JP2021515538A - 自己免疫疾患を治療するための抗ｉｆｎａｒ１抗体 - Google Patents

Abstract

ヒトインターフェロンアルファおよびベータ受容体サブユニット１（ＩＦＮＡＲ１）タンパク質に対して結合特異性を有する抗体またはそれらの断片が提供される。様々な実施例では、抗体またはそれらの断片としては、本明細書に開示されるＶＨおよびＶＬ ＣＤＲ、またはそのバリアントが挙げられる。自己免疫疾患および自己免疫障害を治療するために抗体またはそれらの断片を使用する方法も提供される。

Description

全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）は、単にループスとしても公知であり、体の免疫系が体の多くの部分において健康な組織を誤って攻撃する自己免疫疾患である。一般的な症状としては、疼痛および腫れを伴う関節、発熱、胸痛、脱毛、口内潰瘍、腫れを伴うリンパ節、疲労感、最も顔に多い赤い発疹などが挙げられる。多くの場合、フレアと呼ばれる病気の期間、および症状がほとんどない間の寛解期がある。

ＳＬＥの原因は明らかではない。このメカニズムには、個人自身の組織に対する自己抗体による免疫応答を伴う。これらは最も一般的には抗核抗体であり、結果として炎症となる。ＳＬＥの治療法は存在していない。治療としては、ＮＳＡＩＤ、コルチコステロイド、免疫抑制剤、ヒドロキシクロロキン、およびメトトレキサートを挙げることができる。ＳＬＥでは、心血管疾患のリスクが有意に上昇し、最も一般的な死因である。

Ｉ型ＩＦＮ、特にＩＦＮ‐αおよびＩＦＮ‐βは、ＳＬＥならびに他の自己免疫症候群および炎症性症候群の病因におけるこれらの役割が注目をされている。これらの多面的サイトカインは、共通受容体（ＩＦＮＡＲ）を介するシグナル伝達により、ＭＨＣおよび共刺激分子のアップレギュレーション、ならびに抗原提示細胞によるＢ細胞生存因子（ＢＡＦＦ，Ａｐｒｉｌ）の産生、自己反応性Ｔ細胞およびＢ細胞の関与および拡大に至るなど、自然免疫および適応免疫応答のほとんどすべての態様に影響を及ぼす。ループスの病因と特に関連があるものは、無菌条件下での、自己核酸によるエンドソームＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）の関与によるＩ型ＩＦＮの誘導である。複数のＩＦＮ‐αおよび単一のＩＦＮ‐β、またはそれらの共通の受容体のいずれかに対するブロッキング試薬をベースとした治療法の構築において幅広い関心となっている。

本開示は、ヒトインターフェロンアルファおよびベータ受容体サブユニット１（ＩＦＮＡＲ１）タンパク質に対する結合特異性を有する抗体またはそれらの断片、ならびにＩＦＮＡＲ１およびＢＡＦＦなどの別の抗原に対して特異性を有する二重特異性抗体を提供する。これらの抗体および断片は、全身性エリテマトーデスなどの自己免疫疾患の治療に有用である。

本開示の一実施形態は、ヒトインターフェロンアルファおよびベータ受容体サブユニット１（ＩＦＮＡＲ１）タンパク質に対して特異性を有する抗体またはその断片を提供し、抗体またはその断片は、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、ならびに軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、（ａ）ＨＣＤＲ１：ＤＹＹＭＨ（配列番号７７）、ＨＣＤＲ２：ＲＩＤＰＥＤＧＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号７８）またはＲＩＤＰＥＤＡＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号７９）、ＨＣＤＲ３：ＧＧＮＦＹＶＭＤＹ（配列番号８０）、ＬＣＤＲ１：ＫＡＳＱＮＶＧＴＮＶＶ（配列番号８１）、ＬＣＤＲ２：ＳＡＳＹＲＶＳ（配列番号８２）、およびＬＣＤＲ３：ＱＱＫＮＮＹＰＹＴ（配列番号８３）；（ｂ）ＨＣＤＲ１：ＤＹＹＩＨ（配列番号９２）、ＨＣＤＲ２：ＲＩＤＰＥＤＧＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号９３）またはＲＩＤＰＥＤＡＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号９４）、ＨＣＤＲ３：ＹＨＧＹＷＡＬＤＹ（配列番号９５）、ＬＣＤＲ１：ＫＴＳＱＮＶＧＴＮＶＡ（配列番号９６）、ＬＣＤＲ２：ＳＴＳＹＲＹＳ（配列番号９７）、およびＬＣＤＲ３：ＨＱＹＦＳＹＰＹＴ（配列番号９８）からなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３は、ＨＣＤＲ１：ＤＹＹＭＨ（配列番号７７）、ＨＣＤＲ２：ＲＩＤＰＥＤＡＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号７９）、ＨＣＤＲ３：ＧＧＮＦＹＶＭＤＹ（配列番号８０）、ＬＣＤＲ１：ＫＡＳＱＮＶＧＴＮＶＶ（配列番号８１）、ＬＣＤＲ２：ＳＡＳＹＲＶＳ（配列番号８２）、およびＬＣＤＲ３：ＱＱＫＮＮＹＰＹＴ（配列番号８３）である。

いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号７、および８４〜８７（例えば、配列番号８５）からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号７、および８４〜８７（例えば、配列番号８５）からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号８、および８８〜９１（例えば、配列番号８８）からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号８および８８〜９１（例えば、配列番号８８）からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む軽鎖可変領域を含む。本明細書に記載される重鎖可変領域および軽鎖可変領域としては、上記に記載されているＣＤＲ領域が挙げられる。

いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、ＨＣＤＲ１：ＤＹＹＩＨ（配列番号９２）、ＨＣＤＲ２：ＲＩＤＰＥＤＡＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号９４）、ＨＣＤＲ３：ＹＨＧＹＷＡＬＤＹ（配列番号９５）、ＬＣＤＲ１：ＫＴＳＱＮＶＧＴＮＶＡ（配列番号９６）、ＬＣＤＲ２：ＳＴＳＹＲＹＳ（配列番号９７）、およびＬＣＤＲ３：ＨＱＹＦＳＹＰＹＴ（配列番号９８）である。

いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号７３、および９９〜１０２（例えば、配列番号１００）からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号７３、および９９〜１０２（例えば、配列番号１００）からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む重鎖可変領域を含む。

いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号７４、および１０３〜１０６（例えば、配列番号１０５）からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号７４、および１０３〜１０６（例えば、配列番号１０５）からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む軽鎖可変領域を含む。

いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

別の実施形態では、ヒトインターフェロンアルファおよびベータ受容体サブユニット１（ＩＦＮＡＲ１）タンパク質に対する特異性を有する抗体またはその断片が提供され、抗体またはその断片は、ＩＦＮＡＲ１タンパク質のＨ２７３、Ｌ２７４、Ｙ２７５、Ｋ２７６、およびＫ２７８からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基に結合することができる。

いくつかの実施形態では、請求項の抗体またはその断片は、Ｋ２７６およびＫ２７８など、群から選択されるアミノ酸残基のうちの少なくとも２つに結合することができる。いくつかの実施形態では、請求項の抗体またはその断片は、Ｈ２７３、Ｋ２７６、およびＫ２７８；Ｌ２７４、Ｋ２７６、およびＫ２７８；Ｙ２７５、Ｋ２７６、およびＫ２７８；またはＹ２７５、Ｋ２７６、およびＫ２７８など、群から選択されるアミノ酸残基のうちの少なくとも３つに結合することができる。いくつかの実施形態では、請求項の抗体またはその断片は、群から選択されるアミノ酸残基のうちの少なくとも４つ、５つ、またはすべてに結合することができる。

また、一実施形態では、ヒトインターフェロンアルファおよびベータ受容体サブユニット１（ＩＦＮＡＲ１）タンパク質に対する特異性を有する第１の抗原結合部分および第２のタンパク質に対して特異性を有する第２の部分を含む二機能性分子が提供され、第１の抗原結合部分は、本開示の抗体断片を含む。

いくつかの実施形態では、第２の部分は、ペプチドエドラチド（ｈＣＤＲ１）またはＴＡＣＩ‐Ｉｇである。いくつかの実施形態では、第２の部分は、ＢＡＦＦ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＴＬＡ４、ＩＬ６、ＣＸＣＬ１３およびＣ５からなる群から選択されるタンパク質に対する特異性を有する抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、第２の部分は、ヒトＢ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）タンパク質に対する特異性を有する抗原結合断片である。

いくつかの実施形態では、二機能性分子は、２つの一本鎖断片（ｓｃＦｖ）または２つのＦａｂ断片に融合した完全抗体を含むフォーマットを有する（本明細書ではフォーマット１として例示する）。いくつかの実施形態では、第２の部分は、ベリムマブの抗原結合断片である。

現在開示されている抗体および断片の使用および方法も提供される。例えば、現在開示されている抗体および断片は、それを必要とする患者において免疫応答を抑制するか、または自己免疫疾患もしくは障害を治療するために使用することができる。

いくつかの実施形態では、自己免疫疾患または障害は、１型糖尿病、関節リウマチ（ＲＡ）、乾癬／乾癬性関節炎、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス（ループス）、炎症性腸疾患、アジソン病、グレーブス病、シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、重症筋無力症、血管炎、悪性貧血、およびセリアック病からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患または障害は、全身性エリテマトーデスである。

８Ｇ１１Ｈ抗体および４８５Ｇ１０Ｈ抗体が、対応するキメラ抗体の効力に匹敵する効力で、ＩＦＮα２ｂ誘導性レポーター遺伝子の発現を効率的に遮断したことを示す図である。 ８Ｇ１１Ｈ抗体および４８５Ｇ１０Ｈ抗体が、対応するキメラ抗体の効力に匹敵する効力で、ＩＦＮα２ｂ誘導性レポーター遺伝子の発現を効率的に遮断したことを示す図である。

８Ｇ１１Ｈ抗体および４８５Ｇ１０Ｈ抗体が、ダウディ細胞増殖のＩＦＮα２ｂ媒介阻害を用量依存的に逆転させたことを示す図である。 ８Ｇ１１Ｈ抗体および４８５Ｇ１０Ｈ抗体が、ダウディ細胞増殖のＩＦＮα２ｂ媒介阻害を用量依存的に逆転させたことを示す図である。

８Ｇ１１Ｈおよび４８５Ｇ１０Ｈが、通常のＰＢＭＣ培養により、組換えＩＦＮα２ｂ誘導ＩＰ‐１０の分泌を用量依存的に阻害したことを示す図である。

８Ｇ１１Ｈ抗体および４８５Ｇ１０Ｈ抗体が、分化した細胞表面マーカーＣＤ３８およびＣＤ８６の発現の有意な減少によって示されるように、樹状細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ分化を効率的に阻害したことを示す図である。

８Ｇ１１Ｈ抗体および４８５Ｇ１０Ｈ抗体が樹状細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ分化を効率的に阻害し、ＣＤ４^＋Ｔ細胞によるＩＦＮ‐γの産生の低下によって示されるとおり、分化細胞媒介ＭＬＲの応答が損なわれていることを示す図である。

ヒト化モノクローナル抗体８Ｇ１１Ｈおよび４８５Ｇ１０Ｈが、ｉｎ ｖｉｔｒｏ系において、ＳＬＥ血漿媒介樹状細胞の発達を有意に阻害したことを示す図である。

抗ＩＦＮＡＲ／ＢＡＦＦ二重特異性抗体（Ｂｉ‐ＢＦＩＮＲ）の設計された４つのフォーマットを表す概略図である。

二重特異性抗体がＩＦＮＡＲ‐１への結合において８Ｇ１１抗体と同様の活性を呈し、ＢＡＦＦへの結合においてベリムマブに匹敵する活性を呈したことを示す図である。

Ｂｉ‐ＢＦＩＮＦ抗体がＩＦＮα２ｂシグナル伝達の遮断においてキメラ８Ｇ１１に匹敵する活性を有し（Ａ）、Ｂｉ‐ＢＦＩＮＦ抗体は、ＢＡＦＦ誘導Ｂ細胞の増殖の遮断において優れた活性を呈したこと（Ｂ）を示す図である。 Ｂｉ‐ＢＦＩＮＦ抗体がＩＦＮα２ｂシグナル伝達の遮断においてキメラ８Ｇ１１に匹敵する活性を有し（Ａ）、Ｂｉ‐ＢＦＩＮＦ抗体は、ＢＡＦＦ誘導Ｂ細胞の増殖の遮断において優れた活性を呈したこと（Ｂ）を示す図である。

２匹のカニクイザルにおける４８５Ｇ１０Ｈ１Ｌ３の時間濃度プロファイルを示す図である。

２匹のカニクイザルにおける８Ｇ１１Ｈ２Ｌ１の時間濃度プロファイルを示す図である。

投与後２４時間、４８時間および７２時間におけるＦＡＣによるＣＤ１１Ｃ、ＣＤ３８、ＣＤ８６、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩおよびＩＦＮ‐アルファＲ１の発現を示す図である。

