JP2021187785A - 精神性疲労、意欲低下または眠気の改善剤 - Google Patents
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Abstract
Description
(1)精神性疲労、意欲低下および眠気の改善剤
(1−1)黒大豆種皮抽出物を有効成分として含有する、精神性疲労、意欲低下または眠気の少なくともいずれかを予防または改善する目的で使用される改善剤。
(1−2)前記精神性疲労、意欲低下または眠気がVDT(Visual Display Terminal)作業負荷に起因するものである、1−1記載の改善剤。
(1−3)黒大豆種皮抽出物が黒大豆種皮の酸性抽出物である、1−1または1−2に記載の改善剤。
(1−4))医薬品、医薬部外品または飲食物である、1−1〜1−3のいずれか一項に記載の改善剤。
(2−1)黒大豆種皮抽出物を経口組成物に配合して、当該経口組成物に対して精神性疲労、意欲低下または眠気の少なくともいずれかを予防または改善する作用を付与するための、黒大豆種皮抽出物の使用方法。
また、本発明においては、「予防」とは、疲労やストレスの負荷が生じる前の平常時における精神性疲労、眠気を軽減する、意欲を向上する効果(予防効果)を意味し、「改善」とは、疲労やストレスの負荷が生じた後(直後)における精神性疲労、眠気を抑制する、意欲を維持または低下抑制する効果(改善効果)を意味するものとする。
本発明の精神性疲労、意欲低下または眠気の改善剤(以下、単に「本改善剤」とも称する)は、黒大豆種皮の抽出物を有効成分とすることを特徴とする。
本発明はまた、黒大豆種皮抽出物の使用方法を提供する。
その使用方法の1つは、経口組成物に対して、精神性疲労、意欲低下または眠気を予防または改善する作用を付与するための黒大豆種皮抽出物の使用方法である。
最初に黒大豆種皮抽出物および試験食の調製方法、次いで精神性疲労、意欲低下、眠気の改善に関する試験方法とその結果について説明する。
黒大豆種皮抽出物(酸性熱水抽出物)は下記の方法により調製した。
(1)黒大豆種皮(生)1kgを抽出溶媒として希硫酸(0.3%w/v)30Lに浸漬し、55〜60℃に加熱しながら20分間撹拌抽出する。
(2)抽出後、黒大豆種皮と液とを固液分離し、液を回収する。
(3)回収した液を遠心分離を行ない、固液分離では取り除けない浮遊固形物を除去する。
(4)得られた抽出液を合成吸着樹脂(セパビーズSP700:三菱化学(株)製)を入れたカラムに投入し、樹脂に吸着させる。
(5)カラム内に残存する硫酸を洗い流すため、カラムに水を通液して樹脂を洗浄する。
(6)カラムに59容量%濃度のアルコ−ル水溶液を通液して、樹脂に吸着されたポリフェノールを溶出させる。
(7)回収した溶出液(アルコール溶液)を減圧下で加熱することにより蒸発させ、濃縮する。
(8)得られた濃縮液に、賦形剤としてデキストリンを添加する。
(9)加熱殺菌する。
(10)加熱殺菌後の濃縮液を噴霧乾燥して黒大豆種皮抽出物(85g、ポリフェノール含量61.1%w/w)を得た。
試験食は、黒大豆種皮抽出物含有食(被検食)、及び対照食(プラセボ)を用いた。試験食の配合を以下に示す。
(被検食) 黒大豆種皮抽出物100mg(ポリフェノール含量61.1%w/w)とデキストリン110mgを含有するカプセル剤(合計210mg)
(プラセボ) デキストリン250mgを含有するカプセル剤
なお、プラセボは、熱量等において、被験食と大きな差がないように作製された。表1に各試験食の栄養成分表を示した。
(被験者)
被験者は、年齢が20歳以上65歳未満の健常者である男女の計21名とし、また、本試験参加に際し、事前に当該試験の説明を受け、その内容が理解でき、趣旨に賛同できる者であり、被験者本人による文書同意が得られる者とした。ただし、大豆アレルギーの者、薬を常用している者、妊娠中の者など本試験を実施するのに不適当と認めたものは除外した。
(試験食の摂取)
試験食は、1日1粒を夕食後に4週間継続して摂取させた。なお、試験期間中、抗酸化物質を多く含む健康食品など抗疲労作用を有する可能性がある飲食物については摂取を禁止した。
(試験方法)
試験デザインは、ランダム化二重盲検並行群間比較試験とした。図1に試験デザインを示した。
