JP2021522278A - ライソゾーム病を改善するための、レンチウイルスベクターが形質導入されたt−rapa細胞の使用 - Google Patents
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Abstract
本開示は、ライソゾーム病を治療する方法を提供する。該方法は、関心対象の導入遺伝子を発現する、ベクターにより形質導入されたT−Rapa細胞を産生することおよび治療の必要がある患者に該細胞を投与することを含む。
Description
関連出願の相互参照
本出願は、2018年4月27日に出願された米国仮特許出願第62,663,786号の優先権を主張し、その仮特許出願の内容が参照により全体に組み入れられている。
本出願は、2018年4月27日に出願された米国仮特許出願第62,663,786号の優先権を主張し、その仮特許出願の内容が参照により全体に組み入れられている。
連邦政府による資金提供を受けた研究の記載
本発明は、国立癌研究所によって授与された、プロジェクト番号第ZIA BC011219号による政府の支援によってなされた。政府は本発明に一定の権利を有する。
本発明は、国立癌研究所によって授与された、プロジェクト番号第ZIA BC011219号による政府の支援によってなされた。政府は本発明に一定の権利を有する。
本発明の技術分野は、ライソゾーム病(LSD、ライソゾーム貯蔵疾患)の治療である。LSDは、単純タンパク質の調節不全もしくは欠乏(例えばファブリー病)または酵素の欠乏と共活性化タンパク質との組合せに関連している。
ライソゾームは、ほとんどの任意の生体分子を消化可能である、60種類以上の異なる酵素を含む真核細胞中の膜結合細胞小器官である。ライソゾームは多くの重要な生物学的機能を実行しており、その中には、細胞外部からのものと、細胞内部の古くなった成分の両方といった細胞質内の望まれていない物質を消化することによる、細胞廃棄物の処理系としての機能を含む。ライソゾーム病(LSD)は、ライソゾームの機能障害により生じ、通常は脂質、糖タンパク質または多糖類の細胞内消化に必要となる単純酵素が欠乏している結果として生じる、60種類以上の希少な遺伝性代謝障害の群である。かかる欠乏の結果として、正常に分解されるべき分子が細胞内部に蓄積し、細胞の機能障害または細胞死を引き起こす。
ファブリー病は、グリコスフィンゴ脂質、特にグロボトリアオシルセラミド(Gb3)からのα−ガラクトースを加水分解する酵素である、α−ガラクトシダーゼA(AGA導入遺伝子によりコードされたα−galA)の欠乏により生じるLSDである。
ファブリー病に対する標準的な管理治療は、酵素補充療法(ERT)である。ERTの有効性は、Rombach et al.(Orphanet J Rare Dis.8:47−10.1186/1750−1172−8−47(2013))に概要が述べられている。恩典はいくつか得られているものの、疾患の進行を止めるものではない。ERTは、決まった週間隔で投与される組換えα−galAの長時間の点滴静注が必要となり、その多くは外来センターにて行われる。ファブリー病患者は、多くの場合疼痛、胃腸管系機能障害、不整脈および心臓に関する他の問題に対する治療を必要とし、更には腎臓機能を保護するために抗血栓薬と血圧用医薬品が必須となる。ファブリー病は比較的希少であるにも関わらず、米国内に約4000人の患者がおり、治療コストは患者1人あたり年間300,000ドルほどである(米国の全患者に対しては年間12億ドル)。
造血幹細胞(HSC)は、骨髄内に存在している「多分化能」細胞であり、最終的には全ての血液細胞の種類へと分化することができる。HSCの特徴は、CD34と呼ばれる細胞表面糖タンパク質の発現であり、かかる細胞は時にCD34+造血細胞、またはもっと単純にはCD34+HSCと呼ばれる。臨床的には、HSC上のCD34の存在を利用し、骨髄移植片に対してHSCの選択濃縮を促進させることができる。加えて、CD34+HSCは、脊髄損傷、肝硬変、末梢血管疾患を含む、種々の非造血疾患を治療するために実験的に使用されている。HSCは骨髄から収集することができるが、HSCを「動員」するためのある特定の薬物で治療した後に末梢血から収集してもよい。したがって、HSCは血液から収集され得る(例えばアフェレーシスによる)。HSCはまた、「移動性」である。これは、HSCが血流に入って骨髄から体内の別の部位へと移動可能であることを意味している。HSCは、骨髄に再配置するために注射によって血流へと投与され得る。
発明者らは以前に、ファブリー病患者から収集したHSCを使用してHSCを遺伝子改変し、ファブリー病を抱える患者において欠乏している酵素であるα−galAを産生していた。患者が薬物投与計画によって「条件づけられた」後、これらの遺伝子改変されたHSCを同じ患者に注入して戻し(自己移植片)、治療の成功を向上させるために内因性HSCを除去する。
患者へと戻される、患者の改変された細胞を再度導入した際、遺伝子改変されたHSCは造血系の下流系統全てに定植し、次いで体内全体を循環する。改変された細胞は、患者内にて未修正の「バイスタンダー」細胞が、α−galAをライソゾーム中へと細胞内にて吸収かつ輸送することを可能にする、分子「標識」(マンニトース−6−ホスファート)を有するα−galAの形態を分泌する。この場合、この細胞は患者のα−galA欠乏を補償し、蓄積されたグリコスフィンゴ脂質を効率的に分解する。この方法は、カナダにて実施中の治験である(ClinicalTrials.gov#NCT02800070)。
先行するプロトコールの中心部分は、遺伝子改変されたHSCが変化する可能性のある全ての血液細胞(造血)系統へと分化しかつ体内全体を循環するという点である。ただし、移植の非効率性から、血液除去によって移植患者の調整を行うことが必要となる。大半の場合には、除去の程度が移植効率を決定し得る。加えて、疾患を癒すために取得かつ使用され得る、形質導入された本物の幹細胞の数には限りがある。自己移植片を使用した場合であっても、移植を追加で繰り返すことが疾患を効率的に治療するのに必要になる場合がある。
したがって、治療に使用され得、かつ患者からの除去を最小限必要とするまたはまったく必要としない、対象内の細胞の再生可能な供給源を改良する必要性が存在している。
本発明は、ライソゾーム病を治療する方法を提供することにより、前述の課題点を克服する。
一態様では、本開示は対象にてライソゾーム病を治療する方法を提供する。該方法は、(a)対象または好適なドナー由来のT細胞をラパマイシンを用いてエクスビボで調整し、T−Rapa細胞を生成する工程、(b)該T−Rapa細胞を、ライソゾーム病に関連する酵素をコードする関心対象の導入遺伝子を含むベクターを用いてインビトロで形質導入する工程、および(c)形質導入されたT−Rapa細胞を、該患者へと投与し、該T−Rapa細胞は、対象にてライソゾーム病に関連する酵素を発現し、ライソゾーム病の1つまたは複数の症状を低減する工程を含む。一部の態様では、工程(b)後の該方法は、インビトロで培養することでベクターにより形質導入されたT−Rapa細胞を増やすことを含み、工程(c)は形質導入されかつ増やされたT−Rapa細胞を対象に投与することを含む。
別の態様では、本開示は対象にてライソゾーム病を治療する方法を提供する。該方法は、(a)対象または好適なドナー由来のT細胞を得る工程、(b)ラパマイシンを用いてエクスビボで調整し、T−Rapa細胞を生成する工程、(c)該T−Rapa細胞を、T−Rapa細胞内の関心対象の導入遺伝子を発現するベクターを用いてインビトロで形質導入する工程、(d)培養物中でベクターにより形質導入T−Rapa細胞をインビトロで増やす工程、および(e)T−Rapa細胞を該患者へと投与し、該T−Rapa細胞は、対象内にて関心対象の導入遺伝子を発現し、ライソゾーム病の1つまたは複数の症状を低減する工程を含む。
一部の実施形態では、投与工程は輸血または点滴静注によるものである。
一部の態様では、該方法はベクターにより形質導入されたT−Rapa細胞をインビトロ培養物中で維持かつ増やすこと、および対象に将来的に投与するため、ベクターにより形質導入されたT−Rapa細胞の一部を保存することを更に含む。
別の態様では、本開示はライソゾーム病を治療するため、関心対象の導入遺伝子によってコードされた酵素を発現する、形質導入されたT−Rapa細胞の集団を産生する方法を提供する。該方法は、(a)対象または好適なドナー由来のT細胞をラパマイシンを用いて調整し、T−Rapa細胞の集団を生成すること、および(b)関心対象の導入遺伝子を含むベクターを用いてT−Rapa細胞をインビトロで形質導入し、形質導入T−Rapa細胞の集団を産生することを含む。この方法は、関心対象の導入遺伝子によってコードされたコードするタンパク質(例えば酵素)を発現可能である、形質導入されたT−Rapa細胞を産生する。一部の態様では、該方法は、(c)培養物中でベクターにより形質導入されたT−Rapa細胞をインビトロで増やすことを更に含む。
別の態様では、本開示はライソゾーム病を治療するため、関心対象の導入遺伝子を発現する、形質導入されたT−Rapa細胞の集団を産生する方法を提供する。該方法は、(a)対象または好適なドナー由来のT細胞を得ること、(b)該T細胞をラパマイシンを用いて調整し、T−Rapa細胞を生成すること、および(c)T−Rapa細胞内で関心対象の導入遺伝子を発現するベクターを用いてT−Rapa細胞をインビトロで形質導入することを含む。一部の態様では、該方法は、(d)培養物中でベクターにより形質導入されたT−Rapa細胞をインビトロで増やすことを更に含む。
更に別の態様では、本開示はファブリー病を抱える対象を治療する方法を提供し、該方法は、本明細書に記載の方法によって作製され、α−galAを発現し、ファブリー病の1つまたは複数の症状を治療する、有効量の形質導入されたT−Rapa細胞を投与することを含む。
別の態様では、本開示は関心対象の導入遺伝子によってコードされたタンパク質を発現する、形質導入されたT−Rapa細胞の集団を提供する。一態様では、本開示はα−galAを発現する形質導入T−Rapa細胞の集団を提供する。別の態様では、本開示は、β−グルコセレブロシダーゼを発現する形質導入されたT−Rapa細胞の集団を提供する。別の態様では、本開示は酸性セラミダーゼを発現する形質導入されたT−Rapa細胞の集団を提供する。別の態様では、本開示は酸性α−グルコシダーゼを発現する形質導入されたT−Rapa細胞の集団を提供する。
更に別の態様では、本開示はゴーシェ病を抱える対象を治療する方法を提供し、該方法は、ゴーシェ病の1つまたは複数の症状を治療するため、GBAを発現する、有効量の形質導入されたT−Rapa細胞を投与することを含む。
更に別の態様では、本開示はファーバー病を抱える対象を治療する方法を提供し、該方法は、ファーバー病の1つまたは複数の症状を治療するため、ASAH1を発現する、有効量の形質導入されたT−Rapa細胞を投与することを含む。
更なる態様では、本開示はポンぺ病を抱える対象を治療する方法を提供し、該方法は、ポンぺ病の1つまたは複数の症状を治療するため、GAAを発現する、有効量の形質導入されたT−Rapa細胞を投与することを含む。
更に別の態様では、本開示はライソゾーム病を抱える対象を治療する方法を提供し、該方法は、ライソゾーム病の1つまたは複数の症状を治療する有効量でライソゾーム病の治療に関連する導入遺伝子を発現する、形質導入されたT−Rapa細胞を投与することを含む。
本発明の前述の態様、および他の態様、およびその優位性は、以下の説明より明らかになるだろう。以下の説明では、本明細書の一部を形成する添付の図面を参照し、図面中、例示を用いて本発明の好ましい実施形態が示されている。かかる実施形態は、必ずしも本発明の全範囲を表すものではないが、本発明の範囲を解釈するため、これにより特許請求の範囲および本明細書を参照する。
特許または特許出願書類は、着色された、実施された少なくとも1つの図面を含む。1つまたは複数の色を有する図面本特許または本特許出願公開は、申請し、必要な使用料を支払った場合に特許商標庁より提供される。
造血幹細胞(HSC)特異的遺伝子治療を用いた従来方法は、単純酵素の欠乏によって引き起こされた、対象となるライソゾームの貯蔵欠乏において試験されている。一例として、発明者らは現在、ファブリー病(FD)を抱える患者に遺伝子導入することで治療を行うことを目的としている、遺伝子第I期治験(NCT02800070)を実施している。FDは、α−ガラクトシダーゼA(α−galA)欠乏であり、この状態においてはグロボトリアオシルセラミド(Gb3)および他の代謝物が蓄積する。この従来のプロトコールにおいては、CD34+造血細胞は、α−galAを過剰に発現するよう操作された組換えレンチウイルス(LV)を用いてエクスビボで形質導入された。これらの細胞はその後、患者に戻されている。ベクターにより形質導入されたHSC由来の細胞には白血球が含まれているが、これはα−galAを分泌することができる。また、患者体内の未修正の細胞は分泌されたα−galAを吸収可能である。このプロセスは「クロスコレクション(cross−correction)」と名付けられている。効果的な移植のため、患者は問題となる可能性がある、条件をつけた投与計画(例えば除去)を受容する。加えて、HSCは薬物を用いて末梢血へと動員され、アフェレーシスによって収集されなければならない。取得し、移植するのにより容易である代替的な循環細胞集団は、治療カーゴで全身に輸送するために使用するのにより望ましい。
本開示はライソゾーム病、特にファブリー病(Online Mendelian Inheritance in Man(OMIM)ID#301500、ゴーシェ病(OMIM ID#230800、230900、231000、231005)、ファーバー病(OMIM ID#228000)、およびポンペ病(OMIM ID#232300)を治療する向上した方法を提供する。特に、本発明は、治療用導入遺伝子産物を全身に輸送するための、自己CD4+T−Rapa細胞またはドナー(非自己)CD4+T−Rapaの使用を記載している。T−Rapa細胞は、罹患した患者または正常なドナー(ND)の末梢血細胞から製造されることができ、例えば、ファブリー病については酵素α−galA、ゴーシェ病についてはベータ−グルコセレブロシダーゼ(GBA、β−グルコセレブロシダーゼ、酸性β−グルコシダーゼ、D−グルコシル−N−アシルスフィンゴシングルコハイドロラーゼ、またはGCaseであり、これらは互換的に使用可能である)、ファーバー病については酸性セラミダーゼ(ASAH1導入遺伝子によってコードされている)、およびポンペ病については酸性α−グルコシダーゼ(GAA導入遺伝子によってコードされ、酸性マルターゼとして公知である)があるが、これに限定されない、疾患に欠損している導入遺伝子(例えば酵素をコードしている配列)を含むベクター(例えばレンチウイルスベクター)を用いて生産的に形質導入され得る。本開示は、末梢血から得られた細胞(例えばT細胞)を使用する改良された方法を提供し、必要な時に、循環している導入遺伝子により産生されたT−Rapa細胞をインビボでブーストさせるため、任意の時に保存および注入され得る酵素を発現する、形質導入されたT−Rapa細胞の集団を提供することができる。更には、該方法は、対象にて効果的な移植を提供するために、もしあるのだとしても少量の除去を必要とする。
T細胞は、天然のタンパク質分泌装置であり、多くの治験で既に使用されている。HSCと異なり、T細胞は動員なしに末梢血(PB)から得ることが可能であり、培養物中で指数関数的に増やされ得る。ラパマイシンを用いたエクスビボでの治療は、T細胞(例えばCD4+T細胞)に多数の変化を誘発させる。まとめると、前駆移植片および抗アポトーシス表現型を用いてこうした変化を与える。これらはT−Rapa細胞と名付けられている。T−Rapa細胞の詳細はFowler et al.に見いだされ得(「Phase 2 clinical trial of rapamycin−resistant donor CD4+Th2/Th1(T−Rapa)cells after low−intensity allogeneic hematopoietic cell transplantation」、Blood(2013)11:121(15):2864−2874)、その内容が参照により全体に組み入れられている。ドナーT−Rapa細胞の同種移植を成功させる上で、宿主の調整(リンパ球特異型、ミエロイド温存)はほとんど必要とされず、T細胞移植用の十分な免疫空間を生成させつつ、宿主のミエロイド細胞のディプリーションを最小限に抑える。この宿主の調整方法およびT細胞駆動遺伝子治療は、実質的にはHSC駆動遺伝子療法と異なるものである。これは典型的には相対的に強いミエロイド細胞のディプリーションが必要となる。いかなる理論にも縛られるものではないが、ミエロイド細胞のディプリーションによる低下が、ミエロイドのディプリーションに関連する感染性合併症を低減し、遺伝子治療が外来患者という条件で実施可能であるため、治療による病的状態および治療コストを低下させ、かつ遺伝子治療を繰り返し行うことで、最終的に有効性を向上させるという事実を含む複数の観点から、HSCよりもT細胞を用いた遺伝子治療を施すほうが有益である。
実施例にて示されているように、2週間のインビトロ増殖後、形質導入されたT−Rapa細胞は、インビトロでの刺激がない状態にて、導入遺伝子産物(例えば、α−galAといった酵素)を継続して分泌する。FD患者および正常なドナー由来の形質導入されたおよびコントロールT−Rapa細胞は、NOD/SCID/Aga−/−マウス(NSF)へと異種移植された。血漿およびLV改変された細胞を投与したマウスの臓器中には、高いα−galA活性が検出された。ベクターコピー数解析は、安定した形質導入を示唆する。形質導入細胞を受け入れたNSFマウスはまた、GB3レベルの低下を示している。これは更に、インビボ基質ターゲットを減少させる、形質導入されたT−Rapa細胞から発現されている酵素の能力を表している。
これらの実施例は、レンチウイルスにより形質導入されたT−Rapa細胞のインビトロでの発生を表しており、これにより酵素活性および細胞からの酵素の分泌の増加をもたらすことができる。こうした実施例はα−galA活性を増加させるレンチウイルスにより形質導入されたT−Rapa細胞の使用を表し、ファブリー病の治療に使用され得る一方で、導入遺伝子であるGBA、ASAH1、およびGAAに関する図14および図15に示されるように、レンチウイルス形質導入T−Rapa細胞は他のライソゾーム病を治療する他の酵素を発現するために使用され得る。
一実施形態では、本開示は対象にてライソゾーム病を治療する方法を提供する。該方法は、(a)対象または好適なドナー由来のT細胞を、ラパマイシンを用いてエクスビボで調整し、T−Rapa細胞を生成する工程、(b)該T細胞を、ライソゾーム病に関連する酵素をコードする関心対象の導入遺伝子を含むベクターを用いてインビトロで形質導入する工程、および(c)形質導入されたT−Rapa細胞を、該患者に投与し、該T−Rapa細胞は、対象にてライソゾーム病に関連する酵素を発現し、ライソゾーム病の1つまたは複数の症状を低減する工程を含む。一部の実施形態では、工程(b)後の該方法は、工程(c)にて形質導入かつ増やされたT−Rapa細胞を投与する前に、インビトロで培養することによってベクターにより形質導入されたT−Rapa細胞を増やすことを含む。
形質導入されたT−Rapa細胞を投与する好適な方法は、当技術分野で公知であり、更に輸血および静脈内投与を含む。
一実施形態では、本開示は対象にてライソゾーム病を治療する方法を提供する。該方法は、(a)有効量のラパマイシンでT細胞をエクスビボで調整してT−Rapa細胞を産生する工程、(b)T−Rapa細胞を、ライソゾーム貯蔵疾患に関連する酵素をコードする関心対象の対象遺伝子を含むベクターを用いて、インビトロで形質導入する工程、(c)インビトロ培養物中でベクターにより形質導入されたT−Rapa細胞を増やす工程、および(d)T−Rapa細胞を該患者へと投与し、該T−Rapa細胞は、対象にて関心対象の導入遺伝子をコードするタンパク質を発現し、その後ライソゾーム病の1つまたは複数の症状を低減可能である工程を含む。
別の実施形態では、本開示は対象にてライソゾーム病を治療する方法を提供する。該方法は、(a)対象または好適なドナー由来のT細胞を得る工程、(b)ラパマイシンを用いてエクスビボで調整し、T−Rapa細胞を産生する工程、(c)T−Rapa細胞内に機能的に存在する場合、該T−Rapa細胞を関心対象の導入遺伝子を発現するベクターを用いてインビトロで形質導入する工程、(d)培養物内でベクターにより形質導入T−Rapa細胞をインビトロ培養物で増やす工程、および(e)形質導入されたT−Rapa細胞を該患者へと投与し、該T−Rapa細胞は、関心対象の導入遺伝子によってコードされたタンパク質を対象にて発現し、その後ライソゾーム病の1つまたは複数の症状を低減可能である工程を含む。
標準的な外来患者の採血またはアフェレーシスを含む対象からT細胞(例えば、CD4+T細胞)を得る好適な方法は、当技術分野で公知である。一実施形態では、T細胞を得ることは、対象または好適なドナーの末梢血サンプルからCD4+T細胞を検出および単離することを含む。末梢血からCD4+T細胞を検出および単離する好適な方法は当技術分野で公知であり、これは例えば、蛍光活性細胞分離(FACS)を含むフローサイトメトリー細胞分離、または磁石補助細胞分離(MACS)を含む、T細胞を認識する磁気ビーズを使用した磁気分離を含むがこれに限定されない。好適な実施形態では、CD4に対して特異的な抗体は、一部の例では磁気ビーズへと結合していてもよく、また末梢血内に見られる他の細胞とCD4+T細胞を分離するために使用されている。代替的には、ネガティブセレクションは該CD4−細胞をディプリートさせるために使用され得、こうすることでCD4+細胞の濃縮が可能となる。最新技術の方法の利点は、該方法で使用されるCD4+T細胞が、外来患者の採血から得られる末梢血サンプルから得ることが可能であり、また、末梢血単離前に任意のプライミングまたは他の治療工程を必要としない点である。一部の実施形態では、該方法にて使用される単離されたCD4+T細胞は、少なくとも約70%のCD4+(70%純粋)であり、より好ましくは少なくとも約75%のCD4+(75%純粋)、代替的には少なくとも約80%のCD4+(80%純粋)、代替的には少なくとも約85%(85%純粋)、少なくとも約90%のCD4+(90%純粋)、少なくとも約95%のCD4+(95%純粋)である。
一部の実施形態では、いったんCD4+T細胞が単離されると、該CD4+T細胞はインビトロで培養され、細胞を増やす。
一部の実施形態では、いったん単離されると、単離されたCD4+T細胞はラパマイシンを用いて条件づけ/治療され、T−Rapa細胞を形成する。好適には、該T細胞は導入遺伝子(例えばAGA、GAA、ASAH1、およびGBA導入遺伝子)または他の適切な治療構築物を含むベクターで形質導入する前に、ラパマイシンを用いて条件づけ/治療され得る。T−Rapa細胞を形成するための、T細胞を調整する方法は当技術分野で公知であり、Fowler et al.によって2013年に記載されており、その内容が参照により全体に組み入れられている。好適には、単離されたT細胞は、T細胞をラパマイシン耐性T細胞(T−Rapa細胞)へと形質転換するのに好適な量でサイトカインおよびラパマイシンを含む合成培地中で培養される。
T細胞をT−Rapa細胞に形質転換するのに好適な量のラパマイシンは、約0.1〜2マイクロモル濃度(0.1〜2μM)、代替的には約0.8〜1.5マイクロモル濃度を含むがこれに限定されない。0.1マイクロモル濃度といった低濃度のラパマイシンが使用され得るが、ラパマイシンの濃度を低下させることで、ラパマイシン耐性T細胞を増やす能力を劣化させ得るため、これよりラパマイシンの好ましい濃度は約1マイクロモル濃度である。薬物はこの濃度より高い濃度の従来の培地には完全に溶解されないため、1マイクロモル濃度より大きいラパマイシン濃度が増加することで可能性を限定してしまう。したがって、ほぼ1マイクロモル濃度であることは、ラパマイシン耐性(T−Rapa)表現型を獲得する上で最適である。
いったんT−Rapa細胞が誘導されると、T−Rapa細胞はベクターを用いてインビトロで形質導入され、これにより関心対象の導入遺伝子が発現可能である。関心対象の好適な導入遺伝子は、治療されているライソゾーム病によって変化することがある。
好適なベクターは当技術分野で公知であり、ベクター内にコードされる遺伝子が宿主細胞にて発現されるように、必要なエレメントを含有する。用語「ベクター」は、核酸分子または結合される別の核酸を輸送することができる遺伝子構築物を指す。ベクターの1種は「プラスミド」であり、これは中に追加のDNAセグメントが結合され得る環状二本鎖DNAループ、すなわち標的とされたタンパク質をコードしている特異的な外因性DNAセグメントを指す。別の種類のベクターはウイルスベクターであり、追加のDNAセグメントはウイルスゲノム中へと結合され得る。ある特定のベクターは、ベクターが中へと導入されている宿主細胞にて自己複製することができる。他のベクターは、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムへと組み込まれ得るため、それによって宿主ゲノム(例えばレンチウイルスベクター)と共に複製される。加えて、ある一定のベクターは、ベクターが動作可能に結合されている外因性遺伝子の発現を誘導することができる。かかるベクターは、本明細書にて「組換え発現ベクター」(または単純に「発現ベクター」または「ベクター」)と呼ばれる。一般には、組換えDNA技術において有用なベクターは、多くの場合プラスミドの形態である。本明細書において「ベクター」は、ウイルスベクター(例えば、複製欠陥レトロウイルス(レンチウイルスを含む)、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス)などの発現ベクターを含み、これらは同等の機能を果たす。細胞を形質導入するためのウイルスベクターを用いる方法は、細胞を感染または形質導入するためのウイルスを産生する方法と共に当技術分野で公知である。
ベクターは、2つ以上の異なる供給源由来の配列を含有する、異質の外因性構築物である。好適なベクターには、プラスミド、発現ベクター、レンチウイルス(レンチウイルスベクター)、特にアデノ随伴ウイルスベクター(rAAV)を含むがこれに限定されない。またこれは、関心対象の遺伝子(例えばAGA導入遺伝子)によってコードされたタンパク質を発現することのできる構築物を含む。好ましいベクターはレンチウイルスベクターである。レンチウイルスベクター粒子を作製する好適な方法は当技術分野で公知であり、一実施形態は実施例に記載されている。特異的なレンチウイルスベクターは実施例にて使用されている一方、該ベクターはこれらの実施形態に限定されず、任意のレンチウイルスまたは関心対象の導入遺伝子を発現可能な他のベクターは、最新の発明の実施における使用に関して企図されている。
ベクターは好ましくは、細胞を形質導入、形質転換または感染させることが可能であるため、該ベクターによってコードされた核酸および/またはタンパク質を細胞に発現させる。
導入遺伝子または関心対象の導入遺伝子は、疾患または障害に関連する任意のタンパク質または酵素を発現することが可能であってよい。一部の例では、該導入遺伝子はライソゾーム病に関連する酵素またはタンパク質を発現する。
一実施形態では、ライソゾーム病は、ファブリー病、ゴーシェ病、ファーバー病およびポンぺ病からなる群から選択される。
一実施形態では、ベクターは、ファブリー病の治療のためのα−ガラクトシダーゼA(α−galA)の発現を目的とする導入遺伝子を含有するレンチウイルスベクターである。本明細書にて使用する場合、用語アルファ−galまたはα−galAは互換的に使用されており、α−ガラクトシダーゼA酵素(タンパク質)を指す。
ファブリー病
関心対象の導入遺伝子、例えばコドン最適化AGA導入遺伝子(配列番号1)を外因性発現ベクター(例えばレンチウイルスベクター)へとクローニングする好適な方法は、当技術分野で公知であり、ファブリー病の治療のため、α−galAを発現するようにT−Rapa細胞を操作する機能的ベクターを産生することを目的としている。好ましい実施形態では、好適な発現ベクターは、例えばレンチウイルスベクター、例えばpDY/CO.a−galA(すなわちLV/AGA)(配列番号2)を含む。
関心対象の導入遺伝子、例えばコドン最適化AGA導入遺伝子(配列番号1)を外因性発現ベクター(例えばレンチウイルスベクター)へとクローニングする好適な方法は、当技術分野で公知であり、ファブリー病の治療のため、α−galAを発現するようにT−Rapa細胞を操作する機能的ベクターを産生することを目的としている。好ましい実施形態では、好適な発現ベクターは、例えばレンチウイルスベクター、例えばpDY/CO.a−galA(すなわちLV/AGA)(配列番号2)を含む。
好適には、AGA導入遺伝子は、配列番号1に対して少なくとも80%の類似度を有し、代替的には配列番号1に対して少なくとも85%の配列類似度を有し、代替的には配列番号1に対して少なくとも90%の配列類似度を有し、代替的には配列番号1に対して少なくとも95%の配列類似度を有し、代替的には配列番号1に対して少なくとも98%の配列類似度を有し、代替的には配列番号1に対して少なくとも99%の配列類似度を有し、代替的には配列番号1に対して少なくとも100%の配列類似度を有する。ファブリー病の治療に好適なレンチウイルスベクターは、配列番号2のベクターを含み、配列番号2に対して少なくとも80%の配列類似度を有し、代替的には配列番号2に対して少なくとも85%の配列類似度を有し、代替的には配列番号2に対して少なくとも90%の配列類似度を有し、代替的には配列番号2に対して少なくとも95%の配列類似度を有し、代替的には配列番号2に対して少なくとも98%の配列類似度を有し、代替的には配列番号2に対して少なくとも99%の配列類似度を有し、代替的には配列番号2に対して少なくとも100%の配列類似度を有するベクターを含む。
一部の実施形態では、デュアルプロモータのレンチウイルスベクターが使用され、これは関心対象の1つより多い遺伝子の発現を可能とする。例えば、デュアルプロモータのレンチウイルスベクターは、ある1つのライソゾーム病を治療するための関心対象の導入遺伝子および同じまたは異なる疾患を治療するための関心対象の別のタンパク質を発現することができる。代替的には、デュアルプロモータのレンチウイルスベクターは、インビトロまたはインビボのいずれかにて、関心対象の導入遺伝子および形質導入されたT−Rapa細胞の生存またはセレクションの促進の一助となる第2のタンパク質を発現することができる。代表的な目的のためだけに、仮特許出願番号第62/516,022号に記載のある好適なデュアルプロモータのベクターは、LV/AGA+(IY)(配列番号3、図13B)であり、その内容が参照により全体に組み入れられている。1つの好適な実施形態では、T−Rapa細胞は図12に表されているようにレンチウイルスベクターによって形質導入されている。別の実施形態では、T−Rapa細胞はデュアルプロモータレンチウイルスベクターによって形質導入されており、これはα−ガラクトシダーゼAおよびイノシン−5’−一リン酸デヒドロゲナーゼ2(IMPDH2(IY))の突然変異形態(例えば、配列番号3によってコードされたベクター)を発現する。かかるレンチウイルスベクターを使用することで、対象内のレンチウイルスベクターの形質導入T−Rapa細胞の集団を濃縮するのに十分である、有効量のミコフェノール酸モフェチル(MMF)またはミコフェノール酸(MPA)を用いて対象の治療を行うことにより、対象内の形質導入されたT−Rapa細胞をインビボで更に濃縮することが可能となる。
MPA/MMF投与の初期の結果は、T細胞とB細胞のディプリーションである。IMPDH2(IY)を発現することにより、形質導入されたT−Rapa細胞は、MPA/MMFに対して耐性がある。低用量のMMFを用いた治療は、元々の移植に影響を与えることなく、その一方で毒性が最小限でまたは毒性をまったく生じることなく、治療T−Rapaの数を増加可能である。次いで、この増加によって例えばα−ガラクトシダーゼAといった、導入遺伝子を発現および分泌している循環細胞の総数は増加する。これにより、疾患をより矯正することが可能となり得る。最新方法により、インビボで形質導入された細胞を濃縮するための方法が得られる。更にこれにより、こうした濃縮がいかに選択的かつ強力にMMFの投与によって変化するかに応じ、一部のゲーティングが可能となる。最新方法により、このレンチウイルスベクターを宿している濃縮された細胞を数年先にわたって内部に宿し、関心対象の導入遺伝子を発現する修正細胞の集団を再生させることもできる。
