JP2021515220A - がん細胞検出用の装置及び方法 - Google Patents

がん細胞検出用の装置及び方法 Download PDF

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Abstract

本発明には、生物学的サンプル中のがん細胞、特に胆管がん細胞を検出するための統合型マイクロ流体チップが開示される。生物学的サンプル中の胆管がん細胞を検出するための方法も開示される。【選択図】図２

Description

発明者又は共同発明者による先開示を明らかにするための記載（３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．１．７７（Ｂ）（６））
本出願に記載された本発明の主題の一部は、発明者であるＷｅｉ−ＣｈｕｎＴｓａｉ及びＧｗｏ−ＢｉｎＬｅｅによってタイトル「Ａ Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃ Ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｉｎｏｍａ Ｃｅｌｌｓ ｂｙ Ｕｓｉｎｇ Ｈｅｐａｒａｎ Ｓｕｌｆａｔｅ Ｏｃｔａｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ」の文献で公開された。この文献は、２０１７年４月９日から４月１２日まで、カリフォルニア州ロサンゼルス（米国）で開催されたＩＥＥＥ第１２回国際会議に掲載された。この刊行物は、本発明者のうちの２人によって作成され、この文献の全体は、参照により本明細書に組み込まれる。この文献のコピーは、７８Ｆｅｄ．Ｒｅｇ．１１０７６（Ｆｅｂ．１４，２０１３）連邦準備制度理事会のガイダンスに従って同時に提出された情報開示陳述書で提供される。
本出願は、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）の定めにより２０１８年３月１日に出願された米国仮出願Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．６２／６３６，９１０の優先権を主張し、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本開示は、生物学的サンプル中のがん細胞を検出するための装置及び方法に関する。
胆管がん（ＣＣＡ）は、肝臓から小腸に胆汁を排出する胆管で発生する一種の原発性悪性肝がんであり、その予後が悪く、診断後の５年生存率が１０％未満である。現在、超音波検査、磁気共鳴画像法、コンピュータ断層撮影法などの画像技術、及び鉗子生検又はブラシ細胞診による病理診断が、ＣＣＡを検出するための主要手段である。しかし、これらの方法は、腫瘍のサイズ、局在、病変によって制限されるため、ＣＣＡ腫瘍を早期に発見することはできない。ＣＣＡの診断に使用される最も一般的な腫瘍バイオマーカーは、炭水化物抗原１９−９（ＣＡ１９−９）と癌胎児性抗原（ＣＥＡ）である。しかし、ＣＡ１９−９及びＣＥＡの感度と特異性は、臨床応用ではまだ満足のいくものではない。
従って、関連技術には、ＣＣＡの早期診断と治療を可能にする早期段階でＣＣＡを検出するための新しいバイオマーカーを開発する必要がある。
本発明者は、いくつかの新規な硫酸化八糖が胆管がん細胞の表面に結合するバイオマーカーとして有用であるため、被験体が胆管がんを発症するリスクがあるか否かを予測するのに有用であることを予想外に発見した。したがって、本開示は、生物学的サンプルを分析するための統合型マイクロ流体チップ、及び統合型マイクロ流体チップの分析結果に基づいて被験体が胆管がんを患っているか、又は患うリスクがあることを予測する方法を提供する。
したがって、本開示の第１態様では、生物学的サンプル中の胆管がん細胞を同定するバイオマーカーとして機能する硫酸化八糖の新規用途が提供される。上記硫酸化八糖は、式（Ｉ）の構造を有する。
Figure 2021515220
式中、Ｒ１は−ＮＨＡｃ又は−ＮＨＳＯ３Ｍであり、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立してＨ又は−ＳＯ３Ｍであり、Ｍはナトリウムイオン、カリウムイオン、リチウムイオン又はアンモニウムイオンからなる群より選択される１価のカチオンである。
本開示の好ましい実施形態によれば、式（Ｉ）中、Ｒ１は−ＮＨＳＯ３Ｎａであり、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立して−ＳＯ３Ｎａである。
本開示の別の好ましい実施形態によれば、式（Ｉ）中、Ｒ１は−ＮＨＳＯ３Ｎａであり、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立してＨである。
本開示の第２態様では、生物学的サンプル中の胆管がん細胞を検出する方法が提供される。上記方法は、生物学的サンプルを式（Ｉ）の硫酸化八糖でプレコートされた磁気ビーズ又はその薬学的に許容される塩に接触させるステップを含み、上記磁気ビーズと上記生物学的サンプルとの結合は、上記生物学的サンプルに胆管がん細胞が存在することを示す。
本開示の実施形態によれば、式（Ｉ）の硫酸化八糖は、さらにビオチンに結合する。
本開示の好ましい実施形態によれば、上記磁気ビーズは式（Ｉ）の硫酸化八糖でプレコートされ、式中、Ｒ１は−ＮＨＳＯ３Ｎａであり、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立してＨである。
本開示の別の実施形態によれば、上記磁気ビーズは式（Ｉ）の硫酸化八糖でプレコートされ、式中、Ｒ１は−ＮＨＳＯ３Ｎａであり、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立して−ＳＯ３Ｎａである。
本開示の実施形態によれば、上記生物学的サンプルは、血液、血漿、血清、尿、痰、唾液、組織サンプル、生体組織切片、及び組織溶解物から選択される群より選択され得る。
本開示の第３態様では、生物学的サンプルを分析し、例えば、上記生物学的サンプルががんを有するか否かを検出するためのマイクロ流体チップが提供される。上記マイクロ流体チップは、
洗浄緩衝液を収容するように構成される複数の洗浄緩衝液チャンバ（ｗａｓｈ ｂｕｆｆｅｒ ｃｈａｍｂｅｒ）と、
それぞれがん細胞を、上記がん細胞のバイオマーカーでプレコートされた磁気ビーズに捕捉するように構成される複数の捕捉チャンバ（ｃａｐｔｕｒｅ ｃｈａｍｂｅｒ）と、
複数の上記捕捉チャンバから洗い出された未捕捉のがん細胞を収容するように構成される廃棄物チャンバ（ｗａｓｔｅ ｃｈａｍｂｅｒ）と、
上記洗浄緩衝液チャンバ、複数の上記捕捉チャンバ、及び上記廃棄物チャンバを接続する複数のマイクロチャンネル（ｍｉｃｒｏｃｈａｎｎｅｌ）と、を含む。
本開示の実施形態によれば、上記マイクロ流体チップは、ガラス基板及び少なくとも１層のポリジメチルシロキサンで作製される。
本開示の好ましい実施形態によれば、上記マイクロ流体チップは、構造的には、互いにマイクロチャンネルを介して接続される６つの洗浄緩衝液チャンバ、６つの捕捉チャンバ、及び１つの廃棄物チャンバを含む。
本開示の実施形態によれば、それぞれの捕捉チャンバは、がん細胞が結合した上記磁気ビーズを流体サンプルから分離するように構成される。
本開示の実施形態によれば、上記磁気ビーズは、式（Ｉ）の硫酸化八糖でプレコートされ、
Figure 2021515220
式中、Ｒ１は−ＮＨＡｃ又は−ＮＨＳＯ３Ｍであり、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立してＨ又は−ＳＯ３Ｍであり、Ｍはナトリウムイオン、カリウムイオン、リチウムイオン及びアンモニウムイオンからなる群より選択される１価のカチオンである。
本開示の実施形態によれば、式（Ｉ）の硫酸化八糖は、さらにビオチンに結合する。
本開示の実施形態によれば、式（Ｉ）の硫酸化八糖において、Ｒ１は−ＮＨＳＯ３Ｎａであり、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立して−ＳＯ３Ｎａである。
本開示の実施形態によれば、式（Ｉ）の硫酸化八糖において、Ｒ１は−ＮＨＳＯ３Ｎａであり、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立してＨである。
本開示の第４態様では、生物学的サンプルを分析するためのキットが提供される。上記キットは、本開示のマイクロ流体チップと、バイオマーカーでプレコートされた磁気ビーズと、本開示のマイクロ流体チップを用いて生物学的サンプルを分析するための少なくとも１つの試薬と、ユーザに上記キットの使用方法を提供する説明書と、を含む。
本開示の一実施形態によれば、上記バイオマーカーは、上記式（Ｉ）の硫酸化八糖であり、式中、Ｒ１は−ＮＨＳＯ３Ｎａであり、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立して−ＳＯ３Ｎａである。
本開示の別の実施形態によれば、上記バイオマーカーは、上記式（Ｉ）の硫酸化八糖であり、式中、Ｒ１は−ＮＨＳＯ３Ｎａであり、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立してＨである。
以下、本開示の１つ以上の実施形態の詳細を説明する。本発明の他の特徴又は利点は、以下の詳細な説明、及び添付の特許請求の範囲から明らかであろう。
前述の一般的な説明及び以下の詳細な説明の両方が例によるものであり、請求された本発明のさらなる説明を提供することを意図していることを理解されたい。
本特許又は出願ファイルには、カラーで実行された少なくとも１つの図面を含む。カラー図面を備えるこの特許又は特許出願公開の写しは、要請に応じて必要な料金を支払った上で庁により提供される。
明細書に組み込まれ、その一部を構成する添付の図面は、本発明の様々な態様の様々な例示的なシステム、方法、及び他の例示された実施形態を示している。本明細書は、添付の図面に照らして読んだ以下の詳細な説明からよりよく理解される。
マイクロ流体チップの概略図である。図１（ａ）は、底部から頂部へ順にガラス基板、薄いＰＤＭＳ層、及び厚いＰＤＭＳ層を含むマイクロ流体チップの概略図である。図１（ｂ）は、ＰＤＭＳ層に刻み込まれた洗浄緩衝液チャンバ、捕捉チャンバ、液体チャンバ及びマイクロチャンネルの概略図である。 ＨＳ１塗布ビーズに捕捉されたＨｕｈ−２８細胞を示す写真である。図２（ａ）は、未捕捉のＨｕｈ−２８細胞を示す。図２（ｂ）は、３０分間インキュベーション後のＨＳ１塗布ビーズで捕捉されたＨｕｈ−２８細胞を示す。図２（ｃ）は、磁気ビーズ−細胞複合体から収集された上清を示す。すべての画像は１００倍の倍率で拡大されたものである。
添付の図面に関連して以下に提供される詳細な説明は、本開示の説明として意図されており、本開示を構築又は利用できる唯一の形態を表すことを意図していない。
１．定義
特に明記しない限り、「患者」又は「被験体」という用語は、本開示において交換可能に使用することができ、任意の動物を指す。動物は人間の被験体又は人間以外の被験体でもよい。被験体は人間であってもよいが、獣医の治療を必要とする哺乳類であってもよい。哺乳類は、例えば、家畜又は狩猟動物、農場動物、及び実験動物（例えば、ラット、マウス、モルモット、霊長類など）である。通常、動物は非ヒト霊長類などの非ヒト哺乳動物である。非ヒト霊長類は、チンパンジー、カニクイザル、クモザル、及びマカク（例えば、Ｒｈｅｓｕｓ又はＰａｎ）が含まれる。家畜及び狩猟動物には、牛、馬、豚、羊、鹿、バイソン、水牛、ミンク、ネコ（例えば、飼いネコ、犬（例えば、イヌ））、オオカミとキツネ、鳥類（例えば、鶏、七面鳥、ダチョウ）、魚（例えば、マス、ナマズ、サーモン）が含まれる。
本明細書において、用語「接触」は、細胞（例えば、生物学的サンプル中の細胞）に関して使用され、細胞若しくは生物学的サンプルへの薬剤の送達又は「投与」の任意のモードを指し、薬剤（例えば、本開示の硫酸化八糖又は本開示の硫酸化八糖でプレコートされた磁気ビーズ）は、それらの間の親和性結合を達成するのに十分な量で１つ又は複数の細胞と接触させられる。
