JP2021511358A5

JP2021511358A5 - 第一鉄アミノ酸粒子を含む組成物、およびその組成物を含む、膵臓関連疾患の治療または改善のための薬剤

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Publication number: JP2021511358A5
Application number: JP2020540748A
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Filing date: 2018-12-20
Publication date: 2021-06-17
Anticipated expiration: 2038-12-20

Description

ＰＡＮＣ−１細胞における本発明の組成物による細胞運動性の抑制を解析するために、本発明の組成物で２４時間用量依存的に処置した後のＰＡＮＣ−１細胞の細胞遊走能および浸潤能を示す（エラーバーは、少なくとも三つの独立した実験の平均±標準偏差を示す； nsは有意差なしを示す、*はp < 0.05、**はp < 0.01、***はp < 0.001を示す；スチューデントt検定）。ＳＵＩＴ−２細胞における本発明の組成物による細胞運動の抑制を解析するために、本発明の組成物で２４時間用量依存的に処置した後のＳＵＩＴ−２細胞の細胞遊走能および浸潤能を示す（エラーバーは、少なくとも三つの独立した実験の平均±標準偏差を示す； nsは有意差なしを示す、**はp < 0.05、***はp < 0.001を示す；スチューデントt検定) 。ＢｘＰＣ−３細胞における本発明の組成物による細胞運動の抑制を解析するために、本発明の組成物で２４時間用量依存的に処理した後のＢｘＰＣ−３細胞の細胞遊走能および浸潤能を示す（エラーバーは、少なくとも三つの独立した実験の平均±標準偏差を示す；nsは有意差なしを示す、***はp < 0.001；スチューデントt検定) 。ＡｓＰＣ−１細胞における本発明の組成物による細胞運動の抑制を分析するために、本発明の組成物で２４時間処理した後のＡｓＰＣ−１細胞の細胞遊走能および浸潤能を用量依存的に示す（エラーバーは、少なくとも三つの独立した試験の平均±標準偏差を示す； nsは有意差なしを示す；*はp < 0.05、**はp < 0.01、***はp < 0.001を示す；スチューデントt試験)。本発明の組成物で処置した同所性異種移植膵癌腫瘍のベースライン１０Ｄにおける生物発光像である。本発明の組成物で処置した同所性異種移植膵癌腫瘍の実験１３日目の生物発光像である。本発明の組成物で処置した同所性異種移植膵癌腫瘍の実験１７日目の生物発光像である。本発明の組成物で処置した同所性異種移植膵癌腫瘍の実験２０日目の生物発光像である。本発明の組成物で処置した同所性異種移植膵癌腫瘍の実験２４日目の生物発光像である。本発明の組成物で処置した同所性異種移植膵癌腫瘍の実験３１日目の生物発光像である。本発明の組成物で処置した同所性異種移植膵癌腫瘍の実験３８日目の生物発光像である。本発明の組成物で処置した同所性異種移植膵臓癌マウスにおける腫瘍増殖のランチャートである。本発明の組成物の高用量群および低用量群における同所性異種移植膵臓癌マウスの生存チャートである。本発明の組成物の高用量群および低用量群における同所性異種移植膵臓癌マウスの悪性腹水の定量的測定を示す。本発明の組成物の低用量群における解剖前の実験マウスの背側および腹側の外観を示す。本発明の組成物、ゲムシタビン、またはそれらの組合せで処置したベースライン１０Ｄでの膵臓癌腫瘍の生物発光像である。本発明の組成物、ゲムシタビンまたはこれらの組合せで処置した膵癌腫瘍の実験１７日目の生物発光像である。本発明の組成物、ゲムシタビンまたはこれらの組合せで処置した膵癌腫瘍の実験２４日目の生物発光像である。本発明の組成物、ゲムシタビンまたはこれらの組合せで処置した膵癌腫瘍の実験３１日目の生物発光像である。本発明の組成物、ゲムシタビンまたはこれらの組合せで処置した膵癌腫瘍の実験３８日目の生物発光像である。本発明の組成物、ゲムシタビン、またはそれらの組合せで処置した後の膵臓癌腫瘍発生のランチャートである。膵癌腫瘍に対して、本発明の組成物とゲムシタビンとを併用投与したマウスの、処置９週間目の黄疸現象を示す解剖写真である。膵臓癌腫瘍に対して、本発明の組成物、ゲムシタビン、またはそれらの組合せで処置した各実験動物群の血液サンプル中の総ビリルビンレベルを示す。膵臓癌腫瘍に対して、本発明の組成物、ゲムシタビン、またはそれらの組合せで処置した各実験動物群の血液サンプル中のＧＯＴ/ＡＳＴレベルを示す。膵臓癌腫瘍に対して、本発明の組成物、ゲムシタビン、またはそれらの組合せで処置した各実験動物群の血液サンプル中のＧＰＴ/ＡＬＴレベルを示す。膵臓癌治療のために本発明の組成物、ゲムシタビン、またはそれらの組合せで処置した実験動物の生存チャートである。本発明の組成物、ゲムシタビン、またはそれらの組合せを用いた処置（II）によるベースライン１０Ｄでの膵臓癌腫瘍の生物発光像である。本発明の組成物、ゲムシタビン、またはこれらの組合せを用いた処置（II）による実験１７日目の膵癌腫瘍の生物発光像である。本発明の組成物、ゲムシタビン、またはこれらの組合せを用いた処置（II）による実験２４日目の膵癌腫瘍の生物発光像である。本発明の組成物、ゲムシタビン、またはこれらの組合せを用いた処置（II）による実験３１日目の膵癌腫瘍の生物発光像である。本発明の組成物、ゲムシタビン、またはこれらの組合せを用いた処置（II）による実験３８日目の膵癌腫瘍の生物発光像である。本発明の組成物、ゲムシタビン、またはこれらの組合せを用いた処置（II）による実験４５日目の膵癌腫瘍の生物発光像である。本発明の組成物、ゲムシタビン、またはこれらの組合せを用いた処置（II）による実験５９日目の膵癌腫瘍の生物発光像である。本発明の組成物、ゲムシタビン、またはそれらの組合せを用いた処置（II）による膵臓癌腫瘍発生のランチャートである。膵癌腫瘍に対し、本発明の組成物、ゲムシタビン、またはそれらの組合せを用いた処置（II）による実験動物の各群の血液サンプル中の総ビリルビン、ＧＯＴ/ＡＳＴ、およびＧＰＴ/ＡＬＴを示す平均ランチャートである。膵癌腫瘍に対し、ゲムシタビンを用いた処置（II）による実験動物の各群の血液サンプル中の総ビリルビン、ＧＯＴ/ＡＳＴ、およびＧＰＴ/ＡＬＴを示すランチャートである。膵癌腫瘍に対し、本発明の組成物を用いた処置（II）による実験動物の各群の血液サンプル中の総ビリルビン、ＧＯＴ/ＡＳＴ、およびＧＰＴ／ＡＬＴを示すランチャートである。膵癌腫瘍に対し、本発明の組成物とゲムシタビンの組合せを用いた処理（II）による実験動物の各群の血液サンプル中の総ビリルビン、ＧＯＴ/ＡＳＴ、およびＧＰＴ／ＡＬＴを示すランチャートである。膵臓癌腫瘍に対し本発明の組成物、ゲムシタビン、またはそれらの組合せを用いた処置（II）による実験マウスの生存チャートである。

