JP2021516764A - バイオセンシングフィルムの製造方法、バイオセンシングフィルム及び監視装置 - Google Patents
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Abstract
Description
前記センサは、上記のいずれか1項に記載の製造方法で製造されるバイオセンシングフィルムを備える。
1〜20mg/mlのOs(bpy)2(3−アミノプロピルイミダゾール)ClとグルコースオキシダーゼとをPBS緩衝溶液にて十分に混合し、次に、0.1〜25mmol/Lのカルボジイミドと0.01〜5mmol/LのN−ヒドロキシスクシンイミドを順次加え、十分に混合した後、4℃で24h反応させた。次に、分画分子量5000〜50000で限外ろ過袋を用いて透析することで、1回目の修飾をされたオキシドレダクターゼを分離・精製した。その後、精製したオキシドレダクターゼ溶液に1〜20mg/mlのOs(bpy)2(4−イミダゾール酪酸)Clを加え、次に、0.1〜25mmol/Lのカルボジイミドと0.01〜5mmol/LのN−ヒドロキシスクシンイミドを加え、十分に混合した後、4℃で24h反応させ、反応終了後、分画分子量500〜50000で限外ろ過袋を用いて透析することで、2回目の修飾をされたオキシドレダクターゼを分離・精製した。グルコースオキシダーゼは、修飾されると、その触媒活性中心が直接電極と迅速に電子交換を行うことができた(図1参照)。分光光度法で分析したところ、グルコースオキシダーゼの修飾が完了したことを確認した(図2参照)。
Claims (10)
- オキシドレダクターゼを電気化学的活性化により修飾した後、化学架橋剤としてグルタルアルデヒド又はポリエチレングリコールジグリシジルエーテルを用いて架橋処理し、電極表面に塗布することで、バイオセンシングフィルムを形成する、ことを特徴とするバイオセンシングフィルムの製造方法。
- 前記オキシドレダクターゼは、グルコースオキシダーゼ、グルコースデヒドロゲナーゼ、乳酸オキシダーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ、カタラーゼのうちの任意の1種又は複数種である、ことを特徴とする請求項1に記載の製造方法。
- 遊離アミノ基又はカルボキシ基を有するルテニウムの錯体又は遊離アミノ基又はカルボキシ基を有するオスミウムの錯体を用いて、オキシドレダクターゼを電気化学的活性化により修飾する、ことを特徴とする請求項2に記載の製造方法。
- オキシドレダクターゼを電気化学的活性化により修飾する前記ステップは、具体的には、遊離アミノ基又はカルボキシ基を有するルテニウムの錯体又は遊離アミノ基又はカルボキシ基を有するオスミウムの錯体とオキシドレダクターゼとを緩衝溶液にて均一に混合して、カルボジイミド、N−ヒドロキシスクシンイミドを順次加え、均一に混合して、2〜6℃で12〜48h反応させ、限外ろ過により透析する、ことを特徴とする請求項3に記載の製造方法。
- 遊離アミノ基又はカルボキシ基を有するルテニウムの錯体又は遊離アミノ基又はカルボキシ基を有するオスミウムの錯体を用いて、オキシドレダクターゼを電気化学的活性化により2回修飾し、1回目の修飾の限外ろ過の分画分子量が500〜50000、2回目の修飾の限外ろ過の分画分子量が5000〜50000である、ことを特徴とする請求項4に記載の製造方法。
- 具体的には、前記遊離アミノ基又はカルボキシ基を有するオスミウムの錯体はOs(bpy)2(3−アミノプロピルイミダゾール)Clであり、遊離カルボキシ基を有する錯体はOs(bpy)2(4−イミダゾール酪酸)Clであり、前記遊離アミノ基を有するルテニウムの錯体はRu(bpy)2(3−アミノプロピルイミダゾール)Clであり、遊離カルボキシ基を有する錯体はたとえばRu(bpy)2(4−イミダゾール酪酸)Clである、ことを特徴とする請求項5に記載の製造方法。
- 化学架橋剤を用いて架橋処理するステップは、具体的には、修飾されたオキシドレダクターゼと化学架橋剤とを緩衝溶液にて均一に混合して、0.5〜5h反応させた後、電極表面に塗布することで、バイオセンシングフィルムを形成する、ことを特徴とする請求項1〜6のいずれか1項に記載の製造方法。
- 架橋処理して形成したバイオセンシングフィルムを乾燥させた後、ポリビニルピリジンとNafionとの混合アルコール溶液を前記バイオセンシングフィルムの表面に塗布し、生体適合性を備えたバイオセンシングフィルムを形成する、ことを特徴とする請求項7に記載の製造方法。
- 請求項1〜8のいずれか1項に記載の製造方法で製造されるバイオセンシングフィルム。
- センサを備える監視装置であって、
前記センサは、請求項1〜8のいずれか1項に記載の製造方法で製造されるバイオセンシングフィルムを備える、ことを特徴とする監視装置。
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