本発明の広い範囲を示す数値範囲及びパラメータが近似値であるにもかかわらず、特定の実施例に示された数値は可能な限り正確に報告される。しかし、いずれの数値も本質的に、それぞれの試験測定値に見られる標準偏差から必然的に生じる特定の誤差を含む。また、本明細書で使用する「約」という用語は、一般に、所与の値又は範囲の１０％、５％、１％又は０．５％以内を意味する。或いは、用語「約」は、当業者によって考慮される場合、平均の許容可能な標準誤差内にあることを意味する。操作例／実施例以外で、又は特に明記しない限り、本明細書中に開示される材料の量、時間、温度、操作条件、量の比などについての、数値範囲、量、値及びパーセンテージの全てが、すべての場合において、用語「約」により修飾されているものと理解されるべきである。したがって、反対に示されない限り、本開示及び添付の請求項に記載される数値パラメータは、所望に応じて変化することのできる近似値である。少なくとも、各数値パラメータは、報告された有効数字の数に照らして、及び通常の丸め技法を適用することによって、少なくとも解釈されるべきである。
本明細書で使用されるように、文脈が明らかに他に示されない限り、単数形「ａ」及び「ａｎ」は複数の言及を含む。
２．本発明の硫酸化八糖
本開示のいくつかの態様は、特定の硫酸化八糖が生物学的サンプル中のがん細胞を同定及び／又は検出するための方法及び／又はキットにおいてバイオマーカーとして有用であるという発見に関する。硫酸化八糖の例を後述する。
一態様では、本発明は、式（Ｉ）の硫酸化八糖に関する。
Figure 2021515220
式中、Ｒ１は−ＮＨＡｃ又は−ＮＨＳＯ３Ｍであり、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立してＨ又は−ＳＯ３Ｍであり、Ｍはナトリウムイオン、カリウムイオン、リチウムイオン及びアンモニウムイオンからなる群より選択される１価のカチオンである。
本開示のいくつかの実施形態において、Ｒ１は−ＮＨＳＯ３Ｎａであり、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立して−ＳＯ３Ｎａである。
本開示のさらなる実施形態において、Ｒ１は−ＮＨＳＯ３Ｎａであり、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立してＨである。
本開示の硫酸化八糖は、実施例に記載の手順に従って製造することができる。本発明の化合物のすべての立体異性体は、いずれも本発明の範囲内に含まれる。上記立体異性体は、例えば、式（Ｉ）の化合物のＲ置換基上の不斉炭素により存在し、エナンチオマー及びジアステレオマーの形態を含む。本発明の化合物の個々の立体異性体は、例えば、他の異性体を実質的に含まないか、或いは、例えば、ラセミ体として混合され、又は他のすべての立体異性体若しくは他の選択された立体異性体と混合され得る。本発明のキラル中心は、ＩＵＰＡＣ １９７４勧告に定義されるＳ又はＲ構成を有することができる。
３．使用方法
式（Ｉ）の硫酸化八糖は、がん細胞、特に胆管に由来するがん細胞の表面に結合することができる。従って、本開示は、生物学的サンプル中の胆管がん細胞を同定又は検出する方法を含む。
本発明の方法は、被験体の生物学的サンプルを式（Ｉ）の硫酸化八糖でプレコートされた磁気ビーズに接触させることを含む。磁気ビーズと生物学的サンプルとの間の結合は、生物学的サンプルにおける胆管がん細胞の存在を示す。
本開示の実施形態によれば、磁気ビーズにプレコートされた式（Ｉ）の硫酸化八糖は、さらにビオチンに結合する。
本開示の好ましい実施形態によれば、式（Ｉ）の硫酸化八糖において、Ｒ１は−ＮＨＳＯ３Ｎａであり、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立してＨである。
本開示の別の実施形態によれば、式（Ｉ）の硫酸化八糖において、Ｒ１は−ＮＨＳＯ３Ｎａであり、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立して−ＳＯ３Ｎａである。
本発明の方法に適用される生物学的サンプルの例には、血液、血漿、血清、尿、痰、唾液、組織サンプル、生体組織切片、及び組織溶解物が含まれるが、これらに限定されない。好ましい実施形態において、生物学的サンプルは血液である。
従って、本開示は、被験体が胆管がんを有するか否かを予測する方法を提供する。予測は、被験体のサンプルに対して行われる。上記サンプルは、血液、血漿、血清、尿、痰、唾液、組織サンプル、生体組織切片、及び組織溶解物のいずれか１つであり得る。上記方法は、組織サンプルを式（Ｉ）の硫酸化八糖でプレコートされた磁気ビーズと十分な時間インキュベートすることを含む。組織サンプルと式（Ｉ）の硫酸化八糖でプレコートされた磁気ビーズが結合したことが観察された場合、被験体は胆管がんを患っている。
特定の実施形態によれば、上記組織サンプルは、血液、血漿、血清、尿、痰、唾液、組織サンプル、生体組織切片、及び組織溶解物であり得る。好ましい実施形態において、上記組織サンプルは血液である。
本開示の好ましい実施形態によれば、磁気ビーズは、式（Ｉ）の硫酸化八糖でプレコートされ、式中、Ｒ１は−ＮＨＳＯ３Ｎａであり、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立してＨである。
本開示の別の実施形態によれば、磁気ビーズは、式（Ｉ）の硫酸化八糖でプレコートされ、式中、Ｒ１は−ＮＨＳＯ３Ｎａであり、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立して−ＳＯ３Ｎａである。
４．マイクロ流体チップ
特定の実施形態において、本開示は、生物学的サンプル中のがん細胞の検出及び／又は分離を促進する統合型マイクロ流体チップに関する。
図１は、本開示のマイクロ流体チップ１００の概略図である。マイクロ流体チップ１００は、ガラス基板及び少なくとも１層のポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）で作製される。図１（ａ）に示すように、マイクロ流体チップ１００は、底部から頂部へ順にガラス基板１１０と、第１ＰＤＭＳ層１２０、及び第２ＰＤＭＳ層１３０を含む。第１及び第２ＰＤＭＳ層１２０、１３０は、それぞれ液体通路層及び空気通路層として機能する。好ましくは、第１ＰＤＭＳ層１２０は、第２ＰＤＭＳ層１３０よりも薄い。流体チャンバ及び流体管路（又は流体チャンネル）のような微細構造は、当該技術分野で知られているコンピュータ数値制御（ＣＮＣ）機械加工プロセス（例えば、ＥＧＸ−４００，Ｒｏｌａｎｄ ＩｎｃＪａｐａｎ）により第１及び第２ＰＤＭＳ層１２０、１３０に形成又は刻み込まれた。
図１（ｂ）は、第２ＰＤＭＳ層１３０に形成された流体チャンバ及び／又は流体管路の代表概略図である。同図に示すように、６つの洗浄緩衝液チャンバ１０２（ａ〜ｆ）、６つの捕捉チャンバ１０４（ａ〜ｆ）、廃棄物チャンバ１０６、及び複数のマイクロチャンネル１０８は、ＰＤＭＳ層１３０に形成されている。簡潔にするために、図１（ｂ）には、６つの洗浄緩衝液チャンバの１つ（即ち、チャンバ１０２）及び６つの捕捉チャンバの１つ（即ち、チャンバ１０４）のみが示されている。これらのチャンバは、環状に配置され、廃棄物チャンバ１０６は、ＰＤＭＳ層の中心に設けられ、６つの捕捉チャンバ１０４（ａ〜ｆ）は、廃棄物チャンバ１０６の周囲に刻み込まれ、各捕捉チャンバは、マイクロチャンネル１０８を介して隣接する捕捉チャンバ及び廃棄物チャンバに接続されている。また、６つの洗浄緩衝液チャンバ１０２（ａ〜ｆ）は、６つの捕捉チャンバ１０４（ａ〜ｆ）の周囲に刻み込まれ、各洗浄緩衝液チャンバは、マイクロチャンネル１０８を介して隣接する洗浄緩衝液チャンバ及び捕捉チャンバに接続されている。このような配置により、各洗浄緩衝液チャンバ１０２（ａ〜ｆ）、捕捉チャンバ１０４（ａ〜ｆ）及び廃棄物チャンバ１０６は、マイクロチャンネル１０８を介して流体連通している。チャンバ及びマイクロチャンネルは、同じ方法で第１ＰＤＭＳ層１２０に形成することができる。
操作する際に、まず、適量の流体サンプル（例えば、血液又は血漿）を各捕捉チャンバ１０４（ａ〜ｆ）に注入する。次に、バイオマーカー（即ち、本発明の式（Ｉ）の硫酸化八糖）でプレコートされた磁気ビーズを各捕捉チャンバ１０４（ａ〜ｆ）に加え、各チャンバ１０４（ａ〜ｆ）における混合物を十分な時間（例えば、少なくとも１５分間）反応させ、がん細胞を親和性結合により磁気ビーズ上のバイオマーカーに結合させる。磁力により所望のがん細胞が結合された磁気ビーズを収集し、生物学的サンプルにおける未結合の細胞及び他の成分を洗浄緩衝液チャンバ１０２（ａ〜ｆ）に貯蔵された洗浄緩衝液で洗い出して廃棄物チャンバ１０６に収集する。
本開示の好ましい実施形態によれば、マイクロ流体チップは、６つの洗浄緩衝液チャンバ及び６つの捕捉チャンバを含むように構成される。従って、このマイクロ流体チップは、６つの異なる条件下（例えば、それぞれ異なる種類のバイオマーカーが塗布された６種類の磁気ビーズ、又は１種類のバイオマーカー、６つの異なる結合条件（例えば、ｐＨ、イオン強度など））で所望のがん細胞の同定及び／又は捕捉に使用できる。このようにして、流体サンプル中のがん細胞の検出が促進され、より広範囲のバイオマーカー及び／又は条件を使用できるため、検出はより完全である。
本開示の好ましい実施形態において、本発明の式（Ｉ）の硫酸化八糖でプレコートされた磁気ビーズをそれぞれマイクロ流体チップの捕捉チャンバに注入し、硫酸化八糖ＨＳ１及びＨＳ１２でプレコートされた磁気ビーズにより胆管がん細胞を同定する。
さらに、検出信号を増幅するために、各磁気ビーズをさらにビオチンに結合させてもよい。
５．キット
本発明のさらなる態様は、生物学的サンプル中のがん細胞を同定及び／又は検出するためのキットに関する。このキットは、少なくとも本開示のマイクロ流体チップと、バイオマーカーでプレコートされた磁気ビーズと、マイクロ流体チップにより生物学的サンプルを分析するための少なくとも１つの試薬と、ユーザに上記キットの使用方法を提供する説明書と、を含む。
本開示の好ましい実施形態によれば、上記キットは、少なくとも３つの容器、及びユーザに上記キットの使用方法を提供する説明書を含む。第１容器は、本開示のマイクロ流体チップをその中に収容することができる。第２容器は、硫酸化八糖ＨＳ１でプレコートされた磁気ビーズ、硫酸化八糖ＨＳ１２でプレコートされた磁気ビーズ又はそれらの混合物をその中に収容することができる。第３容器は、分析に必要な緩衝液（例えば、がん細胞と結合していない磁気ビーズを洗い流すための緩衝液）をその中に収容することができる。説明書は、パンフレット、テープ、ＣＤ、ＶＣＤ又はＤＶＤの形態であってもよい。
本発明は、限定ではなく実証の目的で提供される以下の実施形態を参照して、より具体的に説明される。それらは通常使用される可能性のあるものであるが、当技術分野の当業者に知られている他の手順、方法論、又は技術を代わりに使用することができる。
実施例
材料及び方法
細胞培養
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（ヒト胎児腎臓由来）及びＣＯＳ−１細胞（サル腎臓由来）を、熱不活性化された１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で培養した。Ｎｅｕｒｏ２ａ細胞（マウス神経芽細胞腫由来）を１０％ＦＣＳを含有するＲＰＭＩ−１６４０中で培養した。
ＳＮＵ４７８、ＨｕＣＣＴ１、Ｈｕｈ２８、ＢｘＰＣ３、及びＨＣＴ８をそれぞれ１００Ｕ／ｍＬペニシリン及び１００ｇ／ｍＬストレプトマイシン（Ｐｅｎ Ｓｔｒｅｐ,Ｇｉｂｃｏ（登録商標），Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏ．，ＵＳＡ）、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ，Ｇｉｂｃｏ（登録商標），Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏ．，ＵＳＡ）を含むＲＰＭＩ １６４０（Ｇｉｂｃｏ（登録商標），Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏ．，ＵＳＡ）中で培養した。ＫＫＵ１００、ＭＭＮＫ１、及びＨｅｐＧ２をそれぞれ１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００ｇ／ｍＬストレプトマイシン、及び１０％ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ中で培養した。すべての細胞は、５％ＣＯ２を含む雰囲気下、３７℃で培養された。
Figure 2021515220
マイクロ流体チップの構築