試験方法は、摂取開始時検査日、摂取2週間後および4週間後検査日に精神作業負荷を設定した。なお、検査日と前日はアルコール、コーヒーの摂取を禁止した。
(精神作業負荷)
精神作業負荷は、VDT(Visual Display Terminal)作業による疲労負荷として、2−back課題30分間、およびATMT(Advanced Trail Making Test,ABC課題)30分間の計1時間を1セットとし、2セット(2時間)実施した。
(1)2−back課題
3秒毎にランダムにアルファベットがパソコンの画面上に表示され、現在表示されているアルファベットと2つ前に表示されたアルファベットが同じであれば右クリック、異なっていれば左クリックする短期記憶課題とした。
(2)ATMT (ABC課題)
パソコンの画面上にランダムに表示された1から25までの25 個の数字を1から25まで順にすばやくクリックしていく視覚探索課題。A、B、C の3 種類の課題を順に実施した。A課題は1から25までの数字の配置が変わらない課題、B 課題は1から25の配置は変わらないが、クリックした数字が消えて26以降の新たな数字が追加される課題、C 課題はB 課題に加えてさらに25までの数字の配置が変わる課題とした。
本試験では日本疲労学会の定める抗疲労臨床評価ガイドラインをもとに、主要評価項目をVAS(Visual Analogue Scale)検査における疲労感スコア、副次評価項目を作業能率評価(ATMT(Advanced Trail Making Test,ABC課題)とした。
(1)VAS(Visual Analogue Scale)検査
摂取開始時検査日、摂取2週間後検査日、及び摂取4週間後検査日の負荷前、負荷後にVAS検査を実施した。質問項目は、疲労感、意欲、眠気とした。
VASについては疲労感の評価方法として日本疲労学会で推奨されている。VASの自己評価スコアは、長さ10.0cmの水平な直線を提示し、両端をそれぞれの左端を最も否定的(感じない)、右端をもっとも肯定的(感じる)とし、各質問項目に対する被験者自身の感覚がどの程度のレベルに位置するか、その線分上に印を記入させた。評価結果の測定は、各被験者が印した点の位置を左端からの距離として測定し、数値化した。最も否定的な端(左端)を0点、最も肯定的な端(右端)を10.0点とした。
(2)作業能率評価(ATMT(Advanced Trail Making Test,ABC課題)
検査日のVDT(Visual Display Terminal)作業2時間におけるATMT(ABC課題)の平均反応時間、試行数、エラー数により作業能率評価を行い、課題間の意向時間により意欲の客観評価を行った。
(3)生活記録日誌
試験期間中毎日、睡眠時間、就業時間、ライフイベント、試験食摂取状況について記入させた。
(4)統計学的処理
試験データを集計し、項目ごとに統計解析を行った。統計処理ソフトはSPSS Ver.22.0(日本アイ・ビー・エム(株))を使用し、試験条件間の比較においては、対応のないt検定を実施した。ただし、データが正規分布から逸脱していると考えられる場合はMann-WhitneyのU検定を実施した。有意水準は両側検定で5%とし、10%を傾向ありとした。また、対応のないデータの平均を t 検定で検定する際は、G*Power3.1.9.6を用いてα=0.05および1-β=0.8とした場合における統計学的有意差を得るためのサンプルサイズの推定を実施した。
(被験者)
被験者21名をランダムに2グループ(被検食群10名、プラセボ群11名)に割り付けた。2−back課題の正答率が2/3(0.666)以下またはATMT(ABC課題)の課題の移行時間5秒以上の負荷が適切にかかっていない被験者を有効性評価の対象から除外とした。その結果、有効性評価における解析対象者は13名(被検食群7名、プラセボ群6名)であった。図2に被験者のフローチャートを示した。
被験食群、プラセボ群ともに、摂取前検査日、摂取2週間検査日および摂取4週間後検査日のすべての検査において、2−back課題の正答率が平均値で0.882と高い正答率であった。ことから本検査において適切な負荷がかかっていることが確認された。図3に結果を示した。