投与後２４時間、４８時間、および７２時間におけるサルのネオプテリン、ベータ‐２‐マイクログロブリンおよびＣＲＰの血清レベルを示す図である。

投与後２４時間、４８時間および７２時間におけるサルＰＢＭＣにおけるＩ型ＩＦＮ誘導遺伝子シグネチャの発現レベルを示す図である。

定義
用語「ａ」または「ａｎ」エンティティは、そのエンティティの１つ以上を指すことに留意されたい。例えば、「抗体」は、１つ以上の抗体を表すと理解される。したがって、「ａ」（または「ａｎ」）、「１つ以上」、および「少なくとも１つ」という用語は、本明細書では互換的に使用することができる。

本明細書で使用するとき、「抗体」または「抗原結合ポリペプチド」は、抗原を特異的に認識して結合するポリペプチドまたはポリペプチド複合体を指す。抗体は、全抗体および任意の抗原結合断片またはその単鎖であり得る。したがって、「抗体」という用語には、抗原に結合する生物学的活性を有する免疫グロブリン分子の少なくとも一部分を含む任意のタンパク質またはペプチド含有分子を含む。こうした例としては、これらに限定されないが、重鎖または軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）またはそのリガンド結合部分、重鎖または軽鎖可変領域、重鎖または軽鎖定常領域、フレームワーク（ＦＲ）領域、または任意のその一部分、または結合タンパク質の少なくとも一部分が挙げられる。

本明細書で使用されるとき、「抗体断片」または「抗原結合断片」という用語は、Ｆ（ａｂ'）_２、Ｆ（ａｂ）_２、Ｆａｂ'、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖなどの抗体の一部分である。構造に関係なく、抗体断片は無傷の抗体によって認識される同じ抗原と結合する。用語「抗体断片」としては、アプタマー、スピーゲルマー、およびダイアボディが挙げられる。また、用語「抗体断片」としては、特定の抗原に結合することによって複合体を形成することにより抗体のように作用するあらゆる合成されたかまたは遺伝子操作されたタンパク質が挙げられる。

「単鎖可変断片」または「ｓｃＦｖ」は、免疫グロブリンの重鎖（Ｖ_Ｈ）および軽鎖（Ｖ_Ｌ）の可変領域の融合タンパク質を指す。いくつかの態様では、これらの領域は、１０〜約２５アミノ酸の短いリンカーペプチドで接続されている。リンカーは、柔軟性のためにグリシン、溶解性のためにセリンまたはスレオニンが豊富であってもよく、Ｖ_ＨのＮ末端をＶ_ＬのＣ末端と接続すること、またはその逆のいずれかに接続することができる。このタンパク質は、定常領域を除去し、リンカーを導入しているにもかかわらず、元の免疫グロブリンの特異性を保持している。ＳｃＦｖ分子は、当技術分野で公知であり、例えば米国特許第５，８９２，０１９号に記載されている。

用語抗体は、生化学的に区別することができる様々な広範なクラスのポリペプチドを包含する。当業者であれば、重鎖がガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロン（γ、μ、α、δ、またはε）として分類され、その中にいくつかのサブクラス（例えば、γ１〜γ４）があることを理解するであろう。抗体の「クラス」をそれぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ ＩｇＧ、またはＩｇＥとして決定するのは、この鎖の性質である。免疫グロブリンのサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＧ_５などは、十分に特徴が明らかになっており、機能的な特殊化をもたらすことが公知である。これらのクラスおよびアイソタイプのそれぞれの変形型は、本開示を考慮して当業者にとって容易に識別可能であり、したがって、本開示の範囲内である。すべての免疫グロブリンクラスは、明らかに本開示の範囲内にあり、以下の議論は一般に免疫グロブリン分子のＩｇＧクラスに関するものである。ＩｇＧに関して、標準的な免疫グロブリン分子は、分子量が約２３，０００ダルトンの２つの同一の軽鎖ポリペプチド、および分子量が５３，０００〜７０，０００の２つの同一の重鎖ポリペプチドを含む。４本の鎖は、典型的には、「Ｙ」構成のジスルフィド結合によって結合され、軽鎖は、重鎖を囲み、「Ｙ」の口から開始して可変領域を通って続いている。

本開示の抗体、抗原結合ポリペプチド、これらのバリアント、または誘導体としては、これらに限定されないが、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体、またはキメラ抗体、単鎖抗体、エピトープ結合断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ'およびＦ（ａｂ'）_２、Ｆｄ、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＫまたはＶＨドメインのいずれかを含む断片、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生される断片、および抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本明細書に開示されるＬＩＧＨＴ抗体に対する抗Ｉｄ抗体など）が挙げられる。本開示の免疫グロブリンまたは抗体分子は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）または免疫グロブリン分子のサブクラスであり得る。

軽鎖は、カッパまたはラムダ（Κ、Λ）のいずれかに分類される。各重鎖クラスは、カッパ軽鎖またはラムダ軽鎖のいずれかに結合され得る。一般に、軽鎖および重鎖は互いに共有結合により結合し、２つの重鎖の「テール」部分は、免疫グロブリンがハイブリドーマ、Ｂ細胞または遺伝子操作された宿主細胞のいずれかによって生成される場合、共有ジスルフィド結合または非共有結合によって互いに結合する。重鎖では、アミノ酸配列は、Ｙ構成のフォーク型の端のＮ末端から各鎖の底部のＣ末端まで続く。

軽鎖および重鎖の両方が、構造的および機能的に相同である領域に分けられる。用語「定常」および「可変」は、機能的に使用される。これに関して、軽鎖（ＶＫ）部分および重鎖（ＶＨ）部分の両方の可変ドメインにより、抗原の認識および特異性が決定することが理解されよう。逆に、軽鎖（ＣＫ）および重鎖（ＣＨ１、ＣＨ２またはＣＨ３）の定常ドメインは、分泌、経胎盤移動（ｔｒａｎｓｐｌａｃｅｎｔａｌ ｍｏｂｉｌｉｔｙ）、Ｆｃ受容体結合、補体結合など、重要な生物学的特性を付与する。慣習的に、定常領域ドメインのナンバリングは、それらが抗体の抗原結合部位またはアミノ末端から遠位になるにしたがって大きくなる。Ｎ末端部分は可変領域であり、かつＣ末端部分は定常領域である。ＣＨ３ドメインおよびＣＫドメインは実際に、それぞれ重鎖および軽鎖のカルボキシ末端を含む。

上述したとおり、可変領域では、抗体は抗原上のエピトープを選択的に認識し、これに特異的に結合することが可能となる。すなわち、抗体のＶＫドメインおよびＶＨドメイン、または相補性決定領域（ＣＤＲ）のサブセットが結合して、三次元の抗原結合部位を画定する可変領域を形成する。この四次元抗体構造は、Ｙ字の各アームの端に存在する抗原結合部位を形成する。より具体的には、抗原結合部位は、ＶＨ鎖およびＶＫ鎖のそれぞれの上の３つのＣＤＲ（すなわち、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３）によって画定される。場合によっては、例えば、ラクダ種に由来するか、またはラクダ科の免疫グロブリンに基づいて操作された特定の免疫グロブリン分子では、完全な免疫グロブリン分子は重鎖のみで構成され得、軽鎖は含まない。例えば、Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３６３：４４６−４４８（１９９３）を参照されたい。

自然に作られる抗体では、各抗原結合ドメイン内に存在する６つの「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗体が水性環境において３次元構造を有すると想定されるため、抗原結合ドメインを形成するように特別に位置付けられたアミノ酸の短い非連続配列である。抗原結合ドメイン内のアミノ酸の残部は、「フレームワーク」領域と呼ばれ、分子間変動が少ないことを示している。フレームワーク領域は、主にβシート構造を採用し、ＣＤＲは、ループを形成して、βシート構造シート構造に接続し、場合によってはその一部を形成している。したがって、フレームワーク領域は、鎖間での非共有相互作用によって正しい配向にＣＤＲを位置付けるための足場を形成するように作用する。位置付けられたＣＤＲによって形成された抗原結合ドメインは、免疫反応性抗原上のエピトープに相補的な表面を画定する。この相補的な表面では、その同族のエピトープへの抗体の非共有結合による結合が促進される。ＣＤＲおよびフレームワーク領域をそれぞれ含むアミノ酸は、それらが正確に定義されているので、当業者であれば、任意の所与の重鎖可変領域または軽鎖可変領域について容易に同定することができる（「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」Ｋａｂａｔ、Ｅ．、ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，（１９８３）；およびＣｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７（１９８７）を参照されたい）。

当技術分野で使用され、かつ／または許容されている用語の定義が２つ以上ある場合、本明細書において使用される用語の定義は、そうでないことが明示的に記載されていない限り、それらの意味をすべて含むものとする。特定の例は、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内で見られる非隣接抗原結合部位について記載するための「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）という用語の使用である。この特定の領域は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」（１９８３）およびＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）によって記載されており、これらは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａによるＣＤＲの定義には、互いに比較したときのアミノ酸残基の重複またはサブセットが含まれる。それにもかかわらず、抗体またはそのバリアントのＣＤＲに言及するためのいずれかの定義の適用も、本明細書において定義され、使用される用語の範囲内であることが意図される。上記で引用した参考文献のそれぞれによって定義されたＣＤＲを包含する適切なアミノ酸残基を、比較として以下の表に示す。特定のＣＤＲを包含する正確な残基数は、ＣＤＲの配列およびサイズによって異なる。当業者は、抗体の可変領域アミノ酸配列が与えられれば、いずれの残基が特定のＣＤＲを構成するかを日常的に決定することができる。

本明細書に開示される抗体は、トリおよび哺乳動物などの任意の動物起源に由来し得る。好ましくは、抗体は、ヒト、マウス、ロバ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ラマ、ウマ、またはニワトリの抗体である。別の実施形態では、可変領域は、起源が（例えばサメ由来の）コンドリクトイド（ｃｏｎｄｒｉｃｔｈｏｉｄ）であり得る。

本明細書で使用されるように、「重鎖定常領域」という用語には、免疫グロブリン重鎖に由来するアミノ酸配列が含まれる。重鎖定常領域を構成するポリペプチドは、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ（例えば、上部、中間、および／または下部ヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはそれらのバリアントまたは断片の少なくとも１つを含む。例えば、本開示で使用するための抗原結合ポリペプチドは、ＣＨ１ドメインを構成するポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメイン、ヒンジドメインの少なくとも一部、およびＣＨ２ドメインを構成するポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメインおよびＣＨ３ドメインを構成するポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメイン、ヒンジドメインの少なくとも一部、およびＣＨ３ドメインを構成するポリペプチド鎖、またはＣＨ１ドメイン、ヒンジドメインの少なくとも一部、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインを構成するポリペプチド鎖を含み得る。別の実施形態では、本開示のポリペプチドは、ＣＨ３ドメインを構成するポリペプチド鎖を含む。さらに、本開示で使用するための抗体は、ＣＨ２ドメインの少なくとも一部分（例えば、ＣＨ２ドメインの全部または一部）を含まない場合がある。上記のように、重鎖定常領域は、天然に存在する免疫グロブリン分子とはアミノ酸配列が異なるように修飾され得ることは、当業者によって理解されるであろう。

本明細書に開示される抗体の重鎖定常領域は、異なる免疫グロブリン分子に由来し得る。例えば、ポリペプチドの重鎖定常領域は、ＩｇＧ_１分子に由来するＣＨ１ドメインおよびＩｇＧ_３分子に由来するヒンジ領域を含み得る。別の例では、重鎖定常領域は、一部はＩｇＧ_１分子に由来し、一部はＩｇＧ_３分子に由来するヒンジ領域を含むことができる。別の例では、重鎖部分は、一部はＩｇＧ_１分子に由来し、一部はＩｇＧ_４分子に由来するキメラヒンジを含むことができる。

本明細書で使用される場合、「軽鎖定常領域」という用語としては、抗体軽鎖に由来するアミノ酸配列が挙げられる。好ましくは、軽鎖定常領域は、定常カッパドメインまたは定常ラムダドメインのうちの少なくとも１つを含む。

「軽鎖−重鎖対」は、軽鎖のＣＬドメインと重鎖のＣＨ１ドメインとの間のジスルフィド結合を介して二量体を形成することができる軽鎖および重鎖の集合を指す。

前述のとおり、様々な免疫グロブリンのクラスの定常領域のサブユニット構造および三次元構造はよく知られている。本明細書で使用されるように、用語「ＶＨドメイン」には、免疫グロブリン重鎖のアミノ末端可変ドメインを含み、用語「ＣＨ１ドメイン」には、免疫グロブリン重鎖の第１の（最もアミノ末端）定常領域ドメインが含まれる。ＣＨ１ドメインは、ＶＨドメインに隣接し、免疫グロブリン重鎖分子のヒンジ領域のアミノ末端である。

