TW202214698A - 抗pd-l1抗體及其應用 - Google Patents

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梁秋蓮
金泉 俞
勝峰 李
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Abstract

本發明提供了抗PD-L1抗體及其應用，本發明抗體或抗原結合片段可以特異性結合PD-L1，阻斷PD-1與PD-L1之間的相互作用。本發明抗體或抗原結合片段可有助於免疫系統清除腫瘤細胞，也可以用於腫瘤或癌症的診斷和預後。

Description

抗PD-L1抗體及其應用
本發明屬於生物醫藥領域，尤其涉及抗PD-L1抗體及其應用。
程式性死亡受體-1(PD-1)為一種I型跨膜糖蛋白，分子量約為55 kDa。PD-1是表達在活化的T細胞、B細胞和髓樣細胞上表達的免疫抑制性受體，屬於CD28免疫球蛋白超家族成員。作為PD-1的配體，PD-L1也是一種I型跨膜糖蛋白，其分佈廣泛：表達在B細胞、T細胞、樹突狀細胞、巨噬細胞等抗原呈遞細胞的表面，以及腫瘤組織中。
PD-1與PD-L1相互作用會負調節抗原受體信號轉導，減弱T細胞應答。迄今為止，大量研究顯示PD-1和PD-L1之間的相互作用會導致滲入腫瘤的淋巴細胞減少、T細胞受體介導的增殖減少和癌細胞的免疫逃避。阻斷PD-1與PD-L1之間的相互作用可增加T細胞增殖和細胞因數產生，提高腫瘤特異性CD8+T細胞的免疫性，有助於免疫系統清除腫瘤細胞。
PD-1/PD-L1途徑是癌症治療中抗體療法的靶標。
本發明提供了抗PD-L1抗體或抗原結合片段，這些抗體或抗原結合片段可以特異性結合PD-L1，阻斷PD-1與PD-L1之間的相互作用，有助於免疫系統清除腫瘤細胞。
一些實施方案提供了抗PD-L1抗體或抗原結合片段，所述抗體或抗原結合片段特異性結合PD-L1，並且包含： （a）HCDR1，其包含X 15X 16X 17X 18X 19DSWIH所示氨基酸序列，X 15為G、S或N，X 16為F、W、L或S，X 17為T、S、A、R或H，X 18為F、L、T或P，X 19為S、K、R或A；和/或 （b）HCDR2，其包含GWISPYGGSTYYADX 20X 21X 22X 23，X 20為S、D、H、G、P或Y，X 21為V、F、L、M或Y，X 22為K、R、G、S、V或H，X 23為G、H、D、Q、S或A；和/或 （c）HCDR3，其包含RHWPGGX 24X 25X 26，X 24為F或L，X 25為D或L，X 26為Y或P。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段特異性結合PD-L1，並且包含： （a）HCDR1，其包含X 15X 16X 17X 18X 19DSWIH所示氨基酸序列，X 15為G、S或N，X 16為F、W、L或S，X 17為T、S、A、R或H，X 18為F、L、T或P，X 19為S、K、R或A； （b）HCDR2，其包含GWISPYGGSTYYADX 20X 21X 22X 23，X 20為S、D、H、G、P或Y，X 21為V、F、L、M或Y，X 22為K、R、G、S、V或H，X 23為G、H、D、Q、S或A；和 （c）HCDR3，其包含RHWPGGX 24X 25X 26，X 24為F或L，X 25為D或L，X 26為Y或P。
在一些實施方案中，HCDR1包含SEQ ID NO:1-6中任一項所示的氨基酸序列或其有單一位點取代、缺失或插入的變體。在一些實施方案中，HCDR2包含SEQ ID NO:7-16中任一項所示的氨基酸序列或其有單一位點取代、缺失或插入的變體。在一些實施方案中，HCDR3包含SEQ ID NO:17或18所示的氨基酸序列或其有單一位點取代、缺失或插入的變體。在一些實施方案中，所述取代變體為保守氨基酸取代變體。
在一些實施方案中，HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
在一些實施方案中，HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
在一些實施方案中，HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
在一些實施方案中，HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
在一些實施方案中，HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
在一些實施方案中，HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
在一些實施方案中，HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
在一些實施方案中，HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
在一些實施方案中，HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
在一些實施方案中，HCDR1包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
在一些實施方案中，HCDR1包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
在一些實施方案中，HCDR1包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
在一些實施方案中，HCDR1包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
在一些實施方案中，HCDR1包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
在一些實施方案中，HCDR1包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，HCDR2包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列，HCDR3包含SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列。
一些實施方案中提供了抗體或抗原結合片段，所述抗體或抗原結合片段特異性結合PD-L1，並且包含： （a）HCDR1，其包含X 15X 16X 17X 18X 19DSWIH所示氨基酸序列，X 15為G、S或N，X 16為F、W、L或S，X 17為T、S、A、R或H，X 18為F、L、T或P，X 19為S、K、R或A；和/或 （b）HCDR2，其包含GWISPYGGSTYYADX 20X 21X 22X 23，X 20為S、D、H、G、P或Y，X 21為V、F、L、M或Y，X 22為K、R、G、S、V或H，X 23為G、H、D、Q、S或A；和/或 （c）HCDR3，其包含RHWPGGX 24X 25X 26，X 24為F或L，X 25為D或L，X 26為Y或P；和/或 （d）LCDR1，其包含X 1ASQX 2IX 3X 4X 5LX 6，X 1为L、Q或R，X 2为D、T或G， X 3为G或S，X 4为K、T、或S，X 5为H、W、F或Y，X 6为N或A；和/或 （e）LCDR2，其包含X 7ASX 8LX 9X 10，X 7为A或G，X 8为T、N、S或R，X 9为Q或K，X 10为S或T；和/或 （f）LCDR3，其包含QQX 11X 12X 13TPX 14T，X 11为Y或S，X 12为Y或F，X 13为S或T，X 14为R或Y。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段特異性結合PD-L1，並且包含： （a）HCDR1，其包含X 15X 16X 17X 18X 19DSWIH所示氨基酸序列，X 15为G、S或N，X 16为F、W、L或S，X 17为T、S、A、R或H，X 18为F、L、T或P，X 19为S、K、R或A； （b）HCDR2，其包含GWISPYGGSTYYADX 20X 21X 22X 23，X 20为S、D、H、G、P或Y，X 21为V、F、L、M或Y，X 22为K、R、G、S、V或H，X 23为G、H、D、Q、S或A； （c）HCDR3，其包含RHWPGGX 24X 25X 26，X 24为F或L，X 25为D或L，X 26为Y或P； （d）LCDR1，其包含X 1ASQX 2IX 3X 4X 5LX 6，X 1为L、Q或R，X 2为D、T或G， X 3为G或S，X 4为K、T、或S，X 5为H、W、F或Y，X 6为N或A； （e）LCDR2，其包含X 7ASX 8LX 9X 10，X 7为A或G，X 8为T、N、S或R，X 9为Q或K，X 10为S或T；和 （f）LCDR3，其包含QQX 11X 12X 13TPX 14T，X 11为Y或S，X 12为Y或F，X 13为S或T，X 14为R或Y。
在一些實施方案中，LCDR1包含SEQ ID NO:19-23中任一項所示的氨基酸序列或其有單一位點取代、缺失或插入的變體。在一些實施方案中，LCDR2包含SEQ ID NO:24-27中任一項所示的氨基酸序列或其有單一位點取代、缺失或插入的變體。在一些實施方案中，LCDR3包含SEQ ID NO:28-31中任一項所示的氨基酸序列或其有單一位點取代、缺失或插入的變體。在一些實施方案中，所述取代變體為保守氨基酸取代變體。
在一些實施方案中，LCDR1包含SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列，LCDR3包含SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列。
在一些實施方案中，LCDR1包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，LCDR3包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列。
在一些實施方案中，LCDR1包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列，LCDR3包含SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列。
在一些實施方案中，LCDR1包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列，LCDR3包含SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列。
在一些實施方案中，LCDR1包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列，LCDR3包含SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列。
在一些實施方案中，LCDR1包含SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列，LCDR2包含SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列，LCDR3包含SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列。
一些實施方案中提供了抗體或抗原結合片段，所述抗體或抗原結合片段特異性結合PD-L1，並且包含：（a）HCDR1，其包含SEQ ID NO:1-6中任一項所示的氨基酸序列或其有單一位點取代、缺失或插入的變體；和/或（b）HCDR2，其包含SEQ ID NO:7-16中任一項所示的氨基酸序列或其有單一位點取代、缺失或插入的變體；和/或（c）HCDR3，其包含SEQ ID NO:17或18所示的氨基酸序列或其有單一位點取代、缺失或插入的變體；和/或（d）LCDR1，其包含SEQ ID NO:19-23中任一項所示的氨基酸序列或其有單一位點取代、缺失或插入的變體；和/或（e）LCDR2，其包含SEQ ID NO:24-27中任一項所示的氨基酸序列或其有單一位點取代、缺失或插入的變體；和/或（f）LCDR3，其包含SEQ ID NO:28-31中任一項所示的氨基酸序列或其有單一位點取代、缺失或插入的變體。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段特異性結合PD-L1，所述抗體或抗原結合片段至少包含如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:16所示的HCDR2、如SEQ ID NO:17所示的HCDR3、如SEQ ID NO:19-23中任一項所示的LCDR1、如SEQ ID NO:24-27中任一項所示的LCDR2、如SEQ ID NO:28-31中任一項所示的LCDR3中的一個、二個、三個、四個、五個或全部。
在一些實施方案中，抗體或抗原結合片段特異結合PD-L1，所述抗體或抗原結合片段至少包含如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:16所示的HCDR2、如SEQ ID NO:17所示的HCDR3、如SEQ ID NO:19所示的LCDR1、如SEQ ID NO:24所示的LCDR2和如SEQ ID NO:28所示的LCDR3。
在一些實施方案中，抗體或抗原結合片段特異結合PD-L1，所述抗體或抗原結合片段至少包含如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:16所示的HCDR2、如SEQ ID NO:17所示的HCDR3、如SEQ ID NO:20所示的LCDR1、如SEQ ID NO:25所示的LCDR2和如SEQ ID NO:29所示的LCDR3。
在一些實施方案中，抗體或抗原結合片段特異結合PD-L1，所述抗體或抗原結合片段至少包含如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:16所示的HCDR2、如SEQ ID NO:17所示的HCDR3、如SEQ ID NO:21所示的LCDR1、如SEQ ID NO:26所示的LCDR2和如SEQ ID NO:30所示的LCDR3。
在一些實施方案中，抗體或抗原結合片段特異結合PD-L1，所述抗體或抗原結合片段至少包含如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:16所示的HCDR2、如SEQ ID NO:17所示的HCDR3、如SEQ ID NO:22所示的LCDR1、如SEQ ID NO:27所示的LCDR2和如SEQ ID NO:31所示的LCDR3。
在一些實施方案中，抗體或抗原結合片段特異結合PD-L1，所述抗體或抗原結合片段至少包含如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:16所示的HCDR2、如SEQ ID NO:17所示的HCDR3、如SEQ ID NO:23所示的LCDR1、如SEQ ID NO:26所示的LCDR2和如SEQ ID NO:30所示的LCDR3。
在一些實施方案中，抗體或抗原結合片段特異結合PD-L1，所述抗體或抗原結合片段至少包含如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:16所示的HCDR2、如SEQ ID NO:17所示的HCDR3、如SEQ ID NO:19所示的LCDR1、SEQ ID NO:26所示的LCDR2和如SEQ ID NO:31所示的LCDR3。
在一些實施方案中，抗體或抗原結合片段特異結合PD-L1，所述抗體或抗原結合片段至少包含如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:7所示的HCDR2、如SEQ ID NO:17所示的HCDR3、如SEQ ID NO:19所示的LCDR1、如SEQ ID NO:24所示的LCDR2和如SEQ ID NO:28所示的LCDR3。
在一些實施方案中，抗體或抗原結合片段特異結合PD-L1，所述抗體或抗原結合片段至少包含如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:8所示的HCDR2、如SEQ ID NO:17所示的HCDR3、如SEQ ID NO:19所示的LCDR1、如SEQ ID NO:24所示的LCDR2和如SEQ ID NO:28所示的LCDR3。
在一些實施方案中，抗體或抗原結合片段特異結合PD-L1，所述抗體或抗原結合片段至少包含如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:9所示的HCDR2、如SEQ ID NO:17所示的HCDR3、如SEQ ID NO:19所示的LCDR1、如SEQ ID NO:24所示的LCDR2和如SEQ ID NO:28所示的LCDR3。
在一些實施方案中，抗體或抗原結合片段特異結合PD-L1，所述抗體或抗原結合片段至少包含如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:10所示的HCDR2、如SEQ ID NO:17所示的HCDR3、如SEQ ID NO:19所示的LCDR1、如SEQ ID NO:24所示的LCDR2和如SEQ ID NO:28所示的LCDR3。
在一些實施方案中，抗體或抗原結合片段特異結合PD-L1，所述抗體或抗原結合片段至少包含如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:11所示的HCDR2、如SEQ ID NO:17所示的HCDR3、如SEQ ID NO:19所示的LCDR1、如SEQ ID NO:24所示的LCDR2和如SEQ ID NO:28所示的LCDR3。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的重鏈還包括FR1、FR2、FR3、FR4，其中重鏈FR1包含如SEQ ID NO:32所示的序列，與SEQ ID NO:32所示序列具有至少90%同一性的序列，或與SEQ ID NO:32所示序列相比具有一個或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或