磁気ビーズを用いて効果的にがん細胞を捕捉するために、Ｔｓａｉ Ｗ．−Ｃ．ｅｔ ａｌ（Ａ Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃ Ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｉｎｏｍａ Ｃｅｌｌｓ ｂｙ Ｕｓｉｎｇ Ｈｅｐａｒａｎ Ｓｕｌｆａｔｅ 八糖ｓ．２０１７ ＩＥＥＥ １２ｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ,Ｌｏｓ Ａｎｇｅｌｅｓ,ＣＡ ＵＳＡ）に記載の手順に従って統合型マイクロ流体チップを構築した。簡単に言えば、上記統合型マイクロ流体チップは、２層のポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）層及びガラス基板で作製された。２層のＰＤＭＳ層のうちの１層は、もう１層のＰＤＭＳ層よりも厚かった。比較的厚いＰＤＭＳ層は、空気通路層として使用され、比較的薄いＰＤＭＳ層は、液体通路層として使用され、ガラス基板は、ＰＤＭＳ層を密封するために使用された。
コンピュータ数値制御（ＣＮＣ）機械加工プロセス（ＥＧＸ−４００，Ｒｏｌａｎｄ Ｉｎｃ．，Ｊａｐａｎ）により０．５−ｍｍドリルビットを用いてポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）上に微細構造を刻み込むことで空気及び液体通路層のマスターモールドを形成した。さらに、ＰＤＭＳキャスティング及びレプリカ成形プロセスを実行してマスターモールドの逆構造を得た。ＰＤＭＳの製造は、硬化剤とＰＤＭＳプレポリマー（Ｓｙｌｇａｒｄ １８４Ａ／Ｂ,Ｓｉｌ−Ｍｏｒｅ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｌｔｄ．，ＵＳＡ）を１：１０の重量比で混合し、真空下に置いてすべての気泡を除去することによって行った。気泡を４０分間除去した後、マスターモールドにＰＤＭＳ混合物を手動で充填し、７０°Ｃで２時間硬化させた。さらに、硬化した２つのＰＤＭＳ層をマスターモールドから機械的に剥がし、プラズマ酸化により厚いＰＤＭＳ層と薄いＰＤＭＳ層を結合した。最後に、同じプラズマ酸化手順により結合されたＰＤＭＳ層をガラス基板に結合し、マイクロ流体チップを形成した。
マイクロ流体チップを用いるがん細胞の捕捉
上記のように構築されたマイクロ流体チップを用いてがん細胞を捕捉した。簡単に言えば、様々なタイプのがん細胞株に由来する２×１０５細胞を１００μＬの１×リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に懸濁させ、それぞれ６つの捕捉チャンバに注入した。１０μＬの異なる濃度の硫酸化八糖で塗布されたビーズを捕捉チャンバに手動でピペットで加え、マイクロポンプで１５分間細胞と穏やかに混合した。インキュベートした後、細胞は本発明の式（Ｉ）の硫酸化八糖でプレコートされた磁気ビーズによって識別され、結合された。次に、これらの捕捉された細胞を磁力で収集し、１×ＰＢＳ緩衝液で洗浄した。分離後、ビーズと捕捉された細胞を１００μＬの１×ＰＢＳ緩衝液に懸濁させ、最後に血球計算盤に注入して捕捉率を計算した。
統計分析
実験のサンプルサイズを事前に決定するために統計的方法は使用されなかった。データを分析し、平均値±ｓ．ｅ．ｍ．又はｓ．ｄ．で示した（各図に示される）。スチューデントのｔ検定を使用してデータ群を分析し、２群のデータを比較した。２群以上の場合には、一元配置分散分析（Ｏｎｅ−ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）とｐｏｓｔ ｈｏｃ Ｄｕｎｃａｎ'ｓ又はＴｕｋｅｙテストとの組み合わせにより多重比較を校正した。すべてのテストは、両面で実行された。Ｐ値が０．０５以下の結果は有意であると見なされた。Ｅｘｃｅｌ ２０１３（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ ｓｏｆｔｗａｒｅ）により平均値、ｓ．ｄ．、ｓ．ｅ．ｍ．及び統計を計算した。この研究では、データの包含基準又は除外基準は使用されなかった。
実施例１：本発明の硫酸化八糖の化学合成
スキームＩ及びＩＩに記載の手順に従って本発明の八糖ＨＳ１−ＨＳ８及びＨＳ９−ＨＳ１６をそれぞれ合成した。一般に、脱離基となるチオトリル（ｔｈｉｏｔｏｌｙｌ）官能基を有する二糖及び四糖ビルディングブロックを用いて収束的合成により糖骨格を構築した。最近ヘパリン及びヘパロサンの合成に使用されているパターンに従って保護基を選択した（Ｈｕ ｅｔ ａｌ．，２０１１ Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．３，５５７−５６３；Ｚｕｌｕｅｔａ ｅｔ ａｌ．，２０１２ Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１３４，８９８８−８９９５）。完全に保護された骨格に対しては、発散的な方法（Ｈｕ ｅｔ ａｌ．，２０１２ Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅ．Ｓｏｃ．１３４,２０７２２−２０７２７．）により官能基の変換を実行し、アミノペンチルアグリコン部分を有する異なるスルホン化の最終生成物を提供した。
スキームＩ
Figure 2021515220
Pyridine：ピリジン
スキームＩＩ
Figure 2021515220
Pyridine：ピリジン
ＨＳ１からＨＳ１６の化学データを以下に示す。
Figure 2021515220
５−アミノペンチル（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル（ｉｄｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｕｒｏｎｙｌ）−（１→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル−（１→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル−（１→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｌ−イドピラノシドウロネート（ｉｄｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｕｒｏｎａｔｅ）（ＨＳ１）
１Ｈ ＮＭＲ（６００ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ５．１２−５．０６（ｍ，４Ｈ），４．８４−４．８２（ｍ，Ｈ），４．７９−４．７６（ｍ，２Ｈ），４．６７−４．６３（ｍ，３Ｈ），４．４２（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），４．０２−３．９３（ｍ，４Ｈ），３．９０−３．８３（ｍ，５Ｈ），３．８３−３．７１（ｍ，１５Ｈ），３．７１−３．６２（ｍ，８Ｈ），３．６２−３．５３（ｍ，４Ｈ），３．５３−３．４９（ｍ，１Ｈ），３．３８（ｔ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），２．９０（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．９４（ｓ，３Ｈ，Ａｃ），１．９３（ｓ，６Ｈ，Ａｃ×２），１．９２（ｓ，３Ｈ，Ａｃ），１．６３−１．５４（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２ ｌｉｎｋｅｒ），１．４０−１．３２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ ｌｉｎｋｅｒ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ１７５．０（Ｃ），１７４．９（Ｃ），１７４．８（Ｃ），１７４．３（Ｃ），１７４．２８（Ｃ），１７４．２（Ｃ），１０１．６（ＣＨ），１００．７（ＣＨ），９４．４（ＣＨ），９４．３（ＣＨ），７６．６（ＣＨ），７６．５（ＣＨ），７６．４（ＣＨ），７４．５（ＣＨ），７４．４（ＣＨ），７４．３（ＣＨ），７３．９（ＣＨ），７１．９（ＣＨ），７１．１（ＣＨ），７１．０５（ＣＨ），７１．０（ＣＨ），６９．９（ＣＨ），６９．８（ＣＨ），６９．７（ＣＨ），６９．６（ＣＨ），６９．４（ＣＨ），６９．３（ＣＨ），６８．８（ＣＨ），６８．６（ＣＨ），６８．０（ＣＨ２），６０．１（ＣＨ２），６０．０（ＣＨ２），５３．６（ＣＨ），５３．５（ＣＨ），３９．３（ＣＨ２），２８．０（ＣＨ２），２６．２（ＣＨ２），２２．２（ＣＨ２），２１．８（ＣＨ３）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ６１Ｈ９５Ｎ５Ｏ４５（［Ｍ−２Ｈ］２−）：８０８．７６５０，ｆｏｕｎｄ：８０８．７６４１．
Figure 2021515220
５−アミノペンチル（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル−（１→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシドウロニル（ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｕｒｏｎｙｌ）−（１→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル−（１→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシドウロネート（ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｕｒｏｎａｔｅ）（ＨＳ９）
１Ｈ ＮＭＲ（６００ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ５．４０（ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，１Ｈ），５．３８（ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，１Ｈ），５．２０（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），５．１９（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），４．９４（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），４．９３（ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，１Ｈ），４．７５（ｄ，Ｊ＝３．１Ｈｚ，１Ｈ），４．７４（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，１Ｈ），４．５１（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），４．４６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），４．０８（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），３．９７−３．９５（ｍ，１Ｈ），３．９５−３．９１（ｍ，５Ｈ），３．９０−３．８７（ｍ，５Ｈ），３．８６−３．８３（ｍ，７Ｈ），３．８３−３．７９（ｍ，４Ｈ），３．７９−３．７７（ｍ，２Ｈ），３．７７−３．７６（ｍ，２Ｈ），３．７６−３．７４（ｍ，２Ｈ），３．７４−３．７１（ｍ，３Ｈ），３．７１−３．６９（ｍ，４Ｈ），３．６９−３．６６（ｍ，１Ｈ），３．４９（ｔ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），３．３８（ｔ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），３．３１（ｔ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），３．０１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），２．０６（ｓ，６Ｈ，Ａｃ×２），２．０４（ｓ，３Ｈ，Ａｃ），２．０３（ｓ，３Ｈ，Ａｃ），１．７３−１．６５（ｍ，４Ｈ），１．５２−１．４３（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ１７６．０（Ｃ），１７５．９（Ｃ），１７５．８２（Ｃ），１７５．７７（Ｃ），１７５．３（Ｃ），１７５．２４（Ｃ），１７５．２０（Ｃ），１０３．３（ＣＨ），１０３．２（ＣＨ），１０２．８（Ｃ），１０２．７（ＣＨ），９７．９５（ＣＨ），９５．４（ＣＨ），９５．３（ＣＨ），７９．１（ＣＨ），７８．１（ＣＨ），７７．９１（ＣＨ），７７．８７（ＣＨ），７７．７（ＣＨ），７７．５（ＣＨ），７７．３（ＣＨ），７７．１９（ＣＨ），７７．１７（ＣＨ），７５．６（ＣＨ），７５．３（ＣＨ），７４．５（ＣＨ），７４．４（ＣＨ），７２．９（ＣＨ），７２．１（ＣＨ），７１．７（ＣＨ），７１．０３（ＣＨ２），７１．００（ＣＨ），７０．９５（ＣＨ），７０．９（ＣＨ），７０．８（ＣＨ），７０．７（ＣＨ），７０．６（ＣＨ），７０．５（ＣＨ），７０．４（ＣＨ），６１．２（ＣＨ２），６０．７（ＣＨ２），６０．６（ＣＨ２），６０．４（ＣＨ２），５４．８（ＣＨ），５４．５（ＣＨ），５４．１（ＣＨ），４０．４（ＣＨ２），２９．１（ＣＨ２），２７．３（ＣＨ２），２２．９（ＣＨ２），２２．９（ＣＨ３）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ６１Ｈ９４Ｎ５Ｎａ５Ｏ４５（［Ｍ＋５Ｎａ−３Ｈ］２＋）：８６５．７３５５，ｆｏｕｎｄ：８６５．７３５７．