本明細書で使用されるとき、「ＣＨ２ドメイン」という用語には、例えば、従来のナンバリングスキーム（Ｋａｂａｔナンバリングシステムでは残基２４４〜３６０、；およびＥＵナンバリングシステムでは残基２３１〜３４０、；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」（１９８３）を参照されたい）を使用して、抗体の残基２４４から残基３６０まで延在する重鎖分子の一部分が含まれる。ＣＨ２ドメインは、別のドメインと密接にペアリングされていないという点で独特である。むしろ、無傷のネイティブＩｇＧ分子の２つのＣＨ２ドメイン間に２つのＮ結合分岐炭水化物鎖が挿入されている。また、ＣＨ３ドメインがＣＨ２ドメインからＩｇＧ分子のＣ末端まで延在し、約１０８の残基を含むことが十分に文書により裏付けられている。

本明細書で使用されるように、「ヒンジ領域」という用語は、ＣＨ１ドメインをＣＨ２ドメインに結合する重鎖分子の一部分を含む。このヒンジ領域は、約２５の残基を含み、柔軟性があるため、２つのＮ末端抗原結合領域を独立して移動することができる。ヒンジ領域は、上部、中間、下部のヒンジドメインといった３つの異なるドメインに細分できる（Ｒｏｕｘ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １６１：４０８３（１９９８））。

本明細書で使用されるように、「ジスルフィド結合」という用語は、２つの硫黄原子間に形成される共有結合を含む。アミノ酸システインは、ジスルフィド結合を形成できるか、または第２のチオール基と架橋できるチオール基を含む。ほとんどの天然に存在するＩｇＧ分子では、ＣＨ１領域およびＣＫ領域はジスルフィド結合によって連結され、２つの重鎖は、Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用して、２３９および２４２に対応する位置で（ＥＵナンバリングシステムでは、２２６位または２２９位）２つのジスルフィド結合によって連結される。

本明細書で使用されるとき、「キメラ抗体」という用語は、免疫反応性領域または部位が第１の種から得られるかまたはこの種に由来し、定常領域（無傷であり得るか、部分的であり得るかまたは本開示に従って改変され得る）は、第２の種から得られる任意の抗体を意味するものである。特定の実施形態では、標的結合領域または部位は、非ヒト供給源（例えば、マウスまたは霊長類）に由来し、定常領域は、ヒトである。

「特異的に結合する」または「特異性を有する」とは、抗体がその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合すること、および結合が抗原結合ドメインとエピトープとの間にある程度の相補性を伴うことを一般に意味する。この定義によれば、抗体は、ランダムな無関係のエピトープに結合するよりも容易に、その抗原結合ドメインを介して、抗体がそのエピトープに結合するときに、エピトープに「特異的に結合する」と言われる。本明細書では、「特異性」という用語は、特定の抗体が特定のエピトープに結合する相対親和性を適切にするために使用される。例えば、抗体「Ａ」は、抗体「Ｂ」よりも所与のエピトープに対してより高い特異性を有すると見なされ得るか、または抗体「Ａ」は、関連するエピトープ「Ｄ」に対するよりも高い特異性でエピトープ「Ｃ」に結合すると言われ得る。

本明細書で使用される「治療する」または「治療」という用語は、治療的処置および予防的または防止的手段の両方を指し、この目的は、がんの進行などの望ましくない生理学的変化または障害を防止するかまたは遅延（軽減）させることである。有益なまたは所望の臨床結果としては、これらに限定されないが、検出可能であるかまたは検出不可能であるかにかかわらず、症状の緩和、疾患の程度の減少、疾患の状態の安定化（すなわち悪化させない）、疾患の進行の遅延または減速、疾患状態の改善または緩和、および（部分または完全）寛解が挙げられる。「治療」は、治療を受けない場合に予想される生存と比較して、生存を延長することも意味し得る。治療を必要とする場合としては、すでに状態または障害を有する場合、ならびにその状態または障害を有する傾向にある場合、またはその状態もしくは障害が予防されるべき場合が挙げられる。

「対象」または「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳動物」とは、診断、予後、または治療法が望まれる任意の対象、特に哺乳動物対象を意味する。哺乳動物の対象としては、ヒト、家畜、飼育動物、動物園動物、競技動物、またはイヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、畜牛、雌牛などのペット動物が挙げられる。

本明細書で使用されるとき、「治療を必要とする患者に」または「治療を必要とする対象」などの語句としては、例えば、検出するため、診断手順のため、および／または治療のために使用される本開示の抗体または組成物の投与から恩恵を受ける、哺乳動物対象などの対象が挙げられる。
抗ＩＦＮＡＲ１抗体

本開示では、ヒトインターフェロンアルファおよびベータ受容体サブユニット１（ＩＦＮＡＲ１）タンパク質に対して結合特異性を有する、二重特異性抗体および断片を含む抗体を提供する。実験例において実証されているとおり、ヒトＩＦＮＡＲ１タンパク質に対して高い結合親和性を有する多数のマウス抗ヒトＩＦＮＡＲ１抗体が得られた。マウス抗体クローンのうちの２つである８Ｇ１１および４８５Ｇ１０は、さらにヒト化するためおよび特徴を明らかにするために選択した。ヒト化抗体は、ダウディ細胞増殖のＩＦＮα２ｂ媒介阻害、ＩＦＮα２ｂ誘導抗ウイルス機能を用量依存的に逆転させ、かつｐＭレベルで、複数のＩ型ＩＦＮによって誘発される細胞シグナルを効率的に阻害した。ＩＦＮとしては、ＩＦＮα１、ＩＦＮα２ａ、ＩＦＮα４、ＩＦＮα５、ＩＦＮα６、ＩＦＮα７、ＩＦＮα８、ＩＦＮα１０、ＩＦＮα１４、ＩＦＮα１６、ＩＦＮα１７、およびＩＦＮα２１が挙げられる。

追加の機能的研究により、これらの抗体は、細胞表面マーカーＣＤ３８およびＣＤ８６の発現の低下およびＭＬＲ系におけるＣＤ４＋Ｔ細胞によるＩＦＮγ産生の減少によって示されるとおり、ヒトＰＢＭＣによるＩＰ−１０のＩＦＮα２ｂ誘導分泌を効率的に阻害し、ＩＦＮα依存性またはＳＬＥ血漿媒介樹状細胞の発生を阻害したことが示された。

抗ＩＦＮＡＲ１／抗ＢＡＦＦ二重特異性抗体の様々なフォーマットも調製し、結合能力および生物学的機能に関する試験も行った。これらの二重特異性抗体は、ＩＦＮα２ｂシグナル伝達の遮断において単一特異性８Ｇ１１に匹敵する結合活性を呈し、ＢＡＦＦ誘導Ｂ細胞の増殖の遮断においてはさらに優れた活性を呈した。

本開示の一実施形態によれば、実験例において調製された抗体のＣＤＲ領域を有する重鎖および軽鎖可変ドメインを含む抗体およびその断片が提供される。ＣＤＲを以下の表Ａにまとめる。
表Ａ．ＣＤＲ配列

いくつかの実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、表Ａに示すＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の任意のセットから選択され、ＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、表Ａに示すＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の任意のセットから選択される。いくつかの実施形態では、ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびにＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、実施例における同じ抗体に由来するものから選択される。

いくつかの実施形態では、上記のＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３およびＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のうちの少なくとも１つ、または２つ、または３つ、４つ、または５つ、または６つが、１つ、２つ、または３つのアミノ酸の付加、欠失、置換、またはそれらの組み合わせによって改変される。

一実施形態では、抗ＩＦＮＡＲ１抗体またはその断片は、以下のＣＤＲを含む：ＨＣＤＲ１：ＤＹＹＭＨ（配列番号７７）、ＨＣＤＲ２：ＲＩＤＰＥＤＧＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号７８）、ＨＣＤＲ３：ＧＧＮＦＹＶＭＤＹ（配列番号８０）、ＬＣＤＲ１：ＫＡＳＱＮＶＧＴＮＶＶ（配列番号８１）、ＬＣＤＲ２：ＳＡＳＹＲＶＳ（配列番号８２）、およびＬＣＤＲ３：ＱＱＫＮＮＹＰＹＴ（配列番号８３）。

一実施形態では、ＣＤＲ中のアミノ酸残基のうちの１つ以上は、翻訳後修飾を回避するために異なるアミノ酸で置換される。抗ＩＦＮＡＲ１抗体またはその断片の例としては、以下のＣＤＲが挙げられる：ＨＣＤＲ１：ＤＹＹＭＨ（配列番号７７）、ＨＣＤＲ２：ＲＩＤＰＥＤＡＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号７９）、ＨＣＤＲ３：ＧＧＮＦＹＶＭＤＹ（配列番号８０）、ＬＣＤＲ１：ＫＡＳＱＮＶＧＴＮＶＶ（配列番号８１）、ＬＣＤＲ２：ＳＡＳＹＲＶＳ（配列番号８２）、およびＬＣＤＲ３：ＱＱＫＮＮＹＰＹＴ（配列番号８３）。

いくつかの実施形態では、抗体はヒト化されているが、重鎖に以下のうちの１つ以上の復帰突然変異を伴う：１２Ｖ、２０Ｌ、２４Ｇ、３８Ｋ、４８Ｉ、６８Ａ、７０Ｉ、７２Ａ、７９Ａおよび８１Ｌ（Ｋａｂａｔナンバリングによる）ならびにそれらの組み合わせ。いくつかの実施形態では、抗体はヒト化されているが、軽鎖に以下のうちの１つ以上の復帰突然変異を伴う：４Ｍ、１３Ｔ、２１Ｖ、４３Ｓ、４６Ｖ、７４Ｉ、７８Ｖおよび８７Ｆ（Ｋａｂａｔナンバリングによる）ならびにそれらの組み合わせ。

重鎖可変領域の非限定的な例としては、配列番号７、および８４〜８７が挙げられる。軽鎖可変領域の非限定的な例としては、配列番号８、および８８〜９１が挙げられる。

いくつかの実施形態では、重鎖可変領域としては、配列番号８５が挙げられる。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号８８が挙げられる。

一実施形態では、抗ＩＦＮＡＲ１抗体またはその断片は、以下のＣＤＲを含む：ＨＣＤＲ１：ＤＹＹＩＨ（配列番号９２）、ＨＣＤＲ２：ＲＩＤＰＥＤＧＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号９３）、ＨＣＤＲ３：ＹＨＧＹＷＡＬＤＹ（配列番号９５）、ＬＣＤＲ１：ＫＴＳＱＮＶＧＴＮＶＡ（配列番号９６）、ＬＣＤＲ２：ＳＴＳＹＲＹＳ（配列番号９７）、およびＬＣＤＲ３：ＨＱＹＦＳＹＰＹＴ（配列番号Ｃ６）。

一実施形態では、抗ＩＦＮＡＲ１抗体またはその断片は、以下のＣＤＲを含む：ＨＣＤＲ１：ＤＹＹＩＨ（配列番号９２）、ＨＣＤＲ２：ＲＩＤＰＥＤＡＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号９４）、ＨＣＤＲ３：ＹＨＧＹＷＡＬＤＹ（配列番号９５）、ＬＣＤＲ１：ＫＴＳＱＮＶＧＴＮＶＡ（配列番号９６）、ＬＣＤＲ２：ＳＴＳＹＲＹＳ（配列番号９７）、およびＬＣＤＲ３：ＨＱＹＦＳＹＰＹＴ（配列番号Ｃ６）。

いくつかの実施形態では、抗体はヒト化されているが、重鎖に以下のうちの１つ以上の復帰突然変異を伴う：２０Ｌ、２４Ｇ、３８Ｋ、４８Ｉ、６８Ａ、７０Ｉ、７２Ａ、８１Ｌおよび９７Ｇ（Ｋａｂａｔナンバリングによる）およびそれらの組み合わせ。いくつかの実施形態では、抗体はヒト化されているが、軽鎖に以下のうちの１つ以上の復帰突然変異を伴う：１３Ｔ、２１Ｖ、３６Ｙ、４６Ｐ、７８Ｖおよび１０４Ｌ（Ｋａｂａｔナンバリングによる）およびそれらの組み合わせ。

重鎖可変領域の非限定的な例としては、配列番号７３、および９９〜１０２が挙げられる。軽鎖可変領域の非限定的な例としては、配列番号７４、および１０３〜１０６が挙げられる。

いくつかの実施形態では、重鎖可変領域としては、配列番号１００が挙げられる。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域としては、配列番号１０５が挙げられる。

