｋＤａ］を得た。
なお、ＳＬＰ４．１は、ＧＡＧＡＧＳ配列（２）が６個連続した配列、及び、ＧＶＧＶＰ配列（４）が２個連続した配列を、それぞれ２９個有し、これらが交互に化学結合した配列番号３０に示されるアミノ酸配列である配列（３０）のタンパク質である。
なお、タンパク質（Ａ’－１）に含まれる前記のアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）を構成するアミノ酸の合計個数は、タンパク質（Ａ’－１）の全アミノ酸数を基準として２０．７％であった。
また、前記タンパク質（Ａ’－１）１分子中の、前記ＧＡＧＡＧＳ配列（２）の個数と、前記アミノ酸配列（Ｘ）及び前記アミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数との比（ＧＡＧＡＧＳ配列（２）：アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計）は、１：０．３であった。
＜実施例１～１０８及び比較例１～３９：タンパク質（Ａ）のゲル化物の製造＞
マイクロチューブに、表２～８に記載の種類のタンパク質（Ａ）及び２５℃の脱イオン水を表２～８に記載の重量で投入し、３７℃でボルテックスミキサーを用いて混合した。
次に、上記のマイクロチューブに、タンパク質（Ａ）及び脱イオン水以外の成分として、表２～８に記載の成分（３７℃）を、表２～８に記載の重量で投入し、ボルテックスミキサーを用いて混合し、反応に用いる３７℃の混合物を製造した。その後、３７℃で温調し、温調開始直後及びその後１０分おきに、以下の基準でゲル化の有無を確認した。（各実施例につき、エタノールを添加する試験、メタノールを添加する試験、１－プロパノールを添加する試験の３種をそれぞれ実施した。また、比較実験として、酢酸を添加する試験も実施した。）
最初にゲル化したことを確認した時間（温調開始から、最初にゲル化を確認するまでに経過した時間）を表２～８に示す（なお、１９０分経過してもゲル化を確認できなかった場合は、×と記載した）。
なお、ゲル化の有無は、以下の基準で判定した。
ゲル化有り：混合物が入ったマイクロチューブ容器を転倒し、溶液が垂れない場合はゲル化しているとした。
未ゲル化：混合物が入ったマイクロチューブ容器を転倒し、溶液が垂れる場合はゲル化しないと判断した。
マイクロチューブに、表２～８に記載の種類のタンパク質（Ａ）及び２５℃の脱イオン水を表２～８に記載の重量で投入し、３７℃でボルテックスミキサーを用いて混合した。
次に、上記のマイクロチューブに、タンパク質（Ａ）及び脱イオン水以外の成分として、表２～８に記載の成分（３７℃）を、表２～８に記載の重量で投入し、ボルテックスミキサーを用いて混合し、反応に用いる３７℃の混合物を製造した。その後、３７℃で温調し、温調開始直後及びその後１０分おきに、以下の基準でゲル化の有無を確認した。（各実施例につき、エタノールを添加する試験、メタノールを添加する試験、１－プロパノールを添加する試験の３種をそれぞれ実施した。また、比較実験として、酢酸を添加する試験も実施した。）
最初にゲル化したことを確認した時間（温調開始から、最初にゲル化を確認するまでに経過した時間）を表２～８に示す（なお、１９０分経過してもゲル化を確認できなかった場合は、×と記載した）。
なお、ゲル化の有無は、以下の基準で判定した。
ゲル化有り：混合物が入ったマイクロチューブ容器を転倒し、溶液が垂れない場合はゲル化しているとした。
未ゲル化：混合物が入ったマイクロチューブ容器を転倒し、溶液が垂れる場合はゲル化しないと判断した。
＜実施例１０９～１１４及び比較例４０：タンパク質（Ａ）のゲル化物の製造＞
マイクロチューブに、表９に記載の種類のタンパク質（Ａ）及び２５℃の脱イオン水を表９に記載の重量で投入し、１℃でボルテックスミキサーを用いて混合した。
次に、上記のマイクロチューブに、タンパク質（Ａ）及び脱イオン水以外の成分として、表９に記載の成分（１℃）を、表９に記載の重量で投入し、ボルテックスミキサーを用いて混合し、反応に用いる１℃の混合物を製造した。その後、１℃で温調し、温調開始直後及びその後１０分おきに、実施例１と同じ基準でゲル化の有無を確認した。（各実施例につき、エタノールを添加する試験、メタノールを添加する試験、１－プロパノールを添加する試験の３種をそれぞれ実施した。また、比較実験として、酢酸を添加する試験も実施した。）
