JP2021516224A - 同種固形臓器移植に対するドナー特異的寛容を促進する培養胸腺組織移植 - Google Patents

同種固形臓器移植に対するドナー特異的寛容を促進する培養胸腺組織移植 Download PDF

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Abstract

固形臓器移植を必要とするレシピエントにおいて同種固形臓器を移植することによって、固形臓器移植のレシピエントに対するドナー特異的寛容および免疫能力を促進するための方法および組成物であって、ドナーからの固形臓器のレシピエントにおける組織操作された同種培養生後胸腺組織産物の外科的移植をさらに含む、方法および組成物。【選択図】図１

Description

[0001] ドナーからの同種固形臓器移植片を受けるレシピエントにおける同種固形臓器移植片に対するドナー特異的寛容を促進するための方法および組成物。
[0002] 臓器移植は、ドナーからのヒト固形臓器の調製および採取、ならびにレシピエントへの移植を必要する。固形臓器移植の主な問題は、レシピエントがドナーに寛容でないことである。レシピエントＴ細胞は、臓器を拒絶し、レシピエントＢ細胞は、臓器に対する抗体を発生させ、最終的な不全を引き起こす。固形臓器移植の達成するのが難しい理想は、レシピエントによる移植されたヒト臓器に対する寛容の発達である。米国では年間３６，０００を超える臓器移植、ヨーロッパ、および他の主要国ではより多くの臓器移植が行われると推定される。米国では臓器移植の待機リストに１２０，０００人を超える患者がいるとさらに推定される。健康な臓器の需要は、適切な臓器の供給を大幅に上回る。２０１８年には、約１０，０００人のドナーが特定された。ｈｔｔｐｓ：／／ｏｐｔｎ．ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．ｈｒｓａ．ｇｏｖを参照されたい。
[0003] 移植拒絶は、固形臓器移植における実質的な課題である。Ｔ細胞およびＢ細胞の両方による移植拒絶は、臓器機能における重大な合併症または移植不全さえ引き起こし得る。５年移植片生存は、例えば、心臓移植について７７．７％、腎臓移植について７８．６％、肝臓移植について７２．８％、および肺移植について５３．４％である。典型的には、この問題は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）抗原に対するドナーとレシピエントとの適合を通して、およびレシピエント組織タイプに対する抗体を有するレシピエントを回避することによって、部分的に対処されている。加えて、移植拒絶の根底にある免疫学的応答を管理するための免疫抑制レジメンの使用は改善している。しかしながら、寛容は達成されておらず、多くの臓器について平均生存はわずか１０年である。
[0004] 移植処置の前およびその間の臓器生存性の保存は、第２の重要な課題である。臓器の除去、保存、および移植は、臓器の内部構造および機能に深く影響を及ぼし得、移植が完了した後、正常な臓器機能の回復が遅延または防止される程度に大きな影響を与え得る。
[0005] ヒト固形臓器が効果的に保存され得る時間は、臓器によって異なり、腎臓２４〜３６時間、膵臓１２〜１８時間、肝臓８〜１２時間、ならびに心臓および肺４〜６時間の範囲である。ｈｔｔｐｓ：／／ｕｎｏｓ．ｏｒｇ／ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ／ｍａｔｃｈｉｎｇ−ｏｒｇａｎｓを参照されたい。
[0006] 臓器損傷は、主に虚血および低体温の結果として発生するが、エクスビボまたは移植中の臓器の再灌流にも関連し得る。
[0007] エクスビボ灌流を含む、臓器保存のための技法は、当該技術分野で知られており、臓器損傷を最小限に抑え、最適な移植片生存および機能を促進するために役立つ。
[0008] 移植処置の対象となっている主要固形臓器には、腎臓、肝臓、心臓、および肺が含まれる。これらの固形臓器の移植の成功は、変動する成功度で達成されている。主な変動性は、免疫媒介性移植片拒絶に干渉するために使用される技法にある。経験は、固形臓器移植に関わる全ての環境において有用な単一の免疫抑制剤または技法がないことを示している。制限因子は通常、各々の個々の免疫抑制剤に関連する毒性にある。所定の免疫抑制剤に関連する毒性は、移植された固形臓器または腎臓などの他の臓器の正常な機能をしばしば妨害し得、これは、拒絶を防止するためにカルシニューリン阻害剤が使用される場合に不全を引き起こし得る。
[0009] 固形臓器移植における移植片拒絶を防止するために通常使用される既知の免疫抑制剤に関連する毒性の欠点は、固形臓器移植の移植片拒絶を防止するための新しい方法を見出す必要性を提示する。
[0010] 自己抗原と非自己抗原を区別する能力は、免疫応答の中心である。この区別は、自己寛容をもたらす。自己免疫は、自己寛容が失われた場合に発生する。固形臓器移植片に対する寛容を誘導するために、移植処置には満たされていない必要性が存在する。
[0011] ドナー特異的免疫寛容を達成することは、依然として移植における最終的な免疫学的目標である。現在のアプローチのほとんどは、胸腺におけるアロ反応性Ｔ細胞の産生を標的とせずに、枯渇（例えば、アレムツズマブ、チモグロブリンなど）または抑制（例えば、カルシニューリン阻害剤、バシリキシマブなど）による末梢成熟ドナー反応性Ｔ細胞を制御することに焦点を当てる。しかしながら、免疫抑制薬および新しい免疫調節レジメンの劇的な進歩でさえ、移植片寛容はまだ一貫して達成されていない。
[0012] 本発明者は、固形臓器移植片に対する寛容が、胸腺摘出レシピエントにおいて、同種培養生後胸腺組織由来産物（本明細書では「ＣＴＴ」または「ＲＶＴ−８０２」とも呼ばれる）の移植を通して達成され、移植された臓器の拒絶を防止する移植後の免疫抑制剤の使用時間を短縮し得ることを示した。レシピエントの胸腺の除去および同種培養生後胸腺組織由来産物の置換は、固形臓器レシピエントの免疫系の再構築ならびにレシピエントの自己および移植された同種固形臓器に対する寛容をもたらす。
[0013] 同種培養生後胸腺組織由来産物の外科的挿入による寛容誘導は、造血幹細胞移植におけるドナー樹状細胞（「ＤＣ」）を介した寛容誘導と類似する（Ｓｈａｒａｂｉ Ｙ＆Ｓａｃｈｓ ＤＨ，１９８９，“Ｍｉｘｅｄ ｃｈｉｍｅｒｉｓｍ ａｎｄ ｐｅｒｍａｎｅｎｔ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ａ ｎｏｎｌｅｔｈａｌ ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ｒｅｇｉｍｅｎ，”Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １６９（２）：４９３−５０２、Ｍａｎｉｌａｙ ＪＯ，Ｐｅａｒｓｏｎ ＤＡ，Ｓｅｒｇｉｏ ＪＪ，Ｓｗｅｎｓｏｎ ＫＧ，＆Ｓｙｋｅｓ Ｍ，１９９８，“Ｉｎｔｒａｔｈｙｍｉｃ ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｌｏｒｅａｃｔｉｖｅ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｍｉｘｅｄ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｃｈｉｍｅｒａｓ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ａ ｎｏｎｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ ｒｅｇｉｍｅｎ，”Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６６（１）：９６−１０２．）。移植生物学研究センター（ＴＢＲＣ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）からの一連の研究は、寛容誘導における胸腺の重要な役割を示し（Ｙａｍａｄａ Ｋ，ｅｔ ａｌ．，１９９７，“Ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｙｍｕｓ ｉｎ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｉｎ ｍｉｎｉａｔｕｒｅ ｓｗｉｎｅ．Ｉ．Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｙｍｕｓ ｆｏｒ ｒａｐｉｄ ａｎｄ ｓｔａｂｌｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ ｃｌａｓｓ Ｉ−ｍｉｓｍａｔｃｈｅｄ ｒｅｎａｌ ａｌｌｏｇｒａｆｔｓ，”Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８６（４）：４９７−５０６．）、大動物モデルにおいて寛容誘導を伴う胸腺移植を試験した（Ｙａｍａｄａ Ｋ，ｅｔ ａｌ．，２０００，“Ｔｈｙｍｉｃ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｎｉａｔｕｒｅ ｓｗｉｎｅ．ＩＩ．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｂｙ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ ｔｈｙｍｏｋｉｄｎｅｙｓ ｔｏ ｔｈｙｍｅｃｔｏｍｉｚｅｄ ｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ，”Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４（６）：３０７９−３０８６；５、Ｙａｍａｄａ Ｋ，ｅｔ ａｌ．，２００３，“Ｔｈｙｍｉｃ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｎｉａｔｕｒｅ ｓｗｉｎｅ：ＩＩＩ．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｂｙ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ ｔｈｙｍｏｋｉｄｎｅｙｓ ａｃｒｏｓｓ ｆｕｌｌｙ ｍａｊｏｒ ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｃｏｍｐｌｅｘ−ｍｉｓｍａｔｃｈｅｄ ｂａｒｒｉｅｒｓ，”Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ７６（３）：５３０−５３６、Ｎｏｂｏｒｉ Ｓ，ｅｔ ａｌ．，２００６，“Ｔｈｙｍｉｃ ｒｅｊｕｖｅｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｂｙ ａｄｕｌｔ ｔｈｙｍｉｃ ｇｒａｆｔｓ，”Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０３（５０）：１９０８１−１９０８６．彼らの一連の研究では、このグループは、クラスＩＩ適合／クラスＩ不適合ドナー（胸腺および腎臓または心臓）を、胸腺複合組織（胸腺腎および胸腺心）として、移植寛容誘導のために１２日のシクロスポリン（「ＣｓＡ」）と共に成功裏に使用した。彼らは、非血管新生胸腺が彼らのモデルにおいて寛容を誘導しなかったと主張した。より正確には、しかしながら、培養されなかった非血管新生胸腺は、長期間生着しなかった。彼らが示したように、未培養胸腺の生着の失敗は、同種免疫に加えて虚血性損傷によるものであり得る（Ｙａｍａｄａ Ｋ，ｅｔ ａｌ．，２０００）。移植の前に血管新生胸腺を生成して寛容を誘導するというこの洗練された概念は、異種移植を使用せずに臨床へ変換するのは難しいであろう。（このセクションは、２０１９年刊行物に提出される、Ｋｗａｎ Ｊ ｅｔ ａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｔｈｙｍｕｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｄｏｎｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｈｅａｒｔ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓを引用する。）
[0014] 非血管新生胸腺移植の制限は、Ｔ細胞枯渇と同様に培養システムで克服することができる。ＴＥＣを保持する同種培養生後胸腺組織由来産物（ＣＴＴ）の実験的移植は、先天性無胸腺症を有する小児患者を治療するためにうまく適用されている（Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，Ｄｅｖｌｉｎ ＢＨ，ＭｃＣａｒｔｈｙ ＥＡ，２０１０，“Ｔｈｙｍｕｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，”Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３５（２）：２３６−４６、Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，ｅｔ ａｌ．，２００４，“Ｐｏｓｔｎａｔａｌ ｔｈｙｍｕｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｓ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ ＤｉＧｅｏｒｇｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，”Ｂｌｏｏｄ １０４（８）：２５７４−２５８１、Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，ｅｔ ａｌ．，１９９９，“Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｙｍｕｓ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ＤｉＧｅｏｒｇｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，”Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３４１（１６）：１１８０−１１８９ ２７）。
[0015] この参考文献では、ディジョージ症候群は、心臓、胸腺、および副甲状腺に様々な欠陥がある状態として定義される。ディジョージ症候群を有する乳児の約１％は、無胸腺症を有し、よって感染と戦うＴ細胞を有さない。これらの乳児は、完全型ディジョージ症候群を有すると言われる。完全型ディジョージ症候群、２２ｑ１１．２欠失症候群、ＣＨＡＲＧＥ、糖尿病の母親の乳児、および症候群または遺伝的欠陥を有さない乳児の基準を満たす、小児の４つのサブグループがある。４つのグループすべてにおいて、無胸腺症を有する乳児は、非常に小さなグループを示し、おそらく２２ｑ１１．２欠失症候群の診断などの診断を受けた総小児の１％である。
[0016] 胸腺リンパ球形成は、同種移植片生検および末梢におけるレシピエントナイーブＴ細胞の存在によって文書化されている（Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，２０１０、Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，ｅｔ ａｌ．，２００８，“Ｕｓｅ ｏｆ ａｌｌｏｇｒａｆｔ ｂｉｏｐｓｉｅｓ ｔｏ ａｓｓｅｓｓ ｔｈｙｍｏｐｏｉｅｓｉｓ ａｆｔｅｒ ｔｈｙｍｕｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，”Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８０（９）：６３５４−６３６４、Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，ｅｔ ａｌ．，２００７，“Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ５４ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ＤｉＧｅｏｒｇｅ ａｎｏｍａｌｙ ｅｎｒｏｌｌｅｄ ｉｎ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｏｒ ｔｈｙｍｕｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：ｏｕｔｃｏｍｅ ｏｆ ４４ ｃｏｎｓｅｃｕｔｉｖｅ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓ，”Ｂｌｏｏｄ １０９（１０）：４５３９−４５４７２８）。治験ＣＴＴで治療された小児の研究は、混合リンパ球反応によるドナーＭＨＣへの寛容を示す（Ｃｈｉｎｎ ＩＫ，Ｄｅｖｌｉｎ ＢＨ，Ｌｉ ＹＪ，＆Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，２００８，“Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ ｔｈｙｍｕｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓ ｉｎ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ＤｉＧｅｏｒｇｅ ａｎｏｍａｌｙ，”Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ １２６（３）：２７７−２８１）。加えて、先天性無胸腺症を有する乳児は、ＣＴＴ移植後、エプスタインバールウイルスなどの感染を制御することができる（Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，２０１４，Ｔｈｙｍｕｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．Ｓｔｉｅｈｍ’ｓ Ｉｍｍｕｎｅ Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｅｓ，ｅｄｓ Ｓｕｌｌｉｖａｎ ＫＥ＆Ｓｔｉｅｈｍ ＥＲ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ），１ｓｔ Ｅｄ，ｐｐ １０５９−１０６７、Ｉｓａｋｏｖｉｃ Ｋ，Ｓｍｉｔｈ ＳＢ，＆Ｗａｋｓｍａｎ ＢＨ，１９６５，“Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｉｎ Ｔｈｙｍｅｃｔｏｍｉｚｅｄ，Ｉｒｒａｄｉａｔｅｄ Ｒａｔｓ Ｇｒａｆｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｔｈｙｍｕｓ ｆｒｏｍ Ｔｏｌｅｒａｎｔ Ｄｏｎｏｒｓ，”Ｓｃｉｅｎｃｅ １４８（３６７５）：１３３３−１３３５）。先天性無胸腺症を有するヒトにおけるこれらのデータに基づいて、レシピエントにおいて外科的挿入後に固形臓器ドナーのＭＨＣを発現する同種培養生後胸腺組織由来産物は、感染からレシピエントを保護する機能的Ｔ細胞を産生しながら、自己およびドナーの両方に対する寛容を発達させると判定された。
胸腺および胸腺細胞の教育。（このセクションは、２０１９年刊行物に提出される、Ｋｗａｎ Ｊ ｅｔ ａｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｔｈｙｍｕｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｄｏｎｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｈｅａｒｔ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓを引用する。）
[0017] 胸腺は通常、心臓の上に位置する。胸腺は、Ｔ細胞発生に必須の微小環境を提供し、適応免疫系の確立および維持に不可欠である（Ｂｏｅｈｍ Ｔ ａｎｄ Ｔａｋａｈａｍａ Ｙ，２０１４，Ｔｈｙｍｉｃ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ）。生後発達中、胸腺は、骨髄から胸腺まで遊走する造血幹細胞を教育する。前駆幹細胞は、胸腺にコロニーを形成し、それによって胸腺細胞を形成する。胸腺細胞はその後、一連の成熟ステップを経る。これは、胸腺細胞に現れる多くの観察可能な細胞表面マーカーの発現によって証明される。
[0018] Ｔ細胞は、感染からの体の保護のために重要である。正常に機能する胸腺において発生するＴ細胞は、Ｔ細胞受容体（一般的には細胞の表面上のタンパク質）の多様なセットを発達させ、これは、成熟Ｔ細胞が様々な感染と戦うことを可能にする。この教育プロセス中、発生するＴ細胞は、（血中のグルコースおよびカルシウムレベルを調節する）インスリンまたは副甲状腺ホルモンなどの、体の正常なタンパク質を攻撃しないように胸腺によって指示される。これらの指示は、自己免疫調節遺伝子（「ＡＩＲＥ遺伝子」）の影響下で行われる。
[0019] 簡潔には、教育プロセスは、正常に機能する胸腺において起こる。骨髄幹細胞から形成される、胸腺における胸腺細胞は、胸腺内に位置する胸腺上皮細胞（ＴＥＣ）および樹状細胞（ＤＣ）によって、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＲＢ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ１、ＨＬＡ−ＤＱＡ１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１、ＨＬＡ−ＤＰＡ１抗原などのレシピエント主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）タンパク質（抗原）を攻撃しないように教えられる。ＨＬＡ抗原は、溝に自己ペプチドを保持する２つのタンパク質を有する。自己ペプチドは、甲状腺タンパク質もしくはインスリンペプチド、または体において発現するほとんどの任意の他のタンパク質に由来し得る。胸腺において発生する胸腺細胞は、膜を横切る２つのタンパク質で構成されるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を形成する。ＴＣＲは、Ｔ細胞の細胞表面上に発現する。各Ｔ細胞は、その固有のＴＣＲの多くのコピーを発現する。ＴＣＲの樹状細胞上の自己ペプチド：ＭＨＣへの結合が強過ぎる場合、樹状細胞は、Ｔ細胞をアポトーシスに供して死滅させるシグナルを提供する。このメカニズムは、自己に対する自己免疫の発達を防止する。ＴＥＣはまた、胸腺細胞に、それらの結合が強過ぎるというシグナルを提供することができる。最後に、ＤＣは、ＴＥＣから膜の一部を取得し、発生する胸腺細胞にＴＥＣ自己ペプチド：ＭＨＣを提示することができる。胸腺細胞の結合が強過ぎる場合、ＤＣは、胸腺細胞がアポトーシスを受け、死滅するように、シグナルを送る。これらのメカニズムによって、胸腺を離れるＴ細胞は、自己反応性ではない。胸腺を離れるＴ細胞は、非常に多様であり、感染を認識することができるが、それらは体のタンパク質を攻撃しない。
[0020] 胸腺の２つの主要な構成要素は、以下の方法で胸腺において産生される上皮および胸腺細胞である。リンパ球系共通前駆細胞（「ＣＬＰ」）である骨髄幹細胞に由来する細胞は、胸腺に遊走する。ＣＬＰは、胸腺上皮および内皮によって生成されるシグナル（ケモカイン）に応答して胸腺に入る。胸腺では、ＣＬＰは、胸腺細胞に分化し、増殖する。胸腺細胞は、細胞表面上に発現する独特のＴ細胞受容体（「ＴＣＲ」）を発達させる。胸腺細胞はまた、Ｔ細胞分子ＣＤ３、ＣＤ４、およびＣＤ８を発現し始める。非常に多様なＴ細胞が発生し、細胞がレシピエントの生涯を通して感染に応答することができるようになる。混合リンパ球反応は、胸腺ドナーＭＨＣに対する培養胸腺組織（ＲＶＴ−８０２）で治療される小児におけるレシピエントＴ細胞の寛容を示す。
[0021] 自己反応性レシピエント胸腺細胞は、胸腺から出る前に欠失される。これは、胸腺へ遊走するレシピエント胸腺細胞およびレシピエントＤＣの相互作用によって発生する。アポトーシスは、自己免疫疾患から体を保護する手段として、ＤＣへの結合が強過ぎるレシピエント胸腺細胞において誘導される。このプロセスの完了後、胸腺細胞は、胸腺を出る。新しい循環Ｔ細胞、すなわち、「ナイーブ」Ｔ細胞は、マーカーＣＤ４５ＲＡおよびＣＤ６２Ｌを発現する。フローサイトメトリーおよびスペクトルタイピングは、多様なＴ細胞レパートリーの発達を示している。これらのレシピエントＴ細胞は、多様なＴＣＲレパートリーを有し、通常はマイトジェンに応答して増殖する。それらは、自己に対する自己反応性を有することなく、感染からレシピエントを保護する。
同種培養生後胸腺組織由来産物
[0022] 同種培養生後胸腺組織由来産物は、先天性無胸腺症に起因するＴ細胞免疫不全（原発性免疫不全）の治療に有用であることが示されている。無胸腺症によるＴ細胞免疫不全は、機能的胸腺の発達を防止する先天性障害、例えば、２２ｑ１１．２欠失に関連する完全型ディジョージ異常（ｃＤＧＡ）およびｃｈｄ７（クロモドメイン−ヘリカーゼ−ＤＮＡ結合タンパク質７）遺伝子における突然変異に関連するＣＨＡＲＧＥ（コロボーマ、心臓欠陥、後鼻孔閉鎖、成長または精神遅滞、性器発育不全、および耳異常または難聴）症候群、および無胸腺患者におけるフォークヘッドボックスタンパク質Ｎ１（ＦＯＸＮ１）欠損に関連する。先天性無胸腺症は、まれな致死的状態であり、現在、規制当局が承認した製剤を利用した薬物治療の選択肢を有さない。治療せずに放置し、小児の免疫系の治療的再構築が起こらない場合、先天性無胸腺症による一次免疫不全は、致死的であり、ほとんど全ての乳児が２歳前に、ほとんどの場合、重症感染によって死亡する。
[0023] 同種培養生後胸腺組織由来産物は、組織操作産物である。本明細書および実施例における開示に基づいて、ＣＴＴは、移植された固形臓器を受けるレシピエントにおける寛容の発達に有用であると予想される。
[0024] 本明細書および実施例においてより完全に記載されるように、無胸腺症患者における同種培養生後胸腺組織由来産物（例えば、「ＲＶＴ−８０２」）の外科的投与は、機能的免疫系の発達をもたらす一連の事象をもたらす。レシピエントにおける同種培養生後胸腺組織由来産物（例えば、ＲＶＴ−８０２）の外科的配置後、Ｔ細胞は、ドナーＴＥＣおよびレシピエントＤＣによって教育される。レシピエントＤＣと関連したドナーＴＥＣは、移植されたドナー胸腺組織に対する寛容を可能にし、これは、培養胸腺組織片として移植される。これは、正常な胸腺と同じ寛容誘導である。レシピエントＤＣと関連したレシピエントＴＥＣは、本明細書に記載されるように、自己に対する寛容をもたらす。
[0025] この複雑なプロセスは、感染と戦うレシピエントの能力による同種培養生後胸腺組織由来産物（例えば、ＲＶＴ−８０２）を受ける先天性無胸腺症を有する患者における生存の７０％超をもたらすことが臨床的に示されている（Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，Ｄｅｖｌｉｎ ＢＨ，Ａｌｅｘｉｅｆｆ ＭＪ，Ｌｉ Ｊ，ＭｃＣａｒｔｈｙ ＥＡ，Ｇｕｐｔｏｎ ＳＥ，ｅｔ ａｌ．，２００７，“Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ５４ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ＤｉＧｅｏｒｇｅ ａｎｏｍａｌｙ ｅｎｒｏｌｌｅｄ ｉｎ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｏｒ ｔｈｙｍｕｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：ｏｕｔｃｏｍｅ ｏｆ ４４ ｃｏｎｓｅｃｕｔｉｖｅ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓ，”Ｂｌｏｏｄ，１０９（１０）：４５３９−４７、Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，Ｄｅｖｌｉｎ ＢＨ，ＭｃＣａｒｔｈｙ ＥＡ．Ｔｈｙｍｕｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．２０１０，Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３５（２）：２３６−４６）。レシピエントは、ＣＴＴの前に致死的であったエプスタインバールウイルスなどのウイルス感染を制御することができる。（Ｃｈｉｎｎ ＩＫ，Ｄｅｖｌｉｎ ＢＨ，Ｌｉ ＹＪ，＆Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，２００８）。
ＣＴＴの移植と組み合わせた固形臓器移植片における寛容誘導の概要
[0026] 本明細書の説明、図、例、および請求項に従って、発明者は、ＣＴＴがラット心臓移植モデルにおいてドナー特異的寛容を誘導することを示している。本明細書で報告される実験は、ｃＤＧＡに罹患した対象などの先天性無胸腺症を有する対象において臨床的に使用されている同等のＣＴＴ移植方法を使用した。ｃＤＧＡ乳児は、ＣＴＴの外科的配置の前にナイーブＴ細胞を本質的に有さない。ＣＴＴの外科的配置後、乳児は、外科的処置の約６か月後にナイーブＴ細胞を発生させた。（Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，ｅｔ ａｌ．，２００４，“Ｐｏｓｔｎａｔａｌ ｔｈｙｍｕｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｓ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ ＤｉＧｅｏｒｇｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，”Ｂｌｏｏｄ １０４（８）：２５７４−２５８１、Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，Ｄｅｖｌｉｎ ＢＨ，＆ＭｃＣａｒｔｈｙ ＥＡ，２０１０，“Ｔｈｙｍｕｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，”Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３５（２）：２３６−２４６）。ラットモデルにおける寛容誘導の研究は、完全型ディジョージ異常を有する無胸腺乳児における１９９３年から２０１７年までの同種生後培養胸腺組織由来産物（ＣＴＴ）の移植の調査の結果に基づいた。先天性無胸腺症を有する乳児におけるＣＴＴの外科的配置の報告された研究では、好ましい結果が得られた。公表された結果は、この他の致死的状態における７１％（６１／８６）（中央値１１．７年、１．２〜２５年の範囲）の全体生存率を示した（Ｍａｒｋｅｒｔ，ＭＬ，ｅｔ ａｌ．，２０１０）。移植された培養胸腺組織の生検は、免疫組織化学に基づく胸腺リンパ球新生を示している（Ｍａｒｋｅｒｔ，ＭＬ，ｅｔ ａｌ．，２００８）。フローサイトメトリーおよびスペクトルタイピングは、多様なＴ細胞レパートリーの発達を示している。混合リンパ球反応は、胸腺ドナー抗原提示細胞に対するレシピエントＴ細胞の寛容を示す（Ｃｈｉｎｎ ＩＫ，Ｄｅｖｌｉｎ ＢＨ，Ｌｉ ＹＪ，＆Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，２００８）。
[0027] 重要なことに、ＣＴＴのレシピエントは、ＣＴＴの前に致死的であったエプスタインバールウイルスなどのウイルス感染を制御することができる（Ｍａｒｋｅｒｔ，ＭＬ，２０１４，Ｔｈｙｍｕｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．Ｓｔｉｅｈｍ’ｓ Ｉｍｍｕｎｅ Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｅｓ，ｅｄｓ Ｓｕｌｌｉｖａｎ ＫＥ＆Ｓｔｉｅｈｍ ＥＲ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ），１ｓｔ Ｅｄ，ｐｐ １０５９−１０６７）。不適合胸腺ＭＨＣ抗原に対する寛容を示すこれらのヒトデータに基づいて、ラットモデルにおけるＣＴＴの移植は、ラット心臓移植モデルにおけるドナー特異的寛容を誘導するその能力について、臨床的に使用される同じ方法を使用して評価された。これらの研究は、（抗ＣＤ５による初期Ｔ細胞枯渇およびシクロスポリンでの免疫抑制を伴う）心臓ドナーのＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩ抗原を発現するドナーＣＴＴと共に不適合心臓を移植することが、他のＭＨＣ抗原に対するアロ反応性を保存しながら、ドナー心臓の抗原に対する寛容を誘導することを示した。
[0028] 本発明は、レシピエントにおける移植された固形臓器に関する寛容誘導の方法として、固形臓器とドナー胸腺共移植を実証する。処置から最も恩恵を受ける患者群は、心臓移植を必要とする乳児である。生後胸腺組織が存在し、死亡乳児から除去され得、レシピエント胸腺が心臓移植を受けている乳児から日常的に除去されるので、このアプローチを臨床に移すために培養胸腺組織移植（ＣＴＴ）以外の追加の処置は必要ない。
同種培養生後胸腺組織由来産物の調製の概要
[0029] 同種培養生後胸腺組織由来産物は、本明細書により詳細に記載されるように、調製され、培養され、最大２１日間保存され、移植の日に、手術室への輸送のために個々の無菌カップに配置される。
[0030] ＣＴＴ（培養胸腺組織）は、部分的にＴ細胞が枯渇した胸腺組織片を産生するために、例えば、米国食品医薬品局（「ＦＤＡ」）によって確立されたｃＧＭＰの現在の適正製造基準（「ｃＧＭＰ」）下で無菌で処理および培養される。ＣＴＴは、以下で詳細に記載されるコンディショニングプロセスによって、生来の胸腺から区別される。ＣＴＴは、移植後に胸腺においてＴ細胞を発生させる通常の正および負の選択プロセスに影響を与え、Ｔ細胞がドナー胸腺およびドナー固形臓器移植とレシピエント組織の両方に対して寛容であることを可能にする。加えて、これらのＴ細胞は、感染と戦うために、レシピエント主要組織適合性（ＭＨＣ）タンパク質の文脈で外来抗原を認識することができる。
[0031] 投与経路は、以下に記載される方法での、ＣＴＴの外科的移植による。単回投与は、典型的には、１ｍ２のレシピエント体表面積（「ＢＳＡ」）あたり１，０００〜２０，０００ｍｍ２のＣＴＴ表面積である。表面積は、全ての培養組織片の全ての表面積の合計である。個々のＣＴＴ片は、単回投与外科的処置で移植される。
[0032] 無胸腺症患者における同種培養生後胸腺組織由来産物の外科的移植は、機能的免疫系の発達をもたらす一連の事象をもたらす。（Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，２００７、Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，ｅｔ ａｌ．，２０１０、Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，Ｄｅｖｌｉｎ ＢＨ，ＭｃＣａｒｔｈｙ ＥＡ．Ｃｈａｐｔｅｒ ８４ Ｔｈｙｍｉｃ ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ．２０１３．Ｉｎ：Ｆｌｅｉｓｈｅｒ ＴＡ，Ｓｈｅａｒｅｒ ＷＴ，Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ ＨＷ，Ｆｒｅｗ ＡＪ，Ｗｅｙａｎｄ ＣＭ，ｅｄｉｔｏｒｓ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｆｏｕｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ）．Ｌｏｎｄｏｎ；ｐｐ．１０３２−８）。
[0033] 骨髄のレシピエントＣＬＰは、ドナー胸腺移植片に遊走する。ドナー胸腺移植片は、レシピエント胸腺細胞が病原体を認識することができるＴＣＲの幅広いレパートリーを発達させる微小環境を提供する。
[0034] ドナー胸腺へのレシピエントＤＣの遊走は、新しいＴ細胞が胸腺を出て循環に入った後、レシピエントの組織を攻撃する自己反応性レシピエント胸腺細胞を枯渇させる。遺伝的レシピエントナイーブＴ細胞は、投与の約５〜１２か月後に循環中に出現する。これらのレシピエントＴ細胞は、多様なＴＣＲレパートリーを有し、通常はマイトジェンに応答して増殖する。それらは、自己に対する自己反応性を有することなく、感染からレシピエントを保護する。
[0035] レシピエント骨髄ＣＬＰは、胸腺同種移植片に遊走し、そこでレシピエントＴ細胞に発達する。ドナー胸腺に遊走したレシピエントＤＣによる負の選択は、レシピエントＭＨＣ抗原に対する寛容をもたらす。胸腺リンパ球新生の免疫組織化学的な証拠は、移植の約２〜３か月以内に採取された、移植された培養胸腺組織の生検において観察される。胸腺リンパ球新生は、感染を防御および制御し、自己免疫疾患を予防するＴ細胞の能力を反映する。
[0036] ナイーブＴ細胞は、移植の５〜１２か月後に循環において検出され、感染を防御および制御する能力、ならびに自己免疫疾患の予防をもたらす。
[0037] 培養胸腺組織の移植は、完全型ディジョージ異常（ｃＤＧＡ）またはフォークヘッドボックスタンパク質Ｎ１（ＦＯＸＮ１）欠乏症などの状態に関連する先天性無胸腺症から生じる一次免疫不全の治療に有益であることが本発明者によって最初に示された。本明細書における本発明者は、欠陥のある胸腺組織の、培養後の正常な胸腺組織（例えば、ＣＴＴおよびＲＶＴ−８０２）での置換もまた、移植された固形臓器のレシピエントにおいて観察される寛容の欠如を予防し得ることを発見した。
[0038] 培養胸腺組織の配置を通した先天性無胸腺症の治療の根底にある非臨床的および臨床的研究は、患者におけるＣＴＴ（例えば、ＲＶＴ−８０２）の配置が、移植された固形臓器に対する寛容の発達を許容し得るという認識につながった。具体的には、対象が、ドナー臓器のＭＨＣを発現するＣＴＴの移植前に最初に胸腺摘除および免疫抑制される場合、ＣＴＴの配置は、免疫系を再構築し、ドナー臓器に対する寛容を誘導するであろう。
[0039] 胸腺の細胞成分に関連する特定のマーカーの発現および分布の測定は、エクスビボで表現型を確立する。本明細書および実施例に記載される培養条件は、無胸腺症対象におけるＣＴＴの配置後のインビボでの胸腺リンパ球新生の観察を支持する。
[0040] 重要なことには、無胸腺症レシピエントにおけるＣＴＴの外科的配置後、ナイーブＴ細胞の発生および広範囲のＴＣＲ可変領域の存在は、胸腺組織の培養が、機能的内因性Ｔ細胞集団の発生を促進することができるという明確な証拠を提供する。加えて、主要な調節および構造遺伝子の発現は、培養中の胸腺組織において確認された。循環ナイーブ（ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋）Ｔ細胞は、ＣＴＴの外科的挿入の３〜５か月後に最初に検出することができる。これらの観察は、完全型ディジョージ異常を有する患者の治療において確認されている（Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，２０１０、Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ．２０１３）。
[0041] 胸腺組織移植についての文献に記載される非臨床データは、同種培養生後胸腺組織を移植するロバストな臨床有効性と一致し、ヒトにおけるその使用を支持する。（Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，Ｗａｔｓｏｎ ＴＪ，Ｋａｐｌａｎ Ｉ，Ｈａｌｅ ＬＰ，Ｈａｙｎｅｓ ＢＦ，１９９７，“Ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｔｈｙｍｉｃ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｄｕｒｉｎｇ ｏｒｇａｎ ｃｕｌｔｕｒｅ，”Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．Ｊａｎ；８２（１）：２ ６−３６、Ｈｏｎｇ Ｒ，Ｓｃｈｕｌｔｅ−Ｗｉｓｓｅｒｍａｎｎ Ｈ，Ｊａｒｒｅｔｔ−Ｔｏｔｈ Ｅ，Ｈｏｒｏｗｉｔｚ ＳＤ，Ｍａｎｎｉｎｇ ＤＤ，１９７９，“Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｔｈｙｍｉｃ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ．ＩＩ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ，”Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．，１４９（２）：３９８−４１５．Ｌｉ Ｂ，Ｌｉ Ｊ，Ｈｓｉｅｈ ＣＳ，Ｈａｌｅ ＬＰ，Ｌｉ ＹＪ，Ｄｅｖｌｉｎ ＢＨ，Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，２００９，“Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｔｈｙｍｕｓ ｔｉｓｓｕｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｅｍｐｈａｓｉｓ ｏｎ ｐｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｙｒｏｉｄ ｔｉｓｓｕｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｅｎｅｓ，”Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ．２００９；４４（１−３）：７１−８３、Ｌｉ Ｂ，Ｌｉ Ｊ，Ｄｅｖｌｉｎ ＢＨ，Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，２０１１，“Ｔｈｙｍｉｃ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｐｏｓｔｎａｔａｌ ｈｕｍａｎ ｔｈｙｍｕｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，”Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｓｅｐ；１４０（３）：２４４−５９）。