所述抗體或抗原結合片段的重鏈FR2包含如SEQ ID NO:33所示的序列，與SEQ ID NO:33所示序列具有至少90%同一性的序列，或與SEQ ID NO:33所示序列相比具有一個或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或
所述抗體或抗原結合片段的重鏈FR3包含如SEQ ID NO:34所示的序列，與SEQ ID NO:34所示序列具有至少90%同一性的序列，或與SEQ ID NO:34所示序列相比具有一個或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或
所述抗體或抗原結合片段的重鏈FR4包含如SEQ ID NO:35所示的序列，與SEQ ID NO:35所示序列具有至少90%同一性的序列，或與SEQ ID NO:35所示序列相比具有一個或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的重鏈FR1包含如SEQ ID NO:32所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的重鏈FR2包含如SEQ ID NO:33所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的重鏈FR3包含如SEQ ID NO:34所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的重鏈FR4包含如SEQ ID NO:35所示的序列。
在一些實施方案中，所述重鏈可變區（VH）包含結構FR1-HCDR1-FR2-HCDR2-FR3-HCDR3-FR4。在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:36-50中任一項所示的序列，與SEQ ID NO:36-50中任一項所示序列具有至少80%同一性的序列，或與SEQ ID NO:36-50中任一項所示序列相比具有一個或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈還包括FR1、FR2、FR3、FR4，其中輕鏈FR1包含如SEQ ID NO:51-56中任一項所示的序列，與SEQ ID NO:51-56中任一項所示序列具有至少90%同一性的序列，或與SEQ ID NO:51-56中任一項所示序列相比具有一個或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或
所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR2包含如SEQ ID NO:57-60中任一項所示的序列，與SEQ ID NO:57-60中任一項所示序列具有至少90%同一性的序列，或與SEQ ID NO:57-60中任一項所示序列相比具有一個或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或
所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR3包含如SEQ ID NO:61-64中任一項所示的序列，與SEQ ID NO:61-64中任一項所示序列具有至少90%同一性的序列，或與SEQ ID NO:61-64中任一項所示序列相比具有一個或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或
所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR4包含如SEQ ID NO:65-67中任一項所示的序列，與SEQ ID NO:65-67中任一項所示序列具有至少90%同一性的序列，或與SEQ ID NO:65-67中任一項所示序列相比具有一個或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR1包含如SEQ ID NO:51所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR2包含如SEQ ID NO:57所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR3包含如SEQ ID NO:61所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR4包含如SEQ ID NO:65所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR1包含如SEQ ID NO:52所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR2包含如SEQ ID NO:58所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR3包含如SEQ ID NO:62所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR4包含如SEQ ID NO:66所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR1包含如SEQ ID NO:53所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR2包含如SEQ ID NO:59所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR3包含如SEQ ID NO:63所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR4包含如SEQ ID NO:67所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR1包含如SEQ ID NO:54所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR2包含如SEQ ID NO:60所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR3包含如SEQ ID NO:64所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR4包含如SEQ ID NO:67所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR1包含如SEQ ID NO:55所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR2包含如SEQ ID NO:59所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR3包含如SEQ ID NO:63所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR4包含如SEQ ID NO:67所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR1包含如SEQ ID NO:56所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR2包含如SEQ ID NO:57所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR3包含如SEQ ID NO:61所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR4包含如SEQ ID NO:67所示的序列。
在一些實施方案中，所述輕鏈可變區（VL）包含結構FR1-LCDR1-FR2-LCDR2-FR3-LCDR3-FR4。在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:68-73中任一項所示的序列，與SEQ ID NO:68-73中任一項所示序列具有至少80%同一性的序列，或與SEQ ID NO:68-73中任一項所示序列相比具有一個或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:36-50中任一項所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:68-73中任一項所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:36所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:68所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:36所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:69所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:36所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:70所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:36所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:71所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:36所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:72所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:36所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:73所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:37所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:68所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:38所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:68所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:39所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:68所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:40所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:68所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:41所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:68所示的序列。
在一些實施方案中，抗體或抗原結合片段還包含重鏈恆定區、輕鏈恆定區、Fc區或其組合。在一些實施方案中，輕鏈恆定區是κ或λ鏈恆定區。在一些實施方案中，抗體或其片段是IgG、IgM、IgA、IgE或IgD其中一種同種型。在一些實施方案中，同種型是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。在一些實施方案中，抗體或抗原結合片段是鼠源抗體、嵌合抗體、人源化抗體或全人源化抗體。
在一些實施方案中，Fc是變體Fc區。在一些實施方案中，相對於親本Fc區，變體Fc區具有一個或多個氨基酸修飾，如取代、缺失或插入。在一些實施方案中，相對於親本Fc區活性，Fc區的氨基酸修飾改變了效應功能活性。在一些實施方案中，變體Fc區可以具有改變的（即，增加的或降低的）抗體依賴性細胞毒性（ADCC）、補體介導的細胞毒性（CDC）、吞噬作用、調理作用或細胞結合。在一些實施方案中，相對於親本Fc區，Fc區氨基酸修飾可以改變變體Fc區對FcγR（Fcγ受體）的親和力。在一些實施方案中，所述Fc區來源於IgG1或IgG4。在一些實施方案中，Fc區突變是N297A。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段為分離的抗體或抗原結合片段。在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段為scFV、Fab、F(ab) 2或IgG1。在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段為單克隆抗體。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的重鏈恆定區包含氨基酸序列如SEQ ID NO:74或75所示的序列，或與SEQ ID NO:74或75所述序列具有至少80%同一性的序列，或與SEQ ID NO:74或75所示序列相比具有一個或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或
所述抗體或抗原結合片段的輕鏈恆定區包含氨基酸序列如SEQ ID NO:76所示的序列，或與SEQ ID NO:76所述序列具有至少80%同一性的序列，或與SEQ ID NO:76所示序列相比具有一個或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列。
在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的重鏈恆定區包含氨基酸序列如SEQ ID NO:74所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈恆定區包含氨基酸序列如SEQ ID NO:76所示的序列。在一些實施方案中，所述抗體或抗原結合片段的重鏈恆定區包含氨基酸序列如SEQ ID NO:75所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈恆定區包含氨基酸序列如SEQ ID NO:76所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77-91中任一項所示的序列，與SEQ ID NO:77-91中任一項所示序列具有至少80%同一性的序列，或與SEQ ID NO:77-91中任一項所示序列相比具有一或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或
所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92-97中任一項所示的序列，與SEQ ID NO:92-97中任一項所示序列具有至少80%同一性的序列，或與SEQ ID NO:92-97中任一項所示序列相比具有一或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列。
在一些實施方案中，所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:93所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:94所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:95所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:96所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:97所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:78所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:79所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:80所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:81所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:82所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示的序列。
在一個實施方案中，所述抗體或抗原結合片段為單克隆抗體(包括全長單克隆抗體)、多克隆抗體或多特異性抗體或抗原結合片段(例如雙特異性抗體或抗原結合片段)。
在一些實施方案中，所述抗體具有兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈，Fc區配對形成二硫鍵。
在一個實施方案中，所述抗體片段（抗原結合片段）為Fab、Fv或scFv抗體。
本發明還提供了一種編碼所述的抗體或抗原結合片段的核酸分子。在一些實施方案中，所述核酸分子為分離的核酸分子。
本發明還提供了一種包含所述的核酸分子的載體。在一些實施方案中，所述載體為分離的載體。在一些實施方案中，包含所述核酸分子的載體為核酸片段、質粒、噬菌體或病毒。
本發明還提供了一種包含所述核酸分子或載體的宿主細胞。在一些實施方案中，所述宿主細胞為分離的宿主細胞。在一些實施方案中，所述宿主細胞為CHO細胞、HEK細胞（如HEK293F細胞）、BHK細胞、Cos1細胞、Cos7細胞、CV1細胞或鼠L細胞。