最初にゲル化したことを確認した時間（温調開始から、最初にゲル化を確認するまでに経過した時間）を表９に示す（なお、１９０分経過してもゲル化を確認できなかった場合は、×と記載した）。
マイクロチューブに、表９に記載の種類のタンパク質（Ａ）及び２５℃の脱イオン水を表９に記載の重量で投入し、１℃でボルテックスミキサーを用いて混合した。
次に、上記のマイクロチューブに、タンパク質（Ａ）及び脱イオン水以外の成分として、表９に記載の成分（１℃）を、表９に記載の重量で投入し、ボルテックスミキサーを用いて混合し、反応に用いる１℃の混合物を製造した。その後、１℃で温調し、温調開始直後及びその後１０分おきに、実施例１と同じ基準でゲル化の有無を確認した。（各実施例につき、エタノールを添加する試験、メタノールを添加する試験、１－プロパノールを添加する試験の３種をそれぞれ実施した。また、比較実験として、酢酸を添加する試験も実施した。）
最初にゲル化したことを確認した時間（温調開始から、最初にゲル化を確認するまでに経過した時間）を表９に示す（なお、１９０分経過してもゲル化を確認できなかった場合は、×と記載した）。
＜実施例１１５～１２０及び比較例４１：タンパク質（Ａ）のゲル化物の製造＞
マイクロチューブに、表１０に記載の種類のタンパク質（Ａ）及び２５℃の脱イオン水を表１０に記載の重量で投入し、６０℃でボルテックスミキサーを用いて混合した。
次に、上記のマイクロチューブに、タンパク質（Ａ）及び脱イオン水以外の成分として、表１０に記載の成分（６０℃）を、表１０に記載の重量で投入し、ボルテックスミキサーを用いて混合し、反応に用いる６０℃の混合物を製造した。その後、６０℃で温調し、温調開始直後及びその後１０分おきに、実施例１と同じ基準でゲル化の有無を確認した。（各実施例につき、エタノールを添加する試験、メタノールを添加する試験、１－プロパノールを添加する試験の３種をそれぞれ実施した。また、比較実験として、酢酸を添加する試験も実施した。）
最初にゲル化したことを確認した時間（温調開始から、最初にゲル化を確認するまでに経過した時間）を表１０に示す。
マイクロチューブに、表１０に記載の種類のタンパク質（Ａ）及び２５℃の脱イオン水を表１０に記載の重量で投入し、６０℃でボルテックスミキサーを用いて混合した。
次に、上記のマイクロチューブに、タンパク質（Ａ）及び脱イオン水以外の成分として、表１０に記載の成分（６０℃）を、表１０に記載の重量で投入し、ボルテックスミキサーを用いて混合し、反応に用いる６０℃の混合物を製造した。その後、６０℃で温調し、温調開始直後及びその後１０分おきに、実施例１と同じ基準でゲル化の有無を確認した。（各実施例につき、エタノールを添加する試験、メタノールを添加する試験、１－プロパノールを添加する試験の３種をそれぞれ実施した。また、比較実験として、酢酸を添加する試験も実施した。）
最初にゲル化したことを確認した時間（温調開始から、最初にゲル化を確認するまでに経過した時間）を表１０に示す。
炭素数１～４のアルコール（メタノール、エタノール又は１－プロパノール）を添加した実施例１～１２０は、上記の化合物を添加していない比較例１～１８及び４０～４１と比較して、ゲル化速度が飛躍的に向上していることが分かる。
また、「ＧＡＧＡＧＳ配列（２）：アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計」の比が「１：０．５～１：２０」の範囲外である比較例１９～３６も、炭素数１～４のアルコールを添加していない比較例３７～３９と比較して、ゲル加速度は上昇している。一方、上記の比が「１：０．５～１：２０」の範囲内である実施例１～１２０におけるゲル化速度の上昇度合（上記の化合物を添加していない比較例１～１８及び４０～４１からの上昇）は、比較例１９～３６における上昇度合よりも、大きく上回っていることが分かる。
また、「ＧＡＧＡＧＳ配列（２）：アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計」の比が「１：０．５～１：２０」の範囲外である比較例１９～３６も、炭素数１～４のアルコールを添加していない比較例３７～３９と比較して、ゲル加速度は上昇している。一方、上記の比が「１：０．５～１：２０」の範囲内である実施例１～１２０におけるゲル化速度の上昇度合（上記の化合物を添加していない比較例１～１８及び４０～４１からの上昇）は、比較例１９～３６における上昇度合よりも、大きく上回っていることが分かる。