[0042] 完全型ディジョージ異常患者は、胚期初期における頸部、心臓、胸腺、および副甲状腺に発生する３つの腺に欠陥を有する。通常、心臓および胸腺は胸部へ下降し、カルシウムレベルを調節する副甲状腺は頸部に残る。ｃＤＧＡ対象のＣＴＴでの治療は、未治療対象における６％の生存率（未発表データ）と比較して、７５％の２歳での生存率をもたらした。文献では、小児は一般的には、治療なしでは２年以内に死亡する。（Ｍａｒｋｅｒｔ，ｅｔ ａｌ．，２０１０）。注目すべきことに、ＣＴＴ移植は、別々に管理されなければならない心臓および副甲状腺の問題に影響を与えない。
[0043] 本開示の第１の態様は、免疫学的に正常なレシピエントにおける固形臓器移植に対する寛容を誘導するための、レシピエントにおける同種培養生後胸腺組織由来産物の外科的配置を提供する。そのような方法は、免疫応答性レシピエントにおける胸腺の除去、続いて、レシピエントのＴ細胞を、１つ以上の抗体および／または１つ以上のカルシニューリン阻害剤などの１つ以上の免疫抑制剤を含む、誘導免疫抑制レジメンで枯渇させることを含む、これからなる、またはこれから本質的になる。誘導免疫抑制レジメンは、対象における成熟Ｔ細胞を枯渇させるために、および／またはレシピエントのＴ細胞が移植された固形臓器を拒絶するのを抑制するために、治療有効量で投与される。死亡ドナーからの適切な固形ヒト臓器および胸腺が得られ、固形臓器がレシピエントに移植される。移植拒絶を抑制するために、維持免疫抑制レジメンが一定時間投与される。死亡ドナーからの胸腺は、部分的にＴ細胞が枯渇したドナー胸腺組織片を産生するために胸腺臓器培地においてドナー胸腺組織を無菌で処理する最大２１日の期間コンディショニングレジメンに供され、それによって同種培養生後胸腺組織由来産物を含む。部分的にＴ細胞が枯渇したドナー胸腺組織片は、組織全体に散在したケラチンＡＥ１／ＡＥ３について陽性の領域、少なくとも１つのハッサル小体の存在、組織全体に散在したＣＫ１４染色、およびインタクトな核の存在を示す。同種培養生後胸腺組織由来産物は、次いでレシピエントにおいて、典型的には大腿四頭筋に外科的に配置される。同種培養生後胸腺組織由来産物は、レシピエントが移植後にナイーブＴ細胞を発生させることを可能にする。発生する全ての新しいＴ細胞は、遺伝的にレシピエントであり、レシピエントおよびドナーの両方に対して寛容である。胸腺組織片の投与量は、約１，０００〜２０，０００ｍｍ２の胸腺組織表面積／１ｍ２のレシピエント体表面積である。移植後、同種培養生後胸腺組織由来産物は、対象において胸腺リンパ球新生および寛容を誘導する。
[0044] 心臓移植を例にとると、ドナーは、死亡ドナーである。胸腺は、心臓が除去されると同時にドナーから除去される。心臓移植は、Ｔ細胞数を減少させ、残りのレシピエントＴ細胞を抑制してドナー心臓への攻撃を防止するために、誘導免疫抑制と共に直ちに行われる。ドナー胸腺は、少なくとも１２〜約２１日のコンディショニングの期間後に寛容を誘導するために移植に使用することができるヒト同種培養生後胸腺組織由来産物を形成するために処理される。予防措置として、同種培養生後胸腺組織由来産物の約半分は、コンディショニング後に凍結保存することができ、もし拒絶を治療する高用量のステロイドまたは他の免疫抑制剤の投与を必要とする心臓の後期拒絶での問題があり、それによって非常に高用量のステロイドが同種培養生後胸腺組織由来産物を損傷する場合、凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物は、拒絶エピソードが制御された後、移植するために利用可能である。
[0045] 重要なことには、同種培養生後胸腺組織由来産物の移植後、免疫寛容は、感染の存在下でも維持される。ＣＤ８ Ｔ細胞の約３分の１はアロ反応性を有するため、共刺激遮断などの他のアプローチでは、ウイルス感染は、寛容の喪失をもたらし得る。感染と戦うために免疫系が活性化される場合、アロ反応性ＣＤ８ Ｔ細胞は、固形臓器移植を拒絶し始める。対照的には、同種培養生後胸腺組織由来産物に処理された胸腺組織を使用して、寛容を誘導する場合、ドナーに対する全ての潜在的アロ反応性Ｔ細胞は、負の選択のプロセスを通して欠失される。
[0046] 一実施形態では、ドナー胸腺組織は、レシピエントにはないドナー臓器におけるＨＬＡ対立遺伝子に適合する。発生する全ての新しいＴ細胞は、遺伝的にレシピエントであり、レシピエントおよびドナーの両方に対して寛容である。
[0047] 本開示の第２の態様は、固形臓器移植片を必要とするレシピエントにおいて、死亡ドナーから得られる同種固形臓器移植片に対するドナー特異的寛容を促進するための方法を提供し、方法は、
（ａ）レシピエントの胸腺の除去ステップと、
（ｂ）レシピエントを、１つ以上の免疫抑制剤を含む誘導免疫抑制レジメンで治療して、レシピエントのＴ細胞を枯渇させる、および／またはレシピエントのＴ細胞が移植された固形臓器を拒絶するのを抑制するステップと、
（ｃ）死亡ドナーからの適切な固形ヒト臓器および胸腺の両方を提供するステップと、
（ｄ）固形ヒト臓器をレシピエントに移植するステップと、
（ｅ）レシピエントを維持免疫抑制レジメンで治療するステップと、
（ｆ）同種培養生後胸腺組織由来産物を提供するステップであって、同種培養生後胸腺組織由来産物が、固形臓器ドナーの適切な胸腺組織から得られ、ドナー胸腺組織が、同種培養生後胸腺組織由来産物を産生するために最大２１日の期間コンディショニングレジメンに供され、さらに、ドナー胸腺組織のためのコンディショニングレジメンが、胸腺臓器培地においてドナー胸腺組織を無菌で処理して、部分的にＴ細胞が枯渇したドナー胸腺組織片を産生することを含み、部分的にＴ細胞が枯渇したドナー胸腺組織片が、組織全体に散在したサイトケラチン（ＣＫ）（抗体ＡＥ１／ＡＥ３を使用）について陽性の領域、少なくとも１つのハッサル小体の存在、組織全体に散在したＣＫ１４染色、およびインタクトな核の存在を示す、ステップと、
（ｇ）同種培養生後胸腺組織由来産物を、コンディショニングレジメンの１２〜２１日後、レシピエントに移植するステップであって、胸腺組織片の投与量が、約１，０００〜２０，０００ｍｍ２の胸腺組織表面積／１ｍ２のレシピエント体表面積であり、さらに、移植された同種培養生後胸腺組織由来産物が、レシピエントにおいて胸腺リンパ球新生および寛容を誘導する、ステップと、を含む。
[0048] 一実施形態では、死亡ドナー心臓を必要とするレシピエントにおける同種心臓移植片に対するドナー特異的寛容を促進する方法が提供される。方法は、以下のステップ：
（ａ）移植のため死亡ドナーから適切なヒト心臓を得るステップと、
（ｂ）同種培養生後胸腺組織由来産物へのコンディショニングのため心臓が得られると同時に死亡ドナー胸腺を除去するステップであって、
ドナー胸腺が、ドナー移植臓器におけるＨＬＡ対立遺伝子に適合する、ステップと、
（ｃ）レシピエントを、１つ以上の免疫抑制剤を含む誘導免疫抑制レジメンで治療して、レシピエントのＴ細胞を枯渇および／または抑制するステップであって、１つ以上の免疫抑制剤が、麻酔の誘導時および再灌流後に投与されるグルココルチコイドを含む、ステップと、
（ｄ）心臓をレシピエントに移植するステップと、
（ｅ）レシピエントを、カルシニューリン阻害剤、イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤、および抗胸腺細胞グロブリンからなる群から選択される１つ以上の免疫抑制剤を含む維持免疫抑制レジメンで、心臓の移植片拒絶を防止または抑制するために十分な時間治療するステップと、
（ｆ）１２〜２１日目、同種培養生後胸腺組織由来産物を提供するステップであって、同種培養生後胸腺組織由来産物が、ドナー胸腺組織から得られ、ドナー胸腺組織が、同種培養生後胸腺組織由来産物を産生するために約１２〜約２１日の期間コンディショニングレジメンに供され、さらに、ドナー胸腺組織のためのコンディショニングレジメンが、胸腺臓器培地においてドナー胸腺組織を無菌で処理して、部分的にＴ細胞が枯渇したドナー胸腺組織片を産生することを含み、部分的にＴ細胞が枯渇したドナー胸腺組織片が、組織全体に散在したケラチンＡＥ１／ＡＥ３について陽性の領域、少なくとも１つのハッサル小体の存在、組織全体に散在したＣＫ１４染色、およびインタクトな核の存在を示す、ステップと、
（ｇ）同種培養生後胸腺組織由来産物の一部分をレシピエントに移植するステップであって、胸腺組織片の投与量が、約１，０００〜２０，０００ｍｍ２の胸腺組織表面積／１ｍ２のレシピエント体表面積であり、さらに、移植された同種培養生後胸腺組織由来産物が、レシピエントにおいて胸腺リンパ球新生および寛容を誘導する、ステップと、
（ｈ）ステップ（ｇ）において移植された同種培養生後胸腺組織由来産物の一部分を損傷する高用量のステロイドを必要とする早期拒絶エピソードがある場合にレシピエントにおいて使用するために同種培養生後胸腺組織由来産物の一部を凍結保存するステップと、を含む。
[0049] 一実施形態では、死亡ドナー心臓を必要とするレシピエントにおける同種心臓移植片に対するドナー特異的寛容を促進する方法が提供される。方法は、以下のステップ：
（ａ）移植のため死亡ドナーから適切な固形ヒト心臓を得るステップと、
（ｂ）同種培養生後胸腺組織由来産物へのコンディショニングのため心臓が得られると同時に死亡ドナー胸腺を除去するステップであって、ドナー胸腺が、ドナー移植臓器におけるＨＬＡ対立遺伝子に適合する、ステップと、
（ｃ）レシピエントを、１つ以上の免疫抑制剤を含む誘導免疫抑制レジメンで治療して、レシピエントのＴ細胞を枯渇および／または抑制するステップであって、１つ以上の免疫抑制剤が、麻酔の誘導時および再灌流後に投与されるグルココルチコイドを含む、ステップと、
（ｄ）レシピエントの心臓および胸腺を外科的に除去するステップと、
（ｅ）ドナーヒト心臓をレシピエントに移植するステップと、
（ｆ）レシピエントを、カルシニューリン阻害剤、イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤、および抗胸腺細胞グロブリンからなる群から選択される１つ以上の免疫抑制剤を含む維持免疫抑制レジメンで、心臓の移植片拒絶を防止または抑制するために十分な時間治療するステップであって、
レシピエントの術後状態が、グルココルチコイドの離脱およびレシピエントにおける同種培養生後胸腺組織由来産物の安全な移植を可能にするには不安定過ぎる場合、同種培養生後胸腺組織由来産物が、レシピエントが安定である後の時間に移植されるように凍結保存され、ドナー胸腺組織が、同種培養生後胸腺組織由来産物を産生するために約１２〜約２１日の期間コンディショニングレジメンに供され、さらに、ドナー胸腺組織のためのコンディショニングレジメンが、胸腺臓器培地においてドナー胸腺組織を無菌で処理して、部分的にＴ細胞が枯渇したドナー胸腺組織片を産生することを含み、部分的にＴ細胞が枯渇したドナー胸腺組織片が、組織全体に散在したケラチンＡＥ１／ＡＥ３について陽性の領域、少なくとも１つのハッサル小体の存在、組織全体に散在したＣＫ１４染色、およびインタクトな核の存在を示す、ステップと、
（ｈ）同種培養生後胸腺組織由来産物の一部分を、患者が安定した後、レシピエントに移植するステップであって、胸腺組織片の投与量が、約１，０００〜２０，０００ｍｍ２の胸腺組織表面積／１ｍ２のレシピエント体表面積であり、さらに、移植された同種培養生後胸腺組織由来産物が、レシピエントにおいて胸腺リンパ球新生および寛容を誘導する、ステップと、
（ｉ）ステップ（ｈ）において移植された同種培養生後胸腺組織由来産物の一部分を損傷する高用量のステロイドを必要とする拒絶エピソードがある場合にレシピエントにおいて使用するために同種培養生後胸腺組織由来産物の一部を凍結保存するステップと、を含む。
[0050] 本開示の第３の態様は、固形臓器移植片を必要とするヒトレシピエントにおいて、生体ヒトドナーから得られる同種固形臓器移植片に対するドナー特異的寛容を促進するための方法を提供し、方法は、
（ａ）レシピエントの胸腺の除去ステップと、
（ｂ）レシピエントを、１つ以上の免疫抑制剤を含む誘導免疫抑制レジメンで治療して、レシピエントのＴ細胞を枯渇させる、および／またはレシピエントのＴ細胞が移植された固形臓器を拒絶するのを抑制するステップと、
（ｃ）生体ヒトドナーから適切な固形臓器を提供するステップと、
（ｄ）固形臓器をレシピエントに移植するステップと、
（ｅ）レシピエントを維持免疫抑制レジメンで治療するステップと、
（ｆ）凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物バンクに維持された凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物を提供するステップであって、凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物が、固形臓器移植片中に存在しないレシピエントにおけるＨＬＡ対立遺伝子に適合したＨＬＡ対立遺伝子を発現する胸腺ドナーからの胸腺組織から処理され、ドナー胸腺組織が、最大１２日の期間コンディショニングレジメンに供され、さらに、ドナー胸腺組織のためのコンディショニングレジメンが、胸腺臓器培地においてドナー胸腺組織を無菌で処理して、部分的にＴ細胞が枯渇した胸腺組織片を産生することを含み、胸腺組織片が、コンディショニングレジメンの完了時に、組織全体に散在したケラチンＡＥ１／ＡＥ３について陽性の領域、少なくとも１つのハッサル小体の存在、組織全体に散在したＣＫ１４染色、およびインタクトな核の存在を示す、ステップと、
（ｇ）凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物を解凍するステップと、
（ｈ）解凍された凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物をレシピエントに移植するステップであって、凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物の投与量が、約１，０００〜２０，０００ｍｍ２の胸腺組織表面積／１ｍ２のレシピエント体表面積であり、さらに、移植された同種培養生後胸腺組織由来産物が、レシピエントにおいて胸腺リンパ球新生および寛容を誘導する、ステップと、を含む。
[0051] 本開示の第４の態様は、固形臓器移植を必要とするヒトレシピエントにおいて、死亡ヒトドナーから得られる同種固形臓器移植に対するドナー特異的寛容を促進するための方法を提供し、方法は、
（ａ）レシピエントの胸腺の除去ステップと、
（ｂ）レシピエントを、１つ以上の免疫抑制剤を含む誘導免疫抑制レジメンで治療して、レシピエントのＴ細胞を枯渇させる、および／またはレシピエントのＴ細胞が移植された固形臓器を拒絶するのを抑制するステップと、
（ｃ）生体ヒトドナーからの適切な固形臓器を提供するステップと、
（ｄ）固形臓器をレシピエントに移植するステップと、
（ｅ）レシピエントを維持免疫抑制レジメンで治療するステップと、
（ｆ）凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物バンクに維持された凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物を提供するステップであって、凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物が、固形臓器移植片中に存在しないレシピエントにおけるＨＬＡ対立遺伝子に適合したＨＬＡ対立遺伝子を発現する胸腺ドナーからの胸腺組織から処理され、ドナー胸腺組織が、最大１２日の期間コンディショニングレジメンに供され、さらに、ドナー胸腺組織のためのコンディショニングレジメンが、胸腺臓器培地においてドナー胸腺組織を無菌で処理して、部分的にＴ細胞が枯渇した胸腺組織片を産生することを含み、胸腺組織片が、コンディショニングレジメンの完了時に、組織全体に散在したケラチンＡＥ１／ＡＥ３について陽性の領域、少なくとも１つのハッサル小体の存在、組織全体に散在したＣＫ１４染色、およびインタクトな核の存在を示す、ステップと、
（ｇ）凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物を解凍するステップと、
（ｈ）解凍された凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物をレシピエントに移植するステップであって、凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物の投与量が、約１，０００〜２０，０００ｍｍ２の胸腺組織表面積／１ｍ２のレシピエント体表面積であり、さらに、移植された同種培養生後胸腺組織由来産物が、レシピエントにおいて胸腺リンパ球新生および寛容を誘導する、ステップと、を含む。
[0052] 本開示の第２〜第４の態様の一実施形態では、胸腺が、採取日に、領域の５０％超がレース状染色パターンでケラチンについて陽性であること、ハッサル小体が存在すること、ＣＫ１４がレース状パターンで染色すること、および核の９０％超がインタクトであることを示す、請求項６３の同種培養生後胸腺組織由来産物。
[0053] 本開示の第５の態様は、ドナーから適切な胸腺組織を得ることであって、ドナー胸腺組織が、最大２１日の期間コンディショニングレジメンに供され、さらに、ドナー胸腺組織のためのコンディショニングレジメンが、胸腺臓器培地においてドナー胸腺組織を無菌で処理して、部分的にＴ細胞が枯渇したドナー胸腺組織片を産生することを含み、ドナー胸腺組織片が、採取後５〜９日目、組織全体に散在したケラチンＡＥ１／ＡＥ３について陽性の領域、少なくとも１つのハッサル小体の存在、組織全体に散在したＣＫ１４染色、およびインタクトな核の存在を示す、得ることと、部分的にＴ細胞が枯渇したドナー胸腺組織片を、同種培養生後胸腺組織由来産物として回収することと、によって調製される固形臓器移植を受ける対象への移植のための同種培養生後胸腺組織由来産物を提供する。
[0054] 一実施形態では、胸腺は、採取日に、領域の５０％超がレース状染色パターンでケラチンについて陽性であること、ハッサル小体が存在すること、ＣＫ１４がレース状パターンで染色すること、および核の９０％超がインタクトであることを示す。
[0055] 本発明の第５の態様の一実施形態では、同種培養生後胸腺組織由来産物は、凍結保存される。
[0056] 一実施形態では、凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物は、その後の使用のために液体窒素中で維持される。
[0057] 別の実施形態では、凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物は、凍結保存組織バンクにおいて維持される。
[0058] 一実施形態では、同種培養生後胸腺組織由来産物は、固形臓器移植に存在しないレシピエント候補者におけるＨＬＡ対立遺伝子に適合するＨＬＡ対立遺伝子を含むドナーからの適切な胸腺組織から調製される。
[0059] 一実施形態では、ＨＬＡ対立遺伝子は、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＲＢ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５、ＨＬＡ−ＤＱＡ１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１、ＨＬＡ−ＤＰＡ１である。
[0060] 本開示の第６の態様は、
（ａ）ドナーから適切な胸腺組織を得るステップと、
（ｂ）ＨＬＡ対立遺伝子：ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＲＢ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５、ＨＬＡ−ＤＱＡ１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１、ＨＬＡ−ＤＰＡ１をタイピングするステップと、
（ｃ）胸腺組織を、最大１２日の期間コンディショニングレジメンに供するステップであって、ドナー胸腺組織のためのコンディショニングレジメンが、胸腺臓器培地においてドナー胸腺組織を無菌で処理して、部分的にＴ細胞が枯渇したドナー胸腺組織片を産生することを含み、さらに、ドナー胸腺組織片が、５〜９日目に、組織全体に散在したケラチンＡＥ１／ＡＥ３について陽性の領域、少なくとも１つのハッサル小体の存在、組織全体に散在したＣＫ１４染色、およびコンディショニングレジメンの完了時にインタクトな核の存在を示す、ステップと、
（ｄ）部分的にＴ細胞が枯渇したドナー胸腺組織片を同種培養生後胸腺組織由来産物として採取するステップと、
（ｅ）同種培養生後胸腺組織由来産物を液体窒素中で凍結保存するステップと、
（ｆ）凍結保存された同種培養生後胸腺組織由来産物を凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物バンクにおいて液体窒素中で維持するステップと、を含む、方法によって調製される、凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物である。
[0061] 一実施形態では、胸腺は、採取日に、領域の５０％超がレース状染色パターンでケラチンについて陽性であること、ハッサル小体が存在すること、ＣＫ１４がレース状パターンで染色すること、および核の９０％超がインタクトであることを示す。
[0062] 一実施形態では、液体窒素中で凍結保存された同種培養生後胸腺組織由来産物は、レシピエントによるその後の使用のために保持される。
[0063] 本開示の第７の態様は、レシピエント対象に移植するためのドナー胸腺を調製する方法を提供する。そのような方法は、本明細書にさらに記載されるように、ドナー胸腺を最大約５日、最大約６日、最大約７日、最大約８日、最大約９日、最大約１０日、最大約１１日、最大約１２日、最大約１３日、最大約１４日、最大約１５日、最大約１６日、最大約１７日、最大約１８日、最大約１９日、最大約２０日、または最大約２１日間培養することと、次いで培養胸腺組織をレシピエントに外科的に配置することと、を含む、これからなる、またはこれから本質的になる。約６〜約１２日の培養期間は、良好な機能をもたらす。凍結保存胸腺組織の移植の成功のために、組織は、典型的には、約６〜約１２日間培養され、次いで凍結保存される。
[0064] 本開示の第８の態様は、適切なドナーからの胸腺組織を、最大２１日の期間コンディショニングレジメンに供する方法によって製造される固形臓器移植を受ける対象への移植のための同種培養生後胸腺組織由来産物（ＣＴＴ、ＲＶＴ−８０２）を提供し、同種培養生後胸腺組織由来産物のためのコンディショニングレジメンは、胸腺臓器培地においてドナー胸腺組織を無菌で処理して、部分的にＴ細胞が枯渇したドナー胸腺組織片を産生することを含み、胸腺組織片は、組織全体に散在したケラチンＡＥ１／ＡＥ３について陽性の領域、少なくとも１つのハッサル小体の存在、組織全体に散在したＣＫ１４染色、およびインタクトな核の存在を示す。
[0065] 第８の態様の一実施形態では、ドナー胸腺は、採取日に、領域の５０％超がレース状染色パターンでケラチンについて陽性であること、ハッサル小体が存在すること、ＣＫ１４がレース状パターンで染色すること、および核の９０％超がインタクトであることを示す。
[0066] 本開示の第１〜第４の態様の一実施形態では、レシピエントの胸腺は、手術によって得られる。
[0067] 本開示の第１〜第４の態様の一実施形態では、レシピエントの胸腺は、ロボット手術によって得られる。
[0068] 本開示の第１〜第４の態様の一実施形態では、レシピエントの胸腺は、胸腔鏡手術によって得られる。
[0069] 本開示の第１〜第４の態様の一実施形態では、固形臓器は、臓器全体の一部分である。
一実施形態では、第１〜第４の態様の方法は、細胞寛容を示すための混合リンパ球反応における今後の使用のために、死亡ドナーからの末梢血単核細胞を凍結保存するステップをさらに含む。
[0070] 一実施形態では、細胞寛容を示す混合リンパ球反応は、本明細書におけるＣＴＴの移植処置に従った同種培養生後胸腺組織由来産物の移植後に、レシピエントからの末梢血単核細胞およびドナーからの凍結保存された末梢血単核細胞を用いて行われる。
[0071] 一実施形態では、細胞寛容を示す混合リンパ球反応は、同種培養生後胸腺組織由来産物の移植の約６〜１２か月後に、レシピエントからの末梢血単核細胞およびドナーからの凍結保存された末梢血単核細胞で行われる。
[0072] 一実施形態では、細胞寛容を示す混合リンパ球反応は、ナイーブＴ細胞がレシピエントにおける総Ｔ細胞の約１０％を構成した後、レシピエントからの末梢血単核細胞およびドナーからの凍結保存された末梢血単核細胞で行われる。
第１〜第４の態様の一実施形態では、移植された同種培養生後胸腺組織由来産物は、同種培養生後胸腺組織由来産物の移植後１２か月以内に、対象において胸腺リンパ球新生を誘導する。
[0073] 第１〜第４の態様の一実施形態では、寛容の発達は、死亡ドナーからの凍結保存された末梢血単核細胞およびレシピエントからのナイーブＴ細胞で行われる混合リンパ球反応によって決定される。
[0074] 第１〜第４の態様の一実施形態では、体液性寛容は、体液性免疫の発達およびドナー反応性抗体の不在によって決定される。
[0075] 本開示の第１〜第４の態様の一実施形態では、固形臓器移植は、心臓移植、腎臓移植、肝臓移植、肺移植、心臓／肺移植、膵臓移植、腸移植、胃移植、腹壁移植、頭蓋顔面移植、頭皮移植、陰茎移植、子宮移植、片側もしくは両側上肢移植、片側血管新生複合同種移植、またはそれらの組み合わせである。
[0076] 本開示の第１〜第４の態様の一実施形態では、方法は、レシピエントを、固形臓器を移植する前に、ＨＬＡクラスＩまたはＨＬＡクラスＩＩパネル反応性抗体（「ＰＲＡ」）スコアについて評価することをさらに含む。
[0077] 一実施形態では、固形臓器移植は、心臓移植である。
[0078] 一実施形態では、固形臓器移植は、小児心臓移植である。
[0079] 一実施形態では、固形臓器移植は、成人心臓移植である。
[0080] 本開示の第１〜第４の態様の一実施形態では、方法は、レシピエントを、固形臓器を移植する前に、ＨＬＡクラスＩまたはＨＬＡクラスＩＩパネル反応性抗体（「ＰＲＡ」）スコアについて評価することをさらに含む。
[0081] 一実施形態では、ＨＬＡ抗体を有するレシピエントは、潜在的なドナーと交差適合される。
[0082] 一実施形態では、ＨＬＡ抗体を有するレシピエントは、ＵＮＥＴと実質的に交差適合される。
[0083] さらなる実施形態では、２０％超の仮想交差適合のＰＲＡスコアが記録される場合、方法は、レシピエントにおける固形臓器移植時に手術室において血漿交換を行うステップをさらに含む。
[0084] さらなる実施形態では、７０％超の仮想交差適合のＰＲＡスコアが記録される場合、方法は、レシピエントにおける固形臓器移植時に手術室において実際の見込みドナー交差適合を行い、血漿交換を行うステップをさらに含む。典型的には、移植は、低い成功率のため、これらの状況下では行われない。
[0085] 本開示の第１〜第４の態様の一実施形態では、方法は、ＵＮＥＴと実質的に交差適合することによって、ＨＬＡ抗体を有するレシピエントを評価するステップをさらに含む。
[0086] 本開示の第１〜第４の態様の一実施形態では、方法は、ＨＬＡパネル反応性抗体が２０％超のスコアを有する場合、レシピエントにおける固形臓器移植時に手術室において血漿交換を行うことをさらに含む。
[0087] 本開示の第１〜第４の態様の一実施形態では、方法は、ＨＬＡパネル反応性抗体が７０％超のスコアを有する場合、レシピエントにおける固形臓器移植時に手術室において実際の見込みドナー交差適合を行い、血漿交換を行うことをさらに含む。
[0088] 一実施形態では、固形臓器は、例えば、腎臓、部分的肝臓、および部分的腸移植の生体関連ドナーおよびレシピエントについてＨＬＡ適合である。
[0089] 別の実施形態では、固形臓器は、ＨＬＡ不適合である。
[0090] 一実施形態では、固形臓器は、ＨＬＡ適合である。別の実施形態では、ＨＬＡ適合は、ドナーおよびレシピエントにおいてＨＬＡ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＲＢ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５、ＨＬＡ−ＤＱＡ１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１、ＨＬＡ−ＤＰＡ１をタイピングすることによって決定される。
[0091] 一実施形態では、固形臓器移植は、ＡＢＯ適合性である。
[0092] 別の実施形態では、固形臓器は、ＨＬＡ不適合である。一実施形態では、ＨＬＡ不適合は、ドナーおよびレシピエントにおいてＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＲＢ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ１、ＨＬＡ−ＤＱＡ１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１、ＨＬＡ−ＤＰＡ１をタイピングすることによって決定される。
[0093] 一実施形態では、培養胸腺組織片は、対象の大腿四頭筋に外科的に移植される。
[0094] 一実施形態では、培養胸腺組織片は、四頭筋以外の領域において対象の体に外科的に移植される。
[0095] 一実施形態では、同種培養生後胸腺組織由来産物の一部分は、レシピエントの大腿四頭筋に外科的に移植される。
[0096] 別の実施形態では、同種培養生後胸腺組織由来産物の残りの部分は、今後の移植のために液体窒素中で凍結保存される。
[0097] 一実施形態では、コンディショニングレジメンは、約１２日〜約２１日の期間である。
[0098] 一実施形態では、ドナー胸腺組織のコンディショニング期間は、約５日〜約２１日、または約５日、または約６日、または約７日、または約８日、または約９日、または約１０日、または約１１日、または約１２日、または約１３日、または約１４日、または約１５日、または約１６日、または約１７日、または約１８日、または約１９日、または約２０日、または約２１日である。
[0099] 当該技術分野で知られる多数の潜在的な誘導免疫抑制レジメンおよび維持免疫抑制レジメンがあること、ならびに適切な誘導および維持免疫抑制剤が当業者によって過度の負担なしに選択され得ることは、当業者によって理解されるであろう。以下の例示的な誘導免疫抑制レジメンおよび維持免疫抑制レジメンは、本発明の第１〜第４の態様の方法の実施の例示であり、特許請求される発明を支持する。
[00100] 本開示の第１〜第４の態様の、一実施形態では、誘導免疫抑制レジメンは、グルココルチコイド、抗胸腺細胞グロブリン（ウサギ）、抗胸腺細胞グロブリン（ウマ）、およびアレムツジマブの群から選択される誘導免疫抑制剤を含む。
[00101] 別の実施形態では、ＡＴＧは、抗胸腺細胞グロブリン（ウサギ）である。
[00102] 一実施形態では、誘導免疫抑制レジメンは、グルココルチコイドの投与を含む。一実施形態では、グルココルチコイドは、メチルプレドニゾロンを含む。別の実施形態では、グルココルチコイドは、メチルプレドニゾロンコハク酸ナトリウムである。さらなる実施形態では、メチルプレドニゾロンコハク酸ナトリウムは、４ｍｇ／ｋｇ／日以下で静脈内投与される。
[00103] 一実施形態では、誘導免疫抑制レジメンは、ウサギ由来抗胸腺細胞グロブリンを含む。別の実施形態では、ウサギ由来抗胸腺細胞グロブリンは、約１．５ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与される。さらなる実施形態では、抗胸腺細胞グロブリンは、４日間毎日投与される。別の実施形態では、ＡＴＧは、ウマ由来ＡＴＧである。
[00104] 一実施形態では、誘導免疫抑制レジメンは、バシリキシマブを含む。別の実施形態では、バシリキシマブは、体重が３５ｋｇ未満のレシピエントについて１０ｍｇの用量で静脈内投与される。別の実施形態では、バシリキシマブは、体重が３５ｋｇ超のレシピエントついて２０ｍｇの用量で静脈内投与される。
[00105] 本開示の第１〜第４の態様の一実施形態では、第２の免疫抑制レジメンは、グルココルチコイド、カルシニューリン阻害剤、イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤、アザチオプリン、および抗胸腺細胞グロブリン（「ＡＴＧ」）からなる群から選択される１つ以上の免疫抑制剤を含む。
[00106] 一実施形態では、維持免疫抑制レジメンの免疫抑制剤は、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）である。
[00107] 一実施形態では、ＡＴＧは、手術室における投与で開始して、３〜１４日の期間約１．５ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与される。
[00108] 一実施形態では、抗胸腺細胞グロブリンは、静脈内投与によって約１５ｍｇ／ｋｇ／日で３〜１４日間毎日投与される。
[00109] 一実施形態では、第１の免疫抑制レジメンは、アレムツズマブを含む。
[00110] 一実施形態では、アレムツズマブは、体重が３５ｋｇ未満のレシピエントについて約０．２５ｍｇ／ｋｇの用量で４日間静脈内投与される。別の実施形態では、アレムツズマブは、体重が３５ｋｇ超のレシピエントについて約３〜２０ｍｇの用量で４日間静脈内投与される。
[00111] 一実施形態では、第２の免疫抑制レジメンは、カルシニューリン阻害剤、およびイノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤、またはアザチオプリンからなる群から選択される１つ以上の免疫抑制剤を含む。
[00112] 一実施形態では、維持免疫抑制レジメンの免疫抑制剤、免疫抑制剤は、カルシニューリン阻害剤である。
一実施形態では、維持免疫抑制レジメンの免疫抑制剤、免疫抑制剤は、イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤である。
[00113] 一実施形態では、免疫抑制レジメンは、イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤、例えば、ミコフェノール酸モフェチルを含む。一実施形態では、ミコフェノール酸モフェチルは、約１５〜約２５ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与される。一実施形態では、ミコフェノール酸モフェチルは、１日２〜３回静脈内投与される。
[00114] 別の実施形態では、イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤は、ミコフェノール酸である。別の実施形態では、ミコフェノール酸は、約２５〜約５０ｍｇ／ｋｇの用量で、２回または３回の分割用量で投与される。
[00115] 一実施形態では、ミコフェノール酸は、小児には約４００ｍｇ／ｍ２／用量、１日２回、最大用量７２０ｍｇ、またはＢＳＡ １．１９〜１．５９ｍ２、約５４０ｍｇ、１日２回、またはＢＳＡ＞１．５８ｍ２、約７２０ｍｇ、１日２回用量で投与される。
[00116] 一実施形態では、ミコフェノール酸モフェチルは、小児には約１５〜約２５ｍｇ／ｋｇ／用量の用量で１日２回、または成人には約１５００ｍｇで１日２回経口または静脈内投与され、３５００超のＷＢＣのために調整される。
[00117] 本開示の第１〜第４の態様の一実施形態では、第２の免疫抑制レジメンは、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、およびプレドニゾロンからなる群から選択されるグルココルチコイドをさらに含み得る。一実施形態では、グルココルチコイドの用量は、４ｍｇ／ｋｇ／日未満に保持される。
[00118] 一実施形態では、グルココルチコイドは、本開示の他の箇所に記載されるように、漸減投与量で投与される。
[00119] 本開示の第１〜第４の態様の別の実施形態では、カルシニューリン阻害剤は、タクロリムスである。別の実施形態では、カルシニューリン阻害剤は、シクロスポリンＡである。
[00120] 本開示の第１〜第４の態様の別の実施形態では、第２の免疫抑制レジメンの投与は、ナイーブＴ細胞が全Ｔ細胞の１０％に達した後に離脱される。さらに別の実施形態では、第２の免疫抑制レジメンは、同種培養生後胸腺組織由来産物の移植後に離脱される。
[00121] 本明細書に開示される原理、およびその利点のより完全な理解のために、添付の図面と併せて以下の説明が参照される。
[00122]