本發明還提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物包含上述的抗體或抗原結合片段，以及藥學上可接受的輔料。
本發明還提供了治療方法和用途。在一些實施方案中，提供了用於治療或改善T細胞功能障礙病症的方法，所述方法包括向患者施用有效劑量的所述抗體或抗原結合片段。在一些實施方案中，提供了所述抗體或抗原結合片段在用於治療或改善T細胞功能障礙病症中的應用。在一些實施方案中，提供了所述抗體或抗原結合片段在製備用於治療或改善T細胞功能障礙的藥物中的應用。
在一些實施方案中，所述T細胞功能障礙病症包括但不限於由細菌、病毒、真菌或原生動物導致的感染，以及癌症和腫瘤。在一些實施方案中，所述癌症和腫瘤包括但不限於乳腺癌、肺癌、結腸癌、卵巢癌、黑色素瘤、膀胱癌、腎癌、肝癌、唾液腺癌、胃癌、神經膠質瘤、甲狀腺癌、胸腺癌、上皮癌、頭癌、頸癌和胰腺癌。
本發明還提供了診斷方法和用途。在一些實施方案中，提供了檢測樣品中PD-L1表達的方法，使樣品與所述抗體或抗原結合片段進行接觸，使得所述抗體或抗原結合片段結合PD-L1，並檢測其結合，即樣品中PD-L1的含量。在一些實施方案中，提供了所述抗體或抗原結合片段在製備用於診斷或預後癌症或腫瘤試劑盒中的應用。在一些實施方案中，提供了一種包含所述抗體或抗原結合片段的診斷或預後試劑盒。
本發明提供了抗PD-L1抗體或抗原結合片段及其應用，本發明抗體或抗原結合片段可以特異性結合PD-L1，阻斷PD-1與PD-L1之間的相互作用，有助於免疫系統清除腫瘤細胞。本發明抗體或抗原結合片段可以用於治療或改善T細胞功能障礙病症，也可以用於癌症或腫瘤的診斷和預後。 術語
除非另作說明，否則下列的每一個術語應當具有下文所述的含義。 定義
應當注意的是，術語「一種」實體是指一種或多種該實體，例如「一種抗體」應當被理解為一種或多種抗體，因此，術語「一種」（或「一個」）、「一種或多種」 和「至少一種」 可以在本文中互換使用。
本文所用的術語「包含」或「包括」意味著組合物和方法等包括所列舉的元素，例如組份或步驟，但不排除其它。「基本上由……組成」 意味著組合物和方法排除對組合的特徵有根本影響的其它元素，但不排除對組合物或方法無本質上影響的元素。「由……組成」意味著排除未特別列舉的元素。
術語「多肽」旨在涵蓋單數的「多肽」以及複數的「多肽」，並且是指由通過醯胺鍵（也稱為肽鍵）線性連接的氨基酸單體構成的分子。術語「多肽」是指兩個或更多個氨基酸的任何單條鏈或多條鏈，並且不涉及產物的特定長度。因此，「多肽」的定義中包括肽、二肽、三肽、寡肽、「蛋白質」、「氨基酸鏈」或用於指兩個或多個氨基酸鏈的任何其他術語，並且術語「多肽」可以用來代替上述任何一個術語，或者與上述任何一個術語交替使用。術語「多肽」也意在指多肽表達後修飾的產物，包括但不限於糖基化、乙醯化、磷酸化、醯胺化、通過已知的保護/封閉基團衍生化、蛋白水解切割或非天然發生的氨基酸修飾。多肽可以源自天然生物來源或通過重組技術產生，但其不必從指定的核酸序列翻譯所得，它可能以包括化學合成的任何方式產生。
「氨基酸」是指既含氨基又含羧基的有機化合物，比如α-氨基酸，其可直接或以前體的形式由核酸編碼。單個氨基酸由三個核苷酸(所謂的密碼子或堿基三聯體)組成的核酸編碼。每一個氨基酸由至少一個密碼子編碼。相同氨基酸由不同密碼子編碼稱為「遺傳密碼的簡並性」。氨基酸包括天然氨基酸和非天然氨基酸。天然氨基酸包括丙氨酸(三字母代碼：ala，一字母代碼：A)、精氨酸(arg，R)、天冬醯胺(asn，N)、天冬氨酸(asp，D)、半胱氨酸(cys，C)、穀氨醯胺(gln，Q)、谷氨酸(glu，E)、甘氨酸(gly，G)、組氨酸(his，H)、異亮氨酸(ile，I)、亮氨酸(leu，L)、賴氨酸(lys，K)、甲硫氨酸(met，M)、苯丙氨酸(phe，F)、脯氨酸(pro，P)、絲氨酸(ser，S)、蘇氨酸(thr，T)、色氨酸(trp，W)、酪氨酸(tyr，Y)和纈氨酸(val，V)。
「保守氨基酸取代」是指一個氨基酸殘基被另一個含有化學性質（例如電荷或疏水性）相似的側鏈（R基團）的氨基酸殘基所取代。一般而言，保守氨基酸取代不大會在實質上改變蛋白質的功能性質。含有化學性質相似側鏈的氨基酸類別的實例包括：1）脂族側鏈：甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸；2）脂族羥基側鏈：絲氨酸和蘇氨酸；3）含醯胺的側鏈：天冬醯胺和穀氨醯胺；4）芳族側鏈：苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；5）鹼性側鏈：賴氨酸、精氨酸和組氨酸；6）酸性側鏈：天冬氨酸和谷氨酸。
「框架區FR1、FR2、FR3和FR4的保守氨基酸取代」的氨基酸數目為約1個、約2個、約3個、約4個或約5個保守氨基酸取代。「VL、VH的保守氨基酸取代」的氨基酸數目為約1個、約2個、約3個、約4個、約5個、約6個、約8個、約9個、約10個、約11個、約13個、約14個、約15個保守氨基酸取代，或這些數值中的任何兩個值之間的範圍（包括終點）或其中任何值。「重鏈恆定區、輕鏈恆定區、重鏈或輕鏈的保守氨基酸取代」的氨基酸數目為約1個、約2個、約3個、約4個、約5個、約6個、約8個、約9個、約10個、約11個、約13個、約14個、約15個、約18個、約19個、約22個、約24個、約25個、約29個、約31個、約35個、約38個、約41個、約45個保守氨基酸取代，或這些數值中的任何兩個值之間的範圍（包括端點）或其中任何值。
本發明中關於細胞、核酸、多肽、抗體等所使用的術語「分離的」，例如「分離的」DNA、RNA、多肽、抗體是指分別於細胞天然環境中的其它組分如DNA或RNA中的一種或多種所分離的分子。本發明使用的術語「分離的」還指當通過重組DNA技術產生時基本上不含細胞材料、病毒材料或細胞培養基的核酸或肽，或化學合成時的化學前體或其他化學品。此外，「分離的核酸」意在包括不以天然狀態存在的核酸片段，並且不會以天然狀態存在。術語「分離的」在本發明中也用於指從其他細胞蛋白質或組織分離的細胞或多肽。分離的多肽意在包括純化的和重組的多肽。分離的多肽、抗體等通常通過至少一個純化步驟製備。在一些實施方案中，分離的核酸、多肽、抗體等的純度至少為約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、約95%、約99%，或這些數值中的任何兩個值之間的範圍（包括端點）或其中任何值。
術語「重組」涉及多肽或多聚核苷酸，意指天然不存在的多肽或多聚核苷酸的形式，不受限制的實施例可以通過組合產生通常並不存在的多聚核苷酸或多肽。
「同源性」或「同一性」或「相似性」是指兩個肽之間或兩個核酸分子之間的序列相似性。可以通過比較每個序列中可以比對的位置來確定同源性。當被比較的序列中的位置被相同的堿基或氨基酸佔據時，則分子在該位置是同源的。序列之間的同源程度是由序列共有的匹配或同源位置的數目組成的一個函數。
在一些實施方案中，「至少80%同一性」為約80%同一性、約81%同一性、約82%同一性、約83%同一性、約85%同一性、約86%同一性、約87%同一性、約88%同一性、約90%同一性、約91%同一性、約92%同一性、約94%同一性、約95%同一性、約98%同一性、約99%同一性，或這些數值中的任何兩個值之間的範圍（包括端點）或其中任何值。
在一些實施方案中，「至少90%同一性」為約90%同一性、約91%同一性、約92%同一性、約93%同一性、約95%同一性、約96%同一性、約97%同一性、約98%同一性、約99%同一性，或這些數值中的任何兩個值之間的範圍（包括端點）或其中任何值。
多聚核苷酸或多聚核苷酸序列（或多肽或抗體序列）與另一序列有具有一定百分比（例如90%、95%、98%或者99%）的「同一性或序列同一性」是指當序列比對時，所比較的兩個序列中該百分比的堿基（或氨基酸）相同。可以使用目測或本領域已知的軟體程式來確定該比對和同一性百分比或序列同一性，比如Ausubel et al. eds.（2007）在Current Protocols in Molecular Biology中所述的軟體程式。優選使用默認參數進行比對。其中一種比對程式是使用預設參數的BLAST，例如BLASTN和BLASTP，兩者使用下列默認參數：Geneticcode=standard；filter=none；strand=both；cutoff=60；expect=10；Matrix=BLOSUM62；Descriptions=50sequences；sortby=HIGHSCORE；Databases=non-redundant；GenBank+EMBL+DDBJ+PDB+GenBankCDStranslations+Swi ssProtein+SPupdate+PIR。生物學上等同的多聚核苷酸是具有上述指定百分比的同一性並編碼具有相同或相似生物學活性的多肽的多聚核苷酸。
多聚核苷酸是由四個核苷酸堿基的特定序列組成：腺嘌呤（A）、胞嘧啶（C）、鳥嘌呤（G）、胸腺嘧啶（T），或當多聚核苷酸是RNA時胸腺嘧啶換為尿嘧啶（U）。 「多聚核苷酸序列」可以以多聚核苷酸分子的字母表示。該字母表示可以被輸入到具有中央處理單元的電腦中的資料庫中，並用於生物資訊學應用，例如用於功能基因組學和同源性搜索。
術語「多聚核苷酸」和「寡核苷酸」可互換使用，是指任何長度的核苷酸的聚合形式，無論是去氧核糖核苷酸還是核糖核苷酸或其類似物。多聚核苷酸可以具有任何三維結構並且可以執行已知或未知的任何功能。以下是不受限制的多聚核苷酸的實施例：基因或基因片段（例如探針、引物、EST或SAGE標籤）、外顯子、內含子、信使RNA（mRNA）、轉運RNA、核糖體RNA、核糖酶、cDNA、dsRNA、siRNA、miRNA、重組多聚核苷酸、分支的多聚核苷酸、質粒、載體、任何序列的分離的DNA、任何序列的分離的RNA、核酸探針和引物。多聚核苷酸可以包含修飾的核苷酸，例如甲基化的核苷酸和核苷酸類似物。如果存在該修飾，則對核苷酸的結構修飾可以在組裝多聚核苷酸之前或之後進行。核苷酸的序列可以被非核苷酸組分中斷。聚合後可以進一步修飾多聚核苷酸，例如通過與標記組分綴合。這個術語也指雙鏈和單鏈分子。除另有說明或要求外，本公開的任何多聚核苷酸的實施例包括雙鏈形式和已知或預測構成雙鏈形式的兩種可互補單鏈形式中的每一種。
術語「編碼」應用於多聚核苷酸時，是指被稱為「編碼」多肽的多聚核苷酸，在其天然狀態或當通過本領域技術人員公知的方法操作時，經轉錄和/或翻譯可以產生該多肽和/或其片段。
「抗體」、「抗原結合片段」是指特異性識別和結合抗原的多肽或多肽複合物。抗體可以是完整的抗體及其任何抗原結合片段或其單鏈。因此術語「抗體」包括分子中含有具有與抗原結合的生物學活性的免疫球蛋白分子的至少一部分的任何蛋白質或肽。抗體和抗原結合片段包括但不局限重鏈或輕鏈或其配體結合部分的互補決定區（CDR）、重鏈可變區（VH）、輕鏈可變區（VL）、重鏈恆定區（CH）、輕鏈恆定區（CL）、框架區（FR）或其任何部分，或結合蛋白的至少一部分。CDR區包括輕鏈的CDR區（LCDR1-3）和重鏈的CDR區（HCDR1-3）。抗體及抗原結合片段可以特異性識別和結合一個或多個（如兩個）抗原的多肽或多肽複合物。特異性識別和結合多個（如兩個）抗原的抗體或抗原結合片段可以被稱為多特異性（如雙特異性）抗體或抗原結合片段。
術語「抗體片段」或「抗原結合片段」指抗體的一部分，本發明抗體片段的組成形式可類似於單特異性抗體片段中的F(ab’) 2、F(ab) 2、Fab'、Fab、Fv、scFv等。不管其結構如何，抗體片段與被完整抗體識別的同一抗原結合。術語「抗體片段」包括適體、鏡像異構體和雙價抗體。術語「抗原結合片段」還包括通過與特定抗原結合形成複合物起抗體作用的任何合成或基因工程蛋白質。
「單鏈可變片段」或「scFv」是指免疫球蛋白的重鏈（VH）和輕鏈（VL）的可變區的融合蛋白。在一些方面，這些區域與10個至約25個氨基酸的短接頭肽連接。接頭可以富含甘氨酸以增加柔韌性，以及富含絲氨酸或蘇氨酸以增加溶解性，並且可以連接VH的N端和VL的C端，反之亦然。儘管該蛋白質被除去了恆定區和引入了接頭，但其保留了原始免疫球蛋白的特異性。ScFv分子通常是本領域中已知的，例如在美國專利5,892,019中有相關描述。
術語「抗體」包括可以在生物化學上區分的各種廣泛種類的多肽。本領域技術人員將會理解，重鏈的類別包括gamma、mu、alpha、delta或epsilon（γ、μ、α、δ、ε），其中還有一些亞類（例如γ1-γ4）。該鏈的性質決定了抗體的「種類」分別為IgG、IgM、IgA、IgG或IgE。免疫球蛋白亞類（同種型），例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5等已被充分表徵並且賦予的功能特異性也已知。所有的免疫球蛋白種類都在本發明公開的保護範圍內。在一些實施方案中，免疫球蛋白分子為IgG種類。這四條鏈通過二硫鍵以「Y」構型連接，其中輕鏈從「Y」口開始並延續通過可變區包圍重鏈。
本發明公開的抗體、抗原結合片段或衍生物包括但不限於多克隆、單克隆、多特異性、全人源、人源化、靈長類化、嵌合抗體、單鏈抗體、表位結合片段（例如Fab、Fab'和F(ab') 2）、scFv。
輕鏈可以分為kappa（κ）或lambda（λ）。每個重鏈可以與κ或λ輕鏈結合。一般來說，當由雜交瘤，B細胞或基因工程宿主細胞生產免疫球蛋白時，其輕鏈和重鏈通過共價鍵結合，兩條重鏈的「尾巴」部分通過共價二硫鍵或非共價鍵結合。在重鏈中，氨基酸序列從Y構型的叉狀末端的N末端延伸至每條鏈底部的C末端。免疫球蛋白κ輕鏈可變區為Vκ；免疫球蛋白λ輕鏈可變區為V λ。
輕鏈（VL）和重鏈（VH）鏈部分的可變區決定了抗原識別和特異性。輕鏈和重鏈的恆定區賦予重要的生物學性質，如分泌、經胎盤移動、Fc受體結合、補體結合等。按照慣例，恆定區的編號隨著它們變得更遠離抗體的抗原結合位點或氨基末端而增加。N端部分是可變區，C端部分是恆定區；CH3和CL結構域實際上分別包含重鏈和輕鏈的羧基端。
在天然存在的抗體中，假設抗體在含水環境中呈現其三維構型時，存在於每個抗原結合域中的六個「互補決定區」或「CDR」是形成抗原結合結構域的短的、非連續的與抗原特異性結合的氨基酸序列。抗原結合結構域中被稱為「構架」區域的剩餘其它氨基酸顯示出較小的分子間可變性。構架區大部分採用β-折疊構象，CDR形成與之連接的環狀結構，或在某些情況下形成β折疊結構的一部分。因此，框架區通過形成支架從而通過鏈間非共價相互作用使CDR定位在正確的方位上。具有特定位置的CDR的抗原結合域形成了與抗原上的表位互補的表面，該互補表面促進抗體和其抗原表位的非共價結合。對於給定的重鏈或輕鏈可變區，本領域普通技術人員都可以通過已知方法鑒定出包含CDR和框架區的氨基酸（參見 Kabat, E., et al.,U.S. Department of Health and Human Services , Sequences of Proteins of Immunological Interest, (1983) 和Chothia and Lesk, J. Mol. Biol.,196:901-917 (1987)）。
在本領域中使用和/或接受的術語有兩個或多個定義的情況下，除非明確地對立指出，否則本文使用的術語的定義包括所有這些含義。一個具體的例子是使用「互補決定區」（「CDR」）一詞來描述在重鏈和輕鏈多肽的可變區內發現的非連續的抗原結合位點。這一特定區域在Kabat et al.,U.S. Dept. of Health and Human Services,                        Sequences of Proteins of Immunological Interest (1983) 和Chothia等在 J. Mol. Biol.196:901-917 (1987)有相關描述，其通過引用全部併入本文。
根據Kabat和Chothia定義的CDR包括相互比較時的氨基酸殘基的重疊或子集。儘管如此，應用任一定義來指代抗體或其變體的CDR都在本發明範圍內。包含特定CDR的確切殘基編號將根據CDR的序列和大小而變化。本領域技術人員通常可以根據抗體的可變區氨基酸序列確定出CDR包含哪些特定的殘基。
Kabat等人還定義了適用於任何抗體的可變區序列的編號系統。本領域普通技術人員可以不依賴於序列本身以外的其他實驗數據將該「Kabat編號」系統應用到任何可變區序列。「Kabat編號」是指由Kabat et al.,U.S. Dept. of Health and Human Services在「Sequence of Proteinsof Immunological Interest」 (1983)提出的編號系統。抗體還可以用EU或Chothia編號系統。
本發明公開的抗體可以來源於任何動物，包括鳥類和哺乳動物。較佳地，抗體是人源、鼠源、驢源、兔源、山羊源、駱駝源、美洲駝源、馬源或雞源抗體。在另一實施方案中，可變區可以是軟骨魚綱（condricthoid）來源（例如來自鯊魚）。
重鏈恆定區包括CH1結構域、鉸鏈（例如上、中和/或下鉸鏈區）結構域、CH2結構域、CH3結構域，或變體或片段中的至少一種。抗體的重鏈恆定區可以來源於不同的免疫球蛋白分子。例如，多肽的重鏈恆定區可以包括源自IgG 1分子的CH1結構域和源自IgG 3分子的鉸鏈區。在另一實施方案中，重鏈恆定區可以包括部分源自IgG 1分子和部分源自IgG 3分子的鉸鏈區。在另一實施方案中，部分重鏈可以包括部分源自IgG 1分子和部分源自IgG 4分子的嵌合鉸鏈區。
「輕鏈恆定區」包括來自抗體輕鏈的一部分氨基酸序列。較佳地，輕鏈恆定區包含恆定κ結構域或恆定λ結構域中的至少一個。「輕鏈-重鏈對」是指可通過輕鏈的CL結構域和重鏈的CH1結構域之間的二硫鍵形成二聚體的輕鏈和重鏈的集合。
「VH結構域」包括免疫球蛋白重鏈的氨基末端可變結構域，「CH1結構域」包括免疫球蛋白重鏈的第一個（大部分氨基末端）恆定區。CH2結構域不與其它結構域緊密配對，而是在完整的天然IgG分子的兩個CH2結構域之間插入兩個N-連接的分支碳水化合物鏈。還有文獻記載，CH3結構域從CH2結構域開始延伸到IgG分子的C-末端，大約包含108個殘基。「鉸鏈區」包括連接CH1結構域和CH2結構域的部分重鏈區域。所述鉸鏈區包含約25個殘基並且是有韌性的，從而使得兩個N端抗原結合區能夠獨立移動。鉸鏈區可以被細分為三個不同的結構域：上、中和下鉸鏈結構域（Roux et al., J. Immunol161:4083(1998)）。