好適な実施形態では、MMFは有効な投与量で投与される。「有効投与量」は、最小限の副作用を有するレンチウイルスベクターを用いて導入遺伝子を発現するT−Rapa細胞が選択的に濃縮可能である投与量を指す。一実施形態では、有効投与量は低い投与量である。好適な低投与量としては、例えば0.1〜5mg/kg体重での所定のTID(1日あたり3回)を含むがこれに限定されない。代替的には約0.1〜3mg/kg体重での所定のTIDを含む。代替的には、有効量は、高い投与量のMMFを含んでよい。本発明を実施するための、好適な高い投与量は、約5〜10mg/kg体重でのTID(1日あたり3回)の量でMMFを含み、代替的には1000mgの所定のBID(1日あたり2回)を含む。好適には、「有効量」のMMFにより、約0.4〜約2μMの遊離ミコフェノール酸(MPA)の、対象内部での血液濃度が生じる。この血液濃度を得るための好適な投与量は、対象を治療する医師によって容易に決定される。MMFはまた、ミコフェノール酸(MPA)製剤(Myfortic、Novartis、または承認済ジェネリック)に替えられてもよい。
ゴーシェ病
一部の実施形態では、ライソゾーム病はゴーシェ病である。ゴーシェ病においては、GBA遺伝子の突然変異はβ−グルコセレブロシダーゼの活性を大きく低下または除去させる。活性の低下または除去により、脂質に分類されているグルコセレブロシドと呼ばれるグリコスフィンゴ脂質といったロウ様の物質を、糖(グルコース)と、セラミドといった別のスフィンゴ脂質へと分解する。この酵素が十分存在しない場合、グルコセレブロシドと関連物質は、細胞内の毒性レベルを最大に引き上げることがある。組織および臓器は、こうした物質を異常に蓄積および貯蔵することで損傷を受け、ゴーシェ病の特徴的な特色を引き起こす。本発明の好適な実施形態は、ゴーシェ病の治療のためのGBAを発現するT−Rapa細胞を提供する。一実施形態では、レンチウイルスベクターは、形質導入された細胞内で、β−グルコセレブロシダーゼ(例えば、配列番号7に見られるGBA導入遺伝子)の発現を可能とする導入遺伝子(例えばGBA導入遺伝子)を含む。好適には、GBA導入遺伝子は、配列番号7に対して少なくとも80%の類似度を有し、代替的には配列番号7に対して少なくとも85%の配列類似度を有し、代替的には配列番号7に対して少なくとも90%の配列類似度を有し、代替的には配列番号7に対して少なくとも95%の配列類似度を有し、代替的には配列番号7に対して少なくとも98%の配列類似度を有し、代替的には配列番号7に対して少なくとも99%の配列類似度を有し、代替的には配列番号7に対して少なくとも100%の配列類似度を有する。
一部の実施形態では、ライソゾーム病はゴーシェ病である。ゴーシェ病においては、GBA遺伝子の突然変異はβ−グルコセレブロシダーゼの活性を大きく低下または除去させる。活性の低下または除去により、脂質に分類されているグルコセレブロシドと呼ばれるグリコスフィンゴ脂質といったロウ様の物質を、糖(グルコース)と、セラミドといった別のスフィンゴ脂質へと分解する。この酵素が十分存在しない場合、グルコセレブロシドと関連物質は、細胞内の毒性レベルを最大に引き上げることがある。組織および臓器は、こうした物質を異常に蓄積および貯蔵することで損傷を受け、ゴーシェ病の特徴的な特色を引き起こす。本発明の好適な実施形態は、ゴーシェ病の治療のためのGBAを発現するT−Rapa細胞を提供する。一実施形態では、レンチウイルスベクターは、形質導入された細胞内で、β−グルコセレブロシダーゼ(例えば、配列番号7に見られるGBA導入遺伝子)の発現を可能とする導入遺伝子(例えばGBA導入遺伝子)を含む。好適には、GBA導入遺伝子は、配列番号7に対して少なくとも80%の類似度を有し、代替的には配列番号7に対して少なくとも85%の配列類似度を有し、代替的には配列番号7に対して少なくとも90%の配列類似度を有し、代替的には配列番号7に対して少なくとも95%の配列類似度を有し、代替的には配列番号7に対して少なくとも98%の配列類似度を有し、代替的には配列番号7に対して少なくとも99%の配列類似度を有し、代替的には配列番号7に対して少なくとも100%の配列類似度を有する。
一実施形態では、該ベクターは配列番号7または配列番号7に対し少なくとも80%の相同性を有する配列の導入遺伝子GBAを含む、レンチウイルスベクターである。
GBAを含むレンチウイルスベクターに好適な配列は、配列番号4に見られおよび図13Cに表されている。または、配列番号4に対して少なくとも75%の配列類似度を有し、代替的には配列番号4に対して少なくとも80%の配列類似度を有し、代替的には配列番号4に対して少なくとも85%の配列類似度を有し、代替的には配列番号4に対して少なくとも90%の配列類似度を有し、代替的には配列番号4に対して少なくとも95%の配列類似度を有し、代替的には配列番号4に対して少なくとも98%の配列類似度を有し、代替的には配列番号4に対して少なくとも99%の配列類似度を有し、代替的には配列番号4に対して少なくとも100%の配列類似度を有する配列に見られる。β−グルコセレブロシダーゼタンパク質の発現に対してコードしている他の好適なベクターは、本明細書にて企図されている。
ファーバー病
一部の実施形態では、ライソゾーム病はファーバー病(ファーバー脂肪肉芽腫症、セラミダーゼの欠乏、「線維芽細胞ムコ多糖異常症」(Fibrocytic dysmucopolysaccharidosis)、および「脂肪肉芽腫症」としても公知である)であり、導入遺伝子ASAH1は、N−アシルスフィンゴシンアミドハイドロラーゼ1または酸性セラミダーゼ(本明細書にて互換的に用いられる)を発現する。ファーバー病は、酵素である酸性セラミダーゼにおける欠乏により特徴づけられる、極めて稀である常染色体性の潜性ライソゾーム病である。これはスフィンゴ脂質として公知であるロウ様の脂質であり、特にセラミドの蓄積を生じ、関節、肝臓、咽頭、内臓組織および中枢神経系における異常がもたらされる。好適な実施形態は、ファーバー病の治療のためのN−アシルスフィンゴシンアミドハイドロラーゼ1を発現しているT−Rapa細胞を提供する。好適なベクターは、好ましくはレンチウイルスベクターであるがこれは、T−Rapa細胞内でN−アシルスフィンゴシンアミドハイドロラーゼ1を発現するために使用される。本明細書で使用される場合、好適なベクターは、好ましくはレンチウイルスベクターであるがこれは、T−Rapa細胞にてN−アシルスフィンゴシンアミドハイドロラーゼ1を発現するために使用され得る。例えば、好適なベクターは配列番号8または配列番号8と80%の類似度を有する配列のASAH1導入遺伝子を用いてN−アシルスフィンゴシンアミドハイドロラーゼ1を発現し得る。好適には、ASAH1導入遺伝子は、配列番号8に対して少なくとも80%の類似度を有し、代替的には配列番号8に対して少なくとも85%の配列類似度を有し、代替的には配列番号8に対して少なくとも90%の配列類似度を有し、代替的には配列番号8に対して少なくとも95%の配列類似度を有し、代替的には配列番号8に対して少なくとも98%の配列類似度を有し、代替的には配列番号8に対して少なくとも99%の配列類似度を有し、代替的には配列番号8に対して少なくとも100%の配列類似度を有する。
一部の実施形態では、ライソゾーム病はファーバー病(ファーバー脂肪肉芽腫症、セラミダーゼの欠乏、「線維芽細胞ムコ多糖異常症」(Fibrocytic dysmucopolysaccharidosis)、および「脂肪肉芽腫症」としても公知である)であり、導入遺伝子ASAH1は、N−アシルスフィンゴシンアミドハイドロラーゼ1または酸性セラミダーゼ(本明細書にて互換的に用いられる)を発現する。ファーバー病は、酵素である酸性セラミダーゼにおける欠乏により特徴づけられる、極めて稀である常染色体性の潜性ライソゾーム病である。これはスフィンゴ脂質として公知であるロウ様の脂質であり、特にセラミドの蓄積を生じ、関節、肝臓、咽頭、内臓組織および中枢神経系における異常がもたらされる。好適な実施形態は、ファーバー病の治療のためのN−アシルスフィンゴシンアミドハイドロラーゼ1を発現しているT−Rapa細胞を提供する。好適なベクターは、好ましくはレンチウイルスベクターであるがこれは、T−Rapa細胞内でN−アシルスフィンゴシンアミドハイドロラーゼ1を発現するために使用される。本明細書で使用される場合、好適なベクターは、好ましくはレンチウイルスベクターであるがこれは、T−Rapa細胞にてN−アシルスフィンゴシンアミドハイドロラーゼ1を発現するために使用され得る。例えば、好適なベクターは配列番号8または配列番号8と80%の類似度を有する配列のASAH1導入遺伝子を用いてN−アシルスフィンゴシンアミドハイドロラーゼ1を発現し得る。好適には、ASAH1導入遺伝子は、配列番号8に対して少なくとも80%の類似度を有し、代替的には配列番号8に対して少なくとも85%の配列類似度を有し、代替的には配列番号8に対して少なくとも90%の配列類似度を有し、代替的には配列番号8に対して少なくとも95%の配列類似度を有し、代替的には配列番号8に対して少なくとも98%の配列類似度を有し、代替的には配列番号8に対して少なくとも99%の配列類似度を有し、代替的には配列番号8に対して少なくとも100%の配列類似度を有する。
好適なレンチウイルスベクターは、図13Dに表されているまたは配列番号5中のベクターを含む。ASAH1導入遺伝子を含むレンチウイルスベクターに好適な配列は、配列番号5、または配列番号5に対して少なくとも75%の配列類似度を有し、代替的には配列番号5に対して少なくとも80%の配列類似度を有し、代替的には配列番号5に対して少なくとも85%の配列類似度を有し、代替的には配列番号5に対して少なくとも90%の配列類似度を有し、代替的には配列番号5に対して少なくとも95%の配列類似度を有し、代替的には配列番号5に対して少なくとも98%の配列類似度を有し、代替的には配列番号5に対して少なくとも99%の配列類似度を有し、代替的には配列番号5に対して少なくとも100%の配列類似度を有する配列に見られる。N−アシルスフィンゴシンアミドハイドロラーゼ1タンパク質の発現のためにコードする他の好適なベクターは、本明細書にて企図されている。
ポンペ病
別の実施形態では、本発明は、ポンペ病の治療のためのベクターおよび酸α−グルコシダーゼ(GAA導入遺伝子によってコードされている)を発現しているT−Rapa細胞を提供している。ポンペ病は、体の細胞であるライソゾームにおいて、グリコーゲンと呼ばれる複合型糖を分解することができないことで生じる遺伝性障害であり、これによりある特定の臓器および組織(特に筋肉)中でグリコーゲンの蓄積が生じ、正常に機能する能力を損なってしまう。GAA遺伝子は酸性α−グルコシダーゼ(酸性マルターゼとしても公知である)と呼ばれている酵素を産生するための指示を提供することから、GAA遺伝子内部での突然変異はポンペ病を引き起こす。この酵素はライソゾーム内で活性であり、細胞内でのリサイクルセンターとして機能する。この酵素は、ライソゾーム内で、グリコーゲンをグルコースと呼ばれている単純型糖へと分解する。これは大半の細胞にとって主要なエネルギー源である。一部の実施形態では、酸性α−グルコシダーゼを発現しているT−Rapa細胞は、ポンペ病を有する対象を治療するために使用されている。上記のように、ベクター、好ましくはレンチウイルスベクターであるが、これは後の分泌のため、T−Rapa細胞内でGAA導入遺伝子により酸性α−グルコシダーゼを発現するために使用され得る。一実施形態では、ベクター、好ましくはレンチウイルスベクターは、配列番号9または配列番号9に対して少なくとも80%類似している配列のGAA導入遺伝子を含む。好適には、GAA導入遺伝子は、配列番号9に対して少なくとも80%の類似度を有し、代替的には配列番号9に対して少なくとも85%の配列類似度を有し、代替的には配列番号9に対して少なくとも90%の配列類似度を有し、代替的には配列番号9に対して少なくとも95%の配列類似度を有し、代替的には配列番号9に対して少なくとも98%の配列類似度を有し、代替的には配列番号9に対して少なくとも99%の配列類似度を有し、代替的には配列番号9に対して少なくとも100%の配列類似度を有する。
別の実施形態では、本発明は、ポンペ病の治療のためのベクターおよび酸α−グルコシダーゼ(GAA導入遺伝子によってコードされている)を発現しているT−Rapa細胞を提供している。ポンペ病は、体の細胞であるライソゾームにおいて、グリコーゲンと呼ばれる複合型糖を分解することができないことで生じる遺伝性障害であり、これによりある特定の臓器および組織(特に筋肉)中でグリコーゲンの蓄積が生じ、正常に機能する能力を損なってしまう。GAA遺伝子は酸性α−グルコシダーゼ(酸性マルターゼとしても公知である)と呼ばれている酵素を産生するための指示を提供することから、GAA遺伝子内部での突然変異はポンペ病を引き起こす。この酵素はライソゾーム内で活性であり、細胞内でのリサイクルセンターとして機能する。この酵素は、ライソゾーム内で、グリコーゲンをグルコースと呼ばれている単純型糖へと分解する。これは大半の細胞にとって主要なエネルギー源である。一部の実施形態では、酸性α−グルコシダーゼを発現しているT−Rapa細胞は、ポンペ病を有する対象を治療するために使用されている。上記のように、ベクター、好ましくはレンチウイルスベクターであるが、これは後の分泌のため、T−Rapa細胞内でGAA導入遺伝子により酸性α−グルコシダーゼを発現するために使用され得る。一実施形態では、ベクター、好ましくはレンチウイルスベクターは、配列番号9または配列番号9に対して少なくとも80%類似している配列のGAA導入遺伝子を含む。好適には、GAA導入遺伝子は、配列番号9に対して少なくとも80%の類似度を有し、代替的には配列番号9に対して少なくとも85%の配列類似度を有し、代替的には配列番号9に対して少なくとも90%の配列類似度を有し、代替的には配列番号9に対して少なくとも95%の配列類似度を有し、代替的には配列番号9に対して少なくとも98%の配列類似度を有し、代替的には配列番号9に対して少なくとも99%の配列類似度を有し、代替的には配列番号9に対して少なくとも100%の配列類似度を有する。
一実施形態では、好適なレンチウイルスベクターは図13Eおよび配列番号6中に示されている。GAAを含むレンチウイルスベクターに好適な配列は、配列番号6、または配列番号6に対して少なくとも75%の配列類似度を有し、代替的には配列番号6に対して少なくとも80%の配列類似度を有し、代替的には配列番号6に対して少なくとも85%の配列類似度を有し、代替的には配列番号6に対して少なくとも90%の配列類似度を有し、代替的には配列番号6に対して少なくとも95%の配列類似度を有し、代替的には配列番号6に対して少なくとも98%の配列類似度を有し、代替的には配列番号6に対して少なくとも99%の配列類似度を有し、代替的には配列番号6に対して少なくとも100%の配列類似度を有する配列に見られる。酸性α−グルコシダーゼタンパク質の形態で発現するためにコードする他の好適なベクターは、本明細書にて企図されている。
表1に列挙した他のライソゾーム病は、本明細書に記載の方法によって治療されるよう、企図されている。
「配列相同性の比率」または「配列類似度」は、2つの最適に並べられた配列を比較ウインドウによって比較することで決定される。比較ウインドウ内のポリヌクレオチド配列の一部は、2つの配列の最適なアラインメントに関して、参照配列(これは置換、追加または削除を含まない)と比較して、置換、または追加、または削除(すなわちギャップ)を含んでよい。比率は、一致した位置の数を得るため、同一の核酸塩基またはアミノ酸残基が両方の配列内で生じている位置の数を決定することにより計算される。この一致した位置の数を比較ウインドウ内の位置の総数で割り、更に得た結果に100を掛けて配列相同性の比率を得る。
ポリヌクレオチド配列の用語「実質的な相同性」または「類似度」は、ポリヌクレオチドが少なくとも80%の配列相同性を有する配列を含むことを意味する。好適な配列類似度は、導入遺伝子によって発現されているタンパク質の機能に影響しない、導入遺伝子の小さな変化を与える。代替的には、パーセント相同性は、75〜100%の任意の整数であり得る。より好ましい実施形態は、標準的なパラメータを用いるBLASTなどのプログラムを使用する参照配列と比較して、少なくとも75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%を含む。コドン縮退、アミノ酸類似性、リーディングフレームの位置決めなどを考慮することにより、2つのヌクレオチド配列によってコードされた、対応するタンパク質の相同性を測定するため、こうした値が適切に調節され得る。
T−Rapa細胞を形質導入することができる、好適な量のレンチウイルスは、例えば、1〜100のMOI(感染多重度、multiplicity of infection)、好ましくは1〜30のMOI、代替的には1〜60のMOIを使用することを含む。該T−Rapa細胞は、10〜24時間、好適には約12〜16時間の間、レンチウイルスに曝されてよい。該T−Rapa細胞は、本明細書に列挙された曝露時間の間、連続して1〜3回、好適には1回形質導入されてよい。サイトカインは、形質導入中に培地に加えられてよい。形質導入後、細胞は患者へと戻して導入され得るか、または後の移植用に凍結保存され得るか、またはその両方の組合せのいずれかが行われ得る。一部の例では、形質導入された細胞は、導入または凍結保存される前にある程度の日数にわたって培養されてよい。凍結保存の好適な方法は、当技術分野で公知である。
他の好適なベクターは当技術分野で公知であり、これはAAVベクターなどを含む細胞を形質導入するために使用され得る。関心対象の導入遺伝子によってコードされた酵素を安定して発現させることができる任意のベクターが、本明細書にて使用するために企図されている。
一部の実施形態では、形質導入されたT−Rapa細胞は培養物中で増やされ、培養物の種々の段階にて凍結保存される。凍結保存の好適な方法には、凍結保存培地に細胞を懸濁させることおよび−80℃〜−196℃(好ましくは−80℃未満)で細胞を保存することを含むがこれに限定されない。好適な凍結保存培地は当技術分野で公知であり、かつこれは基礎培地、凍結保存用保存剤(例えばDMSO)およびタンパク質供給源の組合せをいくらか含むことができる。例えば、好適な凍結保存培地は、完全培地および10%のグリセロール、10%のDMSO(ジメチルスルホキシド)を含有する完全培地、または45%の新鮮な培地および10%のグリセロールまたはDMSOを有する45%の細胞で条件づけられた培地を含んでよい。代替的な実施形態では、凍結保存培地は血清フリーであり、例えば46.25パーセントの新鮮な血清フリー培地および7.5パーセントのDMSOを有する46.25%の細胞調整血清フリー培地を含む。
T細胞を培養するのに好適な合成培地は当技術分野で公知であり、市販のX−Vivo20などの栄養豊富な培地が含まれるがこれに限定されない。好適には、合成培地はサイトカインを更に追加されている。好ましくは、一実施形態では、組換えヒトIL−2(rhu IL−2)および組換えヒトIL−4(rhu IL−4)サイトカインは、培地に追加するために使用されている。組換えサイトカインの好適な量には、約10〜100IU/mLのIL−2、好ましくは約20IU/mLのIL−2および約500〜2000IU/mLのIL−4、好ましくは約1000IU/mLのIL−4が挙げられる。
一部の実施形態では、形質導入されたT−Rapa細胞はインビトロで増やされる。増殖中、形質導入されたT−Rapa細胞は、本明細書に記載のサイトカインを追加した合成培地中に培養されてよい。好適には、形質導入されたT−Rapa細胞は少なくとも1日間培養されてよく、好適には少なくとも2週間培養されてよく、代替的には少なくとも約4週間、代替的には少なくとも約6週間培養されてよい。
形質導入されたT−Rapa細胞は、少なくとも5継代数にわたって培養物中にてインビトロで維持および増やされてよく、代替的には少なくとも10継代数、代替的には15継代数、代替的には20継代数にわたって維持および増やされてよい。形質導入されたT−Rapa細胞は、形質導入後任意の継代数で凍結保存されてよい。
本開示は、関心対象の導入遺伝子によってコードされたタンパク質を発現する、形質導入されたT−Rapa細胞の集団およびその任意の使用方法を企図している。例えば、本開示は、関心対象の導入遺伝子によってコードされたタンパク質を発現する、形質導入されたT−Rapa細胞の集団を提供する。一実施形態では、本開示はα−galAを発現する形質導入されたT−Rapa細胞の集団を提供する。別の態様では、本開示はβ−グルコセレブロシダーゼを発現する形質導入されたT−Rapa細胞の集団を提供する。別の態様では、本開示は酸性セラミダーゼを発現する形質導入されたT−Rapa細胞の集団を提供する。別の態様では、本開示は酸性α−グルコシダーゼを発現する形質導入されたT−Rapa細胞の集団を提供する。
好適には、形質導入されたT−Rapa細胞は、ライソゾーム病(例えばファブリー病)の1つまたは複数の症状を低減するのに有効な量で、ライソゾーム病を有する対象へと投与される。形質導入されたT−Rapa細胞を投与する好適な方法は、当技術分野で公知であり、点滴静注および輸血を含むがこれに限定されない。
形質導入されたT−Rapa細胞は、少なくとも1回投与されてよく、好適には、ライソゾーム病(例えばファブリー病)の1つまたは複数の症状を治療するため、関心対象の酵素またはタンパク質の発現(例えばα−galAの発現)の向上が必要とされる、それ以上の回数で投与される。ライソゾーム病に詳しい当業者は、酵素(例えばα−galA)の産生のモニタリングおよび追加の投与の必要性を理解するであろう。
用語「対象」または「患者」は互換的に使用され、哺乳動物の対象は例えば、マウス、ラット、サル、ヒトなどを指す。好ましい実施形態では、対象はヒトである。対象または患者は、本明細書にて企図されている治療を行う前に、ライソゾーム病に対して1つまたは複数の治療で既に治療されていてもよいことが企図されている。例えば、外因性酵素で、または形質導入されたHSC細胞を用いた従来の方法によって治療されている患者は、本発明の使用対象である患者として企図されている。
宿主細胞は、好適にはT細胞であり、例えばCD4+T細胞である。本明細書で提供された実施例はCD4+T細胞の使用について記載しているが、一部の実施形態では、治療タンパク質(関心対象の導入遺伝子)を分泌するCD4+細胞とCD8+T細胞の混合集団を製造するのに有益であり得る。更に、一実施形態では、T細胞はTh2サイトカイン表現型に対して歪んでおり、一部の実施形態では、Th1、Th17などの他の表現型または制御因子T細胞サブセットに対して歪んだT細胞を製造するのに有益であり得る。
形質導入されたT−Rapa細胞の集団を産生する好適な方法は、本明細書にて提供されている。
一部の実施形態では、形質導入されたT−Rapa細胞は薬学的に許容される担体または賦形剤と共に対象へと投与される。
「薬学的に許容される担体」は、任意の従来の薬学的に許容される担体、ビヒクル、または産生および対象に組成物を投与するため当技術分野で使用される賦形剤を意味する。薬学的に許容される担体は、典型的には非毒性であり、不活性であり、固形または生理学的に均衡な液体担体である。典型的には、緩衝整理食塩水または他の生理食塩水は、生理学的に許容される担体である。水は生理学的に許容される好適な担体であるとは企図されていない。一部の実施形態では、本発明のT−Rapa細胞の構造および機能を保存するため、追加成分が加えられてよいが、これは対象への投与に関して生理学的に許容されるものである。
本発明は1つまたは複数の好ましい実施形態に関して記載されており、明確に言及されたものを除いて、多くの等価物、代替物、変更物、修飾が可能であり、かつこれらは発明の範囲内であると理解されるべきである。
既に記載したものに加え、多くの追加的な修飾は発明の概念から逸脱しない限り可能であることは、当業者には明白である。本開示を解釈する上で、全ての用語は文脈と一致する最大限広範な様式として解釈されるべきである。用語「含む(comprising)」の変形は、非排他的な様式の要素、成分または工程を指すものとして解釈されるべきである。そのため、言及された要素、成分、または工程は、明確に参照されていない他の要素、成分、または工程と組み合わせられてよい。ある特定の要素を「含む」と参照されている実施形態はまた、それらの要素「から本質的になる」およびそれらの要素「からなる」というように企図されている。値の範囲が設定されている場合、本開示は、明示的に記載されていない範囲の下限および上限の他の組合せを明示的に企図している。例えば、1〜10または2〜9の間の値の列挙はまた、1〜9または2〜10の間の値を企図している。2つの値の「間」にあると確認されている範囲は、その値の終点を包括するものである。例えば、1〜10の間の値の列挙は、1〜10の値を含む。
方法に関して記載されている本開示の態様は、本開示にて議論されている物質の組成物またはキットの文脈で使用され得る。同様に、物質の組成物に関して記載されている本開示の態様は、方法およびキットの文脈で使用され得、キットに関して記載されている本開示の態様は、方法および物質の組成物の文脈で使用され得る。
本発明は、以下の非限定的な実施例を考慮することで、より完全に理解されるだろう。
実施例1:レンチウイルスベクターの産生
LV構築物
α−galAをコードしているヒトGLA遺伝子のcDNAを含むDNAフラグメントを、GenScriptによって合成した。GLA遺伝子のcDNAは、ヒト細胞の増強した発現のため、コドン最適化された。合成されたDNAフラグメントは、3’自己不活性化(3’SIN)し、HIV−1−ベースであり、予め発明者らのラボにて複数のクローニング部位(MCS)中のEcoRIとXmaI制限部位の間に生成した、レンチウイルス骨格プラスミドpDY.cPPT−EF1a−MCS−WPREへとサブクローニングされた。この後、発明者らはQ5−部位特異的変異導入キット(New England Biolabs)を用いて部位特異的な変異導入を行い、cDNAの配列上流を編集し、最適なコザックコンセンサス配列を生成させた。これらの工程によりプラスミドpDY/CO.α−galA(配列番号2)を生成し、これを発明者らの調査におけるLV調製全てに使用した。プロウイルス領域を包含するプラスミド配列は、DNAシーケンシングによって検証された。この方法はHuang et al.が2017年に記載され、注釈として利用しているものであり、その内容が参照により全体に組み入れられている。
機能的力価解析を伴う、研究グレードおよび準医療グレードのLVの調製
α−galAをコードしているヒトGLA遺伝子のcDNAを含むDNAフラグメントを、GenScriptによって合成した。GLA遺伝子のcDNAは、ヒト細胞の増強した発現のため、コドン最適化された。合成されたDNAフラグメントは、3’自己不活性化(3’SIN)し、HIV−1−ベースであり、予め発明者らのラボにて複数のクローニング部位(MCS)中のEcoRIとXmaI制限部位の間に生成した、レンチウイルス骨格プラスミドpDY.cPPT−EF1a−MCS−WPREへとサブクローニングされた。この後、発明者らはQ5−部位特異的変異導入キット(New England Biolabs)を用いて部位特異的な変異導入を行い、cDNAの配列上流を編集し、最適なコザックコンセンサス配列を生成させた。これらの工程によりプラスミドpDY/CO.α−galA(配列番号2)を生成し、これを発明者らの調査におけるLV調製全てに使用した。プロウイルス領域を包含するプラスミド配列は、DNAシーケンシングによって検証された。この方法はHuang et al.が2017年に記載され、注釈として利用しているものであり、その内容が参照により全体に組み入れられている。
機能的力価解析を伴う、研究グレードおよび準医療グレードのLVの調製
研究グレードのLV/AGAは、以前の記載の通り、発明者らのラボにて調製された(Wang,J.C.,Felizardo,T.C.,Au,B.C.,Fowler,D.H.,Dekaban,G.A.,and Medin,J.A.(2013).Engineering lentiviral vectors for modulation of dendritic cell apoptotic pathways.Virol.J.10,240)。準医療グレードのLV/AGAを産生した。これは臨床試験用の新医薬品(IND)の提案下で、期待されるヒト治験での使用に関する最新のGMP要件に合致していた。
LV粒子はHEK293Tパッケージング細胞を用いて産生された。パッケージング細胞を4Lの培養物量に増やし、これをLVパッケージングプラスミド(pCMVΔR8.91(パッケージングプラスミド)およびpMD.G(プラスミドをコードしているVSV−Gエンベロープ))ならびにトランスファープラスミド(pDY/CO.a−gal A)を用いて一時的に共遺伝子導入した。増やされた前述のプラスミドの配列は、DNAシーケンシングによって検証された。培養物の上清を2度収集し、総計で8Lの未濃縮のLV含有上清を得た。LV含有上清は、Mustang Qイオン交換クロマトグラフィーによって更に精製され、タンジェンシャルフローフィルトレーションにより濃縮され、100mLのGMPグレードLonza X vivo 20細胞増殖培地へとバッファ交換された。
水泡口炎ウイルス糖タンパク質シュードタイプレンチウイルス(VSVg−LV)を生成した。手短に、HEK293T細胞は15cmの培養皿に播種され、LVパッケージングプラスミドおよびトランスファープラスミドを用いて24時間後に遺伝子導入した。16〜17時間後、細胞が存在する培地を新鮮な培地へと交換した。24時間後、培養物上清を収集し、新鮮な培地と交換した。更に24時間後、2度目の収集を実施した。培養物上清を0.22μmの吸引フィルタを用いてろ過し、2時間半にわたり50,000gで超遠心分離にかけた。残留液体をウイルスペレットから除去し、次いでこれらをLonza X vivo 20中に再懸濁させ、使用するまで−80℃で保存した。図11に表されるように、24時間後と48時間後にウイルス上清を収集し、2時間超、50,000gで超遠心分離にかけることで濃縮させた。ウイルスの貯蔵物をリンパ球培地(Lonza X vivo 20)中に再懸濁させ、使用するまで−80℃で保存した。
最終濃縮ベクター産物のサンプルバイアルはGC分析にかけられる。この分析にはサザンブロット解析によるベクターの相同性確認およびp24 ELISAによる力価確認が含まれており、これに加えて好気性菌の無菌性および嫌気性菌の無菌性、マイコプラズマレベル、エンドトキシンレベル、および残留DNAベンゾナーゼレベルが検査される。
発明者らは、ベクターの連続希釈を用いてHEK293T細胞を形質導入し、その後定量的リアルタイムPCR解析を用いて細胞あたりの平均ウイルスコピー数を測定することで、全てのLV調製物の感染力価検査を実施した。
実施例2:形質導入されたT−Rapa細胞の製造
形質導入されたT−Rapa細胞を作製する概略は図9に表されている。ドナーのリンパ球は、幹細胞の動員の前に実施された定常状態での10リットルのアフェレーシスによって収集された。CD4細胞は陽性に選択され(Miltenyi、CliniMACS(登録商標)デバイスまたはラボの同等のデバイス)、共刺激された(GMPグレードの抗−CD3[OKT3、Ortho]およびGMPグレードの抗−CD28 9.3抗体[ビーズ:細胞の比が3:1]で抱合されたトシル化磁気ビーズ[Dynal])。代替的には、ドナーのリンパ球は、CD34+cliniMACS法によるCD34−ディプリート通過画分としてドナーから動員された幹細胞から得られた。CD4+細胞は、既に記載の磁気濃縮を用いて得られた。