先天性無胸腺症における免疫再構築のための投与後の同種培養生後胸腺組織由来産物（例えば、ＣＴＴ、ＲＶＴ−８０２）の作用のメカニズムの概略を示す。[00123] 実施例１において他の箇所で記載されるように、免疫学的に正常なＬｅｗｉｓラットにおける胸腺を除去し、レシピエントラットのＴ細胞を殺滅する抗体を投与し、ドナーラットからの培養新生胸腺組織をレシピエントラットに移植し、免疫抑制剤を約４か月間投与し、レシピエントラットにおけるＴ細胞発生を評価することによって、ラットにおいて免疫系を再構築するためのステップの概略を示す。注目すべきことに、治療群における全てのラットは、シクロスポリンを中止する前に、１０％超のナイーブＴ細胞を有した。[00124] 実施例１の２匹の実験レシピエントラット（右の上昇線）対胸腺組織移植を受けていない２匹の対照ラット（ベースラインの太線）におけるナイーブＴ細胞の発生を示す。[00125] ドナーから胸腺を採取し、ドナー胸腺組織の薄片を最大２１日間培養し、レシピエントの大腿四頭筋に培養胸腺組織を移植するための製造プロセスの概略を示す。[00126] セクション［００５２０］において論じられる、特徴分析試験のための胸腺組織の切片化を示す概略を示す。 胸腺の培養に使用される組織培養皿における外科用スポンジ上のセルロースフィルター上の胸腺組織の切片の図である。[00127] ドナーからの胸腺の採取後５、９、１２、および２１日目の培養胸腺組織のロット（ＭＦＧ−０５６）からの胸腺組織切片の組織学的試験を示す。ヘマトキシリンおよびエオジン染色切片（左パネル）ならびに抗サイトケラチン抗体ＡＥ１／ＡＥ３のカクテル（右パネル、褐色は陽性の反応性を示す）とのそれらの対応する反応性は、それぞれ、５日目（図６Ａ、６Ｂ）、９日目（図６Ｃ、６Ｄ）、１２日目（図６Ｅ、６Ｆ）、および２１日目（図６Ｇ、６Ｈ）に示される。各パネルの左下にあるバーは、１００μｍを表す。Ｈ＆Ｅでのパネルは、時間に伴うＴ細胞の進行枯渇を示す。図６Ｅおよび６Ｆは、主に上皮細胞である。胸腺細胞が時間と共に枯渇すると、被膜下皮質の上皮の凝縮が発生する。同様の凝縮は、胸腺の髄質領域で発生する。Ｌａｕｒａ Ｐ．Ｈａｌｅ，ＭＤ，ＰｈＤ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｄｕｋｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙによる写真。[00128] それぞれ、５ｍｍ（図９Ａ）および１００μｍ（図７Ｂ）のスケールにおいて時間経過の０日目の胸腺組織片の組織学を描写する。これは、０日目の低パワー（バー５ｍｍ）および高パワー（バー１００ｕｍ）での胸腺および胸腺細胞を示す。これは正常な胸腺である。この時点で、皮質および髄質の両方は、組織の全体的な濃青色の外観に寄与する濃青色の核を有する多数の胸腺細胞を有する。Ｌａｕｒａ Ｐ．Ｈａｌｅ，ＭＤ，ＰｈＤ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｄｕｋｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙによる写真。 それぞれ、５ｍｍ（図９Ａ）および１００μｍ（図７Ｂ）のスケールにおいて時間経過の０日目の胸腺組織片の組織学を描写する。これは、０日目の低パワー（バー５ｍｍ）および高パワー（バー１００ｕｍ）での胸腺および胸腺細胞を示す。これは正常な胸腺である。この時点で、皮質および髄質の両方は、組織の全体的な濃青色の外観に寄与する濃青色の核を有する多数の胸腺細胞を有する。Ｌａｕｒａ Ｐ．Ｈａｌｅ，ＭＤ，ＰｈＤ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｄｕｋｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙによる写真。[00129] それぞれ５ｍｍ（図８Ａ）および１００μｍ（図８Ｂ）のスケールにおいて時間経過の５日目の胸腺組織片の組織学を描写するＨ＆Ｅ染色スライドの画像である。胸腺細胞の枯渇の進行は、組織のより好酸球性（ピンク）の外観をもたらす。Ｌａｕｒａ Ｐ．Ｈａｌｅ，ＭＤ，ＰｈＤ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｄｕｋｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙによる写真。 それぞれ５ｍｍ（図８Ａ）および１００μｍ（図８Ｂ）のスケールにおいて時間経過の５日目の胸腺組織片の組織学を描写するＨ＆Ｅ染色スライドの画像である。胸腺細胞の枯渇の進行は、組織のより好酸球性（ピンク）の外観をもたらす。Ｌａｕｒａ Ｐ．Ｈａｌｅ，ＭＤ，ＰｈＤ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｄｕｋｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙによる写真。[00130] Ｈ＆Ｅ染色は、それぞれ、５ｍｍ（図９Ａ）および１００μｍ（図９Ｂ）のスケールにおいて時間経過の１２日目の胸腺組織切片の組織学を描写する。我々は、胸腺細胞の進行性枯渇を確認する。より高い倍率は、核を欠いた多数の好酸球性細胞体を示し、これは、核溶解（核の溶解）を受けた壊死性細胞の状態を示す。この壊死度は、培養におけるこの時点では予想される。Ｌａｕｒａ Ｐ．Ｈａｌｅ，ＭＤ，ＰｈＤ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｄｕｋｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙによる写真。 Ｈ＆Ｅ染色は、それぞれ、５ｍｍ（図９Ａ）および１００μｍ（図９Ｂ）のスケールにおいて時間経過の１２日目の胸腺組織切片の組織学を描写する。我々は、胸腺細胞の進行性枯渇を確認する。より高い倍率は、核を欠いた多数の好酸球性細胞体を示し、これは、核溶解（核の溶解）を受けた壊死性細胞の状態を示す。この壊死度は、培養におけるこの時点では予想される。Ｌａｕｒａ Ｐ．Ｈａｌｅ，ＭＤ，ＰｈＤ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｄｕｋｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙによる写真。[00131] Ｈ＆Ｅ染色は、それぞれ、５ｍｍ（図１０Ａ）および１００μｍ（図１０Ｂ）のスケールにおいて時間経過の２１日目の胸腺組織切片の組織学を描写する。図１０Ｂにおける、被膜下皮質、皮質領域、および多数のハッサル小体を含有する髄質領域を含む、組織の全体的な構造の保存に留意されたい。小さな暗細胞は、ほとんどがまだ核溶解を受けていない壊死性胸腺細胞である。Ｌａｕｒａ Ｐ．Ｈａｌｅ，ＭＤ，ＰｈＤ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｄｕｋｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙによる写真。 Ｈ＆Ｅ染色は、それぞれ、５ｍｍ（図１０Ａ）および１００μｍ（図１０Ｂ）のスケールにおいて時間経過の２１日目の胸腺組織切片の組織学を描写する。図１０Ｂにおける、被膜下皮質、皮質領域、および多数のハッサル小体を含有する髄質領域を含む、組織の全体的な構造の保存に留意されたい。小さな暗細胞は、ほとんどがまだ核溶解を受けていない壊死性胸腺細胞である。Ｌａｕｒａ Ｐ．Ｈａｌｅ，ＭＤ，ＰｈＤ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｄｕｋｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙによる写真。[00132] 抗サイトケラチン抗体（ＡＥ１／ＡＥ３）のカクテルで免疫染色された代表的な胸腺切片を示す。図１１Ａ．０日目、図１１Ｂ．５日目、図１１Ｃ．９日目、図１１Ｄ．１２日目、および図１１Ｅ．２１日目。胸腺上皮網の構造は、培養が進むとインタクトなままである。バーは４００μｍを表す。Ｌａｕｒａ Ｐ．Ｈａｌｅ，ＭＤ，ＰｈＤ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｄｕｋｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙによる写真。[00133] １０倍ＰＢＳの強制分解条件への曝露後の胸腺組織スライドの組織学を示す。図１２Ａは、強制分解条件への曝露後の９日目の皮質を示す。図１２Ｂは、強制分解条件への曝露後の２１日目の皮質を示す。図１２Ａにおいて、青色の塗抹は、細胞から放出されたＤＮＡである。細胞の大部分は分解の証拠を示すが、インタクトな核を有する小さな細胞巣を特定することができる。Ｌａｕｒａ Ｐ．Ｈａｌｅ，ＭＤ，ＰｈＤ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｄｕｋｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙによる写真。 １０倍ＰＢＳの強制分解条件への曝露後の胸腺組織スライドの組織学を示す。図１２Ａは、強制分解条件への曝露後の９日目の皮質を示す。図１２Ｂは、強制分解条件への曝露後の２１日目の皮質を示す。図１２Ａにおいて、青色の塗抹は、細胞から放出されたＤＮＡである。細胞の大部分は分解の証拠を示すが、インタクトな核を有する小さな細胞巣を特定することができる。Ｌａｕｒａ Ｐ．Ｈａｌｅ，ＭＤ，ＰｈＤ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｄｕｋｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙによる写真。[00134] 臨床試料ＭＬＭ２４７のＨ＆Ｅ染色された組織学切片を示す。これは培養の０日目である。バーは２００ｕｍである。これは０日目からの凍結切片である。これは凍結されたため、組織は０日目のパラフィン包埋ホルマリン固定組織とは異なって見える。Ｌａｕｒａ Ｐ．Ｈａｌｅ，ＭＤ，ＰｈＤ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｄｕｋｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙによる写真。[00135] 臨床試料ＭＬＭ２１９の凍結切片、Ｈ＆Ｅ染色された組織学切片である。これは凍結切片であるため、組織は上記で培養および提示されたパラフィン包埋ホルマリン固定組織とは異なって見える。それにもかかわらず、胸腺細胞枯渇の重要な組織学的特性およびＴＥＣのロバストな生存可能性は、よく表されている。Ｌａｕｒａ Ｐ．Ｈａｌｅ，ＭＤ，ＰｈＤ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｄｕｋｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙによる写真。[00136] 新しく採取された胸腺組織の写真である。[00137] 実施例５に提示されるように、ラット腎臓被膜下でのＣＴＴの採取、培養、移植、および移植の生検を説明する概略である。[00138] 実施例５に記載される、４片に切断された３日齢Ｆ１（ＬＷｘＤＡ）ラットからの胸腺組織の採取の写真を示す（図１７Ａ）。実施例５に記載されるように、無菌混合セルロースエステルフィルター上、胸腺臓器培地で５〜７日間、３７℃のＣＯ２インキュベーターにおいて、培養された胸腺片の写真（図１７Ｂ）。図１７Ｃは、ＬＷラットの腎臓被膜下に移植されたＣＴＴの写真である。図１７Ｄは、移植後６か月で採取された胸腺移植片の写真である。矢印は、腎臓被膜下のＣＴＴを示す。[00139] 新鮮な胸腺組織（上フレーム）およびＣＴＴ（下フレーム）の組織学的外観を倍率１００倍で示す写真である。図１８Ａは、実施例５に記載されるように、Ｈ＆Ｅ染色された新鮮な胸腺組織（上フレーム）および５日間培養されたＣＴＴ（下フレーム）における髄質分化の比較を示す。図１８Ｂは、実施例５に記載されるように、新鮮な胸腺組織（上フレーム）と比較してサイトケラチンについて染色される場合、５日間培養されたＣＴＴ（下フレーム）において観察可能な典型的なレース状パターンを示す。図１８Ｃは、Ｋｉ−６７について染色される場合の新鮮な胸腺組織（上フレーム）およびＴ細胞が枯渇したＣＴＴ（下フレーム）を示す。図１８Ｄは、ＣＤ３について染色された新鮮な胸腺組織（上フレーム）および５日間培養された後ＣＤ３について染色されたＣＴＴ胸腺組織（下フレーム）を示す。ＣＤ３染色されたＣＴＴ（図１８Ｄ、下フレーム）に記載される褐色の染色は、いくつかの生細胞と、組織から洗い流されていない死Ｔ細胞のデトリタスを表す可能性がある。[00140] 新鮮な胸腺組織（上フレーム）およびＣＴＴ（下フレーム）の組織学的外観を倍率６００倍で示す写真である。図１９Ａは、実施例５に記載されるように、Ｈ＆Ｅ染色された新鮮な胸腺組織（上フレーム）および５日間培養されたＣＴＴ（下フレーム）における髄質分化の比較を示す。図１９Ｂは、実施例５に記載されるように、新鮮な胸腺組織（上フレーム）と比較してサイトケラチンについて染色される場合、５日間培養されたＣＴＴ（下フレーム）において観察可能な典型的なレース状パターンを示す。図１９Ｃは、Ｋｉ−６７について染色される場合の新鮮な胸腺組織（上フレーム）およびＴ細胞が枯渇したＣＴＴ（下フレーム）を示す。図１９Ｄは、ＤＣ３について染色された新鮮な胸腺組織（上フレーム）および５日間培養された後ＣＤ３について染色されたＣＴＴ胸腺組織（下フレーム）を示す。ＣＤ３染色されたＣＴＴ（図１９Ｄ、下フレーム）に記載される褐色の染色は、いくつかの生細胞と、組織から洗い流されていない死Ｔ細胞のデトリタスを表す可能性がある。[00141] 実施例５において報告される実験の実験設計の概略である。この図は、出版に向けた提出の準備中の原稿：Ｋｗｕｎ Ｊ，Ｌｉ Ｊ，Ｒｏｕｓｅ ＤＣ，Ｐａｒｋ Ｊ，Ｆａｒｒｉｓ ＡＢ，Ｔｕｒｅｋ ＪＷ，Ｋｎｅｃｈｔｌｅ ＳＪ，Ｋｉｒｋ ＡＤ，Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｔｈｙｍｕｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｄｏｎｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｈｅａｒｔ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓからのものである。[00142] 再増殖するレシピエントタイプＴ細胞がＣＴＴ移植後、右下象限に見られることを示す。この図は、出版に向けた提出の準備中の原稿：Ｋｗｕｎ Ｊ，Ｌｉ Ｊ，Ｒｏｕｓｅ ＤＣ，Ｐａｒｋ Ｊ，Ｆａｒｒｉｓ ＡＢ，Ｔｕｒｅｋ ＪＷ，Ｋｎｅｃｈｔｌｅ ＳＪ，Ｋｉｒｋ ＡＤ，Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｔｈｙｍｕｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｄｏｎｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｈｅａｒｔ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓからのものである。[00143] 陽性サイトケラチン染色（図２２Ａ）、および生来の胸腺と同様のＴ細胞染色（図２２Ｂ）を示す、移植後８．５か月で外植された移植胸腺を示す。元の倍率の４００倍。この図は、出版に向けた提出の準備中の原稿：Ｋｗｕｎ Ｊ，Ｌｉ Ｊ，Ｒｏｕｓｅ ＤＣ，Ｐａｒｋ Ｊ，Ｆａｒｒｉｓ ＡＢ，Ｔｕｒｅｋ ＪＷ，Ｋｎｅｃｈｔｌｅ ＳＪ，Ｋｉｒｋ ＡＤ，Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｔｈｙｍｕｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｄｏｎｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｈｅａｒｔ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓからのものである。 陽性サイトケラチン染色（図２２Ａ）、および生来の胸腺と同様のＴ細胞染色（図２２Ｂ）を示す、移植後８．５か月で外植された移植胸腺を示す。元の倍率の４００倍。この図は、出版に向けた提出の準備中の原稿：Ｋｗｕｎ Ｊ，Ｌｉ Ｊ，Ｒｏｕｓｅ ＤＣ，Ｐａｒｋ Ｊ，Ｆａｒｒｉｓ ＡＢ，Ｔｕｒｅｋ ＪＷ，Ｋｎｅｃｈｔｌｅ ＳＪ，Ｋｉｒｋ ＡＤ，Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｔｈｙｍｕｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｄｏｎｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｈｅａｒｔ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓからのものである。[00144] ＣＴＴの移植を有さない対照動物と比較した、循環ＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞の有意に増加した数のプロットを示す。これはまた、培養胸腺組織移植（ＣＴＴＴ）群におけるナイーブＣＤ４およびナイーブＣＤ８ Ｔ細胞の、ＣＴＴＴを受けなかった対照群と比較して有意に増加した数、ならびに培養胸腺組織移植（ＣＴＴ）群におけるＣＤ４およびＣＤ８新規胸腺移出（ＲＴＥ）の、ＣＴＴを受けなかった対照群と比較して有意に増加した数を示す。この図は、出版に向けた提出の準備中の原稿：Ｋｗｕｎ Ｊ，Ｌｉ Ｊ，Ｒｏｕｓｅ ＤＣ，Ｐａｒｋ Ｊ，Ｆａｒｒｉｓ ＡＢ，Ｔｕｒｅｋ ＪＷ，Ｋｎｅｃｈｔｌｅ ＳＪ，Ｋｉｒｋ ＡＤ，Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｔｈｙｍｕｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｄｏｎｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｈｅａｒｔ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓからのものである。[00145] １８０日目に外植された移植ＣＴＴの免疫組織学的分析を示し、腎臓の被膜下で正常な胸腺組織学を示す（図２４Ａの右側）。図２４Ｂは、Ｈ＆Ｅで外植された移植片を示す。生存可能Ｔ細胞（ＣＤ３）、Ｔ細胞増殖（Ｋｉ６７）、およびサイトケラチン（ウサギポリクローナル抗体で検出）についての染色が示される。サイトケラチンについて染色されたパネルでは、ＴＥＣ上のハッサル小体形成（矢印）でレース状パターンが見られる。この図は、出版に向けた提出の準備中の原稿：Ｋｗｕｎ Ｊ，Ｌｉ Ｊ，Ｒｏｕｓｅ ＤＣ，Ｐａｒｋ Ｊ，Ｆａｒｒｉｓ ＡＢ，Ｔｕｒｅｋ ＪＷ，Ｋｎｅｃｈｔｌｅ ＳＪ，Ｋｉｒｋ ＡＤ，Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｔｈｙｍｕｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｄｏｎｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｈｅａｒｔ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓからのものである。[00146] 胸腺摘出ならびにＣＴＴ移植（ＣＴＴＴ）あり（実線の三角、青線）およびＣＴＴなし（逆三角、赤線）でのＤＡ心臓移植での免疫抑制後のＬＷラットの生存パーセンテージを示す。ＣＴＴＴを有するＬＷラットは寛容であり、ＣＴＴＴを有さないＬＷラットは免疫不全であり、よってＤＡ心臓を拒絶しない。対照は、ＬＷ未操作ラットにおけるＤＡ心臓移植の完全な拒絶を示す（白四角）。ＬＷ対照動物はまた、ＬＷ心臓移植片を拒絶しなかった（横線付きの白丸）（ｎ＝９）。この図は、出版に向けた提出の準備中の原稿：Ｋｗｕｎ Ｊ，Ｌｉ Ｊ，Ｒｏｕｓｅ ＤＣ，Ｐａｒｋ Ｊ，Ｆａｒｒｉｓ ＡＢ，Ｔｕｒｅｋ ＪＷ，Ｋｎｅｃｈｔｌｅ ＳＪ，Ｋｉｒｋ ＡＤ，Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｔｈｙｍｕｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｄｏｎｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｈｅａｒｔ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓからのものである。[00147] ＣＴＴが移植された動物（２６Ａ）および移植されなかった動物（２６Ｂ）から移植された同種移植片（ＤＡ心臓）の写真であり、図２６Ｃ（実線青四角および実線赤三角）に示される２００４ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｈｅａｒｔ ＆Ｌｕｎｇ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（ＩＳＨＬＴ）による拒絶の兆候なしに単核細胞浸潤を示す。この図は、出版に向けた提出の準備中の原稿：Ｋｗｕｎ Ｊ，Ｌｉ Ｊ，Ｒｏｕｓｅ ＤＣ，Ｐａｒｋ Ｊ，Ｆａｒｒｉｓ ＡＢ，Ｔｕｒｅｋ ＪＷ，Ｋｎｅｃｈｔｌｅ ＳＪ，Ｋｉｒｋ ＡＤ，Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｔｈｙｍｕｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｄｏｎｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｈｅａｒｔ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓからのものである。 ＣＴＴが移植された動物（２６Ａ）および移植されなかった動物（２６Ｂ）から移植された同種移植片（ＤＡ心臓）の写真であり、図２６Ｃ（実線青四角および実線赤三角）に示される２００４ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｈｅａｒｔ ＆Ｌｕｎｇ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（ＩＳＨＬＴ）による拒絶の兆候なしに単核細胞浸潤を示す。この図は、出版に向けた提出の準備中の原稿：Ｋｗｕｎ Ｊ，Ｌｉ Ｊ，Ｒｏｕｓｅ ＤＣ，Ｐａｒｋ Ｊ，Ｆａｒｒｉｓ ＡＢ，Ｔｕｒｅｋ ＪＷ，Ｋｎｅｃｈｔｌｅ ＳＪ，Ｋｉｒｋ ＡＤ，Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｔｈｙｍｕｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｄｏｎｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｈｅａｒｔ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓからのものである。[00148] ＣＴＴを有するＬＷラット（免疫能力があり、頸部同種ＢＮ心臓を拒絶した）およびＣＴＴが挿入されなかった対照ＬＷ動物（胸腺の欠如のため免疫不全であり、頸部ＢＮ心臓を拒絶することができなかった）対ＢＮ対照（頸部ＢＮ心臓を拒絶するＬＷラット）および同系対照（ＬＷラットは頸部ＬＷ心臓を拒絶しない）における動物生存対移植片生存日数の頸部におけるＢＮ心臓移植片生存パーセンテージのプロットである。この図は、出版に向けた提出の準備中の原稿：Ｋｗｕｎ Ｊ，Ｌｉ Ｊ，Ｒｏｕｓｅ ＤＣ，Ｐａｒｋ Ｊ，Ｆａｒｒｉｓ ＡＢ，Ｔｕｒｅｋ ＪＷ，Ｋｎｅｃｈｔｌｅ ＳＪ，Ｋｉｒｋ ＡＤ，Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｔｈｙｍｕｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｄｏｎｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｈｅａｒｔ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓからのものである。[00149] それぞれ、１１および４６日目のＣＴＴ挿入あり（図２８Ａ）およびなし（図２８Ｂ）でのＢＮ心臓組織の写真である。これらの写真は、図２７および２９におけるデータの基礎である。２８Ａにおける心臓は、寛容のために拒絶されない。２８Ｂにおける心臓は、胸腺の欠如からの免疫不全のため拒絶されない。この図は、出版に向けた提出の準備中の原稿：Ｋｗｕｎ Ｊ，Ｌｉ Ｊ，Ｒｏｕｓｅ ＤＣ，Ｐａｒｋ Ｊ，Ｆａｒｒｉｓ ＡＢ，Ｔｕｒｅｋ ＪＷ，Ｋｎｅｃｈｔｌｅ ＳＪ，Ｋｉｒｋ ＡＤ，Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｔｈｙｍｕｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｄｏｎｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｈｅａｒｔ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓからのものである。 それぞれ、１１および４６日目のＣＴＴ挿入あり（図２８Ａ）およびなし（図２８Ｂ）でのＢＮ心臓組織の写真である。これらの写真は、図２７および２９におけるデータの基礎である。２８Ａにおける心臓は、寛容のために拒絶されない。２８Ｂにおける心臓は、胸腺の欠如からの免疫不全のため拒絶されない。この図は、出版に向けた提出の準備中の原稿：Ｋｗｕｎ Ｊ，Ｌｉ Ｊ，Ｒｏｕｓｅ ＤＣ，Ｐａｒｋ Ｊ，Ｆａｒｒｉｓ ＡＢ，Ｔｕｒｅｋ ＪＷ，Ｋｎｅｃｈｔｌｅ ＳＪ，Ｋｉｒｋ ＡＤ，Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｔｈｙｍｕｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｄｏｎｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｈｅａｒｔ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓからのものである。[00150] 頸部ＢＮ心臓の拒絶グレーディングを示す。ＬＷラット（白丸）に配置された同系ＬＷ心臓は拒絶されなかった。ＬＷラット（黒丸）に配置されたＢＮ心臓は拒絶された。ＣＴＴを受けたＬＷラットに配置されたＢＮ心臓は拒絶された（黒四角）。ＣＴＴを受けなかったＬＷラットに配置されたＢＮ心臓は、２匹のラットでは弱く拒絶され（網掛け三角）、他の３匹のラットでは拒絶されなかった。これらのデータは、ＣＴＴを有するラットが、ＣＴＴＴがＤＡを発現したようにＤＡ心臓を受容しても（図２６Ｃ）、第三者心臓を強く拒否することができたことを示す。ＣＴＴを有さないラットは、免疫不全であり、ＤＡ（図２６Ｃ）またはＢＮ心臓のいずれも拒絶しなかった。この図は、出版に向けた提出の準備中の原稿：Ｋｗｕｎ Ｊ，Ｌｉ Ｊ，Ｒｏｕｓｅ ＤＣ，Ｐａｒｋ Ｊ，Ｆａｒｒｉｓ ＡＢ，Ｔｕｒｅｋ ＪＷ，Ｋｎｅｃｈｔｌｅ ＳＪ，Ｋｉｒｋ ＡＤ，Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｔｈｙｍｕｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｄｏｎｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｈｅａｒｔ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓからのものである。[00151] それぞれ、ＬＷおよびＤＡ心臓と比較して、ラットがＣＴＴ挿入を受けたか、または受けなかったＢＮ心臓の写真である。図３０Ａでは、免疫抑制が除去され、ＢＮ心臓が移植された後、ＢＮ心臓は、すぐに拒絶され、よって全ての炎症のために非常に大きい。ＬＷ心臓は、体中に血液を送り出す心臓の通常のサイズである。ＤＡ心臓は、腹部に配置され、血液を送り出す必要がなかったため、小さい。図３０Ｂでは、免疫抑制が除去された後、ラットは免疫不全であり、ＢＮまたはＤＡ心臓のいずれも拒絶することができない。この図は、出版に向けた提出の準備中の原稿：Ｋｗｕｎ Ｊ，Ｌｉ Ｊ，Ｒｏｕｓｅ ＤＣ，Ｐａｒｋ Ｊ，Ｆａｒｒｉｓ ＡＢ，Ｔｕｒｅｋ ＪＷ，Ｋｎｅｃｈｔｌｅ ＳＪ，Ｋｉｒｋ ＡＤ，Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｔｈｙｍｕｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｄｏｎｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｈｅａｒｔ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓからのものである。 それぞれ、ＬＷおよびＤＡ心臓と比較して、ラットがＣＴＴ挿入を受けたか、または受けなかったＢＮ心臓の写真である。図３０Ａでは、免疫抑制が除去され、ＢＮ心臓が移植された後、ＢＮ心臓は、すぐに拒絶され、よって全ての炎症のために非常に大きい。ＬＷ心臓は、体中に血液を送り出す心臓の通常のサイズである。ＤＡ心臓は、腹部に配置され、血液を送り出す必要がなかったため、小さい。図３０Ｂでは、免疫抑制が除去された後、ラットは免疫不全であり、ＢＮまたはＤＡ心臓のいずれも拒絶することができない。この図は、出版に向けた提出の準備中の原稿：Ｋｗｕｎ Ｊ，Ｌｉ Ｊ，Ｒｏｕｓｅ ＤＣ，Ｐａｒｋ Ｊ，Ｆａｒｒｉｓ ＡＢ，Ｔｕｒｅｋ ＪＷ，Ｋｎｅｃｈｔｌｅ ＳＪ，Ｋｉｒｋ ＡＤ，Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｔｈｙｍｕｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｄｏｎｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｈｅａｒｔ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓからのものである。[00152] ＣＴＴ挿入ありおよびなしでのラットからの外植された頸部ＢＮ心臓対ＢＮ対照および同系対照ラットについての拒絶グレーディングのプロットである。図３１Ａは、一次腹部ＤＡ心臓同種移植片における炎症細胞の定量化を示す。同系対照は、ＬＷラットがＬＷ心臓を拒絶しないことを示す。ＤＡ対照は、ＬＷラットがＤＡ心臓を拒絶することを示す。ＣＴＴ群は、寛容のためＤＡ心臓を拒絶しない。ＣＴＴを有さない群は、胸腺の欠如からの免疫不全のためＤＡ心臓を拒絶しない。図３１Ｂは、二次頸部ＢＮ心臓同種移植片における炎症細胞の定量化を示す。同系対照は、ＬＷラットがＬＷ心臓を拒絶しないことを示す。ＢＮ対照は、ＬＷラットがＢＮ心臓を拒絶することを示す。ＣＴＴ群は、免疫能力があるためＢＮ心臓を拒否する。ＣＴＴを有さない群は、胸腺の欠如からの免疫不全のためＢＮ心臓を拒絶しない。 頸部ＢＮ心臓拒絶時に生来のＬＷ心臓と共にＬＷレシピエントから採取されたＤＡおよびＢＮ心臓ラットを示す。右下パネルは、その拒絶を引き起こすＢＮ心臓におけるＴ細胞（褐色）を示す。 ＣＴＴの挿入を有さない対照動物からのＬＷ、ＤＡ、およびＢＮ心臓におけるＴ細胞浸潤を示す。動物が免疫不全であるため、Ｔ細胞浸潤はない。この図は、出版に向けた提出の準備中の原稿：Ｋｗｕｎ Ｊ，Ｌｉ Ｊ，Ｒｏｕｓｅ ＤＣ，Ｐａｒｋ Ｊ，Ｆａｒｒｉｓ ＡＢ，Ｔｕｒｅｋ ＪＷ，Ｋｎｅｃｈｔｌｅ ＳＪ，Ｋｉｒｋ ＡＤ，Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｔｈｙｍｕｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｄｏｎｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｈｅａｒｔ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓからのものである。[00153] ＣＴＴＴ後の体液性寛容である。図３２Ａは、Ｔ細胞フロー交差適合によって測定される移植後ドナー特異的同種抗体（抗ＤＡおよび抗ＢＮ抗体）の代表的なヒストグラムプロットを示す。左上パネル（ＤＡ対照）は、異所性腹部ＤＡ心臓移植を受けた後の正常なＬＷラットにおける抗ＤＡ抗体（太線）の発達を示す。中央上パネルは、ＣＴＴＴを受けたＬＷラットにおける抗ＤＡ抗体の欠如を示し、これは寛容を示す。右上パネルは、ＣＴＴＴを有さないＬＷラットによる応答がないことを示し、これは、胸腺摘出後のラットの免疫不全およびドナー胸腺の受容なしでのＴ細胞枯渇を反映する。左下パネルは、頸部ＢＮ心臓を受ける正常なＬＷラットによって形成される正常な抗ＢＮ抗体を示す。中央下パネルは、頸部ＢＮ心臓移植を受けた後のＢＮに対するＣＴＴＴを有するＬＷラットの正常な応答を示し、免疫能力および第三者を拒絶する能力を示す。右下パネルは、頸部ＢＮ心臓移植を受けた後にＢＮに対するＣＴＴＴを有さないＬＷラットの応答がないことを示し、免疫不全および第三者を拒絶する能力の欠如を示す。図３２Ｂは、一次ＤＡ心臓移植後の抗ＤＡ抗体のレベルを示す。ＬＷｘＤＡ胸腺ドナーからのＣＴＴＴを有するＬＷラットは、ＤＡに寛容であるため、ＤＡ心臓移植後に抗ＤＡ抗体を作製しない。ＣＴＴＴを有さないＬＷラットは、免疫不全であるため、ＤＡ心臓移植後に抗ＤＡ抗体を作製しない。図３２Ｃは、二次頸部ＢＮ心臓移植後の抗ＢＮ抗体のレベルを示す。ＬＷｘＤＡドナーからのＣＴＴＴを有するＬＷラットは、第三者に対して免疫能力を示すＢＮに対する抗体を作製する。ＣＴＴＴを有さないＬＷラットは、免疫不全を示すＢＮに対する抗体を作製しない。この図は、出版に向けた提出の準備中の原稿：Ｋｗｕｎ Ｊ，Ｌｉ Ｊ，Ｒｏｕｓｅ ＤＣ，Ｐａｒｋ Ｊ，Ｆａｒｒｉｓ ＡＢ，Ｔｕｒｅｋ ＪＷ，Ｋｎｅｃｈｔｌｅ ＳＪ，Ｋｉｒｋ ＡＤ，Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｔｈｙｍｕｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｄｏｎｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｈｅａｒｔ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓからのものである。[00154] 培養の１２日後の非ヒト霊長類培養胸腺組織の凍結保存である。１行目は、採取時のサイトケラチン（Ａ）、培養の６日目（Ｂ）、培養の１２日目（Ｃ）、および培養の１２日後、続いて３５日の凍結保存、次いで写真の解凍（Ｄ）である。Ｄにおけるサイトケラチン（ＡＥ１／ＡＥ３）は、Ｃにおけるサイトケラチンに似ている。２行目は、同じ時点でのＣＫ１４染色を示す。ＨにおけるＣＫ１４は、パネルＧにおけるＣＫ１４と非常に類似する。３行目は、時間を通して生存Ｔ細胞の喪失が予想されるＣＤ３染色を示す。パネルＬは、非常に少ないＴ細胞を有する点でパネルＫと類似する。４行目は、増殖するＴ細胞のＫｉ−６７染色を示す。Ｔ細胞が主に死滅しているため、Ｋｉ−６７での染色は６日目までに不在である。この図は、培養胸腺組織が患者のために凍結保存される方法と同様に、非ヒト霊長類胸腺を凍結保存する能力を示す。
[00155] 本明細書で提供されるタイトル、見出し、および小見出しは、本開示の様々な態様を限定するものとして解釈されるべきではない。したがって、以下で定義される用語は、明細書全体への参照によってより完全に定義される。本明細書で引用される全ての参考文献は、参照によってその全体が組み込まれる。
[00156] 特に定義されない限り、本明細書で使用される科学用語および技術用語は、当業者によって一般に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈によって特に必要とされない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。本出願では、「または」の使用は、特に明記されない限り、「および／または」を意味する。複数の従属請求項の文脈では、「または」の使用は、代替の場合のみ、複数の先行する独立または従属請求項に戻って参照される。
[00157] さらに、本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」、ならびに任意の単語の単数形の使用は、１つの指示対象に明確かつ明白に限定されない限り、複数の指示対象を含むことに留意されたい。本明細書で使用される場合、「含む」という用語およびその文法上の変形は、リスト中の項目の列挙が、列挙された項目に置換または追加することができる他の同様の項目を除外しないように、非限定的であることが意図される。
[00158] 本発明は、以下の定義を参照して最も明確に理解される：
[00159] 「約」という用語は、本明細書では、およそ、ほぼ、大体、または前後を意味するために使用される。「約」という用語が数値範囲と共に使用される場合、それは、記載される数値の上下に境界を拡張することによって、その範囲を変更する。一般に、「約」という用語は、本明細書では、＋／−１０％の分散によって、述べられた値の上下の数値を変更するために使用される。本明細書で使用される場合、約という用語は、明示的に示されるかどうかに関係なく、例えば、整数、分数、およびパーセンテージを含む、数値を指す。約という用語は、一般に、当業者が列挙された値と同等であるとみなす（例えば、同じ関数または結果を有する）数値の範囲（例えば、列挙された範囲の＋／−５〜１０％）を指す。数値または範囲のリストに先立って少なくともおよび約などの用語が使用される場合、用語は、リストにおいて提供される値または範囲の全てを変更する。いくつかの場合では、約という用語は、最も近い有効数字が四捨五入された数値を含み得る。
[00160] 本明細書で使用される場合、「動物」という用語は、これらに限定されないが、ヒト、ならびに野生、飼育、および家畜動物などの非ヒト脊椎動物を含む。動物は、「対象」とも呼ぶことができる。
[00161] 本明細書で使用される場合、「生体適合性」とは、哺乳動物に移植される場合、哺乳動物において有害な応答を引き起こさない、任意の材料を指す。
[00162] 「慢性移植拒絶」とは、急性拒絶の免疫抑制が成功した場合でも、一般的には生着後数か月〜数年以内にヒトにおいて発生する。線維症は、全てのタイプの臓器移植の慢性拒絶における一般的な因子である。
[00163] 本明細書で使用される場合、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」（ならびに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、および「含んだ（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ）」などの含むことの任意の形態）、「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」（ならびに「有する（ｈａｖｅ）」および「有する（ｈａｓ）」などの有することの任意の形態）、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」（ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」および「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」などの含むことの任意の形態）、または「含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」（ならびに「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」および「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」などの含有することの任意の形態）は、包括的またはオープンエンドであり、追加の列挙されていない要素または方法ステップを除外しない。加えて、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語と併せて使用される用語は、「〜からなること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」または「〜から本質的になること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という用語と併せて使用することができることも理解される。
[00164] 本明細書で使用される場合、「移植片」とは、典型的には、欠損を置換、修正、またはそうでなければ克服するために、個体に移植される組織または臓器を指す。組織または臓器は、同じ個体に由来する細胞からなり得、この移植片は、本明細書では、以下の互換可能な用語：「自家移植片（ａｕｔｏｇｒａｆｔ）」、「自家移植（ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）」、「自家移植（ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ ｉｍｐｌａｎｔ）」、および「自家移植片（ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ ｇｒａｆｔ）」で呼ばれる。本明細書では、同じ種の遺伝的に異なる個体からの移植片は、以下の互換可能な用語：「同種移植片（ａｌｌｏｇｒａｆｔ）」、「同種移植（ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）」、「同種移植（ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ ｉｍｐｌａｎｔ）」、および「同種移植片（ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ ｇｒａｆｔ）」で呼ばれる。個体からその一卵性双生児への移植片は、本明細書では、「同系移植片（ｉｓｏｇｒａｆｔ）」、「同系移植（ｓｙｎｇｅｎｅｉｃ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）」、「同系移植（ｓｙｎｇｅｎｅｉｃ ｉｍｐｌａｎｔ）」、または「同系移植片（ｓｙｎｇｅｎｅｉｃ ｇｒａｆｔ）」と呼ばれる。「異種移植片（ｘｅｎｏｇｒａｆｔ）」、「異種移植（ｘｅｎｏｇｅｎｅｉｃ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）」、または「異種移植（ｘｅｎｏｇｅｎｅｉｃ ｉｍｐｌａｎｔ）」とは、１つの個体から異なる種の別の個体への移植片を指す。
[00165] 本明細書で使用される場合、「ＨＬＡ適合」という用語は、ドナーとレシピエントとの間でＨＬＡ抗原のいずれも不適合ではないドナーレシピエント対を指す。本発明の方法におけるＨＬＡ適合は、ＨＬＡ対立遺伝子：ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＲＢ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ１、ＨＬＡ−ＤＱＡ１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１、ＨＬＡ−ＤＰＡ１を含む。
[00166] 本明細書で使用される場合、「ＨＬＡ不適合」という用語は、ドナーとレシピエントとの間のＨＬＡ不適合が発生する、典型的には、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＲＢ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ１、ＨＬＡ−ＤＱＡ１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１、ＨＬＡ−ＤＰＡ１に関して、ドナーおよびレシピエントＨＬＡ抗原における適合を指す。いくつかの場合、一方のハプロタイプは適合であり、他方は不適合である。この状況は、生体または死亡ドナーからの臓器でよく見られる。ドナー−レシピエント対におけるＨＬＡ不適合は、ＨＬＡ適合対と比較して増加した移植片拒絶のリスクをもたらす。
[00167] 前述の定義の背景として、ＨＬＡ抗原は、これらの細胞に固有の抗原同一性を付与する細胞の表面上に発現するタンパク質分子である、「ヒト白血球抗原」に対応する。それらは、「主要組織適合性複合抗原」としても知られる。よって、ＭＨＣまたはＨＬＡ抗原は、Ｔ細胞によって「自己」または「非自己」であると認識される標的分子である。ＨＬＡ抗原が免疫エフェクター細胞と同じ造血幹細胞源に由来する場合、それらは「自己」とみなされる。ＨＬＡ抗原が造血再構成細胞の別の源に由来する場合、それらは「非自己」とみなされる。
[00168] ＨＬＡ抗原の２つの主要なクラス：ＨＬＡクラスＩおよびＨＬＡクラスＩＩが認識されている。ＨＬＡクラスＩ抗原（ヒトにおけるＡ、Ｂ、およびＣ）は、各細胞を「自己」として認識可能にする。ＨＬＡクラスＩＩ抗原（ヒトにおけるＤＲＢ１、ＤＰＢ１、ＤＰＡ１、ＤＱＢ１、およびＤＱＡ１）は、リンパ球と抗原提示細胞との間の反応に関与する。ＨＬＡ抗原の両方のクラスは、移植された臓器の拒絶の標的として関与している。
