JP2023537022A - 抗ｐｄ－ｌ１抗体及びその応用 - Google Patents

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Abstract

【課題】本発明は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体及びその応用を提供する。本発明の抗体又は抗原結合断片は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間の相互作用を遮断することができる。本発明の抗体又は抗原結合断片は、免疫系による腫瘍細胞の除去に寄与することができ、腫瘍又はがんの診断及び予後に用いることもできる。

Description

本発明は、生物医学分野に属し、特に抗ＰＤ－Ｌ１抗体及びその応用に関する。
プログラム死受容体－１（ＰＤ－１）は、分子量が約５５ｋＤａのＩ型膜貫通糖タンパク質である。ＰＤ－１は、活性化されたＴ細胞、Ｂ細胞及び骨髄細胞に発現する免疫抑制性受容体であり、ＣＤ２８免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーに属する。ＰＤ－１のリガンドとして、広く分布しており、ＰＤ－Ｌ１は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、樹状細胞、マクロファージなどの抗原提示細胞の表面、及び腫瘍組織に発現するＩ型膜貫通糖タンパク質でもある。
ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用により、抗原受容体シグナル伝達を負に調節し、Ｔ細胞応答を減弱させる。今までの多くの研究によると、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用により、腫瘍に侵入するリンパ球の減少、Ｔ細胞受容体を介した増殖低減、がん細胞の免疫回避を引き起こすことが示されている。ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用を遮断すると、Ｔ細胞の増殖とサイトカインの産生を増加し、腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の免疫性を向上させ、免疫系による腫瘍細胞の除去に寄与することができる。
ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路は、がん治療における抗体療法の標的である。
WO2019/032431 WO2019/018757 WO2015/109124 WO2019/241353
本発明は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間の相互作用を遮断し、免疫系による腫瘍細胞の除去に寄与することができる抗ＰＤ－Ｌ１抗体又は抗原結合断片を提供する。
幾つかの実施形態は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、且つ、
（ａ）Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９ＤＳＷＩＨに示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１であって、Ｘ１５はＧ、Ｓ又はＮ、Ｘ１６はＦ、Ｗ、Ｌ又はＳ、Ｘ１７はＴ、Ｓ、Ａ、Ｒ又はＨ、Ｘ１８はＦ、Ｌ、Ｔ又はＰ、Ｘ１９はＳ、Ｋ、Ｒ又はＡであるＨＣＤＲ１、及び／又は
（ｂ）ＧＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＸ２０Ｘ２１Ｘ２２Ｘ２３を含むＨＣＤＲ２であって、Ｘ２０はＳ、Ｄ、Ｈ、Ｇ、Ｐ又はＹ、Ｘ２１はＶ、Ｆ、Ｌ、Ｍ又はＹ、Ｘ２２はＫ、Ｒ、Ｇ、Ｓ、Ｖ又はＨ、Ｘ２３はＧ、Ｈ、Ｄ、Ｑ、Ｓ又はＡであるＨＣＤＲ２、及び／又は
（ｃ）ＲＨＷＰＧＧＸ２４Ｘ２５Ｘ２６を含むＨＣＤＲ３であって、Ｘ２４はＦ又はＬ、Ｘ２５はＤ又はＬ、Ｘ２６はＹ又はＰであるＨＣＤＲ３を含む、抗ＰＤ－Ｌ１抗体又は抗原結合断片を提供する。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片はＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、且つ、
（ａ）Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９ＤＳＷＩＨに示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１であって、Ｘ１５はＧ、Ｓ又はＮ、Ｘ１６はＦ、Ｗ、Ｌ又はＳ、Ｘ１７はＴ、Ｓ、Ａ、Ｒ又はＨ、Ｘ１８はＦ、Ｌ、Ｔ又はＰ、Ｘ１９はＳ、Ｋ、Ｒ又はＡであるＨＣＤＲ１、
（ｂ）ＧＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＸ２０Ｘ２１Ｘ２２Ｘ２３を含むＨＣＤＲ２であって、Ｘ２０はＳ、Ｄ、Ｈ、Ｇ、Ｐ又はＹ、Ｘ２１はＶ、Ｆ、Ｌ、Ｍ又はＹ、Ｘ２２はＫ、Ｒ、Ｇ、Ｓ、Ｖ又はＨ、Ｘ２３はＧ、Ｈ、Ｄ、Ｑ、Ｓ又はＡであるＨＣＤＲ２、及び
（ｃ）ＲＨＷＰＧＧＸ２４Ｘ２５Ｘ２６を含むＨＣＤＲ３であって、Ｘ２４はＦ又はＬ、Ｘ２５はＤ又はＬ、Ｘ２６はＹ又はＰであるＨＣＤＲ３を含む。
幾つかの実施形態において、ＨＣＤＲ１は、配列番号１～６の何れか１項に示されるアミノ酸配列又は単一部位の置換、欠失又は挿入を伴うその変異体を含む。幾つかの実施形態において、ＨＣＤＲ２は、配列番号７～１６の何れか１項に示されるアミノ酸配列又は単一部位の置換、欠失又は挿入を伴うその変異体を含む。幾つかの実施形態において、ＨＣＤＲ３は、配列番号１７又は１８に示されるアミノ酸配列又は単一部位の置換、欠失又は挿入を伴うその変異体を含む。幾つかの実施形態において、上記置換変異体は、保存的アミノ酸置換変異体である。
幾つかの実施形態において、ＨＣＤＲ１は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、ＨＣＤＲ１は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、ＨＣＤＲ１は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、ＨＣＤＲ１は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、ＨＣＤＲ１は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、ＨＣＤＲ１は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、ＨＣＤＲ１は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、ＨＣＤＲ１は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、ＨＣＤＲ１は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、ＨＣＤＲ１は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、ＨＣＤＲ１は、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、ＨＣＤＲ１は、配列番号３に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、ＨＣＤＲ１は、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、ＨＣＤＲ１は、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、ＨＣＤＲ１は、配列番号６に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、且つ、
（ａ）Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９ＤＳＷＩＨに示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１であって、Ｘ１５はＧ、Ｓ又はＮ、Ｘ１６はＦ、Ｗ、Ｌ又はＳ、Ｘ１７はＴ、Ｓ、Ａ、Ｒ又はＨ、Ｘ１８はＦ、Ｌ、Ｔ又はＰ、Ｘ１９はＳ、Ｋ、Ｒ又はＡであるＨＣＤＲ１、及び／又は
（ｂ）ＧＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＸ２０Ｘ２１Ｘ２２Ｘ２３を含むＨＣＤＲ２であって、Ｘ２０はＳ、Ｄ、Ｈ、Ｇ、Ｐ又はＹ、Ｘ２１はＶ、Ｆ、Ｌ、Ｍ又はＹ、Ｘ２２はＫ、Ｒ、Ｇ、Ｓ、Ｖ又はＨ、Ｘ２３はＧ、Ｈ、Ｄ、Ｑ、Ｓ又はＡであるＨＣＤＲ２、及び／又は
（ｃ）ＲＨＷＰＧＧＸ２４Ｘ２５Ｘ２６を含むＨＣＤＲ３であって、Ｘ２４はＦ又はＬ、Ｘ２５はＤ又はＬ、Ｘ２６はＹ又はＰであるＨＣＤＲ３、及び／又は
（ｄ）Ｘ１ＡＳＱＸ２ＩＸ３Ｘ４Ｘ５ＬＸ６を含むＬＣＤＲ１であって、Ｘ１はＬ、Ｑ又はＲ、Ｘ２はＤ、Ｔ又はＧ、Ｘ３はＧ又はＳ、Ｘ４はＫ、Ｔ、又はＳ、Ｘ５はＨ、Ｗ、Ｆ又はＹ、Ｘ６はＮ又はＡであるＬＣＤＲ１、及び／又は
（ｅ）Ｘ７ＡＳＸ８ＬＸ９Ｘ１０を含むＬＣＤＲ２であって、Ｘ７はＡ又はＧ、Ｘ８はＴ、Ｎ、Ｓ又はＲ、Ｘ９はＱ又はＫ、Ｘ１０はＳ又はＴであるＬＣＤＲ２、及び／又は
（ｆ）ＱＱＸ１１Ｘ１２Ｘ１３ＴＰＸ１４Ｔを含むＬＣＤＲ３であって、Ｘ１１はＹ又はＳ、Ｘ１２はＹ又はＦ、Ｘ１３はＳ又はＴ、Ｘ１４はＲ又はＹであるＬＣＤＲ３を含む、抗体又は抗原結合断片を提供する。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片はＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、且つ、
（ａ）Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９ＤＳＷＩＨに示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１であって、Ｘ１５はＧ、Ｓ又はＮ、Ｘ１６はＦ、Ｗ、Ｌ又はＳ、Ｘ１７はＴ、Ｓ、Ａ、Ｒ又はＨ、Ｘ１８はＦ、Ｌ、Ｔ又はＰ、Ｘ１９はＳ、Ｋ、Ｒ又はＡであるＨＣＤＲ１、
（ｂ）ＧＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＸ２０Ｘ２１Ｘ２２Ｘ２３を含むＨＣＤＲ２であって、Ｘ２０はＳ、Ｄ、Ｈ、Ｇ、Ｐ又はＹ、Ｘ２１はＶ、Ｆ、Ｌ、Ｍ又はＹ、Ｘ２２はＫ、Ｒ、Ｇ、Ｓ、Ｖ又はＨ、Ｘ２３はＧ、Ｈ、Ｄ、Ｑ、Ｓ又はＡであるＨＣＤＲ２、
（ｃ）ＲＨＷＰＧＧＸ２４Ｘ２５Ｘ２６を含むＨＣＤＲ３であって、Ｘ２４はＦ又はＬ、Ｘ２５はＤ又はＬ、Ｘ２６はＹ又はＰであるＨＣＤＲ３、
（ｄ）Ｘ１ＡＳＱＸ２ＩＸ３Ｘ４Ｘ５ＬＸ６を含むＬＣＤＲ１であって、Ｘ１はＬ、Ｑ又はＲ、Ｘ２はＤ、Ｔ又はＧ、Ｘ３はＧ又はＳ、Ｘ４はＫ、Ｔ、又はＳ、Ｘ５はＨ、Ｗ、Ｆ又はＹ、Ｘ６はＮ又はＡであるＬＣＤＲ１、
（ｅ）Ｘ７ＡＳＸ８ＬＸ９Ｘ１０を含むＬＣＤＲ２であって、Ｘ７はＡ又はＧ、Ｘ８はＴ、Ｎ、Ｓ又はＲ、Ｘ９はＱ又はＫ、Ｘ１０はＳ又はＴであるＬＣＤＲ２、及び
（ｆ）ＱＱＸ１１Ｘ１２Ｘ１３ＴＰＸ１４Ｔを含むＬＣＤＲ３であって、Ｘ１１はＹ又はＳ、Ｘ１２はＹ又はＦ、Ｘ１３はＳ又はＴ、Ｘ１４はＲ又はＹであるＬＣＤＲ３を含む。
幾つかの実施形態において、ＬＣＤＲ１は、配列番号１９～２３の何れか１項に示されるアミノ酸配列又は単一部位の置換、欠失又は挿入を伴うその変異体を含む。幾つかの実施形態において、ＬＣＤＲ２は、配列番号２４～２７の何れか１項に示されるアミノ酸配列又は単一部位の置換、欠失又は挿入を伴うその変異体を含む。幾つかの実施形態において、ＬＣＤＲ３は、配列番号２８～３１の何れか１項に示されるアミノ酸配列又は単一部位の置換、欠失又は挿入を伴うその変異体を含む。幾つかの実施形態において、上記置換変異体は、保存的アミノ酸置換変異体である。
幾つかの実施形態において、ＬＣＤＲ１は、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、ＬＣＤＲ１は、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号２９に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、ＬＣＤＲ１は、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号２６に示されるアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号３０に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、ＬＣＤＲ１は、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、ＬＣＤＲ１は、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号２６に示されるアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号３０に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、ＬＣＤＲ１は、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号２６に示されるアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、且つ（ａ）配列番号１～６の何れか１項に示されるアミノ酸配列又は単一部位の置換、欠失又は挿入を伴うその変異体を含むＨＣＤＲ１、及び／又は（ｂ）配列番号７～１６の何れか１項に示されるアミノ酸配列又は単一部位の置換、欠失又は挿入を伴うその変異体を含むＨＣＤＲ２、及び／又は（ｃ）配列番号１７又は１８に示されるアミノ酸配列又は単一部位の置換、欠失又は挿入を伴うその変異体を含むＨＣＤＲ３、及び／又は（ｄ）配列番号１９～２３の何れか１項に示されるアミノ酸配列又は単一部位の置換、欠失又は挿入を伴うその変異体を含むＬＣＤＲ１、及び／又は（ｅ）配列番号２４～２７の何れか１項に示されるアミノ酸配列又は単一部位の置換、欠失又は挿入を伴うその変異体を含むＬＣＤＲ２、及び／又は（ｆ）配列番号２８～３１の何れか１項に示されるアミノ酸配列又は単一部位の置換、欠失又は挿入を伴うその変異体を含むＬＣＤＲ３を含む、抗体又は抗原結合断片を提供する。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、上記抗体又は抗原結合断片は、少なくとも配列番号１に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１６に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ３、配列番号１９～２３の何れか１項に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２４～２７の何れか１項に示されるＬＣＤＲ２、配列番号２８～３１の何れか１項に示されるＬＣＤＲ３のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はすべてを含む。
幾つかの実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、上記抗体又は抗原結合断片は、少なくとも配列番号１に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１６に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ３、配列番号１９に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２４に示されるＬＣＤＲ２及び配列番号２８に示されるＬＣＤＲ３を含む。
幾つかの実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、上記抗体又は抗原結合断片は、少なくとも配列番号１に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１６に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ３、配列番号２０に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２５に示されるＬＣＤＲ２及び配列番号２９に示されるＬＣＤＲ３を含む。
幾つかの実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、上記抗体又は抗原結合断片は、少なくとも配列番号１に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１６に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ３、配列番号２１に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ２及び配列番号３０に示されるＬＣＤＲ３を含む。
幾つかの実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、上記抗体又は抗原結合断片は、少なくとも配列番号１に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１６に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ３、配列番号２２に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２７に示されるＬＣＤＲ２及び配列番号３１に示されるＬＣＤＲ３を含む。
幾つかの実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、上記抗体又は抗原結合断片は、少なくとも配列番号１に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１６に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ３、配列番号２３に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ２及び配列番号３０に示されるＬＣＤＲ３を含む。
幾つかの実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、上記抗体又は抗原結合断片は、少なくとも配列番号１に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１６に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ３、配列番号１９に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ２及び配列番号３１に示されるＬＣＤＲ３を含む。