８．０μm細孔膜を有するトランスウェル（Corning Costar; Lowell, MA, USA）を、細胞浸潤アッセイのために２４ウェルプレートに入れ、ここで、トランスウェルの細孔膜をマトリゲル（60μg; BD Bioscience）でコーティングした。調製例２から得られたヒト膵癌細胞を細胞浸潤アッセイに用いた。対照群の細胞は本発明の組成物で処置せず、実験群の細胞は、調製例1から得られた本発明の組成物で、用量依存的に２４時間処置した。実験群と対照群の細胞を上部チャンバーで無血清培地（１×１０５細胞数/ウェル）に播種し、１０％ＦＢＳを含む培地を化学誘引物質として下部チャンバーに添加した。２４時間培養後、トランスウェルの細孔膜下面の細胞をメタノールで固定し、クリスタルバイオレット（０．０５ｗｔ％）で染色した後、細孔膜を通過する細胞を光学顕微鏡（４０ｘ、ウェル当たり３ランダムフィールド)で計数し、浸潤細胞数を測定した。

図８は、本発明の組成物で処置した後の８０日間(すなわち、実験９０日間)の各群の体重変動を示す。本発明の組成物で処置した８０日間では、高用量群と低用量群の二つの群の平均体重には劇的な変動はなかった。対照群の平均体重は、処置後の約７０日目（実験８０日目）において急激に増加し、処置後の８０日目（実験９０日目）では、平均体重はほぼ３グラム増加した。図９は、対照群および本発明の組成物を投与した低用量群の実験９０日目における解剖前の写真を示す。対照群のマウスの腹腔は異常に腫脹していたが、本発明の組成物で処置した低用量群の実験動物の腹腔に有意な差異はなかった。腹水の程度の観察によれば、対照群の解剖したマウスの腹腔は腹水でいっぱいであったが、本発明の組成物の低用量群のマウスはこのような状況を示さなかった。対照群と低用量群のマウスの定量測定結果から、対照群の平均腹水量は６mLであったが、本発明の組成物を投与した低用量群の平均腹水量は１mL前後であった。対照群と本発明の組成物を投与した低用量群の、同所性異種移植膵癌マウスの定量的測定結果には大きな差があり、本発明の組成物が、同所性異種移植膵癌マウスにおいて進行期の悪性腹水の産生を軽減または抑制する効果を有することを示した。また、実験開始から９０日目までの間で実験マウスにおける副作用の有無を観察した結果、実験マウスの体重、外見、活動性に有意な変化は認められなかった。したがって、本発明の組成物は、同所性異種移植膵臓癌マウスに対して有意な副作用を有さないと推測できる。