[00169] ＨＬＡ遺伝子は、ヒト染色体位置６ｐ２１にクラスター化される。この遺伝子のクラスターは、６つの古典的な移植ＨＬＡ遺伝子をコードする。６ｐ２１のセグメントはまた、免疫系の調節ならびに他の基本的な分子および細胞プロセスにおいて重要な役割を有するタンパク質をコードする遺伝子をコードする。完全なクラスターは、約３．６Ｍｂであり、少なくとも２２４個の遺伝子座を有する。クラスター化の結果として、特定の「ハプロタイプ」が発生する（単一の染色体上に存在する対立遺伝子のセット）。片方の親から受け継がれたハプロタイプは、群として受け継がれる傾向がある。各親から受け継がれた対立遺伝子のセットは、ハプロタイプを形成し、その中でいくつかの対立遺伝子は、一緒に関連付けられる傾向がある。ＨＬＡ適合は、レシピエントのハプロタイプを特定し、適切な適合ドナーを特定するために使用される。特定のハプロタイプは他よりも一般的であり、それらは異なる人種および民族グループによって頻度が変動する。
[00170] 本明細書で使用される場合、「それを必要とする」という句は、対象が特定の方法または治療の必要性を有すると特定されていることを意味する。いくつかの実施形態では、特定は、任意の診断手段によるものであり得る。本明細書に記載される方法および治療のいずれかにおいて、対象は、それを必要とし得る。
[00171] 本明細書で使用される場合、「ＸからＹまでの整数」という句は、端点を含む任意の整数を意味する。例えば、「ＸからＹまでの整数」という句は、１、２、３、４、または５を意味する。
[00172] 本明細書で使用される場合、「哺乳動物」という用語は、齧歯類（すなわち、マウス、ラット、またはモルモット）、サル、ネコ、イヌ、ウシ、ウマ、ブタ、またはヒトを意味する。いくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
[00173] 本明細書で使用される場合、「臓器」という用語は、生物内で特定の機能または機能群を実行する固形血管新生臓器を指す。臓器という用語は、これらに限定されないが、心臓、肺、腎臓、肝臓、膵臓、皮膚、子宮、骨、軟骨、小腸または大腸、膀胱、脳、乳房、血管、食道、卵管、胆嚢、卵巣、膵臓、前立腺、胎盤、脊髄、上下を含む四肢、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、気管、尿管、尿道、子宮を含む。
[00174] 本明細書で使用される場合、「予防する」、「予防すること」、および「予防」という用語は、疾患、障害、または状態の少なくとも１つの症状を最終的に示し得るが、まだ示していない個体に対する、個体が一定期間にわたって疾患、障害、または状態の症状を発症する可能性を低減するための療法の実施を指す。そのような低減は、例えば、患者における疾患、障害、または状態の少なくとも１つの症状の発症遅延において反映され得る。
[00175] 本明細書で使用される場合、「対象」、「個体」、または「患者」という用語は、互換的に使用され、哺乳動物、例えば、マウス、ラット、他の齧歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、またはヒトなどの霊長類を含む、任意の動物を意味する。
[00176] 本明細書で使用される場合、「治療有効量」とは、研究者、獣医、医師、または他の臨床医によって組織、系、動物、個体、またはヒトにおいて求められている生物学的または医学的応答を誘発する活性化合物または薬学的製剤の量を意味する。治療効果は、治療される障害または望ましい生物学的効果に依存する。そのようなものとして、治療効果は、障害に関連する症状の重症度の低下および／もしくは障害の進行の阻害（部分的もしくは完全）、または障害、もしくは副作用の、改善された治療、治癒、予防、もしくは排除であり得る。治療応答を誘導するために必要な量は、対象の年齢、健康状態、サイズ、および性別に基づいて決定することができる。最適量はまた、治療に対する対象の応答のモニタリングに基づいて決定することができる。
[00177] 本明細書で使用される「組織」という用語は、ヒトまたは動物における任意のタイプの組織を指し、これらに限定されないが、血管組織、皮膚組織、肝臓組織、膵臓組織、神経組織、泌尿生殖器組織、胃腸組織、骨および軟骨を含む骨格組織、脂肪組織、腱および靭帯を含む結合組織、羊膜組織、絨毛組織、硬膜、心膜、筋肉組織、腺組織、顔面組織、眼組織を含む。
[00178] 本開示の文脈における「組織バンク」とは、液体窒素下で保存された、凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物の長期保存を指す。同種培養生後胸腺組織由来産物のリポジトリの確立のための一般的なガイダンスは、Ｇｕｉｄａｎｃｅ ｆｏｒ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｇｏｏｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（ＣＧＴＰ）ａｎｄ Ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｒｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｃｅｌｌｓ，Ｔｉｓｓｕｅｓ，ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ−Ｂａｓｅｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（ＨＣＴ／Ｐｓ）ａｖａｉｌａｂｌｅ ａｔ ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｄｏｗｎｌｏａｄｓ／ＢｉｏｌｏｇｉｃｓＢｌｏｏｄＶａｃｃｉｎｅｓ／ＧｕｉｄａｎｃｅＣｏｍｐｌｉａｎｃｅＲｅｇｕｌａｔｏｒｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ／Ｇｕｉｄａｎｃｅｓ／Ｔｉｓｓｕｅ／ＵＣＭ２８５２２３．ｐｄｆから引用され得る。
[00179] 「組織操作」とは、組織置換または再構成における使用のためにエクスビボで組織を生成するプロセスを指す。組織操作は、「再生医療」の一例であり、これは、生体工学材料および技法と共に、細胞、遺伝子、または他の生物学的ビルディングブロックの組み込みによる、組織および臓器を修復または置換へのアプローチを包含する。
[00180] 「移植拒絶」という用語は、急性および慢性の両方の移植拒絶を包含する。「急性拒絶」とは、移植された組織が免疫学的に異質である場合の、組織移植レシピエントの免疫系による拒絶である。急性拒絶は、それらのエフェクター機能を実行し、移植組織を破壊する、レシピエントの免疫細胞による移植組織の浸潤を特徴とする。急性拒絶の発症は、急速であり、一般的には移植手術後数週間以内にヒトにおいて発生する。一般に、急性拒絶は、ラパマイシン、シクロスポリンＡ、抗ＣＤ４０Ｌモノクローナル抗体などのような免疫抑制薬で阻害または抑制することができる。
[00181] 本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療された」、または「治療すること」という用語は、目的が望ましくない生理学的状態、障害もしくは疾患を減速（軽減）するか、または有益なもしくは所望の臨床結果を得ることである、治療的処置および予防的措置の両方を意味する。例えば、有益なまたは所望の臨床結果は、これらに限定されないが、症状の緩和；状態、障害、もしくは疾患の程度の低下；状態、障害、もしくは疾患の安定化された（すなわち、悪化していない）状態；状態、障害、もしくは疾患進行の発症遅延もしくは減速；検出可能か検出不能かにかかわらず、状態、障害、もしくは疾患状態の改善、または（部分または完全にかかわらず）寛解；患者によって識別可能であるとは限らない、少なくとも１つの測定可能な物理的パラメータの改善；または状態、障害、もしくは疾患の向上もしくは改善を含む。
[00182] 本明細書に記載されるように、任意の濃度範囲、パーセンテージ範囲、比範囲、または整数範囲は、特に示されない限り、列挙された範囲内の任意の整数の値、および適切な場合、その分数（整数の１／１０および１００分の１など）を含むと理解されるべきである。範囲は、概算であり、整数よりも変動し得る。
[00183] 単位、接頭辞、および記号は、Ｓｙｓｔｅｍｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｄｅ Ｕｎｉｔｅｓ（ＳＩ）で承認された形式で示される。数値範囲は、範囲を定義する数値を含める。測定値は、有効数字および測定に関連する誤差を考慮して、概算であると理解される。
[00184] さらに、明確にするために、別個の実施形態の文脈において記載される、本明細書に記載される特定の特徴は、単一の実施形態において組み合わせて提供することもできることが理解される。逆に、簡潔にするために、単一の実施形態の文脈において記載される様々な特徴は、別々にまたは任意の適切な部分組み合わせで提供することもできる。
ドナー胸腺組織の採取
[00185] ドナー胸腺組織は、生後心臓手術中にドナーの家族のインフォームドコンセントと共に取得され得る。いくつかの胸腺の除去は、手術部位を明らかにするために必要であり得る。よって、胸腺の一部分は、外科的処置の性質により、生後心臓手術における心臓手術中に除去され得る。
[00186] 生後心臓手術中に、胸腺組織の一部分は、外科的処置中に廃棄され得る。全ての心臓手術について、胸腺が移植のためにスクリーニングされているかどうかに関係なく、外科医は、除去された胸腺組織を無菌容器に入れる。
[00187] 完全型ディジョージ症候群を有する乳児における胸腺組織移植のための胸腺組織ドナーは、９か月齢未満の乳児であった。原薬同種培養生後胸腺組織由来産物は、本明細書に記載されるように廃棄された胸腺組織を処理および培養することによって製造される。
[00188] 培養胸腺組織移植における胸腺の使用についての同意は、胸腺が採取される前または後に取得され得る。しかしながら、バイパスを受ける前に乳児から血液を取得することを許可する同意が必要であり、常に手術前に取得される。この血液試料は、ドナースクリーニングに使用される。
[00189] 廃棄された胸腺組織は、無菌容器に配置される。日常的な試験は、組織移植についてのＦＤＡガイドラインに従って、ドナーおよびドナーの生母に対して行われる。本明細書に記載される外科的処置では、組織タイプ適合は必要とされないが、そのような組織タイプ適合は、特定の状況で行うことができる。
[00190] 組織は、直ちに処理されるか、または翌日処理するために一晩冷蔵保存され得る。胸腺組織が一晩保存される場合は、組織は、元の容器において胸腺組織を完全に覆うために十分な胸腺臓器培地（以下に記載される「ＴＯＭ」培地）に無菌で添加される。胸腺を有する容器は、翌日の処理の準備ができるまで冷蔵庫に配置される。
胸腺組織のコンディショニングの概要
[00191] コンディショニングレジメンは、培養胸腺組織切片からドナー胸腺細胞を枯渇させる。インビトロデータ（免疫組織化学）に基づいて、１２〜２１日の培養期間は、サイトケラチン抗体を使用して評価される上皮網を保存する。培養は、好ましくは、５％ＣＯ２インキュベーターにおいて３７℃で行われる。
[00192] 培養を成功させるには、胸腺組織は、好ましくは切片化され、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（登録商標）セルロースまたは同等のフィルター上に配置され、組織培養皿の外科用スポンジ上に配置される。培地は、胸腺臓器培地（ＴＯＭ）を含み、毎日交換される。
[00193] レシピエントの胸腺は、病理によって評価される。同一性の試験は、レース状染色パターンでケラチンについて陽性の領域の５０％超を示さなければならない。有効性の試験は、ハッサル小体を示さなければならず、またレース状パターンでＣＫ１４染色を示さなければならない。生存性の試験は、切片において観察される９０％超のインタクトな核を示さなければならない。組織のロットリリースは、５日目〜９日目（この日を含める）の１日に行われ、病理によって行われる。同一性について、５〜９日目の組織上の領域は、ケラチン、ＡＥ１／ＡＥ３について陽性でなければならない。有効性について、５〜９日目の培養胸腺組織は、全体に散在するサイトケラチンＣＫ１４染色を示さなければならず、少なくとも１つのハッサル小体が特定されなければならない。生存性について、５〜９日目の培養胸腺組織は、インタクトな核を示さなければならない。
[00194] 一実施形態では、胸腺組織切片は、約１２日間コンディショニングされ、次いで凍結保存される。別の実施形態では、胸腺組織切片の全ては、約１２日間コンディショニングされ、次いで約半分は、レシピエントに移植され、残りの胸腺組織切片は、今後の使用のために凍結保存される。
[00195] 採取の２４時間以内に、胸腺は、薄切片に切断される。切片は、１２〜２１日間培養に保持される。この培養プロセスは、以下で詳細に記載されるように、生存可能ドナーＴ細胞を枯渇させ、最終的には、外科的に移植された組織切片が、潜在的にはより低いが、免疫学的により有効なＴ細胞レベルで、無胸腺症対象の免疫系を再構築することを可能にする。
[00196] 培養プロセスは、以下に概説されるように、ＣＴＴ切片の効果的な治療特性を最適化するために、以下の方法でドナー胸腺組織およびその中に含有される構成細胞の生物学的特性を大幅に変更する。
[00197] 培養プロセスは、予め必要な生物学的特性を有する培養細胞／組織の定義された組成物が、対象への外科的移植に適した方法で得られ、対象の免疫系の再構築を可能にすることを保証する。
[00198] 培養プロセスは、胸腺細胞の喪失ならびにドナー胸腺組織切片における胸腺上皮細胞および他の間質細胞の相対的濃縮をもたらす。
[00199] 培養プロセスはさらに、胸腺細胞の枯渇およびＴＥＣの維持をもたらして、レシピエントの免疫系の再構築を可能にし、寛容がドナー胸腺におけるＨＬＡ抗原に対してレシピエントにおいて発達することを可能にする。
[00200] 全体として、製造プロセスは、胸腺細胞をドナー胸腺組織から枯渇させ、胸腺間質（胸腺上皮細胞および線維芽細胞）の機能的構造を保存するように設計される。
[00201] 一実施形態では、処理されたドナー胸腺組織は、外科的移植処置後、それを必要とする対象において胸腺組織タイプ（ＨＬＡ抗原）に対する寛容を誘導することができる操作された胸腺組織産物である。
[00202] 切片化胸腺組織を生存可能に維持するために、胸腺切片は、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅセルロースフィルター上に配置され、培地を含有する組織培養皿に外科用スポンジが挿入される。各組織培養皿における培養培地は、ドナーからの採取の日から移植の日まで（１２日目〜２１日目）毎日交換される。
[00203] ドナー胸腺組織の培養は、そのような処理された組織において胸腺細胞を枯渇させ、これは、胸腺摘出後の重度免疫不全対象において非常に問題となり得る、移植片対宿主病（「ＧｖＨＤ」）のリスクを最小限にする。
[00204] 培養における最初の数日中、多くの胸腺細胞は、組織切片から培養培地に「溢れ」、培地交換中に廃棄される。培養期間中に培養が続くと、ドナー胸腺細胞は、死滅し続けるが、それらの細胞残滓は、ＣＴＴ切片内に保持される。
[00205] 理論によって縛られることなく、核を欠くこれらの生存不能な胸腺細胞およびそれらの残滓の存在は、治療後のレシピエント骨髄幹細胞の侵入に必要な胸腺上皮細胞の３次元網においてオープンポケットを保存するのに役立つため、組織操作産物の意図された機能にとって重要であると仮定される。侵入する骨髄幹細胞のために「空間」を有する重要性は、Ｍａｒｋｅｒｔ，１９９９（以下の参考文献リストを参照されたい）における患者ＤＩＧ００３での経験によって支持される。前述の参考文献に記載される患者は、ＣＴＴ移植の３５日後に非常に大きな用量のステロイド（４０ｍｇ／ｋｇ／日ｘ３日のメチルプレドニゾロン）が与えられ、これは、胸腺細胞のアポトーシスおよび上皮の凝縮を引き起こした。ナイーブＴ細胞は発生せず、患者は感染症に負けた。剖検では、挿入された胸腺は、胸腺細胞が入るための上皮細胞間に空間を有さない生存可能な立方上皮の塊であった。
[00206] 培養期間中、患者（レシピエント）およびドナー組織が任意のＨＬＡ対立遺伝子を共有するかを確認するために、ＨＬＡタイピングが行われる。抗ＨＬＡ抗体試験は、レシピエントが胸腺においてＨＬＡ抗原に対する任意の抗体を有するかを決定するためにレシピエントにおいて行われる。レシピエントがドナーのＭＨＣを標的とする抗体を有する場合、別の胸腺が求められる。ドナーおよびドナーの母親は、ＦＤＡガイダンス文書「Ｇｕｉｄａｎｃｅ ｆｏｒ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ．Ｅｌｉｇｉｂｉｌｉｔｙ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｄｏｎｏｒｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｃｅｌｌｓ，Ｔｉｓｓｕｅｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ−Ｂａｓｅｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（ＨＣＴ／Ｐｓ）」およびより最近のガイダンス文書に従って感染症について確認される。組織は、連邦規則集（ＣＦＲ）１２７１サブパートＤ「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｇｏｏｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ」に基づいて無菌処理される。
[00207] バッチ記録の再調査およびＱＣ試験後、組織は、製造からリリースされ、移植のために外科チームに提供され、組織は、以前に記載されるように、レシピエントに外科的に移植される。
[00208] 培養胸腺組織は、以下および本明細書で説明される実施例においてより完全に記載されるプロセスで産生される。
[00209] 要約すると、採取された胸腺組織の培養プロセスは、ドナー組織およびその中に含有される構成細胞の生物学的特性を次の方法で大幅に変性する：ドナー胸腺細胞の喪失ならびに胸腺上皮細胞および他の間質細胞の濃縮、ならびにドナー胸腺細胞の枯渇は、組織の生理学的機能（例えば、サイトカインおよび成長因子の分泌）およびその構造特性を変性する。
[00210] 培養における最初の数日中、多くの胸腺細胞は、組織切片から培養培地に「溢れ」、培地交換中に廃棄される。
[00211] 製造プロセス中に行われる操作は、ドナーから得られる供給源または出発材料と比較して、最終産物に含有される結果として得られる細胞の全体的および組織学的な外観の変化をもたらす。
[00212] 培養の最初の数日中の胸腺組織は、組織上および組織内の残留血液により赤く見える。例えば、図１５を参照されたい。
[00213] ５〜９日目に生存可能組織が観察され、１日目に明らかであった血液汚染が除外される。
[00214] 培養の残りの日数中、胸腺細胞が枯渇するにつれて組織の深度が減少する。組織における胸腺細胞の密度の減少は、免疫組織化学によって文書化され、以下で詳細に記載される。
[00215] 廃棄された胸腺組織の採取後０日目に、組織は、胸腺上皮細胞および線維芽細胞を含有する間質に埋め込まれた生存可能な胸腺細胞で密集する。ＡＥ１／ＡＥ３およびＣＫ１４染色は、正常胸腺に特徴的である、サイトケラチン（ＣＫ）陽性胸腺上皮細胞の存在を確認する。胸腺上皮細胞は、隣接する胸腺細胞を取り囲む繊細なプロセスでレース状三次元網を形成する。
[00216] 培養プロセス中、以下に記載されるように、胸腺の切片が培養される。多数の胸腺細胞は、特に最初の３日にわたって、組織から洗い流される。この枯渇は、特に髄質領域において、低下した胸腺細胞密度を示すＨ＆Ｅ染色によって、２日目には組織学的に特定することができる。組織に残る胸腺細胞の大部分は、アポトーシスおよび／もしくは壊死と一致する核変化を示すか、または核溶解（核の完全な喪失）を示す。これらの死滅胸腺細胞およびそれらの細胞残滓の多くは、胸腺組織全体に存在したままであり、上皮細胞間の空間の完全な崩壊を防止すると考えられる。
[00217] いくつかの上皮凝縮は、胸腺細胞の喪失が上皮細胞網を崩壊させた、被膜下皮質などの外部領域に見ることができる。これらの凝縮した被膜下皮質上皮細胞は、いくつかの細胞層の厚さの線形アレイを形成し、これは切片の機械的強度を増加させ得る。いくつかの髄質上皮はまた、凝縮して隣接した上皮細胞のパッチを形成し得る。
[00218] 培養が進むにつれて胸腺細胞の死滅が続き、組織内に壊死性胸腺細胞破片が保持される。髄質および被膜下皮質上皮のさらなる凝縮は、培養の約７〜１９日目に最小である。
[00219] 正常な胸腺に類似した上皮構造を有する領域は、ＡＥ１／ＡＥ３染色を使用して各胸腺について培養後期に依然として観察することができる。より長く培養された組織について、皮質および髄質の上皮構造は、依然として容易に識別することができ、例えば、ハッサル小体は、髄質領域に残る。しかしながら、胸腺細胞枯渇の程度は、１日目以降の時点での正常胸腺のそれと比較して、Ｈ＆Ｅでの実質的に異なる全体的な組織学的外観をもたらす。
胸腺組織の詳細な培養
[00220] 同種培養胸腺組織由来産物を調製する際の一般的な処置は、完全型ディジョージ症候群を有する乳児の胸腺組織が、以前に記載されるように、心臓手術を受ける９か月齢未満の乳児からの廃棄組織として得られることである。固形臓器移植について、廃棄された胸腺は、５０歳までの個体から得られるであろう。胸腺組織の使用は、本明細書に記載される使用の基準を満たすかに依存するであろう。
[00221] 胸腺組織は、部分的にＴ細胞が枯渇した胸腺組織切片を産生するために、無菌処理され、ｃＧＭＰ条件下で培養される。
[00222] 培養胸腺組織（ＣＴＴ）の製造は、以下の一般的なステップからなる：入ってくる胸腺組織の受理および処理、切片化、培養、培地交換、用量計算、包装、胸腺の手術室への輸送。加えて、入ってくる胸腺組織は、受容性について試験され、インプロセスおよびリリース試験は、胸腺組織切片で行われる。
[00223] 一実施形態では、胸腺組織切片化プロセスは、無菌の使い捨てハサミおよび鉗子を使用して、胸腺組織の一片を切り離すことを伴う。手術者は、鉗子およびハサミで胸腺のカプセルを除去し、カプセルを後で廃棄するためにプレートの蓋に置く。
[00224] 胸腺組織の一片は、鉗子を使用して使い捨て組織スライサーに配置される。スライサー（例えば、Ｓｔａｄｉｅ−Ｒｉｇｇｓハンドミクロトーム（Ｔｈｏｍａｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓｗｅｄｅｓｂｏｒｏ，ＮＪ））の上部は、スライサーの中央部分上に配置され、所定の位置に固定される。手術者は、ブレードを組織片に通して切片を切り離す。切片は、約０．５〜１ｍｍ厚である。各切片を切断した後、スライサーの上部は除去され、組織切片は予め湿らせた無菌Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅフィルター上に鉗子を使用して移される。フィルターは、ＴＯＭで予め湿らせる。フィルター空間の約５０〜９０％は、組織切片の重複なしに充填される。
[00225] 典型的には、３つのインプロセス片は、切片化の開始時に組織から切り離され、その全ては約３ｘ３ｍｍである。１つは組織学に送られ、２つは保持される。胸腺が切片化されると、胸腺細胞が培地に自由に流れ込む。
[00226] 一実施形態では、フィルターおよび胸腺切片は、組織培養皿におけるＴＯＭで飽和されたゼラチン外科用スポンジに移される。スポンジ毎に２つのフィルターが配置され、組織培養皿毎に２つのスポンジが使用される。胸腺切片化プロセスは、必要な数の切片が調製されるまで繰り返される。培養皿は、手術番号、皿番号、およびＩＳＢＴバーコードラベルで標識される。完成した皿は、３７℃で、５％ＣＯ２を含む加湿インキュベーターに配置される。
[00227] 組織操作原薬は、以下に記載されるように、培地において培養皿に配置され、１２〜２１日間培養された後の胸腺組織切片を含む。組織操作製剤は、製剤容器への移動後の胸腺組織切片を含む。原薬から製剤を作製するために他の処理は行われず、製剤を作製するための原薬の唯一の処理は、漏れ防止容器への切片の移動および対応する培地交換である。
[00228] 胸腺組織切片の培養は、以下の段落においてより具体的に記載される。
[00229] 一実施形態では、胸腺組織は、手術室から、９か月齢で心臓手術を受ける乳児からの廃棄組織として得られる。組織は、次いで、外科チームによってスクリューキャップトップ付きの無菌検体カップに配置され、処理のために周囲条件下でＧＭＰ施設に輸送される。胸腺が受容される無菌検体容器は、バーコードを含み、ドナーの名前および医療記録番号で標識される。ドナースクリーニング群は、胸腺に固有の識別子（胸腺は連続して付番される）および固有の医療記録番号を与える。製造について、各組織は、手術番号、および固有のラベルを有する。全ての識別子は、バッチ記録とは別に維持され、機密が保持される、「機密胸腺ドナーフォーム」に記録される。
[00230] 一実施形態では、原薬容器密閉システムは、蓋付きの細胞培養皿であり得る。胸腺組織の１つの切片は、フィルター上に配置され、２つのフィルターは、皿における胸腺臓器培地中の各ゼラチンスポンジ上に配置される。４つの切片は、各培養皿に配置され、皿は、インキュベーターにおいて保存され、リリースの準備ができるまで、毎日培地が交換される。
[00231] 一実施形態では、培養皿は、Ｃｏｒｎｉｎｇから入手することができる。皿は、無菌、非発熱性Ｆａｌｃｏｎ（登録商標）１００ｍｍポリスチレン細胞培養皿（製品＃３５３００３）であり得る。皿は、真空ガスプラズマ処理によって浄化され、ガンマ線照射によって無菌化される。皿の寸法は、８９．４３ｍｍＯ．Ｄ．ｘ１９．１８ｍｍである。
[00232] 例示的な実施形態では、Ｓｕｒｇｉｆｏａｍ（登録商標）スポンジは、Ｅｔｈｉｃｏｎによって製造され得、それは、吸収性ゼラチンスポンジ、ＵＳＰの要件を満たす。適切なスポンジは、止血用途が意図される、無菌、水不溶性、可鍛性ブタゼラチン吸収性スポンジである。混合セルロースエステルフィルターの実例は、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅによって製造される（製品番号＃ＳＭＷＰ ０２５００）。２５ｍｍ親水性膜は、５．０μｍ孔径を有する。これは、酢酸セルロースおよび硝酸セルロースの生物学的に不活性な混合物でできている。フィルターは、使用前に酸化エチレンによって無菌化される。
[00233] ドナー胸腺の処理実験室へのリリースおよび受容後、胸腺は、薄切片に切断され、これは、無菌培養皿における外科用スポンジ上に置かれる無菌フィルターペーパー上に配置される。組織が直ちに処理されない場合は、以下に記載されるように、胸腺臓器培地（ＴＯＭ）に、２〜８℃で、処理が開始される前にドナーからの採取後、最大２４時間保存される。ＴＯＭは、ハムのＦ−１２培地、ＨＥＰＥＳバッファー、Ｌ−グルタミン、および熱不活化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）からなる。
[00234] 一実施形態では、処理は、ＩＳＯ７製造クリーンルームにおける生物学的安全キャビネット（ＢＳＣ）のＩＳＯ５空間で行われる。単一胸腺からの胸腺組織の１ロットのみは、いつでもＢＳＣにおいて処理される。ＢＳＣは、使用前に浄化される。胸腺は、外観について目視検査によって試験され、計量される。胸腺は、次いでＴＯＭにおける１５０ｍｍ組織培養皿に配置される。胸腺のカプセルは、無菌の使い捨て鉗子およびハサミで除去される。組織片は、試験のために保持された試料として取得される。入ってくる胸腺組織は、組織学によって同一性について試験される。ドナー適格性も確認される。組織学的結果および全てのドナースクリーニング結果の受け取り前に、処理を継続する。
[00235] ドナースクリーニングの受容基準は、全てのドナー適格性要件が満たされなければならないことである。胸腺組織移植レシピエントの安全を保護するために、２１ ＣＦＲ １２７１に従ってドナースクリーニングが必要である。このスクリーニングは、ドナーからレシピエントへの感染症伝播のリスクを最小限にする。
[00236] 無菌の使い捨てハサミおよび鉗子を使用して、組織の一片が切り離される。組織の一片は、鉗子を使用して使い捨て組織スライサーに配置される。以前に記載されるように、スライサーの上部は、スライサーの中央部分上に配置され、所定の位置に固定される。手術者は、ブレードを組織片に通して切片を切り離す。切片は、約０．５〜１ｍｍ厚である。各切片を切断した後、スライサーの上部は除去され、組織切片は予め湿らせた無菌Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（登録商標）フィルター上に鉗子を使用して移される。フィルターは、ＴＯＭで予め湿らせる。フィルター空間の約５０〜９０％は、組織切片の重複なしに充填される。フィルターおよび胸腺切片は、組織培養皿におけるＴＯＭで飽和されたゼラチン外科用スポンジに移される。
胸腺臓器培地（ＴＯＭ）
[00237] 培地は、そのような試薬が利用可能な場合はいつでも、アレルギー反応を引き起こす可能性が低い、ヒトでの使用が承認された成分で作製される。
[00238] 任意の問題が発生する場合、全ての成分を移植後に特定することができるように、全ての試薬は追跡されなければならない。
[00239] ウシ胎児血清（ＦＢＳ）は、クロイツフェルト・ヤコブ病の懸念のため、ＵＳ材料を使用して製造されなければならない。各ロットについての情報は、使用前にＦＤＡに送られなければならない。
[00240] 正常な成人は、ＦＢＳに対する天然抗体（ガラクトース−アルファ−１、３ガラクトース（Ｇａｌ−α−１−３Ｇａｌ）に対する抗体）を有するが、これは、ＩｇＭ同種赤血球凝集素として試験され、ディジョージ症候群を有する免疫不全小児は、これらの抗体４．４を有さない。（Ｐａｒｋｅｒ Ｗ，Ｙｕ ＰＢ，Ｈｏｌｚｋｎｅｃｈｔ ＺＥ，Ｌｕｎｄｂｅｒｇ Ｋ，Ｂｕｃｋｌｅｙ ＲＨ，Ｐｌａｔｔ ＪＬ．，１９９７，“Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ’ｎａｔｕｒａｌ’ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｓｕｂｊｅｃｔｓ：Ｃｌｕｅｓ ｔｏ Ｂ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅａｇｅ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，”Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：３１１−３２１）。
[00241] 培地は、使用前に細菌、真菌、およびマイコプラズマ汚染について試験されなければならない。
[00242] 一実施形態では、ＴＯＭを調製するために以下の材料が使用される：
[00243] ＨＡＭＳ Ｆ１２、Ｇｉｂｃｏ＃１１７６５−０５４（またはケース１１７６５−０６２）、５００ ｍｌボトルまたは同等の供給源。
[00244] ＨＥＰＥＳ、Ｇｉｂｃｏ＃１５６３０−０８０または同等物、１Ｍ溶液、１００ｍｌボトル。最終濃度２５ｍＭ。
[00245] Ｌ−グルタミン、Ｇｉｂｃｏ＃２５０３０−０８１または同等の供給源、（ストック２００ｍＭ）。
[00246] 胎児ウシ血清、Ｇｉｂｃｏ、＃１６１４０（熱不活化）または＃１００８２−１４７（熱不活化、認定）。
[00247] 一実施形態では、ＨＩであるＦＢＳは、以下の方法で使用され得る。
[00248] ＦＢＳは、５６℃で３０分間熱不活性化されなければならない。
[00249] 培地の汚染の可能性を減少させるために、培地はアリコートに分けられなければならず、アリコートは複数回使用されるべきではない。
[00250] 残りのＦＢＳのアリコートは、研究使用のための２５ｍｌアリコートで冷凍保存（−２０℃）され得る。
[00251] 一実施形態では、ＴＯＭは、以下の方法で調製され得る。
[00252] ウシ胎児血清を一晩冷蔵庫で、または３７℃で頻繁に穏やかに渦を巻かせながら解凍する。
[00253] 非熱不活化ウシ胎児血清が使用される場合、５６℃で３０分間熱不活性化する。
[00254] 一度に４リットルを作製する場合、全ての培地成分を一緒に４リットルのフラスコに入れ、中程度の速度（泡立てない）で磁気撹拌プレート上で撹拌棒で３〜５分間撹拌する。
[00255] ０．２ミクロンフィルターユニットを使用して無菌化する。
[00256] 一実施形態では、ＴＯＭ調製物の無菌化は、以下の方法で行われ得る。１リットルのＴＯＭを１リットルのフラスコに分注する。使い捨ての無菌シリンダーで８０ｍｌのＴＯＭを測定する。８０ｍｌのＴＯＭを１５０ｍｌのＣｏｒｎｉｎｇフィルター無菌化ユニットに注ぐ。製造業者の指示に従って、家庭用バキュームを取り付けて、濾過および濾過無菌化する。容器からフィルターユニットを除去し、廃棄する。収集ボトルに無菌キャップ（ユニットで提供される）で栓をする。ＴＯＭロット番号で標識する。１つのアリコートを、嫌気性細菌での細菌培養；真菌培養、その他；およびマイコプラズマ培養について試験する。１つのアリコートをエンドトキシンについて試験する。全てのＴＯＭアリコートを−２０℃の冷凍庫に直立して保存する。
[00257] ＴＯＭ培地は、ＬＡＬ結果が、試験のために２０倍に希釈された試料について２ＥＵ／ｍｌ以下、または試験のために１０倍に希釈された試料について１ＥＵ／ｍｌ以下でなければならない場合、全ての培養結果が、成長について陰性でなければならない場合、使用のためにリリースされ得る。
[00258] 培地を濾過および分注するためにＢＳＣが使用されなければならない。
[00259] ＴＯＭは、リリース前に無菌性およびエンドトキシンについて試験される。ＴＯＭは、１４日の無菌性試験の受容基準が満たされるまで、ドナー胸腺を培養するためにリリースされない。調製されると、ＴＯＭは、解凍されるまで−２０℃で保存され、その時点で、冷蔵庫において最大２週間、使用のために保存され得る。
[00260] 一実施形態では、１４日の無菌性試験は、例えば、ＢａｃＴ／ＡＬＥＲＴ培養システムを使用して行われ得る。ＢａｃＴ／ＡＬＥＲＴ（ＢｉｏＭｅｒｉｅｕｘ、Ｄｕｒｈａｍ、ＮＣ）は、自動化微生物検出システムを使用して試料を試験するために使用することができる市販の培養システムである。
[00261] 全てのインプロセス培養および原薬培養は、１４日間インキュベートされるか、または産物が陽性になる場合は直ちに報告される。陽性試験について、生物（複数可）が特定され、それらの抗生物質感受性が決定される。好気性成長のための培地を含有する培養ボトルおよび嫌気性成長のための培地を含有するボトルは、１日目、７日目、およびリリースの日に試験される試料が接種される。全てのボトルは、３５〜３７℃で１４日間インキュベートされる。
[00262] ＦＢＳは、ＧＩＢＣＯブランド、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手され得る。ＦＢＳは、無菌で検証済みのプロセスによって調製される。ＦＢＳは、食肉処理場で調達された動物、追跡可能性、および原産国に関するＵＳＤＡ要件を満たす。全ての胎児血液は、屠殺前および後の認定された獣医の検査に合格した健康な母動物に由来する胎児から収集される。全てのＦＢＳは、収集の日付および場所によって追跡可能である。米国において収集および処理されるＦＢＳは、ＵＳＤＡが承認および検査した屠殺施設からのものである。米国は、ＵＳＤＡによって、口蹄疫および牛疫がないと認識される。供給業者を認定するために、ＦＢＳは、使用前にｐＨ、浸透圧、エンドトキシン、総タンパク質、および同一性について試験される。
[00263] 完成した皿は、３７℃で、５％ＣＯ２を含む加湿インキュベーターに配置される。胸腺組織の各ロットは、別々のインキュベーターに保存される。胸腺切片がインキュベーターに配置された後、粒子サンプリングおよび作業員モニタリングが行われる。
[00264] 胸腺切片は最大２１日間培養され、培養中、培地は毎日交換される。これらの胸腺切片は、原薬とみなされる。培養期間中、多くの胸腺細胞は、胸腺細胞切片から洗い流されるか、または胸腺細胞は、胸腺間質を保存しながらアポトーシスを受ける。全ての製造ステップは、無菌の使い捨て機器および消耗品を使用して行われる。培地は、培養皿からピペットで吸引され、インプロセス試験のために無菌収集容器にプールされる。１０ｍＬの新鮮な胸腺臓器培地は次いで、組織切片上ですすぎながら各培養皿に穏やかに分注される。培地交換が完了した後、試料は、必要に応じて、無菌性および組織学のためにプールされた培地から得られる。粒子サンプリングおよび作業者モニタリングが完了し、ラインクリアランスが行われる。
[00265] 培地は、毎日交換される。
[00266] 切片は、最大２１日間培養される。
[00267] インプロセス試験は、プロセスおよび産物の品質に関する洞察を提供し、最終的な製剤の安全性および品質の確保に役立てるために行われる。
インプロセス試験
[00268] 試料は、１日目〜７日目に無菌性インプロセス試験のために収集される。試料は、７日目にマイコプラズマインプロセス試験のために収集される。試料は、５〜９日目にインプロセス組織学試験のために収集される。用量は、リリースの前日に決定される。グラム染色、ＢａｃＴ、マイコプラズマ、およびエンドトキシンは、リリースの日に試験される。
[00269] グラム染色は、細菌種をグラム陽性菌およびグラム陰性菌の２つの群に区別するために使用される細菌学的実験技法である。グラム染色は、培養皿からプールされた使用済み培養培地で試験される。方法は、染色技法を使用して、細胞壁の物理的特性に基づいて分類を決定する。この方法は、予備的な形態学的同定を行うため、または臨床検体に有意な数の細菌が存在するかを確立するために使用される。染色は、手動または自動染色機使用のいずれかで行われる。２つの異なる染色方法は、培養結果に影響を与える定性的な相違を示さなかったことが示されている。
[00270] ５〜９日目に行われる組織学試験は、（１）ケラチンＡＥ１／ＡＥ３について陽性の領域が５〜９日目に組織全体に散在するという決定、（２）少なくとも１つのハッサル小体が顕微鏡で特定されること、（３）組織切片のＣＫ１４染色が胸腺組織全体に散在すること、および（４）インタクトな核が顕微鏡で観察されることを含む。
[00271] ハッサル小体およびインタクトな核の存在、ならびに成功したＣＫ１４染色は、培養された正常な健康な胸腺組織を示す。
[00272] 培養時間は、重要なプロセスパラメータである。述べられたように、培養は、最大２１日間行われる。
[00273] 培養における５、９、１２、および２１日目の胸腺試料の試験は、培養における５〜９日目に生成される組織学結果が、培養における１２〜２１日目に生成される組織学試験結果を表すかを確認するために行われる。実施例において考察される試料について病理学者によって行われる観察に基づいて、５日目の組織切片の組織学的外観は、その後の時点（９、１２、および２１日）の各々で観察されるものを反映する。これは、５〜９日目にリリース試験を行うことを裏付ける。
[00274] 任意の１つの切片の組織学的検査は、ロット全体の受容性に関する結論を裏付ける。胸腺からの任意の１つの切片の関連する特性は、胸腺全体の特性を反映し、組織学試験のために組織の単一の切片の継続的な使用を支持する。
[00275] 図１２Ａおよび１２Ｂに示されるように示される強制分解試験は、培養胸腺組織産物が容易に分解されず、浸透圧の変化と同様に凍結／解凍に最も感受性であることを示した。強制分解中に試験される他の条件は、培養胸腺組織産物にほとんどまたはまったく効果を示さなかった。
培養胸腺産物原薬の制御
[00276] 入ってくる胸腺組織産物の受容基準は、以下の表１で特定される試験を含む。
Figure 2021516224
[00277] 略語：ＣＫ、サイトケラチン、ＥＵ、エンドトキシンユニット、ＵＳＰ、米国薬局方。胸腺組織は、全てのドナースクリーニング結果を得る前に処理される。
[00278] 一般に、重量の受容基準は、３グラム以上である。これは、最終産物の適切な投与のために十分な材料が利用可能であることを保証するために受容される最小の胸腺重量である。受容基準は、胸腺組織の処理経験に基づく。
[00279] インプロセス試験の受容基準は、以下の表２に特定される。
Figure 2021516224
[00280] 培養胸腺組織原薬試験の受容基準は、以下の表３に特定される。
Figure 2021516224
[00281] 同一性の受容基準は、胸腺組織同一性が１日目および中間点（５〜９日目）に組織学によって確認されることである。処理中の組織の追跡にはバーコードが使用され、産物の正しい同一性を検証するためにリリース時にバーコードが確認される。
免疫化学による組織学
[00282] 組織学方法は、当業者によって知られるように、全ての組織タイプについて病院によって使用される標準的な方法である。
[00283] 産物の試料は、１０％ホルマリンで固定され、実験室に輸送される。容器は、医療記録番号に沿って、患者のプライバシーを保護するために患者名の代わりにコード化された識別子で標識される。病理に到着後、検体は、固有の病理アクセッション番号が割り当てられ、バーコード化される。その後のブロック、スライド、および書類は全て、この病理アクセッション番号でバーコード化される。
[00284] 検体が実験室で受け取られた後、ホルマリン固定組織は、全体的に検査され、最終報告の一部となる材料の書面による全体的な説明が準備される。ホルマリン固定組織は、自動処理機で標準的な方法論によって処理され、パラフィンブロックに埋め込まれる。切片がパラフィンブロックから切り取られ、以下の染色がＡＳＣＰ認定組織学技師によって行われる。