2セットまとめたデータの摂取前検査日からの変化について、被検食群はプラセボ群と比較して、A課題誤数字押し型エラー数が摂取4週間後検査日で減少傾向、B課題誤数字押し型エラー数が摂取4週間後検査日で減少傾向、次のトライアルまでの平均反応時間トータルが摂取2週間後検査日で短縮傾向がみられた。特に、次のトライアルまでの平均反応時間C課題−A課題が摂取2週間後検査日で有意に短縮がみられた(図4)。課題間の移行時間は意欲の客観指標として認知されていることから、黒大豆種皮抽出物の意欲向上効果が確認された。表2、図4に結果を示す(数値は平均値とその標準誤差である。)。
実測値について、被検食群はプラセボ群と比較して、精神性疲労感、眠気が摂取4週間後検査日負荷後で低値傾向(図5、図6)、意欲低下が摂取2週間後検査日負荷前で低値傾向がみられた(図7)。この結果から黒大豆種皮抽出物の精神性疲労感抑制(改善)効果、意欲向上(予防)効果、眠気抑制(改善)効果が確認された。図8にVAS実測値の結果を示す(数値は平均値とその標準誤差である。)。
処方例1 ソフトカプセル
下記の原料を用いて、定法に従ってソフトカプセルを調製した。なお、黒大豆種皮抽出物として、実験例1の方法に従って調製した黒大豆種皮抽出物を用いた。
植物油脂:158.6mg
ゼラチン:135.2mg
黒大豆種皮抽出物:100mg
グリセリン:30.2mg
レシチン:30mg
ミツロウ:26mg
ビタミンE:20mg。
下記の原料を用いて、定法に従って錠剤を調製した。なお、黒大豆種皮抽出物として、実施例1方法に従って調製した黒大豆種皮抽出物を用いた。
デキストリン:179.69mg
黒大豆種皮抽出物:100mg
還元水あめ:28.56mg
結晶セルロース:26.51mg
ステアリン酸カルシウム:5.25mg
微粒二酸化ケイ素:5.25mg
ヒドロキシプロピルセルロース:4.77mg。
下記の原料を用いて、定法に従って個包装スティックゼリーを調製した。なお、黒大豆種皮抽出物として、実施例1の方法に従って調製した黒大豆種皮抽出物を用いた。
希少糖含有シロップ:1000mg
黒大豆種皮抽出物:100mg
ゲル化剤(増粘多糖類):100mg
甘味料(キシリトール、スクラロース、ソーマチン、アセスルファムカリウム):70mg
香料:20mg
水:8710mg
て、さらにろ過、共沈または遠心分離による固形物の除去、活性炭処理、吸着処理等の精
製処理を行ってもよく、黒大豆種皮抽出物中のポリフェノールの濃度を高める目的で合成吸着剤を用いて精製処理することが好ましい。
合成吸着剤としては、スチレン、メタアクリル酸エステル等の多孔質架橋重合体の樹脂であり、スチレン系樹脂としては例えば、ダイアイオンHP20、HP21、セパビーズSP825、SP70、SP700などが、アクリル系樹脂としてはダイアイオンHP2MGL、アンバーライトXAD7HPなどが使用できる。合成吸着剤による精製処理は、従来公知の方法で行えばよく、例えば、得られた抽出液をガラス管に充填した合成吸着剤に対して通液して吸着させ、次いで水で不純物や酸を洗い流した後、有機溶媒または有機溶媒と水との混合溶媒を用いて樹脂に吸着されたポリフェノールを溶出させることができる。
黒大豆種皮抽出物(酸性熱水抽出物)は下記の方法により調製した。
(1)黒大豆種皮(生)1kgを抽出溶媒として希硫酸(0.3%w/v)30Lに浸漬し、55〜60℃に加熱しながら20分間撹拌抽出する。
(2)抽出後、黒大豆種皮と液とを固液分離し、液を回収する。
(3)回収した液を遠心分離を行ない、固液分離では取り除けない浮遊固形物を除去する。
(4)得られた抽出液を合成吸着樹脂(セパビーズSP700:三菱化学(株)製)を入れたカラムに投入し、樹脂に吸着させる。
(5)カラム内に残存する硫酸を洗い流すため、カラムに水を通液して樹脂を洗浄する。
(6)カラムに59容量%濃度のアルコ−ル水溶液を通液して、樹脂に吸着されたポリフェノールを溶出させる。
(7)回収した溶出液(アルコール溶液)を減圧下で加熱することにより蒸発させ、濃縮する。
(8)得られた濃縮液に、賦形剤としてデキストリンを添加する。
(9)加熱殺菌する。
(10)加熱殺菌後の濃縮液を噴霧乾燥して黒大豆種皮抽出物(85g、ポリフェノール含量61.1%)を得た。
〔黒大豆種皮抽出物の成分組成〕
上記より得られた黒大豆種皮抽出物(酸性熱水抽出物)の成分組成を下記の方法により分析した。結果を図9に示す。
(1)Total Polyphenol分析