幾つかの実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、上記抗体又は抗原結合断片は、少なくとも配列番号１に示されるＨＣＤＲ１、配列番号７に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ３、配列番号１９に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２４に示されるＬＣＤＲ２及び配列番号２８に示されるＬＣＤＲ３を含む。
幾つかの実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、上記抗体又は抗原結合断片は、少なくとも配列番号１に示されるＨＣＤＲ１、配列番号８に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ３、配列番号１９に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２４に示されるＬＣＤＲ２及び配列番号２８に示されるＬＣＤＲ３を含む。
幾つかの実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、上記抗体又は抗原結合断片は、少なくとも配列番号１に示されるＨＣＤＲ１、配列番号９に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ３、配列番号１９に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２４に示されるＬＣＤＲ２及び配列番号２８に示されるＬＣＤＲ３を含む。
幾つかの実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、上記抗体又は抗原結合断片は、少なくとも配列番号１に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１０に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ３、配列番号１９に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２４に示されるＬＣＤＲ２及び配列番号２８に示されるＬＣＤＲ３を含む。
幾つかの実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、上記抗体又は抗原結合断片は、少なくとも配列番号１に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ３、配列番号１９に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２４に示されるＬＣＤＲ２及び配列番号２８に示されるＬＣＤＲ３を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の重鎖は、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４を更に含み、重鎖ＦＲ１は、配列番号３２に示される配列、配列番号３２に示される配列と少なくとも９０％の同一性を有する配列、又は配列番号３２に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は
上記抗体又は抗原結合断片の重鎖ＦＲ２は、配列番号３３に示される配列、配列番号３３に示される配列と少なくとも９０％の同一性を有する配列、又は配列番号３３に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は
上記抗体又は抗原結合断片の重鎖ＦＲ３は、配列番号３４に示される配列、配列番号３４に示される配列と少なくとも９０％の同一性を有する配列、又は配列番号３４に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は
上記抗体又は抗原結合断片の重鎖ＦＲ４は、配列番号３５に示される配列、配列番号３５に示される配列と少なくとも９０％の同一性を有する配列、又は配列番号３５に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の重鎖ＦＲ１は、配列番号３２に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の重鎖ＦＲ２は、配列番号３３に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の重鎖ＦＲ３は、配列番号３４に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の重鎖ＦＲ４は、配列番号３５に示される配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記重鎖可変領域（ＶＨ）は、構造ＦＲ１－ＨＣＤＲ１－ＦＲ２－ＨＣＤＲ２－ＦＲ３－ＨＣＤＲ３－ＦＲ４を含む。幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号３６～５０の何れか１項に示される配列、配列番号３６～５０の何れか１項に示される配列と少なくとも８０％の同一性を有する配列、又は配列番号３６～５０の何れか１項に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖は、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４を更に含み、軽鎖ＦＲ１は、配列番号５１～５６の何れか１項に示される配列、配列番号５１～５６の何れか１項に示される配列と少なくとも９０％の同一性を有する配列、又は配列番号５１～５６の何れか１項に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は
上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ２は、配列番号５７～６０の何れか１項に示される配列、配列番号５７～６０の何れか１項に示される配列と少なくとも９０％の同一性を有する配列、又は配列番号５７～６０の何れか１項に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は
上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ３は、配列番号６１～６４の何れか１項に示される配列、配列番号６１～６４の何れか１項に示される配列と少なくとも９０％の同一性を有する配列、又は配列番号６１～６４の何れか１項に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は
上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ４は、配列番号６５～６７の何れか１項に示される配列、配列番号６５～６７の何れか１項に示される配列と少なくとも９０％の同一性を有する配列、又は配列番号６５～６７の何れか１項に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ１は、配列番号５１に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ２は、配列番号５７に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ３は、配列番号６１に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ４は、配列番号６５に示される配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ１は、配列番号５２に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ２は、配列番号５８に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ３は、配列番号６２に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ４は、配列番号６６に示される配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ１は、配列番号５３に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ２は、配列番号５９に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ３は、配列番号６３に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ４は、配列番号６７に示される配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ１は、配列番号５４に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ２は、配列番号６０に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ３は、配列番号６４に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ４は、配列番号６７に示される配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ１は、配列番号５５に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ２は、配列番号５９に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ３は、配列番号６３に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ４は、配列番号６７に示される配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ１は、配列番号５６に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ２は、配列番号５７に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ３は、配列番号６１に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ４は、配列番号６７に示される配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記軽鎖可変領域（ＶＬ）は、構造ＦＲ１－ＬＣＤＲ１－ＦＲ２－ＬＣＤＲ２－ＦＲ３－ＬＣＤＲ３－ＦＲ４を含む。幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号６８～７３の何れか１項に示される配列、配列番号６８～７３の何れか１項に示される配列と少なくとも８０％の同一性を有する配列、又は配列番号６８～７３の何れか１項に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号３６～５０の何れか１項に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号６８～７３の何れか１項に示される配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号３６に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号６８に示される配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号３６に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号６９に示される配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号３６に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号７０に示される配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号３６に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号７１に示される配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号３６に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号７２に示される配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号３６に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号７３に示される配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号３７に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号６８に示される配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号３８に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号６８に示される配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号３９に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号６８に示される配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号４０に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号６８に示される配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号４１に示される配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号６８に示される配列を含む。
幾つかの実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、重鎖定常領域、軽鎖定常領域、Ｆｃ領域又はその組み合わせを更に含む。幾つかの実施形態において、軽鎖定常領域は、κ又はλ鎖定常領域である。幾つかの実施形態において、抗体又はその断片は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ又はＩｇＤのうちの１つのアイソタイプである。幾つかの実施形態において、アイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４である。幾つかの実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体又は完全ヒト化抗体である。
幾つかの実施形態において、Ｆｃは、変異体Ｆｃ領域である。幾つかの実施形態において、親Ｆｃ領域と比較して、変異体Ｆｃ領域は、１つ又は複数の置換、欠失又は挿入などのアミノ酸修飾を有する。幾つかの実施形態において、親Ｆｃ領域の活性と比較して、Ｆｃ領域のアミノ酸修飾は、エフェクター機能の活性を変化させる。幾つかの実施形態において、変異体Ｆｃ領域は、変化した（即ち、増加又は減少した）抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、補体媒介性細胞毒性（ＣＤＣ）、貪食作用、調節作用又は細胞結合を有する場合がある。幾つかの実施形態において、親Ｆｃ領域と比較して、Ｆｃ領域アミノ酸修飾は、ＦｃγＲ（Ｆｃγ受容体）に対する変異体Ｆｃ領域の親和性を変化させることができる。幾つかの実施形態において、上記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４に由来する。幾つかの実施形態において、Ｆｃ領域変異はＮ２９７Ａである。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片は、単離された抗体又は抗原結合断片である。幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片は、ｓｃＦＶ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２又はＩｇＧ１である。幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片は、モノクローナル抗体である。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の重鎖定常領域は、配列番号７４又は７５に示されるアミノ酸配列、又は配列番号７４又は７５に示される配列と少なくとも８０％の同一性を有する配列、又は配列番号７４又は７５に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は
上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖定常領域は、配列番号７６に示されるアミノ酸配列、又は配列番号７６に示される配列と少なくとも８０％の同一性を有する配列、又は配列番号７６に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の重鎖定常領域は、配列番号７４に示されるアミノ酸配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖定常領域は、配列番号７６に示されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片の重鎖定常領域は、配列番号７５に示されるアミノ酸配列を含み、上記抗体又は抗原結合断片の軽鎖定常領域は、配列番号７６に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体の重鎖は、配列番号７７～９１の何れか１項に示されるアミノ酸配列、配列番号７７～９１の何れか１項に示される配列と少なくとも８０％の同一性を有する配列、又は配列番号７７～９１の何れか１項に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は