[00285] ヘマトキシリン＆エオジン。
[00286] サイトケラチンＡＥ１／ＡＥ３免疫組織化学。
[00287] サイトケラチン１４免疫組織化学。
[00288] ＣＤ３免疫組織化学。
[00289] Ｋｉ−６７免疫組織化学。
[00290] 前述の免疫組織化学試験の実施中に、適切な対照スライドも試験および再調査される。全ての対照スライドおよび内部対照は、予想される免疫反応パターンを示す。入ってくる胸腺試料はまた、試料が有効性試験の一部として試験される場合、５〜９日間培養されている組織切片の対照として機能する。入ってくる胸腺試料は、典型的な胸腺試料として表れ、次いで培養中に組織切片に変化が生じた後、培養における５〜９日後に試験される。培養における５〜９日後、試料は、組織全体に散在するケラチンＡＥ１／ＡＥ３について陽性の領域、少なくとも１つのハッサル小体の存在、組織全体に散在するＣＫ１４染色、およびインタクトな核の存在を示す。
[00291] スライドは、胸腺組織の組織学的評価において追加の経験を有する、解剖病理学において認定された病理学者によって解釈される。最終報告は病理学者によって発行され、報告は結果を文書化する。
[00292] 培養胸腺組織原薬試験の受容基準は、以下の表４に特定される。
Figure 2021516224
[00293] 培養胸腺組織は、無微生物でなければならない。１日目および７日目に行われる無菌性試験では、微生物の成長がないべきである。マイコプラズマは、７日目の試験で陰性であるべきである。無菌性試験は、グラム染色陰性であるべきである。
[00294] 産物無菌性は、トレーニングプログラムを使用し、手術者の資格を検証する；適切なクリーンルーム認定手順を利用する；確立された清浄培地充填手順を使用し、すぐに使用できる無菌化装置または検証済みの無菌化サイクルを使用して無菌化された装置を利用する、無菌技法を含む適切な管理を使用して維持される。
[00295] 処理された胸腺組織の容器は、損傷について目視検査される。組織切片は通常、変動する厚さおよび形状を有する黄色〜赤褐色の外観を示す。
[00296] 胸腺組織同一性は、１日目および中間点（５〜９日目）に組織学によって確認される。
[00297] 処理中の組織の追跡にはバーコードが使用され、リリース時にバーコードが確認される。
[00298] 投与量（面積）は、胸腺組織の１，０００〜２０，０００ｍｍ２／１ｍ２のレシピエント体表面積である。用量は、患者の体表面積に適した、手術室にリリースされる切片の表面積によって制御される。
[00299] 許容される用量範囲は、１ｍ２のレシピエント体表面積（ＢＳＡ）あたり１，０００〜２０，０００ｍｍ２の胸腺組織と定義される。胸腺組織の面積は、ソフトウェア分析（ＰＡＸ−ｉｔ画像分析ソフトウェア）を使用して写真によって決定される。ＢＳＡは、患者の身長ｃｍおよび体重ｋｇを使用して決定される。ＢＳＡを計算するためにＤｕＢｏｉｓおよびＤｕＢｏｉｓ式が使用される。
[00300] ＢＳＡ＝０．００７１８４×［身長（ｃｍ）］０．７２５×［体重（ｋｇ）］０．４２５。
[00301] 培養胸腺組織は、エンドトキシンについて試験される。仕様は、≦５ＥＵ／ｋｇ体重／時間である。
[00302] エンドトキシン試験は、例えば、Ｅｎｄｏｓａｆｅ ＰＴＳシステムを使用することによって行われ得る。Ｅｎｄｏｓａｆｅ ＰＴＳ内で使用されるカートリッジは、発色速度論的Ｌｉｍｕｌｕｓ Ａｍｅｂｏｃｙｔｅ Ｌｙｓａｔｅ（ＬＡＬ）試験を使用する。各カートリッジは、正確な量のＬＡＬ試薬、発色基質、および対照標準エンドトキシンを含有する。試験試料は、４つの試料リザーバーにピペットで移される。機器は、試料を吸引し、２つのチャネル（試料チャネル）におけるＬＡＬ試薬と、他の２つのチャネル（スパイクチャネル）におけるＬＡＬ試薬および陽性産物対照と混合する。試料は、インキュベートされ、次いで発色基質と組み合わされる。混合後、ウェルの光学密度が測定され、機器においてアーカイブされた標準曲線と比較される。機器は、各チャネルにおける反応時間を測定する。カートリッジの各バッチに特異的なアーカイブされた標準曲線は、エンドトキシン標準濃度のログに対する反応時間のログを使用して構成される。試料およびスパイク値は、反応時間を使用する標準曲線からの補間によって計算される。この試験は、米国薬局方（ＵＳＰ）の要件を満たす。
[00303] マイコプラズマの試験は、以下の方法で行われ得る。プールされた培地の試料は、７日目にプレートから取り出され、産物リリース前に試験される。
[00304] 製造中の陽性培養物の場合、ロットは廃棄され、投与されない。臨床産物投与後の陽性培養物の場合、患者の主治医および試験依頼者は、患者を適切に治療する。陽性培養物は、汚染生物の種が特定され、その抗生物質感受性が決定されることを必要とする。主治医は、示される場合、胸腺レシピエントの抗生物質療法を開始する。
[00305] 製剤は、使用前に同様の目視検査および組織学試験を受ける。
[00306] 胸腺組織切片が最大２１日間培養された後、切片は、手術室への輸送のために製剤容器に移される。手術室に受け取られると、切片は、レシピエント患者の大腿筋に挿入される。
[00307] 容器は、目に見える損傷なしにインタクトであるべきであり、胸腺組織切片は、変動する厚さおよび形状を有する黄色〜赤褐色の組織切片として現れるべきである。組織切片は、これらの受容基準が満たされることを確認するために視覚的に検査される。
同種培養生後胸腺組織由来産物の凍結保存および解凍
[00308] 同種培養生後胸腺組織由来産物の凍結保存は、以下の方法で行われ得る。
[00309]
[00310] （ａ）ドナーから適切な胸腺組織を得るステップと、
[00311] （ｂ）ＨＬＡ対立遺伝子：ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＲＢ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５、ＨＬＡ−ＤＱＡ１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１、ＨＬＡ−ＤＰＡ１をタイピングするステップと、
[00312] （ｃ）胸腺組織を、最大１２日の期間コンディショニングレジメンに供するステップであって、ドナー胸腺組織のための前記コンディショニングレジメンが、胸腺臓器培地においてドナー胸腺組織を無菌で処理して、部分的にＴ細胞が枯渇したドナー胸腺組織片を産生することを含み、さらに、ドナー胸腺組織片が、５〜９日目に、組織全体に散在したケラチンＡＥ１／ＡＥ３について陽性の領域、少なくとも１つのハッサル小体の存在、組織全体に散在したＣＫ１４染色、およびコンディショニングレジメンの完了時にインタクトな核の存在を示す、ステップと、
[00313] （ｄ）部分的にＴ細胞が枯渇したドナー胸腺組織片を同種培養生後胸腺組織由来産物として採取するステップと、
[00314] （ｅ）同種培養生後胸腺組織由来産物を液体窒素中で凍結保存するステップと、
[00315] （ｆ）凍結保存された同種培養生後胸腺組織由来産物を凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物バンクにおいて液体窒素中で維持するステップと、を含む、方法によって調製される、凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物である。一実施形態では、胸腺が、採取日に、領域の５０％超がレース状染色パターンでケラチンについて陽性であること、ハッサル小体が存在すること、ＣＫ１４がレース状パターンで染色すること、および核の９０％超がインタクトであることを示す、請求項６６に記載の凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物。
[00316] 一実施形態では、ドナー胸腺は、切片化され、大まかに２つの等しい部分に分割され、各切片をそのセルロースフィルターと共に別個のクライオバイアル（Ｎｕｎｃチューブ）に入れる。フィルターは、半分に折り畳まれて、チューブに挿入される。組織を覆うために、室温の約１〜約１．５ｍｌの凍結培地［無菌濾過された９０％熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）および１０％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）］が添加される。クライオバイアルの無菌キャップがチューブで取り替えられる。全てのチューブを室温のＢｉｏｃｉｓｉｏｎ Ｃｏｏｌ Ｃｅｌｌまたは同等の容器に入れる。ＣｏｏｌＣｅｌｌにおけるいずれの空のスロットも、１ｍｌの凍結培地を有するチューブで充填されるべきである。チューブは、一晩−８０℃冷凍庫に配置される。あるいは、各組織およびフィルターを５ｍｌのＣｒｙｏＥＬＩＴＥ組織バイアル（Ｗｈｅａｔｏｎ）に配置する。組織を覆うために、室温の３〜５ｍｌの凍結培地を入れる。発泡スチロール箱に入れ、−８０℃冷凍庫に一晩入れる。バイアルは次いで、液体窒素冷凍庫の気相に移される。あるいは、制御された速度の冷凍庫を使用して、クライオバイアルの温度を液体窒素温度にすることができる。
[00317] 組織を回収するために、液体窒素冷凍庫からクライオバイアルまたはＣｒｙｏＥＬＩＴＥ組織バイアルを取り出す。３７℃水浴における渦巻く動きでバイアル中の胸腺片を急速に解凍する。チューブは、７０％エタノールを噴霧され、次いで生物学的安全キャビネット（ＢＳＣ）に配置される。胸腺組織およびフィルターは、鉗子を使用して、ＮｕｎｃクライオバイアルまたはＣｒｙｏＥＬＩＴＥ組織バイアルのいずれかから除去される。組織およびフィルターは、２０ｍｌの４℃のＴＯＭを含有する５０ｍｌコニカルチューブに配置される。最大５つのフィルターは、２０ｍｌの４℃のＴＯＭを含有する各５０ｍｌコニカルチューブに配置することができる。５つのフィルターを組織と共に、２０ｍｌの４℃のＴＯＭ培地を有する新しいコニカルチューブに直ちに移し、４℃で１５分間置く。洗浄を３回繰り返す。組織を４℃で維持して、各片を、５ｍｌの４℃のＴＯＭを有するその独自の１２０ｍｌのＳｔａｒｐｌｅｘ容器に移す。全ての容器は、その中に保冷パックを有する温度制御された容器で手術室に運ばれる。組織を有するＳｔａｒｐｌｅｘ容器は、手術室に運ばれる。フィルター上の組織は、無菌フィールドに移され、約２ｍｌの無菌生理食塩水を含む組織培養皿に移される。手術室看護師は、鉗子でこするか、または引っ張ることによって、フィルターペーパーから組織を除去する。手術室看護師は、組織を、不定形に重ねて、フィルターペーパー上に戻す。約４つのフィルターおよび組織を有する組織培養皿は手術部位に移され、外科医が組織に簡単にアクセスすることができるる。組織は、ＣＴＴ（ＲＶＴ−８０２）での手順と同様に、大腿四頭筋に配置される。Ｃｒｙｏ−ＣＴＴは、部分的にＴ細胞が枯渇し、胸腺組織切片が組織全体に散在したケラチンＡＥ１／ＡＥ３について陽性の領域を示し、切片が少なくとも１つのハッサル小体を含有し、ＣＫ１４染色が組織全体に散在し、およびインタクトな核が存在する点で、ＣＴＴに似ている。
ＣＴＴの移植
[00318] 一実施形態では、ドナーからの不適合胸腺組織切片は、１２〜２１日間培養される。固形臓器移植の日に、ステロイドは、通常、麻酔の誘導時に与えられる。心臓または肺移植について、レシピエントの胸腺は、固形臓器移植時に外科的に除去される。他の臓器移植について、胸腺摘出は、移植の前日またはその日に行われ得る。胸腺摘出方法は、外科的、胸腔鏡、またはロボットによるものである。再灌流後の手術の終わりに、レシピエントは、レシピエントにおける残存Ｔ細胞（およびＮＫ細胞）のほとんどを殺滅するために３〜７日かけてウマ抗胸腺細胞グロブリン（例えば、ウサギ抗胸腺細胞グロブリン）を受ける前により多くのステロイド、またはＴ、Ｂ、およびＮＫ細胞を殺滅するために４日かけてアレムツズマブが与えられる。免疫抑制剤（シクロスポリンまたはタクロリムスなど）およびミコフェニレートの投与は、Ｔ細胞が発生し、１０％超のナイーブＴ細胞を示すまで開始される。ナイーブＴ細胞がこの数まで増加するには６〜１２か月かかり得る。培養胸腺組織は、固形臓器のドナーの胸腺のために処理される。ＣＴＴの半分は、１２〜２１日に四頭筋に移植することができる。胸腺の他の半分は、レシピエントのその後の使用のために凍結保存されるであろう。免疫抑制レジメンは、ナイーブＴ細胞がレシピエントに移植された培養胸腺組織切片によって放出され、レシピエントが維持免疫抑制レジメンからの離脱の基準を満たすまで、いずれの残りのＴ細胞も抑制するであろう。（免疫抑制を離脱するために１０％超のナイーブＴ細胞が必要である。）
胸腺摘出プロトコル
[00319] 患者は、手術室に運ばれ、気管内チューブによって全身麻酔下に置かれる。
[00320] 胸部および腹部は、無菌状態で準備され、ドレープがかけられる。
[00321] 患者は、約４ｃｍの皮膚切開を通して完全な胸骨切開を受ける。
[00322] 両方の胸膜腔は、完全な切除を保証するために侵入される。
[00323] 横隔神経が両側で視覚化され、それらを傷つけないように注意が払われる。
[00324] 胸腺は、特定され、下角で開始して上角まで延在する、肺の胸膜被膜から慎重に解剖される。
[00325] 完全胸腺摘出が行われる。
[00326] 止血は、縦隔内で達成される。
[00327] 胸部チューブ配置。１つの胸部チューブは、常に（縦隔に）挿入される。単一の胸膜腔が手術中に侵入される場合、胸部チューブは、縦隔からその胸膜腔へと継続される。両方の胸膜腔が侵入される場合、縦隔から他の胸膜腔まで同様の方法で第２の胸部チューブが使用される。
[00328] ドレーンサイズ。＃１５ Ｂｌａｋｅドレーンは、２歳までの乳児に使用される。＃１９ Ｂｌａｋｅドレーンは、２歳以上の小児に使用される。
[00329] 胸骨閉鎖：新生児または乳児では、胸骨を閉鎖するために０−Ｔｉｃｒｏｎ縫合糸が使用される。約１〜２歳では、＃１胸骨ワイヤーが使用される。約２〜５歳では、＃４胸骨ワイヤーが使用される。
[00330] 筋膜、皮下組織、および皮膚は、連続吸収性縫合糸で閉鎖される。
[00331] 皮膚創傷ｖａｃは、胸骨上に配置される。
[00332] 患者は、手術室で抜管される。
[00333] スポンジ、器具、針カウントが行われ、症例の終わりに正確でなければならない。
同種培養生後胸腺組織由来産物の外科的移植。
[00334] 同種培養生後胸腺組織由来産物は、以下の指示に従って移植されるべきである。胸腺組織の大腿への移植は、健康な筋肉組織層を必要とする。
移植処置のための準備
[00335] 計画された移植同種培養生後胸腺組織由来産物の最大および最小投与量は、各個々の患者について計算されるべきである。投与前に意図されたレシピエントを正しく識別する。
[00336] 層流フード内の無菌条件下で、培地中の外科用スポンジ上にあるフィルターペーパー上の組織切片は、組織培養皿から取り出され、２０ｍｌ培地を含む１２０ｍｌ無菌カップに配置され、無菌性を維持するように包装され、手術室に送達されるか、または出荷用に包装される。組織切片は、使用する準備ができるまで、個々の容器から取り出されない。産物の有効期限が切れる日付および時間を確認する。
[00337] 同種培養生後胸腺組織由来産物（組織切片）は、常に厳格な無菌技法を使用して取り扱う。各容器を漏れまたは損傷の証拠について検査する。汚染の証拠がある場合は使用しない。滅菌野外で、同種培養生後胸腺組織由来産物容器を出荷箱から開梱する。ポリプロピレン容器を含有するラックを外袋から取り出す。準備ができたら、滅菌野の外側であるが、無菌準備テーブルに隣接するチームメンバーは、一度に１つずつ、各容器からキャップを開けて取り出す。次いで、各々の開いた容器は、滅菌野の外側で滅菌野に触れることなく滅菌野上に腕を伸ばすチームメンバーによって保持される。
[00338] 滅菌野チームメンバーは、一丁の鉗子を使用して、個々の組織切片をそのフィルターペーパーと共に容器から取り出し、無菌準備テーブル上の約２ｍｌの防腐剤フリー生理食塩水を含有する無菌組織培養皿に入れる。４つの容器から取り出されたフィルターペーパーを含む４つの組織切片は、滅菌野チームメンバーの前の滅菌野上にある１つの無菌組織培養皿に配置される。無菌鉗子を使用して、滅菌野チームメンバーは、次いで２対の鉗子を使用して組織切片をフィルターペーパーから剥がし、その一方はフィルターを所定の位置に保持し、他方は組織を引っ張るか、組織を重ねて廃棄する。各フィルターペーパーから取り出された組織は、そのフィルターペーパー上に、フィルターペーパーの中央で重ねて置かれる。無菌組織培養皿は、次いで滅菌野に移される。４つの同種培養生後胸腺組織由来産物容器の次のセットは次いで、外科医が最初の４つの切片を移植している間に、同じ方法で処理される。外科医が最初の４つの切片を移植し終えるとき、４つの組織片を有する次の皿は、手術野に置かれ、最初の組織培養皿は、４つの組織切片の第３のセットを装填するために滅菌野チームメンバーの前の滅菌野に戻される。全ての所望の組織が移植されるまで、このサイクルを継続する。手術室における空気からの汚染を回避するために、組織切片の全ては最初に移されない。
[00339]外科的処置
[00340]ステップ１．皮膚切開
全身麻酔の誘導後、大腿前部コンパートメントの１つにかけて縦皮膚切開を行う（典型的には長さ約５ｃｍ）。注記：切開のサイズおよび移植処置のための片方または両方の脚の使用は、患者のサイズ、計画された移植組織の量、および彼／彼女の筋肉量によって決定される。組織の全てまたは大部分を片脚に移植することができる場合、片脚のみが使用されるべきである。
[00341] ステップ２．筋膜を開いて前部コンパートメント筋肉を露出させる。
[00342]ステップ３．筋肉拡散および移植
[00343] 筋肉を、扁桃腺クランプまたは同様の器具を使用して、大腿四頭筋の自然な溝に沿って分離する。同種培養生後胸腺組織由来産物の個々の胸腺切片は、筋肉組織を切断せずに移植されるべきである。個々の組織切片を、自然な溝に沿って大腿四頭筋内の約１ｃｍ間隔で深さ約１ｃｍの「ポケット」に入れる。患者のサイズに応じて、外科医は、各溝に沿って６〜７個のポケットに約６〜７個の切片を配置し得る。個々の同種培養生後胸腺組織由来産物切片は、各フィルター上の組織の質量に応じて移植前に半分に切断され得る。フィルターペーパーを完全に覆っていた組織の厚切片は、各組織の最適な血管新生のために半分に切断されるべきである。各前部コンパートメント内の必要な量の組織を計画された最大用量まで移植する。
[00344]ステップ４．筋肉閉鎖
[00345] 筋肉が再び開き、移植片が筋肉から出るのを防止するために、筋肉を単一の縫合糸で胸腺組織が移植された部位にかけて閉鎖する。切開部を閉鎖する前に、移植組織が露出した胸腺組織を有さない筋肉組織によって完全に覆われることを確認する。
[00346] ステップ５．各同種培養生後胸腺組織由来産物組織切片についてステップ３〜４を意図された最大用量まで繰り返す。
[00347]ステップ６．切開部閉鎖
[00348] 止血を確認する。皮膚切開部を２層の吸収性縫合糸で閉鎖し、創傷閉鎖ストリップまたは皮膚接着剤などの標準的なドレッシングを適用する。筋コンパートメントが膨張する余地を与えるために、筋膜を開いたままにする。汚染を防止するために密封ドレッシングが使用され得る。
[00349]手術後の外科／医療管理
必要に応じて弱い鎮痛剤を使用する。感染または離開の兆候についてモニターする。
[00350] ドナーが、肺、腎臓、腸、または部分的な肝臓などの生体関連ドナーである場合、その固形臓器ドナーの胸腺の一部分は、培養および移植に適し得る。採取日および５〜９日目について以上に列挙される病理学基準が満たされる必要がある。
[00351] 凍結保存された培養胸腺組織は、第三者ドナーから入手可能であり得る。しかしながら、第三者ドナーは、固形臓器ドナーによって発現されない全てのレシピエントＨＬＡ対立遺伝子を発現しなければならない。これは、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＲＢ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ１、ＨＬＡ−ＤＱＡ１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１、ＨＬＡ−ＤＰＡ１を含む。ＨＬＡ−ＤＰ対立遺伝子における不適合は、不適合が「許容可能」であれる場合は受容される。他の対立遺伝子では、小さな不適合が受容され、例えば、ＨＬＡ−Ａ＊０１：０１を保有するレシピエントへのＨＬＡ−Ａ＊０１：０２、言い換えると、第２のフィールド（コロンの後）は異なり得、第１のフィールド（コロンの前）は同一でなければならない。
ヒト心臓移植処置
[00352] 対象の適格性は、現行の最大限の支持療法にもかかわらず心臓移植なしで１２〜２４か月の予後不良、ＵＮＯＳ基準によって定義される、成長障害を伴う先天性または後天性心疾患、医学的療法に対して抵抗性の先天性または後天性心疾患における進行性心不全の症状、異常な血行動態または増加する肺血管抵抗、手術不能の構造的心疾患、医薬品もしくはデバイス療法を受けることができない症候性不整脈、または低い運動耐性を含む、いくつかの基準に基づいて決定される。
[00353] 例えば、対象が心臓／腎臓移植の候補でない限り、可逆的な腎機能障害；心臓／肝臓移植の候補でない限り、不可逆的な肝疾患；対象が心肺移植の候補でない限り、不可逆的な肺機能障害、非従来型人工呼吸器サポート（すなわち、高周波人工呼吸器、ＣＭＶの最大設定）、もしくは固定肺高血圧症（ＴＰＧ＞１５）の使用；微小血管疾患を伴う糖尿病；または活動性の制御されていない発作性疾患を含む、心臓移植手術に対する多くの絶対的および相対的禁忌が評価される。
[00354] 他の禁忌は、心臓移植後の長期生存およびリハビリテーションを制限する他の疾患；薬物乱用、病的肥満、悪性腫瘍；活動性精神障害；ならびに文書化された医療ノンコンプライアンスなどの他の理由を含み得る。
[00355] 相対的禁忌は、活動性感染症；認知機能障害；不十分な血管アクセスおよび有意な同種感作を含む。
[00356] ドナーおよびレシピエント組織適合性管理も考慮される。患者は、バイパス／血液産物または同種移植片材料を使用した以前の注入または大手術などの「感作事象」に応答してレシピエントが形成し得る予備形成ＨＬＡ抗体のパネル反応性抗体（「ＰＲＡ」）について評価される。
[00357] 評価は、レシピエントの前感作歴、例えば、以前の輸血；数、日付；以前の手術；以前の妊娠；免疫化歴およびＩＶＩＧ実施（日付付き）について行われる。
[00358] 過度に高いＨＬＡクラスＩもしくはクラスＩＩ ＰＲＡを有する患者、または繰り返し移植を受けるものは、脱感作戦略の候補であり得る。特定の戦略は、潜在的なレシピエントに個別化され、血漿交換、ＩＶＩＧ、リツキシマブ、および／またはボルテゾミブの使用を含み得る。重要な抗体は、１：１６希釈後も存在し続けるものである。
[00359] 前感作患者は、潜在的なドナーとの実際の見込み交差適合を必要とし得る。ＨＬＡ抗体の履歴を有する患者は、移植が検討されている時点で、ＵＮＥＴにおける仮想交差適合を受けるであろう。
[00360] 前感作患者は、以下の一般的なガイドラインを介した潜在的なドナーとの実際の見込み交差適合を必要とし得る。ＨＬＡ抗体の履歴を有する全ての患者は、提供が検討されている時点で、ＵＮＥＴにおける仮想交差適合を受けるであろう。
[00361] ｃＰＲＡ＜２０％：ＵＮＥＴにおける仮想交差適合の場合、追加の手段は必要なく、日常的な遡及的なドナー交差適合および日常的な免疫抑制を進める。
[00362] ｃＰＲＡ＞２０％：ＵＮＥＴにおける仮想交差適合の場合、レシピエントは、移植時に手術室（「ＯＲ」）で血漿交換を受ける。
[00363] ｃＰＲＡ＞７０％：仮想交差適合の場合、時間が許せば、実際の見込みドナー交差適合を得ることを検討し、ＯＲで血漿交換を実施する。手術後のフェレシスの継続のためにＯＲにおけるフェレシスカテーテルの配置を検討する。
[00364] 継続的な抗体低減介入は、ドナー交差適合、ＤＳＡ、および臨床経過によって決定される。
[00365] 全ての前感作患者について、血液は、移植後最初の２週間以内にドナー特異的抗体のために送られ、臨床的に示されるように繰り返されるであろう。ＤＳＡについての日常的な試験は、少なくとも移植後６か月毎に、任意の臨床上の懸念があれば必要に応じて、全ての移植後の患者に行われるであろう。
[00366] 移植前および移植後の両方で、標準的な血液産物注入プロトコルに従う。
免疫抑制管理
[00367] 免疫抑制管理は、移植される固形臓器に基づいて決定される。
小児心臓移植
[00368] 全ての患者は、それらの臨床状況およびリスク因子に基づいて、バシリキシマブまたは抗胸腺細胞グロブリンでの誘導療法を受けるであろう。使用される誘導療法のタイプは、移植前に決定されるであろう（第１の免疫抑制レジメン薬物療法）。
[00369] 一実施形態では、移植前／誘導療法は、典型的には、以下の投与を含む：
[00370] 手術室の前にミコフェノール酸モフェチル（ＣｅｌｌＣｅｐｔ（登録商標））２５ｍｇ／ｋｇＩＶ。
[00371] 誘導時にメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇＩＶ（最大用量５００ｍｇ）。
[00372] Ｘクランプの解放時にメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇＩＶ（最大用量５００ｍｇ）。
[00373] Ｘクランプの解放時にＡＴＧ（抗胸腺細胞グロブリン）１．５ｍｇ／ｋｇＩＶ。
[00374] あるいは、レシピエントの体重によって投与される、バシリキシマブ（Ｓｉｍｕｌｅｃｔ（登録商標））を使用する。
[00375] ＜３５ｋｇ、ｘクランプの解放時に１０ｍｇ、４日後に第２の用量。
[00376] ＞３５ｋｇ、ｘクランプの解放時に２０ｍｇ、４日後に第２の用量。
[00377] 一実施形態では、心臓およびＣＴＴ移植候補のための移植前誘導免疫抑制療法は、以下を含み得る：
[00378] バシリキシマブ（Ｓｉｍｕｌｅｃｔ（登録商標））−（ＡＴＧを与えることができない場合）。
[00379]投与：
[00380] ＜３５ｋｇ：初期用量：麻酔の誘導時（安定後およびメチルプレドニゾロンが与えられた後）に麻酔によって手術前に投与される１０ｍｇＩＶ。
[00381]第２の用量：移植４日後に投与される１０ｍｇＩＶ、（重度過敏反応または移植片喪失を含む）合併症が発生する場合、第２の用量を待つ
[00382] ＞３５ｋｇ：初期用量：安定時の麻酔の誘導時に麻酔によって手術前に投与される２０ｍｇＩＶ。
[00383] 第２の用量：移植４日後に投与される２０ｍｇＩＶ、（重度過敏反応または移植片喪失を含む）合併症が発生する場合、第２の用量を待つ
[00384] 投与：２０〜３０分かけてＩＶ注入。半減期小児１〜１１歳：９．５日、思春期１２〜１６歳：９．１日、成人：７．２日。
[00385]一実施形態では、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ、ウサギ由来、Ｔｈｙｍｏｇｌｏｂｕｌｉｎ（登録商標））は、心臓移植対象のための以下の投与スケジュールに従って与えられ得る：
[00386] リンパ球数およびマーカーおよび血小板数に基づいて３〜７日間１．５ｍｇ／ｋｇ／日。第１の用量は、第２の用量のステロイド後（手術中）のクロスクランプの解放時の臓器再灌流後に与えられる。
[00387] 上記パラメータに基づいて毎日継続され、移植ＭＤによって決定されるであろう。
[00388] 投与：第１の用量について６時間かけてゆっくりとＩＶ注入、その後の用量は、寛容に応じて４時間かけて与えることができる。
[00389] 一実施形態では、ＣＰＢ／ポンプ症例のための日常的な手術前／手術中メチルプレドニゾロンに加えて、患者は、バシリキシマブの前に麻酔の誘導時に麻酔によって投与されるメチルプレドニゾロン（ＳｏｌｕＭｅｄｒｏｌ）１０ｍｇ／ｋｇ（最大用量５００ｍｇ）ＩＶの用量、および次いで再灌流時（ＡＴＧの前）の１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）の第２の用量を受け得る。
手術後維持免疫抑制（維持免疫抑制レジメン）
[00390] 一実施形態では、移植後免疫抑制は、以下を含む：
[00391] ５〜７用量について１日ＡＴＧ（Ｔｈｙｍｏｇｌｏｂｕｌｉｎ（登録商標））１．５ｍｇ／ｋｇＩＶ。
[00392] ＷＢＣ＜２，０００または血小板数＜５０，０００の場合は待つ。
[00393] ＷＢＣ２，０００〜３，０００または血小板数５０，０００〜７５，０００の場合は１／２用量。
[00394] １２時間毎のミコフェノール酸１５〜２５ｍｇ／ｋｇＩＶ／ＰＯ。
[00395] ＧＩ不寛容または白血球減少症／好中球減少症について調整する。
[00396] ＧＩ不寛容の場合、アザチオプリンを置換することができる。
[00397] ＧＩ不寛容の場合、ミコフェノール酸（Ｍｙｆｏｒｔｉｃ（登録商標））を置換することができる。
[00398] 腎機能および経口不寛容に応じて、ｔｘの２４〜４８時間後に開始するタクロリムス。
[00399] 開始用量約０．０５ｍｇＰＯｑ １２時間およびレベルに基づいて調整する。
[00400] 最初の６か月は約１０〜１５、６か月〜３年は８〜１２、＞３年は４〜８。
[00401] ＩＶ医薬品が必要な場合、またはタクロリムスに不寛容である場合、シクロスポリンを置換することができる。
[00402] メチルプレドニゾロン５ｍｇ／ｋｇＩＶｑ ８時間ｘ６用量（最大用量１２５ｍｇ）。
[00403] 次いで、１ｍｇ／ｋｇ／用量ＩＶ／ＰＯｑ １２時間（最大３０ｍｇ／用量）。
[00404] 生検結果に基づいて、次の２〜３か月かけて離脱する。
[00405] 一実施形態では、タクロリムス（ＦＫ５０６、Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標））が投与され得る。通常の剤形は、０．５ｍｇ／ｍｌの静脈内溶液、ならびにカプセルあたり０．５ｍｇ、１ｍｇ、および５ｍｇの経口カプセルを含む。
[00406] レシピエントがＰＯ／ＮＧ／ＳＬである場合、約０．０５ｍｇ／ｋｇ／用量の開始用量が１２時間毎に与えられ（最大５ｍｇ／用量）、通常は、腎機能が許容される場合、手術後約２４時間で開始される。
[00407] タクロリムストラフレベルは、治療的投与が達成されるまで毎日モニターされる。必要に応じて、治療的トラフレベルを達成するために、投与を８時間毎に増加させる。薬物が舌下投与される場合、カプセル内容物は、舌の下に振りかけられる（より高レベルをもたらし得る）。経口および舌下用量はそうではない。一般的に、舌下投与される経口用量の約１／２を投与する必要があるであろう。
[00408] タクロリムス投与は、最後の用量後１０〜１４時間（８時間毎に投与される場合７〜９時間）に質量分析法によって測定される血清全血レベルに基づいて投与され得る。
[00409] 腎および肝機能、薬物の副作用、感染および拒絶歴は全て、患者のタクロリムスレベルの管理において考慮される。患者が臨床的に順調である場合、レベルが望ましい範囲内の＋／−１に含まれる場合、用量調整を行う必要はない。これらの場合では、決定は、担当移植医次第である。
[00410] 一実施形態では、シクロスポリンは、タクロリムスを寛容することができない患者に投与される。開始用量：１２時間毎に経口で２ｍｇ／ｋｇ／用量。治療レベルを達成することができない場合（特に乳児および幼児）は、投与頻度が８時間毎に増加される。
[00411] 一般的な投与は、最後の用量後１０〜１４時間（８時間毎に投与される場合７〜９時間）に質量分析法によって測定される以下の血清全血レベルに基づく。
[00412] 腎および肝機能、薬物の副作用、感染および拒絶歴は全て、患者のシクロスポリンレベルの管理において考慮される。患者が臨床的に順調である場合、レベルが望ましい範囲内の＋／−１０−２０に含まれる場合、用量調整を行う必要はない。これらの場合では、決定は、担当移植次第である。患者の目標シクロスポリンレベルをチャートに記録するために、あらゆる努力がなされるべきである。ＩＶ用量は、一般的には、１／３経口用量に等しい。
[00413] 一実施形態では、ミコフェノール酸モフェチル（Ｃｅｌｌｃｅｐｔ（登録商標））（２００ｍｇ／ｍｌ、２５０ｍｇ、または５００ｍｇ錠剤）が投与され得る：
[00414] ３０〜５０ｍｇ／ｋｇ／日を２つの分割用量で開始する（最大用量小児２ｇ／日、成人３ｇ／日）。
[00415] ＩＶ用量＝ＰＯ用量。
[00416] 治療薬モニタリングは必要ないが、毒性について懸念する場合は行うことができる。
[00417] ミコフェノール酸は、骨髄抑制および好中球減少症を引き起こし得る。
[00418] 用量は、ＡＮＣ＜５００またはＷＢＣ＜１０００の場合保持され得、減少するＡＮＣ（＜１０００）またはＷＢＣ（＜３０００）の状況では、用量を減少させる必要があり得る。実際にはＣｅｌｌｃｅｐｔの投与量５００ｍｇ＝Ｍｙｆｏｒｔｉｃ（ミコフェノール酸）３６０ｍｇ。
[00419] 一実施形態では、ミコフェノール酸（Ｍｙｆｏｒｔｉｃ（登録商標）剤形１８０ｍｇ錠剤、３６０ｍｇ錠剤）は、以下の投与量パラメータに従って、ミコフェノール酸モフェチルの代わりに投与され得る。
[00420] 遅延放出錠剤を開始する：４００ｍｇ／ｍ２／用量１日２回、最大用量：７２０ｍｇまたはＢＳＡ １．１９〜１．５８ｍ２：５４０ｍｇ１日２回、ＢＳＡ＞１．５８ｍ２：７２０ｍｇ１日２回。
[00421] ＩＶまたは懸濁液は利用可能ではない。ＩＶまたは懸濁液が必要な場合、薬物はＣｅｌｌｃｅｐｔに変換される。（Ｃｅｌｌｃｅｐｔ ５００ｍｇ＝Ｍｙｆｏｒｔｉｃ ３６０ｍｇ）。ミコフェノール酸は、ミコフェノール酸モフェチルと同じ骨髄抑制を引き起こし得る。
[00422]一実施形態では、ミコフェノール酸モフェチルを寛容することができない場合、アザチオプリンが以下の方法で投与され得る：
[00423]１日１回与えられる、２〜４ｍｇ／ｋｇ／日を開始する
[00424] アザチオプリンは、骨髄抑制を引き起こし、用量は、ＷＢＣ／ＡＮＣに基づいて低減する必要があり得る。ＩＶ用量は、経口用量に等しい。
[00425] 一実施形態では、ステロイドは、メチルプレドニゾロン（Ｓｏｌｕ−Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標））、プレドニゾン、またはプレドニゾロンとして投与され得る。
[00426] 静脈内ステロイドは、手術中に（誘導免疫抑制療法として）開始され、手術後に５ｍｇ／ｋｇ／用量（最大１２５ｍｇ／回）ＩＶで８時間毎ｘ６用量で継続される。
[00427] 経口ステロイドは、その後、プレドニゾン錠剤またはプレドニゾロン懸濁液３ｍｇ／ｍｌとして開始し得る。静脈内メチルプレドニゾロンは、移植レシピエントが免疫抑制治療レジメンを経口的に寛容することができない場合は継続される。経口療法への切り替えは、レシピエントが経口医薬品を寛容することができる場合に行われ得る。ステロイドの例示的な投与範囲は、以下である：
[00428]０〜１０ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ／日分割ＢＩＤで開始、２日毎に離脱、１日６ｍｇで保持する
[00429] ０〜３０ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ／日分割ＢＩＤで開始（３０ｍｇの最大単一用量、以下を参照されたい）、２日毎に５ｍｇ／日で離脱、次いで１日１０ｍｇで保持する。
[00430]＞３０ｋｇ、３０ｍｇＢＩＤｘ４用量、２５ｍｇＢＩＤｘ４用量、２０ｍｇＢＩＤｘ４用量、１５ｍｇＢＩＤｘ４用量、１０ｍｇＢＩＤｘ４用量、次いで１日１５ｍｇを開始し、移植心臓専門医によってさらに離脱される
[00431] 生検結果に基づいて移植後の最初の１か月かけてステロイドを離脱し続ける。拒絶が発生する場合、ステロイドは、移植心臓専門医の裁量で再開され、さらなる生検結果および患者臨床状態に基づいて無期限に継続されるであろう。
[00432]第２の免疫抑制レジメンの他の薬物は、以下を含む：
[00433] シロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ（登録商標））（０．５ｍｇ、１ｍｇ、２ｍｇキャップ）：冠動脈同種移植血管障害の診断後、またはそうでなければ移植心臓専門医によって臨床的に示されるように、開始される。
[00434] 開始用量：１ｍｇ／ｍ２（最大用量：３ｍｇ）１日１回または適切なレベルを達成するのが困難な場合２つの１日用量に分割。
[00435] 治療レベル目標は、４〜８であり、両方の薬物を服用する場合に、より低いタクロリムスレベル（同じ４〜８範囲）を受容する。
[00436] トラフレベルは、最終用量の２３〜２５時間後、または１２時間毎に投与する場合は最終用量の１１〜１３時間後に描画される。
[00437] シロリムスを開始する場合、ミコフェノール酸（Ｃｅｌｌｃｅｐｔ（登録商標）、Ｍｙｆｏｒｔｉｃ（登録商標））、アザチオプリンを中止する。
[00438] Ｂａｃｔｒｉｍ予防を開始する：煩わしい口内炎、および創傷治癒の遅延を引き起こし得る。
[00439] プラバスタチン（Ｐｒａｖａｃｈｏｌ（登録商標））−１０代／年長児およびＣＡＶ患者に使用される。
[00440] １日１回投与される０．２ｍｇ／ｋｇ／日を開始する（錠剤形態で提供され、夜に１日あたり１／４、１／２、または最大１〜２錠を与えることができる。
[00441] 体重変化に応じて用量を漸増する（最大用量２０ｍｇ／日）。
[00442] ８週間毎にＬＦＴ’ｓ、ＣＫをモニターする。
[00443] 関節または筋肉痛が発生する場合は薬物を中止する。
[00444] ガンシクロビルＩＶ−レシピエントまたはドナーがＣＭＶ ＩｇＧ陽性である場合、ＣＭＶ予防のために与えられる。
[00445] 誘導療法：５ｍｇ／ｋｇ ＩＶ ｑ １２時間ｘ７〜１４日。
[00446] 維持療法：１日５ｍｇ／ｋｇＩＶ。
[00447] ＷＢＣおよび腎機能をモニターする。
[00448] 忍容される場合は経口バルガンシクロビルへの移行。
[00449] バルガンシクロビル（Ｖａｌｃｙｔｅ（登録商標））−全てのＣＭＶ＋レシピエントまたはドナーにおけるＣＭＶ予防のため。
[00450] ４５０ｍｇ錠剤または５０ｍｇ／ｍｌ懸濁液。
[00451] ４か月〜１６歳：１日総経口用量（ｍｇ）＝［７ｘＢＳＡｘＣｒクリアランス］。
[00452] ＞１６歳：１日経口９００ｍｇ。
[00453] 各訪問時にＣＭＶ ＰＣＲをモニターする。
[00454]トリメトプリム−スルファメトキサゾール（Ｂａｃｔｒｉｍ（登録商標）、Ｓｅｐｔｒａ（登録商標））：
[00455] シングル強度錠剤８０ｍｇ／４００ｍｇ、ダブル強度錠剤１６０ｍｇ／８００ｍｇ、懸濁液５ｍｌあたり４０ｍｇ／２００ｍｇ。
[00456] ＰＣＰ／Ｔｏｘｏ予防のために退院前に、経口食を取るときに同様に開始する。
[00457] １か月〜１２歳：５〜１０ｍｇ／ｋｇ／日ＴＭＰ ｄｉｖ ＢＩＤ 連日３ｘ／週。
[00458] ＞１２歳：１日８０〜１６０ｍｇＴＭＰ経口または１６０ｍｇＴＭＰ経口３ｘ／週。
[00459] 当業者に知られるように、タクロリムスおよびシクロスポリンレベルを増加または減少させ得る薬物をモニターする。
[00460] またタクロリムスおよびシクロスポリンとの相乗的腎毒性を有する薬物についてモニターする。
急性移植拒絶治療
[00461] 一実施形態では、対象は、移植拒絶が確認される場合に以下の方法で治療される。
[00462] 一実施形態では、移植レシピエントが血行動態悪化なしにグレード０、１Ｒである場合：治療は必要なく、ステロイド離脱が検討され得る。
[00463]患者が血行動態悪化なしにグレード２Ｒの細胞拒絶を示す場合、以下の治療レジメンに従う：
[00464] 維持免疫抑制を最適化する。
[00465] メチルプレドニゾロン１５ｍｇ／ｋｇ／日ＩＶｘ３日（最大１０００ｍｇ）を投与し、１２時間毎の投与に分割するか、または２４時間毎に１回与えることができる。
[00466] 難治性細胞性拒絶について、生検を１〜２週間で繰り返し、メチルプレドニゾロンおよび任意にＴｈｙｍｏｇｌｏｂｕｌｉｎ（登録商標）を繰り返す。
[00467] 拒絶が解消した場合は、生検を１か月後（拒絶後６週間）に繰り返し、拒絶の治療が成功した場合は以前に定義された生検プロトコルを再開する。
[00468] 難治性細胞拒絶について、メチルプレドニゾロンを繰り返し、チモグロブリンを検討する。
[00469] 患者が血行動態悪化なしにグレード２Ｒの細胞拒絶またはより高グレードの拒絶を示す場合。
[00470] より高レベル（１０−１５）で免疫抑制を最適化する。
[00471] メチルプレドニゾロン１５ｍｇ／ｋｇ／日ＩＶｘ３日（最大１０００ｍｇ）を投与する。
[00472] Ｔｈｙｍｏｇｌｏｂｕｌｉｎ（登録商標）を投与する。
[00473] 抗体媒介性拒絶の証拠または懸念がある場合は、血漿交換を行う。
[00474] 患者が血行動態悪化ありまたはなしで抗体媒介性拒絶を示す場合：
[00475] メチルプレドニゾロン１５ｍｇ／ｋｇ／日ＩＶｘ３日（最大１０００ｍｇ）を投与する。
[00476] 血漿交換ｘ５回（毎日または隔日）を行う。
[00477] ＩＶＩＧ １−２ｇｍ／ｋｇ ＩＶを毎月ｘ６か月投与する。
[00478] 移植片機能不全または血行動態悪化の証拠は、Ｃ４ｄ染色を含む、細胞拒絶および抗体媒介性拒絶についての生検（患者が安定した場合）を正当化する。生検結果を待っている間にメチルプレドニゾロン（ＳｏｌｕＭｅｄｒｏｌ）を開始し、チモグロブリンおよび血漿交換の開始を検討する。
[00479] グレード３Ｒ生検または血行動態悪化は、高グレード拒絶エピソードとして扱う。
[00480] メチルプレドニゾロン（ＳｏｌｕＭｅｄｒｏｌ）１５ｍｇ／ｋｇ／日ＩＶｘ３日（最大１０００ｍｇ）。変力療法、チモグロブリン、および／または血漿交換を検討する。