現在調製されている抗体が既知の抗ＩＦＮＡＲ１抗体であるアニフロルマブとは異なるエピトープを標的とすることは興味深い発見であった。したがって、一実施形態では、ヒトインターフェロンアルファおよびベータ受容体サブユニット１（ＩＦＮＡＲ１）タンパク質に対する特異性を有する抗体またはその断片が提供され、抗体またはその断片は、ＩＦＮＡＲ１タンパク質のＨ２７３、Ｌ２７４、Ｙ２７５、Ｋ２７６、およびＫ２７８からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基に結合することができる。

いくつかの実施形態では、抗体または断片は、これらのエピトープ残基のうちの少なくとも２つ、例えば、Ｈ２７３およびＬ２７４、Ｈ２７３およびＹ２７５、Ｈ２７３およびＫ２７６、Ｈ２７３およびＫ２７８、Ｌ２７４およびＹ２７５、Ｌ２７４およびＫ２７６、Ｌ２７４およびＫ２７８、Ｙ２７５およびＫ２７６、Ｙ２７５およびＫ２７８、またはＫ２７６およびＫ２７８に結合することができる。

いくつかの実施形態では、抗体または断片は、これらのエピトープ残基のうちの少なくとも３つ、例えばＨ２７３、Ｌ２７４、およびＹ２７５；Ｈ２７３、Ｌ２７４、およびＫ２７６；Ｈ２７３、Ｌ２７４、およびＫ２７８；Ｈ２７３、Ｙ２７５、およびＫ２７６；Ｈ２７３、Ｙ２７５、およびＫ２７８；Ｈ２７３、Ｋ２７６、およびＫ２７８；Ｌ２７４、Ｙ２７５、およびＫ２７６；Ｌ２７４、Ｙ２７５、およびＫ２７８；Ｌ２７４、Ｋ２７６、およびＫ２７８；ならびにＹ２７５、Ｋ２７６、およびＫ２７８に結合することができる。

いくつかの実施形態では、抗体または断片は、これらのエピトープ残基のうちの少なくとも４つ、例えばＬ２７４、Ｙ２７５、Ｋ２７６、およびＫ２７８；Ｈ２７３、Ｙ２７５、Ｋ２７６、およびＫ２７８；Ｈ２７３、Ｌ２７４、Ｋ２７６、およびＫ２７８；Ｈ２７３、Ｌ２７４、Ｙ２７５、およびＫ２７８；ならびにＨ２７３、Ｌ２７４、Ｙ２７５、およびＫ２７６に結合することができる。

いくつかの実施形態では、抗体または断片は、これらのエピトープ残基のすべてに結合することができる。

本開示のＣＤＲ、重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、さらに修飾することができる。いくつかの実施形態では、修飾された重鎖可変領域または軽鎖可変領域は、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を保持し、依然としてＩＦＮＡＲ１に結合可能である。

いくつかの実施形態では、修飾は、ＣＤＲの各々からの１つ以下のホットスポット位置での置換である。いくつかの実施形態では、修飾は、１つ、２つ、または３つのこうしたホットスポット位置での置換である。一実施形態では、修飾は、ホットスポット位置のうちの１つでの置換である。このような置換は、いくつかの実施形態では、保存的置換である。

「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられるものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリー、例えば塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が、当技術分野で定義されている。したがって、免疫グロブリンポリペプチド内の非必須アミノ酸残基は、好ましくは、同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基で置換される。別の実施形態では、アミノ酸のストリングは、側鎖ファミリーメンバーの順序および／または組成が異なる構造的に類似したストリングで置き換えることができる。

保存的アミノ酸置換の非限定的な例を以下の表に示す。０以上の類似性スコアは、２つのアミノ酸間の保存的置換を示す。
アミノ酸類似性マトリックス

保存的アミノ酸置換

本明細書に開示される抗体は、それらが由来する天然に存在する結合ポリペプチドとはアミノ酸配列が異なるように修飾され得ることも当業者によって理解されるであろう。例えば、指定されたタンパク質に由来するポリペプチドまたはアミノ酸配列は類似していてもよく、例えば、開始配列と一定の同一性を有していてもよい、例えば、それは、開始配列と６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一であってもよい。

特定の実施形態では、抗体は、通常は抗体と関連しないアミノ酸配列または１つ以上の部分を含む。例示的な修飾は、以下により詳細に記載する。例えば、本開示の抗体は、柔軟なリンカー配列を含み得るか、または機能的部分（例えば、ＰＥＧ、薬物、毒素、または標識）を付加するように修飾され得る。

本開示の抗体、バリアント、またはその誘導体としては、すなわち、共有結合による付着が抗体のエピトープへの結合を妨げないように、抗体への任意のタイプの分子の共有結合による付着によって修飾された誘導体が挙げられる。例えば、これらに限定するものではないが、例えば、抗体は、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、リン酸化、アミド化、既知の保護／遮断基による誘導体化、タンパク質分解的切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への連結などにより、修飾され得る。これらに限定されないが、特定の化学的切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成など、既知の技術により、数多くの化学修飾のいずれかを行うことができる。さらに、抗体は、１つ以上の非古典的アミノ酸を含み得る。

いくつかの実施形態では、抗体は、治療剤、プロドラッグ、ペプチド、タンパク質、酵素、ウイルス、脂質、生物学的応答修飾因子、医薬剤、またはＰＥＧに結合され得る。

抗体は、放射性標識などの検出可能な標識、免疫調節剤、ホルモン、酵素、オリゴヌクレオチドを含み得る治療剤、光活性治療剤または診断剤、薬物または毒素であり得る細胞毒性剤、超音波増強剤、非放射性標識、これらの組み合わせ、および当該技術分野で既知の他のこうした剤に結合または融合され得る。
二機能性分子

免疫系に関与するＩＦＮＡＲ１および別のタンパク質の両方の結合が有利であるか、または相乗的でさえあることが企図されている。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗ＩＦＮＡＲ１断片および別の抗原結合断片／部分を有する二重特異性抗体などの二機能性分子が提供される。

二機能性分子の第２の部分は、以下のうちのいずれかであり得る。（１）Ｂ細胞を標的とする、Ｂ細胞成長を標的とするおよび抗ＢＡＦＦ断片、ＴＡＣＩ‐Ｉｇなどの生存因子を標的とするなど、抗ＣＤ２０および抗ＣＤ２２抗体断片などのＢ細胞の表面分子を標的とする；（２）ＣＴＬＡ４−Ｉｇおよび抗ＣＴＬＡ４抗体断片などの共刺激分子を標的とする；（３）エドラチド（ｈＣＤＲ１）などのＴ細胞を標的とする；ならびに（４）サイトカインおよび補体、例えば抗ＩＬ６、抗ＣＸＣＬ１３および抗Ｃ５抗体断片を標的とする。

特に、ＩＦＮＡＲ１およびＢＡＦＦ（Ｂ細胞活性化因子）経路は、ループスなどの自己免疫疾患および障害の治療において相乗効果を有し得ると考えられる。抗ＩＦＮＡＲ１／抗ＢＡＦＦ二重特異性抗体の様々なフォーマット（図７に例示されている）のそれらの結合能力および生物学的機能について試験を行った。驚くべきことに、これらの二重特異性抗体は、ＩＦＮα２ｂシグナル伝達の遮断において単一特異性８Ｇ１１に匹敵する結合活性を呈し、ＢＡＦＦ誘導Ｂ細胞の増殖の遮断においてはさらに優れた活性を呈した。

したがって、一実施形態では、ヒトインターフェロンアルファおよびベータ受容体サブユニット１（ＩＦＮＡＲ１）タンパク質に特異性を有する第１の抗原結合部分と、ヒトＢ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）タンパク質に特異性を有する第２の抗原結合部分とを有する二機能性分子が提供される。抗ＩＦＮＡＲ１部分は、本開示の任意の実施形態の断片であり得る。抗ＢＡＦＦ部分は、ベリムマブからの断片であり得る（例えば、Ｄｕｂｅｙ ＡＫら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ＆Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ２０１１；２（４）：３１７−３１９を参照されたい）。

二機能性分子は、図７に例示されるような、例えば、２つの一本鎖断片（ｓｃＦｖ）または２つのＦａｂ断片に融合した完全抗体を有するフォーマットをとることができる。二機能性または二重特異性分子の他のフォーマットも提供される。いくつかの実施形態では、抗ＩＦＮＡＲ１および抗ＢＡＦＦ断片の各々は、Ｆａｂ断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体から独立して選択される。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、Ｆｃ断片をさらに含む。
抗体をコードするポリヌクレオチドおよび抗体を調製する方法

本開示はまた、本開示の抗体、そのバリアントまたは誘導体をコードする単離されたポリヌクレオチドまたは核酸分子を提供する。本開示のポリヌクレオチドは、同じポリヌクレオチド分子上または別個のポリヌクレオチド分子上の抗原結合ポリペプチド、そのバリアントまたは誘導体の重鎖および軽鎖可変領域全体をコードし得る。さらに、本開示のポリヌクレオチドは、同じポリヌクレオチド分子上または別個のポリヌクレオチド分子上の抗原結合ポリペプチド、そのバリアントまたは誘導体の重鎖および軽鎖可変領域の一部分をコードし得る。

抗体を作製する方法は、当技術分野で周知であり、本明細書に記載されている。特定の実施形態では、本開示の抗原結合ポリペプチドの可変領域および定常領域の両方が完全にヒトである。完全ヒト抗体は、当技術分野で記載されている技術を用いて、本明細書に記載されているとおりに作製することができる。例えば、特定の抗原に対する完全ヒト抗体は、抗原攻撃に応答してそのような抗体を産生するように修飾されているが、内因性遺伝子座が無効であるトランスジェニック動物に抗原を投与することにより調製できる。こうした抗体を作製するために使用できる例示的な技術は、米国特許第６，１５０，５８４号；同第６，４５８，５９２号、同第６，４２０，１４０号に記載されており、これらは、その全体が参照により組み込まれる。
治療および診断方法

本明細書に記載されるとおり、本開示の抗体、バリアントまたは誘導体は、特定の治療および診断方法において使用され得る。

本開示はさらに、本明細書に記載の障害または状態のうちの１つ以上を治療するために、本開示の抗体を動物、哺乳動物、およびヒトなどの患者に投与することを伴う含む抗体ベースの治療に関する。本開示の治療化合物としては、これらに限定されないが、本開示の抗体（本明細書に記載のそれらのバリアントおよび誘導体など）および本開示の抗体（本明細書に記載のそれらのバリアントおよび誘導体など）をコードする核酸またはポリヌクレオチドが挙げられる。

一実施形態は、それを必要とする患者において免疫応答を抑制する方法を提供する。この方法は、本開示の抗体、断片、または二機能性分子を患者に投与することを伴う。いくつかの実施形態では、患者は、組織または臓器移植レシピエントである。

いくつかの実施形態では、自己免疫疾患または障害を治療する方法が提供される。自己免疫疾患または障害の非限定的例としては、１型糖尿病、関節リウマチ（ＲＡ）、乾癬／乾癬性関節炎、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス（ループス）、炎症性腸疾患、アジソン病、グレーブス病、シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、重症筋無力症、血管炎、悪性貧血、およびセリアック病が挙げられる。

特定の実施形態では、この方法は、全身性エリテマトーデス（ループス）の治療に有用である。

任意の特定の患者の特定の投与量および治療レジメンは、使用される特定の抗体、そのバリアントまたは誘導体、患者の年齢、体重、一般的な健康状態、性別、および食事、および投与時間、排泄率、薬物の組み合わせ、および治療されている特定の疾患の重症度など、様々な要因に依存する。医療介護者によるこうした要因の判定は、当技術分野の通常の技術の範囲内である。量はまた、治療される個々の患者、投与経路、配合物の種類、使用される化合物の特徴、疾患の重症度、および所望の効果に依存する。使用される量は、当技術分野で周知である薬理学的および薬物動態学的原理によって決定することができる。

抗体、バリアントの投与方法としては、これらに限定されないが、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、および経口経路が挙げられる。抗原結合ポリペプチドまたは組成物は、例えば注入またはボーラス注射により、上皮または粘膜皮膚の粘膜（例えば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜など）を介した吸収により、任意の便利な経路により投与され得、また他の生物活性剤と一緒に投与され得る。したがって、本開示の抗原結合ポリペプチドを含有する医薬組成物は、経口、直腸内、非経口、大槽内、膣内、腹腔内、局所的（粉末、軟膏、点滴または経皮パッチによる）、頬側、または経口もしくは点鼻薬として投与され得る。

本明細書で使用される「非経口」という用語は、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下および関節内の注射および注入などの投与態様を指す。