上記抗体の軽鎖は、配列番号９２～９７の何れか１項に示されるアミノ酸配列、配列番号９２～９７の何れか１項に示される配列と少なくとも８０％の同一性を有する配列、又は配列番号９２～９７の何れか１項に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体の重鎖は、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体の重鎖は、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖は、配列番号９３に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体の重鎖は、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖は、配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体の重鎖は、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖は、配列番号９５に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体の重鎖は、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖は、配列番号９６に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体の重鎖は、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖は、配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体の重鎖は、配列番号７８に示されるアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体の重鎖は、配列番号７９に示されるアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体の重鎖は、配列番号８０に示されるアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体の重鎖は、配列番号８１に示されるアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体の重鎖は、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含む。
一実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片は、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体又は多重特異的抗体又は抗原結合断片（例えば、二重特異的抗体又は抗原結合断片）である。
幾つかの実施形態において、上記抗体は、２つの同じ重鎖及び２つの同じ軽鎖を有し、Ｆｃ領域が対になってジスルフィド結合を形成する。
一実施形態において、上記抗体断片（抗原結合断片）は、Ｆａｂ、Ｆｖ又はｓｃＦｖ抗体である。
本発明は、上記の抗体又は抗原結合断片をコードする核酸分子を更に提供する。幾つかの実施形態において、上記核酸分子は、単離された核酸分子である。
本発明は、上記核酸分子を含む担体を更に提供する。幾つかの実施形態において、上記担体は、単離された担体である。幾つかの実施形態において、上記核酸分子を含む担体は、核酸断片、プラスミド、ファージ又はウイルスである。
本発明は、上記核酸分子又は担体を含む宿主細胞を更に提供する。幾つかの実施形態において、上記宿主細胞は、単離された宿主細胞である。幾つかの実施形態において、上記宿主細胞は、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ細胞（例えば、ＨＥＫ２９３Ｆ細胞）、ＢＨＫ細胞、Ｃｏｓ１細胞、Ｃｏｓ７細胞、ＣＶ１細胞又はマウスＬ細胞である。
本発明は、上記の抗体又は抗原結合断片、及び薬学的に許容される添加剤を含む医薬組成物を更に提供する。
本発明は、治療方法及び用途を更に提供する。幾つかの実施形態において、患者へ有効用量の上記抗体又は抗原結合断片を投与することを含む、Ｔ細胞機能障害疾患を治療又は改善するための方法を提供する。幾つかの実施形態において、Ｔ細胞機能障害疾患を治療又は改善するための上記抗体又は抗原結合断片の応用を提供する。幾つかの実施形態において、Ｔ細胞機能障害を治療又は改善するための薬物の調製における上記抗体又は抗原結合断片の応用を提供する。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞機能障害疾患は、細菌、ウイルス、真菌又は原生動物により引き起こされる感染症、及びがんと腫瘍を含むが、これらに限定されない。幾つかの実施形態において、上記がんと腫瘍は、乳がん、肺がん、結腸がん、卵巣がん、黒色腫、膀胱がん、腎臓がん、肝臓がん、唾液腺がん、胃がん、神経膠腫、甲状腺がん、胸腺がん、上皮がん、頭部がん、頸部がん、膵臓がんを含むが、これらに限定されない。
本発明は、診断方法及び用途を更に提供する。幾つかの実施形態において、試料を上記抗体又は抗原結合断片と接触させることで、上記抗体又は抗原結合断片がＰＤ－Ｌ１に結合し、且つその結合、即ち試料中のＰＤ－Ｌ１の含有量を検出する、試料中のＰＤ－Ｌ１発現を検出する方法を提供する。幾つかの実施形態において、がん又は腫瘍を診断又は予後するための試薬キットの調製における上記抗体又は抗原結合断片の応用を提供する。幾つかの実施形態において、上記抗体又は抗原結合断片を含む診断又は予後用の試薬キットを提供する。
本発明は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間の相互作用を遮断し、免疫系による腫瘍細胞の除去に寄与することができる抗ＰＤ－Ｌ１抗体又は抗原結合断片及びその応用を提供する。本発明の抗体又は抗原結合断片は、Ｔ細胞機能障害疾患の治療又は改善に用いることができ、がん又は腫瘍の診断及び予後に用いることもできる。
抗ＰＤ－Ｌ１抗体によるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の相互作用の遮断を示し、図１Ａと１Ｂにおいて、縦座標は蛍光値（光単位に対する）を示し、横座標は濃度を示す。 抗ＰＤ－Ｌ１抗体によるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の相互作用の遮断を示し、図１Ａと１Ｂにおいて、縦座標は蛍光値（光単位に対する）を示し、横座標は濃度を示す。 ＰＤ－Ｌ１過剰発現細胞への抗ＰＤ－Ｌ１抗体の結合を示し、ここで、縦座標は平均蛍光強度を示し、横座標は濃度を示し、Ｉｓｏｔｙｐｅは陰性対照抗体ＩｇＧ－Ｉｓｏｔｙｐｅを示す。 腫瘍体積に対する抗体の影響を示す。 腫瘍重量に対する抗体の影響を示す。 マウス体重に対する抗体の影響を示す。 フローサイトメトリーによるＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓ－Ｂｉｏｔｉｎへの抗ＰＤ－Ｌ１のｓｃＦｖの結合状況の検出を示す。
用語
別段の説明がない限り、下記のそれぞれの用語は、後述するような意味を持つべきである。
定義
注意すべきであることは、「１種」の実体という用語は、１種又は複数種の当該実体を指し、例えば、「１種の抗体」は、１種又は複数種の抗体と理解されるべきであるため、「１種」（又は「１つ」）、「１種又は複数種」及び「少なくとも１種」という用語は、本明細書で互換的に使用されてもよい。
本明細書で使用される「含む」又は「包含」という用語は、組成物と方法などが、成分又はステップなどの列挙された要素を含むが、他のものを排除しないことを意味する。「基本的には．．．からなる」とは、組成物と方法が、組み合わせの特性に実質的に影響を与える他の要素を排除するが、組成物又は方法に実質的に影響を与えない要素を排除しないことを意味する。「．．．からなる」とは、特に列挙されていない要素を排除することを意味する。
「ポリペプチド」という用語は、単数の「ポリペプチド」及び複数の「ポリペプチド」を包含することを意図しており、また、アミド結合（ペプチド結合とも呼ばれる）によって線形的に結合したアミノ酸モノマーからなる分子を意味する。「ポリペプチド」という用語は、２つ又はそれ以上のアミノ酸の任意の単鎖又は複数の鎖を意味し、また、生成物の特定の長さに関与しない。従って、「ポリペプチド」の定義は、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド、「タンパク質」、「アミノ酸鎖」、又は、２つ若しくは複数のアミノ酸鎖を示すための任意の他の用語を含み、「ポリペプチド」という用語は、上記何れか１つの用語の代わりに用いられ、又は上記何れか１つの用語と交互に用いられることができる。「ポリペプチド」という用語は、ポリペプチドの発現後に修飾された生成物も指し、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、既知の保護／ブロッキング基による誘導化、タンパク質加水分解切断又は非天然存在アミノ酸による修飾を含むが、これらに限定されない。ポリペプチドは、天然の生物源に由来にするか、又は組換え技術によって産生され得るが、指定された核酸配列から翻訳される必要はなく、化学合成を含む任意の方法によって産生され得る。
「アミノ酸」とは、α－アミノ酸のような、アミノ基とカルボキシル基を同時に含む有機化合物であり、そのまま又は前駆体の形態で核酸によりコードすることができる。単一のアミノ酸は、３つのヌクレオチド（いわゆるコドン又は塩基トリプレット）からなる核酸によってコードされる。各々のアミノ酸は、少なくとも１つのコドンによってコードされる。同じアミノ酸を異なるコドンによってコードすることは、「遺伝子コードの縮重性」と呼ばれる。アミノ酸は、天然アミノ酸と非天然アミノ酸とを含む。天然アミノ酸は、アラニン（３文字コード：ａｌａ、１文字コード：Ａ）、アルギニン（ａｒｇ、Ｒ）、アスパラギン（ａｓｎ、Ｎ）、アスパラギン酸（ａｓｐ、Ｄ）、システイン（ｃｙｓ、Ｃ）、グルタミン（ｇｌｎ、Ｑ）、グルタミン酸（ｇｌｕ、Ｅ）、グリシン（ｇｌｙ、Ｇ）、ヒスチジン（ｈｉｓ、Ｈ）、イソロイシン（ｉｌｅ、Ｉ）、ロイシン（ｌｅｕ、Ｌ）、リシン（ｌｙｓ、Ｋ）、メチオニン（ｍｅｔ、Ｍ）、フェニルアラニン（ｐｈｅ、Ｆ）、プロリン（ｐｒｏ、Ｐ）、セリン（ｓｅｒ、Ｓ）、トレオニン（ｔｈｒ、Ｔ）、トリプトファン（ｔｒｐ、Ｗ）、チロシン（ｔｙｒ、Ｙ）及びバリン（ｖａｌ、Ｖ）を含む。
「保存的アミノ酸置換」は、１つのアミノ酸残基が、化学的特性（例えば、電荷又は疎水性）が類似した側鎖（Ｒ基）を含む別のアミノ酸残基で置換されることを意味する。一般的に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的特性を実質的に変えることはあまりない。化学的特性が類似した側鎖を含むアミノ酸の種類の実例は、１）グリシン、アラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシンのような脂肪族側鎖、２）セリン及びトレオニンような脂肪族ヒドロキシ基側鎖、３）アスパラギン及びグルタミンのようなアミドを含む側鎖、４）フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンのような芳香族側鎖、５）リシン、アルギニン及びヒスチジンのような塩基性側鎖、６）アスパラギン酸及びグルタミン酸のような酸性側鎖を含む。
「フレーム領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４の保存的アミノ酸置換」のアミノ酸の数は、約１個、約２個、約３個、約４個又は約５個の保存的アミノ酸置換である。「ＶＬ、ＶＨの保存的アミノ酸置換」のアミノ酸の数は、約１個、約２個、約３個、約４個、約５個、約６個、約８個、約９個、約１０個、約１１個、約１３個、約１４個、約１５個の保存的アミノ酸置換、又はこれらの数値のうちの何れか２つの値の間の範囲（終点を含む）又はそのうちの任意の値である。「重鎖定常領域、軽鎖定常領域、重鎖又は軽鎖の保存的アミノ酸置換」のアミノ酸の数は、約１個、約２個、約３個、約４個、約５個、約６個、約８個、約９個、約１０個、約１１個、約１３個、約１４個、約１５個、約１８個、約１９個、約２２個、約２４個、約２５個、約２９個、約３１個、約３５個、約３８個、約４１個、約４５個の保存的アミノ酸置換、又はこれらの数値のうちの何れか２つの値の間の範囲（端点を含む）又はそのうちの任意の値である。
本発明において、細胞、核酸、ポリペプチド、抗体などに関して使用される、「単離された」ＤＮＡ、ＲＮＡ、ポリペプチド、抗体などの「単離された」という用語は、ＤＮＡ又はＲＮＡなど、細胞の自然環境の他の成分の１種又は複数種からそれぞれ単離された分子を指す。本発明で使用される「単離された」という用語は、組換えＤＮＡ技術により産生された場合は細胞材料、ウイルス材料若しくは細胞培地を実質的な含まない核酸又はペプチド、或いは、化学合成された場合は化学的前駆体又は他の化学物質を実質的に含まない核酸又はペプチドを更に指す。更に、「単離された核酸」は、天然状態で存在しない核酸断片を含み、天然状態で存在することはないことを意味する。本発明において、「単離された」という用語は、他の細胞タンパク質又は組織から単離された細胞又はポリペプチドを意味するためにも用いられる。単離されたポリペプチドは、精製されたポリペプチド及び組換えポリペプチドを含むことを意味する。単離されたポリペプチド、抗体などは、一般的には、少なくとも１つの精製ステップによって調製される。幾つかの実施形態において、単離された核酸、ポリペプチド、抗体などの純度は、少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％、又はこれらの数値のうちの何れか２つの値の間の範囲（端点を含む）又はそのうちの任意の値である。
「組換え」という用語は、ポリペプチド又はポリヌクレオチドに関するもので、天然に存在しないポリペプチド又はポリヌクレオチドの形態を指し、非制限的な実施例は、組み合わせにより通常存在していないポリヌクレオチド又はポリペプチドを産生することができる。
「相同性」又は「同一性」又は「類似性」は、２つのペプチド間又は２つの核酸分子間の配列類似性を指す。それぞれの配列におけるアラインメント可能な位置を比較することにより、相同性を特定することができる。比較された配列における位置が同じ塩基又はアミノ酸で占められている場合、分子は、この位置上で相同である。配列間の相同性の程度は、配列の共有するマッチング位置又は相同位置の数からなる関数である。
幾つかの実施形態において、「少なくとも８０％の同一性」は、約８０％の同一性、約８１％の同一性、約８２％の同一性、約８３％の同一性、約８５％の同一性、約８６％の同一性、約８７％の同一性、約８８％の同一性、約９０％の同一性、約９１％の同一性、約９２％の同一性、約９４％の同一性、約９５％の同一性、約９８％の同一性、約９９％の同一性、又はこれらの数値のうちの何れか２つの値の間の範囲（端点を含む）又はそのうちの任意の値である。
幾つかの実施形態において、「少なくとも９０％の同一性」は、約９０％の同一性、約９１％の同一性、約９２％の同一性、約９３％の同一性、約９５％の同一性、約９６％の同一性、約９７％の同一性、約９８％の同一性、約９９％の同一性、又はこれらの数値のうちの何れか２つの値の間の範囲（端点を含む）又はそのうちの任意の値である。
ポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド配列（又はポリペプチド又は抗体配列）が別の配列と特定の百分率（例えば９０％、９５％、９８％又は９９％）の「同一性又は配列同一性」を有することは、配列アラインメント時に、比較される２つの配列において当該百分率の塩基（又はアミノ酸）が同じであることを意味する。目視検査又は当該技術分野で知られているソフトウェアプログラム、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．（２００７）がＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙに記載されたソフトウェアプログラムにより、当該アラインメント及び同一性百分率又は配列同一性を決定することができる。好ましくは、デフォルトパラメータを用いてアラインメントを行う。アラインメントプログラムの１つは、ＢＬＡＳＴＮとＢＬＡＳＴＰなどのデフォルトパラメータを使用したＢＬＡＳＴであり、両方とも次のデフォルトパラメータが使用される：Ｇｅｎｅｔｉｃｃｏｄｅ＝ｓｔａｎｄａｒｄ；ｆｉｌｔｅｒ＝ｎｏｎｅ；ｓｔｒａｎｄ＝ｂｏｔｈ；ｃｕｔｏｆｆ＝６０；ｅｘｐｅｃｔ＝１０；Ｍａｔｒｉｘ＝ＢＬＯＳＵＭ６２；Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓ＝５０ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ；ｓｏｒｔｂｙ＝ＨＩＧＨＳＣＯＲＥ；Ｄａｔａｂａｓｅｓ＝ｎｏｎ－ｒｅｄｕｎｄａｎｔ；ＧｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ＋ＧｅｎＢａｎｋＣＤＳｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓ＋ＳｗｉｓｓＰｒｏｔｅｉｎ＋ＳＰｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲ。生物学的に同等のポリヌクレオチドは、上記に指定された百分率の同一性を有し、同一又は類似の生物学活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを意味する。
ポリヌクレオチドは、４つのヌクレオチド塩基の特定の配列、即ち、アデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）とチミン（Ｔ）からなり、ポリヌクレオチドがＲＮＡである場合に、チミンはウラシル（Ｕ）に取り替えられる。「ポリヌクレオチド配列」は、ポリヌクレオチド分子の文字によって表すことができる。当該文字は、中央処理ユニットを有するコンピュータにおけるデータベースに入力され、生物情報学的応用、例えば、機能ゲノミクスと相同性検索に用いられることができることを示す。
「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」という用語は、交換可能に使用され、デオキシリボヌクレオチドであるかリボヌクレオチド又はその類似体であるかに関わらず、任意の長さのヌクレオチドの重合形態を意味する。ポリヌクレオチドは、任意の３次元構造を有してもよく、また、既知又は未知の任意の機能を実行することができる。非制限的なポリヌクレオチドの実施例は、遺伝子又は遺伝子断片（例えば、プローブ、プライマー、ＥＳＴ又はＳＡＧＥラベル）、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、転移ＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、リボザイム、ｃＤＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分岐したポリヌクレオチド、プラスミド、担体、任意の配列の単離されたＤＮＡ、任意の配列の単離されたＲＮＡ、核酸プローブ及びプライマーである。ポリヌクレオチドは、例えばメチル化されたヌクレオチド及びヌクレオチド類似体などの修飾されたヌクレオチドを含んでもよい。当該修飾があると、ヌクレオチドの構造への修飾は、ポリヌクレオチドを組み立てる前でも後でも行うことができる。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分によって中断されてもよい。重合後に、標識成分との複合などによりポリヌクレオチドを更に修飾してもよい。この用語は、二重鎖と単鎖分子も指す。特に説明や要求のない限り、本開示の何れのポリヌクレオチドの実施例は、二重鎖形態、及び二重鎖形態を構成する知られている又は予測される２つの相補可能な単鎖形態のうちのそれぞれの形式を含む。
「コード」という用語は、ポリヌクレオチドに適用される場合に、ポリペプチドを「コード」すると言われるポリヌクレオチドを指し、その天然状態にあるか、又は、当業者に公知の方法により操作される場合、転写及び／又は翻訳によって当該ポリペプチド及び／又はその断片を産生することができる。