「二硫鍵」指兩個硫原子之間形成的共價鍵。半胱氨酸的硫醇基團可以與第二個硫醇基團形成二硫鍵或橋接。在大多數天然存在的IgG分子中，CH1和CL區通過二硫鍵連接。
「嵌合抗體」指其可變區從第一個物種中獲得或衍生，而其恆定區（可以是完整的、部分的或修飾過的）來源於第二個物種的任何抗體。某些實施方案中，可變區來自非人源（例如小鼠或靈長類動物），而恆定區來自人源。
「特異性結合」或「對……具有特異性」通常是指抗體或抗原結合片段與特定抗原通過其抗原結合結構域與表位元互補性結合形成相對穩定的複合物。「特異性」可以用抗體或抗原結合片段與特定抗原或表位結合的相對親和力表達。例如，如果抗體「A」比抗體「B」與同一抗原的相對親和力大，可以認為抗體「A」比抗體「B」對該抗原具有更高的特異性。特異性結合可以用平衡解離常數（KD）來描述，較小的KD意味著較緊密的結合。確定兩個分子是否特異性結合的方法是本領域內眾所周知的，並包括例如平衡透析、表面等離子共振、生物膜層光學干涉測量法等。「特異性結合」 抗原a的抗體包括與抗原a平衡解離常數KD小於或等於約100 nM、小於或等於約10 nM、小於或等於約5 nM、小於或等於約1 nM的抗體。
「治療」是指治療性治療和預防性或防治性措施，其目的是預防、減緩、改善或停止不良的生理改變或紊亂，例如疾病的進程，包括但不限於以下無論是可檢測還是不可檢測的結果，症狀的緩解、疾病程度的減小、疾病狀態的穩定（即不惡化）、疾病進展的延遲或減緩、疾病狀態的改善、緩和、減輕或消失（無論是部分還是全部）、延長與不接受治療時預期的生存期限等。需要治療的患者包括已經患有病症或紊亂的患者，容易患有病症或紊亂的患者，或者需要預防該病症或紊亂的患者，可以或預期從施用本發明公開的抗體或藥物組合物用於檢測、診斷過程和/或治療中受益的患者。
「患者」指需要診斷、預後或治療的任何哺乳動物，包括人類、狗、貓、兔子、鼠、馬、牛等。
「約」指相關技術領域技術人員容易知道的相應數值的常規誤差範圍。在一些實施方式中，本文中提到「約」指所描述的數值以及其±10%、±5%或±1%的範圍。
「EC 50」即半最大效應濃度（concentration for 50% of maximal effect, EC 50）是指能引起50%最大效應的濃度。
本發明中「親本Fc區」可以為天然存在的Fc區，編碼Fc區的基因可來自人、鼠、兔、駱駝、猴子，優選為人和小鼠；例如，親本Fc區為SEQ ID NO:77或78中Fc區。
本文提及出版物的相關描述均通過引用全部併入本文 抗PD-L1抗體
本發明提供了對PD-L1蛋白具有高親和力的抗體或抗原結合片段。篩選出的抗體表現出有效的結合活性、生物學活性，並可用於治療和診斷用途。比如，這些抗體或抗原結合片段可以有效阻斷抑制性的免疫檢查點，激活淋巴細胞釋放細胞因數，用於治療各種類型的癌症、腫瘤或感染等相關疾病。
在一些實施方案中，所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示的序列。在一些實施方案中，所述抗原結合片段的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77中除Fc以外的序列，所述抗原結合片段的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:93所示的序列。在一些實施方案中，所述抗原結合片段的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77中除Fc以外的序列，所述抗原結合片段的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:93所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:94所示的序列。在一些實施方案中，所述抗原結合片段的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77中除Fc以外的序列，所述抗原結合片段的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:94所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:95所示的序列。在一些實施方案中，所述抗原結合片段的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77中除Fc以外的序列，所述抗原結合片段的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:95所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:96所示的序列。在一些實施方案中，所述抗原結合片段的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77中除Fc以外的序列，所述抗原結合片段的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:96所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:97所示的序列。在一些實施方案中，所述抗原結合片段的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77中除Fc以外的序列，所述抗原結合片段的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:97所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:78所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示的序列。在一些實施方案中，所述抗原結合片段的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:78中除Fc以外的序列，所述抗原結合片段的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:79所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示的序列。在一些實施方案中，所述抗原結合片段的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:79中除Fc以外的序列，所述抗原結合片段的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:80所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示的序列。在一些實施方案中，所述抗原結合片段的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:80中除Fc以外的序列，所述抗原結合片段的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:81所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示的序列。在一些實施方案中，所述抗原結合片段的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:81中除Fc以外的序列，所述抗原結合片段的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示的序列。
在一些實施方案中，所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:82所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示的序列。在一些實施方案中，所述抗原結合片段的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:82中除Fc以外的序列，所述抗原結合片段的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示的序列。
在一些實施方案中，本發明抗體含有兩條相同的重鏈（或重鏈片段）和兩條相同的輕鏈（或輕鏈片段）。
本領域普通技術人員還應當理解，本發明所公開抗體或抗原結合片段序列是可以被替換的，替換後其氨基酸序列不同於該抗體的天然存在的氨基酸序列。例如，替換後的氨基酸序列可以是與起始序列相似的，比如與起始序列具有一定比例的同一性，比如它可以與起始序列的同一性是約80%、約85%、約90%、約95%、約98%、約99%，或這些數值中的任何兩個值之間的範圍（包括端點）或其中任何值。
在一些實施方案中，抗體或抗原結合片段包含氨基酸序列具有一個或多個修飾基團。例如，本發明公開的抗體或抗原結合片段可以包含有韌性的接頭序列，或者可以被修飾以添加功能性基團（例如PEG、藥物、毒素或標籤）。
本發明公開的抗體、抗原結合片段包括被修飾的衍生物，即通過任何類型的分子與抗體或抗原結合片段的共價連接進行修飾，其中共價連接不會阻止抗體或抗原結合片段與表位結合。包括但不限制以下實例，抗體或抗原結合片段可以被糖基化、乙醯化、聚乙二醇化、磷酸化、醯胺化、通過已知的保護/封閉基團衍生化、蛋白水解切割、連接至細胞配體或其他蛋白質等。眾多化學修飾中的任一種修飾可以通過現有技術進行，包括但不限於特異性化學裂解、乙醯化、甲醯化、衣黴素的代謝合成等。
在一些實施方案中，抗體或抗原結合片段可以與治療劑、藥物前體、肽、蛋白質、酶、病毒、脂類、生物反應調節劑、藥劑或PEG綴合。
抗體或抗原結合片段可通過將其偶聯至化學發光化合物來被可檢測地標記。然後通過檢測在化學反應過程中出現的發光從而確定化學發光標記的抗體或抗原結合片段的存在。化學發光標記化合物的實例包括魯米諾、異魯米諾、芳香吖啶酯、咪唑、吖啶鹽和草酸酯。
抗體和編碼抗體的多聚核苷酸的製備方法
本發明還公開了編碼本發明所述抗體、抗原結合片段、及其衍生物的多聚核苷酸或核酸分子。本發明公開的多聚核苷酸可以編碼重鏈可變區、輕鏈可變區、Fc區、部分重鏈可變區、部分輕鏈可變區、重鏈或輕鏈等。製備抗體的方法是本領域公知的並且在本發明中有所描述。
在某些實施方案中，製備的抗體不會在待治療的動物（例如人類）中引起有害的免疫應答。在一些實施方案中，本發明公開的抗體、抗原結合片段、或衍生物使用本領域公認的技術修飾以降低其免疫原性。例如，抗體可以被人源化、靈長類化、去免疫化或者可以製備嵌合抗體。這些類型的抗體來源於非人抗體，通常是鼠類或靈長類抗體，其保留或基本保留親本抗體的抗原結合特性但在人體中免疫原性較低。其可以通過多種方法來實現，包括（a）將整個非人源的可變區移植到人源的恆定區以產生嵌合抗體；（b）將一個或多個非人類互補決定區（CDR）的至少一部分移植到人源的框架和恆定區中，保留或不保留關鍵的框架殘基；或（c）移植整個非人源的可變區，但通過用類人源的部分置換表面殘基從而「隱藏」它們。通常人框架區中的框架殘基將被來自CDR供體抗體的相應殘基取代，比如能夠改善抗原結合的殘基。這些框架替換可以通過本領域公知的方法鑒定，例如通過模擬CDR和框架殘基的相互作用以鑒定對抗原結合起重要作用的框架殘基和通過序列對比以鑒定特定位置上異常的框架殘基。（參考美國專利 5,585,089; Riechmann et al., Nature332:323 (1988); 其全部內容通過引用併入本文）。可以使用本領域公知的多種技術使抗體人源化，例如CDR移植（EP 239,400; WO 91/09967; 美國專利5,225,539, 5,530,101和5,585,089)，修復或者表面重排(EP592,106; EP519,596; Padlan, et al., Molecular Immunology28(4/5):489-498 (1991); Studnicka et al., Protein Engineering7(6):805-814 (1994); Roguska, et al., Proc. Natl. Sci. USA91:969-973 (1994))，以及鏈的重排(美國專利 5,565,332），其全部內容通過引用併入本文。
去免疫化也可用於降低抗體的免疫原性。在本發明中，術語「去免疫化」包括改變抗體以修飾T細胞表位（參見例如WO/9852976 A1 和WO/0034317 A2）。例如，分析來自起始抗體的重鏈可變區序列和輕鏈可變區序列，並產生來自每個可變區的人T細胞表位元「圖譜」，顯示表位元相對於互補決定區( CDRs )和序列內其它關鍵殘基的位置。分析來自T細胞表位圖的單個T細胞表位，以鑒定具有較低改變抗體活性風險的可選擇的氨基酸取代。設計包含氨基酸取代組合的一系列可選的重鏈可變區序列和輕鏈可變區序列，隨後將這些序列摻入到一系列結合多肽中。然後將包含修飾過的可變區和人類恆定區的完整重鏈和輕鏈的基因克隆到表達載體中，隨後將質粒轉入細胞系以產生完整的抗體。然後利用合適的生物化學和生物學實驗中比較抗體，鑒定出最佳的抗體。
本發明公開的抗體或抗原結合片段的結合特異性可以通過體外實驗，例如免疫共沉澱、放射免疫實驗（RIA）或酶聯免疫吸附實驗（ELISA）來檢測。
scFv的製備可參見生產單鏈單元的技術（美國專利 4,694,778; Bird, Science242:423-442 (1988)、Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA55:5879-5883 (1988)和Ward et al., Nature334:544-554 (1989)和Nie et al., Antibody Therapeutics 3 (1):18-62(2020) ）。通過氨基酸橋接Fv區的重鏈和輕鏈片段形成單鏈單元，產生單鏈融合肽。也可以使用在大腸桿菌中組裝功能性Fv片段的技術（Skerra et al., Science242: 1038-1041 (1988)）。
可用於生產單鏈Fv（scFv）和抗體的技術的實例包括如美國專利4,946,778和5,258,498，以及Huston et al., Methods in Enzymology203:46-88 (1991)、Shu et al., Proc. Natl. Sci. USA90:1995-1999 (1993)和Skerra et al., Science240:1038-1040 (1988)中所述。對於包括在人體內使用抗體和體外檢測實驗的某些用途，可以使用嵌合抗體、人源化抗體或全人源抗體。嵌合抗體是抗體的不同部分源自不同動物物種的一類分子，例如具有鼠源單克隆抗體的可變區和人源免疫球蛋白恆定區的抗體。生產嵌合抗體的方法是本領域已知的，參見Morrison, Science229:1202 (1985); Oi et al., BioTechniques4:214 (1986)；Gillies et al., J. Immunol. Methods125:191-202 (1989)；Neuberger et al., Nature372:604-608 (1984)；Takeda et al., Nature314:452-454 (1985)；和美國專利5,807,715、4,816,567和4,816,397，其全部內容通過引用併入本文。
此外，在Newman, Biotechnology10: 1455-1460 (1992)中公開了另一種生產重組抗體的高效方法，特別地，該技術能產生含有猴可變區和人恆定區序列的靈長類抗體，該參考文獻的全部內容通過引用併入本文。此外，該技術也在美國專利5,658,570、5,693,780和5,756,096中有所提及，每個專利的全部內容通過引用併入本文。
抗體可以通過本領域已知的多種方法製備，包括使用來自免疫球蛋白序列的抗體文庫進行的噬菌體展示方法。也可參考美國專利4,444,887和4,716,111，以及PCT公佈文本WO 98/46645、WO 98/50433、WO 98/24893、WO 98/16654、WO 96/34096、WO 96/33735和WO 91/10741，每個專利的全部內容通過引用併入本文。
在另一實施方案中，使用常規方法（例如使用能夠特異性結合編碼鼠抗體重鏈和輕鏈的基因的寡核苷酸探針），可以分離編碼所需單克隆抗體的DNA並對其進行測序。分離的和亞克隆的雜交瘤細胞可以作為此類DNA的來源。一旦分離出來，DNA可以被置於表達載體中，然後被轉染到原核或真核宿主細胞如大腸桿菌細胞、猿猴COS細胞、中國倉鼠卵巢（CHO）細胞或不產生其他免疫球蛋白的骨髓瘤細胞中。分離的DNA（如本文所述可以是合成的）也可用於製備抗體的恆定區和可變區的序列，如美國專利5,658,570中所述，其全部內容通過引用併入本文。該方法從所選細胞中提取RNA並轉化成cDNA，然後使用Ig特異性引物通過PCR技術進行擴增。適於此目的的合適的探針在美國專利5,658,570中也有所提及。
此外，使用常規重組DNA技術，可將本發明的抗體的一個或多個CDR插入框架區，例如插入到人類框架區以構建人源化非全人源抗體。框架區可以是天然存在的或共有的框架區，優選人類框架區（參見Chothia et al., J. Mol. Biol. 278:457-479 (1998)，其列出一系列人類框架區）。一些多核苷酸可以編碼框架區和CDR組合產生的與目標抗原的至少一個表位特異性結合的抗體。在框架區內可以進行一個或多個氨基酸取代，可以選擇能夠改善抗體與其抗原結合的氨基酸取代。另外，可用此法進行參與鏈間二硫鍵形成的一個或多個可變區中半胱氨酸殘基的取代或缺失，從而產生缺少一個或多個鏈間二硫鍵的抗體分子。本領域技術範圍內的對多核苷酸進行的其他改變也涵蓋於本發明中。
抗體可以通過使用常規重組DNA技術製備。使用本領域技術人員公知的技術可以選擇、構建和培養生產抗體的載體及細胞系等。這些技術在各種實驗室手冊和主要出版物中均有描述，例如 Recombinant DNA Technology for Production of Protein Therapeutics in Cultured Mammalian Cells ，D.L. Hacker, F.M. Wurm, in Reference Module in Life Sciences, 2017，其全部內容包括補充內容通過引用併入全文。