投与は全身的または局所的であり得る。さらに、脳室内およびくも膜下腔内注射など、任意の適切な経路によって、本開示の抗体を中枢神経系に導入することが望ましい場合がある。脳室内注射は、例えば、オマヤリザーバーなどのリザーバーに取り付けられた脳室内カテーテルによって促進され得る。肺投与もまた、例えば、吸入器または噴霧器、およびエアロゾル化剤を含む配合物の使用により、用いられ得る。

本開示の抗原結合ポリペプチドまたは組成物を、治療を必要とする領域に局所的に投与することが望ましい場合がある。これは、例えば、これらの方法に限定されないが、手術中の局所注入、局所適用、例えば、手術後の創傷被覆材と一緒に、注射による、カテーテルによる、坐剤による、またはインプラントによって達成され得る。インプラントは、膜（ｓｉａｌａｓｔｉｃ膜または繊維など）などの多孔性、非多孔質、またはゼラチン状の材料である。好ましくは、本開示の抗体などのタンパク質を投与する場合、タンパク質が吸収しない材料を使用するように注意を払う必要がある。

サンプル中のヒトインターフェロンアルファおよびベータ受容体サブユニット１（ＩＦＮＡＲ１）タンパク質の発現を検出する方法も提供され、いくつかの実施形態では、サンプルを抗体またはその断片と接触させ、サンプル中のＩＦＮＡＲ１の発現を示す結合を検出することを含む。
組成物

本開示はまた、医薬組成物を提供する。こうした組成物は、有効量の抗体、および許容される担体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、第２の抗がん剤（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）をさらに含む。

特定の実施形態では、「薬学的に許容される」という用語は、連邦政府または州政府の規制機関によって承認されたか、または動物、より具体的にはヒトでの使用のために米国薬局方または他の一般に認められた薬局方に列挙されていることを意味する。さらに、「薬学的に許容される担体」は、一般に、非毒性の固体、半固体、または液体の充填剤、希釈剤、封入材料、または任意のタイプの配合物補助剤である。

「担体」という用語は、治療薬と共に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを指す。このような医薬担体は、水および油などの無菌の液体であり得、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油などの石油、動物、植物または合成起源のものを含む。医薬組成物が静脈内投与される場合、水は好ましい担体である。生理食塩水およびデキストロース水溶液およびグリセロール溶液も、特に注射可能な溶液のための液体担体として使用することができる。好適な医薬賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。組成物は、所望の場合、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、または酢酸塩、クエン酸塩もしくはリン酸塩などのｐＨ緩衝剤を含むこともできる。ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤；および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの張性を調整するための剤も想定される。これらの組成物は、液剤、懸濁剤、乳剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、徐放性製剤などの形態をとることができる。組成物は、従来の結合剤およびトリグリセリドなどの担体を用いて、坐剤として配合することができる。経口配合剤としては、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的な担体を挙げることができる。好適な医薬担体の例は、Ｅ．Ｗ．ＭａｒｔｉｎによるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓに記載されている（参照により本明細書に組み込まれる）。こうした組成物は、患者への適切な投与のための形態をもたらすように、好適な量の担体と共に、好ましくは精製された形態の治療有効量の抗原結合ポリペプチドを含む。配合物は、投与態様に適合しているものとする。親調製物は、ガラス製またはプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器または複数回投与用バイアルに封入され得る。

一実施形態では、組成物は、ヒトへの静脈内投与に適合した医薬組成物として、日常的な手順に従って配合される。典型的には、静脈内投与用の組成物は、無菌等張水性緩衝溶液である。必要な場合、組成物はまた、可溶化剤および注射部位での疼痛を和らげるためのリグノカインなどの局所麻酔薬を含んでもよい。一般に、成分は、例えば、活性剤の量を示すアンプルまたはサシェなどの密閉容器内の乾燥凍結乾燥粉末または無水濃縮物として、別々にまたは一緒に混合して単位剤形で供給される。組成物が注入により投与される場合、無菌医薬品グレードの水または生理食塩水を含む注入ボトルで調剤することができる。組成物が注射により投与される場合、投与前に成分が混合され得るように、注射用滅菌水または生理食塩水のアンプルを提供することができる。

本開示の化合物は、中性または塩の形態として配合され得る。薬学的に許容される塩としては、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するものなどのアニオンで形成されるもの、およびナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するものなどのカチオンで形成されるものが挙げられる。
実施例
実施例１．ヒトＩＦＮＡＲ‐１に対するマウスモノクローナル抗体の作製

この実施例は、ハイブリドーマ技術を使用した抗ヒトＩＦＮＡＲ‐１マウスモノクローナル抗体の作製を示す。
免疫

ヒトＩＦＮＡＲ‐１の細胞外領域全体を含む組換えヒトＩＦＮＡＲ‐１タンパク質を、抗ヒトＩＦＮＡＲ‐１抗体を育てるための免疫原として使用した。Ｃ５７ＢＬ／６、Ｂａｌｂ／ｃ、ＳＪＬマウスまたはＳＤラットを最初に皮下（ｓ．ｃ．）に５０μｇの免疫原で免疫し、次に腹腔内（ｉ．ｐ．）またはｓ．ｃ．で隔週で２５μｇの免疫原により免疫した。免疫応答は、眼窩後出血によって監視した。血漿は、ＥＬＩＳＡ結合アッセイによりスクリーニングした。端的に述べると、Ｈｉｓタグ付きＩＦＮＡＲ‐１を０．５μｇ／ｍｌで一晩コーティングし、次いで５％ＢＳＡ／ＰＢＳでブロックした。段階希釈血清を、コーティングされた抗原と共に室温で１時間インキュベートした。得られたプレートをＰＢＳ／Ｔで洗浄し、ヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰと共に室温で１時間インキュベートした。プレートはＴＭＢ基質で発色させ、ＯＤ４５０〜６３０ｎｍで分光光度計により分析した。融合し、さらなるスクリーニングを行うために、高力価の抗ＩＦＮＡＲ１免疫グロブリンを有するマウスを選択した。屠殺および脾臓摘出の３日前に、マウスを最終的に２５μｇ抗原で腹腔内追加免疫した。脾臓は、融合に使用した。
融合およびハイブリドーマのスクリーニング

マウスから単離したマウス脾細胞は、標準プロトコルに基づいてマウス骨髄腫細胞株と融合させた。免疫マウスの脾臓リンパ球の単一細胞懸濁液を、電気融合装置でＳＰ２／０非分泌マウス骨髄腫細胞の数の３分の１まで融合させた。細胞を平底マイクロタイタープレートに約１＊１０Ｅ５／ウェルで播種し、その後約１＊ＨＡＴ、１０％ウシ胎児血清／ＤＭＥＭ選択培地で約１０日間インキュベートした。１０日後、細胞はＨＡＴをＨＴで置き換えた培地で培養した。次に、マウス抗ＩＦＮＡＲ‐１モノクローナルＩｇＧ抗体について、個々のウェルをＥＬＩＳＡによりスクリーニングした。抗体分泌ハイブリドーマの培地を交換し、２日後に再度スクリーニングした。依然としてマウス抗ＩＦＮＡＲ‐１抗体が陽性であれば、ハイブリドーマを限界希釈により２回サブクローニングした。次に、安定したサブクローンをｉｎ ｖｉｔｒｏで培養し、組織培養培地で少量の抗体を生成して、様々な機能アッセイでさらに特徴を明らかにした。

ＩＦＮ応答性レポーターアッセイで強力なブロッキング能を示すクローンをサブクローニング用に選択した。２ラウンドサブクローンの上清を使用して、ＥＬＩＳＡベースでヒトおよびアカゲザルのＩＦＮＡＲ‐１結合能およびＩＦＮアルファブロッキング能を確認し、その後に配列決定およびさらなる分析を行った。これらのスクリーニング後、３８クローン（４Ａ６、４Ｂ１２、４Ｄ８、８Ｇ１１、１２Ｇ１１、１７Ｆ９、１８Ｂ６、１８Ｃ１、１９Ｂ６、２０Ｂ３、２０Ｅ１０、２０Ｅ１２、２１Ｄ６、２４Ｆ６、２９Ｅ１２、３０Ｂ５、３０Ｃ８、３４Ｈ８、３６Ｅ３、３９Ｆ５、４１Ｆ１、４６Ａ１０、４７Ｃ６、４７Ｆ５、１０４Ａ３、１０６Ａ７、１０７Ｅ１２、１２４Ｄ１２、２６０Ｈ８、２６８Ｅ９、２６９Ａ７、２９３Ｈ１０、３７０Ｅ５、３９２Ｄ６、４０２Ｇ３、４３０Ｈ６、４８５Ｇ１０および４８７Ｅ３）を選択した。これらのクローンの配列は、表１に列挙する。これらのハイブリドーマのヒトＩｇＧ１ Ｆｃに融合したキメラ抗体は、さらに特徴を明らかにするために生成した。
表１．スクリーニングから選択された抗体配列

実施例２．抗ＩＦＮＡＲ‐１マウスモノクローナル抗体の結合特性

この実施例では、ＥＬＩＳＡアッセイにより、ヒトＩＦＮＡＲ‐１タンパク質に対する抗ＩＦＮＡＲ‐１マウス抗体の結合特性の試験を行った。端的に述べると、Ｈｉｓタグ付きＩＦＮＡＲ‐１を０．５μｇ／ｍｌで一晩コーティングし、次いで５％ＢＳＡ／ＰＢＳでブロックした。段階希釈した抗ＩＦＮＡＲ‐１抗体を、コーティングされた抗原と共に室温で１時間インキュベートした。得られたプレートをＰＢＳ／Ｔで洗浄し、ヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰと共に室温で１時間インキュベートした。プレートはＴＭＢ基質で発色させ、ＯＤ４５０〜６３０ｎｍで分光光度計により分析した。ＥＬＩＳＡアッセイの結果は、表２にまとめており、ヒトＩＦＮＡＲ‐１タンパク質への結合のＥＣ_５０を示している。
表２．ｈＩＦＮＡＲ‐１タンパク質におけるＥＣ_５０（ｎＭ）の結合

抗ＩＦＮＡＲ‐１抗体ＢＩＡＣＯＲＥ分析

組換えＨｉｓタグ付きヒトＩＦＮＡＲ‐１−ＥＣＤタンパク質への抗体の結合を、キャプチャ法を用いてＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００により調査した。抗ＩＦＮＡＲ‐１抗体は、チップにコーティングされた抗ヒトＦｃ抗体またはプロテインＡを使用して捕捉させた。Ｈｉｓタグ付きヒトＩＦＮＡＲ‐１‐ＥＣＤタンパク質（０〜８ｎＭ）の段階濃度を、流速３０μｌ／分でキャプチャ抗体に注入した。解離相は６００秒または１２００秒であった。結果を以下の表３に示す。抗ＩＦＮＡＲ‐１抗体に関するＢｉａｃｏｒｅの結果は、これらの抗ＩＦＮＡＲ‐１抗体がヒトＩＦＮＡＲ‐１に対して高親和性結合剤であることを実証している。
表３．組換えＩＦＮＡＲ‐１タンパク質への抗体の結合

実施例３．抗ＩＦＮＡＲ‐１マウスモノクローナル抗体をスクリーニングするためのＩＦＮ応答性レポーターアッセイ

ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＩＦＮα／β細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）は、Ｉ型ＩＦＮによって誘導されるＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の活性化を監視するように特別に設計されている。ＩＦＮαまたはＩＦＮβ刺激時には、これらの細胞はＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路を活性化し、次いで分泌型胚性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）と呼ばれるレポーター遺伝子の発現を活性化する。上清で分泌されたＳＥＡＰは、ＳＥＡＰ検出試薬ＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅ（商標）（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を使用して容易に検出できる。その受容体へのインターフェロンの結合を遮断する中和抗体は、ＩＦＮ誘導レポーター遺伝子の発現を阻害する。このレポーターアッセイは、抗ＩＦＮＡＲ‐１マウスモノクローナル抗体のスクリーニングに利用した。

ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＩＦＮα／β細胞を、４００Ｕ／ｍｌ ＩＦＮα２ｂと共に、抗ＩＦＮＡＲ‐１マウスモノクローナル抗体の段階希釈液の存在下で一晩インキュベートした。レポーター遺伝子ＳＥＡＰの発現は、６５０ｎｍの分光光度計を使用して決定した。試験対象の抗体のＥＣ_５０は、表４に列挙する。これらの抗体の中で、４Ｄ８、８Ｇ１１、３４Ｈ８、４８５Ｇ１０および４８７Ｅ３抗体は、ＩＦＮα２ｂシグナルの遮断において優れた効果を示した。配列相同性に関する分析を考慮して、８Ｇ１１および４８５Ｇ１０のクローンのヒト化をさらに行い、特徴を明らかにするために選択した。
表４．抗体のレポーターアッセイ