Figure 2021515220
５−アミノペンチル（２−デオキシ−２−スルファミド（ｓｕｌｆａｍｉｄｏ）−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル−（１→４）−（２−デオキシ−２−スルファミド−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル−（１→４）−（２−デオキシ−２−スルファミド−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル−（１→４）−（２−デオキシ−２−スルファミド−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｌ−イドピラノシドウロネート（ＨＳ２）
１Ｈ ＮＭＲ（６００ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ５．４１−５．３５（ｍ，４Ｈ），４．９８−４．９４（ｍ，２Ｈ），４．９２−４．８９（ｍ，２Ｈ），４．５１（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），４．１６−４．０２（ｍ，８Ｈ），３．９２−３．５９（ｍ，２７ Ｈ），３．４７（ｔ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），３．２８−３．１９（ｍ，４Ｈ），３．００（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），１．７２−１．６３（ｍ，２Ｈ），１．４８−１．４３（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ１７５．２（Ｃ），１０１．６（ＣＨ），１００．７（ＣＨ），９５．６４（ＣＨ），９５．６（ＣＨ），９５．５（ＣＨ），９５．４（ＣＨ），７７．１（ＣＨ），７７．０（ＣＨ），７６．９（ＣＨ），７４．９（ＣＨ），７４．８（ＣＨ），７４．７（ＣＨ），７１．７（ＣＨ），７１．３（ＣＨ），７１．０（ＣＨ），７０．９（ＣＨ），６９．８（ＣＨ），６９．７３（ＣＨ），６９．７（ＣＨ），６９．３（ＣＨ），６９．１（ＣＨ），６９．０（ＣＨ），６８．８（ＣＨ），６８．５（ＣＨ），６８．４（ＣＨ），６８．２（ＣＨ），６８．１（ＣＨ２），６０．２（ＣＨ２），５９．７（ＣＨ２），５８．０（ＣＨ），５７．８（ＣＨ），３９．４（ＣＨ２），２８．０（ＣＨ２），２６．２（ＣＨ２），２２．２（ＣＨ２）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ５３Ｈ８６Ｎ５Ｏ５３Ｓ４Ｎａ３（［Ｍ＋３Ｎａ−６Ｈ］３−）：６１１．４１７７，ｆｏｕｎｄ：６１１．４１６７．
Figure 2021515220
５−アミノペンチル（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−スルホナト（ｓｕｌｆｏｎａｔｏ）−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル）−（１→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル）−（１→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル）−（１→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−２−Ｏ−スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシドウロネート（ＨＳ７）
１Ｈ ＮＭＲ（６００ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ５．１７（ｂｓ，４Ｈ），５．１１−５．０８（ｍ，４Ｈ），４．９０（ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，２Ｈ），４．５４（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），４．３２（ｂｓ，３Ｈ），４．３０−４．２５（ｍ，４Ｈ），４．２１（ｂｓ，１Ｈ），４．０３−３．９６（ｍ，９Ｈ），３．９０−３．８３（ｍ，９Ｈ），３．８２−３．７６（ｍ，４Ｈ），３．７５−３．６７（ｍ，８Ｈ），３．４５（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），２．９９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．０５（ｓ，６Ｈ，Ａｃ×２），２．０４（ｓ，６Ｈ，Ａｃ×２），１．７０−１．６１（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２ ｌｉｎｋｅｒ），１．５０−１．４０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ ｌｉｎｋｅｒ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ１７５．８（Ｃ），１７５．２（Ｃ），１７４．８（Ｃ），１７４．７（Ｃ），９９．３（ＣＨ），９９．２（ＣＨ），９８．６（ＣＨ），９３．５（ＣＨ），９３．４（ＣＨ），９３．３（ＣＨ），７７．２（ＣＨ），７４．１（ＣＨ），７３．３（ＣＨ），７３．２（ＣＨ），７３．１（ＣＨ），７１．９（ＣＨ），７１．３（ＣＨ），７１．２（ＣＨ），７０．７（ＣＨ），７０．４（ＣＨ），７０．２（ＣＨ），６９．９（ＣＨ），６９．８（ＣＨ），６９．７（ＣＨ），６８．１（ＣＨ２），６７．４（ＣＨ），６７．３（ＣＨ），６７．２（ＣＨ），６４．０（ＣＨ），６３．４（ＣＨ），６３．３（ＣＨ），６３．１（ＣＨ），６０．２（ＣＨ２），５９．７（ＣＨ２），３９．４（ＣＨ２），２７．８（ＣＨ２），２６．２（ＣＨ２），２２．２４（ＣＨ３），２２．２（ＣＨ３），２２．１（ＣＨ３）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ６１Ｈ９４Ｎ５Ｏ５７Ｓ４（［Ｍ−３Ｈ］３−）６４５．４４９８，ｆｏｕｎｄ ６４５．４４８９．
Figure 2021515220
５−アミノペンチル（２−デオキシ−２−スルファミド−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル−（１→４）−（２−デオキシ−２−スルファミド−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシドウロニル−（１→４）−（２−デオキシ−２−スルファミド−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル−（１→４）−（２−デオキシ−２−スルファミド−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシドウロネート（ＨＳ１０）
１Ｈ ＮＭＲ（６００ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ５．６２（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），５．６１（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），５．４１（ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，１Ｈ），５．３９（ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，１Ｈ），４．９８（ｂｓ，１Ｈ），４．９６（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），４．５５（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），４．５０（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），４．１４−４．０７（ｍ，４Ｈ），３．９４−３．８８（ｍ，４Ｈ），３．８８−３．８４（ｍ，６Ｈ），３．８４−３．８１（ｍ，７Ｈ），３．８１−３．７８（ｍ，４Ｈ），３．７６−３．７４（ｍ，３Ｈ），３．７４−３．７０（ｍ，４Ｈ），３．６８−３．６３（ｍ，３Ｈ），３．４８（ｔ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），３．４３（ｔ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），３．３６（ｔ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），３．３１−３．２５（ｍ，３Ｈ），３．２３（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，３．６Ｈｚ，１Ｈ），３．０２（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．７５−１．６５（ｍ，４Ｈ），１．５３−１．４３（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ１７６．３（Ｃ），１７６．１（Ｃ），１７６．０（Ｃ），１０３．３（ＣＨ），１０３．２（ＣＨ），１０２．８（ＣＨ），１０２．７（ＣＨ），９８．５（ＣＨ），９８．４（ＣＨ），９６．５（ＣＨ），９６．４（ＣＨ），７８．９（ＣＨ），７８．３（ＣＨ），７８．１１（ＣＨ），７８．０６（ＣＨ），７７．９４（ＣＨ），７７．８９（ＣＨ），７７．６（ＣＨ），７７．５（ＣＨ），７６．０（ＣＨ），７５．９（ＣＨ），７３．８１（ＣＨ），７３．７６（ＣＨ），７２．７（ＣＨ），７２．４（ＣＨ），７１．９４（ＣＨ），７１．９１（Ｃ），７１．６（ＣＨ），７１．１（ＣＨ２），７０．９（ＣＨ），７０．８４（ＣＨ），７０．８０（ＣＨ），７０．５（ＣＨ），７０．３３（ＣＨ），７０．２８（ＣＨ），７０．０（ＣＨ），６９．６（ＣＨ），６１．４（ＣＨ２），６０．８１（ＣＨ２），６０．７９（ＣＨ２），６０．５（ＣＨ２），５９．３（ＣＨ），５９．０（ＣＨ），５８．６（ＣＨ），４０．５（ＣＨ２），２９．２（ＣＨ２），２７．３（ＣＨ２），２３．０（ＣＨ２）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ５３Ｈ８１Ｎ５Ｎａ８Ｏ５３Ｓ４（［Ｍ＋３Ｎａ−６Ｈ］３−）：６１１．４１７７，ｆｏｕｎｄ：６１１．４１７６；ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ５３Ｈ８１Ｎ５Ｎａ８Ｏ５３Ｓ４（［Ｍ＋４Ｎａ−７Ｈ］３−）：６１８．７４４９，ｆｏｕｎｄ：６１８．７４４９．
Figure 2021515220
５−アミノペンチル（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル）−（１→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−スルホナト−β−Ｄ−グルコピラノシドウロニル−（１→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル）−（１→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−２−Ｏ−スルホナト−β−Ｄ−グルコピラノシドウロネート（ＨＳ１３）