在一些實施方案中，可以按常規方法根據本文所述抗體氨基酸序列設計合成編碼抗體的DNA，將其置入表達載體中，然後轉染宿主細胞，在培養基中培養被轉染的宿主細胞產生單克隆抗體。在一些實施方案中，表達抗體載體包括至少一個啟動子元件，抗體編碼序列，轉錄終止信號和polyA尾。其他元件包括增強子，Kozak序列及插入序列兩側RNA剪接的供體和受體位點。可以通過SV40的前期和後期啟動子，來自逆轉錄病毒的長末端重複序列如RSV、HTLV1、HIVI及巨細胞病毒的早期啟動子來獲得高效的轉錄，也可應用其它一些細胞的啟動子如肌動蛋白啟動子。合適的表達載體可包括pIRES1neo，pRetro-Off，pRetro-On，PLXSN，或者Plncx，pcDNA3.1（+/-），pcDNA/Zeo(+/-)，pcDNA3.1/Hygro（+/-），PSVL，PMSG，pRSVcat，pSV2dhfr，pBC12MI和pCS2等。常使用的哺乳動物細胞包括293細胞，Cos1細胞，Cos7細胞，CV1細胞，鼠L細胞和CHO細胞等。
在一些實施方案中，插入基因片段需含有篩選標記，常見的篩選標記包括二氫葉酸還原酶，穀氨醯胺合成酶，新黴素抗性，潮黴素抗性等篩選基因，以便於轉染成功的細胞的篩選分離。將構建好的質粒轉染到無上述基因的宿主細胞，經過選擇性培養基培養，轉染成功的細胞大量生長，產生想要獲得的目的蛋白。
此外，可以使用本領域技術人員已知的標準技術在編碼本發明所述抗體的核苷酸序列中引入突變，包括但不限於導致氨基酸取代的定點突變和PCR介導的突變。變體（包括衍生物）編碼相對於原重鏈可變區和輕鏈可變區來說少於50個氨基酸的取代、少於40個氨基酸的替換、少於30個氨基酸的取代、少於25個氨基酸的取代、少於20個氨基酸的取代、少於15個氨基酸的取代、少於10個氨基酸的取代、少於5個氨基酸的取代、少於4個氨基酸的取代、少於3個氨基酸的取代或少於2個氨基酸的取代。或者可以沿著全部或部分編碼序列時隨機引入突變，例如通過飽和突變，以及可以篩選所得突變體的生物活性以鑒定保留活性的突變體。
治療方法
本發明還提供了治療方法和用途。在一些實施方案中，提供了用於治療或改善各種類型的癌症、腫瘤或感染等相關疾病的方法，所述方法包括向患者施用有效劑量的抗PD-L1抗體或抗原結合片段。在一些實施方案中，提供了抗PD-L1抗體或抗原結合片段在用於治療或改善癌症、腫瘤或感染等相關疾病中的應用。在一些實施方案中，提供了所述抗PD-L1抗體或抗原結合片段在製備用於治療或改善癌症、腫瘤或感染等相關疾病的藥物中的應用。
對於任何特定患者的具體劑量和治療方案將取決於各種因素，包括所使用的特定抗體或衍生物、患者的年齡和體重、一般健康狀況、性別和飲食，以及給藥時間、排泄頻率、藥物組合，以及所治療的特定疾病的嚴重程度。由包括在本領域普通技術人員範圍內的醫療護理人員對這些因素進行判斷。所述劑量還將取決於待治療的個體患者、給藥途徑、製劑類型、所用化合物的特性、疾病的嚴重程度以及所需的效果。所用劑量可以通過本領域熟知的藥理學和藥代動力學原理確定。
抗體或衍生物的施用方法包括但不限於真皮內、肌肉、腹腔、靜脈、皮下、鼻腔、硬脊膜外和口服注射。藥物組合物可以通過任何方便的途徑施用，例如通過輸注或推注，通過上皮或皮膚粘膜（例如口腔粘膜、直腸和腸粘膜等）吸收，並且可以與其他生物活性劑共同施用。因此，含有本發明抗體或抗原結合片段的藥物組合物可以口服給藥、直腸給藥、腸胃外給藥、腦池內給藥、陰道內給藥、腹腔內給藥、外敷（如通過粉末，軟膏，滴劑或透皮貼劑）、口腔給藥或通過口服或鼻腔噴霧給藥。
本發明使用的術語「腸胃外」是指包括靜脈內、肌肉內、腹腔內、胸骨內、皮下和關節內注射和輸注的施用方式。
施用方式可以是全身施用或局部施用。此外，可能需要通過任何合適的途徑將本發明的抗體引入中樞神經系統，包括腦室內和鞘內注射；腦室內注射可以通過腦室內導管連接到如貯液囊（可以是Ommaya貯液囊）來輔助注射。也可以通過肺部給藥，例如通過使用吸入器或噴霧器，以及使用霧化的製劑。
本發明抗體可以局部施用於需要治療的區域；可以通過但不限於以下方式：手術期間局部輸注，例如與手術後傷口敷料聯合的局部應用，通過注射，通過導管，借助栓劑或借助植入物來實現，所述植入物是多孔的、無孔的或凝膠狀的材料，包括膜（例如矽橡膠膜）或纖維。優選地，當施用本發明的蛋白質（包括抗體）時，必須注意使用不吸收蛋白質的材料。
在一些實施方案中，本發明組合物包含編碼抗體的核酸或多聚核苷酸，可以通過將其構建為合適的核酸表達載體的一部分來體內施用所述核酸以促進其編碼的蛋白質的表達，然後通過下述方式施用上述部分載體使其變為胞內部分，例如通過使用逆轉錄病毒載體（參見美國專利4,980,286），或通過直接注射，或通過使用微粒轟擊（例如基因槍；Biolistic，Dupont），或用脂質或細胞表面受體或轉染試劑包被，或者通過與已知進入細胞核的同源異型盒類肽連接施用（參見例如Joliot et al., 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:1864-1868）等等。可選地，核酸可以通過同源重組在引入細胞內並整合至宿主細胞DNA中用於表達。
在一些實施方案中，本發明抗體施用於患者的劑量為0.01 mg/kg至100 mg/kg患者體重，或0.1 mg/kg至20 mg/kg患者的體重。在初始劑量之後可隨後給予第二劑或多劑該抗體或抗原結合片段，其劑量與初始劑量大致相同或較少，其中該隨後的劑量可相隔至少1天至3天；或至少一星期。可以通過例如脂質化等修飾來增強抗體的攝取和組織穿透能力（例如進入腦內），從而減少本發明抗體的施用的劑量和頻率。
各種已知輸送系統可用於施用本發明抗體或衍生物或編碼其的多核苷酸，例如包封於脂質體、微粒、微膠囊、能夠表達所述化合物的重組細胞、受體介導的內吞作用（參見例如Wu and Wu, 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432）、作為逆轉錄病毒或其它載體的一部分的核酸的構建等。
聯合療法
在一些實施方案中，本發明抗PD-L1抗體或抗原結合片段可以結合其它治療或預防方案，包括施用一種或多種本發明抗體或抗原結合片段以及一種或多種其它治療劑或方法一起使用或組合使用。在一些實施方案中，其他治療方案包括但不限於放射療法、化學療法、激素療法等。對於組合治療，抗體可以與其它治療劑可同時或分開施用。當分開施用時，可以在施用另一種其它治療劑之前或之後施用本發明抗體。
在一些實施方案中，本發明抗體與化療劑組合施用。在一些實施方案中，可與本發明抗體一起施用的化療劑包括但不限於抗生素衍生物（例如阿黴素、博來黴素、柔紅黴素和放線菌素D）、抗雌激素藥（如他莫昔芬）、抗代謝物（如氟尿嘧啶、5-FU、甲氨蝶呤、氟尿苷、干擾素α-2b、谷氨酸、光神黴素、巰基嘌呤和6-硫基鳥嘌呤）、細胞毒性劑（如卡莫司汀、BCNU、洛莫司汀、CCNU、阿糖胞苷、環磷醯胺、雌莫司汀、羥基脲、甲基苄肼、絲裂黴素、白消安、順鉑和硫酸長春新堿）、激素（如甲羥孕酮、雌莫司汀磷酸鈉、炔雌醇、雌二醇、醋酸甲地孕酮、甲睾酮、己烯雌酚二磷酸、氯烯雌醚和睾內酯）、氮芥衍生物（例美法侖、苯丁酸氮芥、二氯甲基二乙銨（氮芥）和噻替哌）、類固醇及其組合（如倍他米松磷酸鈉），以及其它化合物（如氮烯唑胺、天冬醯胺酶、米托坦、硫酸長春新堿、硫酸長春堿和依託泊苷）。在一些實施方案中，本發明抗體與細胞因數聯合施用。可以與本發明抗體一起施用的細胞因數包括但不限於IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-10、IL-12、IL-13、和IL-15等。
在一些實施方案中，本發明抗PD-L1抗體與化療劑聯合施用。化療劑的實例包括免疫治療劑，包括但不限於適用於治療患者的治療性抗體。治療性抗體的一些實例包利妥昔單抗、曲妥珠單抗、托西莫單抗、替伊莫單抗、阿來組單抗、依帕珠單抗、貝伐珠單抗、西妥昔單抗和貝倫妥單抗等。
藥物組合物
本發明還提供了藥物組合物。這樣的組合物包含有效劑量的抗PD-L1抗體或抗原結合片段以及藥學上可接受的輔料。在一些實施方案中，藥物組合物包含0.1%-90%的抗PD-L1抗體或抗原結合片段。在一些實施方案中，藥物組合物還包含抗癌劑（例如免疫檢查點抑制劑）。
在一些實施方案中，術語「藥學上可接受的」是指由政府的監管機構批准的或公認藥典中列出的用於動物，特別是用於人類的物質。此外，「藥學上可接受的輔料」通常指是任何類型的無毒固體、半固體或液體填充劑、稀釋劑、包封材料或製劑助劑等。
術語「輔料」是指可以與活性成分一起施用於患者的稀釋劑、佐劑、賦形劑或載體。這此類藥物載體可以是無菌液體，如水和油，包括石油、動植物或合成來源的油，如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等。當藥物組合物靜脈內給藥時，水是優選的載體。鹽水溶液和葡萄糖水溶液和甘油溶液也可用作液體載體，特別是用於注射溶液。合適的藥物賦形劑包括澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、大米、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。如有需要，組合物還可以含有少量的潤濕劑或乳化劑，或pH緩衝劑如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽。抗菌劑如苯甲醇或對羥基苯甲酸甲酯、抗氧化劑如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉、螯合劑如乙二胺四乙酸，以及調節張力的試劑如氯化鈉或右旋葡萄糖也是可以預見的。這些組合物可以採取溶液、懸液、乳劑、片劑、丸劑、膠囊、散劑、緩釋製劑等形式。該組合物可以用傳統的粘合劑和載體如甘油三酯配製成栓劑。口服製劑可以包括標準載體，例如藥物等級的甘露糖醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。合適的藥物載體的實例在E. W. Martin的Remington's Pharmaceutical Sciences中有描述，在此通過引用併入本發明。此類組合物將含有臨床有效劑量的抗體或抗原結合片段，優選以純化後的形式，連同合適數量的輔料，以提供適合於患者的給藥形式。該製劑應該適用於給藥模式。親本製劑可以封裝在安瓿瓶、一次性注射器或由玻璃或塑料製成的多劑量小瓶中。
在一些實施方案中，根據常規步驟將組合物配製成適合靜脈內注射於人體的藥物組合物。用於靜脈內給藥的組合物通常是在無菌等滲水性緩衝液中的溶液。組合物還可包含增溶劑和局部麻醉劑如利多卡因，從而緩解注射部位的疼痛。一般而言，有效成分以單位劑量形式單獨供給或混在一起供給，如以乾燥的凍幹粉末或無水濃縮物的形式裝在可指示活性劑份量的密封容器（如安瓿瓶或小袋）中。在通過輸注施用組合物的情況下，可以用含有無菌藥用級水或鹽水的輸液瓶來分裝組合物。在通過注射施用組合物的情況下，可以使用注射用的無菌水或鹽水的安瓿瓶，使得可以在施用之前混合有效成分。
本發明的化合物可以配製成中性的或鹽的形式。藥學上可接受的鹽包括衍生自如鹽酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等的與陰離子形成的鹽，以及衍生自如鈉、鉀、銨、鈣、氫氧化鐵、異丙胺、三乙胺、2-乙氨基乙醇、組氨酸、普魯卡因等的與陽離子形成的鹽。
以下通過具體的實施例進一步說明本發明的技術方案，具體實施例不代表對本發明保護範圍的限制。其他人根據本發明理念所做出的一些非本質的修改和調整仍屬於本發明的保護範圍。
下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。 抗PD-L1抗體
實施例1  抗體製備方法
抗體實例相關的氨基酸和核酸序列見表1-13，抗體的重鏈、輕鏈組成見表1；表11中重鏈的Fc區用底線標出，表13中可變區的核酸序列用底線標出。
將抗體的重鏈和輕鏈的氨基酸序列依照宿主細胞密碼子偏好性特點進行序列優化，得到重鏈和輕鏈的DNA序列。為了便於在宿主細胞中表達，分別在重鏈和輕鏈的序列中添加了信號肽。
將優化並合成的序列克隆分別克隆至載體（載體可選pCDNA3.1 TM(+)，Invitrogen，貨號為V79020）中，然後分別抽提大量質粒，重鏈和輕鏈按質粒摩爾比1:1暫態表達轉染HEK293F細胞。以抗體L1-R2-4-46為例，將重鏈核酸序列（SEQ ID NO:99）和輕鏈核酸序列（SEQ ID NO:101）通過酶切克隆至表達載體中；其中，重鏈信號肽的核酸序列為SEQ ID NO:102，輕鏈信號肽的核酸序列為SEQ ID NO:103。以抗體L1-R2-4-71為例，將重鏈核酸序列（SEQ ID NO:100）和輕鏈核酸序列（SEQ ID NO:101）通過酶切克隆至表達載體中；其中，重鏈信號肽的核酸序列為SEQ ID NO:102，輕鏈信號肽的核酸序列為SEQ ID NO:103。細胞表達後培養液經由固定化金屬親和層析(IMAC)採用Protein A柱(GE Healthcare)純化分泌的含兩條重鏈和兩條輕鏈的抗體蛋白，使抗體的純度＞95%，測序結果與預計的序列相同，用於親和力檢測和生物活性鑒定。 表1  抗體的組成
抗體編號 重鏈SEQ ID NO（序列號） 輕鏈序列號
L1-R2-4 77 92
L1-R2-6 77 93
L1-R2-18 77 94
L1-R2-78 77 95
L1-R2-85 77 96
L1-R2-89 77 97
L1-R2-4-36 78 92
L1-R2-4-46 79 92
L1-R2-4-47 80 92
L1-R2-4-55 81 92
L1-R2-4-71 82 92
表2  抗體重鏈CDR區
HCDR1的 氨基酸序列 序列號 HCDR2的氨基酸序列 序列號 HCDR3的 氨基酸序列 序列號
GFTFSDSWIH 1 GWISPYGGSTYYADDFRH 7 RHWPGGFDY 17
SFSLKDSWIH 2 GWISPYGGSTYYADSLGD 8 RHWPGGLLP 18
GWATRDSWIH 3 GWISPYGGSTYYADHLSQ 9 /
NSHLRDSWIH 4 GWISPYGGSTYYADGMRS 10
GLRPADSWIH 5 GWISPYGGSTYYADSYRS 11
GFTFSDSWIH 6 GWISPYGGSTYYADPYVG 12
/ GWISPYGGSTYYADSLKG 13
GWISPYGGSTYYADSYRA 14
GWISPYGGSTYYADYLHG 15
GWISPYGGSTYYADSVKG 16
表3  抗體重鏈CDR區的組成
名稱 HCDR1序列號 HCDR2序列號 HCDR3序列號
CP11-36 1 7 17
CP11-46 1 8 17
CP11-47 1 9 17
CP11-55 1 10 17
CP11-71 1 11 17
CP14-16 1 12 17
CP14-80 1 13 17
CP21-8 1 14 17
CP21-47 1 15 17
CP21-59 2 16 17
CP22-34 3 16 17
CP22-45 4 16 17
CP22-44 5 16 17
CP22-40 6 16 18
L1-27 1 16 17
表4  抗體輕鏈CDR區
LCDR1的 氨基酸序列 序列號 LCDR2的 氨基酸序列 序列號 LCDR3的 氨基酸序列 序列號  
LASQTIGTWLA 19 AASTLQS 24 QQYYSTPRT 28  
QASQDIGKHLN 20 GASNLKT 25 QQSYTTPYT 29  
RASQGIGSWLA 21 AASSLQS 26 QQYFSTPYT 30  
RASQGISSYLA 22 AASRLQS 27 QQYYSTPYT 31  
RASQGIGKFLA 23 /
表5  抗體輕鏈CDR區的組成
名稱 LCDR1的序列號 LCDR2的序列號 LCDR3的序列號
R2-4 19 24 28
R2-6 20 25 29
R2-18 21 26 30
R2-78 22 27 31
R2-85 23 26 30
R2-89 19 26 31
表6  抗體輕鏈框架區
名稱 氨基酸序列 序列號 名稱 氨基酸序列 序列號
FR1 EIVLTQSPSSLSASVGDRVTITC 51 FR2 WYQQKPGKSPQLLIY 57
EIVLTQSPSSVSASVGDKLTMTC 52 WYQQKPGKPPKLLIY 58
EIVLTQSPSSVSASVGDRITITC 53 WYQQKPGKAPSLLIY 59
DIQMTQSPSSFSASTGDRVTITC 54 WYQQKPGKAPKLLIY 60
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTIPC 55 /
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC 56
FR3 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYC 61 FR4 FGQGTKVEIK 65
GVPSRFSGTGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC 62 FGQGTRLEIK 66
GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQTEDVAVYYC 63 FGQGTKVDIK 67
GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC 64 /
表7  抗體重鏈框架區
名稱 氨基酸序列 序列號 名稱 氨基酸序列 序列號
FR1 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS 32 FR2 WVRQAPGKGLEWV 33
FR3 RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR 34 FR4 WGQGTLVTVSS 35
表8 抗體重鏈可變區
名稱 氨基酸序列 序列號
L1-27 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS 36
CP11-36 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADDFRHRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS 37