実施例４．抗ＩＦＮＡＲ‐１ｍＡｂヒト化
Ａ．８Ｇ１１

マウス抗体８Ｇ１１可変領域遺伝子を使用して、ヒト化ＭＡｂを作製した。このプロセスの第１のステップでは、８Ｇ１１のＶＨおよびＶＫのアミノ酸配列をヒトＩｇ遺伝子配列の利用可能なデータベースと比較して、全体的に最も一致するヒト生殖系列Ｉｇ遺伝子配列を同定した。重鎖では、最も近いヒトの一致は、ＩＧＨＶ１−４６＊０１遺伝子であった。軽鎖では、ヒトに最適な一致は、ＩＧＫＶ１−９＊０１遺伝子であった。

次に、ヒト化可変ドメイン配列は、８Ｇ１１ ＶＨのＣＤＲ１（配列番号７７）、２（配列番号７８）、および３（配列番号８０）配列がＩＧＨＶ１−４６＊０１遺伝子のフレームワーク配列にグラフトされ、８Ｇ１１軽鎖のＣＤＲ１（配列番号８１）、２（配列番号８２）および３（配列番号８３）は、ＩＧＫＶ１−９＊０１遺伝子のフレームワーク配列にグラフトされるように設計された。次に、３Ｄモデルを作製して、マウスのアミノ酸をヒトのアミノ酸に置き換えることで、結合および／またはＣＤＲ構造に影響を及ぼし得る任意のフレームワーク位置の有無を判断した。重鎖の場合、ヒトのフレームワークにおいてＫ１２、Ｖ２０、Ａ２４、Ｒ３８、Ｍ４８、Ｖ６８、Ｍ７０、Ｒ７２、Ｖ７９、およびＭ８１（Ｋａｂａｔナンバリング）が同定され、それらの対応するアミノ酸、すなわち、Ｋ１２Ｖ、Ｖ２０Ｌ、Ａ２４Ｇ、Ｒ３８Ｋ、Ｍ４８Ｉ、Ｖ６８Ａ、Ｍ７０Ｉ、Ｒ７２Ａ、Ｖ７９ＡおよびＭ８１Ｌの逆変異を受けた。軽鎖の場合、ヒトのフレームワークでＬ４、Ａ１３、Ｉ２１、Ａ４３、Ｌ４６、Ｔ７４、Ｌ７８およびＹ８７（Ｋａｂａｔナンバリング）が同定され、それらの対応するアミノ酸へすなわち、Ｌ４Ｍ、Ａ１３Ｔ、Ｉ２１Ｖ、Ａ４３Ｓ、Ｌ４６Ｖ、Ｔ７４Ｉ、Ｌ７８Ｖ、およびＹ８７Ｆの逆変異を受けた。一方、Ｇ５６ Ａ変異はＰＴＭを除去するために用いた。
表５．８Ｇ１１配列およびＣＤＲ

ヒト化配列を表６に列挙する：８Ｇ１１−ＶＨ１、８Ｇ１１−ＶＨ２、８Ｇ１１−ＶＨ３、８Ｇ１１−ＶＨ４、８Ｇ１１−ＶＬ１、８Ｇ１１−ＶＬ２、８Ｇ１１−ＶＬ３、および８Ｇ１１−ＶＬ４。
表６．ヒト化配列

１６個のＩｇＧはすべてＨＥＫ２９３細胞株で発現した。親和性のランク付けのためにエクスプレス抗体を実行した。親和性のランク付けの詳細なデータを表７にまとめた。
表７．ヒト化抗体の親和性のランク付け

親和性のランク付け結果に基づいて、４つのＩｇＧ（ＶＨ４＋ＶＬ３、ＶＨ２＋ＶＬ２、ＶＨ２＋ＶＬ１、ＶＨ１＋ＶＬ１）が発現し、精製した。異なる濃度での親和性測定のために、精製抗体をさらに選択した。詳細なデータを表８にまとめた。
表８．選択したヒト化抗体の親和性

Ｂ．４８５Ｇ１０

マウス抗体４８５Ｇ１０可変領域遺伝子を使用して、ヒト化ＭＡｂを作製した。このプロセスの第１のステップでは、４８５Ｇ１０のＶＨおよびＶＫのアミノ酸配列をヒトＩｇ遺伝子配列の利用可能なデータベースと比較して、全体的に最も一致するヒト生殖系列Ｉｇ遺伝子配列を同定した。重鎖では、最も近いヒトの一致は、ＩＧＨＶ１−２＊０５遺伝子であった。軽鎖では、ヒトに最適な一致は、ＩＧＫＶ１−１６＊０１遺伝子であった。

次に、ヒト化可変ドメイン配列は、４８５Ｇ１０重鎖のＣＤＲ１（配列番号９２）、２（配列番号９３）、および３（配列番号９５）配列がＩＧＨＶ１−２＊０５遺伝子のフレームワーク配列にグラフトされ、４８５Ｇ１０軽鎖のＣＤＲ１（配列番号９６）、２（配列番号Ｃ５）および３（配列番号９８）は、ＩＧＫＶ１−１６＊０１遺伝子のフレームワーク配列にグラフトされるように設計された。次に、３Ｄモデルを作製して、マウスのアミノ酸をヒトのアミノ酸に置き換えることで、結合および／またはＣＤＲ構造に影響を及ぼし得る任意のフレームワーク位置の有無を判断した。重鎖の場合、ヒトのフレームワークにおいてＶ２０、Ａ２４、Ｒ３８、Ｍ４８、Ｖ６８、Ｍ７０、Ｒ７２、Ｍ８１、Ａ９７（Ｋａｂａｔナンバリング）が同定され、それらの対応するアミノ酸、すなわち、Ｖ２０Ｌ、Ａ２４Ｇ、Ｒ３８Ｋ、Ｍ４８Ｉ、Ｖ６８Ａ、Ｍ７０Ｉ、Ｒ７２Ａ、Ｍ８１Ｌ、Ａ９７Ｇの逆変異を受けた。軽鎖では、ヒトのフレームワークにおけるＡ１３、Ｉ２１、Ｆ３６、Ｓ４６、Ｌ７８、Ｖ１０４（Ｋａｂａｔナンバリング）が同定され、それらの対応するアミノ酸、すなわち：Ａ１３Ｔ、Ｉ２１Ｖ、Ｆ３６Ｙ、Ｓ４６Ｐ、Ｌ７８Ｖ、Ｖ１０４Ｌへの逆変異を受けた。一方、Ｇ５６ Ａ変異はＰＴＭを除去するために用いた。
表９．４８５Ｇ１０配列およびＣＤＲ

ヒト化配列は、表１０に列挙する：４８５Ｇ１０−ＶＨ０、４８５Ｇ１０−ＶＨ１、４８５Ｇ１０−ＶＨ２、４８５Ｇ１０−ＶＨ３、４８５Ｇ１０−ＶＬ１、４８５Ｇ１０−ＶＬ２、４８５Ｇ１０−ＶＬ３、および４８５Ｇ１０−ＶＬ４。
表１０．ヒト化配列

１６個のＩｇＧすべてがＨＥＫ２９３細胞株において発現できた。親和性のランク付けのためにエクスプレス抗体を実行した。親和性のランク付けの詳細なデータを表１１にまとめた。
表１１．ヒト化抗体の親和性のランク付け

親和性のランク付け結果に基づいて、４つのＩｇＧ（ＶＨ１＋ＶＬ２、ＶＨ１＋ＶＬ４、ＶＨ１＋ＶＬ３、ＶＨ２＋ＶＬ３）が発現し、精製した。異なる濃度での親和性測定のために、精製抗体をさらに選択した。詳細なデータを表１２にまとめた。
表１２．選択したヒト化抗体の親和性

実施例５．抗ＩＦＮＡＲ‐１ヒト化モノクローナル抗体は、ＩＦＮ応答性レポーターアッセイにおいてインターフェロンα２ｂの生物学的活性を阻害する

ヒト化抗体のＩＦＮＡＲ‐１遮断機能を評価するために、実施例３に記載されているｉｎ ｖｉｔｒｏ ＩＦＮ応答性レポーターアッセイを使用した。ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＩＦＮα／β細胞を４００Ｕ／ｍｌ ＩＦＮα２ｂと段階希釈した抗ＩＦＮＡＲ‐１ヒト化モノクローナル抗体の存在下で一晩インキュベートした後、分光光度計を使用して６５０ｎＭで測定した。図１Ａおよび図１Ｂに示すように、８Ｇ１１Ｈ抗体および４８５Ｇ１０Ｈ抗体は、ＩＦＮα２ｂ誘導レポーター遺伝子の発現を効率的に遮断した。それらの効力は、対応するキメラ抗体の効力に匹敵する。
実施例６．抗ＩＦＮＡＲ‐１ヒト化モノクローナル抗体は、ダウディ細胞増殖におけるインターフェロンα２ｂの生物学的活性を阻害する

ヒトＢリンパ芽球バーキットリンパ腫に由来する細胞株ダウディは、高レベルのＩＦＮＡＲを発現し、これらの細胞の成長が、Ｉ型インターフェロンによって阻害される。ヒト化抗ＩＦＮＡＲ‐１抗体の機能的遮断能力を測定するために、段階希釈抗ＩＦＮＡＲ‐１ヒト化抗体の存在下または非存在下で、ダウディ細胞をインターフェロンα２ｂと共に培養した。細胞増殖はＣｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ−８（ＣＣＫ８、ＤＯＪＩＮＤＯ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）で測定した。図２Ａおよび図２Ｂに記載されているように、８Ｇ１１Ｈ抗体および４８５Ｇ１０Ｈ抗体は、ダウディ細胞の増殖のＩＦＮα２ｂ媒介阻害を用量依存的に逆転させる。それらの効力は、対応するキメラ抗体の効力に匹敵する。
実施例７．抗ＩＦＮＡＲ‐１ヒトモノクローナル抗体は、複数のＩ型ＩＦＮの生物学的活性を阻害する

ヒト化抗ＩＦＮＡＲ‐１抗体が複数のＩ型ＩＦＮの生物学的活性を阻害する能力を評価するために、ＩＦＮ応答性レポーターアッセイにおいて、異なるＩＦＮアルファサブタイプの試験を行った。ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＩＦＮ−α／β細胞は、試験した段階希釈抗体またはアイソタイプ対照の存在下で、ＩＦＮαサブタイプ：１、２ａ、４、５、６、７、８、１０、１４、１６、１７および２１のいずれかと共にインキュベートした。レポーターシグナルは、実施例３に記載されるように決定した。表１３に示すように、８Ｇ１１Ｈ抗体および４８５Ｇ１０Ｈ抗体は、複数のＩ型ＩＦＮによって誘発される細胞シグナルを効率的に阻害できる。これらのＥＣ_５０は、ｐＭレベルである。
表１３．複数のＩ型ＩＦＮのレポーターアッセイ

実施例８．抗ＩＦＮＡＲ‐１ヒトモノクローナル抗体は、Ｉ型ＩＦＮ媒介抗ウイルス機能を阻害する

Ｉ型ＩＦＮは、最初にその独自の抗ウイルス機能によって同定された。Ｉ型ＩＦＮ媒介抗ウイルス機能に対する抗ＩＦＮＡＲ‐１抗体の遮断効果を評価するために、ＩＦＮα２ｂベースの抗ウイルスアッセイが確立された。簡潔に述べると、細胞株Ｈｕｈ７は、ホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子に連結された全長ＨＣＶ遺伝子型１ｂレプリコン（Ｃｏｎ１ｂ）を含むように操作された。レポーター遺伝子の豊富さは、ＨＣＶレプリコンの複製レベルと密接に相関していた。ＩＦＮα２ｂ誘導抗ウイルス機能の遮断における抗ＩＦＮＡＲ‐１抗体の活性は、ＩＦＮα２ｂ処理されたＨｕｈ７−Ｃｏｎ１ｂ細胞中でのレポーター遺伝子レベルの回復によって決定することができる。

Ｈｕｈ７−Ｃｏｎ１ｂ細胞を、４００Ｕ／ｍｌ ＩＦＮα２ｂと共に、段階希釈した抗ＩＦＮＡＲ‐１ヒト化モノクローナル抗体の存在下または非存在下で４８時間培養した。ホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子の発現を、Ｂｒｉｔｅｌｉｔｅ ｐｌｕｓ試薬の添加によって測定し、さらに分光光度計を使用して決定した。表１４に示すように、抗ＩＦＮＡＲ‐１ヒト化モノクローナル抗体８Ｇ１１Ｈおよび４８５Ｇ１０Ｈは、ＩＦＮα２ｂ誘導抗ウイルス機能を効率的に阻害し、それらのＥＣ５０は、対応するキメラ抗体のＥＣ５０に匹敵する。
表１４．ＩＦＮα２ｂ媒介抗ウイルスアッセイ