「抗体」又は「抗原結合断片」は、抗原を特異的に認識して結合するポリペプチド又はポリペプチド複合体を意味する。抗体は、完全な抗体及びその任意の抗原結合断片又はその単鎖であってもよい。従って、「抗体」という用語は、分子中に、抗原に結合する生物学的活性を有する免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含む任意のタンパク質又はペプチドを含む。抗体と抗原結合断片は、重鎖又は軽鎖又はそのリガンド結合部分の相補性決定領域（ＣＤＲ）、重鎖可変領域（ＶＨ）、軽鎖可変領域（ＶＬ）、重鎖定常領域（ＣＨ）、軽鎖定常領域（ＣＬ）、フレーム領域（ＦＲ）又はその任意の部分、或いは結合タンパク質の少なくとも一部を含むが、これらに限定されない。ＣＤＲ領域は、軽鎖のＣＤＲ領域（ＬＣＤＲ１～３）と重鎖のＣＤＲ領域（ＨＣＤＲ１～３）を含む。抗体及び抗原結合断片は、１つ又は複数（例えば２つ）の抗原のポリペプチド又はポリペプチド複合体を特異的に認識して結合することができる。複数（例えば２つ）の抗原を特異的に認識して結合する抗体又は抗原結合断片は、多重特異的（例えば、二重特異的）抗体又は抗原結合断片と呼ばれてもよい。
「抗体断片」又は「抗原結合断片」という用語は、抗体の一部を指し、本発明の抗体断片の構成形態は、単一特異的抗体断片におけるＦ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖなどと類似することができる。その構造に関わらず、抗体断片は、完全抗体で認識された同一の抗原に結合する。「抗体断片」という用語は、アプタマー、鏡像異性体及び２価抗体を含む。「抗原結合断片」という用語は、特定の抗原に結合して複合体を形成することによって抗体として機能する任意の合成又は遺伝子操作されたタンパク質を更に含む。
「単鎖可変断片」又は「ｓｃＦｖ」とは、免疫グロブリンの重鎖（ＶＨ）及び軽鎖（ＶＬ）の可変領域の融合タンパク質である。幾つかの態様において、これらの領域は、１０個～約２５個のアミノ酸の短いリンカーペプチドに結合している。リンカーは、柔軟性を増加させるためにグリシンを豊富に含んでもよく、溶解性を増加させるためにセリン又はスレオニンを豊富に含んでもよく、かつ、ＶＨのＮ末端とＶＬのＣ末端に結合してもよく、その逆でもよい。このタンパク質には定常領域が除去され、リンカーが導入されたにも関わらず、原始免疫グロブリンの特異性を保持している。ＳｃＦｖ分子は、例えば米国特許第５，８９２，０１９号に記載されているように、当該技術分野で一般的に知られている。
「抗体」という用語は、生化学的に区分可能な種々の広範なクラスのポリペプチドを含む。当業者であれば、重鎖のクラスは、ｇａｍｍａ、ｍｕ、ａｌｐｈａ、ｄｅｌｔａ又はｅｐｓｉｌｏｎ（γ、μ、α、δ、ε）を含み、更に幾つかのサブクラス（例えば、γ１－γ４）を含むことが理解される。この鎖の性質は、抗体の「種類」がそれぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ又はＩｇＥであることを決定している。例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＧ５などの免疫グロブリンサブクラス（アイソタイプ）は、既に十分に特徴づけられ、付与された機能特異性も知られている。何れの免疫グロブリンの種類も、本発明により開示される請求範囲に保護されている。幾つかの実施形態において、免疫グロブリン分子の種類はＩｇＧである。この４本の鎖は、ジスルフィド結合により「Ｙ」配置で接続され、そのうち軽鎖は「Ｙ」の口部から始まり、可変領域を通って連続して重鎖を取り囲む。
本発明により開示される抗体、抗原結合断片又は誘導体は、ポリクローナル、モノクローナル、多重特異性、完全ヒト、ヒト化、霊長類化、キメラ抗体、単鎖抗体、エピトープ結合断片（例えばＦａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）２）、ｓｃＦｖを含むが、これらに限定されない。
軽鎖は、ｋａｐｐａ（κ）又はｌａｍｂｄａ（λ）に分けることができる。各重鎖は、κ又はλ軽鎖に結合することができる。一般に、ハイブリドーマ、Ｂ細胞又は遺伝子操作された宿主細胞から免疫グロブリンを産生する場合、その軽鎖と重鎖は、共有結合を介して結合し、２本の重鎖の「尾」部分は、共有ジスルフィド結合又は非共有結合を介して結合する。重鎖において、アミノ酸配列は、Ｙ配置の分岐した末端のＮ末端から各本の鎖の底部のＣ末端まで延びている。免疫グロブリンのκ軽鎖可変領域はＶκであり、免疫グロブリンのλ軽鎖可変領域はＶλである。
軽鎖（ＶＬ）及び重鎖（ＶＨ）の鎖部分の可変領域は、抗原の認識と特異性を決定する。軽鎖及び
重鎖の定常領域は、分泌、経胎盤移動、Ｆｃ受容体結合、補体結合などの重要な生物学的性質を付与する。慣例に従って、定常領域の番号は、抗体の抗原結合部位又はアミノ基末端からより遠くなるにつれて増加する。Ｎ末端部分は可変領域であり、Ｃ末端部分は定常領域であり、ＣＨ３とＣＬドメインは、実際には、それぞれ重鎖と軽鎖のカルボキシル末端を含む。
天然に存在する抗体において、抗体が含水環境でその３次元配置を示すと仮定すると、それぞれの抗原結合ドメインに存在する６つの「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」は、抗原結合ドメインが形成される短くて非連続的な、抗原に特異的に結合するアミノ酸配列である。抗原結合ドメインにおいて「フレームワーク」領域と呼ばれる残りの他のアミノ酸は、小さい分子間可変性を示す。フレームワーク領域のほとんどはβ－折り畳み配座を採用し、ＣＤＲがそれに接続する環状構造を形成し、又は場合によっては、β折り畳み構造の一部を形成する。従って、フレーム領域は、ステントを形成することにより、鎖間の非共有相互作用でＣＤＲを正確な方位に位置決めする。特定の位置にＣＤＲを有する抗原結合ドメインは、抗原エピトープへの抗体の非共有結合を促進する抗原エピトープに相補的な表面を形成する。所定の重鎖又は軽鎖可変領域について、当業者は、既知の方法によってＣＤＲ及びフレーム領域を含むアミノ酸を同定することができる（Ｋａｂａｔ、Ｅ．ｅｔ ａｌ．、Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（１９８３）及びＣｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６：９０１－９１７（１９８７）を参照）。
当該技術分野で使用及び／又は許容される用語が２つ以上の定義を有する場合、明示的に対立して指摘されない限り、本明細書で使用された用語の定義は、これらのすべての意味を含む。具体的な例は、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）という用語を使用して重鎖と軽鎖ポリペプチドの可変領域内に見出される非連続的な抗原結合部位を記述する。この特定の領域は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（１９８３）及びＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．のＪ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）に記載されており、そのすべてが参照により本明細書に組み込まれる。
Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａによって定義されたＣＤＲは、互いに比較する時のアミノ酸残基の重複又はサブセットを含む。それにもかかわらず、任意の定義を使用して抗体又はその変異体のＣＤＲを指すことは何れも、本発明の範囲内である。特定のＣＤＲを含む確実な残基番号は、ＣＤＲの配列及び大きさによって変化する。当業者は通常、抗体の可変領域のアミノ酸配列に基づいて、ＣＤＲに含まれる特定の残基を決定することができる。
Ｋａｂａｔらはまた、任意の抗体の可変領域配列に適用される番号付けシステムを定義した。当業者は、配列自体以外の他の実験データとは無関係にこの「Ｋａｂａｔ番号付け」システムを任意の可変領域配列に適用することができる。「Ｋａｂａｔ番号」は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ． ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓが「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」（１９８３）において記述された番号付けシステムを指す。抗体は、ＥＵ又はＣｈｏｔｈｉａ番号付けシステムを使用することもできる。
本発明により開示される抗体は、鳥類と哺乳動物とを含む任意の動物に由来してもよい。好ましくは、抗体は、ヒト由来、マウス由来、ロバ由来、ウサギ由来、ヤギ由来、ラクダ由来、ラマ由来、ウマ由来又はニワトリ由来の抗体である。他の実施形態において、可変領域は、軟骨魚綱（ｃｏｎｄｒｉｃｔｈｏｉｄ）由来（例えば、サメ由来）であってもよい。
重鎖定常領域は、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ（例えば上、中及び／又は下ヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、又は変異体又は断片のうちの少なくとも１種を含む。抗体の重鎖定常領域は、異なる免疫グロブリン分子に由来してもよい。例えば、ポリペプチドの重鎖定常領域は、ＩｇＧ１分子に由来するＣＨ１ドメイン及びＩｇＧ３分子に由来するヒンジ領域を含んでもよい。他の実施形態において、重鎖定常領域は、一部がＩｇＧ１分子に由来し、一部がＩｇＧ３分子に由来するヒンジ領域を含んでもよい。他の実施形態において、一部の重鎖は、一部がＩｇＧ１分子に由来し、一部がＩｇＧ４分子に由来するキメラヒンジ領域を含んでもよい。
「軽鎖定常領域」は、抗体軽鎖に由来する一部のアミノ酸配列を含む。好ましくは、軽鎖定常領域は、定常κドメイン又は定常λドメインのうちの少なくとも１つを含む。「軽鎖－重鎖対」とは、軽鎖のＣＬドメインと重鎖のＣＨ１ドメインとの間のジスルフィド結合によって二量体を形成することができる軽鎖と重鎖の集合体である。
「ＶＨドメイン」は、免疫グロブリン重鎖のアミノ基末端可変ドメインを含み、「ＣＨ１ドメイン」は、免疫グロブリン重鎖の第１の（ほとんどのアミノ基末端）定常領域を含む。ＣＨ２ドメインは、他のドメインと密接に対を形成するものではなく、完全な天然ＩｇＧ分子の２つのＣＨ２ドメイン間に、２つのＮ－で接続した分岐炭水化物鎖を挿入する。また、ＣＨ３ドメインは、ＣＨ２ドメインからＩｇＧ分子のＣ－末端まで延伸し、約１０８個の残基を含むと記載した文献がある。「ヒンジ領域」は、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとを接続する一部の重鎖領域を含む。前記ヒンジ領域は、約２５個の残基を含み、かつ柔軟であることで、２つのＮ末端抗原結合領域を個別に移動させることができる。ヒンジ領域は、上・中・下ヒンジドメインという３つの異なるドメインに細かく分けることができる（Ｒｏｕｘ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １６１：４０８３（１９９８））。
「ジスルフィド結合」は、２つの硫黄原子間に形成される共有子結合を指す。システインのチオール基は、第２のチオール基と共にジスルフィド結合を形成するか、又は架橋することができる。天然に存在する大部分のＩｇＧ分子において、ＣＨ１とＣＬ領域は、ジスルフィド結合によって結合される。
「キメラ抗体」とは、その可変領域が第１の種から得られるか又は由来し、その定常領域（完全なもの、部分的なもの又は修飾されたものであってもよい）が第２の種に由来する任意の抗体を指す。幾つかの実施形態において、可変領域は非ヒト（例えばマウス又は霊長類動物）に由来し、定常領域はヒトに由来する。
「特異的結合」又は「．．．に対して特異的である」とは通常、抗体又は抗原結合断片がその抗原結合ドメイン及びエピトープを介して特定の抗原に相補的に結合し、比較的安定した複合体を形成することを指す。「特異的」は、抗体又は抗原結合断片が特定の抗原又はエピトープに結合する相対的親和性で表すことができる。例えば、抗体「Ａ」が抗体「Ｂ」よりも同じ抗原に対してより高い相対的親和性を有する場合、抗体「Ａ」が抗体「Ｂ」よりもこの抗原に対してより高い特異性を有すると考えられる。特異的結合は、平衡解離定数（ＫＤ）で示すことができ、ＫＤが小さいほど、結合がより緊密であることを意味する。２つの分子が特異的結合であるか否かを決定する方法は、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴、バイオレイヤー光干渉計測法などを含み、当該技術分野でよく知られるものである。抗原ａに「特異的結合」する抗体は、抗原ａとの平衡解離定数ＫＤが約１００ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約５ｎＭ以下、又は約１ｎＭ以下の抗体を含む。
「治療」とは、治療的処置及び予防的又は防止的処置を意味し、その目的は、疾患の進行などの望ましくない生理学的変化又は障害を予防、軽減、改善又は停止することであり、症状の緩和、疾患程度の軽減、疾患状態の安定化（即ち、悪化せず）、疾患進行の遅延又は緩和、疾患状態の改善、緩和、軽減又は消失（部分的又は完全）、治療を受けない場合に予想される生存期限の延長などの検出可能かどうかにかかわらない結果を含むが、これらに限定されない。治療を必要とする患者には、すでに病状又は障害にかかった患者、病状又は障害にかかりやすい患者、又はこの病症又は障害の予防を必要とする患者、検出、診断プロセス及び／又は治療のために、本発明により開示される抗体又は医薬組成物を投与することから利益を得ることができる、又は利益が期待される患者が含まれる。
「患者」は、ヒト、イヌ、ネコ、ウサギ、マウス、ウマ、ウシなどを含む、診断、予後又は治療を必要とする任意の哺乳動物を指す。
「約」は、当業者に容易に知られる対応する数値の通常の誤差範囲を指す。幾つかの実施形態において、本明細書で言及される「約」は、記載された数値及びその±１０％、±５％又は±１％の範囲を指す。
半数最大効果濃度である「ＥＣ５０」（ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｆｏｒ ５０％ ｏｆ ｍａｘｉｍａｌ ｅｆｆｅｃｔ、ＥＣ５０）は、最大効果の５０％を引き起こすことができる濃度を指す。
本発明において、「親Ｆｃ領域」は、天然に存在するＦｃ領域であり得る。Ｆｃ領域をコードする遺伝子は、ヒト、マウス、ウサギ、ラクダ、サルに由来してもよく、好ましくはヒト及びマウスである。例えば、親Ｆｃ領域は、配列番号７７又は７８のＦｃ領域である。
本明細書で言及される出版物の関連する記述は何れも、参照によりすべて本明細書に組み込まれる。
抗ＰＤ－Ｌ１抗体
本発明は、ＰＤ－Ｌ１タンパク質に対して高い親和性を有する抗体又は抗原結合断片を提供する。スクリーニングされた抗体は、有効な結合活性、生物学的活性を示し、治療及び診断の目的に使用できる。例えば、これらの抗体又は抗原結合断片は、抑制性免疫チェックポイントを効果的に遮断し、リンパ球を活性化してサイトカインを放出し、様々な種類のがん、腫瘍又は感染症などの関連疾患の治療に使用することができる。
幾つかの実施形態において、上記抗体の重鎖は、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記抗原結合断片の重鎖は、配列番号７７におけるＦｃ以外のアミノ酸配列を含み、上記抗原結合断片の軽鎖は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体の重鎖は、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖は、配列番号９３に示されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記抗原結合断片の重鎖は、配列番号７７におけるＦｃ以外のアミノ酸配列を含み、上記抗原結合断片の軽鎖は、配列番号９３に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体の重鎖は、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖は、配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記抗原結合断片の重鎖は、配列番号７７におけるＦｃ以外のアミノ酸配列を含み、上記抗原結合断片の軽鎖は、配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体の重鎖は、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖は、配列番号９５に示されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記抗原結合断片の重鎖は、配列番号７７におけるＦｃ以外のアミノ酸配列を含み、上記抗原結合断片の軽鎖は、配列番号９５に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体の重鎖は、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖は、配列番号９６に示されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記抗原結合断片の重鎖は、配列番号７７におけるＦｃ以外のアミノ酸配列を含み、上記抗原結合断片の軽鎖は、配列番号９６に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体の重鎖は、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖は、配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記抗原結合断片の重鎖は、配列番号７７におけるＦｃ以外のアミノ酸配列を含み、上記抗原結合断片の軽鎖は、配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体の重鎖は、配列番号７８に示されるアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記抗原結合断片の重鎖は、配列番号７８におけるＦｃ以外のアミノ酸配列を含み、上記抗原結合断片の軽鎖は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体の重鎖は、配列番号７９に示されるアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記抗原結合断片の重鎖は、配列番号７９におけるＦｃ以外のアミノ酸配列を含み、上記抗原結合断片の軽鎖は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体の重鎖は、配列番号８０に示されるアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記抗原結合断片の重鎖は、配列番号８０におけるＦｃ以外のアミノ酸配列を含み、上記抗原結合断片の軽鎖は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体の重鎖は、配列番号８１に示されるアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記抗原結合断片の重鎖は、配列番号８１におけるＦｃ以外のアミノ酸配列を含み、上記抗原結合断片の軽鎖は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記抗体の重鎖は、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含み、上記抗体の軽鎖は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記抗原結合断片の重鎖は、配列番号８２におけるＦｃ以外のアミノ酸配列を含み、上記抗原結合断片の軽鎖は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、本発明の抗体は、２つの同じ重鎖（又は重鎖断片）及び２つの同じ軽鎖（又は軽鎖断片）を含む。