１Ｈ ＮＭＲ（６００ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ５．３９（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），５．３８（ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，１Ｈ），５．２３−５．２０（ｍ，２Ｈ），５．１４−５．１２（ｍ，２Ｈ），４．９２（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），４．８９（ｓ，１Ｈ），４．７３（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），４．６３（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），４．３５（ｓ，１Ｈ），４．３４（ｓ，１Ｈ），４．３２（ｓ，１Ｈ），４．２８（ｓ，１Ｈ），４．１６（ｔ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｔ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），４．０６−４．００（ｍ，４Ｈ），４．００−３．９７（ｍ，２Ｈ），３．９５−３．９０（ｍ，５Ｈ），３．８８−３．８５（ｍ，１０Ｈ），３．８４−３．８０（ｍ，６Ｈ），３．７８−３．６６（ｍ，６Ｈ），３．４８（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），３．０３（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），２．０９（ｂｓ，３Ｈ，Ａｃ），２．０８（ｂｓ，３Ｈ，Ａｃ），２．０７（ｂｓ，３Ｈ，Ａｃ），２．０６（ｂｓ，３Ｈ，Ａｃ），１．７４−１．６５（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２ ｌｉｎｋｅｒ），１．５６−１．４８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ ｌｉｎｋｅｒ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ１７６．８（Ｃ），１７６．４（Ｃ），１７５．９（Ｃ），１７５．８（Ｃ），１７５．７（Ｃ），１７５．６（Ｃ），１７５．４（Ｃ），１７５．３（Ｃ），１０１．７（ＣＨ），１０１．６（ＣＨ），１００．４（ＣＨ），１００．３（ＣＨ），９８．３（ＣＨ），９８．２（ＣＨ），９４．７０（ＣＨ），９４．６５（ＣＨ），８１．６（ＣＨ），８１．３（ＣＨ），８０．７（ＣＨ），７８．４（ＣＨ），７７．７（ＣＨ），７７．６（ＣＨ），７７．４（ＣＨ），７７．２（ＣＨ），７６．６（ＣＨ），７６．４（ＣＨ），７４．８（ＣＨ），７４．４（ＣＨ），７３．０（ＣＨ），７２．４（ＣＨ），７２．３４（ＣＨ），７２．３０（ＣＨ），７１．８（ＣＨ），７１．５（ＣＨ），７１．１（ＣＨ２），７０．９（ＣＨ），７０．６（ＣＨ），７０．５（ＣＨ），６８．６（ＣＨ），６８．５（ＣＨ），６５．１（ＣＨ），６４．４（ＣＨ），６１．４（ＣＨ２），６０．７（ＣＨ２），６０．５（ＣＨ２），５５．１（ＣＨ），５４．５（ＣＨ），５４．１（ＣＨ），４０．５（ＣＨ２），２９．０（ＣＨ２），２７．３（ＣＨ２），２３．３（ＣＨ３），２３．０（ＣＨ２），２２．９（ＣＨ３）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ６１Ｈ９１Ｎ５Ｏ５７Ｓ４Ｎａ８（［Ｍ＋８Ｎａ−６Ｈ］２＋）：１０５８．６２２１，ｆｏｕｎｄ：１０５８．６２２６．
Figure 2021515220
５−アミノペンチル（２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル−（１→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシドウロニル−（１→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル−（１→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシドウロネート（ＨＳ１５）
１Ｈ ＮＭＲ（６００ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ５．４３−５．３８（ｍ，２Ｈ），５．２１−５．１８（ｍ，２Ｈ），５．０１−４．９９（ｍ，２Ｈ），４．６２−４．５８（ｍ，２Ｈ），４．４９−４．４６（ｍ，２Ｈ），４．３９−４．３６（ｍ，４Ｈ），４．２５−４．２２（ｍ，３Ｈ），４．１２−４．１０（ｍ，３Ｈ），４．０２−３．９８（ｍ，５Ｈ），３．９９−３．９６（ｍ，２Ｈ），３．９３−３．９１（ｍ，２Ｈ），３．８５−３．８２（ｍ，３Ｈ），３．８０−３．７３（ｍ，１４Ｈ），３．６１−３．５７（ｍ，２Ｈ），３．３９−３．３６（ｍ，２Ｈ），３．３５−３．３１（ｍ，１Ｈ），３．０４−３．００（ｍ，２Ｈ），２．０７（ｂｓ，３Ｈ，Ａｃ），２．０６（ｂｓ，３Ｈ，Ａｃ），２．０４（ｂｓ，３Ｈ，Ａｃ），２．０３（ｂｓ，３Ｈ，Ａｃ），１．７１−１．６７（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２ ｌｉｎｋｅｒ），１．５２−１．４６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ ｌｉｎｋｅｒ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ１７６．１（Ｃ），１７６．０２（Ｃ），１７５．９９（Ｃ），１７５．４２（Ｃ），１７５．３７（Ｃ），１７５．３２（Ｃ），１７５．２８（Ｃ），１０３．３（ＣＨ），１０３．０９（ＣＨ），１０３．０６（ＣＨ），１０３．０３（ＣＨ），１０３．０（ＣＨ），１０２．９（ＣＨ），９８．１（ＣＨ），９５．５（ＣＨ），８３．１（ＣＨ），８０．９（ＣＨ），７８．４（ＣＨ），７７．９（ＣＨ），７７．８（ＣＨ），７７．７（ＣＨ），７７．６（ＣＨ），７７．５（ＣＨ），７７．３（ＣＨ），７６．２（ＣＨ），７５．２（ＣＨ），７４．６２（ＣＨ），７４．５７（ＣＨ），７４．１（ＣＨ），７３．０（ＣＨ），７２．２（ＣＨ），７１．２（ＣＨ），７１．１（ＣＨ２），７０．７（ＣＨ），７０．６（ＣＨ），７０．５（ＣＨ），７０．４（ＣＨ），７０．３（ＣＨ），７０．２（ＣＨ），７０．１（ＣＨ），７０．０（ＣＨ），６７．４（ＣＨ２），６７．２（ＣＨ２），６６．９（ＣＨ２），５４．８（ＣＨ），５４．５（ＣＨ），５４．１（ＣＨ），４０．５（ＣＨ２），２９．２（ＣＨ２），２７．３（ＣＨ２），２３．０（ＣＨ３）．
Figure 2021515220
５−アミノペンチル（２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル−（１→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル−（１→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル−（１→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｌ−イドピラノシドウロネート（ＨＳ３）
１Ｈ ＮＭＲ（６００ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ５．２３−５．１０（ｍ，７Ｈ），５．０３−４．９３（ｍ，３Ｈ），４．３３−４．２０（ｍ，１２Ｈ），４．１６−３．９６（ｍ，１１Ｈ），３．９５−３．８４（ｍ，６Ｈ），３．８３−３．６６（ｍ，１０Ｈ），３．６３−３．５８（ｍ，２Ｈ），３．１０−３．００（ｍ，１Ｈ），２．０８（ｂｓ，６Ｈ，Ａｃ），２．０４（ｂｓ，３Ｈ，Ａｃ），２．０３（ｂｓ，３Ｈ，Ａｃ），１．８０−１．６５（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２ ｌｉｎｋｅｒ），１．５２−１．４６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ ｌｉｎｋｅｒ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ１７５．５（Ｃ），１７５．３（Ｃ），１７５．２（Ｃ），１７５．０（Ｃ），１７４．８（Ｃ），１７４．４（Ｃ），１０２．０（ＣＨ），１０１．８（ＣＨ），１００．８（ＣＨ），９９．２（ＣＨ），９４．４（ＣＨ），９３．７（ＣＨ），７４．０（ＣＨ），７１．２（ＣＨ），７１．０（ＣＨ），７０．７（ＣＨ），７０．１（ＣＨ），７０．０（ＣＨ），６９．８（ＣＨ），６９．４（ＣＨ），６９．３（ＣＨ），６９．１（ＣＨ），６９．０（ＣＨ），６８．６（ＣＨ），６８．１（ＣＨ），６６．４（ＣＨ），６６．２（ＣＨ），６６．１（ＣＨ２），５３．６（ＣＨ），５３．４（ＣＨ），５３．２（ＣＨ），５３．１（ＣＨ），３９．４（ＣＨ２），２８．０（ＣＨ２），２６．１（ＣＨ２），２２．２（ＣＨ３）；ＨＲＭＳ（ＭＡＬＤＩ）：ｍ／ｚ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ６１Ｈ９４Ｎ５Ｏ５７Ｓ４（［Ｍ−３Ｈ］３−）：６４５．４４９８，ｆｏｕｎｄ：６４５．４４９３．
Figure 2021515220
５−アミノペンチル（２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル）−（１→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル）−（１→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル）−（１→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−２−Ｏ−スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシドウロネート（ＨＳ５）
１Ｈ ＮＭＲ（６００ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ５．２４−２．１８（ｍ ５Ｈ），５．１８−５．０８（ｍ，５Ｈ），５．０４−４．８９（ｍ，２Ｈ），４．３５−４．２０（ｍ，１３Ｈ），４．１５−３．９３（ｍ，９Ｈ），３．９４−３．７９（ｍ，４Ｈ），３．７９−３．５９（ｍ，１０ Ｈ），３．５６（ｔ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），３．００（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．０８（ｓ，３Ｈ，Ａｃ），２．０６（ｓ，３Ｈ，Ａｃ），２．０１（ｓ，６Ｈ，Ａｃ×２），１．７３−１．５９（ｍ，４Ｈ），１．５２−１．３８（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ１７４．８（Ｃ），１７４．４（Ｃ），１７４．３（Ｃ），１７２．７（Ｃ），１０１．８（ＣＨ），１００．９（ＣＨ），９９．１（ＣＨ），９９．０（ＣＨ），９８．５（ＣＨ），９５．３（ＣＨ），９４．９（ＣＨ），７６．３（ＣＨ），７６．２（ＣＨ），７３．７（ＣＨ），７３．６（ＣＨ），７１．０（ＣＨ），７０．８（ＣＨ），７０．６（ＣＨ），７０．５６（ＣＨ），６９．７（ＣＨ），６９．６（ＣＨ），６８．９（ＣＨ），６８．７（ＣＨ），６８．６（ＣＨ２），６７．４（ＣＨ），６７．３（ＣＨ），６６．５（ＣＨ），６６．３（ＣＨ２），６６．１（ＣＨ２），５３．４（ＣＨ），５３．３（ＣＨ），５３．１（ＣＨ），３９．３（ＣＨ２），２７．９（ＣＨ２），２７．６（ＣＨ２），２６．４（ＣＨ２），２２．２（ＣＨ２），２２．１（ＣＨ３），２１．９（ＣＨ３），２１．８（ＣＨ３）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ６１Ｈ９３Ｎ５Ｏ６９Ｓ８（［Ｍ−４Ｈ］４−）：５６３．７９２２，ｆｏｕｎｄ：５６３．７９４１．
Figure 2021515220
５−アミノペンチル（２−デオキシ−２−スルファミド−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル−（１→４）−（２−デオキシ−２−スルファミド−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル−（１→４）−（２−デオキシ−２−スルファミド−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル−（１→４）−（２−デオキシ−２−スルファミド−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｌ−イドピラノシドウロネート（ＨＳ４）