CP11-46 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADSLGDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS 38
CP11-47 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADHLSQRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS 39
CP11-55 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADGMRSRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS 40
CP11-71 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADSYRSRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS 41
CP14-16 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADPYVGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS 42
CP14-80 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADSLKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS 43
CP21-8 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADSYRARFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS 44
CP21-47 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADYLHGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS 45
CP21-59 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASSFSLKDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS 46
CP22-34 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGWATRDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS 47
CP22-40 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGLLPWGQGTLVTVSS 48
CP22-44 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGLRPADSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS 49
CP22-45 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASNSHLRDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS 50
表9 抗體輕鏈可變區
名稱 氨基酸序列 序列號
R2-4 EIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCLASQTIGTWLAWYQQKPGKSPQLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQYYSTPRTFGQGTKVEIK 68
R2-6 EIVLTQSPSSVSASVGDKLTMTCQASQDIGKHLNWYQQKPGKPPKLLIYGASNLKTGVPSRFSGTGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYTTPYTFGQGTRLEIK 69
R2-18 EIVLTQSPSSVSASVGDRITITCRASQGIGSWLAWYQQKPGKAPSLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQTEDVAVYYCQQYFSTPYTFGQGTKVDIK 70
R2-78 DIQMTQSPSSFSASTGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPYTFGQGTKVDIK 71
R2-85 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTIPCRASQGIGKFLAWYQQKPGKAPSLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQTEDVAVYYCQQYFSTPYTFGQGTKVDIK 72
R2-89 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCLASQTIGTWLAWYQQKPGKSPQLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQYYSTPYTFGQGTKVDIK 73
表10 抗體恆定區
名稱 氨基酸序列 序列號
重鏈恆定區 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 74
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 75
輕鏈恆定區 RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 76
表11  抗體重鏈序列
名稱 氨基酸序列 序列號
L1-27 重鏈 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 77
CP11-36 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADDFRHRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 78
CP11-46 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADSLGDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 79
CP11-47 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADHLSQRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 80
CP11-55 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADGMRSRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 81
CP11-71 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADSYRSRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 82
CP14-16 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADPYVGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 83
CP14-80 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADSLKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 84
CP21-8 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADSYRARFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 85
CP21-47 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADYLHGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 86
CP21-59 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASSFSLKDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 87
CP22-34 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGWATRDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 88
CP22-40 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGLLPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 89
CP22-44 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGLRPADSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 90
CP22-45 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASNSHLRDSWIHWVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 91
重鏈信號肽 MEFGLSWVFLVAILKGVQC 104
表12 抗體輕鏈序列
名稱 氨基酸序列 序列號
R2-4輕鏈 EIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCLASQTIGTWLAWYQQKPGKSPQLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQYYSTPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 92
R2-6輕鏈 EIVLTQSPSSVSASVGDKLTMTCQASQDIGKHLNWYQQKPGKPPKLLIYGASNLKTGVPSRFSGTGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYTTPYTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 93
R2-18 輕鏈 EIVLTQSPSSVSASVGDRITITCRASQGIGSWLAWYQQKPGKAPSLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQTEDVAVYYCQQYFSTPYTFGQGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 94
R2-78 輕鏈 DIQMTQSPSSFSASTGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPYTFGQGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 95
R2-85 輕鏈 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTIPCRASQGIGKFLAWYQQKPGKAPSLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQTEDVAVYYCQQYFSTPYTFGQGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 96
R2-89 輕鏈 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCLASQTIGTWLAWYQQKPGKSPQLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQYYSTPYTFGQGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 97
輕鏈信號肽 MDMRVLAQLLGLLLLCFPGARC 105
表13  抗體相關核酸序列
名稱 核酸序列 序列號
CP11-46 重鏈 GAGGTGCAGCTGGTGGAATCCGGCGGAGGGCTGGTGCAGCCAGGTGGCTCTCTGAGACTGAGTTGCGCCGCTTCAGGATTCACCTTTTCCGACTCTTGGATTCACTGGGTGCGCCAGGCCCCCGGAAAGGGACTGGAGTGGGTCGGTTGGATTTCTCCTTACGGAGGGAGTACATACTATGCCGACAGTCTTGGTGATCGATTCACTATCTCCGCTGATACTAGCAAAAACACCGCATATCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCAGAAGACACAGCCGTCTACTATTGTGCAAGGCGGCATTGGCCCGGTGGCTTTGATTACTGGGGTCAGGGTACCCTGGTTACCGTTAGCAGCGCGAGCACCAAAGGCCCGAGCGTGTTTCCGCTGGCCCCGAGCAGCAAAAGCACCAGCGGTGGCACCGCAGCGCTGGGTTGCCTGGTGAAAGATTATTTCCCGGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGGGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA 99
CP11-71 重鏈 GAGGTGCAGCTGGTGGAATCCGGCGGAGGGCTGGTGCAGCCAGGTGGCTCTCTGAGACTGAGTTGCGCCGCTTCAGGATTCACCTTTTCCGACTCTTGGATTCACTGGGTGCGCCAGGCCCCCGGAAAGGGACTGGAGTGGGTCGGTTGGATTTCTCCTTACGGAGGGAGTACATACTATGCCGACTCTTATAGGTCGCGATTCACTATCTCCGCTGATACTAGCAAAAACACCGCATATCTGCAGATGAACTCCCTGAGGGCAGAAGACACAGCCGTCTACTATTGTGCAAGGCGGCATTGGCCCGGTGGCTTTGATTACTGGGGTCAGGGTACCCTGGTTACCGTTAGCAGCGCGAGCACCAAAGGCCCGAGCGTGTTTCCGCTGGCCCCGAGCAGCAAAAGCACCAGCGGTGGCACCGCAGCGCTGGGTTGCCTGGTGAAAGATTATTTCCCGGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGGGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA 100
R2-4 輕鏈 GAAATTGTGCTGACTCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCTGGCAAGTCAGACCATTGGTACATGGTTAGCATGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAATCTCCTCAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCACTTTGCAATCAGGGGTCCCATCTCGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCAGCAATATTATAGTACTCCTCGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAGATTAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT 101
重鏈信號肽 ATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGGTTTTCCTTGTTGCTATATTAAAAGGTGTCCAGTGT 102
輕鏈信號肽 ATGGACATGAGGGTGCTGGCCCAGCTGCTGGGACTCCTCCTGCTGTGCTTCCCAGGCGCCAGATGC 103
實施例2  解離常數測定
採用Biacore系統（GE公司）通過動力學結合測定法確定本發明上述抗體結合相應抗原的平衡解離常數(KD)。按照使用手冊的方法，將5 μg的抗原蛋白PD-L1-His固定到晶片上，以最高濃度為100 nM（按照1:2稀釋，5個梯度）的抗PD-L1抗體為流動相，進行親和力測定，並用Biacore T200 Evaluation Software分析結果。其中，陽性對照為ATE抗體（ATE抗體的氨基酸序列與Atezolizumab是一致的，其由HEK293F細胞表達）。