当業者はまた、本発明に開示される抗体又は抗原結合断片の配列が置換されてもよく、置換後のアミノ酸配列が当該抗体の天然に存在するアミノ酸配列とは異なることを理解すべきである。例えば、置換後のアミノ酸配列は、開始配列と類似してもよく、例えば、開始配列と一定の比率の同一性を有し、例えば、開始配列と約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９８％、約９９％、又はこれらの数値のうちの何れか２つの値の間の範囲（端点を含む）又はそのうちの任意の値の同一性を有する。
幾つかの実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、１つ又は複数の修飾基を有するアミノ酸配列を含む。例えば、本発明により開示される抗体又は抗原結合断片は、柔軟性を有するリンカー配列を含んでもよく、又は、官能基（例えば、ＰＥＧ、薬物、毒素やラベル）を添加するために修飾されてもよい。
本発明により開示される抗体、抗原結合断片は修飾された誘導体を含み、即ち任意の種類の分子の抗体又は抗原結合断片への共有結合によって修飾され、共有結合は、抗体又は抗原結合断片のエピトープへの結合を阻止しない。抗体又は抗原結合断片のグリコシル化、アセチル化、ポリエチレングリコール化、リン酸化、アミド化、既知の保護／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質加水分解切断、細胞リガンド又は他のタンパク質への接続などの実例を含むが、これらに限定されない。多くの化学修飾のうちの何れか１つの修飾は、特異的化学分解、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝合成などを含むが、これらに限定されない従来技術によって行われてもよい。
幾つかの実施形態において、抗体又は抗原結合断片は、治療剤、薬物前駆体、ペプチド、タンパク質、酵素、ウイルス、脂質、生物学的反応調節剤、薬剤又はＰＥＧと複合することができる。
抗体又は抗原結合断片は、化学発光化合物にカップリングすることによって、検出可能に標識されてもよい。その後、化学発光標識された抗体又は抗原結合断片の存在は、化学反応中に出現した発光を検出することによってを決定される。化学発光標識化合物の実例は、ルミノール、イソルミノール、芳香族アクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジン塩及びシュウ酸エステルを含む。
抗体及び抗体をコードするポリヌクレオチドの調製方法
本発明は、本発明に記載の抗体、抗原結合断片、及びその誘導体をコードするポリヌクレオチド又は核酸分子を更に開示する。本発明により開示されるポリヌクレオチドは、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、Ｆｃ領域、一部の重鎖可変領域、一部の軽鎖可変領域、重鎖又は軽鎖などをコードすることができる。抗体を調製する方法は、当該技術分野で既知であり、且つ本発明に記載されたものである。
幾つかの実施形態において、調製される抗体は、治療される動物（例えば、ヒト）に、有害な免疫応答を引き起こさない。幾つかの実施形態において、本発明により開示される抗体、抗原結合断片、又は誘導体は、その免疫原性を低減させるために、当該分野で認められている技術で修飾される。例えば、抗体は、ヒト化、霊長類化、脱免疫化されてもよく、又はキメラ抗体として調製されてもよい。これらの種類の抗体は非ヒト抗体、通常、マウス類又は霊長類抗体に由来し、親抗体の抗原結合特性を保持又は基本的に保持しているが、ヒトにおいて免疫原性が低い。それは、（ａ）キメラ抗体を産生するために、非ヒトの可変領域全体をヒトの定常領域に移植すること、（ｂ）重要なフレーム残基を保持し、又は保持せずに、１つ又は複数の非ヒト相補性決定領域（ＣＤＲ）の少なくとも一部をヒトのフレーム及び定常領域に移植すること、又は（ｃ）非ヒトの可変領域全体を移植するが、ヒト類似の部分で表面残基を置換することによりそれらを「隠す」ことを含む様々な方法により実現可能である。通常、ヒトフレーム領域におけるフレーム残基は、ＣＤＲドナー抗体からの対応する残基、抗原結合を改善可能な残基などで置換される。これらのフレームの置換は、当該分野で既知の方法で同定することができ、例えば、ＣＤＲとフレーム残基の相互作用をシミュレーションすることで、抗原結合に重要な役割を果たすフレーム残基が同定され、且つ配列アラインメントによって特定の位置での異常なフレーム残基が同定される。（米国特許５，５８５，０８９、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３（１９８８）を参照し、その内容のすべてが参照により本明細書に組み込まれる）。当該技術分野で既知の様々な技術を使用して抗体をヒト化することができ、例えば、ＣＤＲ移植（ＥＰ ２３９，４００、ＷＯ ９１／０９９６７、米国特許５，２２５，５３９、５，５３０，１０１及び５，５８５，０８９）、修復又は表面の再編成（ＥＰ５９２，１０６、ＥＰ５１９，５９６、Ｐａｄｌａｎ、ｅｔ ａｌ．、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９－４９８（１９９１）、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．、Pｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７（６）：８０５－８１４（１９９４）、Ｒｏｇｕｓｋａ、ｅｔ ａｌ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：９６９－９７３（１９９４））、及び鎖の再編成（米国特許５，５６５，３３２）であり、その内容のすべてが参照により本明細書に組み込まれる。
脱免疫化は、抗体の免疫原性の低減に用いることもできる。本発明において、「脱免疫化」という用語は、Ｔ細胞エピトープを修飾するために抗体を変化させることを含む（例えば、ＷＯ／９８５２９７６ Ａ１及びＷＯ／００３４３１７ Ａ２を参照）。例えば、開始抗体からの重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を分析し、各可変領域からのヒトＴ細胞エピトープ「マップ」を生成し、相補性決定領域（ＣＤＲｓ）及び配列内の他の重要な残基に対するエピトープの位置を示す。Ｔ細胞エピトープマップからの単一のＴ細胞エピトープを分析することにより、抗体活性を変えるリスクが低い選択可能なアミノ酸置換を同定する。アミノ酸置換の組み合わせを含む一連の選択可能な重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を設計し、続いてこれらの配列を一連の結合ポリペプチドに組み込む。その後、修飾された可変領域及びヒト定常領域を含む完全な重鎖と軽鎖の遺伝子を発現担体にクローンし、続いてプラスミドを細胞株に導入することで完全な抗体を産生する。その後、適当な生物化学及び生物学実験にて抗体を比較し、最適な抗体を同定する。
本発明により開示される抗体又は抗原結合断片の結合特異性は、免疫共沈降、放射免疫実験（ＲＩＡ）や酵素結合免疫吸着実験（ＥＬＩＳＡ）などの体外実験により、検出することができる。
scFvの調製は、単鎖ユニットを生成する技術を参照することができる（米国特許：４，６９４，７７８、Ｂｉｒｄ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４４２（１９８８）、Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ５５：５８７９－５８８３（１９８８）及びＷａｒｄ ｅｔ ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５４４－５５４（１９８９）及びＮｉｅ ｅｔ ａｌ．、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ３ （１）：１８－６２（２０２０））。Ｆｖ領域の重鎖と軽鎖断片へのアミノ酸架橋によって単鎖ユニットを形成し、単鎖融合ペプチドを形成する。大腸菌で機能的なＦｖ断片を組み立てる技術も使用できる（Ｓｋｅｒｒａ ｅｔ ａｌ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２： １０３８－１０４１（１９８８））。
単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）及び抗体の製造に使用可能な技術の実例は、米国特許４，９４６，７７８及び５，２５８，４９８、並びにＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２０３：４６～８８（１９９１）、Ｓｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：１９９５～１９９９（１９９３）、及びＳｋｅｒｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０３８～１０４０（１９８８）に記載されたような方法を含む。ヒトの体内での抗体の利用及び体外検出実験を含む幾つかの使用には、キメラ抗体、ヒト化抗体又は全ヒト抗体が使用できる。キメラ抗体は、抗体の異なる部分が異なる動物種から由来するような分子であり、例えば、マウスモノクローナル抗体の可変領域及びヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体である。キメラ抗体の製造方法は、当該技術分野で既知されるものであり、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２（１９８５）、Ｏｉ ｅｔ ａｌ．、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４（１９８６）；Ｇｉｌｌｉｅｓ ｅｔ ａｌ．、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １２５：１９１－２０２（１９８９）、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ ３７２：６０４－６０８（１９８４）、Ｔａｋｅｄａ ｅｔ ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４５２－４５４（１９８５）、及び米国特許５，８０７，７１５、４，８１６，５６７と４，８１６，３９７を参照し、その内容のすべてが参照により本明細書に組み込まれる。
更に、Ｎｅｗｍａｎ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１４５５－１４６０（１９９２）には、組換え抗体を製造する他の効率的方法が開示されており、特に、当該技術は、サル可変領域及びヒト定常領域配列を含む霊長類抗体を産生することができ、当該参照文献の内容のすべてが参照により本明細書に組み込まれる。更に、当該技術は、米国特許５，６５８，５７０、５，６９３，７８０及び５，７５６，０９６にも言及されており、それぞれの特許の内容のすべてが参照により本明細書に組み込まれる。
抗体は、免疫グロブリン配列からの抗体ライブラリーを利用して行われるファージディスプレイ法を含む当該分野で知られている種々の方法により、調製することができる。米国特許４，４４４，８８７及び４，７１６，１１１、及びＰＣＴ公開文書ＷＯ９８／４６６４５、ＷＯ９８／５０４３３、ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９８／１６６５４、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ９６／３３７３５及びＷＯ９１／１０７４１を参照してもよく、それぞれの特許の内容のすべてが参照により本明細書に組み込まれる。
別の幾つかの実施形態において、通常の方法（例えば、マウス抗体重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子と特異的に結合可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用すること）により、所望のモノクローナル抗体をコードするＤＮＡを単離し、配列決定することができる。単離され及びサブクローニングされたハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの由来にすることができる。単離されると、ＤＮＡは、発現担体に置かれ、その後、例えば、大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又は他の免疫グロブリンを産生しない骨髄腫細胞などの原核又は真核宿主細胞にトランスフェクトされることができる。単離されたＤＮＡ（本明細書に記載のように合成であってもよい）は、抗体の定常領域及び可変領域の配列を調製するために使用されてもよく、例えば、米国特許５，６５８，５７０に記載されているように、その内容のすべてが参照により本明細書に組み込まれる。この方法は、選択された細胞からＲＮＡを抽出してｃＤＮＡに形質転換してから、Ｉｇ特異的プライマーを利用してＰＣＲ技術により増幅する。この目的に適用される適当なプローブは、米国特許５，６５８，５７０において言及されたこともある。
更に、通常の組換えＤＮＡ技術により、本発明の抗体の１つ又は複数のＣＤＲをフレーム領域に挿入し、例えば、ヒトフレーム領域に挿入することで、ヒト化非完全ヒト抗体を構築することができる。フレーム領域は、天然に存在するか又は共通のフレーム領域であってもよいが、ヒトフレーム領域が好ましい（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７８：４５７～４７９（１９９８）が参照され、その中に一連のヒトフレーム領域が挙げられている）。幾つかのポリヌクレオチドは、フレーム領域とＣＤＲとの組み合わせによって産生される標的抗原の少なくとも１つのエピトープに特異的に結合する抗体をコードすることができる。フレーム領域内で１つ又は複数のアミノ酸置換を行うことができ、抗体のその抗原への結合を改善できるアミノ酸置換を選択することができる。また、この方法で鎖間ジスルフィド結合の形成に関与する１つ又は複数の可変領域におけるシステイン残基の置換又は欠失を行うことにより、１つ又は複数の鎖間ジスルフィド結合が欠失した抗体分子を産生することができる。当該分野の技術的範囲でポリヌクレオチドに対して行われた他の変更も、本発明に含まれる。
抗体は、通常の組換えＤＮＡ技術により調製することができる。当業者に知られている技術により、抗体を製造する担体及び細胞株などを選択し、構築し、培養することができる。これらの技術は何れも、Ｒｅｃｏｍｂｉａｎｔ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｆｏｒ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｉｎ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ、Ｄ．Ｌ．Ｈａｃｋｅｒ，Ｆ．Ｍ．Ｗｕｒｍ、ｉｎ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｍｏｄｕｌｅ ｉｎ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、２０１７などの種々のラボマニュアル及び主な出版物に記載されており、その内容のすべてが参照により全文に組み込まれる。
幾つかの実施形態において、従来の方法に従って、本明細書に記載の抗体アミノ酸配列に基づいて、抗体をコードするＤＮＡを設計して合成し、それを発現担体に入れ、次に宿主細胞をトランスフェクトし、トランスフェクトされた宿主細胞を培地にて培養し、モノクローナル抗体を産生することができる。幾つかの実施形態において、発現抗体担体は、少なくとも１つのプロモータエレメント、抗体コード配列、転写終了シグナル及びｐｏｌｙＡ尾部を含む。他のエレメントは、エンハンサー、Ｋｏｚａｋ配列及び挿入配列の両側のＲＮＡスプライシングのドナーと受容体部位を含む。ＳＶ４０の前期と後期プロモーター、レトロウイルス由来の長い末端反復配列、例えばＲＳＶ、ＨＴＬＶ１、ＨＩＶＩ及びサイトメガロウイルスの早期プロモーターによって、高効率な転写を得ることができ、アクチンプロモーターのような他の幾つかの細胞のプロモーターを適用することもできる。適切な発現担体は、ｐＩＲＥＳ１ｎｅｏ、ｐＲｅｔｒｏ－Ｏｆｆ、ｐＲｅｔｒｏ－Ｏｎ、ＰＬＸＳＮ、又はＰｌｎｃｘ、ｐｃＤＮＡ３．１（＋／－）、ｐｃＤＮＡ／Ｚｅｏ（＋／－）、ｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｙｇｒｏ（＋／－）、ＰＳＶＬ、ＰＭＳＧ、ｐＲＳＶｃａｔ、ｐＳＶ２ｄｈｆｒ、ｐＢＣ１２ＭＩとｐＣＳ２などを含んでもよい。一般的に用いられる哺乳動物細胞は、２９３細胞、Ｃｏｓ１細胞、Ｃｏｓ７細胞、ＣＶ１細胞、マウスＬ細胞とＣＨＯ細胞などを含む。
幾つかの実施形態において、挿入遺伝子断片は、スクリーニング標識を含有する必要があり、よく見られるスクリーニング標識は、トランスフェクションに成功した細胞のスクリーニングと単離を容易にするように、ジヒドロ葉酸レダクターゼ、グルタミン合成酵素、ネオマイシン耐性、ハイグロマイシン耐性などのスクリーニング遺伝子を含む。構築されたプラスミドを上記遺伝子無しの宿主細胞にトランスフェクトし、選択培地で培養し、トランスフェクションに成功した細胞が大量増殖し、所望の目的タンパク質を産生する。
更に、当業者に知られている標準的な技術により、本発明に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列に、アミノ酸置換を引き起こす部位特異的突然変異及びＰＣＲ媒介突然変異を含むが、これらに限定されない突然変異が導入されてもよい。変異体（誘導体を含む）は、元の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域に対して５０個よりも少ないアミノ酸の置換、４０個よりも少ないアミノ酸の置換、３０個よりも少ないアミノ酸の置換、２５個よりも少ないアミノ酸の置換、２０個よりも少ないアミノ酸の置換、１５個よりも少ないアミノ酸の置換、１０個よりも少ないアミノ酸の置換、５個よりも少ないアミノ酸の置換、４個よりも少ないアミノ酸の置換、３個よりも少ないアミノ酸の置換又は２個よりも少ないアミノ酸の置換をコードするものである。又は、例えば、飽和突然変異によって、すべて又は一部に沿って配列をコードする時に無作為に突然変異を導入してもよく、得られた突然変異体の生物活性をスクリーニングすることにより、活性を保持した突然変異体を同定してもよい。