[00481] 血行動態悪化を伴うまたは伴わない抗体媒介性拒絶。診断：末梢血清試料中のドナー特異的抗体の存在での心筋組織におけるＣ４ｄ沈着の同定。ＡＭＲのためにステロイド、ＡＴＧフェレシスを検討する。
腎臓および膵臓免疫抑制管理
[00482] 腎臓および膵臓移植処置のための例示的な誘導免疫抑制レジメンおよび維持免疫抑制レジメンを以下に示す。一実施形態では、移植レシピエントは、第２の免疫抑制レジメンの一部としての維持療法としてベラタセプトを受ける。このプロトコルは、典型的には、レシピエントがエプスタイン・バールウイルス（ＥＢＶ）Ｉｇ＋であり、ＤＳＡ（ドナー特異的同種抗体）を示さない場合に使用され、絶対または計算パネル反応性抗体（ＰＲＡ）に関係なく、移植は、陰性交差適合を含み、レシピエントは、≦３５のＢＭＩを有する７０歳未満である。さらなる考慮事項は、（他の方法でチモグロブリンを受けない場合）誘導を寛容するレシピエントの能力を含む。レシピエントは、特発性巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）の病歴および以前の非腎臓固形臓器移植を有さないべきである。プロトコルは、腎臓移植のみである。
[00483] 一実施形態では、誘導免疫抑制レジメンは、メチルプレドニゾロン５００ｍｇの手術中の静脈内投与を含む。アレムツズマブ３０ｍｇは、静脈内注入によって３時間（ステロイド投与後２時間）にわたって投与される。ベラタセプト１０ｍｇ／ｋｇは、事前薬物投与後に投与（ＴＢＷ）（四捨五入して１２．５ ｍｇ）される。
[00484] 一実施形態では、維持免疫抑制レジメンは、ＰＯＤ４ならびに２、４、８、および１２週目の終わりにベラタセプト１０ｍｇ／ｋｇＴＢＷ、次いで毎月５ｍｇ／ｋｇ（四捨五入して１２．５ｍｇ）を含む。シロリムスは、１日２ｍｇで投与され、最初のトラフレベルは、２週間後に取得される（目標８〜１０ｎｇ／ｍｌ）。ステロイド維持療法は、通常必要ない。
[00485] 一実施形態では、レシピエントがベラタセプトの候補ではない低リスク腎移植において、誘導免疫抑制レジメンは、誘導免疫抑制レジメンを含まない場合もあり得、すなわち、誘導免疫抑制レジメンは任意である。維持免疫抑制レジメンは、１２時間毎に投与されるミコフェノール酸１０００ｍｇおよび０．１ｍｇ／ｋｇ／日、１２時間毎に最大５ｍｇで投与されるタクロリムスを含み得る。
[00486] 一実施形態では、レシピエントが、高リスクであり、ＡＴＧ禁忌、虚弱、７０歳超であり、最近の感染および最近の癌活性の証拠を有する場合、誘導免疫抑制剤は、手術室においておよび術後（ＰＯＤ）４日目に開始するバサリキシマブ２０ｍｇを含み得る。維持免疫抑制レジメンは、漸減投与量のステロイドと共に１２時間毎にミコフェノール酸１０００ｍｇおよび０．１ｍｇ／ｋｇ／日、１２時間毎に最大５ｍｇのタクロリムスを含み得る。
[00487] 高リスク腎移植または腎臓および膵臓移植を含む一実施形態では、以下のパラメータが考慮される。過去のピークＰＲＡ＞３０、過去のドナー特異的抗体（ＤＳＡ、絶対または計算ＰＲＡに関係なく）、推定される免疫学的理由による早期移植片喪失を伴う第２の移植、第３以降の移植、小児ｅｎ ｂｌｏｃ（成人）レシピエント、腎臓／膵臓、膵臓単独、およびＤＧＦの高リスクまたは高リスク生検の場合。そのような移植では、誘導免疫抑制レジメン（誘導療法）は、手術室で開始されるチモグロブリン１．５ｍｇ／ｋｇＩＢＷ（四捨五入して２５ｍｇ）×４用量を含み得る。
[00488] 一実施形態では、レシピエントが、ゼロＰＲＡを有し、自己免疫疾患を有さず、高ＢＭＩを有する場合、誘導免疫抑制レジメンは、手術室で開始されるチモグロブリン１．５ｍｇ／ｋｇＩＢＷ（四捨五入して２５ｍｇ）×４用量を含み得る。第２の免疫抑制レジメン（維持療法）は、漸減投与量のステロイド、例えば、ＯＲで５００ｍｇ、２４０ｍｇＰＯＤ１、１２５ｍｇＰＯＤ２、１２５ｍｇＰＯＤ３、９０ｍｇＰＯＤ４、ＰＯＤ４で開始する１２時間毎のミコフェノール酸１０００ｍｇ、およびタクロリムス０．１ｍｇ／ｋｇ／日、１２時間毎に最大５ｍｇを含み得る。
[00489] 腎臓移植後に膵臓移植が行われる一実施形態では、誘導免疫抑制レジメンは、手術室で開始されるチモグロブリン１．５ｍｇ／ｋｇＩＢＷ（四捨五入して２５ｍｇ）×４用量を含み得る。第２の免疫抑制レジメンは、１日最低５ｍｇまで漸減するステロイド、ＰＯＤ４に開始して１２時間毎に投与されるミコフェノール酸１０００ｍｇ、および０．８ｍｇ／ｋｇ／日、１２時間毎に最大４ｍｇで投与されるタクロリムスを含み得る。
[00490] ミコフェノール酸の投与を含む全ての免疫抑制レジメンについて、初期用量は、患者および移植因子の評価に基づいて選択され得る。
成人心臓移植免疫抑制管理
[00491] 一実施形態では、誘導免疫抑制レジメンが通常投与される。誘導療法のリスクがそのような療法の利点を上回ると考えられる場合、例外が時折発生し得る（すなわち、誘導免疫抑制レジメンは任意である）。
[00492] 一実施形態では、誘導免疫抑制レジメンが投与される場合、レジメンは、再灌流（クロスクランプ除去）後にＯＲに与えられ、術後４日目に繰り返されるＳｉｍｕｌｅｃｔ（登録商標）（バシリキシマブ）：２０ｍｇＩＶを含み得る。誘導免疫抑制療法を受ける患者では、第２の免疫抑制レジメンにおいて投与されるカルシニューリン阻害剤（ＣＮＩ）は、術後４８時間に開始されるべきであるが、患者の腎状態に応じてさらに遅延され得る。ステロイドは、周術期に、典型的には、メチルプレドニゾロン５００ｍｇが全身麻酔の誘導時に静脈内、および５００ｍｇが再灌流（クロスクランプ除去）前にＩＶ投与され得る。
[00493] 一実施形態では、維持免疫抑制レジメン（術後維持免疫抑制治療）、レジメンは、ステロイド、例えば、メチルプレドニゾロン１２５ｍｇ ＩＶ ｑ８時間×３用量（再灌流８時間後開始）、続いてプレドニゾン：１日２回０．５ｍｇ／ｋｇを含み得、術後２日目に開始して、用量を１日２回１０ｍｇ（または１日２０ｍｇ）まで２日毎に１日２回５ｍｇ減量し、この用量を移植後３０日まで維持する。第２の免疫抑制レジメンはまた、カルシニューリン阻害剤（ＣＮＩ）、例えば、タクロリムス／ＦＫ５０６／Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標）（好ましい薬剤）：１２時間毎に経口で１ｍｇを含み得る。用量は、１０−１５ｎｇ／ｍｌのトラフ目標レベルに滴定される。定常状態を確立するために、５用量のカルシニューリン阻害剤後に典型的な用量調整が行われる。ＣＮＩ毒性について評価するために、ＣＮＩの１日レベルがまずモニターされる。
[00494] 代替の実施形態では、シクロスポリン／ＣｙＡ／Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）は、１２時間毎に１００ｍｇ（１．５〜５ｍｇ／ｋｇ）の投与量で経口投与される。用量は、典型的には、３３ｎｇ／ｍｌのトラフ目標レベルに滴定される。維持免疫抑制レジメンは、ミコフェノール酸モフェチル（Ｃｅｌｌｃｅｐｔ（登録商標））１，０００〜１，５００ｍｇ経口などの抗増殖剤を含み、用量がＷＢＣ数＞３，０００を維持するように調整され得る。代替では、抗増殖剤は、１日２回経口投与されるミコフェノール酸（Ｍｙｆｏｒｔｉｃ（登録商標））３６０ｍｇ〜７２０ｍｇであり、用量がＷＢＣ数＞３，０００を維持するように調整され得る。別の実施形態では、抗増殖剤は、１日２ｍｇ／ｋｇの投与量で経口投与されるアザチオプリン（Ｉｍｕｒａｎ（登録商標））であり、投与量が、ＷＢＣ数＞３，０００を維持するように調整される。
[00495] 一実施形態では、維持免疫抑制レジメンは、１日２ｍｇの投与量で経口投与されるシロリムス（Ｒａｐａｍｍｕｎｅ（登録商標））（ＴＯＲ−Ｉ）を含み得る。投与量は、典型的には、４〜１２μｇ／ｍｌのトラフを維持するように滴定される。
[00496] 一実施形態では、維持免疫抑制レジメンは、漸減投与量のステロイドを含み得、例えば、１か月目、用量を１日１５．０ｍｇＰＯに減少させ、２か月目、用量を１日１２．５ｍｇＰＯに減少させ、３か月目、用量を１日１０．０ｍｇＰＯに減少させ、４か月目、用量を１日７．５ｍｇＰＯに減少させ、５か月目、用量を１日５．０ｍｇＰＯに減少させ、６か月目、用量を１日２．５ｍｇＰＯに減少させる。ステロイド漸減は、筋細胞壊死の証拠と共に≧ＩＳＨＬＴグレード１Ｒに従って再評価されるべきである。漸減は、組織学的拒絶ガイドラインの改善後、再開され得る。
[00497] 一実施形態では、維持免疫抑制レジメンは、以下の追加／補助剤：細胞媒介性拒絶のために週に２回２．５〜５ｍｇ投与されるメトトレキサート（ＭＴＸ）を含み得る。ＭＴＸは、＞＝グレード１Ｒ／２での３つ以上の連続生検またはグレード２Ｒ／３Ａでの２つの連続生検について検討されるべきである。
成人肝臓および腸免疫抑制管理
[00498] 一実施形態では、腎機能不全を有さない肝移植は、任意の誘導免疫抑制レジメンなしで行われ得、すなわち、そのような誘導免疫抑制レジメンは任意である。維持免疫抑制レジメンは、漸減投与量のステロイドと共に１２時間毎のミコフェノール酸１ｇおよび１２時間毎のタクロリムス２〜３ｍｇの投与を含み得る。ステロイドの典型的な漸減投与量は：メチルプレドニゾロン５００ｍｇＩＶ手術中、メチルプレドニゾロン２５０ｍｇＩＶ術後６時間１回、メチルプレドニゾロン１８０ｍｇＩＶ １回ＰＯＤ１、メチルプレドニゾロン９０ｍｇ ＩＶ １回ＰＯＤ２、メチルプレドニゾロン６０ｍｇ ＩＶ １回ＰＯＤ３、メチルプレドニゾロン３０ｍｇ ＩＶ １回ＰＯＤ４、プレドニゾン２０ｍｇＰＯ毎日ＰＯＤ５−１４、２週間毎に２．５ｍｇ減少である。一実施形態では、プレドニゾロンの漸減投与量は、最初の２週間は１日２０ｍｇ、２〜４週目は１日１７．５ｍｇ、４〜６週目は１日１５ｍ、６〜８週目は１日１２．５ｍｇ、８〜１０週目は１日１０ｍｇ、１０〜１２週目は１日７．５ｍｇ、１２〜１４週目は１日５ｍｇ、１４〜１６週目は１日２．５ｍｇとして投与され得る。１６週間で中止する。特定の状況では、プレドニゾロンは、１日５ｍｇに離脱され、１年間保持される。
[00499] 一実施形態では、腎温存肝移植は、ＨＤまたはＣＶＶＨＤ／Ｆを必要とする術前機能不全がある場合に行われる。別の実施形態では、腎温存肝移植は、ＰＯＤ０〜１に＞２ｍｇ／ｄＬの血清クレアチニンレベルで術後腎機能不全がある場合に行われる。
[00500] 一実施形態では、誘導免疫抑制レジメンは、４用量の４８時間毎のチモグロブリン１．５ｍｇ／ｋｇ（四捨五入して２５ｍｇ）を含む。一実施形態では、投与量低減は、汎血球減少症または好中球減少症のために行われる。ＷＢＣ数が２〜３であるか、または血小板が３０〜５０である場合、１／２投与量を与える。ＷＢＣが＜２であるか、または血小板が＜３０である場合、投与を待つ。
[00501] 一実施形態では、前投薬が示される場合、前投薬は、ＡＴＧ注入の３０〜６０分前に、アセトアミノフェン６５０ｍｇＶＴまたは経口、ジフェンヒドラミン２５〜５０ｍｇ、およびメチルプレドニゾロン４０ｍｇＩＶが投与され得る（または上記の漸減を使用し得る）。
[00502] 一実施形態では、移植は、レシピエントが高い免疫学的リスク（ＰＲＡ＞０、妊娠前または単離された腸の移植）であるか、または免疫学的リスクが低いが、感染のリスクが高い場合、肝臓、腸、膵臓移植などの腸または多臓器移植であり、誘導免疫抑制レジメンは、上記のように、前投薬を含み得、またチモグロブリン１．５ｍｇ／ｋｇ（２４時間毎に四捨五入して２５ｍｇ、合計６ｍｇ／ｋｇ）、ならびにＰＯＤ０および４にバシリキシマブ２０ｍｇを含み得る。維持免疫抑制レジメンは、上記の漸減投与量のステロイドならびに１２時間毎のミコフェノール酸１ｇおよび１２時間毎のタクロリムス１ｍｇＳＬ（目標１２〜１６ｍｇ／ｍｌ）を含み得る。
[00503] 特定の実施形態では、タクロリムスは、患者がミコフェノール酸モフェチル（Ｃｅｌｌｃｅｐｔ）を服用している間、５〜８（肝臓）または１２〜１７（腸、肝臓−腸）の目標レベルを達成する投与量で投与される。目標は、患者が、薬物治験に参加している場合、拒絶、腎機能悪化を有する場合、または加齢のため、変更され得る。
[00504] ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ、Ｃｅｌｌｃｅｐｔ）が投与される特定の実施形態では、成人の標準投与量は、１２時間毎に１，０００ｍｇである。投与量低減は、汎血球減少症または好中球減少症を有する患者において、以下に従って行われ得る：ＷＢＣ ２−３または血小板３０−５０：１／２用量を与えることを検討し、ＷＢＣ＜２または血小板＜３０、投与を待つことを検討する。
[00505] 急性肝臓同種移植片拒絶の治療を含む特定の実施形態では、以下の治療が投与され得る：メチルプレドニゾロン１日５００ｍｇＩＶ３用量。肝機能試験が改善しない場合、追加の２用量が与えられ（１日５００ｍｇＩＶの合計５用量）、繰り返し肝生検がＰＯＤ３の前夜またはＰＯＤ４の朝に行われ得る。
[00506] 特定の実施形態では、ＣＭＶ ＩｇＧが以前に陰性であった、ＳｏｌｕＭｅｄｒｏｌ（登録商標）またはＴｈｙｍｏｇｌｏｂｕｌｉｎ（登録商標）で治療された患者は、治療の開始時にＣＭＶ ＩｇＧが再検査されるべきである。
肺移植における免疫抑制管理
[00507] 特定の実施形態では、肺移植片における免疫抑制管理は、以下の誘導および維持免疫抑制レジメンに従う。誘導免疫抑制レジメンは、以前に記載された誘導免疫抑制レジメンに従い得る。維持免疫抑制レジメンは、以下を含み得る：
[00508] カルシニューリン阻害剤：トラフタクロリムスレベルを維持するように調整される投与で１２時間毎のタクロリムス。下の表５を参照されたい。
Figure 2021516224
[00509] 下の表６に従ってトラフＣｙＡレベルを維持するように調整される投与で１２時間毎に投与されるシクロスポリン。
Figure 2021516224
[00510] 移植後０〜３か月のステロイド漸減投与量、毎日経口投与される２０ｍｇ、移植後３〜６か月、毎日経口投与される１５ｍｇ、移植後６〜９か月、毎日経口投与される１０ｍｇ、および移植後９か月超、毎日経口投与される５ｍｇ。
[00511] アザチオプリン２ｍｇ／ｋｇは、毎日経口投与され得る。開始前に正常なＴＭＰＴ酵素レベルを確認し、ＬＦＴ／ＣＢＣに従うことが重要である。白血球減少症が観察される場合、投与量の調整が検討され得る。
[00512] ミコフェノール酸モフェチル（Ｃｅｌｌｃｅｐｔ（登録商標））は、１，０００ｍｇの通常の投与量で１日２回投与され得る。心臓および肺移植のための通常の投与量は、１日に経口投与される１，５００ｍｇである。白血球減少症が観察される場合、ＣＢＣに従い、投与量の調整を検討するべきである。
[00513] シロリムスは、一般的には、吻合離開の懸念により、移植後の最初の３か月は禁忌である。投与される場合、シロリムスは、典型的には、トラフレベルに基づいて調整される、経口投与によって１日１ｍｇで投与される。例えば、第３の薬剤として、またはＣＮＩ節約のために投与され、目標トラフは、４〜８ｎｇ／ｍｌであり、ＣＮＩ代替として、トラフレベルは、１０〜１５ｎｇ／ｍｌである。
[00514]実施例１：胸腺内変動性研究
[00515] 胸腺内変動性を研究して、胸腺の一部分からの組織学試験結果が、同じ胸腺の任意の他の部分における組織学試験結果の代表としてなすことができるかを判定した。この試験の結果を使用して、通常のリリース試験およびプロセス検証試験の両方の間に試験されるべきである試料の数を決定する。
[00516] 以前に述べたように、５〜９日目に組織全体に散在するケラチンＡＥ１／ＡＥ３について陽性の領域、特定された少なくとも１つのハッサル小体、組織全体に散在するＣＫ１４染色、および観察されたインタクトな核の評価を含む、組織学受容基準が確立された。
[00517] この研究について、３つの胸腺を指向的に切片化し、各胸腺内の切片の位置を追跡した。切片を６ウェルプレートにおいて培養し、各切片の追跡を可能にした。切片化を図５Ａに示されるように行った。
[00518] 研究における各胸腺について、切片は、以下の時点、ベースライン（０日目）、５日目、９日目、１２日目、および２１日目の各々での分析専用であった。
[00519] ５〜１１個の切片を各胸腺の各時点で培養した。切片を上記の方法に従って培養し、培地を毎日交換した。切片を病理学実験室におけるＨ＆Ｅ染色に提出し、同一性、有効性、および生存性について分析した。この研究における全ての切片は、以上で指定される組織学試験のリリース受容基準、すなわち：５〜９日目に組織全体に散在するケラチンＡＥ１／ＡＥ３について陽性の領域、特定された少なくとも１つのハッサル小体、組織全体に散在するＣＫ１４染色、および観察されたインタクトな核を満たした。
[00520] 各切片がリリース受容基準を満たしたかの評価に加えて、各Ｈ＆ＥおよびＡＥ１／ＡＥ３スライドのより詳細な再調査が病理学者によって行われた。培養胸腺組織ロットＭＦＧ−０５６についてのこれらのスライドのいくつかの画像を図６Ａ〜Ｈに示す。以下の観察が確認された。
[00521] 同じドナー胸腺に由来する全ての切片は、各時点で許容基準を満たした。異なる切片では、皮質の領域は互いに似ており、髄質の領域は互いに似ている。しかしながら、切片間の皮質および髄質の相対的な割合における変動が観察された。
[00522] 培養時間の関数として同じ胸腺に由来する異なる切片間で観察される差は、主に（培養時間の増加に伴って増加した）胸腺細胞の、壊死の量、および（培養時間の増加に伴って減少した）残存胸腺細胞の数に主に関連付けられた。
[00523] これらの観察に基づいて、胸腺からの任意の１つの切片は、胸腺全体の代表であった。加えて、５日目の組織切片の組織学的外観は、その後の時点（９、１２、２１日目）の各々で観察されるものを反映する。
[00524]実施例２：全胸腺時間経過研究
[00525] この研究のために、５つの胸腺をＳＯＰに従って切片化および培養した。切片化の日に、最初、中間、および最後の切片を、免疫組織化学のために調製した。各胸腺の残りを切片化し、６ウェルプレートにおいて培養した。各胸腺を、以下の時点：ベースライン（０日目）、５日目、９日目、１２日目、および２１日目のうちの１つに指定した。０日目の胸腺切片については図７、５日目の切片については図８、１２日目の切片については図９、および２１日目の切片については図１０を参照されたい。
[00526] 各胸腺からの切片の総数は、２１〜６２切片の範囲であった。切片を上記で概説される手順に従って培養し、培地を毎日交換した。切片を病理学実験室におけるＨ＆Ｅ染色に提出し、同一性、有効性、および生存性について分析した。この研究における全ての切片は、組織学試験のリリース受容基準、すなわち：５〜９日目に組織全体に散在するケラチンＡＥ１／ＡＥ３について陽性の領域、特定された少なくとも１つのハッサル小体、組織全体に散在するＣＫ１４染色、および観察されたインタクトな核を満たした。
[00527] 各切片がリリース受容基準を満たしたかの評価に加えて、各Ｈ＆ＥおよびＡＥ１／ＡＥ３スライドのより詳細な再調査が病理学者によって行われた。以下の観察が確認された。
[00528] 同じドナー胸腺に由来し、同じ時点で試験される全ての切片は、上記のように、皮質および髄質の相対量、残存胸腺細胞、ならびに／または壊死における変動でその時点の受容基準を同様に満たした。
[00529] 確認される相違は、相対的なサイズ、形状、胸腺皮質対髄質の相対的な含有量、壊死の量、胸腺上皮の凝縮、および残存胸腺細胞の数であった。
[00530] 加えて、異なる時点で試験される異なるドナーからのロットはまた、互いに定性的に類似した。観察される相違は、（培養時間の増加に伴って増加した）壊死の量および（培養時間の増加に伴って減少した）残存胸腺細胞の数に関連した。
[00531] 任意の１つの切片の組織学的検査は、ロット全体の受容性に関して同じ結論をもたらした。これらの観察に基づいて、胸腺からの任意の１つの切片の関連する特徴は、胸腺全体を反映する。加えて、５日目の組織切片の組織学的外観は、その後の時点（９、１２、２１日目）の各々で観察されるものを反映するが、さらなる壊死がその後の時点で観察される。図１１は、０日目から２１日目までの抗体ＡＥ１／ＡＥ３によって評価されるように、上皮網の類似性を示す良好な例である。
[00532]実施例３：胸腺組織強制分解研究
[00533] この研究では、胸腺組織切片を処理して、分解された、または生存不能とみなされた組織切片を生成した。３つの胸腺をこれらの実験に使用した。対照試料を各胸腺から採取した。表７に示される処理条件を試験した。
Figure 2021516224
[00534] 切片を含有する１０ｃｍ培養皿をＺｉｐｌｏｃバッグに配置し、５５℃の水浴に配置することによって、熱ショックを達成した。プレートは支持体上に静置し、浸漬しなかった。凍結／解凍を、１０ｃｍ培養皿を−２０℃冷凍庫に４時間配置し、続いて周囲温度で解凍することによって達成した。
[00535] 試料を、培養において５および９日目に組織学について試験した。いくつかの試料はまた、２１日目に試験した。この研究における全ての切片は、組織学試験のリリース受容基準、すなわち：５〜９日目に組織全体に散在するケラチンＡＥ１／ＡＥ３について陽性の領域、特定された少なくとも１つのハッサル小体、組織全体に散在するＣＫ１４染色、および観察されたインタクトな核を満たした。
[00536] 各切片がリリース受容基準を満たしたかの評価に加えて、各スライドのより詳細な再調査が病理学者によって行われた。以下の観察が確認された。
[00537] 凍結／解凍または１０倍ＰＢＳに曝露された試料は、ほとんどの壊死を示したが、いくつかの細胞は依然としてインタクトなようであり、生存性の組織学的基準を満たした。１０Ｘ ＰＢＳへの曝露の例については、図１２を参照されたい。
[00538] 室温で保持されたか、脱水されたか、生理食塩水もしくは１％ＤＭＳＯでインキュベートされたか、または熱ショックを受けた切片は、より少ない組織学的変化度を示した。
[00539] 対照試料について、以下の観察が病理学者によって確認された。
[00540] 胸腺細胞は、胸腺組織が培養されるにつれて、徐々に喪失される。しかしながら、死細胞は、食細胞を動員して除去することができないことにより、培養された胸腺において長期存続し得る。アポトーシス細胞死を受ける細胞の核は、初めに凝縮し、ヘマトキシリン色素でより濃く（青く）染色する。これらの細胞は、それらのエネルギーを枯渇させるが、貪食されないため、それらの膜完全性を喪失し、壊死する。核溶解（壊死細胞における核の溶解）は、典型的には、インビボで２〜３日以内に発生するが、胸腺培養中はよりゆっくりと発生するようである。よって、胸腺細胞核が核溶解を受けた壊死性細胞破片の大きな好酸球性（ピンク）の拡大が見られることは珍しいことではない。いくつかの死胸腺細胞はそれらの核を保持し、これはぎざぎざの縁を有し、生細胞のものと比較して染色特性を変化させた。
[00541] 胸腺細胞が組織から枯渇すると、胸腺上皮細胞がより見えやすくなる。３次元胸腺上皮（ＴＥ）網は、通常、接続した上皮細胞および／またはその接続が検査される切片において明らかではない（一見）散在するＴＥ細胞の光およびレース配置を介して切片において示される。胸腺細胞が培養中に喪失されるため、３次元網が収縮する。これは、残存上皮の凝縮をもたらし、被膜下皮質上皮層がより厚くなり、髄質ＴＥ細胞がより密集する。生存ＴＥ細胞の核は、典型的には、楕円形であり、胸腺細胞よりも大きく、ヘマトキシリン（青）染色によって輪郭がはっきりと画定された核膜、および１つ以上の核小体を有する。これらのＴＥ核は、典型的には、「開いて」見え、ヘマトキシリンで濃く染色しないことを意味する。これは、活性クロマチン（「ユークロマチン」）がヘマトキシリン色素に結合することができないため、それらが生きており、代謝的に活性であるという解釈に適合する。多くのＴＥ細胞における、リボソーム合成の部位である、核小体の存在は、それらが生きており、代謝的に活性であることをさらに確認する。５、１２、および２１日目からの対照切片の典型的な組織学的外観を、それぞれ、図８、９、および１０に示す。
[00542] 室温、脱水、１％ＤＭＳＯ、および熱ショックを含む処理条件について、病理学者は、切片の外観が対照のものと有意に異ならなかったことを示した。熱ショックを受けた試料について、病理学者は、熱処理が、さらなる分解を防止するタンパク質を凝固させることによって、細胞を「固定」した可能性があることを確認した。熱処理は、胸腺を含む、組織の固定剤として使用されている。
[00543] 図１２Ａおよび１２Ｂは、強制分解条件への曝露後の胸腺組織スライドの組織学を示す。図１０は、２１日目の対照胸腺組織切片の組織学的外観を示す。
[00544] 強制分解組織の一般的な組織学的外観は、これらの時点で類似するが、２１日目では残存胸腺細胞がより少ない（図１２Ｂ）。髄質領域における代表的なハッサル小体は、図１２Ｂにおいて矢印によって示される。代表的な生存可能に見える胸腺上皮細胞は、図１２Ａおよび１２Ｂにおいて矢印によって示される。図１２Ｂに示される皮質領域は、２１日目でほぼ完全に壊死性リンパ球からなる。左下のバーは、１００μｍを表す。
[00545]実施例４：胸腺組織原薬バッチ分析
[00546] １０ロットの胸腺組織のバッチ分析データを以下の表８に示す。
Figure 2021516224
[00547] 重要：
（ａ）これらのロットは、製造時の仕様に従って試験した。この表に示される原薬試験結果はまた、最終的な製剤試験結果を表す。
（ｂ）外観仕様は、容器の改ざんまたは損傷の証拠ではなかった。
（ｃ）組織学アッセイは、同一性および有効性の両方に使用した。（５〜９日目に試験された）組織学仕様は、以下であった：
（ｄ）組織全体に散在するケラチン陽性領域。
ｉ．特定された少なくとも１つのハッサル小体
ｉｉ．組織全体に散在するＣＫ１４染色
ｉｉｉ．観察されたインタクトな核
ｉｖ．無菌性およびマイコプラズマ試料は、１、７、および１４日目に収集した。
[00548] ５６個の臨床胸腺、胸腺内変動、胸腺間変動、および時間経過試験に使用される８個の胸腺、ならびに強制分解を受けた３個の胸腺のデータを使用して、現在の対照ライブラリを生成した。ライブラリ内の強制分解試料（陰性対照）は、凍結／解凍または１０倍ＰＢＳへの曝露によって分解を受けたものであった。完全なデータセットは、１４個の異なるクラスターをもたらした。全ての強制分解試料は、一緒にクラスター化し、臨床試料または特性分析試料は、強制分解試料とクラスター化しなかった。
[00549]実施例５．
[00550] 実施例５の全体的な実験設計を図２０に示す。外科的手順および治療スケジュールの概略図を提示する。以下の図および本文の多くは、出版に向けた提出の準備中の原稿：Ｋｗｕｎ Ｊ，Ｌｉ Ｊ，Ｒｏｕｓｅ ＤＣ，Ｐａｒｋ Ｊ，Ｆａｒｒｉｓ ＡＢ，Ｔｕｒｅｋ ＪＷ，Ｋｎｅｃｈｔｌｅ ＳＪ，Ｋｉｒｋ ＡＤ，Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｔｈｙｍｕｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｄｏｎｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ Ｈｅａｒｔ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓからのものである。
[00551] 実験設計の概略図は、ナイーブＴ細胞再構成、胸腺リンパ球新生、およびＣＴＴの外科的挿入によって誘導されるドナー特異的寛容を示す。全てのＬｅｗｉｓ（ＬＷ）ラットは、心臓移植およびＣＴＴの外科的挿入の前に、胸腺摘出し、抗ＣＤ５ ｍＡｂを介してＴ細胞を枯渇させた。Ｆ１（ＬＷｘＤＡ）ラットからのＣＴＴおよびＤＡラットからの心臓を、胸腺摘出ＬＷレシピエントに移植した。シクロスポリン（ＣｓＡ）を、浸透圧ポンプを介して移植後４か月間与えた。第三者ＢＮ心臓を、ＣｓＡ中止の２〜３か月後に頸部に移植した。対照ラットは、ＣＴＴの外科的挿入を受けなかったことを除き、同一の手順を経験した。
[00552] 実施例５は、以下に記載されるように、免疫不全ラットモデルにおいて移植されたＣＴＴが、移植された固形臓器に対する寛容を誘導することができることを示す。我々は、Ｌｅｗｉｓラットへの血管新生不適合ＤＡ心臓移植と共にハプロ適合Ｆ１（Ｌｅｗｉｓ ｘ Ｄａｒｋ Ａｇｏｕｔｉ、ＬＷｘＤＡ）（以下に記載されるように培養された）ＣＴＴの移植を行った。
[00553] ＣＴＴの移植前に、レシピエントは、胸腺摘出し、Ｔ細胞を枯渇させた。
[00554] シクロスポリンを、心臓移植日に開始して４か月間投与した。対照群は、ＣＴＴの移植を受けなかった。免疫抑制の中止の２か月後、ＣＴＴが移植されたレシピエントは、末梢血におけるナイーブＣＤ４（ＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ４５ＲＣ＋）Ｔ細胞の再増殖を示し、対照ラットは、何も有さなかった（図２３）。新規胸腺移出ＣＤ４（ＣＤ９０＋ＣＤ４５ＲＣ＋）Ｔ細胞を発生した後でも、ＣＴＴが移植されたレシピエントは、ＤＡ心臓同種移植片を拒絶しなかった（図２３）。対照は、機能的Ｔ細胞の欠如により、ＤＡ移植片を拒絶しなかった（図２３）。
[00555] ドナー特異的不応答性を確認するために、ＭＨＣ不適合Ｂｒｏｗｎ Ｎｏｒｗａｙ（ＢＮ）心臓を、初期不適合ＤＡ心臓移植後１８０日目に移植した。ＣＴＴのＦ１（ＬＷｘＤＡ）移植を有するＬＷラットは、第三者ＢＮ心臓を急速に拒絶した（平均拒絶時間、１０日、ｎ＝５）（図２７）。対照は、第三者心臓を拒絶しなかった（ｎ＝５）。ＣＴＴのレシピエントは、体液性ドナー特異的寛容を示すＤＡ胸腺ドナーに対してではなく、第三者ＢＮドナーに対する抗体を産生することができた（図３２Ａ）。剖検での移植されたＣＴＴの免疫組織化学は、機能的胸腺組織を示した（図２４）。まとめると、Ｌｅｗｉｓラットに与えられたＦ１（ＬＷｘＤＡ）ＣＴＴＴは、ドナー胸腺において発現する同種ＤＡ ＭＨＣに特異的な寛容をもたらし、全ての免疫抑制の撤退後、ＤＡ心臓移植の長期生存が得られた。
[00556]材料および方法
動物モデル
[00557] この実施例５では、同種ＣＴＴを、以下に記載されるように、３日齢Ｆ１（Ｌｅｗｉｓ ｘ Ｄａｒｋ Ａｇｏｕｔｉ ｒａｙ仔（図１７Ａおよび１７Ｂ））から採取および培養し、次いで、以前に記載されるように、無胸腺症ｃＤＧＡを有するヒト乳児の治療に相当する方法で胸腺摘出Ｌｅｗｉｓ（ＲＴ−１ｌ）レシピエントラットに移植した。（Ｍａｒｋｅｒｔ，ＭＬ，ｅｔ ａｌ．，２００８；Ｍａｒｋｅｔ，ＭＬ，ｅｔ ａｌ．，２０１０）。
[00558] Ｌｅｗｉｓ（ＲＴ−１ｌ）およびＢＮ（ＲＴ−１ｎ）ラットは、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒから購入した。ＤＡ（ＲＴ−１ａｖ１）ラットは、Ｅｎｖｉｇｏから購入した。Ｆ１（ＬＥＷ／ＤＡ、ＲＴ−１ｌ／ａｖ１）は、Ｄｕｋｅ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ Ｃｏｒｅ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ施設のプロトコルスタッフによって飼育された。Ｌｅｗｉｓレシピエントは、Ｒｅｎｄｅｌｌ ＶＲ，Ｇｉａｍｂｅｒａｒｄｉｎｏ Ｃ，Ｌｉ Ｊ，Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，＆Ｂｒｅｎｎａｎ ＴＶ，２０１４，“Ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｔｈｙｍｅｃｔｏｍｙ ｉｎ ａｄｕｌｔ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ｎｏｎ−ｉｎｖａｓｉｖｅ ｅｎｄｏｔｒａｃｈｅａｌ ｉｎｔｕｂａｔｉｏｎ．”Ｊ Ｖｉｓ Ｅｘｐ（９４）に記載されるように胸腺摘出を受けた。
[00559] 簡潔には、顎下腺および胸骨舌骨筋を、鈍い鉗子で分離し、気管を覆う組織を露出させた。１〜１．５ｃｍ切開を胸骨柄において行った。７ｃｍのａｌｍｓタイプの開創器を使用して、胸骨柄および胸骨舌骨筋の両半分を後退させて、胸骨を露出させた。胸腺を鈍い鉗子でつかみ、摘出した。胸骨の切断端を単一の３〜４−０絹縫合糸で閉じた。２滴の２．５ｍｇ／ｍｌブピバカインを切開部に適用し、皮膚の外層を３つまたは４つの９ｍｍ創傷クリップで閉じた。
[00560] 全ての胸腺摘出ラットは、Ｓｅｐｔｒａ（ＰＭＩ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、ＬＬＣ）を含有する食餌で維持した。Ｔ細胞枯渇をインビボで誘発するために、１ｍｇの抗ＣＤ５ ｍＡｂ（ＯＸ１９、ＢｉｏＸＣｅｌｌ、ＮＨ）を胸腺摘出後０、５、および１０日目に腹腔内投与し、０．２５ｍｇ／ｋｇ／ｄのシクロスポリンポンプによる抑制を心臓移植に関して０日目（心臓移植およびＣＴＴＴ時点）から４か月まで与えた。全てのラットは、Ｄｕｋｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅのガイドラインおよびコンプライアンスに従って使用および維持した。
インビトロ胸腺培養およびＣＴＴ
[00561] ３日齢の新生Ｆ１（ＬＥＷ／ＤＡ）仔ラットからの胸腺を、無菌で採取し、縦の自然な継ぎ目に沿って４片に切断し、ＴＯＭ培地を有する組織培養皿において無菌ニトロセルロースフィルター（ＭＦ−Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ）上に移した（図１７Ｂ）。胸腺組織を、５％ＣＯ２を有するＣＯ２インキュベーターにおいて３７℃で、所望の長さの時間（５〜７日）培養した。培地は毎日交換した。胸腺臓器培地（ＴＯＭ）は、８６．５％のＨＡＭＳ Ｆ１２（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２５ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２ｍＭのＬ−グル（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、１０％の胎児ウシ血清（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、および１倍のＰｅｎ−ｓｔｒｅｐ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で構成された。移植の日に、胸腺片を新鮮な培地ですすぎ、１本の安全な縫合糸（１０−０モノフィラメント）でのＬｅｗｉｓラットの腎臓被膜下に移植した。図１７Ｃを参照されたい。全ての操作は、生物学的安全キャビネットにおいて無菌条件下で行われた。
腹部および頸部心臓移植
[00562] 完全なＭＨＣ不適合ＤＡ（ＲＴ−１ａｖ１）ドナー心臓を、胸腺摘出Ｌｅｗｉｓ（ＲＴ−１ｌ）レシピエントに移植した。腹部心臓移植は、Ｓｃｈｍｉｄ Ｃ，Ｂｉｎｄｅｒ Ｊ，Ｈｅｅｍａｎｎ Ｕ，＆Ｔｉｌｎｅｙ ＮＬ，１９９４，”Ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ ｈｅｔｅｒｏｔｏｐｉｃ ｈｅａｒｔ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｒａｔ，”Ｍｉｃｒｏｓｕｒｇｅｒｙ １５（４）：２７９−２８１に記載される方法の改変技法を使用して行った。
[00563] 簡潔には、ドナー心臓を、ユーロコリンズ液での短期間の冷虚血の後、レシピエントの腹腔に移植した。ドナー肺動脈および大動脈を、連続９／０非吸収性モノフィラメント縫合糸を使用して、循環用の流入および流出血管として、端側方式でレシピエント下大静脈および下行大動脈に吻合した。シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）を、浸透圧ポンプ（モデル２ＭＬ４、Ａｌｚｅｔ）を介して与えた。レシピエントはまた、浸透圧ポンプを使用して胸腺移植後に約２．５ｍｇ／ｋｇ／日のシクロスポリン（ＣｓＡ）を受けた。ＣｓＡは、試験群が１０％を超えたナイーブＴ細胞を有した場合、胸腺移植の４か月後に中止した。ポンプを、無菌で装填し、レシピエントの背中領域に外科的に皮下挿入した。浸透圧ポンプは４か月間毎月交換した。ＤＡ心臓保有Ｌｅｗｉｓレシピエントへの完全なＭＨＣ不適合ＢＮ（ＲＴ−１ｎ）第三者心臓移植について、Ｈｅｒｏｎ，ｅｔ ａｌ．（Ｈｅｒｏｎ Ｉ．，１９７１，“Ａ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｆｏｒ ａｃｃｅｓｓｏｒｙ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｈｅａｒｔ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｒａｂｂｉｔｓ ａｎｄ ｒａｔｓ，”Ａｃｔａ Ｐａｔｈｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｓｃａｎｄ Ａ ７９（４）：３６６−３７２）によって記載される頸部血管新生心臓移植方法を改変して使用した。
[00564] ６〜７か月で、第三者ＢＮ心臓を頸部に移植した。簡潔には、第三者心臓を、下顎から剣状突起までの縦切開を介して頸部領域の右側に移植した。ドナー肺動脈および外頸静脈を端々吻合し、大動脈を右総頸動脈にカフィング技法によって吻合した。移植片は、毎日の触診によってモニターし、その後犠死時に開腹によって確認した。動物は、拒絶（鼓動の停止）の日または指定された時点で犠死させた。
フローサイトメトリー分析およびモニタリングＤＳＡ
[00565] 末梢血を頭蓋大静脈から得、抗体で染色した。ナイーブおよび新規胸腺移出を分析するために、我々は、抗ラットＣＤ３ ＡＰＣ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、抗ラットＣＤ４ ＡＰＣ−Ｃｙ７（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、抗ラットＣＤ８ａ Ｖ４５０（ＢＤ）、抗ラットＣＤ４５ ＰＥ−Ｃｙ７（ＢＤ）、抗ラットＣＤ４５ＲＣ−ＰＥ（ＢＤ）、抗ラットＣＤ６２Ｌ ＦＩＴＣ（ＢＤ）、および抗ラットＣＤ９０ ＢＶ ５１０（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）の組み合わせを使用した。Ｔ、Ｂ、およびＮＫ細胞のパーセンテージを評価するために、我々は、抗ラットＴＣＲ ＦＩＴＣ（ＢＤ）、抗ラットＣＤ４ ＡＰＣ−Ｃｙ７（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、抗ラットＣＤ８ａ Ｖ４５０（ＢＤ）、抗ラットＣＤ４５ ＰＥ−Ｃｙ７（ＢＤ）、抗ラットＣＤ４５ＲＡ ＰＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、抗ラットＮＫＲ−Ｐ１Ａ−ＡＰＣ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の組み合わせを使用した。ホスト対ドナーの区別には、我々は、抗ラットＴＣＲ ＡＰＣ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、抗ラットＣＤ４５ ＰＥ−Ｃｙ７（ＢＤ）、ＭＨＣ Ｃｌａｓｓ Ｉ ＲＴ１Ａａ（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）の組み合わせを使用した。我々はまた、非結合ＭＨＣクラスＩ ＲＴ１Ａａに二次ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用した。ドナー特異的同種抗体（ＤＳＡ）を、ＤＡドナーまたはＢＮ第三者ラットで連続的に収集されたレシピエント血清試料からのフロー交差適合によって評価した。ＦＩＴＣ結合ｐａｎ−ラット免疫グロブリン抗体を試料に添加し、洗浄後にインキュベートした。Ｔ細胞をＡＰＣ結合抗ＣＤ３で染色した。試料をＬＳＲ ｆｏｒｔｅｓｓａ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）で分析した。
剖検
[00566] 胸腺移植片および全ての心臓は、ＣＴＴＴの８か月後、試験群が頸部ＢＮ心臓を拒絶したとき、剖検で評価した。予測通り、ＤＡ ＭＨＣを発現しない、レシピエント由来Ｔ細胞は、胸腺移植レシピエントの末梢血において出現した（図２１）。
組織学、免疫組織化学（ＩＨＣ）、および形態学的分析
[00567] 腎臓被膜下からの全ての培養胸腺およびＣＴＴＴ試料は、ＯＣＴ（Ｏｐｔｉｍａｌｃｕｔｔｉｎｇ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ、Ｔｉｓｓｕｅ Ｔｅｋ）において凍結した。対照胸腺組織は、新生〜５日齢の仔ラットから得た。４〜５ｍｍ切片を、ＣＤ３（ポリクローナル、Ｄａｋｏ）、Ｋｉ−６７（クローン：ＳＰ６、Ｔｈｅｒｍｏ）、ＣＫ、（ポリクローナル、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）について染色した。ＩＨＣ画像は、Ｏｌｙｍｐｕｓ ＤＰ−７０デジタルカメラシステムのＯｌｙｍｐｕｓ Ｖａｎｏｘ ＡＨ−３顕微鏡を使用して取得した。外植された心臓は、心室中部レベルから基部までの連続切片化（５μｍ）を受けた。Ｈ＆Ｅ染色は、日常的な検査および拒絶のグレーディングのために行った。移植片浸潤Ｔ細胞を、ポリクローナル抗ＣＤ３（Ｄａｋｏ）染色で評価した。移植片の全スライドをＡｐｅｒｉｏ ＳｃａｎＳｃｏｐｅ ＸＴ（Ａｐｅｒｉｏ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｖｉｓｔａ、ＣＡ）でスキャンした。
統計分析
[00568] 実験結果は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ７．０、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）によって分析した。他のデータには、移植片生存の差についてのログランク検定およびスチューデントｔ検定またはマン・ホイットニーＵ検定を使用した。全てのデータは、平均値±ＳＤとして表した。０．０５未満であったｐの値は、統計的に有意であるとみなされた。