PD-L1-His抗原製備：在人PD-L1細胞外結構域(ECD)蛋白質的C-末端添加8×HIS標籤構建成PD-L1重組蛋白，人PD-L1的ECD區通過基因合成並亞克隆到哺乳動物的表達載體(如pcDNA3.1(+)表達載體)中。在暫態轉染HEK293F細胞之後，獲得基於鎳的固定化金屬親和層析純化(GE Healthcare)的PD-L1-His抗原。人PD-L1細胞外結構域(ECD)的氨基酸序列為：MRIFAVFIFMTYWHLLNAFTVTVPKDLYVVEYGSNM TIECKFPVEKQLDLAALIVYWEMEDKNIIQFVHGEEDLKVQHSSYRQRARLLKDQLSLGNAALQITDVKLQDAGVYRCMISYGGADYKRITVKVNAPYNKINQRILVVDPVTSEHELTCQAEGYPKAEVIWTSSDHQVLSGKTTTTNSKREEKLFNVTSTLRINTTTNEIFYCTFRRLDPEENHTAELVIPELPLAHPPNER（SEQ ID NO:98）。
1）如表14所示，與ATE抗體相比，本發明抗體L1-R2-4、L1-R2-18、L1-R2-78和L1-R2-89對PD-L1抗原的親和力基本接近。 表14 抗體的解離常數
抗體編號 KD (M)
L1-R2-4 1.67E-09
L1-R2-6 1.03E-08
L1-R2-18 3.92E-09
L1-R2-78 8.99E-09
L1-R2-85 1.15E-08
L1-R2-89 4.08E-09
ATE 1.12E-09
2）如表15所示，與ATE抗體相比，本發明抗體L1-R2-4-36、L1-R2-4-46、L1-R2-4-47、L1-R2-4-55和L1-R2-4-71對PD-L1抗原的親和力更高。 表15  抗體的解離常數
抗體編號 KD (M)
L1-R2-4-36 3.41E-10
L1-R2-4-46 2.82E-10
L1-R2-4-47 2.90E-10
L1-R2-4-55 3.71E-10
L1-R2-4-71 2.82E-10
ATE 1.84E-09
實施例3  抗PD-L1抗體活性的檢測
抗PD-1/PD-L1抗體能夠通過阻斷PD-1和PD-L1的結合，從而解除對下游NFAT信號通路的抑制作用。採用Promega公司提供的MOA (Mechanisms of Action，MOA)檢測系統(PD-1/PD-L1 Blockade Bioassay，Propagation Model，Catalog J1252)，根據說明書提供的方法，通過檢測螢光報告基因的表達反應出NFAT信號的激活情況，從而檢測抗體對PD-1/PD-L1結合的抑制作用。其中，陰性對照抗體IgG-Isotype購自北京義翹神州科技股份有限公司（目錄號：HG1K）。
活性檢測前一天鋪種CHO-PD-L1細胞(來自上述MOA檢測系統)：鋪CHO-PD-L1前1-2天傳代，丟棄培養上清，用無菌PBS洗一遍細胞。加入適量Trypsin(Gibco)於37℃、5% CO 2培養箱中消化3-5 min。加入新鮮培養基終止消化，轉移細胞至50 ml離心管並計數。取所需體積細胞，900 rpm離心5 min。加入DMEM-F12培養基(Gibco)，重懸細胞至4×10 5個細胞/mL。將細胞加入96孔白色細胞培養板(Corning)，100 μl/孔。細胞於37℃、5% CO 2培養箱中培養過夜。
檢測當天處理Jurkat-PD1細胞(來自上述MOA檢測系統)：計數後取所需體積細胞，900 rpm離心5 min。用測定緩衝液(1640培養基(Gibco)+1%FBS)重懸細胞至1.25×10 6個細胞/ml，待用。將CHO-PD-L1細胞培養板中的培養基上清，吸棄95 μl/孔，加入40 μl/孔的測試樣品（上述抗PD-L1抗體、ATE抗體或陰性對照HG1K抗體，最高濃度為20 μg/ml，2倍稀釋在測定緩衝液中，總共9個梯度），再加入40 μl Jurkat-PD1細胞，輕微震盪混勻，放置於37℃、5% CO 2培養箱中培養6小時。檢測：提前將ONE-Glo™ Luciferase Assay System (購自Promega，E6120)融化。6小時後，加入ONE-Glo™試劑，50 μl/孔。室溫放置5-10 min，讀數。
1）如圖1A所示，本實施例的抗PD-L1抗體（L1-R2-4、L1-R2-6、L1-R2-18、L1-R2-78、L1-R2-85和L1-R2-89）均可有效阻斷PD1/PD-L1的相互作用；其中，L1-R2-4抗體具有較強的阻斷活性。
2）如圖1B所示，本發明抗體L1-R2-4-36、L1-R2-4-46、L1-R2-4-47、L1-R2-4-55和L1-R2-4-71均可以有效阻斷PD1/PD-L1的相互作用；與對照抗體ATE相比，抗體（L1-R2-4-36和L1-R2-4-46）具有更強的阻斷活性。
實施例4  抗PD-L1抗體結合力的檢測
通過流式細胞術檢測本發明抗PD-L1抗體與過量表達人PD-L1的CHO細胞的結合。試驗步驟為：將CHO-PD-L1細胞(來自上述MOA檢測系統)與不同稀釋濃度的抗體混勻（抗體最高工作濃度為20 nM，稀釋比例為1:2，稀釋11個梯度），冰上孵育1 h；用PBS洗滌細胞兩次，再加入PE標記的抗人Fc抗體(Jackson ImmunoResearch)螢光二抗，冰上避光孵育30分鐘；PBS洗滌細胞兩次後，再用PBS重懸細胞，通過FACS檢測抗體與細胞的結合。
如圖2所示，本發明抗PD-L1抗體（L1-R2-4-36、L1-R2-4-46、L1-R2-4-47、L1-R2-4-55和L1-R2-4-71）均能結合CHO細胞上過表達的人PD-L1。
實施例5  抗腫瘤作用
實驗小鼠：雌性C57BL/6小鼠（5-8周齡）（江蘇集萃藥康生物科技有限公司）。實驗細胞：收集對數生長期的小鼠結腸癌細胞MC38，去除培養液並用PBS洗兩次後接種；接種量：1×10 6/100 μL/隻；接種位置：右側腹部區域位置。分組給藥：當腫瘤平均體積在50-100 mm 3，對荷瘤小鼠進行隨機分組；入組標準：腫瘤體積CV值小於30%；接種當天定義為D0天，並於分組當天，根據實驗方案設計開始給藥。給藥劑量和給藥方式如表16所示。細胞接種後，每週常規監測腫瘤對動物正常行為的影響。具體內容：實驗動物的活動性，攝食和飲水情況，體重增加或降低情況，眼睛、被毛及其它異常情況。試驗過程中觀察到的臨床症狀均記錄在原始數據中。開始給藥後，每週稱量體重兩次。每週測量瘤體積兩次，瘤體積計算方式為：腫瘤體積（mm 3）= 0.5 ×腫瘤長徑 × 腫瘤短徑 2。監測至35天后結束。接種後第35天計算相對腫瘤抑制率(TGI%)，計算公式如下：TGI%＝(1 −治療組平均相對腫瘤體積∕溶媒組平均相對腫瘤體積)×100%。
腫瘤抑制率結果如圖3A、3B和表17所示，在接種後第35天，與Isotype IgG1組對比，L1-R2-4-71抗體在5 mg/kg單劑量給藥下腫瘤抑制率約為70.89%，腫瘤重量降低約61.81%；本發明抗體在給藥一周後即顯示出顯著的抗腫瘤作用，到第35天時，本發明抗體組（G2組）有2隻小鼠腫瘤完全消退。如圖3C所示，小鼠的體重之間無顯著性差異。 表16   試驗設計表
組別 給藥組 劑量(mg/kg) 途徑 給藥頻率/周數
G1 Isotype IgG1 5 腹腔注射 BIW×5
G2 L1-R2-4-71 5 腹腔注射 BIW×5
表17  第35天腫瘤抑制率
組別 給藥組 腫瘤體積（mm 3） 腫瘤抑制率（TGI%）
G1 Isotype IgG1 1803.59 N/A
G2 L1-R2-4-71 592.40 70.89%
實施例6  酵母以scFv形式展示抗PD-L1抗體
合成編碼scFv片段（包括重鏈可變區、輕鏈可變區以及重輕鏈可變區的連接子(G 4S) 3）的核酸序列，通過限制位點內切酶插入至pYD1載體（Addgene）中，並通過電轉儀轉進宿主釀酒酵母 (如Invitrogen，EBY100)中獲得陽性酵母克隆。將以上獲得的陽性酵母克隆挑出，進行單克隆培養。其中，ATE陽性酵母克隆表面表達的scFV中重鏈可變區、輕鏈可變區與Atezolizumab是一致的，其他陽性酵母克隆表面表達的scFV見表18。連接子的氨基酸序列為GGGGSGGGGSGGGGS（SEQ ID NO:106），其核酸序列為GGTGGAGGCGGTTCAGGCGGAGGTGGCTCTGGCGGTGGCGGATCG（SEQ ID NO:107）。以CP11-46為例，其VH和VL的核酸序列如表13所示。以CP11-71為例，其VH和VL的核酸序列如表13所示。 表18  陽性酵母克隆展示的scFv（scFV的N-端為VH）
scFV VH序號 VL序號
CP11-36 37 68
CP11-46 38 68
CP11-47 39 68
CP11-55 40 68
CP11-71 41 68
CP14-16 42 68
CP14-80 43 68
CP21-8 44 68
CP21-47 45 68
CP21-59 46 68
CP22-34 47 68
CP22-40 48 68
CP22-44 49 68
CP22-45 50 68
實施例7  酵母展示的抗PD-L1 scFv與抗原結合力
採用流式細胞儀檢測酵母展示的抗PD-L1 scFv與抗原蛋白PD-L1-His-Biotin的結合力。將上述酵母分別與1 nM的PD-L1-His-Biotin抗原蛋白在室溫孵育1 h，再用pH7.4的PBS洗滌3次，然後再與Streptavidin-PE螢光二抗在室溫孵育30 min，再用pH7.4的PBS洗滌3次後，加入新的PBS，準備上機檢測。
PD-L1-His-Biotin製備：將純化得到的PD-L1-His抗原蛋白，按照每1 mg蛋白加入26.6 μl 10 nM DMSO配置的biotin (Sigma-Aldrich，B4501-1G)，室溫孵育2 h後，用pH7.4的PBS進行透析。
如圖4所示，本發明抗PD-L1 scFv（CP11-36、CP11-46、CP11-71、CP14-16和CP14-80）與PD-L1-His-Biotin抗原蛋白的結合力明顯優於陽性對照ATE scFV；與陽性對照ATE scFV相比，本發明抗PD-L1 scFV（CP-11-47、CP-11-55、CP21-8、CP21-47和CP22-34）與PD-L1-His-Biotin抗原蛋白的結合力的基本相同。
無
圖1顯示抗PD-L1抗體阻斷PD-1/PD-L1相互作用；圖1A和1B中，縱坐標表示螢光值（相對光單位），橫坐標表示濃度。 圖2顯示抗PD-L1抗體與過量表達PD-L1的細胞的結合；其中，縱坐標表示平均螢光強度，橫坐標表示濃度，Isotype表示陰性對照抗體IgG-Isotype。 圖3A顯示抗體對腫瘤體積的影響。 圖3B顯示抗體對腫瘤重量的影響。 圖3C顯示抗體對小鼠體重的影響。 圖4採用流式細胞術檢測抗PD-L1的scFv與PD-L1-His-Biotin的結合情況。
無
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Figure 12_A0101_SEQ_0002
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Claims (21)

  1. 一種抗體或抗原結合片段，所述抗體或抗原結合片段特異性結合PD-L1，並且包含： （a）HCDR1，其包含X 15X 16X 17X 18X 19DSWIH所示氨基酸序列，X 15為G、S或N，X 16為F、W、L或S，X 17為T、S、A、R或H，X 18為F、L、T或P，X 19為S、K、R或A；和/或 （b）HCDR2，其包含GWISPYGGSTYYADX 20X 21X 22X 23，X 20為S、D、H、G、P或Y，X 21為V、F、L、M或Y，X 22為K、R、G、S、V或H，X 23為G、H、D、Q、S或A；和/或 （c）HCDR3，其包含RHWPGGX 24X 25X 26，X 24為F或L，X 25為D或L，X 26為Y或P；和/或 （d）LCDR1，其包含X 1ASQX 2IX 3X 4X 5LX 6，X 1為L、Q或R，X 2為D、T或G，X 3為G或S，X 4為K、T、或S，X 5為H、W、F或Y，X 6為N或A；和/或 （e）LCDR2，其包含X 7ASX 8LX 9X 10，X 7為A或G，X 8為T、N、S或R，X 9為Q或K，X 10為S或T；和/或 （f）LCDR3，其包含QQX 11X 12X 13TPX 14T，X 11為Y或S，X 12為Y或F，X 13為S或T，X 14為R或Y。
  2. 如請求項1所述的抗體或抗原結合片段，其中所述HCDR1包含SEQ ID NO:1-6中任一項所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO:7-16中任一項所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含SEQ ID NO:17或18所示的氨基酸序列。
  3. 如請求項1或2所述的抗體或抗原結合片段，其中所述LCDR1包含SEQ ID NO:19-23中任一項所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO:24-27中任一項所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQ ID NO:28-31中任一項所示的氨基酸序列。
  4. 如請求項1-3任一項所述的抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段至少包含如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:8所示的HCDR2、如SEQ ID NO:17所示的HCDR3、如SEQ ID NO:19所示的LCDR1、如SEQ ID NO:24所示的LCDR2和如SEQ ID NO:28所示的LCDR3；和/或 所述抗體或抗原結合片段至少包含如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:11所示的HCDR2、如SEQ ID NO:17所示的HCDR3、如SEQ ID NO:19所示的LCDR1、如SEQ ID NO:24所示的LCDR2和如SEQ ID NO:28所示的LCDR3；和/或 所述抗體或抗原結合片段至少包含如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:16所示的HCDR2、如SEQ ID NO:17所示的HCDR3、如SEQ ID NO:19所示的LCDR1、如SEQ ID NO:24所示的LCDR2和如SEQ ID NO:28所示的LCDR3；和/或 所述抗體或抗原結合片段至少包含如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:16所示的HCDR2、如SEQ ID NO:17所示的HCDR3、如SEQ ID NO:20所示的LCDR1、如SEQ ID NO:25所示的LCDR2和如SEQ ID NO:29所示的LCDR3；和/或 所述抗體或抗原結合片段至少包含如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:16所示的HCDR2、如SEQ ID NO:17所示的HCDR3、如SEQ ID NO:21所示的LCDR1、如SEQ ID NO:26所示的LCDR2和如SEQ ID NO:30所示的LCDR3；和/或 所述抗體或抗原結合片段至少包含如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:16所示的HCDR2、如SEQ ID NO:17所示的HCDR3、如SEQ ID NO:22所示的LCDR1、如SEQ ID NO:27所示的LCDR2和如SEQ ID NO:31所示的LCDR3；和/或 所述抗體或抗原結合片段至少包含如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:16所示的HCDR2、如SEQ ID NO:17所示的HCDR3、如SEQ ID NO:23所示的LCDR1、如SEQ ID NO:26所示的LCDR2和如SEQ ID NO:30所示的LCDR3；和/或 所述抗體或抗原結合片段至少包含如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:16所示的HCDR2、如SEQ ID NO:17所示的HCDR3、如SEQ ID NO:19所示的LCDR1、SEQ ID NO:26所示的LCDR2和SEQ ID NO:31所示的LCDR3；和/或 所述抗體或抗原結合片段至少包含如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:8所示的HCDR2、如SEQ ID NO:17所示的HCDR3、如SEQ ID NO:19所示的LCDR1、如SEQ ID NO:24所示的LCDR2和如SEQ ID NO:28所示的LCDR3；和/或 所述抗體或抗原結合片段至少包含如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:9所示的HCDR2、如SEQ ID NO:17所示的HCDR3、如SEQ ID NO:19所示的LCDR1、如SEQ ID NO:24所示的LCDR2和如SEQ ID NO:28所示的LCDR3；和/或 所述抗體或抗原結合片段至少包含如SEQ ID NO:1所示的HCDR1、如SEQ ID NO:10所示的HCDR2、如SEQ ID NO:17所示的HCDR3、如SEQ ID NO:19所示的LCDR1、如SEQ ID NO:24所示的LCDR2和如SEQ ID NO:28所示的LCDR3。