治療方法
本発明は、治療方法及び用途を更に提供する。幾つかの実施形態において、患者へ有効用量の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又は抗原結合断片を投与することを含む、様々な種類のがん、腫瘍又は感染症などの関連疾患を治療又は改善するための方法を提供する。幾つかの実施形態において、がん、腫瘍又は感染症などの関連疾患を治療又は改善するための抗ＰＤ－Ｌ１抗体又は抗原結合断片の応用を提供する。幾つかの実施形態において、がん、腫瘍又は感染症などの関連疾患を治療又は改善するための薬物の調製における前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体又は抗原結合断片の応用を提供する。
任意の特定の患者の具体的な用量及び治療レジメンは、使用される特定の抗体又は誘導体、患者の年齢と体重、一般的健康状態、性別と飲食、及び投与時間、排泄頻度、薬物の組み合わせ、並びに治療される特定の疾患の重症度を含む様々な要因によって決められる。当業者の範囲に含まれる医療関係者により、これらの要因を判断する。前記用量は、更に、治療すべき個体患者、投与経路、製剤種類、使用される化合物の特性、疾患の重症度及び所望の効果によって決められる。使用される用量は、当該分野でよく知られている薬理学及び薬物動態学的原理によって決定することができる。
抗体又は誘導体の投与方法は、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、経鼻、硬膜外及び経口注射を含むが、これらに限定されない。医薬組成物は、注入やボーラス注射などの任意の好都合な経路により投与され、上皮又は皮膚粘膜（例えば、口腔粘膜、直腸と腸粘膜など）を介して吸収されてもよく、他の生物活性剤と共に投与されてもよい。従って、本発明の抗体又は抗原結合断片を含む医薬組成物は、経口投与、直腸投与、腸胃外投与、脳槽内投与、経膣投与、腹腔内投与、外用（例えば、粉末、軟膏、ドロップ剤又は経皮パッチ剤による）、口腔投与、又は経口や鼻内噴霧投与が可能である。
本発明に使用される「腸胃外」という用語は、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下と関節内注射及び輸注を含む投与形態である。
投与形態は、全身投与又は局所投与であってもよい。更に、脳室内注射及び髄腔内注射を含む任意の適当な経路により、本発明の抗体を中枢神経系に導入する必要があり得るが、脳室内注射は、脳室内カテーテルを介してリザーバーのようなもの（Ｏｍｍａｙａリザーバーであってもよい）に接続されることで、注射を補助することができる。肺部投与によってもよく、例えば、吸入器又は噴霧器を使用すること、及び霧化された製剤を使用することによってもよい。
本発明の抗体は、治療すべき領域に局所投与することができ、手術期間の局所注入、例えば、手術後の創傷被覆材と併用する局所応用により、注射により、カテーテルにより、坐剤又はインプラント体で実現されることができるが、これらの方式に限定されず、上記インプラントは、多孔質、無孔又はゲル状の材料であり、膜（例えば、シリコンゴム膜）又は繊維を含む。好ましくは、本発明のタンパク質（抗体を含む）を投与する場合に、タンパク質を吸収しない材料を使用するように注意しなければならない。
幾つかの実施形態において、本発明の組成物は、抗体をコードする核酸又はポリヌクレオチドを含み、それを適当な核酸発現担体の一部として構築することで前記核酸を体内投与し、それによりコードされるタンパク質の発現を促進し、その後、例えば、レトロウイルス担体の使用（米国特許４，９８０，２８６を参照）によって、又は直接注射によって、又は微粒子銃法の使用（例えば、遺伝子銃、Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ、Ｄｕｐｏｎｔ）によって、又はリポソーム若しくは細胞表面受容体若しくはトランスフェクション試薬でコーティングし、又は細胞核に入ることが知られているホメオボックスペプチドに連結して核酸を投与すること（例えば、Ｊｏｌｉｏｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１８６４－１８６８を参照）などの方法により、上記部分担体を、細胞内部分になるように投与することができる。選択的に、核酸は、相同組換えにより細胞内に導入され、発現するように宿主細胞ＤＮＡに組み込まれてもよい。
幾つかの実施形態において、患者へ投与される本発明の抗体の用量は、患者の体重に対して０．０１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、又は患者の体重に対して０．１ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇである。初期用量の後に、初期用量とほぼ同じか又はそれより少ない量で、２回目又は複数回の当該抗体又は抗原結合断片を投与することができ、その後の用量は、少なくとも１日～３日、又は少なくとも１週間離れてもよい。例えば、リポソーム化などの修飾で抗体の摂取及び組織透過能力（例えば、脳内に入る）を向上させることにより、本発明の抗体の投与用量及び頻度を低減することができる。
種々の既知の輸送システムは、本発明の抗体又は誘導体又はそれらをコードするポリヌクレオチドの投与、例えばリポソーム体、微粒子、マイクロカプセルに封入され、前記化合物を発現可能な組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシス作用（例えば、Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ，１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９－４４３２を参照）、レトロウイルス又は他の担体の一部としての核酸の構築などに用いることができる。
併用療法
幾つかの実施形態において、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又は抗原結合断片は、１種又は複数種の本発明の抗体又は抗原結合断片の投与及び１種又は複数種の他の治療剤又は方法との併用又は組み合わせ使用を含む、他の治療又は予防レジメンと組み合わせることができる。幾つかの実施形態において、他の治療レジメンは、放射線療法、化学療法、ホルモン療法などを含むが、これらに限定されない。併用療法の場合、抗体は、他の治療剤と同時に又は別々に投与することができる。別々に投与する場合、別の他の治療剤を投与する前又は後に、本発明の抗体を投与することができる。
幾つかの実施形態において、本発明の抗体は、化学療法剤と組み合わせて投与される。幾つかの実施形態において、本発明の抗体と共に投与可能な化学療法剤は、抗生物質誘導体（例えば、ドキソルビシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン及びアクチノマイシンＤ）、抗エストロゲン剤（例えば、タモキシフェン）、代謝拮抗物質（例えば、フルオロウラシル、５－ＦＵ、メトトレキサート、フルオロウリジン、インターフェロンα－２ｂ、グルタミン酸、ミトラマイシン、メルカプトプリン及び６－チオグアニン）、細胞傷害剤（例えば、カルムスチン、ＢＣＮＵ、ロムスチン、ＣＣＮＵ、シタラビン、シクロホスファミド、エストラムスチン、ヒドロキシ尿素、プロカルバジン、マイトマイシン、ブスルファン、シスプラチン及び硫酸ビンクリスチン）、ホルモン（例えば、メドロキシプロゲステロン、リン酸エストラムスチンナトリウム、エチニルエストラジオール、エストラジオール、酢酸メゲストロール、メチルテストステロン、ジエチルスチルベストロール二リン酸、クロロトリアニセン及びテストラクトン）、ナイトロジェンマスタード誘導体（例えば、メルファラン、クロラムブシル、ジクロロメチルジエチルアミン（メクロレタミン）及びチオテパ）、ステロイドとその組み合わせ（例えば、ベタメタゾンリン酸ナトリウム）、及び他の化合物（例えば、ダカルバジン、アスパラギナーゼ、ミトタン、硫酸ビンクリスチン、硫酸ビンブラスチン及びエトポシド）を含むが、これらに限定されない。幾つかの実施形態において、本発明の抗体はサイトカインと併用投与される。本発明の抗体と共に投与可能なサイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、及びＩＬ－１５などを含むが、これらに限定されない。
幾つかの実施形態において、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、化学療法剤と併用投与される。化学療法剤の実例は、免疫治療剤を含み、患者の治療に適用される治療抗体を含むが、これらに限定されない。治療抗体の幾つかの実例は、リツキシマブ、トラスツズマブ、トシツモマブ、イコモマブ、アレムツズマブ、エプラツズマブ、ベバシズマブ、トキシマブ及びベレンツズマブなどを含む。
医薬組成物
本発明は、医薬組成物を更に提供する。このような組成物は、有効用量の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又は抗原結合断片及び薬学的に許容される添加剤を含む。幾つかの実施形態において、医薬組成物は、０．１％～９０％の抗ＰＤ－Ｌ１抗体又は抗原結合断片を含む。幾つかの実施形態において、医薬組成物は、抗がん剤（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）を更に含む。
幾つかの実施形態において、「薬学的に許容される」という用語は、政府の規制機関により承認された、又は他の一般に認められている薬局方に挙げられた動物用、特にヒト用の物質を指す。更に、「薬学的に許容される添加剤」は通常、任意種類の無毒な固体、半固体又は液体充填剤、希釈剤、封入材料又は製剤助剤などを指す。
「添加剤」という用語は、活性成分と共に患者へ投与可能な希釈剤、アジュバント、賦形剤又は担体を指す。このような薬物担体は、滅菌液体であってもよく、例えば、水、及び石油、落花生油、大豆油、鉱油、ごま油などの動植物又は合成由来の油を含む油である。医薬組成物が静脈内投与される場合に、水は、好ましい担体である。生理食塩水溶液とグルコース水溶液とグリセリン溶液は、液体担体として用いられてもよく、特に注射用溶液に用いられる。好適な薬用賦形剤は、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセリン、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセリン、プロピレン、エチレングリコール、水、エタノールなどを含む。必要に応じて、組成物は湿潤剤若しくは乳化剤、又は酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩のようなｐＨ緩衝剤を更に少量に含んでもよい。ベンジルアルコールやｐ－ヒドロキシ安息香酸メチルなどの抗菌剤、アスコルビン酸や亜硫酸水素ナトリウムなどの酸化防止剤、エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤、及び塩化ナトリウムやデキストロースなどの張力を調節する試薬も予測可能である。これらの組成物は、溶液、懸濁液、乳剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散薬、徐放性製剤などの形態を採用してもよい。当該組成物は、従来の接着剤及びトリグリセリドなどの担体で坐剤として調製されてもよい。経口製剤は、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的な担体を含んでもよい。好適な薬物担体の実例は、Ｅ．Ｗ．ＭａｒｔｉｎのＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓにおいて記載されており、ここで参照により本発明に組み込まれる。このような組成物は、臨床的有効用量の抗体又は抗原結合断片を含み、好ましくは精製された形態で、適当な数量の添加剤と組み合わせることにより、患者に適する投与形態を提供する。当該製剤は、投与モードに適用すべきである。非経口製剤は、アンプル、使い捨て注射器又はガラスやプラスチックで作製される多用量のバイアルに封入されてもよい。
幾つかの実施形態において、通常のステップによって、組成物を、ヒトへの静脈内注射に適する医薬組成物に調製する。静脈内投与用の組成物は、一般的に、滅菌などの透水性緩衝液における溶液である。組成物は、更に可溶化剤と、リドカインのような局所麻酔薬を含んでもよく、これにより、注射部位の痛みが緩和される。一般的に、有効成分は、単位用量の形態で単独で供給され、又は混合して供給され、例えば、乾燥した凍結乾燥粉末又は無水濃縮物の形態で活性剤の量を指示可能な密封容器（例えば、アンプル又は小袋）に入れられる。注入で組成物を投与する場合に、滅菌医薬等級水又は生理食塩水を含有する点滴ボトルで組成物を分注してもよい。注射で組成物を投与する場合に、投与する前に有効成分を混合できるように、注射用の滅菌水又は生理食塩水のアンプルを使用してもよい。
本発明の化合物は、中性又は塩の形態に調製されてもよい。薬学的に許容される塩は、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するものとアニオンとで形成される塩と、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２－エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するものとカチオンと形成される塩と、を含む。
以下、具体的な実施例によって本発明の技術的解決手段について更に説明するが、具体的な実施例は本発明の保護範囲を限定するものではない。他の当業者が本発明の趣旨を基に行われる本質的でない修正や調整は依然として、本発明の保護範囲に属する。
後述する実施例に用いられる材料、試薬などは、特に説明しない限り、何れも商業的供給源から入手することができる。
抗ＰＤ－Ｌ１抗体
実施例１ 抗体の調製方法
抗体の実例に関連するアミノ酸及び核酸配列は、表１－１３に示され、抗体の重鎖、軽鎖の構成は表１に示された。表１１の重鎖のＦｃ領域には下線が引かれ、表１３の可変領域の核酸配列には下線が引かれた。
抗体の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列について、宿主細胞のコドンバイアスに従って配列を最適化し、重鎖及び軽鎖のＤＮＡ配列が得られた。宿主細胞での発現を容易にするために、重鎖及び軽鎖の配列にシグナルペプチドがそれぞれ付加された。
最適化して合成された配列クローンを担体にそれぞれクローニングし（担体のオプションとしてはｐＣＤＮＡ３．１ＴＭ（＋）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎであり、製品番号はＶ７９０２０である）、その後、大量のプラスミドをそれぞれ抽出し、重鎖及び軽鎖は、１：１のプラスミドのモル比でトランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｆ細胞を一過性に発現した。抗体Ｌ１－Ｒ２－４－４６を例として、重鎖核酸配列（配列番号９９）及び軽鎖核酸配列（配列番号１０１）を酵素的切断により発現担体にクローニングし、ここで、重鎖シグナルペプチドの核酸配列は配列番号１０２であり、軽鎖シグナルペプチドの核酸配列は配列番号１０３であった。抗体Ｌ１－Ｒ２－４－７１を例として、重鎖核酸配列（配列番号１００）及び軽鎖核酸配列（配列番号１０１）を酵素的切断により発現担体にクローニングし、ここで、重鎖シグナルペプチドの核酸配列は配列番号１０２であり、軽鎖シグナルペプチドの核酸配列は配列番号１０３であった。細胞発現後、抗体の純度＞９５％になるように、培養液にてＰｒｏｔｅｉｎ Ａカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用した固定化金属アフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）により、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む分泌された抗体タンパク質を精製し、配列決定の結果は予測される配列と同じであり、親和性の検出及び生物活性の同定に使用された。
実施例２ 解離定数の測定
Ｂｉａｃｏｒｅシステム（ＧＥ社）を用い、動力学的結合アッセイによって、対応する抗原に結合する本発明の上記抗体の平衡解離定数（ＫＤ）を決定した。マニュアルの方法に従って、５μｇの抗原タンパク質ＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓをチップに固定し、最高濃度が１００ｎＭ（１：２で希釈し、５つの勾配）の抗ＰＤ－Ｌ１抗体を流動相として、親和性を測定し、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅにより結果を分析した。ここで、陽性対照はＡＴＥ抗体であった（ＡＴＥ抗体のアミノ酸配列は、ＨＥＫ２９３Ｆ細胞によって発現されるＡｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂと一致した）。
ＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓ抗原の調製：ヒトＰＤ－Ｌ１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）タンパク質のＣ－末端に８×ＨＩＳタグを付加してＰＤ－Ｌ１組換えタンパク質を構築し、ヒトＰＤ－Ｌ１のＥＣＤ領域を遺伝子により合成して哺乳動物の発現担体（ｐｃＤＮＡ３．１（＋）発現担体など）にサブクローニングした。ＨＥＫ２９３Ｆ細胞を一過性にトランスフェクトした後、ニッケルベースの固定化金属アフィニティークロマトグラフィー（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）により精製されたＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓ抗原が得られた。ヒトＰＤ－Ｌ１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）のアミノ酸配列は、ＭＲＩＦＡＶＦＩＦＭＴＹＷＨＬＬＮＡＦＴＶＴＶＰＫＤＬＹＶＶＥＹＧＳＮＭ ＴＩＥＣＫＦＰＶＥＫＱＬＤＬＡＡＬＩＶＹＷＥＭＥＤＫＮＩＩＱＦＶＨＧＥＥＤＬＫＶＱＨＳＳＹＲＱＲＡＲＬＬＫＤＱＬＳＬＧＮＡＡＬＱＩＴＤＶＫＬＱＤＡＧＶＹＲＣＭＩＳＹＧＧＡＤＹＫＲＩＴＶＫＶＮＡＰＹＮＫＩＮＱＲＩＬＶＶＤＰＶＴＳＥＨＥＬＴＣＱＡＥＧＹＰＫＡＥＶＩＷＴＳＳＤＨＱＶＬＳＧＫＴＴＴＴＮＳＫＲＥＥＫＬＦＮＶＴＳＴＬＲＩＮＴＴＴＮＥＩＦＹＣＴＦＲＲＬＤＰＥＥＮＨＴＡＥＬＶＩＰＥＬＰＬＡＨＰＰＮＥＲ（配列番号９８）であった。
１）表１４に示されるように、ＡＴＥ抗体と比較して、ＰＤ－Ｌ１抗原に対する本発明の抗体Ｌ１－Ｒ２－４、Ｌ１－Ｒ２－１８、Ｌ１－Ｒ２－７８及びＬ１－Ｒ２－８９の親和性は実質的に近い。
２）表１５に示されるように、ＡＴＥ抗体と比較して、ＰＤ－Ｌ１抗原に対する本発明の抗体Ｌ１－Ｒ２－４－３６、Ｌ１－Ｒ２－４－４６、Ｌ１－Ｒ２－４－４７、Ｌ１－Ｒ２－４－５５及びＬ１－Ｒ２－４－７１の親和性がより高い。