[00569]結果
[00570] 組織学的分析（図１８Ｃおよび１８Ｄ（倍率１００倍）ならびに図１９Ｃおよび１９Ｄ（倍率６００倍）は、患者に使用された胸腺組織の培養後に見られた変化と同様に、培養後に胸腺において低減したＫｉ６７＋、ＣＤ３＋細胞を示した（Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，ｅｔ ａｌ．，２００８），“Ｕｓｅ ｏｆ ａｌｌｏｇｒａｆｔ ｂｉｏｐｓｉｅｓ ｔｏ ａｓｓｅｓｓ ｔｈｙｍｏｐｏｉｅｓｉｓ ａｆｔｅｒ ｔｈｙｍｕｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．”Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８０（９）：６３５４−６３６４）。培養ヒト胸腺と同様に、胸腺上皮細胞（ＴＥＣ）の網は、サイトケラチン（ＣＫ）染色に基づいてラット培養胸腺組織に保存された（図１８Ｂ（倍率１００倍）および図１９Ｂ（倍率６００倍））。
[00571] 予測通り、ＤＡ ＭＨＣを発現しない、レシピエント由来Ｔ細胞は、胸腺移植レシピエントの末梢血において出現した（図２１）。ＣＴＴの移植後、次第に再増殖するレシピエントタイプＴ細胞は、２６、５５、９７、および２５３日目で、図２１の右下象限に見られる。
生着した同種胸腺組織の免疫組織化学的分析
[00572] Ｔ細胞枯渇ならびに胸腺および心臓移植後の循環Ｔ細胞再増殖を図２３に示す。全ての動物は、Ｔ細胞枯渇後、循環Ｔ細胞の劇的な低減を示した。ＣＴＴ挿入を有する心臓同種移植片レシピエント（青／破線）は、循環Ｔ細胞の徐々の再増殖を示した。ＣＴＴ挿入を有さない動物はまた、ある程度の循環Ｔ細胞を示した（赤／点線）。しかしながら、ナイーブおよび新規胸腺移出ＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞は、ＣＴＴ挿入を有する動物において有意に増加した（ｐ＜０．０１）が、対照動物は、循環ナイーブまたはＲＴＥ ＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞を示さなかった。
[00573] 移植後８．５か月で外植された移植胸腺は、陽性サイトケラチン染色（図２２Ａ）、および生来の胸腺と同様のＴ細胞染色（図２２Ｂ）を示した。元の倍率４００倍。
[00574] ＣＴＴの挿入を有する動物は、末梢血におけるナイーブ（ＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ４５ＲＣ＋）ＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞、ならびに新規胸腺移出（ＲＴＥ）Ｔ細胞の有意に増加した再増殖を示したが、胸腺移植を有さない対照群は、低レベルの循環ナイーブＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞を示し、循環ＲＴＥ ＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞を示さなかった（図２３）。総循環ＣＤ３ Ｔ細胞数は、移植前に群間で有意に異ならなかった。予想通り、ＣＴＴ移植を有するＬＷレシピエントは、ＣＴＴの移植を有さない対照動物と比較して、循環ＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞の有意に増加した数を示した（図２３）。
[00575] 心臓同種移植片レシピエントのレシピエントにおける１８０日目の腎被膜下に生着した培養胸腺組織を図２４に示す。
[00576] 組織学は、腎組織とは別個の異なる構造を示した（元の倍率、２０倍）。生着した培養胸腺組織は、正常胸腺構造（Ｈ＆Ｅ）、生存可能Ｔ細胞（ＣＤ３）、Ｔ細胞増殖（Ｋｉ６７）、および上皮細胞上にレース状パターン（サイトケラチン）を有するハッサル小体形成（黒矢印）を示し、胸腺リンパ球新生を伴う胸腺の生存性を確認した（図２４Ｂ）。元の倍率、２００倍。（データは、平均±ＳＤとして表され、ｎ＝群あたり８〜９匹の動物、スチューデントのｔ検定、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、ＮＳ、有意ではない（ｐ＞０．０５）。
[00577] 加えて、１８０日目に外植された移植ＣＴＴの免疫組織学的分析は、正常胸腺組織学、生存可能Ｔ細胞（ＣＤ３）、Ｔ細胞増殖（Ｋｉ６７）、およびＣＴＴの外科的挿入からのＴＥＣ上のハッサル小体形成（矢印）を伴うＣＫのレース状パターンを示した（図２４Ｂ）。これらの観察は、同種心臓移植を受ける動物における移植された胸腺の生存性および機能（胸腺リンパ球新生）を確認する。
[00578] まとめると、ＣＴＴが移植されたラットは、心臓同種移植片レシピエントにおいてナイーブＴ細胞発生を伴う胸腺リンパ球新生を示した。
[00579] ＤＡドナーに反応性のＴ細胞は、Ｔ細胞がＣＴＴ発現ＤＡおよびＬＷにおいて発生したため、発生しないと予想された。
[00580] ＤＡ心臓を拒絶の証拠について評価した。図２５は、ＤＡ心臓移植を有し、いかなる免疫抑制治療も行わなかったＬＷラットが１０日以内にＤＡ心臓移植片を拒絶したことを示す（ＤＡ対照、白四角）。しかしながら、ＲＴＥ（ＣＤ９０＋ＣＤ４５ＲＣ＋）Ｔ細胞を発生した後でも、ＣＴＴが外科的に挿入されたＬＷレシピエントは、ＤＡ心臓同種移植片（ｎ＝８、黒三角）を拒絶しなかった（鼓動の停止なし）。予想外に、ＣＴＴ挿入を有さないＬＷ対照動物はまた、ＤＡ心臓移植片（ｎ＝９、逆黒三角）を拒絶しなかった。両方の群は、試験期間全体（１８０日目）で良好な鼓動の質を示した。連続的な移植片鼓動は必ずしも拒絶の不在を意味しないため、２匹のレシピエントラットを、免疫抑制の停止後２か月で（すなわち、第三者ＢＮ頸部心臓移植の前に）犠死させて、拒絶がなかったことを確認した。両方の動物からの外植された心臓同種移植片（ＤＡ心臓）は、最小限の単核細胞浸潤を示し（図２６Ａ、ＣＴＴ挿入あり、および図２６Ｂ、ＣＴＴ挿入なし）、２００４ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｈｅａｒｔ＆Ｌｕｎｇ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（ＩＳＨＬＴ）グレーディング図２６Ｃによる拒絶の兆候はなかった。
[00581] カプラン・マイヤー生存曲線（図２５）は、いかなる免疫抑制も有さないＤＡ心臓移植（ＤＡ対照）を有するＬＷラットと比較して、ＣＴＴを有するか、または有さない動物および同系対照（ＬＷラットへのＬＷ心臓）からの有意に延長された移植片生存を示した。ＣＴＴを有する、および有さない動物からの１８０日目の外植された移植片の代表的なスキャン画像を、図２６Ａおよび２６Ｂに示す。画像をスライドスキャン全体から適応した。
[00582] ＩＳＨＬＴグレーディングは、ＣＴＴあり対ＣＴＴなしのレシピエントからの心臓同種移植片間の拒絶グレーディングにおける差を示さなかった（ｎ＝群あたり３〜４）（図２６Ｃ）。マン・ホイットニーＵ検定、＊Ｐ＜０．０５、ＮＳ、有意ではない（ｐ＞０．０５）。
[00583] ＣＴＴＴ後のナイーブＴ細胞の再構成に基づいて、我々は、ＣＴＴを有する動物はドナー反応性Ｔ細胞レパートリーを喪失したが、胸腺移植を有さない動物はそれらのＴ細胞集団を完全には再構成しなかった（一般的な低応答性）と考える。
第三者血管新生心臓移植に対するアロ反応性
[00584] 一般的な低応答性とは対照的にドナー特異的不応答性（寛容）が達成されたことを確認するために、追加の完全ＭＨＣ不適合ＢＮ心臓移植を、ＤＡ心臓移植後６〜７か月（１８０〜２１０日目）に両方の動物群において行った。
[00585] ＣＴＴが挿入されたＬＷラット（実線三角。図２７）は、第三者ＢＮ心臓を急速に拒絶した（移植片鼓動の停止）（ｎ＝５、生存期間中央値（ＭＳＴ）＝１０±１．０日）。しかしながら、ＣＴＴが挿入されていない対照ＬＷ動物は、おそらくアロ反応性Ｔ細胞の欠如により、第三者心臓を拒絶しなかった（ｎ＝６、ＭＳＴ≦３８．５±８．９日）。
[00586] 第三者心臓の拒絶のこの欠如に従って、組織学的分析は、ＣＴＴが挿入された動物（逆黒三角、図２７）が心臓同種移植片において増加した単核細胞浸潤を示した（図２８Ａ）が、ＣＴＴが挿入されていない動物が元のＢＮ心臓同種移植片を示した（図２８Ｂ）ことを確認した。ＣＴＴを有するレシピエントはＢＮ心臓を急速に拒絶した（ＭＳＴ＝１０±１．０日）（黒四角、図２９）が、ＣＴＴを有さないレシピエントは第三者ＢＮ心臓を拒絶しなかった（破線三角、図２９）。ＢＮ対照（黒丸、図２９）は、ＬＷラットによるＢＮ心臓の拒絶を示す。同系対照（白丸、図２９）は、ＬＷラットによるＬＷ心臓の拒絶の欠如を示す。カプラン・マイヤー生存曲線（図２７）は、移植片生存において有意差を示した。拒絶時または移植後４６日での外植されたＢＮ心臓移植片の代表的なスキャン画像を、それぞれ、図２８Ａおよび２８Ｂに示す。ＣＴＴが挿入された動物からのＢＮ心臓移植片は、重度の単核細胞浸潤を示した（図２８Ａ）が、ＣＴＴが挿入されていない動物からのＢＮ心臓移植片は、拒絶の兆候を示さなかった（図２８Ｂ）。画像をスライドスキャン全体から適応した。
[00587] ＣＴＴが挿入されたラット（黒四角、図２９）から外植されたＢＮ心臓の組織学的分析（ＩＳＨＬＴグレーディング）は、ＣＴＴが挿入されていない同系対照またはラット（網掛け三角、図２９）と比較して有意に増加した炎症細胞浸潤でグレード３Ｒ拒絶を示した。ＩＳＨＬＴグレーディングは、ＣＴＴを有さない動物からのＢＮハートと比較してＣＴＴを有する動物からのＢＮ心臓からの有意により高い拒絶グレーディングを示した（ｎ＝群あたり３−５）。マン・ホイットニーＵ検定、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、ＮＳ、有意ではない（ｐ＞０．０５）。
[00588] ＣＴＴが挿入されたレシピエントにおける頸部ＢＮ心臓は大きく拡大された（図３０Ａ）が、腹部ＤＡ心臓は生来の心臓よりも小さかった（図３０Ａ）ことも特筆すべきである。ＣＴＴが挿入されていないレシピエントからのＢＮ心臓は、ＣＴＴを有するレシピエントからのＢＮ心臓と比較して、サイズのいかなる増加も示さなかった（図３０Ｂ）。
ＣＴＴのＤＡ ＭＨＣを共有するＤＡ心臓ではなく、第三者心臓における選択的Ｔ細胞浸潤
[00589] ２つの従来の方法を、このラット心臓移植モデル：心臓鼓動／停止測定およびＩＳＨＬＴヒトグレーディングシステムにおいて移植片拒絶を定義するために使用した。前者は、低グレード拒絶に対して非感受性であり、後者は、高グレード拒絶に対して非感受性である。結果として、炎症細胞浸潤は、１８０日目に３匹のラットからのＤＡ心臓において、および５匹のラットにおける７〜８か月での犠牲時のＢＮ心臓において測定された。炎症細胞浸潤は、１８０日目に３匹のラットからのＤＡ心臓において、および５匹のラットにおける７〜８か月での犠牲時のＢＮ心臓において測定された。
[00590] Ｔ細胞枯渇、ＣＴＴの外科的挿入、および４か月間投与されるＣｓＡで治療されたラットは、Ｔ細胞再増殖後、ＤＡ心臓において炎症細胞浸潤の増加したレベルを示さなかった（図３１Ａ）。（免疫抑制を有さないＬＷラットにおける）ＤＡ制御移植片は、ＣＴＴを有するか、またはＣＴＴを有さないラットにおいて、ＤＡ心臓における免疫細胞の浸潤と比較して、ＤＡ心臓における免疫細胞の有意に増加した移植片浸潤を示した。ＣＴＴが挿入された動物は、第三者心臓同種移植片（ＢＮ心臓）において大量の炎症細胞浸潤を示した（図３１Ｂ）。（免疫抑制を有さないＬＷラットにおける）ＢＮ対照移植片およびＣＴＴを有するレシピエントからのＢＮ移植片は、ＣＴＴを有さない動物からのＢＮ移植片におけるものと比較して、有意に上昇した炎症細胞浸潤を示した。ＣＴＴが挿入されていないラットは、それらの免疫不全のため、ＢＮ心臓（図３１Ｂ）網掛け三角）において浸潤を示さなかった。
[00591] Ｔ細胞浸潤を、免疫組織化学で評価し、ＣＴＴが挿入された動物のＤＡ（中央パネル、図３１Ｃ）ではなくＢＮ（右パネル、図３１Ｃ）心臓において選択的Ｔ細胞浸潤、およびＣＴＴが挿入されていない動物の両方の心臓（図３１Ｄ）においてＴ細胞浸潤の欠如を確認した。ＤＡおよびＢＮラットからの心臓同種移植片を、ＢＮ心臓拒絶時に生来の心臓で収集した。大まかに、生来の心臓およびＤＡ心臓（ＰＯＤ １９６）は、Ｔ細胞の劇的な増加を示さなかったが、ＢＮ心臓（ＰＯＤ１４）は、ＣＴＴが挿入されたレシピエントにおいて大量のＴ細胞を示した。画像をスライドスキャン全体から適応した。群あたり合計３〜５匹の動物を分析し、スチューデントのｔ検定、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、ＮＳ、有意ではない（ｐ＞０．０５）。
[00592] これらのデータは、ＣＴＴを受けた群について、Ｔ細胞浸潤が、第三者ＢＮ移植片においてのみ発生し、おそらく（ＤＡ心臓）ドナー抗原に対するＴ細胞レパートリー（負の選択による）の欠如により、移植された胸腺とＭＨＣ（ＤＡ）を共有する移植片では発生しないことを確認する。
胸腺移植後のドナー抗原に対する体液性応答
[00593] 抗ドナー抗体応答を評価して、胸腺摘出ＬＷラット、続いてＬＷｘＤＡ移植およびＣＴＴの外科的挿入において確認された同種Ｔ細胞不応答性が、ドナーＤＡ ＭＨＣに対する体液性寛容と関連付けられるかを決定した。連続的に収集されたレシピエント血清試料を収集し、ＤＡおよびＢＮラットからのＰＢＭＣとの交差適合を行った。免疫抑制なしでＤＡまたはＢＮ心臓移植を受けた動物は、それらのドナー（それぞれＤＡまたはＢＮ）に対する抗体を発達させた。同系心臓同種移植片を有する動物は、図３２Ａ（左側の列における横網掛けピーク、ＤＡは上部、およびＢＮは下部）において報告されるように、ＤＡまたはＢＮ ＭＨＣのいずれに対しても抗体を産生しなかった。Ｔ細胞フロー交差適合によって測定される移植後のドナー特異的同種抗体（抗ＤＡおよび抗ＢＮ抗体）の代表的なヒストグラムプロットを図３２Ａに示す。レシピエントは、ＣＴＴの有無にかかわらず、ＤＡ抗原に対するいずれの抗体も生成しなかった（図３２Ａにおける上段、中央、および右側の列）が、ＣＴＴを有する動物は、ＢＮ抗原に対する抗体を生成することができた（下段、中央パネル、図３２Ａ）。免疫抑制なしでのＤＡ心臓移植のレシピエントから、および免疫抑制なしでのＢＮ心臓移植のＬＷレシピエントからの血清試料を、それぞれ、抗ＤＡ（上段、左パネル、太線）または抗ＢＮ抗体（下段、左パネル、破線）の陽性対照（ＤＡ対照およびＢＮ対照）として使用した。
[00594] 興味深いことに、Ｔ細胞低応答性と同様に、抗ＤＡ Ａｂは、動物においてＣＴＴＴの有無にかかわらず検出されなかった（図３２Ｂ）。抗ＢＮ Ａｂは、ＣＴＴが挿入されたＬＷｘＤＡを有する動物では容易に検出されたが、ＣＴＴが挿入されていない動物では検出されなかった（ｐ＜０．０１）（図３２Ｃ）。ＣＴＴを有さない動物は、一般的には免疫不全であった。ＣＴＴを有する動物は、ＤＡに特異的な寛容を有した。
[00595] まとめると、胸腺共移植は、ドナー胸腺において発現する同種ＤＡ ＭＨＣに対する特異的寛容、よってドナー特異的抗ＤＡ Ｔ細胞レパートリーの両方の発達を防止すること、およびドナー（ＤＡ）特異的体液性応答を防止することを介した、ＤＡ心臓移植の長期生存をももたらした。免疫能力は、これらのラットにおいて、第三者のＢＮ心臓の急速な拒絶およびＢＮドナー細胞に対する同種抗体応答によって示された。
[00596] 上記の治療についてのさらなる支持は、ディジョージ異常患者との臨床経験から推論され得る。
[00597] 患者１は、完全型ディジョージ異常を持って生まれた小児である。彼は、出生時にＴ細胞を有さなかった。患者１についての主な問題は、低カルシウム血症のための多くの入院につながる深刻な副甲状腺機能低下症であった。患者１は、同じ日に培養胸腺組織移植（ＣＴＴ）および親副甲状腺移植の両方が与えられた。小規模な臨床試験には、胸腺および親副甲状腺が与えられた３人の他の患者がいた。患者１は、生後４か月で２つの移植を受けた。患者１はＴ細胞を有さなかったが、患者１はプロトコルに従って移植前に免疫抑制のためにＲＡＴＧＡＭが与えられた。他の免疫抑制は与えられなかった。患者１は、ナイーブＴ細胞およびマイトジェンに対する正常な増殖性Ｔ細胞応答を発生させた。試験において胸腺および副甲状腺の両方を受けた全ての４人の患者が、正常な副甲状腺ホルモンレベルを発達させた。患者１は、長期（１０年）のカルシウム補充をやめることができた唯一の対象であった。３人の他の患者のうち、１人は１年前に肺の問題で死亡し、完全型ディジョージ異常を有する他の２人は、約１年でカルシウム補充に戻らなければならなかった。患者１は、全ての時点で親副甲状腺ドナーに対して陰性の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）を有した唯一の対象であった。他の３人の対象は、それらの第１のアッセイで開始して陽性ＭＬＲを有した。
[00598] 副甲状腺機能を維持する患者１についての考えられる説明は、患者１の副甲状腺ドナーが、レシピエントクラスＩＩ対立遺伝子（下のグラフにおける淡灰色の網掛け）または胸腺ドナークラスＩＩ対立遺伝子（下のチャートにおける濃灰色の網掛け）のいずれかに適合するＨＬＡ−クラスＩＩ対立遺伝子を有したことである。
[00599] 患者１における幹細胞は、胸腺における胸腺細胞へと発達した。
[00600] 患者１からの樹状細胞は、胸腺に遊走し、患者１ＤＣ上のＭＨＣに強く結合するＴ細胞を欠失する。淡灰色の網掛けで対立遺伝子に対する寛容がある。表９を参照されたい。
[00601] 胸腺ドナー胸腺上皮細胞はまた、それらに強く結合した胸腺細胞も欠失する（濃灰色の網掛け）。これは、濃灰色の対立遺伝子に対する寛容のメカニズムである。
Figure 2021516224
[00602] 注目すべきことに、副甲状腺ドナーにはレシピエントにも胸腺ドナーにも適合しなかった１つのＨＬＡ−Ｂおよび１つのＨＬＡ−Ｃ対立遺伝子があることがわかる。我々は、副甲状腺が拒絶されなかった理由を理解しなかった。しかしながら、１０年が経過した後、小児には麻疹／おたふく風邪／風疹の生ワクチンが与えられた。副甲状腺機能は、２週間以内に破壊され、患者１は、カルシウム補充に戻った。
[00603] 我々は、生ワクチンが患者１においてＣＤ８ Ｔ細胞を活性化したと結論付ける。ＣＤ８ Ｔ細胞の３分の１は、固有のアロ反応性を有する。アロ反応性ＣＤ８ Ｔ細胞は、副甲状腺ドナーにおける不適合ＨＬＡ−ＢおよびＣ対立遺伝子（表における大きな太字ＨＬＡ−ＢおよびＨＬＡ−Ｃ対立遺伝子）に対して反応したであろう。
[00604] この患者からのデータで、長期寛容を誘導するためにクラスＩおよびクラスＩＩの両方についての適合が必要であることは明らかである。加えて、副甲状腺ドナーと胸腺ドナーとの間のＤＲＢ１およびＤＰＢ１における第２のフィールドの不適合（太字斜体）から、第２のフィールドの不適合は、許容性であり、寛容を形成することを可能にし得ることがわかる。特に、これらの第２のフィールド不適合は、移植片機能不全にはつながらず、それらは許容性であった。この小児は、良好なＴ細胞数および機能、ならびに正常な免疫グロブリンレベルで健康に育っている。しかしながら、患者１は、親副甲状腺が拒絶されたため、カルシウムを継続する。
[00605] 前述の実施形態および利点は、単なる例示であり、本発明を限定するものとして解釈されるべきではない。本教示は、他のタイプの装置、実験、および外科的手順に容易に適用することができる。また、本発明の実施形態の記載は、例示的であることが意図され、特許請求の範囲を限定しないことが意図される。多くの代替、変更、および変形は、当業者には明らかであろう。
[00606] 本発明は、その詳細な説明と併せて記載されてきたが、前述の説明は、例示することが意図され、添付の特許請求の範囲によって定義される、本発明の範囲を限定しないことを理解されたい。他の態様、利点、および変更は、以下の特許請求の範囲内である。
[00607] 本出願で議論される参考文献は、それらの意図された目的のために、参照によってその全体が組み込まれ、その文脈に基づいて明らかである。
[00608] 本明細書に引用される全ての特許、特許出願、および刊行物は、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。これらの刊行物の開示は、その全体が参照によって本出願に組み込まれる。
[00609] 本明細書に引用されるありとあらゆる特許、特許出願、刊行物、およびアクセッション番号の開示は、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。
[00610] 本開示は、様々な実施形態を参照して開示されてきたが、他の実施形態およびこれらの変形が、本開示の真の精神および範囲から逸脱することなく当業者によって考案され得ることは明らかである。添付の特許請求の範囲は、全てのそのような実施形態および同等の変形を含むと解釈されることが意図される。
[00611] 前述の明細書は、当業者が実施形態を実施することを可能にするために十分であると考えられる。前述の説明および実施例は、特定の実施形態を詳述し、発明者によって企図される最良の形態を説明する。しかしながら、前述がいかに詳細に本文中に出現しても、実施形態は、多くの方法で実施され得、添付の特許請求の範囲およびその同等物に従って解釈されるべきであることが理解されるであろう。
[00612]参考文献
[00613] Ａｈｏｎｅｎ，Ｐ．，１９８５，“Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｐｏｌｙｅｎｄｏｃｒｉｎｏｐａｔｈｙ−ｃａｎｄｉｄｏｓｉｓ−ｅｃｔｏｄｅｒｍａｌ ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ（ＡＰＥＣＥＤ）：ａｕｔｏｓｏｍａｌ ｒｅｃｅｓｓｉｖｅ ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ，”Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２７：５３５−５４２Ａｈｏｎｅｎ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，１９８７，“Ａｄｒｅｎａｌ ａｎｄ ｓｔｅｒｏｉｄａｌ ｃｅｌｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｐｏｌｙｇｌａｎｄｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ ｔｙｐｅ Ｉ ａｎｄ ｒｉｓｋ ｏｆ ａｄｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃａｌ ａｎｄ ｏｖａｒｉａｎ ｆａｉｌｕｒｅ，”Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，６４：４９４−５００．
[00614] Ａｈｏｎｅｎ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，１９８７，“Ａｄｒｅｎａｌ ａｎｄ ｓｔｅｒｏｉｄａｌ ｃｅｌｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｐｏｌｙｇｌａｎｄｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ ｔｙｐｅ Ｉ ａｎｄ ｒｉｓｋ ｏｆ ａｄｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃａｌ ａｎｄ ｏｖａｒｉａｎ ｆａｉｌｕｒｅ，”Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，６４：４９４−５００．
[00615] Ａｈｏｎｅｎ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，６６，１１５２−１１５７．
[00616] Ａｈｏｎｅｎ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，１９９０，“Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｏｆ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｐｏｌｙｅｎｄｏｃｒｉｎｏｐａｔｈｙ−ｃａｎｄｉｄｉａｓｉｓ−ｅｃｔｏｄｅｒｍａｌ ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ（ＡＰＥＣＥＤ）ｉｎ ａ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ ６８ ｐａｔｉｅｎｔｓ，”Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２２：１８２９−１８３６．
[00617] Ａｒｕｌａｎａｎｔｈａｍ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，１９７９，“Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ Ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｏｆ Ｆａｍｉｌｉａｌ Ｃａｎｄｉｄｉａｓｉｓ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｐａｔｈｙ，”Ｎｅｗ Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３００：１６４−１６８．
[00618] Ｂｌｉｚｚａｒｄ，Ｒ．Ｍ．ａｎｄ Ｋｙｌｅ Ｍ．，１９６３，“Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ａｄｒｅｎａｌ Ａｎｔｉｇｅｎｓ ａｎｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ａｄｄｉｓｏｎ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ，”Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．４２：１６５３−１６６０Ｂｏｅｈｍ Ｔ，Ｔａｋａｈａｍａ Ｙ．２０１４．Ｔｈｙｍｉｃ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ．
[00619] Ｂｏｅｈｍ Ｔ，Ｔａｋａｈａｍａ Ｙ．２０１４．Ｔｈｙｍｉｃ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ．
[00620] ＣＦＲ Ｔｉｔｌｅ ２１；１２７１ Ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌｓ，ｔｉｓｓｕｅｓ，ａｎｄ ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ−ｂａｓｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ．
[00621] Ｃｈｉｎｎ Ｉ，Ｄｅｖｌｉｎ Ｂ，Ｌｉ ＹＪ，ｅｔ ａｌ．，２００８．“Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｔｏ ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ ｔｈｙｍｕｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓ ｉｎ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ＤｉＧｅｏｒｇｅ ａｎｏｍａｌｙ，”Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２６（３）：２７７−２８１．
[00622] Ｈｅｒｏｎ Ｉ．，１９７１，“Ａ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｆｏｒ ａｃｃｅｓｓｏｒｙ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｈｅａｒｔ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｒａｂｂｉｔｓ ａｎｄ ｒａｔｓ，”Ａｃｔａ Ｐａｔｈｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｓｃａｎｄ Ａ ７９（４）：３６６−３７２．
[00623] Ｈｏｎｇ Ｒ，Ｓｃｈｕｌｔｅ−Ｗｉｓｓｅｒｍａｎｎ Ｈ，Ｊａｒｒｅｔｔ−Ｔｏｔｈ Ｅ，Ｈｏｒｏｗｉｔｚ ＳＤ，Ｍａｎｎｉｎｇ ＤＤ，“Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｔｈｙｍｉｃ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ．ＩＩ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ，”Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１４９（２）：３９８−４１５．
[00624] Ｌｉ Ｂ，Ｌｉ Ｊ，Ｈｓｉｅｈ ＣＳ，Ｈａｌｅ ＬＰ，Ｌｉ ＹＪ，Ｄｅｖｌｉｎ ＢＨ，Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ．２００９”Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｔｈｙｍｕｓ ｔｉｓｓｕｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｅｍｐｈａｓｉｓ ｏｎ ｐｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｙｒｏｉｄ ｔｉｓｓｕｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｅｎｅｓ，”２００９，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ．２００９，４４（１−３）：７１−８３．
[00625] Ｌｉ Ｂ，Ｌｉ Ｊ，Ｄｅｖｌｉｎ ＢＨ，Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ．２０１１，“Ｔｈｙｍｉｃ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｐｏｓｔｎａｔａｌ ｈｕｍａｎ ｔｈｙｍｕｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，”Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｓｅｐ；１４０（３）：２４４−５９．
[00626] Ｋｒｏｈｎ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，１９９２，“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｂｙ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ａｎ ａｕｔｏａｎｔｉｇｅｎ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ａｄｄｉｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ａｓ ｓｔｅｒｏｉｄ １７α−ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ，”Ｌａｎｃｅｔ ３３９：７７０−７７３．
[00627] Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，Ｋｏｓｔｙｕ ＤＤ，Ｗａｒｄ ＦＥ，ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ ＴＭ，Ｗａｔｓｏｎ ＴＪ，Ｂｕｃｋｌｅｙ ＲＨ，Ｓｃｈｉｆｆ ＳＥ，Ｕｎｇｅｒｌｅｉｄｅｒ ＲＭ，Ｇａｙｎｏｒ ＪＷ，Ｏｌｄｈａｍ ＫＴ，Ｍａｈａｆｆｅｙ ＳＭ，Ｂａｌｌｏｗ Ｍ，Ｄｒｉｓｃｏｌｌ ＤＡ，Ｈａｌｅ ＬＰ，Ｈａｙｎｅｓ ＢＦ．“Ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ｈｕｍａｎ ｔｈｙｍｕｓ ａｌｌｏｇｒａｆｔ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｒｔｉａｌｌｙ ＨＬＡ−ｍａｔｃｈｅｄ ｐｏｓｔｎａｔａｌ ｔｈｙｍｕｓ，”１９９７，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１５８：９９８−１００５．
[00628] Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，Ｂｏｅｃｋ Ａ，Ｈａｌｅ ＬＰ，Ｋｌｏｓｔｅｒ ＡＬ，ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ ＴＭ，Ｂａｔｃｈｖａｒｏｖａ ＭＮ，ｅｔ ａｌ．，“Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｙｍｕｓ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ＤｉＧｅｏｒｇｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，”１９９９，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．３４１（１６）：１１８０−９．
[00629] Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，ｅｔ ａｌ．，２００４，“Ｐｏｓｔｎａｔａｌ ｔｈｙｍｕｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｓ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ ＤｉＧｅｏｒｇｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，”Ｂｌｏｏｄ １０４（８）：２５７４−２５８１．
[00630] Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，Ｄｅｖｌｉｎ ＢＨ，Ａｌｅｘｉｅｆｆ ＭＪ，Ｌｉ Ｊ，ＭｃＣａｒｔｈｙ ＥＡ，Ｇｕｐｔｏｎ ＳＥ，ｅｔ ａｌ．，“Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ５４ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ＤｉＧｅｏｒｇｅ ａｎｏｍａｌｙ ｅｎｒｏｌｌｅｄ ｉｎ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｏｒ ｔｈｙｍｕｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：ｏｕｔｃｏｍｅ ｏｆ ４４ ｃｏｎｓｅｃｕｔｉｖｅ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓ，”２００７，Ｂｌｏｏｄ，１０９（１０）：４５３９−４７．
[00631] Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，ｅｔ ａｌ．，２００８），“Ｕｓｅ ｏｆ ａｌｌｏｇｒａｆｔ ｂｉｏｐｓｉｅｓ ｔｏ ａｓｓｅｓｓ ｔｈｙｍｏｐｏｉｅｓｉｓ ａｆｔｅｒ ｔｈｙｍｕｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．”Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８０（９）：６３５４−６３６４．
[00632] Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，Ｄｅｖｌｉｎ ＢＨ，ＭｃＣａｒｔｈｙ ＥＡ，２０１０，“Ｔｈｙｍｕｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，”Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３５（２）：２３６−４６．
[00633] Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，Ｄｅｖｌｉｎ ＢＨ，ＭｃＣａｒｔｈｙ ＥＡ．Ｃｈａｐｔｅｒ ８４ Ｔｈｙｍｉｃ ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ．２０１３．Ｉｎ：Ｆｌｅｉｓｈｅｒ ＴＡ，Ｓｈｅａｒｅｒ ＷＴ，Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ ＨＷ，Ｆｒｅｗ ＡＪ，Ｗｅｙ ａｎｄ ＣＭ，ｅｄｉｔｏｒｓ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｆｏｕｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ）．Ｌｏｎｄｏｎ ｐｐ．１０３２−８．
[00634] Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ．２０１４．“Ｔｈｙｍｕｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，”Ｓｔｉｅｈｍ’ｓ Ｉｍｍｕｎｅ Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｅｓ，ｅｄｓ Ｓｕｌｌｉｖａｎ ＫＥ＆Ｓｔｉｅｈｍ ＥＲ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ），１ｓｔ Ｅｄ，ｐｐ １０５９−１０６７．
[00635] Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，Ｗａｔｓｏｎ ＴＪ，Ｋａｐｌａｎ Ｉ，Ｈａｌｅ ＬＰ，Ｈａｙｎｅｓ ＢＦ，“Ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｔｈｙｍｉｃ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｄｕｒｉｎｇ ｏｒｇａｎ ｃｕｌｔｕｒｅ，”１９９７，Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．，Ｊａｎ；８２（１）：２６−３６．
[00636] Ｎｅｕｆｅｌｄ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，１９８１，“Ｔｗｏ ｔｙｐｅｓ ｏｆ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ａｄｄｉｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｏｌｙｇｌａｎｄｕｌａｒ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ（ＰＧＡ）ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ，”Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ６０：３５５−３６２．
[00637] Ｐａｒｋｅｒ Ｗ，Ｙｕ ＰＢ，Ｈｏｌｚｋｎｅｃｈｔ ＺＥ，Ｌｕｎｄｂｅｒｇ Ｋ，Ｂｕｃｋｌｅｙ ＲＨ，Ｐｌａｔｔ ＪＬ，“Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ’ｎａｔｕｒａｌ’ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｓｕｂｊｅｃｔｓ：Ｃｌｕｅｓ ｔｏ Ｂ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅａｇｅ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，”１９９７，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７：３１１−３２１．
[00638] Ｐｅｒｈｅｅｎｔｕｐａ Ｊ．，２００２，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．３１：２９５−３２０Ｒｏｔａ ＩＡ ａｎｄ Ｄｈａｌｌａ Ｆ．ＦＯＸＮ１ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｎｕｄｅ ｓｅｖｅｒｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ．Ｏｒｐｈａｎｅｔ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒａｒｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ．２０１７；１２：６．