精製されたCD4+細胞は、X−VIVO 20培地(Lonza)、5%のドナーの血清、組換えヒト(rhu)IL−4(1000I.U./mL、Schering)、rhu IL−2(20I.U./mL、Chiron)およびSirolimus(登録商標)、経口液(Wyeth、1μM)および抗−CD3/CD28ビーズ(3:1)を用いてポリオレフィン製のバッグ(Baxter)にて培養する。3日後、T細胞を洗浄し、30〜60のMOIにてα−galAを発現可能であるレンチウイルスベクターで形質導入する。18時間後、T細胞を洗浄し、ラパマイシンを含まない追加のX−VIVO 20培地にて繁殖させる。6日目にはビーズを除去した。T細胞を洗浄してサイトカインを除去し、その後凍結保存した。注入された全てのT−Rapa産物は放出基準と見合っていた。この基準には、CD4細胞純度>70%(中央値CD4純度は99%だった)、生存度>70%(中央値生存度が95%だった)、細菌および真菌増殖の不在、リムルスアッセイによるエンドトキシン含有量の不在、ネガティブマイコプラズマ検査、および3×106細胞ごとに<100の磁気ビーズというものが含まれる。T−Rapa細胞は使用のために培養して増やし、凍結保存される。
図2に表されているように、健常なドナー(ND)およびファブリー病ドナー(FD)から誘導されたT−Rapa細胞は、レンチウイルスベクターによって効率的に形質導入された。
実施例3:LVによって形質導入されたT−Rapa細胞内でのα−galAの発現
α−galAのレベルは、健常なドナーおよびファブリー病ドナー由来の形質導入されたT−Rapa細胞に関して測定された。特異的なα−galA活性は、既に記載の蛍光定量的アッセイによって測定された(Yoshimitsu et al.2004,PNAS:942540−2544)。手短に、血漿または細胞/臓器タンパク質抽出物を、α−N−アセチルガラクトサミニダーゼ阻害剤、N−アセチル−D−ガラクトサミン(100mmol/L)(Sigma Aldrich,St.Louis,MO)の存在下で4−メチルウンベリフェリル−α−D−ガラクトピラノシド(5mmol/L)を用いてインキュベートした。酵素反応の産物は、公知の濃度の4−メチルウンベリフェロンと比較して定量化された。各測定は3通りで評価され、総タンパク質濃度へと標準化された(BCA Protein Assay Kit、Pierce,Rockford,IL)。結果は図3Aおよび図3Bに示され、細胞溶解液(A)および上清(B)中のα−galA含有量を表している。
α−galAのレベルはまた、図4および図5に示されているように、Wes(商標)Simple Western Systemにより検出された。
実施例4:ファブリー病のマウスモデルのインビボ治療
既に記載のα−galA欠乏および免疫無防備状態のファブリー病マウス(NOD/SCID/AGA−/−)(Pacienza et al.2012)を使用し、ファブリー病の治療のため、形質導入されたT−Rapa細胞の使用に関するインビボでの有効性を検査した。NOD/SCID/AGA−/−マウスは、図6に表された健常なドナーまたはファブリー病ドナーのいずれか由来である、5×105の形質導入されたヒトT−Rapa細胞を用いて移植された。移植された動物内のα−galA活性は、異種移植した4週間後にアッセイされた。肝臓、脾臓、心臓、腎臓、血漿およびPB−WBCを収集した。PB−WBCは、形質導入されたT−Rapa細胞の存在に関して、フローサイトメトリーおよびにVCNよりアッセイされた。血漿はα−galA活性に関して評価され、図7には結果を図8には生データを示している。図18は、α−galA活性は、形質導入された健常なドナーのT Rapa(n=4〜5)を異種移植した4週間後に、インビボにて収集された臓器内で検出可能であることを示す。
更に、形質導入されたT−Rapa細胞のインビボで基質を低下させる能力もまたアッセイした。グロボトリアオシルセラミド(Gb3)、ファブリー病マウスに蓄積した主要基質、およびグロボトリアオシルスフィンゴシン(lyso−Gb3)は、健常なドナーの形質導入されたT−Rapa細胞を用いた治療後、UPLC−MS/MSによって血漿および組織ホモジネート内で定量化した。図19に示されるように、基質は形質導入された健常なドナーのT Rapa(n=4〜5)を移植した4週間後に、低下した。
健常なドナーおよびファブリー病ドナーから誘導された、LV/AGAベクターにより形質導入されたT−Rapa細胞は、インビボで活性酵素を産生および分泌した。
ファブリー病患者から誘導されたCD4+T細胞はまた、上記のα−galAをコードしているレンチウイルスベクターで形質導入された。最初に、発明者らは、図17に示されるように、3人のファブリー病患者由来のT−Rapa細胞がα−galA活性を示し、細胞内部および細胞内上清の両方での酵素活性を測定したことを確認した。次いで発明者らは、1mMの可溶性マンニトース−6−ホスファートの有無に関わらず、6時間にわたりT−Rapa細胞で条件づけられた上清を用いて、不死化されたファブリー病患者由来の線維芽細胞を治療し、T−Rapa細胞から産生された酵素が吸収され得るかどうかを確認した(図17)。
ファブリー病患者から誘導されたこれらの形質導入されたT−Rapa細胞はまた、免疫無防備状態のファブリー病マウスモデルへと移植され、α−galA活性を測定した。図20に示されるように、α−galAは形質導入されたファブリー病ドナーのT−Rapa(n=4〜5)を異種移植した4週間後に、インビボで検出可能である。更に、これらのファブリー病のT−Rapaを形質導入した細胞は、図21に表されるように、ファブリー病マウス内の基質(Gb3)を低下させることが可能であった。基質は形質導入されたファブリー病ドナーのT−Rapa(n=4〜5)を移植した4週間後に低下した。
この実施例は、形質導入されたT−Rapaがライソゾーム貯蔵疾患に対抗する必要な酵素(例えばα−galAおよびGCase)を発現および分泌することを示す。更に、この実施例は、形質導入されたファブリー病患者のT−Rapa細胞が製造可能であり、形質導入されたT−Rapa細胞が基質を低下させるためにインビボで機能可能であることを示している。
実施例5:ファブリー病の治療
図10は、本明細書に記載の方法によって障害を治療するための全体のプロトコールの概略を示し、形質導入されたT−Rapa細胞を用いてライソゾーム病(例えばファブリー病)を治療するための工程を特に示している。
患者の末梢血は、当技術分野で公知の方法によって収集された。次いでCD4+T細胞は当技術分野で公知である方法を用いて末梢血から単離される。例えば、フローサイトメトリー細胞分離またはCD4に対する抗体を用いる磁気細胞分離といったものである。代替的には、CD4+細胞はアフェレーシス産物からも同様に単離されることができる。これは、当技術分野で公知である方法を用いて得ることができる。単離されたCD4+細胞は、ラパマイシン(例えば1マイクロモル)の存在下で、上記のサイトカイン(IL−2およびIL−4)の存在下にて3日間培養される。T−Rapa細胞は、12〜18時間の間、1〜30または1〜60のMOIにてエクスビボでレンチウイルスを用いて形質導入される。この後、このT−Rapa細胞は更に3日間(3日〜約1か月にわたって培養され得る)、サイトカイン含有培地にて培養される。
T−Rapa細胞を受け入れた患者は、骨髄非破壊的前処置で条件づけされない。むしろ、実施される化学療法の種類は、リンパ球特異的およびミエロイド温存であり得る。リンパ球特異的化学療法は、(他の投与計画が想起される場合もあり得るが)以下の投与計画:(1)フルダラビンおよび低用量の毎日のシクロホスファミド、または(2)ペントスタチンおよび低用量の毎日のシクロホスファミドからなる。
患者には、約2〜10×106/kgの形質導入されたT−Rapa細胞を注入する。α−galAの発現に関して患者をモニタリングした。細胞投与は繰り返されてよく、細胞投与量は適切な医師によって推奨されるように調節されてよい。
実施例6:本発明の方法で使用するためのデュアルプロモータレンチウイルスベクターの産生
一部の実施例では、本発明はデュアルプロモータレンチウイルスベクターを使用して導入遺伝子(例えばAGA導入遺伝子)および薬物(例えばミコフェノール酸モフェチル(MMF))に対する耐性を付与する耐性遺伝子(例えば、IMPDH2(IY))をターゲットT細胞へと導入してよい。デュアルプロモータ構築物(pDY−DP(配列番号10))を設計し、標準的な分子生物学的技術を使い、pDYを用いて骨格としてこれを構築した。ヒト由来であり、遍在性である常時発現プロモータは関心対象の導入遺伝子を発現する。濃縮目的のため、一方のプロモータから発現されたIMPDH2(IY)を用いたベクターを構築した。これはもう一方のプロモータ由来である、関心対象の別の導入遺伝子を挿入する能力を有していた(すなわち、pDY−[MCS]+(IY)、(配列番号11))。AGA導入遺伝子を有するベクターを構築し、ファブリー病(配列番号3)を治療するのに使用した。このベクターの力価は、1×109感染性ウイルス粒子(IVP)/mLの範囲である。IMPDH2(IY)の代わりに増強された緑色蛍光タンパク質(eGFP)を有するベクターは、発現を測定するために使用され、また非濃縮コントロールとして使用するために使用された。図13は本発明で使用されているレンチウイルスベクターのベクターマップを示している。
レンチウイルスベクターを産生する好適な方法は当技術分野で公知である。好適なプロトコールは図11に示されている。レンチウイルスの産生は、以下の工程を含む。すなわち、(a)3つのパッケージングプラスミドであるpCMVΔR8.91(Zufferey,et al.Nature Biotechnology 15:871−874,1997、参照により組み入れられる)、pMD.G(Naldini et al.,Science 272:263−267,1996、参照により組み入れられる)およびpAdV(Promega,USA)を、関心対象のトランスファーベクターをコードしているプラスミドと適切な比で混合させるものである。これらはポリエチレンイミン(PEI)と組み合わせられ、HEK293T細胞へと遺伝子導入される。培地は16時間後に交換した。(b)ウイルス粒子を含有する培養物上清は、遺伝子導入後およそ40〜64時間で収集された。上清は0.22μmの膜フィルタでろ過され、混入物を除去する。(c)収集された上清は示されるように超遠心分離にかけられ、ウイルスを濃縮する。(d)ウイルスペレットは、元々の上清に比べて2000倍未満の量で適切な培地中に再懸濁される。
実施例7:デュアルプロモータレンチウイルスベクターを用いたファブリー病の代表的な治療
ファブリー病患者は、例えば実施例6に記載のようなデュアルプロモータレンチウイルスベクターがα−galAを発現すると共にIMPDH2(IY)を発現することを除いては、実施例5に記載の通り治療される。これは、患者が低用量のMMFで治療される場合に形質導入されたT−Rapa細胞に対し成長優位性を表す。
ミコフェノール酸モフェチル(MMF、CellCept、Rocheまたは承認済ジェネリック)を用いた治療によって必要とされる場合、濃縮が引き起こされ得る。形質導入されたT−Rapa細胞は、この薬物の効果に対して耐性があり、成長優位性をそれらに提供する。低用量の経口MMFは有効(0.1〜5mg/kg TID)であるが、患者によっては高用量(5〜10mg/kg TIDまたは1000mg BID)もまた許容されてよい。一般的なガイドラインとしては、0.4〜2μMの遊離ミコフェノール酸(MPA)の血液濃度が所望されている。MMFは、向上した酵素活性が所望される継続時間の間投与されてよく、用量を設定してその活性を設定してよい。MMFはまた、MPA製剤(Myfortic、Novartis、または承認済ジェネリック)に替えられてもよい。
各刊行物、特許および本開示に記載の特許公開は、本明細書に参照によりその全体が組み入れられている。本発明は前述の実施例を制限しようとするものではないが、添付の特許請求の範囲の範囲内にあるようなかかる修飾および変更を包含する。
本出願はコンピュータにて読み取り可能な形式で同時提出されている配列表を含む。この配列表は本明細書に参照により組み入れられる。
以下の配列は、図13のプラスミドマップに対応する。
プラスミドおよびレンチウイルスベクターの遺伝的エレメント
f1 ori:細菌におけるプラスミド複製の起点
Amp(R):アンピシリン耐性遺伝子(ベータ−ラクタマーゼ)
5’LTR:HIV1由来の5’長い末端反復:宿主ゲノムへの組込みに必要なウイルスエレメント
3’LTR:宿主細胞内でのレトロ転写後、任意のウイルス複製のための能力を不活性化する133bp欠失を有する、HIV1由来の3’長い末端反復
Psi配列:レトロウイルスPsiパッケージングエレメント
5’Gag(del3rdG):プロウイルスのRNA転写のための第2世代レンチウイルス系にて必要とされるウイルスエレメント
RRE:プロウイルスRNAの核外輸送に必要なウイルスREV応答エレメント
cPPT:中央ポリプリントラクト、ウイルスRNAの核内への移入/排出を増強し、その結果、ウイルス力価と形質導入を増強するレンチウイルスエレメントである。
EF1a:ヒト伸長因子1アルファ遺伝子から誘導された、遍在性である常時発現プロモータ
WPRE:ウッドチャック肝炎の転写後制御エレメント、転写を強力に終結させ、かつmRNAを安定化させる。
hPGK:ヒトホスホグリセリン酸キナーゼ1遺伝子から誘導された、遍在性である常時発現プロモータ
CTEおよびポリA:転写終結のためのC末端シグナル配列およびポリAシグナル配列
coIMPDH2(IY):ヒトイノシン−5’−一リン酸デヒドロゲナーゼ2のT333I、S351Y突然変異体を発現する、コドン最適化導入遺伝子
AGA/GBA/ASAH1/GAA:ヒトα−ガラクトシダーゼA、β−グルコセレブロシダーゼ、N−アシルスフィンゴシンアミドハイドロラーゼ1、または酸性α−グルコシダーゼをそれぞれコードしている、関心対象のコドン最適化導入遺伝子
配列
配列番号1(AGA)
>co.hAGA
ATGCAACTTCGAAACCCAGAGCTCCACCTCGGATGTGCCCTTGCTCTGAGGTTCCTGGCGCTGGTGTCTTGGGATATACCCGGAGCACGCGCTCTGGACAACGGGCTGGCCCGGACTCCAACCATGGGTTGGCTCCATTGGGAAAGGTTTATGTGCAACTTGGACTGCCAGGAAGAACCCGACTCCTGTATTTCCGAGAAACTCTTCATGGAGATGGCCGAGCTGATGGTTAGCGAAGGCTGGAAGGATGCCGGTTATGAATACTTGTGTATCGACGATTGTTGGATGGCTCCCCAGCGGGACAGTGAAGGACGACTCCAGGCAGATCCGCAACGGTTCCCTCATGGCATACGGCAGCTCGCCAATTACGTGCACAGCAAGGGTTTGAAGCTGGGGATATATGCTGACGTGGGCAACAAAACCTGTGCTGGTTTCCCCGGCAGCTTCGGCTACTATGATATAGATGCACAAACCTTCGCTGATTGGGGCGTGGACCTGCTTAAATTTGACGGCTGTTACTGCGACAGCTTGGAAAACCTCGCCGATGGATATAAACACATGAGCCTTGCACTCAATCGGACTGGCCGGAGCATTGTCTACTCTTGCGAGTGGCCATTGTACATGTGGCCTTTCCAGAAGCCTAACTATACGGAGATTAGACAGTATTGTAATCACTGGAGAAACTTTGCAGATATCGACGACTCATGGAAGTCCATCAAATCTATTCTGGACTGGACTTCATTCAATCAGGAGCGCATCGTCGATGTTGCCGGTCCAGGTGGATGGAACGACCCTGACATGCTCGTAATTGGGAATTTCGGACTGTCCTGGAATCAGCAGGTCACACAGATGGCTTTGTGGGCTATCATGGCAGCCCCACTCTTTATGTCTAACGATTTGCGGCATATTTCACCACAGGCCAAAGCCCTGCTGCAAGATAAGGACGTCATAGCGATTAACCAGGACCCACTGGGAAAGCAGGGCTACCAGCTGAGACAGGGCGACAATTTTGAGGTCTGGGAAAGACCTCTTAGCGGGCTGGCGTGGGCCGTAGCCATGATTAATCGCCAGGAAATTGGCGGCCCTCGCTCTTACACTATCGCGGTCGCCAGTCTGGGCAAGGGAGTCGCTTGTAACCCCGCCTGCTTCATAACTCAGTTGCTGCCCGTGAAACGGAAGCTGGGCTTCTATGAATGGACTAGCAGACTCCGCAGTCATATTAATCCGACTGGTACGGTGCTGCTGCAACTGGAGAATACCATGCAGATGTCACTTAAGGATCTTCTGTGA
配列番号2
>pDY co.hAGA
AAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGTTGTTCCAGTTTGGAACAAGAGTCCACTATTAAAGAACGTGGACTCCAACGTCAAAGGGCGAAAAACCGTCTATCAGGGCGATGGCCCACTACGTGAACCATCACCCTAATCAAGTTTTTTGGGGTCGAGGTGCCGTAAAGCACTAAATCGGAACCCTAAAGGGAGCCCCCGATTTAGAGCTTGACGGGGAAAGCCGGCGAACGTGGCGAGAAAGGAAGGGAAGAAAGCGAAAGGAGCGGGCGCTAGGGCGCTGGCAAGTGTAGCGGTCACGCTGCGCGTAACCACCACACCCGCCGCGCTTAATGCGCCGCTACAGGGCGCGTCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAATTGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGGCCCGACGTCGCATGCTTGGAAGGGCTAATTCACTCCCAAAGAAGACAAGATATCCTTGATCTGTGGATCTACCACACACAAGGCTACTTCCCTGATTAGCAGAACTACACACCAGGGCCAGGGGTCAGATATCCACTGACCTTTGGATGGTGCTACAAGCTAGTACCAGTTGAGCCAGATAAGGTAGAAGAGGCCAATAAAGGAGAGAACACCAGCTTGTTACACCCTGTGAGCCTGCATGGGATGGATGACCCGGAGAGAGAAGTGTTAGAGTGGAGGTTTGACAGCCGCCTAGCATTTCATCACGTGGCCCGAGAGCTGCATCCGGAGTACTTCAAGAACTGCTGATATCGAGCTTGCTACAAGGGACTTTCCGCTGGGGACTTTCCAGGGAGGCGTGGCCTGGGCGGGACTGGGGAGTGGCGAGCCCTCAGATCCTGCATATAAGCAGCTGCTTTTTGCCTGTACTGGGTCTCTCTGGTTAGACCAGATCTGAGCCTGGGAGCTCTCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCTTAAGCCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAAGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTGACTCTGGTAACTAGAGATCCCTCAGACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCAGTGGCGCCCGAACAGGGACTTGAAAGCGAAAGGGAAACCAGAGGAGCTCTCTCGACGCAGGACTCGGCTTGCTGAAGCGCGCACGGCAAGAGGCGAGGGGCGGCGACTGGTGAGTACGCCAAAAATTTTGACTAGCGGAGGCTAGAAGGAGAGAGATGGGTGCGAGAGCGTCAGTATTAAGCGGGGGAGAATTAGATCGCGATGGGAAAAAATTCGGTTAAGGCCAGGGGGAAAGAAAAAATATAAATTAAAACATATAGTATGGGCAAGCAGGGAGCTAGAACGATTCGCAGTTAATCCTGGCCTGTTAGAAACATCAGAAGGCTGTAGACAAATACTGGGACAGCTACAACCATCCCTTCAGACAGGATCAGAAGAACTTAGATCATTATATAATACAGTAGCAACCCTCTATTGTGTGCATCAAAGGATAGAGATAAAAGACACCAAGGAAGCTTTAGACAAGATAGAGGAAGAGCAAAACAAAAGTAAGACCACCGCACAGCAAGCGGCCGCTGATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATATGAGGGACAATTGGAGAAGTGAATTATATAAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCCACCAAGGCAAAGAGAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATAGGAGCTTTGTTCCTTGGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCGTCAATGACGCTGACGGTACAGGCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGTGCAGCAGCAGAACAATTTGCTGAGGGCTATTGAGGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACAGTCTGGGGCATCAAGCAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAGGATCAACAGCTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATTTGCACCACTGCTGTGCCTTGGAATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAACAGATTTGGAATCACACGACCTGGATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACAAGCTTAATACACTCCTTAATTGAAGAATCGCAAAACCAGCAAGAAAAGAATGAACAAGAATTATTGGAATTAGATAAATGGGCAAGTTTGTGGAATTGGTTTAACATAACAAATTGGCTGTGGTATATAAAATTATTCATAATGATAGTAGGAGGCTTGGTAGGTTTAAGAATAGTTTTTGCTGTACTTTCTATAGTGAATAGAGTTAGGCAGGGATATTCACCATTATCGTTTCAGACCCACCTCCCAACCCCGAGGGGACCCGACAGGCCCGAAGGAATAGAAGAAGAAGGTGGAGAGAGAGACAGAGACAGATCCATTCGATTAGTGAACGGATCTCGACGGGATCGATTTTAAAAGAAAAGGGGGGATTGGGGGGTACAGTGCAGGGGAAAGAATAGTAGACATAATAGCAACAGACATACAAACTAAAGAATTACAAAAACAAATTACAAAAATTCAAAATTTTATCGATAAGCTTTGCAAAGATGGATAAAGTTTTAAACAGAGAGGAATCTTTGCAGCTAATGGACCTTCTAGGTCTTGAAAGGAGTGGGAATTGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACCTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCGACGCTTTTTTTCTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTTTTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAGTTTTTTTCTTCCATTTCAGGTGTCGTGAGGAATTCGCCACCATGCAACTTCGAAACCCAGAGCTCCACCTCGGATGTGCCCTTGCTCTGAGGTTCCTGGCGCTGGTGTCTTGGGATATACCCGGAGCACGCGCTCTGGACAACGGGCTGGCCCGGACTCCAACCATGGGTTGGCTCCATTGGGAAAGGTTTATGTGCAACTTGGACTGCCAGGAAGAACCCGACTCCTGTATTTCCGAGAAACTCTTCATGGAGATGGCCGAGCTGATGGTTAGCGAAGGCTGGAAGGATGCCGGTTATGAATACTTGTGTATCGACGATTGTTGGATGGCTCCCCAGCGGGACAGTGAAGGACGACTCCAGGCAGATCCGCAACGGTTCCCTCATGGCATACGGCAGCTCGCCAATTACGTGCACAGCAAGGGTTTGAAGCTGGGGATATATGCTGACGTGGGCAACAAAACCTGTGCTGGTTTCCCCGGCAGCTTCGGCTACTATGATATAGATGCACAAACCTTCGCTGATTGGGGCGTGGACCTGCTTAAATTTGACGGCTGTTACTGCGACAGCTTGGAAAACCTCGCCGATGGATATAAACACATGAGCCTTGCACTCAATCGGACTGGCCGGAGCATTGTCTACTCTTGCGAGTGGCCATTGTACATGTGGCCTTTCCAGAAGCCTAACTATACGGAGATTAGACAGTATTGTAATCACTGGAGAAACTTTGCAGATATCGACGACTCATGGAAGTCCATCAAATCTATTCTGGACTGGACTTCATTCAATCAGGAGCGCATCGTCGATGTTGCCGGTCCAGGTGGATGGAACGACCCTGACATGCTCGTAATTGGGAATTTCGGACTGTCCTGGAATCAGCAGGTCACACAGATGGCTTTGTGGGCTATCATGGCAGCCCCACTCTTTATGTCTAACGATTTGCGGCATATTTCA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配列番号3
>pDY AGA+(IY)(配列番号3)
AAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGTTGTTCCAGTTTGGAACAAGAGTCCACTATTAAAGAACGTGGACTCCAACGTCAAAGGGCGAAAAACCGTCTATCAGGGCGATGGCCCACTACGTGAACCATCACCCTAATCAAGTTTTTTGGGGTCGAGGTGCCGTAAAGCACTAAATCGGAACCCTAAAGGGAGCCCCCGATTTAGAGCTTGACGGGGAAAGCCGGCGAACGTGGCGAGAAAGGAAGGGAAGAAAGCGAAAGGAGCGGGCGCTAGGGCGCTGGCAAGTGTAGCGGTCACGCTGCGCGTAACCACCACACCCGCCGCGCTTAATGCGCCGCTACAGGGCGCGTCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAATTGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGGCCCGACGTCGCATGCTTGGAAGGGCTAATTCACTCCCAAAGAAGACAAGATATCCTTGATCTGTGGATCTACCACACACAAGGCTACTTCCCTGATTAGCAGAACTACACACCAGGGCCAGGGGTCAGATATCCACTGACCTTTGGATGGTGCTACAAGCTAGTACCAGTTGAGCCAGATAAGGTAGAAGAGGCCAATAAAGGAGAGAACACCAGCTTGTTACACCCTGTGAGCCTGCATGGGATGGATGACCCGGAGAGAGAAGTGTTAGAGTGGAGGTTTGACAGCCGCCTAGCATTTCATCACGTGGCCCGAGAGCTGCATCCGGAGTACTTCAAGAACTGCTGATATCGAGCTTGCTACAAGGGACTTTCCGCTGGGGACTTTCCAGGGAGGCGTGGCCTGGGCGGGACTGGGGAGTGGCGAGCCCTCAGATCCTGCATATAAGCAGCTGCTTTTTGCCTGTACTGGGTCTCTCTGGTTAGACCAGATCTGAGCCTGGGAGCTCTCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCTTAAGCCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAAGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTGACTCTGGTAACTAGAGATCCCTCAGACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCAGTGGCGCCCGAACAGGGACTTGAAAGCGAAAGGGAAACCAGAGGAGCTCTCTCGACGCAGGACTCGGCTTGCTGAAGCGCGCACGGCAAGAGGCGAGGGGCGGCGACTGGTGAGTACGCCAAAAATTTTGACTAGCGGAGGCTAGAAGGAGAGAGATGGGTGCGAGAGCGTCAGTATTAAGCGGGGGAGAATTAGATCGCGATGGGAAAAAATTCGGTTAAGGCCAGGGGGAAAGAAAAAATATAAATTAAAACATATAGTATGGGCAAGCAGGGAGCTAGAACGATTCGCAGTTAATCCTGGCCTGTTAGAAACATCAGAAGGCTGTAGACAAATACTGGGACAGCTACAACCATCCCTTCAGACAGGATCAGAAGAACTTAGATCATTATATAATACAGTAGCAACCCTCTATTGTGTGCATCAAAGGATAGAGATAAAAGACACCAAGGAAGCTTTAGACAAGATAGAGGAAGAGCAAAACAAAAGTAAGACCACCGCACAGCAAGCGGCCGCTGATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATATGAGGGACAATTGGAGAAGTGAATTATATAAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCCACCAAGGCAAAGAGAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATAGGAGCTTTGTTCCTTGGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCGTCAATGACGCTGACGGTACAGGCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGTGCAGCAGCAGAACAATTTGCTGAGGGCTATTGAGGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACAGTCTGGGGCATCAAGCAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAGGATCAACAGCTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATTTGCACCACTGCTGTGCCTTGGAATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAACAGATTTGGAATCACACGACCTGGATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACAAGCTTAATACACTCCTTAATTGAAGAATCGCAAAACCAGCAAGAAAAGAATGAACAAGAATTATTGGAATTAGATAAATGGGCAAGTTTGTGGAATTGGTTTAACATAACAAATTGGCTGTGGTATATAAAATTATTCATAATGATAGTAGGAGGCTTGGTAGGTTTAAGAATAGTTTTTGCTGTACTTTCTATAGTGAATAGAGTTAGGCAGGGATATTCACCATTATCGTTTCAGACCCACCTCCCAACCCCGAGGGGACCCGACAGGCCCGAAGGAATAGAAGAAGAAGGTGGAGAGAGAGACAGAGACAGATCCATTCGATTAGTGAACGGATCTCGACGGGATCGATTTTAAAAGAAAAGGGGGGATTGGGGGGTACAGTGCAGGGGAAAGAATAGTAGACATAATAGCAACAGACATACAAACTAAAGAATTACAAAAACAAATTACAAAAATTCAAAATTTTATCGATAAGCTTTGCAAAGATGGATAAAGTTTTAAACAGAGAGGAATCTTTGCAGCTAATGGACCTTCTAGGTCTGACCCCGTACGCCTCGAGAGATCTGATCATAATCAGCCATACCACATTTGTAGAGGTTTTACTTGCTTTAAAAAACCTCCCACACCTCCCCCTGAACCTGAAACATAAAATGAATGCAATTGTTGTTGTTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAGGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAGGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTTTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGGATCTCAAATCCCTCGGAAGCTGCGCCTGTCTTAGGTTGGAGTGATACATTTTTATCACTTTTACCCGTCTTTGGATTAGGCAGTAGCTCTGACGGCCCTCCTGTCTTAGGTTAGTGAAAAATGTCACTCTCTTACCCGTCATTGGCTGTCCAGCTTAGCTCGCAGGGGAGGTGGTCTGCCTGCAGGTTAGAACAGTCTCTTTTCGTATGAGTGCAGTGAGTGGACGCCGCCTTCGACCTGGGCTGAAGAAGTTCTTTTCTCGAACTTCAGTTCGCCGGAATACATCATTGCCCGCACCTGTGTCAGGCTCTTAGCGCCGATATCCTGGCATGAATGCTGAATTCCGGCGATCAGGTAAGGCACGAATTTGTGAATACTGCCCTTATCCTGGACAGCTCCAGACACGCCCTGTGCGACTTTGATCTTGTCTGCCTCGGAAAAATACCTGTTCTGAGAGGACAGATGCTTATCCATGGCGTCCAGTGACCCCATGCCCCTATATTTCTTCAGTCTGAACCCATCACTAAAGAAGTACTCGCCGGGGGCTTCTGTGGTTGCAGCCAGCAGGCTGCCCATCATCACTGTGCTTGCCCCCAGAGCCAGGGCTTTTGCGATGTGGCCCACATTCTGAATTCCCCCGTCAGCGATCACTGGGACTCCGAATCTCCGGGCATACTCGTACACCTTGTAGACAGCAGTTGCCTGAGGTCGTCCACAGGCCAGCACTTCCTGAATGATGCAGATTGATCCACTCCCCATTCCGACCCTCAGAGCATCCACTCCTGCGTCAATCAGGTTTTTGGCCTGGGCTGCGGTCACGACATTGCCTCCGATGACCTGCAGATTTGGGTACTTGTCCTTAATGTACTTGATCATATTAATCTGGAAGATGCTGTTTCCCTGGCTTGAATCCAGCACGACCACGTCCACCCCTGCCTGAGCCAGCAGATCCAGGCGATATTTATCGTCCTCGTGTGTGCCAATAGCGGCTCCACACAGCAGCTGTTTCTTTGCGTCCTTACTAGCCAGAGGGTAATCTCGATTTTTCTTCAGGTCGGTGCGGGCAATGATTGCCACCAGCTCATCGTCTTCATTCACGATAGGCAGTTTTCCTTTCTTAGACCGCTGCAGAATCTCGTTGGCTTCCTTCAGTGTGATGCCGGCAGGTGCGACCACCAGATCTTCGCGTTTGGTCATAATCTCTTCCAGAAAACAGTCATGCTCTTCCTCCTTCAGGAAATCGATGTCTCGACTAGAAATGATTCCCACCAGTCGGCTGCCCATTCGTCCAGTATCTGTAATGGGGATGCCGCAAAATCCGTGCCTAGCTTTGGCCTCGAACACATCGCGGACCCTGTCCTTGGGGCTCAGGACCACTGGGTCGGTGATAAAGCCCTGTTCGTATTTCTTCACCTTTCTGACCTCATTGGCCTGAAATTCTGGAGTGCAGTTATGGTGAATGAACCCGATCCCGCCTGTCAGTGCCATAGCAATGGCCATGCCAGCCTCGGTGACAGTGTCCATAGGGGAGCTCACCAGGGGTGTCTTCAGGGTGATTTTCTTGGTCAGGGCAGAAGTCAGATCCACCTGGTCTGCGGTAAAATCAATATAGCCGGGCAGGATCAGGAAGTCGTTGTAAGTCAGCCCGTCTCCACAATTAAACAGCTGCTGGGCGGTCAGTCCATCATCAGGGACATAGGAAGTGCCTCCAGAAATCAGGTAGTCGGCCATGGTGGCGCTAGCCCTGGGGAGAGAGGTCGGTGATTCGGTCAACGAGGGAGCCGACTGCCGACGTGCGCTCCGGAGGCTTGCAGAATGCGGAACACCGCGCGGGCAGGAACAGGGCCCACACTACCGCCCCACACCCCGCCTCCCGCACCGCCCCTTCCCGGCCGCTGCTCTCGGCGCGCCCCGCTGAGCAGCCGCTATTGGCCACAGCCCATCGCGGTCGGCGCGCTGCCATTGCTCCCTGGCGCTGT
CCGTCTGCGAGGGTACTAGTGAGACGTGCGGCTTCCGTTTGTCACGTCCGGCACGCCGCGAACCGCAAGGAACCTTCCCGACTTAGGGGCGGAGCAGGAAGCGTCGCCGGGGGGCCCACAAGGGTAGCGGCGAAGATCCGGGTGACGCTGCGAACGGACGTGAAGAATGTGCGAGACCCAGGGTCGGCGCCGCTGCGTTTCCCGGAACCACGCCCAGAGCAGCCGCGTCCCTGCGCAAACCCAGGGCTGCCAAGGAAAAGGCGCAACCCCAACCCCGTGGTTAATTAAGGTGAAAGGAGTGGGAATTGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACCTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCGACGCTTTTTTTCTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTTTTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAGTTTTTTTCTTCCATTTCAGGTGTCGTGAGGAATTCGCCACCATGCAACTTCGAAACCCAGAGCTCCACCTCGGATGTGCCCTTGCTCTGAGGTTCCTGGCGCTGGTGTCTTGGGATATACCCGGAGCACGCGCTCTGGACAACGGGCTGGCCCGGACTCCAACCATGGGTTGGCTCCATTGGGAAAGGTTTATGTGCAACTTGGACTGCCAGGAAGAACCCGACTCCTGTATTTCCGAGAAACTCTTCATGGAGATGGCCGAGCTGATGGTTAGCGAAGGCTGGAAGGATGCCGGTTATGAATACTTGTGTATCGACGATTGTTGGATGGCTCCCCAGCGGGACAGTGAAGGACGACTCCAGGCAGATCCGCAACGGTTCCCTCATGGCATACGGCAGCTCGCCAATTACGTGCACAGCAAGGGTTTGAAGCTGGGGATATATGCTGACGTGGGCAACAAAACCTGTGCTGGTTTCCCCGGCAGCTTCGGCTACTATGATATAGATGCACAAACCTTCGCTGATTGGGGCGTGGACCTGCTTAAATTTGACGGCTGTTACTGCGACAGCTTGGAAAACCTCGCCGATGGATATAAACACATGAGCCTTGCACTCAATCGGACTGGCCGGAGCATTGTCTACTCTTGCGAGTGGCCATTGTACATGTGGCCTTTCCAGAAGCCTAACTATACGGAGATTAGACAGTATTGTAATCACTGGAGAAACTTTGCAGATATCGACGACTCATGGAAGTCCATCAAATCTATTCTGGACTGGACTTCATTCAATCAGGAGCGCATCGTCGATGTTGCCGGTCCAGGTGGATGGAACGACCCTGACATGCTCGTAATTGGGAATTTCGGACTGTCCTGGAATCAGCAGGTCACACAGATGGCTTTGTGGGCTATCATGGCAGCCCCACTCTTTATGTCTAACGATTTGCGGCATATTTCACCACAGGCCAAAGCCCTGCTGCAAGATAAGGACGTCATAGCGATTAACCAGGACCCACTGGGAAAGCAGGGCTACCAGCTGAGACAGGGCGACAATTTTGAGGTCTGGGAAAGACCTCTTAGCGGGCTGGCGTGGGCCGTAGCCATGATTAATCGCCAGGAAATTGGCGGCCCTCGCTCTTACACTATCGCGGTCGCCAGTCTGGGCAAGGGAGTCGCTTGTAACCCCGCCTGCTTCATAACTCAGTTGCTGCCCGTGAAACGGAAGCTGGGCTTCTATGAATGGACTAGCAGACTCCGCAGTCATATTAATCCGACTGGTACGGTGCTGCTGCAACTGGAGAATACCATGCAGATGTCACTTAAGGATCTTCTGTGAGAACCCGGGATCCAAGCTTCAATTGTGGTCACTCGACAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAGCTGACGTCCTTTCCATGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCGTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGCCTGCTCGAGACCTAGAAAAACATGGAGCAATCACAAGTAGCAATACAGCAGCTACCAATGCTGATTGTGCCTGGCTAGAAGCACAAGAGGAGGAGGAGGTGGGTTTTCCAGTCACACCTCAGGTACCTTTAAGACCAATGACTTACAAGGCAGCTGTAGATCTTAGCCACTTTTTAAAAGAAAAGGGGGGACTGGAAGGGCTAATTCACTCCCAACGAAGACAAGATCTGCTTTTTGCTTGTACTGGGTCTCTCTGGTTAGACCAGATCTGAGCCTGGGAGCTCTCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCTTAAGCCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAAGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTGACTCTGGTAACTAGAGATCCCTCAGACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCAGTAGTAGTTCATGTCATCTTATTATTCAGTATTTATAACTTGCAAAGAAATGAATATCAGAGAGTGAGAGGACGCGTTGGATGCATAGCTTGAGTATTCTATAGTGTCACCTAAATAGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAA
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配列番号4
ゴーシェ病
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配列番号5
ファーバー病
>pDY hASAH1
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配列番号6
ポンペ病(GAAをコードしているベクター)
>pDY co hGAA
AAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGTTGTTCCAGTTTGGAACAAGAGTCCACTATTAAAGAACGTGGACTCCAACGTCAAAGGGCGAAAAACCGTCTATCAGGGCGATGGCCCACTACGTGAACCATCACCCTAATCAAGTTTTTTGGGGTCGAGGTGCCGTAAAGCACTAAATCGGAACCCTAAAGGGAGCCCCCGATTTAGAGCTTGACGGGGAAAGCCGGCGAACGTGGCGAGAAAGGAAGGGAAGAAAGCGAAAGGAGCGGGCGCTAGGGCGCTGGCAAGTGTAGCGGTCACGCTGCGCGTAACCACCACACCCGCCGCGCTTAATGCGCCGCTACAGGGCGCGTCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAATTGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGGCCCGACGTCGCATGCTTGGAAGGGCTAATTCACTCCCAAAGAAGACAAGATATCCTTGATCTGTGGATCTACCACACACAAGGCTACTTCCCTGATTAGCAGAACTACACACCAGGGCCAGGGGTCAGATATCCACTGACCTTTGGATGGTGCTACAAGCTAGTACCAGTTGAGCCAGATAAGGTAGAAGAGGCCAATAAAGGAGAGAACACCAGCTTGTTACACCCTGTGAGCCTGCATGGGATGGATGACCCGGAGAGAGAAGTGTTAGAGTGGAGGTTTGACAGCCGCCTAGCATTTCATCACGTGGCCCGAGAGCTGCATCCGGAGTACTTCAAGAACTGCTGATATCGAGCTTGCTACAAGGGACTTTCCGCTGGGGACTTTCCAGGGAGGCGTGGCCTGGGCGGGACTGGGGAGTGGCGAGCCCTCAGATCCTGCATATAAGCAGCTGCTTTTTGCCTGTACTGGGTCTCTCTGGTTAGACCAGATCTGAGCCTGGGAGCTCTCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCTTAAGCCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAAGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTGACTCTGGTAACTAGAGATCCCTCAGACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCAGTGGCGCCCGAACAGGGACTTGAAAGCGAAAGGGAAACCAGAGGAGCTCTCTCGACGCAGGACTCGGCTTGCTGAAGCGCGCACGGCAAGAGGCGAGGGGCGGCGACTGGTGAGTACGCCAAAAATTTTGACTAGCGGAGGCTAGAAGGAGAGAGATGGGTGCGAGAGCGTCAGTATTAAGCGGGGGAGAATTAGATCGCGATGGGAAAAAATTCGGTTAAGGCCAGGGGGAAAGAAAAAATATAAATTAAAACATATAGTATGGGCAAGCAGGGAGCTAGAACGATTCGCAGTTAATCCTGGCCTGTTAGAAACATCAGAAGGCTGTAGACAAATACTGGGACAGCTACAACCATCCCTTCAGACAGGATCAGAAGAACTTAGATCATTATATAATACAGTAGCAACCCTCTATTGTGTGCATCAAAGGATAGAGATAAAAGACACCAAGGAAGCTTTAGACAAGATAGAGGAAGAGCAAAACAAAAGTAAGACCACCGCACAGCAAGCGGCCGCTGATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATATGAGGGACAATTGGAGAAGTGAATTATATAAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCCACCAAGGCAAAGAGAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATAGGAGCTTTGTTCCTTGGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCGTCAATGACGCTGACGGTACAGGCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGTGCAGCAGCAGAACAATTTGCTGAGGGCTATTGAGGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACAGTCTGGGGCATCAAGCAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAGGATCAACAGCTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATTTGCACCACTGCTGTGCCTTGGAATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAACAGATTTGGAATCACACGACCTGGATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACAAGCTTAATACACTCCTTAATTGAAGAATCGCAAAACCAGCAAGAAAAGAATGAACAAGAATTATTGGAATTAGATAAATGGGCAAGTTTGTGGAATTGGTTTAACATAACAAATTGGCTGTGGTATATAAAATTATTCATAATGATAGTAGGAGGCTTGGTAGGTTTAAGAATAGTTTTTGCTGTACTTTCTATAGTGAATAGAGTTAGGCAGGGATATTCACCATTATCGTTTCAGACCCACCTCCCAACCCCGAGGGGACCCGACAGGCCCGAAGGAATAGAAGAAGAAGGTGGAGAGAGAGACAGAGACAGATCCATTCGATTAGTGAACGGATCTCGACGGGATCGATTTTAAAAGAAAAGGGGGGATTGGGGGGTACAGTGCAGGGGAAAGAATAGTAGACATAATAGCAACAGACATACAAACTAAAGAATTACAAAAACAAATTACAAAAATTCAAAATTTTATCGATAAGCTTTGCAAAGATGGATAAAGTTTTAAACAGAGAGGAATCTTTGCAGCTAATGGACCTTCTAGGTCTTGAAAGGAGTGGGAATTGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACCTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCGACGCTTTTTTTCTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTTTTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAGTTTTTTTCTTCCATTTCAGGTGTCGTGAGGAATTCGCCACCATGGGCGTGAGGCACCCCCCTTGCTCTCACAGGCTGCTGGCCGTGTGCGCACTGGTGAGCCTGGCCACCGCCGCCCTGCTGGGCCACATCCTGCTGCACGACTTCCTGCTGGTGCCCAGGGAGCTGTCCGGCAGCTCCCCAGTGCTGGAGGAGACCCACCCAGCACACCAGCAGGGCGCCTCTCGGCCAGGCCCCCGCGATGCACAGGCACACCCAGGCCGGCCCCGCGCCGTGCCAACCCAGTGCGACGTGCCACCCAACAGCCGGTTTGACTGTGCCCCCGATAAGGCCATCACACAGGAGCAGTGCGAGGCCAGGGGCTGCTGTTATATCCCTGCAAAGCAGGGCCTCCAGGGCGCCCAGATGGGACAGCCATGGTGTTTCTTTCCTCCATCTTACCCCAGCTATAAGCTGGAGAATCTGTCTAGCTCCGAGATGGGCTACACAGCCACCCTGACAAGAACCACACCAACATTCTTTCCCAAGGACATCCTGACCCTGCGGCTGGACGTGATGATGGAGACAGAGAACCGCCTGCACTTCACCATCAAGGACCCCGCCAATAGGAGATATGAGGTGCCTCTGGAGACCCCACACGTGCACTCTCGGGCCCCTAGCCCACTGTACTCCGTGGAGTTCTCTGAGGAGCCATTTGGCGTGATCGTGCGGCGCCAGCTGGATGGACGCGTGCTGCTGAACACCACAGTGGCCCCCCTGTTCTTTGCCGACCAGTTCCTCCAGCTGAGCACATCCCTGCCCTCCCAGTATATCACCGGCCTGGCCGAGCACCTGTCTCCTCTGATGCTGTCTACCAGCTGGACAAGGATCACCCTGTGGAACAGAGACCTGGCACCAACCCCTGGCGCAAATCTGTACGGCAGCCACCCTTTCTATCTGGCCCTGGAGGATGGA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CCTGAGCCAAAGTCCGTGGTGCAGCAGTACCTGGACGTGGTGGGCTATCCTTTCATGCCCCCTTACTGGGGACTGGGATTTCACCTGTGCCGCTGGGGCTATTCTAGCACAGCCATCACCCGGCAGGTGGTGGAGAACATGACCCGCGCCCACTTTCCACTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGATTACATGGACTCCAGGAGAGACTTCACCTTCAACAAGGACGGCTTCAGGGATTTTCCCGCCATGGTGCAGGAGCTGCACCAGGGCGGCCGGCGCTACATGATGATCGTGGACCCCGCCATCTCCTCTAGCGGACCTGCCGGCAGCTACAGACCATATGACGAGGGCCTGAGGAGAGGCGTGTTCATCACAAACGAGACCGGCCAGCCTCTGATCGGCAAGGTCTGGCCAGGCTCCACCGCCTTCCCAGACTTCACCAATCCAACCGCCCTGGCCTGGTGGGAGGACATGGTGGCCGAGTTCCACGACCAGGTGCCTTTTGATGGCATGTGGATCGACATGAACGAGCCATCTAATTTCATCAGGGGCAGCGAGGACGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAACCCACCATATGTGCCTGGCGTGGTGGGAGGCACCCTCCAGGCAGCAACCATCTGTGCCTCCTCTCACCAGTTTCTGTCTACACACTATAACCTGCACAATCTGTACGGACTGACCGAGGCAATCGCCAGCCACAGAGCCCTGGTGAAGGCCAGGGGCACAAGACCTTTCGTGATCTCCAGGTCTACCTTTGCCGGACACGGCAGATACGCAGGACACTGGACCGGCGACGTGTGGAGCAGCTGGGAGCAGCTGGCCTCTAGCGTGCCAGAGATCCTCCAGTTCAACCTGCTGGGCGTGCCCCTGGTGGGAGCAGACGTGTGCGGCTTTCTGGGCAATACATCCGAGGAGCTGTGCGTGAGGTGGACCCAGCTGGGAGCCTTCTATCCCTTCATGCGCAACCACAATAGCCTGCTGTCCCTGCCTCAGGAGCCATACAGCTTCTCCGAGCCTGCACAGCAGGCAATGAGGAAGGCCCTGACACTGCGCTATGCCCTGCTGCCACACCTGTACACCCTGTTTCACCAGGCACACGTGGCAGGAGAGACAGTGGCCCGGCCCCTGTTCCTGGAGTTTCCTAAGGATTCCTCTACCTGGACAGTGGACCACCAGCTGCTGTGGGGAGAGGCCCTGCTGATCACCCCCGTGCTCCAGGCAGGCAAGGCAGAGGTGACAGGCTATTTCCCTCTGGGCACATGGTACGACCTCCAGACCGTGCCAGTGGAGGCCCTGGGCAGCCTGCCTCCACCACCTGCCGCCCCCCGCGAGCCTGCCATCCACTCCGAGGGACAGTGGGTGACACTGCCAGCACCTCTGGACACCATCAACGTGCACCTGAGGGCCGGCTATATCATCCCCCTCCAGGGCCCTGGCCTGACCACAACCGAGTCCAGACAGCAGCCAATGGCCCTGGCCGTGGCCCTGACCAAGGGAGGCGAGGCCAGGGGCGAGCTGTTCTGGGACGATGGCGAGTCTCTGGAGGTGCTGGAGAGAGGCGCCTACACACAGGTCATCTTCCTGGCCAGGAACAATACAATCGTGAATGAGCTGGTGAGAGTGACCTCTGAGGGAGCAGGACTCCAGCTCCAGAAGGTGACAGTGCTGGGAGTGGCAACCGCACCACAGCAGGTGCTGAGCAACGGCGTGCCCGTGAGCAATTTCACATACTCCCCTGATACCAAGGTGCTGGACATCTGCGTGAGCCTGCTGATGGGCGAGCAGTTTCTGGTGTCCTGGTGTTGAGAACCCGGGATCCAAGCTTCAATTGTGGTCACTCGACAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAGCTGACGTCCTTTCCATGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCGTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGCCTGCTCGAGACCTAGAAAAACATGGAGCAATCACAAGTAGCAATACAGCAGCTACCAATGCTGATTGTGCCTGGCTAGAAGCACAAGAGGAGGAGGAGGTGGGTTTTCCAGTCACACCTCAGGTACCTTTAAGACCAATGACTTACAAGGCAGCTGTAGATCTTAGCCACTTTTTAAAAGAAAAGGGGGGACTGGAAGGGCTAATTCACTCCCAACGAAGACAAGATCTGCTTTTTGCTTGTACTGGGTCTCTCTGGTTAGACCAGATCTGAGCCTGGGAGCTCTCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCTTAAGCCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAAGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTGACTCTGGTAACTAGAGATCCCTCAGACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCAGTAGTAGTTCATGTCATCTTATTATTCAGTATTTATAACTTGCAAAGAAATGAATATCAGAGAGTGAGAGGACGCGTTGGATGCATAGCTTGAGTATTCTATAGTGTCACCTAAATAGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAA
ACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCACCTGATGCGGTGTGAAATACCGCACAGATGCGTAAGGAGAAAATACCGCATCAGG
配列番号7 GBA導入遺伝子
>co.hGBA
ATGGAGTTCTCAAGCCCCTCTCGGGAAGAATGCCCAAAACCTCTGTCACGGGTGTCTATCATGGCTGGATCACTGACTGGCCTGCTGCTGCTGCAGGCCGTGAGCTGGGCCTCCGGAGCCCGGCCTTGCATCCCAAAGTCTTTCGGCTACAGCTCCGTGGTGTGCGTGTGCAACGCCACCTATTGTGACTCCTTCGATCCCCCTACCTTTCCCGCCCTGGGCACATTTTCTCGGTACGAGTCTACACGCAGCGGCAGGAGAATGGAGCTGAGCATGGGCCCTATCCAGGCCAATCACACCGGAACAGGCCTGCTGCTGACCCTGCAGCCAGAGCAGAAGTTCCAGAAGGTGAAGGGCTTTGGAGGAGCAATGACAGACGCAGCCGCCCTGAACATCCTGGCCCTGTCCCCACCCGCCCAGAATCTGCTGCTGAAGTCCTACTTCTCTGAGGAGGGCATCGGCTATAACATCATCAGGGTGCCCATGGCCAGCTGCGACTTTTCCATCAGAACCTACACATATGCCGATACCCCTGACGATTTCCAGCTGCACAATTTTTCCCTGCCAGAGGAGGATACAAAGCTGAAGATCCCACTGATCCACAGGGCCCTGCAGCTGGCCCAGAGGCCCGTGAGCCTGCTGGCCAGCCCCTGGACCTCCCCTACATGGCTGAAGACCAACGGCGCCGTGAATGGCAAGGGCTCTCTGAAGGGACAGCCAGGCGACATCTACCACCAGACATGGGCCCGCTATTTCGTGAAGTTTCTGGATGCCTACGCCGAGCACAAGCTGCAGTTCTGGGCCGTGACCGCAGAGAACGAGCCTTCTGCCGGCCTGCTGAGCGGCTATCCCTTCCAGTGCCTGGGCTTTACACCTGAGCACCAGAGGGACTTTATCGCCAGAGATCTGGGCCCAACCCTGGCCAACTCCACACACCACAATGTGCGGCTGCTGATGCTGGACGATCAGCGCCTGCTGCTGCCTCACTGGGCCAAGGTGGTGCTGACCGACCCAGAGGCCGCCAAGTACGTGCACGGCATCGCCGTGCACTGGTATCTGGATTTCCTGGCACCAGCAAAGGCCACCCTGGGAGAGACACACAGGCTGTTCCCTAACACCATGCTGTTTGCCAGCGAGGCCTGCGTGGGCTCCAAGTTTTGGGAGCAGTCCGTGCGGCTGGGCTCTTGGGACAGGGGCATGCAGTACTCCCACTCTATCATCACCAATCTGCTGTATCACGTGGTGGGCTGGACAGACTGGAACCTGGCCCTGAATCCAGAGGGCGGCCCCAACTGGGTGAGAAATTTCGTGGATAGCCCCATCATCGTGGACATCACCAAGGATACATTCTACAAGCAGCCAATGTTTTATCACCTGGGCCACTTCTCTAAGTTTATCCCAGAGGGCAGCCAGAGGGTGGGCCTGGTGGCCAGCCAGAAGAACGACCTGGATGCAGTGGCCCTGATGCACCCTGACGGCTCCGCCGTGGTGGTGGTGCTGAATCGCTCTAGCAAGGACGTGCCTCTGACCATCAAGGACCCCGCCGTGGGCTTTCTGGAGACCATTTCACCCGGCTATTCTATTCATACCTATCTGTGGAGGAGGCAGTAA