本発明の製造方法は、タンパク質（Ａ）を短時間でゲル化させることができ、ゲル化物は組織再生用材料として用いることができるため、有用である。
Claims (4)
- 工程（１）を経てタンパク質（Ａ）のゲル化物を得る前記ゲル化物の製造方法であって、
前記タンパク質（Ａ）が、ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又はポリペプチド鎖（Ｙ’）を有し、
前記タンパク質（Ａ）中の前記ポリペプチド鎖（Ｙ）と前記ポリペプチド鎖（Ｙ’）との合計個数が１～１００個であり、
前記ポリペプチド鎖（Ｙ）が、配列番号１に示されるアミノ酸配列であるＶＰＧＶＧ配列（１）、配列番号４に示されるアミノ酸配列であるＧＶＧＶＰ配列（４）、ＧＰＰ配列、ＧＡＰ配列及び配列番号３に示されるアミノ酸配列であるＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（３）のうち少なくとも１つのアミノ酸配列（Ｘ）が２～２００個連続したポリペプチド鎖であり、
前記ポリペプチド鎖（Ｙ’）が、前記ポリペプチド鎖（Ｙ）中の５％以下のアミノ酸がリシン及び／又はアルギニンで置換されたポリペプチド鎖であり、前記リシン及び前記アルギニンの合計個数が１～１００個であり、
前記タンパク質（Ａ）に含まれる前記アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）を構成するアミノ酸の合計個数が、前記タンパク質（Ａ）の全アミノ酸数を基準として２０～９０％であり、
前記アミノ酸配列（Ｘ’）が、前記アミノ酸配列（Ｘ）中の６０％以下のアミノ酸がリシン及び／又はアルギニンで置換されたアミノ酸配列であり、
前記タンパク質（Ａ）が、配列番号２に示されるアミノ酸配列であるＧＡＧＡＧＳ配列（２）を有し、
前記タンパク質（Ａ）１分子中の、前記ＧＡＧＡＧＳ配列（２）の個数と、前記アミノ酸配列（Ｘ）及び前記アミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数との比（ＧＡＧＡＧＳ配列（２）：アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計）が、１：０．５～１：２０であり、
前記工程（１）が、前記タンパク質（Ａ）、水及び炭素数１～４のアルコールを含有する混合物の温度を０～８０℃とする工程である製造方法。 - 前記タンパク質（Ａ）が、前記ＧＶＧＶＰ配列（４）が２～２００個連続したアミノ酸配列中の１個のアミノ酸がリシンで置換されたポリペプチド鎖（Ｙ’１）と前記ＧＡＧＡＧＳ配列（２）が２～２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）とを有するタンパク質（Ａ１１１）、
前記ＶＰＧＶＧ配列（１）が２～２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ２）と前記ＧＡＧＡＧＳ配列（２）とを有するタンパク質（Ａ２１）、及び、
前記ＧＶＧＶＰ配列（４）が２～２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ１）と前記ＧＡＧＡＧＳ配列（２）が２～２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）とを有するタンパク質（Ａ３）からなる群から選ばれる少なくとも１種のタンパク質である請求項１に記載の製造方法。 - 前記タンパク質（Ａ１１１）が、配列番号６に示される（ＧＶＧＶＰ）４ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）３配列（６）であるポリペプチド鎖（Ｙ’１１）と、前記ＧＡＧＡＧＳ配列（２）が２～２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）とを有するタンパク質（Ａ１１１－１）である請求項２に記載の製造方法。
- 前記タンパク質（Ａ）のＳＤＳ－ＰＡＧＥ（ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動）法による分子質量が１５～２００ｋＤａである請求項１～３のいずれか１項に記載の製造方法。
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