[00639] Ｒｅｎｄｅｌｌ ＶＲ，Ｇｉａｍｂｅｒａｒｄｉｎｏ Ｃ，Ｌｉ Ｊ，Ｍａｒｋｅｒｔ ＭＬ，＆Ｂｒｅｎｎａｎ ＴＶ，２０１４，“Ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｔｈｙｍｅｃｔｏｍｙ ｉｎ ａｄｕｌｔ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ｎｏｎ−ｉｎｖａｓｉｖｅ ｅｎｄｏｔｒａｃｈｅａｌ ｉｎｔｕｂａｔｉｏｎ，”Ｊ Ｖｉｓ Ｅｘｐ（９４）．
[00640] Ｓｃｈｍｉｄ Ｃ，Ｂｉｎｄｅｒ Ｊ，Ｈｅｅｍａｎｎ Ｕ，＆Ｔｉｌｎｅｙ ＮＬ，１９９４，”Ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ ｈｅｔｅｒｏｔｏｐｉｃ ｈｅａｒｔ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｒａｔ，”Ｍｉｃｒｏｓｕｒｇｅｒｙ １５（４）：２７９−２８１．
[00641] Ｓｃｈｏｅｎｅｃｋｅｒ ＪＧ，Ｈａｕｃｋ ＲＫ，Ｍｅｒｃｅｒ ＭＣ，Ｐａｒｋｅｒ Ｗ，Ｌａｗｓｏｎ Ｊ，２０００，“Ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｔｏ ｔｏｐｉｃａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｄｕｒｉｎｇ ｓｕｒｇｅｒｙ ｅｌｉｃｉｔｓ ａ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ ｘｅｎｏｇｅｎｅｉｃ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ｇａｌａｃｔｏｓｅ α１−３Ｇａｌａｃｔｏｓｅ，”Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０：４３４−４４４．
[00642] Ｕｉｂｏ Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，１９９４，“Ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ Ｐ４５０ ｅｎｚｙｍｅｓ Ｐ４５０ｓｃｃ，Ｐ４５０ｃ１７，ａｎｄ Ｐ４５０ｃ２１ ｉｎ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｐｏｌｙｇｌａｎｄｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ ｔｙｐｅｓ Ｉ ａｎｄ ＩＩ ａｎｄ ｉｎ ｉｓｏｌａｔｅｄ Ａｄｄｉｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ，”Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．７８：３２３−３２８．
[00643] Ｚｌｏｔｏｇｏｒａ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，１９９２，“Ｐｏｌｙｇｌａｎｄｕｌａｒ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｔｙｐｅ Ｉ ａｍｏｎｇ Ｉｒａｎｉａｎ Ｊｅｗｓ，”Ｊ．Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ，２９，８２４−８２６．
[00644]略語
[00645] ＡＩＲＥ：自己免疫調節遺伝子
[00646] Ａｂ：抗体
[00647] Ａｇ：抗原
[00648] ＡＰＣ：抗原提示細胞
[00649] ＡＴＧ：チモグロブリン
[00650] ｂ．ｉ．ｄ．：１日２回
[00651] ＢＭＩ：体重指数
[00652] ＢＳＡ：体表面積
[00653] ＢＳＣ：生物学的安全キャビネット
[00654] ｃＤＧＡ：完全ＤｉＧｅｏｒｇｅ異常
[00655] ＣＦＲ：連邦規則集
[00656] ＣＫ：サイトケラチン
[00657] ＣＮＩ：カルシニューリン阻害剤
[00658] ＣＴＴ：同種培養生後胸腺組織由来産物
[00659] ＣＶＶＨＤ／Ｆ：持続的静静脈血液透析濾過
[00660] ＤＣ：樹状細胞
[00661] ＤＳＡ：ドナー特異的抗体
[00662] ＤＧＦ：移植片機能遅延
[00663] ＥＢＶ：エプスタインバールウイルス
[00664] ＥＵ：エンドトキシン単位
[00665] ＦＢＳ：ウシ胎児血清
[00666] ＦＤＡ：食品医薬品局
[00667] ＦＳＧＳ：巣状分節性糸球体硬化症
[00668] Ｈ＆Ｅ：ヘマトキシリンおよびエオジン
[00669] ＨＤ：血液透析
[00670] ＨＥＰＥＳ：Ｎ−２−ヒドロキシエチルペペラジンＮ’−２−エタン−スルホン酸
[00671] ＨＩ：ＨＩ−熱不活性化
[00672] ＨＩＰ：腹腔内
[00673] ＨＩＶ：ヒト免疫不全ウイルス
[00674] ＩＢＷ：理想体重
[00675] ＩＤＤＭ：インスリン依存性糖尿病
[00676] ＩＳＨＬＴ：国際心肺移植学会
[00677] ＩＳＯ：国際標準化機構
[00678] ＬＡＬ：カブトガニ変形細胞溶解物
[00679] ｍＡｂ：モノクローナル抗体
[00680] ＭＨＣ：主要組織適合性複合体
[00681] ＭＳＴ：平均生存時間
[00682] ＰＢＭＣ：末梢血単核細胞
[00683] ＰＢＳ：リン酸緩衝生理食塩水
[00684] ＰＯＤ：術後日目
[00685] ＰＲＡ：パネル反応性抗体
[00686] ＳＬ：舌下
[00687] ＴＢＷ：総体重
[00688] ＴＣ：組織培養
[00689] Ｔｆｈ：Ｔ濾胞性ヘルパー
[00690] ＴＯＭ：胸腺臓器培地
[00691] ＵＳＰ：米国薬局方

Claims (124)

  1. 固形臓器移植を必要とするレシピエントにおいて、死亡ドナーから得られる同種固形臓器移植に対するドナー特異的寛容を促進するための方法であって、前記方法が、
    （ａ）前記レシピエントの胸腺の除去ステップと、
    （ｂ）前記レシピエントを、１つ以上の免疫抑制剤を含む誘導免疫抑制レジメンで治療して、前記レシピエントのＴ細胞を枯渇させる、および／または前記レシピエントのＴ細胞が前記移植された固形臓器を拒絶するのを抑制するステップと、
    （ｃ）死亡ドナーからの適切な固形ヒト臓器および胸腺の両方を提供するステップと、
    （ｄ）前記固形ヒト臓器を前記レシピエントに移植するステップと、
    （ｅ）前記レシピエントを維持免疫抑制レジメンで治療するステップと、
    （ｆ）同種培養生後胸腺組織由来産物を提供するステップであって、前記同種培養生後胸腺組織由来産物が、前記固形臓器ドナーの適切な胸腺組織から得られ、前記ドナー胸腺組織が、同種培養生後胸腺組織由来産物を産生するために最大２１日の期間コンディショニングレジメンに供され、さらに、前記ドナー胸腺組織のための前記コンディショニングレジメンが、胸腺臓器培地において前記ドナー胸腺組織を無菌で処理して、部分的にＴ細胞が枯渇したドナー胸腺組織片を産生することを含み、前記部分的にＴ細胞が枯渇したドナー胸腺組織片が、前記組織全体に散在したサイトケラチン（ＣＫ）（抗体ＡＥ１／ＡＥ３を使用）について陽性の領域、少なくとも１つのハッサル小体の存在、前記組織全体に散在したＣＫ１４染色、およびインタクトな核の存在を示す、ステップと、
    （ｇ）前記同種培養生後胸腺組織由来産物を、コンディショニングレジメンの１２〜２１日後、前記レシピエントに移植するステップであって、胸腺組織片の投与量が、約１，０００〜２０，０００ｍｍ２の胸腺組織表面積／１ｍ２のレシピエント体表面積であり、さらに、前記移植された同種培養生後胸腺組織由来産物が、前記レシピエントにおいて胸腺リンパ球新生および寛容を誘導する、ステップと、を含む、方法。
  2. 前記レシピエントの胸腺の前記除去が、外科手術によるものである、請求項１に記載の方法。
  3. 前記レシピエントの胸腺の前記除去が、ロボット手術によるものである、請求項２に記載の方法。
  4. 前記レシピエントの胸腺手術の前記除去が、胸腔鏡手術によるものである、請求項２に記載の方法。
  5. 細胞寛容を示す混合リンパ球反応における今後の使用のために、前記死亡ドナーからの末梢血単核細胞を凍結保存するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
  6. 前記細胞寛容を示す混合リンパ球反応が、ステップ（ｇ）に従った同種培養生後胸腺組織由来産物の前記移植後に、前記レシピエントからの末梢血単核細胞および前記ドナーからの凍結保存された末梢血単核細胞を用いて行われる、請求項５に記載の方法。
  7. 前記細胞寛容を示す混合リンパ球反応が、同種培養生後胸腺組織由来産物の前記移植の約６〜１２か月後に、前記レシピエントからの末梢血単核細胞および前記ドナーからの凍結保存された末梢血単核細胞で行われる、請求項６に記載の方法。
  8. 前記細胞寛容を示す混合リンパ球反応が、ナイーブＴ細胞が前記レシピエントにおける総Ｔ細胞の約１０％を構成した後、前記レシピエントからの末梢血単核細胞および前記ドナーからの凍結保存された末梢血単核細胞で行われる、請求項７に記載の方法。
  9. 前記移植された同種培養生後胸腺組織由来産物が、同種培養生後胸腺組織由来産物の前記移植後１２か月以内に、前記対象において胸腺リンパ球新生を誘導する、請求項１に記載の方法。
  10. 前記ドナー胸腺が、採取日に、領域の５０％超がレース状染色パターンでケラチンについて陽性であること、ハッサル小体が存在すること、ＣＫ１４がレース状パターンで染色すること、および核の９０％超がインタクトであることを示す、請求項１に記載の方法。
  11. 体液性寛容が、体液性免疫の発達および前記ドナーのＭＨＣに対するドナー反応性抗体の不在によって決定される、請求項１に記載の方法。
  12. 前記誘導免疫抑制レジメンが、グルココルチコイド、抗胸腺細胞グロブリン（ウサギ）、抗胸腺細胞グロブリン（ウマ）、およびアレムツジマブ（ａｌｅｍｔｕｚｉｍａｂ）の群から選択される免疫抑制剤を含む、請求項１に記載の方法。
  13. 前記第２の免疫抑制レジメンが、グルココルチコイドの投与を含む、請求項１に記載の方法。
  14. 前記グルココルチコイドが、メチルプレドニゾロンコハク酸ナトリウムを含む、請求項１３に記載の方法。
  15. 前記メチルプレドニゾロンコハク酸ナトリウムが、同種培養生後胸腺組織由来産物の移植後、４ｍｇ／ｋｇ／日以下で静脈内投与される、請求項１４に記載の方法。
  16. 前記第２の免疫抑制レジメンが、グルココルチコイドおよびタクロリムスまたはシクロスポリンの投与、ならびにミコフェニル酸モフェチル、ミコフェニル酸モフェチル（ｍｙｃｏｐｈｅｎｙｌａｔｅ ｍｏｆｅｔｉｌ）の等価物、またはアザトロプリン（ａｚａｔｈｒｏｐｒｉｎｅ）をさらに投与することを含む、請求項１に記載の方法。
  17. 前記固形臓器が、臓器全体の一部分である、請求項１に記載の方法。
  18. 前記固形臓器移植が、心臓移植、腎臓移植、肝臓移植、肺移植、心臓／肺移植、膵臓移植、腸移植、胃移植、腹壁移植、頭蓋顔面移植、頭皮移植、陰茎移植、子宮移植、片側もしくは両側上肢移植、片側血管新生複合同種移植、またはそれらの組み合わせである、請求項１に記載の方法。
  19. 前記固形臓器移植が、心臓移植である、請求項１８に記載の方法。
  20. 前記心臓移植が、小児心臓移植である、請求項１９に記載の方法。
  21. 前記心臓移植が、成人心臓移植である、請求項１８に記載の方法。
  22. 前記レシピエントを、前記固形臓器を移植する前に、ＨＬＡクラスＩまたはＨＬＡクラスＩＩパネル反応性抗体（「ＰＲＡ」）スコアについて評価することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
  23. ＨＬＡ抗体を有するレシピエントが、潜在的なドナーと交差適合される、請求項１に記載の方法。
  24. ＨＬＡ抗体を有するレシピエントが、ＵＮＥＴと実質的に交差適合される、請求項２３に記載の方法。
  25. ２０％超の仮想交差適合のＰＲＡスコアが記録される場合、前記方法が、前記レシピエントにおける固形臓器移植時に手術室において血漿交換を行うステップをさらに含む、請求項２２に記載の方法。
  26. ７０％超の仮想交差適合のＰＲＡスコアが記録される場合、前記方法が、前記レシピエントにおける固形臓器移植時に手術室において実際の見込みドナー交差適合を行い、血漿交換を行うステップをさらに含む、請求項２２に記載の方法。
  27. 前記固形臓器が、ＨＬＡ不適合である、請求項１に記載の方法。
  28. ＨＬＡ不適合が、前記ドナーおよび前記レシピエントにおいてＨＬＡ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＲＢ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５、ＨＬＡ−ＤＱＡ１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１、ＨＬＡ−ＤＰＡ１をタイピングすることによって決定される、請求項２７に記載の方法。
  29. ＨＬＡ不適合が、前記ドナーと前記レシピエントとの間で異なるＨＬＡ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＲＢ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５、ＨＬＡ−ＤＱＡ１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１、ＨＬＡ−ＤＰＡ１のうちの少なくとも１つを含む、請求項２８に記載の方法。
  30. 前記同種培養生後胸腺組織由来産物の一部分が、前記レシピエントの大腿四頭筋に外科的に移植される、請求項１に記載の方法。
  31. 前記同種培養生後胸腺組織由来産物の残りの部分が、前記レシピエントへの今後の移植のために液体窒素中で凍結保存される、請求項３０に記載の方法。
  32. 前記コンディショニングレジメンが、約１２日〜約２１日の期間である、請求項１に記載の方法。
  33. 前記コンディショニング期間が、約１２日間である、請求項３２に記載の方法。
  34. 前記コンディショニング期間が、約１３日間である、請求項３２に記載の方法。
  35. 前記コンディショニング期間が、約１４日間である、請求項３２に記載の方法。
  36. 前記コンディショニング期間が、約１５日間である、請求項３２に記載の方法。
  37. 前記コンディショニング期間が、約１６日間である、請求項３２に記載の方法。
  38. 前記コンディショニング期間が、約１７日間である、請求項３２に記載の方法。
  39. 前記コンディショニング期間が、約１８日間である、請求項３２に記載の方法。
  40. 前記コンディショニング期間が、約１９日間である、請求項３２に記載の方法。
  41. 前記コンディショニング期間が、約２０日間である、請求項３２に記載の方法。
  42. 前記コンディショニング期間が、約２１日間である、請求項３２に記載の方法。
  43. 前記誘導免疫抑制レジメンが、ウサギ由来抗胸腺細胞グロブリンを含む、請求項１２に記載の方法。
  44. 前記ウサギ由来抗胸腺細胞グロブリンが、約１．５ｍｇ／ｋｇ／日の用量で約３〜７日間静脈内投与される、請求項４３に記載の方法。
  45. 前記抗胸腺細胞グロブリンが、静脈内投与によって約１５ｍｇ／ｋｇ／日で３〜１４日間毎日投与される、請求項４４に記載の方法。
  46. 前記誘導免疫抑制レジメンが、アレムツズマブを含む、請求項１２に記載の方法。
  47. 前記アレムツズマブが、体重が３５ｋｇ未満のレシピエントについて、約０．２５ｍｇ／ｋｇの用量で４日間静脈内投与される、請求項４６に記載の方法。
  48. 前記アレムツズマブが、体重が３５ｋｇ超のレシピエントについて、約３〜２０ｍｇの用量で４日間静脈内投与される、請求項４６に記載の方法。
  49. 前記第２の免疫抑制レジメンが、カルシニューリン阻害剤、およびイノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤、またはアザチオプリンからなる群から選択される１つ以上の免疫抑制剤を含む、請求項１に記載の方法。
  50. 前記免疫抑制剤が、カルシニューリン阻害剤である、請求項４９に記載の方法。
  51. 前記免疫抑制剤が、イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤である、請求項４９に記載の方法。
  52. 前記イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤が、ミコフェノール酸モフェチルである、請求項５１に記載の方法。
  53. 前記ミコフェノール酸モフェチルが、経口または静脈内投与される、請求項５２に記載の方法。
  54. 前記ミコフェノール酸モフェチルが、約１５〜約２５ｍｇ／ｋｇの用量で１日あたり２〜３回投与される、請求項５３に記載の方法。
  55. 前記イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤が、ミコフェノール酸である、請求項４９に記載の方法。
  56. 前記ミコフェノール酸が、約２５〜約５０ｍｇ／ｋｇの用量で１日あたり２つまたは３つの用量で投与される、請求項５５に記載の方法。
  57. 前記第２の免疫抑制レジメンが、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、およびプレドニゾロンからなる群から選択されるグルココルチコイドをさらに含む、請求項１に記載の方法。
  58. 前記グルココルチコイドが、漸減投与量で投与され、前記用量が、４ｍｇ／ｋｇ／日以下に保持される、請求項５７に記載の方法。
  59. 前記カルシニューリン阻害剤が、タクロリムスである、請求項４９に記載の方法。
  60. 前記カルシニューリン阻害剤が、シクロスポリンＡである、請求項４９に記載の方法。
  61. 前記第２の免疫抑制剤レジメンの１つ以上の免疫抑制剤の投与が、ナイーブＴ細胞が全Ｔ細胞の１０％に達した後に離脱される、請求項１に記載の方法。
  62. 前記移植された同種培養生後胸腺組織由来産物が、免疫化学によって胸腺リンパ球新生の証拠について評価するために、移植後２〜１２か月で生検される、請求項１に記載の方法。
  63. ドナーから適切な胸腺組織を得ることであって、前記ドナー胸腺組織が、最大２１日の期間コンディショニングレジメンに供され、さらに、前記ドナー胸腺組織のための前記コンディショニングレジメンが、胸腺臓器培地において前記ドナー胸腺組織を無菌で処理して、部分的にＴ細胞が枯渇したドナー胸腺組織片を産生することを含み、前記ドナー胸腺組織片が、採取後５〜９日目、前記組織全体に散在したケラチンＡＥ１／ＡＥ３について陽性の領域、少なくとも１つのハッサル小体の存在、前記組織全体に散在したＣＫ１４染色、およびインタクトな核の存在を示す、得ることと、前記部分的にＴ細胞が枯渇したドナー胸腺組織片を、同種培養生後胸腺組織由来産物として回収することと、によって調製される固形臓器移植を受ける対象への移植のための同種培養生後胸腺組織由来産物。
  64. 前記胸腺が、採取日に、領域の５０％超がレース状染色パターンでケラチンについて陽性であること、ハッサル小体が存在すること、ＣＫ１４がレース状パターンで染色すること、および核の９０％超がインタクトであることを示す、請求項６３に記載の同種培養生後胸腺組織由来産物。
  65. 今後の使用のために液体窒素中で維持され、凍結保存される、同種培養生後胸腺組織由来産物。
  66. （ａ）ドナーから適切な胸腺組織を得るステップと、
    （ｂ）ＨＬＡ対立遺伝子：ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＲＢ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５、ＨＬＡ−ＤＱＡ１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１、ＨＬＡ−ＤＰＡ１をタイピングするステップと、
    （ｃ）前記胸腺組織を、最大１２日の期間コンディショニングレジメンに供するステップであって、前記ドナー胸腺組織のための前記コンディショニングレジメンが、胸腺臓器培地において前記ドナー胸腺組織を無菌で処理して、部分的にＴ細胞が枯渇したドナー胸腺組織片を産生することを含み、さらに、前記ドナー胸腺組織片が、５〜９日目に、前記組織全体に散在したケラチンＡＥ１／ＡＥ３について陽性の領域、少なくとも１つのハッサル小体の存在、前記組織全体に散在したＣＫ１４染色、および前記コンディショニングレジメンの完了時にインタクトな核の存在を示す、ステップと、
    （ｄ）前記部分的にＴ細胞が枯渇したドナー胸腺組織片を同種培養生後胸腺組織由来産物として採取するステップと、
    （ｅ）前記同種培養生後胸腺組織由来産物を液体窒素中で凍結保存するステップと、
    （ｆ）前記凍結保存された同種培養生後胸腺組織由来産物を凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物バンクにおいて液体窒素中で維持するステップと、を含む、方法によって調製される、凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物。
  67. 前記胸腺が、採取日に、領域の５０％超がレース状染色パターンでケラチンについて陽性であること、ハッサル小体が存在すること、ＣＫ１４がレース状パターンで染色すること、および核の９０％超がインタクトであることを示す、請求項６６に記載の凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物。
  68. 固形臓器移植を必要とするヒトレシピエントにおいて、生体ヒトドナーから得られる同種固形臓器移植に対するドナー特異的寛容を促進するための方法であって、前記方法が、
    （ａ）前記レシピエントの胸腺の除去ステップと、
    （ｂ）前記レシピエントを、１つ以上の免疫抑制剤を含む誘導免疫抑制レジメンで治療して、前記レシピエントのＴ細胞を枯渇させる、および／または前記レシピエントのＴ細胞が前記移植された固形臓器を拒絶するのを抑制するステップと、
    （ｃ）生体ヒトドナーからの適切な固形臓器を提供するステップと、
    （ｄ）前記固形臓器を前記レシピエントに移植するステップと、
    （ｅ）前記レシピエントを維持免疫抑制レジメンで治療するステップと、
    （ｆ）凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物バンクに維持された凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物を提供するステップであって、前記凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物が、前記固形臓器移植に存在しない前記レシピエントにおけるＨＬＡ対立遺伝子に適合したＨＬＡ対立遺伝子を発現する胸腺ドナーからの胸腺組織から処理され、前記ドナー胸腺組織が、最大１２日の期間コンディショニングレジメンに供され、さらに、前記ドナー胸腺組織のための前記コンディショニングレジメンが、胸腺臓器培地において前記ドナー胸腺組織を無菌で処理して、部分的にＴ細胞が枯渇した胸腺組織片を産生することを含み、前記胸腺組織片が、組織全体に散在したケラチンＡＥ１／ＡＥ３について陽性の領域、少なくとも１つのハッサル小体の存在、組織全体に散在したＣＫ１４染色、および前記コンディショニングレジメンの完了時にインタクトな核の存在を示す、ステップと、
    （ｇ）前記凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物を解凍するステップと、
    （ｈ）前記解凍された凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物を前記レシピエントに移植するステップであって、前記凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物の投与量が、約１，０００〜２０，０００ｍｍ２の胸腺組織表面積／１ｍ２のレシピエント体表面積であり、さらに、前記移植された同種培養生後胸腺組織由来産物が、前記レシピエントにおいて胸腺リンパ球新生および寛容を誘導する、ステップと、を含む、方法。
  69. ＨＬＡ適合が、第２のフィールドにおける対立遺伝子のアミノ酸配列の小さな変動を許容する、請求項６８に記載の方法。
  70. ＨＬＡ適合が、第２のフィールドにおけるＨＬＡ−ＤＰ対立遺伝子の不適合を許容する、請求項６８に記載の方法。
  71. 前記解凍された凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物の約半分が、前記レシピエントに移植され、残部が、今後の使用のために凍結保存される、請求項６８に記載の方法。
  72. ステップ（ｈ）が、前記固形臓器の移植の約１か月以上後に行われる、請求項６８に記載の方法。
  73. 固形臓器移植を必要とするヒトレシピエントにおいて、死亡ヒトドナーから得られる同種固形臓器移植に対するドナー特異的寛容を促進するための方法であって、前記方法が、
    （ａ）前記レシピエントの胸腺の除去ステップと、
    （ｂ）前記レシピエントを、１つ以上の免疫抑制剤を含む誘導免疫抑制レジメンで治療して、前記レシピエントのＴ細胞を枯渇させる、および／または前記レシピエントのＴ細胞が前記移植された固形臓器を拒絶するのを抑制するステップと、
    （ｃ）生体ヒトドナーからの適切な固形臓器を提供するステップと、
    （ｄ）前記固形臓器を前記レシピエントに移植するステップと、
    （ｅ）前記レシピエントを維持免疫抑制レジメンで治療するステップと、
    （ｆ）凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物バンクに維持された凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物を提供するステップであって、凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物が、固形臓器移植片中に存在しないレシピエントにおけるＨＬＡ対立遺伝子に適合したＨＬＡ対立遺伝子を発現する胸腺ドナーからの胸腺組織から処理され、ドナー胸腺組織が、最大１２日の期間コンディショニングレジメンに供され、さらに、ドナー胸腺組織のためのコンディショニングレジメンが、胸腺臓器培地においてドナー胸腺組織を無菌で処理して、部分的にＴ細胞が枯渇した胸腺組織片を産生することを含み、胸腺組織片が、コンディショニングレジメンの完了時に、組織全体に散在したケラチンＡＥ１／ＡＥ３について陽性の領域、少なくとも１つのハッサル小体の存在、組織全体に散在したＣＫ１４染色、およびインタクトな核の存在を示す、ステップと、
    （ｇ）前記凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物を解凍するステップと、
    （ｈ）前記解凍された凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物を前記レシピエントに移植するステップであって、前記凍結保存同種培養生後胸腺組織由来産物の投与量が、約１，０００〜２０，０００ｍｍ２の胸腺組織表面積／１ｍ２のレシピエント体表面積であり、さらに、前記移植された同種培養生後胸腺組織由来産物が、前記レシピエントにおいて胸腺リンパ球新生および寛容を誘導する、ステップと、を含む、方法。
  74. 前記胸腺が、採取日に、領域の５０％超がレース状染色パターンでケラチンについて陽性であること、ハッサル小体が存在すること、ＣＫ１４がレース状パターンで染色すること、および核の９０％超がインタクトであることを示す、請求項６８または７３に記載の方法。
  75. 前記レシピエントの胸腺の前記除去が、外科手術によるものである、請求項６８または７３に記載の方法。
  76. 前記レシピエントの胸腺の前記除去が、ロボット手術によるものである、請求項６８または７３に記載の方法。
  77. 前記レシピエントの胸腺の前記除去が、胸腔鏡手術によるものである、請求項６８または７３に記載の方法。
  78. 細胞寛容を示す混合リンパ球反応における今後の使用のために、前記死亡ドナーからの末梢血単核細胞を凍結保存するステップをさらに含む、請求項６８または７３に記載の方法。
  79. 前記寛容を示す混合リンパ球反応が、ステップ（ｈ）に従った同種培養生後胸腺組織由来産物の前記移植の約２〜１２か月後に、前記レシピエントからの末梢血単核細胞で行われる、請求項７８に記載の方法。
  80. 前記寛容を示す混合リンパ球反応が、同種培養生後胸腺組織由来産物の前記移植の約６〜１２か月後に、前記レシピエントからのナイーブＴ細胞で行われる、請求項７８に記載の方法。
  81. 前記寛容を示す混合リンパ球反応が、ナイーブＴ細胞が総Ｔ細胞の約１０％を構成した後、前記レシピエントからの末梢血単核細胞で行われる、請求項７８に記載の方法。
  82. 前記移植された胸腺組織片が、前記同種培養生後胸腺組織由来産物の生検によって決定されるように、同種培養生後胸腺組織由来産物の前記移植後約２〜約１２か月で前記対象において胸腺リンパ球新生を誘導する、請求項６８または７３に記載の方法。
  83. 寛容の発達が、前記死亡ドナーからの凍結保存された末梢血単核細胞および前記レシピエントからの末梢血単核細胞で行われる混合リンパ球反応によって決定される、請求項６８または７３に記載の方法。
  84. 寛容が、体液性免疫性の発達およびドナー反応性抗体の不在によって決定される、請求項６８または７３に記載の方法。
  85. 前記誘導免疫抑制レジメンが、グルココルチコイド、抗胸腺細胞グロブリン（ウサギ）、抗胸腺細胞グロブリン（ウマ）、およびアレムツジマブの群から選択される免疫抑制剤を含む、請求項６８または７３に記載の方法。
  86. 前記第２の免疫抑制レジメンが、グルココルチコイドの投与を含む、請求項６８、７３、または７４に記載の方法。
  87. 前記グルココルチコイドが、メチルプレドニゾロンを含む、請求項８６に記載の方法。
  88. 前記グルココルチコイドが、メチルプレドニゾロンコハク酸ナトリウムである、請求項８７に記載の方法。
  89. 前記メチルプレドニゾロンコハク酸ナトリウムが、同種培養生後胸腺組織由来産物の移植後、４ｍｇ／ｋｇ／日以下で静脈内投与される、請求項８８に記載の方法。
  90. 前記固形臓器が、臓器全体の一部分である、請求項６８または７３に記載の方法。
  91. 前記固形臓器移植が、心臓移植、腎臓移植、肝臓移植、肺移植、心臓／肺移植、膵臓移植、腸移植、胃移植、腹壁移植、頭蓋顔面移植、頭皮移植、陰茎移植、子宮移植、片側もしくは両側上肢移植、片側血管新生複合同種移植、またはそれらの組み合わせである、請求項６８または７３に記載の方法。
  92. 前記固形臓器移植が、心臓移植である、請求項９１に記載の方法。
  93. 前記心臓移植が、小児心臓移植である、請求項９２に記載の方法。
  94. 前記心臓移植が、成人心臓移植である、請求項９２に記載の方法。
  95. 前記レシピエントを、前記固形臓器を移植する前に、ＨＬＡクラスＩまたはＨＬＡクラスＩＩパネル反応性抗体（「ＰＲＡ」）スコアについて評価することをさらに含む、請求項６８または７３に記載の方法。
  96. ＨＬＡ抗体を有するレシピエントが、潜在的なドナーと交差適合される、請求項６８または７３に記載の方法。
  97. ＨＬＡ抗体を有するレシピエントが、ＵＮＥＴと実質的に交差適合される、請求項９６に記載の方法。
  98. ２０％超の仮想交差適合のＰＲＡスコアが記録される場合、前記方法が、前記レシピエントにおける固形臓器移植時に手術室において血漿交換を行うステップをさらに含む、請求項９５に記載の方法。
  99. ７０％超の仮想交差適合のＰＲＡスコアが記録される場合、前記方法が、前記レシピエントにおける固形臓器移植時に手術室において実際の見込みドナー交差適合を行い、血漿交換を行うステップをさらに含む、請求項９５に記載の方法。
  100. 前記固形臓器が、ＨＬＡ不適合である、請求項６８、７３、または７４に記載の方法。
  101. ＨＬＡ不適合が、前記ドナーおよび前記レシピエントにおいてＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＲＢ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５、ＨＬＡ−ＤＱＡ１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１、ＨＬＡ−ＤＰＡ１をタイピングすることによって決定される、請求項１００に記載の方法。
  102. ＨＬＡ不適合が、前記ドナーと前記レシピエントとの間で異なるＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＲＢ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ１、ＨＬＡ−ＤＲＢ３、ＨＬＡ−ＤＲＢ４、ＨＬＡ−ＤＲＢ５、ＨＬＡ−ＤＱＡ１、ＨＬＡ−ＤＰＢ１、ＨＬＡ−ＤＰＡ１のうちの少なくとも１つを含む、請求項１０１に記載の方法。
  103. 前記同種培養生後胸腺組織由来産物の一部分が、前記レシピエントの大腿四頭筋に外科的に移植される、請求項６８または７３に記載の方法。
  104. 前記同種培養生後胸腺組織由来産物の残りの部分が、前記レシピエントへの今後の移植のために液体窒素中で凍結保存される、請求項１０３に記載の方法。
  105. 前記コンディショニングレジメンが、最大１２日の期間である、請求項１に記載の方法。
  106. 前記維持免疫抑制レジメンが、カルシニューリン阻害剤、イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤、およびアザチオプリンからなる群から選択される１つ以上の免疫抑制剤を含む、請求項６８、７３、または７４に記載の方法。
  107. 前記誘導免疫抑制レジメンが、ウサギ由来抗胸腺細胞グロブリンを含む、請求項１０６に記載の方法。
  108. 前記ウサギ由来抗胸腺細胞グロブリンが、約１．５ｍｇ／ｋｇの用量で約３〜７日間静脈内投与される、請求項１０７に記載の方法。
  109. 前記抗胸腺細胞グロブリンが、約１５ｍｇ／ｋｇ／日の用量で３〜１４日間投与される、請求項１０８に記載の方法。
  110. 前記誘導免疫抑制レジメンが、アレムツズマブを含む、請求項８５に記載の方法。
  111. 前記アレムツズマブが、体重が３５ｋｇ未満のレシピエントについて、約０．２５ｍｇ／ｋｇ／日の用量で４日間静脈内投与される、請求項１１０に記載の方法。
  112. 前記アレムツズマブが、リンパ球が枯渇するまで、体重が３５ｋｇ未満のレシピエントについて３〜２０ｍｇ／日の用量で静脈内投与される、請求項１１０に記載の方法。
  113. 前記免疫抑制剤が、アザチオプリンである、請求項１０６に記載の方法。
  114. 前記アザチオプリンが、手術室における投与で開始して、２ｍｇ〜４ｍｇ／ｋｇ／日で静脈内または経口投与される、請求項１１３に記載の方法。
  115. 前記イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤が、ミコフェノール酸モフェチルである、請求項１０６に記載の方法。
  116. 前記ミコフェノール酸モフェチルが、経口または静脈内投与される、請求項１１５に記載の方法。
  117. 前記ミコフェノール酸モフェチルが、小児には約１５〜約２５ｍｇ／ｋｇ／用量の用量で１日２回、または成人には約１５００ｍｇで１日２回経口または静脈内投与され、３５００超のＷＢＣのために調整される、請求項１１６に記載の方法。
  118. 前記イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤が、ミコフェノール酸である、請求項１０６に記載の方法。
  119. 前記ミコフェノール酸が、小児には約４００ｍｇ／ｍ２／用量、１日２回、最大用量７２０ｍｇ、またはＢＳＡ １．１９〜１．５９ｍ２、約５４０ｍｇ、１日２回、またはＢＳＡ＞１．５８ｍ２、約７２０ｍｇ、１日２回用量で投与される、請求項１１８に記載の方法。
  120. 前記第２の免疫抑制レジメンが、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、およびプレドニゾロンからなる群から選択されるグルココルチコイドをさらに含む、請求項６８または７３に記載の方法。
  121. 前記グルココルチコイドが、漸減投与量で投与される、請求項１２０に記載の方法。
  122. 前記カルシニューリン阻害剤が、タクロリムスである、請求項１０６に記載の方法。
  123. 前記カルシニューリン阻害剤が、シクロスポリンＡである、請求項１０６に記載の方法。
  124. 前記第２の免疫抑制レジメンの投与が、ナイーブＴ細胞が全Ｔ細胞の１０％に達した後に離脱される、請求項６８または６３に記載の方法。

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021034650A1 (en) 2019-08-19 2021-02-25 Duke University & Medical Center Methods of determining the suitability of cultured thymus tissue for implantation into humans and associated methods of use
CN115287262B (zh) * 2022-01-28 2024-04-02 浙江中医药大学 一种胸腺类器官微球及其制备方法与应用
WO2024042488A1 (en) 2022-08-24 2024-02-29 Enzyvant Therapeutics Gmbh Thymic exosome assays, and methods of producing t cell depleted thymus tissue and uses thereof

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002542174A (ja) * 1999-04-15 2002-12-10 モナシュ ユニバーシティ Ｔ細胞介在性免疫の改善

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6911220B1 (en) * 1992-02-19 2005-06-28 The General Hospital Corporation Allogeneic and xenogeneic transplantation
US5766944A (en) * 1996-12-31 1998-06-16 Ruiz; Margaret Eileen T cell differentiation of CD34+ stem cells in cultured thymic epithelial fragments
US20040086508A1 (en) * 2001-06-05 2004-05-06 Advanced Biotherapy, Inc. Treatment of organ transplant rejection
EP1812060A2 (en) * 2004-10-05 2007-08-01 Genentech, Inc. Method for treating vasculitis
EP1866409B1 (en) * 2005-04-06 2011-10-12 Duke University Parathyroid and thymus transplantation in digeorge syndrome subjects
US20070202085A1 (en) * 2006-01-13 2007-08-30 Renovar Incorporated Systems and methods for monitoring immune responses and predicting outcomes in transplant recipients
CA2822117A1 (en) * 2010-12-31 2012-07-05 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Generation of autologous t-cells in mice
JP6129155B2 (ja) * 2011-04-12 2017-05-17 ライジェル ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 同種移植片拒絶反応を抑制する方法
JP6491651B2 (ja) * 2013-10-15 2019-03-27 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 高解像度での対立遺伝子の同定

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002542174A (ja) * 1999-04-15 2002-12-10 モナシュ ユニバーシティ Ｔ細胞介在性免疫の改善

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
2001年度研究成果報告書概要：自己胸腺摘除・リンパ球除去後、全胸腺臓器移植による免疫寛容誘導の試み, JPN6023005116, 2003, ISSN: 0004988990 *
CLINICAL IMMUNOLOGY, vol. 140, JPN6023005117, 2011, pages 244 - 259, ISSN: 0004988991 *

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