実施例３ 抗ＰＤ－Ｌ１抗体活性の検出
抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１への結合を遮断することによって、下流のＮＦＡＴシグナル伝達経路に対する阻害作用を解除することができる。Ｐｒｏｍｅｇａ社により提供されるＭＯＡ（Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ Ａｃｔｉｏｎ、ＭＯＡ）検出システム（ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ Ｂｌｏｃｋａｄｅ Ｂｉｏａｓｓａｙ、Ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ Ｍｏｄｅｌ、Ｃａｔａｌｏｇ Ｊ１２５２）を用いて、マニュアルに記載された方法に従って、蛍光レポーター遺伝子の発現を検出することによって、ＮＦＡＴシグナルの活性化状態を反映し、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１に結合する抗体の阻害作用を検出した。そのうち、陰性対照抗体ＩｇＧ－Ｉｓｏｔｙｐｅは、北京義翹神州科技股分有限公司（カタログ番号：ＨＧ１Ｋ）から購入された。
活性検出の前日にＣＨＯ－ＰＤ－Ｌ１細胞（上記ＭＯＡ検出システムから）を播種した：ＣＨＯ－ＰＤ－Ｌ１を播種する１～２日前に継代し、培養上清を捨て、滅菌ＰＢＳで細胞を１回洗浄した。適量のＴｒｙｐｓｉｎ（Ｇｉｂｃｏ）を加え、３７℃、５％のＣＯ２のインキュベータで３～５ｍｉｎ消化させた。新鮮な培地を加えて消化を停止させ、細胞を５０ｍＬの遠心分離チューブに移してカウントした。必要な体積の細胞を採取し、９００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心分離した。ＤＭＥＭ－Ｆ１２培地（Ｇｉｂｃｏ）を加え、細胞を４×１０５細胞／ｍＬに再懸濁させた。細胞を９６ウェルの白色細胞培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に１００μＬ／ウェルで加えた。細胞を３７℃、５％のＣＯ２のインキュベータで一晩培養した。
検出の当日に、Ｊｕｒｋａｔ－ＰＤ１細胞（上記ＭＯＡ検出システムから）を処理した：カウント後に必要な体積の細胞を採取し、９００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心分離した。測定緩衝液（１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ）＋１％ＦＢＳ）で細胞を１．２５×１０６細胞／ｍＬに再懸濁させ、使用に備えた。ＣＨＯ－ＰＤ－Ｌ１細胞培養プレートの培地上清を９５μＬ／ウェル吸引除去し、４０μＬ／ウェルの試験試料（上記の抗ＰＤ－Ｌ１抗体、ＡＴＥ抗体又は陰性対照ＨＧ１Ｋ抗体、最高濃度は２０μｇ／ｍＬであり、測定緩衝液において２倍、合計９勾配で希釈した）を加え、４０μＬのＪｕｒｋａｔ－ＰＤ１細胞を更に加え、軽く振とうして均一に混合し、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベータにおいて６時間培養した。検出：ＯＮＥ－ＧｌｏＴＭ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａから購入し、Ｅ６１２０）を事前に融解した。６時間後、ＯＮＥ－ＧｌｏＴＭ試薬を５０μＬ／ウェルで添加した。室温で５～１０ｍｉｎ放置し、値を読み取った。
１）図１Ａに示されるように、本実施例の抗ＰＤ－Ｌ１抗体（Ｌ１－Ｒ２－４、Ｌ１－Ｒ２－６、Ｌ１－Ｒ２－１８、Ｌ１－Ｒ２－７８、Ｌ１－Ｒ２－８５及びＬ１－Ｒ２－８９）は何れも、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の相互作用を効果的に遮断することができ、そのうち、Ｌ１－Ｒ２－４抗体は比較的強い遮断活性を有する。
２）図１Ｂに示されるように、本発明の抗体Ｌ１－Ｒ２－４－３６、Ｌ１－Ｒ２－４－４６、Ｌ１－Ｒ２－４－４７、Ｌ１－Ｒ２－４－５５及びＬ１－Ｒ２－４－７１は何れも、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の相互作用を効果的に遮断することができ、対照抗体ＡＴＥと比較して、抗体（Ｌ１－Ｒ２－４－３６及びＬ１－Ｒ２－４－４６）はより強い遮断活性を有する。
実施例４ 抗ＰＤ－Ｌ１抗体結合能の検出
フローサイトメトリーにより、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体の、ヒトＰＤ－Ｌ１を過剰発現したＣＨＯ細胞への結合を検出した。試験手順：ＣＨＯ－ＰＤ－Ｌ１細胞（上記ＭＯＡ検出システムから）を異なる希釈濃度の抗体と均一に混合し（抗体の最高作動濃度は２０ｎＭ、希釈比率１：２、１１勾配で希釈した）、氷上で１ｈインキュベートし、ＰＢＳで細胞を２回洗浄し、更にＰＥで標識した抗ヒトＦｃ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）の蛍光二次抗体を加え、氷上で暗所で３０分間インキュベートし、ＰＢＳで細胞を２回洗浄し、更にＰＢＳで細胞を再懸濁させ、ＦＡＣＳにより抗体の細胞への結合を検出した。
図２に示されるように、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１抗体（Ｌ１－Ｒ２－４－３６、Ｌ１－Ｒ２－４－４６、Ｌ１－Ｒ２－４－４７、Ｌ１－Ｒ２－４－５５及びＬ１－Ｒ２－４－７１）は何れも、ＣＨＯ細胞で過剰発現したヒトＰＤ－Ｌ１に結合することができる。
実施例５ 抗腫瘍作用
実験用マウス：雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（５～８週齢）（江蘇省集萃薬康生物科技有限公司）。実験細胞：対数増殖期のマウス結腸がん細胞ＭＣ３８を採取し、培養液を除去し、ＰＢＳで２回洗浄した後に、１×１０６／１００μＬ／匹の接種量で接種位置とする右側腹部領域に接種した。群分けによる投与：平均腫瘍体積が５０～１００ｍｍ３の場合、担癌マウスを無作為に群分けにした。群分けの基準：腫瘍体積ＣＶ値が３０％未満である。接種の当日をＤ０日と定義し、群分けの当日に実験プロトコルの設計に従って投与を開始した。投与量と投与方法は表１６に示された。細胞接種後、動物の正常な行動に対する腫瘍の影響を定期的に毎週監視した。具体的な内容：実験動物の活動、摂食と飲水状態、体重の増減状況、目、被毛及び他の異常状態。試験中に観察された臨床症状は何れも、生データに記録された。投与開始後、体重を週２回測定した。腫瘍体積を週２回測定した。腫瘍体積の計算方法：腫瘍体積（ｍｍ３）＝０．５×腫瘍長径×腫瘍短径２。監視は３５日後に終了した。接種後の３５日目に相対腫瘍阻害率（ＴＧＩ％）を計算した。計算式：ＴＧＩ％＝（１－治療群の平均相対腫瘍体積／溶媒群の平均相対腫瘍体積）×１００％。
腫瘍阻害率の結果は図３Ａ、３Ｂ及び表１７に示され、接種後の３５日目、Ｉｓｏｔｙｐｅ ＩｇＧ１群と比較して、５ｍｇ／ｋｇの単回投与下でのＬ１－Ｒ２－４－７１抗体の腫瘍阻害率は約７０．８９％であり、腫瘍重量は約６１．８１％減少した。本発明の抗体は、投与の１週間後に顕著な抗腫瘍作用が示され、３５日目に本発明の抗体群（Ｇ２群）において２匹のマウスの腫瘍が完全に退行した。図３Ｃに示されるように、マウスの体重に有意差がなかった。
実施例６ ｓｃＦｖ形態での酵母による抗ＰＤ－Ｌ１抗体へのディスプレイ
ｓｃＦｖ断片（重鎖可変領域、軽鎖可変領域及び重鎖・軽鎖可変領域のリンカー（Ｇ４Ｓ）３を含む）をコードする核酸配列を合成し、制限部位エンドヌクレアーゼによってｐＹＤ１担体（Ａｄｄｇｅｎｅ）に挿入し、エレクトロポレーターによって宿主サッカロミセスセレビシエ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＥＢＹ１００など）に移して、陽性酵母クローンを得た。上記で得られた陽性酵母クローンを選び出し、モノクローナルとして培養した。そのうち、ＡＴＥ陽性酵母クローンの表面に発現するｓｃＦＶの重鎖可変領域及び軽鎖可変領域はＡｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂと一致し、他の陽性酵母クローンの表面に発現するｓｃＦＶは表１８に示された。リンカーのアミノ酸配列はＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０６）であり、その核酸配列はＧＧＴＧＧＡＧＧＣＧＧＴＴＣＡＧＧＣＧＧＡＧＧＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＧＧＴＧＧＣＧＧＡＴＣＧ（配列番号１０７）であった。ＣＰ１１－４６を例として、そのＶＨとＶＬの核酸配列は表１３に示された。ＣＰ１１－７１を例として、そのＶＨとＶＬの核酸配列は表１３に示された。
実施例７ 酵母によってディスプレイされた抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖの抗原への結合能
フローサイトメトリーにより、酵母によってディスプレイされた抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖの抗原タンパク質ＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓ－Ｂｉｏｔｉｎへの結合能を検出した。上記酵母をそれぞれ、１ｎＭのＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓ－Ｂｉｏｔｉｎ抗原タンパク質と共に室温で１ｈインキュベートし、更にｐＨ７．４のＰＢＳで３回洗浄した後、更にＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ－ＰＥ蛍光二次抗体と共に室温で３０ｍｉｎインキュベートし、更にｐＨ７．４のＰＢＳで３回洗浄した後、新しいＰＢＳを加え、フローサイトメーターでの検出を準備した。
ＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓ－Ｂｉｏｔｉｎの調製：精製されたＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓ抗原タンパク質に、１ｍｇのタンパク質あたり２６．６μＬの１０ｎＭのＤＭＳＯで調製したｂｉｏｔｉｎ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｂ４５０１－１Ｇ）を加え、室温で２ｈインキュベートした後、ｐＨ７．４のＰＢＳで透析した。
図４に示されるように、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖ（ＣＰ１１－３６、ＣＰ１１－４６、ＣＰ１１－７１、ＣＰ１４－１６及びＣＰ１４－８０）の、ＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓ－Ｂｉｏｔｉｎ抗原タンパク質への結合能は、陽性対照ＡＴＥ ｓｃＦＶよりも明らかに優れ、陽性対照ＡＴＥ ｓｃＦＶと比較して、本発明の抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦＶ（ＣＰ－１１－４７、ＣＰ－１１－５５、ＣＰ２１－８、ＣＰ２１－４７及びＣＰ２２－３４）の、ＰＤ－Ｌ１－Ｈｉｓ－Ｂｉｏｔｉｎ抗原タンパク質への結合能は実質的に同じであった。

Claims (21)

  1. ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、且つ、
    （ａ）Ｘ１５Ｘ１６Ｘ１７Ｘ１８Ｘ１９ＤＳＷＩＨに示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１であって、Ｘ１５はＧ、Ｓ又はＮ、Ｘ１６はＦ、Ｗ、Ｌ又はＳ、Ｘ１７はＴ、Ｓ、Ａ、Ｒ又はＨ、Ｘ１８はＦ、Ｌ、Ｔ又はＰ、Ｘ１９はＳ、Ｋ、Ｒ又はＡであるＨＣＤＲ１、及び／又は
    （ｂ）ＧＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＸ２０Ｘ２１Ｘ２２Ｘ２３を含むＨＣＤＲ２であって、Ｘ２０はＳ、Ｄ、Ｈ、Ｇ、Ｐ又はＹ、Ｘ２１はＶ、Ｆ、Ｌ、Ｍ又はＹ、Ｘ２２はＫ、Ｒ、Ｇ、Ｓ、Ｖ又はＨ、Ｘ２３はＧ、Ｈ、Ｄ、Ｑ、Ｓ又はＡであるＨＣＤＲ２、及び／又は
    （ｃ）ＲＨＷＰＧＧＸ２４Ｘ２５Ｘ２６を含むＨＣＤＲ３であって、Ｘ２４はＦ又はＬ、Ｘ２５はＤ又はＬ、Ｘ２６はＹ又はＰであるＨＣＤＲ３、及び／又は
    （ｄ）Ｘ１ＡＳＱＸ２ＩＸ３Ｘ４Ｘ５ＬＸ６を含むＬＣＤＲ１であって、Ｘ１はＬ、Ｑ又はＲ、Ｘ２はＤ、Ｔ又はＧ、Ｘ３はＧ又はＳ、Ｘ４はＫ、Ｔ、又はＳ、Ｘ５はＨ、Ｗ、Ｆ又はＹ、Ｘ６はＮ又はＡであるＬＣＤＲ１、及び／又は
    （ｅ）Ｘ７ＡＳＸ８ＬＸ９Ｘ１０を含むＬＣＤＲ２であって、Ｘ７はＡ又はＧ、Ｘ８はＴ、Ｎ、Ｓ又はＲ、Ｘ９はＱ又はＫ、Ｘ１０はＳ又はＴであるＬＣＤＲ２、及び／又は
    （ｆ）ＱＱＸ１１Ｘ１２Ｘ１３ＴＰＸ１４Ｔを含むＬＣＤＲ３であって、Ｘ１１はＹ又はＳ、Ｘ１２はＹ又はＦ、Ｘ１３はＳ又はＴ、Ｘ１４はＲ又はＹであるＬＣＤＲ３を含む、
    ことを特徴とする抗体又は抗原結合断片。
  2. 前記ＨＣＤＲ１は、配列番号１～６の何れか１項に示されるアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号７～１６の何れか１項に示されるアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号１７又は１８に示されるアミノ酸配列を含む、
    ことを特徴とする請求項１に記載の抗体又は抗原結合断片。
  3. 前記ＬＣＤＲ１は、配列番号１９～２３の何れか１項に示されるアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号２４～２７の何れか１項に示されるアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３は、配列番号２８～３１の何れか１項に示されるアミノ酸配列を含む、
    ことを特徴とする請求項１又は２に記載の抗体又は抗原結合断片。
  4. 前記抗体又は抗原結合断片は、少なくとも配列番号１に示されるＨＣＤＲ１、配列番号８に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ３、配列番号１９に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２４に示されるＬＣＤＲ２及び配列番号２８に示されるＬＣＤＲ３を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片は、少なくとも配列番号１に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１１に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ３、配列番号１９に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２４に示されるＬＣＤＲ２及び配列番号２８に示されるＬＣＤＲ３を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片は、少なくとも配列番号１に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１６に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ３、配列番号１９に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２４に示されるＬＣＤＲ２及び配列番号２８に示されるＬＣＤＲ３を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片は、少なくとも配列番号１に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１６に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ３、配列番号２０に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２５に示されるＬＣＤＲ２及び配列番号２９に示されるＬＣＤＲ３を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片は、少なくとも配列番号１に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１６に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ３、配列番号２１に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ２及び配列番号３０に示されるＬＣＤＲ３を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片は、少なくとも配列番号１に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１６に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ３、配列番号２２に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２７に示されるＬＣＤＲ２及び配列番号３１に示されるＬＣＤＲ３を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片は、少なくとも配列番号１に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１６に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ３、配列番号２３に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ２及び配列番号３０に示されるＬＣＤＲ３を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片は、少なくとも配列番号１に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１６に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ３、配列番号１９に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２６に示されるＬＣＤＲ２及び配列番号３１に示されるＬＣＤＲ３を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片は、少なくとも配列番号１に示されるＨＣＤＲ１、配列番号８に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ３、配列番号１９に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２４に示されるＬＣＤＲ２及び配列番号２８に示されるＬＣＤＲ３を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片は、少なくとも配列番号１に示されるＨＣＤＲ１、配列番号９に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ３、配列番号１９に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２４に示されるＬＣＤＲ２及び配列番号２８に示されるＬＣＤＲ３を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片は、少なくとも配列番号１に示されるＨＣＤＲ１、配列番号１０に示されるＨＣＤＲ２、配列番号１７に示されるＨＣＤＲ３、配列番号１９に示されるＬＣＤＲ１、配列番号２４に示されるＬＣＤＲ２及び配列番号２８に示されるＬＣＤＲ３を含む、