配列番号8 ASAH1導入遺伝子
>hASAH1
ATGCCGGGCCGGAGTTGCGTCGCCTTAGTCCTCCTGGCTGCCGCCGTCAGCTGTGCCGTCGCGCAGCACGCGCCGCCGTGGACAGAGGACTGCAGAAAATCAACCTATCCTCCTTCAGGACCAACGTACAGAGGTGCAGTTCCATGGTACACCATAAATCTTGACTTACCACCCTACAAAAGATGGCATGAATTGATGCTTGACAAGGCACCAGTGCTAAAGGTTATAGTGAATTCTCTGAAGAATATGATAAATACATTCGTGCCAAGTGGAAAAATTATGCAGGTGGTGGATGAAAAATTGCCTGGCCTACTTGGCAACTTTCCTGGCCCTTTTGAAGAGGAAATGAAGGGTATTGCCGCTGTTACTGATATACCTTTAGGAGAGATTATTTCATTCAATATTTTTTATGAATTATTTACCATTTGTACTTCAATAGTAGCAGAAGACAAAAAAGGTCATCTAATACATGGGAGAAACATGGATTTTGGAGTATTTCTTGGGTGGAACATAAATAATGATACCTGGGTCATAACTGAGCAACTAAAACCTTTAACAGTGAATTTGGATTTCCAAAGAAACAACAAAACTGTCTTCAAGGCTTCAAGCTTTGCTGGCTATGTGGGCATGTTAACAGGATTCAAACCAGGACTGTTCAGTCTTACACTGAATGAACGTTTCAGTATAAATGGTGGTTATCTGGGTATTCTAGAATGGATTCTGGGAAAGAAAGATGTCATGTGGATAGGGTTCCTCACTAGAACAGTTCTGGAAAATAGCACAAGTTATGAAGAAGCCAAGAATTTATTGACCAAGACCAAGATATTGGCCCCAGCCTACTTTATCCTGGGAGGCAACCAGTCTGGGGAAGGTTGTGTGATTACACGAGACAGAAAGGAATCATTGGATGTATATGAACTCGATGCTAAGCAGGGTAGATGGTATGTGGTACAAACAAATTATGACCGTTGGAAACATCCCTTCTTCCTTGATGATCGCAGAACGCCTGCAAAGATGTGTCTGAACCGCACCAGCCAAGAGAATATCTCATTTGAAACCATGTATGATGTCCTGTCAACAAAACCTGTCCTCAACAAGCTGACCGTATACACAACCTTGATAGATGTTACCAAAGGTCAATTCGAAACTTACCTGCGGGACTGCCCTGACCCTTGTATAGGTTGGTGA
配列番号9(GAA導入遺伝子)
>co.hGAA
ATGGGCGTGAGGCACCCCCCTTGCTCTCACAGGCTGCTGGCCGTGTGCGCACTGGTGAGCCTGGCCACCGCCGCCCTGCTGGGCCACATCCTGCTGCACGACTTCCTGCTGGTGCCCAGGGAGCTGTCCGGCAGCTCCCCAGTGCTGGAGGAGACCCACCCAGCACACCAGCAGGGCGCCTCTCGGCCAGGCCCCCGCGATGCACAGGCACACCCAGGCCGGCCCCGCGCCGTGCCAACCCAGTGCGACGTGCCACCCAACAGCCGGTTTGACTGTGCCCCCGATAAGGCCATCACACAGGAGCAGTGCGAGGCCAGGGGCTGCTGTTATATCCCTGCAAAGCAGGGCCTCCAGGGCGCCCAGATGGGACAGCCATGGTGTTTCTTTCCTCCATCTTACCCCAGCTATAAGCTGGAGAATCTGTCTAGCTCCGAGATGGGCTACACAGCCACCCTGACAAGAACCACACCAACATTCTTTCCCAAGGACATCCTGACCCTGCGGCTGGACGTGATGATGGAGACAGAGAACCGCCTGCACTTCACCATCAAGGACCCCGCCAATAGGAGATATGAGGTGCCTCTGGAGACCCCACACGTGCACTCTCGGGCCCCTAGCCCACTGTACTCCGTGGAGTTCTCTGAGGAGCCATTTGGCGTGATCGTGCGGCGCCAGCTGGATGGACGCGTGCTGCTGAACACCACAGTGGCCCCCCTGTTCTTTGCCGACCAGTTCCTCCAGCTGAGCACATCCCTGCCCTCCCAGTATATCACCGGCCTGGCCGAGCACCTGTCTCCTCTGATGCTGTCTACCAGCTGGACAAGGATCACCCTGTGGAACAGAGACCTGGCACCAACCCCTGGCGCAAATCTGTACGGCAGCCACCCTTTCTATCTGGCCCTGGAGGATGGAGGCTCCGCCCACGGCGTGTTTCTGCTGAACTCTAATGCCATGGACGTGGTGCTCCAGCCAAGCCCCGCCCTGTCCTGGCGGTCTACCGGCGGCATCCTGGACGTGTACATCTTCCTGGGCCCTGAGCCAAAGTCCGTGGTGCAGCAGTACCTGGACGTGGTGGGCTATCCTTTCATGCCCCCTTACTGGGGACTGGGATTTCACCTGTGCCGCTGGGGCTATTCTAGCACAGCCATCACCCGGCAGGTGGTGGAGAACATGACCCGCGCCCACTTTCCACTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGATTACATGGACTCCAGGAGAGACTTCACCTTCAACAAGGACGGCTTCAGGGATTTTCCCGCCATGGTGCAGGAGCTGCACCAGGGCGGCCGGCGCTACATGATGATCGTGGACCCCGCCATCTCCTCTAGCGGACCTGCCGGCAGCTACAGACCATATGACGAGGGCCTGAGGAGAGGCGTGTTCATCACAAACGAGACCGGCCAGCCTCTGATCGGCAAGGTCTGGCCAGGCTCCACCGCCTTCCCAGACTTCACCAATCCAACCGCCCTGGCCTGGTGGGAGGACATGGTGGCCGAGTTCCACGACCAGGTGCCTTTTGATGGCATGTGGATCGACATGAACGAGCCATCTAATTTCATCAGGGGCAGCGAGGACGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAACCCACCATATGTGCCTGGCGTGGTGGGAGGCACCCTCCAGGCAGCAACCATCTGTGCCTCCTCTCACCAGTTTCTGTCTACACACTATAACCTGCACAATCTGTACGGACTGACCGAGGCAATCGCCAGCCACAGAGCCCTGGTGAAGGCCAGGGGCACAAGACCTTTCGTGATCTCCAGGTCTACCTTTGCCGGACACGGCAGATACGCAGGACACTGGACCGGCGACGTGTGGAGCAGCTGGGAGCAGCTGGCCTCTAGCGTGCCAGAGATCCTCCAGTTCAACCTGCTGGGCGTGCCCCTGGTGGGAGCAGACGTGTGCGGCTTTCTGGGCAATACATCCGAGGAGCTGTGCGTGAGGTGGACCCAGCTGGGAGCCTTCTATCCCTTCATGCGCAACCACAATAGCCTGCTGTCCCTGCCTCAGGAGCCATACAGCTTCTCCGAGCCTGCACAGCAGGCAATGAGGAAGGCCCTGACACTGCGCTATGCCCTGCTGCCACACCTGTACACCCTGTTTCACCAGGCACACGTGGCAGGAGAGACAGTGGCCCGGCCCCTGTTCCTGGAGTTTCCTAAGGATTCCTCTACCTGGACAGTGGACCACCAGCTGCTGTGGGGAGAGGCCCTGCTGATCACCCCCGTGCTCCAGGCAGGCAAGGCAGAGGTGACAGGCTATTTCCCTCTGGGCACATGGTACGACCTCCAGACCGTGCCAGTGGAGGCCCTGGGCAGCCTGCCTCCACCACCTGCCGCCCCCCGCGAGCCTGCCATCCACTCCGAGGGACAGTGGGTGACACTGCCAGCACCTCTGGACACCATCAACGTGCACCTGAGGGCCGGCTATATCATCCCCCTCCAGGGCCCTGGCCTGACCACAACCGAGTCCAGACAGCAGCCAATGGCCCTGGCCGTGGCCCTGACCAAGGGAGGCGAGGCCAGGGGCGAGCTGTTCTGGGACGATGGCGAGTCTCTGGAGGTGCTGGAGAGAGGCGCCTACACACAGGTCATCTTCCTGGCCAGGAACAATACAATCGTGAATGAGCTGGTGAGAGTGACCTCTGAGGGAGCAGGACTCCAGCTCCAGAAGGTGACAGTGCTGGGAGTGGCAACCGCACCACAGCAGGTGCTGAGCAACGGCGTGCCCGTGAGCAATTTCACATACTCCCCTGATACCAAGGTGCTGGACATCTGCGTGAGCCTGCTGATGGGCGAGCAGTTTCTGGTGTCCTGGTGTTGA
配列番号10(デュアルプロモータベクター)
>pDY−DP
AAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGTTGTTCCAGTTTGGAACAAGAGTCCACTATTAAAGAACGTGGACTCCAACGTCAAAGGGCGAAAAACCGTCTATCAGGGCGATGGCCCACTACGTGAACCATCACCCTAATCAAGTTTTTTGGGGTCGAGGTGCCGTAAAGCACTAAATCGGAACCCTAAAGGGAGCCCCCGATTTAGAGCTTGACGGGGAAAGCCGGCGAACGTGGCGAGAAAGGAAGGGAAGAAAGCGAAAGGAGCGGGCGCTAGGGCGCTGGCAAGTGTAGCGGTCACGCTGCGCGTAACCACCACACCCGCCGCGCTTAATGCGCCGCTACAGGGCGCGTCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAATTGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGGCCCGACGTCGCATGCTTGGAAGGGCTAATTCACTCCCAAAGAAGACAAGATATCCTTGATCTGTGGATCTACCACACACAAGGCTACTTCCCTGATTAGCAGAACTACACACCAGGGCCAGGGGTCAGATATCCACTGACCTTTGGATGGTGCTACAAGCTAGTACCAGTTGAGCCAGATAAGGTAGAAGAGGCCAATAAAGGAGAGAACACCAGCTTGTTACACCCTGTGAGCCTGCATGGGATGGATGACCCGGAGAGAGAAGTGTTAGAGTGGAGGTTTGACAGCCGCCTAGCATTTCATCACGTGGCCCGAGAGCTGCATCCGGAGTACTTCAAGAACTGCTGATATCGAGCTTGCTACAAGGGACTTTCCGCTGGGGACTTTCCAGGGAGGCGTGGCCTGGGCGGGACTGGGGAGTGGCGAGCCCTCAGATCCTGCATATAAGCAGCTGCTTTTTGCCTGTACTGGGTCTCTCTGGTTAGACCAGATCTGAGCCTGGGAGCTCTCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCTTAAGCCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAAGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTGACTCTGGTAACTAGAGATCCCTCAGACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCAGTGGCGCCCGAACAGGGACTTGAAAGCGAAAGGGAAACCAGAGGAGCTCTCTCGACGCAGGACTCGGCTTGCTGAAGCGCGCACGGCAAGAGGCGAGGGGCGGCGACTGGTGAGTACGCCAAAAATTTTGACTAGCGGAGGCTAGAAGGAGAGAGATGGGTGCGAGAGCGTCAGTATTAAGCGGGGGAGAATTAGATCGCGATGGGAAAAAATTCGGTTAAGGCCAGGGGGAAAGAAAAAATATAAATTAAAACATATAGTATGGGCAAGCAGGGAGCTAGAACGATTCGCAGTTAATCCTGGCCTGTTAGAAACATCAGAAGGCTGTAGACAAATACTGGGACAGCTACAACCATCCCTTCAGACAGGATCAGAAGAACTTAGATCATTATATAATACAGTAGCAACCCTCTATTGTGTGCATCAAAGGATAGAGATAAAAGACACCAAGGAAGCTTTAGACAAGATAGAGGAAGAGCAAAACAAAAGTAAGACCACCGCACAGCAAGCGGCCGCTGATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATATGAGGGACAATTGGAGAAGTGAATTATATAAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCCACCAAGGCAAAGAGAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATAGGAGCTTTGTTCCTTGGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCGTCAATGACGCTGACGGTACAGGCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGTGCAGCAGCAGAACAATTTGCTGAGGGCTATTGAGGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACAGTCTGGGGCATCAAGCAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAGGATCAACAGCTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATTTGCACCACTGCTGTGCCTTGGAATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAACAGATTTGGAATCACACGACCTGGATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACAAGCTTAATACACTCCTTAATTGAAGAATCGCAAAACCAGCAAGAAAAGAATGAACAAGAATTATTGGAATTAGATAAATGGGCAAGTTTGTGGAATTGGTTTAACATAACAAATTGGCTGTGGTATATAAAATTATTCATAATGATAGTAGGAGGCTTGGTAGGTTTAAGAATAGTTTTTGCTGTACTTTCTATAGTGAATAGAGTTAGGCAGGGATATTCACCATTATCGTTTCAGACCCACCTCCCAACCCCGAGGGGACCCGACAGGCCCGAAGGAATAGAAGAAGAAGGTGGAGAGAGAGACAGAGACAGATCCATTCGATTAGTGAACGGATCTCGACGGGATCGATTTTAAAAGAAAAGGGGGGATTGGGGGGTACAGTGCAGGGGAAAGAATAGTAGACATAATAGCAACAGACATACAAACTAAAGAATTACAAAAACAAATTACAAAAATTCAAAATTTTATCGATAAGCTTTGCAAAGATGGATAAAGTTTTAAACAGAGAGGAATCTTTGCAGCTAATGGACCTTCTAGGTCTGACCCCGTACGCCTCGAGAGATCTGATCATAATCAGCCATACCACATTTGTAGAGGTTTTACTTGCTTTAAAAAACCTCCCACACCTCCCCCTGAACCTGAAACATAAAATGAATGCAATTGTTGTTGTTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAGGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAGGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTTTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGGATCTCAAATCCCTCGGAAGCTGCGCCTGTCTTAGGTTGGAGTGATACATTTTTATCACTTTTACCCGTCTTTGGATTAGGCAGTAGCTCTGACGGCCCTCCTGTCTTAGGTTAGTGAAAAATGTCACTCTCTTACCCGTCATTGGCTGTCCAGCTTAGCTCGCAGGGGAGGTGGTCTGCCTGCAGGCGGATGGCGTTAACATATGACAACTTTCTCCCGGGTAATCTGACCGTTCGCTAGCCCTGGGGAGAGAGGTCGGTGATTCGGTCAACGAGGGAGCCGACTGCCGACGTGCGCTCCGGAGGCTTGCAGAATGCGGAACACCGCGCGGGCAGGAACAGGGCCCACACTACCGCCCCACACCCCGCCTCCCGCACCGCCCCTTCCCGGCCGCTGCTCTCGGCGCGCCCCGCTGAGCAGCCGCTATTGGCCACAGCCCATCGCGGTCGGCGCGCTGCCATTGCTCCCTGGCGCTGTCCGTCTGCGAGGGTACTAGTGAGACGTGCGGCTTCCGTTTGTCACGTCCGGCACGCCGCGAACCGCAAGGAACCTTCCCGACTTAGGGGCGGAGCAGGAAGCGTCGCCGGGGGGCCCACAAGGGTAGCGGCGAAGATCCGGGTGACGCTGCGAACGGACGTGAAGAATGTGCGAGACCCAGGGTCGGCGCCGCTGCGTTTCCCGGAACCACGCCCAGAGCAGCCGCGTCCCTGCGCAAACCCAGGGCTGCCAAGGAAAAGGCGCAACCCCAACCCCGTGGTTAATTAAGGTGAAAGGAGTGGGAATTGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACCTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCGACGCTTTTTTTCTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTTTTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAGTTTTTTTCTTCCATTTCAGGTGTCGTGAGGAATTCTGCAGTCGA
CGGTACCGCGGGCGCGCCCCGGGATCCAAGCTTCAATTGTGGTCACTCGACAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAGCTGACGTCCTTTCCATGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCGTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGCCTGCTCGAGACCTAGAAAAACATGGAGCAATCACAAGTAGCAATACAGCAGCTACCAATGCTGATTGTGCCTGGCTAGAAGCACAAGAGGAGGAGGAGGTGGGTTTTCCAGTCACACCTCAGGTACCTTTAAGACCAATGACTTACAAGGCAGCTGTAGATCTTAGCCACTTTTTAAAAGAAAAGGGGGGACTGGAAGGGCTAATTCACTCCCAACGAAGACAAGATCTGCTTTTTGCTTGTACTGGGTCTCTCTGGTTAGACCAGATCTGAGCCTGGGAGCTCTCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCTTAAGCCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAAGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTGACTCTGGTAACTAGAGATCCCTCAGACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCAGTAGTAGTTCATGTCATCTTATTATTCAGTATTTATAACTTGCAAAGAAATGAATATCAGAGAGTGAGAGGACGCGTTGGATGCATAGCTTGAGTATTCTATAGTGTCACCTAAATAGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCACCTGATGCGGTGTGAAATACCGCACAGATGCGTAAGGAGAAAATACCGCATCAGG
配列番号11
>pDY−[MCS]+(IY)
AAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGTTGTTCCAGTTTGGAACAAGAGTCCACTATTAAAGAACGTGGACTCCAACGTCAAAGGGCGAAAAACCGTCTATCAGGGCGATGGCCCACTACGTGAACCATCACCCTAATCAAGTTTTTTGGGGTCGAGGTGCCGTAAAGCACTAAATCGGAACCCTAAAGGGAGCCCCCGATTTAGAGCTTGACGGGGAAAGCCGGCGAACGTGGCGAGAAAGGAAGGGAAGAAAGCGAAAGGAGCGGGCGCTAGGGCGCTGGCAAGTGTAGCGGTCACGCTGCGCGTAACCACCACACCCGCCGCGCTTAATGCGCCGCTACAGGGCGCGTCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAATTGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGGCCCGACGTCGCATGCTTGGAAGGGCTAATTCACTCCCAAAGAAGACAAGATATCCTTGATCTGTGGATCTACCACACACAAGGCTACTTCCCTGATTAGCAGAACTACACACCAGGGCCAGGGGTCAGATATCCACTGACCTTTGGATGGTGCTACAAGCTAGTACCAGTTGAGCCAGATAAGGTAGAAGAGGCCAATAAAGGAGAGAACACCAGCTTGTTACACCCTGTGAGCCTGCATGGGATGGATGACCCGGAGAGAGAAGTGTTAGAGTGGAGGTTTGACAGCCGCCTAGCATTTCATCACGTGGCCCGAGAGCTGCATCCGGAGTACTTCAAGAACTGCTGATATCGAGCTTGCTACAAGGGACTTTCCGCTGGGGACTTTCCAGGGAGGCGTGGCCTGGGCGGGACTGGGGAGTGGCGAGCCCTCAGATCCTGCATATAAGCAGCTGCTTTTTGCCTGTACTGGGTCTCTCTGGTTAGACCAGATCTGAGCCTGGGAGCTCTCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCTTAAGCCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAAGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTGACTCTGGTAACTAGAGATCCCTCAGACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCAGTGGCGCCCGAACAGGGACTTGAAAGCGAAAGGGAAACCAGAGGAGCTCTCTCGACGCAGGACTCGGCTTGCTGAAGCGCGCACGGCAAGAGGCGAGGGGCGGCGACTGGTGAGTACGCCAAAAATTTTGACTAGCGGAGGCTAGAAGGAGAGAGATGGGTGCGAGAGCGTCAGTATTAAGCGGGGGAGAATTAGATCGCGATGGGAAAAAATTCGGTTAAGGCCAGGGGGAAAGAAAAAATATAAATTAAAACATATAGTATGGGCAAGCAGGGAGCTAGAACGATTCGCAGTTAATCCTGGCCTGTTAGAAACATCAGAAGGCTGTAGACAAATACTGGGACAGCTACAACCATCCCTTCAGACAGGATCAGAAGAACTTAGATCATTATATAATACAGTAGCAACCCTCTATTGTGTGCATCAAAGGATAGAGATAAAAGACACCAAGGAAGCTTTAGACAAGATAGAGGAAGAGCAAAACAAAAGTAAGACCACCGCACAGCAAGCGGCCGCTGATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATATGAGGGACAATTGGAGAAGTGAATTATATAAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCCACCAAGGCAAAGAGAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATAGGAGCTTTGTTCCTTGGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCGTCAATGACGCTGACGGTACAGGCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGTGCAGCAGCAGAACAATTTGCTGAGGGCTATTGAGGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACAGTCTGGGGCATCAAGCAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAGGATCAACAGCTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATTTGCACCACTGCTGTGCCTTGGAATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAACAGATTTGGAATCACACGACCTGGATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACAAGCTTAATACACTCCTTAATTGAAGAATCGCAAAACCAGCAAGAAAAGAATGAACAAGAATTATTGGAATTAGATAAATGGGCAAGTTTGTGGAATTGGTTTAACATAACAAATTGGCTGTGGTATATAAAATTATTCATAATGATAGTAGGAGGCTTGGTAGGTTTAAGAATAGTTTTTGCTGTACTTTCTATAGTGAATAGAGTTAGGCAGGGATATTCACCATTATCGTTTCAGACCCACCTCCCAACCCCGAGGGGACCCGACAGGCCCGAAGGAATAGAAGAAGAAGGTGGAGAGAGAGACAGAGACAGATCCATTCGATTAGTGAACGGATCTCGACGGGATCGATTTTAAAAGAAAAGGGGGGATTGGGGGGTACAGTGCAGGGGAAAGAATAGTAGACATAATAGCAACAGACATACAAACTAAAGAATTACAAAAACAAATTACAAAAATTCAAAATTTTATCGATAAGCTTTGCAAAGATGGATAAAGTTTTAAACAGAGAGGAATCTTTGCAGCTAATGGACCTTCTAGGTCTGACCCCGTACGCCTCGAGAGATCTGATCATAATCAGCCATACCACATTTGTAGAGGTTTTACTTGCTTTAAAAAACCTCCCACACCTCCCCCTGAACCTGAAACATAAAATGAATGCAATTGTTGTTGTTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAGGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAGGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTTTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGGATCTCAAATCCCTCGGAAGCTGCGCCTGTCTTAGGTTGGAGTGATACATTTTTATCACTTTTACCCGTCTTTGGATTAGGCAGTAGCTCTGACGGCCCTCCTGTCTTAGGTTAGTGAAAAATGTCACTCTCTTACCCGTCATTGGCTGTCCAGCTTAGCTCGCAGGGGAGGTGGTCTGCCTGCAGGTTAGAACAGTCTCTTTTCGTATGAGTGCAGTGAGTGGACGCCGCCTTCGACCTGGGCTGAAGAAGTTCTTTTCTCGAACTTCAGTTCGCCGGAATACATCATTGCCCGCACCTGTGTCAGGCTCTTAGCGCCGATATCCTGGCATGAATGCTGAATTCCGGCGATCAGGTAAGGCACGAATTTGTGAATACTGCCCTTATCCTGGACAGCTCCAGACACGCCCTGTGCGACTTTGATCTTGTCTGCCTCGGAAAAATACCTGTTCTGAGAGGACAGATGCTTATCCATGGCGTCCAGTGACCCCATGCCCCTATATTTCTTCAGTCTGAACCCATCACTAAAGAAGTACTCGCCGGGGGCTTCTGTGGTTGCAGCCAGCAGGCTGCCCATCATCACTGTGCTTGCCCCCAGAGCCAGGGCTTTTGCGATGTGGCCCACATTCTGAATTCCCCCGTCAGCGATCACTGGGACTCCGAATCTCCGGGCATACTCGTACACCTTGTAGACAGCAGTTGCCTGAGGTCGTCCACAGGCCAGCACTTCCTGAATGATGCAGATTGATCCACTCCCCATTCCGACCCTCAGAGCATCCACTCCTGCGTCAATCAGGTTTTTGGCCTGGGCTGCGGTCACGACATTGCCTCCGATGACCTGCAGATTTGGGTACTTGTCCTTAATGTACTTGATCATATTAATCTGGAAGATGCTGTTTCCCTGGCTTGAATCCAGCACGACCACGTCCACCCCTGCCTGAGCCAGCAGATCCAGGCGATATTTATCGTCCTCGTGTGTGCCAATAGCGGCTCCACACAGCAGCTGTTTCTTTGCGTCCTTACTAGCCAGAGGGTAATCTCGATTTTTCTTCAGGTCGGTGCGGGCAATGATTGCCACCAGCTCATCGTCTTCATTCACGATAGGCAGTTTTCCTTTCTTAGACCGCTGCAGAATCTCGTTGGCTTCCTTCAGTGTGATGCCGGCAGGTGCGACCACCAGATCTTCGCGTTTGGTCATAATCTCTTCCAGAAAACAGTCATGCTCTTCCTCCTTCAGGAAATCGATGTCTCGACTAGAAATGATTCCCACCAGTCGGCTGCCCATTCGTCCAGTATCTGTAATGGGGATGCCGCAAAATCCGTGCCTAGCTTTGGCCTCGAACACATCGCGGACCCTGTCCTTGGGGCTCAGGACCACTGGGTCGGTGATAAAGCCCTGTTCGTATTTCTTCACCTTTCTGACCTCATTGGCCTGAAATTCTGGAGTGCAGTTATGGTGAATGAACCCGATCCCGCCTGTCAGTGCCATAGCAATGGCCATGCCAGCCTCGGTGACAGTGTCCATAGGGGAGCTCACCAGGGGTGTCTTCAGGGTGATTTTCTTGGTCAGGGCAGAAGTCAGATCCACCTGGTCTGCGGTAAAATCAATATAGCCGGGCAGGATCAGGAAGTCGTTGTAAGTCAGCCCGTCTCCACAATTAAACAGCTGCTGGGCGGTCAGTCCATCATCAGGGACATAGGAAGTGCCTCCAGAAATCAGGTAGTCGGCCATGGTGGCGCTAGCCCTGGGGAGAGAGGTCGGTGATTCGGTCAACGAGGGAGCCGACTGCCGACGTGCGCTCCGGAGGCTTGCAGAATGCGGAACACCGCGCGGGCAGGAACAGGGCCCACACTACCGCC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CCGTCTGCGAGGGTACTAGTGAGACGTGCGGCTTCCGTTTGTCACGTCCGGCACGCCGCGAACCGCAAGGAACCTTCCCGACTTAGGGGCGGAGCAGGAAGCGTCGCCGGGGGGCCCACAAGGGTAGCGGCGAAGATCCGGGTGACGCTGCGAACGGACGTGAAGAATGTGCGAGACCCAGGGTCGGCGCCGCTGCGTTTCCCGGAACCACGCCCAGAGCAGCCGCGTCCCTGCGCAAACCCAGGGCTGCCAAGGAAAAGGCGCAACCCCAACCCCGTGGTTAATTAAGGTGAAAGGAGTGGGAATTGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACCTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCGACGCTTTTTTTCTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTTTTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAGTTTTTTTCTTCCATTTCAGGTGTCGTGAGGAATTCTGCAGTCGACGGTACCGCGGGCGCGCCCCGGGATCCAAGCTTCAATTGTGGTCACTCGACAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAGCTGACGTCCTTTCCATGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCGTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGCCTGCTCGAGACCTAGAAAAACATGGAGCAATCACAAGTAGCAATACAGCAGCTACCAATGCTGATTGTGCCTGGCTAGAAGCACAAGAGGAGGAGGAGGTGGGTTTTCCAGTCACACCTCAGGTACCTTTAAGACCAATGACTTACAAGGCAGCTGTAGATCTTAGCCACTTTTTAAAAGAAAAGGGGGGACTGGAAGGGCTAATTCACTCCCAACGAAGACAAGATCTGCTTTTTGCTTGTACTGGGTCTCTCTGGTTAGACCAGATCTGAGCCTGGGAGCTCTCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCTTAAGCCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAAGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTGACTCTGGTAACTAGAGATCCCTCAGACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCAGTAGTAGTTCATGTCATCTTATTATTCAGTATTTATAACTTGCAAAGAAATGAATATCAGAGAGTGAGAGGACGCGTTGGATGCATAGCTTGAGTATTCTATAGTGTCACCTAAATAGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCACCTGATGCGGTGTGAAATACCGCACAGATGCGTAAGGAGAAAATACCGCATCAGG
プラスミドおよびレンチウイルスベクターの遺伝的エレメント
f1 ori:細菌におけるプラスミド複製の起点
Amp(R):アンピシリン耐性遺伝子(ベータ−ラクタマーゼ)
5’LTR:HIV1由来の5’長い末端反復:宿主ゲノムへの組込みに必要なウイルスエレメント
3’LTR:宿主細胞内でのレトロ転写後、任意のウイルス複製のための能力を不活性化する133bp欠失を有する、HIV1由来の3’長い末端反復
Psi配列:レトロウイルスPsiパッケージングエレメント
5’Gag(del3rdG):プロウイルスのRNA転写のための第2世代レンチウイルス系にて必要とされるウイルスエレメント
RRE:プロウイルスRNAの核外輸送に必要なウイルスREV応答エレメント
cPPT:中央ポリプリントラクト、ウイルスRNAの核内への移入/排出を増強し、その結果、ウイルス力価と形質導入を増強するレンチウイルスエレメントである。
EF1a:ヒト伸長因子1アルファ遺伝子から誘導された、遍在性である常時発現プロモータ
WPRE:ウッドチャック肝炎の転写後制御エレメント、転写を強力に終結させ、かつmRNAを安定化させる。
hPGK:ヒトホスホグリセリン酸キナーゼ1遺伝子から誘導された、遍在性である常時発現プロモータ
CTEおよびポリA:転写終結のためのC末端シグナル配列およびポリAシグナル配列
coIMPDH2(IY):ヒトイノシン−5’−一リン酸デヒドロゲナーゼ2のT333I、S351Y突然変異体を発現する、コドン最適化導入遺伝子
AGA/GBA/ASAH1/GAA:ヒトα−ガラクトシダーゼA、β−グルコセレブロシダーゼ、N−アシルスフィンゴシンアミドハイドロラーゼ1、または酸性α−グルコシダーゼをそれぞれコードしている、関心対象のコドン最適化導入遺伝子
配列
配列番号1(AGA)
>co.hAGA
ATGCAACTTCGAAACCCAGAGCTCCACCTCGGATGTGCCCTTGCTCTGAGGTTCCTGGCGCTGGTGTCTTGGGATATACCCGGAGCACGCGCTCTGGACAACGGGCTGGCCCGGACTCCAACCATGGGTTGGCTCCATTGGGAAAGGTTTATGTGCAACTTGGACTGCCAGGAAGAACCCGACTCCTGTATTTCCGAGAAACTCTTCATGGAGATGGCCGAGCTGATGGTTAGCGAAGGCTGGAAGGATGCCGGTTATGAATACTTGTGTATCGACGATTGTTGGATGGCTCCCCAGCGGGACAGTGAAGGACGACTCCAGGCAGATCCGCAACGGTTCCCTCATGGCATACGGCAGCTCGCCAATTACGTGCACAGCAAGGGTTTGAAGCTGGGGATATATGCTGACGTGGGCAACAAAACCTGTGCTGGTTTCCCCGGCAGCTTCGGCTACTATGATATAGATGCACAAACCTTCGCTGATTGGGGCGTGGACCTGCTTAAATTTGACGGCTGTTACTGCGACAGCTTGGAAAACCTCGCCGATGGATATAAACACATGAGCCTTGCACTCAATCGGACTGGCCGGAGCATTGTCTACTCTTGCGAGTGGCCATTGTACATGTGGCCTTTCCAGAAGCCTAACTATACGGAGATTAGACAGTATTGTAATCACTGGAGAAACTTTGCAGATATCGACGACTCATGGAAGTCCATCAAATCTATTCTGGACTGGACTTCATTCAATCAGGAGCGCATCGTCGATGTTGCCGGTCCAGGTGGATGGAACGACCCTGACATGCTCGTAATTGGGAATTTCGGACTGTCCTGGAATCAGCAGGTCACACAGATGGCTTTGTGGGCTATCATGGCAGCCCCACTCTTTATGTCTAACGATTTGCGGCATATTTCACCACAGGCCAAAGCCCTGCTGCAAGATAAGGACGTCATAGCGATTAACCAGGACCCACTGGGAAAGCAGGGCTACCAGCTGAGACAGGGCGACAATTTTGAGGTCTGGGAAAGACCTCTTAGCGGGCTGGCGTGGGCCGTAGCCATGATTAATCGCCAGGAAATTGGCGGCCCTCGCTCTTACACTATCGCGGTCGCCAGTCTGGGCAAGGGAGTCGCTTGTAACCCCGCCTGCTTCATAACTCAGTTGCTGCCCGTGAAACGGAAGCTGGGCTTCTATGAATGGACTAGCAGACTCCGCAGTCATATTAATCCGACTGGTACGGTGCTGCTGCAACTGGAGAATACCATGCAGATGTCACTTAAGGATCTTCTGTGA
配列番号2
>pDY co.hAGA
AAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGTTGTTCCAGTTTGGAACAAGAGTCCACTATTAAAGAACGTGGACTCCAACGTCAAAGGGCGAAAAACCGTCTATCAGGGCGATGGCCCACTACGTGAACCATCACCCTAATCAAGTTTTTTGGGGTCGAGGTGCCGTAAAGCACTAAATCGGAACCCTAAAGGGAGCCCCCGATTTAGAGCTTGACGGGGAAAGCCGGCGAACGTGGCGAGAAAGGAAGGGAAGAAAGCGAAAGGAGCGGGCGCTAGGGCGCTGGCAAGTGTAGCGGTCACGCTGCGCGTAACCACCACACCCGCCGCGCTTAATGCGCCGCTACAGGGCGCGTCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAATTGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGGCCCGACGTCGCATGCTTGGAAGGGCTAATTCACTCCCAAAGAAGACAAGATATCCTTGATCTGTGGATCTACCACACACAAGGCTACTTCCCTGATTAGCAGAACTACACACCAGGGCCAGGGGTCAGATATCCACTGACCTTTGGATGGTGCTACAAGCTAGTACCAGTTGAGCCAGATAAGGTAGAAGAGGCCAATAAAGGAGAGAACACCAGCTTGTTACACCCTGTGAGCCTGCATGGGATGGATGACCCGGAGAGAGAAGTGTTAGAGTGGAGGTTTGACAGCCGCCTAGCATTTCATCACGTGGCCCGAGAGCTGCATCCGGAGTACTTCAAGAACTGCTGATATCGAGCTTGCTACAAGGGACTTTCCGCTGGGGACTTTCCAGGGAGGCGTGGCCTGGGCGGGACTGGGGAGTGGCGAGCCCTCAGATCCTGCATATAAGCAGCTGCTTTTTGCCTGTACTGGGTCTCTCTGGTTAGACCAGATCTGAGCCTGGGAGCTCTCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCTTAAGCCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAAGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTGACTCTGGTAACTAGAGATCCCTCAGACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCAGTGGCGCCCGAACAGGGACTTGAAAGCGAAAGGGAAACCAGAGGAGCTCTCTCGACGCAGGACTCGGCTTGCTGAAGCGCGCACGGCAAGAGGCGAGGGGCGGCGACTGGTGAGTACGCCAAAAATTTTGACTAGCGGAGGCTAGAAGGAGAGAGATGGGTGCGAGAGCGTCAGTATTAAGCGGGGGAGAATTAGATCGCGATGGGAAAAAATTCGGTTAAGGCCAGGGGGAAAGAAAAAATATAAATTAAAACATATAGTATGGGCAAGCAGGGAGCTAGAACGATTCGCAGTTAATCCTGGCCTGTTAGAAACATCAGAAGGCTGTAGACAAATACTGGGACAGCTACAACCATCCCTTCAGACAGGATCAGAAGAACTTAGATCATTATATAATACAGTAGCAACCCTCTATTGTGTGCATCAAAGGATAGAGATAAAAGACACCAAGGAAGCTTTAGACAAGATAGAGGAAGAGCAAAACAAAAGTAAGACCACCGCACAGCAAGCGGCCGCTGATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATATGAGGGACAATTGGAGAAGTGAATTATATAAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCCACCAAGGCAAAGAGAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATAGGAGCTTTGTTCCTTGGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCGTCAATGACGCTGACGGTACAGGCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGTGCAGCAGCAGAACAATTTGCTGAGGGCTATTGAGGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACAGTCTGGGGCATCAAGCAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAGGATCAACAGCTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATTTGCACCACTGCTGTGCCTTGGAATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAACAGATTTGGAATCACACGACCTGGATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACAAGCTTAATACACTCCTTAATTGAAGAATCGCAAAACCAGCAAGAAAAGAATGAACAAGAATTATTGGAATTAGATAAATGGGCAAGTTTGTGGAATTGGTTTAACATAACAAATTGGCTGTGGTATATAAAATTATTCATAATGATAGTAGGAGGCTTGGTAGGTTTAAGAATAGTTTTTGCTGTACTTTCTATAGTGAATAGAGTTAGGCAGGGATATTCACCATTATCGTTTCAGACCCACCTCCCAACCCCGAGGGGACCCGACAGGCCCGAAGGAATAGAAGAAGAAGGTGGAGAGAGAGACAGAGACAGATCCATTCGATTAGTGAACGGATCTCGACGGGATCGATTTTAAAAGAAAAGGGGGGATTGGGGGGTACAGTGCAGGGGAAAGAATAGTAGACATAATAGCAACAGACATACAAACTAAAGAATTACAAAAACAAATTACAAAAATTCAAAATTTTATCGATAAGCTTTGCAAAGATGGATAAAGTTTTAAACAGAGAGGAATCTTTGCAGCTAATGGACCTTCTAGGTCTTGAAAGGAGTGGGAATTGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACCTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCGACGCTTTTTTTCTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTTTTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAGTTTTTTTCTTCCATTTCAGGTGTCGTGAGGAATTCGCCACCATGCAACTTCGAAACCCAGAGCTCCACCTCGGATGTGCCCTTGCTCTGAGGTTCCTGGCGCTGGTGTCTTGGGATATACCCGGAGCACGCGCTCTGGACAACGGGCTGGCCCGGACTCCAACCATGGGTTGGCTCCATTGGGAAAGGTTTATGTGCAACTTGGACTGCCAGGAAGAACCCGACTCCTGTATTTCCGAGAAACTCTTCATGGAGATGGCCGAGCTGATGGTTAGCGAAGGCTGGAAGGATGCCGGTTATGAATACTTGTGTATCGACGATTGTTGGATGGCTCCCCAGCGGGACAGTGAAGGACGACTCCAGGCAGATCCGCAACGGTTCCCTCATGGCATACGGCAGCTCGCCAATTACGTGCACAGCAAGGGTTTGAAGCTGGGGATATATGCTGACGTGGGCAACAAAACCTGTGCTGGTTTCCCCGGCAGCTTCGGCTACTATGATATAGATGCACAAACCTTCGCTGATTGGGGCGTGGACCTGCTTAAATTTGACGGCTGTTACTGCGACAGCTTGGAAAACCTCGCCGATGGATATAAACACATGAGCCTTGCACTCAATCGGACTGGCCGGAGCATTGTCTACTCTTGCGAGTGGCCATTGTACATGTGGCCTTTCCAGAAGCCTAACTATACGGAGATTAGACAGTATTGTAATCACTGGAGAAACTTTGCAGATATCGACGACTCATGGAAGTCCATCAAATCTATTCTGGACTGGACTTCATTCAATCAGGAGCGCATCGTCGATGTTGCCGGTCCAGGTGGATGGAACGACCCTGACATGCTCGTAATTGGGAATTTCGGACTGTCCTGGAATCAGCAGGTCACACAGATGGCTTTGTGGGCTATCATGGCAGCCCCACTCTTTATGTCTAACGATTTGCGGCATATTTCA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配列番号3
>pDY AGA+(IY)(配列番号3)
AAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGTTGTTCCAGTTTGGAACAAGAGTCCACTATTAAAGAACGTGGACTCCAACGTCAAAGGGCGAAAAACCGTCTATCAGGGCGATGGCCCACTACGTGAACCATCACCCTAATCAAGTTTTTTGGGGTCGAGGTGCCGTAAAGCACTAAATCGGAACCCTAAAGGGAGCCCCCGATTTAGAGCTTGACGGGGAAAGCCGGCGAACGTGGCGAGAAAGGAAGGGAAGAAAGCGAAAGGAGCGGGCGCTAGGGCGCTGGCAAGTGTAGCGGTCACGCTGCGCGTAACCACCACACCCGCCGCGCTTAATGCGCCGCTACAGGGCGCGTCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAATTGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGGCCCGACGTCGCATGCTTGGAAGGGCTAATTCACTCCCAAAGAAGACAAGATATCCTTGATCTGTGGATCTACCACACACAAGGCTACTTCCCTGATTAGCAGAACTACACACCAGGGCCAGGGGTCAGATATCCACTGACCTTTGGATGGTGCTACAAGCTAGTACCAGTTGAGCCAGATAAGGTAGAAGAGGCCAATAAAGGAGAGAACACCAGCTTGTTACACCCTGTGAGCCTGCATGGGATGGATGACCCGGAGAGAGAAGTGTTAGAGTGGAGGTTTGACAGCCGCCTAGCATTTCATCACGTGGCCCGAGAGCTGCATCCGGAGTACTTCAAGAACTGCTGATATCGAGCTTGCTACAAGGGACTTTCCGCTGGGGACTTTCCAGGGAGGCGTGGCCTGGGCGGGACTGGGGAGTGGCGAGCCCTCAGATCCTGCATATAAGCAGCTGCTTTTTGCCTGTACTGGGTCTCTCTGGTTAGACCAGATCTGAGCCTGGGAGCTCTCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCTTAAGCCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAAGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTGACTCTGGTAACTAGAGATCCCTCAGACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCAGTGGCGCCCGAACAGGGACTTGAAAGCGAAAGGGAAACCAGAGGAGCTCTCTCGACGCAGGACTCGGCTTGCTGAAGCGCGCACGGCAAGAGGCGAGGGGCGGCGACTGGTGAGTACGCCAAAAATTTTGACTAGCGGAGGCTAGAAGGAGAGAGATGGGTGCGAGAGCGTCAGTATTAAGCGGGGGAGAATTAGATCGCGATGGGAAAAAATTCGGTTAAGGCCAGGGGGAAAGAAAAAATATAAATTAAAACATATAGTATGGGCAAGCAGGGAGCTAGAACGATTCGCAGTTAATCCTGGCCTGTTAGAAACATCAGAAGGCTGTAGACAAATACTGGGACAGCTACAACCATCCCTTCAGACAGGATCAGAAGAACTTAGATCATTATATAATACAGTAGCAACCCTCTATTGTGTGCATCAAAGGATAGAGATAAAAGACACCAAGGAAGCTTTAGACAAGATAGAGGAAGAGCAAAACAAAAGTAAGACCACCGCACAGCAAGCGGCCGCTGATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATATGAGGGACAATTGGAGAAGTGAATTATATAAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCCACCAAGGCAAAGAGAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATAGGAGCTTTGTTCCTTGGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCGTCAATGACGCTGACGGTACAGGCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGTGCAGCAGCAGAACAATTTGCTGAGGGCTATTGAGGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACAGTCTGGGGCATCAAGCAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAGGATCAACAGCTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATTTGCACCACTGCTGTGCCTTGGAATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAACAGATTTGGAATCACACGACCTGGATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACAAGCTTAATACACTCCTTAATTGAAGAATCGCAAAACCAGCAAGAAAAGAATGAACAAGAATTATTGGAATTAGATAAATGGGCAAGTTTGTGGAATTGGTTTAACATAACAAATTGGCTGTGGTATATAAAATTATTCATAATGATAGTAGGAGGCTTGGTAGGTTTAAGAATAGTTTTTGCTGTACTTTCTATAGTGAATAGAGTTAGGCAGGGATATTCACCATTATCGTTTCAGACCCACCTCCCAACCCCGAGGGGACCCGACAGGCCCGAAGGAATAGAAGAAGAAGGTGGAGAGAGAGACAGAGACAGATCCATTCGATTAGTGAACGGATCTCGACGGGATCGATTTTAAAAGAAAAGGGGGGATTGGGGGGTACAGTGCAGGGGAAAGAATAGTAGACATAATAGCAACAGACATACAAACTAAAGAATTACAAAAACAAATTACAAAAATTCAAAATTTTATCGATAAGCTTTGCAAAGATGGATAAAGTTTTAAACAGAGAGGAATCTTTGCAGCTAATGGACCTTCTAGGTCTGACCCCGTACGCCTCGAGAGATCTGATCATAATCAGCCATACCACATTTGTAGAGGTTTTACTTGCTTTAAAAAACCTCCCACACCTCCCCCTGAACCTGAAACATAAAATGAATGCAATTGTTGTTGTTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAGGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAGGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTTTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGGATCTCAAATCCCTCGGAAGCTGCGCCTGTCTTAGGTTGGAGTGATACATTTTTATCACTTTTACCCGTCTTTGGATTAGGCAGTAGCTCTGACGGCCCTCCTGTCTTAGGTTAGTGAAAAATGTCACTCTCTTACCCGTCATTGGCTGTCCAGCTTAGCTCGCAGGGGAGGTGGTCTGCCTGCAGGTTAGAACAGTCTCTTTTCGTATGAGTGCAGTGAGTGGACGCCGCCTTCGACCTGGGCTGAAGAAGTTCTTTTCTCGAACTTCAGTTCGCCGGAATACATCATTGCCCGCACCTGTGTCAGGCTCTTAGCGCCGATATCCTGGCATGAATGCTGAATTCCGGCGATCAGGTAAGGCACGAATTTGTGAATACTGCCCTTATCCTGGACAGCTCCAGACACGCCCTGTGCGACTTTGATCTTGTCTGCCTCGGAAAAATACCTGTTCTGAGAGGACAGATGCTTATCCATGGCGTCCAGTGACCCCATGCCCCTATATTTCTTCAGTCTGAACCCATCACTAAAGAAGTACTCGCCGGGGGCTTCTGTGGTTGCAGCCAGCAGGCTGCCCATCATCACTGTGCTTGCCCCCAGAGCCAGGGCTTTTGCGATGTGGCCCACATTCTGAATTCCCCCGTCAGCGATCACTGGGACTCCGAATCTCCGGGCATACTCGTACACCTTGTAGACAGCAGTTGCCTGAGGTCGTCCACAGGCCAGCACTTCCTGAATGATGCAGATTGATCCACTCCCCATTCCGACCCTCAGAGCATCCACTCCTGCGTCAATCAGGTTTTTGGCCTGGGCTGCGGTCACGACATTGCCTCCGATGACCTGCAGATTTGGGTACTTGTCCTTAATGTACTTGATCATATTAATCTGGAAGATGCTGTTTCCCTGGCTTGAATCCAGCACGACCACGTCCACCCCTGCCTGAGCCAGCAGATCCAGGCGATATTTATCGTCCTCGTGTGTGCCAATAGCGGCTCCACACAGCAGCTGTTTCTTTGCGTCCTTACTAGCCAGAGGGTAATCTCGATTTTTCTTCAGGTCGGTGCGGGCAATGATTGCCACCAGCTCATCGTCTTCATTCACGATAGGCAGTTTTCCTTTCTTAGACCGCTGCAGAATCTCGTTGGCTTCCTTCAGTGTGATGCCGGCAGGTGCGACCACCAGATCTTCGCGTTTGGTCATAATCTCTTCCAGAAAACAGTCATGCTCTTCCTCCTTCAGGAAATCGATGTCTCGACTAGAAATGATTCCCACCAGTCGGCTGCCCATTCGTCCAGTATCTGTAATGGGGATGCCGCAAAATCCGTGCCTAGCTTTGGCCTCGAACACATCGCGGACCCTGTCCTTGGGGCTCAGGACCACTGGGTCGGTGATAAAGCCCTGTTCGTATTTCTTCACCTTTCTGACCTCATTGGCCTGAAATTCTGGAGTGCAGTTATGGTGAATGAACCCGATCCCGCCTGTCAGTGCCATAGCAATGGCCATGCCAGCCTCGGTGACAGTGTCCATAGGGGAGCTCACCAGGGGTGTCTTCAGGGTGATTTTCTTGGTCAGGGCAGAAGTCAGATCCACCTGGTCTGCGGTAAAATCAATATAGCCGGGCAGGATCAGGAAGTCGTTGTAAGTCAGCCCGTCTCCACAATTAAACAGCTGCTGGGCGGTCAGTCCATCATCAGGGACATAGGAAGTGCCTCCAGAAATCAGGTAGTCGGCCATGGTGGCGCTAGCCCTGGGGAGAGAGGTCGGTGATTCGGTCAACGAGGGAGCCGACTGCCGACGTGCGCTCCGGAGGCTTGCAGAATGCGGAACACCGCGCGGGCAGGAACAGGGCCCACACTACCGCC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配列番号4
ゴーシェ病
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配列番号5
ファーバー病
>pDY hASAH1