黒大豆種皮抽出物を70%エタノールで7.5mg/100ml濃度に調整して試料溶液とし、試料溶液1mlにフォーリンシオカルト溶液5mlを添加、反応させる。これに0.7M炭酸ナトリウム水溶液4mlを加えて撹拌し、30℃で60分間静置した後、分光光度計にて765nmの吸光度を測定した。カテキン(SIGMA社製、「(+)-catechin hydrate」C1251-5G)の検量線を同時に作製し、総Polyphenol量をカテキン当量として算出した。
(2) Total Flavan-3-ol分析
黒大豆種皮抽出物を50%エタノールで12.5mg/100ml濃度に調整して試料溶液とし、試料溶液1mlに4%バニリン溶液を3ml加えて撹拌し、濃塩酸を1.5ml加えて撹拌し、30℃で20分間静置した後、分光光度計にて500nmの吸光度を測定した。なお、対照区には4%バニリン溶液の代わりに100%メタノールを加えた。分光光度計測定は、試験区の吸光度をA、対照区の吸光度をB、ブランク区の吸光度をCとし、検体の吸光度=A−B−Cとして測定した。カテキン(SIGMA社製、「(+)-catechin hydrate」C1251-5G)の検量線を同時に作製し、総Flavan-3-ol量をカテキン当量として算出した。
(3)Catechin, Epicatechin, Procyanidin B2, Procyanidin C1, Cinnamtannin A2 分析
黒大豆種皮抽出物を50%エタノールで0.1mg/ml濃度に調整して試料溶液とし、以下の分析条件でHPLCに供試して測定した。分析条件は、移動相Aに0.1%ギ酸溶液、移動相Bにアセトニトリルを使用し、下記濃度勾配および条件で溶出した。またCatechin, Epicatechin, Procyanidin B2, Procyanidin C1, Cinnamtannin A2の標準溶液を同時にHPLCに供試し、検量線を作成して定量した。
濃度勾配:0〜45分/B:5〜15%,45〜50分/B:15〜80%,50〜53分/B:80%,53〜70分/B:5%,流量:0.7 mL / min,注入量:10μL,カラムオーブン温度:40℃,蛍光:励起波長276 nm 発光:316 nm,Cadenza CL-C18カラム(φ250 mm×4.6 mm、3μm、Imtakt),ガードカラム(Cadenza CL-C18、φ5 mm×2 mm、3μm、Imtakt)
(4) Cyanidin 3-glucoside分析
黒大豆種皮抽出物を1%塩酸-メタノール(1:37, v/v)で0.1mg/ml濃度に調整して試料溶液とし、以下の分析条件でHPLCに供試し測定した。分析条件は、移動相Aにギ酸:水(3:97,v/v)溶液、移動相Bにギ酸:アセトニトリル:水(3:30:67,v/v)を使用し、下記濃度勾配および条件で溶出した。またCyanidin 3-glucosideの標準溶液を同時にHPLCに供試し、検量線を作成して定量した。
濃度勾配:0〜50分/B:25〜50%,50〜55分/B:50〜100%,55〜60分/B:100%,60〜70分/B:25%,流量:0.6 mL / min,注入量:10μL,カラムオーブン温度:40℃,UV:測定波長520 nm,Cadenza CL-C18カラム(φ250 mm×4.6 mm、3μm、Imtakt),ガードカラム(Cadenza CL-C18、φ5 mm×2 mm、3μm、Imtakt)
Claims (5)
- 黒大豆種皮抽出物を有効成分として含有する、精神性疲労、意欲低下または眠気の少なくともいずれかを予防または改善する目的で使用される改善剤。
- 前記精神性疲労、意欲低下または眠気が、VDT(Visual Display Terminal)作業負荷に起因するものである、請求項1記載の改善剤。
- 黒大豆種皮抽出物が黒大豆種皮の酸性抽出物である、請求項1または2に記載の改善剤。
- 医薬品、医薬部外品または飲食物である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の改善剤。
- 黒大豆種皮抽出物を経口組成物に配合して、当該経口組成物に対して精神性疲労、意欲低下または眠気の少なくともいずれかを予防または改善する作用を付与するための黒大豆種皮抽出物の使用方法。
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