１Ｈ ＮＭＲ（６００ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ５．３８−５．３３（ｍ，４Ｈ），５．０２（ｂｓ，４Ｈ），４．８９（ｂｓ，２Ｈ），４．５１（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．４０−４．３３（ｍ，４Ｈ），４．２５−４．１７（ｍ，４Ｈ），４．１６−４．１０（ｍ，４Ｈ），４．１０−４．０５（ｍ，４Ｈ），４．０５−３．９３（ｍ，５Ｈ），３．８８−３．８３（ｍ，１Ｈ），３．８２−３．７３（ｍ，７Ｈ），３．７０−３．６５（ｍ，５Ｈ），３．５８（ｔ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），３．３０−３．２０（ｍ，４Ｈ），３．００（ｔｄ，Ｊ＝２．１，７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．７３−１．６４（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２ ｌｉｎｋｅｒ），１．４９−１．４３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ ｌｉｎｋｅｒ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ１７５．４（Ｃ），１７５．２（Ｃ），１０１．９（ＣＨ），１００．７（ＣＨ），９５．６（ＣＨ），９５．５８（ＣＨ），９５．５（ＣＨ），７７．６（ＣＨ），７７．４（ＣＨ），７７．３（ＣＨ），７１．２（ＣＨ），６９．９（ＣＨ），６９．８（ＣＨ），６９．０（ＣＨ），６８．９（ＣＨ），６８．６（ＣＨ），６８．４（ＣＨ），６８．３（ＣＨ），６８．０（ＣＨ２），６７．８（ＣＨ），６７．５（ＣＨ），６６．４（ＣＨ２），６６．２（ＣＨ２），５７．８（ＣＨ），５７．７（ＣＨ），３９．４（ＣＨ２），２８．０（ＣＨ２），２６．２（ＣＨ２），２２．２（ＣＨ２）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ５３Ｈ７８Ｎ５Ｏ６５Ｓ８Ｎａ８（［Ｍ＋８Ｎａ−１１Ｈ］３−）：７５４．６６３３，ｆｏｕｎｄ：７５４．６６４１．
Figure 2021515220
５−アミノペンチル（２−デオキシ−２−スルファミド−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル）−（１→４）−（２−デオキシ−２−スルファミド−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−スルホナト−β−Ｄ−グルコピラノシドウロニル−（１→４）−（２−デオキシ−２−スルファミド−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル）−（１→４）−（２−デオキシ−２−スルファミド−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−２−Ｏ−スルホナト−β−Ｄ−グルコピラノシドウロネート（ＨＳ１４）
１Ｈ ＮＭＲ（６００ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ５．６１（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），５．６０（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１Ｈ），５．３５−５．３２（ｍ，２Ｈ），５．２７（ｂｓ，２Ｈ），４．８９−４．８７（ｍ，１Ｈ），４．７２（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），４．６４（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），４．３７−４．３４（ｍ，２Ｈ），４．２９−４．２５（ｍ，２Ｈ），４．１８（ｔ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），４．１２（ｔ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），４．０８−４．０４（ｍ，３Ｈ），４．０１−３．９８（ｍ，２Ｈ），３．９０−３．８４（ｍ，１２Ｈ），３．８３−３．８０（ｍ，４Ｈ），３．７７−３．７３（ｍ，２Ｈ），３．７３−３．７０（ｍ，３Ｈ），３．７０−３．６５（ｍ，５Ｈ），３．４８（ｔ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），３．２８（ｄｄ，Ｊ＝１０．６，３．５Ｈｚ，１Ｈ），３．２７−３．２２（ｍ，３Ｈ），３．０２（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），１．７２−１．６３（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２ ｌｉｎｋｅｒ），１．５７−１．４６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ ｌｉｎｋｅｒ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ１７６．５（Ｃ），１７６．２（Ｃ），１７５．９（Ｃ），１７５．６（Ｃ），１０１．８（ＣＨ），１０１．７（ＣＨ），１００．２（ＣＨ），９８．９（ＣＨ），９８．３（ＣＨ），８１．１（ＣＨ），８０．７（ＣＨ），８０．６（ＣＨ），７８．４（ＣＨ），７８．２（ＣＨ），７８．１（ＣＨ），７７．９（ＣＨ），７７．５（ＣＨ），７７．４（ＣＨ），７６．６（ＣＨ），７６．２（ＣＨ），７５．９（ＣＨ），７５．７（ＣＨ），７２．７（ＣＨ），７２．３（ＣＨ），７２．２（ＣＨ），７１．７（ＣＨ），７１．１０（ＣＨ２），７１．０８（ＣＨ），７０．９３（ＣＨ），７０．９０（ＣＨ），７０．４（ＣＨ），６９．５（ＣＨ），６９．３（ＣＨ），６９．０（ＣＨ），６８．８（ＣＨ），６１．４（ＣＨ２），６０．８（ＣＨ２），６０．４（ＣＨ２），５９．４（ＣＨ），５９．２（ＣＨ），５８．９（ＣＨ），４０．６（ＣＨ２），２９．１（ＣＨ２），２７．５（ＣＨ２），２３．０（ＣＨ２）．
Figure 2021515220
５−アミノペンチル（２−デオキシ−２−スルファミド−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル−（１→４）−（２−デオキシ−２−スルファミド−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシドウロニル−（１→４）−（２−デオキシ−２−スルファミド−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル−（１→４）−（２−デオキシ−２−スルファミド−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシドウロネート（ＨＳ１６）
１Ｈ ＮＭＲ（６００ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ５．５８（ｂｓ，１Ｈ），５．３８−５．３２（ｍ，２Ｈ），５．０４−４．９９（ｍ，２Ｈ），４．７６−４．７２（ｍ，２Ｈ），４．６２−４．５８（ｍ，２Ｈ），４．４６（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），４．３８−４．３０（ｍ，２Ｈ），４．２１−４．１７（ｍ，３Ｈ），４．１２−４．１０（ｍ，２Ｈ），４．０３−４．００（ｍ，１Ｈ），３．９５−３．９２（ｍ，１Ｈ），３．８８−３．８３（ｍ，２Ｈ），３．８１−３．６７（ｍ，１３Ｈ），３．６６−３．６２（ｍ，２Ｈ），３．５８−３．５４（ｍ，２Ｈ），３．５３−３．４９（ｍ，１Ｈ），３．４０−３．３６（ｍ，１Ｈ），３．３４（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），３．３２−３．３０（ｍ，２Ｈ），３．２９−３．２４（ｍ，３Ｈ），３．２１（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，３．３Ｈｚ，１Ｈ），２．９９（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），１．７１−１．６０（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２ ｌｉｎｋｅｒ），１．５０−１．４０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ ｌｉｎｋｅｒ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ１７６．５１（Ｃ），１７６．４７（Ｃ），１７６．１（Ｃ），１７６．０（Ｃ），１０３．２（ＣＨ），１０３．０（ＣＨ），１０２．９４（ＣＨ），１０２．９１（ＣＨ），９８．７（ＣＨ），９８．５（ＣＨ），９６．６（ＣＨ），９６．４（ＣＨ），７８．７（ＣＨ），７８．３（ＣＨ），７８．２（ＣＨ），７８．１（ＣＨ），７７．８（ＣＨ），７７．５（ＣＨ），７７．４（ＣＨ），７６．９（ＣＨ），７６．７（ＣＨ），７６．２（ＣＨ），７５．６（ＣＨ），７５．４４（ＣＨ），７５．４０（ＣＨ），７４．１（ＣＨ），７３．９（ＣＨ），７３．８（ＣＨ），７３．０（ＣＨ），７２．３（ＣＨ），７１．０２（ＣＨ２），７０．９６（ＣＨ），７０．９（ＣＨ），７０．７（ＣＨ），７０．１（ＣＨ），７０．０（ＣＨ），６９．９（ＣＨ），６９．８（ＣＨ），６９．６５（ＣＨ），６９．５６（ＣＨ），６９．５（ＣＨ），６８．８（ＣＨ），６７．４（ＣＨ２），６７．３（ＣＨ２），６６．９（ＣＨ２），５９．２（ＣＨ），５８．８（ＣＨ），５８．３（ＣＨ），４０．５（ＣＨ２），２９．２（ＣＨ２），２７．３（ＣＨ２），２３．０（ＣＨ２）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ５３Ｈ７９Ｎ５Ｏ６５Ｓ８Ｎａ６（［Ｍ＋６Ｎａ−１０Ｈ］４−）：５５４．７５４６，ｆｏｕｎｄ：５５４．７５６２．
Figure 2021515220
５−アミノペンチル（２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル）−（１→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−スルホナト−β−Ｄ−グルコピラノシドウロニル）−（１→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル）−（１→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−２−Ｏ−スルホナト−β−Ｄ−グルコピラノシドウロネート（ＨＳ１１）