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配列番号6
ポンペ病(GAAをコードしているベクター)
>pDY co hGAA
AAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGTTGTTCCAGTTTGGAACAAGAGTCCACTATTAAAGAACGTGGACTCCAACGTCAAAGGGCGAAAAACCGTCTATCAGGGCGATGGCCCACTACGTGAACCATCACCCTAATCAAGTTTTTTGGGGTCGAGGTGCCGTAAAGCACTAAATCGGAACCCTAAAGGGAGCCCCCGATTTAGAGCTTGACGGGGAAAGCCGGCGAACGTGGCGAGAAAGGAAGGGAAGAAAGCGAAAGGAGCGGGCGCTAGGGCGCTGGCAAGTGTAGCGGTCACGCTGCGCGTAACCACCACACCCGCCGCGCTTAATGCGCCGCTACAGGGCGCGTCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAATTGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGGCCCGACGTCGCATGCTTGGAAGGGCTAATTCACTCCCAAAGAAGACAAGATATCCTTGATCTGTGGATCTACCACACACAAGGCTACTTCCCTGATTAGCAGAACTACACACCAGGGCCAGGGGTCAGATATCCACTGACCTTTGGATGGTGCTACAAGCTAGTACCAGTTGAGCCAGATAAGGTAGAAGAGGCCAATAAAGGAGAGAACACCAGCTTGTTACACCCTGTGAGCCTGCATGGGATGGATGACCCGGAGAGAGAAGTGTTAGAGTGGAGGTTTGACAGCCGCCTAGCATTTCATCACGTGGCCCGAGAGCTGCATCCGGAGTACTTCAAGAACTGCTGATATCGAGCTTGCTACAAGGGACTTTCCGCTGGGGACTTTCCAGGGAGGCGTGGCCTGGGCGGGACTGGGGAGTGGCGAGCCCTCAGATCCTGCATATAAGCAGCTGCTTTTTGCCTGTACTGGGTCTCTCTGGTTAGACCAGATCTGAGCCTGGGAGCTCTCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCTTAAGCCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAAGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTGACTCTGGTAACTAGAGATCCCTCAGACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCAGTGGCGCCCGAACAGGGACTTGAAAGCGAAAGGGAAACCAGAGGAGCTCTCTCGACGCAGGACTCGGCTTGCTGAAGCGCGCACGGCAAGAGGCGAGGGGCGGCGACTGGTGAGTACGCCAAAAATTTTGACTAGCGGAGGCTAGAAGGAGAGAGATGGGTGCGAGAGCGTCAGTATTAAGCGGGGGAGAATTAGATCGCGATGGGAAAAAATTCGGTTAAGGCCAGGGGGAAAGAAAAAATATAAATTAAAACATATAGTATGGGCAAGCAGGGAGCTAGAACGATTCGCAGTTAATCCTGGCCTGTTAGAAACATCAGAAGGCTGTAGACAAATACTGGGACAGCTACAACCATCCCTTCAGACAGGATCAGAAGAACTTAGATCATTATATAATACAGTAGCAACCCTCTATTGTGTGCATCAAAGGATAGAGATAAAAGACACCAAGGAAGCTTTAGACAAGATAGAGGAAGAGCAAAACAAAAGTAAGACCACCGCACAGCAAGCGGCCGCTGATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATATGAGGGACAATTGGAGAAGTGAATTATATAAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCCACCAAGGCAAAGAGAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATAGGAGCTTTGTTCCTTGGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCGTCAATGACGCTGACGGTACAGGCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGTGCAGCAGCAGAACAATTTGCTGAGGGCTATTGAGGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACAGTCTGGGGCATCAAGCAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAGGATCAACAGCTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATTTGCACCACTGCTGTGCCTTGGAATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAACAGATTTGGAATCACACGACCTGGATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACAAGCTTAATACACTCCTTAATTGAAGAATCGCAAAACCAGCAAGAAAAGAATGAACAAGAATTATTGGAATTAGATAAATGGGCAAGTTTGTGGAATTGGTTTAACATAACAAATTGGCTGTGGTATATAAAATTATTCATAATGATAGTAGGAGGCTTGGTAGGTTTAAGAATAGTTTTTGCTGTACTTTCTATAGTGAATAGAGTTAGGCAGGGATATTCACCATTATCGTTTCAGACCCACCTCCCAACCCCGAGGGGACCCGACAGGCCCGAAGGAATAGAAGAAGAAGGTGGAGAGAGAGACAGAGACAGATCCATTCGATTAGTGAACGGATCTCGACGGGATCGATTTTAAAAGAAAAGGGGGGATTGGGGGGTACAGTGCAGGGGAAAGAATAGTAGACATAATAGCAACAGACATACAAACTAAAGAATTACAAAAACAAATTACAAAAATTCAAAATTTTATCGATAAGCTTTGCAAAGATGGATAAAGTTTTAAACAGAGAGGAATCTTTGCAGCTAATGGACCTTCTAGGTCTTGAAAGGAGTGGGAATTGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACCTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCGACGCTTTTTTTCTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTTTTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAGTTTTTTTCTTCCATTTCAGGTGTCGTGAGGAATTCGCCACCATGGGCGTGAGGCACCCCCCTTGCTCTCACAGGCTGCTGGCCGTGTGCGCACTGGTGAGCCTGGCCACCGCCGCCCTGCTGGGCCACATCCTGCTGCACGACTTCCTGCTGGTGCCCAGGGAGCTGTCCGGCAGCTCCCCAGTGCTGGAGGAGACCCACCCAGCACACCAGCAGGGCGCCTCTCGGCCAGGCCCCCGCGATGCACAGGCACACCCAGGCCGGCCCCGCGCCGTGCCAACCCAGTGCGACGTGCCACCCAACAGCCGGTTTGACTGTGCCCCCGATAAGGCCATCACACAGGAGCAGTGCGAGGCCAGGGGCTGCTGTTATATCCCTGCAAAGCAGGGCCTCCAGGGCGCCCAGATGGGACAGCCATGGTGTTTCTTTCCTCCATCTTACCCCAGCTATAAGCTGGAGAATCTGTCTAGCTCCGAGATGGGCTACACAGCCACCCTGACAAGAACCACACCAACATTCTTTCCCAAGGACATCCTGACCCTGCGGCTGGACGTGATGATGGAGACAGAGAACCGCCTGCACTTCACCATCAAGGACCCCGCCAATAGGAGATATGAGGTGCCTCTGGAGACCCCACACGTGCACTCTCGGGCCCCTAGCCCACTGTACTCCGTGGAGTTCTCTGAGGAGCCATTTGGCGTGATCGTGCGGCGCCAGCTGGATGGACGCGTGCTGCTGAACACCACAGTGGCCCCCCTGTTCTTTGCCGACCAGTTCCTCCAGCTGAGCACATCCCTGCCCTCCCAGTATATCACCGGCCTGGCCGAGCACCTGTCTCCTCTGATGCTGTCTACCAGCTGGACAAGGATCACCCTGTGGAACAGAGACCTGGCACCAACCCCTGGCGCAAATCTGTACGGCAGCCACCCTTTCTATCTGGCCCTGGAGGATGGA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CCTGAGCCAAAGTCCGTGGTGCAGCAGTACCTGGACGTGGTGGGCTATCCTTTCATGCCCCCTTACTGGGGACTGGGATTTCACCTGTGCCGCTGGGGCTATTCTAGCACAGCCATCACCCGGCAGGTGGTGGAGAACATGACCCGCGCCCACTTTCCACTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGATTACATGGACTCCAGGAGAGACTTCACCTTCAACAAGGACGGCTTCAGGGATTTTCCCGCCATGGTGCAGGAGCTGCACCAGGGCGGCCGGCGCTACATGATGATCGTGGACCCCGCCATCTCCTCTAGCGGACCTGCCGGCAGCTACAGACCATATGACGAGGGCCTGAGGAGAGGCGTGTTCATCACAAACGAGACCGGCCAGCCTCTGATCGGCAAGGTCTGGCCAGGCTCCACCGCCTTCCCAGACTTCACCAATCCAACCGCCCTGGCCTGGTGGGAGGACATGGTGGCCGAGTTCCACGACCAGGTGCCTTTTGATGGCATGTGGATCGACATGAACGAGCCATCTAATTTCATCAGGGGCAGCGAGGACGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAACCCACCATATGTGCCTGGCGTGGTGGGAGGCACCCTCCAGGCAGCAACCATCTGTGCCTCCTCTCACCAGTTTCTGTCTACACACTATAACCTGCACAATCTGTACGGACTGACCGAGGCAATCGCCAGCCACAGAGCCCTGGTGAAGGCCAGGGGCACAAGACCTTTCGTGATCTCCAGGTCTACCTTTGCCGGACACGGCAGATACGCAGGACACTGGACCGGCGACGTGTGGAGCAGCTGGGAGCAGCTGGCCTCTAGCGTGCCAGAGATCCTCCAGTTCAACCTGCTGGGCGTGCCCCTGGTGGGAGCAGACGTGTGCGGCTTTCTGGGCAATACATCCGAGGAGCTGTGCGTGAGGTGGACCCAGCTGGGAGCCTTCTATCCCTTCATGCGCAACCACAATAGCCTGCTGTCCCTGCCTCAGGAGCCATACAGCTTCTCCGAGCCTGCACAGCAGGCAATGAGGAAGGCCCTGACACTGCGCTATGCCCTGCTGCCACACCTGTACACCCTGTTTCACCAGGCACACGTGGCAGGAGAGACAGTGGCCCGGCCCCTGTTCCTGGAGTTTCCTAAGGATTCCTCTACCTGGACAGTGGACCACCAGCTGCTGTGGGGAGAGGCCCTGCTGATCACCCCCGTGCTCCAGGCAGGCAAGGCAGAGGTGACAGGCTATTTCCCTCTGGGCACATGGTACGACCTCCAGACCGTGCCAGTGGAGGCCCTGGGCAGCCTGCCTCCACCACCTGCCGCCCCCCGCGAGCCTGCCATCCACTCCGAGGGACAGTGGGTGACACTGCCAGCACCTCTGGACACCATCAACGTGCACCTGAGGGCCGGCTATATCATCCCCCTCCAGGGCCCTGGCCTGACCACAACCGAGTCCAGACAGCAGCCAATGGCCCTGGCCGTGGCCCTGACCAAGGGAGGCGAGGCCAGGGGCGAGCTGTTCTGGGACGATGGCGAGTCTCTGGAGGTGCTGGAGAGAGGCGCCTACACACAGGTCATCTTCCTGGCCAGGAACAATACAATCGTGAATGAGCTGGTGAGAGTGACCTCTGAGGGAGCAGGACTCCAGCTCCAGAAGGTGACAGTGCTGGGAGTGGCAACCGCACCACAGCAGGTGCTGAGCAACGGCGTGCCCGTGAGCAATTTCACATACTCCCCTGATACCAAGGTGCTGGACATCTGCGTGAGCCTGCTGATGGGCGAGCAGTTTCTGGTGTCCTGGTGTTGAGAACCCGGGATCCAAGCTTCAATTGTGGTCACTCGACAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAGCTGACGTCCTTTCCATGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCGTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGCCTGCTCGAGACCTAGAAAAACATGGAGCAATCACAAGTAGCAATACAGCAGCTACCAATGCTGATTGTGCCTGGCTAGAAGCACAAGAGGAGGAGGAGGTGGGTTTTCCAGTCACACCTCAGGTACCTTTAAGACCAATGACTTACAAGGCAGCTGTAGATCTTAGCCACTTTTTAAAAGAAAAGGGGGGACTGGAAGGGCTAATTCACTCCCAACGAAGACAAGATCTGCTTTTTGCTTGTACTGGGTCTCTCTGGTTAGACCAGATCTGAGCCTGGGAGCTCTCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCTTAAGCCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAAGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTGACTCTGGTAACTAGAGATCCCTCAGACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCAGTAGTAGTTCATGTCATCTTATTATTCAGTATTTATAACTTGCAAAGAAATGAATATCAGAGAGTGAGAGGACGCGTTGGATGCATAGCTTGAGTATTCTATAGTGTCACCTAAATAGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAA
ACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCACCTGATGCGGTGTGAAATACCGCACAGATGCGTAAGGAGAAAATACCGCATCAGG
配列番号7 GBA導入遺伝子
>co.hGBA
ATGGAGTTCTCAAGCCCCTCTCGGGAAGAATGCCCAAAACCTCTGTCACGGGTGTCTATCATGGCTGGATCACTGACTGGCCTGCTGCTGCTGCAGGCCGTGAGCTGGGCCTCCGGAGCCCGGCCTTGCATCCCAAAGTCTTTCGGCTACAGCTCCGTGGTGTGCGTGTGCAACGCCACCTATTGTGACTCCTTCGATCCCCCTACCTTTCCCGCCCTGGGCACATTTTCTCGGTACGAGTCTACACGCAGCGGCAGGAGAATGGAGCTGAGCATGGGCCCTATCCAGGCCAATCACACCGGAACAGGCCTGCTGCTGACCCTGCAGCCAGAGCAGAAGTTCCAGAAGGTGAAGGGCTTTGGAGGAGCAATGACAGACGCAGCCGCCCTGAACATCCTGGCCCTGTCCCCACCCGCCCAGAATCTGCTGCTGAAGTCCTACTTCTCTGAGGAGGGCATCGGCTATAACATCATCAGGGTGCCCATGGCCAGCTGCGACTTTTCCATCAGAACCTACACATATGCCGATACCCCTGACGATTTCCAGCTGCACAATTTTTCCCTGCCAGAGGAGGATACAAAGCTGAAGATCCCACTGATCCACAGGGCCCTGCAGCTGGCCCAGAGGCCCGTGAGCCTGCTGGCCAGCCCCTGGACCTCCCCTACATGGCTGAAGACCAACGGCGCCGTGAATGGCAAGGGCTCTCTGAAGGGACAGCCAGGCGACATCTACCACCAGACATGGGCCCGCTATTTCGTGAAGTTTCTGGATGCCTACGCCGAGCACAAGCTGCAGTTCTGGGCCGTGACCGCAGAGAACGAGCCTTCTGCCGGCCTGCTGAGCGGCTATCCCTTCCAGTGCCTGGGCTTTACACCTGAGCACCAGAGGGACTTTATCGCCAGAGATCTGGGCCCAACCCTGGCCAACTCCACACACCACAATGTGCGGCTGCTGATGCTGGACGATCAGCGCCTGCTGCTGCCTCACTGGGCCAAGGTGGTGCTGACCGACCCAGAGGCCGCCAAGTACGTGCACGGCATCGCCGTGCACTGGTATCTGGATTTCCTGGCACCAGCAAAGGCCACCCTGGGAGAGACACACAGGCTGTTCCCTAACACCATGCTGTTTGCCAGCGAGGCCTGCGTGGGCTCCAAGTTTTGGGAGCAGTCCGTGCGGCTGGGCTCTTGGGACAGGGGCATGCAGTACTCCCACTCTATCATCACCAATCTGCTGTATCACGTGGTGGGCTGGACAGACTGGAACCTGGCCCTGAATCCAGAGGGCGGCCCCAACTGGGTGAGAAATTTCGTGGATAGCCCCATCATCGTGGACATCACCAAGGATACATTCTACAAGCAGCCAATGTTTTATCACCTGGGCCACTTCTCTAAGTTTATCCCAGAGGGCAGCCAGAGGGTGGGCCTGGTGGCCAGCCAGAAGAACGACCTGGATGCAGTGGCCCTGATGCACCCTGACGGCTCCGCCGTGGTGGTGGTGCTGAATCGCTCTAGCAAGGACGTGCCTCTGACCATCAAGGACCCCGCCGTGGGCTTTCTGGAGACCATTTCACCCGGCTATTCTATTCATACCTATCTGTGGAGGAGGCAGTAA
配列番号8 ASAH1導入遺伝子
>hASAH1
ATGCCGGGCCGGAGTTGCGTCGCCTTAGTCCTCCTGGCTGCCGCCGTCAGCTGTGCCGTCGCGCAGCACGCGCCGCCGTGGACAGAGGACTGCAGAAAATCAACCTATCCTCCTTCAGGACCAACGTACAGAGGTGCAGTTCCATGGTACACCATAAATCTTGACTTACCACCCTACAAAAGATGGCATGAATTGATGCTTGACAAGGCACCAGTGCTAAAGGTTATAGTGAATTCTCTGAAGAATATGATAAATACATTCGTGCCAAGTGGAAAAATTATGCAGGTGGTGGATGAAAAATTGCCTGGCCTACTTGGCAACTTTCCTGGCCCTTTTGAAGAGGAAATGAAGGGTATTGCCGCTGTTACTGATATACCTTTAGGAGAGATTATTTCATTCAATATTTTTTATGAATTATTTACCATTTGTACTTCAATAGTAGCAGAAGACAAAAAAGGTCATCTAATACATGGGAGAAACATGGATTTTGGAGTATTTCTTGGGTGGAACATAAATAATGATACCTGGGTCATAACTGAGCAACTAAAACCTTTAACAGTGAATTTGGATTTCCAAAGAAACAACAAAACTGTCTTCAAGGCTTCAAGCTTTGCTGGCTATGTGGGCATGTTAACAGGATTCAAACCAGGACTGTTCAGTCTTACACTGAATGAACGTTTCAGTATAAATGGTGGTTATCTGGGTATTCTAGAATGGATTCTGGGAAAGAAAGATGTCATGTGGATAGGGTTCCTCACTAGAACAGTTCTGGAAAATAGCACAAGTTATGAAGAAGCCAAGAATTTATTGACCAAGACCAAGATATTGGCCCCAGCCTACTTTATCCTGGGAGGCAACCAGTCTGGGGAAGGTTGTGTGATTACACGAGACAGAAAGGAATCATTGGATGTATATGAACTCGATGCTAAGCAGGGTAGATGGTATGTGGTACAAACAAATTATGACCGTTGGAAACATCCCTTCTTCCTTGATGATCGCAGAACGCCTGCAAAGATGTGTCTGAACCGCACCAGCCAAGAGAATATCTCATTTGAAACCATGTATGATGTCCTGTCAACAAAACCTGTCCTCAACAAGCTGACCGTATACACAACCTTGATAGATGTTACCAAAGGTCAATTCGAAACTTACCTGCGGGACTGCCCTGACCCTTGTATAGGTTGGTGA
配列番号9(GAA導入遺伝子)
>co.hGAA
ATGGGCGTGAGGCACCCCCCTTGCTCTCACAGGCTGCTGGCCGTGTGCGCACTGGTGAGCCTGGCCACCGCCGCCCTGCTGGGCCACATCCTGCTGCACGACTTCCTGCTGGTGCCCAGGGAGCTGTCCGGCAGCTCCCCAGTGCTGGAGGAGACCCACCCAGCACACCAGCAGGGCGCCTCTCGGCCAGGCCCCCGCGATGCACAGGCACACCCAGGCCGGCCCCGCGCCGTGCCAACCCAGTGCGACGTGCCACCCAACAGCCGGTTTGACTGTGCCCCCGATAAGGCCATCACACAGGAGCAGTGCGAGGCCAGGGGCTGCTGTTATATCCCTGCAAAGCAGGGCCTCCAGGGCGCCCAGATGGGACAGCCATGGTGTTTCTTTCCTCCATCTTACCCCAGCTATAAGCTGGAGAATCTGTCTAGCTCCGAGATGGGCTACACAGCCACCCTGACAAGAACCACACCAACATTCTTTCCCAAGGACATCCTGACCCTGCGGCTGGACGTGATGATGGAGACAGAGAACCGCCTGCACTTCACCATCAAGGACCCCGCCAATAGGAGATATGAGGTGCCTCTGGAGACCCCACACGTGCACTCTCGGGCCCCTAGCCCACTGTACTCCGTGGAGTTCTCTGAGGAGCCATTTGGCGTGATCGTGCGGCGCCAGCTGGATGGACGCGTGCTGCTGAACACCACAGTGGCCCCCCTGTTCTTTGCCGACCAGTTCCTCCAGCTGAGCACATCCCTGCCCTCCCAGTATATCACCGGCCTGGCCGAGCACCTGTCTCCTCTGATGCTGTCTACCAGCTGGACAAGGATCACCCTGTGGAACAGAGACCTGGCACCAACCCCTGGCGCAAATCTGTACGGCAGCCACCCTTTCTATCTGGCCCTGGAGGATGGAGGCTCCGCCCACGGCGTGTTTCTGCTGAACTCTAATGCCATGGACGTGGTGCTCCAGCCAAGCCCCGCCCTGTCCTGGCGGTCTACCGGCGGCATCCTGGACGTGTACATCTTCCTGGGCCCTGAGCCAAAGTCCGTGGTGCAGCAGTACCTGGACGTGGTGGGCTATCCTTTCATGCCCCCTTACTGGGGACTGGGATTTCACCTGTGCCGCTGGGGCTATTCTAGCACAGCCATCACCCGGCAGGTGGTGGAGAACATGACCCGCGCCCACTTTCCACTGGATGTGCAGTGGAATGACCTGGATTACATGGACTCCAGGAGAGACTTCACCTTCAACAAGGACGGCTTCAGGGATTTTCCCGCCATGGTGCAGGAGCTGCACCAGGGCGGCCGGCGCTACATGATGATCGTGGACCCCGCCATCTCCTCTAGCGGACCTGCCGGCAGCTACAGACCATATGACGAGGGCCTGAGGAGAGGCGTGTTCATCACAAACGAGACCGGCCAGCCTCTGATCGGCAAGGTCTGGCCAGGCTCCACCGCCTTCCCAGACTTCACCAATCCAACCGCCCTGGCCTGGTGGGAGGACATGGTGGCCGAGTTCCACGACCAGGTGCCTTTTGATGGCATGTGGATCGACATGAACGAGCCATCTAATTTCATCAGGGGCAGCGAGGACGGCTGCCCCAACAATGAGCTGGAGAACCCACCATATGTGCCTGGCGTGGTGGGAGGCACCCTCCAGGCAGCAACCATCTGTGCCTCCTCTCACCAGTTTCTGTCTACACACTATAACCTGCACAATCTGTACGGACTGACCGAGGCAATCGCCAGCCACAGAGCCCTGGTGAAGGCCAGGGGCACAAGACCTTTCGTGATCTCCAGGTCTACCTTTGCCGGACACGGCAGATACGCAGGACACTGGACCGGCGACGTGTGGAGCAGCTGGGAGCAGCTGGCCTCTAGCGTGCCAGAGATCCTCCAGTTCAACCTGCTGGGCGTGCCCCTGGTGGGAGCAGACGTGTGCGGCTTTCTGGGCAATACATCCGAGGAGCTGTGCGTGAGGTGGACCCAGCTGGGAGCCTTCTATCCCTTCATGCGCAACCACAATAGCCTGCTGTCCCTGCCTCAGGAGCCATACAGCTTCTCCGAGCCTGCACAGCAGGCAATGAGGAAGGCCCTGACACTGCGCTATGCCCTGCTGCCACACCTGTACACCCTGTTTCACCAGGCACACGTGGCAGGAGAGACAGTGGCCCGGCCCCTGTTCCTGGAGTTTCCTAAGGATTCCTCTACCTGGACAGTGGACCACCAGCTGCTGTGGGGAGAGGCCCTGCTGATCACCCCCGTGCTCCAGGCAGGCAAGGCAGAGGTGACAGGCTATTTCCCTCTGGGCACATGGTACGACCTCCAGACCGTGCCAGTGGAGGCCCTGGGCAGCCTGCCTCCACCACCTGCCGCCCCCCGCGAGCCTGCCATCCACTCCGAGGGACAGTGGGTGACACTGCCAGCACCTCTGGACACCATCAACGTGCACCTGAGGGCCGGCTATATCATCCCCCTCCAGGGCCCTGGCCTGACCACAACCGAGTCCAGACAGCAGCCAATGGCCCTGGCCGTGGCCCTGACCAAGGGAGGCGAGGCCAGGGGCGAGCTGTTCTGGGACGATGGCGAGTCTCTGGAGGTGCTGGAGAGAGGCGCCTACACACAGGTCATCTTCCTGGCCAGGAACAATACAATCGTGAATGAGCTGGTGAGAGTGACCTCTGAGGGAGCAGGACTCCAGCTCCAGAAGGTGACAGTGCTGGGAGTGGCAACCGCACCACAGCAGGTGCTGAGCAACGGCGTGCCCGTGAGCAATTTCACATACTCCCCTGATACCAAGGTGCTGGACATCTGCGTGAGCCTGCTGATGGGCGAGCAGTTTCTGGTGTCCTGGTGTTGA
配列番号10(デュアルプロモータベクター)
>pDY−DP
AAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGTTGTTCCAGTTTGGAACAAGAGTCCACTATTAAAGAACGTGGACTCCAACGTCAAAGGGCGAAAAACCGTCTATCAGGGCGATGGCCCACTACGTGAACCATCACCCTAATCAAGTTTTTTGGGGTCGAGGTGCCGTAAAGCACTAAATCGGAACCCTAAAGGGAGCCCCCGATTTAGAGCTTGACGGGGAAAGCCGGCGAACGTGGCGAGAAAGGAAGGGAAGAAAGCGAAAGGAGCGGGCGCTAGGGCGCTGGCAAGTGTAGCGGTCACGCTGCGCGTAACCACCACACCCGCCGCGCTTAATGCGCCGCTACAGGGCGCGTCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAATTGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGGCCCGACGTCGCATGCTTGGAAGGGCTAATTCACTCCCAAAGAAGACAAGATATCCTTGATCTGTGGATCTACCACACACAAGGCTACTTCCCTGATTAGCAGAACTACACACCAGGGCCAGGGGTCAGATATCCACTGACCTTTGGATGGTGCTACAAGCTAGTACCAGTTGAGCCAGATAAGGTAGAAGAGGCCAATAAAGGAGAGAACACCAGCTTGTTACACCCTGTGAGCCTGCATGGGATGGATGACCCGGAGAGAGAAGTGTTAGAGTGGAGGTTTGACAGCCGCCTAGCATTTCATCACGTGGCCCGAGAGCTGCATCCGGAGTACTTCAAGAACTGCTGATATCGAGCTTGCTACAAGGGACTTTCCGCTGGGGACTTTCCAGGGAGGCGTGGCCTGGGCGGGACTGGGGAGTGGCGAGCCCTCAGATCCTGCATATAAGCAGCTGCTTTTTGCCTGTACTGGGTCTCTCTGGTTAGACCAGATCTGAGCCTGGGAGCTCTCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCTTAAGCCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAAGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTGACTCTGGTAACTAGAGATCCCTCAGACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCAGTGGCGCCCGAACAGGGACTTGAAAGCGAAAGGGAAACCAGAGGAGCTCTCTCGACGCAGGACTCGGCTTGCTGAAGCGCGCACGGCAAGAGGCGAGGGGCGGCGACTGGTGAGTACGCCAAAAATTTTGACTAGCGGAGGCTAGAAGGAGAGAGATGGGTGCGAGAGCGTCAGTATTAAGCGGGGGAGAATTAGATCGCGATGGGAAAAAATTCGGTTAAGGCCAGGGGGAAAGAAAAAATATAAATTAAAACATATAGTATGGGCAAGCAGGGAGCTAGAACGATTCGCAGTTAATCCTGGCCTGTTAGAAACATCAGAAGGCTGTAGACAAATACTGGGACAGCTACAACCATCCCTTCAGACAGGATCAGAAGAACTTAGATCATTATATAATACAGTAGCAACCCTCTATTGTGTGCATCAAAGGATAGAGATAAAAGACACCAAGGAAGCTTTAGACAAGATAGAGGAAGAGCAAAACAAAAGTAAGACCACCGCACAGCAAGCGGCCGCTGATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATATGAGGGACAATTGGAGAAGTGAATTATATAAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCCACCAAGGCAAAGAGAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATAGGAGCTTTGTTCCTTGGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCGTCAATGACGCTGACGGTACAGGCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGTGCAGCAGCAGAACAATTTGCTGAGGGCTATTGAGGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACAGTCTGGGGCATCAAGCAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAGGATCAACAGCTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATTTGCACCACTGCTGTGCCTTGGAATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAACAGATTTGGAATCACACGACCTGGATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACAAGCTTAATACACTCCTTAATTGAAGAATCGCAAAACCAGCAAGAAAAGAATGAACAAGAATTATTGGAATTAGATAAATGGGCAAGTTTGTGGAATTGGTTTAACATAACAAATTGGCTGTGGTATATAAAATTATTCATAATGATAGTAGGAGGCTTGGTAGGTTTAAGAATAGTTTTTGCTGTACTTTCTATAGTGAATAGAGTTAGGCAGGGATATTCACCATTATCGTTTCAGACCCACCTCCCAACCCCGAGGGGACCCGACAGGCCCGAAGGAATAGAAGAAGAAGGTGGAGAGAGAGACAGAGACAGATCCATTCGATTAGTGAACGGATCTCGACGGGATCGATTTTAAAAGAAAAGGGGGGATTGGGGGGTACAGTGCAGGGGAAAGAATAGTAGACATAATAGCAACAGACATACAAACTAAAGAATTACAAAAACAAATTACAAAAATTCAAAATTTTATCGATAAGCTTTGCAAAGATGGATAAAGTTTTAAACAGAGAGGAATCTTTGCAGCTAATGGACCTTCTAGGTCTGACCCCGTACGCCTCGAGAGATCTGATCATAATCAGCCATACCACATTTGTAGAGGTTTTACTTGCTTTAAAAAACCTCCCACACCTCCCCCTGAACCTGAAACATAAAATGAATGCAATTGTTGTTGTTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAGGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAGGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTTTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGGATCTCAAATCCCTCGGAAGCTGCGCCTGTCTTAGGTTGGAGTGATACATTTTTATCACTTTTACCCGTCTTTGGATTAGGCAGTAGCTCTGACGGCCCTCCTGTCTTAGGTTAGTGAAAAATGTCACTCTCTTACCCGTCATTGGCTGTCCAGCTTAGCTCGCAGGGGAGGTGGTCTGCCTGCAGGCGGATGGCGTTAACATATGACAACTTTCTCCCGGGTAATCTGACCGTTCGCTAGCCCTGGGGAGAGAGGTCGGTGATTCGGTCAACGAGGGAGCCGACTGCCGACGTGCGCTCCGGAGGCTTGCAGAATGCGGAACACCGCGCGGGCAGGAACAGGGCCCACACTACCGCCCCACACCCCGCCTCCCGCACCGCCCCTTCCCGGCCGCTGCTCTCGGCGCGCCCCGCTGAGCAGCCGCTATTGGCCACAGCCCATCGCGGTCGGCGCGCTGCCATTGCTCCCTGGCGCTGTCCGTCTGCGAGGGTACTAGTGAGACGTGCGGCTTCCGTTTGTCACGTCCGGCACGCCGCGAACCGCAAGGAACCTTCCCGACTTAGGGGCGGAGCAGGAAGCGTCGCCGGGGGGCCCACAAGGGTAGCGGCGAAGATCCGGGTGACGCTGCGAACGGACGTGAAGAATGTGCGAGACCCAGGGTCGGCGCCGCTGCGTTTCCCGGAACCACGCCCAGAGCAGCCGCGTCCCTGCGCAAACCCAGGGCTGCCAAGGAAAAGGCGCAACCCCAACCCCGTGGTTAATTAAGGTGAAAGGAGTGGGAATTGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACCTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCGACGCTTTTTTTCTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTTTTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAGTTTTTTTCTTCCATTTCAGGTGTCGTGAGGAATTCTGCAGTCGA
CGGTACCGCGGGCGCGCCCCGGGATCCAAGCTTCAATTGTGGTCACTCGACAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAGCTGACGTCCTTTCCATGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCGTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGCCTGCTCGAGACCTAGAAAAACATGGAGCAATCACAAGTAGCAATACAGCAGCTACCAATGCTGATTGTGCCTGGCTAGAAGCACAAGAGGAGGAGGAGGTGGGTTTTCCAGTCACACCTCAGGTACCTTTAAGACCAATGACTTACAAGGCAGCTGTAGATCTTAGCCACTTTTTAAAAGAAAAGGGGGGACTGGAAGGGCTAATTCACTCCCAACGAAGACAAGATCTGCTTTTTGCTTGTACTGGGTCTCTCTGGTTAGACCAGATCTGAGCCTGGGAGCTCTCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCTTAAGCCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAAGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTGACTCTGGTAACTAGAGATCCCTCAGACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCAGTAGTAGTTCATGTCATCTTATTATTCAGTATTTATAACTTGCAAAGAAATGAATATCAGAGAGTGAGAGGACGCGTTGGATGCATAGCTTGAGTATTCTATAGTGTCACCTAAATAGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGACCCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCACCTGATGCGGTGTGAAATACCGCACAGATGCGTAAGGAGAAAATACCGCATCAGG
配列番号11
>pDY−[MCS]+(IY)
AAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGTTGTTCCAGTTTGGAACAAGAGTCCACTATTAAAGAACGTGGACTCCAACGTCAAAGGGCGAAAAACCGTCTATCAGGGCGATGGCCCACTACGTGAACCATCACCCTAATCAAGTTTTTTGGGGTCGAGGTGCCGTAAAGCACTAAATCGGAACCCTAAAGGGAGCCCCCGATTTAGAGCTTGACGGGGAAAGCCGGCGAACGTGGCGAGAAAGGAAGGGAAGAAAGCGAAAGGAGCGGGCGCTAGGGCGCTGGCAAGTGTAGCGGTCACGCTGCGCGTAACCACCACACCCGCCGCGCTTAATGCGCCGCTACAGGGCGCGTCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAATTGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGGCCCGACGTCGCATGCTTGGAAGGGCTAATTCACTCCCAAAGAAGACAAGATATCCTTGATCTGTGGATCTACCACACACAAGGCTACTTCCCTGATTAGCAGAACTACACACCAGGGCCAGGGGTCAGATATCCACTGACCTTTGGATGGTGCTACAAGCTAGTACCAGTTGAGCCAGATAAGGTAGAAGAGGCCAATAAAGGAGAGAACACCAGCTTGTTACACCCTGTGAGCCTGCATGGGATGGATGACCCGGAGAGAGAAGTGTTAGAGTGGAGGTTTGACAGCCGCCTAGCATTTCATCACGTGGCCCGAGAGCTGCATCCGGAGTACTTCAAGAACTGCTGATATCGAGCTTGCTACAAGGGACTTTCCGCTGGGGACTTTCCAGGGAGGCGTGGCCTGGGCGGGACTGGGGAGTGGCGAGCCCTCAGATCCTGCATATAAGCAGCTGCTTTTTGCCTGTACTGGGTCTCTCTGGTTAGACCAGATCTGAGCCTGGGAGCTCTCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCTTAAGCCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAAGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTGACTCTGGTAACTAGAGATCCCTCAGACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCAGTGGCGCCCGAACAGGGACTTGAAAGCGAAAGGGAAACCAGAGGAGCTCTCTCGACGCAGGACTCGGCTTGCTGAAGCGCGCACGGCAAGAGGCGAGGGGCGGCGACTGGTGAGTACGCCAAAAATTTTGACTAGCGGAGGCTAGAAGGAGAGAGATGGGTGCGAGAGCGTCAGTATTAAGCGGGGGAGAATTAGATCGCGATGGGAAAAAATTCGGTTAAGGCCAGGGGGAAAGAAAAAATATAAATTAAAACATATAGTATGGGCAAGCAGGGAGCTAGAACGATTCGCAGTTAATCCTGGCCTGTTAGAAACATCAGAAGGCTGTAGACAAATACTGGGACAGCTACAACCATCCCTTCAGACAGGATCAGAAGAACTTAGATCATTATATAATACAGTAGCAACCCTCTATTGTGTGCATCAAAGGATAGAGATAAAAGACACCAAGGAAGCTTTAGACAAGATAGAGGAAGAGCAAAACAAAAGTAAGACCACCGCACAGCAAGCGGCCGCTGATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATATGAGGGACAATTGGAGAAGTGAATTATATAAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCCACCAAGGCAAAGAGAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATAGGAGCTTTGTTCCTTGGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCGTCAATGACGCTGACGGTACAGGCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGTGCAGCAGCAGAACAATTTGCTGAGGGCTATTGAGGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACAGTCTGGGGCATCAAGCAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAGGATCAACAGCTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATTTGCACCACTGCTGTGCCTTGGAATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAACAGATTTGGAATCACACGACCTGGATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACAAGCTTAATACACTCCTTAATTGAAGAATCGCAAAACCAGCAAGAAAAGAATGAACAAGAATTATTGGAATTAGATAAATGGGCAAGTTTGTGGAATTGGTTTAACATAACAAATTGGCTGTGGTATATAAAATTATTCATAATGATAGTAGGAGGCTTGGTAGGTTTAAGAATAGTTTTTGCTGTACTTTCTATAGTGAATAGAGTTAGGCAGGGATATTCACCATTATCGTTTCAGACCCACCTCCCAACCCCGAGGGGACCCGACAGGCCCGAAGGAATAGAAGAAGAAGGTGGAGAGAGAGACAGAGACAGATCCATTCGATTAGTGAACGGATCTCGACGGGATCGATTTTAAAAGAAAAGGGGGGATTGGGGGGTACAGTGCAGGGGAAAGAATAGTAGACATAATAGCAACAGACATACAAACTAAAGAATTACAAAAACAAATTACAAAAATTCAAAATTTTATCGATAAGCTTTGCAAAGATGGATAAAGTTTTAAACAGAGAGGAATCTTTGCAGCTAATGGACCTTCTAGGTCTGACCCCGTACGCCTCGAGAGATCTGATCATAATCAGCCATACCACATTTGTAGAGGTTTTACTTGCTTTAAAAAACCTCCCACACCTCCCCCTGAACCTGAAACATAAAATGAATGCAATTGTTGTTGTTAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAGGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAGGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTTTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGGATCTCAAATCCCTCGGAAGCTGCGCCTGTCTTAGGTTGGAGTGATACATTTTTATCACTTTTACCCGTCTTTGGATTAGGCAGTAGCTCTGACGGCCCTCCTGTCTTAGGTTAGTGAAAAATGTCACTCTCTTACCCGTCATTGGCTGTCCAGCTTAGCTCGCAGGGGAGGTGGTCTGCCTGCAGGTTAGAACAGTCTCTTTTCGTATGAGTGCAGTGAGTGGACGCCGCCTTCGACCTGGGCTGAAGAAGTTCTTTTCTCGAACTTCAGTTCGCCGGAATACATCATTGCCCGCACCTGTGTCAGGCTCTTAGCGCCGATATCCTGGCATGAATGCTGAATTCCGGCGATCAGGTAAGGCACGAATTTGTGAATACTGCCCTTATCCTGGACAGCTCCAGACACGCCCTGTGCGACTTTGATCTTGTCTGCCTCGGAAAAATACCTGTTCTGAGAGGACAGATGCTTATCCATGGCGTCCAGTGACCCCATGCCCCTATATTTCTTCAGTCTGAACCCATCACTAAAGAAGTACTCGCCGGGGGCTTCTGTGGTTGCAGCCAGCAGGCTGCCCATCATCACTGTGCTTGCCCCCAGAGCCAGGGCTTTTGCGATGTGGCCCACATTCTGAATTCCCCCGTCAGCGATCACTGGGACTCCGAATCTCCGGGCATACTCGTACACCTTGTAGACAGCAGTTGCCTGAGGTCGTCCACAGGCCAGCACTTCCTGAATGATGCAGATTGATCCACTCCCCATTCCGACCCTCAGAGCATCCACTCCTGCGTCAATCAGGTTTTTGGCCTGGGCTGCGGTCACGACATTGCCTCCGATGACCTGCAGATTTGGGTACTTGTCCTTAATGTACTTGATCATATTAATCTGGAAGATGCTGTTTCCCTGGCTTGAATCCAGCACGACCACGTCCACCCCTGCCTGAGCCAGCAGATCCAGGCGATATTTATCGTCCTCGTGTGTGCCAATAGCGGCTCCACACAGCAGCTGTTTCTTTGCGTCCTTACTAGCCAGAGGGTAATCTCGATTTTTCTTCAGGTCGGTGCGGGCAATGATTGCCACCAGCTCATCGTCTTCATTCACGATAGGCAGTTTTCCTTTCTTAGACCGCTGCAGAATCTCGTTGGCTTCCTTCAGTGTGATGCCGGCAGGTGCGACCACCAGATCTTCGCGTTTGGTCATAATCTCTTCCAGAAAACAGTCATGCTCTTCCTCCTTCAGGAAATCGATGTCTCGACTAGAAATGATTCCCACCAGTCGGCTGCCCATTCGTCCAGTATCTGTAATGGGGATGCCGCAAAATCCGTGCCTAGCTTTGGCCTCGAACACATCGCGGACCCTGTCCTTGGGGCTCAGGACCACTGGGTCGGTGATAAAGCCCTGTTCGTATTTCTTCACCTTTCTGACCTCATTGGCCTGAAATTCTGGAGTGCAGTTATGGTGAATGAACCCGATCCCGCCTGTCAGTGCCATAGCAATGGCCATGCCAGCCTCGGTGACAGTGTCCATAGGGGAGCTCACCAGGGGTGTCTTCAGGGTGATTTTCTTGGTCAGGGCAGAAGTCAGATCCACCTGGTCTGCGGTAAAATCAATATAGCCGGGCAGGATCAGGAAGTCGTTGTAAGTCAGCCCGTCTCCACAATTAAACAGCTGCTGGGCGGTCAGTCCATCATCAGGGACATAGGAAGTGCCTCCAGAAATCAGGTAGTCGGCCATGGTGGCGCTAGCCCTGGGGAGAGAGGTCGGTGATTCGGTCAACGAGGGAGCCGACTGCCGACGTGCGCTCCGGAGGCTTGCAGAATGCGGAACACCGCGCGGGCAGGAACAGGGCCCACACTACCGCC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Claims (53)
- 対象にてライソゾーム病を治療する方法であって、
(a)対象または好適なドナー由来のT細胞を、ラパマイシンを用いてエクスビボで調整し、T−Rapa細胞を生成する工程、
(b)T−Rapa細胞を、ライソゾーム病に関連する酵素をコードする関心対象の導入遺伝子(a transgene of interest)を含むベクターを用いてインビトロで形質導入する工程、及び
(c)形質導入されたT−Rapa細胞を対象に投与する工程であって、T−Rapa細胞は、対象にてライソゾーム病に関連する酵素を発現し、かつライソゾーム病の1つまたは複数の症状を低減する工程、を含む、方法。 - 工程(b)の後、インビトロで培養することでベクターにより形質導入されたT−Rapa細胞を増やす工程を含み、かつ
工程(c)が、形質導入されかつ増やされたT−Rapa細胞を、対象に投与することを含む、請求項1に記載の方法。 - 工程(a)が、対象または好適なドナー由来のCD4+T細胞を検出かつ単離することおよびT細胞を調整する前にインビトロでT細胞を培養することを更に含み、任意選択的には、CD4+細胞の純度が少なくとも75%である、請求項1に記載の方法。
- 工程(a)は、有効量のラパマイシンを含む合成培地内でT細胞を培養し、T−Rapa細胞を生成することを含む、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- 有効量のラパマイシンは、約0.1〜2マイクロモルであり、好ましくは約1マイクロモルである、請求項4に記載の方法。
- 合成培地が、組換えヒトIL−4および組換えヒトIL−2を更に含み、好ましくは約5〜20IU/mLのIL−2および約500〜2000IU/mLのIL−4を含む、請求項4または5に記載の方法。
- 方法が、ベクターにより形質導入されたT−Rapa細胞をインビトロ培養物中に維持し、かつ増やすこと、および対象への将来的な投与のため、ベクターにより形質導入されたT−Rapa細胞の一部を保存することを更に含む、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- 形質導入されたT−Rapa細胞は、将来的な使用のため、凍結保存によって保存される、請求項7に記載の方法。
- 工程(c)が、形質導入されたT−Rapa細胞を、有効量で対象へと輸血し、ライソゾーム病の1つまたは複数の症状を低減することを含む、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞が、点滴静注によって投与される、請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法。
- ベクターがレンチウイルスベクターである、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- ベクターは、デュアルプロモータレンチウイルスベクターであり、ベクターは、T−Rapa細胞へと形質導入される場合に関心対象の導入遺伝子およびイノシン−5’−一リン酸デヒドロゲナーゼ2(IMPDH2(IY))の突然変異形態を発現する、請求項11に記載の方法。
- ベクターが配列番号11を含む、請求項12に記載の方法。
- 障害が、ファブリー病、ゴーシェ病、ファーバー病およびポンペ病からなる群から選択される、請求項1〜13のいずれか一項に記載の方法。
- 障害がファブリー病であり、関心対象の導入遺伝子が、α−ガラクトシダーゼA(α−galA)をコードする、請求項1〜14のいずれか一項に記載の方法。
- 導入遺伝子が、配列番号1のAGA導入遺伝子、または配列番号1に対し、少なくとも75%の配列相同性を有する配列であり、任意選択的には、ベクターが配列番号1または配列番号1に対し、少なくとも75%の配列相同性を有する配列を含むレンチウイルスベクターである、請求項15に記載の方法。
- ベクターが、配列番号2のレンチウイルスベクターである、請求項15または16に記載の方法。
- ベクターがデュアルプロモータレンチウイルスベクターであり、T−Rapa細胞へと形質導入される際に、α−ガラクトシダーゼAおよびイノシン−5’−一リン酸デヒドロゲナーゼ2(IMPDH2(IY))の突然変異形態を発現する、請求項12に記載の方法。
- 方法が、対象内でレンチウイルスベクターにより形質導入されたT−Rapa細胞の集団を濃縮させるのに十分な量のミコフェノール酸モフェチル(MMF)を、対象に投与することを更に含む、請求項12または18に記載の方法。
- 障害がゴーシェ病であり、導入遺伝子がβ−グルコセレブロシダーゼをコードする、請求項1〜14のいずれか一項に記載の方法。
- β−グルコセレブロシダーゼをコードしているベクターが、配列番号7の導入遺伝子配列または配列番号7に対し、少なくとも75%の配列相同性を有する配列を含む、請求項20に記載の方法。
- ベクターが、β−グルコセレブロシダーゼをコードしているレンチウイルスベクターであり、レンチウイルスベクターが、配列番号7の導入遺伝子配列または配列番号7に対し、少なくとも75%の配列相同性を有する配列を含む、請求項21に記載の方法。
- レンチウイルスベクターの配列が配列番号4である、または配列番号4に対し、少なくとも75%の配列相同性を有する配列である、請求項22に記載の方法。
- 障害がファーバー病であり、導入遺伝子が酸性セラミダーゼをコードする、請求項1〜14のいずれか一項に記載の方法。
- ベクターが酸性セラミダーゼをコードし、ベクターが配列番号8のASAH1導入遺伝子または配列番号8に対し、少なくとも75%の相同性を有する配列を含む、請求項24に記載の方法。
- ベクターがレンチウイルスベクターであり、ASAH1導入遺伝子を含み、好ましくはレンチウイルスベクターが配列番号5または配列番号5に対し、少なくとも75%の相同性を有する配列を含む、請求項25に記載の方法。
- 障害がポンペ病であり、導入遺伝子がGAAである、請求項1〜14のいずれか一項に記載の方法。
- ベクターがGAA導入遺伝子を含み、好ましくはベクターが配列番号9または配列番号9に対し、少なくとも75%の相同性を有する配列を含む、請求項27に記載の方法。
- ベクターがレンチウイルスベクターであり、好ましくはレンチウイルスベクターが配列番号6または配列番号6に対し、少なくとも75%の相同性を有する配列を含む、請求項28に記載の方法。
- ライソゾーム病を治療するため、関心対象の導入遺伝子によってコードされた酵素を発現する、形質導入されたT−Rapa細胞の集団を産生する方法であって、
(a)対象または好適なドナー由来のT細胞を、ラパマイシンを用いて調整し、T−Rapa細胞の集団を産生すること、および
(b)関心対象の導入遺伝子を含むベクターを用いてT−Rapa細胞をインビトロで形質導入し、形質導入T−Rapa細胞の集団を産生することを含む、方法。 - 方法が、(c)培養物中でベクターにより形質導入されたT−Rapa細胞をインビトロで増やすことを更に含む、請求項30に記載の方法。
- 工程(a)が、対象または好適なドナー由来のCD4+T細胞を検出かつ単離することおよび調整する前にインビトロでT細胞を培養することを含む、請求項30または31に記載の方法。
- 検出する工程が、CD4に対して特異的な抗体を用いてCD4+T細胞を検出することを含む、請求項32に記載の方法。
- 工程(a)におけるCD4+T細胞の純度が、少なくとも約75%である、請求項30〜33のいずれか一項に記載の方法。
- 方法が、(c)培養物中の形質導入されたT−Rapa細胞を維持するのに十分な量で組換えヒトIL−4および組換えヒトIL−2を更に含む合成培地中で、形質導入されたT−Rapa細胞を培養することおよび増やすることを含む、請求項30〜34のいずれか一項に記載の方法。
- 方法が、(d)ベクターにより形質導入されたT−Rapa細胞をインビトロ培養物中で維持かつ増やすこと、および対象に将来的に投与するため、ベクターにより形質導入されたT−Rapa細胞の一部を保存することを更に含む、請求項30〜34のいずれか一項に記載の方法。
- 形質導入されたT−Rapa細胞は、将来的な仕様のため、凍結保存によって保存される、請求項36に記載の方法。
- 細胞が−80℃未満で保存される、請求項37に記載の方法。
- ベクターがレンチウイルスベクターである、請求項30〜38のいずれか一項に記載の方法。
- ベクターがデュアルプロモータレンチウイルスベクターであり、T−Rapa細胞へと形質導入される際に、α−ガラクトシダーゼAおよびイノシン−5’−一リン酸デヒドロゲナーゼ2(IMPDH2(IY))の突然変異形態を発現する、請求項39に記載の方法。
- 導入遺伝子がAGAである、請求項30〜40のいずれか一項に記載の方法。
- 導入遺伝子がGBAである、請求項30〜40のいずれか一項に記載の方法。
- 導入遺伝子がASAH1である、請求項30〜40のいずれか一項に記載の方法。
- 導入遺伝子がGAAである、請求項30〜40のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項30〜44のいずれか一項に記載の方法によって作製された、形質導入されたT−Rapa細胞の集団。
- ファブリー病を抱える対象を治療する方法であって、請求項41に記載の方法によって作製された、有効量の形質導入されたT−Rapa細胞を投与し、ファブリー病の1つまたは複数の症状を治療することを含む、方法。
- ゴーシェ病を抱える対象を治療する方法であって、請求項42に記載の方法によって作製された、有効量の形質導入されたT−Rapa細胞を投与し、ゴーシェ病の1つまたは複数の症状を治療することを含む、方法。
- ファーバー病を抱える対象を治療する方法であって、請求項43に記載の方法によって作製された、有効量の形質導入されたT−Rapa細胞を投与し、ファーバー病の1つまたは複数の症状を治療することを含む、方法。
- ポンぺ病を抱える対象を治療する方法であって、請求項41に記載の方法によって作製された、有効量の形質導入されたT−Rapa細胞を投与し、ポンぺ病の1つまたは複数の症状を治療することを含む、方法。
- ライソゾーム病を抱える対象を治療する方法であって、ライソゾーム病の1つまたは複数の症状を治療する有効量で請求項45に記載の形質導入されたT−Rapa細胞を投与することを含む、方法。
- 細胞が点滴静注によって導入される、請求項46〜50のいずれか一項に記載の方法。
- 対象がヒト対象である、請求項1〜27または46〜50のいずれか一項に記載の方法。
- 対象が、ライソゾーム病を治療する1つまたは複数の方法によって以前に治療されたことがある、請求項1〜27または45〜50のいずれか一項に記載の方法。
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