    ことを特徴とする請求項１～３の何れか１項に記載の抗体又は抗原結合断片。
  5. 前記抗体又は抗原結合断片の重鎖は、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４を更に含み、重鎖ＦＲ１は、配列番号３２に示される配列、配列番号３２に示される配列と少なくとも９０％の同一性を有する配列、又は配列番号３２に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片の重鎖ＦＲ２は、配列番号３３に示される配列、配列番号３３に示される配列と少なくとも９０％の同一性を有する配列、又は配列番号３３に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片の重鎖ＦＲ３は、配列番号３４に示される配列、配列番号３４に示される配列と少なくとも９０％の同一性を有する配列、又は配列番号３４に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片の重鎖ＦＲ４は、配列番号３５に示される配列、配列番号３５に示される配列と少なくとも９０％の同一性を有する配列、又は配列番号３５に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、
    ことを特徴とする請求項１～４の何れか１項に記載の抗体又は抗原結合断片。
  6. 前記抗体又は抗原結合断片の重鎖ＦＲ１は、配列番号３２に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の重鎖ＦＲ２は、配列番号３３に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の重鎖ＦＲ３は、配列番号３４に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の重鎖ＦＲ４は、配列番号３５に示される配列を含む、
    ことを特徴とする請求項５に記載の抗体又は抗原結合断片。
  7. 前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖は、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４を更に含み、軽鎖ＦＲ１は、配列番号５１～５６の何れか１項に示される配列、配列番号５１～５６の何れか１項に示される配列と少なくとも９０％の同一性を有する配列、又は配列番号５１～５６に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ２は、配列番号５７～６０の何れか１項に示される配列、配列番号５７～６０の何れか１項に示される配列と少なくとも９０％の同一性を有する配列、又は配列番号５７～６０の何れか１項に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ３は、配列番号６１～６４の何れか１項に示される配列、配列番号６１～６４の何れか１項に示される配列と少なくとも９０％の同一性を有する配列、又は配列番号６１～６４の何れか１項に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ４は、配列番号６５～６７の何れか１項に示される配列、配列番号６５～６７の何れか１項に示される配列と少なくとも９０％の同一性を有する配列、又は配列番号６５～６７の何れか１項に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、
    ことを特徴とする請求項１～６の何れか１項に記載の抗体又は抗原結合断片。
  8. 前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ１は、配列番号５１に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ２は、配列番号５７に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ３は、配列番号６１に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ４は、配列番号６５に示される配列を含み、又は
    前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ１は、配列番号５２に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ２は、配列番号５８に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ３は、配列番号６２に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ４は、配列番号６６に示される配列を含み、又は
    前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ１は、配列番号５３に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ２は、配列番号５９に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ３は、配列番号６３に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ４は、配列番号６７に示される配列を含み、又は
    前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ１は、配列番号５４に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ２は、配列番号６０に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ３は、配列番号６４に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ４は、配列番号６７に示される配列を含み、又は
    前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ１は、配列番号５５に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ２は、配列番号５９に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ３は、配列番号６３に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ４は、配列番号６７に示される配列を含み、又は
    前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ１は、配列番号５６に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ２は、配列番号５７に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ３は、配列番号６１に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖ＦＲ４は、配列番号６７に示される配列を含む、
    ことを特徴とする請求項７に記載の抗体又は抗原結合断片。
  9. 前記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号３６～５０の何れか１項に示される配列、配列番号３６～５０の何れか１項に示される配列と少なくとも８０％の同一性を有する配列、又は配列番号３６～５０の何れか１項に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号６８～７３の何れか１項に示される配列、配列番号６８～７３の何れか１項に示される配列と少なくとも８０％の同一性を有する配列、又は配列番号６８～７３の何れか１項に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、
    ことを特徴とする請求項１～８の何れか１項に記載の抗体又は抗原結合断片。
  10. 前記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号３６～５０の何れか１項に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号６８～７３の何れか１項に示される配列を含む、
    ことを特徴とする請求項１～９の何れか１項に記載の抗体又は抗原結合断片。
  11. 前記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号３６～５０の何れか１項に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号６８～７３の何れか１項に示される配列を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号３６に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号６８に示される配列を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号３６に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号６９に示される配列を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号３６に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号７０に示される配列を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号３６に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号７１に示される配列を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号３６に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号７２に示される配列を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号３６に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号７３に示される配列を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号３７に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号６８に示される配列を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号３８に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号６８に示される配列を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号３９に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号６８に示される配列を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号４０に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号６８に示される配列を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片の重鎖可変領域は、配列番号４１に示される配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖可変領域は、配列番号６８に示される配列を含む、
    ことを特徴とする請求項１～１０の何れか１項に記載の抗体又は抗原結合断片。
  12. 前記抗体又は抗原結合断片の重鎖定常領域は、配列番号７４又は７５に示されるアミノ酸配列、又は配列番号７４又は７５に示される配列と少なくとも８０％の同一性を有する配列、又は配列番号７４又は７５に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は
    前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖定常領域は、配列番号７６に示されるアミノ酸配列、又は配列番号７６に示される配列と少なくとも８０％の同一性を有する配列、又は配列番号７６に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、
    ことを特徴とする請求項１～１１の何れか１項に記載の抗体又は抗原結合断片。
  13. 前記抗体又は抗原結合断片の重鎖定常領域は、配列番号７４に示されるアミノ酸配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖定常領域は、配列番号７６に示されるアミノ酸配列を含み、又は
    前記抗体又は抗原結合断片の重鎖定常領域は、配列番号７５に示されるアミノ酸配列を含み、前記抗体又は抗原結合断片の軽鎖定常領域は、配列番号７６に示されるアミノ酸配列を含む、
    ことを特徴とする請求項１～１２の何れか１項に記載の抗体又は抗原結合断片。
  14. 前記抗体の重鎖は、配列番号７７～９１の何れか１項に示されるアミノ酸配列、配列番号７７～９１の何れか１項に示される配列と少なくとも８０％の同一性を有する配列、又は配列番号７７～９１の何れか１項に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は
    前記抗体の軽鎖は、配列番号９２～９７の何れか１項に示されるアミノ酸配列、配列番号９２～９７の何れか１項に示される配列と少なくとも８０％の同一性を有する配列、又は配列番号９２～９７の何れか１項に示される配列と比較して１つ又は複数の保存的アミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、
    ことを特徴とする抗体又は抗原結合断片。
  15. 前記抗体の重鎖は、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含み、前記抗体の軽鎖は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含み、又は
    前記抗体の重鎖は、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含み、前記抗体の軽鎖は、配列番号９３に示されるアミノ酸配列を含み、又は
    前記抗体の重鎖は、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含み、前記抗体の軽鎖は、配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含み、又は
    前記抗体の重鎖は、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含み、前記抗体の軽鎖は、配列番号９５に示されるアミノ酸配列を含み、又は
    前記抗体の重鎖は、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含み、前記抗体の軽鎖は、配列番号９６に示されるアミノ酸配列を含み、又は
    前記抗体の重鎖は、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含み、前記抗体の軽鎖は、配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含み、又は
    前記抗体の重鎖は、配列番号７８に示されるアミノ酸配列を含み、前記抗体の軽鎖は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含み、又は
    前記抗体の重鎖は、配列番号７９に示されるアミノ酸配列を含み、前記抗体の軽鎖は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含み、又は
    前記抗体の重鎖は、配列番号８０に示されるアミノ酸配列を含み、前記抗体の軽鎖は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含み、又は
    前記抗体の重鎖は、配列番号８１に示されるアミノ酸配列を含み、前記抗体の軽鎖は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含み、又は
    前記抗体の重鎖は、配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含み、前記抗体の軽鎖は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含む、
    ことを特徴とする請求項１４に記載の抗体又は抗原結合断片。
  16. 請求項１～１５の何れか１項に記載の抗体又は抗原結合断片、及び薬学的に許容される添加剤を含む、
    ことを特徴とする医薬組成物。
  17. 請求項１～１５の何れか１項に記載の抗体又は抗原結合断片をコードする、
    ことを特徴とする核酸分子。
  18. 請求項１７に記載の核酸分子を含む、
    ことを特徴とする担体又は宿主細胞。
  19. Ｔ細胞機能障害疾患を治療又は改善するための方法であって、
    前記方法は、患者へ有効用量の請求項１～１５の何れか１項に記載の抗体又は抗原結合断片を投与することを含む、
    ことを特徴とする方法。
  20. 前記Ｔ細胞機能障害疾患は、細菌、ウイルス、真菌又は原生動物により引き起こされる感染症、及び乳がん、肺がん、結腸がん、卵巣がん、黒色腫、膀胱がん、腎臓がん、肝臓がん、唾液腺がん、胃がん、神経膠腫、甲状腺がん、胸腺がん、上皮がん、頭部がん、頸部がん、膵臓がんからなる群から選ばれるがんと腫瘍を含むが、これらに限定されない、
    ことを特徴とする請求項１９に記載の方法。
  21. 請求項１～１５の何れか１項に記載の抗体又は抗原結合断片を含む、
    ことを特徴とする診断又は予後用の試薬キット。
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