１Ｈ ＮＭＲ（６００ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ５．４２（ｓ，１Ｈ），５．３８（ｓ，１Ｈ），５．２３（ｓ，２Ｈ），５．１９（ｓ，２Ｈ），４．９４（ｓ，１Ｈ），４．８９（ｓ，１Ｈ），４．６４（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），４．６０（ｄ，Ｊ＝１０．６Ｈｚ，１Ｈ），４．４０−４．３５（ｍ，５Ｈ），４．３３（ｂｓ，１Ｈ），４．２９−４．２５（ｍ，５Ｈ），４．１８（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．１３−４．０７（ｍ，４Ｈ），４．０７−４．００（ｍ，６Ｈ），３．９８−３．９１（ｍ，５Ｈ），３．８９−３．８１（ｍ，９Ｈ），３．７７（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７５−３．７０（ｍ，２Ｈ），３．５９（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．０４（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．０９（ｂｓ，６Ｈ，ＣＨ３×２），２．０８（ｂｓ，３Ｈ，Ａｃ），２．０７（ｂｓ，３Ｈ，Ａｃ），１．７５−１．６６（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２ ｌｉｎｋｅｒ），１．５６−１．４９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ ｌｉｎｋｅｒ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ１７６．４（Ｃ），１７６．１（Ｃ），１７５．８（Ｃ），１７５．７（Ｃ），１７５．４（Ｃ），１７５．３（Ｃ），１０１．５（ＣＨ），１０１．０（ＣＨ），１００．１（ＣＨ），１００．０（ＣＨ），９８．３（ＣＨ），９８．１（ＣＨ），９５．２（ＣＨ），９４．８（ＣＨ），８１．６（ＣＨ），８１．１（ＣＨ），７８．９（ＣＨ），７７．８（ＣＨ），７７．６（ＣＨ），７７．３（ＣＨ），７７．１（ＣＨ），７６．９（ＣＨ），７６．５（ＣＨ），７６．４（ＣＨ），７５．４（ＣＨ），７４．９（ＣＨ），７３．４（ＣＨ），７２．３（ＣＨ），７２．１（ＣＨ），７１．１３（ＣＨ），７１．１１（ＣＨ２），７０．５（ＣＨ），７０．４（ＣＨ），７０．３４（ＣＨ），７０．３０（ＣＨ），７０．２６（ＣＨ），７０．１（ＣＨ），６９．２（ＣＨ），６８．９（ＣＨ），６７．５（ＣＨ２），６７．３（ＣＨ２），６６．８（ＣＨ２），６６．３（ＣＨ），６５．２（ＣＨ），５４．７（ＣＨ），５４．３（ＣＨ），５４．０（ＣＨ），４０．５（ＣＨ２），２９．０（ＣＨ２），２７．３（ＣＨ２），２３．３（ＣＨ３），２２．９７（ＣＨ２），２２．９５（ＣＨ３）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ６１Ｈ８７Ｎ５Ｏ６９Ｓ８Ｎａ６（［Ｍ＋６Ｎａ−１０Ｈ］４−）：５９６．７６５１，ｆｏｕｎｄ：５９６．７６５７．
Figure 2021515220
５−アミノペンチル（２−デオキシ−２−スルファミド−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル）−（１→４）−（２−デオキシ−２−スルファミド−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル）−（１→４）−（２−デオキシ−２−スルファミド−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル）−（１→４）−（２−デオキシ−２−スルファミド−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−２−Ｏ−スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシドウロネート（ＨＳ８）
１Ｈ ＮＭＲ（６００ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ５．４０−５．２７（ｍ，７Ｈ），５．１０（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），４．９３−４．９０（ｍ，１Ｈ），４．８７−４．８５（ｍ，１Ｈ），４．８９−４．８７（ｍ，１Ｈ），４．４８−４．４７（ｍ，１Ｈ），４．３８−４．３１（ｍ，４Ｈ），４．２７−４．２０（ｍ，４Ｈ），４．１９−４．１７（ｍ，１Ｈ），４．１１−４．００（ｍ，５Ｈ），３．９１−３．８０（ｍ，１２Ｈ），３．７８−３．６４（ｍ，１１Ｈ），３．４５（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．２６−３．２０（ｍ，４Ｈ），２．９９（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），１．７１−１．５９（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２ ｌｉｎｋｅｒ），１．５０−１．３９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ ｌｉｎｋｅｒ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ５３Ｈ８４Ｎ５Ｏ６５Ｓ８（［Ｍ−５Ｈ］５−）：４１７．２２３８，ｆｏｕｎｄ：４１７．２２２４．
Figure 2021515220
５−アミノペンチル（２−デオキシ−２−スルファミド−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル）−（１→４）−（２−デオキシ−２−スルファミド−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−スルホナト−β−Ｄ−グルコピラノシドウロニル）−（１→４）−（２−デオキシ−２−スルファミド−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル）−（１→４）−（２−デオキシ−２−スルファミド−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−２−Ｏ−スルホナト−β−Ｄ−グルコピラノシドウロネート（ＨＳ１２）
１Ｈ ＮＭＲ（６００ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ５．６８（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），５．６４（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），５．４９−５．４６（ｍ，２Ｈ），５．３０（ｂｓ，２Ｈ），４．９８（ｄ，Ｊ＝１．０８Ｈｚ，１Ｈ），４．９４（ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，１Ｈ），４．６６（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），４．６０（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ），４．４４−４．３８（ｍ，５Ｈ），４．３８−４．３４（ｍ，２Ｈ），４．３３−４．２８（ｍ，２Ｈ），４．２６（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，２Ｈ），４．２４−４．２０（ｍ，３Ｈ），４．１６（ｄｄ，Ｊ＝８．７０，８．１９Ｈｚ，１Ｈ），４．１０−４．０６（ｍ，２Ｈ），４．０５−３．９８（ｍ，６Ｈ），３．９８−３．９７（ｍ，１Ｈ），３．９７−３．９２（ｍ，４Ｈ），３．９２（ｂｓ，１Ｈ），３．９１−３．８４（ｍ，４Ｈ），３．７９（ｔ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），３．７５−３．７０（ｍ，１Ｈ），３．６１（ｔ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），３．４５（ｄｄ，Ｊ＝１０．７，３．７Ｈｚ，１Ｈ），３．４３−３．３８（ｍ，３Ｈ），３．０５（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），１．７６−１．６６（ｍ，４Ｈ，ＣＨ２ ｌｉｎｋｅｒ），１．５９−１．４９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ ｌｉｎｋｅｒ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ１７６．４（Ｃ），１７６．１（Ｃ），１７５．６（Ｃ），１０１．６（ＣＨ），１０１．０（ＣＨ），９９．９（ＣＨ），９９．６（ＣＨ），９７．０（ＣＨ），９６．７（ＣＨ），９２．３（ＣＨ），９２．２（ＣＨ），８１．１（ＣＨ），８０．７（ＣＨ），７８．３（ＣＨ），７８．０（ＣＨ），７７．９（ＣＨ），７７．２（ＣＨ），７７．０（ＣＨ），７６．９（ＣＨ），７６．３（ＣＨ），７６．１（ＣＨ），７６．０（ＣＨ），７４．０（ＣＨ），７３．８（ＣＨ），７１．８（ＣＨ），７１．３（ＣＨ），７１．１（ＣＨ２），７０．８（ＣＨ），７０．７（ＣＨ），７０．４（ＣＨ），６９．８（ＣＨ），６９．５（ＣＨ），６９．３（ＣＨ），６８．７（ＣＨ），６８．３（ＣＨ），６８．２（ＣＨ），６７．１４（ＣＨ２），６７．０７（ＣＨ２），６６．５（ＣＨ２），６４．０（ＣＨ），６３．６（ＣＨ），５５．４（ＣＨ），５５．２（ＣＨ），５５．０（ＣＨ），４０．５（ＣＨ２），２９．０（ＣＨ２），２７．２（ＣＨ２），２３．０（ＣＨ２）．
Figure 2021515220
５−アミノペンチル（２−デオキシ−２−スルファミド−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル）−（１→４）−（２−デオキシ−２−スルファミド−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル）−（１→４）−（２−デオキシ−２−スルファミド−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−（２−Ｏ−スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシドウロニル）−（１→４）−（２−デオキシ−２−スルファミド−６−Ｏ−スルホナト−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−２−Ｏ−スルホナト−α−Ｌ−イドピラノシドウロネート（ＨＳ６）
１Ｈ ＮＭＲ（６００ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ５．４３−５．３６（ｍ ４Ｈ），５．２４−５．１５（ｍ，４Ｈ），５．０９−５．０４（ｍ，２Ｈ），４．７６−４．７５（ｍ，２Ｈ），４．４８−４．４６（ｍ，１Ｈ），４．４３−４．２９（ｍ，７Ｈ），４．２８−４．１５（ｍ，９ Ｈ），４．１２−３．９５（ｍ，８ Ｈ），３．８３−３．７１（ｍ，５ Ｈ），３．６９−３．６０（ｍ，５ Ｈ），３．５４（ｔ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），３．２９−３．１９（ｍ，４Ｈ），３．０１−２．９３（ｍ，２Ｈ），１．６９−１．５１（ｍ，４Ｈ），１．４７−１．３９（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１５０ ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ９９．０（ＣＨ），９７．７（ＣＨ），９７．３（ＣＨ），９７．２（ＣＨ），９６．８（ＣＨ），７６．４（ＣＨ），７６．３（ＣＨ），７６．２（ＣＨ），７６．１（ＣＨ），７６．０（ＣＨ），７５．９（ＣＨ），７５．８（ＣＨ），７５．４（ＣＨ），６８．９（ＣＨ），６８．８（ＣＨ），６８．６（ＣＨ），６８．２（ＣＨ２），６６．４（ＣＨ２），６６．３（ＣＨ２），５７．９（ＣＨ），３９．４（ＣＨ２），２７．８（ＣＨ２），２６．２（ＣＨ２），２２．２（ＣＨ２）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ５３Ｈ７３Ｎ５Ｏ７７Ｓ１２Ｎａ４Ｈ１２（［Ｍ＋４Ｎａ−９Ｈ］５−）：４９８．７７４７，ｆｏｕｎｄ：４９８．７７３６．
実施例２：実施例１の硫酸化八糖でプレコートされた磁気ビーズを用いる胆管がん細胞の捕捉
上記「材料及び方法」に記載の手順に従って実施例１の硫酸化八糖でプレコートされた磁気ビーズを用いるがん細胞の捕捉システムを構築した。
プレテストでは、８つのがん細胞株（即ち、ＭＭＮＫ−１、ＳＮＵ−４７８、ＨｕＣＣＴ−１、Ｈｕｈ−２８、ＫＫＵ−１００、ＨｅｐＧ２、ＢｘＰＣ３、及びＨＣＴ８）をそれぞれマイクロシステムに注入し、磁気ビーズと共にインキュベートし、次に、捕捉された細胞を磁力で収集し、最後に、血球計算盤に注入して捕捉率を計算した。結果を表１に示す。
Figure 2021515220
上記８つの細胞株のうち、ＨＳ１２及びＨＳ１は、胆管がん（ＣＣＡ）細胞株であるＨｕｈ２８に高度に特異的であった。１００μＭのＨＳ１２及びＨＳ１で塗布されたビーズによって捕捉されたＨｕｈ２８の最高の捕捉率は、それぞれ７３±４％及び７８±１４％であり、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）で塗布されたビーズの捕捉率（僅か５８±１９％）よりも高かった。さらに、正常細胞（ＭＭＮＫ−１）と転移性ＣＣＡ細胞（ＨｕＣＣＴ−１）の捕捉率が比較的低かったため、ＨＳ１２及びＨＳ１は、より特異的であった。従って、ＨＳ１２及びＨＳ１は、ＣＣＡ細胞の存在を検出するための特異的親和性試薬として適用可能である。