  5. 如請求項1-4任一項所述的抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段的重鏈還包括FR1、FR2、FR3、FR4，其中重鏈FR1包含如SEQ ID NO:32所示的序列，與SEQ ID NO:32所示序列具有至少90%同一性的序列，或與SEQ ID NO:32所示序列相比具有一個或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或 所述抗體或抗原結合片段的重鏈FR2包含如SEQ ID NO:33所示的序列，與SEQ ID NO:33所示序列具有至少90%同一性的序列，或與SEQ ID NO:33所示序列相比具有一個或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或 所述抗體或抗原結合片段的重鏈FR3包含如SEQ ID NO:34所示的序列，與SEQ ID NO:34所示序列具有至少90%同一性的序列，或與SEQ ID NO:34所示序列相比具有一個或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或 所述抗體或抗原結合片段的重鏈FR4包含如SEQ ID NO:35所示的序列，與SEQ ID NO:35所示序列具有至少90%同一性的序列，或與SEQ ID NO:35所示序列相比具有一個或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列。
  6. 如請求項5所述的抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段的重鏈FR1包含如SEQ ID NO:32所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的重鏈FR2包含如SEQ ID NO:33所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的重鏈FR3包含如SEQ ID NO:34所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的重鏈FR4包含如SEQ ID NO:35所示的序列。
  7. 如請求項1-6任一項所述的抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段的輕鏈還包括FR1、FR2、FR3、FR4，其中輕鏈FR1包含如SEQ ID NO:51-56中任一項所示的序列，與SEQ ID NO:51-56中任一項所示序列具有至少90%同一性的序列，或與SEQ ID NO:51-56所示序列相比具有一個或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或 所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR2包含如SEQ ID NO:57-60中任一項所示的序列，與SEQ ID NO:57-60中任一項所示序列具有至少90%同一性的序列，或與SEQ ID NO:57-60中任一項所示序列相比具有一個或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或 所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR3包含如SEQ ID NO:61-64中任一項所示的序列，與SEQ ID NO:61-64中任一項所示序列具有至少90%同一性的序列，或與SEQ ID NO:61-64中任一項所示序列相比具有一個或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或 所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR4包含如SEQ ID NO:65-67中任一項所示的序列，與SEQ ID NO:65-67中任一項所示序列具有至少90%同一性的序列，或與SEQ ID NO:65-67中任一項所示序列相比具有一個或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列。
  8. 如請求項7所述的抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR1包含如SEQ ID NO:51所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR2包含如SEQ ID NO:57所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR3包含如SEQ ID NO:61所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR4包含如SEQ ID NO:65所示的序列；或 所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR1包含如SEQ ID NO:52所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR2包含如SEQ ID NO:58所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR3包含如SEQ ID NO:62所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR4包含如SEQ ID NO:66所示的序列；或 所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR1包含如SEQ ID NO:53所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR2包含如SEQ ID NO:59所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR3包含如SEQ ID NO:63所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR4包含如SEQ ID NO:67所示的序列；或 所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR1包含如SEQ ID NO:54所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR2包含如SEQ ID NO:60所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR3包含如SEQ ID NO:64所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR4包含如SEQ ID NO:67所示的序列；或 所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR1包含如SEQ ID NO:55所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR2包含如SEQ ID NO:59所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR3包含如SEQ ID NO:63所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR4包含如SEQ ID NO:67所示的序列；或 所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR1包含如SEQ ID NO:56所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR2包含如SEQ ID NO:57所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR3包含如SEQ ID NO:61所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈FR4包含如SEQ ID NO:67所示的序列。
  9. 如請求項1-8任一項所述的抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:36-50中任一項所示的序列，與SEQ ID NO:36-50中任一項所示序列具有至少80%同一性的序列，或與SEQ ID NO:36-50中任一項所示序列相比具有一個或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或 所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:68-73中任一項所示的序列，與SEQ ID NO:68-73中任一項所示序列具有至少80%同一性的序列，或與SEQ ID NO:68-73中任一項所示序列相比具有一個或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列。
  10. 如請求項1-9任一項所述的抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:36-50中任一項所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:68-73中任一項所示的序列。
  11. 如請求項1-10任一項所述的抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:36-50中任一項所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:68-73中任一項所示的序列；和/或 所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:36所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:68所示的序列；和/或 所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:36所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:69所示的序列；和/或 所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:36所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:70所示的序列；和/或 所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:36所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:71所示的序列；和/或 所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:36所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:72所示的序列；和/或 所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:36所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:73所示的序列；和/或 所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:37所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:68所示的序列；和/或 所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:38所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:68所示的序列；和/或 所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:39所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:68所示的序列；和/或 所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:40所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:68所示的序列；和/或 所述抗體或抗原結合片段的重鏈可變區包含SEQ ID NO:41所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈可變區包含SEQ ID NO:68所示的序列。
  12. 如請求項1-11任一項所述的抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段的重鏈恆定區包含氨基酸序列如SEQ ID NO:74或75所示的序列，或與SEQ ID NO:74或75所述序列具有至少80%同一性的序列，或與SEQ ID NO:74或75所示序列相比具有一個或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或 所述抗體或抗原結合片段的輕鏈恆定區包含氨基酸序列如SEQ ID NO:76所示的序列，或與SEQ ID NO:76所述序列具有至少80%同一性的序列，或與SEQ ID NO:76所示序列相比具有一個或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列。
  13. 如請求項1-12任一項所述的抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段的重鏈恆定區包含氨基酸序列如SEQ ID NO:74所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈恆定區包含氨基酸序列如SEQ ID NO:76所示的序列；或 所述抗體或抗原結合片段的重鏈恆定區包含氨基酸序列如SEQ ID NO:75所示的序列，所述抗體或抗原結合片段的輕鏈恆定區包含氨基酸序列如SEQ ID NO:76所示的序列。
  14. 一種抗體或抗原結合片段，所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77-91中任一項所示的序列，與SEQ ID NO:77-91中任一項所示序列具有至少80%同一性的序列，或與SEQ ID NO:77-91任一項所示序列相比具有一或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列；和/或 所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92-97中任一項所示的序列，與SEQ ID NO:92-97中任一項所示序列具有至少80%同一性的序列，或與SEQ ID NO:92-97中任一項所示序列相比具有一或多個保守氨基酸取代的氨基酸序列。
  15. 如請求項14所述的抗體或抗原結合片段，其中所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示的序列；或 所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:93所示的序列；或 所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:94所示的序列；或 所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:95所示的序列；或 所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:96所示的序列；或 所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:77所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:97所示的序列；或 所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:78所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示的序列；或 所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:79所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示的序列；或 所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:80所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示的序列；或 所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:81所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示的序列；或 所述抗體的重鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:82所示的序列，所述抗體的輕鏈包含氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示的序列。
  16. 一種藥物組合物，所述藥物組合物包含請求項1-15任一項所述的抗體或抗原結合片段，以及藥學上可接受的輔料。
  17. 一種核酸分子，其編碼如請求項1-15任一項所述的抗體或抗原結合片段。
  18. 一種載體或宿主細胞，包含如請求項17所述的核酸分子。
  19. 一種用於治療或改善T細胞功能障礙病症的方法，包括向患者施用有效劑量的如請求項1-15任一項所述抗體或抗原結合片段。
  20. 如請求項19所述的方法，其中所述T細胞功能障礙病症選自由細菌導致的感染、病毒導致的感染、真菌導致的感染、原生動物導致的感染、癌症與腫瘤所組成之群組， 其中所述癌症和腫瘤選自由乳腺癌、肺癌、結腸癌、卵巢癌、黑色素瘤、膀胱癌、腎癌、肝癌、唾液腺癌、胃癌、神經膠質瘤、甲狀腺癌、胸腺癌、上皮癌、頭癌、頸癌與胰腺癌所組成之群組。
  21. 一種診斷或預後試劑盒，其包括請求項1-15任一項所述的抗體或抗原結合片段。
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