調製例２から得たヒト膵腺癌細胞株ＰＡＮＣ―１をクローニングし、発光・蛍光ベクターで標識した。細胞数５×１０５の実験マウス（BioLASCO Taiwan Co., Ltd.より購入したNOD-SCID実験マウス４０匹）の膵臓に、外科的に発光細胞および蛍光標識細胞を移植した。動物の膵臓への細胞移植の１０日後に、ベースラインデータを非侵襲的インビボイメージングシステム（ＩＶＩＳ）により測定した。ベースラインのＩＶＩＳデータが得られた後、全ての実験マウスを無作為に均等にグループに割り当てた［測定したＩＶＩＳデータの平均値±３標準偏差を算出し、標準範囲内のＩＶＩＳデータを有する動物を対照群(生理食塩液を使用)、本発明の組成物群（調製例１で得られた組成物を２４mg/kgを毎日投与）、ゲムシタビン群（１００mg/kgのゲムシタビンを週２回、３週間連続静脈内注射し、４週目にゲムシタビンを中止。この４週間をゲムシタビンサイクルと命名。本例ではゲムシタビンサイクルは３サイクル）、および併用群(１００mg/kgのゲムシタビンを週２回、３週間連続静脈内注射し４週目にゲムシタビンを中止し、調製例１から得た本発明の組成物２４mg/kgを毎日投与)］。投与経路は、実施例６と同様であるが、実施例６ではゲムシタビンを９週間連続投与した後、同所性異種移植膵癌マウスで黄疸が認められ、投与後１０〜１２週目に死亡したため、実施例６から用法・用量を調節した。この事例のＩＶＩＳデータ計測の時点は、ベースライン１０日（ベースライン１０Ｄ）、１７日目(処置後７日)、２４日目（処置後１４日）、３１日目（処置後２１日）、３８日目（処置後２８日）、４５日目（処置後３５日）、および５９日目（処置後４９日）であった。実験マウスの血液を採取し、血液中のＴ−ビリルビン、ＧＯＴ、およびＧＰＴを調べ、一定の時点［ベースライン１０日（ベースライン１０Ｄ）、処置後４週目、処置後８週目、処置後１０週目、および処置後１２週目］で黄疸の原因をモニターした。黄疸の発生の有無は肉眼でも観察された。肉眼で観察されたマウスの黄疸徴候は、るいそう、腫脹胆嚢、黄色暗色皮膚、異常黄色肢尾であった。実験中の各マウスの生存期間を記録した。

Claims

第一鉄アミノ酸キレートから焼結された第一鉄アミノ酸キレート粒子を含む組成物であって、第一鉄アミノ酸キレート粒子の平均粒子サイズが５００ｎｍから２６００ｎｍの範囲であり、平均分子量が１，５００ダルトンから６００，０００ダルトンの範囲である、組成物。
前記組成物中の第一鉄アミノ酸キレートのアミノ酸に対する、第一鉄のキレート化比が１：１と１：４の間である、請求項１記載の組成物。
第一鉄アミノキレートがグリシン酸第一鉄キレートである、請求項１記載の組成物。
膵臓関連疾患を治療または改善するための薬剤であって、有効量の、請求項１から３のいずれかに記載の組成物と、薬学的に許容可能な担体とを含む薬剤。
膵臓関連疾患が膵臓癌である、請求項４記載の薬剤。
膵臓関連疾患が膵臓癌転移である、請求項５記載の薬剤。
膵臓関連疾患が膵臓癌から産生された腹水である、請求項５記載の薬剤。
膵臓関連疾患が膵炎である、請求項４記載の薬剤。
前記組成物がヒトに投与されるものである、請求項４記載の薬剤。
有効量が０．１mg/kg/日から１２０mg/kg/日の範囲である、請求項４に記載の薬剤。
前記組成物がゲムシタビンと共に投与されるものである、請求項４記載の薬剤。
ゲムシタビンが、一以上のゲムシタビンサイクルを含む用法・用量で投与され、各ゲムシタビンサイクルは、ゲムシタビンを週２回、３週間投与し、４週目にゲムシタビンを中止することから構成される、請求項１１に記載の薬剤。