図２は、１００μＭのＨＳ１でプレコートされた磁気ビーズががん細胞であるＨｕｈ−２８を成功に捕捉できることを示す。図２ａは、磁気ビーズによって捕捉される前のＨｕｈ−２８細胞を示す。Ｈｕｈ−２８細胞とベーズを３０分間十分に混合した後、細胞はビーズに囲まれた（図２ｂ）。３０分間インキュベートした後、磁力による分離プロセスにより上清を収集した（図２ｃ）。ほとんどすべてのＨｕｈ−２８細胞は、磁気ビーズによって捕捉されて分離され、上清にはわずかな細胞しか観察されなかった。これは、Ｈｕｈ−２８細胞のほとんどが捕捉されたことを示している。
実施形態の上記の説明は、例としてのみ与えられ、当業者によって様々な修正がなされ得ることが理解されるであろう。上記の態様、実施例、及びデータは、本発明の例示的な実施形態の構造及び使用の完全な説明を提供する。本発明の様々な実施形態が、ある程度の特殊性を伴って、又は１つ以上の個々の実施形態を参照して上記で説明されたが、当業者は、本開示の精神又は範囲から逸脱することなく、開示された実施形態に多数の変更を加えることができる。

Claims (16)

  1. 生物学的サンプル中の胆管がん細胞を検出する方法であって、
    前記生物学的サンプルを式（Ｉ）の硫酸化八糖でプレコートされた磁気ビーズに接触させるステップを含み、
    Figure 2021515220
    式中、Ｒ１は、−ＮＨＡｃ又は−ＮＨＳＯ３Ｍであり、
    Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立してＨ又は−ＳＯ３Ｍであり、
    Ｍは、ナトリウムイオン、カリウムイオン、リチウムイオン又はアンモニウムイオンからなる群より選択される１価のカチオンであり、
    前記磁気ビーズと前記生物学的サンプルとの結合は、前記生物学的サンプルに胆管がん細胞が存在することを示す、方法。
  2. 式（Ｉ）の前記硫酸化八糖は、さらにビオチンに結合する、請求項１に記載の方法。
  3. 式（Ｉ）の前記硫酸化八糖において、
    Ｒ１は、−ＮＨＳＯ３Ｎａであり、
    Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して−ＳＯ３Ｎａである、請求項１に記載の方法。
  4. 式（Ｉ）の前記硫酸化八糖において、
    Ｒ１は、−ＮＨＳＯ３Ｎａであり、
    Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立してＨである、請求項１に記載の方法。
  5. 前記生物学的サンプルは、血液、プラズマ、血清、尿、痰、唾液、組織サンプル、生体組織切片、及び組織溶解物からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
  6. それぞれ洗浄緩衝液を収容するように構成される複数の洗浄緩衝液チャンバと、
    それぞれがん細胞を、前記がん細胞のバイオマーカーでプレコートされた磁気ビーズに捕捉するように構成される複数の捕捉チャンバと、
    複数の前記捕捉チャンバから洗い出された未捕捉のがん細胞を収容するように構成される廃棄物チャンバと、
    前記洗浄緩衝液チャンバ、複数の前記捕捉チャンバ、及び前記廃棄物チャンバを接続する複数のマイクロチャンネルと、
    を含む、マイクロ流体チップ。
  7. ガラス基板及び少なくとも１層のポリジメチルシロキサンで作製される、請求項６に記載のマイクロ流体チップ。
  8. 各前記捕捉チャンバは、がん細胞が結合した前記磁気ビーズを流体サンプルから分離するように構成される、請求項７に記載のマイクロ流体チップ。
  9. 前記磁気ビーズは、式（Ｉ）の硫酸化八糖でプレコートされ、
    Figure 2021515220
    式中、Ｒ１は、−ＮＨＡｃ又は−ＮＨＳＯ３Ｍであり、
    Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立してＨ又は−ＳＯ３Ｍであり、
    Ｍは、ナトリウムイオン、カリウムイオン、リチウムイオン又はアンモニウムイオンからなる群より選択される１価のカチオンである、請求項８に記載のマイクロ流体チップ。
  10. 式（Ｉ）の前記硫酸化八糖は、さらにビオチンに結合する、請求項９に記載のマイクロ流体チップ。
  11. 式（Ｉ）の前記硫酸化八糖において、
    Ｒ１は、−ＮＨＳＯ３Ｎａであり、
    Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して−ＳＯ３Ｎａである、請求項９に記載のマイクロ流体チップ。
  12. 式（Ｉ）の前記硫酸化八糖において、
    Ｒ１は、−ＮＨＳＯ３Ｎａであり、
    Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立してＨである、請求項９に記載のマイクロ流体チップ。
  13. 請求項６に記載のマイクロ流体チップと、
    それぞれにバイオマーカーが塗布された複数の磁気ビーズと、
    請求項６に記載のマイクロ流体チップを用いて生物学的サンプルを分析するための少なくとも１つの試薬と、
    ユーザに前記キットの使用方法を提供する説明書と、を含むキットであって、
    前記バイオマーカーは、式（Ｉ）の硫酸化八糖であり、
    Figure 2021515220
    式中、Ｒ１は、−ＮＨＡｃ又は−ＮＨＳＯ３Ｍであり、
    Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立してＨ又は−ＳＯ３Ｍであり、
    Ｍは、ナトリウムイオン、カリウムイオン、リチウムイオン又はアンモニウムイオンからなる群より選択される１価のカチオンである、キット。
  14. 式（Ｉ）の前記硫酸化八糖において、
    Ｒ１は、−ＮＨＳＯ３Ｎａであり、
    Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して−ＳＯ３Ｎａである、請求項１３に記載のキット。
  15. 式（Ｉ）の前記硫酸化八糖において、
    Ｒ１は、−ＮＨＳＯ３Ｎａであり、
    Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立してＨである、請求項１３に記載のキット。
  16. 前記生物学的サンプルは、血液、血漿、血清、尿、痰、唾液、組織、生体組織切片、又は組織溶解物である、請求項１３に記載のキット。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI735875B (zh) * 2019-05-10 2021-08-11 國立清華大學 用於偵測膽管癌細胞的方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2011508203A (ja) * 2007-12-20 2011-03-10 コーニンクレッカ フィリップス エレクトロニクス エヌ ヴィ 磁性粒子を有する多数区画装置
WO2011034115A1 (ja) * 2009-09-17 2011-03-24 Jsr株式会社 アビジンとビオチン誘導体の解離方法及び解離剤
JP2012185172A (ja) * 2009-07-14 2012-09-27 National Institute Of Advanced Industrial & Technology 糖タンパク質の測定方法、肝疾患の検査方法および糖タンパク質定量用試薬
JP2016523535A (ja) * 2013-06-17 2016-08-12 ザ ユニバーシティ オブ ノース カロライナ アット チャペル ヒルＴｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｏｆ Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ Ａｔ Ｃｈａｐｅｌ Ｈｉｌｌ 可逆的ヘパリン分子、その製法及びその使用方法

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007092713A2 (en) * 2006-02-02 2007-08-16 Trustees Of The University Of Pennsylvania Microfluidic system and method for analysis of gene expression in cell-containing samples and detection of disease
US20080015684A1 (en) * 2006-07-11 2008-01-17 Wu Patrick P Method And Apparatus For Attaching Radiopaque Markers To A Stent
EP2265942B1 (en) * 2008-03-12 2017-10-18 University Of Virginia Patent Foundation Detection of polymeric analytes
CN101684163B (zh) * 2008-09-24 2012-04-25 中国科学院上海药物研究所 一种天麻多糖硫酸化衍生物及其制备方法和抗肿瘤用途
US20130116423A1 (en) * 2010-04-23 2013-05-09 A. Stewart Campbell Synthetic Oligosaccharides for Staphylococcus Vaccine
EP2612919A1 (en) * 2010-09-02 2013-07-10 Sumitomo Bakelite Company Limited Sulfated polysaccharide capable of binding to growth factor and use thereof
JP2017507118A (ja) * 2014-01-16 2017-03-16 アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ がんの処置および検出のための組成物および方法
TWI735875B (zh) * 2019-05-10 2021-08-11 國立清華大學 用於偵測膽管癌細胞的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2011508203A (ja) * 2007-12-20 2011-03-10 コーニンクレッカ フィリップス エレクトロニクス エヌ ヴィ 磁性粒子を有する多数区画装置
JP2012185172A (ja) * 2009-07-14 2012-09-27 National Institute Of Advanced Industrial & Technology 糖タンパク質の測定方法、肝疾患の検査方法および糖タンパク質定量用試薬
WO2011034115A1 (ja) * 2009-09-17 2011-03-24 Jsr株式会社 アビジンとビオチン誘導体の解離方法及び解離剤
JP2016523535A (ja) * 2013-06-17 2016-08-12 ザ ユニバーシティ オブ ノース カロライナ アット チャペル ヒルＴｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｏｆ Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ Ａｔ Ｃｈａｐｅｌ Ｈｉｌｌ 可逆的ヘパリン分子、その製法及びその使用方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
TSAI, W-C. ET AL: "A Microfluidic System for Detection of Cholangiocarcinoma Cells by Using Heparan Sulfate Octasacchar", 2017 IEEE 12TH INTERNATIONAL CONFERENCE ON NANO/MICRO ENGINEERED AND MOLECULAR SYSTEMS (NEMS), JPN6021047633, 29 August 2018 (2018-08-29), pages 489 - 493, ISSN: 0004812896 *

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