実施例９．抗ＩＦＮＡＲ‐１ヒト化モノクローナル抗体によるＩ型ＩＦＮ誘導ＩＰ−１０分泌の阻害

Ｉ型ＩＦＮ刺激時に、正常な末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、ＩＰ−１０などの一連のＩＦＮ応答遺伝子を発現する。正常なＰＢＭＣによる、ＩＰ−１０のＩＦＮα２ｂ誘導分泌の阻害について、抗ＩＦＮＡＲ‐１抗体の活性の試験を行った。

ＰＢＭＣを、抗ＩＦＮＡＲ‐１ヒト化モノクローナル抗体の存在下または非存在下で、４００Ｕ／ｍｌ ＩＦＮα２ｂと共に４８時間インキュベートした。上清を収集し、製造業者の推奨に従って定量的ＬＡＮＣＥキット（Ｃｉｓｂｉｏ）を使用してＩＰ−１０の濃度を分析した。図３に示すとおり、抗ＩＦＮＡＲ‐１ヒト化モノクローナル抗体８Ｇ１１Ｈおよび４８５Ｇ１０Ｈは、通常のＰＢＭＣ培養による組換えＩＦＮα２ｂ誘導によるＩＰ−１０の分泌を用量依存的に阻害する。
実施例１０．抗ＩＦＮＡＲ‐１ヒト化モノクローナル抗体によるＩ型ＩＦＮ誘導樹状細胞の発生の阻害。

Ｉ型ＩＦＮは、ＣＤ３８、ＣＤ８０、ＣＤ８６などの特定の細胞表面マーカーの発現およびナイーブ同種異系ＣＤ４^＋Ｔ細胞の増殖を刺激する能力（混合リンパ球反応、ＭＬＲ）により定義されるとおり、樹状細胞の発生および成熟を誘導することは周知である。Ｉ型ＩＦＮシグナル伝達の遮断における、樹状細胞の分化に対する抗ＩＦＮＡＲ‐１抗体の機能を評価するために、ＩＦＮα２ｂ媒介樹状細胞分化アッセイを確立した。ヒトＰＢＭＣから単離された単球を、抗ＩＦＮＡＲ‐１ヒト化モノクローナル抗体の存在下または非存在下で、７２時間、２０ｎｇ／ｍｌ ＧＭＣＳＦおよび４００Ｕ／ｍｌ ＩＦＮα２ｂと共に培養した。単球由来樹状細胞を収集し、１：５の比率で５日間、ヒトナイーブ同種異系ＣＤ４^＋Ｔ細胞とさらに培養した。培養上清におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞の増殖状態を反映するサイトカインＩＦＮ−γをＥＬＩＳＡアッセイにより分析した。

図４に示すように、分化系に抗ＩＦＮＡＲ‐１ヒト化モノクローナル抗体８Ｇ１１Ｈまたは４８５Ｇ１０Ｈを添加することにより、細胞表面マーカーＣＤ３８およびＣＤ８６の発現が大幅に減少し、かつＣＤ４＋Ｔ細胞によるＩＦＮ−γの産生の減少により実証されるとおり、ＭＬＲでの応答が明らかに損なわれる（図５）。これらの結果は、抗ＩＦＮＡＲ‐１ヒト化モノクローナル抗体である８Ｇ１１Ｈおよび４８５Ｇ１０Ｈが、樹状細胞の発生におけるＩＦＮα２ｂのシグナル伝達を効率的に遮断できることを実証した。
実施例１１．抗ＩＦＮＡＲ‐１ヒト化モノクローナル抗体によるＳＬＥ血漿媒介樹状細胞の発生の阻害

ＳＬＥ患者の血漿が樹状細胞の発生を誘導する能力は、疾患活性と相関し、かつＩＦＮαの作用に依存する。この実施例では、抗体処理された樹状細胞がナイーブ同種異系ＣＤ４^＋Ｔ細胞の増殖（ＭＬＲ）を刺激する能力が損なわれることによって評価されるとおり、ＳＬＥ血漿誘導樹状細胞の発生の阻害について、精製されたヒト抗ＩＦＮＡＲ‐１抗体８Ｇ１１Ｈおよび４８５Ｇ１０Ｈの試験を行った。

ヒトＰＢＭＣから単離された単球を、２５％ＳＬＥ患者血漿を含む培地で、抗ＩＦＮＡＲ‐１抗体（１５μｇ／ｍｌ）の存在下または非存在下で３〜５日間培養した。次に、分化細胞を収集し、１：５の比率で５日間、ヒトナイーブ同種異系ＣＤ４^＋Ｔ細胞と共培養した。培養上清におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞の増殖状態を反映するサイトカインＩＦＮ−γをＥＬＩＳＡアッセイにより分析した。図６に示すとおり、ＣＤ４^＋Ｔ細胞によるサイトカインＩＦＮ−γの産生が著しく減少していることにより、ＭＬＲを刺激する分化細胞の能力が損なわれていることが実証されるとおり、抗ＩＦＮＡＲ‐１ヒト化モノクローナル抗体８Ｇ１１Ｈおよび４８５Ｇ１０Ｈは、ＩＦＮα依存性樹状細胞の発達を有意に阻害する。
実施例１２．ＢＡＦＦおよびＩＦＮＡＲ‐１を標的とする二重特異性抗体

この実施例では、特定のフォーマットの抗ＢＡＦＦ／抗ＩＦＮＡＲ１二重特異性抗体が、両方の抗原に対する結合親和性および阻害活性を保持できるか否かの試験を行った。

二重特異性モノクローナル抗体は、ベリムマブ（抗ＢＡＦＦ）および８Ｇ１１キメラ抗体で生成した。図７には、抗ＩＦＮＡＲ／ＢＡＦＦ二重特異性抗体（Ｂｉ‐ＢＦＩＮＲ）のために設計された４つのフォーマットの概略図を表す。Ｂｉ‐ＢＦＩＮＲのヒトＩＦＮＡＲ‐１タンパク質およびヒトＢＡＦＦタンパク質への結合特性は、ＥＬＩＳＡアッセイによってそれぞれ検出した。図８に示すように、Ｂｉ‐ＢＦＩＮＦのフォーマット１は、ＩＦＮＡＲ‐１への結合において８Ｇ１１抗体と同様の活性を呈し、ＢＡＦＦへの結合においてベリムマブに匹敵する活性を呈した。さらに、Ｂｉ‐ＢＦＩＮＦの生物学的機能の特徴を明らかにするために、細胞ベースのアッセイを実施した。抗ＩＦＮＡＲ‐１群については、ＩＦＮα２ｂベースのレポーターアッセイを適用した。図９Ａに示すように、フォーマット１のＢｉ‐ＢＦＩＮＦ抗体は、ＩＦＮα２ｂシグナル伝達の遮断において、キメラ８Ｇ１１に匹敵する活性を有する。抗ＢＡＦＦ群については、ＢＡＦＦ誘導Ｂ細胞増殖アッセイを実施した。扁桃腺から単離したＢ細胞は、Ｂｉ‐ＢＦＩＮＦの存在下または非存在下で２μｇ／ｍｌの組換えＢＡＦＦと共に７２時間培養した。Ｃｅｌｌ−ｔｉｔｌｅ ｇｌｏを培養物に加えてＢ細胞数を決定した。図９Ｂに示すとおり、フォーマット１のＢｉ‐ＢＦＩＮＦ抗体は、ＢＡＦＦ誘導Ｂ細胞の増殖の遮断において、より優れた活性を呈する。
実施例１３．８Ｇ１１結合のためのｈＩＦＮＡＲ‐１の重要なアミノ酸の同定

８Ｇ１１抗体のエピトープマッピングでは、ｈＩＦＮＡＲ‐１（１ａａ〜４０９ａａ）の変異ライブラリー（アラニンスキャン）を作製した。アラニンスキャニングライブラリーでの各変異クローンへの８Ｇ１１ Ｆａｂの結合は、ハイスループットフローサイトメトリーにより、重複して測定した。各点で、生データからバックグラウンド蛍光が引かれ、ＷＴ標的タンパク質とのＦａｂ反応性に正規化した。各変異クローンについて、平均結合値を発現に対応させてプロットした（対照反応性によって表す）。８５２８８Ｍａｂ（Ｒ＆Ｄ）およびアニフロルマブを対照抗体として使用した。予備的なプライマリクリティカルクローンを特定するために、ＭＡｂまたは８Ｇ１１ Ｆａｂを制御するために７０％を超えるＷＴ結合、および８Ｇ１１ Ｆａｂの試験を行うために３０％未満のＷＴ結合の閾値を適用した。

変異のスクリーニング結果を表１５に示す。設定した閾値には適合しなかったが、結合活性が低下し、重要な残基に近接しているクローンＨ２７３Ａは、変異した残基が抗体エピトープの一部であり得ることを示唆するものであった。その変異では、特定の抗体との反応性が最も低い重要な残基は、太字で強調表示し、下線が引かれている。検証済みの重要な残基は、側鎖が抗体とエピトープの相互作用に最も高くエネルギー的に寄与するアミノ酸を表す。したがって、強調表示されている（太字で下線が引かれている）残基Ｋ２７６、Ｋ２７８は、結合の主要なエネルギー寄与因子である可能性が高い。これらの結果は表１６に示した。
表１５．８Ｇ１１ Ｆａｂ結合の重要な残基の同定

表１６．ＦａｂとｈＩＦＮＡＲ‐１タンパク質との結合に重要な残基

競合アッセイは、抗体４Ｄ８、８Ｇ１１、４Ｂ１２、３０Ｃ８、３０Ｂ５、３４Ｈ８およびアニフロルマブが互いに競合するかを試験するために使用した。これらの結果は、４Ｄ８、８Ｇ１１、４Ｂ１２、３０Ｃ８、３０Ｂ５、および３４Ｈ８は、互いに競合したが、いずれもＩＦＮＡＲ‐１への結合について、アニフロルマブと競合しなかったことを示した。これらのデータは、新たに同定された抗体が、アニフロルマブのものとは異なるＩＦＮＡＲ‐１上の同じエピトープを標的とすることを示している。
実施例１４．カニクイザルにおけるヒト化抗ＩＦＮＡＲ１抗体の薬物動態

予備的な薬物動態（ＰＫ）研究を、カニクイザルにおいて、８Ｇ１１−Ｈ２Ｌ１および４８５Ｇ１０−Ｈ１Ｌ３を各用量１０ｍｇ／ｋｇで行った。血清サンプルは、−０（投与前）、５分、３０分、１時間、２時間、４時間、８時間、２４時間（１日）、４８時間（２日）、７２時間（３日）、９６時間（４日）、１２０時間（５日）、１６８時間（７日）、２４０時間（１０日）、３３６時間（１４日）、５０４時間（２１日）、６７２時間（２８日）および８４０時間（３５日）での抗体注射と比較して、収集した。抗ＩＦＮＡＲ１ ｍＡｂのレベルは、組換えＩＦＮＡＲ１タンパク質ＥＣＤを捕捉抗原として使用して、一般的なＥＬＩＳＡ法によって測定した。ＰＫパラメータは、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ６．３ソフトウェアによる統計モーメント理論に基づいて計算した。結果を表１７に示す。

時間濃度プロファイルでは、８Ｇ１１−Ｈ２Ｌ１および４８５Ｇ１０−Ｈ１Ｌ３のＰＫが、典型的なＩｇＧに予想されるものとより一致していることを示した（図１０Ａおよび図１０Ｂ）。
表１７．カニクイザルでの８Ｇ１１−Ｈ２Ｌ１および４８５Ｇ１０−Ｈ１Ｌ３のＰＫパラメータ

実施例１５．カニクイザルにおけるヒト化抗ＩＦＮＡＲ１抗体の薬力学

薬力学（ＰＤ）モデルは、抗ＩＦＮＡＲ１抗体がｉｎ ｖｉｖｏでインターフェロン活性を阻害する能力の研究に使用した。カニクイザルを、８Ｇ１１−Ｈ２Ｌ１および４８５Ｇ１０−Ｈ１Ｌ３の１０ｍｇ／ｋｇの静注またはビヒクル対照で処理した後、ヒトＩＦＮ−α２ｂ（３＊１０Ｅ６Ｕ／Ｋｇ）を筋肉内（ｉ．ｍ．）投与した。処理およびＩＦＮ−α２ｂ注射後、ＰＤマーカー測定のために、投与前、処理後投与２４時間、７２時間、１６８時間後に血液を採取した。ＣＤ１１Ｃ、ＣＤ３８、ＣＤ８６、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩおよびＩＦＮ−αＲ１の発現は、総ＰＢＭＣにおいてＦＡＣＳによって検出した。図１１Ａに示すとおり、８Ｇ１１−Ｈ２Ｌ１および４８５Ｇ１０−Ｈ１Ｌ３は、治療後２４時間でＣＤ１４＋細胞のＨＬＡ−ＤＲ発現を有意に減少させることができた。その一方で、８Ｇ１１−Ｈ２Ｌ１および４８５Ｇ１０−Ｈ１Ｌ３も、治療後２４時間および７２時間の両方において、ＣＤ１４＋細胞のＩＦＮ−αＲ１発現を抑制することができた。

サルのネオプテリンおよびベータ−２−マイクログロブリンの血清レベルは、製造業者の指示に従って行われたＥＬＩＳＡによって検出した。末梢血中のＣＲＰのレベルは、血液生化学によって測定した。図１１Ｂに示すとおり、ビヒクル群のネオプテリン、ベータ−２−マイクログロブリンおよびＣＲＰは２４時間以内に急速に増加した。ビヒクル対照と比較して、８Ｇ１１−Ｈ２Ｌ１および４８５Ｇ１０−Ｈ１Ｌ３では、投与２４時間後および７２時間後に、ネオプテリンおよびベータ−２−マイクログロブリンを大幅に抑制できた。また、８Ｇ１１−Ｈ２Ｌ１および４８５Ｇ１０−Ｈ１Ｌ３では、投与２４時間後にＣＲＰを大幅に低下させることができた。

末梢血単核細胞におけるＩ型ＩＦＮ誘導遺伝子シグネチャの発現レベルは、リアルタイムＰＣＲによって検出した。図１１Ｃに示すとおり、ＩＳＧ１５、ＨＥＲＣ５、ＩＦＩ２７およびＩＦＩＴ３のｍＲＮＡレベルは、ビヒクル群では、２４時間以内に急速に増加した。ビヒクル対照と比較して、８Ｇ１１−Ｈ２Ｌ１および４８５Ｇ１０−Ｈ１Ｌ３では、これらの遺伝子に対するＩ型ＩＦＮの誘導効果を大幅に遮断した。

本開示は、本開示の個々の態様の単一の例示として意図されている、記載されている特定の実施形態による範囲に限定するものではなく、機能的に同等である任意の組成物または方法は、本開示の範囲内である。本開示の趣旨または範囲から逸脱することなく、本開示の方法および組成物において様々な修正および変形を行うことができることは、当業者には明らかであろう。したがって、本開示は、添付の特許請求の範囲およびそれらの等価物の範囲内にあるという条件で、本開示の修正および変形を網羅することが意図されている。

本明細書で言及されているすべての刊行物出版物および特許出願は、各個々の刊行物または特許出願が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているように、参照により本明細書に組み込まれる。

Claims (36)

1. ヒトインターフェロンアルファおよびベータ受容体サブユニット１（ＩＦＮＡＲ１）タンパク質に特異性を有する抗体またはその断片であって、前記抗体またはその断片は、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、ならびに軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３が、
   （ａ）ＨＣＤＲ１：ＤＹＹＭＨ（配列番号７７）、ＨＣＤＲ２：ＲＩＤＰＥＤＧＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号７８）またはＲＩＤＰＥＤＡＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号７９）、ＨＣＤＲ３：ＧＧＮＦＹＶＭＤＹ（配列番号８０）、ＬＣＤＲ１：ＫＡＳＱＮＶＧＴＮＶＶ（配列番号８１）、ＬＣＤＲ２：ＳＡＳＹＲＶＳ（配列番号８２）、およびＬＣＤＲ３：ＱＱＫＮＮＹＰＹＴ（配列番号８３）；ならびに
   （ｂ）ＨＣＤＲ１：ＤＹＹＩＨ（配列番号９２）、ＨＣＤＲ２：ＲＩＤＰＥＤＧＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号９３）またはＲＩＤＰＥＤＡＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号９４）、ＨＣＤＲ３：ＹＨＧＹＷＡＬＤＹ（配列番号９５）、ＬＣＤＲ１：ＫＴＳＱＮＶＧＴＮＶＡ（配列番号９６）、ＬＣＤＲ２：ＳＴＳＹＲＹＳ（配列番号９７）、およびＬＣＤＲ３：ＨＱＹＦＳＹＰＹＴ（配列番号９８）からなる群から選択される、
   抗体またはその断片。
2. 前記抗体がキメラ抗体またはヒト化抗体である、請求項１に記載の抗体またはその断片。
3. 前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３が、ＨＣＤＲ１：ＤＹＹＭＨ（配列番号７７）、ＨＣＤＲ２：ＲＩＤＰＥＤＡＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号７９）、ＨＣＤＲ３：ＧＧＮＦＹＶＭＤＹ（配列番号８０）、ＬＣＤＲ１：ＫＡＳＱＮＶＧＴＮＶＶ（配列番号８１）、ＬＣＤＲ２：ＳＡＳＹＲＶＳ（配列番号８２）、およびＬＣＤＲ３：ＱＱＫＮＮＹＰＹＴ（配列番号８３）である、請求項１に記載の抗体またはその断片。
4. ヒト化されており、前記重鎖可変領域が、１２Ｖ、２０Ｌ、２４Ｇ、３８Ｋ、４８Ｉ、６８Ａ、７０Ｉ、７２Ａ、７９Ａおよび８１Ｌ（Ｋａｂａｔナンバリングによる）およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、１つ以上の復帰突然変異を含む、請求項３に記載の抗体またはその断片。
5. ヒト化されており、前記軽鎖可変領域が、４Ｍ、１３Ｔ、２１Ｖ、４３Ｓ、４６Ｖ、７４Ｉ、７８Ｖおよび８７Ｆ（Ｋａｂａｔナンバリングによる）ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される、１つ以上の復帰突然変異を含む、請求項３または４に記載の抗体またはその断片。
6. 配列番号７、および８４〜８７からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号７、および８４〜８７からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む重鎖可変領域を含む、請求項３に記載の抗体またはその断片。
7. 配列番号８、および８８〜９１からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号８、および８８〜９１からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む軽鎖可変領域を含む、請求項３または６に記載の抗体またはその断片。
8. 配列番号８５のアミノ酸配列または配列番号８５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む重鎖可変領域と、配列番号８８のアミノ酸配列または配列番号８８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む軽鎖可変領域を含む、請求項３に記載の抗体またはその断片。
9. 配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項３に記載の抗体またはその断片。
10. 前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、ＨＣＤＲ１：ＤＹＹＩＨ（配列番号９２）、ＨＣＤＲ２：ＲＩＤＰＥＤＡＥＴＫＹＡＰＫＦＱＧ（配列番号９４）、ＨＣＤＲ３：ＹＨＧＹＷＡＬＤＹ（配列番号９５）、ＬＣＤＲ１：ＫＴＳＱＮＶＧＴＮＶＡ（配列番号９６）、ＬＣＤＲ２：ＳＴＳＹＲＹＳ（配列番号９７）、およびＬＣＤＲ３：ＨＱＹＦＳＹＰＹＴ（配列番号９８）である、請求項１に記載の抗体またはその断片。
11. ヒト化されており、前記重鎖可変領域が、２０Ｌ、２４Ｇ、３８Ｋ、４８Ｉ、６８Ａ、７０Ｉ、７２Ａ、８１Ｌ、および９７Ｇ（Ｋａｂａｔナンバリングによる）およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、１つ以上の復帰突然変異を含む、請求項１０に記載の抗体またはその断片。
12. ヒト化されており、前記軽鎖可変領域が、１３Ｔ、２１Ｖ、３６Ｙ、４６Ｐ、７８Ｖ、および１０４Ｌ（Ｋａｂａｔナンバリングによる）ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される、１つ以上の復帰突然変異を含む、請求項１０または１１に記載の抗体またはその断片。
13. 配列番号７３、および９９〜１０２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号７３、および９９〜１０２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む重鎖可変領域を含む、請求項１０に記載の抗体またはその断片。
14. 配列番号７４、および１０３〜１０６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または配列番号７４、および１０３〜１０６からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む軽鎖可変領域を含む、請求項１０または１３に記載の抗体またはその断片。
15. 配列番号１００のアミノ酸配列または配列番号１００に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む重鎖可変領域と、配列番号１０５のアミノ酸配列または配列番号１０５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するペプチドを含む軽鎖可変領域を含む、請求項１０に記載の抗体またはその断片。
16. 配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１０に記載の抗体またはその断片。
17. ヒトインターフェロンアルファおよびベータ受容体サブユニット１（ＩＦＮＡＲ１）タンパク質に特異性を有する抗体またはその断片であって、前記抗体またはその断片は、重鎖相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、ならびに軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、
    ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３のセットは、表Ａから選択されるか、またはＣＤＲセットが、前記ＣＤＲのうちの１つ以上において１つ、２つ、または３つのアミノ酸の付加、欠失、および／または置換を有する表Ａから由来しており、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３のセットは、表Ａから選択されるか、またはＣＤＲセットが、前記ＣＤＲのうちの１つ以上において１つ、２つ、または３つのアミノ酸の付加、欠失、および／または置換を有する表Ａから由来している、抗体またはその断片。
18. ヒトインターフェロンアルファおよびベータ受容体サブユニット１（ＩＦＮＡＲ１）タンパク質に対する特異性を有する抗体またはその断片であって、前記抗体またはその断片は、前記ＩＦＮＡＲ１タンパク質のＨ２７３、Ｌ２７４、Ｙ２７５、Ｋ２７６、およびＫ２７８からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸残基に結合することができる、抗体またはその断片。
19. 前記群から選択される前記アミノ酸残基のうちの少なくとも２つに結合することができる、請求項１８に記載の抗体またはその断片。
20. 前記群から選択される前記アミノ酸残基のうちの少なくとも３つに結合することができる、請求項１８に記載の抗体またはその断片。
21. 前記群から選択される前記アミノ酸残基のうちの５つすべてに結合することができる、請求項１８に記載の抗体またはその断片。
22. ヒトインターフェロンアルファおよびベータ受容体サブユニット１（ＩＦＮＡＲ１）タンパク質に対する特異性を有する第１の抗原結合部分、および第２のタンパク質に対して特異性を有する第２の部分を含む二機能性分子であって、前記第１の抗原結合部分が、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗体断片を含む、二機能性分子。
23. 前記第２の部分が、ペプチドエドラチド（ｈＣＤＲ１）またはＴＡＣＩ‐Ｉｇを含む、請求項２２に記載の二機能性分子。
24. 前記第２の部分が、ＢＡＦＦ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＴＬＡ４、ＩＬ６、ＣＸＣＬ１３およびＣ５からなる群から選択されるタンパク質に対する特異性を有する抗原結合断片である、請求項２２に記載の二機能性分子。
25. 前記第２の部分が、ヒトＢ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）タンパク質に対する特異性を有する抗原結合断片である、請求項２２に記載の二機能性分子。
26. ２つの単鎖断片（ｓｃＦｖ）または２つのＦａｂ断片に融合された完全抗体を含むフォーマットを有する、請求項２５に記載の二機能性分子。
27. 前記第２の部分が、ベリムマブの抗原結合断片を含む、請求項２５または２６に記載の二機能性分子。
28. 請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその断片または請求項２２〜２７のいずれか一項に記載の二機能性分子、および薬学的に許容される担体を含む組成物。
29. 請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗体またはその断片をコードする１つ以上のポリヌクレオチドまたは請求項２２〜２７のいずれか一項に記載の二機能性分子を含む単離された細胞。
30. 請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗体またはその断片の１つ以上の鎖をコードするポリヌクレオチドまたは請求項２２〜２７のいずれか一項に記載の二機能性分子。
31. それを必要とする患者において免疫応答を抑制するかまたは自己免疫疾患もしくは障害を治療する方法であって、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗体もしくは断片または請求項２２〜２７のいずれか一項に記載の二機能性分子を前記患者に投与することを含む、方法。
32. それを必要とする患者における免疫応答の抑制または自己免疫疾患もしくは障害の治療のために医薬品を調製するための、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその断片または請求項２２〜２７のいずれか一項に記載の二機能性分子の使用。
33. 自己免疫疾患または障害を治療するための、請求項３１に記載の方法または請求項３２に記載の使用。
34. 前記自己免疫疾患または障害は、１型糖尿病、関節リウマチ（ＲＡ）、乾癬／乾癬性関節炎、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス（ループス）、炎症性腸疾患、アジソン病、グレーブス病、シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、重症筋無力症、血管炎、悪性貧血、およびセリアック病からなる群から選択される、請求項３１に記載の方法または請求項３２に記載の使用。
35. 前記自己免疫疾患または障害が、全身性エリテマトーデスである、請求項３１に記載の方法または請求項３２に記載の使用。
36. サンプル中のヒトインターフェロンアルファおよびベータ受容体サブユニット１（ＩＦＮＡＲ１）タンパク質の発現を検出する方法であって、前記サンプルを請求項１〜２１のいずれか一項に記載の前記抗体またはその断片と接触させる段階、および前記サンプル中のＩＦＮＡＲ１の発現を示す結合を検出する段階を含む、方法。

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